(57)【要約】  本明細書には、共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質の合成の方法および治療上の使用が記載される。共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、ペプチドおよびタンパク質ベースの治療の改善された薬学的特性を可能にする。【選択図】図１１
2014516036.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペプチドに共有結合的に付けられた、界面活性物質Ｘを含むペプチド生成物であって、該ペプチドは、リンカーアミノ酸Ｕおよび少なくとも１つの他のアミノ酸を含み：
【化１】
2014516036.tif 000113
式中、Ｘは：
【化２】
2014516036.tif 000114
であり、
式中、
Ａは、疎水基であり；および
Ｂは、リンカーアミノ酸Ｕを介してペプチドに共有結合的に付けられた親水基であることを特徴とする、ペプチド生成物。
【請求項２】
ペプチド生成物は、官能化された界面活性物質のペプチドとの反応によって合成されることを特徴とする、請求項１に記載のペプチド生成物。
【請求項３】
Ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル鎖、置換または非置換のアルコキシアリール基、置換または非置換のアラルキル基、またはステロイド核を含有する部分であることを特徴とする、請求項１に記載のペプチド生成物。
【請求項４】
Ｂは、ポリオールであることを特徴とする、請求項１に記載のペプチド生成物。
【請求項５】
ポリオールは、糖類であることを特徴とする、請求項４に記載のペプチド生成物。
【請求項６】
糖類は、グルコース、マンノース、マルトース、グルクロン酸、ガラクツロン酸、ジグルクロン酸およびマルツロン酸から選択されることを特徴とする、請求項５に記載のペプチド生成物。
【請求項７】
界面活性物質は、１−アルキルグリコシドクラスの界面活性物質であることを特徴とする、請求項１に記載のペプチド生成物。
【請求項８】
界面活性物質中の親水基は、アミド結合を介してペプチドに付けられることを特徴とする、請求項１乃至７のいずれか１項に記載のペプチド生成物。
【請求項９】
界面活性物質Ｘは、１−アイコシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−オクタデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−テトラデシルベータ Ｄ−グルクロン酸、１−ドデシルベータ Ｄ−グルクロン酸、１−デシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−オクチルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−アイコシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−オクタデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−テトラデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−ドデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−デシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−オクチルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、または官能化された１−アイコシルベータ−Ｄ−グルコース、１−オクタデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−テトラデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−ドデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−デシルベータ−Ｄ−グルコース、１−オクチルベータ−Ｄ−グルコース、１−アイコシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−オクタデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−ドデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−デシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−オクチルベータ−Ｄ−マルトシドなどから成ることを特徴とする、請求項１乃至７のいずれか１項に記載のペプチド生成物。
【請求項１０】
ペプチドは、オピオイドペプチドであることを特徴とする、請求項１乃至７のいずれか１項に記載のペプチド生成物。
【請求項１１】
ペプチド生成物は、以下の式ＩＡの構造を有し：
【化３】
2014516036.tif 000115
式中：
ａａ１、ａａ２、ａａ３、ａａ４、およびａａ５の各々は、独立して、存在しない、ＤまたはＬの天然または非天然のアミノ酸、Ｎアルキル化アミノ酸、Ｎアセチル化アミノ酸、ＣαＲ３アミノ酸、Ψアミノ酸、または界面活性物質Ｘに共有結合的に付けられたリンカーアミノ酸Ｕであり；
Ｚは、−ＯＨ、−ＮＨ２または−ＮＨＲ３であり；
各Ｒ３は、独立して、置換または非置換のＣ１−Ｃ１２分枝鎖または直鎖のアルキル、１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖、または置換または非置換のアラルキル鎖であり；
但し、ａａ１、ａａ２、ａａ３、ａａ４、およびａａ５の１つまたは少なくとも１つが、界面活性物質Ｘに共有結合的に付けられたリンカーアミノ酸Ｕであり；
およびさらに、ａａ１、ａａ２、ａａ３、ａａ４、およびａａ５のすべてが存在しないわけではないことを条件とすることを特徴とする、請求項１０に記載のペプチド生成物。
【請求項１２】
以下の式ＩＩの構造を有するペプチド生成物であって：
【化４】
2014516036.tif 000116
式中：
ａａ１、ａａ２、ａａ３、ａａ４、およびａａ５の各々は、独立して、存在しない、ＤまたはＬの天然または非天然のアミノ酸、Ｎアルキル化アミノ酸、Ｎアセチル化アミノ酸、ＣαＲ３アミノ酸、Ψアミノ酸、または界面活性物質Ｘに共有結合的に付けられたリンカーアミノ酸Ｕであり；
Ｚは、−ＯＨ、−ＮＨ２または−ＮＨＲ３であり；
各Ｒ３は、独立して、置換または非置換のＣ１−Ｃ１２分枝鎖または直鎖のアルキル、１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖、または置換または非置換のアラルキル鎖であり；および
Ｘは、
【化５】
2014516036.tif 000117
であり、
式中、
Ａは、疎水基であり；および
Ｂは、リンカーアミノ酸Ｕを介してペプチドに共有結合的に付けられた親水基であり；
但し、ａａ１、ａａ２、ａａ３、ａａ４、およびａａ５の１つまたは少なくとも１つが、界面活性物質Ｘに共有結合的に付けられたリンカーアミノ酸Ｕであり；
およびさらに、ａａ１、ａａ２、ａａ３、ａａ４、およびａａ５のすべてが存在しないわけではないことを条件とすることを特徴とする、ペプチド生成物。
【請求項１３】
ペプチド生成物は、以下の式ＩＩＩの構造を有し：
【化６】
2014516036.tif 000118
式中：
ａａ１は、Ｔｙｒ、Ｄｍｔ、Ｎ−Ｒ３−Ｔｙｒ、Ｎ−Ｒ３−Ｄｍｔ、Ｎ−（Ｒ３）２−Ｔｙｒ、またはＮ−（Ｒ３）２−Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｐｒｏ、Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｕ（Ｘ）、Ｄ−Ａｌａ、Ｔｉｃ、またはＴｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）であり；
ａａ３は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、ＣαＭｅＰｈｅ、またはΨ−Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、Ｕ（Ｘ）、Ｄ−またはＬ−ＣαＭｅＵ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、またはＰｒｏ、Ａｉｂ、Ｕ（Ｘ）、Ｄ−またはＬ−ＣαＭｅＵ（Ｘ）であり；および
Ｕは、界面活性物質Ｘに共有結合的に付けるために使用される、二塩基性の天然または非天然のアミノ酸、チオールを含む天然または非天然のアミノ酸、−Ｎ３基を含む非天然のアミノ酸、アセチレン基を含む非天然のアミノ酸、または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒまたは−（ＣＨ２）ｍ−マレイミドを含む非天然のアミノ酸であり、ここで、ｍは、１−１０であることを特徴とする、請求項１２に記載のペプチド生成物。
【請求項１４】
Ｘは、以下の構造を有し：
【化７】
2014516036.tif 000119
式中：
Ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル鎖、置換または非置換のアルコキシアリール基、置換または非置換のアラルキル基、またはステロイド核を含有する部分であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは各々、各々の出現で独立して、Ｈ、保護基、または置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基であり；
Ｗ１は、各々の出現で独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、−（Ｃ＝Ｓ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−ＮＨ−、または−ＣＨ２−Ｓ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；
Ｒ２は、単結合、Ｃ２−Ｃ４アルケン、Ｃ２−Ｃ４アルキン、または−（ＣＨ２）ｍ−マレイミドであり；および
ｍは、１−１０であることを特徴とする、請求項１３に記載のペプチド生成物。
【請求項１５】
Ｘは、以下の構造を有していることを特徴とする、請求項１３に記載のペプチド生成物：
【化８】
2014516036.tif 000120
【請求項１６】
Ｘは、以下の構造を有していることを特徴とする、請求項１３に記載のペプチド生成物：
【化９】
2014516036.tif 000121
【請求項１７】
Ｘは、以下の構造を有し：
【化１０】
2014516036.tif 000122
式中：
Ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、またはステロイド核を含有する部分であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは各々、各々の出現で独立して、Ｈ、保護基、または置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基であり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−であり；
Ｒ２は、単結合であることを特徴とする、請求項１３に記載のペプチド生成物。
【請求項１８】
Ｘは、以下の構造を有し：
【化１１】
2014516036.tif 000123
式中：
Ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、Ｈであり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−であり；および
Ｒ２は、単結合であることを特徴とする、請求項１３に記載のペプチド生成物。
【請求項１９】
Ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ２０アルキル基であることを特徴とする、請求項１４乃至１８のいずれか１項に記載のペプチド生成物。
【請求項２０】
生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１４９）であって、
式中：
Ｕは、二塩基性の天然または非天然のアミノ酸であり；
Ｘは、１−アルキルグリコシドクラスの界面活性物質であり、ここで、１−アルキルは、置換または非置換のＣ１−Ｃ２０アルキルまたは置換または非置換のアルコキシアリール置換基であり；
Ｚは、ＮＨ２であり；
ａａ１は、Ｔｙｒ、Ｄｍｔ、Ｎα−Ｍｅ−Ｔｙｒ、Ｎα−Ｍｅ−Ｔｙｒ、Ｎ，Ｎα−ｄｉＭｅ−Ｔｙｒ、またはＮ，Ｎα−ｄｉＭｅ−Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｐｒｏ、Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｕ（Ｘ）、Ｄ−Ａｌａ、Ｔｉｃ、またはＴｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）であり；
ａａ３は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、ＣαＭｅＰｈｅ、またはΨ−Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、Ｕ（Ｘ）、Ｄ−またはＬ−ＣαＭｅＵ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、またはＰｒｏ、Ａｉｂ、Ｕ（Ｘ）、Ｄ−またはＬ−ＣαＭｅＵ（Ｘ）であることを特徴とする、請求項１３に記載のペプチド生成物。
【請求項２１】
生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５０）であって、
式中：
Ｘは、１−アルキルグルクロン酸または１−アルキルジグルクロン酸から成り；
Ｚは、ＮＨ２であり；
ａａ１は、Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｐｒｏ、Ｄ−Ｌｙｓ（Ｘ）、Ｔｉｃ、またはＴｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）であり；
ａａ３は、Ｐｈｅ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、ＤまたはＬ−Ｎａｌ（２）、またはΨ−Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、ＤまたはＬ−Ｎａｌ（２）、またはＬｙｓ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、またはＰｒｏ、Ａｉｂ、Ｌｙｓ（Ｘ）、Ｄ−またはＬ−ＣαＭｅＬｙｓ（Ｘ）であることを特徴とする、請求項２０に記載のペプチド生成物。
【請求項２２】
生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５１）であって、
式中：
ａａ１は、Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｐｒｏであり；
ａａ３は、Ｐｈｅ、またはＴｍｐであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、またはＬｙｓ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、またはＡｉｂ、Ｌｙｓ（Ｘ）、Ｄ−またはＬ−ＣαＭｅＬｙｓ（Ｘ）であることを特徴とする、請求項２１に記載のペプチド生成物。
【請求項２３】
生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５２）であって、
式中：
ａａ１は、Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｐｒｏであり；
ａａ３は、Ｐｈｅ、またはＴｍｐであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、またはＬｙｓ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、またはＬｙｓ（Ｘ）であることを特徴とする、請求項２２に記載のペプチド生成物。
【請求項２４】
生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５３）であって、
式中：
Ｕは、二塩基性の天然または非天然のアミノ酸であり；
Ｘは、１−アルキルグリコシドクラスの界面活性物質であり、ここで、１−アルキルグリコシドの１−アルキル基は、置換または非置換のＣ１−Ｃ２０アルキルまたは置換または非置換のアルコキシアリール置換基であり；
ａａ１は、Ｔｙｒ、Ｄｍｔ、Ｎ−Ｒ３−Ｔｙｒ、Ｎ−Ｒ３−Ｔｙｒ、Ｎ−（Ｒ３）２−Ｔｙｒ、またはＮ−（Ｒ３）２−Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｄ−Ａｒｇ、またはＤ−Ｕ（Ｘ）であり；
ａａ３は、Ｐｈｅ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、またはＴｍｐであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、Ｕ（Ｘ）、Ｄ−またはＬ−ＣαＭｅＵ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、Ｐｒｏ、またはＵ（Ｘ）であることを特徴とする、請求項１３に記載のペプチド生成物。
【請求項２５】
生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５４）であって、
式中：
Ｘは、１−アルキルグルクロン酸または１−アルキルジグルクロン酸クラスの界面活性物質であり；
ａａ１は、Ｄｍｔ、Ｎα−Ｍｅ−Ｄｍｔ、またはＮ，Ｎα−Ｍｅ−Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｌｙｓ（Ｘ）、またはＤ−Ｏｒｎ（Ｘ）であり；
ａａ３は、Ｐｈｅ、またはＴｍｐであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、Ｔｍｐ、Ｌｙｓ（Ｘ）、またはＯｒｎ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、またはＰｒｏ、Ｌｙｓ（Ｘ）、またはＯｒｎ（Ｘ）であることを特徴とする、請求項２４に記載のペプチド生成物。
【請求項２６】
生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５５）であって、
式中：
Ｕは、二塩基性の天然または非天然のアミノ酸であり；
Ｘは、１−アルキルグリコシドクラスの界面活性物質であり、ここで、１−アルキルは、置換または非置換のＣ１−Ｃ２０アルキルまたは置換または非置換のアルコキシアリールオキシ置換基であり；
Ｚは、ＮＨ２であり；
ａａ１は、Ｔｙｒ、Ｄｍｔ、Ｎ−Ｒ３−Ｔｙｒ、Ｎ−Ｒ３−Ｄｍｔ、Ｎ−（Ｒ３）２−Ｔｙｒ、またはＮ−（Ｒ３）２−Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｔｉｃ、またはＴｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）であり；
ａａ３は、ａａ２がＴｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）であるときに、Ψ−Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、またはＵ（Ｘ）であることを特徴とする、請求項２４または請求項２５に記載のペプチド生成物。
【請求項２７】
生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５６）であって、
式中：
Ｘは、１−アルキルグルクロン酸または１−アルキルジグルクロン酸クラスの界面活性物質であり；
ａａ１は、Ｔｙｒ、Ｄｍｔ、Ｎα−Ｍｅ−Ｔｙｒ、Ｎα−アルキル−Ｄｍｔ、Ｎ，Ｎα−ｄｉＭｅ−Ｔｙｒ、またはＮ，Ｎα−Ｍｅ−Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｔｉｃ、またはＴｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）であり；
ａａ３は、ａａ２が、Ｔｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）、Ｐｈｅ、またはＴＭＰであるときに、Ψ−Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、Ｌｙｓ（Ｘ）、またはＯｒｎ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、またはＡｉｂ、Ｌｙｓ（Ｘ）、またはＯｒｎ（Ｘ）であることを特徴とする、請求項２６に記載のペプチド生成物。
【請求項２８】
生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５７）であって、
式中：
Ｘは、１−アルキルグルクロン酸または１−アルキルジグルクロン酸から成り；
ａａ２は、Ｔｉｃ、またはＴｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）であり；
ａａ３は、ＰｈｅまたはΨ−Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｌｙｓ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しないことを特徴とする、請求項１３に記載のペプチド生成物。
【請求項２９】
生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５８）であって、
式中：
Ｘは、１−アルキルグルクロン酸から成り；
ａａ２は、Ｔｉｃであり：
ａａ３は、Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｌｙｓ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しないことを特徴とする、請求項２８に記載のペプチド生成物。
【請求項３０】
生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５９）であって、
式中：
Ｘは、１−メチルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−オクチルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−ドデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−テトラデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、および１−オクタデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸から選択される、１−アルキルグルクロン酸から成り；
ａａ２は、Ｔｉｃであり；
ａａ３は、Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｌｙｓ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しないことを特徴とする、請求項２９に記載のペプチド生成物。
【請求項３１】
Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１−メチル ベータ−Ｄ−グルクロニル）−ＮＨ２（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．７８）であることを特徴とする、請求項３０に記載のペプチド生成物。
【請求項３２】
Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１−オクチル ベータ−Ｄ−グルクロニル）−ＮＨ２（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．８０）であることを特徴とする、請求項３０に記載のペプチド生成物。
【請求項３３】
Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１−ドデシル ベータ−Ｄ−グルクロニル）−ＮＨ２（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．７９）であることを特徴とする、請求項３０に記載のペプチド生成物。
【請求項３４】
Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１−テトラデシル ベータ−Ｄ−グルクロニル）−ＮＨ２（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１６０）であることを特徴とする、請求項３０に記載のペプチド生成物。
【請求項３５】
Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１−ヘキサデシル ベータ−Ｄ−グルクロニル）−ＮＨ２（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．８２）であることを特徴とする、請求項３０に記載のペプチド生成物。
【請求項３６】
Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１−オクタデシル ベータ−Ｄ−グルクロニル）−ＮＨ２（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．８３）であることを特徴とする、請求項３０に記載のペプチド生成物。
【請求項３７】
図１における表１の化合物から選択される、化合物。
【請求項３８】
請求項１乃至３７のいずれか１項の治療上有効な量のペプチド生成物、またはその薬学的に許容可能な塩、および少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項３９】
ペプチドの薬学的および治療的な反応を改善し、それによって、作用のその持続時間、バイオアベイラビリティ、または製剤におけるその安定性を改善するための方法であって、該方法は、ペプチドに界面活性物質Ｘを共有結合的に付ける工程を含み、ここで、Ｘは、請求項１で定義される通りであることを特徴とする、方法。
【請求項４０】
請求項１乃至３７のいずれか１項の治療上有効な量のペプチド生成物の投与を含む、疼痛を処置する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
＜相互参照＞
本出願は、２０１１年５月１８日に出願の、米国仮特許出願第６１／４８７，６３６号、２０１１年５月１８日に出願の、米国仮特許出願第６１／４８７，６３８号、２０１１年１０月５日に出願の、米国仮特許出願第６１／５４３，７２５号、および２０１１年１０月５日に出願の、米国仮特許出願第６１／５４３，７２１号に対する優先権を主張し、これらは、それら全体が引用によって本明細書に組み込まれる。
【０００２】
共有結合的に修飾されたペプチドおよびタンパク質アナログは、ペプチド及び／又はタンパク質ベースの治療の改善された薬学的特性を可能にする。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
ペプチド及び／又はタンパク質の製剤は、医療でのそれらの使用のいくつかの制限、すなわち、作用の短い持続時間、乏しいバイオアベイラビリティ、および受容体サブタイプの選択性の欠如を被っている（Ｎｅｓｔｏｒ， Ｊ．Ｊ．， Ｊｒ． （２００７） Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＩＩ ２： ５７３−６０１）。さらに、ペプチド及び／又はタンパク質は、製剤において不安定であり、凝集の影響下にある。幾つかの例において、ペプチド及び／又はタンパク質の凝集は、天然または異種のペプチドまたはタンパク質に対する免疫反応の発達につながる。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本明細書には、ペプチド及び／又はタンパク質を共有結合的に修飾し、改善された薬学的特性を有する生成物を生成するための方法および試薬が記載される。幾つかの例において、共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、ペプチド及び／又はタンパク質ベースの治療において、改善された安定性、バイオアベイラビリティ、選択性、および効果の持続時間を可能にする。
【０００５】
本明細書には、改善された薬学的特性を有する特定の共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質が記載される。幾つかの例において、これらの共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、ペプチド及び／又はタンパク質ベースの治療において、改善された安定性、バイオアベイラビリティ、選択性、および効果の持続時間を可能にする。
【０００６】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される、共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、グリコシド界面活性物質に付けられる。１つの態様では、共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、アルキルグリコシドに付けられる。１つの態様では、共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、アルキルグリコシド界面活性物質に付けられ、ここで、ペプチド及び／又はタンパク質は、界面活性物質中のグリコシドに付けられ、その後、グリコシドは、疎水基及び／又はアルキル基に付けられる。本明細書には、幾つかの実施形態において、アルキルグリコシドなどの界面活性物質の取り込みを介するペプチド及び／又はタンパク質の共有結合修飾のための試薬および中間物が提供される。
【０００７】
本明細書には、ペプチドに共有結合的に付けられた、界面活性物質Ｘを含むペプチド生成物が提供され、該ペプチドは、リンカーアミノ酸Ｕおよび少なくとも１つの他のアミノ酸を含み：
【０００８】
【化１】
2014516036.tif 000003
【０００９】
式中、Ｘは：
【００１０】
【化２】
2014516036.tif 000004
【００１１】
であり、
式中、
Ａは、疎水基であり、および、
Ｂは、リンカーアミノ酸Ｕを介してペプチドに共有結合的に付けられた親水基である。
【００１２】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、官能化された界面活性物質の、本明細書に記載されるようなペプチドとの反応によって合成される。幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、官能化された界面活性物質の、本明細書に記載されるような可逆的に保護されたリンカーアミノ酸との反応によって合成され、その後、１つ以上のアミノ酸との反応によって合成され、界面活性物質で修飾されたペプチド生成物を形成する。幾つかの実施形態では、Ｕは、ペプチドの末端アミノ酸である。幾つかの実施形態では、Ｕは、ペプチドの非末端アミノ酸である。
【００１３】
幾つかの実施形態では、Ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル鎖、置換または非置換のアルコキシアリール基、置換または非置換のアラルキル基またはステロイド核を含有する部分である。幾つかの実施形態では、Ａは、置換または非置換のＣ８−Ｃ２０アルキル鎖、置換または非置換の１−アルコキシアリール基、置換または非置換の１−アラルキル基、またはステロイド核を含有する部分である。幾つかの実施形態では、Ａは、置換または非置換のＣ１０−Ｃ２０アルキル鎖、置換または非置換の１−アルコキシアリール基、置換または非置換の１−アラルキル基、またはステロイド核を含有する部分である。
【００１４】
幾つかの実施形態では、Ｂは、ポリオールである。幾つかの実施形態では、ポリオールは、糖類である。幾つかの実施形態では、糖類は、単糖類、二糖類、または多糖類である。幾つかの実施形態では、糖類は、グルコース、マンノース、マルトース、グルクロン酸、ガラクツロン酸、ジグルクロン酸およびマルツロン酸（ｍａｌｔｏｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）から選択される。
【００１５】
幾つかの実施形態では、界面活性物質は、１−アルキルグリコシドクラスの界面活性物質（１−ａｌｋｙｌ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｃｌａｓｓ ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）である。
【００１６】
幾つかの実施形態では、界面活性物質中の親水基は、アミド結合を介してペプチドに付けられる。
【００１７】
ペプチド生成物の幾つかの実施形態において、界面活性物質は、１−アイコシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−オクタデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−テトラデシルベータ Ｄ−グルクロン酸、１−ドデシルベータ Ｄ−グルクロン酸、１−デシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−オクチルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−アイコシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−オクタデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−テトラデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−ドデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−デシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−オクチルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、または官能化された１−アイコシル（ｅｃｏｓｙｌ）ベータ−Ｄ−グルコース、１−オクタデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−テトラデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−ドデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−デシルベータ−Ｄ−グルコース、１−オクチルベータ−Ｄ−グルコース、１−アイコシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−オクタデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−ドデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−デシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−オクチルベータ−Ｄ−マルトシドなどから成り、ペプチド生成物は、前述の基とペプチド上の基（例えば、前述の基における−ＣＯＯＨ基およびペプチドのアミノ基）との間の結合の形成によって調製される。
【００１８】
幾つかの実施形態では、親水基の疎水基との組み合わせによって、界面活性物質が生成される。幾つかの実施形態では、界面活性物質は、イオン性界面活性物質である。幾つかの実施形態では、界面活性物質は、非イオン性界面活性物質である。幾つかの実施形態では、疎水基は、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル鎖またはアラルキル鎖である。幾つかの実施形態では、疎水基は、混合した疎水性および親水性の特性を有する鎖、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基である。
【００１９】
幾つかの実施形態では、リンカーアミノ酸は、天然のＤアミノ酸でまたはＬアミノ酸である。幾つかの実施形態では、リンカーアミノ酸は、非天然のアミノ酸である。幾つかの実施形態では、リンカーアミノ酸は、界面活性物質Ｘに共有結合的に付けるために使用される官能基を含む、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、Ｏｒｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕまたは非天然のアミノ酸から選択される。幾つかの実施形態では、リンカーアミノ酸は、界面活性物質Ｘに共有結合的に付けるために使用される官能基を含む、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、Ｏｒｎ、または非天然のアミノ酸から選択される。幾つかの実施形態では、界面活性物質に共有結合的に付けるために使用される官能基は、−ＮＨ２、−ＳＨ、−ＯＨ、−Ｎ３、ハロアセチル、ａ−（ＣＨ２）ｍ−マレイミドまたはアセチレン基であり、ｍは、１−１０である。
【００２０】
幾つかの実施形態では、ペプチドは、オピオイドペプチドである。幾つかの実施形態では、ペプチド及び／又はタンパク質の生成物は、共有結合的に連結されたアルキルグリコシドを含有する。このような実施形態の幾つかにおいて、ペプチド及び／又はタンパク質の生成物は、アルファまたはベータの構造の１−Ｏ−アルキルグルクロン酸である、共有結合的に連結されたアルキルグリコシドを含有する。このような実施形態の幾つかにおいて、ペプチド及び／又はタンパク質の生成物は、１−Ｏ−アルキルグルクロン酸である、共有結合的に連結されたアルキルグリコシドを含み、アルキル鎖は、Ｃ１乃至Ｃ２０のアルキル鎖である。
【００２１】
幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、以下の式ＩＡの構造を有し：
【００２２】
【化３】
2014516036.tif 000005
【００２３】
式中：
ａａ１、ａａ２、ａａ３、ａａ４、およびａａ５の各々は、独立して、存在しない、ＤまたはＬの天然または非天然のアミノ酸、Ｎアルキル化アミノ酸、Ｎアセチル化アミノ酸、ＣαＲ３アミノ酸、Ψアミノ酸、または界面活性物質Ｘに共有結合的に付けられたリンカーアミノ酸Ｕであり；
Ｚは、−ＯＨ、−ＮＨ２または−ＮＨＲ３であり；
各Ｒ３は、独立して、置換または非置換のＣ１−Ｃ１２分枝鎖または直鎖のアルキル、１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖、または置換または非置換のアラルキル鎖であり；
但し、ａａ１、ａａ２、ａａ３、ａａ４、およびａａ５の１つまたは少なくとも１つが、界面活性物質Ｘに共有結合的に付けられたリンカーアミノ酸Ｕであり；
およびさらに、ａａ１、ａａ２、ａａ３、ａａ４、およびａａ５のすべてが存在しないわけではないことを条件とする。
【００２４】
１つの態様において、本明細書には、以下の式ＩＩの構造を有するペプチド生成物が提供され：
【００２５】
【化４】
2014516036.tif 000006
【００２６】
式中：
ａａ１、ａａ２、ａａ３、ａａ４、およびａａ５の各々は、独立して、存在しない、ＤまたはＬの天然または非天然のアミノ酸、Ｎアルキル化アミノ酸、Ｎアセチル化アミノ酸、ＣαＲ３アミノ酸、Ψアミノ酸、または界面活性物質Ｘに共有結合的に付けられたリンカーアミノ酸Ｕであり；
Ｚは、−ＯＨ、−ＮＨ２または−ＮＨＲ３であり；
各Ｒ３は、独立して、置換または非置換のＣ１−Ｃ１２分枝鎖または直鎖のアルキル、１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖、または置換または非置換のアラルキル鎖であり；および
Ｘは、
【００２７】
【化５】
2014516036.tif 000007
【００２８】
であり、
式中、
Ａは、疎水基であり；および
Ｂは、リンカーアミノ酸Ｕを介してペプチドに共有結合的に付けられた親水基であり；
但し、ａａ１、ａａ２、ａａ３、ａａ４、およびａａ５の１つまたは少なくとも１つが、界面活性物質Ｘに共有結合的に付けられたリンカーアミノ酸Ｕであり；
およびさらに、ａａ１、ａａ２、ａａ３、ａａ４、およびａａ５のすべてが存在しないわけではないことを条件とする。
【００２９】
１つの態様では、本明細書には、以下の式ＩＩＩの構造を有するペプチド生成物が提供され：
【００３０】
【化６】
2014516036.tif 000008
【００３１】
式中：
ａａ１は、Ｔｙｒ、Ｄｍｔ、Ｎ−Ｒ３−Ｔｙｒ、Ｎ−Ｒ３−Ｄｍｔ、Ｎ−（Ｒ３）２−Ｔｙｒ、またはＮ−（Ｒ３）２−Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｐｒｏ、Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｕ（Ｘ）、Ｄ−Ａｌａ、Ｔｉｃ、またはＴｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）であり；
ａａ３は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、ＣαＭｅＰｈｅ、またはΨ−Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、Ｕ（Ｘ）， Ｄ−またはＬ−ＣαＭｅＵ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、またはＰｒｏ、Ａｉｂ、Ｕ（Ｘ）、Ｄ−またはＬ−ＣαＭｅＵ（Ｘ）であり；および
Ｕは、界面活性物質Ｘに共有結合的に付けるために使用される、二塩基性の天然または非天然のアミノ酸、チオールを含む天然または非天然のアミノ酸、−Ｎ３基を含む非天然のアミノ酸、アセチレン基を含む非天然のアミノ酸、または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒまたは−（ＣＨ２）ｍ−マレイミドを含む非天然のアミノ酸であり、ここで、ｍは、１−１０である。
【００３２】
上におよび本明細書に記載される、式Ｉ、式ＩＩまたは式ＩＩＩのペプチド生成物の幾つかの実施形態において、Ｘは、以下の構造を有し：
【００３３】
【化７】
2014516036.tif 000009
【００３４】
式中：
Ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル鎖、置換または非置換のアルコキシアリール基、置換または非置換のアラルキル基、またはステロイド核を含有する部分であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、各々の出現で独立して、Ｈ、保護基、または置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基；
Ｗ１は、各々の出現で独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、−（Ｃ＝Ｓ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−ＮＨ−、または−ＣＨ２−Ｓ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；
Ｒ２は、単結合、Ｃ２−Ｃ４アルケン、Ｃ２−Ｃ４アルキン、または−（ＣＨ２）ｍ−マレイミドであり；および
ｍは、１−１０である。
【００３５】
上におよび本明細書に記載される、式Ｉ、式ＩＩまたは式ＩＩＩのペプチド生成物の幾つかの実施形態において、Ｘは、以下の構造を有する：
【００３６】
【化８】
2014516036.tif 000010
【００３７】
したがって、上に記載される実施形態では、Ｒ２は、単結合である。
【００３８】
上におよび本明細書に記載される、式Ｉ、式ＩＩまたは式ＩＩＩのペプチド生成物の幾つかの実施形態において、Ｘは、以下の構造を有する：
【００３９】
【化９】
2014516036.tif 000011
【００４０】
上におよび本明細書に記載される、式Ｉ、式ＩＩまたは式ＩＩＩのペプチド生成物の幾つかの実施形態において、Ｘは、以下の構造を有し：
【００４１】
【化１０】
2014516036.tif 000012
【００４２】
式中：
Ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、またはステロイド核を含有する部分であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄは、各々の出現で独立して、Ｈ、保護基、または置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基であり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−であり；
Ｒ２は、単結合である。
【００４３】
上におよび本明細書に記載される、式Ｉ、式ＩＩまたは式ＩＩＩのペプチド生成物の幾つかの実施形態において、Ｘは、以下の構造を有し：
【００４４】
【化１１】
2014516036.tif 000013
式中：
Ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、Ｈであり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−であり；および
Ｒ２は、単結合である。
【００４５】
上におよび本明細書に記載される、式Ｉ、式ＩＩまたは式ＩＩＩのペプチド生成物の幾つかの実施形態において、Ｘは、上に記載される通りであり、Ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ２０アルキル基である。
【００４６】
本明細書にはまた、式Ｉ中のＸが以下の構造を有する、代替の実施形態が熟慮される：
【００４７】
【化１２】
2014516036.tif 000014
【００４８】
例えば、上に記載されるＸの構造の典型的な実施形態では、Ｗ１は−Ｓ−であり、Ｒ２はＣ１−Ｃ３０アルキル基であり、Ｗ２はＳであり、Ｒ１ａは、Ｗ２と、ペプチド内のアミノ酸残基Ｕの適切な部分との間の単結合である（例えば、ペプチドのシステイン残基中のチオール基は、Ｘとチオエーテルを形成する）。
【００４９】
上に記載されるＸの構造の別の典型的な交互の実施形態では、Ｗ１は−Ｓ−であり、Ｒ２はＣ１−Ｃ３０アルキル基であり、Ｗ２はＯであり、Ｒ１ａは、Ｗ２と、ペプチド内のアミノ酸残基Ｕの適切な部分との間の単結合である（例えば、ペプチドのセリンまたはテレオニン残基中のヒドロキシル基は、Ｘとエーテルを形成する）。
【００５０】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩのペプチド生成物は、生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１４９）であり、
式中：
Ｕは、二塩基性の天然または非天然のアミノ酸であり；
Ｘは、１−アルキルグリコシドクラスの界面活性物質であり、ここで、１−アルキルは、置換または非置換のＣ１−Ｃ２０アルキルまたは置換または非置換のアルコキシアリール置換基であり；
Ｚは、ＮＨ２であり；
ａａ１は、Ｔｙｒ、Ｄｍｔ、Ｎα−Ｍｅ−Ｔｙｒ、Ｎα−Ｍｅ−Ｔｙｒ、Ｎ、Ｎα−ｄｉＭｅ−Ｔｙｒ、またはＮ，Ｎα−ｄｉＭｅ−Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｐｒｏ、Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｕ（Ｘ）、Ｄ−Ａｌａ、Ｔｉｃ、またはＴｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）であり；
ａａ３は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、ＣαＭｅＰｈｅ、またはΨ−Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、Ｕ（Ｘ）， Ｄ−またはＬ−ＣαＭｅＵ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、またはＰｒｏ、Ａｉｂ、Ｕ（Ｘ）、Ｄ−またはＬ−ＣαＭｅＵ（Ｘ）である。
【００５１】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩのペプチド生成物は、生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５０）であり、
式中：
Ｘは、１−アルキルグルクロン酸または１−アルキルジグルクロン酸から成り；
Ｚは、ＮＨ２であり；
ａａ１は、Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｐｒｏ、Ｄ−Ｌｙｓ（Ｘ）、Ｔｉｃ、またはＴｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）であり；
ａａ３は、Ｐｈｅ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、ＤまたはＬ−Ｎａｌ（２）、またはΨ−Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、ＤまたはＬ−Ｎａｌ（２）、またはＬｙｓ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、またはＰｒｏ、Ａｉｂ、Ｌｙｓ（Ｘ）、Ｄ−またはＬ−ＣαＭｅＬｙｓ（Ｘ）である。
【００５２】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩのペプチド生成物は、生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５１）であり、
式中：
ａａ１は、Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｐｒｏであり；
ａａ３は、Ｐｈｅ、またはＴｍｐであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、またはＬｙｓ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、またはＡｉｂ、Ｌｙｓ（Ｘ）、Ｄ−またはＬ−ＣαＭｅＬｙｓ（Ｘ）である。
【００５３】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩのペプチド生成物は、生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５２）であり、
式中：
ａａ１は、Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｐｒｏであり；
ａａ３は、Ｐｈｅ、またはＴｍｐであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、またはＬｙｓ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、またはＬｙｓ（Ｘ）である。
【００５４】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩのペプチド生成物は、生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５３）であり、
式中：
Ｕは、二塩基性の天然または非天然のアミノ酸であり；
Ｘは、１−アルキルグリコシドクラスの界面活性物質であり、ここで、１−アルキルグリコシドの１−アルキル基は、置換または非置換のＣ１−Ｃ２０アルキルまたは置換または非置換のアルコキシアリール置換基であり；
ａａ１は、Ｔｙｒ、Ｄｍｔ、Ｎ−Ｒ３−Ｔｙｒ、Ｎ−Ｒ３−Ｔｙｒ、Ｎ−（Ｒ３）２−Ｔｙｒ、またはＮ−（Ｒ３）２−Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｄ−Ａｒｇ、またはＤ−Ｕ（Ｘ）であり；
ａａ３は、Ｐｈｅ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、またはＴｍｐであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、Ｕ（Ｘ）、Ｄ−またはＬ−ＣαＭｅＵ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、Ｐｒｏ、またはＵ（Ｘ）である。
【００５５】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩのペプチド生成物は、生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５４）であり、
式中：
Ｘは、１−アルキルグルクロン酸または１−アルキルジグルクロン酸クラスの界面活性物質であり；
ａａ１は、Ｄｍｔ、Ｎα−Ｍｅ−Ｄｍｔ、またはＮ，Ｎα−Ｍｅ−Ｄｍｔ）であり；
ａａ２は、Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｌｙｓ（Ｘ）、またはＤ−Ｏｒｎ（Ｘ）であり；
ａａ３は、Ｐｈｅ、またはＴｍｐであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、Ｔｍｐ、Ｌｙｓ（Ｘ）、またはＯｒｎ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、またはＰｒｏ、Ｌｙｓ（Ｘ）、またはＯｒｎ（Ｘ）である。
【００５６】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩのペプチド生成物は、生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５５）であり、
式中：
Ｕは、二塩基性の天然または非天然のアミノ酸であり；
Ｘは、１−アルキルグリコシドクラスの界面活性物質であり、ここで、１−アルキルは、置換または非置換のＣ１−Ｃ２０アルキルまたは置換または非置換のアルコキシアリールオキシ置換基であり；
Ｚは、ＮＨ２であり；
ａａ１は、Ｔｙｒ、Ｄｍｔ、Ｎ−Ｒ３−Ｔｙｒ、Ｎ−Ｒ３−Ｄｍｔ、Ｎ−（Ｒ３）２−Ｔｙｒ、またはＮ−（Ｒ３）２−Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｔｉｃ、またはＴｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）であり；
ａａ３は、ａａ２がＴｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）であるときに、Ψ−Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、またはＵ（Ｘ）である。
【００５７】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩのペプチド生成物は、生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５６）であり、
式中：
Ｘは、１−アルキルグルクロン酸または１−アルキルジグルクロン酸クラスの界面活性物質であり；
ａａ１は、Ｔｙｒ、Ｄｍｔ、Ｎα−Ｍｅ−Ｔｙｒ、Ｎα−アルキル−Ｄｍｔ、Ｎ，Ｎα−ｄｉＭｅ−Ｔｙｒ、またはＮ，Ｎα−Ｍｅ−Ｄｍｔであり；
ａａ２は。Ｔｉｃ、またはＴｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）であり；
ａａ３は、ａａ２が、Ｔｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）、Ｐｈｅ、またはＴＭＰであるときに、Ψ−Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、Ｌｙｓ（Ｘ）、またはＯｒｎ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、またはＡｉｂ、Ｌｙｓ（Ｘ）、またはＯｒｎ（Ｘ）である。
【００５８】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩのペプチド生成物は、生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５７）であり、
式中：
Ｘは、１−アルキルグルクロン酸または１−アルキルジグルクロン酸から成り；
ａａ２は、Ｔｉｃ、またはＴｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）であり；
ａａ３は、ＰｈｅまたはΨ−Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｌｙｓ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない。
【００５９】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩのペプチド生成物は、生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５８）であり、
式中：
Ｘは、１−アルキルグルクロン酸から成り；
ａａ２は、Ｔｉｃであり：
ａａ３は、Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｌｙｓ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない。
【００６０】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩのペプチド生成物は、生成物（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１５９）であり、
式中：
Ｘは、１−メチルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−オクチルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−ドデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−テトラデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、および１−オクタデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸から選択される、１−アルキルグルクロン酸から成り；
ａａ２は、Ｔｉｃであり；
ａａ３は、Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｌｙｓ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない。
【００６１】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩのペプチド生成物は、Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１−メチルベータ−Ｄ−グルクロニル）−ＮＨ２（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．７８）である。
【００６２】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩのペプチド生成物は、Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎイプシロン−１−オクチルベータ−Ｄ−グルクロニル）−ＮＨ２（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．８０）である。
【００６３】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩのペプチド生成物は、Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎイプシロン−１−ドデシルベータ−Ｄ−グルクロニル）−ＮＨ２（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．７９）である。
【００６４】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩのペプチド生成物は、Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎイプシロン−１−テトラデシルベータ−Ｄ−グルクロニル）−ＮＨ２（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１６０）である。
【００６５】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩのペプチド生成物は、Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎイプシロン−１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−グルクロニル）−ＮＨ２（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．８２）である。
【００６６】
幾つかの実施形態では、式ＩＩＩのペプチド生成物は、Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１−オクタデシルベータ−Ｄ−グルクロニル）−ＮＨ２（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．８３）である。
【００６７】
幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、生物学的に活性である。
【００６８】
具体的な実施形態では、本明細書には、図１−１乃至図１−７の表１の化合物から選択される化合物が提供される。
【００６９】
本明細書にはまた、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの治療上有効な量のペプチド生成物、またはその薬学的に許容可能な塩、および少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む、医薬組成物が提供される。
【００７０】
本明細書には、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの治療上有効な量のペプチド生成物または図１−１乃至図１−７の表１の化合物の投与を含む、疼痛を処置する方法が提供される。
【００７１】
ペプチドの薬学的および治療的な反応（ｂｅｈａｖｉｏｒ）を改善し、それによって、作用のその持続時間、バイオアベイラビリティ、または製剤におけるその安定性を改善するための方法であって、該方法は、ペプチドに界面活性物質Ｘを共有結合的に付ける工程を含み、ここで、Ｘは、本明細書に記載される通りである。
【００７２】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される共有結合的に連結されたアルキルグリコシドを含むペプチド生成物は、Ｌｅｕ‐エンケファリンのアナログである。このような実施形態の幾つかにおいて、ペプチド生成物は、共有結合的に連結された１−Ｏ−アルキルβ−Ｄ−グルクロン酸を含有し、ペプチドは、Ｌｅｕ‐エンケファリンのアナログである。
【００７３】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される共有結合的に連結されたアルキルグリコシドを含むペプチド生成物は、オピオイドペプチドＤＰＤＰＥのアナログである（Ａｋｉｙａｍａ Ｋ， ｅｔ ａｌ． （１９８５） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８２：２５４３−７）。このような実施形態の幾つかにおいて、ペプチド生成物は、共有結合的に連結された１−Ｏ−アルキルグルクロン酸を含有し、ペプチドは、オピオイドペプチドＤＰＤＰＥのアナログである。
【００７４】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される共有結合的に連結されたアルキルグリコシドを含むペプチド生成物は、天然生成物のペプチドのデルモルフィン（Ｍｅｌｃｈｉｏｒｒｉ， Ｐ． ａｎｄ Ｎｅｇｒｉ， Ｌ． （１９９６） Ｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２７： １０９９−１１０７）またはデルトルフィン（Ｅｒｓｐａｍｅｒ， Ｖ．， ｅｔ ａｌ． （１９８９） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８６：５１８８−９２）を含有するＤ−アミノ酸のアナログである。このような実施形態の幾つかにおいて、ペプチド生成物は、共有結合的に連結された１−Ｏ−アルキルβ−Ｄ−グルクロン酸を含有し、ペプチドは、デルモルフィンまたはデルトルフィンのアナログである。
【００７５】
幾つかの実施形態では、共有結合的に連結されたアルキルグリコシドを含むペプチド生成物は、エンドモルフィン−１または−２のアナログである。このような実施形態の幾つかにおいて、ペプチド生成物は、共有結合的に連結された１−Ｏ−アルキルβ−Ｄ−グルクロン酸を含有し、ペプチドは、エンドモルフィンのアナログである（Ｌａｚａｒｕｓ， Ｌ．Ｈ． ａｎｄ Ｏｋａｄａ， Ｙ． （２０１２） Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｔｈｅｒ Ｐａｔｅｎｔｓ ２２： １−１４）。
【００７６】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される共有結合的に連結されたアルキルグリコシドを含むペプチド生成物は、オピオイドペプチドダイノルフィンのアナログである（Ｊａｍｅｓ， Ｉ．Ｆ．， ｅｔ ａｌ． （１９８２） Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ３１：１３３１−４）。このような実施形態の幾つかにおいて、ペプチド生成物は、共有結合的に連結された１−Ｏ−アルキルβ−Ｄグルクロン酸を含有し、ペプチドは、ダイノルフィンのアナログである。
【００７７】
幾つかの実施形態では、２つの異なるアミノ酸残基の側鎖官能基は、環状ラクタムを形成するために連結される。例えば、幾つかの実施形態では、Ｌｙｓ側鎖は、Ｇｌｕの側鎖と環状ラクタムを形成する。幾つかの実施形態では、このようなラクタム構造は、反転され（ｒｅｖｅｒｓｅｄ）、ＧｌｕおよびＬｙｓから形成される。幾つかの例でのこのようなラクタム結合は、ペプチドにおいてアルファヘリックス構造を安定させると知られている（Ｃｏｎｄｏｎ， Ｓ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （２００２） Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １０： ７３１−７３６）。
【００７８】
幾つかの実施形態では、−ＳＨを含有する側鎖を有する、２つの異なるアミノ酸残基の側鎖官能基は、環状ジスルフィドを形成するために連結される。例えば、幾つかの実施形態では、２つのペニシラミンまたは２つのＣｙｓ側鎖は、作用のより長い持続時間またはより大きな受容体の選択性をもたらすために、ペプチドのコンフォメーション（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）を抑制するために連結され得る（Ａｋｉｙａｍａ Ｋ， ｅｔ ａｌ． （１９８５） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８２：２５４３−７）。
【００７９】
具体的な実施形態では、上におよび本明細書に記載される、式Ｉ、式ＩＩまたは式ＩＩＩのペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【００８０】
【化１３】
2014516036.tif 000015
【００８１】
式中、Ａは、図１−１乃至図１−７の表１に記載されるようなＣ１−Ｃ２０アルキル鎖であり、Ｒ’は、図１−１乃至図１−７の表１に記載されるようなペプチドであり、式ＶのＷ２は、−Ｏ−であり、および式ＶのＷ１は、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−である且つペプチドＲ’に対するアミド結合の一部である。このような実施形態の幾つかにおいて、Ａは、Ｃ６−Ｃ２０アルキル鎖である。このような実施形態の幾つかにおいて、Ａは、Ｃ１−Ｃ１０アルキル鎖である。このような実施形態の幾つかにおいて、Ａは、Ｃ１２−Ｃ２０アルキル鎖である。このような実施形態の幾つかにおいて、Ａは、Ｃ１２−Ｃ１８アルキル鎖である。
【００８２】
上に記載される実施形態では、アミノ酸及び／又はペプチドＲ’のアミノ部分（例えば、リジンなどのアミノ酸残基のアミノ基、またはペプチドＲ’内のリジン）は、以下の構造の化合物との共有結合を形成するために使用され：
【００８３】
【化１４】
2014516036.tif 000016
【００８４】
式中、Ａは、上におよび図１−１乃至図１−７の表１に記載されるようなＣ１−Ｃ２０アルキル鎖である。
【００８５】
そのような場合において、上に記載される式Ａの化合物に対する共有結合を形成するために使用される、アミノ部分（例えば、ペプチドＲ’内のリジン）を有するアミノ酸残基は、界面活性物質Ｘに付けられるリンカーアミノ酸Ｕである。したがって、１つの例として、図１−１乃至図１−７の表１のＬｙｓ（Ｃ１２）は、以下の構造を有する：
【００８６】
【化１５】
2014516036.tif 000017
【００８７】
また、本明細書に提示される実施形態の範囲内では、カルボン酸基のいずれか又は両方に対するペプチドの共有結合によって調製された、マルツロン酸ベースの界面活性物質に起因する式Ｉのペプチド生成物が熟慮される。したがって、１つの例として、図１−１乃至図１−７の表１におけるペプチドは、マルツロン酸ベースの界面活性物質Ｘに結合した、および以下の構造を有する、リジンリンカーアミノ酸を含む：
【００８８】
【化１６】
2014516036.tif 000018
【００８９】
１つの実施形態では、式Ｉの化合物は、リジンを基Ｘに付け、その後、式Ｉの化合物を得るために追加のアミノ酸残基及び／又はペプチドを、リジン−Ｘ化合物に付けることによって調製されることが理解されるであろう。本明細書に記載される他の天然または非天然のアミノ酸は、界面活性物質Ｘに付けることにも適しており、式Ｉの化合物を得るために、追加のアミノ酸／ペプチドを付けることに適していることが理解されるであろう。別の実施形態では、式Ｉの化合物は、全長または部分的な長さのペプチドを基Ｘに付け、その後、式Ｉの化合物を得るために追加のアミノ酸残基及び／又はペプチドを付けることによって調製されることが理解されるであろう。
【００９０】
本明細書にはまた、上に記載される治療上有効な量のペプチド生成物、またはその許容可能な塩、および少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む、医薬組成物が提供される。幾つかの実施形態では、担体は、水性ベースの担体である。幾つかの実施形態では、担体は、非水性ベースの担体である。幾つかの実施形態では、非水性ベースの担体は、サブミクロンの無水のα−ラクトースを含むヒドロフルオロアルカン様の溶媒、または他の賦形剤である。
【００９１】
本明細書に提示される実施形態の範囲内で、求核試薬を運ぶ（ｂｅａｒｉｎｇ）リンカーアミノ酸Ｕを含む、アミノ酸及び／又はペプチドと、脱離基または脱離基を含有するために活性化することができる官能基、例えば、カルボン酸、または任意の他の反応基を含む基Ｘとの反応が熟慮され、それによって、リンカーアミノ酸Ｕを介する、界面活性物質Ｘに対するアミノ酸及び／又はペプチドの共有結合が可能となり、式Ｉのペプチド生成物を提供する。
【００９２】
本明細書に提示される実施形態の範囲内ではまた、脱離基または脱離基を含有するために活性化することができる官能基、例えば、カルボン酸、または任意の他の反応基を運ぶ（ｂｅａｒｉｎｇ）リンカーアミノ酸Ｕを含む、アミノ酸及び／又はペプチドと、求核基を含む基Ｘとの反応が熟慮され、それによって、リンカーアミノ酸Ｕを介する、界面活性物質Ｘに対するアミノ酸及び／又はペプチドの共有結合が可能となり、式Ｉのペプチド生成物を提供する。
【００９３】
１つの実施形態では、式Ｉの化合物は、リンカーアミノ酸ＵのＸとの反応によって調製され、その後、式Ｉのペプチド生成物を得るために、さらなる残基をＵに付けることが理解されるであろう。
【００９４】
代替的な実施形態では、式Ｉの化合物は、リンカーアミノ酸Ｕを含む適切なペプチドのＸとの反応によって調製され、その後、式Ｉのペプチド生成物を得るために、さらなる残基をＵに随意に付けることが理解されるであろう。
【００９５】
本明細書にはさらに、本明細書に記載されるペプチド生成物の合成に適した、特定の中間物及び／又は試薬が提供される。特定の実施形態では、このような中間物及び／又は試薬は、ペプチドとの共有結合を可能にする、官能化された界面活性物質である。特定の実施形態では、このような中間物は、ペプチドとの共有結合を可能にする、官能化された１−アルキルグリコシド界面活性物質である。特定の実施形態では、このような中間物は、ペプチドを形成するために、他のアミノ酸との共有結合を可能にする、可逆的に保護されたリンカーアミノ酸に連結された、官能化された１−アルキルグリコシド界面活性物質である。適切に官能化された界面活性物質は、リンカーアミノ酸上にある適切に一致した官能基との反応を介してペプチドに共有結合的に連結されることが理解されるであろう。
【００９６】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるペプチド生成物の合成に適した中間物は、式ＩＶの化合物である。したがって、本明細書には、中間物及び／又は以下の式ＩＶの化合物が提供され：
【００９７】
【化１７】
2014516036.tif 000019
【００９８】
式中：
Ｒ１ａは、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、保護基、天然または非天然のアミノ酸、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル疎水基、置換または非置換のアルコキシアリール基、置換または非置換のアラルキル基、またはステロイド核を含有する部分であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、保護基、天然または非天然のアミノ酸、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル疎水基、置換または非置換のアルコキシアリール基、または置換または非置換のアラルキル基であり；
Ｗ１は、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、−（Ｃ＝Ｓ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−ＮＨ−、または−ＣＨ２−Ｓ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−であり；
Ｒ２は、Ｈ、保護基、天然または非天然のアミノ酸、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル疎水基、置換または非置換のアルコキシアリール基、置換または非置換のアラルキル基、−ＮＨ２、−ＳＨ、Ｃ２−Ｃ４−アルケン、Ｃ２−Ｃ４−アルキン、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒ、−（ＣＨ２）ｍ−マレイミド、または−Ｎ３であり；
ｎは、１、２または３であり；
ｍは、１−１０である。
【００９９】
幾つかの実施形態では、各々の天然または非天然のアミノ酸は、独立して、可逆的に保護された又は遊離したリンカーアミノ酸である。このような実施形態の幾つかにおいて、リンカーアミノ酸は、可逆的に保護された又は遊離したリジンである。
【０１００】
式ＩＶのいくつかの実施形態では、
ｎは、１であり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−であり；
Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル疎水基、置換または非置換の１−アルコキシアリール基、または置換または非置換の１−アラルキル基であり、
Ｒ２は、Ｄ−構成またはＬ−構成の可逆的に保護されたリジンである。
【０１０１】
式ＩＶの幾つかの実施形態では、
ｎは１であり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−であり；
Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ８−Ｃ３０アルキル疎水基、置換または非置換の１−アルコキシアリール基または置換または非置換の１−アラルキル基であり、
Ｒ２は、Ｄ−構成またはＬ−構成の可逆的に保護されたリジンである。
【０１０２】
このような実施形態の幾つかにおいて、Ｒ１ａは、オクチル、デシル、ドデシル、テトラデシル、またはヘキサデシル基である。
【０１０３】
式ＩＶの幾つかの実施形態では、
ｎは、１であり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−または−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−であり；
Ｒ２は、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル疎水基、置換または非置換の１−アルコキシアリール基、または置換または非置換の１−アラルキル基であり、
Ｒ１ａは、Ｄ−構成またはＬ−構成の可逆的に保護されたセリンまたはトレオニンである。
【０１０４】
このような実施形態の幾つかにおいて、Ｒ２は、オクチル、デシル、ドデシル、テトラデシル、またはヘキサデシル基である。
【０１０５】
式ＩＶの幾つかの実施形態では、
ｎは１であり；
ｍは、１−６であり；
Ｗ１は、−ＣＨ２−であり；
Ｒ１ａは、Ｃ１−Ｃ３０アルキル疎水基、１−アルコキシアリール基、または１−アラルキル基であり、
Ｒ２は、−Ｎ３、ＮＨ２、−Ｃ２−アルキン、−（ＣＨ２）ｍ−マレイミド、ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒ、またはＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｉである。
【０１０６】
式ＩＶの幾つかの実施形態では、
ｎは１であり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−であり；
Ｒ２は、Ｈであり、
Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル疎水基である。
【０１０７】
式ＩＶの幾つかの実施形態では、Ｒ２は、ペプチドに付けられか、またはペプチド中のアミノ酸残基である。このような実施形態の幾つかにおいて、Ｒ２は、可逆的に保護されたリジンである。
【０１０８】
式ＩＶの幾つかの実施形態では、ｎは、１である。式ＩＶの幾つかの実施形態では、ｎは、２であり、第１グリコシドは、第１グリコシドのＷ２と、第２グリコシドのＯＲ１ｂ、ＯＲ１ｃまたはＯＲ１ｄの任意の１つとの間の単結合を介して第２グリコシドに付けられる。
【０１０９】
式ＩＶの幾つかの実施形態では、ｎは、３であり、第１グリコシドは、第１グリコシドのＷ２と、第２グリコシドのＯＲ１ｂ、ＯＲ１ｃまたはＯＲ１ｄの任意の１つとの間の単結合を介して第２グリコシドに付けられ、第２グリコシドは、第２グリコシドのＷ２と、第３グリコシドのＯＲ１ｂ、ＯＲ１ｃまたはＯＲ１ｄの任意の１つとの間の単結合を介して第３グリコシドに付けられる。
【０１１０】
本明細書には、上に記載されるペプチド生成物を合成するための方法が提供され、該方法は、連続する、
（ａ）式ＩＶの化合物をペプチドに結合する工程；
（ｂ）工程（ａ）の結合したペプチドを随意に脱保護する工程、を含む。
【０１１１】
幾つかの実施形態では、脱保護は、緩酸及びまたは緩塩基（ｍｉｌｄ ｂａｓｅ）の処理の使用を含む。方法の幾つかの実施形態では、脱保護は、強酸の使用を含む。
【０１１２】
幾つかの実施形態では、方法はさらに、クロマトグラフィー、逆相による中間物の脱塩、高速液体クロマトグラフィー、または中間物のイオン交換クロマトグラフィーの工程を含む。
【０１１３】
本明細書には、ペプチドの薬学的および治療的な反応を改善し、それによって、作用のその持続時間、バイオアベイラビリティ、または製剤におけるその安定性を改善する方法が提供され、該方法は、界面活性物質Ｘをペプチドに共有結合的に付ける工程を含み、ここで：
Ｘは：
【０１１４】
【化１８】
2014516036.tif 000020
【０１１５】
であり、
式中、
Ａは、疎水基であり；および
Ｂは、リンカーアミノ酸を介してペプチドに共有結合的に付けられた親水基である。
【０１１６】
幾つかの実施形態では、Ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル鎖、置換または非置換のアルコキシアリール基、または置換または非置換のアラルキル基である。
【０１１７】
幾つかの実施形態では、Ａは、置換または非置換のＣ８−Ｃ２０アルキル鎖、置換または非置換の１−アルコキシアリール基、または置換または非置換の１−アラルキル基である。
【０１１８】
幾つかの実施形態では、Ａは、置換または非置換のＣ１０−Ｃ２０アルキル鎖、置換または非置換の１−アルコキシアリール基、または置換または非置換の１−アラルキル基である。
【０１１９】
幾つかの実施形態では、Ｂは、官能化されたポリオールである。
【０１２０】
幾つかの実施形態では、ポリオールは、糖類である。
【０１２１】
幾つかの実施形態では、糖類は、単糖類、二糖類、または多糖類である。
【０１２２】
幾つかの実施形態では、糖類は、グルクロン酸、ガラクツロン酸、ジグルクロン酸およびマルツロン酸から選択される。
【０１２３】
上に記載される合成の方法は、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、２−Ｉ−１、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ、２−ＶＩＩ、３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ、または３−Ｖを含む、本明細書に記載されるすべての化合物、および図１−１乃至図１−７、図２−１乃至図２−４、図８−１乃至図８−５および図９−１乃至図９−７にそれぞれ提供される、表１、表２、表３および表４の化合物の合成に適している。
【０１２４】
本明細書には、ペプチドの薬学的および治療的な反応を改善し、それによって、作用のその持続時間、バイオアベイラビリティ、または製剤におけるその安定性を改善する方法が提供され、該方法は、界面活性物質Ｘをペプチドに共有結合的に付ける工程を含み、ここで：
Ｘは：
【０１２５】
【化１９】
2014516036.tif 000021
【０１２６】
であり、
式中、
Ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ２０アルキル鎖、置換または非置換のアルコキシアリール基、または置換または非置換のアラルキル基であり；および
Ｂは、リンカーアミノ酸を介してペプチドに共有結合的に付けられた糖類である。
【０１２７】
幾つかの実施形態では、界面活性物質は、１−アルキルグリコシドクラスの界面活性物質である。
【０１２８】
幾つかの実施形態では、界面活性物質中の親水基は、アミド結合を介してペプチドに付けられる。
【０１２９】
幾つかの実施形態では、界面活性物質は、酸、１−ヘキサデシル−ベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−テトラデシル−ベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−ドデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−デシル−ベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−オクチル−ベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−ヘキサデシル−ベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−テトラデシル−ベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−ドデシル−ベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−デシル−ベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−オクチル−ベータ−Ｄ−ジグルクロン酸から成る。
【０１３０】
本明細書には、本明細書に記載される治療上有効な量のペプチド生成物、または式ＩＶの化合物の、それを必要としている個体への投与を含む、それを必要としている個体において疼痛を処置する方法が提供される。
【０１３１】
本明細書にはまた、本明細書に記載されるような親水基；および親水基に共有結合的に付けられた疎水基、を含む共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質生成物が提供される。具体的な実施形態では、共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質生成物は、糖類である親水基、およびＣ１−Ｃ２０アルキル鎖またはアラルキル鎖である疎水基を含む。
【図面の簡単な説明】
【０１３２】
【図１−１】図１−１乃至図１−７の表１は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１および１４９−１６９に対する配列を提供する。さらに、図１−１乃至図１−７の表１は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．２−１４８、およびＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６４５を有する、化合物ＥＵ−Ａ１０１乃至ＥＵ−Ａ１９９、およびＥＵ−Ａ６００乃至ＥＵ−Ａ６４９に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図１−１乃至図１−７の表１における化合物、および図１−１乃至図１−７の表１に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図１−２】図１−１乃至図１−７の表１は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１および１４９−１６９に対する配列を提供する。さらに、図１−１乃至図１−７の表１は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．２−１４８、およびＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６４５を有する、化合物ＥＵ−Ａ１０１乃至ＥＵ−Ａ１９９、およびＥＵ−Ａ６００乃至ＥＵ−Ａ６４９に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図１−１乃至図１−７の表１における化合物、および図１−１乃至図１−７の表１に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図１−３】図１−１乃至図１−７の表１は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１および１４９−１６９に対する配列を提供する。さらに、図１−１乃至図１−７の表１は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．２−１４８、およびＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６４５を有する、化合物ＥＵ−Ａ１０１乃至ＥＵ−Ａ１９９、およびＥＵ−Ａ６００乃至ＥＵ−Ａ６４９に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図１−１乃至図１−７の表１における化合物、および図１−１乃至図１−７の表１に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図１−４】図１−１乃至図１−７の表１は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１および１４９−１６９に対する配列を提供する。さらに、図１−１乃至図１−７の表１は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．２−１４８、およびＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６４５を有する、化合物ＥＵ−Ａ１０１乃至ＥＵ−Ａ１９９、およびＥＵ−Ａ６００乃至ＥＵ−Ａ６４９に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図１−１乃至図１−７の表１における化合物、および図１−１乃至図１−７の表１に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図１−５】図１−１乃至図１−７の表１は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１および１４９−１６９に対する配列を提供する。さらに、図１−１乃至図１−７の表１は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．２−１４８、およびＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６４５を有する、化合物ＥＵ−Ａ１０１乃至ＥＵ−Ａ１９９、およびＥＵ−Ａ６００乃至ＥＵ−Ａ６４９に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図１−１乃至図１−７の表１における化合物、および図１−１乃至図１−７の表１に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図１−６】図１−１乃至図１−７の表１は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１および１４９−１６９に対する配列を提供する。さらに、図１−１乃至図１−７の表１は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．２−１４８、およびＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６４５を有する、化合物ＥＵ−Ａ１０１乃至ＥＵ−Ａ１９９、およびＥＵ−Ａ６００乃至ＥＵ−Ａ６４９に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図１−１乃至図１−７の表１における化合物、および図１−１乃至図１−７の表１に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図１−７】図１−１乃至図１−７の表１は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１および１４９−１６９に対する配列を提供する。さらに、図１−１乃至図１−７の表１は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．２−１４８、およびＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６４５を有する、化合物ＥＵ−Ａ１０１乃至ＥＵ−Ａ１９９、およびＥＵ−Ａ６００乃至ＥＵ−Ａ６４９に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図１−１乃至図１−７の表１における化合物、および図１−１乃至図１−７の表１に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図２−１】図２−１乃至図２−４の表２は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１７０−１７４およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．２８３−３０２に対する配列を提供する。さらに、図２−１乃至図２−４の表２は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１７５−２８２を有する、化合物ＥＵ−２０１乃至ＥＵ−２９９、およびＥＵ−９００乃至ＥＵ−９０８に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図２−１乃至図２−４の表２における化合物、および図２−１乃至図２−４の表２に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図２−２】図２−１乃至図２−４の表２は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１７０−１７４およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．２８３−３０２に対する配列を提供する。さらに、図２−１乃至図２−４の表２は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１７５−２８２を有する、化合物ＥＵ−２０１乃至ＥＵ−２９９、およびＥＵ−９００乃至ＥＵ−９０８に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図２−１乃至図２−４の表２における化合物、および図２−１乃至図２−４の表２に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図２−３】図２−１乃至図２−４の表２は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１７０−１７４およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．２８３−３０２に対する配列を提供する。さらに、図２−１乃至図２−４の表２は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１７５−２８２を有する、化合物ＥＵ−２０１乃至ＥＵ−２９９、およびＥＵ−９００乃至ＥＵ−９０８に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図２−１乃至図２−４の表２における化合物、および図２−１乃至図２−４の表２に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図２−４】図２−１乃至図２−４の表２は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１７０−１７４およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．２８３−３０２に対する配列を提供する。さらに、図２−１乃至図２−４の表２は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１７５−２８２を有する、化合物ＥＵ−２０１乃至ＥＵ−２９９、およびＥＵ−９００乃至ＥＵ−９０８に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図２−１乃至図２−４の表２における化合物、および図２−１乃至図２−４の表２に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図３】図３は、２つのパネルを有する。図３での上のパネルは、ＰＴＨ１−３４またはＰＴＨｒＰ１−３４と、受容体の細胞外ドメインのＸ線結晶構造（Ｐｉｏｚａｋ， Ａ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８４：２８３８２−３９１）に基づいたＰＴＨ Ｒ１受容体との間の相互作用を例証する。残基２３’（ＷまたはＦ）、２４’（Ｌ）および２８’（ＬまたはＩ）の重要な疎水的相互作用が例証される。幾つかの例において、本明細書に記載される修飾されるペプチド上の界面活性物質の修飾は、これらの重要な疎水的相互作用に取って代わる。図３での下のパネルは、ＰＴＨ１−３４とＰＴＨｒＰ１−３４の配列間の構造的な比較を示し、配列およびペプチドらせん構造における同一性および相同性の強い領域を例証する。
【図４】図４は、本明細書に記載される代表的なペプチド生成物、ＥＵ−２３２による刺激に対する培養物（ＳａＯＳ２）におけるヒト細胞のｃＡＭＰ反応を示す。縦軸（垂直軸）は、内部アッセイ標準、即ち、ＰＴＨｒＰに示された最大の反応の割合としての反応を示す。データは、ＥＵ−２３２に対する超敵対的な（ｓｕｐｅｒ−ａｇｏｎｉｓｔｉｃ）反応を例証する。
【図５】図５は、様々な用量のＥＵ−２８５（ヒトＰＴＨｒＰのコード化されたサンプル）での処置に対する培養物（ＳａＯＳ２）中のヒト細胞の反応を示す。縦軸（垂直軸）は、内部アッセイ標準、即ち、ＰＴＨｒＰの最大の反応の割合としてのｃＡＭＰ反応を示す。
【図６】図６は、生理食塩水（Ｇ１）、１ｋｇ当たり８０マイクログラムのＰＴＨ（Ｇ２）、１ｋｇ当たり８０マイクログラムのＥＵ−２３２（Ｇ３）、または１ｋｇ当たり３２０マイクログラムのＥＵ−２３２（Ｇ４）でのラットに対する皮下の投薬後に、様々な時点で試験された、ラット血清中の血中リン酸塩レベルを示す。この界面活性物質で修飾されたアナログ、ＥＵ−２３２は、アッセイにおける最後の時点（即ち、投薬の５時間後）で見られる、最大の統計的に有意な効果によって証拠づけられるような、作用の延長した持続時間を実証する。実施例６を参照。
【図７】図７は、生理食塩水（Ｇ１）、１ｋｇ当たり８０マイクログラムのＰＴＨ（Ｇ２）、１ｋｇ当たり８０マイクログラムのＥＵ−２３２（Ｇ３）、または１ｋｇ当たり３２０マイクログラムのＥＵ−２３２（Ｇ４）でのラットに対する皮下の投薬後に、様々な時点で試験された、ラット血清中の血中カルシウムレベルを示す。対照（Ｇ１）とは統計的に有意に異なる群はなかった。さらに、ＥＵ−２３２に対する最大に有効な用量および時間点（Ｇ４；５時間で）は、上昇を示さず、それ故、最大に有効な用量での高カルシウム血症の傾向は示されない。実施例６を参照。
【図８−１】図８−１乃至図８−５の表３は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０３−３０５およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．６１９−６４４に対する配列を提供する。さらに、図８−１乃至図８−５の表３は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０６−４３１を有する、化合物ＥＵ−Ａ３００乃至ＥＵ−Ａ４２５に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図８−１乃至図８−５の表３における化合物、および図８−１乃至図８−５の表３に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図８−２】図８−１乃至図８−５の表３は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０３−３０５およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．６１９−６４４に対する配列を提供する。さらに、図８−１乃至図８−５の表３は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０６−４３１を有する、化合物ＥＵ−Ａ３００乃至ＥＵ−Ａ４２５に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図８−１乃至図８−５の表３における化合物、および図８−１乃至図８−５の表３に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図８−３】図８−１乃至図８−５の表３は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０３−３０５およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．６１９−６４４に対する配列を提供する。さらに、図８−１乃至図８−５の表３は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０６−４３１を有する、化合物ＥＵ−Ａ３００乃至ＥＵ−Ａ４２５に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図８−１乃至図８−５の表３における化合物、および図８−１乃至図８−５の表３に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図８−４】図８−１乃至図８−５の表３は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０３−３０５およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．６１９−６４４に対する配列を提供する。さらに、図８−１乃至図８−５の表３は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０６−４３１を有する、化合物ＥＵ−Ａ３００乃至ＥＵ−Ａ４２５に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図８−１乃至図８−５の表３における化合物、および図８−１乃至図８−５の表３に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図８−５】図８−１乃至図８−５の表３は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０３−３０５およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．６１９−６４４に対する配列を提供する。さらに、図８−１乃至図８−５の表３は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０６−４３１を有する、化合物ＥＵ−Ａ３００乃至ＥＵ−Ａ４２５に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図８−１乃至図８−５の表３における化合物、および図８−１乃至図８−５の表３に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図９−１】図９−１乃至図９−７の表４は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０３−３０５およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．６１９−６４４を提供する。さらに、図９−１乃至図９−７の表４は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．４３２−５２０を有する、化合物ＥＵ−Ａ４２６乃至ＥＵ−５９９に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図２−１乃至図２−４の表２における化合物、および図９−１乃至図９−７の表４に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図９−２】図９−１乃至図９−７の表４は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０３−３０５およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．６１９−６４４を提供する。さらに、図９−１乃至図９−７の表４は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．４３２−５２０を有する、化合物ＥＵ−Ａ４２６乃至ＥＵ−５９９に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図２−１乃至図２−４の表２における化合物、および図９−１乃至図９−７の表４に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図９−３】図９−１乃至図９−７の表４は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０３−３０５およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．６１９−６４４を提供する。さらに、図９−１乃至図９−７の表４は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．４３２−５２０を有する、化合物ＥＵ−Ａ４２６乃至ＥＵ−５９９に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図２−１乃至図２−４の表２における化合物、および図９−１乃至図９−７の表４に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図９−４】図９−１乃至図９−７の表４は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０３−３０５およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．６１９−６４４を提供する。さらに、図９−１乃至図９−７の表４は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．４３２−５２０を有する、化合物ＥＵ−Ａ４２６乃至ＥＵ−５９９に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図２−１乃至図２−４の表２における化合物、および図９−１乃至図９−７の表４に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図９−５】図９−１乃至図９−７の表４は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０３−３０５およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．６１９−６４４を提供する。さらに、図９−１乃至図９−７の表４は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．４３２−５２０を有する、化合物ＥＵ−Ａ４２６乃至ＥＵ−５９９に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図２−１乃至図２−４の表２における化合物、および図９−１乃至図９−７の表４に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図９−６】図９−１乃至図９−７の表４は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０３−３０５およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．６１９−６４４を提供する。さらに、図９−１乃至図９−７の表４は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．４３２−５２０を有する、化合物ＥＵ−Ａ４２６乃至ＥＵ−５９９に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図２−１乃至図２−４の表２における化合物、および図９−１乃至図９−７の表４に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図９−７】図９−１乃至図９−７の表４は、本明細書に記載される方法によって調製された化合物を示す。本明細書は、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０３−３０５およびＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．６１９−６４４を提供する。さらに、図９−１乃至図９−７の表４は、示されるように、それぞれ、ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．４３２−５２０を有する、化合物ＥＵ−Ａ４２６乃至ＥＵ−５９９に対するＳＥＱ．ＩＤ Ｎｕｍｂｅｒｓを提供する。図２−１乃至図２−４の表２における化合物、および図９−１乃至図９−７の表４に示される、それぞれのＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．は、出願されるように本明細書に組み込まれる。
【図１０】図１０は、ＧＬＰ−１受容体の細胞外ドメインの結合部位のＸ線結晶構造（Ｒｕｎｇｅ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ． （２００８） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８３： １１３４０−７）を示し、受容体、および本発明のペプチド上の界面活性物質の疎水性の１’−アルキル部分によって模倣され、交換されるリガンドエキセンジン−４（Ｖａｌ１９＊、Ｐｈｅ２２＊、Ｔｒｐ２５＊、Ｌｅｕ２６＊）の重要な疎水性の結合要素を示す。
【図１１】図１１は、ミューオピオイド受容体（ＭＯＰ）を含有する細胞に作用し、３０ｎＭのＤＰＤＰＥと競合して、デルタオピオイド受容体（ＤＯＰ）上でアンタゴニストとして作用する、代表的な化合物、ＥＵ−Ａ１７８の細胞アッセイのデータを示す。代表的な化合物は、ＭＯＰアゴニストアッセイにおいて強力で、完全な敵対行動、およびＤＯＰ受容体上の純粋なアンタゴニストとして、高度に強力な作用を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１３３】
本明細書には、親水基、「頭（ｈｅａｄ）」（例えば、ポリオール（例えば、糖類））に共有結合的に付けられたペプチド及び／又はタンパク質を含む、修飾されたペプチド及び／又はタンパク質が提供され；親水基は、疎水基、「尾（ｔａｉｌ）」に共有結合的に付けられ、それによって、界面活性物質を生成する。幾つかの実施形態では、ペプチドまたはタンパク質の共有結合修飾のための疎水性結合のグリコシド界面活性物質（例えば、アルキルグリコシド）部分の使用は、身体内の投与の部位での薬物の沈着物（ｄｅｐｏｔｓ）の形成および疎水性担体タンパク質に対する結合を含む、複数の機構によるペプチドまたはタンパク質の作用の持続時間を延長する。幾つかの実施形態では、ペプチド及び／又はタンパク質構造への立体障害の組み込みによって、ペプチド及び／又はタンパク質生成物へのプロテアーゼの接近を防ぐことができ、それによって、タンパク質分解を防ぐ。幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるようなペプチド及び／又はタンパク質の界面活性物質の修飾（例えば、界面活性物質のアルキルグリコシドクラスの共有結合的な付着）は、粘膜関門にわたる移動を増加させる。したがって、本明細書に記載されるペプチド及び／又はタンパク質の修飾は、限定されないが、タンパク質分解からの保護、および投与の部位からの遅延した運動を含む、望ましい恩恵を提供し、それによって、持続性の薬物動態学的行動（例えば、循環するｔ１／２の延長）および改善された口腔粘膜のバイオアベイラビリティにつながる。
【０１３４】
幾つかの実施形態では、改善されたペプチド及び／又はタンパク質のそれらの受容体との相互作用は、配列のトランケーション、制約（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｔ）の導入、及び／又は立体障害の組み込みによる有益な方法で修飾される。本明細書には、修飾されたペプチド及び／又はタンパク質における剛性および立体の障害の両方の組み込みを可能にする、新しいアルキルグリコシド試薬が記載される。幾つかの実施形態では、立体障害は、本明細書に記載される修飾されたペプチド及び／又はタンパク質に対する受容体選択性を与える。幾つかの実施形態では、立体障害は、タンパク質分解からの保護を提供する。
【０１３５】
タンパク質およびペプチドは、効能および安全性に影響を与え得る、多数の物理的および化学的な変化を受ける。これらの中では、凝集があり、これは、二量体形成、三量体形成、およびアミロイドなどの高次凝集の形成を含む。凝集は、ペプチド及び／又はタンパク質ベースの治療に対する複数の潜在的に有害な作用の根底にある、主要問題であり、これは、効力の損失、変更された薬物動態、減少した安定性または生成物の貯蔵寿命、および望ましくない免疫原性の誘発を含む。自己会合（ｓｅｌｆ−ａｓｓｏｃｉａｔｉｎｇ）ペプチドのバイオアベイラビリティおよび薬物動態は、凝集の大きさ、および皮下の部位での非共有結合的な分子間相互作用の破壊（ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ）の容易性による影響を受け得る（Ｍａｊｉ， Ｓ．Ｋ．， ｅｔ ａｌ． （２００８） ＰＬｏＳ Ｂｉｏｌ ６： ｅ１７）。幾つかの例では、ペプチドは、３０日以上のｔ１／２で分離する（ｄｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅ ｗｉｔｈ）皮下の貯蔵所へと凝集することができる。このようなゆっくりした分解は、単一の皮下注射からの１か月間の送達などの、好ましい効果につながり得、低い血中濃度を引き起こすため、ペプチドはインビボで不活性であるように見える。したがって、疎水性の凝集は、ペプチドのバイオアベイラビリティおよび有効性を完全に排除するように見える（Ｃｌｏｄｆｅｌｔｅｒ， Ｄ．Ｋ．， ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ １５： ２５４−２６２）。
【０１３６】
凝集は、投与されたペプチド及び／又はタンパク質の治療薬の増加した免疫原性に関係している。この問題を回避する１つの手段は、より低い濃度の溶液と作用させることであるが、濃縮されたペプチドおよびタンパク質溶液は、投与の容易性のための幾つかの例において望ましい。幾つかの例では、精製と濃縮の間にペプチド及び／又はタンパク質溶液にポリオール（例えば、単糖またはオリゴ糖）またはアルキルグリコシドを加えることによって、凝集は減少または除去され、製造プロセス中のより大きな有効性が提供され、免疫原でない可能性がより少ない最終生産物が提供される。
【０１３７】
ＦＤＡおよび他の取り締まり機関は、特に、望ましくない免疫原性に対するこの潜在的な結合のために、凝集の精査を拡大している。自己会合ペプチドの免疫原性は、非共有結合的な分子間相互作用の結果としての凝集の形成による影響を受け得る。例えば、インターフェロンは、凝集すると示され、結果的に抗体反応がもたらされる（Ｈｅｒｍｅｌｉｎｇ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ． （２００６） Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ９５： １０８４−１０９６）。エリスロポエチンに対する抗体反応は、血清アルブミンの源および濃度を変更した製剤の変化後に、組換えＥＰＯ（Ｃａｓａｄｅｖａｌｌ， Ｎ．， ｅｔ ａｌ． （２００２） Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３４６： ４６９−４７５）を受ける多くの患者において、潜在的に生命を脅かす副作用である、「 赤血球糸無形成症」をもたらした。インスリンは、冷蔵貯蔵において見られる温度を超える温度で撹拌後にタンパク質凝集が原因で活性を失う（Ｐｅｚｒｏｎ， Ｉ．， ｅｔ ａｌ． （２００２） Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ９１： １１３５−１１４６， Ｓｌｕｚｋｙ， Ｖ．， ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ８８： ９３７７−９３８１）。モノクローナル抗体ベース治療は、タンパク質凝集の結果として不活性になりやすい（Ｋｉｎｇ， Ｈ．Ｄ．， ｅｔ ａｌ． （２００２） Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ４５： ４３３６−４３４３）。高濃度のモノクローナル抗体製剤は、これらの抗体の凝集する潜在性に関連した、安定性、製造、および送達の難題をもたらしている。酵素もまた、凝集の結果として活性を失い得る。例えば、ウロキナーゼの熱失活は、凝集を介して生じることが報告されている（Ｐｏｒｔｅｒ， Ｗ．Ｒ．， ｅｔ ａｌ． （１９９３） Ｔｈｒｏｍｂ Ｒｅｓ ７１： ２６５−２７９）。
【０１３８】
凍結乾燥中のタンパク質の安定化もまた、問題を引き起こしている。タンパク質治療は、しばしば、凝集の形成および沈澱の結果として、凍結乾燥と再構成の後に生物学的活性を失う。幾つかの例では、（例えば、多糖類、ポリリン酸塩、アミノ酸、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および様々な界面活性物質を含む）再構成の添加剤（Ｚｈａｎｇ， Ｍ．Ｚ．， ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ １２： １４４７−１４５２， Ｖｒｋｌｊａｎ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ １１： １００４−１００８）を加えることによって、凝集が減少される。幾つかの場合では、アルコール、または他の有機溶媒の組み合わせが、溶解化に使用される。トリフルオロエタノールは、ペプチド構造の維持に有効であり、様々なペプチドを安定させるために、混合物中で使用されてきた（Ｒｏｃｃａｔａｎｏ， Ｄ．， ｅｔ ａｌ． （２００２） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ９９： １２１７９−１２１８４）。このような薬剤が、粘膜組織に厳しい効果があり得、その結果、患者の不快感または局所的な毒性作用を引き起こす危険がある。米国特許第７，３９０，７８８号および米国特許第７，４２５，５４２号は、優しい、非イオン性界面活性物質のような効果のために安定剤としてのアルキルグリコシドの使用を記載する。しかしながら、ペプチド及び／又はタンパク質構造自体へのアルキルグリコシドの共有結合的な組み込みが、これまでには記載されてこなかった。
【０１３９】
タンパク質に共有結合的に付けられている、頻繁に自然発生するオリゴ糖には、界面活性物質の特徴はない。幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるペプチド及び／又はタンパク質生成物は、共有結合的に付けられた糖類、および修飾されたペプチドに対して界面活性物質の特徴を与える、追加の疎水基を有し、それによって、界面活性物質で修飾されたペプチドの、バイオアベイラビリティ、免疫原性、及び／又は薬物動態学行動の同調が可能となる。
【０１４０】
オリゴ糖で修飾されたタンパク質およびプチドは、酵素を使用する、糖類またはオリゴ糖の組み込み（Ｇｉｊｓｅｎ， Ｈ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （１９９６） Ｃｈｅｍ Ｒｅｖ ９６： ４４３−４７４； Ｓｅａｒｓ， Ｐ． ａｎｄ Ｗｏｎｇ， Ｃ．Ｈ． （１９９８） Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ５４： ２２３−２５２； Ｇｕｏ， Ｚ． ａｎｄ Ｓｈａｏ， Ｎ． （２００５） Ｍｅｄ Ｒｅｓ Ｒｅｖ ２５： ６５５−６７８）、または化学的な手法（Ｕｒｇｅ， Ｌ． ， ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ １８４： １１２５−１１３２； Ｓａｌｖａｄｏｒ， Ｌ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ５１： ５６４３−５６５６； Ｋｉｈｌｂｅｒｇ， Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２８９： ２２１−２４５； Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ， Ｇ．， ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ５７： １９６４−１９６９； Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙ， Ｔ．Ｋ．， ｅｔ ａｌ． （２００５） Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ Ｊ ２２： ８３−９３； Ｌｉｕ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （２００５） Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ Ｒｅｓ ３４０： ２１１１−２１２２； Ｐａｙｎｅ， Ｒ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （２００７） Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １２９： １３５２７−１３５３６； Ｐｅｄｅｒｓｅｎ， Ｓ．Ｌ．， ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ １１： ３６６−３７４）を介して、例えば、Ｊｅｎｓｅｎ， Ｋ．Ｊ． ａｎｄ Ｂｒａｓｋ， Ｊ． （２００５） Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ８０： ７４７−７６１に記載されている。タンパク質と同様にペプチドも、グリコシル化によって修飾されてきた（Ｆｉｌｉｒａ， Ｆ．， ｅｔ ａｌ． （２００３） Ｏｒｇ Ｂｉｏｍｏｌ Ｃｈｅｍ １： ３０５９−３０６３）； （Ｎｅｇｒｉ， Ｌ．， ｅｔ ａｌ． （１９９９） Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ４２： ４００−４０４）； （Ｎｅｇｒｉ， Ｌ．， ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １２４： １５１６−１５２２）； Ｒｏｃｃｈｉ， Ｒ．， ｅｔ ａｌ． （１９８７） Ｉｎｔ Ｊ Ｐｅｐｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ ２９： ２５０−２６１； Ｆｉｌｉｒａ， Ｆ．， ｅｔ ａｌ． （１９９０） Ｉｎｔ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｍａｃｒｏｍｏｌ １２： ４１−４９； Ｇｏｂｂｏ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｉｎｔ Ｊ Ｐｅｐｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ ４０： ５４−６１； Ｕｒｇｅ， Ｌ．， ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ １８４： １１２５−１１３２； Ｄｊｅｄａｉｎｉ−Ｐｉｌａｒｄ， Ｆ．， ｅｔ ａｌ． （１９９３） Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ３４： ２４５７ − ２４６０； Ｄｒｏｕｉｌｌａｔ， Ｂ．， ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ ７： ２２４７−２２５０； Ｌｏｈｏｆ， Ｅ．， ｅｔ ａｌ． （２０００） Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ ３９： ２７６１−２７６４； Ｇｒｕｎｅｒ， Ｓ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｏｒｇ Ｌｅｔｔ ３： ３７２３−３７２５； Ｐｅａｎ， Ｃ．， ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １５４１： １５０−１６０； Ｆｉｌｉｒａ， Ｆ．， ｅｔ ａｌ． （２００３） Ｏｒｇ Ｂｉｏｍｏｌ Ｃｈｅｍ １： ３０５９−３０６３； Ｇｒｏｔｅｎｂｒｅｇ， Ｇ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ ６９： ７８５１−７８５９； Ｂｉｏｎｄｉ， Ｌ．， ｅｔ ａｌ． （２００７） Ｊ Ｐｅｐｔ Ｓｃｉ １３： １７９−１８９； Ｋｏｄａ， Ｙ．， ｅｔ ａｌ． （２００８） Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １６： ６２８６−６２９６； Ｌｏｗｅｒｙ Ｊ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐｔｌ Ｔｈｅｒａｐ ３３６： ７６７−７８； Ｙａｍａｍｏｔｏ， Ｔ．， ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ５２： ５１６４−５１７５）。
【０１４１】
しかしながら、前述の試みは、ペプチドに結合したオリゴ糖に付けられた追加の疎水基を記載していない。したがって、本明細書には、ペプチド及び／又はタンパク質に共有結合的に付けられ、バイオアベイラビリティ、免疫原性および薬物動態学的行動の同調を可能にする、糖類及び／又はオリゴ糖に付けられた疎水基を組み込む、修飾されたペプチド及び／又はタンパク質が提供される。したがって、本明細書にはまた、オリゴ糖および疎水基を含む、界面活性物質の試薬が提供され、これは、ペプチド及び／又はタンパク質の修飾を可能にする。
【０１４２】
本明細書には、ペプチド及び／又はタンパク質の特性を改善するためのペプチドに対する共有結合における糖類ベースの界面活性物質の使用が提供される。幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるようなペプチド及び／又はタンパク質の界面活性物質の修飾（例えば、界面活性物質のアルキルグリコシドクラスの共有結合的な付着）は、粘膜関門にわたる移動を増加させる。幾つかの実施形態では、ペプチド及び／又はタンパク質生成物に対して界面活性物質を共有結合的に付けることによって、ペプチド及び／又はタンパク質の凝集が防がれる。
【０１４３】
本明細書に記載される界面活性物質で修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、新しいペプチドおよびタンパク質の修飾因子としてのアルキルグリコシドなどの界面活性物質の共有結合的な組み込みを介して、限定されないが、作用の短い持続時間、乏しいバイオアベイラビリティ、凝集、免疫原性、および受容体サブタイプの特異性の欠如を含む、ペプチド製剤の限界を克服する。
【０１４４】
特定の例では、界面活性物質の効果は、医薬製剤の物理的な性質または効能に対して有益であるが、皮膚及び／又は他の組織に対して刺激的であり、特に、鼻、口、眼、膣、直腸、バッカルまたは舌下の領域において見られるなど、粘膜に対して刺激的である。さらに、幾つかの例では、界面活性物質は、タンパク質を変性させるため、それらの生体機能を破壊する。界面活性物質が、臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）上に効果を発揮するため、低いＣＭＣを有する界面活性物質は望ましく、その結果、それらは、低濃度で、または医薬製剤中の少量で効果を有して利用され得る。したがって、幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるペプチド修飾に適した界面活性物質（例えば、アルキルグリコシド）は、純水または水溶液中で約１ｍＭ未満のＣＭＣを有している。ほんの一例として、水中のアルキルグリコシドに対する特定のＣＭＣの値は：オクチルマルトシド １９．５ｍＭ；デシルマルトシド １．８ｍＭ；ドデシル−β−Ｄ−マルトシド ０．１７ｍＭ；トリデシルマルトシド ０．０３ｍＭ；テトラデシルマルトシド ０．０１ｍＭ；スクロースドデカノアート ０．３ｍＭ、である。当然のことながら、適切な界面活性物質は、修飾されるペプチド及び／又はタンパク質によって、より高い又はより低いＣＭＣを有し得る。本明細書で使用されるように、「臨界ミセル濃度」または「ＣＭＣ」は、溶液中のミセル（球状ミセル、円形ロッド、ラメラ構造など）の形成が開始される溶液中での両親媒性の成分（アルキルグリコシド）の濃度である。特定の実施形態では、アルキルグリコシドドデシル、トリデシル、およびテトラデシルマルトシドまたはグルコシドは、スクロースドデカノアート、トリデカノアート、およびテトラデカノアートと同様に、より低いＣＭＣを有し、本明細書に記載されるペプチド及び／又はタンパク質の修飾に適している。
【０１４５】
＜オピオイドペプチドおよびアナログ＞
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるペプチド修飾の方法に適用可能なペプチド治療薬のクラスは、ペプチドオピオイドのクラスである。このクラスは、ミュー（ＭＯＲ）、デルタ（ＤＯＲ）、およびカッパ（ＫＯＲ）のオピオイド受容体に対する結合を介して実行される、身体における非常に広範囲な機能を有している、内因性のペプチドオピオイドに由来する（Ｓｃｈｉｌｌｅｒ， Ｐ．Ｗ． （２００５） ＡＡＰＳ Ｊ ７： Ｅ５６０−５６５）。ほとんどの対象のそれらの役割は、疼痛信号を修飾することであり、特に、疼痛信号の伝達および感知を抑止することである。このような薬剤の開発において、中枢副作用（呼吸抑制、自己投与からの恩恵を示す場所選択性（ｐｌａｃｅ ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ ｒｅｗａｒｄ ｆｒｏｍ ｓｅｌｆ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ））は、主要な問題であり、そのため、周囲で作用する薬剤が魅力的であろう（Ｓｔｅｉｎ， Ｃ．， ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ Ｒｅｖ ６０： ９０−１１３）。多くの研究所からの研究は、最適なクラスの薬剤が、デルタ受容体拮抗の可能性を有する、ミューオピオイド受容体のアゴニズムを有するであろうと示唆してきた（Ｓｃｈｉｌｌｅｒ， Ｐ．Ｗ． （２０１０） Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ８６： ５９８−６０３）。
【０１４６】
エンドモルフィン（Ｊａｎｅｃｋａ， Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２００７） Ｃｕｒｒ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １４： ３２０１−３２０８）は、主として、ミュー受容体に特異的であるが、フレームワーク（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ）の賢明な修飾は、結果的に、ミューおよびデルタの選択性の両方を有する分子をもたらすことができる（Ｌａｚａｒｕｓ， Ｌ．Ｈ． ａｎｄ Ｏｋａｄａ， Ｙ． （２０１２） Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｔｈｅｒ Ｐａｔｅｎｔｓ ２２： １−１４； Ｋｅｒｅｓｚｔｅｓ， Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２０１０） ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ ５： １１７６−９６）。デルモルフィンファミリーに由来するのは、アナログのＤＡＬＤＡクラスである（Ｓｃｈｉｌｌｅｒ， Ｐ．Ｗ． （２０１０） Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ８６： ５９８−６０３）。またデルモルフィンファミリーに由来するのは、ペプチドのＴＩＰＰファミリーである（Ｓｃｈｉｌｌｅｒ， Ｐ．Ｗ．， ｅｔ ａｌ．， （１９９９） Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ５１：４１１−２５）。本明細書には、アルキルグリコシド界面活性物質の糖類群に共有結合的に付けられ、改善された薬学的特性を有する、特定のオピオイドペプチドが記載される。
【０１４７】
本明細書に記載される典型的な合成ペプチドアナログは、エンドモルフィンに由来するものもあれば、デルモルフィンに由来するものもあり、天然のペプチドオピオイド配列の２つのクラスがある。１つの態様では、天然の配列の本発明のペプチドアナログは、ＥＵ−Ａ１０１乃至ＥＵ−Ａ１１５によって例証されるような、エンドルフィン関連の配列である。別の態様では、ペプチドアナログは、ＥＵ−Ａ１３３までの、ＥＵ−Ａ１０７、ＥＵ−Ａ１０８およびＥＵ−Ａ１２０などの、デルモルフィン関連の配列である。オピオイドペプチドアナログの関連するクラスは、配列ＥＵ−Ａ１３４乃至ＥＵ−Ａ１４２によって例証され、ここで、Ｔｉｃ残基は、デルモルフィン構造（ＴＩＰＰファミリー）で見られるＤ−Ａｌａ残基に取って代わる。特殊化した結合のさらなるクラスは、結合を完了するために相補的な残基Ψ−Ｐｈｅを必要とするために、ＴｉｃがＴｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）と交換されるときに示される。
【０１４８】
幾つかの実施形態では、界面活性物質で修飾されたペプチド生成物は、以下の一般的な式ＩＩＩに相当するアミノ酸配列を有し：
【０１４９】
【化２０】
2014516036.tif 000022
【０１５０】
式中、
ａａ１は、Ｔｙｒ、Ｄｍｔ、Ｎ−アルキル−Ｔｙｒ、Ｎ−アルキル−Ｄｍｔ、Ｎ−ジアルキル−Ｔｙｒ、Ｎ−ジアルキル−Ｄｍｔなどであり；
ａａ２は、Ｐｒｏ、Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｕ（Ｘ）、Ｄ−Ａｌａ、Ｔｉｃ、Ｔｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）であり；
ａａ３は、Ｐｈｅ、Ｔｙｐ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、ＣαＭｅＰｈｅ、Ψ−Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、Ｔｍｐ、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（１）、Ｄ−またはＬ−Ｎａｌ（２）、Ｕ（Ｘ）、Ｄ−またはＬ−ＣαＭｅＵ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、またはＰｒｏ、Ａｉｂ、Ｕ（Ｘ）、Ｄ−またはＬ−ＣαＭｅＵ（Ｘ）であり、
アルキルまたはジアルキルは、独立して、置換または非置換のＣ１−Ｃ１０の分枝鎖または直鎖、または置換または非置換のアラルキル鎖であり；
Ｕは、結合するアミノ酸であり；
Ｘは、Ｕの側鎖に結合された、官能化にされた界面活性物質であり；
Ｚは、−ＯＨまたはＮＨ２である。
【０１５１】
式ＩＩＩの幾つかの具体的な実施形態では、Ｘは、以下の構造を有し：
【０１５２】
【化２１】
2014516036.tif 000023
【０１５３】
式中：
Ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、Ｈであり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−であり；および
Ｒ２は、単結合である。
【０１５４】
１つの実施形態では、Ｎ−アルキルは、Ｎ−メチルがあり；
Ｕは、ＬｙｓまたはＯｒｎなどの、二塩基性のアミノ酸であり；
ここで、Ｘは、１−アルキルグリコシドクラスの修飾された非イオン性界面活性物質であり、ここで、アルキルは、Ｃ１−Ｃ２０アルキルまたはアルコキシアリール置換基であり、糖類の環に対するグリコシド結合は、−Ｏ−または他のヘテロ原子（例えば、ＳまたはＮ）を介し；
Ｚは、ＮＨ２である。
【０１５５】
別の実施形態では、１−アルキル−グリコシドにおける１−アルキル基は、置換または非置換のＣ１−Ｃ１６アルキルであり；
ＵはＬｙｓであり、ＺはＮＨ２であり；
ａａ１は、Ｔｙｒ、Ｄｍｔ、Ｎα−Ｍｅ−Ｔｙｒ、Ｎα−Ｍｅ−Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｐｒｏであり；
ａａ３は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｍｐであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、またはＬｙｓ（Ｘ）である。
【０１５６】
さらなる実施形態では、１−アルキルグリコシドにおける１−アルキル基では、置換または非置換のＣ１−Ｃ２０アルキルであり；Ｚは、ＮＨ２であり；
ａａ１は、Ｔｙｒ、Ｄｍｔであり；
ａａ２は、Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｌｙｓ（Ｘ）、Ｔｉｃ、Ｔｉｃ（Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］）であり；
ａａ３は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｍｐ、ＣαＭｅＰｈｅ、Ψ−Ｐｈｅであり；
ａａ４は、Ｐｈｅ、Ｔｍｐ、Ｌｙｓ（Ｘ）であり；
ａａ５は、存在しない、またはＰｒｏ、Ａｉｂ、Ｌｙｓ（Ｘ）、Ｄ−またはＬ−ＣαＭｅＬｙｓ（Ｘ）である。
【０１５７】
エンドモルフィンクラスの親構造は、以下である：
エンドモルフィン１ − Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２
エンドモルフィン２ − Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２
【０１５８】
特定のアナログファミリーの置換基は、以下に示される：
【０１５９】
【表１】
2014516036.tif 000024
【０１６０】
特定の配列は、以下のアミノ酸を含有している：
【０１６１】
【表２】
2014516036.tif 000025
【０１６２】
具体的な実施形態では、付けられた界面活性物質を有するアナログは、限定しないが、以下を含む：
【０１６３】
【表３】
2014516036.tif 000026
【０１６４】
デルモルフィンクラスの親構造は、以下である：
親の（Ｐａｒｅｎｔ）デルモルフィン − Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２。
【０１６５】
特定のアナログファミリーの構成は、以下に示される：
【０１６６】
【表４】
2014516036.tif 000027
【０１６７】
幾つかの実施形態では、界面活性物質の付着に適した特定のアナログは、限定されないが、以下を含む：
【０１６８】
【表５】
2014516036.tif 000028
【０１６９】
具体的な実施形態では、界面活性物質の付着に適したアナログは、限定されないが、以下を含む：
【０１７０】
【表６−１】
2014516036.tif 000029
【０１７１】
【表６−２】
2014516036.tif 000030
【０１７２】
本明細書に提示される実施形態の範囲内では、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、テトラデカン酸、ヘキサデカン酸、オクタデカン酸、３−フェニルプロパン酸などの脂肪酸との、例えば、Ｌｙｓのε−位置でのリンカーアミノ酸上のアシル化による、本明細書で請求されるアナログの、飽和または不飽和のアルキル鎖との置換によって、適切な位置で置換されたペプチド鎖が熟慮される（Ｎｅｓｔｏｒ， Ｊ．Ｊ．， Ｊｒ． （２００９） Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １６： ４３９９ − ４４１８； Ｚｈａｎｇ， Ｌ ａｎｄ Ｂｕｌａｊ， Ｇ． （２０１２） Ｃｕｒｒ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １９： １６０２−１８）。このようなアナログの限定しない、例示的な例は以下の通りである。
【０１７３】
Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−アセチル）−ＮＨ２、（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１６１）。
【０１７４】
Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−ドデカノイル）−ＮＨ２、（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１６２）。
【０１７５】
Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−テトラデカノイル）−ＮＨ２、（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１６３）。
【０１７６】
Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−（ガンマ−グルタミル）−Ｎ−アルファ−ドデカノイル））−ＮＨ２、（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１６４）。
【０１７７】
Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−（ガンマ−グルタミル）−Ｎ−アルファ−テトラデカノイル））−ＮＨ２、（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１６５）。
【０１７８】
Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−アセチル）−ＮＨ−ベンジル、（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１６６）。
【０１７９】
Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−ドデカノイル）−ＮＨ−ベンジル、（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１６７）。
【０１８０】
本発明の他の実施形態では、ペプチド鎖は、スペーサー、およびステロイド核、例えば、コレステロール部分などの疎水性の部分との、リンカーアミノ酸、例えば、Ｃｙｓのスルフヒドリル上の反応によって、適切な位置で置換され得る。このような実施形態の幾つかでは、修飾されたペプチドはさらに、１つ以上のＰＥＧ鎖を含む。このような分子の限定しない例は、以下のものを含む：
【０１８１】
Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（Ｓ−（３−（ＰＥＧ４−アミノエチルアセトアミド−コレステロール）））−ＮＨ２、（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１６８）。
【０１８２】
Ｈ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（Ｓ−（３−（ＰＥＧ４−アミノエチルアセトアミド−コレステロール）））−ＮＨ−ベンジル、（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１６９）など。
【０１８３】
式Ｉ、式ＩＩ、または式ＩＩＩの化合物は、細胞アッセイ中のミューオピオイド受容体活性（アゴニストおよびアンタゴニストのモードにおけるＭＯＰ）に関して、および実施例１２に記載されるような細胞アッセイ中のデルタ２のオピオイド受容体活性（アゴニストおよびアンタゴニストのモードにおけるＤＯＰ）に関してアッセイされる。
【０１８４】
特定の実施形態では、実施例１２に示されるように、純粋なＤＯＰのアンタゴニスト活性と共に、純粋なＭＯＰアゴニスト活性を有する化合物は、臨床応用のための適切な特性である。本明細書の開示の範囲ではまた、低い溶解性および低い明白なインビトロでの効能を有しているが、インビボでの作用の延長された持続時間を示す化合物が熟慮される。
【０１８５】
本明細書に提示される実施形態の範囲内では、式Ｉ、式ＩＩまたは式ＩＩＩのペプチド生成物が熟慮され、ここで、ペプチド生成物は、１つまたはそれ以上の界面活性物質の基（例えば、式Ｉの構造を有している基Ｘ）を含む。１つの実施形態では、式Ｉ、式ＩＩまたは式ＩＩＩのペプチド生成物は、１つの界面活性物質の基を含む。別の実施形態では、式Ｉ、式ＩＩまたは式ＩＩＩのペプチド生成物は、２つの界面活性物質の基を含む。また別の実施形態では、式Ｉ、式ＩＩまたは式ＩＩＩのペプチド生成物は、３つの界面活性物質の基を含む。
【０１８６】
＜ＰＴＨペプチドおよびアナログ＞
本明細書には、幾つかの実施形態において、界面活性物質の組み込みを介する、修飾されたペプチド及び／又はタンパク質（例えば、修飾されたＰＴＨ、ＰＴＨｒＰなど）の合成のための、試薬および中間物が提供される。
【０１８７】
本明細書には、幾つかの実施形態において、ペプチドに共有結合的に付けられた、界面活性物質Ｘを含むペプチド生成物が提供され、ペプチドは、リンカーアミノ酸Ｕおよび少なくとも１つの他のアミノ酸を含み：
【０１８８】
【化２２】
2014516036.tif 000031
【０１８９】
式中、界面活性物質Ｘは、以下の式２−Ｉの基であり：
【０１９０】
【化２３】
2014516036.tif 000032
【０１９１】
式中：
Ｒ１ａは、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアリール基、置換または非置換のアラルキル基、またはステロイド核を含有する部分であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル、置換または非置換のアルコキシアリール基、または置換または非置換のアラルキル基であり；
Ｗ１は、各々の出現で独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、−（Ｃ＝Ｓ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−ＮＨ−、または−ＣＨ２−Ｓ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−であり；
Ｒ２は、各々の出現で独立して、Ｈ、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアリール基、または置換または非置換のアラルキル基、−ＮＨ２、−ＳＨ、Ｃ２−Ｃ４−アルケン、Ｃ２−Ｃ４−アルキン、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒ、−（ＣＨ２）ｍ−マレイミド、または−Ｎ３であり；
ｎは、１、２または３であり；および
ｍは、１−１０であり；
ペプチドは、以下の式２−ＩＩから選択され：
【０１９２】
【化２４】
2014516036.tif 000033
【０１９３】
式中：
Ｚは、ＯＨ、または−ＮＨ−Ｒ３であり、
Ｒ３は、Ｈ、置換または非置換のＣ１−Ｃ１２アルキル、または１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖であり；
ａａ１は、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、またはＤｅｇであり；
ａａ３は、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、またはＤｅｇであり；
ａａ５は、Ｈｉｓ、またはＩｌｅであり；
ａａ６は、Ｇｌｎ、またはＣｉｔであり；
ａａ７は、Ｌｅｕ、またはＰｈｅであり；
ａａ８は、Ｌｅｕ、またはＮｌｅであり；
ａａ１０は、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、Ａｌａ、またはＡｉｂであり；
ａａ１１は、Ａｒｇ、またはｈＡｒｇであり；
ａａ１２は、グリシン、グルタミン酸、リース、翼、ＡｉｂまたはＡｃ５ｃである；
ａａ１３は、Ｌｙｓ、またはＡｒｇであり；
ａａ１４は、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、またはＮａｌ（２）であり；
ａａ１５は、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、またはＡｉｂであり；
ａａ１６は、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、またはＵであり；
ａａ１７は、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵであり；
ａａ１８は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、またはＵであり；
ａａ１９は、存在しない、またはＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ２０は、存在しない、またはＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵであり；
ａａ２１は、存在しない、またはＡｒｇ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ５Ｃ、Ｄｅｇ、またはＵであり；
ａａ２２は、存在しない、またはＰｈｅ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ５Ｃ、Ｌｙｓ、またはＵであり；
ａａ２３は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、またはＵであり；
ａａ２４は、存在しない、またはＨｉｓ、Ａｒｇ、またはＵであり；
ａａ２５は、存在しない、またはＨｉｓ、Ｌｙｓ、またはＵであり、および
ａａ２６は、存在しない、またはＡｉｂ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓであり；
Ｕは、界面活性物質Ｘに共有結合的に付けるため使用される、官能基を含む天然または非天然のアミノ酸であり；
ここで、ａａ１−ａａ２６のいずれか２つは、それらの側鎖を介して随意に環化されることで、ラクタム結合を形成し；
但し、ａａ１６−ａａ２６の１つ、または少なくとも１つが、Ｘに共有結合的に付けられたリンカーアミノ酸Ｕであることを条件とする。
【０１９４】
幾つかの実施形態では、ｎは１である。幾つかの実施形態では、ｎは２であり、第１グリコシドは、第１グリコシドのＷ２と、第２グリコシドのＯＲ１ｂ、ＯＲ１ｃまたはＯＲ１ｄの任意の１つとの間の単結合を介して第２グリコシドに付けられる。
【０１９５】
幾つかの実施形態では、ｎは３であり、第１グリコシドは、第１グリコシドのＷ２と、第２グリコシドのＯＲ１ｂ、ＯＲ１ｃまたはＯＲ１ｄの任意の１つとの間の単結合を介して第２グリコシドに付けられ、第２グリコシドは、第２グリコシドのＷ２と、第３グリコシドのＯＲ１ｂ、ＯＲ１ｃまたはＯＲ１ｄの任意の１つとの間の単結合を介して第３グリコシドに付けられる。
【０１９６】
１つの実施形態化合物では、式Ｉ−Ａは、Ｘが以下の構造を有する化合物であり：
【０１９７】
【化２５】
2014516036.tif 000034
【０１９８】
式中：
Ｒ１ａは、Ｈ、保護基、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、またはステロイド核を含有する部分であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは各々、各々の出現で独立して、Ｈ、保護基、または置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基であり；
Ｗ１は、各々の出現で独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、−（Ｃ＝Ｓ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−ＮＨ−、または−ＣＨ２−Ｓ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；
Ｒ２は、単結合、Ｃ２−Ｃ４アルケン、Ｃ２−Ｃ４アルキン、または−（ＣＨ２）ｍ−マレイミドであり；および
ｍは、１−１０である。
【０１９９】
別の実施形態では、式Ｉ−Ａの化合物は、Ｘが以下の構造を有する化合物であり：
【０２００】
【化２６】
2014516036.tif 000035
【０２０１】
したがって、上に記載される実施形態では、Ｒ２は、単結合である。
【０２０２】
例えば、上に記載されるＸの構造の典型的な実施形態では、Ｗ１は、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−であり、Ｒ２は、Ｗ１と、ペプチド内のアミノ酸残基Ｕとの間の単結合（例えば、ペプチドに存在するリジン残基の側鎖中のアミノ基）である。
【０２０３】
さらなる実施形態では、式Ｉ−Ａの化合物は、Ｘが以下の構造を有する化合物である：
【０２０４】
【化２７】
2014516036.tif 000036
【０２０５】
例えば、上に記載されるＸの構造の典型的な実施形態では、Ｗ１は、−ＣＨ２−であり、Ｒ２は、Ｘ上のアルキル結合したマレイミド官能基であり、Ｒ２は、ペプチド内のアミノ酸残基Ｕの適切な部分に付けられる（例えば、ペプチドのシステイン残基中のチオール基は、Ｘ上のマレイミドとチオエーテルを形成する）。
【０２０６】
また別の実施形態では、式Ｉ−Ａの化合物は、Ｘが以下の構造を有する化合物であり：
【０２０７】
【化２８】
2014516036.tif 000037
【０２０８】
式中：
Ｒ１ａは、Ｈ、保護基、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、またはステロイド核を含有する部分であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは各々、各々の出現で独立して、Ｈ、保護基、または置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基であり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−であり；および
Ｒ２は、単結合である。
【０２０９】
さらなる実施形態では、式Ｉ−Ａの化合物は、Ｘが以下の構造を有する化合物であり：
【０２１０】
【化２９】
2014516036.tif 000038
【０２１１】
式中：
Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、Ｈであり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−であり；および
Ｒ２は、単結合である。
【０２１２】
上に又は本明細書に記載される幾つかの実施形態では、Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基である。
【０２１３】
上に又は本明細書に記載される幾つかの実施形態では、Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ６−Ｃ２０アルキル基である。
【０２１４】
本明細書にはまた、式２−Ｉ−Ａ中のＸが以下の構造を有する、代替の実施形態が熟慮される：
【０２１５】
【化３０】
2014516036.tif 000039
【０２１６】
例えば、上に記載されるＸの構造の典型的な実施形態では、Ｗ１は−Ｓ−であり、Ｒ２はＣ１−Ｃ３０アルキル基であり、Ｗ２はＳであり、Ｒ１ａは、Ｗ２と、ペプチド内のアミノ酸残基Ｕの適切な部分との間の単結合である（例えば、ペプチドのシステイン残基中のチオール基は、Ｘとチオエーテルを形成する）。
【０２１７】
上に記載されるＸの構造の別の典型的な交互の実施形態では、Ｗ１は−Ｓ−であり、Ｒ２はＣ１−Ｃ３０アルキル基であり、Ｗ２はＯであり、Ｒ１ａは、Ｗ２と、ペプチド内のアミノ酸残基Ｕの適切な部分との間の単結合である（例えば、ペプチドのセリンまたはテレオニン残基中のヒドロキシル基は、Ｘとエーテルを形成する）。
【０２１８】
幾つかの実施形態では、Ｕは、Ｘに共有結合的に付けるために使用され、二塩基性の天然または非天然のアミノ酸、チオールを含む天然または非天然のアミノ酸、−Ｎ３基を含む非天然のアミノ酸、アセチレン基を含む非天然のアミノ酸、または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒまたは−（ＣＨ２）ｍ−マレイミドを含む非天然のアミノ酸であり、ここで、ｍは、１−１０である。
【０２１９】
ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、界面活性物質は、１−アルキルグリコシドクラスの界面活性物質である。ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、界面活性物質は、アミド結合を介してペプチドに付けられる。
【０２２０】
ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、界面活性物質Ｘは、１−アイコシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−オクタデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−テトラデシルベータ Ｄ−グルクロン酸、１−ドデシルベータ Ｄ−グルクロン酸、１−デシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−オクチルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−アイコシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−オクタデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−テトラデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−ドデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−デシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−オクチルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、または官能化された１−アイコシルベータ−Ｄ−グルコース、１−オクタデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−テトラデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−ドデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−デシルベータ−Ｄ−グルコース、１−オクチルベータ−Ｄ−グルコース、１−アイコシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−オクタデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−ドデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−デシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−オクチルベータ−Ｄ−マルトシドなどから成り、ペプチド生成物は、前述の基とペプチド上の基（例えば、前述の基における−ＣＯＯＨ基およびペプチドのアミノ基）との間の結合の形成によって調製される。
【０２２１】
ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、Ｕは、ペプチドの末端アミノ酸である。ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、Ｕは、ペプチドの非末端アミノ酸である。ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、Ｕは、天然のＤ−またはＬ−アミノ酸である。ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、Ｕは、非天然のアミノ酸である。ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、Ｕは、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、Ｏｒｎ、または界面活性物質Ｘに共有結合的に付けるために使用される官能基を含む非天然のアミノ酸から選択される。
【０２２２】
ペプチド生成物の幾つかの実施形態では、ペプチドを界面活性物質Ｘに共有結合的に付けるために使用される官能基は、−ＮＨ２、−ＳＨ、−ＯＨ、−Ｎ３、ハロアセチル、−（ＣＨ２）ｍ−マレイミド（ここで、ｍは１−１０である）、またはアセチレン基である。
【０２２３】
幾つかの実施形態では、２つの異なるアミノ酸残基の側鎖官能基は、環状ラクタムを形成するために連結される。例えば、Ｌｙｓ１４側鎖は、Ｇｌｕ１８の側鎖と環状ラクタムを形成し得るか、またはＬｙｓ１８は、Ｇｌｕ２２の側鎖とラクタムを形成し得る。幾つかの実施形態では、このようなラクタム構造は、反転され、例えば、Ｇｌｕ１４およびＬｙｓ１８から形成される。このようなラクタム結合は、幾つかの例において、ペプチドにおいてアルファヘリックス構造を安定させる（Ｃｏｎｄｏｎ， Ｓ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （２００２） Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １０： ７３１−７３６）。
【０２２４】
幾つかの実施形態では、共有結合的に結合されたアルキルグリコシドを含むペプチド生成物は、共有結合的に修飾されたＰＴＨまたはそのアナログである。このような実施形態の幾つかでは、ペプチド生成物は、共有結合的に結合した１−Ｏ−アルキル β−Ｄ−グルクロン酸を含有し、ペプチドは、ＰＴＨのアナログである。
【０２２５】
幾つかの実施形態では、共有結合的に結合されたアルキルグリコシドを含むペプチド生成物は、共有結合的に修飾されたＰＴＨｒＰ、またはそのアナログである。このような実施形態の幾つかでは、ペプチド生成物は共有結合的に結合した１−Ｏ−アルキル β−Ｄ−グルクロン酸を含み、ペプチドは、ＰＴＨｒＰのアナログである。
【０２２６】
幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、以下の式２−ＩＩの構造を有し：
【０２２７】
【化３１】
2014516036.tif 000040
【０２２８】
式中：
Ｚは、ＯＨまたは−ＮＨ２であり；
ａａ１は、Ａｉｂ、またはＡｃ５ｃであり；
ａａ１２は、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、またはＡｃ５ｃであり；
ａａ１４は、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、またはＮａｌ（２）であり；
ａａ１６は、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１７は、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５Ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１８は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｇｌｎ、Ａｉｂ、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１９は、存在しない、またはＡｒｇ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、またはＡｃ５ｃであり；
ａａ２０は、存在しない、またはＡｒｇ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃであり；
ａａ２１は、存在しない、またはＡｒｇ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ５Ｃ、またはＤｅｇであり；
ａａ２２は、存在しない、またはＰｈｅ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、またはＵ（Ｘ）であり。
ａａ２３は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、またはＵ（Ｘ）であり。
ａａ２４は、存在しない、またはＨｉｓ、Ａｒｇ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２５は、存在しない、またはＨｉｓ、Ｌｙｓ、またはＵ（Ｘ）であり；および
ａａ２６は、存在しない、またはＡｉｂ、Ａｃ５ｃであり；
ここで、ａａ１−ａａ２６のいずれか２つは、それらの側鎖を介して随意に環化されることで、ラクタム結合を形成し；
但し、ａａ１６、ａａ１７、ａａ１８、ａａ２２、ａａ２３、ａａ２４またはａａ２５の１つ、または少なくとも１つが、Ｘに共有結合的に付けられたリンカーアミノ酸Ｕであることを条件とする。
【０２２９】
式２−ＩＩＩの幾つかの実施形態では、Ｕは、本明細書に記載される任意のリンカーアミノ酸である。幾つかの実施形態では、式２−ＩＩＩの化合物は、ａａ１２およびａａ１６が、ラクタム結合を形成するために、それらの側鎖を介して環化される化合物である。幾つかの実施形態では、式２−ＩＩＩの化合物は、ａａ１６およびａａ２０が、ラクタム結合を形成するため、にそれらの側鎖を介して環化される化合物である。
【０２３０】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有する：
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１’−ドデシル ベータ−Ｄ−グルクロニル）１８−ＮＨ２（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１８０）。
【０２３１】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有する：
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１’−アルキル ベータ−Ｄ−グルクロニル）１８−Ａｉｂ１９−ＮＨ２。ここで、アルキルは、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、またはオクタデシルである（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２８３）。
【０２３２】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有する：
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１’−アルキル ベータ−Ｄ−グルクロニル）１８−Ａｃ４ｃ１９−ＮＨ２。ここで、アルキルは、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、またはオクタデシルである（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２８４）。
【０２３３】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有する：
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ＊１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１’−アルキル ベータ−Ｄ−グルクロニル）１８−Ａｉｂ１９−Ｌｙｓ＊２０−ＮＨ２。ここで、Ｇｌｕ＊１６およびＬｙｓ＊２０は、ラクタムによってそれらの側鎖を介して結合され、アルキルは、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、またはオクタデシルである（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２８５）。
【０２３４】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有する：
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ｇｌｕ＊１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｌｙｓ＊１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１’−アルキル ベータ−Ｄ−グルクロニル）１８−Ａｉｂ１９−ＮＨ２。ここで、Ｇｌｕ＊１２およびＬｙｓ＊１６は、ラクタムによってそれらの側鎖を介して結合され、アルキルは、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、またはオクタデシルである（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２８６）。
【０２３５】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有する：
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｐｈｅ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１’−アルキル ベータ−Ｄ−グルクロニル）１８−Ａｉｂ１９−ＮＨ２。ここで、アルキルは、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、またはオクタデシルである（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２８７）。
【０２３６】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有する：
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１’−アルキル ベータ−Ｄ−グルクロニル）１８−Ａｉｂ１９−Ａｉｂ２０−ＮＨ２。ここで、アルキルは、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、またはオクタデシルである（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２８８）。
【０２３７】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有する：
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ｇｌｕ＊１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｌｙｓ＊１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１’−アルキル ベータ−Ｄ−グルクロニル）１８−Ａｉｂ１９−Ａｉｂ２０−ＮＨ２。ここで、Ｇｌｕ＊１２およびＬｙｓ＊１６は、ラクタムによってそれらの側鎖を介して結合され、アルキルは、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、またはオクタデシルである（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２８９）。
【０２３８】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有する：
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１’−ドデシル ベータ−Ｄ−グルクロニル）１８−Ａｉｂ１９−ＮＨ２（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２０７）。
【０２３９】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有する：
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１’−テトラデシル ベータ−Ｄ−グルクロニル）１８−Ａｉｂ１９−ＮＨ２（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２６０）。
【０２４０】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有する：
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１’−ヘキサデシル ベータ−Ｄ−グルクロニル）１８−Ａｉｂ１９−ＮＨ２（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２６１）。
【０２４１】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有する：
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１’−オクタデシル ベータ−Ｄ−グルクロニル）１８−Ａｉｂ１９−ＮＨ２（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２６２）。
【０２４２】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有する：
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１’−ドデシル ベータ−Ｄ−グルクロニル）１８−Ａｉｂ１９−Ａｉｂ２０−ＮＨ２（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２７５）。
【０２４３】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、以下の構造を有する：
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−１’−ヘキサデシル ベータ−Ｄ−グルクロニル）１８−Ａｉｂ１９−Ａｉｂ２０−ＮＨ２（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２７７）。
【０２４４】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、ＰＴＨ受容体（ＰＴＨＲ１）に結合する活性ペプチド生成物である。
【０２４５】
具体的な実施形態では、上に及び本明細書に記載される式２−Ｉ−Ａのペプチド生成物は、以下の構造を有し：
【０２４６】
【化３２】
2014516036.tif 000041
【０２４７】
式中、Ｒ１ａは、図２−１乃至図２−４の表２に記載されるようなＣ１−Ｃ２０アルキル鎖であり、Ｒ’は、図２−１乃至図２−４の表２に記載されるようなペプチドであり、式Ｉ−ＡのＷ２は、−Ｏ−であり、および式２−Ｉ−ＡのＷ１は、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−である且つペプチドＲ’に対するアミド結合の一部である。このような実施形態の幾つかにおいて、Ｒ１ａは、Ｃ６−Ｃ２０アルキル鎖である。このような実施形態の幾つかにおいて、Ｒ１ａは、Ｃ８−Ｃ２０アルキル鎖である。このような実施形態の幾つかにおいて、Ｒ１ａは、Ｃ８−Ｃ２０アルキル鎖である。このような実施形態の幾つかにおいて、Ｒ１ａは、Ｃ８−Ｃ１８アルキル鎖である。このような実施形態の幾つかにおいて、Ｒ１ａは、Ｃ８−Ｃ１６アルキル鎖である。
【０２４８】
上に記載される実施形態では、アミノ酸及び／又はペプチドＲ’のアミノ部分（例えば、リジンなどのアミノ酸残基のアミノ基、またはペプチドＲ’内のリジン）は、以下の構造の化合物との共有結合を形成するために使用され：
【０２４９】
【化３３】
2014516036.tif 000042
【０２５０】
式中、Ｒ１ａは、図２−１乃至図２−４の表２に記載されるようなＣ１−Ｃ２０アルキル鎖である。
【０２５１】
このような場合において、上に記載される化合物Ａに対する共有結合を形成するに使用される、アミノ部分（例えば、ペプチドＲ’内のリジン残基）を有するアミノ酸は、式２−Ａの構造を有する界面活性物質Ｘに付けられるリンカーアミノ酸Ｕである。したがって、１つの例として、図２−１乃至図２−４の表２のＬｙｓ（Ｃ１２）は、以下の構造を有する：
【０２５２】
【化３４】
2014516036.tif 000043
【０２５３】
本明細書に提示される実施形態の範囲内ではまた、カルボン酸官能基のいずれか又は両方での結合を介する、マルツロン酸ベースの界面活性物質に由来する、式２−Ｉ−Ａのペプチド生成物が熟慮される。したがって、１つの例として、図２−１乃至図２−４の表２におけるペプチドは、マルツロン酸ベースの界面活性物質Ｘに結合した、および以下の構造を有する、リジンリンカーアミノ酸を含む：
【０２５４】
【化３５】
2014516036.tif 000044
【０２５５】
１つの実施形態では、式２−Ｉ−Ａの化合物は、リジンを基Ｘに付け、その後、式２−Ｉ−Ａの化合物を得るために追加のアミノ酸残基及び／又はペプチドを、リジン−Ｘ化合物に付けることによって調製されることが理解されるであろう。本明細書に記載される他の天然または非天然のアミノ酸は、界面活性物質Ｘに付けることにも適しており、式２−Ｉ−Ａの化合物を得るために、追加のアミノ酸／ペプチドを付けることに適していることが理解されるであろう。別の実施形態では、式２−Ｉ−Ａの化合物は、全長または部分的な長さのペプチドを基Ｘに付け、その後、式２−Ｉ−Ａの化合物を得るために追加のアミノ酸残基及び／又はペプチドを付けることによって調製されることが理解されるであろう。
【０２５６】
具体的な実施形態では、本明細書には、図２−１乃至図２−４の表２の化合物から選択される化合物が提供される。
【０２５７】
本明細書にはまた、上に記載される治療上有効な量のペプチド生成物、またはその許容可能な塩、および少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む、医薬組成物が提供される。
【０２５８】
医薬組成物の幾つかの実施形態では、担体は、水性ベースの担体である。医薬組成物の幾つかの実施形態では、担体は、非水性ベースの担体である。医薬組成物の幾つかの実施形態では、非水性ベースの担体は、サブミクロンの無水のα−ラクトースを含むヒドロフルオロアルカン様の溶媒、または他の賦形剤である。
【０２５９】
本明細書に提示される実施形態の範囲内では、求核試薬を運ぶリンカーアミノ酸Ｕを含む、アミノ酸及び／又はペプチドと、脱離基または脱離基を含有するために活性化することができる官能基、例えば、カルボン酸、または任意の他の反応基を含む基Ｘとの反応が熟慮され、それによって、リンカーアミノ酸Ｕを介する、界面活性物質Ｘに対するアミノ酸及び／又はペプチドの共有結合が可能となり、式２−Ｉ−Ａのペプチド生成物を提供する。
【０２６０】
本明細書に提示される実施形態の範囲内ではまた、脱離基または脱離基を含有するために活性化することができる官能基、例えば、カルボン酸、または任意の他の反応基を運ぶリンカーアミノ酸Ｕを含む、アミノ酸及び／又はペプチドと、求核基を含む基Ｘとの反応が熟慮され、それによって、リンカーアミノ酸Ｕを介する、界面活性物質Ｘに対するアミノ酸及び／又はペプチドの共有結合が可能となり、式２−Ｉ−Ａのペプチド生成物を提供する。
【０２６１】
１つの実施形態では、式２−Ｉ−Ａの化合物は、リンカーアミノ酸ＵのＸとの反応によって調製され、その後、式２−Ｉ−Ａのペプチド生成物を得るために、さらなる残基をＵに加えることが理解されるであろう。代替的な実施形態では、式２−Ｉ−Ａの化合物は、リンカーアミノ酸Ｕを含む適切なペプチドのＸとの反応によって調製され、その後、式２−Ｉ−Ａのペプチド生成物を得るために、さらなる残基をＵに随意に加えることが理解されるであろう。
【０２６２】
本明細書には、上に記載される治療上有効な量のペプチド生成物を、それを必要としている被験体に投与する工程含む、副甲状腺機能低下症を処置する方法が提供される。幾つかの実施形態では、副甲状腺機能低下症は、骨量減少に関係する。
【０２６３】
本明細書にはまた、上に記載される治療上有効な量のペプチド生成物を、それを必要としている被験体に投与する工程を含む、骨修復を刺激する又は骨インプラントの生着を支持する方法が提供される。
【０２６４】
本明細書にはまた、本明細書に記載されるような親水基；および親水基に共有結合的に付けられた疎水基を含む、共有結合的に修飾されたＰＴＨまたはＰＴＨｒＰペプチドまたはそのアナログが提供される。具体的な実施形態では、共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質生成物は、糖類である親水基、およびＣ１−Ｃ２０アルキル鎖またはアラルキル鎖である疎水基を含む。
【０２６５】
１つの実施形態では、組成物または分子の生物作用（例えば、受容体結合または酵素活性）を増加させる又は保持するために、界面活性物質に対する共有結合によって化学的に分子を修飾するための方法が提供される。幾つかの実施形態では、分子は、ペプチドである。方法はさらに、ポリエチレングリコールなどのポリマーに組成物中の分子を共有結合的に付ける工程を含む、さらなる修飾を含むことができる。
【０２６６】
別の実施形態では、少なくとも１つのアルキルグリコシドにペプチド鎖を共有結合的に結合することによって、ペプチド及び／又はタンパク質の薬物の免疫原性を減少または除去する方法が提供され、ここで、アルキルは、１乃至３０の炭素原子を有する。
【０２６７】
副甲状腺機能低下症、を処置する方法である、骨粗鬆症、骨減少症、閉経後骨粗鬆症、パジェット病、グルココルチコイド誘発性の骨粗鬆症、老年骨粗鬆症、液性高カルシウム血症などを処置する方法も提供され、該方法は、少なくとも１つのアルキルグリコシドに共有結合的に結合され、脊椎動物に送達された、ペプチドを含む薬剤組成物を投与する工程を含み、ここで、アルキルは、１乃至３０の炭素原子を有し、またはさらに６乃至１６の炭素原子の範囲内で有し、ここで、ペプチドに対するアルキルグリコシドの共有結合は、薬物の安定性、バイオアベイラビリティ及び／又は作用の持続時間を増加させる。
【０２６８】
幾つかの実施形態では、共有結合的に修飾されたペプチド及び／又はタンパク質は、共有結合的に修飾されたＰＴＨまたはＰＴＨｒＰ、またはそのアナログであり、アルキルグリコシドの界面活性物質部分との共有結合修飾によってそれらの薬学的および医療的特性を改善するために修飾される。これらの界面活性物質で修飾されたアナログは、身体から、タンパク質分解を妨害し、吸収を遅らせ、クリアランスを遅らせる立体障害を増加させた。
【０２６９】
いくつかの研究は、骨粗鬆症を患う患者のおよそ５０パーセントが、１年以内に経口のビスホスホネート治療を中止することを示す。これらの処置を中止する患者の多くは、不耐症を含む副作用が原因で中止している。切断型の（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）組換え副甲状腺ホルモン１−３４（ｒｈＰＴＨ１−３４）は、テリパラチド（Ｌｉｌｌｙ）のような骨のタンパク質同化剤（Ｂｒｉｘｅｎ， Ｋ．Ｔ．， ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｂａｓｉｃ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ ９４： ２６０−２７０； Ｄｏｂｎｉｇ， Ｈ． （２００４） Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ ５： １１５３−１１６２）として、市販で入手可能であるが、低いコンプライアンスは、大きな問題である。より最近では、破骨細胞機能を制御するリガンドに対する抗体（ｄｅｎｏｓｕｍａｂ， Ａｍｇｅｎ）が認可されてきているが、それは、深刻な既知の副作用（重大な皮膚感染、観察された顎の骨壊死の事例、および深刻な骨リモデリングの抑制）を有し、中にはまだ不明瞭な長期間の作用を有し得るものもある。
【０２７０】
＜骨構造＞
ヒトにおける骨のアーキテクチャーは、骨吸収を引き起こす、破骨細胞、および新しい骨基質を下へ置く、骨芽細胞の同調した（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ）機能によって維持されるか又は精巧にされる（ｅｌａｂｏｒａｔｅｄ）。骨は、身体におけるカルシウム（重大なシグナル伝達イオン）の貯蔵のための重要な貯蔵所であり、周囲の細胞外のＣａレベルの減少は、甲状腺傍の細胞膜上のＣａ感知受容体を介したＰＴＨ分泌の増加を引き起こす。ＰＴＨは、骨芽細胞の細胞膜上に存在する、その受容体（ＰＴＨＲ１）に結合し、「核因子−κＢの受容体活性化因子のリガンド」（ＲＡＮＫＬ）の発現をもたらす。ＲＡＮＫＬは、破骨細胞前駆細胞上のその受容体、ＲＡＮＫに結合し、それらの分化および増殖を刺激する（Ｂｏｙｃｅ， Ｂ．Ｆ． ａｎｄ Ｘｉｎｇ， Ｌ． （２００７） Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒ ９ Ｓｕｐｐｌ １： Ｓ１）。これは、骨吸収（骨からのカルシウムの動員）につながる。ＰＴＨはまた、腎尿細管性のＣａ再吸収を増加させ、（循環するカルシトリオールを増加させる）腎臓の１−αコレカルシフェロールヒドロキシラーゼに対するその刺激性の作用を介して腸のＣａ吸収を間接的に増強させるように作用する。両方の作用は、循環するカルシウムイオンをより長期的に増加させるように働く。
【０２７１】
ヒト副甲状腺ホルモン（ｈＰＴＨ）の天然型は、哺乳動物におけるカルシウム恒常性の維持に重要な役割を果たす、８４−アミノ酸ペプチドである（Ｒｏｓｅｎ， Ｃ．Ｊ． ａｎｄ Ｂｉｌｅｚｉｋｉａｎ， Ｊ．Ｐ． （２００１） Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ ８６： ９５７−９６４）。構造的に関連するが独立したホルモン（副甲状腺ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ））は、局所的な組織における骨成長に焦点を置いた、パラクリンの役割を果たす。両方のホルモンは、骨芽細胞、ＰＴＨＲ１上の同じ受容体に結合し、および増加したｃＡＭＰレベルによって調節されたものを含む、複数のシグナル経路の活性をもたらす。
【０２７２】
しかしながら、ＰＴＨ（１−３４）の間欠性の存在は、骨芽細胞の刺激、ＲＡＮＫＬ発現の欠如、および増加した骨密度につながるだけである。ＰＴＨ（１−３４）は、間欠注射によって外因的に与えられたときに、骨格に対する強力な同化作用を示す。小集団の患者は、６−２４か月の間、毎日の皮下注射によってテリパラチドを受け（Ｒｅｅｖｅ， Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （１９８０） Ｂｒ Ｍｅｄ Ｊ ２８０： １３４０−１３４４）、対の骨生検は、骨新形成の証拠、および骨形成と吸収の間の速度（ｒａｔｅｓ）間の解離（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）があったという示唆とともに、腸の海綿骨の量の大きな増加を明らかにした。多数の研究は、ＰＴＨアナログの毎日の注射剤の後の骨組織の発達を確認した（Ｈｏｄｓｍａｎ， Ａ．Ｂ．， ｅｔ ａｌ． （２００５） Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｖ ２６： ６８８−７０３； Ｃｈｅｎｇ， Ｚ．， ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｒｅｓ ２４： ２０９−２２０）。骨代謝を減少させるために主として骨芽細胞の活性の阻害によって作用する、したがって、新しい骨を構築するよりもむしろ保存する再吸収阻害薬での治療後に観察された骨格のアーキテクチャーとは対照的に、アーキテクチャー上の改善が、毎日のテリパラチド注射後の骨格内に生じるという観察を、文献のレビューは支持している。
【０２７３】
外因性のＰＴＨ（１−３４）の間欠投与よりもむしろ継続投与が、結果的に骨吸収をもたらす。したがって、６時間未満のＰＴＨ（１−３４）の注入での処置は、結果的に、骨密度の増加をもたらすが、８時間以上の注入は、結果的に、骨吸収をもたらす（Ｆｒｏｌｉｋ， Ｃ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２００３） Ｂｏｎｅ ３３： ３７２−３７９）。ＰＴＨ（１−３４）の長期投与は、ＲＡＮＫＬ（骨芽細胞前駆細胞上の活性化するＲＡＮＫ）の発現を引き起こし、それ故、それらの分化および増殖を刺激する（Ｂｏｙｃｅ， Ｂ．Ｆ． ａｎｄ Ｘｉｎｇ， Ｌ． （２００７） Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒ ９ Ｓｕｐｐｌ １： Ｓ１）。この観察は、現在の治療パラダイム（皮下注射によるＰＴＨ（１−３４）の毎日１回の投与）につながった。より最近では、１日のＰＴＨ（１−３４）の注入および１週間の中止による研究は、骨密度の重要な増加を示した（Ｅｔｏｈ， Ｍ． ａｎｄ Ｙａｍａｇｕｃｈｉ， Ａ． （２０１０） Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｍｅｔａｂ， ２８： ６４１−９））。テリパラチドは、１０分のＣｍａｘおよび１９分の半減期を有する（Ｆｒｏｌｉｋ， Ｃ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２００３） Ｂｏｎｅ ３３： ３７２−３７９）。より効果的なＰＴＨアナログが、より実質的な骨密度の増加をもたらすと予期され得る。
【０２７４】
ＰＴＨ（１−３４）、およびＰＴＨ（１−８４）での毒性学的研究の間に、かなりの割合のラットが、骨肉腫を発病し、それはおよそ２０か月目に始まったことが観察された（Ｔａｓｈｊｉａｎ， Ａ．Ｈ．， Ｊｒ． ａｎｄ Ｇｏｌｔｚｍａｎ， Ｄ． （２００８） Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｒｅｓ ２３： ８０３−８１１）。組換えＰＴＨ（１−３４）、テリパラチド（Ｆｏｒｔｅｏ（登録商標））での人体試験において、処置関連の肉腫は報告されていない。しかしながら、現在の治療での処置は、＜２年の継続的な毎日の皮下注射に限定されている。
【０２７５】
＜ＰＴＨおよびＰＴＨｒＰ＞
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される方法および組成物は、ＰＴＨ及び／又はＰＴＨｒＰのペプチド及び／又はタンパク質及び／又はそれらのアナログの使用を含む。インタクトなヒトＰＴＨ（ｈＰＴＨ１−８４）の生物学的活性のすべては、Ｎ末端配列に存在し；ほとんどの臨床研究は、テリパラチドとして知られている、３４−アミノ酸ペプチドｈＰＴＨ（１−３４）を使用している。最初の２つのアミノ酸は、生物学的活性には不可欠であり、骨のタンパク質同化特性が、縮小されたフラグメントｈＰＴＨ（１−３１）またはその環化されたラクタムによって十分に維持されるようである（Ｗｈｉｔｆｉｅｌｄ， Ｊ．Ｆ． ａｎｄ Ｍｏｒｌｅｙ， Ｐ． （１９９５） Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｓｃｉ １６： ３８２−３８６）。より最近では、ｈＰＴＨ（１−１１）ほど短い配列の研究は、活性を示しており、それらのＥＣ５０を低いｎＭ範囲まで減少させるためにさらに修正され得る（Ｓｈｉｍｉｚｕ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７５： ２１８３６−２１８４３； Ｓｈｉｍｉｚｕ， Ｎ．， ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｒｅｓ １９： ２０７８−２０８６）。
【０２７６】
ＰＴＨおよびＰＴＨｒＰのＰＴＨ１Ｒとの相互作用の研究は、リガンドが各々、２つの結合領域を有し、１つはＮ末端１−１４領域に、もう１つはＣ末端１５−３４領域に有することを示唆している。１−１４の部分は、より局所的に秩序化した構造を有し、受容体の７−細胞膜貫通領域と相互作用する一方で、１５−３４領域は、アルファヘリックスであり、細胞外の、受容体のＮ末端伸長と相互作用する。これらのペプチドのＮ末端領域は、この膜近接領域の相互作用による受容体活性の主要な役割を有するようであるが、一方で、Ｃ末端のヘリックス領域は、受容体の細胞外領域との相互作用によって（Ｄｅａｎ， Ｔ．， ｅｔ ａｌ． （２００６） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８１： ３２４８５−３２４９５； Ｐｏｔｅｔｉｎｏｖａ， Ｚ．， ｅｔ ａｌ． （２００６） Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４５： １１１１３−１１１２１）、リガンドのより高い効能を生じさせる（Ｇａｒｄｅｌｌａ， Ｔ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １３５： １１８６−１１９４； Ｌｕｃｋ， Ｍ．Ｄ．， ｅｔ ａｌ． （１９９９） Ｍｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ １３： ６７０−６８０）、重要な結合相互作用（図２−１乃至図２−４）を有する。これは、クラスＢ ＧＰＣＲのファミリーの他のメンバーにも伸長された、結合の２つのドメインモデルにつながる（Ｈｏｌｔｍａｎｎ， Ｍ．Ｈ．， ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０： １４３９４−１４３９８； Ｂｅｒｇｗｉｔｚ， Ｃ．， ｅｔ ａｌ． （１９９６） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１： ２６４６９−２６４７２； Ｒｕｎｇｅ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ． （２００３） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８： ２８００５−２８０１０）。
【０２７７】
したがって、本明細書には、ＰＴＨ１Ｒに対する結合を可能にする配列を有する、共有結合的に修飾されたペプチドまたはペプチドアナログが提供される。ＰＴＨ／ＰＴＨｒＰクラスにおけるリガンドの共有結合修飾は、界面活性物質部分（例えば、グルコース由来の１−アルキルグルクロン酸などの、１−アルキル−グルクロン酸部分）の使用によって切断または単純化されたＣ末端領域に連結されたＰＴＨＲ１の膜近接部分と相互作用する、Ｎ末端リガンド配列の発達に依存する。非常に、Ｃ末端領域の相互作用のほとんどが、受容体の細胞外領域における疎水性のチャネル（Ｐｉｏｓｚａｋ， Ａ．Ａ． ａｎｄ Ｘｕ， Ｈ．Ｅ． （２００８） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０５： ５０３４−５０３９； Ｐｉｏｓｚａｋ， Ａ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８４： ２８３８２−２８３９１）との一般的な疎水的相互作用に関係するため、本明細書に記載される共有結合修飾は、低い特異性の相互作用による増加した結合相互作用を可能にする。
【０２７８】
本明細書に記載される界面活性物質で修飾されたペプチドによる改善された細胞刺激の一例は、図４に例証される。したがって、実質的により大きなｃＡＭＰ出力（１２５％；超敵対的な刺激）は、内部標準、ヒトＰＴＨｒＰによるよりも、ＥＵ−２３２（図５）の用量で刺激された細胞によって示される。同様に、ヒトＰＴＨｒＰのコード化されたサンプル（図６；ＥＵ−２８５）は、内部アッセイ標準、ヒトＰＴＨｒＰの最大の刺激のわずか１００％しか達成しない。ＥＵ−２３２は、Ｃ末端領域において１−ドデシル β−Ｄ−グルクロン酸部分によって修飾される。重要なことに、より短いペプチド鎖、または１−ドデシル β−Ｄ−グルクロン酸部分によって修飾されていない、この大きさのペプチド鎖は、減少した効力を示すと予想することができる。
【０２７９】
同様に、この界面活性物質で修飾されたアナログＥＵ−２３２に対するインビボの反応は、高い効能および延長した作用の持続時間を示す（図７）。血中リン酸塩レベルは、生理食塩水（Ｇ１）、１ｋｇ当たり８０マイクログラムのＰＴＨ（Ｇ２）、１ｋｇ当たり８０マイクログラムのＥＵ−２３２（Ｇ３）、または１ｋｇ当たり３２０マイクログラムのＥＵ−２３２（Ｇ４）でのラットに対する投薬後に、様々な時点で試験された。ＥＵ−２３２は、最大の統計的に有意な効果が、アッセイにおける最後の時点（投薬の５時間後）で見られる、延長した作用の持続時間を実証する。
【０２８０】
図７に示されるように、血中カルシウムレベルは、生理食塩水（Ｇ１）、１ｋｇ当たり８０マイクログラムのＰＴＨ（Ｇ２）、１ｋｇ当たり８０マイクログラムのＥＵ−２３２（Ｇ３）、または１ｋｇ当たり３２０マイクログラムのＥＵ−２３２（Ｇ４）でのラットに対する投薬後に、様々な時点で試験された。対照（Ｇ１）とは統計的に有意に異なる群はなかった。重要なことに、ＥＵ−２３２に対する最大に有効な用量および時間点（Ｇ４；５時間で）は、上昇を示さず、それ故、最大に有効な用量での高カルシウム血症の傾向は示されない。高カルシウム血症は、ＰＴＨ１−３４、およびＰＴＨの強力なアナログの投与後に見られる（ｓｅｅ）、重要な副作用である。
【０２８１】
本明細書に記載されるペプチドをもたらすための界面活性物質の修飾に関係する、上に及び図面に記載される、改善は、医療でのそれらの使用に重要な影響をもたらす。このような分子は、ＰＴＨ（皮下注射によるＴ１／２ ３０分）またはＰＴＨｒＰなどの短時間作用型の天然ホルモンでの処置と比較して、増強された生物学的結果を与えるための、毎日１回、またはそれほど頻繁でない投与による使用に適している。ＥＵ−２３２などの界面活性物質で修飾されたペプチドは、鼻のバイオアベイラビリティに対する界面活性物質の周知の効果が原因で、鼻腔内吸入によって投与されるときに、より大きな生物学的作用を示すと予想され得る。
【０２８２】
したがって、幾つかの実施形態では、本明細書に記載される界面活性物質で修飾されたペプチド生成物は、タンパク質分解の発生を減少させる。幾つかの実施形態では、ＰＴＨ及び／又はＰＴＨｒＰ及び／又はそれらのアナログの共有結合修飾によって、治療薬の生産コストを減少させることが可能であり、共有結合的に付けられた界面活性物質部分の存在によって好都合な薬学的特性が提供される。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される界面活性物質で修飾されたＰＴＨ及び／又はＰＴＨｒＰは、このような共有結合修飾を欠く他の既知のペプチドリガンド（Ｄｅａｎ， ｅｔ ａｌ．（Ｄｅａｎ， Ｔ．， ｅｔ ａｌ． （２００６） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８１： ３２４８５−３２４９５）のリガンドなど）と比較して、結果として生じるリガンドのＰＫおよび作用持続時間（ＰＤ）の作用を延長させる。本明細書に提示される実施形態の範囲内ではまた、界面活性物質で修飾したＰＴＨ及び／又はＰＴＨｒＰ及び／又はそれらのアナログの長期的で安全な投与が熟慮される。
【０２８３】
幾つかの例では、Ｎ末端結合領域は、残基１４あたりで終了し、ヘリックス領域は、残基１６以降（ｏｎｗａｒｄ）を囲む（ｅｎｃｏｍｐａｓｓｅｓ）。したがって、１５以降の領域で１−アルキルグルクロン酸の修飾によって１−１４領域で最適化されたリガンドは、高い効能（１−アルキル修飾）を有して高い特異的結合（Ｎ末端）を有する。Ｃ末端領域におけるα−ヘリックスの安定化する置換（Ｋａｕｌ， Ｒ． ａｎｄ Ｂａｌａｒａｍ， Ｐ． （１９９９） Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ７： １０５−１１７）の使用は、より高いヘリックス含量およびより高い効能につながる。一般に使用されるα−ヘリックスの安定剤は、Ａｌａ、およびＡｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃなどの１，１−ジアルキルアミノ酸のクラスである（下記の定義を参照）。ＰＴＨ構造の最小化は、短くされたアナログにつながり、ここで、抑制されたα−ヘリックスの安定剤は、重要な効能の増加につながった（Ｓｈｉｍｉｚｕ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７５： ２１８３６−２１８４３）。例えば、ＰＴＨ１−１４およびＰＴＨ１−１１のアナログの位置１および３へのＡｉｂの置換は、増加した効能につながった（Ｓｈｉｍｉｚｕ， Ｎ．， ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７６： ４９００３−４９０１２）。位置１でのより多くの妨害されたα−ヘリックスの安定剤の組み込みは、さらなる効能の増加につながる（Ｓｈｉｍｉｚｕ， Ｎ．， ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｒｅｓ １９： ２０７８−２０８６）。ＰＴＨ１−３４アナログの様々な位置へのＡｉｂの置換、特に位置１２および１３での置換も、効能の改善につながった（Ｐｅｇｇｉｏｎ， Ｅ．， ｅｔ ａｌ． （２００３） Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ６８： ４３７−４５７）。しかしながら、単純なＰＴＨ１−１１配列の位置１および３でのＡｉｂが、許容可能ではなかったが示された（Ｂａｒａｚｚａ， Ａ．， ｅｔ ａｌ． （２００５） Ｊ Ｐｅｐｔ Ｒｅｓ ６５： ２３−３５）。したがって、幾つかの実施形態では、ＰＴＨ及び／又はＰＴＨｒＰのα−ヘリックス含量は、ペプチド生成物の安定性の決定子である（Ｍａｒｘ， Ｕ．Ｃ．， ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０： １５１９４−１５２０２； Ｓｃｈｉｅｖａｎｏ， Ｅ．， ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ５４： ４２９−４４７）。
【０２８４】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される共有結合ペプチドの修飾における、Ｎε−（１’−ドデシルベータ−Ｄ−グルクロニル）−リジンなどの、長側鎖の使用は、α−ヘリックスを不安定にする。したがって、また本明細書に提示される実施形態の範囲内ではまた、α−ヘリックスの安定剤を含む修飾である。したがって、幾つかの実施形態では、本明細書に記載される界面活性物質で修飾されたペプチド生成物は、（例えば、界面活性物質の置換のちょうどＮ末端及び／又はＣ末端の位置で）ヘリックス安定剤を含む。幾つかの実施形態では、α−ヘリックス安定剤は、ＰＴＨ及び／又はＰＴＨｒＰの鎖における位置１２に位置する。ほんの一例として、下記の表は、がα−ヘリックス安定剤を含む、ＥＵ−２１２乃至ＥＵ−２８２の特定の界面活性物質で修飾されたペプチド生成物（ＥＵ−２１２乃至ＥＵ−２８２）を記載する。
【０２８５】
１つの態様では、共有結合的に修飾され、本明細書に記載される方法に適したペプチドは、ＰＴＨｒＰ及び／又はその関連するホルモンＰＴＨの切断されたアナログであり、該アナログは、限定されないが：
ｈＰＴＨ（１−３４）：Ｓｅｒ１−Ｖａｌ２−Ｓｅｒ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｍｅｔ８−Ｈｉｓ９−Ａｓｎ１０−Ｌｅｕ１１−Ｇｌｙ１２−Ｌｙｓ１３−Ｈｉｓ１４−Ｌｅｕ１５−Ａｓｎ１６−Ｓｅｒ１７−Ｍｅｔ１８−Ｇｌｕ１９−Ａｒｇ２０−Ｖａｌ２１−Ｇｌｕ２２−Ｔｒｐ２３−Ｌｅｕ２４−Ａｒｇ２５−Ｌｙｓ２６−Ｌｙｓ２７−Ｌｅｕ２８−Ｇｌｎ２９−Ａｓｐ３０−Ｖａｌ３１−Ｈｉｓ３２−Ａｓｎ３３−Ｐｈｅ３４−ＯＨ；（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２９０）または、
ｈＰＴＨｒＰ（１−３４）：Ａｌａ１−Ｖａｌ２−Ｓｅｒ３−Ｇｌｕ４−Ｈｉｓ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｌｅｕ８−Ｈｉｓ９−Ａｓｐ１０−Ｌｙｓ１１−Ｇｌｙ１２−Ｌｙｓ１３−Ｓｅｒ１４−Ｌｅｕ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｓｐ１７−Ｌｅｕ１８−Ａｒｇ１９−Ａｒｇ２０−Ａｒｇ２１−Ｐｈｅ２２−Ｐｈｅ２３−Ｌｅｕ２４−Ｈｉｓ２５−Ｈｉｓ２６−Ｌｅｕ２７−Ｉｌｅ２８−Ａｌａ２９−Ｇｌｕ３０−Ｉｌｅ３１−Ｈｉｓ３２−Ｔｈｒ３３−Ａｌａ３４−ＯＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２９１）、を含む。
【０２８６】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるペプチド生成物は、以下の式２Ｖの構造を有し：
【０２８７】
【化３６】
2014516036.tif 000045
【０２８８】
式中：
Ｚは、ＯＨ、または−ＮＨ−Ｒ３であり、ここで、Ｒ３は、ＨまたはＣ１−Ｃ１２アルキル；または１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖であり；
ａａ１は、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、またはＤｅｇであり；
ａａ２は、Ｖａｌであり；
ａａ３は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、またはＤｅｇであり；
ａａ４は、Ｇｌｕであり；
ａａ５は、Ｈｉｓ、またはＩｌｅであり；
ａａ６は、Ｇｌｎ、またはＣｉｔであり；
ａａ７は、Ｌｅｕ、またはＰｈｅであり；
ａａ８は、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、またはＮｌｅであり；
ａａ９は、Ｈｉｓであり；
ａａ１０は、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、Ａｌａ、またはＡｉｂであり；
ａａ１１は、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、またはｈＡｒｇであり；
ａａ１２は、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、またはＡｃ５ｃであり；
ａａ１３は、Ｌｙｓ、またはＡｒｇであり；
ａａ１４は、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ｎａｌ（２）、または位置ａａ１８に環化され；
ａａ１５は、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ａｉｂであり；
ａａ１６は、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、Ｕ（Ｘ）であり；
ａａ１７は、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、Ｕ（Ｘ）、Ｚであり；
ａａ１８は、存在しない、Ｌｅｕ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、またはＵ（Ｘ）、または位置ａａ１４に環化され；
ａａ１９は、存在しない、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２０は、存在しない、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２１は、存在しない、Ａｒｇ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、Ｄｅｇ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２２は、存在しない、Ｐｈｅ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、Ｕ（Ｘ）、または位置ａａ１８またはａａ２６に環化され；
ａａ２３は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２４は、存在しない、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｅｕ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２５は、存在しない、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＵ（Ｘ）；
ａａ２６は、存在しない、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、または位置ａａ２２に環化され；
ａａ２７は、存在しない、Ｌｅｕ、またはＬｙｓであり；
ａａ２８は、存在しない、Ｉｌｅ、またはＬｅｕであり；
ａａ２９は、存在しない、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、またはＡｉｂであり；
ａａ３０は、存在しない、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、またはＡｉｂであり；
ａａ３１は、存在しない、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ５Ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ３２は、存在しない、Ｈｉｓ、Ａｉｂ、Ａｃ５Ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ３３は、存在しない、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ａｉｂ、Ａｃ５Ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ３４は、存在しない、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ａｉｂ、Ａｃ５Ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ３５は、存在しない、Ａｉｂ、Ａｃ５Ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ３６は、存在しない、Ａｉｂ、Ａｃ５Ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
Ｕは、結合するアミノ酸であり；および
Ｘは、Ｕの側鎖に界面活性物質で結合され；
ここで、ａａ１−ａａ３６のいずれか２つは、それらの側鎖を介して随意に環化されることで、ラクタム結合を形成し；
但し、ａａ１−ａａ３６の１つ、または少なくとも１つは、Ｕであることを条件とする。
【０２８９】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるペプチド生成物は、上に記載されるような（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２９２）式Ｖのａａ１−ａａ２０を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるペプチド生成物は、上に記載されるような（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２９３）式Ｖのａａ１−ａａ１９を含む。
【０２９０】
具体的な実施形態では、結合アミノ酸Ｕは、ＬｙｓまたはＯｒｎなどのジアミノ酸であり、Ｘは、Ｕに結合された１−アルキルグリコシドクラスからの修飾された界面活性物質であり、Ｚは、ＯＨ、または−ＮＨ−Ｒ３）であり、ここで、Ｒ３は、ＨまたはＣ１−Ｃ１２；または１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖である。
【０２９１】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるペプチド生成物は、以下の式２−ＶＩの構造を有し：
【０２９２】
【化３７】
2014516036.tif 000046
【０２９３】
式中：
Ｚは、ＯＨ、または−ＮＨ−Ｒ３であり、Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたは１０ｄａ未満のＰＥＧ鎖であり；
ａａ１は、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、Ｄｅｇであり；
ａａ３は、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ｄｅｇであり；
ａａ５は、Ｈｉｓ、Ｉｌｅであり；
ａａ６は、Ｇｌｎ、キットであり；
ａａ７は、Ｌｅｕ、Ｐｈｅであり；
ａａ８は、Ｌｅｕ、Ｎｌｅであり；
ａａ１０は、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、Ａｌａ、Ａｉｂであり；
ａａ１１は、Ａｒｇ、ｈＡｒｇであり；
ａａ１２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃであり；
ａａ１３は、Ｌｙｓ、Ａｒｇであり；
ａａ１４は、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｎａｌ（２）であり；
ａａ１５は、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ａｉｂであり；
ａａ１６は、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、Ｕ（Ｘ）であり；
ａａ１７は、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、Ｕ（Ｘ）であり；
ａａ１８は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｇｌｎ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ｕ（Ｘ）であり；
ａａ１９は、存在しない、またはＡｒｇ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、Ｕ（Ｘ）であり；
ａａ２０は、存在しない、またはＡｒｇ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、Ｕ（Ｘ）であり；
ａａ２１は、存在しない、またはＡｒｇ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ５Ｃ、Ｄｅｇ、Ｕ（Ｘ）であり；
ａａ２２は、存在しない、またはＰｈｅ、Ｇｌｕ、ＬｙｓまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２３は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｐｈｅ、ＴｒｐまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２４は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２５は、存在しない、またはＨｉｓ、Ｌｙｓ、またはＵ（Ｘ）であり、および
ａａ２６は、存在しない、またはＡｉｂ、Ａｃ５ｃであり；
Ｕは、結合するアミノ酸であり；
Ｘは、Ｕに結合された１−アルキルグリコシドクラスからの修飾された界面活性物質であり、ここで、１−アルキル基は、置換または非置換のＣ１−Ｃ２０アルキルまたは置換または非置換のＣ１−Ｃ２０アラルキルであり；
但し、ａａ１−ａａ２６の１つ、または少なくとも１つは、Ｕであることを条件とする。
【０２９４】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるペプチド生成物は、以下の式２−ＶＩＩの構造を有し；
【０２９５】
【化３８】
2014516036.tif 000047
【０２９６】
式中：
Ｚは、ＯＨまたは−Ｈ２であり；
ａａ１は、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃであり；
ａａ１２は、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃであり；
ａａ１４は、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｎａｌ（２）であり；
ａａ１６は、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ｕ（Ｘ）であり；
ａａ１７は、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、Ｕ（Ｘ）であり；
ａａ１８は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｇｌｎ、Ａｉｂ、Ｕ（Ｘ）であり；
ａａ１９は、存在しない、またはＡｒｇ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃであり；
ａａ２０は、存在しない、またはＡｒｇ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃであり；
ａａ２１は、存在しない、またはＡｒｇ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ５Ｃ、Ｄｅｇであり；
ａａ２２は、存在しない、またはＰｈｅ、Ｇｌｕ、ＬｙｓまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２３は、存在しない、またはＬｅｕ、Ｐｈｅ、ＴｒｐまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２４は、存在しない、またはＨｉｓ、Ａｒｇ、またはＵであり；
ａａ２５は、存在しない、またはＨｉｓ、Ｌｙｓ、またはＵであり、および
ａａ２６は、存在しない、またはＡｉｂ、Ａｃ５ｃであり；
Ｕは、結合するアミノ酸であり；
Ｘは、Ｕに結合された１−アルキルグリコシドクラスからの修飾された界面活性物質であり、ここで、１−アルキル基は、置換または非置換のＣ１−Ｃ２０アルキルまたは置換または非置換のＣ１−Ｃ２０アラルキルであり；
但し、ａａ１−ａａ２６の１つ、または少なくとも１つは、Ｕであることを条件とする。
【０２９７】
幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、以下の式ＩＩＩの構造を有し：
【０２９８】
【化３９】
2014516036.tif 000048
【０２９９】
式中：
Ｚは、ＯＨまたは−ＮＨ２であり；
ａａ１は、Ａｉｂ、またはＡｃ５ｃであり；
ａａ１２は、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、またはＡｃ５ｃであり；
ａａ１４は、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、ＧｌｕまたはＮａｌ（２）であり；
ａａ１６は、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１７は、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１８は、存在しないまたはＬｅｕ、Ｇｌｎ、Ａｉｂ、Ｌｙｓ、ＧｌｕまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１９は、存在しないまたはＡｒｇ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、またはＡｃ５ｃであり；
ａａ２０は、存在しないまたはＡｒｇ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃであり；
ａａ２１は、存在しないまたはＡｒｇ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ５Ｃ、またはＤｅｇであり；
ａａ２２は、存在しないまたはＰｈｅ、Ｇｌｕ、ＬｙｓまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２３は、存在しないまたはＬｅｕ、Ｐｈｅ、ＴｒｐまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２４は、存在しないまたはＨｉｓ、Ａｒｇ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２５は、存在しないまたはＨｉｓ、Ｌｙｓ、またはＵ（Ｘ）であり；および
ａａ２６は、存在しないまたはＡｉｂ、Ａｃ５ｃであり；
ここで、ａａ１−ａａ２６のいずれか２つは、それらの側鎖を介して随意に環化されることで、ラクタム結合を形成し；
但し、ａａ１６、ａａ１７、ａａ１８、ａａ２２、ａａ２３、ａａ２４またはａａ２５の１つまたは少なくとも１つが、Ｘに共有結合的に付けられたリンカーアミノ酸Ｕであることを条件とする。
【０３００】
上の式２−ＩＩＩの具体的な実施形態では、Ｘは、以下の構造を有し：
【０３０１】
【化４０】
2014516036.tif 000049
【０３０２】
式中：
Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、Ｈであり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−であり；および
Ｒ２は、単結合である。
【０３０３】
上に記載される実施形態の幾つかでは、Ｒ１ａは、Ｃ１−Ｃ２０アルキル基、Ｃ１−Ｃ１８アルキル基、Ｃ１−Ｃ１６アルキル基、またはＣ１−Ｃ１２アルキル基である。式２−ＩＩＩの幾つかの実施形態では、Ｕは、本明細書に記載される任意のリンカーアミノ酸である。
【０３０４】
本明細書に提示される実施形態の範囲内では、式２−Ｉ−Ａ、式２−ＩＩＩ、式２−Ｖ、式２−ＶＩまたは式２−ＶＩＩのペプチド生成物が熟慮され、ここで、ペプチド生成物は、１つ、または１つを超える界面活性物質の基（例えば、式Ｉの構造を有する基Ｘ）を含む。１つの実施形態では、式２−Ｉ−Ａ、式２−ＩＩＩ、式２−Ｖ、式２−ＶＩまたは式２−ＶＩＩのペプチド生成物は、１つの界面活性物質の基を含む。別の実施形態では、式２−Ｉ−Ａ、式２−ＩＩＩ、式２−Ｖ、式２−ＶＩまたは式２−ＶＩＩのペプチド生成物は、２つの界面活性物質の基を含む。また別の実施形態では、式２−Ｉ−Ａ、式２−ＩＩＩ、式２−Ｖ、式２−ＶＩまたは式２−ＶＩＩのペプチド生成物は、３つの界面活性物質の基を含む。
【０３０５】
図２−１乃至図２−４の表２は、本明細書に記載されるような界面活性物質との共有結合に適している、ペプチドの特定の例を例証する。
【０３０６】
本明細書には、限定されないが、骨粗鬆症、骨減少症、閉経後骨粗鬆症、パジェット病、グルココルチコイド誘発性の骨粗鬆症、炎症性の骨損失、インプラントの定着、顎の骨壊死、幹細胞増殖、老年骨粗鬆症、液性高カルシウム血症などを含む、骨損失及び／又は副甲状腺機能亢進症に関係する疾病の処置のための、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１７０の特定の部分の重要性が認識されている。
【０３０７】
したがって、本明細書には、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１７０のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１７を含む、治療上有効な量のＰＴＨアナログを、それを必要としている個体に投与する工程を含む、それを必要としている個体において、骨損失（例えば、骨粗鬆症）及び／又は副甲状腺機能亢進症に関係する疾病を処置する方法が提供される。
【０３０８】
さらなる実施形態において、本明細書には、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１７０のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１８を含む、治療上有効な量のＰＴＨアナログを、それを必要としている個体に投与する工程を含む、それを必要としている個体において、骨損失（例えば、骨粗鬆症）及び／又は副甲状腺機能亢進症に関係する疾病を処置する方法が提供される。
【０３０９】
別の実施形態において、本明細書には、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１７０のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１９を含む、治療上有効な量のＰＴＨアナログを、それを必要としている個体に投与する工程を含む、それを必要としている個体において、骨損失（例えば、骨粗鬆症）及び／又は副甲状腺機能亢進症に関係する疾病を処置する方法が提供される。
【０３１０】
別の実施形態において、本明細書には、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１７０のアミノ酸残基ａａ１−ａａ２０を含む、治療上有効な量のＰＴＨアナログを、それを必要としている個体に投与する工程を含む、それを必要としている個体において、骨損失（例えば、骨粗鬆症）及び／又は副甲状腺機能亢進症に関係する疾病を処置する方法が提供される。
【０３１１】
さらなる実施形態において、上に記載される前記ＰＴＨアナログの投与は、骨密度の増加を引き起こす。
【０３１２】
本明細書には、限定されないが、骨粗鬆症、骨減少症、閉経後骨粗鬆症、パジェット病、グルココルチコイド誘発性の骨粗鬆症、炎症性の骨損失、インプラントの定着、顎の骨壊死、幹細胞増殖、老年骨粗鬆症、液性高カルシウム血症などを含む、骨損失及び／又は副甲状腺機能亢進症に関係する疾病の処置のための、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１７１、１７３、１７４、６４５または６４６の特定の部分の重要性が認識されている。
【０３１３】
したがって、本明細書には、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１７１、１７３、１７４、２９０または２９１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１７を含む、治療上有効な量のＰＴＨアナログを、それを必要としている個体に投与する工程を含む、それを必要としている個体において、骨損失及び／又は副甲状腺機能亢進症に関係する疾病を処置する方法が提供される。
【０３１４】
さらなる実施形態において、本明細書には、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１７１、１７３、１７４、２９０または２９１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１８を含む、治療上有効な量のＰＴＨアナログを、それを必要としている個体に投与する工程を含む、それを必要としている個体において、骨損失（例えば、骨粗鬆症）及び／又は副甲状腺機能亢進症に関係する疾病を処置する方法が提供される。
【０３１５】
別の実施形態において、本明細書には、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１７１、１７３、１７４、２９０または２９１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１９を含む、治療上有効な量のＰＴＨアナログを、それを必要としている個体に投与する工程を含む、それを必要としている個体において、骨損失（例えば、骨粗鬆症）及び／又は副甲状腺機能亢進症に関係する疾病を処置する方法が提供される。
【０３１６】
別の実施形態において、本明細書には、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１７１、１７３、１７４、２９０または２９１のアミノ酸残基ａａ１−ａａ２０を含む、治療上有効な量のＰＴＨアナログを、それを必要としている個体に投与する工程を含む、それを必要としている個体において、骨損失（例えば、骨粗鬆症）及び／又は副甲状腺機能亢進症に関係する疾病を処置する方法が提供される。
【０３１７】
さらなる実施形態では、上に記載される前記ＰＴＨアナログの投与は、骨密度の増加を引き起こす。
【０３１８】
上に記載される実施形態のいずれかでは、前記ＰＴＨアナログは、式２−Ｉの界面活性物質Ｘによって修飾され：
【０３１９】
【化４１】
2014516036.tif 000050
【０３２０】
式中：
Ｒ１ａは、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、非天然の、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアリール基、置換または非置換のアラルキル基、またはステロイド核を含有する部分であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、各々の出現で独立して、単結合、Ｈ、非天然の、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアリール基、または置換または非置換のアラルキル基であり；
Ｗ１は、各々の出現で独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、−（Ｃ＝Ｓ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−ＮＨ−、または−ＣＨ２−Ｓ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−であり；
Ｒ２は、各々の出現で独立して、Ｕに対する単結合、Ｈ、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアリール基、または置換または非置換のアラルキル基、−ＮＨ２、−ＳＨ、Ｃ２−Ｃ４−アルケン、Ｃ２−Ｃ４−アルキン、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒ、−（ＣＨ２）ｍ−マレイミド、または−Ｎ３であり；
ｎは、１、２または３であり；
ｍは、１−１０である。
【０３２１】
具体的な実施形態では、前記ＰＴＨアナログは、以下の構造を有する界面活性物質Ｘによって修飾され：
【０３２２】
【化４２】
2014516036.tif 000051
【０３２３】
式中：
Ｒ１ａは、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄは、Ｈであり；
Ｗ１は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｗ２は、−Ｏ−であり；および
Ｒ２は、単結合である。
【０３２４】
上に記載される実施形態の幾つかでは、Ｒ１ａは、Ｃ１−Ｃ２０アルキル基、Ｃ８−Ｃ２０アルキル基、Ｃ１２−Ｃ１８アルキル基またはＣ１４−Ｃ１８アルキル基である。
【０３２５】
アミノ末端またはカルボキシル末端での修飾は、ペプチド（例えば、ＰＴＨまたはＰＴＨｒＰ）へと随意に導入され得る（Ｎｅｓｔｏｒ， Ｊ．Ｊ．， Ｊｒ． （２００９） Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １６： ４３９９ − ４４１８）。
【０３２６】
例えば、ペプチドは、幾つかのペプチドに対して見られるように、低い効力、部分アゴニストおよびアンタゴニストの活性を示すペプチドアナログを与えるために、Ｎ末端上で切断またはアシル化され得（Ｇｏｕｒｌｅｔ， Ｐ．， ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ３５４： １０５−１１１， Ｇｏｚｅｓ， Ｉ． ａｎｄ Ｆｕｒｍａｎ， Ｓ． （２００３） Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ ９： ４８３−４９４）、それらの内容は、引用によって本明細書に組み込まれる。例えば、最初のｂＰＴＨの６つの残基の欠失によって、アンタゴニストのアナログがもたらされ（Ｍａｈａｆｆｅｙ， Ｊ．Ｅ．， ｅｔ ａｌ． （１９７９） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５４： ６４９６−６４９８； Ｇｏｌｄｍａｎ， Ｍ．Ｅ．， ｅｔ ａｌ． （１９８８） Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １２３： ２５９７−２５９９）、本明細書に記載されるペプチドに対する類似した作用によって、強力なアンタゴニストのアナログが生じる。Ｄ−ＰｈｅなどのＤ−アミノ酸の欠失または組み込みのような、ペプチドのＮ末端に対する他の修飾によってもまた、長鎖アルキルグリコシドなど、本明細書に記載される修飾によって置換されるときの、強力で長期的に作用するアゴニストまたはアンタゴニストを得ることができる。このようなアゴニストおよびアンタゴニストはまた、商業上有用であり、本明細書に記載される熟慮された実施形態の範囲内にある。
【０３２７】
本明細書に提示される実施形態の範囲内では、ＰＴＨ（例えば７−３４の残基アナログ）またはＰＴＨｒＰのＮ末端切断が熟慮され、それによって、インバースアゴニスト（Ｇａｒｄｅｌｌａ， Ｔ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ． （１９９６） Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １３７： ３９３６−３９４１）またはアンタゴニストが提供される。幾つかの実施形態では、ＰＴＨ及び／又はＰＴＨｒＰのインバースアゴニスト及び／又はアンタゴニストは、広範囲の腫瘍に関係する「液性高カルシウム血症」の処置に有用である。
【０３２８】
本明細書に記載される実施形態の範囲内ではまた、ペプチドアナログに共有結合的に付けられた界面活性物質が熟慮され、ここで、天然のペプチドは、アセチル化、アシル化、ペグ化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、脂質または脂質の誘導体の共有結合的な付着、ホスホチジルイノシトール（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）の共有結合的な付着、交差結合、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、システインの共有結合的な交差結合形成の形成、ピログルタミン酸の形成、フォルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、グリコシル化、脂質の付着、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマ−カルボキシル化、ヒドロキシル化およびＡＤＰリボシル化、セレニル化（ｓｅｌｅｎｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、アルギニル化（ａｒｇｉｎｙｌａｔｉｏｎ）などの、アミノ酸のタンパク質への転移ＲＮＡ媒介性の付加、およびユビキチン化によって修飾される。例えば、（Ｎｅｓｔｏｒ， Ｊ．Ｊ．， Ｊｒ． （２００７） Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＩＩ ２： ５７３−６０１， Ｎｅｓｔｏｒ， Ｊ．Ｊ．， Ｊｒ． （２００９） Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １６： ４３９９ − ４４１８， Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ， Ｔ．Ｅ． （１９９３， Ｗｏｌｄ， Ｆ． （１９８３） Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｖａｌｅｎｔ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ １−１２， Ｓｅｉｆｔｅｒ， Ｓ． ａｎｄ Ｅｎｇｌａｒｄ， Ｓ． （１９９０） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ １８２： ６２６−６４６， Ｒａｔｔａｎ， Ｓ．Ｉ．， ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ６６３： ４８−６２）を参照。
【０３２９】
本明細書に記載される実施形態の範囲内ではまた、分枝形成のある又はない、分枝される又は環状であるペプチドが熟慮される。環式の、分枝した及び分枝した環状ペプチドは、翻訳後の自然工程から結果として生じ、適切な合成方法によっても作られる。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される任意のペプチド生成物は、その後、アルキル−グリコシドの界面活性物質部分に共有結合的に付けられる、上に記載されるペプチドアナログを含む。
【０３３０】
本明細書に提示される実施形態の範囲内ではまた、本明細書に請求されるアナログの修飾によって、例えば、オクタン、デカン酸、ドデカン酸、テトラデカン酸、ヘキサデカン酸、オクタデカン酸、３−フェニルプロパン酸などの、脂肪酸との、または飽和または不飽和のアルキル鎖との、例えば、Ｌｙｓのε−位置での、リンカーアミノ酸上のアシル化によって、適切な位置で置換される、ペプチド鎖が熟慮される（Ｚｈａｎｇ， Ｌ． ａｎｄ Ｂｕｌａｊ， Ｇ． （２０１２） Ｃｕｒｒ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １９： １６０２−１６１８）。このようなアナログの限定しない、例示的な例は、以下のとおりである：
【０３３１】
Ａｃ５ｃ１―Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−ドデカノイル）１８−Ａｉｂ１９−ＮＨ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２９４）
【０３３２】
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−ドデカノイル）１８−ＮＨ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２９５）
【０３３３】
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−パルミトイル）１８−Ａｉｂ１９−ＮＨ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２９６）
【０３３４】
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｐｈｅ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−ドデカノイル）１８−Ａｉｂ１９−ＮＨ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２９７）
【０３３５】
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−テトラデカノイル）１８−Ａｉｂ１９−ＮＨ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２９８）
【０３３６】
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−テトラデカノイル）１８−Ａｉｂ１９−Ａｉｂ２０−ＮＨ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２９９）
【０３３７】
Ａｃ５ｃ１−Ｖａｌ２−Ａｉｂ３−Ｇｌｕ４−Ｉｌｅ５−Ｇｌｎ６−Ｌｅｕ７−Ｎｌｅ８−Ｈｉｓ９−Ｇｌｎ１０−ｈＡｒｇ１１−Ａｌａ１２−Ａｒｇ１３−Ｔｒｐ１４−Ｉｌｅ１５−Ｇｌｎ１６−Ａｉｂ１７−Ｌｙｓ（Ｎ−イプシロン−（Ｎアルファ−ドデカノイル−Ｌ−グルタミル））１８−Ａｉｂ１９−ＮＨ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．３００）など。
【０３３８】
他の実施形態では、ペプチド鎖は、ステロイド核（例えばコレステロール部分）など、スペーサーおよび疎水性の部分でリンカーアミノ酸（例えばシステインのメルカプト基）上の反応によって適切な位置で置換される。そのような実施形態のうちのいくつかでは、変更されたペプチドはさらに１つ以上のＰＥＧ鎖を含む。ナノカプセル化の限定しない例は、次のものである。
【０３３９】
【化４３】
2014516036.tif 000052
【０３４０】
＜ＧＬＰペプチドおよびアナログ＞
【０３４１】
また本明細書において提供されるものは、幾つかの実施形態において、界面活性剤の結合によって変更されるペプチド及び／又はタンパク質（例えば、ＧＬＰ−１、グルカゴン、グルカゴンまたはＧＬＰ−１のアナログなどを変更した）の合成用、試薬および中間物である。
【０３４２】
本明細書で与えられたものは、幾つかの実施形態において、ペプチド、リンカーアミノ酸Ｕを含むペプチド、および少なくとも１つの他のアミノ酸に共有結合で愛情を持っていた界面活性剤Ｘを含むペプチド産物である。
【０３４３】
【化４４】
2014516036.tif 000053
【０３４４】
ここで、界面活性剤Ｘは化学式Ｉの基である。
【０３４５】
【化４５】
2014516036.tif 000054
【０３４６】
ここで、Ｒ１ａは、各々の発生において、単結合、Ｈ、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアルキル基または置換または非置換のアラルキル基に、独立して存在し、
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄは、各々の発生において、単結合、Ｈ、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアルキル基、または置換または非置換のアラルキル基に各々独立して存在し、
Ｗ１は、各々の発生において、―ＣＨ２―、―ＣＨ２−Ｏ−、―（Ｃ＝Ｏ）、―（Ｃ＝Ｏ）―Ｏ−、―（Ｃ＝Ｏ）―ＮＨ−、―（Ｃ＝Ｓ）―、―（Ｃ＝Ｓ）―ＮＨ−、或いは―ＣＨ２Ｓ―に独立して存在し、
Ｗ２は―Ｏ―、―ＣＨ２−あるいは―Ｓ―であり、
Ｒ２は、各々の発生において、単結合、Ｈ、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアルキル基、または置換または非置換のアラルキル基、―ＮＨ２、―ＳＨ、Ｃ２−Ｃ４−アルケン、Ｃ２−Ｃ４−アルキン、―ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒ、―（ＣＨ２）ｍ  ―マレイミド、あるいは―Ｎ３であり、
ｎは、１、２又は３であり、
ｍは１−１０であり、
ペプチドは、化学式３−ＩＩから選択され、
【０３４７】
【化４６】
2014516036.tif 000055
【０３４８】
ここで、
Ｚは、ＯＨ（あるいは―ＮＨ−Ｒ３）であり、ここで、Ｒ３はＨまたはＣ１−Ｃ１２置換又は非置換アルキル、あるいは１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖であり、
ａａ１はＨｉｓ、Ｎ−Ａｃ−Ｈｉｓ、ｐＧｌｕ−Ｈｉｓ、あるいはＮ−Ｒ３−Ｈｉｓであり、
ａａ２はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃまたはＡｃ５ｃであり、
ａａ３はＧｌｎまたはＣｉｔであり、
ａａ４はＧｌｙまたはＤ−Ａｌａであり、
ａａ５はＴｈｒまたはＳｅｒであり、
ａａ６はＰｈｅ、Ｔｒｐ、Ｆ２Ｐｈｅ、Ｍｅ２ＰｈｅまたはＮａｌ２であり、
ａａ７はＴｈｒまたはＳｅｒであり、
ａａ８はＳｅｒまたはＡｓｐであり、
ａａ９はＡｓｐまたはＧｌｕであり、
ａａ１０はＴｙｒ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎａｌ２、ＢｉｐまたはＢｉｐ２ＥｔＭｅＯであり、
ａａ１１はＳｅｒ、ＡｓｎまたはＵであり、
ａａ１２はＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、ＡｒｇまたはＵであり、
ａａ１３は存在しない、あるいはＴｙｒ、Ｇｌｎ、ＣｉｔまたはＵであり、
ａａ１４は存在しない、あるいはＬｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎｌｅ、またはＵであり、
ａａ１５は存在しない、あるいはＡｓｐ、ＧｌｕまたはＵであり、
ａａ１６は存在しない、あるいはＳｅｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＵであり、
ａａ１７は存在しない、あるいはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵであり、
ａａ１８は存在しない、あるいはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵであり、
ａａ１９は存在しない、あるいはＡｌａ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵであり、
ａａ２０は存在しない、あるいはＧｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｃｉｔ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵであり、
ａａ２１は存在しない、あるいはＡｉｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ  Ａｃ５ｃまたはＵ；
ａａ２２は存在しない、あるいはＰｈｅ、Ｔｒｐ、Ｎａｌ２、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵであり、
ａａ２３は存在しない、あるいはＶａｌ、Ｉｌｅ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵであり、
ａａ２４は存在しない、あるいはＧｌｎ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、ＣｉｔまたはＵであり、
ａａ２５は存在しないか、またはＴｒｐ、Ｎａｌ２、またはＵであり、
ａａ２６は存在しない、あるいはＬｅｕ、またはＵであり、
ａａ２７は存在しないかまたはＭｅｔ、Ｖａｌ、Ｎｌｅ、Ｌｙｓ、あるいはＵであり、
ａａ２８は存在しない、あるいはＡｓｎ、ＬｙｓまたはＵであり、
ａａ２９は存在しない、あるいはＴｈｒ、グリシン、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵであり、
ａａ３０は存在しない、あるいはリース、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵであり、
ａａ３１は存在しない、あるいはアルギニン、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵであり、
ａａ３２は存在しない、あるいはアスパラギン、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵであり、
ａａ３３は存在しない、あるいはアルギニン、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵであり、
ａａ３４は存在しない、あるいはアスパラギン、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵであり、
ａａ３５は存在しない、あるいはアスパラギン、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵであり、
ａａ３６は存在しない、あるいは塩化ピクリル、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ＣまたはＵであり、
ａａ３６は存在しない、あるいは翼、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ＣまたはＵ；
ａａ３７は存在しないか、またはＵであり、
Ｕは、界面活性剤Ｘに対する共有結合の取付けに使用された官能基を含む天然か不自然なアミノ酸である；
ここで、ａａ１−ａａ３７のうちの任意の２はラクタム結合を形成するためにそれらの側鎖によって随意に環化される；
そして、ａａ１１―ａａ３７の１つ、または少なくとも１つがＸに共有結合で付けられたリンカーアミノ酸Ｕであると規定した。
【０３４９】
幾つかの実施形態では、ｎは１である。幾つかの実施形態では、ｎは２である。また、第１の配糖体は、第１の配糖体、および第２の配糖体のＯＲ１ｂ、ＯＲ１ｃまたはＯＲ１ｄのうちの任意の１つのＷ２の間の結合によって第２配糖体に付けられている。
幾つかの実施形態では、ｎは３である。また、第１の配糖体は、第１の配糖体、および第２の配糖体のＯＲ１ｂ、ＯＲ１ｃまたはＯＲ１ｄのうちの任意の１つのＷ２の間の結合による第２配糖体および第２の配糖体に付けられている、第２の配糖体、および第３の配糖体のＯＲ１ｂ、ＯＲ１ｃまたはＯＲ１ｄのうちの任意の１つのＷ２の間の結合によって第３の配糖体に付けられている。
【０３５０】
一実施形態において、  化学式Ｉ−Ａの化合物は、Ｘが化学式３−Ｉの構造を有し：
【０３５１】
【化４７】
2014516036.tif 000056
【０３５２】
ここで、
Ｒ１ａは、Ｈ、保護基、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基またはステロイド核含有部分であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄは、各々の発生、Ｈ、保護基または置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基に各々独立して存在し；
Ｗ１は、各々の発生（―ＣＨ２）―、―ＣＨ２Ｏ、―（Ｃ＝Ｏ）、―（Ｃ＝Ｏ）―Ｏ、―（Ｃ＝Ｏ）―ＮＨ、―（Ｃ＝Ｓ）―、―（Ｃ＝Ｓ）―ＮＨ、あるいは―ＣＨ２Ｓ―に、独立して存在し；
Ｗ２は―Ｏ―、―Ｓ―であり；
Ｒ２は、単結合、Ｃ２−Ｃ４アルケン、Ｃ２−Ｃ４アルキンまたは―（ＣＨ２）ｍ  ―マレイミドであり；
及び、ｍ１乃至１０である。
【０３５３】
別の実施形態において、化学式Ｉ−Ａの化合物は、Ｘが前記構造を有する化合物である。
【０３５４】
【化４８】
2014516036.tif 000057
【０３５５】
したがって、上に記載された実施形態では、Ｒ２は単結合である。
【０３５６】
例えば、上に記載されたＸの構造の典型的な実施形態では、Ｗ１は―Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ―であり、Ｒ２は、Ｗ１と、ペプチド（例えばペプチドの中にあるリジン残基の側鎖中のアミノ基）内のアミノ酸残基Ｕとの間の単結合である。
【０３５７】
さらなる実施形態において、化学式Ｉ−Ａの化合物は前記構造を有する化合物である。
【０３５８】
【化４９】
2014516036.tif 000058
【０３５９】
例えば、上に記載されたＸの構造の典型的な実施形態では、Ｗ１は−ＣＨ２−である。また、Ｒ２はＸのアルキルリンクしたマレイミド官能基である。また、Ｒ２は、ペプチド（例えば、ペプチドのシステイン残基中のチオール基は、Ｘの上でマレイミドを有するチオエーテルを形成する）内のアミノ酸残基Ｕの適切な部分に付けられている。
【０３６０】
さらに他の実施形態において、化学式Ｉ−Ａの化合物は前記構造を有する化合物であり、
【０３６１】
【化５０】
2014516036.tif 000059
【０３６２】
ここで、Ｒ１ａは、Ｈ、保護基、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基またはステロイド核含有部分であり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄは、各々の発生において、Ｈ、保護基または置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基に各々独立して存在し；
Ｗ１はで−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ―であり；
Ｗ２は―Ｏ―であり；
Ｒ２は、単結合である。
【０３６３】
追加の実施形態では、化学式Ｉ−Ａの化合物はＸが構造を有している化合物である：
【０３６４】
【化５１】
2014516036.tif 000060
【０３６５】
ここで、Ｒ１ａは、置換又は非置換のＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄはＨであり；
Ｗ１は−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ―であり；
Ｗ２は―Ｏ―であり；
及び、Ｒ２は単結合である。
【０３６６】
上述した、本明細書に記載された幾つかの実施形態において、Ｒ１ａは置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基である。
【０３６７】
上述した、本明細書に記載された幾つかの実施形態において、Ｒ１ａは置換または非置換のＣ６−Ｃ２０アルキル基である。
【０３６８】
また本明細書において熟慮したものは、代替の実施形態であり、ここで化学式３−Ｉ−ＡにおけるＸは、つぎの構造を有している：
【０３６９】
【化５２】
2014516036.tif 000061
【０３７０】
例えば、上述したＸの構造の典型的な実施形態ではＷ１は―Ｓ―であり、Ｒ２はＣ１−Ｃ３０アルキル基であり、Ｗ２はＳであり、Ｒ１ａは、Ｗ２と、ペプチド（例えば、ペプチドのシステイン残基中のチオール基はＸとチオエーテルを形成する）内のアミノ酸残基Ｕの適切な部分との間の単結合である。
【０３７１】
上述したＸの構造の別の典型的な実施形態ではＷ１は−Ｏ−であり、Ｒ２はＣ１−Ｃ３０アルキル基であり、Ｗ２はＯであり、Ｒ１ａは、Ｗ２と、ペプチド（例えば、ペプチドのセリンまたはトレオニンの残基中の水酸基は、Ｘとエーテルを形成する）内のアミノ酸残基Ｕの適切な部分の間の単結合である。
【０３７２】
幾つかの実施形態では、ＵはＸに付加する共有結合に使用され、また二塩基の天然または人工のアミノ酸であり、天然又は人工のアミノ酸はチオールを含み、人工のアミノ酸は、―Ｎ３基を含み、人工のアミノ酸はアセチレン基を含み、あるいは人工のアミノ酸は、―ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒ若しくは―（ＣＨ２）−（ＣＨ２）ｍ−マレイミドを含み、ここで、ｍは１−１０である。
【０３７３】
ペプチド生成物の幾つかの実施形態において、界面活性剤は１−アルキルグリコシドクラスの界面活性剤である。
ペプチド生成物のいくつかの実施形態では、界面活性剤はアミド結合によってペプチドに付加されている。
【０３７４】
ペプチド生成物の幾つかの実施形態において、界面活性剤Ｘは、１−アイコシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、および１−オクタデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−テトラデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−ドデシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−デシルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−オクチルベータ−Ｄ−グルクロン酸、１−アイコシルベータ−ジグルクロン酸、１−オクタデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−ジグルクロングルクロン酸、１−テトラデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−ドデシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−デシルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、１−オクチルベータ−Ｄ−ジグルクロン酸、あるいは官能化された１−アイコシルベータ−Ｄ−グルコース、１−オクタデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−テトラデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−ドデシルベータ−Ｄ−グルコース、１−デシルベータ−Ｄ−グルコース、１−オクチルベータ−Ｄ−グルコース、１−アイコシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−オクタデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−ヘキサデシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−ドデシルベータ−Ｄマルトシド、１−デシルベータ−Ｄ−マルトシド、１−オクチルベータ−Ｄ−マルトシドなどから構成され、ペプチド生成物は、前述の基と、ペプチド上の基（例えば、前述の―ＣＯＯＨ基およびペプチドのアミノ基）との間の結合の形成によって調製される。
【０３７５】
ペプチド生成物のいくつかの実施形態では、Ｕはペプチドの末端のアミノ酸である。ペプチド生成物のいくつかの実施形態では、Ｕはペプチドの不定期のアミノ酸である。ペプチド生成物のいくつかの実施形態では、Ｕは天然のＤ−アミノ酸又はＬ−アミノ酸である。ペプチド生成物のいくつかの実施形態では、Ｕは人工のアミノ酸である。ペプチド生成物の幾つかの実施形態において、Ｕは、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、Ｏｒｎ、または界面活性剤Ｘに対する共有結合の取付けに使用された官能基を含む人工のアミノ酸から選択される。
【０３７６】
ペプチド生成物の幾つかの実施形態において、界面活性剤Ｘへのペプチドの共有結合の付加に使用される官能基は、―ＮＨ２、―ＳＨ、―ＯＨ、―Ｎ３、ハロアセチル  ―（ＣＨ２）ｍ−マレイミド（ここで、ｍは１−１０である）、またはアセチレン基である。
【０３７７】
幾つかの実施形態において、２つの異なるアミノ酸残基の側鎖官能基は周期性のラクタムを形成するために連結される。例えば、幾つかの実施形態では、Ｌｙｓ側鎖は、Ｇｌｕの側鎖を有する周期性のラクタムを形成する。幾つかの実施形態において、そのようなラクタム構造は逆転され、グルタミン酸とリースから形成される。いくつかの実例中のそのようなラクタム結合は、ペプチド中のアルファらせん構造を安定させると知られている（Ｃｏｎｄｏｎ、Ｓ．Ｍ．ら著（２００２年）Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ、１０号、７３１−７３６頁；Ｍｕｒａｇｅ、Ｅ．Ｎ．ら著（２００８年）、Ｂｉｏｏｒｇ  はシン１６をメドした：１０１０６−１２）；Ｍｕｒａｇｅ、Ｅ．Ｎ．ら著、（２０１０年）、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ５３号、（６４１２−２０頁）。幾つかの実施形態において、システイン残基は立体構造の制限の類似した形態を達成し、かつらせん構造の形成を助けるために、ジＴｈｒフィド形成を介して連結され得る（Ｌｉ，Ｙら、（２０１１年）Ｐｅｐｔｉｄｅ  ３２号：１４００−１４０７頁。幾つかの実施形態において、２つの異なるアミノ酸残基の側鎖官能基は立体構造の制限の類似した形態を達成するために、側鎖アジ化物とアルキン官能基の間の「クリック反応」を通じて生じたヘテロ環を形成するために連結され、螺旋の立体構造を安定させた（Ｌｅ  Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ  Ｉｓａａｄ  Ａ．ら著（２００９年）Ｊ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｃｉ１５号：４５１−４頁）。
【０３７８】
幾つかの実施形態では、共有結合されたアルキルグリコシドを含むペプチド生成物は共有結合で修飾されるグルカゴンまたはそのアナログである。そのような実施形態のうちのいくつかでは、ペプチド生成物は共有結合された１−Ｏ−アルキル・ベータ−Ｄ−グルクロン酸を含み、ペプチドはグルカゴンのアナログである。
【０３７９】
幾つかの実施形態では、共有結合されたアルキルグリコシドを含むペプチド生成物は、共有結合で修飾されるＧＬＰ−１またはそのアナログである。そのような実施形態のうちのいくつかでは、ペプチド生成物は共有結合でリンクした１−Ｏ−アルキル・ベータ−Ｄ−グルクロン酸を含み、ペプチドはＧＬＰ−１のアナログである。
【０３８０】
幾つかの実施形態では、化学式Ｉ−Ａのペプチド生成物が化学式ＩＩＩ−Ａ、すなわち
【０３８１】
【化５３】
2014516036.tif 000062
【０３８２】
ここで、ＺはＯＨ、又は―ＮＨＲ３であり、ここで、Ｒ３はＨ、またはＣ１−Ｃ１２置換又は非置換アルキル、若しくは１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖であり；
ａａ１は、Ｈｉｓ、Ｎ−Ａｃ−Ｈｉｓ、ｐＧｌｕ−Ｈｉｓ、あるいはＮ−Ｒ３−Ｈｉｓであり；
ａａ２は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃまたはＡｃ５ｃであり；
ａａ３はＧｌｎ、またはＣｉｔであり；
ａａ４はＧｌｙ、またはＤ−Ａｌａであり；
ａａ５はＴｈｒ、またはＳｅｒであり；
ａａ６はＰｈｅ、Ｔｒｐ、Ｆ２Ｐｈｅ、Ｍｅ２ＰｈｅまたはＮａｌ２であり；
ａａ７はＴｈｒ、またはＳｅｒであり；
ａａ８はＳｅｒ、またはＡｓｐであり；
ａａ９はＡＳｐ、またはＧｌｕであり；
ａａ１０は、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎａｌ２、ＢｉｐまたはＢｉｐ２ＥｔＭｅＯであり；
ａａ１１はＳｅｒ、ＡｓｎまたはＵであり；
ａａ１２はＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、ＡｒｇまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１３は存在しない、あるいはＴｙｒ、Ｇｌｎ、ＣｉｔまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１４は存在しない、あるいはＬｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎｌｅ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１５は存在しない、あるいはＡｓｐ、ＧｌｕまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１６は存在しない、あるいはＳｅｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１７は存在しない、あるいはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１８は存在しない、あるいはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１９は存在しない、あるいはＡｌａ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２０は存在しない、あるいはＧｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｃｉｔ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２１は存在しない、あるいはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２２は存在しない、あるいはＰｈｅ、Ｔｒｐ、Ｎａｌ２、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２３は存在しない、あるいはＶａｌ、Ｉｌｅ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２４は存在しない、あるいはＧｌｎ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、ＣｉｔまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２５は存在しない、またはＴｒｐ、Ｎａｌ２、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２６は存在しない、あるいはＬｅｕ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２７は存在しない、あるいはＭｅｔ、Ｖａｌ、Ｎｌｅ、Ｌｙｓ若しくはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２８は存在しない、あるいはＡｓｎ、ＬｙｓまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２９は存在しない、あるいはＴｈｒ、Ｇｌｙ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ここで、ａａ１−ａａ２９のうちの任意の２つはラクタム結合を形成するためにそれらの側鎖によって随意に環化され；
そして、ａａ１６、ａａ１７、ａａ１８、ａａ１９、ａａ２０、ａａ２１、ａａ２２、ａａ２３、ａａ２４、ａａ２５、ａａ２６、ａａ２７、ａａ２８またはａａ２９の１つ、または少なくとも１つが、Ｘに共有結合で付加された天然若しくは人工の自アミノ酸Ｕであると規定した。
【０３８３】
幾つかの実施形態では、化学式Ｉ−Ａのペプチド生成物は、化学式３−ＩＩＩ−Ｂの構造を有し：すなわち、
【０３８４】
【化５４】
2014516036.tif 000063
【０３８５】
ここで、ＺはＯＨあるいは―ＮＨＲ３であり、ここでＲ３はＨまたは置換または非置換のＣ１−Ｃ１２アルキルであり；
あるいは１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖であり；
ａａ２は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃまたはＡｃ５ｃであり；
ａａ３はＧｌｎ、またはＣｉｔであり；
ａａ６は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｆ２Ｐｈｅ、Ｍｅ２Ｐｈｅ、ＭｅＰｈｅまたはＮａｌ２であり；
ａａ１０は、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎａｌ２、ＢｉｐまたはＢｉｐ２ＥｔＭｅＯであり；
ａａ１１はＳｅｒ、ＡｓｎまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１２はＬｙｓ、Ｇｌｕ、ＳｅｒまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１３は存在しない、あるいはＴｙｒ、Ｇｌｎ、ＣｉｔまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１４は存在しない、あるいはＬｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎｌｅ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１５は存在しない、あるいはＡｓｐ、ＧｌｕまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１６は存在しない、あるいはＳｅｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、ＲまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１７は存在しない、あるいはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１８は存在しない、あるいはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１９は存在しない、あるいはＡｌａ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２０は存在しない、あるいはＧｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｃｉｔ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２１は存在しない、あるいはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２２は存在しない、若しくはＰｈｅ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃであるか、またはＵ（Ｘ）であり、
ａａ２３は存在しない、あるいはＶａｌ、Ｉｌｅ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ここで、ａａ１−ａａ２３のうちの任意の２つはラクタム結合を形成するためにそれらの側鎖によって随意に環化され；
及び、ａａ１６、ａａ１７、ａａ１８、ａａ１９、ａａ２０、ａａ２１、ａａ２２、ａａ２３またはａａ２４の１つ、または少なくとも１つがＸに共有結合で付加された天然又は人工のアミノ酸Ｕであると規定した。
【０３８６】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、Ｕは本明細書に記載されている任意のリンカーアミノ酸である。
【０３８７】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、Ｕは本明細書に記載されている任意のリンカーアミノ酸である。化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖのいくつかの実施形態では、ａａ１２はリジンである。化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖのいくつかの実施形態では、ａａ１４はロイシンである。
【０３８８】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖのいくつかの実施形態では、ａａ１２はリジンである。化学式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、ＩＩＩ−Ｂまたは化学式Ｖのいくつかの実施形態では、ａａ１４はロイシンである。
【０３８９】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖのいくつかの実施形態では、ａａ１８はＸに付加されたリジン残基である。
【０３９０】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖのいくつかの実施形態では、ａａ１７はホモ・アルギニン（ｈＡｒｇ）残基である。
【０３９１】
化学式Ｉ−Ａ、ＩＩＩ−Ａ、ＩＩＩ−Ｂまたは化学式Ｖのいくつかの実施形態では、ａａ１７はグリシン残基である。
【０３９２】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖのいくつかの実施形態では、ａａ２はＡｉｂまたはＡｃ４ｃ残基である。
【０３９３】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、ペプチドは１つ以上のＡｉｂ残基を含む。
【０３９４】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、ペプチドはＣ末端において１つ以上のＡｉｂ残基を含む。
【０３９５】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、つぎの構造を有する（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６１９）：すなわち、
【０３９６】
【化５５】
2014516036.tif 000064
【０３９７】
ここで、ａａ２はＡｉｂまたはＡｃ４ｃであり；
ａａ１７はＡｒｇ、ｈＡｒｇまたはＧｌｎであり；
ａａ１９はＡｉｂ、Ａｃ４ｃまたはＡｃ５ｃである；
及び、アルキルはＣ２０の直鎖のアルキル鎖に対するＣ８である。
【０３９８】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、つぎの構造を有する（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６２０）：
【０３９９】
【化５６】
2014516036.tif 000065
【０４００】
ここで、ａａ２はＡｉｂまたはＡｃ４ｃである、
ａａ１７はアルギニン、ｈＡｒｇまたは、グルタミン、ａａ１９およびａａ２０である、個々にＡｉｂ、Ａｃ４ｃまたはＡｃ５ｃであり；
また、アルキルはＣ８乃至Ｃ２０の直鎖のアルキル鎖である。
【０４０１】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、つぎの構造（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６２１）を有する：すなわち、
【０４０２】
【化５７】
2014516036.tif 000066
【０４０３】
ここで、ａａ２はＡｉｂまたはＡｃ４ｃであり；
ａａ１６はＡｉｂまたはＡｃ４ｃであり；
ａａ１７はＡｒｇ、ｈＡｒｇまたはＧｌｎであり；
ａａ１９はＡｉｂ、Ａｃ４ｃまたはＡｃ５ｃであり；
また、アルキルはＣ９乃至Ｃ２０の直鎖のアルキル鎖である。
【０４０４】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、ａａ１６およびａａ２０はラクタム結合を形成するために環化される。
【０４０５】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、つぎの構造を有する：（ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．６２２）
【０４０６】
【化５８】
2014516036.tif 000067
【０４０７】
ここで、ａａ２はＡｉｂまたはＡｃ４ｃであり；
ａａ１６とａａ２０も各々個々にＬｙｓまたはＧｌｕであり、またラクタム結合を形成するためにそれらの側鎖によって環化され；
ａａ１７はＡｒｇ、ｈＡｒｇまたはＧｌｎであり；
ａａ２７はＭｅｔまたはＮｌｅであり；
また、アルキルはＣ８−Ｃ２０の直鎖のアルキル鎖である。
【０４０８】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、つぎの構造（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６２３）を有する：
【０４０９】
【化５９】
2014516036.tif 000068
【０４１０】
ここで、ａａ２はＡｉｂまたはＡｃ４ｃであり、ａａ２９はＴｈｒ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃまたはＡｃ５ｃであり、また、１’−アルキル基はドデシル、テトラデシル、ヘキサデシルまたはオクタデシルから選択され；また、位置１６および２０のアミノ酸上の側鎖は側鎖ラクタムを形成するために環化される。
【０４１１】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、ａａ１２およびａａ１６はラクタム結合を形成するために環化される。
【０４１２】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、つぎの構造（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６２４）を有する：すなわち、
【０４１３】
【化６０】
2014516036.tif 000069
【０４１４】
ここで、ａａ２はＡｉｂまたはＡｃ４ｃであり；
ａａ１２とａａ１６は、各々個々にＬｙｓまたはＧｌｕのいずれかであり、またラクタム結合を形成するためにそれらの側鎖を介して環化され；
ａａ１７はＡｒｇ、またはｈＡｒｇであり；
ａａ１９とａａ２０は、個々にＡｉｂ、Ａｃ４ｃまたはＡｃ５ｃのいずれかであり；
また、アルキルはＣ８−Ｃ２０の直鎖のアルキル鎖である。
【０４１５】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、つぎの構造（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６２５）を有する：すなわち、
【０４１６】
【化６１】
2014516036.tif 000070
【０４１７】
ここで、ａａ１２とａａ１６はラクタム結合を形成するためにそれらの側鎖によって環化され；
ａａ１７はＡｒｇまたはｈＡｒｇであり；また、アルキルは、Ｃ１２、Ｃ１４、Ｃ１６またはＣ１８の直鎖のアルキル鎖である。
【０４１８】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、つぎの構造（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６２６）を有する：すなわち、
【０４１９】
【化６２】
2014516036.tif 000071
【０４２０】
ここで、
ａａ１２とａａ１６は、各々、個々にＬｙｓまたはＧｌｕのいずれかであり、およびａａ１２およびａａ１６はラクタム結合を形成するためにそれらの側鎖によって環化され；ａａ１７はＡｒｇまたはｈＡｒｇであり；ａａ１９とａａ２０は個々にＡｉｂ、Ａｃ４ｃまたはＡｃ５ｃのいずれかであり；また、１’−アルキル基はドデシル、テトラデシル、ヘキサデシルまたはオクタデシルから選択される。
【０４２１】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、構造（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６２７）を有する：すなわち、
【０４２２】
【化６３】
2014516036.tif 000072
【０４２３】
ここで、ａａ２はＡｉｂまたはＡｃ４ｃであり、ａａ６はＭｅ２Ｐｈｅ、ＭｅＰｈｅまたはフェニルアラニンであり；また、ａａ１９はＡｉｂ、Ａｃ４ｃまたはＡｃ５ｃである。
【０４２４】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、つぎの構造（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６２８）を有する：すなわち、
【０４２５】
【化６４】
2014516036.tif 000073
【０４２６】
ここで、ａａ２はＡｉｂまたはＡｃ４ｃであり、ａａ６はＭｅ２Ｐｈｅ、ＭｅＰｈｅまたはＰｈｅであり；
ａａ１７はＡｒｇまたはｈＡｒｇであり、また、ａａ１９またはａａ２０はＡｉｂ、Ａｃ４ｃまたはＡｃ５ｃである。
【０４２７】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、構造（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６２９）を有する：すなわち、
【０４２８】
【化６５】
2014516036.tif 000074
【０４２９】
ここで、ａａ２３はＡｉｂ、Ａｃ４ｃまたはＡｃ５ｃであり、また、１’−アルキル基はドデシル、テトラデシル、ヘキサデシルまたはオクタデシルから選択される。
【０４３０】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、つぎの構造（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６３０）を有する：すなわち、
【０４３１】
【化６６】
2014516036.tif 000075
【０４３２】
ここで、ａａ２はＡｉｂまたはＡｃ４ｃであり：
ａａ６はＭｅ２Ｐｈｅ、ＭｅＰｈｅまたはＰｈｅであり；
ａａ１２とａａ１６は、各々、個々にＬｙｓまたはＧｌｕのいずれかであり；
また、ａａ１６とａａ２０はラクタム結合を形成するために、それらの側鎖によって環化され；
ａａ１７はＡｒｇ、ｈＡｒｇまたはＧｌｎであり；
ａａ１８はＡｉｂまたはＡｌａであり；
ａａ２３はＡｉｂ、Ａｃ４ｃまたはＡｃ５ｃであり、また、１’−アルキル基はドデシル、テトラデシル、ヘキサデシルまたはオクタデシルから選択される。
【０４３３】
化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、つぎの構造（ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６３１）を有する：すなわち、
【０４３４】
【化６７】
2014516036.tif 000076
【０４３５】
ここで、ａａ２はＡｉｂまたはＡｃ４ｃであり：
ａａ６はフェニルアラニンである；
ａａ１２とａａ１６は、各々、個々にＬｙｓまたはＧｌｕのいずれかであり；
また、ａａ１２とａａ１６はラクタム結合を形成するために、それらの側鎖によって環化され；
ａａ１７はＡｒｇまたはｈＡｒｇであり；
ａａ１９はＡｉｂ、Ａｃ４ｃまたはＡｃ５ｃであり；
ａａ２０はＡｉｂ、Ａｃ４ｃまたはＡｃ５ｃであり、そして、１’−アルキル基はドデシル、テトラデシル、ヘキサデシルまたはオクタデシルから選択される。
【０４３６】
幾つかの実施形態では、化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの任意の化合物については、Ｘはドデシル・アルキル鎖で構成される。
【０４３７】
幾つかの実施形態では、ペプチド生成物は、ＧＬＰ１Ｒに結合する及び／又はＧＬＣＲに結合する生物学的に活性を有するペプチド生成物である。
【０４３８】
具体的な実施形態では、上述された、本明細に記載された化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ又は３−ＩＩＩ−Ｂ若しくは化学式３−Ｖのペプチド生成物は、以下の構造を有する：
【０４３９】
【化６８】
2014516036.tif 000077
【０４４０】
ここで、Ｒ１ａは、図１−１乃至図１−７の表１に記載されているとおりのＣ１−Ｃ２０アルキル鎖であり、Ｒ’は、図８−１乃至図８−５の表３および図９−１乃至図９−７の表４に記載されているとおりのペプチドであり、化学式Ｉ−ＡのＷ２は―Ｏ―であり、また、化学式Ｉ−ＡのＷ１は−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−であり、ペプチドＲ’へのアミド結合の一部である。
このような実施形態の幾つかにおいて、Ｒ１ａは、Ｃ６−Ｃ２０アルキル鎖であり、
このような実施形態の幾つかにおいて、Ｒ１ａは、Ｃ８−Ｃ２０アルキル鎖であり、
このような実施形態の幾つかにおいて、Ｒ１ａは、Ｃ１２−Ｃ２０アルキル鎖であり、
このような実施形態の幾つかにおいて、Ｒ１ａは、Ｃ１２−Ｃ１６アルキル鎖である。
【０４４１】
上述された実施形態で、アミノ酸及び／又はペプチドＲ’（例えば、リジンなどアミノ酸残基のアミノ基、またはペプチドＲ’内のリジン残基）のアミノ部分は、以下の構造の化合物を有する共有結合を形成するために使用される：
【０４４２】
【化６９】
2014516036.tif 000078
【０４４３】
ここで、Ｒ１ａは、上述されたとおりの、かつ図８−１乃至図８−５の表３および図９−１乃至図９−７の表４に記載されるとおりのＣ１−Ｃ２０アルキル鎖である。
【０４４４】
そのような場合、アミノ部分（例えば、ペプチドＲ’内のリジン）を有するアミノ酸残基は、上述された化合物Ａへの共有結合を形成するために使用される、リンカーアミノ酸Ｕであり、界面活性剤Ｘに付加されている。界面活性剤Ｘは化学式Ａの構造を有する。したがって、一実施例として、図８−１乃至図８−５の表３および図９−１乃至図９−７の表５のＬｙｓ（Ｃ１２）は以下の構造を有する：
【０４４５】
【化７０】
2014516036.tif 000079
【０４４６】
また、カルボン酸官能基のいずれかで、または両方での結合を介してマルトウロン（ｍａｌｔｏｕｒｏｎｉｃ）酸をベースにした界面活性剤から誘導された化学式３−Ｉ−Ａのペプチド生成物が本明細書に提示された実施形態の範囲内で熟考される。それゆえ、一実施例として、図８−１乃至図８−５の表３及び図９−１乃至図９−７の表４におけるペプチドは、マルトウロン酸をベースにした界面活性剤Ｘに結合したリジンリンカーアミノ酸を含み、以下の構造を有する：すなわち、
【０４４７】
【化７１】
2014516036.tif 000080
【０４４８】
一実施形態において、化学式３−Ｉ−Ａの化合物は基Ｘにリジンを付付加することにより調製され、ついで化学式３−Ｉ−Ａの化合物を得るために、リジン−Ｘ化合物にアミノ酸残基及び／又はペプチドが付加されることが理解されよう。また、本明細書に記載された他の天然または人工のアミノ酸が界面活性剤Ｘへの付加に適していて、化学式３−Ｉ−Ａの化合物を得るために追加のアミノ酸／ペプチドを付加するのに適切なことが理解されよう。別の実施形態において、化学式３−Ｉ−Ａの化合物は、基Ｘに全長又は部分長のペプチドを付加することによって調製され、ついで追加のアミノ酸残基を随意に付加し及び／又は化学式３−Ｉ−Ａの化合物を得るためにペプチドが付加される。
【０４４９】
特定の実施形態において、図８−１乃至図８−５の表３の化合物および図９−１乃至図９−７の表４の化合物から選択された化合物が本明細書で提供される。
【０４５０】
また、本明細書で提供されるものは、上述された治療上効果的な量のペプチド産、またはその許容可能な塩、および少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体若しくは賦形剤物を含む医薬組成物である。
【０４５１】
医薬組成物のいくつかの実施形態では、担体は水溶性に基づいた担体である。医薬組成物の幾つかの実施形態において、担体は非水溶性に基づいた担体である。医薬組成物の幾つかの実施形態において、非水性の基づいた担体はであるである、１つの、ヒドロフルオロアルカンのよう、溶解力のある、それはサブミクロンの無水のα−ラクトースまたは他の賦形剤を含んでもよい。
【０４５２】
本明細書に提示された実施形態の範囲内で熟慮したものは、アミノ酸及び／又はペプチドの反応であり、当該アミノ酸及び／又はペプチドは、求核分子を運ぶリンカーアミノ酸Ｕと、および脱離基または官能基を運ぶもの（ｂｅａｒｉｎｇ）を含む基Ｘとを含み、当該基Ｘは、例えば、カルボン酸、又は他の反応する基などの脱離基を包含するために活性化することができ、それによって、化学式３−Ｉ−Ａのペプチド生成物を提供する、リンカーアミノ酸Ｕを介して界面活性剤Ｘに対するアミノ酸及び／又はペプチドの共有結合を可能にする。
【０４５３】
また本明細書に提示された実施形態の範囲内で熟慮したものは、アミノ酸及び／又はペプチドの反応であり、当該アミノ酸及び／又はペプチドは脱離基または官能基を運ぶ、リンカーアミノ酸Ｕを含み、当該脱離基または官能基は例えば、カルボン酸、又は他の反応する基などの脱離基を包含するために活性化することができ、また当該脱離基または官能基は求核基を含む基Ｘを含み、それによって、化学式Ｉ−Ａのペプチド生成物を提供する、リンカーアミノ酸Ｕを介して界面活性剤Ｘに対するアミノ酸及び／又はペプチドの共有結合を可能にする。
【０４５４】
一実施形態では、化学式３−Ｉ−Ａの化合物は、Ｘとリンカーアミノ酸Ｕとの反応と、それに続くＵに対する残基の付加によって調製され、化学式３−Ｉ−Ａのペプチド生成物を得ることが理解されよう。代替の実施形態では、化学式３−Ｉ−Ａのペプチド生成物を得るために、Ｘとリンカーアミノ酸Ｕを含む適切なペプチドとの反応と、それに続くＵに対するさらなる残基の随意の付加によって、化学式３−Ｉ−Ａの化合物が調製されることが理解されよう。
【０４５５】
本明細書で提供されるのは、化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖの化合物の投与を含むインスリン抵抗性により関係する治療症状のための方法である。
【０４５６】
本明細書で提供されるものは、糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、創傷治癒、インスリン抵抗性、高血糖症、高インスリン血症、メタボリック症候群、糖尿病合併症、遊離脂肪酸またはグリセロールの高い血中濃度、高脂血症、肥満症、高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化、急性心臓血管の症候群、梗塞、虚血再灌流または高血圧症を治療するための方法であり、当該方法は、上述した本明細書に記載された、治療上効果的な量のペプチド生成物を、それについて必要としている固体に投与することを含む。
【０４５７】
本明細書で提供されるものは、体重増加を減少させるか、減量を誘発する方法であり、当該方法は、上述した本明細に記載された治療上効果的な量のペプチド生成物を、それについて必要としている被験体に投与することを含む。
【０４５８】
本明細書で提供されるものは、哺乳類症状を処置する方法であり、当該方法は、肥満症にリンクされるインスリン抵抗性またはメタボリック症候群によって特徴づけられ、上述した本明細書に記載された減量を引き起こすか、インスリン敏感になる量のペプチド生成物を、必要としている個体に投与することを含む。
【０４５９】
幾つかの実施形態では、処置される症状はメタボリック症候群（症候群Ｘ）である。幾つかの実施形態では、処置される症状は糖尿病である。幾つかの実施形態では、処置される症状は高脂血症である。幾つかの実施形態では、処置される症状は高血圧症である。幾つかの実施形態では、処置される症状は、アテローム性動脈硬化を含む道管病、または高いＣ反応性タンパク質によって特徴付加された全身性の炎症である。
【０４６０】
方法のいくつかの実施形態では、投与のための有効な量のペプチド生成物は、約０．１μｇ／ｋｇ／日から約１００．０μｇ／ｋｇ／日まで、０．０１μｇ／ｋｇ／日から約１ｍｇ／ｋｇ／日、あるいは０．１μｇ／ｋｇ／日から約５０ｍｇ／ｋｇ／日までである。
【０４６１】
本明細書で提供されるものはメタボリック症候群、またはその成分の疾患を処置する方法であり、当該方法は上述した治療上効果的な量のペプチド生成物をそれについて必要としている被験体に投与することを含む。幾つかの実施形態では、メタボリック症候群症状は糖尿病に進行した。
【０４６２】
また、本明細書で提供されたものは共有結合で修飾されるＧＬＣＲ及び／又はＧＬＰ１Ｒ結合ペプチドまたはそのアナログであり、本明細書に記載されたとおりの親水基と；および、当該親水基に共有結合で付加された疎水基とを含む。具体的な実施形態では、共有結合で修飾されるペプチド及び／又は蛋白質製品は、糖類である親水基、およびＣ１−Ｃ２０アルキル鎖またはアラルキル鎖である疎水基を含む。
【０４６３】
＜インスリン抵抗性＞
延長された高血糖症により関係する危険は、微小血管の合併症、感覚ニューロパチー、心筋梗塞、脳卒中、大血管性の死亡率および全原因死亡率の増加した危険を含む。２型糖尿病も、付加的な世界的な流行病である肥満症の原因となって結び付けられる。２００７年において世界中の糖尿病の処置および予防に、少なくとも２３２０億ドルが費やされた、その４分の３の金額により、微小血管性及び大血管性の合併症を予防するための努力など、長期的合併症の処置及び一般的なケアに工業先進国で費やされた。２００７年には、米国の経済に対する糖尿病の推定された間接費（生産性を失われた障害、および糖尿病による若死）は５８０億ドルであった。
【０４６４】
肥満は、インスリン抵抗性、インシュリン受容体の減少した数を介したインスリン刺激に反応する身体の細胞の減少した能力、および臨界的な細胞内シグＮａｌ伝達システムに対する前記受容体の減少した結合へと導く。肥満状態は、さらに「メタボリック症候群」、非常に大きな健康管理結果を有する疾患の群（ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｉｏｎ）（インスリン抵抗性、高血圧症、アテローム性動脈硬化など）へと導く。インスリン抵抗性が十分に初期に診断されるとき、２型糖尿病は、血糖の対照を標準化するために、カロリー摂取量と体脂を減少させることを目標とし、かつ薬物療法を介してライフスタイルによって、予防するか遅延させることができる。早期の攻撃的な介入を推奨する処置ガイドラインにもかかわらず、多くの患者が、血糖の対照の標的に達しない。多くの因子が、利用可能な抗糖尿病薬の効能、利便性および耐性特性における心理社会的並びに経済の影響および欠点を含む２型糖尿病をうまく管理するための失敗の一因となる。本明細書に記載されているペプチド及び／又はプロテイン製品は、これらの欠点を克服するように設計されている。
【０４６５】
＜インクレチン効果＞
「インクレチン効果」は、それによってグルコース負荷が経口的に送達されたグルコース負荷が、静脈中に投与される同じグルコース負荷よりはるかに大きいインスリン分泌を生成する現象を記載するために使用される。この効果は、腸のＬ細胞によって分泌された少なくとも２つのインクレチン・ホルモンによって媒介される。グルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド（ＧＩＰ）およびグルカゴンのようなペプチド１（ＧＬＰ−１）は、インクレチンであると識別され、健康な個体はインクレチン効果からの食事のインスリンの分泌の反応の７０％まで誘導し得ると考えられる。
【０４６６】
通常は、インクレチン・ペプチドは、摂取された栄養素に応答して、必要に応じて分泌され、かつジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ（ＤＰＰ−４）酵素による分解により短い血漿半減期を有している。２型糖尿病をもつ人々は、ＧＬＰ−１に対する膵臓の反応性が損なわれるが、インスリン分泌の反応は、ヒトＧＬＰ−１の薬理学の用量により回復することができる（Ｋｉｅｆｆｅｒ、Ｔ．Ｊ．ら（１９９５年）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１３６：３５８５−３５９６）。加えて、ＧＬＰ−１は、ベータ細胞ネオゲネシスおよび貯蔵性を促進する（Ａａｂｏｅ、Ｋ．ら（２００８）Ｄｉａｂａｔｅｓ  Ｏｂｅｓ  Ｍｅｔａｂ  １０：９９４−１００３）。ＧＬＰ−１は心臓機能上などで追加の有益な効果がある：例えば、それはヒト被験体において左室機能を改善する（Ｓｏｋｏｓ、Ｇ．Ｇ．ら（２００６）ＪＣａｒｄ  Ｆａｉｌ  １２：６９４−６９９）。ＧＬＰ−１は、また人体内の胃排出を減速させ、食欲を減退させる（Ｔｏｆｔ−Ｎｉｅｌｓｅｎ、Ｍ．Ｂ．ら（１９９９年）Ｄｉａｂａｔｅｓ  Ｃａｒｅ、２２：１１３７−１１４３）。
【０４６７】
代謝的に安定し、かつＧＬＰ−１の長時間作用性のアナログをもつ糖尿病患者の処置は、例えば、Ｓ．Ｒ．（２０１０）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  ３０： ６０９−６２４に述べられ、使用の利便性と関係する問題、および吐き気、膵臓炎および甲状腺癌の危険性などの副作用に苦しむ。ＧＬＰ−１アナログはインスリン分泌のグルコース依存の刺激を提供し、低血糖症の減少させられた危険性へと導く。加えて、以下に述べられるように、糖尿病の多くの現在の処置は体重増加を引き起こしている一方で、ＧＬＰ−１アナログは満腹および軽度の減量を誘発する。したがって、幾つかの実施形態では、本明細書で提供されたものは、長く作用しており、低薬量で投与されるＧＬＰ−１アナログであり、それによって、現在の処置により関係する副作用を減じる。
【０４６８】
多くのペプチド消化管ホルモンは、食欲を調節すると知られている（Ｓａｎｇｅｒ、Ｇ．Ｊ．およびＬｅｅ、Ｋ．（２００８年）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ、Ｄｉｓｃｏｖ  ７：２４１−２５４）。いくつかのペプチドは、つぎのような、前プログルカゴン遺伝子生成物の組織に特異的な酵素の処理（プロホルモン・コンベルターゼ；  ＰＣ）から誘導され、すなわち、例えば、グルカゴン、ＧＬＰ−１およびグルカゴンのようなペプチド−２（ＧＰＬ−２）、グリセンチン、オキシントモジュリン（ＯＸＭ）（Ｄｒｕｃｋｅｒ、Ｄ．Ｊ．（２００５年）Ｎａｔ・Ｃｌｉｎ  Ｐｒａｃｔ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ、１：２２−３１；Ｓｉｎｃｌａｉｒ，Ｅ．Ｍ．およびＤｒｕｃｋｅｒ，Ｄ．Ｊ．（２００５年）Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ）２０：３５７−３６５）。ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−２、グリセンチンおよびＯＸＭは摂食に応じて腸内でのＬ細胞から共同分泌される。前プログルカゴンは代替的に、膵島中のα細胞のグルカゴンを生成するために処理される（ＰＣ２）。ＯＸＭの構造は、本質的に８つの残基のＣ末端延長を有するグルカゴンである。
【０４６９】
インスリン生合成、およびグルコース依存のインスリン分泌の刺激に加えて、ＧＬＰ−１およびその安定したミメティック（例えば、Ｂｙｅｔｔａ）は、また動物モデル（Ｍａｃｋ、Ｃ．Ｍ．ら（２００６年）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｂｅｓ（Ｌｏｎｄ）３０：１３３２−１３４０）、およびタイプ２糖尿病患者（ＤｅＦｒｏｎｚｏ、Ｒ．Ａ．ら（２００５）Ｄｉａｂａｔｅｓ  Ｃａｒｅ、２８：１０９２−１１００；Ｂｕｓｅ、Ｊ．Ｂ．ら（２０１０）Ｄｉａｂａｔｅｓ  Ｃａｒｅ、３３：１２５５−１２６１）において、適度の減量を引き起こす。グルカゴン注入は、人における食物摂取量を減らす（Ｇｅａｒｙ、Ｎ．，ら（１９９２年）Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２６２：Ｒ９７５−９８０一方で、脂肪組織の一続きのグルカゴン処置はまた脂肪分解（Ｈｅｃｋｅｍｅｙｅｒ、Ｃ．Ｍ．ら（１９８３年）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １１３：２７０−２７６）および減量（Ｓａｌｔｅｒ、Ｊ．Ｍ．ら（１９６０年）Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ９：７５３−７６８；Ｃｈａｎ、Ｅ．Ｋ．ら（１９８４）Ｅｘｐ  ｍｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ  ４０：３２０−３２７）を促進する。
グルカゴンは、エネルギー代謝（ヘップナー、Ｋ．Ｍ．ら（２０１０）Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｂｅｈａｖ）に広範な効果がある。グルカゴンあるいはアナログは、胃管の一時的麻痺のための診断のモードで使用することができる。したがって、前プログルカゴン・タンパク質のＰＣ処理からの生成物の少なくとも２つは、満腹と代謝効果に結び付けられる。
【０４７０】
齧歯類において、ＯＸＭの繰り返された腹腔内投与、前プログルカゴンの第３の生成物は、制御部と比較して、減少した白色脂肪組織および減量に関係している（Ｄａｋｉｎ，Ｃ．Ｌ．ら（２００４）内分泌内科学１４５：２６８７−２６９５）。Ｏｘｍは標準体重人体に点滴投与の間に食物摂取量を１９．３％減らし、この効果は、注入の後に１２時間以上継続する（Ｃｏｈｅｎ、Ｍ．Ａ．ら（２００３年）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ８８：４６９６−４７０１）。４週の期間にわたるボランティアの処置は、体脂の減少を反映する、持続した満腹効果および減量を結果として生じた（Ｗｙｎｎｅ、Ｋ．ら（２００５年）Ｄｉａｂａｔｅｓ  ５４：２３９０−２３９５）。
【０４７１】
ＯＸＭは、構造上ＧＬＰ−１およびグルカゴンにより相同性を有し、グルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）およびＧＬＰ−１受容体（ＧＬＰ１Ｒ）の両方を活性化する、しかし、名祖のリガンドより１０〜１００倍効能が少ない。加えて、ＧＬＰ１Ｒを有するＯＸＭ相互作用に関する研究は、ベータ−アレスチンの補充がＧＬＰ−１と比較して異なる効果を有し得ることを示唆しており（Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ、Ｒ．ら（２００７年）Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  ３２２：１４８−１５４）、それゆえ「偏見的である」リガンドとして作用する。ＯＸＭのための特有の受容体は数年間追及されたが、まだ解明されていない。また、ＧＬＰ１ＲとＧＣＧＲの経路を通って作用すると仮定される。したがって、本明細書で提供されるのは、糖尿病前症の進行のインスリン抵抗性及び／又は遅延の満腹、減量、緩和の誘発を可能にする腸ペプチドの界面活性剤修飾のための方法である。
【０４７２】
＜ＧＬＰ−１＞
上述された満腹と代謝についての前プログルカゴン・タンパク質の生成物の複雑で相互に作用する挙動を考慮して、複数のグループからの職員が、ＧＬＰ−１およびグルカゴン構造上の構造活性関連性を調査した。配列の全体にわたる残基は置換を受け入れることを示した。例えば、Ａｌａによる置換は、特に２、３、５、８、１１および１２においてＧＬＰ−１のＮ末端領域に十分に受け入れられる（Ａｄｅｌｈｏｒｓｔ、Ｋ．ら（１９９４）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６９：６２７５−６２７８）。
【０４７３】
グルカゴンのＮ末端にＧＬＰ−１からＣ末端残基を接ぐことにより、ＧＬＰ１ＲとＧＬＣＲに結合する能力を有するキメラ的なアナログを達成し得ることが示された（Ｈｊｏｒｔｈ、Ｓ．Ａ．ら（１９９４）Ｊ  Ｂｉｏｌシン２６９：３０１２１−３０１２４）。位置３での残基（グルカゴンまたはＯＸＭ中のＧＬＰ１または中性のグルタミンでの酸性のグルタミン酸）は、ＧｌＰ１Ｒのためにグルカゴン（Ｒｕｎｇｅ、Ｓ．ら（２００３年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８：２８００５−２８０１０）またはＯＸＭ（Ｐｏｃａｉ、Ａ．ら（２００９年）Ｄｉａｂａｔｅｓ  ５８：２２５８−２２６６）の親和性を減少させる。
位置３におけるＧｌｎによりＧＬＰ−１またはグルカゴン若しくはＯＸＭの安定したアナログまたはＯＸＭによって処置される動物の代謝性特性に対する効果が調査された（Ｄａｙ、Ｊ．Ｗ．ら（２００９年）Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  ５：７４９−７５７；Ｄｒｕｃｅ、Ｍ．Ｒ．ら（２００９年）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １５０：１７１２−１７２２；Ｐｏｃａｉ、Ａ。ら（２００９年）Ｄｉａｂａｔｅｓ  ５８：２２５８−２２６６）。これらのアナログは、ＧＬＰ１ＲおよびＧＣＧＲの両方上に反発的な作用をもつように設計された（Ｄａｙ、Ｊ．Ｗ．ら、米国特許出願公開第２０１０／０１９０７０１Ａ１）。
【０４７４】
キメラ的なアナログはそれらの受容体に作用する親ホルモンの望ましい効果があるべきである、そしてそれ故、それは明らかにＧＬＰ−１ＲとＧＬＣＲ両方に作用するＯＸＭの効果に類似している：脂肪分解と、グルカゴンによる増加した脂肪の燃焼に結び付けられたグルコース依存のインスリン分泌および満腹。アナログは減少した体重の所望の効果および脂肪の増加した燃焼を引き起こすと示された。そのような特性は肥満症の処置において魅力的である。しかし、肥満治療での主要なチャレンジはコンプライアンスである。グルカゴンとＯＸＭの現在知られている全長のアナログは、それぞれ、ＧＬＰ−１ＲおよびＧＬＣＲの両方への親和性により、結果として減量を生じ得るが、これらのアナログは、最適な薬物治療レジメンに必要な患者に対する、高いバイオアベイラビリティ、薬学の特性および好都合な送達のために最適化されない。したがって、本明細書で提供されたものは、高いバイオアベイラビリティ及び／又は肥満症及び／又は糖尿病及び／又はメタボリック症候群などの症状の処置での改善された治療上の結果用の長期の永続的な効果を可能にする腸ペプチド（例えばＧＬＰ、ＯＸＭ、グルカゴンなど）のアナログである。
【０４７５】
ＯＸＭのような分子によるメタボリック症候群および糖尿病の最適化された処置の追加の因子は、処置の持続期間およびグルカゴン作用の量に関連する。例えば、ＧＬＰ−１およびグルカゴン受容体（ＯＸＭ薬理学的特性）を活性化するアナログを有する連続的な処置は、非常に大きく迅速な脂肪の量の損失を生じ得る（Ｄａｙ、Ｊ．Ｗ．ら（２００９年）Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  ５：７４９−７５７）、しかし、また、それは、細い筋腫瘤の損失敗北を引き起こし得る（Ｋｏｓｉｎｓｋｉ、Ｊ．Ｒ．ら（２０１２年）Ｏｂｅｓｉｔｙ（Ｓｉｌｖｅｒ  Ｓｐｐｒｉｎｇ）：ｄｏｉ：１０．１０３８／ｏｂｙ．２０１２．６７）。それはこのクラスでの薬剤には不利である。例えば、Ｋｏｓｉｎｓｌｉ、Ｊ．Ｒ．らによる研究論文では、天然抽出ホルモンＯｘｍは、Ａｌｚｅｔのミニポンプから１４日間続けて投与され、脂肪の量の３０％の減少を結果として生じただけでなく、除脂肪量（筋肉）の７％の減少を引き起こした。
【０４７６】
グルカゴン作用は、グリコーゲン分解、脂肪分解および脂肪の増加した燃焼を刺激すると知られているが、筋肉にまた異化の効果があり得る。ＧＬＰ−１およびグルカゴン作用（ＯＸＭ特性）を組み合わせる薬剤を使用する成功した処置は、賢明な量のグルカゴン作用（脂肪燃焼）を有するＧＬＰ−１アナログの満腹および強められたグルコース依存のインスリン分泌を最良に引き起こす必要がある。加えて、そのような薬剤の不連続使用は、除脂肪量の最小限の損失で、脂肪の量の損失によって、中程度で一続きの減量の所望の臨床的な特性を提供する。本明細書で提供されるのは、療法での最適の使用を認める、調整可能な薬物動態学／薬理学の特性と同様にＧＬＰ−１およびＯＸＭの作用の望ましい組み合わせを有する分子である（例えばメタボリック症候群、糖尿病、肥満症など中の）。
【０４７７】
１つの実施形態では、化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂおよび３Ｖの化合物は、グルカゴンのような活性またはＧＬＰ−１のような活性のいずれかを提供するために設計される。化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂおよび３Ｖの化合物は、調整可能な活性を提供する。例えば、１つの実例では、本明細書に記載されているペプチド生成物は、グルカゴンとＧＬＰ−１の両方のための受容体において、約５００ｎＭ未満、好ましくは約５０ｎＭ未満、より好ましくは約２０ｎＭ未満のＥＣ５０を有している（例えば図８−１乃至図８−５の表３および図９−１乃至図９−７の表４の化合物）。別の実例では、本明細書に記載されているペプチド生成物（例えば図８−１乃至図８−５の表３および図９−１乃至図９−７の表４の化合物）は、ＧＬＰ−１受容体のためにより強力であり（例えば、１０ｎＭ未満、好ましくは１０ｎＭ未満、より好ましくは１ｎＭ未満）、グルカゴン受容体のためにより強力ではない（例えば、５０ｎＭ好未満、好ましくは約２０ｎＭ未満、より好ましくは５ｎＭ未満のＥＣ５０）。生物学的活性のこの調和は、賢明な量のグルカゴン作用のある貯留を可能にし、それによって、また強められたグルコース依存のインスリン分泌の有益な効果を保持している一方で、脂肪燃焼が生じることを可能にする。ＯＸＭは、構造上ＧＬＰ−１およびグルカゴンにより相同性を有し、グルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）およびＧＬＰ−１受容体（ＧＬＰ１Ｒ）の両方を活性化する。したがって、幾つかの実施形態では、化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂおよび３Ｖの化合物は、調整可能なＯＸＭのような生物学的活性を提供する。特定の実施形態では、本明細書に記載されているペプチド生成物は、ＧＬＰ−１のアミノ酸残基１−１７及び／又はそのアナログを有するペプチドを含む（例えば、本明細書に記載されているとおりの修飾された人工のアミノ酸置換、本明細書に記載されている環化されたラクタム結合、本明細書に記載されている界面活性剤の修飾、またはそれらの組み合わせ）。他の特定の実施形態では、本明細書に記載されているペプチド生成物は、ＧＬＰ−１のアミノ酸残基１−１６及び／又はそのアナログを有するペプチドを含む（例えば、本明細書に記載されているとおりの修飾された人工のアミノ酸置換、本明細書に記載されている環化されたラクタム結合、本明細書に記載されている界面活性剤の修飾、またはそれらの組み合わせ）。追加の実施形態では、本明細書に記載されているペプチド生成物は、ＧＬＰ−１のアミノ酸残基１−１８６及び／又はそのアナログを有するペプチドを含む（例えば、本明細書に記載されているとおりの修飾された人工のアミノ酸置換、本明細書に記載されている環化されたラクタム結合、本明細書に記載されている界面活性剤の修飾、またはそれらの組み合わせ）。さらに、本明細書に記載されているペプチド生成物は１つ以上の残基を含み（例えば、Ａｉｂ、Ａｃ４Ｃ）、化学式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂおよび３Ｖの設計された化合物の螺旋安定化と、および図８−１乃至図８−５の表３および図９−１乃至図９−７の表４での化合物を提供する。
【０４７８】
リガンドのグルカゴン亜科が受容体のクラスＢの数に共通の２つのドメイン・モードにおける受容体に結合されると信じられる（セクレチン・クラス（Ｇのタンパク質を連結する受容体（ＧＰＣＲ））。ＧＬＰ−１については、残基１から大体残基１６までの、膜貫通性の螺旋状体（ｈｅｌｉｃｉｅｓ）（膜近傍領域）の頂部に結合するＮ末端領域と、および受容体の大きく、細胞外で、Ｎ末端延長（ＥＣＤ）に結合する１７から３１までの螺旋状のＣ末端領域が存在すると思われる。これらのリガンドの結合は、これらのペプチドリガンドのＮ−末端で先を切られたアナログが今までどおり単なる受容体の分離されたＥＣＤ領域用の本質的な結合能および選択性を保持することができるという事実に注目する。それ故、Ｎ末端領域が受容体起動の原因で、その一方でＣ末端領域が結合の原因であることが示唆された。ＧＬＰ−１の短いＮ末端アナログが両方とも受容体活性化因子と同様に強力な結合剤になりえることが最近示された（Ｍａｐｅｌｌｉ、Ｃ．ら（２００９年）Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ５２：７７８８−７７９９；Ｈａｑｕｅ、Ｔ．Ｓ．ら（２０１０年）Ｐｅｐｔｉｄｅ  ３１：９５０−９５５；Ｈａｑｕｅ、Ｔ．Ｓ．ら（２０１０年）Ｐｅｐｔｉｄｅ  ３１：１３５３−１３６０）。
【０４７９】
加えて、この領域において結合された模倣ＧＬＰ−１のアナログであるｅｘｅｎｄｉｎ−４（Ｂｙｅｔｔａ社）の先を切られたアンタゴニストをもつＧＬＰ１ＲのＮ末端領域のＸ線結晶構造（Ｒｕｎｇｅ、Ｓ．ら（２００８年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８３：１１３４０−７）の研究は、ＥＣＤでの臨界的なリガンド結合領域が高い疎水性をもつことを示している（図１０）。Ｇｌｕ１５の向こうのｅｘｅｎｄｉｎ−４の配列は、このまさに疎水性領域（Ｖａｌ１９＊、Ｐｈｅ２２＊、Ｔｒｐ２５＊、Ｌｅｕ２６＊）を有する両親媒性の螺旋として相互に作用する。Ｎ末端フラグメントを切り詰められた１つの実施形態では、ＧＬＰ−１またはグルカゴンはＧＬＣＲに結合するために修飾され、界面活性剤に共有結合で連結される。界面活性剤の疎水性の１’−アルキル部分は、ネイティブホルモン・リガンドのＣ末端領域を模倣し取って代わり、ペプチド効能、効力および作用持続時間を増加させる。付加では、そのようなアナログはそれらのより少人数の大きさにより主要な利点を有する。それはそれらの複雑性、合成コストおよび感受性をタンパク質分解にする。付加では、より少人数のペプチドは、鼻粘膜または腸細胞バリアによってより容易に吸収される。
【０４８０】
低血糖症は生命を脅かし得る低い血糖の症状であり、強化インスリン療法によって高い血糖のより多くの積極的治療が、より多くの患者の中で使用されていると見られる。血糖レベルがあまりにも低く落ちて、身体の活性のために脳および筋肉に十分なエネルギーを与えることができないとき、低血糖症が見られる。グルカゴンはこの疾病を処置するために使用することができ、グルコースを生じさせ、かつ血糖レベルを平年値の方へ上昇させるグリコーゲンを分解するために肝臓を刺激することによりそのようにする。ＧＬＣＲを活性化する能力を保持するグルカゴンのアナログは、血糖レベルへの望ましい効果を達成するために使用され得る。
【０４８１】
ＧＬＰ１Ｒを活性化するＧＬＰ−１のアナログは生成を刺激し、高くなった血糖レベルがある状態で、膵臓からインスリンに放出する。ｅｘｅｎａｔｉｄｅ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））など現在の生成物により見られるように、この作用は血糖レベルの効果的な対照および正常化を生じる。加えて、そのような生成物は、食欲減退を生成し、かつ胃からの食物の運動を遅くするように見える。したがって、それらは複数の機構によって糖尿病の処置に効果的である。ＧＬＣＲとＧＬＰ１Ｒの両方を活性化するグルカゴンおよびＧＬＰ−１の効果を組み合わせるアナログは、食欲を抑制するために共同行為を介する糖尿病の処置での恩恵を提供し得、グルコース依存の方法でインスリンを放出し、低血糖症からの保護を助けて、脂肪のバーニングを加速する。
【０４８２】
糖尿病、真性糖尿病タイプＩ、真性糖尿病タイプＩＩ、又は妊娠性糖尿病、インスリン依存性若しくは非インスリン依存性を含む高血糖症を治療するそのような方法は、腎症、網膜症及び道管病を含む糖尿病の合併症を低減するのに役立つことが予想される。循環器疾患における適用は、大血管性と同様に微小血管性の疾患を包含する（Ｄａｖｉｄｓｏｎ、Ｍ．Ｈ．（２０１１）、Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ  １０８である［ｓｕｐｐｌ］：３３Ｂ−４１Ｂ；Ｇｅｊｌ、Ｍ．ら（２０１２年）  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ９７：ｄｏｉ：１０．１２１０／ｊｃ．２０１１−３４５６）、および心筋梗塞の処置を含む。
食欲を減退させるか、体重の損失を促進するそのような方法が、体重を減少させるか、体重増加を予防するか、薬剤性の肥満症を含む様々な原因の処置する肥満症に役立ち、道管病（冠動脈疾患、脳卒中、末梢血管疾患、虚血再灌流など）高血圧症、ＩＩ型糖尿病の開始、高脂血症および筋骨格の疾患を含む肥満症に関係する合併症を減少させていると予想される。
【０４８３】
本明細書で使用されているように、用語グルカゴンまたはＧＬＰ−１アナログは薬学的に許容可能な塩またはそのエステルをすべて含む。
【０４８４】
１つの態様では、共有結合で修飾され、本明細書に記載されている方法に適しているペプチドは、グルカゴンの先を切られたアナログ及び／又は関連するホルモンＧＬＰ−１であり、限定されないが、以下のものを含む：
【０４８５】
【化７２】
2014516036.tif 000081
【０４８６】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されているペプチド生成物は化学式３−Ｖの構造を有する：
【０４８７】
【化７３】
2014516036.tif 000082
【０４８８】
ここで、Ｕは結合アミノ酸であり；
ＸはＵの側鎖に界面活性剤連結されたものであり；
ＺはＯＨあるいは―ＮＨＲ３であり、ここでＲ３はＨまたはＣ１−Ｃ１２の置換又は非置換アルキルであり；
ａａ１はＨｉｓ、Ｎ−Ａｃ−Ｈｉｓ、ｐＧｌｕ−Ｈｉｓ、あるいはＮ−Ｒ３−Ｈｉｓであり；
ａａ２は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃまたはＡｃ５ｃであり；
ａａ３はＧｌｎ、またはＣｉｔであり；
ａａ４はＧｌｙ、またはＤ−Ａｌａであり；
ａａ５はＴｈｒ、またはＳｅｒであり；
ａａ６はＰｈｅ、Ｔｒｐ、Ｆ２Ｐｈｅ、Ｍｅ２ＰｈｅまたはＮａｌ（２）であり；
ａａ７はＴｈｒ、またはＳｅｒであり；
ａａ８はＳｅｒ、またはＡｓｐであり；
ａａ９はＡｓｐ、またはＧｌｕであり；
ａａ１０は、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎａｌ（２）、ＢｉｐまたはＢｉｐ２ＥｔＭｅＯであり；
ａａ１１はＳｅｒ、ＡｓｎまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１２はＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、ＡｒｇまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１３は存在しない、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、ＣｉｔまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１４は存在しない、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎｌｅ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１５は存在しない、Ａｓｐ、ＧｌｕまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１６は存在しない、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１７は存在しない、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１８は存在しない、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１９は存在しない、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）；
ａａ２０は存在しない、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｃｉｔ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２１は存在しない、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２２は存在しない、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｎａｌ（２）、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２３は存在しない、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２４は存在しない、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２５は存在しない、Ｔｒｐ、Ｎａｌ（２）またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２６は存在しない、Ｌｅｕ、Ｕ（Ｘ）であり；
ａａ２７は存在しない、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｎｌｅ、Ｌｙｓ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２８は存在しない、Ａｓｎ、ＬｙｓまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２９は存在しない、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ３０は存在しない、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ３１は存在しない、Ａｒｇ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ３２は存在しない、Ａｓｎ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ３３は存在しない、Ａｒｇ、Ａｉｂ、Ａｃ５ｃ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ３４は存在しない、Ａｓｎ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ３５は存在しない、Ａｓｎ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ３６は存在しない、Ｉｌｅ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５Ｃ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ３６は存在しない、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５Ｃ、あるいはＵ（Ｘ）であり；
ａａ３７は存在しないまたはＵ（Ｘ）であり；
但し、ａａ１１乃至ａａ３７の１つ、または少なくとも１つがＵ（Ｘ）であると規定した。
【０４８９】
具体的な実施形態で、結合アミノ酸Ｕはリンパ球またはオルニチンのようなジアミノ酸である、Ｘは、Ｕに連結された１−アルキルグリコシドクラスから修飾される界面活性剤である。また、ここで、ＺはＯＨあるいは―ＮＨＲ３であり、ここでＲ３はＨまたはＣ１−Ｃ１２である；あるいは１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖である。
【０４９０】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されているペプチド生成物は、化学式ＩＩＩ−Ｂの構造を有する：
【０４９１】
【化７４】
2014516036.tif 000083
【０４９２】
、
ここで、ＺはＯＨ（あるいは―ＮＨＲ３）であり、ここでＲ３はＨまたは置換または非置換のＣ１−Ｃ１２アルキルであり；
あるいは１０Ｄａ未満のＰＥＧ鎖；
ａａ２は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃまたはＡｃ５ｃであり；
ａａ３はＧｌｎ、またはＣｉｔであり；
ａａ６は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｆ２Ｐｈｅ、Ｍｅ２Ｐｈｅ、ＭｅＰｈｅまたはＮａｌ２であり；
ａａ１０は、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎａｌ２、ＢｉｐまたはＢｉｐ２ＥｔＭｅＯであり；
ａａ１１はＳｅｒ、ＡｓｎまたはＵであり；
ａａ１２はＬｙｓ、Ｇｌｕ、ＳｅｒまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１３は存在しない、あるいはＴｙｒ、Ｇｌｎ、ＣｉｔまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１４は存在しない、あるいはＬｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎｌｅ、またはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１５は存在しない、あるいはＡｓｐ、ＧｌｕまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１６は存在しない、あるいはＳｅｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃ、Ｌｙｓ、ＲまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１７は存在しない、あるいはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｃｉｔ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１８は存在しない、あるいはＡｒｇ、ｈＡｒｇ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ１９は存在しない、あるいはＡｌａ、Ｖａｌ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２０は存在しない、あるいはＧｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｃｉｔ、Ｇｌｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２１は存在しない、あるいはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ａａ２２は存在しない。あるいは、Ｐｈｅ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）ａａ２３は存在しない、あるいはＶａｌ、Ｉｌｅ、Ａｉｂ、Ａｃ４ｃ、Ａｃ５ｃまたはＵ（Ｘ）であり；
ここで、ａａ１乃至ａａ２３のうちの任意の２つはラクタム結合を形成するためにそれらの側鎖によって随意に環化され；および、ａａ１６、ａａ１７、ａａ１８、ａａ１９、ａａ２０、ａａ２１、ａａ２２、ａａ２３またはａａ２４の１つ、または少なくとも１つがＸに共有結合で付加された天然又は人工のアミノ酸Ｕであると規定した。
【０４９３】
化学式３−ＩＩＩ−Ａ、化学式３−ＩＩＩ−Ｂおよび化学式３−Ｖのいくつかの具体的な実施形態では、Ｘはつぎの構造を有している：
【０４９４】
【化７５】
2014516036.tif 000084
【０４９５】
ここで、
Ｒ１ａは、置換又は非置換のＣ１−Ｃ６アルキルであり；及び
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄはＨであり；
Ｗ１は−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｗ２は―Ｏ―であり；
および、Ｒ２は単結合である。
【０４９６】
上述された実施形態のうちのいくつかでは、Ｒ１ａは、Ｃ１−Ｃ２０アルキル基、Ｃ８−Ｃ２０アルキル基、Ｃ１２−Ｃ１８アルキル基またはＣ１４−Ｃ１８アルキル基である。
【０４９７】
化学式３−ＩＩＩ−Ｂの幾つかの実施形態において、Ｕは本明細書に記載されている任意のリンカーアミノ酸である。図８−１乃至図８−５の表３および図９−１乃至図９−７の表４は、本明細書に記載されたとおりの界面活性剤により共有結合で連結したペプチドの特定の実施例を例証する。
【０４９８】
本明細書に提示された実施形態の範囲内で熟慮したものは、化学式３−Ｉ−Ａ、化学式３−ＩＩＩ−Ａ、化学式３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖのペプチド生成物であり、ここで、ペプチド生成物は１つ、あるいは２つ以上の界面活性剤基を含む（例えば、化学式３−Ｉの構造を有する基Ｘ）。１つの実施形態で、化学式３−Ｉ−Ａ、化学式３−ＩＩＩ−Ａ、化学式３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３−Ｖのペプチド生成物、１つの界面活性剤基を含む。
別の実施形態では、化学式３−Ｉ−Ａ、化学式３−ＩＩＩ−Ａ、化学式３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３Ｖのペプチド生成物は、２つの界面活性剤基を含む。さらに別の実施形態では、化学式３−Ｉ−Ａ、化学式３−ＩＩＩ−Ａ、化学式３−ＩＩＩ−Ｂまたは化学式３Ｖのペプチド生成物は、３つの界面活性剤基を含む。
【０４９９】
インスリン抵抗性及び／又は心臓血管性症状により関係する症状の処置のためにＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．６３２の特定の部分の重要性が、本明細書において認識される。したがって、本明細書で提供されたものは、必要のある個体に対するＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６３２のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１７を含む、治療上効果的な量のグルカゴン・アナログの投与を含む必要中の個体内での糖尿病を治療する方法である。
【０５００】
さらなる実施形態において本明細書において提供されたものは、必要のある個体に対するＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６３２のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１８を含む、治療上有効な量のグルカゴン・アナログの投与を含む必要中の個体の糖尿病を治療する方法である。
【０５０１】
別の実施形態において、本明細書で提供されたものは、必要のある個体に対するＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６３２のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１９を含む、治療上効果的な量のグルカゴン・アナログの投与を含む必要中の個体内での糖尿病を処理する方法である。
【０５０２】
別の実施形態において、本明細書で提供されたものは、必要のある個体に対するＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６３２のアミノ酸残基ａａ１−ａａ２０を含む、治療上効果的な量のグルカゴン・アナログの投与を含む必要中の個体内での糖尿病を処理する方法である。
【０５０３】
追加の実施形態では、上に記載された前記グルカゴン・アナログの投与は減量を引き起こす。
【０５０４】
インスリン抵抗性及び／又は心臓血管性症状により関係する症状の治療に対してＳＥＱＱ．ＩＤ．ＮＯ．３０３の特定の部分の重要性が、本明細書に認識される。したがって、本明細書で提供されたものは、必要のある個体に対するＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．３０３のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１７を含む、治療上効果的な量のグルカゴン・アナログの投与を含む必要中の個体内での糖尿病を処理する方法である。したがって、本明細書で提供されたものは、必要のある個体に対するＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．３０３のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１７を含む、治療上効果的な量のグルカゴン・アナログの投与を含む必要中の個体内での糖尿病を処理する方法である。したがって、本明細書で提供されたものは、必要のある個体に対するＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．３０３のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１７を含む、治療上効果的な量のグルカゴン・アナログの投与を含む必要中の個体内での糖尿病を処理する方法である。したがって、本明細書で提供されたものは、必要のある個体に対するＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．３０３のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１７を含む、治療上効果的な量のグルカゴン・アナログの投与を含む必要中の個体内での糖尿病を処理する方法である。
【０５０５】
追加の実施形態では、上述された前記グルカゴン・アナログの投与は減量を引き起こす。
【０５０６】
上述された実施形態のうちのいずれにおいても、前記グルカゴン・アナログは、化学式３−Ｉの界面活性剤Ｘによって修飾される：
【０５０７】
【化７６】
2014516036.tif 000085
【０５０８】
ここで、
Ｒ１ａは、各々の発生で、単結合、Ｈ、置換または非置換Ｃ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアルキル基、置換または非置換アラルキル基またはステロイド核含有部分に、独立して存在し；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄは、各々の発生で、単結合、Ｈ、置換または非置換Ｃ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換アルコキシアルキル基または置換または非置換アラルキル基に各々独立して存在し；
Ｗ１は、各々の発生で、―ＣＨ２−、―ＣＨ２Ｏ−、―（Ｃ＝Ｏ）、―（Ｃ＝Ｏ）―Ｏ−、―（Ｃ＝Ｏ）―ＮＨ−、―（Ｃ＝Ｓ）―、―（Ｃ＝Ｓ）―ＮＨ−、あるいは―ＣＨ２Ｓ―に独立して存在し；
Ｗ２は―Ｏ−、―ＣＨ２−あるいは―Ｓ―であり；
Ｒ２は、各々の発生に、Ｕに対する単結合、Ｈ、置換または非置換Ｃ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換アルコキシアルキル基、あるいは置換または非置換アラルキル基、―ＮＨ２、―ＳＨ、Ｃ２−Ｃ４−アルケン、Ｃ２−Ｃ４−アルキン、―ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒ、―（ＣＨ２）ｍ  ―マレイミド、あるいは―Ｎ３に独立して存在し；
ｎは１、２又は３であり、
ｍは１乃至１０である。
【０５０９】
特定の実施形態では、前記グルカゴン・アナログは、界面活性剤（構造を有しているＸ）により修飾される：
【０５１０】
【化７７】
2014516036.tif 000086
【０５１１】
ここで、
Ｒ１ａは、置換又は非置換のＣ１−Ｃ６アルキルであり；及び
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄはＨである；
Ｗ１はであるである（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ―；
Ｗ２は―Ｏ―である；
また、Ｒ２は単結合である。
【０５１２】
上に記載された実施形態のうちのいくつかでは、Ｒ１ａは、Ｃ１−Ｃ２０アルキル基、Ｃ８−Ｃ２０アルキル基、Ｃ１２−Ｃ１８アルキル基またはＣ１４−Ｃ１８アルキル基である。
【０５１３】
また、本明細書で提供されたものは、必要のある個体に対するＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６３２のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１７を含む、治療上効果的な量のグルカゴン・アナログの投与を含む必要中の個体内での心臓血管の疾病を治療する方法である。
【０５１４】
また、本明細書で提供されたものは、必要のある個体に対するＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６３２のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１８を含む、治療上効果的な量のグルカゴン・アナログの投与を含む必要中の個体内での心臓血管の疾病を治療する方法である。
【０５１５】
また、本明細書で提供されたものは、必要のある個体に対するＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６３２のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１９を含む、治療上効果的な量のグルカゴン・アナログの投与を含む必要中の個体内での心臓血管の疾病を治療する方法である。
【０５１６】
また、本明細書で提供されたものは、必要のある個体に対するＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６３２のアミノ酸残基ａａ１−ａａ２０を含む、治療上効果的な量のグルカゴン・アナログの投与を含む必要中の個体内での心臓血管の疾病を治療する方法である。
【０５１７】
上述した実施形態に記載された幾つかの場合では、循環器疾患が虚血のイベントにより関係するとき、前記グルカゴン・アナログは投与される。
【０５１８】
また、本明細書で提供されたものは、必要のある個体に対するＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．３０３のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１７を含む、治療上効果的な量のグルカゴン・アナログの投与を含む必要中の個体内での心臓血管の疾病を治療する方法である。
【０５１９】
また、本明細書で提供されたものは、必要のある個体に対するＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．３０３のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１８を含む、治療上効果的な量のグルカゴン・アナログの投与を含む必要中の個体内での心臓血管の疾病を治療する方法である。
【０５２０】
また、本明細書で提供されたものは、必要のある個体に対するＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．３０３のアミノ酸残基ａａ１−ａａ１９を含む、治療上効果的な量のグルカゴン・アナログの投与を含む必要中の個体内での心臓血管の疾病を治療する方法である。
【０５２１】
また、本明細書で提供されたものは、必要のある個体に対するＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．３０３のアミノ酸残基ａａ１−ａａ２０を含む、治療上効果的な量のグルカゴン・アナログの投与を含む必要中の個体内での心臓血管の疾病を治療する方法である。
【０５２２】
上述した実施形態のためのいくつかの場合では、循環器疾患が虚血のイベントにより関係するとき、前記グルカゴン・アナログは投与される。
【０５２３】
上述した実施形態のうちのいずれにおいても、前記グルカゴン・アナログは、化学式３−Ｉの界面活性剤Ｘによって修飾される：
【０５２４】
【化７８】
2014516036.tif 000087
【０５２５】
ここで、
Ｒ１ａは、各々の発生において、単結合、Ｈ、置換または非置換Ｃ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換アルコキシアルキル基、置換または非置換アラルキル基またはステロイド核含有部分に、独立して存在し；
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄは、各々の発生において、単結合、Ｈ、置換または非置換のＣ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアルキル基または置換または非置換のアラルキル基に各々独立して存在し；
Ｗ１は、各々の発生において、―ＣＨ２―、―ＣＨ２Ｏ−、―（Ｃ＝Ｏ）、―（Ｃ＝Ｏ）―Ｏ−、―（Ｃ＝Ｏ）―ＮＨ−、―（Ｃ＝Ｓ）―、―（Ｃ＝Ｓ）―ＮＨ−、あるいは―ＣＨ２Ｓ―において独立して存在し；
Ｗ２は―Ｏ―、―ＣＨ２−あるいは―Ｓ―であり；
Ｒ２は、各々の発生に、Ｕに対する単結合、Ｈ、置換または非置換Ｃ１−Ｃ３０アルキル基、置換または非置換のアルコキシアルキル基、あるいは置換または非置換アラルキル基、―ＮＨ２、―ＳＨ、Ｃ２−Ｃ４アルケン、Ｃ２−Ｃ４アルキン、―ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒ、―（ＣＨ２）ｍ―マレイミド、あるいは―Ｎ３であり；
ｎは１、２又は３であり、
ｍは１乃至１０である。
【０５２６】
特定の実施形態では、前記グルカゴン・アナログは、つぎの構造を有する界面活性剤Ｘにより修飾される：
【０５２７】
【化７９】
2014516036.tif 000088
【０５２８】
ここで、
Ｒ１ａは、置換又は非置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；及び
Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄはＨであり；
Ｗ１は−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ―であり；
Ｗ２は―Ｏ―であり；
および、Ｒ２は単結合である。
【０５２９】
上述した実施形態のうちのいくつかでは、Ｒ１ａは、Ｃ１−Ｃ２０アルキル基、Ｃ８−Ｃ２０アルキル基、Ｃ１２−Ｃ１８アルキル基またはＣ１４−Ｃ１８アルキル基である。
【０５３０】
アミノ末端またはカルボキシル末端での修飾は、ペプチドへ随意に導入されるかもしれない（例えば、グルカゴンまたはＧＬＰ−１）（Ｎｅｓｔｏｒ、Ｊ．Ｊ．Ｊｒ．（２００９年）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １６：  ４３９９−４４１８）。例えば、ペプチドはいくつかのペプチドに対して見られたとおり、低い効能、半アゴニストおよびアンタゴニスト活性を示すアナログをペプチドにもたらすために、Ｎ末端の上で先端を切るか、又はアシル化することができ（Ｇｏｕｒｌｅｔ  Ｐ．ら（１９９８年）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ３５４：１０５−１１１、Ｇｏｚｅｓ、Ｉ．およびＦｕｒｍａｎ、Ｓ．（２００３年）Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ  ９：４８３−４９４）、その内容を参照によって本明細書に取り入れた。例えば、ｂＰＴＨの第１の６つの残基の欠失は、相反するアナログをもたらし（Ｍａｈａｆｆｅｙ、Ｊ．Ｅ．ら（１９７９年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５４：６４９６−６４９８；Ｇｏｌｄｍａｎ、Ｍ．Ｅ．ら（１９８８年）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １２３：２５９７−２５９９）、および本明細書に記載されているペプチドに類似した操作は強力に相反するアナログを生じさせる。Ｄ−ＰｈｅなどのＤ−アミノ酸の欠失または結合などのペプチドのＮ末端に対する他の修飾は、長鎖アルキルグリコシドなどの本明細書に記載された修飾により置換されたとき、強力で長く作用するアゴニストまたはアンタゴニストを与え得る。そのようなアゴニストおよびアンタゴニストは、また商用有用性を有しており、本明細書に記載された熟慮された実施形態の範囲内である。
【０５３１】
また本明細書に記載された実施形態の範囲内で熟慮したものは、ペプチドアナログに共有結合で付加された界面活性剤であり、ここでネイティブペプチドは、アセチル化、アシル化、ペグ化（ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ）、ＡＤＰリボシル化、アミド化、脂質または脂質の誘導体の共有結合の取付け、ホスファチジルイノシトールの共有結合の付加、架橋、環化、ジスルフィド結合生成、脱メチル化、システインの共有結合の架橋形成の形成、ピログルタミン酸の形成、フォルミル化、γ−カルボキシル化、γ−カルボキシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、蛋白質分解を生ずる処理、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、グリコシル化、脂質付加、硫酸化、グルタミン酸残基のグリコシル化、ヒドロキシル化およびＡＤＰリボシル化、セレノイル化、硫酸化、アルギニン化やユビキチン化などタンパク質へのアミノ酸の転移ＲＮＡ媒介された付加である。例えば、Ｎｅｓｔｏｒ，Ｊ．Ｊ．Ｊｒ．（２００７年）Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＩＩ２：５７３−６０１、Ｎｅｓｔｏｒ，Ｊ．Ｊ．Ｊｒ．（２００９年）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １６：４３９９―４４１８、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｔ．Ｅ．（１９９３年，  Ｗｏｌｄ，Ｆ．（１９８３年）Ｐｏｓｔｔｒａｎｌａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｖａｌｅｎｔ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  １−１２、Ｓｅｉｆｔｅｒ，Ｓ．およびＥｎｇｌａｒｄ，Ｓ．（１９９０年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  １８２：６２６−６４６、Ｒａｔｔａｎ，Ｓ．Ｉ．ら（１９９２年）Ａｎｎ  ＮＹ  ＡｃａｄＳｃｉ  ６６３：４８−６２）参照。また、本明細書に記載された実施形態の範囲内で熟考されるのは、分枝されるか、あるいは周期性であるペプチドが分岐、または分岐なしであることである。環式の、分枝したポリペプチドおよび分枝した環式のペプチドは、翻訳後の自然工程から結果として生じてもよく、または合成方法によって作られてもよい。幾つかの実施形態では、本明細書に記載された任意のペプチド生成物は、上述のペプチドアナログを含み、その後、共有結合でアルキルグリコシドの界面活性剤部分に付けられている。
【０５３２】
また本明細書に提示された実施形態の範囲内で熟慮したものは、例えば、飽和或いは不飽和のアルキル鎖を有する、オクタン、デカン、ドデカン酸、テトラデカン酸、ヘキサデカン酸、オクタデカン酸、３−フェニルプロパン酸など脂肪酸を有するＬｙｓのε−位置でリンカーアミノ酸上のアシル化によって、本明細書において請求されたアナログの置換によって適切な位置で置換されたペプチド鎖である（Ｚｈａｎｇ，Ｌ．およびＢｕｌａｊ，Ｇ．（２０１２年）Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  １９：１６０２−１６１８）。そのようなアナログの限定されない例証的な実施例は次のとおりである：
【０５３３】
【化８０】
2014516036.tif 000089
【０５３４】
さらなる実施形態では、ペプチド鎖は、ステロイド核、例えばコレステロール部分など、スペーサーおよび疎水性の部分で、Ｃｙｓのスルフヒドリル基などのリンカーアミノ酸上の反応によって適切な位置で随意に置換される。そのような実施形態のうちのいくつかでは、修飾されるペプチドは、さらに１つ以上のＰＥＧ鎖を含む。ナノカプセル化の限定しない例は、次のとおりである：
【０５３５】
【化８１】
2014516036.tif 000090
【０５３６】
２０の標準のアミノ酸に加えて、「非標準のアミノ酸」、または膨大な数の人工のアミノ酸が存在し、当該技術で知られており、上述のとおり本明細に記載された化合物に組み入れた。他の非標準のアミノ酸は、結合のための反応性の側鎖により修飾される（Ｇａｕｔｈｉｅｒ，Ｍ．Ａ．及びＫｌｏｋ，Ｈ．Ａ．（２００８年）Ｃｈｅｍ  Ｃｏｍｍｕｎ（Ｃａｍｂ）２５９１−２６１１；ｄｅ  Ｇｒａａｆ，Ａ．Ｊ．ら（２００９年）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  ２０：１２８１−１２９５）。１つの手法、発展した転移リボ核酸／転移ＲＮＡ合成酵素対は、アンバー・サプレッサー・コドンによって発現プラスミドにおいてコード化した（Ｄｅｉｔｅｒｓ，Ａら（２００４年）．Ｂｉｏ−ｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．ｌｅｔｔ．１４，５７４３−５）。例えば、ｐ‐アジドフェニルアラニンは、ペプチドに組み入れられ、次に、官能化された界面活性剤、または「Ｈｕｉｓｇｅｎ［３＋２］付加環化」として知られている有機反応を促進するために、還元剤と銅イオンの存在中にアセチレン部分を有するＰＥＧポリマーにより反応した。アセチレン修飾アルキルグリコシドまたはＰＥＧ修飾グリコシドを含有する本明細書に記載された試薬を使用する類似した反応配列は、ペグ化された、或いはアルキルグリコシド修飾ペプチドを生じる。約５０未満の残基のペプチドについて、標準の固相合成は、鎖における所望の位置に前記反応的なアミノ酸残基の結合のために使用される。界面活性剤修飾ペプチド及び／又はタンパク質は、ＰＥＧ結合によって単独で修飾されるペプチドより薬理学的および薬効成分の異なるスペクトルを提示する。
【０５３７】
当業者は、ペプチドアナログの多数の置換が起こり得ることを認識する、もし、アミノ酸配列に組み入れられた界面活性剤部分があれば、本明細書に記載されている界面活性剤修飾されたペプチド生成物の望ましい特質を持つ。
【０５３８】
＜特定の定義＞
明細書の中で使用されているように、「１つの（ａ）」あるいは「１つの（ａｎ）」は１つ以上を意味する。
特許請の範囲において使用されているように、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と併用して使用された時、単語「１つの（ａ）」あるいは「１つの（ａｎ）」は１つ以上を意味する。本明細書で使用されているように、「別の（ａｎｏｔｈｅｒ）」は、少なくとも２または３以上を意味する。
【０５３９】
本明細書で使用されているように、様々な共通のアミノ酸のための１および３文字の略語は、Ｐｕｒｅ  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ  ３１，６３９−６４５（１９７２年）および４０，２７７−２９０（１９７４年）で推奨された通りであり、３７のＣＦＲ§１．８２２の規定に準拠する（５５  ＦＲ  １８２４５，１９９０年５月１日）。もしＤ−あるいはＤＬとして明示されなければ、その略語はＬアミノ酸を表わす。天然及び人工の両方の特定のアミノ酸は、アキラル、例えばグリシン、α−アミノ−イソ酪酸（Ａｉｂ）である。すべてのプチド配列は、左のＮ−末端アミノ酸および右のＣ末端アミノ酸が提示される。
【０５４０】
「アルキル」基は、脂肪族炭化水素基を指す。アルキル基への言及は、「飽和アルキル」及び／又は「不飽和アルキル」すなわちアルケン又はアルキンを含む。アルキル基は、飽和であろうと不飽和であろうと、分岐鎖、直鎖又は環状の基を含む。アルキル基は、置換基を含むことにより随意に置換され、当該置換基は、限定されない、オキソ、ハロゲン、アリール、シクロアルキル、ステロイドなどの疎水性の天然物、アラルキル鎖（アルコキシアリルを含む）、アシル部分を含有するアルキル鎖などを含む。幾つかの実施形態では、アルキル基はペプチド中の残基（例えば、ＴｙｒまたはＤｍｔ）のＮα−位置に連結される。このクラスはＮ−アルキルと呼ばれ、Ｃ１−Ｃ１０からの直鎖状の、あるいは、分岐鎖状のアルキル基、またはベンジル、フェニルエチルなどのアリール置換アルキル基を含む。幾つかの実施形態では、アルキル部分は１−アルキル基であり、糖類部分へのグリコシド結合（典型的には、例えばグルコースの１ー位置に）に存在する。そのような１つのアルキル基はＣ１−Ｃ３０アルキル基である。
【０５４１】
「アリール」基は芳香環を指し、環を形成する原子の各々が炭素原子である。本明細書に記載されるアリール環は、５、６、７、８、９、又は１０以上の炭素原子を有する環を含む。アリール基は、ハロゲン、アルキル、アシル、アルコキシ、アルキルチオ、Ｔｈｒフォニル、ジアルキルアミノおよびカルボキシル・エステルから選択された置換基、シアノなどにより随意に置換される。アリール基の例は、限定されないが、フェニル、およびナフタレニルを含む。
【０５４２】
用語「アシル」はＣ１−Ｃ２０アシル鎖を指す。この鎖は、直鎖の脂肪鎖、分岐した脂肪鎖、周期性のアルキル部分を包含する鎖、ステロイドなど疎水性の天然物、アラルキル鎖またはアシル部分を包含しているアルキル鎖を含み得る。
【０５４３】
用語「ステロイド核」は、以下に示されるとおりのＡ、Ｂ、ＣおよびＤに指定された４つの融合環を含むステロイドのコアを指す。
【０５４４】
【化８２】
2014516036.tif 000091
【０５４５】
部分を含むステロイドの例は、限定されないが、コレステロールなどを含む。
【０５４６】
本明細書で使用されているように、治療上の組成物」は、水溶性又は有機担体若しくは賦形剤を有する混合物を含み得、錠剤、ペレット剤、カプセル、凍結乾燥体、坐剤、溶液、乳剤、懸濁液または使用に適している他の形態用の通常の無毒で、薬学的に許容可能な担体で調合することができる。担体は、上に開示されたものに加えて、アルギナート、コラーゲン、グルコース、ラクトース、マンノース、アラビアゴム、ゼラチン、マンニトール、デンプン糊、三珪酸マグネシウム、タルク、コーンスターチ、ケラチン、コロイドシリカ、ジャガイモ澱粉、尿素、媒体鎖長トリグリセリド、デキストラン、および固形物、半固体物質または液体の形態で、製剤の製造に使用するに適している他の担体を含むことができる。加えて、補助的安定化、増粘または着色剤が、使用することができる、ジヒドロキシアセトン（ｔｒｉｕｌｏｓｅ）など安定化する乾燥した薬剤。
【０５４７】
例えば、本明細書で使用されているように、「薬学的に許容可能な担体」または「治療上の効果的な担体」は、水溶性か、または非水性（固形物）、例えば、アルコール若しくはか油性の、あるいはその混合物であり、界面活性剤、皮膚軟化薬、潤滑剤、安定剤、色素、芳香、防腐剤、ｐＨの調整用の酸またはベース、溶媒、分散剤、ゲル化剤、モイスチャライザー、安定剤、湿潤剤、限時解錠器薬剤、保湿剤、あるいは医薬組成物の特定の形態に一般に含まれる他の構成要素を含み得る。薬学的に許容可能な担体は、当業者には周知で、例えば、水または生理学的に緩衝食塩水など水溶液またはグリコール、グリセロール、およびオリーブオイルまたは注射可能な有機酸エステルなど油など他の溶媒または、ビヒクルを含む。
薬学的に許容可能な担体は、例えば、特異的阻止因子、例えばグルコース、スクロースまたはデキストランなど炭水化物、アスコルビン酸またはグルタチオンなど抗酸化剤、キレート剤、低分子量タンパク質、他の安定剤、賦形剤の吸収を安定させるか増加させるために作用する生理学的に許容可能な化合物を包含することができる。
【０５４８】
医薬組成物は、また生理学的症状に近づくのに所望の他の薬学的に許容可能な補助の物質を包含することができ、そのような「物質」は、限定されないが、ｐＨ調節および緩衝剤、等張化剤およびその他同種のもの、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウムなど含んでいる。さらに、ペプチド、あるいはその変異体、懸濁液は、保管上のフリーラジカルおよび脂質過酸化破損から脂質を保護する脂質保護剤を含み得る。フェリオキサミンなどアルファ−トコフェロールと水溶性の鉄の特異的なキレート化剤など脂肪親和性の強いフリーラジカル消光剤は適切である。
【０５４９】
本明細書で使用されているように、「界面活性剤」は水の界面張力を修飾する界面活性剤である。典型的には、界面活性剤は分子の中に１つの親油性、１つの親水基または領域を有している。広く、基は石鹸、清浄剤、分散剤、分散および湿潤剤、および防腐剤のいくつかの基を含む。より具体的には、界面活性剤はステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウムおよびグリセリンモノステアリン酸塩；及びポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、カルボキシメチルセルロース、ナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、及びヒドロキシプロピルセルロース若しくはアルキルグリコシドなどの親水性重合体を含む。幾つかの実施形態では、界面活性剤は非イオン性の界面活性剤（例えば、アルキルグリコシド界面活性剤）である。幾つかの実施形態において、界面活性剤は、イオン界面活性剤である。
【０５５０】
本明細書で使用されているように「アルキルグリコシド」は、当該技術で知られているように、結合によって任意の疎水性のアルキルにつながれた任意の糖を指す。疎水性のアルキルは、所望の疎水性および糖類部分の親水性に依存するので、任意の所望の大きさから選択され得る。１つの態様では、アルキル鎖の範囲は１〜３０の炭素原子である；あるいは６〜１６の炭素原子である。
【０５５１】
本明細書で使用されているように「糖類」は、直鎖または環状体中の単糖類、オリゴ糖または多糖類を含む。オリゴ糖は２つ以上の単糖類残基がある糖類である。官能化された形態で使用するに適している多くの起こり得る糖類のいくつかの実施例は、グルコース、ガラクトース、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラオース、スクロース、トレハロースなどを含む。
【０５５２】
本明細書で使用されているように、「ショ糖エステル類」は脂肪酸のショ糖エステル類である。ショ糖エステル類は、スクロースにより反応させることができる、より大きく、より多くのかさばった脂肪まで上の酢酸塩から、反応に利用可能なスクロース中の８つの水酸基および多くの脂肪酸群のために多くの形態をとることができる。この柔軟性は、使用される脂肪酸部分に基づいて、多くの生成物および機能性を調整することができることを意味する。ショ糖エステル類は、薬剤、化粧品、清浄剤および飼料添加剤中の成長している適用により、特に界面活性剤と乳化剤として、食物および食料品以外の用途を有する。
それらは生分解性で、無毒で、皮膚に対して刺激性が少ない。
【０５５３】
本明細書で使用されているように、「適切な」アルキルグリコシドは、無毒で、非イオン性のものを意味する。幾つかの例においては、適切なアルキルグリコシドは、眼、鼻、鼻涙、舌下腺、バッカル、吸入経路を介して、あるいは皮下、筋肉内、静脈内経路などの注入経路によって化合物により投与されるとき、免疫原性または凝集を減少させ、化合物のバイオアベイラビリティを増加させる。適切な化合物は、当該技術において知られた方法及び実施例において述べられた方法を使用して、測定され得る。
【０５５４】
「リンカーアミノ酸」は、官能化された界面活性剤を有する共有結合に使用される反応性官能基（ｄｅ  Ｇｒａａｆ，Ａ．Ｊ．ら（２００９年）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  ２０：１２８１−１２９５）を含む任意の天然又は人工のアミノ酸である。一例として、幾つかの実施形態では、リンカーアミノ酸はＬｙｓ、または反応性官能基―ＮＨ２を有するＣｙｓである；あるいは反応性官能基―ＳＨがあるシステイン；あるいは反応性の官能基−Ｃ（＝Ｏ）―ＯＨを有するＡｓｐまたはＧｌｕである。一例として、他の特定の実施形態では、リンカーアミノ酸は、―ＯＨ、―Ｎ３、ハロアセチル、または適切に官能化された界面活性剤を有する共有結合の形成に使用されるアセチレン基などの反応性官能基を有する任意のアミノ酸である。
【０５５５】
本明細書で使用されているように、「官能化された界面活性剤」は、リンカーアミノ酸を有する共有結合に適している反応性基を含む界面活性剤である。一例として、幾つかの実施形態では、官能化された界面活性剤は、リンカーアミノ酸を有する共有結合に適している反応性基としてカルボン酸基（例えば、単糖類の６−位置での）を含む。一例として、幾つかの実施形態では、官能化された界面活性剤は―ＮＨ２基、―Ｎ３基、アセチレン基、ハロアセチル基、―Ｏ−ＮＨ２基または−（ＣＨ２−）ｍ−マレイミド基を含む、例えば、単糖類（模式図６に示されたように）の６−位置では、それは、適切なリンカーアミノ酸を有する共有結合を可能にする。幾つかの実施形態では、本明細書に記載されているように、官能化された界面活性剤は化学式ＩＶの化合物である。
【０５５６】
本明細書で使用されているように、用語「ペプチド」は２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチドである。用語「ペプチド」は短いペプチド（例えば２乃至１４の間のアミノ酸を含むペプチド）、中間鎖長ペプチド（１５−５０）または長鎖ペプチド（例えばタンパク質）を含む。ペプチド、中間鎖長ペプチドおよびタンパク質という用語は交換可能に本明細書に使用されてもよい。本明細書で使用されているように、用語「ペプチド」は、自然発生の構造変異種、およびペプチド結合を介してリンクした合成の非自然発生のアナログに関連づけられたアミノ酸残基から構成するポリマーを意味すると解釈される。合成ペプチドは自動化ペピチド合成機を使用するので、例えば合成することができる。ペプチドは、２０の遺伝子にコード化されたアミノ酸以外にアミノ酸を含み得る。「ペプチド」は、処理および他の翻訳後修飾などナチュラル・プロセスのいずれかのみならず、化学的修飾技術によって修飾されるものを含む。そのような修飾は、基本的なテキストにおいて、およびより詳細な研究書に記載され、かつ当業者には周知である。同じタイプの修飾は、与えられたペプチド中のいくつかの部位で同じ程度または異なる度まで存在し得ることが認識される。また、定められたペプチドは幾つかの実施形態では２以上のタイプの修飾を包含している。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノ末端またはカルボキシル末端を含むペプチドのあらゆる場所で生じ得る。
【０５５７】
したがって、また本明細書に記載されている実施形態の範囲内で熟慮したのは、ペプチドに共有結合で付加された界面活性剤であり、当該ペプチドは、例えば、アセチル化、アシル化、ペグ化、脂質または脂質の誘導体のＡＤＰリボシル化、アミド化、共有結合の付加、ホスファチジルイノシトールの共有結合の付加、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、システインの共有結合の架橋形成の形成、ピログルタミン酸形成、フォルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、蛋白質分解を生ずる処理、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、グリコシル化、グルタミン酸残基の脂質取付け（硫酸化）、ヒドロキシル化およびＡＤＰリボシル化、セレノイル化、硫酸化、アルギニン化およびユビキチン化などタンパク質に対するアミノ酸の転移ＲＮＡ媒介された付加を含む修飾によって修飾される。例えば、（Ｎｅｓｔｏｒ，Ｊ．Ｊ．Ｊｒ．（２００７年）Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｍｅｄｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＩＩ  ２：５７３−６０１、Ｎｅｓｔｏｒ，Ｊ．Ｊ．Ｊｒ．（２００９年）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １６：４３９９―４４１８、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｔ．Ｅ．（１９９３年、Ｗｏｌｄ，Ｆ．（１９８３年）Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｖａｌｅｎｔ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  １−１２、Ｓｅｉｆｔｅｒ，Ｓ．およびＥｎｇｌａｒｄ，Ｓ．（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  １８２：６２６−６４６、Ｒａｔｔａｎ，Ｓ．Ｉ．ら（１９９２）Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ６６３：４８−６２）。また、本明細書に記載されている実施形態の範囲内で熟考されるのは、分岐したか、或いは周期性のペプチドが、分岐を有するか、または分岐を有しないことである。環式の、分枝したポリペプチドおよび分枝した環式のペプチドは、翻訳後の自然工程から結果として生じてもよいし、または合成方法によって作られてもよい。
【０５５８】
用語「ペプチド」は、天然及び人工のアミノ酸または天然のアミノ酸のアナログを含むペプチドまたはタンパク質を含む。本明細書で使用されているように、ペプチド及び／又はタンパク質「アナログ」は、ｐ−置換チロシン、ｏ−置換チロシンおよびｍ−置換チロシンを含むチロシンアナログなど、天然のアミノ酸をベースにした人工のアミノ酸を含み、ここで、チロシン上の置換基は、アセチル基、ベンゾイル基、アミノ基、ヒドラジン、ヒドロキシアミン、チオール基、カルボキシ基、メチル基、イソプロピル基、Ｃ２−Ｃ２０直鎖または分岐した炭化水素、１つの、飽和、あるいは不飽和炭化水素、Ｏ−メチル基、ポリエーテル基、ハロゲン、ニトロ基などを含む。Ｔｙｒ・アナログの実施例は、２，４−ジメチル−チロシン（Ｄｍｔ）、２，４−ジエチル−チロシン、Ｏ−４−アリールを含む−チロシン、４−プロピル−チロシン、Ｃα−メチル−チロシンなどを含む。リジン・アナログの実施例は、オルニチン（Ｏｒｎ）、ホモ−リジン、Ｃα−メチル−リジン（ＣＭｅＬｙｓ）などを含む。フェニルアラニン・アナログの実施例は限定されないが、メタ置換されたフェニルアラニンを含み、ここで置換基はメトキシ基、Ｃ１−Ｃ２０アルキル基、例えばメチル基、アリール基、アセチル基などを含む。特定の実施例は、限定されないが、２，４，６−トリメチル−Ｌ−フェニルアラニン（Ｔｍｐ）およびＯ−メチル―チロシン、３−（２−ナフチル）アラニン（Ｎａｌ（２））、３−（１−ナフチル）アラニン（Ｎａｌ（１））、３−メチル−フェニルアラニン、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸（Ｔｉｃ）、フッ素で処理されたフェニルアラニン、イソプロピル−フェニルアラニン、ｐ−ａｚｉｄｏ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−フェニルアラニン、ｐ−ヨード−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−・フェニルアラニン、またイソプロピル−  フェニルアラニンなどを含む。当該技術において知られており、ペプチドアナログの設計で使用される非標準或いは人工のアミノ酸の膨大なアレイの中で、Ａｉｂ、Ｃα―ジエチルグリシン（Ｄｅｇ）、アミノシクロペンタン−１−カルボン酸（Ａｃ４ｃ）、アミノシクロペンタン−１−カルボン酸（Ａｃ５ｃ）などのＣ−アルファ−２置換アミノ酸である。そのようなアミノ酸は、しばしば、アルファらせん構造にバイアスされる抑制された構造へと導く（Ｋａｕｌ，Ｒ．およびＢａｌａｒａｍ，Ｐ．（１９９９年）Ｂｉｏ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ７：１０５−１１７）。アナログ設計に役立つそのような人工のアミノ酸の追加の実施例は、ホモ−アルギニン（Ｈａｒ）などである。特定の実例における減少したアミド結合の置換は、酵素の破壊からの改善された保護へと導くか、あるいは受容体結合を修飾する。一例として、残基（Ｔｉｃ―Ψ［ＣＨ２−ＮＨ］−Ψ−Ｐｈｅ）間の減少したアミド結合をもつＴｉｃ−Ｐｈｅジペプチド系の結合は、酵素の分解を減少させる。したがって、本明細書に記載されている実施形態の範囲内で熟慮したのは、上述したに記載された、修飾されるアミノ酸及び／又はペプチドアナログを含むペプチドに共有結合で付加された界面活性剤である。特定の人工のアミノ酸は以下に示される。
【０５５９】
【化８３】
2014516036.tif 000092
【０５６０】
本明細書で使用されているように、「オピオイドペプチド」は、身体中のオピオイド受容体に結合するアミノ酸の短い配列である。幾つかの実施形態では、オピオイドペプチドは、例えばエンドルフィン、エンケファリン、エンドモルフィン、デルモルフィンまたはその他同種のものなど、内因性のペプチドである。幾つかの実施形態では、オピオイドペプチドは、内因性モルヒネ様ペプチドから誘導されている（例えば、偽ペプチド、抑制されたペプチド、アルファ・メチル・アナログなど）。幾つかの実施形態では、オピオイドペプチドは、外因性及び／又は合成であり、修飾されるアミノ酸及び／又は人工のアミノ酸を含み、該人工のアミノ酸はオピオイドペプチドの効果を模倣する。
【０５６１】
本明細書で使用されているように、用語「変異体」は参照ペプチドと異なるが、不可欠な特性を保持するペプチドを意味すると理解される。ペプチドの典型的な変異体は、アミノ酸配列において他の参照ペプチドと異なる。一般に、違いは限定的であり、その結果、参照ペプチドおよび変異体の配列が全体として類似しており、および多くの領域では同一である。変異体および参照ペプチドは、任意の組み合わせにおいて、１以上の置換、付加、欠失によってアミノ酸配列において異なることがある。置換された、または挿入されたアミノ酸残基は、遺伝暗号によってコード化されたものかもしれないし、そうではないかもしれない。ペプチドの人工的に発生する変異体は、突然変異生成技術によって、直接合成、および他の適切な組み換え法によって作られ得る。
【０５６２】
ここで、本明細書に記載されている共有結合で修飾されるペプチド及び／又はタンパク質の様々な実施形態および特定の適用について詳細に言及する。共有結合で修飾されるペプチド及び／又はタンパク質は、様々な実施形態および適用と併用して記載されるが、そのような実施形態および適用が例証的であり、本明細書に記載されている実施形態の範囲を限定するように意図されないことが理解される。加えて、この開示の全体にわたって、様々な特許、特許出願、ウェブサイトおよび刊行物が参照され、また、もし他の方法で示されなかったならば、関連する開示のために各々は参照により本明細書に組み入れられる。
【０５６３】
＜ペプチド＞
身体中のペプチドによって果たされる多くの重要な役割がある。また、いくつかの商取引の機会が利用された（Ｎｅｓｔｏｒ，Ｊ．Ｊ．Ｊｒ．（２００９年）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １６：４３９９−４４１８；Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ，Ｃ．Ｌ．（２００９年）Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １０：１２２−１３７）。しかしながら、これらの認識された標的および生成物さえ（Ｔｙｎｄａｌｌ，Ｊ．Ｄ．ら（２００５年）Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ  １０５：７９３−８２６）、作用持続時間とバイオアベイラビリティの欠損症から苦しみ続ける。幾つかの実施形態では、本明細書に記載されている改善されたペプチドは現在入手可能な商品と比較したので、より長期の作用持続時間及び／又はバイオアベイラビリティ及び／又は治療上の効力を提供する。臨床的な発達のアナログ設計（アゴニストとアンタゴニスト）の魅力的な商用標的を表わすペプチドのいくつかの例示的な実施例は、例えば、クラスＢの部材、G蛋白質連結受容体（ＧＰＣＲ）リガンドおよび関連するペプチド（「セクレチン・ファミリー」）を含む：セクレチン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、副甲状腺ホルモン関連タンパク（ＰＴＨｒＰ）、グルカゴン、タンパク質−１および−２（ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−２）のようなグルカゴン、グルコース依存インシュリン様ポリペプチド（ＧＩＰ）、オキシントモジュリン、脳下垂体のアデニル酸シクラーゼを起動するペプチド（ＰＡＣＡＰ）、血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）、アミリン（またプラムリンチド、デバリンチドなどのアナログ）、カルシトニン（またサケ・カルシトニン、エルカトニンなどのアナログ）、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）、アドレノメジュリン、副腎皮質刺激ホルモン放出因子ファミリーなど（ＣＲＦ、Ｘｅｒｅｃｅｐｔ；  ウロコルチン）などで、本明細書に記載の方法によるさらなる修飾による臨床的な生成物として改善される合成類似体を含む。また、本明細書に提示された実施形態の範囲内で熟考されるのは、オピオイドペプチド・ファミリーであり；そのようなペプチドは、増加した作用持続時間および増加した特異性を与えるのに本明細書に記載されているペプチド修飾の方法から利益を得る。一例として、エンドモルフィン、ダイノルフィン、エンケファリン、デルモルフィン、カソモルフィンなどのアナログ、ペプチド・ファミリーは疼痛、依存らの処置に魅力的な治療上の手法を提供する。本明細書に記載されているペプチド生成物をもたらす修飾の追加の魅力的なペプチド標的は、視床下部ホルモン、例えばゴナドトロピン・ホルモン放出ホルモン及びそのアナログ（例えば、ナファレリン、ゴセレリン、トリプトレリン、リュープロレリン、フェルチレリン、ヒストレリン、ブセレリン、ガニレリックス、セトロレリックス、デガレリクス、デスロレリン、など）、副腎皮質刺激ホルモン、ソマトスタチン（例えば、オクトレオチド、ランレオチド、バプレオチドなど）、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、ニューロテンシンである。魅力的な商用標的のさらなる実施例、バソプレシン（デスモプレシン、など）、オキシトシンおよびアナログなど脳下垂体ホルモンおよび��ナログである、甲状腺ホルモンの刺激的なホルモン、プロラクチン、成長ホルモン、黄体形成ホルモン、袋果状の刺激的なホルモン、アルファ・メラニン細胞刺激ホルモン・アナログ（メラノタンアナログ）など、並びにそれらのアナログ。成長因子は本明細書に記載された方法を使用して、有利に修飾され得る重要なクラスの分子である、改善された薬学の候補、例えばインスリン（またリスプロ、レベミル、グラルギンなどのアナログ）、インスリン様成長因子Ｉ（ＩＧＦ−ＩまたはソマトメジンＣ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ；ＦＧＦ−１８、ＦＧＦ−２０、ＦＧＦ−２１など）、角化細胞成長因子（ＫＧＦ）および血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）など。特に魅力的な標的は腸機能および食欲を制御するが、作用（それらのうちのいくらかは上に言及される）の短い期間を有するペプチドで、限定されないが、グレリン、膵臓のペプチド、ペプチドＹＹ、ニューロペプタイドＹ、コレシストキニン（シンカリドなど）、メラノコルチンなどを含む。本明細書に記載されている方法から利益を得る追加の標的は、肥満症に関連する炎症誘発性の脂肪組織生成物で、レプチン（及びＯＢ−３ペプチドなど関連付けられたアナログ）、アディポカイン、アディポネクチン、ケメリン、ビスファチン、ネスファチン、レジスチン、腫瘍壊死因子アルファ、ケモキネス、単球走化性のあるタンパク質−１（ＭＣＰ−１）、オメンチン、インターロイキン、などである。改善された薬学・薬理学的な挙動から利益を得る重要な標的は免疫機能を制御するタンパク質である、その中で、以下の実施例が挙げられるが、それらは限定することが意味されておらず、単に例証的なものである：インターフェロン・ファミリーのメンバー（ＩＬ−１０、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２２、ＩＬ−２４、ＩＬ−２６などを含む、インターフェロン・アルファ、―ベータ、―ガンマ、―カッパ、―オメガ）、チモペンチン、サイモシン  アルファ１などである。循環するもの、または血液凝固を制御する重要なペプチド生成物は、本明細書に記載された方法によって改善されるだろう、それによって増加した作用持続時間が達成されるだろう、ビバリルジン（Ａｎｇｉｏｍａｘアンジオマックス）、エプチフィバチド（インテグレリン）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ、ウラリチド）、脳性ナトリウム利尿ペプチド、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド、ｂ−タイプ・ナトリウム利尿ペプチド（ネシリチド）、アンギオテンシン、血液造成阻害剤、ロチガプチド、トロンボスポンジンとその他同種のもの。幹細胞増殖および分化を刺激するペプチドは本明細書に記載されている修飾によって改善されるかもしれない重要な薬剤である。例えば、エリスロポエチン、ヘマタイド、トロンボポイエチン、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−コロニー刺激因子）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、インターロイキン６（ＩＬ−６）顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−コロニー刺激因子）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子など（ＧＭ−コロニー刺激因子）はであるである、界面活性剤（例えばアルキルグリコシド界面活性剤）に対する共有結合の取付けに適しているペプチドとして熟慮する。神経栄養因子は、作用持続時間と効力を増加させるのに本明細書に記載されている修飾から大幅に利益を得る、別のクラスの少人数のタンパク質である。例えばグリア細胞を派生した神経栄養因子（ＧＤＮＦ）およびファミリー（ニュールツリン、アルテミン、パースフィン）（神経成長因子（ＮＧＦ）、ＢＤＮＦおよびその他同種のものなどニューロトロフィン）。炎症誘発性で、疼痛引き起こすペプチドは本明細書に記載されている修飾によって改善される重要なペプチド標的である。例えば、ブラジキニン（あるいはその放出（例えばエカランチド））およびサブスタンスＰの阻害剤、特にアンタゴニストは重要な治療上の標的（イカチバントら）を提供する、界面活性剤（例えばアルキルグリコシドの界面活性剤）の共有結合の取付けに適している。ウイルスの融合（フゼオン）、タンパク質成熟（プロテアーゼ阻害剤）または統合の阻害剤は、作用の短い期間に苦しむ。界面活性剤（例えばアルキルグリコシドの界面活性剤）の共有結合の取付けによるそのような阻害剤の修飾は、より長期の作用持続時間を可能にする。多くのプロテアーゼが疾患に関係することが見出された（本明細書に記載されている修飾およびそのような標的によってさらに改善されるだろう）。また、それらの作用の阻害剤は診療室（Ａｂｂｅｎａｎｔｅ、Ｇ．およびＦａｉｒｌｉｅ，Ｄ．Ｐ．（２００５年）Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  １：７１−１０４）に達し、そのような標的は本明細書に記載された実施形態の範囲内で熟慮する。追加の天然のペプチド生成物、およびその疼痛、抗菌剤デフェンシンなど用のコノトキシン・ペプチドなどアナログは、またバイオアベイラビリティの欠如、および生理液内での作用の短期間から苦しみ、それ故、本明細書に記載されているペプチド修飾から利益を得る。当業者は、本明細書に記載されている修飾に適用可能で、増加した作用持続時間およびバイオアベイラビリティを提供する多くの追加の商業上重要なペプチドを認識する。また、そのようなペプチドはまたある、現在の開示の範囲内で熟慮する。
【０５６４】
アミノまたはカルボキシル末端の修飾は、本ペプチドへ随意に導入されるかもしれない（Ｎｅｓｔｏｒ，Ｊ．Ｊ．Ｊｒ．（２００９年）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １６：４３９９―４４１８）。例えば、本ペプチドはいくつかのペプチドに対して見られるように、低い効力、半アゴニストおよびアンタゴニスト活性を示すペプチドをもたらすためにＮ末端で上端を切り取るかアシル化することができ（Ｇｏｕｒｌｅｔ（Ｐ）。ら（１９９８年）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ３５４：１０５−１１１、Ｇｏｚｅｓ、Ｉ．およびＦｕｒｍａｎ，Ｓ．（２００３年）Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ  ９：４８３−４９４）、それらの内容は、参照により本明細書に組み入れられる。Ｄ−フェニルアラニンなどＤ−アミノ酸の欠失または結合などのペプチドのＮ末端に対する他の修飾は、長鎖アルキルグリコシドなど本明細書に記載された修飾により置換されたときにも、強力で長く作用するアゴニストまたはアンタゴニストを与えることができる。そのようなアゴニストおよびアンタゴニストはまた商用有用性を有しており、本明細書に記載されている熟慮された実施形態の範囲内である。
【０５６５】
２０の標準のアミノ酸に加えて、「非標準のアミノ酸」、または当該技術分野で知られており、組み入れられ得る膨大な数のアミノ酸が存在し、上述のとおり本明細書に記載された化合物に組み入れられ得る。他の非標準のアミノ酸は、結合のための反応的な側鎖により修飾される（Ｇａｕｔｈｉｅｒ、Ｍ．Ａ．およびＫｌｏｋ，Ｈ．Ａ．（２００８年）Ｃｈｅｍ  Ｃｏｍｍｕｎ（Ｃａｍｂ）２５９１−２６１１；ｄｅ  Ｇｒａａｆ，Ａ．Ｊ．ら（２００９年）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  ２０：１２８１−１２９５）。１つの手法、発展した転移リボ核酸／転移ＲＮＡ合成酵素対で、発現プラスミドにおいてアンバーサプレッサーによってコドンがコード化した（Ｄｅｉｔｅｒｓ，Ａら（２００４年）Ｂｉｏ−ｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１４，５７４３−５）。例えば、ｐ−アジドフェニルアラニンはペプチドに組み入れられ、次に、官能化された界面活性剤、または「Ｈｕｉｓｇｅｎ［３＋２］付加環化として知られている有機反応を促進するために還元剤と銅イオンが存在する状態の中にアセチレン部分を有しているＰＥＧポリマーによって反応した。
アセチレン修飾アルキルグリコシドまたはＰＥＧ修飾グリコシドを含む本明細書に記載された試薬を使用する類似した反応配列は、ペグ化された、或いはアルキルグリコシド修飾ペプチド結果として生じる。約５０未満の残基のペプチドについては、標準の固相合成は鎖の中で所望位置に前記反応的なアミノ酸残基の結合のために使用される。界面活性剤修飾されるペプチド及び／又はタンパク質は、ＰＥＧ結合によって単独で修飾されるペプチドと、薬理学的および薬効成分の異なるスペクトルを提示する。
【０５６６】
＜中間体＞
１つの実施形態において、本明細書では、界面活性剤部分、および天然又は人工のアミノ酸上で反応性官能基を有する単結合を形成し得る反応性官能基を含む中間体及び／又は試薬が提供される。これらの中間体及び／又は試薬は、ヒト、また家畜の疾病に使用するペプチド及び／又はタンパク質のバイオアベイラビリティと、薬剤の、薬物動態学的及び／又は薬理学的な挙動行動における利用を可能にする。例えば、Ｌｙｓのイプシロン・アミノ官能基上、Ｃｙｓのスルフヒドリル基、またはペプチド及び／又はタンパク質標的のアミノ末端又はカルボキシ末端でのメルカプト基での、アミノ酸の側鎖上の官能基によるそのような中間体及び／又は試薬の共有結合の付加が、本明細書に記載されているペプチド生成物の合成を可能にする。具体的な実施形態では、非イオン性の界面活性剤部分はＯ−アルキルグリコシドの置換を有する、単糖類または二糖類であり、前記グリコシド結合はアルファまたはβ構造をある。具体的な実施形態では、Ｏ−アルキル鎖はＣ１−Ｃ２０アルキル鎖、またはＣ６−Ｃ１６アルキル鎖からである。
【０５６７】
別の実施形態において、本明細書で、特定のアルキルグリコシド結合をもつ非イオン性の界面活性剤部分を含む中間体及び／又は試薬が提供され、該アルキルグリコシド結合はＯ−アルキルグリコシド結合、および天然又は人工のアミノ酸上で反応性官能基を有する単結合を形成することができる反応性官能基を模倣する。そのような中間体及び／又は試薬は、Ｓ−リンク・アルキル鎖またはＮ−リンク・アルキル鎖を包含しており、酵素の安定性がＯ−リンク・アルキルグリコシド・リンクした生成物と比較して、化学的な及び／又は酵素的安定性を修飾した。
【０５６８】
幾つかの実施形態では、本明細書で提供された中間体及び／又は試薬は化合物であり、ここで、親水基は、修飾されるグルコース、ガラクトース、マルトース、グルクロン酸、ジグルクロン酸、マルタウロン（ｍａｌｔｏｕｒｏｎｉｃ）酸などである。幾つかの実施形態では、親水基はグルコース、マルトース、グルクロン酸、ジグルクロン酸又はマルタウロン酸であり、疎水基はＣ１−Ｃ２０アルキル鎖またはアラルキル鎖である。幾つかの実施形態において、疎水基に対するグリコシド結合はアルファ構造であり、いくつかでは、結合は糖類上のアノメリック中心でベータ構造である。
【０５６９】
幾つかの実施形態では、親水基はグルコース、マルトース、グルクロン酸、ジグルクロン酸、あるいはマルタウロン酸であり、疎水基はＣ１−Ｃ２０アルキル鎖またはアラルキル鎖である。
【０５７０】
幾つかの実施形態では、本明細書で提供された中間体及び／又は試薬は、カルボン酸基、アミノ基、アジ化物、アルデヒド、マレイミド、メルカプト基、ヒドロキシルアミノ群、アルキンまたはその他同種のものである反応性官能基を包含する界面活性剤を含む。
【０５７１】
幾つかの実施形態では、中間体及び／又は試薬は、カルボン酸またはアミノ官能基となるために修飾される水酸基のうちの１つを有するＯ−リンク・アルキルグリコシドである。
幾つかの実施形態では、試薬は、アルファ構造またはベータ構造の１−Ｏ−アルキルグルクロン酸であり、アルキル鎖は長さでＣ１乃至Ｃ２０までである。そのような実施形態のうちのいくらかでは、アルキル基は長さでＣ６乃至Ｃ１８までである。そのような実施形態のうちのいくらかでは、アルキル基は長さでＣ６乃至Ｃ１６までである。
【０５７２】
幾つかの実施形態では、試薬は、アルファ構造またはベータ構造の１−Ｏ−アルキルジグルクロン酸を含み、アルキル鎖は長さでＣ１乃至Ｃ２０までである。そのような実施形態のうちのいくらかでは、アルキル基は長さでＣ６乃至Ｃ１６までである。
【０５７３】
幾つかの実施形態では、試薬は、カルボン酸またはアミノ官能基であるために修飾される水酸基のうちの１つを有する、アルファ構造またはベータ構造のＳ−リンク・アルキルグリコシドである。
【０５７４】
幾つかの実施形態では、試薬は、カルボン酸またはアミノ官能基であるために修飾される水酸基のうちの１つを有する、アルファ構造またはベータ構造のＮ−リンク・アルキルグリコシドである。
【０５７５】
さらに別の実施形態において、本明細書で、ヒト及び家畜の疾病で使用するために許容可能な特性を有する共有結合で連鎖性のアルキルグリコシドを包含するペプチド及び／又は蛋白質生成物が存在する。模式図１は、本明細書に記載されている界面活性剤に修飾されるペプチド生成物の合成に有用な試薬及び／又は中間体をもたらすために修飾することができる典型的な非イオン性の界面活性剤を挙げる。
【０５７６】
【化８４】
2014516036.tif 000093
【０５７７】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載の共有結合で修飾されるペプチド及び／又はタンパク質は、ペプチド構造に界面活性剤部分を合併する。特定の実施形態では、共有結合で修飾される本明細書に記載されているペプチド及び／又はタンパク質は、アルキル、アルコキシアルキルまたはアラルキルグリコシドクラスの非イオン性の界面活性剤を組み入れる。アルキルグリコシドは重要な商品で、食物、サービスおよびクリーニング産業で広く使用される。したがって、商業上有意な規模のそれらの生成は広範囲な研究の被験体だった。酵素及び化学の両方のプロセスは、非常に低コストでそれらの製造に利用可能である（Ｐａｒｋ，Ｄ．Ｗ．ら（２０００年）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２２：９５１−９５６）。これらのアルキルグリコシドは本明細書に記載されている共有結合で修飾されるペプチド及び／又はタンパク質の合成用の中間体を生じさせるためにさらに修飾することができる。したがって、酸素の存在状態で保護されていない物質および白金黒触媒を使用するときに、高収率で対応するグルクロン酸アナログをもたらす６−位置上で、１−ドデシルベータ−Ｄ−グルコシドが優先的に酸化することは知られている（ｖａｎ  Ｂｅｋｋｕｍ，Ｈ．（１９９０年）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ  ａｓ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒａｗ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２８９−３１０）。アルキルグルコシドの６−位置での第１アルコールの酸化のための追加の化学種選択的な方法が利用可能である。例えば、有機酸化剤［ｂｉａ（アセトキシ）ヨード］ベンゼン（ＢＡＩＢ）（Ｄｅ  Ｍｉｃｏ，Ａ．ら（１９９７年」）Ｊ  Ｏｒｇ  Ｃｈｅｍ  １９９７：６９７４−６９７７）の化学量を有する触媒の量をもつ２，２，６，６−テトラメチル−１−ピペリジルオキシル（ＴＥＭＰＯ）の使用は、主要なヒドロキシルの酸化によってヌクレオシド−５’−カルボン酸の顕著な収率を与えた（Ｅｐｐ，Ｊ．Ｂ．及びＷｉｄｌａｎｓｋｉ，Ｔ．Ｓ．（１９９９年）Ｊ  Ｏｒｇ  Ｃｈｅｍ  ６４：２９３−２９５）。この酸化は、第２のヒドロキシルが保護されてないときでさえ、第１のヒドロキシルには化学種選択的である（Ｃｏｄｅｅ、Ｊ．Ｄ．ら（２００５年）Ｊ  Ａｍ  ＣｈｅｍＳｏｃ  １２７：３７６７−３７７３）。類似した方法で、１−ドデシルβ−Ｄ−グルコピラノシドおよび１−テトラデシルβ−Ｄ−グルコピラノシドは、水中の化学量論の酸化剤として、ＫＢｒと次亜塩素酸ナトリウムを使用して、ＴＥＭＰＯを有する酸化によって対応するウロン酸（１−ドデシルβ−Ｄ−グルクロン酸、１−テトラデシルβ−Ｄ−グルクロン酸）に酸化した（Ｍｉｌｋｅｒｅｉｔ，Ｇ．ら（２００４年）Ｃｈｅｍ  Ｐｈｙｓ  Ｌｉｐｉｄｓ  １２７：４７−６３）。（ジアセトキシヨード）ベンゼン（ＤＡＩＢ・アルカ・ＢＡＩＢ）を使用する軽度の酸化処理は、実施例において与えられる。これらのグルクロン酸中間体の特定のものは、市場で入手可能である（例えば、オクチルｂ−Ｄ−グルクロン酸；Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ、ＭＯ  ０７９２８）及び、示されるように、広範囲で、ルティンの方法または請求によって調製がなされる（Ｓｃｈａｍａｎｎ，Ｍ．及びＳｃｈａｆｅｒ，Ｈ．Ｊ．（２００３年）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｏｒｇ  ��ｈｅｍ  ３５１−３５８；Ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｏｓ，Ｌ．Ｊ．ら（２００７年）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｏｒｇ  Ｃｈｅｍ  ３９６３−３９７６）。模式図２は、本明細書に記載されている中間体及び／又は試薬を調製するために使用される反応性官能基として―ＣＯＯＨ基を含む、特定の官能化された界面活性剤中間体を例証する。
【０５７８】
【化８５】
2014516036.tif 000094
【０５７９】
同様に、アラルキルグリコシド（アルコキシアルキルを含む）は、密接に関連する非イオン性界面活性剤試薬の基礎を形成することができる。例えば４−アルコキシフェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドは、三弗化硼素エーテラートの存在下でペンタ−Ｏ−アセチルβ−Ｄ−グルコースと４−アルキシルオキシフェノールとの反応によって容易に合成される。上述され、実施例に記載されているように、メタノール／水中でトリメチルアミンを使用して脱アセチル化し、選択的酸化の後に、試薬およびペプチドを形成するのに適切なアルコキシアリルグルクロン酸試薬をもたらす（Ｓｍｉｔｓ，Ｅ．ら（１９９６年）Ｊ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ，Ｐａｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ  Ｉ  ２８７３−２８７７；Ｓｍｉｔｓ，Ｅ．ら（１９９７年）Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｒｙｓｔａｌ  ２３：４８１−４８８）。
【０５８０】
【化８６】
2014516036.tif 000095
【０５８１】
グルクロン酸クラスの中間体は、アミノ酸側鎖（例えば、Ｌｙｓの側鎖）に対する結合のための標準のカップリング剤によって容易に活性化される。したがって、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ−Ｏ−Ｔｍ（トリメチルシリル＝ＴＭＳ）は、カップリング剤の存在下で、オクチルベータ−Ｄ−グルクロン酸により反応させることができ、およびその後、水性の後処理で加水分解することができ、模式図４に示されるようにＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（１−オクチル・β−Ｄ−グルクロン酸アミド）をもたらす。この試薬は、分子のＮ末端領域の近くの界面活性剤部分を組込むことが望まれるとき、標準連結プロトコルを使用して、ペプチドの結合強力発破相合成に使用することができる。第２の水酸基は、Ｌｙｓアミノ官能基の非常に高い反応性により、無保護備にしておくことができるか、あるいは、第２の水酸基は過汗チル化によって保護することができる。アセチル保護された形態が使用されるとき、アセチル保護基はＭｅＯＨ／ＮａＯＭｅによる処置、またはＭｅＯＨ／Ｅｔ３Ｎによって、高収率では除去することができる。模式図４は、本明細書に記載されている試薬の製剤を例証する。
【０５８２】
【化８７】
2014516036.tif 000096
【０５８３】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されている活性ペプチド生成物の製剤用の試薬及び／又は中間体は、合成ペプチド生成物への結合のための界面活性剤に修飾されるリンカーアミノ酸のファミリーを含む。したがって、一実施形態において、本明細書に記載されているペプチド生成物は直鎖の方法で合成され、ここで、官能化された界面活性剤は、リンカーアミノ酸（例えばリジン残基のアミノ基）の側鎖上の官能基によって可逆的に保護されたリンカーアミノ酸に付加されて、独自の試薬（模式図４に示されるように）をもたらし、いる、成長しているペプチド鎖に組み込まれ、ついで残りのペプチドは、さらなるシステイン残基に対するアミノ酸の付加によって合成される。本明細書に記載されている修飾されるペプチド及び／又はタンパク質の合成に適している保護基は、例えば「Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９年，５０３−５０７，７３６−７３９」に記載され、その開示は、参照により本明細書に組み入れられる。
【０５８４】
別の実施形態において、本明細書に記載されているペプチド生成物は、ペプチド鎖にあるリンカーアミノ酸上の適切な官能基によって省略がないペプチドに対する官能化された界面活性剤の共有結合の付加によって合成される。
【０５８５】
代替的に、官能化された界面活性剤は、ペプチドの固相合成の間に脱保護されたリンカーアミノ酸側鎖に加えることができる。実施例として、アルキルグルクロニル基は、ペプチドの固相合成中にリンカーアミノ酸側鎖（例えば脱保護されたリース側鎖）に直接加えることができる。例えば、サブユニットとしてのＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨの使用が、ペプチドがまだ樹脂上にある間除去することができる垂直の保護を提供する。
したがって、Ｐｄ／チオバルビタールまたは他のａｌｌｏｃ脱保護レシピを使用するリース側鎖の脱保護は、保護されたアシルまたは無防備の１−オクチルβ−Ｄ−グルクロン酸ユニットにより連結されるためにアミノ基の曝露を許可する。その後、低い％  ＣＦ３ＣＯ２Ｈ（ＴＦＡ）開裂カクテルを有する最終的な脱保護は所望生成物を運ぶ。グリコシド結合は強酸に不安定であるが、本明細書で、他のものによる経験は、それが低い％のＴＦＡ開裂症状に対して比較的安定しているということである。代替的に、糖類ＯＨ官能基上のアシル保護（例えばアセチル、Ａｃ；  ベンゾイル、Ｂｚ）またはトリアルキルシリル保護はグリコシド結合に増加した保護を与えるために使用されてもよい。ベース（ＮＨ２ＮＨ２／ＭｅＯＨ；ＮＨ３／ＭｅＯＨ、ＮａＯＭｅ／ＭｅＯＨ）によって後に脱保護は、所望の脱保護された生成物をもたらす。模式図４は本明細書に記載されている試薬を例証する。
模式図５は本明細書に記載されているペプチド中間体を例証する。
【０５８６】
【化８８】
2014516036.tif 000097
【０５８７】
模式図６に以下に示されるように、アミノ酸側鎖官能基への結合の様々な手段を与えるために、追加の試薬は６−位置官能基の修飾によって生じさせられる。したがって、アミノ置換基は、Ａｓｐ側鎖またはＧｌｕ側鎖に対する結合に使用することができる。Ａｚｉｄｏ置換基またはアルキン置換基は、Ｈｕｉｓｇｅｎ  ３＋２付加環化のための相補的な受容体を包含している人工のアミノ酸に対する結合に使用することができる（Ｇａｕｔｈｉｅｒ、Ｍ．Ａ．およびＫｌｏｋ、Ｈ．Ａ．（２００８）Ｃｈｅｍ  Ｃｏｍｍｕｎ（Ｃａｍｂ）２５９１−２６１１）。アミノキシまたはアルデヒド官能基はアルデヒド（すなわちオキシム結合）またはアミノ官能基（すなわち縮小するアルキル化）にそれぞれ連結するために使用することができる。マレイミドまたは―ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｂｒ官能基は、Ｃｙｓまたは他のＳＨ官能基により化学選択的に結合することができる。本明細書に記載されている試薬と併用して使用された時、これらのタイプの結合方策は有利である。官能基の相互転換は、有機合成で広く実施され、本明細書にリストされた官能基修飾の各々に対する複数の経路の総覧は、利用可能である（Ｌａｒｏｃｋ、Ｒ．Ｃ．（１９９９年）”Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ”、ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。
【０５８８】
したがって、オクチル１―β―Ｄ−グルコシドの位置６上の第１のヒドロキシルがアジドアニオンを備えた、賦活および置換、炭水化物化学の中で使用される反応のような反応によってアジ化物に変換される（例えばＮａＮ３が後続するトシル化による）。対応するアジ化物は、ピリジン中のチオ酢酸による還元によって（Ｅｌｏｆｓｓｏｎ，Ｍ．ら（１９９７年）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ５３：３６９−３９０）、あるいはアミノ基生成の類似した方法によってアミノ機能になる（Ｓｔａｎｇｉｅｒ，Ｐ．ら（１９９４年）Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｒｓｙｔａｌ  １７：５８９−５９５）。アセチレン、アミノキシおよびアルデヒド部分への手法は、第一アミンの軽度の加水分解が後続するＡｃ２Ｏによる処置によって市場で入手できるグルコシドから利用可能なトリアセトキシ形態に対して最良に実行される。この６−ヒドロキシ形態は、選択的にアルデヒドに酸化するか、トシラートまたはトリフラートとして活性化され、ＮＨ２ＯＨ、またはナトリウム・アセチリドによって置き換えることができる。マレイミド結合は示されるような炭素結合によって、好ましくは、Ｏまたはアミド結合を介して、活性化されたヒドロキシルの変位または、グルクロン酸誘導体のアミノリンクした当該技術で周知のマレイミド試薬との連結によって再び存在する場合がある。追加の官能基変換は、薬化学の当業者に周知で、本明細書に記載されている実施形態の範囲内である。
【０５８９】
また本明細書に記載されている合成方法の範囲内で熟慮したものは界面活性剤であり、ここで糖類および疎水性鎖は、アルファ・グリコシド結合によって共有結合で付けられる。主にα―リンク・グリコシドへの合成の経路は、当該技術において周知で、典型的には過アセチル化糖に由来し、酸性の触媒（例えば、ＳｎＣｌ４、ＢＦ３またはＨＣｌ）を使用して、α−グリコシル化を産出する（Ｃｕｄｉｃ、Ｍ．およびＢｕｒｓｔｅｉｎ、Ｇ．Ｄ．（２００８年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ４９４：１８７−２０８、Ｖｉｌｌ，Ｖ．ら（２０００年）Ｃｈｅｍ  Ｐｈｙｓ  Ｌｉｐｉｄｓ  １０４：７５−９１、そのような開示のための言及によって本明細書に組み入れた）類似した合成の経路は、二糖グリコシドのために存在する（ｖｏｎ  Ｍｉｎｄｅｎ、Ｈ．Ｍ．ら（２０００年）Ｃｈｅｍ  Ｐｈｙｓ  Ｌｉｐｉｄｓ  １０６：１５７−１７９）そのような開示のための言及によって本明細書に組み入れた）。ついで官能基変換は上述のとおり進み、その後、対応するα−リンク試薬の生成のために、６−カルボン酸等へと導く。
【０５９０】
模式図６は本明細書に記載されている共有結合で修飾されるペプチド及び／又はタンパク質の合成に役立つ一定の化合物および試薬をリストする。アミノ酸のための正式名称を使用する単一の文字略語が使用される。
【０５９１】
【化８９】
2014516036.tif 000098
【０５９２】
多くのアルキルグリコシドは既知の手続きによって合成することができる。例えば（Ｒｏｓｅｖｅａｒ、Ｐ．ら（１９８０年）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９：４１０８−４１１５、Ｌｉ、Ｙ．Ｔ．ら（１９９１年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６６：１０７２３−１０７２６）あるいはＫｏｅｌｔｚｏｗおよびＵｒｆｅｒ、Ｊ．Ａｍ．Ｏｉｌ  Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ．６１：１６５１−１６５５（１９８４年）、米国特許第３，２１９，６５６号明細書および米国特許第３，８３９，３１８号明細書に記載されるとおりであり、あるいは酵素学的に記載される。例えば（Ｌｉ、Ｙ．Ｔ．ら（１９９１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６６：１０７２３−１０７２６、Ｇｏｐａｌａｎ、Ｖ．ら（１９９２年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６７：９６２９−９６３８）に記載される。Ｓｅｒなどｎｏ天然のアミノ酸に対するＯ−アルキル結合はＮα−Ｆｍｏｃ−４−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノジル）−Ｌ−セリンをもたらすために過アセチルグルコースを使用してＦｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ上で実行することができる。この材料は、第一級炭素原子（位置６）に選択的に脱保護され、新しいクラスの非イオン性界面活性剤および試薬（模式図７）を生じさせるために脂肪親和性の強いアミンに連結され得る、対応する６−カルボキシル機能をもたらすために上述されるようなＴＥＭＰＯ／ＢＡＩＢを使用して、選択的に酸化する。
【０５９３】
【化９０】
2014516036.tif 000099
【０５９４】
疎水性アルキルと親水性の糖類との間の結合は、他の可能性の中で、グリコシド、チオグリコシド、アミドを含むことができる（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｓ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒａｗ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ、Ｆ．Ｗ．Ｌｉｃｈｔｅｎｔｈａｌｅｒ  ｅｄ．ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１年）、ｕｒｅｉｄ（Ａｕｓｔｒｉａｎ  Ｐａｔ．３８６，４１４（１９８８年）；Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔｒ．１１０：１３７５３６ｐ（１９８９年）；ｓｅｅ  Ｇｒｕｂｅｒ、Ｈ．およびＧｒｅｂｅｒ，Ｇ．，”Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｓｕｃｒｏｓｅ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ”ｉｎ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ  ａｓ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒａｗ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｐｐ．９５−１１６）または、エステルリンケージ（Ｓｕｇａｒ  Ｅｓｔｅｒｓ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ、Ｊ．Ｃ．Ｃｏｌｂｅｒｔ  ｅｄ（Ｎｏｙｅｓ  Ｄａｔａ  Ｃｏｒｐ．（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）（１９７４年）。
【０５９５】
本明細書に記載された試薬に対する修飾または生成物の製剤のために有用なアルキルグリコシドが選択され得る実施例は、次のものを含む：アルキルグリコシド、オクチル−、ノニル−、デシル−、ウンデシル−、ドデシル−、トリデシル−、テトラデシル−、ペンタデシル−、ヘキサデシル−、ヘプタデシル−、及びオクタデシル−Ｄ−マルトコシド、−グルコシドまたは−スクロシドｅ（すなわちスクロース・エステル）（Ｋｏｅｌｔｚｏｗ  ａｎｄ  Ｕｒｆｅｒ；Ａｎａｔｒａｃｅ、Ｍａｕｍｅｅ，Ｏｈｉｏ；Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｆ．；Ｆｌｕｋａ  Ｃｈｅｍｉｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄに従って合成される）；
ヘプチル、オクチル、ドデシル−、トリデシル−、及びテトラデシル−β−Ｄ−チオマルトシド；（Ｄｅｆａｙｅ、Ｊ．およびＰｅｄｅｒｓｏｎ、Ｃ．、「Ｈｙｄｒｏｇｅｎ  Ｆｌｕｏｒｉｄｅ，  Ｓｏｌｖｅｎｔ  ａｎｄ  Ｒｅａｇｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」  ｉｎ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ  ａｓ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒａｗ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，  ２４７−２６５（Ｆ．Ｗ．Ｌｉｃｈｔｅｎｔｈａｌｅｒ、ｅｄ．）ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９１）；Ｆｅｒｅｎｃｉ、Ｔ．Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、１４４：７−１１（１９８０））；１−ドデシルあるいは−１−オクチル・チオα−またはβ−Ｄ−グルコピラノシドなどのアルキル・チオグルコシド（Ａｎａｔｒａｃｅ、（Ｍａｕｍｅｅ、Ｏｈｉｏ；ｓｅｅ  Ｓａｉｔｏ、Ｓ．およびＴｓｕｃｈｉｙａ、Ｔ．Ｃｈｅｍ  Ｐａｈｒｍ．Ｂｕｌｌ．３３：５０３−５０８（１９８５））；アルキル・チオスクロース（例えば、Ｂｉｎｄｅｒ、Ｔ．Ｐ．およびＲｏｂｙｔ、Ｊ．Ｆ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．１４０：９−２０（１９８５））に従って合成される。アルキル・マルトリオシド（ＫｏｅｌｔｚｏｗとＵｒｆｅｒに従って合成される）；スクロースβアミノ−アルキルエーテルの長鎖脂肪族炭酸アミド；（オーストリア特許第３８２，３８１号（１９８７年）に従って合成された；Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔｒ．１０８：１１４７１９（１９８８年）およびＧｒｕｂｅｒ及びＧｒｅｂｅｒ  ９５−１１６；アミド結合によってアルキル鎖に連結されたパラチノースとイソマルトアミンの誘導体（Ｋｕｎｚ、Ｍ著、有機原料としての炭水化物中の「界面活性剤とポリマーの合成用中間体としてのスクロースに基づいた親水性のビルディングブロック」、１２７−１５３に従って合成された；尿素によってアルキル鎖に連結されたイソマルトアミンの誘導体（クンツに従って合成された）；スクロース・アミノ・アルキル・エーテル（グルーバーおよびＧｒｅｂｅｒ（ｐｐ．９５−１１６）に従って合成された）の長鎖脂肪族炭酸ウレイド；及びスクロース・アミノ・アルキル・エーテルの長鎖脂肪族炭酸アミド（オーストリアの特許３８２，３８１（１９８７）Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔｒ１０８：１１４７１９（１９８８）およびグルーバーおよびグレーバー（ｐｐ．９５−１１６．に従って合成された。
【０５９６】
いくつかの好ましいグリコシドは糖類マルトース、スクロース、グルコース、および６、８、１０、１２、または１４炭素原子のアルキル鎖に対するグリコシドまたはエステルリンケージによってリンクしたガラクトースを含む、例えば、ヘキシル−、オクチル−、デシル−、ドデシル−、及びテトラデシル−、マルトシド、スクロシド、グルコシド及びガラクトシド。身体では、これらのグリコシドは、無毒なアルコールまたは脂肪酸、および少糖類または、糖類に分解される。上述の実施例は、本明細書に請求された方法中で使用されるアルキルグリコシドのタイプの例証となる。しかしながら、目録は、網羅したようになるように意図されない。
【０５９７】
一般に、これらの界面活性剤（例えばアルキルグリコシド）は、バイオアベイラビリティを調節するように、随意に計画されているか、またはペプチドの生物学的な特性を修飾するのに選択されている、半減期、受容体選択性、毒性、生体内分布、溶解性、安定性、例えば、熱、加水分解、酸化、酵素の分解に対する耐性など、精製と処理用の設備、構造用特性、分光器の特性、化学的な及び／又は光化学の特性、触媒能力、酸化還元電位、他の分子により反応する能力、例えば、共有結合で、あるいは、非共有で、など。
【０５９８】
＜界面活性剤＞
用語「界面活性剤」は、「表面活性剤（ｓｕｒｆａｃｅ  ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎ）」を短くすることから由来する。薬学の適用では、界面活性剤は、それらが分散剤、可溶化剤および湿潤剤として作用するので、多くの目的に役立つ液体の医薬製剤に役立つ。
乳化剤は、脂肪親和性が強いか、部分的に脂肪親和性の強い物質の水溶液を安定させる。
可溶化剤は、達成することができる濃度を増加させる医薬組成物の構成要素の溶解性を増加させる。湿潤剤は、したがって、適用される表面に容易に広がるために、誘発する流体の表面張力を減少させる添加剤で、流体を有する表面をさらに「湿る」こと引き起こす。
湿潤剤は、液剤が粘膜との親密な関係、または医薬製剤が接触する他の表面積を達成する手段を提供する。したがって、界面活性剤は、ペプチド自体の特性の修飾と同様に本明細書に記載されているペプチド生成物の製剤の安定化のための有用な添加剤であり得る。
【０５９９】
具体的な実施形態では、本明細書に記載されているように、スクロースドデカノアートと同様に合成的に疎通性を有し（例えばアルキルグリコシドドデシル）、トリデシル、テトラデシル・マルトースグリコシドまたはグルコシド、アルキルグリコシド、トリデカノアートおよびテトラデカノアートは、ペプチドに対する共有結合の取付けに適している。同様に、対応するアルキルチオグリコシドは製剤開発には許容可能に安定して、合成的に利用可能な界面活性剤である。
【０６００】
広範囲の物理的な界面活性剤特性は、界面活性剤（例えば、アルキルグリコシド）の疎水性か親水性の領域の適切な修飾によって達成することができる。例えば、ドデシル・マルトースグリコシド（ＤＭ）の二分子層活性をドデシル・グルコシド（ＤＧ）のそれと比較する研究は、ＤＭの疎水性の尾（Ｌｏｐｅｚ、Ｏ．ら（２００２年）コロイド・ポリマー  Ｓｃｉ２８０：３５２−３５７）の同じ長さをもつにもかかわらず、ＤＧより３倍以上高いことが分かった。特にこの実例では、極領域（ｐｏｌａｒ  ｒｅｇｉｏｎ）（二糖類ｖｓ単糖類）の同一性は界面活性剤行動に影響を及ぼす。ペプチドに連結された界面活性剤の場合には、例えば、ペプチド生成物、本明細書に記載されている、ペプチド領域は、また全体的な分子に疎水性か親水性の特徴を寄付し得る。したがって、物理的な界面活性剤特性のチューニングは個々のペプチド標的に適している特定の物理的・薬学の特性を達成するために使用されてもよい。
【０６０１】
＜ＰＥＧ修飾＞
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されている界面活性剤に修飾されるペプチド生成物は１つ以上のＰＥＧ部分（ベロネーゼ、Ｆ．Ｍ．およびメロ、Ａ．（２００８）ＢｉｏＤｒｕｇｓ  ２２：  ３１５−３２９）を組込むためにさらに修飾される。いくつかの実例では、大きなＰＥＧ鎖の合体は、そこに生ずる薄い尿の中への腎臓中の糸球体中のペプチドの濾過を防ぐ（ネストール、Ｊ．Ｊ．（Ｊｒ．の（２００９）の現在の医薬品化学１６）：４３９９−４４１８、Ｃａｌｉｃｅｔｉ、Ｐ．およびベロネーゼ、Ｆ．Ｍ．（２００３）Ａｄｖ、Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ  ５５：１２６１−１２７７）。幾つかの実施形態では、随意のＰＥＧ、親水性鎖はペプチドまたはタンパク質の溶解性および物理的性質の平衡を保つことを可能にし、それはレンダリングされた、より長期のチェーンの結合によって疎水性、アルキルグリコシド部分。
【０６０２】
タンパク質のペグ化には同様に潜在的に負の効果があり得る。したがって、ペグ化は、いくつかのタンパク質のための生物学的活性の本質的な敗北を引き起こす場合がある。また、これは具体的なクラスの受容体用リガンドに関連するかもしれない。そのような実例では、可逆的なペグ化に利点があり得る（ペレグ−シュルマン、ティーら（２００４）Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４７：４８９７−４９０４、グリーンウォルドら（２００３）Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｖ  ５５：２１７−２５０、ロバーツ、Ｍ．Ｊ．およびハリス、Ｊ．Ｍ．（１９９８）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８７：１４４０−１４４５）。
【０６０３】
加えて、増加した分子量は、糸球体の細胞膜バリア以外の生理的なバリアの浸透を予防するかもしれない。例えば、ペグ化の高分子量形態がいくつかの組織に対する浸透を予防するかもしれないし、その結果として、治療上の効力を減少させるかもしれないことが示唆された。加えて、高分子量は、粘膜の細胞膜バリア、鼻、バッカル、膣、経口、直腸、肺送達を超えて取り込みを予防するかもしれない。どんなに遅れた取り込みも、実質的に作用持続時間を延長する肺に対する、安定した分子の投与には非常に有利かもしれない。本明細書に記載されているペプチド及び／又は蛋白質製品は口腔粘膜なバイオアベイラビリティを増加させた。また、これは、鼻腔内か他の口腔粘膜な経路に従う商業上有意なバイオアベイラビリティの達成を有する界面活性剤修飾と併用してより長期の鎖ＰＥＧ修飾が使用されることを可能にする。
【０６０４】
幾つかの実施形態では、長鎖ＰＥＧポリマー、また、短鎖ＰＥＧポリマーは本明細書に記載されているタンパク質およびペプチドの修飾に適している。吸入によって糖尿病の処置の管理はドラッグデリバリーのための新しい手法であり、肺には高度に透過性のバリア（例えばエクスベラ）がある。この適用については、肺バリアの浸透を遅らせた、ペグ化の好ましい形態は、Ｃ４００（１０，０００Ｄａに対するおよそ２５０）に対するＣ１０のよりより低い分子量範囲にある。したがって、ＰＥＧによって延長に対する主要な経路は糸球体濾過切断（６８ｋＤａより大きな）の上の「有効分子量」の達成であるが、より短いチェーンの使用は、肺疾患および他の呼吸器の症状の処置用の肺内での滞留の延長用の経路であり得る。したがって、約５００〜３０００ｄａのＰＥＧ鎖は、末梢循環への侵入を遅くする十分な大きさの、だがそれらに非常に延長された循環時間を有させるのに不十分であるである。幾つかの実施形態では、ペグ化は全身性副作用の減少させられた可能性を持った肺組織に増加した局所効力を与える本明細書に記載されている共有結合で修飾されるペプチド及び／又はタンパク質のために適用される。そのような実施形態ＰＥＧのうちのいくらかでは、約７５０から約１５００ｄａまでの範囲中の鎖は、「ＰＥＧ１Ｋ」としてまとめて指される。
【０６０５】
加えて、他のポリマーは、それらの物理的性質を最適化するために本明細書に記載されていることの化合物と併用して使用されてもよい。例えば、ポリ（２−エチル２−オキサゾリン）共役は、作用持続時間を増強するために可変的な疎水性および十分な大きさを有している（Ｍｅｒｏ、Ａ．ら（２００８）Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ：８７−９５）。糖類に対するそのようなポリマーの結合は、本明細書に記載されているペプチド及び／又はタンパク質の修飾で使用するに適している界面活性剤のクラスをもたらす。
【０６０６】
ポリエチレングリコール鎖はペプチド及び／又はタンパク質鎖上の反応性基に対するそれらの結合を許可するために官能化される。典型的な官能基は、ポリエチレングリコール・チェーン上でアミノ、対応するカルボキシルによるペプチド上のカルボキシルまたは、スルフィドリル基、アミノまたはマレイミド基など）を有する反応を許可する。実施形態では、ＰＥＧはＣ１０−Ｃ３０００鎖を含む。別の実施形態では、ＰＥＧには４０，０００Ｄａｌｔｏｎを超える分子量がある。さらに別の実施形態では、ＰＥＧには１０，０００Ｄａｌｔｏｎ未満の分子量がある。タンパク質修飾としてのＰＥＧは当該技術において周知であり、その使用は例えば米国特許第４，６４０，８３５号；米国特許第４，４９６，６８９号；米国特許第４，３０１，１４４号；米国特許第４，６７０，４１７号；米国特許第４，７９１，１９２号；及び米国特許第４，１７９，３３７号に記載される。
【０６０７】
非伝統的なタイプのＰＥＧ鎖は本来両親媒性のために修飾される。すなわち、両方の親水性のＰＥＧ構造を有しているが、脂肪酸エステルおよび他の疎水性の構成要素など疎水性領域を包含するために修飾される。例えば（Ｍｉｌｌｅｒ、Ｍ．Ａ．ら（２００６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  １７：２６７−２７４）参照；Ｅｋｗｕｒｉｂｅらの米国特許第６，３０９，６３３号；Ｅｋｗｕｒｉｂｅらの米国特許第６，８１５，５３０号；Ｅｋｗｕｒｉｂｅらの米国特許第６，８３５，８０２号。タンパク質に対するこれらの両親媒性のＰＥＧ共役は経口のバイオアベイラビリティを増加させるために元来開発されたが、それらはこの役割において比較的無効性だった。しかしながら、両親媒性のペプチドを有するそのような両親媒性のＰＥＧ共役の使用は、これらの薬剤の有用な生物学的活性を拡大するために肺内での著しく延長された滞留を与える。好ましいＰＥＧ鎖は、３０００Ｄａに対する５００Ｄａの分子量範囲にある。これらの共役の合成の方法の詳述は上述引用文で与えられる。その十分な内容物は組み入れられた本明細書である。
【０６０８】
ＰＥＧの実体には、ペプチドのように標的分子に付けられている官能基が存在しない。したがって、ＰＥＧ付加を作成するために、ＰＥＧ実体を最初に官能化しなければならず、官能化された付加はペプチドのような標的分子にＰＥＧ実体を付けるために使用される（グリーンウォルド、Ｒ．Ｂ．ら（２００３）Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ５５：２１７−２５０、ベロネーゼ、Ｆ．Ｍ．およびＰａｓｕｔ、Ｇ．（２００５）、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ、１０：１４５１−１４５８、ロバーツ、Ｍ．Ｊ．ら（２００２）Ａｄｖ、Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ  ５４に薬品を混ぜる：４５９−４７６）。1つの具体化では、部位特異的なペグ化は、ペプチド分子上のシステイン代理形成によって達成することができる。ここに記述されるように、目標ペプチドは固相法、組み換えの手段あるいは他の手段によって合成することができる。
【０６０９】
したがって、いくつかの具体化では、ここに記述されたペプチド生成物は、少なくとも１つのシステイン残渣、リース残渣あるいは他の反応的なアミノ酸残基上のアルキル基のグリコシドおよび特定のペグ化で分子のどこか他のところに修正済のリースあるいは他の反応残基を含む。
【０６１０】
別の具体化では、Ｌｙｓあるいは求核性の側鎖を備えた他の残渣残渣は、ＰＥＧ残渣の合体のために使用されてもよい。これは、ＰＥＧカルボキシルあるいはＰＥＧ炭酸塩鎖へのアミドまたはカルバマートのリンケージの使用を通じて遂行され得る。記載されるとおりの例を参照されたい（Ｖｅｒｏｎｅｓｅ、Ｆ．Ｍ．およびＰａｓｕｔ、Ｇ．（２００５）  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ１０：１４５１−１４５８）。代替アプローチはリース側鎖を修正することである、メルカプトアセチル、メルカプトプロピオニルなど（ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＳＨ）のようなＳＨを含んでいる残渣の付属によるアミノの機能。あるいは、ＰＥＧ鎖は合成の間にアミドとしてＣ末端で組込まれ得る。ＰＥＧ鎖を付ける追加の方法は、ＨｉｓとＴｒｐの側鎖を備えた反応を利用する。ＰＥＧ鎖の付属を許可するためにペプチド鎖を修正する他の同様の方法は、当技術の中で知られており、（Ｒｏｖｅｒｔｓ、Ｍ．Ｊ．ら（２００２）Ａｄｖ、Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ  ５４：４５９−４７６）によってここに具体化される。
【０６１１】
＜処方＞
１つの具体化では、共有結合で修正済のペプチドあるいはここに示されるようなタンパク質は、それがペプチド、タンパク質関連あるいは組成中の凝集を例えばさらに縮小するか、防ぐか、減少させるか、ペプチド、タンパク質自己会合あるいは自己会合を縮小するか、主題に処理された時他のペプチドあるいはタンパク質との関連あるいは凝集を縮小することを処方で提供される。
【０６１２】
高いタンパク濃度の自己会合は治療の処方において問題である。例えば、自己会合は、水溶液中の濃縮単クローン抗体の粘性を増加させる。濃縮インスリン製剤は、自己凝集によって不活性化される。これらの自己を関連させるタンパク質相互作用は、特に高いタンパク濃度で、多くの治療学（Ｃｌｏｄｆｅｌｔｅｒ、Ｄ．Ｋ．ら（１９９８）遺伝子操作による生物製造事実１５：２５４−２６２）の生物活性を縮小するか、調整するか、消す。注入あるいは他の手段によって分娩用高濃度で公式化された治療のタンパク質は、物理的に不安定になるか、あるいはこれらのタンパク質相互作用の結果不溶性になることができる。
【０６１３】
ペプチドとタンパク質の処方の準備での重要な挑戦は、製造可能で安定した剤形を開発することである。処理と取り扱いには重大な物理的な安定特性は予測するためにしばしば貧弱に特徴づけられ困難である。
タンパク質相互作用および溶解度特性によって決定されるように、連合、凝集、結晶化および沈澱反応のように様々な物理的な不安定性現象に遭遇する。これは重要な生産に帰着する、安定、分析的、また分娩の挑戦である。ペプチドのための処方、および高い薬注（ｍｇ／ｋｇの命令の）を要求するタンパク薬物の開発は、多くの臨床の状況で必要である。例えば、ＳＣルートを使用して、およそ＜１．５  ｍＬは許し得る投与ボリュームである。これは、適切な薬注を達成することを＞１００ｍｇ／ｍＬのタンパク濃度に要求し得る。同様の考察は単クローン抗体のための高濃度凍結乾燥された処方を開発する際に存在する。一般に、より高いタンパク濃度は、より小さな注入ボリュームが使用されることを可能にするが、それは患者の安心、便宜およびコンプライアンスにとって非常に重要である。ここに記述された界面活性剤に修正済の化合物は、そのような凝集の出来事を最小化することを目指しており、ここに記述されるような少量の界面活性剤の使用を通じてさらに促進され得る。
【０６１４】
注入が多くの人々のための投与の不快なモードであるので、ペプチド治療学を処理する他の手段は求められた。例えば、特定のペプチドおよびタンパク質治療学は鼻腔内、バッカル、口、膣、吸入、あるいは他の口腔粘膜な投与によって、処理され得る。例は、商用鼻内噴霧処方として処理されるナファレリン（Ｓｙｎａｒｅｌ（登録商標））およびカルシトニンである。共有結合で修飾済のペプチドおよび（または）ここに記述されたタンパク質は、そのような口腔粘膜な投与を促進することを目指しており、そのような処方は、ここに記述されるような少量の界面活性剤の使用を通じてさらに促進されるかもしれない。
【０６１５】
典型的な処方パラメーターは、最適解水素指数、バッファーおよび安定する添加剤の淘汰を含む。さらに、凍結乾燥されたケーキ再構成は、凍結乾燥された処方あるいは粉末の処方にとって重要である。一層で重要な問題は、自己会合上のタンパク質処方の粘性の変化を含む。粘性の変化は、例えば、鼻腔内のスプレー、肺性のスプレー、あるいは口腔スプレーのためのスプレー（エーロゾル）分娩で著しく分娩特性を修飾することができる。更に、増加した粘性は、注射器かｉｖラインによる注入分娩をより困難か不可能にすることができる。
【０６１６】
ペプチドの完全性及び生理活性を安定させ維持する多くの試みが報告されている。幾つかの試みは、特にインシュリンポンプ・システムのために、熱変性と凝集に対する安定化を生んでいる。ポリマー界面活性物質が記載されている。（Ｔｈｕｒｏｗ，  Ｈ．  ａｎｄ  Ｇｅｉｓｅｎ，  Ｋ．  （１９８４）  Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ  ２７：  ２１２−２１８；  Ｃｈａｗｌａ，  Ａ．Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８５）  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ３４：  ４２０−４２４）。これらの化合物によるインスリンの安定化は立体的性質であると考えられた。使用される他のシステムの中に、糖類（Ａｒａｋａｗａ，  Ｔ．  ａｎｄ  Ｔｉｍａｓｈｅｆｆ，  Ｓ．Ｎ．  （１９８２）  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２１：  ６５３６−６５４４）、アミノ酸などのオスモライト  （Ａｒａｋａｗａ，  Ｔ．  ａｎｄ  Ｔｉｍａｓｈｅｆｆ，  Ｓ．Ｎ．  （１９８５）  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｊ  ４７：  ４１１−４１４）、及び尿素などの水構造ブレーカー  （Ｓａｔｏ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８３）  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ７２：  ２２８−２３２）である。タンパク質又はペプチドの分子内の疎水的相互作用を調節することにより、これらの化合物は、その作用を及ぼす。
【０６１７】
様々なペプチド、ペプチド又はタンパク質は本明細書に記載され、本明細書に記載されている共有結合型界面活性試薬のいずれかで修正され得る。好都合に、本明細書に記載されているペプチド修飾は、親水性（例えば糖類）及び疎水性（例えばアルキル鎖）の基を含む界面活性物質の共有結合を含み、それによって、生理学的条件におけるペプチドの安定化を可能にする。幾つかの実施形態において、ペプチドに対する親水基及び疎水基（例えば配糖体界面活性物質）を含む部分の共有結合、及び／又は本明細書に記載されているタンパク質は、ペプチドのアミノ酸配列を修飾する必要性、及び／又は安定性を増強する（例えば、凝集を減少させる）ためのタンパク質を取り除く。
【０６１８】
幾つかの実施形態において、製剤は、本明細書に記載されている界面活性物質由来の試薬により変更され、さらに製剤中で界面活性物質と関連するペプチドを含む、少なくとも１つの薬物を含み、ここで、界面活性物質は、例えば糖類、アルキル配糖体又は他の賦形剤でさらに構成され、点滴剤、噴霧剤、エアロゾル、凍結乾燥物、噴霧剤乾製品、注入物質、及び持続放出フォーマットからなる群から選択されたフォーマットで投与することができる。噴霧剤及びエアロゾルは、適切な調剤者の使用を通じて達成され、鼻腔内、トランスバッカル、吸入又は他の経粘膜な経路によって投与され得る。凍結乾燥物は、マンニトール、糖類、サブミクロンの無水α−ラクトース、ゼラチン、生学適合性ゲル剤又はポリマーなどの他の化合物を含有し得る。持続放出フォーマットは、眼球インサート、受食性微小粒子、加水分解性ポリマー、腫脹粘膜付着性微粒子、ｐＨ感受性微小粒子、ナノ粒子／ラテックス・システム、イオン交換樹脂、及び他のポリマー・ゲル剤及びインプラントであり得る（Ｏｃｕｓｅｒｔ，  Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐ．，  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ；  Ｊｏｓｈｉ，  Ａ．，  Ｓ．  Ｐｉｎｇ  ａｎｄ  Ｋ．  Ｊ．  Ｈｉｍｍｅｌｓｔｅｉｎ，  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ  ９１／１９４８１）。有意な経口バイオアベイラビリティも達成可能である。
【０６１９】
本明細書に記載されているペプチドとタンパク質の修飾は緩和し、ある場合には、有機溶媒の必要性を取り除き得る。トレハロース、ラクトース、及びマンニトール及び他の糖類は凝集を予防するために使用されている。抗ＩｇＥヒト化モノクローナル抗体の凝集は、３００：１乃至５００：１（賦形剤：タンパク質）の範囲又はそれ以上の分子比で、トレハロースとともに製剤によって最小化された。しかしながら、粉末剤は、エアロゾル投与には過度に密着力があり不適当であったか、あるいは保管中に望まれないタンパク質糖化反応を示した（Ａｎｄｙａ，  Ｊ．Ｄ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ  １６：  ３５０−３５８）。発見された添加剤の各々は、異物代謝、刺激又は毒性など治療学に対する添加剤としての限界を有し、又は高コストである。本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質との使用のために考えられるのは、効果的で、非刺激性かつ無毒な賦形剤であり、該賦形剤は自身が自然な糖、脂肪酸、又は長鎖アルコールから成り、水溶液中や、乾燥ペプチドの水性再構成及び／又は、血漿又は唾液など水性の体液による生理的水性再構成によるインサイツのタンパク質製剤上で、凝集を最小化するために使用され得るため、異物代謝を必要としない。
【０６２０】
他の製剤の構成要素は、バッファー及び生理的食塩、アプロチニン及び大豆トリプシン阻害剤、アルファ−１−アンチトリプシンなどの無毒なプロテアーゼ阻害剤、及びプロテアーゼを不活性化するモノクローナル抗体などを含む可能性もある。バッファーは、酢酸塩、シトラート、グルコン酸塩、フマル酸塩、リンゴ酸塩、ポリリシン、ポリグルタミン酸、キトサン、デキストラン硫酸塩などの有機物、又はリン酸塩などの無機物、及び硫酸塩を含む可能性もある。そのような製剤は、ベンジルアルコールのような低濃度の静菌剤及びその他同種のものを追加的に含有し得る。
【０６２１】
鼻腔内投与に適している製剤は、ヒドロフルオロアルカンなど許容可能な蒸発溶剤中の、本明細書に記載されている修飾ペプチド及び／又はタンパク質の溶液又は懸濁液も含む。そのような製剤は、定量吸入器（ＭＤＩ）からの投与に適しており、投与の部位からの運動の欠如、低刺激及び殺菌の必要性がないことといった利点を有する。そのような製剤は、許容可能な賦形剤又はサブミクロンの無水α−ラクトースなどの充填剤も含有し得る。
【０６２２】
さらに別の態様において、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質は増加した貯蔵寿命を示す。本明細書で使用されているように、句「貯蔵寿命」は、生成物が使用又は摂取に不適当とならずに、保存され得る時間の長さとして広く記載される。本明細書に記載されている組成物の「貯蔵寿命」は、組成物の品質の容認できる喪失に相当する時間を示すこともできる。本明細書で使用されているように、組成上の貯蔵寿命は、使用期限とは区別される；「貯蔵寿命」は、本明細書に記載されている組成物の品質に関連する一方、「使用期限」は組成物の製造要件及び試験要件について、より関係する。例えば、その「使用期限」を経過した組成物はまだ安全で効果的かもしれないが、最適な品質はもはや製造業者によって保証されない。
【０６２３】
＜方法＞
１つの態様において、本明細書に記載されている治療用組成物の効果的な量を必要とする被験体に投与する方法が提供される。本明細書で使用されているように、「治療上効果的な量」は、本明細書の目的のために「効果的な量」と交換可能であり、技術分野で知られているような考察によって決定される。量はその疾患に苦しんでいる処置被験体で、所望の薬物媒介効果を達成するのに効果的でなければならない。治療上効果的な量は、限定されないが、当業者によって選択された適切な測定、例えば、改善された生存率、より迅速な回復、症状の改善又は除去、又は他の許容可能なバイオマーカー又は代用マーカーも含む。
【０６２４】
本明細書に記載されている組成物は、限定されないが、例えばヒトなど、処置を必要としている脊椎動物の被験体へ送達される。その上、処理されている条件次第で、これらの治療用組成物は処方され、全身又は局部的に処方され投与され得る。製剤と投与用の技術は、”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”  （Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ，  Ｅａｓｔｏｎ  Ｐａ．）の最新版において見られ得る。適切な経路は、筋肉内、皮下、静脈内、又は腹腔内の投与を含む非経口送達だけでなく、例えば、経口、又は、鼻腔内、バッカル、眼、膣、直腸などの経粘膜の投与を含み得る。
【０６２５】
方法の幾つかの実施形態において、投与用のペプチド生成物の効果的な量は、約０．１μｇ／ｋｇ／日乃至約１００．０μｇ／ｋｇ／日、又は０．０１μｇ／ｋｇ／日乃至約１ｍｇ／ｋｇ／日、又は０．１μｇ／ｋｇ／日乃至約５０ｍｇ／ｋｇ／日である。幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は非経口的に投与される。幾つかの実施形態において、ペプチド生成物は、皮下に投与される。幾つかの実施形態において、ペプチド生成物の投与の方法は経鼻吸入法である。
【０６２６】
しかしながら、処置を必要としている任意の特定の被験体用の、具体的な用量レベル及び投与量の頻度は変動し得、また、使用された具体的な化合物の活性、その化合物の代謝安定性及び作用持続時間、年齢、体重、健康状態、性別、食事、投与の様式及び時間、分泌の割合、複合薬、特定の疾病の重症度、及び療法を受ける宿主などの様々な要因に依存するだろうということを理解されたい。
【０６２７】
ひとつの実施形態において、例えば、受容体結合又は酵素活性といった、組成物又は分子の生物作用を増加又は維持するために、界面活性物質に対する共有結合によって分子を化学的に修飾する方法が提供される。幾つかの実施形態において、分子はペプチドである。方法は、ポリエチレングリコールなどのポリマーに対する組成物中の分子の共有結合を含むさらなる修飾を含むことができる。
【０６２８】
方法は、限定されないが、ペプチド及び／又はタンパク薬物の免疫原性を減少又は除去し、無刺激性で、抗細菌又は抗菌の活性を有し、薬物の安定性又はバイオアベイラビリティを増加させており、その薬物のバイオアベイラビリティ変動を減少させ、初回通過肝臓クリアランスを防ぎ、任意の副作用を減少又は除去する組成物を含む、本明細書に記載されている組成物のすべての態様を含む。本明細書で使用されているように、用語「免疫原性」は、免疫反応を刺激する特定の物質又は組成物、又は薬剤の能力である。本明細書に記載されている、共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質の免疫原性は、技術分野で既知の方法によって確認される。
【０６２９】
少なくとも１つのアルキル配糖体に共有的に結合され、脊椎動物へ送達されるペプチドを含む薬物組成物を投与する方法も提供され、ここで、アルキルは１乃至３０の炭素原子を有するか、又さらには６乃至１６の炭素原子の範囲内にあり、アルキル配糖体は、薬物の安定性、バイオアベイラビリティ及び／又は作用持続時間を増加させる。
【０６３０】
別の実施形態において、アルキルが１乃至３０の炭素原子を有する、少なくとも１つのアルキル配糖体に対してペプチド鎖を共有的に結合することにより、ペプチド及び／又はタンパク薬物の免疫原性を減少又は除去する方法が提供される。
【０６３１】
本出願の全体にわたって、様々な刊行物が参照される。当業者は、これらの刊行物の参照された開示が、本明細書での参照によって本出願へ組み入れられると理解するだろう。
【０６３２】
＜処置の方法＞
幾つかの実施形態において、手術後又は慢性的な疼痛を含む疼痛の処置のための方法が本明細書で提供され、本明細書に記載されている界面面活性剤修飾ペプチド及び／又はタンパク質生成物（例えば、式Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩのペプチド生成物）をそれらを必要としている個体へ投与することを含む。そのような実施形態の幾つかにおいて、本明細書に記載されているオピオイドアナログは、依存性又は習慣性でなく、及び／又は、現在の薬剤（例えばコデイン）に比べてより低い投与量で投与され、かつ現在の薬剤に比べてより長く持続する。
【０６３３】
幾つかの実施形態において、副甲状腺機能低下症及び／又は骨量密度の減少に関連する疾病の予防又は処置のための方法が提供され、本明細書に記載されている界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質生成物（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）の治療上効果的な量を、それらを必要とする個体へ投与することを含む。幾つかの実施形態において、骨量密度の減少によって特徴付けられた疾病は、限定されないが、骨粗鬆症、オステオペニア、閉経後骨粗鬆症、パジェット病、グルココルチコイド誘発性骨粗鬆症、老年骨粗鬆症、体液性高カルシウム血症、又はその他同種のものを含む。
【０６３４】
幾つかの実施形態において、副甲状腺機能低下症の処置のための方法が本明細書に提供され、本明細書に記載されている界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質生成物（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）の治療上効果的な量を、それらを必要としている個体へ投与することを含む。幾つかの実施形態において、副甲状腺機能低下症は骨量密度の減少に関連する。
【０６３５】
骨修復を刺激し及び／又は骨インプラントの移植を促すための方法が本明細書でさらに提供され、本明細書に記載されている界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質生成物（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）の治療上効果的な量を、それらを必要としている個体へ投与することを含む。
【０６３６】
またさらなる実施形態において、骨密度を増加させ及び／又は骨折（例えば脊椎骨骨折、股関節部骨折、又はその他同種のもの）の発生を減少させるための方法が本明細書に提供され、本明細書に記載されている界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質生成物（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）の治療上効果的な量を、それらを必要としている個体へ投与することを含む。
【０６３７】
幾つかの実施形態において、体液性高カルシウム血症の処置のための方法が本明細書に提供され、本明細書に記載されている界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質生成物（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）の治療上効果的な量を、それらを必要としている個体へ投与することを含む。幾つかの実施形態において、体液性高カルシウム血症は腫瘍に関連する。そのような実施形態の幾つかにおいて、ペプチド生成物（例えば、化学式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）は、ＰＴＨ又はＰＴＨｒＰのインバースアゴニスト或いはアンタゴニストである。
【０６３８】
上記の方法の幾つかの実施形態において、界面活性物質に共有的に付着しているペプチド及び／又はタンパク質は、ＰＴＨ、ＰＴＨｒＰ又はそのアナログである。幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）は、予防的に投与され、限定されないが、骨粗鬆症、骨減少症、閉経後骨粗鬆症、パジェット病、グルココルチコイド誘発性骨粗鬆症、老年骨粗鬆症、又はその他同種のものを含む、骨密度の損失に関連する任意の疾病の発生を遅らせる。幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）は、治療的に投与され、限定されないが、骨粗鬆症、骨減少症、閉経後骨粗鬆症、パジェット病、グルココルチコイド誘発性骨粗鬆症、体液性高カルシウム血症、又はその他同種のものを含む、骨密度の損失に関連する任意の疾病の進行を遅らせる。幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）は、予防的及び／又は治療的に投与され、骨減少症から骨粗鬆症への進行を遅らせる。幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）は、予防的及び／又は治療的に投与され、骨密度のさらなる損失を減少させるか停止させ、その結果疾患を安定化させる。
【０６３９】
幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）は非経口的に投与される。幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）は皮下に投与される。幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）は、経鼻吸入法によって投与される。
【０６４０】
上記の方法の幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）は、現在知られている治療学（例えば組み換えＰＴＨ、ビスホスホネート、抗体デノスマブ、又は同種のもの）を含む製薬に比べてより長い作用時間を有する。幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）は、現在知られている治療学（例えば組み換えＰＴＨ、ビスホスホネート、抗体デノスマブ、又は同種のもの）に関連する副作用（例えば顎内の骨壊死、皮膚感染、又は同種のもの）を減少又は改善させている間、現在知られている治療学（例えば組み換えＰＴＨ、ビスホスホネート、抗体デノスマブ、又は同種のもの）を含む製剤に比べて、より長い期間（例えば＞２年）投与される。上記の方法の幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）は、ＰＴＨ又はＰＴＨｒＰのアゴニストである。上記の方法の幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）は、ＰＴＨ又はＰＴＨｒＰのアンタゴニストである。上記の方法の幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）は、ＰＴＨ又はＰＴＨｒＰのインバースアゴニストである。
【０６４１】
幾つかの実施形態において、インスリン感受性の減少に関連する疾病の予防及び／又は処置のための方法が本明細書に提供され、本明細書に記載されている界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質生成物（例えば、式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ、又は式３−Ｖのペプチド生成物）の治療上効果的な量を、それらを必要としている個体へ投与することを含む。幾つかの実施形態において、インスリン感受性の減少によって特徴付けられた疾病は、限定されないが、メタボリック症候群、肥満症関連のインスリン抵抗性、高血圧症、高Ｃ反応性タンパク質に関連する全身性炎症、糖尿病、又は同種のものを含む。
【０６４２】
限定されないが、肥満症、メタボリック症候群、２型糖尿病、高血圧症、アテローム性動脈硬化又は同種のものを含む、インスリン抵抗性に関連する疾病を処置する方法が本明細書に提供され、少なくとも１つのアルキル配糖体に共有的に結合され、脊椎動物に送達されるペプチドを含む医薬組成物を投与することを含み、ここでアルキルは１乃至３０の炭素原子を有するか、又はさらに６乃至１８の炭素原子（例えば、式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ又は式３−Ｖのペプチド生成物）の範囲内にあり、ここで、ペプチドに対するアルキル配糖体の共有結合は、薬物の安定性、バイオアベイラビリティ及び／又は作用持続時間を増加させる。
【０６４３】
また、インスリン抵抗性の処置のための方法が本明細書に記載され、本明細書に記載されている界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質生成物（例えば、式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ、又は式３−Ｖのペプチド生成物）の治療上効果的な量を、それらを必要としている個体へ投与することを含む。幾つかの実施形態において、インスリン抵抗性はメタボリック症候群（症候群Ｘ）及び／又は糖尿病に関連する。
【０６４４】
インスリンに対する身体の再感作を刺激するための方法が本明細書にさらに提供され、本明細書に記載されている界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質生成物（例えば、式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ、又は式３−Ｖのペプチド生成物）の治療上効果的な量を、それらを必要としている個体へ投与することを含む。
【０６４５】
またさらなる実施形態において、減量によってインスリン感受性を高めるための方法が本明細書に提供され、本明細書に記載されている界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質生成物（例えば、式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ、又は式３−Ｖ、及び図１−１乃至図１−７の表１内、及び図２−１乃至図２−４の表２内のペプチド生成物）の治療上効果的な量を、それらを必要としている個体へ投与することを含む。
【０６４６】
また、糖尿病又は糖尿病前症を処置する方法が本明細書に提供され、上記及び本明細書、及び図１−１乃至図１−７の表１内及び図２−１乃至図２−４の表２内に記載されているペプチド生成物の治療上効果的な量を、それらを必要としている個体へ投与することを含む。
【０６４７】
糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎障害、インスリン抵抗性、高血糖症、高インスリン血症、メタボリック症候群、糖尿病合併症、遊離脂肪酸又はグリセロールの高い血中濃度、高脂血症、肥満症、高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化、急性心循環器症候群、梗塞、虚血再灌流高血圧症から選択される疾病の進行又は開始を処置又は遅らせるための方法が本明細書に提供され、本明細書、及び図１−１乃至図１−７の表１内、及び図２−１乃至図２−４の表２内に記載されているペプチド生成物の治療上効果的な量を、それらを必要とする個体へ投与することを含む。追加の実施形態において、創傷治癒の遅れを処置するための方法が提供され、本明細書、及び図１−１乃至図１−７の表１内、及び図２−１乃至図２−４の表２内に記載されているペプチド生成物の治療上効果的な量を、それらを必要とする個体へ投与することを含む。
【０６４８】
１つの実施形態において、処置されるべき前記疾病は糖尿病である。１つの実施形態において、処置されるべき前記疾病はインスリン抵抗性である。１つの実施形態において、処置されるべき前記疾病はメタボリック症候群である。１つの実施形態において、前記ペプチドの前記効果的な量は約０．１μｇ／ｋｇ／日乃至約１００．０μｇ／ｋｇ／日である。
【０６４９】
１つの実施形態において、投与の方法は非経口である。１つの実施形態において、投与の方法は経口である。１つの実施形態において、投与の方法は皮下である。１つの実施形態において、投与の方法は経鼻吸入法である。
【０６５０】
体重増加を減少させ、減量を誘発する方法が本明細書にさらに提供され、本明細書及び図１−１乃至図１−７の表１内及び図２−１乃至図２−４の表２に記載されているペプチド生成物の治療上効果的な量を、それを必要している個体へ投与することを含む。幾つかの実施形態において、体重増加は、メタボリック症候群に関連する。
【０６５１】
低血糖症を処置する方法が本明細書にさらに提供され、本明細書及び図１−１乃至図１−７の表１内及び図２−１乃至図２−４の表２内に記載されているペプチド生成物の治療上効果的な量を、それを必要している個体へ投与することを含む。
【０６５２】
糖尿病の処置のための方法も本明細書に提供され、本明細書及び図１−１乃至図１−７の表１内及び図２−１乃至図２−４の表２内に記載されているペプチド生成物の治療上効果的な量を、それを必要している個体へ投与することを含み、ここで、前記治療剤は、糖尿病薬、抗肥満剤、満腹薬剤、抗炎症剤、抗血圧治療薬、抗アテローム性動脈硬化剤及び脂質低下剤から選択される。
【０６５３】
上記の方法の幾つかの実施形態において、界面活性物質に共有的に結合されているペプチド及び／又はタンパク質は、グルカゴン又はＧＬＰ−１ペプチド、又はそのアナログである。幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ又は式３−Ｖのペプチド生成物）は、予防的に投与され、限定されないが、メタボリック症候群、高血圧症、糖尿病、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、高脂血症、アテローム性動脈硬化、全身性の炎症又はその他同種のものを含む、インスリン抵抗性関連の任意の疾病の発生を遅らせる。幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ又は式３−Ｖのペプチド生成物）は、治療上投与され、メタボリック症候群、高血圧症、糖尿病、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、高脂血症、アテローム性動脈硬化、全身性の炎症又はその同種のものに関連する任意の疾病の進行を遅らせる。幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ又は式３−Ｖのペプチド生成物）は、予防的及び／又は治療的に投与され、糖尿病に対するインスリン抵抗性の進行を遅らせる。幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ又は式３−Ｖのペプチド生成物）は、予防的及び／又は治療的に投与され、インスリン抵抗性のさらなる損失を減少又は一時停止させ、その結果疾患を安定化させる。
【０６５４】
幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ又は式３−Ｖのペプチド生成物）は、非経口的に投与される。幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ又は式３−Ｖのペプチド生成物）は、皮下に投与される。幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ又は式３−Ｖのペプチド生成物）は、経鼻吸入法によって投与される。
【０６５５】
上記の方法の幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ又は式３−Ｖのペプチド生成物）は、現在知られている治療学（例えばエクセナチド、メトホルミン、又は同種のもの）を含む薬剤に比べてより長期の作用持続時間を有する。
【０６５６】
＜ＰＴＨアナログによる併用療法＞
上記の方法の幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）は、ビスホスホネート（例えばアレンドロネート）又はストロンチウム塩を含む骨吸収阻害剤、あるいはエストロゲン様効果を有する物質（例えばエストロゲン）、あるいは選択的エストロゲン受容体モジュレーター（例えばラロキシフェン、タモキシフェン、ドロロキシフェン、トレミフェン、イドキシフェン、又はレボルメロキシフェン）、あるいはカルシトニン様物質（例えばカルシトニン）、あるいはビタミンＤアナログ、又はカルシウム塩と組み合わせて投与される。治療剤は、任意の順で同時又は連続して随意に投与される。一例として、上記の方法の幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）の第１のレジメンは、それらを必要としている個体に投与され、該レジメンの後にビスホスホネート療法の第２のレジメンが続く。一例として、他の幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式２−Ｉ−Ａ、２−ＩＩＩ、２−Ｖ、２−ＶＩ又は２−ＶＩＩのペプチド生成物）の第１のレジメンは、それらを必要としている個体に投与され、続いて休薬期間があり、その後エストロゲン受容体モジュレーターの第２レジメンが続く。
【０６５７】
＜ＧＬＰアナログによる併用療法＞
上記の方法の幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ又は式３−Ｖのペプチド生成物）は、抗糖尿病薬、抗肥満剤、抗高圧症薬、抗アテローム性動脈硬化剤、及び脂質低下剤を含む群から選択されたメタボリック症候群の処置の他の方法と組み合わせて投与される。一例として、本明細書に記載されている界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質生成物と組み合わせた投与に適している有効な抗糖尿病薬は、ビグアニド、スルホニル尿素誘導体、グルコシダーゼ阻害剤、ＰＰＡＲγアゴニスト、ＰＰＡＲα／γデュアル・アゴニスト、ａＰ２阻害剤、ＤＰＰ４阻害剤、インスリン増感剤、ＧＬＰ−１アナログ、インスリン、及びメグリチニドを含む。追加の例は、メトホルミン、グリブライド、グリメピリド、グリピリド（ｇｌｉｐｙｒｉｄｅ）、グリピジド、クロルプロパミド、グリクラジド、アカルボース、ミグリトール、ピオグリタゾン、トログリタゾン、ロシグリタゾン、ムラグリタザール（ｍｕｒａｇｌｉｔａｚａｒ）、インスリン、Ｇｌ−２６２５７０、イサグリタゾン（ｉｓａｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ＪＴＴ−５０１、ＮＮ−２３４４、Ｌ８９５  ６４５、ＹＭ−４４０、Ｒ−１１９７０２、Ａ１９６７７、レパグリニド、ナテグリニド、ＫＡＤ  １１２９、ＡＲ−ＨＯ  ３９２４２  、ＧＷ−４０  Ｉ  ５  ４４、ＫＲＰ２  Ｉ  ７、ＡＣ２９９３、ＬＹ３  Ｉ  ５９０２、ＮＶＰ−ＤＰＰ−７２８Ａ、及びサクサグリプチン（ｓａｘａｇｌｉｐｔｉｎ）を含む。
【０６５８】
上記の方法の幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ又は式３−Ｖのペプチド生成物）は、有効な抗肥満剤の群から選択されたメタボリック症候群の処置の他の方法と組み合わせて投与される。一例として、本明細書に記載されているペプチド生成物との投与に適している有効な抗肥満剤は、ベータ３アドレナリンアゴニスト、リパーゼ阻害剤、セロトニン（及びドーパミン）再取込み阻害剤、甲状腺受容体ベータ化合物（ｔｈｙｒｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｅｔａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）、ＣＢ−１アンタゴニスト、ＮＰＹ−Ｙ２及びＮＰＹ−Ｙ４受容体アゴニスト、及び食欲抑制剤を含む。これらの類の具体的なメンバーは、オルリスタット、ＡｆＬ−９６２、Ａ１９６７ｌ、Ｌ７５０３５５、ＣＰ３３１６４８、シブトラミン、トピラマート、アキソキン（ａｘｏｋｉｎｅ）、デキサンフェタミン、フェンテルミン、フェニルプロパノラミン、リモナバント（ｒｉｍｏｎａｂａｎｔ）（ＳＲ１  ４Ｉ７１６４）及びマジンドールを含む。
【０６５９】
上記の方法の幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ又は式３−Ｖのペプチド生成物）は、有効な脂質低下剤の群から選択されたメタボリック症候群の他の治療法と組み合わせて投与される。一例として、本明細書に記載されているペプチド生成物との投与に適している有効な脂質低下剤は、ＭＴＰ阻害剤、コレステロールエステル転送タンパク質、ＨＭＧ  ＣｏＡリダクターゼ阻害剤、スクワレン合成酵素阻害剤、フィブリン酸誘導体、ＬＤＬ受容体活性の上向き調節因子（ｕｐｒｅｇｕｌａｔｏｒ）、リポキシゲナーゼ阻害剤、及びＡＣＡＴ阻害剤から成る群から選択された薬剤を含む。これらのクラスからの具体的な例は、プラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ニスバスタチン、ビサスタチン、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブレート、アバシミブ（ａｖａｓｉｍｉｂｅ）、ＴＳ−９６２、ＭＤ−７００、ＣＰ−５２９４１  ４及びＬＹ２９５  ４２７を含む。
【０６６０】
上記の方法の幾つかの実施形態において、界面活性物質修飾ペプチド及び／又はタンパク質（例えば、式３−Ｉ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ａ、３−ＩＩＩ−Ｂ又は式３−Ｖのペプチド生成物）は、動物モデルとヒトにおいて前満腹感を示すことが知られているペプチドホルモン及びそのアナログと組み合わせて投与される。本明細書に記載されているペプチド生成物と肥満症の処置のための長時間作用性の満腹剤の組み合わせが、本明細書に提示された実施形態の範囲内で熟慮される。そのようなペプチド満腹剤の例は、ＧＬＰ−１、膵臓ポリペプチド（ＰＰ）、コレシストキニン（ＣＣＫ）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、アミリン、カルシトニン、ＯＸＭ、神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）、及びそのアナログ含む（Ｂｌｏｏｍ，  Ｓ．Ｒ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  Ｍｏｌ  Ｉｎｔｅｒｖ  ８：  ８２−９８；  Ｆｉｅｌｄ，  Ｂ．Ｃ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ｂｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ６８：  ８３０−８４３）。
【０６６１】
限定されないが、レプチン、グレリン及びＣＡＲＴ（コカイン及びアンフェタミン調節転写）アナログ及びアンタゴニストを含むペプチドホルモンと組み合わせた、本明細書に記載されたペプチド生成物の投与を含む肥満症の処置のための方法もまた本明細書に提示された実施形態の範囲内で熟考される。
【０６６２】
身体中の追加のペプチド生成物は脂肪細胞又は肥満状態（アディポカイン）に関連し、炎症誘発効果があると知られている(Gonzalez-Periz, A. and Claria, J. (2010) ScientificWorldJournal 10: 832-856).そのような薬剤は、本明細書に記載されているペプチド生成物と組み合わせて使用された時、追加の好都合な作用を有する。本明細書に記載されているペプチド生成物と組み合わせて使用された時に有益な効果を提供する薬剤の例は、アディポネクチン、ケメリン、ビスファチン、ネスファチン、オメンチン（ｏｍｅｎｔｉｎ）、レジスチン、ＴＮＦアルファ、ＩＬ−６及びオベスタチンのアナログ及びアンタゴニストを含む。
【０６６３】
＜投薬＞
本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質は、多くの疾患状態で有益な治療効果を与えるために、任意の量で投与され得る。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質は、炎症の処置に役立つ。実施形態において、本明細書に提示された化合物は、手術後又は慢性的な疼痛の調節に有益な活性を与える。実施形態において、本発明のペプチドは、疼痛を調節する処置の他の形態よりも高い又は低い濃度で患者に投与される。また別の実施形態において、本発明のペプチドは相乗的な治療効果をもたらすために他の化合物と投与される。
【０６６４】
代表的な送達レジメンは、経口、非経口（皮下、筋肉内及び静脈注入を含む）、直腸、バッカル（舌下を含む）、経皮、吸入、眼性、及び鼻腔内を含む。ペプチドの送達のために魅力的かつ広く使用される方法は、徐放注入可能な製剤の皮下注入を要する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質は、皮下、鼻腔内、及び吸入投与に役立つ。
【０６６５】
正確な用量及び組成物、及び最も適切な送達レジメンの選択は、とりわけ、選択されたペプチドの薬理学的性質、処理されている疾病の性質及び重症度、及びレシピエントの健康状態及び知力に影響される。追加的に、投与経路は吸収される物質の差異量をもたらす。異なる経路によるペプチドの投与に関するバイオアベイラビリティは、特に可変的であり、１％未満から約１００％に近い量が見られる。典型的には、静脈内、腹腔内又は皮下の注入以外の経路からのバイオアベイラビリティは、５０％以下である。
【０６６６】
一般に、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質、又はその塩は、１日当たり約０．００１から２０ｍｇ／ｋｇ体重の間、１日当たり約０．０１から１０ｍｇ／ｋｇ体重の間、１日当たり約０．１から１０００μｇ／ｋｇ体重の間、又は１日当たり約０．１から約１００μｇ／ｋｇ体重の間の量で投与される。投与経路は異なる。例えば、本明細書に記載されている共有的な修飾オピオイドペプチド及び／又はタンパク質、又はその塩は、１日当たり約０．１から１０００μｇ／ｋｇ体重の間、又は１日当たり約０．１から約１００μｇ／ｋｇ体重までの間の量で皮下注入によって投与される。一例として、５０ｋｇのヒトの女性の被験者については、活性成分の一日の用量は、約５から約５０００μｇ、又は約５から約５０００μｇまでで皮下注入によるものである。投与経路、複合の効能、観察された薬物動態特性及び適用可能なバイオアベイラビリティ、及び処置されている活性剤及び疾患次第で、異なる用量が必要となるだろう。投与が吸入によるものである代替的な実施形態において、一日の用量は毎日２回、１０００から約２０，０００μｇである。馬、イヌ及び家畜などの他の哺乳動物においては、より高い用量が必要とされ得る。最も効果的な結果を達成するために必要とされるように、この投与量は、単一の投与によって、複数の適用によって、又は徐放によって、従来の医薬組成物で送達され得る。
【０６６７】
薬学的に許容可能な塩は、毒性副作用のない親ペプチドの所望の生物学的活性を保持する。そのような塩の例は、（ａ）例えば塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸及び同種のものの無機酸で形成された酸付加塩；及び、例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタリンスルホン酸、ナフタレン二スルホン酸、ポリガラクツロン酸及びその他同種のものなどの有機酸で形成された塩；（ｂ）亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウム、及び同種のものなどの多価金属カチオン；又はＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン又はエチレンジアミンから形成された有機カチオンで形成された塩基付加塩又は複合物、又は（ｃ）例えば、亜鉛タンニン酸塩及び同種のものである、（ａ）と（ｂ）の組み合わせである。
【０６６８】
幾つかの実施形態において、薬学的に許容可能で無毒な担体を有する混合物中の、活性成分としての本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質、又はその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物もまた考慮される。上記のように、そのような組成物は、非経口（皮下、筋肉内、又は静脈内の）投与用に特に溶液又は懸濁液の形態で調製され得、経口又はバッカルの投与用に特に錠剤又はカプセルの形態で調製され得、鼻腔内の投与用に特に粉末剤、点鼻液、蒸発性溶液又はエアロゾルの形態で調製され得、吸入用に、特に広く定義された溶液又は賦形剤を有する乾燥粉末剤の形態で調製され得、及び直腸又は経皮的な投与用に調製され得る。
【０６６９】
組成物は、単位剤形で好都合に投与され得、例えば、参照によって本明細書に組み込まれている、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １７ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．，  （１９８５）に記載されているように、製薬の技術分野において周知の方法のいずれかによって調製され得る。非経口投与用製剤は賦形剤として、滅菌水又は塩水、プロピレングリコールなどのアルキレングリコール、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、糖類、野菜由来の油、水素化ナフタレン、（Ａｂｒａｘａｎｅ（商標），Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，  Ｉｎｃ．  Ｓｃｈａｕｍｂｕｒｇ  ＩＬで使用されているような）血清アルブミン・ナノ粒子および同種のものを含み得る。経口投与について、製剤は、胆汁塩又はアシルカルニチンの付加によって増強することができる。経鼻投与用の製剤は、ハイドロフルオロカーボンなどの蒸発溶剤中で固体又は溶液であり得、例えば糖類、界面活性物質、サブミクロンのα−ラクトース又はデキストランといった安定化のための賦形剤を含有し得、あるいは点鼻液又は定量（ｍｅｔｅｒｅｄ）噴霧剤の形態での使用のために水溶性又は油性の溶液であり得る。バッカル投与について、典型的な賦形剤は、糖、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、アルファ化デンプン（ｐｒｅｇｅｌａｔｉｎａｔｅｄ  ｓｔａｒｃｈ）、及び同種のものを含む。
【０６７０】
経鼻投与用に製剤されるとき、鼻粘膜を通しての吸収は、約０．１から１５重量パーセント、約０．５から４重量パーセントの間、又は約２重量パーセントの範囲の量の、例えばグリココール酸、コール酸、タウロコール酸、エトコール酸（ｅｔｈｏｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、デヒドロコール酸、グリコデオキシコール酸、シクロデキストリン、及び同種のものなどの界面活性物質によってさらに促進され得る。減少した刺激を有するより大きな効力を示すと報告された吸収促進剤の追加のクラスは、テトラデシルマルトシド（ｔｅｔｒａｄｅｃｙｌｍａｌｔｏｓｉｄｅ）（Ａｒｎｏｌｄ，  Ｊ．Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ９３：  ２２０５−２２１３，  Ａｈｓａｎ，  Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ  １８：  １７４２−１７４６）及び、参照によって本明細書中にすべてが組み入れられているその中の引用などの、アルキルマルトシドの類である。
【０６７１】
吸入による送達用に処方されるとき、多くの製剤には利点がある。ジケトピペラジン（例えばテクノスフェア粒子（Ｐｆｕｔｚｎｅｒ，  Ａ．  ａｎｄ  Ｆｏｒｓｔ，  Ｔ．  （２００５）  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  ２：  １０９７−１１０６））又は類似構造などの容易に分散した固形物に対する活性ペプチドの吸着は、治療剤の迅速な最初の取り込みをもたらす製剤を与える。冷凍乾燥した（Ｌｙｏｐｈｙｌｉｚｅｄ）粉末剤、特に活性ペプチド及び賦形剤を含有するガラス質の粒子は、優れたバイオアベイラビリティを有する肺への送達に役立ち、例えば、エクスベラ（商標）（Ｐｆｉｚｅｒ  ａｎｄ  Ａｖｅｎｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．による吸引インスリン）である。吸入によるペプチドの送達用の追加のシステムは記載される（Ｍａｎｄａｌ，  Ｔ．Ｋ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｙｓｔ．  Ｐｈａｒｍ．  ６２：  １３５９−６４  （２００５））。
【０６７２】
長期間、例えば１週間から１年間にわたる、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質の被験体への送達は、所望の放出期間に十分な活性成分を含有する徐放システムの単一の投与によって達成され得る。一体（ｍｏｎｏｌｉｔｈｉｃ）又はリザーバー型のマイクロカプセル、デポ剤インプラント、ポリマー・ヒドロゲル、浸透圧のポンプ、ベシクル、ミセル、リポソーム、経皮パッチ、イオン導入デバイス及び代替の注入可能な剤形などの様々な徐放システムは、この目的のために利用され得る。活性成分の送達が望まれる部位での局在化は、幾つかの徐放デバイスの追加的な特徴であり、それは特定の障害の処置において有益であると証明し得る。
【０６７３】
徐放製剤の１つの形態は、参照によって本明細書に組み込まれている、Ｋｅｎｔ，  Ｌｅｗｉｓ，  Ｓａｎｄｅｒｓ，  ａｎｄ  Ｔｉｃｅ，  Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔ．  Ｎｏ．  ４，６７５，１８９の先導的研究に記載されているように、緩慢に分解し無毒な共重合（ｃｏｐｏｌｙ）（乳／グリコール）酸などの非抗原性ポリマーへ分散又は封入される、ペプチド又はその塩を含有する。化合物、又はそれらの塩もまた、コレステロール又は他の脂質マトリックス・ペレット剤、又はシラストマー（ｓｉｌａｓｔｏｍｅｒ）マトリックス・インプラントへ処方され得る。追加的な徐放性の、デポ剤インプラント又は注入可能な製剤は、熟練した職人に明白であるだろう。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978, and R. W. Baker, Controlled Release of Biologically Active Agents, John Wiley & Sons, New York, 1987.を参照のこと。
【０６７４】
徐放製剤の追加の形態は、乳酸とＰＥＧの共重合（乳／グリコール酸）又はブロックコポリマーなどの生分解性ポリマーの溶液を含み、生体許容可能な（ｂｉｏａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）溶媒であり、それはデポ製剤を達成するために皮下に又は筋肉内に注入される。そのようなポリマー製剤と本明細書に記載されているペプチドとの混合は、作用製剤の非常に長い期間を達成するのに適切である。
【０６７５】
本明細書で言及されるすべての刊行物及び特許出願は、それぞれの個々の刊行物又は特許出願が、引用によって組み込まれるように明確に且つ個々に示されるのと同じ程度まで、引用によって本明細書に組み込まれる。
【０６７６】
多数の変更及び変化は通常の当業者へ明らかであるため、本明細書に記載されている共有的なペプチド及び／又はタンパク質、及びその合成用の試薬は、例示のみを意図した以下の実施例により特に記載される。
【０６７７】
＜実施例１：試薬−Ｎ−α―Ｆｍｏｃ（Ｎ）−ε−（１−オクチル  β−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｌ−リジン＞
炉内乾燥した２５０ｍＬのエルレンマイヤーフラスコ内に、１−オクチルβ−Ｄ−グルクロン酸（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ  Ｌｔｄ．，３．０６ｇ、１０ｍｍｏｌ）、５０ｍＬの無水ＤＭＦ、及び無水の１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．６２ｇ、１２ｍｍｏｌ）がある。５０ｍＬのＤＭＦにおけるＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（２．４８ｇ、１２ｍｍｏｌ）の冷却した（４°Ｃ）溶液が撹拌しながら加えられ、反応を５分間進ませる。Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシル尿素の豊富な白降汞は、フリットガラス漏斗上で濾過され、濾液は２５ｍｌの無水ＤＭＦ内のＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−リジン（３．６８ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液に加えられる。反応を、室温まで温めながら２５分間、又はニンヒドリン色が非常に薄くなるまで進ませる。反応混合物は濾過され、乾燥に曝され、ＭｅＯＨ内の溶解及びＥｔ２Ｏでの曇り点までの緩慢な希釈によってＭｅＯＨ／Ｅｔ２Ｏから結晶化され、その後再冷却される。さらなる精製は、ＥｔＯＡｃからＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＡｃＯＨまでの溶媒勾配を使用するシリカゲル・クロマトグラフィーによって達成することができる。
【０６７８】
類似した手法で、しかしＮ−α−Ｂｏｃ−Ｌ−リジンを代わりに用いて、Ｎ末端取り込み及び遊離Ｎ末端に対する開裂に適したＮ−α―Ｂｏｃ，Ｎ−ε−（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｌ−リジンが得られる。類似した手法で、しかしＮ−α−Ａｃ−Ｌ−リジンを代わりに用いて、遮断されたＮ末端を有するペプチドのＮ末端での取り込みに適したＮ−α−Ａｃ，Ｎ−ε−（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｌ−リジンが得られる。類似した手法で、しかし適性量のＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−オルニチンを代わりに用いて、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ，Ｎ−δ−（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｌ−オルニチンが得られる。類似した手法で、しかし他のＮ−モノ−保護ジアミノ酸ｏｎｅを使用して、対応する試薬を得る。代替的に、連結中で、１−オクチルβ−Ｄグルクロン酸の前作動のない、一過性のＭｅ３Ｓｉエステル保護基の使用は、試薬の形成に容易な経路を与える。一過性のＭｅ３Ｓｉエステルは、ジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２）におけるＦｍｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨと等モル量のＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミドとの反応によって生成される。有機質層は、上記のように１−アルキルグルコロニドとの結合の準備ができているＣＨ２Ｃｌ２内で、溶液として所望の試薬を含有している。濾過された反応混合物は、Ｍｅ３Ｓｉエステルを加水分解するために水溶性ＮａＨＳＯ４で洗浄され、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、溶媒は取り除かれる。
【０６７９】
同様に、しかしペルアセチル又はペルベンゾイル  １−オクチルβ−Ｄ−グルクロン酸ｏｎｅを使用して、試薬（例えば、Ａｃ２Ｏとの処置で形成された、２，３，４−トリスアセチル  １−オクチルβ−Ｄ−グルクロン酸、および同種のもの）のＡｃ又はＢｚ保護形態を得る。そのような試薬は、樹脂からの酸開裂中に安定性を増加させ、脱保護中に不安定性が検出されるときに使用される（Ｋｉｈｌｂｅｒｇ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２８９：  ２２１−２４５）及びその中の引用を参照のこと。そのような生成物の最終的な脱保護は、上記のように、ＭｅＯＨ／ＮＨ３、ＭｅＯＨ／ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ／ＮＨ２ＮＨ２の使用による、開裂後の塩基触媒化エステル転移反応によって実行される。
【０６８０】
＜実施例２：合成ペプチドアナログ＞
一般に、ペプチド合成方法は、成長しているペプチド鎖に対する保護されたアミノ酸の連続的付加を含む。通常は、アミノ又は第１アミノ酸のカルボキシル基のいずれか、及び任意の反応的な側鎖基は保護される。この保護されたアミノ酸は、次に不活性固形支持体へ取り付けられるか、又は溶液中で利用され、配列における次のアミノ酸もまた適切に保護され、アミノ連結の形成に適用可能な条件下で加えられる。所望のアミノ酸がすべて適切な配列で連結された後、保護基及び任意の固形支持体は粗製ペプチドを提供するために除去される。ペプチドはクロマトグラフィーで脱塩され精製される。
【０６８１】
約５０以下のアミノ酸を有する、生理的に活性な切断型（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）ペプチドのアナログを調製する好ましい方法は、固相ペプチド合成を含む。この方法では、α―アミノ（Ｎα）官能基及び任意の反応的な側鎖は、酸感受性又は塩感受性の基によって保護される。保護基は、残存するペプチド鎖に影響を与えずに容易に除去可能である一方、ペプチド連結形成の条件に対して安定していなければならない。適切なα―アミノ保護基は、限定されないが、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル、ビフェニルイソプロピルオキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニル（Ａｍｏｃ）、イソボルニルオキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシ−カルボニル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、２−シアノ−ｔ−ブトキシカルボニル、９−フルオレニル−メトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）及び同種のもの、好ましくはＢｏｃ又はより好ましくはＦｍｏｃを含む。最適な側鎖保護基は、限定されないが、アセチル、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、Ｂｏｃ、ｔ−ブチル、ｏ−ブロモベンジルオキシカルボニル、ｔ−ブチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、２−クロロベンジル（Ｃｌ−ｚ）、２，６−ジクロロベンジル、シクロヘキシル、シクロペンチル、イソプロピル、ピバリル（ｐｉｖａｌｙｌ）、テトラヒドロピラン−２−イル、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル（Ｐｂｆ）、トリメチルシリル及びトリチルを含む。化合物の合成に好ましいＮα保護基は、Ｆｍｏｃ基である。好ましい側鎖保護基は、Ｇｌｕ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、及びＳｅｒ用のＯ−ｔ−ブチル基；Ｌｙｓ及びＴｒｐ側鎖用のＢｏｃ基；Ａｒｇ用のＰｂｆ基；Ａｓｎ、Ｇｌｎ、及びＨｉｓ用のＴｒｔ基である。Ｌｙｓ残基の選択的な変更については、Ｆｍｏｃ又はｔ−ブチルベースの保護基を開裂する試薬によって除去されない保護基を有する直交の保護が好ましい。Ｌｙｓ側鎖の修飾についての好ましい例は、限定されないが、ピペリジンではなくヒドラジンによって除去されたもの、例えば１−（４，４−ジメチル−２，６−ｄｉｏｘｏｃｙｃｌｏｈｅｘ−１−ｙｌｉｄｅｎｅ）−３−メチルブチル（ｉｖＤｄｅ）又は１−（４，４−ジメチル−２，６−ｄｉｏｘｏｃｙｃｌｏｈｅｘ−１−ｙｌｉｄｅｎｅ）エチル（Ｄｄｅ）及びアリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）を含む。
【０６８２】
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）又はＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）保護基スキームは、側鎖ラクタム形成が所望される場合において好ましい。（Ｈｏｕｓｔｏｎ，  Ｍ．Ｅ．，  Ｊｒ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｓｃｉ  １：２７４−２８２；Ｍｕｒａｇｅ，  Ｅ．Ｎ．，  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ）この場合、Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）保護基が後の除去及び機能化された界面活性物質との反応のために残存する一方、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ−アリル）及びＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）は組み入れられて一過性の保護を提供するために使用され、ラクタム形成のために脱保護することが出来るからである。
【０６８３】
固相合成では、Ｃ末端アミノ酸は、まず適切な樹脂支持体に取り付けられる。適切な樹脂支持体は、使用される培地において不溶性であると同様に、段階的な濃縮及び脱保護反応の試薬及び反応条件に対して不活性な物質である。市販の樹脂の例は、例えばｃｏ−ポリ−（スチレン−ジビニルベンゼン）、ヒドロキシメチル化ｃｏ−ポリ−（スチレン−ジビニルベンゼン）、及び同種のものといった反応性基により変更されるスチレン／ジビニルベンゼン樹脂を含む。ベンジル化した、ヒドロキシメチル化フェニルアセトアミドメチル（ＰＡＭ）樹脂は、ペプチド酸の調製に好ましい。化合物のＣ末端がアミドであるとき、好ましい樹脂は、ｐ−メチルベンズヒドリルアミノ−ｃｏ−ポリ（スチレン−ジビニル−ベンゼン）樹脂、２，４ジメトキシベンズヒドリルアミノベースの樹脂（「Ｒｉｎｋアミド」）、及び同種のものである。より大きなペプチドの合成に特に好ましい支持体は、Ｒｉｎｋアミド−ＰＥＧ及びＰＡＬ−ＰＥＧ−ＰＳ樹脂（アプライド・バイオシステムズ）、又はＦｍｏｃプロトコルを使用したペプチドアミド合成のために指定された類似樹脂などの他のポリマーマトリックス上に移植されたＰＥＧ配列を含有する市販の樹脂である。したがって、特定の場合においては、ＰＥＧ鎖に対してアミド連結を有していることが望ましい。それらの場合においては、Ｎ−Ｆｍｏｃ−アミノ−ＰＥＧ−カルボン酸を上記のアミド形成樹脂（例えばＲｉｎｋアミド樹脂及び同種のもの）へ連結することは都合がいい。鎖の第１のアミノ酸は、ＰＥＧ鎖のアミノ官能基にＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ酸として連結することができる。最終的な脱保護は所望のペプチド−ＮＨ−ＰＥＧ−ＣＯ−ＮＨ２生成物をもたらすだろう。
【０６８４】
ＰＡＭ樹脂に対する取付けは、Ｎα保護アミノ酸、例えばＢｏｃアミノ酸など、そのアンモニウム、セシウム、トリエチルアンモニウム、１，５−ジアザビシクロ−［５．４．０］ｕｎｄｅｃ−５−ｅｎｅ、テトラメチルアンモニウム，又はエタノール中の類似する塩、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、及び同種のもの、好ましくはＤＭＦ中のセシウム塩を、例えば、約４０°Ｃと６０°Ｃの間、好ましくは約５０°Ｃの高温で、約１２乃至７２時間、好ましくは約４８時間、樹脂と反応させることによって達成され得る。これによって最終的に、酸開裂に続いてペプチド酸産生物、又はアミノリシスに続いてアミドがもたらされる。
【０６８５】
Ｎα−Ｂｏｃ−アミノ酸は、ＣＨ２Ｃｌ２又はＤＭＦ、好ましくはＣＨ２Ｃｌ２などの溶媒中で、約１０乃至５０°Ｃの間、好ましくは２５°Ｃの温度で、約２乃至２４時間、好ましくは約２時間、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）／１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）媒介の連結（ｃｏｕｐｌｉｎｇ）によって、ベンズヒドリルアミン樹脂に取り付けられ得る。
【０６８６】
Ｂｏｃベースのプロトコルについては、保護されたアミノ酸の連続連結（ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅ  ｃｏｕｐｌｉｎｇ）は、典型的に自動ペプチドシンセサイザー内において、当該技術分野で周知の方法によって実行され得る。トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジ−イソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、コリジン、又は類似した塩基との中和に続き、各々の保護アミノ酸は、およそ約１．５乃至２．５倍モル過剰に導入され、連結は、好ましくは周囲温度のジクロロメタン内の、ＣＨ２Ｃｌ２、ＤＭＦ、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、又はそれらの混合物などの、不活性かつ非水性の極性溶媒内で行われる。Ｆｍｏｃベースのプロトコルについて、酸は脱保護用に一切使用されないが、塩基、好ましくはＤＩＥＡ又はＮＭＭは、通常、連結混合物へと組み込まれる。連結は、ＤＭＦ、ＮＭＰ、ＤＭＡ又は混合溶媒、好ましくはＤＭＦにおいて典型的になされる。単独、又はＨＯＢｔ、Ｏアシル尿素、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢｏｐ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、他のＮ−ヒドロキシイミド、又はオキシムの存在下のいずれかで、代表的なカップリング剤は、Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−カルボジイミド（ＤＩＣ）、又は他のカルボジイミドである。代替的に、保護アミノ酸活性エステル（例えばｐ−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニル、及び同種のもの）又は対称的な無水物類が使用され得る。好ましいカップリング剤は、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアルミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール（ａｚａｂｅｎｚｏｔｒａｉａｚｏｌｅ）−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ）、２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（ｂｅｎｚｏｔｒａｉａｚｏｌｅ）−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアルミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＣＴＵ）、及び同種のものなどのアルミニウム／ウロニウム（供給者によって使用される代替的な命名法）類のものである。
【０６８７】
Ｆｍｏｃ−ＰＡＬ−ＰＥＧ−ＰＳ樹脂に対する取付けの好ましい方法は、ＤＭＦ内の２０％のピペリジンでの樹脂リンカーの脱保護によって達成され得、その後、５分間の最大７５°の連結サイクルを有するマイクロ波関連のペプチドシンセサイザー内で、ＤＭＦ内のＨＢＴＵ：ジ−イソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）（１：２）を使用して、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−アミノ酸の約５倍モル超過したＮ−α−Ｆｍｏｃ保護アミノ酸の反応が続く。
【０６８８】
マイクロ波関連のペプチドシンセサイザー内のこのＦｍｏｃベースのプロトコルに関して、Ｎ−α−Ｆｍｏｃアミノ酸保護基は、二重脱保護プロトコルで３０秒間、次に７５°Ｃに設定された最高温度で３分間、０．１Ｍ  １−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を含有しているＤＭＦ内の２０％のピペラジンにより除去される。ＨＯＢｔは、アスパルトイミド形成を減少させるために脱保護溶液に加えられる。その後、次のアミノ酸の連結は、５分間、最大７５°Ｃの二重連結サイクルにより、ＨＢＴＵ：ＤＩＥＡ（１：２）を使用する、５倍モル超過を利用する。
【０６８９】
固相合成の終わりに、十分に保護されたペプチドは、樹脂から取り除かれる。樹脂支持体に対する結合が、ベンジルエステル型であるとき、開裂は、約−１０°Ｃと５０°Ｃの間、好ましくは約２５°Ｃの温度で、約１２乃至２４時間、好ましくは約１８時間、アルキルアミドＣ末端を有するペプチド用のアルキルアミン又はフルオロアルキルアミンでのアミノリシスによって、又は非置換型アミドＣ末端を有するペプチド用のアンモニア／メタノール又はアンモニア／エタノールでのアンモノリシスによって影響を受け得る。ヒドロキシＣ末端を有するペプチドは、ＨＦ又は他の強く酸性の脱保護レジメン、又は鹸化によって開裂され得る。代替的に、ペプチドは、例えばメタノールでのエステル転移反応によって樹脂から取り除かれ得、その後アミノリシス又は鹸化が続く。保護ペプチドは、シリカゲル又は逆相ＨＰＬＣによって精製され得る。
【０６９０】
側鎖保護基は、約−１０°から＋１０°Ｃの間、好ましくは約０°Ｃの温度で、約１５分から２時間の間、好ましくは約１．５時間、アミノリシス生成物を、例えば、アニソール又は他のカルボニウムイオン・スカベンジャーの存在下で無水の液体フッ化水素で処理することによって、フッ化水素／ピリジン複合物での処理によって、トリス（トリフルオロアセチル）ホウ素とトリフルオロ酢酸での処理によって、炭素又はポリビニルピロリドン上の水素及びパラジウムによる減少によって、あるいは液体アンモニア中のナトリウム、好ましくは液体フッ化水素及びアニソールによる減少によって、ペプチドから取り除かれ得る。
【０６９１】
ベンズヒドリルアミン型樹脂上のペプチドについては、樹脂開裂及び脱保護の工程は、上記のように液体フッ化水素及びアニソールを利用する単一様式で、又は好ましくはより軽度の開裂カクテルの使用を通じて組み合わせられ得る。例えば、ＰＡＬ−ＰＥＧ−ＰＳ樹脂について、好ましい方法は、毎回３８°Ｃで１８分間、ＴＦＡ／水／トリ−イソ−プロピルシラン／３，６−ジオキサ−１，８−オクタンジチオール（ＤＯＤＴ）（９２．５／２．５／２．５／２．５）などの、当該技術分野で既知の軽度の開裂カクテルのうちの１つを使用する、マイクロ波関連のペプチドシンセサイザー中での二重脱保護プロトコルの使用によるものである。材料を含有しているアルキル配糖体の開裂は、９／１乃至１９／１の範囲内のＴＦＡ／水比率を有するプロトコルを使用する、アルキルグリコシド結合の生存を示している。典型的なカクテルは９４％のＴＦＡ：２％のＥＤＴ、２％のＨ２Ｏ、２％のＴＩＳである。典型的には、十分に脱保護された生成物は、冷たい（−７０°Ｃ乃至４°Ｃ）ジエチルエーテルにより沈殿し洗浄され、脱イオン水に溶解され、凍結乾燥される。
【０６９２】
ペプチド溶液は脱塩され得（例えば、ＢｉｏＲａｄ  ＡＧ−３（登録商標）陰イオン交換樹脂により）、ペプチドは、以下のタイプの何か又はすべてを使用する一連のクロマトグラフィーの工程によって精製される：酢酸塩形態の弱塩基性樹脂上のイオン交換、非誘導化ｃｏ−ポリ（スチレン−ジビニルベンゼン）、例えばアンバーライト（登録商標）ＸＡＤ上の疎水性吸着クロマトグラフィー、シリカゲル吸着クロマトグラフィー、カルボキシメチルセルロース上のイオン交換クロマトグラフィー、Ｇ−２５上の分配クロマトグラフィー（例えば、セファデックス（登録商標））、向流分配、超臨界流体クロマトグラフィー、又はＨＰＬＣ、特にオクチル−又はオクタデシルシリルシリカ（ＯＤＳ）結合相カラム充填上の逆相ＨＰＬＣ。
【０６９３】
また、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質、及びその薬学的に許容可能な塩を調製するための工程も本明細書に提供され、その工程は、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質の生理活性な切断ホモログ及びアナログを得るために、適切な樹脂支持体上で保護アミノ酸を連続して凝縮する工程、保護基及び樹脂支持体を除去する工程、及び生成物を精製する工程を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質は、上に定義されるようにアルキル配糖体修飾を組み込む。
【０６９４】
別の態様は、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質、及びその薬学的に許容可能な塩を調製するための工程に関し、その工程は、上に定義されているように、生理活性なペプチドのアナログを得るために、マイクロ波関連の固相合成ベースの工程又は、適切な樹脂支持体上で保護アミノ酸を連続して濃縮するための標準のペプチド合成プロトコルの使用、保護基及び樹脂支持体を除去する工程、及び生成物を精製する工程を含む。
【０６９５】
＜実施例３：Ｎ−末端エンドモルフィン−１  アナログ−ＡｃＬｙｓ（１−オクチル  β−Ｄ−グルクロニド−６−イル）エンドモルフィン  １（Ａｃ−Ｌｙｓ（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｔｙｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２（ＡｃＬｙｓ（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）エンドモルフィン１）＞
上記のように、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ−ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂は、（Ｋｏｄａ，  Ｙ．  ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  １６：  ６２８６−６２９６）に記載されているように調製される。樹脂は、ピペラジン／ＤＭＦ溶液でＮα脱保護され、溶媒で洗浄され、標準の連結混合物（例えば、ＨＢＴＵ／ＤＩＰＥＡ）を使用してＮ−α−Ａｃ、Ｎ−ε−（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｌ−リジンの２つの等価物と連結される。連結の完成に続いて、ペプチドは、脱保護混合物（９５％のＴＦＡ／５％Ｈ２Ｏ又はＤＯＤＴ）を使用して、樹脂から脱保護され開裂される。溶媒は、窒素の流れによって除去され、粗製のペプチドは冷たいＥｔ２Ｏにより沈殿され、収集され、２０％のアセトニトリルに溶解され、凍結乾燥される。精製は、０．１％のＴＦＡ又はＮＨ４ＯＡｃ緩衝系を使用して、Ｈ２ＯからＨ２Ｏ／アセトニトリルまでの勾配を含有する移相ｈｐｌｃによる。その混合物はＨ２Ｏから複数の凍結乾燥にさらされる。
【０６９６】
＜実施例４：Ｎ末端エンドモルフィン−１アナログ−ＡｃＬｙｓ（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）エンドモルフィン１（Ａｃ−Ｌｙｓ（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｔｙｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２（ＡｃＬｙｓ（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）エンドモルフィン１）＞
上記のように、Ａｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ−ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂は本明細書に記載されているように調製される。合成の完成に続き、ペプチドは、脱保護混合物（９５％のＴＦＡ／５％のＨ２Ｏ又はＤＯＤＴ）を使用して、樹脂から脱保護され開裂される。溶媒は窒素の流れによって取り除かれ、粗製のペプチドは、冷たいＥｔ２Ｏにより沈殿され、収集され、２０％のアセトニトリルに溶解され、凍結乾燥される。脱保護されたＬｙｓε−アミノ官能基を含有するペプチドは、ＤＭＦ又は類似した無水の非プロトン性溶媒の中で標準の連結混合物（例えばＨＢＴＵ／ＤＩＰＥＡ）を使用して、１−オクチルβ−Ｄ−グルコロン酸の２つの等価物と連結される。溶媒は真空内で取り除かれ、生成物は２０％のアセトニトリル又はＨ２Ｏから凍結乾燥される。精製は、０．１％のＴＦＡ又はＮＨ４ＯＡｃ緩衝系を使用して、Ｈ２ＯからＨ２Ｏ／アセトニトリルまでの勾配を含有する移動相中の逆相ｈｐｌｃによる。その混合物はＨ２Ｏから複数の凍結乾燥にさらされる。
【０６９７】
＜実施例５：２’，６’−ジメチル−Ｌ−チロシル−プロリル−２’，４’，６’−トリメチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎε（１’−オクチルβ−Ｄ−グルクロニル）−Ｌ−リジンアミド（ＥＵ−Ａ１０２）＞
Ｆｍｏｃ−Ｒｉｎｋ−アミド樹脂（０．５ｍｍｏｌ／ｇ）の０．３ｍｍｏｌのサンプルは、標準のＤＩＣ／ＨＯＢｔ固相連結プロトコル（ＤＩＣ／ＨＯＢｔ及びアミノ酸の３つの等価物）を使用して、アミノ酸の以下の配列と連結された：Ｆｍｏｃ−Ｌ−リジン（Ｎε―Ａｌｌｏｃ）、Ｆｍｏｃ−２’，４’，６’−トリメチル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｆｍｏｃ−Ｌ−プロリン、Ｆｍｏｃ−２’，４’−ジメチル−Ｌ−チロシン。
【０６９８】
２’，６’−ジメチル−Ｌ−チロシル−プロリル−２’，４’，６’−トリメチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎε−（Ａｌｌｏｃ）−Ｌ−リジンアミド樹脂は、室温の暗やみの中で一晩かけた、ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１）内でのＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．５  ｅｑ）とＤＭＢＡ（２０ｅｑ）との培養によって、Ｌｙｓ−Ｎε位置上で脱保護された。ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２による洗浄に続き、Ｌｙｓ側鎖は、ＤＩＣ／ＨＯＢｔの使用を通じたＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２内で、１’−オクチルβ−Ｄ−グルコロン酸によりアシル化された（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ）。連結の完成はニンヒドリンによって検査され、生成物はＣＨ２Ｃｌ２により広範囲にわたり洗浄された。
【０６９９】
生成物樹脂（０．７７ｇ）は、室温で２４０分間の開裂カクテル（９４％のＴＦＡ：２％のＥＤＴ；２％のＨ２Ｏ；２％のＴＩＳ）による処置によって、樹脂からの最終的な脱保護及び開裂を受けた。生成物を沈殿させるために、その混合物はＥｔ２Ｏにより処理され、真空内で乾燥させた後に２９０ｍｇの粗製の表題ペプチド生成物をもたらすためにＥｔ２Ｏにより広範囲に洗浄された。
【０７００】
精製は、逆相（Ｃ１８）ｈｐｌｃによって２つのバッチで実行された。粗製のペプチドは、１５ｍＬ／分の流量（１５％の有機変性剤；酢酸バッファー）で４．１ｘ２５ｃｍ  ｈｐｌｃカラムに充填され、５０°Ｃで６０分内に１５乃至４５％のバッファーＢから勾配により溶出された。生成物画分は、分析的なｈｐｌｃ／質量分析法（Ｍ＋１ピーク＝９１１．８７）によって＞９６％の純度を有する１００ｍｇの表題生成物ペプチドをもたらすために凍結乾燥された。全体的な合成収率は１８％で計算された。
【０７０１】
類似した方法で、しかし試薬１’−メチルβ−Ｄ−グルクロン酸及び１’−ドデシルβ−Ｄ−グルクロン酸を使用して、表題化合物の対応するＮε−（１’−メチルβ−Ｄ−グルクロニル）−Ｌ−リジン４（ＥＵＡ−１０１）及びＮε−（１’ドデシルβ−Ｄ−グルクロニル）−Ｌ−リジン４（ＥＵ−Ａ１０３）アナログが調製された。
【０７０２】
分析は。下記の表で与えられた溶離液勾配を使用して、陽イオンモードのＨＰＬＣ／質量分析法によって行われた。
【０７０３】
【表７】
2014516036.tif 000100
【０７０４】
＜実施例６：２’，６’−ジメチル−Ｌ−チロシル−プロリル−２’，４’，６’−トリメチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎε−（１’−ドデシルβ−Ｄ−グルクロニル）−  Ｌ−リジンアミド（ＥＵ−Ａ１０６）＞
上に設けられた実施例５における、固相合成及びリジン側鎖修飾のために与えられたものと類似した手法で、しかしリジンＮεアシル化のために１−ドデシルβ−Ｄ−グルクロン酸（Ｍｉｌｋｅｒｅｉｔ，  Ｇ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｃｈｅｍ  Ｐｈｙｓ  Ｌｉｐｉｄｓ  １２７：  ４７−６３）を使用して、粗製生成物として表題ペプチドが調製された。上記のような逆相ｈｐｌｃ精製に続き、ｈｐｌｃ／質量分析法（Ｍ＋１＝１１１４．８）によって９６．１％の純度の、白色の粉体としての表題生成物を得る。
【０７０５】
類似した方法で、しかし試薬１’−メチルβ−Ｄ−グルクロン酸を使用して、表題化合物の対応するＮε−（１’−メチルβ−Ｄ−グルクロニル）−Ｌ−リジン５（ＥＵＡ−１０５）アナログが調製された。
【０７０６】
分析は下記の表に与えられた勾配溶離液を使用して、陽イオンモードのＨＰＬＣ／質量分析法によって行われた。
【０７０７】
【表８】
2014516036.tif 000101
【０７０８】
＜実施例７：２’，６’−ジメチル−Ｌ−チロシル−Ｎε−（１’−ドデシルβ−Ｄ−グルクロニル）−Ｄ−リシル−２’，４’，６’−トリメチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニン−アミド（ＥＵ−Ａ１０８）＞
実施例６において与えられたものと類似した方法で、ｈｐｌｃ／質量分析法（Ｍ＝１０１７．０７）によって９５．８％の純度の白色粉体として表題ペプチドが調製された。
【０７０９】
類似した方法で、しかし試薬１’−メチルβ−Ｄ−グルクロン酸を使用して、表題化合物の対応するＮε−（１’−メチルβ−Ｄ−グルクロニル）−Ｌ−リジン（ＥＵ−Ａ１０７）アナログが調製された。
【０７１０】
分析は下記の表に与えられる溶離液勾配を使用して、陽イオンモードのＨＰＬＣ／質量分析法によって行われた。
【０７１１】
【表９】
2014516036.tif 000102
【０７１２】
＜実施例８：２’，６’−ジメチル−Ｌ−チロシル−Ｌ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎε−（１’−メチルβ−Ｄ−グルクロニル）−Ｌ−リシル−アミド（ＥＵ−Ａ１７８）＞
実施例６において与えられたものと類似した方法で、ｈｐｌｃ／質量分析法（Ｍ＝８３２．３３）によって９５．５％の純度の白色粉体として、表題ペプチドが調製された。
【０７１３】
類似した方法で、しかし試薬１’−ドデシルβ−Ｄ−グルクロン酸を使用して、表題化合物の対応するＮε−（１’−ドデシルβ−Ｄ−グルクロニル）−Ｌ−リジンアナログ（ＥＵ−Ａ１７９）が調製された。類似した方法で、しかし、対応する１−アルキルグルクロン酸試薬を使用して、本発明に対応するペプチド、ＥＵ−Ａ１８０、ＥＵ−Ａ１８１、ＥＵ−Ａ１８２、ＥＵ−Ａ１８３、ＥＵ−Ａ１８４、ＥＵ−Ａ１８５、及び同種のものが作られた。
【０７１４】
分析は、下記の表に与えられた溶離液勾配を使用して、陽イオンモードのＨＰＬＣ／質量分析法によって行われた。
【０７１５】
【表１０】
2014516036.tif 000103
【０７１６】
＜実施例９：２’，６’−ジメチル−Ｌ−チロシル−Ｌ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニス（ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｙｓ）−Ｎε−（１’−メチルβ−Ｄ−グルクロニル）−Ｌ−リシル−アミド）（ＥＵ−Ａ１８９）＞
実施例６において与えられたものと類似した方法で、ｈｐｌｃ／質量分析法（Ｍ＝９７９．５３）によって９８．９９％の純度の白色粉体として表題ペプチドが精製された。
【０７１７】
類似した方法で、しかし試薬１’−ドデシルβ−Ｄ−グルクロン酸を使用して、表題化合物の対応するＮε−（１’−ドデシルβ−Ｄ−グルクロニル）−Ｌ−リジン（ＥＵ−Ａ１９０）アナログが調製された。
【０７１８】
分析は、下記の表に与えられる溶離液勾配を使用して、陽イオンモードのＨＰＬＣ／質量分析法によって行われた。
【０７１９】
【表１１】
2014516036.tif 000104
【０７２０】
＜実施例１０：本発明の追加のアナログ＞
実施例６において与えられたがものと類似する手法で、しかし対応する１−アルキルβ−Ｄ−グルクロン酸試薬を使用して、ｈｐｌｃ／質量分析によって９５％よりも高い純度の白色粉体として本発明の追加のアナログが提供される。
【０７２１】
分析は、下記の表に与えられるものなどの適切な溶離液勾配を使用して、陽イオンモードのＨＰＬＣ／質量分析法によって行われる。
【０７２２】
【表１２】
2014516036.tif 000105
【０７２３】
＜実施例１１：ウロン酸の一般的な酸化方法＞
［０５７８］  ２０ｍＬのアセトニトリル中の１−ドデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ）［２．０ｇ、５．７４ｍｍｏｌ］と２０ｍＬのＤＩ水との溶液に、（ジアセトキシヨード）ベンゼン（Ｆｌｕｋａ）［４．４ｇ、１３．７ｍｍｏｌ］及びＴＥＭＰＯ（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）［０．１８０ｇ、１．１５ｍｍｏｌ］が加えられた。結果として生じる混合物を室温で２０時間撹拌した。１．５２ｇの粗製生成物（粗収率７３．１％）、さらなる精製をせずに固相合成に直接使用された白色粉体としての１−ドデシルβ−Ｄ−グルコロン酸を与えるために、反応混合物は水で希釈され、乾燥まで凍結乾燥された。類似の方法で、しかし対応する１−テトラデシル、１−ヘキサデシル、及び１−オクタデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド（Ａｎａｔｒａｃｅ、Ｍａｕｍｅｅ、ＯＨから購入）を使用して、本明細書に記載されている生成物や試薬を作るために使用される、所望のアルキル糖類ウロン酸が調製された。この生成物は、酸化剤としてＮａＯＣｌを使用する代替的な工程により以前に調製され、より長いアルキル基用に使用されている。
【０７２４】
＜実施例１２：化合物の細胞アッセイ＞
化合物は、およそ２ｍｇの量で正確に量られ、自身の子会社Ｃｅｒｅｐ  ＳＡ  （Ｌｅ  Ｂｏｉｓ  ｌ’Ｅｖｅｑｕｅ，  Ｆｒａｎｃｅ）で実行されるような、受託試験機関Ｃｅｒｅｐ社  （Ｐｕｌｌｍａｎ，  ＷＡ）による標準の細胞アッセイでアッセイされた。読出された情報は、アゴニスト又はアンタゴニスト型のいずれかで、試験化合物により処置された細胞内で産生されたｃＡＭＰの量である。使用されるアッセイは、ミューオピオイド受容体細胞アッセイ（アゴニスト及びアンタゴニスト型におけるＭＯＰ）、デルタ２オピオイド受容体細胞アッセイ（アゴニスト及びアンタゴニスト型におけるＤＯＰ）及びカッパオピオイド受容体細胞アッセイ（アゴニスト及びアンタゴニスト型におけるＫＯＰ）である。使用されるアッセイはＷａｎｇ，  Ｊ．Ｂ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ３３８：  ２１７−２２２，  Ｌａｗ，  Ｐ．Ｙ．  及びＬｏｈ，  Ｈ．Ｈ．  （１９９３）  Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ４３：  ６８４−６９３，  及びＡｖｉｄｏｒ−Ｒｅｉｓｓ，  Ｔ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ３６１：  ７０−７４．に記載されている。ＤＯＲアンタゴニストアッセイにおける細胞用の覚醒薬は、十分に許容するＤＯＲ文献標準、３ｘ１０Ｅ−８Ｍ  ＤＰＤＰＥであった。
【０７２５】
界面活性物質（１−アルキルグルクロン酸）の疎水性部分がＣ１からＣ１２で長さが変化する、一連の化合物ＥＵ−Ａ１０１からＥＵ−Ａ１０３に関して、受容体選択性及び起動（以下を参照）の形質は全体的作用薬（Ｃ１）から純粋なアンタゴニスト（Ｃ１２）まで異なる。活性はＤＯＰ又はＫＯＰアッセイのために使用された細胞で見られず、ゆえにアゴニストとしてミューオピオイド受容体用に十分な選択性を示す。この行動は、受容体相互作用の基本特性を変える本明細書に記載されている修飾の能力を実証する。分子内のどこか他のところにおける（例えば、アミノ酸アナログを使用する）修飾は、薬物候補の相互作用の効能及び特徴をさらに変更するために使用される。
【０７２６】
【表１３】
2014516036.tif 000106
【０７２７】
ＤＯＰ拮抗活性は、３ｘ１０Ｅ−８Ｍ  ＤＰＤＰＥの刺激的なｃＡＭＰ反応の阻害によって評価された。
【０７２８】
【表１４】
2014516036.tif 000107
【０７２９】
＜実施例１３：化合物の使用＞
本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質は、どの類が考慮されるかに依存する様々な疾患の予防及び処置に役立つ。例えば、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質は、慢性及び急性の疼痛及びＭＯＲ又はＤＯＲに関連する疾患状態の予防及び治療上の処置のために示される。日焼け、痒症、癌、免疫機能、炎症、循環器疾患に関する出願も文書化されている（Ｌａｚａｒｕｓ，  Ｌ．Ｈ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｐａｔｅｎｔｓ  ２２：  １−１４）。
【０７３０】
代表的な送達レジメンは、経口、非経口（皮下、筋肉内及び静脈注入を含む）、直腸、バッカル（舌下を含む）、経皮、吸入、眼、及び鼻腔内を含む。ペプチドの送達のための魅力的かつ広く使用される方法は、徐放注入可能な製剤の皮下注入を要する。本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質の適用のための他の投与経路は、皮下、鼻腔内、及び吸入投与である。
【０７３１】
＜実施例１４：疼痛の処置のための製薬の使用＞
急性又は慢性的な疼痛を有するヒトの患者は、０．５から１０ｍｇ／ｍＬの医薬品、及びベンジルアルコールなどの標準の賦形剤を含有する生理食塩水内の医薬品の溶液の技術分野で使用される標準の噴霧器からの鼻腔内投与（２００μＬ）によってＥＵ−Ａ１７８で処置される。疼痛の緩和のために必要に応じて、処置が繰り返される。代替的に、ヒドロフルオロアルカンなどを含有する蒸発溶媒における、ＥＵ−Ａ１７８の溶液及び選択された賦形剤は、疼痛を緩和するために必要とされるようなＭＤＩによって鼻腔内で投与される。代替的に、ＥＵ−Ａ１７８の水溶液は、選択された賦形剤とともに、疼痛を緩和するために必要とされるような皮下注入によって投与される。
【０７３２】
処置の効果は、生活の質の質問表を含む、患者の評価から測定される。疼痛スケールは、自己報告、観測上（行動）又は生理的なデータに基づく。臨床設定での使用に適切な幾つかの疼痛スケールは、アルダー・ヘイトリアージ疼痛スコア、簡易な疼痛目録（ＢＰＩ）、ダラス疼痛質問表、痛覚計疼痛インデックス（ＤＰＩ）、マギル疼痛質問表（ＭＰＱ）、数値１１のポイントボックス（Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  １１  ｐｏｉｎｔ  ｂｏｘ）（ＢＳ−１１）、数値評定尺度（ＮＲＳ−１１）、ローランド−モリス背痛質問表、視覚的アナログ尺度（ＶＡＳ）、及び同種のものを含む。
【０７３３】
類似した方法で、トランスバッカル、膣内、吸入、皮下、静脈内、眼内、又は経口経路による調整された量の投与は、疼痛の軽減を測定するために試験される。
【０７３４】
＜実施例２１：試薬−Ｎ−α―Ｆｍｏｃ，Ｎ−ε−（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｌ−リジン＞
炉内乾燥した２５０ｍＬのエルレンマイヤーフラスコ内に、１−オクチルβ−Ｄ−グルクロン酸（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ  Ｌｔｄ．、３．０６ｇ、１０ｍｍｏｌ）、５０ｍＬの無水ＤＭＦ、及び無水の１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．６２ｇ、１２ｍｍｏｌ）が置かれる。  ５０ｍＬのＤＭＦ中のＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（２．４８ｇ、１２ｍｍｏｌ）の冷却された（４°Ｃ）溶液は、撹拌しながら加えられ、反応は５分間進む。Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシル尿素の豊富な白降汞は、フリットガラス漏斗上で濾過され、濾液は２５ｍｌの無水ＤＭＦ内のＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−リジン（３．６８ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液に加えられる。反応は、室温まで温めながら２５分間、又はニンヒドリン色が非常に薄くなるまで進ませる。反応混合物は濾過され、乾燥に曝され、ＭｅＯＨ内の溶解及びＥｔ２Ｏでの曇り点までの緩慢な希釈によってＭｅＯＨ／Ｅｔ２Ｏから結晶化され、その後再冷却される。さらなる精製は、ＥｔＯＡｃからＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＡｃＯＨまでの溶媒勾配を使用するシリカゲル・クロマトグラフィーによって達成することができる。
【０７３５】
類似した手法で、しかしＮ−α−Ｂｏｃ−Ｌ−リジンを代わりに用いて、Ｎ末端取り込み及び遊離Ｎ末端に対する開裂に適したＮ−α―Ｂｏｃ，Ｎ−ε−１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｌ−リジンが得られる。類似した手法で、しかしＮ−α−Ａｃ−Ｌ−リジンを代わりに用いて、遮断されたＮ末端を有するペプチドのＮ末端での取り込みに適したＮ−α−Ａｃ，Ｎ−ε−（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｌ−リジンが得られる。類似した手法で、しかし適性量のＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−オルニチンを代わりに用いて、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ，Ｎ−δ−（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｌ−オルニチンが得られる。類似した手法で、しかし他のＮ−モノ−保護ジアミノ酸ｏｎｅを使用して、対応する試薬を得る。代替的に、連結中で、１−オクチルβ−Ｄグルクロン酸の前作動のない、一過性のＭｅ３Ｓｉエステル保護基の使用は、試薬の形成に容易な経路を与える。一過性のＭｅ３Ｓｉエステルは、ジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２）におけるＦｍｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨと等モル量のＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミドとの反応によって生成される。有機質層は、上記のように１−アルキルグルコロニドとの結合の準備ができているＣＨ２Ｃｌ２内で、溶液として所望の試薬を含有している。濾過された反応混合物は、Ｍｅ３Ｓｉエステルを加水分解するために水溶性ＮａＨＳＯ４で洗浄され、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、溶媒は取り除かれる。  
【０７３６】
同様に、しかしペルアセチル又はペルベンゾイル  １−オクチルβ−Ｄ−グルクロン酸ｏｎｅを使用して、試薬（例えば、Ａｃ２Ｏとの処置で形成された、２，３，４−トリスアセチル  １−オクチルβ−Ｄ−グルクロン酸、および同種のもの）のＡｃ又はＢｚ保護形態を得る。そのような試薬は、樹脂からの酸開裂中に安定性を増加させ、脱保護中に不安定性が検出されるときに使用される（Ｋｉｈｌｂｅｒｇ、Ｊ。ら（１９９７）方法Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２８９：２２１−２４５）及びその中の引用を参照のこと。そのような生成物の最終的な脱保護は、上記のように、ＭｅＯＨ／ＮＨ３、ＭｅＯＨ／ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ／ＮＨ２ＮＨ２の使用による、開裂後の塩基触媒化エステル転移反応によって実行される。
【０７３７】
＜実施例２−２：合成ペプチドアナログ＞
一般に、ペプチド合成方法は、成長しているペプチド鎖に対する保護されたアミノ酸の連続的付加を含む。通常は、アミノ又は第１アミノ酸のカルボキシル基のいずれか、及び任意の反応的な側鎖基は保護される。この保護されたアミノ酸は、次に不活性固形支持体へ取り付けられるか、又は溶液中で利用され、配列における次のアミノ酸もまた適切に保護され、アミノ連結の形成に適用可能な条件下で加えられる。所望のアミノ酸がすべて適切な配列で連結された後、保護基及び任意の固形支持体は粗製ペプチドを提供するために除去される。ペプチドはクロマトグラフィーで脱塩され精製される。
【０７３８】
約５０以下のアミノ酸を有する、生理的に活性な切断型（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）ペプチドのアナログを調製する好ましい方法は、固相ペプチド合成を含む。この方法では、α―アミノ（Ｎα）官能基及び任意の反応的な側鎖は、酸感受性又は塩感受性の基によって保護される。保護基は、残存するペプチド鎖に影響を与えずに容易に除去可能である一方、ペプチド連結形成の条件に対して安定していなければならない。適切なα―アミノ保護基は、限定されないが、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル、ビフェニルイソプロピルオキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニル（Ａｍｏｃ）、イソボルニルオキシカルボニル、α、α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシ−カルボニル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、２−シアノ−ｔ−ブトキシカルボニル、９−フルオレニル−メトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、及び同種のもの、好ましくはＢｏｃ、又はより好ましくはＦｍｏｃを含む。最適な側鎖保護基は、限定されないが、アセチル、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、Ｂｏｃ、ｔ−ブチル、ｏ−ブロモベンジルオキシカルボニル、ｔ−ブチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、２−クロロベンジル（Ｃｌ−ｚ）、２，６−ジクロロベンジル、シクロヘキシル、シクロペンチル、イソプロピル、ピバリル（ｐｉｖａｌｙｌ）、テトラヒドロピラン−２−イル、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル（Ｐｂｆ）、トリメチルシリル及びトリチルを含む。化合物の合成に好ましいＮα保護基は、Ｆｍｏｃ基である。好ましい側鎖保護基は、Ｇｌｕ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、及びＳｅｒ用のＯ−ｔ−ブチル基；Ｌｙｓ及びＴｒｐ側鎖用のＢｏｃ基；Ａｒｇ用のＰｂｆ基；Ａｓｎ、Ｇｌｎ、及びＨｉｓ用のＴｒｔ基である。Ｌｙｓ残基の選択的な変更については、Ｆｍｏｃ又はｔ−ブチルベースの保護基を開裂する試薬によって除去されない保護基を有する直交の保護が好ましい。Ｌｙｓ側鎖の修飾用の好ましい例は、限定されないが、ピペリジンではなくヒドラジンによって除去されたもの、例えば１−（４，４−ジメチル−２，６−ｄｉｏｘｏｃｙｃｌｏｈｅｘ−１−ｙｌｉｄｅｎｅ）−３−メチルブチル（ｉｖＤｄｅ）又は１−（４，４−ジメチル−２，６−ｄｉｏｘｏｃｙｃｌｏｈｅｘ−１−ｙｌｉｄｅｎｅ）エチル（Ｄｄｅ）及びアリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）を含む。
【０７３９】
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）又はＦｍｏｃＬｙｓ（Ｄｄｅ）保護基スキームは、側鎖ラクタム形成が所望される場合において好ましい。（Ｈｏｕｓｔｏｎ，  Ｍ．Ｅ．，  Ｊｒ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｓｃｉ  １：２７４−２８２；Ｍｕｒａｇｅ，  Ｅ．Ｎ．，  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ）この場合、Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）保護基が後の除去及び機能化された界面活性物質との反応のために残存する一方、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ−アリル）及びＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）は組み入れられて一過性の保護を提供するために使用され、ラクタム形成のために脱保護することが出来るからである。    
【０７４０】
固相合成では、Ｃ末端アミノ酸は、まず適切な樹脂支持体に付けられる。適切な樹脂支持体は、使用される培地において不溶性であると同様に、段階的な濃縮及び脱保護反応の試薬及び反応条件に対して不活性な材料である。市販の樹脂の例は、例えばｃｏ−ポリ−（スチレン−ジビニルベンゼン）、ヒドロキシメチル化ｃｏ−ポリ−（スチレン−ジビニルベンゼン）、及び同種のものといった反応性基により変更されるスチレン／ジビニルベンゼン樹脂を含む。ベンジル化した、ヒドロキシメチル化フェニルアセトアミドメチル（ＰＡＭ）樹脂は、ペプチド酸の調製に好ましい。化合物のＣ末端がアミドであるとき、好ましい樹脂は、ｐ−メチルベンズヒドリルアミノ−ｃｏ−ポリ（スチレン−ジビニル−ベンゼン）樹脂、２，４ジメトキシベンズヒドリルアミノベースの樹脂（「Ｒｉｎｋアミド」）、及び同種のものである。より大きなペプチドの合成に特に好ましい支持体は、Ｒｉｎｋアミド−ＰＥＧ及びＰＡＬ−ＰＥＧ−ＰＳ樹脂（アプライド・バイオシステムズ）、又はＦｍｏｃプロトコルを使用したペプチドアミド合成のために指定された類似樹脂などの他のポリマーマトリックス上に移植されたＰＥＧ配列を含有する市販の樹脂である。したがって、特定の場合においては、ＰＥＧ鎖に対してアミド連結を有していることが望ましい。それらの場合においては、Ｎ−Ｆｍｏｃ−アミノ−ＰＥＧ−カルボン酸を上記のアミド形成樹脂（例えばＲｉｎｋアミド樹脂及び同種のもの）へ連結することは都合がいい。鎖の第１のアミノ酸は、ＰＥＧ鎖のアミノ官能基にＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ酸として連結することができる。最終的な脱保護は所望のペプチド−ＮＨ−ＰＥＧ−ＣＯ−ＮＨ２生成物をもたらすだろう。
【０７４１】
ＰＡＭ樹脂に対する取付けは、Ｎα保護アミノ酸、例えばＢｏｃアミノ酸など、そのアンモニウム、セシウム、トリエチルアンモニウム、１，５−ジアザビシクロ−［５．４．０］ｕｎｄｅｃ−５−ｅｎｅ、テトラメチルアンモニウム，又はエタノール中の類似する塩、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、及び同種のもの、好ましくはＤＭＦ中のセシウム塩を、例えば、約４０°Ｃと６０°Ｃの間、好ましくは約５０°Ｃの高温で、約１２乃至７２時間、好ましくは約４８時間、樹脂と反応させることによって達成され得る。これによって最終的に、酸開裂に続いてペプチド酸産生物又はアミノリシスに続いてアミドがもたらされる。
【０７４２】
Ｎα−Ｂｏｃ−アミノ酸は、ＣＨ２Ｃｌ２又はＤＭＦ、好ましくはＣＨ２Ｃｌ２などの溶媒中で、約１０乃至５０°Ｃの間、好ましくは２５°Ｃの温度で、約２乃至２４時間、好ましくは約２時間、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）／１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）媒介の連結（ｃｏｕｐｌｉｎｇ）によって、ベンズヒドリルアミン樹脂に取り付けられ得る。
【０７４３】
Ｂｏｃベースのプロトコルについては、保護されたアミノ酸の連続連結（ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅ  ｃｏｕｐｌｉｎｇ）は、典型的に自動ペプチドシンセサイザー内において、技術分野で周知の方法によって実行され得る。  トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジ−イソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、コリジン、又は類似した塩基との中和に続き、各々の保護アミノ酸は、およそ約１．５乃至２．５倍モル過剰に導入され、連結は、好ましくは周囲温度のジクロロメタン内の、ＣＨ２Ｃｌ２、ＤＭＦ、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、又はそれらの混合物などの、不活性かつ非水性の極性溶媒内で行われる。Ｆｍｏｃベースのプロトコルについて、酸は脱保護用に一切使用されないが、塩基、好ましくはＤＩＥＡ又はＮＭＭは、通常、連結混合物へと組み込まれる。連結は、ＤＭＦ、ＮＭＰ、ＤＭＡ又は混合溶媒、好ましくはＤＭＦにおいて典型的になされる。単独、又はＨＯＢｔ、Ｏアシル尿素、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢｏｐ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、他のＮ−ヒドロキシイミド、又はオキシムの存在下のいずれかで、代表的なカップリング剤は、Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−カルボジイミド（ＤＩＣ）、又は他のカルボジイミドである。代替的に、保護アミノ酸活性エステル（例えばｐ−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニル、及び同種のもの）又は対称的な無水物類が使用され得る。好ましいカップリング剤は、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアルミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）、Ｏ−（７−アラベンゾトリアゾール（ａｚａｂｅｎｚｏｔｒａｉａｚｏｌｅ）−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ）、２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（ｂｅｎｚｏｔｒａｉａｚｏｌｅ）−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアルミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＣＴＵ）、及び同種のものなどのアルミニウム／ウロニウム（供給者によって使用される代替的な命名法）類のものである。
【０７４４】
Ｆｍｏｃ−ＰＡＬ−ＰＥＧ−ＰＳ樹脂に対する取付けの好ましい方法は、５分間の最大７５°の連結サイクルを有するマイクロ波関連のペプチドシンセサイザー内で、ＤＭＦ内のＨＢＴＵ：ジ−イソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）（１：２）を使用して、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−アミノ酸の約５倍モル超過したＮ−α−Ｆｍｏｃ保護アミノ酸の反応に続く、ＤＭＦ内の２０％のピペリジンでの樹脂リンカーの脱保護によって達成され得る。
【０７４５】
マイクロ波関連のペプチドシンセサイザー内のこのＦｍｏｃベースのプロトコルに関して、Ｎ−α−Ｆｍｏｃアミノ酸保護基は、二重脱保護プロトコルで３０秒間、次に７５°Ｃに設定された最高温度で３分間、０．１Ｍ  １−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を含有しているＤＭＦ内の２０％のピペラジンにより除去される。ＨＯＢｔは、アスパルトイミド形成を減少させるために脱保護溶液に加えられる。その後、次のアミノ酸の連結は、５分間、最大７５°Ｃの二重連結サイクルにより、ＨＢＴＵ：ＤＩＥＡ（１：２）を使用する、５倍モル超過を利用する。
【０７４６】
固相合成の終わりに、十分に保護されたペプチドは、樹脂から取り除かれる。樹脂支持体に対する結合が、ベンジルエステル型であるとき、開裂は、約−１０°Ｃと５０°Ｃの間、好ましくは約２５°Ｃの温度で、約１２乃至２４時間、好ましくは約１８時間、アルキルアミドＣ末端を有するペプチド用のアルキルアミン又はフルオロアルキルアミンでのアミノリシスによって、又は非置換型アミドＣ末端を有するペプチド用のアンモニア／メタノール又はアンモニア／エタノールでのアンモノリシスによって影響を受け得る。ヒドロキシＣ末端を有するペプチドは、ＨＦ又は他の強く酸性の脱保護レジメン、又は鹸化によって開裂され得る。代替的に、ペプチドは、例えばメタノールでのエステル転移反応、後続するアミノリシス又は鹸化によって樹脂から取り除かれ得る。保護ペプチドは、シリカゲル又は逆相ＨＰＬＣによって精製され得る。
【０７４７】
側鎖保護基は、約−１０°から＋１０°Ｃの間、好ましくは約０°Ｃの温度で、約１５分から２時間の間、好ましくは約１．５時間、アミノリシス生成物を、例えば、アニソール又は他のカルボニウムイオン・スカベンジャーの存在下での無水の液体フッ化水素で処理することによって、フッ化水素／ピリジン複合物での処理によって、トリス（トリフルオロアセチル）ホウ素とトリフルオロ酢酸での処理によって、炭素又はポリビニルピロリドン上の水素及びパラジウムによる減少によって、あるいは液体アンモニア中のナトリウム、好ましくは液体フッ化水素及びアニソールによる減少によって、ペプチドから取り除かれ得る。
【０７４８】
ベンズヒドリルアミン型樹脂上のペプチドについては、樹脂開裂及び脱保護の工程は、上記のように液体フッ化水素及びアニソールを利用する単一様式で、又は好ましくはより軽度の開裂カクテルの使用を通じて組み合わせられ得る。例えば、ＰＡＬ−ＰＥＧ−ＰＳ樹脂について、好ましい方法は、毎回３８°Ｃで１８分間、ＴＦＡ／水／トリ−イソ−プロピルシラン／３，６−ジオキサ−１，８−オクタンジチオール（ＤＯＤＴ）（９２．５／２．５／２．５／２．５）などの、技術分野で既知の軽度の開裂カクテルのうちの１つを使用する、マイクロ波関連のペプチドシンセサイザー中での二重脱保護プロトコルの使用によるものである。材料を含有しているアルキル配糖体の開裂は、９／１乃至１９／１の範囲内のＴＦＡ／水比率を有するプロトコルを使用する、アルキルグルコシド結合の生存を示している。典型的なカクテルは９４％のＴＦＡ：２％のＥＤＴ、２％のＨ２Ｏ、２％のＴＩＳである。典型的には、十分に脱保護された生成物は、冷たい（−７０°Ｃ乃至４°Ｃ）ジエチルエーテルにより沈殿し洗浄され、脱イオン水に溶解され、凍結乾燥される。
【０７４９】
ペプチド溶液は脱塩され得（例えば、ＢｉｏＲａｄ  ＡＧ−３（登録商標）陰イオン交換樹脂により）、ペプチドは、以下のタイプの何か又はすべてを使用する一連のクロマトグラフィーの工程によって精製される：酢酸塩形態の弱塩基性樹脂上のイオン交換、誘導されていないｃｏ−ポリ（スチレン−ジビニルベンゼン）、例えばアンバーライト（登録商標）ＸＡＤ上の疎水性吸着クロマトグラフィー、シリカゲル吸着クロマトグラフィー、カルボキシメチルセルロース上のイオン交換クロマトグラフィー、Ｇ−２５上の分配クロマトグラフィー（例えば、セファデックス（登録商標））、向流分配、超臨界流体クロマトグラフィー、又はＨＰＬＣ、特にオクチル−又はオクタデシルシリルシリカ（ＯＤＣ）結合相カラム充填上の逆相ＨＰＬＣ。
【０７５０】
また、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質、及びその薬学的に許容可能な塩を調製するための工程も本明細書に提供され、その工程は、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質の生理活性な切断ホモログ及びアナログを得るために、適切な樹脂支持体上で保護アミノ酸を連続して凝縮する工程、保護基及び樹脂支持体を除去する工程、及び生成物を精製する工程を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質は、上に定義されるようにアルキル配糖体修飾を組み込む。
【０７５１】
別の態様は、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質、及びその薬学的に許容可能な塩を調製するための工程に関し、その工程は、上に定義されているように、生理活性なペプチドのアナログを得るために、マイクロ波関連の固相合成ベースの工程又は、適切な樹脂支持体上で保護アミノ酸を連続して濃縮するための標準のペプチド合成プロトコルの使用、保護基及び樹脂支持体を除去する工程、及び生成物を精製する工程を含む。
【０７５２】
＜実施例２−３．ウロン酸用の一般的な酸化法＞
２０ｍＬのアセトニトリル内の１−ドデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ）［２．０ｇ、５．７４ｍｍｏｌ］と２０ｍＬのＤＩとの溶液に、（ジアセトキシヨード）ベンゼン（Ｆｌｕｋａ）［４．４ｇ、１３．７ｍｍｏｌ］及びＴＥＭＰＯ（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）［０．１８０ｇ、１．１５ｍｍｏｌ］が加えられた。結果として生じる混合物を室温で２０時間撹拌した。１．５２ｇの粗製生成物（粗収率７３．１％）、さらなる精製をせずに固相合成に直接使用された白色粉体としての１−ドデシルβ−Ｄ−グルコロン酸を与えるために、反応混合物は水で希釈され、乾燥まで凍結乾燥された。この生成物は、本明細書に記載されるように、酸化剤としてＮａＯＣｌを使用する代替的な工程により以前に調製され、より長いアルキル基用にも使用されている。類似の方法で、しかし対応する１−テトラデシル、１−ヘキサデシル、及び１−オクタデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド（Ａｎａｔｒａｃｅ、Ｍａｕｍｅｅ、ＯＨから購入）を使用して、本明細書に記載されている生成物や試薬を作るために使用される、所望のアルキル糖類ウロン酸が調製された。
【０７５３】
＜実施例２４：ＰＴＨｒＰアナログＥＵ−２０４の調製＞
Ｆｍｏｃ−  Ａｃ５ｃ−Ｖａｌ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−Ｒｉｎｋアミド樹脂のサンプルは、室温の暗やみの中で一晩、ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１）内でのＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．５  ｅｑ）とＤＭＢＡ（２０ｅｑ）との培養によって、Ｌｙｓ−Ｎε−エプシロン位置上で脱保護された。ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２による洗浄に続き、Ｌｙｓ側鎖は、ＤＩＣ／ＨＯＢｔの使用を通じてＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２内で、１’−オクチルドデシルβ−Ｄ−グルコロン酸（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ）によりアシル化された。連結の完成はニンヒドリンによって検査され、生成物はＣＨ２Ｃｌ２により広範囲にわたり洗浄された。
【０７５４】
生成物樹脂は、室温で２４０分間、開裂カクテル（９４％のＴＦＡ：２％のＥＤＴ；２％のＨ２Ｏ；２％のＴＩＳ）による処置によって、樹脂からの最終的な脱保護及び開裂を受けた。生成物を沈殿させるために、その混合物はＥｔ２Ｏにより処理され、真空内で乾燥させた後に粗製の表題ペプチド生成物をもたらすためにＥｔ２Ｏにより広範囲に洗浄された。
【０７５５】
精製は、逆相（Ｃ１８）ｈｐｌｃによって２つのバッチで実行された。粗製のペプチドは、１５ｍＬ／分の流量（１５％の有機変性剤；酢酸バッファー）で４．１ｘ２５ｃｍ  ｈｐｌｃカラムに充填され、５０°Ｃで６０分内に１５乃至４５％のバッファーＢから勾配により溶出された。生成物画分は、分析的なｈｐｌｃ（１２．０分；０．１％ＴＦＡ中の３５乃至６５％ＣＨ３ＣＮ）／質量分析法（Ｍ＋１ピーク＝２４７３．９）によって＞９７％の純度を有する表題の生成物ペプチドをもたらすために凍結乾燥された。
【０７５６】
対応する、１−メチル、１−オクチル、１−デシル、１−ドデシル、１−テトラデシル、１−ヘキサデシル、１−オクタデシル、及び１−アイコシルアナログは、対応するグルコロン酸を使用して、上記のように調製された。代替的に、１−アルキルグルクロニル、又は他のウロン酸アシル化アナログは、所望のウロン酸試薬によるアシル化が後続する、脱保護された、もしくは部分的に脱保護されたペプチドの最初の精製によって調製され得る。
【０７５７】
分析は、下記の表に与えられた溶離液勾配を使用して、陽イオンモードのＨＰＬＣ／質量分析法によって行われた。
【０７５８】
【表１５】
2014516036.tif 000108
【０７５９】
＜実施例２−５：化合物の細胞アッセイ＞
化合物は、およそ１ｍｇの量で正確に量られ、標準の細胞アッセイ（Ｃｅｒｅｐ  ＳＡ）でアッセイされた。読み出された情報は、アゴニスト又はアンタゴニスト型のいずれかで、試験化合物により処理された細胞内で産生されたｃＡＭＰの量である。使用されるＰＴＨ１細胞アッセイは、Ｏｒｌｏｆｆ，  Ｊ．Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  １３１：  １６０３−１６１１に記載されている。
【０７６０】
界面活性物質（１−アルキルグルクロン酸）の疎水性部分がＣ１からＣ１２で長さが変化する、一連の化合物ＥＵ−２０１からＥＵ−２０３に関して、細胞応答は、増加した鎖長による効能及び効果で増加する。アナログの全てはアゴニストであった。
受容体選択性及び起動（以下を参照）の形質は全的作用薬（Ｃ１）から純粋なアンタゴニスト（Ｃ１２）まで異なる。活性はＤＯＰ又はＫＯＰアッセイのために使用された細胞で見られず、ゆえにアゴニストとしてミューオピオイド受容体用に十分な選択性を示す。この行動は、受容体相互作用の基本特性を変える本明細書に記載されている修飾の能力を実証する。分子内のどこか他のところにおける（例えば、アミノ酸アナログを使用する）修飾は、薬物候補の相互作用の効能及び特徴をさらに変更するために使用される。ＰＴＨ１−３４に類似するＥＣ５０と有するが、超拮抗活性（例えば、ＥＵ−２３２）を有する分子となる更なる置換、及びそのような分子は医療において重要な応用がある。追加のアナログは、インビボにおける非常に長い作用期間を有するように設計されている。（つまりＥＵ−２８６、ＥＵ−２８７及びＥＵ−２８８）。このアッセイにおいて、ＰＴＨには１．４ｎＭのＥＣ５０及び１０５％の最大の反応のＥＣ５０があった一方、ＰＴＨｒＰ（コード化サンプル）には、２．９ｎＭのＥＣ５０及び１００％の最大の反応があった。化合物は水に溶かされ、１％のウシ血清アルブミンを含有しているアッセイ・バッファーで希釈された。以下の表は、本明細書に記載されている一定のペプチド生成物の効能及び効力を示す。
【０７６１】
【表１６】
2014516036.tif 000109
【０７６２】
アンタゴニストモードで試験された時、追加ＰＴＨｒＰにより、最大の効果はさらに大きかった（Ｃ−１２化合物、ＥＵ−２０３に関してＰＴＨｒＰの最大の１４６％まで）。この行動は、受容体相互作用の基本特性を変える本明細書に記載されている修飾の能力を実証する。分子のどこか他の修飾は、薬物候補の相互作用の効能及び特徴を変更するために使用することができる。
【０７６３】
＜実施例２−６：化合物のインビボでのアッセイ＞
Ｆｒｏｌｉｋ，  Ｃ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｂｏｎｅ  ３３：  ３７２−３７９の方法を受けて、中英ＳＩＰＰＲ／ＢＫＬａｂ  Ａｎｉｍａｌ  Ｌｔｄからの２０匹の雄のラットが、標準の実験室条件に７日間の間順化された。順化の後、動物は５つの群へ年齢によって分類された。群内の各動物は、ビヒクル又は検査薬のいずれかの単一の皮下注入により処置された。
【０７６４】
２つの試験群内の動物は、８０ｍｃｇ／動物のｈｕＰＴＨ１−３４（Ｂａｃｈｅｍ）又は８０ｍｃｇ／動物のＥＵ−２３により処置された。第４の群は３２０ｍｃｇ／動物でＥＵ−２３２により処理された。血液サンプルは、注入後０．５、１、２、４及び５時間に眼窩後の静脈を介して収集され、血液サンプルは血液ＰＯ４及びＣａレベルに関して遠心分離と試験の前に、氷上で貯蔵された。
【０７６５】
８０ｍｃｇ群（ＰＴＨ及びＥＵ−２３２）において、ＰＴＨ又はＥＵ−２３２に応じて血液ＰＯ４レベルの一時的だが統計的に有意ではない減少があり、ＰＯ４レベルは１時間後それ以上縮小することはなかった。ＥＵ−２３２による処置に応じて、血液ＰＯ４レベルは、５時間の時点で、時間及び最大の減少（時間０時間レベルから２５−３５％の減少）を有する統計的に優位なより低いレベルまで減少し、ＥＵ−２３２について効能と作用持続時間を示している。任意の時点でのビヒクルと比較した統計的に異なる血液Ｃａレベルを示す群はなく、それゆえ、投与を受けての高カルシウム血症の傾向の指標はなかった。
【０７６６】
類似した方法で、本明細書に記載されているアナログ（図１−１乃至図１−７内の表１の化合物を含む）は、インビボでのそれらの効能及び作用持続時間を評価するために試験される。
【０７６７】
本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質は、様々な疾患の予防及び処置に役立つ。ＰＴＨＲ１アゴニストは、閉経後又は老人性骨粗鬆症、副甲状腺機能低下症（ｈｙｐｏｐａｒａｔｈｒｏｉｄｉｓｍ）、骨減少症、インプラント凝固、及び一定の転移性腫瘍などの骨密度疾患の処置において効果的である。拮抗アナログは、副甲状腺機能亢進症又は悪性高カルシウム血症に特に関するように、高カルシウム血症の処置に適している。ＰＴＨとＰＴＨｒＰのアゴニストは、骨髄移植、及び低血液細胞濃度に関する疾患症候群での使用のために、インビボ又はインビトロでの骨髄において造血幹細胞（ＨＳＣ）の増殖を動態化するために使用することができる。拡張移植後もまた魅力的な適用である。血液中の多くの細胞がＨＳＣから生じるため、広範囲の適用は可能である。適切に標識化された界面活性物質修飾ペプチドは、診断プローブとして使用することができる。
【０７６８】
代表的な送達レジメンは、経口、非経口、（皮下、筋肉内、及び静脈注入を含む）、直腸、バッカル（舌下を含む）、経皮、吸入、眼、及び鼻腔内を含む。ペプチドの送達のための魅力的かつ広く使用されている方法は、徐放注入可能な製剤の皮下注入を要する。本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質の適用の他の投与経路は、皮下、鼻腔内、及び吸入投与である。
【０７６９】
＜実施例２−７．骨粗鬆症の処置のための薬学の使用＞
骨粗鬆症又は骨減少症の証拠のあるヒト患者は、０．５乃至１０ｍｇ／ｍＬの医薬品及びネンジルアルコールなどの標準の賦形剤を含有している生理食塩水内を、当該技術分野において使用される標準の噴霧器から鼻腔内投与（２００μＬ）することによってＥＵ−２０４により処置される。処置は、骨痛、骨減少症、低骨密度又は骨折などの症状の緩和に必要なだけ繰り返される。類似した手法で、ドロフルオロアルカンなどを含む蒸発溶剤内のＥＵ−２０４の溶液及び選択された賦形剤は、骨付加成長を刺激するために必要とされる定量吸入器（ＭＤＩ）によって鼻腔内に投与される。処置の効果は、骨ミネラル密度試験（ＢＭＤ試験）を含む標準試験の使用によって測定される。
【０７７０】
図１−１乃至図１−７の表１に記載されている化合物のすべては、類似したプロトコルを使用して試験される。類似した方法で、トランスバッカル、膣内、吸入、皮下、静脈内、眼内、又は経口経路による調整量の投与は、身体中の細胞上でのＰＴＨＲ１の刺激のレベルを測地するために、そして治療効果を測定するために試験される。
【０７７１】
＜実施例３−１：試薬−Ｎ−α―Ｆｍｏｃ，Ｎ−ε−（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）Ｌ−リジン＞
炉内乾燥した２５０ｍＬのエルレンマイヤーフラスコ内に、１−オクチルβ−Ｄ−グルクロン酸（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ  Ｌｔｄ．、３．０６ｇ、１０ｍｍｏｌ）、５０ｍＬの無水ＤＭＦ、及び無水の１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．６２ｇ、１２ｍｍｏｌ）が置かれる。  ５０ｍＬのＤＭＦ中のＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（２．４８ｇ、１２ｍｍｏｌ）の冷却された（４°Ｃ）溶液は、撹拌しながら加えられ、反応は５分間進む。Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシル尿素の豊富な白降汞は、フリットガラス漏斗上で濾過され、濾液は２５ｍｌの無水ＤＭＦ内のＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−リジン（３．６８ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液に加えられる。反応は、室温まで温めながら２５分間、又はニンヒドリン色が非常に薄くなるまで進ませる。反応混合物は濾過され、乾燥に曝され、ＭｅＯＨ内の溶解及びＥｔ２Ｏでの曇り点までの緩慢な希釈によってＭｅＯＨ／Ｅｔ２Ｏから結晶化され、その後再冷却される。さらなる精製は、ＥｔＯＡｃからＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＡｃＯＨまでの溶媒勾配を使用するシリカゲル・クロマトグラフィーによって達成することができる。
【０７７２】
類似した手法で、しかしＮ−α−Ｂｏｃ−Ｌ−リジンを代わりに用いて、Ｎ末端取り込み及び遊離Ｎ末端に対する開裂に適した、Ｎ−α―Ｂｏｃ，Ｎ−ε−１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｌ−リジンが得られる。類似した手法で、しかしＮ−α−Ａｃ−Ｌ−リジンを代わりに用いて、遮断されたＮ末端を有するペプチドのＮ末端での取り込みに適したＮ−α−Ａｃ，Ｎ−ε−（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｌ−リジンが得られる。類似した手法で、しかし適性量のＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−オルニチンを代わりに用いて、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ，Ｎ−δ−（１−オクチルβ−Ｄ−グルクロニド−６−イル）−Ｌ−オルニチンが得られる。類似した手法で、しかし他のＮ−ｍｏｎｏ−保護ジアミノ酸ｏｎｅを使用して、対応する試薬を得る。代替的に、連結中で、１−オクチルβ−Ｄ−グルクロン酸の前作動のない、一過性のＭｅ３Ｓｉエステル保護基の使用は、試薬の形成に容易な経路を与える。一過性のＭｅ３Ｓｉエステルは、ジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２）におけるＦｍｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨと等モル量のＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミドとの反応によって生成される。有機層は、上記のように１−アルキルグルコロニドとの結合の準備ができているＣＨ２Ｃｌ２内で、溶液として所望の試薬を含有している。濾過された反応混合物は、Ｍｅ３Ｓｉエステルを加水分解するために水溶性ＮａＨＳＯ４で洗浄され、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、溶媒は取り除かれる。
【０７７３】
同様に、しかしペルアセチル又はペルベンゾイル  １−オクチルβ−Ｄ−グルクロン酸ｏｎｅを使用して、試薬（例えば、Ａｃ２Ｏとの処置で形成された、２，３，４−トリスアセチル  １−オクチルβ−Ｄ−グルクロン酸、および同種のもの）のＡｃ又はＢｚ保護形態を得る。そのような試薬は、樹脂からの酸開裂中に安定性を増加させ、脱保護中に不安定性が検出されるときに使用される（Ｋｉｈｌｂｅｒｇ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２８９：  ２２１−２４５）及びその中の引用を参照のこと。そのような生成物の最終的な脱保護は、上記のように、ＭｅＯＨ／ＮＨ３、ＭｅＯＨ／ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ／ＮＨ２ＮＨ２の使用による、開裂後の塩基触媒化エステル転移反応によって実行される。
【０７７４】
＜実施例３−２：合成ペプチドアナログ＞
一般に、ペプチド合成方法は、成長しているペプチド鎖に対する保護されたアミノ酸の連続的付加を含む。通常は、アミノ又は第１アミノ酸のカルボキシル基のいずれか、及び任意の反応的な側鎖基は保護される。この保護されたアミノ酸は、次に不活性固形支持体へ取り付けられるか、又は溶液中で利用され、配列における次のアミノ酸もまた適切に保護され、アミノ連結の形成に適用可能な条件下で加えられる。所望のアミノ酸がすべて適切な配列で連結された後、保護基及び任意の固形支持体は粗製ペプチドを提供するために除去される。ペプチドはクロマトグラフィーで脱塩され精製される。
【０７７５】
約５０以下のアミノ酸を有する、生理的に活性な切断型（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）ペプチドのアナログを調製する好ましい方法は、固相ペプチド合成を含む。この方法では、α―アミノ（Ｎα）官能基及び任意の反応的な側鎖は、酸感受性又は塩感受性の基によって保護される。保護基は、残存するペプチド鎖に影響を与えずに容易に除去可能である一方、ペプチド連結形成の条件に対して安定していなければならない。適切なα―アミノ保護基は、限定されないが、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル、ビフェニルイソプロピルオキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニル（Ａｍｏｃ）、イソボルニルオキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシ−カルボニル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、２−シアノ−ｔ−ブトキシカルボニル、９−フルオレニル−メトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）及び同種のもの、好ましくはＢｏｃ又はより好ましくはＦｍｏｃを含む。最適な側鎖保護基は、限定されないが、アセチル、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、Ｂｏｃ、ｔ−ブチル、ｏ−ブロモベンジルオキシカルボニル、ｔ−ブチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、２−クロロベンジル（Ｃｌ−ｚ）、２，６−ジクロロベンジル、シクロヘキシル、シクロペンチル、イソプロピル、ピバリル（ｐｉｖａｌｙｌ）、テトラヒドロピラン−２−イル、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル（Ｐｂｆ）、トリメチルシリル及びトリチルを含む。化合物の合成に好ましいＮα保護基は、Ｆｍｏｃ基である。好ましい側鎖保護基は、Ｇｌｕ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、及びＳｅｒ用のＯ−ｔ−ブチル基；Ｌｙｓ及びＴｒｐ側鎖用のＢｏｃ基；Ａｒｇ用のＰｂｆ基；Ａｓｎ、Ｇｌｎ、及びＨｉｓ用のＴｒｔ基である。Ｌｙｓ残基の選択的な変更については、Ｆｍｏｃ又はｔ−ブチルベースの保護基を開裂する試薬によって除去されない保護基を有する直交の保護が好ましい。Ｌｙｓ側鎖の修飾についての好ましい例は、限定されないが、ピペリジンではなくヒドラジンによって除去されたもの、例えば１−（４，４−ジメチル−２，６−ｄｉｏｘｏｃｙｃｌｏｈｅｘ−１−ｙｌｉｄｅｎｅ）−３−メチルブチル（ｉｖＤｄｅ）又は１−（４，４−ジメチル−２，６−ｄｉｏｘｏｃｙｃｌｏｈｅｘ−１−ｙｌｉｄｅｎｅ）エチル（Ｄｄｅ）及びアリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）を含む。Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）又はＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）保護基スキームは、側鎖ラクタム形成が所望される場合において好ましい。（Ｈｏｕｓｔｏｎ，  Ｍ．Ｅ．，  Ｊｒ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｓｃｉ  １：２７４−２８２；Ｍｕｒａｇｅ，  Ｅ．Ｎ．，  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ）この場合、Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）保護基が後の除去及び機能化された界面活性物質との反応のために残存する一方、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ−アリル）及びＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）は組み入れられて一過性の保護を提供するために使用され、ラクタム形成のために脱保護することが出来るからである。
【０７７６】
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）又はＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）保護基スキームは、側鎖ラクタム形成が所望される場合において好ましい。（Ｈｏｕｓｔｏｎ，  Ｍ．Ｅ．，  Ｊｒ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｓｃｉ  １：２７４−２８２；Ｍｕｒａｇｅ，  Ｅ．Ｎ．，  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ）この場合、Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）保護基が後の除去及び機能化された界面活性物質との反応のために残存する一方、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ−アリル）及びＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）は組み入れられて一過性の保護を提供するために使用され、ラクタム形成のために脱保護することが出来るからである。
【０７７７】
固相合成では、Ｃ末端アミノ酸は、まず適切な樹脂支持体に取り付けられる。適切な樹脂支持体は、使用される培地において不溶性であると同様に、段階的な濃縮及び脱保護反応の試薬及び反応条件に対して不活性な材料である。市販の樹脂の例は、例えばクロロメチル化ｃｏ−ポリ−（スチレン−ジビニルベンゼン）、ヒドロキシメチル化ｃｏ−ポリ−（スチレン−ジビニルベンゼン）、及び同種のものといった反応性基により変更されるスチレン／ジビニルベンゼン樹脂を含む。ベンジル化した、ヒドロキシメチル化フェニルアセトアミドメチル（ＰＡＭ）樹脂は、ペプチド酸の調製に好ましい。化合物のＣ末端がアミドであるとき、好ましい樹脂は、ｐ−メチルベンズヒドリルアミノ−ｃｏ−ポリ（スチレン−ジビニル−ベンゼン）樹脂、２，４ジメトキシベンズヒドリルアミノベースの樹脂（「Ｒｉｎｋアミド」）、及び同種のものである。より大きなペプチドの合成に特に好ましい支持体は、Ｒｉｎｋアミド−ＰＥＧ及びＰＡＬ−ＰＥＧ−ＰＳ樹脂（アプライド・バイオシステムズ）、又はＦｍｏｃプロトコルを使用したペプチドアミド合成のために指定された類似樹脂などの他のポリマーマトリックス上に移植されたＰＥＧ配列を含有する市販の樹脂である。したがって、特定の場合においては、ＰＥＧ鎖に対してアミド連結を有していることが望ましい。それらの場合においては、Ｎ−Ｆｍｏｃ−アミノ−ＰＥＧ−カルボン酸を上記のアミド形成樹脂（例えばＲｉｎｋアミド樹脂及び同種のもの）へ連結することは都合がいい。鎖の第１のアミノ酸は、ＰＥＧ鎖のアミノ官能基にＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ酸として連結することができる。最終的な脱保護は所望のペプチド−ＮＨ−ＰＥＧ−ＣＯ−ＮＨ２生成物をもたらすだろう。
【０７７８】
ＰＡＭ樹脂に対する取付けは、Ｎα保護アミノ酸、例えばＢｏｃアミノ酸など、そのアンモニウム、セシウム、トリエチルアンモニウム、１，５−ジアザビシクロ−［５．４．０］ｕｎｄｅｃ−５−ｅｎｅ、テトラメチルアンモニウム，又はエタノール中の類似する塩、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、及び同種のもの、好ましくはＤＭＦ中のセシウム塩を、例えば、約４０°Ｃと６０°Ｃの間、好ましくは約５０°Ｃの高温で、約１２乃至７２時間、好ましくは約４８時間、樹脂と反応させることによって達成され得る。これによって最終的に、酸開裂に続いてペプチド酸産生物又はアミノリシスに続いてアミドがもたらされる。
【０７７９】
Ｎα−Ｂｏｃ−アミノ酸は、ＣＨ２Ｃｌ２又はＤＭＦ、好ましくはＣＨ２Ｃｌ２などの溶媒中で、約１０乃至５０°Ｃの間、好ましくは２５°Ｃの温度で、約２乃至２４時間、好ましくは約２時間、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）／１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）媒介の連結（ｃｏｕｐｌｉｎｇ）によって、ベンズヒドリルアミン樹脂に取り付けられ得る。
【０７８０】
Ｂｏｃベースのプロトコルについては、保護されたアミノ酸の連続連結（ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅ  ｃｏｕｐｌｉｎｇ）は、典型的に自動ペプチドシンセサイザー内において、当該技術分野で周知の方法によって実行され得る。トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジ−イソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、コリジン、又は類似した塩基との中和に続き、各々の保護アミノ酸は、およそ約１．５乃至２．５倍モル過剰に導入され、連結は、好ましくは周囲温度のジクロロメタン内の、ＣＨ２Ｃｌ２、ＤＭＦ、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、又はそれらの混合物などの、不活性かつ非水性の極性溶媒内で行われる。Ｆｍｏｃベースのプロトコルについて、酸は脱保護用に一切使用されないが、塩基、好ましくはＤＩＥＡ又はＮＭＭは、通常、連結混合物へと組み込まれる。連結は、ＤＭＦ、ＮＭＰ、ＤＭＡ又は混合溶媒、好ましくはＤＭＦにおいて典型的になされる。単独、又はＨＯＢｔ、Ｏアシル尿素、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢｏｐ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、他のＮ−ヒドロキシイミド、又はオキシムの存在下のいずれかで、代表的なカップリング剤は、Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−カルボジイミド（ＤＩＣ）、又は他のカルボジイミドである。代替的に、保護アミノ酸活性エステル（例えばｐ−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニル、及び同種のもの）又は対称的な無水物類が使用され得る。好ましいカップリング剤は、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアルミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール（ａｚａｂｅｎｚｏｔｒａｉａｚｏｌｅ）−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ）、２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（ｂｅｎｚｏｔｒａｉａｚｏｌｅ）−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアルミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＣＴＵ）、及び同種のものなどのアルミニウム／ウロニウム（供給者によって使用される代替的な命名法）類のものである。
【０７８１】
Ｆｍｏｃ−ＰＡＬ−ＰＥＧ−ＰＳ樹脂に対する取付けの好ましい方法は、ＤＭＦ内の２０％のピペリジンによる樹脂リンカーの脱保護によって達成され得、その後、５分間の最大７５°の連結サイクルを有するマイクロ波関連のペプチドシンセサイザー内で、ＤＭＦ内のＨＢＴＵ：ジ−イソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）（１：２）を使用して、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−アミノ酸の約５倍モル超過したＮ−α−Ｆｍｏｃ保護アミノ酸の反応が続く。
【０７８２】
マイクロ波関連のペプチドシンセサイザー内のこのＦｍｏｃベースのプロトコルに関して、Ｎ−α−Ｆｍｏｃアミノ酸保護基は、二重脱保護プロトコルで３０秒間、次に７５°Ｃに設定された最高温度で３分間、０．１Ｍ  １−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を含有しているＤＭＦ内の２０％のピペラジンにより除去される。ＨＯＢｔは、アスパルトイミド形成を減少させるために脱保護溶液に加えられる。その後、次のアミノ酸の連結は、５分間、最大７５°Ｃの二重連結サイクルにより、ＨＢＴＵ：ＤＩＥＡ（１：２）を使用する、５倍モル超過を利用する。
【０７８３】
固相合成の終わりに、十分に保護されたペプチドは、樹脂から取り除かれる。樹脂支持体に対する結合が、ベンジルエステル型であるとき、開裂は、約−１０°Ｃと５０°Ｃの間、好ましくは約２５°Ｃの温度で、約１２乃至２４時間、好ましくは約１８時間、アルキルアミドＣ末端を有するペプチド用のアルキルアミン又はフルオロアルキルアミンでのアミノリシスによって、又は非置換型アミドＣ末端を有するペプチド用のアンモニア／メタノール又はアンモニア／エタノールでのアンモノリシスによって影響を受け得る。ヒドロキシＣ末端を有するペプチドは、ＨＦ又は他の強く酸性の脱保護レジメン、又は鹸化によって開裂され得る。代替的に、ペプチドは、例えばメタノールでのエステル転移反応によって樹脂から取り除かれ得、その後アミノリシス又は鹸化が続く。保護ペプチドは、シリカゲル又は逆相ＨＰＬＣによって精製され得る。
【０７８４】
側鎖保護基は、約−１０°から＋１０°Ｃの間、好ましくは約０°Ｃの温度で、約１５分から２時間の間、好ましくは約１．５時間、アミノリシス生成物を、例えば、アニソール又は他のカルボニウムイオン・スカベンジャーの存在下で無水の液体フッ化水素で処理することによって、フッ化水素／ピリジン複合物での処理によって、トリス（トリフルオロアセチル）ホウ素とトリフルオロ酢酸での処理によって、炭素又はポリビニルピロリドン上の水素及びパラジウムによる減少によって、あるいは液体アンモニア中のナトリウム、好ましくは液体フッ化水素及びアニソールによる減少によって、ペプチドから取り除かれ得る。
【０７８５】
ベンズヒドリルアミン型樹脂上のペプチドについては、樹脂開裂及び脱保護の工程は、上記のように液体フッ化水素及びアニソールを利用する単一様式で、又は好ましくはより軽度の開裂カクテルの使用を通じて組み合わせられ得る。例えば、ＰＡＬ−ＰＥＧ−ＰＳ樹脂について、好ましい方法は、毎回３８°Ｃで１８分間、ＴＦＡ／水／トリ−イソ−プロピルシラン／３，６−ジオキサ−１，８−オクタンジチオール（ＤＯＤＴ）（９２．５／２．５／２．５／２．５）などの、当該技術分野で既知の軽度の開裂カクテルのうちの１つを使用する、マイクロ波関連のペプチドシンセサイザー中での二重脱保護プロトコルの使用によるものである。材料を含有しているアルキル配糖体の開裂は、９／１乃至１９／１の範囲内のＴＦＡ／水比率を有するプロトコルを使用する、アルキルグリコシド結合の生存を示している。典型的なカクテルは９４％のＴＦＡ：２％のＥＤＴ、２％のＨ２Ｏ、２％のＴＩＳである。典型的には、十分に脱保護された生成物は、冷たい（−７０°Ｃ乃至４°Ｃ）ジエチルエーテルにより沈殿し洗浄され、脱イオン水に溶解され、凍結乾燥される。
【０７８６】
ペプチド溶液は脱塩され得（例えば、ＢｉｏＲａｄ  ＡＧ−３（登録商標）陰イオン交換樹脂により）、ペプチドは、以下のタイプの何か又はすべてを使用する一連のクロマトグラフィーの工程によって精製される：酢酸塩形態の弱塩基性樹脂上のイオン交換、非誘導化ｃｏ−ポリ（スチレン−ジビニルベンゼン）、例えばアンバーライト（登録商標）ＸＡＤ上の疎水性吸着クロマトグラフィー、シリカゲル吸着クロマトグラフィー、カルボキシメチルセルロース上のイオン交換クロマトグラフィー、Ｇ−２５上の分配クロマトグラフィー（例えば、セファデックス（登録商標））、向流分配、超臨界流体クロマトグラフィー、又はＨＰＬＣ、特にオクチル−又はオクタデシルシリルシリカ（ＯＤＳ）結合相カラム充填上の逆相ＨＰＬＣ。
【０７８７】
また、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質、及びその薬学的に許容可能な塩を調製するための工程も本明細書に提供され、その工程は、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質の生理活性な切断ホモログ及びアナログを得るために、適切な樹脂支持体上で保護アミノ酸を連続して凝縮する工程、保護基及び樹脂支持体を除去する工程、及び生成物を精製する工程を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質は、上に定義されるようにアルキル配糖体修飾を組み込む。別の態様は、本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質、及びその薬学的に許容可能な塩を調製するための工程に関し、その工程は、上に定義されているように、生理活性なペプチドのアナログを得るために、マイクロ波関連の固相合成ベースの工程又は、適切な樹脂支持体上で保護アミノ酸を連続して濃縮するための標準のペプチド合成プロトコルの使用、保護基及び樹脂支持体を除去する工程、及び生成物を精製する工程を含む。
【０７８８】
＜実施例３−３．ウロン酸の一般的な酸化法＞
２０ｍＬのアセトニトリル中の１−ドデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ）［２．０ｇ、５．７４ｍｍｏｌ］と２０ｍＬのＤＩ水との溶液に、（ジアセトキシヨード）ベンゼン（Ｆｌｕｋａ）［４．４ｇ、１３．７ｍｍｏｌ］及びＴＥＭＰＯ（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）［０．１８０ｇ、１．１５ｍｍｏｌ］が加えられた。結果として生じる混合物を室温で２０時間撹拌した。１．５２ｇの粗製生成物（粗収率７３．１％）、さらなる精製をせずに固相合成に直接使用された白色粉体としての１−ドデシルβ−Ｄ−グルコロン酸を与えるために、反応混合物は水で希釈され、乾燥まで凍結乾燥された。この生成物は、酸化剤としてＮａＯＣｌを使用する代替的な工程により以前に調製され、より長いアルキル基用に使用されている。類似した方法で、本明細書に記載されている生成物及び試薬作るために使用される所望のアルキル糖類ウロン酸が調製される。
【０７８９】
類似の方法で、しかし対応する１−テトラデシル、１−ヘキサデシル、及び１−オクタデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド（Ａｎａｔｒａｃｅ、Ｍａｕｍｅｅ、ＯＨから購入）を使用して、本明細書に記載されている生成物や試薬を作るために使用される、所望の１−アルキル糖類ウロン酸が調製された。
【０７９０】
＜実施例３−４：アナログＥＵ−Ａ３８７の調製＞
Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ−Ａｉｂ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｂｉｐ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−Ｒｉｎｋアミド樹脂のサンプルは、実施例１に記載されているようにＮ−アルファ−Ｆｍｏｃ保護アミノ酸の連続付加によって調製され、室温の暗やみの中で一晩、ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１）内でＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．５  ｅｑ）とＤＭＢＡ（２０ｅｑ）との培養によって、Ｌｙｓ−Ｎε−エプシロン位置上で脱保護された。ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２による洗浄に続き、Ｌｙｓ側鎖は、ＤＩＣ／ＨＯＢｔの使用を通じてＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２内で、１’−ドデシルβ−Ｄ−グルコロン酸（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ）によりアシル化された。連結の完成はニンヒドリンによって検査され、生成物はＣＨ２Ｃｌ２により広範囲にわたり洗浄された。
【０７９１】
生成物樹脂は、室温で２４０分間、開裂カクテル（９４％のＴＦＡ：２％のＥＤＴ；２％のＨ２Ｏ；２％のＴＩＳ）による処置によって、樹脂からの最終的な脱保護及び開裂を受けた。生成物を沈殿させるために、その混合物はＥｔ２Ｏにより処理され、真空内で乾燥させた後に粗製の表題ペプチド生成物をもたらすためにＥｔ２Ｏにより広範囲に洗浄された。
【０７９２】
精製は、逆相（Ｃ１８）ｈｐｌｃによって２つのバッチで実行された。粗製のペプチドは、１５ｍＬ／分の流量（１５％の有機変性剤；酢酸バッファー）で４．１ｘ２５ｃｍ  ｈｐｌｃカラムに充填され、５０°Ｃで６０分内に１５乃至４５％のバッファーＢから勾配により溶出された。生成物画分は、分析的なｈｐｌｃ（１８．６分；０．１％ＴＦＡ中３０乃至６０％のＣＨ３ＣＮ）／質量分析法（Ｍ＋１ピーク＝２３８２．１４）によって９８．０３％の純度を有する表題の生成物ペプチドをもたらすために凍結乾燥された。
【０７９３】
表題化合物の対応する１−メチル及び１−オクチルアナログは、同様の手法、しかし試薬１’−メチルβ−Ｄ−グルクロン酸及び１’−オクチルβ−Ｄ−グルコロン酸（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ）を使用して調製された。対応する１−デシル、１−ドデシル、１−テトラデシル、１−ヘキサデシル、１−オクタデシル、及び１−アイコシルアナログは、対応するグルコロン酸を使用して、上記のように調製された。代替的に、１−アルキルグルクロニル、又は他のウロン酸アシル化アナログは、所望のウロン酸試薬によるアシル化が後続する、脱保護された、もしくは部分的に脱保護されたペプチドの最初の精製によって調製され得る。
【０７９４】
分析は、下記の表に与えられた溶離液勾配を使用して、陽イオンモードのＨＰＬＣ／質量分析法によって行われた。
【０７９５】
【表１７−１】
2014516036.tif 000110
【０７９６】
【表１７−２】
2014516036.tif 000111
【０７９７】
＜実施例３−５：化合物の細胞アッセイ＞
化合物は、およそ１ｍｇの量で正確に量られ、標準の細胞アッセイ（Ｃｅｒｅｐ  ＳＡ）でアッセイされた。読み出された情報は、アゴニスト又はアンタゴニスト型のいずれかで、試験化合物により処理された細胞内で産生されたｃＡＭＰの量である。使用されるアッセイは、グルカゴン及びＧＬＰ−１細胞アッセイ中のｃＡＭＰレベルの刺激であった。アッセイはＣｈｉｃｃｈｉ，  Ｇ．Ｇ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２：  ７７６５−７７６９  ａｎｄ  Ｒｕｎｇｅ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １３８：  ７８７−７９４．に記載されている。
【０７９８】
化合物ＥＵ−Ａ３９１に関しては、ＧＬＣＲ細胞応答は変化せず、ＧＬＰ１Ｒ細胞応答は４２０ｎＭのＥＣ５０により急速に上昇する。
【０７９９】
【表１８】
2014516036.tif 000112
【０８００】
＜実施例３６：化合物のインビボでのアッセイ＞
６０匹の食餌性肥満Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄のマウスは、年齢１４週目でＪＡＸ研究所から受け取られた。マウスは、識別用に耳に刻み目があり、ＨＥＰＡ濾過空気で個々に積極的に換気されるポリカーボネート・ケージに１ケージ当たり１マウスの密度で収容される。動物飼育室は、制御された１２時間の明／暗サイクルで、人工の蛍光照明により完全に照らされている。動物飼育室内の標準温度及び相対湿度範囲は、それぞれ２２±４°Ｃ及び５０±１５％である。２．８乃至３．１のｐＨの濾過された水道水、及び高脂肪食（６０ｋｃａｌ％）は適宜提供された。
【０８０１】
２週間の環境順化に続き、４０匹のマウスは所望の体重範囲に基づいて選択され、マウスは下記のように群（ｎ＝１０）へ無作為化される。群１．ビヒクル処置；群２．低用量の試験化合物；群３．中用量の試験化合物；群４．高用量の試験化合物。マウスは、２８日間ＳＣによって毎日投薬される。体重及びケージ側観察は毎日記録される。食物及び水分摂取量は毎週記録される。マウスは、１日目（投与前）及び２６日目に、全体の体脂肪及び脂肪の少ない化合物を測定するためにＮＭＲ測定を受ける。０、１４及び２７日目に、マウスは経口ブドウ糖負荷試験のために一晩絶食される。翌日、第１の血液サンプルは尾の切れ目（ｔａｉｌ  ｎｉｃｋ）から収集される（ｔ＝０）。その後、マウスは、１．０ｇ／ｋｇのグルコースのボーラスを投与される。グルコースと血漿グルコースがグルコミター（ｇｌｕｃｏｍｅｔｅｒ）を使用してすぐに測定された後、血液サンプルは５、３０、６０及び１２０分に尾の切れ目から得られる。
【０８０２】
屠殺及び組織収集：マウスは２９日目に屠殺される。末端の血液は血清／血漿に処理され、アリコートはグルコース、インスリン及び脂質特性の分析のために送られる。脂肪組織は分析のために収集され、量られ、冷凍される。最適な化合物特性は、ＯＧＴＴにおけるグルコース可動域の減少、増強されたグルコース依存インスリン分泌による基礎インスリン分泌の減少、体重増加の減少を示すが、除脂肪量には最小の効果を示す。
【０８０３】
＜実施例３７：化合物の使用＞
本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質は、肥満症、メタボリック症候群、循環器疾患及び糖尿病に関係する様々な疾患の予防及び処置に役立つ。適切に標識化された界面活性物質修飾ペプチドは、診断プローブとして使用することができる。
【０８０４】
代表的な送達レジメンは、経口、非経口、（皮下、筋肉内、及び静脈注入を含む）、直腸、バッカル（舌下を含む）、経皮、吸入、眼、及び鼻腔内を含む。ペプチドの送達のための魅力的かつ広く使用される方法は、徐放注入可能な製剤の皮下注入を要する。本明細書に記載されている共有結合的に修飾された及び／又はタンパク質の適用のための他の投与経路は、皮下、鼻腔内、及び吸入投与である。
【０８０５】
＜実施例３−８．インスリン抵抗性の処置のための薬学の使用＞
インスリン又はメタボリック症候群の証拠のあるヒト患者は、０．５乃至１０ｍｇ／ｍＬの医薬品及びベンジルアルコールなどの標準の賦形剤を含有している生理食塩水内の、当該技術分野において使用される標準の噴霧器から鼻腔内投与（２００μＬ）することによってＥＵ−Ａ５９６により処置される。肥満症、高血糖及びその他同種のものなどの症状の緩和に必要なだけ繰り返される。類似した手法で、ヒドロフルオロアルカンなどを含む蒸発溶剤内のＥＵ−Ａ５９６の溶液及び選択された賦形剤は、インスリン抵抗性を減少させるために必要とされる定量吸入器（ＭＤＩ）によって鼻腔内に投与される。処置の効果は、血糖レベル、体容量指数、及び／又は体重の測定及び／又はウエスト・ヒップ比の測定を含む標準試験を使用して測定される。
【０８０６】
類似した方法で、トランスバッカル、膣内、吸入、皮下、静脈内、眼内、又は経口経路による調整量の投与は、身体中の細胞上のＧＬＰ１Ｒ及び／又はＧＬＣＲの刺激のレベルを測定するため、及び治療効果を測定するために検査される。
【０８０７】
＜配列＞
図１−１乃至図１−７内での表１は、本明細書に記載されている方法によって調製された化合物を表わす。明細書はＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１及び１４９乃至１６９に関する配列を提供する。追加的に、図１−１乃至図１−７の表１は、図１−１乃至図１−７の表１に示されるように、それぞれＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．２乃至１４８とＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．６４５を有する、化合物ＥＵ−Ａ１０１乃至ＥＵ−Ａ１９９とＥＵ−Ａ６００乃至ＥＵ−Ａ６４９に関するＳＥＱ．ＩＤ番号を提供する。図１−１乃至図１−７の表１内の化合物、及び図１−１乃至図１−７の表１に示されるそれらのそれぞれのＳＥＱ．ＩＤ．番号は、出願された明細書へとこれによって組み入れられる。
【０８０８】
図２−１乃至図２−４内での表２は、本明細書に記載されている方法によって調製された化合物を表わす。明細書はＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１７０乃至１７４及び２８３乃至３０２に関する配列を提供する。追加的に、図２−１乃至図２−４の表２は、図２−１乃至図２−４の表２に示されるようにＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．１７５乃至２８２を有する、化合物ＥＵ−２０１乃至ＥＵ−２９９及びＥＵ−９００乃至ＥＵ−９０８に関するＳＥＱ．ＩＤ番号を提供する。図２−１乃至図２−４の表２内の化合物、及び図２−１乃至図２−４の表２に示されるそれらのそれぞれのＳＥＱ．ＩＤ．番号は、出願された明細書へとこれにより組み入れられる。
【０８０９】
図８−１乃至図８−５内での表３は、本明細書に記載されている方法によって調製された化合物を表わす。明細書はＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０３乃至３０５及びＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．６１９乃至６４４に関する配列を提供する。追加的に、図８−１乃至図８−５の表３は、図８−１乃至図８−５の表３に示されるように、それぞれＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０６乃至４３１を有する、化合物ＥＵ−Ａ３００乃至ＥＵ−Ａ４２５に関するＳＥＱ．ＩＤ番号を提供する。図８−１乃至図８−５の表３内の化合物、及び図８−１乃至図８−５の表３に示されるそれらのそれぞれのＳＥＱ．ＩＤ．番号は、出願された明細書へこれにより組み入れられる。
【０８１０】
図９−１乃至図９−７内での表４は、本明細書に記載されている方法によって調製された化合物を表わす。明細書はＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．３０３乃至３０５及びＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．６１９乃至６４４に関する配列を提供する。追加的に、図９−１乃至図９−７の表４は、図９−１乃至図９−７の表４に示されるように、それぞれＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏｓ．４３２乃至５２０を有する、化合物ＥＵ−Ａ４２６乃至ＥＵ−５９９に関するＳＥＱ．ＩＤ番号を提供する。図９−１乃至図９−７の表４内の化合物、及び図９−１乃至図９−７の表４に示されるそれらのそれぞれのＳＥＱ．ＩＤ．番号は、出願された明細書へこれにより組み入れられる。
【図１０Ａ】
2014516036.tif 000124
【図１０Ｂ】
2014516036.tif 000125
【図１０Ｃ】
2014516036.tif 000126
【図１−１】
2014516036.tif 000127
【図１−２】
2014516036.tif 000128
【図１−３】
2014516036.tif 000129
【図１−４】
2014516036.tif 000130
【図１−５】
2014516036.tif 000131
【図１−６】
2014516036.tif 000132
【図１−７】
2014516036.tif 000133
【図２−１】
2014516036.tif 000134
【図２−２】
2014516036.tif 000135
【図２−３】
2014516036.tif 000136
【図２−４】
2014516036.tif 000137
【図３】
2014516036.tif 000138
【図４】
2014516036.tif 000139
【図５】
2014516036.tif 000140
【図６】
2014516036.tif 000141
【図７】
2014516036.tif 000142
【図８−１】
2014516036.tif 000143
【図８−２】
2014516036.tif 000144
【図８−３】
2014516036.tif 000145
【図８−４】
2014516036.tif 000146
【図８−５】
2014516036.tif 000147
【図９−１】
2014516036.tif 000148
【図９−２】
2014516036.tif 000149
【図９−３】
2014516036.tif 000150
【図９−４】
2014516036.tif 000151
【図９−５】
2014516036.tif 000152
【図９−６】
2014516036.tif 000153
【図９−７】
2014516036.tif 000154
【図１１】
2014516036.tif 000155
【国際調査報告】
2014516036.tif 000156
2014516036.tif 000157
2014516036.tif 000158
2014516036.tif 000159