(57)【要約】  本発明は、抗マラリア化合物アルテミニシン及びその誘導体を用いた、外傷出血または外傷出血誘発性臓器損傷及び関連障害（特に脳卒中、熱傷、及び脳損傷）の治療に関する。本発明はまた、抗マラリア化合物アルテミニシン及びその誘導体を用いた、心筋梗塞及び冠状動脈性心疾患（並びに関連障害）の治療に関する。本発明はまた、冠状動脈バイパス手術、心臓移植、及び虚血再潅流に関連する疾患における、アルテミニシン及びその誘導体の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
外傷出血、外傷出血誘発性臓器損傷、外傷出血誘発性多臓器不全、脳卒中、または熱傷損傷の治療における使用のための、式Ｉ
【化１】
2014517001.tif 000009
式中、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル及びヘテロアリールアルキルから選択され任意に置換される基であり、並びにＲ３及びＲ４は統合してカルボニル（＝Ｏ）を形成し；若しくは、
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル及びヘテロアリールアルキルから選択され任意に置換される基であり、Ｒ３はＨであり、及びＲ４はＨ若しくは−ＯＲ５であり、Ｒ５はＨ、若しくは、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル及びヘテロアリールアルキルから選択され任意に置換される基であり；
に従う化合物、または、薬学的に許容されるその塩若しくはエステル。
【請求項２】
前記外傷出血誘発性臓器損傷が、外傷出血誘発性膵炎、外傷出血誘発性腸損傷、外傷出血誘発性脳損傷、外傷出血誘発性頭部損傷、外傷出血誘発急性肺損傷、外傷出血誘発性脊髄損傷、及び外傷出血誘発性成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）からなる群から選択され、または前記熱傷損傷が、熱傷誘発性腎機能障害である、請求項１に従う使用のための化合物。
【請求項３】
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、任意に置換されるＣ１−Ｃ１０アルキルであり、並びにＲ３及びＲ４は統合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成し；若しくは、
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、任意に置換されるＣ１−Ｃ１０アルキルであり、Ｒ３はＨであり、並びにＲ４はＨ若しくは−ＯＲ５であり、Ｒ５はＨ、若しくは、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル及びヘテロアリールアルキルから選択され任意に置換される基であり；または、薬学的に許容されるその塩若しくはエステルである、請求項１または請求項２で請求される使用のための化合物。
【請求項４】
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、任意に置換されるＣ１−Ｃ３アルキルであり、並びにＲ３及びＲ４は統合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成し；若しくは、
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、任意に置換されるＣ１−Ｃ３アルキルであり、Ｒ３はＨであり、並びにＲ４はＨ若しくは−ＯＲ５であり、Ｒ５はＨ、若しくは、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル及びヘテロアリールアルキルから選択され任意に置換される基であり；または、薬学的に許容されるその塩若しくはエステルである、請求項１または請求項２で請求される使用のための化合物。
【請求項５】
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、任意に置換されるメチルであり、並びにＲ３及びＲ４は統合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成し；若しくは、
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、任意に置換されるメチルであり、Ｒ３はＨであり、並びにＲ４は−ＯＲ５であり、Ｒ５はＨ、若しくは、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル及びヘテロアリールアルキルから選択され任意に置換される基であり；または、薬学的に許容されるその塩若しくはエステルである、請求項１または請求項２で請求される使用のための化合物。
【請求項６】
Ｒ１及びＲ２は両方とも、独立してメチルであり、並びにＲ３及びＲ４は統合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成し；若しくは、
Ｒ１及びＲ２は両方とも、独立してメチルであり、Ｒ３はＨであり、並びにＲ４は−ＯＲ５であり、Ｒ５はＨ、若しくは、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル及びヘテロアリールアルキルから選択され任意に置換される基であり；または、薬学的に許容されるその塩若しくはエステルである、請求項１または請求項２で請求される使用のための化合物。
【請求項７】
Ｒ５は、Ｈ、アルキル、またはアリールアルキルであり、該アルキル及び／またはアリールアルキルは、任意に１つ以上のハロ、＝Ｏ、ＣＯＯＲ６、ＯＲ６及びＯＣＯＲ６で置換され、Ｒ６はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである、請求項１〜６のいずれか１項における使用ための化合物。
【請求項８】
Ｒ５はＨ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ、及び−ＣＨ２Ｃ６Ｈ４ＣＯＯＨからなる群から選択される、請求項１〜７のいずれか１項で請求される使用のための化合物。
【請求項９】
前記化合物が、アルテスネート、アルテミシニン、アルテメテル、ジヒドロアルテミシニン、アルテリン酸、及びアルテモチルからなる群から選択される、請求項１〜８のいずれか１項で請求される使用のための化合物。
【請求項１０】
外傷出血、外傷出血誘発性臓器損傷、外傷出血誘発性多臓器不全、脳卒中または熱傷損傷の治療における使用のための、請求項１若しくは３〜９のいずれか１項に規定される式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１１】
前記外傷出血誘発性臓器損傷が、外傷出血誘発性膵炎、外傷出血誘発性腸損傷、外傷出血誘発性脳損傷、外傷出血誘発性頭部損傷、外傷出血誘発急性肺損傷、外傷出血誘発性脊髄損傷、及び外傷出血誘発性成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）からなる群から選択され、または前記熱傷損傷が、熱傷誘発性腎機能障害である、請求項１０に従う医薬組成物。
【請求項１２】
追加的な薬学的に活性な薬剤をさらに含む、請求項１０または請求項１１で請求される使用のための医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１若しくは３〜９のいずれか１項に規定される式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、及び同時、個別、または連続投与のための１以上のさらなる薬学的に活性な薬剤を含む部品の、キット。
【請求項１４】
請求項１若しくは３〜９のいずれか１項に規定される式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、及び、１以上の増量剤を含む、蘇生液。
【請求項１５】
前記増量剤が、コロイドまたはクリスタロイドである、請求項１４の蘇生液。
【請求項１６】
前記コロイドが、ゼラチン、スクシニル化ゼラチン、アルブミン、デキストラン、血液、及びエーテル化澱粉からなる群から選択される少なくとも１つの成分を含む水性溶液を含む、請求項１５の蘇生液。
【請求項１７】
前記クリスタロイドが、ナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオン及びカルシウムイオンからなる群から選択される少なくとも３つのイオンを含む水性溶液である、請求項１５の蘇生液。
【請求項１８】
前記クリスタロイドが、以下を含む水性溶液である、請求項１５の蘇生液：
−  約１００ｍｍｏｌ／Ｌ〜約１５０ｍｍｏｌ／Ｌのナトリウムイオン；
−  約９０ｍｍｏｌ／Ｌ〜約１２０ｍｍｏｌ／Ｌの塩化物イオン；
−  約２０ｍｍｏｌ／Ｌ〜約３０ｍｍｏｌ／Ｌの乳酸イオン；
−  約２ｍｍｏｌ／Ｌ〜約６ｍｍｏｌ／Ｌのカリウムイオン；及び
−  約１ｍｍｏｌ／Ｌ〜約５ｍｍｏｌ／Ｌのカルシウムイオン。
【請求項１９】
外傷出血、外傷出血誘発性臓器損傷、外傷出血誘発性多臓器不全、脳卒中、または熱傷損傷の治療における使用のための、請求項１４〜１８のいずれか１項の蘇生液。
【請求項２０】
請求項１若しくは３〜９のいずれか１項に規定される式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルを含む、輸血用分離血液のユニット。
【請求項２１】
前記分離血液のユニットが、赤血球、血小板、及び血漿を含む、請求項２０で請求される輸血用分離血液のユニット。
【請求項２２】
前記血液のユニットが、３００と７００ｍｌの間の量で提供される、請求項２０または請求項２１で請求される輸血用分離血液のユニット。
【請求項２３】
請求項１若しくは３〜９のいずれか１項に規定される式Ｉの化合物、若しくは、薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、または請求項１０若しくは１２に規定される医薬組成物、または請求項１４〜１９のいずれか１項の蘇生液、または請求項２０〜２２のいずれか１項の輸血用分離血液のユニットを、これらを必要とする患者へ投与することを含む、外傷出血、外傷出血誘発性臓器損傷、外傷出血誘発性多臓器不全、脳卒中または熱傷損傷の治療方法。
【請求項２４】
前記外傷出血誘発性臓器損傷が、外傷出血誘発性膵炎、外傷出血誘発性腸損傷、外傷出血誘発性脳損傷、外傷出血誘発性頭部損傷、外傷出血誘発急性肺損傷、外傷出血誘発性脊髄損傷、及び外傷出血誘発性成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）からなる群から選択され、または前記熱傷損傷が、熱傷誘発性腎機能障害である、請求項２３の方法。
【請求項２５】
前記化合物、医薬組成物、または蘇生液が、経口、非経口、静脈内、筋肉内、髄腔内若しくは腹腔内経路により投与され、または吸入により投与される、請求項２３または請求項２４の方法。
【請求項２６】
前記分離血液のユニットが、静脈内投与によってされる、請求項２３の方法。
【請求項２７】
心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患、または心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患の関連障害の治療における使用のための、請求項１若しくは３〜９のいずれか１項に規定される式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル。
【請求項２８】
前記化合物が、１０ｍｇ／ｋｇ未満の量で投与されるためのものである、請求項２７で請求される使用のための化合物。
【請求項２９】
前記化合物が、５ｍｇ／ｋｇ未満の量で投与されるためのものである、請求項２７で請求される使用のための化合物。
【請求項３０】
前記化合物が、３ｍｇ／ｋｇ未満の量で投与されるためのものである、請求項２７で請求される使用のための化合物。
【請求項３１】
前記化合物が、１日１回投与されるためのものである、請求項２７〜３０のいずれか１項で請求される使用のための化合物。
【請求項３２】
心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患、または心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患の関連障害の治療における使用のための、請求項１若しくは３〜９のいずれか１項に規定される式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項３３】
追加的な１以上のさらなる薬学的に活性な薬剤を含む、請求項３２で請求される使用のための医薬組成物。
【請求項３４】
請求項１若しくは３〜９のいずれか１項に規定される式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、追加的な１以上の薬学的に活性な薬剤、及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項３５】
請求項１若しくは３〜９のいずれか１項に規定される式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、及び同時、個別、または連続投与のための１以上のさらなる薬学的に活性な薬剤を含む部品の、キット。
【請求項３６】
前記１以上のさらなる薬学的に活性な薬剤が、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、エリスロポエチンまたはその類似体、ＰＰＡＲ（ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体）−ガンマリガンド、ＰＰＡＲ−ベータリガンド、ＰＰＡＲ−アルファリガンド、硝酸塩含有化合物、一酸化窒素（ＮＯ）供与体、フェニルプロパノイド、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３阻害剤、アンドログラホリドまたはその類似体、抗酸化剤、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）調節剤（ＶＤＲＭ）、リポキシン、アネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）またはその類似体、ペントキシフィリン、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、カルベノキソロン、グリチルリチン、高移動度群タンパク質Ｂ１（ＨＭＧＢ１）及びその類似体、ＨＭＧＢ１阻害剤、活性化プロテインＣ、サリチル酸またはその誘導体、プロスタサイクリンまたはその誘導体、ＣＸＣＲ２調節剤、並びにホスホジエステラーゼ阻害剤、からなる群から選択される、請求項３３で請求される使用のための医薬組成物、請求項３４の医薬組成物、または請求項３５の部品のキット。
【請求項３７】
前記化合物が、請求項３６に規定される１以上のさらなる薬学的に活性な薬剤との組み合わせで投与される、請求項２７〜３１のいずれか１項で請求される使用のための化合物。
【請求項３８】
請求項１若しくは３〜９のいずれか１項に規定される式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、及び、１以上の増量剤を含む、再灌流液。
【請求項３９】
前記増量剤が、コロイドまたはクリスタロイドである、請求項３８の再灌流液。
【請求項４０】
前記コロイドが、ゼラチン、スクシニル化ゼラチン、アルブミン、デキストラン、血液、及びエーテル化澱粉からなる群から選択される少なくとも１つの成分を含む水性溶液を含む、請求項３９の再灌流液。
【請求項４１】
前記クリスタロイドが、ナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオン及びカルシウムイオンからなる群から選択される少なくとも３つのイオンを含む水性溶液である、請求項３９の再灌流液。
【請求項４２】
前記クリスタロイドが、以下を含む水性溶液である、請求項３９の再灌流液：
−  約１００ｍｍｏｌ／Ｌ〜約１５０ｍｍｏｌ／Ｌのナトリウムイオン；
−  約９０ｍｍｏｌ／Ｌ〜約１２０ｍｍｏｌ／Ｌの塩化物イオン；
−  約２０ｍｍｏｌ／Ｌ〜約３０ｍｍｏｌ／Ｌの乳酸イオン；
−  約２ｍｍｏｌ／Ｌ〜約６ｍｍｏｌ／Ｌのカリウムイオン；及び
−  約１ｍｍｏｌ／Ｌ〜約５ｍｍｏｌ／Ｌのカルシウムイオン。
【請求項４３】
前記再灌流液が、請求項３６に規定される１以上のさらなる薬学的に活性な薬剤をさらに含む、請求項３８〜４２のいずれか１項の再灌流液。
【請求項４４】
心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患、または心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患の関連障害の治療における使用のための、請求項３８〜４３のいずれか１項の再灌流液。
【請求項４５】
前記式Ｉの化合物が、１０ｍｇ／ｋｇと等しいか未満の量で投与されるためのものである、請求項４４で請求される使用のための再灌流液。
【請求項４６】
請求項３８〜４３のいずれか１項の再灌流液に動脈、静脈、心臓、心臓弁またはその組み合わせを浸すことを含む、冠状動脈組織、動脈、静脈、心臓、肺、心臓弁またはその組み合わせを灌流する方法。
【請求項４７】
請求項４６の方法に従って還流された心臓を移植する、または静脈若しくは動脈を移植する、または心臓弁を移植することを含む、心臓移植の方法、または冠状動脈バイパス手術の方法、または心臓弁移植の方法。
【請求項４８】
ステント移植の前、間若しくは後、またはこれらの組み合わせに、請求項１若しくは３〜９のいずれか１項に規定される式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルを投与することを含む、患者へ冠状動脈ステントを移植する方法。
【請求項４９】
請求項１若しくは３〜９のいずれか１項に規定される式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、及び重炭酸ナトリウムを含む、水性組成物。
【請求項５０】
前記重炭酸ナトリウムが、５重量％と１５重量％の間の濃度で存在する、請求項４９の水性組成物。
【請求項５１】
前記組成物中のナトリウム及び重炭酸イオンが、それぞれ約７５０ｍＭ／Ｌ〜約１２５０ｍＭ／Ｌの濃度で存在する、請求項４９の水性組成物。
【請求項５２】
代謝性アシドーシスまたは心筋梗塞の治療における使用のための、請求項４９〜５１のいずれか１項の水性組成物。
【請求項５３】
前記式Ｉの化合物が、１０ｍｇ／ｋｇと等しいか未満の量で投与されるためのものである、請求項５２で請求される使用のための水性組成物。
【請求項５４】
前記心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患の関連障害が、虚血−再灌流誘発性膵炎、虚血−再灌流誘発性急性肺損傷、虚血−再灌流誘発性成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）のような狭心症、肺高血圧及び虚血再灌流誘発性障害、並びに心停止からなる群から選択される、請求項２７〜３１若しくは請求項３７のいずれか１項で請求される使用のための化合物、請求項３２、３３若しくは３６で請求される使用のための医薬組成物、請求項４４若しくは請求項４５で請求される使用のための再灌流液、または請求項５２若しくは請求項５３で請求される使用のための水性組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗マラリア化合物アルテミニシン及びその誘導体を用いた、外傷出血または外傷出血誘発性臓器損傷及び関連障害（特に脳卒中、熱傷、及び脳損傷）の治療に関する。本発明はまた、抗マラリア化合物アルテミニシン及びその誘導体を用いた、心筋梗塞及び冠状動脈性心疾患（並びに関連障害）の治療に関する。本発明はまた、冠状動脈バイパス手術、心臓移植、及び虚血再潅流に関連する疾患における、アルテミニシン及びその誘導体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
外傷出血は、例えば内出血や他の損傷に起因して、患者がその血液量のうちかなりの量を失うと生じる。結果として起こる臓器の灌流（血液が組織に入るプロセス）の低下は、細胞の代謝ニーズを満たすには不十分である。流量の減少は患者の臓器に大きな負担を与え、低酸素血症（動脈血中の酸素の欠乏）、多臓器不全、最終的には心停止や死に至ることもある。
【０００３】
外傷出血に対する現在の治療は、臓器の灌流を確保するため、静脈内輸液や輸血によって、失われた血液量を置き換えることに基づいている。しかし、輸血が利用できる時までに既に、臓器へのダメージ、特に外傷出血誘発性の臓器損傷や多臓器不全が生じていることもある。外傷出血は重大な問題であり、手術後の合併症を含む多数の原因となる。それが持続的な内出血の結果である場合、それは検出されずに進行することもある。
【０００４】
早期発見と治療は、したがって、患者の生存と回復に不可欠であり、当技術分野においては出血性ショックの結果としてもたらされるダメージを最小限に抑えるための効果的な治療が要求されている。
【０００５】
心筋梗塞（ＭＩ、心臓発作としても知られている。）は、心臓の一部への血液供給が遮られることである。血液供給の遮断は、通常、動脈硬化性プラークの破裂後の血栓による血管の閉塞によるものであるか、または血管を通る血流を遮断する血管攣縮、若しくは感染の結果である。結果として起こる虚血が、影響を受けた心筋へのダメージや死を引き起こすことがある。ダメージを受けた心臓組織は、正常な心臓組織よりも遅い電気インパルスを伝導し、それゆえ心臓の正常なリズムを乱す。
【０００６】
糖尿病、肥満、喫煙、高血圧、ストレス、過剰なアルコール摂取及び老齢を含む、心筋梗塞及びアテローム性動脈硬化についてのいくつかの危険因子がある。冠状動脈性心疾患（心筋に十分な血液循環を供給する冠状動脈循環の、進行性機能不全）がＭＩに先立って頻繁に起こり、致命的な心筋梗塞のリスクを低減するため、薬学的介入（例えば、コレステロール低下薬スタチン、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、及びカルシウムチャネルブロッカー）並びに外科的介入（例えば、血管形成術、ステント、冠状動脈バイパス、及び心臓移植）だけでなく、ライフスタイルの変化（禁煙、運動、減量）を含む、アプローチの組み合わせによって治療される。ＭＩは医学的に緊急な事態であり、心筋へのダメージを抑え、さらなる合併症を防ぐために、速やかな医学的治療を必要とする。重度のＭＩは心停止や死につながることもあり、世界保健機関は、２００２年における世界的の死亡原因の１２．６％が虚血性心疾患によると見積もった。
【発明の概要】
【０００７】
アルテスネートは抗マラリア薬であり、元々は中国の薬草アルテミシア  アンヌア（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ａｎｎｕａ）Ｌ．から単離された化合物であるアルテミシニンの誘導体（キンガオス（ｑｉｎｇｈａｏｓｕ）としても知られている。）である。この化合物のファミリーはセスキテルペンラクトンであり、アルテスネートは（徐脈、心電図異常、胃腸障害、発熱のような）有害な副作用をもたらすことが知られているが、熱帯性マラリアの治療用の薬学的に活性な他の薬剤とそれを組み合わせて使用することが標準的である。
【０００８】
米国２０１１／００７７２５８は、血管拡張を促進するアジュバントと組み合わせてアルテミシニン誘導体を用いる、マラリアの治療を開示する。米国２００８／０１３９６４２は、アルテミシニン誘導体及びその調製、並びに免疫抑制における使用を開示する。ＷＯ２０１０／１１０７４７は、喘息及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療のためのアルテミシニン誘導体の使用を開示する。米国２０１０／０１３７２４６は、Ｔｏｌｌ様受容体、Ｓｒｃファミリーキナーゼ、ＮＦ−κＢ分子、プロテアーゼまたはプロテアソームの１つ以上を調節する抗炎症組成物に関する。
【０００９】
サン（Ｓｕｎ）ら（２００７），Ｚｈｏｎｇｇｕｏ  Ｚｈｏｎｇ  Ｙａｏ  Ｚａ  Ｚｈｉ，３２（１５）：１５４７−５１は、単離されたラット心筋の虚血／再灌流損傷への、アルテミシニン前治療の効果を開示する。ワン（Ｗａｎｇ）ら（２０１１），Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ，５２（２）：９１６−９は、ラットでのエンドトキシン誘発性ブドウ膜炎への、アルテスネートの効果を開示する。リ（Ｌｉ）ら（２００８），Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，８（３）：３７９−８９は、ＴＬＲ４、ＴＬＲ９  ｍＲＮＡ発現及び転写因子ＮＦ−κＢの活性化を減少させることにより、熱殺菌大腸菌チャレンジに対して、敗血症モデルマウスを保護するアルテスネートの能力を開示する。
【００１０】
本発明者らは、驚くべきことに、アルテスネート及びその関連化合物の投与は、外傷出血によって引き起こされる臓器ダメージに対して、並びに脳卒中（ｓｔｒｏｋｅ）及び脳卒中や熱傷損傷においても、保護を与えることができることを見出した。本発明者らはまた、驚くべきことに、アルテスネート及びその関連化合物の投与は、ＭＩで梗塞サイズを小さくすることができ、梗塞が行われた後のダメージのレベルを減らすことさえできることを見出した。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、（ｉ）外科的処置単独（疑似（Ｓｈａｍ）、ｎ＝４）、または、外科的処置及び出血性ショックに次いで蘇生時に（ｉｉ）ビヒクル（１０％ＤＭＳＯ、１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ＨＳ対照、ｎ＝１０）若しくは（ｉｉｉ）アルテスネート（１，３または１０ｍｇ／ｋｇ静脈内投与、それぞれ、ＨＳ＋アルテスネート１ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝６、ＨＳ＋アルテスネート３ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝７、及び、ＨＳ＋アルテスネート１０ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝８）による処置を施したラットにおけるＭＡＰの変化を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表現される。＊Ｐ＜０．０５疑似  対ＨＳ対照。
【図２】図２は、（ｉ）外科的処置単独（疑似、ｎ＝４）、または、外科的処置及び出血性ショックに次いで蘇生時に（ｉｉ）ビヒクル（１０％ＤＭＳＯ、１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ＨＳ対照、ｎ＝１０）若しくは（ｉｉｉ）アルテスネート（１，３または１０ｍｇ／ｋｇ静脈内投与、それぞれ、ＨＳ＋アルテスネート１ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝６、ＨＳ＋アルテスネート３ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝７、及び、ＨＳ＋アルテスネート１０ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝８）による処置を施したラットにおける、（ａ）尿素及び（ｂ）クレアチニンの血清レベル；並びに（ｃ）クレアチニンクリアランスの変化を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表現される。＊Ｐ＜０．０５対ＨＳ対照。
【図３】図３は、（ｉ）外科的処置単独（疑似、ｎ＝４）、または、外科的処置及び出血性ショックに次いで蘇生時に（ｉｉ）ビヒクル（１０％ＤＭＳＯ、１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ＨＳ対照、ｎ＝１０）若しくは（ｉｉｉ）アルテスネート（１，３または１０ｍｇ／ｋｇ静脈内投与、それぞれ、ＨＳ＋アルテスネート１ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝６、ＨＳ＋アルテスネート３ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝７、及び、ＨＳ＋アルテスネート１０ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝８）による処置を施したラットにおける、（ａ）ＡＳＴ、（ｂ）ＡＬＴ、及び（ｃ）ＣＫの血清レベルの変化を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表現される。＊Ｐ＜０．０５対ＨＳ対照。
【図４】図４は、（ｉ）外科的処置単独及びビヒクルによる治療（疑似＋１０％ＤＭＳＯ、ｎ＝４）、熱傷損傷及び（ｉｉ）ビヒクル（熱傷＋１０％ＤＭＳＯ、ｎ＝１０）または（ｉｉｉ）アルテスネート（熱傷＋アルテスネート、ｎ＝９）による処置を施したラットにおける、（ａ）尿素及び（ｂ）クレアチニンの血清レベルの変化を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表現され、熱傷＋１０％ＤＭＳＯと比べられるときは＊Ｐ＜０．０５。
【図５】図５は、（ｉ）外科的処置単独及びビヒクルによる治療（疑似＋１０％ＤＭＳＯ、ｎ＝４）、熱傷損傷及び（ｉｉ）ビヒクル（熱傷＋１０％ＤＭＳＯ、ｎ＝１０）または（ｉｉｉ）アルテスネート（熱傷＋アルテスネート、ｎ＝９）による処置を施したラットにおける、（ａ）ＡＳＴ及び（ｂ）ＡＬＴの血清レベルの変化を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表現され、熱傷＋１０％ＤＭＳＯと比べられるときは＊Ｐ＜０．０５。
【図６】図６は、外科的処置単独及びビヒクルによる治療を施した（疑似、ｎ＝４）；または、脳虚血及び再灌流、並びに再灌流時及び再灌流の開始から６時間後にビヒクル（Ｉ／Ｒ、ｎ＝７）若しくは３ｍｇ／ｋｇアルテスネート（Ｉ／Ｒ＋アルテスネート、ｎ＝７）による処置を施したラットにおける梗塞サイズの変化を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表現される。＊Ｐ＜０．０５対Ｉ／Ｒ。
【図７】図７は、（ｉ）模擬（ｓｈａｍ）手術（疑似、ｎ＝５）、または敗血症ショックに次いで（ｉｉ）ビヒクル（１０％ＤＭＳＯ、１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ＬＰＳ、ｎ＝１０）若しくは（ｉｉｉ）アルテスネート（１０ｍｇ／ｋｇ、ＬＰＳ＋アルテスネート１０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与  ＬＰＳ後１時間、ｎ＝６、ＬＰＳ＋アルテスネート１０ｍｇ／ｋｇ静脈内投与  ＬＰＳ後１時間、ｎ＝３、ＬＰＳ＋アルテスネート１０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与  ＬＰＳ前３０分、ｎ＝２）で処置を施したマウスにおける（ａ）尿素及び（ｂ）クレアチニン、並びに（ｃ）ＡＬＴの血清レベルの変化を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表現される。＊Ｐ＜０．０５対ＬＰＳ。
【図８】図８は、外科的処置単独及びビヒクルによる治療（疑似、１０％ＤＭＳＯ  １ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝６）、または、局所心筋虚血（２５分）及び再灌流（２時間）並びにビヒクル（対照、１０％ＤＭＳＯ  １ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝８）による治療、または、２サイクルのＩＰＣ（５分）に続いてＬＡＤ−閉塞（２５分）及び再灌流（２時間）並びにビヒクル（ＩＰＣ、１０％ＤＭＳＯ  １ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝８）による治療、または、局所心筋虚血（２５分）及び再灌流（２時間）並びにアルテスネート（アルテスネート、１０％ＤＭＳＯ、１ｍｌ／ｋｇで１，３または１０ｍｇ／ｍｌ静脈内投与、ｎ＝８）による処置を施したラットの、（Ａ）リスクのある領域並びに（Ｂ）梗塞サイズを示す。＊Ｐ＜０．０５対  対照。
【図９】図９は、外科的処置単独及びビヒクルによる治療（疑似、５％重炭酸ナトリウム１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝６）、または、局所心筋虚血（２５分）及び再灌流（２時間）並びにビヒクル（対照、５％重炭酸ナトリウム１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝１４）による治療、または、局所心筋虚血（２５分）及び再灌流（２時間）並びにアルテスネート（０．３，１または１０ｍｇ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝２−１０）による処置を施したラットの、（Ａ）リスクのある領域並びに（Ｂ）梗塞サイズを示す。＊Ｐ＜０．０５対  対照。
【図１０】図１０は、外科的処置単独及びビヒクルによる治療（疑似、１０％ＤＭＳＯ  １ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝６）、または、局所心筋虚血（２５分）及び再灌流（２時間）並びにビヒクル（対照、１０％ＤＭＳＯ  １ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝１４）による治療、または、局所心筋虚血（２５分）及び再灌流（２時間）並びにアルテスネート（１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝７）による治療、または、局所心筋虚血（２５分）及び再灌流（２時間）並びにジヒドロアルテミシニン（ＤＨＡ  ０．１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝６）による処置を施したラットの、（Ａ）リスクのある領域並びに（Ｂ）梗塞サイズを示す。＊Ｐ＜０．０５対  対照。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
従って、本発明の第一の態様は、外傷出血、外傷出血誘発性臓器損傷、外傷出血誘発性多臓器不全、脳卒中、または熱傷損傷の治療における使用のための、式Ｉ
【００１３】
【化１】
2014517001.tif 000002
【００１４】
式中、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル及びヘテロアリールアルキルから選択され任意に置換される基であり、並びにＲ３及びＲ４は統合してカルボニル（＝Ｏ）を形成し；若しくは、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル及びヘテロアリールアルキルから選択され任意に置換される基であり、Ｒ３はＨであり、並びにＲ４はＨ若しくは−ＯＲ５であり、Ｒ５はＨ、若しくは、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル及びヘテロアリールアルキルから選択され任意に置換される基であり；に従う化合物、または、薬学的に許容されるその塩若しくはエステルが提供される。
【００１５】
外傷出血は、出血性ショックとしても知られている。外傷出血誘発性臓器損傷は、外傷出血誘発性膵炎、外傷出血誘発性腸損傷、外傷出血誘発性脳損傷、外傷出血誘発性頭部損傷、外傷出血誘発急性肺損傷、外傷出血誘発性脊髄損傷、または外傷出血誘発性成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を含む。熱傷損傷についての言及は、熱傷誘発性腎機能障害または腎臓病／不全などの、熱傷関連性多臓器不全、及び熱傷誘発性臓器損傷をも含む。
【００１６】
本発明の一実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、任意に置換されるＣ１−Ｃ１０アルキルであり、並びにＲ３及びＲ４は統合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成し；若しくは、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、任意に置換されるＣ１−Ｃ１０アルキルであり、Ｒ３はＨであり、並びにＲ４はＨ若しくは−ＯＲ５であり、Ｒ５はＨ、若しくは、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル及びヘテロアリールアルキルから選択され任意に置換される基であり；または、薬学的に許容されるその塩若しくはエステルである。
【００１７】
本発明の別の実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、任意に置換されるＣ１−Ｃ１０アルキルであり、並びにＲ３及びＲ４は統合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成し、または、薬学的に許容されるその塩若しくはエステルである。
【００１８】
本発明の別の実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、任意に置換されるＣ１−Ｃ１０アルキルであり、Ｒ３はＨであり、並びにＲ４はＨ若しくは−ＯＲ５であり、Ｒ５はＨ、若しくは、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル及びヘテロアリールアルキルから選択され任意に置換される基であり；または、薬学的に許容されるその塩若しくはエステルである。
【００１９】
本発明の更に別の実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、任意に置換されるＣ１−Ｃ３アルキルであり、並びにＲ３及びＲ４は統合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成し；若しくは、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、任意に置換されるＣ１−Ｃ３アルキルであり、Ｒ３はＨであり、並びにＲ４はＨ若しくは−ＯＲ５であり、Ｒ５はＨ、若しくは、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル及びヘテロアリールアルキルから選択され任意に置換される基であり；または、薬学的に許容されるその塩若しくはエステルである。
【００２０】
本発明の更に別の実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、任意に置換されるメチルであり、並びにＲ３及びＲ４は統合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成し；若しくは、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、若しくは、任意に置換されるメチルであり、Ｒ３はＨであり、並びにＲ４はＨ若しくは−ＯＲ５であり、Ｒ５はＨ、若しくは、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル及びヘテロアリールアルキルから選択され任意に置換される基であり；または、薬学的に許容されるその塩若しくはエステルである。
【００２１】
本発明の更に別の実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ１及びＲ２は両方とも、独立してメチル（−ＣＨ３）であり、並びにＲ３及びＲ４は統合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成し；若しくは、Ｒ１及びＲ２は両方とも、メチルであり、Ｒ３はＨであり、並びにＲ４は−ＯＲ５であり、Ｒ５はＨ、若しくは、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル及びヘテロアリールアルキルから選択され任意に置換される基であり；または、薬学的に許容されるその塩若しくはエステルである。
【００２２】
本発明の更に別の実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ１及びＲ２は両方とも、任意に置換されるメチルであり、並びにＲ３及びＲ４は統合してカルボニル（＝Ｏ）基を形成し；または、Ｒ１及びＲ２は両方とも、メチルであり、Ｒ３はＨであり、並びにＲ４は−ＯＲ５であり、Ｒ５はＨ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ、及び−ＣＨ２Ｃ６Ｈ４ＣＯＯＨからなる群から選択される。
【００２３】
ある実施形態では、Ｒ５は、Ｈ、アルキル、またはアリールアルキルであり、該アルキル及び／またはアリールアルキルは任意にもう１つまたはより多くのハロ、＝Ｏ、ＣＯＯＲ６、ＯＲ６及びＯＣＯＲ６で置換され、Ｒ６はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。例えば、本発明の一実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ１及びＲ２は両方とも、メチルであり、Ｒ３はＨであり、及びＲ４は−ＯＲ５であり、Ｒ５はＨ、アルキル、またはアリールアルキルであり、該アルキル及び／またはアリールアルキルは任意にもう１つまたはより多くののハロ、＝Ｏ、ＣＯＯＲ６、ＯＲ６及びＯＣＯＲ６で置換され、Ｒ６はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【００２４】
本発明のある実施形態では、Ｒ５はＨ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ、及び−ＣＨ２Ｃ６Ｈ４ＣＯＯＨからなる群から選択される。
【００２５】
ある実施形態では、Ｒ５はカルボキシルを含み、任意に、式Ｉの化合物は該カルボン酸の塩またはエステルとして使用される。ある実施形態では、該エステルは、Ｃ１−Ｃ６アルキルエステルなどの単純アルキルエステルであり、該Ｃ１−Ｃ６アルキルは任意に１つ以上のハロ、ヒドロキシル、またはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されてもよい。式Ｉの化合物がエステルの場合は、時にはメチル、エチル、プロピル、若しくはブチルエステル、または２−メトキシエチルエステル、若しくはエチレングリコールエステルである。
【００２６】
本明細書で使用するとき、用語“アルキル”、“アルケニル”、及び“アルキニル”は、直鎖、分岐鎖及び環状の一価のヒドロカルビル基、及びこれらの組み合わせを含み、非置換の場合はＣ及びＨのみを含有する。例としては、メチル、エチル、イソブチル、シクロヘキシル、シクロペンチルエチル、２−プロペニル、３−ブチニルなどが挙げられる。これらの各基における炭素原子の総数は時々、本明細書に記載されている、例えば、該基が１０個までの炭素原子を含有することができるときには、Ｃ１−１０のように表されることができる。ヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ及びＳ）がヘテロアルキル基において炭素原子を交換するときは、依然としてＣ１−Ｃ６のように記載されるが、例えば、該基を記述する番号は、該基における炭素原子の数と、説明されている環または鎖において炭素原子の置換として含まれるようなヘテロ原子の数とを足した、和を表す。
【００２７】
ある実施形態では、本発明のアルキル、アルケニル、及びアルキニル基は、Ｃ１−１０（アルキル）またはＣ２−１０（アルケニル若しくはアルキニル）である。あるいは、これらはＣ１−８（アルキル）またはＣ２−８（アルケニル若しくはアルキニル）である。ときには、これらはＣ１−４（アルキル）またはＣ２−４（アルケニル若しくはアルキニル）である。単一の基は、１種を超える多重結合、または、１つより多い多重結合を含有することができ；このような基は、これらが少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する場合は用語“アルケニル”の定義に含まれ、これらが少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含有する場合は用語“アルキニル”に含まれる。
【００２８】
アルキル、アルケニル又はアルキニル基の一般的な任意の置換基としては、限定されるものではないが、ハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ、＝ＮＲ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ２、ＯＣＯＲ、ＣＯＲ、及びＮＯ２を含み、各Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ１−Ｃ８アシル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、またはＣ５−Ｃ１０ヘテロアリールであり、並びに各Ｒは、ハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ’、＝ＮＲ’、ＯＲ’、ＮＲ’２、ＳＲ’、ＳＯ２Ｒ’、ＳＯ２ＮＲ’２、ＮＲ’ＳＯ２Ｒ’、ＮＲ’ＣＯＮＲ’２、ＮＲ’ＣＯＯＲ’、ＮＲ’ＣＯＲ’、ＣＮ、ＣＯＯＲ’、ＣＯＮＲ’２、ＯＯＣＲ’、ＣＯＲ’、及びＮＯ２で任意に置換され、各Ｒ’は独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ１−Ｃ８アシル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、またはＣ５−Ｃ１０ヘテロアリールである。アルキル、アルケニル及びアルキニル基はまた、Ｃ１−Ｃ８アシル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ６−Ｃ１０アリールまたはＣ５−Ｃ１０ヘテロアリールで置換されても良く、これらはそれぞれ、個別の基について適当な置換基によって置換されても良い。ある実施形態では、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基は、もう１つまたはより多くのハロ、＝Ｏ、ＣＯＯＲ６、ＯＲ６及びＯＣＯＲ６で置換されており、該Ｒ６はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【００２９】
本明細書で用いられる“アルキル”は、シクロアルキル及びシクロアルキルアルキル基を含み、用語“シクロアルキル”は本明細書では、環炭素原子（すなわち、分子に結合するためのその空いた原子価（ｏｐｅｎ  ｖａｌｅｎｃｅ）が、環炭素上にある。）を介して接続されている炭素環式非芳香族基を表し、及び、“シクロアルキルアルキル”は、アルキレンリンカーを経由して分子に接続されている炭素環式非芳香族基を表すために使用されることもある。同様に、“ヘテロシクリル”は、少なくとも１個のヘテロ原子を環員として含有し、ＣまたはＮであってもよい環原子を介して分子に結合している非芳香族環式基を表すために使用されることもあり、及び、“ヘテロシクリルアルキル”は、リンカーを経由して別の分子に結合しているそのような基を表すために使用されることもある。シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリル、及びヘテロシクリルアルキル基に適したサイズ及び置換基としては、アルキル基について上述したものと同じである。本明細書で使用されるとき、これらの用語はまた、環が芳香族でない限り、二重結合を１つまたは２つ含有する環を含む。
【００３０】
本明細書で使用されるとき、“アシル”は、カルボニル炭素原子（−Ｃ（Ｏ）−）の２つの利用可能な原子価位置のうちの１つに結合したアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、またはアリールアルキル基を含む基を包含し、及び、ヘテロアシルは、例えばＮ、Ｏ及びＳから選ばれるようなヘテロ原子によって、カルボニル炭素以外の少なくとも１つの炭素が置換された相当する基をいう。カルボニルのもう一方の空いた原子価は、アシル基またはヘテロアシル基を基本となる分子へ結合するために利用可能である。従って、ヘテロアシルは、例えば、−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロアリールだけでなく−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ及び−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２を含む。
【００３１】
アシル及びヘテロアシル基は、カルボニル炭素原子の空いた原子価を経由して連結した、任意の基または分子に結合している。ある実施形態では、それらはホルミル、アセチル、ピバロイル、及びベンゾイルを含むＣ１−Ｃ８アシル基であり、並びにメトキシアセチル、エトキシカルボニル、４−ピリジノイルを含むＣ２−Ｃ８ヘテロアシル基である。ヒドロカルビル基、アリール基、及び、アシルまたはヘテロアシル基を含むそのような基のヘテロ型は、アシルまたはヘテロアシル基のそれぞれ対応する構成要素に対して、一般的に適切である置換基として本明細書に記載の置換基で、置換されてもよい。
【００３２】
“芳香族”部分または“アリール”部分は、芳香族性のよく知られた特性を有する単環式または縮合二環式部分をいい；例としては、フェニル及びナフチルが挙げられる。同様に、“ヘテロ芳香族”と“ヘテロアリール”は、例えば、Ｏ、Ｓ及びＮから選択される１個以上のヘテロ原子を環員として含有する単環または縮合二環式環系をいう。ヘテロ原子の含有は、６員環と同様に５員環においても芳香族性を可能にする。典型的なヘテロ芳香族系は、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、チエニル、フラニル、ピロリル、ピラゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、及びイミダゾリルのような単環式のＣ５−Ｃ６芳香族基、並びに、これらの単環式基の１つと、フェニル環または何らかのヘテロ芳香族単環式基とが、インドリル、ベンゾイミダゾリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、イソキノリル、キノリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフラニル、ピラゾロピリジル、キナゾリニル、キノキサリニル、シンノリニル等のようなＣ８−Ｃ１０二環式基を形成するように縮合することによって形成された縮合二環式部分を含む。環系全体に渡って電子が分布するという点において芳香族性の特性を有する、任意の単環式または縮合環二環式系は、この定義に含まれる。それはまた、少なくとも、分子の残りの部分に直接結合した環が、芳香族の特徴を有する二環式基も含む。ある実施形態では、環系は５−１２個の環員原子を含有する。ある実施形態では、単環式ヘテロアリールは５−６個の員環を含むことがあり、二環式ヘテロアリールは８−１０個の環員を含むことがある。
【００３３】
アリール及びヘテロアリール部分は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ５−Ｃ１２アリール、Ｃ１−Ｃ８アシル、及びこれらのヘテロ型を含む様々な置換基で置換されてもよく、そのそれぞれの置換基自身がさらに置換されても良く；アリール及びヘテロアリール部分についての他の置換基は、ハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ２、ＯＣＯＲ、ＣＯＲ、及びＮＯ２を含み、各Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、Ｃ５−Ｃ１０ヘテロアリール、Ｃ７−Ｃ１２アリールアルキル、またはＣ６−Ｃ１２ヘテロアリールアルキルであり、並びに、各Ｒはアルキル基について上述したように任意に置換される。ある実施形態において、それらはもう１つまたはより多くのハロ、＝Ｏ、ＣＯＯＲ６、ＯＲ６及びＯＣＯＲ６で置換されており、Ｒ６はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。アリールまたはヘテロアリール基上の置換基は、もちろん、そのような置換基の各種類、または置換基の各構成要素に適するとして本明細書に記載の基で、さらに置換されることもある。従って、例えば、アリールアルキル置換基は、アリール基について典型的なものとして本明細書に記載の置換基と、アリール部位において置換されても良く、アルキル基について典型的または適切なものとして本明細書に記載の置換基と、アルキル部分においてさらに置換されていてもよい。
【００３４】
同様に、“アリールアルキル”及び“ヘテロアリールアルキル”は、置換または非置換の、飽和または不飽和の、環式または非環式リンカーを含むアルキレンのような連結基を通じて、それらの連結部位に結合している、芳香族及びヘテロ芳香環系を意味する。リンカーは、Ｃ１−Ｃ８アルキル、またはそれらのヘテロ型であってもよい。これらのリンカーはまた、カルボニル基を含んでも良く、これによってアシルまたはヘテロアシル部分としての置換基を提供することができるようになる。アリールアルキル基におけるアリールまたはヘテロアリール環は、アリール基について上述したものと同じ置換基に置換されてもよい。アリールアルキル基は、アリール基について前に定義した基によって任意に置換されるフェニル環、及び非置換または１つ若しくは２つのＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキレンを含んでも良く、該アルキル基は、任意に、シクロプロパン、ジオキソラン、またはオキサシクロペンタンのような環を形成するように環化することもある。同様に、ヘテロアリールアルキル基は、アリール基上に典型的な置換基として前述した基によって任意に置換されるＣ５−Ｃ６単環式ヘテロアリール基、及び非置換若しくは１つ若しくは２つのＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキレンを含んでも良く、または、任意に置換されるフェニル環若しくはＣ５−Ｃ６単環式ヘテロアリール基、及び非置換若しくは１つ若しくは２つのＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されたＣ１−Ｃ４ヘテロアルキレンを含み、前記アルキル基は、任意に、シクロプロパン、ジオキソラン、またはオキサシクロペンタンのような環を形成するように環化することもある。
【００３５】
アリールアルキル基が、任意に置換されるとして記載される場合、置換基はアルキル部分、または該基のアリール若しくはヘテロアリール部分のいずれの上でもよい。アルキル部分に任意に存在する置換基は、アルキル基について一般的に上述したものと同じであり；アリールまたはヘテロアリール部分に任意に存在する置換基は、アリール基について一般的に上述したものと同じである。ある実施形態では、アリールアルキル又はヘテロアリールアルキルは、もう１つまたはより多くのハロ、＝Ｏ、ＣＯＯＲ６、ＯＲ６、及びＯＣＯＲ６置換されており、Ｒ６はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【００３６】
本明細書で用いられる“アリールアルキル”基は、それらが置換されていない場合はヒドロカルビル基であり、環、及びアルキレンまたは類似のリンカー中の炭素原子の総数で記載されている。従って、ベンジル基はＣ７−アリールアルキル基であり、フェニルエチルはＣ８−アリールアルキルである。
【００３７】
本明細書で用いられる“アルキレン”は二価のヒドロカルビル基を意味し；それは二価であるので、２つの他の基を一緒に繋げることができる。ときには、それは、ｎが１−８であり、好適にはｎが１−４である−（ＣＨ２）ｎ−を意味し、特定される場合でも、アルキレンはまた他の基により置換されてもよく、及び他の長さでもあり得る。アルキレンの空いた原子価は、鎖の向かい合った端に位置する必要はない。従って、−ＣＨ（Ｍｅ）−及び−Ｃ（Ｍｅ）２−はまた、シクロプロパン−１，１−ジイルのような環状基も、用語“アルキレン”の範囲に含まれる。アルキレン基が置換されている場合、置換基は、本明細書に記載されたアルキル基上に典型的に存在するものを含む。
【００３８】
一般に、置換基に含まれる任意のアルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、若しくは、アリール若しくはアリールアルキル基、またはこれらの基のどれか１つのヘテロ型は、それ自身が任意に、さらなる置換基で置換されていてもよい。置換基は特に記載されていない場合、これらの置換基の性質は、第１次置換基自体に関して列挙されたものと同様である。従って、一実施形態では、例えば、Ｒ’はアルキルであり、このアルキルは、化学理に適うもので、該アルキルそれ自体に与えられたサイズ制限を損ねることはないものであるＲ’についての実施形態として記載されている、残りの置換基で任意に置換されていてもよく、例えば、アルキルまたはアルケニルによって置換されたアルキルは単に、これらの実施形態について炭素原子の上限を広げるつもりである。しかしながら、アリール、アミノ、アルコキシ、＝Ｏ等によって置換されたアルキルは、本発明の範囲に含まれるつもりであり、これらの置換基の原子は、記載されたアルキル、アルケニル等の基を説明するために使用される数に数えられない。置換基の数値が指定されていない場合には、そのようなアルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、またはアリール基はそれぞれ、その利用可能な原子価に応じた置換基数によって置換されてもよく；特に、これらの基のいずれかは、例えば、その利用可能な原子価のいずれかまたは全てがフッ素原子で置換されていてもよい。
【００３９】
本明細書で使用する“任意に置換される”は、特定の基若しくは記載される基が、非水素置換基を有していないこともあり、または、該基若しくは基（複数）が、１つ以上の非水素置換基を有していてもよい。特に特定しない場合は、存在し得るそのような置換基の総数は、記載されている基の非置換形態上に存在するＨ原子の数に等しく、ある実施形態では、基において許容できる置換基の数は、該基における炭素原子の数に等しい。任意の置換基がカルボニル酸素（＝Ｏ）のような二重結合を介して結合されている場合は、基は利用可能な原子価２つを占有しているため、含まれていてもよい他の置換基の総数は、他の利用可能な原子価の数に応じて低減される。
【００４０】
本明細書で用いる“ハロ”は、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを含む。“ヘテロ”原子は、窒素、酸素、硫黄、リン、ホウ素、塩素、臭素及びヨウ素からなる群から選択することができる。好適には、ヘテロ原子は、窒素、酸素及び硫黄からなる群から選択される。
【００４１】
式１に従う代表的な化合物は、アルテスネート、アルテミシニン、アルテメテル、ジヒドロアルテミシニン（ＤＨＡまたはアルテニモール（ａｒｔｅｎｉｍｏｌ）としても知られている。）、アルテリン酸、及びアルテモチル（アルテエーテルとしても知られている。）が含まれる。化合物は（Ｒ３及びＲ４の立体異性に言及するときは）アルファまたはベータ型であってもよい。
【００４２】
【化２】
2014517001.tif 000003
【００４３】
アルテミシニンの系統（国際純正応用化学連合、ＩＵＰＡＣ）名は、（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１２Ｓ，１２ａＲ）−オクタヒドロ−３，６，９−トリメチル−３，１２−エポキシ−１２Ｈ−ピラノ［４，３−ｊ］−１，２−ベンゾジオキセピン−１０（３Ｈ）−オンである。ジヒドロアルテミシニンの系統（ＩＵＰＡＣ）名は、（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１２Ｓ，１２ａＲ）−デカヒドロ−３，６，９−トリメチル−３，１２−エポキシ−１２Ｈ−ピラノ［４，３−ｊ］−１，２−ベンゾジオキセピン−１０−オールである。アルテリン酸の系統（ＩＵＰＡＣ）名は、４−［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）−デカヒドロ−３，６，９−トリメチル−３，１２−エポキシ−１２Ｈ−ピラノ［４，３−ｊ］−１，２−ベンゾジオキセピン−１０−イル］オキシ］メチル安息香酸である。簡潔にするため、“式Ｉの化合物”への言及は、上に提示した好ましくより狭い定義を含み、本明細書に開示された（アルテスネート、アルテミシニン、アルテメテル、ジヒドロアルテミシニン、アルテリン酸、及びアルテモチルのような）特定の化合物を含む。
【００４４】
したがって、本発明の一実施形態では、外傷出血、外傷出血誘発性臓器損傷、外傷出血誘発性多臓器不全、脳卒中または熱傷損傷の治療における使用のためのアルテミシニン若しくはその誘導体、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルが提供される。一実施形態では、アルテミシニン誘導体は、アルテスネート、アルテメテル、ジヒドロアルテミシニン、アルテリン酸及びアルテモチルからなる群から選択される。
【００４５】
本発明の実施形態では、膵炎、腸の損傷、脳損傷、頭部損傷、急性肺損傷、脊髄損傷、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、のような外傷出血誘発性臓器損傷の治療における使用、並びに、外傷性頭部損傷及び外傷性脳損傷のような外傷の治療における使用のための式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩若しくはエステルが提供されてもよい。
【００４６】
外傷性脳損傷はまた、頭蓋内損傷として知られており、外力が外傷的に脳を傷つけたときに発生する。脳へのダメージは、局所的（脳の特定の領域に限定される。）又はびまん性（ダメージが、より全般的な様式で分布することがある。）であり得るが、もっとも、ある状況において両方の型の損傷が存在することは、一般的である。外傷性頭部損傷は、脳へのダメージを含むことも含まないこともある頭部への損傷である。一般的には、本発明の実施形態では、外傷性頭部または外傷性脳損傷は、外傷出血誘発性外傷性頭部損傷または外傷出血誘発性脳損傷である。
【００４７】
膵炎は膵臓の炎症を指し、急性膵炎または慢性膵炎であり得る。一般的には、本発明の実施形態では、膵炎は外傷出血誘発性膵炎である。
【００４８】
急性肺損傷は、一般に、外傷または関連状態の結果としての、二次急性肺損傷である。急性肺損傷において、毛細血管内皮界面は破壊され、肺と血液との間に開いた界面を生じる結果、肺からの微生物の全身への拡散を促進し、全身性炎症反応を引き起こす。さらに、上皮細胞への損傷は、気腔外へ液体をポンピングする肺の能力を低下させる。液体で満たされた気胞、サーファクタントの損失、微小血管血栓症及び無秩序な修復（線維症に至ることもある。）は、安静時肺気量を減らし（コンプライアンスの低下）、換気血流不均等、右から左へのシャント、及び呼吸の労力を増やす。一般に、本発明の実施形態では、急性肺損傷は、外傷出血誘発性急性肺損傷である。
【００４９】
成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）はまた、急性呼吸窮迫症候群として知られている。これは、正常なガス交換機能が損なわれた肺実質の炎症によって特徴づけられ、炎症、低酸素血、及びしばしば多臓器不全の結果をもたらす炎症性メディエーターの付随的全身放出を伴う。一般に、本発明の実施形態では、ＡＲＤＳは、外傷出血誘発性ＡＲＤＳである。
【００５０】
本発明はまた、熱傷及び熱傷損傷、並びに関連障害に関する。熱傷は、熱（直熱や熱い液体）、電気、化学薬品、光、放射線または摩擦による肉体への損傷である。このため、本発明の概念の範囲に含まれる“熱傷”は、熱傷損傷の全ての型に及ぶが、特に熱、熱い液体、電気、及び放射線に起因する熱傷である。熱傷は、もたらされるダメージの程度に応じて等級付けされる。第１度熱傷は表皮にのみダメージを与える。第２度熱傷は、浅達性（乳頭層）真皮、またはより深達性（網状層）真皮にまで及ぶことがある。２度浅達性部分層熱傷は、局所感染及び／または蜂巣炎を併発することもある。２度深達性部分層熱傷は、瘢痕、並びに切除及び／または皮膚移植が必要なこともある拘縮を併発することもある。第３度熱傷（全層熱傷）は、真皮全体を侵し、通常はダメージを受けた組織の切除を必要とする。第４度熱傷は、皮膚、皮下組織を通って、下の筋肉や骨の中にまで及ぶ。ダメージを受けた組織の切除が必要である。
【００５１】
熱傷はまた、ダメージを受けた総体表面積の割合に応じて等級付けされることもある。小児における１０％以上、及び成人における１５％以上の熱傷は、血液量減少性ショックの危険性があるため、潜在的に生命を脅かす損傷である。
【００５２】
本発明者らは、式Ｉの化合物、または医薬的に許容されるその塩若しくはエステルが、熱傷の治療に有用であることを見出した。したがって、本発明の一態様では、化学薬品熱傷、電気熱傷、放射線熱傷、摩擦熱傷、及び熱湯によるやけどを含む、熱傷の治療における使用のための、式Ｉの化合物が提供される。本発明のこの態様は、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルを、それを必要とする患者に投与することによる、熱傷を治療する方法にも及ぶ。外傷出血誘発性熱傷損傷、及び熱傷誘発性腎機能障害のような熱傷誘発性臓器損傷の治療における使用のための式Ｉの化合物（またはその誘導体）、並びに対応する治療方法も提供される。
【００５３】
本発明はまた、脳卒中（ｓｔｒｏｋｅｓ）の治療に関する。脳卒中（脳血管発作としても知られている、ＣＶＡｓ）は、脳への血液供給が中断されたときに発生する。脳卒中は、脳の一部への動脈供給血が（例えば、血栓症により）ブロックされたときは、虚血性となり、または、血管が破裂し、脳自体に若しくは脳と頭蓋骨との間の脳の表面に出血したときは、出血性となり得る。本発明の特定の実施形態においては、式Ｉの化合物またはその誘導体を用いて治療される脳卒中は、虚血性脳卒中である。
【００５４】
脳卒中の危険因子には、高齢、高血圧、糖尿病、高コレステロール、喫煙及び心房細動がある。本明細書で使用する用語“脳卒中”は、急性梗塞を伴わない虚血によってもたらされる神経機能障害の一過性発現である、一過性脳虚血発作（ＴＩＡｓ）を含むことが意図される。脳卒中は、医学的な緊急事態であると考えられており、従って、脳卒中によるダメージを低減することができる薬剤は、当技術分野において強く望まれている。本明細書で用いられる用語“脳卒中”はまた、脳に血液を供給する脳若しくは予備脳血管の閉塞（一過性または永久的のいずれか）、及びその後の再潅流によってもたらされる虚血−再灌流、または、脳浮腫があるような血管の出血を伴う破裂、若しくは、他の要因によって引き起こされた脳浮腫の結果としての損傷、を含むことを意図する。
【００５５】
本発明者らは、式Ｉに従う化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルの投与が、脳卒中、特に虚血性脳卒中によってもたらされるダメージを低減できることを見出した。したがって、本発明の一態様では、脳卒中、虚血性脳卒中、出血性脳卒中、一過性脳虚血発作（ＴＩＡｓ）の治療における使用のための、式Ｉの化合物が提供される。本発明のこの態様は、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルを、それを必要とする患者に投与することによる、脳卒中の治療方法にも及ぶ。
【００５６】
本発明に用いられる化合物は、当業者に公知の任意の適切な手段によって得られる。例えば、ロ（Ｒｏ）ら（２００６），ネイチャー，４４０（７０８６）：９４０−３は、改質酵母における抗マラリア前駆体アルテミシン酸（ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）の産生を記載する。ファンヘルペン（Ｖａｎ  Ｈｅｒｐｅｎ）ら（２０１０），ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，５（１２）：ｅ１４２２２は、アルテミシニン酸を作るために使用できる改質形態のニコチアナ  ベンサミアナ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）を記載する。あるいは、例えばコーラー（Ｋｏｈｌｅｒ）ら，（１９９７），Ｊ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  Ａ，７８５（１−２）：３５３−６０に記載されているように、アルテミシニンは、植物アルテミシア  アンヌア（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ａｎｎｕａ）Ｌ．（Ｑｉｎｇｈａｏ）から得られる。ＵＳ２００８／０１３９６４２もまた、アルテミシニン誘導体の調製について記載する。
【００５７】
アルテスネートは、ジヒドロアルテミシニン（ＤＨＡ、アルテミシニン化合物の活性代謝物）を、塩基性媒体中でコハク酸無水物と反応させることによって調製されることもできる。塩基／溶媒としてのピリジン、クロロホルム中の重炭酸ナトリウム、並びに１，２−ジクロロエタン中の触媒ＤＭＡＰ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン）及びトリエチルアミンが使用されることができ、１００％までの収率である。大規模プロセスは、ピリジン、触媒量のＤＭＡＰ及び無水コハク酸の混合物と、ジクロロメタン中でＤＨＡを処理することを含んでも良い。ジクロロメタン混合物は、定量的収率でアルテスネートを得るために６−９時間撹拌される。ジクロロメタンから、生成物をさらに再結晶化されることができる。α−アルテスネートが通常は形成される（融点１３５−１３７℃）。
【００５８】
アルテミシニン及びその誘導体を得るための他の手段は当業者には明らかである。アルテミシニン、及びジヒドロアルテミシニンのようなその誘導体は、シグマ−アルドリッチ（プール，ドーセット，英国）などの供給業者からも入手可能である。
【００５９】
本発明の実施形態では、式Ｉの化合物、または塩若しくはエステルは、１つ以上の薬学的に活性な薬剤と組み合わせて投与されることもある。
【００６０】
本発明の第二の態様においては、外傷出血、外傷出血誘発性臓器損傷、外傷出血誘発性多臓器不全、脳卒中または熱傷損傷の治療における使用のための、式Ｉの化合物またはその塩若しくは誘導体、及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物、が提供される。
【００６１】
薬学的に許容される賦形剤は、結合剤、充填剤、コーティング、崩壊剤、可溶化剤、及び溶媒を含む。
【００６２】
式Ｉの化合物は、例えば、何れの適切なカチオン（ナトリウム、カルシウム、ベンザチン、マグネシウム、アンモニウム、亜鉛、カリウムなど）をも含む塩酸塩（ＨＣｌ）、メシル酸塩、マレイン酸塩、塩化物、臭化物、クエン酸塩、酒石酸塩、硫酸塩、リン酸塩のような、薬学的に許容される塩の形態で存在していても良い。式Ｉの化合物の多くは、カルボン酸基を含むことがあり；そのような化合物のために、塩は、カルボン酸塩を形成するために、カルボン酸の脱プロトン化によって形成されることができる。
【００６３】
医薬組成物は、１以上のさらなる薬学的に活性な薬剤を含んでもよい。
【００６４】
医薬組成物は、当業者に適切と考えられるいずれの経路による投与に適合されてもよい。例えば、医薬組成物は、経口（頬側または舌下を含む）、非経口、静脈内、筋肉内、髄腔内若しくは腹腔内投与用に、または吸入による投与用に適合されてもよい。このような組成物は、薬学の分野で公知の任意の方法によって調製することができ、例えば、無菌条件下で担体（複数可）または賦形剤（複数可）と有効成分とを混合する。
【００６５】
経口投与に適した医薬組成物は、カプセルまたは錠剤などの個別単位として；粉末または顆粒として；溶液、シロップまたは懸濁液（水性溶液若しくは非水油脂中で；若しくは、可食発泡体若しくはホイップとして；若しくは、エマルジョンとして）として提供されてもよい。ジヒドロアルテミシニン（ＤＨＡ）は脂溶性であることから、経口投与に特に有用でありえる。
【００６６】
錠剤または硬ゼラチンカプセル剤に適切な賦形剤は、ラクトース、トウモロコシ澱粉またはその誘導体、ステアリン酸またはその塩が挙げられる。軟ゼラチンカプセル剤との使用に適した賦形剤には、植物油、ワックス、脂肪、半固体または液体のポリオール等が挙げられる。
【００６７】
溶液及びシロップ剤の調製には、使用される賦形剤は、例えば水、ポリオール及び糖が挙げられる。懸濁液の調製には、水中油型または油中水滴型懸濁液を提供するため、油（例えば、植物油）が使用されてもよい。
【００６８】
吸入による投与に適した医薬組成物は、定量加圧エアロゾル、ネブライザーまたは吸入器の様々なタイプの手段によって生成され得る微粒子粉末またはミストが挙げられる。
【００６９】
非経口投与に適した医薬組成物は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤及び意図するレシピエントの血液に対して製剤を実質的に等張にする溶質を含み得る、水性または非水性滅菌注射溶液；並びに、懸濁化剤及び増粘剤を含み得る水性または非水性滅菌懸濁液、を含む。注射溶液のために使用され得る賦形剤は、例えば水、アルコール、ポリオール、グリセリン及び植物油が挙げられる。組成物は、例えば密封アンプル及びバイアルのように単位用量または複数用量の容器で提供されてもよく、例えば注射用の水のような、滅菌された携行液体を使用直前に添加することのみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存されてもよい。即時注射溶液及び懸濁液は、滅菌粉末、顆粒及び錠剤から調製することができる。
【００７０】
医薬組成物は、防腐剤、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色剤、香料、塩（本発明の物質は、それ自体が薬学的に許容される塩の形態で提供されてもよい。）、緩衝剤、コーティング剤、または酸化防止剤を含んでもよい。それらはまた、本発明の物質に加えて、治療上活性な薬剤を含んでもよい。
【００７１】
式Ｉの化合物を含む本発明の任意の組成物を調製する場合、当業者は、式Ｉの化合物の溶解性を高めるために必要な如何なる手順をとることもできる。例えば、式Ｉの化合物は、アンサリ（Ａｎｓａｒｉ）ら（２００９），Ａｒｃｈ  Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ  ３２巻（１）：１５５−６５に記載のような、シクロデキストリン包接複合体のような、包接複合体の形態で存在しても良い。従って、式Ｉの化合物は、例えばシクロデキストリン包接複合体またはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン複合体のような、包接複合体の形態で存在してもよい。溶解性を高めるための他の技術は、例えば、界面活性剤（ラウリル硫酸ナトリウムなど）及び共溶媒（エタノールまたはＤＭＳＯなど）の使用など、当業者には明らかである。
【００７２】
本発明の医薬組成物の用量は、処置すべき疾患または障害、年齢、及び治療される個体等により、広範囲に変更することができ、最終的には医師が使用する適切な投薬量を決定する。例えば、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルは、０．１〜５０ｍｇ／ｋｇで、若しくは０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ、若しくは０．１〜３ｍｇ／ｋｇの間、または０．３〜３ｍｇ／ｋｇの間の量で投与されることができる。ある実施形態では、アルテスネートは、５０、３０、２５、２０、１５、１０、５または１ｍｇ／ｋｇと等しいか未満の量で投与される。式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルは、これらの用量で一度だけ投与されても良い。あるいは、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルは、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回、これらの用量で投与されることができ、好ましくは、各ボーラスは上述の用量より（寧ろ一日の累積用量より）も少ない。ある実施形態においては、化合物は１日３回を超えることは無く、若しくは１日２回を超えることは無く、または１日ただ１回投与される。ある実施形態では、用量は少なくとも６時間間隔で、好ましくは少なくとも１２時間間隔で与えられる。化合物は、ボーラスとして投与されてもよく、または、例えば点滴のように当業者によって適切であるとみなされる期間にわたって投与されてもよい。ある実施形態において、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルは、単回ボーラス用量として、または１日１回、１日２回、若しくは１日３回、若しくはそれ以上、０．１〜５ｍｇ／ｋｇ（または０．１〜３ｍｇ／ｋｇの間）の間の量で投与され得る。
【００７３】
このような組成物は、ヒトまたは獣医学用に処方することができる。別途に明言する文脈が無い限り、本願は、動物と同様にヒトにも等しく適用されると解釈されるべきである。
【００７４】
本発明の第三の態様においては、外傷出血、外傷出血誘発性臓器損傷、外傷出血誘発性多臓器不全、脳卒中または熱傷損傷の治療のための薬剤の製造における、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルの使用が提供される。本発明の別の態様では、外傷出血、外傷出血誘発性臓器損傷、外傷出血誘発性多臓器不全、脳卒中または熱傷損傷の治療のための薬剤の製造における、アルテミシニン及びその誘導体、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルの使用が提供される。一実施形態では、アルテミシニン誘導体は、アルテスネート、アルテメテル、ジヒドロアルテミシニン、アルテリン酸、及びアルテモチルからなる群から選択される。
【００７５】
本発明の第四の態様においては、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、及び同時、個別、または連続投与のための１以上のさらなる薬学的に活性な薬剤を含む部品の、キットが提供される。部品のキットは、任意に使用説明書を含んでもよい。式Ｉの化合物は、単位剤形で存在してもよい。
【００７６】
本発明の第五の態様においては、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、及び１つ以上の増量剤を含む蘇生液（あるいは再灌流液）が提供される。
【００７７】
一実施形態では、増量剤は、クリスタロイド若しくはコロイド、またはクリスタロイド及びコロイドの組み合わせである。
【００７８】
クリスタロイドは、ナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオン及びカルシウムイオンからなる群から選択される少なくとも２つのイオンを含む塩の水性溶液である。ある実施形態では、クリスタロイドは、ナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオン及びカルシウムイオンからなる群から選択される少なくとも３つのイオンを含む水性溶液である。ある実施形態では、クリスタロイドは、ナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオン及びカルシウムイオンからなる群から選択される少なくとも４つのイオンを含む水性溶液である。ある実施形態では、クリスタロイドは、ナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオン及びカルシウムイオンを含む水性溶液である。クリスタロイドはまた、重炭酸イオン及び／またはグルコースを含んでもよい。
【００７９】
クリスタロイドの例は、無機塩または他の水溶性分子の水性溶液（例えば、生理食塩水、乳酸リンゲル若しくはハルトマン液）が挙げられる。乳酸リンゲル溶液（Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ  ｌａｃｔａｔｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（乳酸リンゲル液（ｌａｃｔａｔｅｄ  Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）または乳酸リンゲル（Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ  Ｌａｃｔａｔｅ）としても知られる）１リットルは、一般的には以下を含む：
−  約１３０ｍＥｑのナトリウムイオン＝１３０ｍｍｏｌ／Ｌ
−  約１０９ｍＥｑの塩化物イオン＝１０９ｍｍｏｌ／Ｌ
−  約２８ｍＥｑの乳酸＝２８ｍｍｏｌ／Ｌ
−  約４ｍＥｑのカリウムイオン＝４ｍｍｏｌ／Ｌ
−  約３ｍＥｑのカルシウムイオン＝１．５ｍｍｏｌ／Ｌ。
【００８０】
一般に、ナトリウム、塩化物、カリウム及び乳酸は、ＮａＣｌ（塩化ナトリウム）、ＮａＣ３Ｈ５Ｏ３（乳酸ナトリウム）、ＣａＣｌ２（塩化カルシウム）、及びＫＣｌ（塩化カリウム）に由来する。しかしながら、所望のイオン濃度となるように他の成分を使用できることは、当業者には明らかであろう。乳酸リンゲルのｐＨは６〜７の範囲であり、例えば６．５であるが、それは一般にアルカリ化溶液である。
【００８１】
ハルトマン液（合成乳酸ナトリウムとしても知られる）１リットルは、一般的には以下を含む：
−  １３１ｍＥｑのナトリウムイオン＝１３１ｍｍｏｌ／Ｌ
−  １１１ｍＥｑの塩化物イオン＝１１１ｍｍｏｌ／Ｌ
−  ２９ｍＥｑの乳酸＝２９ｍｍｏｌ／Ｌ
−  ５ｍＥｑのカリウムイオン＝５ｍｍｏｌ／Ｌ
−  ４ｍＥｑのカルシウムイオン＝２ｍｍｏｌ／Ｌ。
【００８２】
従って、本発明の一実施形態では、本発明の蘇生液は、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、及びクリスタロイド増量剤を含み、クリスタロイド増量剤は、ナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオン及びカルシウムイオンからなる群から選択される少なくとも３つのイオンを含む水性溶液である。本発明の別の実施形態では、本発明の蘇生液は、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、及びクリスタロイド増量剤を含み、クリスタロイド増量剤は、ナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオン及びカルシウムイオンからなる群から選択される少なくとも４つのイオンを含む水性溶液である。本発明のさらに別の実施形態では、本発明の蘇生液は、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、及びクリスタロイド増量剤を含み、クリスタロイド増量剤は、ナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオン及びカルシウムイオンを含む水性溶液である。
【００８３】
これらの実施形態では、イオンは、当業者に公知の任意の適切な濃度で存在することができる。例えば、ナトリウムイオンは、約１００ｍｍｏｌ／Ｌ〜約１５０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で存在することができる。塩化物イオンは、約９０ｍｍｏｌ／Ｌ〜約１２０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で存在することができる。乳酸イオンは、約２０ｍｍｏｌ／Ｌ〜約３０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で存在することができる。カリウムイオンは、約２ｍｍｏｌ／Ｌ〜約６ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で存在することができる。カルシウムイオンは、約１ｍｍｏｌ／Ｌ〜約５ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で存在することができる。重炭酸イオン（存在する場合）は、約１０ｍｍｏｌ／Ｌ〜約５０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で存在することができる。グルコース（存在する場合）は、約２重量％〜約１０重量％、例えば約３重量％〜約６重量％の濃度で存在することができる。
【００８４】
したがって、本発明の別の実施形態では、本発明の蘇生液は；
−  約１００ｍｍｏｌ／Ｌ〜約１５０ｍｍｏｌ／Ｌのナトリウムイオン
−  約９０ｍｍｏｌ／Ｌ〜約１２０ｍｍｏｌ／Ｌの塩化物イオン
−  約２０ｍｍｏｌ／Ｌ〜約３０ｍｍｏｌ／Ｌの乳酸イオン
−  約２ｍｍｏｌ／Ｌ〜約６ｍｍｏｌ／Ｌのカリウムイオン
−  約１ｍｍｏｌ／Ｌ〜約５ｍｍｏｌ／Ｌのカルシウムイオン
を含む水性溶液中で、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルを含む。
【００８５】
当業者には明らかであろうが、上記の水性溶液は、適切なクリスタロイド増量剤の例である。
【００８６】
蘇生液は、代替的に、コロイド増量剤を含んでもよく、またはそれは、上述のクリスタロイド増量剤とコロイド増量剤との混合物を含んでもよい。適切なコロイドの例は、ゼラチン、スクシニル化ゼラチン、アルブミン、デキストラン（例えばデキストラン４０、デキストラン７０、若しくはデキストラン７５）、血液、またはエーテル化澱粉（ヒドロキシエチル澱粉、テトラスターチ、ヘタスターチ、若しくはペンタスターチとしても知られる。）が挙げられる。コロイドは、一般的には、これらの成分を含む水性溶液である。例えば、コロイドは、ゼラチン、スクシニル化ゼラチン、アルブミン、デキストラン、血液、及びエーテル化澱粉からなる群から選ばれる少なくとも一つの成分を含むことができる。
【００８７】
市販のコロイドは、ヘマセル（Ｈａｅｍａｃｃｅｌ）（登録商標）（ピラマル（Ｐｉｒａｍａｌ）、尿素架橋を介して架橋された分解ゼラチンポリペプチドを含む）、ゲロフシン（Ｇｅｌｏｆｕｓｉｎｅ）（登録商標）（ブラウン（Ｂｒａｕｎ）、スクシニル化ゼラチン（変性液状ゼラチン、平均分子量３００００）４０ｇ（４％）、Ｎａ＋１５４ｍｍｏｌ、ＣＬ−１２０ｍｍｏｌ／リットル）、ゲロパスマ（Ｇｅｌｏｐａｓｍａ）（登録商標）（フレゼニウスカービ（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｋａｂｉ）、部分的に加水分解され、スクシニル化されたゼラチン（変性液状ゼラチン）（無水ゼラチンとして）３０ｇ（３％）、Ｎａ＋１５０ｍｍｏｌ、Ｋ＋５ｍｍｏｌ、Ｍｇ２＋１．５ｍｍｏｌ、ＣＬ−１００ｍｍｏｌ、乳酸イオン３０ｍｍｏｌ／リットル）、イソプレックス（Ｉｓｏｐｌｅｘ）（登録商標）（ビーコン（Ｂｅａｃｏｎ）、スクシニル化ゼラチン（変性液体ゼラチン、平均分子量３００００）４０ｇ（４％）、Ｎａ＋１４５ｍｍｏｌ、Ｋ＋４ｍｍｏｌ、Ｍｇ２＋０．９ｍｍｏｌ、Ｃｌ−１０５ｍｍｏｌ、乳酸イオン２５ｍｍｏｌ／リットル）、ボルプレックス（Ｖｏｌｐｌｅｘ）（登録商標）（ビーコン、スクシニル化ゼラチン（変性液体ゼラチン、平均分子量３００００）４０ｇ（４％）、Ｎａ＋１５４ｍｍｏｌ、ＣＬ−１２５ｍｍｏｌ／リットル）、ボルベン（Ｖｏｌｕｖｅｎ）（登録商標）（フレゼニウスカービ、０．９％塩化ナトリウム注射液中、６％ヒドロキシエチル澱粉（平均分子量１３００００））、ボルライト（Ｖｏｌｕｌｙｔｅ）（登録商標）（フレゼニウスカービ、０．６％塩化ナトリウム静脈注射液中、６％ヒドロキシエチル澱粉（重量平均分子量１３００００）、Ｎａ＋１３７ｍｍｏｌ、Ｋ＋４ｍｍｏｌ、Ｍｇ２＋１．５ｍｍｏｌ、Ｃｌ−１１０ｍｍｏｌ、酢酸イオン３４ｍｍｏｌ／リットルを含む）、ベノファンジン（Ｖｅｎｏｆｕｎｄｉｎ）（登録商標）（ブラウン、０．９％塩化ナトリウム注射液中、６％ヒドロキシエチル澱粉（重量平均分子量１３００００））、テトラスパン（Ｔｅｔｒａｓｐａｎ）（登録商標）（ブラウン、０．６２５％塩化ナトリウム中、ヒドロキシエチル澱粉（重量平均分子量１３００００）６％または１０％、Ｎａ＋１４０ｍｍｏｌ、Ｋ＋４ｍｍｏｌ、Ｍｇ２＋１ｍｍｏｌ、Ｃｌ−１１８ｍｍｏｌ、Ｃａ２＋２．５ｍｍｏｌ、酢酸イオン２４ｍｍｏｌ、リンゴ酸イオン５ｍｍｏｌ／リットルを含む）、ＨＡＥＳ−ステリル（ＨＡＥＳ−ｓｔｅｒｉｌ）（登録商標）（フレゼニウスカービ、０．９％塩化ナトリウム静脈注射液中、ペンタスターチ（重量平均分子量２０００００）１０％）、ヘモヘス（Ｈｅｍｏｈｅｓ）（登録商標）（ブラウン、０．９％塩化ナトリウム静脈注射液中、６％または１０％ペンタスターチ（重量平均分子体重２０００００））、ハイパーＨＡＥＳ（ＨｙｐｅｒＨＡＥＳ）（登録商標）（フレゼニウスカービ、７．２％塩化ナトリウム静脈注射液中、ヒドロキシエチル澱粉（重量平均分子量２０００００）６％）、及び、レスキューフロー（ＲｅｓｃｕｅＦｌｏｗ）（登録商標）（ビタライン（Ｖｉｔａｌｉｎｅ）、７．５％塩化ナトリウム静脈注射液中、６％デキストラン７０）が挙げられる。
【００８８】
したがって、本発明の一実施形態では、本発明の蘇生液は、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、並びにコロイド増量剤及び／またはクリスタロイド増量剤を含み、コロイド増量剤は、ゼラチン、スクシニル化ゼラチン、アルブミン、デキストラン、血液、及びエーテル化澱粉からなる群から選択される少なくとも１つの成分を含み、並びに、クリスタロイド増量剤は、ナトリウムイオン、塩化物イオン、乳酸イオン、カリウムイオン及びカルシウムイオンからなる群から選択される少なくとも３つのイオンを含む水性溶液である。
【００８９】
本発明のさらなる実施形態において、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、並びにコロイド増量剤及び／またはクリスタロイド増量剤を含む蘇生液が提供され、コロイド増量剤は、ゼラチン、スクシニル化ゼラチン、アルブミン、デキストラン、血液、及びエーテル化澱粉からなる群から選択される少なくとも１つの成分を含み、並びに、クリスタロイド増量剤は以下を含む：
−  約１００ｍｍｏｌ／Ｌ〜１５０ｍｍｏｌ／Ｌのナトリウムイオン
−  約９０ｍｍｏｌ／Ｌ〜１２０ｍｍｏｌ／Ｌの塩化物イオン
−  約２０ｍｍｏｌ／Ｌ〜３０ｍｍｏｌ／Ｌの乳酸イオン
−  約２ｍｍｏｌ／Ｌ〜６ｍｍｏｌ／Ｌのカリウムイオン
−  約１ｍｍｏｌ／Ｌ〜５ｍｍｏｌ／Ｌのカルシウムイオン。
【００９０】
患者に提供する蘇生溶液の量は、当業者によって決定されることができる。
例えば、クリスタロイド増量剤を含む蘇生液は、患者から失われた量の２から４倍に等しい量で提供されることができる。コロイド増量剤を含有する蘇生液は、患者から失われた量に等しい量で提供されることができる。
【００９１】
本発明の蘇生液は水性溶液である。組成液の各成分の濃度は、必要に応じて当業者によって決定されることができる。例えば、式Ｉの化合物（または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル）の濃度は、１０−６Ｍ〜１０−２Ｍであり、例えば１０−５Ｍ〜３×１０−３Ｍである。ある実施形態において、式Ｉの化合物（または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル）は、１０−２Ｍと等しいか未満の濃度で存在する。ある実施形態において、式Ｉの化合物（または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル）は、１０−６Ｍまたは１０−５Ｍと等しいか超える濃度で存在する。
【００９２】
本発明の蘇生液は、低張性、高張性、または等張性である。本発明のいくつかの態様において、増量剤（及び／または蘇生若しくは再灌流液）は、等張水性溶液である。従って、本発明はまた、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルを含む、等張水性溶液を提供する。
【００９３】
本発明の蘇生溶液は、当業者によって適切とみなされるような、さらなる成分を含んでもよい。例えば、蘇生液はまた、マンニトール、ヘモグロビン（例えば、２〜９ｇ／リットルの用量範囲内）、ペグ化ヘモグロビン（例えば、ＭＰ４ＯＸ（登録商標）（乳酸電解液中に４ｇ／Ｌ  ＰＥＧ−Ｈｂ、サンガート（Ｓａｎｇａｒｔ）））、ペグ化カルボキシヘモグロビン（例えば、ＭＰ４ＣＯ（登録商標）（生理酢酸電解質溶液中に４３ｍｇ／ｍＬのペグ化カルボキシヘモグロビン［≧９０％ＣＯヘモグロビン飽和度］、サンガート）、血小板（例えば、５０×１０８／リットル以上の用量）、フィブリノゲン（例えば、５０ｍｇ／ｋｇの用量）、抗線維素溶解剤、組換え活性化凝固第ＶＩＩ因子（ｒＦＶＩＩａ）、及びプロトロンビン複合体、からなる群から選択される１つ以上の追加的成分を含んでもよい。
【００９４】
本発明のこの態様は、蘇生液の製造における、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、増量剤、及び任意の追加的成分（例えば、上記のようなもの）の使用に及ぶ。
【００９５】
外傷出血の治療は、患者の要求に応じて調整することができる。治療投薬計画例は、ロッサント（Ｒｏｓｓａｉｎｔ）ら（２０１０），Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ，１４：Ｒ５２に記載されている。
【００９６】
式Ｉの化合物を含む水性蘇生液を調製するときは、当業者は、上述のような式Ｉの化合物の溶解性を増大させる、いかなる必要な手順をとってもよい。
【００９７】
式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルは、出血によって引き起こされる臓器のダメージを低減するために、輸血前にドナー血液に加えられても良い。従って、本発明のさらなる態様においては、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルを含む、分離血液のサンプルまたはユニットが提供される。分離血液のサンプルまたはユニットは、外傷出血または関連症状を患っている患者における輸血用である。
【００９８】
輸血用分離血液のユニットは、全血サンプルを含まないこともあるが、一般的には、赤血球、血漿、及び血小板を含有する。分離血液のユニットは、白血球及び／または凝固因子（第Ｖ因子又は第ＶＩＩＩ因子のようなもの）をさらに含んでもよい。血液のユニットは、一般的には、例えば３００〜７００ｍｌ、好適には４００〜６００ｍｌの量で、単位剤形で提供される。血液は、ヒトドナー患者から得てもよいし、外傷出血を患っている患者に投与する前に貯蔵されてもよい。
【００９９】
患者に投与される血液型は、当業者によって決定されうる。例えば、血液は、患者の要件に応じて、Ａ型、Ｂ型、ＡＢ型、またはＯ型でもよい。血液は、患者の要件に応じて、Ｒｈ型陽性、または陰性でもよい。
【０１００】
分離血液のユニット中の式Ｉの化合物（または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル）の濃度は、１０−６Ｍ〜１０−２Ｍ、例えば１０−５Ｍ〜３×１０−３Ｍであっても良い。ある実施形態において、式Ｉの化合物（または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル）は、１０−２Ｍと等しいか未満の濃度で存在する。ある実施形態において、式Ｉの化合物（または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル）は、１０−６Ｍまたは１０−５Ｍと等しいか超える濃度で存在する。
【０１０１】
本発明の更なる態様では、式Ｉの化合物、若しくは薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、本発明の医薬組成物、本発明の蘇生液、または本発明の輸血用分離血液のユニットを、これらを必要とする患者へ投与することを含む、外傷出血、外傷出血誘発性臓器損傷、外傷出血誘発性多臓器不全、脳卒中または熱傷損傷の治療方法を提供する。
【０１０２】
化合物、医薬組成物、蘇生液または血液のユニットは、外傷出血を患った後に患者に投与されてもよい。あるいは、またはさらに、失血による臓器ダメージのような術後合併症を回避するために、手術前に投与されてもよい。投与経路は、当業者に公知の任意の適切な経路であってもよく、例えば、経口（口腔若しくは舌下を含む）、非経口、静脈内、筋肉内、髄腔内若しくは腹腔内投与、または吸入による投与である。本発明の輸血用分離血液のユニットは、一般的には、外傷出血を患った後に静脈内投与される。
【０１０３】
本発明の一実施形態において、外傷出血の治療における使用ためのアルテスネートが提供される。アルテスネートは、臓器ダメージを最小限にするため出血を患っている患者に投与される。０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内の用量で、溶液が静脈内投与されることができる。溶液は、コロイドまたはクリスタロイド増量剤を含む水性蘇生液として投与されてもよい。
【０１０４】
上述したように、本発明者らはまた、驚くべきことに、アルテスネート及びその関連化合物の投与は、ＭＩにおいて梗塞サイズを減らすことができ、さらには梗塞が起こった後のダメージの程度を減らすことができることを見出した。従って、本発明のさらなる態様においては、心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患、または心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患の関連障害の治療における使用のための、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルが提供される。
【０１０５】
本明細書で使用される“心筋梗塞”は、貫壁性ＭＩと心内膜下ＭＩを含む。貫壁性ＭＩは、主冠状動脈に関わるアテローム性動脈硬化症に関連している。心内膜下ＭＩは、左心室、心室中隔、または乳頭筋の心内膜下壁の小さな領域に関わる。本発明の態様はまた、冠状動脈性心疾患及び心筋梗塞に関連する症状、並びに／または、心停止（効果的には、全身虚血）及び心停止に起因する臓器ダメージを含む、冠状動脈性心疾患、の治療に及ぶ。
【０１０６】
虚血−再灌流に関連する疾患は、虚血再灌流誘発性膵炎、急性肺損傷（前述）、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ、これも前述）、狭心症、及び肺高血圧を含む。
【０１０７】
肺高血圧は、肺動脈、肺静脈、または肺毛細血管（共に肺血管系として知られている）内の血圧の上昇を意味する。“一次性”または“原発性”肺高血圧は、単一の同定可能な原因が存在しないという事実を意味するが、環境及び／または遺伝的危険因子が存在し得る。
【０１０８】
世界保健機関は、肺高血圧を、Ｉ〜ＶのＷＨＯの５群に分類している。ＷＨＯグループＩは、肺動脈性肺高血圧（ＰＡＨ）であり、特発性ＰＡＨ、家族性ＰＡＨ、他の疾患（膠原血管病（例えば、強皮症）、全身と肺循環間の先天的シャント、門脈圧亢進症、ＨＩＶ感染、薬物、毒素、または他の疾患若しくは障害）と関連したＰＨＡ、及び静脈または毛細血管疾患と関連するＰＡＨを含む。
【０１０９】
ＷＨＯグループＩＩは、心房若しくは心室疾患または弁膜症（例えば僧帽弁狭窄症）のような、左心疾患と関連する肺静脈高血圧症である。ＷＨＯグループＩＩＩは、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、及び間質性肺疾患（ＩＬＤ）のような、肺疾患及び／または低酸素血症に関連する肺高血圧である。ＷＨＯグループＩＶは、近位または遠位肺動脈の肺塞栓症のような、慢性血栓性及び／または塞栓性疾患に起因する肺高血圧である。ＷＨＯグループＶは、種々の疾患に関連する肺高血圧である。
【０１１０】
単に狭心症（ａｎｇｉｎａ）としても知られている狭心症（ａｎｇｉｎａ  ｐｅｃｔｏｒｉｓ）は、心筋の虚血に起因する胸痛である。これは、一般に、冠状動脈の閉塞、または、心臓への血流の制限をもたらす痙攣によるものである。冠状動脈性心臓病は、心臓動脈のアテローム性動脈硬化症に起因する狭心症の主な原因である。本明細書で使用される“狭心症”は、安定狭心症、不安定狭心症、及び微小血管狭心症を含むことが意図される。
【０１１１】
肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）は、肺血管抵抗を漸進的に増加させて右心室の過負荷にし、最終的に右心室不全、及び早死に至ることを特徴とする症候群である。肺血管抵抗の増加は、血管収縮、血管壁（平滑筋細胞及び内皮細胞の増殖）の様々な層での増殖を介した肺血管壁の閉塞性リモデリング、炎症、及びその場（ｉｎ−ｓｉｔｕ）での血栓形成を含む、肺動脈における数多くの進行性変化に関連している。
【０１１２】
主な組織学的特徴は、中膜肥大、内膜肥厚、外膜肥厚、叢状病変とその場での血栓形成を含む。叢状病変は、内皮及び平滑筋細胞の限局性増殖を示し、ＰＡＨに特徴的である。ＰＡＨは、正常肺動脈楔入圧（＜１５ｍｍＨｇ）で、安静時の平均肺動脈圧２５ｍｍＨｇ以上、または運動時の平均肺動脈圧３０ｍｍＨｇ以上までの持続的上昇と定義することができる。ほとんどの場合、最も初期の症状は、身体運動時の呼吸困難である。他の症状は、失神またはほぼ失神、疲労、及び末梢浮腫が含まれる。狭心症に似た胸の圧迫感や痛みが、特に身体運動時に、起こることがある。
【０１１３】
本発明の第一の態様の化合物はまた、心臓移植、または心臓及び肺移植を含む、心臓の全部または一部の虚血−再灌流をもたらす外科的処置において、特に、虚血によってもたらされる何らかのダメージを低減するための移植中の心臓の灌流に有用である。同様に、本発明の第一の態様の化合物はまた、冠状動脈バイパス手術において、特に、処置の間、または、例えばバルーンによる冠状動脈をステントするための処置の間に、動脈または静脈の灌流に有用である。本発明の第一の態様の化合物は、心臓移植、または冠状動脈バイパス手術のような冠状動脈手術を受けている患者へ、虚血及び虚血−再灌流によるダメージを最小限にするために投与されてもよい。本発明の第一の態様の化合物はまた、肺高血圧の治療に有用である。
【０１１４】
本発明の実施形態では、式Ｉの化合物、またはその塩若しくは誘導体は、１つ以上の薬学的に活性な薬剤と組み合わせて投与されてもよい。特に、ＭＩ心筋梗塞若しくは冠状動脈性心疾患、または心筋梗塞若しくは冠状動脈性心疾患に関連する障害（心停止を含む）の治療時に、本発明の化合物は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、エリスロポエチン（ＥＰＯ）またはその類似体、ＰＰＡＲ（ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体）−ガンマリガンド、ＰＰＡＲ−ベータリガンド、ＰＰＡＲ−アルファリガンド  硝酸塩含有化合物、一酸化窒素（ＮＯ）供与体、フェニルプロパノイド、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３阻害剤、アンドログラホリドまたはその類似体、抗酸化剤、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）調節剤（ＶＤＲＭ）、リポキシン、アネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）またはその類似体、ペントキシフィリン、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、カルベノキソロン、グリチルリチン、高移動度群タンパク質Ｂ１（ｈｉｇｈ−ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂ１、ＨＭＧＢ１）及びその類似体、ＨＭＧＢ１阻害剤、活性化プロテインＣ、サリチル酸またはその誘導体、プロスタサイクリンまたはその誘導体、脂質の豊富な溶液（ｌｉｐｉｄ−ｒｉｃｈ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、ＣＸＣＲ２調節剤、並びにホスホジエステラーゼ阻害剤、からなる群から選択される１つ以上の薬学的に活性な化合物と組み合わせて投与するためのものであってもよい。
【０１１５】
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤は、０．０３−１０ｍｇ／ｋｇの用量範囲で投与されるためのものであってもよい。ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤はスタチンでもよく、例えば、シンバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン及びロスバスタチンである。
【０１１６】
エリスロポエチン（ＥＰＯ）は、１０００ＩＵ／ｋｇの用量範囲で投与するためのものであってもよい。エリスロポエチン類似体は、ＡＲＡ−２９０（アライムファーマシューティカルズ（Ａｒａｉｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ），オッシニング，ニューヨーク州，米国、例えば０．０３−１０ｎｇ／ｋｇの用量範囲）であってもよい。ＡＲＡ２９０は、（ピログルタミン酸の５員環構造により）保護されたＮ−末端、及びＣ−末端に遊離カルボキシル基を有する１１−アミノ酸ペプチドである。すべてのアミノ酸残基は、Ｌ−配置である。アミノ酸配列は（Ｎ−末端からＣ−末端方向に）、Ｐｙｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−ＯＨであり、このときＰｙｒはピログルタミン酸を表す。例えば、ＰＥＧ化ＥＰＯ、またはカルバミル化ＥＰＯのようなＥＰＯ誘導体が使用されてもよい。
【０１１７】
ＰＰＡＲ（ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体）−ガンマリガンドは、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、シグリタゾン、プロスタグランジンＡ１若しくはプロスタグランジンＤ２（例えば、０．０３−１０ｍｇ／ｋｇの用量範囲）、または１５−デオキシデルタ１２，１４−プロスタグランジンＪ２（１５Ｄ−ＰＧＪ２、例えば０．１−３ｍｇ／ｋｇの容量範囲で静脈内に提供される。）であってもよい。ＰＰＡＲ−ベータリガンドは、ＧＷ０７４２（シグマ）、またはＧＷ５０１５１６（例えば、容量範囲０．００１〜３ｍｇ／ｋｇ）であってもよい。ＰＰＡＲ−アルファリガンドは、フェノフィブラート、クロフィブラート、またはＷＹ１４６４３（ウェイマン（Ｗａｙｍａｎ）ら（２００２），ＦＡＳＥＢ  Ｊ，１６（９）：１０２７−４０で説明される。）であってもよい。
【０１１８】
【化３】
2014517001.tif 000004
【０１１９】
硝酸塩含有化合物は、硝酸ナトリウム、硝酸リチウム、硝酸カリウム、硝酸マグネシウム、硝酸カルシウム、硝酸であってもよい。硝酸塩含有化合物はまた、三硝酸グリセリン（ＧＴＮ）のような有機硝酸塩であってもよい。一酸化窒素（ＮＯ）供与体は、ジアゼニウムジオラートであってもよい。
【０１２０】
フェニルプロパノイドは、クマリン、オストール（ｏｓｔｈｏｌｅ）（例えば、用量当たり最大１００ｍｇ／ｋｇ）、またはメリーバ（Ｍｅｒｉｖａ）（登録商標）（ホスファチジルコリンと複合体を形成したクルクミン、ソーンリサーチ，ドーバー，アイダホ州，米国、から入手可能）であることもある。ホスファチジルコリン及び／または高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）及び／またはスフィンゴシルフォスフォリルコリン（ＳＰＣ、マーチら（２００８），Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ，３６（２）：５５０−９で説明される。）を含む脂質の豊富な溶液が（または、これらいずれかの成分が個別に）、また、使用されてもよい。リポタンパク質は、一般に、それらの密度が１．０６３ｇ／ｍｌより大きいか等しい場合、「高密度」と定義される。ＨＤＬは、５〜１５ｎｍの直径を有することがある。ＨＤＬは、３０％以上のタンパク質を含むことがある。
【０１２１】
グリコーゲンシンターゼキナーゼ３阻害剤は、リチウム（例えば、０．１−３０ｍｇ／ｋｇの用量範囲）、またはＴＤＺＤ−８（シグマ−アルドリッチ、例えば、０．０３−１０ｍｇ／ｋｇの用量範囲）、ＮＰ−１２（シグマ−アルドリッチ、例えば、０．０３−１０ｍｇ／ｋｇの用量範囲）若しくはバルプロエート（バルプロ酸の塩、例えば、０．０３−１０ｍｇ／ｋｇの用量範囲）でありえる。
【０１２２】
【化４】
2014517001.tif 000005
【０１２３】
アンドログラホリドは、０．１−３ｍｇ／ｋｇの用量範囲で投与されるためであってもよい。
【０１２４】
抗酸化剤はスーパーオキシドジスムターゼ、テンポール（スピントラップ剤、例えば、１〜１００ｍｇ／ｋｇの用量範囲）、トロロックス（登録商標）（ホフマン−ラロシュ、例えば、１〜１００ｍｇ／ｋｇの用量範囲）、または、ＲＳＶＡ３１４及びＲＳＶＡ４０５（ヴァンドゥ（Ｖｉｎｇｔｄｅｕｘ）ら（２０１１），ＦＡＳＥＢ  Ｊ，２５（１）：２１９−２３１で説明される。）のようなレスベラトロール並びにその類似体であってもよい。
【０１２５】
【化５】
2014517001.tif 000006
【０１２６】
ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）調節剤（ＶＤＲＭ）は、ビタミンＤ、カルシトリオール、パリカルシトール、ドキセルカルシフェロール、またはＶＳ−１０５（ヴィダシム（Ｖｉｄａｓｙｍ），シカゴ，イリノイ州，米国）であってもよい。
【０１２７】
リポキシンはリポキシンＡ４であってもよい。アネキシンＡ１類似体は、例えば、アンチフラミン−２、ｆＭＬＦ、またはＡｃ２−２６（Ｎ末端アシル）、ＡＣ１−２５、ＵＤＰ２５（ユニジーン）、及びＵＤＰ２６（ユニジーン）のようなホルミルペプチド受容体２型（ＦＰＲ２／ＡＬＸ）に対するリガンドであってもよい。
【０１２８】
【化６】
2014517001.tif 000007
【０１２９】
ペントキシフィリンは、０．１〜４００ｍｇ／ｋｇの用量範囲で投与するためのものであってもよい。カルベノキソロンは、０．０１−３０ｍｇ／ｋｇの用量範囲で投与するためのものであってもよい。甘草（グリシリザ  グラブラ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａ））の主要な活性成分であるグリチルリチンは、０．１−３０ｍｇ／ｋｇの用量範囲で投与するためのものであってもよい。ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤は、ＫＡＲ３１６６（カルス（Ｋａｒｕｓ），サウサンプトン，英国）、ＫＡＲ３０００（カルス，サウサンプトン，英国）、またはロミデプシン（ＮＳＣ  ６３０１７６，イストダックス（ｉｓｔｏｄａｘ）（登録商標）、デプシペプチド、ＦＲ９０１２２８、及びＦＫ２８８としても知られている）であってもよい。
【０１３０】
高移動度群タンパク質Ｂ１（ＨＭＧＢ１）類似体は、ＨＭＧＢ１のＣ末端ドメイン及びＡ−ボックス組換体（バネルジー（Ｂａｎｅｒｊｅｅ）とクンドゥ（Ｋｕｎｄｕ），Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ（２００３），３１（１２）：３２３６−４７、及び、アンダーソンとトレイシー，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１１），２９：１３９−６２、で説明される。）、またはそのペプチド誘導体であってもよい。ＨＭＧＢ１阻害剤は、抗ＨＭＢ１抗体であってもよい。サリチル酸誘導体は、（サリチル酸ナトリウムのような）サリチル酸塩、例えば最大１００ｍｇ／ｋｇの用量範囲で、またはアスピリン（例えば、最大３００ｍｇ／ｋｇの用量範囲）であってもよい。
【０１３１】
プロスタサイクリン類似体は、イロプロスト（バイエル  シエーリング）、またはシカプロスト（ケイマン  ケミカル）であってもよい。ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤は、シルデナフィル（バイアグラ（登録商標））、またはタダラフィル（シアリス（登録商標））を含み、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ（シム（Ｓｉｍ）ら（２０１１），Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ，１４６（３）：４５９−６０、及び、コカ（Ｋｏｋａ）とククレジャ（Ｋｕｋｒｅｊａ）（２０１０），Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２（５）：１７３−１７８、で説明される。）の用量である。ＰＤＥ阻害剤は、１，２，３，４若しくは５型ＰＤＥ選択的阻害剤、または非選択的ＰＤＥ阻害剤であってもよい。
【０１３２】
ＣＸＣＲ２は、“インターロイキン８受容体，ベータ”、またはＩＬＲＢ８としても知られている。ＣＸＣＲ２調節剤は、ＣＸＣＲ２の活性化剤または阻害剤であってもよい。ＣＳＣＲ２のアンタゴニストは、米国２００９／０２５８９０６で説明されている。ＣＸＣＲ２調節剤は、キム（Ｋｉｍ）ら（２０１１），Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ（印刷前に公開、２０１１年４月２１日）、及び、カプール（Ｋａｐｏｏｒ）とシーマーマン（Ｔｈｉｅｍｅｒｍａｎｎ）（２０１１），Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ，１８３（２）：１５０−１、でも説明されている。
【０１３３】
式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルは、間葉系幹細胞、胚性幹細胞、内皮前駆細胞、心臓幹細胞、または人工多能性幹細胞などの幹細胞のような幹細胞と組み合わせて投与するためのものであってもよい。幹細胞は、投与当たり１０，０００〜１千万個の細胞の用量で投与するためのものであってもよい。あるいは、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルはまた、式Ｉの化合物及び／又はＥＰＯの存在が欠けた状態で、生体外で最大２４時間培養した後に回収された、そのような細胞の上清との組み合わせで投与するためのものであってもよい。
【０１３４】
式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルは、マレイン（ｍａｒｅｉｎ）を含有するコレオプシス  ティンクトリア（Ｃｏｒｅｏｐｓｉｓ  ｔｉｎｃｔｏｒｉａ）のフラボノイド高濃度画分と組み合わせて投与するためのものであってもよい（ディアス（Ｄｉａｓ）ら，Ｊ．  Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ（２０１０），１３２（２）：４８３−９０に説明される。）。これは、マレインについて０．１−３０ｍｇ／ｋｇ、及び画分について最大３００ｍｇ／ｋｇの用量範囲で投与するためのものであってもよい。
【０１３５】
式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルはまた、例えばワカイ（２０１１），Ｃｌｉｎ  Ｅｖｉｄ（オンライン），ｐｉｉ：０２０２、及び、ジェーンバーグ（Ｊｅｒｎｂｅｒｇ）ら（２０１１），ＪＡＭＡ，３０５（１６）：１６７７−８４、に説明される、従来のＭＩ治療とともに投与されてもよい。
【０１３６】
本発明の医薬組成物は、従って、１つ以上のさらなる薬学的に活性な薬剤を含むことができる。追加的な医薬組成物例は、本発明の化合物と組み合わせて投与するための本発明の第一の態様のために有用であるとして記載されているものが挙げられる。本発明は、従って、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、並びに、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、エリスロポエチンまたはその類似体、ＰＰＡＲ（ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体）−ガンマリガンド、ＰＰＡＲ−ベータリガンド、ＰＰＡＲ−アルファリガンド、硝酸塩含有化合物、一酸化窒素（ＮＯ）供与体、フェニルプロパノイド、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３阻害剤、アンドログラホリドまたはその類似体、抗酸化剤、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）調節剤（ＶＤＲＭ）、リポキシン、アネキシンＡ１（ＡｎｘＡ１）またはその類似体、ペントキシフィリン、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、カルベノキソロン、グリチルリチン、高移動度群タンパク質Ｂ１（ＨＭＧＢ１）及びその類似体、ＨＭＧＢ１阻害剤、並びに活性化プロテインＣ、からなる群から選択される１つ以上の薬学的に活性な成分、を含む医薬組成物も提供する。
【０１３７】
本発明のさらなる側面では、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、及び、薬学的に許容される賦形剤を含む、心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患、または心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患の関連障害の治療における使用のための医薬組成物が提供される。
【０１３８】
本発明の医薬組成物の用量は、処置すべき疾患または障害、処置されるべき個体の年齢及び状態などに応じて、広い限度の間で変動し得るものであり、使用される適切な投薬量は最終的に医師が決定する。しかしながら、本発明者らは、電解質異常、腹痛、食欲不振、下痢、嘔吐、吐き気、動悸、ＱＴ間隔の延長、咳、頭痛、めまい、睡眠障害、無力症、知覚異常、関節痛、筋肉痛、掻痒、発疹、運動失調、感覚鈍麻、及びクローヌスのような、アルテミシニン及びその誘導体に通常関連する有害な副作用を回避する、低濃度の化合物を用いて、心筋梗塞、冠状動脈心疾患、及び関連障害のような障害が治療され得ることを発見した。
【０１３９】
例えば、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルは、０．１〜５０ｍｇ／ｋｇで、若しくは０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ、若しくは０．１〜３ｍｇ／ｋｇの間、または０．３〜３ｍｇ／ｋｇの間の量で投与されることができる。ある実施形態では、アルテスネートは、５０、３０、２５、２０、１５、１０、５または１ｍｇ／ｋｇと等しいか未満の量で投与される。式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルは、一度だけ、これらの用量で投与されてもよい。あるいは、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルは、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回、これらの用量で投与されてもよく、好ましくは、各ボーラスは上述の用量より（寧ろ一日の累積用量より）も少ない。ある実施形態においては、化合物は１日３回を超えることは無く、若しくは１日２回を超えることは無く、または１日ただ１回投与される。ある実施形態では、用量は少なくとも６時間間隔で、好ましくは少なくとも１２時間間隔で与えられる。化合物は、ボーラスとして投与されてもよく、または、例えば点滴のように当業者によって適切であるとみなされる期間にわたって投与されてもよい。ある実施形態において、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルは、単回ボーラス用量として、または１日１回、１日２回、若しくは１日３回、若しくはそれ以上、０．１〜５ｍｇ／ｋｇ（または０．１〜３ｍｇ／ｋｇの間）の間の量で投与され得る。
【０１４０】
本発明のさらなる態様においては、心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患、または心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患の関連障害の治療のための薬剤の製造における、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルの使用が提供される。本発明の別の態様では、心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患、または心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患の関連障害の治療のための薬剤の製造における、アルテミシニン及びその誘導体、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルの使用が提供される。一実施形態では、アルテミシニン誘導体は、アルテスネート、アルテメテル、ジヒドロアルテミシニン、アルテリン酸、及びアルテモチルからなる群から選択される。
【０１４１】
本発明のさらなる態様では、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、及び、同時、個別または連続投与のための１以上のさらなる薬学的に活性な薬剤を含む部品、のキットが提供される。部品のキットは、任意に使用説明書を含むことができる。式Ｉの化合物は、単位剤形で存在してもよい。さらに１以上の医薬的に活性な薬剤は、上述の心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患、または心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患の関連障害に対して有用であるとして記載されたこのような成分のいずれを含んでもよい。
【０１４２】
上記のように、本発明の別の態様では、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、及び、１以上の増量剤を含む、再灌流液が提供される。本発明のこの態様は、再灌流液の製造における、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルの使用に及ぶ。本発明の再灌流液は、上述した本発明の蘇生液と本質的に同一である。従って、本発明の蘇生液の好ましい及び任意の成分の全てが、本発明の灌流液に等しく適用される（例えば、上記の好適な濃度範囲のみならず、特定の増量剤、特定のイオン、及び他の成分の存在）。
【０１４３】
本発明のさらなる態様において、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、及び重炭酸ナトリウムを含む水性組成物が提供される。重炭酸ナトリウムは、５重量％と１５重量％の間、例えば、５重量％と１０重量％の間、または７重量％と１０重量％の間の濃度で存在してもよい。ある実施形態では、重炭酸ナトリウムは、１重量％、２重量％、３重量％、４重量％、５重量％、６重量％、７重量％、または８重量％と等しいか超える量で存在する。
【０１４４】
本発明の水性組成物中のナトリウム及び重炭酸イオンは、約５００ｍＭ／Ｌ〜約１５００ｍＭ／Ｌ、例えば約７５０ｍＭ／Ｌ〜約１２５０ｍＭ／Ｌ、若しくは約８００ｍＭ／Ｌ〜約１２００ｍＭ／Ｌ、または約９００ｍＭ／Ｌ〜約１１００ｍＭ／Ｌの濃度でそれぞれ存在してもよい。本発明のある実施形態において、本発明の組成物中のナトリウム及び重炭酸イオンは、それぞれ、約５００、６００、７００、８００、９００、９５０または１０００ｍＭ／Ｌと等しいか未満の濃度で存在してもよい。
【０１４５】
そのような本発明の水性組成物は、心筋梗塞に罹患している患者、または最近心筋梗塞を罹患した患者における代謝性アシドーシスを是正することに有用である。本発明のこの態様は、したがって、アシドーシスの治療における使用のための、式Ｉの化合物、若しくは薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、または本発明の水性組成物に及ぶ。本発明のこの態様はまた、アシドーシスの治療のための薬剤の製造、及び対応する治療の方法における、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、及び重炭酸ナトリウムの使用に及ぶ。本発明の水性組成物はまた、冠状動脈性心疾患または心筋梗塞、及びその関連症状の治療において有用であり得る。
【０１４６】
本発明の他の態様では、式Ｉの化合物、若しくは薬学的に許容されるその塩若しくはエステル、本発明の医薬組成物、本発明の再灌流液、または本発明の水性組成物を、これらを必要とする患者へ投与すること含む、心筋梗塞または冠状動脈性心疾患（または、その関連疾患）の治療方法が提供される。
【０１４７】
化合物、医薬組成物、再灌流液または水性組成物は、心筋梗塞に罹患した後、または心筋梗塞に罹患している患者に投与されてもよい。あるいは、血流の制限による虚血のような術後合併症を回避するために、心臓移植手術または冠状動脈バイパス手術の前に、それは投与されてもよい。投与経路は、例えば経口（口腔若しくは舌下を含む。）、局所、非経口、静脈内、筋肉内、髄腔内若しくは腹腔内投与、または吸入による投与のように、当業者に公知の任意の適切な経路であり得る。
【０１４８】
本発明のさらに別の態様においては、本発明の再灌流液に冠状動脈組織、静脈、動脈、心臓、肺、心臓弁またはその組み合わせを浸すことを含む、冠状動脈組織、静脈、動脈、心臓、肺、心臓弁またはその組み合わせを灌流する方法が提供される。心臓または組織は、死亡したドナー患者（生きている患者または死体のいずれか）から得られる。ある実施形態では、ドナー患者は、（例えば、ブタ心臓弁の異種移植においては）ブタのような動物であってもよく、したがって、本発明のこの実施形態は、本発明の再灌流液中に心臓弁を浸すことを含む、心臓弁を灌流する方法に及ぶ。ある実施形態では、器官または器官の一部が、組織工学を用いてインビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で作成されていてもよい。
【０１４９】
本発明の別の態様においては、本発明の灌流方法に従って灌流された心臓を、それを必要とする患者（レシピエント患者）へ移植することを含む、心臓移植（または心臓及び肺移植）の方法が提供される。
【０１５０】
本発明の別の態様においては、本発明の灌流方法に従って灌流された静脈または動脈を、それを必要とする患者（レシピエント患者）へ移植することを含む、冠状動脈バイパスの方法が提供される。
【０１５１】
本発明の別のさらなる態様においては、本発明の灌流方法に従って灌流された心臓弁を、それを必要とする患者（レシピエント患者）へ移植することを含む、心臓弁移植の方法が提供される。
【０１５２】
本発明の別の態様においては、ステント移植の間または後に、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩若しくはエステルを、それを必要とする患者へ投与することを含む、冠状動脈ステントを移植する方法が提供される。冠状動脈ステントは、薬剤溶出ステントでもよい。
【０１５３】
ある実施形態では、ドナー患者とレシピエント患者は別の患者（異物移植（ａｌｌｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ））である。しかしながら、それらは、例えば患者の身体の一部からの動脈または静脈が冠状血管系に移植される冠状動脈バイパス手術の場合、同じ患者（自己移植（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）または自家移植（ａｕｔｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ））であってもよい。ドナー患者は、異なる種のであってもよい（例えば、心臓弁異種移植の場合）。
【０１５４】
移植または灌流されることもある器官若しくは器官の一部、または組織は、一般的に、動脈、静脈、心臓、肺、心臓弁、及びこれらの組み合わせを含む。
【０１５５】
本発明の一実施形態では、心筋梗塞の治療における使用のためのアルテスネートが提供される。アルテスネートは、梗塞の大きさ及び心筋へのダメージを低減するために、心筋梗塞に罹患している患者、または最近心筋梗塞を罹患した患者に、静脈内製剤として投与される。溶液は、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量範囲内で静脈内投与され得る。溶液は、コロイド若しくはクリスタロイド増量剤を含む水性再灌流液として、または式Ｉの化合物及び重炭酸ナトリウムを含む水性組成物として投与されてもよい。
【０１５６】
本発明の第一の態様の特徴は、本発明の第二及び後続の態様に、変更すべきところは変更して適用する。
【０１５７】
本発明は、ここで、次の実施例を参照して説明されるであろうが、ただ参照目的のために示されるのであり、本発明の範囲を制限すること意図しない。実施例では、図の番号へ参照され、この場合：
図１は、（ｉ）外科的処置単独（疑似（Ｓｈａｍ）、ｎ＝４）、または、外科的処置及び出血性ショックに次いで蘇生時に（ｉｉ）ビヒクル（１０％ＤＭＳＯ、１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ＨＳ対照、ｎ＝１０）若しくは（ｉｉｉ）アルテスネート（１，３または１０ｍｇ／ｋｇ静脈内投与、それぞれ、ＨＳ＋アルテスネート１ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝６、ＨＳ＋アルテスネート３ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝７、及び、ＨＳ＋アルテスネート１０ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝８）による処置を施したラットにおけるＭＡＰの変化を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表現される。＊Ｐ＜０．０５疑似  対ＨＳ対照。
【０１５８】
図２は、（ｉ）外科的処置単独（疑似、ｎ＝４）、または、外科的処置及び出血性ショックに次いで蘇生時に（ｉｉ）ビヒクル（１０％ＤＭＳＯ、１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ＨＳ対照、ｎ＝１０）若しくは（ｉｉｉ）アルテスネート（１，３または１０ｍｇ／ｋｇ静脈内投与、それぞれ、ＨＳ＋アルテスネート１ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝６、ＨＳ＋アルテスネート３ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝７、及び、ＨＳ＋アルテスネート１０ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝８）による処置を施したラットにおける、（ａ）尿素及び（ｂ）クレアチニンの血清レベル；並びに（ｃ）クレアチニンクリアランスの変化を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表現される。＊Ｐ＜０．０５対ＨＳ対照。
【０１５９】
図３は、（ｉ）外科的処置単独（疑似、ｎ＝４）、または、外科的処置及び出血性ショックに次いで蘇生時に（ｉｉ）ビヒクル（１０％ＤＭＳＯ、１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ＨＳ対照、ｎ＝１０）若しくは（ｉｉｉ）アルテスネート（１，３または１０ｍｇ／ｋｇ静脈内投与、それぞれ、ＨＳ＋アルテスネート１ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝６、ＨＳ＋アルテスネート３ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝７、及び、ＨＳ＋アルテスネート１０ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝８）による処置を施したラットにおける、（ａ）ＡＳＴ、（ｂ）ＡＬＴ、及び（ｃ）ＣＫの血清レベルの変化を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表現される。＊Ｐ＜０．０５対ＨＳ対照。
【０１６０】
図４は、（ｉ）外科的処置単独及びビヒクルによる治療（疑似＋１０％ＤＭＳＯ、ｎ＝４）、熱傷損傷及び（ｉｉ）ビヒクル（熱傷＋１０％ＤＭＳＯ、ｎ＝１０）または（ｉｉｉ）アルテスネート（熱傷＋アルテスネート、ｎ＝９）による処置を施したラットにおける、（ａ）尿素及び（ｂ）クレアチニンの血清レベルの変化を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表現され、熱傷＋１０％ＤＭＳＯと比べられるときは＊Ｐ＜０．０５。
【０１６１】
図５は、（ｉ）外科的処置単独及びビヒクルによる治療（疑似＋１０％ＤＭＳＯ、ｎ＝４）、熱傷損傷及び（ｉｉ）ビヒクル（熱傷＋１０％ＤＭＳＯ、ｎ＝１０）または（ｉｉｉ）アルテスネート（熱傷＋アルテスネート、ｎ＝９）による処置を施したラットにおける、（ａ）ＡＳＴ及び（ｂ）ＡＬＴの血清レベルの変化を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表現され、熱傷＋１０％ＤＭＳＯと比べられるときは＊Ｐ＜０．０５。
【０１６２】
図６は、外科的処置単独及びビヒクルによる治療を施した（疑似、ｎ＝４）；または、脳虚血及び再灌流、並びに再灌流時及び再灌流の開始から６時間後にビヒクル（Ｉ／Ｒ、ｎ＝７）若しくは３ｍｇ／ｋｇアルテスネート（Ｉ／Ｒ＋アルテスネート、ｎ＝７）による処置を施したラットにおける梗塞サイズの変化を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表現される。＊Ｐ＜０．０５対Ｉ／Ｒ。
【０１６３】
図７は、（ｉ）模擬（ｓｈａｍ）手術（疑似、ｎ＝５）、または敗血症ショックに次いで（ｉｉ）ビヒクル（１０％ＤＭＳＯ、１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ＬＰＳ、ｎ＝１０）若しくは（ｉｉｉ）アルテスネート（１０ｍｇ／ｋｇ、ＬＰＳ＋アルテスネート１０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与  ＬＰＳ後１時間、ｎ＝６、ＬＰＳ＋アルテスネート１０ｍｇ／ｋｇ静脈内投与  ＬＰＳ後１時間、ｎ＝３、ＬＰＳ＋アルテスネート１０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与  ＬＰＳ前３０分、ｎ＝２）で処置を施したマウスにおける（ａ）尿素及び（ｂ）クレアチニン、並びに（ｃ）ＡＬＴの血清レベルの変化を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表現される。＊Ｐ＜０．０５対ＬＰＳ。
【０１６４】
図８は、外科的処置単独及びビヒクルによる治療（疑似、１０％ＤＭＳＯ  １ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝６）、または、局所心筋虚血（２５分）及び再灌流（２時間）並びにビヒクル（対照、１０％ＤＭＳＯ  １ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝８）による治療、または、２サイクルのＩＰＣ（５分）に続いてＬＡＤ−閉塞（２５分）及び再灌流（２時間）並びにビヒクル（ＩＰＣ、１０％ＤＭＳＯ  １ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝８）による治療、または、局所心筋虚血（２５分）及び再灌流（２時間）並びにアルテスネート（アルテスネート、１０％ＤＭＳＯ、１ｍｌ／ｋｇで１，３または１０ｍｇ／ｍｌ静脈内投与、ｎ＝８）による処置を施したラットの、（Ａ）リスクのある領域並びに（Ｂ）梗塞サイズを示す。＊Ｐ＜０．０５対  対照。
【０１６５】
図９は、外科的処置単独及びビヒクルによる治療（疑似、５％重炭酸ナトリウム１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝６）、または、局所心筋虚血（２５分）及び再灌流（２時間）並びにビヒクル（対照、５％重炭酸ナトリウム１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝１４）による治療、または、局所心筋虚血（２５分）及び再灌流（２時間）並びにアルテスネート（０．３，１または１０ｍｇ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝２−１０）による処置を施したラットの、（Ａ）リスクのある領域並びに（Ｂ）梗塞サイズを示す。＊Ｐ＜０．０５対  対照。
【０１６６】
図１０は、外科的処置単独及びビヒクルによる治療（疑似、１０％ＤＭＳＯ  １ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝６）、または、局所心筋虚血（２５分）及び再灌流（２時間）並びにビヒクル（対照、１０％ＤＭＳＯ  １ｍｌ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝１４）による治療、または、局所心筋虚血（２５分）及び再灌流（２時間）並びにアルテスネート（１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝７）による治療、または、局所心筋虚血（２５分）及び再灌流（２時間）並びにジヒドロアルテミシニン（ＤＨＡ  ０．１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与、ｎ＝６）による処置を施したラットの、（Ａ）リスクのある領域並びに（Ｂ）梗塞サイズを示す。＊Ｐ＜０．０５対  対照。
【０１６７】
実施例
本件研究における動物プロトコルは、女王書簡局によって公表された内務省動物（科学的処置）法１９８６施行ガイダンス、及び国立研究協議会の実験動物の管理と使用に関する指針、の両方の派生物に従った、地域動物使用管理委員会（ｌｏｃａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｕｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって承認された。統計解析は、一般に、グラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）５．０３（グラフパッドソフトウェア，サンディエゴ，カリフォルニア，米国）によって行われ、０．０５未満のＰ値は有意であるとみなされた。文書や図で記述されているすべての値は、ｎ点観測についての平均値±標準誤差（ＳＥＭ）として表される。
【０１６８】
１．  外傷出血によって誘導された臓器損傷及び機能障害に対するアルテスネートの効果のラットにおける評価
１．１  外科的処置
ウィスター（Ｗｉｓｔａｒ）系雄性ラット３５匹（２７１±５ｇ）は、ナトリウムチオペントン（１２０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与、リンクファーマシューティカルズ社（ＬＩＮＫ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｌｔｄ），ウエストサセックス，英国）によって麻酔をかけられ、麻酔は、必要な量、必要な時にナトリウムチオペントンの補充注射（〜１０ｍｇ／ｋｇ静脈投与）によって維持された。動物は温度調節された加熱マット（ハーバードアパラタス社（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ  Ｌｔｄ），ケント，英国）の上に置かれ、恒温毛布に取り付けた直腸プローブを用いて体温は３７±１℃に維持された。気管切開は、気道の開存性を維持し自発呼吸を促すために、小さな長さのポリエチレンチューブ［内径（ＩＤ）１．６７ｍｍ、ポーテックス（Ｐｏｒｔｅｘ），ケント，英国］を気管の内腔へ挿入することで行った。左大腿動脈はカニューレ（ＩＤ  ０．４０ｍｍ、ポーテックス）が挿入され、平均動脈圧（ＭＡＰ）及び心拍（ＨＲ）の誘導をパルス波形から測定するために圧力変換器（ＳＰ８４４血圧センサー、メムスキャップ（Ｍｅｍｓｃａｐ），米国）へ接続され、これら両方が、ウィンドウズＸＰを実行するインテルに基づいた（Ｉｎｔｅｌ−ｂａｓｅｄ）コンピュータへインストールされたデータ取得システム（パワーラボ（ＰｏｗｅｒＬａｂ）８ＳＰ、チャートｖ５．５．３、ＡＤインスツルメンツ，ヘイスティングス，英国）上に実験の期間中表示された。右頸動脈は、ヘパリン化シリンジを用いた血液の抜き取りを容易にするために、カニューレ（ＩＤ  ０．５８ｍｍ、ポーテックス）が挿入された。右頚静脈は、乳酸リンゲル（ＲＬ）、血流、試験化合物及び／またはビヒクルの投与のために、カニューレ（ＩＤ  ０．４０ｍｍ、ポーテックス）が挿入された。膀胱はまた、尿を収集するために、カニューレ（ＩＤ  ０．７６ｍｍ、ポーテックス）が挿入された。外科的処置が完了すると、心血管パラメータが安定するために、１５分間が割り当てられた。
【０１６９】
１．２  出血及び蘇生
安定化期間の後、１０分以内に３５±５ｍｍＨｇまでＭＡＰの低下を達成するために、右頸動脈に挿入したカニューレを介して血液が抜き取られた。これ以降、補償期（交感神経応答による、採血後のＭＡＰ上昇）の間はさらに血液を抜き取るか、補償不全期（動物がＭＡＰを増大し、高く維持することができない）の間は乳酸リンゲルの静脈投与によって、９０分の間、３５±５ｍｍＨｇにＭＡＰは維持された。出血時に引き抜いた血液の平均量は、９．８±０．２ｍｌ（ｎ＝３１、全ての出血した群に渡って）であった。出血の開始から９０分後の時点で、２０ｍｌ／ｋｇ乳酸リンゲル静脈内投与１０分間、次に１００ｕ／ｍｌヘパリン化生理食塩水と流血半分と混合した静脈内投与５０分間により、蘇生が行われた。１時間の蘇生の最後に、乳酸リンゲル（１．５ｍｌ／ｋｇ／時）の静脈内注入が、補液として開始され、さらに３時間維持された。
【０１７０】
１．３  臓器損傷／機能障害の定量
蘇生の開始から４時間後、１．２ｍｌの血液が右頸動脈から採血され、血清ゲルチューブ（ザルスタット，ヌムブレヒト，ドイツ）へ注がれ、その後、実験を終了するために心臓が取り出された。サンプルは血清を分離するために遠心分離（９９００ｒｐｍ  ３分間）され、そこから尿素、クレアチニン、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びクレアチニンキナーゼ（ＣＫ）が、２４時間以内に測定された（アイデックスラボラトリーズ社（Ｉｄｅｘｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｌｔｄ），ウェストヨークシャー，英国）。実験の最後の３時間中に収集された尿は、糸球体機能障害の指標としてクレアチニンクリアランスを推定するためにクレアチニンレベルについて分析され、以下のように計算された：
【０１７１】
【化７】
2014517001.tif 000008
【０１７２】
１．４  実験計画
ラットは無作為に以下のグループに割り当てられた：
（ｉ）    疑似（ｎ＝４）
（ｉｉ）  ＨＳ対照（ｎ＝１０）
（ｉｉｉ）ＨＳ＋アルテスネート１ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６）
（ｉｖ）  ＨＳ＋アルテスネート３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）
（ｖ）    ＨＳ＋アルテスネート１０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）
模擬手術ラットは同一の外科的処置を受けたが、出血や蘇生がなかった。動物は、蘇生時に１０％ＤＭＳＯ（１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与）またはアルテスネート（１，３，または１０ｍｇ／ｋｇ静脈内投与）のいずれかを与えられた。
【０１７３】
１．５  材料
別途に明記しない限り、全ての化合物は、シグマ−アルドリッチカンパニー社（プール，ドーセット，英国）から入手した。すべてのストック溶液は、非発熱性（ｎｏｎ−ｐｙｒｏｇｅｎｉｃ）生理食塩水［０．９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ：バクスター  ヘルスケア社，セットフォード，ノーフォーク，英国］中で調製された。乳酸リンゲルも、バクスター  ヘルスケア社より入手した。ナトリウムチオペントン（チオベット（Ｔｈｉｏｖｅｔ））（登録商標）は、リンクファーマシューティカルズ社，ホーシャム，英国、より入手した。マルチパリン（Ｍｕｌｔｉｐａｒｉｎ）（ヘパリン注射ＢＰ、５０００ｉｕ／ｍｌ）は、国立獣医サービス（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ），ストークオントレント，英国から入手し、０．１ｍｌマルチパリンは１００ｕ／ｍｌの濃度を与えるように０．９％（ｗ／ｖ）塩化ナトリウム４．９ｍｌへ添加され、５ｍｌマルチパリンは２５ｕ／ｍｌの濃度を与えるように０．９％（ｗ／ｖ）塩化ナトリウム１リットルへ添加された。アルテスネートはまた、シグマ−アルドリッチカンパニー社（プール，ドーセット，英国）より入手した。
【０１７４】
１．６  統計解析
各データ点は、最大１０の別々の動物から得られた生化学的測定を表す。繰り返し測定の無いデータは、一元配置ＡＮＯＶＡによって、続けてダネットポストホックテストによって評価された。繰り返し測定のあるデータは、二元配置ＡＮＯＶＡによって、続けてボンフェローニポストホックテストによって評価された。
【０１７５】
１．７  出血性ショックによって引き起こされた循環不全に対するアルテスネートの効果
模擬手術ラットと比べたとき、ビヒクルによって処置されたＨＳ−ラットは、蘇生期間内ＭＡＰについて有意な低下を示した（Ｐ＜０．０５、図１）。蘇生時におけるアルテスネート（１，３または１０ｍｇ／ｋｇ）の投与は、蘇生期間内に出血によって引き起こされるＭＡＰについての低下を改善することができなかった。
【０１７６】
１．８  出血性ショックによって誘導された臓器損傷及び機能障害に対するアルテスネートの効果
模擬手術ラットと比較すると、ビヒクルによって処置されたＨＳ−ラットは、血清尿素（Ｐ＜０．００１、図２Ａ）及びクレアチニン（Ｐ＜０．００１、図２Ｂ）について有意な増加を発症し；模擬手術ラットと比較すると、クレアチニンクリアランスが有意に減少し（Ｐ＜０．００５、図２Ｃ）、腎及び糸球体機能不全の発症を示している。ＨＳ−ラットと比較したとき、３ｍｇ／ｋｇアルテスネートによるＨＳ−ラットの処置は、血清尿素（Ｐ＜０．０５、図２Ａ）及びクレアチニン（Ｐ＜０．００５、図２Ｂ）の上昇を有意に緩和し；１０ｍｇ／ｋｇアルテスネートによる処置は、血清クレアチニンの上昇（Ｐ  ＜０．００５、図２Ｂ）及びクレアチンクリアランスの低下（Ｐ＜０．００５、図２Ｃ）を有意に緩和した。１ｍｇ／ｋｇアルテスネートによるＨＳ−ラットの処置は、血清尿素（Ｐ＞０．０５、図２Ａ）若しくはクレアチニン（Ｐ＞０．０５、図２Ｂ）の上昇、またはクレアチニンクリアランスの低下（Ｐ＞０．０５、図２Ｃ）に有意な影響を与えなかった。
【０１７７】
模擬手術ラットと比較すると、ビヒクルによって処置されたＨＳ−ラットは、血清ＡＳＴ（Ｐ＜０．００５、図３Ａ）、ＡＬＴ（Ｐ＜０．００５、図３Ｂ）、及びクレアチニンキナーゼ（Ｐ＜０．０５、図３Ｃ）について有意な上昇を発症し、肝障害及び骨格筋損傷の発症を示している。アルテスネート（３及び１０ｍｇ／ｋｇの両方）によるＨＳ−ラットの処理は、血清ＡＳＴ（Ｐ＜０．０５、図３Ａ）、ＡＬＴ（Ｐ＜０．００５、図３Ｂ）、及びクレアチニンキナーゼ（Ｐ＜０．０５、図３Ｃ）の上昇を、有意に緩和した。１ｍｇ／ｋｇアルテスネートによる処置は、血清ＡＳＴ（Ｐ＞０．０５、図３Ａ）、ＡＬＴ（Ｐ＞０．０５、図３Ｂ）またはクレアチニンキナーゼ（Ｐ＞０．０５、図３Ｃ）の上昇に対して有意な影響を有さなかった。
【０１７８】
２．熱傷損傷によって誘導された臓器損傷及び機能障害に対するアルテスネートの効果のラットにおける評価
２．１  外科的処置
体重３００〜３５０ｇのウィスター系雄性ラット２２匹（ハーラン，ウディネ，イタリア）は、ペントバルビタールナトリウム（ユータシル（Ｅｕｔａｓｉｌ）（登録商標）、６０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与；サノフィ  ヴェテリナリア，アルゲス，ポルトガル）で麻酔され、必要に応じて補充された。麻酔されたラットは、（背及び腹の）毛が剃られ、温度調節された加熱マット（ハーバードアパラタス社，ケント，英国）の上に置かれ、恒温毛布に取り付けた直腸プローブを用いて体温が３７±１℃に維持された。気管切開は、気道の開存性を維持し自発呼吸を促すために行われた。熱傷の３０分前に、ラットは、３．２節で説明したように、ビヒクルまたは薬物で処置された。熱傷損傷を誘発するために、６０％の第３度の熱傷は、合成発泡体板（ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｆｏａｍ  ｔｅｍｐｌａｔｅ）を使用して背部の剃毛した皮膚を９９℃の水に１０秒間に浸漬することによって誘導された。ラットは、その後乾かされ、加熱マットの上に置かれた。ラットは、麻酔薬の過剰量接種によって熱傷損傷から６時間後に屠殺され、臓器損傷や機能障害の解析のために血清サンプルが回収された。
【０１７９】
２．２  実験計画
ラットは無作為に以下のグループに割り当てられた：
（ｉ）    疑似（ｎ＝４）
（ｉｉ）  熱傷＋１０％ＤＭＳＯ（ｎ＝１０）
（ｉｉｉ）熱傷＋アルテスネート（ｎ＝９）
模擬手術ラットは同一の外科的処置を受けたが、熱傷がなかった（室温の水へ浸漬された）。動物は、熱傷損傷の３０分前及び熱傷損傷の３０分後に１０％ＤＭＳＯ（１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与）またはアルテスネート（３ｍｇ／ｋｇ静脈内投与）のいずれかを与えられた。
【０１８０】
２．３  材料
別途に明記しない限り、全ての化合物は、シグマ−アルドリッチ  キミカＳ．Ａ．（シントラ，ポルトガル）から入手した。ペントバルビタールナトリウム（ユータシル（登録商標））は、サノフィ  ヴェテリナリア（ミラフローレス，アルゲス，ポルトガル）より入手した。すべてのストック溶液は、非発熱性（ｎｏｎ−ｐｙｒｏｇｅｎｉｃ）生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ；Ｂ．ブラウンメディカル社，ケルス，ポルトガル）中で調製された。
【０１８１】
２．４  統計解析
各データ点は、最大１０の別々の動物から得られた測定を表す。データは、マン―ホイットニーＵテストを使用して評価された。
【０１８２】
２．５  熱傷損傷によって誘導された腎機能障害に対するアルテスネートの効果
模擬手術ラットと比較すると、熱傷を受けビヒクルによって処置されたラットは、血清尿素（Ｐ＜０．０５、図４Ａ）及びクレアチニン（Ｐ＜０．０５、図４Ｂ）の有意な上昇を発症し、腎機能障害の発症を示している。３ｍｇ／ｋｇアルテスネートによる熱傷ラットの処置は、熱傷ラットと比較したとき、血清尿素ｐ＜０．０５、図４Ａ）及びクレアチニン（Ｐ＜０．０５、図４Ｂ）の上昇を有意に緩和した。
【０１８３】
２．６  熱傷損傷によって誘導された肝障害に対するアルテスネートの効果
模擬手術ラットと比較すると、熱傷を受けビヒクルによって処置されたラットは、血清アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ，ＡＳＴ（Ｐ＜０．００５、図５Ａ）、及びアラニンアミノトランスフェラーゼ，ＡＬＴ（Ｐ＜０．００５、図５Ｂ）について有意な上昇を発症し、肝障害の発症を示している。３ｍｇ／ｋｇアルテスネートによる熱傷ラットの処理は、熱傷によって誘導された血清ＡＳＴ（Ｐ＞０．０５、図５Ａ）及びＡＬＴ（Ｐ＞０．０５、図５Ｂ）の上昇に対して有意な影響を有さなかった。
【０１８４】
２．７  まとめ
熱傷を受けたラットのビヒクルによる処置は、有意な腎機能障害（血清尿素及びクレアチニンの上昇によって示される）及び有意な肝障害（血清ＡＳＴ及びＡＬＴの上昇によって示される）という結果となった。
【０１８５】
熱傷を受けたラットの３ｍｇ／ｋｇアルテスネートによる処置は、熱傷損傷によって引き起こされた腎機能障害の有意な低減（血清尿素及びクレアチニンを用いて測定された）という結果となった。しかしながら、熱傷を受けたラットの３ｍｇ／ｋｇアルテスネートによる処置は、熱傷によって誘導された肝障害（血清ＡＳＴ及びＡＬＴを用いて測定された）に対して有意な影響を有さなかった。
【０１８６】
３．  脳虚血及び再灌流のラットモデルにおける、梗塞サイズに対するアルテスネートの効果の評価
３．１  外科的処置
全ての手順は、米国国立衛生研究所によって採択され公布された実験動物の管理と使用に関する指針だけでなく、実験及び他の科学的目的に使用される動物の保護（ＤＭ１１６／９２）についてのイタリアの規制に従って行われた。実験プロトコルは、トリノ大学倫理委員会によって承認された。
【０１８７】
体重２１０〜２３０ｇのウィスター系雄性ラット１８匹（ハーラン−イタリア，ウディネ，イタリア）は、ゾレチル（Ｚｏｌｅｔｉｌ）１００（３０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与、チレタミンとゾラゼパムの混合物、ラボラトワレ  ビルバック（Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅｓ  Ｖｉｒｂａｃ），フランス）で麻酔され、必要に応じて補充された。動物は、温度調節された加熱マット（ハーバードアパラタス社，ケント，英国）の上に置かれ、恒温毛布に取り付けた直腸プローブを用いて体温が３７±１℃に維持された。両方の総頸動脈は正中切開を介して曝露され、解剖は、胸鎖乳突筋と胸骨舌骨筋の間で、気管に平行に行われた。各頸動脈は、外膜鞘及び迷走神経から解放され、注意深く分離されて維持された。虚血は、非外傷性動脈クランプ（マイクロブルドッグクランプ，ハーバードアパラタス社，ケント，英国）を用いて３０分間両側総頸動脈をクランプすることによって達成された。虚血の間、動物は、体温、呼吸パターン、正向反射の消失、無反応、角膜反射、並びに瞳孔固定及び散大について観察された。血流の再循環は、クリップを開放することにより確立され、頚動脈における血流の回復は、注意深い観察により確認された。再灌流は、２４時間割り当てられた。手術後、術後の回復が良好であったことを確かなものにするために、動物は３７℃培養庫中で少なくとも３時間保持された。その後、それらは、餌と水を自由摂取する温度と光が制御された条件下で、グループ収容された。再灌流の最後に、麻酔されたラットは、大動脈放血後に断頭により殺され、前脳が０℃で素早く解剖された。両半球からの海馬全体が取り出され、生化学的アッセイ用の適切な氷冷ホモジナイズ培地に移された。
【０１８８】
３．２  梗塞体積の測定
再灌流の終わりに、ラットは、ゾレチル１００（チレタミンとゾラゼパムの混合物）の過剰量接種によって殺され、断頭された。ラットの脳は、直ちに取り出され、氷冷生理食塩水に５分間入れられた。それぞれの脳は、次いで脳マトリックスに入れられ、冠状切片は、２ｍｍ切片に切断された。脳スライスは直ちに、２％  ２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロリド一水和物（ＴＴＣ）溶液（生理食塩水中）に３７℃で３０分間、続いて４％パラホルムアルデヒド溶液に浸漬された。各切片の梗塞領域及び半球領域は、トレースされ、画像解析システム（インクワイアリィー；ローツ（Ｌｏａｔｓ），ウェストミンスター，メリーランド州，米国）によって定量化され、脳全体の梗塞領域百分率として表現された。
【０１８９】
３．３  実験計画
ラットは無作為に以下のグループに割り当てられた：
（ｉｖ）  疑似（ｎ＝４）
（ｖ）    Ｉ／Ｒ（ｎ＝７）
（ｖｉ）  Ｉ／Ｒ＋アルテスネート３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）
模擬手術ラットは同一の外科的処置を受けたが、頸動脈閉塞が無かった。動物は、再灌流時及び再灌流の開始から６時間後に再び、３０％ヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリン（ＨＰ−β−ＣＤ）（１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与）またはアルテスネート（３ｍｇ／ｋｇ静脈内投与）のいずれかを与えられた。
【０１９０】
３．４  材料
別途に明記しない限り、全ての化合物は、シグマ−アルドリッチカンパニー社（プール，ドーセット，英国）から入手した。すべてのストック溶液は、非発熱性生理食塩水［０．９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ：バクスター  ヘルスケア社，セットフォード，ノーフォーク，英国］中で調製された。麻酔薬ゾレチル１００（チレタミンとゾラゼパムの混合物）は、ラボラトワレ  ビルバック，カロス  セデックス（Ｃａｒｒｏｓ  Ｃｅｄｅｘ），フランスより入手した。
【０１９１】
３．５  統計解析
各データ点は、最大７の別々の動物から得られた測定を表す。データは、一元配置ＡＮＯＶＡによって、続けてダネットポストホックテストによって評価された。
【０１９２】
３．６  脳梗塞に対するアルテスネートの効果
模擬手術ラットと比較すると、脳虚血及び再灌流を施したラットは、２７．１±３．９％の梗塞体積をもたらし；脳虚血及び再灌流を施したラットのアルテスネート（３ｍｇ／ｋｇ）による処置は、１９．３±４．３％まで梗塞体積の有意な減少を誘導した（Ｐ＜０．０５、図６）。
【０１９３】
３．７  まとめ
脳虚血及び再灌流を施したラットのビヒクルによる処置は、模擬手術ラットと比較すると、梗塞の発症を引き起こした。脳虚血及び再灌流を施したラットのアルテスネート（３ｍｇ／ｋｇ）による処置は、ビヒクルによって処置したラットと比較すると、梗塞サイズを有意に低下させた。
【０１９４】
実施例１〜３の結果は、アルテスネート及びその誘導体が、外傷出血、及び外傷出血誘発性臓器損傷（急性肺傷害及びＡＲＤＳを含む）若しくは多臓器不全のような関連症状の治療、または、外傷出血、外傷出血誘発性臓器損傷、外傷出血誘発性多臓器不全、脳卒中若しくは熱傷損傷の治療に有用であり得ることを示している。
【０１９５】
４．  敗血症ショックのモデルマウスにおける、臓器損傷及び機能障害に対するアルテスネートの効果の評価
４．１  敗血症の誘発
体重２０−３０ｇのＣ５７ＢＬ／６系雄性マウス２６匹（ハーランラボラトリーズ，ワイトン，英国）が、この実験に使用された。時間０の時点で（ｔ＝０時間）、マウスはＬＰＳ（５ｍｌ／ｋｇ  ０．９％ＮａＣｌで９ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（５ｍｌ／ｋｇ  ０．９％ＮａＣｌ）のいずれかの腹腔内投与（ｉ．ｐ．）を与えられた。マウスはその後、ケタミン（１００ｍｇ／ｍｌ）／キシラジン（２０ｍｇ／ｍｌ）が２：１の比率の溶液を用いた麻酔の誘導によって、ＬＰＳの注射から１６〜１８時間後に屠殺され、心臓が取り出された。
【０１９６】
４．２  臓器損傷／機能障害の定量化
実験の最後に、血液０．７ｍｌが右頸動脈から採血され、血清ゲルチューブ（ザルスタット，ヌムブレヒト，ドイツ）へ注がれた。サンプルは血清を分離するために遠心分離（９９００ｒｐｍ  ３分間）され、そこから尿素、クレアチニン、及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）が、２４時間以内に測定された（アイデックスラボラトリーズ社，ウェストヨークシャー，英国）。
【０１９７】
４．３  実験計画
マウスは無作為に以下のグループに割り当てられた：
（ｖｉｉ）    疑似（ｎ＝５）
（ｖｉｉｉ）  ＬＰＳ（ｎ＝１０）
（ｉｘ）      ＬＰＳ＋アルテスネート１０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与  ＬＰＳ後１時間（ｎ＝６）
（ｘ）        ＬＰＳ＋アルテスネート１０ｍｇ／ｋｇ静脈内投与  ＬＰＳ後１時間（ｎ＝３）
（ｘｉ）      ＬＰＳ＋アルテスネート１０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与  ＬＰＳ前３０分（ｎ＝２）
模擬手術マウスはＬＰＳの代わりに生理食塩水（５ｍｌ／ｋｇ腹腔内投与）を与えられた。マウスは、上述の時点において、１０％ＤＭＳＯ（５ｍｌ／ｋｇ腹腔内投与、若しくは静脈内投与）またはアルテスネート（１０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与、若しくは静脈内投与）のいずれかを与えられた。
【０１９８】
４．４  材料
別途に明記しない限り、全ての化合物は、シグマ−アルドリッチカンパニー社（プール，ドーセット，英国）から入手した。すべてのストック溶液は、非発熱性生理食塩水［０．９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ：バクスター  ヘルスケア社，セットフォード，ノーフォーク，英国］中で調製された。アルテスネートはまた、シグマ−アルドリッチカンパニー社（プール，ドーセット，英国）より入手した。
【０１９９】
４．５  統計解析
各データ点は、最大１１の別々の動物から得られた生化学的測定を表す。データは、一要因（ｏｎｅ−ｆａｃｔｏｒｉａｌ）ＡＮＯＶＡによって、続けてダネットポストテストによって評価された。
【０２００】
４．６  敗血症ショックによって誘導された臓器損傷及び機能障害に対する、アルテスネートの効果
模擬手術マウスと比較すると、ＬＰＳを注射してビヒクルで処置したマウスは、血清尿素（Ｐ＜０．０５、図７Ａ）、クレアチニン（Ｐ＜０．０５、図７Ｂ）及びＡＬＴ（Ｐ＜０．０５、図７Ｃ）の有意な上昇を発症し、腎機能障害及び肝障害を示している。３つの処置群全てにおける１０ｍｇ／ｋｇのアルテスネートを用いた敗血症ラットの処置は、ビヒクルで処置した敗血症ラットと比較したとき、血清尿素（Ｐ＞０．０５、図７Ａ）、クレアチニン（Ｐ＞０．０５、図７Ｂ）、及びＡＬＴ（Ｐ＜０．０５、図７Ｃ）の上昇に対して有意な影響を有さなかった。
【０２０１】
４．７  まとめ
敗血症ショックを施したマウスのビヒクルによる処置は、有意な腎機能障害（血清尿素及びクレアチニンの上昇によって示される）及び有意な肝障害（血清ＡＳＴ及びＡＬＴの上昇によって示される）という結果となった。敗血症ショックを施したラットの１０ｍｇ／ｋｇアルテスネートによる処置は（３つの処置群全てにおいて）、敗血症ショックによって引き起こされた腎機能障害（血清尿素及びクレアチニンによって測定された）及び肝障害（血清ＡＳＴ及びＡＬＴを用いて測定された）に対して有意な影響を有さなかった。
【０２０２】
５．  心筋梗塞に対する、１０％ＤＭＳＯに溶解したアルテスネートの効果
５．１  外科的処置
ラットは、チオペントンナトリウム（イントラバル（Ｉｎｔｒａｖａｌ）（登録商標）１２０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与）で麻酔された。麻酔は、必要に応じてチオペントンナトリウムの補充注射によって維持された。気管はカニューレが挿入され、動物はハーバード人工呼吸器（吸気酸素濃度：３０％；７０ストローク／分、一回換気量：８−１０ｍｌ／ｋｇ）によって換気された。体温は、恒温毛布ユニット（ハーバードアパラタス社，エデンブリッジ，ケント，英国）に取り付けた直腸プローブを活用して３７±１℃に維持された。右頚動脈はポリエチレンカテーテルがカニューレ挿入され、平均動脈圧（ＭＡＰ）及び心拍（ＨＲ）を観察するために圧力変換器（センソ−ノル（Ｓｅｎｓｏ−Ｎｏｒ）８４４，センソ−ノル，ホルテン，ノルウェー）へ接続され、これらが、ＩＢＭ互換コンピュータにインストールされたデータ取得システム（マックラボ（ＭａｃＬａｂ）８ｅ，ＡＤＩインスツルメンツ，ヘイスティングス，英国）上に表示された。右頸静脈は、その後、薬剤及び生理食塩水の投与のためにカニューレが挿入された。傍胸骨開胸がその後、肋間動脈を焼灼するための電気手術装置を使用して、３つの肋骨を切り開く前に実施された。胸が引込められ（ｒｅｔｒａｃｔｅｄ）、心臓から心膜が解剖された。左前下行枝（ＬＡＤ）冠状動脈が単離され、スネア閉鎖栓がＬＡＤの周辺に置かれた。開創器が次に取り除かれ、動物は安定化させるために１５分間が割り当てられた。
【０２０３】
５．２  虚血及び再灌流
閉鎖栓は時間０で締められた。ＬＡＤ閉塞の２５分後、閉鎖栓は、前もって虚血心筋（２時間）の再灌流を可能にするために開放された。血行動態パラメータは、連続的に観察された。ベースライン測定値は処置、及び、心筋ＩＲＩ前に採られた。圧力率指数（ＰＲＩ）、心筋酸素消費量の相対的指標は、ＭＡＰ（ｍｍＨｇ）及びＨＲ（拍／分−ｂｐｍ）の積として計算され、ｍｍＨｇｂｐｍ×１０−３で表された。
【０２０４】
５．３  心筋組織損傷の定量化
２時間の再灌流期間の終わりに、ＬＡＤは再閉塞され、１ｍｌのエバンスブルー色素（２％ｗ／ｖ）が、頸静脈を介して動物に注入された。エバンスブルー色素は、それが循環することができる組織を染色し、従って、非灌流血管（閉塞された）組織は着色されないままとなる。各動物は麻酔薬の過剰投与によって殺され、心臓が摘出され、過剰な染料が洗い流された。心臓は、その後３−４ｍｍの切片に切断され、右心室壁が除去され、リスクのある領域（ＡＡＲ−非灌流で、それゆえ、非染色心筋）が非虚血性（青）組織から分離された。虚血性及び非虚血性組織は秤量され、ＡＡＲは、左心室の百分率として表された。ＡＡＲからの組織は小片に切断され、ｐ−ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ、０．５ｍｇ／ｍｌ）にて３７℃で３０分間インキュベートされた。ＮＢＴは、生存（非梗塞）組織に存在するデヒドロゲナーゼと反応してダークブルーのホルマザン［１４］を生成する、還元剤である。梗塞組織（非生存）は、デヒドロゲナーゼ活性を有しておらず、それゆえ染色することができない。染色された組織は、梗塞組織から分離され、秤量され、梗塞サイズがＡＡＲの百分率として表された。
【０２０５】
５．４  ウェスタンブロット分析
簡単に述べると、心臓サンプルは、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．９、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．５ｍＭ  ＥＤＴＡ、１％ＮＰ−４０、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、１ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ）、０．５ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）、５μｇ／ｍｌアプロチニン、２．５μｇ／ｍｌロイペプチンを含むホモジネーション緩衝液を用いて、ポッターエルベージェム（Ｐｏｔｔｅｒ  Ｅｌｖｅｈｊｅｍ）ホモジナイザー（ウィートン，ミルビル，ニュージャージー州，米国）内で１０％（ｗ／ｖ）で均質化された。ホモジネートは、４℃で５分間、４，０００ｇで遠心分離された。上清が取り出され、細胞質画分を得るために４℃で４０分間、１５，０００ｇで遠心分離された。細胞質タンパク質含量は、製造業者の指示に従ってビシンコニン酸（ＢＣＡ）タンパク質アッセイキットを用いて測定された。サンプルは、使用するまで−８０℃で保存された。６０μｇの全タンパク質がロードされた。タンパク質は、８％ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により分離され、ポリビニリデンジフルオライド膜に転写され、次いでスーパーブロック（ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ）ブロッキング緩衝液と共にインキュベートされた。膜は、一次抗体（ウサギ抗−総ＧＳＫ−３β、ヤギ抗−ｐＧＳＫ−３β  Ｓｅｒ９、ウサギ抗−全Ａｋｔ、ラット抗−ｐＡｋｔ  Ｓｅｒ４７３、ウサギ抗−ｅＮＯＳ）と共にインキュベートされた。ブロットは次に、３０分間室温で、西洋ワサビペルオキシダーゼと接合した二次抗体と共にインキュベートされ、増強化学発光検出システムによって現像された。免疫反応性バンドはオートラジオグラフィーによって可視化され、バンドの濃度は、ゲルプロ（登録商標）アナライザー４．５、２０００ソフトウェア（メディア  サイバーネティックス（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ），シルバースプリング，米国）を用いてデンシトメトリーによって評価された。ゲル−ローディング均質性を評価するために、膜は引き剥がされ、室温で、β−アクチンモノクローナル抗体と３０分間、続いて抗−マウス抗体と３０分間インキュベートされた。相対バンド強度が評価され、対応するβ−アクチン発現に対して正規化された。各群は、その後、模擬−対照動物と比較した場合の相対的なタンパク質発現を確立するため、対応する模擬−対照データに対して調節された。
【０２０６】
５．５  統計解析
血行動態パラメータは、二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）、続けてボンフェローニポストテストによって解析された。繰り返し測定の無いデータは、一元配置ＡＮＯＶＡによって、続けて多重比較のためにダネットポストホックテストによって解析された。
【０２０７】
５．６  血行動態パラメータに対する、局所ＭＩ及びアルテスネートの効果
全ての動物の群における平均動脈圧のベースライン値は、１０５．１±５．６から１２０．２±２．９ｍｍＨｇの範囲であり、群間で有意差はなかった（Ｐ＞０．０５、データは示されていない）。局所心筋虚血に続く再灌流は、実験終了時には、９０．９±５．７ｍｍＨｇまで平均動脈圧の進行的な低下を引き起こした。ＬＡＤの閉塞前のＩＰＣ（５分）の２サイクルによる動物の前処置は、心筋虚血及び再灌流によって生じる平均動脈圧の低下を緩和しなかった。再灌流時のアルテスネート（１０％ＤＭＳＯ中に、１０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇで溶解）による動物のボーラス処置は、心筋虚血及び再灌流によってもたらされる平均動脈圧の低下を緩和しなかった（Ｐ＞０．０５対  対照）。
【０２０８】
ラットの全群の心拍のベースライン値は、分あたり３９３．６±１０．５から４４２．７±５．３拍（ｂｐｍ）の範囲であり、群間で有意差はなかった（Ｐ＞０．０５、データは示されていない）。ＬＡＤの閉塞前のＩＰＣ（５分）の２サイクルによる動物の前処置は、局所心筋虚血及び再灌流を施したラットの心拍に有意な影響を有さなかった。再灌流時のアルテスネート（１０％ＤＭＳＯ中に、１０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇで溶解）による動物のボーラス処置は、局所心筋虚血及び再灌流を施したラットの心拍に有意な影響を有さなかった（Ｐ＞０．０５対  対照）。
【０２０９】
圧力率指数、心筋酸素消費量の相対的指標は、平均動脈圧及び心拍の積として計算された。動物の全ての群における圧力率指数のベースライン値は、４１．４±２．６〜５３．２±１．１拍ｍｍＨｇ分−１１０−３であり、群間で有意差はなかった（Ｐ＞０．０５、データは示されていない）。心筋虚血及び再灌流を施したラットでは、圧力率指数が４６．０±２．４から実験終了時には３８．２±３．０拍ｍｍＨｇ分−１１０−３に進行的に低下していた。ＬＡＤの閉塞前のＩＰＣ（５分）の２サイクルによる動物の前処置は、局所心筋虚血及び再灌流を施したラットの圧力率指数の低下に有意な影響を有さなかった。再灌流時のアルテスネート（１０％ＤＭＳＯ中に、１０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇで溶解）による動物のボーラス処置は、局所心筋虚血及び再灌流を施したラットの圧力率指数の低下に有意な影響を有さなかった（Ｐ＞０．０５対  対照）。
【０２１０】
５．７  リスクのある領域及び梗塞サイズに対する効果
梗塞のリスクがある領域は、研究されたすべての群で同様であり、左心室の４７．０±２．１から５４．７±２．０％の範囲であった（Ｐ＞０．０５、図８Ａ）。模擬手術動物は、ＡＡＲの６．２±２．０％の梗塞サイズを示した（図８Ｂ）。模擬手術動物と比較した場合、局所心筋虚血（２５分間）に続いて再灌流（２時間）を施した動物は、ＡＡＲの５９．８±３．２％の梗塞サイズとなった（図８Ｂ）。ＬＡＤの閉塞前のＩＰＣ（５分）の２サイクルによる動物の前処置は、梗塞サイズを５９．８±３．２から３０．３±３．２％（Ｐ＜０．０５、図８Ｂ）に有意に緩和した。
【０２１１】
局所心筋のＩ／Ｒを施した動物と比較した場合、再灌流時のアルテスネート（１０ｍｇ／ｋｇ）による動物のボーラス処置は、梗塞サイズを５９．８±３．２から４２．８±１．７％（２８％の梗塞サイズ低下、Ｐ＜０．０５、図８Ｂ）に有意に緩和した。局所心筋のＩ／Ｒを施した動物と比較した場合、再灌流時のアルテスネート（３ｍｇ／ｋｇ）による処置は、梗塞サイズを５９．８±３．２から４６．９±２．３％（１３％の梗塞サイズ低下、Ｐ＜０．０５、図８Ｂ）に有意に緩和した。加えて、局所心筋のＩ／Ｒを施した動物と比較した場合、再灌流時のアルテスネート（１ｍｇ／ｋｇ）による処置は、梗塞サイズを５９．８±３．２から４８．０±３．５％（１２％の梗塞サイズ低下、Ｐ＜０．０５、図８Ｂ）に有意に緩和した。
【０２１２】
６．  局所心筋虚血及び再灌流のラットモデルにおける、梗塞サイズに対するアルテスネートの効果の評価
６．１  外科的処置
この研究は、体重２４０〜３２０ｇの、標準飼料と水を自由摂取させたウィスター系雄性ラット（チャールズリバー，英国）２８匹に対して行われた。
【０２１３】
ラットは、チオペントンナトリウム（イントラバル（登録商標）１２０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与）で麻酔された。麻酔は、必要に応じてチオペントンナトリウムの補充注射によって維持された。気管はカニューレが挿入され、動物はハーバード人工呼吸器（吸気酸素濃度：３０％；７０ストローク／分、一回換気量：８−１０ｍｌ／ｋｇ）によって換気された。体温は、恒温毛布ユニット（ハーバードアパラタス社，エデンブリッジ，ケント，英国）に取り付けた直腸プローブを活用して３７±１℃に維持された。右頚動脈はポリエチレンカテーテルがカニューレ挿入され、平均動脈圧（ＭＡＰ）及び心拍（ＨＲ）を観察するために圧力変換器（センソ−ノル８４４，センソ−ノル，ホルテン，ノルウェー）へ接続され、これらが、ＩＢＭ互換コンピュータにインストールされたデータ取得システム（マックラボ８ｅ，ＡＤＩインスツルメンツ，ヘイスティングス，英国）上に表示された。右頸静脈は、その後、薬剤及び生理食塩水の投与のためにカニューレが挿入された。傍胸骨開胸がその後、肋間動脈を焼灼するための電気手術装置を使用して、３つの肋骨を切り開く前に実施された。胸が引込められ（ｒｅｔｒａｃｔｅｄ）、心臓から心膜が解剖された。左前下行枝（ＬＡＤ）冠状動脈が単離され、スネア閉鎖栓がＬＡＤの周辺に置かれた。開創器が次に取り除かれ、動物は安定化させるために１５分間が割り当てられた。
【０２１４】
６．２  虚血及び再灌流
閉鎖栓は時間０で締められた。ＬＡＤ閉塞の２５分後、閉鎖栓は、前もって虚血心筋（２時間）の再灌流を可能にするために開放された。血行動態パラメータは、連続的に観察された。ベースライン測定値は処置、及び、心筋虚血再灌流（ＩＲ）損傷前に採られた。圧力率指数（ＰＲＩ）、心筋酸素消費量の相対的指標は、ＭＡＰ（ｍｍＨｇ）及びＨＲ（拍／分−ｂｐｍ）の積として計算され、ｍｍＨｇｂｐｍ×１０−３で表された。
【０２１５】
６．３  心筋組織損傷の定量化
２時間の再灌流期間の終わりに、ＬＡＤは再閉塞され、１ｍｌのエバンスブルー色素（２％ｗ／ｖ）が、頸静脈を介して動物に注入された。エバンスブルー色素は、それが循環することができる組織を染色し、従って、非灌流血管（閉塞された）組織は着色されないままとなる。各動物は麻酔薬の過剰投与によって殺され、心臓が摘出され、過剰な染料が洗い流された。心臓は、その後３−４ｍｍの切片に切断され、右心室壁が除去され、リスクのある領域（ＡＡＲ−非灌流で、それゆえ、非染色心筋）が非虚血性（青）組織から分離された。虚血性及び非虚血性組織は秤量され、ＡＡＲは、左心室の百分率として表された。ＡＡＲからの組織は小片に切断され、ｐ−ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ、０．５ｍｇ／ｍｌ）にて３７℃で３０分間インキュベートされた。ＮＢＴは、生存（非梗塞）組織に存在するデヒドロゲナーゼと反応してダークブルーのホルマザン［１４］を生成する、還元剤である。梗塞組織（非生存）は、デヒドロゲナーゼ活性を有しておらず、それゆえ染色することができない。染色された組織は、梗塞組織から分離され、秤量され、梗塞サイズがＡＡＲの百分率として表された。
【０２１６】
６．４  実験計画
ラットは無作為に以下のグループに割り当てられた：
（ｉ）    疑似（ｎ＝６）
（ｉｉ）  対照（ｎ＝８）
（ｉｉｉ）アルテスネート０．３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝５）
（ｉｖ）  アルテスネート１ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）
（ｖ）    アルテスネート１０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝２）
模擬手術ラットは同一の外科的処置を受けたが、心筋虚血及び再灌流がなかった。動物は、蘇生時に５％重炭酸ナトリウム（１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与）またはアルテスネート（０．３，１，または１０ｍｇ／ｋｇ静脈内投与）のいずれかを与えられた。
【０２１７】
６．５  統計解析
血行動態パラメータは、二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）、続けてダネット多重比較テストによって解析された。繰り返し測定の無いデータは、一元配置ＡＮＯＶＡによって、続けて多重比較のためにダネットポストホックテストによって解析された。
【０２１８】
６．６  血行動態パラメータに対する、局所ＭＩ及びアルテスネートの効果
局所心筋虚血に続く再灌流は、実験終了時には平均動脈圧の進行的な低下をもたらした（データは示されていない）。再灌流時のアルテスネート（０．３、１、または１０ｍｇ／ｋｇ）による動物のボーラス処置は、局所心筋虚血及び再灌流によって引き起こされた平均動脈圧の低下を緩和しなかった（Ｐ＞０．０５対  対照）。
【０２１９】
動物の全ての群における心拍のベースライン値は、群間で有意差はなかった（Ｐ＞０．０５、データは示されていない）。再灌流時のアルテスネート（０．３、１、または１０ｍｇ／ｋｇ）による動物のボーラス処置は、局所心筋虚血及び再灌流を施されたラットの心拍に有意な影響を有さなかった（Ｐ＞０．０５対  対照）。
【０２２０】
６．７  リスクのある領域及び梗塞サイズに対する効果
梗塞のリスクがある領域は、研究されたすべての群で同様であり、左心室の４７．３±２．６から５５．５±７．５％の範囲であった（Ｐ＞０．０５、図９Ａ）。模擬手術動物は、ＡＡＲの６．２±２．０％の梗塞サイズを示した（図９Ｂ）。模擬手術動物と比較した場合、局所心筋虚血（２５分間）に続いて再灌流（２時間）を施した動物は、ＡＡＲの５７．６±２．１％の梗塞サイズとなった（図９Ｂ）。しかしながら、局所心筋ＩＲ損傷を施した動物と比較した場合、再灌流時の０．３ｍｇ／ｋｇの用量でのアルテスネートによる動物のボーラス処置は、梗塞サイズを５７．６±２．１から４４．０±２．６１％に有意に緩和した（図９Ｂ）。再灌流時の１ｍｇ／ｋｇの用量でのアルテスネートに処置したとき、これは梗塞サイズを５７．６±２．１から４２．６±１．１％（４０％の梗塞サイズ低下、Ｐ＜０．０５）に有意に緩和した（図９Ｂ）。１０ｍｇ／ｋｇアルテスネートによる処置は、梗塞サイズに有意な影響を有さなかった（Ｐ＞０．０５、図９Ｂ）。
【０２２１】
６．８  まとめ
心筋虚血及び再灌流を施したラットのビヒクルによる処置は、模擬手術ラットと比較すると、梗塞サイズについて有意な増加となった。ビヒクルによる処置は、模擬手術ラットと比較すると、血行動態パラメータまたはリスクのある領域に対して有意な影響を有さなかった。
【０２２２】
心筋虚血及び再灌流を施したラットの０．３ｍｇ／ｋｇアルテスネートによる処置は、ビヒクルによって処置したラットと比較すると、梗塞サイズについて有意な低下となった。０．３ｍｇ／ｋｇアルテスネートによる処置は、ビヒクルによって処置したラットと比較すると、血行動態パラメータまたはリスクのある領域に対して有意な影響を有さなかった。心筋虚血及び再灌流を施したラットの１ｍｇ／ｋｇアルテスネートによる処置は、ビヒクルによって処置したラットと比較すると、梗塞サイズについて有意な低下となった。１ｍｇ／ｋｇアルテスネートによる処置は、ビヒクルによって処置したラットと比較すると、血行動態パラメータまたはリスクのある領域に対して有意な影響を有さなかった。心筋虚血及び再灌流を施したラットの１０ｍｇ／ｋｇアルテスネートによる処置は、ビヒクルによって処置したラットと比較すると、血行動態パラメータ、リスクのある領域または梗塞サイズに対して有意な影響を有さなかった。
【０２２３】
７．  局所心筋虚血及び再灌流のラットモデルにおける、梗塞サイズに対するアルテスネート及びその活性代謝物（ジヒドロアルテミシニン）の効果の評価
７．１  外科的処置
この研究は、体重２４０〜３２０ｇの、標準飼料と水を自由摂取させたウィスター系雄性ラット（チャールズリバー，英国）２７匹に対して行われた。
【０２２４】
ラットは、チオペントンナトリウム（イントラバル（登録商標）１２０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与）で麻酔された。麻酔は、必要に応じてチオペントンナトリウムの補充注射によって維持された。気管はカニューレが挿入され、動物はハーバード人工呼吸器（吸気酸素濃度：３０％；７０ストローク／分、一回換気量：８−１０ｍｌ／ｋｇ）によって換気された。体温は、恒温毛布ユニット（ハーバードアパラタス社，エデンブリッジ，ケント，英国）に取り付けた直腸プローブを活用して３７±１℃に維持された。右頚動脈はポリエチレンカテーテルがカニューレ挿入され、平均動脈圧（ＭＡＰ）及び心拍（ＨＲ）を観察するために圧力変換器（センソ−ノル８４４，センソ−ノル，ホルテン，ノルウェー）へ接続され、これらが、ＩＢＭ互換コンピュータにインストールされたデータ取得システム（マックラボ８ｅ，ＡＤＩインスツルメンツ，ヘイスティングス，英国）上に表示された。右頸静脈は、その後、薬剤及び生理食塩水の投与のためにカニューレが挿入された。傍胸骨開胸がその後、肋間動脈を焼灼するための電気手術装置を使用して、３つの肋骨を切り開く前に実施された。胸が引込められ（ｒｅｔｒａｃｔｅｄ）、心臓から心膜が解剖された。左前下行枝（ＬＡＤ）冠状動脈が単離され、スネア閉鎖栓がＬＡＤの周辺に置かれた。開創器が次に取り除かれ、動物は安定化させるために１５分間が割り当てられた。
【０２２５】
７．２  虚血及び再灌流
閉鎖栓は時間０で締められた。ＬＡＤ閉塞の２５分後、閉鎖栓は、前もって虚血心筋（２時間）の再灌流を可能にするために開放された。血行動態パラメータは、連続的に観察された。ベースライン測定値は処置、及び、心筋虚血再灌流（ＩＲ）損傷前に採られた。圧力率指数（ＰＲＩ）、心筋酸素消費量の相対的指標は、ＭＡＰ（ｍｍＨｇ）及びＨＲ（拍／分−ｂｐｍ）の積として計算され、ｍｍＨｇｂｐｍ×１０−３で表された。
【０２２６】
７．３  心筋組織損傷の定量化
２時間の再灌流期間の終わりに、ＬＡＤは再閉塞され、１ｍｌのエバンスブルー色素（２％ｗ／ｖ）が、頸静脈を介して動物に注入された。エバンスブルー色素は、それが循環することができる組織を染色し、従って、非灌流血管（閉塞された）組織は着色されないままとなる。各動物は麻酔薬の過剰投与によって殺され、心臓が摘出され、過剰な染料が洗い流された。心臓は、その後３−４ｍｍの切片に切断され、右心室壁が除去され、リスクのある領域（ＡＡＲ−非灌流で、それゆえ、非染色心筋）が非虚血性（青）組織から分離された。虚血性及び非虚血性組織は秤量され、ＡＡＲは、左心室の百分率として表された。ＡＡＲからの組織は小片に切断され、ｐ−ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ、０．５ｍｇ／ｍｌ）にて３７℃で３０分間インキュベートされた。ＮＢＴは、生存（非梗塞）組織に存在するデヒドロゲナーゼと反応してダークブルーのホルマザン［１４］を生成する、還元剤である。梗塞組織（非生存）は、デヒドロゲナーゼ活性を有しておらず、それゆえ染色することができない。染色された組織は、梗塞組織から分離され、秤量され、梗塞サイズがＡＡＲの百分率として表された。
【０２２７】
７．４  実験計画
ラットは無作為に以下のグループに割り当てられた：
（ｖｉ）    疑似（ｎ＝６）
（ｖｉｉ）  対照（ｎ＝８）
（ｖｉｉｉ）アルテスネート１ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）
（ｉｘ）    ジヒドロアルテミシニン０．１ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６）
模擬手術ラットは同一の外科的処置を受けたが、心筋虚血及び再灌流がなかった。動物は、蘇生時に１０％ＤＭＳＯ（１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与）、アルテスネート（１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与）、またはジドロアルテミシニン，ＤＨＡ（０．１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与）のいずれかを与えられた。
【０２２８】
７．５  統計解析
６．５節で説明されたように行った。
【０２２９】
７．６  血行動態パラメータに対する、局所ＭＩ並びにアルテスネート及びジヒドロアルテミシンの効果
全ての動物の群における平均動脈圧のベースライン値は、１０６．８から１２０．２ｍｍＨｇの範囲であり、群間で有意差はなかった（Ｐ＞０．０５、データは示されていない）。局所心筋虚血に続く再灌流は、実験終了時には、１０１．８ｍｍＨｇまで平均動脈圧の進行的な低下を引き起こした。再灌流時のアルテスネート（１ｍｇ／ｋｇ）による動物のボーラス処置は、心筋虚血及び再灌流によってもたらされる平均動脈圧の低下を緩和しなかった（Ｐ＞０．０５対  対照）。加えて、再灌流時のジヒドロアルテミシン（ＤＨＡ  ０．１ｍｇ／ｋｇ）による動物のボーラス処置は、心筋虚血及び再灌流によってもたらされる平均動脈圧の低下を緩和しなかった（Ｐ＞０．０５対  対照）。
【０２３０】
ラットの全群の心拍のベースライン値は、分あたり４０７．６から４４８．７拍（ｂｐｍ）の範囲であり、群間で有意差はなかった（Ｐ＞０．０５、データは示されていない）。再灌流時のアルテスネート（１ｍｇ／ｋｇ）による動物のボーラス処置は、心筋虚血及び再灌流によってもたらされる局所心筋虚血及び再灌流を施したラットの心拍に有意な影響を有さなかった（Ｐ＞０．０５対  対照）。加えて、再灌流時のジヒドロアルテミシン（ＤＨＡ  ０．１ｍｇ／ｋｇ）による動物のボーラス処置は、心筋虚血及び再灌流によってもたらされる局所心筋虚血及び再灌流を施したラットの心拍に有意な影響を有さなかった（Ｐ＞０．０５対  対照）。
【０２３１】
７．７  リスクのある領域及び梗塞サイズに対する効果
梗塞のリスクがある領域は、研究されたすべての群で同様であり、左心室の４６．９±２．３から５７．６±２．１２％の範囲であった（Ｐ＞０．０５、図１０Ａ）。模擬手術動物は、ＡＡＲの６．２±２．０％の梗塞サイズを示した（図１０Ｂ）。模擬手術動物と比較した場合、局所心筋虚血（２５分間）に続いて再灌流（２時間）を施した動物は、ＡＡＲの５７．６±２．１２％の梗塞サイズとなった（図１０Ｂ）。しかしながら、局所心筋ＩＲ損傷を施した動物と比較した場合、再灌流時の１ｍｇ／ｋｇの用量でのアルテスネートによる動物のボーラス処置は、梗塞サイズを５９．８±３．２から３６．０±１．１％（４０％の梗塞サイズ低下、Ｐ＜０．０５）に有意に緩和した（図１０Ｂ）。加えて、局所心筋ＩＲ損傷を施した動物と比較した場合、ジヒドロアルテミシン（ＤＨＡ  ０．１ｍｇ／ｋｇ）による動物のボーラス処置は、梗塞サイズを５９．８±３．２から４６．５±１．３％（４０％の梗塞サイズ低下、Ｐ＜０．０５）に有意に緩和した（図１０Ｂ）。
【０２３２】
７．８  まとめ
心筋虚血及び再灌流を施したラットのビヒクルによる処置は、模擬手術ラットと比較すると、梗塞サイズについて有意な増加となった。ビヒクルによる処置は、模擬手術ラットと比較すると、血行動態パラメータまたはリスクのある領域に対して有意な影響を有さなかった。心筋虚血及び再灌流を施したラットの１ｍｇ／ｋｇアルテスネートによる処置は、ビヒクルによって処置したラットと比較すると、梗塞サイズについて有意な低下となった。また、１ｍｇ／ｋｇアルテスネートによる処置は、ビヒクルによって処置したラットと比較すると、血行動態パラメータまたはリスクのある領域に対して有意な影響を有さなかった。心筋虚血及び再灌流を施したラットの０．１ｍｇ／ｋｇジヒドロアルテミシニンによる処置は、ビヒクルによって処置したラットと比較すると、梗塞サイズについて有意な低下となった。また、０．１ｍｇ／ｋｇジヒドロアルテミシニンによる処置は、ビヒクルによって処置したラットと比較すると、血行動態パラメータまたはリスクのある領域に対して有意な影響を有さなかった。
【０２３３】
実施例５から７の結果は、アルテスネート及びその誘導体（特にＤＨＡ）が、心筋梗塞若しくは冠状動脈心疾患、または心筋梗塞若しくは冠状動脈性心疾患の関連障害の治療に有用であり得ることを示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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