(57)【要約】  本発明は、被験者において急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）を診断する方法であって、被験者の試料中の血漿マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）濃度を測定すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断することを含み、ここで試料が症状発症後の４時間未満に採取される方法に関する。本発明は、また、被験者においてＡＣＳを予後診断する方法であって、被験者の試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度からＡＣＳの規模を予後診断することを含む方法に関する。また提供されるものは、被験者においてＡＣＳを治療する方法、装置、キット、並びにＡＣＳを診断及び予後診断する方法に関連する心臓バイオマーカーである。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者において急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）を診断する方法であって、被験者の試料中の血漿マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）濃度を測定すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断することを含み、試料が症状発症後の４時間未満に採取される方法。
【請求項２】
被験者の血漿ＭＩＦ濃度からＡＣＳの規模を予後診断することを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
被験者においてＡＣＳを予後診断（prognosing）する方法であって、被験者の試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度からＡＣＳの規模を予後診断することを含む方法。
【請求項４】
症状発症後の４時間未満に採取された試料において被験者の血漿ＭＩＦ濃度を測定することを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
症状発症後の３時間以下、２時間以下、１時間以下又は３０分以下に採取された試料において被験者の血漿ＭＩＦ濃度を測定することを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
基準血漿ＭＩＦ濃度が１．４μｇ／Ｌ以上である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
ＡＣＳが急性心筋梗塞（ＡＭＩ）である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
ＡＭＩが、ＳＴ上昇心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）又は非ＳＴ上昇心筋梗塞（非ＳＴＥＭＩ）である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ＡＣＳがＡＭＩであり、ＡＣＳの規模がＡＭＩ後の３日目の百分率として表される梗塞サイズであり、梗塞サイズが以下の相関関係：
３日目の梗塞サイズ（％）＝６．７×入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度（μｇ／Ｌ）＋３．０
から予後診断される、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
ＡＣＳがＡＭＩであり、ＡＣＳの規模がＡＭＩ後の３か月目の百分率として表される梗塞サイズであり、梗塞サイズが以下の相関関係：
３か月目の梗塞サイズ（％）＝５×入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度（μｇ／Ｌ）＋１．３。
から予後診断される、請求項３に記載の方法。
【請求項１１】
被験者の血漿ミオグロビン、血漿トロポニン又は血漿クレアチンキナーゼ濃度を測定することを更に含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
ＭＩＦ及びミオグロビン、トロポニン又はクレアチンキナーゼ濃度のいずれか１つ以上が、同じ血漿試料において測定される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
被験者のＡＣＳを治療する方法であって、（ａ）症状発症後の４時間未満に被験者から採取した試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定し、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断すること；又は（ｂ）被験者の試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定し、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいときにＡＣＳを診断し、被験者の血漿ＭＩＦ濃度からＡＣＳの規模を予後診断すること；並びに（ｃ）被験者に経皮的冠動脈インターベンション（ＰＣＩ）及び／又は線維素溶解を実施することを含む方法。
【請求項１４】
（ａ）被験者においてＡＣＳを診断する方法であって、症状発症後の４時間未満に被験者から採取された試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断することを含む方法における；又は（ｂ）被験者においてＡＣＳを予後診断する方法であって、試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度からＡＣＳの規模を予後診断することを含む方法における使用のための、被験者の試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定する手段を含む装置。
【請求項１５】
血漿ＭＩＦ濃度を測定するイムノアッセイを実施する手段を含む、請求項１４に記載の装置。
【請求項１６】
電気化学セルを含む、請求項１４又は請求項１５に記載の装置。
【請求項１７】
電気化学セルが非共面電極（non-coplanar electrodes）を含む、請求項１６に記載の装置。
【請求項１８】
装置が専用医療向け（point-of-care）装置である、請求項１４〜１７のいずれか１項に記載の装置。
【請求項１９】
装置が、血漿ミオグロビン、血漿トロポニン又は血漿クレアチンキナーゼを測定する手段を更に含む、請求項１４〜１８のいずれか１項に記載の装置。
【請求項２０】
（ａ）被験者においてＡＣＳを診断する方法であって、症状発症後の４時間未満に被験者から採取された試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断することを含む方法における；又は（ｂ）被験者においてＡＣＳを予後診断する方法であって、試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度からＡＣＳの規模を予後診断することを含む方法における使用のための、被験者の試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定する試薬を含む、並びに／或いは請求項１４〜１９のいずれか１項に記載の装置を含むキット。
【請求項２１】
試薬が抗ＭＩＦ抗体を含む、請求項２０に記載のキット。
【請求項２２】
症状発症後の４時間未満に被験者から採取された試料中の血漿ＭＩＦ濃度を含み、基準血漿ＭＩＦ濃度より大きな血漿ＭＩＦ濃度が、被験者におけるＡＣＳの診断となる、心臓バイオマーカー。
【請求項２３】
被験者の試料中の血漿ＭＩＦ濃度を含み、基準血漿ＭＩＦ濃度より大きな血漿ＭＩＦ濃度が、被験者におけるＡＣＳの規模の予後診断となる、心臓バイオマーカー。
【請求項２４】
被験者の血漿ＭＩＦ濃度が、症状発症後の４時間未満に採取された試料において測定される、請求項２３に記載の心臓バイオマーカー。
【請求項２５】
被験者の血漿ＭＩＦ濃度が、症状発症後の３時間以下、２時間以下、１時間以下又は３０分以下に採取された試料において測定される、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の心臓バイオマーカー。
【請求項２６】
基準血漿ＭＩＦ濃度が１．４μｇ／Ｌ以上である、請求項２２〜２５のいずれか１項に記載の心臓バイオマーカー。
【請求項２７】
ＡＣＳがＡＭＩである、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の心臓バイオマーカー。
【請求項２８】
ＡＭＩが、ＳＴ上昇心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）又は非ＳＴ上昇心筋梗塞（非ＳＴＥＭＩ）である、請求項２７に記載の心臓バイオマーカー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）を診断する方法、ＡＣＳを予後診断する方法及びこれらの方法に使用される心臓バイオマーカーに関する。本発明は、また、これらの方法により使用される装置及びキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
任意の従来技術の出版物が本明細書において参照される場合、そのような参考文献は、出版物がオーストラリア又はその他の国において当該技術における一般的な技術常識の一部を形成することの容認を構成しないことが、理解されるべきである。
【０００３】
血漿バイオマーカーの使用は、ＡＣＳの診断及び管理の中心となっている。例えば、冠状動脈疾患（ＣＡＤ）の患者におけるトロポニン上昇の予後診断（prognostic）の影響は、十分に確立されている。
【０００４】
心筋壊死、したがってＡＣＳのための現存する血漿バイオマーカーには、ミオグロビン、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）及びトロポニンが含まれる。これらの血漿バイオマーカーは、それぞれ問題がある。
【０００５】
ミオグロビンは、心臓事象のおよそ２時間後に血漿中でピークに達する。しかし、ミオグロビンは低い心臓特異性を有する。
【０００６】
ピーク血漿ＣＫ及びＣＫの累積放出（曲線下の面積）を、心筋壊死に起因する梗塞サイズの計算を含むＡＣＳの診断に使用することができる。ＣＫは、心臓事象のおよそ１０時間後に血漿中でピークに達する。累積血漿ＣＫ濃度は、心臓事象の少なくとも４８時間後まで入手可能ではない。更に、ＣＫは心臓特異性ではない。
【０００７】
トロポニンは、ＡＣＳ、例えば心筋壊死の早期検出のために主に使用される血漿バイオマーカーとなっており、ＣＫによる測定の座をほぼ奪っている（largely superseded）。トロポニンは、現在では心筋壊死の最も感受性があり、特異的な検査である。ピーク血漿トロポニン及びトロポニンの累積放出の両方を、心筋壊死に起因する梗塞サイズの計算を含むＡＣＳの診断に使用することができる。しかし、非冠動脈性（非虚血性）の原因に起因する、例えば腎不全、敗血症（sepsis）又は異好抗体（heterophile antibodies）の存在に起因する血漿トロポニンの明らかな上昇が良く知られている。これらの制限は重要であるが、血漿トロポニン測定の診断価値に対する最も有意な制限は、心臓事象の発症とその後のトロポニン上昇との間の遅延である。多くの場合において、心臓事象後の最初の６時間にわたってトロポニンの上昇がないことは明白である。したがって、ピークトロポニン濃度に基づいてＡＣＳ、例えばＡＭＩを排除又は除外するため、症状発症後の８〜１２時間まで一連の測定を実施しなければならない。累積血漿トロポニン濃度の計算は、心臓事象後の少なくとも４８時間の間、測定を必要とする。
【０００８】
したがって、胸痛を示す患者の早期、すなわち症状発症後の６時間未満の診断を改善することができる、ＡＣＳに特異的なバイオマーカーを使用するＡＣＳの診断方法の必要性が存在する。そのような方法は、世界的な保健サービスの供給に重大な影響を与える潜在性を有する。
【発明の概要】
【０００９】
第一態様は、被験者において急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）を診断する方法であって、被験者の試料中の血漿マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）濃度を測定すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断することを含み、ここで試料が症状発症後の４時間未満に採取される方法を提供する。
【００１０】
第二態様は、被験者においてＡＣＳを予後診断（prognosing）する方法であって、被験者の試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度からＡＣＳの規模を予後診断（prognosing）することを含む方法を提供する。
【００１１】
第三態様は、被験者のＡＣＳを治療する方法であって、（ａ）症状発症後の４時間未満に被験者から採取した試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定し、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断すること；又は（ｂ）被験者の試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定し、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいときにＡＣＳを診断し、被験者の血漿ＭＩＦ濃度からＡＣＳの規模を予後診断（prognosing）すること；並びに（ｃ）被験者に経皮的冠動脈インターベンション（ＰＣＩ）及び／又は線維素溶解を実施することを含む方法を提供する。
【００１２】
第四態様は、（ａ）被験者においてＡＣＳを診断する方法であって、症状発症後の４時間未満に被験者から採取された試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断することを含む方法における；又は（ｂ）被験者においてＡＣＳを予後診断（prognosing）する方法であって、試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度からＡＣＳの規模を予後診断prognosingすることを含む方法における使用のための、被験者の試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定する手段を含む装置を提供する。
【００１３】
第五態様は、（ａ）被験者においてＡＣＳを診断する方法であって、症状発症後の４時間未満に被験者から採取された試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断することを含む方法における；又は（ｂ）被験者においてＡＣＳを予後診断する方法であって、試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度からＡＣＳの規模を予後診断することを含む方法における使用のための、被験者の試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定する試薬を含む、並びに／或いは第四態様の装置を含むキットを提供する。
【００１４】
第六態様は、症状発症後の４時間未満に被験者から採取された試料中の血漿ＭＩＦ濃度を含み、基準血漿ＭＩＦ濃度より大きな血漿ＭＩＦ濃度が、被験者におけるＡＣＳの徴候を示す心臓バイオマーカーを提供する。
【００１５】
第七態様は、被験者の試料中の血漿ＭＩＦ濃度を含み、基準血漿ＭＩＦ濃度より大きな血漿ＭＩＦ濃度が、被験者におけるＡＣＳの規模の予後徴候（prognostic）を示す心臓バイオマーカーを提供する。
【００１６】
本発明者たちはＳＴＥＭＩの患者における梗塞サイズに対するデスフェリオキサミン（desferrioxamine）を用いた鉄キレート化の効果を研究し、血漿ＭＩＦ濃度及び梗塞サイズを測定することを選択した。ＭＩＦは既知のタンパク質である。ＭＩＦは、ＡＭＩ後の１日以内に血漿に放出されることも知られている。驚くべきことに、本発明者たちは、ＡＭＩ（症状発症）後の４時間未満にＡＭＩ被験者から採取された血漿試料においてＭＩＦが測定されたとき、ＭＩＦ濃度がＡＭＩの徴候を示すことを見出した。更に本発明者たちは、予想外なことに、そのような血漿ＭＩＦ濃度がＡＭＩの徴候を示すのみならず、血漿ＭＩＦ濃度がＡＭＩの規模、すなわち梗塞サイズの予後徴候を示すことも見出した。本発明者たちはこれらの所見を確認し、得られた発明は、従来技術の方法及びバイオマーカーに対して少なくとも以下の利点を提供する。
（１）現在、ミオグロビンは梗塞の最も早期の測定であるが、ミオグロビンは心臓特異的でもなく、梗塞サイズを予後診断又は予測（prognose or predict）もせず、一方、血漿ＭＩＦは、梗塞サイズに対して心臓特異的でもあり、予後徴候的（prognostic）でもある。
（２）ＭＩＦは、症状発症後の４時間未満に血漿に出現し、ミオグロビンと類似しているが、ＣＫ及びトロポニンよりもかなり早い。
（３）症状発症後の４時間未満に採取された血漿中で測定されたＭＩＦ濃度は、ＡＣＳの徴候を示すが、同様の時点で採取された血漿中で測定されたミオグロビン、ＣＫ又はトロポニンのいずれもＡＣＳの徴候を示さない。および
（４）血漿ＭＩＦ濃度は、ＭＩの規模又は程度（magnitude or extent）、したがって罹患率及び死亡率（morbidity and mortality）の予後徴候（prognostic）を示す（全ての現存するバイオマーカーを参照すること）。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図1は、ＡＭＩ後の被験者（ＭＩ、ｎ＝１５）において増加したが、安定狭心症（stable angina）の被験者（ＳＡ、ｎ＝１０）又は健康な被験者（ＣＴＬ、ｎ＝１０）において増加しなかった入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度を示す。血漿ＭＩＦ濃度は、ＡＭＩ患者において、梗塞後の３日目にも増加した（ｎ＝１４）。*Ｐ＜０．０５対ＣＴＬ又はＳＡ、†Ｐ＜０．０５対１日目のＭＩ（ＭＩ  ｄ１）。
【図２】図２は、対照の上限基準値と比較した、バイオマーカー入院（admission）ＭＩＦ、ＣＫ、トロポニンＩ及びミオグロビン濃度を示す。破線は対応するバイオマーカーの上限基準正常限度を示す。ＭＩＦと比較して*ｐ＝０．００２；ＭＩＦと比較して†ｐ＜０．０００１；ＭＩＦと比較して‡ｐ＝０．００１。
【図３】図３は、入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度と、入院（admission）与心臓バイオマーカーの（Ａ）トロポニンＩ（ｎ＝１４）及び（Ｂ）ＣＫ（ｎ＝１５）、（Ｃ）梗塞サイズ（ｎ＝１０）、並びに（Ｄ）ＡＭＩ後のＬＶ機能（ＬＶＥＦ）（ｎ＝１０）との相関関係を示す。入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度は、トロポニンＩ及びＣＫの入院（admission）血漿濃度と正相関した。入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度は、また、３日目の梗塞サイズと正相関し、３日目のＬＶＥＦと負相関した。
【図４】図４は、それぞれ３日目のＭＩサイズに対する（Ａ）入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度、心臓バイオマーカーの（Ｂ）ＣＫ、（Ｃ）トロポニン及び（Ｃ）ミオグロビンの入院（admission）濃度の相関関係を示す。
【図５】図５は、それぞれ３か月目のＭＩサイズに対する（Ａ）入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度及び（Ｂ）心臓バイオマーカーのミオグロビンの入院（admission）濃度の相関関係を示す。
【図６】図６は、入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度と、（Ａ）左心室駆出分画（ＬＶＥＦ）、（Ｂ）左心室拡張末期容積（ＬＶＥＤＶ）及び（Ｃ）左心室収縮末期容積をそれぞれ含む（心臓磁気共鳴画像により検出される）左心室機能及び寸法との相関関係を示す。これらのデータは、入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度がＭＩ後心臓リモデリングを予測することを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
ＡＭＩ後の長期罹患率及び死亡率は、ＭＩサイズ及び左心室（ＬＶ）機能障害の程度によりほぼ決定される。一次経皮的冠動脈インターベンション（ＰＰＣＩ）は、現在、梗塞サイズ及び罹患率を制限するためのＳＴ上昇ＭＩ（ＳＴＥＭＩ）患者の治療における確立された標準治療である。本発明者たちは、正常（すなわち、基準濃度）より大きな入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度がＡＭＩ、特にＳＴＥＭＩを診断できることを見出した。一部の被験者は、ベースラインで異常なＥＣＧを示し、このことはＡＣＳ又はＡＭＩの診断にとって情報価値がない。したがって、入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度は、これらの患者においてＡＭＩを診断するために特に有用である。
【００１９】
ＡＭＩが診断された大部分の被験者は、ＰＰＣＩで治療される。永続的又は一時的にＰＣＩ施設のない病院では、本発明者たちは、入院（admission）ＭＩＦ血漿濃度が、所定の被験者をＰＣＩ施設のある病院に転院させるべきかを確立できると提案している。更に本発明者たちは、ＭＩＦが予後的影響を有し、したがってＡＭＩ患者におけるＭＩサイズの早期の正確な予測は、特に複雑な患者において又は地方の医療資源が限定されている場合に有益であることを見出した。
【００２０】
実施例１は、血漿ＭＩＦ濃度が、最初に得られる入院（admission）後試料において他のバイオマーカーと比較して高い割合のＳＴＥＭＩ患者で上昇していることを示す。一回入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度は、ＭＩＦが心筋壊死後に極めて早期に上昇すると思われるので、ＳＴＥＭＩの急性心筋壊死の早期診断のために現行のバイオマーカーより優れていることが更に開示されている。入院（admission）後に得られる最も早期の血液試料に由来する血漿ＭＩＦ濃度は、梗塞サイズ及び心臓機能を評価するための現行の標準的画像化様式である心臓磁気共鳴（ＣＭＲ）により評価される梗塞サイズを予測できたことも開示している。
【００２１】
したがって、血漿トロポニン濃度が正常範囲内に留まっている時間である来院の最初の数時間以内に大部分の患者において心筋壊死を検出することができる、入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度のようなバイオマーカーの利用可能性に本質的な利点がある。本発明者たちが示しているように、入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度は、診断、予後診断（prognosis）（すなわち、梗塞サイズの予測）及び患者管理において意味を持つ。
【００２２】
遺伝子改変動物による研究は、ＡＭＩ後の強い炎症応答と組み合わされたＭＩＦの重要な役割を明らかにした。ＭＩＦは、前もって形作られた状態で心筋細胞に存在することが知られている。このことは、ＡＭＩ後の早ければ４〜６時間後に検出された著しく上昇し、ＡＭＩの３週間後に対照濃度に戻る前に次の２週間にわたって上昇したままであった、ＭＩＦ血漿濃度を報告したヒト臨床研究により支持されている。これらの臨床及び実験研究は、ＭＩＦとＡＩＭの密接な関係を示しているが、極めて早期の循環ＭＩＦ濃度が心筋壊死の発症及び程度、すなわち梗塞サイズとどの程度相関するかは確立されていなかった。すなわち、本件発明者が、ＭＩＦ濃度が症状発症後の４時間未満に上昇すること及び血漿ＭＩＦ濃度がＡＣＳの徴候と予後徴候（例えば、ＡＭＩと梗塞サイズ）の両方を示すことを実証するまで、確立されていなかった。
【００２３】
線維素溶解又はＰＣＩのいずれかによるＭＩサイズの制限は、ＳＴＥＭＩの罹患率及び死亡率を低減するために重要である。患者管理及び血管再生の意思決定過程における最終的なＭＩサイズの早期知識は、多数の利点をもたらす。第一には、ＳＴＥＭＩの診断が明白ではない又は言いよどむ（stuttering）患者を診察する臨床医たちは、上昇したバイオマーカーがＭＩサイズを予測するという知識から利益を得ることができ、このことは、再灌流の適時性のみならず、冠動脈疾患集中治療室又は集中治療に必要な再灌流後支持心臓治療についても意思決定過程を促進する（facilitate）。第二には、医療資源が限定されている地域では、最終的なＭＩサイズについての早期知識は、患者をＰＣＩが可能な病院に転院させるか又は特に有意な共存病（co-morbidities）を有するものでは最初に線維素溶解を試みるかに関して影響を及ぼすことがある。一回入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度と３日目ＭＩサイズの印象的な相関関係の所見（この所見は、３か月間続いた）は、本発明のバイオマーカーが臨床設定において、とりわけ緊急治療室設定において有用であること又は専用医療向け（point-of-care）パネル（point-of-care panel）に別のバイオマーカーとして組み込まれることを証明している。ＰＰＣＩの緊急機械式再灌流は、ＳＴＥＭＩの患者における目的であることが認識されている。入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度の測定は、再灌流を遅延させるべきではなく、ＰＰＣＩ後の患者の補助療法を含む進行中の管理において極めて重要であり、それは、そのことがＭＩサイズの更なる予後情報を提供するからである。
【００２４】
早期診断は、ＡＣＳが疑われる患者の管理にとって重要である。加えて、最終的なＭＩサイズの早期知識は、患者管理の優先順位付け及び医療供給サービスにおいて有利である。入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度がＳＴＥＭＩ患者において最高であることが、本明細書の実施例１に開示されている（ＳＴＥＭＩの２．２±１．２対安定したＣＡＤの０．８±０．３対対照の０．７±０．４μｇ／Ｌ、ｐ＜０．０００１）。ミオグロビン、ｃＴｎＩ及びＣＫと比較すると、血漿ＭＩＦ濃度は、入院（admission）時に有意に多くの割合の患者において上昇した（ＭＩＦ  ７１％対ｃＴｎＩの３６％対ミオグロビンの３２％対ＣＫの１４％、全てＭＩＦと比較してｐ＜０．０５）。入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度は、３日目と３か月目の両方のＭＩサイズ（それぞれ、ｒ＝０．８、ｐ＜０．０００１；及びｒ＝０．７、ｐ＜０．０００１）と相関した。入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度は、３日目及び３か月目のＭＩサイズ（両方とも、ｐ＜０．０５）の唯一の多変量予測因子であった。
【００２５】
血漿ＭＩＦの上限基準濃度は、対照及び安定なＣＡＤ参加者で計算した平均より２ＳＤ高く、１．４μｇ／Ｌであった。
【００２６】
ＡＭＩの３日後の梗塞サイズを、百分率で表すことができ、以下の相関関係から予後診断（定量化）（prognosed (quantified)）することができる：
３日目の梗塞サイズ（％）＝６．７×入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度（μｇ／Ｌ）＋３．０。
【００２７】
ＡＭＩの３か月後の梗塞サイズを、百分率で表すことができ、以下の相関関係から予後診断（定量化）（prognosed (quantified)）することができる：
３か月目の梗塞サイズ（％）＝５×入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度（μｇ／Ｌ）＋１．３。
【００２８】
当業者は、血漿ＭＩＦ濃度の規模がＭＩＦの測定に使用されるアッセイの特徴（例えば、異なる抗体）によって変わりうることを理解する。それにもかかわらず、当業者は、適切な対照試料が分析される限り、適切な基準血漿ＭＩＦ濃度を決定できることも理解する。
【００２９】
したがって、上限基準血漿ＭＩＦ濃度は、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０μｇ／Ｌ又はそれ以上でありうる。
【００３０】
血漿ＭＩＦ濃度は、基準血漿ＭＩＦ濃度を１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは１００％又はそれ以上で超える場合、基準血漿ＭＩＦ濃度よりも大きい。基準血漿ＭＩＦ濃度を５０％超える血漿ＭＩＦ濃度は、１．５倍大きな血漿ＭＩＦ濃度と等しく、基準血漿ＭＩＦ濃度を１００％超える血漿ＭＩＦ濃度は、２倍大きな血漿ＭＩＦ濃度と等しい、等々である。したがって、血漿ＭＩＦ濃度は、基準血漿ＭＩＦ濃度の２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、１０倍又はそれ以上の場合、基準血漿ＭＩＦ濃度より大きい。別の実施態様において、血漿ＭＩＦ濃度は、基準血漿ＭＩＦ濃度を超え、差が当業者に既知の方法により統計的に有意であると決定される場合、基準血漿ＭＩＦ濃度より大きい。
【００３１】
更に、ＡＣＳの規模、例えば梗塞サイズを計算する予後診断（prognostic）相関関係は、本開示によって当業者により容易に決定することができる。
【００３２】
血漿バイオマーカーは、急性心筋虚血事象の診断において中心的な役割が想定される。これらのマーカーのうち最も広範囲に使用されるものは、収縮器官（筋節）（contraction apparatus (sarcomere)）関連タンパク質、トロポニン及びトロポニンの心筋細画分（subfractions）、の放出に依存したものであり、これらは感受性及び特異性における利点に起因してＣＫの使用にほぼ取って代わっている（supplanted）。血漿トロポニン測定の利点は、心筋壊死の７〜１０日後まで上昇したままであることであり、これは前の週に発生した胸痛の症状の診断に臨床的に有用でありうる。しかし、非冠動脈性（非虚血性）（non-coronary (non-ischaemic)）の原因に起因する、例えば腎不全、敗血症（sepsis）又は異好抗体（heterophile antibodies）の存在に起因する血漿トロポニンの明らかな上昇が良く知られている。これらの制限は重要であるが、血漿トロポニン測定の診断価値に対する最も重要な制限は、虚血事象の発症とその後のトロポニン値の上昇との間の遅延である。したがって、多くに場合において、最初の６時間にわたって上昇がないことは明白であり、急性ＭＩを「除外（rule out）」するバイオマーカーは、症状発症後の８〜１２時間まで一連の測定を必要とする。対照的に、血漿ＭＩＦ濃度は、症状発症後の約４時間未満にＡＣＳ、例えばＡＭＩを正確に診断する。血漿トロポニン濃度が正常範囲内に留まっている時間である来院の最初の数時間以内に大部分の患者において心筋壊死を検出することができる、本発明のバイオマーカーの利用可能性に本質的な利点がある。
【００３３】
ＡＣＳの専用医療向け（point-of-care）の除外を評価する大部分の研究は、ミオグロビンは心筋壊死の早期マーカーであるが、特異性を欠いているので、診断アルゴリズムの感受性を改善するためにミオグロビンの使用を用いてきた。しかし、ＳＴＥＭＩ群における入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度は、入院（admission）ミオグロビンと比較して有意に高い割合の患者において既に上昇していた。このことは、ＭＩＦが、少なくとも多量の心筋壊死がＳＴＥＭＩ設定のように発生する可能性がある場合には、早期心筋壊死の診断に対する感受性を改善する目的においてミオグロビンよりも大きな臨床有用性があることを示唆する。
【００３４】
実験研究は、ＭＩＦが梗塞及び非梗塞心筋層において高く発現することを示唆している。いかなる特定の仮説に束縛されるものではなく、正確な供給源は依然として不明であるが、血漿ＭＩＦ濃度の早期上昇は、前合成（pre-synthesized）された心筋貯蔵の放出を反映するもので、一方、濃度の後期上昇は、循環単核細胞（circulating mononuclear cells）による生成を反映しているのかもしれない。
【００３５】
したがって、本発明はＡＣＳを診断する方法、ＡＣＳを予後診断する方法及びＡＣＳを治療する方法に関する。
【００３６】
本明細書で使用されるとき、血漿ＭＩＦ濃度を測定することを含む、被験者のＡＣＳを診断、予後診断又は治療する「方法」は、代替的な形態で存在することができる。一つの例において、方法は、被験者のＡＣＳを診断、予後診断又は治療するための血漿ＭＩＦ濃度の「使用」の形態でありうる。第二の例において、方法は、被験者のＡＣＳを診断、予後診断又は治療するための「使用」における血漿ＭＩＦ濃度の形態でありうる。別の形態において、方法は、診断若しくは予後診断用の試薬又は薬剤の「製造における血漿ＭＩＦ濃度の使用」のスイス型でありうる。
【００３７】
好ましい実施態様において、被験者におけるＡＣＳの診断又は予後診断の方法は、被験者に戻されない血漿（又は血清又は血液）試料によりインビトロで実施される。
【００３８】
被験者のＡＣＳを診断、予後診断又は治療する方法は、別の心臓バイオマーカーを測定することを更に含むことができる。一つの実施態様において、方法は、血漿ミオグロビン、血漿トロポニン又は血漿クレアチンキナーゼを測定することを更に含んでもよい。トロポニンは、心臓トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）を含むトロポニンＩ又はトロポニンＴでありうる。トロポニンは、高感度トロポニンアッセイを使用して測定することができる。
【００３９】
被験者のＡＣＳの診断又は予後診断に続いて、方法は、経皮的冠動脈インターベンション（ＰＣＩ）及び／又は線維素溶解（fibrinolysis）により被験者を治療することを更に含むことができる。治療は、抗血栓薬、抗血小板薬、例えば、糖タンパク質ＩＩＢ／ＩＩＩＡインヒビター（例は、アブシキシマブ、エプチフィバチド若しくはチロフィバン（abciximab, eptifibatide, or tirofiban））又はアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）レセプターインヒビター（例は、クロピドグレル、プラスグレル、チカグレロール若しくはチクロピジン（clopidogrel, prasugrel, ticagrelor, or ticlopidine））の投与を更に含むことができる。
【００４０】
好ましくは、ＭＩＦが測定される試料は血漿である。血漿は、ＥＤＴＡ、ヘパリンナトリウム、ヘパリンリチウム、クエン酸ナトリウム又はシュウ酸ナトリウムによる抗凝血血液から得ることができる。あるいは、ＭＩＦが測定される試料は血清である。一つの実施態様において、試料は全血である。
【００４１】
「急性冠動脈症候群」又は「ＡＣＳ」は、胸部不快感を伴う状態又は心臓への酸素不足により引き起こされる他の症状の範囲を意味する。症状は、既に存在している動脈硬化性プラークの侵食、亀裂（fissuring）又は破裂（rupture）の結果として生じ、同時に生じる。心筋壊死の証拠が不在のとき、不安定狭心症が診断されるが、心筋壊死の証拠が存在するとき（例えば、血漿バイオマーカー）、ＡＭＩが診断される。したがって、ＡＣＳは不安定狭心症又はＡＭＩを含みうる。「ＡＣＳ」は、安定狭心症を含まない。
【００４２】
「急性心筋梗塞」又は「ＡＭＩ」は、血液供給の制限（「虚血」）、酸素不足及び細胞死（「壊死」）を引き起こす、心臓の一部への血液供給の中断を意味する。これは、心臓筋肉組織（心筋層）の損傷又は死をもたらしうる。したがって、「心筋壊死」は心臓細胞の死を意味する。ＡＭＩを、心電図のＳＴセグメントの上昇により診断されるＳＴ上昇心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）及びそのような心電図の変化の不在により診断される非ＳＴ上昇心筋梗塞（非ＳＴＥＭＩ）に分けることができる。ＳＴＥＭＩは、線維素溶解、血栓溶解又はＰＣＩにより治療することができる。非ＳＴＥＭＩは投薬により管理することができるが、ＰＣＩが多くの場合、入院（admission）中に実施される。
【００４３】
「冠動脈事象」は、ＡＭＩ、不安定狭心症又は心臓死亡率（cardiac mortality）を含む任意の重篤な又は急性の心血管性の状態を意味する。
【００４４】
「左心室肥大」又は「ＬＶＨ」は、心臓の左心室の心筋層（筋肉）の肥厚を意味する。
【００４５】
「左心室拡張末期容積（Left ventricular end-diastolic volume）」又は「ＬＶＥＤＶ」は、収縮（contraction）直前の左心室内の血液の容積と定義される。
【００４６】
「左心室収縮期容積（Left ventricular end-systolic volume）」又は「ＬＶＥＳＶ」は、収縮末期の左心室内に残留する血液の容積と定義される。
【００４７】
「一回拍出量（Stroke volume）」は、ＬＶＥＤＶとＬＶＥＳＶの差と定義され、収縮（心拍）毎に左心室から駆出される血液量を意味する。
【００４８】
「左心駆出分画（Left ventricular ejection fraction）」又は「ＬＶＥＦ」は、収縮（心拍）毎に駆出されるＬＶＥＤＶの分画、すなわちＬＶＥＤＶで割った「一回拍出量」と定義される。ＬＶＥＦは百分率で表すことができる。
【００４９】
本明細書で使用されるとき、「梗塞サイズ」は、心臓磁気共鳴（ＣＭＲ）により測定され、切片厚さ及び心筋密度の１．０５ｇ／ｍｌと掛けて梗塞体積を得て、左心室体積の百分率として表される、切片の各短軸における超拡大心筋層（手作業でたどった心内膜（endocardial）及び心外膜（epicardial）輪郭（contours）により境界を付けた）領域と定義される。
【００５０】
本明細書で使用されるとき、「左室心筋重量係数（left ventricular mass indexed）」は、被験者の身長（ｍ）の二乗で割った左心室重量（ｇ）を意味し、ｇ／ｍ2の単位で表される。
【００５１】
本明細書で使用されるとき、「バイオマーカー」は、測定可能な物質を意味し、その検出は特定の心臓疾患を示す。「バイオマーカー」は、疾患の予後診断と相関する測定可能な物質の発現又は状態の変化を示すことができる。「バイオマーカー」は、タンパク質又はペプチドでありうる。「バイオマーカー」は、血漿のような体液中で測定することができる。本明細書で使用されるとき、「バイオマーカー」は、血漿マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）である。一つの実施態様において、ＭＩＦは完全長である。別の実施態様において、ＭＩＦはそのフラグメントである。
【００５２】
好ましくは、ＭＩＦは臨床診断用のヒトＭＩＦであり、ＮＣＢＩ基準配列：ＮＰ＿００２４０６．１（配列番号１）により提供されるアミノ酸配列を含む。
ＭＰＭＦＩＶＮＴＮＶＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬＨＳＩＧＫＩＧＧＡＱＮＲＳＹＳＫＬＬＣＧＬＬＡＥＲＬＲＩＳＰＤＲＶＹＩＮＹＹＤＭＮＡＡＮＶＧＷＮＮＳＴＦＡ
【００５３】
あるいは、ＭＩＦは獣医診断用に別の哺乳動物、例えば霊長類、ネズミ、ウシ、ヒツジ、ウマ、ブタ、イヌ又はネコからのものでありうる。
【００５４】
本明細書で使用されるとき、「診断」及び同様の用語は、ＡＣＳの同定を意味する。特に、血漿ＭＩＦ濃度の測定はＡＣＳの診断を可能にする。
【００５５】
本明細書で使用されるとき、「予後診断」及び関連する用語は、ＡＳＣの起こりそうな結果の記載を意味する。更に、血漿ＭＩＦ濃度の測定はＡＣＳを定量化することができ、それによってＡＣＳの予後診断を可能にする。
【００５６】
診断及び予後診断を相前後して使用することができる。例えば、ＡＭＩが疑われる被験者において、血漿ＭＩＦ濃度の測定はＡＭＩの同定（診断）を可能にし、血漿ＭＩＦ濃度がＡＭＩの規模と相関するので（例えば、梗塞サイズの定量化）、血漿ＭＩＦ濃度は、梗塞から生じる起こりそうな罹患率及び死亡率の記載（予後診断）を可能にする。一つの実施態様において、第一態様の方法は、ＡＣＳを予後診断することを更に含む。第二態様の一つの実施態様において、診断及び／又は予後診断は、症状発症後の４時間未満に被験者から採取された試料によって行うことができる。
【００５７】
本明細書で使用されるとき、「症状の発症」又は「症状発症」は、被験者が正常な生理からの逸脱を経験し始める時である。
【００５８】
本明細書で使用されるとき、「入院（admission）」は、医学的治療が提供されるべき被験者が、病院又は他の医療施設により正式に受け入れられたことを意味する。特に、「入院（admission）」は、被験者が医学的治療のために受け入れられた正確な時間と関連する。
【００５９】
本明細書で使用されるとき、「入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度」は、入院（admission）後に実施可能な限り早くであるが、症状発症後の４時間未満に得られた血液試料に由来する血漿において測定されたＭＩＦ濃度を意味する。あるいは、「入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度」は、症状発症後の２１０分、１８０分、１５０分、１２０分、１１０分、１００分、９０分、８０分、７０分、６０分、５０分、４０分、３０分、２０分、１０分若しくは５分又はそれ以下で得た血液試料に由来する血漿において測定されたＭＩＦ濃度を意味することができる。
【００６０】
被験者が医学的治療のために受け入れられるのではなく、例えば家庭又は仕事場に居る場合、「入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度」は、症状発症後の２４０分未満、或いは２１０分、１８０分、１５０分、１２０分、１１０分、１００分、９０分、８０分、７０分、６０分、５０分、４０分、３０分、２０分、１０分若しくは５分又はそれ以下を意味することが理解される。
【００６１】
試料を被験者から採取できる時間は、本発明の全ての態様、特に本発明の第一、第二及び第三態様に対して適用されうる。
【００６２】
本明細書で使用されるとき、血漿ＭＩＦを「測定する手段」は、ＭＩＦが検出及び測定（アッセイ又は定量化）されうる任意の機構を意味する。
【００６３】
血漿ＭＩＦは、例えば、イムノアッセイ、例えばＥＬＩＳＡ、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、ウエスタンブロット、スロットブロット、ドットブロット又は免疫沈降、続くドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）、クロマトグラフィーなどが含まれるが、これらに限定されない、タンパク質を検出するための当業者に既知の任意の方法を使用して試料において検出及び測定することができる。例えば、デンドリマー増強放射状分割イムノアッセイ（Dendrimer-enhanced radial partition immunoassays）及び免疫蛍光アッセイが当該技術において知られており、市販されている。
【００６４】
本明細書で使用されるとき、「アッセイ」及びその変形は、血漿ＭＩＦの濃度の測定又は定量化を意味する。
【００６５】
目的のタンパク質を検出する一つの例示的な作用物質は、血漿ＭＩＦに特異的に結合することができる抗体又はそのフラグメントである。抗体を、直接的又は間接的のいずれかにより検出可能に標識することができる。
【００６６】
抗ＭＩＦ抗体は、Ａｂｃａｍのような供給者により市販されており、ニワトリポリクローナル抗ＭＩＦ抗体（ａｂ３４６４４）；ヤギポリクローナル抗ＭＩＦ抗体（ａｂ３６１４６、ａｂ１４５７４）；ウサギポリクローナル抗ＭＩＦ（Ｃ末端）抗体（ａｂ６５８６９）；ウサギポリクローナル抗ＭＩＦ抗体（ａｂ８６６７０）；マウスモノクローナル抗ＭＩＦ抗体（ａｂ５５４４５）；及びマウス抗ＭＩＦモノクローナル抗体［２Ａｒ３］（ａｂ１４５７５）が含まれる。
【００６７】
血漿ＭＩＦのイムノアッセイは、試料を、血漿ＭＩＦに特異的に結合することができる検出可能に標識された抗体又は抗体フラグメントと共にインキュベートすること及び結合した抗体を、当該技術において周知の多数の技術のいずれかにより検出することを含むことができる。下記により詳細に考察されるように、用語「標識された」は、例えば、検出可能な物質を抗体にカップリング（すなわち、物理的に結合）することを介する抗体の直接標識化を意味することができ、また、直接標識された別の試薬との反応による抗体の間接標識化を意味することができる。間接標識化の例には、蛍光標識された二次抗体を使用する一時抗体の検出が含まれる。
【００６８】
試料を、固体支持体又は担体又は可溶性タンパク質を固定化することができる他の固体支持体に接触させ、固定化することができる。次に支持体を適切な緩衝液で洗浄し、続いて、検出可能に標識された抗体で処理することができる。次に固体支持体を緩衝液で再度洗浄して、非結合抗体を除去することができる。次に、支持体に結合した標識の量を従来の方法により検出することができる。
【００６９】
「固体支持体又は担体」とは、抗原又は抗体を結合することができる任意の支持体が意図される。周知の支持体又は担体には、ニトロセルロース、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然及び変性セルロース、ポリアクリルアミド、並びに磁鉄鉱が含まれる。固体支持体又は担体の性質は、ある程度の可溶性又は不溶性のいずれかでありうる。固体支持体は、結合分子が抗原又は抗体に結合することができる限り、実質的にあらゆる可能な構造形態を有することができる。したがって、支持体形態は、ビーズのような球状又は試験管の内面もしくはロッドの外面のような円筒状でありうる。あるいは、表面はシート、試験ストリップなどのような平面でありうる。当業者は、抗体若しくは抗原を結合するのに適した多くの他の担体を知っている又は日常的な実験の使用により確認することができる。
【００７０】
血漿ＭＩＦに特異的な抗体を検出可能に標識する一つの方法は、抗体を、酵素イムノアッセイに使用する酵素に結合することである。抗体に結合した酵素は、例えば分光光度的、蛍光定量的又は可視的手段により検出されうる化学部分を生成するような方法で、適切な基質、好ましくは色原体基質と反応する。抗体を検出可能に標識することができる酵素には、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ−５−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、アルファ−グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ及びアセチルコリンエステラーゼが含まれるが、これらに限定されない。検出及び測定は、酵素のために色原体基質を用いる比色法により達成することができる。検出及び測定は、同様に調製した基質と比較した基質の酵素反応の程度を可視比較することによっても達成することができる。
【００７１】
検出及び測定は、多様な他のイムノアッセイのいずれかの使用によっても達成することができる。例えば、抗体又は機能性抗体フラグメントを放射能標識することによって、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）の使用を介して血漿ＭＩＦを検出することが可能である。放射性同位体（例えば、125Ｉ、131Ｉ、35Ｓ、32Ｐ又は3Ｈ）は、ガンマカウンター若しくはシンチレーションカウンターの使用のような手段により又はオートラジオグラフィーにより検出することができる。
【００７２】
抗体を蛍光性又は発光性化合物で抗体を標識することも可能である。蛍光標識された抗体が適切な波長の光に曝露されるとき、その存在を蛍光によって検出することができる。これらのうち最も一般的に使用される蛍光標識化合物は、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒド（phthaldehyde）及びフルオレスカミンである。
【００７３】
抗体を、152Ｅｕ又は他のランタニド系列のような蛍光発光金属の使用により検出可能に標識することもできる。これらの金属を、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）又はエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような金属キレート群の使用により抗体に結合させることができる。
【００７４】
蛍光エネルギー移転化合物を用いることもできる。
【００７５】
抗体を、化学発光化合物とカップリングさせることによって検出可能に標識することもできる。化学発光標識抗体の存在は、化学反応の経過で生じる発光の存在を検出することによって決定される。特に有用な化学発光標識化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、セロマティックアクリジニウムエステル（theromatic acridinium ester）、イミダゾール、アクリジニウム塩及びシュウ酸エステルである。同様に、生物発光化合物を使用して、抗体を標識することができる。生物発光は、生態系において見出される化学発光の種類であり、そこでは触媒タンパク質が化学発光反応の効率を増加している。生物発光タンパク質の存在は、発光の存在を検出することによって決定される。標識化の目的にとって重要な生物発光化合物は、ルシフェリン、ルシフェラーゼ及びエクオリンである。
【００７６】
別の実施態様において、アプタマーのような、抗体以外の特定の結合分子を、血漿ＭＩＦとの結合に使用することができる。
【００７７】
血漿ＭＩＦの他の「測定手段」には、染料に基づいた検出を用いるクロマトグラフィー若しくは電気泳動又は質量分析法のような分光測定法を用いるプロテオミクス手法が含まれる。分光測定法を、可視染料に基づいたアッセイ及び蛍光又は発光剤の測定に使用することができる。
【００７８】
タンパク質チップアッセイを使用して、血漿ＭＩＦを測定することができる。
【００７９】
血漿ＭＩＦは、以下の方法の１つ以上を使用して測定又はアッセイすることもできる。例えば、方法には、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、質量分析法、例えば、エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ−ＭＳ）、ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ、ＥＳＩ−ＭＳ／（ＭＳ）ｎ（ｎは０を超える整数である）、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ）、表面増強レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分析（surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry）（ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ）、ケイ素の脱離／イオン化（ＤＩＯＳ）、二次イオン質量分析（ＳＩＭＳ）３四重極飛行時間型（quadrupole time-of-flight）（Ｑ−ＴＯＦ）、大気圧化学イオン化質量分析（atmospheric pressure chemical ionization mass spectrometry）（ＡＰＣＩ−ＭＳ）、ＡＰＣＩ−ＭＳ／ＭＳ、ＡＰＣＩ−（ＭＳ）、大気圧光イオン化質量分析（atmospheric pressure photoionization mass spectrometry）（ＡＰＰＩ−ＭＳ）、ＡＰＰＩ−ＭＳ／ＭＳ及びＡＰＰＩ−（ＭＳ）が含まれうる。他の質量分析法には、四重極フーリエ変換質量分析（ＦＴＭＳ）及びイオントラップが含まれうる。他の適切な方法には、化学抽出分配、カラムクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性（逆相）液体クロマトグラフィー、等電点電気泳動、一次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）、二次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動（２Ｄ−ＰＡＧＥ）又は薄層、ガス若しくは液体クロマトグラフィーのような他のクロマトグラフィー、或いはこれらの任意の組み合わせが含まれうる。
【００８０】
一つの実施態様において、ＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳは、大量の情報を比較的短時間に生成することを可能にする。生物学的試料が、試料中のＭＩＦに結合する幾つかの多様な支持体の１つに適用される。試料は、事前に精製又は分画され、また、されることなく０．５μＬほどの少ない容量でこれらの表面に直接適用される。試料を支持体表面に適用する前に濃縮又は希釈することができる。次にレーザー脱離／イオン化を使用して、３時間の短さで試料の質量スペクトルが生成される。
【００８１】
ビーズアッセイを使用して、血漿ＭＩＦを測定することができる。
【００８２】
本発明で使用されるとき、「装置」は、血漿ＭＩＦを測定するアッセイを実施する構成要素の物理的な配置を意味する。装置は、実験室測定を必要とすることなく血漿ＭＩＦを測定するために、医師により使用される専用医療向け（point-of-care）装置でありうる。あるいは、専用医療向け（point-of-care）装置を、例えば初めて又は後発の冠動脈事象の危険性のある被験者において家庭で使用することができる。あるいは、装置を、血漿ＭＩＦが測定される被験者から離れた場所にある実験室に置くことができる。
【００８３】
装置は電気化学セルを用いることができる。電気化学セルは、電極間の電気的干渉を最小限にするため、並列又は「共面（coplanar）」配置でセル内に位置付けされた電極を使用することができる。あるいは、電気化学セルは、電極間の電気的干渉を利用して、試料中に存在しうるヘマトクリット及び妨害化学物質における患者間の変動を修正することができる情報を含む、試料に関する追加的な情報を生じる非共面電極を使用することができる。
【００８４】
一つの実施態様において、装置は、また、血漿ミオグロビン、血漿トロポニン及び／又は血漿クレアチンキナーゼを測定する。一つの実施態様において、装置は、高感度ＣＲＰアッセイの使用によりＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）を測定する。
【００８５】
装置は、定性的な結果（例えば、あり／なし、存在／不在、高／低）、数値的若しくは定量的な結果（例えば、濃度）又は可視検査の結果（例えば、参照スケールと比較した色）を提供することができる。
【００８６】
本発明で使用されるとき、「キット」は、そのうちの１つが血漿ＭＩＦを測定する装置でありうる構成要素の物理的な配置を意味する。キットは、抗ＭＩＦ免疫原性部分のような試薬、免疫原性部分を検出する二次検出剤又は試料調製及び／若しくは処理のための試薬、例えば緩衝液を含むことができる。キットは、高感度ＣＲＰアッセイを実施するため、試薬のような手段を含むことができる。
【００８７】
装置又はキットは、（ａ）被験者においてＡＣＳを診断する方法であって、症状発症後の４時間未満に被験者から採取された試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断することを含む方法；又は（ｂ）被験者においてＡＣＳを予後診断する方法であって、試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度からＡＣＳの規模を予後診断することを含む方法における装置又はキットの使用のための、使用説明書又は指示書を伴うことができる。
【００８８】
本明細書で使用されるとき、装置又はキットは代替的な形態でありうる。一つの形態は、特定の使用に適している又は限定されているように指定され、語「のための（for）」により示される。別の形態は、特定の使用のみに限定され、語「のために使用されるとき（when used for）」又は類似の語により示される。
【００８９】
被験者のＡＣＳを診断又は治療する方法の一つの実施態様において、血漿ＭＩＦは、本明細書に開示される装置を使用して測定される。
【００９０】
本明細書で使用されるとき、「感受性」は、陽性の結果を同定する能力を意味する。「感受性」は、試料中の真陽性の数を真陽性の数と嘘陰性の数の合計で割ることにより計算される。
【００９１】
本明細書で使用されるとき、「特異性」は、陰性の結果を同定する能力を意味する。「特異性」は、試料中の真陰性の数を真陰性の数と嘘陽性の数の合計で割ることにより計算される。
【００９２】
本明細書で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に文脈から明白に示されない限り、複数の対象を含む。したがって、例えば、「発光材料」の意味は、単一の発光材料のみならず、２つ以上の発光材料も含む、等々である。
【００９３】
以下の特許請求の範囲及び本発明記載において、明確な言葉又は必要な含意に起因して文脈が他の解釈を必要とする場合を除いて、語「含む（comprise）」又は「含む（comprises）」若しくは「含む（comprising）」のような変形は、包括的な意味で使用され、すなわち、記述された特徴の存在を特定するが、本発明の多様な実施態様において更なる特徴の存在又は追加を排除しない。
【００９４】
本発明は明確さ及び理解の目的でいくらか詳細に記載されてきたが、本明細書に記載されている実施態様及び方法に対する多様な変更及び改変を、本明細書に開示されている発明の概念の範囲から逸脱することなく行えることを当業者は理解する。
【００９５】
本発明の任意の態様を例示する実施態様は、本発明の他のいずれかの態様に当てはまる。換言すると、本発明の任意の態様を例示する任意の実施態様は、本発明の特定の態様のみに限定されるものではない。
【００９６】
実施例
ここで本発明は、以下の実施例を参照して更に詳細に説明される。実施例は、例示の目的のみで提供され、特に指定のない限り、限定的であることを意図しない。したがって、本発明は、本明細書に提供されている教示の結果から明白になる任意のあらゆる変形を包含する。
【００９７】
方法
試験参加者
試験参加者は、ＳＴＥＭＩの患者における梗塞サイズに対するデスフェリオキサミンによる鉄キレート化の効果を評価する同時研究者主導試験から集めた。簡潔には、ＳＴＥＭＩを初めて示し、胸痛が≧３０分間の長さ、症状発症が＜６時間、新たな虚血の心電図変化（２つの連続的なリード（contiguous leads）でＪポイントが≧０．１ｍＶでのＳＴ上昇）を有する＞１８歳の継続患者が、参加するように求められた。以下の基準の１つ以上を有する全ての患者が排除された。ＣＭＲと適合しない心臓内装置（例えば、ペースメーカー）；現在のＳＴＥＭＩと同じ冠状動脈領域において、以前にＭＩが疑われる又は知られている；救急血管形成術；心原性ショック（収縮期血圧＜９０ｍｍＨｇ）；現在の鉄補給又は既知の鉄欠乏状態；腎不全（推定糸球体濾過率≦３０ｍｌ／分）又は重篤な閉所恐怖症（claustrophobia）。
【００９８】
合計４１名の患者を鉄キレート化試験から動員し（デスフェリオキサミンによる鉄キレート化群からｎ＝２０、プラセボ群からｎ＝２１）、日常的な診療のように全てＰＰＣＩを受けた。全ての患者に、あらゆる試験治療投与の前及びＰＣＩの前に血清試料採取を実施した。ＭＩ後ＣＭＲ検査を、４１名全ての患者では３±１日目、３３名の患者では３か月目に完了した。
【００９９】
ＭＩの病歴のない１０名の年齢適合健康志願者を対照として用いた。過去１２か月間に事前のＭＩを有さず、既知の安定ＣＡＤを有する別の９名の患者も、日常的な外来患者の来診の際に非梗塞対照として用いた。
【０１００】
研究は、２００８年８月から２０１０年１２月までアルフレッド病院（Alfred Hospital）において実施された。全ての患者が書面でインフォームドコンセントを提出し、研究は、ＮＨＭＲＣ  ヒトを対照とした研究の論理的行為に関する国家声明（National Statement on Ethical Conduct in Research Involving Humans）に従ってアルフレッド病院ヒト研究論理委員会（Alfred Hospital Human Research Ethics Committee）によって承認された。
【０１０１】
生化学分析
全血検査、腎機能、ｃＴｎＩ及びＣＫを含む全ての日常的な実験室分析は、患者無作為化に関与しない実験室技術者により市販の自動化プラットフォームでアルフレッド病院病理学部門（Alfred Hospital Pathology Service）において直ぐに分析された。
【０１０２】
この研究のために選択されたＣＫの上限基準限度は、製造会社の推奨に基づいて２００Ｕ／Ｌと控えめに選択され、これは９５パーセンタイルである。
【０１０３】
この研究のために選択されたミオグロビンの上限基準値は、心筋壊死を排除するために専用医療向け（point-of-care）試験を使用するＭｃＣｏｒｄら3による研究に基づいて２００μｇ／Ｌであり、ここで２００μｇ／Ｌは、ＡＣＳに起因する胸痛と区別する最適な切点を提供した。この研究では、ミオグロビンを蛍光イムノアッセイ（Ｔｒｉａｇｅ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｐａｎｅｌ、Ｂｉｏｓｉｔｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）の使用により全血において測定した。
【０１０４】
心臓トロポニンＩ及びミオグロビンは、化学発光微粒子イムノアッセイ（ＣＭＩＡ）を使用してＡｂｂｏｔｔ  Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ  ｃｉ１６２００（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）により測定した。トロポニンＩの検出の下限は０．０３μｇ／Ｌであった。下限検出限度を下回る濃度を「０」として処理した。トロポニンＩの上限基準限度を、０．０５μｇ／Ｌ1とした。
【０１０５】
ＭＩＦは、製造会社の仕様書（正副）に従ってＥＬＩＳＡキット（ＤｕｏｓｅｔヒトＭＩＦカタログ番号ＤＹ２８９）を使用し、Ｒ＆Ｄ  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＮ  Ｕ．Ｓ．Ａ．）から供給された全ての試薬を以前に記載された2ように使用して、血漿中で測定した。正常な血漿値は、Ｙｕ及び同僚2による短い連載以外には以前に発表されていなかったので、対照及び安定ＣＡＤ参加者から得た平均より２ＳＤ高い上限基準値カットオフを使用し、これは１．４μｇ／Ｌであり、Ｙｕら2により報告された正常値をはるかに上回った。
【０１０６】
心臓磁気共鳴画像法による左心室容積、機能及び梗塞サイズの測定
全てのＣＭＲ検査は、アルフレッド病院において臨床１．５−Ｔ  ＣＭＲスキャナー（Ｓｉｇｎａ  ＨＤｘ  １．５−Ｔ、Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｗａｕｋｅｓｈａ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡ）により実施した。ＬＶ機能は、「ＦＩＥＳＴＡ」［定常状態収集を用いる高速画像化（Fast Imaging Employing Steady State Acquisition）］（反復時間［ＴＲ］３．８分間、エコー時間［ＴＥ］１．６分間、３０相及び８ｍｍの切片厚）と呼ばれる標準的なsteady state free precession techniqueにより評価した。ＬＶ駆出分画は、治療割当に関与しない少なくとも２名の心臓病専門医によりディスク法4の加重を使用して、ＬＶ及び右心室を、尖部から、房室間溝をはるかに超える濃度まで網羅する連続短軸ＦＩＥＳＴＡスタック（切片厚８ｍｍ）において容量分析によって計算した。全心室を網羅する遅延増強画像（Late enhancement images）を、大量のガドリニウム−ＤＴＰＡ（０．２ｍｍｏｌ／ｋｇ、Ｍａｇｎｅｖｉｓｔ、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の静脈内投与のおよそ１５分後に取得し、反転回復グラディエントエコー技術（inversion recovery gradient echo technique）（ＴＲ７．１分間、ＴＥ３．１分間、ＴＩは正常な心筋シグナルをゼロにするため個別に決定された、範囲１８０〜２５０分間、切片厚さ８ｍｍ、マトリックス２５６×１９２、取得数＝２）の使用により、梗塞サイズ定量化のために局所的な壊死／線維症を同定した。切片の各短軸における超拡大心筋層（hyperenhanced myocardium）（心内膜及び心外膜輪郭（endocardial and epicardial contours）により境界を付けた）の領域を手作業でたどり、次に切片厚さ及び心筋密度の１．０５ｇ／ｍｌを掛けて、梗塞体積を得て、ＬＶ体積（梗塞サイズ）の百分率で表した5。全ての分析は、梗塞サイズ評価の優れた再現性（ｒ＝０．９８）を伴って、盲検観察者によりＡＷ  ＳＤＣ４．４及びＩＤＬバージョン６．３とＲｅｐｏｒｔＣＡＲＤバージョン３．６を稼働する専用ワークステーションにおいてオフラインで実施した。
【０１０７】
統計分析
分類データは数値及び百分率で表される。連続データは、特に記述のない限り、平均±ＳＤで表される。連続変数は、対応又は非対応（paired or un-paired）スチューデントｔ検定により比較し、一方、分類変数（categorical variables）は、適切な場合、ピアソンカイ二乗検定、マン−ホイットニー検定又フィッシャー正確確率検定により群間で比較した。連続パラメーター間の相関関係は、ピアソン相関係数により評価した。
【０１０８】
単変量線形ロジスティック回帰（Univariate linear logistic regression）を従属変数として３日目及び３か月目のＣＭＲ梗塞サイズにより実施し、入院（admission）
ＭＩＦ、ｃＴｎＩ、ＣＫ及びミオグロビン濃度と梗塞サイズとの関係を逐次的手法により検査して、複数試験の偽陽性結果の数を低減した。ｐ＜０．１０の線形ロジスティック回帰によって現れた任意のバイオマーカーを、変数減少（backward elimination）（保持閾値Ｐ＜０．０５）の使用により多変量線形ロジスティック回帰モデル（multivariate linear logistic regression model）に入れた。
【０１０９】
確率値の＜０．０５が統計的に有意であると考慮された。全てのデータ分析は、ＳＰＳＳバージョン１６（ＳＰＳＳ  Ｉｎｃ．、Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）及びＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５．０（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ＣＡ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）により実施した。
【０１１０】
結果
ベースライン臨床特徴
４１名のＳＴＥＭＩの患者、９名の安定ＣＡＤの患者及び１０名の年齢適合健康志願者を含む試験集団のベースライン臨床特徴を表１に提示する。急性ＭＩ及び安定ＣＡＤの患者は、対照と比較して大部分が男性であった。安定ＣＡＤの患者は、ＳＴＥＭＩ及び対照群よりも有意に年上であった（７３．７±５．１対５９．４±１０．９対５７．７±１２．７、全てｐ＜０．０５）。有意な割合のＳＴＥＭＩ患者は、他の２群と比較して喫煙者であるが、ＳＴＥＭＩと安定ＣＡＤ患者では他の心血管危険因子に有意な差はなかった。
【０１１１】
【表１】
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【０１１２】
ＳＴＥＭＩ患者のベースライン臨床及び処置特徴
表２は、ＳＴＥＭＩ患者の臨床及び処置特徴をまとめる。入院（admission）から血液試料採取までの時間の中央値は、７０［４７〜１０５］分であった。発症から血液試料採取までの時間の中央値は、１９６分であった。平均ＣＫ血漿濃度の１３２．５±１１０．７Ｕ／Ｌのみが、この研究のために選択された上限基準限度（２００Ｕ／Ｌ）を下回り、一方、他の入院（admission）バイオマーカーの濃度は、全て、上限基準限度を上回った（ｃＴｎＩ  ０．１０±０．２１μｇ／Ｌ［基準範囲＜０．０５μｇ／Ｌ］；ミオグロビン３６６．６±９１３．３μｇ／Ｌ［基準範囲＜２００μｇ／Ｌ］；ＭＩＦ２．２±１．２μｇ／Ｌ［基準範囲＜１．４μｇ／Ｌ］。
【０１１３】
【表２】
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【０１１４】
ＳＴＥＭＩ後の入院（admission）バイオマーカーの濃度
図１は、入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度が２つの対照群と比較して有意に増加したこと（３．５倍）を示している。ＭＩＦのそのような上昇は、ＭＩ後３日目まで持続した。
【０１１５】
図２は、入院（admission）血漿バイオマーカー濃度が最初の入手可能な血漿試料において既に上限基準限度を超えていたＳＴＥＭＩの患者の分布を示す。ｃＴｎＩ（３６％）、ミオグロビン（３２％）及びＣＫ（１４％）（全てＭＩＦと比較してｐ＜０．０５）と比較して、有意に高い率の患者が１．４μｇ／Ｌのカットオフを超えるＭＩＦ濃度を有した（７１％）。
【０１１６】
ＣＭＲによる左心室及び梗塞の特徴、並びに心臓バイオマーカーとの相関関係
ＣＭＲパラメーターを表３に提示する。予測されるように、左心室体積指数、梗塞体積及び梗塞サイズは、３日目に大きくなり、３か月で減少した。ＬＶ駆出は、ＬＶ拡張末期容積指数（LV end-diastolic indexed volume）の増加を伴って、この期間にわたって４８．７±７．８から５３．８±９．４％に改善した。
【０１１７】
【表３】
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【０１１８】
図３は、入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度がトロポニンＩ及びＣＫと、並びにＣＭＲにより決定された梗塞サイズと正相関したことを示す。血漿ＭＩＦ濃度と梗塞サイズの相関関係は、入院（admission）時にのみ観察され、３日目の血漿ＭＩＦ濃度と梗塞サイズでは観察されず（データ示さず）、循環中のＭＩＦ濃度の早期上昇が梗塞サイズと関連したことを示した。更に、入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度と、ＡＭＩの３日後にＣＭＲで測定されたＬＶＥＦとの間に負の相関があった（図３）。ＭＩＦ血漿濃度と、ＣＭＲにより決定されたＬＶ容積パラメーター（ＬＶＥＤＶＩ及びＬＶＥＳＶＩ）との間に相関関係は検出されなかった。
【０１１９】
心筋壊死の４つのバイオマーカーのうち、入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度は、３日目のＣＭＲのＭＩサイズと最良に相関し（ｒ＝０．８、ｐ＜０．０００１）、続いてミオグロビンであった（ｒ＝０．３、ｐ＝０．０５）（図４）。入院（admission）ＣＫ及びｃＴｎＩは、３日目のＭＩサイズと相関しなかった。３か月目では、入院（admission）ＭＩＦとミオグロビンの両方の濃度がＭＩサイズと相関した（それぞれ、ｒ＝０．７、ｐ＜０．０００１；ｒ＝０．４、ｐ＝０．０４）（図５）。
【０１２０】
プラセボ群のみの患者における入院（admission）ＭＩＦ及び３日目と３か月目のＭＩサイズ（３日目ではｎ＝２１、３か月目ではｎ＝１８）は、有意な相関関係を生じた（それぞれ、ｒ＝０．７、ｐ＜０．０００１；及びｒ＝０．６、ｐ＝０．００５）。
【０１２１】
ＣＫ及びｃＴｎＩのピーク及び累積放出（曲線下面積［ＡＵＣ］）と、３日目及び３か月目のＭＩサイズとの相関関係の分析も実施した。最強の相関関係は、ＣＫピークと３日目のＭＩサイズ（ｒ＝０．９、ｐ＜０．０００１）で観察され、続いてｃＴｎＩ及びＡＵＣと３日目のＭＩサイズ、（両方とも、ｒ＝０．９、ｐ＜０．０００１）、ＣＫピークと３か月目のＭＩサイズ（ｒ＝０．８、ｐ＜０．０００１）であった。
【０１２２】
３日目及び３か月目のＭＩサイズの入院（admission）バイオマーカー予測因子
ＭＩＦ、ミオグロビン、ＣＫ及びトロポニンのそれぞれの濃度を、症状発症後の中央値の１９６分に採取した各試料において測定した。４つのバイオマーカーを、３日目のＭＩサイズとの単変量関係について試験した（表４Ａ）。ＭＩＦのみが、３日目のＭＩサイズ（非標準化係数（unstandardized coefficient）（Ｂ）４．７５、９５％Ｃｌ  １．７０〜７．８１、ｐ＝０．００４）及び３か月目のＭＩサイズ（４．９６、１．５５〜８．３８、ｐ＝０．０１）の有意に独立した多変量予測因子として現れた（表４Ｂ）。
【０１２３】
【表４】
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【表５】
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【表６】
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【表７】
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【０１２４】
考察
この前向き観察研究（prospective observational study）は、２つの主要な所見を明らかにした。第一には、来院の中央値の７０分に決定された入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度が、ｃＴｎＩの３６％、ミオグロビン値の３２％及びＣＫの僅か１４％と比較して、ＳＴＥＭＩ患者の７１％において既に上昇していたことである。第二には、入院（admission）ＭＩＦ濃度が、ＣＭＲにより決定された３日目及び３か月目の両方の梗塞サイズとの強い相関関係を示したことである。ピーク及び累積放出のＣＫ及びｃＴｎＩ濃度もＡＭＩ後の３日目及び３か月目の両方のＭＩサイズと有意な相関関係を示したが、入院（admission）ＣＫ及びｃＴｎＩにおいては、続くＭＩサイズとの間に有意な相関関係は観察されなかった。
【０１２５】
本発明の分析には、鉄キレート化治療（デスフェリオキサミン）を受けた患者、並びにプラセボ患者が含まれた。全ての入院（admission）血漿試料採取は、あらゆる研究治療の前及びＰＰＣＩの前に実施され、したがって、鉄キレート化が入院（admission）ＭＩＦ濃度に影響を及ぼすことはなかった。加えて、３日目及び３か月目のＭＩサイズによる入院（admission）ＭＩＦの分析がプラセボのみの患者に限定された場合であっても、ＭＩＦは３日目及び３か月目のＭＩサイズの唯一の有意な予測因子であり続けた。全ての被験者がＰＰＣＩを受け、これは、最終梗塞サイズに影響を与え、最終梗塞サイズを低減したと思われる。それにもかかわらず、初期血漿ＭＩＦ濃度は、入院（admission）中（３日目）及び３か月目の梗塞サイズに関して高度に予測的であり続けた。
【０１２６】
最後に、ＰＰＣＩ後のＣＫ及びｃＴｎＩのピーク及び累積放出の両方が３日目及び３か月目のＭＩサイズの両方における強力な予測因子であると思われるという観察は、発表された文献と一致している。しかし、この情報は、少なくともピーク濃度ではさらに１２時間及びＡＵＣではさらに４８時間入手可能ではない。入院（admission）ＭＩＦとピーク又は累積のＣＫ又はｃＴｎＩとの比較は、この文脈において適切ではない。現在、症状の発症の初めの時間内で使用されたとき、最終ＭＩサイズを予測できると思われる入院（admission）バイオマーカーはない。現在の研究は、血漿ＭＩＦ濃度がそのような可能性を提供できることを示している。
【０１２７】
結論
血漿ＭＩＦ濃度は、入院（admission）後に最初に得られる試料において大多数のＳＴＥＭＩ患者で上昇し、ミオグロビン、ｃＴｎＩ及びＣＫと比較して優れた診断精度を示していることが本明細書に開示されている。入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度は、ＡＭＩ後の３日目及び３か月目の最終梗塞サイズを予測し、患者管理及び医療の利用について有意な意味を有することができる。まとめると、入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度の測定は、心筋壊死の非常に早期の検出及び梗塞サイズの予測についてトロポニンよりも有意な利点を有する。
【０１２８】
参考文献
１．Ｔｈａｎ  Ｍ、Ｃｕｌｌｅｎ  Ｌ、Ｒｅｉｄ  ＣＭら、アジア太平洋地域における胸痛症状を有する患者を評価する２−ｈ診断プロトコール（ＡＳＰＥＣＴ）：前向き観察確認研究（2-h diagnostic protocol to assess patients with chest pain symptoms in the Asia-Pacific region (ASPECT): a prospective observational validation study）ランセット（Lancet）２０１１年；３７７（９７７１）：１０７７〜８４
２．Ｙｕ  ＣＭ、Ｌａｕ  ＣＰ、Ｌａｉ  ＫＷら、急性心筋梗塞の患者におけるマクロファージ遊走阻止因子の血漿濃度の上昇（Elevation of plasma concentration of macrophage migration inhibitory factor in patients with acute myocardial infarction）米国心臓学ジャーナル（Am J Cardiol.）２００１年；８８（７）：７７４〜７
３．ＭｃＣｏｒｄ  Ｊ、Ｎｏｗａｋ  ＲＭ、ＭｃＣｕｌｌｏｕｇｈ  ＰＡら、ミオグロビン及びトロポニンＩの定量的専用医療向け（point-of-care）試験の使用による急性心筋梗塞の９０分排除（Ninety-minute exclusion of acute myocardial infarction by use of quantitative point-of-care testing of myoglobin and troponin I）循環（Circulation）２００１年；１０４（１３）：１４８３〜８
４．Ｇａｎａｍｅ  Ｊ、Ｍｅｓｓａｌｌｉ  Ｇ、Ｄｙｍａｒｋｏｗｓｋｉ  Ｓら、左心室機能に対する心筋出血の影響及び再灌流急性心筋梗塞の患者におけるリモデリング（Impact of myocardial haemorrhage on left ventricular function and remodelling in patients with reperfused acute myocardial infarction）ヨーロッパ心臓ジャーナル（Eur Heart J.）２００９年；３０（１２）：１４４０〜９
５．Ｐｉｏｔ  Ｃ、Ｃｒｏｉｓｉｌｌｅ  Ｐ、Ｓｔａａｔ  Ｐら、急性心筋梗塞による再灌流損傷に対するシクロスポリンの効果（Effect of cyclosporine on reperfusion injury in acute myocardial infarction）ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メディシン（N Engl J Med.）２００８年；３５９（５）：４７３〜８１
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【手続補正書】
【提出日】平成25年6月4日(2013.6.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者において急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）を診断する方法であって、被験者の試料中の血漿マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）濃度を測定すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断することを含み、試料が症状発症後の４時間未満に採取される方法。
【請求項２】
被験者の血漿ＭＩＦ濃度からＡＣＳの規模を予後診断することを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
被験者においてＡＣＳを予後診断（prognosing）する方法であって、被験者の試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度からＡＣＳの規模を予後診断することを含む方法。
【請求項４】
症状発症後の４時間未満に採取された試料において被験者の血漿ＭＩＦ濃度を測定することを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
症状発症後の３時間以下、２時間以下、１時間以下又は３０分以下に採取された試料において被験者の血漿ＭＩＦ濃度を測定することを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
基準血漿ＭＩＦ濃度が１．４μｇ／Ｌ以上である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
ＡＣＳが急性心筋梗塞（ＡＭＩ）である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
ＡＭＩが、ＳＴ上昇心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）又は非ＳＴ上昇心筋梗塞（非ＳＴＥＭＩ）である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ＡＣＳがＡＭＩであり、ＡＣＳの規模がＡＭＩ後の３日目の百分率として表される梗塞サイズであり、梗塞サイズが以下の相関関係：
３日目の梗塞サイズ（％）＝６．７×入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度（μｇ／Ｌ）＋３．０
から予後診断される、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
ＡＣＳがＡＭＩであり、ＡＣＳの規模がＡＭＩ後の３か月目の百分率として表される梗塞サイズであり、梗塞サイズが以下の相関関係：
３か月目の梗塞サイズ（％）＝５×入院（admission）血漿ＭＩＦ濃度（μｇ／Ｌ）＋１．３。
から予後診断される、請求項３に記載の方法。
【請求項１１】
被験者の血漿ミオグロビン、血漿トロポニン又は血漿クレアチンキナーゼ濃度を測定することを更に含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
ＭＩＦ及びミオグロビン、トロポニン又はクレアチンキナーゼ濃度のいずれか１つ以上が、同じ血漿試料において測定される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
被験者のＡＣＳを治療する方法であって、（ａ）症状発症後の４時間未満に被験者から採取した試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定し、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断すること；又は（ｂ）被験者の試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定し、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいときにＡＣＳを診断し、被験者の血漿ＭＩＦ濃度からＡＣＳの規模を予後診断すること；並びに（ｃ）被験者に経皮的冠動脈インターベンション（ＰＣＩ）及び／又は線維素溶解を実施することを含む方法。
【請求項１４】
（ａ）被験者においてＡＣＳを診断する方法であって、症状発症後の４時間未満に被験者から採取された試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断することを含む方法における；又は（ｂ）被験者においてＡＣＳを予後診断する方法であって、試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度からＡＣＳの規模を予後診断することを含む方法に使用するときに、被験者の試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定する手段を含む装置。
【請求項１５】
手段が、イムノアッセイを含む、請求項１４に記載の装置。
【請求項１６】
電気化学セルを含む、請求項１４に記載の装置。
【請求項１７】
電気化学セルが非共面電極（non-coplanar electrodes）を含む、請求項１６に記載の装置。
【請求項１８】
装置が専用医療向け（point-of-care）装置である、請求項１４〜１７のいずれか１項に記載の装置。
【請求項１９】
装置が、血漿ミオグロビン、血漿トロポニン又は血漿クレアチンキナーゼを測定する手段を更に含む、請求項１４〜１８のいずれか１項に記載の装置。
【請求項２０】
（ａ）被験者においてＡＣＳを診断する方法であって、症状発症後の４時間未満に被験者から採取された試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断することを含む方法における；又は（ｂ）被験者においてＡＣＳを予後診断する方法であって、試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定すること、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が基準血漿ＭＩＦ濃度より大きいとき、ＡＣＳを診断すること及び被験者の血漿ＭＩＦ濃度からＡＣＳの規模を予後診断することを含む方法に使用するとき、被験者の試料中の血漿ＭＩＦ濃度を測定する試薬を含むキット。
【請求項２１】
試薬が抗ＭＩＦ抗体を含む、請求項２０に記載のキット。
【請求項２２】
請求項１４〜１９のいずれか１項に記載の装置を含むキット。
【請求項２３】
症状発症後の４時間未満に被験者から採取された試料中の血漿ＭＩＦ濃度の心臓バイオマーカーとしての使用であって、基準血漿ＭＩＦ濃度より大きな血漿ＭＩＦ濃度が、被験者におけるＡＣＳの診断となる使用。
【請求項２４】
被験者の試料中の血漿ＭＩＦ濃度の心臓バイオマーカーとしての使用であって、基準血漿ＭＩＦ濃度より大きな血漿ＭＩＦ濃度が、被験者におけるＡＣＳの規模の予後診断となる使用。
【請求項２５】
請求項２４に記載の使用であって、被験者の血漿ＭＩＦ濃度が、症状発症後の４時間未満に採取された試料において測定される使用。
【請求項２６】
被験者の血漿ＭＩＦ濃度が、症状発症後の３時間以下、２時間以下、１時間以下又は３０分以下に採取された試料において測定される、請求項２３〜２５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２７】
基準血漿ＭＩＦ濃度が１．４μｇ／Ｌ以上である、請求項２３〜２６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２８】
ＡＣＳがＡＭＩである、請求項２３〜２７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２９】
ＡＭＩが、ＳＴ上昇心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）又は非ＳＴ上昇心筋梗塞（非ＳＴＥＭＩ）である、請求項２８に記載の使用。
【国際調査報告】
2014521972.tif 000016
2014521972.tif 000017