(57)【要約】ヒトおよびヒト以外の動物対象における、これらの対象にカリウムチャネル阻害剤を投与することによる、褐色脂肪組織の活性化、肥満症の治療、および／または肥満症関連障害の治療である。カリウムチャネル阻害剤は、ＳｈＫトキシンまたは修飾ＳｈＫトキシンを含み得る。修飾ＳｈＫトキシンの例としては、ＳｈＫ−１８６が挙げられる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトまたは動物対象における褐色脂肪組織の活性化、肥満症の治療、または肥満症関連障害の治療のためのカリウムチャネル阻害剤の使用。
【請求項２】
前記薬剤が、ＳｈＫトキシン（配列番号１）を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記薬剤が、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、または配列番号７から選択される修飾ＳｈＫトキシンを含む、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記薬剤が、化学物質に付加されるＳｈＫトキシンを含む、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記ＳｈＫトキシンに付加される前記化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（ＰＯ３Ｈ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ、Ｅｔ）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｔｙｒ、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＮＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＣＯ２Ｈ）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−アスパラギン酸塩、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−アスパラギン酸塩、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−グルタミン酸塩、およびＡＥＥＡｃ−Ｄ−グルタミン酸塩から選択される、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
前記化学物質が、ＳｈＫのＮ末端残基に付加される、請求項４または５に記載の使用。
【請求項７】
前記ＳｈＫトキシンが、天然源から得られる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記ＳｈＫトキシンが、合成物である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、フルオロフォアタグを含む、請求項４に記載の使用。
【請求項１０】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）を含む、請求項４に記載の使用。
【請求項１１】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）を含む、請求項４に記載の使用。
【請求項１２】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ、Ｅｔ）を含む、請求項４に記載の使用。
【請求項１３】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）を含む、請求項４に記載の使用。
【請求項１４】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）を含む、請求項４に記載の使用。
【請求項１５】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｔｙｒを含む、請求項４に記載の使用。
【請求項１６】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＮＨ２）を含む、請求項４に記載の使用。
【請求項１７】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＣＯ２Ｈ）を含む、請求項４に記載の使用。
【請求項１８】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−アスパラギン酸塩を含む、請求項４に記載の使用。
【請求項１９】
前記化学物質が、ＳｈＫトキシンＡＥＥＡｃ−Ｄ−アスパラギン酸塩に付加される、請求項４に記載の使用。
【請求項２０】
前記化学物質が、ＳｈＫトキシンＡＥＥＡｃ−Ｌ−グルタミン酸塩に付加される、請求項４に記載の使用。
【請求項２１】
前記化学物質が、ＳｈＫトキシンＡＥＥＡｃ−Ｄ−グルタミン酸塩に付加される、請求項４に記載の使用。
【請求項２２】
前記薬剤が、異なる大きさのインフレームタンパク質またはポリエチレングリコールをさらに含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３】
前記薬剤が、Ｋｖ１．３カリウムチャネルを阻害する、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４】
前記薬剤が、Ｋｖ１．１カリウムチャネルよりＫｖ１．３を選択的に阻害する、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５】
ヒトまたは動物対象における褐色脂肪組織の活性化、肥満症の治療、または肥満症関連障害の治療のための方法であって、カリウムチャネルを阻害する薬剤を前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項２６】
前記薬剤が、ＳｈＫトキシン（配列番号１）を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記薬剤が、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、または配列番号７から選択される修飾ＳｈＫトキシンを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記薬剤が、化学物質に付加されるＳｈＫトキシンを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（ＰＯ３Ｈ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ、Ｅｔ）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｔｙｒ、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＮＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＣＯ２Ｈ）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−アスパラギン酸塩、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−アスパラギン酸塩、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−グルタミン酸塩、またはＡＥＥＡｃ−Ｄ−グルタミン酸塩から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記化学物質が、ＳｈＫのＮ末端残基に付加される、請求項２５〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＳｈＫトキシンが、天然源から得られる、請求項２５〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＳｈＫトキシンが、合成物である、請求項２５〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記化学物質が、フルオロフォアタグを含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ、Ｅｔ）を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｔｙｒを含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＮＨ２）を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＣＯ２Ｈ）を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−アスパラギン酸塩を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−アスパラギン酸塩を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−グルタミン酸塩を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項４５】
前記化学物質が、ＳｈＫトキシンＡＥＥＡｃ−Ｄ−グルタミン酸塩に付加される、請求項２８に記載の方法。
【請求項４６】
前記薬剤が、Ｋｖ１．３カリウムチャネルを阻害する、請求項２５〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記薬剤が、Ｋｖ１．１カリウムチャネルよりＫｖ１．３を選択的に阻害する、請求項２５〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記ＳｈＫトキシンに付加される化学物質が、異なる大きさのインフレームタンパク質またはポリエチレングリコールをさらに含む、請求項２５〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、生物学および医学に関し、より具体的には肥満症および肥満症関連障害を治療するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満症は、今や命に関わる世界的規模の流行病である。２００８年の米国における体重過剰に加え肥満症の成人有病率は６８％（約２億人）であった。中程度の肥満症でさえ、特に過剰な脂肪が腹部に位置する場合、２型真性糖尿病、心血管疾患、脳卒中、およびいくつかの形態の癌のリスクを増加させる。肥満症の経済的コストは、年間２７００億ドルであると推定される。食事制限および／または運動によって体重を維持するための方法は、長期にわたり食事レジメンを守る人は少なく、定期的な運動のコンプライアンスも同様によくないため、ほとんど有効性がない。結果は、概して、一時的な体重減少（または体重安定）段階であり、続いて肥満症への軌道に戻る。これらの失敗は、安全な抗肥満療法の必要性を強調している。
【０００３】
ヒトおよび多くの他の哺乳類において、脂肪は、脂肪組織に貯蔵される。脂肪組織は、白色脂肪組織（即ち、「白色脂肪」）と、褐色脂肪組織（即ち、「褐色脂肪」）の２つの種類に分類される。白色脂肪は、個々の細胞内に大きな脂質滴としてカロリーを貯蔵する。（非特許文献１）食物摂取後、過剰なカロリーは、主に、女性においては臀部および脚部の皮膚下、男性においては内部臓器の周囲に位置する白色脂肪に脂肪として貯蔵される。逆に、褐色脂肪は、脂肪をほとんど貯蔵せず、代わりに熱を生成し、体温を調節するために燃焼する。（非特許文献１）褐色脂肪がカロリーを貯蔵するよりも燃焼する能力は、多くのミトコンドリアを有する各褐色脂肪細胞に依存する。褐色脂肪細胞のミトコンドリアは、熱を生成するためにＡＴＰ生成から代謝を脱共役するタンパク質であるＵＣＰ１を含むという点で独特である。（非特許文献２）小型哺乳類および新生児は、肩甲骨の周囲に、低温で彼らが生存するのを助ける多量の褐色脂肪を有する。最近の研究は、ヒト成人において、主に下頸部および鎖骨の筋肉の周囲、ならびに胸部および腹部の脊椎に沿った褐色脂肪を最終的に確認した。（非特許文献３〜５）褐色脂肪における熱産生の刺激を通して肥満症を管理するという概念は、現在、医薬品、栄養補助食品、および機能性食品産業界から大きな関心を集めている。（非特許文献６）骨格筋は、熱産生に関与する別の組織であり、この組織による熱産生を標的とする薬物も肥満症の制御において価値があるかもしれない。（非特許文献６、７）
褐色脂肪は、主に、交感神経系によって衰弱される。ホルモン的に活性化されるとき、褐色脂肪は、熱を生成し、過剰なエネルギーを燃焼する。実験動物において、褐色脂肪における熱産生は、交感神経系から放出されるノルエピネフィリンによって制御される。ノルエピネフィリンは、熱産生を刺激するために、主に、β−アドレナリン受容体と相互作用する（図１）。（非特許文献２、８）したがって、ラットにおいて、β−アドレナリン拮抗薬プロプラノロール（５ｍｇ／ｋｇ体重）は、褐色脂肪への１８−フルオロ−デオキシグルコース取り込みを排除する（非特許文献８、９）。男性において、プロプラノロール（１ｍｇ／ｋｇ）は同じ作用を有し（非特許文献１０、１１）、同様に、男性において、グルコース取り込み（よって、おそらく熱産生）はβ−アドレナリンの制御下であることを明らかに示す。
【０００４】
肥満症を管理する、またはその管理を補助するために熱産生を刺激するという考えには、長い経歴がある。（非特許文献６）１９世紀の終わりに肥満症療法に利用された甲状腺抽出物は、顕著な体重減少を誘発したが、肥満症療法におけるそれらの使用は、心臓刺激
およびタンパク質異化作用の増加を含む容認できない副作用のため、不評を招いた。（非特許文献６）褐色脂肪および骨格筋における熱産生の誘発における交感神経副腎の中心的役割が理解されると、１９９０年代のヒトにおける試験は、熱産生抗肥満症性質に関する全ての臨床的に使用された交感神経刺激薬を評価した。（非特許文献１２）しかしながら、製薬会社は、抗肥満薬として多くが特許保護外である昔の薬物の開発を懸念した。この時期、ｂ３−アドレナリン受容体は、交感神経的に放出されたＮＡが、褐色脂肪における熱産生を媒介するＵＣＰ１の活性化を含む、末梢組織において熱産生および脂肪酸化を活性化した主要な受容体であると報告された。げっ歯類およびイヌにおいて、いくつかのｂ３−アドレナリン受容体作動薬は、古典的なアドレナリン受容体刺激に関連する心臓血管副作用をもたらすことなく、熱産生抗肥満症作用の可能性を有することが示された。（非特許文献１３）ｂ３−アドレナリン受容体は、ヒト脂肪組織および骨格筋において示された。しかしながら、これらの薬物はヒトｂ３−アドレナリン受容体に対する選択性が乏しいか、または経口利用可能性に乏しいかのいずれかであり、第ＩＩ相臨床試験を超えて進展した薬物はなかった。（非特許文献１３）
肥満症および肥満症関連障害の治療に関して熱産生を促進するための平行した試みは、植物療法（例えばＭａ  ＨｕａｎｇおよびＧｕａｒａｎａ）、および食品成分（メチルキサンチン、ポリフェノール化合物、カプサイシノイド、およびカプサイノイド（ｃａｐｓｉｎｏｉｄｓ）、高タンパク質の食事、ならびに長鎖不飽和脂肪酸に富む食事）を含んだ。この点において、Ａｇｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  Ｂｒｏｗｎ  Ｆａｔ  Ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  Ｌｉｎｏｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  ａｓ  Ａｃｔｉｖｅ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔと題される特許文献１（Ｓｕｇａｎｏら）は、抱合リノール酸を投与することにより、褐色脂肪組織の生成を刺激するための方法を説明する。また、特許文献２（Ｂｉｌｌｓ）は、半透膜にカプセル封入された大量の培養褐色脂肪細胞を対象に投与することにより、対象における褐色脂肪組織の量を増加させる方法を説明する。
【０００５】
薬学的および栄養学的アプローチに加えて、寒冷気候に曝露することによって、褐色脂肪活性を刺激することも可能であるかもしれない。「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ  ｏｆ  Ｂｒｏｗｎ  Ａｄｉｐｏｓｅ  Ｔｉｓｓｕｅ  ｉｎ
Ａｄｕｌｔ  Ｈｕｍａｎｓ」と題されるＮｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅに公開された２００９年の研究において、著者は、外気温が上昇したとき、褐色脂肪活性が減少したことを報告した。さらに、マウスにおける最近の研究は、寒冷への短期曝露が褐色脂肪への取り込みの増加の結果として、トリグリセリドの血漿クリアランスを加速し、病的状態において、寒冷への曝露が高脂血症を直したことを示した。（非特許文献１４）これらの知見は、代謝的に活性な褐色脂肪を有する個人が寒冷への曝露により体重を減少させることができる可能性があるため、有用であり得る。体重減少は、交感神経系を活性化することにより、寒冷状態を摸倣する薬物を通しても達成され得る。
別の可能な用途は、褐色脂肪と、亜鉛フィンガータンパク質ＰＲＤＭ１６が白色脂肪細胞と比較して褐色脂肪細胞において高度に富化されるという知見との間の相関をうまく利用することであり得る。２００７年の研究は、白色脂肪貯蔵物における生理学的レベルでのＰＲＤＭ１６の遺伝子導入発現が、褐色脂肪細胞の形成を刺激し、一方で、褐色脂肪細胞におけるｓｈＲＮＡ発現を通したＰＲＤＭ１６の枯渇がほぼ全ての褐色特性の損失をもたらすことを発見した。
【０００６】
電位開口型カリウムチャネル（ＩＫｖ）およびカルシウム活性化型カリウムチャネル（ＩＫｃａ）の両方が褐色脂肪組織細胞の細胞膜に存在する。非特許文献１５を参照。しかしながら、カリウムチャネル遮断剤テトラエチルアンモニウム（ＴＥＡ）を用いた前の研究では、褐色脂肪におけるカリウムチャネルの遮断は、アドレナリン刺激に対する褐色脂肪組織細胞の代謝応答を変更しないと結論づけた。非特許文献１６。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第６，４５１，３３６号明細書
【特許文献２】米国特許第５，４５３，２７０号明細書
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｒ．Ｆａｒｍｅｒ．Ｂｅ  ｃｏｏｌ，ｌｏｓｅ  ｗｅｉｇｈｔ．Ｎａｔｕｒｅ  ４５８，８３９−８４０，２００９
【非特許文献２】Ｃａｎｎｏｎ  Ｂ，Ｎｅｄｅｒｇａａｒｄ  Ｊ．Ｂｒｏｗｎ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ：ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ  ８４：２７７-３５９，２００４．
【非特許文献３】Ｖｉｒｔａｎｅｎ，Ｋ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６０，１５１８-１５２５，２００９．
【非特許文献４】ｖａｎ  Ｍａｒｋｅｎ  Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｌｔ，Ｗ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６０，１５００-１５０８，２００９．
【非特許文献５】Ｃｙｐｅｓｓ，Ａ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６０，１５０９-１５１７，２００９．
【非特許文献６】Ｄｕｌｌｏｏ  ＡＧ．Ｔｈｅ  ｓｅａｒｃｈ  ｆｏｒ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｔｈａｔ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅ  ｔｈｅｒｍｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｏｂｅｓｉｔｙ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ：ｆｒｏｍ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ｔｏ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｆｏｏｄ  ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ．Ｏｂｅｓ．Ｒｅｖ．１２：８６６−８８３，２０１１
【非特許文献７】Ｃｌａｐｈａｍ  ＪＣ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｉｃｅ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−３  ｉｎ  ｓｋｅｌｅｔａｌ  ｍｕｓｃｌｅ  ａｒｅ  ｈｙｐｅｒｐｈａｇｉｃ  ａｎｄ  ｌｅａｎ．Ｎａｔｕｒｅ  ４０６：４１５−４１８，２０００
【非特許文献８】Ｊａｎ  Ｎｅｄｅｒｇａａｒｄ，Ｔｏｒｅ  Ｂｅｎｇｔｓｓｏｎ，ａｎｄ  Ｂａｒｂａｒａ  Ｃａｎｎｏｎ．Ｕｎｅｘｐｅｃｔｅｄ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖｅ  ｂｒｏｗｎ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  ｈｕｍａｎｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ２９３：Ｅ４４４−Ｅ４５２，２００７．
【非特許文献９】Ｔａｔｓｕｍｉ  Ｍ，Ｅｎｇｌｅｓ  ＪＭ，Ｉｓｈｉｍｏｒｉ  Ｔ，Ｎｉｃｅｌｙ  Ｏ，Ｃｏｈａｄｅ  Ｃ，Ｗａｈｌ  ＲＬ．Ｉｎｔｅｎｓｅ  （１８）Ｆ−ＦＤＧ  ｕｐｔａｋｅ  ｉｎ  ｂｒｏｗｎ  ｆａｔ  ｃａｎ  ｂｅ  ｒｅｄｕｃｅｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ．Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  ４５：１１８９-１１９３，２００４
【非特許文献１０】Ｊａｃｏｂｓｓｏｎ  Ｈ，Ｂｒｕｚｅｌｉｕｓ  Ｍ，Ｌａｒｓｓｏｎ  ＳＡ．Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＦＤＧ  ｕｐｔａｋｅ  ｉｎ  ｂｒｏｗｎ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｂｙ  ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  Ｍｏｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ３２：１１３０，２００５．
【非特許文献１１】Ｓｏｄｅｒｌｕｎｄ  Ｖ，Ｌａｒｓｓｏｎ  ＳＡ，Ｊａｃｏｂｓｓｏｎ  Ｈ．Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＦＧＤ  ｕｐｔａｋｅ  ｉｎ  ｂｒｏｗｎ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｂｙ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ｄｏｓｅ  ｏｆ  ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  Ｍｏｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ．３４：１０１８−２２，２００７．
【非特許文献１２】Ｄｕｌｌｏｏ  ＡＧ，Ｓｅｙｄｏｕｘ  Ｊ，Ｇｉｒａｒｄｉｅｒ  Ｌ．Ｄｉｅｔａｒｙ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  ｏｆ  ｔｈｅｒｍｏｇｅｎｉｃ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｏｂｅｓｉｔｙ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｉｎ：Ｏｏｍｕｒａ  Ｙ，Ｔａｒｕｉ  Ｓ，Ｉｎｏｕｅ  Ｓ，Ｓｈｉｍａｚｕ  Ｔ（ｅｄｓ）．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｏｂｅｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９９０．Ｊｏｈｎ  Ｌｉｂｂｅｙ＆Ｃｏｍｐａｎｙ  Ｌｔｄ：Ｌｏｎｄｏｎ，１９９０，ｐｐ．１３５−１４４．
【非特許文献１３】Ａｒｃｈ  ＪＲ．Ｔｈｅ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｄｒｕｇｓ  ｆｏｒ  ｏｂｅｓｉｔｙ，ｔｈｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｌｅｐｔｉｎ  ａｎｄ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｆｒｏｍ  ｂｅｔａ３−ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔｓ．Ｎａｕｎｙｎ  Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ  Ａｒｃｈ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ；３７８：２２５-２４０，２００８．
【非特許文献１４】Ｂａｒｔｅｌｌ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒｏｗｎ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １７：２００−５，２０１１
【非特許文献１５】Ｌｕｃｅｒｏ，Ｍ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．；Ｖｏｌｔａｇｅ−Ｇａｔｅｄ  Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌｓ  ｉｎ  Ｂｒｏｗｎ  Ｆａｔ  Ｃｅｌｌｓ；Ｊ．Ｇｅｎ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．９３：４５１−４７２（１９８９）
【非特許文献１６】Ｐａｐｐｏｎｅ，Ｐ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌ  Ｂｌｏｃｋ  Ｄｏｅｓ  Ｎｏｔ  Ａｆｆｅｃｔ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｏｆ  Ｂｒｏｗｎ  Ｆａｔ  Ｃｅｌｌｓ；Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６２（３  Ｐｔ  １）：Ｃ６７８−８１（１９９２）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
したがって、体重減少を促進し、インスリン感受性を増加させるために、褐色脂肪組織および／または骨格筋の生成および活性化を刺激するための薬剤および方法の開発の必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、ヒトもしくは動物の対象または患者において、カリウムチャネル阻害剤を投与することにより肥満症および肥満症関連障害の治療のための方法を提供する。本発明は、肥満症および肥満症関連障害の治療におけるカリウムチャネル阻害剤の使用も提供する。
【００１１】
さらに、本発明に従い、カリウムチャネルを阻害し、それによって、褐色脂肪および／または骨格筋の活性を増加させることにより、抗肥満症作用を有する治療有効量の組成物を対象に投与するステップを含む、哺乳類対象における肥満症または肥満症関連障害を治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、その全開示が参照により本明細書に明示的に組み込まれる、米国特許出願公開第２００８／０２２１０２４号（現在、米国特許第８，０８０，５２３号（Ｃｈａｎｄｙら）として発行される）に記載されるカリウムチャネル阻害組成物のうちの１つ以上を含み得る。米国特許出願公開第２００８／０２２１０２４号に記載されるカリウムチャネル阻害組成物は、一般に、イソギンチャクトキシンＳｈＫの誘導体を含む。ＳｈＫトキシンの既知のアミノ酸配列は、Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（配列番号１）である。米国特許出願公開第２００８／０２２１０２４号に記載されるカリウムチャネル阻害組成物は、次の配列を有するものを含む：
【００１２】
【表１】
2014531469.tif 000002
【００１３】
本発明は、肥満症および肥満症関連障害の治療におけるこれらの特定のカリウムチャネ
ル阻害組成物の使用も提供する。
またさらに、本発明に従い、アニオン性電荷を有する有機または無機の化学物質に付加されたＳｈＫを含む、治療有効量の組成物を対象に投与することにより、哺乳類対象における肥満症または肥満症関連障害を治療するための方法を提供する。本発明は、肥満症または肥満症関連障害を治療するためのそのような組成物の使用も含む。これらの組成物である有機または無機の化学物質は、ＳｈＫのＮ末端残基に付加され得る。ＳｈＫに付加され得るアニオン性電荷を有する化学物質の例としては、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（ＰＯ３Ｈ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ、Ｅｔ）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｔｙｒ、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＮＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＣＯ２Ｈ）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−アスパラギン酸塩、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−アスパラギン酸塩、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−グルタミン酸塩、またはＡＥＥＡｃ−Ｄ−グルタミン酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１４】
またさらに、本発明に従い、付録Ａに定義される治療有効量のＳｈＫ（Ｌ５）を対象に投与することにより、哺乳類対象における肥満症または肥満症関連障害を治療するための方法を提供する。ＳｈＫ（Ｌ５）は、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（ＰＯ３  Ｈ２）、即ち、上記の配列番号２に付加されるＳｈＫを含む。本発明は、肥満症または肥満症関連障害を治療するために、この組成物（配列番号２）の使用も含む。本明細書で使用される、用語ＳｈＫ（Ｌ５）、ＳｈＫ−１８６、および配列番号２は、同義語である。
【００１５】
またさらに、本発明に従い、上記に要約される組成物は、体重および／または体重増加を減衰させるように使用可能であり、したがって、それを必要とする患者におけるエネルギー恒常性および代謝関連（例えば糖尿病）、食物摂取関連および／またはエネルギー平衡ならびに体重関連の疾患、障害、および／または状態（肥満症および体重過剰を含む）、ならびに肥満症および／または体重過剰に関連する疾患、障害、および／または状態（２型糖尿病および代謝症候群等）の治療に有用である。対象または患者は、ヒトまたはヒト以外の動物であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１Ａ】食餌誘発性肥満症マウスモデルにおけるパーセント体重増加対時間のグラフである。全てのマウスに、試験を通して高脂肪／高フルクトース食餌を与えた。皮下注射により、１日おきにマウスにビヒクル（Ｐ６Ｎ）またはＳｈＫ−１８６（２０、１００、もしくは５００μｇ／ｋｇ）を与えた。研究の開始時に体重を平均体重に基準化した。本研究における全てのマウスは、雄であった。反復測定ＡＮＯＶＡを用いることにより、全てのＳｈＫ−１８６用量に関して、ｐ値＜０．０００１。
【図１Ｂ】食餌誘発性肥満症マウスモデルにおける血糖濃度対時間のグラフである。全てのマウスに、試験を通して高脂肪／高フルクトース食餌を与えた。皮下注射により、１日おきにマウスにビヒクル（Ｐ６Ｎ）またはＳｈＫ−１８６（２０、１００、もしくは５００μｇ／ｋｇ）を与えた。血中グルコース濃度は６日おきに各動物において測定された。
【図２Ａ】食餌誘発性肥満症マウスモデルにおける脂質プロファイルを示す棒グラフである。
【図２Ｂ】食餌誘発性肥満症マウスモデルにおける脂質プロファイルを示す棒グラフである。
【図３Ａ】高脂肪／高フルクトースを食餌とした４５日後の対照およびＳｈＫ−１８６治療（５００μｇ／ｋｇ）マウスのＣＴスキャンを示す。白色脂肪組織は矢印によって強調される。
【図３Ｂ】対照マウスの白色脂肪組織含量を５００ｍｇ／ｋｇ用量のＳｈＫ−１８６を与えられたマウスのものと比較した棒グラフである。
【図４Ａ】負の流量のＣＬＡＭＳ（総合実験動物監視システム（Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｌａｂ  Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ））代謝ケージにおいて分析したマウスの摂食および飲水パターンを示す。全ての動物は代謝ケージ研究前の少なくとも７日間、高脂肪／高フルクトース食餌で慣らされた。全ての動物は、各代謝ケージに個別に配置され、通常の１２時間の明暗周期下で２日間慣らされた。
【図４Ｂ】負の流量のＣＬＡＭＳ（総合実験動物監視システム（Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｌａｂ  Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ））代謝ケージにおいて分析したマウスの摂食および飲水パターンを示す。全ての動物は代謝ケージ研究前の少なくとも７日間、高脂肪／高フルクトース食餌で慣らされた。全ての動物は、各代謝ケージに個別に配置され、通常の１２時間の明暗周期下で２日間慣らされた。
【図４Ｃ】負の流量のＣＬＡＭＳ（総合実験動物監視システム（Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｌａｂ  Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ））代謝ケージにおいて分析したマウスの摂食および飲水パターンを示す。全ての動物は代謝ケージ研究前の少なくとも７日間、高脂肪／高フルクトース食餌で慣らされた。全ての動物は、各代謝ケージに個別に配置され、通常の１２時間の明暗周期下で２日間慣らされた。
【図４Ｄ】負の流量のＣＬＡＭＳ（総合実験動物監視システム（Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｌａｂ  Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ））代謝ケージにおいて分析したマウスの摂食および飲水パターンを示す。全ての動物は代謝ケージ研究前の少なくとも７日間、高脂肪／高フルクトース食餌で慣らされた。全ての動物は、各代謝ケージに個別に配置され、通常の１２時間の明暗周期下で２日間慣らされた。
【図５Ａ】ビヒクル対照（ｎ−２）およびＳｈＫ−１８６処置マウス（ｎ＝２）における呼吸交換率（ＲＥＲ）およびエネルギー消費を示す。
【図５Ｂ】ビヒクル対照（ｎ−２）およびＳｈＫ−１８６処置マウス（ｎ＝２）における呼吸交換率（ＲＥＲ）およびエネルギー消費を示す。
【図５Ｃ】ビヒクル対照（ｎ−２）およびＳｈＫ−１８６処置マウス（ｎ＝２）における呼吸交換率（ＲＥＲ）およびエネルギー消費を示す。
【図５Ｄ】ビヒクル対照（ｎ−２）およびＳｈＫ−１８６処置マウス（ｎ＝２）における呼吸交換率（ＲＥＲ）およびエネルギー消費を示す。
【図６Ａ】１８フルオロ−デオキシグルコース（１８ＦＤＧ）のＰＥＴスキャンを示す。褐色脂肪組織における１８ＦＤＧ取り込みは矢印によって強調される。
【図６Ｂ】１８フルオロ−デオキシグルコース（１８ＦＤＧ）のＰＥＴスキャンを示す。褐色脂肪組織における１８ＦＤＧ取り込みは矢印によって強調される。
【図７】矢印によって強調される骨格筋による１８ＦＤＧ取り込みのＰＥＴ撮像を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
次の発明を実施するための形態、および参照する添付の図面は、必ずしも全てではないが、本発明のいくつかの実施例または実施形態を説明することが意図される。記載される実施形態は、全ての点において、単に例示的であり、限定的でないと考慮されるものとする。この発明を実施するための形態の内容および添付の図面は、本発明の範囲を決して限定するものではない。
【００１８】
薬学的組成物にあるような、用語「組成物」は、担体を構成する活性成分（複数可）、および不活性成分（複数可）を含む生成物、ならびに成分のうちのいずれの２つ以上の組み合わせ、錯体化、もしくは凝集、または成分のうちの１つ以上の解離、または成分のうちの１つ以上の他の種類の反応もしくは相互作用によって直接または間接的に生じるいずれの生成物を包含することが意図される。したがって、本発明に利用される薬学的組成物は、活性成分、および１つ以上の薬学的に許容される担体の混合により作製されるいずれの組成物を包含する。
【００１９】
本明細書に使用される、用語「薬理学的有効量」（「治療有効量」を含む）とは、所望される治療効果または生物学的作用を誘発するのに十分な本発明に従うペプチドの量を意味する。
【００２０】
本明細書に使用される、用語「治療有効量」とは、医師または他の臨床医によって治療される哺乳類において生物学的応答または医療応答を生じさせる本発明のペプチドの量を意味する。
【００２１】
本明細書で使用される、用語「予防的に有効」または「防止」とは、患者が特定の疾患または障害に罹患する前に、医師または臨床医が防止、阻害、または緩和しようとする医療状態を有する哺乳類の苦痛を防止する、もしくは阻害する、またはその苦痛を緩和する本発明のペプチドの量を意味する。
【００２２】
用語「糖尿病」は、空腹時の血漿グルコースレベルが１デシリットル当たり１２６ミリグラム以上であり、主な原因が膵臓のβ細胞破壊である、Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｌｌｉｔｕｓ  {Ｄｉａｂｅ
ｔｅｓ  Ｃａｒｅ，Ｖｏｌ．２４，Ｓｕｐｐ．１，Ｊａｎｕａｒｙ  ２００１）に公表された基準に従い診断されるインスリン依存性真性糖尿病である１型糖尿病、空腹時の血漿グルコースレベルが１デシリットル当たり１２６ミリグラム以上である、Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ
ａｎｄ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｌｌｉｔｕｓに公表される基準に従い診断される、非インスリン依存性真性糖尿病である２型糖尿病、および成人の潜在性自己免疫真性糖尿病（ＬＡＤＡ）を含む。
【００２３】
用語「代謝症候群」とは、代謝障害、具体的には、インスリン耐性および膵臓β細胞によるインスリンの不完全分泌を含むグルコースおよび脂質調節障害を指し、腹部肥満症、脂質異常症、血圧上昇、グルコース不耐性、または前血栓段階等の状態および段階をさらに含み得、これは高脂血症、肥満症、糖尿病、インスリン耐性、グルコース不耐性、高血糖、および血圧上昇等の障害をさらにもたらす可能性がある。
【００２４】
本明細書に開示される組成物および方法は、医療用途および畜産または獣医用途の両方に使用され得る。典型的に、本方法は、ヒトにおいて使用されるが、他の哺乳類においても使用され得る。用語「患者」は、哺乳類の個体を示すことが意図され、本明細書および特許請求の範囲を通してそのように使用される。
【００２５】
本発明の主な用途はヒト患者を伴うが、本発明は、研究室、農場、動物園、野生生物、ペット、変種、または他の動物に適用され得る。
臨床適応および特定の汎用性は次を含む：肥満症および代謝症候群、エネルギー恒常性および代謝を伴う疾患、障害、および／または状態（例えば糖尿病、特に２型糖尿病、脂質異常症、脂肪肝、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高尿酸血症、耐糖能障害、空腹時血糖異常、インスリン耐性症候群、および代謝症候群等）、食物摂取（例えば多食症、過食症、大食症、および強制的摂食等）、ならびに／またはエネルギー平衡および体重関連疾患、障害、および／または状態、より具体的には過体重および／または過剰な食物摂取を特徴とする疾患、障害、および状態。
【００２６】
本発明のペプチドは、特に、肥満症および体重過剰を含む過体重を特徴とする体重関連疾患、障害、および／または状態の治療（医薬品誘導性体重増加または禁煙後の体重増加を含む、体重減少の促進、体重減少の維持、および／または体重増加の防止により）、ならびにインスリン耐性等の肥満症および／または体重過剰、耐糖能障害、２型糖尿病、代
謝症候群、脂質異常症（高脂血症を含む）、血圧上昇、心臓障害（例えば冠動脈心疾患、心筋梗塞）、心血管障害、非アルコール脂肪肝疾患（非アルコール性脂肪性肝炎を含む）、関節障害（２次変形性関節炎を含む）、胃食道逆流、睡眠時無呼吸症、粥状動脈硬化、脳卒中、大血管疾患および細小血管疾患、脂肪症（例えば肝臓における）、胆石、ならびに胆嚢障害に関連する疾患、障害、および／または状態の治療に有用であると考えられる。
【００２７】
本発明のペプチドは、特に、肥満症および２型糖尿病、より具体的には肥満症の治療に有用であると考えられる。肥満症および体重過剰の医学的に認められている定義があることを理解する。
【００２８】
本発明による治療の候補対象は、例えば、体重（キログラム）を身長（メートル）で割り２乗することにより計算される肥満度指数（ＢＭＩ）を測定し、結果を定義と比較することにより識別され得る。Ｅｘｐｅｒｔ  Ｐａｎｅｌ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｖｅｒｗｅｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｏｂｅｓｉｔｙ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔｓによって採択され、健康専門家の主要団体によって支持されるヒトにおけるＢＭＩの推奨分類は次の通りである：体重不足＜１８．５ｋｇ／ｍ２、正常体重１８．５〜２４．９ｋｇ／ｍ２、体重過剰２５〜２９．９ｋｇ／ｍ２、肥満症（クラス１）３０〜３４．９ｋｇ／ｍ２、肥満症（クラス２）３５〜３９．９ｋｇ／ｍ２、極度肥満症（クラス３）は４０ｋｇ／ｍ２である（Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｖｅｒｗｅｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｏｂｅｓｉｔｙ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔｓ，Ｔｈｅ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｏｂｅｓｉｔｙ（ＮＡＡＳＯ）ａｎｄ
ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ  ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＨＬＢＩ）２０００）。本分類の修正は特定の民族および小児に対して使用され得る。
【００２９】
体重過剰および肥満症を評価する別の代替物は、腹囲を測定することによる。提案された分類法がいくつかあり、民族に基づきカットオフが異なる。例えば、国際糖尿病連合（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ）による分類によると、９４ｃｍ（ヨーロッパ人のカットオフ）を超える腹囲の男性、および８０ｃｍ（ヨーロッパ人のカットオフ）を超える腹囲の女性は、過剰な腹部脂肪のため、糖尿病、脂質異常症、血圧上昇、および心血管疾患のリスクが高い。別の分類法は、推奨されるカットオフが、男性１０２ｃｍ、および女性８８ｃｍである成人治療パネルＩＩＩの推奨に基づく。しかしながら、本発明のペプチドは、自己診断の体重増加の減少、ならびに生活様式、遺伝的考察、遺伝、および／または他の要因による肥満になるリスクを減少させるためにも使用され得る。
【００３０】
本発明のペプチドは、ヒトを含む動物への投与時、その動物の体重および／または体重増加を減少させると考えられる。
ある適応症に対する併用療法
本発明のペプチド、組成物、および方法は、１つ以上の他の薬学的に活性な化合物と併用して投与することにより、前述の疾患、適応症、状態、もしくは症候群のいずれか、またはいずれの疾患、適応症、状態、もしくは症候群を治療するために使用され得る。そのような併用投与は、本発明のペプチドおよび１つ以上の他の薬学的に活性な化合物の両方を含む単回投薬形態によって行われ、そのような単回投薬形態は、錠剤、カプセル、スプレー、吸入粉末、注射可能液体等を含む。別の方法としては、併用投与は、１つの投薬形態が本発明のペプチドを含み、もう一方の投薬形態が別の薬学的に活性な化合物を含む、２つの異なる投薬形態の投与によって行われ得る。この場合、投薬形態は、同じであって
も、異なってもよい。併用療法を制限することを意味しないが、以下は採用され得るある併用療法を例示する。
【００３１】
マウス肥満症モデル
添付の図面は、Ｃ５７ＢＬ／Ｊマウス（食餌は２１％の脂肪＋６０％のフルクトース−水から構成される）における食餌誘発肥満症モデルにおけるＳｈＫ−１８６の肥満症防止の有効性を示す。８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスをＨａｒｌａｎ  Ｃｏ．（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）から購入した。Ｈａｒｌａｎ  Ｃｏ．（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）から購入した特別な高脂肪食（＃ＴＤ８８１３７、脂肪２１％）をマウスに与え、飲用に６０％のフルクトース溶液を与えた。マウスは、１日おきに皮下注射により、ビヒクル（Ｐ６Ｎ）またはＳｈＫ−１８６（２０、１００、もしくは５００μｇ／ｋｇ）を投与された。動物を１日おきに量った。ＲｏｃｈｅのＡｃｃｕ−Ｃｈｅｋコンパクトグルコメーターを用いて、尾静脈サンプリングにより、血中グルコースレベルを６日おきに監視した。動物実験プロトコルは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｉｒｖｉｎｅの動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ
ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）により承認された。
【００３２】
ＣＴ走査の前にマウスを一晩絶食させた。全てのＣＴ取得は、Ｉｎｖｅｏｎ（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）前臨床ＣＴスキャナで実施された。走査中、２％のイソフランを使用し、マウスをスキャナ上に仰臥位に横たえた。０．１の補整係数で、高速ＭＡＰアルゴリズムを用いて、１２８×１２８マトリックとして画像を再構築した。ＷＡＴのＣＴ  ＨＵは、水ＣＴ密度（ＣＴ  ＨＵ＝０）および空気ＣＴ密度（ＣＴ  ＨＵ＝−１０００）の線形補間を用いて、ＣＴデータを較正することにより得た。走査手順後、動物を麻酔から回復させ、ケージに収容し、正常な回復のため監視した。全ての走査データをフルリストモードで取得し、フーリエ層間変換（ｒｅｂｉｎｎｉｎｇ）アルゴリズムを用いて層間変換された、単一フレームの３次元サイグラムに保存した。画像は、０．５のＮｙｑｕｉｓｔカットオフで、Ｈａｎｎｉｎｇ  Ｆｉｌｔｅｒを使用して、２次元フィルタ補正逆投影を用いて再構築され、Ｃｏ−５７減衰走査データを用いて減衰を補正した。全てのＣＴデータ分析は、ＰＭＯＤ３．０ソフトウェアを用いて行われた。
【００３３】
１８Ｆ−ＦＤＧをＰＥＴＮＥＴから購入した。ＣＴまたはＰＥＴ走査前にマウスを一晩絶食させた。ＰＥＴ走査に関して、動物は、減菌生理食塩水中０．１〜０．２ｍＣｉの１８Ｆ−ＦＤＧで注射された。約０．０２〜０．０５ｍｌが２％のイソフランにより静脈内（尾静脈）投与され、動物をケージの中で６０分間目覚めさせたままにし、１８Ｆ−ＦＤＧを分布させ、取り込ませた。走査中、２％のイソフランを使用し、マウスをスキャナ上に仰臥位に横たえた。全てのＰＥＴ取得は、Ｉｎｖｅｏｎ（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）前臨床ＰＥＴスキャナで実施された。ＰＥＴデータを３０分間取得した。ＰＥＴスキャナを使用したとき、動物の位置を変更することなく、ＰＥＴ撮像直後にＣＴデータを得た。ＰＥＴ画像は、減衰、拡散、不規則、および不動時間について補正された。０．１の補整係数で、高速ＭＡＰアルゴリズムを用いて、１２８×１２８マトリックとして画像を再構築した。ＢＡＴおよびＷＡＴのＣＴ  ＨＵは、水ＣＴ密度（ＣＴ  ＨＵ＝０）および空気ＣＴ密度（ＣＴ  ＨＵ＝−１０００）の線形補間を用いて、ＣＴデータを較正することにより得た。走査手順後、動物を麻酔から回復させ、ケージに収容し、正常な回復のため監視した。
【００３４】
全ての走査データをフルリストモードで取得し、フーリエ層間変換（ｒｅｂｉｎｎｉｎｇ）アルゴリズムを用いて層間変換された、単一フレームの３次元サイグラムに保存した。画像は、０．５のＮｙｑｕｉｓｔカットオフで、Ｈａｎｎｉｎｇ  Ｆｉｌｔｅｒを使用して、２次元フィルタ補正逆投影を用いて再構築され、Ｃｏ−５７減衰走査データを用いて減衰を補正した。全てのＭｉｃｒｏＰＥＴおよびＣＴデータ分析は、ＰＭＯＤ３．０ソ
フトウェアを用いて行われた。
【００３５】
全てのマウスに、試験を通して高脂肪／高フルクトース食餌を与えた。皮下注射により、１日おきにマウスにビヒクル（Ｐ６Ｎ）またはＳｈＫ−１８６（２０、１００、もしくは５００μｇ／ｋｇ）を与えた。研究の開始時に体重を平均体重に基準化する。本研究における全てのマウスは、雄であった。反復測定ＡＮＯＶＡを用いることにより、全てのＳｈＫ−１８６用量に関して、ｐ値＜０．０００１。
【００３６】
図１Ａに示されるように、１日おきに皮下投与により投与されたＳｈＫ−１８６は、ビヒクル処置されたマウスと比較して、用量依存様式で体重増加（全てのＳｈＫ−１８６用量に関して、ｐ値＜０．０００１）を大幅に減少させた。また、体重増加におけるこの減少は、図１Ｂに示されるように、血中グルコースレベルを変更することなく生じた。
【００３７】
図２Ａは、血漿中のトリグリセリドおよび非エステル化脂肪酸レベルを示す。図２Ｂは、血漿中のコレステロール、ＨＬＤ、およびＬＤＬを示す。心穿刺により血液をヘパリン管に採取し、血漿を分離し、−２０℃で保管した。血漿中の脂質レベルは、製造者の推奨を使用して、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＣＯＢＡＳ  ＩＮＴＥＧＲＡ  ４００  Ｐｌｕｓを用いて、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＤａｖｉｓのＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙで分析された。ｐ値＝０．０１３２５、ＮＥＦＡ、ｐ＜０．０５、トリグリセリド。
【００３８】
図３Ａの矢印により強調され、図３Ｂの棒グラフに示されるように、ＳｈＫ−１８６処置は、ビヒクル処置されたマウスと比較して、食餌誘発肥満症モデルにおいて、白色脂肪組織の容量を大幅に減少させた（ｐ＝０．０００７０８）。
【００３９】
図４Ａ〜４Ｄは、測定段階の開始時にビヒクル（対照）またはＳｈＫ−１８６を投与されたマウスによる摂食および飲水を示す。全グラフにおいて、最初の２４時間後、ｐ＜０．０５。測定を行う前に、マウスを代謝ケージで２日間馴化させた。対照マウスには、暗周期中に食餌および水を与え、明周期中に「休止」し、一方で、ＳｈＫ−１８６処置されたマウスには、暗周期と明周期中の両方で食餌および水を与えた。
【００４０】
図５Ａ〜５Ｄは、ビヒクル対照（ｎ−２）およびＳｈＫ−１８６処置マウス（ｎ＝２）における呼吸交換率（ＲＥＲ）およびエネルギー消費を示す。対照が純脂肪を代謝しているとき、ＲＥＲは０．７０であり、一方で、対照が純炭水化物を代謝しているとき、ＲＥＲは１．０である。ＳｈＫ−１８６処置マウスは、特に明周期中、脂肪より炭水化物を多く代謝する。ＳｈＫ−１８６処置マウスは、日中のエネルギー消費が多いが、夜のエネルギー消費はほぼ同じである。
【００４１】
図６Ａおよび６Ｂは、ＰＥＴスキャンを示し、褐色脂肪組織における１８フルオロ−デオキシグルコース（１８ＦＤＧ）取り込みは矢印で強調される。図６Ａは、ＳｈＫ−１８６（１００および５００μｇ／ｋｇで）が褐色脂肪組織による１８ＦＤＧ取り込みを誘発することを示す。図６Ｂは、褐色脂肪組織による１８ＦＤＧ取り込みがプロプラノロール（５ｍ／ｋｇ）により阻害されることを示す。
【００４２】
図７は、ＰＥＴ撮像を示し、骨格筋による１８ＦＤＧ取り込みは矢印によって強調される。ＳｈＫ−１８６（２０、１００、および５００μｇ／ｋｇ）は、骨格筋による１８ＦＤＧ取り込みを増加させたが、プロプラノロール（５ｍｇ／ｋｇ）はこの取り込みを阻害しなかった。ＰＥＴ走査は、図６と同じ様式で実施された。
【００４３】
肥満症および関連代謝症候群の併用療法
本発明の１つ以上のペプチドは、肥満症および／または体重過剰等の様々な体重および摂食関連障害の治療に有用である１つ以上の他の薬理学的に活性な薬剤（複数可）、特にエネルギー消費、糖分解、糖新生、グリコーゲン分解（ｇｌｕｃｏｇｅｎｏｌｙｓｉｓ）、脂肪分解、脂肪生成、脂肪吸収、脂肪蓄積、脂肪排出、空腹および／もしくは満腹および／もしくは欲求機構、食欲／意欲、食物摂取、または胃腸運動に影響を及ぼす他の抗肥満薬と併用することができる。エネルギー摂取を減少させる薬物は、一部、体重軽減プログラムにおける行動療法の付加物として使用される、食欲低下薬と称される様々な薬理学的作用剤を含む。
【００４４】
一般に、後述する肥満症制御剤または医薬品の総投薬量は、本発明の１つ以上のペプチドと併用して使用されるとき、単回用量または２〜４の分割用量で、０．１〜３，０００ｍｇ／日、好ましくは約１〜１，０００ｍｇ／日、より好ましくは約１〜２００ｍｇ／日の範囲であり得る。しかしながら、正確な用量は、担当の医師により決定され、投与される化合物の有効性、患者の年齢、体重、状態、および応答等のそのような要因に依存する。
【００４５】
本発明の１つ以上のペプチドは、他の抗糖尿病薬等の糖尿病の治療に有用である１つ以上の他の薬理学的に活性な薬剤（複数可）と併用することができる。
本発明の１つ以上のペプチドは、加えて、または別の方法としては、インスリン耐性等の肥満症および／または体重過剰、耐糖能障害、２型糖尿病、代謝症候群、脂質異常症（高脂血症を含む）、血圧上昇、心臓障害（例えば冠動脈心疾患、心筋梗塞）、心血管障害、非アルコール性脂肪性肝疾患（非アルコール性脂肪性肝炎を含む）、関節障害（２次変形性関節炎を含む）、胃食道逆流、睡眠時無呼吸症、粥状動脈硬化、脳卒中、大血管疾患および細小血管疾患、脂肪症（例えば肝臓における）、胆石、ならびに胆嚢障害に関連する疾患、障害、および／または状態の治療に有用である１つ以上の他の薬理学的に活性な薬剤（複数可）とさらに併用され得る。
【００４６】
本発明のさらなる態様によると、任意に、薬学的に許容される希釈剤もしくは担体と共に、本発明による薬理学的有効量のペプチド、またはその薬学的に許容される塩の投与と、任意に薬学的に許容される担体と共に、次の（１）インスリンおよびインスリン類似体、（２）メグリチニド（例えばレパグリニドおよびナテグリニド）等のスルホニル尿素（例えばグリピジド）および食事グルコース調節物質（「短時間作用型分泌促進物質」と呼ばれることがある）を含むインスリン分泌促進物質、（３）インクレチン作用を改善する薬剤、例えばジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−４）阻害剤（例えばビルダグリプチン、サクサグリプチン、およびシタグリプチン）、およびグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）作動薬（例えばエクセナチド）、（４）チアゾリジンジオン（例えばピオグリタゾンおよびロシグリタゾン）等のペルオキシゾーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲｙ）を含むインスリン感受性促進薬、およびＰＰＡＲα、γ、δ活性のいずれの組み合わせを有する薬剤、（５）肝グルコース平衡を調節する薬剤、例えばビグアニド（例えばメトホルミン）、フルクトース、１，６−ビスホスファターゼ阻害剤、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、グリコーゲンシンターゼキナーゼ阻害剤、およびグルコキナーゼ活性化剤、（６）α−グルコシダーゼ阻害剤（例えばミグリトールおよびアカルボース）等の腸からのグルコースの吸収を減少させる／遅らせるように設計される薬剤、および（７）アミリン類似体（例えばプラムリンチド）等のグルカゴンの作用を拮抗する、もしくはその分泌を減少させる薬剤、（７）ナトリウム依存グルコース輸送体２（ＳＧＬＴ−２）阻害剤（例えばダパグリフロジン）等の腎臓によるグルコースの再吸収を防止する薬剤、（８）アルドースレダクターゼ阻害剤（例えばエパルレスタットおよびラニレスタット）等の長期高血糖の合併症を治療するように設計される薬剤、および細小血管症に関連する合併症を治療するために使用される薬剤、（９）ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（スタチン、例えばロスバスタチン）等の抗脂質異常症剤、および他のコレステロール低下剤、Ｐ
ＰＡＲａ作動薬（フィブラート、例えばゲムフィブロジルおよびフェノフィブラート）、胆汁酸封鎖剤（例えばコレスチラミン）、（１０）コレステロール吸収阻害剤（例えば植物ステロール（即ち、フィトステロール）、合成阻害剤）、コレステリルエステル転移タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤、回腸胆汁酸運搬系の阻害剤（ＩＢＡＴ阻害剤）、胆汁酸結合樹脂、ニコチン酸（ナイアシン）およびその類似体、プロブコール等の抗酸化剤、およびオメガ３脂肪酸、（１１）β遮断剤（例えばアテノロール）、α遮断剤（例えばドキサゾシン）、および混合α／β遮断剤（例えばラベタロール）等のアドレナリン受容体拮抗薬を含む降圧薬、α−２作動薬（例えばクロニジン）を含むアドレナリン受容体作動薬、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤（例えばリシノプリル）、カルシウムチャネル遮断剤（ジヒドロピリジン（例えばニフェジピン）、フェニルアルキルアミン（例えばベラパミル）、およびベンゾチアゼピン（例えばジルチアゼム）等）、アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬（例えばカンデサルタン）、アルドステロン受容体拮抗薬（例えばエプレレノン）、中枢α作動薬（例えばクロニジン）等の中枢作用アドレナリン剤、および利尿薬（例えばフロセミド）、（１２）線維素溶解等の抗血栓薬を含む止血修飾薬、トロンビン拮抗薬、ビラ（Ｖｉｌａ）因子阻害剤、ビタミンＫ拮抗薬（例えばワルファリン）、ヘパリン、およびその低分子量類似体等の抗凝固剤、Ｘａ因子阻害剤、ならびに直接的トロンビン阻害剤（例えばアルガトロバン）、シクロオキシゲナーゼ阻害剤（例えばアスピリン）、アデノシン２リン酸（ＡＤＰ）受容体阻害剤（例えばクロピドグレル）、ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えばシロスタゾール）、糖タンパク質ＩＩＢ／ＩＩＡ阻害剤（例えばチロフィバン）、およびアデノシン再取り込み阻害剤（例えばジピリダモール）等の抗血小板薬、（１４）ノルアドレナリン作動薬（例えばフェンテルミン）およびセロトニン作用薬（例えばシブトラミン）を含む食欲抑制剤（例えばエフェドリン）等の抗肥満症剤、膵リパーゼ阻害剤（例えばオルリスタット）、ミクロソーム転移タンパク質（ＭＴＰ）修飾薬、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）阻害剤、およびカンナビノイド（ＣＢ１）受容体拮抗薬（例えばリモナバン）、（１５）オレキシン受容体修飾薬およびメラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ）修飾薬等の摂食行動改質剤、（１６）グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）受容体修飾薬、（１７）神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）／ＮＰＹ受容体修飾薬、（１８）ピルビン酸デヒドロゲナーゼ  キナーゼ（ＰＤＫ）修飾薬、（１９）セロトニン受容体修飾薬、（２０）レプチン／レプチン受容体修飾薬、（２１）グレリン／グレリン受容体修飾薬、または（２２）選択的セロトニン取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）（例えばフルオキセチン）、ノルアドレナリン再取り込み阻害剤（ＮＡＲＩ）、ノルアドレナリ−セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＮＲＩ）、３重モノアミン再取り込み遮断剤（例えばテソフェンシン）、およびモノアミンオキシダーゼ阻害剤（ＭＡＯＩ）（例えばトロキサトンおよびアミフラミン）等のモノアミン伝達調節剤、または薬学的に許容される���、溶媒和、そのような塩もしくはそのプロドラッグの溶媒和から選択される薬剤のうちの１つ以上の、そのような治療上の処置を必要とするヒト等の哺乳類への同時、逐次、または個別投与を含む併用療法が提供される。
【００４７】
本発明の追加のさらなる態様によると、任意に、薬学的に許容される担体と共に、薬理学的有効量の本発明による化合物、またはその薬学的に許容される塩の投与と、非常に低カロリーの食事（ＶＬＣＤ）もしくは低カロリーの食事（ＬＣＤ）の同時、逐次、または個別投与を含む併用治療が提供される。
【００４８】
ペプチドを作製する方法
一般に、本発明のペプチドは、固相合成により合成され、当該技術分野において既知の方法に従い精製され得る。本発明のペプチドを調製するために、様々な樹脂および試薬を利用する多くの周知の手順のいずれかが使用され得る。そのようは方法において、本発明のペプチドの合成は、固相法の一般原則に従い、所望されるアミノ酸残基を１つずつ成長ペプチド鎖に逐次組み込むことにより行うことができる。これらの方法は、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｂ．，Ｓｏｌｉｄ  ｐｈａｓｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｎｏｂｅｌ  ｌｅ
ｃｔｕｒｅ）．Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  ２４：７９９−８１０（１９８５）、およびＢａｒａｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２，Ｇｒｏｓｓ，Ｅ．ａｎｄ  Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｊ．，Ｅｄｓ．Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １−２８４（１９８０）を含む多くの参考文献に開示されている。ペプチドの化学合成において、様々なアミノ酸残基の反応性側鎖基は、保護基が除去されるまで、その部位で化学反応が生じるのを防止する好適な保護基で保護される。その物質がカルボキシル基で反応する間、アミノ酸残基のαアミノ基またはその断片を保護し、その後αアミノ保護基を選択的に除去し、その部位で後続反応を起こさせるのも一般的である。固相合成法および溶液相合成法において、特定の保護基が開示され、既知である。αアミノ基は、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）および置換されたベンジルオキシカルボニル（ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、ｐ−ビフェニル−イソプロポキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、およびｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル（Ｍｏｚ）等）等のウレタン型の保護基、およびｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、およびアリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）等の脂肪族ウレタン型保護基を含む、好適な保護基により保護され得る。αアミノ保護に関しては、Ｆｍｏｃが好ましい。グアニジノ基は、ニトロ、ｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）、Ｚ、ペンタメチルクロマンスルホニル（Ｐｍｃ）、アダマンチルオキシカルボニル、ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル（Ｐｂｆ）、およびＢｏｃ等の好適な保護基によって保護され得る。アルギニンに関しては、ＰｂｆおよびＰｍｃが好ましい保護基である。
【００４９】
固相合成は、保護されたαアミノ酸を好適な樹脂にカップリングすることにより、ペプチドのＣ末端端部から開始される。そのような開始材料は、アミド連結によるαアミノ保護されたアミノ酸を４−（２’，４’−ジメトキシルフェニル−アミノメチル−フェノキシ（Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ）樹脂、４−（２’，４’−ジメトキシルフェニル−アミノメチル）−フェノキシアセトアミド−ノルロイシル−ＭＢＨＡ樹脂、アミノ−キサンテン−３−イルオキシ−メリフィエル（ｍｅｒｉｆｉｅｌ）樹脂（Ｓｉｅｂｅｒ  Ａｍｉｄｅ）樹脂への、もしくはエステル連鎖によるｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール（Ｗａｎｇ）樹脂、２−塩化クロロトリチル樹脂への付加により、または当該技術分野において周知の他の手段により調製される。Ｆｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂支持体は、商業的に入手可能であり、一般に、現実可能なときに使用される。樹脂は、逐次アミノ酸を付加するために、必要に応じて反復周期を通して運ばれる。
【００５０】
αアミノＦｍｏｃ保護基は、塩基条件下で除去される。Ｎ，Ｎジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のピペリジン、ピペラジン、ジエチルアミン、またはモルホリン（２０〜４０％ｖ／ｖ）はこの目的に使用され得る。αアミノ保護基の除去後、後続の保護されたアミノ酸を所望される順序で段階的にカップリングして、中間体の保護ペプチド樹脂を得る。
【００５１】
ペプチドの固相合成においてアミノ酸のカップリングに使用された活性化試薬は、当該技術分野において周知である。ペプチドが合成された後、所望される場合、直交的に保護された側鎖保護基は、ペプチドのさらなる誘導体化のために当該技術分野において周知の方法を用いて除去され得る。
【００５２】
ペプチドにおける反応基は、固相合成中または樹脂からの除去後のいずれかのときに、選択的に修飾され得る。
最後に、ペプチドは、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（ＰＯ３Ｈ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ、Ｅｔ）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｔｙｒ、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＮＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（
ｐ−ＣＯ２Ｈ）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−アスパラギン酸塩、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−アスパラギン酸塩、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−グルタミン酸塩、またはＡＥＥＡｃ−Ｄ−グルタミン酸塩の付加によるものを含む、用途の好ましい実施形態のいくつかを得るために、それらのＮ末端で修飾され得る。
【００５３】
本発明のペプチドは、空気酸化、または樹脂からの粗ペプチドの開裂後、グルタチオン交換系を用いて環化され得る。様々な特定の環化方法は当該技術分野において既知である。環化ペプチドは、Ｃ１８カラム等の好適なカラムを用いて逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）により精製され得るか、またはペプチドの大きさもしくは電荷に基づく方法等の他の分離または精製方法も採用することができる。一旦精製されると、ペプチドは、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、アミノ酸分析、質量分析法等のいずれの数の方法によって特徴付けされ得る。
【００５４】
Ｃ末端置換されたアミド誘導体またはＮ−アルキル基を有する本発明のペプチドに関して、合成は、保護されたαアミノ酸を好適な樹脂にカップリングすることによりペプチドのＣ末端端部から開始される、固相合成により進めることができる。固相上で置換されたアミド誘導体を調製するためのそのような方法は、当該技術分野において説明されてきた。例えば、Ｂａｒｎ  Ｄ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ａｎ  ａｒｒａｙ  ｏｆ  ａｍｉｄｅｓ  ｂｙ  ａｌｕｍｉｎｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ  ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｃｌｅａｖａｇｅ  ｏｎ  ｒｅｓｉｎ  ｂｏｕｎｄ  ｅｓｔｅｒｓ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，３７：３２１３−３２１６（１９９６）、ＤｅＧｒａｄｏ
Ｗ．Ｆ．ａｎｄ  Ｋａｉｓｅｒ  Ｅ．Ｔ．，Ｓｏｌｉｄｐｈａｓｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｏｎ  ａ  ｐｏｌｙｍｅｒ  ｂｏｕｎｄ  ｏｘｉｍｅ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｇｍｅｎｔｓ  ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ａ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ２６−ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎａｌｏｇｕｅ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，４７：３２５８３２６１（１９８２）を参照。
【００５５】
合成は主に固相Ｆｍｏｃ化学を参照に説明されてきたが、本発明の環状ペプチドを作製するために、限定するものではないが、例として、Ｂｏｃ化学、溶液化学、および他の化学を採用する方法、ならびに合成方法等の、他の化学および合成方法が採用され得ることを理解する。
【００５６】
本明細書で使用されるように、特定の化学式または化学名を含む、本発明によるペプチドに対する全ての参照は、全てのその薬学的に許容される塩、溶媒和、水和物、多形体、プロドラッグ、代謝物、立体異性体、および互変異性の異性体を含むことが意図されることを理解するべきである。
【００５７】
本発明のペプチドは、いずれの薬学的に許容される塩の形態であり得る。用語「薬学的に許容される塩」とは、無機塩基もしくは有機塩基および無機酸もしくは有機酸を含む薬学的に許容される非毒性塩基または酸から調製される塩を指す（“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ”，Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ，Ｐ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ，ＩＵＰＡＣ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２を参照）。無機塩基に由来する塩は、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第二鉄、第一鉄、リチウム、マグネシウム、マンガン塩、マンガン、カリウム、ナトリウム、亜鉛等を含む。アンモニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、およびナトリウム塩が特に好ましい。薬学的に許容される有機非毒性塩基に由来する塩は、１級、２級、３級アミン、天然に存在する置換されたアミン、環状アミンおよび塩基性イオン交換樹脂（アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタ
ノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチル−モルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミン）等を含む置換されたアミンの塩を含む。本発明のペプチドが塩基であるとき、酸添加塩は、無機酸および有機酸を含む、薬学的に許容される非毒性酸から調製され得る。そのような酸は、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、樟脳スルホン酸、カルボン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸塩、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、マロン酸、粘液酸、硝酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸等を含む。本発明のペプチドの酸添加塩は、ペプチドに好適な溶媒および過乗な酸（塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、クエン酸、酒石酸、マレイン酸、コハク酸、またはメタンスルホン酸等）において調製される。酢酸、酢酸アンモニウム、およびＴＦＡ酸塩形態が特に有用である。
【００５８】
薬学的組成物
本発明は、本発明の１つ以上のペプチドを含む薬学的組成物、および薬学的に許容される担体を提供する。薬学的に許容される担体と共に製剤化されるとき、本発明の化合物は、全組成物の０．００１〜９５重量％等の０．０００１〜９９．５重量％の濃度で薬学的組成物に存在し得る。担体の選択は、当業者の知識の範囲内であり、例えば投与様式、投薬形態、ならびに溶解度および安定性等の活性化合物の物理的性質に依存する。本明細書で使用される、用語「担体」とは、治療的に不活性な成分を指す。投薬形態は、固体、半固体、液体、または自己ゲル化系であり得る。製剤は、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、標的放出、プログラム放出の製剤を含む、即時および／または徐放放出であり得る。担体は、液体製剤であり得、好ましくは、緩衝液、等張液、水溶液である。薬学的に許容される担体は、以下の記載される、希釈剤、担体等の賦形剤、および安定剤、防腐剤、可溶化剤、緩衝剤等の添加剤も含む。
【００５９】
製剤の賦形剤は、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、アカシア、ポリエチレングリコール、マンニトール、塩化ナトリウム、およびクエン酸ナトリウムを含み得る。注射または他の液体投与製剤に関して、少なくとも１つ以上の緩衝成分を含む水が好ましく、安定剤、防腐剤、および可溶化剤も採用され得る。好ましい実施形態は、注射用の水（ｐＨ６）に、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、０．８％（ｗ／ｖ）のＮａＣｌ、０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０から構成される溶液中１、１０、または２５ｍｇ／ｍＬのペプチドを含む液体製剤を含む。
【００６０】
固体投与製剤に関して、デンプン、糖類、セルロース誘導体、脂肪酸等の様々な増粘剤、充填剤、バルク、および担体添加剤のうちのいずれかが採用され得る。局所投与製剤に関して、様々なクリーム、軟膏、ゲル、ローション等のうちのいずれかが採用され得る。
【００６１】
大半の薬学的製剤に関して、非活性成分は、重量または容量で調製物の大部分を構成する。薬学的製剤に関して、投薬量がある期間にわたって本発明のペプチドの送達を提供するように製剤化され得るように、様々な測定放出、徐放放出、または持続放出の製剤および添加剤のうちのいずれかが採用され得ることも想定される。一般に、患者に投与される本発明のペプチドの実際の量は、投与様式、使用される製剤、および所望される応答によりかなり広範囲に変動する。実用性において、本発明のペプチドは、従来の薬学的配合技術に従い、薬学的担体との混合物に活性成分として混合され得る。担体は、投与に所望される調製物の形態、例えば、経口、非経口（静脈内を含む）、尿道、膣、鼻、頬、舌下等の幅広い形態を取り得る。
【００６２】
経口投薬形態用の組成物の調製において、例えば懸濁液、エリキシル剤、および溶液等の経口液体調製物の場合、例えば水、グリコール、油、アルコール、風味剤、防腐剤、着色剤、または例えば粉末、硬質および軟質のカプセル、ならびに錠剤等の経口固体調製物の場合、デンプン、糖類、微結晶セルロース、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤等の担体等の通常の薬学的培地のいずれかが採用され得る。
【００６３】
錠剤およびカプセルは、投与が容易であるため、有利な経口投薬単位形態を表す。所望される場合、錠剤は標準的な水性または非水性技術によってコーティングされ得る。そのような治療的に有用な組成物における活性ペプチドの量は、有効投薬量が得られるようなものである。別の投薬単位形態において、シート、ウェハ、錠剤等の舌下構築物が採用され得る。
【００６４】
錠剤、ピル、カプセル等は、結合剤（ポビドン、トラガカントガム、アカシア、コーンスターチ、またはゼラチン等）、希釈剤、充填剤（微結晶セルロース等）、賦形剤（リン酸ニカルシウム等）、崩壊剤（コーンスターチ、ジャガイモデンプン、またはアルギン酸等）、防腐剤、着色剤、潤滑剤（ステアリン酸マグネシウム等）、および甘味剤（スクロース、ラクトース、またはサッカリン等）も含み得る。投薬単位形態がカプセルであるとき、上記の種類の材料に加えて、脂肪油等の液体担体を含み得る。様々な他の材料がコーティング剤として、または投薬単位の物理的形態を修飾するために利用され得る。例えば、錠剤は、セラック、糖、またはその両方でコーティングされ得る。シロップまたはエリキシル剤は、活性成分に加えて、甘味剤としてスクロース、防腐剤としてメチルおよびプロピルパラベン、染料、およびチェリーまたはオレンジ風味の風味剤を含み得る。
【００６５】
経口送達用に製剤化される場合、ペプチドは、好ましくは、腸溶保護剤に封入されるように、より好ましくは錠剤またはカプセルが胃に移行されるまで、任意に小腸の一部にさらに移行するまで放出されないように製剤化され、作製される。この用途の文脈において、用語腸溶コーティングまたは材料とは、本質的に無傷で胃を通過するが、胃を通過した後に崩壊し、活性薬物物質を放出するコーティングまたは材料を指すことを理解する。使用され得る材料は、酢酸フタル酸セルロース、コハク酸ヒドロキシプロピルメチルエチルセルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ酢酸フタル酸ビニル、およびメタクリル酸メタクリル酸メチルコポリマーを含む。採用される腸溶コーティングは、主に胃の外側の部位で投薬形態の溶解を促進し、腸溶コーティングがおよそ少なくとも５．５のｐＨ、より好ましくは約６．０〜約８．０のｐＨで溶解するように選択され得る。
【００６６】
腸溶コーティングの溶解時に腸での取り込みを増加させるために、様々な浸透増進剤のいずれかが採用され得る。一態様では、浸透増進剤は、傍細胞または経細胞のいずれかの輸送系を増加させる。
【００６７】
そのような浸透増進剤の代表的な非限定的な例としては、カルシウムキレート剤、胆汁塩（コール酸ナトリウム等）、および脂肪酸が挙げられる。いくつかの実施形態では、腸プロテアーゼの基材として作用するペプチドまたはポリペプチドがさらに添加される。ペプチドは、非経口的にも投与され得る。これらの活性ペプチドの溶液または懸濁液は、例えばヒドロキシ−プロピルセルロースと混合された例えば水中で調製され得る。分散液は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、および油中のそれらの混合物中で調製され得る。これらの調製物は、任意に、微生物の成長を防止するために、防腐剤を含み得る。
【００６８】
注射可能な使用に好適な薬学的形態は、減菌水溶液または分散液、および減菌注射可能
溶液もしくは分散液の即時調製物用の減菌粉末を含む。全ての場合において、本形態は、減菌でなくてはならず、シリンジによって投与することが可能な程度に流体でなければならない。本形態は、製造および保存の状態下で安定していなければならず、細菌および真菌等の微生物の汚染作用を防がなければならない。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、または液体ポリエチレングリコール、それらの好適な混合物、および植物油を含む溶媒または分散培地であり得る。
【００６９】
本発明のペプチドは、鼻投与により治療的に適用され得る「鼻投与」とは、本発明の環状ペプチドのいずれかの経鼻投与のいずれかの形態を意味する。ペプチドは、生理食塩水、クエン酸塩、または他の一般的な賦形剤もしくは防腐剤を含む溶液等の水溶液に存在する。ペプチドは、乾燥または粉末製剤中にも存在し得る。
【００７０】
水溶液中に存在する場合、ペプチドは、約ｐＨ４〜約ｐＨ７等のいずれの生理学的に許容されるｐＨであり得る生理食塩水、酢酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、または他の緩衝剤によって適切に緩衝され得る。リン酸緩衝生理食塩水、生理食塩水と酢酸塩の緩衝剤等の緩衝剤の組み合わせも採用され得る。生理食塩水の場合、０．９％の食塩水溶液が採用され得る。酢酸塩、リン酸塩、クエン酸塩等の場合、５０ｍＭの溶液が採用され得る。緩衝剤に加えて、細菌および他の微生物の成長を防止または制限するために、好適な防腐剤が採用され得る。採用され得るそのような防腐剤の１つは、０．０５％の塩化ベンザルコニウムである。
【００７１】
代替えの実施形態では、本発明のペプチドは、肺に直接投与され得る。肺内投与は、吸気中患者によって起動されるとき、本発明のペプチドの定量ボーラスの自己投与を可能にするデバイスである定量吸入器によって実施され得る。乾燥粉末微粒子を作製するために、微小粉砕、スプレー乾燥、および急速凍結エアロゾル後の凍結乾燥を含むがこれらに限定されない様々な異なる技術のいずれかが使用され得る。
【００７２】
本発明のペプチドは、持続放出製剤の注射によって治療的に投与され得る。一般に、多くの注射可能であり、生腐食性であるポリマーのうちのいずれかが持続放出注射可能製剤に採用され得る。別の方法としては、他の製剤が、ナノ／微小球、リポソーム、エマルジョン（油中水型エマルジョン等）、ゲル、不溶性塩、または油中懸濁液のうちの１つ以上を含み得る、皮下注射を可能にする製剤を含む、他の持続放出製剤が採用され得る。製剤は、注射がペプチドの濃度および量、採用される材料の持続放出速度、および当業者に既知の他の要因により、毎日、毎週、毎月、または他の周期的な態様で必要とされるようなものであり得る。
【００７３】
投与経路
本発明の１つ以上のペプチドを含む組成物が注射により投与される場合、注射は、静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、または当業者に既知の他の手段であり得る。一般に、本発明のペプチドが細胞の表皮にわたって導入されるいずれの投与経路が採用され得る。よって、投与手段は、粘液膜、頬投与、経口投与、経皮投与、吸入投与、鼻投与、尿道投与、膣投与等を通した投与を含み得る。
【００７４】
治療有効量
一般に、患者に投与される本発明のペプチドの実際の量は、投与様式、患者（体重、性別、健康状態、および食事を含む）、使用される製剤、および所望される応答によりかなり広範囲に変動する。おおよその所望される治療効果をもたらすのに十分な量の治療の投薬量は、前述の手段のうちのいずれか、または当該技術分野において既知のいずれの他の手段により投与される。本発明のペプチドは、極めて活性である。例えば、ペプチドは、選択される特定のペプチド、所望される治療応答、投与経路、製剤、および当業者に既知
の他の要因により、約０．００１、０．０１、０．５、１、５、５０、１００、５００、１０００、５０００、１００００、または２５０００ｕｇ／ｋｇ体重で（単回投与として、または分割日用量で）投与され得る。
【００７５】
本発明は、投与時、活性な薬理学的ペプチドになる前、代謝プロセスによって化学変換を受ける本発明のペプチドのプロドラッグを含むことがさらに意図される。一般に、そのようなプロドラッグは、生体内で容易に変換可能である本発明のペプチドの機能性誘導体である。プロドラッグは、活性親ペプチド薬物を生体内で放出するいずれの共有結合化合物である。好適なプロドラッグ誘導体の選択および調製の従来の手順は、例えば「Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ編、１９８５年に記載される。
【００７６】
本発明のペプチドのある修飾は、ペプチドの半減期を強化するために行われ得る（Ｇ．Ｐａｓｕｔａ  ａｎｄ  Ｆ．Ｍ．Ｖｅｒｏｎｅｓｅ（２００７）“Ｐｏｌｙｍｅｒ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ，ｒｅｃｅｎｔ  ａｃｈｉｅｖｅｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ”Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２（８−９）：９３３−９６１を参照）。
【００７７】
本発明は、本発明のある実施例または実施形態を参照に上記に説明されてきたが、様々な追加、削除、変更、および修正が、本発明の意図される趣旨および範囲から逸脱することなく、これらの説明される実施例および実施形態に対して行うことができることを理解する。例えば、一実施形態または実施例のいずれの要素、ステップ、構成材、成分、組成物、反応物、部分、または一部は、特に記載のない限り、またはそうすることで意図される使用に関してその実施形態または実施例に不適切さを付与しない限り、別の実施形態または実施例に組み込まれるか、またはそれと共に使用することができる。また、方法またはプロセスのステップが特定の順序で記載または列挙されている場合、そのようなステップの順序は、特に記載のない限り、またはそうすることでその意図される目的に関してその方法またはプロセスに不適切さを付与しない限り、変更することができる。加えて、本明細書に記載されるいずれの発明または実施例の要素、ステップ、構成材、成分、組成物、反応物、部分、または一部は、特に注記しない限り、任意に、他の要素、ステップ、構成材、成分、組成物、反応物、部分、または一部の実質的な不在下で存在するか、または利用することができる。全ての妥当な追加、削除、修正、および変更は、記載される実施例および実施形態の等価物であると考慮され、以下の特許請求の範囲内に含まれるものとする。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【国際調査報告】
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