(57)【要約】  本発明の目的は、殺鼠作用を示すクマリン系分子から得られた新規化合物である。本発明は、かかる化合物を配合した組成物、および有害齧歯類を退治するための使用も対象とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）に対応する化合物、
2014521603.tif 000037
およびその鏡像異性体、ジアステレオ異性体、互変異性体、またはあらゆる比率のこれらの混合物
（式中、
−  Ｒ１は、−Ｈまたは
2014521603.tif 000038
または
2014521603.tif 000039
を表し、
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３またはＮＯ２であり、
−  Ｒ２は、
2014521603.tif 000040
または
2014521603.tif 000041
または
2014521603.tif 000042
を表し、
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３またはＮＯ２であり、
−  Ｒ３は、ＯまたはＳまたはＣＨ−Ｘを表し、
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３またはＮＯ２であり、
−  Ｒ４は、以下の鎖から選択される炭素鎖を表し、
2014521603.tif 000043
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３またはＮＯ２のとき、Ｙ＝ＨまたはＣＨ３であり、
2014521603.tif 000044
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３またはＮＯ２のとき、Ｙ＝Ｈである、
またはＸ＝ＣＦ３のとき、Ｙ＝ＣＨ３であり、
Ｘは、Ｒ１、Ｒ２、またはＲ３で、異なっていても同じであってもよく、
Ｙは、同じＲ２基内にＹが複数あるとき、異なっていても同じであってもよい）。
【請求項２】
Ｒ３が酸素Ｏを表すことを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
−  Ｒ１が−Ｈを表し、
−  Ｒ２が
2014521603.tif 000045
を表し、
−  Ｒ３がＯを表し、
−  Ｒ４が鎖ｄ）ｅ）ｆ）ｉ）ｊ）ｋ）ｌ）のいずれか１つを表し、Ｙ＝Ｈである、
式（Ｉ）に対応することを特徴とする、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ４が鎖ｄ）ｅ）ｆ）ｉ）ｌ）から選択され、Ｙ＝Ｈであることを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物を少なくとも１つ含むことを特徴とする殺鼠剤用組成物。
【請求項６】
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物を０．００１から５０重量％含むことを特徴とする、請求項５に記載の殺鼠剤用組成物。
【請求項７】
濃縮液形態、粉末形態、穀物形態、ゲル形態、ペースト形態、またはペレットまたはブロックなどの押出成形した餌の形態を取ることを特徴とする、請求項５または６に記載の殺鼠剤用組成物。
【請求項８】
有害齧歯類を退治するための化合物、または少なくともこの化合物を含む殺鼠剤用組成物の使用であって、前記化合物が以下の式（Ｉ）に対応する化合物、
2014521603.tif 000046
またはその鏡像異性体、ジアステレオ異性体、互変異性体、またはあらゆる比率のこれらの混合物である使用
（式中、
−  Ｒ１は、−Ｈ
または
2014521603.tif 000047
または
2014521603.tif 000048
を表し、
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３またはＮＯ２であり、
−  Ｒ２は、
2014521603.tif 000049
または
2014521603.tif 000050
または
2014521603.tif 000051
を表し、
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３またはＮＯ２であり、
−  Ｒ３は、ＯまたはＳまたはＣＨ−Ｘを表し、
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３またはＮＯ２であり、
−  Ｒ４は、鎖ａ）からｌ）から選択される炭素鎖を表し、
2014521603.tif 000052
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３またはＮＯ２のとき、Ｙ＝ＨまたはＣＨ３であり、
2014521603.tif 000053
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３またはＮＯ２のとき、Ｙ＝Ｈである、
またはＸ＝ＣＦ３のとき、Ｙ＝ＣＨ３であり、
Ｘは、Ｒ１、Ｒ２、またはＲ３で、異なっていても同じであってもよく、
Ｙは、同じＲ２基内に複数のＹがあるとき、異なっていても同じであってもよい）。
【請求項９】
家庭環境、農村環境、業務環境、都市環境、公共の飲食業または接客業の場所、あるいは農産物加工業において、ラット、ネズミ、ノネズミ、ドブネズミ、および／またはその他のあらゆる有害齧歯類を退治するための、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
化合物が、請求項２から４のいずれか一項に記載の化合物である、請求項８または９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、殺鼠剤、すなわち齧歯類を殺傷する特性を有する製品の分野に関する。
【０００２】
本発明は、特に殺鼠効果を示す新規分子、およびこの分子を配合した組成物を対象とする。本発明は、有害齧歯類を退治するためのこの分子および組成物の使用にも関する。
【背景技術】
【０００３】
ラットまたはネズミなどの特定の有害動物がもたらす被害は昔から知られており、その存在に関連するリスクは深刻である。
【０００４】
特に、電気設備にもたらされる可能性のある物理的被害、貯蔵した農作物および食料品の被害のほか、有害齧歯類はとりわけ重大な衛生災害となる。直接または寄生虫を介して、有害齧歯類は、破傷風、ストレプトバチルス症、パスツレラ症、レプトスピラ症、サルモネラ症、出血熱、あるいはペストなど人間および家畜に伝染する多くの疾患の原因となっている。
【０００５】
そのため、長年にわたり、様々な駆除方式が開発されてきた。例えば、機械的な罠、接着剤あるいは超音波に基づく物理的方式、および特に撃退剤、不妊剤、または殺鼠剤などの化学的方式である。物理的方式の使用が発達しているとしても、特に偶発的な中毒の場合に完全に有効な解毒薬があること、および大量発生した場合の有効性という理由から、齧歯類の個体群制御は、大半が殺鼠剤を使用する退治方法を介して実施されるのが常である。
【０００６】
殺鼠剤は、抗凝固系、抗痙攣系、心毒系、細胞毒性系、または高カルシウム血症系など極めて様々な化学系に属する。現在使用されている殺鼠剤の多くは抗凝固剤であり、特にクマクロル、クマテトラリル、ジフェナコウムまたはブロジファクム、ブロマジオロンなどの４−ヒドロキシクマリンまたはワルファリン由来の抗凝固剤、ジフェチアロンなどの４−ヒドロキシチオクマリン由来の抗凝固剤、およびクロロファシノン、ジファシノンなどの１，３−インダンジオン由来の抗凝固剤である。
【０００７】
抗凝固剤の代謝は、経口吸収が良好で実質的に肝臓に分布されることが特徴である。したがって、これらの製品は極めて有効である。これらの製品は、動物を急性貧血によって死亡させるまで数日間蓄積されることによって作用し、苦痛はなく、仲間が製品に警戒心を起こすこともない。
【０００８】
しかし、現存する殺鼠用抗凝固剤は、残留性が高く、これを摂取した動物中に長期間残留する。しかるに、これは非選択的毒性製品であるため、齧歯類の捕食種、特に猛禽類および野生または飼育されている小哺乳類が、中毒した齧歯類を介して間接的に摂取したこれらの抗凝固剤で中毒するおそれがある。
【０００９】
これらの欠点を緩和するため、フランス特許出願第１０５１１５５号で化合物が提案された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】フランス特許出願第１０５１１５５号
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、標的ではない動物相の二次中毒リスクを軽減しつつ、齧歯類を有効に退治することができる新規解決方法を提案することを目的とする。
【００１２】
この目的のために、本発明は式（Ｉ）に対応する化合物、
2014521603.tif 000002
およびその鏡像異性体、ジアステレオ異性体、互変異性体、またはあらゆる比率のこれらの間の混合物を対象とする
（式中、
−  Ｒ１は、−Ｈまたは
2014521603.tif 000003
または
2014521603.tif 000004
を表し、
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３、またはＮＯ２であり、
−  Ｒ２は、
2014521603.tif 000005
または
2014521603.tif 000006
または
2014521603.tif 000007
を表し、
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３、またはＮＯ２であり、
−  Ｒ３は、ＯまたはＳまたはＣＨ−Ｘを表し、
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３、またはＮＯ２であり、
−  Ｒ４は、以下の鎖ａ）からｌ）から選択される炭素鎖を表し、
2014521603.tif 000008
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３、またはＮＯ２のとき、Ｙ＝ＨまたはＣＨ３であり、
2014521603.tif 000009
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３、またはＮＯ２のとき、Ｙ＝Ｈである、
またはＸ＝ＣＦ３のとき、Ｙ＝ＣＨ３であり、
Ｘは、Ｒ１、Ｒ２、またはＲ３で、異なっていても同じであってもよく、
Ｙは、同じＲ２基内にＹが複数あるとき、異なっていても同じであってもよい）。
【００１３】
本発明は、クマリン系分子から式（Ｉ）の化合物を生成する方法も対象とする。
【００１４】
本発明の他の目的は、式（Ｉ）に対応する少なくとも１つの化合物を含む殺鼠剤用組成物に関する。好ましくは、これらの組成物は、粉末形態、ブロック形態、ゲル形態、ペースト形態、含浸させた穀物形態、あるいは液体形態である。
【００１５】
最後に、本発明は、齧歯類の個体群を制御するための式（Ｉ）の化合物、またはこの化合物を含有する組成物の使用も対象とする。
【００１６】
有利には、本発明による分子は、すべての齧歯類に対する現実的な殺鼠効果と、肝臓へのごくわずかな残留性とを両立させる。この分子の使用により、二次中毒のリスクを大幅に軽減した上で、齧歯類を有効に退治することができる。
【００１７】
その他の特徴および利点は、本発明に関する以降の詳細な説明から明らかにする。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
したがって、第１の態様によれば、本発明は、下記式（Ｉ）に対応する化合物、
2014521603.tif 000010
およびその鏡像異性体、ジアステレオ異性体、互変異性体、またはあらゆる比率のこれらの混合物に関する
（式中、
−  Ｒ１は、−Ｈまたは
2014521603.tif 000011
または
2014521603.tif 000012
を表し、
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３、またはＮＯ２であり、
−  Ｒ２は、
2014521603.tif 000013
または
2014521603.tif 000014
または
2014521603.tif 000015
を表し、
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３、またはＮＯ２であり、
−  Ｒ３は、ＯまたはＳまたはＣＨ−Ｘを表し、
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３、またはＮＯ２であり、
−  Ｒ４は、鎖ａ）からｌ）から選択する炭素鎖を表し、
2014521603.tif 000016
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３、またはＮＯ２のとき、Ｙ＝ＨまたはＣＨ３であり、
2014521603.tif 000017
Ｘ＝Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３、またはＮＯ２のとき、Ｙ＝Ｈである、
またはＸ＝ＣＦ３のとき、Ｙ＝ＣＨ３であり、
Ｘは、Ｒ１、Ｒ２、またはＲ３で、異なっていても同じであってもよく、
Ｙは、同じＲ２基内にＹが複数あるとき、異なっていても同じであってもよい）。
【００１９】
Ｒ１基は、鎖の最初の炭素に結合しているが、この最初の炭素を構成しない。
【００２０】
Ｒ１が−Ｈを表すとき、本発明による化合物は以下の式に対応する。
2014521603.tif 000018
【００２１】
Ｒ１が
2014521603.tif 000019
を表すとき、本発明による化合物は以下の式に対応する。
2014521603.tif 000020
【００２２】
Ｒ１が
2014521603.tif 000021
を表すとき、本発明による化合物は以下の式に対応する。
2014521603.tif 000022
【００２３】
Ｒ２が
2014521603.tif 000023
を表すとき、本発明による化合物は以下の式に対応する。
2014521603.tif 000024
【００２４】
Ｒ２が
2014521603.tif 000025
を表すとき、本発明による化合物は以下の式に対応する。
2014521603.tif 000026
【００２５】
Ｒ２が
2014521603.tif 000027
を表すとき、本発明による化合物は以下の式に対応する。
2014521603.tif 000028
【００２６】
したがって、本発明による化合物は、８から９個の炭素原子を含む直鎖炭素鎖を含む。
【００２７】
本発明は、式（Ｉ）の化合物の鏡像異性体、ジアステレオ異性体、互変異性体、またはあらゆる比率のこれらの間の混合物も対象とする。
【００２８】
この式（Ｉ）に対応する化合物、およびその鏡像異性体、ジアステレオ異性体、互変異性体、または混合物は、殺鼠作用を示す。
【００２９】
好ましくは、Ｒ３は酸素Ｏを表す。
【００３０】
好ましくは、Ｒ４は、Ｙ＝Ｈであるｂ）からｉ）およびｌ）基、あるいはより好ましくはＹ＝Ｈであるｄ）、ｅ）、ｆ）、ｉ）、ｌ）から選択する。
【００３１】
特に適合した実施形態によれば、本発明は、
−  Ｒ１が−Ｈを表し、
−  Ｒ２が
2014521603.tif 000029
を表し、
−  Ｒ３がＯを表し、
−  Ｒ４が鎖ａ）からｌ）のいずれか１つを表し、Ｙ＝Ｈである
式（Ｉ）に対応する化合物を対象とする。
【００３２】
非限定的な例として、以下の式（ＩＩ）から（ＶＩＩ）によって表される化合物のいずれか１つであることができる。
2014521603.tif 000030
【００３３】
本発明による化合物は、分枝し、多少なりとも置換されていてもよい脂肪族側鎖をクマリン系分子、特に４−ヒドロキシクマリンまたはこれに由来とする分子にグラフトすることで得られる。
【００３４】
例として、Ｒ３＝Ｏのときは４−ヒドロキシクマリンであり、Ｒ３＝Ｓのときは４−ヒドロキシチオクマリンである。
【００３５】
本発明による式（Ｉ）の化合物を得る方法は、次のように図式化できる。
2014521603.tif 000031
【００３６】
脂肪族鎖のグラフトは、適合したあらゆるグラフト方法によって実施できる。
【００３７】
特に下記に表すように、臭素化誘導体、特に、臭化アルカンを用いて実施できる。
−  水酸化ナトリウム溶液を用いて、４−ヒドロキシクマリン（または誘導体）のフェノラートイオンを調製する
2014521603.tif 000032
−  溶媒（例えばエタノール）の存在下で、クマリン核の３位でアルキル化する。
2014521603.tif 000033
【００３８】
例として、式（ＩＩ）の特定の化合物は、以下のステップを実施することによって得られる。
2014521603.tif 000034
【００３９】
４−ヒドロキシクマリンのフェノラートイオンを調製するステップは、２０から４０分間、６０から８０℃の水酸化ナトリウム溶液を用いて実施できる。
【００４０】
これに続くＣ−アルキル化は、クマリン環の３位の帯電した炭素に対する臭化アルカンの攻撃に相当する。この反応は、グラフトする鎖の長さに応じて、１から６日間、６０から８０℃の温度で、溶媒、好ましくはエタノールを用いて行う。
【００４１】
鎖の長さに応じて、淡黄色から橙色さらには濃赤色の変化が観察されることに留意すべきである。反応の進行は、ＨＰＬＣによって追跡できる。
【００４２】
次に、反応媒体を選択的な液液抽出を連続して行うことによって精製する。
【００４３】
本発明による式（Ｉ）の化合物、およびその鏡像異性体、ジアステレオ異性体、互変異性体、またはこれらの間の混合物は、低濃度であっても強い殺鼠効果を示す。
【００４４】
これらの化合物は、有害齧歯類を退治するための組成物に配合することができる。
【００４５】
したがって、本発明は、少なくともの１つの式（Ｉ）化合物を有効成分として含有する殺鼠剤用組成物も目的とする。
【００４６】
好ましくは、本発明は、式（Ｉ）に対応する化合物を０．００１から５０重量％、より好ましくは０．００１から２０重量％含む殺鼠剤用組成物を対象とする。
【００４７】
本発明による組成物は、有害齧歯類の退治に適合したあらゆる形態を取ることができる。本組成物は、特に濃縮液形態、粉末形態、穀物形態、ゲル形態、ペースト形態、またはペレットまたはブロックなどの押出成形した餌の形態を取ることができる。
【００４８】
本発明による組成物は、式（Ｉ）の化合物に加え、複数の賦形剤すなわち、殺鼠用化合物を含むマトリクスを構成する１つまたは複数の賦形剤、および技術的または生物学的役割を果たす１つまたは複数の賦形剤を含む。
【００４９】
マトリクスに使用する賦形剤は、特に鉱物油、デキストリンなどの糖質、粘土などの無機物質、グリコールおよびＤＭＳＯなどのその他の有機溶媒、水、大麦、小麦、トウモロコシ、または米などの穀物原材料、パラフィンなどの結合剤から選択できる。
【００５０】
よく用いられるその他の賦形剤は、例えば砂糖または香料、保存料、あるいは子どもや家畜が偶発的に摂取するリスクを軽減するための苦味剤など、齧歯類の喫食性および誘引性を高める添加剤である。
【００５１】
本発明による組成物は、式（Ｉ）の有効化合物を担体の成分に完全かつ均質に混合することによって製造できる。
【００５２】
この実施の容易性は、特に所望する殺鼠効果を得るために必要な有効化合物の量が少量であるため可能である。
【００５３】
有効成分と賦形剤との混合は、適合した方法、特に対流、分散、および／または剪断によって実施できる。この混合は、例えば必要があれば冷却または加熱が可能な二重槽で実施できる。
【００５４】
押出成形した餌の形態にするための、本発明に適合した組成物の一例は、以下の化合物を含む。
−  好ましくは組成物の４０から７０重量％を占める穀物原材料（小麦、大麦、トウモロコシ、米）、
−  好ましくは組成物の１５から４０重量％を占めるパラフィンタイプまたは水の結合剤、
−  好ましくは組成物の０．００１から５０重量％を占める式（Ｉ）の化合物、
−  安息香酸デナトニウムタイプの苦味剤、
−  アスコルビン酸、プロピオン酸、またはソルビン酸カリウムなどの有機酸およびその塩から成る群の１つまたは複数の保存料、
−  着色料、好ましくは緑ＰＧ７の着色料。
【００５５】
連続的方法で押出成形される担体の製造は以下のステップを含む。
−  対流による混合機を用いて成分を混合する、
−  直径３０ｍｍから１００ｍｍ、５５℃から９５℃で単軸押出成形機または二軸押出成形機を用いて押出成形する、
−  成形する、
−  ５から１００ｇの餌の塊を切断する、
−  ３０分間の送風または２から１０時間の対流乾燥により冷却する温度処理によって安定化させる、
−  コンディショニングする。
【００５６】
本発明による式（Ｉ）の化合物および組成物は、有害齧歯類を退治するために使用できる。
【００５７】
式（Ｉ）の化合物を含む殺鼠剤用組成物は、齧歯類の攻撃から保護すべき領域に予防措置として、または処理に適用できる。本組成物は、場合によっては、使用上の安全を守るために、齧歯類の退治に適合した餌箱内に挿入または固定してもよい。
【００５８】
有利には、本発明による式（Ｉ）の化合物は、殺鼠効果が極めて高く、少なくとも既存の抗凝固剤による殺鼠剤と同等の有効性があるとともに、肝臓への残留性が極めて低い。実際、本発明による化合物は、極めて限られた時間しか肝臓に蓄積されない。
【００５９】
したがって、本化合物の使用により、二次中毒の標的ではない動物相を防護した上で、齧歯類を有効に退治することができる。
【００６０】
本化合物は、特に家庭環境、農村環境、業務環境、都市環境、公共の飲食業または接客業の場所、あるいは農産物加工業において、ラット、ネズミ、ノネズミ、ドブネズミ、および／またはその他のあらゆる有害齧歯類を退治するために使用できる。
【００６１】
使用する化合物の用量は、標的とする齧歯類によって異なる。好ましくは、対象とする齧歯類に応じて０．５ｍｇから１００ｍｇである。
【００６２】
次に、請求項に記載した効果を示す試験の例および結果によって、本発明を説明する。
【実施例】
【００６３】
特定の式（Ｉ）の化合物、式（ＩＩ）から（ＶＩＩ）の化合物を得る方法の実施例
本方法は、２つのステップすなわち、４−ヒドロキシクマリンのフェノラートイオンの調製およびＣ−アルキル化を実施することから成る。
【００６４】
１．４−ヒドロキシクマリンのフェノラートイオンの調製
４−ヒドロキシクマリンのフェノラートイオンは、以下のステップを実施することによって得られる。
−  丸底フラスコ中で、４−ヒドロキシクマリン２０ｍＭを１Ｍ  ＮａＯＨ  １０ｍＬおよび１０Ｍ  ＮａＯＨ  １．５ｍＬと完全に溶解するまで混合して、完全に可溶化させ、微淡黄色の溶液を得る、
−  ７０℃で３０分間還流して、クマリンのフェノラートを形成させる。
【００６５】
２．化合物ＩＩからＶＩＩの合成
項目１で調製した混合物から、以下のステップを続ける。
−  エタノール５０ｍＬを加える、
−  臭素誘導体２５ｍＭを加える、
−  ７０℃で還流する。
【００６６】
反応の進行は、ＨＰＬＣ分析によって追跡する。
【００６７】
臭素化合物は以下である。
−  化合物（ＩＩ）では、ブロモオクタン  Ｃ８Ｈ１７Ｂｒ
−  化合物（ＩＩＩ）では、ブロモデカン  Ｃ１０Ｈ２１Ｂｒ
−  化合物（ＩＶ）では、ブロモドデカン  Ｃ１２Ｈ２５Ｂｒ
−  化合物（Ｖ）では、ブロモテトラデカン  Ｃ１４Ｈ２９Ｂｒ
−  化合物（ＶＩ）では、ブロモヘキサデカン  Ｃ１６Ｈ３３Ｂｒ
−  化合物（ＶＩＩ）では、ブロモオクトデカン  Ｃ１８Ｈ３７Ｂｒ
【００６８】
次に、反応媒体を精製する。反応媒体の精製は、液液抽出によって実施する（この操作では、すべての液相をＨＰＬＣにかける）。
−  ｐＨ１４の媒体が得られるまで、媒体に１Ｍ水酸化ナトリウムを加える、
−  トルエンで洗浄し、デカンテーションし、アルカリ相との油状の界面を回収する、
−  １Ｍ  ＮａＯＨ溶液でトルエン相を抽出し、これを除去する、
−  赤色のアルカリ相を合わせ、酢酸エチルを用いて抽出する、
−  アルカリ水相を除去し、ＨＣｌ溶液で酢酸エチル相を洗浄する、
−  酸性水相を除去し、蒸留水で酢酸エチル相を洗浄する、
−  水相を除去し、無水硫酸ナトリウムで酢酸エチルを濾過する、
−  酢酸エチルで硫酸ナトリウムを洗浄する、
−  窒素流下で酢酸エチルを蒸発半乾固させる。
【００６９】
最終生成物は、化合物に応じて、黄色から橙黄色の油状、または白色から微黄色の粉末を示す。
【００７０】
得られた分子は、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）に対応する。
【００７１】
他の２つの生成物と比較した式（ＩＩ）から（ＶＩＩ）の生成物のラットでの有効性（ＩＣ５０）の評価
本発明による化合物の殺鼠効果を以下の式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）に対応する生成物と比較してテストした。
2014521603.tif 000035
【００７２】
これらの生成物は以下を臭素化合物として、式（ＩＩ）から（ＶＩＩ）について実施したものと同じ方法によって得られた。
−  化合物（ＶＩＩＩ）では、ブロモヘキサン  Ｃ６Ｈ１３Ｂｒ
−  化合物（ＩＸ）では、ブロモエイコサン  Ｃ２０Ｈ４１Ｂｒ
【００７３】
化合物（ＩＩ）から（ＩＸ）の濃度を徐々に増やしながら加えた後、下記に説明されている操作プロトコルによるビタミンＫに対する作用の測定によって、式（ＩＩ）から（ＩＸ）の化合物のＩＣ５０（５０％阻害濃度）を決定する。
【００７４】
操作プロトコルは以下の通りである。最終容量１ｍＬの、還元剤、ジチオトレイトール（１ｍＭ）、
−  感受性のあるラット肝臓のミクロソーム画分０．５から１ｍｇ、および反応基質、
−  ビタミンＫのエポキシド２００μＭ
の存在下で１５０ｍＭ  ＫＣｌを含む２００ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ７．４）中でインキュベートする。
【００７５】
混合物を３７℃で３０分間インキュベートし、イソプロパノール／ヘキサン混合物（１：１）４ｍＬを加えて反応を停止する。
【００７６】
次に、反応混合物を３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離する。
【００７７】
有機相を集め、窒素下で蒸発乾固する。
【００７８】
直ちに、乾固残渣をイソプロパノール２００μＬ内に入れる。
【００７９】
次に、ビタミンＫを分析する。生成物の分離は、４５℃のアイソクラティック条件下（１ｍＬ／分）で、メタノールと酢酸から成る移動相によるＣ８カラム逆相クロマトグラフィーによって実施する。生成物の検出は、ポジティブモードのＡＰＣＩソースを用いたＭＳ／ＭＳによって実施する。
【００８０】
ビタミンＫの同定基準は、保持時間、および初期イオン４５１からの画分１８７の生成である。
【００８１】
ＩＣ５０の値は、次の非競合阻害の式から、非線形からの線形回帰によって評価する。
ｖ＝（ｖｍａｘ／（１＋（Ｉ／Ｋｉ）））＊（Ｓ／（Ｋｍ＋Ｓ））
（式中、ｖは初期速度、Ｉは抗凝固剤濃度、Ｋｍはミカエリス・メンテン定数、Ｓは基質濃度（単位はｍＭ）、Ｖｍａｘは反応の最高速度、Ｋｉは阻害定数を表す）。
【００８２】
殺鼠効果を証明するには、ＩＣ５０が０．１９μＭ以下でなければならない。
【００８３】
得られた結果を以下に示す。
2014521603.tif 000036
【００８４】
これらの結果は、化合物ＶＩＩＩおよびＩＸとは対照的に、本発明による化合物は０．１９以下のＩＣ５０で、殺鼠効果を示すことを表す。
【国際調査報告】
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