(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）：2014531449.tif 000049の化合物に関し、式中、Ｘ１〜Ｘ５、Ｙ、ＺＡ、ＺＢ、ＲおよびＡは、明細書本文および請求項に記載の意味を有する。この化合物は、免疫学的、炎症性、自己免疫性、アレルギー性の障害および免疫学的なことが関係している疾患の治療または予防のためのキナーゼ阻害剤として有用である。本発明は、この化合物を含む医薬組成物および薬剤としてのその使用にも関する。
2014531449.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2014531449.tif 000044
〔式中、
ＲはＨまたはＦであり、
ＺＡおよびＺＢは独立して、ＣＨおよびＮからなる群から選択され、
環Ａはフェニル、ナフチル、芳香族５〜６員ヘテロシクリルまたは芳香族９〜１１員ヘテロビシクリルであり、環Ａは１つ以上のＲ１で置換されていてもよく、
各Ｒ１は独立してハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ２、ＯＲ２、Ｃ（Ｏ）Ｒ２、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ２、Ｓ（Ｏ）Ｒ２、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、ＳＲ２、Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ２、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）ＯＲ２ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｔ１、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであり、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ３で置換されていてもよく、これらのＲ３は同じであるかまたは異なり、
Ｒ２、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂは独立してＨ、Ｔ１、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ３で置換されていてもよく、これらのＲ３は同じであるかまたは異なり、
Ｒ３はハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、Ｓ（Ｏ）Ｒ４、Ｎ（Ｒ４）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ４ａＲ４ｂ）、Ｎ（Ｒ４）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４ａＲ４ｂ）、ＳＲ４、Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ４、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ４ａ、Ｎ（Ｒ４）Ｓ（Ｏ）２Ｒ４ａ、Ｎ（Ｒ４）Ｓ（Ｏ）Ｒ４ａ、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４ａＲ４ｂ）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ４ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）またはＴ１であり、
Ｒ４、Ｒ４ａ、Ｒ４ｂは独立してＨ、Ｔ１、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なり、
Ｔ１はＣ３−７シクロアルキル、飽和４〜７員ヘテロシクリルまたは飽和７〜１１員ヘテロビシクリルであり、Ｔ１は１つ以上のＲ１０で置換されていてもよく、これらのＲ１０は同じであるかまたは異なり、
Ｙは（Ｃ（Ｒ５Ｒ５ａ））ｎであり、
ｎは０、１、２、３または４であり、
Ｒ５、Ｒ５ａは独立してＨおよび非置換Ｃ１−６アルキルからなる群から選択されるか、または共同でオキソ（＝Ｏ）を形成し、
あるいは、Ｒ５、Ｒ５ａは連結されて非置換Ｃ３−７シクロアルキルを形成してもよく、
Ｘ１はＣ（Ｒ６）またはＮであり、Ｘ２はＣ（Ｒ６ａ）またはＮであり、Ｘ３はＣ（Ｒ６ｂ）またはＮであり、Ｘ４はＣ（Ｒ６ｃ）またはＮであり、Ｘ５はＣ（Ｒ６ｄ）またはＮであり、ただし、Ｎであるのは、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５のうち、最多でも２つであり、
Ｒ６、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ６ｃ、Ｒ６ｄは独立してＲ６ｅ、Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、ＯＲ７、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７Ｒ７ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ７Ｒ７ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７Ｒ７ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ７、Ｓ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ７ａＲ７ｂ）、Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７ａＲ７ｂ）、ＳＲ７、Ｎ（Ｒ７Ｒ７ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７ａ、Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）２Ｒ７ａ、Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）Ｒ７ａ、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７ａＲ７ｂ）、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７Ｒ７ａ）、Ｔ２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ１１で置換されていてもよく、これらのＲ１１は同じであるかまたは異なり、ただしＲ６、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ６ｃ、Ｒ６ｄの１つはＲ６ｅであり、
Ｒ６ｅはＮ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ１１ａ）＝Ｃ（Ｒ１１ｂＲ１１ｃ）、Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）２Ｃ（Ｒ１１ａ）＝Ｃ（Ｒ１１ｂＲ１１ｃ）またはＮ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｃ≡Ｃ（Ｒ１１ａ）であり、
あるいは、対Ｒ６／Ｒ６ａ、Ｒ６ａ／Ｒ６ｂの１つは連結されて環Ｔ３を形成してもよく、
Ｒ７、Ｒ７ａ、Ｒ７ｂは独立してＨ、Ｔ２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ８で置換されていてもよく、これらのＲ８は同じであるかまたは異なり、
Ｒ８はハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ９、ＯＲ９、Ｃ（Ｏ）Ｒ９、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９Ｒ９ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ９Ｒ９ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９Ｒ９ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、Ｓ（Ｏ）Ｒ９、Ｎ（Ｒ９）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ９ａＲ９ｂ）、Ｎ（Ｒ９）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９ａＲ９ｂ）、ＳＲ９、Ｎ（Ｒ９Ｒ９ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ９、Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、Ｎ（Ｒ９）Ｓ（Ｏ）２Ｒ９ａ、Ｎ（Ｒ９）Ｓ（Ｏ）Ｒ９ａ、Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９ａＲ９ｂ）、Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）ＯＲ９ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９Ｒ９ａ）またはＴ２であり、
Ｒ９、Ｒ９ａ、Ｒ９ｂは独立してＨ、Ｔ２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ１２で置換されていてもよく、これらのＲ１２は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１０はハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、ＯＲ１３、オキソ（＝Ｏ）（環が少なくとも部分的に飽和している場合）、Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３Ｒ１３ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１３Ｒ１３ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３Ｒ１３ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）Ｒ１３、Ｎ（Ｒ１３）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１３ａＲ１３ｂ）、Ｎ（Ｒ１３）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３ａＲ１３ｂ）、ＳＲ１３、Ｎ（Ｒ１３Ｒ１３ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１３、Ｎ（Ｒ１３）Ｃ（Ｏ）Ｒ１３ａ、Ｎ（Ｒ１３）Ｓ（Ｏ）２Ｒ１３ａ、Ｎ（Ｒ１３）Ｓ（Ｏ）Ｒ１３ａ、Ｎ（Ｒ１３）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３ａＲ１３ｂ）、Ｎ（Ｒ１３）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３Ｒ１３ａ）、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであり、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ１４で置換されていてもよく、これらのＲ１４は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１３、Ｒ１３ａ、Ｒ１３ｂは独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ１４で置換されていてもよく、これらのＲ１４は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１１、Ｒ１２は独立してハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１５、ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１５、Ｓ（Ｏ）Ｒ１５、Ｎ（Ｒ１５）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１５ａＲ１５ｂ）、Ｎ（Ｒ１５）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５ａＲ１５ｂ）、ＳＲ１５、Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１５、Ｎ（Ｒ１５）Ｃ（Ｏ）Ｒ１５ａ、Ｎ（Ｒ１５）Ｓ（Ｏ）２Ｒ１５ａ、Ｎ（Ｒ１５）Ｓ（Ｏ）Ｒ１５ａ、Ｎ（Ｒ１５）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５ａＲ１５ｂ）、Ｎ（Ｒ１５）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１５ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）およびＴ２からなる群から選択され、
Ｒ１１ａ、Ｒ１１ｂ、Ｒ１１ｃは独立してＨ、ハロゲン、ＣＮ、ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）およびＣ１−６アルキルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキルは１つ以上のＲ１４で置換されていてもよく、これらのＲ１４は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１５、Ｒ１５ａ、Ｒ１５ｂは独立してＨ、Ｔ２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なり、
Ｒ１４はハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、ＯＲ１６、Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６Ｒ１６ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１６Ｒ１６ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６Ｒ１６ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、Ｓ（Ｏ）Ｒ１６、Ｎ（Ｒ１６）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１６ａＲ１６ｂ）、Ｎ（Ｒ１６）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａＲ１６ｂ）、ＳＲ１６、Ｎ（Ｒ１６Ｒ１６ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１６、Ｎ（Ｒ１６）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６ａ、Ｎ（Ｒ１６）Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６ａ、Ｎ（Ｒ１６）Ｓ（Ｏ）Ｒ１６ａ、Ｎ（Ｒ１６）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａＲ１６ｂ）、Ｎ（Ｒ１６）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６ａまたはＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６Ｒ１６ａ）であり、
Ｒ１６、Ｒ１６ａ、Ｒ１６ｂは独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なり、
Ｔ２はフェニル、ナフチル、インデニル、インダニル、Ｃ３−７シクロアルキル、４〜７員ヘテロシクリルまたは７〜１１員ヘテロビシクリルであり、Ｔ２は１つ以上のＲ１７で置換されていてもよく、これらのＲ１７は同じであるかまたは異なり、
Ｔ３はフェニル、Ｃ３−７シクロアルキルまたは４〜７員ヘテロシクリルであり、Ｔ３は１つ以上のＲ１８で置換されていてもよく、これらのＲ１８は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１７、Ｒ１８は独立してハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１９、ＯＲ１９、オキソ（＝Ｏ）（環が少なくとも部分的に飽和している場合）、Ｃ（Ｏ）Ｒ１９、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９Ｒ１９ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１９Ｒ１９ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９Ｒ１９ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１９、Ｓ（Ｏ）Ｒ１９、Ｎ（Ｒ１９）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１９ａＲ１９ｂ）、Ｎ（Ｒ１９）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９ａＲ１９ｂ）、ＳＲ１９、Ｎ（Ｒ１９Ｒ１９ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１９、Ｎ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａ、Ｎ（Ｒ１９）Ｓ（Ｏ）２Ｒ１９ａ、Ｎ（Ｒ１９）Ｓ（Ｏ）Ｒ１９ａ、Ｎ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９ａＲ１９ｂ）、Ｎ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１９ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９Ｒ１９ａ）、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ２０で置換されていてもよく、これらのＲ２０は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１９、Ｒ１９ａ、Ｒ１９ｂは独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ２０で置換されていてもよく、これらのＲ２０は同じであるかまたは異なり、
Ｒ２０はハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、ＯＲ２１、Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２１Ｒ２１ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２１Ｒ２１ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２１Ｒ２１ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ２１、Ｓ（Ｏ）Ｒ２１、Ｎ（Ｒ２１）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２１ａＲ２１ｂ）、Ｎ（Ｒ２１）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２１ａＲ２１ｂ）、ＳＲ２１、Ｎ（Ｒ２１Ｒ２１ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、Ｎ（Ｒ２１）Ｃ（Ｏ）Ｒ２１ａ、Ｎ（Ｒ２１）Ｓ（Ｏ）２Ｒ２１ａ、Ｎ（Ｒ２１）Ｓ（Ｏ）Ｒ２１ａ、Ｎ（Ｒ２１）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２１ａＲ２１ｂ）、Ｎ（Ｒ２１）Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１ａまたはＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２１Ｒ２１ａ）であり、
Ｒ２１、Ｒ２１ａ、Ｒ２１ｂは独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なる〕
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
式（Ｉ）の環Ａ、ＺＡ、ＺＢが、式（Ｉａ）：
【化２】
2014531449.tif 000045
を与えるように定義され、環Ａが芳香族５員複素環であり、Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は独立してＣ（Ｒ１）、Ｎ、Ｎ（Ｒ１）、ＯおよびＳからなる群から選択され、ただしＺ１、Ｚ２、Ｚ３の少なくとも１つはＮであり、Ｒ、Ｙ、Ｘ１〜Ｘ５およびＲ１は請求項１で定義した通りである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式（Ｉ）の環Ａ、ＺＡ、ＺＢ、Ｒが、式（Ｉｂ）：
【化３】
2014531449.tif 000046
を与えるように定義され、環Ａが５員芳香族複素環であり、Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は独立してＣ（Ｒ１）、Ｎ、Ｎ（Ｒ１）、ＯおよびＳからなる群から選択され、ただしＺ１、Ｚ２、Ｚ３の少なくとも１つはＮであり、Ｙ、Ｘ１〜Ｘ５およびＲ１は請求項１で定義した通りである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
式（Ｉ）の環Ａ、ＺＡ、ＺＢが、式（Ｉｃ）：
【化４】
2014531449.tif 000047
を与えるように定義され、環Ａが芳香族５員複素環であり、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３およびＺ４は独立してＣ（Ｒ１）、Ｎ、Ｎ（Ｒ１）、ＯおよびＳからなる群から選択され、ただしＺ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４の少なくとも１つはＮまたはＮ（Ｒ１）であり、Ｒ、Ｙ、Ｘ１〜Ｘ５およびＲ１は請求項１で定義した通りである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
式（Ｉ）のＡ、ＺＡ、ＺＢが、式（Ｉｄ）：
【化５】
2014531449.tif 000048
を与えるように定義され、環ＡにおけるＺ１はＣ（Ｒ１）またはＮであり、Ｚ２はＣ（Ｒ１）またはＮであり、Ｚ３はＣ（Ｒ１）またはＮであり、Ｚ４はＣ（Ｒ１）またはＮであり、Ｚ５はＣ（Ｒ１）またはＮであり、ただし、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５のうち、Ｎであるのは最多で２つであり、
２つの隣接するＲ１は連結されて、Ｚ１〜Ｚ５を含む環と共に芳香族二環式環Ｔ０を形成してもよく、
Ｔ０は芳香族９〜１１員ヘテロビシクリル、ナフチル、インデニルまたはインダニルであり、Ｔ０は１つ以上のＲ１ａで置換されていてもよく、これらのＲ１ａは同じであるかまたは異なり、
Ｒ１ａはハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ２、ＯＲ２、オキソ（＝Ｏ）（環が少なくとも部分的に飽和している場合）、Ｃ（Ｏ）Ｒ２、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ２、Ｓ（Ｏ）Ｒ２、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、ＳＲ２、Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ２、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）ＯＲ２ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｔ１またはＣ１−６アルキルであり、Ｃ１−６アルキルは１つ以上のＲ３で置換されていてもよく、これらのＲ３は同じであるかまたは異なり、
Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３、Ｙ、Ｘ１〜Ｘ５およびＲ１は請求項１で定義した通りである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
ＲがＨである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
ＹがＣＨ２である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ６、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ６ｃ、Ｒ６ｄのうちの０個または１つがＮである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ６、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ６ｃ、Ｒ６ｄが独立してＲ６ｅ、Ｈ、ハロゲンおよびＣ１−６アルキルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なり、ただし、Ｒ６、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ６ｃ、Ｒ６ｄの１つはＲ６ｅである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ７、Ｒ１１ａ、Ｒ１１ｂ、Ｒ１１ｃが独立してＨおよびＣ１−４アルキルからなる群から選択され、Ｃ１−４アルキルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ６ａがＲ６ｅである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ６ｅがＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ＝ＣＨ２またはＮＨＣ（Ｏ）Ｃ≡ＣＨである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
環Ａがピラゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、トリアゾール、フェニルまたはピリジル環である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
同じであるかまたは異なる０、１または２個のＲ１がＨ以外のものである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１がＣ１−４アルキルであり、１または２個のＲ３で置換されていてもよく、これらのＲ３は同じであるかまたは異なる、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ３がハロゲン、ＣＮ、ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）またはＣ（Ｏ）Ｔ１である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド、
Ｎ−（２−フルオロ−５−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド、
Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）プロピオルアミド、
Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）エテンスルホンアミド、
Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）メタクリルアミド、
３−メチル−Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）ブト−２−エンアミド、
Ｎ−（３−（（２−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）フェニル）エテンスルホンアミド、
Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−１−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド、
Ｎ−（３−（（２−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド、および
Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−１−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド
からなる群から選択される、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、薬学的に許容可能な担体と共に、任意で１種以上の他の医薬組成物と組み合わせて含んでなる、医薬組成物。
【請求項１９】
薬剤として使用するための、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２０】
ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣに関連した疾患または障害を治療または予防する方法で使用するための、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２１】
移植拒絶反応の免疫学的、炎症性、自己免疫性若しくはアレルギー性の障害若しくは疾患または移植片対宿主病を治療または予防する方法で使用するための、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２２】
増殖性疾患を治療または予防する方法において使用するための、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２３】
ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣに関連した疾患および障害を治療または予防するための薬剤を製造するための、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項２４】
患者／患畜に治療有効量の請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含んでなる、ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣに関連した疾患および障害からなる群から選択される１つ以上の病態を、それを必要としている哺乳動物の患者／患畜において治療する、制御する、進行遅延させる、または予防するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シグナル伝達、増殖、サイトカイン分泌等の細胞活動を調節するにあたってタンパク質キナーゼ活性を調節するのに有用な、薬学的に許容可能な塩を含めた新規な分類のキナーゼ阻害剤に関する。より具体的には、本発明では、キナーゼ活性、特にはＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫおよびＴＥＣ活性並びに上述したような細胞活動に関係したシグナル伝達経路を阻害する化合物を提供する。さらに、本発明は上記の化合物を含む、例えば免疫学的、炎症性、自己免疫性またはアレルギー性の障害若しくは疾患または移植拒絶反応または移植片対宿主病を治療または予防するための医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
キナーゼはタンパク質、脂質、糖、ヌクレオシドおよび他の細胞代謝産物のリン酸化を触媒し、また真核細胞の生理の全ての局面において重要な役割を果たす。特に、タンパク質キナーゼおよび脂質キナーゼは、細胞外メディエータまたは刺激、例えば増殖因子、サイトカインまたはケモカインに応答した細胞の活性化、増殖、分化および生存を制御するシグナル伝達事象に関与している。一般に、タンパク質キナーゼは、チロシン残基を優先的にリン酸化するものと、セリンおよび／またはスレオニン残基を優先的にリン酸化するものという２つの群に分類される。チロシンキナーゼには、膜貫通増殖因子受容体、例えば上皮増殖因子受容体(ＥＧＦＲ）および細胞質非受容体型キナーゼ、例えばＴＥＣキナーゼ、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）が含まれる。
【０００３】
ＴＥＣファミリーのキナーゼには５つのメンバー（ＴＥＣ、ＢＴＫ、ＩＴＫ、ＲＬＫ、ＢＭＸ）が含まれ、これらは主に造血細胞で発現し、また免疫受容体、例えば高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）、Ｔ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）を介したシグナル伝達において中心的な役割を果たす。ＴＥＣファミリーのメンバーは、共通のタンパク質ドメイン構成を有する。ＴＥＣファミリーのメンバーは、アミノ末端プレクストリン相同（ＰＨ）ドメイン、１つまたは２つのプロリンリッチ領域を有するＴＥＣ相同ドメイン、ＳＲＣ相同３（ＳＨ３）および２（ＳＨ２）タンパク質相互作用ドメイン並びにカルボキシ末端キナーゼドメインを有する。ＴＥＣファミリーキナーゼの活性化には幾つかのステップ、すなわちプレクストリン相同ドメインを介した細胞膜へのリクルートメント、ＳＲＣファミリーキナーゼによるリン酸化および免疫受容体シグナル伝達複合体近傍へとタンパク質を移動させるタンパク質との相互作用を必要とする（Schwartzberg et al., 2005, Nature Reviews Immunology 5, 284-295）。
【０００４】
ＴＥＣファミリーキナーゼは、Ｂ細胞の発生および活性化に必須である。変異したＢＴＫを有する患者はＢ細胞発生における遮断を示し、その結果、Ｂ細胞および形質細胞をほぼ完全に欠くこととなり、免疫グロブリンレベルは低下し、液性免疫応答が損なわれる。
【０００５】
加えて、ＴＥＣキナーゼは、高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）を介したマスト細胞活性化に関与している。ＩＴＫおよびＢＴＫはマスト細胞で発現し、ＦｃεＲＩ架橋によって活性化される。気道経由でアレルゲンに曝露されると、ＩＴＫ欠損マウスにおいて、急性期および遅延型の両方の炎症性アレルギー反応は著しく低下する。重要なのは、野生型レベルのアレルゲン特異的ＩｇＥおよびＩｇＧ１であるにも関わらず、気道マスト細胞の脱顆粒が損なわれることである（Forssell et al., 2005, Am. J. Respir. Cell Mol. Bio. 32, 511-520）。
【０００６】
Ｔ細胞は３つのＴＥＣキナーゼ（ＩＴＫ、ＲＬＫ、ＴＥＣ）を発現し、これらはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の下流で活性化され、またＴＣＲシグナル伝達に関与している。Ｉｔｋタンパク質をコードしている遺伝子を欠失させた遺伝子操作マウスの研究からは、Ｉｔｋの生理学的および病態生理学的な機能に関する重要な情報が得られる。Ｉｔｋ欠損（Ｉｔｋ−／−）マウスはＴヘルパー２（ＴＨ２）細胞応答において特異的な欠陥を有し、またアレルギー性喘息のモデルにおいて病状は軽い。逆に、ＴＨ２細胞媒介性疾患であるアトピー性皮膚炎の患者のＴ細胞ではＩＴＫ発現が増加する。このため、ＴＨ２細胞媒介性疾患の治療ターゲットとしてＩＴＫが示唆されている（Schwartzberg et al., 2005, Nature Reviews Immunology 5, 284-295）。
【０００７】
創薬において最近注目を浴びている別のキナーゼ群が、非受容体型チロシンキナーゼのヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）ファミリーである。哺乳動物において、このファミリーには４つのメンバー：ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、チロシンキナーゼ２（ＴＹＫ２）が含まれる。各タンパク質は、キナーゼドメインおよび触媒的に不活性な偽キナーゼドメインを有する。ＪＡＫタンパク質はサイトカイン受容体に、そのアミノ末端ＦＥＲＭ（バンド−４．１、エズリン、ラディキシン、モエシン）ドメインを介して結合する。サイトカインがその受容体に結合した後、ＪＡＫは活性化され、受容体をリン酸化することでシグナル伝達分子、特にはシグナル伝達性転写因子（Ｓｔａｔ）ファミリーのメンバー用のドッキング部位を作り出す（Yamaoka et al., 2004. The Janus kinases (Jaks). Genome Biology 5(12): 253）。
【０００８】
哺乳動物において、ＪＡＫ、ＪＡＫ２およびＴＹＫ２は広範に発現する。対照的に、ＪＡＫ３は主に造血細胞で発現し、発現は細胞の発生および活性化によって高度に調整されている（Musso et al., 1995. 181(4):1425-31）。
【０００９】
ＪＡＫ欠損細胞株および標的遺伝子破壊マウスの研究は、サイトカインシグナル伝達におけるＪＡＫの必要不可欠且つ重複しない機能を明らかにした。ＪＡＫ１ノックアウトマウスは周産期致死表現型を示し、これは吸乳を阻む神経学的作用に関係すると考えられる（Rodig et al., 1998. Cell 93(3):373-83）。ＪＡＫ２遺伝子の欠失は、赤血球生成における異常の結果、胎齢１２．５日目に胚性致死に至る（Neubauer et al., 1998. Cell 93(3):397-409）。興味深いことに、ＪＡＫ３の欠損は、常染色体劣性重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）のヒトにおいて初めて確認された（Macchi et al., 1995. Nature 377(6544):65-68）。ＪＡＫ３ノックアウトマウスもＳＣＩＤを呈するが、非免疫性の欠陥を示さず、これは免疫抑制剤としてのＪＡＫ３の阻害剤の作用がインビボでは制限され、従って免疫抑制のための有望な薬剤となることを示唆している（Papageorgiou and Wikman 2004, Trends in Pharmacological Sciences 25(11):558-62）。
【００１０】
急性巨核芽球性白血病（ＡＭＫＬ）の患者では、ＪＡＫ３に関する活性化突然変異が観察されている（Walters et al., 2006. Cancer Cell 10(1):65-75）。これらのＪＡＫ３突然変異型は、Ｂａ／Ｆ３細胞を形質転換して因子独立的に増殖させ、またマウスモデルにおいて巨核芽球性白血病の特徴を誘発させ得る。
【００１１】
ＪＡＫ３の阻害に関係した疾患および障害については、例えば国際公開第０１／４２２４６号および第２００８／０６０３０１号のパンフレットに更に記載されている。
【００１２】
幾つかのＪＡＫ３阻害剤は文献で報告されており、これらは医療分野で有用となり得る（O’Shea et al., 2004. Nat. Rev. Drug Discov. 3(7):555-64）。ある強力なＪＡＫ３阻害剤（ＣＰ−６９０５５０）が臓器移植の動物モデル（Changelian et al., 2003, Science 302(5646):875-888）および臨床試験（Pesu et al., 2008. Immunol. Rev. 223, 132-142で概説されている）で有効性を示すと報告された。ＣＰ−６９０５５０阻害剤はＪＡＫ３キナーゼに対して選択的ではなく、ＪＡＫ２キナーゼをほぼ等効力で阻害する（Jiang et al., 2008, J. Med. Chem. 51(24):8012-8018）。ＪＡＫ２の阻害は貧血を引き起こし得ることから、ＪＡＫ２より高い効力でＪＡＫ３を阻害する選択的ＪＡＫ３阻害剤は有利な治療特性を有し得ると予測される（Ghoreschi et al., 2009. Nature Immunol. 4, 356-360）。
【００１３】
ＪＡＫ３およびＪＡＫ２キナーゼ阻害活性を示すピリミジン誘導体は、国際公開第２００８／００９４５８−Ａ号パンフレットに記載されている。ＪＡＫ経路を調節するまたはＪＡＫキナーゼ、特にはＪＡＫ３を阻害する病態の治療におけるピリミジン化合物は、国際公開第２００８／１１８８２２−Ａ号および国際公開第２００８／１１８８２３号のパンフレットに記載されている。
【００１４】
ＪＡＫ３阻害剤としてのフルオロ置換ピリミジン化合物は国際公開第２０１０／１１８９８６−Ａ号パンフレットに記載されている。ＪＡＫ阻害剤としてのヘテロシクリルピラゾロピリミジン類似体は国際公開第２０１１／０４８０８２−Ａ号パンフレットに記載されている。
【００１５】
ピロロピリミジン化合物が、国際公開第２００９／０９８２３６−Ａ１号、国際公開第２０１０／１００４３１−Ａ１号および国際公開第２０１０／１２９０５３−Ａ２号のパンフレットに記載されている。
【００１６】
ピラゾロピリジンおよびその調製は、国際公開第２００６／０６３８２０−Ａ１号パンフレット、国際公開第２０１１／０１９７８０−Ａ１号パンフレットおよびR.V. Fucini et al., Bioorg. & Med. Chem. Lett. 18 (2008), 5648-5652から公知である。
【００１７】
Ｊａｋ阻害剤は、出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１２／０５６８８７、ＰＣＴ／ＥＰ２０１２／０６４５１０およびＰＣＴ／ＥＰ２０１２／０６４５１２並びに国際公開第２０１２／０２２６８１−Ａ２号の国際特許出願にも記載されている。
【００１８】
ＪＡＫ阻害剤は当該分野で公知であるとしても、少なくとも部分的により効果的な薬学的な特性、例えば活性、特にはＪＡＫ２キナーゼより優先しての選択性およびＡＤＭＥ特性を有する追加のＪＡＫ阻害剤を提供することが求められている。
【発明の概要】
【００１９】
したがって、本発明の目的は、ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣに関係した障害の治療または予防に効果的となり得る新しい分類のキナーゼ阻害剤を提供することである。
【００２０】
したがって、本発明は、式（Ｉ）：
【化１】
2014531449.tif 000003
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供し、式中、
ＲはＨまたはＦであり、
ＺＡおよびＺＢは独立して、ＣＨおよびＮからなる群から選択され、
環Ａはフェニル、ナフチル、芳香族５〜６員ヘテロシクリルまたは芳香族９〜１１員ヘテロビシクリルであり、環Ａは１つ以上のＲ１で置換されていてもよく、
各Ｒ１は独立してハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ２、ＯＲ２、Ｃ（Ｏ）Ｒ２、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ２、Ｓ（Ｏ）Ｒ２、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、ＳＲ２、Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ２、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）ＯＲ２ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｔ１、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであり、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ３で置換されていてもよく、これらのＲ３は同じであるかまたは異なり、
Ｒ２、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂは独立してＨ、Ｔ１、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ３で置換されていてもよく、これらのＲ３は同じであるかまたは異なり、
Ｒ３はハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、Ｓ（Ｏ）Ｒ４、Ｎ（Ｒ４）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ４ａＲ４ｂ）、Ｎ（Ｒ４）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４ａＲ４ｂ）、ＳＲ４、Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ４、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ４ａ、Ｎ（Ｒ４）Ｓ（Ｏ）２Ｒ４ａ、Ｎ（Ｒ４）Ｓ（Ｏ）Ｒ４ａ、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４ａＲ４ｂ）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ４ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）またはＴ１であり、
Ｒ４、Ｒ４ａ、Ｒ４ｂは独立してＨ、Ｔ１、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なり、
Ｔ１はＣ３−７シクロアルキル、飽和４〜７員ヘテロシクリルまたは飽和７〜１１員ヘテロビシクリルであり、Ｔ１は１つ以上のＲ１０で置換されていてもよく、これらのＲ１０は同じであるかまたは異なり、
Ｙは（Ｃ（Ｒ５Ｒ５ａ））ｎであり、
ｎは０、１、２、３または４であり、
Ｒ５、Ｒ５ａは独立してＨおよび非置換Ｃ１−６アルキルからなる群から選択されるか、または共同でオキソ（＝Ｏ）を形成し、
あるいは、Ｒ５、Ｒ５ａは連結されて非置換Ｃ３−７シクロアルキルを形成してもよく、
Ｘ１はＣ（Ｒ６）またはＮであり、Ｘ２はＣ（Ｒ６ａ）またはＮであり、Ｘ３はＣ（Ｒ６ｂ）またはＮであり、Ｘ４はＣ（Ｒ６ｃ）またはＮであり、Ｘ５はＣ（Ｒ６ｄ）またはＮであり、ただし、Ｎであるのは、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５のうち、最多でも２つであり、
Ｒ６、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ６ｃ、Ｒ６ｄは独立してＲ６ｅ、Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、ＯＲ７、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７Ｒ７ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ７Ｒ７ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７Ｒ７ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ７、Ｓ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ７ａＲ７ｂ）、Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７ａＲ７ｂ）、ＳＲ７、Ｎ（Ｒ７Ｒ７ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７ａ、Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）２Ｒ７ａ、Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）Ｒ７ａ、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７ａＲ７ｂ）、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７Ｒ７ａ）、Ｔ２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ１１で置換されていてもよく、これらのＲ１１は同じであるかまたは異なり、ただしＲ６、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ６ｃ、Ｒ６ｄの１つはＲ６ｅであり、
Ｒ６ｅはＮ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ１１ａ）＝Ｃ（Ｒ１１ｂＲ１１ｃ）、Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）２Ｃ（Ｒ１１ａ）＝Ｃ（Ｒ１１ｂＲ１１ｃ）またはＮ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｃ≡Ｃ（Ｒ１１ａ）であり、
あるいは、対Ｒ６／Ｒ６ａ、Ｒ６ａ／Ｒ６ｂの１つは連結されて環Ｔ３を形成してもよく、
Ｒ７、Ｒ７ａ、Ｒ７ｂは独立してＨ、Ｔ２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ８で置換されていてもよく、これらのＲ８は同じであるかまたは異なり、
Ｒ８はハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ９、ＯＲ９、Ｃ（Ｏ）Ｒ９、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９Ｒ９ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ９Ｒ９ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９Ｒ９ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、Ｓ（Ｏ）Ｒ９、Ｎ（Ｒ９）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ９ａＲ９ｂ）、Ｎ（Ｒ９）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９ａＲ９ｂ）、ＳＲ９、Ｎ（Ｒ９Ｒ９ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ９、Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、Ｎ（Ｒ９）Ｓ（Ｏ）２Ｒ９ａ、Ｎ（Ｒ９）Ｓ（Ｏ）Ｒ９ａ、Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９ａＲ９ｂ）、Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）ＯＲ９ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９Ｒ９ａ）またはＴ２であり、
Ｒ９、Ｒ９ａ、Ｒ９ｂは独立してＨ、Ｔ２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ１２で置換されていてもよく、これらのＲ１２は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１０はハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、ＯＲ１３、オキソ（＝Ｏ）（環が少なくとも部分的に飽和している場合）、Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３Ｒ１３ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１３Ｒ１３ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３Ｒ１３ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）Ｒ１３、Ｎ（Ｒ１３）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１３ａＲ１３ｂ）、Ｎ（Ｒ１３）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３ａＲ１３ｂ）、ＳＲ１３、Ｎ（Ｒ１３Ｒ１３ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１３、Ｎ（Ｒ１３）Ｃ（Ｏ）Ｒ１３ａ、Ｎ（Ｒ１３）Ｓ（Ｏ）２Ｒ１３ａ、Ｎ（Ｒ１３）Ｓ（Ｏ）Ｒ１３ａ、Ｎ（Ｒ１３）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３ａＲ１３ｂ）、Ｎ（Ｒ１３）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３Ｒ１３ａ）、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであり、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ１４で置換されていてもよく、これらのＲ１４は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１３、Ｒ１３ａ、Ｒ１３ｂは独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ１４で置換されていてもよく、これらのＲ１４は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１１、Ｒ１２は独立してハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１５、ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１５、Ｓ（Ｏ）Ｒ１５、Ｎ（Ｒ１５）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１５ａＲ１５ｂ）、Ｎ（Ｒ１５）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５ａＲ１５ｂ）、ＳＲ１５、Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１５、Ｎ（Ｒ１５）Ｃ（Ｏ）Ｒ１５ａ、Ｎ（Ｒ１５）Ｓ（Ｏ）２Ｒ１５ａ、Ｎ（Ｒ１５）Ｓ（Ｏ）Ｒ１５ａ、Ｎ（Ｒ１５）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５ａＲ１５ｂ）、Ｎ（Ｒ１５）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１５ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）およびＴ２からなる群から選択され、
Ｒ１１ａ、Ｒ１１ｂ、Ｒ１１ｃは独立してＨ、ハロゲン、ＣＮ、ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）およびＣ１−６アルキルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキルは１つ以上のＲ１４で置換されていてもよく、これらのＲ１４は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１５、Ｒ１５ａ、Ｒ１５ｂは独立してＨ、Ｔ２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なり、
Ｒ１４はハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、ＯＲ１６、Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６Ｒ１６ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１６Ｒ１６ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６Ｒ１６ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、Ｓ（Ｏ）Ｒ１６、Ｎ（Ｒ１６）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１６ａＲ１６ｂ）、Ｎ（Ｒ１６）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａＲ１６ｂ）、ＳＲ１６、Ｎ（Ｒ１６Ｒ１６ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１６、Ｎ（Ｒ１６）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６ａ、Ｎ（Ｒ１６）Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６ａ、Ｎ（Ｒ１６）Ｓ（Ｏ）Ｒ１６ａ、Ｎ（Ｒ１６）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａＲ１６ｂ）、Ｎ（Ｒ１６）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６ａまたはＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６Ｒ１６ａ）であり、
Ｒ１６、Ｒ１６ａ、Ｒ１６ｂは独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なり、
Ｔ２はフェニル、ナフチル、インデニル、インダニル、Ｃ３−７シクロアルキル、４〜７員ヘテロシクリルまたは７〜１１員ヘテロビシクリルであり、Ｔ２は１つ以上のＲ１７で置換されていてもよく、これらのＲ１７は同じであるかまたは異なり、
Ｔ３はフェニル、Ｃ３−７シクロアルキルまたは４〜７員ヘテロシクリルであり、Ｔ３は１つ以上のＲ１８で置換されていてもよく、これらのＲ１８は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１７、Ｒ１８は独立してハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１９、ＯＲ１９、オキソ（＝Ｏ）（環が少なくとも部分的に飽和している場合）、Ｃ（Ｏ）Ｒ１９、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９Ｒ１９ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１９Ｒ１９ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９Ｒ１９ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１９、Ｓ（Ｏ）Ｒ１９、Ｎ（Ｒ１９）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１９ａＲ１９ｂ）、Ｎ（Ｒ１９）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９ａＲ１９ｂ）、ＳＲ１９、Ｎ（Ｒ１９Ｒ１９ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１９、Ｎ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａ、Ｎ（Ｒ１９）Ｓ（Ｏ）２Ｒ１９ａ、Ｎ（Ｒ１９）Ｓ（Ｏ）Ｒ１９ａ、Ｎ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９ａＲ１９ｂ）、Ｎ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１９ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９Ｒ１９ａ）、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ２０で置換されていてもよく、これらのＲ２０は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１９、Ｒ１９ａ、Ｒ１９ｂは独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ２０で置換されていてもよく、これらのＲ２０は同じであるかまたは異なり、
Ｒ２０はハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、ＯＲ２１、Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２１Ｒ２１ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２１Ｒ２１ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２１Ｒ２１ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ２１、Ｓ（Ｏ）Ｒ２１、Ｎ（Ｒ２１）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２１ａＲ２１ｂ）、Ｎ（Ｒ２１）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２１ａＲ２１ｂ）、ＳＲ２１、Ｎ（Ｒ２１Ｒ２１ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、Ｎ（Ｒ２１）Ｃ（Ｏ）Ｒ２１ａ、Ｎ（Ｒ２１）Ｓ（Ｏ）２Ｒ２１ａ、Ｎ（Ｒ２１）Ｓ（Ｏ）Ｒ２１ａ、Ｎ（Ｒ２１）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２１ａＲ２１ｂ）、Ｎ（Ｒ２１）Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１ａまたはＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２１Ｒ２１ａ）であり、
Ｒ２１、Ｒ２１ａ、Ｒ２１ｂは独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なる。
【００２１】
驚くべきことに、理論により拘束するものではないが、本発明の化合物は、そのタンパク質標的と共有結合を形成するキナーゼ阻害剤として作用し得ること、またしたがって、標的タンパク質に不可逆的に結合して標的タンパク質を永久に失活させ得ることから、非共有結合の阻害剤より有利な特性を有し得ることが判明した。標的の不可逆的な阻害後、その機能を回復させるためには、そのタンパク質の再合成が必要となる。したがって、薬剤の作用が持続的であると、薬剤の薬力学が薬物動態的曝露から分離され得る（Singh et al., 2011. Nat. Rev. Drug Discov. 10(4): 307-317; Singh et al., 2010. Curr. Opin. Chem. Biol. 14(4):475-480）。
【発明の具体的説明】
【００２２】
変数または置換基を様々な変種の群から選択でき且つそのような変数または置換基が２回以上生じる場合、それぞれの変種は同じであるかまたは異なり得る。
【００２３】
本発明の趣旨において、用語を以下の通りに使用する。
【００２４】
「置換されていてもよい」という表現は、非置換または置換を意味する。一般に、ただし以下に限定するものではないが、「１つ以上の置換基」とは、１、２または３つ、好ましくは１または２つ、より好ましくは１つの置換基を意味する。一般に、これらの置換基は同じであるか、または異なり得る。
【００２５】
「アルキル」は、直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖を意味する。アルキル炭素の各水素は、本明細書で更に指定するような置換基で置き換え得る。
【００２６】
「Ｃ１−４アルキル」は１〜４個の炭素原子を有するアルキル鎖を意味し、例えば、分子の末端に存在する場合はメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチルであり、あるいは分子の２つの部分をアルキル基で連結する場合は−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）―、−Ｃ（ＣＨ３）２−である。Ｃ１−４アルキル炭素の各水素は、本明細書で更に指定するような置換基で置き換え得る。
【００２７】
「Ｃ１−６アルキル」は１〜６個の炭素原子を有するアルキル鎖を意味し、例えば、分子の末端に存在する場合はＣ１−４アルキル、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルであり、あるいは分子の２つの部分をアルキル基で連結する場合は−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）−、−Ｃ（ＣＨ３）２−である。Ｃ１−６アルキル炭素の各水素は、本明細書で更に指定するような置換基で置きかえ得る。
【００２８】
「Ｃ３−７シクロアルキル」または「Ｃ３−７シクロアルキル環」は３〜７個の炭素原子を有する環状のアルキル鎖を意味し、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチルである。好ましくは、シクロアルキルとは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはシクロヘプチルのことである。シクロアルキル炭素の各水素は、本明細書で更に指定するような置換基で置き換え得る。用語「Ｃ３−５シクロアルキル」または「Ｃ３−５シクロアルキル環」も同様に定義される。
【００２９】
「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを意味する。一般に、ハロゲンがフルオロまたはクロロであることが好ましい。
【００３０】
「４〜７員ヘテロシクリル」または「４〜７員複素環」は、４、５、６または７個の環原子を有する環を意味し、この環は最大数までの二重結合を含むことができ（完全に飽和、部分的に飽和または不飽和の芳香族または非芳香族の環）、少なくとも１つ環原子〜最高で４個の環原子が、硫黄（−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−を含む）、酸素および窒素（＝Ｎ（Ｏ）−を含む）からなる群から選択されるヘテロ原子で置換され、環は分子の残りに炭素または窒素原子を介して連結される。４〜７員複素環の例は、アゼチジン、オキセタン、チエタン、フラン、チオフェン、ピロール、ピロリン、イミダゾール、イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、オキサゾール、オキサゾリン、イソオキサゾール、イソオキサゾリン、チアゾール、チアゾリン、イソチアゾール、イソチアゾリン、チアジアゾール、チアジアゾリン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、ピロリジン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、オキサゾリジン、イソオキサゾリジン、チアゾリジン、イソチアゾリジン、チアジアゾリジン、スルホラン、ピラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、イミダゾリジン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、ピリミジン、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、テトラゾール、トリアゾール、トリアゾリジン、テトラゾリジン、ジアゼパン、アゼピンまたはホモピペラジンである。用語「５〜６員ヘテロシクリル」または「５〜６員複素環」も同様に定義される。
【００３１】
「飽和４〜７員ヘテロシクリル」または「飽和４〜７員複素環」は、完全に飽和した「４〜７員ヘテロシクリル」または「４〜７員複素環」を意味する。
【００３２】
「芳香族５〜６員ヘテロシクリル」または「芳香族５〜６員複素環」はシクロペンタジエニルまたはベンゼン由来の複素環を意味し、少なくとも１つの炭素原子が、硫黄（−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−を含む）、酸素および窒素（＝Ｎ（Ｏ）−を含む）からなる群から選択されるヘテロ原子で置き換えられる。このような複素環の例は、フラン、チオフェン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、チアジアゾール、トリアゾール、テトラゾール、ピリジン、ピリミジン、ピリダジン、ピラジン、トリアジンである。
【００３３】
「芳香族５員ヘテロシクリル」または「芳香族５員複素環」はシクロペンタジエニル由来の複素環を意味し、少なくとも１つの炭素原子が、硫黄（−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−を含む）、酸素および窒素（＝Ｎ（Ｏ）−を含む）からなる群から選択されるヘテロ原子で置き換えられる。このような複素環の例は、フラン、チオフェン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、チアジアゾール、トリアゾール、テトラゾールである。
【００３４】
「７〜１１員ヘテロビシクリル」または「７〜１１員ヘテロビサイクル」は７〜１１個の環原子を有する２つの環の複素環系を意味し、少なくとも１つの環原子が両方の環によって共有され、また最大数までの二重結合を含むことができ（完全に飽和、部分的に飽和または不飽和の芳香族または非芳香族の環）、少なくとも１つの環原子〜最高６個の環原子が硫黄（−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−を含む）、酸素および窒素（＝Ｎ（Ｏ）−を含む）からなる群から選択されるヘテロ原子で置き換えられ、環は分子の残りに炭素または窒素原子を介して連結される。７〜１１員ヘテロビサイクルの例は、インドール、インドリン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、ベンズオキサゾール、ベンズイソオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンズイソチアゾール、ベンズイミダゾール、ベンズイミダゾリン、キノリン、キナゾリン、ジヒドロキナゾリン、キノリン、ジヒドロキノリン、テトラヒドロキノリン、デカヒドロキノリン、イソキノリン、デカヒドロイソキノリン、テトラヒドロイソキノリン、ジヒドロイソキノリン、ベンズアゼピン、プリンまたはプテリジンである。用語７〜１１員ヘテロビサイクルは、２つの環のスピロ構造体、例えば６−オキサ−２−アザスピロ［３，４］オクタン、２−オキサ−６−アザスピロ［３．３］ヘプタン−６−イル若しくは２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタン−６−イルまたは架橋複素環、例えば８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン若しくは２，５−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン−２−イル若しくは３，８−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタンも含む。
【００３５】
「飽和７〜１１員ヘテロビシクリル」または「飽和７〜１１員ヘテロビサイクル」は、完全に飽和した７〜１１員ヘテロビシクリルまたは７〜１１員ヘテロビサイクルを意味する。
【００３６】
「芳香族９〜１１員ヘテロビシクリル」または「芳香族９〜１１員ヘテロビサイクル」は２つの環の複素環系を意味し、少なくとも１つの環が芳香族であり、複素環系は９〜１１個の環原子を有し、２つの環原子が両方の環によって共有され、また最大数までの二重結合を含むことができ（完全にまたは部分的に芳香族）、少なくとも１つの環原子〜最高６個の環原子が硫黄（−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−を含む）、酸素および窒素（＝Ｎ（Ｏ）−を含む）からなる群から選択されるヘテロ原子で置き換えられ、環は分子の残りに炭素または窒素原子を介して連結される。芳香族９〜１１員ヘテロビサイクルの例は、インドール、インドリン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、ベンズオキサゾール、ベンズイソオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンズイソチアゾール、ベンズイミダゾール、ベンズイミダゾリン、キノリン、キナゾリン、ジヒドロキナゾリン、ジヒドロキノリン、テトラヒドロキノリン、イソキノリン、テトラヒドロイソキノリン、ジヒドロイソキノリン、ベンズアゼピン、プリンまたはプテリジンである。
【００３７】
式（Ｉ）の好ましい化合物は含まれる残基の１つ以上が下記の意味を有する化合物であり、好ましい置換基の定義の全ての組み合わせが本発明の主題である。式（Ｉ）の全ての好ましい化合物に関し、本発明には、全ての互変異性体および立体異性体並びに全ての比率でのこれらの混合物並びにこれらの薬学的に許容可能な塩が含まれる。
【００３８】
本発明の好ましい実施態様において、下で挙げる置換基は独立して以下の意味を有する。そのため、これらの置換基の１つ以上は、下記の好ましいまたはより好ましい意味を有し得る。
【００３９】
好ましくは、式（Ｉ）の環Ａ、ＺＡ、ＺＢは、式（Ｉａ）：
【化２】
2014531449.tif 000004
を与えるように定義され、式中、環Ａは芳香族５員複素環であり、Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は独立してＣ（Ｒ１）、Ｎ、Ｎ（Ｒ１）、ＯおよびＳからなる群から選択され、ただしＺ１、Ｚ２、Ｚ３の少なくとも１つはＮであり、Ｒ、Ｙ、Ｘ１〜Ｘ５およびＲ１は上で定義した通りである。
【００４０】
好ましくは、式（Ｉ）の環Ａ、ＺＡ、ＺＢ、Ｒは、式（Ｉｂ）：
【化３】
2014531449.tif 000005
を与えるように定義され、環Ａは５員芳香族複素環であり、Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は独立してＣ（Ｒ１）、Ｎ、Ｎ（Ｒ１）、ＯおよびＳからなる群から選択され、ただしＺ１、Ｚ２、Ｚ３の少なくとも１つはＮであり、Ｙ、Ｘ１〜Ｘ５およびＲ１は上で定義した通りである。
【００４１】
好ましくは、式（Ｉ）の環Ａ、ＺＡ、ＺＢは、式（Ｉｃ）：
【化４】
2014531449.tif 000006
を与えるように定義され、環Ａは芳香族５員複素環であり、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３およびＺ４は独立してＣ（Ｒ１）、Ｎ、Ｎ（Ｒ１）、ＯおよびＳからなる群から選択され、ただしＺ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４の少なくとも１つはＮまたはＮ（Ｒ１）であり、Ｒ、Ｙ、Ｘ１〜Ｘ５およびＲ１は上で定義した通りである。
【００４２】
好ましくは、式（Ｉ）のＡ、ＺＡ、ＺＢは、式（Ｉｄ）：
【化５】
2014531449.tif 000007
を与えるように定義され、環ＡにおけるＺ１はＣ（Ｒ１）またはＮであり、Ｚ２はＣ（Ｒ１）またはＮであり、Ｚ３はＣ（Ｒ１）またはＮであり、Ｚ４はＣ（Ｒ１）またはＮであり、Ｚ５はＣ（Ｒ１）またはＮであり、ただし、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５のうち、Ｎであるのは最多で２つであり、
２つの隣接するＲ１は連結されて、Ｚ１〜Ｚ５を含む環と共に芳香族二環式環Ｔ０を形成してもよく、
Ｔ０は芳香族９〜１１員ヘテロビシクリル、ナフチル、インデニルまたはインダニルであり、Ｔ０は１つ以上のＲ１ａで置換されていてもよく、これらのＲ１ａは同じであるかまたは異なり、
Ｒ１ａはハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ２、ＯＲ２、オキソ（＝Ｏ）（環が少なくとも部分的に飽和している場合）、Ｃ（Ｏ）Ｒ２、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ２、Ｓ（Ｏ）Ｒ２、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、ＳＲ２、Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ２、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）ＯＲ２ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｔ１またはＣ１−６アルキルであり、Ｃ１−６アルキルは１つ以上のＲ３で置換されていてもよく、これらのＲ３は同じであるかまたは異なり、
Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３、Ｙ、Ｘ１〜Ｘ５およびＲ１は上で定義した通りである。
【００４３】
好ましくは、ＲはＨである。
【００４４】
好ましくは、ＹはＣＨ２である。
【００４５】
好ましくは、Ｒ６、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ６ｃ、Ｒ６ｄのうちの０個または１つ（より好ましくは０個）がＮである。
【００４６】
好ましくは、Ｒ６、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ６ｃ、Ｒ６ｄは独立してＲ６ｅ、Ｈ、ハロゲンおよびＣ１−６アルキルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なり、ただしＲ６、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ６ｃ、Ｒ６ｄの１つはＲ６ｅである。より好ましくは、Ｒ６、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ６ｃ、Ｒ６ｄの１つはＲ６ｅであり、残りのものの最多で２つまで（より好ましくは１つ、より一層好ましくは０個）がＨ以外のものである。
【００４７】
好ましくは、Ｒ７、Ｒ１１ａ、Ｒ１１ｂ、Ｒ１１ｃは独立してＨおよびＣ１−４アルキルからなる群から選択され、Ｃ１−４アルキルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なる。
【００４８】
好ましくは、Ｒ６ａはＲ６ｅである。
【００４９】
好ましくは、Ｒ６ｅはＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ＝ＣＨ２またはＮＨＣ（Ｏ）Ｃ≡ＣＨである。
【００５０】
好ましくは、環Ａはピラゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、トリアゾール、フェニルまたはピリジル環である。より好ましくは、環Ａはピラゾリル環であり、より一層好ましくは
【化６】
2014531449.tif 000008
からなる群から選択される環である。
【００５１】
より一層好ましくは、
【化７】
2014531449.tif 000009
である。
【００５２】
より一層好ましくは、
【化８】
2014531449.tif 000010
である。
【００５３】
好ましくは、同じであるかまたは異なる０、１または２（より好ましくは０または１、より一層好ましくは１）個のＲ１はＨ以外である。
【００５４】
好ましくは、Ｒ１はＣ１−４アルキルであり、１または２個のＲ３で置換されていてもよく、これらのＲ３は同じであるかまたは異なる。好ましくは、Ｒ１は非置換Ｃ１−４アルキルである。
【００５５】
好ましくは、Ｒ３はハロゲン、ＣＮ、ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）またはＣ（Ｏ）Ｔ１である。
【００５６】
上記の基の幾つかまたは全てが好ましい意味を有する式（Ｉ）の化合物もまた、本発明の目的である。
【００５７】
本発明の更に好ましい化合物は、
Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド、
Ｎ−（２−フルオロ−５−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド、
Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）プロピオルアミド、
Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）エテンスルホンアミド、
Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）メタクリルアミド、
３−メチル−Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）ブト−２−エンアミド、
Ｎ−（３−（（２−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）フェニル）エテンスルホンアミド、
Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−１−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド、
Ｎ−（３−（（２−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）フェニル）アクリルアミドおよび
Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−１−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド
からなる群から選択される。
【００５８】
一般式（Ｉ）の化合物の互変異性、例えばケト−エノール互変異性が起き得る場合、個々の型、例えばケトおよびエノール型は別々におよび一緒に任意の比率の混合物として含まれる。同じことが立体異性体、例えばエナンチオマー、シス／トランス異性体、配座異性体等にあてはまる。
【００５９】
式（Ｉ）の同位体標識化合物（「同位体誘導体」）も本発明の範囲内にある。同位体標識法は当該分野で公知である。好ましい同位体は、元素Ｈ、Ｃ、Ｎ、ＯおよびＳのものである。
【００６０】
必要に応じて、異性体を当該分野で周知の方法、例えば液体クロマトグラフィで分離し得る。同じことが、例えばキラル固定相を用いてエナンチオマーに関してあてはまる。加えて、エナンチオマーをジアステレオマーに変換する、すなわち鏡像異性的に純粋な補助化合物とのカップリング、それに続く得られたジアステレオマーの分離および補助残基の開裂によりエナンチオマーを単離し得る。あるいは、式（Ｉ）の化合物のどのエナンチオマーも、光学的に純粋な出発原料を使用した立体選択的合成から得られる。
【００６１】
式（Ｉ）の化合物は、結晶またはアモルファス形態で存在し得る。さらに、式（Ｉ）の化合物の結晶形態の幾つかは多形体として存在し得て、本発明の範囲内に含まれる。式（Ｉ）の化合物の多形形態を多数の慣用の分析技法を用いて特徴づけおよび識別し得て、分析技法には、以下に限定するものではないが、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターン、赤外線（ＩＲ）スペクトル、ラマンスペクトル、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）および固体核磁気共鳴（ｓｓＮＭＲ）が含まれる。
【００６２】
式（Ｉ）の化合物が１つ以上の酸性または塩基性の基を有する場合、本発明は、その対応する薬学的にまたは毒物学的に許容可能な塩、特にはその薬学的に利用可能な塩も含む。したがって、酸性基を有する式（Ｉ）の化合物は本発明に従って、例えばアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩またはアンモニウム塩として使用し得る。このような塩のより明確な例には、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩またはアンモニア若しくは有機アミンとの塩、例えばエチルアミン、エタノールアミン、トリエタノールアミン若しくはアミノ酸が含まれる。１つ以上の塩基性基、すなわちプロトン化が可能な基を有する式（Ｉ）の化合物は、無機または有機酸とのその付加塩の形態で存在し得るおよび本発明に従って使用され得る。適切な酸の例には、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、硝酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、シュウ酸、酢酸、酒石酸、乳酸、サリチル酸、安息香酸、ギ酸、プロピオン酸、ピバル酸、ジエチル酢酸、マロン酸、コハク酸、ピメリン酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、スルファミン酸（sulfaminic acid）、フェニルプロピオン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、イソニコチン酸、クエン酸、アジピン酸および当業者に公知の他の酸が含まれる。式（Ｉ）の化合物が分子中に酸性基および塩基性基を同時に含むならば、本発明には、言及した塩形態に加え、内塩またはベタイン（双性イオン）も含まれる。式（Ｉ）の塩はそれぞれ、当業者に公知の慣用の方法、例えばこれらを有機酸若しくは無機酸または有機塩基若しくは無機塩基と溶媒または分散剤中で接触させることによって、あるいは他の塩とのアニオン交換またはカチオン交換によって得られる。本発明には、低生理学的適合性により医薬品での使用には直接適してはいないが例えば化学反応または薬学的に許容可能な塩の調製にとっての中間体として使用可能な式（Ｉ）の化合物の全ての塩も含まれる。
【００６３】
本発明全体を通して、用語「薬学的に許容可能な」は、対応する化合物、担体または分子がヒトへの投与に適していることを意味する。好ましくは、この用語は、規制当局、例えばＥＭＥＡ（欧州）および／またはＦＤＡ（米国）および／または他の国家規制当局によって動物、好ましくはヒトでの使用が認可されていることを意味する。
【００６４】
本発明は更に、本発明の化合物の全ての溶媒和物を含む。
【００６５】
本発明において、「ＪＡＫ」は、ＪＡＫファミリーの全てのメンバーを含む（例えば、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＴＹＫ２）。
【００６６】
本発明において、表現「ＪＡＫ１」または「ＪＡＫ１キナーゼ」は、「ヤヌスキナーゼ１」を意味する。
【００６７】
本発明において、表現「ＪＡＫ２」または「ＪＡＫ２キナーゼ」は、「ヤヌスキナーゼ２」を意味する。
【００６８】
本発明において、表現「ＪＡＫ３」または「ＪＡＫ３キナーゼ」は、「ヤヌスキナーゼ３」を意味する。ＪＡＫ３をコードしている遺伝子はヒト染色体１９ｐ１３．１上に位置し、また造血細胞において優勢である。ＪＡＫ３は、インターロイキン（ＩＬ−２）受容体のガンマ鎖に関連した細胞質内のタンパク質チロシンキナーゼである。この鎖は、インターロイキンＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１を含めた幾つかのリンパ球向性サイトカインの受容体の構成要素としても働く（Schindler et al., 2007. J. Biol. Chem. 282(28):20059-63）。ＪＡＫ３は、特にはマスト細胞、リンパ球およびマクロファージにおけるサイトカインに対する免疫細胞の応答において重要な役割を果たす。ＪＡＫ３の阻害は、移植拒絶反応の防止において有益な作用を示している（Changelian et al., 2003, Science 302(5646):875-888）。
【００６９】
さらに、本発明において、表現「ＪＡＫ３」または「ＪＡＫ３キナーゼ」には、ＪＡＫ３の突然変異型、好ましくは急性巨核芽球性白血病（ＡＭＫＬ）患者に見られるＪＡＫ３突然変異が含まれる。より好ましくは、これらの突然変異は、単一アミノ酸突然変異である。ＪＡＫ３突然変異の活性化が、急性巨核芽球性白血病（ＡＭＫＬ）患者で観察された（Walters et al., 2006. Cancer Cell 10(1):65-75）。従って、好ましい実施態様において、表現「ＪＡＫ」には、Ｖ７２２１またはＰ１３２Ｔ突然変異を有するＪＡＫ３タンパク質も含まれる。
【００７０】
本発明において、表現「ＴＹＫ２」または「ＴＹＫ２キナーゼ」は、「タンパク質−チロシンキナーゼ２」を意味する。
【００７１】
本発明において、表現「ＢＴＫ」は「ブルトン型チロシンキナーゼ」を意味する。
【００７２】
本発明において、表現「ＢＬＫ」は、「Ｂリンパ球特異的キナーゼ」を意味する。
【００７３】
本発明において、表現「ＩＴＫ」は、「インターロイキン−２（ＩＬ−２）誘導性Ｔ細胞キナーゼ」を意味する。
【００７４】
本発明において、表現「ＴＥＣ」は「ＴＥＣキナーゼ」を意味する。
【００７５】
実施例に示すように、本発明の化合物を、その効力、選択性、有効性および作用様式に関して試験した。ＪＡＫファミリーにおいて、試験した全ての化合物は、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２およびＴＹＫ２よりＪＡＫ３により強力に結合する（表６を参照のこと）。
【００７６】
本発明の化合物はＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫおよびＴＥＣに強力に結合し（表８を参照のこと）、キナーゼ機能を阻害する（表１０を参照のこと）。細胞の洗い流し試験において、共有結合性阻害剤であると予測される本発明の化合物が最高４時間の長時間にわたる薬理学的作用を示すのに対して、２種の比較用阻害剤はより短い活性を示すと実証された（表１２を参照のこと）。加えて、質量分析により、実施例１がＪＡＫ３のシステイン残基９０９（Ｃｙｓ９０９）と共有結合することが実証された（表１５を参照のこと）。
【００７７】
その結果、本発明の化合物は、ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣに関連した疾患および障害、例えば免疫学的、炎症性、自己免疫性若しくはアレルギー性の障害、移植拒絶反応、移植片対宿主病またはがん等の増殖性疾患の予防または治療に有用であるとみなされる。
【００７８】
好ましい実施態様において、本発明の化合物は選択的ＪＡＫ３阻害剤である。
【００７９】
本発明では、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として、薬学的に許容可能な担体と共に、任意で１種以上の他の医薬組成物と組み合わせて含む医薬組成物を提供する。
【００８０】
「医薬組成物」とは、１種以上の有効成分および担体を構成する１種以上の不活性成分、また２種以上の成分の直接的若しくは間接的な組み合わせ、複合体形成若しくは凝集または１種以上の成分の解離または１種以上の成分の他のタイプの反応若しくは相互作用から生じるいずれの生成物をも意味する。したがって、本発明の医薬組成物の範囲には、本発明の化合物と薬学的に許容可能な担体との混合によって生成される全ての組成物が含まれる。
【００８１】
用語「担体」とは、治療薬と共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤またはビヒクルのことである。このような医薬担体は滅菌液、例えば水および油になり得て、石油、動物、植物または合成由来のものが含まれ、以下に限定するものではないが、ピーナツ油、ダイズ油、鉱物油、ゴマ油等が含まれる。医薬組成物を経口投与する場合、好ましい担体は水である。医薬組成物を静脈内投与する場合、好ましい担体は生理食塩水およびデキストロース水溶液である。好ましくは、生理食塩水溶液およびデキストロース水溶液およびグリセロール溶液を、注射用溶液向けの液状担体として使用する。適切な医薬品賦形剤には、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、胡粉、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等が含まれる。必要に応じて、組成物は、少量の湿潤剤または乳化剤またはｐＨ緩衝剤も含有し得る。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、徐放性製剤等の形態をとり得る。組成物は、伝統的な結合剤および担体、例えばトリグリセリドと共に座薬として製剤し得る。経口製剤は標準的な担体、例えば医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等を含み得る。適切な医薬担体の例は、E.W. Martin著のRemington's Pharmaceutical Sciencesに記載されている。このような組成物は、治療有効量の治療薬を、好ましくは精製された形で、患者に適切に投与できる形態となるような適切な量の担体と共に含有し得る。
【００８２】
本発明の医薬組成物は、有効成分として１種以上の追加の化合物、例えば組成物の第１化合物ではない１種以上の式（Ｉ）の化合物または他のＪＡＫ阻害剤を含み得る。更なる生理活性化合物は、ステロイド、ロイコトリエンアンタゴニスト、シクロスポリンまたはラパマイシンになり得る。
【００８３】
本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩および他の薬学的に活性な剤を一緒にまたは別々に投与し得て、別々に投与する場合、投与は順序を問わず別々にまたは連続的に起こり得る。同一製剤中で組み合わせる場合、当然のことながら、これら２種の化合物が安定し且つ互いにおよび製剤の残りの成分と適合性でなくてはならない。別々に製剤する場合、これらの化合物を、便利にはそのような化合物に関して当該分野で知られているようなやり方でもって便利な剤形で提供し得る。
【００８４】
本発明には、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩または式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物を別の薬剤若しくは薬学的に活性な剤と組み合わせて投与すること、並びに／または本発明の医薬組成物がこのような薬剤若しくは薬学的に活性な剤を更に含むことが更に含まれる。
【００８５】
この意味において、用語「薬剤または薬学的に活性な剤」には、例えば研究者または臨床医が求めている組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を引き出す薬剤または医薬品が含まれる。
【００８６】
「組み合わせ（combined、in combination、combination）」とは機能的な同時投与であると理解すべきであり、幾つかまたは全ての化合物を別々に、別々の製剤、異なる投与様式（例えば、皮下投与、静脈内投与、経口投与）および異なる投与時期で投与し得る。このような組み合わせの個々の化合物を、別々の医薬組成物として連続的に、また組み合わせた医薬組成物として同時に投与し得る。
【００８７】
例えば、関節リウマチ治療においては、他の化学療法剤または抗体薬との組み合わせが考えられる。関節リウマチ治療のための、本発明の化合物およびその塩と組み合わせて使用し得る薬学的に活性な剤の適切な例には、免疫抑制剤、例えばアムトルメチングアシル、ミゾリビンおよびリメキソロン、抗ＴＮＦα剤、例えばエタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ、アナキンラ、アバタセプト、リツキシマブ、チロシンキナーゼ阻害剤、例えばレフルノミド、カリクレインアンタゴニスト、例えばサブレウム（subreum）、インターロイキン１１アゴニスト、例えばオプレルベキン、インターフェロンベータ１アゴニスト、ヒアルロン酸アゴニスト、例えばＮＲＤ−１０１（Ａｖｅｎｔｉｓ社）、インターロイキン１受容体アンタゴニスト、例えばアナキンラ、ＣＤ８アンタゴニスト、例えばアミプリロースヒドロクロリド（amiprilose hydrochloride）、βアミロイド前駆体タンパク質アンタゴニスト、例えばリューマコン（reumacon）、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、例えばシペマスタット並びに他の疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、例えばメトトレキサート、スルファサラジン、シクロスポリンＡ、ヒドロキシクロロキン、オーラノフィン、オーロチオグルコース、金チオリンゴ酸ナトリウムおよびペニシラミンが含まれる。
【００８８】
特に、本明細書で定義する治療は単独の療法として適用し得るが、あるいは本発明の化合物に加えて、慣用の外科手術または放射線療法または化学療法も併用し得る。したがって、本発明の化合物は、がん等の増殖性疾患の治療のための既存の治療薬と組み合わせても使用し得る。組み合わせて使用する適切な剤には、
（ｉ）腫瘍内科学で使用するような他の増殖／抗悪性腫瘍薬およびこれらの組み合わせ、例えばアルキル化剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア）、代謝拮抗剤（例えば、葉酸代謝拮抗剤、例えば５フルオロウラシル、テガフール等のフルオロピリミジン、ラルチトレキセド、メトトレキセート、シトシンアラビノシド、ヒドロキシウレア、ゲムシタビン）、抗腫瘍性抗生物質（例えば、アドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン−Ｃ、ダクチノマイシン、ミトラマイシン等のアントラサイクリン）、有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン等のビンカアルカロイド、パクリタキセル、タキソテール等のタキソイド）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エトポシド、テニポシド等のエピポドフィロトキシン、アムサクリン、トポテカン、カンプトテシン）、
（ｉｉ）細胞分裂阻害剤、例えば抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェン（iodoxifene）、エストロゲン受容体ダウンレギュレータ（例えば、フルベストラント）、抗アンドロゲン剤（例えば、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド、酢酸シプロテロン）、ＬＨＲＨアンタゴニストまたはＬＨＲＨアゴニスト（例えば、ゴセレリン、リュープロレリン、ブセレリン）、プロゲストーゲン（例えば、酢酸メゲストロール）、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、レトロゾール、ボラゾール（Vorazole）、エキセメスタン）並びにフィナステリド等の５α−レダクターゼの阻害剤、
（ｉｉｉ）抗浸潤剤（例えば、４−（６−クロロ−２，３−メチレンジオキシアニリノ）−７−［２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エトキシ］−５−テトラヒドロピラン−４−イルオキシキナゾリン（ＡＺＤ０５３０）、Ｎ−（２−クロロ−６−メチルフェニル）−２−｛６−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］−２−メチルピリミジン−４−イルアミノ｝チアゾール−５−カルボキシアミド（ダサチニブ、ＢＭＳ−３５４８２５）等のｃ−Ｓｒｃキナーゼファミリー阻害剤およびマリマスタット等のメタロプロテイナーゼ阻害剤、ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベータ受容体機能の阻害剤）、
（ｉｖ）増殖因子機能の阻害剤：例えば、このような阻害剤には、増殖因子抗体および増殖因子受容体抗体（例えば、抗ｅｒｂＢ２抗体トラスツズマブ［ハーセプチン（商標）］、抗ｅｒｂＢ１抗体セツキシマブ［Ｃ２２５］）が含まれる。このような阻害剤には例えば、チロシンキナーゼ阻害剤、例えば上皮増殖因子ファミリーの阻害剤（例えば、Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ゲフィチニブ、ＺＤ１８３９）、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン（エルロチニブ、ＯＳＩ−７７４）、６−アクリルアミド−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ＣＩ１０３３）等のＥＧＦＲファミリーチロシンキナーゼ阻害剤、ラパチニブ等のｅｒｂＢ２チロシンキナーゼ阻害剤）、肝細胞増殖因子ファミリーの阻害剤、イマチニブ等の血小板由来増殖因子ファミリーの阻害剤、セリン／スレオニンキナーゼの阻害剤（例えば、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤等のＲａｓ／Ｒａｆシグナル伝達阻害剤、例えばソラフェニブ（ＢＡＹ４３−９００６））、ＭＥＫおよび／またはＡＫＴキナーゼを介した細胞のシグナル伝達の阻害剤も含まれる、
（ｖ）血管内皮増殖因子の影響を阻害するもの等の血管新生抑制剤、例えば抗血管内皮細胞増殖因子抗体ベバシズマブ（アバスチン（商標））、４−（４−ブロモ−２−フルオロアニリノ）−６−メトキシ−７−（１−メチルピペリジン−４−イルメトキシ）キナゾリン（ＺＤ６４７４、国際公開第０１／３２６５１号パンフレットに記載の実施例２）、４−（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イルオキシ）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キナゾリン（ＡＺＤ２１７１、国際公開第００／４７２１２号パンフレットに記載の実施例２４０）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７、国際公開第９８／３５９８５号）、ＳＵ１１２４８（スニチニブ、国際公開第０１／６０８１４号）等のＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤、他の作用機序による化合物（例えば、リノマイド、インテグリンａｖβ３機能の阻害剤、アンジオスタチン）、
（ｖｉ）血管損傷剤、例えばコンブレタスタチンＡ４、国際特許出願第９９／０２１６６号パンフレットに開示の化合物、
（ｖｉｉ）アンチセンス療法、例えばＩＳＩＳ  ２５０３、抗−ｒａｓアンチセンス等の上で挙げた標的が対象のもの、
（ｖｉｉｉ）異常なｐ５３または異常なＢＲＣＡ１若しくはＢＲＣＡ２等の異常な遺伝子を置き換えるアプローチ、シトシンデアミナーゼ、チミジンキナーゼまたは細菌性ニトロレダクターゼ酵素を使用するもの等のＧＤＥＰＴ（遺伝子指向性酵素プロドラッグ療法）アプローチ、多剤耐性遺伝子療法等の化学療法または放射線療法に対する患者の耐性を向上させるアプローチを含めた遺伝子療法アプローチ、並びに
（ｉｘ）インターロイキン２、インターロイキン４または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子等のサイトカインによる遺伝子導入等の、患者の腫瘍細胞の免疫原性を上昇させるためのエクスビボおよびインビボのアプローチ、Ｔ細胞アネルギーを低下させるアプローチ、サイトカイン遺伝子導入樹状細胞等の遺伝子導入免疫細胞を使用するアプローチ、サイトカイン遺伝子導入腫瘍細胞系を使用したアプローチ、抗イディオタイプ抗体を使用したアプローチを含めた免疫療法アプローチ
が含まれる。
【００８９】
更に別の併用治療が国際公開第２００９／００８９９２−Ａ号パンフレットおよび国際公開第２００７／１０７３１８−Ａ号パンフレットに記載されており、これらの文献は参照により本明細書に組み込まれる。
【００９０】
したがって、このような組み合わせの個々の化合物を別々の医薬組成物として連続的に、また組み合わせた医薬組成物として同時に投与し得る。
【００９１】
本発明の医薬組成物には、経口、直腸、非経口（皮下、筋肉内、静脈内を含む）、点眼（眼適用）、経肺（鼻または頬側吸入）または経鼻投与に適した組成物が含まれるが、任意の症例における最も適切な経路は、治療対象である病態の性質および重症度並びに有効成分の性質に応じたものとなる。本発明の医薬組成物は便利には単位剤形として提供され得て、また薬学の分野で周知の任意の方法で調製し得る。
【００９２】
実際の使用においては、式（Ｉ）の化合物を、有効成分として、慣用の薬学的な配合技術に従って医薬担体と混和させて組み合わせ得る。担体は多種多様な形態をとり得て、投与、例えば経口または非経口（静脈内投与を含む）にとって望ましい製剤形態に左右される。経口剤形用の組成物を調製する場合、通常のいずれの医薬媒質も使用し得て、例えば、経口液体製剤（例えば、懸濁液、エリキシル剤、溶液）の場合は水、グリコール、油、アルコール、香味料、保存料、着色料等であり、あるいは経口固形製剤の場合（例えば、粉剤、ハードおよびソフトカプセル剤、錠剤）の場合には、デンプン類、糖類、微結晶性セルロース、希釈剤、造粒剤、滑剤、結合剤、崩壊剤等の担体であり、液体製剤よりも経口固体製剤が好ましい。
【００９３】
その投与しやすさから、錠剤およびカプセルが最も有利な経口投与単位剤形であり、この場合は当然のことながら固体医薬担体を使用する。必要に応じて、標準的な水性または非水性の技法で錠剤をコーティングし得る。このような組成物および製剤は少なくとも０．１パーセントの活性化合物を含有する。これらの組成物中の活性化合物の割合は当然のことながら様々になり得て、また便利には単位の重量の約２〜約６０パーセントになり得る。このような治療的に有用な組成物における活性化合物の量は、有効な用量が得られるようなものである。活性化合物は、例えば液滴またはスプレーとして鼻腔内投与することもできる。
【００９４】
錠剤、丸薬、カプセル等は、結合剤、例えばトラガカントゴム、アラビアゴム、コーンスターチまたはゼラチン、賦形剤、例えばリン酸二カルシウム、崩壊剤、例えばコーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸、滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウムおよび甘味料、例えばスクロース、ラクトースまたはサッカリンも含有し得る。投与単位剤形がカプセルの場合、上で挙げたタイプの材料に加えて、脂肪油等の液体担体を含有し得る。
【００９５】
様々な他の材料がコーティングとしてまたは投与単位の物理的な形態を変化させるために存在し得る。例えば、錠剤をシェラック、糖またはその両方でコーティングし得る。シロップ剤またはエリキシル剤は、有効成分に加えて、甘味料としてのスクロース、保存料としてのメチルおよびプロピルパラベン、色素並びに香味料（例えば、チェリー味、オンレジ味）を含有し得る。
【００９６】
式（Ｉ）の化合物は非経口でも投与し得る。これらの活性化合物の溶液または懸濁液を、ヒドロキシプロピルセルロース等の界面活性剤と適切に混合した水で調製し得る。分散液もまた、油中のグリセロール、液体ポリエチレングリコールおよびこれらの混合物として調製し得る。通常の保存および使用条件下において、これらの製剤は、微生物の増殖を予防するための保存料を含有する。
【００９７】
注射による使用に適した医薬品は、滅菌水溶液または分散液と、滅菌注射溶液または分散液の即時調製用の滅菌粉末とを含む。全てのケースにおいて、医薬品は無菌でなくてはならず、またシリンジでの投与が容易な程度に流動性でなくてはならない。医薬品は、製造および保存条件下で安定でなくてはならず、また細菌、真菌等の微生物による汚染から保護されなくてはならない。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）、これらの適切な混合物および植物油を含有する溶媒または分散媒になり得る。
【００９８】
いずれの適切な投与経路を利用しても、哺乳動物、特にはヒトに、有効な用量の本発明の化合物を提供し得る。例えば、経口投与、直腸内投与、局所投与、非経口投与、点眼、経肺投与、経鼻投与等を利用し得る。剤形には、錠剤、トローチ剤、分散液剤、懸濁液剤、溶液剤、カプセル剤、クリーム剤、軟膏剤、噴霧剤等が含まれる。好ましくは、式（Ｉ）の化合物を経口投与する。
【００９９】
採用する有効成分の有効用量は、用いる特定の化合物、投与様式、治療対象である病態および治療対象である病態の重症度に応じて異なり得る。当業者ならば、そのような用量を容易に突き止め得る。
【０１００】
本発明の化合物の治療有効量は通常、例えば動物の年齢および体重、治療を必要としている正確な病態およびその重症度、製剤の性質並びに投与経路を含めた多数の要素に左右される。しかしながら、炎症性疾患、例えば関節リウマチ（ＲＡ）の治療のための式（Ｉ）の化合物の有効量は一般に、１日あたり０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ（レシピエントである哺乳動物の）体重、より一般的には１日あたり１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にある。このため、体重７０ｋｇの成獣または成人の場合、１日あたりの実際の量は通常７０〜７００ｍｇとなり、この量を１日あたり１回の投与でまたはより一般的には１日の総用量が同じとなるように何回かに小分けして投与し得る（例えば、２、３、４、５または６回）。有効量の薬学的に許容可能な塩、プロドラッグまたはその代謝産物は、式（Ｉ）の化合物それ自体の有効量のある割合として求め得る。同様の用量が、上で挙げた残りの病態の治療にとって適当であると考えられる。
【０１０１】
本明細書で使用の用語「有効量」は、例えば研究者または臨床医が求めている組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を引き出す薬剤または医薬品の量を意味する。
【０１０２】
さらに、用語「治療有効量」は、そのような量を投与されていない対応する対象と比較した場合に、疾患、障害または副作用の治療、治癒、予防または回復に改善がみられる、あるいは疾患または障害の進行速度が低下する量を意味する。この用語には、その範囲内に、正常な生理機能の強化に効果的な量も含まれる。
【０１０３】
本発明の別の側面は、薬剤として使用するための、本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である。
【０１０４】
本発明の別の側面は、ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣに関連した疾患または障害を治療または予防する方法で使用するための本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である。
【０１０５】
本発明において、ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫおよびＴＥＣに関連した疾患または障害は、ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣが関わっている疾患または障害であると定義される。
【０１０６】
好ましい実施態様において、ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣに関連した疾患または障害は、移植拒絶反応の免疫学的、炎症性、自己免疫性若しくはアレルギー性の障害若しくは疾患または移植片対宿主病である。
【０１０７】
この結果、本発明の別の側面は、移植拒絶反応の免疫学的、炎症性、自己免疫性若しくはアレルギー性の障害若しくは疾患または移植片対宿主病を治療または予防する方法で使用するための本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である。
【０１０８】
組織および臓器の炎症は広範囲の障害および疾患で発生し、様々な形で受容体のサイトカインファミリーの活性化から生じる。ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣの活性化に関連する例示的な炎症性疾患には、非限定的に、放射線被ばくによる皮膚炎症、喘息、アレルギー性炎症および慢性炎症が含まれる。
【０１０９】
本発明において、自己免疫疾患は、自分自身の体の構成成分、例えばタンパク質、脂質またはＤＮＡに対する身体の免疫反応によって少なくとも部分的に誘発される疾患である。臓器特異性自己免疫疾患の例は、膵臓を冒すインスリン依存性糖尿病（Ｉ型）、甲状腺を冒す橋本甲状腺炎およびグレーブス病、胃を冒す悪性貧血、副腎を冒すクッシング病およびアジソン病、肝臓を冒す慢性活動性肝炎、多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、セリアック病、乾癬、炎症性大腸炎（ＩＢＤ）並びに強直性脊椎炎である。非臓器特異性自己免疫疾患の例は関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデスおよび重症筋無力症である。
【０１１０】
１型糖尿病は自己反応性Ｔ細胞のランゲルハンス島のインスリン分泌β細胞に対する選択的侵襲の結果として起きる。この疾患においてＪＡＫ３を標的とすることは、ＪＡＫ経路をシグナル伝達する複数のサイトカインがＴ細胞が媒介するβ細胞の自己免疫破壊に関係すると知られているとの観察結果に基づく。実際、ＪＡＫ３阻害物質であるＪＡＮＥＸ−１は、I型糖尿病のＮＯＤマウスモデルにおいて自己免疫性糖尿病の自然発症を予防すると判明している。
【０１１１】
好ましい実施態様において、自己免疫疾患は、関節リウマチ（ＲＡ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ；クローン病および潰瘍性大腸炎）、乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）および多発性硬化症（ＭＳ）からなる群から選択される。
【０１１２】
関節リウマチ（ＲＡ）は、世界の人口の約１％を襲う慢性進行性且つ消耗性の炎症性疾患である。ＲＡは、主に手足の小関節を蝕む対称性の多関節型関節炎である。関節を覆う層である滑膜における炎症に加えて、パンヌスと称される侵襲性の組織前部が局所的な関節構造に浸潤し、それを破壊する（Firestein 2003, Nature 423:356-361）。
【０１１３】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、慢性再発性小腸炎を特徴とする。ＩＢＤはクローン病と潰瘍性大腸炎の表現型に更に分類される。クローン病は、回腸終末部および結腸で最も多く起き、貫壁性であり且つ非連続的である。対照的に、潰瘍性大腸炎において、炎症は連続的であり、直腸および結腸粘膜層に限定される。直腸および結腸に限局される約１０％の症例において、クローン病であるか潰瘍性大腸炎であるかを確定分類することはできず、「未定型大腸炎」と称される。どちらの疾患も、皮膚、目または関節の腸管外炎症を伴う。好中球誘発性の損傷は、好中球遊走阻害剤の使用によって防止し得る（Asakura et al., 2007, World J Gastroenterol. 13(15):2145-9）。
【０１１４】
乾癬は、人口の約２％を襲う慢性炎症性皮膚疾患である。赤いうろこ状の皮膚斑を特徴とし、これらは通常、頭皮、ひじおよび膝に見られ、また重度の関節炎に関係している場合がある。病変は角化細胞の異常な増殖並びに炎症細胞の真皮および表皮への浸潤によって引き起こされる（Schon et al., 2005, New Engl. J. Med. 352:1899-1912）。
【０１１５】
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）はＴ細胞媒介性のＢ細胞活性化によって引き起こされる慢性炎症性疾患であり、糸球体腎炎および腎不全に至る。ヒトＳＬＥは、初期段階での持続性の自己反応性ＣＤ４＋メモリー細胞の増殖を特徴とする（D’Cruz et al., 2007, Lancet 369(9561):587-596）。
【０１１６】
多発性硬化症（ＭＳ）は、炎症性且つ脱髄性の神経疾患である。ＣＤ４＋タイプ１のＴヘルパー細胞によって媒介される自己免疫障害であると考えられてきたが、近年の研究から他の免疫細胞も関係していることが明らかとなった(Hemmer et al., 2002, Nat. Rev. Neuroscience 3, 291-301)。
【０１１７】
好ましい実施態様において、アレルギー性疾患は、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、成人呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、気管支炎、結膜炎、皮膚炎およびアレルギー性鼻炎からなる群から選択される。
【０１１８】
マスト細胞はＪＡＫ３を発現し、ＪＡＫ３は、炎症性メディエーターの放出を含めたＩｇＥ依存性マスト細胞応答の重要な調節因子である。ＪＡＫ３は、マスト細胞媒介性アレルギー反応の治療における妥当な標的であると判明している。マスト細胞活性化に関連するアレルギー性疾患には、Ｉ型即時型過敏症反応、例えばアレルギー性鼻炎（枯草熱）、アレルギー性蕁麻疹（urticaria、hives）、血管浮腫、アレルギー性喘息およびアナフィラキシー、例えばアナフィラキシーショックが含まれる。これらの障害はＪＡＫ３活性の阻害、例えば本発明のＪＡＫ３阻害剤の投与によって治療または予防し得る。
【０１１９】
移植拒絶反応（同種移植片移植拒絶反応）は、限定するものではないが、例えば腎臓、心臓、肝臓、肺、骨髄、皮膚および角膜の移植後の急性および慢性同種移植片拒絶反応を含む。Ｔ細胞が同種移植片拒絶反応の特異的免疫応答において中心的な役割を果たすことが知られている。超急性、急性および慢性臓器移植拒絶反応を治療し得る。超急性拒絶反応は移植後数分以内に起きる。急性拒絶反応は一般に、移植から６〜１２ヶ月以内に起きる。超急性および急性拒絶反応は、典型的には、免疫抑制剤で処置する場合は可逆的である。臓器機能の段階的な喪失を特徴とする慢性拒絶反応は、移植後はいつでも生じ得ることから、移植レシピエントが常に抱える懸念事項である。
【０１２０】
移植片対宿主病（ＧＶＤＨ）は、同種骨髄移植（ＢＭＴ）における主な合併症である。ＧＶＤＨは、組織適合性複雑系におけるレシピエントの違いを認識しそれに反応するドナーＴ細胞によって引き起こされ、著しく高い罹患率および死亡率をもたらす。ＪＡＫ３はＧＶＨＤの誘発において重要な役割を果たし、ＪＡＫ３阻害剤であるＪＡＮＥＸ−１での治療はＧＶＨＤの重症度を減弱させると判明した（Cetkovic-CvrIje and Ucken, 2004で概説）。
【０１２１】
喘息は、成人および小児の両方における、多くの臨床表現型を有する複合症候群である。その主な特徴には、様々な度合いの気道閉塞、気管支過感受性および気道炎症が含まれる（Busse and Lemanske, 2001, N. Engl. J. Med. 344:350-362）。
【０１２２】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、炎症、完全には可逆性ではない気流制限および肺機能の段階的な喪失を特徴とする。ＣＯＰＤにおいて、刺激物質の慢性的な吸入は異常な炎症反応、気道の再造形および肺における気流の制限を引き起こす。吸入される刺激物質は通常タバコの煙であるが、職業性粉塵および環境汚染が可変的に関わっている（Shapiro 2005, N.Engl. J. med. 352, 2016-2019）。
【０１２３】
好ましい実施態様において、炎症性疾患は眼疾患である。
【０１２４】
ドライアイ症候群（ＤＥＳ、乾性角結膜炎としても知られる）は、眼科医が治療する最も一般的な問題の１つである。ＤＥＳを涙液機能不全症候群と称される場合もある（Jackson, 2009. Canadian Journal Ophthalmology 44(4), 385-394）。ＤＥＳは２０〜４５歳の人口の最大１０％において発症し、その割合は年齢と共に上昇する。多種多様な人工涙液製品が利用可能であるが、これらの製品は症状を一時的に緩和するにすぎない。このため、ドライアイを治療するための剤、組成物および治療方法が必要とされている。
【０１２５】
本明細書で使用の「ドライアイ障害」は、Ｄｒｙ  Ｅｙｅ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ（ＤＥＷＳ）の最近の公式報告においてまとめられた疾患状態をその範囲に含むものとされ、公式報告はドライアイを、「不快感、視力障害および涙膜の不安定性の症状を眼表面の潜在的な損傷と共に生じさせる、涙液および眼表面の多機能性疾患と定義した。それは涙膜の浸透圧の上昇および眼表面の炎症を伴う」(Lemp, 2007. "The Definition and Classification of Dry Eye Disease: Report of the Definition and Classification Subcommittee of the International Dry Eye Workshop", The Ocular Surface, 5(2), 75-92)。ドライアイは乾性角結膜炎と称される場合もある。幾つかの実施態様において、ドライアイ障害の治療は、ドライアイ障害の特定の症状、例えば眼の不快感、視力障害、涙膜の不安定性、涙液の高浸透圧および眼表面の炎症を寛解させることを伴う。
【０１２６】
ぶどう膜炎は眼内炎症の最も一般的な形態であり、依然として失明の大きな原因である。ぶどう膜炎に対して現在行われている治療では、重い副作用を伴い且つ包括的に免疫抑制的である全身投薬を採用している。臨床的には、慢性進行性または再発性の形態の非伝染性ぶどう膜炎は、局所的および／または全身的コルチコステロイドで治療する。加えて、マクロライド、例えばシクロスポリン、ラパマイシンを使用し、場合によっては、細胞障害性薬物、例えばシクロホスファミド、クロラムブシルおよび代謝拮抗薬、例えばアザチオプリン、メトトレキサート、レフルノミドを使用する（Srivastava et al., 2010. Uveitis: Mechanisms and recent advances in therapy. Clinica Chimica Acta, doi:10.1016/j.cca.2010.04.017）。
【０１２７】
更なる眼疾患、併用治療および投与経路は、例えば国際公開第２０１０／０３９９３９−Ａ号パンフレットに記載され、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２８】
更に好ましい実施態様において、ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣに関連した疾患または障害は増殖性疾患、特にがんである。
【０１２９】
特にＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣに関連した疾患および障害は、増殖性障害または疾患、特にがんである。
【０１３０】
したがって、本発明の別の側面は、増殖性疾患、特にはがんを治療または予防する方法において使用するための、本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である。
【０１３１】
がんは、異常な細胞の制御されない増殖および拡散を特徴とする疾患群を含む。一般に、全てのタイプのがんに細胞の増殖、分裂および生存の制御における何らかの異常と、その結果としての細胞の悪性増殖が見られる。細胞のこの悪性増殖に寄与する主な要素は、増殖信号からの独立、抗増殖信号に対する非感受性、アポトーシスの回避、無制限の複製能、持続的な血管新生、組織浸潤および転移並びにゲノム不安定性である（Hanahan and Weinberg, 2000. The Hallmarks of Cancer. Cell 100, 57-70）。
【０１３２】
典型的には、がんは、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫）および固形がん、例えば肉腫、がん腫（例えば、脳がん、乳がん、肺がん、結腸がん、胃がん、肝がん、膵がん、前立腺がん、卵巣がん）として分類される。
【０１３３】
本発明のキナーゼ阻害剤は、皮膚がんおよび血液悪性腫瘍、例えばリンパ腫、白血病を含めた特定の悪性腫瘍の治療においても有用となり得る。
【０１３４】
例えばＪＡＫ３の活性化によってＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路が活性化されるがんは特に、ＪＡＫ３阻害剤での治療に応答すると予測される。ＪＡＫ３突然変異を抱えるがんの例は、急性巨核芽球性白血病（ＡＭＫＬ）（Walters et al., 2006. Cancer Cell 10(1):65-75）および乳がん（Jeong et al., 2008. Clin. Cancer Res. 14, 3716-3721）である。
【０１３５】
本発明の更に別の側面は、ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣに関連した疾患および障害の治療または予防のための薬剤を製造するための、本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用である。
【０１３６】
本発明の更に別の側面は、免疫学的、炎症性、自己免疫性またはアレルギー性の障害若しくは疾患または移植拒絶反応または移植片対宿主病を治療または予防するための薬剤を製造するための、本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用である。
【０１３７】
本発明の更に別の側面は、増殖性疾患、特にはがんを治療または予防する薬剤を製造するための、本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用である。
【０１３８】
本発明のこれらの使用との関連において、ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣに関連した疾患および障害は上で定義した通りである。
【０１３９】
本発明の更に別の側面は、ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣに関連した疾患および障害からなる群から選択される１つ以上の病態を、それを必要としている哺乳動物の患者／患畜において治療する、制御する、進行遅延させる、または予防するための方法であり、この方法は、患者／患畜への治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の投与を含む。
【０１４０】
本発明の更に別の側面は、免疫学的、炎症性、自己免疫性またはアレルギー性の障害若しくは疾患または移植拒絶反応または移植片対宿主病からなる群から選択される１つ以上の病態を、それを必要としている哺乳動物の患者／患畜において治療する、制御する、進行遅延させるまたは予防するための方法であり、この方法は、患者／患畜への治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の投与を含む。
【０１４１】
本発明の更に別の側面は、増殖性疾患、特にはがんを、それを必要としている哺乳動物の患者／患畜において治療する、制御する、進行遅延させるまたは予防するための方法であり、この方法は、患者／患畜への治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の投与を含む。
【０１４２】
本発明のこれらの方法との関連において、ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣに関連した疾患および障害は上で定義した通りである。
【０１４３】
本発明のこれらの方法との関連において、本発明の化合物は、好ましくは、ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣ、好ましくはシステイン残基に共有結合する。
【０１４４】
本明細書で使用の用語「治療する」または「治療」は、疾患の進行の緩徐化、中断、抑止または中止があり得る全ての工程を意味するとするが、必ずしも全ての症状の完全なる排除を示すわけではない。
【０１４５】
本発明の医薬組成物に関して上で論じた全ての実施態様は、本発明の上記の第１または第２の医学的使用または方法にもあてはまる。
【０１４６】
本発明の化合物の調製は、国際公開第２０１１／０４８０８２−Ａ１号パンフレット等の文献に記載されている。本発明の化合物を調製するための例示的な経路を以下に記載する。当業者には、このような経路を特には活性化または保護基の導入と組み合わせて併用または調節することが明白である。
【０１４７】
本発明の化合物を調製するための例示的な一般経路をスキーム１で概説する。化合物（ＩＶ）を実証を目的として使用する。当業者ならば、化合物（ＩＶ）を同様の試薬で置き換えて本明細書に記載の別の化合物を合成し得ることがわかる。
【０１４８】
【化９】
2014531449.tif 000011
【０１４９】
式（ＩＩ）の化合物を、市販のまたは当業者ならば生成可能な化合物（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（ＶＩ）および（ＩＸ）から生成し得る。これらの反応には多様な溶媒が任意で使用され、プロトン性溶媒、例えばアルコール、極性非プロトン性溶媒、例えばジメチルスルホキシド、ＤＭＦ、アセトニトリル、ジオキサン、ＴＨＦ、非極性溶媒、例えばトルエン、ＤＣＭまたは塩基性溶媒、例えばピリジンが含まれる。任意で、反応を、トリエチルアミン、ＤＩＰＥＡ等のアミン塩基を含むがこれらに限定されない塩基または金属カーボネートの添加により促進し得る。任意で、反応を、塩酸等の鉱酸、有機酸およびルイス酸を含めた酸により促進し得る。Ａ、ＢおよびＣは、ハロゲン等の適切な脱離基である。ＧはＳＯ２またはＣ（Ｏ）である。Ｄは置換されていてもよいアルケンまたはアルキンである。
【０１５０】
当業者ならば、事象の順序が反応条件および試薬の性質に左右され、またどの化合物にも２つ以上の経路が考えられ、またスキーム１で指定したものとは異なる順序の事象も可能であることがわかる。
【０１５１】
一つの実施態様において、式（ＩＩＩ）の化合物を式（ＩＶ）の化合物と、炭酸カリウム等の塩基の存在下、アセトニトリル等の極性非プロトン性溶媒中で反応させることによって式（Ｖ）の化合物を得る。次に、式（Ｖ）のこの化合物を式（ＶＩ）の化合物と塩酸等の酸の存在下、イソプロパノール等のプロトン性溶媒中、２０℃より高い温度、例えば９０℃で反応させて式（ＶＩＩ）の化合物を得る。次に、式（ＶＩＩ）の化合物を水素等の還元剤とＰｄ／Ｃ等の触媒の存在下、メタノール等のプロトン性溶媒中で反応させると式（ＶＩＩＩ）の化合物が得られる。次に、式（ＶＩＩＩ）のこの化合物を式（ＩＸ）の化合物とＤＩＰＥＡ等の塩基の存在下、ＤＣＭ等の非極性溶媒中で反応させると式（ＩＩ）の化合物が得られる。
【図面の簡単な説明】
【０１５２】
【図１】ヒトＪＡＫ３（ＩＰＩＩＰＩ００００２７７３．４）のアミノ酸配列。システイン残基９０９を有するペプチドＬＶＭＥＹＬＰＳＧＣＬＲ（位置９００−９１１）に下線を引いている。
【実施例】
【０１５３】
分析方法
ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｃｋｅｒ  ｄｐｘ４００で得た。ＬＣＭＳを、Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８、３ｘ３０ｍｍ、３ミクロンを使用してＡｇｉｌｅｎｔ  １１００で行った。カラム流量は１．２ｍＬ／分、使用溶媒は水およびアセトニトリル（０．１％ギ酸−高ｐＨ、０．１％アンモニア−低ｐＨ）、注入量は３μＬであった。波長は２５４および２１０ｎｍであった。
【０１５４】
方法Ａ
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ−Ｃ１８、３ｘ３０ｍｍ、３ミクロン。流量：１．２ｍＬ／分
【表１】
2014531449.tif 000012
【０１５５】
方法Ｂ
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ−Ｃ１８、４．６ｘ１５０ｍｍ、５ミクロン。流量：１．０ｍＬ／分。
【表２】
2014531449.tif 000013
【０１５６】
方法Ｃ
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ−ＮＸ  Ｃ１８、４．６ｘ１５０ｍｍ、５ミクロン。流量：１ｍＬ／分。グラジエント：
【表３】
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【０１５７】
【表４】
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【０１５８】
実験
実施例１：Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド
【化１０】
2014531449.tif 000017
【０１５９】
アセトニトリル（１５０ｍＬ）中の６−クロロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（１０ｇ、５２ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２ｅｑ）および１−（ブロモメチル）−３−ニトロベンゼン（１．２ｅｑ）の懸濁液を室温で２０時間にわたって撹拌した。溶媒を真空下で減量し、残留物をエチルアセテートに溶解させ、水で洗浄した。有機物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で減量し、カラムクロマトグラフィで精製すると、６−クロロ−１−（３−ニトロベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンが得られた。
【０１６０】
イソプロパノール（６２ｍＬ）中の６−クロロ−１−（３−ニトロベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（２．２ｇ、７．６ｍｍｏｌ）の溶液に、１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−アミン（２．５ｅｑ）および濃塩酸溶液（０．２ｍＬ）を添加し、反応物を９０℃で１８時間にわたって加熱した。室温まで冷却した後、固形物を濾過し、冷イソプロパノールで洗浄し、次に空気乾燥させると、Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（３−ニトロベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−アミンが得られた。
【０１６１】
ＭｅＯＨ（２５ｍＬ）中のＮ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（３−ニトロベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−アミン（０．６ｇ、１．７ｍｍｏｌ）の溶液に、濃塩酸溶液（０．６ｍＬ）、次にＰｄ／Ｃ（６０ｍｇ）を添加し、反応物を水素バルーン下で２時間にわたって撹拌した。得られた混合物をセライトで濾過し、濾液を真空下で濃縮すると、１−（３−アミノベンジル）−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−アミンが得られた。
【０１６２】
ＤＣＭ（１ｍＬ）およびＤＭＦ（１ｍＬ）中の１−（３−アミノベンジル）−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−アミン（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（２ｅｑ）、次にアクリロイルクロリド（１．２ｅｑ）を添加し、反応物を室温で１６時間にわたって撹拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、１ＭのＨＣｌ水溶液で洗浄した。有機物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次に水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で減量し、分取ＨＰＬＣで精製すると標題の化合物が得られた。ＬＣ−ＭＳ法Ｃ、（ＥＳ＋）３７５、ＲＴ＝７．０８分。
【０１６３】
実施例２：Ｎ−（２−フルオロ−５−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド
【化１１】
2014531449.tif 000018
【０１６４】
標題の化合物を、４−（ブロモメチル）−１−フルオロ−２−ニトロベンゼンを使用し、実施例１の手順に従って生成した。ＬＣ−ＭＳ法Ｃ、（ＥＳ＋）３９３、ＲＴ＝７．１９分
【０１６５】
実施例３：Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）プロピオルアミド
【化１２】
2014531449.tif 000019
【０１６６】
ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の１−（３−アミノベンジル）−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−アミン（実施例１で調製）（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の溶液にプロピオル酸（０．９ｅｑ）、ＤＩＰＥＡ（３ｅｑ）、次にＰｙＢｒｏＰ（１．３ｅｑ）を添加し、反応物を室温で３時間にわたって撹拌した。反応物をＤＣＭで希釈し、１ＭのＨＣｌ水溶液で洗浄した。有機物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次に水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で減量し、分取ＨＰＬＣで精製すると標題の化合物が得られた。ＬＣ−ＭＳ法Ｃ、（ＥＳ＋）３７３、ＲＴ＝６．９９分
【０１６７】
実施例４：Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）エテンスルホンアミド
【化１３】
2014531449.tif 000020
【０１６８】
ＤＣＭ（２ｍＬ）中の２−クロロエタンスルホニルクロリド（１．１ｅｑ）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（２．５ｅｑ）を添加し、混合物を３０分間にわたって撹拌した。１−（３−アミノベンジル）−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−アミン（実施例１で調製）（１００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）および飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２ｍＬ）を添加し、反応物を室温で３時間にわたって撹拌した。相が分離し、生成物をＤＣＭ中に抽出し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で減量し、分取ＨＰＬＣで精製すると標題の化合物が得られた。ＬＣ−ＭＳ法Ｃ、（ＥＳ＋）４１１、ＲＴ＝７．１７分
【０１６９】
実施例５：Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）メタクリルアミド
【化１４】
2014531449.tif 000021
【０１７０】
標題の化合物を、メタクリロイルクロリドを使用し、実施例１の手順に従って生成した。ＬＣ−ＭＳ法Ｃ、（ＥＳ＋）３８９、ＲＴ＝７．４４分
【０１７１】
実施例６：３−メチル−Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）ブト−２−エンアミド
【化１５】
2014531449.tif 000022
【０１７２】
標題の化合物を、３−メチルブト−２−エノイルクロリドを使用し、実施例１の手順に従って生成した。ＬＣ−ＭＳ法Ｃ、（ＥＳ＋）４０３、ＲＴ＝７．７２分
【０１７３】
実施例７：Ｎ−（３−（（２−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）フェニル）エテンスルホンアミド
【化１６】
2014531449.tif 000023
【０１７４】
アセトニトリル（１５０ｍＬ）中の２−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１ｇ、６．５ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２ｅｑ）および１−（ブロモメチル）−３−ニトロベンゼン（１．２ｅｑ）の懸濁液を、室温で２０時間にわたって撹拌した。次に、溶媒を真空下で減量し、残留物をエチルアセテートで希釈し、水で洗浄した。有機物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で減量すると、２−クロロ−７−（３−ニトロベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンが得られた。
【０１７５】
イソプロパノール（２ｍＬ）中の２−クロロ−７−（３−ニトロベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）の溶液に、１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−アミン（２．５ｅｑ）および濃塩酸溶液（０．０５ｍＬ）を添加し、混合物をマイクロ波中、１４０℃で１時間にわたって反応させた。次に、混合物を濾過し、冷イソプロパノールで洗浄し、次に空気乾燥させると、Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−７−（３−ニトロベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミンが得られた。
【０１７６】
ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中のＮ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−７−（３−ニトロベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン（８０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の溶液にＳｎＣｌ２を添加し、反応物を６０℃で４時間にわたって加熱した。室温まで冷却した後、混合物をエチルアセテートに抽出し、水およびブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空下で減量すると、７−（３−アミノベンジル）−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミンが得られた。
【０１７７】
ＤＣＭ（１ｍＬ）およびＤＭＦ（１ｍＬ）中の７−（３−アミノベンジル）−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（２ｅｑ）、次にアクリロイルクロリド（１．２ｅｑ）を添加し、反応物を室温で１６時間にわたって撹拌した。次に、混合物をＤＣＭで希釈し、１ＭのＨＣｌ水溶液で洗浄した。次に、有機物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で減量し、カラムクロマトグラフィで精製すると標題の化合物が得られた。ＬＣ−ＭＳ法Ｃ、（ＥＳ＋）４１０、ＲＴ＝５．７６分
【０１７８】
実施例８：Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−１−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド
【化１７】
2014531449.tif 000024
【０１７９】
アセトニトリル（３０ｍＬ）中の６−クロロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン（１ｇ、６．５ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２ｅｑ）および１−（ブロモメチル）−３−ニトロベンゼン（１．２ｅｑ）の懸濁液を、室温で２０時間にわたって撹拌した。溶媒を真空下で減量し、残留物をエチルアセテートに溶解させ、水で洗浄した。有機物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で減量し、カラムクロマトグラフィで精製すると、６−クロロ−１−（３−ニトロベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジンが得られた。
【０１８０】
ジオキサン（５ｍＬ）中のＰｄ２（ｄｂａ）３（０．１ｅｑ）およびＸＡＮＴＰＨＯＳ（０．２ｅｑ）の脱気溶液に、炭酸セシウム（２ｅｑ）、１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（１．２ｅｑ）および６−クロロ−１−（３−ニトロベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン（１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を１１０℃で１８時間にわたって加熱した。室温まで冷却した後、反応物をエチルアセテートで希釈し、水で洗浄した。有機物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で減量し、カラムクロマトグラフィで精製すると、Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１−（３−ニトロベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−６−アミンが得られた。
【０１８１】
ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中のＮ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１−（３−ニトロベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−６−アミン（５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）の溶液に、濃塩酸溶液（０．１ｍＬ）、次にＰｄ／Ｃ（１０ｍｇ）を添加し、反応物を水素バルーン下で２時間にわたって撹拌した。得られた混合物をセライトで濾過し、濾液を真空下で濃縮すると、１−（３−アミノベンジル）−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−６−アミンが得られた。
【０１８２】
ＤＣＭ（１ＭＬ）およびＤＭＦ（１ｍＬ）中の１−（３−アミノベンジル）−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−６−アミン（４０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（２ｅｑ）、次にアクリロイルクロリド（１．２ｅｑ）を添加し、反応物を室温で１６時間にわたって撹拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、１ＭのＨＣｌ水溶液で洗浄した。有機物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次に水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で減量し、分取ＨＰＬＣで精製すると標題の化合物が得られた。ＬＣ−ＭＳ法Ｃ、（ＥＳ＋）３７４、ＲＴ＝５．３８分
【０１８３】
実施例９：Ｎ−（３−（（２−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド
【化１８】
2014531449.tif 000025
【０１８４】
ＤＣＭ（１ｍＬ）およびＤＭＦ（１ｍＬ）中の７−（３−アミノベンジル）−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン（実施例７で調製）（２０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（２ｅｑ）、次にアクリロイルクロリド（１．２ｅｑ）を添加し、反応物を室温で１６時間にわたって撹拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、１ＭのＨＣｌ水溶液で洗浄した。有機物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次に水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で減量し、分取ＨＰＬＣで精製すると標題の化合物が得られた。ＬＣ−ＭＳ法Ｃ、（ＥＳ＋）３７４、ＲＴ＝５．７５分
【０１８５】
実施例１０：Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−１−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド
【化１９】
2014531449.tif 000026
【０１８６】
アセトニトリル（３０ｍＬ）中の６−クロロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン（１ｇ、６．５ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２ｅｑ）および１−（ブロモメチル）−３−ニトロベンゼン（１．２ｅｑ）の懸濁液を室温で２０時間にわたって撹拌した。溶媒を真空下で減量し、残留物をエチルアセテートに溶解させ、水で洗浄した。有機物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で減量し、カラムクロマトグラフィで精製すると、６−クロロ−１−（３−ニトロベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジンが得られた。
【０１８７】
ジオキサン（５ｍＬ）中のＰｄ２（ｄｂａ）３（０．１ｅｑ）およびＸＡＮＴＰＨＯＳ（０．２ｅｑ）の脱気溶液に、炭酸セシウム（２ｅｑ）、１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−アミン（１．２ｅｑ）および６−クロロ−１−（３−ニトロベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン（１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を１１０℃で１８時間にわたって加熱した。室温まで冷却した後、反応物をエチルアセテートで希釈し、水で洗浄した。有機物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で減量し、カラムクロマトグラフィで精製すると、Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（３−ニトロベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−６−アミンが得られた。
【０１８８】
ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中のＮ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（３−ニトロベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−６−アミン（５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）の溶液に、濃塩酸溶液（０．１ｍＬ）、次にＰｄ／Ｃ（１０ｍｇ）を添加し、反応物を水素バルーン下で２時間にわたって撹拌した。得られた混合物をセライトで濾過し、濾液を真空下で濃縮すると、１−（３−アミノベンジル）−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−６−アミンが得られた。
【０１８９】
ＤＣＭ（１ｍＬ）およびＤＭＦ（１ｍＬ）中の１−（３−アミノベンジル）−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−６−アミン（２５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（２ｅｑ）、次にアクリロイルクロリド（１．２ｅｑ）を添加し、反応物を室温で１６時間にわたって撹拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、１ＭのＨＣｌ水溶液で洗浄した。有機物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次に水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で減量し、分取ＨＰＬＣで精製すると標題の化合物が得られた。ＬＣ−ＭＳ法Ｃ、（ＥＳ＋）３７４、ＲＴ＝５．３８分
【０１９０】
参考例１：Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１−（３−（オキセタン−３−イルアミノ）ベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−アミン
【化２０】
2014531449.tif 000027
【０１９１】
この化合物を、上記のものと同様の手順により合成した。加えて、国際公開第２０１２／０２２６８１−Ａ２号パンフレットの１２１頁、実施例１１４を参照する。
【０１９２】
参考例２：Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）アセトアミド
【化２１】
2014531449.tif 000028
【０１９３】
この化合物を、上記のものと同様の手順により合成した。
【０１９４】
参考例３：ＪＡＫ３阻害剤ＣＰ６９０５５０（Changelian et al., 2003, Science 302(5646):875-888）。
【０１９５】
生物学アッセイ
Ｋｉｎｏｂｅａｄｓ（商標）アッセイにおけるキナーゼの免疫検出によるヤヌスキナーゼ（ＪＡＫファミリー）に対する本発明の化合物の作用の測定
アッセイ原理
前出の実施例に記載の本発明の化合物を、ＺＡＰ−７０について記載のＫｉｎｏｂｅａｄｓ（商標）アッセイで試験した（国際公開第２００７／１３７８６７−Ａ号）。簡潔に述べると、試験化合物（様々な濃度）およびアミノピリド−ピリミジンリガンド２４を固定させたアフィニティマトリックスを細胞溶解産物アリコートに添加し、溶解産物試料中のタンパク質に結合させた。インキュベーション時間が過ぎたら、タンパク質が捕捉されたビーズを溶解産物から分離した。次に、結合したタンパク質を溶出させ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２の存在を、ドットブロット法およびＯｄｙｓｓｅｙ赤外線検出システムにおいて特異的抗体を使用して検出および定量した。個々のキナーゼの用量反応曲線を作成し、ＩＣ５０値を計算した。ＺＡＰ−７０（国際公開第２００７／１３７８６７−Ａ号）およびキナーゼ選択性プロファイリング（国際公開第２００６／１３４０５６−Ａ号）に関するＫｉｎｏｂｅａｄｓ（商標）アッセイはこれまでに記載されている。
【０１９６】
プロトコル
アフィニティマトリックスの洗浄
アフィニティマトリックスを２回、０．２％ＮＰ４０（ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＡ−６３０、Ｓｉｇｍａ社、Ｉ３０２１）を含有する１５ｍＬの１ｘＤＰバッファで洗浄し、次に０．２％ＮＰ４０を含有する１ｘＤＰバッファに再懸濁させた（３％ビーズスラリー）。
５ｘＤＰバッファ：２５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．４、２５％グリセロール、７．５ｍＭのＭｇＣｌ２、７５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＮａ３ＶＯ４。０．２２μｍフィルタを通して５ｘＤＰバッファを濾過し、アリコートにして−８０℃で保管した。５ｘＤＰバッファをＨ２Ｏで希釈して１ｍＭのＤＴＴおよび２５ｍＭのＮａＦを含有する１ｘＤＰバッファにする。
【０１９７】
試験化合物の調製
試験化合物のストック溶液をＤＭＳＯ中で調製した。９６ウェルプレート内で、ＤＭＳＯ中５ｍＭの希釈試験化合物の溶液３０μＬを調製した。この溶液から出発して、１：３希釈系列（９段階）を調製した。コントロール実験（試験化合物なし）では、２％のＤＭＳＯを含有するバッファを使用した。
【０１９８】
細胞培養および細胞溶解産物の調製
１Ｌスピナーフラスコ（Ｉｎｔｅｇｒａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、＃１８２１０１）において、Ｍｏｌｔ４細胞（ＡＴＣＣカタログ番号：ＣＲＬ−１５８２）およびＲａｍｏｓ細胞（ＡＴＣＣカタログ番号：ＣＲＬ−１５９６）を、１０％ウシ胎仔血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を補充したＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、＃２１８７５−０３４）中、０．１５ｘ１０６〜１．２ｘ１０６細胞／ｍＬの密度で懸濁させて増殖させた。細胞を遠心分離で回収し、１ｘＰＢＳバッファ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、＃１４１９０−０９４）で１回洗浄し、細胞ペレットを液体窒素中で凍結させ、続いて−８０℃で保管した。Ｐｏｔｔｅｒ  Ｓホモジナイザにより、細胞を溶解バッファ：５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、０．８％のＮＰ４０、５％グリセロール、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのＭｇＣｌ２、２５ｍＭのＮａＦ、１ｍＭバナジン酸ナトリウム、１ｍＭのＤＴＴ、ｐＨ７．５中でホモジナイズした。バッファ２５ｍＬあたり１個のコンプリートＥＤＴＡフリー錠（プロテアーゼ阻害剤カクテル、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社、１８７３５８０）を添加した。材料を機械化ＰＯＴＴＥＲ  Ｓを使用して１０回ダウンス処理し、５０ｍＬファルコンチューブに移し、氷上で３０分間にわたってインキュベートし、１０分間にわたって２００００ｇ、４℃で遠心沈殿させた（１００００ｒｐｍ、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＳＬＡ６００、予冷）。上清を超遠心機（ＵＺ）−ポリカーボネートチューブ（Ｂｅｃｋｍａｎｎ社、３５５６５４）に移し、１時間にわたって１００．０００ｇ、４℃で超遠心した（３３．５００ｒｐｍ、Ｔｉ５０．２、予冷）。上清を再度新しい５０ｍＬファルコンチューブに移し、タンパク質濃度をＢｒａｄｆｏｒｄアッセイ（ＢｉｏＲａｄ社）により測定し、１アリコートあたり５０ｍｇのタンパク質を含有する試料を調製した。試料を速やかに実験に使用しまたは液体窒素中で凍結させ、−８０℃で凍結保管した。
【０１９９】
細胞溶解産物の希釈
細胞溶解産物（プレート１枚あたりタンパク質約５０ｍｇ）を水浴中、室温で解凍し、次に氷上で保管した。解凍した細胞溶解産物にプロテアーゼ阻害剤（バッファ２５ｍＬあたり１錠、ＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤カクテル、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社、１８７３５８０）を含有する１ｘＤＰ  ０．８％ＮＰ４０バッファを添加して総タンパク質量１０ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度にした。希釈細胞溶解産物を氷上で保管した。１体積のＭｏｌｔ４溶解産物および２体積のＲａｍｏｓ溶解産物を組み合わせる（比１：２）ことで混合Ｍｏｌｔ４／Ｒａｍｏｓ溶解産物を調製した。
【０２００】
溶解産物の試験化合物およびアフィニティマトリックスとのインキュベーション
９６ウェルフィルタープレート（Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ  ＨＴＳ、ＢＶフィルタープレート、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社、＃ＭＳＢＶＮ１２５０）に、１ウェルあたり１００μＬのアフィニティマトリックス（３％ビーズスラリー）、３μＬの化合物溶液および５０μＬの希釈溶解産物を加えた。プレートを封止し、３時間にわたって低温室内で、プレート加振機（Ｈｅｉｄｏｌｐｈ  ｔｉｒａｍａｘ  １０００）により７５０ｒｐｍでインキュベートした。その後、プレートを３回、２３０μＬの洗浄バッファ（１ｘＤＰ  ０．４％ＮＰ４０）で洗浄した。フィルタープレートをコレクションプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ｂｉｏ−ｏｎｅ社、ＰＰ−マイクロプレート９６ウェルＶ字形、６５１２０）上に配置し、次にビーズを２０μＬの試料バッファ（１００ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．４、４％ＳＤＳ、０．０００２５％ブロモフェノールブルー、２０％グリセロール、５０ｍＭのＤＴＴ）で溶出させた。溶出液を−８０℃で速やかに凍結させ、−２０℃で保管した。
【０２０１】
溶出させたキナーゼの検出および定量
ニトロセルロース膜上に溶出液をスポットし、対象であるキナーゼに対する第１抗体および蛍光標識した二次抗体（抗ウサギＩＲＤｙｅ（商標）抗体８００（Ｌｉｃｏｒ社、＃９２６−３２２１１）を使用して、溶出液中のキナーゼを検出および定量した。ＬＩ−ＣＯＲ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社（リンカーン、ネブラスカ州、米国）のＯｄｙｓｓｅｙ赤外線撮像システムを、製造業者が提供する指示に従って操作した（Schutz-Geschwendener et al., 2004. Quantitative, two-color Western blot detection with infrared fluorescence. Published May 2004 by LI-COR Biosciences, www.licor.com）。
【０２０２】
溶出液をスポットした後、ニトロセルロース膜（ＢｉｏＴｒａｃｅ  ＮＴ、ＰＡＬＬ社、＃ＢＴＮＴ３０Ｒ）を、Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファ（ＬＩＣＯＲ、９２７−４００００）と共に１時間にわたって室温でインキュベートすることによって最初にブロックした。次に、ブロックした膜を、Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファ（ＬＩＣＯＲ社、＃９２７−４００００）中で希釈した第１抗体と共に、表５に示す温度で１６時間にわたってインキュベートした。その後、０．２％Ｔｗｅｅｎ  ２０を含有する室温のＰＢＳバッファで膜を１０分間にわたって、２回洗浄した。次に、Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファ（ＬＩＣＯＲ社、＃９２７−４００００）中で希釈した検出抗体（抗ウサギＩＲＤｙｅ（商標）抗体８００、Ｌｉｃｏｒ社、＃９２６−３２２１１）と共に、膜を室温で６０分間にわたってインキュベートした。その後、０．２％Ｔｗｅｅｎ  ２０を含有する室温の１ｘＰＢＳバッファで膜を各回１０分間にわたって、２回洗浄した。次に膜をＰＢＳバッファで１回すすいで残留Ｔｗｅｅｎ  ２０を除去した。膜をＰＢＳバッファ中で４℃に保持した後、Ｏｄｙｓｓｅｙ機器でスキャンした。製造業者の指示に従って蛍光シグナルを記録し、分析した。
【０２０３】
【表５】
2014531449.tif 000029
【０２０４】
結果
表６は、ＪＡＫ  Ｋｉｎｏｂｅａｄｓ（商標）アッセイにおける本発明の選択された化合物に関するデータを示す。
【０２０５】
【表６】
2014531449.tif 000030
【０２０６】
キナーゼの定量的質量分析検出によるＫｉｎｏｂｅａｄｓ（商標）アッセイにおける化合物のキナーゼ選択性プロファイリング
前出の実施例において説明したような本発明の選択された化合物を、記載の通りにＫｉｎｏｂｅａｄｓ（商標）アッセイにおいて試験した（国際公開第２００６／１３４０５６−Ａ号、Bantscheff et al., 2007. Nature Biotechnol. 25, 1035-1044）。
【０２０７】
化合物を、細胞溶解産物アリコート（ジャーカット細胞およびラモス細胞溶解産物の１：１混合物）と共に４５分間にわたって４℃でインキュベートし、溶解産物試料中のタンパク質に結合させた、次に、Ｋｉｎｏｂｅａｄｓ（商標）アフィニティマトリックスを添加して前に添加した化合物と相互作用しなかったタンパク質を捕捉させた。この２時間にわたる４℃でのインキュベーションステップ後、ビーズを溶解産物から分離し、ビーズに結合したタンパク質をＳＤＳ試料バッファに溶出させ、続いてＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により分離した。ゲルをコロイド状クーマシーで染色し、各ゲルレーンにおける染色された領域を切り出し、トリプシンでのインゲルタンパク質分解消化に供した。異なるゲル領域から得たペプチドに、表７に示すような等圧標識試薬（ＴＭＴ試薬、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ社）で標識した。ＴＭＴ試薬は、最高で６種類の異なる生物試料においてペプチド標識が可能な一組の多重アミン特異的安定同位体試薬であり、ペプチドの同時同定および定量を可能にする。合わせた試料をｐＨ１１での逆相クロマトグラフィにより分画し、画分を続いて、タンデム型質量分析計にオンライン接続されたナノフロー液体クロマトグラフィシステム（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）による実験およびそれに続くＭＳ／ＭＳスペクトルでのリポーターイオン定量により分析した（Ross et al., 2004. Mol. Cell. Proteomics 3(12):1154-1169; Dayon et al., 2008. Anal. Chem. 80(8):2921-2931、Thompson et al., 2003. Anal. Chem. 75(8):1895-1904）。更なる実験プロトコルは、国際公開第２００６／１３４０５６号パンフレットおよび前出の出版物に記載されている（Bantscheff et al., 2007. Nat. Biotechnol. 25, 1035-1044; Bantscheff et al., 2011. Nat. Biotechnol. 29(3):255-265）。
【０２０８】
【表７】
2014531449.tif 000031
【０２０９】
表８に示すように、本発明の選択された化合物のキナーゼ選択性プロファイルを、前述したようなキナーゼの質量分析検出によるＫｉｎｏｂｅａｄｓアッセイにおいて決定した（Bantscheff et al., 2007. Nat Biotechnol. 25(9):1035-1044; WO-A 2006/134056）。
【０２１０】
【表８】
2014531449.tif 000032
【０２１１】
キナーゼアッセイにおける本発明の化合物のＢＬＫ、ＢＴＫ、ＩＴＫおよびＪＡＫ３に対する作用の測定
放射性タンパク質キナーゼアッセイ（３３ＰａｎＱｉｎａｓｅ（登録商標）Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ａｓｓａｙ、ＰｒｏＱｉｎａｓｅ  ＧｍｂＨ社、フライブルク、ドイツ）を、タンパク質キナーゼＢＬＫ、ＢＴＫ、ＩＴＫおよびＪＡＫ３のキナーゼ活性を測定するために使用した。全てのキナーゼアッセイは、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社（ボストン、マサチューセッツ州、米国）製の９６ウェルＦｌａｓｈＰｌａｔｅｓ（商標）において反応物体積５０μｌで行われた。反応物カクテルを以下の順序：
２０μｌのアッセイバッファ（標準バッファ）；
５μｌのＡＴＰ溶液（Ｈ２Ｏ中）；
５μｌの試験化合物（１０％ＤＭＳＯ中）；
１０μｌの基質／１０μｌの酵素溶液（事前に混合）
で４つのステップでピペッティングした。
【０２１２】
全ての酵素についてのアッセイで、７０ｍＭのＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ、ｐＨ７．５、３ｍＭのＭｇＣｌ２、３ｍＭのＭｎＣｌ２、３μＭのＮａ−オルトバナデート、１．２ｍＭのＤＴＴ、ＡＴＰ／［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰ（量は様々であり、それぞれのキナーゼの見かけのＡＴＰ−Ｋｍに対応する）、タンパク質キナーゼおよび基質を含んだ（表９）。
【０２１３】
反応カクテルを３０℃で６０分間にわたってインキュベートした。反応を５０μｌの２％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４で停止させ、プレートを吸引し、２００μｌの０．９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌで２回洗浄した。３３Ｐｉの取り込みを、マイクロプレートシンチレーションカウンタ（Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ、Ｗａｌｌａｃ社）で確認した。全てのアッセイを、ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ／ＳＡＧＩＡＮ（商標）コアシステムで行った。
【０２１４】
【表９】
2014531449.tif 000033
【０２１５】
表１０は、キナーゼアッセイにおける本発明の選択された化合物のデータを示す。
【表１０】
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【０２１６】
細胞アッセイ
ｐＳＴＡＴ５アッセイ
アッセイ原理
ＳＴＡＴ５リン酸化は、ＪＡＫ３活性化の下流でのシグナル伝達カスケードにおける近位事象の１つを代表する。したがって、ＳＴＡＴ５リン酸化は、ＪＡＫ３阻害の機構的な作用を評価するための適当な読み出し情報である。ヒトＹＴ細胞、ＮＫ様細胞株をインターロイキン２（ＩＬ−２）で刺激するとチロシン残基６９４（Ｔｙｒ６９４）でＳＴＡＴ５がリン酸化され、これは特異的抗体を使用した免疫検出および適当な検出法、この場合はＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイテクノロジーにより定量的に測定し得る。
【０２１７】
アッセイプロトコル
細胞培養および細胞播種
ヒトＹＴ細胞を、ＲＰＭＩ培地（Ｌｏｎｚａ社、ＢＥ１２−１６７）において２ｍＭのＬ−グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、２５０３０−０２４）および１０％熱失活ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、１０１０６−１６９）と共に培養し、加湿インキュベータ（３７℃、５％ＣＯ２）で維持した。細胞を遠心分離で回収し、ＨＢＳＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、１４１８０−０４６）で１回洗浄し、ＨＢＳＳに１．５ｘ１０６細胞／ｍｌで再懸濁させ、０．９ｘ１０４個の細胞を、９６ウェルホワイトプレートの１ウェルあたり６μｌで播種した（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社、６００５５６９）。
【０２１８】
試験化合物およびＩＬ−２刺激による処理
試験化合物をＤＭＳＯに溶解させ、１：３希釈系列（９ステップ）を調製した。用量反応曲線を作成するために、４％ＤＭＳＯ／ＨＢＳＳ中の３μｌの４倍濃縮化合物を、９６ウェルプレート中の各細胞試料に添加すると、最終ＤＭＳＯ濃度が１％ＤＭＳＯとなった。細胞を１時間にわたって加湿インキュベータ（３７℃、５％ＣＯ２）でインキュベートした。各ウェルに、３μｌの４倍濃縮ＩＬ−２溶液（組み換えヒトＩＬ−２、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ  ２００−０２、ＨＢＳＳ中の１２０ｎＭ溶液）を添加し、３０分間にわたって室温でインキュベートした。３μｌの５ｘ溶解バッファ（ＳｕｒｅＦｉｒｅ溶解バッファ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社、ＴＧＲＳ５Ｓ１０Ｋ）の添加により細胞を溶解させ、１０分間にわたって室温で、穏やかに加振しながらインキュベートした。
【０２１９】
シグナル検出
ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）テクノロジーによるシグナル検出のために、ＳｕｒｅＦｉｒｅホスホ−ＳＴＡＴ５（Ｔｙｒ６９４／Ｔｙｒ６９９）キットを製造業者が提供する指示に従って使用した（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社、ＴＧＲＳ５Ｓ１０Ｋ）。製造業者が推奨する通りにアクセプタビーズを添加し（再活性化バッファ／活性化バッファ／アクセプタビーズ＝比４０：１０：１）、室温で１．５時間にわたって穏やかに加振しながらインキュベートした。次に、推奨される通りにドナービーズを添加し（希釈バッファ／ドナービズ＝比２０：１）、室温で１．５時間にわたって穏やかに加振しながらインキュベートした。プレートを、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎプロトコルの機器Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社）で読んだ。データをＢｉｏＡｓｓａｙにおいて、可変スロープのＳ字状用量反応について非線形回帰を利用して分析した。
【０２２０】
表１１は、ｐＳＴＡＴ５細胞アッセイにおける本発明の選択された化合物についてのデータを示す。
【０２２１】
【表１１】
2014531449.tif 000035
【０２２２】
化合物の洗い流しを伴う細胞アッセイ
アッセイ原理
このタイムコース実験により、試験化合物の薬理学的作用が、この化合物を細胞試料から除去した後であっても続くか否かについてを判定することができる。
【０２２３】
アッセイプロトコル
細胞培養および細胞播種
ヒトＹＴ細胞を上述した通りに増殖させた。細胞を遠心分離で回収し、ＲＰＭＩ／０．５％熱失活ＦＢＳに再懸濁させた。３ｘ１０５個の細胞を、丸底９６ウェルプレート（ＢＤ−Ｆａｌｃｏｎ社、３５３０７７）の１ウェルあたり６０μｌで播種した。
【０２２４】
試験化合物およびＩＬ−２刺激による処理
試験化合物をＤＭＳＯに溶解させ、１：３希釈系列（９ステップ）を調製した。用量反応曲線を作成するために、４％ＤＭＳＯ／ＲＰＭＩ／０．５％ＦＢＳ中の３０μｌの４倍濃縮化合物を、９６ウェルプレート中の各細胞試料に添加すると、最終ＤＭＳＯ濃度が１％ＤＭＳＯとなった。細胞を１時間にわたって加湿インキュベータ（３７℃、５％ＣＯ２）でインキュベートした。インキュベーション後、細胞を２回、遠心分離および培地（ＲＰＭＩ／０．５％ＦＢＳ）の取り換えにより洗浄した。ただし０時間のプレートは除外した。洗浄した細胞を３０分間、１、２および４時間にわたって加湿インキュベータ（３７℃、５％ＣＯ２）でインキュベートしてから、ＩＬ−２で刺激した。各ウェルに、３０μｌの４倍濃縮ＩＬ−２溶液（組み換えヒトＩＬ−２、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ  ２００−０２、ＲＰＭＩ中の１２０ｎＭ溶液）を添加し、３０分間にわたって室温でインキュベートした。３０μｌの５ｘ溶解バッファ（ＭＳＤ溶解バッファ）を添加することで細胞を溶解させ、１０分間にわたって４℃で穏やかに加振しながらインキュベートした。
【０２２５】
シグナル検出
化合物のＳＴＡＴ５リン酸化への作用を、溶解産物において、製造業者のプロトコルに従ってＭＳＤ  ＭＵＬＴＩ−ＳＰＯＴ（登録商標）９６  ４スポットホスホ−ＳＴＡＴ５ａ、ｂホールセルライセートキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ社、Ｋ１５０ＩＧＤ−３）を使用して測定した。データをＢｉｏＡｓｓａｙにおいて、可変スロープのＳ字状用量反応について非線形回帰を利用して分析し、ＩＣ５０値を求めた。
【０２２６】
結果
参考例３（ＪＡＫ３阻害剤ＣＰ６９０５５０）に関して、活性における著しい低下が細胞洗浄から３０分後に観察され、阻害活性は１時間後に完全に失われる。参考例２の活性は、洗浄から３０分後に完全に失われる。これとは対照的に、実施例１、３は、洗浄から最高４時間まで活性を保持し、活性の低下は若干である。
【０２２７】
表１２は、細胞洗い流し研究における本発明の選択された化合物および参考化合物についてのデータを示す。
【０２２８】
【表１２】
2014531449.tif 000036
【０２２９】
化合物例１で修飾したＪＡＫ３ペプチドの質量分析同定
アッセイ原理
化合物処理後の免疫沈降ＪＡＫ３の質量分析を用いて、化合物例１がＪＡＫ３に共有結合するか否かを判定した。ジャーカット細胞溶解産物を１０μＭの化合物例１と４５分間にわたってプレインキュベートした。コントロール試料を、化合物なしでインキュベートした（ＤＭＳＯコントロール）。続いて、ＪＡＫ３を、抗ＪＡＫ３抗体（Ａｂｃａｍ社、ａｂ４５１４１）で免疫沈降させた。加えて、コントロール実験を抗ＩｇＧで行った（偽免疫沈降）。沈降したタンパク質を、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離した。このゲルをコロイド状クーマシーで染色し、各ゲルレーンにおける染色された領域を切り出し、トリプシンでのインゲルタンパク質分解消化に供した。３つの試料から得たペプチドに、表１３に示すようなｉＴＲＡＱ試薬で標識し、合わせた試料を、タンデム型質量分析計にオンライン接続されたナノフロー液体クロマトグラフィシステム（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）による実験、続いてＭＳ／ＭＳスペクトルでのｉＴＲＡＱリポーターイオン定量により分析した（Ross et al., 2004. Mol. Cell. Proteomics 3(12):1154-1169）。ＪＡＫ３を含有するゲル領域を２７０分間にわたってＨＣＤｉｑ（高質量精度ＭＳ／ＭＳスペクトル）でＯｒｂｉｔｒａｐ  Ｖｅｌｏｓ質量分析計を使用して分析した。Ｍａｓｃｏｔサーチに関しては、標準パラメータ＋化合物例１によるシステインの可変修飾を使用した。更なる実験プロトコルは、国際公開第２００６／１３４０５６号パンフレットおよび前出の出版物に見出すことができる（Bantscheff et al., 2007. Nature Biotechnology 25, 1035-1044）。
【０２３０】
【表１３】
2014531449.tif 000037
【０２３１】
プロトコル
１．細胞溶解産物の調製
ジャーカット細胞（ＡＴＣＣカタログ番号：ＴＩＢ−１５２  ジャーカット、クローンＥ６−１）を、１リットルのスピナーフラスコ（Ｉｎｔｅｇｒａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、＃１８２１０１）において、１０％ウシ胎仔血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を補充したＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、＃２１８７５−０３４）に密度０．１５ｘ１０６〜１．２ｘ１０６細胞／ｍｌで懸濁させて増殖させた。細胞を遠心分離で回収し、１ｘＰＢＳバッファ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、＃１４１９０−０９４）で１回洗浄し、細胞ペレットを液体窒素で凍結させ、続いて−８０℃で保管した。ジャーカット細胞を、Ｐｏｔｔｅｒ  Ｓホモジナイザにより、溶解バッファ：５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、０．８％ＮＰ４０、５％グリセロール、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのＭｇＣｌ２、２５ｍＭのＮａＦ、１ｍＭのバナジン酸ナトリウム、１ｍＭのＤＴＴにおいてｐＨ７．５でホモジナイズした。バッファ２５ｍｌあたり１個のコンプリートＥＤＴＡフリー錠（プロテアーゼ阻害剤カクテル、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社、１８７３５８０）を添加した。材料を、機械化ＰＯＴＥＥＲ  Ｓを使用して１０回ダウンス処理し、５０ｍｌファルコンチューブに移し、３０分間にわたって氷上でインキュベートし、１０分間にわたって２００００ｇ、４℃で遠心沈降させた（１００００ｒｐｍ、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＳＬＡ６００、予冷）。上清を超遠心機（ＵＺ）−ポリカーボネートチューブ（Ｂｅｃｋｍａｎｎ社、３５５６５４）に移し、１時間にわたって１００．０００ｇ、４℃で超遠心した（３３．５００ｒｐｍ、Ｔｉ５０．２、予冷）。上清を再度新しい５０ｍｌファルコンチューブに移し、タンパク質濃度をＢｒａｄｆｏｒｄアッセイ（ＢｉｏＲａｄ社）で測定し、１アリコートあたり５０ｍｇのタンパク質を含有する試料を調製した。試料を速やかに実験に使用したまたは液体窒素で凍結させて−８０℃で凍結保管した。
【０２３２】
２．タンパク質の免疫沈降
抗体のカップリング
抗体を、一級アミンを介して活性化アガロースビーズに共有結合させた。ＡｍｉｎｏＬｉｎｋ（登録商標）プラスカップリングリアクション（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、ロックフォード、イリノイ州、６１１０５、米国）は、アルデヒド（担体上）とアミン（抗体上）との間でのシッフ塩基結合の自発的形成および続く弱い還元剤（ナトリウムシアノボロヒドリド）でのインキュベーションによる安定化を伴う。２００μｌのＡｍｉｎｏＬｉｎｋ（登録商標）レジン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、２０５０１）を１バッチ、適当な濃度で抗ＪＡＫ３抗体（８０μｌ、Ａｂｃａｍ社、ａｂ４５１４１、ロットＧＲ５５７１−５）にカップリングさせた。偽免疫沈降のために、適当な量のウサギＩｇＧ（８０μｇ、Ｓｉｇｍａ社、Ｉ５００６）を１００μｌのＡｍｉｎｏＬｉｎｋ（登録商標）レジン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、２０５０１）にカップリングさせた。
【０２３３】
ＡｍｉｎｏＬｉｎｋ（登録商標）レジンを３回、１０ビーズ体積のＰＢＳで洗浄し、続いて抗体溶液を、１．５ｍｌシリコン処理マイクロチューブ内のレジンに添加した。１ＭのＮａＣＮＢＨ３（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、４４８９２）を新たに０．０１ＭのＮａＯＨ中で調製し（１ＭのＮａＯＨから調製。Ｍｅｒｃｋ社、１０９１３７）、反応体積１ｍｌあたり２５μｌを添加した。混合物を一晩、４℃で回転させながらインキュベートした（ＮｅｏＬａｂ  Ｒｏｔａｔｏｒ、２−１１７５）。少量の上清をとっておいてＢｒａｄｆｏｒｄアッセイでカップリング効率を求め、残りは廃棄した。ビーズを２回、１０ビーズ体積の１ＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．４（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｓ５１５０）で洗浄した。１ＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．４をビーズに比１：１で添加し、反応体積１ｍｌあたり２５μｌの新しく調製したＮａＣＮＢＨ３を添加し、回転させながら３０分間にわたって室温でインキュベートした。上清を廃棄し、ビーズを２回、１０ビーズ体積の１ＭのＮａＣｌ（５ＭのＮａＣｌから調製、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｓ５１５０）で洗浄した。使用前に、ビーズを２回、０．２％ＮＰ４０の入った溶解バッファ（ＤＴＴなし）で洗浄した。
【０２３４】
細胞溶解産物の化合物とのインキュベーションおよび免疫沈降
細胞溶解産物を解凍し、ＤＴＴおよびＮＰ４０なしの溶解バッファで１：１の比率で希釈し、０．４％ＮＰ４０（ＤＴＴなし）を含有する溶解バッファで５ｍｇ／ｍｌタンパク質濃度まで更に希釈した。溶解産物を超遠心チューブに移し（Ｂｅｃｋｍａｎｎ社、３５５６５４）、２０分間にわたって１００．０００ｘｇ、４℃で遠心分離した（３３．５００ｒｐｍ、Ｔｉ５０．２、予冷）。上清を新しいファルコンチューブに移した。
【０２３５】
その間に、化合物の４ｍＭ溶液を、３０ｍＭストック溶液をＤＭＳＯで希釈することで調製した。５μｌの４ｍＭ化合物溶液および２ｍｌの超遠心分離溶解産物（１０ｍｇタンパク質／試料）を、回転式加振機（Ｒｏｔｏ  Ｓｈａｋｅ  Ｇｅｎｉｅ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社）上の１５ｍｌグレイナーチューブで４５分間にわたって４℃でインキュベートした。これは１０μＭの化合物例１の最終濃度に対応する。コントロール実験のために、０．２５％ＤＭＳＯを使用した。
【０２３６】
インキュベーションステップ後、アフィニティマトリックス（抗体を固定させたＡｍｉｎｏＬｉｎｋ（登録商標）レジン、１００μｌビーズ／免疫沈降試料）を次に、溶解産物試料と共に回転式加振機上で１時間にわたって４℃でインキュベートした。ビーズを、２０００ｒｐｍでの２分間にわたる遠心分離により回収し、少量の非結合画分をとっておき、残った上清を廃棄した。ビーズを、モビコールカラム（ＭｏＢｉＴｅｃｈ社、１００５５）に６００μｌの溶解バッファ（ＤＴＴなし）と共に移し、０．２％ＮＰ４０洗浄剤を含有する１０ｍｌ溶解バッファ、続いて洗浄剤なしの５ｍｌ溶解バッファで洗浄した。結合したタンパク質を溶出させるために、８０μｌの２ｘＳＤＳ試料バッファをカラムに加えた。このカラムを１０分間にわたって９５℃でインキュベートし、溶出液を遠心分離によりシリコン処理ミクロチューブに移した。次に、タンパク質を５０ｍＭのＤＴＴで還元し、その後１０８ｍＭのヨードアセトアミドでアルキル化した。次に、タンパク質をＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）で分離した。
【０２３７】
３．質量分析によるタンパク質同定
３．１  質量分析前のタンパク質消化
ゲル分離したタンパク質を、基本的に前記の手順に従ってインゲルで消化させた（Shevchenko et al., 1996, Anal. Chem. 68:850-858）。簡単に説明すると、ゲル分離したタンパク質を、清潔なメスでゲルから切除し、１００μｌの５ｍＭのトリエチルアンモニウムバイカーボネートバッファ（ＴＥＡＢ、Ｓｉｇｍａ社、Ｔ７４０８）および４０％エタノール水溶液を使用して２回脱染し、無水エタノールで脱水した。タンパク質を続いて、５ｍＭのＴＥＡＢ中のプロテアーゼ濃度１０ｎｇ／μｌでブタトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ社）によりインゲル消化させた。消化を４時間にわたって３７℃で進行させ、反応を続いて５μｌの５％ギ酸を使用して停止させた。
【０２３８】
３．２  質量分析による分析前の試料調製
ゲルプラグを、２０μｌの１％ギ酸で２回、上昇濃度のアセトニトリルで３回抽出した。抽出物を続いて酸性化消化上清と共にプールし、真空遠心分離により乾燥させた。
【０２３９】
３．３  ペプチド抽出物のｉＴＲＡＱ標識
２００μＭの自由実施例１および溶媒コントロール（０．５％ＤＭＳＯ）で処理した試料のペプチド抽出物を、等圧標識試薬の異なる変化形（ｉＴＲＡＱ試薬マルチプレックスキット、パート番号４３５２１３５、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、フォスターシティ、カリフォルニア州、米国）で処理した。ｉＴＲＡＱ試薬は最高で４種類の異なる生物試料においてアミノ基上でのペプチド標識が可能な一組の多重アミン特異的安定同位体試薬であり、ペプチドの同時同定および定量を可能にする。ｉＴＲＡＱ試薬を、製造業者が提供する指示に従って使用した。試料を１０μｌの５０ｍＭのＴＥＡＢ溶液、ｐＨ８．５に再懸濁させ、１０μｌのエタノールを添加した。ｉＴＲＡＱ試薬を１２０μｌのエタノールに溶解させ、１０μｌの試薬溶液を試料に添加した。標識反応を室温で１時間にわたって水平加振機上で行い、５μｌの１００ｍＭのＴＥＡＢおよび１００ｍＭのグリシン水溶液を添加することで停止させた。次に、これら２つの標識試料を合わせ、真空遠心分離で乾燥させ、１０μｌの０．１％ギ酸水溶液に再懸濁させた。
【０２４０】
３．４  質量分析データ取得
ペプチド試料を、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｖｅｌｏｓ質量分析機に直接連結された１Ｄ＋、Ｅｋｓｉｇｅｎｔ）ナノＬＣシステムに注入した。ペプチドをＬＣシステム上で、水性および有機溶媒のグラジエントを用いて分離した（以下を参照のこと）。溶媒Ａは０．１％ギ酸であり、溶媒Ｂは、０．１％ギ酸中の７０％アセトニトリルであった。
【０２４１】
【表１４】
2014531449.tif 000038
【０２４２】
３．５  タンパク質の同定および定量
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ実験で生成されたペプチド質量およびフラグメンテーションデータを使用して、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｄｅｘ（ＩＰＩ）タンパク質配列データベースの組織内精選バージョンおよびこのデータベースのデコイバージョンから成るタンパク質データベースに照会した（Elias and Gygi, 2007. Target-decoy search strategy for increased confidence in large-scale protein identifications by mass spectrometry. Nature Methods 4, 207-214）。タンパク質は、測定されたペプチド質量およびフラグメンテーションデータをデータベースのエントリーから算出されたデータとソフトウェアツールであるＭａｓｃｏｔを使用して相関させることで同定された（Perkins et al., 1999. Probability-based protein identification by searching sequence databases using mass spectrometry data. Electrophoresis 20, 3551-3567）。Ｍａｓｃｏｔサーチパラメータは２０ｐｐｍペプチド質量許容差であった。フラグメント質量許容差２０ｍｍｕ。酵素トリプシン。固定修飾ｉＴＲＡＱ（Ｋ）。可変修飾ｉＴＲＡＱ（Ｎ末端）＆アセチル（Ｎ末端）＆酸化（Ｍ）＆カルバミドメチル（Ｃ）＆化合物例１（Ｃ）。最大見逃し切断数３。タンパク質受容閾値を調節し、デコイデータベースでのヒット率で示唆されるような１％未満の偽発見率を達成した（Elias and Gygi, 2007. Target-decoy search strategy for increased confidence in large-scale protein identifications by mass spectrometry. Nature Methods 4, 207-214）。相対タンパク質定量を、基本的に前出の出版物に記載される通りに、ｉＴＲＡＱリポーターイオンシグナルのピーク領域を使用して行った（Bantscheff et al., 2007. Nature Biotechnology 25, 1035-1044）。
【０２４３】
結果
図１は、ヒトＪＡＫ３の配列を示す。ペプチドＬＶＭＥＹＬＰＳＧＣＬＲ（ＪＡＫ３位置９００−９１１）は、化合物例１で共有結合的に修飾される唯一のペプチドである。このペプチドをシステイン９０９で修飾する（表１５〜１７を参照のこと）。
【０２４４】
【表１５】
2014531449.tif 000039
【０２４５】
【表１６】
2014531449.tif 000040
2014531449.tif 000041
【０２４６】
【表１７】
2014531449.tif 000042
2014531449.tif 000043
【図１】
2014531449.tif 000050
【配列表】
2014531449000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成26年5月20日(2014.5.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2014531449.tif 000051
〔式中、
ＲはＨまたはＦであり、
ＺＡおよびＺＢは独立して、ＣＨおよびＮからなる群から選択され、  環Ａはフェニル、ナフチル、芳香族５〜６員ヘテロシクリルまたは芳香族９〜１１員ヘテロビシクリルであり、環Ａは１つ以上のＲ１で置換されていてもよく、
各Ｒ１は独立してハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ２、ＯＲ２、Ｃ（Ｏ）Ｒ２、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ２、Ｓ（Ｏ）Ｒ２、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、ＳＲ２、Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ２、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）ＯＲ２ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｔ１、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであり、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ３で置換されていてもよく、これらのＲ３は同じであるかまたは異なり、
Ｒ２、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂは独立してＨ、Ｔ１、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ３で置換されていてもよく、これらのＲ３は同じであるかまたは異なり、
Ｒ３はハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）Ｒ４、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、Ｓ（Ｏ）Ｒ４、Ｎ（Ｒ４）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ４ａＲ４ｂ）、Ｎ（Ｒ４）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４ａＲ４ｂ）、ＳＲ４、Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ４、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ４ａ、Ｎ（Ｒ４）Ｓ（Ｏ）２Ｒ４ａ、Ｎ（Ｒ４）Ｓ（Ｏ）Ｒ４ａ、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４ａＲ４ｂ）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ４ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）またはＴ１であり、
Ｒ４、Ｒ４ａ、Ｒ４ｂは独立してＨ、Ｔ１、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なり、
Ｔ１はＣ３−７シクロアルキル、飽和４〜７員ヘテロシクリルまたは飽和７〜１１員ヘテロビシクリルであり、Ｔ１は１つ以上のＲ１０で置換されていてもよく、これらのＲ１０は同じであるかまたは異なり、
ＹはＣＨ２であり、
Ｘ１はＣ（Ｒ６）またはＮであり、Ｘ２はＣ（Ｒ６ａ）またはＮであり、Ｘ３はＣ（Ｒ６ｂ）またはＮであり、Ｘ４はＣ（Ｒ６ｃ）またはＮであり、Ｘ５はＣ（Ｒ６ｄ）またはＮであり、ただし、Ｎであるのは、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５のうち、最多でも２つであり、
Ｒ６、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ６ｃ、Ｒ６ｄは独立してＲ６ｅ、Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、ＯＲ７、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７Ｒ７ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ７Ｒ７ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７Ｒ７ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ７、Ｓ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ７ａＲ７ｂ）、Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７ａＲ７ｂ）、ＳＲ７、Ｎ（Ｒ７Ｒ７ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７ａ、Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）２Ｒ７ａ、Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）Ｒ７ａ、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７ａＲ７ｂ）、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７Ｒ７ａ）、Ｔ２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ１１で置換されていてもよく、これらのＲ１１は同じであるかまたは異なり、ただしＲ６、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ６ｃ、Ｒ６ｄの１つはＲ６ｅであり、
Ｒ６ｅはＮ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ１１ａ）＝Ｃ（Ｒ１１ｂＲ１１ｃ）、Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）２Ｃ（Ｒ１１ａ）＝Ｃ（Ｒ１１ｂＲ１１ｃ）またはＮ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｃ≡Ｃ（Ｒ１１ａ）であり、
あるいは、対Ｒ６／Ｒ６ａ、Ｒ６ａ／Ｒ６ｂの１つは連結されて環Ｔ３を形成してもよく、
Ｒ７、Ｒ７ａ、Ｒ７ｂは独立してＨ、Ｔ２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ８で置換されていてもよく、これらのＲ８は同じであるかまたは異なり、
Ｒ８はハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ９、ＯＲ９、Ｃ（Ｏ）Ｒ９、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９Ｒ９ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ９Ｒ９ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９Ｒ９ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、Ｓ（Ｏ）Ｒ９、Ｎ（Ｒ９）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ９ａＲ９ｂ）、Ｎ（Ｒ９）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９ａＲ９ｂ）、ＳＲ９、Ｎ（Ｒ９Ｒ９ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ９、Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、Ｎ（Ｒ９）Ｓ（Ｏ）２Ｒ９ａ、Ｎ（Ｒ９）Ｓ（Ｏ）Ｒ９ａ、Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９ａＲ９ｂ）、Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）ＯＲ９ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９Ｒ９ａ）またはＴ２であり、
Ｒ９、Ｒ９ａ、Ｒ９ｂは独立してＨ、Ｔ２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ１２で置換されていてもよく、これらのＲ１２は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１０はハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、ＯＲ１３、オキソ（＝Ｏ）（環が少なくとも部分的に飽和している場合）、Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３Ｒ１３ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１３Ｒ１３ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３Ｒ１３ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１３、Ｓ（Ｏ）Ｒ１３、Ｎ（Ｒ１３）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１３ａＲ１３ｂ）、Ｎ（Ｒ１３）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３ａＲ１３ｂ）、ＳＲ１３、Ｎ（Ｒ１３Ｒ１３ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１３、Ｎ（Ｒ１３）Ｃ（Ｏ）Ｒ１３ａ、Ｎ（Ｒ１３）Ｓ（Ｏ）２Ｒ１３ａ、Ｎ（Ｒ１３）Ｓ（Ｏ）Ｒ１３ａ、Ｎ（Ｒ１３）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３ａＲ１３ｂ）、Ｎ（Ｒ１３）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３Ｒ１３ａ）、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであり、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ１４で置換されていてもよく、これらのＲ１４は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１３、Ｒ１３ａ、Ｒ１３ｂは独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ１４で置換されていてもよく、これらのＲ１４は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１１、Ｒ１２は独立してハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１５、ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１５、Ｓ（Ｏ）Ｒ１５、Ｎ（Ｒ１５）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１５ａＲ１５ｂ）、Ｎ（Ｒ１５）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５ａＲ１５ｂ）、ＳＲ１５、Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１５、Ｎ（Ｒ１５）Ｃ（Ｏ）Ｒ１５ａ、Ｎ（Ｒ１５）Ｓ（Ｏ）２Ｒ１５ａ、Ｎ（Ｒ１５）Ｓ（Ｏ）Ｒ１５ａ、Ｎ（Ｒ１５）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５ａＲ１５ｂ）、Ｎ（Ｒ１５）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１５ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）およびＴ２からなる群から選択され、
Ｒ１１ａ、Ｒ１１ｂ、Ｒ１１ｃは独立してＨ、ハロゲン、ＣＮ、ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１５Ｒ１５ａ）およびＣ１−６アルキルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキルは１つ以上のＲ１４で置換されていてもよく、これらのＲ１４は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１５、Ｒ１５ａ、Ｒ１５ｂは独立してＨ、Ｔ２、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なり、
Ｒ１４はハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、ＯＲ１６、Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６Ｒ１６ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１６Ｒ１６ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６Ｒ１６ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、Ｓ（Ｏ）Ｒ１６、Ｎ（Ｒ１６）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１６ａＲ１６ｂ）、Ｎ（Ｒ１６）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａＲ１６ｂ）、ＳＲ１６、Ｎ（Ｒ１６Ｒ１６ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１６、Ｎ（Ｒ１６）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６ａ、Ｎ（Ｒ１６）Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６ａ、Ｎ（Ｒ１６）Ｓ（Ｏ）Ｒ１６ａ、Ｎ（Ｒ１６）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａＲ１６ｂ）、Ｎ（Ｒ１６）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６ａまたはＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６Ｒ１６ａ）であり、  Ｒ１６、Ｒ１６ａ、Ｒ１６ｂは独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なり、
Ｔ２はフェニル、ナフチル、インデニル、インダニル、Ｃ３−７シクロアルキル、４〜７員ヘテロシクリルまたは７〜１１員ヘテロビシクリルであり、Ｔ２は１つ以上のＲ１７で置換されていてもよく、これらのＲ１７は同じであるかまたは異なり、
Ｔ３はフェニル、Ｃ３−７シクロアルキルまたは４〜７員ヘテロシクリルであり、Ｔ３は１つ以上のＲ１８で置換されていてもよく、これらのＲ１８は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１７、Ｒ１８は独立してハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１９、ＯＲ１９、オキソ（＝Ｏ）（環が少なくとも部分的に飽和している場合）、Ｃ（Ｏ）Ｒ１９、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９Ｒ１９ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１９Ｒ１９ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９Ｒ１９ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１９、Ｓ（Ｏ）Ｒ１９、Ｎ（Ｒ１９）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１９ａＲ１９ｂ）、Ｎ（Ｒ１９）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９ａＲ１９ｂ）、ＳＲ１９、Ｎ（Ｒ１９Ｒ１９ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１９、Ｎ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａ、Ｎ（Ｒ１９）Ｓ（Ｏ）２Ｒ１９ａ、Ｎ（Ｒ１９）Ｓ（Ｏ）Ｒ１９ａ、Ｎ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９ａＲ１９ｂ）、Ｎ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１９ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９Ｒ１９ａ）、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ２０で置換されていてもよく、これらのＲ２０は同じであるかまたは異なり、
Ｒ１９、Ｒ１９ａ、Ｒ１９ｂは独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のＲ２０で置換されていてもよく、これらのＲ２０は同じであるかまたは異なり、
Ｒ２０はハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、ＯＲ２１、Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２１Ｒ２１ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２１Ｒ２１ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２１Ｒ２１ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ２１、Ｓ（Ｏ）Ｒ２１、Ｎ（Ｒ２１）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２１ａＲ２１ｂ）、Ｎ（Ｒ２１）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２１ａＲ２１ｂ）、ＳＲ２１、Ｎ（Ｒ２１Ｒ２１ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、Ｎ（Ｒ２１）Ｃ（Ｏ）Ｒ２１ａ、Ｎ（Ｒ２１）Ｓ（Ｏ）２Ｒ２１ａ、Ｎ（Ｒ２１）Ｓ（Ｏ）Ｒ２１ａ、Ｎ（Ｒ２１）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２１ａＲ２１ｂ）、Ｎ（Ｒ２１）Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１ａまたはＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２１Ｒ２１ａ）であり、  Ｒ２１、Ｒ２１ａ、Ｒ２１ｂは独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なる〕
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
式（Ｉ）の環Ａ、ＺＡ、ＺＢが、式（Ｉａ）：
【化２】
2014531449.tif 000052
を与えるように定義され、環Ａが芳香族５員複素環であり、Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は独立してＣ（Ｒ１）、Ｎ、Ｎ（Ｒ１）、ＯおよびＳからなる群から選択され、ただしＺ１、Ｚ２、Ｚ３の少なくとも１つはＮであり、Ｒ、Ｙ、Ｘ１〜Ｘ５およびＲ１は請求項１で定義した通りである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式（Ｉ）の環Ａ、ＺＡ、ＺＢ、Ｒが、式（Ｉｂ）：
【化３】
2014531449.tif 000053
を与えるように定義され、環Ａが５員芳香族複素環であり、Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は独立してＣ（Ｒ１）、Ｎ、Ｎ（Ｒ１）、ＯおよびＳからなる群から選択され、ただしＺ１、Ｚ２、Ｚ３の少なくとも１つはＮであり、Ｙ、Ｘ１〜Ｘ５およびＲ１は請求項１で定義した通りである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
式（Ｉ）の環Ａ、ＺＡ、ＺＢが、式（Ｉｃ）：
【化４】
2014531449.tif 000054
を与えるように定義され、環Ａが芳香族５員複素環であり、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３およびＺ４は独立してＣ（Ｒ１）、Ｎ、Ｎ（Ｒ１）、ＯおよびＳからなる群から選択され、ただしＺ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４の少なくとも１つはＮまたはＮ（Ｒ１）であり、Ｒ、Ｙ、Ｘ１〜Ｘ５およびＲ１は請求項１で定義した通りである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
式（Ｉ）のＡ、ＺＡ、ＺＢが、式（Ｉｄ）：
【化５】
2014531449.tif 000055
を与えるように定義され、環ＡにおけるＺ１はＣ（Ｒ１）またはＮであり、Ｚ２はＣ（Ｒ１）またはＮであり、Ｚ３はＣ（Ｒ１）またはＮであり、Ｚ４はＣ（Ｒ１）またはＮであり、Ｚ５はＣ（Ｒ１）またはＮであり、ただし、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５のうち、Ｎであるのは最多で２つであり、
２つの隣接するＲ１は連結されて、Ｚ１〜Ｚ５を含む環と共に芳香族二環式環Ｔ０を形成してもよく、
Ｔ０は芳香族９〜１１員ヘテロビシクリル、ナフチル、インデニルまたはインダニルであり、Ｔ０は１つ以上のＲ１ａで置換されていてもよく、これらのＲ１ａは同じであるかまたは異なり、
Ｒ１ａはハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ２、ＯＲ２、オキソ（＝Ｏ）（環が少なくとも部分的に飽和している場合）、Ｃ（Ｏ）Ｒ２、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｓ（Ｏ）２Ｒ２、Ｓ（Ｏ）Ｒ２、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、ＳＲ２、Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、ＮＯ２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ２、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）Ｒ２ａ、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２ａＲ２ｂ）、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）ＯＲ２ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２Ｒ２ａ）、Ｔ１またはＣ１−６アルキルであり、Ｃ１−６アルキルは１つ以上のＲ３で置換されていてもよく、これらのＲ３は同じであるかまたは異なり、
Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３、Ｙ、Ｘ１〜Ｘ５およびＲ１は請求項１で定義した通りである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
ＲがＨである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ６、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ６ｃ、Ｒ６ｄのうちの０個または１つがＮである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ６、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ６ｃ、Ｒ６ｄが独立してＲ６ｅ、Ｈ、ハロゲンおよびＣ１−６アルキルからなる群から選択され、Ｃ１−６アルキルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なり、ただし、Ｒ６、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ６ｃ、Ｒ６ｄの１つはＲ６ｅである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ７、Ｒ１１ａ、Ｒ１１ｂ、Ｒ１１ｃが独立してＨおよびＣ１−４アルキルからなる群から選択され、Ｃ１−４アルキルは１つ以上のハロゲンで置換されていてもよく、これらのハロゲンは同じであるかまたは異なる、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ６ａがＲ６ｅである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ６ｅがＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ＝ＣＨ２またはＮＨＣ（Ｏ）Ｃ≡ＣＨである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
環Ａがピラゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、トリアゾール、フェニルまたはピリジル環である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
同じであるかまたは異なる０、１または２個のＲ１がＨ以外のものである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ１がＣ１−４アルキルであり、１または２個のＲ３で置換されていてもよく、これらのＲ３は同じであるかまたは異なる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ３がハロゲン、ＣＮ、ＯＲ４、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４Ｒ４ａ）またはＣ（Ｏ）Ｔ１である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド、
Ｎ−（２−フルオロ−５−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド、
Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）プロピオルアミド、  Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）エテンスルホンアミド、
Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）メタクリルアミド、  ３−メチル−Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）メチル）フェニル）ブト−２−エンアミド、
Ｎ−（３−（（２−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）フェニル）エテンスルホンアミド、
Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−１−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド、
Ｎ−（３−（（２−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド、および
Ｎ−（３−（（６−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−１−イル）メチル）フェニル）アクリルアミド
からなる群から選択される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、薬学的に許容可能な担体と共に、任意で１種以上の他の医薬組成物と組み合わせて含んでなる、医薬組成物。
【請求項１８】
薬剤として使用するための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１９】
ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣに関連した疾患または障害を治療または予防する方法で使用するための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２０】
移植拒絶反応の免疫学的、炎症性、自己免疫性若しくはアレルギー性の障害若しくは疾患または移植片対宿主病を治療または予防する方法で使用するための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２１】
増殖性疾患を治療または予防する方法において使用するための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２２】
ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣに関連した疾患および障害を治療または予防するための薬剤を製造するための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項２３】
患者／患畜に治療有効量の請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含んでなる、ＪＡＫ３、ＢＴＫ、ＢＬＫ、ＩＴＫまたはＴＥＣに関連した疾患および障害からなる群から選択される１つ以上の病態を、それを必要としている哺乳動物の患者／患畜において治療する、制御する、進行遅延させる、または予防するための方法。
【国際調査報告】
2014531449.tif 000056
2014531449.tif 000057