(57)【要約】本発明は、米、米ぬか、または籾殻の抽出物のヒスタミン受容体拮抗剤としての新規用途を提供する。米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、天然の抗ヒスタミン剤として使われて、アレルギー性鼻炎；炎症性腸疾患；喘息；気管支炎；嘔吐；胃及び十二指腸潰瘍；胃食道逆流；睡眠障害；不安；及びうつ病の予防または治療に利用されうるということはもとより、従来の睡眠誘導剤として使われる医薬であるジアゼパムとほぼ同じレベル、または向上した入眠潜時の減少及び睡眠時間の増加の効果がある。米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、天然物であって、長期間使っても、認知障害、耐性、または依存性などの副作用がない。【選択図】図２６
2014516052.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
米、米ぬか、または籾殻の抽出物を有効成分として含むヒスタミン受容体活性阻害用の薬剤学的組成物。
【請求項２】
前記ヒスタミン受容体活性阻害用の薬剤学的組成物は、アレルギー性鼻炎；炎症性腸疾患；喘息；気管支炎；嘔吐；胃及び十二指腸潰瘍；胃食道逆流；睡眠障害；不安；及びうつ病の予防または治療のためのものであることを特徴とする請求項１に記載のヒスタミン受容体活性阻害用の薬剤学的組成物。
【請求項３】
前記睡眠障害の予防または治療は、入眠潜時の減少、睡眠持続時間の増加、またはノンレム睡眠の増加であることを特徴とする請求項２に記載のヒスタミン受容体活性阻害用の薬剤学的組成物。
【請求項４】
前記米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、水、有機溶媒、またはこれらの混合物を用いて抽出された、米、米ぬか、または籾殻の抽出物であることを特徴とする請求項１に記載のヒスタミン受容体活性阻害用の薬剤学的組成物。
【請求項５】
前記有機溶媒は、低級アルコール、ヘキサン、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、及びジエチルエーテルからなる群から選択された１種以上の溶媒であることを特徴とする請求項４に記載のヒスタミン受容体活性阻害用の薬剤学的組成物。
【請求項６】
前記有機溶媒は、エタノールであることを特徴とする請求項５に記載のヒスタミン受容体活性阻害用の薬剤学的組成物。
【請求項７】
前記米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、米、米ぬか、または籾殻の抽出物のオイル分画、米、米ぬか、または籾殻の抽出物の液相分画、及び米、米ぬか、または籾殻の抽出物のワックス分画からなる群から選択された何れか１つ以上を含むことを特徴とする請求項１に記載のヒスタミン受容体活性阻害用の薬剤学的組成物。
【請求項８】
前記米ぬかの抽出物のオイル分画は、米ぬか油であることを特徴とする請求項７に記載のヒスタミン受容体活性阻害用の薬剤学的組成物。
【請求項９】
前記米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、米、米ぬか、または籾殻の有機溶媒抽出物を第２の有機溶媒に再分画した分画物であることを特徴とする請求項１に記載のヒスタミン受容体活性阻害用の薬剤学的組成物。
【請求項１０】
前記米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、米ぬかの低級アルコール抽出物を第２の有機溶媒に再分画した分画物であることを特徴とする請求項１に記載のヒスタミン受容体活性阻害用の薬剤学的組成物。
【請求項１１】
前記米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、米ぬかのエタノール抽出物をヘキサンに再分画した分画物であることを特徴とする請求項１に記載のヒスタミン受容体活性阻害用の薬剤学的組成物。
【請求項１２】
米、米ぬか、または籾殻の抽出物を有効成分として含むヒスタミン受容体の活性阻害による睡眠障害、不安またはうつ病の予防または改善用食品組成物。
【請求項１３】
前記睡眠障害の予防または改善は、入眠潜時の減少、睡眠持続時間の増加、またはノンレム睡眠の増加であることを特徴とする請求項１２に記載の睡眠障害、不安またはうつ病の予防または改善用食品組成物。
【請求項１４】
前記米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、水、有機溶媒、またはこれらの混合物を用いて抽出された、米、米ぬか、または籾殻の抽出物であることを特徴とする請求項１２に記載の睡眠障害、不安またはうつ病の予防または改善用食品組成物。
【請求項１５】
前記有機溶媒は、低級アルコール、ヘキサン、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、及びジエチルエーテルからなる群から選択された１種以上の溶媒であることを特徴とする請求項１３に記載の睡眠障害、不安またはうつ病の予防または改善用食品組成物。
【請求項１６】
前記有機溶媒は、エタノールであることを特徴とする請求項１５に記載の睡眠障害、不安またはうつ病の予防または改善用食品組成物。
【請求項１７】
前記米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、米、米ぬか、または籾殻の抽出物のオイル分画、米、米ぬか、または籾殻の抽出物の液相分画、及び米、米ぬか、または籾殻の抽出物のワックス分画からなる群から選択された何れか１つ以上を含むことを特徴とする請求項１２に記載の睡眠障害、不安またはうつ病の予防または改善用食品組成物。
【請求項１８】
前記米ぬかの抽出物のオイル分画は、米ぬか油であることを特徴とする請求項１７に記載の睡眠障害、不安またはうつ病の予防または改善用食品組成物。
【請求項１９】
前記米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、米、米ぬか、または籾殻のエタノール抽出物をヘキサンに再分画した分画物であることを特徴とする請求項１２に記載の睡眠障害、不安またはうつ病の予防または改善用食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、米、米ぬか、または籾殻の抽出物のヒスタミン受容体拮抗剤としての新規用途に係り、また、米、米ぬか、または籾殻の抽出物を有効成分とするアレルギー性鼻炎；炎症性腸疾患；喘息；気管支炎；嘔吐；胃及び十二指腸潰瘍；胃食道逆流；睡眠障害；不安；及びうつ病の予防または治療用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
睡眠は、人間寿命の１／３を占めており、最も根本的であり、必須的な生理現象であって、健康維持及び精神的安定において、非常に重要な要素である。慢性的な睡眠不足及び障害は、心血管疾患及び高血圧、記憶と学習、代謝調節及び体重、免疫力及び癌抵抗力、糖尿病、安全事故、気持ちなど全般的な身体・精神的健康に否定的な影響を及ぼす。現在、世界人口の３０％程度が不眠症を経験しており、１０％は慢性的に経験しているほど睡眠障害による問題が最近大きく台頭しつつある。
【０００３】
アメリカ国立睡眠協会（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｌｅｅｐ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  ＵＳＡ、２００８）の調査によれば、アメリカ成人の５０％程度が、１週間に１回以上不眠症を経験しており、アメリカ国民の５０％程度が、自身の睡眠に対して満足することができないと調査された。最近、国内の不眠症及び睡眠障害の有病率は、迅速に先進国レベルに近接しているが、睡眠障害診療患者数が、２００１年５万１０００人から、２００８年２２万８０００人となって、最近の８年間４．５倍増加した（国民健康保険公団、２００９）。
【０００４】
韓国国内の場合、依然として睡眠に対する関心が高くなく、特に、医学的治療が必要であるという認識、あるいは疾患という認識がまだ形成されていない実情である。一方、統計によれば、成人の約１５％が不安症状による不眠症のために、薬物治療が必要であると知られており、不眠の原因としては、ストレス、緊張、恐怖など多様であり、治療薬物としては、ベンゾジアゼピン系の薬物とセロトニン効能薬などが使われているが、しかし、このような薬物を長期間使った時、認知障害（ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ）、耐性、依存性などの副作用が激しい問題点がある。このような薬理学的副作用や依存性が低いために、アメリカでは、抗ヒスタミン剤（ａｎｔｉｈｉｓｔａｍｉｎｅ）と天然ハーブ製品とが非処方睡眠補助剤として使われており、特に、抗ヒスタミン剤は、ヒスタミン受容体に対する拮抗剤として風邪薬の代表的成分であり、医師の処方なしにも、直ちに購入して摂取しうる唯一の睡眠剤として使われている。
【０００５】
ヒスタミン［２−（４−イミダゾリル）エチルアミン］は、身体、例えば、胃腸管全体に広く分布されている作動性神経伝達物質の１つである［非特許文献１］。ヒスタミンは、胃酸分泌物、腸運動性［参照：非特許文献２］、血管運動系反応、腸炎証性反応及びアレルギー反応［参照：非特許文献３］のような多様な病態生理学的事象（ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｖｅｎｔ）を調節する［参照：非特許文献４］。現在のところ、ヒスタミンは、４種のファミリーのヒスタミン受容体、すなわち、ヒスタミンＨ１、Ｈ２、Ｈ３及びＨ４受容体を通じて中枢神経系及び末梢領域いずれもであらゆるその作用を媒介する。ヒスタミン受容体は、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３及びＨ４収容体が単独または複合的に作用して、アレルギー性鼻炎、炎症性腸疾患、喘息、気管支炎、嘔吐のようなアレルギー及び免疫反応、胃酸分泌と関連して、胃及び十二指腸潰瘍または胃食道逆流、脳で鎮静（ｓｅｄａｔｉｖｅ）及び睡眠誘導と関連していることが知られている。
【０００６】
一方、米は、世界人口の半分が主食として使う世界３大穀物のうち１つである貴重な食糧資源であり、特に、アジア圏では、他の作物とは置き換えられない国家核心資源である。稲の外皮である籾殻を剥き、搗精していない状態の米を玄米と言い、玄米を精米して、米ぬかと米胚芽とを剥き出した状態の米を白米と言う。特に、米ぬかは、精白米の副産物にも拘らず、栄養に関しては、非常に優れる材料である。
【０００７】
米ぬか（米糠）は、米栄養分の約９５％が集結されており、良質のタンパク質と食物繊維、及び各種ビタミンとミネラルとが含有されている。米ぬかの効能としては、坑癌、抗酸化、抗炎症、抗動脈硬化、コレステロール低下、成長促進作用、消化機能促進、及び免疫強化作用などが明かになった。しかし、米、米ぬか、または籾殻とヒスタミン受容体拮抗剤との相関関係、さらに、アレルギー鼻炎、喘息のようなアレルギー疾患、胃酸分泌過多と関連した疾患、睡眠、不安またはうつ病との相関関係については、いまだに明かになっていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｂｕｒｋｓ  １９９４  ｉｎ  Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｌ．Ｒ．ｅｄ．，Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｔｒａｃｔ，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，ｐｐ．２１１−２４２
【非特許文献２】Ｌｅｕｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９１，１０２，ｐｐ１７９−１８５
【非特許文献３】Ｒａｉｔｈｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，１０８，１２７−１３３
【非特許文献４】Ｐａｎｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １９８４，８１，２５７２−２５７６；Ｉｎａｇａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｎｅｕｒｏｌ  １９８８，２７３，２８３−３００
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、ヒスタミン受容体拮抗剤として、アレルギー性鼻炎；炎症性腸疾患；喘息；気管支炎；嘔吐；胃及び十二指腸潰瘍；胃食道逆流；睡眠障害；不安；及びうつ病の予防または治療に使われた既存の薬物を代替しうる天然物来由の成分を抽出することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、米、米ぬか、または籾殻の抽出物のヒスタミン受容体拮抗剤としての新規用途、米、米ぬか、または籾殻の抽出物を有効成分として含むアレルギー性鼻炎；炎症性腸疾患；喘息；気管支炎；嘔吐；胃及び十二指腸潰瘍；胃食道逆流；睡眠障害；不安；及びうつ病の予防または治療用薬剤学的組成物、治療上有効量の米ぬか抽出物、または米ぬか粉末を対象体に投与することを含むアレルギー性鼻炎；炎症性腸疾患；喘息；気管支炎；嘔吐；胃及び十二指腸潰瘍；胃食道逆流；睡眠障害；不安；及びうつ病の予防または治療方法を提供する。
【発明の効果】
【００１１】
米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、従来の睡眠誘導剤として使われる医薬であるジアゼパムとほぼ同じレベル、または向上した入眠潜時の減少及び睡眠持続時間の増加、ノンレム睡眠の増加の効果を提供し、従来のヒスタミン受容体拮抗剤として知られたピリラミンマレイン酸塩の睡眠効果が、ヒスタミン受容体効能剤である２−ピリジルエチルアミン二塩酸塩によって完全に抑制されると同様のメカニズムで、米、米ぬか、または籾殻の抽出物の睡眠効果が抑制されて、天然の抗ヒスタミン剤として作用し、天然物である米、米ぬか、または籾殻から由来したものであって、長期間使っても、認知障害、耐性、または依存性などの副作用がない。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの入眠潜時に対するＲＷＥの効果を示すグラフである。
【図２】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの睡眠時間に対するＲＷＥの効果を示すグラフである。対照群（０．５％ＣＭＣ−食塩水１０ｍＬ／ｋｇ）、ＤＺＰ（２ｍｇ／ｋｇ）及びＲＷＥ（５０、１００、２５０、５００ｍｇ／ｋｇ）を経口投与（ｐ．ｏ．）し、４５分後、ペントバルビタールを投与した。各グラフは、平均値（ｍｅａｎｓ±ＳＥＭ、ｎ＝１０）を表わす。＊は、対照区と比較して、ｐ＜０．０５で、＊＊は、対照群と比較して、ｐ＜０．０１で有意差があること（Ｄｕｎｎｅｔ'ｓ  ｔｅｓｔ）を意味する。ＣＯＮは、対照群；ＤＺＰは、ジアゼパムの略称である。
【図３】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの入眠潜時に対するＲＥＥの効果を示すグラフである。
【図４】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの睡眠時間に対するＲＥＥの効果を示すグラフである。対照群（０．５％ＣＭＣ−食塩水１０ｍＬ／ｋｇ）、ＤＺＰ（２ｍｇ／ｋｇ）及びＲＥＥ（５０、１００、２５０、５００ｍｇ／ｋｇ）を経口投与（ｐ．ｏ．）し、４５分後、ペントバルビタールを投与した。各グラフは、平均値（ｍｅａｎｓ±ＳＥＭ、ｎ＝１０）を表わす。＊は、対照区と比較して、ｐ＜０．０５で、＊＊は、対照群と比較して、ｐ＜０．０１で有意差があること（Ｄｕｎｎｅｔ'ｓ  ｔｅｓｔ）を意味する。ＣＯＮは、対照群；ＤＺＰは、ジアゼパムを表わす。
【図５】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの入眠潜時に対するＨＷＥの効果を示すグラフである。
【図６】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの睡眠時間に対するＨＷＥの効果を示すグラフである。対照群（０．５％ＣＭＣ−食塩水１０ｍＬ／ｋｇ）、ＤＺＰ（２ｍｇ／ｋｇ）及びＨＷＥ（５０、１００、２５０、５００ｍｇ／ｋｇ）を経口投与（ｐ．ｏ．）し、４５分後、ペントバルビタールを投与した。各グラフは、平均値（ｍｅａｎｓ±ＳＥＭ、ｎ＝１０）を表わす。＊は、対照区と比較して、ｐ＜０．０５で、＊＊は、対照群と比較して、ｐ＜０．０１で有意差があること（Ｄｕｎｎｅｔ'ｓ  ｔｅｓｔ）を意味する。ＣＯＮは、対照群；ＤＺＰは、ジアゼパムの略称である。
【図７】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの入眠潜時に対するＨＥＥの効果を示すグラフである。
【図８】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの睡眠時間に対するＨＥＥの効果を示すグラフである。対照群（０．５％ＣＭＣ−食塩水１０ｍＬ／ｋｇ）、ＤＺＰ（２ｍｇ／ｋｇ）及びＨＥＥ（５０、１００、２５０、５００ｍｇ／ｋｇ）を経口投与（ｐ．ｏ．）し、４５分後、ペントバルビタールを投与した。各グラフは、平均値（ｍｅａｎｓ±ＳＥＭ、ｎ＝１０）を表わす。＊は、対照区と比較して、ｐ＜０．０５で、＊＊は、対照群と比較して、ｐ＜０．０１で有意差があること（Ｄｕｎｎｅｔ'ｓ  ｔｅｓｔ）を意味する。ＣＯＮは、対照群；ＤＺＰは、ジアゼパムを表わす。
【図９】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの入眠潜時に対するＢＷＥの効果を示すグラフである。
【図１０】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの睡眠時間に対するＢＷＥの効果を示すグラフである。対照群（０．５％ＣＭＣ−食塩水１０ｍＬ／ｋｇ）、ＤＺＰ（２ｍｇ／ｋｇ）及びＢＷＥ（５０、１００、２５０、５００ｍｇ／ｋｇ）を経口投与（ｐ．ｏ．）し、４５分後、ペントバルビタールを投与した。各グラフは、平均値（ｍｅａｎｓ±ＳＥＭ、ｎ＝１０）を表わす。＊は、対照区と比較して、ｐ＜０．０５で、＊＊は、対照群と比較して、ｐ＜０．０１で有意差があること（Ｄｕｎｎｅｔ'ｓ  ｔｅｓｔ）を意味する。ＣＯＮは、対照群；ＤＺＰは、ジアゼパムの略称である。
【図１１】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの入眠潜時に対するＢＥＥの効果を示すグラフである。
【図１２】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの睡眠時間に対するＢＥＥの効果を示すグラフである。対照群（０．５％ＣＭＣ−食塩水１０ｍＬ／ｋｇ）、ＤＺＰ（２ｍｇ／ｋｇ）及びＢＥＥ（５０、１００、２５０、５００ｍｇ／ｋｇ）を経口投与（ｐ．ｏ．）し、４５分後、ペントバルビタールを投与した。各グラフは、平均値（ｍｅａｎｓ±ＳＥＭ、ｎ＝１０）を表わす。＊は、対照区と比較して、ｐ＜０．０５で、＊＊は、対照群と比較して、ｐ＜０．０１で有意差があること（Ｄｕｎｎｅｔ'ｓ  ｔｅｓｔ）を意味する。ＣＯＮは、対照群；ＤＺＰは、ジアゼパムを表わす。
【図１３】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの入眠潜時に対するＢＥＥ−Ｗａｘの効果を示すグラフである。
【図１４】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの睡眠時間に対するＢＥＥ−Ｗａｘの効果を示すグラフである。対照群（０．５％ＣＭＣ−食塩水１０ｍＬ／ｋｇ）、ＤＺＰ（２ｍｇ／ｋｇ）及びＢＥＥ−Ｗａｘ（５０、１００、２５０、５００ｍｇ／ｋｇ）を経口投与（ｐ．ｏ．）し、４５分後、ペントバルビタールを投与した。各グラフは、平均値（ｍｅａｎｓ±ＳＥＭ、ｎ＝１０）を表わす。＊は、対照区と比較して、ｐ＜０．０５で、＊＊は、対照群と比較して、ｐ＜０．０１で有意差があること（Ｄｕｎｎｅｔ'ｓ  ｔｅｓｔ）を意味する。ＣＯＮは、対照群；ＤＺＰは、ジアゼパムを表わす。
【図１５】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの入眠潜時に対するＢＥＥ−Ｏｉｌの効果を示すグラフである。
【図１６】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの睡眠時間に対するＢＥＥ−Ｏｉｌの効果を示すグラフである。対照群（０．５％ＣＭＣ−食塩水１０ｍＬ／ｋｇ）、ＤＺＰ（２ｍｇ／ｋｇ）及びＢＥＥ−Ｏｉｌ（５０、１００、２５０、５００ｍｇ／ｋｇ）を経口投与（ｐ．ｏ．）し、４５分後、ペントバルビタールを投与した。各グラフは、平均値（±ＳＥＭ、ｎ＝１０）を表わす。＊は、対照区と比較して、ｐ＜０．０５で、＊＊は、対照群と比較して、ｐ＜０．０１で有意差があること（Ｄｕｎｎｅｔ'ｓ  ｔｅｓｔ）を意味する。ＣＯＮは、対照群；ＤＺＰは、ジアゼパムを表わす。
【図１７】ＳＤラットで入眠潜時及び総睡眠時間に対するＢＥＥ（５００ｍｇ／ｋｇ）の効果を示すグラフである。各グラフは、平均値（±ＳＥＭ、ｎ＝８）を表わす。＊は、対照区と比較して、ｐ＜０．０５で、＊＊は、対照群と比較して、ｐ＜０．０１で有意差があること（Ｄｕｎｎｅｔ'ｓ  ｔｅｓｔ）を意味する。ＣＯＮは、対照群を表わす。
【図１８】ＳＤラットで睡眠構造に対するＢＥＥ（５００ｍｇ／ｋｇ）の効果を示すグラフである。ＣＯＮは、対照群を表わす。
【図１９】時間別覚醒、ノンレム睡眠及びレム睡眠の変化を示すグラフである。ＣＯＮは、対照群を表わす。
【図２０】ＢＥＥ（ＥｔＯＨ抽出物）の分画過程を示す図である。ＥｔＯＡｃは、酢酸エチル；ｎ−ＢｕＯＨは、ｎ−ブタノール；Ｈ２Ｏは、蒸留水を表わす。
【図２１】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの入眠潜時に対するＢＥＥ分画物の効果を示すグラフである。
【図２２】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの睡眠時間に対するＢＥＥ分画物の効果を示すグラフである。対照群（０．５％ＣＭＣ−食塩水１０ｍＬ／ｋｇ）、ＤＺＰ（２ｍｇ／ｋｇ）及びＢＥＥ−Ｈ、ＢＥＥ−Ｂ、ＢＥＥ−Ｗ及びＢＥＥ−Ｅ（５０、２５０ｍｇ／ｋｇ）を経口投与（ｐ．ｏ．）し、４５分後、ペントバルビタールを投与した。各グラフは、平均値（±ＳＥＭ、ｎ＝１０）を表わす。＊は、対照区と比較して、ｐ＜０．０５で、＊＊は、対照群と比較して、ｐ＜０．０１で有意差があること（Ｄｕｎｎｅｔ'ｓ  ｔｅｓｔ）を意味する。ＣＯＮは、対照群；ＤＺＰは、ジアゼパム；Ｈは、ヘキサン抽出物；Ｂは、ブタノール抽出物；Ｗは、水抽出物；Ｅは、酢酸エチル抽出物を表わす。
【図２３】ＢＥＥからｎ−ヘキサン抽出物のサブ分画を分離する過程を示す図である。ＥｔＯＡｃは、酢酸エチル；Ｈ２Ｏは、蒸留水を表わす。
【図２４】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの入眠潜時に対するＢＥＥ−Ｈから得たサブ分画の効果を示すグラフである。
【図２５】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの睡眠時間に対するＢＥＥ−Ｈから得たサブ分画の効果を示すグラフである。対照群（０．５％ＣＭＣ−食塩水１０ｍＬ／ｋｇ）、ＤＺＰ（２ｍｇ／ｋｇ）及びＢＥＥ−Ｈサブ分画（５０ｍｇ／ｋｇ）を経口投与（ｐ．ｏ．）し、４５分後、ペントバルビタールを投与した。各グラフは、平均値（±ＳＥＭ、ｎ＝１０）を表わす。＊は、対照群と比較して、ｐ＜０．０５で、＊＊は、対照群と比較して、ｐ＜０．０１で有意差があること（Ｄｕｎｎｅｔ'ｓ  ｔｅｓｔ）を意味する。Ｃは、対照群；Ｄは、ジアゼパムを表わす。
【図２６】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの入眠潜時に対するＢＥＥ−Ｈから得たサブ分画の効果を示すグラフである。
【図２７】ペントバルビタール睡眠容量（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与したマウスの睡眠時間に対するＢＥＥ−Ｈから得たサブ分画の効果を示すグラフである。対照群（０．５％ＣＭＣ−食塩水１０ｍＬ／ｋｇ）、ＤＺＰ（２ｍｇ／ｋｇ）及びＢＥＥ−Ｈサブ分画（２５０ｍｇ／ｋｇ）を経口投与（ｐ．ｏ．）し、４５分後、ペントバルビタールを投与した。各グラフは、平均値（±ＳＥＭ、ｎ＝１０）を表わす。＊は、対照区と比較して、ｐ＜０．０５で、＊＊は、対照群と比較して、ｐ＜０．０１で有意差があること（Ｄｕｎｎｅｔ'ｓ  ｔｅｓｔ）を意味する。Ｃは、対照群；Ｄは、ジアゼパムを表わす。
【図２８】ＢＥＥからｎ−ヘキサン抽出物の小分画を分離する過程を示す図である。ＭｅＯＨは、メタノール；ＥｔＯＡｃは、酢酸エチルを表わす。
【図２９】ｎ−ヘキサン抽出物の小分画を分離する過程を示す図である。ＥｔＯＡｃは、酢酸エチル；ＣＨＣｌ３は、クロロホルム；ＭｅＯＨは、メタノール；Ｈ２Ｏは、蒸留水を表わす。
【図３０】ｎ−ヘキサン抽出物の小分画を分離する過程を示す図である。ＥｔＯＡｃは、酢酸エチル；ＣＨＣｌ３は、クロロホルム；ＭｅＯＨは、メタノールを表わす。
【図３１】ＢＥＥ−Ｈ−２分画がＧＰＣＲ（Ｇ−Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）の活性に及ぼす影響を示すグラフである。
【図３２】製造例１の米の水抽出物（ＲＷＥ）とヒスタミン受容体に作用する拮抗剤（ＰＭＳ）とに対するヒスタミン受容体効能剤（ＰＤ）の投与による入眠潜時を示すグラフである。
【図３３】製造例１の米の水抽出物（ＲＷＥ）とヒスタミン受容体に作用する拮抗剤（ＰＭＳ）とに対するヒスタミン受容体効能剤（ＰＤ）の投与による睡眠時間を示すグラフである。対照群（ＣＯＮ、０．５％ＣＭＣ−食塩水１０ｍＬ／ｋｇ）、ＲＷＥ（５００ｍｇ／ｋｇ）、ＰＭＳ（７０ｍｇ／ｋｇ）をペントバルビタール投与（ｈｙｐｎｏｔｉｃ  ｄｏｓａｇｅ４５ｍｇ／ｋｇ）４５分前に経口投与した。＊は、対照区と比較して、ｐ＜０．０５で、＊＊は、対照群と比較して、ｐ＜０．０１で有意差があること（Ｄｕｎｎｅｔ'ｓｔｅｓｔ）を意味する。
【図３４】製造例３の米ぬかのエタノール抽出物（ＢＥＥ）とヒスタミン受容体に作用する拮抗剤（ＰＭＳ）とに対するヒスタミン受容体効能剤（ＰＤ）の投与による入眠潜時を示すグラフである。
【図３５】製造例３の米ぬかのエタノール抽出物（ＢＥＥ）とヒスタミン受容体に作用する拮抗剤（ＰＭＳ）とに対するヒスタミン受容体効能剤（ＰＤ）の投与による睡眠時間を示すグラフである。対照群（ＣＯＮ、０．５％ＣＭＣ−食塩水１０ｍＬ／ｋｇ）、ＢＥＥ（５００ｍｇ／ｋｇ）、ＰＭＳ（７０ｍｇ／ｋｇ）をペントバルビタール投与（ｈｙｐｎｏｔｉｃ  ｄｏｓａｇｅ４５ｍｇ／ｋｇ）４５分前に経口投与した。＊は、対照区と比較して、ｐ＜０．０５で、＊＊は、対照群と比較して、ｐ＜０．０１で有意差があること（Ｄｕｎｎｅｔ'ｓ  ｔｅｓｔ）を意味する。
【図３６】ヒスタミン受容体効能剤（ＰＤ）の投与の有無によるジアゼパム（ＤＺＰ）とＰＭＳとの入眠潜時を示すグラフである。
【図３７】ヒスタミン受容体効能剤（ＰＤ）の投与の有無によるジアゼパム（ＤＺＰ）とＰＭＳとの睡眠時間を示すグラフである。対照群（ＣＯＮ、０．５％ＣＭＣ−食塩水１０ｍＬ／ｋｇ）、ＤＺＰ（２ｍｇ／ｋｇ）、ＰＭＳ（７０ｍｇ／ｋｇ）をペントバルビタール投与（ｈｙｐｎｏｔｉｃ  ｄｏｓａｇｅ４５ｍｇ／ｋｇ）４５分前に経口投与し、ＰＤ（２０ｍｇ／ｋｇ）は、ＰＭＳ経口投与１０分前にあらかじめ腹腔注射した。＊は、対照区と比較して、ｐ＜０．０５で、＊＊は、対照群と比較して、ｐ＜０．０１で有意差があること（Ｄｕｎｎｅｔ'ｓ  ｔｅｓｔ）を意味する。
【図３８】ＧＡＢＡＡ−ベンゾジアゼピン拮抗剤であるフルマゼニル（ＦＬＵ）の投与の有無によるジアゼパム（ＤＺＰ）とＰＭＳとの入眠潜時を示すグラフである。
【図３９】フルマゼニル（ＦＬＵ）の投与の有無によるジアゼパム（ＤＺＰ）とＰＭＳとの睡眠時間を示すグラフである。対照群（ＣＯＮ、０．５％ＣＭＣ−食塩水１０ｍＬ／ｋｇ）、ＤＺＰ（２ｍｇ／ｋｇ）、ＢＥＥ（５００ｍｇ／ｋｇ）をペントバルビタール投与（ｈｙｐｎｏｔｉｃ  ｄｏｓａｇｅ４５ｍｇ／ｋｇ）４５分前に経口投与し、ＦＬＵ（８ｍｇ／ｋｇ）は、ＤＺＰ、ＢＥＥ経口投与１０分前にあらかじめ腹腔注射した。＊は、対照区と比較して、ｐ＜０．０５で、＊＊は、対照群と比較して、ｐ＜０．０１で有意差があること（Ｄｕｎｎｅｔ'ｓ  ｔｅｓｔ）を意味する。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明で、“効能剤”は、他の説明がない限り、ヒスタミン受容体、すなわち、Ｈ１受容体、Ｈ２受容体、Ｈ３受容体及びＨ４受容体と相互作用して、ヒスタミン受容体を活性化させ、前記受容体の生理学または薬理学的反応特性を開始する物質であり、“拮抗剤”は、効能剤と同じ部位で受容体に競争的に結合するが、受容体の活性形態によって開始される細胞内反応を活性化させず、これによって効能剤による細胞内反応を抑制することができる物質を意味する。
【００１４】
本発明者は、ヒスタミン受容体拮抗剤として、アレルギー性鼻炎；炎症性腸疾患；喘息；気管支炎；嘔吐；胃及び十二指腸潰瘍；胃食道逆流；睡眠障害；不安；及びうつ病の予防または治療に効果が高い天然組成物を製造するために努力した。その結果、米ぬかが、ヒスタミン受容体拮抗剤として作用し、特に、睡眠障害、不安またはうつ病の予防または治療効能があるということを解明することによって、本発明を完成した。
【００１５】
本発明は、米、米ぬか、または籾殻の抽出物のヒスタミン受容体拮抗剤としての新規用途、米、米ぬか、または籾殻の抽出物を有効成分として含むアレルギー性鼻炎；炎症性腸疾患；喘息；気管支炎；嘔吐；胃及び十二指腸潰瘍；胃食道逆流；睡眠障害；不安；及びうつ病の予防または治療用薬剤学的組成物、治療上有効量の米ぬか抽出物、または米ぬか粉末を対象体に投与することを含むアレルギー性鼻炎；炎症性腸疾患；喘息；気管支炎；嘔吐；胃及び十二指腸潰瘍；胃食道逆流；睡眠障害；不安；及びうつ病の予防または治療方法を提供する。
【００１６】
本発明において、睡眠障害の改善、予防または治療とは、入眠潜時の減少、睡眠持続時間の増加、またはノンレム睡眠の増加を意味する。
【００１７】
下記の実施例では、米、米ぬか、または籾殻の抽出物が、従来に、睡眠剤、抗不安剤、または抗うつ剤として使われている医薬であるジアゼパムと比較して、ほぼ同じレベル、または向上した入眠潜時の減少及び睡眠持続時間の増加の効果を表わし、ノンレム睡眠時間を増加させることを示す。また、従来のヒスタミン受容体拮抗剤として知られたピリラミンマレイン酸塩（ｐｙｒｉｌａｍｉｍｅ  ｍａｌｅａｔｅ  ｓａｌｔ）の睡眠効果が、ヒスタミン受容体効能剤である２−ピリジルエチルアミン二塩酸塩（２−ｐｙｒｉｄｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ  ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）によって完全に抑制されると同様のメカニズムで、米、米ぬか、または籾殻の抽出物の睡眠効果が抑制されて、天然の抗ヒスタミン剤として作用する。したがって、米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、ヒスタミン受容体拮抗剤として、アレルギー性鼻炎；炎症性腸疾患；喘息；気管支炎；嘔吐；胃及び十二指腸潰瘍；胃食道逆流；睡眠障害；不安；及びうつ病の予防または治療用組成物の有効成分として使われ、特に、睡眠障害、不安またはうつ病の予防または治療用組成物として有用である。従来の睡眠剤とは異なって、米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、食品として承認されている人体に無害な成分であって、副作用がないだけではなく、入眠誘導効果及び睡眠延長効果に優れるので、睡眠障害、不安またはうつ病の予防または治療のために有用に使われる。本発明の実施例では、不安やうつ病に対する実験は別途に行わなかったが、例えば、ジアゼパムのように、睡眠障害の改善、予防または治療のために使われる成分は、投与容量を変更することによって、不安やうつ病の改善、予防または治療のために使われうるということは、当業者によく知られている。
【００１８】
本発明において、前記米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、米ぬかの水、有機溶媒、またはこれらの混合物を抽出溶媒として用いて抽出されたものであり得る。この際、使われる有機溶媒の種類や水と有機溶媒との混合比率は、特に制限されるものではない。
【００１９】
例えば、前記有機溶媒は、低級アルコール、ヘキサン、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、及びジエチルエーテルからなる群から選択された１種以上の溶媒であり得る。前記低級アルコールは、炭素数１ないし６のアルコールであり得る。例えば、低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ノルマルプロパノール、イソプロパノール、ノルマルブタノール、１−ペンタノール、２−ブトキシエタノール、またはエチレングリコールなどを利用できる。有機溶媒は、それ以外にも、酢酸、ＤＭＦＯ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ−ｆｏｒｍａｍｉｄｅ）、ＤＭＳＯ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）などの極性溶媒、アセトニトリル、酢酸エチル、酢酸メチル、フルオロアルカン、ペンタン、２，２，４−トリメチルペンタン、デカン、シクロヘキサン、シクロペンタン、ジイソブチレン、１−ペンテン、１−クロロブタン、１−クロロペンタン、ｏ−キシレン、ジイソプロピルエーテル、２−クロロプロパン、トルエン、１−クロロプロパン、クロロベンゼン、ベンゼン、ジエチルエーテル、硫酸ジエチル、クロロホルム、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、アニリン、ジエチルアミン、エーテル、四塩化炭素及びＴＨＦ（Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ）などの非極性溶媒を使うこともある。
【００２０】
下記の実施例で確認できるように、米、米ぬか、または籾殻を有機溶媒で抽出する場合、米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、上澄み液と下澄み液とに分離されるが、上澄み液は、米ぬか抽出物のオイル分画であり、下澄み液は、一般的な溶媒抽出物に該当する。下澄み液を再び遠心分離または濾過紙を通じて分離すると、液相と固相の残渣に分けられ、この際の残渣は、米、米ぬか、または籾殻の抽出物のワックス分画である。したがって、本発明の米、米ぬか、または籾殻抽出物は、米、米ぬか、または籾殻の抽出物のオイル分画、米ぬか抽出物の液相分画、米ぬか抽出物のワックス分画をいずれも含む概念として解釈される。一具体例で、前記米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、米、米ぬか、または籾殻の抽出物のオイル分画、米、米ぬか、または籾殻の抽出物の液相分画、及び米、米ぬか、または籾殻の抽出物のワックス分画からなる群から選択された何れか１つ以上を含みうる。
【００２１】
一具体例で、前記米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、米ぬかの低級アルコール抽出物であり、望ましくは、米、米ぬか、または籾殻のエタノール抽出物であり得る。
【００２２】
一具体例で、前記米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、米、米ぬか、または籾殻のヘキサン抽出物であり得る。米、米ぬか、または籾殻のヘキサン抽出物は、一般的に‘米ぬか油（ｒｉｃｅ  ｂｒａｎ  ｏｉｌ）’として利用されている。したがって、本発明の一具体例で、前記米ぬか抽出物は、米ぬか油であり得る。本明細書で使われる用語‘抽出物’は、抽出物を追加的に分画（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ）した分画物も含む。すなわち、米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、前述した抽出溶媒を用いて得たものだけではなく、さらに精製過程を追加的に適用して得たものも含む。また、前記抽出物や分画物を一定の分子量カットオフ値を有する限外濾過膜を通過させて得た分画、多様なクロマトグラフィー（サイス、電荷、疎水性または親和性による分離のために製作されたもの）による分離など、追加的に実施された多様な精製方法を通じて得られた分画も、本発明の米、米ぬか、または籾殻の抽出物に含まれる。
【００２３】
一具体例で、前記米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、米ぬかの有機溶媒抽出物を第２の有機溶媒に再分画した分画物であり得る。ここで、米、米ぬか、または籾殻の有機溶媒抽出物とは、広義としては、前述した米、米ぬか、または籾殻の抽出物のオイル分画、米、米ぬか、または籾殻の抽出物の液相分画、米、米ぬか、または籾殻の抽出物のワックス分画をいずれも含み、狭義としては、そのうち、米、米ぬか、または籾殻の抽出物の液相分画を意味する。したがって、一具体例で、前記米、米ぬか、または籾殻の有機抽出物を第２の有機溶媒に再分画した分画物は、米ぬかの抽出物の液相分画を第２の有機溶媒に再分画した分画物を意味する。他の具体例で、前記米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、米、米ぬか、または籾殻の低級アルコール抽出物を第２の有機溶媒に再分画した分画物であり得る。さらに他の具体例で、前記米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、米、米ぬか、または籾殻のエタノール抽出物をヘキサンに再分画した分画物であり得る。下記の実施例で説明するように、このような米、米ぬか、または籾殻の脂溶性成分が多量含有されている米、米ぬか、または籾殻の抽出物の分画物は、非常に優れる入眠誘導及び睡眠延長効果を表わす。
【００２４】
本明細書で、米、米ぬか、または籾殻を言及しながら使われる用語‘抽出物’は、米ぬかに抽出溶媒を処理して得た粗抽出物だけではなく、米、米ぬか、または籾殻の抽出物の加工物も含む。例えば、米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、減圧蒸留及び凍結乾燥または噴霧乾燥のような追加的な過程によって粉末状態で製造可能である。
【００２５】
また、本発明の米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、広義としては、米、米ぬか、または籾殻自体を動物に投与できるように、剤型化された米、米ぬか、または籾殻加工物、例えば、米ぬか、または籾殻粉末も含む意味を有する。たとえ本発明で、米、米ぬか、または籾殻の抽出物で実験を進行したが、米、米ぬか、または籾殻加工物のような形態でも、目的する効果を果たすことができるということは、当業者ならば予想可能である。
【００２６】
一方、本明細書で、用語‘有効成分として含む’とは、米、米ぬか、または籾殻の抽出物の効能、または活性を果たすのに十分な量を含むことを意味する。本発明の一具体例で、本発明の組成物内で米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、例えば、０．００１ｍｇ／ｋｇ以上、望ましくは、０．１ｍｇ／ｋｇ以上、より望ましくは、１０ｍｇ／ｋｇ以上、さらに望ましくは、１００ｍｇ／ｋｇ以上、さらに望ましくは、２５０ｍｇ／ｋｇ以上、最も望ましくは、０．１ｇ／ｋｇ以上含まれる。米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、天然物であって、過量投与しても、人体に副作用がないので、本発明の組成物内に含まれる米、米ぬか、または籾殻の抽出物の量的上限は、当業者が適切な範囲内で選択して実施することができる。
【００２７】
本発明の薬剤学的組成物は、前記有効成分以外に薬剤学的に適し、生理学的に許容される補助剤を使って製造可能であり、前記補助剤としては、賦形剤、崩解剤、甘味剤、結合剤、被覆剤、膨張剤、潤滑剤、滑沢剤、または香味剤などを使うことができる。
【００２８】
前記薬剤学的組成物は、投与のために、前記記載の有効成分以外に、さらに薬剤学的に許容可能な担体を１種以上含んで薬剤学的組成物で望ましく製剤化することができる。
【００２９】
前記薬剤学的組成物の製剤形態は、顆粒剤、散剤、錠剤、被覆錠、カプセル剤、座剤、液剤、シロップ、汁、懸濁剤、乳剤、点滴剤、または注射可能な液剤などになりうる。例えば、錠剤またはカプセル剤の形態への製剤化のために、有効成分は、エタノール、グリセロール、水のような経口、無毒性の薬剤学的に許容可能な不活性担体と結合されうる。また、所望するか、必要な場合、適した結合剤、潤滑剤、崩解剤及び発色剤も混合物で含まれうる。適した結合剤は、これに制限されるものではないが、澱粉、ゼラチン、グルコース、またはβ−ラクトースのような天然糖、トウモロコシ甘味剤、アカシア、トラガント、またはオレイン酸ナトリウムのような天然及び合成ガム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどを含む。崩解剤は、これに制限されるものではないが、澱粉、メチルセルロース、アガ、ベントナイト、ザンタンガムなどを含む。
【００３０】
液相溶液で製剤化される組成物において、許容可能な薬剤学的担体としては、滅菌及び生体に適したものであって、食塩水、滅菌水、リンゲル液、緩衝食塩水、アルブミン注射溶液、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール、エタノール及びこれら成分のうち、１成分以上を混合して使い、必要に応じて、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤など他の通常の添加剤を添加することができる。また、希釈剤、分散剤、界面活性剤、結合剤及び潤滑剤を付加的に添加して、水溶液、懸濁液、乳濁液のような注射用剤型、丸薬、カプセル、顆粒または錠剤で製剤化することができる。
【００３１】
さらに、当該分野の適切な方法で、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ  ＰＡに開示されている方法を用いて、各疾患によって、または成分によって、望ましく製剤化することができる。
【００３２】
本発明の薬剤学的組成物は、経口または非経口投与し、非経口投与である場合には、静脈内注入、皮下注入、筋肉注入、腹腔注入、経皮投与などで投与し、望ましくは、経口投与である。
【００３３】
本発明の薬剤学的組成物の適した投与量は、製剤化方法、投与方式、患者の年齢、体重、性、病的状態、食べ物、投与時間、投与経路、排泄速度及び反応感応性のような要因によって多様であり、通常熟練された医師は、所望する治療または予防に効果的な投与量を容易に決定及び処方することができる。本発明の望ましい具現例によれば、本発明の薬剤学的組成物の１日投与量は、０．００１−１０ｇ／ｋｇである。
【００３４】
本発明の薬剤学的組成物は、当業者が容易に実施することができる方法によって、薬剤学的に許容される担体及び／または賦形剤を用いて製剤化することによって、単位容量形態で製造されるか、または多容量容器内に内入させて製造可能である。この際、剤型は、オイルまたは水性媒質中の溶液、懸濁液または乳液形態であるか、エクストラクト剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤形態でもあり、分散剤または安定化剤を追加的に含みうる。
【００３５】
本発明は、また、米、米ぬか、または籾殻の抽出物を有効成分として含む睡眠障害、不安またはうつ病の予防または改善用食品組成物を提供する。
【００３６】
本発明による食品組成物は、前記薬剤学的組成物と同じ方式で製剤化されて機能性食品として利用するか、各種食品に添加することができる。本発明の組成物を添加することができる食品としては、例えば、飲料類、アルコール飲料類、菓子類、ダイエットバー、乳製品、肉類、チョコレート、ピザ、ラーメン、その他の麺類、ガム類、アイスクリーム類、ビタミン複合剤、健康補助食品類などがある。
【００３７】
本発明の食品組成物は、有効成分として米ぬか抽出物、または米ぬか粉末だけではなく、食品製造時に通常添加される成分を含み、例えば、タンパク質、炭水化物、脂肪、栄養素、調味剤及び香味剤を含む。前述した炭水化物の例は、モノサッカライド、例えば、ブドウ糖、果糖など；ジサッカライド、例えば、マルトース、スクロース、オリゴ糖など；及びポリサッカライド、例えば、デキストリン、シクロデキストリンのような通常の糖、及びキシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールである。香味剤として、天然香味剤［タウマチン、ステビア抽出物（例えば、レバウディオサイドＡ、グリチルリチンなど］）及び合成香味剤（サッカリン、アスパルテームなど）を使うことができる。例えば、本発明の食品組成物が、ドリンク剤と飲料類として製造される場合には、本発明の米、米ぬか、または籾殻の抽出物以外に、クエン酸、液相果糖、砂糖、ブドウ糖、酢酸、リンゴ酸、果汁、及び各種植物抽出液などをさらに含ませることができる。
【００３８】
本発明は、前記米、米ぬか、または籾殻の抽出物を有効成分として含む睡眠障害、不安またはうつ病の予防または改善用食品組成物を含む健康機能食品を提供する。健康機能食品とは、米ぬか抽出物、または米ぬか粉末を飲料、茶類、香辛料、ガム、菓子類などの食品素材に添加するか、カプセル化、粉末化、懸濁液などで製造した食品であって、これを摂取する場合、健康上特定の効果をもたらすことを意味するが、一般薬品とは異なって、食品を原料として薬品の長期服用時に発生する副作用などがない長所がある。このようにして得られる本発明の健康機能食品は、日常的に摂取することが可能であるために、非常に有用である。このような健康機能食品における米ぬか抽出物、または米ぬか粉末の添加量は、対象である健康機能食品の種類によって異なって、一律的に規定することができないが、食品本来の味を損傷させない範囲で添加すれば良く、対象食品に対して、通常０．０１ないし５０重量％、望ましくは、０．１ないし２０重量％の範囲である。また、丸剤、顆粒剤、錠剤、またはカプセル剤形態の健康機能食品の場合には、通常０．１ないし１００重量％、望ましくは、０．５ないし８０重量％の範囲で添加すれば良い。一具体例で、本発明の健康機能食品は、丸剤、錠剤、カプセル剤、または飲料の形態であり得る。
【００３９】
本発明は、また、睡眠障害、不安またはうつ病の予防、治療または改善用医薬、または食品の製造のための米、米ぬか、または籾殻の抽出物の用途を提供する。前述したように、米ぬか抽出物、または米ぬか粉末は、睡眠障害、不安またはうつ病の予防、治療または改善のための用途として利用されうる。
【００４０】
また、本発明は、哺乳動物に有効量の米、米ぬか、または籾殻の抽出物を投与することを含む睡眠障害、不安またはうつ病の予防、治療または改善方法を提供する。
【００４１】
ここで使われた用語“哺乳動物”は、治療、観察または実験の対象である哺乳動物を言い、望ましくは、人間を言う。
【００４２】
ここで使われた用語“有効量”は、研究者、獣医師、医師、またはその他の臨床医によって思われる組職系、動物または人間で生物学的、または医学的反応を誘導する有効成分、または薬学的組成物の量を意味するものであって、これは、当該疾患または障害の症状の緩和を誘導する量を含む。本発明の有効成分に対する有効量及び投与回数は、所望の効果によって変化されることは、当業者に自明である。したがって、投与される最適の投与量は、当業者によって容易に決定され、疾患の種類、疾患の重症度、組成物に含有された有効成分及び他の成分の含量、剤型の種類、及び患者の年齢、体重、一般健康状態、性別及び食餌、投与時間、投与経路及び組成物の分泌率、治療期間、同時使われる薬物を含めた多様な因子によって調節される。本発明の予防、治療または改善方法において、成人の場合、米、米ぬか、または籾殻の抽出物を１日１回ないし数回投与時に、０．００１ｍｇ／ｋｇないし１０ｇ／ｋｇの容量で投与することが望ましい。
【００４３】
本発明の治療方法で、米、米ぬか、または籾殻の抽出物を有効成分として含む組成物は、経口、直腸、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、胸骨内、経皮、局所、眼球内、または皮内経路を通じて通常の方式で投与することができる。
【００４４】
本発明の利点及び特徴、そして、それらを果たす方法は、詳細に後述されている実施例を参照すると、明確になる。しかし、本発明は、以下で開示される実施例に限定されるものではなく、互いに異なる多様な形態で具現でき、単に本実施例は、本発明の開示を完全にし、当業者に発明の範囲を十分に理解させるために提供されるものであり、本発明は、特許請求の範囲によって定義されるだけである。
【実施例】
【００４５】
『実験方法』
［実験動物］
ＩＣＲマウス（１８−２２ｇ、雄性）及びＳＤラット（２００−２５０ｇ、雄性）は、それぞれ（株）コアテック及び（株）オリエントバイオから分譲されて実験動物用飼育箱に一週間適応させた後、実験に使った。動物の飼育は、温度２３±１℃、湿度５５±５％、明暗周期（明：午前９時−午後９時）、照度３０００Ｌｕｘの条件下になされ、飼料及び飲水は、自由に与えた。あらゆる動物は、韓国食品研究院動物管理委員会（ＫＦＲＩ−ＩＡＣＵＣ、Ｋｏｒｅａ  Ｆｏｏｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌＡｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）の実験動物使用指針によって管理した。
【００４６】
［ペントバルビタール睡眠誘導実験（Ｐｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｌｅｅｐ  ｔｅｓｔ）］
ペントバルビタール睡眠誘導実験は、午後１時から５時の間の一定の時間内に進行し、グループ当たり、１０匹（ｎ＝１０）のマウスを実験前２４時間絶食させた後に使った。あらゆる試料は、０．５％ＣＭＣ−食塩水溶液を用いて製造し、ペントバルビタール投与４５分前にマウスに経口投与（ｐ．ｏ．）した。一般対照群／実験群は、０．５％ＣＭＣ−食塩水水溶液を１０ｍｇ／ｋｇの濃度で処理し、ジアゼパムは、代表的な睡眠剤のうち１つであって、抽出物の睡眠増進効果を比較するために、陽性対照群を薬物として使った。ペントバルビタール（（株）翰林製薬）は、実験デザインによって４５ｍｇ／ｋｇ（ｈｙｐｎｏｔｉｃ  ｄｏｓａｇｅ）の濃度で腹腔注射（ｉ．ｐ．）を通じて投与した。ペントバルビタール処理後、それぞれの個体を独立した空間に移して、入眠潜時（ｓｌｅｅｐ  ｌａｔｅｎｃｙ）と睡眠時間（ｓｌｅｅｐ  ｄｕｒａｔｉｏｎ）とを測定した。入眠潜時は、ペントバルビタールを腹腔注射した後、正反射（ｒｉｇｈｔｉｎｇ  ｒｅｆｌｅｘ）を１分以上喪失する時までの経過時間で設定し、睡眠時間は、再び正反射を回復する時までの時間で設定した。ペントバルビタール投与後、１０分が経ても睡眠行動を見せていないマウスは、実験から除外した。
【００４７】
［睡眠構造分析］
ＳＤラット（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ  Ｒａｔ、２００−２５０ｇ）を１週間適応させた後、脳波（Ｅｌｅｃｔｒｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｇｒａｍ、ＥＥＧ）及び筋電図度（Ｅｌｅｃｔｒｏｍｙｏｇｒａｍ、ＥＭＧ）の測定のために、電極挿入手術を実施した。ラットをペントバルビタール（５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）で麻酔し、脳定位器（ｓｔｅｒｅｏｔａｘｉｃ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）に頭部を固定させた。頭部皮下結合組織を切開した後、ＥＥＧ及びＥＭＧの測定のために、ステンレススチールスクリュー（ｓｔａｉｎｌｅｓｓ−ｓｔｅｅｌ  ｓｃｒｅｗ）と銀電極ライン（ｓｉｌｖｅｒ  ｅｌｅｃｔｒｏｄｅ  ｌｉｎｅ）とを挿入した。以後、歯科用セメントで固定させて縫合した。手術部位の消毒及び抗生剤投与を３日間実施して、手術による炎症を予防し、７日間回復期間を置いた。測定環境に適応させるために、測定４日前から対照群に使う０．５％ＣＭＣ−食塩水溶液を経口投与（ｐ．ｏ．）した後、レコーディング装置を連結して、本実験過程に順応するように誘導した。試料経口投与後、５分間安定化させた後、ＰＡＬ−８２００ｓｅｒｉｅｓ（Ｐｉｎｎａｃｌｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ，Ｏｒｅｇｏｎ，ＵＳＡ）を用いて、１０：００から１６：００まで６時間脳電図［ｅｌｅｃｔｒｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｇｒａｍ（ＥＥＧ）］及び筋電図［ｅｌｅｃｔｒｏｍｙｏｇｒａｍ（ＥＭＧ）］を測定した。ＥＥＧ及びＥＭＧのサンプリングレート（Ｓａｍｐｌｉｎｇ  Ｒａｔｅ）は、２００Ｈｚに設定し（ｅｐｏｃｈ  ｔｉｍｅ：１０ｓ）、ＥＥＧは、０．１−２５Ｈｚ、ＥＭＧは、１０−１００Ｈｚのフィルター領域を設定してデータを記録した。睡眠構造分析は、ＦＦＴ（Ｆａｓｔ  Ｆｏｕｒｉｅｒ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍ）アルゴリズムによって行い、ＳｌｅｅｐＳｉｇｎプログラム（Ｖｅｒ．３．０，Ｋｉｓｓｅｉ  Ｃｏｍｔｅｃ，Ｎａｇｏｎｏ，Ｊａｐａｎ）を利用した。分析結果は、覚醒（ｗａｋｅ）、レム睡眠（ＲＥＭ  ｓｌｅｅｐ、ｒａｐｉｄ  ｅｙｅ  ｍｏｖｅｍｅｎｔ、ｔｈｅｔａ  ｂａｎｄ：６−１０Ｈｚ）、ノンレム睡眠（ＮＲＥＭ  ｓｌｅｅｐ、ｎｏｎ−ｒａｐｉｄ  ｅｙｅ  ｍｏｖｅｍｅｎｔ、ｄｅｌｔａ  ｂａｎｄ：０．６５−４Ｈｚ）に区分して表わした。入眠潜時は、１０秒ｅｐｏｃｈ単位のノンレム睡眠が１２回以上連続して表われるのにかかる時間として設定した。
【００４８】
［製造例１：米抽出物の製造］
米の水抽出物（ＲＷＥ）は、粉砕試料１００ｇに蒸留水１Ｌを入れて１時間１００℃で加熱して製造し、米のエタノール抽出物（ＲＥＥ）は、粉砕試料に７０％エタノールを１０倍（ｗ／ｖ）加えて、５０℃インキュベーターで１日間抽出して製造し、一日に９０分間３回ずつ超音波処理した。あらゆる抽出物は、濾過及び減圧濃縮を経て凍結乾燥した後、粉末化して実験に使った。
【００４９】
米の水抽出物（ＲＷＥ）の収率は、１．１６重量％であり、米のエタノール抽出物（ＲＥＥ）の収率は、０．１９重量％で表われた。
【００５０】
［製造例２：籾殻抽出物の製造］
籾殻の水抽出物（ＨＷＥ）は、粉砕試料１００ｇに蒸留水１Ｌを入れて１時間１００℃で加熱して製造し、籾殻のエタノール抽出物（ＨＥＥ）は、粉砕試料に７０％エタノールを１０倍（ｗ／ｖ）加えて、５０℃インキュベーターで１日間抽出して製造し、一日に９０分間３回ずつ超音波処理した。あらゆる抽出物は、濾過及び減圧濃縮を経て凍結乾燥した後、粉末化して実験に使った。
【００５１】
籾殻の水抽出物（ＨＷＥ）の収率は、５％、籾殻のエタノール抽出物（ＨＥＥ）の収率は、０．９６％で表われた。
【００５２】
［製造例３：米ぬか抽出物の製造］
米ぬかの水抽出物（ＢＷＥ）は、粉砕試料１００ｇに蒸留水１Ｌを入れて１時間１００℃で加熱して製造し、米ぬかのエタノール抽出物（ＢＥＥ）は、粉砕試料に７０％エタノールを１０倍（ｗ／ｖ）加えて、５０℃インキュベーターで１日間抽出して製造した。あらゆる抽出物は、濾過及び減圧濃縮を経て凍結乾燥した後、粉末化して実験に使った。米ぬかの水抽出物（ＢＷＥ）の収率は、５．５６％、米ぬかのエタノール抽出物（ＢＥＥ）の収率は、７．０２％で表われた。
【００５３】
ＢＥＥは、抽出過程で油脂成分が多くて、ＢＥＥ以外に別途に２種の分画物をさらに確認できたが、これをＢＥＥ−ＷａｘとＢＥＥ−Ｏｉｌと名付けた。具体的に説明すれば、米ぬかのエタノール抽出物（ＢＥＥ）は、製造過程のうち、３種に区分された。最初の米ぬか抽出物は、上澄み液と下澄み液とに区分されるが、上澄み液は、米ぬか抽出物のオイル分画（ＢＥＥ−Ｏｉｌ）であり、下澄み液は、一般エタノール抽出物に該当する。下澄み液を再び遠心分離または濾過紙を通じて分離すると、液相（米ぬか抽出物の液相分画）と固相の残渣に分けられ、この際の残渣は、米ぬか抽出物のワックス分画（ＢＥＥ−Ｗａｘ）に該当する。
【００５４】
［実験例１：米抽出物を利用したペントバルビタール睡眠誘導実験］
製造例１の米の水抽出物（ＲＷＥ）及びエタノール抽出物（ＲＥＥ）を５０、１００、２５０及び５００ｍｇ／ｋｇの濃度で経口投与（ｐ．ｏ．）した後、ペントバルビタール（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）による睡眠誘導効果を分析した。その結果、図１及び図２から見られるように、米の水抽出物（ＲＷＥ）では、５０ｍｇ／ｋｇを除いた濃度で用量依存的な入眠潜時の減少と睡眠持続時間の増加（ｐ＜０．０１）とが表われた。また、図３及び図４から見られるように、米のエタノール抽出物（ＲＥＥ）でも、５０ｍｇ／ｋｇを除いた濃度で用量依存的な入眠潜時の減少と睡眠持続時間の増加とが表われた。米の水抽出物（ＲＷＥ）よりも米のエタノール抽出物（ＲＥＥ）で睡眠持続時間の増加が大きく表われ、入眠潜時は、米の水抽出物（ＲＷＥ）と米のエタノール抽出物（ＲＥＥ）いずれも類似して減少する傾向を表わした。
【００５５】
［実験例２：籾殻抽出物を利用したペントバルビタール睡眠誘導実験］
製造例２の籾殻の水抽出物（ＨＷＥ）及びエタノール抽出物（ＨＥＥ）を５０、１００、２５０及び５００ｍｇ／ｋｇの濃度で経口投与（ｐ．ｏ．）した後、ペントバルビタール（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）による睡眠誘導効果を分析した。その結果、図５及び図６から見られるように、籾殻の水抽出物（ＨＷＥ）では、有意的に入眠潜時の減少が表われ、２５０と５００ｍｇ／ｋｇの濃度で有意的に睡眠持続時間が有意的に増加した（ｐ＜０．０１）。また、図７及び図８から見られるように、籾殻のエタノール抽出物（ＨＥＥ）では、５０ｍｇ／ｋｇを除いた濃度で留意した入眠潜時の減少（ｐ＜０．０１）が表われ、用量依存的な睡眠持続時間の増加が表われた（ｐ＜０．０１）。籾殻の水抽出物（ＨＷＥ）よりも籾殻のエタノール抽出物（ＨＥＥ）で睡眠持続時間の増加が大きく表われ、入眠潜時は、籾殻の水抽出物（ＨＷＥ）と籾殻のエタノール抽出物（ＨＥＥ）いずれも類似して減少する傾向を表わした。
【００５６】
［実験例３：米ぬか抽出物を利用したペントバルビタール睡眠誘導実験］
製造例３の米ぬか（ＢＥ）の水抽出物（ＢＷＥ）及びエタノール抽出物（ＢＥＥ）を５０、１００、２５０及び５００ｍｇ／ｋｇの濃度で経口投与（ｐ．ｏ．）した後、ペントバルビタール（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）による睡眠誘導効果を分析した。その結果、ＢＷＥで入眠潜時がいずれも有意的に減少（ｐ＜０．０１）し（図９）、陽性対照群であるＤＺＰよりも減少した入眠潜時を確認することができた。また、ＢＷＥで５０ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ／ｋｇを除いた２５０ｍｇ／ｋｇ及び５００ｍｇ／ｋｇの濃度で用量依存的な睡眠時間の増加が表われた（図１０）。ＢＥＥでは、ＢＷＥと同様に、ＤＺＰよりも減少した入眠潜時（図１１）と２５０ｍｇ／ｋｇ及び５００ｍｇ／ｋｇの濃度で用量依存的な睡眠時間との増加を示した（図１２）。睡眠誘導物質ＢＥは、水とエタノール抽出物との差なしに有意的に減少した入眠潜時と２５０ｍｇ／ｋｇと５００ｍｇ／ｋｇとで有意的に増加した睡眠時間とを示した。
【００５７】
また、ＢＥＥ−ＷａｘとＢＥＥ−Ｏｉｌとの睡眠誘導増進効果を確認するために、ＢＥＥ−Ｗａｘを５０、１００、２５０及び５００ｍｇ／ｋｇの濃度で、ＢＥＥ−Ｏｉｌを５００及び１，０００ｍｇ／ｋｇの濃度で経口投与（ｐ．ｏ．）した後、ペントバルビタール（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を腹腔注射して、入眠潜時と睡眠時間との変化を測定した。実験結果、ＢＥＥ−Ｗａｘで驚くべき結果を確認することができた。用量依存的な入眠潜時の減少（ｐ＜０．０１）（図１３）と睡眠時間の増加（ｐ＜０．０１）（図１４）とを表わし、ＢＥＥよりも減少した入眠潜時と増加した睡眠時間とを示した。また、ＢＥＥ−Ｏｉｌ１，０００ｍｇ／ｋｇの濃度でも、有意的な入眠潜時の減少（ｐ＜０．０１）（図１５）と睡眠時間の増加（ｐ＜０．０１）（図１６）とを表わした。ＢＥＥとＢＥＥ−Ｗａｘよりは睡眠誘導効果が大きくはないが、ＢＥＥ−Ｏｉｌでも、睡眠増進効果を確認することができ、ＢＥＥ−Ｗａｘは、今後波及効果が非常に大きいと期待される。
【００５８】
［実験例４：米ぬか抽出物を利用した睡眠構造分析］
ＢＥＥ５００ｍｇ／ｋｇを経口投与後、入眠潜時と総睡眠時間とを図１７に表わした。対照群の平均入眠潜時は、３１．９分であり、ＢＥＥの入眠潜時は、２６．２分で約５．７分程度短縮された。総睡眠時間では、対照群が１６５．４分であり、ＢＥＥ５００ｍｇ／ｋｇを経口投与した時、２４８．６分で約８３分が増加した。
【００５９】
ＳＤラットの覚醒、レム及びノンレム時間を分析して、図１８に表わした。ＢＥＥ投与群でノンレムが増加しながら、相対的に覚醒が減少し、対照群のノンレムが１５３．８分であり、ＢＥＥ５００ｍｇ／ｋｇのノンレムが、２３４．８分で約８１分増加し、総睡眠時間の増加量のほとんどは、ノンレムであると表われた。
【００６０】
ＢＥＥ５００ｍｇ／ｋｇを経口投与した後、ラットの脳波を測定する間に、毎時間別覚醒、ノンレム及びレムの比率を図１９に表わした。経口投与後、３時間の間にノンレムが大きく増加し、以後若干減少してから、再び増加する傾向が表われた。これは、最初に３時間の間にＢＥＥが消化されながら睡眠を誘導し、全般的にあらゆる時間でノンレムの比率が対照群よりも大きく表われたものと見て、睡眠効果が６時間の間に持続的に起こったことが分かった。ＢＥＥは、睡眠誘導時間が大きく短くならなかったが、総睡眠時間が長くなりながら睡眠の持続性を増加させたと判断される。
【００６１】
［製造例４：米ぬかのエタノール抽出物の溶媒分画の製造］
油脂成分が多いＢＥＥを用いて、さらに正確な単一睡眠誘導物質を得るために、ＢＥＥ（製造例３の米ぬかのエタノール抽出物の液相分画）をヘキサン、ブタノール、水及び酢酸エチルの４種の溶媒を用いて分離精製した（図２０）。
【００６２】
米ぬかのエタノール抽出物（ＢＥＥ）２００ｋｇを６０％酒精ＥｔＯＨ水溶液に４３時間含浸して５０℃で抽出した。抽出物を濾過し、残余物を同じ方法で３回さらに抽出した。得られた濾液をいずれも合わせ減圧濃縮してＥｔＯＨ抽出物水溶液２０Ｌを得て、該得られたＥｔＯＨ抽出物に７ＬのＨ２Ｏを加えた後、ｎ−ヘキサン（２７Ｌ×２）／Ｈ２Ｏ（２７Ｌ）で分配抽出し、Ｈ２Ｏ分画を再びＥｔＯＡｃ（２７Ｌ×２）で分配抽出後、Ｈ２Ｏ分画を再びｎ−ＢｕＯＨ（２５Ｌ×２）で分配抽出した。各層を減圧濃縮して、ｎ−ヘキサン分画（ＢＥＥ−Ｈ、２１７６ｇ）、ＥｔＯＡｃ分画（ＢＥＥ−Ｅ、１４５８ｇ）とｎ−ＢｕＯＨ分画（ＢＥＥ−Ｂ、１２２３ｇ）及びＨ２Ｏ分画（ＢＥＥ−Ｗ、６．７４ｋｇ）とを得た（図２０）。
【００６３】
［実験例５：米ぬかのエタノール抽出物の溶媒分画のペントバルビタール睡眠誘導実験］
ＢＥＥ−Ｈ（ヘキサン）、ＢＥＥ−Ｂ（ブタノール）、ＢＥＥ−Ｗ（水）及びＢＥＥ−Ｅ（酢酸エチル）の睡眠誘導増進効果を確認するために、５０ｍｇ／ｋｇ及び２５０ｍｇ／ｋｇの量で経口投与（ｐ．ｏ．）した後、ペントバルビタール（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を腹腔注射して、入眠潜時と睡眠時間との変化を調べた（図２１及び図２２）。
【００６４】
実験結果、ＢＥＥ−Ｅ（酢酸エチル）では、有意的な入眠潜時の減少が表われたが、睡眠時間の増加は表われなくて、睡眠誘導増進効果がないと確認された。ＢＥＥ−Ｗ（水）では、２５０ｍｇ／ｋｇの濃度で有意的な入眠潜時の減少（ｐ＜０．０１）と睡眠時間の増加（ｐ＜０．０１）とを示したが、ＢＥＥ−Ｈ（ヘキサン）とＢＥＥ−Ｂ（ブタノール）よりは効果が低く表われた。ＢＥＥ−Ｈ（ヘキサン）とＢＥＥ−Ｂ（ブタノール）では、有意的な入眠潜時の減少（ｐ＜０．０１）と濃度依存的な睡眠時間の増加（ｐ＜０．０１）とが表われ、ＢＥＥ−Ｂ（ブタノール）よりはＢＥＥ−Ｈ（ヘキサン）で睡眠誘導増進効果が多いと確認された。最終的に、ＢＥＥ−Ｈ（ヘキサン）を用いて、さらに細部的な分離精製を進行した。
【００６５】
［製造例５：米ぬかのエタノール抽出物のヘキサン分画のサブ分画の製造］
米ぬかのエタノール抽出物（ＢＥＥ）の溶媒分画物のｉｎ  ｖｉｖｏ実験結果、他の分画物に比べて、ｎ−ヘキサン分画の活性が有意的に優れているために、ｎ−ヘキサン分画のサブ分画を製造した。ｎ−ヘキサン分画（ＢＥＥ−Ｈ、２１７６ｇ）のうち、３６５ｇに対して、ＳｉＯ２カラムクロマトグラフィー（以下、ｃ．ｃ．）を進行したが、この際、カラムは、直径１３ｃｍに高さ１５ｃｍでシリカゲルレジンを充填した。溶出溶媒は、ｎ−ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝１０：１の非極性溶媒から次第に極性を高めて、ｎ−ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝７：１→２：１の比率で使い、その結果、総１２つのサブ分画（ＢＥＥ−Ｈ−１〜ＢＥＥ−Ｈ−１２）を得た（図２３参照）。
【００６６】
［実験例６：ＢＥＥ−Ｈ分画のサブ分画に対するペントバルビタール睡眠誘導実験］
ＢＥＥ−Ｈ分画のサブ分画であるＢＥＥ−Ｈ−１ないしＢＥＥ−Ｈ−１１の睡眠誘導増進効果を確認するために、５０ｍｇ／ｋｇ及び２５０ｍｇ／ｋｇの濃度で経口投与（ｐ．ｏ．）した後、ペントバルビタール（４５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を腹腔注射して、入眠潜時と睡眠時間との変化を調べた。
【００６７】
実験結果、図２４及び図２５から見られるように、５０ｍｇ／ｋｇの濃度では、ＢＥＥ−ヘキサン抽出物２画分でのみ有意的な睡眠時間の増加（ｐ＜０．０１）を示し、入眠潜時は、ＢＥＥ−ヘキサン抽出物２、６、１０及び１１画分でのみ有意的な減少（ｐ＜０．０５）が表われた。２５０ｍｇ／ｋｇの濃度では、図２６及び図２７から見られるように、ＢＥＥ−ヘキサン抽出物１、２、４、７、１０及び１１画分で有意的な睡眠時間の増加（ｐ＜０．０１）が表われ、ＢＥＥ−ヘキサン抽出物９及び１０画分を除いたあらゆる画分で有意的な入眠潜時の減少（ｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１）が表われた。１１つ画分のうちからＢＥＥ−ヘキサン抽出物２、１０及び１１の画分で睡眠誘導延長効果が多いということを糾明した。
【００６８】
［製造例６：ＢＥＥ−Ｈのサブ分画から小分画の製造］
（１）ＢＥＥ−Ｈ−２分画
ＢＥＥ−Ｈを小分画した結果、総１２つの分画（ＢＥＥ−Ｈ−１〜ＢＥＥ−Ｈ−１２）を得た。これらに対して、ｉｎ  ｖｉｖｏ活性をテストした結果、ＢＥＥ−Ｈ−２、ＢＥＥ−Ｈ−１０及びＢＥＥ−Ｈ−１１分画物で高い活性結果を表わし、そのうち、ＢＥＥ−Ｈ−２の２次小分画の製造を進行した。ＢＥＥ−Ｈ−２（８．２ｇ）に対して、ＯＤＳ  ｃ．ｃ．（φ４×７ｃｍ、アセトン：Ｈ２Ｏ＝１：１）を実施して、同じ分画は、再び集めて濃縮後、５つの分画（ＢＥＥ−Ｈ−２−１〜ＢＥＥ−Ｈ−２−５）に分け、ＳｉＯ２とＯＤＳ  ＴＬＣとで物質を確認した（図２８）。
（２）ＢＥＥ−Ｈ−１０分画
ＢＥＥ−Ｈを小分画した結果、総１２つの分画（ＢＥＥ−Ｈ−１〜ＢＥＥ−Ｈ−１２）を得た。これらに対して、ｉｎ  ｖｉｖｏ活性をテストした結果、ＢＥＥ−Ｈ−２、ＢＥＥ−Ｈ−１０、ＢＥＥ−Ｈ−１１分画物で高い活性結果を表わし、そのうち、ＢＥＥ−Ｈ−１０の２次小分画の製造を進行した。ＢＥＥ−Ｈ−１０（９．５ｇ）に対して、ＳｉＯ２  ｃ．ｃ．（φ６×１７ｃｍ、ｎ−ｈｅｘａｎｅ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１→６：１→４：１→２：１→１：１→ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ＝８：１→１：１）を実施して、２３つの分画（ＢＥＥ−Ｈ−１０−１〜ＢＥＥ−Ｈ１０−２３）に分け、ＳｉＯ２とＯＤＳ  ＴＬＣとで物質を確認した（図２９参照）。
（３）ＢＥＥ−Ｈ−１１分画
ＢＥＥ−Ｈを小分画した結果、総１２つの分画（ＢＥＥ−Ｈ−１〜ＢＥＥ−Ｈ−１２）を得た。これらに対して、ｉｎ  ｖｉｖｏ活性をテストした結果、ＢＥＥ−Ｈ−２、ＢＥＥ−Ｈ−１０、ＢＥＥ−Ｈ−１１分画物で高い活性結果を表わし、そのうち、ＢＥＥ−Ｈ−１１の２次小分画の製造を進行した。ＢＥＥ−Ｈ−１１（８１０ｍｇ）に対して、ＳｉＯ２  ｃ．ｃ．（φ５×１０ｃｍ、ｎ−ｈｅｘａｎｅ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１→５：１→３：１→１：１→ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ＝８：１→５：１→１：１）を実施して、１３つの分画（ＢＥＥ−Ｈ−１１−１〜ＢＥＥ−Ｈ１１−１３）に分け、ＳｉＯ２とＯＤＳ  ＴＬＣとで物質を確認した（図３０参照）。
【００６９】
［実験例７：ＢＥＥ−Ｈ２分画のＧＰＣＲ（Ｇ−Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）活性抑制］
ＢＥＥ−Ｈ−２分画が、ＧＰＣＲの活性を抑制するか否かをＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（アメリカ）に依頼して、ＧＰＣＲＰｒｏｆｉｌｅｒＴＭ方法によって分析した。実験結果、７つのＧＰＣＲ受容体（セロトニン１Ａ受容体、アデノシン１受容体、ヒスタミン１受容体、ヒスタミン２受容体、アセチルコリン２受容体、バソプレシン１Ａ受容体、及びニューロペプチドＹ２受容体）に５０％以上の抑制効果があった（図３１参照）。
【００７０】
［実験例８：米または米ぬかの抽出物の睡眠作用機作］
製造例１の米の水抽出物（ＲＷＥ）と製造例３の米ぬかのエタノール抽出物（ＢＥＥ）との睡眠作用機作を確認するために、ヒスタミン受容体効能剤である２−ピリジルエチレンアミン二塩酸塩が、米ぬかのエタノール抽出物の睡眠誘導効果に及ぼす影響を調べた。
【００７１】
ヒスタミン受容体拮抗剤の睡眠誘導効果は、ヒスタミン受容体効能剤によって、その効果が抑制される。本実験例では、このようなヒスタミン受容体に作用する拮抗剤（ｐｙｒｉｌａｍｉｎｅ  ｍａｌｅａｔｅ  ｓａｌｔ、ＰＭＳ）と効能剤（２−ｐｙｒｉｄｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ  ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ、ＰＤ）とを用いて、米ぬかのエタノール抽出物の作用機作を明らかにした。
【００７２】
効能剤ＰＤが、米または米ぬかの抽出物の睡眠誘導効果に及ぼす影響に対して調べるために、米の水抽出物（ＲＷＥ）及び米ぬかのエタノール抽出物（ＢＥＥ）は、それぞれ５００ｍｇ／ｋｇ、拮抗剤ＰＭＳは、７０ｍｇ／ｋｇをペントバルビタール投与（ｈｙｐｎｏｔｉｃ  ｄｏｓａｇｅ４５ｍｇ／ｋｇ）４５分前に経口投与し、効能剤ＰＤは、２０ｍｇ／ｋｇをＢＥＥ、ＰＭＳ経口投与１０分前にあらかじめ腹腔注射して、入眠潜時と睡眠時間とを測定した。
【００７３】
実験結果、図３２ないし図３５から見られるように、ヒスタミン受容体の拮抗剤であるＰＭＳの睡眠効果は、よく知られた通りに効能剤であるＰＤによって完全に抑制された。また、米の水抽出物（ＲＷＥ）及び米ぬかのエタノール抽出物（ＢＥＥ）でも、ＰＭＳと同様にヒスタミン受容体効能剤であるＰＤによって、その効果が抑制された。
【００７４】
一方、効能剤ＰＤが代表的な睡眠剤中の１つであるダイアゼパムは、よく知られたＧＡＢＡＡ−ベンゾジアゼピンの活性効能剤であるジアゼパム（ＤＺＰ）の睡眠誘導効果に及ぼす影響に対して調べるために、ジアゼパム（ＤＺＰ）は、０．５ｍｇ／ｋｇ、ＢＥＥ５００ｍｇ／ｋｇ、拮抗剤ＰＭＳは、７０ｍｇ／ｋｇをペントバルビタール投与（ｈｙｐｎｏｔｉｃ  ｄｏｓａｇｅ４５ｍｇ／ｋｇ）４５分前に経口投与し、ヒスタミン受容体効能剤であるＰＤ２０ｍｇ／ｋｇ、またはＧＡＢＡＡ−ベンゾジアゼピン拮抗剤であるフルマゼニル（ＦＬＵ）８ｍｇ／ｋｇをＤＺＰ、ＢＥＥ、ＰＭＳ経口投与１０分前にあらかじめ腹腔注射して、入眠潜時と睡眠時間とを測定した。
【００７５】
実験結果、図３６及び図３７から見られるように、ヒスタミン受容体効能剤であるＰＤは、ジアゼパム（ＤＺＰ）の入眠潜時や睡眠期間には影響を与えず、図３８及び図３９から見られるように、ＧＡＢＡＡ−ベンゾジアゼピン拮抗剤であるフルマゼニルは、ジアゼパムの睡眠効果には影響を与えるが、米ぬかのエタノール抽出物（ＢＥＥ）の睡眠効果には影響を与えないと確認された。
【００７６】
前記の結果で、米ぬかのエタノール抽出物（ＢＥＥ）は、ＧＡＢＡＡ−ベンゾジアゼピン受容体結合ではないヒスタミン受容体に拮抗作用を行うことによって、睡眠効果を表わすと確認された。
【産業上の利用可能性】
【００７７】
このようなヒスタミン受容体作用活性を表わす天然物は、事例が珍しいために、本発明の米、米ぬか、または籾殻の抽出物は、抗ヒスタミン剤として睡眠障害；不安；及びうつ病の予防または治療だけではなく、アレルギー性鼻炎；炎症性腸疾患；喘息；気管支炎；嘔吐；胃及び十二指腸潰瘍；胃食道逆流などのヒスタミン受容体に媒介される疾患の予防及び治療に有効な天然物医薬または食品として有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【国際調査報告】
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