(57)【要約】  ０．５ｎｇ〜２００μｇのＨＳＰ７０と、０．５〜１００μｇの抗原構造体断片と、を含む皮下注射用の医薬製剤。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
０．５ｎｇ〜２００μｇのＨＳＰ７０と、
０．５〜１００μｇの抗原構造体断片と
を含む皮下注射用の医薬製剤。
【請求項２】
８０μｇ以下、５０μｇ以下、または２５μｇ以下のＨＳＰ７０を含む、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項３】
溶液または凍結乾燥粉末の形態である、請求項１または請求項２に記載の医薬製剤。
【請求項４】
アレルギー、自己免疫疾患、または移植片拒絶の処置に使用するための、請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項５】
ＨＳＰ７０：抗原構造体断片の比が、２：１〜１：１０００（ｗ／ｗ）、好ましくは１：１〜１：３０（ｗ／ｗ）、または１：１〜１：５（ｗ／ｗ）である、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項６】
前記抗原構造体断片が、酵素により抗原構造体を加水分解して調製される、請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項７】
前記抗原構造体が、移植片拒絶、アレルギー反応、または自己免疫疾患を誘発する抗原構造体から選択され、好ましくは前記抗原構造体が、インスリン、サイログロブリン、甲状腺ペルオキシダーゼ、ＩＩ型コラーゲン、グリアジン、ホルデイン、セカリン、ＧＡＤ６５、プロテオリピドタンパク質、Ｓ抗原、アセチルコリン受容体、ハプテン化結腸タンパク質、光受容体間レチノイド結合タンパク質、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、末梢神経Ｐ２、細胞質ＴＳＨ受容体、内因子、水晶体タンパク質、血小板、例えばヒストンのような核タンパク質、ヒートショックタンパク質、ＭＨＣ  Ｉ、ＭＨＣ  ＩＩ、ＭＨＣ−ペプチド複合体、乳アレルゲン、ハチ毒アレルゲン、卵アレルゲン、雑草アレルゲン、牧草アレルゲン、樹木アレルゲン、低木アレルゲン、花アレルゲン、穀物アレルゲン、真菌アレルゲン、果物アレルゲン、液果アレルゲン、ナッツアレルゲン、種子アレルゲン、豆アレルゲン、魚アレルゲン、甲殻類アレルゲン、肉アレルゲン、香辛料アレルゲン、昆虫アレルゲン、ダニアレルゲン、動物アレルゲン、動物フケアレルゲン、パラゴムノキのアレルゲン、凝固因子、および血液型抗原から選択される、請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項８】
前記医薬製剤が３〜１０回分の投与量に分割されている、請求項１〜請求項７のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項９】
前記投与量が、異なる量の抗原構造体断片を含む、請求項８に記載の医薬製剤。
【請求項１０】
前記製剤が、異なる時点における患者への少なくとも２回の注射を含む処置に使用するためのものであり、好ましくは、前記製剤が、前記製剤の量を増やしながらの３〜５回の注射を含む処置に使用するためのものである、請求項１〜請求項９のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１１】
前記ＨＳＰ７０が、原核生物のＨＳＰ７０、好ましくは腐生原核生物のＨＳＰ７０、最も好ましくは大腸菌のＤｎａＫである、請求項１〜請求項１０のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１２】
０．５ｎｇ〜２００μｇのＨＳＰ７０と、
０．５〜１００μｇの抗原構造体断片と
の累積投与量を皮下注射により患者に投与することを含む、アレルギー、自己免疫疾患、または移植片拒絶の処置方法。
【請求項１３】
前記製剤が、少なくとも２回の注射に分割される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記製剤が、３〜５回の注射に分割され、好ましくは、２つの注射間の間隔が５〜１０日間である、請求項１２または請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＨＳＰ７０が原核生物のＳＨＰ７０、好ましくは腐生原核生物のＨＳＰ７０、最も好ましくは大腸菌のＤｎａＫである、請求項１２〜請求項１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アレルギー、自己免疫疾患、または移植片拒絶の処置に特に有用な医薬製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ペプチドとヒートショックタンパク質の複合体は寛容の誘導に適している。
【０００３】
例えば、特許文献１は、ストレスタンパク質と抗原構造体のエピトープとの複合体を投与することを含む、移植片拒絶またはアレルギー反応もしくは自己免疫反応に関連する病態を処置することを意図した医薬組成物または食品組成物を開示している。
【０００４】
寛容誘導の理解における多くの進展および進歩にも関わらず、臨床的な成功はあまり観察されておらず、矛盾する結果となる場合もある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第６，３１２，７１１号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、改善された信頼できる処置結果を示す医薬組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
一実施形態では、本発明は、
０．５ｎｇ〜２００μｇ、好ましくは１００μｇ以下のＨＳＰ７０と
０．５〜１００μｇの抗原構造体断片と
を含む、ヒトを処置するための医薬製剤を提供する。
【０００８】
第２の実施形態では、本発明は、累積で
０．５ｎｇ〜２００μｇのＨＳＰ７０と
０．５〜１００μｇの抗原構造体断片と
を患者に投与することを含む、アレルギー、自己免疫疾患、または移植片拒絶を処置する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ペプチド単独およびペプチド＋ＤｎａＫにおける健康日（ｗｅｌｌ  ｄａｙ）の日数を示す図である。
【図２】ＩｇＧ４の変化を示す図である。
【図３】ＩｇＥの変化を示す図である。
【図４】種々の群における健康日の日数を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明は、抗原構造体断片と共に少量のＨＳＰ７０を適用することによるアレルギーの処置に関する。医薬製剤はヒトを処置することが意図され、０．５ｎｇ〜２００μｇのＨＳＰおよび０．５〜１００μｇの抗原構造体の量は、２以上の時点で患者に適用される合計量であり、すなわち、医薬製剤は、特定の期間にわたって、例えば３〜１０回の投与中に患者に与えられる複数回用の投与量に分割される。
【００１１】
皮下注射が好ましい投与方法の１つであるが、本発明は、すなわち、経鼻経路、経皮パッチ、経口経路、例えば舌下適用による適用も包含する。
【００１２】
したがって、好ましくは患者は累積量０．５μｇ〜１００μｇ、１〜８０μｇ、１〜５０μｇ、もしくは５〜２５μｇのＨＳＰ７０または０．５〜１００ｎｇもしくは１μｇまでである本発明の製剤で処置される。
【００１３】
抗原断片の量は０．５〜１００μｇである。好ましい実施形態は１μｇ〜８０μｇまたは０．５μｇ〜５０μｇおよび５０μｇ〜１００μｇである。
【００１４】
医薬製剤は、ＨＳＰ７０／抗原断片を溶液の形態で含み得、これは好ましくは等張性である。別の形態では、医薬製剤はＨＳＰ７０および抗原断片を凍結乾燥粉末形態で含み得る。
【００１５】
本発明の医薬製剤は、当然、バッファー物質、賦形剤、補助剤等の更なる成分を含んでよい。
【００１６】
本発明の医薬製剤は、アレルギー、自己免疫疾患、または移植片拒絶の処置に特に有用である。
【００１７】
好ましい実施形態では、ＨＳＰ７０：抗原断片の比は重量で約１：１であるが、一般的に２：１〜１：１０００（ｗ／ｗ）の比も好適である。
【００１８】
好ましい実施形態は、１：１〜１：３０または１：１〜１：５の範囲を含む。いくつかの実施形態では、患者に各時点で、ＨＳＰ７０は同じ量であるが抗原断片の量は増やして投与することが望ましい。
【００１９】
場合によっては、ＨＳＰ７０および抗原断片は複合体を形成する。別の実施形態では、ＨＳＰ７０および抗原断片は複合体を形成しない。
【００２０】
好ましい実施形態では、抗原断片は、例えば参照により援用する国際公開第２００８／０００７８３号に記載の方法を用いて、抗原構造体を酵素により加水分解することで調製される。
【００２１】
好ましくは、抗原構造体断片（「抗原断片」）のサイズは１０００〜１００００Ｄａである。
【００２２】
抗原構造体は、好ましくは、移植片拒絶、アレルギー反応、または自己免疫疾患を誘発する抗原構造体に由来する。例えば、牧草花粉（ｇｒａｓｓ  ｐｏｌｌｅｎ）アレルギーの処置の場合、製剤は、牧草花粉アレルゲンに由来するペプチドを含む。ピーナッツアレルギーを処置するための製剤は、ピーナッツアレルゲンに由来するペプチド断片を含む。
【００２３】
一般的に、好適な抗原構造体は、インスリン、サイログロブリン、甲状腺ペルオキシダーゼ、ＩＩ型コラーゲン、グリアジン、ホルデイン、セカリン、ＧＡＤ６５、プロテオリピドタンパク質、Ｓ抗原、アセチルコリン受容体、ハプテン化結腸タンパク質、光受容体間レチノイド結合タンパク質、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、末梢神経Ｐ２、細胞質ＴＳＨ受容体、内因子、水晶体タンパク質、血小板、例えばヒストンのような核タンパク質、ヒートショックタンパク質、ＭＨＣ  Ｉ、ＭＨＣ  ＩＩ、ＭＨＣ−ペプチド複合体、乳アレルゲン、ハチ毒アレルゲン（ｖｅｎｏｍ  ａｌｌｅｒｇｅｎ）、卵アレルゲン、雑草（ｗｅｅｄ）アレルゲン、牧草（ｇｒａｓｓ）アレルゲン、樹木アレルゲン、低木アレルゲン、花アレルゲン、穀物アレルゲン、真菌アレルゲン、果物アレルゲン、液果（ｂｅｒｒｙ）アレルゲン、ナッツアレルゲン、種子アレルゲン、豆アレルゲン、魚アレルゲン、甲殻類アレルゲン、肉アレルゲン、香辛料アレルゲン、昆虫アレルゲン、ダニアレルゲン、動物アレルゲン、動物フケアレルゲン、パラゴムノキ（Ｈｅｖｅａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）のアレルゲン、凝固因子、および血液型抗原から選択される。
【００２４】
ＨＳＰ７０は、真核生物および原核生物の約７０ｋＤａのヒートショックタンパク質を包含する。ヒートショックタンパク質についての概説はVan Eden et al., Nature Reviews, Immunology 5 (2005), 318 - 330を参照されたい。
【００２５】
参照により援用する国際公開第２００８／０４３８３２号にＤｎａＫの好ましい調製方法が記載されている。
【００２６】
本発明の好ましいＨＳＰ７０は原核生物のＨＳＰ７０である。腐生原核生物のＨＳＰ７０が特に好ましい。非常に好ましいＨＳＰ７０は大腸菌のＤｎａＫである。ＨＳＰ７０はＡＴＰおよびＡＤＰに結合できる化合物であり、ＡＴＰアーゼ活性を有する。この活性は医薬製剤中のリン酸の量の影響を受け得る。
【００２７】
いくつかの実施形態では、バッファー中のリン酸濃度は好ましくは５０ｍｍｏｌ／ｌ以下、好ましくは２０ｍｍｏｌ／ｌ未満、３ｍｍｏｌ／ｌ未満、または２ｍｍｏｌ／ｌ未満であるべきである。
【００２８】
好ましい実施形態では、医薬製剤の総量は少なくとも２つの時点で投与されるが、３〜５回または３〜１０回の投与の使用が一般的に好ましい。
【００２９】
本発明のいくつかの実施形態では、医薬製剤は、完全量のＨＳＰ７０／抗原断片、例えば５０μｇの抗原ペプチドおよび５０μｇのＨＳＰ７０を含む、１個のバイアルであり得る。処置の際にバイアルから好適な量が取られる。例えば、バイアルは１．５ｍＬの溶液中に総量１００μｇを含み得、投与は１週間間隔で１００μｌ、２００μｌ、４００μｌ、８００μｌでなされ得る。典型的には、皮下投与では、量は１０００μｌを超えるべきではない。
【００３０】
別の実施形態では、医薬製剤は、１回の投与に必要な量のＨＳＰ７０／抗原断片を含む別個のバイアル、例えば２０μｇのＨＳＰ７０／抗原断片を含む４個のバイアルを含み得る。
【００３１】
別の実施形態では、医薬製剤は、必要量を含む別個の医療器具、例えば投与計画に従う１００、２００、４００、および８００μｌを含む４個の注射器を含み得る。
【００３２】
注射器の代わりに、錠剤のような経口投与用の製剤または経鼻投与用の製剤が用いられ得る。経鼻投与では、パフ（ｐｕｆｆ）の回数を増やしてもよく、例えば、各パフが例えば５μｇのＨＳＰ７０および５μｇの抗原断片を含む場合に１、２、４回のパフを用いることができる。
【００３３】
更なる実施形態では、処置中に経皮適用用のパッチを用いることができる。パッチの数またはサイズは、異なる時点で適用される物質の量が増えるように増やすことができる。
【００３４】
別の実施形態では、注射器は、量は同じであるが濃度が異なる溶液を含み得、例えば、注射器中の溶液は常に２００μＬであり得るが、ＨＳＰ７０／抗原断片の量は５／５μｇ、１０／１０μｇ、２０／２０μｇであり得る。前述したように、ＨＳＰの量を変えずに、例えば５／５μｇ、５／１０μｇ、５／２０μｇ（ＨＳＰ７０／抗原断片）等で適用することも可能である。
【００３５】
本投与の医薬製剤を好ましくは少なくとも２回、好ましくは３〜１０回、または３〜５回の投与で投与するステップを含む、アレルギー、自己免疫疾患、または移植片拒絶を処置する方法も本発明の主題である。
【００３６】
好ましい実施形態では、２回の投与の間の時間は約５〜１０日間である。
【００３７】
注射、好ましくは皮下注射が好ましい投与方法である。
【００３８】
本発明者らは、第Ｉ相二重盲検プラセボ対照前向き無作為化比較研究を行った。例えば、牧草花粉アレルゲン断片の標準試料を単独でまたは同じ重量のＤｎａＫと一緒に皮下注射により投与した。
【実施例】
【００３９】
研究
対象２７名を３つの群に分けた：
Ａ）プラセボ
Ｂ）牧草花粉アレルゲン断片
Ｃ）牧草花粉アレルゲン断片＋ＤｎａＫ。
【００４０】
以下の表に従って１週間間隔で５回の皮下注射により群を処置することとした。
【００４１】
【表１】
2014520875.tif 000003
【００４２】
注射後の局所的反応に応じて、主任研究員（ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ）は翌週の投与量を増加させない可能性があった。そのため、ＢおよびＣ各群における対象３名では、処置中の投与が１０５μｇ未満であった。
【００４３】
結果
臨床効果
健康日数
累積投与量と健康日（鼻結膜炎スコアが２未満であり且つレスキュー薬の摂取のない日）の関係を図１ａおよび１ｂに示す。
【００４４】
図１ａは、Ｂ群における累積投与量に対する健康日数を示している。結果から分かるように、健康日数と累積投与量との間には関係がある。
【００４５】
興味深いことに、図１ｂに示されているように、Ｃ群では健康日数が累積投与量と共に減少しており、すなわち、より少ない量の牧草花粉アレルゲン断片およびＤｎａＫで健康日数の向上が観察され、この結果はプラセボ群Ａの結果より有意に良好であった。
【００４６】
ＤｎａＫ特異的ＩｇＧ抗体の誘導
高量の累積投与量のアレルゲン断片／ＤｎａＫで処置された群とは対照的に、低量のアレルゲン断片／ＤｎａＫによる処置はＤｎａＫ特異的ＩｇＧの産生を誘導しなかった。
【００４７】
アレルゲン特異的ＩｇＧ４およびＩｇＥの誘導
花粉季節前の高レベルの牧草花粉特異的ＩｇＧ４は、自然に獲得されたものであれ、免疫療法によって刺激されたものであれ、通常、その後の季節における季節性アレルギー性鼻炎（ＳＡＲ）症状の軽減の代替マーカーと見なされる。
【００４８】
処置の初期に牧草花粉特異的ＩｇＥおよびＩｇＧ４が並行して誘導される。
【００４９】
遷延した免疫化だけが牧草花粉特異的ＩｇＧ４の増加および特異的ＩｇＥの低下減少を引き起こすことが以前に示されている。
【００５０】
興味深いことに、低累積投与量の牧草花粉断片およびＤｎａＫで処置された群は、より高い累積投与量で処置された群とは対照的に、ＩｇＧ４抗花粉抗体の明確な増加を示した（図２参照）。
【００５１】
それとは対照的に、抗花粉ＩｇＥは、高量の牧草花粉アレルゲン断片およびＤｎａＫで処置された群においてより強力に増加し、低累積投与量処置群ではそれより低かった（図３参照）。
【００５２】
スコア
更に、健康日数に加えて、鼻結膜炎スコア（ＲＣＳ）、レスキュー薬スコア（ＲＭＳ）、総症状スコア（ＴＳＳ）、および平均複合スコア（ＡＣＳ）の４つの更なるパラメーターを記録した。
【００５３】
Ｃ群の結果を表２に示す
【００５４】
【表２】
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【００５５】
牧草花粉断片／ＤｎａＫの低累積投与量処置と牧草花粉断片／ＤｎａＫの高投与量処置の差および両群とプラセボ群の差は統計的に有意である。
【００５６】
表３に処置群Ｂの結果を示す。
【００５７】
【表３】
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【００５８】
要約すると、健康日数を見ると、低投与量の牧草花粉断片／ＤｎａＫで、高投与量の牧草花粉断片単独よりも良い結果が得られた（図４参照）。
【００５９】
要約すると、患者は、１００μｇ未満、好ましくは５０μｇ未満のＤｎａＫと、１００μｇ未満、好ましくは５０μｇ未満の抗原構造体断片とを投与された時に最大の恩恵を受けた。
【００６０】
医薬製剤
国際公開第２００８／０４３８３２号に記載の方法でヒートショックタンパク質を調製し、国際公開第２００８／０００７８３号に記載の方法で牧草花粉抗原を調製した。
【００６１】
１ｍｌ当たり１００μｇの両生成物を含む、１２ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭリン酸ナトリウム、４．２％（ｗ／ｖ）マニトール、１％（ｗ／ｖ）トレハロースを含む溶液を調製した。溶液を、次第に増加する量のＨＳＰおよび抗原を含むバイアルに分注した（２５、５０、１００、２００、および４００μｌの量で）。バイアルを凍結乾燥した。凍結乾燥した医薬製剤を再構成することにより好適な投与量を調製することができた。これらを、１週間間隔での５回の投与に用いた。前回の注射の忍容性が良好であった場合、量を増やした。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
2014520875.tif 000010
2014520875.tif 000011
2014520875.tif 000012