(57)【要約】  本発明は、少なくとも１つのメタボリックシンドローム、および／またはアテローム性動脈硬化症、特に、糖尿病、脂質異常症、肥満、および／または脂肪過多症を処置するための、少なくとも１つのＦＧＦ−２１（線維芽細胞成長因子２１）化合物、少なくとも１つのＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニスト、および場合により少なくとも１つの抗糖尿病薬、および／または少なくとも１つのＤＰＰ−４（ジペプチジルペプチダーゼ−４）阻害薬を含む医薬組成物を対象とする。本発明はまた、少なくとも１つのメタボリックシンドローム、および／またはアテローム性動脈硬化症、特に、糖尿病、脂質異常、肥満、および／または脂肪過多症を処置するための、少なくとも１つのＦＧＦ−２１（線維芽細胞成長因子２１）化合物、少なくとも１つのＤＰＰ−４（ジペプチジルペプチダーゼ−４）阻害薬、および場合によりＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニスト、および／または少なくとも１つの少なくとも１つの抗糖尿病薬を含む医薬組成物をも対象とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つのＦＧＦ−２１（線維芽細胞成長因子２１）化合物、および少なくとも１つのＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニストを含む医薬組成物。
【請求項２】
少なくとも１つの抗糖尿病薬、および／または少なくとも１つのＤＰＰ−４（ジペプチジルペプチダーゼ−４）阻害薬をさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
少なくとも１つのＦＧＦ−２１（線維芽細胞成長因子２１）化合物、および少なくとも１つのＤＰＰ−４（ジペプチジルペプチダーゼ−４）阻害薬を含む医薬組成物。
【請求項４】
少なくとも１つの抗糖尿病薬および／または少なくとも１つのＧＬＰ１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニストをさらに含む、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ＦＧＦ−２１化合物（複数可）、場合によりＧＬＰ−１Ｒアゴニスト（複数可）、場合により抗糖尿病薬（複数可）、および場合によりＤＰＰ−４阻害薬は、１製剤において組み合わされ、またはいくつかの製剤中に含まれる、請求項１〜４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
ＦＧＦ−２１組成物（複数可）、場合によりＧＬＰ−１Ｒアゴニスト（複数可）、場合により抗糖尿病薬（複数可）、および場合によりＤＰＰ−４阻害薬の製剤は、同時投与または後続投与（複数可）に適する、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ＦＧＦ−２１化合物は、天然のＦＧＦ−２１またはＦＧＦ−２１ミメティックから選択される、請求項１〜６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８】
ＦＧＦ−２１ミメティックは、配列番号：１に示すアミノ酸配列に対してアミノ酸配列同一性を少なくとも約９６％有し、ＦＧＦ−２１活性を有するタンパク質、ＦＧＦ−２１融合タンパク質、および／またはＦＧＦ−２１コンジュゲートから選択される、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ＦＧＦ−２１ミメティックは、ＦＧＦ−２１ムテイン、ＦＧＦ−２１−Ｆｃ融合タンパク質、ＦＧＦ−２１−ＨＳＡ融合タンパク質、および／またはＰＥＧ化ＦＧＦ−２１から選択される、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、生理活性ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１類似体、またはＧＬＰ−１代替物から選択される、請求項１〜９のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、ＧＬＰ−１（７〜３７）、ＧＬＰ−１（７〜３６）アミド、エキセンジン−４（extendin-4）、リラグルチド、ＣＪＣ−１１３１、アルブゴン、アルビグルチド、エキセナチド、エキセナチド−ＬＡＲ、オキシントモジュリン、リキシセナチド、ゲニポシド（geniproside）、ＡＶＥ−００１０（配列番号：９）、ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する短鎖ペプチド、および／またはＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する小有機化合物から選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
抗糖尿病薬は、メトホルミン、チアゾリジンジオン、スルホニル尿素、および／またはインスリンから選択される、請求項１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１３】
ＤＰＰ−４阻害薬は、シタグリプチン、ビルダグリプチン、サキサグリプチン、リナグリプチン、アログリプチン（ａｄｏｇｌｉｐｔｉｎ）、および／またはベルベリンから選択される、請求項１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１４】
患者における心血管疾患ならびに／または糖尿病、ならびに／または心血管疾患および／もしくは糖尿病を発症するリスクを増大する少なくとも１つのメタボリックシンドロームを処置するための医薬を製造するための、請求項１〜１３に記載のいずれかに記載の医薬組成物の使用。
【請求項１５】
メタボリックシンドロームは、脂質異常症、脂肪肝疾患（ＦＬＤ）、糖代謝異常、耐糖能異常（ＩＧＴ）、肥満、および／または脂肪過多症、特に２型糖尿病から選択される、請求項１７に記載の使用。
【請求項１６】
心血管疾患はアテローム性動脈硬化症である、請求項１７に記載の使用。
【請求項１７】
患者は、１型糖尿病患者、２型糖尿病患者、特に食事療法中の２型糖尿病患者、スルホニル尿素治療中の２型糖尿病患者、極期２型糖尿病患者、および／または長期インスリン治療中の２型糖尿病患者から選択される、請求項１７〜１９のいずれかに記載の使用。
【請求項１８】
心血管疾患ならびに／または糖尿病、ならびに／または心血管疾患および／もしくは糖尿病を発症するリスクを増大する少なくとも１つのメタボリックシンドローム、好ましくは２型糖尿病を処置するための、請求項１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１９】
メタボリックシンドロームは、脂質異常症、脂肪肝疾患（ＦＬＤ）、糖代謝異常、耐糖能異常（ＩＧＴ）、肥満、および／または脂肪過多症から選択される、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
心血管疾患はアテローム性動脈硬化症である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
血漿グルコースレベルを低下させ、肝臓における脂質含量を低下させ、高脂血症を処置し、高血糖を処置し、耐糖能を増大させ、インスリン耐性を低減し、体温を上昇させ、かつ／または体重を減少させるための、請求項１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２２】
糖尿病患者、好ましくは１型糖尿病患者、２型糖尿病患者、特に食事療法中の２型糖尿病患者、スルホニル尿素治療中の２型糖尿病患者、極期２型糖尿病患者、および／または長期インスリン治療中の２型糖尿病患者からなる群から選択される糖尿病患者において、血漿グルコースレベルを低下させ、肝臓における脂質含量を低下させ、耐糖能を増大させ、インスリン耐性を増大させ、体温を上昇させ、かつ／または体重を減少させるための、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
患者は哺乳動物、好ましくはヒトである、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
血漿グルコースレベルを低下させ、肝臓における脂質含量を低下させ、耐糖能を増大させ、インスリン耐性を低減し、体温を上昇させ、かつ／または体重を減少させるための医薬を製造するための、請求項１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物の使用。
【請求項２５】
請求項１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物の投与を含む、心血管疾患ならびに／または糖尿病、ならびに／または心血管疾患および／もしくは糖尿病を発症するリスクを増大する少なくとも１つのメタボリックシンドローム、好ましくは２型糖尿病を処置する方法。
【請求項２６】
メタボリックシンドロームは、脂質異常症、脂肪肝疾患（ＦＬＤ）、糖代謝異常、耐糖能異常（ＩＧＴ）、肥満、および／または脂肪過多症から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
心血管疾患はアテローム性動脈硬化症である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
請求項１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物の投与を含む、血漿グルコースレベルを低下させ、肝臓における脂質含量を低下させ、高脂血症を処置し、高血糖を処置し、耐糖能を増大させ、インスリン耐性を低減し、体温を上昇させ、かつ／または体重を減少させる処置方法。
【請求項２９】
医薬組成物を、糖尿病患者、好ましくは１型糖尿病患者、２型糖尿病患者、特に食事療法中の２型糖尿病患者、スルホニル尿素治療中の２型糖尿病患者、極期２型糖尿病患者、および／または長期インスリン治療中の２型糖尿病患者からなる群から選択される糖尿病患者に投与する、請求項２５〜２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
患者は哺乳動物、好ましくはヒトである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
治療有効量を投与する、請求項２５〜３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
医薬組成物を、１日あたり０．０１ｍｇから１日あたり約１０００ｍｇまで、好ましくは１日あたり約０．１ｍｇから１日あたり約１００ｍｇまで、より好ましくは約１．０ｍｇ／日から約１０ｍｇ／日まで、最も好ましくは約１〜５ｍｇ／日の投与量範囲において投与する、請求項２５〜３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
医薬組成物を、経口、皮下、筋肉内、肺投与、吸入による投与、かつ／または徐放投与によって投与し、好ましくは組成物を皮下投与する、請求項２５〜３２のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、少なくとも１つのメタボリックシンドローム、および／またはアテローム性動脈硬化症、特に、糖尿病、脂質異常症、肥満、および／または脂肪過多症を処置するための、少なくとも１つのＦＧＦ−２１（線維芽細胞成長因子２１）化合物、少なくとも１つのＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニスト、および場合により少なくとも１つの抗糖尿病薬、および／または少なくとも１つのＤＰＰ−４（ジペプチジルペプチダーゼ−４）阻害薬を含む医薬組成物を対象とする。さらに、本発明は、少なくとも１つのメタボリックシンドローム、および／またはアテローム性動脈硬化症、特に、糖尿病、脂質異常症、肥満、および／または脂肪過多症を処置するための、少なくとも１つのＦＧＦ−２１（線維芽細胞成長因子２１）化合物、少なくとも１つのＤＰＰ−４（ジペプチジルペプチダーゼ−４）阻害薬、および場合により少なくとも１つのＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニスト、および／または少なくとも１つの抗糖尿病薬を含む医薬組成物を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は、その臨床兆候、すなわち、２型糖尿病としても知られるインスリン非依存性または成人発症型、および１型糖尿病としても知られるインスリン依存性または若年発症型によって特徴づけられる。２型糖尿病の臨床症状の兆候、および根底となる肥満は、通常、４０歳を超えて出現する。それとは対照的に、１型糖尿病は通常、しばしば３０歳前という速やかな疾患の発症を示す。この疾患は、罹患率が一般人口のおよそ１パーセントであるヒトにおける代謝障害であり、その４分の１が１型糖尿病であり、その４分の３が２型糖尿病である。２型糖尿病は、循環血液中高レベルのグルコース、インスリン、およびコルチコステロイドによって特徴づけられる疾患である。
【０００３】
現在、２型糖尿病を処置するための様々な薬理学的取組みが存在し、これら取組みは個々に、または組み合わせて利用することができ、様々な作用機序によって作用する：
１）スルホニル尿素はインスリン分泌を刺激し；
２）ビグアナイド（メトホルミン）は、グルコース利用を促進し、肝臓のグルコース生成を低減し、腸のグルコース産出を低減することによって作用し；
３）ｏｃ−グルコシダーゼ阻害薬（アカルボース、ミグリトール（ｍｉｇｌｉｔｏｌ））は、炭水化物の消化を減速し、その結果、腸からの吸収を減速し、食後高血糖を低減し；４）チアゾリジンジオン（トログリタゾン）はインスリンの作用を増強し、したがって末梢組織におけるグルコース利用を促進し；
５）インスリンは、組織のグルコース利用を刺激し、肝臓のグルコース産出を阻害する。
【０００４】
しかし、ほとんどの薬物には限定された効能しかなく、β細胞の機能およびそれに関連する肥満を減少させるという、最も重要な問題に対処することはない。肥満は、現代社会に大いに蔓延している慢性疾患であり、糖尿病、インスリン耐性、高血圧、高コレステロール血症、および冠動脈心疾患を含めた、多くの医学上の問題に関連する。肥満は糖尿病およびインスリン耐性にさらに大いに相関し、インスリン耐性は、高インスリン血症もしくは高血糖、または両者を一般的に伴う。さらに、２型糖尿病は、２倍から４倍の冠動脈疾患のリスクに関連する。
【０００５】
１型糖尿病患者は、特徴的に、非常に低い、またははかることができない血漿インスリンを示し、グルカゴンは上昇する。特異的にβ細胞に対する免疫応答は、β細胞がインスリンを分泌することから、１型糖尿病をもたらす。１型糖尿病に対する現在の治療レジメンは、天然のインスリンの欠乏に起因する高血糖を最小にしようとするものである。
【０００６】
線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ２１）は、肥満および２型糖尿病の動物モデルにおいて強力な抗糖尿病性および脂質低下の効果を発揮する、主に肝臓によって生成される新規の代謝調節剤である。このホルモンは、マウスにおいて、体重調節に貢献し、栄養欠乏に対する応答およびケトン体産生状態に関与する。ＦＧＦ２１の代謝作用の主要部位は、脂肪組織、肝臓、および膵臓である。実験的研究は、糖尿病のマウスおよび霊長動物においてＦＧＦ２１投与後、糖尿病の代償、および脂質異常症における改善を示している（Ｄｏｓｔａｌｏｖａら、２００９年）。ＦＧＦ２１は、インスリンの存在下および非存在下でマウス３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞においてグルコース取込みを刺激し、ｏｂ／ｏｂおよびｄｂ／ｄｂマウスならびに８週齢ＺＤＦラットにおいて食後および空腹時血中グルコース、トリグリセリド、およびグルカゴンのレベルを投与量依存的に低減することが示されており、このように、糖尿病および肥満を処置するための治療法としてＦＧＦ−２１を使用するためのベースを提供する（例えば、特許文献１を参照されたい）。
【０００７】
線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）は、発達中の、および成人の組織において広く発現されるポリペプチドである。ＦＧＦファミリーは現在、ＦＧＦ−１からＦＧＦ−２３の、２２のメンバーからなる。ＦＧＦファミリーのメンバーは、脊椎動物種間で、遺伝子構造およびアミノ酸配列の両方において高度に保存されている。哺乳動物線維芽細胞成長因子は１８個存在し（ＦＧＦ１〜ＦＧＦ１０およびＦＧＦ１６〜ＦＧＦ２３）、これらは配列相同性および系統発生における違いに基づいて６個のサブファミリーにグループ分けされる。サブファミリーに割り当てられていない、番号のつけられた「ＦＧＦ」は、ＦＧＦ相同因子（以前、ＦＧＦ１１〜ＦＧＦ１４として知られていた）であり、ＦＧＦファミリーと高度な配列同一性を有するが、ＦＧＦ受容体（ＦＧＦＲ）を活性化せず、したがって一般的にＦＧＦファミリーのメンバーとみなされていない。
【０００８】
ほとんどのＦＧＦは細胞の成長および分化の局所調節因子として作用する一方で、最近の研究は、ＦＧＦ１５／１９、ＦＧＦ２１、およびＦＧＦ２３を含むＦＧＦ１９サブファミリーメンバーは、内分泌の様式によって重要な代謝効果を発揮することを指摘した。ＦＧＦ１９サブファミリーのメンバーは、古典的なＦＧＦによって影響されない多様な生理学的過程を調節する。これらの内分泌因子の多種多様な代謝活性は、胆汁酸、炭水化物、および脂質の代謝、ならびにリン酸、カルシウム、およびビタミンＤの恒常性の調節を含む（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、２００２年、Ｈｏｌｔら、２００３年、Ｓｈｉｍａｄａら、２００４年、Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖら、２００５年、Ｉｎａｇａｋｉら、２００５年、Ｌｕｎｄａｓｅｎら、２００６年）。
【０００９】
ＦＧＦ−２１は最初、マウスの胚から単離された。ＦＧＦ２１のｍＲＮＡは肝臓において最も大量に発現され、胸腺においてより低い程度で発現される（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら、２０００年）。ヒトＦＧＦ２１は、マウスＦＧＦ２１に高度に同一性である（アミノ酸同一性およそ７５％）。ヒトＦＧＦファミリーメンバーの中では、ＦＧＦ２１がＦＧＦ１９に最も類似する（アミノ酸同一性およそ３５％）（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら、２０００年）。ＦＧＦファミリーメンバーの大多数に典型的である増殖効果および腫瘍原性効果（ＯｒｎｉｔｚおよびＩｔｏｈ、２００１年、Ｎｉｃｈｏｌｅｓら、２００２年、Ｅｓｗａｒａｋｕｍａｒら、２００５年）は、ＦＧＦ−２１にはない（Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖら、２００５年、Ｈｕａｎｇら、２００６年、Ｗｅｎｔｅら、２００６年）。
【００１０】
肥満のレプチン欠損ｏｂ／ｏｂマウスおよびレプチン受容体欠損ｄｂ／ｄｂマウス、ならびに肥満のＺＤＦラットに対するＦＧＦ２１投与は、経口耐糖能試験の間、血中グルコースおよびトリグリセリドを有意に低下させ、空腹時インスリンレベルを低減し、グルコースクリアランスを改善した。ＦＧＦ２１は、投与２週間の経過にわたって、糖尿病または痩身のマウスおよびラットの食物摂取または体重／組成に影響を及ぼさなかった。重要なことに、ＦＧＦ２１は、糖尿病動物もしくは健常動物において試験した任意の投与量で、またはトランスジェニック動物において過剰発現された場合、分裂促進性、低血糖、または体重増加を誘発しなかった（Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖら、２００５）。ＦＧＦ２１を過剰発現するトランスジェニックマウスは、食餌誘発性の肥満に抵抗性であった。
【００１１】
糖尿病のアカゲザルにＦＧＦ２１を６週間投与すると、グルコース、フルクトサミン、トリグリセリド、インスリン、およびグルカゴンの空腹時血漿レベルを低減した。重要なことに、研究中、著しいグルコース低下効果にかかわらず、低血糖は観察されなかった。ＦＧＦ２１投与はまた、ＬＤＬ−コレステロールを著しく低下させ、ＨＤＬ−コレステロールを増大し、マウスとは対照的に（Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖら、２００５年）、わずかではあるが有意に体重を減少させた（Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖら、２００７年）。
【００１２】
さらなる情報は以下の参考文献から得ることができる：
1. DOSTALOVA I. et al.:Fibroblast Growth Factor 21:A Novel Metabolic Regulator With Potential Therapeutic Properties in Obesity/Type 2 Diabetes Mellitus. Physiol Res 58:1-7, 2009.
2. ESWARAKUMAR V.P. et al.:Cellular signaling by fibroblast growth factor receptors. Cytokine Growth Factor Rev 16:139-149, 2005.
3. HOLT J.A. et al.:Definition of a novel growth factor-dependent signal cascade
for the suppression of bile acid biosynthesis. Genes Dev 17:1581-1591, 2003.
4. HUANG X. et al.:Forced expression of hepatocytespecific fibroblast growth factor 21 delays initiation of chemically induced hepatocarcinogenesis. Mol Carcinog 45:934-942, 2006.
5. INAGAKI T. et al.:Endocrine regulation of the fasting response by PPARα-mediated induction of fibroblast growth factor 21. Cell Metab 5:415-425, 2007.
6. KHARITONENKOV A. et al.:FGF-21 as a novel metabolic regulator. J Clin Invest 115:1627-1635, 2005.
7. KHARITONENKOV A. et al.:The metabolic state of diabetic monkeys is regulated by fibroblast growth factor-21. Endocrinology 148:774-781, 2007.
8. LUNDASEN T. et al.:Circulating intestinal fibroblast growth factor 19 has a pronounced diurnal variation and modulates hepatic bile acid synthesis in man. J Intern Med 260:530-536, 2006.
9. NICHOLES K. et al.:A mouse model of hepatocellular carcinoma:ectopic expression of fibroblast growth factor 19 in skeletal muscle of transgenic mice. Am J Pathol 160:2295-2307, 2002.
10. NISHIMURA T. et al.:Identification of a novel FGF, FGF-21, preferentially expressed in the liver. Biochim Biophys Acta 1492:203-206, 2000.
11. ORNITZ D.M. et al.:Fibroblast growth factors. Genome Biol 2:REVIEWS3005, 2001.
12. SHIMADA T. et al.:FGF-23 is a potent regulator of vitamin D metabolism and phosphate homeostasis. J Bone Miner Res 19:429-435, 2004.
13. TOMLINSON E. et al.:Transgenic mice expressing human fibroblast growth factor-19 display increased metabolic rate and decreased adiposity. Endocrinology 143:1741-1747, 2002.
14. WENTE W. et al.:Fibroblast growth factor-21 improves pancreatic beta-cell function and survival by activation of extracellular signal-regulated kinase 1/2 and Akt signaling pathways. Diabetes 55:2470-2478, 2006.
【００１３】
腸のペプチドであるグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）はインクレチンホルモンであり、栄養依存的に分泌される。ＧＬＰ−１はグルコース依存性のインスリン分泌を刺激する。ＧＬＰ−１はまた、β細胞の増殖を促進し、グルコースセンサーに対するさらなる作用、胃内容排出の阻害、食物摂取、およびグルカゴン分泌によって糖血症をコントロールする。さらに、ＧＬＰ−１は、２型糖尿病を有するヒト対象において、インスリン分泌を刺激し、血中グルコースを低減する。生理的な食後レベルのおよそ３〜４倍に血漿濃度を上昇させる投与量での、生理活性ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１（７〜２７）、またはＧＬＰ−１（７〜３６アミド）の外因性投与により、２型糖尿病患者における空腹時高血糖を完全に正常化した（非特許文献１）。ヒトＧＬＰ−１受容体（ＧＬＰ−１Ｒ）は、膵島、腎臓、肺、心臓、ならびに末梢神経系および中枢神経系の複数の領域において広く発現されるアミノ酸４６３個のヘプタヘリカルＧタンパク質共役受容体である。島内では、ＧＬＰ−１は、島のβ細胞に主に局在する。ＧＬＰ−１Ｒシグナル伝達を活性化すると、より内分泌様の表現型に向かう分化のプログラム、特にヒト膵島に由来する前駆細胞の機能性のβ細胞への分化を開始させる（非特許文献２）。
【００１４】
残念なことに、ＦＧＦ−２１および生理活性ＧＬＰ−１の両方、ならびに他の知られている薬物は単独で、２型糖尿病または他の代謝障害において観察され得る、複雑で多因子性の代謝機能不全に対して限定された効能しかない。これは、前記化合物自体による血中グルコースレベルを低下させる効能にも当てはまる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】国際公開第０３／０１１２１３号
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Ｎａｕｃｋ，Ｍ．Ａ．ら、（１９９７年）Ｅｘｐ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ、１０５巻、１８７〜１９７頁
【非特許文献２】Ｄｒｕｃｋｅｒ，Ｄ．Ｊ．（２００６年）Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、３巻、１５３〜１６５頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明によると、驚くべきことに、ＦＧＦ−２１およびＧＬＰ−１Ｒアゴニストの組合せは、相乗的に血中グルコースレベルを、正常血糖のレベルまで著しく低下させることが見出された。さらに、驚くべきことに、ＦＧＦ−２１およびＤＰＰ−ＩＶ阻害薬の組合せは、肝臓の脂質レベルを相乗的に著しく低下させることが見出された。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明を以下に詳しく記載する前に、本明細書に記載する特定の方法、プロトコール、および試薬は変動することがあるので、本発明はこれらに限定されないことを理解されたい。本明細書で用いる用語は特定の実施形態のみを記載する目的であり、本発明の範囲を限定することを意図するものではなく、本発明は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることも理解されたい。別段の規定がなければ、本明細書で用いる技術用語および科学用語は全て、当業者の一人によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。
【００１９】
好ましくは、本明細書で用いる用語は、「Ａ  ｍｕｌｔｉｌｉｎｇｕａｌ  ｇｌｏｓｓａｒｙ  ｏｆ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｅｒｍｓ：（ＩＵＰＡＣ  Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ）」、Ｌｅｕｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｈ．Ｇ．Ｗ、Ｎａｇｅｌ，Ｂ．およびＫｏｌｂｌ，Ｈ．編集（１９９５年）、Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ、ＣＨ−４０１０  Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）に記載されているものと規定する。
【００２０】
いくつかの文書を、本明細書のテキストを通して引用する。本明細書に引用する各々の文書は（全ての特許、特許出願、科学出版物、製造元の規格書、指示書、ＧｅｎＢａｎｋ受諾番号配列付託などを含めて）、上記でもまたは下記でも、その全文が参照によって本明細書に組み入れられる。本明細書は、先行発明によって本発明がこのような開示に先行する権利を与えられないことを認めるものと解釈してはならない。
【００２１】
本明細書および以下の特許請求の範囲を通して、文脈上別段に要求されない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という言葉、ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、記載する整数もしくは工程、またはグループの整数もしくは工程の包含を意味するが、任意の他の整数もしくは工程、またはグループの整数もしくは工程を除外するものではないことを意味すると理解されたい。同じことが「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」という用語、ならびに「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「包含（ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ）」などのこの用語の変形にも当てはまる。
【００２２】
本発明の一実施形態は、したがって、少なくとも１つのＦＧＦ−２１（線維芽細胞成長因子２１）化合物および少なくとも１つのＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニストを含む医薬組成物を対象とする。
【００２３】
本明細書で用いられる「医薬組成物」という用語は、活性化合物の製剤を担体と一緒に含む（がそれには限定されない）。担体は、例えば、他の担体と一緒に、または他の担体なしで、活性化合物（複数可）／成分（複数可）が、担体によって取り囲まれており、したがってそれと会合しているカプセル剤を提供するカプセル化材料であってよい。担体はまた、活性成分（複数可）の液体製剤に適していてよく、好ましくはそれ自体が液体であってよい。担体は、医薬組成物の意図した製剤に適した任意の他の担体であってもよい。
【００２４】
「薬学的に許容される」は、動物において、特にヒトにおいて使用するために、連邦政府もしくは州政府の監督官庁、もしくは超国家的な国の組織、例えば、欧州連合もしくは経済圏、例えば欧州経済地域によって認可されている、または米国薬局方もしくは所与の国もしくは経済地域の他の一般的に認められている薬局方に列挙されていることを意味する。
【００２５】
本明細書で用いられる「担体」という用語は、それだけには限定されないが、それと一緒に治療的活性成分が投与される希釈剤、賦形剤、またはビヒクルなどの薬理学的に不活性な物質を意味する。このような医薬担体は、液体または固体であってよい。液体の担体は、それだけには限定されないが、無菌の液体、例えば、水および油（石油、動物、植物、または合成起源のものを含む）中の、例えば、ラッカセイ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油など中の食塩溶液を含む。食塩溶液、ならびにデキストロースおよびグリセロールの水溶液を、液体の担体として、特に注射溶液用に使用することもできる。食塩溶液は、医薬組成物を静脈内投与する場合に好ましい担体である。
【００２６】
適切な医薬品賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク（ｃｈａｌｋ）、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどを含む。適切な医薬担体は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。
【００２７】
「活性成分」という用語は、生物学的に活性である、すなわち、医薬的価値を提供する、医薬組成物または製剤における物質を意味する。医薬組成物は、相互に併用され、または独立に作用し得る１つまたはそれ以上の有効成分を含むことができる。
【００２８】
活性成分は、中性の、または塩の形態として調合され得る。薬学的に許容される塩は、遊離のアミノ基と形成される塩、例えば、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来する塩、および遊離のカルボキシル基と形成される塩、例えば、それだけには限定されないが、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来する塩を含む。
【００２９】
本明細書で用いられる「患者」は、本明細書に記載する医薬組成物での処置の恩恵を受け得る任意の哺乳動物、爬虫類動物、またはトリを意味する。好ましくは、「患者」は、実験動物（例えば、サル、マウス、もしくはラット）、家畜（例えば、モルモット、ウサギ、ウマ、ロバ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ニワトリ、ラクダ、ネコ、イヌ、ウミガメ（ｔｕｒｔｌｅ）、カメ（ｔｏｒｔｏｉｓｅ）、ヘビ、もしくはトカゲを含む）、またはチンパンジー、ボノボ、ゴリラ、およびヒトを含めた霊長動物からなる群から選択される。「患者」はヒトであるのが特に好ましい。
【００３０】
本明細書で用いられる、疾患または障害を「処置する」、「処置している」、または「処置」は、以下の１つまたはそれ以上を達成することを意味する：（ａ）障害の重症度を低減する；（ｂ）処置する障害（複数可）に特徴的な症状の発症を制限または防止する；（ｃ）処置する障害（複数可）に特徴的な症状の悪化を阻害する；（ｄ）以前に障害（複数可）を有していた患者における障害（複数可）の再発を制限または防止する；（ｅ）以前に障害（複数可）の兆候を示した患者における症状の再発を制限または防止する。
【００３１】
本明細書で用いられる「投与する」は、ｉｎ  ｖｉｖｏの投与、および静脈移植など、ｅｘ  ｖｉｖｏで組織への直接投与を含む。
【００３２】
「有効量」は、意図した目的を実現するのに十分な治療薬の量である。所与の治療薬の有効量は、薬剤の性質、投与経路、治療薬を与える動物のサイズおよび種、ならびに投与の目的などの因子とともに変化する。各個体の症例における有効量は、当技術分野において確立されている方法にしたがって当業者が経験的に決定することができる。
【００３３】
「ＦＧＦ−２１化合物」は、ＦＧＦ−２１活性を示す化合物、特に、（ｉ）天然のＦＧＦ−２１または（ｉｉ）ＦＧＦ−２１活性を有するＦＧＦ−２１ミメティックを含むと規定される。
【００３４】
「天然のＦＧＦ−２１」という用語は、天然に存在するＦＧＦ−２１、または天然のＦＧＦ−２１に実質的に相同であるバリアントを意味する。典型的に、このようなＦＧＦ−２１バリアントは、天然のＦＧＦ−２１に生物学的に同等であり、すなわち、天然に存在するＦＧＦ−２１と同一または類似の様式において特性の全てまたはいくつかを表すことができる。好ましい実施形態において、天然のＦＧＦ−２１は哺乳動物のＦＧＦ−２１であり、好ましくは、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ウシ、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、サル、およびヒトのＦＧＦ−２１からなる群から選択される。配列番号：１において示すヒトのＦＧＦ−２１が特に好ましい。
【００３５】
天然のＦＧＦ−２１に「実質的に相同」であるバリアントは、それが由来する天然のＦＧＦ−２１に対するある程度の配列同一性によって特徴づけられる。より正確には、本発明の文脈において、天然のＦＧＦ−２１に実質的に相同であるバリアントは、天然のＦＧＦ−２１に対して少なくとも８０％の配列同一性を表す。
【００３６】
「少なくとも８０％の配列同一性」という用語は、ポリペプチド配列の比較に関して、本明細書にわたって用いられる。この表現は、好ましくは、それぞれの基準のポリペプチドに対して少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を意味する。ＦＧＦ−２１バリアントは、アミノ酸の欠失をさらに、または代わりに含むことがあり、アミノ酸の欠失は、Ｎ末端の切断、Ｃ末端の切断、もしくは内部的欠失、またはこれらの任意の組合せであってよい。Ｎ末端の切断、Ｃ末端の切断、および／または内部的欠失を含むこのようなバリアントを、本出願の文脈において、「欠失バリアント」または「フラグメント」と呼ぶ。「欠失バリアント」および「フラグメント」という用語は、本明細書において交換可能に用いられる。フラグメントは、天然に存在することがあり（例えば、スプライスバリアント）、または好ましくは遺伝子工学の手段によって、人工的に構築され得る。好ましくは、フラグメント（または欠失バリアント）は、親のポリペプチドに比べて、そのＮ末端に、および／またはそのＣ末端に、および／または内部に、好ましくはそのＮ末端に、そのＮ末端およびＣ末端に、および／またはそのＣ末端に、最高１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００個のアミノ酸の欠失を有する。２つの配列を比較し、それに比べて配列同一性パーセント値が算出される参照配列が特定されない場合、特に別段の指摘がなければ、配列同一性は比較される２つの配列の長いほうに関して算出される。参照配列が指摘される場合、特に別段の指摘がなければ、配列同一性は、配列番号によって指摘される参照配列の全長に基づいて決定される。例えば、配列番号：１によるアミノ酸配列ＦＧＦ−２１に比べて、アミノ酸１０５個からなるペプチド配列は、最大の配列同一性パーセント値５０．２４％（１０５／２０９）を表し得、アミノ酸１８１個の長さの配列は、最大の配列同一性パーセント値８６．６％（１８１／２０９）を表し得る。
【００３７】
アミノ酸配列の類似性、すなわち、配列同一性のパーセント値は、配列アラインメントによって決定することができる。このようなアラインメントは、いくつかの技術分野で知られているアルゴリズムで、好ましくは、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌの数学アルゴリズム（ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０巻、５８７３〜５８７７頁）で、ｈｍｍａｌｉｇｎ（ＨＭＭＥＲ、パッケージｈｔｔｐ：／／ｈｍｍｅｒ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／）で、または、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｃｌｕｓｔａｌｗ／、もしくはｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｃｌｕｓｔａｌｗ２／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ、もしくはｈｔｔｐ：／／ｎｐｓａ−ｐｂｉｌ．ｉｂｃｐ．ｆｒ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｎｐｓａ＿ａｕｔｏｍａｔ．ｐｌ？ｐａｇｅ＝／ＮＰＳＡ／ｎｐｓａ＿ｃｌｕｓｔａｌｗ．ｈｔｍｌ．上で入手できるＣＬＵＳＴＡＬアルゴリズム（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．、Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．およびＧｉｂｓｏｎ，Ｔ．Ｊ．（１９９４年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２２巻、４６７３〜８０頁）で行うことができる。用いられる好ましいパラメータは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｃｌｕｓｔａｌｗ／またはｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｃｌｕｓｔａｌｗ２／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ上に設定される通りのデフォルトパラメータである。配列同一性のグレード（配列マッチング）は、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＴ、またはＢｌａｓｔＺ（もしくはＢｌａｓｔＸ）を用いて算出することができる。同様のアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２１５巻、４０３〜４１０頁のＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰプログラム中に組み入れられる。ＢＬＡＳＴポリヌクレオチド検索は、Ｆ、Ｎ、またはＭ２−１をコードする核酸に相同であるポリヌクレオチド配列を得るために、ＢＬＡＳＴＮプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２で行われる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、Ｆポリペプチド、Ｎポリペプチド、またはＭ２−１ポリペプチドに相同であるアミノ酸配列を得るために、ＢＬＡＳＴＰプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３で行われる。比較目的でギャップ付アラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２５巻、３３８９〜３４０２頁において記載されているギャップ付ＢＬＡＳＴを利用する。ＢＬＡＳＴおよびギャップ付ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合は、それぞれのプログラムのデフォルトパラメータを用いる。配列マッチング分析は、Ｓｈｕｆｆｌｅ−ＬＡＧＡＮ（ＢｒｕｄｎｏＭ．、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、２００３ｂ、１９巻、補完１、Ｉ５４〜Ｉ６２頁）またはＭａｒｋｏｖランダムフィールドなどの、確立されたホモロジーマッピング技術を補足してもよい。配列同一性のパーセント値を本出願において言及する場合、これらのパーセント値は、特に別段の指摘がなければ、全長のより長い配列に関して算出される。
【００３８】
ＦＧＦ−２１活性を有するＦＧＦ−２１ミメティックは、これらがＦＧＦ−２１活性を表し、それだけには限定されないが、修飾された化学的特性および／または長期の血清半減期などのさらなる特性をさらに表すように、天然のＦＧＦ−２１のアミノ酸鎖に対する改変を保有するＦＧＦ−２１分子を含む。ＦＧＦ−２１ミメティックは、それだけには限定されないが、ＦＧＦ−２１ムテイン、ＦＧＦ−２１融合タンパク質、およびＦＧＦ−２１コンジュゲートを含む。
【００３９】
「ＦＧＦ−２１活性」という用語は、例えば、それだけには限定されないが、上記および以下に列挙するものなどの、天然に存在するＦＧＦ−２１の任意の知られている生物学的活性を意味する：
１）インスリン存在下およびインスリン非存在下でのグルコース取込みの刺激（例えば、ヒトまたはマウスの脂肪細胞などの脂肪細胞、例えば、マウス３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞において）。
２）糖尿病の島からのグルコース誘発性インスリン分泌における増大（例えば、糖尿病患者、もしくは糖尿病の齧歯動物などの糖尿病の試験動物から、または糖尿病の齧歯動物などの糖尿病の試験動物から単離されたβ細胞、または糖尿病の齧歯動物などの糖尿病の試験動物から単離された島）。
３）食後および空腹時血中グルコースレベルの低減（例えば、ｏｂ／ｏｂマウスにおいて、ｄｂ／ｄｂマウスにおいて、または８週齢のＺＤＦラットにおいて投与量依存的に）。４）食後および空腹時トリグリセリドの低減（例えば、ｏｂ／ｏｂマウスにおいて、ｄｂ／ｄｂマウスにおいて、または８週齢のＺＤＦラットにおいて投与量依存的に）。
５）食後および空腹時グルカゴンレベルの低減（例えば、ｏｂ／ｏｂマウスにおいて、ｄｂ／ｄｂマウスにおいて、または８週齢のＺＤＦラットにおいて投与量依存的に）。
６）ｌｄｌリポタンパク質コレステロールの低下および／またはｈｄｌリポタンパク質コレステロールの上昇。
７）Ｇｌｕｔ−１定常状態レベルにおける増大。
８）他のタンパク質、例えば、ＦＧＦ−受容体、特に、ＦＧＦ−２１と相互作用することができる、ＦＧＦ−受容体１、２、もしくは３、またはこれらの部分との相互作用。
９）ある種のシグナル伝達経路の活性化、例えば、細胞外シグナル関連キナーゼ１／２の活性化、Ａｋｔシグナル伝達経路の活性化。
【００４０】
「ＦＧＦ−２１活性」という用語はまた、上記に列挙した活性のいずれかの２つ以上の組合せを意味し、また、これらの１つまたはそれ以上の、ＦＧＦ−２１の任意の他の知られている有益な活性との組合せを意味する。
【００４１】
「ＦＧＦ−２１活性」は、例えば、当業者には一般的に知られているＦＧＦ−２１活性アッセイにおいて測定することができる。ＦＧＦ−２１活性アッセイは、例えば、Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖ，Ａ．ら、（２００５年）、１１５巻、１６２７頁、Ｎｏ．６．において記載されている、「グルコース取込みアッセイ」である。グルコース取込みアッセイに対する一例として、脂肪細胞をＤＭＥＭ／０．１％  ＢＳＡ中で３時間飢餓状態にし、ＦＧＦ−２１で２４時間刺激し、ＫＲＰバッファー（１５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１１８ｍＭ  ＮａＣｌ、４．８ｍＭ  ＫＣｌ、１．２ｍＭ  ＭｇＳＯ4、１．３ｍＭ  ＣａＣｌ2、１．２ｍＭ  ＫＨ2ＰＯ4、０．１％ＢＳＡ）で２回洗浄し、２−デオキシ−Ｄ−［14Ｃ］グルコース（２−ＤＯＧ）（０．１μＣｉ、１００μＭ）を含むＫＲＰバッファー１００μｌを各ウエルに加える。対照のウエルは、非特異性に対してモニタリングするために２−ＤＯＧ（０．１μＣｉ、１０ｍＭ）を有するＫＲＰバッファー１００μｌを含む。取込み反応を、３７℃で１時間行い、サイトカラシンＢ（２０μＭ）の添加によって終結させ、Ｗａｌｌａｃ  １４５０  ＭｉｃｒｏＢｅｔａカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＵＳＡ）を用いて測定する。
【００４２】
ＦＧＦ−２１ミメティックの例は、（ａ）配列番号：１に示すアミノ酸配列に少なくとも約９６％、特に９９％のアミノ酸配列同一性を有し、ＦＧＦ−２１活性を有するタンパク質、（ｂ）ＦＧＦ−２１融合タンパク質、または（ｃ）ＦＧＦ−２１コンジュゲート、例えば、ＦＧＦ−２１ムテイン、ＦＧＦ−２１−Ｆｃ融合タンパク質、ＦＧＦ−２１−ＨＳＡ融合タンパク質、またはＰＥＧ化ＦＧＦ−２１である。
【００４３】
「ムテイン」は、典型的に、それだけには限定されないが、ＦＧＦ−２１活性を維持し、典型的には、アミノ酸鎖の化学的特性を改変する、ＦＧＦ−２１アミノ酸鎖に対するアミノ酸の交換、付加、および／または欠失などの改変（例えば、それだけには限定されないが、アミノ酸鎖のグリコシル化もしくはアミノ化の増大もしくは低減、および／またはタンパク分解性に分解される電位の増大もしくは低減、および／またはタンパク質の静電気的な表面電位に対する改変）を含む。
【００４４】
ＦＧＦ−２１ムテインの例は、例えば、国際公開第２００５／０６１７１２号、国際公開第２００６／０２８５９５号、国際公開第２００６／０２８７１４号、国際公開第２００６／０６５５８２号、または国際公開第２００８／１２１５６３号において記載されている。例示的なムテインは、例えば酵母中で発現させた場合に、野生型ヒトＦＧＦ−２１に比べてＯ−グリコシル化に対する能力が低減しているムテインであり、例えば、１６７位（セリン）の置換を有するヒトＦＧＦ−２１、例えば、以下の置換：Ｓｅｒ１６７Ａｌａ、Ｓｅｒ１６７Ｇｌｕ、Ｓｅｒ１６７Ａｓｐ、Ｓｅｒ１６７Ａｓｎ、Ｓｅｒ１６７Ｇｌｎ、Ｓｅｒ１６７Ｇｌｙ、Ｓｅｒ１６７Ｖａｌ、Ｓｅｒ１６７Ｈｉｓ、Ｓｅｒ１６７Ｌｙｓ、またはＳｅｒ１６７Ｔｙｒの１つを有するヒトＦＧＦ−２１である。別の一例は、野生型のヒトＦＧＦ−２１に比べて脱アミドの低減を示すムテインであり、例えば、ヒトＦＧＦ−２１の１２１位（アスパラギン）の置換、例えば、Ａｓｎ１２１Ａｌａ、Ａｓｎ１２１Ｖａｌ、Ａｓｎ１２１Ｓｅｒ、Ａｓｎ１２１Ａｓｐ、またはＡｓｎ１２１Ｇｌｕを有するムテインである。代替のムテインは、１つまたはそれ以上の非天然にコードされるアミノ酸を有するヒトＦＧＦ−２１であり、例えば、国際公開第２００８／１２１５６３号の請求項２９における一般式によって記載される通りである。その他のムテインは、例えば、極性であるが非荷電または荷電のアミノ酸それぞれに対して、荷電の（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、または極性であるが非荷電のアミノ酸（例えば、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン）の置換を含む。例として、Ｌｅｕ１３９Ｇｌｕ、Ａｌａ１４５Ｇｌｕ、Ｌｅｕ１４６Ｇｌｕ、Ｉｌｅ１５２Ｇｌｕ、Ｇｌｎ１５６Ｇｌｕ、Ｓｅｒ１６３Ｇｌｕ、Ｉｌｅ１５２Ｇｌｕ、Ｓｅｒ１６３Ｇｌｕ、またはＧｌｎ５４Ｇｌｕである。別のムテインは、例えば、酵母中で発現させた場合に、ヒトＦＧＦ−２１、特に、Ｌｅｕ１５３の、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｃｙｓ、またはＭｅｔから選択されるアミノ酸での置換を有するヒトＦＧＦ−２１に比べてタンパク分解性の分解に対する感受性の低減を示すムテインである。好ましいＦＧＦ−２１ムテインは、ヒトＦＧＦ−２１（配列番号：１）のアミノ酸１〜２８の欠失を保有し、Ｎ末端にさらなるグリシンを含む、配列番号：２による変異のＦＧＦ−２１である。
【００４５】
本明細書で用いられる「融合タンパク質」という用語は、天然のＦＧＦ−２１のアミノ酸鎖または、１つもしくはそれ以上のさらなるアミノ酸鎖を含むＦＧＦ−２１の実質的に相同なバリアントを意味する。各アミノ酸鎖は、好ましくは、完全なタンパク質、すなわちＯＲＦ全体にまたがるもの、またはそのフラグメント、ドメイン、もしくはエピトープである。融合タンパク質の個々の部分は、永久的に、または一時的に相互に接続されていてよい。永久的に接続されている融合タンパク質の部分は、単一のＯＲＦから翻訳され、後で同時翻訳的に、または翻訳後に分離されない。一時的に接続されている融合タンパク質の部分はまた、単一のＯＲＦに由来し得るが、翻訳プロセスの間の分離によって同時翻訳的に、またはエンドペプチダーゼなどによるペプチド鎖の切断によって、翻訳後に分割される。さらに、または代わりに、共有結合による場合には、融合タンパク質の部分はまた、２つの異なるＯＲＦに由来することがあり、翻訳後に接続される。
【００４６】
ＦＧＦ−２１融合タンパク質の例は、ＦＧＦ−２１−Ｆｃ融合タンパク質、またはＦＧＦ−２１−ＨＡＳ融合タンパク質、など、国際公開第２００４／１１０４７２号または国際公開第２００５／１１３６０６号において記載されている。「Ｆｃ」は、ＩｇＧ４のＦｃタンパク質など、免疫グロブリンのＦｃ部分を意味する。「ＨＳＡ」はヒト血清アルブミンを意味する。このようなＦＧＦ−２１融合タンパク質は、それだけには限定されないが、天然のＦＧＦ−２１または実質的に相同なそのバリアントに比べて延長した血清半減期など、長時間作用を示す。
【００４７】
本明細書で用いられる「コンジュゲート」という用語は、それだけには限定されないが、ＰＥＧ化、ＨＥＳ化、またはポリシアル化など、アミノ酸鎖の化学的コンジュゲーションを可能にするアミノ酸鎖の改変を含む、天然のＦＧＦ−２１またはＦＧＦ−２１の実質的に相同なバリアントのアミノ酸鎖を意味する。このようなＦＧＦ−２１コンジュゲートは、典型的には、それだけには限定されないが、天然のＦＧＦ−２１または実質的に相同なそのバリアントに比べて延長した血清半減期など、長時間の作用を示す。
【００４８】
ＦＧＦ−２１コンジュゲートの例は、例えば、グリコール連結したＦＧＦ−２１化合物など、国際公開第２００５／０９１９４４号、国際公開第２００６／０５０２４７号、または国際公開第２００９／０８９３９６号に記載されている。このようなグリコール連結したＦＧＦ−２１化合物は、通常、例えば、システインもしくはリジンであるアミノ酸残基に、または導入されたＮ−連結もしくはＯ−連結したグリコシル化部位に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を保有する（本明細書において「ＰＥＧ化ＦＧＦ−２１」と呼ぶ）。このようなＰＥＧ化ＦＧＦ−２１化合物は、一般的にヒトＦＧＦ−２１に比べて長時間の作用を示す。適切なＰＥＧは、分子量約２０，０００から４０，０００ダルトンを有する。
【００４９】
「ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト」は、ＧＬＰ−１（グルカゴン様ペプチド１）など、ＧＬＰ−１受容対に結合し、活性化する化合物と規定される。ＧＬＰ−１および／またはＧＬＰ−１Ｒアゴニストの生理学的作用は、Ｎａｕｃｋ，Ｍ．Ａ．ら、（１９９７年）Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ、１０５巻、１８７〜１９５頁などに記載されている。正常な対象、特にヒトにおけるこれらの生理学的作用は、例えば、インスリン分泌のグルコース依存性の刺激、グルカゴン分泌の抑制、（プロ）インスリン生合成の刺激、食物摂取の低減、胃内容排出の減速、および／またはあいまいなインスリン感受性を含む。
【００５０】
ＧＬＰ−１Ｒアゴニストを見出すのに適するアッセイは、例えば、Ｔｈｏｒｋｉｌｄｓｅｎ，Ｃｈｒ．ら（２００３年）、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、３０７巻、４９０〜４９６頁；Ｋｎｕｄｓｅｎ，Ｌ．Ｂ．ら（２００７年）、ＰＮＡＳ、１０４巻、９３７〜９４２頁、Ｎｏ．３；Ｃｈｅｎ，Ｄ．ら（２００７年）、ＰＮＡＳ、１０４巻、９４３〜９４８頁、Ｎｏ．３；または米国特許出願公開第２００６／０００３４１７  Ａ１号（例えば、実施例８を参照されたい）に記載されている。簡潔に述べると、「受容体結合アッセイ」において、ヒト組換えＧＬＰ−１受容体などを内部に持つ真核細胞、例えば、ＣＨＯ、ＢＨＫ、またはＨＥＫ２９３細胞の精製した膜分画を、例えば、125Ｉ（例えば、８０ｋＢｑ／ｐｍｏｌ）などでマークされているＧＬＰ−１（７〜３６）アミドなどのヒトＧＬＰ−１の存在下で、試験化合物または化合物（複数）とインキュベートする。通常、様々な濃度の試験化合物または化合物（複数）を用い、ＩＣ50値を、ヒトＧＬＰ−１の特異的な結合を低減する濃度として決定する。「受容体機能アッセイ」において、ヒトＧＬＰ−１受容体などを発現する、上記に記載したものなど、真核細胞から単離した原形質膜を調製し、試験化合物と一緒にインキュベートした。試験化合物による刺激に対する応答としてｃＡＭＰを測定することによって、機能アッセイを行う。「レポーター遺伝子アッセイ」において、ヒトＧＬＰ−１受容体などを発現し、複数の応答エレメント／ｃＡＭＰ応答エレメントが駆動するルシフェラーゼレポータープラスミドなどを含む、上記に記載したものなどの真核細胞を、試験化合物の存在下で培養する。ｃＡＭＰ応答エレメントが駆動するルシフェラーゼ活性を、試験化合物による刺激に対する応答として測定する。
【００５１】
適切なＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、生理活性ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１類似体、またはＧＬＰ−１置換物、例えば、Ｄｒｕｃｋｅｒ，Ｄ．Ｊ．（２００６年）Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、３巻、１５３〜１６５頁；Ｔｈｏｒｋｉｌｄｓｅｎ，Ｃｈｒ．（２００３年；上述）；Ｃｈｅｎ，Ｄ．ら（２００７年；上述）；Ｋｎｕｄｓｅｎ，Ｌ．Ｂ．ら（２００７年；上述）；Ｌｉｕ，Ｊ．ら（２００７年）Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  Ｉｎｔ．、５１巻、３６１〜３６９頁、Ｎｏ．６〜７；Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｍ．ら（２００９年）、Ｄｒｕｇｓ、１２巻、５０３〜５１３頁；Ｍａｉｄａ，Ａ．ら（２００８年）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１４９巻、５６７０〜５６７８頁、Ｎｏ．１１、および米国特許出願公開第２００６／０００３４１７号において記載されているものから選択される。例示的な化合物は、ＧＬＰ−１（７〜３７）、ＧＬＰ−１（７〜３６）アミド、エキステンジン−４、リラグルチド、ＣＪＣ−１１３１、アルブゴン、アルビグルチド、エキセナチド、エキセナチド−ＬＡＲ、オキシトモジュリン、リキシセナチド、ゲニプロシド、ＡＶＥ−００１０、ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する短鎖ペプチド、および／またはＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する小有機化合物である。
【００５２】
詳しく述べると、ヒトＧＬＰ−１（７〜３７）は、配列番号：３のアミノ酸配列を所有する。ヒトＧＬＰ−１（７〜３６）アミドは、配列番号：４のアミノ酸配列を所有する。エキステンジン−４は、配列番号：５のアミノ酸配列を所有する。エキセナチドは、配列番号：６のアミノ酸配列を、オキシントモジュリンは、配列番号：７のアミノ酸配列を所有する。リキシセナチドのアミノ酸配列を配列番号：８に示す。リキシセナチドの構造は、ＤＰＰ−４（ジペプチジルペプチダーゼ−４）による生理学的分解に即時に抵抗するために、さらなる６個のリジン残基でＣ末端が修飾されたエキステンジン−４（１〜３９）に基づく。ＡＶＥ００１０のアミノ酸配列を、配列番号：９に示す。
【００５３】
リラグルチドの化学構造を図１に示す。リラグルチドは、ＧＬＰ−１（７〜３７）のＬｙｓ３４をＡｒｇに置換し、γ−グルタミン酸スペーサーを用いて２６位にＣ１６脂肪酸を付加することによって得られた。化学名は、［Ｎ−ε（γ−Ｌ−グルタモイル（Ｎ−α−ヘキサデカノイル）−Ｌｙｓ26，Ａｒｇ34−ＧＬＰ−１（７〜３７）］である。
【００５４】
ＣＪＣ−１１３１の化学構造を図２に示す。ＧＬＰ−１のＣ末端にアルブミンが付着しており、８位がｄ−アラニンで置換されている。ＣＪＣ−１１３１は、安定性および生理活性の非常に良好な組合せを示す。
【００５５】
ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する他のペプチドは、米国特許出願公開第２００６／０００３４１７号に例示的に記載されており、ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する小有機化合物は、Ｃｈｅｎら、２００７年、ＰＮＡＳ、１０４巻、９４３〜９４８頁、Ｎｏ．３、またはＫｎｕｄｓｅｎら、２００７年、ＰＮＡＳ、１０４巻、９３７〜９４２頁に例示的に開示されている。
【００５６】
本発明のさらなる一実施形態において、医薬組成物は、少なくとも１つの抗糖尿病薬および／または少なくとも１つのＤＰＰ−４阻害薬をさらに含む。
【００５７】
本明細書で用いられる「抗糖尿病薬」という用語は、糖尿病の症状および／または原因を低減する作用機序を示す医薬品を意味する。例示的な抗糖尿病薬は、
ａ）インスリン、
ｂ）チアゾリジンジオン、例えば、ロシグリタゾンもしくはピオグリタゾン（例えば、国際公開第２００５／０７２７６９号を参照されたい）、メトホルミン（Ｎ，Ｎ−ジメチルイミドジカルボニミジックジアミド）、または
ｃ）スルホニル尿素、例えば、クロルプロプアミド（４−クロロ−Ｎ−（プロピルカルバモイル）−ベンゼンスルホンアミド）、トラズアミド（Ｎ−［（アゼパン−１−イルアミノ）カルボニル］−４−メチル−ベンゼンスルホンアミド）、グリクラジド（Ｎ−（ヘキサヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロール−２（１Ｈ）−イル−カルバモイル）−４−メチルベンゼンスルホンアミド），またはグリメピリド（３−エチル−４−メチル−Ｎ−（４−［Ｎ−（（１ｒ，４ｒ）−４−メチルシクロヘキシルカルバモイル）−スルファモイル］フェネチル）−２−オキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボキサミド）。
【００５８】
本発明によると、「インスリン」は、天然に存在するインスリン、修飾されているインスリン、またはインスリンの塩を含むインスリン類似体、およびこれらの組合せ、例えば、修飾されているインスリンとインスリン類似体との組合せ、例えば、アミノ酸の交換／欠失／付加ならびにアシル化または他の化学的修飾などのさらなる修飾を有するインスリンを意味する。このタイプの化合物の一例は、インスリンデテミル、すなわち、ＬｙｓＢ２９−テトラデカノイル／ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンである。別の一例は、非天然のアミノ酸または真核生物において通常非コードであるアミノ酸、例えば、Ｄ−アミノ酸が組み入れられているインスリンであってよい（Ｇｅｉｇｅｒ，Ｒ．ら、Ｈｏｐｐｅ  Ｓｅｙｌｅｒｓ  Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９７６年）３５７巻、１２６７〜１２７０頁；Ｇｅｉｇｅｒ，Ｒ．ら、Ｈｏｐｐｅ  Ｓｅｙｌｅｒｓ  Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９７５年）３５６巻、１６３５〜１６４９頁、Ｎｏ．１０；Ｋｒａｉｌ，Ｇ．ら、Ｈｏｐｐｅ  Ｓｅｙｌｅｒｓ  Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９７１年）３５２巻、１５９５〜１５９８頁、Ｎｏ．１１）。さらに他の例は、Ａ鎖もしくはＢ鎖のいずれか、または両方のＣ末端のカルボン酸がアミドによって置換されているインスリン類似体である。
【００５９】
「修飾されているインスリン」は、好ましくは、インスリン活性を有するアシル化されているインスリン、特に、インスリンのＡ鎖および／またはＢ鎖における１つまたはそれ以上のアミノ酸（複数可）がアシル化されている、好ましくはＢ２９位がアシル化されているヒトインスリンから選択される（Ｔｓａｉ，Ｙ．Ｊ．ら（１９９７年）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、８６巻、１２６４〜１２６８頁、Ｎｏ．１１）。他のアセチル化されたインスリンは、ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンまたはＢ０１ウシインスリンである（Ｔｓａｉ，Ｙ．Ｊ．ら、上述）。アシル化されているインスリンの他の例は、例えば、米国特許第５，７５０，４９７号および米国特許第６，０１１，００７号に開示されている。修飾されているインスリンに対する構造−活性関係の概要は、Ｍａｙｅｒ，Ｊ．Ｐ．ら、（２００７年）Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ、８８巻、６８７〜７１３頁、Ｎｏ．５において提供される。修飾されているインスリンは、典型的に、インスリン、またはプレプロインスリン、プロインスリン、もしくはこれらの切断された類似体などの適切なインスリン前駆体の、化学的および／または酵素的操作によって製造される。
【００６０】
「インスリン類似体」は、好ましくは、１つまたはそれ以上の変異（複数可）、置換（複数可）、欠失（複数可）、および／または付加（複数可）を有するインスリン活性を有するインスリン、特に、Ａ鎖および／またはＢ鎖におけるＣ末端および／またはＮ末端の切断または延長を有するインスリン、好ましくは、ｄｅｓ（Ｂ３０）インスリン、ＰｈｅＢ１インスリン、Ｂ１〜４インスリン、ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン（インスリンアスパルト）、ＬｙｓＢ２８／ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン（インスリンリスプロ）、ＬｙｓＢ０３／ＧｌｕＢ２９ヒトインスリン（インスリングルリシン）、またはＧｌｙＡ２１／ＡｒｇＢ３１／ＡｒｇＢ３２ヒトインスリン（インスリングラルギン）から選択される。インスリン類似体の唯一の条件は、それが十分なインスリン活性を有するということである。インスリン類似体に対する構造−活性相互関係の概要は、どのアミノ酸の交換、欠失、および／または付加が認容されるかという議論とともに、Ｍａｙｅｒ，Ｊ．Ｐ．ら（２００７年；上述）において提供される。インスリン類似体は、好ましくは、天然に存在するアミノ酸残基の１つまたはそれ以上、好ましくはその１、２、または３つが別のアミノ酸残基によって置換されているものである。インスリン類似体のさらなる例は、Ｃ末端が切断されている誘導体、例えばｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン；Ｂ鎖Ｎ末端が切断されているインスリン類似体、例えば、ｄｅｓＰｈｅＢ１インスリン、またはｄｅｓＢ１〜４インスリン；Ｂ鎖がＮ末端の延長を有する、いわゆる「プレインスリン」を含めた、Ａ鎖および／またはＢ鎖がＮ末端の延長を有するインスリン類似体；Ａ鎖および／またはＢ鎖がＣ末端の延長を有するインスリン類似体である。例えば、１つまたは２つのＡｒｇをＢ１位に付加してもよい。インスリン類似体の例は、以下の特許およびその同等物において記載されている：米国特許第５，６１８，９１３号、欧州特許第０２５４５１６  Ａ２号、および欧州特許第０２８０５３４  Ａ２号。臨床使用におけるインスリン類似体の概要はＭａｙｅｒ  Ｊ．Ｐ．ら（２００７年、上述）において提供される。インスリン類似体、またはこれらの前駆体は、典型的に、当業者にはよく知られている遺伝子工学の技術を用いて、典型的には細菌または酵母において製造され、所望によりその後酵素的または合成操作を行う。あるいは、インスリン類似体は化学的に製造することができる（Ｃａｏ，Ｑ．Ｐ．ら（１９８６年）Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ  Ｓｅｙｌｅｒ、３６７巻、１３５〜１４０頁、Ｎｏ．２）。特定のインスリン類似体の例には、インスリンアスパルト（すなわち、ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン）；インスリンリスプロ（すなわち、ＬｙｓＢ２８、ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン）；インスリングルリシン（すなわち、ＬｙｓＢ０３、ＧｌｕＢ２９ヒトインスリン）；およびインスリングラルギン（すなわち、ＧｌｙＡ２１、ＡｒｇＢ３１、ＡｒｇＢ３２ヒトインスリン）がある。
【００６１】
例示的なＤＰＰ−４阻害薬は、
式Ｉの化合物（図３）、シタグリプチン：（Ｒ）−４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］−ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミン、
ビルダグリプチン：（Ｓ）−１−［Ｎ−（３−ヒドロキシ−１−アダマンチル）グリシル］ピロリジン−２−カルボニトリル、サキサグリプチン：（１Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−アミノ−２−（３−ヒドロキシ−１−アダマンチル）−アセチル］−２−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−カルボニトリル、リナグリプチン８−［（３Ｒ）−３−アミノピペリジン−１−イル］−７−（ブト−２−イン−１−イル）−３−メチル−１−［（４−メチル−キナゾリン−２−イル）メチル］−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン）アドグリプチン（２−（｛６−［（３Ｒ）−３−アミノピペリジン−１−イル］−３−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル｝メチル）−ベンゾニトリル、およびメギ属、ヒドラスチス（ヒドラスチスカナデンシス（Ｈｙｄｒａｓｔｉｓ  ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ））、およびコプチスチネンシス（Ｃｏｐｔｉｓ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）などの植物の根、根茎、茎、および樹皮において見出されるイソキノリンアルカロイドのグループからの第四級アンモニウム塩であるベルベリンである。
【００６２】
本発明のさらなる実施形態において、医薬組成物は、少なくとも１つのＦＧＦ−２１（線維芽細胞成長因子２１）化合物および少なくともＤＰＰ−４（ジペプチジルペプチダーゼ−４）阻害薬を含む。このような組成物は、少なくとも１つの抗糖尿病薬および／または少なくとも１つのＧＬＰ１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニストをさらに含むことができる。
【００６３】
少なくとも１つのＦＧＦ−２１化合物（例えば、天然に存在するＦＧＦ−２１（例えば、配列番号：１の配列を含む、もしくは有する）、またはＦＧＦ−２１ミメティック（例えば、配列番号：２を含む、もしくは有する）および少なくとも１つのＤＰＰ−４阻害薬（例えば、式１を有する化合物、特にシタグリプチン）および少なくとも１つのＧＬＰ−１Ｒアゴニスト（例えば、ＡＶＥ００１０）を含む医薬組成物も、ＦＧＦ−２１のＧＬＰ−１Ｒアゴニストとの血中グルコースの低下に対する相乗効果と、ＦＧＦ−２１のＤＰＰＩＶ阻害薬との肝臓もしくは血中の脂質（特に、トリグリセリド）の低下に対する相乗効果を組み合わせるので、やはり有利である。このような組合せは、（血漿、血液、および／または肝臓の）脂質、好ましくは上昇した脂質および特に上昇したトリグリセリドの低減における使用（例えば、高脂血症もしくは脂肪肝疾患の処置における適用）、および血中または血漿グルコースレベルの低下または耐糖能の増大（例えば、高血糖、耐糖能異常、もしくは糖尿病の処置における適用）、または、３つの成分の他の組合せ使用のいずれかに有利であり得る。
【００６４】
本発明の医薬組成物の個々の化合物を、一製剤において組み合わせることができ、または例えば、同時、もしくは後続、すなわち逐次投与（複数可）、またはこれらの組合せを、いくつかの製剤において含むことができる。
【００６５】
本発明によると、少なくとも１つのＦＧＦ−２１化合物と少なくとも１つのＧＬＰ−１Ｒアゴニストとの組合せは、驚くべきことに、実施例における動物モデルで示す通り、血漿グルコースレベルを低下させる上で相乗効果をもたらす。さらに、少なくとも１つのＦＧＦ−２１化合物と、少なくとも１つのＤＰＰ−４阻害薬との組合せは、驚くべきことに、実施例における動物モデルで示す通り、トリグリセリド、特に肝臓のトリグリセリドを低下させる上で相乗効果をもたらす。動物モデルは、ｏｂ／ｏｂすなわち肥満マウス、ｄｂ／ｄｂマウスおよびＤＩＯマウス（食餌誘発性肥満マウス）である。ｏｂ／ｏｂマウスは、食欲を調節するホルモンであるレプチンを生成することができない変異マウスである。したがって、ｏｂ／ｏｂマウスは過剰に摂食し、大いに肥満になる。これは、高血糖、インスリン耐性、および肥満に対する標準的な動物モデルである。糖尿病に対する別の標準的な動物モデルは、レプチン受容体活性の欠損を保有するｄｂ／ｄｂマウスである。このマウスも、肥満、高血糖、およびインスリン耐性を特徴とする。
【００６６】
本発明の医薬組成物は、治療有効量の個々の化合物、および一般的に、許容される医薬担体である希釈剤または賦形剤、例えば、滅菌水、生理食塩水、静菌性の食塩水、すなわちベンジルアルコールを約０．９％ｍｇ／ｍｌ含む食塩水、リン酸緩衝食塩水、ハンクス溶液、リンゲルの乳酸塩、ラクトース、デキストロース、ショ糖、トレハロース、ソルビトール、マンニトールなどを含む。組成物は、一般的に、溶液または懸濁液である。組成物は経口、皮下、筋肉内、肺投与、吸入による投与、かつ／または徐放投与によって投与することができる。組成物を皮下投与するのが好ましい。
【００６７】
「治療有効量」という用語は、許容できない副作用を引き起こさずに、望ましい治療効果および／または予防効果をもたらす化合物の量を一般的に意味する。典型的な投与量範囲は、１日あたり約０．０１ｍｇから１日あたり約１０００ｍｇまで、である。各々の治療上有効な化合物に対する好ましい投与量範囲は、１日あたり約０．１ｍｇから１日あたり約１００ｍｇまで、であり、最も好ましい投与量範囲は、約１．０ｍｇ／日から約１０ｍｇ／日までであり、特に約１〜５ｍｇ／日である。
【００６８】
後続投与（複数可）の場合、医薬組成物の個々の化合物を、ＦＧＦ−２１化合物とＧＬＰ−１Ｒアゴニストとの相乗効果が、例えば、実施例において示す「耐糖能試験」などにおいて、依然として測定可能である期間の間投与される。耐糖能試験は、グルコース投与後、いかに速やかにグルコースが血中から消失するかを決定するための試験である。グルコースはほとんどの場合、経口投与される（「経口耐糖能試験」または「ＯＧＴＴ」）。個々の化合物、特に、ＦＧＦ−２１化合物およびＧＬＰ−１Ｒアゴニストの後続投与の期間は、通常１時間以内であり、好ましくは３０分、最も好ましくは１５分以内、特に５分以内である。
【００６９】
一般的に、医薬組成物の患者への適用は、１日あたり１回もしくは数回、または１週間に１回もしくは数回、または場合に応じてさらに長期間の間である。本発明の医薬組成物の最も好ましい適用は、組合せ投与量で１日あたり１回から３回の皮下適用である。
【００７０】
本明細書で用いられる「メタボリックシンドローム」は、心血管疾患および／または糖尿病を発症するリスクを増大する医学的障害を意味する。心血管疾患および／または糖尿病を発症するリスクを増大する医学的障害は、それだけには限定されないが、脂質異常症、脂肪肝疾患（ＦＬＤ）、糖代謝異常、耐糖能異常（ＩＧＴ）、肥満、および脂肪過多を含む。
【００７１】
心血管疾患は、当技術分野において、それだけには限定されないが、アテローム性動脈硬化症など、心臓または血管（動脈および静脈）に関与する疾患のクラスとして知られている。
【００７２】
脂質異常症は、異常量の脂質（例えば、コレステロール、特にｌｄｌコレステロール、および／またはトリグリセリドなどの脂肪）が血中に存在する状態である。先進国において、脂質異常症のほとんどは食事および生活様式によってしばしば引き起こされる、高脂血症；すなわち、血中の脂質（例えば、トリグリセリドおよび／またはｌｄｌコレステロール）の上昇である。インスリンレベルの長期間の上昇も、脂質異常症をもたらし得る。
【００７３】
脂肪肝疾患（ＦＬＤ）は、脂肪変性（すなわち、細胞内の脂質の異常な滞留）により、トリグリセリド脂肪の大型の液胞が肝臓に蓄積する可逆性の状態である。ＦＬＤには、しかし、複数の原因があることがあり；（インスリン耐性の効果の有無にかかわらず）過剰のアルコール摂取および肥満に主に関連する。
【００７４】
糖代謝異常は、身体の糖代謝／エネルギー生成のメカニズムにおける不均衡を意味する。糖尿病は、高血糖の存在を特徴とする代謝障害である。耐糖能異常（ＩＧＴ）は、インスリン耐性、および心血管の病理のリスクの増大に関連する前糖尿病状態の糖代謝異常であり、何年も２型糖尿病に先行し得る。
【００７５】
肥満は、過剰の体脂肪が健康に対して有害作用を有し得る程度に蓄積し、平均余命の減少および／または健康問題の増大をもたらす、医学的状態である。
【００７６】
少なくとも１つのＦＧＦ−２１化合物およびＧＬＰ−１受容体アゴニストを含み、または少なくともＦＧＦ−２１化合物およびＤＰＰ  ＩＶ阻害薬を含む本発明の医薬組成物は、血中グルコースレベルを正常血糖のレベルまで低下させ、より速やかでより効果的なグルコース利用によってエネルギー消費を増大し、したがって少なくとも１つのメタボリックシンドロームおよび／またはアテローム性動脈硬化症、特に、１型または２型糖尿病、脂質異常症、脂肪肝疾患（ＦＬＤ）、糖代謝異常、耐糖能異常（ＩＧＴ）、肥満、および／または脂肪過多症、特に２型糖尿病を処置するのに有用である。
【００７７】
したがって、本発明はまた、上記に記載した疾患または障害の少なくとも１つを処置するための医薬品の製造のための記載した医薬組成物（複数可）の使用、および患者における上記に記載した疾患の少なくとも１つを処置するための方法をも対象とする。患者は特に、１型糖尿病患者、２型糖尿病患者、特に食事療法中の２型糖尿病患者、スルホニル尿素治療中の２型糖尿病患者、極期２型糖尿病患者、および／または長期インスリン治療中の２型糖尿病患者から選択される。医薬品は、当業者には知られている方法によって、例えば、上記に記載した通り、薬学的に有効な量の化合物または化合物（複数）と、許容できる医薬担体である希釈剤または賦形剤と混合することによって製造することができる。
【００７８】
さらなる実施形態において、本発明はまた、好ましくは糖尿病患者、より好ましくは、１型糖尿病患者、２型糖尿病患者、特に食事療法中の２型糖尿病患者、スルホニル尿素治療中の２型糖尿病患者、極期２型糖尿病患者、および／または長期インスリン治療中の２型糖尿病患者からなる群から選択される糖尿病患者における糖尿病、好ましくは２型糖尿病を処置するための記載した医薬組成物をも対象とする。典型的には、患者は哺乳動物、好ましくはヒトである。
【００７９】
本発明はまた、好ましくは糖尿病患者、より好ましくは、１型糖尿病患者、２型糖尿病患者、特に食事療法中の２型糖尿病患者、スルホニル尿素治療中の２型糖尿病患者、極期２型糖尿病患者、および／または長期インスリン治療中の２型糖尿病患者からなる群から選択される糖尿病患者における血漿グルコースレベルを低下させるための記載した医薬組成物をも対象とする。典型的には、患者は哺乳動物、好ましくはヒトである。
【００８０】
さらに、本発明は、好ましくは糖尿病患者、より好ましくは、１型糖尿病患者、２型糖尿病患者、特に食事療法中の２型糖尿病患者、スルホニル尿素治療中の２型糖尿病患者、極期２型糖尿病患者、および／または長期インスリン治療中の２型糖尿病患者からなる群から選択される糖尿病患者における耐糖能を増大するための記載した医薬組成物を対象とする。典型的には、患者は哺乳動物、好ましくはヒトである。
【００８１】
本発明はまた、好ましくは糖尿病患者、より好ましくは、１型糖尿病患者、２型糖尿病患者、特に食事療法中の２型糖尿病患者、スルホニル尿素治療中の２型糖尿病患者、極期２型糖尿病患者、および／または長期インスリン治療中の２型糖尿病患者からなる群から選択される糖尿病患者におけるインスリン耐性を低減するための上記に記載した医薬組成物をも対象とする。典型的には、患者は哺乳動物、好ましくはヒトである。
【００８２】
さらなる実施形態において、本発明は、好ましくは糖尿病患者、より好ましくは、１型糖尿病患者、２型糖尿病患者、特に食事療法中の２型糖尿病患者、スルホニル尿素治療中の２型糖尿病患者、極期２型糖尿病患者、および／または長期インスリン治療中の２型糖尿病患者からなる群から選択される糖尿病患者における体温を上昇させるための記載した医薬組成物を対象とする。典型的には、患者は哺乳動物、好ましくはヒトである。
【００８３】
さらなる実施形態において、本発明は、好ましくは糖尿病患者、より好ましくは、１型糖尿病患者、２型糖尿病患者、特に食事療法中の２型糖尿病患者、スルホニル尿素治療中の２型糖尿病患者、極期２型糖尿病患者、および／または長期インスリン治療中の２型糖尿病患者からなる群から選択される糖尿病患者における体重を減少させるための記載した医薬組成物を対象とする。典型的には、患者は哺乳動物、好ましくはヒトである。
【００８４】
さらなる実施形態において、本発明は、好ましくは糖尿病患者、より好ましくは、１型糖尿病患者、２型糖尿病患者、特に食事療法中の２型糖尿病患者、スルホニル尿素治療中の２型糖尿病患者、極期２型糖尿病患者、および／または長期インスリン治療中の２型糖尿病患者からなる群から選択される糖尿病患者における肝臓における脂質含量、特にトリグリセリドレベルを低減するための記載した医薬組成物を対象とする。典型的には、患者は哺乳動物、好ましくはヒトである。
【００８５】
さらなる実施形態において、本発明は、上記に記載した医薬組成物の投与を含む、血漿グルコースレベルを低下させ、特に上昇した血漿グルコースレベルを低下させ、血漿グルコースレベルを正常化し、肝臓における脂質含量を低下させ、血漿脂質レベルを低下させ、特に上昇したレベルのトリグリセリドもしくは上昇したレベルのｌｄｌコレステロールなどの血漿脂質レベルを低下させ、脂質異常症（好ましくは高脂血症）を処置し、体重を減少させ、耐糖能を増大し、インスリン耐性を低減し、体温を上昇させ、または肥満を処置し、耐糖能異常を処置し、脂肪肝疾患を処置し、高血糖を処置し、かつ／または体重を減少させる糖尿病、好ましくは２型糖尿病の処置方法を対象とする。
【００８６】
好ましくは、医薬組成物を糖尿病患者、より好ましくは、１型糖尿病患者、２型糖尿病患者、特に食事療法中の２型糖尿病患者、スルホニル尿素治療中の２型糖尿病患者、極期２型糖尿病患者、および／または長期インスリン治療中の２型糖尿病患者からなる群から選択される糖尿病患者に投与する。典型的には、患者は哺乳動物、好ましくはヒトである。
【００８７】
好ましい実施形態において、治療有効量を投与する。典型的に、投与量範囲は１日あたり０．０１ｍｇから１日あたり約１０００ｍｇまでである。好ましくは、各々の治療有効量の投与量範囲は、１日あたり約０．１ｍｇから１日あたり約１００ｍｇまでであり、より好ましい投与量範囲は約１．０ｍｇ／日から約１０ｍｇ／日まで、最も好ましくは約１〜５ｍｇ／日である。
【００８８】
典型的には、医薬組成物を、経口、皮下、筋肉内、肺投与、吸入による投与、かつ／または徐放投与によって投与する。組成物を皮下投与するのが好ましい。
【００８９】
本発明は以下の態様も包含する：
１．少なくとも１つのＦＧＦ−２１（線維芽細胞成長因子２１）化合物、および少なくとも１つのＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニストを含む医薬組成物。
２．少なくとも１つの抗糖尿病薬、および／または少なくとも１つのＤＰＰ−４（ジペプチジルペプチダーゼ−４）阻害薬をさらに含む、態様１に記載の医薬組成物。
３．少なくとも１つのＦＧＦ−２１（線維芽細胞成長因子２１）化合物、および少なくとも１つのＤＰＰ−４（ジペプチジルペプチダーゼ−４）阻害薬を含む医薬組成物。
４．少なくとも１つの抗糖尿病薬および／または少なくとも１つのＧＬＰ１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニストをさらに含む、態様３に記載の医薬組成物。
５．ＦＧＦ−２１化合物（複数可）、場合によりＧＬＰ−１Ｒアゴニスト（複数可）、場合により抗糖尿病薬（複数可）、および場合によりＤＰＰ−４阻害薬は、１製剤において組み合わされ、またはいくつかの製剤中に含まれる、態様１〜４のいずれかに記載の医薬組成物。
６．ＦＧＦ−２１組成物（複数可）、場合によりＧＬＰ−１Ｒアゴニスト（複数可）、場合により抗糖尿病薬（複数可）、および場合によりＤＰＰ−４阻害薬の製剤は、同時投与または後続投与（複数可）に適する、態様５に記載の医薬組成物。
７．ＦＧＦ−２１化合物は、天然のＦＧＦ−２１またはＦＧＦ−２１ミメティックから選択される、態様１〜６のいずれかに記載の医薬組成物。
８．ＦＧＦ−２１ミメティックは、配列番号：１に示すアミノ酸配列に対してアミノ酸配列同一性を少なくとも約９６％有し、ＦＧＦ−２１活性を有するタンパク質、ＦＧＦ−２１融合タンパク質、および／またはＦＧＦ−２１コンジュゲートから選択される、態様７に記載の医薬組成物。
９．ＦＧＦ−２１ミメティックは、ＦＧＦ−２１ムテイン、ＦＧＦ−２１−Ｆｃ融合タンパク質、ＦＧＦ−２１−ＨＳＡ融合タンパク質、および／またはＰＥＧ化ＦＧＦ−２１から選択される、態様８に記載の医薬組成物。
１０．ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、生理活性ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１類似体、またはＧＬＰ−１代替物から選択される、態様１〜９のいずれかに記載の医薬組成物。
１１．ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、ＧＬＰ−１（７〜３７）、ＧＬＰ−１（７〜３６）アミド、エキセンジン−４（ｅｘｔｅｎｄｉｎ−４）、リラグルチド、ＣＪＣ−１１３１、アルブゴン、アルビグルチド、エキセナチド、エキセナチド−ＬＡＲ、オキシントモジュリン、リキシセナチド、ゲニポシド（ｇｅｎｉｐｒｏｓｉｄｅ）、ＡＶＥ−００１０（配列番号：９）、ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する短鎖ペプチド、および／またはＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する小有機化合物から選択される、態様１０に記載の医薬組成物。
１２．抗糖尿病薬は、メトホルミン、チアゾリジンジオン、スルホニル尿素、および／またはインスリンから選択される、態様１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
１３．ＤＰＰ−４阻害薬は、シタグリプチン、ビルダグリプチン、サキサグリプチン、リナグリプチン、アログリプチン（ａｄｏｇｌｉｐｔｉｎ）、および／またはベルベリンから選択される、態様１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
１４．患者における心血管疾患ならびに／または糖尿病、ならびに／または心血管疾患および／もしくは糖尿病を発症するリスクを増大する少なくとも１つのメタボリックシンドロームを処置するための医薬を製造するための、態様１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物の使用。
１５．メタボリックシンドロームは、脂質異常症、脂肪肝疾患（ＦＬＤ）、糖代謝異常、耐糖能異常（ＩＧＴ）、肥満、および／または脂肪過多症、特に２型糖尿病から選択される、態様１７に記載の使用。
１６．心血管疾患はアテローム性動脈硬化症である、態様１７に記載の使用。
１７．患者は、１型糖尿病患者、２型糖尿病患者、特に食事療法中の２型糖尿病患者、スルホニル尿素治療中の２型糖尿病患者、極期２型糖尿病患者、および／または長期インスリン治療中の２型糖尿病患者から選択される、態様１７〜１９のいずれかに記載の使用。１８．心血管疾患ならびに／または糖尿病、ならびに／または心血管疾患および／もしくは糖尿病を発症するリスクを増大する少なくとも１つのメタボリックシンドローム、好ましくは２型糖尿病を処置するための、態様１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物。
１９．メタボリックシンドロームは、脂質異常症、脂肪肝疾患（ＦＬＤ）、糖代謝異常、耐糖能異常（ＩＧＴ）、肥満、および／または脂肪過多症から選択される、態様１８に記載の医薬組成物。
２０．心血管疾患はアテローム性動脈硬化症である、態様１８に記載の医薬組成物。
２１．血漿グルコースレベルを低下させ、肝臓における脂質含量を低下させ、高脂血症を処置し、高血糖を処置し、耐糖能を増大させ、インスリン耐性を低減し、体温を上昇させ、かつ／または体重を減少させるための、態様１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物。２２．糖尿病患者、好ましくは１型糖尿病患者、２型糖尿病患者、特に食事療法中の２型糖尿病患者、スルホニル尿素治療中の２型糖尿病患者、極期２型糖尿病患者、および／または長期インスリン治療中の２型糖尿病患者からなる群から選択される糖尿病患者において、血漿グルコースレベルを低下させ、肝臓における脂質含量を低下させ、耐糖能を増大させ、インスリン耐性を増大させ、体温を上昇させ、かつ／または体重を減少させるための、態様２１に記載の医薬組成物。
２３．患者は哺乳動物、好ましくはヒトである、態様２２に記載の医薬組成物。
２４．血漿グルコースレベルを低下させ、肝臓における脂質含量を低下させ、耐糖能を増大させ、インスリン耐性を低減し、体温を上昇させ、かつ／または体重を減少させるための医薬を製造するための、態様１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物の使用。
２５．態様１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物の投与を含む、心血管疾患ならびに／または糖尿病、ならびに／または心血管疾患および／もしくは糖尿病を発症するリスクを増大する少なくとも１つのメタボリックシンドローム、好ましくは２型糖尿病を処置する方法。
２６．メタボリックシンドロームは、脂質異常症、脂肪肝疾患（ＦＬＤ）、糖代謝異常、耐糖能異常（ＩＧＴ）、肥満、および／または脂肪過多症から選択される、態様２５に記載の方法。
２７．心血管疾患はアテローム性動脈硬化症である、態様２６に記載の方法。
２８．態様１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物の投与を含む、血漿グルコースレベルを低下させ、肝臓における脂質含量を低下させ、高脂血症を処置し、高血糖を処置し、耐糖能を増大させ、インスリン耐性を低減し、体温を上昇させ、かつ／または体重を減少させる処置方法。
２９．医薬組成物を、糖尿病患者、好ましくは１型糖尿病患者、２型糖尿病患者、特に食事療法中の２型糖尿病患者、スルホニル尿素治療中の２型糖尿病患者、極期２型糖尿病患者、および／または長期インスリン治療中の２型糖尿病患者からなる群から選択される糖尿病患者に投与する、態様２５〜２８のいずれかに記載の方法。
３０．患者は哺乳動物、好ましくはヒトである、態様２９に記載の方法。
３１．治療有効量を投与する、態様２５〜３０のいずれかに記載の方法。
３２．医薬組成物を、１日あたり０．０１ｍｇから１日あたり約１０００ｍｇまで、好ましくは１日あたり約０．１ｍｇから１日あたり約１００ｍｇまで、より好ましくは約１．０ｍｇ／日から約１０ｍｇ／日まで、最も好ましくは約１〜５ｍｇ／日の投与量範囲において投与する、態様２５〜３１のいずれかに記載の方法。
３３．医薬組成物を、経口、皮下、筋肉内、肺投与、吸入による投与、かつ／または徐放投与によって投与し、好ましくは組成物を皮下投与する、態様２５〜３２のいずれかに記載の方法。
【００９０】
以下の図面および実施例は説明の目的にすぎず、本発明を限定することを意図するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００９１】
【図１】リラグルチドの化学構造を示す図である。
【図２】ＣＪＣ−１１３１の化学構造を示す図である。
【図３】式Ｉ：（Ｒ）−４−オキソ−４−［３−（Ｒ１）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリ−アゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２−Ｒ２，４−Ｒ３，５−Ｒ４フェニル）ブタン−２−アミン、Ｒ１＝Ｈまたはハロゲン：Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｊ、Ａｔ；ＣＦ3、またはＣＨ2ＣＦ3；Ｒ２＝Ｈまたはハロゲン：Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｊ、Ａｔ、Ｒ３＝Ｈまたはハロゲン：Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｊ、Ａｔ；Ｒ４＝Ｈまたはハロゲン：Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｊ、Ａｔの化学構造を示す図である。
【図４】ｏｂ／ｏｂマウスにＦＧＦ−２１をＡＶＥ００１０と一緒に皮下注射後、経時の血漿グルコースレベルを示す図である。データは全て、平均値±ＳＥＭであり、１群あたりｎ＝６である。
【図５】ｏｂ／ｏｂマウスにＦＧＦ−２１をＡＶＥ００１０と一緒に皮下注射し、１０日後の経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）の結果を示す図である。データは全て、平均値±ＳＥＭであり、１群あたりｎ＝６である。
【図６】ｏｂ／ｏｂマウスにシタグリプチンの経口処置と一緒にＦＧＦ−２１を皮下注射し、１０日後の肝臓トリグリセリドレベルを示す図である。データは全て、平均値±ＳＥＭであり、１群あたりｎ＝６である。*Ｐ＜０．０５；***Ｐ＜０．００１対ビヒクル処置した肥満対照。
【図７】ｄｂ／ｄｂマウスにＦＧＦ−２１をＡＶＥ００１０と一緒に皮下注射後、経時の血漿グルコースレベルを示す図である。データは全て、平均値±ＳＥＭであり、１群あたりｎ＝６である。
【図８】ｄｂ／ｄｂマウスにＦＧＦ−２１をＡＶＥ００１０と一緒に皮下注射し、２１日後のＯＧＴＴの結果を示す図である。データは全て、平均値±ＳＥＭであり、１群あたりｎ＝６である。
【図９】ｄｂ／ｄｂマウスにＦＧＦ−２１をＡＶＥ００１０またはエキセナチドと一緒に皮下注射後、８週間の期間にわたる血漿グルコースレベルを示す図である。データは全て、平均値±ＳＥＭであり、１群あたりｎ＝６である。
【図１０】ｄｂ／ｄｂマウスにＦＧＦ−２１をＡＶＥ００１０またはエキセナチドと一緒に皮下注射後、８週間の期間にわたる血漿ＨｂＡ１ｃレベルを示す図である。データは全て、平均値±ＳＥＭであり、１群あたりｎ＝６である。
【図１１】ＦＧＦ−２１をＡＶＥ００１０またはエキセナチドと一緒に皮下注射し、８週間後のｄｂ／ｄｂマウスの体温を示す図である。データは全て、平均値±ＳＥＭであり、１群あたりｎ＝６である。**Ｐ＜０．０１；***Ｐ＜０．００１対ビヒクル処置した肥満対照。
【図１２】ＤＩＯマウスにＦＧＦ−２１をＡＶＥ００１０と一緒に皮下注射し、１６日後のインスリン耐性試験（ＩＴＴ）の結果を示す図である。データは全て、平均値±ＳＥＭであり、１群あたりｎ＝８である。*Ｐ＜０．０５対ビヒクル処置したＨＦＤ対照。
【図１３】ＦＧＦ−２１をＡＶＥ００１０と一緒に皮下注射し、３週間後のＤＩＯマウスの体重変化を示す図である。データは全て、平均値±ＳＥＭであり、１群あたりｎ＝８である。*Ｐ＜０．０５対ビヒクル処置したＨＦＤ対照。
【発明を実施するための形態】
【００９２】
実施例
１．ｏｂ／ｏｂマウスの処置
ｏｂ／ｏｂ雌マウス（Ｂ６．Ｖ−ＬＥＰ  ＯＢ／Ｊ、６週齢）を、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｓｕｌｚｆｅｌｄ、ドイツ）から得た。マウスを処置群またはビヒクル群に無作為に割り当て、無作為化を、体重および食後血中グルコースレベルによって層別化した。動物を６匹の群で、２３℃、１２時間の明暗周期で飼育した。実験手順は全て、ドイツ動物保護法（Ｇｅｒｍａｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  Ｌａｗ）にしたがって行った。マウスは、薬物処置期間の間は自由に齧歯類用標準飼料を摂食させた。体重を１日おきに記録し、食物摂取を、試験を通して週１回測定した。
【００９３】
ｏｂ／ｏｂマウスを、１日１回皮下的に、ビヒクル（ＰＢＳ）０．０５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1ＡＶＥ００１０、組換えヒトＦＧＦ−２１（配列番号：２）０．７５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1、またはＦＧＦ−２１（配列番号：２）とＡＶＥ００１０との組合せ投与量（０．７５＋０．０５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1）で処置した。第１の処置の１日前および試験１０日目に、血中グルコースを、食後条件下、尾の先端部からの出血によって測定した。図３に示す通り、処置マウスの血中グルコースレベルは正常血糖となった。試験８日目、耐糖能試験（ＯＧＴＴ）を行った。空腹マウスに２ｇ・ｋｇ-1グルコースを経口的に負荷させた。血中グルコースを、麻酔なしで、示された時点に尾の先端部からの出血によって測定した。ＯＧＴＴの結果を図４に示す。ＦＧＦ−２１のみ、またはＡＶＥ０１００のみの投与に比べて、組合せ処置は耐糖能を顕著に強く改善した。組合せ処置した肥満動物は、痩身の対照動物よりもさらに耐糖能がまさっていた。
【００９４】
別の一実験において、ｏｂ／ｏｂ雌マウスを、ビヒクル（ＰＢＳ）もしくは組換えヒトＦＧＦ−２１（配列番号：２）０．７５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1で皮下的に、またはシタグリプチン５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1を経口的に１日１回、またはＦＧＦ−２１皮下（配列番号：２）とシタグリプチン経口との組合せ投与量（０．７５＋５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1）で処置した。１０日目、脂質分析用に肝臓を収集した。肝臓脂質の抽出を行い、脂質含量を測定した。ＤＰＰＩＶ阻害薬であるシタグリプチンの経口投与と組み合わせたＦＧＦ−２１の皮下注射で１０日間処置したｏｂ／ｏｂマウスの肝臓において、ビヒクル処置したマウス、またはＦＧＦ−２１もしくはシタグリプチン単独の投与と比べた場合、脂質蓄積の著しい低減が見られた（図５）。
【００９５】
２．ｄｂ／ｄｂマウスの処置
ｄｂ／ｄｂ雌マウス（ＢＫＳ．Ｃｇ−ｍ＋／＋Ｌｅｐｒｄｂ／Ｊ、６週齢）を、１日１回皮下的に、ビヒクル（ＰＢＳ）、ＡＶＥ００１０  ０．０５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1、組換えヒトＦＧＦ−２１（配列番号：２）０．７５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1、またはＦＧＦ−２１（配列番号：２）とＡＶＥ００１０との組合せ投与量（０．７５＋０．０５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1）で処置した。マウスに自由に摂食させた。第１の処置の前、１週間後および４週間後、血中グルコースおよびＨｂＡ１ｃを、食後条件下で測定した。処置２１日後、経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）を開始した。空腹マウスにグルコース溶液２ｇ・ｋｇ-1を経口的に負荷させ、示された時点に血中グルコースを測定した。結果を図６および図７に示す。ＦＧＦ−２１プラスＡＶＥ００１０の組合せの投与は、血中グルコースの正常化をもたらし、ビヒクル処置した肥満対照に比べて耐糖能を劇的に改善した。一方、ＦＧＦ−２１またはＡＶＥ００１０の単独処置は、組合せのみに比べて、血中グルコース増大の阻害および耐糖能のわずかな改善をもたらした。
【００９６】
別の一実験において、ｄｂ／ｄｂ雌マウス（ＢＫＳ．Ｃｇ−ｍ＋／＋Ｌｅｐｒｄｂ／Ｊ、１２週齢）を８週間、１日１回皮下的に、ビヒクル（ＰＢＳ）、またはＡＶＥ００１０  ０．０５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1、またはエキセナチド０．０４ｍｇ・ｋｇ-1・日-1、または組換えヒトＦＧＦ−２１（配列番号：２）０．７５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1、またはＦＧＦ−２１（配列番号：２）とＡＶＥ００１０との組合せ投与量（０．７５＋０．０５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1）、またはＦＧＦ−２１（配列番号：２）とエキセナチドとの組合せ投与量（０．７５＋０．０４ｍｇ・ｋｇ-1・日-1）で処置した。食後条件下で血中グルコースレベルおよびＨｂＡ１ｃを分析した。処置８週間後に直腸体温を測定した。
【００９７】
ＧＬＰ−１ＲアゴニストであるＡＶＥ００１０およびエキセナチドの両方とも、全体的に、ＦＧＦ−２１と組み合わせた場合、血中グルコースレベルを正常化し、ＨｂＡ１ｃのさらなる上昇を阻止したが、単一の処置はそれほど効果的ではなく、結果を図８および図９に示す。痩身の対照動物の生理学的正常値に向かって１〜１．６℃の体温の上昇は、ＦＧＦ−２１プラスＡＶＥ００１０またはエキセナチドでの組合せ処置のｄｂ／ｄｂマウスにおける結果であり、単一の処置は図１０に示す通り、効果が低かった。
【００９８】
３．ＤＩＯマウスの処置
別の一実験において、Ｃ５７ｂｌ６雌マウスに２２週間、高脂肪食を与えて肥満を誘発した（ＤＩＯ）。その後、マウスを３週間、ビヒクル（ＰＢＳ）、またはＡＶＥ００１０  ０．０５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1、または組換えヒトＦＧＦ−２１（配列番号：２）０．７
５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1、またはＦＧＦ−２１（配列番号：２）とＡＶＥ００１０との組合せ投与量（０．７５＋０．０５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1）で処置した。体重を１日おきに記録し、食物摂取を、試験を通して週１回、測定した。
【００９９】
処置１６日後、非空腹動物においてインスリン耐性試験（ＩＴＴ）を行うことによって、インスリン感受性を分析した。インスリン（０．７５単位・ｋｇ-1）を腹腔内注射し、血中グルコースを、示された時点に測定した（図１１）。血清インスリンを、マウスインスリンＥＬＩＳＡキット（Ｍｅｒｃｏｄｉａ、Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）によって、その後測定した。ＦＧＦ−２１とＡＶＥ００１０との組合せで１６日間処置したマウスは、食後条件下、ビヒクルまたは単一処置を与えたマウスよりも、インスリン感受性の有意な改善および低減した基礎血中グルコースレベルを示した。図１２に示す通り、体重の劇的な減少も、ビヒクルまたは単一処置したマウスに比べて観察された。
【０１００】
配列
ヒトＦＧＦ−２１（配列番号１）：
MDSDETGFEHSGLWVSVLAGLLLGACQAHPIPDSSPLLQPGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPAPPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYAS
変異のＦＧＦ−２１（Ｇ＋ＦＧＦ２１  Ｈ２９−Ｓ２０９；配列番号２）：
GHPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPAPPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYAS
ヒトＧＬＰ−１（７−３７）（配列番号３）：
HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG-NH2
ヒトＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（配列番号４）：
HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-NH2
エキステンジン−４（配列番号５）：
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2
エキセナチド（配列番号６）：
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIETLKNGGPSSGAPPPS-NH2
オキシトモジュリン（配列番号７）：
HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA-NH2
リキシセナチド（配列番号８）
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPSKKKKKK-NH2
ＡＶＥ００１０（配列番号９）：
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPSKKKKKK-NH2
【図２】
2014520868.tif 000002
【図３】
2014520868.tif 000003
【図４】
2014520868.tif 000004
【図５】
2014520868.tif 000005
【図６】
2014520868.tif 000006
【図７】
2014520868.tif 000007
【図８】
2014520868.tif 000008
【図９】
2014520868.tif 000009
【図１０】
2014520868.tif 000010
【図１１】
2014520868.tif 000011
【図１２】
2014520868.tif 000012
【図１３】
2014520868.tif 000013
【図１】
2014520868.tif 000014
【配列表】
2014520868000001.app
【国際調査報告】
2014520868.tif 000015
2014520868.tif 000016
2014520868.tif 000017