(57)【要約】タンパク質分解酵素セアプローゼを含有する創傷デブリードマン組成物、および創傷の酵素的デブリードマンのための創傷治療におけるそのような組成物の使用。2014513696.tif 000015
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
セアプローゼを含む組成物を創傷に適用する工程を含む、壊死組織を含む創傷をデブリードマンする（debriding）方法であって、該組成物の適用が創傷中の壊死組織をデブリードマンする、方法。
【請求項２】
壊死組織が痂皮である、請求項1記載の方法。
【請求項３】
前記組成物が創傷に局所適用される、請求項1〜2のいずれか一項記載の方法。
【請求項４】
前記組成物が、薬学的に許容される局所用担体をさらに含む、請求項1〜3のいずれか一項記載の方法。
【請求項５】
創傷が慢性的な創傷である、請求項1〜4のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
慢性的な創傷が、糖尿病性の足の潰瘍、静脈性の下腿潰瘍、動脈性の下腿潰瘍、褥瘡性潰瘍（decubitus ulcer）、うっ血性潰瘍、皮膚の潰瘍、熱傷、または圧迫性潰瘍（pressure ulcer）である、請求項5記載の方法。
【請求項７】
前記組成物が0.1〜2重量％のセアプローゼを含有する、請求項1〜6のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
前記組成物が0.5〜1重量％のセアプローゼを含有する、請求項7記載の方法。
【請求項９】
セアプローゼが、単離されたまたは精製されたセアプローゼである、請求項1〜8のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０】
前記組成物がゲル、クリームまたは軟膏として製剤化される、請求項1〜9のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物が、グリセリンポリアクリラートクラスレート、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、乳化ろう、もしくはワセリン、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項1〜10のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物が創傷に注入される、請求項1〜2および5〜9のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物が、薬学的に許容される注入可能な担体をさらに含む、請求項1〜2、5〜9および12のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
壊死組織を含む創傷のデブリードマンのための組成物の調製におけるセアプローゼの使用。
【請求項１５】
壊死組織が痂皮である、請求項14記載の使用。
【請求項１６】
前記組成物が、薬学的に許容される局所用担体をさらに含む、請求項14〜15のいずれか一項記載の使用。
【請求項１７】
創傷が慢性的な創傷である、請求項14〜16のいずれか一項記載の使用。
【請求項１８】
慢性的な創傷が、糖尿病性の足の潰瘍、静脈性の下腿潰瘍、動脈性の下腿潰瘍、褥瘡性潰瘍、うっ血性潰瘍、皮膚の潰瘍、熱傷、または圧迫性潰瘍である、請求項17記載の使用。
【請求項１９】
前記組成物が0.1〜2重量％のセアプローゼを含有する、請求項14〜18のいずれか一項記載の使用。
【請求項２０】
前記組成物が0.5〜1重量％のセアプローゼを含有する、請求項19記載の使用。
【請求項２１】
セアプローゼが、単離されたまたは精製されたセアプローゼである、請求項14〜20のいずれか一項記載の使用。
【請求項２２】
前記組成物がゲル、クリームまたは軟膏として製剤化される、請求項14〜21のいずれか一項記載の使用。
【請求項２３】
前記組成物が、グリセリンポリアクリラートクラスレート、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、乳化ろう、もしくはワセリン、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項14〜22のいずれか一項記載の使用。
【請求項２４】
前記組成物が、薬学的に許容される注入可能な担体をさらに含む、請求項14〜15および17〜21のいずれか一項記載の使用。
【請求項２５】
創傷デブリードマンに有効な量のセアプローゼと薬学的に許容される局所用担体とを含む、創傷のデブリードマンのための局所用組成物。
【請求項２６】
前記組成物が0.1〜2重量％のセアプローゼを含有する、請求項25記載の局所用組成物。
【請求項２７】
前記組成物が0.5〜1重量％のセアプローゼを含有する、請求項26記載の局所用組成物。
【請求項２８】
セアプローゼが、単離されたまたは精製されたセアプローゼである、請求項25〜27のいずれか一項記載の局所用組成物。
【請求項２９】
前記組成物がゲル、クリームまたは軟膏として製剤化される、請求項25〜28のいずれか一項記載の局所用組成物。
【請求項３０】
前記組成物が、ワセリンを含む軟膏である、請求項25〜29のいずれか一項記載の局所用組成物。
【請求項３１】
前記組成物が、グリセリンポリアクリラートクラスレートを含むゲルである、請求項25〜29のいずれか一項記載の局所用組成物。
【請求項３２】
前記組成物が、ヒドロキシエチルセルロースを含むゲルである、請求項25〜29のいずれか一項記載の局所用組成物。
【請求項３３】
前記組成物が、グリセリンおよび乳化ろうを含むクリームである、請求項25〜29のいずれか一項記載の局所用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は2011年5月12日に出願された米国仮出願第61/485,503号の恩典を主張する。参照される出願の内容は参照により本出願に組み入れられる。
【０００２】
A．発明の技術分野
本発明は概して、創傷のデブリードマンおよび治療のために有用な方法および組成物に関する。より具体的には、本発明は、セアプローゼを含む酵素的創傷デブリードマン組成物および同組成物を用いた創傷治療の方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
B．発明の背景
創傷の治癒は、創傷領域における生存不能な壊死細胞の存在によってしばしばさらに複雑化する複雑な過程である。創傷における痂皮およびその他の壊死組織の存在は、治癒の過程を妨害して、創傷の緩慢な治癒つまり「慢性的な」創傷をもたらし得る。糖尿病性の足の潰瘍、静脈性の下腿潰瘍、動脈性の下腿潰瘍、褥瘡性潰瘍（decubitus ulcer）、うっ血性潰瘍、皮膚の潰瘍、熱傷、および圧迫性潰瘍（pressure ulcer）などの創傷は、治癒を遅らせる壊死組織の存在を伴う慢性的な創傷となり得る創傷の例であり、これらの創傷は治癒が妨げられる可能性がある。
【０００４】
有効な創傷の洗浄およびデブリードマンは、最適な創傷治癒に関して長い間認識されてきた必要条件である。創傷床に存在する壊死組織は、それが細菌生育の病原巣となり得、創傷部位の慢性的な炎症を助長する多量の炎症性介在物質を含有し得、さらに創傷の修復に必要な細胞の遊走を妨げ得ることから、望ましくない。壊死組織の創傷床の浄化は、種々の創傷のタイプ、特に熱傷の創傷および様々な慢性的な創傷における治癒過程を促進し得る重要な工程であることが益々よく認識されている。
【０００５】
創傷デブリードマンには多くの異なる様式が存在する。4つのもっとも一般的なデブリードマンの方法は外科的、自己溶解的、酵素的および機械的である。これらのそれぞれは、創傷のタイプおよび患者の状態に応じて、その独自の利点および欠点を持つ。
【０００６】
酵素的デブリードマンは、痂皮およびその他の壊死組織を消化するために創傷に酵素的デブリードマン物質を局所的に適用して、それによって壊死組織の除去を促す過程である。酵素的デブリードマン物質は、生細胞を損傷することなく壊死組織を速やかに消化することができて、それによって治癒過程を加速する酵素である。このようなデブリードマン物質の使用は、実にウジまたはクロバエの幼虫などの物質、より一般的にはパパイヤの木に由来する酵素パパイン、動物の膵臓に由来する酵素トリプシン、および細菌ヒストリチクス菌（Clostridium histolyticum）に由来する酵素コラゲナーゼといった種々様々な細菌性、植物性および動物性の材料の利用を含んでいる。これらのケースのほぼすべてにおけるメカニズムは酵素活性であると確認されている。
【０００７】
創傷の治癒は、膿、組織の細片、細菌、滲出物および痂皮の存在によって遅延する。創傷の痂皮の主な構成物はコラーゲン、フィブリン、エラスチン、フィブロネクチンおよびヘモグロビンなどのタンパク質である。これらの内、創傷の痂皮の様々なタイプが、主として線維性タンパク質であるコラーゲン、エラスチンおよびフィブリンで構成されることが実証されている。デブリードマン酵素の第一の目的は、創傷の様々な壊死組織要素のすべてを浄化すること、および厚い滲出性分泌物を薄くすることである。選択された患者に適切に適用された場合、特定のタンパク質分解酵素は、生存組織を傷付けることなく汚染されたタンパク質性表面の炎症性滲出物を洗浄し、局所の膿性、血液性および線維性の蓄積物の領域の排液を促し、隠れた細菌の遊離を促進し、それによってそれらを抗細菌性物質および先天性免疫に曝露し、そしてすでに感染した創傷の修復の速度を高める。この酵素作用は、乾癬および湿疹などの炎症性皮膚疾患の治療にも有利であり得る。
【０００８】
パパイン、トリプシンおよびコラゲナーゼなどのタンパク質分解酵素を含有する局所用の軟膏およびクリーム組成物は、特に外科的デブリードマンを受け入れられない患者集団において、酵素的創傷デブリードマン用に広く用いられてきた。サーモリシン（米国特許出願第2003/0198631号（特許文献1））およびブロメライン（米国特許第4,197,291号（特許文献2））を含有する組成物も創傷デブリードマンにおける使用に関して開示されている。
【０００９】
市販の酵素的デブリードマン軟膏の一つの例は、創傷中のコラーゲン成分を分解するために用いられる細菌由来のコラゲナーゼを含有するものである。もう一つの製品は、フィブリンの細片を消化するために特異的に用いられるフィブリノリジンを含有するものである。これらの製品は、それらの基質に対して強力かつ特異的な酵素を含有する。このような高いデブリードマン特異性は、生存可能な組織に対する害が少なく、患者に対する刺激性が低い。しかし、これらの酵素は基質特異的であるため、慢性的な創傷の壊死組織には様々なタンパク質要素が存在することから、生存不能な壊死組織のデブリードマンが緩慢または不完全となる可能性がある。例えば、コラゲナーゼはコラーゲンの消化に対しては極めて特異的であるが、その他のタンパク質にはあまり有効でない。同様に、フィブリノリジンはフィブリン細片を消化するために特異的に用いられるが、その他のタンパク質においてはあまり有効でない。
【００１０】
創傷の痂皮およびその他の壊死組織におけるタンパク質の多様性のため、創傷デブリードマンにはパパインなどの非特異的なプロテアーゼを含有する市販の組成物が用いられて、良好な臨床効果を上げた。しかし、これらの製品の大半は古い（DESI）薬剤であり、現在では市販されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許出願第2003/0198631号
【特許文献２】米国特許第4,197,291号
【発明の概要】
【００１２】
本発明は概して、タンパク質分解酵素であるセアプローゼを含有する創傷デブリードマン組成物、およびこのような組成物を用いた創傷の酵素的デブリードマンのための創傷治療の方法に向けられている。本発明の組成物を用いて治療またはデブリードマン（debride）されるこのような創傷は壊死組織（例えば、痂皮）を含むことができる。
【００１３】
本発明の一つの局面において、デブリードマンを必要とする創傷にセアプローゼを含む組成物を局所適用する工程を含む、創傷を治療する方法を開示する。創傷はヒトの皮膚に存在し得る（例えば、皮膚の上皮および／または真皮の層が損傷され得る）。創傷は壊死組織（例えば、痂皮）を含み得る。もう一つの局面において、セアプローゼの量は、セアプローゼの創傷デブリードマンに有効な量である。一つの態様において、組成物は、薬学的に許容される局所用担体をさらに含む。一つの態様において、創傷は慢性的な創傷である。様々な態様において、慢性的な創傷は糖尿病性の足の潰瘍、静脈性の下腿潰瘍、動脈性の下腿潰瘍、褥瘡性潰瘍、うっ血性潰瘍、皮膚の潰瘍、熱傷、または圧迫性潰瘍である。
【００１４】
本発明のもう一つの局面において、デブリードマンを必要とする創傷にデブリードマンに有効な量のセアプローゼを含む組成物を局所適用する工程を含む、酵素的な創傷デブリードマンの方法を開示する。この場合も、創傷はヒトの皮膚に存在し得る（例えば、皮膚の表皮および／または真皮の層が損傷され得る）。創傷は壊死組織（例えば、痂皮）を含み得る。一つの態様において、組成物は、薬学的に許容される局所用担体をさらに含む。一つの態様において、創傷は慢性的な創傷である。様々な態様において、慢性的な創傷は糖尿病性の足の潰瘍、静脈性の下腿潰瘍、動脈性の下腿潰瘍、褥瘡性潰瘍、うっ血性潰瘍、皮膚の潰瘍、熱傷、または圧迫性潰瘍である。創傷は壊死組織（例えば、痂皮）を含み得る。
【００１５】
本発明のさらにもう一つの局面において、デブリードマンを必要とする創傷にセアプローゼを含む組成物を注入する工程を含む、創傷を治療する方法を開示する。創傷はヒトの皮膚に存在し得る（例えば、皮膚の表皮および／または真皮の層が損傷され得る）。創傷は壊死組織（例えば、痂皮）を含み得る。もう一つの局面において、セアプローゼの量は、セアプローゼの創傷デブリードマンに有効な量である。一つの態様において、組成物は注入に適切な薬学的に許容される担体をさらに含む。一つの態様において、創傷は慢性的な創傷である。様々な態様において、慢性的な創傷は、糖尿病性の足の潰瘍、静脈性の下腿潰瘍、動脈性の下腿潰瘍、褥瘡性潰瘍、うっ血性潰瘍、皮膚の潰瘍、熱傷、または圧迫性潰瘍である。
【００１６】
本発明のさらにもう一つの局面において、デブリードマンを必要とする創傷にデブリードマンに有効な量のセアプローゼを含む組成物を注入する工程を含む、酵素的な創傷デブリードマンの方法を開示する。創傷はヒトの皮膚に存在し得る（例えば、皮膚の表皮および／または真皮の層が損傷され得る）。創傷は壊死組織（例えば、痂皮）を含み得る。一つの態様において、組成物は注入に適切な薬学的に許容される担体をさらに含む。一つの態様において、創傷は慢性的な創傷である。様々な態様において、慢性的な創傷は、糖尿病性の足の潰瘍、静脈性の下腿潰瘍、動脈性の下腿潰瘍、褥瘡性潰瘍、うっ血性潰瘍、皮膚の潰瘍、熱傷、または圧迫性潰瘍である。
【００１７】
本発明のもう一つの局面において、創傷デブリードマンに有効な量のセアプローゼと創傷への局所適用または創傷への注入のための薬学的に許容される担体とを含む、創傷デブリードマンのための組成物を開示する。創傷はヒトの皮膚に存在し得る（例えば、皮膚の表皮および／または真皮の層が損傷され得る）。創傷は壊死組織（例えば、痂皮）を含み得る。
【００１８】
一つの態様において、本発明の組成物は無菌である。一つの態様において、セアプローゼは薬学的に許容される担体に溶解された状態である。もう一つの態様において、セアプローゼは薬学的に許容される担体に分散した状態である。さらに、セアプローゼは単離されたまたは精製されたセアプローゼであってよい。加えて、本発明の組成物の創傷デブリードマン能力は壊死組織の外科的除去の代わりに用いることができる。
【００１９】
特記する場合を除いて、本明細書に示されるパーセントの数値は重量によるものであり、組成物全体に対する。
【００２０】
本明細書および特許請求の範囲で用いられる、「含む（comprising）」（ならびに「含む（comprise）」および「含む（comprises）」などの含む（comprising）の任意の形）、「持つ（having）」（ならびに「持つ（have）」および「持つ（has）」などの持つ（having）の任意の形）、「含む（including）」（ならびに「含む（includes）」および「含む（include）」などの含む（including）の任意の形）、または「含有する（containing）」（ならびに「含有する（contains）」および「含有する（contain）」などの含有する（containing）の任意の形）の語句は包括的であり、または状況に応じて変更可能であり、列記されていない追加の要素または方法の工程を除外しない。
【００２１】
組成物およびそれらの使用のための方法は、本明細書を通じて開示される任意の成分または工程を「含み」得る、「本質的にそれらからなり」得る、または「それらからなり」得る。「本質的にそれらからなる」という移行句に関して、一つの非限定的な局面において、本明細書に開示される組成物および方法の基本的かつ新しい特性は、本組成物の増強された酵素的デブリードマン活性を含む。
【００２２】
本発明のその他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかとなる。但し、詳細に述べられるこの説明から本発明の精神および範囲内の様々な変更および改変が当業者には明白となることから、詳細な説明および具体的な例は、本発明の具体的態様を示すものではあるが、例示としてのみ示されるものであることが理解されるべきである。
【００２３】
本明細書および／または特許請求の範囲において用いられる用語としての「有効な」という用語は、所望の、期待される、または意図される結果を達成するために適切であることを意味する。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】24時間の期間における37℃でのブロメライン、サーモリシン、およびセアプローゼのゲルによるブタ痂皮の分解を比較するインビトロ試験の結果のプロット。
【図２】対照（湿性の創傷ケア）と比較したセアプローゼヒドロゲルを用いた24時間治療後のインビボにおけるブタの創傷の画像。
【図３】対照（湿性の創傷ケア）と比較したセアプローゼヒドロゲルを用いた創傷のデブリードマンを比較するインビボにおけるブタ試験の結果のグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
例示的態様の説明
本発明は、セアプローゼを含む酵素的創傷デブリードマン組成物、ならびに同組成物を用いた創傷の治療および酵素的創傷デブリードマンの方法を対象とする。
【００２６】
A．組成物
本発明の組成物は、デブリードマンに有効な量のセアプローゼを含む、創傷デブリードマンのための組成物であり、薬学的に許容される担体をさらに含んでもよい。本発明の組成物はセアプローゼを唯一の成分として含んでもよく、または薬学的に許容される担体をさらに含んでもよい。本発明の組成物は、薬学的に活性な成分、美容的に活性な成分、および創傷への局所または注入可能な投与に適切な傷薬物質（例えば、成長因子）をさらに含むことができる。
【００２７】
インビトロの試験において、セアプローゼを含有する組成物が、ブロメラインおよびサーモリシンの組成物よりも痂皮物質の分解において驚くほど有効であることが実証された（図1）。
【００２８】
1．セアプローゼ
セアプローゼは、真菌であるアスペルギルス・メレウス（Aspergillus melleus）の発酵によって産生されるセミアルカリプロテアーゼであり、Amano Enzyme, Inc., JapanからセアプローゼS（登録商標）の商品名で粉末として販売されている。セアプローゼは、当業者に公知の手法を用いて液体発酵または固体発酵のいずれかの過程によって調製することができる。セアプローゼは、オノプローゼ、プロメラーゼ、プロメラスム（promelasum）、ゼオエース、FLAMINASE（登録商標）（Prodotti Formenti S.r.l., Milan Italy）、およびアスペルギルス・メレウス・セミアルカリプロテアーゼとも称されている。
【００２９】
セアプローゼ内の主なプロテアーゼは、分子量 約31kDaのセミアルカリプロテアーゼである。炭水化物を分解する加水分解酵素であるアミラーゼなどのその他の酵素をさらに含有することもできる。または、セアプローゼは当業者に公知の標準的な手法で精製または単離され得る。セアプローゼは5〜9の至適pH範囲、および50℃よりも低い至適温度において高い安定性を示す。これらの条件は創傷における酵素の適用に適していて、薬剤の製剤化および製造において好ましい。
【００３０】
セアプローゼはこれまでに様々な医学上の適用および治療において用いられてきた；しかし、創傷デブリードマン物質としての使用のために局所用または注入可能な形として用いられたことはなかった。例えば、セアプローゼはインビトロにおける粘液溶解活性を有し（Braga 1990）、セアプローゼカプセルの経口投与によって気管支炎の患者を有効に治療することが示されている（Braga 1993), (Moretti 1993）。セアプローゼは、動物モデルにおいて多くの異なる炎症性条件に対して抗炎症活性を示している（Fossati 1991）。セアプローゼは、セアプローゼ錠の経口投与によって炎症性静脈疾患の患者の治療に有効であることが示された（Bracale 1996）。セアプローゼは膵炎に起因する腹痛を治療するために用いられている（米国特許第7,459,155号）。セアプローゼは、セアプローゼ30mg錠の経口投与によって、産褥の外科的創傷の合併症を治療するために用いられている（Dindelli 1990）。
【００３１】
本発明によると、セアプローゼは薬学的に許容される担体に溶解した状態および／または分散した状態であり得る。セアプローゼはカプセルに内包されてもよい。また、担体を用いることなく混ぜ物なしに用いてもよい。セアプローゼは精製または単離された形で用いられてもよい。
【００３２】
薬学的に許容される担体を伴う組成物中のセアプローゼの量は、創傷デブリードマンに有効な量であり、一般に約0.001％ w/wから約10％ w/w；もしくは約0.01％から約9％；もしくは約0.1％から約8％；または約0.1％から約0.9％；もしくは約0.2％から約0.8％；もしくは約0.3％から約0.7％；もしくは約0.4％から約0.6％；もしくは約0.5％；または約0.5％から約7％；もしくは約1％から約6％；もしくは約1.5％から約5％；または約0.5％から約1.5％；もしくは約0.6％から約1.4％；もしくは約0.7％から約1.3％；もしくは約0.8％から約1.2％；もしくは約0.9％から約1.1％；または約1％の範囲であることができる。このような量は創傷中の壊死組織を効果的にデブリードマンする量である。
【００３３】
2．薬学的に許容される担体
本発明の組成物は、局所送達に適切で、かつセアプローゼと適合性の薬学的に許容される様々な担体を含むことができる。非限定的な例には、ローション、クリーム、乳濁液、軟膏、ゲル、ペースト、溶液、エアロゾルスプレー、エアロゾル泡沫、非エアロゾルスプレー、非エアロゾル泡沫、粉末、溶液、懸濁液、フィルムおよびシートが含まれる。組成物は、ガーゼ、絆創膏、または局所送達のためのその他の創傷包帯材料に含浸させてもよい。
【００３４】
本発明の組成物は、局所的な組成物における使用に適切で、かつセアプローゼと適合性の機能性成分をさらに含むことができる。非限定的な例には、吸収剤、抗菌物質、抗酸化剤、結合剤、緩衝物質（トリス緩衝液を含む）、増量物質、キレート化物質、着色剤、殺生物剤、脱臭物質、乳濁液安定剤、フィルム形成剤、芳香成分、湿潤剤、溶解性物質、酵素性物質、不透明化物質、酸化物質、pH調整剤、可塑剤、保存剤、還元物質、軟化性皮膚調節物質、湿潤性皮膚調節物質、モイスチャーライザー、界面活性剤、乳化物質、洗浄物質、発泡物質、ハイドロトープ、溶媒、懸濁物質、粘度調節物質（レオロジー修飾剤）、粘度増強物質（増粘剤）、および噴霧剤が含まれる。本明細書に記載される機能性成分の一覧およびモノグラフは、参照により本明細書に組み入れられるThe International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook (INCI), 12th Edition, 2008に開示されている。
【００３５】
適切な薬学的に許容される局所用担体には、参照により本明細書に組み入れられる米国特許第6,548,556号に開示される無水親水性創傷デブリードマン剤（debrider）組成物；参照により本明細書に組み入れられる米国特許第7,785,584号に開示されるスプレー式局所用創傷デブリードマン剤組成物；参照により本明細書に組み入れられる国際PCT出願PCT/US 10/5 9409に開示される酵素的創傷デブリードマン（debriding）組成物；参照により本明細書に組み入れられる米国特許第6,479,060号に開示される硬化ヒマシ油軟膏；参照により本明細書に組み入れられる米国特許第6,399,092号に開示される無水親水性吸収性創傷包帯剤；および参照により本明細書に組み入れられる米国特許第5,902,600号に開示されるヒドロゲル創傷包帯剤が含まれる。
【００３６】
本発明の組成物は、セアプローゼと適合性で、注入可能な送達に適した、薬学的に許容される様々な担体をさらに含むことができる。
【００３７】
本発明の組成物は、局所用または注入可能な製品に適した任意の包装形態で包装されてよい。局所用の製品の非限定的な例には、瓶、ローション用ポンプ、トドル（toddle）、チューブ、ジャー、非エアロゾルのポンプ式スプレー、エアロゾル容器、シリンジ、小袋（pouch）および小包（packet）が含まれる。包装は一回使用（一回用量）または複数回使用の投与のために設計され得る。注入可能な製品の非限定的な例はバイアル、シリンジ、顕微針のシリンジまたは袋（bag）を含む。
【００３８】
本発明の組成物は無菌であってもよい。それらは無菌的な製造過程を介して無菌化されてよく、または包装後に当技術分野に公知の方法によって無菌化されてもよい。
【００３９】
3．製造
本発明の組成物は、局所用および／または注入可能な製品として、当業者に公知の適切な加工方法によって製造することができる。例えば、セアプローゼは薬学的に許容される担体と混合してよい。または、セアプローゼは混ぜ物のない形（例えば、担体を伴わない）で創傷に適用することができる。
【００４０】
B．使用方法
本発明の組成物は、デブリードマンを必要とする創傷のデブリードマンのための治療方法において用いることができる。本方法は、局所適用によって、または注入によって、セアプローゼを含む組成物を創傷に適用する工程を含む。局所適用後、創傷はガーゼパッドなどの創傷包帯剤で被覆してもよい。組成物は先ずガーゼパッドなどの包帯剤に適用して、続いて創傷表面に適用され得る。適用量は、創傷の程度およびタイプならびに対象の性質に依存する。
【００４１】
組成物は、定期的に、例えば、毎日、創傷に適用することができる。壊死組織のデブリードマンが完了するまで、創傷の洗浄、および交換の間の新鮮な組成物の適用を伴う定期的な包帯剤の交換を含む、治療計画を採用することができる。組成物の使用は、壊死組織のデブリードマンが完了した時点で中止することができる。
【００４２】
熱傷、急性の創傷または慢性的な創傷は本発明の方法に従って治療され得る。慢性的な創傷の非限定的な例には、糖尿病性の足の潰瘍、静脈性の下腿潰瘍、動脈性の下腿潰瘍、褥瘡性潰瘍、うっ血性潰瘍、皮膚の潰瘍、熱傷、および圧迫性潰瘍が含まれる。
【実施例】
【００４３】
以下の実施例は、本開示の一部の非限定的な局面を実証するために含められる。以下の実施例において開示される手法は、本発明の実践において十分に機能することが出願人によって発見された手法を表すことが、当業者によって認識される。但し、当業者は、本開示に照らして、開示される具体的態様において多くの変更が可能であり、本発明の精神および範囲から逸脱することなく類似または同様の結果を得られことが可能であることを認識する。
【００４４】
実施例1
（例示的な製剤）
以下の表は、本発明のセアプローゼを含有する製剤の非限定的な例を示す：
【００４５】
（表１）ゲル*
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*過程：HECおよびトリス緩衝液を用いてゲルを作製した。セアプローゼSをHECゲルと混合した。ゲルの粘度は、恐らくHECを分解するセアプローゼ材料中に存在するアミラーゼのために、時間とともに徐々に低下した。
【００４６】
（表２）ゲル*
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*過程：セアプローゼSをCURASOLゲル創傷包帯剤と混合して、透明なゲルを形成した。粘度は時間を通じて維持された。
【００４７】
（表３）クリーム*
2014513696.tif 000005
*過程：メチルパラベン、プロピルパラベンおよびグリセリンを70℃でトリス緩衝液に溶解した。乳化ろうおよびイソプロピルパルミテートを、乳濁液を形成するために、70℃で上記の溶液に加えて撹拌した。乳濁液を35℃まで冷却して、この時点でセアプローゼSを乳濁液と混合した。白色のクリームが得られた。
【００４８】
（表４）軟膏*
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*過程：半量のPEG-600および半量のポロキサマー-407の混合物を70℃で融解して、この混合物を35℃まで冷却し、この時点でセアプローゼSをこの混合物と混合することによって、活性相を作製した。白色ワセリン、ならびに残り半量のPEG-600および残り半量のポロキサマー-407の混合物を70℃で融解して、この混合物を35℃まで冷却することによって、主相を作製した。続いて、活性相を主相と混合した。得られた混合物を45分間、室温で撹拌した。
【００４９】
実施例2
（インビトロにおけるブタの熱傷痂皮の消化）
表1のゲル製剤（1％セアプローゼゲル）および以下の2つの各ゲル製剤（1％サーモリシンゲルおよび10％ブロメラインゲル）をインビトロ試験で用いて、各ゲル製剤によるブタ痂皮の分解を比較した。
【００５０】
（表５）1％サーモリシンゲル
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【００５１】
（表６）10％ブロメラインゲル
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【００５２】
本試験は、ブタの熱傷創傷から得られた痂皮材料を用いてインビトロにて実施された。痂皮材料は完全に乾燥させた。乾燥重量をベースラインとして用いた。40〜60mgの重量の乾燥させた痂皮試料をトリス緩衝生理食塩水50μlで湿らせた。湿らせた痂皮試料を3つの各ゲル製剤3gに浸漬した。痂皮を含むゲルを37℃で24時間、保存した。24時間後、試料を5000rpmで5分間、遠心分離した。上清を廃棄して、沈殿物を洗浄するために水を加えた。試料を再度、遠心分離した。洗浄工程をもう一度実施して、続いて、沈殿物を凍結乾燥した。沈殿物の乾燥重量を用いて、ベースラインの乾燥重量を基準とする分解パーセントを算出した。結果を図1に示す。
【００５３】
図1の結果は、セアプローゼゲルが、24時間の期間において1％サーモリシンゲル（表5）および10％ブロメラインゲル（表6）に比べて、痂皮材料の消化においてより有効であり、優れた力価を示したことを実証する。当技術分野においてサーモリシンおよびブロメラインはいずれも迅速なデブリードマン酵素であることが公知であったので（例えば、それぞれ、米国特許公開第2003/0198631号および米国特許第8,119,124号を参照）、1％サーモリシンゲルおよび10％ブロメラインゲルと比較したセアプローゼゲルの痂皮を消化する迅速さは完全に予想外であった。本インビトロ試験の結果は、セアプローゼが痂皮のタンパク質を効率的かつ有効に標的化して消化することができ、従って、デブリードマンを必要とする創傷の治療のために用いることができる優れた酵素的創傷デブリードマン剤として適切であることを示す。
【００５４】
実施例3
（インビボにおけるブタ熱傷のデブリードマン）
このインビボにおけるブタの試験では、熱した黄銅の棒を用いてブタの背部に熱傷創傷を生じさせて、数日間かけて乾燥した痂皮を形成させることによって、痂皮が形成された。1日の治療後、対照に比べて、多くの創傷においてセアプローゼ（SAP）の目に見える効果があった（図2）。全体として、SAPは、対照（生理食塩水を用いた非粘着性の予め湿らせた創傷包帯剤）と比較した際に、より迅速で完全な痂皮のデブリードマンを示した（図3）。
【００５５】
このインビボ試験の詳細は以下の通りである。ブタを麻酔し、胴体をバリカンおよびカミソリを用いて剪毛し、ベタジンを用いて洗浄した。続いて、手術野を無菌化するために、イソプロピル洗浄を実施した。各ブタの背部に2cmの創傷を20個作った。砂浴において100℃に熱した中実の黄銅の棒を皮膚上に45秒間保持して、創傷を作った。創傷を5日間乾燥させて、痂皮を形成する時間を与え、痂皮形成期間中、一日おきに保護性の泡沫包帯剤を交換した。痂皮形成後、治療のために一日単位で、創傷を浄化して写真を撮り、治療無作為化スキームに従って治療して、トランスポアテープおよび密閉性の二次包帯剤で固定した非粘着性包帯剤（生理食塩水で予め湿らせた）を巻いた。完全にデブリードマンされた痂皮の数に関する統計学的な有意性をFisherの直接検定を用いて調べた。
【００５６】
この試験のための治療計画には、以下の方法で調製されたセアプローゼ含有製剤、および生理食塩水で予め湿らせた非粘着性の創傷包帯剤からなる対照の使用が含まれた：（1）セアプローゼS粉末を調製し（以下の表7を参照）、該粉末100mgを創傷に直接適用した；および（2）ゲルを調製し（以下の表8を参照）、該ゲル400mgを該セアプローゼS粉末の上に適用した。治療は15日の期間中、1日1回、実施された。治療の最初の24時間の後、セアプローゼで治療された多くの創傷において、痂皮上の小さい穴の形成（pitting）、およびいくつかの症例では健常な創傷組織の限定的な露出を含む、目に見える相違が見られた（図2）。15日間の治療期間を通じて、セアプローゼ治療は対照よりも多くの創傷の完全なデブリードマンの一貫した傾向を生じた（セアプローゼ治療は治療13日目に対照に対して統計学的な有意性（p＜0.05）を達成した）（図3）。
【００５７】
（表７）セアプローゼS粉末*
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*過程：セアプローゼSおよびソルビトールを室温（約20〜25℃）で撹拌して、均質な粉末を得た。
【００５８】
（表８）ゲル*
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*過程：保存料を、高温（＞70℃）でグリセリンと共にトリス緩衝液中で撹拌した。冷却後、ヒスパゲル-200を加えた。清澄で透明なゲルが得られた。
【００５９】
参照資料
刊行物
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【００６０】
米国特許資料
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【００６１】
外国の特許資料
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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