(57)【要約】  本発明は、固体試薬を保持するための、および／または診断試験用のサンプルを処理するための装置を提供する。装置は、サンプル移動時、サンプルまたは流体量の損失につながるおそれのある液体の「停滞」を防止する。本発明は、感度および精度の高い分析物検出を提供するために装置を用いる診断的方法をさらに提供する。
2014521960.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
固体試薬を保持する装置であって、
ビーズまたはペレット形態の前記固体試薬を含む隔室を含み、前記隔室が液体サンプルの停滞を低減しつつも前記固体試薬を保持するのに十分なリブデザインによって形成された開口部を有する、装置。
【請求項２】
前記固体試薬を保持する隔室を有するチューブである、請求項１に記載の装置。
【請求項３】
前記リブが丸みのある断面を有する、請求項１または２に記載の装置。
【請求項４】
前記リブの直径が約０．０１インチ〜約０．０６インチである、請求項３に記載の装置。
【請求項５】
前記リブの直径が約０．０３インチである、請求項４に記載の装置。
【請求項６】
前記リブが前記チューブの端部から突出している、請求項１〜５のいずれか一項に記載の装置。
【請求項７】
４つのリブを有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の装置。
【請求項８】
３つのリブを有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の装置。
【請求項９】
前記リブが半径方向に延在し、かつ前記開口部の周縁の周りに等間隔で配置される、請求項７または８に記載の装置。
【請求項１０】
前記リブが接していない、請求項１に記載の装置。
【請求項１１】
前記固体試薬がペレットまたはビーズの形態で凍結乾燥または乾燥される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の装置。
【請求項１２】
前記固体試薬が、ビーズまたはペレットに共役させた試薬である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の装置。
【請求項１３】
前記固体試薬が免疫試薬である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の装置。
【請求項１４】
少なくとも１つの免疫試薬がポリヌクレオチド捕捉部分を含む、請求項１３に記載の装置。
【請求項１５】
少なくとも１つの免疫試薬が検出可能な部分を含む、請求項１２に記載の装置。
【請求項１６】
前記隔室からの液体サンプルの送達を補助するために前記チューブの前記開口部上に嵌合するキャップをさらに含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の装置。
【請求項１７】
前記隔室の、前記リブに対向する側から液体サンプルを制御可能に送達するための機構をさらに含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の装置。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の装置と、側方流動膜および液体サンプルの送達のために前記装置と接続するポートを含む試験デバイスと、を含むキット。
【請求項１９】
サンプル処理チューブと、サンプル塗布構成要素と、をさらに含む、請求項１８に記載のキット。
【請求項２０】
蛍光シグナル読取器または目視シグナル読取器をさらに含む、請求項１８または１９に記載のキット。
【請求項２１】
分析物を検出するための方法であって、
前記分析物を含むことが疑われる液体サンプルを、固体免疫試薬を保持した装置に塗布するステップであって、前記装置が、ビーズまたはペレット形態の前記固体免疫試薬試薬を含む隔室を含み、前記隔室が、液体サンプルの停滞を低減し、それによって、前記隔室内の前記免疫試薬を可溶化しつつも前記固体試薬を保持するのに十分なリブデザインによって形成された開口部を有する、ステップと、
前記液体サンプルを前記装置と接続するように構成された側方流動膜に送達するステップと、
を含む、方法。
【請求項２２】
前記分析物を含むことが疑われる前記液体サンプルがピペットによって前記装置に添加され、前記装置がチューブの形態である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
キャップが前記チューブの開口部上に嵌合され、前記チューブが前記サンプルおよび可溶化試薬を前記側方流動膜上に送達するために反転される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記装置が、前記可溶化試薬および前記液体サンプルを前記隔室から送達するために側方流動膜を含むデバイスと接続する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
結果が蛍光シグナル読取器または目視シグナル読取器を使用して読み取られる、請求項２１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の分野
本出願は全般的に分析物検出のための装置および方法に関し、国際公開第２００７／０９８１８４号、国際公開第２００９／０１４７８７号および国際公開第２０１０／１３２４５３号に記載された装置および方法に関する。これらはそれぞれ、その全体を参照により本明細書に組み込む。特に、しかし非排他的に、本出願は、特定の結合剤を固体形態において保持するため、および標的分析物の検出前に対象のサンプルを、薬剤を用いて処理するための装置またはキットに関する。装置は、妨げのないサンプル移動を可能にしつつ固体試薬ビーズまたはペレットを保持するために構成される。
【背景技術】
【０００２】
生物学的または環境サンプル中の物質（「分析物」）の存在またはレベルを検出するためのアッセイにはしばしば抗原抗体反応を伴い、かつ側方流動アッセイ形式での免疫複合体の捕捉および検出を伴う場合がある。試験は定量的、半定量的または定性的決定目的で設計してもよい。
【０００３】
試験流体中の対象の分析物がしばしば低濃度であるおよび／または試験流体が少量であることから、特に試験に顕著なサンプル操作が必要な場合、および／または本質的に定量的とする場合、アッセイではサンプル損失を阻止しなければならない。例えば、国際公開第２００７／０９８１８４号および国際公開第２００９／０１４７８７号に記載されているアッセイでは、装置が、対象の分析物を含む液体サンプルによる可溶化または処理のためにチューブ隔室内に保持される固体免疫試薬ビーズを必要とする。分析物が可溶化された免疫試薬によって結合されると、サンプルは免疫複合体の捕捉および検出のため側方流動膜に送達される。しかしながら、多くの液体サンプルの量がミリリットルまたはマイクロリットル範囲内であると考えると、試験では感度および／または精度を維持するために移動中のサンプル損失を防止すべきである。本発明はこれら目的および他の目的を満たすものである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明の概要
本発明は、診断試験用の固体試薬を保持するおよび／またはサンプルを処理するための装置またはキットを提供し、装置は、サンプル移動時のサンプルの損失または流体量の損失につながるおそれのある液体の「停滞」または保持を防止する。本発明は、さらに、感度および精度の高い分析物検出を提供するための装置を使用する診断的方法を提供する。
【０００５】
一態様においては、本発明は、サンプル処理構成要素すなわち「試薬チューブ」を含む装置またはキットを提供する。試薬チューブは、乾燥（または乾燥させた）ビーズ、ペレットまたはウェーハ形態であってもよい固体試薬を含む隔室を含む。一般に、隔室はミリリットルまたはマイクロリットルサイズの流体サンプルを保持し、かつ移動するように設計されている。隔室は、試薬の可溶化のためおよび／または１つまたは複数の分析物との結合のために液体サンプルを隔室に添加することを可能にしつつ固体試薬を保持するのに十分なリブデザインによって形成された開口部を有する。リブデザインは、隔室に入るおよび／または隔室を出るサンプル移動時における液体サンプルの停滞を低減する。試薬チューブ内におけるリブの位置は様々であってもよいが、それらは一般に、アッセイの少なくとも１つの工程において、液体サンプルがリブによって画定された開口部を通じて隔室内におよび／または隔室外に移動するように配置される。装置の例示的なリブデザインおよび寸法を本明細書中に開示する。例えば、リブは丸みのある断面を有してもよく、いくつかの実施形態では、０．０２インチ〜０．０５インチの範囲内等の、約０．０１インチ〜約０．０６インチの直径または断面を有する。特定の実施形態のリブデザインは、鋭角を含まないか、鋭角が最小限にされている。いくつかの実施形態では、リブがチューブの底部または床に配置される場合、リブはチューブの端部から突出する。いくつかの実施形態では、リブデザインは３つまたは４つのリブを有してもよく、これらは隔室開口部上においてほぼ半径方向のパターンでまたは実質的に平行なパターンにおいて等間隔で配置してもよい。リブは隔室開口部の中心で交差してもよいが、いくつかの実施形態では、リブは交差も接触もしない。
【０００６】
本明細書では、「固体試薬」という用語は、液体形態で可溶化されない試薬を意味し、したがって、凍結乾燥形態、乾燥形態または粉末形態の試薬、ならびにビーズなどの固体支持物に共役させた試薬を含む。特定の実施形態では、固体試薬は免疫試薬である。免疫試薬は、１つまたは複数のペレット、ビーズ、ウェーハおよび／またはピルの形態で凍結乾燥させても乾燥させてもおよび／または圧縮してもよく、かつ任意選択で、後の可溶化を含み、１つまたは複数の適切な結合剤または他の化合物と組み合わせて固体の特性に作用してもよい。いくつかの実施形態では、免疫試薬を１つまたは複数のビーズに共役させる。免疫試薬は、対象の分析物の少なくとも１つの抗体を含んでもよく、アッセイで複数の分析物を試験する場合は対象の各分析物の少なくとも１つの抗体を含んでもよい。いくつかの実施形態では、免疫試薬は、分析物の存在下で「サンドウィッチ型免疫学的検定」を形成するように設計されており、これら実施形態においては、各分析物に対して免疫試薬が対で提供される。各「対」においては、少なくとも１つの免疫試薬が対象の分析物に特有のものであり、その抗体または抗原結合部に加えて、ビオチンまたはストレプトアビジンまたはオリゴヌクレオチドなどの連鎖結合剤（linked binder）または固定化部分を含む。固定化部分は、検出のために、生じた免疫複合体の固定化を可能にする。各対は、固定化された免疫複合体の検出を可能にする蛍光部分または目視観察可能部分などの付着性の検出可能部分を有する少なくとも１つの免疫試薬をさらに含む。本明細書中に詳細に記載されるように、免疫複合体は側方流動検出形式において捕捉および検出されても、読取機器の補助により検出されてもよい。
【０００７】
容器は、抽出バッファおよび対象の分析物を含むサンプルを含んでもよい１つまたは複数の液体サンプルを、例えばピペットによって隔室に添加することができるように設計されている。試薬の可溶化および／または結合後、サンプルは検出のため第２のデバイスに移動される。いくつかの実施形態では、装置は、隔室から検出デバイスまたは「試験デバイス」（ＴＤ：Test Device）への液体サンプルの送達を補助する容器またはチューブの開口部上に嵌合するキャップをさらに含む。さらに他の実施形態では、試薬チューブは、隔室の床から液体サンプルを制御可能に送達するための機構を有する。この機構またはキャップは、試験デバイスのポートとしっかりと接続するための構成要素を含んでもよい。
【０００８】
装置は、当然、サンプル捕集器具、サンプル処理および／または抽出構成要素および／または読取機器などの他の構成要素または器具を含んでもよい。
【０００９】
他の実施形態では、本発明は分析物を検出するための方法を提供する。方法では本発明の装置を用いてもよい。例えば、方法は、分析物を含むことが疑われる液体サンプルを試薬チューブに塗布するステップを含んでもよい。固体試薬を液体サンプル中の１つまたは複数の分析物と可溶化および／または結合するのに十分な、簡単な混合または撹拌後、いくつかの実施形態において試薬チューブは側方流動膜などの検出デバイスと接続される。この接続は取り付け可能なキャップによるものであっても、試薬チューブの設計内に含まれる他の接続機構であってもよい。液体サンプルを検出デバイスに移動後、分析物の存在を目視検査によって、または読取機器の使用によって読み取ってもよい。リブデザインの存在ゆえに、種々の工程中に送達される液体サンプルの量は固体試薬に送達される量と一致したままである。
【００１０】
さらなる態様を添付の図面とともに以下にさらに記載する。
【００１１】
本願は、添付の図面と併せて解釈される以下の詳細な説明とともにより完全に理解されうる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】試薬の保持用のリブを備えたサンプル捕集チューブを示す。
【図２Ａ】丸みのある断面を有する例示的なリブデザインを示し、かつ０．０３インチの例示的な断面を示す。
【図２Ｃ】丸みのある断面を有する例示的なリブデザインを示し、かつ０．０３インチの例示的な断面を示す。
【図３Ａ】チューブの端部から突出した例示的なリブデザインを示す。
【図３Ｂ】チューブの端部から突出した例示的なリブデザインを示す。
【図４】試薬チューブの例示的な内寸を示す。
【図５】試薬チューブの例示的な内寸を示す。
【図６】半径方向のパターンで間隔をおいて配置された３つのリブを有する例示的なリブデザインを示す。
【図７】半径方向のパターンで間隔をおいて配置された３つのリブを有する例示的なリブデザインを示す。
【図８】リブが交差しない例示的なリブデザインを示す。
【図９】リブが交差しない例示的なリブデザインを示す。
【図１０】リブが交差しない例示的なリブデザインの側部断面図を示す。
【図１１】生物学的サンプルをアッセイ媒体により処理し（図１１）、その後、試薬ビーズによる処理のために試薬チューブに移動し（図１２）、その後、液体サンプルを検出デバイスに移動する（図１３）ことによって対象の分析物を検出するための例示的な方法を示す。
【図１２】生物学的サンプルをアッセイ媒体により処理し（図１１）、その後、試薬ビーズによる処理のために試薬チューブに移動し（図１２）、その後、液体サンプルを検出デバイスに移動する（図１３）ことによって対象の分析物を検出するための例示的な方法を示す。
【図１３】生物学的サンプルをアッセイ媒体により処理し（図１１）、その後、試薬ビーズによる処理のために試薬チューブに移動し（図１２）、その後、液体サンプルを検出デバイスに移動する（図１３）ことによって対象の分析物を検出するための例示的な方法を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の詳細な説明
本発明は、診断試験のために固体試薬形態を保持するための、および／またはサンプルを処理するための装置またはキットを提供する。この装置は、サンプルの損失、または流体量の損失、またはサンプル移動時における不均一な流体保持に至るおそれのある液体の「停滞」を回避する。本発明は、感度および精度の高い分析物検出を提供するための、装置を使用した診断的方法をさらに提供する。
【００１４】
本明細書中に記載されるように、キットまたは装置は、隔室へのまたは隔室からの移動時における液体サンプルの「停滞」または損失を防止し、試験間における一定の移動量を提供する。例えば、マイクロリットルサイズのサンプル（例えば、１００〜５００μｌの範囲内または１５０〜４００μｌの範囲内）を使用する場合、特定の実施形態においては、リブデザインが、３０μｌ、２５μｌまたは２０μｌ以下の「停滞」または損失を生じさせる。例えば、特定のサンプルの量によっては、サンプル停滞または損失は、サンプル量の２０％未満であっても、サンプル量の１５％未満であっても、サンプル量の１０％未満であっても、サンプル量の５％未満であってもよい。特定の実施形態では、一定のサンプル量により、サンプル損失は、サンプル間で１０％超またはサンプル間で５％超変わることはない。
【００１５】
種々の実施形態では、装置またはキットは、液体サンプルとともに処理するための固体試薬を保持する試薬容器または試薬チューブを含む。装置またはキットは、１つまたは複数のサンプル捕集用具（例えば、スワブ、ブラシ、織られた基材等）、アッセイ媒体によるサンプルの抽出用のサンプルチューブ、対象の分析物の抽出および懸濁用に適切に選択したアッセイ媒体、サンプルの移動用ピペット、分析物を捕捉し、存在を検出するための試験デバイス（例えば、側方流動試験デバイス）、および読取機器（例えば、検出標識が単なる目視検査用に設計されていない場合、または定量的検出が必要な場合）などの、診断的アッセイのための追加構成要素をさらに含んでもよい。これら追加構成要素については本明細書中に詳細に記載する。
【００１６】
一般に、試薬チューブは、１つまたは複数の液体サンプルがピペットまたは他の手段によって固体試薬に添加されるように設計された容器である。液体サンプルは、抽出溶液または媒体により生物学的または環境サンプルを抽出して液体サンプルを形成した後に添加することができる。あるいは、サンプルの抽出と結合試薬の可溶化を同時に実施することもできる。利便性のため本明細書中においては「チューブ」という用語が使用されるが、試薬チューブは従来のチューブ形状に限定されず、記載される試薬を保持するのに十分な任意の容器を意味する。固体試薬の、液体サンプルとの可溶化および／または結合後、生じた試験サンプルは検出のため試験デバイスにその後送達される。いくつかの実施形態では、試験デバイスは、検出のために捕捉した分析物を固定化するための固体支持物を含む。試験デバイスは側方流動膜の形態であってもよい。
【００１７】
いくつかの実施形態では、キットは、試薬チューブの反転時における検出デバイスへの試験サンプルの送達を補助するために試薬チューブの開口部上に嵌合するキャップを含む。これら実施形態は、例えば、国際公開第２００９／０１４７８７号に記載されており、その全体を参照により本明細書に組み込む。さらに他の実施形態では、試薬チューブは、デバイスの反転なく試験サンプルを隔室の床から試験デバイスに制御可能に送達するための内蔵機構を有する。これら実施形態は、例えば、国際公開第２００７／０９８１８４号に記載されており、その全体を参照により本明細書に組み込む。この機構またはキャップは、参照により本明細書に組み込む国際公開第２０１０／１３２４５３号に記載されるような、側方流動デバイスのポートと接続するための機構を含んでもよい。
【００１８】
試薬ビーズ、ウェーハおよびペレット
試薬チューブは、固体結合試薬を保持するための隔室を含む。種々の実施形態では、固体試薬はビーズ、ウェーハまたはペレット形態であり、免疫学的検定用の試薬（「免疫試薬」）を含む。固体試薬は、例えば、ピル、ビーズ、凍結乾燥ペレット、型押凍結乾燥パワー（pressed lyophilized power）の形態であってもよく、乾燥させても固体支持物（例えばビーズ）に共役させてもよい。免疫試薬および免疫抱合体の調製については当技術分野において公知であり、例えば、CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY（Coligan,John E et al.,eds 1999）を参照のこと。
【００１９】
隔室は、１個〜約１０個の試薬ビーズを含んでもよく、いくつかの実施形態では、約２個〜約５個の試薬ビーズを含んでもよい。
【００２０】
種々の実施形態では、免疫試薬は、対象の分析物の少なくとも１つの抗体を含む、もしくはアッセイで複数の分析物を試験する場合は対象の各分析物の少なくとも１つの抗体を含む。本明細書中に記載されるように少なくとも１つの免疫試薬は捕捉または検出可能な部分を含んでもよい。いくつかの実施形態では、免疫試薬は分析物の存在下で「サンドウィッチ型免疫学的検定」を形成するように設計されており、したがって、各分析物に対して対で提供される。これら実施形態では、少なくとも１つの免疫試薬は、試験デバイス内の対応する部分によって捕捉可能なポリヌクレオチドベースの捕捉部分などの捕捉部分を含む。種々の実施形態では、少なくとも１つの免疫試薬は検出可能な部分を含み、これは目視で検出しても器具の補助により検出してもよい。
【００２１】
一実施形態において、少なくとも１つの免疫試薬は、捕捉部分を含む捕捉可能な試薬である。捕捉可能な試薬は、捕捉部分パートナー（capture moiety partner）に直接的または間接的に結合された抗体または免疫試薬を含む。捕捉部分パートナーは、固体支持物（例えば、ニトロセルロース膜）上に試験デバイス内のアドレス指定可能な領域または線として配置された同族固定化（cognate−immobilized）捕捉部分パートナーによって「捕捉される」。このような捕捉部分および同族パートナーは、本明細書中において捕捉部分パートナー（ＣＭＰ（ｓ）：Capture Moiety Partners）と呼ばれる。例示的な実施形態では、ＣＭＰは、特定の配列の第１のｐＲＮＡ分子を含むことができ、これは第１の分子に相補的な第２のｐＲＮＡ分子に結合し、２つの分子が互いに接触した場合にそれらの特定の結合を可能にする。種々の実施形態では、ＣＭＰは、ｐＲＮＡ分子またはｐＤＮＡ分子を含むがこれらに限定されない分子、アプタマーおよびその同族標的、またはストレプトアビジン−ビオチン、または他のリガンド／レセプタ対を含む。ＣＭＰの特定のセットにおいては、２つの分子はそれらの互いの結合が、それらの結合パートナーを類似の特性を有する他のアッセイ成分と区別できるように関連付けられる。
【００２２】
免疫試薬は分析物の存在下で免疫複合体を形成してもよく、分析物は、微生物およびそれを示すマーカを含む生物学的または環境サンプル中の任意の対象の分析物から選択してもよい。例えば、いくつかの実施形態では、検出される種々の分析物はウイルスまたはウイルスの成分である。種々の実施形態では、種々の抗原はインフルエンザウイルスおよび／またはインフルエンザウイルスの亜型に由来する。さらに他の実施形態では、検出される種々の分析物は１つまたは複数の異なる感染症因子および／または１つまたは複数の異なる感染症因子の亜型である。
【００２３】
試薬ビーズまたはペレットのサイズは、リブまたは「十字線」デザインによって保持されるように選択される。例えば、ビーズまたはペレットは、特定の実施形態においては、約２ｍｍまたは約３ｍｍ等の、約１ｍｍ〜約５ｍｍの断面または直径を有してもよい。
【００２４】
試薬チューブおよびリブデザイン
一態様においては、本発明は、ビーズまたはペレット形態の固体試薬を隔室内に保持する試薬チューブを含む装置またはキットを提供する。隔室は、妨げのないサンプル移動または流れを可能にする、つまり、液体サンプルの停滞を低減する一方で固体試薬を保持するのに十分なリブデザインによって形成された開口部を有する。試薬チューブは、さらに、特に固体支持物に共役させた試薬を用いる実施形態において洗浄を容易にする。
【００２５】
隔室は試薬を収容し、約５０μｌ〜約１０ｍＬの範囲内の液体サンプルを保持および移動するのに十分である。いくつかの実施形態では、隔室の容積は、約１００μｌ〜約５ｍＬ、約２ｍＬ、約１ｍＬ、約０．５ｍＬまたは約０．２ｍＬを保持および移動してもよい。
【００２６】
いくつかの実施形態では、鋭角は流体の停滞につながる可能性があるため、リブには丸みがあり鋭角を含まない。いくつかの実施形態では、リブデザインには３つまたは４つのリブを有してもよく、かつこれらを隔室の開口部上に半径方向のパターンにおいて等間隔で配置してもよい。例えば、リブは交差パターンを形成してもよい。当然、リブの実質的に平行するパターンなど他の代替的なパターンも可能である。しかしながら、デザインではリブ表面積の量を最小にすべきである。例えば、リブは丸みのある断面を有してもよく、いくつかの実施形態では、約０．０２インチ、約０．０３インチまたは約０．０４インチ等の、約０．０１インチ〜約０．０６インチの直径または断面を有してもよい。
【００２７】
いくつかの実施形態では、リブデザインが隔室（または底部チャンバ）をチューブの端部から分離する場合、側部から見るとリブがチューブの端部から突出している。
【００２８】
リブは隔室開口部の中心で交差してもよいが、いくつかの実施形態では、リブは交差も接触もしない。
【００２９】
いくつかの実施形態では、チューブおよび／またはリブの表面は表面張力を低下するために、例えば、シラン処理によって変性される。
【００３０】
ここでサンプル試薬チューブ１００を示す図１に注目する。チューブ１００は試薬を含む液体サンプルを貯蔵するために使用される。チューブ１００は４つの十字線リブ１１０を含む。示される構成は、表面張力により付着する、液体サンプルのための三方の表面（three−sided surface）を形成する。直線の側部を備えた矩形形状を有するリブ１１０の断面が図１Ｂに示される。リブ１１０断面の一般的な寸法は、０．０３インチ×０．０４インチである。
【００３１】
ここで本発明によるサンプルチューブ２００の一実施形態の詳細を示す図２Ａに注目する。サンプルチューブ２００は４つのリブ２１０を有する十字線デザインを含む。チューブ１００のリブとは異なり、リブ２１０は図２Ｂに示すような丸みのある断面を有して構成されている。例示的な実施形態においては、リブ２１０の断面は丸いが、その代わりに、特定の実施形態においては、楕円または他の丸縁構成などの他の形状を使用してもよい。サンプルチューブ２００は４つのリブ２１０を備えて示されるが、いくつかの構成においては、その代わりに、より多数またはより少数のリブ（例えば、３つのリブ）を使用してもよい。図２Ｂの実施形態では、リブ２１０は０．０３インチの直径を有するが、他の実施形態においては異なる寸法を使用してもよい。
【００３２】
図３Ａおよび図３Ｂは、図２Ａおよび図２Ｂに示した実施形態のさらなる詳細を示す。図３Ａは、チューブ３２０の上縁部および複数のリブ２１０を含むサンプルチューブ２００の側面図である。図３Ａに示すサンプルチューブ２００の部分３１０を図３Ｂにさらに示す。特に、図３Ａに示すように側部から見た場合に、リブ２１０は、リブ２１０Ａの第１の部分が上縁部３２０の上にあるように配置してもよい。加えて、リブ２１０Ｂの第２の部分は上縁部３２０の下にある。
【００３３】
図４は、チューブ２００の断面図を示す。
【００３４】
図５は、チューブの上縁部に配置されたリブ２１０の１つの構成を示すチューブ２００のオフセット断面図を示す。
【００３５】
図６は、本発明の態様によるサンプルチューブ６００の一実施形態の詳細を示す。図６に示すように、サンプルチューブ６００は３つのリブ６１０を含む。リブ６１０は３つの開口部領域６２０を形成するように構成されており、図６に示すように開口部６２０を直径によって画定してもよく、この直径は、使用されるビーズのサイズに関係してもよい。この例では、リブの直径は０．０３インチであり、開口部６２０の直径は約１ｍｍ〜約３ｍｍであるが、保持されることになるビーズのサイズにもよる。例えば、試薬ビーズまたはペレットは断面が約２ｍｍである場合、開口部のサイズは２ｍｍ未満で十分である。この３開口部構成は最小限の流量制限を形成するが、ビーズが開口部を通じて落下する可能性がより高くなる。これに対処するため、開口部のサイズ、リブの直径、リブの数または他の寸法パラメータに基づきリブの直径を増加してもよい、および／またはビーズサイズを調整してもよい。
【００３６】
図７は、より大径のリブ７１０を有する別の実施形態を示す。この例では、リブ７１０は０．０４５インチの直径を有するため、より小さな開口部７２０を形成する。
【００３７】
図８は、本発明の態様によるサンプル捕集チューブ８００の一実施形態の詳細を示す。チューブ８００は、複数の支持式リブ８１０を含む（この実施形態では、４つのリブ８１０が示されるが、他の実施形態はより多数またはより少数のリブを含んでもよい）。いくつかの実施形態では、リブ縁端８２０はほぼ四角であっても直角であってもよいが、これにより、停滞量が増加し、サンプルの変動性が増加するおそれがある。いくつかの実施形態では、リブ縁端８２０はより良好な流れを提供するために湾曲させても丸みをつけてもよい。図８に示すように、リブ構成は、中央を流れることを可能にする一方で、また、開口部８３０を通過するビーズの流れを制限するように構成される開いた中心領域８３０を含んでもよい。特に、開口部８３０がビーズの直径よりもわずかに小さくなるように画定するようにリブを構成してもよい。
【００３８】
図１０は、リブ８１０の一実施形態の断面図を示すチューブ８００の断面側面図である。
【００３９】
サンプル処理および移動
容器は、液体サンプルを上部チャンバからピペットまたは放出バッファ（releasing buffer）を含む他の手段によって隔室に添加することができ、試薬と１つまたは複数の分析物の可溶化および混合後、サンプルが検出のため第２のデバイスに移動されるように設計されている。特定の実施形態においてピペットは、特定の量の液体サンプルを、目盛線または特定の量の流体の移動を確実とするための他の手段のいずれかによって移動するように設計されている。
【００４０】
試薬（例えば免疫試薬）を分析物と最適に反応させるために、検出前にサンプルと試薬とを混合することが望まれる。サンプルと結合剤の十分な混合は、約５、１０秒、１５秒、２０秒、２５秒、３０秒または６０秒、またはそれを超えた後に生じてもよい。例えば、サンプルと結合剤の混合は、約５〜１０秒間であっても、約１０〜１５秒間であっても、約１５〜２０秒間であっても、約２０〜３０秒間であっても、約３０〜６０秒間であっても、それを超える時間であってもよい。混合は、試薬チューブをはじくこと、手首を使って試薬チューブをはじくこと（wrist flicking）、チューブを回転させること、または試薬チューブを前後に揺らすことを含むいくつかの方法によって達成することができる。
【００４１】
いくつかの実施形態では、キットは、十分な混合を評価するための手段を含む。特定の実施形態では、試薬サンプル混合チャンバは、試薬ビーズまたはペレットに組み込まれた染料であってもよい混合インジケータをさらに含む。あるいは、試薬ビーズはコーティングすることができる、または適切な混合が発生したことを示すための染料を含んでもよい。説明のため、試薬ビーズは、ビーズの存在下でサンプルと結合剤とを混合する間、赤色に変わる溶液によって適切な接触および混合が実証されるように赤色染料でコーティングしてもよい。一般に、染料は、放出時に肉眼で見える放出可能な水溶性染料とすべきである。
【００４２】
いくつかの実施形態では、キットは、血液または他の屑を濾過するためのリブ上のフィルタまたは膜を含む。
【００４３】
いくつかの実施形態では、装置は、試薬チューブの反転時における、検出デバイスへの、隔室からの液体サンプルの送達を補助する、容器またはチューブの開口部上に嵌合するキャップをさらに含む。さらに他の実施形態では、試薬チューブは、隔室の床から液体サンプルを制御可能に送達するための機構を有する。この機構またはキャップは、側方流動デバイスのポートとしっかりと接続するための構成要素を含んでもよい。
【００４４】
方法および例示的な実施形態
他の態様では、本発明は分析物を検出するための方法を提供する。方法では、本明細書中に記載されるような本発明の装置またはキットを用いてもよい。例えば、方法は、分析物を含むことが疑われる液体サンプルを、固体結合試薬をビーズまたはペレット形態で保持する試薬隔室または試薬チューブに塗布するステップを含んでもよい。隔室は、液体の停滞を低減しつつ固体試薬を保持するのに十分なリブデザインによって形成された開口部を有するため、液体サンプルを検出デバイスに送達するときのサンプル損失を最小にしつつ試薬がサンプル中に可溶化される。
【００４５】
本発明の装置またはキットは、すでに記載したように、生物学的または環境サンプルを捕集するのに必要な構成要素、ならびに特定の結合試薬をそれらの特定の標的分析物とともに含む複合体を形成するためにサンプル中の分析物を処理しかつそれと反応させるのに必要な試薬およびバッファを含んでもよい。
【００４６】
方法は、生物学的または環境サンプル中の対象の任意の分析物の検出目的であってもよい。サンプルは、１つまたは複数の分析物の存在および／または濃度について試験される任意の材料である。一般に、生物学的サンプルは、ヒト以外の動物またはヒトなどの被験体から得た任意のサンプルとされうる。生物学的サンプルは、任意の体液のサンプル、細胞、または生検の組織サンプルとすることができる。体液サンプルは、何ら制約を受けることなく、血液、尿、痰、精液、糞便、唾液、胆汁、髄液、鼻腔スワブ、鼻咽頭スワブ、鼻咽頭吸引液、鼻腔洗浄液、咽頭スワブ、尿生殖器スワブ、鼻腔吸引液、髄液等を含みうる。例えば、生物学的サンプルは、血液サンプルの血漿または血清画分、収集した細胞または組織のタンパク質または核酸抽出物とされうるか、標本の検出感度を向上するような手法で処理された標本からのものとされうる。例えば、鼻部標本中のムチンを分解する粘液溶解剤を含む溶解バッファが標本および洗浄剤の粘性を大幅に減少させ、ウイルスを溶解し、それによって抗原を放出させ、それらをアッセイによる検出に利用可能にする。
【００４７】
対象の分析物は、疾病、病理学、または他の生理学的状態に関連するものであってもよい。種々の実施形態では、このような分析物は、心臓、肝臓、腎臓、腸、脳、胎児組織または膵臓を含むがこれらに限定されない任意の体組織に関する状態に関連するバイオマーカである。分析物は、毒素、アレルゲン、有機化合物、タンパク質、ペプチド、微生物、細菌、ウイルス、アミノ酸、核酸、炭水化物、ホルモン、ステロイド、ビタミン、薬剤（治療の目的で投与されるものならびに違法目的で投与されるものを含む）、汚染物質、殺虫剤、および上記物質のいずれかの代謝産物または抗体を含むがこれらに限定されない。分析物という用語は、また、任意の抗原性物質、ハプテン、抗体、巨大分子およびこれらの組み合わせを含む。
【００４８】
説明のため、特定の実施形態では、サンプルは抽出され、別個のキット構成要素内の固体形態結合剤と接触する。例えば、図１１は、前に図１〜１０に示したようなサンプルチューブの使用の処理順序例を示す。サンプルを捕集するために、スワブ１１１２を使用してもよく、その後、サンプルはステージ１１２０においてサンプル捕集チューブ１１００内に配置される。ステージ１１３０において、スワブを捕集チューブ１１００内に挿入してもよく、捕集チューブ１１００は、ウイルス転送媒体（Viral Transfer Media）すなわちＶＴＭなどの、対象の分析物に適したアッセイ媒体を含む。その後、スワブをチューブ１１００内において回転し、サンプルを分配する。ステージ１１４０において、チューブ１１００からサンプルを捕集するためにピペット１１１４を使用してもよい。ピペットは目盛線または特定の量の流体の移動を確実とするための他の手段のいずれかによって特定の量の液体サンプルを移動するように設計してもよい。
【００４９】
ここで、本明細書中に記載されるようなサンプル試薬チューブ１２００の使用を示す図１２に注目する。チューブ１２００は、上述のチューブ２００、６００、７００または８００と類似してもよい。ステージ１２１０において、サンプル液体をピペット１１１４からチューブ１２００に移動させてもよい。記載したようにチューブ１２００は凍結乾燥試薬ビーズ１２０５を含んでもよい。ステージ１２２０において、試験デバイスへの移動のためにチューブ１２００に蓋をしてもよい。ステージ１２３０において、チューブ１２００内の混合物は、例えば、５〜１０秒などの適切な混合時間の間混合してもよい。
【００５０】
抽出溶液は、試薬ビーズまたはペレットのぬれ（再水和）を確実にするために、および／またはサンプルを抽出するために十分な量のものとすべきである。例えば、乾燥スワブがサンプルスワブとして使用される場合、サンプルを抽出または放出するのに十分な、および試薬をぬらすのに十分な抽出溶液の量は少なくとも約７０μｌである。
【００５１】
アッセイ媒体は、１種または複数の塩、キレート剤、凝固阻止剤、洗浄剤、安定剤、希釈剤、緩衝剤、酵素、余因子、特定結合メンバー、標識、溶菌薬、粘液溶解剤等を含んでもよい。
【００５２】
図１３を参照すると、ステージ１３５０において、チューブ１２００の内容を、サンプルポート１３１０を有する試験デバイス１３００に移動してもよい。サンプルは、その後、試験膜に吸い取られてもよく、吸い取られると、洗浄が開始されてもよい。デバイスは、その後、例えば、読取機器の補助により処理してもよく、ステージ１３７０において結果が提供される。
【００５３】
特定の実施形態では、試薬ビーズによるサンプル抽出および処理は単一デバイスまたは国際公開第２００７／０９８１８４号に記載されるようなサンプル捕集デバイス（ＳＣＤ：sample collection device）において行われる。同文献は参照により本明細書に組み込まれる。ＳＣＤは、１つまたは複数の密閉チャンバを含んでもよく、シールがＳＣＤの第２のチャンバ間における流体連通を妨げるように機能する。下部チャンバは固体試薬を保持してもよく、上部チャンバはアッセイ媒体を含んでもよい。いくつかの実施形態では、シールは、分離弁（break−away valve）、フラップ弁、ねじり弁、ねじ式弁、破断可能なシール、穿刺可能なシールまたは破壊可能な弁を含む。さらなる実施形態では、シールを開くと、上部チャンバの内容がサンプル受容チューブの下部チャンバに流れることを可能にすることができる。他の実施形態では、上部チャンバは、その中の内容を放出するために圧力がかけられアンプルを破断、穿刺または破壊しない限りは、上部チャンバ内に収容された溶液が下部チャンバに流れることが防止される１つまたは複数のアンプルを含むことができる。
【００５４】
一実施形態において、上部チャンバは、上部チャンバからの溶液の制御可能な放出を可能にする弁を含む。弁は当技術分野において公知である任意の種類の弁であってもよく、本明細書中に記載されるシステムに適合してもよい。使用することができるさらなる弁には、回転弁、破壊可能な弁、止水栓弁、ゲート弁、ボール弁、フラップ弁、ニードル弁、蝶形弁、ピンチ弁、ベローズ弁、ピストン弁、滑り弁、プラグ弁、切換え弁またはアクチュエータ弁を含む。例えば、弁は、分離弁であっても、スナップ弁であっても、フラップ弁であっても、ねじり弁であっても、ねじ式弁であっても、破断可能な弁であっても、穿刺可能な弁であっても、破壊可能な弁であってもよい。例えば、弁がスナップ弁である場合、軸を破壊するために使用者が弁軸に力を印加し、分離機能が、バッファが軸を介してサンプル捕集チューブおよび下部チャンバに入ることを可能にする。一実施形態において、上部チャンバは、弁の開口またはシールの破断により上部チャンバ内の溶液が流出するように正圧下にある。一実施形態において、上部チャンバは、上部チャンバ内の溶液が圧力下において流れ、軸を介して下部チャンバに入るように十分な正圧下にある。例えば、弁がスナップ弁である場合、使用者が力を印加してスナップ弁軸を破壊し、上部チャンバ内の溶液がわずかな圧力下において流れ、軸を介して下部チャンバに入る。
【００５５】
したがって、上部チャンバ内に供給された溶液（例えば、バッファまたは洗浄溶液）によりサンプルが下方に押し流される場合、溶液およびサンプルを含む混合物が生成され、この混合物は下部チャンバ混合または試薬構成要素に移動する。下部チャンバ混合または試薬構成要素は固体試薬を有する試薬領域を含む。固体試薬はバッファによって急速に溶解することができ、生じた溶液は、対象の分析物とアッセイ試薬（例えば、特定の結合剤、標識検出および捕捉プローブ等）とを含んでもよいサンプルの混合物とすることができる。いくつかの実施形態では、ＳＣＤは、また、後の検出のために反応混合物を送達するために試験デバイスに係止するルアーロックを含むことができる。
【００５６】
いくつかの実施形態では、上部密閉隔室内の溶液はバッファ溶液である。溶液の量は約５０μｌ〜約５ｍＬであってもよく、他の実施形態では、約１００μｌ〜約５００μｌ（例えば、約８０μｌ、１００μｌまたは１２０μｌ）であってもよい。上部チャンバ内の溶液は、上部チャンバと下部チャンバとの間に流体連通を設けるために弁構造により穴が開けられる、破壊される、または開かれる密閉隔室であってもよい。一実施形態において、上部チャンバは、圧縮することができる（例えば、使用者がバルブに圧力を印加する）圧搾可能なバルブとすることができる。いくつかの実施形態では、上部チャンバは、溶液を含む自己内蔵型隔室であるバルブ構成要素を含む。このような溶液には、抽出溶液、溶菌溶液、試薬溶液、バッファ溶液または保存溶液を含む。
【００５７】
いくつかの実施形態では、上部チャンバは半剛性材料または押下可能な材料を含む。他の実施形態では、上部チャンバは硬質材料または剛性材料を含む。硬質または剛性の上部チャンバの形成に有用な材料には、例えば、硬質プラスチックまたはガラスを含む。上部チャンバ内にある１つまたは複数の隔室は、洗浄バッファ、抽出バッファ、試薬溶液などの溶液、またはそれらの組み合わせを含むことができる。
【００５８】
一実施形態において、サンプリングアセンブリはサンプル受容チューブを含むハウジングに一体化されていない。このような構成では、サンプリングアセンブリは、サンプルをサンプル受容チャンバに捕集および送達するために利用される。サンプル受容チャンバは、サンプルをサンプル受容チューブ内に導入することを可能にするために開閉することができる。本明細書中に開示される任意のサンプル受容チューブは円筒形、正方形、三角形または所望の任意の多角形を含む種々の幾何学的形状のものとすることができることを理解すべきである。いくつかの実施形態では、ハウジングは、１つまたは複数の選択した試薬、バッファまたは洗浄流体を添加するために開口することができる１つまたは複数の密閉可能な孔を含むことができる。
【００５９】
検出のために内容を試験デバイス（ＴＤ：Test Device）に移動する。いくつかの実施形態では、試験デバイスは側方流動膜を収容する本体を含むことができ、本体には、１つまたは複数の窓が提供され、それを通じて側方流動膜を見ることができる。本明細書中に記載される種々の実施形態では、ＴＤは、前記側方流動膜に配置された試験ゾーンの上流側または下流側のウィッキング基材および吸水性基材を含む側方流動膜を含む。さらに他の実施形態では、ＴＤは、生物発光反応を可視化または定量化するためのチャンバを含む。
【００６０】
一般に、ＴＤは軸方向流路を画定するマトリックスを含む。一般に、マトリックスは、サンプル受容ゾーンと、１つまたは複数の試験ゾーンと、１つまたは複数の制御ゾーンとをさらに含む。いくつかの実施形態では、試験領域は、集合的にアドレス指定可能な線である試験および制御ゾーンを含む。一実施形態において、試験ストリップの下流側に吸水性基材が配置されている。別の実施形態では、試験膜はウィッキング基材および吸収基材の１つまたは両方にそれぞれ重なることも当接することもできる。上部ハウジングの１つまたは複数の窓は結果の可視化および読取りを可能にする。試験膜は、最後のアドレス指定可能な線の下流側に配置された吸水性ゾーンをさらに含んでもよい。一実施形態においては、隔室が側方流動膜の上流側に配置されている。別の実施形態では、ウィッキングパッドがサンプル投入孔の真下に配置されている。
【００６１】
吸水性基材を製造するのに適した材料には、親水性ポリエチレン材料またはパッド、アクリル系繊維、ガラス繊維、ろ紙またはパッド、乾燥紙、製紙用パルプ、布帛等を含むがこれらに限定されない。
【００６２】
特定の実施形態では、サンプル捕集デバイスは、互いに嵌合し、外部圧力またはＳＣＤの操作の必要なくＳＣＤから均一な状態で溶液を放出することを可能にする負圧背圧を生成する構成要素を含む。例えば、試薬チューブの着座構成要素は、構成要素が力（例えば圧力ばめ）により気密シールを形成することができるように硬質または剛性材料で作製してもよい。一実施形態においては、ＳＣＤとＴＤはオリフィス（例えば、スプリットセプタム）を通じて結合される。
【００６３】
別の実施形態では、ＳＣＤの遠位端が開かれ、上部密閉チャンバから溶液が放出される前に、ＳＣＤは（例えば、摩擦嵌合によって）ＴＤの受容ポート内に係合される。このような実施形態では、ＳＣＤの遠位端からＴＤへの流体の流れをルアーまたは弁構造によって調整する必要はなく、流体の流れを、例えば、ＴＤ内における負圧またはＳＣＤとＴＤとの間の差圧の生成、重力または毛細管流によって得ることができる。
【００６４】
別の実施形態では、ＳＣＤの遠位端に弁を用いるのではなくむしろ開放される。バッファを上部チャンバから放出する前にＳＣＤを試験デバイスに取り付けてもよい。溶液を上部チャンバから放出すると、溶液によって捕集器具からサンプルが放出および／または抽出され、下部チャンバ内にある試薬と混合される。混合物は、その後、１つまたは複数の分析物の存在の分析のために試験デバイスに流れる。ＳＣＤから試験デバイス上に出る混合物の流れを遅延させるため下部チャンバ内に水溶解性の膜を含むことが可能である。このような膜は従来のものであり、試薬とサンプル分析物の混合および反応を可能にするのに十分な異なる時間混合物を保持することを可能にするように設計することができる。
【００６５】
いくつかの実施形態では、試験デバイスは、読取器の受容ポート内に嵌合するような形状にされる（専用アダプタ形状）。例えば、いくつかの実施形態では、試験デバイスは洗浄バッファが膜に塗布された後にのみ、例えば、上流側アクチュエータが押下され、その中に収容された洗浄バッファまたは追跡バッファ（chase buffer）が側方流動膜を通じて放出されたことを示す場合に読取機器に嵌合する。このような実施形態においては、試験デバイスの上流側チャンバ内の追跡バッファまたは溶液が放出され、側方流動膜の上流側にある任意のサンプルが側方流動膜を通じて押し流されたことを示すことを確認するための手段を試験デバイス内にある専用アダプタおよび読取器が提供する。これによって、専用アダプタは未処理のサンプルの読取りを防止するための「安全手段」を提供する。
【００６６】
分析物の有／無の表示として試験デバイスからのシグナルを検出するために、例えば、紫外線ＬＥＤ読取器などの読取器が提供される。種々の実施形態では、検出されるシグナルは標識分子からの蛍光反応シグナルである。さらなる実施形態では、標識分子はユウロピウムなどのランタニドである。一実施形態において、読取器は紫外線フォトダイオードまたは紫外線レーザダイオードを含む。
【００６７】
いくつかの実施形態では、読取器は少なくとも１つの確固たる基準または永久的基準を含むように構成される。確固たる基準（hard standard）には、検出可能なシグナルを送信する標識分子を含む。種々の適切な標識については参照により本明細書に組み込む国際公開第２００７／０９８１８４号に記載されている。
【００６８】
いくつかの実施形態では、サンプル受容チューブは軟質材料または可撓性材料で作製される。サンプル受容チューブの形成に有用な材料は当技術分野において周知であり、軟質プラスチックを含む。他の実施形態では、サンプル受容チューブは硬質材料または剛性材料で作製することができる。硬質または剛性のサンプル受容チューブの形成に有用な材料は当技術分野において周知であり、例えば、硬質プラスチック（例えばポリプロピレン）またはガラスを含む。
【００６９】
検出可能な標識は、目視手段または器具による手段によって検出可能なシグナルを生成することができる任意の物質であってもよい。使用に適した種々の標識には、化学的手段または物理的手段のいずれかによりシグナルを生成する標識を含む。このような標識には、酵素および基質、色原体、触媒、蛍光または蛍光様化合物および／または粒子、もしくは凝集体、磁気化合物および／または粒子、化学発光化合物およびまたは粒子、ならびに放射性標識を含む。他の適切な標識には微粒子標識を含み、微粒子標識には、例えば、金などのコロイド金属粒子、セレンまたはテルルなどのコロイド非金属粒子、染色プラスチックなどの染色または着色粒子、有機ポリマーラテックス粒子およびリポソーム、着色ビーズ、高分子マイクロカプセル、嚢、または直に目視可能な物質を含む他の小嚢を含む。目視で検出可能な標識は一般に標識試薬の標識成分として使用され、それによって、検出部位におけるさらなるシグナル生成成分を必要とすることなく、試験サンプルにおける分析物の存在または量の直接目視もしくは器具での読み取りを提供する。
【００７０】
本明細書中に記載されるシステムおよび方法は、読取器（反射率および／または蛍光反応ベースの読取器などの、特に内蔵コンピュータを備えた読取器）と組み合わせた免疫学的検定デバイスを含むことができる。このような読取器は、また、生物学的サンプル中の分析物の存在および／または濃度を正確に決定するために、任意選択で、訓練されたニューラルネットワークと組み合わせた、データ整理およびカーブフィッティングアルゴリズムを用いたデータ処理ソフトウェアを含んでもよい。一実施形態において、蛍光反応読取器は一貫したまたは永久的基準（「確固たる基準」（hard standard））を含むように構成されている。用語「確固たる基準」は、試験サンプルを読み取るためのデバイスが、内部の、一貫したまたは永久的基準を含み、この基準に照らして、確固たる基準において使用されるものと同じ標識が付されたサンプルが読み取られることを意味する。一実施形態において、確固たる基準および試験標識はランタニド（例えば、ユウロピウムＩＩＩ）を含む。
【００７１】
開示される実施形態の前述の記載は当業者が本開示を作製または使用することを可能にするために提供される。これら実施形態に対する種々の変更は当業者には容易に明らかになろう。また、本明細書中に定義される一般的な原理を本開示の精神または範囲から逸脱することなく他の実施形態に適用してもよい。したがって、本発明は、本明細書中に示される実施形態に限定することを意図するものではなく、本明細書中に開示される原理および新規な特徴に合致する最も広い範囲によるものである。
【実施例】
【００７２】
実施例１：変更した十字線の評価
チューブの反転時にアッセイ媒体（例えば、ＶＴＭ）の投入量によりチューブの十字線内に試薬溶液の停滞が生じることが認められたことから、十字線構造のデザイン変更物を作製した。試薬溶液の停滞およびビーズ保持に対するこの変更チューブの影響を評価した。
【００７３】
ハサミを使用してチューブ内の十字線構造の中心を切り取った。これにより不連続な４本線構造を形成した。線は長さ約２．５ｍｍ〜３ｍｍである。中心開口部は３ｍｍ未満であり、これは凍結乾燥ビーズを保持するのに十分であろう（約２ｍｍ）。
【００７４】
この例では、凍結乾燥ユウロピウムおよびｐＲＮＡ試薬ビーズ、ならびにプルロニック／ＮａＣｌおよびＴＤＯＣ／カゼイン／ＢＳＡ抽出ビーズを用いた。
【００７５】
十字線を備えたチューブ内に４つの試薬ビーズのそれぞれを配置して、１２０μｌのＶＴＭをビーズに添加し、攪拌して溶解させた。チューブを反転し、流体の停滞を観察した。回収した流体量を計量した。この結果、変更した十字線がビーズを保持したことが分かり、サンプルの停滞は認められなかったが、約２０μｌの残留流体損失があった。いくつかのサンプルでは、液体は３〜７秒間滴下を続けた。
【００７６】
１００μｌの投入量を使用して実験を繰り返した。再度、２０μｌの残留損を認めたが、少量の方が１２０μｌよりも高いＣＶを有する。先端部の再使用は時折のドリップ形成につながる。
【００７７】
結論として、チューブ本体内の４本線の変更十字線は投入量にかかわらずサンプル液体の停滞を防止する。１００μｌの投入量は７６μｌ〜８３μｌのサンプル送達量を可能にし、１２０μｌの投入量は９４μｌ〜１０３μｌのサンプル送達量を可能にする。４本線の変更本体は凍結乾燥ビーズをキャップ内に依然保持している。
【００７８】
実施例２：十字線半径の評価
この実施例では、内部により大きな半径を有するキャップが送達する量を評価する。この目的は、サンプルを先端部に引き込むためにチューブが反転される場合、キャップ内により少量のサンプル液体を保持することを可能にすることである。元の十字線構造を有するか、切り取られた中心十字線を有し、４本ピン型リブデザインを形成するかのいずれかである第１の使用先端部および本体チューブを有するキャップが評価される。この例では、希釈剤として１００μｌまたは１２０μｌのＶＴＭと、記載したような凍結乾燥試薬ビーズとを使用する。
【００７９】
チューブの全内部表面上にチューブが反転されているときに流れ落ちる溶液から液体ビーディングが形成される。
【００８０】
十字線デザインにおける停滞量は、十字線の四分円および／または反転されたキャップのリムのいずれかにおいて、およびチューブのキャップと底部の接合部において生じた。
【００８１】
ドリップ形成の遅延は手動で補正した。
【００８２】
結論：開いたリブデザインでは、より少量のＣＶを有する十字線デザインと比較してより多い量の送達を得た。残留損は１７μｌ〜２３μｌであり、キャップ内のサンプル停滞はなかった。１２０μｌはより少量のＣＶを生じ、液体保持は１００μｌの投入量に匹敵するものであった。約２０μｌの保持量であるキャップの前のロットと比較すると、ＲｅｖＸ１キャップは保持量の点において同様に機能する。
【００８３】
実施例３：液体停滞用の変更したリブ保持器の評価
この実施例では、リブ保持器を備えたＲｅｖ−Ｘ１本体チューブの送達量、ビーズ保持および液体停滞を評価する。この様式の本体チューブはサンプルを送達するためにチューブが反転された場合に液体停滞を不可能にする変更チューブの最初の製品である。実施例では１２０μｌのＶＴＭの停滞について試験する。
【００８４】
観察：本体チューブに成形されるリブデザインは無傷であり構造的に頑丈に見える。支持式リブは前実施例の変更した十字線に類似している。モールドからの任意の瞬間蒸発（flashing）は微視的である。キャップおよび先端部を本体チューブ上にしっかりと嵌合した。先端部には、チューブの湾曲を防止するためにいくらかの配慮（直圧）が必要であった。結果は前の実験に類似するものであった。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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