(57)【要約】  スクレロスチンまたはスクレロスチンおよびＴＮＦに結合するタンパク質が、スクレロスチン関連疾患を治療、予防および診断するための、ならびに細胞、組織、試料、および組成物中のスクレロスチンまたはスクレロスチンおよびＴＮＦを検出するための組成物および方法におけるそれらの使用とともに記載される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトスクレロスチンに結合可能な抗原結合ドメインを含む結合タンパク質であって、前記抗原結合ドメインはアミノ酸コンセンサス配列を含む少なくとも１つのＣＤＲを含む、結合タンパク質。
【請求項２】
前記少なくとも１つのＣＤＲは、配列番号３の残基３１〜３５；配列番号３の残基５０〜６６；配列番号３の残基９９〜１０８；配列番号４の残基２３〜３４；配列番号４の残基５１〜５７；配列番号４の残基９０〜１０１；配列番号５の残基３１〜３５；配列番号５の残基５０〜６６；配列番号５の残基９９〜１１５；配列番号６の残基２３〜３３；配列番号６の残基４９〜５５；配列番号６の残基８８〜９６；配列番号７の残基３１〜３５；配列番号７の残基５０〜６６；配列番号７の残基９９〜１０７；配列番号８の残基２３〜３３；配列番号８の残基４９〜５５；配列番号８の残基８８〜９５；配列番号９の残基３１〜３５；配列番号９の残基５０〜６６；配列番号９の残基９９〜１０７；配列番号１０の残基２４〜３９；配列番号１０の残基５５〜６１；配列番号１０の残基９４〜１１２；配列番号１１の残基３１〜３５；配列番号１１の残基５０〜６６；配列番号１１の残基９９〜１１１；配列番号１２の残基２４〜３９；配列番号１２の残基５５〜６１；配列番号１２の残基９４〜１１３；配列番号１３の残基３１〜３７；配列番号１３の残基５２〜６９；配列番号１３の残基１０２〜１２２；配列番号１４の残基２４〜３４；配列番号１４の残基５０〜５６；配列番号１４の残基８９〜９７；配列番号１９９８の残基３１〜３５；配列番号１９９８の残基５０〜６６；配列番号１９９８の残基９９〜１１０；配列番号１９９９の残基３１〜３５；配列番号１９９９の残基５０〜６６；配列番号１９９９の残基９９〜１１０；配列番号２０００の残基３１〜３５；配列番号２０００の残基５０〜６６；配列番号２０００の残基９９〜１１０；配列番号２００１の残基３１〜３５；配列番号２００１の残基５０〜６６；配列番号２００１の残基９９〜１１０；配列番号２００２の残基３１〜３５；配列番号２００２の残基５０〜６６；配列番号２００２の残基９９〜１１０；配列番号２００３の残基３１〜３５；配列番号２００３の残基５０〜６６；配列番号２００３の残基９９〜１１０；配列番号２００４の残基３１〜３５；配列番号２００４の残基５０〜６６；配列番号２００４の残基９９〜１１０；配列番号２００５の残基３１〜３５；配列番号２００５の残基５０〜６６；配列番号２００５の残基９９〜１１０；配列番号２００６の残基３１〜３５；配列番号２００６の残基５０〜６６；配列番号２００６の残基９９〜１１０；配列番号２００７の残基３１〜３５；配列番号２００７の残基５０〜６６；配列番号２００７の残基９９〜１１０；配列番号２００８の残基２３〜３６；配列番号２００８の残基５２〜５８；配列番号２００８の残基１０１〜１０９；配列番号２００９の残基２３〜３６；配列番号２００９の残基５２〜５８；配列番号２００９の残基１０１〜１０９；配列番号２００８の残基２３〜３６；配列番号２０１０の残基５２〜５８；配列番号２０１０の残基１０１〜１０９；配列番号２０１１の残基２３〜３６；配列番号２０１１の残基５２〜５８；配列番号２０１１の残基１０１〜１０９；配列番号２０１２の残基２３〜３６；配列番号２０１２の残基５２〜５８；配列番号２０１２の残基１０１〜１０９；配列番号２０１３の残基２３〜３６；配列番号２０１３の残基５２〜５８；配列番号２０１３の残基１０１〜１０９；配列番号２０１４の残基２３〜３６；配列番号２０１４の残基５２〜５８；配列番号２０１４の残基１０１〜１０９；配列番号２０１５の残基２３〜３６；配列番号２０１５の残基５２〜５８；配列番号２０１５の残基１０１〜１０９；配列番号２０１６の残基２３〜３６；配列番号２０１６の残基５２〜５８；配列番号２０１６の残基１０１〜１０９；配列番号２０１７の残基２３〜３６；配列番号２０１７の残基５２〜５８；配列番号２０１７の残基１０１〜１０９；配列番号２０２０の残基３１〜３５；配列番号２０２０の残基５０〜６６；配列番号２０２０の残基９９〜１０８；配列番号２０２１の残基３１〜３５；配列番号２０２１の残基５０〜６６；配列番号２０２１の残基９９〜１０８；配列番号２０２２の残基３１〜３５；配列番号２０２２の残基５０〜６６；配列番号２０２２の残基９９〜１０８；配列番号２０２３の残基３１〜３５；配列番号２０２３の残基５０〜６６；配列番号２０２３の残基９９〜１０８；配列番号２０２４の残基３１〜３５；配列番号２０２４の残基５０〜６６；配列番号２０２４の残基９９〜１０８；配列番号２０２５の残基３１〜３５；配列番号２０２５の残基５０〜６６；配列番号２０２５の残基９９〜１０８；配列番号２０２６の残基３１〜３５；配列番号２０２６の残基５０〜６６；配列番号２０２６の残基９９〜１０８；配列番号２０２７の残基３１〜３５；配列番号２０２７の残基５０〜６６；配列番号２０２７の残基９９〜１０８；配列番号２０２８の残基３１〜３５；配列番号２０２８の残基５０〜６６；配列番号２０２８の残基９９〜１０８；配列番号２０２９の残基３１〜３５；配列番号２０２９の残基５０〜６６；配列番号２０２９の残基９９〜１０８；配列番号２０３０の残基３１〜３５；配列番号２０３０の残基５０〜６６；配列番号２０３０の残基９９〜１０８；配列番号２０３１の残基３１〜３５；配列番号２０３１の残基５０〜６６；配列番号２０３１の残基９９〜１０８；配列番号２０３２の残基３１〜３５；配列番号２０３２の残基５０〜６６；配列番号２０３２の残基９９〜１０８；配列番号２０３３の残基３１〜３５；配列番号２０３３の残基５０〜６６；配列番号２０３３の残基９９〜１０８；配列番号２０３４の残基３１〜３５；配列番号２０３４の残基５０〜６６；配列番号２０３４の残基９９〜１１０；配列番号２０３５の残基３１〜３５；配列番号２０３５の残基５１〜５７；配列番号２０３５の残基９０〜１０１；配列番号２０３６の残基３１〜３５；配列番号２０３６の残基５１〜５７；配列番号２０３６の残基９０〜１０１；配列番号２０３７の残基３１〜３５；配列番号２０３５の残基５１〜５７；配列番号２０３７の残基９０〜１０１；配列番号２０３８の残基３１〜３５；配列番号２０３８の残基５１〜５７；配列番号２０３８の残基９０〜１０１；配列番号２０３９の残基３１〜３５；配列番号２０３９の残基５１〜５７；配列番号２０３９の残基９０〜１０１；配列番号２０４０の残基３１〜３５；配列番号２０４０の残基５１〜５７；配列番号２０４０の残基９０〜１０１；配列番号２０４１の残基３１〜３５；配列番号２０４１の残基５１〜５７；配列番号２０４１の残基９０〜１０１；配列番号２０４２の残基３１〜３５；配列番号２０４２の残基５１〜５７；配列番号２０４２の残基９０〜１０１；配列番号２０４３の残基３１〜３５；配列番号２０４３の残基５１〜５７；配列番号２０４３の残基９０〜１０１；配列番号２０４４の残基３１〜３５；配列番号２０４４の残基５１〜５７；配列番号２０４４の残基９０〜１０１；配列番号２０４５の残基３１〜３５；配列番号２０４５の残基５１〜５７；配列番号２０４５の残基９０〜１０１；配列番号２０４６の残基３１〜３５；配列番号２０４６の残基５１〜５７；配列番号２０４６の残基９０〜１０１；配列番号２０４７の残基３１〜３５；配列番号２０４７の残基５１〜５７；配列番号２０４７の残基９０〜１０１；配列番号２０４８の残基３１〜３５；配列番号２０４８の残基５１〜５７；配列番号２０４８の残基９０〜１０１；配列番号２０４９の残基３１〜３５；配列番号２０４９の残基５１〜５７；および配列番号２０４９の残基９０〜１０１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項３】
前記結合タンパク質は少なくとも３つのＣＤＲを含む、請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項４】
前記少なくとも３つのＣＤＲは、以下：
【表１】
2014533659.tif 000280
【表２】
2014533659.tif 000281
【表３】
2014533659.tif 000282
【表４】
2014533659.tif 000283
【表５】
2014533659.tif 000284
【表６】
2014533659.tif 000285
【表７】
2014533659.tif 000286
からなる群より選択される可変ドメインＣＤＲセットを含む、請求項３に記載の結合タンパク質。
【請求項５】
少なくとも２つの可変ドメインＣＤＲセットを含む、請求項４に記載の結合タンパク質。
【請求項６】
前記少なくとも２つの可変ドメインＣＤＲセットは、ＶＨ  ＭＳＬ１０ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＬ１０ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＬ１７ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＬ１７ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＬ９−８ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＬ９−８ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＫ９ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＫ９ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＫ１３ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＫ１３ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＫ２１ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＫ２１ＣＤＲセット；ＶＨ  ＡＥ１０−６  ＡＭ１ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＡＥ１０−６  ＡＭ１ＣＤＲセット；ＶＨ  ＡＥ１０−６  ＡＭ２ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＡＥ１０−６  ＡＭ２ＣＤＲセット；ＶＨ  ＡＥ１０−６  ＡＭ３ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＡＥ１０−６  ＡＭ３ＣＤＲセット；ＶＨ  ＡＥ１０−６  ＡＭ４ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＡＥ１０−６  ＡＭ４ＣＤＲセット；ＶＨ  ＡＥ１０−６  ＡＭ５ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＡＥ１０−６  ＡＭ５ＣＤＲセット；ＶＨ  ＡＥ１０−６  ＡＭ６ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＡＥ１０−６  ＡＭ６ＣＤＲセット；ＶＨ  ＡＥ１０−６  ＡＭ７ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＡＥ１０−６  ＡＭ７ＣＤＲセット；ＶＨ  ＡＥ１０−６  ＡＭ８ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＡＥ１０−６  ＡＭ８ＣＤＲセット；ＶＨ  ＡＥ１０−６  ＡＭ９ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＡＥ１０−６  ＡＭ９ＣＤＲセット；ＶＨ  ＡＥ１０−６  ＡＭ１０ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＡＥ１０−６  ＡＭ１０ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＬ１０  ＡＭ１ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＬ１０  ＡＭ１ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＬ１０  ＡＭ２ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＬ１０  ＡＭ２ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＬ１０  ＡＭ３ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＬ１０  ＡＭ３ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＬ１０  ＡＭ４ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＬ１０  ＡＭ４ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＬ１０  ＡＭ５ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＬ１０  ＡＭ５ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＬ１０  ＡＭ６ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＬ１０  ＡＭ６ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＬ１０  ＡＭ７ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＬ１０  ＡＭ７ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＬ１０  ＡＭ８ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＬ１０  ＡＭ８ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＬ１０  ＡＭ９ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＬ１０  ＡＭ９ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＬ１０  ＡＭ１０ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＬ１０  ＡＭ１０ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＬ１０  ＡＭ１．２ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＬ１０  ＡＭ１．２ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＬ１０  ＡＭ２．２ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＬ１０  ＡＭ２．２ＣＤＲセット；ＶＨ  ＭＳＬ１０  ＡＭ３．２ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＬ１０  ＡＭ３．２ＣＤＲセット；ならびにＶＨ  ＭＳＬ１０  ＡＭ４．２ＣＤＲセットおよびＶＬ  ＭＳＬ１０  ＡＭ４．２ＣＤＲセットからなる群より選択される、請求項５に記載の結合タンパク質。
【請求項７】
前記結合タンパク質は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４；配列番号１７１９〜１８６６；配列番号１８６７〜１９９７；配列番号１９９８〜２００７；配列番号２００８〜２０１７；配列番号２０２０〜２０３４；および配列番号２０３５〜２０４９からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの可変ドメインを含む、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項８】
前記結合タンパク質は２つの可変ドメインを含み、前記第１の可変ドメインは、配列番号３、５、７、９、１１、１３、１７１９〜１８６６、１９９８〜２００７、２０１８、および２０２０〜２０３４からなる群より選択される配列を含み、かつ前記第２の可変ドメインは、配列番号４、６、８、１０、１２、１８６７〜１９９７、２００７〜２０１７、２０１９、および２０３５〜２０４９からなる群より選択される配列を含む、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項９】
前記結合タンパク質は：
（ａ）スクレロスチンの生物学的機能を調節可能であり；
（ｂ）スクレロスチンを中和可能であり；
（ｃ）前記スクレロスチンは、プロ−ヒトスクレロスチン；成熟−ヒトスクレロスチン、または短縮型−ヒトスクレロスチンであり；
（ｄ）前記結合タンパク質は、スクレロスチンがそのレセプターに対して結合する能力を低下させ；および／または
（ｅ）前記中和性結合タンパク質は、Ｔｈ１調節；Ｔｈ２調節；Ｎｋ調節；好中球調節；単球−マクロファージ系列調節；好中球調節；好酸球調節；Ｂ細胞調節；サイトカイン調節；ケモカイン調節；接着分子調節；および細胞動員調節のうちの１つ以上を低減できる、
請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項１０】
前記結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１；または少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１のスクレロスチンに対するオン速度定数（Ｋｏｎ）を有する、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項１１】
前記結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合、多くとも約１０−３ｓ−１；多くとも約１０−４ｓ−１；多くとも約１０−５ｓ−１；または多くとも約１０−６ｓ−１のスクレロスチンに対するオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項１２】
前記結合タンパク質は、多くとも約１０−７Ｍ；多くとも約１０−８Ｍ；多くとも約１０−９Ｍ；多くとも約１０−１０Ｍ；多くとも約１０−１１Ｍ；多くとも約１０−１２Ｍ；および多くとも１０−１３Ｍのスクレロスチンに対する解離定数（ＫＤ）を有する、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項１３】
請求項１に記載の結合タンパク質アミノ酸配列をコードしている単離された核酸。
【請求項１４】
請求項１３に記載の単離された核酸を含むベクター。
【請求項１５】
請求項１４に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１６】
スクレロスチンに結合可能なタンパク質を産生するのに十分な条件下で培養培地中で請求項１５に記載の宿主細胞を培養することを含む、スクレロスチンに結合可能なタンパク質を産生する方法。
【請求項１７】
請求項１６に記載の方法によって産生されるタンパク質。
【請求項１８】
請求項１７に記載のタンパク質の有効量を哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物を治療する方法。
【請求項１９】
請求項１に記載の結合タンパク質、および薬学的に許容される担体を含有する、医薬組成物。
【請求項２０】
スクレロスチン活性が有害である障害を治療するための少なくとも１つの追加の治療薬をさらに含有する、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記追加薬は、治療薬、造影剤、細胞毒性剤、血管形成インヒビター；キナーゼインヒビター；同時刺激分子ブロッカー；接着分子ブロッカー；抗−サイトカイン抗体またはそれらの機能的なフラグメント；メトトレキサート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能標識またはレポーター；ＴＮＦアンタゴニスト；抗リウマチ薬；筋弛緩薬、睡眠薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋ブロッカー、抗菌剤、乾癬治療薬、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫剤、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン置換薬、放射性医薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、刺激薬、喘息薬、βアゴニスト、吸入ステロイド、経口ステロイド、エピネフリンまたはアナログ、サイトカイン、およびサイトカインアンタゴニストからなる群より選択される、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
ヒトスクレロスチン活性を低減させるための方法であって、ヒトスクレロスチン活性が低減するように、ヒトスクレロスチンと請求項１に記載の結合タンパク質とを接触させることを含む、方法。
【請求項２３】
スクレロスチン活性が有害である障害に罹患しているヒト被験体においてヒトスクレロスチン活性を低減させるための方法であって、前記ヒト被験体におけるヒトスクレロスチン活性が低減するように、前記ヒト被験体に対して、請求項１に記載の結合タンパク質を投与することを含む、方法。
【請求項２４】
スクレロスチン活性が有害である疾患または障害について被験体を治療するための方法であって、治療が達成されるように、前記被験体に対して、請求項１に記載の結合タンパク質を投与することによる、方法。
【請求項２５】
前記障害が、呼吸器障害；喘息；アレルギーおよび非アレルギー性喘息；感染に起因する喘息；呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の感染に起因する喘息；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；気道炎症に関与する状態；好酸球増多症；線維症および／または過剰粘液産生；嚢胞性線維症；肺線維症；アトピー性障害；アトピー性皮膚炎；蕁麻疹；湿疹；アレルギー性鼻炎；アレルギー性胃腸炎；皮膚の炎症性および／または自己免疫状態；胃腸器官の炎症性および／または自己免疫状態；炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；潰瘍性大腸炎；クローン病；肝臓の炎症性および／または自己免疫状態；肝硬変；肝線維症；Ｂ型および／またはＣ型肝炎ウイルスによって引き起こされる肝線維症；強皮症；腫瘍；癌；肝細胞癌；グリア芽腫；リンパ腫、ホジキンリンパ腫；ウイルス感染；ＨＴＬＶ−１感染（例えば、ＨＴＬＶ−１から）；防御性１型免疫応答の発現の抑制、およびワクチン接種中の防御性１型免疫応答の発現の抑制からなる群より選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
スクレロスチンが有害である障害に罹患している患者を治療する方法であって、第２の剤の投与の前、同時または後に請求項１に記載の結合タンパク質を投与する工程を含み、前記第２の剤は、吸入ステロイド；β−アゴニスト；短時間作用性または長時間作用性β−アゴニスト；ロイコトリエンまたはロイコトリエンレセプターのアンタゴニスト；ＡＤＶＡＩＲ；ＩｇＥインヒビター；抗−ＩｇＥ抗体；ＸＯＬＡＩＲ；ホスホジエステラーゼインヒビター；ＰＤＥ４インヒビター；キサンチン；抗コリン薬；肥満細胞安定化薬；クロモリン；ＩＬ−４インヒビター；ＩＬ−５インヒビター；エオタキシン／ＣＣＲ３インヒビター；ヒスタミンまたはＨ１、Ｈ２、Ｈ３、およびＨ４を含むそのレセプターのアンタゴニスト；プロスタグランジンＤまたはそのレセプターＤＰ１およびＣＲＴＨ２のアンタゴニスト；ＴＮＦアンタゴニスト；ＴＮＦレセプターの可溶性フラグメント；ＥＮＢＲＥＬ；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト；ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）インヒビター；ムスカリンレセプターアンタゴニスト；ＴＧＦ−βアンタゴニスト；インターフェロンγ；ペルフェニドン；化学療法剤、メトトレキサート；レフルノミド；シロリムス（ラパマイシン）またはそのアナログ、ＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２またはｃＰＬＡ２インヒビター；ＮＳＡＩＤ；免疫調節物質；ｐ３８インヒビター；ＴＰＬ−２、ＭＫ−２およびＮＦｋＢインヒビター；ブデノシド；上皮細胞成長因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチル酸塩；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼインヒビター；メサラミン；オルサラジン；バルサラジン；抗酸化剤；トロンボキサンインヒビター；ＩＬ−１レセプターアンタゴニスト；抗−ＩＬ−１β抗体；抗−ＩＬ−６抗体；成長因子；エラスターゼインヒビター；ピリジニル−イミダゾール化合物；ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、もしくはＰＤＧＦの抗体もしくはアゴニスト；ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０もしくはそれらのリガンドの抗体；ＦＫ５０６；ラパマイシン；ミコフェノール酸モフェチル；イブプロフェン；プレドニゾロン；ホスホジエステラーゼインヒビター；アデノシンアゴニスト；抗血栓剤；補体インヒビター；アドレナリン作動薬；ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、もしくはＭＡＰキナーゼインヒビター；ＩＬ−１β変換酵素インヒビター；ＴＮＦ−α変換酵素インヒビター；Ｔ細胞シグナル伝達インヒビター；メタロプロテイナーゼインヒビター；６−メルカプトプリン；アンジオテンシン変換酵素インヒビター；可溶性サイトカインレセプター；可溶性ｐ５５  ＴＮＦレセプター；可溶性ｐ７５  ＴＮＦレセプター；ｓＩＬ−１ＲＩ；ｓＩＬ−１ＲＩＩ；ｓＩＬ−６Ｒ；抗炎症性サイトカイン；ＩＬ−４；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ＳＯＳＴ；およびＴＧＦ−βからなる群より選択される、方法。
【請求項２７】
ポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、前記ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
ＶＤ１は第１の重鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２の重鎖可変ドメインであり；
Ｃは重鎖定常ドメインであり；
Ｘ１は、ＣＨ１でないという条件でリンカーであり；
Ｘ２はＦｃ領域であり；
（Ｘ１）ｎは（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは（Ｘ２）０または（Ｘ２）１であり；および
（ａ）ＶＤ１またはＶＤ２は、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、および１６８４からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、前記結合タンパク質は、スクレロスチンおよび別の標的に結合可能であり；
（ｂ）ＶＤ１およびＶＤ２は独立して、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、および１６８４からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、前記結合タンパク質は、スクレロスチンおよびスクレロスチンに結合可能であり；
（ｃ）ＶＤ１は、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、および１６８４からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつＶＤ２は、配列番号２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、２０２、２１２、２２２、２３２、２４２、２５２、２６２、２７２、２８２、２９２、３０２、３１２、３２２、３３２、３４２、３５２、３６２、３７２、３８２、３９２、４０２、４１２、４２２、４３２、４４２、４５２、４６２、４７２、４８２、４９２、５０２、５１２、５２２、５３２、５４２、５５２、５６２、５７２、５８２、５９２、６０２、６１２、６２２、６３２、６４２、６５２、６６２、６７２、６８２、６９２、７０２、７１２、７２２、７３２、７４２、７５２、７６２、７７２、７８２、７９２、８０２、８１２、８２２、８３２、８４２、８５２、８６２、８７２、８８２、８９２、９０２、９１２、９２２、９３２、９４２、９５２、９６２、９７２、９８２、９９２、１００２、１０１２、１０２２、１０３２、１０４２、１０５２、１０６２、１０７２、１０８２、１０９２、１１０２、１１１２、１１２２、１１３２、１１４２、１１５２、１１６２、１１７２、１１８２、１１９２、１２０２、１２１２、１２２２、１２３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１３４２、１３５２、１３６２、１３７２、１３８２、１３９２、１４０２、１４１２、１４２２、１４３２、１４４２、１４５２、１４６２、１４７２、１４８２、１４９２、１５０２、１５１２、１５２２、１５３２、１５４２、１５５２、１５６２、１５７２、１５８２、１５９２、１６０２、１６１２、１６２２、１６３２、１６４２、１６５２、１６６２、１６７２、および１６８２からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記結合タンパク質は、スクレロスチンおよびＴＮＦ−αに結合可能であり；または
（ｄ）ＶＤ２は、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、および１６８４からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつＶＤ１は、配列番号２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、２０２、２１２、２２２、２３２、２４２、２５２、２６２、２７２、２８２、２９２、３０２、３１２、３２２、３３２、３４２、３５２、３６２、３７２、３８２、３９２、４０２、４１２、４２２、４３２、４４２、４５２、４６２、４７２、４８２、４９２、５０２、５１２、５２２、５３２、５４２、５５２、５６２、５７２、５８２、５９２、６０２、６１２、６２２、６３２、６４２、６５２、６６２、６７２、６８２、６９２、７０２、７１２、７２２、７３２、７４２、７５２、７６２、７７２、７８２、７９２、８０２、８１２、８２２、８３２、８４２、８５２、８６２、８７２、８８２、８９２、９０２、９１２、９２２、９３２、９４２、９５２、９６２、９７２、９８２、９９２、１００２、１０１２、１０２２、１０３２、１０４２、１０５２、１０６２、１０７２、１０８２、１０９２、１１０２、１１１２、１１２２、１１３２、１１４２、１１５２、１１６２、１１７２、１１８２、１１９２、１２０２、１２１２、１２２２、１２３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１３４２、１３５２、１３６２、１３７２、１３８２、１３９２、１４０２、１４１２、１４２２、１４３２、１４４２、１４５２、１４６２、１４７２、１４８２、１４９２、１５０２、１５１２、１５２２、１５３２、１５４２、１５５２、１５６２、１５７２、１５８２、１５９２、１６０２、１６１２、１６２２、１６３２、１６４２、１６５２、１６６２、１６７２、および１６８２からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記結合タンパク質は、ＴＮＦ−αおよびスクレロスチンに結合可能である、結合タンパク質。
【請求項２８】
ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２は、配列番号２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、１６１、１７１、１８１、１９１、２０１、２１１、２２１、２３１、２４１、２５１、２６１、２７１、２８１、２９１、３０１、３１１、３２１、３３１、３４１、３５１、３６１、３７１、３８１、３９１、４０１、４１１、４２１、４３１、４４１、４５１、４６１、４７１、４８１、４９１、５０１、５１１、５２１、５３１、５４１、５５１、５６１、５７１、５８１、５９１、６０１、６１１、６２１、６３１、６４１、６５１、６６１、６７１、６８１、６９１、７０１、７１１、７２１、７３１、７４１、７５１、７６１、７７１、７８１、７９１、８０１、８１１、８２１、８３１、８４１、８５１、８６１、８７１、８８１、８９１、９０１、９１１、９２１、９３１、９４１、９５１、９６１、９７１、９８１、９９１、１００１、１０１１、１０２１、１０３１、１０４１、１０５１、１０６１、１０７１、１０８１、１０９１、１１０１、１１１１、１１２１、１１３１、１１４１、１１５１、１１６１、１１７１、１１８１、１１９１、１２０１、１２１１、１２２１、１２３１、１２４１、１２５１、１２６１、１２７１、１２８１、１２９１、１３０１、１３１１、１３２１、１３３１、１３４１、１３５１、１３６１、１３７１、１３８１、１３９１、１４０１、１４１１、１４２１、１４３１、１４４１、１４５１、１４６１、１４７１、１４８１、１４９１、１５０１、１５１１、１５２１、１５３１、１５４１、１５５１、１５６１、１５７１、１５８１、１５９１、１６０１、１６１１、１６２１、１６３１、１６４１、１６５１、１６６１、１６７１、および１６８１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２７に記載の結合タンパク質。
【請求項２９】
ポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、前記ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
ＶＤ１は第１の軽鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２の軽鎖可変ドメインであり；
Ｃは軽鎖定常ドメインであり；
Ｘ１はＣＬではないという条件でリンカーであり；
Ｘ２はＦｃ領域を含まず；
（Ｘ１）ｎは（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは（Ｘ２）０または（Ｘ２）１であり；および
（ａ）ＶＤ１またはＶＤ２は、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９，９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、および１６８９からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記結合タンパク質は、スクレロスチンおよび別の標的に結合可能であり；
（ｂ）ＶＤ１およびＶＤ２は独立して、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９、９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、および１６８９からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記結合タンパク質は、スクレロスチンおよびスクレロスチンに結合可能であり；
（ｃ）ＶＤ１は、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９，９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、および１６８９からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつＶＤ２は、配列番号２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、１５７、１６７、１７７、１８７、１９７、２０７、２１７、２２７、２３７、２４７、２５７、２６７、２７７、２８７、２９７、３０７、３１７、３２７、３３７、３４７、３５７、３６７、３７７、３８７、３９７、４０７、４１７、４２７、４３７、４４７、４５７、４６７、４７７、４８７、４９７、５０７、５１７、５２７、５３７、５４７、５５７、５６７、５７７、５８７、５９７、６０７、６１７、６２７、および６３７からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記結合タンパク質は、スクレロスチンおよびＴＮＦ−αに結合可能であり；または
（ｄ）ＶＤ２は、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９，９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、および１６８９からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつＶＤ１は、配列番号２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、１５７、１６７、１７７、１８７、１９７、２０７、２１７、２２７、２３７、２４７、２５７、２６７、２７７、２８７、２９７、３０７、３１７、３２７、３３７、３４７、３５７、３６７、３７７、３８７、３９７、４０７、４１７、４２７、４３７、４４７、４５７、４６７、４７７、４８７、４９７、５０７、５１７、５２７、５３７、５４７、５５７、５６７、５７７、５８７、５９７、６０７、６１７、６２７、６３７、６４７、６５７、６６７、６７７、６８７、６９７、７０７、７１７、７２７、７３７、７４７、７５７、７６７、７７７、７８７、７９７、８０７、８１７、８２７、８３７、８４７、８５７、８６７、８７７、８８７、８９７、９０７、９１７、９２７、９３７、９４７、９５７、９６７、９７７、９８７、９９７、１００７、１０１７、１０２７、１０３７、１０４７、１０５７、１０６７、１０７７、１０８７、１０９７、１１０７、１１１７、１１２７、１１３７、１１４７、１１５７、１１６７、１１７７、１１８７、１１９７、１２０７、１２１７、１２２７、１２３７、１２４７、１２５７、１２６７、１２７７、１２８７、１２９７、１３０７、１３１７、１３２７、１３３７、１３４７、１３５７、１３６７、１３７７、１３８７、１３９７、１４０７、１４１７、１４２７、１４３７、１４４７、１４５７、１４６７、１４７７、１４８７、１４９７、１５０７、１５１７、１５２７、１５３７、１５４７、１５５７、１５６７、１５７７、１５８７、１５９７、１６０７、１６１７、１６２７、１６３７、１６４７、１６５７、１６６７、１６７７、および１６８７からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記結合タンパク質は、ＴＮＦ−αおよびスクレロスチンに結合可能である、結合タンパク質。
【請求項３０】
ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２は、配列番号２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４６、１５６、１６６、１７６、１８６、１９６、２０６、２１６、２２６、２３６、２４６、２５６、２６６、２７６、２８６、２９６、３０６、３１６、３２６、３３６、３４６、３５６、３６６、３７６、３８６、３９６、４０６、４１６、４２６、４３６、４４６、４５６、４６６、４７６、４８６、４９６、５０６、５１６、５２６、５３６、５４６、５５６、５６６、５７６、５８６、５９６、６０６、６１６、６２６、６３６、６４６、６５６、６６６、６７６、６８６、６９６、７０６、７１６、７２６、７３６、７４６、７５６、７６６、７７６、７８６、７９６、８０６、８１６、８２６、８３６、８４６、８５６、８６６、８７６、８８６、８９６、９０６、９１６、９２６、９３６、９４６、９５６、９６６、９７６、９８６、９９６、１００６、１１１６、１１２６、１１３６、１１４６、１１５６、１１６６、１１７６、１１８６、１１９６、１２０６、１２１６、１２２６、１２３６、１２４６、１２５６、１２６６、１２７６、１２８６、１２９６、１３０６、１３１６、１３２６、１３３６、１３４６、１３５６、１３６６、１３７６、１３８６、１３９６、１４０６、１４１６、１４２６、１４３６、１４４６、１４５６、１４６６、１４７６、１４８６、１４９６、１５０６、１５１６、１５２６、１５３６、１５４６、１５５６、１５６６、１５７６、１５８６、１５９６、１６０６、１６１６、１６２６、１６３６、１６４６、１６５６、１６６６、１６７６、および１６８６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の結合タンパク質。
【請求項３１】
（Ｘ１）ｎは（Ｘ１）０であり、および／または（Ｘ２）ｎは（Ｘ２）０である、請求項２８または２９に記載の結合タンパク質。
【請求項３２】
第１および第２のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、前記第１のポリペプチド鎖は第１のＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
ＶＤ１は第１の重鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２の重鎖可変ドメインであり；
Ｃは重鎖定常ドメインであり；
Ｘ１は第１のリンカーであり；
Ｘ２はＦｃ領域であり；
（Ｘ１）ｎは（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは（Ｘ２）０または（Ｘ２）１であり；および
前記第２のポリペプチド鎖は、第２のＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
ＶＤ１は第１の軽鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２の軽鎖可変ドメインであり；
Ｃは軽鎖定常ドメインであり；
Ｘ１は第２のリンカーであり；
Ｘ２はＦｃ領域を含まず；
（Ｘ１）ｎは（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは（Ｘ２）０または（Ｘ２）１であり；および
前記第１および第２のＸ１リンカーは同じであるか、または異なり；
前記第１のＸ１リンカーはＣＨ１でなく、および／または前記第２のＸ１リンカーはＣＬでなく、
（ａ）前記ＶＤ１またはＶＤ２の重鎖可変ドメインは、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、および１６８４からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記ＶＤ１またはＶＤ２の軽鎖可変ドメインは、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９，９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、および１６８９からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記結合タンパク質は、スクレロスチンおよび別の標的に結合可能であり；
（ｂ）前記ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは独立して、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、および１６８４からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記ＶＤ１またはＶＤ２の軽鎖可変ドメインは、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９，９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、および１６８９からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記結合タンパク質は、スクレロスチンおよびスクレロスチンに結合可能であり；
（ｃ）前記ＶＤ１重鎖可変ドメインは、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、および１６８４からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記ＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、２０２、２１２、２２２、２３２、２４２、２５２、２６２、２７２、２８２、２９２、３０２、３１２、３２２、３３２、３４２、３５２、３６２、３７２、３８２、３９２、４０２、４１２、４２２、４３２、４４２、４５２、４６２、４７２、４８２、４９２、５０２、５１２、５２２、５３２、５４２、５５２、５６２、５７２、５８２、５９２、６０２、６１２、６２２、６３２、６４２、６５２、６６２、６７２、６８２、６９２、７０２、７１２、７２２、７３２、７４２、７５２、７６２、７７２、７８２、７９２、８０２、８１２、８２２、８３２、８４２、８５２、８６２、８７２、８８２、８９２、９０２、９１２、９２２、９３２、９４２、９５２、９６２、９７２、９８２、９９２、１００２、１０１２、１０２２、１０３２、１０４２、１０５２、１０６２、１０７２、１０８２、１０９２、１１０２、１１１２、１１２２、１１３２、１１４２、１１５２、１１６２、１１７２、１１８２、１１９２、１２０２、１２１２、１２２２、１２３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１３４２、１３５２、１３６２、１３７２、１３８２、１３９２、１４０２、１４１２、１４２２、１４３２、１４４２、１４５２、１４６２、１４７２、１４８２、１４９２、１５０２、１５１２、１５２２、１５３２、１５４２、１５５２、１５６２、１５７２、１５８２、１５９２、１６０２、１６１２、１６２２、１６３２、１６４２、１６５２、１６６２、１６７２、および１６８２からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み；前記ＶＤ１軽鎖可変ドメインは、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９，９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、および１６８９からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記ＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、１５７、１６７、１７７、１８７、１９７、２０７、２１７、２２７、２３７、２４７、２５７、２６７、２７７、２８７、２９７、３０７、３１７、３２７、３３７、３４７、３５７、３６７、３７７、３８７、３９７、４０７、４１７、４２７、４３７、４４７、４５７、４６７、４７７、４８７、４９７、５０７、５１７、５２７、５３７、５４７、５５７、５６７、５７７、５８７、５９７、６０７、６１７、６２７、６３７、６４７、６５７、６６７、６７７、６８７、６９７、７０７、７１７、７２７、７３７、７４７、７５７、７６７、７７７、７８７、７９７、８０７、８１７、８２７、８３７、８４７、８５７、８６７、８７７、８８７、８９７、９０７、９１７、９２７、９３７、９４７、９５７、９６７、９７７、９８７、９９７、１００７、１０１７、１０２７、１０３７、１０４７、１０５７、１０６７、１０７７、１０８７、１０９７、１１０７、１１１７、１１２７、１１３７、１１４７、１１５７、１１６７、１１７７、１１８７、１１９７、１２０７、１２１７、１２２７、１２３７、１２４７、１２５７、１２６７、１２７７、１２８７、１２９７、１３０７、１３１７、１３２７、１３３７、１３４７、１３５７、１３６７、１３７７、１３８７、１３９７、１４０７、１４１７、１４２７、１４３７、１４４７、１４５７、１４６７、１４７７、１４８７、１４９７、１５０７、１５１７、１５２７、１５３７、１５４７、１５５７、１５６７、１５７７、１５８７、１５９７、１６０７、１６１７、１６２７、１６３７、１６４７、１６５７、１６６７、１６７７、および１６８７からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記結合タンパク質は、スクレロスチンおよびＴＮＦ−αと結合可能であり；または
（ｄ）前記ＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、および１６８４からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記ＶＤ１重鎖可変ドメインは、配列番号２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、２０２、２１２、２２２、２３２、２４２、２５２、２６２、２７２、２８２、２９２、３０２、３１２、３２２、３３２、３４２、３５２、３６２、３７２、３８２、３９２、４０２、４１２、４２２、４３２、４４２、４５２、４６２、４７２、４８２、４９２、５０２、５１２、５２２、５３２、５４２、５５２、５６２、５７２、５８２、５９２、６０２、６１２、６２２、６３２、６４２、６５２、６６２、６７２、６８２、６９２、７０２、７１２、７２２、７３２、７４２、７５２、７６２、７７２、７８２、７９２、８０２、８１２、８２２、８３２、８４２、８５２、８６２、８７２、８８２、８９２、９０２、９１２、９２２、９３２、９４２、９５２、９６２、９７２、９８２、９９２、１００２、１０１２、１０２２、１０３２、１０４２、１０５２、１０６２、１０７２、１０８２、１０９２、１１０２、１１１２、１１２２、１１３２、１１４２、１１５２、１１６２、１１７２、１１８２、１１９２、１２０２、１２１２、１２２２、１２３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１３４２、１３５２、１３６２、１３７２、１３８２、１３９２、１４０２、１４１２、１４２２、１４３２、１４４２、１４５２、１４６２、１４７２、１４８２、１４９２、１５０２、１５１２、１５２２、１５３２、１５４２、１５５２、１５６２、１５７２、１５８２、１５９２、１６０２、１６１２、１６２２、１６３２、１６４２、１６５２、１６６２、１６７２、および１６８２からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み；前記ＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９，９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、および１６８９からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記ＶＤ１軽鎖可変ドメインは、配列番号２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、１５７、１６７、１７７、１８７、１９７、２０７、２１７、２２７、２３７、２４７、２５７、２６７、２７７、２８７、２９７、３０７、３１７、３２７、３３７、３４７、３５７、３６７、３７７、３８７、３９７、４０７、４１７、４２７、４３７、４４７、４５７、４６７、４７７、４８７、４９７、５０７、５１７、５２７、５３７、５４７、５５７、５６７、５７７、５８７、５９７、６０７、６１７、６２７、６３７、６４７、６５７、６６７、６７７、６８７、６９７、７０７、７１７、７２７、７３７、７４７、７５７、７６７、７７７、７８７、７９７、８０７、８１７、８２７、８３７、８４７、８５７、８６７、８７７、８８７、８９７、９０７、９１７、９２７、９３７、９４７、９５７、９６７、９７７、９８７、９９７、１００７、１０１７、１０２７、１０３７、１０４７、１０５７、１０６７、１０７７、１０８７、１０９７、１１０７、１１１７、１１２７、１１３７、１１４７、１１５７、１１６７、１１７７、１１８７、１１９７、１２０７、１２１７、１２２７、１２３７、１２４７、１２５７、１２６７、１２７７、１２８７、１２９７、１３０７、１３１７、１３２７、１３３７、１３４７、１３５７、１３６７、１３７７、１３８７、１３９７、１４０７、１４１７、１４２７、１４３７、１４４７、１４５７、１４６７、１４７７、１４８７、１４９７、１５０７、１５１７、１５２７、１５３７、１５４７、１５５７、１５６７、１５７７、１５８７、１５９７、１６０７、１６１７、１６２７、１６３７、１６４７、１６５７、１６６７、１６７７、および１６８７からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記結合タンパク質は、ＴＮＦ−αおよびスクレロスチンに結合可能である、結合タンパク質。
【請求項３３】
前記Ｘ１またはＸ２は、配列番号１６９５、１６９６、１６９７、１６９８、１６９９、１７００、１７０１、１７０２、１７０３、１７０４、１７０５、１７０６、１７０７、１７０８、１７０９、１７１０、１７１１、１７１２、１７１３、１７１４、１７１５、１７１６、２０５０、２０５１、２０５２、２０５３、２０５４、２０５５、２０５６、２０５７、２０５８、および２０５９からなる群より選択されるアミノ酸配列である、請求項２８、２９または３２に記載の結合タンパク質。
【請求項３４】
前記結合タンパク質は２つの第１のポリペプチド鎖および２つの第２のポリペプチド鎖を含む、請求項３３に記載の結合タンパク質。
【請求項３５】
前記Ｆｃ領域は改変体配列Ｆｃ領域である、請求項２８、２９または３２に記載の結合タンパク質。
【請求項３６】
前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、およびＩｇＤからなる群より選択される、請求項２８、２９または３２に記載の結合タンパク質。
【請求項３７】
前記第１のポリペプチド鎖のＶＤ１および前記第２のポリペプチド鎖のＶＤ１は、それぞれ同じ第１および第２の親抗体、またはその抗原結合部分から得られる、請求項２８、２９または３２に記載の結合タンパク質。
【請求項３８】
前記抗−ＴＮＦ−α抗体は、前記抗−スクレロスチン抗体がヒトスクレロスチンに結合する力価とは異なる力価でＴＮＦ−αに結合する、請求項２８、２９または３２に記載の結合タンパク質。
【請求項３９】
前記抗−ＴＮＦ−α抗体は、前記抗−スクレロスチン抗体がヒトスクレロスチンに結合する親和性とは異なる親和性でＴＮＦ−αに結合する、請求項２８、２９または３２に記載の結合タンパク質。
【請求項４０】
前記結合タンパク質は、抗原特異性、抗原に対する親和性、力価、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、産生効率、免疫原性、薬物動態、バイオアベイラビリティー、組織交差反応性、またはオーソロガス抗原結合に関連する抗−ＴＮＦ−α抗体または抗−スクレロスチン抗体によって示される少なくとも１つの所望の特性を保有する、請求項２８、２９または３２に記載の結合タンパク質。
【請求項４１】
４つのポリペプチド鎖を含む２つの抗原に結合可能な結合タンパク質であって、２つのポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
ＶＤ１は第１の重鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２の重鎖可変ドメインであり；
Ｃは重鎖定常ドメインであり；
Ｘ１は第１のリンカーであり；
Ｘ２はＦｃ領域であり；
（Ｘ１）ｎは（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは（Ｘ２）０または（Ｘ２）１であり；および
２つのポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
ＶＤ１は第１の軽鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は第２の軽鎖可変ドメインであり；
Ｃは軽鎖定常ドメインであり；
Ｘ１は第２のリンカーであり；
Ｘ２はＦｃ領域を含まず；
（Ｘ１）ｎは（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは（Ｘ２）０または（Ｘ２）１であり；および
前記第１および第２のＸ１リンカーは同じであるか、または異なり；
前記第１のＸ１リンカーはＣＨ１でなく、および／または前記第２のＸ１リンカーはＣＬでなく、および
（ａ）前記ＶＤ１またはＶＤ２の重鎖可変ドメインは、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、および１６８４からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、前記ＶＤ１またはＶＤ２の軽鎖可変ドメインは、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９，９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、および１６８９からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記結合タンパク質は、スクレロスチンおよび別の標的に結合可能であり；
（ｂ）前記ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは独立して、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、および１６８４からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記ＶＤ１またはＶＤ２の軽鎖可変ドメインは、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９，９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、および１６８９からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記結合タンパク質は、スクレロスチンおよびスクレロスチンに結合可能であり；
（ｃ）前記ＶＤ１重鎖可変ドメインは、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、および１６８４からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記ＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、２０２、２１２、２２２、２３２、２４２、２５２、２６２、２７２、２８２、２９２、３０２、３１２、３２２、３３２、３４２、３５２、３６２、３７２、３８２、３９２、４０２、４１２、４２２、４３２、４４２、４５２、４６２、４７２、４８２、４９２、５０２、５１２、５２２、５３２、５４２、５５２、５６２、５７２、５８２、５９２、６０２、６１２、６２２、６３２、６４２、６５２、６６２、６７２、６８２、６９２、７０２、７１２、７２２、７３２、７４２、７５２、７６２、７７２、７８２、７９２、８０２、８１２、８２２、８３２、８４２、８５２、８６２、８７２、８８２、８９２、９０２、９１２、９２２、９３２、９４２、９５２、９６２、９７２、９８２、９９２、１００２、１０１２、１０２２、１０３２、１０４２、１０５２、１０６２、１０７２、１０８２、１０９２、１１０２、１１１２、１１２２、１１３２、１１４２、１１５２、１１６２、１１７２、１１８２、１１９２、１２０２、１２１２、１２２２、１２３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１３４２、１３５２、１３６２、１３７２、１３８２、１３９２、１４０２、１４１２、１４２２、１４３２、１４４２、１４５２、１４６２、１４７２、１４８２、１４９２、１５０２、１５１２、１５２２、１５３２、１５４２、１５５２、１５６２、１５７２、１５８２、１５９２、１６０２、１６１２、１６２２、１６３２、１６４２、１６５２、１６６２、１６７２、および１６８２からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み；前記ＶＤ１軽鎖可変ドメインは、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９，９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、および１６８９からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記ＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、１５７、１６７、１７７、１８７、１９７、２０７、２１７、２２７、２３７、２４７、２５７、２６７、２７７、２８７、２９７、３０７、３１７、３２７、３３７、３４７、３５７、３６７、３７７、３８７、３９７、４０７、４１７、４２７、４３７、４４７、４５７、４６７、４７７、４８７、４９７、５０７、５１７、５２７、５３７、５４７、５５７、５６７、５７７、５８７、５９７、６０７、６１７、６２７、６３７、６４７、６５７、６６７、６７７、６８７、６９７、７０７、７１７、７２７、７３７、７４７、７５７、７６７、７７７、７８７、７９７、８０７、８１７、８２７、８３７、８４７、８５７、８６７、８７７、８８７、８９７、９０７、９１７、９２７、９３７、９４７、９５７、９６７、９７７、９８７、９９７、１００７、１０１７、１０２７、１０３７、１０４７、１０５７、１０６７、１０７７、１０８７、１０９７、１１０７、１１１７、１１２７、１１３７、１１４７、１１５７、１１６７、１１７７、１１８７、１１９７、１２０７、１２１７、１２２７、１２３７、１２４７、１２５７、１２６７、１２７７、１２８７、１２９７、１３０７、１３１７、１３２７、１３３７、１３４７、１３５７、１３６７、１３７７、１３８７、１３９７、１４０７、１４１７、１４２７、１４３７、１４４７、１４５７、１４６７、１４７７、１４８７、１４９７、１５０７、１５１７、１５２７、１５３７、１５４７、１５５７、１５６７、１５７７、１５８７、１５９７、１６０７、１６１７、１６２７、１６３７、１６４７、１６５７、１６６７、１６７７、および１６８７からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記結合タンパク質は、スクレロスチンおよびＴＮＦ−αに結合可能であり；または
（ｄ）前記ＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、および１６８４からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記ＶＤ１重鎖可変ドメインは、配列番号２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、２０２、２１２、２２２、２３２、２４２、２５２、２６２、２７２、２８２、２９２、３０２、３１２、３２２、３３２、３４２、３５２、３６２、３７２、３８２、３９２、４０２、４１２、４２２、４３２、４４２、４５２、４６２、４７２、４８２、４９２、５０２、５１２、５２２、５３２、５４２、５５２、５６２、５７２、５８２、５９２、６０２、６１２、６２２、６３２、６４２、６５２、６６２、６７２、６８２、６９２、７０２、７１２、７２２、７３２、７４２、７５２、７６２、７７２、７８２、７９２、８０２、８１２、８２２、８３２、８４２、８５２、８６２、８７２、８８２、８９２、９０２、９１２、９２２、９３２、９４２、９５２、９６２、９７２、９８２、９９２、１００２、１０１２、１０２２、１０３２、１０４２、１０５２、１０６２、１０７２、１０８２、１０９２、１１０２、１１１２、１１２２、１１３２、１１４２、１１５２、１１６２、１１７２、１１８２、１１９２、１２０２、１２１２、１２２２、１２３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１３４２、１３５２、１３６２、１３７２、１３８２、１３９２、１４０２、１４１２、１４２２、１４３２、１４４２、１４５２、１４６２、１４７２、１４８２、１４９２、１５０２、１５１２、１５２２、１５３２、１５４２、１５５２、１５６２、１５７２、１５８２、１５９２、１６０２、１６１２、１６２２、１６３２、１６４２、１６５２、１６６２、１６７２、および１６８２からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み；前記ＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９，９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、および１６８９からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記ＶＤ１軽鎖可変ドメインは、配列番号２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、１５７、１６７、１７７、１８７、１９７、２０７、２１７、２２７、２３７、２４７、２５７、２６７、２７７、２８７、２９７、３０７、３１７、３２７、３３７、３４７、３５７、３６７、３７７、３８７、３９７、４０７、４１７、４２７、４３７、４４７、４５７、４６７、４７７、４８７、４９７、５０７、５１７、５２７、５３７、５４７、５５７、５６７、５７７、５８７、５９７、６０７、６１７、６２７、６３７、６４７、６５７、６６７、６７７、６８７、６９７、７０７、７１７、７２７、７３７、７４７、７５７、７６７、７７７、７８７、７９７、８０７、８１７、８２７、８３７、８４７、８５７、８６７、８７７、８８７、８９７、９０７、９１７、９２７、９３７、９４７、９５７、９６７、９７７、９８７、９９７、１００７、１０１７、１０２７、１０３７、１０４７、１０５７、１０６７、１０７７、１０８７、１０９７、１１０７、１１１７、１１２７、１１３７、１１４７、１１５７、１１６７、１１７７、１１８７、１１９７、１２０７、１２１７、１２２７、１２３７、１２４７、１２５７、１２６７、１２７７、１２８７、１２９７、１３０７、１３１７、１３２７、１３３７、１３４７、１３５７、１３６７、１３７７、１３８７、１３９７、１４０７、１４１７、１４２７、１４３７、１４４７、１４５７、１４６７、１４７７、１４８７、１４９７、１５０７、１５１７、１５２７、１５３７、１５４７、１５５７、１５６７、１５７７、１５８７、１５９７、１６０７、１６１７、１６２７、１６３７、１６４７、１６５７、１６６７、１６７７、および１６８７からなる群より選択される３つのＣＤＲを含み、かつ前記結合タンパク質は、ＴＮＦ−αおよびスクレロスチンに結合可能である、結合タンパク質。
【請求項４２】
前記結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１；または少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１の１つ以上の標的に対するオン速度定数（Ｋｏｎ）を有する、請求項２７、２９、３２または４１に記載の結合タンパク質。
【請求項４３】
前記結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合、多くとも約１０−３ｓ−１；多くとも約１０−４ｓ−１；多くとも約１０−５ｓ−１；または多くとも約１０−６ｓ−１の１つ以上の標的に対するオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する、請求項２７、２９、３２または４１に記載の結合タンパク質。
【請求項４４】
前記結合タンパク質は、多くとも約１０−７Ｍ；多くとも約１０−８Ｍ；多くとも約１０−９Ｍ；多くとも約１０−１０Ｍ；多くとも約１０−１１Ｍ；多くとも約１０−１２Ｍ；または多くとも１０−１３Ｍの１つ以上の標的に対する解離定数（ＫＤ）を有する、請求項２７、２９、３２または４１に記載の結合タンパク質。
【請求項４５】
請求項２７、２９、３２または４１に記載の結合タンパク質配列を含む結合タンパク質構築物であって、リンカーポリペプチドおよび／または免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む、結合タンパク質構築物。
【請求項４６】
前記結合タンパク質は、免疫グロブリン分子、ジスルフィド連結Ｆｖ、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、キメラ抗体、単一ドメイン抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、ヒト化抗体、多価特異的抗体、Ｆａｂ、二重特異的抗体、Ｆａｂ’、二価特異的抗体、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはＤＶＤ−結合タンパク質である、請求項４５に記載の結合タンパク質構築物。
【請求項４７】
前記結合タンパク質は、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、またはヒトＩｇＡ定常ドメインを含む、請求項４６に記載の結合タンパク質構築物。
【請求項４８】
配列番号１６９１、配列番号１６９２、配列番号１６９３、および配列番号１６９４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン定常ドメインを含む、請求項４６に記載の結合タンパク質構築物。
【請求項４９】
請求項２７、２９、３２、または４１に記載の結合タンパク質構築物を含む結合タンパク質コンジュゲートであって、前記結合タンパク質コンジュゲートはさらに、免疫接着分子、造影剤、治療薬、または細胞毒性剤を含む、結合タンパク質コンジュゲート。
【請求項５０】
請求項２７、２９、３２、または４１に記載の結合タンパク質アミノ酸配列をコードする単離された核酸。
【請求項５１】
請求項５０に記載のスクレロスチン結合タンパク質構築物アミノ酸配列をコードする単離された核酸。
【請求項５２】
請求項５１に記載の単離された核酸を含むベクター。
【請求項５３】
請求項５２に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項５４】
スクレロスチンに結合可能なタンパク質を産生する方法であって、スクレロスチンに結合可能な結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で培養培地中で請求項５３に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。
【請求項５５】
請求項５４に記載の方法によって産生されるタンパク質。
【請求項５６】
請求項２７、２９、３２、または４１に記載の結合タンパク質および薬学的に許容される担体を含有する、医薬組成物。
【請求項５７】
請求項５６に記載の組成物の有効量を哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物を治療する方法。
【請求項５８】
スクレロスチン活性が有害である障害を治療するための少なくとも１つの追加の治療薬をさらに含有する、請求項５６に記載の医薬組成物。
【請求項５９】
前記追加薬は、治療薬、造影剤、細胞毒性剤、血管形成インヒビター；キナーゼインヒビター；同時刺激分子ブロッカー；接着分子ブロッカー；抗−サイトカイン抗体またはそれらの機能的なフラグメント；メトトレキサート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能標識またはレポーター；ＴＮＦアンタゴニスト；抗リウマチ薬；筋弛緩薬、睡眠薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋ブロッカー、抗菌剤、乾癬治療薬、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン置換薬、放射性医薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、刺激薬、喘息薬、βアゴニスト、吸入ステロイド、経口ステロイド、エピネフリンまたはアナログ、サイトカイン、およびサイトカインアンタゴニストからなる群より選択される、請求項５８に記載の医薬組成物。
【請求項６０】
ヒトスクレロスチン活性を低減させるための方法であって、ヒトスクレロスチン活性が低減するように、ヒトスクレロスチンと請求項２７、２９、３２または４１に記載の結合タンパク質とを接触させることを含む、方法。
【請求項６１】
スクレロスチン活性が有害である障害に罹患しているヒト被験体においてヒトスクレロスチン活性を低減させるための方法であって、前記ヒト被験体におけるヒトスクレロスチン活性が低減するように、前記ヒト被験体に対して、請求項２７、２９、３２または４１に記載の結合タンパク質を投与することを含む、方法。
【請求項６２】
スクレロスチン活性が有害である疾患または障害について被験体を治療するための方法であって、治療が達成するように、前記被験体に対して、請求項２７、２９、３２または４１に記載の結合タンパク質を投与することによる、方法。
【請求項６３】
前記障害は、呼吸器障害；喘息、アレルギー性および非アレルギー性喘息；感染に起因する喘息；呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の感染に起因する喘息；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；気道炎症に関与する状態；好酸球増多症；線維症および／または過剰粘液産生；嚢胞性線維症；肺線維症；アトピー性障害；アトピー性皮膚炎；蕁麻疹；湿疹；アレルギー性鼻炎；アレルギー性胃腸炎；皮膚の炎症性および／または自己免疫状態；胃腸器官の炎症性および／または自己免疫状態；炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；潰瘍性大腸炎；クローン病；肝臓の炎症性および／または自己免疫状態；肝硬変；肝線維症；Ｂ型および／またはＣ型肝炎ウイルスによって引き起こされる肝線維症；強皮症；腫瘍；癌；肝細胞癌；グリア芽腫；リンパ腫、ホジキンリンパ腫；ウイルス感染；ＨＴＬＶ−１感染（例えば、ＨＴＬＶ−１から）；防御性１型免疫応答の発現の抑制、およびワクチン接種中の防御性１型免疫応答の発現の抑制からなる群より選択される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
スクレロスチンが有害である障害に罹患している患者を治療する方法であって、第２の剤の投与の前、同時または後に請求項２７、２９、３２、または４１に記載の結合タンパク質を投与する工程を含み、前記第２の剤は、吸入ステロイド；β−アゴニスト；短時間作用性または長時間作用性β−アゴニスト；ロイコトリエンまたはロイコトリエンレセプターのアンタゴニスト；ＡＤＶＡＩＲ；ＩｇＥインヒビター；抗−ＩｇＥ抗体；ＸＯＬＡＩＲ；ホスホジエステラーゼインヒビター；ＰＤＥ４インヒビター；キサンチン；抗コリン薬；肥満細胞安定化薬；クロモリン；ＩＬ−４インヒビター；ＩＬ−５インヒビター；エオタキシン／ＣＣＲ３インヒビター；ヒスタミンまたはＨ１、Ｈ２、Ｈ３、およびＨ４を含むそのレセプターのアンタゴニスト；プロスタグランジンＤまたはそのレセプターＤＰ１およびＣＲＴＨ２のアンタゴニスト；ＴＮＦアンタゴニスト；ＴＮＦレセプターの可溶性フラグメント；ＥＮＢＲＥＬ；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト；ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）インヒビター；ムスカリンレセプターアンタゴニスト；ＴＧＦ−βアンタゴニスト；インターフェロンγ；ペルフェニドン；化学療法剤、メトトレキサート；レフルノミド；シロリムス（ラパマイシン）またはそのアナログ、ＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２またはｃＰＬＡ２インヒビター；ＮＳＡＩＤ；免疫調節物質；ｐ３８インヒビター；ＴＰＬ−２、ＭＫ−２およびＮＦｋＢインヒビター；ブデノシド；上皮細胞成長因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチル酸塩；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼインヒビター；メサラミン；オルサラジン；バルサラジン；抗酸化剤；トロンボキサンインヒビター；ＩＬ−１レセプターアンタゴニスト；抗−ＩＬ−１β抗体；抗−ＩＬ−６抗体；成長因子；エラスターゼインヒビター；ピリジニル−イミダゾール化合物；ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、またはＰＤＧＦの抗体またはアゴニスト；ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはそれらのリガンドの抗体；ＦＫ５０６；ラパマイシン；ミコフェノール酸モフェチル；イブプロフェン；プレドニゾロン；ホスホジエステラーゼインヒビター；アデノシンアゴニスト；抗血栓剤；補体インヒビター；アドレナリン作動薬；ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、またはＭＡＰキナーゼインヒビター；ＩＬ−１β変換酵素インヒビター；ＴＮＦ−α変換酵素インヒビター；Ｔ細胞シグナル伝達インヒビター；メタロプロテイナーゼインヒビター；６−メルカプトプリン；アンジオテンシン変換酵素インヒビター；可溶性サイトカインレセプター；可溶性ｐ５５  ＴＮＦレセプター��可溶性ｐ７５  ＴＮＦレセプター；ｓＩＬ−１ＲＩ；ｓＩＬ−１ＲＩＩ；ｓＩＬ−６Ｒ；抗炎症性サイトカイン；ＩＬ−４；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ＳＯＳＴ；およびＴＧＦ−βからなる群より選択される、方法。
【請求項６５】
ＤＶＤ−結合タンパク質を生成させるための方法であって、
ａ）ＴＮＦ−αに結合可能な、第１の親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と；
ｂ）ヒトスクレロスチンに結合可能な、第２の親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と；
ｃ）請求項２７、２９、３２、または４１に記載のＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含むポリペプチド鎖を構築する工程と；
ｅ）前記ポリペプチド鎖を発現する工程と；
を含み、結果としてＤＶＤ−結合タンパク質が生成される、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１１年の１０月２４日に出願され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国仮出願第６１／５５０，７２４号の優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、スクレロスチン結合タンパク質、ならびに具体的には、関節リウマチ、変形性関節症、乾癬、多発性硬化症、および他の自己免疫疾患などの急性および慢性免疫疾患の予防および／または治療におけるスクレロスチン結合タンパク質の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＳＯＳＴ遺伝子は、配列相同性に基づき、糖タンパク質を含有するシステインノットのＤＡＮファミリーのメンバーとして分類されているスクレロスチンと呼ばれる２４ＫＤタンパク質をコードする（Ａｖａｓｉａｎ−Ｋｒｅｔｃｈｍｅｒ（２００４）Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．８（１）：１−１２）。スクレロスチンは、インビトロで骨芽細胞の増殖および分化を阻害し、骨芽細胞の石灰化を抑制する骨形成の負の調節因子である（Ｐｏｏｌｅら（２００５）ＦＡＳＥＢ Ｊ．１９：１８３６−３８；Ｗｉｎｋｌｅｒら（２００５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０（４）：２４９８−２５０２）。
【０００４】
スクレロスチンは、古典的Ｗｎｔシグナル伝達経路のインヒビターである。スクレロスチンが、ＬＲＰ４、ＬＲＰ５および／またはＬＲＰ６受容体に結合すると、β−カテニンが安定化され、リンパ系エンハンサー因子−１（ＬＥＦ）およびＴ細胞因子（ＴＣＦ）を含む転写調節因子を介して遺伝子転写が調節される。スクレロスチン阻害は、Ｗｎｔ経路を介するシグナル伝達を可能にし、骨形成をもたらす（ｖａｎ Ｂｅｚｏｏｉｊｅｎら（２００７）Ｊ．Ｂｏｎｅ Ｍｉｎ．Ｒｅｓ．２２（１）：１９−２８）。
【０００５】
古典的Ｗｎｔシグナル伝達が増加すると、骨量が増加する（Ｌｉら（２００５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０（２０）：１９８８３−７；Ｓｅｍｅｎｏｖら（２００５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０（２９）：２６７７０−７７５）。ＬＲＰ５の機能欠損変異体は、ヒトの骨粗鬆症−偽性神経膠腫症候群に見られる低骨量表現型をもたらし、ＬＲＰ５ ＫＯマウスは、これらの患者に見られる表現型に似た表現型を示す（Ｂａｌｅｍａｎｓら（２００８）Ｃａｌｃｉｆ．Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｔ．８２：４４５−５３）。ＳＯＳＴ遺伝子の２つのヒト変異は、硬結性骨化症（Ｓｃｌｅｒｏｓｔｅｏｓｉｓ）およびＶａｎ Ｂｕｃｈｅｍ疾患につながることが特定されており、これらの両方は、高骨量表現型をもたらす（Ｂｒｕｎｋｏｗら（２００１）Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．６８：５７７−８９；Ｂａｌｅｍａｎｓら（２００１）Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ １０：５３７−４３）。さらに、スクレロスチンＫＯマウスは高骨量表現型を示すが、スクレロスチン過剰産生Ｔｇマウスは、低骨量表現型を有する（Ｌｉら（２００８）Ｊ．Ｂｏｎｅ ａｎｄ Ｍｉｎ．Ｒｅｓ．２３（６）：８６０−９）。
【０００６】
ＡＭＧＥＮ社と共同でＵＣＢ Ｃｅｌｌｔｅｃｈ社（以前は、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ社）は、骨粗鬆症および骨折治癒の治療のためのスクレロスチン中和ｍＡｂを開発している。フェーズＩ臨床試験は完了している。フェーズＩＩ試験は骨粗鬆症で完了しており、フェーズＩＩＩ試験が開始された。骨折治癒の治療のための複数のフェーズＩＩ試験が進行している。ＴＮＦ−αアンタゴニストが、ヒト疾患において炎症を減少させ、軟骨損傷および骨侵食の進行を制限するので、関節炎におけるＴＮＦの病因的役割は十分に確立している（ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｅｒｇ（２００１）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ．３：１８−２６）。ＴＮＦアンタゴニストはＲＡ治療に革命をもたらしたが、多くの患者は、これらの薬物の適切な効果を示さない。ＴＮＦ−αおよびＳＯＳＴを用いた前臨床試験は、関節炎の病態生理学における独立した役割と重複した役割の両方を提示する。スクレロスチンまたはＴＮＦ−αの単独阻害は、炎症促進性遺伝子発現に対してほとんど影響を与えないが、ＳＯＳＴ阻害とＴＮＦ−α阻害の組み合わせは強い相乗反応をもたらす。特に、スクレロスチンとＴＮＦ−αを阻害する組み合わせは、炎症を阻止し、かつ骨折治癒を促進する可能性を有し、患者に多くの臨床的利点を提供する。
【０００７】
この重要な炎症促進性サイトカインの発見以来、スクレロスチンに対する様々な抗体について説明されてきたが、骨塩量、骨量および骨の強度を保護するかまたは回復させる一方で、炎症反応または自己免疫疾患中のスクレロスチンの活性を効果的に媒介または中和することができる改良された抗体のニーズが依然としてある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ヒトスクレロスチンに結合するタンパク質を提供する。抗体、その抗原結合部分、ならびにヒトスクレロスチンおよびＴＮＦ−αなどの別の標的に結合できるＤＶＤ結合タンパク質などの多価多特異的結合タンパク質を含むが、これらに限定されない結合タンパク質を提供する。本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質の作製法および使用法を提供し、かつ試料中のスクレロスチンの検出法、あるいはスクレロスチン活性と関連するかまたは関連すると疑われる個人の障害の治療法もしくは予防法において使用できる様々な組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
一態様において、ヒトスクレロスチンに結合可能な抗原結合ドメインであって、以下を含む少なくとも１つのＣＤＲを含む抗原結合ドメインを含む結合タンパク質を提供する：
ＣＤＲ−Ｈ１．Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５（配列番号１５）
式中、Ｘ１は、ＤもしくはＮであるか、または存在せず；
Ｘ２は、ＹまたはＮであり；
Ｘ３は、ＡまたはＮであり；
Ｘ４は、ＬまたはＮであり；
Ｘ５は、ＨまたはＮであり；
【００１０】
ＣＤＲ−Ｈ２．Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７（配列番号１６）
式中、Ｘ１は、ＧまたはＮであり；
Ｘ２は、ＩまたはＮであり；
Ｘ３は、ＳまたはＮであり；
Ｘ４は、ＷまたはＮであり；
Ｘ５は、ＨまたはＮであり；
Ｘ６は、ＧまたはＮであり；
Ｘ７は、ＤまたはＮであり；
Ｘ８は、ＦまたはＮであり；
Ｘ９は、ＩまたはＮであり；
Ｘ１０は、ＤまたはＮであり；
Ｘ１１は、ＹまたはＮであり；
Ｘ１２は、ＡまたはＮであり；
Ｘ１３は、ＤまたはＮであり；
Ｘ１４は、ＳまたはＮであり；
Ｘ１５は、ＶまたはＮであり；
Ｘ１６は、ＫまたはＮであり；
Ｘ１７は、ＧまたはＮであり；
【００１１】
ＣＤＲ−Ｈ３．Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２（配列番号１７）
式中、Ｘ１は、ＮまたはＮであり；
Ｘ２は、ＮまたはＮであり；
Ｘ３は、ＲまたはＮであり；
Ｘ４は、ＧまたはＮであり；
Ｘ５は、ＹまたはＮであり；
Ｘ６は、ＧまたはＮであり；
Ｘ７は、ＧまたはＮであり；
Ｘ８は、ＬまたはＮであり；
Ｘ９は、ＤまたはＮであり；
Ｘ１０は、ＶまたはＮであり；
【００１２】
ＣＤＲ−Ｌ１．Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６（配列番号１８）
式中、Ｘ１は、ＳまたはＮであり；
Ｘ２は、ＧまたはＮであり；
Ｘ３は、ＳまたはＮであり；
Ｘ４は、ＳまたはＮであり；
Ｘ５は、ＳまたはＮであり；
Ｘ６は、ＮまたはＮであり；
Ｘ７は、ＩまたはＮであり；
Ｘ８は、ＧまたはＮであり；
Ｘ９は、ＳまたはＮであり；
Ｘ１０は、ＮまたはＮであり；
Ｘ１１は、ＴまたはＮであり；
Ｘ１２は、ＶまたはＮであり；
Ｘ１３は、ＮまたはＮであり；
【００１３】
ＣＤＲ−Ｌ２．Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（配列番号１９）
式中、Ｘ１は、ＳまたはＮであり；
Ｘ２は、ＮまたはＮであり；
Ｘ３は、ＮまたはＮであり；
Ｘ４は、ＱまたはＮであり；
Ｘ５は、ＲまたはＮであり；
Ｘ６は、ＰまたはＮであり；
Ｘ７は、ＳまたはＮであり；
または
【００１４】
ＣＤＲ−Ｌ３．Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９（配列番号２０）
式中、Ｘ１は、ＡまたはＮであり；
Ｘ２は、ＡまたはＮであり；
Ｘ３は、ＷまたはＮであり；
Ｘ４は、ＤまたはＮであり；
Ｘ５は、ＤまたはＮであり；
Ｘ６は、ＳまたはＮであり；
Ｘ７は、ＬまたはＮであり；
Ｘ８は、ＮまたはＮであり；
Ｘ９は、ＧまたはＮであり；
Ｘ１０は、ＳまたはＮであり；
Ｘ１１は、ＹまたはＮであり；
Ｘ１２は、ＶまたはＮである。
【００１５】
一実施形態において、配列番号３の残基３１〜３５；配列番号３の残基５０〜６６；配列番号３の残基９９〜１０８；配列番号４の残基２３〜３４；配列番号４の残基５１〜５７；配列番号４の残基９０〜１０１；配列番号５の残基３１〜３５；配列番号５の残基５０〜６６；配列番号５の残基９９〜１１５；配列番号６の残基２３〜３３；配列番号６の残基４９〜５５；配列番号６の残基８８〜９６；配列番号７の残基３１〜３５；配列番号７の残基５０〜６６；配列番号７の残基９９〜１０７；配列番号８の残基２３〜３３；配列番号８の残基４９〜５５；配列番号８の残基８８〜９５；配列番号９の残基３１〜３５；配列番号９の残基５０〜６６；配列番号９の残基９９〜１０７；配列番号１０の残基２４〜３９；配列番号１０の残基５５〜６１；配列番号１０の残基９４〜１１２；配列番号１１の残基３１〜３５；配列番号１１の残基５０〜６６；配列番号１１の残基９９〜１１１；配列番号１２の残基２４〜３９；配列番号１２の残基５５〜６１；配列番号１２の残基９４〜１１３；配列番号１３の残基３１〜３７；配列番号１３の残基５２〜６９；配列番号１３の残基１０２〜１２２；配列番号１４の残基２４〜３４；配列番号１４の残基５０〜５６；配列番号１４の残基８９〜９７；配列番号１９９８の残基３１〜３５；配列番号１９９８の残基５０〜６６；配列番号１９９８の残基９９〜１１０；配列番号１９９９の残基３１〜３５；配列番号１９９９の残基５０〜６６；配列番号１９９９の残基９９〜１１０；配列番号２０００の残基３１〜３５；配列番号２０００の残基５０〜６６；配列番号２０００の残基９９〜１１０；配列番号２００１の残基３１〜３５；配列番号２００１の残基５０〜６６；配列番号２００１の残基９９〜１１０；配列番号２００２の残基３１〜３５；配列番号２００２の残基５０〜６６；配列番号２００２の残基９９〜１１０；配列番号２００３の残基３１〜３５；配列番号２００３の残基５０〜６６；配列番号２００３の残基９９〜１１０；配列番号２００４の残基３１〜３５；配列番号２００４の残基５０〜６６；配列番号２００４の残基９９〜１１０；配列番号２００５の残基３１〜３５；配列番号２００５の残基５０〜６６；配列番号２００５の残基９９〜１１０；配列番号２００６の残基３１〜３５；配列番号２００６の残基５０〜６６；配列番号２００６の残基９９〜１１０；配列番号２００７の残基３１〜３５；配列番号２００７の残基５０〜６６；配列番号２００７の残基９９〜１１０；配列番号２００８の残基２３〜３６；配列番号２００８の残基５２〜５８；配列番号２００８の残基１０１〜１０９；配列番号２００９の残基２３〜３６；配列番号２００９の残基５２〜５８；配列番号２００９の残基１０１〜１０９；配列番号２００８の残基２３〜３６；配列番号２０１０の残基５２〜５８；配列番号２０１０の残基１０１〜１０９；配列番号２０１１の残基２３〜３６；配列番号２０１１の残基５２〜５８；配列番号２０１１の残基１０１〜１０９；配列番号２０１２の残基２３〜３６；配列番号２０１２の残基５２〜５８；配列番号２０１２の残基１０１〜１０９；配列番号２０１３の残基２３〜３６；配列番号２０１３の残基５２〜５８；配列番号２０１３の残基１０１〜１０９；配列番号２０１４の残基２３〜３６；配列番号２０１４の残基５２〜５８；配列番号２０１４の残基１０１〜１０９；配列番号２０１５の残基２３〜３６；配列番号２０１５の残基５２〜５８；配列番号２０１５の残基１０１〜１０９；配列番号２０１６の残基２３〜３６；配列番号２０１６の残基５２〜５８；配列番号２０１６の残基１０１〜１０９；配列番号２０１７の残基２３〜３６；配列番号２０１７の残基５２〜５８；配列番号２０１７の残基１０１〜１０９；配列番号２０２０の残基３１〜３５；配列番号２０２０の残基５０〜６６；配列番号２０２０の残基９９〜１０８；配列番号２０２１の残基３１〜３５；配列番号２０２１の残基５０〜６６；配列番号２０２１の残基９９〜１０８；配列番号２０２２の残基３１〜３５；配列番号２０２２の残基５０〜６６；配列番号２０２２の残基９９〜１０８；配列番号２０２３の残基３１〜３５；配列番号２０２３の残基５０〜６６；配列番号２０２３の残基９９〜１０８；配列番号２０２４の残基３１〜３５；配列番号２０２４の残基５０〜６６；配列番号２０２４の残基９９〜１０８；配列番号２０２５の残基３１〜３５；配列番号２０２５の残基５０〜６６；配列番号２０２５の残基９９〜１０８；配列番号２０２６の残基３１〜３５；配列番号２０２６の残基５０〜６６；配列番号２０２６の残基９９〜１０８；配列番号２０２７の残基３１〜３５；配列番号２０２７の残基５０〜６６；配列番号２０２７の残基９９〜１０８；配列番号２０２８の残基３１〜３５；配列番号２０２８の残基５０〜６６；配列番号２０２８の残基９９〜１０８；配列番号２０２９の残基３１〜３５；配列番号２０２９の残基５０〜６６；配列番号２０２９の残基９９〜１０８；配列番号２０３０の残基３１〜３５；配列番号２０３０の残基５０〜６６；配列番号２０３０の残基９９〜１０８；配列番号２０３１の残基３１〜３５；配列番号２０３１の残基５０〜６６；配列番号２０３１の残基９９〜１０８；配列番号２０３２の残基３１〜３５；配列番号２０３２の残基５０〜６６；配列番号２０３２の残基９９〜１０８；配列番号２０３３の残基３１〜３５；配列番号２０３３の残基５０〜６６；配列番号２０３３の残基９９〜１０８；配列番号２０３４の残基３１〜３５；配列番号２０３４の残基５０〜６６；配列番号２０３４の残基９９〜１１０；配列番号２０３５の残基３１〜３５；配列番号２０３５の残基５１〜５７；配列番号２０３５の残基９０〜１０１；配列番号２０３６の残基３１〜３５；配列番号２０３６の残基５１〜５７；配列番号２０３６の残基９０〜１０１；配列番号２０３７の残基３１〜３５；配列番号２０３７の残基５１〜５７；配列番号２０３７の残基９０〜１０１；配列番号２０３８の残基３１〜３５；配列番号２０３８の残基５１〜５７；配列番号２０３８の残基９０〜１０１；配列番号２０３９の残基３１〜３５；配列番号２０３９の残基５１〜５７；配列番号２０３９の残基９０〜１０１；配列番号２０４０の残基３１〜３５；配列番号２０４０の残基５１〜５７；配列番号２０４０の残基９０〜１０１；配列番号２０４１の残基３１〜３５；配列番号２０４１の残基５１〜５７；配列番号２０４１の残基９０〜１０１；配列番号２０４２の残基３１〜３５；配列番号２０４２の残基５１〜５７；配列番号２０４２の残基９０〜１０１；配列番号２０４３の残基３１〜３５；配列番号２０４３の残基５１〜５７；配列番号２０４３の残基９０〜１０１；配列番号２０４４の残基３１〜３５；配列番号２０４４の残基５１〜５７；配列番号２０４４の残基９０〜１０１；配列番号２０４５の残基３１〜３５；配列番号２０４５の残基５１〜５７；配列番号２０４５の残基９０〜１０１；配列番号２０４６の残基３１〜３５；配列番号２０４６の残基５１〜５７；配列番号２０４６の残基９０〜１０１；配列番号２０４７の残基３１〜３５；配列番号２０４７の残基５１〜５７；配列番号２０４７の残基９０〜１０１；配列番号２０４８の残基３１〜３５；配列番号２０４８の残基５１〜５７；配列番号２０４８の残基９０〜１０１；配列番号２０４９の残基３１〜３５；配列番号２０４９の残基５１〜５７；配列番号２０４９の残基９０〜１０１を含む少なくとも１つのＣＤＲを含む結合タンパク質を提供する。
【００１６】
別の実施形態において、上記の少なくとも３つのＣＤＲを含むスクレロスチン結合タンパク質を提供する。
【００１７】
別の実施形態において、表１の少なくとも３つのＣＤＲを含むスクレロスチン結合タンパク質を提供する。
【００１８】
【表１】
2014533659.tif 000002
【００１９】
【表２】
2014533659.tif 000003
【００２０】
【表３】
2014533659.tif 000004
【００２１】
【表４】
2014533659.tif 000005
【００２２】
【表５】
2014533659.tif 000006
【００２３】
【表６】
2014533659.tif 000007
【００２４】
【表７】
2014533659.tif 000008
【００２５】
別の実施形態において、スクレロスチン結合タンパク質は、上記の少なくとも２つの可変ドメインＣＤＲセットを含んでもよい。一実施形態において、この２つの可変ドメインＣＤＲセットは、ＶＨ ＭＳＬ１０ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＬ１０ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＬ１７ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＬ１７ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＬ９−８ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＬ９−８ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＫ９ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＫ９ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＫ１３ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＫ１３ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＫ２１ ＣＤＲセットまたはＶＬ ＭＳＫ２１ ＣＤＲセット；ＶＨ ＡＥ１０−６ ＡＭ１ ＣＤＲセットとＶＬ ＡＥ１０−６ ＡＭ１ ＣＤＲセット；ＶＨ ＡＥ１０−６ ＡＭ２ ＣＤＲセットとＶＬ ＡＥ１０−６ ＡＭ２ ＣＤＲセット；ＶＨ ＡＥ１０−６ ＡＭ３ ＣＤＲセットとＶＬ ＡＥ１０−６ ＡＭ３ ＣＤＲセット；ＶＨ ＡＥ１０−６ ＡＭ４ ＣＤＲセットとＶＬ ＡＥ１０−６ ＡＭ４ ＣＤＲセット；ＶＨ ＡＥ１０−６ ＡＭ５ ＣＤＲセットとＶＬ ＡＥ１０−６ ＡＭ５ ＣＤＲセット；ＶＨ ＡＥ１０−６ ＡＭ６ ＣＤＲセットとＶＬ ＡＥ１０−６ ＡＭ６ ＣＤＲセット；ＶＨ ＡＥ１０−６ ＡＭ７ ＣＤＲセットとＶＬ ＡＥ１０−６ ＡＭ７ ＣＤＲセット；ＶＨ ＡＥ１０−６ ＡＭ８ ＣＤＲセットとＶＬ ＡＥ１０−６ ＡＭ８ＣＤＲセット；ＶＨ ＡＥ１０−６ ＡＭ９ＣＤＲセットとＶＬ ＡＥ１０−６ ＡＭ９ＣＤＲセット；ＶＨ ＡＥ１０−６ ＡＭ１０ＣＤＲセットとＶＬ ＡＥ１０−６ ＡＭ１０ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＬ１０ ＡＭ１ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＬ１０ ＡＭ１ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＬ１０ ＡＭ２ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＬ１０ ＡＭ２ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＬ１０ ＡＭ３ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＬ１０ ＡＭ３ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＬ１０ ＡＭ４ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＬ１０ ＡＭ４ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＬ１０ ＡＭ５ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＬ１０ ＡＭ５ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＬ１０ ＡＭ６ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＬ１０ ＡＭ６ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＬ１０ ＡＭ７ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＬ１０ ＡＭ７ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＬ１０ ＡＭ８ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＬ１０ ＡＭ８ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＬ１０ ＡＭ９ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＬ１０ ＡＭ９ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＬ１０ ＡＭ１０ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＬ１０ ＡＭ１０ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＬ１０ ＡＭ１．２ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＬ１０ ＡＭ１．２ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＬ１０ ＡＭ２．２ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＬ１０ ＡＭ２．２ ＣＤＲセット；ＶＨ ＭＳＬ１０ ＡＭ３．２ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＬ１０ ＡＭ３．２ ＣＤＲセット；ならびにＶＨ ＭＳＬ１０ ＡＭ４．２ ＣＤＲセットとＶＬ ＭＳＬ１０ ＡＭ４．２ ＣＤＲセットである。
【００２６】
別の実施形態において、本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質は２つの可変ドメインを含み、その際、第１の可変ドメインは、配列番号３、５、７、９、１１、１３、１７１９〜１８６６、１９９８〜２００７、２０１８、および２０２０〜２０３４からなる群から選択される配列を含み、第２の可変ドメインは、配列番号４、６、８、１０、１２、１８６７〜１９９７、２００７〜２０１７、２０１９、および２０３５〜２０４９からなる群から選択される配列を含む。
【００２７】
別の実施形態において、ＶＨを含む抗原結合ドメインを含むスクレロスチン結合タンパク質を提供する。一実施形態において、ＶＨは、配列番号３、５、７、９、１１、１３、１７１９〜１８６６、１９９８〜２００７、２０１８、または２０２０〜２０３４のいずれか１つを含む。別の実施形態において、ＶＬを含む抗原結合ドメインを含むスクレロスチン結合タンパク質を提供する。一実施形態において、ＶＬは、配列番号４、６、８、１０、１２、１４、１８６７〜１９９７、２００８〜２０１７、２０１９、または２０３５〜２０４９のいずれか１つを含む。
【００２８】
別の実施形態において、ＶＨおよびＶＬを含む抗原結合ドメインを含むスクレロスチン結合タンパク質を提供する。一実施形態において、ＶＨは、配列番号３、５、７、９、１１、または１３を含み、ＶＬは、配列番号４、６、８、１０、１２、１４、１８６７〜１９９７、２００８〜２０１７、２０１９、または２０３５〜２０４９を含む。
【００２９】
スクレロスチン結合タンパク質は、少なくとも１つのフレームワーク領域のアミノ酸置換を含む別のヒトアクセプターフレームワークを含んでもよく、このフレームワークのアミノ酸配列は、前記ヒトアクセプターフレームワークの配列と少なくとも６５％同一であり、前記ヒトアクセプターフレームワークと同一の少なくとも７０個のアミノ酸残基を含む。
【００３０】
別の実施形態において、スクレロスチン結合タンパク質は、別のヒトアクセプターフレームワークを含み、前記アクセプターフレームワークは、少なくとも１つのフレームワーク領域の重要な残基のアミノ酸置換を含み、前記重要な残基は、以下を含む：
ＣＤＲに隣接した残基；
糖鎖付加部位の残基；
まれな残基；
ヒトＳＯＳＴと相互作用可能な残基；
ＣＤＲと相互作用可能な残基；
カノニカル残基（ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｒｅｓｉｄｕｅ）；
重鎖可変領域と軽鎖可変領域の間の接触残基；
ベルニエ領域（Ｖｅｒｎｉｅｒ ｚｏｎｅ）内の残基；または
コチア（Ｃｈｏｔｈｉａ）によって定義される可変重鎖ＣＤＲ１とカバット（Ｋａｂａｔ）によって定義される第１の重鎖フレームワークの間で重複する領域中の残基。
【００３１】
別の実施形態において、本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質は、さらに、以下の重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む：ヒトＩｇＭ定常ドメイン；ヒトＩｇＧ１定常ドメイン；ヒトＩｇＧ２定常ドメイン；ヒトＩｇＧ３定常ドメイン；ヒトＩｇＧ４定常ドメイン；ヒトＩｇＥ定常ドメイン；またはヒトＩｇＡ定常ドメイン。一実施形態において、この重鎖免疫グロブリン定常領域は、ヒトＩｇＧ１定常ドメインである。一実施形態において、ヒトＩｇＧ１定常ドメインは、配列番号１６９１または配列番号１６９２を含む。
【００３２】
別の実施形態において、本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質は、ヒトＩｇκ定常ドメインまたはヒトＩｇλ定常ドメインである軽鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。例示的なヒトＩｇκ定常ドメインは、アミノ酸配列１６９３を含む。例示的なヒトＩｇλ定常ドメインは、アミノ酸配列１６９４を含む。
【００３３】
別の実施形態において、本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質は、免疫グロブリン分子、ｓｃＦｖ、モノクローナル抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ、またはジスルフィド結合Ｆｖである。特定の実施形態において、スクレロスチン結合タンパク質は、ヒト抗体である。
【００３４】
別の態様は、ヒトスクレロスチンに結合可能な結合タンパク質であって、以下を含む結合タンパク質を提供する：
配列番号１６９１または配列番号１６９２のアミノ酸配列を有するＩｇ重鎖定常領域；
配列番号１６９３または配列番号１６９４のアミノ酸配列を有するＩｇ軽鎖定常領域；
配列番号３、５、７、９、１１、１３、１７１９〜１８６６、１９９８〜２００７、２０１８、または２０２０〜２０３４のアミノ酸配列を有するＩｇ重鎖可変領域；ならびに
配列番号４、６、８、１０、１２、１４、１８６７〜１９９７、２００８〜２０１７、２０１９、または２０３５〜２０４９のアミノ酸配列を有するＩｇ軽鎖可変領域。
【００３５】
一実施形態において、ヒトスクレロスチンに結合可能な結合タンパク質であって、以下を含む結合タンパク質を提供する：
配列番号３のアミノ酸配列を有するＩｇ重鎖定常領域；
配列番号５のアミノ酸配列を有するＩｇ軽鎖定常領域；
表１８のＶＨのアミノ酸配列を有するＩｇ重鎖可変領域；
配列番号３、５、７、９、１１、１３、１７１９〜１８６６、１９９８〜２００７、２０１８、または２０２０〜２０３４のＶＨのアミノ酸配列；ならびに
配列番号４、６、８、１０、１２、１４、１８６７〜１９９７、２００８〜２０１７、２０１９、または２０３５〜２０４９のＶＬのアミノ酸配列を有するＩｇ軽鎖可変領域。
【００３６】
別の態様は、ポリペプチド鎖を含む多価多特異的ＤＶＤ結合タンパク質を提供し、このポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
式中、ＶＤ１は、第１の重鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は、第２の重鎖可変ドメインであり；
Ｃは、重鎖定常ドメインであり；
Ｘ１は、ＣＨ１ではないという条件でリンカーであり；
Ｘ２は、Ｆｃ領域であり；
（Ｘ１）ｎは、（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは、（Ｘ２）０または（Ｘ２）１であり；
【００３７】
（ａ）ＶＤ１またはＶＤ２は、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、または１６８４からの３つのＣＤＲを含み、この結合タンパク質は、スクレロスチンおよび別の標的に結合可能であり；
【００３８】
（ｂ）ＶＤ１およびＶＤ２は、独立して、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、または１６８４からの３つのＣＤＲを含み、この結合タンパク質は、スクレロスチンおよびスクレロスチンに結合可能であり；
【００３９】
（ｃ）ＶＤ１は、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、または１６８４からの３つのＣＤＲを含み、ＶＤ２は、配列番号２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、２０２、２１２、２２２、２３２、２４２、２５２、２６２、２７２、２８２、２９２、３０２、３１２、３２２、３３２、３４２、３５２、３６２、３７２、３８２、３９２、４０２、４１２、４２２、４３２、４４２、４５２、４６２、４７２、４８２、４９２、５０２、５１２、５２２、５３２、５４２、５５２、５６２、５７２、５８２、５９２、６０２、６１２、６２２、６３２、６４２、６５２、６６２、６７２、６８２、６９２、７０２、７１２、７２２、７３２、７４２、７５２、７６２、７７２、７８２、７９２、８０２、８１２、８２２、８３２、８４２、８５２、８６２、８７２、８８２、８９２、９０２、９１２、９２２、９３２、９４２、９５２、９６２、９７２、９８２、９９２、１００２、１０１２、１０２２、１０３２、１０４２、１０５２、１０６２、１０７２、１０８２、１０９２、１１０２、１１１２、１１２２、１１３２、１１４２、１１５２、１１６２、１１７２、１１８２、１１９２、１２０２、１２１２、１２２２、１２３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１３４２、１３５２、１３６２、１３７２、１３８２、１３９２、１４０２、１４１２、１４２２、１４３２、１４４２、１４５２、１４６２、１４７２、１４８２、１４９２、１５０２、１５１２、１５２２、１５３２、１５４２、１５５２、１５６２、１５７２、１５８２、１５９２、１６０２、１６１２、１６２２、１６３２、１６４２、１６５２、１６６２、１６７２、または１６８２からの３つのＣＤＲを含み、この結合タンパク質は、スクレロスチンおよびＴＮＦ−αに結合可能であり；または
【００４０】
（ｄ）ＶＤ２は、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、または６３４からの３つのＣＤＲを含み、ＶＤ１は、配列番号２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、２０２、２１２、２２２、２３２、２４２、２５２、２６２、２７２、２８２、２９２、３０２、３１２、３２２、３３２、３４２、３５２、３６２、３７２、３８２、３９２、４０２、４１２、４２２、４３２、４４２、４５２、４６２、４７２、４８２、４９２、５０２、５１２、５２２、５３２、５４２、５５２、５６２、５７２、５８２、５９２、６０２、６１２、６２２、６３２、６４２、６５２、６６２、６７２、６８２、６９２、７０２、７１２、７２２、７３２、７４２、７５２、７６２、７７２、７８２、７９２、８０２、８１２、８２２、８３２、８４２、８５２、８６２、８７２、８８２、８９２、９０２、９１２、９２２、９３２、９４２、９５２、９６２、９７２、９８２、９９２、１００２、１０１２、１０２２、１０３２、１０４２、１０５２、１０６２、１０７２、１０８２、１０９２、１１０２、１１１２、１１２２、１１３２、１１４２、１１５２、１１６２、１１７２、１１８２、１１９２、１２０２、１２１２、１２２２、１２３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１３４２、１３５２、１３６２、１３７２、１３８２、１３９２、１４０２、１４１２、１４２２、１４３２、１４４２、１４５２、１４６２、１４７２、１４８２、１４９２、１５０２、１５１２、１５２２、１５３２、１５４２、１５５２、１５６２、１５７２、１５８２、１５９２、１６０２、１６１２、１６２２、１６３２、１６４２、１６５２、１６６２、１６７２、または１６８２からの３つのＣＤＲを含み、この結合タンパク質は、ＴＮＦ−αおよびスクレロスチンに結合可能である。
【００４１】
上記のＤＶＤ結合タンパク質の実施形態において、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２は、配列番号２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、１６１、１７１、１８１、１９１、２０１、２１１、２２１、２３１、２４１、２５１、２６１、２７１、２８１、２９１、３０１、３１１、３２１、３３１、３４１、３５１、３６１、３７１、３８１、３９１、４０１、４１１、４２１、４３１、４４１、４５１、４６１、４７１、４８１、４９１、５０１、５１１、５２１、５３１、５４１、５５１、５６１、５７１、５８１、５９１、６０１、６１１、６２１、６３１、６４１、６５１、６６１、６７１、６８１、６９１、７０１、７１１、７２１、７３１、７４１、７５１、７６１、７７１、７８１、７９１、８０１、８１１、８２１、８３１、８４１、８５１、８６１、８７１、８８１、８９１、９０１、９１１、９２１、９３１、９４１、９５１、９６１、９７１、９８１、９９１、１００１、１０１１、１０２１、１０３１、１０４１、１０５１、１０６１、１０７１、１０８１、１０９１、１１０１、１１１１、１１２１、１１３１、１１４１、１１５１、１１６１、１１７１、１１８１、１１９１、１２０１、１２１１、１２２１、１２３１、１２４１、１２５１、１２６１、１２７１、１２８１、１２９１、１３０１、１３１１、１３２１、１３３１、１３４１、１３５１、１３６１、１３７１、１３８１、１３９１、１４０１、１４１１、１４２１、１４３１、１４４１、１４５１、１４６１、１４７１、１４８１、１４９１、１５０１、１５１１、１５２１、１５３１、１５４１、１５５１、１５６１、１５７１、１５８１、１５９１、１６０１、１６１１、１６２１、１６３１、１６４１、１６５１、１６６１、１６７１、または１６８１を含む。
【００４２】
別の態様は、ポリペプチド鎖を含む多価多特異的ＤＶＤ結合タンパク質を提供し、このポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
式中、ＶＤ１は、第１の軽鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は、第２の軽鎖可変ドメインであり；
Ｃは、軽鎖定常ドメインであり；
Ｘ１は、ＣＬではないという条件でリンカーであり；
Ｘ２は、Ｆｃ領域を含まず；
（Ｘ１）ｎは、（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは、（Ｘ２）０または（Ｘ２）１であり；
【００４３】
（ａ）ＶＤ１またはＶＤ２は、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９、９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、または１６８９からの３つのＣＤＲを含み、この結合タンパク質は、スクレロスチンおよび別の標的に結合可能であり；
【００４４】
（ｂ）ＶＤ１およびＶＤ２は、独立して、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９、９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、または１６８９からの３つのＣＤＲを含み、この結合タンパク質は、スクレロスチンおよびスクレロスチンに結合可能であり；
【００４５】
（ｃ）ＶＤ１は、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９、９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、または１６８９からの３つのＣＤＲを含み、ＶＤ２は、配列番号２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、１５７、１６７、１７７、１８７、１９７、２０７、２１７、２２７、２３７、２４７、２５７、２６７、２７７、２８７、２９７、３０７、３１７、３２７、３３７、３４７、３５７、３６７、３７７、３８７、３９７、４０７、４１７、４２７、４３７、４４７、４５７、４６７、４７７、４８７、４９７、５０７、５１７、５２７、５３７、５４７、５５７、５６７、５７７、５８７、５９７、６０７、６１７、６２７、６３７、６４７、６５７、６６７、６７７、６８７、６９７、７０７、７１７、７２７、７３７、７４７、７５７、７６７、７７７、７８７、７９７、８０７、８１７、８２７、８３７、８４７、８５７、８６７、８７７、８８７、８９７、９０７、９１７、９２７、９３７、９４７、９５７、９６７、９７７、９８７、９９７、１００７、１０１７、１０２７、１０３７、１０４７、１０５７、１０６７、１０７７、１０８７、１０９７、１１０７、１１１７、１１２７、１１３７、１１４７、１１５７、１１６７、１１７７、１１８７、１１９７、１２０７、１２１７、１２２７、１２３７、１２４７、１２５７、１２６７、１２７７、１２８７、１２９７、１３０７、１３１７、１３２７、１３３７、１３４７、１３５７、１３６７、１３７７、１３８７、１３９７、１４０７、１４１７、１４２７、１４３７、１４４７、１４５７、１４６７、１４７７、１４８７、１４９７、１５０７、１５１７、１５２７、１５３７、１５４７、１５５７、１５６７、１５７７、１５８７、１５９７、１６０７、１６１７、１６２７、１６３７、１６４７、１６５７、１６６７、１６７７、または１６８７からの３つのＣＤＲを含み、この結合タンパク質は、スクレロスチンおよびＴＮＦ−αに結合可能であり；または
【００４６】
（ｄ）ＶＤ２は、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９、９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、または１６８９からの３つのＣＤＲを含み、ＶＤ１は、配列番号２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、１５７、１６７、１７７、１８７、１９７、２０７、２１７、２２７、２３７、２４７、２５７、２６７、２７７、２８７、２９７、３０７、３１７、３２７、３３７、３４７、３５７、３６７、３７７、３８７、３９７、４０７、４１７、４２７、４３７、４４７、４５７、４６７、４７７、４８７、４９７、５０７、５１７、５２７、５３７、５４７、５５７、５６７、５７７、５８７、５９７、６０７、６１７、６２７、６３７、６４７、６５７、６６７、６７７、６８７、６９７、７０７、７１７、７２７、７３７、７４７、７５７、７６７、７７７、７８７、７９７、８０７、８１７、８２７、８３７、８４７、８５７、８６７、８７７、８８７、８９７、９０７、９１７、９２７、９３７、９４７、９５７、９６７、９７７、９８７、９９７、１００７、１０１７、１０２７、１０３７、１０４７、１０５７、１０６７、１０７７、１０８７、１０９７、１１０７、１１１７、１１２７、１１３７、１１４７、１１５７、１１６７、１１７７、１１８７、１１９７、１２０７、１２１７、１２２７、１２３７、１２４７、１２５７、１２６７、１２７７、１２８７、１２９７、１３０７、１３１７、１３２７、１３３７、１３４７、１３５７、１３６７、１３７７、１３８７、１３９７、１４０７、１４１７、１４２７、１４３７、１４４７、１４５７、１４６７、１４７７、１４８７、１４９７、１５０７、１５１７、１５２７、１５３７、１５４７、１５５７、１５６７、１５７７、１５８７、１５９７、１６０７、１６１７、１６２７、１６３７、１６４７、１６５７、１６６７、１６７７、または１６８７からの３つのＣＤＲを含み、この結合タンパク質は、ＴＮＦ−αおよびスクレロスチンに結合可能である。
【００４７】
上記のＤＶＤ結合タンパク質の実施形態において、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２は、配列番号２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４６、１５６、１６６、１７６、１８６、１９６、２０６、２１６、２２６、２３６、２４６、２５６、２６６、２７６、２８６、２９６、３０６、３１６、３２６、３３６、３４６、３５６、３６６、３７６、３８６、３９６、４０６、４１６、４２６、４３６、４４６、４５６、４６６、４７６、４８６、４９６、５０６、５１６、５２６、５３６、５４６、５５６、５６６、５７６、５８６、５９６、６０６、６１６、６２６、６３６、６４６、６５６、６６６、６７６、６８６、６９６、７０６、７１６、７２６、７３６、７４６、７５６、７６６、７７６、７８６、７９６、８０６、８１６、８２６、８３６、８４６、８５６、８６６、８７６、８８６、８９６、９０６、９１６、９２６、９３６、９４６、９５６、９６６、９７６、９８６、９９６、１００６、１１１６、１１２６、１１３６、１１４６、１１５６、１１６６、１１７６、１１８６、１１９６、１２０６、１２１６、１２２６、１２３６、１２４６、１２５６、１２６６、１２７６、１２８６、１２９６、１３０６、１３１６、１３２６、１３３６、１３４６、１３５６、１３６６、１３７６、１３８６、１３９６、１４０６、１４１６、１４２６、１４３６、１４４６、１４５６、１４６６、１４７６、１４８６、１４９６、１５０６、１５１６、１５２６、１５３６、１５４６、１５５６、１５６６、１５７６、１５８６、１５９６、１６０６、１６１６、１６２６、１６３６、１６４６、１６５６、１６６６、１６７６、または１６８６を含む。
【００４８】
別の実施形態は、第１および第２のポリプチド鎖を含む多価多特異的ＤＶＤ−Ａ結合タンパク質を提供し、
この第１のポリペプチド鎖は、第１のＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
式中、ＶＤ１は、第１の重鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は、第２の重鎖可変ドメインであり；
Ｃは、重鎖定常ドメインであり；
Ｘ１は、第１のリンカーであり；
Ｘ２は、Ｆｃ領域であり；
（Ｘ１）ｎは、（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは、（Ｘ２）０または（Ｘ２）１であり；
この第２のポリペプチド鎖は、第２のＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
ＶＤ１は、第１の軽鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は、第２の軽鎖可変ドメインであり；
Ｃは、軽鎖定常ドメインであり；
Ｘ１は、第２のリンカーであり；
Ｘ２は、Ｆｃ領域を含まず；
（Ｘ１）ｎは、（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは、（Ｘ２）０または（Ｘ２）１であり；
この第１および第２のＸ１リンカーは、同じであるかまたは異なっており；
この第１のＸ１リンカーはＣＨ１ではなく、かつ／またはこの第２のＸ１リンカーはＣＬではなく、
【００４９】
（ａ）このＶＤ１またはＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、または１６８４からの３つのＣＤＲを含み、このＶＤ１またはＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９、９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、または１６８９からの３つのＣＤＲを含み、この結合タンパク質は、スクレロスチンおよび別の標的に結合可能であり；
【００５０】
（ｂ）このＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、独立して、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、または１６８４からの３つのＣＤＲを含み、このＶＤ１またはＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９、９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、または１６８９からの３つのＣＤＲを含み、この結合タンパク質は、スクレロスチンおよびスクレロスチンに結合可能であり；
【００５１】
（ｃ）このＶＤ１重鎖可変ドメインは、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、または１６８４からの３つのＣＤＲを含み、このＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、２０２、２１２、２２２、２３２、２４２、２５２、２６２、２７２、２８２、２９２、３０２、３１２、３２２、３３２、３４２、３５２、３６２、３７２、３８２、３９２、４０２、４１２、４２２、４３２、４４２、４５２、４６２、４７２、４８２、４９２、５０２、５１２、５２２、５３２、５４２、５５２、５６２、５７２、５８２、５９２、６０２、６１２、６２２、６３２、６４２、６５２、６６２、６７２、６８２、６９２、７０２、７１２、７２２、７３２、７４２、７５２、７６２、７７２、７８２、７９２、８０２、８１２、８２２、８３２、８４２、８５２、８６２、８７２、８８２、８９２、９０２、９１２、９２２、９３２、９４２、９５２、９６２、９７２、９８２、９９２、１００２、１０１２、１０２２、１０３２、１０４２、１０５２、１０６２、１０７２、１０８２、１０９２、１１０２、１１１２、１１２２、１１３２、１１４２、１１５２、１１６２、１１７２、１１８２、１１９２、１２０２、１２１２、１２２２、１２３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１３４２、１３５２、１３６２、１３７２、１３８２、１３９２、１４０２、１４１２、１４２２、１４３２、１４４２、１４５２、１４６２、１４７２、１４８２、１４９２、１５０２、１５１２、１５２２、１５３２、１５４２、１５５２、１５６２、１５７２、１５８２、１５９２、１６０２、１６１２、１６２２、１６３２、１６４２、１６５２、１６６２、１６７２、または１６８２からの３つのＣＤＲを含み、このＶＤ１軽鎖可変ドメインは、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９、９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、または１６８９からの３つのＣＤＲを含み、このＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、１５７、１６７、１７７、１８７、１９７、２０７、２１７、２２７、２３７、２４７、２５７、２６７、２７７、２８７、２９７、３０７、３１７、３２７、３３７、３４７、３５７、３６７、３７７、３８７、３９７、４０７、４１７、４２７、４３７、４４７、４５７、４６７、４７７、４８７、４９７、５０７、５１７、５２７、５３７、５４７、５５７、５６７、５７７、５８７、５９７、６０７、６１７、６２７、６３７、６４７、６５７、６６７、６７７、６８７、６９７、７０７、７１７、７２７、７３７、７４７、７５７、７６７、７７７、７８７、７９７、８０７、８１７、８２７、８３７、８４７、８５７、８６７、８７７、８８７、８９７、９０７、９１７、９２７、９３７、９４７、９５７、９６７、９７７、９８７、９９７、１００７、１０１７、１０２７、１０３７、１０４７、１０５７、１０６７、１０７７、１０８７、１０９７、１１０７、１１１７、１１２７、１１３７、１１４７、１１５７、１１６７、１１７７、１１８７、１１９７、１２０７、１２１７、１２２７、１２３７、１２４７、１２５７、１２６７、１２７７、１２８７、１２９７、１３０７、１３１７、１３２７、１３３７、１３４７、１３５７、１３６７、１３７７、１３８７、１３９７、１４０７、１４１７、１４２７、１４３７、１４４７、１４５７、１４６７、１４７７、１４８７、１４９７、１５０７、１５１７、１５２７、１５３７、１５４７、１５５７、１５６７、１５７７、１５８７、１５９７、１６０７、１６１７、１６２７、１６３７、１６４７、１６５７、１６６７、１６７７、または１６８７からの３つのＣＤＲを含み、この結合タンパク質は、スクレロスチンおよびＴＮＦ−αに結合可能であり；
【００５２】
（ｄ）このＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、または１６８４からの３つのＣＤＲを含み、このＶＤ１重鎖可変ドメインは、配列番号２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、２０２、２１２、２２２、２３２、２４２、２５２、２６２、２７２、２８２、２９２、３０２、３１２、３２２、３３２、３４２、３５２、３６２、３７２、３８２、３９２、４０２、４１２、４２２、４３２、４４２、４５２、４６２、４７２、４８２、４９２、５０２、５１２、５２２、５３２、５４２、５５２、５６２、５７２、５８２、５９２、６０２、６１２、６２２、６３２、６４２、６５２、６６２、６７２、６８２、６９２、７０２、７１２、７２２、７３２、７４２、７５２、７６２、７７２、７８２、７９２、８０２、８１２、８２２、８３２、８４２、８５２、８６２、８７２、８８２、８９２、９０２、９１２、９２２、９３２、９４２、９５２、９６２、９７２、９８２、９９２、１００２、１０１２、１０２２、１０３２、１０４２、１０５２、１０６２、１０７２、１０８２、１０９２、１１０２、１１１２、１１２２、１１３２、１１４２、１１５２、１１６２、１１７２、１１８２、１１９２、１２０２、１２１２、１２２２、１２３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１３４２、１３５２、１３６２、１３７２、１３８２、１３９２、１４０２、１４１２、１４２２、１４３２、１４４２、１４５２、１４６２、１４７２、１４８２、１４９２、１５０２、１５１２、１５２２、１５３２、１５４２、１５５２、１５６２、１５７２、１５８２、１５９２、１６０２、１６１２、１６２２、１６３２、１６４２、１６５２、１６６２、１６７２、または１６８２からの３つのＣＤＲを含み、このＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９、９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、または１６８９からの３つのＣＤＲを含み、このＶＤ１軽鎖可変ドメインは、配列番号２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、１５７、１６７、１７７、１８７、１９７、２０７、２１７、２２７、２３７、２４７、２５７、２６７、２７７、２８７、２９７、３０７、３１７、３２７、３３７、３４７、３５７、３６７、３７７、３８７、３９７、４０７、４１７、４２７、４３７、４４７、４５７、４６７、４７７、４８７、４９７、５０７、５１７、５２７、５３７、５４７、５５７、５６７、５７７、５８７、５９７、６０７、６１７、６２７、６３７、６４７、６５７、６６７、６７７、６８７、６９７、７０７、７１７、７２７、７３７、７４７、７５７、７６７、７７７、７８７、７９７、８０７、８１７、８２７、８３７、８４７、８５７、８６７、８７７、８８７、８９７、９０７、９１７、９２７、９３７、９４７、９５７、９６７、９７７、９８７、９９７、１００７、１０１７、１０２７、１０３７、１０４７、１０５７、１０６７、１０７７、１０８７、１０９７、１１０７、１１１７、１１２７、１１３７、１１４７、１１５７、１１６７、１１７７、１１８７、１１９７、１２０７、１２１７、１２２７、１２３７、１２４７、１２５７、１２６７、１２７７、１２８７、１２９７、１３０７、１３１７、１３２７、１３３７、１３４７、１３５７、１３６７、１３７７、１３８７、１３９７、１４０７、１４１７、１４２７、１４３７、１４４７、１４５７、１４６７、１４７７、１４８７、１４９７、１５０７、１５１７、１５２７、１５３７、１５４７、１５５７、１５６７、１５７７、１５８７、１５９７、１６０７、１６１７、１６２７、１６３７、１６４７、１６５７、１６６７、１６７７、または１６８７からの３つのＣＤＲを含み、この結合タンパク質は、ＴＮＦ−αおよびスクレロスチンに結合可能である。
【００５３】
上記のＤＶＤ結合タンパク質の実施形態において、Ｘ１またはＸ２は、配列番号１６９５、１６９６、１６９７、１６９８、１６９９、１７００、１７０１、１７０２、１７０３、１７０４、１７０５、１７０６、１７０７、１７０８、１７０９、１７１０、１７１１、１７１２、１７１３、１７１４、１７１５、１７１６、２０５０、２０５１、２０５２、２０５３、２０５４、２０５５、２０５６、２０５７、２０５８、および２０５９である。
【００５４】
別の実施形態は、４つのポリプチド鎖を含む２つの抗原に結合可能である多価多特異的ＤＶＤ−Ａ結合タンパク質を提供し、
２つのポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
式中、ＶＤ１は、第１の重鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は、第２の重鎖可変ドメインであり；
Ｃは、重鎖定常ドメインであり；
Ｘ１は、第１のリンカーであり；
Ｘ２は、Ｆｃ領域であり；
（Ｘ１）ｎは、（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは、（Ｘ２）０または（Ｘ２）１であり；
２つのポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
式中、ＶＤ１は、第１の軽鎖可変ドメインであり；
ＶＤ２は、第２の軽鎖可変ドメインであり；
Ｃは、軽鎖定常ドメインであり；
Ｘ１は、第２のリンカーであり；
Ｘ２は、Ｆｃ領域を含まず；
（Ｘ１）ｎは、（Ｘ１）０または（Ｘ１）１であり；
（Ｘ２）ｎは、（Ｘ２）０または（Ｘ２）１であり；
この第１および第２のＸ１リンカーは、同じであるかまたは異なっており；
この第１のＸ１リンカーはＣＨ１ではなく、かつ／または第２のＸ１リンカーはＣＬではなく、
【００５５】
（ａ）このＶＤ１またはＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、または１６８４からの３つのＣＤＲを含み、このＶＤ１またはＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９、９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、または１６８９からの３つのＣＤＲを含み、この結合タンパク質は、スクレロスチンおよび別の標的に結合可能であり；
【００５６】
（ｂ）このＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、独立して、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、または１６８４からの３つのＣＤＲを含み、このＶＤ１またはＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９、９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、または１６８９からの３つのＣＤＲを含み、この結合タンパク質は、スクレロスチンおよびスクレロスチンに結合可能であり；
【００５７】
（ｃ）このＶＤ１重鎖可変ドメインは、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、または１６８４からの３つのＣＤＲを含み、このＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、２０２、２１２、２２２、２３２、２４２、２５２、２６２、２７２、２８２、２９２、３０２、３１２、３２２、３３２、３４２、３５２、３６２、３７２、３８２、３９２、４０２、４１２、４２２、４３２、４４２、４５２、４６２、４７２、４８２、４９２、５０２、５１２、５２２、５３２、５４２、５５２、５６２、５７２、５８２、５９２、６０２、６１２、６２２、６３２、６４２、６５２、６６２、６７２、６８２、６９２、７０２、７１２、７２２、７３２、７４２、７５２、７６２、７７２、７８２、７９２、８０２、８１２、８２２、８３２、８４２、８５２、８６２、８７２、８８２、８９２、９０２、９１２、９２２、９３２、９４２、９５２、９６２、９７２、９８２、９９２、１００２、１０１２、１０２２、１０３２、１０４２、１０５２、１０６２、１０７２、１０８２、１０９２、１１０２、１１１２、１１２２、１１３２、１１４２、１１５２、１１６２、１１７２、１１８２、１１９２、１２０２、１２１２、１２２２、１２３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１３４２、１３５２、１３６２、１３７２、１３８２、１３９２、１４０２、１４１２、１４２２、１４３２、１４４２、１４５２、１４６２、１４７２、１４８２、１４９２、１５０２、１５１２、１５２２、１５３２、１５４２、１５５２、１５６２、１５７２、１５８２、１５９２、１６０２、１６１２、１６２２、１６３２、１６４２、１６５２、１６６２、１６７２、または１６８２からの３つのＣＤＲを含み、このＶＤ１軽鎖可変ドメインは、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９、９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、または１６８９からの３つのＣＤＲを含み、このＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、１５７、１６７、１７７、１８７、１９７、２０７、２１７、２２７、２３７、２４７、２５７、２６７、２７７、２８７、２９７、３０７、３１７、３２７、３３７、３４７、３５７、３６７、３７７、３８７、３９７、４０７、４１７、４２７、４３７、４４７、４５７、４６７、４７７、４８７、４９７、５０７、５１７、５２７、５３７、５４７、５５７、５６７、５７７、５８７、５９７、６０７、６１７、６２７、６３７、６４７、６５７、６６７、６７７、６８７、６９７、７０７、７１７、７２７、７３７、７４７、７５７、７６７、７７７、７８７、７９７、８０７、８１７、８２７、８３７、８４７、８５７、８６７、８７７、８８７、８９７、９０７、９１７、９２７、９３７、９４７、９５７、９６７、９７７、９８７、９９７、１００７、１０１７、１０２７、１０３７、１０４７、１０５７、１０６７、１０７７、１０８７、１０９７、１１０７、１１１７、１１２７、１１３７、１１４７、１１５７、１１６７、１１７７、１１８７、１１９７、１２０７、１２１７、１２２７、１２３７、１２４７、１２５７、１２６７、１２７７、１２８７、１２９７、１３０７、１３１７、１３２７、１３３７、１３４７、１３５７、１３６７、１３７７、１３８７、１３９７、１４０７、１４１７、１４２７、１４３７、１４４７、１４５７、１４６７、１４７７、１４８７、１４９７、１５０７、１５１７、１５２７、１５３７、１５４７、１５５７、１５６７、１５７７、１５８７、１５９７、１６０７、１６１７、１６２７、１６３７、１６４７、１６５７、１６６７、１６７７、または１６８７からの３つのＣＤＲを含み、この結合タンパク質は、スクレロスチンおよびＴＮＦ−αに結合可能であり；または
【００５８】
（ｄ）このＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４、３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、５６４、５７４、５８４、５９４、６０４、６１４、６２４、６３４、６４４、６５４、６６４、６７４、６８４、６９４、７０４、７１４、７２４、７３４、７４４、７５４、７６４、７７４、７８４、７９４、８０４、８１４、８２４、８３４、８４４、８５４、８６４、８７４、８８４、８９４、９０４、９１４、９２４、９３４、９４４、９５４、９６４、９７４、９８４、９９４、１００４、１０１４、１０２４、１０３４、１０４４、１０５４、１０６４、１０７４、１０８４、１０９４、１１１４、１１２４、１１３４、１１４４、１１５４、１１６４、１１７４、１１８４、１１９４、１２０４、１２１４、１２２４、１２３４、１２４４、１２５４、１２６４、１２７４、１２８４、１２９４、１３０４、１３１４、１３２４、１３３４、１３４４、１３５４、１３６４、１３７４、１３８４、１３９４、１４０４、１４１４、１４２４、１４３４、１４４４、１４５４、１４６４、１４７４、１４８４、１４９４、１５０４、１５１４、１５２４、１５３４、１５４４、１５５４、１５６４、１５７４、１５８４、１５９４、１６０４、１６１４、１６２４、１６３４、１６４４、１６５４、１６６４、１６７４、または１６８４からの３つのＣＤＲを含み、このＶＤ１重鎖可変ドメインは、配列番号２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１６２、１７２、１８２、１９２、２０２、２１２、２２２、２３２、２４２、２５２、２６２、２７２、２８２、２９２、３０２、３１２、３２２、３３２、３４２、３５２、３６２、３７２、３８２、３９２、４０２、４１２、４２２、４３２、４４２、４５２、４６２、４７２、４８２、４９２、５０２、５１２、５２２、５３２、５４２、５５２、５６２、５７２、５８２、５９２、６０２、６１２、６２２、６３２、６４２、６５２、６６２、６７２、６８２、６９２、７０２、７１２、７２２、７３２、７４２、７５２、７６２、７７２、７８２、７９２、８０２、８１２、８２２、８３２、８４２、８５２、８６２、８７２、８８２、８９２、９０２、９１２、９２２、９３２、９４２、９５２、９６２、９７２、９８２、９９２、１００２、１０１２、１０２２、１０３２、１０４２、１０５２、１０６２、１０７２、１０８２、１０９２、１１０２、１１１２、１１２２、１１３２、１１４２、１１５２、１１６２、１１７２、１１８２、１１９２、１２０２、１２１２、１２２２、１２３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１２４２、１２５２、１２６２、１２７２、１２８２、１２９２、１３０２、１３１２、１３２２、１３３２、１３４２、１３５２、１３６２、１３７２、１３８２、１３９２、１４０２、１４１２、１４２２、１４３２、１４４２、１４５２、１４６２、１４７２、１４８２、１４９２、１５０２、１５１２、１５２２、１５３２、１５４２、１５５２、１５６２、１５７２、１５８２、１５９２、１６０２、１６１２、１６２２、１６３２、１６４２、１６５２、１６６２、１６７２、または１６８２からの３つのＣＤＲを含み、このＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９、２８９、２９９、３０９、３１９、３２９、３３９、３４９、３５９、３６９、３７９、３８９、３９９、４０９、４１９、４２９、４３９、４４９、４５９、４６９、４７９、４８９、４９９、５０９、５１９、５２９、５３９、５４９、５５９、５６９、５７９、５８９、５９９、６０９、６１９、６２９、６３９、６４９、６５９、６６９、６７９、６８９、６９９、７０９、７１９、７２９、７３９、７４９、７５９、７６９、７７９、７８９、７９９、８０９、８１９、８２９、８３９、８４９、８５９、８６９、８７９、８８９、８９９、９０９、９１９、９２９、９３９、９４９、９５９、９６９、９７９、９８９、９９９、１００９、１０１９、１０２９、１０３９、１０４９、１０５９、１０６９、１０７９、１０８９、１０９９、１１０９、１１１９、１１２９、１１３９、１１４９、１１５９、１１６９、１１７９、１１８９、１１９９、１２０９、１２１９、１２２９、１２３９、１２４９、１２５９、１２６９、１２７９、１２８９、１２９９、１３０９、１３１９、１３２９、１３３９、１３４９、１３５９、１３６９、１３７９、１３８９、１３９９、１４０９、１４１９、１４２９、１４３９、１４４９、１４５９、１４６９、１４７９、１４８９、１４９９、１５０９、１５１９、１５２９、１５３９、１５４９、１５５９、１５６９、１５７９、１５８９、１５９９、１６０９、１６１９、１６２９、１６３９、１６４９、１６５９、１６６９、１６７９、または１６８９からの３つのＣＤＲを含み、このＶＤ１軽鎖可変ドメインは、配列番号２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、１５７、１６７、１７７、１８７、１９７、２０７、２１７、２２７、２３７、２４７、２５７、２６７、２７７、２８７、２９７、３０７、３１７、３２７、３３７、３４７、３５７、３６７、３７７、３８７、３９７、４０７、４１７、４２７、４３７、４４７、４５７、４６７、４７７、４８７、４９７、５０７、５１７、５２７、５３７、５４７、５５７、５６７、５７７、５８７、５９７、６０７、６１７、６２７、６３７、６４７、６５７、６６７、６７７、６８７、６９７、７０７、７１７、７２７、７３７、７４７、７５７、７６７、７７７、７８７、７９７、８０７、８１７、８２７、８３７、８４７、８５７、８６７、８７７、８８７、８９７、９０７、９１７、９２７、９３７、９４７、９５７、９６７、９７７、９８７、９９７、１００７、１０１７、１０２７、１０３７、１０４７、１０５７、１０６７、１０７７、１０８７、１０９７、１１０７、１１１７、１１２７、１１３７、１１４７、１１５７、１１６７、１１７７、１１８７、１１９７、１２０７、１２１７、１２２７、１２３７、１２４７、１２５７、１２６７、１２７７、１２８７、１２９７、１３０７、１３１７、１３２７、１３３７、１３４７、１３５７、１３６７、１３７７、１３８７、１３９７、１４０７、１４１７、１４２７、１４３７、１４４７、１４５７、１４６７、１４７７、１４８７、１４９７、１５０７、１５１７、１５２７、１５３７、１５４７、１５５７、１５６７、１５７７、１５８７、１５９７、１６０７、１６１７、１６２７、１６３７、１６４７、１６５７、１６６７、１６７７、または１６８７からの３つのＣＤＲを含み、この結合タンパク質は、ＴＮＦ−αおよびスクレロスチンに結合可能である。
【００５９】
本明細書に記載の多価多特異的ＤＶＤ結合タンパク質の実施形態において、ｎは０である。
【００６０】
Ｘ１またはＸ２が、配列番号１６９５、１６９６、１６９７、１６９８、１６９９、１７００、１７０１、１７０２、１７０３、１７０４、１７０５、１７０６、１７０７、１７０８、１７０９、１７１０、１７１１、１７１２、１７１３、１７１４、１７１５、１７１６、２０５０、２０５１、２０５２、２０５３、２０５４、２０５５、２０５６、２０５７、２０５８、および２０５９である多価多特異的ＤＶＤ結合タンパク質の実施形態を提供する。
【００６１】
別の実施形態において、本明細書に記載の多価多特異的ＤＶＤ結合タンパク質は、２つの第１のポリペプチド鎖および２つの第２のポリペプチド鎖を含む。
【００６２】
本明細書に記載の多価多特異的ＤＶＤ結合タンパク質の実施形態において、Ｆｃ領域は、天然配列のＦｃ領域または変異体配列のＦｃ領域である。
【００６３】
一実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、またはＩｇＤからのＦｃ領域である。
【００６４】
第１および第２のポリペプチド鎖を含む、本明細書に記載の多価多特異的ＤＶＤ結合タンパク質の別の実施形態において、第１のポリペプチド鎖のＶＤ１および第２のポリペプチド鎖の前記ＶＤ１は、それぞれ同じ第１および第２の親抗体、またはその抗原結合部分から得られる。
【００６５】
本明細書に記載のＴＮＦ−αおよびスクレロスチンＤＶＤ結合タンパク質の実施形態において、親の抗ＴＮＦ−α抗体は、親の抗スクレロスチン抗体がヒトスクレロスチンに結合する力価とは異なる力価でＴＮＦ−αに結合する。
【００６６】
本明細書に記載のＴＮＦ−αおよびＳＯＳＴＤＶＤ結合タンパク質の別の実施形態において、親の抗ＴＮＦ−α抗体は、前記抗スクレロスチン抗体がヒトスクレロスチンに結合する親和性とは異なる親和性でＴＮＦ−αに結合する。
【００６７】
本明細書に記載のＴＮＦ−αおよびＳＯＳＴＤＶＤ結合タンパク質の別の実施形態において、抗ＴＮＦ−α抗体および前記抗スクレロスチン抗体は、ヒト抗体、ＣＤＲ移植抗体、またはヒト化抗体である。
【００６８】
別の実施形態において、本明細書に記載のＴＮＦ−αおよびＳＯＳＴＤＶＤ結合タンパク質は、前記抗ＴＮＦ−α抗体または前記抗スクレロスチン抗体が示す少なくとも１つの所望の特性を保有する。一実施形態において、この所望の特性は、１つ以上の抗体パラメータである。一実施形態において、この抗体パラメータは、抗原特異性、抗原への親和性、力価、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、溶解性、生産効率、免疫原性、薬物動態、バイオアベイラビリティー、組織交差反応性、またはオルソロガス抗原結合である。
【００６９】
別の実施形態は、本明細書に記載の多価多特異的ＤＶＤ結合タンパク質の産生法であって、この結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で、本明細書に記載の核酸を含むベクターを保有する宿主細胞を培地中で培養することを含む方法を提供する。一実施形態において、この方法に従って産生される結合タンパク質の５０〜７５％は、本明細書に記載の二重特異的４価ＤＶＤ結合タンパク質である。一実施形態において、この方法に従って産生される結合タンパク質の７５〜９０％は、二重特異的４価結合タンパク質である。一実施形態において、産生される結合タンパク質の９０〜９５％は、二重特異的４価結合タンパク質である。
【００７０】
別の実施形態は、記載の方法に従って産生されるタンパク質を提供する。
【００７１】
別の実施形態において、本明細書に記載の多価多特異的ＤＶＤ結合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００７２】
別の実施形態において、多価多特異的ＤＶＤ結合タンパク質を含む医薬組成物は、さらに、少なくとも１種類の追加薬を含む。一実施形態において、この追加薬は、治療薬、造影剤、細胞毒性物質、血管形成阻害剤、キナーゼ阻害剤、共刺激分子遮断薬、接着分子遮断薬、抗サイトカイン抗体またはその機能的断片、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、検出可能な標識またはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、睡眠薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド、タンパク質同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫化薬、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬品、抗鬱薬、抗精神病薬、刺激薬、喘息治療薬、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、エピネフリンまたは類似体、サイトカイン、またはサイトカインアンタゴニストである。
【００７３】
別の実施形態は、治療が達成されるようにＴＮＦ−αおよびスクレロスチンに結合する、本明細書に記載の多価多特異的ＤＶＤ結合タンパク質を対象に投与することによって、疾患または障害に関して対象を治療する方法を提供する。
【００７４】
本明細書に記載の多価多特異的ＤＶＤ結合タンパク質を作製する方法であって、以下のステップを含む方法を提供する：
ＤＶＤ結合タンパク質が作製されるように、
ａ）第１の親抗体またはその抗原結合部分を取得するステップ；
ｂ）第２の親抗体またはその抗原結合部分を取得するステップ；
ｃ）本明細書に記載のポリペプチド鎖を構築するステップ；
ｅ）前記ポリペプチド鎖を発現させるステップ。
【００７５】
上記の方法の別の実施形態において、前記第１の親抗体またはその抗原結合部分、および前記第２の親抗体またはその抗原結合部分は、ヒト抗体、ＣＤＲ移植抗体、またはヒト化抗体である。
【００７６】
上記の方法の別の実施形態において、前記第１の親抗体またはその抗原結合部分、および前記第２の親抗体またはその抗原結合部分は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド結合によって結合される２つのＦａｂ断片を含む２価の断片、ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、ｄＡｂ断片、単離した相補性決定領域（ＣＤＲ）、一本鎖抗体、またはダイアボディである。
【００７７】
この方法の別の実施形態において、第１の親抗体またはその抗原結合部分はＤＶＤ結合タンパク質が示す少なくとも１つの所望の特性を有する。
【００７８】
上記の方法の別の実施形態において、第２の親抗体またはその抗原結合部分はＤＶＤ結合タンパク質が示す少なくとも１つの所望の特性を有する。
【００７９】
一実施形態において、上記の方法では、Ｆｃ領域は、天然配列のＦｃ領域または変異体配列のＦｃ領域である。一実施形態において、このＦｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、またはＩｇＤからのＦｃ領域である。
【００８０】
別の実施形態において、上記の方法では、所望の特性は、第１の親抗体またはその抗原結合部分の１つ以上の抗体パラメータである。
【００８１】
別の実施形態において、上記の方法では、所望の特性は、第２の親抗体の１つ以上の抗体パラメータである。
【００８２】
一実施形態において、前記抗体パラメータは、抗原特異性、抗原への親和性、力価、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、溶解性、生産効率、免疫原性、薬物動態、バイオアベイラビリティー、組織交差反応性、またはオルソロガス抗原結合である。
【００８３】
上記の方法の別の実施形態において、第１の親抗体またはその抗原結合部分は、前記第２の親抗体またはその抗原結合部分が前記第２の抗原に結合する親和性とは異なる親和性で、前記第１の抗原に結合する。
【００８４】
別の実施形態において、第１の親抗体またはその抗原結合部分は、前記第２の親抗体またはその抗原結合部分が前記第２の抗原に結合する力価とは異なる力価で、前記第１の抗原に結合する。
【００８５】
別の実施形態において、本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質は、ヒトスクレロスチンに結合し、ＳＯＳＴの生物学的機能を調節可能である。
【００８６】
中和結合タンパク質であって、上記のスクレロスチン結合タンパク質を含み、スクレロスチンを中和可能な中和結合タンパク質を提供する。
【００８７】
別の実施形態において、ヒトスクレロスチン前駆体、成熟ヒトスクレロスチン、または切り詰められたヒトスクレロスチンに結合する中和スクレロスチン結合タンパク質を提供する。
【００８８】
一実施形態において、本明細書に記載の中和スクレロスチン結合タンパク質は、スクレロスチンのその受容体に結合する能力を低下させる。一実施形態において、中和スクレロスチン結合タンパク質は、ヒトスクレロスチン前駆体、成熟ヒトスクレロスチン、または切り詰められたヒトスクレロスチンのスクレロスチン受容体に結合する能力を低下させる。
【００８９】
別の実施形態において、本明細書に記載の中和スクレロスチン結合タンパク質は、骨形成の阻害につながる骨芽細胞分化および骨芽細胞機能の阻害を含む、スクレロスチンの生物活性のうちの１つ以上を減少させることが可能である。
【００９０】
一実施形態において、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、前記標的へのオン速度定数（Ｋｏｎ）が、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１、または少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１であるスクレロスチン結合タンパク質を提供する。
【００９１】
別の実施形態において、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、前記標的へのオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）が、最大で約１０−３ｓ−１、最大で約１０−４ｓ−１、最大で約１０−５ｓ−１、または最大で約１０−６ｓ−１であるスクレロスチン結合タンパク質を提供する。
【００９２】
別の実施形態において、前記標的への解離定数（ＫＤ）が、最大で約１０−７Ｍ、最大で約１０−８Ｍ、最大で約１０−９Ｍ、最大で約１０−１０Ｍ、最大で約１０−１１Ｍ、最大で約１０−１２Ｍ、または最大で約１０−１３Ｍであるスクレロスチン結合タンパク質を提供する。
【００９３】
別の態様は、本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質を含み、さらに、リンカーポリペプチドまたは免疫グロブリン定常ドメインを含むスクレロスチン結合タンパク質コンストラクトを提供する。一実施形態において、スクレロスチン結合タンパク質コンストラクトであって、免疫グロブリン分子、ジスルフィド結合したＦｖ、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、キメラ抗体、単一ドメイン抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、ヒト化抗体、多特異的抗体、Ｆａｂ、二重特異的抗体（ｄｕａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、Ｆａｂ’、二特異的抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはＤＶＤ結合タンパク質のスクレロスチン結合タンパク質を含むコンストラクトを提供する。
【００９４】
一実施形態において、スクレロスチン結合タンパク質コンストラクトであって、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、またはヒトＩｇＡ定常ドメインの重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含むコンストラクトを提供する。
【００９５】
さらに別の実施形態において、スクレロスチン結合タンパク質コンストラクトは、配列番号１６９１、配列番号１６９２、配列番号１６９３、および配列番号１６９４のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン定常ドメインを含む。
【００９６】
別の実施形態において、本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質コンストラクトは、インビボで、前記スクレロスチン結合タンパク質コンストラクトの可溶性対応物よりも長い半減期を有する。
【００９７】
別の態様は、スクレロスチン結合タンパク質コンストラクトを含むスクレロスチン結合タンパク質コンジュゲートであって、免疫接着分子（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）、造影剤、治療薬、または細胞毒性物質をさらに含むスクレロスチン結合タンパク質コンジュゲートを提供する。
【００９８】
スクレロスチン結合タンパク質を作製するのに有用な例示的な造影剤を提供し、これには、放射標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識、およびビオチンが含まれるが、これらに限定されない。
【００９９】
例示的な放射標識を提供し、これには、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、または１５３Ｓｍが含まれるが、これらに限定されない。
【０１００】
別の実施形態において、代謝拮抗薬、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生薬、有糸分裂阻害薬、アントラサイクリン、毒素、もしくはアポトーシス剤をさらに含む治療薬または細胞毒性物質を含むスクレロスチン結合タンパク質コンジュゲートを提供する。
【０１０１】
別の実施形態において、本明細書に記載の結合タンパク質は、ヒト糖鎖付加パターンを有する。
【０１０２】
別の実施形態において、スクレロスチン結合タンパク質コンストラクトおよびスクレロスチン結合タンパク質コンジュゲートを含む本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質は、結晶化結合タンパク質の形態であってもよい。例示的な結晶形態は、本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質の非結晶化形態の生物活性の少なくとも一部を保有する。このような結晶形態は、担体を含まない医薬徐放性結晶化スクレロスチン結合タンパク質として使用してもよい。
【０１０３】
別の実施形態は、本明細書に記載の結合タンパク質コンストラクトを含む、スクレロスチン結合タンパク質をコードする単離核酸を提供する。このような核酸を、本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質の１つ以上の性質を発現させるか、特徴づけるか、または改良するために、様々な遺伝子解析および組換え技術を実行するためのベクターに挿入してもよい。本明細書に記載の結合タンパク質をコードする核酸をクローニングするための例示的なベクターには、ｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ、ｐＴＴ３、ｐＥＦＢＯＳ、ｐＢＶ、ｐＪＶ、およびｐＢＪが含まれるが、これらに限定されない。
【０１０４】
結合タンパク質をコードする核酸を含むベクターを含む宿主細胞を提供し、本明細書に記載する。本発明の宿主細胞は、原核生物でも、または真核生物でもよい。例示的な原核宿主細胞は大腸菌である。本発明において宿主細胞として有用な真核細胞には、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞、および真菌細胞が含まれる。
【０１０５】
例示的な真菌細胞は、出芽酵母を含む酵母細胞である。本発明において宿主細胞として有用な例示的な動物細胞には、哺乳類細胞、鳥細胞、および昆虫細胞が含まれるが、これらに限定されない。例示的な哺乳類細胞には、ＣＨＯ細胞およびＣＯＳ細胞が含まれる。本発明において宿主細胞として有用な昆虫細胞は、Ｓｆ９昆虫細胞である。
【０１０６】
ベクターは、本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質をコードする核酸を含んでもよく、この核酸は、このベクターを保有する特定の宿主細胞内で結合タンパク質の発現を可能にする適切な転写および／または翻訳配列に作動可能に連結される。
【０１０７】
別の態様は、スクレロスチン結合タンパク質を産生する方法であって、スクレロスチンに結合することが可能な結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で、スクレロスチン結合タンパク質をコードするベクターを含む宿主細胞を培地中で培養することを含む方法を提供する。そのように産生されたタンパク質は単離し、本明細書に記載の様々な組成物および方法で使用できる。
【０１０８】
結合タンパク質の放出用の組成物を含む組成物を提供し、前記放出用の組成物は、（ａ）本明細書に記載の結晶化結合タンパク質および成分を含む製剤、ならびに（ｂ）少なくとも１種類のポリマー担体を含む。
【０１０９】
本発明において組成物に有用な例示的なポリマー担体には、ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリレート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（酸無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸・グリコール酸コポリマー）またはＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチレート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド）、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、マレイン酸無水物・アルキルビニルエーテルコポリマー、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギン酸塩、セルロースおよびセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリコサミノグリカン、硫酸化多糖類、それらの混合物およびコポリマーからなる群のうちの１つ以上が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１０】
別の態様において、組成物の成分であって、アルブミン、スクロース、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコールである成分を提供する。
【０１１１】
別の実施形態は、哺乳類を治療する方法であって、本明細書に記載の組成物の有効量を哺乳類に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１１２】
本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質を含む医薬組成物および薬学的に許容される担体を提供する。薬学的に許容される担体は、組成物中のスクレロスチン結合タンパク質の吸収または分散を増加させるためのアジュバントとしても役立ち得る。例示的なアジュバントは、ヒアルロニダーゼである。
【０１１３】
別の実施形態において、医薬組成物は、さらに、ＳＯＳＴ活性が有害である障害を治療するための、少なくとも１種類の追加の治療薬を含む。
【０１１４】
別の実施形態は、ヒトＳＯＳＴ活性を低下させるための方法であって、ヒトＳＯＳＴ活性が低下するように、本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質とヒトＳＯＳＴを接触させることを含む方法を提供する。
【０１１５】
別の実施形態において、本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質を含む医薬組成物は、少なくとも１種類の追加薬を含む。一実施形態において、この追加薬は、治療薬、造影剤、細胞毒性物質、血管形成阻害剤、キナーゼ阻害剤、共刺激分子遮断薬、接着分子遮断薬、抗サイトカイン抗体またはその機能的断片、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、検出可能な標識またはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、睡眠薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド、タンパク質同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫化薬、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬品、抗鬱薬、抗精神病薬、刺激薬、喘息治療薬、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、エピネフリンもしくは類似体、サイトカイン、またはサイトカインアンタゴニストである。別の実施形態は、治療が達成されるように、ＴＮＦ−αおよびスクレロスチンに結合する、本明細書に記載の多価多特異的ＤＶＤ結合タンパク質を対象に投与することによって、疾患または障害に関して対象を治療する方法を提供する。
【０１１６】
別の実施形態において、本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質を対象に投与する方法によって治療され得る障害であって、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶反応、臓器移植に伴う急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固症候群、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェグナー肉芽腫症、シェーンライン・ヘノッホ紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫症、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性Ｉ型多腺性内分泌不全症およびＩＩ型多腺性内分泌不全症、シュミット症候群、成人（急性）呼吸窮迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清反応陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性大腸炎性関節症、腸性滑膜炎、クラミジア、エルシニアおよびサルモネラ関連関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉性天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ疾患、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、原因不明の自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全症関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣不全、早発卵巣不全、線維性肺疾患、特発性間質性肺炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病関連間質性肺疾患、混合性結合組織病関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、ショーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症関連肺疾患、薬物誘発性間質性肺疾患、線維症、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（旧称自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫性低血糖症、黒色表皮症を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に伴う急性免疫疾患、臓器移植に伴う慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、特発性男性不妊症またはＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（全サブタイプ）、交感性眼炎、結合組織病続発性肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発性動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スティル病、全身性硬化症、ショーグレン症候群、高安動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール性肝傷害、胆汁鬱滞症、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染症、精神障害（例えば、鬱病および統合失調症）、Ｔｈ２型およびＴｈ１型介在疾患、急性および慢性疼痛（異なる種類の疼痛）、および癌（例えば肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌および直腸癌）および造血器悪性腫瘍（白血病およびリンパ腫）、無βリポタンパク血症、先端チアノーゼ、急性および慢性寄生虫または感染プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性または慢性細菌感染症、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房異所性拍動、エイズ痴呆合併症、アルコール性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植片拒絶反応、α１抗トリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ＣＤ３抗体療法、抗リン脂質抗体症候群、抗受容体過敏反応、大動脈および末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈瘻、運動失調、心房細動（持続性および発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶反応、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶反応、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心臓性失神症候群、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶反応、小脳皮質変性症、小脳障害、無秩序型または多源性心房頻拍、化学療法関連障害、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール依存症、慢性炎症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、鬱血性心不全、結膜炎、接触皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツェルフェルト・ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連障害、拳闘家認知症、脱髄疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚疾患、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化症、びまん性レビー小体病、拡張型鬱血性心筋症、基底核障害、中高年ダウン症候群、ＣＮＳドーパミン受容体を遮断する薬物により誘発される薬物誘発性運動障害、薬物過敏症、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌障害、喉頭蓋炎、エプスタイン・バールウイルス感染症、肢端紅痛症、錐体外路および小脳障害、家族性血球貪食リンパ組織球症、胎児胸腺移植拒絶反応、フリードリヒ運動失調症、機能性末梢動脈障害、真菌性敗血症、ガス壊疽、胃潰瘍、糸球体腎炎、任意臓器または組織の移植片拒絶反応、グラム陰性菌敗血症、グラム陽性菌敗血症、細胞内生物による肉芽腫、ヘアリー細胞白血病、ハレルフォルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、花粉症、心臓移植拒絶反応、ヘモクロマトーシス、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓性血小板減��性紫斑病、出血、肝炎（Ａ）、Ｈｉｓ束不整脈（Ｈｉｓ ｂｕｎｄｌｅ ａｒｒｈｙｔｈｍｉａｓ）、ＨＩＶ感染症／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、多動性運動障害、過敏反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下障害、視床下部−下垂体−副腎軸評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体による細胞傷害、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈炎、ａ型インフルエンザ、電離放射線被爆、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再潅流傷害、虚血性脳卒中、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶反応、レジオネラ症、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系傷害、脂肪性浮腫、肝移植拒絶反応、リンパ水腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性メラノーマ、髄膜炎、髄膜炎菌血症、代謝性／特発性偏頭痛、ミトコンドリア多系統疾患、混合性結合組織病、モノクローナル免疫グロブリン症、多発性骨髄腫、多系統変性症（Ｍｅｎｃｅｌ Ｄｅｊｅｒｉｎｅ−Ｔｈｏｍａｓ Ｓｈｉ−ＤｒａｇｅｒおよびＭａｃｈａｄｏ−Ｊｏｓｅｐｈ）、重症筋無力症、トリ型結核菌イントラセルラーレ、結核症、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血障害、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、Ｉ型神経原性筋萎縮症、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈とその分枝の閉塞、閉塞性動脈障害、ＯＫＴ３（登録商標）療法、精巣炎／副睾丸炎、精巣炎／精管復元術、臓器肥大症、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶反応、膵臓癌、腫瘍随伴症候群／悪性腫瘍による高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶反応、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム性動脈硬化症、末梢血管障害、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発ニューロパシー、臓器肥大症、内分泌障害、モノクローナル免疫グロブリン症および皮膚変化症候群）、潅流後症候群、ポストポンプ症候群、ＭＩ心臓切開後症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧症、放射線療法、レイノー現象およびレイノー病、レイノー病、レフサム病、規則的な幅の狭いＱＲＳ頻拍、腎血管性高血圧症、再潅流傷害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老人性舞踏病、レビー小体型老年性認知症、血清反応陰性関節症、ショック、鎌状赤血球貧血、皮膚同種移植片拒絶反応、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶反応、充実性腫瘍、特異的不整脈、脊髄性運動失調症、脊髄小脳変性症、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造傷害、亜急性硬化性汎脳炎、失神、心臓血管系梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢ ＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓性血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏反応、ＩＶ型過敏反応、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、蕁麻疹、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルスおよび真菌感染症、ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ・コルサコフ症候群、ウィルソン病、任意臓器または組織の異種移植片拒絶反応、急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根障害、急性虚血、成人スティル病、円形脱毛症、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に伴う自己免疫疾患、自己免疫性腸疾患、自己免疫性聴力低下、自己免疫性リンパ球増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早発卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心臓血管疾患、劇症型抗リン脂質抗体症候群、セリアック病、頸部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症の危険を伴う臨床分離症候群（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ｃｉｓ））、結膜炎、小児期発症型精神障害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病網膜症、真性糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発性免疫性溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、花粉症、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ介在型アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症性疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎（ｋｅｒａｔｏｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ ｓｉｃｃａ）、クスマウル病またはクスマウル・マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞組織球症、網状皮斑、黄斑変性症、顕微鏡的多発血管炎、ベヒテレフ病、運動ニューロン障害、粘膜類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ非Ｂ型肝炎、視神経炎、骨溶解症、卵巣癌、少関節型ＪＲＡ、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発動脈炎（または結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、リウマチ性多発筋痛症、白毛症、多関節型ＪＲＡ、多腺性内分泌不全症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）、ポストポンプ症候群、原発性パーキンソン病、前立腺癌および直腸癌ならびに造血器悪性腫瘍（白血病およびリンパ腫）、前立腺炎、赤血球糸無形成症、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ｓａｐｈｏ（滑膜炎、座瘡、膿疱症、骨化症および骨炎）、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、座骨神経痛、続発性副腎不全、シリコン関連結合組織病、スネドン・ウィルキンソン皮膚病、強直性脊椎炎、スティーブンス・ジョンソ
ン症候群（ＳＪＳ）、全身性炎症反応症候群、側頭動脈炎、トキソプラズマ性網膜炎、中毒性表皮壊死融解症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体、１型）アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、蕁麻疹、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季カタル、ウイルス性網膜炎、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性症、創傷治癒、またはエルシニアおよびサルモネラ関連関節症である障害を提供する。
【０１１７】
別の実施形態は、ＳＯＳＴ活性が有害である疾患または障害に関して対象を治療するための方法であって、治療が達成されるように、本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質を対象に投与することによる方法を提供する。本方法を用いて、呼吸器疾患、喘息、アレルギー性および非アレルギー性喘息、感染による喘息、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の感染による喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気道炎症を伴う他の病状、好酸球増加症、線維症および過剰粘液産生、嚢胞性線維症、肺線維症、アトピー性疾患、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、湿疹、アレルギー性鼻炎、アレルギー性胃腸炎、皮膚の炎症および／または自己免疫状態、胃腸器の炎症および／または自己免疫状態、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎、クローン病、肝臓の炎症および／または自己免疫状態、肝硬変、肝線維症、Ｂ型および／またはＣ型肝炎ウイルスにより引き起こされる肝線維症、強皮症、腫瘍または癌、肝細胞癌、グリア芽腫、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、ウイルス感染、ＨＴＬＶ−１感染（例えば、ＨＴＬＶ−１由来）、１型防御免疫反応の発現の抑制、または予防接種中の１型防御免疫反応の発現の抑制を治療することができる。
【０１１８】
上記のさらなる実施形態において、対象への投与は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、こう内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸部内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、関節滑液嚢内、胸郭内、子宮内、膀胱内、急速投与、膣、直腸、頬、舌下、経鼻、または経皮投与によって行われる。
【０１１９】
スクレロスチンが有害である障害を患う患者を治療する方法であって、第２の薬剤の投与前、その投与と同時、またはその投与後に、本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質を投与するステップを含む方法を提供し、この第２の薬剤は、吸入ステロイド、β−アゴニスト、短時間作用型もしくは長時間作用型β−アゴニスト、ロイコトリエンもしくはロイコトリエン受容体のアンタゴニスト、ＡＤＶＡＩＲ、ＩｇＥ阻害剤、抗ＩｇＥ抗体、ＸＯＬＡＩＲ、ホスホジエステラーゼ阻害剤、ＰＤＥ４阻害剤、キサンチン、抗コリン薬、マスト細胞安定化剤、クロモリン、ＩＬ−４阻害剤、ＩＬ−５阻害剤、エオタキシン／ＣＣＲ３阻害剤、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３およびＨ４を含むヒスタミンもしくはその受容体のアンタゴニスト、プロスタグランジンＤもしくはその受容体ＤＰ１およびＣＲＴＨ２のアンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、ＴＮＦ受容体の可溶性断片、ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）、ＴＮＦ酵素アンタゴニスト、ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、ムスカリン受容体アンタゴニスト、ＴＧＦ−βアンタゴニスト、インターフェロンγ、ペルフェニドン（ｐｅｒｆｅｎｉｄｏｎｅ）、化学療法薬、メトトレキサート、レフルノミド、シロリムス（ラパマイシン）もしくはその類似体、ＣＣＩ−７７９、ＣＯＸ２もしくはｃＰＬＡ２阻害剤、ＮＳＡＩＤ、免疫調節剤、ｐ３８阻害剤、ＴＰＬ−２、ＭＫ−２およびＮＦｋＢ阻害剤、ブデノシド、上皮成長因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチラート、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサン阻害剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１β抗体、抗ＩＬ−６抗体、成長因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジニル−イミダゾール化合物；ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦの抗体もしくはアゴニスト；ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０の抗体もしくはそれらのリガンド；ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラート・モフェチル、イブプロフェン、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動薬；ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８もしくはＭＡＰキナーゼ阻害剤；ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦ−α変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体、可溶性ｐ５５ＴＮＦ受容体、可溶性ｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−４、ＩＬ���１０、ＩＬ−１１、ＳＯＳＴ、またはＴＧＦ−βである。
【図面の簡単な説明】
【０１２０】
【図１】図１Ａは、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）コンストラクトの概略図であり、２つの親抗体からＤＶＤ結合タンパク質を作製する戦略を示す。図１Ｂは、ＤＶＤ１−Ｉｇ、ＤＶＤ２−Ｉｇ、および２つのキメラ単一特異的抗体クローンのコンストラクトの概略図である。
【図２】誘導した関節炎のマウスモデルの足の腫れに対する抗ＴＮＦ、抗スクレロスチン、または併用療法の効果を示すグラフである。図２Ａは、抗マウスＴＮＦ  ｍＡｂ、抗スクレロスチンｍＡｂ、または抗マウスＴＮＦ  ｍＡｂと抗スクレロスチンｍＡｂの両方の組み合わせを投与した時の足の厚さの変化を示す。図２Ｂは、抗マウスＴＮＦ  ｍＡｂ、抗スクレロスチンｍＡｂ、または抗マウスＴＮＦ  ｍＡｂと抗スクレロスチンｍＡｂの両方の組み合わせを投与した時の関節炎の距骨の体積を示す。図２Ｃは、抗マウスＴＮＦ  ｍＡｂ、抗スクレロスチンｍＡｂ、または抗マウスＴＮＦ  ｍＡｂと抗スクレロスチンｍＡｂの両方の組み合わせを投与した時の腰椎（Ｌ５）の海綿骨の骨密度を示す。
【図３】抗ＳＯＳＴ抗体のアラインメントである。
【図４】炎症の発症後５日目に治療を始めた時の、コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）の遅い治療マウスモデルにおけるＴＮＦとＳＯＳＴの併用による中和を示すグラフである。図４Ａは、抗マウスＴＮＦ  ｍＡｂ、抗スクレロスチンｍＡｂ、または抗マウスＴＮＦ  ｍＡｂと抗スクレロスチンｍＡｂの両方の組み合わせを投与した時の足の厚さの変化を示す。図４Ｂは、抗マウスＴＮＦ  ｍＡｂ、抗スクレロスチンｍＡｂ、または抗マウスＴＮＦ  ｍＡｂと抗スクレロスチンｍＡｂの両方の組み合わせを投与した時の関節炎の距骨の体積を示す。図４Ｃは、抗マウスＴＮＦ  ｍＡｂ、抗スクレロスチンｍＡｂ、または抗マウスＴＮＦ  ｍＡｂと抗スクレロスチンｍＡｂの両方の組み合わせを投与した時の腰椎（Ｌ５）の海綿骨の骨密度を示す。
【図５】炎症の発症後５日目に治療を始めた時の、マウスの関節炎の関節の骨の回復を阻害するスクレロスチンの能力を示すグラフである。図５Ａは、抗ＩＬ１α治療用抗体と抗ＩＬ１β治療用抗体、抗スクレロスチン、または抗ＩＬ１α治療用抗体と抗ＩＬ１β治療用抗体と抗スクレロスチンの組み合わせを投与した時の足の厚さの変化を示す。図５Ｂは、抗ＩＬ１α治療用抗体と抗ＩＬ１β治療用抗体、抗スクレロスチン、または抗ＩＬ１α治療用抗体と抗ＩＬ１β治療用抗体と抗スクレロスチンの組み合わせを投与した時の関節炎の距骨の体積を示す。図５Ｃは、抗ＩＬ１α治療用抗体と抗ＩＬ１β治療用抗体、抗スクレロスチン、または抗ＩＬ１α治療用抗体と抗ＩＬ１β治療用抗体と抗スクレロスチンの組み合わせを投与した時の腰椎（Ｌ５）の海綿骨の骨密度を示す。
【図６】クローン病のマウスモデルのデータを示す。図６Ａは、マウスに、抗ＴＮＦ  ｍＡｂ、抗スクレロスチンｍＡｂ、または抗ＴＮＦ  ｍＡｂと抗スクレロスチンｍＡｂの組み合わせを投与した時の結腸炎症スコアを示す。図６Ｂは、マウスに、抗ＴＮＦ  ｍＡｂ、抗スクレロスチンｍＡｂ、または抗ＴＮＦ  ｍＡｂと抗スクレロスチンｍＡｂの組み合わせを投与した時の腰椎（Ｌ５）の海綿骨の骨密度を示す。
【図７】ＴＮＦで飽和させた時に、例示的なスクレロスチン／ＴＮＦ  ＤＶＤ−Ｉｇがスクレロスチンに結合することを示す結合プロファイルデータ、およびその逆の場合の結合プロファイルデータを示す。
【発明を実施するための形態】
【０１２１】
スクレロスチンに結合する抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合部分、ならびにＳＯＳＴおよび別の標的に結合するＤＶＤ結合タンパク質などの多価多特異的結合タンパク質を含むが、これらに限定されないスクレロスチン結合タンパク質を提供する。抗体および抗体断片、ＤＶＤ結合タンパク質、およびその医薬組成物、ならびに抗体、ＤＶＤ結合タンパク質、およびその断片を含むこのようなスクレロスチン結合タンパク質を作製するための核酸、組換え発現ベクターおよび宿主細胞に関する様々な態様を提供する。ヒトスクレロスチンをインビトロまたはインビボのいずれかで検出するために、このスクレロスチン結合タンパク質を使用する方法、ならびに遺伝子発現を調節するための方法も提供する。
【０１２２】
本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質と競合可能な結合タンパク質または抗体も提供する。
【０１２３】
特に本明細書で定義しない限り、科学用語および技術用語は、当業者が一般に理解する意味を有する。しかし、用語の意味および範囲は、あらゆる潜在的な曖昧性の事象において明らかでなければならず、本明細書に提供する定義は、全ての辞書または外的な定義より優先する。さらに、特に、文脈によって必要とされない限り、単数形の用語は、複数形を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。本出願において、特に記載しない限り、「または」の使用は、「および／または」を意味する。さらに、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語の使用、ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形の使用は制限されない。また、「要素」または「成分」などの用語も、特に具体的に記載しない限り、１つのユニットを含む要素および成分と２つ以上のサブユニットを含む要素および成分の両方を包含する。
【０１２４】
一般的に、本明細書に記載の細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、タンパク質化学、核酸化学およびハイブリダイゼーションに関連して使用される命名法、ならびにそれらの技術は、当技術分野で公知であり、一般に用いられている。本発明の方法および技術は、特に示されない限り、一般に、当技術分野で公知の従来法に従い、かつ本明細書を通して引用および議論される様々な一般的かつより具体的な参考文献に記載されているとおりに実行される。酵素反応および精製技術は、メーカーの仕様書に従うか、当該技術分野で一般に達成されるとおりに、または本明細書に記載のとおりに行われる。本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、医薬品化学および製薬化学に関連して使用される命名法、ならびにそれらの実験手順および技術は、当技術分野で周知であり、一般に用いられている。標準的な技術は、化学合成、化学分析、薬学的調製、処方、および送達、ならびに患者の治療のために使用される。
【０１２５】
本発明がより容易に理解されるように、厳選した用語を以下に定義する。
【０１２６】
「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸の全てのポリマー鎖を指す。「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、ポリペプチドという用語と互換的に用いられ、アミノ酸のポリマー鎖も指す。「ポリペプチド」という用語は、天然または人工のタンパク質、タンパク質断片およびタンパク質配列のポリペプチド類似体を包含する。ポリペプチドは、単量体または重合体であり得る。本明細書での「ポリペプチド」の使用は、特に文脈に矛盾しない限り、ポリペプチドならびにその断片および（変異体の断片を含む）変異体を包含するものとする。抗原性ポリペプチドについては、ポリペプチドの断片は、必要に応じて、ポリペプチドの少なくとも１つの連続エピトープまたは非線形エピトープを含む。少なくとも１つのエピトープ断片の正確な境界は、当技術分野における通常の知識を用いて確認できる。断片は、少なくとも約５個の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも約１０個の連続するアミノ酸、少なくとも約１５個の連続するアミノ酸、または少なくとも約２０個の連続するアミノ酸を含む。ポリペプチドの変異体は、本明細書に記載するとおりである。
【０１２７】
「単離タンパク質」または「単離ポリペプチド」という用語は、その起源または由来源により、その天然の状態でそれに付随する天然に付随する成分に付随しないか、同じ種に由来する他のタンパク質を実質的に含まないか、異なる種の細胞で発現されるか、または天然に存在しないタンパク質またはポリペプチドを指す。したがって、化学的に合成されるか、またはそれが天然に由来する細胞とは異なる細胞系で合成されるポリペプチドは、その天然に付随する成分から「単離」されている。タンパク質は、当技術分野で周知のタンパク質精製技術を用いて、単離によって天然に付随する成分を実質的に含まない状態にしてもよい。
【０１２８】
「回収」という用語は、単離によって、例えば、当技術分野で周知のタンパク質精製技術を用いて、ポリペプチドなどの化学種を天然に付随する成分を実質的に含まない状態にさせるプロセスを指す。
【０１２９】
「ヒトスクレロスチン」または「ヒトＳＯＳＴ」（本明細書では「ｈＳＯＳＴ」と略記する）という用語は、配列類似性に基づいて、糖タンパク質を含有するシステインノットのＤＡＮファミリーのメンバーとして分類されている、スクレロスチンと呼ばれる２４ＫＤのタンパク質、またはその活性断片を指す（Ａｖａｓｉａｎ−Ｋｒｅｔｃｈｍｅｒ（２００４）Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．８（１）：１−１２）。スクレロスチンは、インビトロで骨芽細胞の増殖および分化を阻害し、骨芽細胞の石灰化を抑制する骨形成の負の調節因子である（Ｐｏｏｌｅら（２００５）ＦＡＳＥＢ Ｊ．１９：１８３６−３８；Ｗｉｎｋｌｅｒら（２００５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０（４）：２４９８−２５０２）。ヒト「ＳＯＳＴ」という用語は、標準的な組換え発現法によって調製することができる組換えヒトスクレロスチン（ｒｈＳＯＳＴ）を含むものとする。ヒトＳＯＳＴの配列を表２に示す。
【０１３０】
【表８】
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【０１３１】
「生物活性」とは、サイトカインの全ての固有の生物学的特性を指す。スクレロスチンの生物学的特性には、スクレロスチン受容体への結合が含まれるが、これに限定されない。
【０１３２】
抗体、タンパク質、またはペプチドの第２の化学種との相互作用に関して、「特異的結合」または「特異的に結合する」という用語は、その相互作用が、その化学種の特定の構造（例えば、抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存することを意味する。例えば、抗体は、タンパク質全体というよりむしろ特定のタンパク質構造を認識し、結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識した「Ａ」およびその抗体を含む反応において、エピトープＡ（または遊離の、非標識Ａ）を含む分子が存在すると、抗体に結合する標識Ａの量は減少する。
【０１３３】
「抗体」という用語は、広義に、Ｉｇ分子の本質的なエピトープ結合特性を保持する、４つのポリペプチド鎖、２つの重鎖（Ｈ）および２つの軽鎖（Ｌ）、またはその任意の機能的断片、突然変異体、変異体、もしくは派生物で構成される全ての免疫グロブリン（Ｉｇ）分子を指す。このような突然変異体、変異体、または誘導体の抗体型は、当技術分野で公知である。これらの限定されない実施形態を以下で述べる。
【０１３４】
全長の抗体において、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略記する）および重鎖定常領域で構成されている。重鎖定常領域は、３つのドメインであるＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３で構成されている。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略記する）および軽鎖定常領域で構成されている。軽鎖定常領域は、１つのドメインであるＣＬで構成されている。ＶＨおよびＶＬ領域は、さらに、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域に細分することができる。それぞれのＶＨおよびＶＬは、以下の順番でアミノ末端からカルボキシ末端に配置される３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。免疫グロブリン分子は、全ての種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスのものであり得る。
【０１３５】
「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために用いられ、この領域は、インタクトな抗体のパパイン消化によって生成され得る。Ｆｃ領域は、天然配列のＦｃ領域または変異体のＦｃ領域であり得る。免疫グロブリンのＦｃ領域は、一般に、２つの定常ドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含み、必要に応じて、ＣＨ４ドメインを含む。抗体のエフェクター機能を変更するために、Ｆｃ部分のアミノ酸残基を置換することは、当技術分野で公知である（米国特許第５，６４８，２６０号および同第５，６２４，８２１号）。抗体のＦｃ部分は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、ＡＤＣＣ、食作用、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、ならびに抗体および抗原−抗体複合体の半減期／クリアランス速度を媒介する。場合によって、これらのエフェクター機能は治療用抗体に好ましいが、他の場合には、治療目的に応じて、不要または有害でさえあり得る。特定のヒトＩｇＧアイソタイプ、特に、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、それぞれＦｃγＲおよび補体Ｃ１ｑへの結合によって、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを媒介する。新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、抗体の循環半減期を決定する重要な成分である。さらに別の実施形態において、抗体のエフェクター機能が変わるように、少なくとも１個のアミノ酸残基が、抗体の定常領域、例えば、抗体のＦｃ領域内で置換される。免疫グロブリンの２つの同一の重鎖の二量体化は、ＣＨ３ドメインの二量体化によって媒介され、ヒンジ領域内のジスルフィド結合によって安定化される（ＨｕｂｅｒらＮａｔｕｒｅ ２６４：４１５−２０；Ｔｈｉｅｓら（１９９９）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：６７−７９）。重鎖−重鎖ジスルフィド結合を防ぐために、ヒンジ領域内のシステイン残基を変異させると、ＣＨ３ドメインの二量体化が不安定になる。ＣＨ３二量体化に関与する残基が同定されている（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ（１９９８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．３７：９２６６−９２７３）。したがって、一価の半Ｉｇ（ｈａｌｆ−Ｉｇ）を生成することが可能である。興味深いことに、ＩｇＧとＩｇＡサブクラスの両方について、これらの一価の半Ｉｇ分子は天然に見られる（Ｓｅｌｉｇｍａｎ（１９７８）Ａｎｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２９：８５５−７０；Ｂｉｅｗｅｎｇａら（１９８３）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５１：３９５−４００）。ＦｃＲｎ：ＩｇＦｃ領域の化学量論は、２：１であると判定され（Ｗｅｓｔら（２０００）Ｂｉｏｃｈｅｍ．３９：９６９８−７０８）、半Ｆｃ（ｈａｌｆ Ｆｃ）はＦｃＲｎ結合を媒介するのに十分である（Ｋｉｍら（１９９４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：５４２−５４８）。ＣＨ３二量体化に重要な残基がＣＨ３のｂシート構造の内側の界面上に位置するが、ＦｃＲｎ結合に関与する領域は、ＣＨ２−ＣＨ３ドメインの外側の界面上に位置するので、ＣＨ３ドメインの二量体化を破壊する変異は、そのＦｃＲｎ結合に対して大きな悪影響を与えるとはかぎらない。しかし、半Ｉｇ分子は、通常の抗体よりもサイズが小さいので、組織透過における特定の利点を有し得る。本発明の一実施形態において、少なくとも１個のアミノ酸残基は、重鎖の二量体化が��壊され、半ＤＶＤ  Ｉｇ分子になるように、結合タンパク質の定常領域、例えば、Ｆｃ領域内で置換される。ＩｇＧの抗炎症活性は、ＩｇＧのＦｃ断片のＮ−結合グリカンのシアル酸付加に完全に依存する。適切なＩｇＧ１  Ｆｃ断片が作られ、それにより力価が非常に増強された、完全に組換えの、シアル酸付加ＩｇＧ１  Ｆｃを生成できるように、抗炎症活性に必要なグリカンが正確に決定された（Ａｎｔｈｏｎｙら（２００８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２０：３７３−３７６）。
【０１３６】
抗体の「抗原結合部分」（または単に、「抗体部分」）という用語は、抗原（例えば、ヒトスクレロスチン（ｈＳＯＳＴ））に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、全長の抗体の断片によって実行され得ることが証明されている。このような抗体の実施形態は、特異的に２つ以上の異なる抗原に結合する二特異的、二重特異的、または多特異的の形態であってもよい。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価の断片であるＦａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結合した２つのＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）単一可変ドメインを含むｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６、ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０５１４４）、および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子がコードするが、それらは、組換え法を用いて、ＶＬおよびＶＨ領域が対になり一価の分子を形成する単一タンパク質鎖（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる、例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３参照）として作製されることを可能にする合成リンカーによって結合できる。このような一本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されるものとする。ダイアボディなどの一本鎖抗体の他の形態も包含される。ダイアボディは、二価の二特異的抗体であり、その中のＶＨおよびＶＬドメインは、単一ポリペプチド鎖上で発現しているが、あまりにも短いために、同じ鎖上の２つのドメイン間で対になることができないリンカーを用いることによって、これらのドメインは別の鎖の相補的ドメインと対にさせられ、２つの抗原結合部位が作製される（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋら（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１−１１２３参照）。このような抗体結合部分は、当技術分野で公知である（ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ編、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ社、ニューヨーク、ページ７９０（ＩＳＢＮ ３−５４０−４１３５４−５））。さらに、一本鎖抗体には、相補的な軽鎖ポリペプチドと共に、抗原結合領域の対を形成する直列のＦｖセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）の対を含む「直鎖状抗体」も含まれる（Ｚａｐａｔａら（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２；および米国特許第５，６４１，８７０号）。
【０１３７】
免疫グロブリン定常（Ｃ）ドメインは、重鎖（ＣＨ）または軽鎖（ＣＬ）定常ドメインを指す。マウスならびにヒトのＩｇＧ重鎖定常ドメインアミノ酸配列およびマウスならびにヒトのＩｇＧ軽鎖定常ドメインアミノ酸配列は、当技術分野で公知である。
【０１３８】
「結合タンパク質コンストラクト」という用語は、リンカーポリペプチドまたは免疫グロブリン定常ドメインに結合した抗原結合部分のうちの１つ以上を含むポリペプチドを指す。リンカーポリペプチドは、ペプチド結合によって結合した２つ以上のアミノ酸残基を含み、１つ以上の抗原結合部分を結合するために用いられる。このようなリンカーポリペプチドは、当技術分野で周知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋら（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１−１１２３参照）。免疫グロブリン定常ドメインは、重鎖または軽鎖定常ドメインを指す。ヒトＩｇＧ重鎖定常ドメインおよび軽鎖定常ドメインのアミノ酸配列を表３に示す。
【０１３９】
以下に提供するＶＨおよびＶＬドメイン配列は、当技術分野で公知であるか、または当技術分野で公知の方法を用いて容易に識別可能である相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク配列を含む。いくつかの実施形態において、これらのＣＤＲおよび／またはフレームワーク配列のうちの１つ以上は、機能を喪失することなく、同じ抗原に結合することが当技術分野で知られている結合タンパク質の他のＣＤＲおよび／またはフレームワーク配列によって置換される。
【０１４０】
【表９】
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【０１４１】
さらに、抗体もしくはその抗原結合部分などのスクレロスチン結合タンパク質は、その抗体もしくは抗体部分が、１つ以上の他のタンパク質もしくはペプチドと共有結合または非共有結合することによって形成されるより大きな免疫接着分子の一部であり得る。このような免疫接着分子の例としては、４量体のｓｃＦｖ分子を作製するためのストレプトアビジンコア領域の使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖら（１９９５）Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ６：９３−１０１）、ならびに二価のビオチン化ｓｃＦｖ分子を作製するためのシステイン残基、マーカーペプチドおよびＣ末端ポリヒスチジンタグの使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖら（１９９４）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１０４７−１０５８）が挙げられる。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片などの抗体部分は、それぞれ、抗体全体のパパイン消化またはペプシン消化などの従来の技術を用いて、抗体全体から調製できる。さらに、抗体、抗体部分および免疫接着分子は、本明細書に記載の標準的な組換えＤＮＡ技術を用いて取得できる。
【０１４２】
「単離抗体」という用語は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す（例えば、ｈＳＯＳＴに特異的に結合する単離抗体は、ｈＳＯＳＴ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかし、ｈＳＯＳＴに特異的に結合する単離抗体は、他の種由来のスクレロスチン分子などの他の抗原と交叉反応を有してもよい。さらに、単離抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含んでいなくてもよい。
【０１４３】
「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」という用語は、実質的に均一な抗体集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在するであろう天然に起こり得る変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高い特異性があり、単一抗原に対して作られている。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物と対照的に、各ｍＡｂは、抗原上の単一決定基に対して作られている。修飾語「モノクローナル」は、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。
【０１４４】
「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むものとする。本発明のヒト抗体には、例えば、ＣＤＲ、特にＣＤＲ３中にヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム変異誘発もしくは部位特異的変異誘発またはインビボでの体細胞変異によって導入される変異）が含まれ得る。しかし、「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳類種の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列上に移植された抗体を含むことを意図しない。
【０１４５】
「組換えヒト抗体」という用語は、組換え手段によって調製、発現、作製もしくは単離された全てのヒト抗体、例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現された抗体（以下のセクションＩＩＣでさらに詳細に記載する）、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ（１９９７）ＴＩＢ Ｔｅｃｈ．１５：６２−７０；Ａｚｚａｚｙ ａｎｄ Ｈｉｇｈｓｍｉｔｈ（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：４２５−４４５；Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ ａｎｄ Ｌａｒｒｉｃｋ（２００２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２９：１２８−１４５；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｃｈａｍｅｓ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１：３７１−３７８）、ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニック動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒら（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５；ＫｅｌｌｅｒｍａｎｎおよびＧｒｅｅｎ（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：５９３−５９７；Ｌｉｔｔｌｅら（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１：３６４−３７０を参照されたい）、またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う任意の他の手段によって調製、発現、作製もしくは単離された抗体を含むものとする。このような組換えヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する。しかし、特定の実施形態において、このような組換えヒト抗体は、インビトロ変異誘発（または、ヒトＩｇ配列のトランスジェニック動物が用いられる場合は、インビボ体細胞変異誘発）に供され、したがって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、それに関連するが、インビボのヒト抗体生殖細胞系列レパートリー内には元々存在しない場合があり得る配列である。
【０１４６】
「キメラ抗体」という用語は、１つの種の重鎖および軽鎖可変領域配列ならびに別の種の定常領域配列を含む抗体、例えば、ヒト定常領域に結合したマウス重鎖可変領域およびマウス軽鎖可変領域を有する抗体を指す。
【０１４７】
「ＣＤＲ移植抗体」という用語は、１つの種の重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ領域のうちの１つ以上の配列が、別の種のＣＤＲ配列と置換された抗体、例えば、マウスＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ３）のうちの１つ以上がヒトＣＤＲ配列と置換されたマウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体を指す。
【０１４８】
「カバット番号付け」、「カバット定義」、および「カバット標識（Ｋａｂａｔ ｌａｂｅｌｉｎｇ）」という用語は、本明細書において互換的に用いられる。当技術分野で認められているこれらの用語は、抗体またはその抗原結合部分の重鎖および軽鎖可変領域中の他のアミノ酸残基よりも可変性のある（すなわち、超可変性である）アミノ酸残基の番号付けシステムを指す（Ｋａｂａｔら（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１およびＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ら（１９９１）免疫学的に興味のあるタンパク質配列（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）、第５版、米国保健社会福祉省、ＮＩＨ公開番号９１−３２４２）。重鎖可変領域については、超可変領域は、ＣＤＲ１ではアミノ酸位置３１〜３５、ＣＤＲ２ではアミノ酸位置５０〜６５、ＣＤＲ３ではアミノ酸位置９５〜１０２の範囲にある。軽鎖可変領域については、超可変領域は、ＣＤＲ１ではアミノ酸位置２４〜３４、ＣＤＲ２ではアミノ酸位置５０〜５６、ＣＤＲ３ではアミノ酸位置８９〜９７の範囲にある。
【０１４９】
「ＣＤＲ」という用語は、抗体の可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖および軽鎖それぞれの可変領域に３つのＣＤＲがあり、それぞれの可変領域で、これらはＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と命名されている。「ＣＤＲセット」という用語は、抗原に結合可能な単一可変領域中に存在する３つのＣＤＲのグループを指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムに従って別に定義されている。カバットが説明するシステム（Ｋａｂａｔら、免疫学的に興味のあるタンパク質配列（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）（米国立衛生研究所、ベセスダ、メリーランド州（１９８７）および（１９９１））は、抗体の任意の可変領域に適用できる明確な残基番号付与システムを提供するだけでなく、３つのＣＤＲを定義する正確な残基の境界も提供する。これらのＣＤＲは、カバットＣＤＲと呼ばれ得る。コチアと共同研究者（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７、ならびにＣｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７−８８３）らは、カバットＣＤＲ内の特定のサブ部分が、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにも関わらず、ほぼ同一のペプチド骨格構造をとることを発見した。これらのサブ部分は、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３またはＨ１、Ｈ２、およびＨ３と命名され、「Ｌ」および「Ｈ」は、それぞれ、軽鎖領域および重鎖領域を表す。これらの領域は、コチアＣＤＲと呼ばれてもよく、カバットＣＤＲと重複する境界を有する。カバットＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界は、Ｐａｄｌａｎ（１９９５）が説明している。特定の実施形態がカバットまたはコチアによって定義されるＣＤＲを使用するが、本明細書に用いられる方法は、これらのシステムのいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用することができる。
【０１５０】
「カノニカル残基」という用語は、コチアら（Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９０７；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９））によって定義されるように、特定のカノニカルＣＤＲ構造を定義するＣＤＲまたはフレームワーク中の残基を指す。コチアらによると、多くの抗体のＣＤＲの重要な部分は、アミノ酸配列のレベルでの大きな多様性にも関わらず、ほぼ同一のペプチド骨格構造を有する。それぞれのカノニカル構造は、主に、ループを形成するアミノ酸残基の連続するセグメントに対して、ペプチド骨格のねじれ角のセットを指定する。
【０１５１】
「親和性成熟」抗体は、変化（複数可）をしていない親抗体と比較して、抗体の標的抗原に対する親和性の改善をもたらす１つ以上のＣＤＲ中の１つ以上の変化を有する抗体である。例示的な親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモルまたはまさにピコモルの親和性を有する。親和性成熟抗体を産生する様々な手順は、当技術分野で公知である。例えば、Ｍａｒｋｓら（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１０：７７９−７８３は、ＶＨおよびＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟について説明している。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発については、Ｂａｒｂａｓら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３８０９−３８１３；Ｓｃｈｉｅｒら（１９９５）Ｇｅｎｅ １６９：１４７−１５５；Ｙｅｌｔｏｎら（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４；Ｊａｃｋｓｏｎら（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−３３１９；Ｈａｗｋｉｎｓら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６が説明している。選択的変異誘発位置における選択的変異、および活性を亢進するアミノ酸残基を有する接触位置または高頻度変異位置における選択的変異は、米国特許第６，９１４，１２８号に記載されている。
【０１５２】
「多価結合タンパク質」という用語は、２つ以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質を意味する。実施形態において、多価結合タンパク質は、３つ以上の抗原結合部位を有するように設計され、一般に、天然に存在する抗体ではない。「多特異的結合タンパク質」という用語は、２つ以上の関連する標的または関連しない標的に結合可能な結合タンパク質を指す。本発明の「２重可変ドメイン」（「ＤＶＤ」）結合タンパク質は、２つ以上の抗原結合部位を含み、４価または多価の結合タンパク質である。ＤＶＤは、単一特異的、すなわち、１つの抗原に結合可能か、または多特異的、すなわち２つ以上の抗原に結合可能であり得る。「ＤＶＤ結合タンパク質」は、２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含む。ＤＶＤ結合タンパク質のそれぞれの半分は、重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび軽鎖ＤＶＤポリペプチド、ならびに２つ以上の抗原結合部位を含む。それぞれの結合部位は、抗原結合部位あたり抗原結合に関与する全６つのＣＤＲを有する重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。ＤＶＤ結合タンパク質は、ＤＶＤ−Ｉｇ（商標）分子としても知られている。
【０１５３】
ＤＶＤ結合タンパク質の設計、発現、および特徴づけについては、ＰＣＴ公開ＷＯ２００７／０２４７１５、米国特許第７，６１２，１８１号、およびＷｕら（２００７）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２５：１２９０−１２９７に記載されている。このようなＤＶＤ結合タンパク質の例は、構造式ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（式中、ＶＤ１は第１の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１は、ＣＨ１ではないという条件でリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域であり、ｎは０または１であるが、一実施形態においては１である）を含む重鎖、ならびに構造式ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（式中、ＶＤ１は第１の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１は、ＣＬではないという条件でリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域を含まず、ｎは０または１であるが、一実施形態においては１である）を含む軽鎖を含む。このようなＤＶＤ結合タンパク質は、２つのこのような重鎖および２つのこのような軽鎖を含むことができ、それぞれの鎖は、可変領域間に定常領域が介在しない、直列に結合した可変ドメインを含み、重鎖および軽鎖が結合して、直列の機能的抗原結合部位を形成し、重鎖および軽鎖の対は、重鎖および軽鎖の別の対と結合して、４つの機能的抗原結合部位を有する四量体の結合タンパク質を形成できる。別の例では、ＤＶＤ結合タンパク質は、それぞれ、可変領域間に定常領域が介在しない、直列に結合した３つの可変ドメイン（ＶＤ１、ＶＤ２、ＶＤ３）を含む重鎖および軽鎖を含むことができ、その中の重鎖および軽鎖の対が結合して、３つの抗原結合部位を形成し、重鎖および軽鎖の対は、重鎖および軽鎖の別の対と結合して、６つの抗原結合部位を有する四量体の結合タンパク質を形成できる。
【０１５４】
ＤＶＤ結合タンパク質は、スクレロスチンの１つ以上のエピトープに結合できる。ＤＶＤ結合タンパク質は、スクレロスチンのエピトープおよびスクレロスチンポリペプチド以外の第２の標的抗原のエピトープにも結合できる。
【０１５５】
「二特異的抗体」という用語は、クアドローマ技術（ｑｕａｄｒｏｍａ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ（１９８３）Ｎａｔｕｒｅ ３０５（５９３４）：５３７−４０）参照）、２つの異なるモノクローナル抗体の化学的結合（Ｓｔａｅｒｚら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１４（６０１２）：６２８−３１）、またはＦｃ領域中に変異を導入するノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂ ｉｎｔｏ ｈｏｌｅ）もしくは同様の方法（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０（１４）：６４４４−６４４８）によって生成され、そのうちの１つのみが機能的な二特異的抗体である複数の異なる免疫グロブリン種をもたらす全長抗体を指す。分子機能によって、二特異的抗体は、その２つの結合アームのうちの１つ（ＨＣ／ＬＣの一対）である抗原（またはエピトープ）に結合し、かつその第２のアーム（ＨＣ／ＬＣの異なる対）で異なる抗原（またはエピトープ）に結合する。この定義によって、二特異的抗体は（特異性とＣＤＲ配列の両方において）２つの異なる抗原結合アームを有し、それが結合するそれぞれの抗原に対して一価である。
【０１５６】
「二重特異的抗体」という用語は、その２つの結合アーム（ＨＣ／ＬＣの対）のそれぞれで２つの異なる抗原（またはエピトープ）に結合できる全長抗体を指す（ＰＣＴ公開ＷＯ０２／０２７７３参照）。したがって、二重特異的結合タンパク質は、同一の特異性および同一のＣＤＲ配列を有する２つの同一の抗原結合アームを有し、それが結合する各抗原に対して二価である。
【０１５７】
結合タンパク質の「機能的抗原結合部位」は、標的抗原に結合可能な部位である。この抗原結合部位の抗原結合親和性は、必ずしも、抗原結合部位が由来する親抗体ほど強くなくてもよいが、抗原に結合する能力は、抗原への抗体結合を評価するための公知の様々な方法のうちのいずれか１つを用いて測定できなければならない。さらに、本明細書の多価抗体の各抗原結合部位の抗原結合親和性は、定量的に同じである必要はない。
【０１５８】
「サイトカイン」という用語は、１つの細胞集団によって放出され、細胞間メディエーターとして別の細胞集団に作用するタンパク質に対する一般的な用語である。このようなサイトカインの例としては、リンホカイン、モノカイン、および従来のポリペプチドホルモンが挙げられる。ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）などの糖タンパク質ホルモン、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝成長因子；線維芽細胞成長因子；プロラクチン；胎盤ラクトゲン；腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）および腫瘍壊死因子−ベータ（ＴＮＦ−β）などの腫瘍壊死因子；ミュラー管抑制物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−アルファ（ＮＧＦ−α）などの神経成長因子；血小板成長因子；胎盤成長因子；ＴＧＦ−アルファ（ＴＧＦ−α）およびＴＧＦ−ベータ（ＴＧＦ−β）などの形質転換成長因子（ＴＧＦ）；インスリン様成長因子−１およびインスリン様成長因子−１１；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン−アルファ（ＩＦＮ−α）、インターフェロン−β（ＩＦＮ−β）、およびインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）などのインターフェロン；マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；ならびに顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３３などのインターロイキン類（ＩＬ）；ならびにＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子は、サイトカイン類に含まれる。サイトカインという用語は、天然の由来源または組み換え細胞培養からのタンパク質および天然配列サイトカイン類の生物学的活性同等物を含む。
【０１５９】
「ドナー」および「ドナー抗体」という用語は、１つ以上のＣＤＲを提供する抗体を指す。一実施形態において、ドナー抗体は、そこからフレームワーク領域を得るかまたは派生する抗体とは異なる種の抗体である。ヒト化抗体に関連して、「ドナー抗体」という用語は、１つ以上のＣＤＲを提供する非ヒト抗体を指す。
【０１６０】
「フレームワーク」および「フレームワーク配列」という用語は、ＣＤＲを差し引いた可変領域の残りの配列を指す。ＣＤＲ配列の正確な定義は、異なるシステムによって決定できるので、フレームワーク配列の意味は、それに対応して異なる解釈に従う。６つのＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３ならびに重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３）はまた、軽鎖および重鎖のフレームワーク領域を各鎖の４つのサブ領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）に分け、ＣＤＲ１は、ＦＲ１とＦＲ２の間に位置し、ＣＤＲ２はＦＲ２とＦＲ３の間に位置し、ＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４の間に位置する。ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３またはＦＲ４として特定のサブ領域を指定することなく、他者が言及するとおりに、フレームワーク領域は、天然に存在する単一の免疫グロブリン鎖の可変領域内の組み合わされたＦＲを表す。ＦＲは、４つのサブ領域のうちの１つを表し、ＦＲ類は、フレームワーク領域を構成する４つのサブ領域のうちの２つ以上を表す。
【０１６１】
「アクセプター」および「アクセプター抗体」という用語は、１つ以上のフレームワーク領域のアミノ酸配列の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％を備える抗体、または１つ以上のフレームワーク領域のアミノ酸配列の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％をコードする核酸配列を指す。いくつかの実施形態において、「アクセプター」という用語は、定常領域（複数可）をもたらす抗体のアミノ酸配列または定常領域（複数可）をコードする核酸配列を指す。さらに別の実施形態において、「アクセプター」という用語は、１つ以上のフレームワーク領域および定常領域（複数可）をもたらす抗体のアミノ酸配列または１つ以上のフレームワーク領域および定常領域（複数可）をコードする核酸配列を指す。特定の実施形態において、「アクセプター」という用語は、１つ以上のフレームワーク領域のアミノ酸配列の少なくとも８０％、一実施形態において、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは１００％をもたらすか、またはコードするヒト抗体のアミノ酸配列もしくは核酸配列を指す。この実施形態に従って、アクセプターは、ヒト抗体の１つ以上の特定の位置に存在しない少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、または少なくとも１０個のアミノ酸残基を含み得る。アクセプターフレームワーク領域および／またはアクセプター定常領域（複数可）は、例えば、生殖細胞系列抗体遺伝子、成熟抗体遺伝子、機能的抗体（例えば、当技術分野で周知である抗体、開発中の抗体、もしくは市販の抗体）に由来するか、またはそれらから取得できる。
【０１６２】
ヒト重鎖およびヒト軽鎖アクセプター配列は、当技術分野で公知である。一実施形態において、Ｖ−ｂａｓｅ（ｈｖｂａｓｅ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／）またはＩＭＧＴ（登録商標）、ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（ｈｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／ｔｅｘｔｅｓ／ＩＭＧＴｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ／ＬｏｃｕｓＧｅｎｅｓ／）からのヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列を提供する。「生殖細胞系列抗体遺伝子」または「遺伝子断片」という用語は、特定の免疫グロブリンの発現のための遺伝子再構成および変異をもたらす成熟プロセスを経ていない非リンパ細胞によってコードされる免疫グロブリン配列を指す（例えば、Ｓｈａｐｉｒｏら（２００２）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（３）：１８３−２００；Ｍａｒｃｈａｌｏｎｉｓら（２００１）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．４８４：１３−３０参照）。様々な実施形態によって提供される利点の１つは、生殖細胞系列抗体遺伝子が、成熟抗体遺伝子よりも、その種の個体に特徴的な必須アミノ酸配列構造を保存している可能性が高く、このため、その種で治療的に使用される場合に、外来源に由来すると認識される可能性がより低いという認識から生じる。
【０１６３】
「キー」残基という用語は、抗体、特にヒト化抗体の結合特異性および／または親和性に対してより多くの影響を与える可変領域内の特定の残基を指す。キー残基には、以下のもののうちの１つ以上が含まれるが、これらに限定されない：ＣＤＲに隣接する残基、潜在的な糖鎖付加部位（Ｎ−糖鎖付加部位またはＯ−糖鎖付加部位のいずれかであり得る）、レア残基、抗原と相互作用可能な残基、ＣＤＲと相互作用可能な残基、カノニカル残基、重鎖可変領域と軽鎖可変領域の間の接触残基、バーニヤ（Ｖｅｒｎｉｅｒ）ゾーン内の残基、および可変重鎖ＣＤＲ１のコチア定義と第１の重鎖フレームワークのカバット定義の間で重複する領域内の残基。
【０１６４】
「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト種（例えば、マウス）からの重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨおよび／またはＶＬ配列の少なくとも一部はより「ヒト様」、すなわちヒト生殖細胞系列可変配列により類似するように変更された抗体を指す。ヒト化抗体の一種は、ヒトＣＤＲ配列が、対応する非ヒトＣＤＲ配列を置換するために、非ヒトＶＨおよび非ヒトＶＬ配列に導入されるＣＤＲ移植抗体である。「ヒト化抗体」はまた、目的の抗原に免疫特異的に結合し、実質的にヒト抗体のアミノ酸配列を有するフレームワーク（ＦＲ）領域、および実質的に非ヒト抗体のアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその変異体、誘導体、類似体もしくは断片である。ＣＤＲに関して「実質的に」という用語は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全部または実質的に全部が非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のＣＤＲ領域に対応し、かつフレームワーク領域の全部または実質的に全部がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的に全部を含む。一実施形態において、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖と少なくとも重鎖の可変ドメインの両方を含む。この抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４領域を含み得る。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含む。特定の実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメインおよび／またはヒト化重鎖のみを含む。
【０１６５】
ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡもしくはＩｇＥを含む任意クラスの免疫グロブリン、またはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含むが、これらに限定されない任意のアイソタイプに由来し得る。ヒト化抗体は、２つ以上のクラスまたはアイソタイプの配列を含むことができ、特定の定常ドメインは、当技術分野で周知の技術を使用して、所望のエフェクター機能を最適化するように選択できる。
【０１６６】
ヒト化抗体のフレームワーク領域およびＣＤＲ領域は、親配列に厳密に一致する必要はなく、例えば、ドナー抗体ＣＤＲまたはコンセンサスフレームワークを、少なくとも１個のアミノ酸残基の置換、挿入および／または欠失により改変してもよく、その結果、その部位のＣＤＲまたはフレームワーク残基は、ドナー抗体またはコンセンサスフレームワークのいずれにも一致しない。しかし、一実施形態において、このような変異は、広範囲に及ばない。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、および少なくとも９５％は、親ＦＲ配列およびＣＤＲ配列の残基に一致する。「コンセンサスフレームワーク」という用語は、コンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク領域を指す。「コンセンサス免疫グロブリン配列」という用語は、関連する免疫グロブリン配列のファミリーに最高頻度で存在するアミノ酸（またはヌクレオチド）から形成される配列を指す（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ、ワインハイム、ドイツ、１９８７）参照）。免疫グロブリンファミリーでは、コンセンサス配列中の各位置は、そのファミリーでその位置に最高頻度で存在するアミノ酸が占有している。２個のアミノ酸が、同じ頻度で存在する場合には、どちらもコンセンサス配列に含まれ得る。
【０１６７】
ＤＶＤ結合タンパク質分子または他の結合タンパク質分子の構築に関して、「リンカー」は、ペプチド結合によって結合した２個以上のアミノ酸残基を含むポリペプチドを示すために用いられ、かつ１つ以上の抗原結合部分をつなぐために用いられる。このようなリンカーポリペプチドは、当技術分野で公知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋら（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，２：１１２１−１１２３参照）。例示的なリンカーには、ＧＧＧＧＳＧ（配列番号１６９５）、ＧＧＳＧＧ（配列番号１６９６）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１６９７）、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号１６９８）、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号：１６９９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１７００）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１７０１）、ＡＳＴＫＧＰ（配列番号１７０２）、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号１７０３）、ＴＶＡＡＰ（配列番号１７０４）、ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号１７０５）、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ（配列番号１７０６）、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号１７０７）、ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号１７１０）、ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号１７０９）、ＳＡＫＴＴＰ（配列番号１７０２）、ＲＡＤＡＡＰ（配列番号１７１１）、ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ（配列番号１７１２）、ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ（配列番号１７１３）、ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１７１４）、ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号１７１５）、ＡＤＡＡＰ（配列番号１７１６）、ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ（配列番号２０５０）、ＱＰＫＡＡＰ（配列番号２０５１）、ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号２０５２）、ＡＫＴＴＰＰ（配列番号２０５３）、ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ（配列番号２０５４）、ＡＫＴＴＡＰ（配列番号２０５５）、ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号２０５６）、ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ（配列番号２０５７）、ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ（配列番号２０５８）、およびＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳ（配列番号２０５９）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６８】
「バーニヤ」ゾーンという用語は、ＦｏｏｔｅとＷｉｎｔｅｒ（１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−４９９）により記載されているように、ＣＤＲ構造を調節し、抗原に対しはめ合いを微調整できるフレームワーク残基のサブセットを指す。バーニヤゾーン残基は、ＣＤＲの下にある層を形成し、ＣＤＲの構造および抗体の親和性に影響を与え得る。
【０１６９】
「中和」という用語は、結合タンパク質が特異的に抗原（例えば、ＳＯＳＴ）に結合する場合に、その抗原の生物活性の中和を指す。一実施形態において、本明細書に記載の中和結合タンパク質は、ｈＳＯＳＴに結合することにより、ｈＳＯＳＴの生物活性を阻害する。一実施形態において、中和結合タンパク質は、ｈＳＯＳＴに結合し、ｈＳＯＳＴの生物活性を少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％またはそれ以上低下させる。中和結合タンパク質によるｈＳＯＳＴの生物活性の阻害は、当技術分野で公知のｈＳＯＳＴ生物活性の１つ以上の指標を測定することにより評価できる。
【０１７０】
「活性」という用語には、抗原に対する抗体、例えば、ＳＯＳＴ抗原に結合する抗ｈＳＯＳＴ抗体の結合特異性／親和性、および／または抗体、例えば、ｈＳＯＳＴに結合することによりｈＳＯＳＴの生物活性を阻害する抗ｈＳＯＳＴ抗体の中和能などの活性が含まれる。
【０１７１】
「エピトープ」という用語には、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合可能な任意ポリペプチド決定基が含まれる。特定の実施形態において、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニルなどの化学的に活性のある表面分子群を含み、特定の実施形態において、特定の三次元構造の特徴、および／または特定の電荷の特徴を有し得る。エピトープは、抗体と結合した抗原の一領域である。特定の実施形態において、抗体は、タンパク質および／または巨大分子の複雑な混合物中でその標的抗原を優先的に認識する時に、抗原に特異的に結合するとされる。抗体は、交差競合（ｃｒｏｓｓ−ｃｏｍｐｅｔｅ）する（一方が、他方の結合または調節作用を妨げる）場合に、「同じエピトープに結合する」とされる。さらに、エピトープの構造的定義（重複、類似、同一）は有益であるが、機能的定義は、それらが構造的（結合）および機能的（調節、競合）パラメータを包含するので、より適切な場合が多い。
【０１７２】
「表面プラズモン共鳴」という用語は、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ、ウプサラ、スウェーデン、およびピスカタウェイ、ニュージャージー州）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度変化を検出することにより、リアルタイムで生体特異的相互作用の分析を可能にする光学現象を指す。さらなる詳細については、Ｊｏｎｓｓｏｎら（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６；Ｊｏｎｓｓｏｎら（１９９１）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７；Ｊｏｈｎｓｓｏｎら（１９９５）Ｊ．Ｍｏｌ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５−１３１；およびＪｏｈｎｎｓｏｎら（１９９１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８−２７７を参照されたい。
【０１７３】
「Ｋｏｎ」（「Ｋｏｎ」、「ｋｏｎ」ともいう）という用語は、当技術分野で公知の通り、結合タンパク質（例えば、抗体）が抗原と会合して、会合複合体（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｃｏｍｐｌｅｘ）、例えば、抗体／抗原複合体を形成するためのオン速度定数を指す。「Ｋｏｎ」はまた、本明細書で互換的に用いられる通り、「会合速度定数」、または「ｋａ」という用語でも知られる。この値は、抗体のその標的抗原への結合速度、または以下の式によって示される通り、抗体と抗原との間での複合体形成速度を示す。
抗体（「Ａｂ」）＋抗原（「Ａｇ」）→Ａｂ−Ａｇ
【０１７４】
「Ｋｏｆｆ」（「Ｋｏｆｆ」、「ｋｏｆｆ」ともいう）という用語は、当技術分野で公知の通り、結合タンパク質（例えば、抗体）の会合複合体（例えば、抗体／抗原複合体）からの解離のオフ速度定数を指すものとする。「Ｋｏｆｆ」はまた、本明細書で互換的に用いられる通り、「解離速度定数」、または「ｋｄ」という用語でも知られる。この値は、抗体のその標的抗原からの解離速度、または以下の式によって示される通り、時間と共にＡｂ−Ａｇ複合体が遊離の抗体および抗原へと分離する速度を示す。
Ａｂ＋Ａｇ←Ａｂ−Ａｇ
【０１７５】
「ＫＤ」（「Ｋｄ」ともいう）という用語は、「平衡解離定数」を指すものとし、平衡状態での滴定測定で得られる値、または解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を会合速度定数（Ｋｏｎ）で割ることによって得られる値を指す。会合速度定数（Ｋｏｎ）、解離速度定数（Ｋｏｆｆ）、および「平衡解離定数」（Ｋ）は、抗体の抗原への結合親和性を表すために用いられる。会合および解離速度定数を決定する方法は、当技術分野で周知である。蛍光ベースの技術の使用は、高感受性および平衡状態での生理緩衝液中の試料を調べる能力を提供する。ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）（生体分子相互作用分析）アッセイなどの他の実験アプローチおよび装置を使用できる（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＡＢ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、ウプサラ、スウェーデンから入手できる装置）。さらに、Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社（ボイシ、アイダホ州）から入手できるＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（動態排除アッセイ（Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ））アッセイも使用できる。
【０１７６】
「標識」および「検出可能な標識」という用語は、例えば、抗体と検体などの特異的結合対のメンバー間での反応を検出可能にするための、抗体または検体などの特異的結合パートナーに付着した部分を意味する。そのように標識された特異的結合パートナー、例えば、抗体または検体は、「検出可能に標識される」と言われる。したがって、「標識された結合タンパク質」という用語は、結合タンパク質の同定をもたらす、標識が取り込まれたタンパク質を指す。一実施形態において、この標識は、目視または機器手段によって検出可能なシグナルを生成できる検出可能なマーカー、例えば、放射標識したアミノ酸の取り込み、または標識アビジンもしくはストレプトアビジン（例えば、光学的方法もしくは比色法によって検出できる蛍光マーカーまたは酵素活性を含むストレプトアビジン）によって検出され得るビオチン化部分のポリペプチドへの付着である。ポリペプチドの標識の例としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、または１５３Ｓｍ）、色素原、蛍光標識（例えば、ＦＴＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光マーカー、ビオチニル基、二次レポーターにより認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）、および磁性薬剤（例えば、ガドリニウムキレート）。免疫測定法に一般に用いられる標識の代表的な例としては、光を発する部分、例えば、アクリジニウム化合物、および蛍光を発する部分、例えば、フルオレセインが挙げられる。他の標識については、本明細書に記載されている。この点で、その部分それ自体は、検出可能に標識されていなくてもよいが、さらなる別の部分との反応の際に、検出可能に成り得る。「検出可能に標識される」という用語の使用は、検出可能な標識の後者のタイプを包含するものとする。
【０１７７】
「ＳＯＳＴ結合タンパク質コンジュゲート」または「スクレロスチン結合タンパク質コンジュゲート」という用語は、治療薬または細胞毒性物質などの第２の化学部分と化学的に結合した、本明細書に記載のスクレロスチン結合タンパク質を指す。「薬剤」という用語は、本明細書では、化合物、化合物の混合物、生体高分子、または生体物質から作製された抽出物を示すために用いられる。一実施形態において、治療薬または細胞毒性物質には、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにそれらの類似体またはホモログが含まれるが、これらに限定されない。免疫測定法との関連で用いられる場合、スクレロスチン結合タンパク質コンジュゲートは、検出抗体として使用される検出可能に標識された抗体であり得る。
【０１７８】
「結晶」および「結晶化」という用語は、結晶形態で存在する結合タンパク質（例えば、抗体）、またはその抗原結合部分を指す。結晶は、アモルファス固体状態または液体結晶状態などの他の形態とは異なる物質の固体状態の一形態である。結晶は、原子、イオン、分子（例えば、抗体などのタンパク質）、または分子集合体（例えば、抗原／抗体複合体）の規則的な反復三次元配列で構成される。これらの三次元配列は、当技術分野で詳細に解明されている特定の数学的関係に従って配置される。結晶中で反復される基本単位、または構成ブロックは非対称単位と呼ばれる。非対称単位が所定の明確な結晶対称性に従う配置で反復されて、結晶の「単位格子」をもたらす。単位格子が全ての３次元で規則的変換により反復されて結晶をもたらす。Ｇｉｅｇｅら、第１章、核酸およびタンパク質の結晶化（Ｉｎ Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）、実践的なアプローチ、第２版（Ｄｕｃｒｕｉｘ ａｎｄ  Ｇｉｅｇｅ編）（オックスフォード大学出版局、ニューヨーク、１９９９）ページ１〜１６を参照されたい。
【０１７９】
「ポリヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのいずれかの２個以上のヌクレオチドのポリマー形態、またはいずれかのヌクレオチド型の修飾形態を意味する。この用語は、ＤＮＡの１本鎖形態および２本鎖形態を含む。
【０１８０】
「単離ポリヌクレオチド」という用語は、ポリヌクレオチド（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡ、もしくは合成起源、またはそれらのいくつかの組み合せの）を意味し、その起源により、「単離ポリヌクレオチド」は、「単離ポリヌクレオチド」と共に自然界で見られるポリヌクレオチドの全部または一部と結合していないか；自然界で連結していないポリヌクレオチドと作動可能に連結しているか；またはより長い配列の一部として自然界に存在しない。
【０１８１】
「ベクター」という用語は、これと結合した別の核酸を輸送可能な核酸分子を指すものとする。ベクターの１つの種類は、「プラスミド」であり、これは、追加のＤＮＡセグメントを連結可能な環状２本鎖ＤＮＡループを指す。ベクターの別の種類は、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムに連結できるウイルスベクターである。特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞内で自己複製可能である（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳類ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳類ベクター）は、宿主細胞への導入の際に宿主細胞のゲノムに組込むことができ、それによって宿主ゲノムと共に複製される。さらに、特定のベクターは、これらと作動可能に連結した遺伝子の発現を指令することが可能である。このようなベクターを、本明細書では「組換え発現ベクター」（または単に、「発現ベクター」）と言う。一般に、組換えＤＮＡ技術で有用な発現ベクターは、プラスミド形態である場合が多い。プラスミドは最も一般的に使用されているベクター形態であるので、本明細書では、「プラスミド」および「ベクター」は互換的に使用され得る。しかし、同等機能を果たす、ウイルス（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）ベクターなど他の形態の発現ベクターも提供する。
【０１８２】
「作動可能に連結される」という用語は、記載の成分が、それらの所望の様式で機能できる関係にある並置を指す。コーディング配列に「作動可能に連結される」調節配列は、調節配列に適合した条件下で、コーディング配列の発現が達成されるように連結される。「作動可能に連結される」配列は、目的の遺伝子に隣接する発現調節配列と、トランスでまたは離れたところで目的の遺伝子を調節するよう作用する発現調節配列の両者を含む。「発現調節配列」という用語は、これらの配列が連結されたコーディング配列の発現およびプロセシングを起こすために必要なポリヌクレオチド配列を指す。発現調節配列には、適切な転写開始、終結、プロモーターおよびエンハンサー配列；スプライシングシグナルおよびポリアデニル化シグナルなどの効率的ＲＮＡプロセシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を高める配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質安定性を高める配列；および必要に応じて、タンパク質分泌を高める配列が含まれる。このような調節配列の性質は宿主生物により異なり、原核生物では、このような調節配列は一般に、プロモーター、リボソーム結合部位および転写終結配列を含み、真核生物では、一般にこのような調節配列は、プロモーターおよび転写終結配列を含む。「調節配列」という用語は、その存在が発現とプロセシングに必須である成分を含むものとし、その存在が有利である追加成分、例えば、リーダー配列および融合パートナー配列も含み得る。
【０１８３】
本明細書で定義する「形質転換」は、外来ＤＮＡが宿主細胞に入る任意のプロセスを指す。形質転換は、当技術分野で周知の様々な方法を使用して天然または人工条件下で生じ得る。形質転換は、外来核酸配列を原核または真核宿主細胞に挿入する任意の公知の方法に頼ってよい。この方法は、形質転換する宿主細胞に基づいて選択され、ウイルス感染、エレクトロポレーション、リポフェクション、および微粒子銃が含まれ得るが、これらに限定されない。このような「形質転換された」細胞には、そこに挿入されたＤＮＡが自己複製プラスミドとしてまたは宿主染色体の一部として複製可能な安定型形質転換細胞が含まれる。それらには、挿入されたＤＮＡまたはＲＮＡを限られた期間、一過的に発現する細胞も含まれる。
【０１８４】
「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）という用語は、外来ＤＮＡが導入された細胞を指すものとする。一実施形態において、例えば、米国特許第７，２６２，０２８号に記載の宿主細胞などの宿主細胞は、抗体をコードする２つ以上（例えば、複数）の核酸を含む。このような用語は、特定対象細胞のみならず、このような細胞の子孫も指すものとする。後続世代には突然変異または環境影響により特定の改変が生じる場合があるので、このような子孫は、実際には、親細胞と同一でない場合もあるが、それでも「宿主細胞」という用語の範囲内に含まれる。一実施形態において、宿主細胞には、生物界のいずれかの原核細胞および真核細胞が含まれる。別の実施形態において、真核細胞には、原生生物細胞、真菌細胞、植物細胞または動物細胞が含まれる。別の実施形態において、宿主細胞には、原核細胞株の大腸菌；哺乳類細胞株のＣＨＯ、ＨＥＫ２９３、ＣＯＳ、ＮＳ０、ＳＰ２およびＰＥＲ．Ｃ６；昆虫細胞株のＳｆ９；ならびに真菌細胞の出芽酵母が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８５】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養および形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）には標準技術を使用してもよい。酵素反応および精製技術は、製造業者の仕様に従うか、当技術分野で一般に実施されているように、または本明細書の記載のとおりに実施できる。上記技術および手順は、一般に、当技術分野で周知の従来法に従って、かつ本明細書の随所に引用および記載される様々な一般文献ならびにより特定の文献に記載されるとおりに実施できる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク（１９８９））を参照されたい。
【０１８６】
当技術分野で公知である「トランスジェニック生物」は、トランスジーンを含む細胞を有する生物を指し、生物（または生物の祖先）に導入されるトランスジーンは、この生物で天然には発現されないポリペプチドを発現する。「トランスジーン」は、そこからトランスジェニック生物が発生する細胞のゲノムに安定的かつ作動可能に組み込まれ、トランスジェニック生物の１種以上の細胞種または組織でコード遺伝子産物の発現を指令するＤＮＡコンストラクトである。
【０１８７】
「制御」および「調節」という用語は、互換的に使用され、目的の分子の活性（例えば、ｈＳＯＳＴの生物活性）の変化または変更を指す。調節は、目的の分子の特定の活性もしくは機能の強さの増加または低下であり得る。例示的な分子の活性および機能には、結合特性、酵素活性、細胞受容体活性化、およびシグナル伝達が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８８】
同様に、「モジュレーター」という用語は、目的の分子の活性または機能（例えば、ｈＳＯＳＴの生物活性）を変化させるか、または変更することが可能な化合物である。例えば、モジュレーターは、モジュレーターの不在下で観察される活性または機能の強さと比較して、分子の特定の活性または機能の強さを増加または低下させることができる。特定の実施形態において、モジュレーターは、分子の少なくとも１種の活性または機能の強さを低下させる阻害剤である。例示的な阻害剤には、タンパク質、ペプチド、抗体、ペプチボディ、糖類または有機小分子が含まれるが、これらに限定されない。ペプチボディは、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ０１／８３５２５に記載されている。
【０１８９】
「アゴニスト」という用語は、目的の分子と接触した場合に、アゴニストの不在下で観察される活性または機能の強さと比較して、分子の特定の活性または機能の強さを増加させるモジュレーターを指す。特定の目的のアゴニストには、スクレロスチンのポリペプチド、核酸、糖類、またはヒトスクレロスチン（ｈＳＯＳＴ）に結合する任意の他の分子が含まれ得るが、これらに限定されない。
【０１９０】
「アンタゴニスト」または「阻害剤」という用語は、目的の分子と接触した場合に、アンタゴニストの不在下で観察される活性または機能の強さと比較して、分子の特定の活性または機能の強さを低下させるモジュレーターを指す。特定の目的のアンタゴニストには、ヒトスクレロスチンの生物活性または免疫活性を阻害または調節するものが含まれる。ヒトスクレロスチンのアンタゴニストおよび阻害剤には、ヒトスクレロスチンに結合するタンパク質、核酸、炭水化物または任意の他の分子が含まれるが、これらに限定されない。
【０１９１】
「有効量」という用語は、障害またはその１つ以上の症状の重篤度および／もしくは持続期間を低減または改善する、障害の進行を予防する、障害を退縮させる、障害に関連する１つ以上の症状の再発、発現、発症または進行を予防する、障害を検出する、あるいは別の療法剤（例えば、予防薬または治療薬）の予防効果もしくは治療効果（複数可）を強化または改善するのに十分な療法剤の量を指す。
【０１９２】
「患者」および「対象」は、本明細書で互換的に用いられ、霊長類（例えば、ヒト、サル、およびチンパンジー）、非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ラクダ、ラマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット、マウス、クジラ）を含む哺乳類、鳥（例えば、アヒルまたはガチョウ）、およびサメなどの動物を表し得る。一実施形態において、患者または対象はヒトであり、疾患、障害もしくは病状について治療されるかまたは評価されるヒト、疾患、障害もしくは病状の危険性があるヒト、疾患、障害もしくは病状を有するヒト、ならびに／または疾患、障害もしくは病状について治療されるヒトなどである。
【０１９３】
「試料」という用語は、その最も広義な意味で使用される。「生体試料」には、生物またはかつての生物に由来する任意量の物質が含まれるが、これに限定されない。このような生物には、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、サル、イヌ、ウサギおよび他の動物が含まれるが、これらに限定されない。このような物質には、血液（例えば、全血）、血漿、血清、尿、羊水、滑液、内皮細胞、白血球、単球、他の細胞、臓器、組織、骨髄、リンパ節および脾臓が含まれるが、これらに限定されない。
【０１９４】
「成分（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）」、「成分（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）」、および「少なくとも１種類の成分」は、一般に、本明細書に記載の方法および当技術分野で公知の他の方法に従って、患者の尿、血清または血漿試料などの試験試料のアッセイ用キットに含まれ得る捕捉抗体、検出抗体またはコンジュゲート抗体、対照、キャリブレーター、一連のキャリブレーター、感受性パネル、容器、緩衝液、希釈剤、塩、酵素、酵素の補助因子、検出試薬、前処理試薬／溶液、（例えば、溶液としての）基質、および停止溶液などを指す。したがって、本開示に関連して、「少なくとも１種類の成分」、「成分（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）」、および「成分（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）」には、抗検体（例えば、抗ポリペプチド）抗体に結合するなどによって固体支持体上に任意に固定されるポリペプチドなどの検体を含む組成物などの、上記のポリペプチドまたは他の検体が含まれ得る。いくつかの成分は、溶液中に存在するか、またはアッセイでの使用の際に再構成するために凍結乾燥できる。
【０１９５】
「対照」は、非検体として知られる組成物（陰性対照）または検体を含むことが知られる組成物（「陽性対照」）を指す。陽性対照は、既知濃度の検体を含み得る。「対照」、「陽性対照」、および「キャリブレーター」は、本明細書では互換的に用いられ、既知濃度の検体を含む組成物を表し得る。「陽性対照」は、分析性能特性を証明するために用いることができ、試薬（例えば、検体）の完全性の有用な指標である。
【０１９６】
「所定のカットオフ」および「所定のレベル」は、一般に、様々な臨床パラメータ（例えば、疾患の重症度、進行／非進行／改善など）とすでに関係または関連している所定のカットオフ／レベルに対しアッセイ結果を比較することによって、診断／予後／治療の有効性の結果を評価するために用いられるアッセイカットオフ値を指す。本開示は、例示的な所定のレベルを提供できるが、カットオフ値は、免疫測定法の性質（例えば、用いられる抗体など）に依存して変更できることは周知である。さらに、本開示に基づき、それらの他の免疫測定法の免疫測定法特異的カットオフ値を得るために、他の免疫測定法に関する本明細書の開示を適合させることは、十分に当業者の技術の範囲内である。所定のカットオフ値／レベルの正確な値は、アッセイ間で変わってもよいが、（もしあれば）本明細書に記載の相関は、一般に適用できるべきである。
【０１９７】
「前処理試薬」、例えば、本明細書に記載の診断アッセイに用いられる溶解、沈殿および／または可溶化用の試薬は、試験試料中に存在する任意の細胞を溶解する、かつ／または任意の検体を可溶化する試薬である。前処理は、さらに本明細書に記載のとおり、全試料にとって必要とは限らない。とりわけ、検体（例えば、目的のポリペプチド）の可溶化は、試料中に存在する任意の内在性結合タンパク質からの検体の放出を伴い得る。前処理試薬は、均一（分離ステップを必要としない）であっても、または不均一（分離ステップを必要とする）であってもよい。不均一前処理試薬を使用する時は、アッセイの次のステップへ進む前に、沈殿した任意の検体結合タンパク質を試験試料から除去するステップがある。
【０１９８】
本明細書に記載の免疫測定法およびキットに関連して、「品質管理試薬」には、キャリブレーター、対照、および感受性パネルが含まれるが、これらに限定されない。「キャリブレーター」または「標準物質」は、典型的には、抗体または検体などの検体濃度の補間のための検量線（標準曲線）を確立するために用いられる（例えば、多数などの１つ以上）。もう１つの方法として、所定の陽性／陰性カットオフに近い単一キャリブレーターを用いることができる。多数のキャリブレーター（すなわち、２つ以上のキャリブレーターまたは様々な量のキャリブレーター（複数可））を、「感受性パネル」を含むようにするために組み合わせて使用できる。
【０１９９】
「リスク」は、現在または将来のある時点で特定の事象が生じる可能性または確実性の高い可能性を指す。「リスク層化」は、医師が、患者の特定の疾患、障害もしくは病状が発症するリスクを、低いリスク、軽度リスク、高いリスクまたはより高いリスクに分類することを可能にする数々の既知の臨床リスクファクターを指す。
【０２００】
特異的結合対（例えば、抗原（またはその断片）および抗体（またはその抗原反応性断片））のメンバー間での相互作用に関連して、「特異的」および「特異性」は、その相互作用の選択的反応性を指す。「特異的に結合する」という語句および類似の語句は、抗体（またはその抗原反応性断片）が検体（またはその断片）に特異的に結合し、かつ他の構成要素には特異的に結合しない能力を指す。
【０２０１】
「特異的結合パートナー」は、特異的結合対のメンバーである。特異的結合対は、化学的または物理的手段を経て互いに特異的に結合する２つの異なる分子を含む。したがって、一般的な免疫測定法の抗原と抗体の特異的結合対に加えて、他の特異的結合対には、ビオチンとアビジン（またはストレプトアビジン）、炭水化物とレクチン、相補的なヌクレオチド配列、エフェクターと受容体分子、補助因子と酵素、および酵素阻害剤と酵素などが含まれ得る。さらに、特異的結合対には、元の特異的結合メンバーの類似体、例えば、検体−類似体であるメンバーが含まれ得る。免疫反応の特異的結合メンバーには、単離されたものまたは組換え産生されたものに関わらず、抗原、抗原断片、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を含む抗体、ならびにそれらの複合体、断片、および（変異体の断片を含む）変異体が含まれる。
【０２０２】
「変異体」という用語は、アミノ酸の付加（例えば、挿入）、欠失、または保存的置換によってアミノ酸配列において所定のポリペプチド（例えば、スクレロスチン、ＢＮＰ、ＮＧＡＬ、もしくはＨＩＶポリペプチド、または抗ポリペプチド抗体）とは異なるポリペプチドであるが、その所定のポリペプチドの生物活性を保持しているポリペプチド（例えば、変異体スクレロスチンは、スクレロスチンと結合する抗スクレロスチン抗体と競合し得る）を意味する。アミノ酸の保存的置換、すなわち、アミノ酸を同様の性質（例えば、親水性ならびに荷電領域の程度および分布）を有する異なるアミノ酸と置換することは、典型的には微小な変更であると当技術分野で認められている。これらの微小変更は、当技術分野で理解されているように、部分的には、アミノ酸の疎水性親水性指標を考慮することによって特定され得る（例えば、Ｋｙｔｅら（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２参照）。アミノ酸の疎水性親水性指標は、その疎水性および電荷の考慮に基づく。同様の疎水性指標をもつアミノ酸を置換してもなおタンパク質機能を保持し得ることは当技術分野で公知である。一態様において、疎水性指標が±２であるアミノ酸が置換される。アミノ酸の親水性は、生物学的機能を保持するタンパク質をもたらす置換を明らかにするために使用することもできる。ペプチドにおけるアミノ酸の親水性を考慮すると、そのペプチドの最大局所平均親水性を計算でき、これは、抗原性および免疫原性と非常に良く相関することが報告された有用な尺度である（例えば、米国特許第４，５５４，１０１号参照）。同様の親水性値を有するアミノ酸の置換は、当技術分野で理解されるように、生物活性、例えば、免疫原性を保持するペプチドをもたらし得る。一態様において、置換は、互いに±２以内の親水性値を有するアミノ酸を用いて行われる。アミノ酸の疎水性指標および親水性値の両方は、そのアミノ酸の特定の側鎖によって影響を受ける。その観察と一致して、生物学的機能に適合したアミノ酸置換は、疎水性、親水性、電荷、サイズ、および他の特性によって明らかにされるように、アミノ酸、特に、それらのアミノ酸の側鎖の相対的類似度に依存することが理解される。「変異体」は、タンパク質分解、リン酸化反応、または他の翻訳後修飾などによって差次的にプロセシングされ、なお、その生物活性または抗原反応性、例えば、スクレロスチンに結合する能力を保持するポリペプチドまたはその断片について説明するために用いることもできる。本明細書での「変異体」の使用は、特に文脈が矛盾しない限り、変異体の断片を包含するものとする。
【０２０３】
Ｉ．ヒトＳＯＳＴに結合する抗体
一態様は、スクレロスチンに結合し、高い親和性、遅いオフ速度および高い中和能を有する単離マウスモノクローナル抗体、またはその抗原結合部分を提供する。第２の態様は、スクレロスチンに結合するキメラ抗体を提供する。第３の態様は、スクレロスチンに結合するＣＤＲ移植抗体、またはその抗原結合部分を提供する。第４の態様は、スクレロスチンに結合するヒト化抗体、またはその抗原結合部分を提供する。第５の態様は、スクレロスチンおよび１種類の他の標的に結合する二重可変ドメイン結合タンパク質（ＤＶＤ結合タンパク質）を提供する。一実施形態において、抗体またはその一部は単離抗体である。一実施形態において、ヒト抗スクレロスチンを中和する抗体を提供する。
【０２０４】
Ｉ．Ａ．抗スクレロスチン抗体の作製法
当技術分野で公知のいくつかの技術のいずれかによって作製した抗スクレロスチン抗体を提供する。
【０２０５】
Ｉ．Ａ．１．ハイブリドーマ技術を用いる抗スクレロスチンモノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術、組換え技術、およびファージディスプレイ技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む、当技術分野で公知の多種多様な技術を用いて調製できる。例えば、モノクローナル抗体は、当技術分野で公知の技術および、例えば、Ｈａｒｌｏｗらの抗体：実験マニュアル、第２版（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９８８）、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇらのモノクローナル抗体およびＴ細胞ハイブリドーマ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）の中で教示される技術を含むハイブリドーマ技術を用いて産生できる。「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術を経て産生される抗体に限定されない。「モノクローナル抗体」という用語は、全ての真核、原核、またはファージのクローンを含む単一クローンに由来する抗体を指し、それが産生される方法ではない。
【０２０６】
ハイブリドーマ技術を用いて特異的抗スクレロスチン抗体を産生する方法およびスクリーニングする方法は、当技術分野で日常的なものであり、周知である。一実施形態は、抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養する工程を含む方法によって産生されるモノクローナル抗体および抗体を作製する方法であって、一実施形態において、このハイブリドーマは、抗原で免疫したマウスから単離した脾細胞と骨髄腫細胞を融合し、その後、融合から生じるハイブリドーマを、ポリペプチドに結合可能な抗体を分泌するハイブリドーマクローンについてスクリーニングすることによって作製される。簡単に説明すると、マウスはスクレロスチン抗原で免疫できる。一実施形態において、このスクレロスチン抗原は、免疫反応を刺激するためにアジュバントと共に投与する。このようなアジュバントには、完全または不完全なフロイントアジュバント、ＲＩＢＩ（ムラミルジペプチド）またはＩＳＣＯＭ（免疫賦活性複合体）が含まれる。このようなアジュバントは、局所性沈着でそれを捕捉することによって急速な分散からポリペプチドを保護できるか、またはマクロファージを遊走させる因子および免疫系の他の成分を分泌するよう、宿主を刺激する物質を含むことができる。一実施形態において、ポリペプチドが投与される場合、免疫化スケジュールは、数週間にわたって、ポリペプチドの２回以上の投与を伴う。
【０２０７】
スクレロスチン抗原で動物を免疫後、抗体および／または抗体産生細胞をその動物から取得できる。抗スクレロスチン抗体を含む血清は、その動物を出血させるかまたは屠殺することによってその動物から得られる。この血清は、その動物から得た状態で使用してもよく、免疫グロブリン画分を血清から取得するか、または抗スクレロスチン抗体を血清から精製してもよい。この方法で得られた血清または免疫グロブリンは、ポリクローナルであるので、異種の多くの性質を有する。
【０２０８】
免疫反応を検出した時点、例えば、抗原ＳＯＳＴに特異的な抗体をマウス血清中で検出した時点で、そのマウスの脾臓を摘出し、脾細胞を単離する。その後、この脾細胞を周知の技術によって任意の適切な骨髄腫細胞、例えば、アメリカ培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、マナッサス、バージニア州、米国）から入手できる細胞株ＳＰ２０からの細胞に融合する。ハイブリドーマを選択し、限界希釈によりクローン化する。その後、ハイブリドーマクローンを、ＳＯＳＴに結合可能な抗体を分泌する細胞について、当技術分野で公知の方法によってアッセイする。腹水は、一般に高レベルの抗体を含むが、陽性のハイブリドーマクローンでマウスを免疫することにより産生できる。
【０２０９】
別の実施形態において、抗体を産生する不死化ハイブリドーマは、免疫動物から調製できる。当技術分野で周知の通り、免疫化後、動物を屠殺し、脾臓Ｂ細胞を不死化骨髄腫細胞に融合する。例えば、上記のＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅを参照されたい。一実施形態において、これらの骨髄腫細胞は、免疫グロブリンポリペプチドを分泌しない（非分泌細胞株）。融合および抗生物質選択後、ＳＯＳＴ、もしくはその部分、またはＳＯＳＴを発現する細胞を用いて、これらのハイブリドーマをスクリーニングする。一実施形態において、最初のスクリーニングは、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）または放射免疫測定法（ＲＩＡ）を用いて行われ、一実施形態においては、ＥＬＩＳＡを用いて行われる。ＥＬＩＳＡスクリーニングの例は、ＰＣＴ公開ＷＯ００／３７５０４に提供されている。
【０２１０】
以下でさらに説明するように、抗スクレロスチン抗体を産生するハイブリドーマを選択し、クローン化し、さらに、確実なハイブリドーマ成長、抗体の高生産および所望の抗体特性を含む所望の特性についてスクリーニングする。ハイブリドーマは、同系動物、免疫系を欠く動物、例えば、ヌードマウスにおいてインビボで、またはインビトロの細胞培養で培養および増殖させることができる。ハイブリドーマの選択法、クローニング法および増殖法は、当業者に周知である。
【０２１１】
一実施形態において、ハイブリドーマは、上記のようにマウスハイブリドーマである。別の実施形態において、ハイブリドーマは、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマなどの非ヒト、非マウス種で産生される。別の実施形態において、ハイブリドーマは、ヒトの非分泌骨髄腫が抗スクレロスチン抗体を発現するヒト細胞と融合されたヒトハイブリドーマである。
【０２１２】
特異的エピトープを認識する抗体断片は、公知の技術によって作製できる。例えば、パパイン（Ｆａｂ断片を生成するため）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片を生成するため）などの酵素を用いて、免疫グロブリン分子のタンパク質切断によって生成されるＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片を提供する。Ｆ（ａｂ’）２断片は、可変領域、軽鎖定常領域および重鎖のＣＨＩドメインを含む。
【０２１３】
Ｉ．Ａ．２．ＳＬＡＭを用いる抗スクレロスチンモノクローナル抗体
別の実施形態において、当技術分野で選択リンパ球抗体法（ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｍｅｔｈｏｄ（ＳＬＡＭ））と称され、米国特許第５，６２７，０５２号、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０２５５１、およびＢａｂｃｏｏｋら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：７８４３−７８４８に記載されているような手順を用いて、単離した単一リンパ球から生成した組換え抗体を提供する。この方法において、目的の抗体を分泌する単一細胞、例えば、セクション１に記載の免疫動物のいずれか１つに由来するリンパ球を、抗原特異的溶血プラークアッセイを用いてスクリーニングし、その際、抗原ＳＯＳＴ、ＳＯＳＴのサブユニット、またはその断片は、ビオチンなどのリンカーを用いてヒツジの赤血球と結合され、ＳＯＳＴに対する特異性を有する抗体を分泌する単一細胞を特定するために用いられる。目的の抗体分泌細胞を特定後、重鎖および軽鎖可変領域（ＶＨおよびＶＬ）のｃＤＮＡを、逆転写酵素−ＰＣＲによってこれらの細胞から回収し、その後、これらの可変領域を、適切な免疫グロブリン定常領域（例えば、ヒト定常領域）に関して、ＣＯＳまたはＣＨＯ細胞などの哺乳類宿主細胞中で発現させることができる。増幅した免疫グロブリン配列でトランスフェクトし、インビボ選択したリンパ球由来の宿主細胞は、その後さらに、例えば、トランスフェクト細胞をパニングして、ＳＯＳＴに対する抗体を発現する細胞を単離することによって、インビトロで分析および選択することができる。増幅した免疫グロブリン配列は、さらに、ＰＣＴ公開ＷＯ９７／２９１３１およびＷＯ００／５６７７２に記載の方法などのインビトロ親和性成熟法などによってインビトロで操作できる。
【０２１４】
Ｉ．Ａ．３．トランスジェニック動物を用いる抗スクレロスチンモノクローナル抗体
別の実施形態において、ヒト免疫グロブリン遺伝子座のいくつかまたは全部を含む非ヒト動物をＳＯＳＴ抗原で免疫することによって産生される抗体を提供する。一実施形態において、この非ヒト動物は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウスであり、これは、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の巨大断片を含み、マウス抗体産生を欠く改変マウスの系統である。例えば、Ｇｒｅｅｎら（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．７：１３−２１、米国特許第５，９１６，７７１号、同第５，９３９，５９８号、同第５，９８５，６１５号、同第５，９９８，２０９号、同第６，０７５，１８１号、同第６，０９１，００１号、同第６，１１４，５９８号、同第６，１３０，３６４号を参照されたい。また、ＰＣＴ公開ＷＯ９１／１０７４１、ＷＯ９４／０２６０２、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／５０４３３、ＷＯ９９／４５０３１、ＷＯ９９／５３０４９、ＷＯ００／０９５６０およびＷＯ００／０３７５０４も参照されたい。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスは、完全ヒト抗体の成人様ヒトリパートリーを産生し、抗原特異的ヒトＭａｂを生成する。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）トランスジェニックマウスは、ヒト重鎖遺伝子座およびｘ軽鎖遺伝子座のメガベースサイズの生殖細胞系列配置ＹＡＣ断片の導入を経て、ヒト抗体レパートリーの約８０％を含む。Ｍｅｎｄｅｚら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、１５：１４６−１５６（１９９７）、ならびにＧｒｅｅｎおよびＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８８：４８３−４９５（１９９８）を参照されたい。
【０２１５】
Ｉ．Ａ．４．組換え抗体ライブラリーを用いる抗スクレロスチンモノクローナル抗体
抗体を作製するインビトロ法であって、抗体ライブラリーをスクリーニングして、所望の結合特異性を有する抗体を特定する方法を提供する。組換え抗体ライブラリーのこのようなスクリーニング法は、当技術分野で公知であり、例えば、Ｌａｄｎｅｒらの米国特許第５，２２３，４０９号、ＫａｎｇらのＰＣＴ公開ＷＯ９２／１８６１９、ＤｏｗｅｒらのＷＯ９１／１７２７１、ＷｉｎｔｅｒらのＷＯ９２／２０７９１、ＭａｒｋｌａｎｄらのＷＯ９２／１５６７９、ＢｒｅｉｔｌｉｎｇらのＷＯ９３／０１２８８、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらのＷＯ９２／０１０４７、ＧａｒｒａｒｄらのＷＯ９２／０９６９０、ＦｕｃｈｓらのＢｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：１３６９−１３７２（１９９１）、Ｈａｙらのｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，３：８１−８５（１９９２）、ＨｕｓｅらのＳｃｉｅｎｃｅ，２４６：１２７５−１２８１（１９８９）、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらのＮａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４（１９９０）、ＧｒｉｆｆｉｔｈｓらのＥＭＢＯ  Ｊ．，１２：７２５−７３４（１９９３）、ＨａｗｋｉｎｓらのＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２６：８８９−８９６（１９９２）、ＣｌａｃｋｓｏｎらのＮａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）、ＧｒａｍらのＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．ＡｃＡＤ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：３５７６−３５８０（１９９２）、ＧａｒｒａｒｄらのＢｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：１３７３−１３７７（１９９１）、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍらのＮｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９：４１３３−４１３７（１９９１）、およびＢａｒｂａｓらのＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：７９７８−７９８２（１９９１）、米国特許出願公開第２００３／０１８６３７４号、ＰＣＴ公開ＷＯ９７／２９１３１に記載の方法を含む。
【０２１６】
組換え抗体ライブラリーは、スクレロスチン、またはスクレロスチンの一部で免疫した対象由来であり得る。もう１つの方法として、この組換え抗体ライブラリーは、ヒトスクレロスチンで免疫していないヒト対象由来のヒト抗体ライブラリーなどの、未処置の対象、すなわち、スクレロスチンで免疫していない対象由来のものであり得る。本発明の抗体は、ヒトスクレロスチンを含むペプチドを用いて組換え抗体ライブラリーをスクリーニングし、スクレロスチンを認識するそれらの抗体を選択することによって選択される。このようなスクリーニングおよび選択を行うための方法は、前の段落の参考文献に記載されるように当技術分野で周知である。特定のＫｏｆｆ速度定数を有するヒトスクレロスチンから解離するものなどの、ヒトスクレロスチンに対する特定の結合親和性を有する抗体を選択するために、当技術分野で公知の表面プラズモン共鳴法を用いて、所望のＫｏｆｆ速度定数を有する抗体を選択できる。特定のＩＣ５０を有するものなどの、ヒトスクレロスチンに対する特定の中和活性を有する抗体を選択するために、ヒトスクレロスチン活性の阻害を評価するための、当技術分野で公知の標準法を用いてもよい。
【０２１７】
一態様において、ヒトスクレロスチンに結合する単離抗体またはその抗原結合部分を提供する。一実施形態において、この抗体は中和抗体である。様々な実施形態において、この抗体は、組換え抗体またはモノクローナル抗体である。
【０２１８】
例えば、本発明の抗体は、当技術分野で公知の様々なファージディスプレイ法を用いて作製することもできる。ファージディスプレイ法において、機能的抗体ドメインは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面上に提示される。特に、このようなファージは、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から発現される抗原結合ドメインを提示するために利用できる。目的の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原、例えば、固体表面もしくはビーズに結合するかまたは捕捉された標識抗体、または固体表面もしくはビーズに結合するかまたは捕捉された標識抗原を用いて、選択または特定できる。これらの方法を用いたファージは、典型的には、ファージ遺伝子ＩＩＩもしくは遺伝子ＶＩＩＩタンパク質のいずれかに組換えにより融合されたＦａｂ、Ｆｖ、またはジスルフィド安定化Ｆｖ抗体ドメインを有するファージから発現されるｆｄおよびＭ１３結合ドメインを含む線状ファージである。本発明の抗体を作製するために用いることができるファージディスプレイ法には、ＢｒｉｎｋｍａｎｎらのＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１８２：４１−５０（１９９５）；ＡｍｅｓらのＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１８４：１７７−１８６（１９９５）；ＫｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈらのＥｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：９５２−９５８（１９９４）；ＰｅｒｓｉｃらのＧｅｎｅ，１８７：９−１８（１９９７）；ＢｕｒｔｏｎらのＡｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，５７：１９１−２８０（１９９４）；ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０２８０９；ＷＯ９１／１０７３７；ＷＯ９２／０１０４７（ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４）；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９３／１１２３６；ＷＯ９５／１５９８２；ＷＯ９５／２０４０１；および米国特許第５，６９８，４２６号；同第５，２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号；同第５，５８０，７１７号；同第５，４２７，９０８号；同第５，７５０，７５３号；同第５，８２１，０４７号；同第５，５７１，６９８号；同第５，４２７，９０８号；同第５，５１６，６３７号；同第５，７８０，２２５号；同第５，６５８，７２７号；同第５，７３３，７４３号および同第５，９６９，１０８号に開示されるものが含まれる。
【０２１９】
上記の参考文献に記載されるように、ファージ選択後、ファージから抗体コード領域を単離し、ヒト抗体を含む全抗体または任意の他の所望の抗原結合断片を作製するために用い、例えば、以下に詳細に記載するとおり、哺乳類細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、および細菌を含む任意の所望の宿主で発現させることができる。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／２２３２４；ＭｕｌｌｉｎａｘらのＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１２（６）：８６４−８６９（１９９２）；ＳａｗａｉらのＡｍ．Ｊ．ｒｅｐｒｏｄ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３４：２６−３４（１９９５）；およびＢｅｔｔｅｒらのＳｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０４１−１０４３（１９８８）に記載されるものなどの、当技術分野で公知の方法を用いて、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２断片を組換えにより産生するための技術も利用できる。一本鎖Ｆｖおよび抗体を産生するために用いることができる技術の例としては、米国特許第４，９４６，７７８号および同第５，２５８，４９８号；ＨｕｓｔｏｎらのＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２０３：４６−８８（１９９１）；ＳｈｕらのＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７９９５−７９９９（１９９３）；およびＳｋｅｒｒａらのＳｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０３８−１０４１（１９８８）に記載のものが挙げられる。
【０２２０】
ファージディスプレイによる組換え抗体ライブラリーのスクリーニングに代わるものとして、多数のコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングするための、当技術分野で公知の他の方法が、２重特異的抗体の特定に適用できる。別の発現系の１種類は、ＳｚｏｓｔａｋおよびＲｏｂｅｒｔｓによるＰＣＴ公開ＷＯ９８／３１７００、ならびにＲｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｗ．およびＳｚｏｓｔａｋ，Ｊ．Ｗ．（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：１２２９７−１２３０２に記載されるように、組換え抗体ライブラリーをＲＮＡ−タンパク質融合物として発現させるものである。この系において、ペプチジル受容体抗生物質のピューロマイシンを３’末端に有する合成ｍＲＮＡのインビトロ翻訳によって、ｍＲＮＡとそれがコードするペプチドまたはタンパク質との間で共有結合融合物が作製される。したがって、特異的ｍＲＮＡは、２重特異的抗原への抗体またはその一部の結合などの、コードされるペプチドもしくはタンパク質、例えば、抗体またはその一部の性質に基づいて、ｍＲＮＡ（例えば、コンビナトリアルライブラリー）の複合体混合物から濃縮できる。このようなライブラリーのスクリーニングから回収された、抗体またはその一部をコードする核酸配列は、上記の組換え手段により（例えば、哺乳類宿主細胞内で）発現させることができ、さらに、上記のように、変異が最初に選択された配列（複数可）に導入されるｍＲＮＡ−ペプチド融合物の追加の一連のスクリーニング、または組換え抗体のインビトロ親和性成熟のための他の手段のいずれかによりさらなる親和性成熟に供することができる。
【０２２１】
別のアプローチにおいて、当技術分野で公知の酵母ディスプレー法を用いて作製される抗体を提供する。酵母ディスプレー法では、遺伝学的手法を用いて、酵母の細胞壁に抗体ドメインを繋ぎとめ、酵母の表面上にそれらを提示する。特に、このような酵母を利用して、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から発現される抗原結合ドメインを提示できる。本発明の抗体を作製するために用いることができる酵母ディスプレー法の例としては、Ｗｉｔｔｒｕｐらが米国特許第６，６９９，６５８号で開示されるものが挙げられる。
【０２２２】
Ｉ．Ｂ．組換えスクレロスチン抗体の産生
当技術分野で公知のいくつかの技術のいずれかにより産生される抗体を提供する。例えば、宿主細胞からの発現は、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクター（複数可）が標準的な技術により宿主細胞にトランスフェクトされる。「トランスフェクション」という用語の様々な形態は、外来ＤＮＡを原核または真核宿主細胞に導入するために一般的に使用される多種多様な技術、例えば、電気穿孔法、リン酸カルシウム沈殿、およびＤＡＥＡデキストラントランスフェクションなどを包含するものとする。原核宿主細胞または真核宿主細胞のいずれかで本発明の抗体を発現させることが可能であるが、真核細胞での抗体発現が好ましく、最も好ましくは、哺乳類宿主細胞での発現である。なぜならこのような真核細胞（特に、哺乳類細胞）は、原核細胞よりも、正しく折りたたまれ免疫学的に活性のある抗体を構築し、分泌する可能性が高いからである。
【０２２３】
本発明の組換え抗体を発現させるための例示的な哺乳類宿主細胞には、（例えば、Ｒ．Ｊ．Ｋａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｐ．Ａ．Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，．１５９：６０１−６２１に記載のＤＨＦＲ選択マーカーと共に用いられ、Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６−４２２０に記載のｄｈｆｒ−ＣＨＯを含む）チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞が含まれる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳類宿主細胞に導入されると、宿主細胞での抗体の発現を可能にするのに十分な期間、または一実施形態においては、宿主細胞が増殖する培地中への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間、宿主細胞を培養することによって、抗体が産生される。抗体は標準的なタンパク質精製法を用いて培地から回収できる。
【０２２４】
宿主細胞を用いて、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖ分子などの機能的抗体断片を産生することもできる。上記の手順におけるバリエーションは、本発明の範囲内にあることを理解されたい。例えば、本発明の抗体の軽鎖および／または重鎖のいずれかの機能的断片をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトすることが望ましい場合もある。組換えＤＮＡ技術を用いて、目的の抗原に結合するのに必要では無い軽鎖および重鎖のいずれかもしくはその両方をコードするＤＮＡのいくつか、または全部を除去することもできる。このような切り詰められたＤＮＡ分子から発現される分子も、本発明の抗体に包含される。さらに、二機能性抗体であって、標準的な化学架橋法によってある抗体を第２の抗体と架橋することにより、一方の重鎖および一方の軽鎖がひとつの抗体であり、他方の重鎖および軽鎖が目的の抗原以外の抗原に特異的である、二機能性抗体を産生できる。
【０２２５】
抗体、またはその抗原結合部分の組換え発現用の例示的な系において、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションによってｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入される、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターを提供する。この組換え発現ベクター内で、抗体の重鎖遺伝子および軽鎖遺伝子は、それぞれ、遺伝子の高レベル転写を促進するために、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントに作動可能に連結される。組換え発現ベクターは、メトトレキサート選択／増幅を用いてベクターでトランスフェクトしたＣＨＯ細胞の選択を可能にするＤＨＦＲ遺伝子も保有する。選択される形質転換宿主細胞を、抗体重鎖および軽鎖を発現させるために培養し、インタクトな抗体を培地から回収する。標準的な分子生物学的技術を用いて、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培地から抗体を回収する。さらに、組換え抗体が合成されるまで適切な培地中で宿主細胞を培養することによって組換え抗体を合成する方法を提供する。この方法は、さらに、培地から組換え抗体を単離することを含み得る。
【０２２６】
Ｉ．Ｂ．１．抗ヒトスクレロスチン抗体
本明細書の表は、例示的なヒト抗ヒトスクレロスチン抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列のリストを提供する。
【０２２７】
表６は、ヒトスクレロスチンに結合可能な抗原結合ドメインを含むスクレロスチン結合タンパク質を提供し、前記抗原結合ドメインは、本明細書に提供するアミノ酸配列を含む少なくとも１つのＣＤＲを含む。
【０２２８】
Ｉ．Ｂ．２．抗ヒトスクレロスチンキメラ抗体
キメラ抗体は、マウスモノクローナル抗体に由来する可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体などの、抗体の異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。キメラ抗体を産生する方法は、当技術分野で公知であり、実施例のセクションで詳細に説明する。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：１２０２−１２０７（１９８５）；ＯｉらのＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，４：２１４−２２１（１９８６）；ＧｉｌｌｉｅｓらのＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１２５：１９１−２０２（１９８９）；米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、および同第４，８１６，３９７号を参照されたい。さらに、適切な抗原特異性のあるマウス抗体分子の遺伝子を、適切な生物活性のあるヒト抗体分子の遺伝子と共にスプライシングすることによる「キメラ抗体」の産生のために開発された技術（ＭｏｒｒｉｓｏｎらのＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４）；ＮｅｕｂｅｒｇｅｒらのＮａｔｕｒｅ，３１２：６０４−６０８（１９８４）；ＴａｋｅｄａらのＮａｔｕｒｅ，３１４：４５２−４５４（１９８５）を用いることができる。
【０２２９】
一実施形態において、セクション１に記載のマウスモノクローナル抗ヒトスクレロスチン抗体の重鎖定常領域を、ヒトＩｇＧ１定常領域と置換することによって産生されるキメラ抗体を提供する。
【０２３０】
Ｉ．Ｂ．３．抗ＳＯＳＴ  ＣＤＲ移植抗体
ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ領域のうちの１つ以上を、マウス抗体のＣＤＲ配列と置換した、ヒト抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域の配列を含むＣＤＲ移植抗体を提供する。任意のヒト抗体のフレームワーク配列は、ＣＤＲ移植のための鋳型として役立ち得る。しかし、このようなフレームワーク上の直鎖置換は、抗原への結合親和性を幾分か喪失する場合が多い。ヒト抗体が元のマウス抗体により類似しているほど、マウスＣＤＲとヒトフレームワークとの組み合わせがＣＤＲ中に歪みを導入し、それが親和性を低下させるという可能性が低くなる。したがって、マウス可変フレームワークを置換するために選択されるヒト可変フレームワークは、ＣＤＲを除き、マウス抗体可変領域フレームワークと少なくとも６５％の配列同一性を有することが好ましい。ヒトおよびマウスの可変領域はＣＤＲを除き少なくとも７０％の配列同一性を有することがより好ましい。ヒトおよびマウスの可変領域はＣＤＲを除き少なくとも７５％の配列同一性を有することがさらにより好ましい。ヒトおよびマウスの可変領域はＣＤＲを除き少なくとも８０％の配列同一性を有することが最も好ましい。キメラ抗体の産生法は、当技術分野で公知である（ＥＰ０２３９４００；ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５３０，１０１号；および同第５，５８５，０８９号も参照されたい）；ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）およびリサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（例えば、ＥＰ０５９２１０６；ＥＰ０５１９５９６；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）；ＳｔｕｄｎｉｃｋａらのＰｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４（１９９４）；ＲｏｇｕｓｋａらのＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：９６９−９７３（１９９４）参照）；ならびに鎖のシャフリング（ｃｈａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（例えば、米国特許第５，５６５，３５２号参照））。
【０２３１】
Ｉ．Ｂ．４．抗ヒトスクレロスチンヒト化抗体
ヒト化抗体は、所望の抗原に結合し、非ヒト種の抗体からの１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク領域を有する非ヒト種の抗体由来の抗体分子である。公知のヒトＩｇ配列は、例えば、以下のワールドワイドウェブサイト（ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ ｗｅｂ ｓｉｔｅ）で開示されている：ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ−／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ；ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ｐｈａｇｅ／ｈｄｂ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｓｃｉｑｕｅｓｔ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｂｃａｍ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／ｏｎｌｉｎｅｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｐｕｂｌｉｃ．ｉａｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｐｅｄｒｏ／ｒｅｓｅａｒｃｈ＿ｔｏｏｌｓ．Ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｍｇｅｎ．ｕｎｉ−ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．ｄｅ／ＳＤ／ＩＴ／ＩＴ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｗｈｆｒｅｅｍａｎ．ｃｏｍ／ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ／ＣＨ−０５／ｋｕｂｙ０５．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｌｉｂｒａｒｙ．ｔｈｉｎｋｑｕｅｓｔ．ｏｒｇ／１２４２９／Ｉｍｍｕｎｅ／Ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｈｈｍｉ．ｏｒｇ／ｇｒａｎｔｓ／ｌｅｃｔｕｒｅｓ／１９９６／ｖｌａｂ／；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｍ− ｉｋｅｉｍａｇｅｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／；ｍｃｂ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ＢｉｏＬｉｎｋｓ／Ｉｍｍｕｎｏ− ｌｏｇｙ．ｈｔｍｌ．ｗｗｗ．ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｌｉｎｋ．ｃｏｍ／；ｐａｔｈｂｏｘ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｅｎｔｅｒ／ｉｎｄｅｘ．−ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｌ／；ｗｗｗ．ｐｅｂｉｏ．ｃｏｍ／ｐａ／３４０９１３／３４０９１３．Ｈｔｍｌ−；ｗｗｗ．ｎａｌ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ／ａｗｉｃ／ｐｕｂｓ／ａｎｔｉｂｏｄｙ／；ｗｗｗ．ｍ．ｅｈｉｍｅ−ｕ．ａｃｊｐ／．ａｂｏｕｔ．ｙａｓｕｈｉｔｏ− ／Ｅｌｉｓａ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ．ｃｏｍ／ｔａｂｌｅ．ａｓｐ；ｗｗｗ．ｉｃｎｅｔ．ｕｋ／ａｘｐ／ｆａｃｓ／ｄａｖｉｅｓ／ｌｉｎ−ｋｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｆｃｃｌ／ｐｒｏｔｏｃｏｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｓａｃ−ｎｅｔ．ｏｒｇ／ｓｉｔｅｓ＿ｇｅｏ．ｈｔｍｌ；ａｘｉｍｔｌ．ｉｍｔ．ｕｎｉ−ｍａｒｂｕｒｇ．ｄｅ／．ａｂｏｕｔ．ｒｅｋ／ＡＥＰ−Ｓｔａｒｔ．ｈｔｍｌ；ｂａｓｅｒｖ．ｕｃｉ．ｋｕｎ．ｎｌ／．ａｂｏｕｔ．ｊｒａａｔｓ／ｌｉｎｋｓｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｒｅｃａｂ．ｕｎｉ−ｈｄ．ｄｅ／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ／；ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｉｍｔ−ｄｏｃ／ｐｕ−ｂｌｉｃ／ＩＮＴＲＯ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／Ｖ＿ｍｉｃｅ．ｈｔｍｌ；ｉｍｇｔ．ｃｎｕｓｃ．ｆｒ：８１０４／；ｗｗｗ．ｂｉｏｃｈｅｍ．ｕｃｌ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍａｒｔｉｎ／ａｂｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｂａｔｈ．ａｃ．ｕｋ／；ａｂｇｅｎ．ｃｖｍ．ｔａｍｕ．ｅｄｕ／ｌａｂ／ｗｗｗａｂｇｅｎ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ���ｕｎｉｚｈ．ｃｈ／．ａｂｏｕｔ．ｈｏｎｅｇｇｅｒ／ＡＨＯｓｅｍ−ｉｎａｒ／Ｓｌｉｄｅ０１．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｂｋ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｕｂｃｇ０７ｓ／；ｗｗｗ．ｎｉｍｒ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ／ＣＣ／ｃｃａｅｗｇ／ｃｃａｅｗｇ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／Ｈ−ｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ＴＡＨＨＰ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／ｓｔａｔ＿ａｉｍ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｓｃｉ．ｍｉｓｓｏｕｒｉ．ｅｄｕ／ｓｍｉｔｈｇｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｉｏｃ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏ−ｕｔ．ｆｍｏｌｉｎａ／Ｗｅｂ−ｐａｇｅｓ／Ｐｅｐｔ／ｓｐｏｔｔｅｃｈ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｊｅｒｉｎｉ．ｄｅ／ｆｒ ｒｏｄｕｃｔｓ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｅｎｔｓ．ｉｂｍ．ｃｏｍ／ｉｂｍ．ｈｔｍｌ．、Ｋａｂａｔらの免疫学的に興味のあるタンパク質の配列（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ（１９８３）。当技術分野で公知のとおり、このようなインポート配列を用いて、免疫原性を低下させるか、または結合、親和性、オン速度、オフ速度、結合活性、特異性、半減期、もしくは任意の他の適切な特性を低下、増強もしくは変更できる。
【０２３２】
ヒトフレームワーク領域中のフレームワーク（ＦＲ）残基は、抗原結合を変更するため、一実施形態においては、それを改善するために、ＣＤＲドナー抗体の対応する残基と置換してもよい。これらのフレームワーク置換は、当技術分野で周知の方法、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を特定するための、ＣＤＲおよびフレームワークの残基の相互作用のモデリングならびに特定の位置における普通でないフレームワーク残基を特定するための配列比較によって特定される。例えば、米国特許第５，５８５，０８９号；ＲｉｅｃｈｍａｎｎらのＮａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）を参照されたい。３次元免疫グロブリンモデルが一般に利用でき、当業者に良く知られている。選択した候補免疫グロブリン配列の取り得る３次元立体構造を説明および表示するコンピュータープログラムが利用できる。これらの表示を調べることにより、その候補免疫グロブリン配列の機能における残基のあり得る役割の解析、すなわち、候補免疫グロブリン配列のその抗原への結合能に影響を与える残基の解析が可能になる。このような方法で、ＦＲ残基は、標的抗原（複数可）に対する親和性の増加などの所望の抗体特性が達成されるように、コンセンサスおよびインポート配列から選択し、組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合への影響に直接的および最も実質的に関与する。抗体は、限定されないが、以下に記載のものなどの当技術分野で公知の様々な技術を用いてヒト化できる：ＪｏｎｅｓらのＮａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；ＶｅｒｈｏｅｙｅｎらのＳｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８）；ＳｉｍｓらのＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６−２３０８（１９９３）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７）；ＣａｒｔｅｒらのＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５−４２８９（１９９２）；ＰｒｅｓｔａらのＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３−２６３２（１９９３）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）；ＳｔｕｄｎｉｃｋａらのＰｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４（１９９４）；ＲｏｇｕｓｋａらのＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：９６９−９７３（１９９４）；ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０９９６７；ＷＯ９０／１４４４３；ＷＯ９０／１４４２４；ＷＯ９０／１４４３０；ＷＯ９９／０６８３４（ＰＣＴ／ＵＳ９８／１６２８０）；ＷＯ９７／２００３２（ＰＣＴ／ＵＳ９６／１８９７８）；ＷＯ９２／１１２７２（ＰＣＴ／ＵＳ９１／０９６３０）；ＷＯ９２／０３４６１（ＰＣＴ／ＵＳ９１／０５９３９）；ＷＯ９４／１８２１９（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０１２３４）；ＷＯ９２／０１０４７（ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４）；およびＷＯ９３／０６２１３（ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１７５５）；ＥＰ特許ＥＰ０５９２１０６；ＥＰ０５１９５９６およびＥＰ０２３９４００；米国特許第５，５６５，３３２号；同第５，７２３，３２３号；同第５，９７６，８６２号；同第５，８２４，５１４号；同第���，８１７，４８３号；同第５，８１４，４７６号；同第５，７６３，１９２号；同第５，７２３，３２３号；同第５，７６６，８８６号；同第５，７１４，３５２号；同第６，２０４，０２３号；同第６，１８０，３７０号；同第５，６９３，７６２号；同第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，２２５，５３９号および同第４，８１６，５６７号。
【０２３３】
Ｉ．Ｂ．５．抗スクレロスチンＤＶＤ結合タンパク質
スクレロスチンの１つ以上のエピトープに結合する２重可変ドメイン結合タンパク質（ＤＶＤ結合タンパク質）も提供する。ＤＶＤ結合タンパク質は、スクレロスチンのエピトープおよびスクレロスチンポリペプチド以外の第２の標的抗原のエピトープにも結合できる。このようなＤＶＤ結合タンパク質の実施形態は、構造式ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（式中、ＶＤ１は、第１の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１はＣＨ１ではないリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域であり、ｎは０または１であり、一実施形態において、ｎは１である）を含む重鎖を含み、かつ構造式ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（式中、ＶＤ１は、第１の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１はＣＬではないリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域を含まず、ｎは０または１であり、一実施形態において、１である）を含む軽鎖を含む。このようなＤＶＤ結合タンパク質は、２つのこのような重鎖および２つのこのような軽鎖を含み得、それぞれの鎖は、可変領域間に定常領域が介在することなく、直列に連結された可変ドメインを含み、重鎖および軽鎖は、結合して２つの直列の抗原結合部位を形成し、また重鎖および軽鎖の対は、別の重鎖および軽鎖の対と結合して４つの抗原結合部位を有する四量体の結合タンパク質を形成できる。別の実施形態において、ＤＶＤ結合タンパク質は、可変領域間に定常領域が介在することなく、直列に連結された３つの可変ドメイン、例えば、ＶＤ１、ＶＤ２、ＶＤ３をそれぞれが含む重鎖および軽鎖を含むことができ、重鎖および軽鎖は、結合して３つの抗原結合部位を形成し、また重鎖および軽鎖の対は、別の重鎖および軽鎖の対と結合して６つの抗原結合部位を有する四量体の結合タンパク質を形成できる。
【０２３４】
ＤＶＤ結合タンパク質中のそれぞれの可変ドメイン（ＶＤ）は、スクレロスチンおよび／もしくは非スクレロスチンの抗原またはエピトープ（例えば、ＴＮＦ−α）などの１つ以上の所望の抗原またはエピトープと結合する１つ以上の「親」モノクローナル抗体から取得できる。
【０２３５】
ＩＩＩ．Ａ．親モノクローナル抗体の作製
ＤＶＤ結合タンパク質の可変ドメインは、目的の抗原に結合可能なモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を含む親抗体から取得できる。これらの抗体は、天然に存在し得るか、または組換え技術によって作製できる。所望の標的抗原またはエピトープに結合する抗体がポリクローナルである場合、ＤＶＤ結合タンパク質の作製に使用するために、ポリクローナル集団からの単一抗体の、すなわち、ポリクローナル集団の単一モノクローナルメンバーの抗原結合部位の可変ドメインを取得することがなお必要であることを理解されたい。モノクローナル抗体は、本明細書に記載のものを含む、当技術分野で公知の様々な方法のいずれかによって作製できる（上記のセクションＡ．１．〜Ａ．４．参照）。
【０２３６】
ＩＩＩ．Ｂ．親モノクローナル抗体を選択するための基準
ＤＶＤ結合タンパク質に望まれる少なくとも１つ以上の性質を有する親抗体を選択することに関連する実施形態を提供する。一実施形態において、所望の性質は、１つ以上の抗体パラメータである。別の実施形態において、抗体パラメータは、抗原特異性、抗原に対する親和性、力価、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、溶解性、生産効率、免疫原性、薬物動態、生物学的利用率、組織交差反応性、およびオルソロガスな抗原結合である。
【０２３７】
ＩＩＩ．Ｂ．１．抗原に対する親和性
治療用ｍＡｂの所望の親和性は、抗原の性質および所望の治療エンドポイントに依存し得る。一実施形態において、モノクローナル抗体は、サイトカイン−サイトカイン受容体相互作用を阻害する場合に、そのような相互作用が、一般に親和性の高い相互作用（例えば、ｐＭ未満〜ｎＭ未満の範囲）であるので、より高い親和性（Ｋｄ＝０．０１〜０．５０ｐＭ）を有する。このような場合において、その標的に対するｍＡｂ親和性は、サイトカイン（リガンド）のその受容体に対する親和性と同等であるか、またはそれを上回るべきである。一方、より低い親和性（ｎＭを超える範囲）を有するｍＡｂ、例えば、Ａ−βアミロイドなどの循環している標的抗原の種に結合し、隔離し、かつ排除するモノクローナル抗体は、例えば、循環している潜在的病原性タンパク質を排除するのに治療効果があり得る。他の場合、部位特異的突然変異誘発法によって存在する高親和性ｍＡｂの親和性を低下させること、またはその標的に対して低い親和性を有するｍＡｂを用いることにより、潜在的な副作用を避けることができ、例えば、高親和性ｍＡｂは、その意図される標的の全てを隔離または中和することによって、標的タンパク質の機能（複数可）を完全に枯渇／除去できる。このシナリオにおいて、低い親和性ｍＡｂは、疾患症状に関わり得る標的の画分（病理学的レベルまたは過剰産生レベル）を隔離／中和し、それゆえに、その標的の画分はその正常な生理学的機能（複数可）を実行し続けることが可能になり得る。したがって、投与量を調節し、かつ／または副作用を減らすためにＫｄを低下させることは可能であり得る。親ｍＡｂの親和性は、所望の治療結果を達成するために、細胞表面分子を適切にターゲティングする役割を果たし得る。例えば、標的が、高密度で癌細胞上に発現し、かつ低密度で正常細胞上に発現している場合、親和性のより低いｍＡｂは、正常細胞よりも腫瘍細胞上の非常に多くの標的に結合し、その結果ＡＤＣＣまたはＣＤＣを介して腫瘍細胞が除去されるので、治療上望ましい効果を有し得る。したがって、所望の親和性を有するｍＡｂの選択は、可溶性の標的と表面上の標的の両方に関連し得る。
【０２３８】
そのリガンドとの相互作用における受容体を介するシグナル伝達は、受容体−リガンド相互作用の親和性に依存し得る。同様に、表面受容体に対するｍＡｂの親和性は、細胞内シグナル伝達の性質、およびｍＡｂがアゴニストまたはアンタゴニストのシグナルを送達できるか否かを決定できると考えられ得る。ｍＡｂ媒介シグナル伝達の親和性に基づく性質は、その副作用プロファイルに影響を及ぼし得る。したがって、治療用モノクローナル抗体の所望の親和性および所望の機能は、インビトロおよびインビボ実験によって注意深く決定される必要がある。
【０２３９】
結合タンパク質（例えば、抗体）の所望のＫｄは、所望の治療結果に依存して実験により決定できる。一実施形態において、同じ抗原に対するＤＶＤ結合タンパク質の所望の親和性と同じであるかまたはそれより高い特定の抗原に対する親和性（Ｋｄ）を有する親抗体を選択する。抗原の結合親和性および速度論を、Ｂｉａｃｏｒｅまたは別の同様の技術によって評価する。一実施形態において、それぞれの親抗体は、その抗原に対して最大で約１０−７Ｍ、約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ、約１０−１０Ｍ、約１０−１１Ｍ、約１０−１２Ｍ、または約１０−１３Ｍの解離定数（Ｋｄ）を有する。ＶＤ１が得られる第１の親抗体およびＶＤ２が得られる第２の親抗体は、それぞれの抗原に対して同様のまた異なる親和性（ＫＤ）を有してもよい。それぞれの親抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合、抗原に対して少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１、または少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１のオン速度定数（Ｋｏｎ）を有する。例えば、ＶＤ１が得られるこの第１の親抗体およびＶＤ２が得られるこの第２の親抗体は、それぞれの抗原に対して同様のまたは異なるオン速度定数（Ｋｏｎ）を有してもよい。一実施形態において、それぞれの親抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合、抗原に対して、最大で約１０−３ｓ−１、最大で約１０−４ｓ−１、最大で約１０−５ｓ−１、または最大で約１０−６ｓ−１のオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。ＶＤ１が得られるこの第１の親抗体およびＶＤ２が得られるこの第２の親抗体は、それぞれの抗原に対して同様のまたは異なるオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有してもよい。
【０２４０】
ＩＩＩ．Ｂ．２．力価
親モノクローナル抗体の所望の親和性／力価は、所望の治療結果に依存する。例えば、受容体−リガンド（Ｒ−Ｌ）相互作用では、親和性（ｋｄ）は、Ｒ−Ｌｋｄ（ｐＭ範囲）と同等であるか、またはそれより高い。病的循環タンパク質の単純なクリアランス、例えば、循環Ａ−βペプチドの様々な種のクリアランスでは、Ｋｄは低いｎＭ範囲内にあり得る。さらに、例えば、Ａβオリゴマー中の立体構造エピトープをターゲティングするｍＡｂのＫｄは、標的が同じエピトープの複数コピーを発現しているかどうかにも依存する。
【０２４１】
ＶＤ１およびＶＤ２が、同じ抗原であるが異なるエピトープに結合する場合、このＤＶＤ結合タンパク質は、同じ抗原に対する結合部位を含み、したがってＤＶＤ結合タンパク質の結合活性が増加し、その結果、見かけのＫｄが増加する。一実施形態において、ＤＶＤ結合タンパク質で望まれるＫｄと同等であるかまたはそれより低いＫｄを有する親抗体を選択する。親ｍＡｂの親和性の考慮は、ＤＶＤ結合タンパク質（すなわち、単一ｍＡｂからのＤＶＤ結合タンパク質）が４つ以上の同一の抗原結合部位を含むかどうかにも依存し得る。この場合、見かけのＫｄは、結合活性のためｍＡｂよりも高い。このようなＤＶＤ結合タンパク質は、表面受容体の架橋、中和能力の増加、病的タンパク質のクリアランスの増強などに用いることができる。
【０２４２】
別の実施形態において、同じ抗原に対するＤＶＤ結合タンパク質の所望の中和能力と同等であるかまたはそれを上回る、特異的抗原に対する中和力価を有する親抗体を選択する。この中和力価は、適切な種類の細胞が、標的刺激に反応して測定可能なシグナル（すなわち、増殖またはサイトカイン産生）を発生することによる、標的依存性バイオアッセイによって評価でき、またｍＡｂによる標的中和は、用量依存的にシグナルを低下させることができる。
【０２４３】
ＩＩＩ．Ｂ．３．生物学的機能
モノクローナル抗体は、潜在的にいくつかの機能を発揮できる。これらの機能のいくつかを表４にまとめる。これらの機能は、インビトロアッセイ（例えば、細胞ベースアッセイおよび生化学アッセイ）ならびにインビボ動物モデルの両方によって評価できる。
【０２４４】
【表１０】
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【０２４５】
本明細書中の実施例および表８に記載の別々の機能を有するｍＡｂは、所望の治療結果を達成するように選択できる。その後、２つ以上の選択された親モノクローナル抗体をＤＶＤ結合タンパク質型で用いて、単一ＤＶＤ結合タンパク質での２つの別々の機能を達成できる。例えば、ＤＶＤ結合タンパク質は、スクレロスチンなどの特異的サイトカインの機能を中和する親ｍＡｂを選択し、病的タンパク質のクリアランスを亢進する親ｍＡｂを選択することによって作製できる。同様に、一方のｍＡｂが１つの受容体に対するアゴニスト機能を有し、他方のｍＡｂが異なる受容体に対するアンタゴニスト機能を有する、２つの異なる細胞表面受容体を認識する２つの親ｍＡｂを選択してもよい。それぞれ異なる機能を有するこれらの２つの選択されたｍＡｂを用いて、単一分子中に選択されたモノクローナル抗体の２つの異なる機能（アゴニストおよびアンタゴニスト）を有する単一ＤＶＤ結合タンパク質を構築できる。同様に、各々がそれぞれの受容体リガンド（例えば、ＥＧＦおよびＩＧＦ）の結合を阻止する、細胞表面受容体に対する２つのアンタゴニストｍＡｂを、ＤＶＤ結合タンパク質型で用いてもよい。逆に、アンタゴニスト抗受容体ｍＡｂ（例えば、抗ＥＧＦＲ）および中和抗可溶性メディエーター（例えば、抗ＩＧＦ１／２）ｍＡｂは、ＤＶＤ結合タンパク質を作製するために選択できる。
【０２４６】
ＩＩＩ．Ｂ．４．エピトープ認識
タンパク質の異なる領域は、異なる機能を実行し得る。例えば、スクレロスチンなどのサイトカインの特異的領域は、サイトカイン受容体と相互作用して受容体活性化をもたらすが、タンパク質の他の領域は、サイトカインの安定化に必要であり得る。この場合、サイトカインの受容体相互作用領域（複数可）に特異的に結合することによって、サイトカイン受容体相互作用を阻止するｍＡｂを選択できる。場合によっては、例えば、複数のリガンドに結合する特定のケモカイン受容体、１つのみのリガンドと相互作用するエピトープ（ケモカイン受容体上の領域）に結合するｍＡｂを選択できる。他の場合では、モノクローナル抗体は、タンパク質の生理的機能に直接関与しない標的上のエピトープに結合できるが、ｍＡｂがこれらの領域に結合すると、生理的機能が妨げられる（立体障害）か、またはタンパク質が機能できないようにタンパク質の立体構造が変えられ得る（複数のリガンドを有する受容体に対するｍＡｂであって、どのリガンドも結合できないように受容体の立体構造を変えるｍＡｂ）。サイトカインのその受容体への結合は阻止しないが、シグナル伝達は阻止する抗サイトカインモノクローナル抗体も同定された（例えば、１２５−２Ｈ、抗ＩＬ−１８ ｍＡｂ）。
【０２４７】
エピトープおよびｍＡｂ機能の例としては、受容体−リガンド（Ｒ−Ｌ）相互作用の阻止（Ｒ−相互作用部位に結合する中和ｍＡｂ）、Ｒ−結合を減少またはゼロとする立体障害が挙げられるが、これらに限定されない。抗体は、受容体結合部位以外の部位で標的に結合できるが、なお立体構造変化の誘導によって標的の受容体結合および機能を妨げ、Ｒに結合するがシグナル伝達を阻止する（１２５−２Ｈ  ｍＡｂ）ことで機能を排除する（例えば、ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）オマリズマブ、Ｇｅｎｅｔｅｃｈ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ社）。
【０２４８】
一実施形態において、親ｍＡｂは、最大の効力のために適切なエピトープを標的とする必要がある。このようなエピトープは、ＤＶＤ結合タンパク質中に保存されるべきである。ｍＡｂの結合エピトープは、共結晶化、ｍＡｂ抗原複合体の限定タンパク質分解と質量分析ペプチドマッピング（Ｌｅｇｒｏｓ Ｖ．ら、２０００ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．９：１００２−１０）、ファージディスプレイペプチドライブラリー（Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ ＫＨ．ら、２００５ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２９９：２１−３５）、および突然変異誘発（Ｗｕ Ｃ．ら、２００３ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７０：５５７１−７）を含むいくつかのアプローチによって決定できる。
【０２４９】
ＩＩＩ．Ｂ．５．物理化学的特性および薬学的特性
抗体を用いた治療的処置は、（一般的に高分子量の結果として質量基準で力価が低いために）高用量の、しばしば数ｍｇ／ｋｇの投与を必要とする場合が多い。患者コンプライアンスに適合させ、慢性疾患療法および外来患者治療に適切に取り組むために、治療用ｍＡｂの皮下（ｓ．ｃ．）または筋肉内（ｉ．ｍ．）投与が望ましい。例えば、ｓ．ｃ．投与に望ましい最大量は約１．０ｍＬであり、したがって、用量あたりの注射の回数を制限するために、１００ｍｇ／ｍＬを超える濃度が望ましい。一実施形態において、治療用抗体は、一回用量で投与される。しかし、このような製剤の開発は、タンパク質−タンパク質相互作用（例えば、免疫原性のリスクを高める可能性のある凝集）によって、ならびにプロセシングおよび送達中の制限（例えば、粘性）によって制約される。その結果、臨床効果のために多くの量が必要とされ、また関連する開発上の制約により、抗体製剤の能力の完全利用および高用量投与計画でのｓ．ｃ．投与が制限される。タンパク質分子およびタンパク質溶液の物理化学的特性ならびに薬学的特性、例えば、安定性、溶解性および粘性の特徴は、最も重要であることは明らかである。
【０２５０】
ＩＩＩ．Ｂ．５．ｉ．安定性
「安定な」抗体製剤は、その中の抗体が、保管の際に、基本的にその物理的安定性および／もしくは化学的安定性ならびに／または生物活性を保持している製剤である。安定性は、選択された期間、選択された温度で測定できる。一実施形態において、製剤中の抗体は、常温（約３０℃）または４０℃で、少なくとも１ヶ月間安定であり、かつ／または約２〜８℃で、少なくとも１年間、少なくとも２年間安定である。さらに、一実施形態において、製剤は、その製剤の凍結（例えば、−７０℃まで）および融解後に安定であり、これを、以後、「凍結／融解サイクル」という。別の例において、「安定な」製剤は、タンパク質の約１０％未満および約５％未満が製剤中に凝集体として存在する製剤であり得る。
【０２５１】
ＤＶＤ結合タンパク質は、長期間、様々な温度で、インビトロで安定であることが望ましい。このことは、高温、例えば、４０℃で２〜４週間、インビトロで安定な親ｍＡｂの迅速なスクリーニング後に、安定性を評価することによって達成できる。２〜８℃での保管中に、このタンパク質は、少なくとも１２ヶ月間、例えば、少なくとも２４ヶ月間安定であることを示す。安定性（単量体でインタクトな分子の割合（％））は、陽イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、および生物活性試験などの様々な技術を用いて評価できる。共有結合および立体構造の変更を分析するために用いることができる分析技術のより包括的なリストについては、Ｃｌｅｌａｎｄ，Ｊ．Ｌ．；Ｌａｎｇｅｒ，Ｒ．編集、ペプチドおよびタンパク質の製剤および送達（Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ）、第１版（ワシントン、ＡＣＳ）中の、Ｊｏｎｅｓ，Ａ．Ｊ．Ｓ．（１９９３）“タンパク質製剤および送達システムの評価のための分析法（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍｓ）”、ページ２２−４５；ならびにＬｅｅ，Ｖ．Ｈ．編集、ペプチドおよびタンパク質の薬物の送達（Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ）、第１版（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．）中の、Ｐｅａｒｌｍａｎ，Ｒ．；Ｎｇｕｙｅｎ，Ｔ．Ｈ．（１９９０）“タンパク質薬物の分析（Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｒｕｇｓ）”、ページ２４７−３０１を参照されたい。
【０２５２】
不均一性および凝集体形成：抗体の安定性は、製剤のＧＭＰ抗体物質の約１０％未満、一実施形態において、約５％未満、別の実施形態において、約２％未満、または一実施形態において、０．５％〜１．５％またはそれ未満が凝集体として存在することが明らかなような安定性であり得る。サイズ排除クロマトグラフィーは、タンパク質凝集体の検出において高感度で、再現性のある、非常に確実な方法である。
【０２５３】
低凝集体レベルに加えて、抗体は、一実施形態において、化学的に安定でなければならない。化学的安定性は、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、陽イオン交換クロマトグラフィーもしくは陰イオン交換クロマトグラフィー）、疎水性相互作用クロマトグラフィー、または等電点電気泳動法もしくはキャピラリー電気泳動法などの他の方法によって決定できる。例えば、抗体の化学的安定性は、少なくとも１２ヶ月間、２〜８℃で保管した後、陽イオン交換クロマトグラフィーで未修飾抗体を示すピークが、保管試験前の抗体溶液と比較して２０％以下、一実施形態において、１０％以下、または別の実施形態において、５％以下しか増加しないような安定性であり得る。
【０２５４】
一実施形態において、親抗体は、構造的完全性；正しいジスルフィド結合形成、および正しい折り畳みを示す。抗体の二次または三次構造の変化による化学的不安定性は、抗体活性に影響を及ぼし得る。例えば、抗体の活性によって示されるような安定性は、保管試験前の抗体溶液と比較して、少なくとも１２ヶ月間、２〜８℃で保管後、抗体の活性が、５０％以下、一実施形態において、３０％以下、さらに１０％以下、または一実施形態において、５％以下もしくは１％以下減少するような安定性であり得る。適切な抗原結合アッセイを用いて、抗体活性を測定できる。
【０２５５】
ＩＩＩ．Ｂ．５．ｉｉ．溶解性
ｍＡｂの「溶解性」は、正しく折り畳まれた単量体ＩｇＧの産生と相関する。したがって、ＩｇＧの溶解性は、ＨＰＬＣによって評価できる。例えば、可溶性（単量体）ＩｇＧは、ＨＰＬＣクロマトグラフィー上に単一ピークを与え、不溶性（例えば、多量体で、凝集している）ＩｇＧは、複数のピークを与える。したがって、当業者は、日常的なＨＰＬＣ技術を用いて、ＩｇＧの溶解性の増加または減少を検出できる。溶解性を分析するために用いることができる分析技術のより包括的なリストについては、Ｊｏｎｅｓ，Ａ．Ｇ．Ｄｅｐ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．，Ｕｎｉｖ．Ｃｏｌｌ．Ｌｏｎｄｏｎ、ロンドン、英国、編集者：Ｓｈａｍｌｏｕ，Ｐ．Ａｙａｚｉ、プロセス、固体−液体懸濁液（Ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｓｏｌｉｄ−Ｌｉｑｕｉｄ Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ）（１９９３），９３−１１７．（Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ−Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ、オックスフォード、英国）およびＰｅａｒｌｍａｎ，Ｒｏｄｎｅｙ；Ｎｇｕｙｅｎ，Ｔｕｅ Ｈ，非経口化学における進歩（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｓｃｉｅｎｃｅｓ）（１９９０），４（ペプチドタンパク質薬物送達（Ｐｅｐｔ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ）），２４７−３０１を参照されたい。治療用ｍＡｂの溶解性は、適切な投薬に必要とされる場合が多い高濃度の製剤化に重要である。本明細書で概要を述べる通り、１００ｍｇ／ｍＬを超える溶解性が、効率的な抗体投薬に適応させるために必要とされ得る。例えば、抗体の溶解性は、早期の研究段階では約５ｍｇ／ｍＬ以上、一実施形態において、進んだ研究段階では約２５ｍｇ／ｍＬ以上、または一実施形態において、約１００ｍｇ／ｍＬ以上、または一実施形態において、約１５０ｍｇ／ｍＬ以上であり得る。タンパク質分子の固有の特性は、タンパク質溶液の物理−化学的特性、例えば、安定性、溶解性、粘性に重要である。しかし、当業者は、最終タンパク質製剤の特徴に有益に影響するための添加剤として用いることができる広範囲の賦形剤が存在することを認識するであろう。これらの賦形剤には以下のものが含まれ得る：（ｉ）液体溶媒、共溶媒（例えば、エタノールなどのアルコール）、（ｉｉ）緩衝剤（例えば、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、アミノ酸緩衝液）、（ｉｉｉ）糖類または糖アルコール類（例えば、ショ糖、トレハロース、果糖、ラフィノース、マンニトール、ソルビトール、デキストラン）、（ｉｖ）界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０、４０、６０、８０、ポロキサマー）、（ｖ）等張剤（例えば、ＮａＣｌなどの塩、糖類、糖アルコール類）、および（ｖｉ）他のもの（例えば、保存剤、キレート剤、抗酸化剤、キレート物質（例えば、ＥＤＴＡ）、生分解性ポリマー、担体分子（例えば、ＨＳＡ、ＰＥＧ類））。
【０２５６】
粘性は、抗体製造および抗体プロセッシング（例えば、透析濾過／限外濾過）、フィルフィニッシュ（ｆｉｌｌ−ｆｉｎｉｓｈ）プロセス（ポンピングの局面、濾過の局面）および送達の局面（注射可能性、洗練された装置による送達）に関して非常に重要なパラメータである。低粘性は、より高濃度の抗体溶液を可能にする。これにより、同一用量をより少量で投与できる。少ない注射量は、注射感覚における痛みが弱いという利点を与え、この溶液は、必ずしも、患者における注射の痛みを減らすために等張でなくてもよい。抗体溶液の粘性は、１００（ｌ／ｓ）の剪断速度で、抗体溶液粘性が２００ｍＰａｓ未満、一実施形態において１２５ｍＰａｓ未満、別の実施形態において７０ｍＰａｓ未満、さらに別の実施形態において２５ｍＰａｓ未満、または１０ｍＰａｓ未満であるような粘性であり得る。
【０２５７】
ＩＩＩ．Ｂ．５．ｉｉｉ．産生効率
チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）などの哺乳類細胞で効率的に発現するＤＶＤ結合タンパク質の作製は、一実施形態において、それ自体哺乳類細胞で効率的に発現する２つの親モノクローナル抗体を必要とする。安定な哺乳類細胞株（すなわち、ＣＨＯ）からの産生収率は、約０．５ｇ／Ｌを超え、一実施形態において約１ｇ／Ｌを超え、別の実施形態において約２〜約５ｇ／Ｌの範囲またはそれを超えなければならない（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ ＳＭ，Ｌｉｔｔｌｅ Ｍ．，１９９９，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１２：１７３−２０１；Ｃａｒｒｏｌｌ Ｓ，Ａｌ−Ｒｕｂｅａｉ Ｍ．，２００４，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．，４：１８２１−９）。
【０２５８】
哺乳類細胞での抗体およびＩｇ融合タンパク質の産生は、いくつかの要因により影響される。強力なプロモーター、エンハンサーおよび選択マーカーの導入による発現ベクターの改変は、組み込まれたベクターコピーからの目的の遺伝子の転写を最大限にできる。高レベルの遺伝子転写を可能にするベクター組み込み部位の特定により、ベクターからのタンパク質発現を増やすことができる（Ｗｕｒｍら，２００４，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００４，２２（１１）：１３９３−１３９８）。さらに、産生レベルは、抗体重鎖および軽鎖の比ならびにタンパク質アセンブリおよび分泌のプロセス中の様々なステップにより影響される（Ｊｉａｎｇら，２００６，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ，Ｊａｎ−Ｆｅｂ，２００６，ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．１，ｐ．３１３−３１８）。
【０２５９】
ＩＩＩ．Ｂ．６．免疫原性
治療用ｍＡｂを投与すると、免疫反応（すなわち、治療用ｍＡｂに対する内因性抗体の形成）がある頻度で生じ得る。免疫原性を誘導する可能性のある潜在的要素を、親モノクローナル抗体の選択中に分析すべきであり、ＤＶＤ結合タンパク質の構築の前に、親モノクローナル抗体を最適化するために、そのようなリスクを減らすステップを取ることができる。マウス由来の抗体は、患者において免疫原性が高いことが判明している。マウス可変領域およびヒト定常領域を含むキメラ抗体の作製は、治療用抗体の免疫原性を低下させるための論理的な次のステップを与える（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ｓｃｈｌｏｍ，１９９０）。あるいは、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，１９８８が治療用抗体について記載しているように、マウスＣＤＲ配列をヒト抗体フレームワークに移すことにより（再形成／ＣＤＲ移植／ヒト化）、免疫原性を低下させることができる。別の方法は「リサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」または「ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）」と称され、齧歯類可変軽鎖および重鎖ドメインから出発して、ＣＤＲおよび埋め込まれているアミノ酸は親齧歯類抗体由来のままにし、表面接近可能なフレームワークアミノ酸のみをヒトのアミノ酸に変える（Ｒｏｇｕｓｋａら，１９９６）。別の種類のヒト化において、全ＣＤＲを移植する代わりに、１つの技術は、抗体のその標的への結合に関与するＣＤＲ残基のサブセットとして定義される「特異性決定領域」（ＳＤＲ）のみを移植する（Ｋａｓｈｍｉｒｉら，２００５）。これは、標的と相互作用するものを調べるために、抗体−標的複合体の利用可能な三元構造解析または抗体ＣＤＲ残基の変異解析のいずれかによるＳＤＲの特定を必要とする。あるいは、完全ヒト抗体は、マウス抗体、キメラ抗体またはヒト化抗体と比較して、免疫原性が低くてもよい。
【０２６０】
治療用抗体の免疫原性を低下させるための別のアプローチは、免疫原性があると予想されるいくつかの特定配列を排除することである。１つのアプローチでは、第１世代バイオロジックをヒトで試験し、許容できない免疫原性があると判明した後に、Ｂ細胞エピトープをマッピングし、次いで免疫検出を避けるために改変できる。別のアプローチは、潜在的なＴ細胞エピトープを予測し、除去するための方法を使用する。ＭＨＣタンパク質に結合する可能性があるバイオロジック治療薬のペプチド配列をスキャンし、同定するためのコンピュータによる方法が開発された（Ｄｅｓｍｅｔら，２００５）。もう１つの方法として、潜在的なタンパク質アレルゲン中のＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを同定するために、ヒト樹状細胞ベースの方法を用いることができる（Ｓｔｉｃｋｌｅｒら，２００５，Ｓ．Ｌ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ｊ．Ｓｃｈｌｏｍ，Ｉｍｐｏｒｔａｎｔ Ａｄｖ．Ｏｎｃｏｌ．（１９９０），ｐ．３−１８；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．，Ｃｌａｒｋ，Ｍ．，Ｗａｌｄｍａｎｎ，Ｈ．ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．，“治療用ヒト抗体の再形成（Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｙ）”、Ｎａｔｕｒｅ（１９８８），３３２：３２３−３２７；Ｒｏｇｕｓｋａ−Ｍ−Ａ，Ｐｅｄｅｒｓｅｎ−Ｊ−Ｔ，Ｈｅｎｒｙ−Ａ−Ｈ，Ｓｅａｒｌｅ−Ｓ−Ｍ，Ｒｏｊａ−Ｃ−Ｍ，Ａｖｅｒｙ−Ｂ，Ｈｏｆｆｅｅ−Ｍ，Ｃｏｏｋ−Ｓ，Ｌａｍｂｅｒｔ−Ｊ−Ｍ，Ｂｌａｔｔｌｅｒ−Ｗ−Ａ，Ｒｅｅｓ−Ａ−Ｒ，Ｇｕｉｌｄ−Ｂ−Ｃ．，“ＣＤＲ移植および可変ドメイン再舗装によってヒト化した２つのマウスｍＡｂの比較（Ａ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ｍｕｒｉｎｅ ｍＡｂ ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ｂｙ ＣＤＲ−ｇｒａｆｔｉｎｇ ａｎｄ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎ ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）”、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，（１９９６），９：ｐ．８９５−９０４；Ｋａｓｈｍｉｒｉ−Ｓｙｅｄ−Ｖ−Ｓ，Ｄｅ−Ｐａｓｃａｌｉｓ−Ｒｏｂｅｒｔｏ，Ｇｏｎｚａｌｅｓ−Ｎｏｒｅｅｎ−Ｒ，Ｓｃｈｌｏｍ−Ｊｅｆｆｒｅｙ，“ＳＤＲ移植−抗体のヒト化の新しいアプローチ（ＳＤＲ ｇｒａｆｔｉｎｇ−ａ ｎｅｗ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ）”、Ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ），Ｍａｙ ２００５，３６（１）：２５−３４；Ｄｅｓｍｅｔ−Ｊｏｈａｎ，Ｍｅｅｒｓｓｅｍａｎ−Ｇｅｅｒｔ，Ｂｏｕｔｏｎｎｅｔ−Ｎａｔｈａｌｉｅ，Ｐｌｅｔｉｎｃｋｘ−Ｊｕｒｇｅｎ，Ｄｅ−Ｃｌｅｒｃｑ−Ｋｒｉｓｔａ，Ｄｅｂｕｌｐａｅｐ−Ｍａｊａ，Ｂｒａｅｃｋｍａｎ−Ｔｅｓｓａ，Ｌａｓｔｅｒｓ−Ｉｇｎａｃｅ，“ＨＬＡ特異的ペプチドのアンカープロファイル：新しい親和性スコアリング法による分析および実験検証（Ａｎｃｈｏｒ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｏｆ ＨＬＡ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ａｎａｌｙｓｉｓ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｓｃｏｒｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ）”、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（２００５）５８：５３−６９；Ｓｔｉｃｋｌｅｒ−Ｍ−Ｍ，Ｅｓｔｅｌｌ−Ｄ−Ａ，Ｈａｒｄｉｎｇ−Ｆ−Ａ，“暴露されていないヒトドナー末梢血単核細胞を用いたＣＤ４＋Ｔ細胞のエピトープの決定（ＣＤ４＋Ｔ−ｃｅｌｌ ｅｐｉｔｏｐｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｕｎｅｘｐｏｓｅｄ ｈｕｍａｎ ｄｏｎｅｒ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ）”、Ｊ．Ｉｍｍｕｏｔｈｅｒ．（２０００）２３：６５４−６０）。
【０２６１】
ＩＩＩ．Ｂ．７．インビボ有効性
所望のインビボ有効性を有するＤＶＤ結合タンパク質を作製するためには、組み合わせて与えたときに同様の所望のインビボ有効性を有するｍＡｂを作製し、選択することが重要である。しかし、場合によって、ＤＶＤ結合タンパク質は、２つの別々のｍＡｂの組み合せで達成できないインビボ有効性を示し得る。例えば、ＤＶＤ結合タンパク質は、２つの標的を非常に接近させ、２つの別々のｍＡｂの組み合せでは達成できない活性をもたらし得る。追加の所望の生物学的機能は、本明細書のセクションＢ．３に記載されている。ＤＶＤ結合タンパク質において望まれる特性を有する親抗体を、薬物動態半減期（ｔ１／２）、組織分布、可溶性標的対細胞表面標的、および標的濃度−可溶性／密度−表面などの要因に基づいて選択できる。
【０２６２】
ＩＩＩ．Ｂ．８．インビボ組織分布
所望のインビボ組織分布を有するＤＶＤ結合タンパク質を作製するために、一実施形態において、類似の所望のインビボ組織分布プロファイルを有する親ｍＡｂを選択しなければならない。あるいは、二重特異的標的化戦術のメカニズムに基づき、ある時には、組み合わせて与える際、同様に所望のインビボ組織分布を有する親ｍＡｂを選択する必要がないことがある。例えば、１つの結合成分がＤＶＤ結合タンパク質を特異的部位に標的させる場合、ＤＶＤ結合タンパク質を特異的部位に導くことによって、第２の結合成分を同一標的部位に導く。例えば、ＤＶＤ結合タンパク質の１つの結合特異性は、膵臓（島細胞）を標的とし、他の特異性はＧＬＰ１を膵臓に導いて、インスリンを誘導できる。
【０２６３】
ＩＩＩ．Ｂ．９．アイソタイプ
アイソタイプ、エフェクター機能および循環半減期を含むが、これらに限定されない所望の特性を有するＤＶＤ結合タンパク質を作製するために、治療有用性および所望の治療のエンドポイントに応じて適切なＦｃ−エフェクター機能を有する親ｍＡｂを選択する。５つの主な重鎖クラスまたはアイソタイプがあり、このうちのいくつかはいくつかのサブタイプを有し、これらが抗体分子のエフェクター機能を決める。これらのエフェクター機能は、抗体分子のヒンジ領域、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインに存在する。しかし、抗体分子の他の部分の残基も同様に、エフェクター機能に影響を及ぼし得る。ヒンジ領域Ｆｃ−エフェクター機能には、（ｉ）抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、（ｉｉ）補体（Ｃ１ｑ）の結合、活性化および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、（ｉｉｉ）抗原−抗体複合体の食作用／クリアランス、ならびに（ｉｖ）場合によっては、サイトカイン放出が含まれる。抗体分子のこれらのＦｃ−エフェクター機能は、Ｆｃ領域と一組のクラス特異的細胞表面受容体との相互作用により媒介される。ＩｇＧ１アイソタイプの抗体に最も活性があり、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４のエフェクター機能は最小であるかまたは全くない。ＩｇＧ抗体のエフェクター機能は、３つの構造的に相同な細胞Ｆｃ受容体タイプ（およびサブタイプ）（ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩおよびＦｃｇＲＩＩＩ）との相互作用を介して媒介される。ＩｇＧ１のこれらのエフェクター機能は、ＦｃｇＲおよびＣ１ｑ結合に必要な低ヒンジ領域（例えば、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）中の特定のアミノ酸残基を変異させることにより排除できる。Ｆｃ領域、特にＣＨ２−ＣＨ３ドメイン中のアミノ酸残基も、抗体分子の循環半減期を決定する。このＦｃ機能は、抗体分子を酸性リソソームから全身循環に戻して再利用するのに関与する新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）へのＦｃ領域の結合を介して媒介される。
【０２６４】
ｍＡｂが活性または不活性アイソタイプを有するべきかどうかは、抗体に対する所望の治療エンドポイントに依存する。アイソタイプの使用および所望の治療結果のいくつかの例を以下にまとめる：
１．所望のエンドポイントが可溶性サイトカインの機能的中和である場合、不活性アイソタイプを使用できる；
２．所望の結果が病的タンパク質のクリアランスである場合、活性アイソタイプを使用できる；
３．所望の結果がタンパク質凝集体のクリアランスである場合、活性アイソタイプを使用できる；
４．所望の結果が表面受容体を拮抗させることである場合、不活性アイソタイプ（Ｔｙｓａｂｒｉ、ＩｇＧ４；ＯＫＴ３（登録商標）、突然変異ＩｇＧ１）を使用する；
５．所望の結果が標的細胞を排除することである場合、活性アイソタイプ（ハーセプチン、ＩｇＧ１（エフェクター機能が強化されている）を使用する；
６．所望の結果がＣＮＳに入ることなく循環からタンパク質を除去すること（例えば、循環Ａｂペプチド種の除去）である場合、ＩｇＭアイソタイプを使用できる。
【０２６５】
親ｍＡｂのＦｃエフェクター機能は、当技術分野で公知の様々なインビトロ法により決定できる。
【０２６６】
説明したように、アイソタイプの選択、およびそれにより、エフェクター機能は、所望の治療エンドポイントに依存する。循環標的の簡単な中和、例えば、受容体−リガンド相互作用の阻止が望まれる場合には、エフェクター機能が必要でないことがある。そのような場合は、エフェクター機能を排除するアイソタイプまたは抗体のＦｃ領域における突然変異が望ましい。標的細胞の排除、例えば、腫瘍細胞の排除が治療のエンドポイントである他の場合には、エフェクター機能を強化するアイソタイプまたはＦｃ領域における突然変異あるいは脱フコシル化が望ましい（Ｐｒｅｓｔａ ＧＬ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．，５８：６４０−６５６，２００６；Ｓａｔｏｈ Ｍ，Ｉｉｄａ Ｓ，Ｓｈｉｔａｒａ Ｋ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．，６：１１６１−１１７３，２００６）。同様に、治療有用性に依存して、抗体分子の循環半減期は、Ｆｃ領域に特異的突然変異を導入することで抗体−ＦｃＲｎ相互作用を調節することにより短縮／延長できる（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ＷＦ，Ｋｉｅｎｅｒ ＰＡ，Ｗｕ Ｈ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８１：２３５１４−２３５２４（２００６）；Ｐｅｔｋｏｖａ ＳＢ，Ａｋｉｌｅｓｈ Ｓ，Ｓｐｒｏｕｌｅ ＴＪ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１８：１７５９−１７６９（２００６）；Ｖａｃｃａｒｏ Ｃ，Ｂａｗｄｏｎ Ｒ，Ｗａｎｊｉｅ Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：１８７０９−１８７１４（２００７）。
【０２６７】
通常の治療用ｍＡｂの異なるエフェクター機能に影響を与える様々な残基について公表されている情報を、ＤＶＤ結合タンパク質について確認する必要があり得る。ＤＶＤ結合タンパク質フォーマットでは、モノクローナル抗体エフェクター機能の調節のために同定されているもの以外の追加の（異なる）Ｆｃ領域残基が重要である可能性がある。
【０２６８】
全体として、どのＦｃエフェクター機能（アイソタイプ）が、最終ＤＶＤ結合タンパク質型において重要であるかについての決定は、疾患の徴候、治療標的、所望の治療エンドポイントおよび安全性の考慮に依存する。以下のものを含むが、これらに限定されない適切な重鎖および軽鎖定常領域の例を以下にまとめる：
ＩｇＧ１−アロタイプ：Ｇｌｍｚ
ＩｇＧ１変異体−Ａ２３４，Ａ２３５
ＩｇＧ２−アロタイプ：Ｇ２ｍ（ｎ−）
κ−Ｋｍ３
λ
【０２６９】
Ｆｃ受容体およびＣ１ｑ研究：細胞膜上に過剰発現した任意の標的に対して抗体複合体化することによる望ましくない抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）が起こる可能性は、（例えば、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）ヒンジ領域突然変異によりなくすことができる。ｍＡｂのＩｇＧ１ヒンジ領域中に存在するこれらのアミノ酸の置換は、ＦｃｇＲ結合がＩｇＧ１ヒンジ領域上の重複部位内で生ずると考えられるので、ｍＡｂのヒトＦｃ受容体（ＦｃＲｎではない）への結合を低下させると予想される。ｍＡｂのこの特徴により、安全性プロファイルが野生型ＩｇＧを含む抗体よりも改善され得る。ｍＡｂのヒトＦｃ受容体への結合は、細胞株（例えば、ＴＨＰ−１、Ｋ５６２）およびＦｃｇＲＩＩｂ（または、他のＦｃｇＲ）を発現する改変ＣＨＯ細胞株を用いて、フローサイトメトリー実験により判定できる。ＩｇＧ１対照モノクローナル抗体と比較して、ｍＡｂのＦｃｇＲＩＩｂへの結合は変化しないが、ＦｃｇＲＩおよびＦｃｇＲＩＩａへの結合は低下する。抗原／ＩｇＧ免疫複合体によるＣ１ｑの結合および活性化は、古典的補体カスケードを誘発し、その結果、炎症および／または免疫調節反応が生ずる。ＩｇＧ上のＣ１ｑ結合部位は、ＩｇＧヒンジ領域内の残基に局在すると同定された。高濃度のｍＡｂへのＣ１ｑ結合を、Ｃ１ｑ ＥＬＩＳＡにより評価した。これらの結果は、野生型対照ＩｇＧ１の結合と比較したときに予想されるとおり、ｍＡｂがＣ１ｑに結合できないことを立証する。全体的に見て、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａヒンジ領域突然変異は、ｍＡｂのＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａおよびＣ１ｑへの結合を消失させるが、ｍＡｂのＦｃｇＲＩＩｂとの相互作用には影響を与えない。これらのデータにより、変異体Ｆｃを有するｍＡｂは、通常、インビボで抑制性ＦｃｇＲＩＩｂと相互作用するが、活性化ＦｃｇＲＩおよびＦｃｇＲＩＩａ受容体またはＣ１ｑとは相互作用できない可能性が示唆される。
【０２７０】
ヒトＦｃＲｎ結合：新生児受容体（ＦｃＲｎ）は、胎盤を横切るＩｇＧの輸送およびＩｇＧ分子の異化半減期の調節に関与する。有効性を改善し、投与の用量もしくは頻度を減らし、または標的に対する局在化を改善するために、抗体の終末半減期を延長させることが望ましい。あるいは、逆にすること、すなわち全身暴露を減らすために抗体の終末半減期を短縮させること、または標的対非標的結合比を改善することが有利である。ＩｇＧとそのサルベージ受容体であるＦｃＲｎとの間の相互作用の調節が、ＩｇＧの終末半減期を延長または短縮させる方法を提示する。ＩｇＧを含む循環中のタンパク質は、血管内皮細胞などの特定の細胞による微飲作用により流体相に取り込まれる。ＩｇＧは、僅かに酸性（ｐＨ６．０〜６．５）の条件下でエンドソーム中のＦｃＲｎに結合し得、細胞表面に再利用され、そこで、ほぼ中性（ｐＨ７．０〜７．４）の条件下で放出される。ＦｃＲｎ８０、ＦｃＲｎ１６、ＦｃＲｎ１７上のＦｃ領域結合部位をマッピングすることにより、種を越えて保存される２つのヒスチジン残基Ｈｉｓ３１０およびＨｉｓ４３５が、この相互作用のｐＨ依存性に関与することが判明した。ファージディスプレイテクノロジーを用いて、ＦｃＲｎへの結合を増加させ、マウスＩｇＧの半減期を延長させるマウスＦｃ領域突然変異が同定された（Ｖｉｃｔｏｒ，Ｇ．ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１５（７）：６３７−６４０（１９９７）参照）。ＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧの結合親和性をｐＨ７．４ではなく、ｐＨ６．０で高めるＦｃ領域突然変異も同定された（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６９（９）：５１７１−８０（２００２）参照）。さらに、１つの場合には、結合における類似のｐＨ依存性増加（最高２７倍）がアカゲザルＦｃＲｎについても観察され、これにより、アカゲザルにおける血清半減期は親ＩｇＧと比較して２倍延長した（Ｈｉｎｔｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７９（８）：６２１３−６２１６（２００４）参照）。これらの所見は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎとの相互作用を調節することにより、抗体治療の血漿半減期を延長させることが実行可能であることを示す。逆に、ＦｃＲｎとの相互作用を減衰させるＦｃ領域突然変異は、抗体半減期を短縮できる。
【０２７１】
ＩＩＩ．Ｂ．１０．薬物動態（ＰＫ）
所望の薬物動態プロファイルを有するＤＶＤ結合タンパク質分子を作製するために、一実施形態において、同様の所望の薬物動態プロファイルを有する親ｍＡｂを選択する。１つ考慮すべきことは、モノクローナル抗体に対する免疫原性反応（すなわち、「ＨＡＨＡ」、ヒト抗ヒト抗体反応；「ＨＡＣＡ」、ヒト抗キメラ抗体反応）が、さらにこれらの治療薬の薬物動態を複雑にすることである。一実施形態において、結果として生じるＤＶＤ結合タンパク質の免疫原性も最小限であるかまたは全くないように、免疫原性が最小限であるかまたは全くないモノクローナル抗体をＤＶＤ結合タンパク質の構築に用いる。ｍＡｂのＰＫを決定する要因のいくつかには、ｍＡｂの固有の特性（ＶＨアミノ酸配列）、免疫原性、ＦｃＲｎ結合およびＦｃ機能が含まれるが、これらに限定されない。
【０２７２】
選択した親モノクローナル抗体のＰＫプロファイルは、齧歯類におけるＰＫプロファイルがカニクイザルおよびヒトにおけるモノクローナル抗体のＰＫプロファイルとうまく相関している（または、厳密に予測される）ので、齧歯類で簡単に決定できる。
【０２７３】
所望のＰＫ特性（および、本明細書で説明されるような他の所望の機能特性）を有する親モノクローナル抗体を選択した後に、ＤＶＤ結合タンパク質を構築する。ＤＶＤ結合タンパク質は、２つの親モノクローナル抗体由来の２つの抗原−結合ドメインを含むので、ＤＶＤ結合タンパク質のＰＫ特性も同様に評価する。したがって、ＤＶＤ結合タンパク質のＰＫ特性を決定しながら、２つの親モノクローナル抗体に由来する両方の抗原−結合ドメインの機能性に基づいてＰＫプロファイルを決定するＰＫアッセイを使用できる。ＤＶＤ結合タンパク質のＰＫプロファイルは決定できる。ＤＶＤ結合タンパク質のＰＫプロファイルに影響を与え得る追加の要因には、抗原−結合ドメイン（ＣＤＲ）配向、リンカーサイズ、およびＦｃ／ＦｃＲｎ相互作用が含まれる。親抗体のＰＫ特性は、以下のパラメータ：吸収、分布、代謝および排泄の評価により調べることができる。
【０２７４】
吸収：これまで、治療用モノクローナル抗体は非経口経路（例えば、静脈内［ＩＶ］、皮下［ＳＣ］または筋肉内［ＩＭ］）を介して投与されている。ＳＣまたはＩＭ投与後のｍＡｂの間質腔から全身循環への吸収は、主にリンパ経路を介する。飽和性で前全身性の（ｐｒｅｓｙｓｔｅｍｉｃ）タンパク質分解により、血管外投与後に、可変の絶対的バイオアベイラビリティーが生じ得る。通常、高用量での飽和タンパク質分解能力により、モノクローナル抗体の用量の増加と共に絶対的バイオアベイラビリティーの増加が観察され得る。リンパ液がゆっくり血管系に流出するので、ｍＡｂの吸収プロセスは通常非常に遅く、吸収期間は数時間〜数日間に及び得る。ＳＣ投与後のモノクローナル抗体の絶対的バイオアベイラビリティーは、通常５０％〜１００％の範囲である。ＤＶＤ結合タンパク質コンストラクトによって標的される血液脳関門（ＢＢＢ）における輸送媒介性構造の場合、血漿中の循環時間は、血液脳関門（ＢＢＢ）におけるＣＮＳ区画へのトランス細胞輸送の増加により短縮され得、ＤＶＤ結合タンパク質が遊離してその第２の抗原認識部位による相互作用が可能になる。
【０２７５】
分布：ＩＶ投与後、モノクローナル抗体は通常、迅速分布相から始まりその後に遅い排出相が続く、二相の血清（または、血漿）濃度−時間プロファイルに従う。一般的に、双指数関数薬物動態モデルがこの種の薬物動態プロファイルをうまく説明する。ｍＡｂの中心コンパートメント（Ｖｃ）中の分布容量は通常、血漿容量（２〜３リットル）に等しいかまたは僅かに多い。血清（血漿）濃度−時間曲線の分布相は長い吸収部分により隠されるので、時間プロファイルに対する血清（血漿）濃度における明確な二相パターンは、ＩＭまたはＳＣなどの他の非経口投与経路では明らかでない場合がある。生理化学的特性、部位特異的吸収および標的配向受容体により媒介される吸収、組織の結合能力、ならびにｍＡｂ用量を含む多くの要因がｍＡｂの生体分布に影響を与え得る。これらの要因のいくつかが、ｍＡｂの生体分布における非直線性に寄与し得る。
【０２７６】
代謝および排泄：分子サイズの理由から、インタクトなモノクローナル抗体は腎臓を介して尿に排泄されない。これらの抗体は、主に代謝（例えば、異化）により不活化される。ＩｇＧベースの治療用モノクローナル抗体の場合、半減期は、典型的には数時間または１〜２日間から２０日以上の範囲である。ｍＡｂの排除は、ＦｃＲｎ受容体に対する親和性、ｍＡｂの免疫原性、ｍＡｂのグリコシル化の程度、タンパク質分解に対するｍＡｂの感受性、および受容体が媒介する排除を含むが、これらに限定されない多くの要因により影響され得る。
【０２７７】
ＩＩＩ．Ｂ．１１．ヒトおよびｔｏｘ種（ｔｏｘ ｓｐｅｃｉｅｓ）における組織交差反応性パターン
同一染色パターンは、潜在的なヒト毒性をｔｏｘ種で評価できることを示唆する。ｔｏｘ種は、非関連毒性が研究されている動物種である。
【０２７８】
個々の抗体は、以下の２つの基準を満たすように選択される：（１）抗体標的の公知の発現に適した組織染色、および（２）同一臓器からのヒトとｔｏｘ種の組織間での類似の染色パターン。
【０２７９】
基準１：免疫化および／または抗体選択は、典型的には組換えまたは合成した抗原（タンパク質、炭水化物または他の分子）を使用する。非関連抗原に対する天然の対応物への結合およびカウンタースクリーンは、治療用抗体のためのスクリーニング漏斗の一部である場合が多い。しかし、多数の抗原に対するスクリーニングは、実際的ではない場合が多い。したがって、全ての主要臓器からのヒト組織との組織交差反応性研究は、あらゆる非関連抗原に対する抗体の望ましくない結合を除外するのに役立つ。
【０２８０】
基準２：ヒトおよびｔｏｘ種組織（カニクイザル、イヌ、およびおそらく齧歯類など、ヒト研究と同じ３６または３７種の組織を試験する）を用いた比較組織交差反応性研究は、ｔｏｘ種の選択を検証するのに役立つ。凍結組織切片での典型的な組織交差反応性研究において、治療用抗体は、公知抗原に対して予想される結合および／または低レベルの相互作用（非特異的結合、類似抗原に対する低レベルの結合、低レベルの電荷をベースとする相互作用など）のいずれかに基づく組織へのより低い低度の結合を示し得る。いずれの場合も、最も関連する毒性学動物種は、ヒトおよび動物組織への結合の一致の程度が最高である種である。
【０２８１】
組織交差反応性研究は、ＥＣ ＣＰＭＰガイドラインＩＩＩ／５２７１／９４“ｍＡｂの産生および品質管理（Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｍＡｂ）”ならびに１９９７ 米国ＦＤＡ／ＣＢＥＲ“ヒトに使用するためのモノクローナル抗体産物の製造および試験における留意事項（Ｐｏｉｎｔｓ ｔｏ Ｃｏｎｓｉｄｅｒ ｉｎ ｔｈｅ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｕｓｅ）”を含む適切な規制ガイドラインに従う。剖検または生検で得たヒト組織の凍結切片（５μｍ）を対物ガラス上に固定し、乾燥させた。組織切片のペルオキシダーゼ染色をアビジン−ビオジン系を用いて実施した。ＦＤＡのガイダンス“ヒトに使用するためのモノクローナル抗体産物の製造および試験における留意事項（Ｐｏｉｎｔｓ ｔｏ Ｃｏｎｓｉｄｅｒ ｉｎ ｔｈｅ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｕｓｅ）”。関連文献には、Ｃｌａｒｋｅ Ｊ．（２００４）、Ｂｏｏｎ Ｌ．（２００２ａ）、Ｂｏｏｎ Ｌ．（２００２ｂ）、Ｒｙａｎ Ａ．（１９９９）が含まれる。
【０２８２】
組織交差反応性研究は、２段階で実施する場合が多く、第１段階は一人のヒトドナーからの３２種の組織（典型的には、副腎、胃腸管、前立腺、膀胱、心臓、骨格筋、血球、腎臓、皮膚、骨髄、肝臓、脊髄、乳房、肺、脾臓、小脳、リンパ節、睾丸、大脳皮質、卵巣、胸腺、結腸、膵臓、甲状腺、内皮、副甲状腺、尿管、眼、下垂体、子宮、卵管および胎盤）の凍結切片を含む。第２段階では、完全交差反応性研究を、３人の関連しない成人からの（副腎、血液、血管、骨髄、小脳、大脳、頸部、食道、眼、心臓、腎臓、大腸、肝臓、肺、リンパ節、乳腺、卵巣、卵管、膵臓、副甲状腺、末梢神経、下垂体、胎盤、前立腺、唾液腺、皮膚、小腸、脊髄、脾臓、胃、横紋筋、精巣、胸腺、甲状腺、扁桃、尿管、膀胱および子宮を含む）最高３８種の組織で実施する。研究は、典型的には少なくとも２つの用量レベルで実施する。
【０２８３】
治療用抗体（すなわち、試験品）およびアイソタイプ適合対照抗体は、アビジン−ビオチン複合体（ＡＢＣ）検出のためにビオチン化できる。他の検出方法には、ＦＩＴＣ（または、他の方法で）標識された試験品の三次元抗体検出、または非標識試験品については標識抗ヒトＩｇＧとのプレコンプレックス形成が含まれ得る。
【０２８４】
簡単に説明すると、剖検または生検で得たヒト組織の凍結切片（約５μｍ）を対物ガラス上に固定し、乾燥させる。組織切片のペルオキシダーゼ染色をアビジン−ビオチン系を用いて実施する。最初に、（プレコンプレックス形成検出システムの場合）、試験品を二次ビオチン化抗ヒトＩｇＧとインキュベートし、免疫複合体を形成させる。この免疫複合体を、試験品の最終濃度２および１０μｇ／ｍＬにて対物ガラス上の組織切片に添加し、次いで、この組織切片をアビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼキットと３０分間反応させた。その後、組織染色のために、ペルオキシダーゼ反応の基質であるＤＡＢ（３，３’−ジアミノベンジジン）を４分間適用した。抗原−セファロースビーズを、陽性対照組織切片として使用する。
【０２８５】
あらゆる特異的染色は、問題の標的抗原の既知の発現に基づいて、予測される反応性（例えば、抗原発現と一致）であるかまたは予期せぬ反応性であるかを判定する。特異的と判定した染色を強度および頻度についてスコア化する。抗原もしくは血清競合またはブロッキング研究により、さらに、観察された染色が特異的であるかまたは非特異的であるかを決定できる。
【０２８６】
２つの選択した抗体が、選択基準、すなわち適切な組織染色、ヒトと毒性学動物の特異的組織間での染色の適合を満たすと判明した場合は、これらをＤＶＤ結合タンパク質作製のために選択できる。
【０２８７】
最終ＤＶＤ結合タンパク質コンストラクトを用いて組織交差反応性研究を繰り返さなければならないが、あらゆる結合が２つの親抗体のいずれかに由来し得、あらゆる不明な結合を複雑な抗原競合研究で確認する必要があるので、これらの研究は本明細書中に概説されているものと同じプロトコルに従いながらも、評価はより複雑である。
【０２８８】
２つの親抗体を（１）予期せぬ組織交差反応性所見の欠如および（２）対応するヒトと毒性学動物種の組織間での組織交差反応性所見の適切な類似性について選択した場合は、ＤＶＤ結合タンパク質のような多特異的分子を用いた組織交差反応性研究の複雑な仕事が大いに簡素化されることはすぐにわかることである。
【０２８９】
ＩＩＩ．Ｂ．１２．特異性および選択性
所望の特異性および選択性を有するＤＶＤ結合タンパク質を作製するためには、同様に所望の特異性および選択性プロファイルを有する親ｍＡｂを作製し、選択する必要がある。
【０２９０】
ＤＶＤ結合タンパク質を用いた特異性および選択性についての結合研究は、各抗原について各々２つで、４つ以上の結合部位があるために複雑であり得る。簡単に説明すると、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡｃｏｒｅ、ＫｉｎＥｘＡ、または他の相互作用研究を用いる、ＤＶＤ結合タンパク質の結合研究では、ＤＶＤ結合タンパク質への１つ、２つまたはそれ以上の抗原の結合を監視する必要がある。ＢＩＡｃｏｒｅ技術では、複数の抗原の順次的な独立した結合を解明できるが、ＥＬＩＳＡを含むより従来的な方法またはＫｉｎＥｘＡのようなより現代的な技術ではできない。したがって、各親抗体を注意深く特徴づけることが重要である。個々の各抗体の特異性を特徴づけたら、ＤＶＤ結合タンパク質中の個々の結合部位の特異性保持の確認は大いに簡略化される。
【０２９１】
ＤＶＤ結合タンパク質に組み合わせる前に、２つの親抗体を特異性について選択すると、ＤＶＤ結合タンパク質の特異性を調べる複雑な仕事が大いに簡略化されることはすぐにわかることである。
【０２９２】
抗原−抗体相互作用研究は、ＥＬＩＳＡ（酵素免疫測定法）、質量分光法、化学架橋、光散乱を伴うＳＥＣ、平衡透析、ゲル浸透、限外濾過、ゲルクロマトグラフィー、大帯域分析ＳＥＣ、微小分離超遠心（沈降平衡）、分光法、滴定微小熱量測定、（分析超遠心分離における）沈降平衡法、（分析遠心分離における）沈降速度、（ＢＩＡｃｏｒｅを含む）表面プラズモン共鳴を含む多くの古典的タンパク質−タンパク質相互作用研究を含む様々な形態をとり得る。関連する文献には、“タンパク質科学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ）”，Ｊｏｈｎ Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｂｅｎ Ｍ．Ｄｕｎｎ，Ｄａｖｉｄ Ｗ．Ｓｐｅｉｃｈｅｒ，Ｐａｕｌ Ｔ．，Ｗｉｎｇｆｉｅｌｄ（編），３巻，１９および２０章，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．発行およびその中に含まれる参考文献、ならびに“免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）”，Ｊｏｈｎ Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｂａｒｂａｒａ Ｅ．Ｂｉｅｒｅｒ，Ｄａｖｉｄ Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅｔｈａｎ Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗａｒｒｅｎ Ｓｔｒｏｂｅｒ（編），Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．発行およびその中に含まれる関連文献が含まれる。
【０２９３】
全血におけるサイトカイン放出：ｍＡｂのヒト血球との相互作用は、サイトカイン放出アッセイにより調べることができる（Ｗｉｎｇ，Ｍ．Ｇ．，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９９５），２（４）：１８３−１９０；“薬理学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）”，Ｓ．Ｊ．Ｅｎｎａ，Ｍｉｃｈａｅｌ Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｊｏｈｎ Ｗ．Ｆｅｒｋａｎｙ，Ｔｅｒｒｙ Ｋｅｎａｋｉｎ，Ｐａｕｌ Ｍｏｓｅｒ（編），Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．発行；Ｍａｄｈｕｓｕｄａｎ，Ｓ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００４），１０（１９），６５２８−６５３４；Ｃｏｘ，Ｊ．Ｍｅｔｈｏｄｓ（２００６），３８（４）：２７４−２８２；Ｃｈｏｉ，Ｉ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１），３１（１）：９４−１０６）。簡単に説明すると、様々な濃度のｍＡｂをヒト全血と２４時間インキュベートする。試験する濃度は、患者中の典型的な血液レベルによく似た（１００ｎｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌを含むが、これらに限定されない）最終濃度を含む広範囲をカバーしなければならない。インキュベートした後、上清および細胞溶解物をＩＬ−１Ｒα、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６およびＩＬ−８の存在について分析する。ｍＡｂについて作製したサイトカイン濃度プロファイルを、陰性ヒトＩｇＧ対照および陽性のＬＰＳ対照またはＰＨＡ対照により作製したプロファイルと比較する。細胞上清および細胞溶解物の両方に由来するｍＡｂが示すサイトカインプロファイルは、対照ヒトＩｇＧを用いたプロファイルと比較する。一実施形態において、モノクローナル抗体は、炎症性サイトカインを自発的に放出するようにヒト血球と相互作用しない。
【０２９４】
ＤＶＤ結合タンパク質についてのサイトカイン放出研究は、各抗原について各々２つで、４つ以上の結合部位があるために複雑である。簡単に説明すると、本明細書に記載のサイトカイン放出研究は、全ＤＶＤ結合タンパク質の全血または他の細胞系に対する影響を調べるが、分子のどの部分がサイトカイン放出を引き起こすかを解明することはできない。サイトカイン放出が検出されたら、ＤＶＤ結合タンパク質調製物の純度を確認しなければならない。なぜなら、いくつかの共精製された細胞成分がそれ自体サイトカイン放出を引き起こし得るからである。ＤＶＤ結合タンパク質調製物の純度を確認しなければならない。純度が問題でない場合は、（Ｆｃ部分の除去、結合部位の分離などを含むが、これらに限定されない）ＤＶＤ結合タンパク質の断片化、結合部位の改変または他の方法を用いて、全ての所見を解析する必要があり得る。ＤＶＤ結合タンパク質に組み合わせる前に、２つの親抗体をサイトカイン放出の欠如について選択すると、この複雑な仕事が大いに簡略化されることはすぐにわかることである。
【０２９５】
ＩＩＩ．Ｂ．１３．毒性学研究のための他の種に対する交差反応性
一実施形態において、適切なｔｏｘ種、例えば、カニクイザルに対して十分な交差反応性を有する個々の抗体を選択する。親抗体は、オルソロガス種標的（すなわち、カニクイザル）に結合し、適切な反応（調節、中和、活性化）を引き起こす必要がある。一実施形態において、オルソロガス種標的に対する交差反応性（親和性／力価）は、ヒト標的の１０倍以内であるべきである。実際に、親抗体を、マウス、ラット、イヌ、サル（および他の非ヒト霊長類）を含む複数種ならびに疾患モデル種（すなわち、喘息モデルのヒツジ）に対して評価する。親モノクローナル抗体からのｔｏｘ種に対する許容され得る交差反応性により、同じ種におけるＤＶＤ結合タンパク質のさらなる毒性研究が可能になる。このために、２つの親モノクローナル抗体は、共通するｔｏｘ種に対して許容され得る交差反応性を有するべきであり、それにより、同じ種におけるＤＶＤ結合タンパク質の毒性学研究が可能になる。
【０２９６】
親ｍＡｂは、特定の標的に結合でき、当技術分野で公知の様々なｍＡｂから選択され得る。これらには、抗スクレロスチン、抗ＳＯＳＴＦ、抗ＴＮＦ抗体（米国特許第６，２５８，５６２号）、抗ＩＬ−１２および／または抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体（米国特許第６，９１４，１２８号）、抗ＩＬ−１８抗体（米国特許出願公開第２００５／０１４７６１０号Ａ１）、抗Ｃ５、抗ＣＢＬ、抗ＣＤ１４７、抗ｇｐ１２０、抗ＶＬＡ−４、抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１８、抗ＶＥＧＦ、抗ＣＤ４０Ｌ、抗ＣＤ−４０（例えば、ＷＯ２００７１２４２９９参照）、抗Ｉｄ、抗ＩＣＡＭ１、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＤ２、抗ＥＧＦＲ、抗ＴＧＦ−β２、抗ＨＧＦ、抗ｃＭｅｔ、抗ＤＬＬ−４、抗ＮＰＲ１、抗ＰＬＧＦ、抗ＥｒｂＢ３、抗Ｅ−セレクチン、抗Ｆａｃｔ ＶＩＩ、抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、抗Ｆ ｇｐ、抗ＣＤ１１／１８、抗ＣＤ１４、抗ＩＣＡＭ３、抗ＲＯＮ、抗ＣＤ−１９、抗ＣＤ８０（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ２００３／０３９４８６参照）、抗ＣＤ４、抗ＣＤ３、抗ＣＤ２３、抗β２−インテグリン、抗α４β７、抗ＣＤ５２、抗ＨＬＡ ＤＲ、抗ＣＤ２２（例えば、米国特許第５，７８９，５５４号参照）、抗ＣＤ２０、抗ＭＩＦ、抗ＣＤ６４（ＦｃＲ）、抗ＴＣＲαβ、抗ＣＤ２、抗Ｈｅｐ Ｂ、抗ＣＡ １２５、抗ＥｐＣＡＭ、抗ｇｐ１２０、抗ＣＭＶ、抗ｇｐＩＩｂＩＩＩａ、抗ＩｇＥ、抗ＣＤ２５、抗ＣＤ３３、抗ＨＬＡ、抗ＩＧＦ１，２、抗ＩＧＦＲ、抗ＶＮＲインテグリン、抗ＩＬ−１α、抗ＩＬ−１β、抗ＩＬ−１受容体、抗ＩＬ−２受容体、抗ＩＬ−４、抗ＩＬ−４受容体、抗ＩＬ５、抗ＩＬ−５受容体、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−６Ｒ、ＲＡＮＫＬ、ＮＧＦ、ＤＫＫ、αＶβ３、抗ＩＬ−８、抗ＩＬ−９、抗ＩＬ−１３、抗ＩＬ−１３受容体、および抗ＩＬ−２３；ＩＬ−２３ｐ１９（Ｐｒｅｓｔａ，“治療用抗体の選択、設計、および遺伝子工学処理（Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ｄｅｓｉｇｎ、ａｎｄ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）”、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１６：７３１−７３６（２００５）、ならびにワールドワイドウェブのｈｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／〜ｍｒｃ７／ｈｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．ｈｔｍｌ参照）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２９７】
親ｍＡｂは、使用が認可されている、臨床試験中のまたは臨床使用のために開発中の様々な治療用抗体からも選択され得る。このような治療用抗体には、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標），ＩＤＥＣ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ社）（例えば、米国特許第５，７３６，１３７号参照）、非ホジキンリンパ腫を治療するために認可されているキメラ抗ＣＤ２０抗体；ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、現在Ｇｅｎｍａｂ社が開発している抗ＣＤ２０、米国特許第５，５００，３６２号に記載の抗ＣＤ２０抗体、ＡＭＥ−１３３（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ社）、ｈＡ２０（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、ＨｕｍａＬＹＭ（Ｉｎｔｒａｃｅｌ社）およびＰＲＯ７０７６９（“Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｖａｒｉａｎｔｓ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ”という発明の名称のＰＣＴ／ＵＳ２００３／０４０４２６）、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社）（例えば、米国特許第５，６７７，１７１号参照）、乳癌を治療するために認可されているヒト化抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ抗体；現在Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社が開発しているペルツズマブ（ｒｈｕＭａｂ−２Ｃ４，Ｏｍｎｉｔａｒｇ（登録商標））；米国特許第４，７５３，８９４号に記載の抗Ｈｅｒ２抗体；セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ社）（米国特許第４，９４３，５３３号；ＰＣＴ ＷＯ９６／４０２１０）、様々な癌についての臨床試験中のキメラ抗ＥＧＦＲ抗体；現在Ａｂｇｅｎｉｘ−Ｉｍｍｕｎｅｘ−Ａｍｇｅｎ社が開発しているＡＢＸ−ＥＧＦ（米国特許第６，２３５，８８３号）；現在Ｇｅｎｍａｂ社が開発しているＨｕＭａｘ−ＥＧＦｒ（米国特許出願第１０／１７２，３１７号）；４２５，ＥＭＤ５５９００、ＥＭＤ６２０００およびＥＭＤ７２０００（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ）（米国特許第５，５５８，８６４号；Ｍｕｒｔｈｙら，１９８７，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２５２（２）：５４９−６０；Ｒｏｄｅｃｋら，１９８７，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５（４）：３１５−２０；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら，１９９１、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．４（７）：７７３−８３）；ＩＣＲ６２（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（ＰＣＴ ＷＯ９５／２００４５；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら，１９９３，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｐｈｙｓ．１９９３，２２（１−３）：１２９−４６；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら，１９９３，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．１９９３，６７（２）：２４７−５３；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら，１９９６，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，７３（２）：２２８−３５；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら，２００３，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，１０５（２）：２７３−８０）；ＴｈｅｒａＣＩＭ ｈＲ３（ＹＭ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、カナダおよびＣｅｎｔｒｏ ｄｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉａ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ社、キューバ（米国特許第５，８９１，９９６号；米国特許第６，５０６，８８３号；Ｍａｔｅｏら，１９９７，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３（１）：７１−８１）；ｍＡｂ−８０６（Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ）（Ｊｕｎｇｂｌｕｔｈら，２００３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，１００（２）：６３９−４４）；ＫＳＢ−１０２（ＫＳ Ｂｉｏｍｅｄｉｘ）；ＭＲｌ−１（ＩＶＡＸ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（ＰＣＴ ＷＯ０１６２９３１ Ａ２）；およびＳＣ１００（Ｓｃａｎｃｅｌｌ社）（ＰＣＴ ＷＯ０１／８８１３８）；アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）、Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍ社）、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病治療のために現在認可されているヒト化ｍＡｂ；ムロモナブ−ＣＤ３（Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ ＯＫＴ３（登録商標））、Ｏｒｔｈｏ Ｂｉｏｔｅｃｈ／Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎが開発している抗ＣＤ３抗体、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））、ＩＤＥＣ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧが開発している抗ＣＤ２０抗体、ゲムツズマブオゾガマイシン（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標））、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｗｙｅｔｈ社が開発している抗ＣＤ３３（ｐ６７タンパク質）抗体、アレファセプト（Ａｍｅｖｉｖｅ（登録商標））、Ｂｉｏｇｅｎ社が開発している抗ＬＦＡ−３ Ｆｃ融合物、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ／Ｌｉｌｌｙ社が開発しているアブシキマブ（ＲｅｏＰｒｏ（登録商標））、Ｎｏｖａｒｔｉｓ社が開発しているバシリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標））、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ社が開発しているパリビズマブ（Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標））、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ社が開発している抗ＴＮＦα抗体、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、Ａｂｂｏｔｔ社が開発している抗ＴＮＦα抗体、Ｈｕｍｉｃａｄｅ（登録商標）、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ社が開発している抗ＴＮＦα抗体、ゴリムマブ（ＣＮＴＯ−１４８）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ社が開発している完全ヒトＴＮＦ抗体、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、Ｉｍｍｕｎｅｘ／Ａｍｇｅｎ社が開発しているｐ７５ ＴＮＦ受容体Ｆｃ融合物、レネルセプト、既にＲｏｃｈｅ社が開発したｐ５５ＴＮＦ受容体Ｆｃ融合物、ＡＢＸ−ＣＢＬ、Ａｂｇｅｎｉｘ社が開発している抗ＣＤ１４７抗体、ＡＢＸ−ＩＬ８、Ａｂｇｅｎｉｘ社が開発している抗ＩＬ８抗体、ＡＢＸ−ＭＡ１、Ａｂｇｅｎｉｘ社が開発している抗ＭＵＣ１８抗体、ペムツモマブ（Ｒ１５４９，９０Ｙ−ｍｕＨＭＦＧ１）、Ａｎｔｉｓｏｍａ社が開発中の抗ＭＵＣ１、Ｔｈｅｒｅｘ（Ｒ１５５０）、Ａｎｔｉｓｏｍａ社が開発している抗ＭＵＣ１抗体、Ａｎｔｉｓｏｍａ社が開発しているＡｎｇｉｏＭａｂ（ＡＳ１４０５）、Ａｎｔｉｓｏｍａ社が開発しているＨｕＢＣ−１、Ａｎｔｉｓｏｍａ社が開発しているチオプラチン（ＡＳ１４０７）、Ａｎｔｅｇｒｅｎ（登録商標）（ナタリズマブ）、Ｂｉｏｇｅｎ社が開発している抗α−４−β−１（ＶＬＡ−４）およびα−４−β−７抗体、ＶＬＡ−１ ｍＡｂ、Ｂｉｏｇｅｎ社が開発している抗ＶＬＡ−１インテグリン抗体、ＬＴＢＲ ｍＡｂ、Ｂｉｏｇｅｎ社が開発している抗リンホトキシンβ受容体（ＬＴＢＲ）抗体、ＣＡＴ−１５２、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社が開発している抗ＴＧＦ−β２抗体、ＡＢＴ ８��４（Ｊ６９５）、Ａｂｂｏｔｔ社が開発している抗ＩＬ−１２ ｐ４０抗体、ＣＡＴ−１９２、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社およびＧｅｎｚｙｍｅ社が開発している抗ＴＧＦβ１抗体、ＣＡＴ−２１３、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社が開発している抗エオタキシン１抗体、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社およびＨｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．が開発しているＬｙｍｐｈｏＳｔａｔ−Ｂ（登録商標）抗Ｂｌｙｓ抗体、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１ｍＡｂ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社およびＨｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．が開発している抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ１抗体、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）ベバシズマブ、ｒｈｕＭＡｂ−ＶＥＧＦ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社が開発している抗ＶＥＧＦ抗体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社が開発している抗ＨＥＲ受容体ファミリー抗体、抗組織因子（ＡＴＦ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社が開発している抗組織因子抗体、Ｘｏｌａｉｒ（登録商標）（オマリズマブ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社が開発している抗ＩｇＥ抗体、Ｒａｐｔｉｖａ（登録商標）（エファリズマブ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社およびＸｏｍａ社が開発している抗ＣＤ１１ａ抗体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社およびＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社が開発しているＭＬＮ−０２抗体（旧、ＬＤＰ−０２）、ＨｕＭａｘ ＣＤ４、Ｇｅｎｍａｂ社が開発している抗ＣＤ４抗体、ＨｕＭａｘ−ＩＬ１５、Ｇｅｎｍａｂ社およびＡｍｇｅｎ社が開発している抗ＩＬ１５抗体、Ｇｅｎｍａｂ社およびＭｅｄａｒｅｘ社が開発しているＨｕＭａｘ−Ｉｎｆｌａｍ、ＨｕＭａｘ−Ｃａｎｃｅｒ、Ｇｅｎｍａｂ社およびＭｅｄａｒｅｘ社ならびにＯｘｆｏｒｄ ＧｃｏＳｃｉｅｎｃｅｓが開発している抗ヘパラナーゼＩ抗体、Ｇｅｎｍａｂ社およびＡｍｇｅｎ社が開発しているＨｕＭａｘ−Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｇｅｎｍａｂ社が開発しているＨｕＭａｘ−ＴＡＣ、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社が開発しているＩＤＥＣ−１３１および抗ＣＤ４０Ｌ抗体、ＩＤＥＣ−１５１（クレノリキシマブ）、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社が開発している抗ＣＤ４抗体、ＩＤＥＣ−１１４、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社が開発している抗ＣＤ８０抗体、ＩＤＥＣ−１５２、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社が開発している抗ＣＤ２３、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓが開発している抗マクロファージ遊走因子（ＭＩＦ）抗体、ＢＥＣ２、Ｉｍｃｌｏｎｅ社が開発している抗イディオタイプ抗体、ＩＭＣ−１Ｃ１１、Ｉｍｃｌｏｎｅ社が開発している抗ＫＤＲ抗体、ＤＣ１０１、Ｉｍｃｌｏｎｅ社が開発している抗ｆｌｋ−１抗体、Ｉｍｃｌｏｎｅ社が開発している抗ＶＥカドヘリン抗体、ＣＥＡ−Ｃｉｄｅ（登録商標）（ラベツズマブ）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ社が開発している抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体、ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（登録商標）（エプラツズマブ）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ社が開発している抗ＣＤ２２抗体、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ社が開発しているＡＦＰ−Ｃｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍ��ｄｉｃｓ社が開発しているＭｙｅｌｏｍａＣｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ社が開発しているＬｋｏＣｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ社が開発しているＰｒｏｓｔａＣｉｄｅ、ＭＤＸ−０１０、Ｍｅｄａｒｅｘ社が開発している抗ＣＴＬＡ４抗体、ＭＤＸ−０６０、Ｍｅｄａｒｅｘ社が開発している抗ＣＤ３０抗体、Ｍｅｄａｒｅｘ社が開発しているＭＤＸ−０７０、Ｍｅｄａｒｅｘ社が開発しているＭＤＸ−０１８、Ｏｓｉｄｅｍ（登録商標）（ＩＤＭ−１）、およびＭｅｄａｒｅｘ社およびＩｍｍｕｎｏ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ社が開発している抗Ｈｅｒ２抗体、ＨｕＭａｘ（登録商標）−ＣＤ４、Ｍｅｄａｒｅｘ社およびＧｅｎｍａｂ社が開発している抗ＣＤ４抗体、ＨｕＭａｘ−ＩＬ１５、Ｍｅｄａｒｅｘ社およびＧｅｎｍａｂ社が開発している抗ＩＬ１５抗体、ＣＮＴＯ １４８、Ｍｅｄａｒｅｘ社およびＣｅｎｔｏｃｏｒ／Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ社が開発している抗ＴＮＦα抗体、ＣＮＴＯ １２７５、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ／Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ社が開発している抗サイトカイン抗体、ＭＯＲ１０１およびＭＯＲ１０２、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ社が開発している抗細胞内接着分子−１（ＩＣＡＭ１）（ＣＤ５４）抗体、ＭＯＲ２０１、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ社が開発している抗線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ−３）抗体、Ｎｕｖｉｏｎ（登録商標）（ビシリズマブ）、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ社が開発している抗ＣＤ３抗体、ＨｕＺＡＦ（登録商標）、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ社が開発している抗γインターフェロン抗体、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ社が開発している抗α５β１インテグリン、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ社が開発している抗ＩＬ−１２、ＩＮＧ−１、Ｘｏｍａ社が開発している抗Ｅｐ−ＣＡＭ抗体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社およびＮｏｖａｒｔｉｓ社が開発しているＸｏｌａｉｒ（登録商標）（オマリズマブ）ヒト化抗ＩｇＥ抗体、ならびにＭＬＮ０１、Ｘｏｍａ社が開発している抗β２インテグリン抗体が含まれるが、これらに限定されない。別の実施形態において、治療薬には、ＫＲＮ３３０（Ｋｉｒｉｎ社）、ｈｕＡ３３抗体（Ａ３３，Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、ＣＮＴＯ ９５（αＶインテグリン、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ社）、ＭＥＤＩ−５２２（
αＶβ３インテグリン、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ社）、ボロシキシマブ（αＶβ１インテグリン、Ｂｉｏｇｅｎ／ＰＤＬ）、ヒトｍＡｂ ２１６（Ｂ細胞グリコシル化エピトープ，ＮＣＩ）、ＢｉＴＥ ＭＴ１０３（二特異性ＣＤ１９×ＣＤ３、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ社）、４Ｇ７×Ｈ２２（二特異性Ｂ細胞×ＦｃγＲ１、Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｍｅｒｃｋ ＫＧａ）、ｒＭ２８（二特異性ＣＤ２８×ＭＡＰＧ、米国特許第ＥＰ１４４４２６８号）、ＭＤＸ４４７（ＥＭＤ ８２６３３）（二特異性ＣＤ６４×ＥＧＦＲ、Ｍｅｄａｒｅｘ社）、カツマキソマブ（レモバブ）（二特異性ＥｐＣＡＭ×抗ＣＤ３、Ｔｒｉｏｎ／Ｆｒｅｓ）、エリツマキソマブ（二特異性ＨＥＲ２／ＣＤ３、Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）、オレゴボマブ（ＯｖａＲｅｘ）（ＣＡ−１２５，ＶｉＲｅｘｘ社）、Ｒｅｎｃａｒｅｘ（登録商標）（ＷＸ Ｇ２５０）（炭酸脱水酵素ＩＸ、Ｗｉｌｅｘ社）、ＣＮＴＯ ８８８（ＣＣＬ２、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ社）、ＴＲＣ１０５（ＣＤ１０５（エンドグリン）、Ｔｒａｃｏｎ社）、ＢＭＳ−６６３５１３（ＣＤ１３７アゴニスト、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ社）、ＭＤＸ−１３４２（ＣＤ１９、Ｍｅｄａｒｅｘ社）、シプリズマブ（ＭＥＤＩ−５０７）（ＣＤ２、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ社）、オフツムマブ（Ｈｕｍａｘ−ＣＤ２０）（ＣＤ２０、Ｇｅｎｍａｂ社）、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ）（ＣＤ２０、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社）、ベルツズマブ（ｈＡ２０）（ＣＤ２０、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ社）、エプラツズマブ（ＣＤ２２、Ａｍｇｅｎ社）、ルミリキシマブ（ＩＤＥＣ １５２）（ＣＤ２３、Ｂｉｏｇｅｎ社）、ムロモナブ−ＣＤ３（ＣＤ３、Ｏｒｔｈｏ社）、ＨｕＭ２９１（ＣＤ３ ｆｃ受容体、ＰＤＬ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ社）、ＨｅＦｉ−１，ＣＤ３０，ＮＣＩ）、ＭＤＸ−０６０（ＣＤ３０、Ｍｅｄａｒｅｘ社）、ＭＤＸ−１４０１（ＣＤ３０、Ｍｅｄａｒｅｘ社）、ＳＧＮ−３０（ＣＤ３０、Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｎｔｉｃｓ社）、ＳＧＮ−３３（リンツズマブ）（ＣＤ３３、Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｎｔｉｃｓ社）、ザノリムマブ（ＨｕＭａｘ−ＣＤ４）（ＣＤ４、Ｇｅｎｍａｂ社）、ＨＣＤ１２２（ＣＤ４０、Ｎｏｖａｒｔｉｓ社）、ＳＧＮ−４０（ＣＤ４０、Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｎｔｉｃｓ社）、キャンパス１ｈ（アルメツズマブ）（ＣＤ５２、Ｇｅｎｚｙｍｅ社）、ＭＤＸ−１４１１（ＣＤ７０、Ｍｅｄａｒｅｘ社）、ｈＬＬ１（ＥＰＢ−１）（ＣＤ７４．３８、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ社）、ガリキシマブ（ＩＤＥＣ−１４４）（ＣＤ８０、Ｂｉｏｇｅｎ社）、ＭＴ２９３（ＴＲＣ０９３／Ｄ９３）（切断コラーゲン、Ｔｒａｃｏｎ社）、ＨｕＬｕｃ６３（ＣＳ１、ＰＤＬ Ｐｈａｒｍａ社）、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０）（ＣＴＬＡ４、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ社）、トレメリムマブ（チシリムマブ、ＣＰ−６７５，２）（ＣＴＬＡ４，Ｐｆｉｚｅｒ社）、ＨＧＳ−ＥＴＲ１（マパツムマブ）（ＤＲ４ ＴＲＡＩＬ−Ｒ１アゴニスト、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ／Ｇｌａｘｏ Ｓｍｉｔｈ Ｋｌｉｎｅ社）、ＡＭＧ−６５５（ＤＲ５，Ａｍｇｅｎ社）、アポマブ（ＤＲ５、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社）、ＣＳ−１００８（ＤＲ５，第１三共）、ＨＧＳ−ＥＴＲ２（レキサツムマブ）（ＤＲ５ ＴＲＡＩＬ−Ｒ２アゴニスト，ＨＧＳ）、セツキシマブ（アービタックス（ＥＧＦＲ，Ｉｍｃｌｏｎｅ社）、ＩＭＣ−１１Ｆ８（ＥＧＦＲ，Ｉｍｃｌｏｎｅ社）、ニモツズマブ（ＥＧＦＲ，ＹＭ Ｂｉｏ）、パニツムマブ（Ｖｅｃｔａｂｉｘ）（ＥＧＦＲ、Ａｍｇｅｎ社）、ザルツムマブ（ＨｕＭａｘＥＧＦｒ）（ＥＧＦＲ、Ｇｅｎｍａｂ社）、ＣＤＸ−１１０（ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＡＶＡＮＴ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社）、アデカツムマブ（ＭＴ２０１）（Ｅｐｃａｍ、Ｍｅｒｃｋ社）、エドレコロマブ（Ｐａｎｏｒｅｘ，１７−１Ａ）（Ｅｐｃａｍ、Ｇｌａｘｏ／Ｃｅｎｔｏｃｏｒ社）、ＭＯＲＡｂ−００３（フォレート受容体ａ、Ｍｏｒｐｈｏｔｅｃｈ社）、ＫＷ−２８７１（ガングリオシドＧＤ３、共和薬品工業）、ＭＯＲＡｂ−００９（ＧＰ−９、Ｍｏｒｐｈｏｔｅｃｈ社）、ＣＤＸ−１３０７（ＭＤＸ−１３０７）（ｈＣＧｂ、Ｃｅｌｌｄｅｘ社）、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）（ＨＥＲ２、Ｃｅｌｌｄｅｘ社）、ペルツズマブ（ｒｈｕＭＡｂ ２Ｃ４）（ＨＥＲ２（ＤＩ），Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社）、アポリズマブ（ＨＬＡ−ＤＲβ鎖、ＰＤＬ Ｐｈａｒｍａ）、ＡＭＧ−４７９（ＩＧＦ−ＩＲ、Ａｍｇｅｎ社）、抗ＩＧＦ−１Ｒ Ｒ１５０７（ＩＧＦ１−Ｒ、Ｒｏｃｈｅ社）、ＣＰ ７５１８７１（ＩＧＦ１−Ｒ、Ｐｆｉｚｅｒ社）、ＩＭＣ−Ａ１２（ＩＧＦ１−Ｒ、Ｉｍｃｌｏｎｅ社）、ＢＩＬＢ０２２（ＩＧＦ−ＩＲ、Ｂｉｏｇｅｎ社）、Ｍｉｋ−β−１（ＩＬ−２Ｒｂ（ＣＤ１２２）、Ｈｏｆｆｍａｎ ＬａＲｏｃｈｅ社）、ＣＮＴＯ ３２８（ＩＬ６、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ社）、抗ＫＩＲ（１−７Ｆ９）（キラー細胞Ｉｇ様受容体（ＫＩＲ）、Ｎｏｖｏ社）、Ｈｕ３Ｓ１９３（Ｌｅｗｉｓ（ｙ），Ｗｙｅｔｈ，Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、ｈＣＢＥ−１１（ＬＴβＲ、Ｂｉｏｇｅｎ社）、ＨｕＨＭＦＧ１（ＭＵＣ１，Ａｎｔｉｓｏｍａ／ＮＣＩ）、ＲＡＶ１２（Ｎ−結合炭水化物エピトープ、Ｒａｖｅｎ社）、ＣＡＬ（副甲状腺ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨ−ｒＰ），カリフォルニア大学）、ＣＴ−０１１（ＰＤ１、ＣｕｒｅＴｅｃｈ社）、ＭＤＸ−１１０６（ｏｎｏ−４５３８）（ＰＤ１，Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｏｎｏ）、ＭＡｂ ＣＴ−０１１（ＰＤ１、Ｃｕｒｅｔｅｃｈ社）、ＩＭＣ−３Ｇ３（ＰＤＧＦＲａ、Ｉｍｃｌｏｎｅ社）、バビツキシマブ（ホスファチジルセリン、Ｐｅｒｅｇｒｉｎｅ社）、ｈｕＪ５９１（ＰＳＭＡ，Ｃｏｒｎｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）、ｍｕＪ５９１（ＰＳＭＡ，Ｃｏｒｎｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）、ＧＣ１００８（ＴＧＦｂ（ｐａｎ）インヒビター（ＩｇＧ４）、Ｇｅｎｚｙｍｅ社）、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ）（ＴＮＦα、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ社）、Ａ２７．１５（トランスフェリン受容体、ソーク研究所、ＩＮＳＥＲＮ ＷＯ２００５／１１１０８２）、Ｅ２．３（トランスフェリン受容体、ソーク研究所）、ベバシズマブ（アバスチン）（ＶＥＧＦ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社）、ＨｕＭＶ８３３（ＶＥＧＦ、Ｔｓｕｋｕｂａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂ−ＷＯ／２０００／０３４３３７、テキサス大学）、ＩＭ���−１８Ｆ１（ＶＥＧＦＲ１、Ｉｍｃｌｏｎｅ社）、ＩＭＣ−１１２１（ＶＥＧＦＲ２、Ｉｍｃｌｏｎｅ社）が含まれる。
【０２９８】
ＩＩＩ．Ｃ．ＤＶＤ結合タンパク質の構築
多価多特異的二重可変ドメイン結合タンパク質（ＤＶＤ結合タンパク質）は、２つの異なる親モノクローナル抗体由来の２つの異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を、組換えＤＮＡ技術により直接または短いリンカーを介して直列に連結し、その後ろに軽鎖定常ドメインが続くように設計する。同様に、重鎖は、直列に連結された２つの異なる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）の後に、定常ドメインＣＨ１およびＦｃ領域を含む。
【０２９９】
可変ドメインは、本明細書に記載の方法のいずれか１つにより作製した親抗体から組換えＤＮＡ技術を用いて取得できる。一実施形態において、可変ドメインは、マウスの重鎖または軽鎖可変ドメインである。別の実施形態において、可変ドメインは、ＣＤＲ移植もしくはヒト化した可変重鎖ドメインまたはＣＤＲ移植もしくはヒト化した可変軽鎖ドメインである。一実施形態において、この可変ドメインは、ヒト重鎖またはヒト軽鎖可変ドメインである。
【０３００】
一実施形態において、第１および第２の可変ドメインを、組換えＤＮＡ技術を用いて互いに直接連結させる。別の実施形態において、可変ドメインを、リンカー配列を介して連結する。一実施形態において、２つの可変ドメインを連結する。３つ以上の可変ドメインを、直接またはリンカー配列を介して連結させてもよい。可変ドメインは、同一の抗原に結合するか、または異なる抗原に結合してもよい。１つの免疫グロブリン可変ドメインおよび、受容体のリガンド結合ドメインまたは酵素の活性ドメインなどの１つの非免疫グロブリン可変ドメインを含み得るＤＶＤ結合タンパク質を提供する。ＤＶＤ結合タンパク質は２つ以上の非Ｉｇドメインも含んでよい。
【０３０１】
リンカー配列は、単一アミノ酸またはポリペプチド配列であり得る。一実施形態において、リンカー配列は、ＧＧＧＧＳＧ（配列番号１６９５）、ＧＧＳＧＧ（配列番号１６９６）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１６９７）、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号１６９８）、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１６９９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１７００）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１７０１）、ＡＳＴＫＧＰ（配列番号１７０２）、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号１７０３）、ＴＶＡＡＰ（配列番号１７０４）、ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号１７０５）、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ（配列番号１７０６）、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号１７０７）、ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号１７１０）、ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号１７０９）、ＳＡＫＴＴＰ（配列番号１７０２）、ＲＡＤＡＡＰ（配列番号１７１１）、ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ（配列番号１７１２）、ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ（配列番号１７１３）、ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１７１４）、ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号１７１５）、ＡＤＡＡＰ（配列番号１７１６）、ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ（配列番号２０５０）、ＱＰＫＡＡＰ（配列番号２０５１）、ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号２０５２）、ＡＫＴＴＰＰ（配列番号２０５３）、ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ（配列番号２０５４）、ＡＫＴＴＡＰ（配列番号２０５５）、ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号２０５６）、ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ（配列番号２０５７）、ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ（配列番号２０５８）、およびＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳ（配列番号２０５９）である。リンカー配列の選択は、いくつかのＦａｂ分子の結晶構造解析に基づく。Ｆａｂまたは抗体分子構造中の可変ドメインとＣＨ１／ＣＬ定常ドメインの間に天然の柔軟な連結が存在する。この天然の連結は、ＶドメインのＣ末端から４〜６個の残基およびＣＬ／ＣＨ１ドメインのＮ末端から４〜６個の残基により与えられるほぼ約１０〜１２個のアミノ酸残基を含む。本明細書に記載のＤＶＤ結合タンパク質は、ＤＶＤ結合タンパク質の軽鎖および重鎖中のそれぞれＣＬまたはＣＨ１のＮ末端の５〜６個のアミノ酸残基または１１〜１２個のアミノ酸残基をリンカーとして用いて作製できる。ＣＬまたはＣＨ１ドメインのＮ末端残基、特に最初の５〜６個のアミノ酸残基は、強い二次構造なしにループ立体構造を採り、したがって、２つの可変ドメイン間の柔軟なリンカーとして作用し得る。ＣＬまたはＣＨ１ドメインのＮ末端残基は、Ｉｇ配列の一部であるので可変ドメインの自然な伸長であり、したがって、リンカーおよび接合部から潜在的に生ずる免疫原性がかなりの程度まで抑えられる。
【０３０２】
他のリンカー配列は、ＣＬ／ＣＨ１ドメインのあらゆる長さのあらゆる配列、例えば、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの最初の５〜１２個のアミノ酸残基を含み得るが、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの全ての残基を含まなくてもよい。軽鎖リンカーは、ＣκまたはＣλ由来であり得、重鎖リンカーは、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４、Ｃα１、Ｃα２、Ｃδ、ＣεおよびＣμを含む、いずれかのアイソタイプのＣＨ１から生じ得る。リンカー配列は、Ｉｇ−様タンパク質（例えば、ＴＣＲ、ＦｃＲ、ＫＩＲ）などの他のタンパク質、Ｇ／Ｓに基づく配列、ヒンジ領域由来の配列、および他のタンパク質からの他の天然配列に由来してもよい。
【０３０３】
一実施形態において、定常ドメインを組換えＤＮＡ技術を用いて２つの連結した可変ドメインに連結する。一実施形態において、直列に連結した重鎖可変ドメインを含む配列を重鎖定常ドメインに連結し、直列に連結した軽鎖可変ドメインを含む配列を軽鎖定常ドメインに連結する。一実施形態において、定常ドメインは、それぞれヒト重鎖定常ドメインおよびヒト軽鎖定常ドメインである。一実施形態において、ＤＶＤ重鎖は、さらにＦｃ領域に連結される。このＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域であっても、またはバリアントＦｃ領域であってもよい。別の実施形態において、このＦｃ領域はヒトＦｃ領域である。別の実施形態において、このＦｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥまたはＩｇＤ由来のＦｃ領域を含む。
【０３０４】
一実施形態において、２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを組み合せて、ＤＶＤ結合タンパク質を形成する。ＳＯＳＴなどの特異的標的抗原に結合可能な特異的ＤＶＤ結合タンパク質の詳細な説明、ならびにその作製法を、以下の実施例のセクションに提供する。
【０３０５】
ＩＩＩ．Ｄ．ＤＶＤ結合タンパク質の産生
例えば、宿主細胞からの発現を含む、当技術分野で公知のいくつかの技術のいずれかによって産生されるＤＶＤ結合タンパク質を提供し、その際、ＤＶＤ結合タンパク質重鎖およびＤＶＤ結合タンパク質軽鎖をコードする発現ベクター（複数可）を、標準的な技術によって宿主細胞中にトランスフェクトする。「トランスフェクション」という用語の様々な形態は、原核または真核宿主細胞中への外来ＤＮＡの導入のために一般に使用される多様な技術、例えば、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、およびＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを包含するものとする。原核または真核宿主細胞のいずれかにおいて、本発明のＤＶＤ結合タンパク質を発現させることは可能であるが、ＤＶＤ結合タンパク質は、真核細胞、例えば、哺乳類宿主細胞中で発現させる。なぜなら、このような真核細胞（特に、哺乳類細胞）は原核細胞よりも、正しく折り畳まれ、免疫学的に活性のあるＤＶＤ結合タンパク質を構築し分泌する可能性が高いからである。
【０３０６】
本発明の組換え抗体を発現させるための例示的な哺乳類宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（ＵｒｌａｕｂおよびＣｈａｓｉｎ，（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６−４２２０に記載されており、例えば、Ｒ．Ｊ．Ｋａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｐ．Ａ．Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に記載のＤＨＦＲ選択可能マーカーと共に用いられるｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞、ＳＰ２細胞およびＰＥＲ．Ｃ６細胞が含まれる。ＤＶＤ結合タンパク質をコードする組換え発現ベクターが哺乳類宿主細胞に導入されると、宿主細胞中でのＤＶＤ結合タンパク質の発現を可能にするか、または宿主細胞が増殖している培地中へのＤＶＤタンパク質の分泌を可能にするのに十分な期間、宿主細胞を培養することによってＤＶＤ結合タンパク質が産生される。ＤＶＤ結合タンパク質は、標準的なタンパク質精製方法を用いて、培地から回収できる。
【０３０７】
本発明のＤＶＤ結合タンパク質の組換え発現用の例示的なシステムにおいて、リン酸カルシウムで媒介されるトランスフェクションによって、ＤＶＤ結合タンパク質重鎖およびＤＶＤ結合タンパク質軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターを、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞中に導入する。遺伝子の高レベル転写を誘導するために、組換え発現ベクター内で、ＤＶＤ結合タンパク質の重鎖および軽鎖の遺伝子を、各々ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター制御エレメントへ作動可能に連結する。組換え発現ベクターは、メトトレキサート選択／増幅を用いて、ベクターでトランスフェクトしたＣＨＯ細胞の選択を可能にするＤＨＦＲ遺伝子も保有する。選択した形質転換宿主細胞を培養してＤＶＤ結合タンパク質の重鎖および軽鎖を発現させ、インタクトなＤＶＤ結合タンパク質を培地から回収する。標準的な分子生物学的技術を用いて、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培地からＤＶＤ結合タンパク質を回収する。さらに、本発明は、ＤＶＤ結合タンパク質が合成されるまで適切な培地中で宿主細胞を培養することによって、ＤＶＤ結合タンパク質を合成する方法を提供する。本方法は、さらに、培地からのＤＶＤ結合タンパク質の単離を含み得る。
【０３０８】
ＤＶＤ結合タンパク質の重要な特徴は、ＤＶＤ結合タンパク質が、従来の抗体として、類似の方法で産生および精製され得ることである。ＤＶＤ結合タンパク質の生成は、定常領域の配列修飾も、またはいかなる種類の化学的修飾もなく、所望の二重特異的活性を有する均一な、単一の主産物をもたらす。「二特異的」、「多特異的」および「多特異的多価」の全長の結合タンパク質を作製するための、他の以前に記載された方法は、単一の主要産物をもたらさず、代わりに、集合した不活性な単一特異的、多特異的、多価の全長結合タンパク質と、異なる結合部位の組み合せを有する多価の全長結合タンパク質との混合物の細胞内生産または分泌生産をもたらす。例として、ＭｉｌｌｅｒおよびＰｒｅｓｔａ（ＰＣＴ公開ＷＯ２００１／０７７３４２（Ａ１））に記載の設計に基づいて、重鎖および軽鎖の１６の可能な組み合せが存在する。その結果、タンパク質の僅か６．２５％が、所望の活性形態であり、他の１５の可能な組み合せに対し、単一の主産物または単一の主要産物ではないと思われる。所望の完全な活性をもつタンパク質を、大規模な製造において典型的に使用される標準的クロマトグラフィー技術を用いて、タンパク質の不活性なタンパク質および部分的に活性のあるタンパク質から分離することは、未だ行われていない。
【０３０９】
驚くべきことに、本発明の「二重特異的多価の全長結合タンパク質」の設計は、所望の「二重特異的多価の全長結合タンパク質」を主として構築する二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖をもたらす。
【０３１０】
構築して、発現させたＤＶＤ結合タンパク質分子の少なくとも５０％、少なくとも７５％および少なくとも９０％が、所望の二重特異的四価タンパク質である。本態様は特に、本発明の商用利用を高める。したがって、単一細胞中で二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現させ、「二重特異的四価全長結合タンパク質」の単一主要産物をもたらす方法を提供する。
【０３１１】
単一細胞中で二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現させ、「二重特異的四価全長結合タンパク質」の「主要産物」をもたらす方法であって、この「主要産物」が、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を含む全ての構築されたタンパク質の５０％を上回る方法を提供する。
【０３１２】
単一細胞中で二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現させ、「二重特異的四価全長結合タンパク質」の単一「主要産物」をもたらす方法であって、この「主要産物」が、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を含む全ての構築されたタンパク質の７５％を上回る方法を提供する。
【０３１３】
単一細胞中で二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現させ、「二重特異的四価全長結合タンパク質」の単一「主要産物」をもたらす方法であって、この「主要産物」が、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を含む全ての構築されたタンパク質の９０％を上回る方法を提供する。
【０３１４】
ＩＶ．スクレロスチン結合タンパク質および結合タンパク質産生細胞株の作製
本発明の実施形態において、抗スクレロスチン抗体を含むスクレロスチン結合タンパク質は、例えば、当技術分野で公知のいくつかのインビトロおよびインビボアッセイのうちのいずれか１つにより評価した場合、ＳＯＳＴ活性を低下させるまたは中和する高い能力を示す。好ましくは、スクレロスチン結合タンパク質も、ＳＯＳＴ活性を低下または中和する高い能力を示す。
【０３１５】
一実施形態において、結合タンパク質またはその抗原結合部分は、ヒトスクレロスチンに結合し、その際、この結合タンパク質もしくはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、約０．１ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＳＯＳＴから解離するか、または約１×１０−６Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＳＯＳＴ活性を阻害する。あるいは、この結合タンパク質もしくはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、約１×１０−２ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトスクレロスチンから解離し得るか、または約１×１０−７Ｍ以下のＩＣ５０でヒトスクレロスチン活性を阻害し得る。あるいは、この結合タンパク質もしくはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、約１×１０−３ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトスクレロスチンから解離し得る、または約１×１０−８Ｍ以下のＩＣ５０でヒトスクレロスチン活性を阻害し得る。あるいは、前記結合タンパク質もしくはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、約１×１０−４ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトスクレロスチンから解離し得るか、または約１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０でヒトスクレロスチン活性を阻害し得る。あるいは、この結合タンパク質もしくはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、約１×１０−５ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトスクレロスチンから解離し得るか、または約１×１０−１０Ｍ以下のＩＣ５０でヒトスクレロスチン活性を阻害し得る。あるいは、この結合タンパク質もしくはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、約１×１０−５ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトスクレロスチンから解離し得るか、または約１×１０−１１Ｍ以下のＩＣ５０でヒトスクレロスチン活性を阻害し得る。
【０３１６】
特定の実施形態において、この結合タンパク質は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域などの重鎖定常領域を含む。一実施形態において、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域またはＩｇＧ４重鎖定常領域である。さらに、この抗体は、κ軽鎖定常領域またはλ軽鎖定常領域のいずれかの軽鎖定常領域を含むことが可能である。一実施形態において、この抗体は、κ軽鎖定常領域を含む。あるいは、この抗体部分は、例えば、Ｆａｂ断片または一本鎖Ｆｖ断片であり得る。
【０３１７】
抗体エフェクター機能を変えるためにＦｃ部分のアミノ酸残基を置換することは、当技術分野で公知である（Ｗｉｎｔｅｒら、米国特許第５，６４８，２６０号および同第５６２４８２１号）。抗体のＦｃ部分は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、ＡＤＣＣ、食作用、補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）ならびに抗体および抗原−抗体複合体の半減期／排除速度を媒介する。場合によって、これらのエフェクター機能は治療用抗体に望ましいが、他の場合には、治療目的によっては不必要であるかまたは有害でさえあり得る。特定のヒトＩｇＧアイソタイプ、特にＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、それぞれＦｃγＲおよび補体Ｃ１ｑへの結合を介したＡＤＣＣならびにＣＤＣを媒介する。新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、抗体の循環半減期を決定する非常に重要な成分である。さらに別の実施形態において、抗体のエフェクター機能が変わるように、抗体の定常領域、例えば、抗体のＦｃ領域において少なくとも１個のアミノ酸残基を置換する。
【０３１８】
一実施形態は、抗体または抗体部分を、別の機能的分子（例えば、別のペプチドもしくはタンパク質）へ誘導体化または連結した標識結合タンパク質を提供する。例えば、標識結合タンパク質は、別の抗体（例えば、二特異的抗体もしくはダイアボティ）、検出可能な化学物質、細胞毒性剤、医薬品および／もしくは別の分子（ストレプトアビジンコア領域もしくはポリヒスチジンタグなど）との抗体または抗体部分の会合を媒介できるタンパク質もしくはペプチドなどの１つ以上の他の分子実体へ、（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合またはその他によって）抗体または抗体部分を機能的に連結することによって誘導できる。
【０３１９】
抗体または抗体部分などの結合タンパク質を誘導体化し得る有用な検出可能な化学物質には、蛍光化合物が含まれる。例示的な蛍光検出可能な化学物質には、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニルクロリド、およびフィコエリトリンなどが含まれる。抗体は、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、およびグルコースオキシダーゼなどの検出可能な酵素でも誘導体化され得る。抗体が検出可能な酵素で誘導体化される場合、検出可能な反応産物を生成させるために酵素が使用するさらなる試薬を添加することによって抗体が検出される。例えば、検出可能な化学物質の西洋ワサビペルオキシダーゼが存在する場合、過酸化水素およびジアミノベンジジンの添加は、検出可能な発色反応産物をもたらす。抗体をビオチンで誘導体化し、アビジンまたはストレプトアビジン結合の間接的な測定を通じて検出することもできる。
【０３２０】
別の実施形態は、結晶化された結合タンパク質を提供する。一実施形態において、本明細書で開示されている全抗スクレロスチン抗体およびそれらの断片の結晶、ならびにこのような結晶を含む製剤および組成物を提供する。一実施形態において、結晶化された結合タンパク質は、結合タンパク質の可溶性対応物より長いインビボ半減期を有する。別の実施形態において、結合タンパク質は、結晶化後に生物活性を保持する。
【０３２１】
結晶化された結合タンパク質であって、当技術分野で公知の方法に従って、かつＰＣＴ公開ＷＯ０２０７２６３６に開示されているように産生され得る結合タンパク質を提供する。
【０３２２】
別の実施形態は、抗体またはその抗原結合部分が１つ以上の炭水化物残基を含む、糖鎖付加結合タンパク質を提供する。新生インビボタンパク質産生は、翻訳後修飾として知られるさらなるプロセッシングを受けてもよい。特に、糖（グリコシル）残基は、酵素的に付加でき、このプロセスは糖鎖付加として知られる。得られたタンパク質は、共有結合したオリゴ糖側鎖を有し、糖鎖付加されたタンパク質または糖タンパク質として知られる。
【０３２３】
天然に存在する抗体は、Ｆｃドメイン中および可変ドメイン中に１つ以上の炭水化物残基を有する糖タンパク質である。Ｆｃドメイン中の炭水化物残基は、抗体の抗原結合または半減期に対する影響は最小限であるが、Ｆｃドメインのエフェクター機能に対して重要な影響を及ぼす（Ｒ．Ｊｅｆｆｅｒｉｓ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．，２１：１１−１６（２００５））。これに対して、可変ドメインの糖鎖付加は、抗体の抗原結合活性に対して影響を及ぼし得る。可変ドメイン中の糖鎖付加は、おそらくは立体障害のために、抗体結合親和性に対して負の影響を及ぼし得るか（Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．ら、ＭｏＩ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３０：１３６１−１３６７（１９９３））、または抗原に対する親和性の増加をもたらし得る（Ｗａｌｌｉｃｋ，Ｓ．Ｃ．ら、Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１６８：１０９９−１１０９（１９８８）；Ｗｒｉｇｈｔ，Ａ．ら、ＥＭＢＯ Ｊ．，１０：２７１７−２７２３（１９９１））。
【０３２４】
本発明の一態様は、結合タンパク質のＯ−結合型またはＮ−結合型糖鎖付加部位が変異している糖鎖付加部位変異体を作製することに関する。当業者は、標準的な公知の技術を用いて、このような変異体を作製できる。生物学的活性を保持するが、増加または減少した結合活性を有する糖鎖付加部位変異体を提供する。
【０３２５】
本発明のさらに別の実施形態において、本抗体または抗原結合部分の糖鎖付加は修飾される。例えば、無糖鎖付加グリコシル化抗体（すなわち、糖鎖付加を欠く抗体）を作製できる。例えば、抗原に対する抗体の親和性を増加させるために、糖鎖付加を変更できる。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内の糖鎖付加の１つ以上の部位を変更することによって達成できる。例えば、それによって、その部位の糖鎖付加を除去するために、１つ以上の可変領域の糖鎖付加部位を除去する１つ以上のアミノ酸置換を施すことができる。このような無糖鎖付加は、抗原に対する抗体の親和性を増加させ得る。このようなアプローチは、ＰＣＴ公開ＷＯ２００３／０１６４６６Ａ２ならびに米国特許第５，７１４，３５０号および同第６，３５０，８６１号に、さらに詳しく記載されている。
【０３２６】
さらにまたはあるいは、修飾された結合タンパク質を提供し、結合タンパク質が、フコシル残基の量が減少した低フコシル化抗体（Ｋａｎｄａ，Ｙｕｔａｋａら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００７），１３０（３），３００−３１０参照）または分岐が進んだＧｌｃＮＡｃ構造を有する抗体などの、糖鎖付加の改変型を有するように作製できる。このように変更された糖鎖付加パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増加させることが示されている。このような炭水化物修飾は、例えば、糖鎖付加機構が変化した宿主細胞中で抗体を発現させることによって達成できる。糖鎖付加機構が変化した細胞を提供し、これは、当技術分野で説明されており、組換え抗体を発現させる宿主細胞として使用し、それにより糖鎖付加が変化した抗体を産生できる。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ら（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０；Ｕｍａｎａら、「最適化された抗体依存性細胞傷害活性を有する抗神経芽種ＩｇＧ１の遺伝子工学処理したグリコフォーム（Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｇｌｙｃｏｆｏｒｍｓ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ ＩｇＧ１ ｗｉｔｈ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１７：１７６−１８０（１９９９）、および欧州特許第１，１７６，１９５号；ＰＣＴ公開ＷＯ０３／０３５８３５ならびにＷＯ９９／５４３４２を参照されたい。
【０３２７】
タンパク質の糖鎖付加は、対象のタンパク質のアミノ酸配列およびタンパク質が発現する宿主細胞に依存する。異なる生物は、異なる糖鎖付加酵素（例えば、糖転移酵素およびグリコシダーゼ）を産生し得、利用可能な異なる基質（ヌクレオチド糖）を有し得る。このような要因のために、タンパク質の糖鎖付加パターンおよびグリコシル残基の組成は、特定のタンパク質が発現する宿主系に応じて異なり得る。グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、ｎ−アセチルグルコサミンおよびシアル酸が含まれ得るが、これらに限定されない有用なグリコシル残基を提供する。一実施形態において、糖鎖付加結合タンパク質は、糖鎖付加パターンがヒトであるように、グリコシル残基を含む。
【０３２８】
異なるタンパク質の糖鎖付加は異なるタンパク質特性をもたらし得ることが、当業者に公知である。例えば、酵母などの微生物宿主中で産生され、酵母の内在性経路を用いて糖鎖付加された治療用タンパク質の効力は、ＣＨＯ細胞株などの哺乳類細胞中で発現させた同じタンパク質の効力と比べて低下し得る。このような糖タンパク質はまた、ヒトにおいて免疫原性であり、投与後に、減少したインビボ半減期を示し得る。ヒトおよび他の動物中の特異的な受容体は、特異的なグリコシル残基を認識し、血流からのタンパク質の迅速な除去を促進し得る。他の有害な効果は、タンパク質の折り畳み、溶解度、プロテアーゼに対する感受性、輸送、運搬、区画化、分泌、他のタンパク質または因子による認識、抗原性またはアレルゲン性の変化が含まれ得る。したがって、当業者は、糖鎖付加の特異的な組成およびパターン、例えば、ヒト細胞中もしくは意図される対象動物の種特異的細胞中で産生されるものと同一または少なくとも類似している糖鎖付加組成および糖鎖付加パターンを有する治療用タンパク質を選択し得る。
【０３２９】
宿主細胞のものとは異なる糖鎖付加タンパク質の発現は、異種糖鎖付加酵素を発現するために宿主細胞を遺伝的に修飾することによって達成され得る。当技術分野で公知の技術を使用して、当業者は、ヒトタンパク質の糖鎖付加を示す抗体またはその抗原結合部分を作製できる。例えば、酵母株が天然に存在しない糖鎖付加酵素を発現するように遺伝子組換えされており、これらの酵母株で産生された糖鎖付加タンパク質（糖タンパク質）は、動物細胞、特にヒト細胞のものと同一のタンパク質の糖鎖付加を示す（米国特許出願公開第２００４００１８５９０号および第２００２０１３７１３４号）。
【０３３０】
結合タンパク質に加えて、このような結合タンパク質に対して特異的な抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体を提供する。抗Ｉｄ抗体は、一般的に別の抗体の抗原結合領域に付随する固有の決定基を認識する抗体である。抗Ｉｄは、結合タンパク質またはそのＣＤＲ含有領域で動物を免疫することによって調製できる。免疫された動物は、免疫抗体のイディオタイプ決定基を認識し、これに応答して、抗Ｉｄ抗体を産生する。ＤＶＤ結合タンパク質分子に取り込まれる２つ以上の親抗体に対する抗イディオタイプ抗体を生成し、当技術分野で十分認識されている方法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ、ＥＬＩＳＡ）によって結合研究を確認して、各親抗体のイディオタイプに特異的な抗イディオタイプ抗体もまたＤＶＤ結合タンパク質との関連でイディオタイプ（例えば、抗原結合部位）を認識するということを実証するのはより簡単であり得ることは、すぐにわかる。ＤＶＤ結合タンパク質の２つ以上の抗原結合部位の各々に特異的な抗イディオタイプ抗体は、患者血清中のヒトＤＶＤ結合タンパク質のＤＶＤ結合タンパク質濃度を測定するための理想的な試薬を提供する。例えば、ＤＶＤ結合タンパク質濃度アッセイは、固相（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅチップ、ＥＬＩＳＡプレートなど）にコーティングされた第１の抗原結合領域に対する抗体を用いる「サンドイッチアッセイＥＬＩＳＡフォーマット」を使用して確立でき、その際、すすぎ用緩衝液ですすぎ、血清試料とともにインキュベーションし、もう一度すすぎ工程を行い、最終的に、結合反応の定量化のための酵素でそれ自体標識された、他の抗原結合部位に対する別の抗イディオタイプ抗体とともにインキュベーションする。一実施形態において、２つを超える異なる結合部位を有するＤＶＤ結合タンパク質の場合、２つの最も外側の結合部位（定常領域から最も遠位および近位）に対する抗イディオタイプ抗体は、ヒト血清中のＤＶＤ結合タンパク質濃度を決定する助けとなるだけでなく、インビボでの分子の完全性も示す。各抗Ｉｄ抗体は、さらに別の動物で免疫応答を誘導して、いわゆる抗−抗Ｉｄ抗体を産生する「免疫原」として使用することもできる。
【０３３１】
さらに、ライブラリーのメンバー宿主細胞が変異糖鎖付加パターンを有する目的のタンパク質を産生するように、様々な糖鎖付加酵素を発現するよう改変した宿主細胞のライブラリーを用いて目的のタンパク質を発現させることができることは、当業者なら理解するであろう。次いで、当業者は、特定の新規糖鎖付加パターンを有する目的のタンパク質を選択および単離できる。一実施形態において、特に選択された新規糖鎖付加パターンを有するタンパク質は、改善または変更された生物学的特性を示す。
【０３３２】
Ｖ．スクレロスチン結合タンパク質の使用
本発明のスクレロスチン結合タンパク質、またはその抗原結合部分は、ヒトスクレロスチンに結合できるので、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または組織免疫組織化学などの慣用のイムノアッセイを用いて、（例えば、血清または血漿などの生物学的試料中で）スクレロスチンを検出するために使用することが可能である。本発明は、生物試料中でスクレロスチンを検出するための方法を提供し、この方法は、生物試料を本発明の結合タンパク質、または抗原結合部分と接触させ、スクレロスチンに結合した結合タンパク質（または抗原結合部分）、または非結合の結合タンパク質（または結合部分）のいずれかを検出することを含み、これによって生物試料中のスクレロスチンを検出する。結合したまたは結合していない抗体の検出を容易にするために、結合タンパク質は、検出可能な物質で直接的または間接的に標識される。好適な検出可能な物質としては、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質及び放射性物質が挙げられる。好適な酵素の例としては、ホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ；好適な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが挙げられ；好適な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、イソチオシアン酸フルオレセイン、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミン・フルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリスリンが挙げられ；発光物質の例としては、ルミノールが挙げられ；並びに好適な放射性物質の例としては、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、または１５３Ｓｍが挙げられる。
【０３３３】
結合タンパク質を標識する代わりに、ヒトスクレロスチンは、検出可能な物質で標識されたｒｈＳＯＳＴ標準と非標識ヒトスクレロスチン結合タンパク質を利用する競合免疫アッセイによって生体液中でアッセイされ得る。このアッセイでは、生物試料、標識ｒｈＳＯＳＴ標準、及びヒトスクレロスチン結合タンパク質が組み合わされ、非標識抗体に結合した標識組換えヒトスクレロスチン標準の量が決定される。生物試料中のヒトスクレロスチンの量は、スクレロスチン結合タンパク質に結合した標識ｒｈＳＯＳＴ標準の量に反比例する。同様に、ヒトスクレロスチンはまた、検出可能な物質で標識されたｒｈＳＯＳＴ標準と非標識ヒトスクレロスチン結合タンパク質を利用する競合免疫アッセイによって、生体液中でアッセイすることも可能である。
【０３３４】
提供されている実施形態では、結合タンパク質及びそのスクレロスチン結合部分は、インビトロ及びインビボの双方でヒトスクレロスチン活性を中和できる。したがって、このような結合タンパク質及びそのスクレロスチン結合部分が提供され、例えばｈＳＯＳＴを含有する細胞培養において、ヒト対象において、または抗体が交差反応するスクレロスチンを有するその他の哺乳動物対象において、ｈＳＯＳＴ活性を阻害するために使用可能である。一実施形態は、ｈＳＯＳＴ活性を阻害するための方法を提供し、この方法は、ｈＳＯＳＴ活性が阻害されるように、ｈＳＯＳＴをスクレロスチン結合タンパク質またはその結合部分と接触させることを含む。例えば、ｈＳＯＳＴを含有する、またはｈＳＯＳＴを含有することが疑われる細胞培養において、スクレロスチン結合タンパク質またはその結合部分を培養基に添加し、培養中のｈＳＯＳＴ活性を阻害できる。
【０３３５】
別の実施形態は、スクレロスチン活性が有害である疾患または障害に罹っている対象から有利に、対象におけるｈＳＯＳＴ活性を低減するための方法を提供する。そのような疾患または障害に罹っている対象においてスクレロスチン活性を低減するための方法が提供され、この方法は、対象においてスクレロスチン活性が低減されるように、対象に抗体または抗体部分を投与することを含む。一実施形態では、スクレロスチンはヒトスクレロスチンであり、対象は、ヒト対象である。あるいは、対象は、抗体が結合できるスクレロスチンを発現する哺乳動物であることが可能である。なお更に、対象は、スクレロスチンが導入された（例えば、スクレロチンの投与によって、またはＳＯＳＴ導入遺伝子の発現によって）哺乳動物であることが可能である。スクレロチン結合タンパク質は、治療目的でヒト対象に投与可能である。更に、本発明の結合タンパク質は、獣医学目的で、またはヒトの疾患の動物モデルとして、抗体が結合できるスクレロスチンを発現している非ヒト哺乳動物に投与されてもよい。後者に関しては、このような動物モデルは、抗体の治療有効性を評価するため（例えば、投与量の試験及び投与の時間経過）に有用であり得る。
【０３３６】
「スクレロスチン活性が有害である障害」という用語は、本障害に罹患している対象におけるスクレロスチンの存在が、障害の病態生理の原因であるかまたは障害の悪化に寄与する因子であるかのいずれかが示されたまたは疑われる疾患及びその他の障害を包含することを意図している。したがって、スクレロスチン活性が有害である障害とは、スクレロスチン活性の低減が障害の症状及び／または進行を軽減することが予測される障害である。このような障害は、例えば、この障害に罹患している対象の生物学的液体中のスクレロスチンの濃度の増加（例えば、対象の血清、血漿、滑液中のスクレロスチンの濃度の増加）によって立証され得、これは、例えば、上記のように抗−スクレロスチン抗体を用いて検出され得る。本発明の抗体で治療され得る障害の非限定的な例として、本発明の抗体の医薬組成物に関連する以下のセクションで説明されるような障害が含まれる。
【０３３７】
スクレロスチン（例えば、ヒトスクレロスチン）単独にまたは複数の抗原（例えば、ヒトスクレロスチン及び別の非スクレロスチン抗原）に結合可能なＤＶＤ−結合タンパク質を提供する。したがって、ＤＶＤ−結合タンパク質は、ヒトスクレロスチンの活性及び別の標的抗原の活性を遮断または低減できる。このようなその他の標的抗原としては、可溶性標的（例えば、ＴＮＦ）及び細胞表面受容体標的（例えば、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ）を挙げることができる。
【０３３８】
このようなその他の抗原としては、限定されないが、公的に利用可能なデータベースに収載されている標的を含み、このデータベースは、ワールドワイドウェブ上で利用可能なデータベースを含む。
これら標的データベースは、以下のものを含む：
治療標的（ｈｘｉｎ．ｃｚ３．ｎｕｓ．ｅｄｕ．ｓｇ／ｇｒｏｕｐ／ｃｊｔｔｄ／ｔｔｄ．ａｓｐ）；
サイトカイン及びサイトカイン受容体（ｈｗｗｗ．ｃｙｔｏｋｉｎｅｗｅｂｆａｃｔｓ．ｃｏｍ／，  ｈｗｗｗ．ｃｏｐｅｗｉｔｈｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．ｄｅ／ｃｏｐｅ．ｃｇｉ及びｈｃｍｂｉ．ｂｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／ｃｍｂｉｄａｔａ／ｃｇｆ／ＣＧＦ＿Ｄａｔａｂａｓｅ／ｃｙｔｏｋｉｎｅ．ｍｅｄｉｃ．ｋｕｍａｍｏｔｏ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ＣＦＣ／ｉｎｄｅｘＲ．ｈｔｍｌ）；
ケモカイン（ｈｃｙｔｏｋｉｎｅ．ｍｅｄｉｃ．ｋｕｍａｍｏｔｏ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ＣＦＣ／ＣＫ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ．ｈｔｍｌ）；
ケモカイン受容体及びＧＰＣＲ（ｈｃｓｐ．ｍｅｄｉｃ．ｋｕｍａｍｏｔｏ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ＣＳＰ／Ｒｅｃｅｐｔｏｒ．ｈｔｍｌ，  ｈｗｗｗ．ｇｐｃｒ．ｏｒｇ／７ｔｍ／）；
嗅覚受容体（ｈｓｅｎｓｅｌａｂ．ｍｅｄ．ｙａｌｅ．ｅｄｕ／ｓｅｎｓｅｌａｂ／ＯＲＤＢ／ｄｅｆａｕｌｔ．ａｓｐ）；
受容体（ｈｗｗｗ．ｉｕｐｈａｒ−ｄｂ．ｏｒｇ／ｉｕｐｈａｒ−ｒｄ／ｌｉｓｔ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍ）；
癌標的（ｈｃｇｅｄ．ｈｇｃ．ｊｐ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｉｎｐｕｔ．ｃｇｉ）；
潜在的な抗原標的として分泌されるタンパク質（ｈｓｐｄ．ｃｂｉ．ｐｋｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／）；
タンパク質キナーゼ（ｈｓｐｄ．ｃｂｉ．ｐｋｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／）；及び
ヒトＣＤマーカー（ｈｔｔｐ：／／ｃｏｎｔｅｎｔ．ｌａｂｖｅｌｏｃｉｔｙ．ｃｏｍ／ｔｏｏｌｓ／６／１２２６／ＣＤ＿ｔａｂｌｅ＿ｆｉｎａｌ＿ｌｏｃｋｅｄ．ｐｄｆ）及び（Ｚｏｌａ  Ｈ著、２００５年、ＣＤ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２００５：ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｂｌｏｏｄ、１０６：３１２３−６）。
【０３３９】
ＤＶＤ−結合タンパク質は、有効性／安全性を増強し、及び／または患者の適用範囲を増大させるために、２つまたはそれ以上の異なる標的、すなわち、ｈＳＯＳＴ、及び１つ以上のその他の非−ＳＯＳＴ標的抗原を同時に遮断するための治療剤として有用である。このような標的としては、可溶性標的（ＴＮＦ）及び細胞表面受容体標的（ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ）が含まれ得る。
【０３４０】
これに加えて、本発明のＤＶＤ−結合タンパク質は、細胞内送達（インターナライジング受容体及び細胞内分子をターゲティングする）、脳内への送達（血液脳関門を横切るために、トランスフェリン受容体及びＣＮＳ疾患媒介物質をターゲティングする）を含む組織特異的送達（増強された局所ＰＫにより、より高い有効性及び／またはより低い毒性を得るために、組織マーカー及び疾患媒介物質を標的にする）のために使用可能である。ＤＶＤ−結合タンパク質はまた、抗原の非中和エピトープへの結合を介してその抗原を特異的な場所に送達するための担体タンパク質としての役割を果たすこともでき、並びにこの抗原の半減期を増加させることもできる。更に、ＤＶＤ−結合タンパク質は、患者に埋め込まれた医療装置に物理的に結合され、またはこれら医療装置を標的にするよう設計できる（Ｂｕｒｋｅ、Ｓａｎｄｒａ  Ｅ；Ｋｕｎｔｚ、Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｅ；Ｓｃｈｗａｒｔｚ、Ｌｅｗｉｓ  Ｂ著、Ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓｕ  ｅｌｕｔｉｎｇ  ｓｔｅｎｔｓ、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（２００６）、５８（３）、４３７−４４６；Ｓｕｒｆａｃｅ  ｃｏａｔｉｎｇｓ  ｆｏｒ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄ，Ｈ．Ｆ．；Ｂｌａｎｃｈｅｍａｉｎ，Ｎ．；Ｍａｙｅｒ，Ｇ．；Ｃｈａｉ，Ｆ．；Ｌｅｆｅｂｖｒｅ，Ｍ．；Ｂｏｓｃｈｉｎ，  Ｆ．著、Ｓｕｒｆａｃｅ  ａｎｄ  Ｃｏａｔｉｎｇｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００６）、２００（２２−２３）、６３１８−６３２４；Ｗｕら著、“Ｄｒｕｇ／ｄｅｖｉｃｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｌｏｃａｌ  ｄｒｕｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｐｒｏｐｈｙｌａｌｉｓ”、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、２７：２４５０−２４６７（２００６）；Ｍａｒｑｕｅｓら著、“Ｍｅｄｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗｏｒｋ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃ  Ｄｅｖｉｃｅｓ”、第２１章、Ｉｎ  Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、（Ｒｅｉｓら編集）（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  ＬＬＣ，  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、２００５）３７７−３９７頁を参照されたい）。簡単に言うと、適切なタイプの細胞を医療用インプラントの部位に誘導することで、正常な組織機能の治癒及び回復を促進できる。あるいは、装置に連結された、または装置を標的とするＤＶＤ−結合タンパク質によって、装置移植時に放出される媒介物質（限定されないがサイトカインを含める）の阻害もまた提供される。例えば、ステントは、封鎖された動脈を一掃し、心筋への血液の流れを改善するために、介入的心臓病学において長年にわたって使用されてきた。しかしながら、従来のベアメタルステントは、一部の患者では再狭窄（処置した領域における動脈の再狭化）を引き起こすことが知られており、血液凝固に繋がる場合がある。最近、抗ＣＤ３４抗体でコーティングされたステントが、血液全体を循環している内皮前駆細胞（ＥＰＣ）を捕捉することによって再狭窄を低減し血液凝固の発生を予防することが報告されている。内皮細胞は、血管に沿って整列している細胞であり、血液を滑らかに流動させる。ＥＰＣはステントの硬質表面に付着して滑らかな層を形成し、この層は、治癒を促進するのみならず、従来のステントの使用に付随してきた合併症である再狭窄及び血液凝固を予防する（Ａｏｊｉら著、２００５、Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ．、４５（１０）：１５７４−９）。ステントを必要としている患者の転帰を改善することに加えて、心血管バイパス手術を必要としている患者に対しても改善が示唆されている。例えば、抗ＥＰＣ抗体でコーティングされた人工血管導管（人工動脈）は、バイパス手術移植片のために、患者の脚部または腕部からの動脈を使用する必要性を排除する。このことが手術及び麻酔時間を減らし、これにより冠動脈手術死が低下するであろう。ＤＶＤ−結合タンパク質は、細胞動員を容易にするために、埋め込まれた装置上にコーティングされた細胞表面マーカー（ＣＤ３４など）及びタンパク質（または、限定されないが、タンパク質、脂質及び多糖類を含むあらゆる種類のエピトープ）に結合するように設計される。このようなアプローチはまた、一般的に、その他の医療用インプラントに対しても適用可能である。あるいは、ＤＶＤ−結合タンパク質は、医療装置上にコーティングでき、埋め込みの際及び装置から全てのＤＶＤが放出された際（または、既に装填されたＤＶＤ−結合タンパク質の老化および変性を含む、追加の新鮮なＤＶＤ−結合タンパク質を必要とする全てのその他の要請に応じて）、装置は、患者への新鮮なＤＶＤ−結合タンパク質の全身投与によって、再充填可能であり、この場合、ＤＶＤ−結合タンパク質は、結合部位の１セットで目的の標的（サイトカイン、細胞表面マーカー（ＣＤ３４など）等）に結合し、かつ結合部位の他のセットで装置上にコーティングされた標的（タンパク質、あらゆる種類のエピトープ（脂質、多糖類及びポリマーを含むが、これらに限定されない））に結合するよう設計されている。この技術は、コーティングされたインプラントの有用性を高める利点を有している。
【０３４１】
Ｖ．Ａ．様々な疾患におけるＤＶＤ−結合タンパク質の使用
本発明のＤＶＤ−結合タンパク質は、様々な疾患を治療するための治療分子として有用である。このようなＤＶＤ分子は、特定の疾患に関与する１つ以上の標的に結合できる。様々な疾患におけるこのような標的の例が、以下に記載されている。
【０３４２】
ＶＩ．ヒト自己免疫及び炎症性応答
一態様では、本発明のＤＶＤ−結合タンパク質は、ヒトスクレロスチン並びにＣ５、ＣＣＬ１  （Ｉ−３０９）、ＣＣＬ１１（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ｍｃｐ−４）、ＣＣＬ１５  （ＭＩＰ−１ｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ−４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２（ｍｃｐ−１）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａ）、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ−２）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ−１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−２）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１ｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ｍｃｐ−３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ−ＴＡＣ／ＩＰ−９）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ−７８／ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６  （ＧＣＰ−２）、ＣＸＣＬ９、ＩＬ１３、ＩＬ８、ＣＣＬ１３  （ｍｃｐ−４）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸ３ＣＲ１、ＩＬ８ＲＡ、ＸＣＲ１（ＣＣＸＣＲ１）、ＩＦＮＡ２、ＩＬ１０、ＩＬ１３、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ１Ｆ５、ＩＬ１Ｆ６、ＩＬ１Ｆ７、ＩＬ１Ｆ８、ＩＬ１Ｆ９、ＩＬ２２、ＩＬ５、ＩＬ８、ＩＬ９、ＬＴＡ、ＬＴＢ、ＭＩＦ、ＳＣＹＥ１（内皮単球活性化サイトカイン）、ＳＰＰ１、ＴＮＦ、ＴＮＦＳＦ５、ＩＦＮＡ２、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＡＢＣＦ１、ＢＣＬ６、Ｃ３、Ｃ４Ａ、ＣＥＢＰＢ、ＣＲＰ、ＩＣＥＢＥＲＧ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ８ＲＢ、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＯＬＬＩＰ、ＦＡＤＤ、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＭＹＤ８８、ＮＣＫ２、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ４、ＴＲＡＦ５、ＴＲＡＦ６、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ１Ｂ、ＡＣＶＲ２、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＡＣＶＲＬ１、ＣＤ２８、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３Ｚ、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＮＲ１、ＣＴＬＡ４、ＣＹＳＬＴＲ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＦＣＧＲ３Ａ、ＧＰＲ４４、ＨＡＶＣＲ２、ＯＰＲＤ１、Ｐ２ＲＸ７、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＢＬＲ１、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ４、ＧＰＲ２、ＳＣＹＥ１、ＳＤＦ２、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＡＭＨ、ＡＭＨＲ２、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２、Ｃ１９ｏｒｆ１０  （ＩＬ２７ｗ）、ＣＥＲ１、ＣＳＦ１、ＣＳＦ２、ＣＳＦ３、ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８、ＦＧＦ２、��ＦＩ１、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ＩＧＦ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１１、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１５、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒ、ＩＬ１８、ＩＬ１８Ｒ１、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＫＩＴＬＧ、ＬＥＰ、ＬＴＡ、ＬＴＢ、ＬＴＢ４Ｒ、ＬＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ、ＭＩＦ、ＮＰＰＢ、ＰＤＧＦＢ、ＴＢＸ２１、ＴＤＧＦ１、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＧＦＢＩ、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３、ＴＨ１Ｌ、ＴＮＦ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＳＦ４、ＴＮＦＳＦ５、ＴＮＦＳＦ６、ＴＮＦＳＦ１１、ＶＥＧＦ、ＺＦＰＭ２、及びＲＮＦ１１０（ＺＮＦ１４４）を含む、一般的な自己免疫及び炎症性応答に関与しているとされる１つ以上の抗原に結合可能である。
【０３４３】
ＶＩ．Ａ．喘息
アレルギー性喘息は、好酸球増加、杯細胞異性化、上皮細胞の変化、気道過敏症（ＡＨＲ）、並びにＴｈ２及びＴｈ１サイトカイン発現、並びに上昇した血清ＩｇＥレベルの存在により特徴付けられる。気道炎症が、喘息の発症機序の根底をなす重要な因子であることは、現在では広く受け入れられており、この発症機序はＴ細胞、Ｂ細胞、好酸球、肥満細胞、及びマクロファージなどの炎症性細胞、並びにサイトカイン及びケモカインなどの分泌されるこれらの媒介物質の複雑な相互作用を含む。コルチコステロイドは、今日、喘息に対する最も重要な抗炎症治療であるが、それらの作用機序は非特異的であり、特に幼児患者集団では、安全上の問題が存在する。したがってより特異的かつ標的化された療法の開発が必要とされている。
【０３４４】
炎症及びＡＨＲの双方が評価され得るＯＶＡ誘発喘息マウスモデルなどの動物モデルが、当該技術分野で既知であり、様々なＤＶＤ−結合タンパク質の喘息を治療する能力を判定するために使用され得る。喘息を研究するための動物モデルは、Ｃｏｆｆｍａｎら著、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００５）、２０１（１２）、１８７５−１８７９；Ｌｌｏｙｄら著、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１）、７７、２６３−２９５；Ｂｏｙｃｅら著、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００５）２０１（１２）、１８６９−１８７３；及びＳｎｉｂｓｏｎら著、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００５）、３５（２）、１４６−５２に開示されている。これら標的対の定型的な安全性評価に加えて、免疫抑制の程度に対する特異的検査が保証され、最適な標的対を選択する上で有用であり得る（Ｌｕｓｔｅｒら著、Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ（１９９４）、９２（１−３）、２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓら著、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ（１９９２）、７７  ９９−１０２；  Ｈａｒｔら著、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１）、１０８（２）、２５０−２５７を参照されたい）。
【０３４５】
一態様は、ＳＯＳＴ及び１つ以上の、例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−１８、ＩＬ−５Ｒ（α）、ＴＮＦＳＦ４、ＩＬ−４Ｒ（α）、インターフェロンα、エオタキシン、ＴＳＬＰ、ＰＡＲ−２、ＰＧＤ２、またはＩｇＥの２つに結合できるＤＶＤ−結合タンパク質を提供する。一実施形態は、喘息の治療に有益な治療薬として、二重特異的抗スクレロスチン／ＴＮＦα  ＤＶＤ結合タンパク質を含む。
【０３４６】
ＶＩ．Ｂ．リウマチ性関節炎（ＲＡ）
全身性疾患であるリウマチ性関節炎（ＲＡ）は、関節の滑膜における慢性炎症反応により特徴付けられ、軟骨の変性及び関節近接部骨の浸食に関連する。ＴＮＦ、ケモカイン、及び成長因子を含む多くの炎症誘発性サイトカインが、罹患した関節中で発現する。ＲＡのマウスモデルへの抗ＴＮＦ抗体またはｓＴＮＦＲ融合タンパク質の全身投与は、抗炎症性及び関節保護性であることが示された。スクレロスチンを含む様々なサイトカインは、ＲＡに関与していると考えられている。ＲＡ患者におけるＴＮＦの活性が、静脈内投与されたキメラ抗−ＴＮＦ  ｍＡｂであるインフリキシマブで遮断されたという臨床的調査（Ｈａｒｒｉｍａｎ  Ｇ、Ｈａｒｐｅｒ  ＬＫ、Ｓｃｈａｉｂｌｅ  ＴＦ、１９９９、Ｓｕｍｍａｒｙ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｕｓｉｎｇ  ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ，ａｎ  ａｎｔｉ−ＴＮＦａｌｐｈａ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ、Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．、５８  Ｓｕｐｐｌ：Ｉ６１−４）は、ＴＮＦがＩＬ−６、ＩＬ−８、ＭＣＰ−１、及びＶＥＧＦ産生、免疫及び炎症性細胞の関節への動員、血管形成、並びにマトリックスメタロプロテイナーゼ−１及び−３の血中レベルの減少を調節するという証拠を提供した。リウマチ性関節炎における炎症経路のよりよい理解は、リウマチ性関節炎に関与するその他の治療標的の同定につながった。過去に、インターロイキン−６拮抗薬（中外、ロシェ製薬によって開発されたＬ−６受容体抗体ＭＲＡ（Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｎｏｒｉｈｉｒｏら著、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ、（２００４）、５０（６）：１７６１−１７６９を参照））、ＣＴＬＡ４Ｉｇ（アバタセプト、Ｇｅｎｏｖｅｓｅら著、（２００５）“Ａｂａｔａｃｅｐｔ  ｆｏｒ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｔｏ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ”、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３５３：１１１４−２３）、及び抗−Ｂ細胞療法（リツキシマブ、Ｏｋａｍｏｔｏ  Ｈ、Ｋａｍａｔａｎｉ  Ｎ著、（２００４）“Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ｆｏｒ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ”、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３５１：１９０９）などの有望な治療法は、無作為化対照臨床試験において既に試験されてきた。スクレロスチン並びにＩＬ−１５及びＩＬ−８などのその他のサイトカインは、ＲＡ動物モデルを用いて、重要な役割を果たすものとして特定されている（治療用抗体ＨｕＭａｘ−ＩＬ＿１５、ＡＭＧ７１４、Ｂａｓｌｕｎｄ，Ｂｏら著、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（２００５）、５２（９）：２６８６−２６９２を参照）。抗−ＴＮＦとスクレロスチンなどのその他の媒介物質を組み合わせる二重特異的抗体療法は、臨床的有効性及び／または患者の適用範囲を増大する上で大きな可能性を秘めている。例えば、ＴＮＦ及びＶＥＧＦ（両者共にＲＡの病態生理に関与している）の双方を遮断することは、炎症及び血管新生を一掃できる可能性を秘めている。ＴＮＦ−α及びスクレロスチンを遮断できるＤＶＤ−結合タンパク質も想定される。これら標的対の定型的な安全性評価に加えて、免疫��制の程度に対する特異的検査が保証され、最適の標的対を選択する上で有用であり得る（Ｌｕｓｔｅｒら著、Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ（１９９４）、９２（１−３）、２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓら著、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔａｎｄｉｚａｔｉｏｎ（１９９２）、４４  ９９−１０２；Ｈａｒｔら著、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１）、１０８（２）、２５０−２５７を参照）。ＤＶＤ−結合タンパク質がリウマチ性関節炎の治療に有用であるかどうかは、コラーゲン誘発関節炎マウスモデルなどの前臨床動物ＲＡモデルを用いて評価可能である。その他の有用なマウスモデルもまた、当該技術分野で周知である（Ｂｒａｎｄ  ＤＤら著、Ｃｏｍｐ．Ｍｅｄ．、（２００５）、５５（２）：１１４−２２を参照）。ヒト及びマウス相同分子種に対する親抗体の交差反応性（例えば、ヒト及びマウスＴＮＦ、ヒト及びマウスＩＬ−１５等に対する反応性）に基づいて、マウスＣＩＡモデルにおける有効性試験が、「適合サロゲート抗体」由来ＤＶＤ−結合タンパク質を用いて行われてもよく、簡単に言うと、２つ（またはそれ以上）のマウス標的特異的抗体に基づくＤＶＤ−結合タンパク質が、ヒトＤＶＤ−結合タンパク質構築に使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特性に可能な限りの範囲で適合されてもよい（類似した親和性、類似した中和効力、類似した半減期等）。
【０３４７】
一実施形態は、ヒトスクレロスチン及び別の非スクレロスチン標的に結合するＤＶＤ−結合タンパク質を提供し、このタンパク質は、ＳＯＳＴが関与しているその他の疾患の治療に使用されてもよい。このような疾患としては、ＳＬＥ、多発性硬化症（ＭＳ）、敗血症、様々な神経疾患、及び癌（子宮頸癌、乳癌、胃癌を含める）が挙げられるが、これらに限定されない。スクレロスチンが関与している疾患及び障害の更に広範囲なリストもまた、以下に提供される。
【０３４８】
一実施形態は、ｈｕＳＯＳＴ並びにＴＮＦα、ＩＬ−１２、ＴＷＥＡＫ、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１３、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−１８、ＶＥＧＦ、ＶＬＡ−４、ＴＮＦβ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ２００、ＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、Ｃ５、ＣＤ５２、スクレロスチン、またはＣＣＲ２の１つ以上の標的に結合できるＤＶＤ−結合タンパク質を提供する。
【０３４９】
ＶＩ．Ｃ．ＳＬＥ（狼瘡）
ＳＬＥの免疫病原性の特徴は、ポリクローナルＢ細胞活性化であり、これはグロブリン過剰血症、自己抗体の産生及び免疫複合体形成につながる。基礎的な異常は、全身性Ｔ細胞調節不全によりＴ細胞が禁止Ｂ細胞クローンを抑制できないことにあると思われる。これに加えて、Ｂ細胞及びＴ細胞の相互作用は、第２のシグナルを開始するＩＬ−１０並びにＣＤ４０とＣＤ４０Ｌ及びＢ７及びＣＤ２８とＣＴＬＡ−４などの同時刺激分子群などのいくつかのサイトカインによって促進される。これらの相互作用は、免疫複合体及びアポトーシス物質の食作用性排除の障害と共に、結果として生じる組織損傷を伴う免疫応答を永続化させる。
【０３５０】
一態様は、ヒトスクレロスチン及びＳＬＥに関与すると考えられる以下の抗原の１つ以上に結合できるＤＶＤ−結合タンパク質を提供する：Ｂ細胞標的化療法：ＣＤ−２０、ＣＤ−２２、ＣＤ−１９、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８０、ＨＬＡ−ＤＲＡ、ＩＬ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＮＦＳＦ５、ＴＮＦＳＦ６、ＢＬＲ１、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ＩＣＯＳＬ、ＩＧＢＰ１、ＭＳ４Ａ１、ＲＧＳ１、ＳＬＡ２、ＣＤ８１、ＩＦＮＢ１、ＩＬ１０、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＳＦ５、ＡＩＣＤＡ、ＢＬＮＫ、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ−６ＳＴ、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ４、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＫＬＦ６、ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＤＰＰ４、ＦＣＥＲ２、ＩＬ２ＲＡ、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＲ２、ＩＬ１Ｒ２、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＭＳ４Ａ１、ＳＴ６ＧＡＬ１、ＣＤ１Ｃ、ＣＨＳＴ１０、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＤＲＡ、及びＮＴ５Ｅ；同時刺激シグナル：ＣＴＬＡ４またはＢ７．１／Ｂ７．２；Ｂ細胞生存の阻害：ＢｌｙＳ、ＢＡＦＦ；補体不活性化：Ｃ５；サイトカイン調節：重要な原理は、いずれの組織における正味の生物学的応答も炎症誘発性サイトカインまたは抗炎症性サイトカインの局所的レベルの間でのバランスの結果であるということである（Ｓｆｉｋａｋｉｓ  ＰＰら著、２００５  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  １７：５５０−７を参照）。ＳＬＥは、血清中のＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０の実証された上昇を伴う、Ｔｈ−２によって誘起される疾患であると考えられる。ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＦＮ−α、またはＴＮＦ−αに結合可能なＤＶＤ−結合タンパク質もまた想定される。本明細書で論述されている標的の組み合わせは、多数の狼瘡前臨床モデルで検査され得るＳＬＥに対する治療的有効性を増強させるであろう（Ｐｅｎｇ  ＳＬ、（２００４）、Ｍｅｔｈｏｄ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、１０２：２２７−７２を参照）。ヒト及びマウスの相同分子種に対する親抗体の交差反応性（例えば、ヒト及びマウスＣＤ２０、ヒト及びマウスインターフェロンアルファ等に対する反応性）に基づいて、マウス狼瘡モデルにおける有効性試験が、「適合サロゲート抗体」由来ＤＶＤ−結合タンパク質で行われてもよく、簡単に言うと、２つ（またはそれ以上の）マウス標的特異的抗体に基づくＤＶＤ−結合タンパク質が、ヒトＤＶＤ−結合タンパク質構築に使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特性に可能な限りの範囲で適合されてもよい（類似した親和性、類似した中和効力、類似した半減期等）。
【０３５１】
ＶＩ．Ｄ多発性硬化症（ＭＳ）
多発性硬化症（ＭＳ）は、主に病因が不明な複雑なヒト自己免疫型疾患である。神経系全体に渡るミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）の免疫学的破壊が、多発性硬化症の主な病因である。ＭＳはＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞による浸潤を伴う複雑な病変であり、中枢神経系内の応答を必然的に伴う。サイトカイン、反応性窒素種及び同時刺激分子のＣＮＳにおける発現は、全てがＭＳにおいて報告されている。主に検討すべき点は、自己免疫の発現に寄与する免疫学的機序である。特に、抗原発現、サイトカイン及び白血球の相互作用、並びに調節性Ｔ細胞は、Ｔｈ１及びＴｈ２細胞などのその他のＴ−細胞の平衡／調整を助けており、治療標的の同定のための重要な領域である。
【０３５２】
ＩＬ−１２は、ＡＰＣによって産生され、Ｔｈ１エフェクター細胞の分化を促進する炎症誘発性サイトカインである。ＩＬ−１２は、ＭＳを有する患者及びＥＡＥ罹患動物中の発達する病変中で産生される。以前に、ＩＬ−１２経路における妨害が齧歯類においてＥＡＥを効果的に抑制すること、並びに抗−ＩＬ−１２  ｍＡｂを用いるＩＬ−１２ｐ４０のインビボ中和がコモンマーモセットのミエリン誘発ＥＡＥモデルで有益な効果を有することが示された。
【０３５３】
ＴＷＥＡＫはＴＮＦファミリーのメンバーであり、中枢神経系（ＣＮＳ）中で恒常的に発現され、細胞型に応じて、炎症誘発性、増殖性またはアポトーシス効果を有する。その受容体であるＦｎ１４は、内皮細胞、反応性星状膠細胞及びニューロンによって、ＣＮＳ中で発現している。ＴＷＥＡＫ及びＦｎ１４ｍＲＮＡの発現は、実験的な自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の間に、脊髄中で増加した。ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）でＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて誘発されたＥＡＥの抗ＴＷＥＡＫ抗体治療は、マウスが初回刺激相後に治療された場合、疾患の重篤性及び白血球浸潤の低減をもたらした。
【０３５４】
一態様は、ＳＯＳＴ並びに、ＩＬ−１２、ＴＷＥＡＫ、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１３、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−１８、ＶＥＧＦ、ＶＬＡ−４、ＴＮＦ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ２００、ＩＦＮガンマ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、Ｃ５、ＣＤ５２、オステオポンチン、及び／またはＣＣＲ２を含む１つ以上の、例えば２つの標的に結合できるＤＶＤ−結合タンパク質を提供する。一実施形態は、ＭＳの治療に対して有益な治療剤として、二重特異的抗−スクレロスチン／ＴＮＦ−α  ＤＶＤ−結合タンパク質を含む。
【０３５５】
ＭＳを治療するためのＤＶＤ−結合タンパク質分子の有用性を評価するためのいくつかの動物モデルが当該技術分野で既知である（Ｓｔｅｉｎｍａｎ  Ｌら著、（２００５）、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２６（１１）：５６５−７１；Ｌｕｂｉｎ  ＦＤら著、（１９８５）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．、８（３）：１９７−２０８；Ｇｅｎａｉｎ  ＣＰら著、（１９９７）、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．、７５（３）：１８７−９７；Ｔｕｏｈｙ  ＶＫら著、（１９９９）、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．、１８９（７）：１０３３−４２；Ｏｗｅｎｓ  Ｔら著、（１９９５）、Ｎｅｕｒｏｌ  Ｃｌｉｎ．１３（１）：５１−７３；及び’ｔＨａｒｔら著、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１７５（７）：４７６１−４７６８（２００５）を参照）。ヒト及び動物の相同分子種に対する親抗体の交差反応性（例えば、ヒト及びマウスＳＯＳＴ、ヒト及びマウスＴＷＥＡＫ等に対する反応性）に基づいて、マウスＥＡＥモデルにおける有効性試験が、「適合サロゲート抗体」由来ＤＶＤ−結合タンパク質で行われてもよく、簡単に言うと、２つ（またはそれ以上の）マウス標的特異的抗体に基づくＤＶＤ−結合タンパク質が、ヒトＤＶＤ−結合タンパク質構築に使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特性に可能な限りの範囲で適合されてもよい（類似した親和性、類似した中和効力、類似した半減期等）。同じ概念が、その他の非齧歯類動物種の動物モデルに当てはまり、ここでは「適合サロゲート抗体」由来ＤＶＤ−結合タンパク質は、予期される薬理学及び可能な安全性研究のために選択される。これら標的対の定型的な安全性評価に加えて、免疫抑制性の程度に対する特異的検査が保証され、かつ最適な標的対を選択する上で有用であり得る（Ｌｕｓｔｅｒら著、Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ（１９９４）、９２（１−３）、２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓら著、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ（１９９２）、７７  ９９−１０２；Ｊｏｎｅｓ  Ｒ、２０００Ｒｏｖｅｌｉｚｕｍａｂ（ＩＣＯＳ  Ｃｏｒｐ．）、ＩＤｒｕｓ、３（４）：４４２−６を参照）。
【０３５６】
ＶＩ．Ｅ．敗血症
敗血症の病態生理は、グラム陰性菌（リポ多糖［ＬＰＳ］、脂質Ａ、エンドトキシン）及びグラム陽性菌（リポテイコ酸、ペプチドグリカン）の双方の外膜成分によって開始される。これら外膜成分は、単球の表面上のＣＤ１４受容体に結合可能である。最近報告があったトール様受容体によって、その後シグナルが細胞に送達され、炎症誘発性サイトカインである腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）及びインターロイキン−１（ＩＬ−１）の最終的な産生に進む。圧倒的な炎症応答及び免疫応答は、敗血症ショックの本質的な特徴であり、敗血症によって誘導される組織損傷、多臓器不全、及び死亡の病因において、中心的な役割を果たす。サイトカイン、特に腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）及びインターロイキン（ＩＬ−１）は、敗血症ショックの極めて重要な媒介物質であることが示されている。これらのサイトカインは、組織に及ぼす直接的毒性効果を有し、これらはまた、ホスフォリパーゼＡ２も活性化させる。これらの効果及びその他の効果が血小板活性化因子の濃度上昇、酸化窒素合成酵素活性の促進、好中球による組織浸潤の促進、及び好中球活性の促進をもたらす。
【０３５７】
敗血症及び敗血症ショックの治療は、臨床的な難題のままであり、炎症性応答を標的とした生体応答修飾物質（すなわち、抗ＴＮＦ、抗ＭＩＦ）を用いた最近のプロスペクティブ試験では、若干の臨床的有効性が示されたに過ぎなかった。最近、関心は、免疫抑制の付随期間を逆転させることを目指す療法にシフトしてきている。実験動物及び重病の患者における研究は、リンパ系臓器及び一部の実質組織の増加したアポトーシスが、この免疫抑制、アネルギー（抗原反応不顕性）、及び臓器不全に寄与することを立証している。敗血症症候群の間に、リンパ球アポトーシスは、ＩＬ−２の不在によってまたはグルココルチコイド、グランザイム、もしくはいわゆる「死亡（ｄｅａｔｈ）」サイトカイン（腫瘍壊死因子αまたはＦａｓリガンド）の放出によって惹起され得る。アポトーシスは、Ｂｃｌ−２ファミリーのアポトーシス促進性のメンバー及びアポトーシス抑制性のメンバーによって影響を受け得る、細胞質及び／またはミトコンドリアのカスパーゼの自己活性化を介して進む。実験動物では、アポトーシスの阻害剤を用いた治療は、リンパ系細胞のアポトーシスを抑制できるのみならず、これはまた予後も改善できる。抗−アポトーシス作用物質を用いた臨床試験は、主にそれらの投与及び組織ターゲティングに関連する技術的困難さのために、実用性が低いままであるが、リンパ球アポトーシスの阻害は、敗血症患者に対して魅力的な治療標的であると考えられる。同様に、炎症媒介物質及びアポトーシス媒介物質の双方を標的とする二重特異的剤は、更なる有益性を有するかもしれない。一態様は、スクレロスチン並びにＴＮＦ、ＩＬ−１、ＭＩＦ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１８、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＦａｓＬ、ＬＰＳ、トール様受容体、ＴＬＲ−４、組織因子、ＭＩＰ−２、ＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＡＳＰ１、ＣＡＳＰ４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１Ｂ、ＮＦＫＢ１、ＰＲＯＣ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＣＳＦ３、ＣＣＲ３、ＩＬ１ＲＮ、ＭＩＦ、ＮＦＫＢ１、ＰＴＡＦＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＧＰＲ４４、ＨＭＯＸ１、ＨＭＧ−Ｂ１、ミドカイン、ＩＲＡＫ１、ＮＦＫＢ２、ＳＥＲＰＩＮＡ１、ＳＥＲＰＩＮＥ１、またはＴＲＥＭ１を含む敗血症に関与する１つ以上の標的に結合できるＤＶＤ−結合タンパク質を提供する。このようなＤＶＤ−結合タンパク質の敗血症に対する有効性は、当該技術分野で既知である前臨床動物モデルで評価可能である（Ｂｕｒａｓ  ＪＡら著、（２００５）、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．、４（１０）：８５４−６５及びＣａｌａｎｄｒａ  Ｔら著、（２０００）、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、６（２）：１６４−７０を参照）。
【０３５８】
ＶＩ．Ｆ．神経障害及び神経変性疾患
神経変性疾患は、通常は年齢依存性である慢性か、または急性（例えば、卒中、外傷性脳損傷、脊髄損傷等）のいずれかである。これら神経変性疾患は、ニューロン機能の進行性の喪失（神経細胞死、脱ミエリン化）、運動機能の喪失及び記憶の喪失により特徴付けられる。慢性神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病、ＡＤ）の根底にある機序として明らかになりつつある知見は、複雑な病因を示し、多様な因子、例えば、年齢、血糖状態、アミロイド産生及び多量体化、それらの受容体ＲＡＧＥ（ＡＧＥに対する受容体）に結合する後天的グリケーション最終産物（ＡＧＥ）の蓄積、増加した脳の酸化的ストレス、減少した脳の血流、炎症性サイトカイン及びケモカインの放出を含む神経炎症、ニューロン機能障害及びミクログリアの活性化がそれらの発症及び進行に寄与することが認識された。したがって、これらの慢性神経変性疾患は、複数の細胞型と媒介物質との間の複雑な相互作用を示す。このような疾患のための治療戦略は限定されており、多くの場合、非特異的な抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド、ＣＯＸ阻害剤）による炎症プロセスの遮断か、またはニューロン喪失及び／またはシナプス機能を抑制するための作用物質のいずれかである。これらの治療は、疾患の進行を停止させることができない。最近の研究は、可溶性Ａβペプチド（Ａβオリゴマー型を含む）に対する抗体などのより標的化された療法が、疾患の進行を停止させることに役立つばかりでなく、なお記憶の維持に役立つことを示唆している。これらの予備的な所見は、複数の疾患媒介物質（例えば、Ａβ及びＴＮＦなどの炎症誘発性サイトカイン）を標的とする特異療法が、単一の疾患機序（例えば、可溶性Ａβのみ）を標的とする場合に観察されたものよりも慢性神経変性疾患に対しはるかに優れた治療的有効性を提供できることを示唆している（Ｃ．Ｅ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄら著、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ、２００５年１０月２４日；Ｎｅｌｓｏｎ  ＲＢ．著、Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ．２００５；１１：３３３５；Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｌ．Ｋｌｅｉｎ著、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  Ｉｎｔ．、２００２；４１：３４５；Ｊａｎｅｌｓｉｎｓら著、“Ｅａｒｌｙ  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｏｆ  ｍｉｃｒｏｇｌｉａｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ−ａｌｐｈａ  ａｎｄ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｉ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｗｉｔｈｉｎ  ｔｈｅ  ｅｎｔｏｒｈｉｎａｌ  ｃｏｒｔｅｘ  ｏｆ  ｔｒｉｐｌｅ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｍｉｃｅ”、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ、２（２３）：１−１２（２００５）；Ｓｏｌｏｍａｎ  Ｂ．著、Ｃｕｒｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｓ．２００４；１：１４９；Ｉｇｏｒ  Ｋｌｙｕｂｉｎら著、Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２００５；１１：５５６−６１；Ａｒａｎｃｉｏ  Ｏら著、ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ（２００４）、１−１０；Ｂｏｒｎｅｍａｎｎ  ＫＤら著、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．２００１；１５８：６３；Ｄｅａｎｅ  Ｒら著、Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２００３、９：９０７−１３；及びＥｌｉｅｚｅｒ  Ｍａｓｌｉａｈら著、Ｎｅｕｒｏｎ．２００５、４６：８５７を参照）。
【０３５９】
本発明のＤＶＤ−結合タンパク質は、スクレロスチン及びアルツハイマー病などの慢性神経変性疾患に関与する１つ以上の標的に結合可能である。このような標的としては、ＡＤの発病に関与すると考えられる可溶性または細胞表面のあらゆる媒介物質、例えばＡＧＥ（Ｓ１００Ａ、アンホテリシン）、炎症誘発性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１）、ケモカイン（例えば、ＭＣＰ１）、神経再生を阻害する分子（例えば、Ｎｏｇｏ、ＲＧＭ  Ａ）、神経突起の成長を増強する分子（ニュートロフィン）及び血液脳関門での輸送を媒介できる分子（例えば、トランスフェリン受容体、インスリン受容体またはＲＡＧＥ）が挙げられるが、これらに限定されない。ＤＶＤ−結合タンパク質の有効性は、アミロイド前駆体タンパク質またはＲＡＧＥを過剰発現し、アルツハイマー病様症状を発症する遺伝子導入マウスなどの前臨床動物モデルで検証可能である。これに加えて、ＤＶＤ−結合タンパク質を構築して動物モデルにおける有効性を検査でき、かつ最適な治療用ＤＶＤ−結合タンパク質を、ヒト患者における有効性を検査するために選択できる。ＤＶＤ−結合タンパク質はまた、パーキンソン病などその他の神経変性疾患の治療に使用可能である。アルファ−シヌクレインは、パーキンソン病に関与している。スクレロスチン並びにＬＩＮＧＯ−１、α−シヌクレイン、及び／またはＴＮＦ、ＩＬ−１、ＭＣＰ−１などの炎症性媒介物質を標的とすることができるＤＶＤ−結合タンパク質は、パーキンソン病に対して有効な療法を証明することが可能であり、本発明において想定される。
【０３６０】
ＶＩ．Ｇ．ニューロン再生及び脊髄損傷
病的機序の知見の増大にも関わらず、脊髄損傷（ＳＣＩ）は、未だに深刻な症状であり、高度医療ニーズを特徴とする医学的適応症である。大部分の脊髄損傷は、挫傷または圧縮損傷であり、通常、一次傷害の後、最初の傷害を悪化させ、病変部の著しい拡大、場合によっては１０倍を超える拡大を結果として生じる二次的な損傷機序（炎症媒介物質、例えば、サイトカイン及びケモカイン）に続く。ＳＣＩにおけるこれら一次的及び二次的機序は、他の手段、例えば発作によって引き起こされた脳損傷におけるものと極めて類似している。満足な治療は存在せず、メチルプレドニゾロン（ＭＰ）の高用量ボーラス注射が、損傷後８時間という狭い時間枠内で唯一使用されている治療である。しかしながら、この治療は、顕著な機能的回復が全くなく、続発性の障害を予防することを目的としているに過ぎない。これは、明確な有効性の欠如並びにその後の感染症を伴う免疫抑制及び組織病理的筋肉変化のような重篤な副作用のために大きな批判を受けるものである。内因性の再生能を刺激するその他の薬物、生物製剤または小分子は承認されていないが、昨今、有望な治療原理及び薬物候補物が、ＳＣＩの動物モデルで有効性を示している。ヒトのＳＣＩにおける機能回復の欠如の大部分は、病変部位、瘢痕組織、ミエリンにおいて、並びに損傷を伴う細胞上において、神経突起の成長を阻害する因子によって引き起こされる。このような因子は、ミエリン随伴タンパク質ＮｏｇｏＡ、ＯＭｇｐ及びＭＡＧ、ＲＧＭ  Ａ、瘢痕随伴ＣＳＰＧ（コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）並びに反応性星状膠細胞（一部のセマホリン及びエフィリン）である。しかしながら、病変部位では、増殖阻害分子が見出されるのみならず、ニュートロフィン、ラミニンＬ１及びその他のもののような神経突起成長刺激因子も見出される。阻害的な影響の低下が、バランスを増殖阻害から増殖促進へとシフトさせ得るために、神経突起成長阻害分子及び成長促進分子のこの協調は、ＮｏｇｏＡまたはＲＧＭ  Ａのような単一の因子の遮断が、齧歯類ＳＣＩモデルにおいて著しい機能回復をもたらしたことを説明し得る。しかしながら、単一の神経突起増殖阻害分子を遮断することで観察された回復は、完全ではなかった。より迅速かつより明確な回復を達成するために、２つの神経突起増殖阻害分子、例えば、Ｎｏｇｏ及びＲＧＭ  Ａを遮断すること、または神経突起増殖阻害分子を遮断し、神経突起外増殖増強分子、例えばＮｏｇｏ及びニュートロフィンの機能を増強させること、または神経突起増殖阻害分子、例えばＮｏｇｏ及び炎症誘発性分子（例えば、ＴＮＦ）を遮断することのいずれかが望ましい場合がある（ＭｃＧｅｅ  ＡＷら著、（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、２６：１９３；Ｍａｒｃｏ  Ｄｏｍｅｎｉｃｏｎｉら著、（２００５）、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．、２３３：４３；Ｍｉｌａｎ  Ｍａｋｗａｎａ１ら著、（２００５）、ＦＥＢＳ  Ｊ．２７２：２６２８；Ｂａｒｒｙ  Ｊ．Ｄｉｃｋｓｏｎ著、（２００２）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２９８：１９５９；Ｆｅｌｉｃｉａ  Ｙｕ  Ｈｓｕａｎ  Ｔｅｎｇら著（２００５）、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．、７９：２７３；Ｔａｒａ  Ｋａｒｎｅｚｉｓら著、（２００４���、Ｎａｔｕｒｅ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、７：７３６；Ｇａｎｇ  Ｘｕら著、（２００４）、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．、９１：１０１８を参照）。
【０３６１】
一態様では、ヒトスクレロスチンに結合するＤＶＤ−結合タンパク質はまた、ＮｇＲ及びＲＧＭ  Ａ；ＮｏｇｏＡ及びＲＧＭ  Ａ；ＭＡＧ及びＲＧＭ  Ａ；ＯＭＧｐ及びＲＧＭ  Ａ；ＲＧＭ  Ａ及びＲＧＭ  Ｂ；ＣＳＰＧ及びＲＧＭ  Ａ；アグレカン、ミドカイン、ニューロカン、ベルシカン、ホスファカン、Ｔｅ３８及びＴＮＦ−α；樹状突起＆軸索萌芽を促進する抗体と組み合されたＡβグロブロマー特異的抗体などの標的対の１つまたは双方にも結合できる。樹状突起の病変は、ＡＤの極めて早い時期の徴候であり、ＮＯＧＯ  Ａが樹状突起の成長を制限することが知られている。このようなタイプのａｂはＳＣＩ−候補（ミエリンタンパク質）Ａｂのいずれかと組み合わせることが可能である。その他のＤＶＤ−結合タンパク質の標的としては、ＮｇＲ−ｐ７５、ＮｇＲ−Ｔｒｏｙ、ＮｇＲ−Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇｏ）、ＮｇＲ−Ｌｉｎｇｏ、Ｌｉｎｇｏ−Ｔｒｏｙ、Ｌｉｎｇｏ−ｐ７５、ＭＡＧまたはＯｍｇｐのいずれかの組み合わせを挙げることができる。更には、標的は、神経突起の阻害に関与すると考えられる、あらゆる可溶性または細胞表面の媒介物質を含んでもよく、これらは、例えば、Ｎｏｇｏ、Ｏｍｐｇ、ＭＡＧ、ＲＧＭ  Ａ、セマフォリン、エフリン、可溶性Ａβ、炎症誘発性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１）、ケモカイン（例えば、ＭＩＰ  １ａ）、神経再生を阻害する分子も含まれ得る。抗−ｎｏｇｏ／抗−ＲＧＭ  Ａまたは類似のＤＶＤ−結合タンパク質の有効性は、脊髄損傷の前臨床動物モデルにおいて、検証可能である。これに加えて、これらＤＶＤ−結合タンパク質を構築して動物モデルにおける有効性を検査でき、かつヒト患者での検査用に、最適な治療用ＤＶＤ−結合タンパク質を選択できる。加えて、ＤＶＤ−結合タンパク質は、単一受容体、例えば、３つのリガンドＮｏｇｏ、Ｏｍｐｇ、及びＭＡＧに結合するＮｏｇｏ受容体並びにＡβ及びＳ１００Ａに結合するＲＡＧＥの上の、２つの異なるリガンド結合部位を標的とするようにも構築できる。更に、神経突起増殖阻害剤、例えば、ｎｏｇｏ及びｎｏｇｏ受容体はまた、多発性硬化症のような免疫学的疾患における神経再生の抑制にも関与している。ｎｏｇｏ−ｎｏｇｏ受容体相互作用の阻害は、多発性硬化症の動物モデルで回復を増強させることが示されている。したがって、１つの免疫媒介物質、例えば、ＩＬ−１２のようなサイトカイン、及び神経突起外殖阻害分子、例えば、ＮｏｇｏまたはＲＧＭの機能を遮断できるＤＶＤ−結合タンパク質は、免疫または神経突起増殖阻害剤分子のいずれかを単独でブロックするよりも迅速かつ大きな有効性を提供できる。
【０３６２】
一般的に、抗体は、血液脳関門（ＢＢＢ）を効率的かつ適正な方法で通過しない。しかしながら、特定の神経疾患、例えば脳卒中、外傷性脳損傷、多発性硬化症等では、ＢＢＢが損なわれ、ＤＶＤ−結合タンパク質及び抗体の脳への侵入を増加させる可能性がある。ＢＢＢ漏出が生じていないその他の神経学的状態では、グルコース担体及びアミノ酸担体などの担体媒介輸送並びにＢＢＢの血管内皮における受容体媒介経細胞輸送媒介細胞構造／受容体を含む内因性輸送系のターゲティングを使用して、したがって、ＤＶＤ−結合タンパク質のトランスＢＢＢ輸送を可能にし得る。このような輸送を可能にするＢＢＢにおける構造体としては、インスリン受容体、トランスフェリン受容体、ＬＲＰ及びＲＡＧＥを挙げることができるが、これらに限定されない。これに加えて、戦略によって、低分子量薬剤、ナノ粒子及び核酸を含む有望な薬剤をＣＮＳに輸送するためのシャトルとしてもＤＶＤ−結合タンパク質の使用が可能になる（Ｃｏｌｏｍａ  ＭＪら著、（２０００）、Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．、１７（３）：２６６−７４；Ｂｏａｄｏ  ＲＪら著、（２００７）、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．、１８（２）：４４７−５５）。
【０３６３】
ＶＩ．Ｈ．腫瘍学的障害
モノクローナル抗体療法は、癌に対する重要な治療形態として浮上した（ｖｏｎ  Ｍｅｈｒｅｎら著、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．、５４：３４３−６９（２００３））。抗体は、アポトーシス、リダイレクトされた細胞毒性、リガンド−受容体相互作用の妨害を誘導することによって、または腫瘍表現型にとって重要なタンパク質の発現を抑制することによって、抗腫瘍効果を及ぼすことができる。これに加えて、抗体は、腫瘍微小環境の成分を標的とすることが可能であり、腫瘍に付随する脈管構造の形成などの不可欠な構造を混乱させる。抗体はまた、上皮増殖因子受容体などの、そのリガンドが増殖因子である受容体を標的とすることも可能である。抗体はこのように、細胞増殖を刺激する天然のリガンドの標的とされる腫瘍細胞への結合を阻害する。あるいは、抗体は、抗−イディオタイプネットワーク、補体媒介性細胞傷害、または抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）を誘発できる。２つの別個の腫瘍媒介物質を標的とする二重特異的抗体は、単一特異的療法に比べて、更なる有益性を供与すると考えられる。
【０３６４】
別の実施形態は、ヒトスクレロスチンに結合するＤＶＤ−結合タンパク質を提供し、この結合タンパク質はまた、腫瘍学的疾患に関与する別の標的に結合でき、これらは、限定されないが、ＩＧＦＲ、ＩＧＦ、ＶＧＦＲ１、ＰＤＧＦＲｂ、ＰＤＧＦＲａ、ＩＧＦ１，２、ＥＲＢ３、ＣＤＣＰ、１ＢＳＧ２、ＥｒｂＢ３、ＣＤ５２、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＢＭＰ６、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ２４、ＩＮＨＡ、ＴＮＦ、ＴＮＦＳＦ１０、ＢＭＰ６、ＥＧＦ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＧＲＰ、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＮＨＡ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＶＥＧＦ、ＣＤＫ２、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ２、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２、ＢＣＬ２、ＣＤ１６４、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＤＫＮ２Ｂ、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＤＫＮ３、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＯＤＺ１、ＰＡＷＲ、ＰＬＧ、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＡＲ、ＢＲＣＡ１、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ９、Ｅ２Ｆ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＯ１、ＥＲＢＢ２、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ２、ＩＮＳＬ４、ＭＹＣ、ＮＯＸ５、ＮＲ６Ａ１、ＰＡＰ、ＰＣＮＡ、ＰＲＫＣＱ、ＰＲＫＤ１、ＰＲＬ、ＴＰ５３、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ９、ＩＧＦＢＰ３、ＩＬ２、ＩＮＨＡ、ＫＬＫ６、ＴＰ５３、ＣＨＧＢ、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＮＨＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＰＲＬ、ＫＬＫ６、ＳＨＢＧ、ＮＲ１Ｄ１、ＮＲ１Ｈ３、ＮＲ１Ｉ３、ＮＲ２Ｆ６、ＮＲ４Ａ３、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、ＮＲ０Ｂ１、ＮＲ０Ｂ２、ＮＲ１Ｄ２、ＮＲ１Ｈ２、ＮＲ１Ｈ４、ＮＲ１Ｉ２、ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ２Ｃ２、ＮＲ２Ｅ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲ２Ｆ１、ＮＲ２Ｆ２、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲ４Ａ１、ＮＲ４Ａ２、ＮＲ５Ａ１、ＮＲ５Ａ２、ＮＲ６Ａ１、ＰＧＲ、ＲＡＲＢ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ６、ＫＬＫ３、ＫＲＴ１、ＡＰＯＣ１、ＢＲＣＡ１、ＣＨＧＡ、ＣＨＧＢ、ＣＬＵ、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ６Ａ１、ＥＧＦ、ＥＲＢＢ２、ＥＲＫ８、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ２４、ＩＮＨＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、ＫＬＫ１５、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ９、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＳＭＢ、ＮＴＮ４、ＯＤＺ１、ＰＡＰ、ＰＬＡＵ、ＰＲＬ、ＰＳＡＰ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＨＢＧ、ＴＧＦＡ、ＴＩＭＰ３、ＣＤ４４、ＣＤＨ１、ＣＤＨ１０、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２０、ＣＤＨ７、ＣＤＨ９、ＣＤＨ１、ＣＤＨ１０、ＣＤＨ１３、ＣＤＨ１８、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２０、ＣＤＨ７、ＣＤＨ８、ＣＤＨ９、ＲＯＢＯ２、ＣＤ４４、ＩＬＫ、ＩＴＧＡ１、ＡＰＣ、ＣＤ１６４、ＣＯＬ６Ａ１、ＭＴＳＳ１、ＰＡＰ、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＡＧＲ２、ＡＩＧ１、ＡＫＡＰ１、ＡＫＡＰ２、ＣＡＮＴ１、ＣＡＶ１、ＣＤＨ１２、ＣＬＤＮ３、ＣＬＮ３、ＣＹＢ５、ＣＹＣ１、ＤＡＢ２ＩＰ、ＤＥＳ、ＤＮＣＬ１、ＥＬＡＣ２、ＥＮＯ２、ＥＮＯ３、ＦＡＳＮ、ＦＬＪ１２５８４、ＦＬＪ２５５３０、ＧＡＧＥＢ１、ＧＡＧＥＣ１、ＧＧＴ１、ＧＳＴＰ１、ＨＩＰ１、ＨＵＭＣＹＴ２Ａ、ＩＬ２９、Ｋ６ＨＦ、ＫＡＩ１、ＫＲＴ２Ａ、ＭＩＢ１、ＰＡＲＴ１、ＰＡＴＥ、ＰＣＡ３、ＰＩＡＳ２、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＰＩＤ、ＰＲ１、ＰＳＣＡ、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ２、ＴＰＭ１、ＴＰＭ２、ＴＲＰＣ６、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＰＥＰ、ＥＣＧＦ１、ＥＲＥＧ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＩＧＦ、ＦＬＴ１、ＪＡＧ１、ＫＤＲ、ＬＡＭＡ５、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＰＧＦ、ＰＬＸＤＣ１、ＳＴＡＢ１、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＣ、ＡＮＧＰＴＬ３、ＢＡＩ１、ＣＯＬ４Ａ３、ＩＬ８、ＬＡＭＡ５、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＳＴＡＢ１、ＡＮＧＰＴＬ４、ＰＥＣＡＭ１、ＰＦ４、ＰＲＯＫ２、ＳＥＲＰＩＮＦ１、ＴＮＦＡＩＰ２、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ９、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ６、ＭＤＫ、ＥＤＧ１、ＥＦＮＡ１、ＥＦＮＡ３、ＥＦＮＢ２、ＥＧＦ、ＥＰＨＢ４、ＦＧＦＲ３、ＨＧＦ、ＩＧＦ１、ＩＴＧＢ３、ＰＤＧＦＡ、ＴＥＫ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢＲ１、ＣＣＬ２、ＣＤＨ５、ＣＯＬ１８Ａ１、ＥＤＧ１、ＥＮＧ、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ３、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＢＡＤ、ＢＡＧ１、ＢＣＬ２、ＣＣＮＡ１、ＣＣＮＡ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＥ２、ＣＤＨ１（Ｅ−カドヘリン）、ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７Ｋｉｐ１）、ＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６ＩＮＫ４ａ）、ＣＯＬ６Ａ１、ＣＴＮＮＢ１（ｂ−カテニン）、ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ−２）、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、Ｆ３（ＴＦ）、ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ−１）、ＧＡＴＡ３、ＧＳＮ（ゲルゾリン）、ＩＧＦＢＰ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ（糖タンパク質１３０）、ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）、ＪＵＮ、ＫＬＫ５、ＫＲＴ１９、ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ−Ｊｕｎ）、ＭＫＩ６７（Ｋｉ−６７）、ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）、ＰＧＲ、ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）、ＰＴＥＮ、ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン）、ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ−１）、ＴＧＦＡ、ＴＨＢＳ１トロンボスポンジン−１）、ＴＩＥ（Ｔｉｅ−１）、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＩｉａ）、ＴＰ５３、ＡＺＧＰ１（亜鉛−ａ−糖タンパク質）、ＢＰＡＧ１（プレクチン）、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）、ＣＬＤＮ７（クローディン−７）、ＣＬＵ（クラステリン）、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ−２）、ＦＧＦ１、ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）、ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）、ＧＮＡＳ１、ＩＤ２、ＩＴＧＡ６（ａ６−インテグリン）、ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）、ＫＬＦ５（ＧＣ  Ｂｏｘ  ＢＰ）、ＫＲＴ１９（ケラチン１９）、ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的ＩＩ型ケラチン）、ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ、ＭＴ３（メタロチオネクチン−ＩＩＩ）、ＭＵＣ１（無賃）、ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ−２）、ＲＡＣ２（ｐ２１Ｒａｃ２）、Ｓ１００Ａ２、ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）、ＳＣＧＢ２Ａ１（ママグロビン２）、ＳＣＧＢ２Ａ２（ママグロビン１）、ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒ１）、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＴＨＢＳ４及びＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）、ＲＯＮ、ｃ−Ｍｅｔ、ＣＤ６４、ＤＬＬ４、ＰＬＧＦ、ＣＴＬＡ４、フォスファチジルセリン、ＲＯＢＯ４、ＣＤ８０、ＣＤ２２、ＣＤ４０、ＣＤ２３、ＣＤ２８、ＣＤ５５、ＣＤ３８、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ３０、ＣＤ１３８、ＣＤ５６、ＣＤ３３、ＣＤ２、ＣＤ１３７、ＤＲ４、ＤＲ５、ＲＡＮＫＬ、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ１、ＭＴＳＰ１、ＭＳＰ、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＡ１、ＥＰＨＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＰＧＥ２、ＮＫＧ２Ｄ、ＬＰＡ、ＳＩＰ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＭＡＰＧ、ＦＬＴ３、ＰＤＧＦＲアルファ、ＰＤＧＦＲβ、 ＲＯＲ１、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＳＣＤ１及びＣＤ５９が挙げられる。
【０３６５】
ＶＩＩ．医薬組成物
本発明の抗体、またはその抗原−結合タンパク質部分及び薬学的に許容し得る担体を含む医薬組成物が提供される。抗体を含む医薬組成物が提供され、これらは、限定されないが、障害を診断し、検出し、またはモニタリングする上で、障害またはその１つ以上の症状を予防し、治療し、管理し、または軽減する上で使用され、及び／または研究で使用される。特定の実施形態では、１つ以上の抗体を含む組成物が提供される。別の提供される実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の抗体と、ＳＯＳＴ活性が有害である障害を治療するための抗体以外の１つ以上の予防剤または治療剤とを含む。一実施形態では、この予防剤または治療剤は、障害またはその１つ以上の症状の予防、治療、管理、または軽減に有用であることが既知であるか、もしくは障害またはその１つ以上の症状の予防、治療、管理、または軽減において使用されてきたかまたは現在使用されているものである。これらの実施形態によると、この組成物は、担体、希釈剤または賦形剤を更に含んでもよい。
【０３６６】
本発明の抗体及び抗体部分は、対象に投与するのに好適な医薬組成物に組み込まれることが可能である。典型的には、医薬組成物は、抗体または抗体部分と、薬学的に許容し得る担体とを含む。「薬学的に許容し得る担体」という用語は、生理的に適合性がある、あらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等を包含する。薬学的に許容し得る担体の例としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール等、並びにこれらの組み合わせの１つ以上が挙げられる。多くの場合、組成物中に、等張剤、例えば、糖、マンイトール、ソルビトールなどの多価アルコール、または塩化ナトリウムを含有することが好ましいであろう。薬学的に許容し得る担体は、抗体または抗体部分の保存期間を延ばしまたは有効性を高める湿潤剤または乳化剤、防腐剤もしくは緩衝液などの少量の補助剤を更に含んでもよい。
【０３６７】
様々な送達システムが既知であり、障害またはその１つ以上の症状を予防し、管理し、治療し、または軽減するために有用な、１つ以上の抗体もしくは１つ以上の抗体と予防剤または治療剤の組み合わせを投与するために使用できる。これらは例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルへの封入、抗体または抗体断片を発現できる組換え細胞、受容体依存性エンドサイト―シス（例えば、Ｗｕ及びＷｕ著、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６２：４４２９−４４３２（１９８７）を参照）、レトロウイルスまたはその他のベクターの一部としての核酸の構築物である。予防剤または治療剤を投与する方法が提供され、これらは、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内及び皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与、及び粘膜投与（例えば、鼻腔内及び経口経路）を含むが、これらに限定されない。これに加えて、例えば、吸入器または噴霧器及びエアロゾル化剤を加えた製剤の使用によって、肺内投与が使用可能である。例えば、米国特許第６，０１９，９６８号；同第５，９８５，３２０号；同第５，９８５，３０９号；同第５，９３４，２７２号；同第５，８７４，０６４号；同第５，８５５，９１３号；同第５，２９０，５４０号；及び同第４，８８０，０７８号；並びにＰＣＴ公開ＷＯ９２／１９２４４、ＷＯ９７／３２５７２、ＷＯ９７／４４０１３、ＷＯ９８／３１３４６、及びＷＯ９９／６６９０３を参照されたい。一実施形態は、抗体または抗体部分、併用療法、またはＡｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ（登録商標）肺内薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．、マサチューセッツ州ケンブリッジ、米国）を使用して投与される組成物を提供する。提供される特定の実施形態では、予防剤または治療剤は、筋肉内、静脈内、腫瘍内、経口、鼻腔内、肺内、または皮下投与される。本発明の予防剤または治療剤は、例えば、点滴またはボーラス注射による、上皮層または粘膜皮膚層（例えば、口腔粘膜、直腸、及び超粘膜等）を通した吸収による、あらゆる都合のよい経路により投与されてもよく、またその他の生物学的活性作用物質と共に投与されてもよい。投与は全身的であっても局所的であってもよい。
【０３６８】
一実施形態では、インビトロでの腫瘍細胞への抗体結合カーボンナノチューブ（ＣＮＴ）の特異的結合、それに続く近赤外（ＮＩＲ）光によるこれらの高度に特異的な切断が、腫瘍細胞を標的とするために使用できる。例えば、ビオチン化極性脂質が、安定で生体適合性のある非細胞毒性ＣＮＴ分散物を調製するために使用でき、次いでこの分散物が、１つ以上の腫瘍抗原（例えば、ＣＤ２２）に向けられる１つまたは２つの異なるｎｅｕｔｒａｌｉｔｅアビジン誘導体化ＤＶＤ−結合タンパク質に付着される（Ｃｈａｋｒａｖａｒｔｙ，Ｐら著、（２００８）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０５：８６９７−８７０２）。
【０３６９】
特定の実施形態では、本発明の予防剤または治療剤を、治療を必要とする領域に局所的に投与することが望ましい場合があり得る。これは、局所的注入によって、注射によって、またはインプラントの手段によって達成され得るが、これらに限定されるものではなく、該インプラントは、シアラスチック膜、ポリマー、繊維性マトリックス（例えば、Ｔｉｓｓｕｅｌ（登録商標））、またはコラーゲンマトリックスなどの膜及びマトリックスを含む多孔質または非多孔質材料である。一実施形態では、１つ以上の抗体拮抗剤の有効量を、障害またはその症状を予防し、治療し、管理し、及び／または軽減するために、対象の患部に局部的に投与する。別の実施形態では、１つ以上の抗体の有効量を、障害またはその１つ以上の症状を治療し、管理し、及び／または軽減するために、抗体以外の１つ以上の治療薬（例えば、１つ以上の予防剤または治療剤）の有効量と組み合わせて、対象の患部に局所的に投与する。
【０３７０】
別の実施形態では、予防剤または治療剤は、制御された放出系または徐放系で送達可能である。一実施形態では、制御された放出または徐放を達成するためにポンプが使用されてもよい（Ｌａｎｇｅｒ著、前掲、Ｓｅｆｔｏｎ、１９８７、ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．、１４：２０；Ｂｕｃｈｗａｌｄら著、１９８０、Ｓｕｒｇｅｒｙ、８８：５０７；Ｓａｕｄｅｋら著、１９８９、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｉ，Ｍｅｄ．、３２１：５７４を参照）。別の実施形態は、治療薬の制御された放出または徐放を達成するために、ポリマー材料を使用することが可能である（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｊ．Ｍ．著、第６章、Ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、第ＩＩ巻、Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ、（Ｌａｎｇｅｒ及びＷｉｓｅ編集）  （ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、１９８４）、１１５−１３８頁；Ｒａｎｇｅｒ及びＰｅｐｐａｓ著、１９８３、Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２３：６１を参照；更にＬｅｖｙら著、１９８５、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇら著、１９８９、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．、２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄら著、１９８９、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．、７  １：１０５を参照）；米国特許第５，６７９，３７７号；同第５，９１６，５９７号；同第５，９１２，０１５号；同第５，９８９，４６３号；同第５，１２８，３２６号；ＰＣＴ公開ＷＯ９９／１５１５４及びＷＯ９９／２０２５３を参照）。徐放性製剤で使用されるポリマーの例としては、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−ｃｏ−酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ酸無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、及びポリオルトエステルが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の実施形態では、徐放性製剤で使用されるポリマーは、不活性であり、溶脱可能な不純物を含まず、保存時に安定であり、無菌かつ生体分解性である。更に別の実施形態では、制御された放出系または徐放系は、予防剤または治療剤に近接して配置でき、したがって、全身投与量の一部のみが必要なようにできる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ著、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ、ｓｕｐｒａ、第２巻、１１５−１３８頁、（１９８４）を参照）。
【０３７１】
制御された放出系は、Ｌａｎｇｅｒによる概説中に論述されている（１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９：１５２７−１５３３）。１つ以上の治療剤を含む徐放性製剤を作製するために、当業者に既知のあらゆる技術を使用することが可能である。例えば、米国特許第４，５２６，９３８号、ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０５５４８、ＷＯ９６／２０６９８、Ｎｉｎｇら著、１９９６、“Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｇｅｌ”、Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、３９：  １７９−１８９、Ｓｏｎｇら著、１９９５、“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｌｕｎｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｏｎｇ−Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ”、ＰＤＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、５０：３７２−３９７、Ｃｌｅｅｋら著、１９９７、“Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｆｏｒ  ａ  ｂＦＧＦ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ”、Ｐｒｏ．  Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．、２４：８５３−８５４、及びＬａｍら著、１９９７、“Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｌｏｃａｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”、Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．、２４：７５９−７６０を参照されたい。
【０３７２】
本発明の組成物が予防剤または治療剤をコードする核酸である特定の実施形態では、この核酸は、適切な核酸発現ベクターの一部としてこれを構築し、コードしている予防剤または治療剤の発現を促進するために、インビボで投与することが可能である。投与は核酸が細胞内に導入されるよう、例えばレトロウイルスベクター（米国特許第４，９８０，２８６号を参照）の使用によって、または直接注入によって、または微粒子照射（例えば、遺伝子ガン：Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ、デュポン社）の使用によって、もしくは脂質によるコーティングまたは細胞表面受容体または形質導入剤により、あるいは核内に侵入することが知られているホメオボックス様ペプチドに結合させて（例えば、Ｊｏｌｉｏｔら著、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８８：１８６４−１８６８を参照）行う。あるいは、相同的組換えによる発現のために、核酸を細胞内に導入し、宿主細胞ＤＮＡ内に組み込むことが可能である。
【０３７３】
本発明の医薬組成物は、その予定された投与経路に適合するよう製剤化される。投与の経路の例としては、例えば、静脈内、皮内、皮下などの非経口、経口、鼻腔内（例えば、吸入）、経皮（例えば、局所投与）、経粘膜、及び直腸投与が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、組成物は、ヒトへの静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内、または局所投与に適合された医薬組成物として、通常的な手順に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与用の組成物は、無菌の等張水性緩衝液中の溶液である。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤と、注射の部位における痛みを和らげるために、リグノカイン（リドカイン）などの局所麻酔剤を含有してもよい。
【０３７４】
本発明の組成物が局所投与される場合、組成物は軟膏、クリーム、経皮パッチ、ローション、ゲル、シャンプー、スプレー、エアロゾル、溶液、エマルジョンの形態で、または当業者に周知であるその他の形態で製剤化可能である。例えば、ＲｅｍｉｎｇｔｏｎのＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ、第１９版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．、ペンシルバニア州イーストン、（１９９５）を参照されたい。非噴霧形の局所投与形態については、局所的用途に適合性のある担体または１つ以上の賦形剤を含み、かつ例えば水よりも大きな動的粘度を有する、粘性剤形から半固体剤形または固体剤形が通常使用される。好適な製剤としては、溶液、懸濁液、エマルジョン、クリーム剤、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、粉剤、リニメント剤、軟膏剤（ｓａｌｖｅ）等が挙げられ（これらに限定されない）、これらは、必要に応じて、滅菌され、または例えば浸透圧などの様々な特性に影響を及ぼすために、補助剤（例えば、防腐剤、安定化剤、湿潤剤、緩衝液、または塩類）と混合される。その他の好適な局所投与形態としては、噴霧可能なエアロゾル調製物が挙げられ、これは、例えば固体または液体不活性担体と組み合わされた活性成分が、加圧された揮発性物質（例えば、ＦＲＥＯＮ（登録商標）などのガス状推進剤）と混合されて、またはスクィーズボトル中にパッケージされている。所望される場合、加湿剤または保湿剤もまた、医薬組成物及び剤形に添加され得る。このような追加の成分の例は、当該技術分野で周知である。
【０３７５】
本発明の方法が組成物の鼻腔内投与を含む場合、組成物は、エアロゾル形態、スプレー、ミストまたは点鼻薬の形態で製剤化可能である。特に、予防剤または治療剤は、好適な推進剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素またはその他の好適な気体）を用いて、加圧されたパックまたは噴霧器からエアロゾルスプレー組成の形態で好都合に送達可能である。加圧されたエアロゾルの場合には、投与単位は、単位用量を送達するためのバルブを提供することによって、決定されてもよい。吸入器あるいは通気器に用いるカプセル及びカートリッジ（例えば、ゼラチン製）は、化合物と適当な粉末基剤、例えば乳糖またはデンプンとの混合粉末を含んで製剤化できる。
【０３７６】
本発明の方法が経口投与を含む場合、錠剤、カプセル剤、カシェ剤、ゲルキャップ剤、溶液、懸濁液等の剤形で、組成物を経口的に製剤化可能である。錠剤またはカプセル剤は、結合剤（例えば、前糊化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、またはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、増量剤（例えば、乳糖、微結晶セルロース、またはリン酸水素カルシウム）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、またはシリカ）、崩壊剤（例えば、馬鈴薯デンプンまたはグリコール酸ナトリウムデンプン）、または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容し得る賦形剤と共に、通常の方法で調製可能である。錠剤は、当該技術分野で周知の方法でコーティングされてもよい。経口投与用の液体調製物は、溶液、シロップまたは懸濁液の剤形を採ることができ（これらに限定されない）、あるいは、これらは使用前に水またはその他の好適なビヒクルを用いて構成するための乾燥製品として提供できる。このような液体調製物は、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体、または水素添加食用油脂）、乳化剤（例えば、レシチンまたはアラビアゴム）、非水性ビヒクル（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、または分画された植物油）、及び防腐剤（例えば、メチルまたはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）などの薬学的に許容し得る添加剤と共に通常の方法によって調製され得る。調製物はまた、適宜、緩衝塩類、風味剤、着色剤、及び甘味剤を含有してもよい。経口投与用の調製物は、予防剤または治療剤（複数可）の遅延放出、制御された放出、または徐放のために、好適に製剤化されてもよい。
【０３７７】
本発明で提供される方法は、例えば、吸入器または噴霧器の使用によって、エアロゾル化剤と共に製剤化された組成物の肺内投与を含むことができる。例えば、米国特許第６，０１９，９６８号；同第５，９８５，３２０号；同第５，９８５，３０９号；同第５，９３４，２７２号；同第５，８７４，０６４号；同第５，８５５，９１３号；同第５，２９０，５４０号；及び同第４，８８０，０７８号；並びにＰＣＴ公開ＷＯ９２／１９２４４、ＷＯ９７／３２５７２、ＷＯ９７／４４０１３、ＷＯ９８／３１３４６、及びＷＯ９９／６６９０３を参照されたい。特定の実施形態において、抗体、併用療法、及び／またはＡｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ（登録商標）肺内薬剤送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．、マサチューセッツ州ケンブリッジ）を用いて投与される組成物を提供する。
【０３７８】
本発明で提供される方法は、注射（例えば、ボーラス注射または連続的輸注）による非経口投与用に製剤化された組成物の投与を含む。注射用製剤は、添加された防腐剤と共に、単位投与形態で（例えばアンプルまたは複数用量容器で）提供できる。組成物は、懸濁液、溶液または油性あるいは水性ビヒクル中のエマルジョンなどの形態を採ることができ、懸濁剤、安定化剤及び／または分散剤などの調剤用薬剤を含有できる。あるいは、活性成分は、使用前に好適なビヒクル（例えば、滅菌発熱性物質除去水）で構成するために粉末剤形であってもよい。
【０３７９】
本発明で提供される方法は更に、デポー調製物として製剤化された組成物の投与から成ってもよい。このような長時間作用性の製剤は、埋め込み（例えば、皮下または筋肉内）によって、または筋肉内注射によって投与され得る。したがって、例えば、組成物は、好適なポリマー材料または疎水性材料（例えば、許容し得る油中のエマルジョン）またはイオン交換樹脂と共に製剤化されてもよく、あるいは難溶性誘導体として（例えば、難溶性塩として）製剤化されてもよい。
【０３８０】
本発明で提供される方法は、中性または塩剤形として製剤化された組成物の投与を包含する。薬学的に許容し得る塩としては、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸等に由来するようなアニオンと形成されるもの、及び水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等に由来するようなカチオンと形成されるものが挙げられる。
【０３８１】
一般には、組成物の成分は個別に、または単位用量剤形として一緒に混合されて、例えば活性剤の量を示すアンプルあるいは小容器などの気密封入容器に凍結乾燥された粉末または無水濃縮物として供給される。投与のモードが輸注である場合、組成物は無菌医薬用水または生理食塩水を含有する輸注ビンで分配可能である。投与のモードが注射である場合、投与前に成分が混合されるように、注射用無菌水または生理食塩水のアンプルが提供され得る。
【０３８２】
特に、１つ以上の予防剤または治療剤、もしくは医薬組成物が、薬剤の量を示すアンプルまたは小容器などの気密封入容器にパッケージされることも提供する。一実施形態では、１つ以上の予防剤または治療剤、もしくは医薬組成物は、気密封入容器に凍結乾燥された乾燥無菌粉末または無水濃縮物として供給され、対象に投与するための適切な濃度になるよう再構成できる（例えば、水または生理食塩水で）。一実施形態では、１つ以上の予防剤または治療剤、もしくは医薬組成物は、少なくとも５ｍｇの単位投与量、例えば少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、または少なくとも１００ｍｇで、気密封入容器に凍結乾燥された乾燥無菌粉末として供給される。本発明の凍結乾燥された予防剤または治療剤、もしくは医薬組成物は、その元の容器内で２℃〜８℃で保管されるべきであり、本発明の予防剤または治療剤、もしくは医薬組成物は、再構成された後１週間以内、例えば５日以内、７２時間以内、または４８時間以内、２４時間以内、１２時間以内、６時間以内、５時間以内、３時間以内に、または１時間以内に投与されるべきである。他の実施形態では、１つ以上の予防剤または治療剤もしくは医薬組成物は、薬剤の量及び濃度を表示する気密封入容器で、液体形態で供給される。一実施形態では、投与される組成物の液体形態は、少なくとも０．２５ｍｇ／ｍｌ、例えば、少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７５ｍｇ／ｍｌまたは少なくとも１００ｍｇ／ｍｌで、気密封入容器で供給される。液体形態は、その元の容器内で２℃〜８℃で保管されるべきである。
【０３８３】
非経口投与に適した医薬組成物に組み込まれることが可能な抗体及び抗体部分を供給する。一実施形態では、この抗体または抗体部分は、０．１〜２５０ｍｇ／ｍｌの抗体を含有する注射可能な溶液として調製されるであろう。この注射可能な溶液は、フリントまたはアンバーバイアル、アンプルもしくは前充填された注射器内で、液体または凍結乾燥投与剤形のいずれかから構成され得る。緩衝液は、ｐＨ５．０〜７．０（最適にはｐＨ６．０）で、Ｌ−ヒスチジン（１〜５０ｍＭ）（最適には、５〜１０ｍＭ）であってよい。その他の好適な緩衝液としては、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムが挙げられるが、これらに限定されない。塩化ナトリウムは、０〜３００ｍＭ（液剤剤形については最適には１５０ｍＭ）の濃度で、溶液の毒性を調整するために用いることができる。凍結保護剤は、主として０〜１０％のショ糖（最適には０．５〜１．０％）が、凍結乾燥された投与剤形に含まれてもよい。その他の好適な凍結保護剤としては、トレハロース及び乳糖が挙げられる。充填剤は、主として１〜１０％のマンニトール（最適には２〜４％）が、凍結乾燥された投与剤形に含まれてもよい。安定化剤は、主として１〜５０ｍＭのＬ−メチオニン（最適には５〜１０ｍＭ）が、液体及び凍結乾燥された投与剤形の双方に用いられてもよい。その他の好適な充填剤としては、グリシン、アルギニンが挙げられ、０〜０．０５％（最適には０．００５〜０．０１％）のポリソルベート−８０として含まれてもよい。追加の界面活性剤としては、限定されないが、ポリソルベート２０及びＢＲＩＪ界面活性剤が挙げられる。非経口投与用の注射可能な溶液として調製される、抗体または抗体部分を含む医薬組成物は、治療用タンパク質（例えば、抗体）の吸収、または分散を増加させるために使用されるものなど、アジュバントとして有用である作用物質を更に含むことができる。特に有用なアジュバントは、ヒアルロニダーゼ（Ｈｙｌｅｎｅｘ（登録商標）組換えヒトヒアルロニダーゼなど）である。注射可能な溶液中へのヒアルロニダーゼの添加は、非経口投与後に、特に皮下投与後に、ヒトのバイオアベイラビリティーを改善する。これはまた、痛み及び不快感がより少なく、かつ注射部位反応の発生を最小限に抑えながら、より大きな注射部位容量（すなわち、１ｍｌを超える）を可能にする（国際公開第２００４／０７８１４０号及び米国特許出願公開第２００６１０４９６８号を参照）。
【０３８４】
本発明の組成物は、多様な形態であってよい。これらとしては、例えば、液体溶液（例えば、注射可能かつ輸注可能な溶液）、分散液または懸濁液、錠剤、丸剤、粉剤、リポソーム及び坐剤などの、液体、半固体及び固体投与剤形が挙げられる。例示的な剤形は、目的とされる投与のモード及び治療用途に依存する。典型的な組成物は、その他の抗体を用いたヒトの受動免疫に対して使用される組成物と類似した組成物などの、注射可能なまたは輸注可能な溶液の剤形である。投与の例示的なモードは、非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。一実施形態では、抗体は、静脈内輸注または注射によって投与される。別の実施形態では、抗体は、筋肉内または皮下注射によって投与される。
【０３８５】
治療用組成物は、典型的には、製造及び保管の条件下で、無菌かつ安定でなければならない。この組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散液、リポソーム、または高薬物濃度に適したその他の秩序化された構造として製剤可能である。無菌の注射可能な溶液は、必要量の活性化合物（すなわち、抗体または抗体部分）を適切な溶媒中で上に列記されている成分の１つまたは組み合わせと混合することにより調製でき、必要であればその後濾過滅菌を行う。一般的に、分散液は、活性成分を塩基性分散媒体及び前述の必要なその他の成分を含有する無菌ビヒクルに混ぜることで調製される。無菌の注射可能な溶液の調製のための無菌凍結乾燥粉末の場合には、例示的な調製方法は、予め滅菌濾過されたその溶液から、活性成分および任意の追加の所望される成分の粉末を与える真空乾燥及び噴霧乾燥である。溶液の適正な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用により、分散液の場合は必要な粒径の維持により、及び界面活性剤の使用により維持できる。注射可能な組成物の延長された吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩類及びゼラチンを組成物中に組み込むことによって実現できる。
【０３８６】
抗体及び抗体部分は、当該技術分野で既知の多様な方法によって投与されるが、多くの治療用途があるとはいえ、投与の例示的な経路／モードは、皮下注射、静脈内注射または輸注である。当業者であれば理解されるように、投与の経路及び／またはモードは、所望される結果に応じて異なるであろう。特定の実施形態では、例えば、活性化合物は、インプラント、経皮パッチ、及びマイクロカプセル化された送達系を包含する徐放性製剤として、急速な放出に対して化合物を防護するような担体と共に調製してよい。エチレンビニルアセテート、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生体分解可能な生体適合性のポリマーを使用できる。このような製剤の多くの調製方法は特許化され、または当業者に一般的に既知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ、Ｉ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編集、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク、１９７８を参照されたい。
【０３８７】
特定の実施形態では、抗体または抗体部分は、例えば、不活性希釈剤または同化性の食用担体と共に経口投与できる。化合物（及び所望の場合、その他の成分）はまた、硬質または軟質シェルゼラチンカプセル内に封入されてもよく、錠剤へと圧縮されてもよく、または対象の食事に直接組み込まれてもよい。経口治療投与については、化合物は、賦形剤に組み込まれ、摂取可能な錠剤、口腔錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、ウエハース等の剤形で使用できる。非経口投与以外で化合物を投与するためには、化合物を、その不活性化を防止するための物質でコーティングすること、または化合物をそれらと同時投与することが必要な場合がある。
【０３８８】
補助的活性化合物もまた、組成物に組み込むことができる。ある種の実施形態においては、抗体または抗体部分は、ＳＯＳＴ活性が有害である障害を治療するために有用である１つ以上の追加の治療剤と共に同時製剤化され、及び／または同時投与される。例えば、抗ｈＳＯＳＴ抗体または抗体部分は、その他の標的（例えば、その他のサイトカインに結合する抗体、または細胞表面分子に結合する抗体）に結合する１つ以上の追加の抗体と同時製剤化され、及び／または同時投与されてもよい。更に、１つ以上の抗体は、前述の治療剤の２つ以上と組み合わせて使用してもよい。このような併用療法は、投与される治療剤のより低い投与量を好都合に使用でき、したがって、様々な単独療法に伴って生じる可能性のある毒性または合併症を回避できる。
【０３８９】
特定の実施形態では、ＳＯＳＴに対する抗体またはその断片は、当該技術分野で既知の半減期延長ビヒクルに結合される。このようなビヒクルとしては、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコール、及びデキストランが挙げられるが、これらに限定されない。このようなビヒクルは、例えば、米国特許出願第０９／４２８，０８２号及び公開されたＰＣＴ公開ＷＯ９９／２５０４４に記載されている。
【０３９０】
特定の実施形態では、本発明の抗体もしくは本発明の別の予防剤または治療剤をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列が、遺伝子療法として、障害またはその１つ以上の症状を治療し、予防し、管理し、または軽減するために投与される。遺伝子療法とは、発現されたまたは発現可能な核酸の対象への投与により実行される療法を指す。本発明で提供される実施形態では、この核酸は、予防的または治療的効果を媒介する、それらがコードする抗体もしくは予防剤または治療剤を産生する。
【０３９１】
当該技術分野で利用可能な遺伝子療法のための方法のいずれかが提供される。遺伝子療法の方法の概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら著、１９９３、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、１２：４８８−５０５；Ｗｕら著、“Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ”、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ、３：８７−９５（１９９１）；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ著、１９９３、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ、３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ著、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６０：９２６−９３２（１９９３）；及びＭｏｒｇａｎ及びＡｎｄｅｒｓｏｎ著、“Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ”、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、６２：１９１−２１７（１９９３）；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｃ．著、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１１：１５５（１９９３）を参照されたい。使用可能な組換えＤＮＡ技術の技術分野で一般的に既知の方法は、Ａｕｓｕｂｅｌら（編集）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆Ｓｏｎｓ、ニューヨーク（１９９３）；及びＫｒｉｅｇｌｅｒ著、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク（１９９０）に記載されている。遺伝子療法の様々な方法の詳細な説明は、米国特許出願公開第２００５／００４２６６４号に開示されている。
【０３９２】
スクレロスチンは、免疫及び炎症性要素を含む様々な疾患に伴う病理で重要な役割を果たしている。これらの疾患としては、後天性免疫不全症候群；後天性免疫不全関連疾患；後天性悪性貧血；急性冠状症候群；急性または慢性疼痛；（異なる形態の疼痛）；急性突発性多発神経炎；臓器移植に関連する急性免疫疾患；臓器移植に伴う急性または慢性免疫疾患； 急性炎症性脱髄性多発根ニューロパチー；急性虚血；急性肝疾患；急性リウマチ熱；急性横断性脊髄炎；アジソン病；成人性（急性）呼吸促迫症候群；成人性スチル病；アルコール肝硬変；アルコール誘導肝損傷；アレルギー性疾患；アレルギー；脱毛症；円形脱毛症；アルツハイマー病；アナフィラキシー；強直性脊椎炎；強直性脊椎炎関連肝疾患；抗−リン脂質抗体症候群；再生不良性貧血；動脈硬化症；関節症；喘息；アテローム性疾患／動脈硬化症；アテローム硬化症；アトピー性アレルギー；アトピー性湿疹；アトピー性皮膚炎；萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症；自己免疫性水疱性疾患；自己免疫性皮膚炎；自己免疫性糖尿病；溶連菌感染症に伴う自己免疫障害；自己免疫性腸疾患；自己免疫性溶血性貧血；自己免疫性肝炎；自己免疫性聴覚障害；自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）；自己免疫仲介低血糖症；自己免疫性心筋炎；自己免疫性好中球減少症；自己免疫性早期卵巣不全；自己免疫性血小板減少症（ＡＩＴＰ）；自己免疫性甲状腺疾患；自己免疫性ブドウ膜炎；閉塞性細気管支炎；ベーチェット病；眼瞼炎；気管支拡張症；水疱性類疱瘡；悪液質；心血管疾患；劇症型抗リン脂質抗体症候群；セリアック病；頚椎骨軟化症；クラミジア感染症；胆汁鬱滞；慢性活動性肝炎；慢性好酸球性肺炎；慢性疲労症候群；臓器移植に関連する慢性免疫疾患；慢性虚血；慢性肝疾患；慢性粘膜皮膚カンジダ症；瘢痕性粘膜類天疱瘡；多発性硬化症の危険性のある臨床的に単離された症候群（ＣＩＳ）；分類不能型免疫不全症（分類不能型低γグロブリン血症）；結合組織関連間質性肺疾患；結膜炎；クームズ陽性溶血性貧血；幼児期発生精神障害；慢性塞栓性呼吸器疾患（ＣＯＰＤ）；クローン病；特発性自己免疫性肝炎；特発性線維性肺胞炎；涙嚢炎；鬱病；皮膚硬化症；皮膚筋炎；肺疾患に関連する皮膚筋炎／多発性筋炎；糖尿病性網膜症；真性糖尿病；拡張型心筋症；円板状エリテマトーデス；椎間板ヘルニア；椎間板脱出；播種性血管内凝固症候群；薬物性肝炎；薬物性間質性肺炎；薬物誘発性溶血性貧血；心内膜炎症；子宮内膜症；眼内炎；滑膜炎；上強膜炎；多形紅斑；重症性多型紅斑；女性不妊症；線維症；線維性肺疾患；妊娠性水疱性類天疱瘡；巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ）；糸球体腎炎；甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）；グッドパスチャー症候群；通風性関節炎；移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、グレーブス病；Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染症；ビラン・バレー症候群（ＧＢＳ）；血鉄症関連肺疾患；枯草熱；心不全；溶血性貧血；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；Ｂ型肝炎；Ｃ型肝炎；ハンチントン舞踏病；甲状腺機能亢進症；副甲状腺機能低下症；特発性白血球減少症；特発性血小板減少症；特発性パーキンソン病；特発性間質肺炎；特異体質性肝疾患；ＩｇＥ媒介アレルギー；免疫溶血性貧血；封入体筋炎；感染性疾患；感染性眼炎症性疾患；炎症性大腸疾患；炎症性脱髄疾患；炎症性心疾患；炎症性腎疾患；インスリン依存性真性糖尿病；間質肺炎；ＩＰＦ／ＵＩＰ；虹彩炎；若年性慢性関節炎；若年性悪性貧血；若年性リウマチ性関節炎；川崎病；角膜炎；乾性角結膜炎；クスマウル病またはクスマルマイヤー病；ランドリー麻痺；ランゲルハンス細胞組織球症；線状ＩｇＡ病；網状皮斑；ライム関節炎；リンパ球浸潤性肺疾患；黄斑変性症；男性不妊特発性またはＮＯＳ；悪性腫瘍；腎臓の微視的血管炎；顕微鏡的多発血管炎；混合性結合組織病関連肺疾患；モルブス・ベヒテレフ（Ｍｏｒｂｕｓ  Ｂｅｃｈｔｅｒｅｖ）；運動ニューロン障害；粘膜類天疱瘡；多発性硬化症（全サブタイプ：原発性進行型、二次性進行型、再発寛解型等）；多臓器不全；筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病；重症筋無力症；骨髄異形成症候群；心筋梗塞；心筋炎；ネフローゼ症候群；神経根障害；神経障害；非アルコール性脂肪性肝炎；非Ａ非Ｂ型肝炎；視神経炎；臓器移植拒絶反応；変形性関節炎；骨溶解症；卵巣癌；卵巣機能不全；膵炎；寄生虫症；パーキンソン病；小関節型ＪＲＡ；類天疱瘡；落葉状天疱瘡；尋常性天疱瘡；末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）；末梢血管疾患（ＰＶＤ）；末梢動脈疾患（ＰＡＤ）；水晶体性ブドウ膜炎；静脈炎；結節性多発動脈炎（または結節性動脈周囲炎）；多発性軟骨炎；リウマチ性多発筋痛炎；白毛；多関節型ＪＲＡ；多内分泌腺不全症候群；多発性筋炎；多腺性不全Ｉ型及び多腺性不全ＩＩ型；リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）；感染後間質性肺疾患；炎症後間質性肺疾患；ポストポンプ症候群；早期卵巣機能不全；原発性胆汁性肝硬変；原発性粘液水腫；原発性パーキンソニズム；原発性硬化性胆管炎；原発性硬化性肝炎；原発性血管炎；前立腺及び直腸癌並びに造血器悪性腫瘍（白血病及びリンパ腫）；前立腺炎；乾癬；１型乾癬；２型乾癬；乾癬性関節炎；乾癬性関節症；結合組織疾患に続発する肺高血圧症；結節性多発動脈炎の肺症状；赤芽球癆；原発性副腎不全；放射性線維症；反応性関節炎；ライター病；再発性視神経脊髄炎；腎臓病ＮＯＳ；再狭窄；関節リウマチ；関節リウマチ関連間質性肺疾患；リウマチ性心疾患；ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、座瘡、膿疱症、骨化過剰症及び骨炎）；サルコイドーシス；統合失調症；シュミット症候群；強皮症；続発性アミロイド症；ショック肺；強膜炎；坐骨神経痛；二次性副腎機能低下症；敗血症症候群；敗血症性関節炎；敗血症性ショック；血清反応陰性関節症；シリコーン関連結合組織病；シェーグレン病関連肺疾患；シェーグレン症候群；スネドン・ウィルキンソン皮膚病；精子自己免疫（ｓｐｅｒｍ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ）；脊椎関節炎；強直性脊椎炎；スチーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）；スチル病；脳卒中；交感性眼炎；全身性炎症反応症候群；全身性エリテマトーデス；全身性エリテマトーデス関連肺疾患；全身性硬化症；全身性硬化症連間質性肺疾患；高安病／動脈炎；側頭動脈炎；Ｔｈ２タイプ及びＴｈ１タイプ媒介疾患；甲状腺炎；中毒性ショック症候群；トキソプラスマ性網膜炎；中毒性表皮壊死症；横断性脊髄炎；ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子Ｉ型受容体（ＴＮＦＲ）関連周期性症候群（Ｔｕｍｏｒ−ｎｅｃｒｏｓｉ��  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ１（ＴＮＦＲ）−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ））；黒色表皮腫に関するＢ型インスリン耐性（ｔｙｐｅ  Ｂ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｗｉｔｈ  ａｃａｎｔｈｏｓｉｓ  ｎｉｇｒｉｃａｎｓ）；１型アレルギー反応；１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫またはルポイド肝炎）；２型自己免疫肝炎（坑ＬＫＭ抗体肝炎）；ＩＩ型糖尿病；潰瘍性大腸炎性関節症；潰瘍性大腸炎；じんましん；通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）；ブドウ膜炎；血管炎瀰漫性肺疾患；血管炎；春季カタル；ウイルス性網膜炎；白斑症；フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）；ウェグナー肉芽腫症；ウェット黄斑変性症；創傷治癒；またはエルシニア及びサルモネラ関連関節症が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３９３】
本発明の抗体及び抗体部分を使用して、自己免疫疾患、特に炎症、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、変形性関節炎、乾癬、多発性硬化症（ＭＳ）及び他の自己免疫疾患に関わる疾患に罹っているヒトを治療できる。
【０３９４】
抗体または抗体部分は、自己免疫疾患及び炎症性疾患の治療に有用な１つ以上の追加の治療剤と一緒に投与することも可能である。
【０３９５】
一実施形態において、本発明の組成物及び方法で治療されまたは診断され得る疾患としては、乳房、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢及び胆管、小腸、尿路（腎臓、膀胱及び尿路上皮を含む）、女性生殖路（子宮頚部、子宮及び卵巣並びに絨毛癌及び妊娠性絨毛性疾患を含む）、男性生殖路（前立腺、精嚢、精巣及び生殖細胞腫瘍を含む）、内分泌腺（甲状腺、副腎及び下垂体を含む）及び皮膚の癌腫、並びに血管腫、悪性黒色腫、肉腫（骨及び軟部組織から生じるもの並びにカポジ肉腫を含む）、脳、神経、眼および髄膜の腫瘍（星状膠細胞腫、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽細胞腫、シュワン細胞腫及び髄膜腫を含む）、白血病などの造血性悪性病変から生じる固形腫瘍、及びリンパ腫（ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫の両方）を含む原発性及び転移性の癌が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３９６】
別の実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、癌を治療するためにまたは腫瘍の転移の予防において使用される。このような治療は、単独でまたは放射線療法及び／または化学療法剤などの別の治療剤または治療と組み合わせて、抗体またはその抗原結合部分を投与することを含んでもよい。
【０３９７】
本発明の抗体またはその抗原結合部分は、抗腫瘍剤、放射線療法、化学療法（ＤＮＡアルキル化剤、シスプラチン、カルボプラチン、抗チューブリン剤、パクリタキセル、ドセタキセル、タキソール、ドキソルビシン、ゲムシタビン、ジェムザール、アントラサイクリン、アドリアマイシン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、イリノテカン、受容体チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ）、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、キナーゼ阻害剤、及びｓｉＲＮＡを含むが、これらに限定されない作用物質と組み合わせることが可能である。
【０３９８】
本発明の結合タンパク質は、様々な疾患の治療に有用な１つ以上の追加の治療剤と共に投与することも可能である。
【０３９９】
本発明の抗体またはその抗体結合部分は、このような疾患を治療するために、単独で、または組み合わせて使用することが可能である。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、単独で、または追加の作用物質、例えば、治療剤と組み合わせて使用でき、該追加の作用物質は、その意図される目的に対して、当業者によって選択されることを理解するべきである。例えば、この追加の作用物質は、本発明の抗体によって治療されている疾患または症状を治療するために有用であると本分野で認識されている治療剤とすることができる。追加の作用物質はまた、治療用組成物に有益な属性を付与する作用物質、例えば、組成物の粘性に影響を与える作用物質とすることができる。
【０４００】
本発明に含まれるべき組み合わせは、それらの意図される目的に対して有用な組み合わせであることを更に理解するべきである。以下に記載される作用物質は、例示を目的とするものであって、限定されることを意図するものではない。この組み合わせは、本発明の抗体及び以下のリストから選択される少なくとも１つの追加の作用物質であり得る。この組み合わせはまた、形成された組成物がその意図される機能を実行することが可能であるように、複数の追加の薬剤、例えば、２つまたは３つの追加の作用物質を含むこともできる。
【０４０１】
例示的な組み合わせは、イブプロフェンのような薬物を含む、ＮＳＡＩＤとも称される非ステロイド性抗炎症薬（複数可）である。その他の例示の組み合わせは、プレドニゾンを含むコルチコステロイドであり、ステロイド使用の周知の副作用は、本発明の抗スクレロスチン抗体と組み合わせて患者を治療する場合、ステロイド用量を徐々に減らすことによって、低減することが可能であり、または除去することさえもできる。本発明の抗体または抗体部分と組み合わせることが可能なリウマチ性関節炎に対する治療剤の非限定的な例としては、以下のもの：サイトカイン抑制性高炎症薬（複数可）（ＣＳＡＩＤ）；その他のヒトサイトカインまたは増殖因子（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、インターフェロン、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、及びＰＤＧＦ）に対する抗体またはそのアンタゴニストが挙げられるが、限定されない。抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、ＣＴＬＡまたはＣＤ１５４を含むそれらのリガンド（ｇｐ３９またはＣＤ４０Ｌ）などの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることが可能である。
【０４０２】
治療剤の例示的な組み合わせは、自己免疫及びこれに続く炎症カスケードを妨害し得る。例示的な例としては、キメラ、ヒト化またはヒトＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７、（ＰＣＴ公開ＷＯ９７／２９１３１）、ＣＡ２（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標））、ＣＤＰ  ５７１、及び可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体、これらの誘導体、（ｐ７５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））またはｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）、及び更にＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤などのようなＴＮＦ拮抗薬が含まれる。同様に、ＩＬ−１阻害剤（インターロイキン−１変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ＲＡ等）は、同じ理由のために有効であり得る。その他の例示的な組み合わせには、インターロイキン１１が含まれる。更に別の例示的な組み合わせは、ＳＯＳＴ機能と平行して、ＳＯＳＴ機能に依存して、またはＳＯＳＴ機能と協調して作用し得る自己免疫応答の他の中心的プレーヤーである。更に別の例示的な組み合わせは、非破壊性の抗ＣＤ４阻害剤である。更に別の例示的な組み合わせとしては、抗体、可溶性受容体または拮抗性リガンドを含む、共同刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）またはＣＤ８６（Ｂ７．２）の拮抗薬が含まれる。
【０４０３】
本発明の抗体またはその抗原結合部分は、メトトレキサート、６−ＭＰ、アザチオプリンスルファサラジン、メサラジン、オルサラジン、クロロキニン／ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、アウロチオリンゴ酸（筋肉内及び経口）、アザチオプリン、コルヒチン、コルチコステロイド（経口、吸入及び局所注射）、ベータ−２アドレナリン作動性受容体作動薬（サルブタモール、テルブタリン、サルメテラール）、キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）、クロモグリカート、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトロピン及びオキシトロピウム、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラート・モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシン拮抗薬、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦ−αまたはＩＬ−１などの炎症誘発性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する作用物質（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体及びそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体及び誘導体ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標）及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦβ）、セレコキシブ、葉酸、硫酸ヒドロキシクロロキン、ロフェコキシブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、ナプロキセン、バルデコキシブ、スルファサラジン、メチルプレドニゾロン、メキシカム、酢酸メチルプレドニゾロン、金チオリンゴ酸ナトリウム、アスピリン、トリアムシノロン・アセトニド、プロポキシフェンナプシラート／ａｐａｐ、葉酸塩、ナブメトン、ジクロフェナク、ピロキシカム、エトドラク、ジクロフェナクナトリウム、オキサプロジン、塩酸オキシコドン、ヒドロコドン二酒石酸塩／ａｐａｐ、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フェンタニル、アナキンラ、ヒト組換え、塩酸トラマドール、サルサラート、スリンダク、シアノコバルミン／ｆａ／ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロナートナトリウム、プレドニゾロン、硫酸モルヒネ、塩酸リドカイン、インドメタシン、硫酸グルコサミン／コンドロイチン、塩酸アミトリプチリン、スルファジアジン、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸オロパタジン、ミソプロストール、ナプロキセンナトリウム、オメプラゾール、シクロホスファミド、リツキシマブＩＬ−１  ＴＲＡＰ、ＭＲＡ、ＣＴＬＡ４−ＩＧ、ＩＬ−１８  ＢＰ、抗−ＩＬ−１８、抗−ＩＬ−１５、ＢＩＲＢ−７９６、ＳＣＩＯ−４６９、ＶＸ−７０２、ＡＭＧ−５４８、ＶＸ−７４０、ロフルミラスト、ＩＣ−４８５、ＣＤＣ−８０１、及びメソプラムなどの作用物質とも組み合され得る。例示的な組み合わせには、メトトレキサートまたはレフルノミドが含まれ、中度または重度のリウマチ性関節炎の症例では、シクロスポリンが含まれる。
【０４０４】
リウマチ性関節炎（ＲＡ）を治療するために、結合タンパク質と組み合わせて使用することも可能な非限定的な追加の作用物質としては、以下の非ステロイド性抗炎症薬（複数可）（ＮＳＡＩＤ）；サイトカイン抑制性抗炎症薬（複数可）（ＣＳＡＩＤ）；ＣＤＰ−５７１／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化された抗ＴＮＦα抗体；Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｂａｙｅｒ）；ｃＡ２／インフリキシマブ（キメラ抗−ＴＮＦα抗体；Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ／エタネルセプト（７５ｋＤＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質；イムネックス；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９４）第３７巻、Ｓ２９５；Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．（１９９６年）、第４４巻、２３５Ａを参照；５５ｋｄＴＮＦ−ＩｇＧ（５５ｋＤＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質；Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ）；ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ２１０３９６（抗原刺激された（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）非枯渇性抗ＣＤ４抗体；ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９５）、第３８巻、Ｓ１８５を参照；ＤＡＢ４８６−ＩＬ−２及び／またはＤＡＢ３８９−ＩＬ−２（ＩＬ−２融合タンパク質；Ｓｅｒａｇｅｎ；（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９３）、第３６巻、１２２３参照）；抗Ｔａｃ（ヒト化抗ＩＬ−２Ｒα；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ／Ｒｏｃｈｅ）；ＩＬ−４（抗炎症性サイトカイン；ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１０（ＳＣＨ５２０００；組換えＩＬ−１０、抗炎症性サイトカイン；ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−４；ＩＬ−１０及び／またはＩＬ−４アゴニスト（例えば、アゴニスト抗体）；ＩＬ−１ＲＡ（ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；Ｓｙｎｅｒｇｅｎ／Ａｍｇｅｎ）；アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）／Ａｍｇｅｎ）；ＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦ（可溶性ＴＮＦ結合タンパク質；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）、第３９巻、Ｎｏ．９（補遺）、Ｓ２８４；Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．−Ｈｅａｒｔ  ａｎｄ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（１９９５）、第２６８巻、３７−４２頁を参照）；Ｒ９７３４０１（ホスホジエステラーゼＩＶ型阻害剤；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）第３９巻、Ｎｏ．９（補遺）、Ｓ２８２参照；ＭＫ−９６６（ＣＯＸ−２阻害剤；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）第３９巻、Ｎｏ．９（補遺）、Ｓ８１参照）；Ｉｌｏｐｒｏｓｔ（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）、第３９巻、Ｎｏ．９（補遺）、Ｓ８２参照；メトトレキサート；サリドマイド（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）、第３９巻、Ｎｏ．９（補遺）、Ｓ２８２参照）及びサリドマイド関連薬（例えば、Ｃｅｌｇｅｎ）；レフノミド（抗炎症性及びサイトカイン阻害剤；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）第３９巻、Ｎｏ．９（補遺）、Ｓ１３１；Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９６）、第４５巻、１０３−１０７頁参照）；トラネキサム酸（プラスミノーゲン活性化の阻害剤；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６年）、第３９巻、Ｎｏ．９（補遺）、Ｓ２８４参照）；Ｔ−６１４（サイトカイン阻害剤；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）、第３９巻、Ｎｏ．９（補遺）、Ｓ２８２参照）；プロスタグランジンＥ１（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）、第３９巻、Ｎｏ．９（補遺）、Ｓ２８２参照）；Ｔｅｎｉｄａｐ（非ステロイド性抗炎症薬；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６年）、第３９巻、Ｎｏ．９（補遺）、Ｓ２８０参照）；ナプロキセン（非ステロイド性抗炎症薬；例えば、Ｎｅｕｒｏ  Ｒｅｐｏｒｔ（１９９６）、第７巻、１２０９−１２１３頁参照）；メロキシカム（非ステロイド性抗炎症薬）；イブプロフェン（非ステロイド性抗炎症薬）；ピロキシカム（非ステロイド性抗炎症薬）；ジクロフェナク（非ステロイド性抗炎症薬）；インドメタシン（非ステロイド性抗炎症薬）；スルファサラジン（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）、第３９巻、Ｎｏ．９（補遺）、Ｓ２８１参照）；アザチオプリン（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）、第３９巻、Ｎｏ．９（補遺）、Ｓ２８１参照）；ＩＣＥ阻害剤（酵素インターロイキン１β変換酵素の阻害剤）；ｚａｐ−７０及び／またはｌｃｋ阻害剤（チロシンキナーゼｚａｐ−７０またはｌｃｋの阻害剤）；ＶＥＧＦ阻害剤及び／またはＶＥＧＦ−Ｒ阻害剤（血管内皮細胞増殖因子または血管内皮細胞増殖因子受容体の阻害剤；血管新生の阻害剤）；コルチコステロイド抗炎症薬（例えば、ＳＢ２０３５８０）；ＴＮＦ−コンベルターゼ阻害剤；抗ＩＬ−１２抗体；抗ＩＬ−１８抗体；インターロイキン−１１（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）、第３９巻、Ｎｏ．９（補遺）、Ｓ２９６参照）；インターロイキン−１３（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）、第３９巻、Ｎｏ．９（補遺）、Ｓ３０８参照）；インターロイキン−１７阻害剤（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）、第３９巻、Ｎｏ．９（補遺）、Ｓ１２０参照）；金；ペニシラミン；クロロキン；クロラムブシル；ヒドロキシクロロキン；シクロスポリン；シクロホスファミド；全リンパ系照射；抗胸腺細胞グロブリン；抗ＣＤ４抗体；ＣＤ５トキシン；経口投与されたペプチド及びコラーゲン；ロベンザリト二ナトリウム；サイトカイン制御作用物質（ＣＲＡ）ＨＰ２２８及びＨＰ４６６（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；ＩＣＡＭ−Ｉアンチセンス・ホスホロチオアートオリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ２３０２；Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；可溶性補体受容体１（ＴＰ１０；Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）；プレドニゾン；オルゴテイン；グリコサミノグリカンポリサルファート；ミノサイクリン；抗ＩＬ２Ｒ抗体；マウス及び植物脂質（魚及び植物種子脂肪酸；例えば、ＤｅＬｕｃａら著、（１９９５）、Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．、２１：７５９−７７７参照）；アウラノフィン；フェニルブタゾン；メクロフェナミン酸；フルフェナミン酸；静脈内免疫グロブリン；ジレウトン；アザリビジン；ミコフェノール酸（ＲＳ−６１４４３）；タクロリムス（ＦＫ−５０６）；シロリムス（ラパマイシン）；アミプリロース（テラフェクチン）；クラドリビン（２−クロロデオキシアデノシン）；メトトレキサート；ｂｃｌ−２阻害剤（Ｂｒｕｎｃｋｏ，Ｍｉｌａｎら著、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００７）、５０（４）、６４１−６６２参照）；抗ウイルス剤及び免疫調節剤が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０４０５】
一実施形態において、本発明の結合タンパク質またはその抗原結合部分は、リウマチ性関節炎（ＲＡ）の治療用の以下の作用物質の１つと組み合わせて投与される。ＫＤＲの小分子阻害剤、Ｔｉｅ−２の小分子阻害剤、メトトレキサート；プレドニゾン；セレコキシブ；葉酸；硫酸ヒドロキシクロロキン；ロフェコキシブ；エタネルセプト；インフリキシマブ；レフルノミド；ナプロキセン；バルデコキシブ；スルファサラジン；メチルプレドニゾロン；イブプロフェン；メロキシカム；酢酸メチルプレドニゾロン；金チオリンゴ酸ナトリウム；アスピリン；アザチオプリン；トリアムシノロン・アセトニド；プロプキシフェン・ナプシラート／ａｐａｐ；フォラート；ナブメトン；ジクロフェナク；ピロキシカム；エトドラク；ジクロフェナクナトリウム；オキサプロジン、塩酸オキシコドン、重酒石酸ヒドロコドン／ａｐａｐ；ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール；フェンタニル；アナキンラ、ヒト組換え；塩酸トラマドール；サルサラート；スリンダク；シアノコバラミン／ｆａ／ピリドキシン；アセトアミノェン；アレンドロナートナトリウム；プレドニゾロン；硫酸モルヒネ；塩酸リドカイン；インドメタシン；硫酸グルコサミン／コンドロイチン；シクロスポリン；塩酸アミトリプチリン；スルファジアジン；塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン；塩酸オロパタジン；ミソプロストール；ナプロキセンナトリウム；オメプラゾール；ミコフェノラート・モフェチル；シクロホスファミド；リツキシマブ、ＩＬ−１ＴＲＡＰ；ＭＲＡ；ＣＴＬＡ４−ＩＧ；ＩＬ−１８ＢＰ；ＩＬ−１２／２３；抗ＩＬ−１８；抗ＩＬ−１５；ＢＩＲＢ−７９６；ＳＣＩＯ−４６９；ＶＸ−７０２；ＡＭＧ−５４８；ＶＸ７４０；ロフルミラスト；ＩＣ−４８５；ＣＤＣ−８０１及びメソプラム。
【０４０６】
結合タンパク質と共に組み合わせることが可能な炎症性腸疾患に対する治療剤の非限定的な例としては、以下のもの：ブデノシド；上皮増殖因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチラート；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１βｍＡｂ；抗ＩＬ−６ｍＡｂ；増殖因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；他のヒトサイトカインまたは増殖因子（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ）に対する抗体またはこれらのアンタゴニストが含まれる。抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはこれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることが可能である。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラート・モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦαまたはＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する作用物質（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体及びそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）及び炎症抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦβ）及びｂｃｌ−２阻害剤などの作用物質とも組み合わされ得る。
【０４０７】
結合タンパク質を組み合わせることが可能な、クローン病に対する治療剤の例には、以下のもの：ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体、アダリムマブ（ＰＣＴ公開ＷＯ９７／２９１３１；ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物、（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ（商標）））阻害剤及びＰＤＥ４阻害剤が含まれる。抗体またはその抗原結合部分は、コルチコステロイド、例えば、ブデノシド及びデキサメタゾンと組み合わせることが可能である。結合タンパク質またはこれらの抗原結合部分は、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸及びオルサラジンなどの作用物質、並びにＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインの合成または作用を妨害する作用物質（例えば、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤及びＩＬ−１ｒａ）とも組み合わされ得る。抗体またはその抗原結合部分は、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤６−メルカプトプリンとともに使用され得る。結合タンパク質またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１１と組み合わせることが可能である。結合タンパク質またはその抗原結合部分は、メサラミン、プレドニゾン、アザチオプリン、メルカプトプリン、インフリキシマブ、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ジフェノキシラート／硫酸アトロピン、塩酸ロペラミド、メトトレキサート、オメプラゾール、フォラート、シプロフロキサシン／デキストロース−水、重酒石酸ヒドロコドン／ａｐａｐ、テトラサイクリン塩酸塩、フルオシノニド、メトロニダゾール、チメロサール／ホウ酸、コレスチラミン／スクロース、塩酸シプロフロキサシン、硫酸ヒヨスチアミン、塩酸メペリジン、塩酸ミダゾラム、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸プロメタジン、リン酸ナトリウム、スルファメトキサゾール／トリメトプリム、セレコキシブ、ポリカルボフィル、ナプシル酸プロポキシフェン、ヒドロコルチゾン、マルチビタミン、バルサラジド二ナトリウム、リン酸コデイン／ａｐａｐ、塩酸コレセベラム、シアノコバラミン、葉酸、レボフロキサシン、メチルプレドニソロン、ナタリズマブ及びインターフェロンγと組み合わせることが可能である。
【０４０８】
結合タンパク質と組み合わせることが可能な、多発性硬化症（ＭＳ）のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：コルチコステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキサート；４−アミノピリジン；チザニジン；インターフェロン−β１ａ（ＡＶＯＮＥＸ；Ｂｉｏｇｅｎ）；インターフェロン−β１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；インターフェロンα−ｎ３）（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｆｕｊｉｍｏｔｏ）、インターフェロン−α（Ａｌｆａ  Ｗａｓｓｅｒｍａｎｎ／Ｊ＆Ｊ）、インターフェロン−β１Ａ−ＩＦ（Ｓｅｒｏｎｏ／Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＰＥＧインターフェロンα２ｂ（Ｅｎｚｏｎ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、コポリマー１（Ｃｏｐ−１；ＣＯＰＡＸＯＮＥ；Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎ．）；高圧酸素；静脈内免疫グロブリン；クラブリビン；他のヒトサイトカインまたは増殖因子（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ）及びそれらの受容体に対する抗体またはこれらのアンタゴニストが含まれる。結合タンパク質は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０またはこれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることが可能である。結合タンパク質は、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラート・モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦαまたはＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する作用物質（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＡＣＥ阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、炎症抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３及びＴＧＦβ）及びｂｃｌ−２阻害剤などの作用物質とも組み合わされ得る。
【０４０９】
結合タンパク質と組み合わせることが可能な、多発性硬化症のための治療剤の例には、インターフェロン−β、例えば、ＩＦＮβ１ａ及びＩＦＮβ１ｂ；コパキソン（ｃｏｐａｘｏｎｅ）、コルチコステロイド、カスパーゼ阻害剤、例えばカスパーゼ−１の阻害剤、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤並びにＣＤ４０リガンド及びＣＤ８０に対する抗体が含まれる。
【０４１０】
本発明の結合タンパク質は、アレムツズマブ、ドロナビノール、ユニメド、ダクリズマブ、ミトキサントロン、塩酸キサリプロデン、ファムプリジン、酢酸グラチラマー、ナタリズマブ、シンナビドール、ａ−イムノカインＮＮＳＯ３、ＡＢＲ−２１５０６２、ＡｎｅｒｇｉＸ．ＭＳ、ケモカイン受容体アンタゴニスト、ＢＢＲ−２７７８、カラグアリン、ＣＰＩ−１１８９、ＬＥＭ（リポソーム封入されたミトキサントロン）、ＴＨＣ．ＣＢＤ（カンナビノイドアゴニスト）ＭＢＰ−８２９８、メソプラム（ＰＤＥ４阻害剤）、ＭＮＡ−７１５、抗ＩＬ−６受容体抗体、ニューロバックス、ピルフェニドンアロトラップ
１２５８（ＲＤＰ−１２５８）、ｓＴＮＦ−Ｒ１、タラムパネル、テリフルノミド、ＴＧＦ−β２、チプリモチド、ＶＬＡ−４アンタゴニスト（例えば、ＴＲ−１４０３５、ＶＬＡ４Ｕｌｔｒａｈａｌｅｒ、Ａｎｔｅｇｒａｎ−ＥＬＡＮ／Ｂｉｏｇｅｎ）、インターフェロンγアンタゴニスト、ＩＬ−４アゴニストなどの作用物質とも組み合わされ得る。
【０４１１】
結合タンパク質と組み合わせることが可能な、狭心症のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：アスピリン、ニトログリセリン、イソソルバイド・モノニトラート、コハク酸メトプロロール、アテノロール、酒石酸メトプロロール、ベシル酸アムロジピン、塩酸ジルチアゼム、硝酸イソソルビド、重硫酸クロピドグレル、ニフェジピン、アトロバスタチンカルシウム、塩化カリウム、フロセミド、シンバスタチン、塩酸ベラパミル、ジゴキシン、塩酸プロプラノロール、カルベジロール、リシノプリル、スピロノラクトン、ヒドロクロロチアジド、マレイン酸エナラプリル、ナドロール、ラミプリル、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、バルサルタン、塩酸ソタロール、フェノフィブラート、エゼチミブ、ブメタニド、ロサルタンカリウム、リシノプリル／ヒドロクロロチアジド、フェロジピン、カプトプリル、フマル酸ビソプロロールが含まれる。
【０４１２】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、強直性脊椎炎のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：イブプロフェン、ジクロフェナクおよびミソプロストール、ナプロキセン、メロキシカム、インドメタシン、ジクロフェナク、セレコキシブ、ロフェコキシブ、スルファサラジン、メトトレキサート、アザチオプリン、ミノサイクリン、プレドニゾン、エタネルセプト、インフリキシマブが含まれる。
【０４１３】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、喘息のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：アルブテロール、サルメテロール／フルチカゾン、モンテルカストナトリウム、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニド、プレドニゾン、キシナホ酸サルメテロール、塩酸レバルブテロール、硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、リン酸プレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロン・アセトニド、二プロピオン酸ベクロメタゾン、イプラトロピウム臭化物、アジスロマイシン、酢酸ピルブテロール、プレドニゾロン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、クラリスロマイシン、ザフィルルカスト、フマル酸フォルモテロール、インフルエンザウイルスワクチン、メチルプレドニゾロン、アミノキシシリン三水和物、フルニソリド、アレルギー注射、クロモリンナトリウム、塩酸フェキソフェナジン、フルニソリド／メントール、アモキシシリン／クラブラナート、レボフロキサシン、吸入補助装置、グアイフェネシン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、塩酸マキシフロキサシン、ドキシサイクリン水和物（ｈｙｃｌａｔｅ）、グアイフェネシン／ｄ−メトルファン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／クロルフェニル、ガチフロキサシン、塩酸セチリジン、フロ酸モメタゾン、キシナホ酸サルメテロール、ベンゾナタート、セファレキシン、ｐｅ／ヒドロコドン／クロルフェニル、塩酸セチリジン／シュードエフェドリン、フェニレフリン／ｃｏｄ／プロメタジン、コデイン／プロメタジン、セフプロジル、デキサメタゾン、グアイフェネシン／シュードエフェドリン、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、ネドクロミルナトリウム、硫酸テルブタリン、エピネフリン、メチルプレドニゾロン、硫酸メタプロテレノールが含まれる。
【０４１４】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることができる、ＣＯＰＤに対する治療剤の非限定的な例には、以下のもの：硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、イプラトロピウムブロミド、サルメテロール／フルチカゾン、アルブテロール、キシナホ酸サルメテロール、プロピオン酸フルチカゾン、プレドニゾン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、モンテルカストナトリウム、ブデソニド、フマル酸フォルモテロール、トリアムシノロン・アセトニド、レボフロキサシン、グアイフェネシン、アジスロマイシン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、塩酸レバルブテロール、フルニソリド、セフトリアキソンナトリウム、アミノキシシリン三水和物、ガチフロキサシン、ザフィルルカスト、アモキシシリン／クラブラナート、フルニソリド／メントール、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、硫酸メタプロテレノール、メチルプレドニゾロン、フロ酸モメタゾン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／クロロフェニル、酢酸ピルブテロール、ｐ−エフェドリン／ロラタジン、硫酸テルブタリン、チオトロピウムブロミド、（Ｒ，Ｒ）−フォルモテロール、ＴｇＡＡＴ、シロミラスト、ロフルミラストが含まれる。
【０４１５】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることができる、ＨＣＶに対する治療剤の非限定的な例には、以下のもの：インターフェロン−α−２ａ、インターフェロン−α−２ｂ、インターフェロン−αｃｏｎ１、インターフェロン−α−ｎ１、ＰＥＧ化されたインターフェロン−α−２ａ、ＰＥＧ化されたインターフェロン−α−２ｂ、リバビリン、Ｐｅｇインターフェロンα−２ｂ＋リバビリン、ウルソデオキシコール酸、グリシルリジン酸、チマルファシン、マキサミン、ＶＸ−４９７及び以下の標的：ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶプロテアーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶＩＲＥＳ（配列内リボソーム進入部位）へ
の介入を通じて、ＨＣＶを治療するために使用される任意の化合物が含まれる。
【０４１６】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることができる、特発性肺線維症のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：プレドニゾン、アザチオプリン、アルブテロール、コルヒチン、硫酸アルブテロール、ジゴキシン、γインターフェロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ロラゼパム、フロセミド、リシノプリル、ニトログリセリン、スピロノラクトン、シクロホスファミド、イプラトロピウムブロミド、アクチノマイシンｄ、アルテプラーゼ、プロピオン酸フルチカゾン、レボフロキサシン、硫酸メタプロテレノール、硫酸モルヒネ、塩酸オキシコドン、塩化カリウム、トリアムシノロン・アセトニド、タクロリムス無水物、カルシウム、インターフェロン−α、メトトレキサート、ミコフェノラート・モフェチル、インターフェロン−ガンマ−１βが含まれる。
【０４１７】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることができる、心筋梗塞のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：アスピリン、ニトログリセリン、酒石酸メトプロロール、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、重硫酸クロピドグレル、カルベジロール、アテノロール、硫酸モルヒネ、コハク酸メトプロロール、ワルファリンナトリウム、リシノプリル、一硝酸イソソルビド、ジゴキシン、フロセミド、シンバスタチン、ラミプリル、テネクテプラーゼ、マレイン酸エナラプリル、トルセミド、レタバーゼ、ロサルタンカリウム、塩酸キナプリル／ｍａｇ  ｃａｒｂ、ブメタニド、アルテプラーゼ、エナラプリラート、塩酸アミオダロン、塩酸チロフィバンｍ−水和物、塩酸ジルチアゼム、カプトプリル、イルベサルタン、バルサルタン、塩酸プロプラノロール、フォシノプリルナトリウム、塩酸リドカイン、エプチフィバチド、セファゾリンナトリウム、硫酸アトロピン、アミノカプロン酸、スピロノラクトン、インターフェロン、塩酸ソタロール、塩化カリウム、ドキュセートナトリウム、塩酸ドブタミン、アルプラゾラム、プラバスタチンナトリウム、アトロバスタチンカルシウム、塩酸ミダゾラム、塩酸メペリジン、二硝酸イソソルビド、エピネフリン、塩酸ドーパミン、ビバリルジン、ロスバスタチン、エゼチミブ／シ
ンバスタチン、アバシミブ、カリポリドが含まれる。
【０４１８】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、乾癬のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：ＫＤＲの小分子阻害剤、Ｔｉｅ−２の小分子阻害剤、カルシポトリエン、プロピオン酸クロベタゾール、トリアムシノロン・アセトニド、プロピオン酸ハロベタゾール、タザロテン、メトトレキサート、フルオシノニド、増強された（ａｕｇｍｅｎｔｅｄ）二プロピオン酸ベタメタゾン、フルオシノロン・アセトニド、アシトレチン、タールシャンプー、吉草酸ベタメタゾン、フロ酸モメタゾン、ケトコナゾール、パラモキシン／フルオシノロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、フルランドレノリド、尿素、ベタメ
タゾン、プロピオン酸クロベタゾール／皮膚軟化剤（ｅｍｏｌｌ）、プロピオン酸フルチカゾン、アジスロマイシン、ヒドロコルチゾン、保湿処方、葉酸、デソニド、ピメクロリムス、コールタール、二酢酸ジフロラゾン、葉酸エタネルセプト、乳酸、メトキサレン、ｈｃ／次没食子酸ビスマス（ｂｉｓｍｕｔｈ  ｓｕｂｇａｌ）／酸化亜鉛（ｚｎｏｘ）／ｒｅｓｏｒ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、日焼け止め、ハルシノニド、サリチル酸、アンスラリン、ピバル酸クロコルトロン、石炭抽出物、コールタール／サリチル酸、コールタール／サリチル酸／硫黄、デスオキシメタゾン、ジアゼパム、皮膚軟化
剤、フルオシノニド／皮膚軟化剤、鉱物油／ヒマシ油／ｎａ  ｌａｃｔ、鉱物油／落花生油、石油／ミリスチン酸イソプロピル、ソラーレン、サリチル酸、石鹸／トリブロムサラン、チメロサール／ホウ酸、セレコキシブ、インフリキシマブ、シクロスポリン、アレファセプト、エファリズマブ、タクロリムス、ピメクロリムス、ＰＵＶＡ、ＵＶＢ、スルファサラジンが含まれる。
【０４１９】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることができる、乾癬性関節炎のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：メトトレキサート、エタネルセプト、ロフェコキシブ、セレコキシブ、葉酸、スルファサラジン、ナプロキセン、レフルノミド、酢酸メチルプレドニゾロン、インドメタシン、硫酸ヒロドキシクロロキン、プレドニゾン、スリンダク、増強された二プロピオン酸ベタメタゾン、インフリキシマブ、メトトレキサート、フォラート、トリアムシノロン・アセトニド、ジクロフェナク、ジメチルスルホキシド、ピロキシカム、ジクロフェナクナトリウム、ケトプロフェン、メロキシカム、メチルプレドニゾロン、ナブメトン、トルメチンナトリウム、カルシポトリエン、シクロスポリン、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フルオシノニド、硫酸グルコサミン、金チオリンゴ酸ナトリウム、二酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、イブプロフェン、リセドロン酸ナトリウム、スルファジアジン、チオグアニン、バルデコキシブ、アレファセプト、エファリズマブおよびｂｃｌ−２阻害剤が含まれる。
【０４２０】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、再狭窄のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：シロリムス、パクリタキセル、エベロリムス、タクロリムス、ゾタロリムス、アセトアミノフェンが含まれる。
【０４２１】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、坐骨神経痛のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：二酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、ロフェコキシブ、塩酸シクロベンザプリン、メチルプレドニゾロン、ナプロキセン、イブプロフェン、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、セレコキシブ、バルデコキシブ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、リン酸コデイン／アセトアミノフェン、塩酸トラマドール／アセトアミノフェン、メタキサロン、メロキシカム、メトカルバモール、塩酸リドカイン、ジクロフェナクナトリウム、ギャバペンチン、デキサメタゾン、カリソプロドール、ケトロラク・トロメタミン、インドメタシン、アセトアミノフェン、ジアゼパム、ナブメタオン、塩酸オキシコドン、塩酸チザニジン、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、ナプシル酸プロポキシフェン／アセトアミノフェン、ａｓａ／ｏｘｙｃｏｄ／オキシコドンｔｅｒ、イブプロフェン／重酒石酸ヒドロコドン、塩酸トラマドール、エトドラク、塩酸プロポキシフェン、塩酸アミトリプチリン、カリソプロドール／リン酸コデイン／ａｓａ、硫酸モルヒネ、マルチビタミン、ナプロキセンナトリウム、クエン酸オルフェナドリン、テマゼパムが含まれる。
【０４２２】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、ＳＬＥ（狼瘡）のための治療剤の例には、以下のもの：ＮＳＡＩＤ、例えば、ジクロフェナク、ナプロキセン、イブプロフェン、ピロキシカム、インドメタシン；ＣＯＸ２阻害剤、例えば、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ；抗マラリア剤、例えば、ヒドロキシクロロキン；ステロイド、例えば、プレドニゾン、プレドニゾロン、ブデノシド、デキサメタゾン；細胞障害剤、例えば、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノラート・モフェチル、メトトレキサート；ＰＤＥ４の阻害剤またはプリン合成阻害剤、例えば、Ｃｅｌｌｃｅｐｔが
含まれる。結合タンパク質は、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸、オルサラジン、イムランなどの作用物質、並びにＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインの合成、産生または作用を妨害する作用物質、例えば、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤及びＩＬ−１ｒａのようなカスパーゼ阻害剤とも組み合わされ得る。結合タンパク質はまた、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤；またはＴ細胞活性化分子を標的とする分子、例えば、ＣＴＬＡ−４−ＩｇＧまたは抗Ｂ７抗体ファミリー抗体、抗ＰＤ−１ファミリー抗体とともに使用され得る。結合タンパク質は、ＩＬ−１１または抗サイトカイン抗体、例えば、ホノトリズマブ（抗ＩＦＮｇ抗体）、または抗受容体受容体抗体、例えば、抗ＩＬ−６受容体抗体及びＢ細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることが可能である。抗体またはその抗原結合部分はまた、ＬＪＰ３９４（アベチムス（ａｂｅｔｉｍｕｓ））、Ｂ細胞を枯渇させるまたは不活化する作用物質、例えば、リツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）、リンホスタット−Ｂ（抗ＢｌｙＳ抗体）、ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体、アダリムマブ（ＰＣＴ公開ＷＯ９７／２９１３１；ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ（登録商標）））及びｂｃｌ−２阻害剤（遺伝子導入マウスにおけるｂｃｌ−２過剰発現が狼瘡様表現型をもたらすことが実証されており（Ｍａｒｑｕｉｎａ，Ｒｅｇｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００４），１７２（１１），７１７７−７１８５参照）、したがって阻害が治療効果を有すると予想されるので）とともに使用され得る。
【０４２３】
本発明の医薬組成物は、抗体またはその抗体部分の「治療的有効量」または「予防的有効量」を含み得る。「治療的有効量」は、所望の治療的結果を達成するために必要な投与量及び期間にわたる有効な量を表す。抗体または抗体部分の治療的有効量は、当業者によって決定され得、個体の病状、年齢、性別及び体重、並びに抗体または抗体部分が個体内で所望の応答を惹起する能力などの因子に従って変動し得る。治療的有効量は、抗体または抗体部分のあらゆる毒性効果または有害効果が、治療的に有益な効果によって凌駕される量でもある。「予防的有効量」は、所望の予防的結果を達成するために必要な投薬量及び期間にわたる有効量を表す。典型的には、疾病のより初期段階の前にまたは疾病のより初期段階において予防的投薬が患者に使用されるので、予防的有効量は治療的有効量より少ない。
【０４２４】
投薬計画は、最適な所望の応答（例えば、治療的応答または予防的応答）を供与するように調整され得る。例えば、単一のボーラスを投与でき、複数の分割された用量を経時的に投与でき、または、治療状況の緊急性によって示されるように、用量を比例的に減少または増加させ得る。投与の容易さ及び投薬量の均一性のために、投薬単位形態で非経口組成物を製剤することが特に有利である。「投薬単位形態」という用語は、治療されるべき哺乳動物対象への統一された投薬量として適した、物理的に分離された単位を表し、各単位は、必要とされる医薬担体とともに、所望される治療効果を生じるように計算された活性化合物の所定量を含有する。本発明の投薬単位形態についての規格は、（ａ）活性化合物の特有の特徴及び達成されるべき具体的な治療効果または予防効果、並びに（ｂ）個体における過敏症の治療用にこのような活性化合物を配合する分野に固有の制約によって規定され、これらに直接依存する。
【０４２５】
軽減されるべき症状の種類及び重度に応じて、投薬量の値が変化し得ることに注意すべきである。いずれかの特定の患者に対して、個体の要求に従って、かつ組成物の投与を行いまたは監視している者の専門的判断に従って、特異的投薬計画を経時的に調整すべきこと、及び本明細書に記載されている投与量の範囲は典型的なものに過ぎず、特許請求の範囲に記載されている組成物の範囲または実施に限定することを意図しないことを更に理解すべきである。
【０４２６】
ＶＩＩＩ．診断
本明細書における開示は、診断的用途も提供する。これは、以下に更に明確にされる。スクレロスチンに結合する抗体が提供され、インビボ、インビトロ、またはエクスビボで（すなわち、生きた個体から得られ、手順にかけられ、次いで個体に戻された細胞または組織において）、スクレロスチンを検出するための様々なフォーマットのうちのいずれかにおいて使用され得る。本発明のＤＶＤ−結合タンパク質は、様々な診断用及び検出アッセイフォーマットにおいて、スクレロスチンのエピトープ並びに他の抗原またはエピトープに結合できるという更なる利点を提供する。
【０４２７】
Ｉ．アッセイの方法
本開示は、本明細書に記載されるように、ＤＶＤ−結合タンパク質を含む、少なくとも１つの抗スクレロチン結合タンパク質またはその抗原結合部分を用いて試験試料中のスクレロスチン、またはその断片（「分析物」）の存在、量または濃度を決定する方法も提供する。当該技術分野で既知である任意の適切なアッセイが、この方法で使用可能である。例として、サンドイッチイムノアッセイ（例えば、放射性同位体検出（ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））及び酵素検出（エンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ）または酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）（例えば、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡアッセイ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ））を含む、モノクローナル、ポリクローナル及び／またはＤＶＤ−結合タンパク質サンドイッチイムノアッセイまたはその任意のバリエーション（例えば、モノクローナル／ＤＶＤ−結合タンパク質、ＤＶＤ−結合タンパク質／ポリクローナルなど））、競合阻害イムノアッセイ（例えば、順向及び逆向）、蛍光偏光イムノアッセイ（ＦＰＩＡ）、酵素増幅イムノアッセイ技術（ＥＭＩＴ）、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）、および均一系化学発光アッセイなどのイムノアッセイが含まれるが、これらに限定されない。ＳＥＬＤＩを基礎とするイムノアッセイにおいては、目的の分析物（またはその断片）に特異的に結合する捕捉試薬が、予め活性化されたプロテインチップアレイのような、質量分析プローブの表面に付着する。分析物（またはその断片）が、次いで、バイオチップ上で特異的に捕捉され、捕捉された分析物（またはその断片）は、質量分析によって検出される。あるいは、分析物（またはその断片）は、捕捉試薬から溶出させ、伝統的なＭＡＬＤＩ（マトリックス支援レーザー脱離／イオン化）またはＳＥＬＤＩによって検出可能である。化学発光微粒子イムノアッセイ、特にＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）自動分析器（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ，ＩＬ）を使用するものは、好ましいイムノアッセイの例である。
【０４２８】
尿、血液、血清及び血漿、並びにその他の体液を採集し、取扱いかつ処理するための当該技術分野で周知の方法が、例えば、本明細書に記載の抗スクレロスチン結合タンパク質が免疫診断試薬として、及び／または分析物イムノアッセイキットにおいて使用される場合、本開示の実施において使用される。試験試料は、目的の分析物に加えて、抗体、抗原、ハプテン、ホルモン、薬物、酵素、受容体、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド及び／またはポリヌクレオチドなど、更なる部分を含み得る。例えば、試料は、対象から得られた全血試料であり得る。試験試料、特に全血は、本明細書に記載されているイムノアッセイの前に、例えば前処理試薬を用いて処理されることが必要であるか、または所望され得る。前処理が必要でない場合（例えば、ほとんどの尿試料）においても、前処理は任意に（例えば、商業的プラットホームでのレジメンの一部として）行うことが可能である。
【０４２９】
前処理試薬は、イムノアッセイ及びキットでの使用に適切な任意の試薬であり得る。前処理試薬は、必要に応じて、（ａ）１つ以上の溶媒（例えば、メタノール及びエチレングリコール）及び必要に応じて塩、（ｂ）１つ以上の溶媒及び塩、並びに必要に応じて界面活性剤、（ｃ）界面活性剤、もしくは（ｄ）界面活性剤及び塩を含む。前処理試薬は当該技術分野において既知であり、このような前処理は、例えば、文献中に記載されているように（例えば、Ｙａｔｓｃｏｆｆら著、Ａｂｂｏｔｔ  ＴＤｘ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ａｓｓａｙ  Ｅｖａｌｕａｔｅｄ  ｆｏｒ  Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  ｉｎ  Ｗｈｏｌｅ  Ｂｌｏｏｄ，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、３６：１９６９−１９７３（１９９０）及びＷａｌｌｅｍａｃｑら著、Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  ＡｘＳＹＭ  Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  Ａｓｓａｙ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｗｉｔｈ  ＴＤｘ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ｗｈｏｌｅ  Ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  ＥＭＩＴ  Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  Ａｓｓａｙｓ、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、４５：４３２−４３５（１９９９）を参照）、Ａｂｂｏｔｔ  ＴＤｘ、ＡｘＳＹＭ（登録商標）およびＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）分析器（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ，ＩＬ）でのアッセイに使用されるような前処理試薬、及び／または市販されているものを使用することが可能である。さらに、前処理は、Ａｂｂｏｔｔの米国特許第５，１３５，８７５号；欧州特許公開第０４７１２９３号；ＰＣＴ公開ＷＯ２００８／０８２９８４；及び米国特許出願公開第２００８／００２０４０１号（前処理に関する教示についてその全体が参照により組み込まれる。）に記載されているように行うことが可能である。前処理試薬は、不均一剤または均一剤であり得る。
【０４３０】
不均一前処理試薬を使用する場合、この前処理試薬は、試料中に存在する分析物結合タンパク質（例えば、分析物またはその断片に結合できるタンパク質）を沈殿させる。このような前処理工程は、前処理試薬を試料に添加することによって形成された混合物の上清と沈殿した分析物結合タンパク質を分離することによって、任意の分析物結合タンパク質を除去することを含む。このようなアッセイでは、いかなる結合タンパク質も存在しない混合物の上清がアッセイに使用され、抗体捕捉工程へと直接進行する。
【０４３１】
均一前処理試薬を使用する場合、このような分離工程は存在しない。試験試料の混合物及び前処理試薬の全体を、標識抗分析物抗体（またはその抗原的に活性な断片）などの分析物（またはその断片）の標識特異的結合パートナーと接触させる。このようなアッセイに使用される前処理試薬は、第１の特異的結合パートナーによる捕捉前に、または捕捉の間のいずれかに、典型的には、前処理された試験試料混合物中で希釈される。かかる希釈にもかかわらず、特定の量の前処理試薬は、捕捉の間に試験試料混合物中に依然として存在する（または、残存する）。例示的な標識特異的結合パートナーは、ＤＶＤ−結合タンパク質（または、その断片、その変異体、もしくはその変異体の断片）であり得る。
【０４３２】
不均一フォーマットでは、試験試料が対象から得られた後に、第１の混合物が調製される。混合物は、分析物（またはその断片）及び第１の特異的結合パートナーについて評価されている試験試料を含有し、第１の特異的結合パートナー及び試験試料中に含有されているあらゆる分析物は、第１の特異的結合パートナー−分析物複合体を形成する。一実施形態では、この第１の特異的結合パートナーは、抗分析物抗体またはその断片である。この第１の特異的結合パートナーは、本明細書に記載されているＤＶＤ−結合タンパク質（またはその断片、その変異体もしくはその変異体の断片）であり得る。混合物を形成するために試験試料及び第１の特異的結合パートナーが添加される順序は重要ではない。一実施形態では、この第１の特異的結合パートナーは、固相上に固定化されている。イムノアッセイ（第１の特異的結合パートナー、及び必要に応じて第２の特異的結合パートナーについての）で使用される固相は、磁気粒子、ビーズ、試験管、マイクロタイタープレート、キュベット、膜、足場分子、フィルム、濾紙、ディスク及びチップなど（但し、これらに限定されない）、当該技術分野で既知のあらゆる固相であり得る。
【０４３３】
第１の特異的結合パートナー−分析物複合体を含有する混合物が形成された後に、当該技術分野で既知のあらゆる技術を使用して、あらゆる未結合分析物が混合物から除去される。例えば、未結合分析物は、洗浄によって除去できる。しかしながら、望ましくは、第１の特異的結合パートナーは、試験試料中に存在する全ての分析物が、第１の特異的結合パートナーによって結合されるように、試験試料中に存在するあらゆる分析物よりも過剰に存在する。
【０４３４】
あらゆる未結合分析物が除去された後に、第２の特異的結合パートナーが混合物に添加されて、第１の特異的結合パートナー−分析物−第２の特異的結合パートナー複合体を形成する。この第２の特異的結合パートナーは、例えば、第１の特異的結合パートナーによって結合される分析物上のエピトープとは異なる分析物上のエピトープに結合する抗分析物抗体である。更に、一実施形態では、この第２の特異的結合パートナーは、上記に記載される検出可能な標識で標識されているか、またはこの標識を含有する。第２の特異的結合パートナーは、本明細書に記載されているＤＶＤ−結合タンパク質（またはその断片、その変異体もしくはその変異体の断片）であり得る。
【０４３５】
当該技術分野で既知であるようなあらゆる好適な検出可能な標識が使用され得る。例えば、検出可能な標識は、放射性標識（３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、３２Ｐ、及び３３Ｐなど）、酵素標識（ホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ、アルカリ性ペルオキシダーゼ、グルコース６−リン酸デヒドロゲナーゼなど）、化学発光標識（アクリジニウムエステル、チオエステル、またはスルホンアミド；ルミノール、イソルミノール、フェナンスリジウムエステル等）、蛍光標識（フルオレセインなど（例えば、５−フルオレセイン、６−カルボキシフルオレセイン、３’６−カルボキシフルオレセイン、５（６）−カルボキシフルオレセイン、６−ヘキサクロロ−フルオレセイン、６−テトラクロロフルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート等））、ローダミン、フィコビリンタンパク質、Ｒ−フィコエリスリン、量子ドット（例えば、硫化亜鉛キャップ付加セレン化カドミウム）、温度測定標識、または免疫−ポリメラーゼ連鎖反応標識であり得る。標識の導入、標識手順及び標識の検出は、Ｐｏｌａｋ及びＶａｎ  Ｎｏｏｒｄｅｎ著、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．（１９９７）及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇｏｎによって出版されたハンドブックとカタログの組み合せであるＨａｕｇｌａｎｄ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（１９９６）に見出される。蛍光標識は、ＦＰＩＡにおいて使用可能である（例えば、米国特許第５，５９３，８９６号、同第５，５７３，９０４号、同第５，４９６，９２５号、同第５，３５９，０９３号及び同第５，３５２，８０３号を参照）。アクリジニウム化合物は、均一系または不均一系化学発光アッセイにおいて検出可能な標識として使用可能である（例えば、Ａｄａｍｃｚｙｋら著、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１６：１３２４−１３２８（２００６）；Ａｄａｍｃｚｙｋら著、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、４：２３１３−２３１７（２００４）；Ａｄａｍｃｚｙｋら著、Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１４：３９１７−３９２１（２００４）；及びＡｄａｍｃｚｙｋら著、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．、５：３７７９−３７８２（２００３）を参照）。
【０４３６】
例示的なアクリジニウム化合物は、アクリジニウム−９−カルボキサミドである。アクリジニウム９−カルボキサミドを調製する方法は、Ｍａｔｔｉｎｇｌｙ著、Ｊ．Ｂｉｏｌｕｍｉｎ．Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎ．、６：１０７−１１４（１９９１）；Ａｄａｍｃｚｙｋら著、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６３：５６３６−５６３９（１９９８）；Ａｄａｍｃｚｙｋら著、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、５５：１０８９９−１０９１４（１９９９）；Ａｄａｍｃｚｙｋら著、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．、１：７７９−７８１（１９９９）；Ａｄａｍｃｚｙｋら著、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．、１１：７１４−７２４（２０００）；Ｍａｔｔｉｎｇｌｙら著、Ｉｎ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ；Ｄｙｋｅ，Ｋ．Ｖ．（編集）；ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ：Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、７７−１０５頁（２００２）；Ａｄａｍｃｚｙｋら著、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．、５：３７７９−３７８２（２００３）；並びに米国特許第５，４６８，６４６号、同第５，５４３，５２４号及び同第５，７８３，６９９号に記載されている。別の例示的なアクリジニウム化合物は、アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルである。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルの例は、１０−メチル−９−（フェノキシカルボニル）アクリジニウムフルオロスルホネート（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，ＭＩから入手可能）である。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルを調製する方法は、ＭｃＣａｐｒａら著、Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．、４：１１１１−２１（１９６５）；Ｒａｚａｖｉら著、Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、１５：２４５−２４９（２０００）；Ｒａｚａｖｉら著、Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、１５：２３９−２４４（２０００）；及び米国特許第５，２４１，０７０号に記載されている。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステル及びその使用に関する更なる詳細は、米国特許出願第２００８−０２４８４９３号に示されている。
【０４３７】
化学発光アッセイ（例えば、上記のアクリジニウムまたはその他の化学発光剤を使用する）は、Ａｄａｍｃｚｙｋら著、Ａｎａｌ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ、５７９（１）：６１−６７（２００６）に記載されている方法に従って行える。あらゆる好適なアッセイフォーマットが使用され得るが、マイクロプレートケミルミノメータ（Ｍｉｔｈｒａｓ  ＬＢ−９４０、Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｕ．Ｓ．Ａ．，ＬＬＣ、テネシー州、オークリッジ）は、小容量の複数試料のアッセイを迅速に行うことができる。
【０４３８】
化学発光アッセイ用の混合物を形成するために、試験試料及び特異的結合パートナー（複数可）が添加される順序は重要ではない。第１の特異的結合パートナーがアクリジニウム化合物などの化学発光剤で検出可能に標識される場合、検出可能に標識された第１の特異的結合パートナー−分析物複合体が形成する。あるいは、第２の特異的結合パートナーが使用され、この第２の特異的結合パートナーがアクリジニウム化合物などの化学発光剤で検出可能に標識される場合、検出可能に標識された第１の特異的結合パートナー−分析物−第２の特異的結合パートナー複合体が形成する。標識されていてもまたは標識されていなくても、あらゆる未結合の特異的結合パートナーは、洗浄などの当該技術分野で既知の任意の技術を使用して、混合物から除去することが可能である。
【０４３９】
過酸化水素は、混合物においてその場で生成されるかまたは、上記のアクリジニウム化合物の添加前、添加と同時にまたは添加後に、混合物に提供されるかもしくは供給され得る（例えば、過酸化水素を含有することが知られている１つ以上の緩衝液またはその他の溶液である過酸化水素の供給源）。過酸化水素は、当業者には明らかであるようないくつかの方法によって、その場で生成され得る。
【０４４０】
少なくとも１つの塩基性溶液を試料に同時にまたは逐次的に添加すると、分析物の存在の指標となる検出可能なシグナル、すなわち、化学発光シグナルが発生する。塩基性溶液は、１つ以上の塩基を含有し、１０以上、例えば、１２以上のｐＨを有する。塩基性溶液の例としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化アンモニウム、水酸化マグネシウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、水酸化カルシウム、炭酸カルシウム、及び重炭酸カルシウムが挙げられるが、これらに限定されない。試料に添加される塩基性溶液の量は、塩基性溶液の濃度に依存する。使用される塩基性溶液の濃度に基づいて、当業者は、試料に添加する塩基性溶液の量を容易に決定することができる。
【０４４１】
発生した化学発光シグナルは、当業者に既知である通常の技術を使用して検出可能である。発生したシグナルの強度に基づいて、試料中の分析物の量を定量化することが可能である。具体的には、試料中の分析物の量は、発生したシグナルの強度に比例する。存在する分析物の量は、発生した光の量を分析物についての標準曲線と比較することによって、または基準標準物質と比較することによって定量化できる。標準曲線は、既知の濃度の分析物の段階希釈物または溶液を使用して、質量分析、重量測定法、及び当該技術分野で既知のその他の技術によって生成できる。化学発光剤としてアクリジニウム化合物の使用を強調して上に記載したが、当業者は、この記載をその他の化学発光剤の使用に容易に適合できる。
【０４４２】
分析物イムノアッセイは、限定されるものではないが、サンドイッチフォーマットなど、当該技術分野で既知のあらゆるフォーマットを使用して一般的に行うことができる。具体的には、１つのイムノアッセイフォーマットにおいて、少なくとも２つの抗体が、試料中のヒト分析物、またはその断片などの分析物を分離かつ定量するために使用される。より具体的には、少なくとも２つの抗体が、分析物（またはその断片）上の異なるエピトープに結合して、「サンドイッチ」と呼ばれる免疫複合体を形成する。一般的に、このイムノアッセイでは、１つ以上の抗体が、試験試料中の分析物（またはその断片）を捕捉するために使用でき（これらの抗体は、多くの場合「捕捉」抗体または「捕捉」抗体（複数）と呼ばれる）かつ１つ以上の抗体が検出可能な（すなわち、定量可能な）標識をこのサンドイッチに結合するために使用できる（これらの抗体は、多くの場合「検出抗体」、「検出抗体（複数）」、「コンジュゲート、結合体」、または「コンジュゲート、結合体（複数）」と呼ばれる）。したがって、サンドイッチイムノアッセイフォーマットの状況においては、本明細書に記載されているＤＶＤ−結合タンパク質（またはその断片、その変異体もしくはその変異体の断片）は、捕捉抗体、検出抗体、またはこの双方として使用することができる。例えば、分析物（またはその断片）上の第１のエピトープに結合できるドメインを有する１つのＤＶＤ−結合タンパク質（またはその断片、変異体もしくは変異体の断片）は、捕捉抗体として使用することが可能であり、及び／または分析物（またはその断片）上の第２のエピトープに結合できるドメインを有する別のＤＶＤ−結合タンパク質は、検出抗体として使用することが可能である。これに関連して、分析物（またはその断片）上の第１のエピトープに結合できるドメインと、分析物（またはその断片）上の第２のエピトープに結合できる第２のドメインとを有するＤＶＤ−結合タンパク質は、捕捉抗体及び／または検出抗体として使用することが可能である。あるいは、分析物（またはその断片）上の第１のエピトープに結合できるドメインと、分析物（またはその断片）上の第２のエピトープに結合できる第２のドメインとを有する１つのＤＶＤ−結合タンパク質は、捕捉抗体として及び／または、２つ以上の分析物を検出し、必要に応じて定量するための検出抗体として使用することが可能である。分析物が、単量体及び二量体／多量体（ホモマーまたはヘテロマーであり得る）など、分析物が複数の形態で試料中に存在する可能性がある場合、単量体でのみ露出するエピトープに結合できるドメインを有する１つのＤＶＤ−結合タンパク質及び二量体／多量体の異なる部分上のエピトープに結合できるドメインを有する別のＤＶＤ−結合タンパク質は、捕捉抗体及び／または検出抗体として使用することが可能であり、これによって、異なる形態の所与の分析物の検出、及び必要に応じて定量を可能にする。更に、単一のＤＶＤ−結合タンパク質内で及び／またはＤＶＤ−結合タンパク質間で親和性に差があるＤＶＤ−結合タンパク質を使用することは、結合力の利点をもたらし得る。本明細書に記載されているイムノアッセイの状況において、ＤＶＤ−結合タンパク質の構造内に１つ以上のリンカーを組み込むことが一般的に有益または望ましいことがある。存在する場合、最適には、このリンカーは、内部ドメインによるエピトープの結合並びにその他のドメインによる別のエピトープの結合を可能にするよう、十分な長さ及び構造的柔軟性を有するべきである。これに関連して、ＤＶＤ−結合タンパク質が２つの異なる分析物に結合することができ、一方の分析物が他方よりも大きい場合、大きい方の分析物が外部ドメインによって結合されることが望ましい。
【０４４３】
一般的に言うと、ＳＯＳＴタンパク質（またはその断片）について試験される試料（例えば、ＳＯＳＴを含有することが疑われる試料）は、少なくとも１つの捕捉抗体（または、抗体（複数））及び少なくとも１つの検出抗体（例えば、捕捉抗体及び／または検出抗体が複数の抗体を含む場合のように、第２の検出抗体または第３の検出抗体もしくは更に連続した番号の抗体であり得る）と、同時にまたは順次及びあらゆる順序のいずれかで接触させることが可能である。例えば、試験試料は、まず初めに少なくとも１つの検出抗体と接触させ、次いで（順次）少なくとも１つの捕捉抗体と接触させることが可能である。更に別の代替法においては、試験試料は、捕捉抗体及び検出抗体と同時に接触させることができる。
【０４４４】
サンドイッチアッセイフォーマットにおいては、ＳＯＳＴ（またはその断片）を含有することが疑われる試料は、第１の結合タンパク質／ＳＯＳＴ複合体の形成を可能にする条件下で、少なくとも１つの第１の捕捉結合タンパク質（例えば、ＳＯＳＴ抗体）とまず初めに接触させる。複数の捕捉結合タンパク質が使用される場合、２つ以上の捕捉結合タンパク質を含む第１の捕捉結合タンパク質／ＳＯＳＴ複合体が形成する。サンドイッチアッセイにおいては、結合タンパク質、すなわち、例えば少なくとも１つの捕捉結合タンパク質は、試験試料中で予想されるＳＯＳＴ分析物（またはその断片）の最大量より過剰なモル量で使用される。例えば、緩衝液（例えば、微粒子コーティング緩衝液）のｍＬ当たり約５μｇ〜約１ｍｇの抗体が使用され得る。
【０４４５】
小型分析物を測定するために頻繁に使用される競合阻害イムノアッセイは、１つだけの抗体による結合が必要とされるために、順次的及び古典的フォーマットを含む。順次的競合阻害イムノアッセイでは、スクレロスチンに対する捕捉結合タンパク質が、マイクロタイタープレートのウェルまたはその他の固体支持体上にコーティングされる。スクレロスチンを含有する試料がウェルに添加されると、スクレロスチンは捕捉結合タンパク質に結合する。洗浄後、既知の量の標識（例えば、ビオチンまたはホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ（ＨＲＰ））スクレロスチンがウェルに添加される。酵素標識の基質が、シグナルの発生に必要である。ＨＲＰに好適な基質は、３，３’５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）である。洗浄後、標識分析物によって発生したシグナルが測定され、これは試料中のスクレロスチンの量に反比例する。古典的競合阻害イムノアッセイでは、スクレロスチンに対する結合タンパク質は、固体支持体（例えば、マイクロタイタープレートのウェル）上にコーティングされる。しかしながら、順次的競合阻害アッセイとは異なり、試料及び標識スクレロスチンはウェルに同時に添加される。試料中のあらゆるスクレロスチンが、捕捉結合タンパク質への結合で、標識スクレロスチンと競合する。洗浄後、標識スクレロスチンによって発生したシグナルが測定され、これは試料中のスクレロスチンの量に反比例する。
【０４４６】
必要に応じて、試験試料を少なくとも１つの捕捉結合タンパク質（例えば、第１の捕捉抗体）と接触させる前に、少なくとも１つの捕捉結合タンパク質を固体支持体に結合させることができ、このことは試験試料からの第１の結合タンパク質／スクレロスチン（またはその断片）複合体の分離を容易にする。捕捉結合タンパク質が結合する基質は、捕捉抗体−分析物複合体の試料からの分離を容易にするあらゆる固体支持体または固相であり得る。
【０４４７】
例として、マイクロタイタープレートなどのプレートのウェル、試験管、多孔質ゲル（例えば、シリカゲル、アガロースまたは磁気ビーズ）、ポリマーフィルム（例えば、ポリアクリルアミド）、ビーズ（例えば、ポリスチレンビーズまたは磁気ビーズ）、フィルター／膜のストリップ（例えば、ニトロセルロースまたはナイロン）、微粒子（例えば、ラテックス粒子、磁化可能な微粒子（例えば、酸化第二鉄または酸化クロムコア及びホモ−またはヘテロ−ポリマーコート及び約１〜１０ミクロンの半径を有する微粒子））が挙げられる。基質は、抗原に結合するための適切な表面親和性及び検出抗体による到達を可能にするための十分な多孔性を備えた好適な多孔質材料を含むことができる。水和状態のゼラチン性材料も使用され得るが、微小多孔質材料が一般的には好ましい。このような多孔質材料は、例えば、約０．０１〜約０．５ｍｍ、例えば約０．１ｍｍの厚さを有するシートの形態である。孔径は、かなり様々であり得るが、孔径は、例えば約０．０２５〜約１５ミクロン、例えば、約０．１５〜約１５ミクロンである。この様な基質の表面は、抗体の基質への共有結合を引き起こす化学的プロセスによって活性化可能である。一般的に疎水性の力を通しての吸着により、基質への抗原または抗体の不可逆的結合が結果として生じ、あるいは、化学的カップリング剤またはその他の手段が抗体を基質に共有結合させるために使用できるが、このような結合が抗体の分析物に対する結合能力を干渉しないという条件つきである。あるいは、抗体は、ストレプトアビジン（例えばＤＹＮＡＬ（登録商標）Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｂｅａｄｓ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）またはビオチン（例えば、Ｐｏｗｅｒ−ＢｉｎｄＴＭ−ＳＡ−ＭＰストレプトアビジンコーティング微粒子（Ｓｅｒａｄｙｎ、イリノイ州インディアナポリス）を使用する）または抗種特異的モノクローナル抗体で予めコーティングされている微粒子と結合することが可能である。必要な場合、基質は、抗体上の様々な官能基との反応が可能となるよう、誘導体化され得る。このような誘導体化は、特定のカップリング剤の使用を必要とし、このカップリング剤の例としては、無水マレイン酸、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドが挙げられるが、これらに限定されない。所望される場合、それぞれが分析物（複数可）に特異的である、抗体（またはその断片）などの１つ以上の捕捉試薬を、様々な物理的またはアドレス可能な場所で（例えば、バイオチップの配置などにおいて）、固相に付着させることが可能である（例えば、米国特許第６，２２５，０４７号；ＰＣＴ公開ＷＯ９９／５１７７３；米国特許第６，３２９，２０９号；ＰＣＴ公開ＷＯ００／５６９３４；及び米国特許第５，２４２，８２８号）。捕捉試薬が固体支持体として質量分析プローブに付着している場合、プローブに結合した分析物の量は、レーザー脱離イオン化質量分析によって検出できる。あるいは、単一のカラムを、１つ以上の捕捉試薬で誘導体化された異なるビーズで充填でき、これによって、単一の場所で分析物を捕捉する（抗体誘導体化、ビーズベースの技術、例えば���Ｌｕｍｉｎｅｘ（テキサス州オースチン）のｘＭＡＰ技術を参照）。
【０４４８】
分析物（またはその断片）についてアッセイされている試験試料を、少なくとも１つの捕捉抗体（例えば、第１の捕捉抗体）に接触させた後に、第１の抗体（または複数の抗体）−分析物（またはその断片）複合体の形成を可能にするために、混合物はインキュベートされる。インキュベーションは、約４．５〜約１０．０のｐＨで、約２℃〜約４５℃の温度で、少なくとも約１分〜約１８時間、例えば約１〜約２４分、例えば、約４〜約１８分の時間にわたって実行され得る。本明細書に記載されるイムノアッセイは、１つの工程（試験試料、少なくとも１つの捕捉抗体及び少なくとも１つの検出抗体が全て、反応容器に順次にまたは同時に添加されることを意味する）で、または２つの工程、３つの工程などの２つ以上の工程で行うことが可能である。
【０４４９】
（第１のまたは複数の）捕捉抗体／分析物（またはその断片）複合体の形成後に、次いでこの複合体を、（第１のまたは複数の）捕捉抗体／分析物（またはその断片）／第２の検出抗体複合体の形成を可能にする条件下で、少なくとも１つの検出抗体と接触させる。明瞭にするために、「第２の」抗体（例えば第２の検出抗体）と説明されているが、実際、複数の抗体が捕捉及び／または検出に使用される場合、少なくとも１つの検出抗体は、イムノアッセイにおいて使用される第２、第３、第４等の抗体であり得る。捕捉抗体／分析物（またはその断片）複合体が複数の検出抗体と接触すると、次いで（第１のまたは複数の）捕捉抗体／分析物（またはその断片）／（複数の）検出抗体複合体が形成される。この捕捉抗体（例えば、この第１の捕捉抗体）と同様に、少なくとも１つの（例えば、第２の及びあらゆるその後の）検出抗体が、この捕捉抗体／分析物（またはその断片）複合体と接触する場合、上に記載されているものと同様な条件下でのインキュベーション時間が、この（第１のまたは複数の）捕捉抗体／分析物（またはその断片）／（第２のまたは複数の）検出抗体複合体の形成のために必要とされる。一実施形態では、少なくとも１つの検出抗体は、検出可能な標識を含有する。この検出可能な標識は、（第１のまたは複数の）捕捉抗体／分析物（またはその断片）／（第２のまたは複数の）検出抗体複合体の形成前に、形成と同時に、または形成後に、少なくとも１つの検出抗体（例えば、第２の検出抗体）に結合することが可能である。当該技術分野で既知のあらゆる検出可能な標識が使用され得る（Ｐｏｌａｋ及びＶａｎ  Ｎｏｏｒｄｅｎ（１９９７）及びＨａｕｇｌａｎｄ（１９９６）の参考文献の論述を含む、上記論述を参照）。
【０４５０】
検出可能な標識は、直接またはカップリング剤を介して抗体に結合可能である。使用できるカップリング剤の例は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイスから市販されているＥＤＡＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、塩酸塩）である。使用できるその他のカップリング剤は、当該技術分野で公知である。検出可能な標識を抗体に結合する方法は、当該技術分野において公知である。更に、ＣＰＳＰ−アクリジニウムエステル（すなわち、９−［Ｎ−トシル−Ｎ−（３−カルボキシプロピル）］−１０−（３−スルホプロピル）アクリジニウムカルボキサミド）またはＳＰＳＰ−アクリジニウムエステル（すなわち、Ｎ１０−（３−スルホプロピル）−Ｎ−（３−スルホプロピル）−アクリジニウム−９−カルボキサミド）などの、検出可能な標識の抗体へのカップリングを容易にする末端基を既に含有する多くの検出可能な標識を購入または合成することが可能である。
【０４５１】
（第１のまたは複数の）捕捉抗体／分析物／（第２のまたは複数の）検出抗体複合体は、標識の定量の前に、試験試料の残部から分離可能であるが、分離しなければならないわけではない。例えば、少なくとも１つの捕捉抗体（例えば、第１の捕捉抗体）が、ウェルまたはビーズなどの固体支持体に結合している場合、分離は、固体支持体との接触から（試験試料の）流体を除去することによって達成可能である。あるいは、少なくとも第１の捕捉抗体が固体支持体に結合している場合、これを分析物含有試料及び少なくとも１つの第２の検出抗体に同時に接触させて、第１の（複数の）抗体／分析物／第２の（複数の）抗体複合体を形成することができ、その後、固体支持体との接触から流体（試験試料）を除去できる。少なくとも１つの第１の捕捉抗体が、固体支持体に結合していない場合は、今度は（第１のまたは複数の）捕捉抗体／分析物／（第２のまたは複数の）検出抗体複合体は、標識量の定量のために、試験試料から取り出される必要はない。
【０４５２】
標識捕捉抗体／分析物／検出抗体複合体（例えば第１の捕捉抗体／分析物／第２の検出抗体複合体）の形成後に、複合体中の標識量が、当該技術分野で既知の技術を使用して定量される。例えば、酵素標識が使用される場合、標識複合体を、発色などの定量可能な反応を供与する標識の基質と反応させる。標識が放射性標識である場合、標識はシンチレーションカウンターなどの適当な手段を使用して定量される。標識が蛍光標識である場合、標識は、標識を１つの光（「励起波長」として知られている）で刺激し、刺戟に反応して標識によって放出される別の色（「放出波長」として知られている）を検出することによって定量される。標識が化学発光標識である場合、標識は、放出された光を、視覚的にまたはルミノメータ―、Ｘ線フィルム、高速写真フィルム、ＣＣＤカメラ等を使用して検出することによって定量される。複合体中の標識の量が一旦定量されると、試験試料中の分析物またはその断片の濃度が、既知の濃度の分析物またはその断片の段階的希釈を使用して生成された標準曲線の使用などの適当な手段によって決定される。分析物またはその断片の段階的希釈を使用する以外に、標準曲線は、重量測定法、質量分析法及び当該技術分野で公知のその他の技術によって生成され得る。
【０４５３】
ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）分析器を使用する化学発光微粒子アッセイでは、コンジュゲート希釈物のｐＨは、約６．０±０．２であるべきであり、微粒子コーティング緩衝液は、およそ室温で（すなわち、約１７〜約２７℃で）維持されるべきであり、微粒子コーティング緩衝液のｐＨは、約６．５±０．２であるべきであり、微粒子希釈物のｐＨは、約７．８±０．２であるべきである。一実施形態において、固体は、約０．１５％未満、約０．１４％未満、約０．１３％未満、約０．１２％未満、または（約０．１０％未満などの）約０．１１％未満などの約０．２％未満である。
【０４５４】
ＦＰＩＡは、競合的結合イムノアッセイ原理を基礎としている。蛍光標識化合物は、直線偏光によって励起されると、その回転速度と反比例する偏光の程度を有する蛍光を放出する。蛍光標識トレーサー−抗体複合体が直線偏光によって励起されると、蛍光体は光が吸収される時間と光が放出される時間との間での回転が制約されるために、放出される光は高度に偏光したままである。「遊離」トレーサー化合物（すなわち、抗体に結合していない化合物）が直線偏光によって励起される場合、その回転は、競合的結合イムノアッセイで産生される対応するトレーサー−抗体コンジュゲートよりもはるかに速い。ＦＰＩＡは、特別な取り扱い及び廃棄を必要とする放射性物質が存在しないために、ＲＩＡよりも有利である。加えて、ＦＰＩＡは、容易かつ迅速に実行することが可能な均一アッセイである。
【０４５５】
上記を考慮して、試験試料中の分析物（またはその断片）の存在、量、または濃度を決定する方法が提供される。この方法は、（ｉ）（ｉ’）分析物に結合できる抗体、抗体の断片、分析物に結合できる抗体の変異体、分析物に結合できる抗体の変異体の断片、及びＤＶＤ−結合タンパク質（またはその断片、変異体、もしくは変異体の断片）の少なくとも１つを使用し、並びに（ｉｉ’）少なくとも１つの検出可能な標識を使用し、（ｉｉ）試験試料中の分析物（またはその断片）の存在、量または濃度の直接的または間接的指標として検出可能な標識によって発生したシグナルを、対照または較正物質中の分析物（またはその断片）の存在、量または濃度の直接的または間接的な指標として発生したシグナルと比較することを含むアッセイによって、分析物（またはその断片）について試験試料をアッセイすることを含む。較正物質は、必要に応じて、一連の較正物質の一部であり、較正物質のそれぞれは、分析物の濃度によってその他の較正物質とは異なる。
【０４５６】
この方法は、（ｉ）第１の特異的結合パートナー／分析物（またはその断片）複合体を形成するように、試験試料を、抗体、分析物に結合できる抗体の断片、分析物に結合できる抗体の変異体、分析物に結合できる抗体の変異体の断片、または分析物に結合できるＤＶＤ−結合タンパク質（またはその断片、その変異体もしくはその変異体の断片）の分析物（またはその断片）に対する少なくとも１つの第１の特異的パートナーと接触させることと、（ｉｉ）第１の特異的結合パートナー／分析物（またはその断片）／第２の特異的結合パートナー複合体を形成するように、この第１の特異的結合パートナー／分析物（またはその断片）複合体を、検出可能に標識された抗分析物抗体、分析物に結合できる抗分析物抗体の検出可能に標識された断片、分析物に結合できる抗分析物抗体の検出可能に標識された変異体、分析物に結合できる抗分析物抗体の変異体の検出可能に標識された断片、または検出可能に標識されたＤＶＤ−結合タンパク質（またはその断片、その変異体、もしくはその変異体の断片）の分析物（またはその断片）に対する少なくとも１つの第２の特異的結合パートナーと接触させることと、（ｉｉｉ）（ｉｉ）において形成された第１の特異的結合パートナー／分析物（またはその断片）／第２の特異的結合パートナー複合体で、検出可能な標識によって発生したシグナルを検出または測定することにより、試験試料中の分析物の存在、量または濃度を決定することを含むことができる。分析物（またはその断片）に対する少なくとも１つの第１の特異的結合パートナー及び／または分析物（またはその断片）に対する少なくとも１つの第２の特異的結合パートナーは、本明細書に記載されているＤＶＤ−結合タンパク質（またはその断片、変異体、もしくは変異体の断片）である方法が好まれ得る。
【０４５７】
あるいは、この方法は、試験試料を、抗体、分析物に結合できる抗体の断片、分析物に結合できる抗体の変異体、分析物に結合できる抗体の変異体の断片、またはＤＶＤ−結合タンパク質（またはその断片、その変異体もしくはその変異体の断片）のＳＯＳＴ分析物（またはその断片）に対する少なくとも１つの第１の特異的結合パートナーと接触させること、並びに試験試料を、少なくとも１つの第１の特異的結合パートナーへの結合について分析物（またはその断片）と競合でき、かつ検出可能に標識された分析物、第１の特異的結合パートナーに結合できる分析物の検出可能に標識された断片、第１の特異的結合パートナーに結合できる分析物の検出可能に標識された変異体、または第１の特異的結合パートナーに結合できる分析物の変異体の検出可能に標識された断片である、少なくとも１つの第２の特異的結合パートナーと、同時にまたは順次のいずれかの順序で接触させることを含むことができる。試験試料中に存在するあらゆるＳＯＳＴ（またはその断片）及び少なくとも１つの第２の結合パートナーは、それぞれ、第１の特異的結合パートナー／分析物（またはその断片）複合体及び第１の特異的結合パートナー／第２の特異的結合パートナー複合体を形成するために互いに競合する。この方法は、（ｉｉ）において形成された第１の特異的結合パートナー／第２の特異的結合パートナー複合体において、検出可能な標識によって発生したシグナルを検出または測定することにより、試験試料中の分析物の存在、量または濃度を決定することを更に含み、この第１の特異的結合パートナー／第２の特異的結合パートナー複合体において、検出可能な標識によって発生したシグナルは、試験試料中の分析物の量または濃度に反比例する。
【０４５８】
上記の方法は、そこから試験試料を得た患者の治療的／予防的処置の有効性を診断、予後診断、または評価することを更に含むことができる。この方法が、そこから試験試料を得た患者の治療的／予防的処置の有効性を評価することを更に含む場合、この方法は、必要に応じて、有効性を改善するために必要とされる、その患者の治療的／予防的処置の改善を加えることを更に含む。この方法は、自動化システムまたは半自動化システムにおける使用に適合可能である。
【０４５９】
アッセイの方法（及びそのためのキット）に関して、市販されている抗分析物抗体または文献に記載されている抗分析物の産生のための方法の使用が可能であり得る。様々な抗体の商業的供給元としては、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（カリフォルニア州サンタクルーズ）、ＧｅｎＷａｙ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（カリフォルニア州サンディエゴ）、及びＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（ＲＤＳ、ミネソタ州ミネアポリス）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４６０】
一般的に、所定のレベルがベンチマークとして使用でき、それに対し、例えば、疾患または疾患のリスクを検出するために、分析物またはその断片について試験試料をアッセイして得られた結果を評価する。一般に、このような比較を行う場合、分析物の存在、量または濃度が疾患、障害または状態の特定の段階またはエンドポイント、もしくは特定の臨床的徴候と繋がるかまたは関連し得るように、適当な条件下で、十分な回数にわたり特定のアッセイを実行することによって、所定のレベルが得られる。典型的には、所定のレベルは、基準対象（または対象の集団）のアッセイから得られる。測定される分析物は、その断片、その分解産物及び／またはその酵素的切断産物を含むことができる。
【０４６１】
特に、疾患の進行及び／または治療をモニタリングするために使用されるような所定のレベルに対して、分析物またはその断片の量または濃度は、「変化していない」、「好ましい」（または「好ましく変化している」）、または「好ましくない」（または「好ましくなく変化している」）場合がある。「上昇している」または「増加している」とは、典型的または正常なレベルもしくは範囲（例えば、所定のレベル）よりも高い、または別の基準レベルまたは範囲（例えば、初期またはベースライン試料）よりも高い、試験試料における量または濃度を指す。「低下している」または「低減している」という用語は、典型的なまたは正常なレベルもしくは範囲（例えば、所定のレベル）よりも低い、または別の基準レベルまたは範囲（例えば、初期またはベースライン試料）よりも低い、試験試料における量または濃度を指す。「変化している」という用語は、典型的なまたは正常なレベルもしくは範囲（例えば、所定のレベル）を超えて、または別の基準レベルまたは範囲（例えば、初期またはベースライン試料）を超えて変化している（増加しているまたは減少している）、試料における量または濃度を指す。
【０４６２】
分析物の典型的なまたは正常なレベルもしくは範囲は、標準的な慣習に従って定義される。ある場合には、分析物のレベルは非常に低いために、いわゆる変化したレベルまたは変化は、典型的なまたは正常なレベルもしくは範囲、または基準レベルもしくは範囲と比較して、任意の正味の変化（実験エラーまたは試料の変動によって説明できない）が存在する場合に起こったとみなされ得る。したがって、特定の試料において測定されるレベルは、いわゆる正常な対象から得られた類似の試料で決定されたレベルまたはレベルの範囲と比較される。この文脈において、「正常な対象」とは、例えば、検出可能な疾患を有さない個体であり、「正常な」（「対照」と称される場合もある）患者または集団は、例えば、それぞれ検出可能な疾患を呈さないもの（複数可）である。更に、分析物がヒトの集団の大部分において通常は高レベルで見出されないならば、「正常な対象」は、実質的に検出可能な分析物の量または濃度の増加または上昇を有さない個体とみなすことが可能であり、「正常な」（「対照」と称される場合もある）患者または集団は、実質的に検出可能な分析物の量または濃度の増加または上昇を呈さないもの（複数可）である。「見かけ上正常な対象」とは、その対象において分析物が未だ評価されていないかまたは現在評価中であるものである。分析物のレベルは、分析物が通常は検出不能である（例えば、正常レベルが０、または正常集団の約２５〜約７５パーセンタイルの範囲内にある）が、試験試料で検出される場合、並びに分析物が試験試料中に正常レベルよりも高く存在する場合に、「上昇している」と言われる。したがって、特に、本開示は、特定の疾患、障害、または状態を有するまたはリスクがある対象をスクリーニングする方法を提供する。アッセイの方法はまた、その他のマーカーのアッセイなどを含むことができる。
【０４６３】
結果的に、本明細書に記載されている方法は、対象が所与の疾患、障害または状態を有するか、またはこれらを発症するリスクがあるか否かを決定するために使用することも可能である。具体的には、このような方法は、
（ａ）対象から得られた試験試料におけるスクレロスチン（またはその断片）の濃度または量を（例えば、本明細書に記載されている方法、または当該技術分野で既知の方法を使用して）決定する工程と、
（ｂ）工程（ａ）で決定されたスクレロスチン（またはその断片）の濃度または量を所定のレベルと比較する工程と、を含むことができ、工程（ａ）で決定された分析物の濃度または量が所定のレベルに対して好ましい場合、対象は所与の疾患、障害または状態を有さずまたはこれらのリスクがないと決定される。しかしながら、工程（ａ）で決定されたスクレロスチンの濃度または量が、所定のレベルに対して好ましくない場合、対象は、所与の疾患、障害または状態を有するまたはこれらのリスクがあると決定される。
【０４６４】
更に、本明細書において提供されるものは、対象における疾患の進行をモニタリングする方法である。最適には、この方法は、
（ａ）対象から得た試験試料においてスクレロスチンの濃度または量を決定する工程と、
（ｂ）この対象から得た、より後の試験試料においてＳＯＳＴの濃度または量を決定する工程と、
（ｃ）工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量を、工程（ａ）において決定されたスクレロスチンの濃度または量と比較する工程とを含み、工程（ｂ）において決定された濃度または量が、工程（ａ）において決定されたスクレロスチンの濃度または量と比較して変化していないまたは好ましくない場合、対象における疾患は継続、進行または悪化していると決定される。これと比較して、工程（ｂ）において決定されたスクレロスチンの濃度または量が、工程（ａ）において決定されたスクレロスチンの濃度または量と比較して好ましい場合、この対象における疾患は消失、退行または改善していると決定される。
【０４６５】
必要に応じて、この方法は、工程（ｂ）において決定されたスクレロスチン分析物の濃度または量を、例えば所定のレベルと比較することを更に含む。更に、必要に応じて、この方法は、比較により、工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量が、例えば、所定のレベルに対して好ましくなく変化していることが示される場合、１つ以上の医薬組成物で対象をしばらくの間治療することを含む。
【０４６６】
また更に、この方法は、１つ以上の医薬組成物で治療を受けている対象において、治療をモニタリングするために使用できる。具体的には、このような方法は、対象が１つ以上の医薬組成物を投与される前に、対象から得られた第１の試験試料を提供することを含む。次に、対象から得られた第１の試験試料において、スクレロスチンの濃度または量が決定される（例えば、本明細書に記載されている方法または当該技術分野で既知の方法を使用して）。スクレロスチンの濃度または量が決定された後、必要に応じて、スクレロスチンの濃度または量が、所定のレベルと比較される。第１の試験試料において決定されたスクレロスチンの濃度または量が、所定のレベルよりも低い場合、この対象は１つ以上の医薬組成物で治療されない。しかしながら、第１の試験試料において決定されたスクレロスチンの濃度または量が、所定のレベルよりも高い場合、この対象は、１つ以上の医薬組成物で一時期治療される。対象が１つ以上の医薬組成物で治療される期間は、当業者に依って決定され得る（例えば、期間は約７日間〜約２年間、例えば、約１４日間〜約１年間であってよい）。
【０４６７】
１つ以上の医薬組成物での治療の経過の間に、第２及びその後の試験試料が次いで対象から得られる。試験試料の数及び該試験試料が対象から得られる時期は重要ではない。例えば、第２の試験試料は、対象が１つ以上の組成物を最初に投与された７日後に得ることが可能であり、第３の試験試料は、対象が１つ以上の医薬組成物を最初に投与された２週間後に得ることが可能であり、第４の試験試料は、対象が１つ以上の医薬組成物を最初に投与された３週間後に得ることが可能であり、第５の試験試料は、対象が１つ以上の医薬組成物を最初に投与された４週間後に得ることが可能である、などである。
【０４６８】
第２またはその後の試験試料の各々が対象から得られた後に、第２及びその後の試験試料において決定されるスクレロスチン分析物の濃度または量が、（例えば、本明細書に記載されている方法または当該技術分野で既知の方法を使用して）決定される。第２及びその後の試験試料の各々において決定されるスクレロスチンの濃度または量は、次いで第１の試験試料（例えば、所定のレベルと元々必要に応じて比較された試験試料）において決定される分析物の濃度及び量と比較される。工程（ｃ）において決定されたスクレロスチンの濃度または量が、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量と比較して好ましい場合、対象における疾患は、消失、退行または改善していると決定され、対象は工程（ｂ）の１つ以上の医薬組成物を投与され続けるべきである。しかしながら、工程（ｃ）において決定された濃度または量が、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量と比較して変化していないまたは好ましくない場合、対象における疾患は、継続、進行または悪化していると決定され、対象はより高い濃度の工程（ｂ）において対象に投与された１つ以上の医薬組成物で治療されるべきであり、または対象は、工程（ｂ）において対象に投与された１つ以上の医薬組成物とは異なる１つ以上の医薬組成物で治療されるべきである。具体的には、対象は、対象が、該対象の分析物のレベルを減少または低減させるために以前受けていた１つ以上の医薬組成物とは異なる１つ以上の医薬組成物で治療することができる。
【０４６９】
一般的に、反復試験が行われ得るアッセイ（例えば、疾患の進行及び／または治療に対する応答のモニタリング）については、第２またはその後の試験試料が、対象から第１の試験試料が得られた後のある時期に得られる。具体的には、第２の試験試料は、第１の試験試料が対象から得られた数分、数時間、数日、数週間または数年の後に得ることができる。例えば、第２の試験試料は、対象から第１の試験試料が得られた約１分、約５分、約１０分、約１５分、約３０分、約４５分、約６０分、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、２２週間、約２３週間、約２４週間、約２５週間、約２６週間、約２７週間、約２８週間、約２９週間、約３０週間、約３１週間、３２週間、約３３週間、約３４週間、約３５週間、約３６週間、約３７週間、約３８週間、約３９週間、約４０週間、約４１週間、４２週間、約４３週間、約４４週間、約４５週間、約４６週間、約４７週間、約４８週間、約４９週間、約５０週間、約５１週間、約５２週間、約１．５年、約２年、約２．５年、約３．０年、約３．５年、約４．０年、約４．５年、約５．０年、約５．５年、約６．０年、約６．５年、約７．０年、約７．５年、約８．０年、約８．５年、約９．０年、約９．５年または約１０．０年の後の時期に対象から得ることができる。
【０４７０】
疾患の進行をモニタリングするとき、上記のアッセイは、急性状態に罹患している対象における疾患の進行をモニタリングするために使用できる。急性状態は、救急状態としても知られ、例えば、心血管系または排泄系が関与する、生命を脅かす急性の疾患またはその他の救急医学的状態を指す。典型的には、救急状態は、病院を基礎とする設備（救急処置室、集中治療室、外傷センター、またはその他の緊急医療設備が含まれるが、これらに限定されない）における救急の医学的介入もしくは医療補助者またはその他の分野に基づく医療関係者による管理を必要とする状態を指す。救急状態については、反復モニタリングが短時間の枠内で、すなわち、数分間、数時間または数日間（例えば、約１分間、約５分間、約１０分間、約１５分間、約３０分間、約４５分間、約６０分間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、または約７日間）で一般的に行われ、同様に最初のアッセイは、一般に短時間の枠内で、例えば、疾患または状態の発症のおよそ数分間、数時間または数日間以内に行われる。
【０４７１】
アッセイは、慢性または非急性状態に罹患している対象において、疾患の進行をモニタリングするために使用することも可能である。非救急または急性状態は、例えば、心血管系及び／または排泄系が関与する、急性の生命を脅かす疾患またはその他の救急医学的状態以外の状態を指す。典型的には、非急性状態は、長期または慢性の持続期間の状態を含む。非急性状態については、反復モニタリングが、長時間の枠内で、例えば、数時間、数日間、数週間、数ヶ月間または数年間（例えば、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、２２週間、約２３週間、約２４週間、約２５週間、約２６週間、約２７週間、約２８週間、約２９週間、約３０週間、約３１週間、３２週間、約３３週間、約３４週間、約３５週間、約３６週間、約３７週間、約３８週間、約３９週間、約４０週間、約４１週間、４２週間、約４３週間、約４４週間、約４５週間、約４６週間、約４７週間、約４８週間、約４９週間、約５０週間、約５１週間、約５２週間、約１．５年間、約２年間、約２．５年間、約３．０年間、約３．５年間、約４．０年間、約４．５年間、約５．０年間、約５．５年間、約６．０年間、約６．５年間、約７．０年間、約７．５年間、約８．０年間、約８．５年間、約９．０年間、約９．５年間または約１０．０年間）で一般的に行われ、同様に最初のアッセイは、長時間枠内、例えば、疾患または状態の発症の約数時間、数日間、数週間、数ヶ月間または数年間以内に、一般的に行われる。
【０４７２】
更に、上記のアッセイは、対象から得られた第１の試験試料を使用して行うことが可能であり、第１の試験試料は、尿、血清または血漿などの１つの供給源から得られる。必要に応じて、上記のアッセイは、次いで、この対象から得られた第２の試験試料を使用して反復することが可能であり、第２の試験試料は、別の供給源から得られる。例えば、第１の試験試料が尿から得られる場合、第２の試験試料は、血清または血漿から得ることができる。第１の試験試料及び第２の試験試料から得た結果は、比較されることができる。この比較は、対象における疾患または状態の状況を評価するために使用可能である。
【０４７３】
更には、本開示はまた、所与の疾患、障害または状態に罹患しやすいまたは罹患している対象が治療から利益を得るかどうかを決定する方法に関する。特に、本開示は、分析物に伴う診断方法及び製品に関する。したがって、本明細書に記載されている「対象における疾患の治療のモニタリング」の方法は、更に最適には、治療の候補を選択または特定することも包含できる。
【０４７４】
したがって、特定の実施形態では、本開示はまた、所与の疾患、障害または状態を有するまたはこれらのリスクがある対象が治療の候補であるかどうかを決定する方法も提供する。一般的に、対象は、所与の疾患、障害または状態のいくつかの症状を経験している者、または所与の疾患、障害または状態を有するもしくはこれらのリスクがあると実際に診断されている者及び／または本明細書に記載されている分析物またはその断片の好ましくない濃度または量を有する者である。
【０４７５】
この方法は、本明細書に記載されているアッセイを任意に含み、このアッセイでは、ＳＯＳＴが、１つ以上の医薬組成物を用いた（例えば、特に分析物を含む作用機序に関する医薬品を用いた）免疫抑制療法による、もしくは免疫吸収療法による対象の治療前後に評価され、もしくは分析物がこのような治療の後に評価され、かつ分析物の濃度または量が所定のレベルに対して比較される。治療後に観察されるＳＯＳＴの好ましくない濃度または量により、対象が、更にまたは続けて治療を受けることから利益を得ないことが確認されるが、一方治療後に観察される分析物の好ましい濃度または量により、対象が更にまたは続けて治療を受けることから利益を得ることが確認される。この確認は、臨床研究の管理及び改善された患者ケアの提供を補助する。
【０４７６】
本明細書における特定の実施形態は、本明細書に説明されている所与の疾患、障害または状態を評価するために使用されるとき有利であるが、このアッセイ及びキットは、他の疾患、障害または状態において分析物を評価するために使用できることは言うまでもない。アッセイの方法は、その他のマーカーのアッセイなども含むことができる。
【０４７７】
アッセイの方法は、所与の疾患、障害または状態を軽減する化合物を同定するためにも使用できる。例えば、分析物を発現する細胞は、候補化合物と接触させることができる。化合物と接触した細胞における分析物の発現のレベルは、本明細書に記載されているアッセイの方法を使用して、対照細胞におけるものと比較することができる。
【０４７８】
ＩＩ．キット
試験試料における分析物（またはその断片）の存在、量または濃度をアッセイするためのキットもまた提供される。キットは、スクレロスチン（またはその断片）について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分と、分析物（またはその断片）について試験試料をアッセイするための説明書とを含む。分析物（またはその断片）について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分は、本明細書に記載されていて、必要に応じて固相に固定化されている、モノクローナル抗体またはＤＶＤ−結合タンパク質（またはその断片、変異体もしくは変異体の断片）などの抗スクレロスチン結合タンパク質を含有する組成物を含むことができる。
【０４７９】
キットは、イムノアッセイ、例えば化学発光微粒子イムノアッセイによりＳＯＳＴ分析物について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分と、例えば化学発光微粒子イムノアッセイによりＳＯＳＴ分析物について試験試料をアッセイするための説明書を含むことができる。例えば、キットは、抗スクレロスチンモノクローナル／ポリクローナル抗体（またはＳＯＳＴに結合できるその断片、分析物に結合できるその変異体、もしくは分析物に結合できる変異体の断片）または抗スクレロスチンＤＶＤ−結合タンパク質（またはその断片、変異体、もしくは変異体の断片）、（これらのいずれかが検出可能に標識され得る）など、ＳＯＳＴの少なくとも１つの特異的結合パートナーを含むことができる。この代わりにまたはこれに加えて、キットは、抗分析物モノクローナル／ポリクローナル抗体（または分析物に結合できるその断片、分析物に結合できるその変異体、または分析物に結合できる変異体の断片）または抗分析物ＤＶＤ−結合タンパク質（またはその断片、変異体、もしくは変異体の断片）（これらのいずれかが固体支持体上に固定化され得る）への結合について試験試料中のあらゆる分析物と競合できる、検出可能に標識されたＳＯＳＴ分析物（抗分析物、モノクローナル／ポリクローナル抗体または抗分析物ＤＶＤ−結合タンパク質（またはその断片、変異体、もしくは変異体の断片）に結合できるその断片）を含むことができる。キットは、較正物質または対照、例えば単離されたまたは精製された分析物を含むことができる。キットは、アッセイを行うための少なくとも１つの容器（例えば、管、マイクロタイタープレートまたはストリップ（これらは、例えば、第１の特異的結合パートナーで既にコーティングされていてよい））、及び／またはアッセイ緩衝液または洗浄緩衝液などの緩衝液（これらのいずれか１つは、濃縮溶液として提供できる）、検出可能な標識（例えば、酵素標識）用の基質溶液、または停止溶液を含むことができる。一実施形態では、キットは、アッセイを行うために必要な全ての成分、すなわち、試薬、標準物質、緩衝液、希釈剤等を含む。説明書は、紙の形態またはディスク、ＣＤ、ＤＶＤなどのコンピュータ読み取り可能な形態であり得る。
【０４８０】
抗スクレロスチン結合タンパク質または抗分析物ＤＶＤ−結合タンパク質などのあらゆる結合タンパク質、もしくはトレーサーは、蛍光体、放射性部分、酵素、ビオチン／アビジン標識、発色団、化学発光標識など、本明細書に記載されている検出可能な標識を組み込むことができ、またはキットは、検出可能な標識化を実行するための試薬を含むことができる。抗体、較正物質及び／または対照は、別個の容器で提供できまたは適当なアッセイフォーマットに、例えばマイクロタイタープレートに予め分注できる。
【０４８１】
必要に応じて、キットは、品質管理成分（例えば、感受性パネル、較正物質及び陽性対照）を含む。品質対照試薬の調製は当該技術分野で周知であり、様々な免疫診断製品のインサートシートに記載されている。感受性パネルのメンバーは、必要に応じて、アッセイの性能特性を確立するために使用され、更に必要に応じて、イムノアッセイキットの試薬の安全性、及びアッセイの標準化の有用な指標である。
【０４８２】
キットはまた、緩衝液、塩類、酵素、酵素の補因子、酵素の基質、検出試薬など、診断アッセイを行うためまたは品質管理の評価を容易にするために必要なその他の試薬も必要に応じて含むことができる。試験試料の単離及び／または処理のための緩衝液及び溶液（例えば、前処理試薬）などの、その他の成分もキットに含まれてよい。キットは、１つ以上のその他の対照を更に含むことができる。キットの成分の１つ以上は、凍結乾燥されることが可能であり、この場合、キットは、凍結乾燥された成分の再構成に好適な試薬を更に含むことができる。
【０４８３】
キットの様々な成分は、必要に応じて好適な容器、例えば、マイクロタイタープレートに入れて任意に提供される。キットは、試料を保持するまたは保管するための容器（例えば、尿試料用の容器またはカートリッジ）を更に含むことができる。該当する場合、キットは、任意に、反応容器、混合容器、及び試薬または試験試料の調製を容易にするその他の成分を含有できる。キットはまた、シリンジ、ピペット、鉗子、計量スプーンなど、試験試料を採取することを補助するための１つ以上の器具も含むことができる。
【０４８４】
検出可能な標識が少なくとも１つのアクリジニウム化合物である場合、キットは、少なくとも１つのアクリジニウム−９−カルボキサミド、少なくとも１つのアクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステル、またはこれらの任意の組み合わせを含むことができる。検出可能な標識が少なくとも１つのアクリジニウム化合物である場合、キットはまた、過酸化水素の供給源、例えば緩衝液、溶液、及び／または少なくとも１つの塩基性溶液を含むこともできる。所望される場合、キットは、磁気粒子、ビーズ、試験管、マイクロタイタープレート、キュベット、膜、足場分子、フィルム、濾紙、ディスクまたはチップなどの固相を含有することもできる。
【０４８５】
ＩＩＩ．キット及び方法の適合
本明細書に記載されているイムノアッセイなどのアッセイによって、試験試料中の分析物の存在、量または濃度を決定するキット（またはその成分）、並びに方法は、例えば、米国特許第５，０８９，４２４号及び同第５，００６，３０９号に記載され、例えばＡｂｂｏｔｔ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（イリノイ州アボットパーク）によってＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）として商業的に販売されている、様々な自動化または半自動化システム（固相が微粒子を含むものを含む）における使用に適合させることが可能である。
【０４８６】
非自動化システム（例えば、ＥＬＩＳＡ）と比較した自動化または半自動化システムでのいくつかの差異としては、第１の特異的結合パートナー（例えば、抗分析物、モノクローナル／ポリクローナル抗体（またはその断片、その変異体もしくはその変異体の断片）または抗分析物ＤＶＤ−結合タンパク質（またはその断片、その変異体もしくはその変異体の断片）が付着する基質（いずれにしても、サンドイッチ形成及び分析物反応性が影響され得る）、及び捕捉、検出及び／または任意のあらゆる洗浄工程の長さ及びタイミングが挙げられる。ＥＬＩＳＡなどの非自動化フォーマットは、試料及び捕捉試薬の比較的長いインキュベーションを必要とする場合があるが（例えば、約２時間）、自動化または半自動化フォーマット（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）は、比較的短いインキュベーション時間（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）では、約１８分）でよい。同様に、ＥＬＩＳＡなどの非自動化フォーマットは、コンジュゲート試薬などの検出抗体を比較的長い時間インキュベーションするが（例えば、約２時間）、自動化または半自動化フォーマット（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標））は、比較的短いインキュベーション時間（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）では、約４分間）でよい。
【０４８７】
Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手可能なその他のプラットホームには、ＡｘＳＹＭ（登録商標）、ＩＭｘ（登録商標）（例えば、米国特許第５，２９４，４０４号を参照）、ＰＲＩＳＭ（登録商標）、ＥＩＡ（ビーズ）、及びＱｕａｎｔｕｍ（商標）ＩＩ、並びにその他のプラットホームが挙げられるが、これらに限定されない。更に、アッセイ、キット及びキット成分は、その他のフォーマットで、例えば、電気化学的またはその他の携帯式もしくはポイント・オブ・ケアアッセイシステムで使用することも可能である。本開示は、例えば、サンドイッチイムノアッセイを実行する市販のＡｂｂｏｔｔ  Ｐｏｉｎｔ  ｏｆ  Ｃａｒｅ（ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）電気化学的イムノアッセイシステムに適用可能である。免疫センサー並びに単回使用試験装置におけるこれらの製造及び操作方法は、例えば、米国特許第５，０６３，０８１号、米国特許出願公開第２００３／０１７０８８１号、同第２００４／００１８５７７号、同第２００５／００５４０７８号、及び同第２００６／０１６０１６４号に記載されている。
【０４８８】
特に、Ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）システムへの分析物アッセイの適合に関しては、以下の構成が好例となる。金の電流測定用作用電極の対及び銀−塩化銀基準電極を有する微細加工シリコンチップが製造される。１つの作用電極上で、抗分析物、モノクローナル／ポリクローナル抗体（またはその断片、その変異体もしくはその変異体の断片）または抗分析物ＤＶＤ−結合タンパク質（またはその断片、その変異体もしくはその変異体の断片）が固定化されたポリスチレンビーズ（直径０．２ｍｍ）が、電極上のパターン化されたポリビニルアルコールのポリマーコーティングに付着している。このチップは、イムノアッセイに適した流体工学フォーマットを有するＩ−ＳＴＡＴ（登録商標）カートリッジに組み込まれる。カートリッジの試料保持チャンバーの壁の一部に、抗分析物、モノクローナル／ポリクローナル抗体（または分析物に結合できるその断片、その変異体もしくはその変異体の断片）または抗分析物ＤＶＤ−結合タンパク質（または分析物に結合できるその断片、その変異体もしくはその変異体の断片）（これらのいずれかが検出可能に標識され得る）など、分析物の特異的結合パートナーを含む層が存在する。ｐ−アミノフェノールリン酸を含む水性試薬が、カートリッジの流体ポーチ内にある。
【０４８９】
操作時に、分析物を含有することが疑われる試料が、試験カートリッジの保持チャンバーに添加され、カートリッジはＩ−ＳＴＡＴ（登録商標）リーダーに挿入される。分析物に対する特異的結合パートナーが試料中で溶解された後に、カートリッジ内のポンプエレメントが、チップを含有する導管に試料を押し入れる。ここでそれが振動してサンドイッチの形成を促進する。アッセイの最後から２番目の工程において、流体がポーチから押し出され、導管に入ってチップから試料を廃棄チャンバーに洗い流す。アッセイの最後の工程では、アルカリ性ホスファターゼ標識がｐ−アミノフェノールリン酸と反応してリン酸基を切断し、遊離したｐ−アミノフェノールを作用電極にて電気化学的に酸化させる。測定された電流に基づいて、リーダーは、埋め込まれたアルゴリズム及び工場で決定された較正曲線によって、試料における分析物の量を計算できる。
【０４９０】
本明細書に記載されている方法及びキットは、イムノアッセイを実行するためのその他の試薬及び方法を必然的に包含することは言うまでもない。例えば、当該技術分野で既知であるような様々な緩衝液並びに／もしくは、例えば洗浄に、コンジュゲート希釈剤、微粒子希釈剤として、及び／または較正希釈剤として使用されるように、容易に調製されまたは最適化され得るような様々な緩衝液が包含される。例示的なコンジュゲート希釈剤は、特定のキット（Ａｂｂｏｔｔ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、イリノイ州アボットパーク）で使用され、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、塩、タンパク質遮断剤、抗微生物剤及び洗浄剤を含有するＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）コンジュゲート希釈剤である。例示的な較正物質希釈剤は、特定のキット（Ａｂｂｏｔｔ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、イリノイ州アボットパーク）で使用され、ＭＥＳ、その他の塩、タンパク質遮断剤及び抗微生物剤を含むＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）ヒト較正物質希釈剤である。更に、米国特許出願第１２／６５０，２４１号（更にＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６９８４６を参照）に記載されているように、改善されたシグナルの発生は、例えばＩ−Ｓｔａｔカートリッジフォーマットにおいて、シグナル増幅物質としてシグナル抗体に連結された核酸配列を使用して得られる。
【０４９１】
本明細書に記載される本発明の方法のその他の適切な修正及び適応は明白であり、本明細書に開示される実施形態の範囲から逸脱することなく、適切な等価物を使用して行うことができることは、当業者には容易に理解されるであろう。
【０４９２】
ここまで本発明を詳細に説明してきたが、例示の目的のためだけのものであり、限定することを意図するものではない以下の実施例を参照にすることにより、本発明はより明確に理解されるであろう。
【実施例】
【０４９３】
実施例１：抗ヒトＳＯＳＴ抗体
実施例１．１：インビトロの提示系によるスクレロスチンに対する完全ヒト結合タンパク質の特定
実施例１．１．１：抗体選択
完全ヒト抗−ヒトスクレロスチンモノクローナル抗体を、ヒト抗体ライブラリーから、組み換えヒトスクレロスチンタンパク質に対してそれらが結合する能力によって、インビトロ提示技術によって単離した。その可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）のアミノ酸配列を、ＤＮＡ配列決定から決定した。
【０４９４】
実施例１．１．２：完全ヒト抗−ヒトスクレロスチン結合タンパク質ＡＥ１０−６の親和性成熟
ヒトスクレロスチンに対するＡＥ１０−６ヒト結合タンパク質を、インビトロの提示技術によって親和性成熟させた。配列アラインメントによって、スクレロスチン抗体ＡＥ１０−６が、ヒト生殖細胞系列ＶＨ１−２４／ＪＨ１およびＩＧＫＶ７−４６／ＪＬ２に対して共有する同一性が最高であることが示される。スクレロスチンに対するＡＥ１０−６の親和性を改善するために、高頻度に変異したＣＤＲ残基を、生殖細胞系列ＶＨ１−２４およびＩＧＫＶ７−４６と高い同一性をやはり共有したＩｇＢＬＡＳＴデータベース中の他のヒト抗体配列から特定した。次いで、対応するＡＥ１０−６  ＣＤＲ残基を、これらの位置での低縮重性を有するプライマーを用いるＰＣＲによって制限突然変異に供して、表面提示に適切なｓｃＦｖフォーマットで２つの抗体ライブラリーを創出した。この第１のライブラリーは、ＶＨ  ＣＤＲ１、２および３において、残基３４、５１、５４、５７および９５〜１００ｃで変異を含んだ（Ｋａｂａｔの番号付け）；第２のライブラリーでは、３つのＶＬ  ＣＤＲにおいて残基２７ｂ、２９、３０、５２、５３、５５および９１〜９６で変異を含んだ。ヒト生殖細胞系列フレームワーク配列に対するＡＥ１０−６の同一性をさらに増大するために、二元性縮重（ｂｉｎａｒｙ  ｄｅｇｅｎｅｒａｃｙ）を、ＶＨ位置３０（Ｔ／Ｓ）、５０（Ｇ／Ｒ）および５２（Ｄ／Ｎ）で第１のライブラリーに導入した。また、ＶＨ位置１０５は、第１のライブラリーにおける生殖細胞系列であった（Ｐ／Ｑ）。ＶＬ位置２４（Ｋ／Ｒ）、３３（Ｖ／Ｌ）、５４（Ｒ／Ｌ）、５５（Ｈ／Ｑ）、５６（Ｔ／Ｓ）、９１（Ｈ／Ｓ）および９６（Ｆ／Ｙ）の二元性縮重を、第２のライブラリーに導入した。（表１を参照のこと）。また、第２のライブラリーにおけるＶＬ位置２は、生殖細胞系列であった（Ｔ／Ａ）。
【０４９５】
下の表（表５）は、親和性成熟選択プロトコールに供された、完全ヒトＡＥ１０−６結合タンパク質のＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列のリストを示す。各々のＶＨおよびＶＬ配列の個々のＣＤＲのアミノ酸残基は、太字で示す。
【表１１】
2014533659.tif 000012
【０４９６】
これらのＡＥ１０−６ライブラリーを形質転換して、磁気、次いで蛍光活性化細胞分取によって低濃度のビオチニル化スクレロスチンに対して選択されるように細胞表面上に提示した。オン速度定数、オフ速度定数、またはその両方を改善するための選択を行って、親和性調節ＡＥ１０−６クローンの抗体タンパク質配列を細胞から回収して、変換してさらに特徴付けのためにＩｇＧ形式に戻した。
【０４９７】
下の表は、ＡＥ１０−６由来の親和性成熟した完全ヒトスクレロスチン抗体のＶＨ領域（表６）およびＶＬ領域（表７）のアミノ酸配列のリストを示す。各々のＶＨ配列の個々のＣＤＲのアミノ酸残基は、太字で示す。
【０４９８】
【表１２】
2014533659.tif 000013
【０４９９】
【表１３】
2014533659.tif 000014
【０５００】
【表１４】
2014533659.tif 000015
【０５０１】
【表１５】
2014533659.tif 000016
【０５０２】
【表１６】
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【０５０３】
【表１７】
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【０５０４】
【表１８】
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【０５０５】
【表１９】
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【０５０６】
【表２０】
2014533659.tif 000021
【０５０７】
【表２１】
2014533659.tif 000022
【０５０８】
【表２２】
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【０５０９】
【表２３】
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【０５１０】
【表２４】
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【０５１１】
【表２５】
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【０５１２】
【表２６】
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【０５１３】
【表２７】
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【０５１４】
【表２８】
2014533659.tif 000029
【０５１５】
【表２９】
2014533659.tif 000030
【０５１６】
【表３０】
2014533659.tif 000031
【０５１７】
下の表は、ＶＨ配列（表８）およびＶＬ配列（表９）の両方を特徴付けるためのＩｇＧタンパク質に変換されたＡＥ１０−６クローンのリストを示す。
【表３１】
2014533659.tif 000032
【０５１８】
【表３２】
2014533659.tif 000033
【０５１９】
【表３３】
2014533659.tif 000034
【０５２０】
【表３４】
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【０５２１】
【表３５】
2014533659.tif 000036
【０５２２】
【表３６】
2014533659.tif 000037
【０５２３】
重鎖および軽鎖の対は、表１０のとおり調製した。
【表３７】
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【０５２４】
実施例１．１．３：完全ヒト抗−ヒトスクレロスチン結合タンパク質ＭＳＬ１０の親和性成熟
ヒトＴＮＦに対するＭＳＬ１０ヒト結合タンパク質を、インビトロの提示技術によって親和性成熟させた。親のＭＳＬ１０抗体のＶＨおよびＶＬ配列は、下に示す。
【化１】
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【化２】
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【０５２５】
スクレロスチンに対するＭＳＬ１０の親和性を改善するため、高頻度に変異したＣＤＲ残基を、ヒト生殖細胞系列と高い同一性をやはり共有した、ＩｇＢＬＡＳＴデータベース中他のヒト抗体配列から特定した。次いで、対応するＭＳＬ１０  ＣＤＲ残基を、これらの位置で低い縮重性を有するプライマーを用いるＰＣＲによって、制限突然変異に供して、表面提示に適切なｓｃＦｖ形式で２つの抗体ライブラリーを創出した。
【０５２６】
下の表は、ＭＳＬ１０由来の親和性成熟された完全ヒトスクレロスチン抗体のＶＨ領域（表１４）およびＶＬ領域（表１５）のアミノ酸配列のリストを示す。各々のＶＨ配列の個々のＣＤＲのアミノ酸残基は、太字で示す。
【表３８】
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【０５２７】
【表３９】
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【０５２８】
下の表（表１６）は、完全ヒトＳＯＳＴ抗体ＭＳＬ１０のＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列のリストを示す。各々のＶＨ配列およびＶＬ配列の個々のＣＤＲのアミノ酸残基は、太字で示す。
【表４０】
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【０５２９】
【表４１】
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【０５３０】
【表４２】
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【０５３１】
上記の表における完全ヒトＳＯＳＴ抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域の個々のＣＤＲの配列を整列させて、下の表のようなコンセンサスＣＤＲ配列を得てもよい（表１７）。
【表４３】
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【０５３２】
実施例１．２：ヒトＳＯＳＴ抗体の機能的な特徴付け
実施例１．２．１：スクレロスチン酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）プロトコール
直接結合ＥＬＩＳＡ
以下のプロトコールを用いて、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によってヒトＳＯＳＴに対するＳＯＳＴ抗体の結合を特徴付けした。ＥＬＩＳＡプレートを、１ウェルあたり５０μｌのヤギ抗−マウスＩｇＧ−Ｆｃを２μｇ／ｍｌで用いて一晩４℃でコーティングした（Ｊａｃｋｓｏｎカタログ番号１１５−００５−１６４）。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ＰＢＳ／０．１％ＢＳＡ中で１μｇ／ｍｌまで希釈した５０μｌの抗体を適切なウェルに添加して、室温（ＲＴ）で１時間インキュベートした。プレートを、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。５０μｌの連続希釈したビオチン−ＳＯＳＴを適切なウェルに添加して、ＲＴで１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎを用いて３回洗浄した。ＰＢＳ／０．１％ＢＳＡ中で１：１０，０００希釈した５０μｌのストレプトアビジン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号２１１２６）を、適切なウェルに添加して、ＲＴで１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。５０μｌのＴＭＢ（Ｚｙｍｅｄカタログ番号００２０２３）を適切なウェルに添加して、その反応を、１分間進行させた。その反応を５０μｌの２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４で停止して、吸光度を４５０ｎｍで読んだ。
【０５３３】
抗ヒトＦｃ捕捉ＥＬＩＳＡ
抗−ヒトＦｃに特異的な抗体を、０．２モルの炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．４）中で１μｇ／ｍｌまで希釈した。プレートを、１ウェルあたり１００μｌを用いてＲＴで２時間コーティングした。追加の結合能力のブロックは、各々のウェルに５％の脱脂粉乳を含むＰＢＳを２００μｌ添加することによってＲＴで１時間行った。プレートを洗浄した後、０．５μｇ／ｍｌに希釈された個々の抗体の１００μｌを各々のウェルに二連で添加した。プレートを、ＲＴで１時間インキュベートして、洗浄した。１００μｌの１：６の連続希釈したビオチンｒｈ（ｒｃｙｎｏ／ｒｒａｔ／ｒｍｏｕｓｅ）スクレロスチン（１００ｎＭ〜０．００１ｎＭ）を、各々のウェルに添加して、プレートをＲＴで１時間インキュベートした。洗浄後、１：１０，０００希釈したＳＡ−ＨＲＰを、１ウェルあたり１２０μｌ添加した。ＲＴでＳＡ−ＨＲＰＲＴと１５分間インキュベーションした後に洗浄を続けた。最後に、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎの１２０μｌのＴＭＢ基質（カタログ番号００−２０２３ロット番号４２５８２０Ａ）を、各々のウェルに添加し、１０分間発色させた。その反応を、６０μｌの２Ｎの硫酸を用いて停止した。そのプレートを４５０ｎｍで読み取って、データを収集して分析した。
【０５３４】
抗ビオチン捕捉ＥＬＩＳＡ
ヤギ抗−ビオチン（Ｓｉｇｍａ  ＣＡＴ  Ｂ３６４０−１ＭＧ）を、０．２Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ  ＣＡＴ  ２８３８２ロットＩＡ  １０９３４２）（ｐＨ９．４）中で、１μｇ／ｍｌの濃度まで希釈した。プレートを、１ウェルあたり１００μｌでＲＴで２時間コーティングした。追加の結合能力のブロックを、各々のウェルに５％の脱脂粉乳を含むＰＢＳを２００μｌ添加することによってＲＴで１時間行った。洗浄後、１００μｌの２μｇ／ｍｌのビオチンｒｈ（ｒｃｙｎｏ／ｒｒａｔ／ｒｍｏｕｓｅ）スクレロスチンを、各々のウェルに添加した。サンプルをＲＴで１時間インキュベートした。プレート洗浄後、１００μｌの１：６連続希釈した抗体を、ウェルに、２５μｇ／ｍｌで出発して添加した。サンプルを、ＲＴで１時間インキュベートして、プレートを洗浄した。１：５０００希釈した抗ヒトＦｃ−ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎカタログ番号１０９−０３６−０９８）を、１ウェルあたり１２０μｌ添加し、ＲＴで３０分間インキュベートした。洗浄後、１２０μｌのＴＭＢ基質を、各々のウェルに添加した（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号００−２０２３ロット番号４２５８２０Ａ）。５〜１０分間発色させた。その反応を６０μｌの２Ｎ硫酸で停止した。そのプレートを４５０ｎｍで読み取り、データを収集して分析した。いくつかのスクレロスチン特異的な抗体を、この形式を用いて特定した（表１１）。
【表４４】
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【０５３５】
実施例１．２．２：ＴｏｐＦｌａｓｈ  Ｗｎｔ経路中和アッセイ
以下のプロトコールを用いて、スクレロスチンによって阻害されるＷｎｔ経路活性の復旧を介してｍＡｂおよびＤＶＤ結合タンパク質のスクレロスチン中和特性を評価した。ＨＥＫ２９３Ａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カタログ番号：５１−００３６，ロット番号７３７４７０）細胞を、ＴｏｐＦｌａｓｈ  Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ（ＳＡ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，カタログＣＬＳ  ０１８Ｌ−１）を用いて安定に形質導入して、選択された１Ｇ６クローンをさらに、Ｗｎｔ−１レンチウイルス（Ｏｒｉｇｅｎｅカタログ番号ＳＣ３０３６４４）で感染させて、ＬｕｃｉｆｅｒａｓｅおよびＷｎｔ−１を同時発現するクローンを得た。１つの二重安定クローン（クローン番号１４）を、以下の培養培地中で：ＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１１９６５−０９２）（１０％  Ｑｕａｌｉｆｉｅｄ  ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号２６１４０−０７９）、Ｐｅｎ−Ｓｔｒｅｐ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１５１４０−１２２）、Ｌ−グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号２５０３０−０８１最終２ｍＭ）、ピルビン酸ナトリウム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１１３６０−０７０最終１ｍＭ）および２．５μｇ／ｍｌピューロマイシン（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎカタログ番号ａｎｔ−ｐｒ−１）を含有）、Ｔ７５フラスコ中で、アッセイの日に８０〜９０％コンフルエントになるまで培養した。アッセイは以下の、アッセイ培地中で行う：ピューロマイシンなしの培養培地。ヒトスクレロスチン（Ａｂｂｏｔｔ）、カニクイザル（ｃｙｎｏ）スクレロスチン（Ａｂｂｏｔｔ）、マウス（ｍｕｒｉｎｅ）スクレロスチン、およびラット（ｒａｔ）スクレロスチンを、アリコートして、−８０℃で凍結保存した。１日目にクローン番号１４の細胞を、１ウェルあたり１０，０００細胞で、５０ｕｌのアッセイ培地にて黒側面で底の透明な組織培養物処理９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３６０３）中に播種して、３７℃で一晩（２０〜２４時間）インキュベートした。翌日（２日目）、スクレロスチンストックを、アッセイ培地中で、ヒトおよびカニクイザル（ｃｙｎｏ）については６０ｎＭ（４×）、ならびにマウスおよびラットについては２００ｎＭ（４×）に希釈する。抗−スクレロスチン抗体を、アッセイ培地中で通常は８００ｎＭ（４×）で開始して、希釈する。培地を、細胞を含むプレートから除去して、５０μｌ／ウェルの新鮮なアッセイ培地で置き換える。細胞を次に、ヒトおよびカニクイザル（ｃｙｎｏ）のスクレロスチンについては６０ｎＭ（４×）の２５μｌ、またはマウスおよびラットのスクレロスチンについては２００ｎＭの２５μｌを用いて１時間インキュベートする。この抗−スクレロスチン抗体（４×の２５μｌ）を細胞に添加した後、プレートを３７℃で一晩（２０〜２４時間）インキュベートする。各々のウェル中の最終容積は１００μｌである。翌日（３日目）細胞を、２００μｌのＰＢＳを用いて１回洗浄する（ＲＴ）。Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ｋｉｔ  ＃Ｅ１５０１を、細胞溶解およびルシフェラーゼ読み取りに用いる。要するに、５×細胞溶解試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，カタログ番号Ｅ１５３Ａ）を、ｍｉｌｌｉＱ水で１×まで希釈し、２０��ｌを各々のウェルに添加する。完全に溶解するために、プレートを５００ｒｐｍで２０分間回転する。１００μｌのルシフェラーゼアッセイ試薬（基質１バイアルカタログ番号Ｅ１５１Ａ＋アッセイ緩衝液１０ｍｌカタログ番号Ｅ１５２Ａ）を各々のウェルに添加する。プレートをＴｏｐＣｏｕｎｔマシン（Ｐｒｏｇｒａｍ：Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  ９６，Ａｓｓａｙ  １７：１秒／ウェル読み取り）で読み取る。
【０５３６】
ＡＥ１０−６  ＡＭ２、ＡＥ１０−６  ＡＭ３、ＡＥ１０−６  ＡＭ５、ＡＥ１０−６  ＡＭ６、ＡＥ１０−６  ＡＭ７、およびＡＥ１０−６  ＡＭ８は、組み換えヒトスクレロスチンを１．５〜７．７ｎＭのＩＣ５０で、組み換えカニクイザルスクレロスチンを４．７〜２１．１ｎＭのＩＣ５０で中和した。ＡＥ１０−６  ＡＭ３、ＡＥ１０−６  ＡＭ７、およびＡＥ１０−６  ＡＭ８は、組み換えマウススクレロスチンを９．６〜１１．７ｎＭのＩＣ５０で、組み換えラットスクレロスチンを、１２．１〜１５．７ｎＭのＩＣ５０で中和した。ＭＳＬ１０  ＡＭ１−１１抗体は、組み換えヒトスクレロスチンを３〜２３．３ｎＭのＩＣ５０で中和した。ＭＳＬ１０  ＡＭ６、ＭＳＬ１０  ＡＭ７、ＭＳＬ１０  ＡＭ８、ＭＳＬ１０  ＡＭ９、ＭＳＬ１０  ＡＭ１０、ＭＳＬ１０  ＡＭ１１は、組み換えカニクイザルスクレロスチンを１３．５〜２９．７ｎＭのＩＣ５０で中和した。
【０５３７】
実施例１．２．３：表面プラズモン共鳴によるスクレロスチン抗体の親和性測定
精製された組み換えヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏ）、ラットおよびマウスのスクレロスチンおよびＴＮＦαに対する抗体または抗−スクレロスチン−ＴＮＦ  ＤＶＤの結合を、２５℃で、追加の１５０ｍＭのＮａＣｌ、および／または１０ｍｇ／ｍｌのカルボキシメチルデキストラン、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むランニングＨＢＳ−ＥＰ＋（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ［ｐＨ７．４］、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．００５％サーファクタントＰ２０）を用いて、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００またはＴ２００装置（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ、ＵＳＡ）による表面プラズモン共鳴ベースの測定によって決定した。全ての化合物は、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ、ＵＳＡから、そうでなければ、本明細書に記載されるような異なる供給源から得た。１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）中で希釈された、約１０，０００ＲＵ（またはＣＭ３チップを用いる場合、３０００ＲＵ）のヤギ抗−マウスまたは抗−ヒトＩｇＧ（Ｆｃγ）フラグメント特異的ポリクローナル抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を、製造業者の指示および手順に従う標準アミンカップリングキットを用いて、１５μｇ／ｍｌでＣＭ５（またはＣＭ３）研究等級のバイオセンサーチップ全体に直接固定化した。バイオセンサー表面上の未反応部分を、エタノールアミンでブロックした。フローセル２、３および４の修飾カルボキシメチルデキストラン表面を反応表面として用いた。フローセル１の修飾カルボキシメチルデキストランを参照表面として用いた。Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｔ１００ソフトウェアバージョン２．０．２、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓを用いて、同時に全ての注入物の会合および解離をフィットさせた（局所Ｒｍａｘによる１：１フィット分析を用いる）。精製された抗体をランニング緩衝液中で、ヤギ抗−マウスまたは抗−ヒトＩｇＧ特異的反応表面にまたがる捕捉のために希釈した。リガンドとして捕捉されるべき抗体（１μｇ／ｍｌ）を、１０μｌ／分の流速で反応マトリックス上に注入した。会合および解離の速度定数、ｋオン（ｋｏｎ）（単位Ｍ−１ｓ−１）およびｋオフ（ｋｏｆｆ）（単位ｓ−１）を、５０μｌ／分という連続流量下で決定した。速度定数は、スクレロスチン抗原については０．３９〜５０ｎＭおよびＴＮＦについては０．１９５〜２５ｎＭの範囲におよぶ６〜８の異なる抗原濃度で動態学的な結合測定を行うことによって誘導された。各々のサイクルの終わりに、表面を、５０ｍＭのＮａＯＨの１０ｓ注入、および／または１０ｍＭのグリシンン（ｐＨ１．５）の１０ｓ注入（１００μｌ／分の流速で）によって再生した。Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ  Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓを用いて、同時に、会合定数および解離定数、ならびにＫＤをフィットさせた（局所Ｒｍａｘによる１：１の全体的フィット分析を用いる）。結合は時間の関数として記録し、動力学的な速度定数を算��する。このアッセイでは、１０７Ｍ−１ｓ−１くらい速いオン速度および１０−６ｓ−１くらい遅いオン速度が測定され得る。特定の抗体／ＤＶＤ−結合タンパク質についてのオフ速度が１０−６ｓ−１より遅い場合には、ｋｄは１＊１０−６ｓ−１以下であると仮定され、ＫＤ値は、このような場合である前提で算出された。オン速度を１＊１０−６で割ることによって得られ、「少なくとも」で示された。
【０５３８】
ヒトおよびカニクイザル（ｃｙｎｏ）スクレロスチンについての抗−スクレロスチンＭＳＬ１０クローンの親和性および動態学的速度を、下の表１２に示すが、全てのスクレロスチン種（ヒト、カニクイザル、ラットおよびマウス）についてのＡＥ１０−６クローンの親和性および動態学的速度は、表１３に示す（ＭＳＬ１０クローンは、マウスおよびラットのスクレロスチンには結合しなかった）。
【表４５】
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【０５３９】
【表４６】
2014533659.tif 000049
【０５４０】
実施例２：ラットにおけるＳＯＳＴ抗体の薬物動態分析
ヒト抗−ヒトＳＯＳＴ抗体の薬物動態研究を、Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットで行う。雄性ラットの静脈内に、４ｍｇ／ｋｇの抗体タンパク質を単回投与で投与し、血清サンプルは、抗原捕捉ベースの化学発光ＭＳＤ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）方法を用いて分析する。薬物動態学的パラメータは、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎを用いてノンコンパートメント分析によって算出する。
【０５４１】
実施例２．２．１：ラット血清の調製
外科的に変更した（頸静脈カニューレ挿入，ＪＶＣ）および標準の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（ほぼ７週齢、秤量２４０〜３９０グラム）を、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から購入する。動物を、１２時間の光／暗サイクル下で一定の温度および湿度で維持している室内に収容して、通常のげっ歯類用のエサを与え、食物および水は自由にとらせた。動物の水和および臨床状態は、毎日モニターする。
【０５４２】
血液サンプルを、種々の時点で収集し（０．２ｍＬ）、室温で３０分間凝固させ、１３，２００ｒｐｍで８分間遠心分離する。血清をエッペンドルフチューブに移して、−８０℃で凍結保存する。
【０５４３】
実施例２．２．２：ＰＫ血清サンプルにおけるＳＯＳＴ抗体を定量するために用いられるＭＳＤアッセイ
ＭＳＤストレプトアビジンプレート（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０（１０×ＰＢＳから希釈，Ａｂｂｏｔｔ  Ｂｉｏｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｍｅｄｉａ  Ｒｏｏｍ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，ＭＡ、およびＴｗｅｅｎ−２０，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を含有しているリン酸緩衝化生理食塩水で洗浄する。プレートを、蓋をして室温で振盪（６００ｒｐｍ）しながら、１５０μＬ／ウェルのブロッキング溶液（ＭＳＤ  Ｂｌｏｃｋ，Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，ＰＢＳ中で最終濃度３％に希釈）で１時間ブロックする。
【０５４４】
分析前に、ラット血清サンプルを、氷上で解凍し、穏やかに混合し、１４，０００ｒｐｍで３分間４℃でエッペンドルフ遠心管中で遠心分離する。標準曲線およびコントロールのサンプルを、ラット血清中で調製する。研究サンプル、標準曲線サンプル、ブランクおよび品質管理サンプルを、別々の２ｍＬのディープウェルの９６−ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）中で１：１：１＝Ｖ：Ｖ：Ｖビオチン化ヒトＳＯＳＴ（アッセイ緩衝液中で０．１ｕｇ／ｍＬ）およびスルホ−タグ化ヤギ抗−ヒトＩｇＧ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，アッセイ緩衝液中１μｇ／ｍＬ）と１時間、室温でインキュベートする。次いで、サンプルを、ＭＳＤプレートに移し、室温で振盪（６００ｒｐｍ）しながらさらに１時間インキュベートする。ＭＳＤプレートを洗浄し、２×Ｒｅａｄ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）で発色させる。化学発光を、ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ６０００で１０分内に測定する。
【０５４５】
標準曲線を、４パラメータのロジスティックフィットを用いて分析し、サンプル濃度をＸＬｆｉｔ４ソフトウェアバージョン２．２．１  Ｂｕｉｌｄ  １６，（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）によって算出する。薬物動態学的パラメータを、Ｗｉｎｏｎｌｉｎソフトウェアバージョン５．０．１（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を用いノンコンパートメント分析によって、各々の動物について算出する。
【０５４６】
実施例３：ＴＮＦ／ＳＯＳＴ  ＤＶＤ−結合タンパク質の生成
実施例３．１：ＴＮＦ／ＳＯＳＴ  ＤＶＤ−結合タンパク質ＤＮＡコンストラクトの構築
ヒト抗体Ｄ２Ｅ７、脱免疫化Ｄ２Ｅ７、マウスまたはヒト化抗体ＭＡＫ１９９、およびマウスまたはヒト化抗体ＭＡＫ１９５由来の抗−ＴＮＦ抗体可変ドメインを、介在性のリンカーＤＮＡ配列を用いる重複ＰＣＲ増幅によって、複数のＳＯＳＴ抗体可変ドメインと組み合わせた。増幅したＰＣＲ生成物を、ＨＥＫ２９３細胞中の一過性発現に適切な発現ベクター中にサブクローニングして、オープンリーディングフレーム領域を、ＤＶＤ−結合タンパク質発現前に配列決定によって確認する。
【０５４７】
実施例３．２：ＴＮＦ／ＳＯＳＴ  ＤＶＤ−結合タンパク質の発現および産生
全てのＤＶＤ−結合タンパク質のｃＤＮＡコンストラクトを、配列決定して、Ｅ．ｃｏｌｉ中で増殖し、Ｑｉａｇｅｎ  Ｈｉｓｐｅｅｄ  Ｍａｘｉ  Ｐｒｅｐｓ（カタログ番号１２６６２，ＱＩＡＧＥＮ）を用いてＤＮＡ精製した。ＤＶＤ−結合タンパク質ＤＮＡを、ＰＥＩおよびＤＮＡを２：１の比で（０．２μｇ／ｍｌの重鎖ＤＮＡおよび０．３μｇ／ｍｌの軽鎖ＤＮＡを含む）混合することによって、対数期の２９３Ｅ細胞（０．５×１０６／ｍｌ，生存度＞９５％）の中にトランスフェクトした。ＤＮＡ：ＰＥＩ複合体を、室温で、ＴＣフード中で１５分間形成させた後に、２９３Ｅ細胞に添加した。２４時間後、０．５％のＴＮ１を、２９３Ｅ細胞に添加した。５日目に、上清をヒトＩｇＧ１力価測定のために収集した。細胞上清を、７日目に回収して、０．２μＭのＰＥＳフィルターを通して濾過した。上清を、製造業者の指示によるＰｒｏｔｅｉｎ  Ａ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙによって精製した。精製されたＤＶＤ−結合タンパク質を、０．１Ｍグリシン（ｐＨ２．９９）によってカラムから溶出し、２Ｍのｔｒｉｓ−ＨＣｌもしくはリン酸塩によって緩衝化するか、および／または１５ｍＭのヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）中に直ちに透析した。結合タンパク質を、Ａ２８０によって定量し、質量分析およびＳＥＣによって分析した。
【０５４８】
実施例３．３：ＴＮＦ／ＳＯＳＴ  ＤＶＤ−結合コンストラクトの配列
ヒトＴＮＦおよびＳＯＳＴに結合可能なＤＶＤ−結合タンパク質の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を決定した。ＴＮＦ／ＳＯＳＴ  ＤＶＤ−結合タンパク質の可変重鎖、可変軽鎖および定常領域のアミノ酸配列は、下の表に示す（表１８）。
【表４７】
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【０５４９】
【表４８】
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【０５５０】
【表４９】
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【０５５１】
【表５０】
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【０５５２】
【表５１】
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【０５５３】
【表５２】
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【０５５４】
【表５３】
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【０５５５】
【表５４】
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【０５５６】
【表５５】
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【０５５７】
【表５６】
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【０５５８】
【表５７】
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【０５５９】
【表５８】
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【０５６０】
【表５９】
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【０５６１】
【表６０】
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【０５６２】
【表６１】
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【０５６３】
【表６２】
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【０５６４】
【表６３】
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【０５６５】
【表６４】
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【０５６６】
【表６５】
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【０５６７】
【表６６】
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【０５６８】
【表６７】
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【０５６９】
【表６８】
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【０５７０】
【表６９】
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【０５７１】
【表７０】
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【０５７２】
【表７１】
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【０５７３】
【表７２】
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【０５７４】
【表７３】
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【０５７５】
【表７４】
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【０５７６】
【表７５】
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【０５７７】
【表７６】
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【０５７８】
【表７７】
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【０５７９】
【表７８】
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【０５８０】
【表７９】
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【０５８１】
【表８０】
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【０５８２】
【表８１】
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【０５８３】
【表８２】
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【０５８４】
【表８３】
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【０５８５】
【表８４】
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【０５８６】
【表８５】
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【０５８７】
【表８６】
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【０５８８】
【表８７】
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【０５８９】
【表８８】
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【０５９０】
【表８９】
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【０５９１】
【表９０】
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【０５９２】
【表９１】
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【０５９３】
【表９２】
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【０５９４】
【表９３】
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【０５９５】
【表９４】
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【０５９６】
【表９５】
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【０５９７】
【表９６】
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【０５９８】
【表９７】
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【０５９９】
【表９８】
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【０６００】
【表９９】
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【０６０１】
【表１００】
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【０６０２】
【表１０１】
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【表１０３】
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【表１０５】
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【０６０７】
【表１０６】
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【０６０８】
【表１０７】
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【０６０９】
【表１０８】
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【０６１０】
【表１０９】
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【０６１１】
【表１１０】
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【０６１２】
【表１１１】
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【０６１３】
【表１１２】
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【０６１４】
【表１１３】
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【０６１５】
【表１１４】
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【０６１６】
【表１１５】
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【表１１６】
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【０６１８】
【表１１７】
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【表１１８】
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【表１１９】
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【表１２０】
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【表１２１】
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【表１２２】
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【０６２４】
【表１２３】
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【０６２５】
【表１２４】
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【表１２５】
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【０６２７】
【表１２６】
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【０６２８】
【表１２７】
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【０６２９】
【表１２８】
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【０６３０】
【表１２９】
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【０６３１】
【表１３０】
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【０６３２】
【表１３１】
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【０６３３】
【表１３２】
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【０６３４】
【表１３３】
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【０６３５】
【表１３４】
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【０６３６】
【表１３５】
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【表１３６】
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【０６３８】
【表１３７】
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【０６３９】
【表１３８】
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【０６４０】
【表１３９】
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【０６４１】
【表１４０】
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【表１４１】
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【表１４２】
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【０６４４】
【表１４３】
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【０６４５】
【表１４４】
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【表１４５】
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【表１４６】
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【表１４７】
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【０６４９】
【表１４８】
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【表１４９】
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【表１５０】
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【表１５１】
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【表１５２】
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【表１５３】
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【表１５４】
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【表１５５】
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【表１５６】
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【表１５７】
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【表１５８】
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【表１５９】
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【表１６０】
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【０６６２】
【表１６１】
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【０６６３】
【表１６２】
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【０６６４】
【表１６３】
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【０６６５】
【表１６４】
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【０６６６】
【表１６５】
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【０６６７】
【表１６６】
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【０６６８】
【表１６７】
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【０６６９】
【表１６８】
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【０６７０】
【表１６９】
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【０６７１】
【表１７０】
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【０６７２】
【表１７１】
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【０６７３】
【表１７２】
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【０６７４】
【表１７３】
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【０６７５】
【表１７４】
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【０６７６】
【表１７５】
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【０６７７】
【表１７６】
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【０６７８】
【表１７７】
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【０６７９】
【表１７８】
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【０６８０】
【表１７９】
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【０６８１】
【表１８０】
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【０６８２】
【表１８１】
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【０６８３】
【表１８２】
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【０６８４】
【表１８３】
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【０６８５】
【表１８４】
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【０６８６】
【表１８５】
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【表１８６】
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【表１８７】
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【０６８９】
【表１８８】
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【０６９０】
【表１８９】
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【０６９１】
【表１９０】
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【０６９２】
【表１９１】
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【０６９３】
【表１９２】
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【０６９４】
【表１９３】
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【０６９５】
【表１９４】
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【０６９６】
【表１９５】
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【０６９７】
【表１９６】
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【０６９８】
【表１９７】
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【０６９９】
【表１９８】
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【０７００】
【表１９９】
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【０７０１】
【表２００】
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【０７０２】
【表２０１】
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【０７０３】
【表２０２】
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【０７０４】
【表２０３】
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【０７０５】
【表２０４】
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【０７０６】
【表２０５】
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【０７０７】
【表２０６】
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【０７０８】
【表２０７】
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【０７０９】
【表２０８】
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【０７１０】
【表２０９】
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【０７１１】
【表２１０】
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【０７１２】
【表２１１】
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【０７１３】
【表２１２】
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【０７１４】
【表２１３】
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【０７１５】
【表２１４】
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【０７１６】
【表２１５】
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【０７１７】
【表２１６】
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【０７１８】
【表２１７】
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【０７１９】
【表２１８】
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【０７２０】
【表２１９】
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【０７２１】
【表２２０】
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【０７２２】
【表２２１】
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【０７２３】
【表２２２】
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【０７２４】
【表２２３】
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【０７２５】
【表２２４】
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【０７２６】
【表２２５】
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【０７２７】
【表２２６】
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【０７２８】
【表２２７】
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【０７２９】
【表２２８】
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【０７３０】
【表２２９】
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【０７３１】
【表２３０】
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【０７３２】
【表２３１】
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【０７３３】
【表２３２】
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【０７３４】
【表２３３】
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【０７３５】
【表２３４】
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【０７３６】
【表２３５】
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【０７３７】
【表２３６】
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【０７３８】
【表２３７】
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【０７３９】
【表２３８】
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【０７４０】
【表２３９】
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【０７４１】
【表２４０】
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【０７４２】
【表２４１】
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【０７４３】
【表２４２】
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【０７４４】
【表２４３】
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【０７４５】
【表２４４】
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【０７４６】
【表２４５】
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【０７４７】
【表２４６】
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【０７４８】
【表２４７】
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【０７４９】
【表２４８】
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【０７５０】
【表２４９】
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【０７５１】
【表２５０】
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【０７５２】
【表２５１】
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【０７５３】
【表２５２】
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【０７５４】
【表２５３】
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【０７５５】
【表２５４】
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【０７５６】
【表２５５】
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【０７５７】
【表２５６】
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【０７５８】
【表２５７】
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【０７５９】
【表２５８】
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【０７６０】
【表２５９】
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【０７６１】
【表２６０】
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【０７６２】
【表２６１】
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【０７６３】
【表２６２】
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【０７６４】
【表２６３】
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【０７６５】
【表２６４】
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【０７６６】
【表２６５】
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【０７６７】
【表２６６】
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【０７６８】
【表２６７】
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【０７６９】
実施例３．４：ＤＶＤ−Ｉｇの結合親和性
ＤＶＤに対する２つの抗原の同時結合を測定するために、ＤＶＤ−Ｉｇを、ヤギ抗ｈｕＩｇＧ  ＦＣ上に５μｌ／分で１分間捕捉した。次いで、スクレロスチンを５０ｎＭで、捕捉された表面上に５μｌ／分で１０分間注入して、ＤＶＤ結合を飽和し、続いて、５０ｎＭのＴＮＦを５μｌ／分で１０分間同時注入して、ＤＶＤ（スクレロスチンが既に結合した）に対するＴＮＦ結合をチェックした。この表面を、５０ｍＭのＮａＯＨの１０ｓ注入で、続いて、１０ｍＭのグリシン（ｐＨ１．５）の１０ｓ注入（１００μｌ／分の流速）によって再生した。同じ実験を、抗原の逆の順序で繰り返した（ここではＴＮＦを最初に注入し、続いてスクレロスチンを注入した）。例示的な結合プロフィールを、ＭＡＫ１９９−１−ＧＳ−ＡＥ１０−６ＡＭ７  ＤＶＤ−Ｉｇ（図７Ａ）およびＤＶＤ２６２３（図７Ｂ）について示す。
【０７７０】
ＳＯＳＴおよびＴＮＦに対するＤＶＤ−Ｉｇ結合の親和性および動態学的パラメータは下の表１９に示す。用いられる方法の詳細な説明は、セクションに示す。
【表２６８】
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【０７７１】
【表２６９】
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【０７７２】
【表２７０】
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【０７７３】
実施例３．５：ＴｏｐＦｌａｓｈ  Ｗｎｔ経路スクレロスチン中和アッセイ
Ｗｎｔ経路のスクレロスチン阻害の中和を示すアッセイを上記のとおり行った。ＤＶＤ２６０３、ＤＶＤ２６０５、ＤＶＤ２６０６、ＤＶＤ２６０７、ＤＶＤ２６０８、ＤＶＤ２６１０、ＤＶＤ２６１１、ＤＶＤ２６２３、ＤＶＤ２６２７、ＤＶＤ２６２８、ＤＶＤ２６３０、ＤＶＤ２６３１、ＤＶＤ２６４２、ＤＶＤ２６４３、ＤＶＤ２６４５、ＤＶＤ２６４６、ＤＶＤ２６４７、ＤＶＤ２６４８、ＤＶＤ２６５０、ＤＶＤ２６５１、ＤＶＤ２６５７、ＤＶＤ２６５８は、組み換えヒトスクレロスチンを、１２〜２４．４ｎＭのＩＣ５０で阻害した。ＭＡＫ１９９−１−ＧＳ−ＡＥ１０−６  ＡＭ７、ＭＡＫ１９９−１−ＳＳ−ＡＥ１０−６  ＡＭ７、ＭＡＫ１９９−１−ＧＳ−ＡＥ１０−６  ＡＭ７  ＱＬ、ＭＡＫ１９５／２１−ＧＳ−ＡＥ１０−６  ＡＭ３、ＭＡＫ１９５／２１−ＧＳ−ＡＥ１０−６  ＡＭ８、ｄｉＤ２Ｅ７ｓｓ−ＧＳ−ＡＥ１０−６  ＡＭ７、Ｄ２Ｅ７−ＧＳ−ＡＥ１０−６  ＡＭ７、ＡＥ１０−６  ＡＭ７−ＧＳ  ＭＡＫ１９５／２１は、組み換えヒトスクレロスチンを、１．７〜６．６ｎＭのＩＣ５０で、および組み換えカニクイザルスクレロスチンを、２〜９．１ｎＭのＩＣ５０で阻害した。ＭＡＫ１９９−１−ＧＳ−ＡＥ１０−６  ＡＭ７、ＭＡＫ１９９−１−ＳＳ−ＡＥ１０−６  ＡＭ７、ＭＡＫ１９５／２１−ＧＳ−ＡＥ１０−６  ＡＭ７、ＭＡＫ１９５／２１−ＳＳ−ＡＥ１０−６  ＡＭ７、ＭＡＫ１９５／２１−ＧＳ−ＡＥ１０−６  ＡＭ３、ＭＡＫ１９５／２１−ＧＳ−ＡＥ１０−６  ＡＭ８、ｄｉＤ２Ｅ７ｓｓ−ＧＳ−ＡＥ１０−６  ＡＭ７、Ｄ２Ｅ７−ＧＳ−ＡＥ１０−６  ＡＭ７、ＡＥ１０−６  ＡＭ７−ＧＳ  ＭＡＫ１９５／２１は、組み換えマウススクレロスチンを、９．４〜２７．６ｎＭのＩＣ５０で阻害した。
【０７７４】
実施例３．６：組み換えＴＮＦ−αの中和
ＤＶＤ−ＩｇのＴＮＦ−ａ中和力価を、Ｌ９２９組み換えＴＮＦ中和アッセイで評価した。半コンフルエントのＬ９２９マウス線維芽細胞（ＡＴＣＣ，カタログ番号ＣＣＬ−１（商標））を増殖し、０．２５％のトリプシン（Ｇｉｂｃｏ，カタログ番号２５２００−０５６）を用いて回収した。細胞をＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，カタログ番号１４１９０−１４４）で洗浄し、カウントして、ＲＰＭＩ  １６４０（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号２１８７０）、１０％ウシ胎仔血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ，カタログ番号ＳＨ３００７０．０３）、１％のＬ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ，カタログ番号２５０３０）、１％のピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ，カタログ番号１１３６７０）、１％の非必須アミノ（Ｎｏｎ−Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ａｍｉｎｏｓ）（Ｇｉｂｃｏ，カタログ番号１１１４０）、５０単位／ｍＬのペニシリン／５０μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ，カタログ番号１５１４０）、５５μＭの２−ＢＭＥ（Ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ−Ｇｉｂｃｏ，カタログ番号２１９８５）、および２×濃度の２μｇ／ｍＬアクチノマイシンＤ（Ｓｉｇｍａ，カタログ番号Ａ１４１０）からなる完全アッセイ培地中に５×１０５細胞／ｍＬで再懸濁した。この細胞を、９６−ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ，カタログ番号３５９９）に、５×１０４細胞／ウェルに相当する１００μＬの容積で播種した。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、ＤＶＤ−Ｉｇ（商標）およびコントロールのＩｇＧを４×濃度にアッセイ培地で希釈して、連続希釈を行った。組み換えＴＮＦ−αを、アッセイ培地で４×濃度の６００ｐｇ／ｍＬまで希釈した。全ての抗体サンプル（ｍＡｂまたはＤＶＤ−Ｉｇ（商標））を組み換えＴＮＦ−αと１：１の容積比でプレインキュベートして、１時間３７℃，５％ＣＯ２でインキュベートさせた。ある場合には、組み換えヒトスクレロスチンもまた、プレインキュベーション工程に添加した。これらの条件については、８×希釈のＤＶＤ−Ｉｇ（商標）、組み換えＴＮＦ−α（１２００ｎｇ／ｍＬ）およびヒトスクレロスチン（４００ｎＭ）および５０μＬの完全アッセイ培地を、１時間、３７℃で、５％ＣＯ２中でプレインキュベートした。
【０７７５】
１００μＬのｍＡｂまたはＤＶＤ−Ｉｇ（商標）／組み換えＴＮＦ−α溶液を、１００μＬで播種した細胞に、１×最終濃度の１５０ｐｇ／ｍＬの組み換えＴＮＦ−α、ｍＡｂまたはＤＶＤ−Ｉｇ（商標）および１μｇ／ｍＬのアクチノマイシンＤとなるよう添加した。ヒトスクレロスチン（ｓｃｌｅｒｓｏｔｉｎ）を添加した場合、１００μＬのＤＶＤ−Ｉｇ（商標）／組み換えＴＮＦ−α／ヒトスクレロスチン／培地溶液を、１００μＬで播種した細胞に、１×最終濃度の１５０ｐｇ／ｍＬの組み換えＴＮＦ−α、ｍＡｂまたはＤＶＤ−Ｉｇ（商標）、ヒトスクレロスチン（ｓｃｌｅｒｓｏｔｉｎ）（５０ｎＭ）および１μｇ／ｍＬのアクチノマイシンＤとなるよう添加した。プレートを、一晩（１６〜２４時間）３７℃にて、５％ＣＯ２でインキュベートした。生存度を定量するために、１００μＬを、ウェルから取り出して、１０μＬのＷＳＴ−１試薬（Ｒｏｃｈｅ，カタログ番号１１６４４８０７００１）を添加した。プレートを、３７℃にて、５％ＣＯ２で、さらに３〜５時間インキュベートして、Ｓｐｅｃｔｒｏｍａｘ  １９０  ＥＬＩＳＡプレートリーダーで、ＯＤ４２０〜６００ｎｍで読んだ。中和データを、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いてプロットした。報告されたＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍシグモイド曲線用量ソフトウェアを用いて算出して、下の表２０に示す。
【０７７６】
【表２７１】
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【０７７７】
ＤＶＤ−Ｉｇへのスクレロスチンの結合が分子のＴＮＦ−ａ中和特性に影響しないことを実証するために、ＤＶＤ−Ｉｇを最初に５０ｎＭのＳＯＳＴと少なくとも３０分間インキュベートし、次いでＬ９２９アッセイを、実験全体を通じて５０ｎＭのＳＯＳＴで行った。この実験の結果を、下の表２１に示す。
【表２７２】
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【０７７８】
実施例４：ＴＮＦ／スクレロスチン  ＤＶＤ  Ｉｇの薬物動態（ＰＫ）分析
雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ  ＪＶＣラット（約２８０ｇ秤量）に、単回投与で頸静脈にＤＶＤ−Ｉｇまたは親抗体を５ｍｇ／ｋｇで投与した。血清サンプルは、尾静脈から、投与後、１５分、４時間および２４時間、ならびに２、３、７、１０、１４、２１および２８日で収集した。血清サンプルを分析まで−８０℃で凍結した。
【０７７９】
雄性ＣＤ１マウス（約２８０ｇ秤量）に、単回投与で頸静脈を介してＤＶＤ−Ｉｇまたは親抗体を５ｍｇ／ｋｇで投与した。全血清サンプルを、尾静脈から、投与後、１時間および２４時間、ならびに４、７、１０、１４、および２１日で収集した。サンプルを分析まで−８０℃で凍結した。
【０７８０】
サンプルの生物分析を、ＭＳＤアッセイを用いて行った。要するに、ストレプトアビジンプレートを、ビオチン化ヒト抗原でコーティングして、一晩インキュベートした。プレートをブロックして、希釈した血清サンプル（最終血清濃度は１％）をこのウェルに添加し、スルホ−タグ−標識したヤギ抗−ヒトＩｇＧを検出のために用いた。各々の動物についての薬物動態パラメータを、線形台形フィットを用いるノンコンパートメント分析によってＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェアバージョン５．２．１で算出した。マウスおよびラットで得られるＰＫパラメータを、それぞれ下の表２２および２３に示す。
【表２７３】
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【０７８１】
【表２７４】
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【０７８２】
実施例５：インビボ有効性に関するＤＶＤドメインの評価
ＤＶＤの抗−スクレロスチンドメインを、急性ＰＤモデルを用いてインビボの有効性について評価した。試験した全てのＤＶＤ−Ｉｇは、骨バイオマーカーＰＩＮＰの増大に基づいた骨形成増大を誘導した。１０週齢を超えるナイーブなＤＢＡ／１マウスを、単回投与のＤＶＤ−Ｉｇ（ｉ．ｐ．）で処理した。注射の３日後、血清を心穿刺によって収集して、骨形成のバイオマーカーＰＩＮＰのレベルについて、ＥＬＩＳＡによって試験した。試験した全てのＤＶＤ−Ｉｇは、骨バイオマーカーＰＩＮＰの血清レベルにおける増大に基づいた骨形成の増大を誘導した。表２４を参照のこと。
【表２７５】
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【０７８３】
ＤＶＤの抗−ＴＮＦドメインを、ヒトＴＮＦ／Ｄ−ガラクトサミン致死性モデルでインビボ有効性について評価し、ここでは、ナイーブなＣ５７Ｂｌ／６雌性マウスを、ＤＶＤ（ｉ．ｐ．）で処理した。投与１８時間後、動物にマウス１匹あたり０．５μｇのＴＮＦおよびマウス１匹あたり２０ｍｇのＤ−ガラクトサミンを腹腔内に投与して、動物を生存について毎日２回モニターした。試験した全てのＤＶＤ−ＩｇのＴＮＦドメインは活性であって、ＴＮＦ誘導性の致死からマウスを保護した。表２５を参照のこと。
【表２７６】
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【０７８４】
誘導された関節炎マウスモデルにおける抗−ＴＮＦ、抗−ＳＯＳＴ、および組み合わせた抗−ＴＮＦおよび抗−ＳＯＳＴ治療の有効性
抗−ＴＮＦ、抗−ＳＯＳＴ、および組み合わせた抗−ＴＮＦおよび抗−ＳＯＳＴ治療を、誘導された関節炎のマウスモデルでの関節炎の予防におけるそれらの有効性について評価した。マウスを、０日目にコラーゲンで免疫し、２１日目にザイモサンの腹腔内注射でブーストし、２４〜２８日目に関節炎の臨床徴候について選択した。次いで、マウスを、登録の日を始めとして、抗−ＴＮＦ治療（抗−ＴＮＦ，１２ｍｇ／ｋｇ，皮下注射、１週あたり２回）、抗−スクレロスチン治療（３０ｍｇ／ｋｇ，皮下注射、１週あたり２回）、または２つの治療の組み合わせで処理した。マウスを、２０日間にわたって足の厚みの変化で評価し、および４４〜４８日目に、血清および骨を終末点分析のために収集した。図２Ａに示されるとおり、抗−ＴＮＦまたは併用療法のいずれかで処理したマウスは、０．９％生理食塩水で処理したコントロール群よりも示した足の腫脹が少なかった。さらに、抗−ＴＮＦおよび抗−スクレロスチン治療による併用処置は、マイクロＣＴによって測定されるように、それぞれ足首および背骨の両方で骨の厚みを維持または増大した（図２Ｂおよび図２Ｃ）。
【０７８５】
ＴＮＦおよびＳＯＳＴの組み合わせた中和を、後期治療マウスコラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）モデルで試験し、ここでは治療は、炎症の発生の５日後（中度の骨量減少が生じた時点）で開始した。ＤＢＡ／１マウスを、０日目にコラーゲンで免疫し、２１日目にザイモサンでブーストした。２４〜２８日目に、マウスを、関節炎の最初の臨床兆候に基づいて試験に登録した。登録の５日後、マウスに１２ｍｇ／ｋｇの抗−マウスＴＮＦｍＡｂ、３０ｍｇ／ｋｇの抗−スクレロスチンｍＡｂ、または両方のｍＡｂの組み合わせを、２週間の間毎週２回投与した。炎症は、ノギスを用いて足の腫脹によってモニターした。足首および背骨のマイクロＣＴ分析を用いて、研究の終了時に骨容積／密度の変化を評価した。免疫マウスの群を、炎症の最初の兆候から５日後に屠殺して、この時点で失われた骨の量を、マイクロコンピュータートモグラフィー（μＣＴ）を用いて評価した。図４ａに示されるとおり、抗−ＴＮＦ処理による処置は、処置が疾患の開始５日後に開始される場合、炎症の予防には有効ではない。抗−ＴＮＦまたは抗−スクレロスチンｍＡｂ単独のいずれかによる処置は、関節炎の足首からの骨減少を予防しないが、両方のｍＡｂの組み合わせは、この部位でのさらなる骨量減少から防御した（図４ｂ）。対照的に、ＴＮＦ阻害は、骨格の骨を保護しなかったが、骨は、抗−スクレロスチンｍＡｂを、単独で用いるか、または抗ＴＮＦｍＡｂと組み合わせて用いるかのいずれで処置しても動物の背骨ではナイーブな動物でみられるレベルに復帰した（図４ｃ）。
【０７８６】
ＴＮＦ阻害は、マウスＣＩＡモデルで炎症を制御するのには無効であるので、別の抗炎症性機構を用いて、スクレロスチン阻害が関節炎の関節の骨を修復する能力を試験した。組み合わせたＩＬ−１ａおよびＩＬ−１ｂ阻害は、炎症の発生の５日後に投与を開始した場合炎症をブロックするので、研究を行い、ここでは、０日にコラーゲンでマウスを免疫し、２１日目にザイモサンの腹腔内注射でブーストし、２４〜２８日目に関節炎の臨床兆候について選択した。マウスを、抗−ＩＬ１α治療（９ｍｇ／ｋｇ，ｉｐ）および抗−ＩＬ１β（４．５ｍｇ／ｋｇ，ｉｐ）、抗−スクレロスチン（３０ｍｇ／ｋｇ，ｉｐ）、または３つのｍＡｂの組み合わせで、炎症の発現の５日後に開始して毎週２回処置した。足の腫脹を処置の２０日の間モニターして、その後に、血清および骨を終末点分析のために収集した。ＩＬ−１ａおよびＩＬ−１ｂの併用阻害で得られた抗炎症性活性は、図５ａで実証される。関節炎の足首のマイクロＣＴ分析によって、スクレロスチン阻害と組み合わせた炎症の遮断によって、関節炎の足首における骨の回復が可能になったことが示された（図５ｂ）。これらの動物の腰椎の骨梁の分析によって、スクレロスチン阻害は、単独でまたは炎症の遮断と共同して、骨格の骨を回復できたことが示された（図５ｃ）。
【０７８７】
実施例６：クローン病のマウスモデルにおける抗−ＴＮＦ、抗−スクレロスチン、ならびに抗−ＴＮＦおよび抗−スクレロスチンの組み合わせの有効性
骨格の骨量減少は、クーロン病を有する患者での共通の併存疾患である。本発明者らは、抗−スクレロスチンｍＡｂ、抗−ＴＮＦｍＡｂ、および両方のＡｂの組み合わせをクローン病のマウスモデルで試験し、腰椎の骨梁における変化を測定した。
【０７８８】
雌性ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ）由来の脾細胞を、機械的破壊によって収集して、ネガティブ選択磁気ビーズキット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ）を用いてＣＤ４＋細胞を富化した。精製されたＣＤ４＋細胞を、フルオレセイン（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で標識した抗ＧＩＴＲ（グルココルチコイド誘発性ＴＮＦファミリーレセプター）で染色した。細胞を、ＦＡＣＳ（ＭｏＦｌｏｗ  Ｌｅｇａｃｙ）によって分析して、最低４０％のＧＩＴＲ−染色細胞を収集した。分取後の分析によって、集団が純度９５〜９８％のＣＤ４＋ＧＩＴＲ−であることが示された。細胞を洗浄して、再懸濁し、５×１０５個の細胞を、雌性ＣＢ−１７ｓｃｉｄマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ）中にｉ．ｐ．注射した。レシピエントマウスを、体重、軟便または血便の存在、直腸脱および全身状態について週に２〜３回モニターした。一群の動物を、２７日目（処置開始の日）に、基礎の疾患を決定する、結腸の組織学的分析および脊椎のμＣＴ検査のために屠殺した。処置は、ビヒクル（ＰＢＳ）、抗−ＴＮＦ（１５ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）、抗−スクレロスチン（３０ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）、または抗−ＴＮＦおよび抗−スクレロスチンの両方の毎週２回の注射から構成されており、かつ細胞注射の５７日後に研究が終わるまで続けた。動物を屠殺して；血清を収集し抗体レベルの決定のために用いるまで−２０℃で保管した。結腸を収集して、ＰＢＳでフラッシュして糞便物質を除去し、秤量かつ測定し、スイスロール技術を用いて組織学的カセット中に入れ、それから処理まで１０％ホルマリン中で保管した。パラフィン包埋後、切片を、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色し、それから炎症の存在、陰窩の損傷、粘膜の潰瘍および疾患の程度についてスコア付けした。１群あたり８または９匹の動物がいた。最初の体重の２０％超が減少した動物を、ＩＡＣＵＣガイドラインに従って安楽死させた。さらに、脊椎を収集して、Ｌ５脊椎中の骨梁を、μＣＴを用いて分析した。抗−ＴＮＦは単独で、または抗−スクレロスチンｍＡｂと組み合わせて、腸内の炎症を阻害したが、抗−スクレロスチンｍＡｂでは、阻害しなかった（図５ａ）。対照的に、抗−スクレロスチンｍＡｂ処置は、単独で、または抗−ＴＮＦと組み合わせて、脊椎の骨量減少をナイーブな動物で見られるレベルまで回復できた（図５ｂ）。
【０７８９】
参照による援用
分子生物学、薬物送達、免疫学、分子生物学および細胞生物学の分野で周知の技術は、その全体が参照によって援用される。これらの技術としては、限定するものではないが、以下の刊行物に記載される技術が挙げられる：Ａｕｓｕｂｅｌら、（編集），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ  （１９９３）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら、編集，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（第４版．１９９９）Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ．（ＩＳＢＮ  ０−４７１−３２９３８−Ｘ）。コントロールされた薬物バイオアベイラビリティーの薬物設計および能力（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ），Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ（編集），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｇｉｅｇｅ，Ｒ．およびＤｕｃｒｕｉｘ，Ａ．Ｂａｒｒｅｔｔ，核酸およびタンパク質の結晶化、実際的アプローチ（Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ），第２版，２０１−１６ページ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，（１９９９）；Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，第２巻，１１５−１３８ページ（１９８４）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら：モノクローナル抗体およびＴ細胞ハイブリドーマ（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ）５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１；Ｈａｒｌｏｗら、，抗体：実験マニュアル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，第２版．１９８８）；Ｋａｂａｔら、免疫学的に目的のタンパク質の配列（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）および（１９９１）；Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ら、（１９９１）免疫学的に目的のタンパク質の配列（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ），第５版，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２；  ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ編，抗体エンジニアリング（Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．７９０ページ（ＩＳＢＮ３−５４０−４１３５４−５）；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，遺伝子移入および発現（Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ），Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ  （１９９０）；ＬｕおよびＷｅｉｎｅｒ編集，遺伝子機能分析のためのクローニングおよび発現ベクター（Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）（２００１）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｐｒｅｓｓ。Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ，Ｍａｓｓ．２９８ページ（ＩＳＢＮ  １−８８１２９９−２１−Ｘ），Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ（編集），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９７４）；Ｏｌｄ，Ｒ．Ｗ．＆  Ｓ．Ｂ．Ｐｒｉｍｒｏｓｅ，遺伝子操作の原理：遺伝子工学への序論（Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ：Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）（第３版．１９８５）Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｂｏｓｔｏｎ。Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ；Ｖ．２：４０９ページ（ＩＳＢＮ  ０−６３２−０１３１８−４）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら、編集、分子クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ）：実験マニュアル（Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）（第２版．１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ．第１〜３巻（ＩＳＢＮ  ０−８７９６９−３０９−６）；徐放性および制御放出の薬物送達系（Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ），Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編集，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８；Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｅ．Ｌ．遺伝子からクローンへ：遺伝子技術への序章（Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  Ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ：Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）（１９８７）ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎ．Ｙ．（ｔｒａｎｓｌａｔｅｄ  ｂｙ  Ｈｏｒｓｔ  Ｉｂｅｌｇａｕｆｔｓ）．６３４ページ（ＩＳＢＮ０−８９５７３−６１４−４）。
【０７９０】
さらに、本出願全体を通じて引用され得る全ての引用される文献の内容（引用文献、特許、特許出願およびウェブサイトを含む）の内容は、任意の目的のためにその全体が参照によって明確に援用され、そこに引用される引用文献も同様である。
【０７９１】
等価物
その趣旨または本質的な特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で具体化され得るものが示される。従って、本明細書に記載の前述の実施形態は、限定するものではなく全ての関連の例示中で考慮されるべきである。従って、範囲は、前述の説明によるのではなく、添付の特許請求の範囲によって示され、従って特許請求の範囲の意味および等価な範囲内におさまる全ての変化は、本明細書に包含されるものとする。
【図１】
2014533659.tif 000287
【図２Ａ】
2014533659.tif 000288
【図２Ｂ】
2014533659.tif 000289
【図２Ｃ】
2014533659.tif 000290
【図３】
2014533659.tif 000291
【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
2014533659.tif 000293
【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
2014533659.tif 000295
【図５Ｂ】
2014533659.tif 000296
【図５Ｃ】
2014533659.tif 000297
【図６Ａ】
2014533659.tif 000298
【図６Ｂ】
2014533659.tif 000299
【図７Ａ】
2014533659.tif 000300
【図７Ｂ】
2014533659.tif 000301
【配列表】
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【国際調査報告】
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