(57)【要約】ワクチンとして有用な薬剤組成物が記載され、その組成物は、あるタイプの癌と質的もしくは量的に関連がある精製された表面タンパク質もしくは分泌タンパク質、少なくとも一つのインターロイキン（ＩＬ）、および少なくとも一つのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）を含み、この精製された表面タンパク質もしくは分泌タンパク質は、組成物を投与された個体において免疫応答を誘発するのに十分な量にて提供される。このような組成物は、癌を有する個体を治療するため、および同個体において免疫療法応答を誘発するための方法において使用され得る。
2014502636.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）あるタイプの癌と質的もしくは量的に関連がある精製された表面タンパク質もしくは分泌タンパク質；（ｉｉ）少なくとも一つのインターロイキン（ＩＬ）；および（ｉｉｉ）少なくとも一つのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）を含む組成物であって、該タンパク質が、該組成物を投与された個体において免疫応答を誘発するのに十分な量で提供される、組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物であって、前記表面タンパク質もしくは前記分泌タンパク質が、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）を含む、組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の組成物であって、組成物１００μＬ当たり、ＰＳＡ約５０μｇ、ＣＥＡ約２μｇ、ＣＡ  １２５約１０００ＩＵ、ＩＬ−２約２０，０００単位、およびＧＭ−ＣＳＦ約１６．７μｇを含む、組成物。
【請求項４】
請求項１に記載の組成物であって、前記表面タンパク質もしくは前記分泌タンパク質が、ＣＡ  １２５もしくはＣＡ１５−３、またはそれらの組み合わせを含む、組成物。
【請求項５】
請求項１に記載の組成物であって、前記表面タンパク質もしくは前記分泌タンパク質が、前立腺酸性フォスフォターゼ（ＰＡＰ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＡ  ２７．２９、αフェトプロテイン（ＡＦＰ）、エストロゲン受容体（ＥＲ）、プロゲステロン受容体（ＰｇＲ）、ヒト上皮成長因子受容体２（Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ）、血漿中脂質結合シアル酸（ｌｉｐｉｄ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｓｉａｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｉｎ  ｐｌａｓｍａ）（ＬＡＳＡ−Ｐ）、ＣＡ  ７２−４、膀胱腫瘍抗原（ＢＴＡ）、組織ポリペプチド抗原（ＴＰＡ）、神経特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、クロモグラニンＡ、ＣＡ  １９−９、ＣＡ  ５０、カルシトニン、チログロブリン、Ｓ−１００、腫瘍関連抗原９０（ＴＡ−９０）、β−２ミクログロブリン、核マトリックスタンパク質２２（ＮＭＰ２２）、βヒト絨毛性ゴナドトロピン（β−ｈＣＧ）、およびクロモグラニンＡ（ＣｇＡ）から選択される、組成物。
【請求項６】
請求項１に記載の組成物であって、前記ＩＬが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４およびＩＬ−１５から選択される、組成物。
【請求項７】
請求項１に記載の組成物であって、前記ＣＳＦが、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦおよびＭ−ＣＳＦから選択される、組成物。
【請求項８】
請求項１に記載の組成物であって、ＩＬ−２およびＧＭ−ＣＳＦを含む、組成物。
【請求項９】
請求項１に記載の組成物であって、前記タイプの癌と関連がある少なくとも一つの付加的な精製されたタンパク質をさらに含む、組成物。
【請求項１０】
請求項１に記載の組成物であって、前記組成物１００μＬ当たり前記タンパク質約１μｇから約１０００μｇを含む、組成物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の組成物であって、前記組成物１００μＬ当たり前記タンパク質約１μｇから約２５０μｇを含む、組成物。
【請求項１２】
請求項９に記載の組成物であって、前記組成物１００μＬ当たり各タンパク質約１μｇから約１０００μｇを含む、組成物。
【請求項１３】
請求項１２に記載の組成物であって、前記組成物１００μＬ当たり前記タンパク質約１μｇから約２５０μｇを含む、組成物。
【請求項１４】
請求項１に記載の組成物であって、組成物１００μＬ当たり、インターロイキン約０．３μｇから約３μｇと、ＣＳＦ約１０μｇから約１００μｇとを含む、組成物。
【請求項１５】
請求項１４に記載の組成物であって、組成物１００μＬ当たり、インターロイキン約０．３μｇから約３μｇと、ＣＳＦ約１５μｇから約２０μｇとを含む、組成物。
【請求項１６】
請求項９に記載の組成物であって、組成物１００μＬ当たり、インターロイキン約０．６μｇから約１．８μｇと、ＣＳＦ約１０μｇから約１００μｇとを含む、組成物。
【請求項１７】
請求項１６に記載の組成物であって、組成物１００μＬ当たり、インターロイキン約０．６μｇから約１．８μｇと、ＣＳＦ約１５μｇから約２０μｇとを含む、組成物。
【請求項１８】
個体を治療するための方法であって、あるタイプの癌を有する個体に対し、治療有効量の請求項１に記載の組成物を投与する工程を含む、方法。
【請求項１９】
個体において免疫療法応答を誘発するための方法であって、あるタイプの癌と診断された個体に対して、治療有効量の請求項１に記載の組成物を投与する工程を含み、組成物が、前記精製された表面タンパク質もしくは分泌タンパク質を、該個体において免疫療法応答を誘発するのに十分な量で含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（本発明の分野）
本発明は、癌を治療するための方法および精製表面タンパク質もしくは精製分泌タンパク質を含む組成物に関する発明である。
【背景技術】
【０００２】
（本発明の背景）
国立癌研究所は、１０００万人以上の米国人が癌の病歴を有すると見積もっている。米国癌協会は、今年、１４０万件以上の新たな癌の診断がなされ、そして５０万人以上の米国人が癌で死亡すると予測した。癌は、合衆国において二番目にありふれた死亡原因であり、これを凌ぐのは心疾患のみである。
【０００３】
この国における様々な形態の癌の罹患率ゆえに、かなりの研究は、診断および治療の新たな方法の開発に集中している。癌のタイプおよびその進行段階に依存して、現在の治療の形態は、典型的に、外科手術、放射線、化学療法および／もしくはホルモン治療を含み得る。
【０００４】
近年、研究の努力はまた、癌ワクチンの開発に集中した。このようなワクチンは、存在している癌を治療する（すなわち、治療ワクチン）か、癌が発症することを予防する（すなわち、予防ワクチン）かのいずれかが意図される。治療ワクチンは、免疫システムを刺激して非癌細胞を損傷させることなく癌細胞を認識および攻撃させることにより、癌を治療するように設計される。予防ワクチンは、健常者に投与されて、彼らの免疫システムを刺激して発癌性ウイルスのような発癌性因子を攻撃させる。
【０００５】
現在、２つのワクチンが、癌につながり得るウイルス感染を予防するとして米国食品医薬品局により認可されている。一つは、いくつかの形態の肝臓癌と関連のあるウイルスであるＢ型肝炎ウイルスの感染を予防するワクチンである；二つ目は、併せて子宮頸癌の症例のうち７０パーセントの原因となる二つのタイプのヒト乳頭腫ウイルスの感染を予防するワクチンである。
【０００６】
癌治療ワクチンの開発における進展は、より遅れていた。癌患者に腫瘍細胞もしくは腫瘍関連抗原をワクチン接種する試みがなされてきた。これらの試みのうちのいくつかは、限定された成果を得た。ワクチンの一種の例は、特許文献１において報告されていて、その特許文献は、乳癌患者に、癌細胞から得られた抽出自己由来もしくは同種異系の乳房腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）の組み合わせを含む組成物をワクチン接種することを記載している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第５，４７８，５５６号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（本発明の要約）
一つの局面において、組成物が提供され、その組成物は、（ｉ）あるタイプの癌に質的もしくは量的に関連がある精製表面タンパク質もしくは精製分泌タンパク質；（ｉｉ）少なくとも一つのインターロイキン（ＩＬ）；および（ｉｉｉ）少なくとも一つのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）を含み、このタンパク質は、組成物を投与された個人において免疫応答を誘導するのに十分な量で提供される。
【０００９】
別の局面において、個人を治療するための方法が提供され、その方法は、あるタイプの癌を有する個人へ、治療有効量の先述の局面の組成物を投与する工程を含む。
【００１０】
別の局面において、個人において免疫療法応答を誘導するための方法が提供され、その方法は、あるタイプの癌であると診断された個人へ、治療有効量の先述の局面（上記）の組成物を投与する工程を含み、この組成物は、個人において免疫療法応答を誘導するのに十分な量で精製表面タンパク質もしくは精製分泌タンパク質を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、参考例１に関する、他の原因のために死亡した患者に対してのＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ全生存曲線である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
（本発明の詳細な説明）
本開示は、癌の治療のために有用な方法および組成物を提供する。それによって、本開示に従うと、あるタイプの癌に悩まされる患者は、その癌のタイプと質的もしくは量的に関連がある精製表面タンパク質もしくは精製分泌タンパク質を含む組成物を、治療有効量で、インターロイキン（ＩＬ）およびコロニー刺激因子（ＣＳＦ）を含むアジュバントと組み合わせて投与される。
【００１３】
本開示は、さらに、インターロイキンおよびコロニー刺激因子を含む生物学的アジュバントと組み合わされる、特定のタイプの癌と質的もしくは量的に関連がある精製表面タンパク質もしくは精製分泌タンパク質を含む癌ワクチン組成物に関する。
【００１４】
作用の任意の一つのメカニズムにより限定されることなく、腫瘍細胞の死を引き起こすこと、腫瘍の成長もしくは再発を抑制すること、腫瘍の退縮および／もしくは転移の抑制を促進すること、無再発生存率および／もしくは全生存率の増加につながること；またはそれらの任意の組み合わせにより、この組成物は作用すると思われる。
【００１５】
特定の実施形態において、このインターロイキンは、インターロイキン２（ＩＬ−２）であり、コロニー刺激因子は、顆粒球マクロファージＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）である。
【００１６】
ワクチンを与えられる患者の免疫応答は、第一のワクチン接種の前に測定可能であり、次いで、第一のワクチン接種の後に、および所望される場合は任意の後続のワクチン接種の後に、免疫応答の程度を決定するために再び測定可能である。免疫応答のレベルは、リンパ球幼若化分析（Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ｂｌａｓｔｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ａｓｓａｙ）（ＬＢＡ）により定量化され得る（本明細書において参考として援用される；Ｅｌｌｉｏｔｔ，Ｒ．ら、Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ３０：２９９−３０４（１９９４）を参照のこと）。この分析においては、単核細胞が、組織培養法において７日間増殖させられる。この単核細胞は、様々な濃度において腫瘍抗原と同時培養される（ｃｏ−ｃｕｌｔｕｒｅｄ）。３Ｈ−チミジンが、終了の少し前に培養物へ加えられる。次いで、増殖指数（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ）が、培養における腫瘍の抗原刺激性の単核細胞（ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌ）の中へ取り込まれた３Ｈ−チミジン吸収量を、（腫瘍抗原とは同時培養されなかった）対照の単核細胞の中へ取り込まれた３Ｈ−チミジン吸収量で割ることにより計算される。
【００１７】
本明細書において使用される場合、「治療有効量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」という熟語は、組織、システム、動物、個体もしくはヒトにおいて、研究者、獣医、医師もしくは他の臨床家により探求されている生物学的もしくは医学的反応を誘発する参照化合物もしくは組成物の量をいい、その生物学的もしくは医学的反応は、以下のもののうちの一つ以上を含む：
（１）疾患の予防；例えば、疾患、状態（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）もしくは障害（ｄｉｓｏｒｄｅｒ）に対する素因を与えられ得るが、まだその疾患の病理もしくは症状を経験もしくは呈示していない個人において、疾患、状態もしくは障害を予防すること；
（２）疾患の抑制；例えば、疾患、状態もしくは障害の病理もしくは症状を経験もしくは呈示している個人において、疾患、状態もしくは障害を抑制すること；および
（３）疾患の寛解；例えば、疾患、状態もしくは障害の病理もしくは症状を経験もしくは呈示している個人において、疾患、状態もしくは障害を寛解すること（すなわち、病理および／もしくは症状を後退させること）、例えば、疾患の重症度を減少させること。
【００１８】
例えば、化合物もしくは組成物の治療有効量は、腫瘍抗原に対する免疫応答を少なくとも５０％増大させる；または循環している腫瘍マーカータンパク質を安定もしくは減少させ、結果として癌の進行を抑制する量として、測定され得る。
【００１９】
本明細書において使用される場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」もしくは「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、（ｉ）上で説明されたように、参照される疾患の状態を寛解、抑制、もしくは予防すること；または（ｉｉ）参照される生物学的効果を誘導すること（例えば、免疫療法的反応の結果、対象の患者が悩まされている疾患を緩和または停止させること）を意味する。より具体的には、治療することは、腫瘍の成長もしくは再発を抑制すること、腫瘍を退縮させること、および／または転移の形成を抑制することを含み得る。
【００２０】
本明細書において使用される場合、「ある（ａ）」もしくは「ある（ａｎ）」もしくは「その（ｔｈｅ）」タンパク質もしくは抗原もしくはアジュバントに対する言及は、一つ以上のタンパク質もしくは抗原もしくはアジュバントをいい得る。
【００２１】
本明細書において使用される場合、癌タイプと「質的もしくは量的に関連がある」表面タンパク質もしくは分泌タンパク質は、典型的に、一以上の特定のタイプの癌の表面上のみに見出されるか、もしくはそれらのみにより分泌されるか、または正常細胞もしくは非癌細胞よりも豊富に、癌細胞の表面上で見出されるか、もしくはそれらにより分泌されるかのいずれかであるタンパク質を意味する。このようなタンパク質はまた、腫瘍マーカータンパク質または腫瘍関連抗原としても公知であり、そしてこれらの用語は、本出願内で相互交換可能に使用される。これらのタンパク質は、腫瘍細胞調製物から精製され得るか、当業者にとって公知の方法により合成され得る。さらに、これらのタンパク質は、他の非腫瘍関連タンパク質との混合物として調製され得るか、またはそれらが唯一のタンパク質成分である調製物として調製され得る。
【００２２】
このようなタンパク質または抗原、およびそれらと関連がある癌の例は、以下の表１において列挙されるものが含まれる。
【００２３】
【表１Ａ】
2014502636.tif 000003
【００２４】
【表１Ｂ】
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この組成物は、単離および精製がされた自己由来、同系異種または組換型の表面腫瘍マーカータンパク質もしくは分泌腫瘍マーカータンパク質、またはそれらの組み合わせから作られ得る。これらの組成物は、低用量のインターロイキンおよびＣＳＦと組み合わされて投与された場合、癌ワクチンとして有用であることが見出されている。
【００２５】
一つの実施形態において、この組成物は、ＩＬ−２およびＧＭ−ＣＳＦを含む。
【００２６】
治療されるべき特定のタイプの癌に対する単離および精製がされた抗原の使用は、いっそうの特異性を提供し、先行技術のワクチン組成物において存在した変動性を除去する。その上さらに、本ワクチンの調製は、患者由来の組織を必要とせず、それゆえ診察時または手術後のあらゆる患者が、治療ワクチンの候補者になる。しかしながら、所望される場合、患者由来の組織は、本ワクチンを作るために使用され得る。単離および精製がされた抗原の使用はまた、ワクチン組成物が大量生産されることを可能にする。
【００２７】
本明細書において使用される場合、「精製がされた」という用語は、参照される存在物が総重量の約５０％よりも高い純度を有することを意味する。すなわち、特定の実施形態において、本明細書において使用される単離および精製がされた抗原の各々は、独立に、総重量で約５０％よりも高い；または約６０重量％よりも高い；または約７０重量％よりも高い；または約８０重量％よりも高い；または約８５重量％よりも高い；または約９０重量％よりも高い；または約９５重量％よりも高い；または約９８重量％よりも高い；または約９９重量％よりも高い純度を有する。
【００２８】
本明細書において使用される場合の「約」という用語は、参照される値の＋／−１０％を意味する。
【００２９】
この組成物は、固形腫瘍、悪性腹水もしくは造血性癌に悩まされる患者に対し投与され得、腫瘍の成長もしくは再発を抑制し得るか、または転移の形成を抑制し得る。この組成物はまた、白血病もしくはリンパ腫に悩まされる患者に対しても投与され得る。
【００３０】
ワクチン組成物は、腫瘍マーカータンパク質を使用して作られる。所望の単離および精製がされた腫瘍マーカータンパク質は、市販されている。上で列挙された抗原のうちの多くの供給元としては、Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｃｏｎｃｏｒｄ，ＭＡ、およびＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ，Ｄａｌｌａｓ，ＴＸが挙げられる。他の商業的供給元は、当業者にとって公知および利用可能である。特定の抗原が市販されていない場合、その抗原は、当業者により公知の方法に従ってｃＧＭＰ設備（ｃＧＭＰ  ｆａｃｉｌｉｔｙ）において合成され得る。
【００３１】
腫瘍マーカータンパク質（単数もしくは複数）の各々は、独立に、典型的にワクチン組成物１００μＬ当たり約１μｇから約１０００μｇ、もしくは組成物１００μＬ当たり約１μｇから約２５０μｇ、もしくは組成物１００μＬ当たり約２５μｇから約１００μｇ、もしくは組成物１００μＬ当たり約５０μｇ、もしくは１００μＬ当たり約１μｇから約１０μｇの範囲の量で存在する。特定の抗原が容易に利用可能でないか、もしくは妥当なコストでは容易に利用可能でない場合、１００μＬ当たり１μｇから約１０μｇの範囲内のような、先述の範囲内のより小さな量が、使用され得て良好な効果を持つ。
【００３２】
いくつかの腫瘍マーカータンパク質は、μｇではなく、国際単位（ＩＵ）を基準にして販売される。このような例において、抗原は、典型的に、ワクチン組成物１００μＬ当たり約１ＩＵから約１０，０００ＩＵ；もしくは組成物１００μＬ当たり約２０ＩＵから約５，０００ＩＵ；もしくは組成物１００μＬ当たり約５００ＩＵから約１，５００ＩＵ；もしくは組成物１００μＬ当たり約１０００ＩＵの範囲内の量で提供される。
【００３３】
例えば、対象の癌のタイプが前立腺癌であり、そしてＰＳＡがワクチン組成物の中に含まれる場合、ＰＳＡは、組成物１００μＬ当たり約１μｇから約２５０μｇ、もしくは組成物１００μＬ当たり約２５μｇから約１００μｇ、もしくは組成物１００μＬ当たり約５０μｇの濃度で供給され得る。ＰＳＡは、前立腺癌ワクチンにおける唯一のマーカーであり得、またはワクチンは、上で説明されたような１以上の付加的もしくは代替的な抗原を含み得る。
【００３４】
例えば、このワクチンはまた、ＣＥＡを含み得る；この抗原は、典型的に、組成物１００μＬ当たり約１μｇから約２５０μｇの濃度で提供される。ＣＡ１２５タンパク質が、このワクチンの中に含まれ得る；ＣＡ１２５タンパク質は、典型的に、ＩＵの形で販売され、組成物１００μＬ当たり約２０ＩＵから約５０００ＩＵ、もしくは組成物１００μＬ当たり約１００ＩＵから約２５００ＩＵ、もしくは組成物１００μＬ当たり約１０００ＩＵの濃度で提供され得る。
【００３５】
ＣＡ１５−３および／もしくはＣＡ２７．２９が、各々、組成物１００μＬ当たり約１μｇから約２５０μｇの濃度で含まれ得る。
【００３６】
一般的に、このワクチンにおいて使用される特定の抗原の量は、抗原がワクチンにおいて提供される唯一の抗原であるか、もしくはワクチン組成物において提供される多数の抗原のうちの一つであるかに関わらず、おおよそ同じままである。それゆえ、前の段落において提供された前立腺癌ワクチンの例において、組成物が、示された抗原のうちの一つを含むか、または２、３、４もしくは５つの抗原の組み合わせを含むかに関わらず、各抗原は、上で述べられたガイドライン内の量にて提供される。付加的な抗原の存在は、患者における有効な免疫応答の可能性を増大させ得る。
【００３７】
別の実施形態において、この精製された抗原（単数もしくは複数）は、少量のインターロイキンおよびＣＳＦの組み合わせと物理的に組み合わされる。別の実施形態において、この抗原溶液とアジュバント（例えば、インターロイキンおよびＣＳＦ）とが別個に投与されるが、抗原およびアジュバントは、可能な限り時間を近づけて２時間以上間隔をあけずに、同じところへ投与されるべきである。典型的に、このワクチンの各成分は、生理学的に許容可能な溶液の形で提供され、次いで、各溶液の所望の量が、最終のワクチン組成物を作るために組み合わされる。
【００３８】
適切なインターロイキンとしては、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、およびＩＬ−１５が挙げられる。特定の実施形態において、このインターロイキンは、ＩＬ−１である。特定の他の実施形態において、このインターロイキンは、ＩＬ−２である。特定の他の実施形態において、このインターロイキンは、ＩＬ−３である。特定の他の実施形態において、このインターロイキンは、ＩＬ−４である。特定の他の実施形態において、このインターロイキンは、ＩＬ−５である。特定の他の実施形態において、このインターロイキンは、ＩＬ−６である。特定の他の実施形態において、このインターロイキンは、ＩＬ−７である。特定の他の実施形態において、このインターロイキンは、ＩＬ−９である。特定の他の実施形態において、このインターロイキンは、ＩＬ−１２である。特定の他の実施形態において、このインターロイキンは、ＩＬ−１３である。特定の他の実施形態において、このインターロイキンは、ＩＬ−１４である。特定の他の実施形態において、このインターロイキンは、ＩＬ−１５である。
【００３９】
適切なコロニー刺激因子としては、顆粒球マクロファージＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）およびマクロファージＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）が挙げられる。特定の実施形態において、このコロニー刺激因子は、ＧＭ−ＣＳＦである。特定の実施形態において、このコロニー刺激因子は、Ｇ−ＣＳＦである。特定の実施形態において、このコロニー刺激因子は、Ｍ−ＣＳＦである。
【００４０】
単一のインターロイキンおよび単一のコロニー刺激因子が、本明細書における組成物において使用され得、または２以上のインターロイキンおよび／もしくはコロニー刺激因子の組み合わせが、使用され得る。サイトカインの各タイプの有効性は、単独で投与された場合、非常に限定されるが、腫瘍マーカー抗原と組み合わせたインターロイキンおよびＣＳＦの両方の投与は相乗効果を有することが、見出されている。
【００４１】
一つの実施形態において、サイトカインの組み合わせは、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−２である。ＩＬ−２は、細胞障害性Ｔ細胞免疫を促進する；ＧＭ−ＣＳＦは、樹状細胞プロセッシングを促進する。
【００４２】
典型的に、この組成物は、組成物１００μＬ当たりインターロイキン約５，０００Ｕから約５０，０００単位（Ｕ）（約０．３μｇから約３μｇ）；もしくは組成物１００μＬ当たりインターロイキン約１０，０００Ｕから約３０，０００Ｕ（約０．６μｇから約１．８μｇ）；もしくは組成物１００μＬ当たりインターロイキン約２０，０００Ｕ（約１．２μｇ）、および組成物１００μＬ当たりＣＳＦ約１０μｇから約１００μｇ；もしくは組成物１００μＬ当たりＣＳＦ約１５μｇから約２０μｇ；もしくは組成物１００μＬ当たりＣＳＦ約１６．５μｇから約１６．９μｇ；もしくは組成物１００μＬ当たりＣＳＦ約１６．７μｇを含む。
【００４３】
典型的に、各サイトカインは、凍結乾燥粉末として供給され、生理学的に許容可能な液体担体と組み合わされ、順次に希釈されて、必要な場合、１００μＬ中の最終所望濃度に至る。例えば、ＩＬ−２は、２２×１０６ＩＵ（１．３ｍｇ）／バイアルの凍結乾燥粉末として、Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡからＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の名称で得られ得る。例えば、ＩＬ−２が減菌水１．１ｍＬと組み合わされ、次いで１：１０、１：１０で順次に希釈（最終的に１：１００）された場合、その最終濃度は、１００μＬ中で２０，０００ＩＵ（１．１８μｇ）になる。同様に、ＧＭ−ＣＳＦは、２５０μｇ／バイアルの凍結乾燥粉末として、Ｂｅｒｌｅｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｍｏｎｔｖｉｌｌｅ，Ｎ．Ｊ．からＬｅｕｋｉｎｅ（登録商標）の名称で得られ得る。例えば、ＧＭ−ＣＳＦが減菌水１．５ｍＬと組み合わされた場合、１００μＬ当たり１６．７μｇの最終濃度が得られる。
【００４４】
本明細書における組成物に関し適切な薬学的に許容可能な担体は、有意な副作用なしに受容者の中へ注射され得る流体の賦形剤に関連する。当該分野において公知の適切な薬学的に許容可能な担体としては、減菌水、生理食塩水、グルコース、および（生理食塩水もしくはリン酸緩衝生理食塩水を含む）生理学的に許容可能な水性緩衝剤または溶液が挙げられるが、それらに限定されない。担体は補助剤を含み得、その補助剤としては、希釈剤、安定剤（すなわち、糖およびアミノ酸）、保存剤、湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝剤、粘度増強剤、着色剤などが挙げられるが、それらに限定されない。例えば、腫瘍マーカータンパク質およびアジュバントに関し適切な担体としては、生理学的に許容可能な水性緩衝剤または溶液が挙げられ、その水性緩衝剤または溶液としては、減菌水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、もしくはハンクの緩衝電解液（Ｈａｎｋ’ｓ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（ＨＢＳＳ）が挙げられる。
【００４５】
適切な量の抗原もしくはアジュバントが、選択された担体と混合される。このワクチンの成分の全ては、一つの担体において一緒に提供され得るが、所望される場合、一つ以上の成分が、別個の担体において提供され得、他の成分と組み合わされて投与され得る。
【００４６】
別の局面において、本開示は癌を治療するための方法を提供し、その方法は、インターロイキン（ＩＬ）およびコロニー刺激因子（ＣＳＦ）を含有する生物学的アジュバントと組み合わせて、癌のタイプと質的もしくは量的に関連がある精製された表面タンパク質もしくは分泌タンパク質を含有する組成物を治療有効量で投与する工程を含む。
【００４７】
このワクチンは、注射により投与され得る。別の実施形態において、このワクチンは、表皮下に投与されるが、ワクチンはまた、筋肉内、皮下、もしくは腹膜内に投与され得る。このワクチンは、典型的に、用量当たり約０．３ｍＬから約１ｍＬ、もしくは約０．５ｍＬから約０．７ｍＬ、もしくは約０．５ｍＬの用量で投与される。このワクチンは一用量のみでも有用であり得るが、多くの場合、ワクチン約３用量から約１２用量、もしくは約６用量から約１２用量投与されることが、所望される。１用量よりも多くが投与される場合、この１用量は、典型的に、少なくとも７日の間隔をあける。例えば、この１用量は、典型的に、約７日から約９０日の間隔をあけて投与され得る。例えば、一つの有用な投薬療法は、このワクチンを１週間の間隔で３用量投与して、次いでその後、４週間の間隔でさらに３用量投与することである（すなわち、このワクチンは、第０週、第１週、第２週、第６週、第１０週および第１４週に投与される）。所望される場合、ブースター注射が、最初の免疫処置療法に続く約１年までの間、毎月もしくは隔月で投与され得る。このブースター注射は、（例えばＩＬ−２があるがそれに限定されない）インターロイキンのブースター注射と交互に投与され得て、患者のナチュラルキラー細胞をブーストし得る。
【００４８】
本開示に従いワクチンを与えられた患者のＴ細胞免疫およびＢ細胞免疫が、ワクチン投与開始の前、ならびに、次いで、ワクチン投薬療法の間およびその後で、リンパ球幼若化分析を使用してモニターされ得る（本明細書において参考として援用される；Ｅｌｌｉｏｔｔ，Ｒ．ら、Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ３０：２９９−３０４（１９９４）を参照のこと）。増殖指数の増加が、ワクチン接種処置による細胞性抗原およびタンパク質抗原に対する免疫応答の増大を実証する。本開示に従いワクチンを与えられた患者はまた、循環する腫瘍マーカータンパク質を測定する分析でモニターされ得る。循環する腫瘍マーカータンパク質の減少は、免疫応答の増大に関する代理マーカーである。
【００４９】
本明細書におけるワクチンは、前立腺、乳房、肺、結腸、直腸、（子宮頚部および子宮内膜を含む）子宮、卵巣、口腔、膀胱、膵臓、胃、肝臓、腎臓、皮膚、睾丸ならびにリンパ組織の癌を含む任意の固形癌の治療に対し有用である。これらのワクチンはまた、悪性腹水症、ならびに白血病およびリンパ腫を含む造血性腫瘍を治療するために使用され得る。適切な腫瘍マーカータンパク質が選択され、そしてこのワクチンは、上で述べられたようなワクチンの成分の一般的な量を使用して、調製される。
【００５０】
一つの実施形態において、前立腺癌ワクチンとして有用な組成物が提供され、その組成物は、前立腺癌と質的もしくは量的に関連がある少なくとも一つの精製された表面タンパク質もしくは分泌タンパク質を、生物学的アジュバントの組み合わせと組み合わせて含み、このアジュバントは、インターロイキンおよびコロニー刺激因子から本質的に成る。一つの実施形態において、少なくとも一つの精製された表面タンパク質もしくは分泌タンパク質は、精製されたＰＳＡを、前立腺癌と関連がある１以上の他の精製されたタンパク質と必要に応じて組み合わせて含む。関連した実施形態において、前立腺癌を持つ人を治療するための方法が提供され、その方法は、前立腺癌に関連がある一つ以上の他の精製されたタンパク質、ならびにインターロイキンおよびコロニー刺激因子を含む生物学的アジュバントを必要に応じて組み合わせて、精製されたＰＳＡを含む組成物でその人に免疫を付与する工程を含む。さらなる関連した実施形態において、前立腺癌に関連がある他の精製されたタンパク質、ならびに生物学的アジュバント（このアジュバントは、インターロイキンおよびコロニー刺激因子から本質的に成る）を必要に応じて組み合わせて、精製されたＰＳＡを含む組成物で前立腺癌を持つヒトに免疫を付与することにより、前立腺癌を持つヒトにおいて免疫療法応答を誘発するための方法が提供され、この免疫療法応答の結果、循環するＰＳＡが減少し、腫瘍細胞に死がもたらされる。この免疫付与は、１回実施され得るか、もしくは繰り返され得る。この免疫付与は、腫瘍抗原／タンパク質に対する免疫療法応答を、ベースラインの免疫を最低限約５０％超えるまで増大させ、循環するＰＳＡを減少させて、その結果、腫瘍細胞の死ならびに無進行生存および全生存の増加をもたらすように設計される。
【００５１】
別の実施形態は、乳癌ワクチンとして有用な組成物を含み、その組成物は、乳房の癌と質的もしくは量的に関連がある精製された表面タンパク質もしくは分泌タンパク質を治療有効量含む。このような組成物は、ＣＡ  １５−３、ＣＡ  １２５もしくはＣＥＡ、またはそれらの組み合わせを、生物学的アジュバントの上述の組み合わせと一緒に含み得る。関連した実施形態において、乳癌を持つ人を治療するための方法が提供され、その方法は、乳癌に関連がある一つ以上の他の精製されたタンパク質、ならびにインターロイキンおよびコロニー刺激因子を含む生物学的アジュバントを必要に応じて組み合わせて、精製されたＣＡ  １５−３、ＣＡ  １２５およびＣＥＡを含む組成物でその人に免疫を付与する工程を含む。この免疫付与は、１回実施され得るか、もしくは繰り返され得る。この免疫付与は、腫瘍抗原／タンパク質に対する免疫療法応答を、ベースラインの免疫を最低限約５０％超えるまで増大させ、循環する腫瘍抗原を減少させて、その結果、腫瘍細胞の死ならびに無進行生存および全生存の増加をもたらすように設計される。
【００５２】
他の実施形態は、胃腸系、肺、肝臓、膵臓、甲状腺、卵巣、睾丸、結腸直腸系、子宮内膜、膀胱もしくは神経系の癌、または黒色腫、白血病もしくはリンパ腫と質的もしくは量的に関連がある精製されたタンパク質を治療有効量含む組成物、およびこのような癌に悩まされるヒトに対しこれらの組成物を投与して癌に対する免疫応答を誘発することを含む。
【００５３】
本開示は、以下の実施例によりさらに例証されるが、その実施例は、限定することを意図されない。
【実施例】
【００５４】
参考例１
レトロスペクティブな研究を、免疫応答と全生存との関係を決定するために行った。上で考察したように、免疫応答をＬＢＡで測定した。
【００５５】
本研究は、アジュバント設定において乳癌ワクチンを受けた低下免疫を持つ早期乳癌の患者を対象にして行った。この患者に対し、自己由来細胞、同種異系細胞およびタンパク質抗原への免疫応答に関する試験をした。ＬＢＡにおいて（今回の修正ＬＢＡ分析のデータセットの切点分析（ｃｕｔ  ｐｏｉｎｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ）（Ｈｅａｄら、Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ、１９９３；６９０：３４０−３４２）により決定された）比率が１．５未満であった、低下免疫を持つ患者に、自己由来乳癌細胞、同種異系乳癌細胞（ＭＣＦ−７細胞）、ＣＡ  １５−３抗原、ＣＡ  １２５抗原、ＣＥＡ抗原ならびに生物学的アジュバント（ＩＬ−２およびＧＭ−ＣＳＦ）を含む最低限６つのワクチンでワクチン接種をした。第二のＬＢＡを、６回目のワクチン投与の２〜４週間後に行った。追跡調査を１０年までの期間行った。図１は、他の原因ののために死亡した患者に対してのＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ全生存曲線である。患者に対する計算されたＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ全生存（すなわち、連続的期間にわたる生存百分率）は、１０年で、低下免疫であり標準的な治療を施された患者においては５９％であり、診察時のＬＢＡにおいて自分自身の腫瘍関連抗原に対する免疫を持っていた標準的な治療を施された患者に関しては９５％生存である（研究のための病歴対照）。診察時に自分自身の腫瘍抗原に対する免疫を欠いていた低下免疫の患者に、上で述べたようにワクチンを接種し、そしてこのことが、１０年間での全生存を５９％から７９％へと増加させることへ繋がった。これらの群を、年齢、閉経期の状態、腫瘍サイズ、結節の状態、疾患の進行段階、エストロゲン受容体の状態、プロゲステロン受容体の状態、および抗ホルモン療法に関してよく一致させた。
【００５６】
本研究により、正常な免疫を持つ患者と比較した場合、低下免疫を持つ患者がより低い全生存および芳しくない長期間予後を有すること、そしてさらに、ワクチン接種により免疫応答によって全生存を改善することを、示した。
【００５７】
さらに、免疫応答の増大が全生存の増加と相関を持つことが、当該分野において一般的に公知である。例えば、本明細書において参考として援用されるＨｓｕｅｈら（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．、Ｄｅｃ．１、２００２；２０（２３）：４５４９−５４）は、「ワクチン免疫療法後の生存は、ワクチンに対するＤＴＨ免疫応答とは有意な相関があったが、対照抗原に対してはなく．．．」（ｐ．４５５３、考察部の第一段落）と述べている。加えて、本明細書において参考として援用されるＧａｌｏｎら（Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓｅｐ．２９、２００６；３１３：１９６０−６４）は、「．．．再発までの期間および全生存期間は、局所的な適応免疫応答の状態により大部分左右される」（ｐ．１９６３、最終段落）ことを報告した。
【００５８】
それゆえに、改善された免疫応答が癌患者における全生存と相関を持つことが、当該分野において公知であり、かつ、図１におけるデータにより実証される。
【００５９】
実施例１  ＰＳＡ組成物の調製
本開示に従う組成物を、以下の手順に従い作製した。
【００６０】
１．ＰＳＡ（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｃｏｎｃｏｒｄ、ＭＡ、ＣＡＴ♯  ３０−ＡＰ１５Ｅ）１ｍｇを、ＵＳＰ減菌水２．０ｍＬ中で希釈した。この溶液を、０．２２ミクロンフィルターでフィルター減菌した。減菌アリコート１００μＬを、−８０℃で必要になるまで凍らせた。
【００６１】
２．ＣＥＡ（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｃｏｎｃｏｒｄ、ＭＡ、ＣＡＴ♯  ３０−ＡＣ３０）５００μｇを、ＵＳＰ減菌水２５ｍＬ中で希釈し、そして結果として生じた溶液を、０．２２ミクロンフィルターでフィルター減菌した。減菌アリコート１００μＬを、−８０℃で必要になるまで凍らせた。
【００６２】
３．ＣＡ  １２５（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｃｏｎｃｏｒｄ、ＭＡ、ＣＡＴ♯  ３０−ＡＣ１１）２０，０００単位を、ＵＳＰ減菌水２．０ｍＬ中で希釈し、そして結果として生じた溶液を、０．２２ミクロンフィルターでフィルター減菌した。減菌アリコート１００μＬを、−８０℃で必要になるまで凍らせた。
【００６３】
４．ＩＬ−２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ；Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）２，２００万単位を、ＵＳＰ減菌水１．１ｍＬ中で再構成し、次いで、ＵＳＰ減菌水にて１：１０で希釈した。結果として生じた溶液を、再び１：１０で希釈して、１００μＬ当たり２０，０００単位の最終濃度を提供した。減菌アリコート１００μＬを、−８０℃で必要になるまで凍らせた。
【００６４】
５．ＧＭ−ＣＳＦ（Ｂｅｒｌｅｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｍｏｎｔｖｉｌｌｅ、ＮＪ）２５０μｇのバイアルを、ＵＳＰ減菌水１．５ｍＬで再構成して、１００μＬ中に１６．７μｇの最終濃度を提供した。この溶液を、４℃で冷蔵した。
【００６５】
６．このワクチン１用量を調製するために、以下の物の凍結したアリコートを、室温に移した：三つの抗原（ＰＳＡ、ＣＥＡおよびＣＡ  １２５）の各々１００μＬ、ならびに二つのアジュバント（ＩＬ−２およびＧＭ−ＣＳＦ）の各々１００μＬ。次いで、各成分１００μＬを、１インチの２６ゲージ針で１ｍＬシリンジの中へ抜き取った。最終の総体積は０．５ｍＬであった。
【００６６】
ワクチンの各１用量は、ＰＳＡを５０μｇ；ＣＥＡを２μｇ；ＣＡ  １２５を１０００ＩＵ；ＩＬ−２を２０，０００単位；およびＧＭ−ＣＳＦを１６．７μｇ含有していた。
【００６７】
実施例２
１３名の生検確認された前立腺癌患者へ、第０週、第１週、第２週、第６週、第１０週および第１４週に、最初のコースのワクチン６回を表皮下に投与した。各用量は、実施例１において調整されたＰＳＡ、ＣＥＡ、ＣＡ  １２５、ＩＬ−２およびＧＭ−ＣＳＦを含んでいた。各患者の血清ＰＳＡレベルを、第一のワクチン接種が開始される前に決定した。このワクチン接種期間中、患者は、他の同時療法（すなわち、外科手術、ホルモン、放射線、放射性シードもしくは化学療法）を受けなかった。
【００６８】
治療プロトコルを、Ｇｅｈａｎ（本明細書において参考として援用される；Ｇｅｈａｎ，Ｅ．、Ｊ．Ｃｈｒｏｎ．Ｄｉｓ．１３（４）、３４６−３５３（１９６１）を参照のこと）により教示されたスキームに従って、単一群第Ｉ／ＩＩ相臨床試験における腫瘍学薬剤（ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ｄｒｕｇ）に関する最小奏効率を決定するように設計した。手短に言うと、Ｇｅｈａｎの方法により、いかなる奏功もない場合、事前に設定した最小奏効率（典型的に１５〜２０％）に到達しないために本研究を終了するのに必要となる最小サンプルサイズを計算した。信頼水準を９５％に設定し、それゆえ奏効率が目標の奏効率である１５〜２０％よりも低いことが９５％の信頼度で生じた場合、本研究を早期に終了する。それゆえに、患者１４名に対し奏効率２０％、もしくは患者１９名に対し奏効率１５％が、いかなる奏功もなしとして扱われる場合には、この薬剤は不活性である。一名の患者に奏功が現れた場合には、正確な奏効率を決定するために、より多くの患者が治療される必要がある。
【００６９】
この前立腺癌ワクチンの投与の結果を、以下の表２において提供する：
【００７０】
【表２Ａ】
2014502636.tif 000005
【００７１】
【表２Ｂ】
2014502636.tif 000006
患者♯８のＰＳＡレベルが、４回目のワクチン接種の後、７．６から１３．７へ上昇したので、彼は、他の療法を探し求めるために本研究を辞退した。残っている１２名の前立腺癌患者の各々の血清ＰＳＡレベルを、６回目のワクチン接種の３〜４週間後に決定した。表２において示すように、６回目のワクチン接種後、１２名中８名の患者において、血清ＰＳＡレベルの低下が存在した。
【００７２】
１名の患者（患者♯３）は、そのＰＳＡが６．８から６．４へと下がり、そして以前に放射線療法を受けていた（以前に治療を受けていた唯一の患者）が、この最初のワクチン接種期間の最後に、本研究からの辞退を選択し、根治的前立腺摘出術を受けた。６回のワクチン後にＰＳＡの上昇があった２名の患者は、付加的な標準的療法を受けることを選択した（１名の患者はシードインプラントを受け、そして別の１名はＬｕｐｒｏｎを受けた）。当初の１３名の患者のうちの９名に、最初のワクチン接種に続く６月間、患者のナチュラルキラー細胞をブーストするためのＩＬ−２の用量（１１００万単位）と交互に、ワクチンをさらに３用量与えた。ＰＳＡが上昇した患者のうちの１名は、Ｚｏｌａｄｅｘおよびシードインプラントを受けることを選択した。８名の患者を１８〜９２か月の間追跡調査した（追跡調査における差異は、各患者の最初のワクチン接種の日付（患者は異なった時にこの試験へ参加した）と、追跡調査で見失った患者に起因する）。これら８名の患者に関する平均ＰＳＡ値は、最初５．９であった；それは、最初の６回のワクチン後に４．１へ減少し、１２回のワクチン後にさらに３．７へ減少し、平均追跡調査期間４９月（中央値４５．５月）の後で４．７であった。
【００７３】
１名の患者は、そのＰＳＡがワクチン接種の後で４．１ｎｇ／ｍｌから正常の２．４ｎｇ／ｍｌへと減少し、１８月後および３０月後の再生検では癌が見出されず、１０年以上の間再発せずに安定なままである。２名の他の患者もまた、ワクチン接種プロセスの後で再生検を行っている：１名は、第２４月での生検サンプルにおいて疾患を有さず、そして別の１名は、第１６月で癌細胞を含む生検サンプルの百分率が非常に有意に（５５％から１％へ）減少した。
【００７４】
ワクチン６回後に患者１２名中８名（６７％）において、そしてワクチン１２回後に患者９名中６名（６７％）において血清ＰＳＡが減少したことにより実証されるように、上で説明された前立腺癌ワクチンは、免疫学的応答を有した。この試験に登録した当初の１３名の被験者のうち７名（５４％）の被験者は、中央値４５．５月（１８月から８０月の範囲）の追跡調査の後、診察時よりも低いＰＳＡレベルを有し、このことは、患者の疾患の生物化学的進行がないこと（血清ＰＳＡの量の非増加）の指標であった。生物学的腫瘍マーカーであるＰＳＡ血清濃度の減少により測定されるこれらの奏効率は、５０％以上と見積もられ、それゆえに、Ｇｅｈａｎプロトコルに従うと、非常に有意な奏効率を表している。時が経つにつれて前立腺癌患者の多くはＰＳＡにある程度の増加が現れ、そしてこのことは、最初のワクチン１２回の後にブースターワクチンが必要であることを示唆している。
【００７５】
実施例３
本明細書において提供されたワクチンをまた、他の形態の癌を持つ患者を処置するために使用する。ワクチン組成物を、表３において示されるように、実施例１における一般的手順に従い以下の成分を使用して作製する。
【００７６】
【表３】
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【図１】
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【国際調査報告】
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