(57)【要約】本発明は、ＢＭＰシグナル伝達の低分子インヒビターを提供する。これらの化合物は、ＡｐｏＢ−１００もしくはＬＤＬの循環レベルを低下させるために使用され得る。これらの化合物はまた、後天性もしくは先天性の高コレステロール血症もしくは高リポタンパク質血症；脂質吸収もしくは代謝における欠陥と関連する疾患、障害、もしくは症候群；または高脂血症によって引き起こされる疾患、障害、もしくは症候群を処置または予防するために使用され得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化４１】
2014504604.tif 000038
の構造を有する化合物であって、
式中、
ＸおよびＹは、独立してＣＲ１５およびＮから選択され；
Ｚは、ＣＲ３およびＮから選択され；
Ａｒは、置換もしくは非置換の、アリールおよびヘテロアリールから選択され；
Ｌ１は存在しないか、あるいは、置換もしくは非置換の、アルキルおよびヘテロアルキルから選択され；
ＡおよびＢは、各存在について独立して、ＣＲ１６およびＮから選択され；
ＥおよびＦは、各存在について独立して、ＣＲ５およびＮから選択され；
Ａ、Ｂ、Ｅ、およびＦのうちの２つ以下が、Ｎであり；そして
ＥおよびＦが両方ＣＲ５であり、かつＲ５の出現の両方が、ＥおよびＦと一緒になって環を形成するか、あるいはＬ１が存在しないかのいずれかであり；
Ｒ３は、Ｈおよび、置換もしくは非置換の、アルキル、シクロアルキル、ハロゲン、アシルアミノ、カルバメート、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択され；
Ｒ４は、Ｈおよび、置換もしくは非置換の、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択され；
Ｒ５は、各存在について独立して、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択されるか、あるいは２個存在するＲ５が、それらが結合する原子と一緒になって、置換もしくは非置換の、５員または６員、シクロアルキル環、ヘテロシクロアルキル環、アリール環、またはヘテロアリール環を形成し；
Ｒ１５は、各存在について独立して、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシルアミノ、カルバメート、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択され；
Ｒ１６は、各存在について独立して、存在しないか、あるいは、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテ
ロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択される、
化合物、またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグ。
【請求項２】
ＡおよびＢが、各々、ＣＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＥおよびＦが、各々ＣＲ５であり、そして、Ｒ５の存在両方が結合している原子が６員環を形成する、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
ＥおよびＦが一緒になって、以下の基：
【化４２】
2014504604.tif 000039
を表し、式中、Ｒ４０は、存在しないか、あるいは、置換もしくは非置換の、アルキル、シクロアルキル、ハロゲン、アシルアミノ、カルバメート、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイルまたはスルホンアミドから選択される１個〜４個の置換基を表す、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｌ１が、以下の構造：
【化４３】
2014504604.tif 000040
を有し、式中、
Ｑは、ＣＲ１０Ｒ１１、ＮＲ１２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、およびＳＯ２から選択され；そして
Ｒ１０およびＲ１１は、各存在について独立して、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択され；
Ｒ１２は、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、スルホニル、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択され、そして
ｎは、０〜４の整数である、
前述の請求項のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ４が以下：
【化４４】
2014504604.tif 000041
から選択され、式中、
Ｗは、存在しないか、あるいは、Ｃ（Ｒ２１）２、Ｏ、またはＮＲ２１であり；
Ｒ２０は存在しないか、あるいは、置換もしくは非置換の、アルキル、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロア
ルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、アシル、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、およびスルホンアミドから選択され；そして
Ｒ２１は、各存在について独立して、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、アシル、スルホニル、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択される、
前述の請求項のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
Ａｒが、６員の、アリール環またはヘテロアリール環である、
前述の請求項のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】
Ｌ１が、二環式コアに対してＡｒのパラ位に位置する、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
前述の請求項のいずれかに記載の化合物および薬学的に受容可能な、賦形剤または溶媒を含有する、薬学的組成物。
【請求項１０】
被験体におけるＡｐｏＢ−１００および／もしくはＬＤＬおよび／もしくは総コレステロールの循環レベルを低下させ、それによって、一次性もしくは二次性の心血管事象のリスクを低下させる方法であって、該方法は、有効量の、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１１】
被験体における高コレステロール血症、高脂血症、高リポタンパク質血症もしくは肝臓脂肪症を処置する方法であって、該方法は、有効量の、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１２】
前記高コレステロール血症、高脂血症、もしくは高リポタンパク質血症は、先天性の高コレステロール血症、高脂血症、もしくは高リポタンパク質血症である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記高コレステロール血症、高脂血症、もしくは高リポタンパク質血症は、常染色体優性高コレステロール血症（ＡＤＨ）、家族性高コレステロール血症（ＦＨ）、多遺伝子性高コレステロール血症、家族性複合型高脂血症（ＦＣＨＬ）、高アポβリポタンパク質血症、もしくは低密度ＬＤＬ症候群（ＬＤＬ表現型Ｂ）である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記高コレステロール血症、高脂血症、高リポタンパク質血症もしくは肝臓脂肪症は、後天性の高コレステロール血症、高脂血症、もしくは高リポタンパク質血症である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記高コレステロール血症、高脂血症、高リポタンパク質血症もしくは肝臓脂肪症は、糖尿病、高脂肪食および／もしくは座りがちなライフ・スタイル、肥満症、メタボリックシンドローム、内因性もしくは二次性の肝疾患、胆汁性肝硬変もしくは他の胆汁鬱滞障害、アルコール依存症、膵炎、ネフローゼ症候群、末期腎疾患、甲状腺機能低下症、チアジド、β−ブロッカー、レチノイド、高活性な抗レトロウイルス剤、エストロゲン、プロゲスチン、もしくはグルココルチコイドの投与に起因する医原性と関連する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
被験体における脂質吸収もしくは代謝における欠損と関連するか、または高脂血症によって引き起こされる疾患、障害、もしくは症候群を処置する方法であって、該方法は、有効量の、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１７】
被験体における冠動脈疾患、脳血管疾患、もしくは末梢血管疾患から生じる一次性もしくは二次性の心血管事象を低下させる方法であって、該方法は、有効量の、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１８】
心血管リスクのマーカーの上昇を有する被験体における心血管疾患を予防する方法であって、該方法は、有効量の、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１９】
非アルコール性肝臓脂肪症疾患（ＮＡＦＬＤ）、脂肪症誘導性肝傷害、線維症、肝硬変、もしくは非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）と関連する、被験体における肝機能不全を予防および処置する方法であって、該方法は、有効量の、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本願は、２０１１年１月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／４３４，９３２号に対する優先権の利益を主張する。米国仮特許出願第６１／４３４，９３２号は、その全体が本明細書に参考として援用される。
【０００２】
（連邦によって後援された研究または開発に関する表明）
本発明は、米国政府により、国立衛生研究所の助成（ＮＩＨ／ＮＨＬＢＩ  ５Ｋ０８ＨＬ０７９９４３）の下で一部援助された。政府は、本発明における特定の権利を有し得る。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーのリガンドが関与するシグナル伝達は、広範な細胞プロセス（例えば、細胞の成長、増殖、分化、およびアポトーシス）の中核を成す。ＴＧＦ−βシグナル伝達は、Ｉ型受容体を漸増しかつリン酸化する、ＩＩ型受容体（セリン／トレオニンキナーゼ）へのＴＧＦ−βリガンドの結合が関与する。次いで、このＩ型受容体が、ＳＭＡＤ４に結合する受容体制御ＳＭＡＤ（Ｒ−ＳＭＡＤ；例えば、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ５、ＳＭＡＤ８、またはＳＭＡＤ９）をリン酸化し、次いで、このＳＭＡＤ複合体が転写調節において役割を果たす核に入る。リガンドのＴＧＦスーパーファミリーは、２つの大きな分科を含み、ＴＧＦ−β／アクチビン／結節性および骨形成タンパク質（ＢＭＰ）により特徴付けられる。
【０００４】
骨形成タンパク質（ＢＭＰ）リガンドにより媒介されるシグナルは、脊椎動物の一生にわたって多様な役割を果たす。胚形成の間に、背腹軸は、リガンド、受容体、補助受容体、および可溶性アンタゴニストの協調発現により形成されるＢＭＰシグナル伝達の勾配によって確立される（非特許文献１）。過剰なＢＭＰシグナル伝達は、腹側化（ｖｅｎｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ）（背側構造を犠牲にしての腹側の拡大）を引き起こすのに対し、減少したＢＭＰシグナル伝達は背側化（ｄｏｒｓａｌｉｚａｔｉｏｎ）（腹側構造を犠牲にしての背側の拡大）を引き起こす（非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５）。ＢＭＰは、原腸形成、中胚葉誘導、器官形成、および軟骨性骨形成の重要なレギュレータであり、多能性細胞集団の運命を制御する（非特許文献６）。ＢＭＰシグナルはまた、生理機能および疾患において重大な役割を果たし、原発性肺高血圧症、遺伝性出血性毛細管拡張症候群、進行性骨化性線維形成異常症、および若年性ポリポーシス症候群に関与する（非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９）。
【０００５】
ＢＭＰシグナル伝達ファミリーは、ＴＧＦ−βスーパーファミリーの別種のサブセットである（非特許文献１０）。２０種を超える公知のＢＭＰリガンドが、３種の異なるＩＩ型受容体（ＢＭＰＲＩＩ、ＡｃｔＲＩＩａ、およびＡｃｔＲＩＩｂ）および少なくとも４種のＩ型受容体（ＡＬＫ１、ＡＬＫ２、ＡＬＫ３、およびＡＬＫ６）により認識される。二量体のリガンドは、受容体ヘテロマーの会合を促進し、構成要素的に活性な（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅｌｙ−ａｃｔｉｖｅ）ＩＩ型受容体セリン／トレオニンキナーゼがＩ型受容体セリン／トレオニンキナーゼをリン酸化するのを可能にする。活性化されたＩ型受容体は、ＢＭＰ応答性（ＢＲ）ＳＭＡＤエフェクター（ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ５、およびＳＭＡＤ８）をリン酸化し、ＳＭＡＤ４（ＴＧＦシグナル伝達もまた促進するｃｏ−ＳＭＡＤ）との複合体において核転座を促進する。加えて、ＢＭＰシグナルは、ＳＭＡＤ非依存性様式で細胞内エフェクタ（例えば、ＭＡＰＫｐ３８）を活性化させ得る（非特許文献１１）。可溶性ＢＭＰアンタゴニスト（例えば、ノギン、コーディン、グレムリン、およびフォリスタチン）は、リガンド隔離によりＢＭＰシグナル伝達を制限する。
【０００６】
ヘプシジン（ｈｅｐｃｉｄｉｎ）（ペプチドホルモンであり、全身の鉄のバランスのレギュレータ）の発現を制御するときのＢＭＰシグナルにとっての役割もまた示唆されてきた（非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５）。ヘプシジンは、結合し、フェロポーチン（ｆｅｒｒｏｐｏｒｔｉｎ）（脊椎動物における唯一の鉄のエクスポータ）の分解を促進する。フェロポーチン活性の低下は、腸細胞、マクロファージ、および肝細胞中の細胞内貯蔵から血流への鉄の流動化を妨げる（非特許文献１６）。ＢＭＰシグナル伝達と鉄代謝の間のつながりは、治療学の潜在的な対象を表す。
【０００７】
リガンド（現在、２５種を超える異なるリガンド）および受容体（ＢＭＰを認識する４種のＩ型受容体および３種のＩＩ型受容体）のレベルでのＢＭＰおよびＴＧＦ−βスーパーファミリーの途方もない構造的多様性、ならびに結合している受容体のヘテロ四量体の様式を考慮すると、可溶性受容体、内在性インヒビター、または中和抗体によってＢＭＰシグナルを阻害するための慣習的なアプローチは、実践的でも効果的でもない。内在性インヒビター（例えば、ノギンおよびフォリスタチン）は、リガンドサブクラスに対する限定された特異性を有する。単一受容体は、リガンドに対する限定された親和性を有する一方で、リガンドヘテロ四量体は、むしろ、特定のリガンドに対する正確な特異性を示す。中和抗体は、特定のリガンドまたは受容体に対して特異的であり、また、このシグナル伝達系の構造的多様性によって限定される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｍａｓｓａｇｕｅら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１：１６９−１７８、２０００
【非特許文献２】Ｎｇｕｙｅｎら、Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．１９９：９３−１１０、１９９８
【非特許文献３】Ｆｕｒｔｈａｕｅｒら、Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２１４：１８１−１９６、１９９９
【非特許文献４】Ｍｉｎｔｚｅｒら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １２８：８５９−８６９、２００１
【非特許文献５】Ｓｃｈｍｉｄら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １２７：９５７−９６７、２０００
【非特許文献６】Ｚｈａｏ、Ｇｅｎｅｓｉｓ、３５：４３−５６、２００３
【非特許文献７】Ｗａｉｔｅら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．４：７６３−７７３、２００３
【非特許文献８】Ｐａｐａｎｉｋｏｌａｏｕら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．３６：７７−８２、２００４
【非特許文献９】Ｓｈｏｒｅら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．３８：５２５−５２７、２００６
【非特許文献１０】Ｓｅｂａｌｄら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．３８５：６９７−７１０、２００４
【非特許文献１１】Ｎｏｈｅら、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌ  １６：２９１−２９９、２００４
【非特許文献１２】Ｐｉｇｅｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：７８１１−７８１９、２００１
【非特許文献１３】Ｆｒａｅｎｋｅｌら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１５：１５３２−１５４１、２００５
【非特許文献１４】Ｎｉｃｏｌａｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９：４５９６−４６０１、２００２
【非特許文献１５】Ｎｉｃｏｌａｓら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．３４：９７−１０１、２００３
【非特許文献１６】Ｎｅｍｅｔｈら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０６：２０９０−２０９３、２００４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
従って、ＢＭＰシグナル伝達経路に特異的に拮抗し、かつ、治療的または実験的適用（例えば、列挙されたもの）においてこれらの経路を操るために使用され得る薬理学的薬剤に対する必要性が当該分野においてある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（発明の概要）
一局面において、本発明は、一般式Ｉ：
【００１１】
【化１】
2014504604.tif 000002
【００１２】
により表される化合物を含む、ＳＭＡＤ１／５／８のＢＭＰ誘導リン酸化を阻害する化合物であって、
ここで、
Ｘは、ＣＲ１５およびＮから選択され；
Ｙは、ＣＲ１５およびＮから選択され；
Ｚは、ＣＲ３およびＮから選択され；
Ａｒは、置換もしくは非置換の、アリールおよびヘテロアリール（例えば、六員環、例えば、フェニル）から選択され；
Ｌ１は存在しないか、あるいは、置換もしくは非置換の、アルキルおよびヘテロアルキルから選択され；
ＡおよびＢは、各存在について独立して、ＣＲ１６およびＮ、好ましくはＣＲ１６（例えば、ＣＨ）から選択され；
ＥおよびＦは、各存在について独立して、ＣＲ５およびＮ、好ましくはＣＲ５から選択され；
好ましくは、Ａ、Ｂ、Ｅ、およびＦのうちの２つ以下が、Ｎであるように選択され；
Ｒ３は、置換基（例えば、Ｈ、および、置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アシルアミノ、カルバメート、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択される置換基（例えば、低級アルキル））を表し；
Ｒ４は、置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミド（例えば、置換もしくは非置換の、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、アシル、カルボキシル、エステル、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミド）から、好ましくは、置換もしくは非置換の、ヘテロシクリルまたはヘテロアリールから選択され；
Ｒ５は、各存在について独立して、置換基（例えば、Ｈ、および、置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミド（好ましくは、Ｈ、あるいは、置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、またはシアノ）から選択される置換基）を表すか、あるいは、２個存在するＲ５が、それらが結合する原子と一緒になって、置換もしくは非置換の、５員または６員シクロアルキル環、ヘテロシクロアルキル環、アリール環、またはヘテロアリール環を、好ましくは、アリールまたはヘテロアリール環（例えば、置換もしくは非置換のベンゾ環）を形成し；
Ｒ１３は存在しないか、あるいは、それらが結合する環上の１〜２個の置換基を表し、各存在について独立して、置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アシルアミノ、カルバメート、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは、置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アシルアミノ、カルバメート、またはシアノから選択され；
Ｒ１５は、各存在について独立して、置換基（例えば、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アシルアミノ、カルバメート、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは、Ｈ、あるいは、置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アシルアミノ、カルバメート、またはシアノから選択される置換基）を表し；
Ｒ１６は、各存在について独立して、置換基（例えば、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは、Ｈ、あるいは、置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、またはシアノから選択される置換基）を表す、
化合物、あるいは、その薬学的に受容可能な塩、エステル、またはプロドラッグを提供する。
特定の実施形態において、ＹがＮであるか、または、Ａｒがその環の中に窒素原子を含むかのいずれかである。
【００１３】
特定の実施形態において、ＥおよびＦはそれぞれＣＲ５であり、存在するＲ５の両方が、それらの間にある原子と一緒になって、置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミド（好ましくは置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、またはシアノ）で必要に応じて置換される５員環、６員環、または７員環を形成する。特定の実施形態において、ＥおよびＦが一緒になって、置換もしくは非置換の、６員シクロアルキル環、ヘテロシクリル環、アリール環、またはヘテロアリール環（例えば、ピリジン環、ピペリジン環、ピラン環、またはピペラジン環など）を形成する。特定のそのような実施形態において、上記環は１〜４個のアミン基を含むのに対し、他の実施形態において、上記環は、置換もしくは非置換のベンゾ環（例えば、
【００１４】
【化２】
2014504604.tif 000003
【００１５】
）である。特定のそのような実施形態において、上記環は、例えば、必要に応じて置換されたアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミド（好ましくはアルキル、アルケニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、またはシアノ）で置換される。
【００１６】
特定の実施形態において、Ａｒは、置換もしくは非置換のヘテロアリール（例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、キノリン、およびピリミジン）を表す。特定の実施形態において、Ａｒは、置換もしくは非置換のアリール（例えば、フェニル）を表す。特定の実施形態において、Ａｒは、６員環（例えば、フェニル環（例えば、そのフェニル環において、Ｌ１が二環式コアに対してＡｒのパラ位に配置される））である。
【００１７】
上記で考察されたような特定の実施形態において、Ａｒ上の置換基は、置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミド（好ましくは、置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、またはシアノ）から選択される。
【００１８】
特定の実施形態において、Ｌ１はリンカーＭｋを表し、ここで、ｋは１〜８、好ましくは２〜４の整数であり、各Ｍは、Ｃ（Ｒ１８）２、ＮＲ１９、Ｓ、ＳＯ２、またはＯから選択される単位を表し、好ましくは、２個のヘテロ原子が隣接する位置に存在しないように、より好ましくは任意の窒素原子と別のヘテロ原子との間に少なくとも２個の炭素原子を有するように選択され；ここで、Ｒ１８は、各存在について独立して、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは、Ｈまたは低級アルキルから選択され；そして、Ｒ１９は、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、オキシド、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、スルホニル、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは、Ｈまたは低級アルキルから選択される。
【００１９】
特定の実施形態において、Ｌ１は存在しない。特定の実施形態において、Ｌ１は、置換もしくは非置換の、アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ８鎖、好ましくはＣ２−Ｃ４鎖）、およびヘテロアルキルから選択される。特定のそのような実施形態において、Ｌ１は、以下の構造：
【００２０】
【化３】
2014504604.tif 000004
【００２１】
を有し、ここで、ｎは０〜４の整数であり、Ｑは、ＣＲ１０Ｒ１１、ＮＲ１２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、およびＳＯ２から選択され；Ｒ１０およびＲ１１は、各存在について独立して、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは、Ｈまたは低級アルキルから選択され；そして、Ｒ１２は、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、オキシド、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、スルホニル、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは、Ｈまたは低級アルキルから選択される。特定の実施形態において、Ｌ１は、以下の構造：
【００２２】
【化４】
2014504604.tif 000005
【００２３】
を有し、ここで、Ｑは、ＣＨ２、ＮＨ、Ｓ、ＳＯ２、またはＯであり、好ましくは、Ｏである。
【００２４】
特定の実施形態において、Ｒ４は
【００２５】
【化５】
2014504604.tif 000006
【００２６】
であり、ここで、Ｒ２１は、各存在について独立して、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、アシル、スルホニル、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは、Ｈまたは低級アルキルから選択される。
【００２７】
特定の実施形態において、Ｒ４はヘテロシクリルであり、例えば、１個または２個のヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｓ、またはＯ）を含むヘテロシクリル（例えば、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリン、ラクトン、またはラクタム）である。特定のそのような実施形態において、Ｒ４は、１個の窒素原子を含むヘテロシクリル（例えば、ピペリジンまたはピロリジン）であり、例えば、
【００２８】
【化６】
2014504604.tif 000007
【００２９】
であり、ここで、Ｒ２０は存在しないか、あるいは、それが結合する環上の１〜４個の置換基（例えば、置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアリール、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、アシル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、およびスルホンアミドから、好ましくは、Ｈまたは低級アルキルから選択される、それが結合する環上の１〜４個の置換基）を表す。特定の実施形態において、Ｒ４は、２個の窒素原子を含むヘテロシクリル（例えば、ピペラジン）である。特定の実施形態において、Ｒ４は、窒素原子および酸素原子を含むヘテロシクリル（例えば、モルホリン）である。
【００３０】
特定の実施形態において、Ｒ４は、環原子の内にアミンを含むヘテロシクリルまたはヘテロアリール（例えば、ピリジル、イミダゾリル、ピロリル、ピペリジル、ピロリジル、ピペラジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリルなど）であり、かつ／あるいは、アミノ置換基を有する。特定の実施形態において、Ｒ４は
【００３１】
【化７】
2014504604.tif 000008
【００３２】
であり、ここで、Ｒ２０は、上記で定義される通りであり；Ｗは、結合を表すか、あるいは、Ｃ（Ｒ２１）２、Ｏ、またはＮＲ２１から選択され；そして、Ｒ２１は、各存在について独立して、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、アシル、スルホニル、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは、Ｈまたは低級アルキルから選択される。
【００３３】
特定の好ましい実施形態において、Ｌ１は存在せず、Ａｒ−Ｒ４は、以下の構造：
【００３４】
【化８】
2014504604.tif 000009
【００３５】
を有する。
【００３６】
上記で考察されたような特定の実施形態において、Ｒ４上の置換基は、置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミド（好ましくは、置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、またはシアノ）から選択される。
【００３７】
特定の実施形態において、Ｌ１は存在せず、Ｒ４はＡｒに直接結合する。ある実施形態において、ここで、Ｒ４は、Ａｒに直接結合する六員環であり、かつ、Ｎに対してその環の４位にアミノ置換基を有する。
【００３８】
特定の実施形態において、Ｌ１−Ｒ４は、塩基性窒素含有基を含む（例えば、Ｌ１-が
窒素含有ヘテロアルキル、またはアミン置換されたアルキルを含むか、あるいは、Ｒ４が置換もしくは非置換の、窒素含有ヘテロシクリルまたはヘテロアリールを含み、かつ／または、アミン置換基で置換されるかのいずれかである）。特定のそのような実施形態において、上記塩基性窒素含有基の共役酸のｐＫａは、６以上か、あるいは、８以上でさえある。
【００３９】
特定の実施形態において、Ｌ１は、以下の構造：
【００４０】
【化９】
2014504604.tif 000010
【００４１】
を有し、ここで、ｎは０〜４の整数であり、Ｒ４はヘテロシクリルである。特定のそのような実施形態において、ＥおよびＦは一緒になって環（例えば、ベンゾ環）を形成するのに対し、他の実施形態において、ＥおよびＦは環を形成しない。
【００４２】
特定の実施形態において、Ｌ１は存在せず、Ｒ４は、ヘテロシクリル、特に、窒素含有ヘテロシクリルである。特定のそのような実施形態において、ＥおよびＦは一緒になって環（例えば、ベンゾ環）を形成するのに対し、他の実施形態において、ＥおよびＦは環を形成しない。特定の実施形態において、Ｌ１は存在せず、Ｒ４は、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、またはモルホリンである。
【００４３】
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がアルキルまたはヘテロアルキルであり、かつＲ４がヘテロシクリル、特に、窒素含有ヘテロシクリルである場合、そこで、ＥおよびＦは一緒になって環（例えば、ベンゾ環）を形成する。上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１が、以下の構造：
【００４４】
【化１０】
2014504604.tif 000011
【００４５】
を有し、ここで、ｎは０〜４（特に、１〜２）の整数であり、かつ、ＱがＳまたはＯである場合、そこで、ＥおよびＦは一緒になって環（例えば、ベンゾ環）を形成する。
【００４６】
特定の実施形態において、ＥおよびＦは両方ともＣＲ５であり、かつ、存在するＲ５の両方がＥおよびＦと一緒になって、環（例えば、ベンゾ環）を形成するか、あるいは、Ｌ１が存在しないかのいずれかである。特定のそのような実施形態において、Ｒ４は、置換もしくは非置換の、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、アシル、カルボキシル、エステル、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、およびスルホンアミドから選択される。特定の実施形態において、ＥおよびＦは両方ともＣＲ５であり、かつ、存在するＲ５の両方がＥおよびＦと一緒になって、環（例えば、ベンゾ環）を形成するか、あるいは、Ｒ４が、置換もしくは非置換の、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アシル、カルボキシル、エステル、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、およびスルホンアミドから選択されるかのいずれかである。
【００４７】
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１が存在しない場合、Ｒ４は、シクロアルキルまたはヘテロシクリル（例えば、窒素含有ヘテロ環（例えば、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリンなど））である。
【００４８】
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつ、Ｒ４がヘテロシクリル（特に、窒素含有ヘテロ環）である場合、そこで、ＹはＣＲ１５であり、ここで、Ｒ１５は上記で定義される通りである。上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつ、Ｒ４がピペリジンである場合、そこで、ＹはＣＲ１５であり、ここで、Ｒ１５は上記で定義される通りである。ＹがＣＲ１５である特定の実施形態において、Ｒ１５は、Ｈ、低級アルキル、ヘテロアルキル、およびエステル（例えば、低級アルキルエステル（例えば、メチルエステル））から選択される。
【００４９】
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつ、Ｒ４がヘテロシクリル（特に、窒素含有ヘテロシクリル）である場合、そこで、ＸはＣＲ１５であり、ここで、Ｒ１５は上記で定義される通りである。上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつ、Ｒ４がピペリジンである場合、そこで、ＸはＣＲ１５であり、ここで、Ｒ１５は上記で定義される通りである。ＸがＲ１５である特定の実施形態において、Ｒ１５は、Ｈ、低級アルキル、およびヘテロアルキルから選択される。
【００５０】
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつ、Ｒ４がヘテロシクリル（特に、窒素含有ヘテロシクリル）である場合、そこで、ＺはＣＲ３であり、ここで、Ｒ３は上記で定義される通りである。上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつ、Ｒ４がピペリジンである場合、そこで、ＺはＣＲ３であり、ここで、Ｒ３は上記で定義される通りである。ＺがＣＲ３である特定の実施形態において、Ｒ３は、Ｈ、低級アルキル、およびヘテロアルキルから選択される。
【００５１】
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつ、Ｒ４がヘテロシクリル（特に、窒素含有ヘテロ環（例えば、ピペリジン））である場合、Ｒ１３は、それが結合する環上の２個の置換基を表し、各存在について独立して、置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アシルアミノ、カルバメート、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択される。
【００５２】
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつ、Ｒ４がヘテロシクリル（特に、窒素含有ヘテロ環（例えば、ピペリジン））である場合、Ａｒは、置換もしくは非置換の、ヘテロアリール（例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、キノリン、およびピリミジン）を表す。特定のそのような実施形態において、Ａｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択される１個以上の置換基で置換される。
【００５３】
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつ、Ｒ４がヘテロシクリル（例えば、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリン、ラクトン、ラクタムなど）である場合、Ｒ４は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択される１個以上の置換基で置換される。
【００５４】
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、化合物は、以下の：
ＹがＮであるか、または、Ａｒがその環の中に窒素原子を含むかのいずれかである；
Ｌ１は存在しない；
ＥおよびＦは一緒になって環を形成する；
Ｒ４は、シクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールである；
ＸはＣＲ１５である；
ＹはＣＲ１５である；
ＺはＣＲ３である；
Ｒ１３は、それが結合する環上の１〜２個の置換基を表し、各存在について独立して、置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アシルアミノ、カルバメート、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択される；
Ａｒは、置換もしくは非置換の、ヘテロアリール（例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、キノリン、およびピリミジン）を表す；
Ａｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択される１個以上の置換基で置換される；および
Ｒ４は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択される１個以上の置換基で置換される、
という特徴のうちの１つ以上を有する。
【００５５】
一局面において、本発明は、一般式ＩＩ：
【００５６】
【化１１】
2014504604.tif 000012
【００５７】
により表される化合物を含むＳＭＡＤ１／５／８のＢＭＰ誘導リン酸化を阻害する化合物であって、
ここで、
Ｘは、ＣＲ１５およびＮから選択され；
Ｙは、ＣＲ１５およびＮから選択され；
Ｚは、ＣＲ３およびＮから選択され；
Ａｒは、置換もしくは非置換の、アリールおよびヘテロアリール（例えば、六員環（例えば、フェニル））から選択され；
Ｌ１は存在しないか、あるいは、置換もしくは非置換の、アルキルおよびヘテロアルキルから選択され；
Ｐｙは、置換もしくは非置換の、４−ピリジニルまたは４−キノリニル（例えば、置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドで必要に応じて置換された４−ピリジニルまたは４−キノリニル）であり；そして
Ｒ３は、置換基（例えば、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アシルアミノ、カルバメート、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択される置換基（例えば、低級アルキル））を表し；
Ｒ４は、置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミド（例えば、置換もしくは非置換の、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、アシル、カルボキシル、エステル、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミド）から、好ましくは、置換もしくは非置換の、ヘテロシクリルまたはヘテロアリールから選択され；
Ｒ５は、各存在について独立して、置換基（例えば、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミド（好ましくは、Ｈ、あるいは、置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、またはシアノ）から選択される置換基）を表すか、あるいは、２個存在するＲ５が、それらが結合する原子と一緒になって、置換もしくは非置換の、５員または６員のシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル環、アリール環、またはヘテロアリール環、好ましくは、アリール環またはヘテロアリール環（例えば、置換もしくは非置換のベンゾ環）を形成し；
Ｒ１３は、存在しないか、あるいは、それが結合する環上の１〜２個の置換基を表し、各存在について独立して、置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アシルアミノ、カルバメート、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アシルアミノ、カルバメート、またはシアノから選択され；
Ｒ１５は、各存在について独立して、置換基（例えば、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アシルアミノ、カルバメート、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは、Ｈ、あるいは、置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アシルアミノ、カルバメート、またはシアノから選択される置換基）を表し；
Ｒ１６は、各存在について独立して、置換基（例えば、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは、Ｈ、あるいは、置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、またはシアノから選択される置換基）を表す、
化合物、あるいは、その薬学的に受容可能な塩、エステル、またはプロドラッグを提供する。
【００５８】
特定の実施形態において、ＹがＮであるか、または、Ａｒがその環の中に窒素原子を含むかのいずれかである。
【００５９】
特定の実施形態において、Ｐｙは、置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミド（好ましくは置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、またはシアノ）で置換される。
【００６０】
特定の実施形態において、Ａｒは、置換もしくは非置換のヘテロアリール（例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、キノリン、およびピリミジン）を表す。特定の実施形態において、Ａｒは、置換もしくは非置換のアリール（例えば、フェニル）を表す。特定の実施形態において、Ａｒは６員環（例えば、フェニル環（例えば、そのフェニル環において、Ｌ１は、二環式コアに対してＡｒのパラ位に配置される）である。
【００６１】
上記で考察されたような特定の実施形態において、Ａｒ上の置換基は、置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミド（好ましくは置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、またはシアノ）から選択される。
【００６２】
特定の実施形態において、Ｌ１は、リンカーＭｋを表し、ここで、ｋは１〜８、好ましくは２〜４の整数であり、各Ｍは、Ｃ（Ｒ１８）２、ＮＲ１９、Ｓ、ＳＯ２、またはＯから選択される単位を表し、好ましくは、２個のヘテロ原子が隣接する位置に存在しないように、より好ましくは任意の窒素原子と別のヘテロ原子との間に少なくとも２個の炭素原子を有するように選択され；ここで、Ｒ１８は、各存在について独立して、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは、Ｈまたは低級アルキルから選択され；そして、Ｒ１９は、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、オキシド、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、スルホニル、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは、Ｈまたは低級アルキルから選択される。
【００６３】
特定の実施形態において、Ｌ１は存在しない。特定の実施形態において、Ｌ１は、置換もしくは非置換の、アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ８鎖、好ましくはＣ２−Ｃ４鎖）、およびヘテロアルキルから選択される。特定のそのような実施形態において、Ｌ１は、以下の構造：
【００６４】
【化１２】
2014504604.tif 000013
【００６５】
を有し、ここで、ｎは０〜４の整数であり、Ｑは、ＣＲ１０Ｒ１１、ＮＲ１２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、およびＳＯ２から選択され；Ｒ１０およびＲ１１は、各存在について独立して、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは、Ｈまたは低級アルキルから選択され；そして、Ｒ１２は、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、オキシド、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、スルホニル、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは、Ｈまたは低級アルキルから選択される。特定の実施形態において、Ｌ１は、以下の構造：
【００６６】
【化１３】
2014504604.tif 000014
【００６７】
を有し、ここで、Ｑは、ＣＨ２、ＮＨ、Ｓ、ＳＯ２、またはＯであり、好ましくはＯである。
【００６８】
特定の実施形態において、Ｒ４は
【００６９】
【化１４】
2014504604.tif 000015
【００７０】
であり、ここで、Ｒ２１は、各存在について独立して、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、アシル、スルホニル、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは、Ｈまたは低級アルキルから選択される。
【００７１】
特定の実施形態において、Ｒ４はヘテロシクリルであり、例えば、１個または２個のヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｓ、またはＯ）を含むヘテロシクリル（例えば、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリン、ラクトン、またはラクタム）である。特定のそのような実施形態において、Ｒ４は、１個の窒素原子を含むヘテロシクリル（例えば、ピペリジンまたはピロリジン）であり、例えば、
【００７２】
【化１５】
2014504604.tif 000016
【００７３】
であり、ここで、Ｒ２０は存在しないか、あるいは、それが結合する環上の１〜４個の置換基（例えば、置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアリール、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、アシル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、およびスルホンアミドから、好ましくは、Ｈまたは低級アルキルから選択される）を表す。特定の実施形態において、Ｒ４は、２個の窒素原子を含むヘテロシクリル（例えば、ピペラジン）である。特定の実施形態において、Ｒ４は、窒素原子および酸素原子を含むヘテロシクリル（例えば、モルホリン）である。
【００７４】
特定の実施形態において、Ｒ４は、環原子の内にアミンを含むヘテロシクリルまたはヘテロアリール（例えば、ピリジル、イミダゾリル、ピロリル、ピペリジル、ピロリジル、ピペラジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリルなど）であり、かつ／あるいは、アミノ置換基を有する。特定の実施形態において、Ｒ４は
【００７５】
【化１６】
2014504604.tif 000017
【００７６】
であり、ここで、Ｒ２０は、上記で定義される通りであり；Ｗは、結合を表すか、あるいは、Ｃ（Ｒ２１）２、Ｏ、またはＮＲ２１から選択され；そして、Ｒ２１は、各存在について独立して、Ｈ、および置換もしくは非置換の、アルキル、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、アシル、スルホニル、スルファモイル、またはスルホンアミドから、好ましくは、Ｈまたは低級アルキルから選択される。
【００７７】
上記で考察されたような特定の実施形態において、Ｒ４上の置換基は、置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミド（好ましくは置換もしくは非置換の、アルキル、アルケニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、またはシアノ）から選択される。
【００７８】
特定の実施形態において、Ｌ１は存在せず、Ｒ４はＡｒに直接結合する。Ｒ４がＡｒに直接結合する六員環であり、かつ、Ｎに対してその環の４位にアミノ置換基を有するある実施形態において、このＮおよびアミン置換基は、その環のトランスに配置され得る。
【００７９】
特定の実施形態において、Ｌ１−Ｒ４は、塩基性窒素含有基を含む（例えば、Ｌ１が窒素含有ヘテロアルキル、またはアミン置換されたアルキルを含むか、あるいは、Ｒ４が置換もしくは非置換の、窒素含有ヘテロシクリルもしくはヘテロアリールを含み、かつ／または、アミン置換基で置換されるかのいずれかである）。特定のそのような実施形態において、上記塩基性窒素含有基の共役酸のｐＫａは、６以上か、あるいは、８以上である。
【００８０】
特定の実施形態において、Ｌ１は、以下の構造：
【００８１】
【化１７】
2014504604.tif 000018
【００８２】
を有し、ここで、ｎは０〜４の整数であり、Ｒ４はヘテロシクリルである。特定のそのような実施形態において、Ｐｙは４−キノリニルであるのに対し、他の実施形態において、Ｐｙは、４−ピリジニルである。
【００８３】
特定の実施形態において、Ｌ１は存在せず、Ｒ４は、ヘテロシクリル、特に、窒素含有ヘテロシクリルである。特定のそのような実施形態において、Ｐｙは、４−キノリニルであるのに対し、他の実施形態において、Ｐｙは、４−ピリジニルである。特定の実施形態において、Ｌ１は存在せず、Ｒ４は、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、またはモルホリンである。
【００８４】
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がアルキルまたはヘテロアルキルであり、かつＲ４がヘテロシクリル、特に、窒素含有ヘテロシクリルである場合、そこで、Ｐｙは４−キノリニルである。上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１が以下の構造：
【００８５】
【化１８】
2014504604.tif 000019
【００８６】
を有し、ここで、ｎは０〜４（特に、１〜２）の整数であり、かつ、ＱがＳまたはＯである場合、そこで、Ｐｙは４−キノリニルである。
【００８７】
特定の実施形態において、Ｐｙが４−キノリニルであるか、あるいは、Ｌ１が存在しないかのいずれかである。特定のそのような実施形態において、Ｒ４は、置換もしくは非置換の、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、アシル、カルボキシル、エステル、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、およびスルホンアミドから選択される。特定の実施形態において、Ｐｙが４−キノリニルであるか、あるいは、Ｒ４が、置換もしくは非置換の、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アシル、カルボキシル、エステル、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、およびスルホンアミドから選択されるかのいずれかである。
【００８８】
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１が存在しない場合、Ｒ４は、シクロアルキルまたはヘテロシクリル（例えば、窒素含有ヘテロ環（例えば、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリンなど））である。
【００８９】
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつＲ４がヘテロシクリル（特に、窒素含有ヘテロ環）である場合、そこで、ＹはＣＲ１５であり、ここで、Ｒ１５は上記で定義される通りである。上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつ、Ｒ４がピペリジンである場合、そこで、ＹはＣＲ１５であり、ここで、Ｒ１５は上記で定義される通りである。ＹがＣＲ１５である特定の実施形態において、Ｒ１５は、Ｈ、低級アルキル、ヘテロアルキル、およびエステル（例えば、低級アルキルエステル（例えば、メチルエステル））から選択される。
【００９０】
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつ、Ｒ４がヘテロシクリル（特に、窒素含有ヘテロシクリル）である場合、そこで、ＸはＣＲ１５であり、ここで、Ｒ１５は上記で定義される通りである。上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつ、Ｒ４がピペリジンである場合、そこで、ＸはＣＲ１５であり、ここで、Ｒ１５は、上記で定義される通りである。ＸがＲ１５である特定の実施形態において、Ｒ１５は、Ｈ、低級アルキル、およびヘテロアルキルから選択される。
【００９１】
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつ、Ｒ４がヘテロシクリル（特に、窒素含有ヘテロシクリル）である場合、ＺはＣＲ３であり、ここで、Ｒ３は上記で定義される通りである。上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつ、Ｒ４がピペリジンである場合、そこで、ＺはＣＲ３であり、ここで、Ｒ３は上記で定義される通りである。ＺがＣＲ３である特定の実施形態において、Ｒ３は、Ｈ、低級アルキル、およびヘテロアルキルから選択される。
【００９２】
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつ、Ｒ４がヘテロシクリル（特に、窒素含有ヘテロ環（例えば、ピペリジン））である場合、Ｒ１３は、それが結合する環上の２個の置換基を表し、各存在について独立して、置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アシルアミノ、カルバメート、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択される。
【００９３】
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつ、Ｒ４がヘテロシクリル（特に、窒素含有ヘテロ環（例えば、ピペリジン））である場合、Ａｒは、置換もしくは非置換の、ヘテロアリール（例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、キノリン、およびピリミジン）を表す。特定のそのような実施形態において、Ａｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択される１個以上の置換基で置換される。
【００９４】
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、Ｌ１がヘテロアルキルであり、かつ、Ｒ４がヘテロシクリル（例えば、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリン、ラクトン、ラクタムなど）である場合、Ｒ４は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択される１個以上の置換基で置換される。
上記で開示された実施形態のうちの特定のものにおいて、化合物は、以下の：
ＹがＮであるか、または、Ａｒがその環の中に窒素原子を含むかのいずれかである；
Ｌ１は存在しない；
Ｐｙは４−キノリニルである；
Ｒ４はシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールである；
ＸはＣＲ１５である；
ＹはＣＲ１５である；
ＺはＣＲ３である；
Ｒ１３は、それが結合する環上の１〜２個の置換基を表し、各存在について独立して、置換もしくは非置換の、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アシルアミノ、カルバメート、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択される；
Ａｒは、置換もしくは非置換の、ヘテロアリール（例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、キノリン、およびピリミジン）を表す；
Ａｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択される１個以上の置換基で置換される；および
Ｒ４は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロゲン、アシル、カルボキシル、エステル、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、アミノ、アシルアミノ、カルバメート、アミド、アミジノ、シアノ、スルホニル、スルホキシド、スルファモイル、またはスルホンアミドから選択される１個以上の置換基で置換される、
という特徴のうちの１つ以上を有する。
【００９５】
式Ｉおよび式ＩＩの例示的化合物としては、以下の化合物：
【００９６】
【化１９】
2014504604.tif 000020
【００９７】
【化２０】
2014504604.tif 000021
【００９８】
【化２１】
2014504604.tif 000022
【００９９】
【化２２】
2014504604.tif 000023
【０１００】
ならびに、上記のものの塩（例えば、薬学的に受容される塩）が挙げられる。
【０１０１】
一局面において、本発明は、本明細書中に開示される通りの化合物、および、薬学的に受容可能な賦形剤または溶媒を含有する薬学的組成物を提供する。特定の実施形態において、薬学的組成物は、本明細書中に開示される通りの化合物のプロドラッグを含有し得る。
【０１０２】
別の局面において、本発明は、本明細書中で開示される通りの化合物と細胞を接触させる工程を包含する、ＳＭＡＤ１／５／８のＢＭＰ誘導リン酸化を阻害する方法を提供する。特定の実施形態において、上記方法は、異常に高いＡｐｏＢ−１００および／もしくはＬＤＬおよび／もしくは総コレステロールのレベルを有するか、または疾患もしくは所望されない医学的状態を発症させる患者のリスクを増大させる被験体におけるＡｐｏＢ−１００および／もしくはＬＤＬおよび／もしくは総コレステロールの循環レベルを低下させる。特定の実施形態において、被験体におけるＡｐｏＢ−１００および／もしくはＬＤＬおよび／もしくは総コレステロールの循環レベルを低下させる上記方法は、一次性もしくは二次性心血管事象のリスクを低下させる。特定の実施形態において、上記方法は、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達の阻害により利益を得ることになる被験体の疾患または状態を処置または予防する。特定の実施形態において、上記疾患または状態は、肺高血圧症；遺伝性出血性毛細管拡張症候群；心臓弁先天異常；心臓構造先天異常（ｃａｒｄｉａｃ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｍａｌｆｏｒｍａｔｉｏｎ）；進行性骨化性線維形成異常症；若年性家族性ポリポーシス症候群；上皮小体疾患；がん（例えば、乳癌、前立腺癌、腎細胞癌、骨転移、肺転移、骨肉腫、および多発性骨髄腫）；貧血；血管石灰化；血管炎症；アテローム性動脈硬化症；後天性もしくは先天性の高コレステロール血症もしくは高リポタンパク質血症；脂質吸収もしくは脂質代謝における欠陥と関連する疾患、障害、もしくは症候群；高脂血症によって引き起こされる疾患、障害、もしくは症候群；弁石灰化；腎性骨形成異常症；炎症性障害（例えば、強直性脊椎炎）；ウイルス、細菌、真菌、ヒト型結核菌、および寄生生物による感染症から選択される。
【０１０３】
別の局面において、本発明は、被験体における高コレステロール血症、高脂血症、高リポタンパク質血症もしくは肝臓脂肪症を処置する方法を提供し、上記方法は、有効量の本明細書に開示される化合物を投与する工程を包含する。特定のこのような実施形態において、上記高コレステロール血症、高脂血症、高リポタンパク質血症もしくは肝臓脂肪症は、後天性の高コレステロール血症、高脂血症、高リポタンパク質血症もしくは肝臓脂肪症である。特定のこのような実施形態において、上記高コレステロール血症、高脂血症、高リポタンパク質血症、もしくは肝臓脂肪症は、糖尿病、高脂肪食および／もしくは座りがちなライフ・スタイル（ｓｅｄｅｎｔａｒｙ  ｌｉｆｅｓｔｙｌｅ）、肥満症、メタボリックシンドローム、内因性もしくは二次性の肝疾患、胆汁性肝硬変もしくは他の胆汁鬱滞障害、アルコール依存症、膵炎、ネフローゼ症候群、末期腎疾患、甲状腺機能低下症、チアジド、β-ブロッカー、レチノイド、高活性な抗レトロウイルス剤、エストロゲン、プロゲスチン、もしくはグルココルチコイドの投与に起因する医原性と関連する。
【０１０４】
別の局面において、本発明は、被験体における冠血管、脳血管もしくは末梢血管の疾患から生じる一次性および二次性心血管事象を低下させる方法を提供し、上記方法は、有効量の本明細書で開示される化合物を投与する工程を包含する。
【０１０５】
別の局面において、本発明は、被験体における非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、脂肪症誘導性肝傷害、線維症、肝硬変、もしくは非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）と関連する、被験体における肝機能不全を予防および処置する方法を提供し、上記方法は、有効量の本明細書で開示される化合物を投与する工程を包含する。
【０１０６】
別の局面において、本発明は、本明細書中で開示される通りの化合物と細胞を接触させる工程を包含する、細胞の膨張または分化を誘導する方法を提供する。特定の実施形態において、上記細胞は、胚性幹細胞および成体幹細胞から選択される。特定の実施形態において、上記細胞は、インビトロである。
【０１０７】
特定の実施形態において、本発明の方法は、本明細書中で開示される通りの化合物のプロドラッグと細胞を接触させる工程を包含し得る。
【図面の簡単な説明】
【０１０８】
【図１】図１は、ＢＭＰシグナル伝達経路が、高脂肪食を受けているＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）−／−マウスにおけるアテローム硬化性病変内で活性化されたことを示す。（ａ）高脂肪食を６週間受けて後、アテローム硬化性病変が、石灰化の徴候なしに大動脈小弯部に現れた（ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ／Ｅ）染色、左上パネル；矢印は、大動脈起始部および小弯部（ｌｅｓｓｅｒ  ｃｕｒｖａｔｕｒｅ）における病変を示す）；高脂肪食を２０週間受けて後、顕著な医学的石灰化が、小弯部において検出可能であった（フォンコッサ染色、右下パネル；矢印は、大動脈小弯部における医学的石灰化を示す）（全てのパネルは、前面連続切片（ｆｒｏｎｔａｌ，ｓｅｒｉａｌ  ｓｅｃｔｉｏｎ））。バーは、５００μｍを示す。（ｂ）６週間にわたる高脂肪食を受けているＬＤＬＲ−／−マウスの大動脈小弯部におけるアテローム硬化性病変。初期のアテローム病変は、内皮の直ぐ下のマクロファージ蓄積を主な特徴とした。マクロファージ及び内皮細胞の両方から、リン酸化ＳＭＡＤ１／５／８（ｐ−ＳＭＡＤ１／５／８）の強い核シグナルが明らかになった。組織を、ｐ−ＳＭＡＤ１／５／８に対して特異的な抗体（緑色）もしくはマクロファージに対して特異的な抗体（ＭＡＣ２，赤色）で染色し、ＤＮＡ結合色素（ＤＡＰＩ，青色）で対比染色した。白色のバーは、１００μｍを示す。（ｃ）化合物１３での５日間にわたる処置は、６週間にわたって高脂肪食を与えたＬＤＬＲ−／−マウスの大動脈起始部におけるアテローム硬化性病変内でのＳＭＡＤ  １／５／８のリン酸化を抑制した。上側のパネル（ｐ−ＳＭＡＤ１／５／８免疫反応性，緑色）：ビヒクル処置（左）および化合物１３での処置（毎日２．５ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ，右）；下側のパネル（ＤＡＰＩ染色，青色）。白色のバーは、１００μｍを示す。
【図２】図２は、ＢＭＰアンタゴニストでの処置が、ＬＤＬＲ−／−における動脈石灰化およびアテローム硬化を予防したことを示す。（ａ）ビヒクル（左パネル）、もしくは化合物１３（毎日２．５ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ，右パネル）のいずれかで２０週間にわたって処置した高脂肪食を受けているＬＤＬＲ−／−マウスから採取した全組織の大動脈標本の比較。明視野画像（外側）は、蛍光強度を示すヒートマップ（内側）に関連している。上記蛍光強度は、蛍光体標識ビスホスホネート（Ｏｓｔｅｏｓｅｎｓｅ  ６８０ｎｍ）の取り込みに基づく骨形成活性を表す。下側のパネル：目的の４つの領域（大動脈起始部（起始部）、大動脈弓（弓）、頸動脈（頸動脈）もしくは大動脈胸部（胸部）として定義）における定量化されたシグナル強度。示される値は、任意単位（ＡＵ，  ＊ビヒクル処置したＬＤＬＲ−／−マウスにおける対応する目的の領域に対してｐ≦０．０５）において表される平均値±ＳＥＭである。（ｂ）顕著な医学的石灰化が、２０週間にわたる高脂肪食を受けているビヒクル処置ＬＤＬＲ−／−の小弯部において検出可能であったが、アリザリンレッド染色に基づいて、化合物１３（毎日２．５ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）で処置したＬＤＬＲ−／−の大動脈において有意に量が少なかった。示される前面切片は、合計２０匹のビヒクル処置および薬物処置マウスの代表を示す。矢印は、大動脈小弯部における石灰性沈着を示す。バーは、５００μｍを示す。（ｃ）ビヒクル（左パネル）、もしくは化合物１３（毎日２．５ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ，右パネル）のいずれかで２０週間にわたって処置した高脂肪食を受けているＬＤＬＲ−／−マウスから採取した、全組織大動脈標本の比較。明視野画像（外側）は、蛍光強度を示すヒートマップ（内側）に関連している。上記蛍光強度は、蛍光体標識基質（Ｐｒｏｓｅｎｓｅ  ８００ｎｍ）のカテプシン媒介性切断に基づくマクロファージ活性を表す。下側のパネル：目的の４つの領域（大動脈起始部、大動脈弓、頸動脈、もしくは胸部大動脈として定義）における定量化されたシグナル強度。データは、任意単位（ＡＵ，＊ビヒクル処置ＬＤＬＲ−／−マウスにおける対応する目的の領域に対してｐ≦０．０５）において表される平均値±ＳＥＭとして示される。（ｄ）アテローム負荷は、化合物１３で処置したＬＤＬＲ−／−マウスにおいて低下した。２０週間にわたって高脂肪食を受け、ビヒクル（左）もしくは化合物１３（毎日２．５ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ，右）で処置したＬＤＬＲ−／−マウスからのオイルレッドＯ染色した代表的な正面の大動脈（ｅｎ  ｆａｃｅ  ａｏｒｔａｅ）は、合計６匹のビヒクル処置マウスおよび薬物処置マウスから示される。（ｅ）ＡＬＫ３−Ｆｃは、インビボでＢＭＰシグナル伝達経路を阻害した。６週間にわたる高脂肪食を受け、そしてビヒクル、ＡＬＫ３−Ｆｃ（１日おきに２ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）、もしくは化合物１３（毎日２．５ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）で５日間にわたって処置したＬＤＬＲ−／−マウスの小弯部におけるアテローム硬化性病変。上パネル：リン酸化ＳＭＡＤ  １／５／８に対して特異的な抗体での染色（ｐ−ＳＭＡＤ１／５／８，緑色）。下パネル：ＤＡＰＩでの核染色（青色）。白色のバーは、１００μｍを示す。（ｆ）Ａ���Ｋ３−Ｆｃおよび化合物１３は、ＬＤＬＲ−／−における泡沫細胞蓄積を阻害した。６週間にわたる高脂肪食を受けそしてビヒクル、ＡＬＫ３−Ｆｃ（１日おきに２ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）もしくは化合物１３（毎日２．５ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）のいずれかで６週間にわたって処置したＬＤＬＲ−／−の大動脈弓の前面切片。ＤＡＰＩ（青色）およびＭＡＣ２（赤色）の合わせた染色。白色のバーは、５００μｍを示す。（ｇ）ＡＬＫ３−Ｆｃは、６週間にわたる高脂肪食を受けているＬＤＬＲ−／−マウス由来の大動脈においてマクロファージ活性を阻害した。近紫外線画像化プローブのカテプシン媒介性切断により示される、目的の４つの領域（大動脈起始部（起始部）、大動脈弓（弓）、頸動脈（頸動脈）もしくは胸部大動脈（胸部）として定義）におけるシグナル強度。データは、平均値±ＳＥＭとして示され、任意単位（ＡＵ，＊ビヒクル処置ＬＤＬＲ−／−マウスにおける対応する目的の領域に対してｐ≦０．０５）において表される。
【図３】図３は、ＳＭＡＤ１／５／８リン酸化が、高脂肪食を受けているＬＤＬＲ−／−マウスにおけるアテローム硬化性病変内で誘導されたことを示す。高脂肪食を受けている最初の２０週間の間に、アテローム病変の発生から、リン酸化ＳＭＡＤ  １／５／８（ｐ−ＳＭＡＤ１／５／８）の強い核染色が明らかになった。３週間、６週間、７週間、９週間もしくは２０週間にわたる高脂肪食を受けているＬＤＬＲ−／−マウスの小弯の比較から、増殖しつつあるアテローム硬化性プラーク内のｐ−ＳＭＡＤ１／５／８免疫反応性における強い増大が示された。左パネル：ｐ−ＳＭＡＤ１／５／８の免疫蛍光染色（緑色）。右パネル：ＦＩＴＣ標識二次抗体のみで染色した連続切片。白いバーは、５００μｍを示す。
【図４】図４は、ＢＭＰシグナル伝達の阻害が、内皮細胞における活性酸素種の誘導を低下させたことを示す。（ａ）ヒト大動脈内皮細胞における活性酸素種（ＲＯＳ）の酸化ＬＤＬ−（ＯｘＬＤＬ，８０μｇ／ｍＬ）もしくはＢＭＰ２−（２０ｎｇ／ｍＬ）誘導性生成を、クロロメチル２’，７’−ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート（ＤＣＦ）蛍光によって定量化した。ｏｘＬＤＬおよびＢＭＰ２の両方によるＲＯＳの誘導は、化合物１３（１００ｎＭ）もしくはＡＬＫ３−Ｆｃ（５００ｎｇ／ｍＬによって阻害された（＊処置なしのコントロールに対してｐ≦０．０５、＃ｏｘＬＤＬ単独での処置に対してｐ≦０．０５、§ＢＭＰ２単独での処置に対してｐ≦０．０５）。（ｂ）ＢＭＰ２  ｍＲＮＡは、ｏｘＬＤＬ（８０μｇ／ｍＬ）での８時間にわたるチャレンジに応答して、ヒト大動脈内皮細胞においてアップレギュレートされた（＊処置なしのコントロールに対してｐ≦０．０５）。ｏｘＬＤＬは、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、もしくはＢＭＰ９をコードする遺伝子の発現を有意に変化させなかった。
【図５】図５は、体重および飼料摂取が、ビヒクルで処置したマウスと化合物１３で処置したマウスとの間で有意に異ならなかったことを示す。（ａ）ビヒクルもしくは化合物１３（２．５ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）の毎日の注射を受けながら、２０週間の高脂肪食投与にわたる平均体重（ｇ）。（ｂ）ビヒクルもしくは化合物１３（２．５ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）の毎日の注射を受けながら、６週間の高脂肪食投与にわたる、体重１ｇあたりの飼料摂取。データは、平均値±ＳＥＭとして表される。
【図６】図６は、酸化ＬＤＬが、ヒト大動脈内皮細胞において用量依存性様式での反応性酸素種の生成を誘導したことを示す。ヒト大動脈内皮細胞を、示された用量の酸化ＬＤＬコレステロール（ｏｘＬＤＬ）と２０時間にわたって、ＥＧＭ−２培地（０．１％  ウシ胎仔血清を含む）中でインキュベートした。細胞を、６０分間にわたってＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡとインキュベートし、５２７ｎｍでの蛍光強度を、過酸化水素生成の尺度として測定した。データは、平均値±ＳＥＭとして表した。＊酸化ＬＤＬとインキュベートしなかった（０μｇ／ｍｌ）細胞に対してｐ≦０．０５。
【図７】図７は、ルシゲニン蛍光で見積もられるとおり、ヒト大動脈内皮細胞（ＨＡＥＣ）における反応性酸素種のｏｘＬＤＬ誘導性生成を示す。ｏｘＬＤＬによるＲＯＳの誘導は、細胞と化合物１３（１００ｎＭ）もしくはＡＬＫ３−Ｆｃ（５００ｎｇ／ｍＬ）とをインキュベートすることによってブロックされ得る。＊ｏｘＬＤＬで処理しなかったＨＡＥＣに対してｐ≦０．０５。＃ｏｘＬＤＬ単独での処理に対してｐ≦０．０５。
【図８】図８は、ＢＭＰ２が、ｏｘＬＤＬによってＨＡＥＣにおいて誘導されたことを示す。定量的ＲＴ−ＰＣＲによって測定される場合のＢＭＰ２  ｍＲＮＡ（ａ）、およびＢＭＰ−２  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（ＤＢＰ２００，  Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＭＮ）によって測定される場合のＢＭＰ２タンパク質発現（ｂ）は、酸化ＬＤＬ（８０μｇ／ｍＬ）とともにインキュベートした細胞において経時的に増大した。データは、平均値±ＳＥＭとして示される。＊ｏｘＬＤＬに対して曝露されなかった（０時間）細胞に対してｐ≦０．０５。
【図９】図９は、ＢＭＰシグナル伝達の阻害が、血清リポタンパク質および肝臓脂質代謝に影響を及ぼしたことを示す。（ａ）化合物１３で処置したＬＤＬＲ−／−マウスは、ビヒクル処置マウスより低い血清ＬＤＬコレステロールレベルを示した一方で、ＨＤＬコレステロールレベルは、変化しなかった（＊ビヒクル処置に対してｐ≦０．０５，ｐ＝ｎｓは、有意でないことを示す）。（ｂ）化合物１３は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ酵素活性をインビトロで阻害しなかった。基質ＨＭＧ−ＣｏＡ（コントロール）単独の存在下またはプラバスタチンもしくは２種の異なる濃度の化合物１３（５０ｎＭおよび１００ｎＭ）いずれかの存在下での、３４０ｎｍでの吸光度の低下の分光光度測定に基づく３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡレダクターゼ（ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ）についての活性アッセイ。データは、平均値±ＳＥＭとして示される。（ｃ）アトルバスタチン（ＡＴＳ，  １ｎＭ）および化合物１３（１００ｎＭ）は、ＨｅｐＧ２細胞における基底アポリポタンパク質Ｂ１００（ＡｐｏＢ−１００）分泌を低下させた（＊コントロールに対してｐ≦０．０５）。ＢＭＰ２（１００ｎｇ／ｍＬ）は、ＡｐｏＢ−１００分泌を誘導した（＊コントロールに対してｐ≦０．０５）。これは、化合物１３）とのインキュベーションによってブロックされたが、アトルバスタチンとのインキュベーションによってはブロックされなかった（＃ＢＭＰ２＋化合物１３に対してｐ≦０．０５）。（ｄ）２０週間にわたる高脂肪食を受けている、化合物１３で処置したＬＤＬＲ−／−マウスは、肝臓脂肪症から保護された。合計１２匹のビヒクル処置マウスおよび薬物処置マウスから示され、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した、２０週間にわたる高脂肪食を与え、ビヒクル（左側パネル）もしくは化合物１３（毎日２．５ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ，右側パネル）で処置したＬＤＬＲ−／−マウスの肝臓組織の代表的切片。バーは、４００μｍを示す。
【図１０】図１０は、ＢＭＰ２が、ＨｅｐＧ２細胞において時間および用量依存性様式でＡｐｏＢ−１００生成を誘導したことを示す。（ａ）ＥＭＥＭ培養培地（０．１％  ウシ胎仔血清を含む）中で２４時間わたる飢餓の後、ＨｅｐＧ２細胞を、ＢＭＰ２（１００ｎｇ／ｍＬ）とともに種々の期間にわたってインキュベートした。ＥＬＩＳＡによって培養培地中で測定したアポリポタンパク質Ｂ  １００（ＡｐｏＢ）レベルは、ＢＭＰ２刺激の２４時間後に増大した。データは、平均値±ＳＥＭとして示される（ｎ＝４，＊コントロールに対してｐ≦０．０５）。（ｂ）ＥＭＥＭ培養培地（０．１％  ウシ胎仔血清を含む）中での２４時間にわたる飢餓の後、細胞を、示された用量のＢＭＰ２とともにインキュベートし、上記培地を、２４時間後に採取した。ＥＬＩＳＡを使用して、上清中に分泌されたＡｐｏＢ−１００の量を決定した。データは、平均値±ＳＥＭとして示した（＊ＢＭＰ２とインキュベートしなかった（０ｎｇ／ｍｌ）細胞に対してｐ≦０．０５）。
【図１１】図１１は、ＢＭＰ２（１００ｎｇ／ｍＬ）が、ＨｅｐＧ２細胞においてアポリポタンパク質Ｂ  １００（ＡｐｏＢ−１００）分泌を誘導したことを示す。これは、化合物１３（１００ｎＭ）もしくはＡＬＫ３−Ｆｃ（４００ｎｇ／ｍＬ）のいずれかによってブロックされた。＊未処理コントロール細胞に対してｐ≦０．０５。＃化合物１３もしくはＡＬＫ−Ｆｃの非存在下でのＢＭＰ２処理細胞に対してｐ≦０．０５。
【図１２】図１２Ａは、大動脈起始部、大動脈弁、および大動脈弓のヘマトキシリンおよびエオシン染色切片を示し、その切片は、高コレステロール血症になりやすい変異（ＬＤＬｒ−／−）マウス（アテローム動脈硬化症および粥状石灰化血管疾患（ａｔｈｅｒｏ−ｃａｌｃｉｆｉｃ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ）のマウスモデル）における大動脈起始部および大動脈弓の小弯に沿って多くの線維脂肪性プラークの存在を示す。これらのマウスは、生後８週間で高脂肪（Ｐａｉｇｅｎ）食餌を開始し、１６週間にわたってこの食餌を継続して、アテローム病変および血管石灰化を発生させた。図１２Ｂは、大動脈起始部、大動脈弁、および大動脈弓のフォンコッサ染色切片を示し、その切片は、図１２Ａにおいて使用した上記変異（ＬＤＬｒ−／−）マウスにおける大動脈弓の小弯の中膜の強い石灰化を示す。
【図１３】図１３は、ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物が、アテローム発生性マウスにおける血管石灰化および血管炎症を低下させ得ることを定量的に示す。
【図１４】図１４は、マクロファージ媒介性炎症が、組換えもしくは低分子ＢＭＰインヒビターによって、アテローム発生性動物の中心動脈血管床において定量的に低下することを示す。
【図１５】図１５Ａは、２８日齢の野生型マウスの大動脈のアリザリン染色切片を示す。図１５Ｂは、２８日齢ＭＧＰ−／−マウスの大動脈のアリザリン染色切片を示す。図１５Ｃは、ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物（化合物１３）で処置した２８日齢のＭＧＰ−／−マウスの大動脈のアリザリン染色切片を示す；上記大動脈は、図１５Ｂに示されるＭＧＰ−／−マウスの大動脈と比較して石灰化が少ない。図１５Ｄは、ＡＬＫ３−Ｆｃポリペプチドで処置した２８日齢のＭＧＰ−／−マウスの大動脈のアリザリン染色切片を示す；上記大動脈は、図１５Ｂに示されるＭＧＰ−／−マウスの大動脈と比較して、石灰化が少ない。
【図１６】図１６は、ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物（化合物１３）で、もしくはＡＬＫ３−Ｆｃポリペプチドで処置したＭＧＰ−／−マウスの大動脈において、ｏｓｔｅｏｓｅｎｓｅ蛍光によって決定されるような、動脈石灰化の低下を示す。
【図１７】図１７は、ＭＧＰ−／−マウスにおける動脈石灰化が、過剰なＳｍａｄ  １／５／８リン酸化（核に局在した）と関連することを示す。ビヒクル処置（Ａ、Ｃ、Ｅの左側）および化合物１３処置（Ｂ、Ｄ、Ｅの右側）のＭＧＰ−／−マウスに由来する２８日目の大動脈のリン酸化Ｓｍａｄ  １／５／８の免疫組織化学（Ａ−Ｂ）、組織カルシウムのアリザリンレッド染色（Ｃ−Ｄ）、およびＯｓｔｅｏＳｅｎｓｅ  ６８０ｎｍ画像化（Ｅ）を示す。
【図１８】図１８は、ＢＭＰシグナル伝達の薬理学的阻害が、ＭＧＰ欠損における大動脈石灰化を低下させることを明らかにする実験の結果を示す。
【図１９】図１９は、ＢＭＰシグナル伝達の薬理学的阻害が、ＭＧＰ欠損における生存を改善することを明らかにする実験の結果を示す。
【図２０】図２０は、骨密度（ｂｏｎｅ  ｍｉｎｅｒａｌ  ｄｅｎｓｉｔｙ）が、ビヒクルもしくは化合物１３で処置したＬＤＬＲ−／−マウスの間で異ならなかったことを示す。
【発明を実施するための形態】
【０１０９】
（発明の詳細な説明）
本発明は、ＢＭＰシグナル伝達経路を阻害する化合物、ならびに、ＢＭＰシグナル伝達の阻害により利益を得ることになる被験体の疾患または状態を処置または予防するための方法を提供する。
【０１１０】
（Ｉ．化合物）
本発明の化合物としては、上記で開示された通りの式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物が挙げられる。このような化合物は、本明細書中で開示される組成物および方法に適する。他の実施形態において、以下の化合物およびそれらの塩（例えば、薬学的に受容可能な塩）は、本発明の化合物であり、本明細書中で開示される組成物および方法に適する：
【０１１１】
【化２３】
2014504604.tif 000024
【０１１２】
【化２４】
2014504604.tif 000025
【０１１３】
【化２５】
2014504604.tif 000026
【０１１４】
【化２６】
2014504604.tif 000027
【０１１５】
【化２７】
2014504604.tif 000028
【０１１６】
（ＩＩ．定義）
用語「アシル」は、当該技術分野において認識されており（ａｒｔ−ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ）、一般式ヒドロカルビルＣ（Ｏ）−、好ましくはアルキルＣ（Ｏ）−により表される基を意味する。
【０１１７】
用語「アシルアミノ」は、当該技術分野において認識されており、アシル基で置換されたアミノ基を意味し、そして、例えば、式ヒドロカルビルＣ（Ｏ）ＮＨ−、好ましくはアルキルＣ（Ｏ）ＮＨ−により表され得る。
【０１１８】
用語「アシルオキシ」は、当該技術分野において認識されており、一般式ヒドロカルビルＣ（Ｏ）Ｏ−、好ましくはアルキルＣ（Ｏ）Ｏ−により表される基を意味する。
【０１１９】
用語「脂肪族」は、本明細書中で使用される場合、完全に飽和しているか、または、１つ以上の単位の不飽和を含む、直鎖状、鎖状、分枝鎖状、または環状炭化水素を含む。脂肪族基は、置換されていても、非置換であってもよい。
【０１２０】
用語「アルコキシ」は、アルキル基が結合している酸素を意味する。代表的なアルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、およびｔｅｒｔ−ブトキシなどが挙げられる。
【０１２１】
用語「アルケニル」、本明細書中で使用される場合、少なくとも１個の二重結合を含む脂肪族基を意味し、「非置換アルケニル」および「置換アルケニル」の両方を含むことが意図される。これらのうち後者は、アルケニル基の１個以上の炭素上の水素を置き換える置換基を有するアルケニル部分を意味する。そのような置換基は、１個以上の二重結合に含まれるかまたは含まれない１個以上の炭素上に存在し得る。さらに、そのような置換基としては、安定性により許容されない場合を除いて、以下で検討される通り、アルキル基に対して企図される全ての置換基が挙げられる。例えば、１個以上のアルキル基、カルボシクリル基、アリール基、ヘテロシクリル基、またはヘテロアリール基でのアルケニル基の置換が企図される。好ましい実施形態において、直鎖状または分枝鎖状アルケニルは、その主鎖中に１〜１２個の炭素、好ましくはその主鎖中に１〜８個の炭素、および、より好ましくはその主鎖中に１〜６個の炭素を有する。例示的なアルケニル基としては、アリル、プロペニル、ブテニル、および２−メチル−２−ブテニルなどが挙げられる。
【０１２２】
用語「アルキル」は、飽和脂肪族基（例えば、直鎖状アルキル基、および分枝鎖状アルキル基）の基を意味する。好ましい実施形態において、直鎖状アルキルまたは分枝鎖状アルキルは、その主鎖中に３０個以下（例えば、直鎖ではＣ１〜Ｃ３０、分枝鎖ではＣ３〜Ｃ３０）、より好ましくは２０個以下の炭素原子を有する。特定の実施形態において、アルキル基は、低級アルキル基（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチルおよびｎ−ペンチル）である。
【０１２３】
さらに、本明細書、実施例および特許請求の範囲の中で使用される場合には、用語「アルキル」（または「低級アルキル」）は、「非置換アルキル」および「置換アルキル」の両方を含むことが意図され、これらのうちの後者は、炭化水素主鎖の１個以上の炭素上の水素を置き換える置換基を有するアルキル部分を意味する。特定の実施形態において、直鎖状アルキルまたは分枝鎖状アルキルは、その主鎖中に３０個以下の炭素原子を有する（例えば、直鎖ではＣ１〜Ｃ３０、分枝鎖ではＣ３〜Ｃ３０）。好ましい実施形態において、上記鎖は、その主鎖中に１０個以下の炭素原子（Ｃ１〜Ｃ１０）を有する。他の実施形態において、上記鎖は、その主鎖中に６個以下の炭素原子（Ｃ１〜Ｃ６）を有する。
【０１２４】
このような置換基としては、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル（例えば、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、またはアシル）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセテート、またはチオホルメート）、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、ホスホリル、ホスフェート、ホスホネート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、スルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキル、またはアリール部分、もしくはヘテロアリール部分が挙げられ得る。
【０１２５】
用語「Ｃｘ−ｙ」は、化学的部分（例えば、アシル、アシルオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアルコキシ）と組み合わせて使用される場合、鎖中にｘ個からｙ個までの炭素を含有する基を含むことを意味する。例えば、用語「Ｃｘ−ｙアルキル」は、置換もしくは非置換の飽和炭化水素基（例えば、鎖中にｘ個からｙ個までの炭素を含有する直鎖状アルキル基および分枝鎖状アルキル基（例えば、ハロアルキル基（例えば、トリフルオロメチルおよび２，２，２−トリ（ｔｉｒ）フルオロエチルなど）））を意味する。Ｃ０アルキルは、その基が末端の位置に存在する場合は、水素を示し、内部である場合は結合を示す。用語「Ｃ２−ｙアルケニル」および「Ｃ２−ｙアルキニル」は、長さおよび可能な置換基が上記アルキルと類似した置換または非置換の不飽和脂肪族基を意味しするが、少なくとも１個の二重結合または三重結合をそれぞれ含有する。
【０１２６】
用語「アルキルアミノ」は、本明細書中で使用される場合、少なくとも１個のアルキルで置換されたアミノ基を意味する。
【０１２７】
用語「アルキルチオ」は、本明細書中で使用される場合、アルキル基で置換されたチオール基を意味し、一般式アルキルＳ−により表され得る。
【０１２８】
用語「アルキニル」は、本明細書中で使用される場合、少なくとも１個の三重結合を含有する脂肪族基を意味し、「不飽和アルキニル」および「飽和アルキニル」の両方を含むことが意図される。これらのうちの後者は、上記アルキニル基の１個以上の炭素上の水素を置き換える置換基を有するアルキニル部分を意味する。そのような置換基は、１個以上の三重結合中に含まれるかまたは含まれない１個以上の炭素上に存在し得る。さらに、そのような置換基としては、安定性により許容されない場合を除いて、上記で検討された通り、アルキル基に対して企図される全ての置換基を含む。例えば、１個以上のアルキル基、カルボシクリル基、アリール基、ヘテロシクリル基、またはヘテロアリール基でのアルキニル基の置換が企図される。好ましい実施形態において、アルキニルは、その主鎖中に１〜１２個の炭素、好ましくは、その主鎖中に１〜８個の炭素、そして、より好ましくは、その主鎖中に１−６個の炭素を有する。例示的なアルキニル基としては、プロピニル、ブチニル、および３−メチルペンタ−１−イニルなどが挙げられる。
【０１２９】
用語「アミド」は、本明細書中で使用される場合、以下の基：
【０１３０】
【化２８】
2014504604.tif 000029
【０１３１】
を意味する。
【０１３２】
ここで、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素またはヒドロカルビル基を表し、あるいは、Ｒ９およびＲ１０は、それらが結合するＮ原子と一緒になって、環構造中に４〜８個の原子を有するヘテロ環を完成させる。
【０１３３】
用語「アミン」および「アミノ」は、当該技術分野において認識されており、
非置換アミンおよび置換アミンの両方、ならびにそれらの塩を意味する（例えば、以下の：
【０１３４】
【化２９】
2014504604.tif 000030
【０１３５】
により表され得る部分であって、ここで、Ｒ９、Ｒ１０、およびＲ１０’は、それぞれ独立して、水素またはヒドロカルビル基を表すか、あるいは、Ｒ９およびＲ１０は、それらが結合するＮ原子と一緒になって、環構造中に４〜８個の原子を有するヘテロ環を完成させる。）。
【０１３６】
用語「アミノアルキル」は、本明細書中で使用される場合、アミノ基で置換されたアルキル基を意味する。
【０１３７】
用語「アラルキル」は、本明細書中で使用される場合、１個以上のアリール基で置換されたアルキル基を意味する。
【０１３８】
用語「アリール」は、本明細書中で使用される場合、環の各原子が炭素である、置換または非置換の単環式芳香族基を含む。好ましくは、上記環は、５員環〜７員環であり、より好ましくは、６員環である。アリール基としては、フェニル、フェノール、およびアニリンなどが挙げられる。
【０１３９】
用語「カルバメート」は、当該技術分野において認識されており、以下の基：
【０１４０】
【化３０】
2014504604.tif 000031
【０１４１】
を意味し、ここで、Ｒ９およびＲ１０は、独立して、水素またはヒドロカルビル基（例えば、アルキル基）を表す。
【０１４２】
用語「炭素環」、「カルボシクリル」、および「炭素環式」は、本明細書中で使用される場合、環の各原子が炭素である、飽和または不飽和非芳香族環を意味する。好ましくは、炭素環は、３〜１０個の原子、より好ましくは、５〜７個の原子を含有する。
【０１４３】
用語「カルボシクリルアルキル」は、本明細書中で使用される場合、炭素環基で置換されたアルキル基を意味する。
【０１４４】
用語「カルボネート」は、当該技術分野において認識されており、基−ＯＣＯ２−Ｒ９を意味し、ここで、Ｒ９は、ヒドロカルビル基（例えば、アルキル基）を表す。
【０１４５】
用語「カルボキシ」は、本明細書中で使用される場合、式−ＣＯ２Ｈにより表される基を意味する。
【０１４６】
用語「シクロアルキル」は、本明細書中で使用される場合、飽和脂肪族環の基を意味する。好ましい実施形態において、シクロアルキルは、その環構造中に３〜１０個の炭素原子を、より好ましくは、その環構造中に５〜７個の炭素原子を有する。適切なシクロアルキルとしては、シクロヘプチル、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロブチル、およびシクロプロピルが挙げられる。
【０１４７】
用語「エステル」は、本明細書中で使用される場合、基−Ｃ（Ｏ）ＯＲ９を意味し、ここで、Ｒ９は、ヒドロカルビル基（例えば、アルキル基またはアラルキル基）を表す。
【０１４８】
用語「エーテル」は、本明細書中で使用される場合、別のヒドロカルビル基に酸素を介して結合したヒドロカルビル基を意味する。従って、ヒドロカルビル基のエーテル置換基は、ヒドロカルビル−Ｏ−であり得る。エーテルは、対称的または非対称的のいずれかであり得る。エーテルの例としては、限定はされないが、ヘテロ環−Ｏ−ヘテロ環、およびアリール−Ｏ−ヘテロ環が挙げられる。エーテルは、「アルコキシアルキル」基として挙げられ、これは、一般式アルキル−Ｏ−アルキルにより表され得る。
【０１４９】
用語「ハロ」および「ハロゲン」は、本明細書中で使用される場合、ハロゲンを意味し、クロロ、フルオロ、ブロモ、およびヨードが挙げられる。
【０１５０】
用語「ヘテロアルキル」は、本明細書中で使用される場合、少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ５０（例えば、ここで、Ｒ５０はＨもしくは低級アルキルである））を含有する、炭素原子の飽和鎖または不飽和鎖を意味し、ここで、２個のヘテロ原子は隣接しない。
【０１５１】
用語「ヘタラルキル（ｈｅｔａｒａｌｋｙｌ）」および「ヘテロアラルキル」は、本明細書中で使用される場合、ヘタリール基で置換されたアルキル基を意味する。
【０１５２】
用語「ヘテロアリール」および「ヘタリール」は、置換または非置換の、芳香族単環式構造、好ましくは５員環〜７員環、より好ましくは５員環〜６員環を含み、これらの環構造は、少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、またはＳ）、好ましくは、１〜４個または１〜３個のヘテロ原子、より好ましくは１個または２個のヘテロ原子を含有する。２個以上のヘテロ原子がヘテロアリール環中に存在する場合、そのヘテロ原子は同じであっても異なっていてもよい。用語「ヘテロアリール」および「ヘタリール」はまた、２個以上の炭素が２つの隣接する環に共通する、二またはそれを超える環式環を有する多環式環系を含み、ここで、上記環のうちの少なくとも１つが、ヘテロ環式芳香族である（例えば、他の環式環が、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリルであり得る）。好ましい多環式環系は、環の両方が芳香族である二環式環を有する。ヘテロアリール基としては、例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、キノリン、およびピリミジンなどが挙げられる。
【０１５３】
用語「ヘテロ原子」は、本明細書中で使用される場合、炭素または水素以外の任意の元素の原子を意味する。好ましいヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄である。
【０１５４】
用語「ヘテロシクリル」、「ヘテロ環」、および「ヘテロ環式」は、置換または非置換の、非芳香族環構造、好ましくは３員環〜１０員環、より好ましくは３員環〜７員環を意味し、これらの環構造は、少なくとも１個のヘテロ原子、好ましくは１〜４個のヘテロ原子、より好ましくは１個または２個のヘテロ原子を含有する。ヘテロシクリル基としては、例えば、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリン、ラクトン、およびラクタムなどが挙げられる。
【０１５５】
用語「ヘテロシクリルアルキル」は、本明細書中で使用される場合、ヘテロ環基で置換されたアルキル基を意味する。
【０１５６】
用語「ヒドロカルビル」は、本明細書中で使用される場合、炭素原子を通して結合した基を意味し、この基は＝Ｏ置換基も＝Ｓ置換基も有さず、代表的には、少なくとも１個の炭素−水素結合、および、主として炭素主鎖を有するが、必要に応じてヘテロ原子を含有し得る。それゆえ、メチル、エトキシエチル、２−ピリジル、およびトリフルオロメチルのような基は、本出願の目的のためのヒドロカルビルであるとみなされるが、例えば、アセチル（結合している炭素上に＝Ｏ置換基を有する）、およびエトキシ（炭素ではなく、酸素を介して結合する）といった置換基は、そうみなされない。ヒドロカルビル基としては、以下に限定はされないが、アリール、ヘテロアリール、炭素環、ヘテロ環、アルキル、アルケニル、アルキニル、およびこれらの組み合わせが挙げられる。
【０１５７】
用語「低級」は、化学的部分（例えば、アシル、アシルオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアルコキシ）と組み合わせて使用される場合、置換基中に１０個以下、好ましくは６個以下の非水素原子が存在する基を意味する。「低級アルキル」は、例えば、１０個以下、好ましくは６個以下の炭素原子を含有するアルキル基を意味する。直鎖状低級アルキルまたは分枝鎖状低級アルキルの例としては、メチル、エチル、イソプロピル、プロピル、ブチル、およびｔｅｒｔ−ブチルなどが挙げられる。特定の実施形態において、本明細書中で定義されるアシル置換基、アシルオキシ置換基、アルキル置換基、アルケニル置換基、アルキニル置換基、またはアルコキシ置換基は、それらが単独で現れても、他の置換基と組み合わされて現れても（アラルキルとの記載（アラルキルの場合、例えば、アルキル置換基中の炭素原子を数えるとき、そのアリール基内部の原子の数は数えない）のように）、それぞれ、低級アシル、低級アシルオキシ、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、または低級アルコキシである。
【０１５８】
用語「ポリシクリル」、「多環」、および「多環式」は、２個以上の原子が２個の隣接する環に対して共通である、２個以上の環（例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリル）を意味し、例えば、その環は、「縮合環」である。好ましい多環は、２〜３個の環を有する。多環のそれぞれの環は、置換されていても非置換であってもよい。特定の実施形態において、多環の各環は、その環中に３〜１０個、好ましくは５〜７個の原子を含有する。
【０１５９】
用語「置換（される）」は、主鎖の１個以上の炭素上の水素を置換している置換基を有する部分を意味する。「置換」または「で置換される」は、その置換が、置換される原子および置換基の許容される価数に従い、ならびに、その置換が安定な化合物（例えば、（例えば、転移、環化、脱離などによって）自発的に変換されない化合物）をもたらすという潜在的な条件を含むことが理解される。本明細書中で使用される場合、用語「置換（される）」は、有機化合物の全ての許容される置換基を含むことが企図される。広範な局面において、上記許容される置換基としては、有機化合物の非環式置換基および環式置換基、分枝鎖状置換基および非分枝鎖状置換基、炭素環式置換基およびヘテロ環式置換基、芳香族置換基および非芳香族置換基が挙げられる。この許容される置換基は、適切な有機化合物では、１個であっても複数であってもよく、そして、同じであっても異なっていてもよい。本発明の目的のために、ヘテロ原子（例えば、窒素）は、そのヘテロ原子の価数を満たす、水素置換基、および／または、本明細書中に記載される有機化合物の任意の許容される置換基を有し得る。置換基としては、本明細書中に記載される任意の置換基、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル（例えば、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、またはアシル）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセテート、またはチオホルメート）、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、ホスホリル、ホスフェート、ホスホネート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、スルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキル、あるいは、芳香族部分またはヘテロ環式芳香族部分が挙げられ得る。
【０１６０】
「非置換」と具体的に述べられない場合、本明細書中では、化学的部分に対する参照事項は、置換された変異体を含むと理解される。例えば、「アリール」基または「アリール」部分に対する参照事項は、置換された変異体および非置換の変異体の両方を暗に含む。
【０１６１】
用語「スルフェート」は、当該技術分野において認識されており、基−ＯＳＯ３Ｈ、あるいは、その薬学的に受容可能な塩またはエステルを意味する。
【０１６２】
用語「スルホンアミド」は、当該技術分野において認識されており、以下の一般式：
【０１６３】
【化３１】
2014504604.tif 000032
【０１６４】
により表される基を意味し、ここで、Ｒ９およびＲ１０は、独立して水素またはヒドロカルビル（例えば、アルキル）を表す。
【０１６５】
用語「スルホキシド」は、当該技術分野において認識されており、基−Ｓ（Ｏ）−Ｒ９を意味し、ここで、Ｒ９は、ヒドロカルビル（例えば、アルキル、アリール、またはヘテロアリール）を表す。
【０１６６】
用語「スルホネート」は、当該技術分野において認識されており、基−ＳＯ３Ｈ、あるいは、その薬学的に受容可能な塩またはエステルを意味する。
【０１６７】
用語「スルホン」は、当該技術分野において認識されており、基−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ９を意味し、ここで、Ｒ９はヒドロカルビル（例えば、アルキル、アリール、またはヘテロアリール）を表す。
【０１６８】
用語「チオエステル」は、本明細書中で使用される場合、基−Ｃ（Ｏ）ＳＲ９または−ＳＣ（Ｏ）Ｒ９を意味し、ここで、Ｒ９はヒドロカルビル（例えば、アルキル）を表す。
【０１６９】
用語「チオエーテル」は、本明細書中で使用される場合、酸素が硫黄に置き換えられたエーテルに等しい。
【０１７０】
用語「尿素」は、当該技術分野において認識されており、以下の一般式：
【０１７１】
【化３２】
2014504604.tif 000033
【０１７２】
により表され得、ここで、Ｒ９およびＲ１０は、独立して、水素またはヒドロカルビル（例えば、アルキル）を表す。
【０１７３】
本明細書中の様々な場所で、本発明の化合物の置換基は、群または範囲で開示される。本発明は、そのような群および範囲のメンバーの、それぞれのおよびあらゆる個別の下位の組み合わせを含むことが、明確に意図される。例えば、用語「Ｃ１−Ｃ６アルキル」は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチルなどを個別に開示することが、明確に意図される。
【０１７４】
用語「約」により限定される数値について、２％、５％、１０％、または２０％の変動は、限定される数値の範囲内である。
【０１７５】
本明細書中で使用される場合、障害または状態を「予防する」治療剤は、統計的サンプルにおいて、未処置の対照サンプルと比較して処置されたサンプルの障害もしくは状態の発生を減少させるか、または、発症を遅らせるか、または、未処置の対照サンプルと比較して障害もしくは状態の１つ以上の症状の重篤度を下げる化合物を意味する。
【０１７６】
用語「プロドラッグ」は、生理的条件下で、本発明の治療活性薬剤（例えば、式Ｉまたは式ＩＩの化合物）へ変換される化合物を包含することが意図される。プロドラッグを作製するための一般的方法は、生理的条件下で加水分解され所望の分子を現す、１つ以上の選択された部分を含むことである。他の実施形態において、上記プロドラッグは、宿主動物の酵素活性により変換される。例えば、エステル（例えば、アルコールのエステル、またはカルボン酸のエステル）は、本発明の好ましいプロドラッグである。本明細書中に開示される種々の実施形態（例えば、種々の化合物、組成物、および方法）において、上記で表された処方物中の、式Ａの化合物の一部もしくは全て、式Ｉもしくは式ＩＩのいずれか１つの化合物、式Ｉもしくは式ＩＩの化合物の全てまたは一部分は、適したプロドラッグ（例えば、ここで、親化合物中に存在するヒドロキシルまたはカルボン酸は、エステルとして与えられるプロドラッグ）で置き換えられ得る。
【０１７７】
用語「処置（すること）」は、予防処置および／または治療処置を含む。用語「予防処置または治療処置」は、当該技術分野において認識されており、宿主への、組成物のうちの１つ以上の投与を含む。所望されない状態（例えば、宿主動物の疾患または他の所望されない状態）の臨床症状の発現前に組成物が投与される場合、そのとき処置は予防的である（例えば、この処置は、その所望されない状態を発生させることから、宿主を保護する）のに対し、所望されない状態の症状の発現後にそれが投与される場合、その処置は治療的である（例えば、存在する所望されない状態、またはその副作用を低下させるか、改善するか、安定化させることが意図される）。
【０１７８】
（ＩＩＩ．薬学的組成物）
本発明の化合物は、患者へ投与するために薬学的組成物において、例えば、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わされ、用いられ得る。そのような組成物はまた、当該分野において周知である希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤、および他の物質を含有し得る。用語「薬学的に受容可能な」は、活性成分の生物学的活性の効果に干渉しない非毒性物質を意味する。キャリアの特徴は、投与の経路に依存する。そのような追加の因子および／または追加の薬剤は、薬学的組成物中に含有され得、本発明の化合物との相乗効果をもたらし得るか、あるいは、本発明の化合物により引き起こされる副作用を減少させ得る。
【０１７９】
本発明の薬学的組成物は、本発明の化合物が、他の薬学的に受容可能なキャリアに加えて、両親媒性薬剤（例えば、水溶液中で、ミセル、不溶性単一層、液晶、または層状層として凝集形態で存在する脂質）と組み合わされた、リポソームまたはミセルの形態であり得る。リポソーム処方物に適した脂質としては、限定はされないが、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、および胆汁酸などが挙げられる。このようなリポソーム処方物の調製は、例えば、米国特許第４，２３５，８７１号；同第４，５０１，７２８号；同第４，８３７，０２８号；および同第４，７３７，３２３号（これらの全てが、参考として本明細書中で援用される）において開示されるように、当該分野の技術レベルの範囲内である。
【０１８０】
用語「薬学的有効量」または「治療有効量」は、本明細書中で使用される場合、意味のある患者の利益（例えば、生理的応答または状態（例えば、炎症性状態もしくは疼痛）の処置、治癒、予防、阻害、または改善、あるいは、そのような状態の処置、治癒、予防、阻害、または改善のペースの増加）を示すのに十分である薬学的組成物または方法の各活性成分の総量を意味する。単独で投与される、個々の活性成分に適用される場合、上記用語は、その成分単独を意味する。ある組み合わせに適用される場合、上記用語は、組み合わせて連続して投与されても、同時に投与されても、治療効果をもたらす活性成分の合わせた量を意味する。
【０１８１】
各々の本発明の処置または使用の方法は、本明細書中に記載される通り、その処置または使用を必要とする哺乳動物に、薬学的有効量または治療有効量の本発明の化合物、または、その薬学的に受容可能な塩もしくはエステル形態を投与する工程を包含する。本発明の化合物は、単独か、あるいは他の治療と組み合わせて本発明の方法に従って投与され得る。
【０１８２】
薬学的組成物において、または、本発明の方法を実施するために使用される本発明の化合物の投与は、様々な慣習的手段（例えば、経口摂取、吸入、または皮膚注射、皮下注射、または静脈内注射、筋肉内注射、および腹腔内注射）で実行され得る。
【０１８３】
治療有効量の本発明の化合物が経口投与される場合、本発明の化合物は、錠剤、カプセル剤、散剤、液剤またはエリキシル剤の形態であり得る。錠剤形態で投与される場合、本発明の薬学的組成物は、固体キャリア（例えば、ゼラチンまたはアジュバント）をさらに含有し得る。錠剤、カプセル剤、および散剤は、約５％〜９５％の本発明の化合物、そして、好ましくは約１０％〜９０％の本発明の化合物を含有し得る。液体形態で投与される場合、液体キャリア（例えば、水、石油、動物もしくは植物由来の油（例えば、落花生油、鉱油、リン脂質、ｔｗｅｅｎｓ、トリグリセリド（例えば、中鎖トリグリセリド）、大豆油、もしくはゴマ油、または、合成油）が加えられ得る。薬学的組成物の液体形態は、生理食塩水溶液、デキストロース溶液もしくは他の糖類溶液、または、グリコール（例えば、エチレングリコール、プロピレングリコール、もしくはポリエチレングリコール）をさらに含有し得る。液体形態で投与される場合、薬学的組成物は、代表的には、約０．５重量％〜９０重量％の本発明の化合物、そして、好ましくは約１％〜５０％の本発明の化合物を含有する。
【０１８４】
治療有効量の本発明の化合物が静脈内注射、皮膚注射または皮下注射により投与される場合、本発明の化合物は、発熱物質を含まない、非経口の受容可能な水溶液の形態であり得る。然るべきｐＨ、等張性、および安定性などを有する、そのような非経口の受容可能な溶液の調製は、当該分野の技術の範囲内である。静脈内注射、皮膚注射、または皮下注射に対して好ましい薬学的組成物は、本発明の化合物に加えて、等張性ビヒクル（例えば、塩化ナトリウム注射、リンガー液、デキストロース注射、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射、乳酸加リンガー液）、または当該分野において公知である他のビヒクルを含有すべきである。本発明の薬学的組成物はまた、安定化剤、保存剤、緩衝剤、抗酸化剤、または当業者に公知である他の添加剤を含有し得る。
【０１８５】
本発明の薬学的組成物中の本発明の化合物の量は、処置される状態の性質および重篤度、ならびに、以前に患者が経験してきた処置の性質に依存する。最終的には、医師が、本発明の化合物の量を決定し、その化合物を用いてそれぞれ個々の患者を処置する。最初に、医師は、低用量の本発明の化合物を投与し得、患者の反応を観察し得る。より高い用量の本発明の化合物が、患者に対して最適な治療効果が得られるまで投与され得、その時点で、投与量はさらに増加させない。本発明の方法を実施するために使用される種々の薬学的組成物は、体重１ｋｇ当たり約０．１μｇ〜約１００ｍｇ（好ましくは、約０．１ｍｇ〜約５０ｍｇ、より好ましくは、約１ｍｇ〜約２ｍｇ）の本発明の化合物を含有すべきであることが企図される。
【０１８６】
本発明の薬学的組成物を用いる静脈注射での治療の期間は、処置されている疾患の重篤度、ならびに、それぞれ個々の患者の状態および起こり得る特異体質性反応に依存して変わる。本発明の化合物の適用の期間は、継続的静脈内投与において１２〜２４時間の範囲であることが企図される。最終的には、医師は、本発明の薬学的組成物を用いる静脈注射での治療の適切な期間を決定する。
【０１８７】
（ＩＶ．ポリマーとの使用）
本明細書中に開示される通りの化合物は、例えば、化合物の制御された送達のためにポリマーマトリクスに結合し得る。上記化合物は、共有結合または非共有性会合によって共役し得る。上記化合物がポリマーマトリクスに共有結合する特定の実施形態において、その結合は、生物学的条件下で開裂可能な部分（例えば、エステル、アミド、カルボネート、カルバメート、イミドなど）を含み得る。特定の実施形態において、上記の結合した化合物は、本明細書中に開示される化合物の薬学的に受容可能な塩、エステル、またはプロドラッグであり得る。本明細書中で開示される通りの化合物は、治療剤の送達のために、当該分野で公知である任意のタイプのポリマーマトリクスと会合し得る。
【０１８８】
（Ｖ．合成的調製）
本明細書中に開示される化合物は、有機合成の分野の当業者に公知である様々な手段で、および、本明細書中にその合成が記載される例示的化合物からの類推で調製され得る。これらの化合物を調製するときに使用される出発物質は、市販されているか、あるいは公知の方法で調製され得る。化合物の調製は、種々の化学的基の保護および脱保護を含み得る。保護および脱保護の必要性、ならびに、適切な保護基の選択は、当業者により容易に決定され得る。保護基の化学は、例えば、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、４４ｔｈ．  Ｅｄ．、Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、２００６（これは、その全体が本明細書中で参考として援用される）の中に見出され得る。
【０１８９】
本明細書中に記載されるプロセスの反応は、有機合成の分野の当業者により容易に選択され得る適した溶媒中で実行され得る。適した溶媒は、反応が実行される温度（例えば、その溶媒が凝固する温度から、その溶媒が沸騰するまでの範囲であり得る温度）で出発物質（反応体）、中間体、または生成物と実質的に非反応性であり得る。所定の反応は、１つの溶媒中で、または、複数の溶媒の混合物中で実行され得る。特定の反応工程に依存して、特定の反応工程に適した溶媒が選択され得る。
【０１９０】
（ＶＩ．使用）
ＢＭＰおよびＴＧＦ−βシグナル伝達経路は、正常な器官発生およびパターン形成に必須であり、ならびに成熟組織の正常なリモデリングおよび病的なリモデリングにも必須である。ＢＭＰシグナル伝達経路における欠損は、遺伝性出血性毛細血管拡張症、原発性肺高血圧症、若年性家族性ポリポーシス、ならびに散発性腎細胞癌腫および前立腺癌腫を含む、多数の先天性および後天性疾患プロセスの原因として示唆されている。ＢＭＰシグナル伝達の減衰は、シグナル伝達成分の欠損に関連するある種の疾患状態の要因となり得ることが示唆されているが、一方発明者らの発見は、いくつかの状況においては、過剰なＢＭＰシグナル伝達は病原となり得ることを示唆している（Ｗａｉｔｅら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．４：７６３〜７７３，２００５；Ｙｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：２４４４３〜２４４５０，２００３）。ＢＭＰシグナル伝達を実験的に調節する能力は、これらの病状の治療を研究するための手段、およびこれらの病状の根本的原因を決定するための手段を提供する。
【０１９１】
（Ａ．鉄欠乏および慢性疾患の貧血を含む、貧血の処置）
概観のためには、Ｗｅｉｓｓら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５２：１０１１〜１０２３，２００５を参照のこと。炎症性貧血（慢性疾患の貧血とも呼ばれる）は、慢性感染症、自己免疫疾患（全身性エリテマトーデスおよび慢性関節リウマチ、ならびにキャッスルマン病など）、炎症性腸疾患、がん（多発性骨髄腫を含む）、および腎不全を有する患者において見られ得る。炎症性貧血は、ペプチドホルモンのヘプシジンの不適切な発現によってしばしば引き起こされる。ヘプシジンは、マクロファージの細胞内ストアからの鉄輸送および腸管上皮細胞からの鉄輸送を可能にしている重要なタンパク質の、フェロポーチン（ｆｅｒｒｏｐｏｒｔｉｎ）の分解を引き起こす。腎不全を有する多くの患者は、エリスロポエチンの欠乏と過剰なヘプシジン発現との組み合わせを有する。ＢＭＰシグナル伝達はヘプシジン発現を誘導し、ならびに、ＢＭＰアンタゴニストでのヘプシジン発現の阻害は鉄レベルを増大させる。本明細書に記載の化合物は、慢性疾患または炎症による貧血および高ヘプシジン状態（ｈｙｐｅｒｈｅｐｃｉｄｉｎｅｍｉｃ  ｓｔａｔｅ）に関連する貧血の処置に用いられ得る。
【０１９２】
種々の病因の炎症性貧血におけるＩＬ−６の上昇、インビボでの慢性的ＩＬ−６投与の影響、およびＩＬ−６欠損げっ歯目が貧血から防護されること（Ｗｅｉｓｓら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５２：１０１１〜１０２３，２００５）に基づき、炎症性サイトカインＩＬ−６は、炎症性状態におけるヘプシジン発現上昇の本質的原因であると考えられている。ＩＬ−６による肝細胞癌細胞株の刺激は、ヘプシジン発現を誘導するが、一方、ＢＭＰアンタゴニストによる処置は、ＩＬ−６誘導性ヘプシジン発現を阻害することが示されている（Ｙｕら、Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．４：３３〜４１，２００８）。さらに、発明者らは、ＢＭＰアンタゴニストは、インビボでの病原性細菌注入によるヘプシジン発現誘導を阻害し得ることを見出している（実施例８を参照）。マウスおよびゼブラフィッシュにおける全身的鉄投与は、ＢＭＰ応答性ＳＭＡＤおよび肝臓でのヘプシジン発現を迅速に活性化すること、ならびにＢＭＰ拮抗作用は、効果的にこれらの応答をブロックすることもまた示されている（Ｙｕら、Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．４：３３〜４１，２００８）。鉄調節におけるＢＭＰシグナル伝達の機能的重要性は、ＢＭＰアンタゴニストはヘプシジン発現を阻害し得、かつインビボでの血清鉄レベルを上昇させ得るという発明者らの発見（実施例７を参照）によって支持される。総合すれば、これらのデータは、ヘプシジンおよび循環鉄レベルの鉄媒介性調節および炎症媒介性調節は、ＢＭＰシグナル伝達を必要とすることを示唆する。本明細書に記載の化合物は、治療的利益のため、種々の状況における鉄の利用可能性を変えるために使用され得る。
【０１９３】
本明細書に記載の化合物は、（ｉ）食餌療法の鉄または経口の鉄補給（これらは、鉄の静脈内投与よりも安全である）の効能を高め、血清鉄濃度を増大させるため；（ｉｉ）手術前に前もって血液中のヘモグロビン蓄積（ｂｕｉｌｄ  ｕｐ）を高めるか、または自分自身のために手術前に前もって献血することを可能にするため；ならびに（ｉｉｉ）エリスロポエチンおよびその関連物の効能を高めるため、貧血状態において使用され得、これにより、貧血のために投与されるべきエリスロポエチン投与量の低下を可能にしながら、エリスロポエチンの公知の毒性および副作用（すなわち、高血圧、心血管イベント、および腫瘍増殖）を最小限にし得る。
【０１９４】
（Ｂ．進行性骨化性線維形成異常症（ＦＯＰ）の処置）
ＦＯＰは、病気に冒された個体において、ＡＬＫ２の構成的に活性な変異形態の存在によって引き起こされる。（Ｓｈｏｒｅら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．３８：５２５〜５２７，２００６）。本明細書に記載の化合物などのＢＭＰシグナル伝達の特異的インヒビターは、外傷、筋骨格のストレスまたは炎症に応答した過剰な骨形成を防ぐために使用され得る。上記化合物はまた、病的な骨の退行を助けるためにも使用され得る。上記ＢＭＰインヒビターは、全身に、または、外傷もしくは炎症の領域に効果を集中もしくは限定するため局所的に、投与され得る。
【０１９５】
本明細書に記載のＢＭＰインヒビターは、非常に感染しやすい個体における自発的骨形成を抑えるための慢性的治療として使用され得る。一時的治療は、最も頻繁には外傷と関連して骨腫または病的な骨を発症するＦＯＰ個体において、異常な骨形成を防ぐために、その外傷的出来事の前に、最中に、またはさらに後で施すことによって使用され得る。本明細書に記載のＢＭＰインヒビターによる一時的治療は、ＦＯＰを有する個体において、必要または緊急の内科的手順または外科的手順（およびさらに、重要な免疫処置および抜歯）の前、最中または直後に使用され得、病的な石灰化を防ぎ得る。他の骨阻害剤、免疫調節薬または抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ、ステロイド、シクロスポリン、シクロホスファミド、アザチオプリン、メトトレキサート、リツキシマブ、エタネルセプト、または類似の薬など）との組み合わせ治療は、上記障害における異所性の骨形成を阻害し、ＢＭＰアンタゴニストの有効性を増大させ得る。
【０１９６】
Ｃｒｅリコンビナーゼの発現をもたらす（ｄｉｒｅｃｔ）アデノウイルスを、遺伝的に改変されたマウスの膝窩に注射することによって、ＡＬＫ２の構成的に活性な変異形態の発現が誘導される、ＦＯＰのマウスモデルが開発されている。このモデルは、ＦＯＰ患者において見られる異所性石灰化および障害を再現する。化合物１３（３ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）の１日２回の投与は、上記の異所性石灰化および障害を防いだ（実施例１０を参照）。
【０１９７】
（Ｃ．がんの処置）
過剰なＢＭＰシグナル伝達（これはＢＭＰの過剰発現のために、または逆説的になるがＢＭＰＩＩ型受容体発現の欠損の結果として生じ得る）は、腫瘍形成、ある種の固形腫瘍（乳癌、前立腺癌腫を含む）、骨癌腫、肺癌腫および腎臓細胞癌腫の増殖または転移に寄与し得る（Ｙｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：２４４４３〜２４４５０，２００８；Ｗａｉｔｅら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．４：７６３〜７７３，２００３；Ａｌａｒｍｏら、Ｇｅｎｅｓ，Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ  Ｃａｎｃｅｒ  ４５：４１１〜４１９，２００６；Ｋｉｍら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：２８４０〜２８４４，２０００；Ｋｉｍら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．９：６０４６〜６０５１，２００３；Ｋｉｍら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２３：７６５１〜７６５９，２００４）。ＢＭＰ過剰発現またはＢＭＰＩＩ型受容体欠損と関連するＢＭＰ活性の増大が疾患の病因に寄与する場合、本明細書に記載の化合物を用いて、ＢＭＰＩ型受容体（リガンドおよびＩＩ型受容体の両方の下流）のレベルでＢＭＰシグナル伝達活性を阻害することは、ＢＭＰシグナル伝達活性を正常化し、そして腫瘍増殖または転移を潜在的に阻害する有効な手段であり得る。
【０１９８】
本明細書に記載の化合物は、補助的な化学療法または主要な化学療法のいずれかとして、臨床的利益のために、上記腫瘍細胞（ならびに他の腫瘍構成細胞型）の増殖または転移を遅くするかまたは停止させるために使用され得る。同様に、本明細書に記載のＢＭＰインヒビターはまた、がんのある種の型（例えば、前立腺癌腫および乳癌などの腺癌）の骨転移性特性を妨げるために使用され得る。加えて、本明細書に記載の化合物は、骨を形成する腫瘍または骨に由来する腫瘍（骨肉種など）のいずれかにおける骨芽細胞活性を阻害するために、（補助的な化学療法または主要な化学療法として）使用され得る。さらに、本明細書に記載の化合物は、破骨活性（ＢＭＰ標的遺伝子のＲＡＮＫＬの働きを介して、ＢＭＰによっても調節される）を阻害するために使用され得、破骨活性は、多発性骨髄腫および他の骨標的腫瘍などの病状において異常に増大する。これらの病状におけるＢＭＰインヒビターの適用は、腫瘍の関与による骨溶解性病変および骨折の存在を低減し得る。
【０１９９】
（Ｄ．ＢＭＰアンタゴニストによる免疫調節）
ＢＭＰは、炎症性応答または免疫応答を減衰させることが報告されており（Ｃｈｏｉら、Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：１０５７〜１０６５，２００６；Ｋｅｒｓｔｅｎら、ＢＭＣ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：９，２００５）、これは、個体が感染症（すなわち、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、寄生生物感染またはヒト型結核菌感染）と戦う能力を害し得る。本明細書に記載のＢＭＰシグナル伝達インヒビターは、したがって、炎症性応答または免疫応答を高め得、このことは、個体がより速く感染症を排除することを可能にし得る。
【０２００】
リンパ球および他の免疫細胞は、それらの細胞表面上にＢＭＰ受容体を発現しており、そして、ＢＭＰは種々の液性および細胞性免疫学的コンパートメントの分化および成熟を調節しているということ、ならびにＢＭＰは成熟した生物において液性および細胞性免疫応答を調節しているということの証拠が増加している。免疫学的に重要な多数のサイトカインの効果について一般に知られているのと同様に、免疫細胞へのＢＭＰシグナルの効果は状況特異的であり得、したがって、ＢＭＰシグナルの効果が、特定のリンパ球集団の分化または機能を増大させるかまたは減少させるかは、経験的に決定されるはずである。本明細書に記載の化合物を用いたＢＭＰ拮抗作用は、治療のために細胞性免疫コンパートメント、先天性免疫コンパートメントもしくは液性免疫コンパートメントの分化を意図的に偏らせるための有効な戦略になり得、または成熟した免疫系において免疫応答を治療上逸脱させる（ｄｅｖｉａｔｉｏｎ）ための戦略になり得る。これらの戦略は、細胞性免疫、先天性免疫もしくは液性免疫の先天的障害を標的にし得、または免疫応答が不適切に弱い障害を標的とし得（例えば、他の手段による免疫処置が難しいかもしくは効果がない場合、良好な抗原感作を促進するためのアジュバントとして）、または免疫応答が過剰もしくは不適切である場合の障害を標的とし得る（例えば、自己免疫および自己感作）。本明細書に記載のＢＭＰアンタゴニストはまた、いくつかの状況において（すなわち、同種移植術または自己免疫において）、免疫寛容の意図的誘導のために有効であり得る。
【０２０１】
（Ｅ．病的骨形成の処置）
本明細書に記載の化合物は、強直性脊椎炎または他の「セロネガティブな」脊椎関節症などの炎症性障害における病的骨形成／骨融合を改善させるために使用され得る（上記障害における自己免疫および炎症は、骨形成を刺激するようだ）。上記化合物の適用の一つは、特に脊椎炎または慢性関節リウマチを有する患者において、関節手術後の過剰な骨形成を防ぐ。本明細書に記載の化合物はまた、全身性エリテマトーデス、強皮症、または皮膚筋炎などの疾患において、石灰沈着症（異栄養性軟組織石灰化）を防ぐために使用され得る。
【０２０２】
筋肉への鈍的外傷性損傷は、ある種の個体において筋肉内に異常な骨形成を引き起こし得、これによって骨化性筋炎性外傷と呼ばれる障害を生じ得る（Ｃｕｓｈｎｅｒら、Ｏｒｔｈｏｐ．Ｒｅｖ．２１：１３１９〜１３２６，１９９２）。頭部外傷および熱傷はまた、異所性の骨形成を誘導し得、これは、患者のリハビリテーションおよび回復を著しく害し得る。本明細書に記載のＢＭＰインヒビターでの処置、必要に応じて上記病状のために通常処方される抗炎症薬（例えば、インドメタシンまたはイブプロフェンなどの非ステロイド系抗炎症性薬）を加えた処置は、病的な骨形成を起しやすい個体における病的な骨形成を防ぐために役立ち得、または最近もしくは以前に発症した個体における病変を小さくするかもしくは退行させるために役立ち得る。他の筋肉（心筋を含む）が、損傷または外傷の存在下で骨化を発症するとの記載は非常にまれであるが、本明細書に記載のＢＭＰインヒビターによる類似の処置は、これらの状況において役立ち得る。
【０２０３】
（Ｆ．異所性骨形成または不適応骨形成の処置）
ＢＭＰシグナルおよびそれらの転写標的は、初期血管リモデリングおよび中期血管リモデリングならびにメンケベルク血管石灰化疾患およびアテローム性血管疾患の石灰化の原因として示唆されている（Ｂｏｓｔｒｏｍら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：１８００〜１８０９，１９９３；Ｔｙｓｏｎら、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．２３：４８９〜４９４，２００３）。ＢＭＰおよびＢＭＰ誘導性骨分化（ｏｓｔｅｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｔｉｏｎ）はまた、心臓弁石灰化の原因として示唆されている。生得の心臓弁は、特にかねてから異常である場合、石灰化し得る。典型的な例は、大動脈二尖弁であり、これらの弁は、一般に、狭窄症を導く石灰化を起こす。石灰性大動脈弁狭窄症を有する患者は、しばしば、弁置換のための心臓手術を必要とする。異常な石灰化は、人工器官の血管移植片または心臓弁の機能に有害な影響を及ぼし得る。例えば、人工器官の心臓弁は、狭窄およびしばしば漏出を導く石灰化を起こす。
【０２０４】
本明細書に記載の化合物は、血管のもしくは弁の石灰性疾患のみを阻害するために使用され得、または、アテローム性疾患、腎性疾患、腎性骨形成異常症もしくは副甲状腺性疾患と組み合わさった血管のもしくは弁の石灰性疾患を阻害するためにも使用され得る。
【０２０５】
本明細書に記載の化合物は、全身投与もしくは局所投与によって、または人工器官材料もしくは他の移植片への直接的組み込みによって（例えば、移植片または人工器官の全てまたは一部を覆うまたは構成するポリマーを有する混合物中に）、人工器官の血管材料または弁材料の石灰化を阻害するために使用され得る。
【０２０６】
いくつかの例において、骨折後の骨折治癒を遅らせること、または不適応な骨形成による機能損傷を防ぐために特定の部位において骨折治癒を意図的に阻害することが望まれる。例えば、骨折が生じたけれども医学的または現実的な理由からすぐに手術を実施できない場合、最終的な手術または治療が実施され得るまで、骨折治癒は、本明細書に記載のＢＭＰインヒビターの使用によって一時的に「延期」され得る。これは、例えば、骨フラグメントの骨折面相互の適切な位置的関係（ａｐｐｏｓｉｔｉｏｎ）を保証するために、後で意図的に再骨折（ｒｅ−ｆｒａｃｔｕｒｅ）させる必要性を抑え得る。処置期間が比較的短い場合、ＢＭＰインヒビターの中止に際して、正常な骨折治癒プロセスが起こることは予期される。他の場合において、例えば骨折が関節に直接的に影響している場合、少しの量でも新規の骨増殖は機能を害し得る。この場合において、ＢＭＰ活性の全体的または局所的阻害（本明細書に記載のＢＭＰアンタゴニストの全身的送達によって、または局所的移植片もしくはマトリックスからの拡散を介した、本明細書に記載のＢＭＰアンタゴニストの局所的送達によって）は、標的（ｃｒｉｔｉｃａｌ）領域において、骨折治癒を阻害するためまたは骨折仮骨を妨げるために使用され得る。
【０２０７】
（Ｇ．皮膚疾患の処置）
培養されたケラチノサイトの増殖−インビトロにおいて、ＢＭＰは、ケラチノサイト増殖を阻害し、分化を促進する（Ｂｏｔｃｈｋａｒｅｖら、Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ７２：５１２〜５２６，２００４に概説されている）。皮膚移植を必要としている患者において（例えば、熱傷の後など）、植皮片は、培養されたケラチノサイトから作製される。ケラチノサイトは、他の動物由来でもあり得るが（異種移植片）、これらは免疫系によって拒絶されるため、単に一時的なものにすぎない。ケラチノサイトは、患者自身に由来し得、かつ、実験室内において細胞シートへと増殖し得る（培養された上皮自家移植片）。患者は、自分自身の体に由来するケラチノサイトを拒絶しない。ケラチノサイト培養物への本明細書に記載のＢＭＰアンタゴニストの添加は、ケラチノサイト増殖を促進するために使用され得、これにより患者はより早く移植片を受け取ることが可能になる。
【０２０８】
上皮形成の改善−ＢＭＰ６は皮膚損傷部において高度に発現されており、高レベルのＢＭＰ６は、種々の病因の慢性的なヒトの創傷において検出される（Ｋａｉｓｅｒら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１１：１１４５〜１１５２，１９９８）。皮膚でＢＭＰ６を過剰に発現しているマウスにおいて、再上皮形成および皮膚創傷の治癒は有意に遅延した（Ｋａｉｓｅｒら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１１：１１４５〜１１５２，１９９８）。上皮形成の改善は、瘢痕形成を低減し得る。本明細書に記載のＢＭＰアンタゴニストの表面的投与または全身的投与は、例えば、圧迫潰瘍（とこずれ）または治癒していないかもしくは治癒が不十分である皮膚瘢痕（例えば、末梢血管疾患、真性糖尿病、静脈不全を有する患者における）の処置において、皮膚創傷の上皮形成を高めるために使用され得る。化合物はまた、瘢痕形成を減らすことが予期される。
【０２０９】
体毛増殖の促進−頭皮の毛包増殖は３つの期：成長期（増殖期）、退行期（退縮期）、および休止期（静止期）を有するサイクルである。最近の証拠は、ＢＭＰシグナルは休止期から成長期への移行を遅らせていることを示唆している（Ｐｌｉｋｕｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ４５１：３４０〜３４４，２００８）。本明細書に記載の化合物を用いたＢＭＰシグナル伝達の阻害は、休止期を短くし得、成長期にある毛包の数を増大し得る。本明細書に記載の化合物は、毛包が不十分であるような処置状況または体毛が増殖するよりも高い頻度で失われる場合に、使用され得る。このような状況は、アンドロゲン性脱毛症（男性型脱毛症）、円形脱毛症、および休止期脱毛を含む。
【０２１０】
乾癬の処置−乾癬は、炎症性皮膚障害であり、しばしば皮膚外傷ならびにその後の修復および炎症後に生じる（Ｋｏｅｂｎｅｒ現象）。マウスの皮膚におけるＢＭＰ６の過剰発現は、乾癬を有する患者で見られるものと類似した皮膚病変を導くことから（Ｂｌｅｓｓｉｎｇら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１３５：２２７〜２３９，１９９６）、ＢＭＰは、乾癬を引き起こす炎症性メカニズムおよびその修復に関与し得る。本明細書に記載の化合物は、樹立した乾癬を処置するため、または皮膚損傷後に乾癬の発症を防ぐため、表面的にまたは全身的に投与され得る。
【０２１１】
角膜瘢痕化の処置−ＢＭＰ６発現は、結膜の瘢痕化に関連する（Ａｎｄｒｅｅｖら、Ｅｘｐ．Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．８３：１１６２〜１１７０，２００６）。本明細書に記載の化合物は、角膜瘢痕化およびその結果としての失明を予防または処置するために使用され得る。
【０２１２】
（Ｈ．全身性高血圧の処置）
ＢＭＰ４の注入は、マウスに全身性高血圧を誘導する（Ｍｉｒｉｙａｌａら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１３：２８１８〜２８２５，２００６）。血管平滑筋細胞は、種々のＢＭＰリガンドを発現する。ＢＭＰは、電位依存性カリウムチャネルの発現を増大させ、これによって血管平滑筋の収縮を増大させる（Ｆａｎｔｏｚｚｉら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２９１：Ｌ９９３〜１００４，２００６）。ＢＭＰシグナル伝達を阻害する本明細書に記載の化合物は、血圧を低減するために使用され得る。高血圧を有する患者における血圧の持続的低減は、心筋梗塞、うっ血性心不全、脳血管障害、および腎不全を防ぐと予期される。本明細書に記載のＢＭＰインヒビターは、局所的送達を介して（例えば、エアロゾルを介して）肺高血圧症などの、特異的な血管床における高血圧を標的とするために使用され得る。
【０２１３】
（Ｉ．肺高血圧症の処置）
ＢＭＰシグナル伝達は、肺高血圧症の病因に寄与する。例えば、ＢＭＰ４レベルが低下しているマウスは、肺高血圧症および長期間にわたって低酸素濃度で呼吸することから誘導される肺性血管リモデリングから保護される（Ｆｒａｎｋら、Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．９７：４９６〜５０４，２００５）。さらに、ＩＩ型ＢＭＰ受容体（ＢＭＰＲＩＩ）をコードする遺伝子中の変異は、散発性および家族性肺動脈性肺高血圧を有する患者において頻繁に発見される。ＢＭＰシグナル伝達の低減は、肺高血圧症を引き起こし得ることが予想され得る。しかしながら、Ｙｕおよびその同僚（Ｙｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：２４４４３〜２４４５０，２００８）は、ＢＭＰＲＩＩ欠損は、一部のＢＭＰリガンドによるＢＭＰシグナル伝達を逆説的に増大させることを報告し、したがって、本明細書に記載の化合物を用いたＢＭＰシグナル伝達の増大は、実際は、肺高血圧症の発症に寄与し得る。
【０２１４】
本明細書に記載の化合物は、肺動脈性肺高血圧のリスクがある患者（例えば、ＢＭＰＲＩＩ変異を有する患者）においてこの疾患の発症を防ぐために、または特発性もしくは後天性肺動脈性肺高血圧を有する患者を処置するために、使用され得る。本明細書に記載の化合物で処置された個体における肺高血圧症の低減は、息切れ、右心室肥大、および右心室不全を低減させると予期される。
【０２１５】
（Ｊ．心室肥大の処置）
ＢＭＰ−１０レベルは、高血圧を有するラットの肥大した心室において増大し、このＢＭＰリガンドは、培養された新生仔ラット心室筋細胞において肥大を誘導する（Ｎａｋａｎｏら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ．Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２９３：Ｈ３３９６〜３４０３，２００７）。本明細書に記載の化合物によるＢＭＰ−１０シグナル伝達の阻害は、心室肥大を予防／処置し得る。心室肥大は、拡張機能障害によるうっ血性心不全を導き得る。本明細書に記載の化合物は、うっ血性心不全を予防／処置すると予期される。
【０２１６】
（Ｋ．神経学的障害の処置）
脊髄損傷および神経障害の処置−ＢＭＰは、脊髄損傷後の成体の脊髄における軸索再生の強力な抑制因子である（Ｍａｔｓｕｕｒａら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００８）。ＢＭＰ発現は、脊髄挫傷後、損傷部位の周囲の希突起神経膠細胞および神経膠星状細胞において上昇することが報告されている。ＢＭＰインヒビターであるノギン（ｎｏｇｇｉｎ）の鞘内投与は、脊髄挫傷後の、運動活性の増強および皮質脊髄路の有意な再増殖を導いた。
【０２１７】
ＲＧＭａは脊髄損傷後の軸索増殖および回復ならびにシナプス再形成を阻害し、ＲＧＭａの効果はＲＧＭａに対する抗体によってブロックされる（Ｈａｔａら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１７３：４７〜５８，２００６；Ｋｙｏｔｏら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１１８６：７４〜８６，２００７）。ＲＧＭａはＢＭＰシグナル伝達を増強し（Ｂａｂｉｔｔら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：２９８２０〜２９８２７，２００５）、このことは、ＢＭＰシグナル伝達が、軸索増殖および回復の妨害の原因であり得ることを示唆する。
【０２１８】
この考察に基づき、本明細書に記載の化合物は、脊髄損傷後の軸索増殖および回復を増強させることが予期される。本明細書に記載の化合物は、真性糖尿病を含む広範な障害に関連する神経障害を予防／処置すると予期される。本明細書に記載の化合物は、神経障害に関連する疼痛および運動機能障害のいずれもを処置することが予期される。
【０２１９】
中枢神経系の炎症に関連する神経学的障害の処置−ＢＭＰ４および５は、多発性硬化症およびクロイツフェルト−ヤーコプ病の病変内で検出されている（Ｄｅｉｎｉｎｇｅｒら、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．９０：７６〜７９，１９９５）。ＢＭＰはまた、実験的自己免疫脳脊髄炎を有するマウス（多発性硬化症の動物モデル）においても検出されている（Ａｒａら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．８６：１２５〜１３５，２００８）。本明細書に記載の化合物は、多発性硬化症を、および中枢神経系の炎症に関連するかまたはＢＭＰシグナルによって媒介される不適応な損傷修復プロセスに関連する他の神経学的障害を、予防または処置するために使用され得る。
【０２２０】
痴呆の処置−ＢＭＰシグナル伝達のインヒビターは、マウスの神経前駆細胞における神経発生を促進し得る（Ｋｏｉｋｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：１５８４３〜１５８５０，２００７）。本明細書に記載の化合物は、ニューロンの加速度的損失を伴う種々の神経学的障害（脳血管障害およびアルツハイマー疾患、ならびに他の痴呆を含む）において神経発生を増強するために使用され得る。
【０２２１】
記憶および学習の変化−ＢＭＰシグナル伝達は、記憶および認知行動に関与するニューロンの発生および維持において重要な役割を有している。例えば、ＢＭＰアンタゴニストであるコーディン（ｃｈｏｒｄｉｎ）が欠損しているマウスは、空間学習は向上するが、新規の環境における探査的行動は低下する（Ｓｕｎら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２７：７７４０〜７７５０，２００７）。本明細書に記載の化合物は、記憶もしくは学習を変化させるためかもしくは防ぐために使用され得（例えば、麻酔のための健忘もしくは苦痛を引き起こすであろう他の状況においてを含む）、または心的外傷後ストレス障害を防ぐために使用され得る。
【０２２２】
（Ｌ．動脈硬化症の処置）
多くの証拠は、ＢＭＰリガンドは血管壁において炎症促進性（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）およびアテローム促進性（ｐｒｏ−ａｔｈｅｒｏｇｅｎｉｃ）であることを示唆している（Ｃｈａｎｇら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１６：１２５８〜１２６６，２００７）。ＢＭＰ４発現のノックダウンは、炎症性シグナルを減少させ、一方ＢＭＰアンタゴニスト（例えば、フォリスタチン（ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ）またはノギン）のノックダウンは、炎症性シグナルを増大させる。本明細書に記載の化合物は、アテローム性動脈硬化症、自己免疫疾患、および他の血管炎に関連する血管炎症を低減するために使用され得る。アテローム性動脈硬化症の減少から、本明細書に記載の化合物は、急性冠症候群（狭心症および心臓発作）、一過性脳虚血発作、脳卒中、末梢血管疾患、および他の血管性虚血イベントの発生数および／または重篤度を減少させると予想される。さらに、アテローム性動脈硬化症が動脈瘤形成の病因に寄与する限りにおいて、本明細書に記載の化合物は、動脈瘤形成の進行を遅くするために使用され得、このことは、動脈瘤破裂の頻発および手術の必要性を低減し得る。
【０２２３】
マトリックスリモデリングに影響するＢＭＰおよび多くのＢＭＰ誘導性遺伝子産物は、初期アテローム硬化性病変において過剰に発現されているため、ＢＭＰシグナルは、アテローム硬化性プラーク形成および進行を促進し得る（Ｂｏｓｔｒｏｍら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．９１：１８００〜１８０９．１９９３；Ｄｈｏｒｅら、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ．２１：１９９８〜２００３．２００１）。アテローム性プラークにおけるＢＭＰシグナル伝達活性は、したがって、不適応な損傷修復の一形態を表し得、または炎症に寄与し得る。ＢＭＰシグナルはまた、徐々に、常在性血管細胞集団または新生血管細胞集団の骨芽細胞様細胞への分化を誘導し得、このことは、血管の初期および中期石灰化を導き得る（Ｈｒｕｓｋａら、Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．９７：１０５〜１１２．２００５）。石灰性血管疾患または動脈硬化症は、血管進展性の減少ならびに心血管イベントのリスクおよび死亡率の増大に関連し、そして潜在的アテローム硬化性疾患が付随する場合、特に問題である。（Ｂｏｓｔｒｏｍら、Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｅｕｋａｒｙｏｔ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒ．１０：１５１〜１５８．２０００）。しかしながら、アテローム硬化性病変および石灰性病変の進行に寄与するシグナルが遮断され得る場合、これらの病変はいずれも退縮し得る（ａｍｅｎａｂｌｅ）（Ｓａｎｏら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．１０３：２９５５〜２９６０．２００１）。ある種の局面において、化合物１３またはＢＭＰ  Ｉ型受容体活性の別のインヒビターは、インビボにおいてアテローム性プラークおよび血管石灰化の進行を制限するために使用され得る。
【０２２４】
（Ｍ．高コレステロール血症もしくは高リポタンパク質血症の処置）
低分子もしくは組換えＢＭＰインヒビターでの処置は、低密度リポタンパク質受容体が欠損しているマウス（ＬＤＬＲ−／−）における血管炎症（マクロファージ蓄積およびカテプシン活性を介する）、アテローム形成、および血管石灰化を低下させる。理論に拘束されることは望まないが、血管炎症に対する影響に関する考えられる説明として、酸化ＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ）は、ＢＭＰ２発現を増大させ、ヒト大動脈内皮細胞における反応性酸素種（ＲＯＳ）の生成を誘導することを見いだした。ｏｘＬＤＬによって誘導されるＲＯＳ生成は、低分子もしくは組換えＢＭＰインヒビターによる阻害に基づいて、ＢＭＰシグナル伝達を必要とするようである。低分子ＢＭＰインヒビターでの処置は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ活性を阻害することなく血漿低密度リポタンパク質レベルを低下させる。このことは、ＬＤＬコレステロール生合成の調節におけるＢＭＰシグナル伝達の役割を示唆する。低分子ＢＭＰインヒビターはまた、高脂肪食を摂取させたＬＤＬＲ欠損マウスにおいて認められる肝臓脂肪症を阻害することを見いだした。低分子もしくは組換えＢＭＰインヒビターは、インビトロで肝癌細胞におけるＡｐｏＢ−１００の合成を阻害する。これらの知見は、血管石灰化およびアテローム形成におけるＢＭＰシグナル伝達を意味し、ＢＭＰシグナル伝達がアテローム性動脈硬化症の病因に寄与し得る少なくとも２種の新規の機構を提供する。これらの研究は、血管の酸化的ストレス、炎症および脂質代謝の調節におけるＢＭＰシグナル伝達のいくつかの新規な機能を同定すると同時に、アテローム性動脈硬化症の処置における治療標的としての上記ＢＭＰシグナル伝達経路を強調する。
【０２２５】
特定の実施形態において、本明細書に記載されるＢＭＰインヒビターは、患者におけるＡｐｏＢ−１００の循環レベルの低下のために使用され得る。特定の実施形態において、本明細書に記載されるＢＭＰインヒビターは、患者におけるＬＤＬの循環レベルの低下のために使用され得る。よって、本明細書に記載されるＢＭＰインヒビターは、高コレステロール血症、高脂血症、もしくは高リポタンパク質血症（先天性もしくは後天性の高コレステロール血症、高脂血症、もしくは高リポタンパク質血症が挙げられる）の処置のために使用され得る。
【０２２６】
特定の実施形態において、上記先天性の高コレステロール血症、高脂血症、もしくは高リポタンパク質血症は、常染色体優性高コレステロール血症（ＡＤＨ）、家族性高コレステロール血症（ＦＨ）、多遺伝子性高コレステロール血症、家族性複合型高脂血症（ＦＣＨＬ）、高アポβリポタンパク質血症、もしくは低密度ＬＤＬ（ｓｍａｌｌ  ｄｅｎｓｅ  ＬＤＬ）症候群（ＬＤＬ表現型Ｂ）である。
【０２２７】
特定の実施形態において、上記後天性の高コレステロール血症、高脂血症、もしくは高リポタンパク質血症は、糖尿病、高脂肪食および／もしくは座りがちなライフ・スタイル、肥満症、メタボリックシンドローム、内因性もしくは二次性の肝疾患、原発性胆汁性肝硬変もしくは他の胆汁鬱滞障害、アルコール依存症、膵炎、ネフローゼ症候群、末期腎疾患、甲状腺機能低下症、チアジド、β−ブロッカー、レチノイド、高活性な抗レトロウイルス剤、エストロゲン、プロゲスチン、もしくはグルココルチコイドの投与に起因する医原性と関連する。
【０２２８】
特定の実施形態において、本明細書に記載されるＢＭＰインヒビターは、脂質吸収もしくは代謝における欠損と関連する疾患、障害、もしくは症候群（例えば、シトステロール血症，  脳腱黄色腫症、もしくは家族性低β-リポタンパク質血症）の処置のために使用され得る。
【０２２９】
特定の実施形態において、本明細書に記載されるＢＭＰインヒビターは、高脂血症によって引き起こされる疾患、障害、もしくは症候群（例えば、冠動脈疾患およびその発現（例えば、心筋梗塞；狭心症；急性冠動脈症候群（例えば、不安定狭心症）；心筋梗塞によって引き起こされる心機能不全（例えば、鬱血性心不全）；または心筋虚血／心筋梗塞と関連する心臓不整脈）、脳の一部に供給する動脈の閉塞に起因する脳卒中、脳出血、末梢動脈疾患（例えば、腸間膜虚血；腎動脈狭窄；四肢虚血および跛行；鎖骨下動脈盗血症候群；腹部大動脈瘤；胸部大動脈瘤、偽動脈瘤、壁内血腫（ｉｎｔｒａｍｕｒａｌ  ｈｅｍａｔｏｍａ）；または穿通性大動脈潰瘍（ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  ａｏｒｔｉｃ  ｕｌｃｅｒ）、大動脈解離、大動脈狭窄、血管石灰化、黄色腫（例えば、腱に影響を及ぼす黄色腫もしくは強膜黄色腫および皮膚黄色腫）、眼瞼黄色板症、または肝臓脂肪症の処置のために使用され得る。特定の実施形態において、本明細書に記載されるＢＭＰインヒビターは、循環脂質レベルとは関係なく（例えば、正常の循環脂質レベルもしくは代謝を示す個体において）、上記の疾患、障害、もしくは症候群の処置のために使用され得る。
【０２３０】
特定の実施形態において、本明細書に記載されるＢＭＰインヒビターは、冠動脈疾患、脳血管疾患、もしくは末梢血管疾患から生じる二次的心血管事象の低下のために使用され得る。特定のこのような実施形態において、本明細書に記載されるＢＭＰインヒビターは、脂質レベルに拘わらず、個体を処置するために使用され得る（例えば、正常な循環コレステロールレベルおよび脂質レベルを示す個体の処置において使用され得る）。特定のこのような実施形態において、本明細書に記載されるＢＭＰインヒビターは、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターとともに共同して投与される。
【０２３１】
特定の実施形態において、本明細書に記載されるＢＭＰインヒビターは、心血管疾患の予防のために（例えば、心血管リスクのマーカー（例えば、Ｃ反応性タンパク質）の上昇、もしくは例えば、フラミンガムリスクスコアの上昇を有する個体において）使用され得る。特定のこのような実施形態において、本明細書に記載されるＢＭＰインヒビターは、正常な循環コレステロールレベルおよび脂質レベルを示す個体において心血管疾患を予防するために使用され得る。
【０２３２】
１種以上の本明細書に記載されるＢＭＰインヒビターが上記の疾患、障害、もしくは症候群の処置もしくは予防において使用される特定の実施形態において、処置される患者は、以下の状態のうちの１つ以上を有すると診断されておらず、そして／または以下の状態のうちの１つ以上に罹患していない：アテローム性動脈硬化症、自己免疫疾患、および他の血管炎と関連する血管炎症；動脈硬化性疾患、アテロームプラーク、ならびに／または血管石灰化；動脈瘤および／もしくは動脈瘤形成；急性冠動脈症候群（狭心症および心臓発作）、一過性虚血発作、脳卒中、末梢血管疾患、もしくは他の血管虚血事象。
【０２３３】
１種以上の本明細書に記載されるＢＭＰインヒビターが、上記の疾患、障害、もしくは症候群の処置もしくは予防において（例えば、患者におけるＡｐｏＢ−１００および／もしくはＬＤＬの循環レベルの低下のために；高コレステロール血症、高脂血症、もしくは高リポタンパク質血症（先天性もしくは後天性の高コレステロール血症、高脂血症、もしくは高リポタンパク質血症が挙げられる）の処置のために；脂質吸収もしくは代謝における欠陥と関連する疾患、障害、もしくは症候群の処置のために；高脂血症によって引き起こされる疾患、障害、もしくは症候群の処置のために；冠動脈疾患、脳血管疾患、もしくは末梢血管疾患から生じる二次的心血管事象の低下のために；または冠動脈疾患、脳血管疾患、もしくは末梢血管疾患から生じる二次的心血管事象の低下のために）使用される他の実施形態において、処置される患者はまた、以下の状態のうちの１種以上を有すると診断され、そして／または以下の状態のうちの１種以上に罹患している：アテローム性動脈硬化症、自己免疫疾患、および他の血管炎と関連する血管炎症；動脈硬化性疾患、アテロームプラーク、ならびに／または血管石灰化；動脈瘤および／もしくは動脈瘤形成；急性冠動脈症候群（狭心症および心臓発作）、一過性虚血発作、脳卒中、末梢血管疾患、もしくは他の血管虚血事象。
【０２３４】
（Ｎ．インビトロおよびインビボにおける、胚細胞および成体幹細胞を含む前駆細胞の増殖、生着および分化）
ＢＭＰシグナルは、前駆細胞集団および幹細胞集団（いくつかの状況においてはさらに組織も）の分化および再生の調節に重要であり、この調節は、分化系列への分化を防ぐ（一方で他の状況では分化を方向づける）。本明細書に記載の化合物は、（ｉ）インビボまたはインビトロにおいて、幹細胞集団または多能性（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ）細胞集団の多能性状態を維持するため；（ｉｉ）インビボまたはインビトロにおいて、幹細胞集団または多能性細胞集団を増殖させるため；（ｉｉｉ）インビボまたはインビトロにおいて、幹細胞集団または多能性細胞集団の分化を方向づけるため；（ｉｖ）インビボまたはインビトロにおいて、幹細胞集団または多能性細胞集団の分化を操作または方向づけるため（単独で、または他処置と組み合わせて、もしくは他の処置と連続してのいずれかで）；ならびに（ｖ）分化細胞集団から多能性集団または前駆体集団への脱分化を調節するため、に使用され得る。
【０２３５】
多くの幹細胞系列および前駆体系列は、増殖するか、特異的な組織系列に分化するか、特定の組織型にたどり着きそして統合するか、またはプログラム細胞死を起こすかを決定するためにＢＭＰシグナルを必要とする。しばしば、ＢＭＰシグナルは、増殖因子（ｂＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＶＥＧＦ、ＨＢＥＧＦ、ＰｌＧＦ、およびその他）、ソニックヘッジホッグ（Ｓｏｎｉｃ  Ｈｅｄｇｅｈｏｇ（ＳＨＨ））、ノッチ（ｎｏｔｃｈ）、およびＷｎｔシグナル伝達経路によって提供されるシグナルと相互作用し、上記変化に影響する（Ｏｋｉｔａら、Ｃｕｒｒ．Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．１：１０３〜１１１，２００６）。本明細書に記載の化合物は、治療的適用のため、幹細胞（例えば、胚性幹細胞）または組織前駆細胞の特異的系列への分化を方向づけるために使用され得る（Ｐａｒｋら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １３１：２７４９〜２７６２，２００４；Ｐａｓｈｍｆｏｒｏｕｓｈら、Ｃｅｌｌ  １１７：３７３〜３８６，２００４）。または、ある種の細胞集団において、本明細書に記載のＢＭＰインヒビターは、臨床的適用に有効となる十分な数の細胞を製造するために、分化を防ぎ増殖を促進する上で有効であり得る。ＢＭＰアンタゴニストと増殖因子またはシグナル伝達分子との的確な組み合わせは、各細胞および組織型に対して非常に特異的であり得る。
【０２３６】
例えば、ある種の胚性幹細胞株は、培養されたある種の胚性幹細胞株の分化を阻害し多能性を維持するために、白血病抑制因子（ＬＩＦ）との共培養（ｃｏ−ｃｕｌｔｕｒｅ）を必要とする（Ｏｋｉｔａら、Ｃｕｒｒ．Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．１：１０３〜１１１，２００６）。本明細書に記載のＢＭＰインヒビターの使用は、ＬＩＦ非存在下において多能性を維持するために用いられ得る。他のＥＳ細胞株は、多能性を維持するために、特定のフィーダー細胞層との共培養を必要とする。単独または他の薬剤と組み合わせにおける本明細書に記載のＢＭＰインヒビターの使用は、フィーダー細胞層による汚染が懸念される場合、またはそのＤＮＡもしくはタンパク質成分がヒト治療への細胞の使用を困難にするかもしくは妨げる場合、多能性を維持する上で有効であり得る。
【０２３７】
別の例において、いくつかの状況において、培養物中でＬＩＦの休止直前にノギンなどのタンパク質によってＢＭＰシグナルに拮抗することは、心筋細胞分化系列への分化を誘導し得る（Ｙｕａｓａら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：６０７〜６１１，２００５）。本明細書に記載の薬理学的ＢＭＰアンタゴニストの使用は、類似の（もしそうでないなら、強力な）効果を達成し得る。上記分化細胞は、病的な心筋に治療的に導入され得る。または、そのような処置は、実際は、すでに病的な心筋にたどり着いている生着前駆細胞に対し、より有効であり得る。ＢＭＰのタンパク質性アンタゴニスト（ノギンなど）による全身的治療は、非常に費用がかかり、かつ複雑な投薬を必要とする。本明細書に記載のＢＭＰアンタゴニストの全身的または局所的な送達は、インサイチューで、上記前駆細胞の分化を機能する心筋細胞へと偏らせる得る。
【０２３８】
（Ｏ．さまざまな程度での選択性を有する化合物の適用：特定のＢＭＰ  Ｉ型受容体を介してＢＭＰシグナル伝達を阻害する化合物、またはＴＧＦ−β、アクチビン、ＡＭＰキナーゼ、もしくはＶＥＧＦ受容体を介したシグナル伝達にも影響する化合物）
ＡＬＫ特異的アンタゴニスト−ドルソモルフィン（ｄｏｒｓｏｍｏｒｐｈｉｎ）は、ＢＭＰ  Ｉ型受容体である、ＡＬＫ２、ＡＬＫ３、およびＡＬＫ６の活性を阻害する。ドルソモルフィンは、ＡＬＫ２およびＡＬＫ３を、ＡＬＫ６よりも高い程度まで阻害する（Ｙｕら、Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．４：３３〜４１，２００８）。本明細書に記載の化合物のいくつかは、特定のＢＭＰ  Ｉ型受容体に対し相対的により高い選択性を有する。ある種の疾患の病因は、ある特定の受容体の、シグナル伝達の機能障害によると考えられ得る。例えば、進行性骨化性線維形成異常症は、異常な（構成的に活性な）ＡＬＫ２機能によって引き起こされる疾患である（Ｙｕら、Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．４：３３〜４１，２００８）。そのような例において、一部のＢＭＰ  Ｉ型受容体の機能に特異的に拮抗する本明細書に記載の化合物は、毒性もしくは副作用の低減またはより高い有効性という利点、またはそのいずれもの利点を有し得る。
【０２３９】
本明細書に記載の化合物のいくつかは、ＴＧＦ−β、アクチビン、ＡＭＰキナーゼ、およびＶＥＧＦ受容体シグナル伝達と比較してＢＭＰへの高い程度の選択性を有し得る。他の化合物は、より低い特異性であり得、ＢＭＰシグナル伝達に加えて他の経路も標的にし得る。例えば、腫瘍の処置において、特定の患者の腫瘍の分子フェノタイピング（ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ）が複数経路の調節障害を示す場合、ＢＭＰシグナル伝達と一つまたはそれより多い上記経路とを阻害する薬剤は、有益な効果（例えば、腫瘍の大きさの減少）を有し得る。
【０２４０】
（Ｐ．ヒト以外の種における化合物の適用）
本明細書に記載の化合物は、当業者によって適切に決定された投与量および投与レジメンの使用によって、被験体（例えば、ヒト、家庭のペット、家畜、または他の動物）を処置するために用いられ得、投与量および投与レジメンのパラメーターは、例えば、処置されるべき障害のタイプおよび程度、被験体の総合的な健康状態、その化合物の治療指数、ならびに投与経路に依存して変わり得る。標準的臨床試験は、本発明の任意の特定の薬学的組成物について、用量および投与頻度を最適化するために使用され得る。使用され得る例示的投与経路としては、経口投与、非経口投与、静脈内投与、動脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、表面投与、頭蓋内投与、眼窩内投与、眼投与、心室内投与、嚢内投与、脊椎内投与、槽内投与、腹腔内投与、鼻内投与、エアロゾルでの投与、または坐剤による投与が挙げられる。本発明において使用され得る処方物を作製するための方法は当該分野において周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ），Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００において見られ得る。
【０２４１】
（Ｑ．組み合わせ治療）
ＢＭＰのみを阻害する効果は、それ単独では最善ではないかもしれず、および／または、ＢＭＰシグナル伝達と機能的相互作用がある別経路に作用する治療との組み合わせ、もしくはＢＭＰ経路それ自体に作用する治療との組み合わせにおいて、相乗的もしくはより高度に有効であるかもしれないため、ある例において、本明細書に記載のＢＭＰアンタゴニストは、他の現代の薬物治療または将来的な薬物治療と組み合わせて使用され得る。特定の場合において、本明細書に記載されるＢＭＰアンタゴニストとさらなる薬物治療との共同投与は、単一療法において（例えば、本明細書に記載されるＢＭＰアンタゴニストの非存在下で）使用される場合に、治療効果を達成する量未満であるように、さらなる薬物療法の用量を低減する。組み合わせ治療のいくつかの例は、以下のものを含み得る。
【０２４２】
特定の実施形態において、本明細書に記載されるＢＭＰアンタゴニストは、他の抗高脂血症薬もしくは抗脂血症剤（ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビター（例えば、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、もしくはシンバスタチンが挙げられるが、これらに限定されない）、フィブラート（例えば、ベザフィブラート、シプロフィブラート、クロフィブラート、ゲムフィブロジル、もしくはフェノフィブラート）、エゼチミブ、ナイアシン、コレステリルエステル転移タンパク質（ＣＥＴＰ）インヒビター（例えば、トルセトラピブ、アナセトラピブ、もしくはダルセトラピブ）、コレスチラミン、コレスチポール、プロブコール、デキストロチロキシン、胆汁酸捕捉剤、または上記のうちの組み合わせ）と共同して投与され得る。
【０２４３】
特定の実施形態において、本明細書に記載されるＢＭＰアンタゴニストは、糖尿病の治療薬（スルホニルウレア（例えば、クロルプロパミド、トルブタミド、グリブリド、グリピジド、もしくはグリメピリド）、肝臓によって生成されるグルコースの量を低下させる医薬（例えば、メトホルミン）、メグリチニド（例えば、レパグリニドもしくはナテグリニド）、腸からの炭水化物の吸収を低下させる医薬（例えば、α-グルコシダーゼインヒビター（例えば、アカルボース））、血糖コントロールに影響を及ぼす医薬（例えば、プラムリンチドもしくはエキセナチド）、ＤＰＰ−ＩＶインヒビター（例えば、シタグリプチン）、インスリン治療薬、チアゾリジノン（例えば、トログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、もしくはロシグリタゾン）、オキサジアゾリジンジオン、α-グルコシダーゼインヒビター（例えば、ミグリトールもしくはアカルボース）、β細胞のＡＴＰ依存性カリウムチャネルに作用する薬剤（例えば、トルブタミド、グリベンクラミド、グリピジド、グリカジド（ｇｌｉｃａｚｉｄｅ）、もしくはレパグリニド）、ナテグリニド、グルカゴンアンタゴニスト、糖新生および／もしくはグリコーゲン分解の刺激に関与する肝酵素のインヒビター、あるいは上記のうちの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない）と共同して投与され得る。
【０２４４】
特定の実施形態において、本明細書に記載されるＢＭＰアンタゴニストは、肥満症の治療薬（オルリスタット、シブトラミン、フェンジメトラジン、フェンテルミン、ジエチルプロピオン、ベンズフェタミン、マジンドール、デキストロアンフェタミン、リモナバン、セチリスタット、ＧＴ  ３８９−２５５、ＡＰＤ３５６、プラムリンチド／ＡＣ１３７、ＰＹＹ３−３６、ＡＣ  １６２３５２／ＰＹＹ３−３６、オキシントモジュリン、ＴＭ  ３０３３８、ＡＯＤ  ９６０４、オレオイル−エストロン、ブロモクリプチン、エフェドリン、レプチン、プソイドエフェドリン、もしくはこれらの薬学的に受容可能な塩、または上記のうちの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない）と共同して投与され得る。
【０２４５】
特定の実施形態において、本明細書に記載されるＢＭＰアンタゴニストは、高血圧治療薬（β−ブロッカー（例えば、アルプレノロール、アテノロール、チモロール、ピンドロール、プロプラノロールおよびメトプロロール）、ＡＣＥ（アンギオテンシン変換酵素）インヒビター（例えば、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、フォシノプリル、リシノプリル、キナプリルおよびラミプリル）、カルシウムチャネルブロッカー（例えば、ニフェジピン、フェロジピン、ニカルジピン、イスラジピン、ニモジピン、ジルチアゼムおよびベラパミル）、およびα−ブロッカー（例えば、ドキサゾシン、ウラピジル、プラゾシンおよびテラゾシン）、または上記のうちの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない）と共同して投与され得る。
【０２４６】
ＳＵ−５４１６などのチロシンキナーゼ受容体インヒビターと本明細書に記載のＢＭＰアンタゴニストとは、血管形成の阻害、特に腫瘍に対する抗血管形成療法において相乗効果を有し得る。ＢＭＰシグナル（ＢＭＰ−４）は、造血／内皮共通前駆細胞への幹細胞または前駆細胞の分化（ｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ）にとって重要であると考えられており、ならびに、血管形成に必要な成熟内皮細胞の増殖、生存、および移動を促進し得る（Ｐａｒｋら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １３１：２７４９〜２７６２，２００４）。したがって、本明細書に記載の化合物を用いたＢＭＰシグナルへの拮抗は、内皮前駆体および内皮細胞レベルでの、血管形成のさらなる阻害を提供し得る。同様に、本明細書に記載のＢＭＰアンタゴニストとイマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ）などの他のチロシンキナーゼ受容体インヒビターとの共処置（ｃｏ−ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）は、ある種の腫瘍の血管リモデリングおよび血管形成を阻害するために使用され得る。
【０２４７】
ソニックヘッジホッグアゴニストと本明細書に記載のＢＭＰアンタゴニストとの組み合わせは、ＳＨＨ活性が毛包の休止期（静止期）からの移行を刺激する（Ｐａｌａｄｉｎｉら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２５：６３８〜６４６，２００５）と知られていると同時に、ＢＭＰ経路の阻害は休止期を短くする（Ｐｌｉｋｕｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ４５１：３４０〜３４４，２００８）ことから、体毛増殖を促進する上で特に有用であり得る。両者の使用は、成長期または増殖期における時間の相対的増大を引き起こすことが予期される。
【０２４８】
ノッチ調節因子（例えば、γ−セクレターゼインヒビター）と本明細書に記載のＢＭＰアンタゴニストとの組み合わせ使用は、両者の経路が協同して機能し、細胞分化および血管細胞移動に影響することを示唆する証拠が増加しているため（Ｋｌｕｐｐｅｌら、Ｂｉｏｅｓｓａｙｓ  ２７：１１５〜１１８，２００５）、血管リモデリングまたは骨分化を阻害するように設計された適用において、どちらかの薬剤のみでの使用よりも有効であり得る。これらの治療は、一つまたは両方の経路が乱れている腫瘍の処置において相乗的であり得る（Ｋａｔｏｈ，Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｖ．３：３０〜３８，２００７）。
【０２４９】
インディアンヘッジホッグ（Ｉｎｄｉａｎ  Ｈｅｄｇｅｈｏｇ（ＩＨＨ））アンタゴニストと本明細書に記載のＢＭＰアンタゴニストとの組み合わせ使用は、病的な骨形成を阻害し得る。ＩＨＨは、軟骨細胞または軟骨形成細胞への骨前駆体の分化の原因である。軟骨内骨形成は、軟骨形成（ＢＭＰシグナルおよびＩＨＨシグナルによって促進される）および鉱化作用プログラム（これはＢＭＰシグナルによって開始される）によるその後の石灰化の、よく調節された活性を必要とする（Ｓｅｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：１８５４４〜１８５４９，２００４；Ｍｉｎｉｎａら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １２８：４５２３〜４５３４，２００１）。ＩＨＨアンタゴニストと本明細書に記載のＢＭＰアンタゴニストとの共投与は、したがって、過剰に活性な（ｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｅ）ＢＭＰシグナル伝達（ＦＯＰにおいてなど）による病的骨増殖の阻害において、または、上記病的骨形成の任意の炎症性障害もしくは外傷性障害において、より有効であり得る。
【０２５０】
グリア芽細胞腫の処置に対するＳｍｏ拮抗作用およびＢＭＰ拮抗作用、両者の効果について、強力な実験的証拠が存在する。本明細書に記載の化合物は、グリア芽細胞腫の処置のためにＳｍｏアンタゴニストと組み合わせて使用され得る。
【０２５１】
（Ｒ．昆虫におけるＢＭＰシグナル伝達の阻害）
本明細書に記載の化合物のいくつかは、節足動物のＢＭＰ受容体に対し活性を有し得、そしておそらく、脊索動物のＢＭＰ受容体と比較して節足動物のＢＭＰ受容体への選択性も有し得る。節足動物の幼虫または卵におけるＢＭＰシグナル伝達の阻害は、深刻な発達異常を引き起し得、ならびにおそらく、彼らの繁殖能力に障害を生じさせ得る（例えば、ゼブラフィッシュおよびショウジョウバエにおいてこの経路が阻害された場合に観察されるのと同様の背側化を介して）。本明細書に記載のＢＭＰアンタゴニストが、ヒトＢＭＰ受容体と比較して節足動物ＢＭＰ受容体への非常に強い選択性を有する場合、本明細書に記載のＢＭＰアンタゴニストは、明らかに毒性がより低いかまたは環境保護の立場から現時での戦略より安全な、殺虫薬またはペストコントロール剤として使用され得る。
【０２５２】
治療法において患者に投与されることに加えて、本明細書に記載の化合物はまた、エクスビボで、患者に移植される細胞および組織ならびに構造的材料（上記参照）を処理するために使用され得る。例えば、上記化合物は、例えば移植術において使用され得る、外植された（ｅｘｐｌａｎｔｅｄ）組織を処理するために使用され得る。
【０２５３】
本発明は、目下のところ一般的に記述されているが、以下の実施例を参照することにより、本発明はより容易に理解される。以下の実施例は、単に、本発明の特定の局面および実施形態の例示を目的として含まれるのであり、本発明を制限するとは意図されない。
【実施例】
【０２５４】
（例示）
本明細書で開示される特定のＢＭＰインヒビターの合成、ならびにインビトロおよびインビボでの評価は、ＷＯ  ２００９／１１４１８０（これは、その全体において本明細書に参考として援用される）に示される。
【０２５５】
実施例１：
血管石灰化およびアテローム形成におけるＢＭＰシグナル伝達の役割を解明するために、ＢＭＰシグナル伝達を、低分子および組換えタンパク質アプローチを使用して、インビボで阻害した。高脂肪食（ＨＦＤ）を与えた低密度リポタンパク質受容体が欠損したマウス（ＬＤＬＲ−／−）を、研究した（Ｉｓｈｉｂａｓｈｉ，  Ｓ．，  Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，  Ｊ．Ｌ．，  Ｂｒｏｗｎ，  Ｍ．Ｓ．，  Ｈｅｒｚ，  Ｊ．  ＆  Ｂｕｒｎｓ，  Ｄ．Ｋ．  Ｍａｓｓｉｖｅ  ｘａｎｔｈｏｍａｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ−ｆｅｄ  ｌｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｍｉｃｅ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ９３，  １８８５−１８９３  （１９９４））。これらのマウスは、４〜６週間以内にアテロームを発生させ、続いて、内膜および中膜の石灰化が１６〜２０週間までに発生した（図１ａ）。２０週間において、大動脈および大きな血管分枝には、広範囲の血管石灰化（蛍光標識ビスホスホネート取り込み、アリザリンレッド染色およびフォンコッサ染色によって示されるように）、炎症（近赤外線画像化プローブのカテプシン媒介性切断によって示されるように）および豊富な脂質蓄積（オイルレッドＯによって示されるように）が存在した（図２ａ〜ｄ）。
【０２５６】
ＬＤＬＲ−／−マウスの発生しつつある病変におけるＢＭＰシグナル伝達活性を特徴付けた。リン酸化ＢＭＰ応答性ＳＭＡＤ（ｐ−ＳＭＡＤ１／５／８）（活性化細胞の核において保持される上記ＢＭＰシグナル伝達経路のエフェクターである）を、ＨＦＤの３週間で始まる内皮細胞、マクロファージおよびアテローム病変の中膜（図１ｂ）、特に、大動脈の小弯部における免疫蛍光によって検出した。ＢＭＰシグナル伝達の活性化は、少なくとも２０週間にわたって持続し、石灰化病変近くに豊富であった（図３）。ＬＤＬＲ−／−マウスの血管において認められたＳＭＡＤ１／５／８の活性化が、ＢＭＰシグナル伝達に帰し得たことを確認するために、ＢＭＰタイプＩ受容体インヒビターである化合物１３を、６週間にわたってＨＦＤを受けたＬＤＬＲ−／−マウスに投与した（５日間にわたって毎日２．５ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）。ＢＭＰタイプＩ受容体阻害は、アテローム硬化性病変内のｐ−ＳＭＡＤ１／５／８の検出を顕著に低下させた（図１ｃ）。
【０２５７】
次いで、ＬＤＬＲ−／−マウスにおけるＨＦＤ投与後に認められたＢＭＰシグナル伝達の活性化が、血管石灰化に必要とされるかどうかを、決定した。ＨＦＤを２０週間にわたって受ける一方でＬＤＬＲ−／−マウスへの化合物１３の投与（毎日２．５ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）は、蛍光体標識ビスホスホネートの取り込みの低下およびアリザリンレッド染色の低下に基づいて、大動脈全体にわたる血管石灰化を低下させた（図２ａおよびｂ）。化合物１３での処置による血管石灰化の低下を、血管炎症（図２ｃ）および脂質蓄積（図２ｄ）における類似の顕著な低下によって達成した。血管の炎症および石灰化に対する化合物１３の影響は、体重の低下および食餌摂取の低下と関連しなかった（図５ａ、ｂ）。これらの結果は、ＢＭＰ阻害が、アテローム形成および関連する血管炎症、加えて石灰化を改善し得ることを示唆する。骨密度はまた、ビヒクルもしくは化合物１３で処置したＬＤＬＲ−／−マウスの間で差異はなかった（図２０）。骨密度を、ビヒクル（ｎ＝８）もしくは化合物１３（ｎ＝１０，２．５ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）の毎日の注射を受けながら２０週間にわたってＨＦＤを与えた屠殺したＬＤＬＲ−／−マウスから大腿骨において、遠位大腿骨（遠位，図２０）、大腿骨幹（骨幹，図２０）もしくは全骨（全，図２０，平均値±ＳＥＭ）において二重エネルギーＸ線吸収法を使用して測定した。
【０２５８】
血管炎症およびアテロームに対する化合物１３の効果が、オフターゲット効果ではなく、ＢＭＰシグナル伝達の阻害に起因したことを確認するために、アテローム形成の間の組換えＢＭＰインヒビター（ＡＬＫ３−Ｆｃ）の影響を、このモデルにおいて試験した。ＨＦＤを６週間にわたって受ける一方ＬＤＬＲ−／−マウスへのＡＬＫ３−Ｆｃ（１日おきに２ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）の投与は、同じ期間にわたる化合物１３での処置と同様に、ｐ−ＳＭＡＤ１／５／８（図２ｅ）、マクロファージ負荷（図２ｆ）、および大動脈全体にわたるカテプシン活性（図２ｇ）の検出を低下させた。２種の異なるＢＭＰ阻害戦略の効力は、ＢＭＰシグナル伝達が、アテローム形成および関連する血管炎症に寄与するという注目すべき証拠を提供する。
【０２５９】
反応性酸素種（ＲＯＳ）における増大によって示される、酸化ＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ）による内皮細胞の活性化は、アテローム性動脈硬化症および血管石灰化の病因に関わっていた（Ｌｅｖｉｔａｎ，  Ｉ．，  Ｖｏｌｋｏｖ，  Ｓ．  ＆  Ｓｕｂｂａｉａｈ，  Ｐ．Ｖ．  Ｏｘｉｄｉｚｅｄ  ＬＤＬ：  ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ，  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｏｆ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．  Ａｎｔｉｏｘｉｄ  Ｒｅｄｏｘ  Ｓｉｇｎａｌ  １３，  ３９−７５  （２０１０））。ＢＭＰ阻害がどのようにして血管炎症もしくは酸化的ストレスに影響を及ぼしうるかの洞察を得るために、化合物１３、ＡＬＫ３−Ｆｃ、もしくはビヒクルのいずれかで前処理した、ｏｘＬＤＬに曝露したヒト大動脈内皮細胞（ＨＡＥＣ）におけるＲＯＳ生成を試験した。ｏｘＬＤＬは、未処理ＨＡＥＣにおいてＲＯＳ生成を増大させ（図６）、化合物１３およびＡＬＫ３−Ｆｃの両方が、ｏｘＬＤＬ誘導性ＲＯＳ生成を阻害し得る（図４ａおよび図７）ことが観察された。ＲＯＳ生成に関与するＢＭＰリガンドを同定するために、ｏｘＬＤＬに８時間にわたって曝露されたＨＡＥＣにおけるＢＭＰリガンドをコードするｍＲＮＡのレベルを、測定した。ｏｘＬＤＬへのＨＡＥＣの曝露は、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、もしくはＢＭＰ９のｍＲＮＡレベルを変化させなかった（図４ｂ）が、ＢＭＰ２  ｍＲＮＡおよびタンパク質レベルを増大させた（図８ａおよびｂ）。さらに、ＨＡＥＣとＢＭＰ２とのインキュベーションは、化合物１３感受性およびＡＬＫ３−Ｆｃ感受性の様式でＲＯＳ生成を増大させた（図４ａ）。これらの結果は、ｏｘＬＤＬが内皮細胞を誘導して、一部、ＢＭＰ依存性機構を介して（おそらくＢＭＰ２によって媒介される）、ＲＯＳを発生させることを実証し、このことは、内皮細胞のＢＭＰ媒介性活性化が、アテローム性動脈硬化症および血管石灰化の病因において重要な役割を果たし得ることを示唆する。
【０２６０】
血清リポタンパク質レベルは、アテローム性動脈硬化症の重要なリスク因子であることが公知であり、総コレステロールおよびＬＤＬレベルは、ＬＤＬＲ−／−マウスにおいて顕著に上昇している（図９ａおよび表１）。化合物１３による処置は、ＨＦＤを２０週間にわたって与えたＬＤＬＲ−／−マウスにおいて、総コレステロールレベルおよびＬＤＬレベルを低下させるが、ＨＤＬレベルを低下させないことが観察された（図９ａおよび表１）。さらに、化合物１３による処置は、ＨＦＤを受けている野生型動物において総血清コレステロールを低下させた（表２）。化合物１３がＬＤＬレベルを低下させる能力は、インビトロでの酵素活性に対する化合物１３の影響の欠如に基づいて、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ活性に対する直接的効果によって媒介されるようではなかった（図９ｂ）。ＬＤＬ合成の調節におけるＢＭＰシグナル伝達の潜在的役割を調査するために、ＢＭＰインヒビターありもしくはなしで、ＢＭＰ２の存在下もしくは非存在下でのＨｅｐＧ２細胞によるアポリポタンパク質Ｂ１００（ＡｐｏＢ−１００）生成を測定した。ＨｅｐＧ２とＢＭＰ２との２４時間にわたるインキュベーションは、用量依存性様式でＡｐｏＢ−１００生成を増大させることが観察された（図９ｃならびに図１０ａおよびｂ）。化合物１３（図９ｃ）およびＡＬＫ３−Ｆｃ（図１１）とのインキュベーションは、ＢＭＰ２の非存在下でのＨｅｐＧ２細胞によるＡｐｏＢ−１００生成を阻害し、ＡｐｏＢ−１００分泌のＢＭＰ２媒介性誘導を予防した。対照的に、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターである、アトルバスタチンは、ＢＭＰ２の非存在下でのＡｐｏＢ−１００生成を低下させたが、ＢＭＰ２によるＡｐｏＢ−１００合成の誘導を予防しなかった。まとめると、これらの知見は、リポタンパク質生合成の調節におけるＢＭＰシグナル伝達の新規な役割を示唆する。
【０２６１】
【表１】
2014504604.tif 000034
【０２６２】
【表２】
2014504604.tif 000035
【０２６３】
アテローム形成に対する化合物１３の効果がそのリポタンパク質レベルを低下させるその能力に単に帰しうることは、考えられる。しかし、ＨＦＤを６週間にわたって与えたＬＤＬＲ−／−のＡＬＫ３−Ｆｃでの処置は、ＬＤＬレベルも総コレステロールレベルも変化させることなく、アテローム形成を阻害した（表３）。これらの結果は、ＢＭＰシグナル伝達が、例えば、血管壁において、リポタンパク質生合成に対するその影響に加えてアテローム形成において役割を有することを示唆する。ＬＤＬＲ−／−マウスにおいて、化合物１３がなぜリポタンパク質レベルを低下させるが、ＡＬＫ３−Ｆｃは低下させないかは未知である。ＡＬＫ３−Ｆｃがなぜリポタンパク質レベルをインビボで低下させないかという考えられる説明は、バイオアベイラビリティーにおける差異、妨害されるＢＭＰリガンドの範囲、および薬物動態もしくは薬力学における差異を含む。
【０２６４】
【表３】
2014504604.tif 000036
【０２６５】
アテローム性動脈硬化症および血管石灰化に加えて、ＨＦＤを与えたＬＤＬＲ−／−マウスが肝臓脂肪症を発生させることを観察する（Ｈａｒｔｖｉｇｓｅｎ，  Ｋ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ａ  ｄｉｅｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉｃ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ  ｔｏ  ｓｔｕｄｙ  ａｔｈｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｏｂｅｓｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ  ２７，  ８７８−８８５  （２００７））。近年の報告から、血清リポタンパク質レベルの低下は、ＬＤＬＲ−／−マウスにおける脂肪症を予防し得ることが示された（Ｗｏｕｔｅｒｓ，  Ｋ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｉｅｔａｒｙ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，  ｒａｔｈｅｒ  ｔｈａｎ  ｌｉｖｅｒ  ｓｔｅａｔｏｓｉｓ，  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉｃ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ．  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ４８，  ４７４−４８６  （２００８））。よって、化合物１３での処置が、ＬＤＬＲ−／−マウスにおいて脂肪症を予防し得るかどうかを試験した。ＨＦＤを２０週間にわたって与えたＬＤＬＲ−／−マウスは、化合物１３での処置によって予防されうる顕著な脂肪症を有することが観察された（図９ｄ）。脂肪症および関連する炎症の低下と一致して、化合物１３での処置は、ＬＤＬＲ−／−マウスにおける血清アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）およびアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）レベルを低下させることが観察された（表１および表３）。これらの結果は、ＢＭＰシグナル伝達の阻害が、おそらくリポタンパク質レベルを低下させることによって、ＬＤＬＲ−／−マウスにおいて肝臓脂肪症を予防しうることを示唆する；しかし、肝臓の脂肪蓄積に対するＢＭＰシグナル伝達のリポタンパク質非依存性効果という可能性は、排除できない。
【０２６６】
化学物質および試薬。    化合物１３（４−［６−（４−ピペラジン−１−イルフェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル］キノリン）を、以前に記載されるように合成した。（Ｃｕｎｙ，  Ｇ．Ｄ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｂｏｎｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  （ＢＭＰ）  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．  Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ  １８，  ４３８８−４３９２  （２００８））。ＡＬＫ３−Ｆｃは、Ａｃｃｅｌｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａ  Ｉｎｃ．（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  ＭＡ）から提供された。ＯｓｔｅｏＳｅｎｓｅ  ６８０およびＰｒｏＳｅｎｓｅ  ７５０を、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（Ｗａｌｔｈａｍ，  ＭＡ）から得た。組換えヒトＢＭＰ２は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＭＮ）製であった。ヒト酸化ＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ）は、Ｉｎｔｒａｃｅｌｌ  Ｃｏｒｐ．（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，  ＭＤ）製であった。ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡ（クロロメチル  ２’，７’−ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート）は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｅｕｇｅｎｅ，  ＯＲ）製であった。ルシゲニンをＳｉｇｍａ（Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）から購入した。
【０２６７】
動物。    Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドで低密度リポタンパク質受容体が欠損した雌性マウス（ＬＤＬＲ−／−）と適切なコントロールマウス（８週齢）を、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＭＥ）から得た。動物に、Ｐａｉｇｅｎ’ｓ  Ａｔｈｅｒｏｇｅｎｉｃ  Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ（４２％  脂肪、０．１５％  コレステロール、１９．５％  カゼイン；Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，  ＮＪ）と適合するように処方した西洋式の食餌を与えた。
【０２６８】
近赤外線画像化およびアテローム硬化性負荷の推定。    蛍光反射画像化（ＦＲＩ）を、以前に記載されるように行った（Ａｉｋａｗａ，  Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｏｓｔｅｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ−ｓｔａｇｅ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｅｖａｌｕａｔｅｄ  ｂｙ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１６，  ２８４１−２８５０  （２００７）；およびＡｉｋａｗａ，  Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｕｌｔｉｍｏｄａｌｉｔｙ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ  ａｎｄ  ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ａｏｒｔｉｃ  ｖａｌｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１５，  ３７７−３８６  （２００７））。動物に、１５０μｌのＯｓｔｅｏＳｅｎｓｅ  ６８０および１５０μｌのＰｒｏＳｅｎｓｅ  ７５０を、安楽死の２４時間前に尾静脈注射を介して与えた。切開の後、大動脈を、Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＬＩ−ＣＯＲ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｌｉｎｃｏｌｎ，  ＮＥ）を使用してエキソビボ近赤外線蛍光反射画像化に供し、統合したシグナル強度を、ソフトウェアバージョン３．０．１６を使用して、目的の領域に関して決定した。
【０２６９】
定量的ＲＴ−ＰＣＲ。    急速凍結組織もしくは培養細胞のいずれかに由来する総細胞ＲＮＡを、記載されるようにフェノール／グアニジン法によって抽出した（Ｃｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉ，  Ｐ．  ＆  Ｓａｃｃｈｉ，  Ｎ．  Ｓｉｎｇｌｅ−ｓｔｅｐ  ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  ＲＮＡ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  ａｃｉｄ  ｇｕａｎｉｄｉｎｉｕｍ  ｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ−ｐｈｅｎｏｌ−ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １６２，  １５６−１５９  （１９８７））。ｃＤＮＡを、モロニーマウス白血病ウイルス逆転写酵素（Ｐｒｏｍｅｇａ，  Ｍａｄｉｓｏｎ，  ＷＩ，  ＵＳＡ）を使用して合成した。定量的ＰＣＲを、表４に提供されるプライマー配列を使用して行った。
【０２７０】
【表４】
2014504604.tif 000037
【０２７１】
反応性酸素種およびＮＡＤＰＨオキシダーゼ活性の測定。    ９６ウェル様式で蒔いた細胞を、化合物１３、ＡＬＫ３−Ｆｃ、もしくはビヒクルで３０分間にわたって前処理し、続いて、６時間の飢餓の後、酸化ＬＤＬ、ＢＭＰ２、もしくはビヒクルで２０時間にわたって処理した。クロロメチル  ２’，７’−ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート（ＤＣＦ，２μｍ）でＨ２Ｏ２生成を、およびルシゲニンでＮＡＤＰＨオキシダーゼ活性を、以前に記載されるように測定した（Ｉｃｈｉｎｏｓｅ，  Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ３  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ．  Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ  １００，  １３０−１３９  （２００７）；  Ｓｏｒｅｓｃｕ，  Ｇ．Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｏｎｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４  ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｉｎ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｙ  ｓｈｅａｒ  ｓｔｒｅｓｓ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｂｙ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ａ  ｎｏｘ１−ｂａｓｅｄ  ＮＡＤＰＨ  ｏｘｉｄａｓｅ．  Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ  ９５，  ７７３−７７９  （２００４）；およびＡｂｉｄ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｓｐｏｋｅｓ，  Ｋ．Ｃ．，  Ｓｈｉｈ，  Ｓ．Ｃ．  ＆  Ａｉｒｄ，  Ｗ．Ｃ．  ＮＡＤＰＨ  ｏｘｉｄａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８２，  ３５３７３−３５３８５  （２００７））。
【０２７２】
組織学および免疫組織化学。    大動脈を、直ぐに包埋し、最適切断温度の媒体を使用して低温保存する（Ｓａｋｕｒａ  Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ，  Ｚｏｅｔｅｒｗｏｕｄｅ，  Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）か、またはパラホルムアルデヒド中で固定し、パラフィン包埋するかいずれかを行った。石灰化の存在は、アリザリンレッドもしくはフォンコッサで組織切片を染色することによって決定した。組織切片における脂質蓄積は、オイルレッドＯで染色することによって可視化した。肝臓切片を、パラホルムアルデヒド固定組織から調製し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。
【０２７３】
免疫蛍光については、凍結切片を、冷メタノール中で後固定し、ｐ−ＳＭＡＤ１／５／８に対して特異的なポリクローナル抗体（１：１００，  Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，  Ｄａｎｖｅｒｓ，  ＭＡ）もしくはＭＡＣ２に対して特異的なポリクローナル抗体（１：１００，  Ｃｅｄａｒｌａｎｅ，  Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，  ＯＮ）とともにインキュベートし、続いて、それぞれ、ＦＩＴＣ標識ヤギ抗ウサギＩｇＧもしくはローダミンヤギ抗ラットＩｇＧ（ともに、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，  ＰＡ）とともにインキュベートした。
【０２７４】
血清分析。    トリグリセリド、総コレステロール、白血球数、ヘマトクリット、ヘモグロビン、および血小板を、ＨｅｍａＴｒｕｅＴＭ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｈｅｓｋａ  ＡＧ，  Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用して分析した。尿素窒素、グルコース、アルカリホスファターゼ、総タンパク質、アラニントランスアミナーゼおよびクレアチニンを、Ｓｐｏｔｃｈｅｍ  ＥＺ  ＳＰ−４４３０  ＰＯＣＴ分析器（Ａｒｋｒａｙ，  Ｉｎｃ．，  Ｋｙｏｔｏ，  Ｊａｐａｎ）を使用して決定した。ＨＤＬレベルおよびＬＤＬレベルを、蛍光定量化キット（Ｋ６１３−１００，  Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ，  Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，  ＣＡ）を使用して決定した。
【０２７５】
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ活性。    酵素活性を、市販のアッセイキット（ＣＳ１０９０  ＨＭＧ−ＣｏＡ  Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ  Ｋｉｔ，  Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）を使用して定量化した。
【０２７６】
統計分析。    統計分析を、ＳＰＳＳ  １４．０  Ｄａｔａ  ｐａｃｋａｇｅ  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）（ＳＰＳＳ，  Ｃｈｉｃａｇｏ，  ＩＬ）およびＧｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５．０２（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，  Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，  ＣＡ）を使用して行った。データを、平均値±ＳＥＭとして報告する。サンプルを、例えば、スチューデントｔ検定によって比較した。ｐ≦０．０５は、統計的に有意であるとみなした。
【０２７７】
組織培養。    肝癌Ｇ２（ＨｅｐＧ２）細胞およびヒト大動脈内皮細胞（ＨＡＥＣ）を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ｍａｎａｓｓａｓ，  ＶＡ）から購入した。ＨｅｐＧ２細胞を、１０％  ウシ胎仔血清、１００単位／ｍｌのペニシリン、０．１ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシンおよびグルタミンを補充したイーグルの最少必須培地（ＥＭＥＭ）中で維持した。ＨＡＥＣを、ＥＢＭ２ブレットキット（Ｌｏｎｚａ，  Ｂａｓｅｌ，  Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を補充した内皮細胞基礎培地（ＥＢＭ  ２）中で培養した。実験のために、細胞を、６ウェルもしくは１２ウェルのプレート（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ，  Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，  ＮＪ）中に、５ｍＬ培地あたり０．５×１０６細胞の濃度で播種した。ＨＡＥＣを、全ての実験に関して、０．１％  ＦＢＳを有し、さらなる増殖因子を含まないＥＢＭ  ２中で維持した。ＨｅｐＧ２細胞を、０．１％  ＦＢＳを富化したＥＭＥＭ中でインキュベートする前に該細胞が７０％  コンフルエンスになるまで増殖させた。０．５％  ウシ血清アルブミンを含むＥＭＥＭ中でインキュベートしたＨｅｐＧ２の上清において、市販のＨｕｍａｎ  ＡｐｏＢ−１００  ＥＬＩＳＡキット（Ｍａｂｔｅｃｈ  ＡＢ，  Ｎａｃｋａ  Ｓｔｒａｎｄ，  Ｓｗｅｄｅｎ）を使用してＡｐｏＢ−１００測定を行った。ＢＭＰ２タンパク質測定を、０．１％  ＦＢＳを含むＥＢＭ２中でインキュベートしたＨＡＥＣからの上清において、ＢＭＰ２  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して行った。
【０２７８】
（実施例２．アテローム疾患および血管石灰化疾患のマウスモデルの樹立）
本発明者らの目的は、ＢＭＰ阻害が、アテローム性動脈硬化症を予防するか、もしくはその進行を制限するための効果的な戦略であり得るという潜在的概念実証を提供するために、（ｉ）アテローム疾患負荷、および（ｉｉ）アテローム性動脈硬化症の受容された動物モデルにおける血管石灰化の発生に対する薬理学的ＢＭＰ阻害の効果を実証することである。
【０２７９】
ＢＭＰは、シグナル伝達タンパク質のトランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）ファミリーのサブセットを形成する多機能タンパク質リガンドである（Ｆｅｎｇ，  Ｘ．Ｈ．  ＆  Ｄｅｒｙｎｃｋ，  Ｒ．，  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  ２１，  ６５９−６９３  （２００５））。ＢＭＰ（これは、本来これらが異所性骨形成を誘導する能力によって同定された）は、原腸形成、発生的パターン形成、および器官形成において広い役割を果たす。成体器官においては、ＢＭＰシグナルは、主に、傷害修復および炎症を媒介するように働く。異常なＢＭＰシグナル伝達は、おそらく、修復もしくは炎症応答の不適切な活性化を介して、多くの後天性疾患に関与し得る。具体的には、ＢＭＰシグナルは、アテローム性動脈硬化症に関与すると提唱された。なぜなら、ＢＭＰおよびＢＭＰ誘導性遺伝子生成物のうちの多く（これらは、マトリクスリモデリングに影響を及ぼす）は、初期のアテローム硬化性病変において過剰発現され、プラーク形成および進行を促進し得るからである（Ｂｏｓｔｒｏｍ，  Ｋ．  ＆  Ｄｅｍｅｒ，  Ｌ．Ｌ．，  Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｅｕｋａｒｙｏｔ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒ  １０，  １５１−１５８  （２０００）；  Ｂｏｓｔｒｏｍ，  Ｋ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ９１，  １８００−１８０９  （１９９３）；  Ｔｉｎｔｕｔ，  Ｙ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０８，  ２５０５−２５１０  （２００３））。時間を経ると、ＢＭＰシグナルはまた、常在するかもしくは循環している前駆体を誘導して、骨の細胞（骨芽細胞および軟骨芽細胞が挙げられる）を形成し得、血管の石灰化を引き起こしうる（Ｔｉｎｔｕｔ，  Ｙ．，  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，前出）。心血管事象および死亡のリスクが増大することに加えて、重度の石灰化血管疾患は、上記疾患が、身体が血管形成術もしくはバイパス手術によって冠動脈への適切な循環を回復させる能力に干渉しうるという点で、特に問題である。これらの研究において、本発明者らは、アテローム硬化性病変および石灰化病変の進行に寄与するシグナルが、それらの形成の間に遮断されうる場合、アテローム硬化性病変および石灰化病変が、改善もしくは予防され得るかを調査した。この報告において記載される原理実証実験は、アテローム疾患の受容された動物モデルにおけるＢＭＰシグナル伝達の新規な薬理学的インヒビターの効果を試験した。
【０２８０】
本発明者らは、高脂肪食を８週齢で開始したＬＤＬＲ−／−マウスにおいて、１６〜２０週間以内に、顕著なアテローム病変および血管石灰化病変を動脈ツリー（大動脈およびその主要な分枝血管を含む）全体に発生させることを観察した（図１２）。高脂肪食を与えた場合、低密度リポタンパク質受容体欠損（ＬＤＬｒ−／−）マウスは、遺伝的に高いコレステロールレベルになりやすく、結果的に、アテローム硬化性病変および石灰化血管病変を発生し、これは、高コレステロールおよび高脂肪食でのチャレンジ後わずか数週間の様式で起こる（Ａｉｋａｗａ，  Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１６，  ２８４１−２８５０  （２００７）；  Ａｉｋａｗａ，  Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１５，  ３７７−３８６  （２００７）；  Ｏｈｓｈｉｍａ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  ５０，  ６１２−６１７  （２００９）；  Ｉｓｏｂｅ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  ４７，  １４９７−１５０５  （２００６））。アテローム疾患および血管石灰化疾患の程度を定量化および評価するために、本発明者らは、外植血管組織サンプルに対して伝統的な免疫化学技術（脂質沈着に関してはオイルレッドＯ染色、および石灰化の証拠のためにフォンコッサミネラル染色）を使用した。さらに、本発明者らは、骨原性もしくは骨形成活性の存在（Ｏｓｔｅｏｓｅｎｓｅ（血管関連骨芽細胞に結合するビスホスホネートプローブ））、およびアテロームと関連する血管炎症（Ｐｒｏｓｅｎｓｅ（血管関連マクロファージを結合するカテプシン基質））を検出することが確認されたいくつかの新規な分子画像化プローブを使用した。そのうちのいずれかの強度は、以前に記載されるように、近赤外線蛍光反射画像化によって定量し得る（Ａｉｋａｗａ，  Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）および（２００６）前出）。
【０２８１】
以前に記載されたように、これらのマウスは、大動脈の小弯における内膜の病変（図１２Ａ）の肉眼で見える証拠を有し、さらに、フォンコッサミネラル染色によって検出される場合に血管中膜の石灰化を発生させた（図１２Ｂ）。これらの所見は、高脂肪食を与えたＬＤＬｒ−／−マウスにおいて１００％浸透度で見いだされ、通常の食餌を与えたコントロール変異マウスにおいても、高脂肪食を与えた野生型（Ｃ５７ＢＬ／６）コントロールマウスにおいても見いだされなかった。このプロトコルは、高コレステロール血症およびアテローム発生の食餌の状況における、アテローム性動脈硬化症およびアテローム性動脈硬化症関連血管石灰化の頑健なモデルを生じた。
【０２８２】
（実施例３．ＢＭＰインヒビターは、血管石灰化の発生およびアテローム疾患と関連するマクロファージ媒介性炎症を阻害しうる）
ＬＤＬｒ−／−マウスは、高脂肪食の開始後に、ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物（化合物１３，２．５ｍｇ／ｋｇ／ｄ  腹腔内）もしくはビヒクル（生理食塩水）で、２０週間にわたって処置した。マウスに、Ｏｓｔｅｏｓｅｎｓｅ（このプローブの骨芽細胞結合を介して、骨形成活性の部位を標識するため）およびＰｒｏｓｅｎｓｅ（マクロファージ媒介性炎症の部位を標識するため）を注射した。大動脈を外植し、蛍光反射画像化（ＬＩＣＯＲ  Ｏｄｙｓｓｅｙ  ｉｍａｇｅｒ）に供した。７００ｎｍ  チャネル（Ｏｓｔｅｏｓｅｎｓｅ）における蛍光から、ビヒクル処置マウスと比較して、上記ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物処置の大動脈において低下した蛍光が明らかになった（データは示さず）。マクロファージおよび骨芽細胞の染色における有意差は、処置マウスおよびコントロールマウスのコホート（各々ｎ＝１０）における血管ツリー全体で観察された。１０匹のビヒクル処置マウスおよび１０匹の薬物処置マウスのコホートの試験において、上記Ｏｓｔｅｏｓｅｎｓｅシグナルの定量から、動脈ツリー全体で骨芽細胞活性の顕著な減衰が明らかになり（データは示さず）、特に、強いアテローム硬化性リモデリングの部位（大動脈弁および起始部、大動脈弓、頸動脈分岐点、ならびに腎上の（ｓｕｐｒａｒｅｎａｌ）分岐点が挙げられる）であることが公知の重要な領域において明らかになった。上記ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物処置大動脈は、７００ｎｍでの骨芽細胞プローブ強度に基づいて、骨形成の重度に低下した証拠を有した。８００ｎｍチャネル（Ｐｒｏｓｅｎｓｅ）での蛍光の試験から、ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物処置マウス  対  ビヒクル処置マウスの血管における低下したマクロファージ活性が明らかになった（データは示さず）。このことは、上記ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物処置大動脈が、８００ｎｍにおけるマクロファージプローブ強度に基づいて、マクロファージ活性の重度に低下した証拠を有したことを示す。上記低下したマクロファージ活性は、大動脈起始部、大動脈弓、および頸動脈分岐点において定量化した場合、薬物処置に伴って有意に低下した（図１３）。これらの結果は、上記ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物での上記ＢＭＰシグナル伝達経路の低分子薬理学的阻害が、骨原性活性の低下（血管石灰化に必要とされる）および血管炎症の低下をもたらすことを示し、これらの両方が、全体のアテローム硬化性負荷に比例して変動することが示された（Ａｉｋａｗａ，  Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１６，  ２８４１−２８５０  （２００７））。これらの結果は、ＢＭＰシグナル伝達がアテローム形成のプロセスを調節することを示唆した。
【０２８３】
ＢＭＰシグナル伝達が、アテローム形成に対して直接的な影響を有することを確認するために、２０週間後に上記ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物処置ＬＤＬｒ−／−マウスおよびビヒクル処置ＬＤＬｒ−／−マウスから外植した大動脈を、オイルレッドＯ染色に供して、脂質が豊富なプラークに印を付けた。大動脈を固定し、脂質特異的染色オイルレッドＯで標識した。全てのアテローム負荷は、この技術によって、上記ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物処置マウスと比較した場合、一致してビヒクル処置マウスにおいてより大きいことが観察された（各々ｎ＝３，代表的データを示す）。オイルレッドＯ染色したアテローム病変のサイズおよび程度は、一致して、上記ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物処置マウスよりビヒクル処置マウスにおいてより重度であることが見いだされた（データは示さず）。このことは、低下した骨芽細胞およびマクロファージ活性（ＯｓｔｅｏｓｅｎｓｅおよびＰｒｏｓｅｎｓｅデータに基づく）が、低下したプラーク形成を示すという解釈を裏付けた。これらのデータは、ＢＭＰ阻害が、アテローム自体の形成を低下させるという解釈の確証となる。
【０２８４】
（実施例４．ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物が、アテローム病変形成と関連するＢＭＰシグナル伝達活性（活性化ＳＭＡＤ１／５／８）を阻害することの検証）
ＬＤＬｒ−／−マウスを、８週齢において高コレステロール血症の食餌を開始し、ビヒクル（生理食塩水）もしくはＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物（化合物１３，２．５ｍｇ／ｋｇ／ｄ  腹腔内）のいずれかでさらに８週間にわたって処置した。大動脈を採取し、固定し、次いで、ＢＭＰエフェクター分子であるリン酸化ＳＭＡＤ１／５／８に対して高感度な抗体で染色し、ＤＡＰＩ核染色で対比染色した。高脂肪食に供されている６〜８週間以内に、ＬＤＲ−／−マウスは、伝統的な組織化学染色技術に基づいて大動脈起始部の内膜において脂肪性の病変を発生させた（データは示さず）。上記ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物処置動物は、ビヒクル処置動物と比較して、低下した内膜アテローム形成を有した。アテローム形成は、ビヒクル処置動物におけるリン酸化ＳＭＡＤ１／５／８の顕著な染色と関連していた。これは、ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物処置動物において大いに低下していた。ＳＭＡＤ１／５／８のリン酸化形態（上記ＢＭＰシグナル伝達経路によって補充されるエフェクター分子）を免疫蛍光染色に供した場合、ビヒクル処置マウスの大動脈から、核局在した活性化ＳＭＡＤ１／５／８の幾分典型的な強い核染色が明らかになった（データは示さず）（Ｆｅｎｇ，  Ｘ．Ｈ．  ＆  Ｄｅｒｙｎｃｋ，  Ｒ．，  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  ２１，  ６５９−６９３  （２００５））。従って、脂質が豊富なプラークの細胞成分（主にマクロファージ由来の泡沫細胞）は、上記ＢＭＰシグナル伝達経路の強い活性化の証拠を有した。対照的に、上記ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物処置マウスにおいて見いだされる脂質プラークは、ビヒクル処置マウスのものと比較して、サイズおよび程度が低下し、ＳＭＡＤ１／５／８のリン酸化形態の染色の強度も低下していた（データは示さず）。従って、高コレステロール血症マウスは、アテローム病変の細胞成分において強いＢＭＰシグナル伝達経路活性化の証拠を有した。そして上記ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物での高コレステロール血症マウスの処置は、これらの病変における上記ＢＭＰシグナル伝達経路の活性化を低下させた。
【０２８５】
（実施例５．可溶性組換えＢＭＰ受容体外部ドメインは、アテローム病変形成と関連するＢＭＰシグナル伝達活性（活性化ＳＭＡＤ１／５／８）を阻害し、マクロファージ媒介性炎症も阻害することの実証）
炎症活性（アテローム硬化性プラーク負荷の代替）を、７００ｎＭでのＰｒｏｓｅｎｓｅ（蛍光体−カテプシン基質）の近ＩＲ蛍光によって評価した。１０匹の個々のマウスを、各処置群において使用した。Ｐｒｏｓｅｎｓｅ取り込みは、成体（８週齢）ＬＤＬＲ−／−  Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいてアテローム生成性（Ｐａｉｇｅｎ）食餌の開始後６週間にわたって、ビヒクルと比較して、特に、大動脈起始部および大動脈弓において、ＡＬＫ３−Ｆｃ（２ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＱＯＤ）もしくはＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物（化合物１３，２．５ｍｇ  ＩＰ  ＱＤ）での処置によって有意に低下した（データは示さず）。この結果は、マクロファージ媒介性炎症が、組換えもしくは低分子ＢＭＰインヒビターによるアテローム生成性動物の中心動脈血管床において定性的に低下することを示す。
【０２８６】
炎症活性（アテローム硬化性プラーク負荷の代替）を、７００ｎＭでのＰｒｏｓｅｎｓｅ（蛍光体−カテプシン基質）の近ＩＲ蛍光の統合した強度によって評価した。Ｐｒｏｓｅｎｓｅ統合強度は、成体（８週齢）ＬＤＬＲ−／−  Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるアテローム生成性（Ｐａｉｇｅｎ）食餌の開始後６週間にわたって、ビヒクルに対して、特に、大動脈弁、大動脈起始部、大動脈弓、および大動脈の腎上の領域において、ＡＬＫ３−Ｆｃ（２ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＱＯＤ）もしくはＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物（化合物１３，  ２．５ｍｇ  ＩＰ  ＱＤ）での処置によって有意に阻害された。図１４は、マクロファージ媒介性炎症が、組換えもしくは低分子ＢＭＰインヒビターによって、アテローム形成性動物の中心動脈血管床において定量的に低下することを示す。各バーは、１群あたり１０匹の個々のマウスから得られた組織で得られる測定の平均値±ＳＥＭを表し、有意差は、示されたビヒクル処置動物に対するものである。
【０２８７】
ＬＤＬＲ−／−欠損マウスを、８週齢においてアテローム生成性食餌（Ｐａｉｇｅｎ）を開始し、ビヒクル、ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物（化合物１３，２．５ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  毎日）もしくはＡＬＫ３−Ｆｃ（２ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  １日おき）のいずれかを投与した。各処置群は、合計１０匹のマウスからなった。アテローム生成性食餌および薬物もしくはビヒクルでの処置の４週間後、上記動物を屠殺した。大動脈弓の前面切片を切り出し、マクロファージマーカー（ＭＡＣ２）について染色し、ＤＡＰＩで対比染色した。上記ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物処置マウスは、全体として低下した病変形成を示し、ＭＡＣ２に対する染色を低下させた。ＡＬＫ３−Ｆｃ処置マウスはまた、顕著に低下した病変形成およびＭＡＣ２染色を示した。この結果は、ＢＭＰインヒビターが、アテローム生成性マウスにおける初期のアテローム病変の発生を効率的に制限し得ることを示す。
【０２８８】
ＬＤＬＲ−／−欠損マウスに、８週齢においてアテローム生成性食餌（Ｐａｉｇｅｎ）を開始し、ビヒクル、ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物（化合物１３，  ２．５ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  毎日）もしくはＡＬＫ３−Ｆｃ（０．２ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  １日おき）のいずれかを投与した。アテローム生成性食餌および処置の６週間後、上記動物を屠殺した。大動脈弓の前面切片を切り出し、リン酸化ＳＭＡＤ１／５／８について染色し、ＤＡＰＩで対比染色した。ビヒクル処置マウスは、内皮細胞集団、平滑筋細胞集団、ならびにＭＡＣ２＋泡沫細胞集団におけるＳＭＡＤ１／５／８の活性化と関連する初期のアテローム病変形成を示した（データは示さず）。二次Ａｂのみで染色したコントロール切片は、内側の弾性層において弱いバックグラウンド蛍光を示した（データは示さず）。上記ＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物処置マウスは、全体として低下した病変形成を示し、リン酸化ＳＭＡＤ１／５／８の染色を低下させた（データは示さず）。ＡＬＫ３−Ｆｃ処置マウスはまた、顕著に低下した病変形成およびリン酸化ＳＭＡＤ１／５／８染色を示した（データは示さず）。この結果は、ＢＭＰインヒビター処置が、アテローム生成性マウスの血管系においてＢＭＰ−ＳＭＡＤシグナル伝達の活性化を効率的に阻害することを示す。
【０２８９】
（実施例６．骨形性タンパク質シグナル伝達は、マトリクスＧＬＡタンパク質欠損のマウスモデルにおいて血管石灰化に必要とされる）
マトリクスＧＬＡタンパク質（ＭＧＰ）は、カルシウムイオンの隔離によって血管石灰化を予防すると考えられているミネラル結合細胞外マトリクスタンパク質である。しかし、ＭＧＰはまた、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達を阻害する。ＭＧＰ−／−マウスは、２週間までに重度の動脈の中膜石灰化を示し、大動脈瘤および破裂によって６週間までに死亡する。本発明者らは、ＭＧＰが、ＢＭＰシグナル伝達に対するその効果を介して血管石灰化を予防するかどうかを試験した。
【０２９０】
ＭＧＰ−／−マウスを、１〜２８日目まで、ビヒクルもしくは低分子ＢＭＰタイプＩ受容体インヒビター化合物１３（２．５ｍｇ／ｋｇ  毎日１回  ＩＰ）のいずれかで処置した。化合物１３を、これらの実験においてＢＭＰインヒビター陽性コントロール化合物として使用する。ホスホ（ｐｈｏｓｐｈｏ）−Ｓｍａｄ  １／５／８（Ｐ−Ｓｍａｄ）免疫組織化学、ＢＭＰシグナル伝達のマーカー、およびカルシウムのアリザリンレッド染色のために全大動脈を採取した。大動脈の骨生成活性を、蛍光ビスホスホネート画像化プローブの取り込みによって、エキソビボで可視化した。ＭＧＰ−／−マウスをまた、ビヒクルもしくは化合物１３で処置して、ＢＭＰシグナル伝達の阻害がＫａｐｌａｎ−ＭｅｉｅｒおよびＣｏｘ回帰分析を使用して、生存に影響を及ぼしうるかどうかを確認した。
【０２９１】
ＭＧＰ−／−大動脈は、野生型マウスと比較して、増大したＰ−Ｓｍａｄを示した（データは示さず）。ＭＧＰ−／−マウスの化合物１３による処置は、大動脈Ｐ−Ｓｍａｄレベルを低下させ、それは、組織カルシウムレベルの低下と関連した（図１５Ｃ）。同様に、ＭＧＰ−／−マウスのＡＬＫ３−Ｆｃによる処置はまた、大動脈において有意に低下した組織石灰化を示した（図１５Ｄ）。ＭＧＰ−／−マウスにおけるＢＭＰシグナル伝達の薬理学的阻害は、ビヒクル処置コントロールと比較して、大動脈骨生成活性の８１％低下を生じた（各群においてｎ＝６；正規化平均強度±ＳＥＭ，  ０．１９±０．０５  対  １．０±０．１０，  Ｐ＜０．０００１）（図１６）。類似の低下が、大動脈弓および腹部大動脈において観察された。化合物１３で処置したマウスは、ビヒクル処置コントロールと比較して、改善した生存を示した（各群においてｎ＝１０；  Ｃｏｘハザード比  ０．０４，  ９５％ＣＩ  ０．０１−０．１７，  Ｐ＜０．００１）。
【０２９２】
よって、これらのデータは、ＭＧＰが、主にＢＭＰシグナル伝達に対するその影響を介して、血管石灰化を予防するという結論を裏付ける。薬理学的ＢＭＰ阻害は、ＭＧＰ−／−マウスにおける生存を改善し、ヒトの血管疾患の処置において重要な治療標的を表し得る。
【０２９３】
（実施例７．ＭＧＰ欠損が血管石灰化を誘導する主な機構としての増強されたＢＭＰシグナル伝達）
ＭＧＰ−／−マウスを、１〜２８日目まで、ビヒクルもしくは化合物１３（２．５ｍｇ／ｋｇ／日で）のいずれかの腹腔内（ＩＰ）注射で処置した。２８日目に、組織学およびＲＮＡ単離のために、大動脈を採取した。Ｓｍａｄ  １／５／８リン酸化についての免疫組織化学（ＩＨＣ）から、化合物１３による処置はＢＭＰシグナル伝達を低下させることが確認された（図１７Ａ−Ｂ）。組織カルシウムについてのアリザリンレッド染色（図１７Ｃ−Ｄ）から、化合物１３は血管石灰化を低下させることが明らかになった。大動脈カルシウムをさらに定量化するために、ヒドロキシアパタイトに特異的に結合する蛍光ビスホスホネート剤（ＯｓｔｅｏＳｅｎｓｅ  ６８０ｎｍ，  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用した。（Ａｉｋａｗａ  Ｅ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｕｌｔｉｍｏｄａｌｉｔｙ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ  ａｎｄ  ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ａｏｒｔｉｃ  ｖａｌｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．  ２００７；１１５（３）：３７７−３８６およびＺａｈｅｅｒ  Ａ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｎｅａｒ−ｉｎｆｒａｒｅｄ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．  ２００１；１９（１２）：１１４８−１１５４）。ビヒクルもしくは化合物１３で処置した２７日齢のＭＧＰ−／−マウスに、尾静脈を介してＯｓｔｅｏＳｅｎｓｅを与え、２４時間後に、画像化のために大動脈を採取した。化合物１３で処置したＭＧＰ−／−マウスは、動脈石灰化において顕著な低下を示した（図１７Ｅ）。ＭＧＰ−／−マウスの化合物１３による処置で認められたＢＭＰシグナル伝達および大動脈石灰化における低下は、ＢＭＰ依存性骨原性分化の重要なメディエーターとしてのＷｎｔシグナル伝達経路を関係させる、大動脈のＷｎｔ３ａ遺伝子発現における５倍超の低下と関連した（Ｐ＜０．０１）。
【０２９４】
ＭＧＰ−／−マウスは、Ｓｍａｄ  １／５／８リン酸化の免疫組織学的な証拠（図１７Ａ）と関連して、２週齢までに組織学的に明らかな大動脈石灰化を発生させる（図１７Ｃ）のに対して、野生型マウスは、動脈石灰化を示さず、Ｓｍａｄ  １／５／８リン酸化の顕著に低いレベルを有する（データは示さず）。Ｗｎｔ３ａ遺伝子発現は、年齢を適合させたコントロールのものより、４週齢のＭＧＰ−／−マウスの大動脈において２倍高かった（Ｐ＝０．０２）。Ｗｎｔ３ａ発現レベルは、血管壁石灰化の程度と相関した。血管石灰化は、年齢と共に進行し、全てのＭＧＰ−／−マウスは、生後６〜８週間で死亡した。（Ｌｕｏ，  Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｒｔｅｒｉｅｓ  ａｎｄ  ｃａｒｔｉｌａｇｅ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｌａｃｋｉｎｇ  ｍａｔｒｉｘ  ＧＬＡ  ｐｒｏｔｅｉｎ．    Ｎａｔｕｒｅ．    １９９７；  ３８６（６６２０）：７８−８１）。
【０２９５】
（実施例８．ＢＭＰシグナル伝達の薬理学的阻害は、ＭＧＰ欠損における大動脈石灰化を低下させる）
ＭＧＰ−／−マウスを、生後１日目に開始して、ビヒクル（ｎ＝７）、化合物１３（２．５ｍｇ／ｋｇ／日  ＩＰ，ｎ＝６）、もしくはＡＬＫ３−Ｆｃ（２ｍｇ／ｋｇ  ＱＯＤ  ＩＰ，ｎ＝４）で処置した。２７日目に、マウスに尾静脈を介して、組織石灰化を標的とする蛍光ビスホスホネートプローブ（Ｏｓｔｅｏｓｅｎｓｅ  ６８０ｎｍ，  ２ｎｍｏｌ／マウス）を注射した。２４時間後、大動脈を採取し、画像化した。結果を図１８に示す。ここで左側パネルは、ビヒクル処置マウス、化合物１３で処置したマウスおよびＡｌｋ３−Ｆｃで処置したマウスの代表的な大動脈を示す。これらの結果は、化合物１３もしくはＡｌｋ３−Ｆｃのいずれかでの処置が血管石灰化を低下させることを示す。右側パネルは、大動脈からの蛍光強度を定量化したもので、これにより、薬理学的ＢＭＰ阻害に伴って血管石灰化の８０％低下が実証される。ここで＊は、ビヒクル処置と比較してＰ＜０．０５を示す。
【０２９６】
（実施例９．ＢＭＰシグナル伝達の薬理学的阻害は、ＭＧＰ欠損における生存を改善する）
２０匹のＭＧＰ−／−マウスを、生後１日目に開始して、ビヒクル（ｎ＝１０）もしくは化合物１３（２．５ｍｇ／ｋｇ／日  ＩＰ，ｎ＝１０）のいずれかで処置し、生存について追跡した。Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ生存曲線を、図１９に示す。化合物１３での処置は、Ｃｏｘハザード比  ０．０４で生存を改善した（対数順位  Ｐ＝０．００２）。
【０２９７】
本明細書に引用される全ての刊行物および特許は、その全容が参照によって本明細書に援用される。
【０２９８】
当業者は、本明細書に記載された本発明の特定の実施形態の多くの等価物を認識し、または、慣用されている範囲内の実験法を用いてそれを確かめることが可能である。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲に含まれることが意図される。
【図４】
2014504604.tif 000042
【図５】
2014504604.tif 000043
【図６】
2014504604.tif 000044
【図７】
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【図８】
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【図１０】
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【図１１】
2014504604.tif 000048
【図１３】
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【図１４】
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【図１６】
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【図２０】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図９】
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【図１２】
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【図１５】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【手続補正書】
【提出日】平成25年9月20日(2013.9.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2014504604000001.app
【国際調査報告】
2014504604.tif 000062
2014504604.tif 000063
2014504604.tif 000064