(57)【要約】【課題】  ナノエマルジョン組成物およびその製造方法を提供すること。【解決手段】  本発明のナノエマルジョン組成物はアスタキサンチンを含むことができる。本発明のナノエマルジョン組成物の製造方法は、アスタキサンチンを形成する段階と、水相成分と油相成分とを混合して混合物を形成する段階と、前記混合物に前記アスタキサンチンを投入して混合する段階と、前記アスタキサンチンの投入された混合物に圧力を加える段階とを含むことをできる。本発明のナノエマルジョン組成物は、アスタキサンチンの安定性を改善して皮膚または体内吸収率を向上させることができるようにする。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アスタキサンチンを含む、ナノエマルジョン組成物。
【請求項２】
前記アスタキサンチンはヘマトコッカス藻(Haematococcus pluvialis)から超臨界抽出して得られることを特徴とする、請求項１に記載のナノエマルジョン組成物。
【請求項３】
補助抗酸化剤０．１〜５．０重量％、界面活性剤０．１〜５．０重量％、柔軟化剤８．０〜１２．０重量％、およびオイル類０．１〜５．０重量％をさらに含む、請求項１に記載のナノエマルジョン組成物。
【請求項４】
前記補助抗酸化剤はトコフェロール、ヒドロキシジメトキシベンジルマロネート、およびジエチルヘキシルシリンギリデンマロネートの中から選ばれる１種以上を含む、請求項３に記載のナノエマルジョン組成物。
【請求項５】
前記界面活性剤はＰＰＧ−２６−ブテス−２６、ＰＥＧ−４０水添ヒマシ油、ポリソルベート３０、ポリソルベート６０、およびポリソルベート８０の中から選ばれる１種以上を含むことを特徴とする、請求項３に記載のナノエマルジョン組成物。
【請求項６】
前記柔軟化剤はエタノールを含むことを特徴とする、請求項３に記載のナノエマルジョン組成物。
【請求項７】
セラミドおよびコレステロールをさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載のナノエマルジョン組成物。
【請求項８】
前記ナノエマルジョン組成物はグリセリルエステルによってエマルジョン化されたことを特徴とする、請求項１に記載のナノエマルジョン組成物。
【請求項９】
前記グリセリルエステルの含量は０．５〜１０．０重量％であり、
前記グリセリルエステルはクエン酸／乳酸／リノール酸／オレイン酸グリセリル、クエン酸ステアリン酸グリセリル、およびヤシ油脂肪酸／クエン酸／乳酸グリセリルの中から選ばれる１種以上を含むことを特徴とする、請求項８に記載のナノエマルジョン組成物。
【請求項１０】
化粧料、健康食品、医薬品、および家畜飼料に含まれることを特徴とする、請求項１に記載のナノエマルジョン組成物。
【請求項１１】
アスタキサンチンを製造する段階と、
水相成分と油相成分とを混合して混合物を形成する段階と、
前記混合物に前記アスタキサンチンを投入して混合する段階と、
前記アスタキサンチンの投入された前記混合物に圧力を加えてナノエマルジョン化する段階とを含んでなる、ナノエマルジョン組成物の製造方法。
【請求項１２】
前記混合物は補助抗酸化剤、界面活性剤、柔軟化剤、およびオイル類を含むことを特徴とする、請求項１１に記載のナノエマルジョン組成物の製造方法。
【請求項１３】
前記ナノエマルジョン化する段階は前記混合物をマイクロフルイディクスを用いて少なくとも３回通過させることを特徴とする、請求項１１に記載のナノエマルジョン組成物の製造方法。
【請求項１４】
前記アスタキサンチンを製造する段階はヘマトコッカス藻(Haematococcus pluvialis)から超臨界抽出する段階を含むことを特徴とする、請求項１１に記載のナノエマルジョン組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ナノエマルジョン組成物およびその製造方法に係り、さらに詳しくは、アスタキサンチンを含むナノエマルジョン組成物およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
最近、生活の潤いおよびウェルビーイング（ｗｅｌｌ−ｂｅｉｎｇ）のトレンドに伴い、より楽しく、より健康に、より綺麗に暮らそうとする欲求が強まっており、老化防止のために運動や健康補助食品、化粧品、医薬品などへの関心が何時よりも高まっている。
老化の最も大きい原因としては、呼吸により起こる酸化（Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ）を挙げることができる。
【０００３】
ヒトは呼吸によって吸い込んだ酸素の２〜５％程度を不安全燃焼させるが、不完全燃焼された酸素は活性酸素（ＲＯＳ、ｒｅａｃｔｉｖｅ
ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ；ａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ）と呼び、有害酸素とも呼ぶ。有害酸素は容易にラジカルとなって隣接細胞を攻撃して皮膚老化、免疫性低下、糖尿病、癌を誘発するので、老化をもたらすのはもとより、人体に致命的な損傷を引き起こす。このような有害酸素を除去することができるものが抗酸化剤（ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ）である。
【０００４】
抗酸化剤は、ビタミンＣなどの水溶性とトコフェロールなどの脂溶性に分類することもでき、ニンジンなどに含有されている天然抗酸化剤とビタミンＣなどの合成抗酸化剤に分類することもできる。さらに、抗酸化剤は、機序によって、新しい活性酸素が体内に生じることを防止する１次抗酸化剤と、活性酸素を捕集して連鎖反応を中止させる２次抗酸化剤に分類することもできる。様々な抗酸化剤の中でも、活性酸素除去能力に最も優れると知られているものがトコフェロールであるが、最近、アスタキサンチンは、このトコフェロールより５００〜１０００倍以上の抗酸化力を持つことが知られ、健康機能食品、医薬品、動物飼料などに広く用いられている。
【０００５】
上述のように、アスタキサンチンが優れた抗酸化力を持っているにも拘らず、アスタキサンチンの商用化が難しい理由としては、安定性、他の成分との配合困難性、および高いコストなどを挙げることができる。
【０００６】
アスタキサチンは、ヘマトコッカス藻(Haematococcus pluvialis)やファフィア・ロドジマ(Phaffia
rhodozyma)などから収得するが、その含有量が少なく、不純物が多いため、高含量・良質のアスタキサンチンを得るのに困難さがあって、コストが他の抗酸化剤に比べて非常に高い。さらに、色相があまり強くて一般な剤形への適用には困難さがあり、独特な匂いも持っている。
【０００７】
既存のアスタキサンチンの製造方法を考察すると、次のとおりである。一つ目は、Ｈｏｆｆｍａｎ
ｌａｒｏｃｈｅ社で使用する化学的合成法である。この方法は産業用としては使用されるが、吸収度と安全性が低くて食品添加物などへの使用は難しい。二つ目は、蟹や海老などの甲殻類から生産する方法であるが、灰分とキチンの含量が多くて公害を誘発するという欠点がある。三つ目は、微細藻類であるヘマトコッカス藻から生産する方法である。この方法は、最近多く用いられており、アスタキサンチンの含量が比較的高い（０．２％〜２．０％）が、天然池で培養しなければならず、色調を菌体から抽出しなければならないという欠点がある。四つ目は、海洋微生物から生産する方法である。五つ目は、赤色酵母（ファフィア・ロドジマ(Phaffia rhodozyma)）から得る方法が一般的である。
【０００８】
二酸化炭素超臨界抽出の際にエタノールなどの補助溶媒を使用すると、収得率を向上させることはできるが、１０〜１５％程度の損失が発生するおそれがあり、補助溶媒を除去しなければならないという不便さがある。補助溶媒を使用しないと、収率と収率時間（Ｓ／Ｆ
ｒａｔｉｏ）が長くなるおそれがある。すなわち、超臨界抽出も多量の熱が発生するので、短時間で抽出しなければ熱変性によるタンパク質の損傷が発生することもある。超音波による抽出の際にリン酸バッファ溶液、アセトンなどの溶媒を使用するので、溶媒の除去と溶媒によるタンパク質の変性が引き起こされ、収率が超臨界抽出の際に比べて低いという欠点がある。酵素を用いる抽出の際に、強塩の苛性ソーダを用いて酵素反応を中温（５０℃前後）で長時間処理しなければならず、アセトンなどを使用しなければならないので、溶媒除去、溶媒による変性を引き起こし、何よりも収率が低いという問題点がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、かかる問題点を解決するために、その目的は、微細藻類であるヘマトコッカス藻から抽出されたアスタキサンチンの安定性を向上させたナノエマルジョン組成物およびその製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の実施形態に係るナノエマルジョン組成物はアスタキサンチンを含むことができる。
前記アスタキサンチンはヘマトコッカス藻(Haematococcus
pluvialis)から超臨界抽出して得ることができる。
【００１１】
前記ナノエマルジョン組成物は補助抗酸化剤０．１〜５．０重量％、界面活性剤０．１〜５．０重量％、柔軟化剤８．０〜１２．０重量％、およびオイル類０．１〜５．０重量％をさらに含むことができる。
【００１２】
前記補助抗酸化剤はトコフェロール、ヒドロキシジメトキシベンジルマロネート、およびジエチルヘキシルシリンギリデンマロネートの中から選ばれる１種以上を含むことができる。
【００１３】
前記界面活性剤はＰＰＧ−２６−ブテス−２６、ＰＥＧ−４０水添ヒマシ油、ポリソルベート３０、ポリソルベート６０、およびポリソルベート８０の中から選ばれる１種以上を含むことができる。
前記柔軟化剤はエタノールを含むことができる。
前記ナノエマルジョン組成物はセラミドおよびコレステロールをさらに含むことができる。
前記ナノエマルジョン組成物はグリセリルエステルによってエマルジョン化できる。
【００１４】
前記グリセリルエステルの含量は０．５〜１０．０重量％であり、前記グリセリルエステルはクエン酸／乳酸／リノール酸／オレイン酸グリセリル、クエン酸ステアリン酸グリセリル、およびヤシ油脂肪酸／クエン酸／乳酸グリセリルの中から選ばれる１種以上を含むことができる。
前記ナノエマルジョン組成物は化粧料、健康食品、医薬品、および家畜飼料に含まれてもよい。
【００１５】
本発明の実施形態に係るナノエマルジョン組成物の製造方法は、アスタキサンチンを製造する段階と、水相成分と油相成分とを混合して混合物を形成する段階と、前記混合物に前記アスタキサンチンを投入して混合する段階と、前記アスタキサンチンの投入された混合物をナノエマルジョン化する段階とを含んでなることができる。
前記混合物は補助抗酸化剤、界面活性剤、柔軟化剤、およびオイル類を含むことができる。
前記混合物は、前記ナノエマルジョン化する段階でマイクロフルディックスを用いて少なくとも３回通過させることができる。
前記アスタキサンチンを製造する段階で、ヘマトコッカス藻から超臨界抽出してアスタキサンチンを得ることができる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の実施形態によれば、ヘマトコッカス藻から良質のアスタキサンチンを多量抽出することができる。抽出されたアスタキサンチンを含むナノエマルジョン組成物は、グリセリルエステルでエマルジョン化されてアスタキサンチンの安定性を向上させることにより、効果的に皮膚または体内に吸収されるようにする。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】抽出されたアスタキサンチンを含むナノエマルジョンを作る過程を示す工程図である。
【図２】アスタキサンチンの抽出速度と収率を比較して示すグラフである。
【図３】アスタキサンチンの抽出速度と収率を比較して示すグラフである。
【図４】アスタキサンチン標準液（Ｓｉｇｍａ社製）と本発明の実施形態によって抽出したアスタキサンチンとの吸光度を比較して示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、好適な実施形態によって本発明をより詳細に説明する。本発明の目的、特徴、利点は下記の実施形態から容易に理解されるであろう。本発明はここで説明する実施形態に限定されず、他の形態でも具体化され得る。むしろ、ここで紹介する実施形態は、開示された内容が徹底かつ完全なものとなるように、そして本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者に本発明の思想が十分伝達されるようにするために提供されるものである。よって、本発明はこれらの実施形態に限定されるものではない。
ナノエマルジョン組成物
本発明の実施形態に係るナノエマルジョン組成物はアスタキサンチンを含むことができる。
前記アスタキサンチンはヘマトコッカス藻(Haematococcus pluvialis)から超臨界抽出法を用いて抽出することができる。
【００１９】
前記ヘマトコッカス藻を乾燥させた後、高圧のエアジェットミルで前記ヘマトコッカス藻を粉砕して細胞壁を破壊し、補助溶媒を使用することなくアスタキサンチンを超短時間で抽出して変性を最小化した高純度、良質のアスタキサンチンを得ることができる。
前記ナノエマルジョン組成物は補助抗酸化剤、界面活性剤、オイル類、柔軟化剤、および安定性向上剤をさらに含むことができる。
【００２０】
前記補助抗酸化剤は、界面膜の強化のために使用でき、トコフェロール、ヒドロキシジメトキシベンジルマロネート、およびジエチルヘキシルシリンギリデンマロネートの中から選ばれる１種以上を含むことができる。前記補助抗酸化剤の含量は０．１〜５．０重量％、好ましくは０．５〜２．０重量％である。
【００２１】
前記補助抗酸化剤の含量が０．１重量％未満の場合には、界面膜強化剤としての効果が弱く、前記補助抗酸化剤の含量が５．０重量％を超える場合には、界面膜強化効果がさらに低下するおそれがある。
【００２２】
前記界面活性剤は、ＰＰＧ−２６−ブテス−２６、ＰＥＧ−４０水添ヒマシ油、ポリソルベート３０、ポリソルベート６０、およびポリソルベート８０の中から選ばれる１種以上を含むことができる。前記界面活性剤の含量は０．１〜５．０重量％、好ましくは０．５〜２．０重量％である。
【００２３】
前記界面活性剤の含量が０．１重量％未満の場合には、界面活性剤としての役割を果たし難く、前記界面活性剤の含量が５．０重量％を超える場合には、効果の変化がない。
【００２４】
前記オイル類は、使用性を向上させるために使用でき、不飽和基を有するパラフィンおよび天然オイル類としてのオリーブ油、アボカド油、およびヒマワリ油の中から選ばれる１種以上を含むことができる。前記オイル類の含量は０．１〜２０重量％、好ましくは１．０〜１０．０重量％である。
【００２５】
前記オイル類の含量が０．１重量％未満の場合には、使用性の増進に効果がなく、前記オイル類の含量が２０重量％を超える場合には、使用性が低下し、アスタキサンチンの安定性が低下するおそれがある。
前記柔軟化剤としてはエタノールを含むことができる。
【００２６】
前記柔軟化剤の含量は８．０〜１２．０重量％、好ましくは１０．０重量％である。前記柔軟化剤の含量が８．０重量％未満の場合には、柔軟化効果が少なく、前記柔軟化剤の含量が１２．０重量％を超える場合には、安定性の低下および刺激の誘発が発生するおそれがある。
【００２７】
前記ナノエマルジョン組成物は、効果的な皮膚浸透およびアスタキサンチンの安定性向上のために、セラミドおよびコレステロールの中から選ばれる１種以上をさらに含むことができる。
【００２８】
前記ナノエマルジョン組成物はグリセリルエステルによってエマルジョン化できる。前記グリセリルエステルはアルファヒドロキシ酸（ＡＨＡ）誘導体であり、酸化エチレン（ＥＯ）フリー形態であり、親水性基と親油性基の両方とも持っている。
【００２９】
前記グリセリルエステルの含量は０．５〜１０．０重量％であり、前記グリセリルエステルはクエン酸／乳酸／リノール酸／オレイン酸グリセリル、クエン酸ステアリン酸グリセリル、およびヤシ油脂肪酸／クエン酸／乳酸グリセリルの中から選ばれる１種以上を含むことができる。
【００３０】
前記グリセリルエステルの含量が０．５重量％未満の場合には、エマルジョン化が難しく、前記グリセリルエステルの含量が１０.０重量％を超える場合には、安定性が低下し、エマルジョン化が難しいおそれがある。
ナノエマルジョン組成物の製造方法
【００３１】
本発明の実施形態に係るナノエマルジョン組成物の製造方法は、アスタキサンチンを製造する段階と、水相成分と油相成分とを混合して混合物を形成する段階と、前記混合物に前記アスタキサンチンを投入して混合する段階と、前記アスタキサンチンの投入された混合物をナノエマルジョン化する段階とを含んでなることができる。
【００３２】
前記アスタキサンチンを製造する段階は、ヘマトコッカス藻をエアジェットミル（ａｉｒ
ｊｅｔ ｍｉｌｌ）で粉砕する段階と、前記ヘマトコッカス藻から二酸化炭素超臨界抽出法によってアスタキサンチンを抽出する段階とを含むことができる。
【００３３】
超臨界抽出は、超臨界流体の溶解力を用いて物質を抽出することであり、抽出段階と分離段階からなり得る。抽出段階では、試料と超臨界流体溶媒とが互いに密接に接触し、溶解度の差により試料中の可溶成分が超臨界流体に溶解できる。抽出段階から出てくる溶質を含んでいる超臨界流体は、温度および圧力によって分離段階で溶質から分離できる。抽出段階では、温度および圧力を調整することにより、超臨界流体の溶解力を変更させて試料中の特定の成分を選択的に抽出することができる。
【００３４】
超臨界物質として最も多く用いられている二酸化炭素は、臨界条件に容易に接近することができ、人体に無害であるうえ、不燃性であり、化学的に安定であり、臨界温度が３１．５℃と低いので、溶質成分の変質を起こさない可能性がある。
【００３５】
赤色の休眠胞嚢細胞形態（ｒｅｄ ｃｙｓｔ ｃｅｌｌｓ）に成長した前記ヘマトコッカス藻を乾燥させた後、高圧のエアジェットミルを用いて瞬間的に細胞壁を破壊する。ヘマトコッカス藻は、友好的環境で緑色の成長細胞が安定的に成長していて、多様な外部条件の変化に伴って発生する非友好的環境に晒されるとき、緑色の細胞は自己保護メカニズムによって赤色の胞嚢細胞に転換し、このような赤色の休眠段階でアスタキサンチンを多量蓄積する。
前記エアジェットミルは１．０〜７．０ｂａｒの圧力、好ましくは３．０〜５．５ｂａｒの圧力を持つことができる。
【００３６】
前記圧力が１．０ｂａｒ未満の場合には、細胞壁破壊が不十分であり、前記圧力が７．０ｂａｒを超える場合には、ヘマトコッカス藻が凝集するという欠点がある。
【００３７】
前記アスタキサンチンを抽出するために、酸加水分解によって酵母の細胞壁を破壊した後に中和して抽出する方法、細胞壁を酵素で破壊する方法、ヘマトコッカス藻を突然変異化する方法、補助溶媒としてエタノールを用いて抽出する方法などがあるが、これらの方法はアスタキサンチンの安定性を増加させることに限界があった。
【００３８】
超音波抽出は長時間ソニケーションを行う場合、熱が発生し、別途の溶媒を必要とするが、エアジェットミルは別途の熱が発生せず、外部との何の化学的接触もないため、純粋なアスタキサンチンを得ることができる。
【００３９】
前記エアジェットミルによって粉砕されたヘマトコッカス藻から二酸化炭素超臨界抽出法を用いて別途の補助溶媒なしでアスタキサンチンを抽出することができる。前記二酸化炭素超臨界抽出法は、補助溶媒を使用しないため、溶媒による変性を減らすことができ、抽出時間が短くて高純度の良質のアスタキサンチンを得ることができる。
【００４０】
前記二酸化炭素超臨界抽出のための温度は３０〜７０℃であり、好ましくは４０〜５０℃である。前記温度が３０℃未満の場合には、抽出効果が低下し、前記温度が７０℃を超える場合には、抽出収率に変化がなく、温度による安定性が低下するおそれがある。
【００４１】
前記二酸化炭素超臨界抽出のための圧力は２５０〜３５０ｂａｒ、好ましくは３００ｂａｒである。前記圧力が２５０ｂａｒ未満の場合には抽出効果が低下し、前記圧力が３５０ｂａｒを超える場合には抽出効果上の差異がないおそれがある。
【００４２】
前記水相成分と油相成分とを混合して混合物を形成する段階では、精製水、ポリソルベート６０、およびクエン酸／乳酸／リノール酸／オレイン酸グリセリルを準備し、前記準備された混合物にパラフィン油、セラミド、補助抗酸化剤、コレステロール、およびエタノールを入れて混合して混合物を作る。
前記混合物をホモミキサーを用いて７０℃で３０００〜４０００ｒｐｍにて５〜１０分間均一に混ぜた後、５０℃でゆっくり冷やす。
ゆっくり冷やした前記混合物に前記超臨界抽出されたアスタキサンチンを投入し、３０００〜４０００ｒｐｍで５分間均一に混ぜた後、室温で冷やす。
【００４３】
前記アスタキサンチンの投入された混合物をマイクロフルイディクス（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ）を用いて５００ｂａｒ、１５００ｂａｒ、１５００ｂａｒの圧力で３回或いはそれ以上通過させて平均粒度（ａｖｅｒａｇｅ ｐａｒｔｉｃｌｅ）１２０〜２００ｎｍのナノエマルジョン組成物を製造することができる。
図１はナノエマルジョン組成物を製造する過程を示す工程図である。
【００４４】
前記アスタキサンチンを含むナノエマルジョン組成物は、アスタキサンチンの安定性を改善してアスタキンサンチンを皮膚に効果的に浸透させ、化粧料、健康食品、医薬品および動物飼料などの多様な分野で用いることができる。
【実施例】
【００４５】
実施例１〜５
ヘマトコッカス藻からのアスタキサンチン抽出
赤色の休眠胞嚢細胞形態（ｒｅｄ
ｃｙｓｔ ｃｅｌｌ）に成長したヘマトコッカス藻を乾燥させた後、超臨界二酸化炭素抽出を行った。
【００４６】
細胞壁が破壊されていない状態、エアジェットミルで３．５ｂａｒの圧力を加えた状態、およびエアジェットミルで５．５ｂａｒの圧力を加えた状態に分け、収率と抽出速度をチェックした。
ヘマトコッカス藻を、超臨界研究所（韓国）で製作されたシリンダーに２００ｇ充填して温度、圧力の条件を変えて抽出した。結果は図２および図３のとおりである。
【００４７】
図２および図３を参照すると、図３はヘマトコッカス藻の細胞壁を破壊する前と、３．５ｂａｒおよび５．５ｂａｒの圧力を加えたときの、アスタキサンチンの抽出速度と収率を比較して示すグラフであり、細胞壁が破壊されていない場合、収率が著しく低く、抽出速度が遅いことが分かる。
図３はヘマトコッカス藻の細胞壁を破壊した後、抽出圧力による収率と抽出速度を示すグラフである。
細胞壁を破壊することにより圧力による依存度を低めて、圧力の増加により抽出速度が大きく変わらないことが分かる。
抽出されたアスタキサンチンの定量
【００４８】
前記抽出されたアスタキサンチンの含量を調べるために、定量分析を行った。前記定量分析は、健康機能食品分野で多く活用される方法であって、試料（ヘマトコッカス藻）をアセトンで溶解させて抽出し、コレステロールエステラーゼ（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ
ｅｓｔｅｒａｓｅ）を入れ、アスタキサンチンに付いているエステル基を分離させる。
【００４９】
硫酸ナトリウムと石油エーテルを入れて遠心分離し、石油エーテル層を分取して無水硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧濃縮し、これをアセトンで溶かしてシリカカラムによってアスタキサンチンを分離する。前記分離されたアスタキサンチンを紫外部吸光度検出器（４７４ｎｍ）で検出して逆相ＨＰＬＣ(High performance liquid chromatography)で定量する。
アスタキサンチンの含量は次のように計算する。
アスタキサンチン定量（ｍｇ／ｇ）＝Ｓ×ａ×ｂ×１００／検体採取量（ｍｇ）×１０００
Ｓ：試験溶液の濃度（ｇ／ｍＬ）
ａ：試験溶液の濃度（ｇ／ｍＬ）
ｂ：希釈倍数
図４はアスタキサンチン標準液と本発明の実施形態によって抽出したアスタキサンチンとの吸光度を比較して示すグラフである。
【００５０】
図４に示すように、通常使用されるＳｉｇｍａ社のアスタキサンチン標準原液とヘマトコッカス藻との吸収波長が略同一であり、それぞれ４７５ｎｍで吸収ピークが観察された。
すなわち、同一の波長で吸収ピークが観察されたことからみて、ヘマトコッカス藻から抽出された物質がアスタキサンチンであることが分かった。
ナノエマルジョン組成物の製造
下記表１に記載された成分と含量でナノエマルジョン組成物を製造した。
【００５１】
【表１】
2014520165.tif 000003
（１）Ａ（水相のベース）相を７０℃で加温した後、均一に溶解する。
【００５２】
（２）Ｂ相を７０℃で加温溶解し、Ｂ相をＡ相に入れて３０００ｒｐｍで乳化した後、４０〜５０℃に冷却し、しかる後に、Ｃ相を投入して３０００ｒｐｍで３分間乳化した後、室温で冷却する。
【００５３】
（３）前記冷却した混合物からマイロフルイディクスを用いて５００ｂａｒ、１５００ｂａｒおよび１５００ｂａｒの圧力を加えてナノエマルジョン組成物を製造した。
試験例１：ＨＰＬＣを用いる力価測定
表１の組成を持つナノエマルジョンの安定性を試験するために、ＨＬＰＣを用いる力価測定を行った。その結果を下記表２に示す。
【００５４】
【表２】
2014520165.tif 000004
【００５５】
表２に示すように、アスタキサンチンの安定化はベシクルの種類に大きく影響され、通常用いられるリポソームの一つである水添レシチンに比べて一層安定的であった。
さらに、補助抗酸化剤の有無によって安定性の差異が非常に大きく、有用な他の成分との相溶性に優れることが分かった。
【００５６】
表２の結果と関連して最も大きい特徴は、補助抗酸化剤と水添レシチンは混和性（ｍｉｓｃｉｂｉｌｉｔｙ）がないことであり、アスタキサンチンの投入段階にも影響されることが分かった。
試験例２：粒子変化状態の測定
【００５７】
表１の組成によるナノエマルジョン組成物に対する安定性試験のために、粒度測定器を用いて粒子の変化状態を測定した。結果は次のとおりである。マイクロフルイディクスの圧力を１００ｂａｒとして３回通過させた。
【００５８】
【表３】
2014520165.tif 000005
【００５９】
表３に示すように、グリセリルエステルベシクルの平均粒度の変化はレシチンベシクルの平均粒度の変化より少なかった。また、補助抗酸化剤とグリセリルエステルベシクルを混合して１次乳化した後、アスタキサンチンを投入した実施例２および３の結果が最も優れた。
【００６０】
以上、本発明に係る具体的な実施形態を考察した。本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者は、本発明が本発明の本質的な特性から外れない範囲内で変形された形態で具現できることを理解することができるであろう。したがって、開示された実施形態は限定的な観点ではなく、説明的な観点から考慮されるべきである。本発明の範囲は前述した説明ではなく、特許請求の範囲に現れており、それと同等な範囲内にある全ての差異点も本発明に含まれるものと理解されるべきであろう。
【図１】
2014520165.tif 000006
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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2014520165.tif 000011
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