(57)【要約】  ＣＤ３８を特異的に認識する抗体とボルテゾミブを含む医薬組成物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ３８を特異的に認識する抗体および少なくともボルテゾミブを含む医薬的組合せであって、前記抗体がアポトーシス、抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、および補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）によってＣＤ３８＋細胞を殺傷することができる、医薬的組合せ。
【請求項２】
抗体がヒト化抗体である、請求項１に記載の組合せ。
【請求項３】
抗体が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６および８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する１つまたは複数の相補性決定領域を含む、請求項２に記載の組合せ。
【請求項４】
抗体が少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号６６のアミノ酸配列を有し、ならびに前記重鎖が配列番号１３、１４（または８１）、および１５のアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、ならびに前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号６２または６４であり、ならびに前記軽鎖が配列番号１６、１７および１８のアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む、請求項３に記載の組合せ。
【請求項５】
抗体が少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号７２によって表されるアミノ酸配列を有し、ならびに前記重鎖が配列番号２５、２６および２７のアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、ならびに前記軽鎖が配列番号６８および７０の群から選択されるアミノ酸配列を有し、ならびに前記軽鎖が配列番号２８、２９および３０のアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む、請求項３に記載の組合せ。
【請求項６】
抗腫瘍有効性が約１１から約４２％のＴ／Ｃである、癌の治療において使用するための、請求項１に記載の組合せ。
【請求項７】
組合せの抗腫瘍有効性が約０から約１０％のＴ／Ｃである、癌の治療において使用するための、請求項１に記載の組合せ。
【請求項８】
癌の治療において使用するための、請求項１に記載の医薬的組合せ。
【請求項９】
抗体がヒト化抗体である、請求項８に記載の組合せ。
【請求項１０】
抗体が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６および８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する１つまたは複数の相補性決定領域を含む、請求項９に記載の組合せ。
【請求項１１】
抗体が少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖がアミノ酸配列の配列番号６６を有し、ならびに前記重鎖が配列番号１３、１４（または８１）、および１５のアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、ならびに前記軽鎖が配列番号６２および６４の群から選択されるアミノ酸配列を有し、ならびに前記軽鎖が配列番号１６、１７および１８のアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む、請求項９に記載の組合せ。
【請求項１２】
抗体が少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号７２のアミノ酸配列を有し、ならびに前記重鎖が配列番号２５、２６および２７のアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、ならびに前記軽鎖が配列番号６８または７０のアミノ酸配列を有し、ならびに前記軽鎖が配列番号２８、２９および３０のアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む、請求項１１に記載の組合せ。
【請求項１３】
ＣＤ３８を特異的に認識する抗体とボルテゾミブが別々に投与される、請求項８から１２に記載の組合せ。
【請求項１４】
ＣＤ３８を特異的に認識する抗体とボルテゾミブがほぼ同時に投与される、請求項８から１２に記載の組合せ。
【請求項１５】
ＣＤ３８を特異的に認識する抗体とボルテゾミブの投与を一定時間の間空けて、組合せの最大有効性を得る、請求項８から１２に記載の組合せ。
【請求項１６】
ａ）包装材料
ｂ）ＣＤ３８を特異的に認識する抗体と少なくともボルテゾミブの組合せであって、前記抗体が、アポトーシス、抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、および補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）によってＣＤ３８＋細胞を殺傷することができる組合せ、および
ｃ）前記の組合せが癌を治療するのに有効であることを示す、前記包装材料中に含有されるラベルまたは添付文書
を含む製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍性疾患の治療において治療上有用である、ＣＤ３８を対象とするモノクローナル抗体とボルテゾミブの組合せに関する。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤ３８は、長いＣ末端細胞外ドメインおよび短いＮ末端細胞質ドメインを有する、４５ｋＤのＩＩ型膜貫通型糖タンパク質である。ＣＤ３８タンパク質は、ＮＡＤ＋の環状ＡＤＰ−リボース（ｃＡＤＰＲ）への変換を触媒しｃＡＤＰＲをＡＤＰ−リボースに加水分解することもできる二官能性表面酵素である。ＣＤ３８は上方制御され、多くの造血器悪性腫瘍に関与している。
【０００３】
ＣＤ３８を特異的に認識するモノクローナル抗体３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１、および３８ＳＢ３９は、その全体を参照により本明細書に組み込むＰＣＴ出願ＷＯ２００８／０４７２４２中に記載される。前記抗ＣＤ３８抗体は、アポトーシス誘発、抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、および補体依存性細胞傷害（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｙｔｏｘｉｃｉｔｙ）（ＣＤＣ）の３つの異なる細胞傷害機構によってＣＤ３８＋細胞を殺傷することができる。さらに、これらの抗体は、間質細胞または間質細胞由来サイトカインの存在なしでも、ＣＤ３８＋細胞のアポトーシスを直接誘発することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００８／０４７２４２号
【発明の概要】
【０００５】
用語「抗体」は本明細書中では広義に使用しており、具体的にはＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥなどの、任意のアイソタイプの（完全長モノクローナル抗体を含めた）モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体、キメラ抗体、および抗体断片を含む。典型的なＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合により結合した２つの同じ重鎖と２つの同じ軽鎖で構成される。それぞれの重鎖および軽鎖は、定常領域および可変領域を含有する。それぞれの可変領域は、抗原のエピトープの結合を主に担う、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）または「超可変領域」と呼ばれる３つのセグメントを含有する。それらはＮ末端から順に名称付けしてＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と通常呼ばれる。ＣＤＲ外側可変領域のより高度に保存された部分は、「フレームワーク領域」と呼ばれる。
【０００６】
本明細書中で使用する「ＶＨ」または「ＶＨ」は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’またはＦ（ａｂ’）２断片の重鎖を含めた抗体の免疫グロブリン重鎖の可変領域を指す。「ＶＬ」または「ＶＬ」という言及は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’またはＦ（ａｂ’）２断片の軽鎖を含めた抗体の免疫グロブリン軽鎖の可変領域を指す。
【０００７】
３８ＳＢ１３抗体は、配列番号５０からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と配列番号３８からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号１、２、および３からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含み、前記軽鎖は配列番号４、５、および６からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。
【０００８】
３８ＳＢ１８抗体は、配列番号５２からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と配列番号４０からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号７、８、および９からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含み、前記軽鎖は配列番号１０、１１、および１２からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。
【０００９】
３８ＳＢ１９抗体は、配列番号５４からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と配列番号４２からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号１３、１４（または８１）、および１５からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含み、前記軽鎖は配列番号１６、１７、および１８からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。
【００１０】
３８ＳＢ３０抗体は、配列番号５６からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と配列番号４４からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号１９、２０、および２１からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含み、前記軽鎖は配列番号２２、２３、および２４からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。
【００１１】
３８ＳＢ３１抗体は、配列番号５８からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と配列番号４６からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号２５、２６、および２７からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含み、前記軽鎖は配列番号２８、２９、および３０からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。
【００１２】
３８ＳＢ３９抗体は、配列番号６０からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と配列番号４８からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号３１、３２、および３３からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含み、前記軽鎖は配列番号３４、３５、および３６からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。
【００１３】
３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１、および３８ＳＢ３９ネズミ抗ＣＤ３８抗体を産生するハイブリドーマ細胞系は、（その全体を参照により本明細書に組み込むＷＯ２００８／０４７２４２中に記載されたように）、それぞれ寄託番号ＰＴＡ−７６６７、ＰＴＡ−７６６９、ＰＴＡ−７６７０、ＰＴＡ−７６６６、ＰＴＡ−７６６８、およびＰＴＡ−７６７１の下、２００６年６月２１日にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、２０１１０−２２０９、ＵＳＡ）に寄託されている。
【００１４】
本明細書中で使用する用語「ヒト化抗体」は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含有するキメラ抗体を指す。ヒト化の目的は、抗体の完全な抗原結合親和性および特異性を維持しながら、ヒト中に導入するための、ネズミ抗体などの異種抗体の免疫原性を低下させることである。ヒト化抗体、または他の哺乳動物による非拒絶に適合した抗体は、リサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）およびＣＤＲ移植などの、いくつかの技術を使用して産生することができる。本明細書中で使用するリサーフェシング技術は、分子モデリング、統計解析および突然変異誘発の組合せを使用して、抗体可変領域の非ＣＤＲ表面を改変し、標的宿主抗体の知られている表面に似せる。ＣＤＲ移植技術は、例えばマウス抗体の相補性決定領域をヒトフレームワークドメインに置換することを含む。例えば、その全体を参照により本明細書に組み込むＷＯ９２／２２６５３を参照。ヒト化キメラ抗体は、対応するヒト抗体領域に実質的または排他的に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）以外の定常領域と可変領域およびヒト以外の哺乳動物に実質的または排他的に由来するＣＤＲを有し得る。
【００１５】
抗体のリサーフェシングのための戦略および方法、および異なる宿主内の抗体の免疫原性を低下させるための他の方法は、その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第５，６３９，６４１号中に開示される。ＣＤＲ移植（ＥＰ０２３９４００；ＷＯ９１／０９９６７；米国特許第５，５３０，１０１号；および同第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたはリサーフェシング（その全体を参照により本明細書に組み込む、ＥＰ０５９２１０６；ＥＰ０５１９５９６；Ｐａｄｌａｎ  Ｅ．Ａ．、１９９１、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  Ｇ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．、１９９４、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、７（６）：８０５−８１４；Ｒｏｇｕｓｋａ  Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．、１９９４、ＰＮＡＳ、９１：９６９−９７３）、鎖シャッフリング（その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第５，５６５，３３２号）、および柔軟性残基の同定（その全体を参照により本明細書に組み込むＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７４３８１）を含めた様々な他の技法を使用して、抗体をヒト化することができる。ヒト抗体は、ファージディスプレイ法を含めた当技術分野で知られている様々な方法によって作製することができる。米国特許第４，４４４，８８７号、同第４，７１６，１１１号、同第５，５４５，８０６号、および同第５，８１４，３１８号、ならびに国際特許出願公開番号ＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５、およびＷＯ９１／１０７４１も参照（前記参照文献はそれら全体を参照により組み込む）。
【００１６】
本発明の医薬的組合せの抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤ３８を認識しアポトーシス、ＡＤＣＣ、およびＣＤＣによってＣＤ３８＋細胞を殺傷するヒト化抗体である。さらなる実施形態では、本発明のヒト化抗体は、間質細胞または間質細胞由来サイトカインの不在下でさえアポトーシスにより、前記ＣＤ３８＋細胞を殺傷することができる。
【００１７】
このようなヒト化抗体の一実施形態は、ヒト化３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１、または３８ＳＢ３９抗体、またはそれらのエピトープ結合断片である。
【００１８】
３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１、および３８ＳＢ３９抗体のＣＤＲはモデリングにより同定され、それらの分子構造は予測されている。したがって、一実施形態では、本発明は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６および８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する１つまたは複数のＣＤＲを含むヒト化抗体またはそれらのエピトープ結合断片を提供する。一実施形態では、少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号１、２、および３によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号４、５、および６によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む、ヒト化型の３８ＳＢ１３を提供する。別の実施形態では、少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号７、８、および９によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号１０、１１、および１２によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む、ヒト化型の３８ＳＢ１８を提供する。別の実施形態では、少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号１３、１４（または８１）、および１５によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号１６、１７、および１８によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む、ヒト化型の３８ＳＢ１９を提供する。別の実施形態では、少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号１９、２０、および２１によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号２２、２３、および２４によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む、ヒト化型の３８ＳＢ３０を提供する。別の実施形態では、少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号２５、２６、および２７によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号２８、２９、および３０によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む、ヒト化型の３８ＳＢ３１を提供する。別の実施形態では、少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号３１、３２、および３３によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号３４、３５、および３６によって表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む、ヒト化型の３８ＳＢ３９を提供する。
【００１９】
一実施形態では、本発明は、配列番号６６および７２の群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨを含むヒト化抗体またはそれらの断片を提供する。一実施形態では、配列番号６６によって表されるアミノ酸配列を有するＶＨを含む、ヒト化３８ＳＢ１９抗体を提供する。別の実施形態では、配列番号７２によって表されるアミノ酸配列を有するＶＨを含む、ヒト化３８ＳＢ３１抗体を提供する。
【００２０】
別の実施形態では、本発明は、配列番号６２、６４、６８、および７０の群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬを含むヒト化抗体またはそれらの断片を提供する。一実施形態では、配列番号６２および６４の群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬを含むヒト化３８ＳＢ１９抗体を提供する。別の実施形態では、配列番号６８および７０の群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬを含むヒト化３８ＳＢ３１抗体を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
それぞれのヒト化型３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１、および３８ＳＢ３９抗体が、抗癌剤として非常に有用であることが示されている。その調製、物理的性質およびそれらの有益な薬理学的性質は、その全体を参照により本明細書に組み込むＷＯ２００８／０４７２４２中に記載されている。一般に、治療する対象に特有な要因に依存する、ヒトの治療に使用する用量は、経口投与で１ｍｇ／ｋｇと１５０ｍｇ／ｋｇの間、１０ｍｇ／ｋｇと１００ｍｇ／ｋｇの間もしくは５０ｍｇ／ｋｇと１００ｍｇ／ｋｇの間であり、または静脈内投与で１ｍｇ／ｋｇと１５０ｍｇ／ｋｇの間、１０ｍｇ／ｋｇと１００ｍｇ／ｋｇの間もしくは５０ｍｇ／ｋｇと１００ｍｇ／ｋｇの間である。
【００２２】
ボルテゾミブは、抗腫瘍活性を有する（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３５２：２４８７−２４９８、２００５）、ボロン酸ジペプチド（［（１Ｒ）−３−メチル−１−（｛（２Ｓ）−３−フェニル−２−［（ピラジン−２−イルカルボニル）アミノ］プロパノイル｝アミノ）ブチル］ボロン酸；商標名：Ｖｅｌｃａｄｅ（商標））である。ボルテゾミブは非常に特異的で、可逆的な２６Ｓプロテアソーム阻害剤である。正常細胞において、プロテアソームはユビキチン化タンパク質の分解によりタンパク質の発現および機能を制御し、さらにミスフォールディングタンパク質の排除に関与する。ボルテゾミブの作用機構は、ＮＦ−ｋＢ、ｐ２１、ｐ２７、ｐ５３、Ｂｉｄ、およびＢａｘの安定化、カベオリン−１活性化の阻害、およびＪＮＫの活性化、ならびに小胞体ストレス応答に関与する（Ｂｏｃｃａｄｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｉｎｔ．、５（１）：１８、２００５）。多数の機構が関与する可能性がある一方で、プロテアソーム阻害は、アポトーシス促進経路の抑制に応じて、腫瘍性細胞におけるプログラムされた細胞死の活性化をしたがって可能にし得る。具体的には、その作用物質は核因子（ＮＦ）−ｋａｐｐａＢを阻害し、それによってＮＦ−ｋａｐｐａＢ媒介性の細胞生存、腫瘍増殖、および血管形成に干渉する。したがって、ボルテゾミブは、多発性骨髄腫およびマントル細胞リンパ腫の治療に使用される。ボルテゾミブは通常静脈内投与される。
【００２３】
本発明に関して、抗癌治療において治療上有用であり、ヒト化抗ＣＤ３８抗体の１つと同じであるまたは異なる機構を有し、本発明ではボルテゾミブに限られる少なくとも１つの物質と組合せてヒト化抗ＣＤ３８抗体を投与すると、その有効性を著しく改善することができることが現在分かっている。
【００２４】
さらに、生成物の活性は使用する用量に依存するので、より少ない用量を使用して、毒性事象を減らしながら活性を増大することができる。本発明による組合せの改善された有効性は、治療相乗効果の測定により実証することができる。ある組合せが、最大忍容用量または試験した動物種において毒性に到達し得ない最高用量で、試験において単独で使用した最良の作用剤よりも治療上優れている場合、その組合せは治療相乗効果を示す。
【００２５】
この有効性は、例えば、以下の式に従い決定されるｌｏｇ１０細胞殺傷によって定量化することができる：
ｌｏｇ１０細胞殺傷＝Ｔ−Ｃ（日数単位）／３．３２×Ｔｄ
上式で、Ｔ−Ｃは、治療群（Ｔ）の腫瘍と対照群（Ｃ）の腫瘍が所定の値（例えば１ｇ）に達するまでの日数単位の時間のメジアンである腫瘍増殖遅延を表し、Ｔｄは、対照動物において腫瘍体積が倍になるのに必要な時間日数を表す［Ｔ．Ｈ．Ｃｏｒｂｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ、４０：２６６０−２６８０（１９７７）；Ｆ．Ｍ．Ｓｃｈａｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、ＰａｒｔＢ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１７：３−５１、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．（１９７９）］。ｌｏｇ１０細胞殺傷が０．７以上である場合、製品は活性があると考えられる。ｌｏｇ１０細胞殺傷が２．８以上である場合、製品は非常に活性があると考えられる。
【００２６】
ｌｏｇ１０細胞殺傷が、その最大許容用量または試験したその最高用量において単独で投与する最良成分のｌｏｇ１０細胞殺傷の値を超えるとき、組合せは治療相乗効果を示す。
【００２７】
固形腫瘍における組合せの有効性は、以下の形式で実験によって決定することができる：
実験対象の動物、一般にマウスに、第０日に腫瘍細胞または断片を片側または両側に皮下移植する。腫瘍を有する動物は、様々な治療および対照治療を施す前に、それらの腫瘍サイズに基づきランダムに分類する。移植後腫瘍が所定サイズに達したときに化学療法を開始し、腫瘍の型に応じて動物を毎日観察する。最大の体重減少に到達し後の完全な体重回復が起こるまで、治療を通じて種々の動物群を１日１回体重測定する。次いで、これらの群は、試験の最後まで１週間に１回または２回体重測定する。
【００２８】
腫瘍が約７５０ｍｇに達するまで、または動物が死ぬまで（腫瘍が７５０ｍｇに達する前にこれが起こる場合）、腫瘍倍加時間に応じて、腫瘍を１週間に１回から５回測定する。安楽死または死の直後に動物を死体解剖する。
【００２９】
抗腫瘍活性は、記録した異なるパラメーターに従い決定する。
【００３０】
それらの最適用量で使用したｈｕ３８ＳＢ１９とボルテゾミブの組合せを用いて得た結果は、例として本明細書で以下に示す。
【００３１】
したがって、本発明はさらに、本発明による組合せを含有する医薬組成物に関する。
【００３２】
組合せを構成する構成成分は、組合せの最大有効性を得るために、同時に、ほぼ同時に、別々に、または一定の時間を空けて投与することができる。それぞれの投与は、迅速投与から連続灌流まで、その持続期間を変えることが可能である。
ＣＤ３８を特異的に認識する抗体の少なくとも１回の投与とボルテゾミブの少なくとも１回の投与の間のタイミングは、約１カ月以下、または約２週間以下、または約１日以下である。
【００３３】
結果として、本発明の目的に関して、組合せは、構成成分の物理的結合によって得られる組合せだけに限定されず、一定の時間を空けることも可能な同時または別個の投与でもある。
本発明による組成物は、非経口的に（ｐａｒｅｎｔａｌｌｙ）投与することができる組成物であることが好ましい。しかしながら、局所領域治療の場合、これらの組成物は経口、皮下または腹腔内投与することができる。
【００３４】
非経口投与用（ｐａｒｅｎｔａｌ）の組成物は、使用時に必要に応じて場合によって調製することができる、一般に薬学的に許容される、滅菌溶液または懸濁液である。非水溶液または懸濁液の調製用に、オリーブ油、ゴマ油などの天然植物油、または液状石油もしくはオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルを使用することができる。滅菌水溶液は製品の水溶液からなり得る。ｐＨを適切に調節し、例えば十分な量の塩化ナトリウムまたはグルコースで溶液を等張にするという条件で、水溶液は静脈内投与に適している。滅菌は加熱により、または組成に悪影響を与えない任意の他の手段により実施することができる。組合せはリポソームの形、またはシクロデキストリンもしくはポリエチレングリコールなどの担体との結合体の形をとってもよい。
【００３５】
好ましくは、経口、皮下または腹腔内投与用の組成物は、水性懸濁液または水溶液であってよい。
【００３６】
本発明による組合せにおいて、それらの構成成分の施用は同時、別々、または一定時間の間空白にすることができ、ヒト化抗ＣＤ３８抗体の量は組合せの１０重量％から９０重量％を示すことが非常に有利であり、関連物質の性質、目的とする有効性、および治療する癌の性質に従い、この含有量を変えることは可能である。
【００３７】
本発明による組合せは、以下の：膀胱、乳房、結腸、頭頸部、前立腺、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、胃、子宮頸、甲状腺および皮膚のそれを含めた、および有棘細胞癌を含めた癌腫および腺癌；多発性骨髄腫、白血病、急性および慢性リンパ球（またはリンパ）白血病、急性および慢性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例えばバーキットリンパ腫）を含めたリンパ系の造血器腫瘍；急性および慢性骨髄性（骨髄または骨髄球）白血病、および前骨髄球性白血病を含めた骨髄系の造血器腫瘍；線維肉腫、骨原性肉腫および横紋筋肉腫を含めた間葉系の腫瘍；星状細胞腫、神経芽細胞腫、グリオーマ、およびシュワン鞘腫を含めた中枢および末梢神経系の腫瘍；およびメラノーマ、奇形癌、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、およびセミノーマを含めた他の腫瘍、およびＣＤ３８が発現される未だ決定されていない他の癌（だけには限られないが）これらを含めた、いくつかの型の癌の治療において特に有用である。それらは主に、白血病、リンパ腫、および一般に使用される抗癌剤に耐性がある癌を治療するのに有用である。本発明の抗ＣＤ３８抗体は独自の作用機構を有するからである。
【００３８】
一実施形態では、組合せの抗腫瘍有効性は約１１から約４２％のＴ／Ｃである。Ｔ／Ｃ（％）は、治療群のメジアン腫瘍体積と対照群のメジアン腫瘍体積の比×１００である。
【００３９】
別の実施形態では、組合せの抗腫瘍有効性は約０から約１０％のＴ／Ｃである。
【００４０】
したがって、本発明の一態様は、癌の治療において使用するための前述の組合せである。別の態様では本発明は、癌の治療用の医薬品を製造するための、前述の組合せの使用をさらに包含する。
【００４１】
本発明の別の実施形態は、
ａ）包装材料
ｂ）ＣＤ３８を特異的に認識する抗体と少なくともボルテゾミブの組合せであって、前記抗体が、アポトーシス、抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、および補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）によってＣＤ３８＋細胞を殺傷することができる組合せ、および
ｃ）前記それらの組合せが癌を治療するのに有効であることを示す、前記包装材料中に含有されるラベルまたは添付文書
を含む製品である。
【実施例】
【００４２】
この実施例では、腫瘍増殖阻害に関する、本発明の抗ＣＤ３８抗体／ボルテゾミブの組合せの効果をインビボで実証した。
【００４３】
試験品の投与：
Ｈｕ３８ＳＢ１９およびボルテゾミブの治療は細胞接種３４日後に開始し、用量は、投与前に行った最終測定から決定した個々の動物の体重に基づいて計算した。２７ゲージ、１／２インチの針を備える１．０ｍＬシリンジを使用して、ＰＢＳおよびｈｕ３８ＳＢ１９抗体の投与を腹腔内（ＩＰ）注射により実施し、ボルテゾミブの投与は尾静脈を介して静脈内（ＩＶ）注射により実施した。
【００４４】
具体的な試験デザイン：
ＮＣＩ−Ｈ９２９多発性骨髄腫皮下異種移植片モデルを、０．１ｍｌ無血清培養培地中に懸濁したマウス当たり１×１０７個の細胞の皮下注射により、メスＣＢ．１７ＳＣＩＤマウスにおいてイニシエートした。
【００４５】
腫瘍細胞接種３３日後に、６４匹のマウスを腫瘍体積によりランダムに８群に分けた（ｎ＝８）。腫瘍体積は８６．７ｍｍ３から３５５．２ｍｍ３の範囲であった（１８９．０±７４．３、メジアン±ＳＤ）。マウスの体重は１７．２グラムから２２．４グラムの範囲であった（１９．４±１．１、メジアン±ＳＤ）。各群のマウスは耳部の穿刺によって識別した。
【００４６】
治療群は、ＰＢＳ対照（２００μＬ／マウス／治療）、ｈｕ３８ＳＢ１９抗体（５．０ｍｇ／ｋｇ／治療）、ボルテゾミブ（１．０、０．６および０．４ｍｇ／ｋｇ／治療）、およびｈｕ３８ＳＢ１９（５．０ｍｇ／ｋｇ／治療）とボルテゾミブ（１．０、０．６および０．４ｍｇ／ｋｇ／治療）での３つの組合せ群を含んでいた。ＰＢＳ、ｈｕ３８ＳＢ１９およびボルテゾミブは、１週間の間１週間当たり２回投与した（合計２回の治療に関して第３４日と第３７日）。腫瘍細胞接種後３４日で治療を開始した。
【００４７】
腫瘍体積は、カリパーを使用して、三次元で１週間に１回から２回測定した。腫瘍体積は、以下の式：
Ｖ＝長さ×幅×高さ×１／２
を使用してｍｍ３（またはｍｇ）で表した。
【００４８】
体重は、試験物質毒性の大まかな指標として１週間当たり２回測定した。腫瘍体積および体重を決定し、Ｌａｂｃａｔソフトウエアによって記録した。
【００４９】
結果：
単独および組合せでのｈｕ３８ＳＢ１９抗体およびボルテゾミブの抗腫瘍活性を、皮下ＮＣＩ−Ｈ９２９腫瘍異種移植片を有するメスＳＣＩＤマウス、ヒト多発性骨髄腫モデルにおいて評価した。
【００５０】
以下のエンドポイントを使用した：
２０％以上の体重減少または１０％以上の薬物死を誘導した用量において、毒性が宣言され、
抗腫瘍有効性は以下の計算によって決定した：
Ｔ／Ｃ（％）＝治療群のメジアン腫瘍体積／対照群のメジアン腫瘍体積×１００、
上式で４２％以下のＴ／Ｃは最小レベルの抗腫瘍活性であり、１０％未満のＴ／Ｃは高い抗腫瘍活性レベルであると考えられる；
ｌｏｇ１０細胞殺傷＝（Ｔ−Ｃ値、日数）／（３．３２×Ｔｄ、日数）
上式でＴ、Ｃ、およびＴｄは前に定義したとおりである。０．７未満のｌｏｇ細胞殺傷に関しては抗腫瘍活性は無しと宣言された。
無腫瘍生存者（ＴＦＳ）：（最終治療後１００日を超える）試験の全期間中の触診限界（６３ｍｇ）未満の完全な退縮に相当する。
治療相乗効果：試験の最良単独物質より活性がある場合、組合せは治療相乗効果を有する。
【００５１】
５．０ｍｇ／ｋｇ／注射でのＨｕ３８ＳＢ１９抗体単独はかろうじて抗腫瘍活性を有しており、Ｔ／Ｃの％は４１％であり、ｌｏｇ１０細胞殺傷は０．５であった（表１参照）。
【００５２】
同様に、ボルテゾミブ単独は０．４および０．６ｍｇ／ｋｇ／注射に関して不活性であり、それぞれＴ／Ｃは４５％および７５％であり、ｌｏｇ１０細胞殺傷は０．１および０．３であった。０．６ｍｇ／ｋｇ／注射においてＴＦＳは観察されず、一方０．４ｍｇ／ｋｇ／注射では１匹のＴＦＳを得た。最高用量で試験したボルテゾミブ（１．０ｍｇ／ｋｇ／注射）のみある程度の活性があり、Ｔ／Ｃの％は１５％であり、２匹のＴＦＳを得たが、しかしながら、ｌｏｇ１０細胞殺傷はわずか０．６であった。
【００５３】
他方で、ｈｕ３８ＳＢ１９抗体（５．０ｍｇ／ｋｇ／注射）とボルテゾミブの組合せは、最小用量においてさえ活性がある。実際、ｈｕＳＢ３８１９を０．４および０．６ｍｇ／ｋｇ／注射で投与すると、Ｔ／Ｃの％はそれぞれ８．７％および１１％である。いずれの場合も、これらの組合せで、ｌｏｇ１０細胞殺傷は約１であり（それぞれ０．９および１．５）、８匹のマウス中３匹のＴＦＳを得た。
【００５４】
したがって、ｈｕ３８ＳＢ１９抗体（５ｍｇ／ｋｇ／注射）とボルテゾミブ（０．４、０．６および１．０ｍｇ／ｋｇ／注射）の組合せは、試験の最良単独物質（ボルテゾミブ）より高い活性を実証した。
【００５５】
本発明者らは、ｈｕ３８ＳＢ１９抗体とボルテゾミブの組合せは、治療相乗効果を示すと結論付ける。
【００５６】
【表１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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