(57)【要約】  ＦＫ５０６を用いる、哺乳類における肺動脈性肺高血圧を低減する方法が提供される。ある特定の実施形態において、本方法は、哺乳類の肺動脈の血圧を低下させるのに十分な投与量で、ＭＢＰＲ２シグナル伝達の欠陥と関連する肺動脈性高血圧症を有する哺乳類にＦＫ５０６を投与する工程を含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類における肺動脈性高血圧症を低減する方法であって、
ＢＭＰＲ２シグナル伝達の欠陥と関連する肺動脈性高血圧症を有する哺乳類にＦＫ５０６を投与する工程を含み、前記ＦＫ５０６が、５ｎｇ／ｍｌ未満であり、前記哺乳類の肺動脈の血圧を低下させるのに十分である投与量で投与される、方法。
【請求項２】
前記哺乳類がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記哺乳類においてＢＭＰＲ２、ＡＬＫ１またはエンドグリンの発現が減少した、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記哺乳類が、ＢＭＰＲ２の変異によって引き起こされる遺伝性の肺動脈性高血圧症を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記哺乳類が、ＡＬＫ１の変異によって引き起こされる遺伝性の肺動脈性高血圧症を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記哺乳類が、エンドグリンの変異によって引き起こされる遺伝性の肺動脈性高血圧症を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記投与量が、０．１〜０．２ｎｇ／ｍｌのＦＫ５０６の血清濃度を提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記投与が経口投与である、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
政府の権利
本発明は、米国国立衛生研究所によって与えられた契約ＨＬ０８９９８９の下、米国政府の支援で行われた。米国政府は、本発明において一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００２】
肺動脈性高血圧症は、肺の動脈における異常に高い血圧である。症状は、非常に緩やかに進展し得るので、患者は、長年、医師に診察してもらうことが遅れる可能性がある。一般的な症状は、息切れ、疲労、乾性咳、狭心症、失神（ｆａｉｎｔｉｎｇ）または失神（ｓｙｎｃｏｐｅ）、末梢浮腫（足首や足の周りの腫脹）、およびまれに喀血（血を吐くこと）である。
【発明の概要】
【０００３】
ＦＫ５０６を用いる、哺乳類における肺動脈性肺高血圧を低減する方法が提供される。ある特定の実施形態において、本方法は、哺乳類の肺動脈の血圧を低下させるのに十分な用量で、ＢＭＰＲ２シグナル伝達の欠陥と関連する肺動脈性高血圧症を有する哺乳類にＦＫ５０６を投与する工程を含む。場合によって、この哺乳類は、マウス、ラットまたはヒトである。特定の場合において、この哺乳類は、例えば、ＢＭＰＲ２、ＡＬＫ１またはエンドグリンにおける変異によって引き起こされる遺伝性の肺動脈性高血圧症を有する。特定の場合において、ＦＫ５０６は、０.０５〜１ｎｇ／ｍｌ、例えば、０.１〜０.２ｎｇ／ｍｌのＦＫ５０６血清濃度を提供する用量で投与することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００４】
例示的実施形態の詳細な説明
本明細書に記載の方法は、ＢＭＰＲ２（骨形成タンパク質受容体２）シグナル伝達に欠陥を有する患者の肺動脈性高血圧症を治療するためのものである。肺動脈性高血圧症（ＰＡＨ）は、未治療でいると、診断後、平均で数年以内に死に至る場合が多い進行性肺障害である。肺循環の収縮が増加すると、右心に対するストレスが増加し、右心不全に進展し得る。定義によると、慢性肺高血圧症の場合の平均肺動脈圧（ｍＰＡＰ）は、安静時は２５ｍｍＨｇを超え、または労作時には３０ｍｍＨｇを超え、正常値は、２０ｍｍＨｇ未満である。肺動脈性高血圧症の病態生理は、肺血管の血管収縮およびリモデリングによって特徴付けられる。慢性ＰＡＨでは、初めは、筋肉新生していない肺血管の筋肉新生があり、すでに筋肉新生した血管の血管筋の周囲が増加する。この肺循環の閉塞の増加は、右心に対する進行性のストレスをもたらし、右心からの排出量の低減につながり、最終的に、右心不全になる（Ｈｕｍｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ.,Ｊ.Ａｍ.Ｃｏｌｌ.Ｃａｒｄｉｏｌ.２００４,４３,１３Ｓ−２４Ｓ）。
【０００５】
ＢＭＰＲ２シグナル伝達の欠陥は、例えば、ＢＭＰＲ２（ＮＣＢＩのＯＭＩＭデータベースにおける受託番号６００７９９参照）の変異、ＡＬＫ１（アクチビンＡ受容体；ＮＣＢＩのＯＭＩＭデータベースにおける受託番号６０１２８４参照）の変異またはエンドグリン（ＮＣＢＩのＯＭＩＭデータベースにおける受託番号１３１１９５参照）の変異によって引き起こされ得る。ＢＭＰＲ２シグナル伝達における欠陥は、例えば、ＢＭＰＲ２シグナル伝達のための周知の下流の読み出しであるＩｄ１（分化抑制因子１）のｍＲＮＡまたはタンパク質の発現を測定することにより検出することができる。ＢＭＰＲ２シグナル伝達が減少すると、肺動脈平滑筋細胞中のＩｄ１の量が減少する。特定の場合において、肺動脈性高血圧症は、遺伝性肺動脈性高血圧症で有り得る。特定の実施形態において、対象がＢＭＰＲ２シグナル伝達に影響を与える変異を有するか否かを特定するために、対象を事前にスクリーニングしてもよく、または対象がＩｄ１の異常な発現を有するかどうかを判定するために対象をアッセイしてもよい。
【０００６】
ＦＫ５０６（タクロリムスまたはフジマイシン（Ｆｕｊｉｍｙｃｉｎ）とも知られている）は、患者の免疫系の活性を低下させ、臓器拒絶反応の危険性を下げるために、主に、同種異系臓器移植後に用いられる免疫抑制薬である。ＦＫ５０６は、重度のアトピー性皮膚炎（湿疹）、骨髄移植後の重度の難治性ぶどう膜炎、および皮膚疾患の白斑症の治療のためにも用いられる。ＦＫ５０６は、１９８４年に発見された２３員環マクロライドラクトンである。
【０００７】
Ｔ細胞において、Ｔ細胞受容体の活性化は、通常、カルシニューリンを活性化するためにカルモジュリンを介して作用する細胞内カルシウムを増加させる。その後、カルシニューリンは、Ｔ−細胞の核へ移動し、ＩＬ−２および関連するサイトカインをコードする遺伝子の活性を増加させる転写因子ＮＦ−ＡＴ（活性化Ｔ細胞の核因子（ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ ｏｆ ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｔ−ｃｅｌｌ））を脱リン酸化する。ＦＫ５０６は、ＮＦ−ＡＴの脱リン酸化を防ぐ。具体的には、ＦＫ５０６は、新しい複合体を作製するイムノフィリンＦＫＢＰ１２（ＦＫ５０６結合タンパク質）に結合することにより、ペプチジル−プロリルイソメラーゼ活性を低下させる。このＦＫＢＰ１２−ＦＫ５０６複合体は、カルシニューリンと相互作用して、カルシニューリンを抑制するので、Ｔリンパ球シグナル伝達とＩＬ−２の転写の両方を抑制する。いくつかの実施形態において、ＦＫ５０６は、一般的に免疫抑制の用途で用いられるＦＫ５０６血清濃度よりもはるかに低いＦＫ５０６血清濃度（典型的には、５〜１５ｎｇ／ｍｌ）を提供する用量および投与計画で投与される。例えば、本方法のある特定の実施形態において、ＦＫ５０６は、ＦＫ５０６血清濃度が０．０５ｎｇ／ｍｌ〜１ｎｇ／ｍｌ、例えば、０．１ｎｇ／ｍｌ〜０．５ｎｇ／ｍｌ、０．１５ｎｇ／ｍｌ〜０．３ｎｇ／ｍｌまたは例えば、０．１〜０．２ｎｇ／ｍｌである用量および投与計画で投与される。一つには、ＦＫ５０６はチトクロームＰ４５０系によって代謝されるので、正確な投与量は患者間で異なり得る。ＦＫ５０６は、１日１回以上、例えば、１日２回投与してもよい。免疫抑制の用途では、ＦＫ５０６は、通常、５〜１５ｎｇ／ｍｌのＦＫ５０６血清レベルに達することを目標に、毎日２回与えられる。この治療は、毎日２回、０．５ｍｇで開始され、その後、測定されるＦＫ５０６血清レベルに応じて用量が増加する。場合によって、５〜１０ｎｇ／ｍｌの血清レベルに達するために、０.０７５ｍｇ／ｋｇ／日の投薬が勧められる。本方法のいくつかの実施形態において、目標は、免疫抑制血清レベル（ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｓｅｒｕｍ ｌｅｖｅｌ）の約１／２０である約０.２ｎｇ／ｍｌの血清レベルに達することである。この場合において、０．００１ｍｇ／ｋｇ／日〜０．０１ｍｇ／ｋｇ／日（例えば、０．００２ｍｇ／ｋｇ／日〜０．０５ｍｇ／ｋｇ／日）の初期用量が十分であり得、この用量は、測定されるＦＫ５０６血清レベルに応じて用量を増加させることができる。この対象は、任意の哺乳類、例えば、ヒト、ラット、またはマウスであってよい。特定の場合において、ＦＫ５０６は、０．１〜０．２ｎｇ／ｍｌ（例えば、０．１０〜０．１２、０．１２〜０．１４、０．１４〜０．１６、０．１６〜０．１８または０．１８〜０．２０ほどの低い血清濃度に達してもよいが、０．２〜２ｎｇ／ｍｌの範囲、例えば、０．２、０．５、１および２ｎｇ／ｍｌの血清濃度が許容範囲であり得る。特定の場合において、ＦＫ５０６は、１．０未満、１．５〜２．５、または３〜５ｎｇ／ｍｌの血清濃度に達してもよい。
【０００８】
ＦＫ５０６は、単独で、またはＰＡＨを治療または予防する他の活性化合物と組み合わせて投与することができる。この他の活性化合物は、異なる時間に、またはＦＫ５０６と同時に投与してもよく、ある特定の実施形態において、ＦＫ５０６および他の活性化合物は、同じ製剤中に、または同一のキット内の別々の製剤として存在してもよい。ＰＡＨを治療する例示的な他の活性化合物には、例えば、プロスタサイクリン類似体、エンドセリン受容体拮抗薬、ホスホジエステラーゼ５阻害剤、高用量のカルシウムチャネル遮断薬、抗凝固薬、利尿薬または抗増殖剤が含まれる。特定の場合において、この他の活性化合物は、例えば、アイソーディル（硝酸イソソルビド）、レバティオ（シルデナフィル）、トラクリア（ボセンタン）、レタイリス（アンブリセンタン）、フローラン（エポプロステノール）、アドシルカ（タダラフィル）、リモジュリン（トレプロスチニル）、ベンタビス（Ｖｅｎｔａｖｉｓ（イロプロスト））、ティバソ（Ｔｙｖａｓｏ（トレプロスチニル））、ジラトレートＳＲ（Ｄｉｌａｔｒａｔｅ−ＳＲ（硝酸イソソルビド））、アイソーディルチトラドーズ（Ｉｓｏｒｄｉｌ Ｔｉｔｒａｄｏｓｅ（硝酸イソソルビド））、イソディトレート（ＩｓｏＤｉｔｒａｔｅ（硝酸イソソルビド））またはアイソクロン（Ｉｓｏｃｈｒｏｎ（硝酸イソソルビド））であってよい。
【０００９】
対象へのＦＫ５０６の投与は、少なくとも約１ｍｍＨｇ、例えば、少なくとも２ｍｍＨｇ、少なくとも３ｍｍＨｇ、少なくとも４ｍｍＨｇ、少なくとも５ｍｍＨｇもしくは少なくとも１０ｍｍＨｇまたはそれ以上で肺動脈圧を低下させ、それによって、対象にとって正常と考えられ得るレベルまで肺動脈圧を戻すことができる。
【００１０】
一般論として、ＦＫ５０６は、ＦＫ５０６が免疫抑制の用途で投与される方法と同様の本方法で、即時に対象に投与することができる。例えば、ＦＫ５０６は、薬学的に許容される賦形剤中に存在してもよく、静脈内投与することができる。あるいは、経口投与であってもよい。
【００１１】
ＦＫ５０６はより低い用量で投与されているので、その通常の副作用を減少させることができる。典型的な副作用には、感染症、心臓障害、高血圧症、かすみ目、肝臓または腎臓の問題（タクロリムス腎毒性）、高カリウム血症、低マグネシウム血症、高血糖症、糖尿病、かゆみ、肺損傷（シロリムスは肺損傷も引き起こす）、ならびに食欲不振、不眠症、後部可逆脳症症候群、精神錯乱、脱力感、うつ病、腹痛、神経障害、発作、振戦、および緊張病などの様々な精神神経の問題が含まれる。
【００１２】
医薬組成物
本化合物を含む医薬組成物は、単独で、または他の補助的な活性剤と組み合わせて患者に投与することができる。この医薬組成物は、従来の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠形成、粉末化、乳化、カプセル化、封入、および凍結乾燥を含むが、これらに限定されない様々なプロセスのいずれかを用いて製造することができる。この医薬組成物は、滅菌溶液、懸濁液、乳剤、凍結乾燥剤、錠剤、丸剤、ペレット剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤、エリキシル剤または投与に適する任意の他の剤形を含むが、これらに限定されない様々な形態のいずれかを取ることができる。
【００１３】
本化合物は、病状または症状の所望の低減をもたらすことができる任意の便利な手段を用いて、宿主に投与することができる。したがって、本化合物は、治療的投与のための様々な製剤に組み込むことができる。より具体的には、本化合物は、適切な薬学的に許容される担体または希釈剤との組み合わせによって医薬組成物に製剤化することができ、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、液剤、坐剤、注射剤、吸入剤およびエアロゾルなどの固体、半固体、液体または気体の形態の調製物に製剤化してもよい。
【００１４】
医薬組成物のための製剤化は、当技術分野で周知である。例えば、Ｅ．Ｗ．マーティンによるレミントンの薬学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、マックパブリッシング社、イーストン、ペンシルバニア州、第１９版、１９９５は、開示される化合物の薬学的送達に適する代表的な製剤（およびそれらの成分）について説明している。本化合物の少なくとも１つを含む医薬組成物は、ヒトまたは獣医学における使用のために製剤化することができる。開示される医薬組成物の特定の製剤は、例えば、投与方法および／または治療すべき感染部位に依存し得る。いくつかの実施形態において、製剤には、本化合物などの少なくとも１つの有効成分に加えて、薬学的に許容される担体が含まれる。他の実施形態において、例えば、治療される苦痛に対して同様の効果、関連する効果または相補的な効果を有する他の医薬剤または医薬品も、医薬組成物中の有効成分として含めることができる。
【００１５】
開示される方法および組成物に有用な薬学的に許容される担体は、当該分野において確立されている。医薬担体の性質は、用いられている特定の投与方法に依存する。例えば、非経口製剤は、通常、ビヒクルとして水、生理食塩水、平衡塩類溶液、水性デキストロース、またはグリセロールなどの薬学的、生理学的に許容される液体を含む注射可能な液体を含む。固体組成物（例えば、散剤、丸剤、錠剤、またはカプセルの形態）では、従来の非毒性の固体担体は、例えば、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、またはステアリン酸マグネシウムを含むことができる。生物学的に中性の担体に加えて、投与される医薬組成物は、湿潤剤または乳化剤、防腐剤、およびｐＨ緩衝剤など、例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレートなどの少量の非毒性補助物質（例えば、賦形剤）を任意選択で含むことができる。他の非限定的な賦形剤には、クレモフォールなどの非イオン性可溶化剤、またはヒト血清アルブミンもしくは血漿調製物などのタンパク質が含まれる。
【００１６】
薬学的に許容される担体として役立ち得る物質のいくつかの例としては、以下のものが挙げられる：（１）ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖類、（２）トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなどのデンプン類、（３）カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのセルロース類ならびにその誘導体、（４）粉末トラガント、（５）麦芽、（６）ゼラチン、（７）タルク、（８）カカオバターおよび坐剤ワックスなど賦形剤、（９）ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油および大豆油などの油類、（１０）プロピレングリコールなどのグリコール類、（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなどのポリオール類、（１２）オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル類、（１３）寒天、（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤、（１５）アルギン酸、（１６）発熱物質を含まない水、（１７）等張食塩水、（１８）リンゲル溶液、（１９）エチルアルコール、（２０）ｐＨ緩衝溶液、（２１）ポリエステル、ポリカーボネートおよび／またはポリ酸無水物、ならびに（２２）医薬製剤に用いられる他の非毒性の適合性物質。
【００１７】
開示される医薬組成物は、開示される化合物の薬学的に許容される塩として製剤化されてもよい。薬学的に許容される塩は、遊離塩基の所望の薬理活性を有する化合物の遊離塩基形態の非毒性塩である。これらの塩は、無機酸または有機酸に由来するものであってよい。適切な無機酸の非限定的な例としては、塩酸、硝酸、臭化水素酸、硫酸、ヨウ化水素酸、およびリン酸が挙げられる。適切な有機酸の非限定的な例としては、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メチルスルホン酸、サリチル酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、グルコン酸、アスパラギン酸（ａｓｐａｒａｇｉｃ ａｃｉｄ）、アスパラギン酸（ａｓｐａｒｔｉｃ ａｃｉｄ）、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、およびナフタレンスルホン酸などが挙げられる。他の適切な薬学的に許容される塩のリストは、レミントンの薬学、第１７版、マックパブリッシング社、イーストン、ペンシルバニア州、１９８５年で見つけられる。薬学的に許容される塩も、本組成物の浸透圧を調節するのに役立ち得る。
【００１８】
本化合物は、錠剤、散剤、顆粒剤またはカプセル剤を作るために単独で、または適当な添加剤と組み合わせて使用することができる。適当な添加剤は、例えば、ラクトース、マンニトール、トウモロコシデンプンまたはジャガイモデンプンなどの従来の添加剤、結晶性セルロース、セルロース誘導体、アカシア、トウモロコシデンプンまたはゼラチンなどの結合剤、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプンまたはカルボキシメチルセルロースナトリウムなどの崩壊剤、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの滑剤、必要に応じて、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、防腐剤および香味剤である。このような調製物は、経口投与用に用いることができる。
【００１９】
本化合物は、必要に応じて、可溶化剤、等張剤、懸濁化剤、乳化剤、安定剤および防腐剤などの従来の添加剤と共に、植物油または他の類似の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸エステルもしくはプロピレングリコールのエステルなどの水性溶媒または非水性溶媒に調製物を溶解するか、懸濁するか、または乳化することによって注射用調製物に製剤化することができる。この調製物は乳化してもよく、または有効成分は、リポソームビヒクルに封入してもよい。注射に適する製剤は、硝子体内、眼内、筋肉内、皮下、舌下、または他の投与経路、例えば、歯肉組織もしくは他の口腔組織への注射によって投与することができる。このような製剤は、局所投与にも適する。
【００２０】
いくつかの実施形態において、本化合物は、連続的な送達システムによって送達することができる。「連続的な送達システム」という用語は、本明細書で「制御された送達システム」と互換的に用いられ、カテーテル、および注射器具などと組み合わせた連続的な（例えば、制御された）送達装置（例えば、ポンプ）を包含し、それらの多種多様なものが当技術分野で知られている。
【００２１】
本化合物は、吸入によって投与されるエアロゾル製剤に利用することができる。本化合物は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、および窒素などの加圧された許容される噴射剤に製剤化することができる。
【００２２】
さらに、本化合物は、乳化塩基または水溶性塩基などの様々な塩基と共に混合することによって坐剤にすることができる。本化合物は、坐薬によって直腸に投与することができる。この坐剤は、体温で溶融し、さらに室温で固化するカカオバター、カーボワックス、およびポリエチレングリコールなどのビヒクルを含み得る。
【００２３】
本明細書で使用する「単位剤形」という用語は、ヒトおよび動物対象用の単一の投与量として適する物理的に別個の単位を指し、それぞれの単位は、薬学的に許容される希釈剤、担体またはビヒクルに関連して、所望の効果を生み出すのに十分な量で算出された所定量の本化合物を含む。本化合物の仕様は、用いられる特定の化合物および達成すべき効果、ならびに宿主内での各化合物と関連する薬力学に依存する。
【００２４】
開示される医薬組成物の剤形は、選択される投与方法によって決定される。例えば、注射可能な液体に加えて、局所投与用の剤形または経口剤形を用いることができる。局所用調製物には、点眼剤、軟膏剤、およびスプレー剤などが含まれ得る。経口製剤は、液体（例えば、シロップ、溶液もしくは懸濁液）または固体（例えば、散剤、丸剤、錠剤、もしくはカプセル剤）であってもよい。このような剤形を調製する方法は、当業者には周知であり、または明らかであろう。
【００２５】
本化合物を含む医薬組成物のある特定の実施形態は、正確な投与量の個々の投与に適する単位剤形に製剤化することができる。投与される有効成分の量は、治療される対象、苦痛の重症度、および投与の様式に依存し、当業者に知られている。これらの範囲内で、投与すべき製剤は、治療される対象において所望の効果を達成するのに有効な量で、本明細書に開示される抽出物または化合物の量を含む。
【００２６】
各治療用化合物は、独立して、本明細書に記載のものなどの任意の剤形であり得、本明細書で説明される通り、様々な方法で投与することもできる。例えば、これらの化合物は、併用製品として単一の投薬単位で共に製剤化することができる（すなわち、カプセル、錠剤、粉末、または液体などの一形態で共に組み合わせることができる）。あるいは、単一の投薬単位で共に製剤化されない場合は、それぞれの本化合物は、それらの任意の順序で、別の治療用化合物と同時に、または連続して投与してもよい。
【００２７】
投与法
投与経路は、治療すべき病状、用いられる製剤および／または装置、ならびに治療すべき患者などを含むが、必ずしもこれらに限定されない様々な要因に応じて選択され得る。開示される方法に有用な投与経路には、経口経路、ならびに、静脈内（ｉｖ）、腹腔内（ｉｐ）、直腸、局所、眼、鼻、および経皮などの非経口経路が含まれるが、これらに限定されない。これらの剤形用の製剤は、本明細書に記載される。
【００２８】
本化合物の有効量は、少なくとも、特定の使用法、治療される対象、苦痛の重症度、および治療用組成物の投与様式に依存する。組成物の「治療有効量」は、治療される対象（宿主）において所望の効果を達成するのに十分な特定化合物の量である。
【００２９】
本化合物または医薬組成物の治療有効用量（または増殖阻害量）は、少なくとも、本明細書に開示される適用可能な化合物のＩＣ５０と同じくらい高い局所（例えば、組織）濃度を達成することを目標に、当業者が決定することができる。
【００３０】
任意の特定の対象のための具体的な用量レベルおよび投薬の頻度は変えることができ、本化合物の活性、本化合物の代謝安定性および作用時間、対象の年齢、体重、全体的な健康、性別、食事、投与の方法および時間、排泄率、薬剤配合、ならびに治療を受ける宿主の病状の重篤度を含む様々な要因に依存する。
【００３１】
本発明をさらに説明するために、以下の具体的な実施例は、それらが本発明を例証するために提供され、決して本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではないという理解の下で与えられる。
【実施例】
【００３２】
実施例１  マウスの研究
背景
骨形成タンパク質（ＢＭＰ）受容体ＩＩ（ＢＭＰＲＩＩ）における機能変異の損失は、家族性ＰＡＨでは８０％を超えて存在し、孤発性の特発性（Ｉ）ＰＡＨでは約２０％に存在する（Ｍａｃｈａｄｏ ｅｔ ａｌ.Ｈｕｍ Ｍｕｔａｔ ２００６,２７：１２１−３２）。ＢＭＰＲＩＩ変異は無いがＩＰＡＨを有する患者、またはＰＡＨの他の原因を有する患者でさえ、ＢＭＰＲＩＩの発現は減少するので、ＰＡＨの病因におけるＢＭＰＲＩＩシグナル伝達の重要性が強まる（Ｈｕｍｂｅｒｔ Ｍ ｅｔ ａｌ.Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ ２００２,２０:５１８−２３）。さらに、ＢＭＰＲ２受容体遺伝子療法は、ラットにおける実験的低酸素性肺高血圧症を弱める（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ.Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２００７）。したがって、肺動脈性高血圧症の患者においてＢＭＰＲＩＩシグナル伝達を増加させると、病気を防ぐか、または逆転させる可能性がある。
【００３３】
方法
ルシフェラーゼ遺伝子に結合させたＩｄ１プロモーターからＢＭＰ応答エレメント（ＢＲＥ）を発現するレポータープラスミド（ＢＲＥ−ｌｕｃ）で安定的にトランスフェクトしたＣ２Ｃ１２マウス筋芽細胞株を用いて、３６００個のＦＤＡに承認された薬物および生物活性化合物を、ＢＭＰシグナル伝達を活性化するそれらの能力についてスクリーニングした。陽性対照としてＢＭＰ４を用いて、最高のｑＨＴＳ−ＢＭＰＲＩＩ活性化剤が、Ｓｍａｄのリン酸化（リン酸）、Ｉｄ１発現を誘導し、ＰＡＥＣ生存および管形成を促進することができるか否かを判定した。ｑＨＴＳ−ＢＭＰＲＩＩ活性化剤が、低酸素症（１０％Ｏ２）の３週間後に肥大したＰＡＨを発症する、ＥＣにＢＭＰＲＩＩの条件的欠失を有するマウス（ＢＭＰＲＩＩ−ＳＣＬ−ＣｒｅＥＲＴ）においてＰＡＨを防ぐか否かを判定した。ＢＭＰＲＩＩ活性化剤がＰＡＨも逆転させることができるか否かを評価するために、発明者らは、ラットにおける重篤な実験的ＰＨの以下の２つのモデルを用いた：１．注射後３週目に肺動脈の重症な内側肥大が発症するモノクロタリン誘導性肺高血圧症、２．刺激開始後８週目に、肺動脈内に新生内膜形成が起こる、ＳＵＧＥＮ（ＶＥＧＦ−受容体遮断薬）および３週間の慢性的な低酸素症によって誘導される肺高血圧症。両群を、ＰＡＨおよび肺動脈のリモデリングが確立された後に、皮下浸透圧ポンプ（０.０５ｍｇ／ｋｇ／ｄ）を経由して３週間ＦＫ５０６で治療した。マウスおよびラットにおけるＦＫ５０６の血清レベルは、０.２ｎｇ／ｍｌであることを目標にした。
【００３４】
結果
ＢＭＰＲＩＡリン酸化を誘導することができる薬剤のＦＫ５０６は、Ｉｄ１発現の主な活性化剤であった。ＦＫ５０６は、免疫抑制を誘導するために用いられる治療血清レベルの１５ｎｇ／ｍｌの用量、およびはるかに低い用量の０.２ｎｇ／ｍｌで、ＢＭＰ４（１０ｎｇ／ｍｌ）に匹敵する様式で、刺激後１時間でＩｄ１タンパク質発現を増加させた（ｎ＝３、ｐ＜０.０６）。これは、ＢＭＰ４と同様に、リン酸化Ｓｍａｄ１／５／８に１５分で先行された（ｎ＝３、ｐ＜０.００１）。ＦＫ５０６は、ＢＭＰ４に応答しなかった６人中３人の患者を含めて、６人の異なるIＰＡＨ患者から移植時に収集したＰＡＥＣにおいてｐ−Ｓｍａｄ１／５／８およびＩｄ１発現を誘導した。ＢＭＰ４およびＦＫ５０６の両方は、ＰＡＥＣの生存を改善し（ｎ＝５、ｐ＜０.００１）、血管新生アッセイにおいて管形成を誘導した（ｎ＝３、ｐ＜０.０１）。低酸素症に３週間さらしたＥＣにＢＭＰＲＩＩの条件的欠失を有するマウスにおいて、ＦＫ５０６（０.０５ｍｇ／ｋｇ／ｄ）（血清レベル０.２ｎｇ／ｍｌ）での３週間の予防的治療は、ＰＡＨおよび右心室肥大（ＲＶＨ）の発症を防ぎ、ＲＶ収縮期圧は３２±０.９対２１±２.３ｍｍＨｇ、ｐ＜０.００１であり、ＲＶＨは３６.２±２.５対２６.９±４.５、ｐ＜０.０１、両方ともｎ＝５であった。ＦＫ５０６が、ＰＡＨも逆転できるか否かを試験するために、発明者らは、モノクロタリン（６０ｍｇ、１回、皮下）でラットにＰＡＨを誘導し、ＰＡＨが確立された時間の注射後３週目にＦＫ５０６での治療を開始した（ＲＶＳＰ ５０.８±２.７ｍｍＨｇ、ｎ＝７）。ＦＫ５０６での３週間の治療後の生存率は、ビヒクル群（６６％）と比較して、ＦＫ５０６（５７％）に差は認められなかったにもかかわらず、ＰＡＨを乗り越えた動物の生存率は、ビヒクル治療動物と比較して、ＦＫ５０６での治療後に著しく低下した（ＲＶＳＰ３９.５±４.７対６８.６±４.２ｍｍＨｇ、ｎ＝１４）。
【００３５】
ＳＵＧＥＮ（２０ｍｇ／ｋｇ、皮下）および３週間の慢性低酸素症の併用刺激は、ラットをＲＡに戻し、さらに５週間放置したときにＰＡＨを誘導したが（ＲＶＳＰ ５５.１±１０.７対対照２５.１±０.５ｍｍＨｇ、ＲＶＨ ０.２４±０.００５対０.４４±０.０７、ｎ＝４、ｐ＜０.０５）、ＰＡＨが確立した時点で、ＦＫ５０６の３週間の皮下投与による治療を行った時のラットにおいて、ビヒクル治療動物（ＲＶＳＰ ６６.５±４．１ｍｍＨｇ対３９.５±０.６ｍｍＨｇ、ＲＶＨ ０.４９±０.０７対０.３４±０.０２、ｎ＝４、ｐ＜０．０５）に対して、ＦＫ５０６治療動物ではＰＡＨの進行を防ぎ、ＰＡＨの退縮を誘導することができた。血管の総数あたりの小さな肺動脈における新生内膜形成（肺胞壁と肺胞管の血管）が、６１.２±６.１％から１６.２±５.８％に減少した（ｎ＝４、ｐ＜０.０１）。０.２ｎｇ／ｍｌの低用量のＦＫ５０６では、ＷＢＣの総数またはＷＢＣの百分率（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ＷＢＣ ｃｏｕｎｔ）に対する影響は観察されず、減少した核内ＮＦＡＴｃ２の免疫抑制効果も測定されなかった。
【００３６】
結論
ＦＫ５０６（タクロリムス）は、ＦＤＡに承認された薬物および生理活性化合物の定量的なハイスループットスクリーン（ｑＨＴＳ）で、マウスおよびラットにおいて、ＢＭＰＲＩＩシグナル伝達を活性化し、肺動脈内皮細胞（ＰＡＥＣ）の正常な機能を回復させ、実験的ＰＡＨを予防し、逆転させる薬物として、同定された。
【００３７】
実施例２  臨床研究
患者は、肺高血圧症（ＰＨ）を有しており、現在、ＰＤＥ−５阻害剤（シルデナフィル、タダラフィル）、プロスタサイクリン（フローラン、リモジュリン、イロプロスト）および／またエンドセリン拮抗薬のアンブリセンタンなどの、ＰＨための１つまたは複数の薬物で治療されているため、本研究に参加することが求められる。これら全ての薬物は血管拡張薬として有効であるが、肺動脈の病理学的リモデリングを逆転させることができる新しい薬剤が求められている。対象が肺高血圧症の家族型であろうとなかろうと、ある特定の経路（ＢＭＰＲ２）がＰＨにおいて損なわれることが知られている。免疫抑制薬ＦＫ５０６（タクロリムス）は、実験的な肺高血圧症においてＢＭＰＲ２経路を活性化し、肺高血圧症を防ぎ、逆転させることを複数の研究が証明している。
【００３８】
この研究は、ＰＨを有する１８〜７０歳の男性または女性の対象に開放されている。患者がこの研究に参加することに同意する場合は、その患者は、本研究に参加する４０人の対象のうちの一人となる。
【００３９】
患者が参加することに同意し、資格を得ると、その患者には、ランダム化と呼ばれるプロセスを通して本治験薬が割り当てられる。ランダム化とは、患者が受け取る治験薬が偶然に（コインのフリップのように）選択されることを意味する。この研究のための治験薬の選択肢は、プラセボ、ならびに３つの異なる用量のＦＫ５０６である（血中濃度１.０未満、１.５〜２.５、および３〜５ｎｇ／ｍｌ；参照として、免疫抑制用量は５〜１５ｎｇ／ｍｌである）。この治験薬は、患者のベースラインのＰＨ療法に追加される。この研究のためのランダム化は、患者がＦＫ５０６での治療を受ける可能性が７５％であることを意味する１:３である。
【００４０】
この研究の目的は、免疫抑制のために用いられる通常の用量未満の用量でＦＫ５０６をＰＨ治療に加えることが安全であり、ＦＫ５０６が肺高血圧症を改善するか否かを確認することである。心機能は、エコー、６分間の歩行およびバイオマーカーのＮＴ−ｐｒｏＢＮＰによって評価される。
【００４１】
試験薬
ＦＫ５０６（タクロリムス）は、臓器移植および自己免疫疾患において用いられる、ＦＤＡに承認された免疫抑制薬である。ＦＫ５０６の代謝は患者間で非常に広範に異なるので、治療は、全血中の薬物レベルを測定することによって指示される。血液は、ＦＫ５０６のレベルを測定するための試験ラボに輸送される。目的の免疫抑制用量は、５〜１５ｎｇ／ｍｌである。この研究において、発明者らは、はるかに低い用量を目標にしている（上記参照）。患者は、試験期間中、本治験薬を受け取る。この薬物は、薬物摂取の監視を可能にするように準備されたボトルで送られる。この装置は、投薬事象監視システム（Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ Ｅｖｅｎｔ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（ＭＥＭＳ））と呼ばれ、適切に薬物摂取を監視するためのものである。患者は、常に、このボトルから一度に１錠を取り出す必要がある。
【００４２】
本研究への参加は、約１６週間続く。この期間、患者は、診療所を約４〜５回訪問することが義務づけられている。
【００４３】
研究手続き
患者がこの研究に参加することに同意する場合は、患者は、最初に、この同意書に署名する。患者が、署名し、日付を記入し、この同意書のコピーを受け取った後、患者がこの研究に参加する資格があることを確認するために、彼らは、本研究のスクリーニング訪問をする。以前の試験結果（心エコー図、身体検査、肺機能検査、右心カテーテル法（ＲＨＣ））も用いて、患者の適格性を決定してもよい。
【国際調査報告】
2014513121.tif 000002