(57)【要約】  （ａ）３０％〜８０％の少なくとも１つの式（１）を有する化合物及び（ｂ）１０％〜４０％の少なくとも１つの式（２）の化合物；を含む、殺菌特性を有する組成物。  【化１】2014504627.tif 000036  【化２】2014504627.tif 000037【選択図】なし
2014504627.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のものを含む組成物；
（ａ）３０％〜８０％の少なくとも１つの式１を有する化合物
【化１】
2014504627.tif 000028
【化２】
2014504627.tif 000029
【化３】
2014504627.tif 000030
【化４】
2014504627.tif 000031
【請求項２】
前記少なくとも１つの式１の化合物が、α−テルピネオール、β−テルピネオール、γ−テルピネオール、テルピネン−４−オール、メントール、チモール、カルバクロール、カルベオール、ペリリルアルコール、イソプレゴール、リモネン−１０−オール、及びジヒドロカルベオールからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記少なくとも１つの式１の化合物がテルピネン−４−オールである、請求項１又は請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物が、４０％〜７０％のテルピネン−４−オールを含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
少なくとも２つの式１の化合物を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記式１の化合物が、テルピネン−４−オール及びα−テルピネオールから本質的になる、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
約４０〜約７０％のテルピネン−４−オール及び約４〜約１５％のテルピネン−４−オールを含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記少なくとも１つの式２の化合物が、以下の化合物から選択される請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物；
【化５】
2014504627.tif 000032
【化６】
2014504627.tif 000033
【請求項９】
前記組成物が、約１０％〜約４０％、好ましくは、約１５％〜約３５％、好ましくは、約２０％〜約３０％の少なくとも１つの式２の化合物を含むことを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物が、少なくとも２つの式２の化合物を含み、少なくとも１つの化合物が２つの酸素原子を有し、少なくとも１つの化合物が３つの酸素原子を有し、ここで、２つの酸素原子を有する前記少なくとも１つの化合物と３つの酸素原子を有する前記少なくとも１つの化合物の比が、約１：１〜５：１、好ましくは、約１．５：１〜約４：１、最も好ましくは、約２：１〜約３：１であることを特徴とする、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの式２の化合物が、約１〜約４％、好ましくは、約２〜約３％の２−ヒドロキシ−１，４−シネオール；約５％〜約１５％、好ましくは、約６％〜約１２％の１，４−ジヒドロキシ−メント−２−エン；約０．５％〜約５％、好ましくは、約１％〜約４％の１，２−ジヒドロキシ−メント−３−エン、及び約１〜約１０％、好ましくは、約３％〜約６％の１，２，４−トリヒドロキシ−メンタンを含むことを特徴とする、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
約７〜約１５％のｐ−シメンを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、少なくとも１つのセスキテルペンを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記少なくともつのセスキテルペンが、イソレデン、カラメン、レデン、アロ−アロマデンドレン、アロマデンドレンからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
最大５％の式３の化合物をさらに含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物；
【化７】
2014504627.tif 000034
【化８】
2014504627.tif 000035
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗ウイルス剤、抗菌剤、又は抗真菌剤などの多種多様な治療的使用に好適な殺菌特性を有する組成物に関する。特に、本発明は、動物における内服投与に好適な組成物を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
精油は、通常、供給源植物の部分の蒸気蒸留によって得られる。この油は、炭化水素の複合混合物であり、中には、１００を超える異なる化合物を含む油もある。精油中に見られる化合物の大部分は、モノテルペン、セスキテルペン、及びそれらの酸素化されたその誘導体に分類することができる。
【０００３】
モノテルペンは、２つのイソプレン単位から形成され、分子式Ｃ10Ｈ16を有し、非環式、単環式、又は二環式であり得る。酸化又は転位などの生化学的修飾によって、モノテルペン骨格を有する関連化合物が生成される。これらの誘導体は、モノテルペノイドと呼ばれる。著者の中には、モノテルペンという用語を、モノテルペン骨格を有する任意の化合物を指すために使用するものもいる。しかしながら、本明細書及び特許請求の範囲では、モノテルペンという用語を、分子式Ｃ10Ｈ16を有する化合物のみを指すために使用する。
【０００４】
セスキテルペンは、３つのイソプレン単位からなり、分子式Ｃ15Ｈ24を有する。本明細書及び特許請求の範囲では、セスキテルペンという用語を、分子式Ｃ10Ｈ15を有する化合物を指すために、また、セスキテルペノイドという用語を、セスキテルペンの酸素化された誘導体を指すために使用する。
【０００５】
科学及び代替医療の文献には、精油の生物学的活性に関する報告がたくさんある。多くの精油は、広範な抗微生物活性、抗ウイルス活性、抗寄生虫活性、及び抗真菌活性を有すると言われている。代替医療の文献の多くは、活性の事例証拠に基づいている。科学的研究は、十分に特徴付けられていない油の使用によって、しばしば混乱させられる。精油の組成は、植物系統、植物部分、原産国、季節、貯蔵条件などで顕著に異なり得る。特に興味深いのは、抗生物質耐性細菌に対するいくつかの精油の報告された活性である。特に問題となるのは、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（ＭＳＲＡ）の出現である。いくつかの精油は、ＭＳＲＡに対して効果があることが示されている。５％ティーツリー油は、ＭＳＲＡ脱コロニー化のための効果的なボディーウォッシュであることが報告されている。これらの肯定的な結果にもかかわらず、精油は、一般医療で採用されていない。致死量未満の濃度のティーツリー油の使用が、ヒト病原体における抗生物質耐性の発生をもたらし得るという懸念も生じている。（ＭｃＭａｈｏｎ  ｅｔ  ａｌ  "Ｈａｂｉｔｕａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｓｕｂ−ｌｅｔｈａｌ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｅａ  ｔｒｅｅ  ｏｉｌ（Ｍｅｌａｌｅｕｃａ  Ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ）  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｒｅｄｕｃｅｄ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐａｔｈｏｇｅｎｓ"，Ｊ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（２００７）  ５９，１２５−１２７）。
【０００６】
この広範囲の活性にもかかわらず、全身用抗生物質と比較したときの抗菌活性は、ともかく、わずかであると言わなければならない。例えば、ある研究で、伝統的な韓国の医療で使用される植物であるイワヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｉｗａｙｏｍｏｇｉ）の精油、及びその主な化合物であるボルネオール、α−テルピネオール、樟脳、１，８−シネオール、β−カリオフィレン、テルピネン−４−オールの抗微生物活性と、抗生物質アンピシリン及びゲンタマイシンとが比較された。（Ｃｈａ  Ｊｅｏｎｇ−Ｄａｎ，"Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｏｒａｌ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｏｉｌ  ｏｆ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｏｉｌ  ｏｆ  Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｉｗａｙｏｍｏｇｉ"，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００７  ３７，Ｎｏ  ３  １２９−１３６）。ボルネオール、α−テルピネオール、樟脳、１，８−シネオール、β−カリオフィレン、及びテルピネン−４−オールは全て、広範な細菌に対して阻害挙動を示したと同時に、ＭＩＣ（最小阻害濃度）及びＭＢＣ（最小殺菌濃度）は、アンピシリン及びゲンタマイシンの２×１０3ｍｇ／ｍｌ〜２５６×１０-3ｍｇ／ｍｌと比較して、約０．４ｍｇ／ｍｌ〜３．２ｍｇ／ｍｌであった。言い換えると、精油及びその成分のＭＩＣ値及びＭＢＣ値は、全身用抗生物質の場合よりも約１０００倍大きかった。
【０００７】
全身用抗生物質が有効であるためには、感染の部位でそのＭＩＣ／ＭＢＣ値に達することができなければならない。例えば、５００ｍｇ用量のアンピシリンカプセルの投与は、約３μｇ／ｍｌの平均ピーク血清レベルをもたらす。アンピシリンの１０００倍のＭＩＣ／ＭＢＣを有する化合物又は組成物の用量は、実用的でないだけでなく、患者にとって潜在的に毒性があることも明らかである。
【０００８】
上述のように、抗生物質の使用は、広範な抗生物質耐性生物を生じさせてきた。これは、処方抗生物質の乱用及び誤用、トリクロサンなどの局所消毒剤の乱用、並びに動物飼料中の成長促進剤としての抗生物質の幅広い使用などの、広範な要因によるものである。特に動物飼料中の成長促進剤としての抗生物質の幅広い使用は、懸念を生じさせている。米国内の抗生物質の７０％は、家畜によって消費されると推定されている。世界各国の政府は、動物生産における抗生物質の使用の段階的廃止を検討しつつある。抗生物質は、化粧品において、及び食糧生産においても広く使用されている。例えば、多くの包装済みの予めカットされている食品は、貯蔵期間を延長するために、抗菌溶液が噴霧されている。
【０００９】
特に、動物飼料業界において、現在の抗菌剤の使用に代わるものを提供することができるようにしたいという要望が明らかにある。
【００１０】
精油の中には、抗ウイルス活性を有すると言われているものもある。しかしながら、これらの報告は、通常、代替医療及び民間療法での使用に限られている。科学的な裏付けはほとんどない。ティーツリー油は、ヘルペス治療のための局所薬として提案されており、この活性についての科学的裏付けがいくつかある。
【００１１】
驚くべきことに、本発明者らは、広範な抗菌活性を有する精油から取得又は誘導し得る化合物であって、従来の精油とは異なり、現在の抗生物質の使用に対する実行可能な代替案又は補足案を提供し得る化合物を含む、相乗的なモノテルペノイド組成物を発見した。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】ＭｃＭａｈｏｎ  ｅｔ  ａｌ  "Ｈａｂｉｔｕａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｓｕｂ−ｌｅｔｈａｌ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｅａ  ｔｒｅｅ  ｏｉｌ（Ｍｅｌａｌｅｕｃａ  Ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ）  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｒｅｄｕｃｅｄ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐａｔｈｏｇｅｎｓ"，Ｊ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（２００７）  ５９，１２５−１２７
【非特許文献２】Ｃｈａ  Ｊｅｏｎｇ−Ｄａｎ，"Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｏｒａｌ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｏｉｌ  ｏｆ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｏｉｌ  ｏｆ  Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｉｗａｙｏｍｏｇｉ"，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００７  ３７，Ｎｏ  ３  １２９−１３６
【発明の概要】
【００１３】
本発明の第一の広範な形態によれば、以下のものを含む組成物が提供される；
（ａ）３０％〜８０％の少なくとも１つの式１を有する化合物
【００１４】
【化１】
2014504627.tif 000003
【００１５】
【化２】
2014504627.tif 000004
【００１６】
（ｂ）１０％〜４０％の少なくとも１つの式２の化合物
【００１７】
【化３】
2014504627.tif 000005
【００１８】
【化４】
2014504627.tif 000006
【００１９】
（ｃ）セスキテルペン、セスキテルペンアルコール、セスキテルペンエポキシド、ｐ−シメン、酸素化シクロヘキサン、酸素化シクロヘキセン、及びモノテルペン（ここで、画分中の任意のモノテルペンの量は、全組成の５％を超えない）からなる群から選択される０〜２０％の少なくとも１つの化合物。
【００２０】
本明細書及び特許請求の範囲において、％という用語は、別途示さない限り、ガスクロマトグラフィー分析によって決定したときのパーセンテージを指す。テルペン及び関連化合物の混合物の分析のためのガスクロマトグラフィー法は、天然物化学及びアロマ化学の分野において周知である。
【００２１】
驚くべきことに、本発明者らは、本発明の組成物が、治療に好適であると考えることができる濃度で、広範な細菌に対して有効であることを発見した。
【００２２】
式１及び２の化合物には、ｐ−メンタン骨格を有するモノテルペンの酸素化された誘導体が含まれる。モノテルペンは、天然物に広く見られ、式Ｃ１０Ｈ１６を有する。式１及び２の化合物は、モノテルペンの既知の天然源から得るもしくは誘導することができ、又は合成することができる。モノテルペン及びその酸素化された誘導体の供給源としては、ユーカリ油、カユプテの油、樟脳の油、カルダモンの油、ティーツリー油、ヒマラヤスギの油、及び糸杉の油が挙げられるが、これらに限定されない。好適な抽出方法は、当業者に公知である。
【００２３】
式１及び式２の酸素化された化合物は、親モノテルペンの酸化によって得ることができる。好適な出発モノテルペンとしては、αピネン、βピネン、サビネン、ミルセン、αフェランドレン、βフェランドレン、αテルピネン、βテルピネン、γテルピネン、リモネン、αリモネンジエポキシド、及びテルピノレンが挙げられる。これらの化合物は、天然に存在しており、種々の植物源から単離することができる。
【００２４】
これらの化合物の多くは、本質的に純粋な形態で市販されている。モノテルペンの酸化は、香料及び香水産業で使用される化合物を生産するために使用されている。モノテルペンの酸化は、有機フレーバー化学の分野において周知である。
【００２５】
α−テルピネンは、１，３−ジエンのディールス・アルダー環化を介して、分子酸素で容易に酸化させて、メント−２−エン、１，４−エンドペルオキシドを生成させることができる（下のスキーム１の反応１）ので、好適な出発材料である。過酸化物は、水とのさらなる反応を受けて、１−ヒドロペルオキシ−４−ヒドロキシ−メント−２−エンを生成させることができる（反応２）ので、有用な中間体である。その後の水酸化リチウムによる還元によって、例えば、１，４−ジヒドロキシメント−２−エンが得られる（反応３）。
【００２６】
【化５】
2014504627.tif 000007
【００２７】
α−テルピネンは、Ｓｕｇａ  ｅｔ  ａｌ"Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｍｏｎｏｔｅｒｐｅｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ＩＩＩ．Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  ｉｎｔｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｂｏｎｄｉｎｇ  ｏｆ  １−ｈｙｄｒｏｘｙ−ｐ−ｍｅｎｔｈ−３−ｅｎ−２−ｏｎｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｊａｐａｎ，４１，９４４−０４８（１９６８）に記載されている手順に従って、ｔ−ブチルクロメートで酸化することもできる。この反応から、１−ヒドロキシ−ｐ−メント−３−エン−２−オンが生成され（反応４）、これをその後、下のスキーム２に示すように、水素化して（反応５）、還元する（反応６）か、又は還元して（反応７）、水素化する（８）ことができる。
【００２８】
【化６】
2014504627.tif 000008
【００２９】
テルピネン−４−オールも好適な出発生成物であり、いくつかの反応によって、１，２，４−トリヒドロキシメンタンへと酸化することができる。これらの反応のうちの１つは、下のスキーム３に示されている通りである（Ｃｒｉｓｔｅａ，ｅｔ  ａｌ  "Ｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｔｒａｎｓ−ｄｉｈｉｄｒｏｘｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｅｒｐｉｎｅｎ−４−ｏｌ：ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｓｏｍｅ  ｓｔｅｒｉｏｓｏｍｅｒｓ  ｏｆ  ｐ−ｍｅｎｔｈａｎｅ−１，２，４−ｔｒｉｏｌ"，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｅｔｒｙ，１３，（９）９１５−９１８）。
【００３０】
【化７】
2014504627.tif 000009
【００３１】
１，４−ジヒドロキシメント−２−エンは、まず、アスカリドールをメント−２−エン−１，４−エンドペルオキシドへと加水分解し、その後、還元して、生成物化合物を生じさせることによって、アスカリドールから調製することができる。
【００３２】
【化８】
2014504627.tif 000010
【００３３】
モノテルペンの酸化は、多くの場合、化合物の混合物を生じさせる。本発明の組成物及び方法において、本発明の化合物の混合物は、混合物の成分が、不活性かつ無毒であるか、又は非常に低濃度で存在するかのいずれかの場合、許容することができる。場合によっては、親モノテルペンが化学的に又はキラル的に純粋である必要がないこともある。
【００３４】
式１の好ましい化合物としては、αテルピネオール（１）、β−テルピネオール（２）、γ−テルピネオール（３）、テルピネン−４−オール（４）、メントール（５）、チモール（６）、カルバクロール（７）、カルベオール（８）、イソピペリテノール（９）、ペリリルアルコール（１０）、８−ヒドロキシ−ｐ−シメン（１１）、イソプレゴール（１２）、リモネン−１０−オール（１３）、及びジヒドロカルベオール（１４）、並びに４−イソプロピル−１−メチルシクロヘキセノール（１５）が挙げられる。
【００３５】
【化９】
2014504627.tif 000011
【００３６】
好ましい組成物は、テルピネン−４−オールを主成分として含む。テルピネン−４−オールは天然に見られ、ティーツリー油の主成分である。テルピネン−４−オールはまた、ラセミ形態で、かつＲ及びＳ異性体として市販されている。ティーツリー油において、キラル純度は、（＋）−（４Ｒ）−αテルピネオールが７５％、（−）−４Ｓ−α−テルピネン４−オールが２５％であることが分かっている（Ｂｕｒｆｉｅｋｄ  ａｎｄ  Ｓｈｅｐｐａｒｄ  Ｈａｎｇｅｒ"，"ｓｕｐｅｒ  Ｃｌｏｎｅ  ８８  −  ＜ｅｌａｌｅｃｕａ  Ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ−ｗｈａｔ  ｉｓ  ｉｔｓ  ｖａｌｕｅ？"，ｈｔｔｐ：／／ａｔｌａｎｔｉｃｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｃｏｍ／ｔｅａｔｒｅｅ．ｐｄｆ）。好ましくは、テルピネン−４−オールは、組成物の約４０％〜約７０％、好ましくは、約４５％〜約６５％、好ましくは、約４８％〜約６０％で存在する。好ましくは、テルピネン−４−オールのキラル純度は、天然に見られるキラル純度を反映する。
【００３７】
好ましくは、組成物は、少なくとも２つの式１の化合物を含む。好ましくは、第２の化合物は、α−テルピネオールである。典型的な組成物は、約４０％〜約７０％、好ましくは、約４５％〜約６５％、好ましくは、約４８％〜約６０％のテルピネン−４−オール、及び約２％〜約１５％、好ましくは、約４％〜約１２％、最も好ましくは、約５％〜約１０％のα−テルピネオールを含む。
【００３８】
一実施形態では、式１の化合物は、テルピネン−４−オール及びα−テルピネオールから本質的になる。
【００３９】
本明細書で使用される場合、「から本質的になる」という語句は、関連する開示又は特許請求の範囲の範囲を、指定された化合物、さらに、開示及び／又は特許請求された主題の基本的かつ新規の特徴（複数可）に大きくは影響を及ぼさない化合物に限定する。例えば、式１の化合物がテルピネン−４−オール及びα−テルピネオール「から本質的になる」組成物は、記載された化合物が、合わせて、式１の化合物の少なくとも８０％又は少なくとも８５％又は少なくとも９０％又は少なくとも９５％又は少なくとも９７．５％又は少なくとも９９％に相当することを意味する。
【００４０】
式２の好適な化合物としては、以下のものが挙げられる：
【００４１】
【化１０】
2014504627.tif 000012
【００４２】
【化１１】
2014504627.tif 000013
【００４３】
好ましくは、組成物は、約１０％〜約４０％、好ましくは、約１５％〜約３５％、好ましくは、約２０〜約３０％の式２のジ酸素化化合物及びトリ酸素化化合物を含む。
【００４４】
好ましくは、ジ酸素化化合物対トリ酸素化化合物の比は、約１：１〜５：１、好ましくは、約１．５：１〜約４：１、最も好ましくは、約２：１〜約３：１である。
【００４５】
特に好適な組成物は、約１〜約４％、好ましくは、約２〜約３％の２−ヒドロキシ−１，４−シネオール、約５％〜約１５％、好ましくは、約６％〜約１２％、好ましくは、約８％〜約１０％の１，４−ジヒドロキシ−メント−２−エン、約０．５％〜約５％、好ましくは、約１％〜約４％の１，２−ジヒドロキシ−メント−３−エン、及び約１〜約１０％、好ましくは、約２％〜約８％、好ましくは、約３％〜約６％の１，２，４−トリヒドロキシ−メンタンを含む式２の化合物の画分を含む。
【００４６】
これらの化合物のいくつかは天然に存在し、精油中に見られる。２−ヒドロキシ−１，４−シネオールは、ローゼル（Ｈｉｂｉｓｃｕｓ  ｓａｂｄａｒｉｆｆａ  Ｌ）由来の抽出物中に見出すことができる。それは市販もされている。シメノールは、セージ精油（セージ（Ｓａｌｖｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ））及びビャクシン属の植物の精油中に見られ、４，６−ジヒドロキシ−ｐ−メント−１−エンは、クミン油中に見られ、１，４−ジヒドロキシ−ｐ−メント−２−エンは、ペパーミント油中に、１，２−ジヒドロキシ−ｐ−メント−３−エンは、フェルラ・イェシュケアナ（Ｆｅｒｕｌａ  ｊａｅｓｃｈｃｈｋｅａｎａ）中に、１，２，４−トリヒドロキシ−ｐ−メンタンは、ザントキシルム・ブンドルガ（Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ  ｂｕｎｄｒｕｇａ）果実油中に見られる。
【００４７】
組成物は、式１及び２の化合物以外に、最大２０％の化合物を含むこともできる。これらの他の化合物としては、セスキテルペン及びその酸素化された誘導体、ｐ−シメン、酸素化シクロヘキサン、酸素化シクロヘキセン、並びに低レベル（５％未満）のモノテルペンを挙げることができる。さらなる化合物はいずれも、無毒であるか、又は毒性レベル未満で存在するべきであることが理解される。一実施形態では、組成物は、最大１５ｗｔ％のｐ−シメンを含むことができる。
【００４８】
酸素化シクロヘキセンという用語は、＝Ｏ、−ＯＯＨ、又はＯＨなどの１以上の酸素基で置換されているシクロヘキセン骨格を有する任意の化合物を指す。シクロヘキセンは、メチル又はエチルでさらに置換されていてもよい。好ましい化合物は、４−メチル−４−ヒドロキシ−シクロヘキス−３−エノンである。
【００４９】
酸素化シクロヘキサンという用語は、＝Ｏ、−ＯＯＨ、又はＯＨなどの１以上の酸素基で置換されているシクロヘキサン骨格を有する任意の化合物を指す。シクロヘキサンは、メチル又はエチルでさらに置換されていてもよい。
【００５０】
組成物は、最大５％の式３の化合物を含むこともできる；
【００５１】
【化１２】
2014504627.tif 000014
【００５２】
【化１３】
2014504627.tif 000015
【００５３】
式３の化合物は、親モノテルペンの酸化的開環反応によって形成させることができる。これは、式１の化合物を生成させる酸化反応の副生成物として生じることができる。特に好ましい化合物としては、シス及び／又はトランス６−オキソ−３−イソプロピル−ヘプト−２−エナール及び６−オキソ−３−イソプロピルヘプテン酸が挙げられる。
【００５４】
立体異性体：
本発明の特定の化合物はキラル中心を含む。ラセミ混合物とジアステレオマー混合物の両方、及びそのエナンチオマー又はジアステレオマーパートナーを実質的に含まない、単離又は合成された個々の光学異性体は全て、本発明の範囲内である。ラセミ混合物は、光学活性付加物、例えば、酸又は塩基とともに形成されるジアステレオマー塩の分離と、その後の光学活性物質への逆変換などの、周知の技術によって、その個々の、実質的に光学的に純粋な異性体に分離することができる。所望の光学異性体は、所望の出発材料の適切な立体異性体から始めて、立体特異的反応によって合成することができる。
【００５５】
プロドラッグ：
本発明の化合物のプロドラッグも企図される。「プロ−ドラッグ」及び「プロドラッグ」という用語は、本明細書において互換的に使用され、そのようなプロドラッグを動物に投与したときに、式１、２、又は２ａに係る活性のある親化合物をインビボで放出する任意の化合物を指す。プロドラッグは、式１又は２の化合物中に存在する１以上の官能基を、修飾（複数可）がインビボで切断されて、親化合物を放出することができるような形で修飾することによって調製することができる。
【００５６】
プロドラッグには、式１、２、又は３の化合物が含まれ、ここで、式１、２、又は３の化合物中のヒドロキシ基、カルボキシ基、又はカルボニル基は、インビボで切断されて、遊離ヒドロキシル基を再生することができる任意の基に結合している。プロドラッグの例としては、化合物中のヒドロキシ官能基のエステル（例えば、アセテート、ジアルキルアミノアセテート、ホルメート、ホスフェート、スルフェート、及びベンゾエート誘導体）並びにカルボキシル官能基のエステル基（例えば、エチルエステル、モルホリノエタノールエステル）、ケトン及びアルデヒド官能基のオキシム、アセタール、ケタール、及びエノールエステルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５７】
本発明の医薬組成物は、とりわけ、従来の混合、溶解、封入、凍結乾燥、又は乳化などの当技術分野で周知の方法によって製造することができる。組成物は、例えば、顆粒、粉末、錠剤、カプセル、シロップ、坐剤、注射液、エマルジョン、エリキシル、懸濁液、又は溶液の形態であることができる。本組成物は、例えば、経口投与によるもの、経粘膜投与によるもの、直腸投与又は皮下投与によるもの、及び髄腔内、静脈内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、眼球内、又は心室内注射などの、様々な投与経路用に製剤化することができる。本発明の１つ又は複数の化合物は、徐放製剤としての注射液などで、全身にではなく、局所に投与することもできる。以下の剤形は一例として示されており、本発明を限定するものとみなされるべきではない。
【００５８】
経口、口腔、及び舌下投与のために、粉末、懸濁液、顆粒、錠剤、丸剤、カプセル剤、ゲルキャップ剤、及びカプレット剤が、固体剤形として許容される。これらは、例えば、本発明の１以上の化合物、又は医薬として許容し得るその塩もしくは互変異性体を、デンプン又は他の添加剤などの、少なくとも１つの添加剤又は賦形剤と混合することによって調製することができる。好適な添加剤又は賦形剤は、スクロース、ラクトース、セルロース糖、マンニトール、マルチトール、デキストラン、ソルビトール、デンプン、寒天、アルギネート、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントゴム、アラビアゴム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成もしくは半合成ポリマーもしくはグリセリド、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、及び／又はポリビニルピロリドンである。任意に、経口剤形は、投与を助ける他の成分、例えば、不活性希釈剤、又はステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、又はパラベンもしくはソルビン酸などの防腐剤、又はアスコルビン酸、トコフェロール、もしくはシステインなどの抗酸化剤、崩壊剤、結合剤、増粘剤、緩衝剤、甘味剤、香味剤又は芳香剤を含むことができる。さらに、染料又は顔料を識別用に添加することができる。錠剤及び丸剤はさらに、当技術分野で公知の好適なコーティング材で処理することができる。
【００５９】
経口投与用の液体剤形は、医薬として許容し得るエマルジョン、シロップ、エリキシル、懸濁液、スラリー、及び溶液の形態であることができ、これらは、水などの不活性希釈剤を含むことができる。医薬製剤は、限定されないが、油、水、アルコール、及びこれらの組合せなどの滅菌液を用いて、液体懸濁液又は溶液として調製することができる。医薬として好適な界面活性剤、懸濁化剤、乳化剤を、経口又は非経口投与用に添加することができる。
【００６０】
鼻腔又は口腔投与のために、医薬製剤は、適切な溶媒、並びに任意に、限定されないが、安定化剤、抗微生物剤、抗酸化剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、バイオアベイラビリティー調整剤、及びこれらの組合せなどの他の化合物を含む、スプレー又はエアロゾルであることができる。エアロゾル製剤用の噴射剤としては、圧縮空気、窒素、二酸化炭素、又は炭化水素系低沸点溶媒を挙げることができる。本発明の１つ又は複数の化合物は、ネブライザーなどからエアロゾルスプレー体裁の形態で好都合に送達される。
【００６１】
注射用剤形としては、通常、好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤を用いて調製し得る水性懸濁液又は油性懸濁液が挙げられる。注射用形態は、溶液相であるか、又は懸濁液の形態であることができ、これは、溶媒又は希釈剤とともに調製される。許容し得る溶媒又はビヒクルとしては、滅菌水、リンガー溶液、又は等張水性食塩水溶液が挙げられる。或いは、滅菌油を溶媒又は懸濁化剤として利用することができる。好ましくは、油又は脂肪酸は非揮発性であり、これには、天然油もしくは合成油、脂肪酸、モノグリセリド、ジグリセリド、又はトリグリセリドが含まれる。
【００６２】
注射のために、製剤は、任意に、安定化剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、バイオアベイラビリティー調整剤、及びこれらの組合せを含むことができる。化合物は、注射による、例えば、ボーラス注射又は連続注入による、非経口投与用に製剤化することができる。注射用の単位剤形は、アンプル中又は多用量容器中に入れることができる。
【００６３】
直腸投与のために、医薬製剤は、腸、Ｓ字状結腸、及び／又は直腸内で化合物を放出する坐剤、軟膏、浣腸剤、錠剤、又はクリームの形態であることができる。直腸坐剤は、本発明の１以上の化合物、又はこの化合物の医薬として許容し得る塩もしくは互変異性体を、通常の貯蔵温度では固相で存在し、かつ体内、例えば、直腸内で薬物を放出するのに好適な温度では液相で存在する、許容し得るビヒクル、例えば、ココアバター又はポリエチレングリコールと混合することによって調製される。油は、軟ゼラチン型の製剤及び坐剤の調製において利用することもできる。水、食塩水、水性デキストロース、及び関連する糖溶液、並びにグリセロールは、懸濁製剤の調製において利用することができ、これは、ペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、又はカルボキシメチルセルロースなどの懸濁化剤、並びに緩衝剤及び防腐剤を含むこともできる。
【００６４】
化合物を経皮投与することもできる。リンパ節周辺への皮膚適用によるリンパ系への直接的な経皮摂取が可能になるように、化合物が皮膚を通じて容易に吸収されることが観察されている。
【００６５】
本明細書で使用される化合物の「有効量」及び「治療的有効量」という用語は、所望の治療的又は生理的な効果又は結果をもたらすのに十分な化合物又はその１以上の混合物の量を意味する。望ましくない効果、例えば、副作用が、所望の治療効果とともに現われることがある；したがって、医師は、どれが適切な「有効量」であるかを決定する際に、潜在的利益と潜在的リスクのバランスを取る。必要とされる正確な量は、対象の種、年齢、及び全身状態、投与様式などによって、対象ごとに異なる。したがって、正確な「有効量」を特定することができない場合がある。しかしながら、任意の個々の事例における適切な「有効量」は、ルーチンの実験のみを用いて、当業者によって決定されることができる。
【発明を実施するための形態】
【００６６】
実施例１
以下の組成を有する組成物を調製し、参照記号ＭＪＲ−１を割り当てた。
２−ヒドロキシ１，４−シネオール−４％
【００６７】
【化１４】
2014504627.tif 000016
【００６８】
１α，４β−ジヒドロキシ−メント−２−エン−５％
【００６９】
【化１５】
2014504627.tif 000017
【００７０】
１α，２βジヒドロキシメント−３−エン−２％
【００７１】
【化１６】
2014504627.tif 000018
【００７２】
１α，２β，４−トリヒドロキシ−メンタン−５％
【００７３】
【化１７】
2014504627.tif 000019
【００７４】
１α，４α−ジヒドロキシ−メント−２−エン−５％
【００７５】
【化１８】
2014504627.tif 000020
【００７６】
テルピネン−４−オール−５６．４％
【００７７】
【化１９】
2014504627.tif 000021
【００７８】
α−テルピネオール−６％
【００７９】
【化２０】
2014504627.tif 000022
【００８０】
ｐ−シメン  ８％
【００８１】
【化２１】
2014504627.tif 000023
【００８２】
この組成物の残りの部分は、微量の式１及び式２の化合物、また、微量のセスキテルペンを含む。
【００８３】
１．第１相試験
研究デザイン
２９人の対象を、５人の男性及び４〜５人の女性からなる３つの等しい投与グループに分けた。これらの対象は、１９〜５３歳であり、正常体重であった。この３つのグループを、実施例１の組成物の経口カプセル用量の以下の投薬レジメンに供した；グループ１−食後１回の６００ｍｇ用量；食後１回の７５０ｍｇ用量、及び８時間間隔で３回、５日間の３００ｍｇ用量。
【００８４】
結果
投与１時間後及び２時間後の生命活動に重要な身体パラメータ、収縮期及び拡張期血圧、並びに心拍数に対する単回用量の効果を観察した。臨床的に重要な変化は観察されなかった。
【００８５】
投与前及び投与１４日後に、尿化学、尿沈渣、血液化学、及び血液学的プロファイルを測定した。結果は、全ての投薬レジメンの後に、尿沈渣、尿、血液化学、及び血液学的プロファイルのレベルが正常値にあることを示した。これらの研究結果は、肝臓への明白な害がなく、その場合、血液中の全体的及び直接的なビリルビン、ＳＧＯＴ、及びアルカリホスファターゼの総レベルが正常範囲内であり、かつ尿中にビリルビンもウロビリンも見られなかったことを示している。同様の結果は腎臓でも観察され、その場合、血液中の総タンパク質アルブミン、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、及びクレアチニンのレベルが正常であり、かつ尿中にタンパク質も、血液細胞も、白血球も見られなかった。尿中にグルコース及びケトン体が存在しないことから、６００ｍｇの本発明の組成物が糖生成にも影響を及ぼさないことも示された。血液学的プロファイル（特に、白血球及び赤血球、ヘモグロビン、ヘマトクリット、血小板（ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｅ）（血小板（ｐｌａｔｅｌｅｔ））のレベル、及びこれらの対象物の凝固時間）もまた、この用量に影響されなかった。さらに、尿中でのシュウ酸Ｃａ、三リン酸塩、又は尿酸結晶の生成もなかった。
【００８６】
この試験から出すことができる結論は、実施例１の組成物が対象において十分に許容され、肝臓、腎臓、及び血液（ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ）などの生命維持に重要な器官に影響を及ぼす可能性が低く、また、それが、結晶尿を引き起こさなかったということである。
【００８７】
実施例２
いくつかの異なる微生物に対する従来のメラレウカ油（ＴＴＯ）、ＭＡＣ、及び精製（９８．９％）テルピネン−４−オールの抗微生物活性の違いを評価するために、比較試験を実施した。
【００８８】
黄色ブドウ球菌は、正常なヒトの皮膚に見られる通性嫌気性グラム陽性細菌である。それは、広範な感染、及び院内感染の主な原因を生じさせることがある。大腸菌（Ｅｓｃｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）は、グラム陰性桿菌である。緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）は、広範な院内感染の原因となるグラム陰性桿菌である。ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）は、食品媒介性疾病の原因となるグラム陰性桿菌である。リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）はグラム陽性桿菌である。それは、最も毒性の強い食品媒介性病原体の１つである。実験は、ビタミンＥを乳化剤として用いた１０％の水可溶化溶液に対して実施した。ＴＴＯは、本発明の好ましい組成物の主要な成分であるテルピネン−４−オールの含有量が多いので、ＴＴＯを比較用油として選んだ。上で論じたように、ＴＴＯの５％溶液は、ＭＲＳＡの脱コロニー化洗浄液として提案されている。
【００８９】
培養準備
１．ストック培養物をトリプトン大豆寒天プレートの表面にストリークし、３６℃で１８〜２４時間インキュベートした。
２．新鮮な寒天プレートの表面にストリークし、１８〜２４時間インキュベートすることによって、第２の継代培養物を第１の継代培養物から調製した。
３．約５〜１０ｍＬの滅菌水を滅菌チューブに添加した。
４．白金耳量の作業用培養物（第２の継代培養物）を希釈液中に移した。
５．微生物試験懸濁液を、１％ペプトン溶液を用いた連続希釈によってカウントし、２つ１組の希釈液を別々のペトリ皿にプレーティングした。
６．これらのプレートに、約４６℃に冷却した１２〜１５ｍｌの溶融トリプトン大豆寒天を注ぎ入れた。寒天を固まらせておき、３６℃で４８時間インキュベートした。
７．試験懸濁液中のｃｆｕ／ｍＬの数を計算した。
【００９０】
試験手順
手順を室温で実施した。回復時間は３０分及び２４時間とした。
１．攻撃用生物ストックを脱イオン水及び水溶性ビタミンＥへの生物ストック懸濁液に無菌的に添加した。水溶性形態のビタミンＥは、水性媒体中での組成物の水不溶性化合物の分散をもたらすための界面活性剤として添加された。水溶性形態のビタミンＥは、ＢＡＳＦによってＳｏｌｕＥという商標名で製造されている。
２．試験生成物を攻撃用混合物に添加した。
３．この混合物をシェーカー中に３０分＋／−３０秒間置いた。
４．接触時間の最後に、１ｍＬの試験混合物をピペッティングして、３％ｔｗｅｅｎ  ８０を含む９ｍＬの栄養培養液を含むチューブに入れた。
５．１ｍＬの中和した混合物の試料（栄養培養液＆ｔｗｅｅｎ＋攻撃用試験懸濁液）を栄養ペトリ皿にプレーティングした。
６．０．１％ペプトン溶液の連続希釈を行ない、１ｍＬ部を２つ１組でプレーティングした。
７．これらのプレートに溶融トリプトン大豆寒天プレートを重層し、３６＋／−１℃で４８時間インキュベートした。
８．試験混合物中のｃｆｕ／ｍＬの数を計算した。
９．２４時間後に、工程４〜７を繰り返した。
【００９１】
試験結果
２４時間の接触時間の後の攻撃用生物の対数減少を、以下の式を用いて計算した：
Ｌｏｇ  Ｒ＝Ｌｏｇ  Ａ−Ｌｏｇ  Ｂ
式中、Ｒ＝減少
Ａ＝試験溶液中の細菌の数
Ｂ＝所望の接触時間にわたってインキュベートした植菌試験溶液から回収した細菌の数
【００９２】
試験細菌の９９．９％を死滅させた有効濃度（ＭＢＣ）を決定する。結果をまとめ、下の表１に示す。
【００９３】
【表１】
2014504627.tif 000024
【００９４】
この表は、各試験におけるテルピネン−４−オールのレベルの違いも示している。ティーツリー油は、４９％のテルピネン−４−オールを有しており、したがって、それぞれのＭＢＣをティーツリー油の含有量によって補正すると、黄色ブドウ球菌のＭＢＣ値が比較可能となる（すなわち、ＴＴＯでの約５００ｐｐｍは、テルピネン−４−オールでの２５０ｐｐｍと比較される）。本発明の組成物について同じ計算をすると、ＭＢＣ値は、１０ｐｐｍから１６．７６ｐｐｍに変わる。ティーツリー油と本発明の組成物の間で認められた効力の違いを、テルピネン−４−オールのレベルがわずかに高いことのせいにすることができないことは明らかである。
【００９５】
本発明の化合物の値は、ＴＴＯ及びテルピネン−４−オールの値を顕著に下回り、これは、相乗効果を強く示唆する。１０ｐｐｍでのＭＣＣ値が全身用抗生物質について許容し得ると考えられる範囲内にあることに留意すべきである。例えば、そのＭＣＣ値が約３０ｐｐｍ以上である場合、大半の細菌は、特定の抗生物質に耐性があると考えられる。
【００９６】
本発明の組成物は、ｐ−シメン及びα−テルピネオールも含む。これらの化合物は両方ともＴＴＯ中に存在する。本組成物中の各々の含有量は、ＴＴＯ中のそれとは異なる。６．５％及び８％と比較して、Ｐ−シメンは、通常、ＴＴＯ中に、約１．３％で存在し、α−テルピネオールは、約２０．９％で存在する。本発明者らは、これらの化合物の抗菌活性を検討しなかったが、これは、以前に他の著者らによって何度も行なわれている。一例として、Ｃａｒｏｎ  ａｎｄ  Ｒｉｌｅｙ，"Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍａｊｏｒ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｏｉｌ  ｏｆ  Ｍｅｌａｌｅｕｃａ  Ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ"，Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ  １９９５  ７８，２６４−２６９がある。培養液希釈法によって得られたＭＩＣ  ａ（最小阻害濃度）及びＭＢＣ値についての結果の概要を下の表２にまとめる。
【００９７】
【表２】
2014504627.tif 000025
【００９８】
異なる実験条件下で得られた結果を比較するのは困難であると認められる。この困難は、本報告で述べた通りであり、溶解性及び濁度の問題に関して困難に直面した。特に、これらの化合物のうちのいくつかの水不溶性のために、精密測定が困難になり、各研究者がこれらの問題に対処するやり方によって、最終的な結果が影響を受けることがある。それでも、個々の報告に内部的な一貫性があると考えるのは妥当である。
【００９９】
ここで表２に戻ると、テルピネン−４−オールのＭＩＣ値が表１の値と異なることが分かる。これは、異なる実験デザインによるものと考えることができる。しかしながら、これらのデータは、α−テルピネオールの活性がテルピネン−４−オールの活性と類似していること、及びｐ−シメンに全く効果がないことを確かに示している。
【０１００】
残りの化合物は、ジ酸素化又はトリ酸素化モノテルペン誘導体である。本発明者らは、これらの化合物の報告された抗菌活性を全く知らない。
【０１０１】
理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らは、本発明の組成物が相乗的活性を示すと考えている。
【０１０２】
実施例３
クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に対する本発明の組成物の抗微生物活性の有効性を評価するために、さらなる研究を実施した。クロストリジウム・ディフィシレは、競合する細菌が抗生物質によって全滅させられたときに、下痢及び他の腸疾患を引き起こす嫌気性細菌である。
【０１０３】
実験手順
クロストリジウム攻撃用微生物のクロストリジウム・ディフィシレＡＣＭ  ５０４７を３７℃で２４時間インキュベートした後、スプレッドプレート法を用いてコロンビアウマ血液寒天上に継代培養した。コロンビアＨＢＡプレートを嫌気的に３７℃で２日間インキュベートし、目視可能なコロニーをカウントした。
【０１０４】
１０ｖ／ｖ％の本発明の組成物の試料を水に入れて調製した。この１０ｖ／ｖ％溶液を滅菌脱イオン水で希釈し、１０ｍｌの各試験濃度を滅菌試験管に添加した。１００μｍｌの試験培養物を各試験希釈液に添加した。
【０１０５】
結果を下の表３に示す。
【０１０６】
【表３】
2014504627.tif 000026
【０１０７】
実施例４
プロテウス・ブルガリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）ＮＣＴＣ  ４６３５及び大腸菌ＮＣＴＣ  ９００１での死滅時間を評価するために、さらなる研究を実施した。プロテウス・ブルガリスは、尿路及び傷口感染を引き起こすことができる桿状グラム陰性細菌である。
【０１０８】
【表４】
2014504627.tif 000027
【０１０９】
上記の結果は、本発明の組成物が、これらの細菌の９９．９％を５０ｐｐｍ及び２５ｐｐｍの濃度で速やかに死滅させるのに有効であることを示している。上記の大腸菌についての以前の結果は、９９．９％が、２４時間で、１０ｐｐｍで死滅することを示している。
【０１１０】
本発明の組成物は、広範な生物に対して驚くほど有効であることが分かる。その有効性は、個々の成分の既知の活性に基づいては予測することができず、したがって、相乗的な関係性が示唆される。例えば、同様の、しかし、わずかに低いレベルのテルピネン−４−オールを有するティーツリー油は、培養液希釈法（ＭａＭａｈｏｎら）で測定したとき、大腸菌で０．５％（５０００ｐｐｍ）、黄色ブドウ球菌で０．５％（５０００ｐｐｍ）、及びサルモネラ属種（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐ．）で０．２５％（２５００ｐｐｍ）、ＭＩＣを有すると報告されている。これは、各々の生物で１０ｐｐｍ（０．００１１％）のＭＣＣを示した実施例１の組成物と比較することができる。異なる試験条件間での直接的な比較はできないが、２５０及び５００という因数は、顕著であるとみなされるはずであり、また、攻撃条件の違いによって説明することはできないと考えられる。
【０１１１】
本明細書に記載され、特許請求された本発明に対して、その精神及び範囲を逸脱することなく、様々な他の変更及び修正を行なうことができることが理解されるであろう。
【手続補正書】
【提出日】平成25年12月13日(2013.12.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】
以下のものを含む組成物；
（ａ）３０％〜８０％の少なくとも１つの式１を有する化合物
【化１】
2014504627.tif 000038
【化２】
2014504627.tif 000039
【化３】
2014504627.tif 000040
【化４】
2014504627.tif 000041
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１５】
最大５％の式３の化合物をさらに含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物；
【化７】
2014504627.tif 000042
【化８】
2014504627.tif 000043
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
科学及び代替医療の文献には、精油の生物学的活性に関する報告がたくさんある。多くの精油は、広範な抗微生物活性、抗ウイルス活性、抗寄生虫活性、及び抗真菌活性を有すると言われている。代替医療の文献の多くは、活性の事例証拠に基づいている。科学的研究は、十分に特徴付けられていない油の使用によって、しばしば混乱させられる。精油の組成は、植物系統、植物部分、原産国、季節、貯蔵条件などで顕著に異なり得る。特に興味深いのは、抗生物質耐性細菌に対するいくつかの精油の報告された活性である。特に問題となるのは、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（ＭＲＳＡ）の出現である。いくつかの精油は、ＭＲＳＡに対して効果があることが示されている。５％ティーツリー油は、ＭＲＳＡ脱コロニー化のための効果的なボディーウォッシュであることが報告されている。これらの肯定的な結果にもかかわらず、精油は、一般医療で採用されていない。致死量未満の濃度のティーツリー油の使用が、ヒト病原体における抗生物質耐性の発生をもたらし得るという懸念も生じている。（ＭｃＭａｈｏｎ  ｅｔ  ａｌ  "Ｈａｂｉｔｕａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｓｕｂ−ｌｅｔｈａｌ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｅａ  ｔｒｅｅ  ｏｉｌ（Ｍｅｌａｌｅｕｃａ  Ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ）  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｒｅｄｕｃｅｄ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐａｔｈｏｇｅｎｓ"，Ｊ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（２００７）  ５９，１２５−１２７）。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
この広範囲の活性にもかかわらず、全身用抗生物質と比較したときの抗菌活性は、ともかく、わずかであると言わなければならない。例えば、ある研究で、伝統的な韓国の医療で使用される植物であるイワヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｉｗａｙｏｍｏｇｉ）の精油、及びその主な化合物であるボルネオール、α−テルピネオール、樟脳、１，８−シネオール、β−カリオフィレン、テルピネン−４−オールの抗微生物活性と、抗生物質アンピシリン及びゲンタマイシンとが比較された。（Ｃｈａ  Ｊｅｏｎｇ−Ｄａｎ，"Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｏｒａｌ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｏｉｌ  ｏｆ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｏｉｌ  ｏｆ  Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｉｗａｙｏｍｏｇｉ"，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００７  ３７，Ｎｏ  ３  １２９−１３６）。ボルネオール、α−テルピネオール、樟脳、１，８−シネオール、β−カリオフィレン、及びテルピネン−４−オールは全て、広範な細菌に対して阻害挙動を示したと同時に、ＭＩＣ（最小阻害濃度）及びＭＢＣ（最小殺菌濃度）は、アンピシリン及びゲンタマイシンの２×１０-3ｍｇ／ｍｌ〜２５６×１０-3ｍｇ／ｍｌと比較して、約０．４ｍｇ／ｍｌ〜３．２ｍｇ／ｍｌであった。言い換えると、精油及びその成分のＭＩＣ値及びＭＢＣ値は、全身用抗生物質の場合よりも約１０００倍大きかった。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
【化１】
2014504627.tif 000044
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
【化３】
2014504627.tif 000045
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
【化４】
2014504627.tif 000046
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
好ましい組成物は、テルピネン−４−オールを主成分として含む。テルピネン−４−オールは天然に見られ、ティーツリー油の主成分である。テルピネン−４−オールはまた、ラセミ形態で、かつＲ及びＳ異性体として市販されている。ティーツリー油において、キラル純度は、（＋）−（４Ｒ）−αテルピネオールが７５％、（−）−４Ｓ−α−テルピネン４−オールが２５％であることが分かっている（Ｂｕｒｆｉｅｋｄ  ａｎｄ  Ｓｈｅｐｐａｒｄ  Ｈａｎｇｅｒ"，"ｓｕｐｅｒ  Ｃｌｏｎｅ  ８８  −  ＜Ｍｅｌａｌｅｃｕａ  Ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ−ｗｈａｔ  ｉｓ  ｉｔｓ  ｖａｌｕｅ？"，ｈｔｔｐ：／／ａｔｌａｎｔｉｃｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｃｏｍ／ｔｅａｔｒｅｅ．ｐｄｆ）。好ましくは、テルピネン−４−オールは、組成物の約４０％〜約７０％、好ましくは、約４５％〜約６５％、好ましくは、約４８％〜約６０％で存在する。好ましくは、テルピネン−４−オールのキラル純度は、天然に見られるキラル純度を反映する。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
【化１３】
2014504627.tif 000047
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９５】
本発明の化合物の値は、ＴＴＯ及びテルピネン−４−オールの値を顕著に下回り、これは、相乗効果を強く示唆する。１０ｐｐｍでのＭＢＣ値が全身用抗生物質について許容し得ると考えられる範囲内にあることに留意すべきである。例えば、そのＭＢＣ値が約３０ｐｐｍ以上である場合、大半の細菌は、特定の抗生物質に耐性があると考えられる。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１０】
本発明の組成物は、広範な生物に対して驚くほど有効であることが分かる。その有効性は、個々の成分の既知の活性に基づいては予測することができず、したがって、相乗的な関係性が示唆される。例えば、同様の、しかし、わずかに低いレベルのテルピネン−４−オールを有するティーツリー油は、培養液希釈法（ＭａＭａｈｏｎら）で測定したとき、大腸菌で０．５％（５０００ｐｐｍ）、黄色ブドウ球菌で０．５％（５０００ｐｐｍ）、及びサルモネラ属種（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐ．）で０．２５％（２５００ｐｐｍ）、ＭＩＣを有すると報告されている。これは、各々の生物で１０ｐｐｍ（０．００１１％）のＭＢＣを示した実施例１の組成物と比較することができる。異なる試験条件間での直接的な比較はできないが、２５０及び５００という因数は、顕著であるとみなされるはずであり、また、攻撃条件の違いによって説明することはできないと考えられる。
【国際調査報告】
2014504627.tif 000048
2014504627.tif 000049
2014504627.tif 000050
2014504627.tif 000051