(57)【要約】  本発明は、（ａ）２６４時間未満の貯蔵時間を有するミルクを準備する工程、そして（ｂ１）少なくともカゼインの豊富な画分および血清タンパク質の豊富な画分が得られるように、ミルクを、０．０１〜２μmの孔サイズのマイクロフィルターを用いて処理する工程、または（ｂ２）グラム陰性細菌の少なくとも９８重量％が除去されるようにミルクを処理し、そしてグラム陰性細菌の少なくとも９８重量％が除去されたミルクを、６０〜９０℃まで加熱する工程のいずれかを含む、低いＬＰＳを有する乳製品をベースとした食品組成物を生産するための方法に関する。本発明の方法は、使用準備のできた食品組成物１リットルあたり５１００ＥＵ未満のＬＰＳが存在するか、または乾燥製品１ｇあたり３９ＥＵ未満のＬＰＳが存在する、乳製品をベースとした食品組成物を提供するために非常に適切である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
低いＬＰＳ濃度を有する乳製品をベースとした食品組成物を生産するための方法であって、
（ａ）２６４時間未満の貯蔵時間を有するミルクを準備する工程、
（ｂ）少なくともカゼインの豊富な画分と血清タンパク質の豊富な画分が得られるように、０．０１〜２μmの孔サイズのマイクロフィルターでミルクを処理する工程
を含む、前記方法。
【請求項２】
加熱工程が含まれる、請求項１記載の方法。
【請求項３】
低いＬＰＳを有する乳製品をベースとした食品組成物を生産するための方法であって、
（ａ）２６４時間未満の貯蔵時間を有するミルクを準備する工程、
（ｂ）グラム陰性細菌の少なくとも９８重量％が除去されるようにミルクを処理する工程、
（ｃ）グラム陰性細菌の少なくとも９８重量％が除去されたミルクを、６０〜９０℃まで加熱する工程
を含む、前記方法。
【請求項４】
（ｃ）グラム陰性細菌の少なくとも９８重量％が除去されるようにミルクを処理する工程、
（ｄ）グラム陰性細菌の少なくとも９８重量％が除去されたミルクを、６０〜９０℃まで加熱する工程
をさらに含む、請求項１または２記載の方法。
【請求項５】
細菌の少なくとも９８重量％を除去するための処理が、
０．５〜２．５μmの孔サイズを用いての、好ましくは２５〜６５℃の温度での細菌ろ過；
遠心分離；
グラム陰性細菌を除去するための抗体の使用
からなる群より選択される、請求項３または４記載の方法。
【請求項６】
乳製品をベースとした食品組成物を生産するためのプロセス中に、ミルクおよびそれから得られた製品は、９０℃を超える熱処理にかけられない、請求項１〜５のいずれか記載の方法。
【請求項７】
精密ろ過が０〜６５℃の温度で実施される、請求項１〜６のいずれか記載の方法。
【請求項８】
精密ろ過の孔サイズが、０．０５〜１．２μm、より好ましくは０．１〜０．８μm、最も好ましくは０．１５〜０．５μmである、請求項１〜７のいずれか記載の方法。
【請求項９】
精密ろ過の最中の膜差圧が２．５バール未満である、請求項１〜８のいずれか記載の方法。
【請求項１０】
精密ろ過が２５〜６５℃または０〜２５℃の温度で実施される、請求項１〜９のいずれか記載の方法。
【請求項１１】
ミルクが、６０〜６５℃の温度で１〜１０分間、または６５〜８５℃の温度で５〜１８０秒間、好ましくは６５〜７６℃の温度で１０〜１２０秒間、最も好ましくは６６〜７１℃で５〜１８０秒間加熱される、請求項２〜１０のいずれか記載の方法。
【請求項１２】
ミルクの貯蔵時間が２００〜８０時間である、請求項１〜１１のいずれか記載の方法。
【請求項１３】
（ａ）２６４時間未満の貯蔵時間を有するミルクを準備する工程、
（ｂ）グラム陰性細菌の少なくとも９８重量％が除去されるようにミルクを処理する工程、
（ｃ）グラム陰性細菌の少なくとも９８重量％が除去されたミルクを、６０〜９０℃まで加熱する工程、
（ｄ）少なくともカゼインの豊富な画分と血清タンパク質の豊富な画分が得られるように、０．０１〜２μmの孔サイズのマイクロフィルターでミルクを処理する工程
を含む、請求項１〜１２のいずれか記載の方法。
【請求項１４】
ミルクを、グラム陰性細菌の精密ろ過工程および／または除去工程の前に脱クリーム（decream）処理にかける、請求項１〜１３のいずれか記載の方法。
【請求項１５】
血清タンパク質の豊富な画分を、２６４時間未満の貯蔵時間を有するカゼインの豊富な画分またはミルクタンパク質製品と合わせて、乳製品をベースとした組成物において０．１〜４．０、好ましくは０．２〜２、より好ましくは０．３〜１、最も好ましくは０．４〜０．７のカゼイン：血清タンパク質の比を得る、請求項１〜１４のいずれか記載の方法。
【請求項１６】
脂肪が組成物に加えられる、請求項１〜１５のいずれか記載の方法。
【請求項１７】
脂肪の少なくとも２５重量％がバターオイルを含む、請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
ビタミン、ミネラル、多不飽和脂肪酸、プレバイオティクス、プロバイオティクス、タンパク質、抗体、ヌクレオチド、抗酸化剤およびリン脂質からなる群より選択された成分が組成物に加えられる、請求項１〜１７のいずれか記載の方法。
【請求項１９】
乾燥工程が存在する、請求項１〜１８のいずれか記載の方法。
【請求項２０】
食品組成物が、乳児用調製乳、薬用食品、栄養補助食品組成物、ヨーグルト、ドリンク、スプレッドまたはクリームからなる群より選択される、請求項１〜１９のいずれか記載の方法。
【請求項２１】
ミルクは、牛乳、好ましくは雌ウシの牛乳である、請求項１〜２０のいずれか記載の方法。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか記載の方法によって得ることのできる乳製品をベースとした食品組成物。
【請求項２３】
使用準備のできた食品組成物１リットルあたり４０００Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳが存在するか、または乾燥製品１ｇあたり３０Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳが存在する、乳製品をベースとした食品組成物。
【請求項２４】
使用準備のできた食品組成物１リットルあたり５１００ＥＵ未満のＬＰＳが存在するか、または乾燥製品１ｇあたり３９ＥＵ未満のＬＰＳが存在する、請求項２２記載の乳製品をベースとした食品組成物。
【請求項２５】
好ましくは少なくとも８０％Ｈの疎水性を有する乳酸菌およびビフィズス菌を含む、請求項２１〜２３のいずれか記載の乳製品をベースとした食品組成物。
【請求項２６】
前記組成物がカゼインの豊富な画分であり、タンパク質の８０重量％超がカゼインである、請求項２１〜２４のいずれか記載の組成物。
【請求項２７】
前記組成物が、血清タンパク質の豊富な画分であり、タンパク質の３０重量％超が血清タンパク質である、請求項２１または２５記載の組成物。
【請求項２８】
全カゼインに対するβ−カゼインの量が、少なくとも３７％、好ましくは少なくとも３９％、より好ましくは少なくとも４１％である、請求項２１〜２６のいずれか記載の組成物。
【請求項２９】
カゼイン：血清タンパク質の比は、０．１〜４．０、好ましくは０．２〜２．５、より好ましくは０．３〜１、最も好ましくは０．４〜０．７である、請求項２１〜２７のいずれか記載の組成物。
【請求項３０】
脂肪を含み、その脂肪が少なくとも２５重量％のバターオイルを含む、脂肪を含む、請求項２１〜２８のいずれか記載の組成物。
【請求項３１】
食品組成物が、乳児用調製乳、薬用食品、栄養補助食品組成物、ヨーグルト、ドリンク、スプレッドまたはクリームからなる群より選択される、請求項２１〜２９のいずれか記載の組成物。
【請求項３２】
食品組成物、好ましくは乳児用調製乳を生産するための、請求項２５に請求したカゼインの豊富な画分および請求項２６に請求した血清タンパク質の豊富な画分の使用。
【請求項３３】
食品組成物、好ましくは乳児用調製乳を生産するための、請求項２６に請求した血清の豊富な画分、およびグラム陰性細菌の少なくとも９８％が除去され、そして６０〜９０℃の温度での熱処理にかけられたミルク、および／またはグラム陰性細菌の少なくとも９８％が除去され、そして６０〜９０℃の温度での熱処理にかけられたミルクタンパク質濃縮物の使用。
【請求項３４】
ＬＰＳの量が、好ましくは洗浄剤の存在下、ＬＡＬアッセイまたはカイネティック発色性ＬＡＬアッセイに従って測定される、請求項２１〜３２のいずれか記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、ミルクタンパク質を提供する方法に関する。特に、本発明は、低いリポ多糖（ＬＰＳ）濃度を有するミルクタンパク質組成物を製造する方法に関する。より特定すると、本発明は、乳児用および幼児用調製乳のための低いＬＰＳ濃度を有するミルクタンパク質組成物を製造する方法に関する。
【０００２】
背景
腸における上皮完全性は、例えば哺乳動物において最適な上皮バリアのために非常に重要である。グラム陽性細菌とは対照的にグラム陰性細菌の外膜はリポ多糖（ＬＰＳ）を含み、これはエンドトキシンである。単一の細菌細胞は、約３．５×１０６個のＬＰＳ分子を含む。ＬＰＳは、Ｏ−特異的鎖と呼ばれる遠位多糖鎖、コア多糖およびリピドＡと呼ばれる脂質部分からなる、複雑で負に荷電した分子である。ＬＰＳは、動物およびヒトにおいて強力な炎症応答の誘導を生じるエンドトキシンとして作用し、そして例えば敗血症などの重篤な疾病の発症に関与する。ＬＰＳの毒性部分はリピドＡ部分であり、これは２つのリン酸化グルコサミン残基および少なくとも６つの脂肪酸からなる。これらの２つのリン酸基は、ＬＰＳの生物活性に必須である。グラム陰性細菌細胞膜の外葉に取り込まれたＬＰＳ分子は比較的無毒性である。なぜなら、リピドＡ部分は多かれ少なかれ積み込まれているからである。しかしながら、分裂中または死滅中の細菌が、自発的にＬＰＳを哺乳動物の循環中に放出した場合、それはアルブミン、ラクトフェリン、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および細菌透過性増強タンパク質（ＢＰＩ）などのいくつかのタンパク質と相互作用することができる。ＬＰＳ結合タンパク質（ＬＢＰ）は、この点において最も重要なタンパク質である。ＬＢＰ−ＬＰＳ複合体は、骨髄系統の細胞膜（マクロファージ、単球および多形核白血球）から放出された後にＣＤ１４（「表面抗原分類１４」）に結合する。ＣＤ１４は、細胞における細胞シグナル伝達カスケードを開始するために、アクセサリーレセプター複合体、ｔｏｌｌ様レセプター４／ミエロイド系分化−２複合体（ＴＬＲ４／ＭＤ−２）を必要とする。このカスケードは、ＮＦ−κＢの核内転移および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）などの炎症誘発性サイトカインの転写を促進する。ＴＮＦαおよび他の炎症誘発性サイトカインは、血管透過性、増強された血流、およびＬＰＳ源への好中球の補充、並びに発熱などの全身性応答を誘導する。高濃度において、ＬＰＳは、ＴＬＲ４シグナル伝達の過剰刺激によって毒性となり、過剰な炎症応答がもたらされ、これにより敗血症ショックなどの有害な反応がもたらされる。ＬＰＳまたは他の細菌性抗原（例えばフラゲリンまたはＴ細胞エピトープ）に対する異常な免疫応答は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）および壊死性腸炎（ＮＥＣ）に関連している。ＮＥＣは主に未熟児に影響を及ぼし、そして生誕後に腸にコロニー形成する共生生物に対する未熟免疫応答によって引き起こされると推定されている。未熟児はおそらくＬＰＳに対する感作が損なわれている。なぜなら、未熟児はＴＬＲ４誘導シグナル伝達経路に由来する必須な分子を欠失しており、それ故、新生児は、未成熟な腸への微生物のコロニー形成時にＮＥＣにかかりやすくなる。なぜなら、脊椎動物に見られる最も豊富なＬＰＳの供給源は、その常在性腸内細菌叢であるからである。これらの腸内細菌叢は、成人宿主においては病的炎症を誘発しない。ＬＰＳは全身性炎症の誘導において重要な役割を果たしているという示唆もある。新生児は、生後１カ月間はその腸内上皮の高い透過性を有するので、病原性物質は��上皮バリアを通過し、そして子供に炎症を誘発するより高い機会を有する。
【０００３】
生乳は、有意な数のグラム陰性細菌を含み得る。健康安全性の理由から、食品における、細菌（グラム陰性細菌を含む）は、低温殺菌および滅菌技術によって死滅される。残念なことに、グラム陰性細菌の殺滅により、グラム陰性細菌の膜の完全な破壊は起こらず、そしてＬＰＳ分子は大部分は無傷で留まり、それ故、組成物中に遊離される。さらに、食品組成物の加工中に、ＬＰＳは、食品加工技術によって引き起こされる剪断力に因り細菌壁から遊離される。ＬＰＳは１００℃で熱に安定であり、そして食品製品の加工中にも存続し得る。
【０００４】
乳児食および他の乳製品をベースとした製品中のタンパク質はしばしば、チーズ製造プロセスから派生した乳清画分に由来する。乳清画分は、α−ラクトアルブミンおよびβ−ラクトグロブリンなどの多くの栄養的な乳清タンパク質を含む。チーズ製造プロセス中に、ミルクは、最初にしばしば熱処理されて、グラム陰性細菌を含む細菌を死滅させ、そして不要の酵素を不活性化する。上で説明されているように、これらの処理はミルク中にＬＰＳを遊離する。チーズ製造プロセス中に、このようにＬＰＳは結局、乳清画分となり得る。さらに、乳児用調製乳または他の乳製品をベースとした食品の製造における乳清画分の次の加工工程中において、グラム陰性細菌のコンタミが再度起こり得、それ故、さらなる熱処理が行なわれ得る。細菌数はこのように制御下にあり得るが、これにより調製乳中には増加した量のＬＰＳがもたらされ得る。上で説明されているように、高いＬＰＳ負荷は、乳児用調製乳においては望ましくない。
【０００５】
乳児用調製乳または他の乳製品をベースとした食品を生産するために使用され得るタンパク質画分を提供するための別の方法は、精密ろ過を使用する方法である。精密ろ過を用いてミルクからタンパク質画分を提供する背景参考文献は、米国特許第５，１６９，６６６号である。ここで牛乳は、低温の限外ろ過または精密ろ過にかけられる。
【０００６】
別の背景参考文献は欧州特許第１１３３２３８号である。ここで、乳清に由来するタンパク質組成物は、熱処理されていない、またはせいぜい中程度の熱処理にかけられたミルクを、高温（典型的には５０℃）で精密ろ過にかけることによって製造される。
【０００７】
さらなる背景参考文献は国際公開公報第２００８／１２７１０４号である。これは、０．３〜０．５μmの孔サイズを有する膜を利用した１０℃〜２０℃の温度での牛乳の精密ろ過によって得られる、例えば離乳食のための成分として適した血清タンパク質製品に関する。
【０００８】
上記した方法を含む従来技術の方法は、乳児用調製乳および他の乳製品をベースとした製品を生産するのに適したタンパク質画分を提供し得るが、それらはＬＰＳの含量を最小限にすることに指向されておらず、従って、タンパク質画分中の、従って最終的な乳製品中のＬＰＳ含量は極めて高くあり得る。例えばＬＰＳは精密ろ過法によっては除去されず、そして透過画分となり得る。
【０００９】
欧州特許第１３５９９２４Ｂ１号は、乳酸菌およびビフィズス菌、特に疎水性表面を有するものは、エンドトキシンと結合する能力を有することを開示している。疎水性乳酸菌またはビフィズス菌は、少なくとも８０％Ｈの疎水性％（％Ｈ）を有するはずである。これらの細菌が成長すると、存在する９５％までのＬＰＳ分子に結合し得る。しかしながら、ＬＰＳ分子は組成物中に依然として存在し、従って、前記組成物の加工中に例えば熱処理または剪断力によって疎水性細菌から脱着されるようになり得る。さらに、前記組成物に疎水性細菌を加えたくないならば、低レベルのＬＰＳを有する組成物を生産する満足の行く方法は依然として存在しない。
【００１０】
発明の要約
それ故、微生物学的に安全であるが、低いＬＰＳ負荷も有する、組成物を有することが望ましい。本発明は溶液を提供する。
【００１１】
第１の局面において、本発明は、
（ａ）２６４時間未満の貯蔵時間を有するミルクを準備する工程、
（ｂ）少なくともカゼインの豊富な画分と血清タンパク質の豊富な画分が得られるように、０．０１〜２μmの孔サイズのマイクロフィルターでミルクを処理する工程
を含む、低いＬＰＳを有する乳製品をベースとした食品組成物を生産するための方法に関する。
【００１２】
第２の局面において、本発明は、
（ａ）２６４時間未満の貯蔵時間を有するミルクを準備する工程、
（ｂ）グラム陰性細菌の少なくとも９８％が除去されるようにミルクを処理する工程、
（ｃ）グラム陰性細菌の少なくとも９８％が除去されたミルクを、６０〜９０℃まで加熱する工程
を含む、低いＬＰＳを有する乳製品をベースとした食品組成物を生産するための方法に関する。
【００１３】
さらなる局面において、本発明は、
（ａ）２６４時間未満の貯蔵時間を有するミルクを準備する工程、
（ｂ）グラム陰性細菌の少なくとも９８重量％が除去されるようにミルクを処理する工程、
（ｃ）グラム陰性細菌の少なくとも９８重量％が除去されたミルクを、６０〜９０℃まで加熱する工程
（ｄ）少なくともカゼインの豊富な画分と血清タンパク質の豊富な画分が得られるように、０．０１〜２μmの孔サイズのマイクロフィルターでミルクを処理する工程
を含む、低いＬＰＳを有する乳製品をベースとした食品組成物を生産するための方法に関する。
【００１４】
さらに別の局面において、本発明は、使用準備のできた組成物１リットルあたり４０００Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳを含む、または乾燥製品１ｇあたり３０Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳを含む、乳製品をベースとした食品組成物に関する。
【００１５】
詳細な説明
本発明は、低いＬＰＳ負荷を有する乳製品をベースとした組成物に関する。
【００１６】
生乳中にはグラム陰性細菌、並びにグラム陽性細菌およびミルクを駄目にし得る酵素が存在する。これらの理由のために、ミルクは通常、細菌を死滅させて酵素を不活性化させるために、低温殺菌または滅菌されている。熱処理および他のミルク処理のプロセス、例えばクリーム状化およびホモジナイズ中に、存在する細菌を破裂させることができる。グラム陰性細菌が破裂されると、ＬＰＳはミルク中に遊離される。残念なことにＬＰＳは熱に安定であり、従って、これらの処理後に、ミルクに、特に乳児などの脆弱なグループに依然として害を引き起こし得るＬＰＳがローディングされる。ミルク中のＬＰＳの量は、ミルク中のグラム陰性細菌の量に依存する。ミルク中のグラム陰性細菌が多ければ多いほど、より多くのＬＰＳがミルク中に放出される。ミルクが古くなればなるほど、ミルクが低温殺菌または滅菌されていない場合にはより多くのグラム陰性細菌がミルク中に存在する。なぜなら、これらの細菌は低温で貯蔵中に増殖および繁殖するからである。
【００１７】
農場では雌ウシからもたらされたミルクを最初に冷却タンクに貯蔵することにより、ミルクが収集されミルク加工工場に輸送されるまでミルクを保持する。通常の環境下では、ミルクは一般的に２〜３日毎に収集される。これらの２〜３日間の全ての雌ウシのミルクを冷却タンクに収集する。従って、ミルク工場に輸送されたミルクは、経過時間の異なるミルクの混合物である。それは、雌ウシの搾乳からミルクの工場到着までの時間は、最初にタンクに収集されたミルクについては約３〜４日間であり得、そして最後に収集されたミルクについては僅か０．１〜１日間であり得ることを意味する。
【００１８】
本発明のミルクの貯蔵時間は、最も古いミルク（すなわち、最初に農場の貯蔵タンクに収集されたミルク）の貯蔵時間として定義される。貯蔵時間は、雌ウシを搾乳した時から、ミルクまたはそれから得られた製品が乾燥製品または完成された濃縮製品に加工される時までの時間である。従って、貯蔵時間は、農場のタンクにおける時間、輸送時間、工場での貯蔵時間および工場での加工時間を含む。通常、貯蔵時間は最大約２週間であり得る。乳児用調製乳などの多くの乳製品をベースとした製品では、タンパク質画分の一部は、しばしば、チーズ製造プロセスからの乳清から得られる。乳清画分を有するこのような製品では、雌ウシの搾乳から乾燥乳児用調製乳などの完成された製品までの全時間は、最大約３週間であり得る。
【００１９】
本発明においては最大貯蔵時間は２６４時間すなわち１１日間である。これは最も古いミルクの最大貯蔵時間である。以前に言っているように、ミルク工場に到着したミルクは、経過時間の異なるミルクの混合物であり、最も古いものは、３〜４日間まで農場のタンクに貯蔵され得るが、一方、最も新しいものは僅か半日間の古さであり得る。従って、雌ウシの搾乳から、ミルクが乾燥製品または完成された濃縮液へ取り込まれるまでの最大時間は２６４時間すなわち１１日間である。
【００２０】
好ましくは、貯蔵時間は２５０〜４０時間、より好ましくは２２０〜６０時間、さらにより好ましくは２００〜８０時間、より好ましくは１８０〜１００時間、より好ましくは１６０〜１１０時間、さらにより好ましくは１５０〜１３０時間、最も好ましくは１４５〜１３５時間である。適切な貯蔵時間はまた１０．５〜１．５日間、より適切には１０〜２日間、より適切には９．５〜２．５日間、より適切には９〜３日間、さらにより適切には８．５〜３．５日間、より適切には８〜４日間、さらにより適切には７．５〜４．５日間、より適切には７〜５日間、さらにより適切には６．５〜５．５日間、最も適切には６〜５日間であり得る。
【００２１】
雌ウシの搾乳からミルク工場への到着までにかかる時間、すなわち到着時間も、重要であり、そして好ましくは可能な限り短くすべきである。ここでも、到着時間は、搾乳混合物中に存在する最も古いミルクの時間であることを理解すべきである。好ましい態様において、到着時間は３日未満または７０時間未満である。好ましくは、到着時間は、２．５日未満、より好ましくは２日未満、さらにより好ましくは１．５日未満、より好ましくは１日未満、最も好ましくは０．５日未満である。適切には、到着時間は６０時間未満、より好ましくは５０時間未満、さらにより好ましくは３５時間未満、より好ましくは２５時間未満、最も好ましくは１５時間未満である。グラム陰性細菌のミルクのコンタミを最小限に保持することが重要であるので、搾乳、貯蔵およびミルクの輸送、並びにミルク工場における取扱いは、衛生学的または無菌的な方法で行なわれる。
【００２２】
本発明のプロセスに提供されるミルクは、原則的に、任意の乳畜に由来し得る。これは殆ど畜牛であり、特に雌ウシ（成体雌畜牛）であるが、畜牛に加えて、以下の動物も、乳製品のためにヒトによって使用されるミルクを提供する：ラクダ、ロバ、ヤギ、ウマ、トナカイ、ヒツジ、水牛、ヤクおよびムース。最も好ましくは、本発明に使用されるミルクは雌ウシのミルクである。
【００２３】
精密ろ過は、一般的に、０．０１〜２μm、好ましくは０．１〜１．２μm、より好ましくは０．２〜０．５μm、最も好ましくは０．１５〜０．４５μmの範囲の孔サイズを有するマイクロフィルターを使用して実施される。適切なマイクロフィルターは当技術分野において公知であり、そして例えば渦巻型ポリマーまたはセラミックをベースとしたシステムを含む。
【００２４】
精密ろ過のために、クロスフロー型精密ろ過のための任意の慣用的な装置を使用することができる。従って、例えば、ＥＰ−Ａ−１６７３９７５に記載のような、渦巻型精密ろ過膜が使用され得る。好ましくは、複数の渦巻型モジュールを有するプロセスシステムが使用される。クロスフロー型精密ろ過プロセスにおいては、膜間圧が最大２．５バールであるように、膜を横切る膜間圧を減少させるための措置がとられていることが助けになると判明した。その理由のために、好ましくは、本発明による方法における精密ろ過中の膜間圧は、比較的低く維持され、それは最大で２．５バールである。浸透物のタンパク質組成に関する良好な結果が、２バールの最大膜間圧で得られた。平均膜間圧は変化し得、そして例えば０．１〜１．８バールである。特定の態様において、最大膜間圧は０．２〜１．５バール、より好ましくは０．３〜１．２バール、より好ましくは０．５〜１バール、最も好ましくは０．６〜０．８バールである。
【００２５】
膜間圧を減少させる代わりに、異なる解決策は、多孔度または膜層の厚さに勾配を有する精密ろ過膜の使用であり得る。
【００２６】
本発明による方法において、０．１〜１．２μmの孔サイズを有する標準的な精密ろ過膜が使用され得る。一般的に知られているように、孔サイズは、透過分と保持分の最終的なタンパク質組成に影響を及ぼす。本発明に鑑みて、孔サイズは、血清タンパク質とカゼインの比、およびカゼイン画分中のβカゼインの比率の両方に対してとりわけ影響を及ぼすことが証明されている。１つの態様において、０．２〜０．５μm、好ましくは０．１５〜０．４５μmの孔サイズを有する、膜、例えば渦巻型膜が使用される。
【００２７】
精密ろ過工程は、変性していないミルクタンパク質を含むミルクから出発して、十分な微生物学的な品質をもって実施される。これは、生（処理していない）乳、または穏やかな熱処理を受けたミルクを指し得るが、９０℃を超える温度にかけられていない。ミルクは、ホールミルクまたは多かれ少なかれ脱脂したミルク、生乳、遠心除菌されたミルク、または細菌ろ過された（bactofiltered）ミルク、または穏やかな条件下で低温殺菌されたもしくは低温で乾燥させた粉末化ミルクから復元したミルクであり得る。好ましくは、熱処理されていない脱脂生乳が使用される。熱処理されていれば、これは、グラム陰性細菌が破壊される温度を下回る、好ましくは８０℃を下回る温度で行なわれる。適切には、ミルクおよびプロセス中にミルクから得られた製品は、７５℃を超える、より好ましくは７０℃を超える、さらにより好ましくは６５℃を超える、またより好ましくは６０℃を超える、より好ましくは５５℃を超える、最も好ましくは５０℃を超える温度での熱処理にはかけられない。
【００２８】
精密ろ過工程は、０〜６５℃の温度で実施され得る。好ましくは、精密ろ過は、２５〜６５℃、または０〜２５℃の温度で実施される。より好ましくは精密ろ過工程は、０〜２５℃、より好ましくは５〜２０℃、最も好ましくは１０〜１５℃の温度で実施される。別の好ましい態様において、精密ろ過工程は、２５〜６５℃、より好ましくは３５〜６０℃、最も好ましくは４５〜５５℃の温度で実施される。
【００２９】
精密ろ過は、ミルクを透過分と保持分に分離する。保持分はカゼインの豊富な画分であり、そして透過分は血清タンパク質の豊富な画分である。カゼインの豊富な画分では、全タンパク質に対するカゼインの量は、精密ろ過にかけられていないミルク中の全タンパク質に対するカゼインの量よりも多い。好ましくは、カゼインの豊富な画分は、精密ろ過されていないミルクよりも、全タンパク質に対して１重量％を超える、より好ましくは５重量％を超える、最も好ましくは１０重量％を超えるカゼインを含む。血清タンパク質の豊富な画分においては全タンパク質に対する血清タンパク質の量は、精密ろ過にかけられていないミルク中の全タンパク質に対する血清タンパク質の量よりも多い。好ましくは、血清タンパク質の豊富な画分は、精密ろ過にかけられていないミルクよりも全タンパク質に対して２０重量％を超える血清、より好ましくは４０重量％、最も好ましくは６０重量％を超える血清を含む。
【００３０】
好ましい態様において、加熱工程は、６０〜８５℃、より好ましくは６５〜８０℃、最も好ましくは７０〜７５℃の温度で実施される。適切な加熱レジメンは、６０〜６５℃で１〜２分間または７０〜７２℃の温度で５〜３０秒間である。
【００３１】
好ましい態様において、加熱工程は、６０〜６５℃で１〜１０分間、または６５〜８５℃の温度で５〜１８０秒間、好ましくは６５〜７６℃の温度で１０〜１２０秒間、最も好ましくは６６〜７１℃の温度で５〜１８０秒間で実施される。
【００３２】
別の局面において、本発明は、
（ａ）２６４時間未満の貯蔵時間を有するミルクを準備する工程、
（ｂ）グラム陰性細菌の少なくとも９８％が除去されるようにミルクを処理する工程、
（ｃ）グラム陰性細菌の少なくとも９８％が除去されたミルクを、６０〜９０℃まで加熱する工程
を含む、低いＬＰＳを有する乳製品をベースとした食品組成物を生産するための方法に関する。
【００３３】
菌に対する安全性のために、ミルクを、グラム陰性細菌の少なくとも９８％が除去されるように処理する。好ましくは、グラム陰性細菌をインタクトな細胞として除去する。好ましい態様において、グラム陰性細菌は除去され、これにより細菌細胞は依然としてインタクトであり、そして好ましくはできる限り少ないＬＳＰが処理ミルク中に遊離されるか、最も好ましくはさらなるＬＰＳが処理ミルク中に全く遊離されない。グラム陰性細菌を除去するために、０．５〜２．５μmの孔サイズを有する細菌ろ過、遠心分離、または抗体の使用などの細菌除去技術が知られている。グラム陰性細菌を除去する他の方法も存在し得ることも理解されたい。グラム陰性細菌の少なくとも９８％を除去し、そして食品製品にとって安全である限り、あらゆる方法が適切である。除去により、グラム陰性細菌が、死滅しているが依然として製品に存在するのではなく（例えば低温殺菌法および滅菌法がそうであるように）、製品から取り出されることを意味する。
【００３４】
０．５〜２．５μmの孔サイズを有するフィルターを用いての細菌ろ過は、約０．５〜２．５μmよりも大きなグラム陰性細菌および芽胞を除去する。適切には、細菌フィルターの孔サイズは、０．７〜２μmであり、より好ましくは１〜１．５μmである。このような細菌ろ過の適切な例はバクトキャッチ（bactocatch）である。好ましい態様において、グラム陰性細菌および芽胞を除去するためのろ過は、０〜６５℃、より好ましくは３５〜６０℃、最も好ましくは４５〜５５℃の温度で実施される。
【００３５】
グラム陰性細菌はまた、遠心分離によっても除去され得る。ミルクを、高速で、例えば５０００rpm〜８０００rpmで遠心分離して、グラム陰性細菌を除去する。適切な遠心分離速度は、５５００rpm〜７５００rpm、より適切には６０００rpm〜７０００rpmである。適切には、グラム陰性細菌は遠心除菌（例えばTetrapack社）によって除去される。
【００３６】
グラム陰性細菌を除去するための別の適切な方法は、抗体の使用である。抗体は、特異的なグラム陰性細菌または広域グラム陰性細菌を認識するために設計され得る。好ましくは、抗体は、容易に除去することができるようにカラムまたはビーズに固定される。
【００３７】
好ましい態様において、グラム陰性細菌の少なくとも９８．５％が除去され、より好ましくはグラム陰性細菌の少なくとも９９％が除去され、より好ましくはグラム陰性細菌の少なくとも９９．５％が除去される。最も好ましくはグラム陰性細菌の少なくとも９９．９％またはさらには１００％が除去される。
【００３８】
グラム陰性細菌の少なくとも９８％の除去後、加熱工程を実施して、細菌除去工程によって除去されていない可能性のある不要な酵素または他の病原体を不活性化する。加熱は、菌に対する安全性に対して別の効果も与える。大半のグラム陰性細菌が除去されているので、ミルクを、９０℃までの熱処理にかけ得る。なぜなら、残っているグラム陰性細菌の破壊によりミルク中にそのＬＰＳを遊離する可能性があるからである。しかしながら、残っているグラム陰性細菌の量が仮にあったとしても非常に少ないために、ミルク中のＬＰＳの量は依然として非常に少ない。好ましくは、食品製品を生産するためのプロセス中に、ミルクおよびそれから得られた製品は、８５℃を超える、より好ましくは８０℃を超える、最も好ましくは７０℃を超える熱処理にはかけられない。好ましい態様において、加熱工程は、６０〜６５℃の温度で１〜１０分間、または６５〜８５℃の温度で５〜１８０秒間、好ましくは６５〜７６℃の温度で１０〜１２０秒間、最も好ましくは６６〜７１℃の温度で５〜１８０秒間実施される。
【００３９】
適切な穏やかな低温殺菌技術は、６０〜６５℃で１〜２分間、または７０〜７４℃の温度で、好ましくは７０〜７２℃で５〜３０秒間である。
【００４０】
本発明の好ましい局面において、
（ａ）２６４時間未満の貯蔵時間を有するミルクを準備する工程、
（ｂ）グラム陰性細菌の少なくとも９８％が除去されるようにミルクを処理する工程、
（ｃ）グラム陰性細菌の少なくとも９８％が除去されたミルクを、６０〜９０℃まで加熱する工程、
（ｄ）少なくともカゼインの豊富な画分と血清タンパク質の豊富な画分が得られるように、０．０１〜２μmの孔サイズのマイクロフィルターでミルクを処理する工程
を含む方法が提供される。
【００４１】
細菌除去工程および精密ろ過工程は任意の順序で実施され得るが、細菌除去工程の後に加熱工程を行なうことが好ましい。好ましい態様において、細菌除去工程は、精密ろ過工程の前に実施され、最も好ましくは加熱工程は精密ろ過工程の前に実施される。
【００４２】
適切には、精密ろ過および／またはグラム陰性細菌除去工程は、脱クリーム化処理にかけられたミルクに対して実施される。脱クリーム化は、当業者には公知の任意の適切な方法を用いて実施され得る。適切な方法は遠心分離であり、より重いタンパク質および炭水化物が、より軽い脂肪粒子から分離される。好ましくは、ミルクは、元来の脂肪含量の約７０重量％、より好ましくは元来の脂肪含量の約５０重量％、より好ましくは脂肪含量の約２５重量％、最も好ましくは元来の脂肪含量の約１０重量％である脂肪含量まで脱クリーム化される。
【００４３】
食品組成物を製造するために、カゼインの豊富な画分および／または血清タンパク質の豊富な画分が使用される。好ましい態様において、血清タンパク質の豊富な画分を、カゼインの豊富な画分と合わせるか、または血清タンパク質の豊富な画分を、２６４時間未満の貯蔵時間を有する別のミルク製品と合わせる。適切には、２６４時間未満の貯蔵時間を有するミルクを、グラム陰性細菌の少なくとも９８重量％が除去される処理にかけ、そして６０〜９０℃の温度を超える熱処理にかけられる。好ましくは、血清の豊富な画分および／またはカゼインの豊富な画分、またはミルクを合わせて、乳製品をベースとした組成物中０．１〜２．５、好ましくは０．２〜２、より好ましくは０．３〜１、最も好ましくは０．４〜０．７のカゼイン：血清タンパク質の比を得る。
【００４４】
別の好ましい態様において、脂肪を組成物に加える。脂肪は、任意の脂肪であり得るが、好ましくは植物性脂肪である。適切な脂肪はヒマワリ油、大豆油、サフラワー油、菜種油、ヤシ油、パーム核油、ぬか油、オリーブ油、ラッカセイ油、およびココナッツ油を含む。乳脂肪、バターオイル、および他の動物性脂肪、例えばラードも適切である。魚油および藻油もまた非常に適切である。脂肪は、種々の脂肪の組合せであり得る。適切には、脂肪は植物油とミルク脂肪、クリーム、バターミルクまたはバターオイルの混合物である。好ましくは、脂肪の少なくとも２５重量％は、ミルク脂肪またはバターオイルを含み、より好ましくは脂肪の少なくとも４０重量％はミルク脂肪またはバターオイルを含む。
【００４５】
さらに、ビタミン、ミネラル、多不飽和脂肪酸、プレバイオティクス、プロバイオティクス、タンパク質、抗体、ヌクレオチド、抗酸化剤、極性脂質（リン脂質を含む）などの他の成分も、食品組成物に加え得る。例えば、食品組成物に、炭水化物、例えばラクトースおよびオリゴ糖、脂質、および成分（例えばビタミン、アミノ酸、ミネラル、タウリン、カルニチン、ヌクレオチドおよびポリアミン）、および抗酸化剤（例えばＢＨＴ、アスコルビルパルミテート、ビタミンＥ、αおよびβ−カロテン、ルテイン、ゼアキサンチン、リコピンおよびレシチン）を加えることが慣用的である。さらに、食品組成物は、多不飽和脂肪酸、例えばγ−リノレン酸、ジホモ−γ−リノレン酸、アラキドン酸、ステアリドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸およびドコサペンタエン酸を用いて強化し得る。腸内細菌叢の適切な発達の観点で、乳酸菌および／またはビフィズス菌などのプロバイオティクス並びにプレバイオティクスを加え得る。好ましいプロバイオティクスの組合せは、例えば、Bifidobacterium lactisおよび／またはBifidobacterium animalisと、L. rhamnosis、L. casei、L. paracasei、L. salivariusまたはL. reuteriである。プレバイオティクスの例としては、短鎖および長鎖の両方のフコ−、フルクト−および／またはガラクト−オリゴ糖、（フコ）シアリルオリゴ糖、分岐（オリゴ）糖、シアル酸の豊富なミルク製品またはその誘導体、イヌリン、イナゴマメ粉、ガム（加水分解されていてもされていなくてもよい）、線維などが挙げられる。
【００４６】
食品製品を濃縮することが必要であり得ることが理解されるべきである。このような濃縮法が使用されるならば、濃縮製品中のタンパク質の２５重量％未満が変性されるように、穏やかな濃縮法を使用することが望ましい。適切な濃縮法は、正浸透、逆浸透、膜蒸留、凍結濃縮、薄膜スピニングコーン（spinning cone）蒸発器、およびスクレープトフィルム（scraped film）蒸発器である。濃縮技術は、減少した滞留時間分布、および／または変性を最小限するための改善された熱転移によって最適化され得る。
【００４７】
乾燥製品は、低下したレベルの水またはさらには水が欠失していることに因り、より長い有効期間を有するという利点を有する。さらに、乾燥製品はより軽く、そしてより小さな容量を有するので、輸送がより容易である。しかしながら、慣用的な乾燥技術は、存在するかなりの量のタンパク質を変性させるだろう。それ故、乾燥は、好ましくは、乾燥製品中のタンパク質の２５重量％未満が変性するような穏やかな乾燥工程である。適切な乾燥工程は噴霧乾燥、表面活性成分の存在下における乾燥、ガス注入、超臨界ＣＯ２を用いての乾燥、凍結乾燥である。本発明において、乾燥製品は、少なくとも７０重量％の乾燥物、好ましくは少なくとも７５重量％の乾燥物、より好ましくは少なくとも８０重量％の乾燥物、より好ましくは少なくとも８５重量％、より好ましくは少なくとも９０重量％、より好ましくは少なくとも９５重量％の乾燥物、最も好ましくは少なくとも９８重量％の乾燥物を含む製品である。
【００４８】
本発明の食品製品は、乳製品をベースとした任意の食品製品であり得、そして、タンパク質、例えばヨーグルト、デザート、乳製品ドリンク、クリーム、クレームフレーシュ、サワークリーム、アイスクリーム、チーズ、デイリースプレッド（dairy spreads）を含む。しかしながら、本発明の方法に因る低いＬＰＳ負荷のために、乳児および幼児のための食品製品、薬用食品、高齢者のための食品、および栄養補助食品に特に適切である。
【００４９】
本発明はまた、本発明による方法によって得ることのできる乳製品をベースとした食品組成物に関する。
【００５０】
本発明の方法は、非常に僅かなＬＰＳを含む食品組成物を提供する。前記したように、欧州特許第１３５９９２４Ｂ１号から、乳酸菌およびビフィズス菌、特に疎水性表面を有するものは、エンドトキシンと結合する能力を有する。本発明は、乳酸菌およびビフィズス菌を添加することなく、ＬＰＳの量を減少させる方法を提供する。
【００５１】
それ故、好ましい態様は、組成物中に使用準備のできた組成物１リットルあたり４０００Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳ、より好ましくは３５００Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳ、好ましくは３０００Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳ、より好ましくは２０００Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳ、より好ましくは１３００Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳ、さらにより好ましくは７００Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳ、最も好ましくは使用準備のできた組成物１リットルあたり２００Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳを含む、食品組成物を含む。適切には、乾燥製品について、食品組成物は、乾燥製品１ｇあたり３０Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳ、より適切には２０Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳ、より適切には１５Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳ、さらにより適切には１０Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳ、より適切には７Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳ、さらにより好ましくは５Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳ、最も適切には乾燥製品１ｇあたり１．５Ｅ３ ＥＵ未満のＬＰＳを含む。好ましくは、食品組成物は、少なくとも８０％Ｈの疎水性％を有する乳酸菌およびビフィズス菌を含まない。
【００５２】
しかしながら、本発明の食品組成物は、乳酸菌およびビフィズス菌を含み得、そしてこれは組成物中のＬＰＳの量をさらにもっと低下させるだろう。適切には、本発明の食品組成物は、使用準備のできた組成物１リットルあたり５１００ＥＵ未満のＬＰＳ、より好ましくは５０００ＥＵ未満のＬＰＳ、好ましくは４５００ＥＵ未満のＬＰＳ、より好ましくは４０００ＥＵ未満のＬＰＳ、より好ましくは３０００ＥＵ未満のＬＰＳ、さらにより好ましくは２５００ＥＵ未満のＬＰＳ、より好ましくは２０００ＥＵ未満のＬＰＳ、より好ましくは１５００ＥＵ未満のＬＰＳ、より好ましくは１０００ＥＵ未満のＬＰＳ、さらにより好ましくは７５０ＥＵ未満のＬＰＳ、より好ましくは５００ＥＵ未満のＬＰＳ、より好ましくは２５０ＥＵ未満のＬＰＳ、より好ましくは１５０ＥＵ未満のＬＰＳ、最も好ましくは使用準備のできた組成物１リットルあたり１００ＥＵ未満のＬＰＳを含む。適切には、乾燥製品について、食品組成物は、乾燥製品１ｇあたり３９ＥＵ未満のＬＰＳ、より適切には３５ＥＵ未満のＬＰＳ、より適切には３０ＥＵ未満のＬＰＳ、さらにより適切には２５ＥＵ未満のＬＰＳ、より適切には２０ＥＵ未満のＬＰＳ、より適切には１５ＥＵ未満のＬＰＳ、さらにより好ましくは１０ＥＵ未満のＬＰＳ、より適切には５ＥＵ未満のＬＰＳ、より適切には２ＥＵ未満のＬＰＳ、最も適切には乾燥製品１ｇあたり１ＥＵ未満のＬＰＳを含む。好ましくは、食品組成物は、好ましくは少なくとも８０％Ｈの疎水性％を有する乳酸菌およびビフィズス菌を含む。
【００５３】
ＥＵはエンドトキシン単位を意味する。１０エンドトキシン単位（ＥＵ）は、約１ngのエンドトキシンに等しい。本明細書に使用されているようなＥ表記は、「１０の累乗」を意味し、従って、科学的表記では×１０と置き換え、これは標準的な形または指数表記としても知られ、上付き文字は累乗を示す。
【００５４】
適切には、ＬＰＳの量は、ＬＡＬゲルクロットアッセイまたはカイネティック発色性ＬＡＬアッセイ（Gehring et al, Environmental Int 2008; 34:1132-1136）により測定する。リムルスアメーバ様細胞溶解物（ＬＡＬ）は、カブトガニ（Limulus polyphemus）からの血球（アメーバ様細胞）の水性抽出物である。ＬＡＬは、グラム陰性細菌の膜成分である、菌体内毒素またはリポ多糖（ＬＰＳ）と反応する。ＬＡＬは、ＬＰＳの存在下で、一連の反応で、リムルス凝固カスケードへと活性化される酵素を含む。この反応は、菌体内毒素の検出および定量のために使用されるＬＡＬ試験の基礎である。ＬＡＬ含有酵素は、発色性基質から、発色団のパラニトロアニリン（ｐＮＡ）を分裂して、カイネティック発色性ＬＡＬアッセイにおいて黄色を産生する。
【００５５】
しかしながら、乳脂肪小球から得られたミルク中においてリン脂質などの脂質複合体に包埋された、または乳酸菌およびビフィズス菌に結合したＬＰＳは、ＬＰＳ結合タンパク質（ＬＰＢ）からリピドＡ部分を遮蔽し、それ故、検出を回避する。それ故、このような場合、食品組成物に存在するＬＰＳの量は、脂質複合体の水性懸濁液を、米国特許第６，０１５，７１６号に記載のようなＬｕｂｒｏｌ−ＰＸ（登録商標）などの適切な洗浄剤と合わせることによって検出することができる。
【００５６】
本発明による方法は、カゼインの豊富な画分および血清タンパク質の豊富な画分を生じる。好ましくは、カゼインの豊富な画分は、全タンパク質に対して８１重量％を超えるカゼイン、より好ましくは全タンパク質に対して８５重量％を超えるカゼイン、さらにより好ましくは全タンパク質に対して９０重量％を超えるカゼイン、最も好ましくは全タンパク質に対して９５重量％を超えるカゼインを含む。
【００５７】
また、全タンパク質に対して２０重量％を超える血清タンパク質、より好ましくは全タンパク質に対して３０重量％を超える血清タンパク質、さらにより好ましくは全タンパク質に対して４０重量％を超える血清タンパク質、より好ましくは全タンパク質に対して４５重量％を超える血清タンパク質、より好ましくは全タンパク質に対して５０重量％を超える血清タンパク質、さらにより好ましくは全タンパク質に対して５５重量％を超える血清タンパク質、最も好ましくは全タンパク質に対して６０重量％を超える血清タンパク質を含む、血清タンパク質の豊富な画分が好ましい。
【００５８】
別の局面において、本発明は、カゼイン：血清タンパク質の比が０．１〜４．０である乳製品をベースとした食品組成物に関する。好ましくは、本発明による組成物は、使用準備のできた製品に対して１〜４０重量％タンパク質、および乾燥製品中に１０〜８０重量％のタンパク質、より好ましくは使用準備のできた製品に対して２０〜３０重量％のタンパク質、または２０〜６０重量％の乾燥製品、最も好ましくは使用準備のできた製品に対して３〜２５重量％のタンパク質、または乾燥製品に対して３０〜５０重量％を含む。乳児用調製乳については、適切には、カゼイン：血清タンパク質の比は、０．１〜４、好ましくは０．２〜２．５、より好ましくは０．３〜１、最も好ましくは０．４〜０．７である。医学的栄養製品または高齢者用の栄養製品については、カゼイン：血清タンパク質の適切な比は、３〜１５、より好ましくは４〜１２、より好ましくは５〜１１、さらにより好ましくは６〜１０、最も好ましくは７〜９である。
【００５９】
乳製品をベースとした食品組成物はまた、使用準備のできた製品に対して０．５〜１５重量％の量の脂肪、乾燥製品中に２〜４０重量％の脂肪、より好ましくは使用準備のできた製品に対して１〜８重量％の脂肪、または乾燥製品中に３〜３０重量％、最も好ましくは使用準備のできた製品中に２〜５重量％の脂肪、または乾燥製品中に５〜２０重量％脂肪を含み得る。脂肪は、任意の脂肪であり得るが、好ましくは植物性脂肪である。適切な脂肪は、ヒマワリ油、大豆油、サフラワー油、菜種油、ヤシ油、パーム核油、ぬか油、オリーブ油、ラッカセイ油、およびココナッツ油を含む。乳脂肪、クリーム、バターミルクまたはバターオイルおよび他の動物性脂肪、例えばラードも適切である。魚油および藻油もまた非常に適切である。脂肪は、種々の脂肪の組合せであり得る。適切には、脂肪は植物油とバターオイルの混合物である。好ましくは、脂肪の少なくとも２５重量％が、バターオイルを含み、より好ましくは脂肪の少なくとも４０重量％がバターオイルを含む。
【００６０】
好ましい態様において、本発明による組成物は、使用準備のできた製品１Ｌあたり２〜４．５ｇ、好ましくは使用準備のできた製品１Ｌあたり２．５〜４ｇ、最も好ましくは使用準備のできた製品１Ｌあたり３〜３．５ｇの量のβ−カゼインを含む。適切には、乾燥製品は、乾燥製品１ｇあたり、１０〜５０mgのβ−カゼイン、より適切には１５〜４０mgのβカゼイン、最も好ましくは２０〜３０mgのβカゼインを含む。
【００６１】
別の好ましい態様において、本発明による組成物は、使用準備のできた製品１Ｌあたり２〜４．５ｇ、好ましくは使用準備のできた製品１Ｌあたり２．５〜４ｇ、最も好ましくは使用準備のできた製品１Ｌあたり３〜３．５ｇの量のαラクトアルブミンを含む。適切には、乾燥製品は、乾燥製品１ｇあたり、１０〜５０mgのαラクトアルブミン、より適切には１５〜４０mgのαラクトアルブミン、最も好ましくは２０〜３０mgのαラクトアルブミンを含む。
【００６２】
別の好ましい態様において、本発明による組成物は、使用準備のできた製品中２ｇ/Ｌ未満、より好ましくは１ｇ/Ｌ未満、さらにより好ましくは１００mg/Ｌ未満、最も好ましくは使用準備のできた製品中１０mg/Ｌ未満のαカゼインを含む。さらには使用準備のできた製品中１mg/Ｌ未満のαカゼインが非常に適している。乾燥製品において、好ましくは、乾燥製品１ｇあたり１５mg未満のαカゼインが存在し、より好ましくは乾燥製品１ｇあたり１mg未満のαカゼインが存在し、より好ましくは５００mcg/g未満、最も好ましくは１００mcg/g未満のαカゼインが乾燥製品中に存在する。
【００６３】
別の好ましい態様において、本発明による組成物は、使用準備のできた製品中２ｇ/Ｌ未満のβラクトグロブリン、より好ましくは１ｇ/Ｌ未満、さらにより好ましくは１００mg/Ｌ、最も好ましくは１０mg/Ｌ未満を使用準備のできた製品中に含む。さらには使用準備のできた製品中１mg/Ｌ未満のβラクトグロブリンが非常に適している。乾燥製品においては、好ましくは乾燥製品１ｇあたり１５mg未満のβラクトグロブリン、より好ましくは乾燥製品１ｇあたり１mg未満のβラクトグロブリンが存在し、より好ましくは５００mcg/g、最も好ましくは１００mcg/g未満のβラクトグロブリンが乾燥製品中に存在する。
【００６４】
乳児（赤ん坊）用調製乳は、一般的に、ヒトの母乳に加えてまたはその代わりに、１８か月までの乳児に使用するためのものである。幼児用調製乳は、一般的に、１８〜４８カ月の小児のための以後の調製乳を指す。明らかに、本発明により、ミルクタンパク質および得られたミルクタンパク質組成物を、小児用および高齢者用の経腸栄養食品、医学的栄養製品などの他の目的のためにも使用することは排除されない。
【００６５】
本発明により提供された、乳児用調製乳または幼児用調製乳などのあらゆる栄養組成物は、任意のさらなる慣用的な成分を含み得ることが理解されるだろう。例えば、ベビーフードおよび乳児食および治療組成物に、炭水化物、例えばラクトースおよびオリゴ糖、脂質、および成分（例えばビタミン、アミノ酸、ミネラル、タウリン、カルニチン、ヌクレオチドおよびポリアミン）、および抗酸化剤（例えばＢＨＴ、アスコルビルパルミテート、ビタミンＥ、αおよびβ−カロテン、ルテイン、ゼアキサンチン、リコピンおよびレシチン）を加えることが慣用的である。脂質は殆どが植物性起源である。さらに、食品または治療組成物は、多不飽和脂肪酸、例えばγ−リノレン酸、ジホモ−γ−リノレン酸、アラキドン酸、ステアリドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸およびドコサペンタエン酸を用いて強化し得る。腸内細菌叢の適切な発達の観点で、乳酸菌および／またはビフィズス菌などのプロバイオティクス並びにプレバイオティクスを加え得る。好ましいプロバイオティクスの組合せは、例えば、Bifidobacterium lactisおよび／またはBifidobacterium animalisと、L. rhamnosis、L. casei、L. paracasei、L. salivariusまたはL. reuteriである。プレバイオティクスの例としては、短鎖および長鎖の両方のフコ−、フルクト−および／またはガラクト−オリゴ糖、（フコ）シアリルオリゴ糖、分岐（オリゴ）糖、シアル酸の豊富なミルク製品またはその誘導体、イヌリン、イナゴマメ粉、ガム（加水分解されていてもされていなくてもよい）、線維などが挙げられる。
【００６６】
本発明はまた、食品組成物、好ましくは乳児用調製乳を生産するための、本発明によるカゼインの豊富な画分および血清タンパク質の豊富な画分の使用に関する。また、食品組成物、好ましくは乳児用調製乳を生産するための、請求項２４に請求した血清の豊富な画分およびグラム陰性細菌の少なくとも９８％が除去され、そして６０〜９０℃の温度で熱処理にかけられたミルク、および／またはグラム陰性細菌の少なくとも９８％が除去され、そして６０〜９０℃の温度の熱処理にかけられたミルクタンパク質濃縮物の使用に関する。
【００６７】
好ましくは、食品組成物を生産するための血清の豊富な画分および／またはカゼインの豊富な画分の使用は、カゼイン：血清タンパク質の比が０．１〜２．５または３〜１５である。乳児用調製乳については適切には、カゼイン：血清タンパク質の比は、０．１〜２．５、好ましくは０．２〜２、より好ましくは０．３〜１、最も好ましくは０．４〜０．７である。医学的栄養製品または高齢者用栄養製品については適切なカゼイン：血清タンパク質の比は、３〜１５、より好ましくは４〜１２、より好ましくは５〜１１、さらにより好ましくは６〜１０、最も好ましくは７〜９である。
【００６８】
本発明は、以下の非制限的な実施例において説明される。
【００６９】
実施例１
精密ろ過を用いての低いＬＰＳ／エンドトキシンミルクタンパク質製品の調製
７２時間の貯蔵時間を有する生乳を遠心分離にかけ（温度：５０〜５５℃）、クリームを分離し、そして脱脂乳を得る。次の工程で、ミルクを、セラミックマイクロフィルター（孔サイズ１．５μm、温度５０〜５５℃）でろ過し、その後、続いて低温殺菌し（７２．５℃、２０秒間）、そして６℃まで冷却し、その後、６℃のタンクで貯蔵する。このタンクにおける最大貯蔵時間は２４時間である。入ってくる脱脂乳および得られる精密ろ過されたミルクを、全菌数（３０℃でのＣＦＵ/ml）およびエンドトキシン（ＥＵ/ｇＤＭ）の決定のためにサンプリングする。結果を表１に示す。
【００７０】
【表１】
2014520548.tif 000002
【００７１】
精密ろ過された脱脂乳（貯蔵時間１８０時間）を、６℃の温度のタンクに貯蔵する。次の工程において、ミルクを、０．１５μm（ＤＳＳ）の孔サイズを有する渦巻型膜を用いて精密ろ過する。ろ過は、１０〜１２℃の温度で行なう。膜間圧は最大で１．８バール、好ましくは１．３バールである。予め設定された容積減少率は、この実施例において３．３であった。この設定においてカゼインミセルは濃縮液中に留まるが、血清タンパク質の大半はフィルターを通過してろ液中に移行する。
【００７２】
得られたカゼイン濃縮液は６℃未満のタンクに貯蔵される。貯蔵時間は１５０時間であった。
【００７３】
【表２】
2014520548.tif 000003
【００７４】
血清タンパク質を有する得られた透過液は、タンクに収集され、その後、１０〜１２℃の温度の限外ろ過システム（渦巻型膜、カットオフ１０ｋＤ）で濃縮される。濃縮は、保持分のタンパク質含量が、１４〜１５％の値に達するまで行なわれる。得られた血清タンパク質濃縮液は６℃のタンクに貯蔵される。貯蔵時間は１５０時間であった。
【００７５】
【表３】
2014520548.tif 000004
【００７６】
実施例２
低いＬＰＳ含量を有する乳児用調製乳組成物
表２において、乳児用調製乳組成物の例が示される。
【００７７】
【表４】
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【００７８】
乳児用調製乳組成物は、血清タンパク質濃縮液もしくはミルクカゼイン濃縮液のいずれかまたはその両方を使用することによって調製され、これは主要なタンパク質源として実施例１に従って得られる。これらは、（少量の）粉ミルクおよび/または脱ミネラル化乳清タンパク質粉末などの慣用的なタンパク質源と合わせることができる。
【国際調査報告】
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