(57)【要約】  炎症障害又は自己免疫疾患等の免疫障害の症状を予防、治療又は回復するのに有用である、抽出物の形態のトリプテリジウム・ウィルフォルディ・フックＦ（ＴｗＨＦ）植物由来の製品が提供される。さらに、ＴｗＨＦの根及び／又は根部を凍結乾燥する方法と、凍結乾燥させたＴｗＨＦの根及び／又は根部の皮を剥ぐ方法と、凍結乾燥させた皮剥ＴｗＨＦの根及び／又は根部から自由流動性固体形態の抽出物を調製及び／又は精製する方法と、炎症障害及び／又は免疫障害の症状を予防、治療又は回復するのにＴｗＨＦの自由流動性固体抽出物を使用する方法とが提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
自由流動性固体の形態の抽出物を作製するためにトリプテリジウム・ウィルフォルディ・フックＦ（ＴｗＨＦ）植物の天然抽出物を処理する方法であって、
（ａ）前記天然抽出物をアルコールと混合することであって、抽出物／アルコール混合物を作製することと、
（ｂ）前記抽出物／アルコール混合物を、５０℃以下の温度で真空下において添加剤と混ぜ合わせることであって、濃縮混合物を作製することと、
（ｃ）前記濃縮混合物を５５℃以下の温度で乾燥することであって、残留アルコールを除去することによって、自由流動性固体の形態の抽出物を作製することと、
を含む、方法。
【請求項２】
前記天然抽出物が、１回又は複数回のエタノール抽出によって前記ＴｗＨＦ植物の根から得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記天然抽出物が、前記ＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根部から得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記添加剤が、微結晶性セルロース、マルトデキストリン、Ａｅｒｏｓｉｌ（商標）（フュームドシリカ）、コーンスターチ、及びＮｅｕｓｉｌｉｎ（メタケイ酸アルミン酸マグネシウム）からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記添加剤が微結晶性セルロースである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記乾燥工程が、０．２気圧（ａｔｍ）以下の大気圧を確立する真空下において行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
自由流動性固体の形態の抽出物を作製するためにトリプテリジウム・ウィルフォルディ・フックＦ（ＴｗＨＦ）植物の天然抽出物を処理する方法であって、
（ａ）前記天然抽出物を非極性有機溶媒と混ぜ合わせることであって、それらの混合物を作製することと、
（ｂ）前記混合物を濾過することであって、固体沈殿物を単離することと、
（ｃ）前記固体沈殿物を乾燥することであって、それにより自由流動性固体の形態の抽出物を作製することと、
を含む、方法。
【請求項８】
前記天然抽出物が、１回又は複数回のエタノール抽出によって前記ＴｗＨＦ植物の根から得られる、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記非極性有機溶媒が、直鎖Ｃ５〜Ｃ１０アルカン及び分岐鎖Ｃ５〜Ｃ１０アルカンからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記非有機極性溶媒がヘプタンである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記天然抽出物が、前記ＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根部から得られる、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１に記載の方法によって作製される自由流動性固体の形態のＴｗＨＦ植物の抽出物。
【請求項１３】
抽出物１ｍｇ当たり２.５μｇ以下のセラストロールを含む、請求項１２に記載の抽出物。
【請求項１４】
（トリプトリド＋トリプジオリド）／セラストロールの比率（（Ｔ＋Ｔｄ）／Ｃ）が少なくとも１．４６である、請求項１２に記載の抽出物。
【請求項１５】
比率（Ｔ＋Ｔｄ）／Ｃが少なくとも１．３６である、請求項１２に記載の抽出物。
【請求項１６】
請求項７に記載の方法によって作製される自由流動性固体の形態のＴｗＨＦ植物の抽出物。
【請求項１７】
抽出物１ｍｇ当たり２.５μｇ以下のセラストロールを含む、請求項１６に記載の抽出物。
【請求項１８】
（トリプトリド＋トリプジオリド）／セラストロールの比率（（Ｔ＋Ｔｄ）／Ｃ）が少なくとも１．４６である、請求項１６に記載の抽出物。
【請求項１９】
比率（Ｔ＋Ｔｄ）／Ｃが約１．３６である、請求項１６に記載の抽出物。
【請求項２０】
自由流動性固体の形態の抽出物を作製するためにトリプテリジウム・ウィルフォルディ・フックＦ（ＴｗＨＦ）植物のアルコール抽出物を処理する方法であって、
（ａ）ＴｗＨＦ植物のアルコール抽出物を得ることと、
（ｂ）前記アルコール抽出物中のアルコールを極性有機溶媒に交換することであって、抽出物／極性有機溶媒混合物を形成することと、
（ｃ）前記抽出物／極性有機溶媒混合物を、５０℃以下の温度で真空下において添加剤と混ぜ合わせることであって、濃縮混合物を作製することと、
（ｄ）前記濃縮混合物を５５℃以下の温度で乾燥することであって、それにより自由流動性固体の形態のアルコール抽出物を作製することと、
を含む、方法。
【請求項２１】
前記極性有機溶媒が酢酸エチルである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
自由流動性固体の形態の抽出物を作製するためにトリプテリジウム・ウィルフォルディ・フックＦ（ＴｗＨＦ）植物のアルコール抽出物を処理する方法であって、
（ａ）ＴｗＨＦ植物のアルコール抽出物を得ることと、
（ｂ）前記アルコール抽出物中のアルコールを極性有機溶媒に交換することであって、抽出物／極性有機溶媒混合物を形成することと、
（ｃ）前記抽出物／極性有機溶媒混合物を、非極性有機溶媒と混ぜ合わせることであって、抽出物／非極性有機溶媒混合物を作製することと、
（ｄ）前記抽出物／非極性有機溶媒混合物を濾過することであって、固体沈殿物を単離することと、
（ｅ）前記固体沈殿物を乾燥することであって、それにより自由流動性固体の形態のアルコール抽出物を作製することと、
を含む、方法。
【請求項２３】
前記非極性有機溶媒がヘプタンである、請求項２２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
開示された主題は、概して植物及び植物産物に関するものであり、より具体的にはトリプテリジウム・ウィルフォルディ・フックＦ（Tripterygium wilfordii Hook F.）植物、植物産物、並びにこのような植物及び植物産物の抽出物を作製する方法及び使用する方法に関するものである。
【０００２】
［関連出願の相互参照］
本願は、２０１１年３月１日付けで出願された米国仮出願第６１／４４８，０２８号及び２０１１年５月９日付けで出願された米国仮出願第６１／４８４，０３１号に対する優先権の利益を主張する。各々の優先権出願の開示は、引用することによりその全体が本明細書の一部をなすものとする。
【背景技術】
【０００３】
雷公藤として一般的に知られるトリプテリジウム・ウィルフォルディ・フックＦ（ＴｗＨＦ）（ニシキギ科（Celastraceae））は、中国及び東南アジア固有の多年生低木である。ＴｗＨＦには、毒性の化学化合物が数多く含まれる。ＴｗＨＦ植物の各部、例えば葉、茎、花、並びに根の表皮及び／又は皮が有毒であり、摂取すると死に至る場合がある。ＴｗＨＦは、伝統中国医学において疾患及び障害を治療するのに用いられているが、その使用は多大な毒性リスクによって制限されている。ＴｗＨＦの投与は、インターロイキン−２媒介性の免疫抑制を阻害することも分かっている。ＴｗＨＦ抽出物又はその成分（すなわちＴｗＨＦから得られる化合物であるトリプトリド及びトリプジオリド））の投与がインターロイキン−２（ＩＬ−２）を阻害することが分かっている。このような化合物の精製は費用及び時間がかかるが、毒素のことを考えると必要なことである。精製が不十分なこの植物由来の材料の使用には、毒性物質の投与に起因する有害事象のリスクが治療による有益性を上回る危険性がある。
【０００４】
炎症反応は異物の身体への侵入又は損傷に伴って起こる。場合によっては、急性及び慢性両方の炎症反応が、身体が真の脅威に曝されていない状況下で生じ、炎症反応自体が治療を要する病態又は障害となることがある。同様にこれに密接に関連して（Analogously and closely aligned）、免疫反応は異物の侵入を防ぐが、免疫反応は異物が存在しないような不適切な状況下でも起こる。世に知られる様々な自己免疫障害に例示される多様な障害が不適切な免疫反応を特徴とする。不適切な免疫反応及び／又は不適切な炎症反応を伴う障害のより効果的でかつ安全な治療を提供することに対して継続的な労力が注がれている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記の理由から、当該技術分野において、不適切な炎症反応及び／又は不適切な免疫反応の症状を予防、軽減、治療又は回復するのに有用である、ＴｗＨＦ毒素の存在を許容範囲まで（acceptably）低減させたＴｗＨＦの有益な生物活性化合物を含む組成物が引き続き必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
安全性プロファイルを改善する、毒性物質のレベルを許容範囲まで低減させた有益な生物活性化合物をもたらす、トリプテリジウム・ウィルフォルディ・フックＦ（ＴｗＨＦ）植物の抽出物を得るとともに処理する改善された方法が本明細書に記載される。該方法に
よって、天然の植物の使用の特徴であるレシピエントに悪影響を与える過度の危険を伴わずに、ＴｗＨＦの利益をもたらす天然産物が得られる。
【０００７】
一態様では、ＴｗＨＦ植物の根から凍結乾燥させた根部を作製する方法であって、複数の凍結させたＴｗＨＦ根部を凍結乾燥器内の容器に入れることであって、熱移動を促進するように、根部同士が容器内で互いに十分に近接しており、凍結乾燥器の温度が−３０℃以下であることと、凍結乾燥器内の大気圧を下げることと、根部中の水を昇華させるのに十分な量で、容器を加熱することであって、それによりＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた根部を作製することとを含む、方法が本明細書に記載される。一実施の形態では、凍結乾燥プロセスを、凍結乾燥させた根部に２０％（ｗ／ｗ）以下の水が含まれるまで継続する。別の実施の形態では、凍結乾燥プロセスは、容器の温度が約４０℃の温度に達した時点で終了させる。本明細書に記載される凍結乾燥方法によって作製されたＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた根も提供される。
【０００８】
幾つかの実施の形態では、根は３０ヶ月未満栽培したＴｗＨＦ植物から採取する。幾つかの実施の形態では、根はＴｗＨＦシャイロ変種（var. Shiloh）から採取する。幾つかの実施の形態では、ＴｗＨＦ植物の根を、特定の平均長又は最大長の根部に加工することが望ましい。これらの実施の形態の幾つかでは、凍結乾燥プロセスを開始する前に、根を６インチ以下の長さの根部に加工する。幾つかの実施の形態では、根を加工して、根の分岐部を個々の根部、例えば可変長さの実質的に線形の根部へと切り分ける。
【０００９】
幾つかの実施の形態では、容器を凍結乾燥器内の加熱支持体上に載せる。支持体は直接加熱することができるが、本開示は、容器の加熱が加熱支持体の温度の漸増を含むものであることも包含する。容器はどのようなサイズ、形状及び深さであってもよい。幾つかの実施の形態では、容器の深さは２インチ以下である。幾つかの実施の形態では、容器の加熱は、凍結乾燥器の加熱を起こさない。幾つかの実施の形態では、容器は実質的に平面の棚、例えば縁が０．１２５インチ、０．２５インチ、０．５インチ、１．０インチ、１．５インチ、又は２インチ（高さ）盛り上がった、若しくは０．１２５インチ〜２インチの範囲内の任意の寸法の、又は公称の高さの平面である。
【００１０】
幾つかの実施の形態では、容器内の根部は約２０℃〜約７０℃の範囲の温度に維持される。一実施の形態では、容器内の根部は約３８℃の温度に維持される。
【００１１】
別の態様では、ＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥（debarked）根部（すなわち凍結乾燥させた根芯）を作製する方法も提供される。幾つかの実施の形態では、該方法は、凍結乾燥させた根部の根芯から皮を分離し、それによりＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根部を作製することを含む。幾つかの実施の形態では、分離工程は、根芯から皮を剥脱するのに効果的な量で、凍結乾燥させた根部に機械力を加えることを含む。幾つかの実施の形態では、該方法を任意で、ドラム式皮剥器、リング式皮剥器及びフレイル式皮剥器からなる群から選択される装置内で行う。
【００１２】
機械力は当該技術分野において既知の任意の手段によって生じさせることができる。幾つかの実施の形態では、機械力は凍結乾燥させた根部を、凍結乾燥させた根部、金属体、ガラス物体、木製物体（wooden object）、セラミック体、ロープ、皮革、砂土、岩石、セメント、コンクリート、ガーネット、酸化アルミニウム、酸化ケイ素、繊維ガラス、ダイアモンド、皮剥ドラムの内部突起、皮剥ドラムの平らな若しくは凹凸のある内面、リング式皮剥器の平らな若しくはザラザラした内面、複数のフレイル鎖、又は複数のフレイル鎖に取り付けられた複数の物体からなる群から選択される研磨剤に接触させることにより生じる。一実施の形態では、研磨剤は磁化金属体である。
【００１３】
一実施の形態では、上記方法は、ドラム式皮剥器である装置の使用を含み、研磨剤が１：８という凍結乾燥させた根部と研磨剤との重量比で存在するばら材料である。別の実施の形態では、研磨剤は１：２という凍結乾燥させた根部と研磨剤との重量比で存在するばら材料である。幾つかの実施の形態では、凍結乾燥させた根部から皮を剥脱するのに十分な時間、凍結乾燥させた根部を真空下で研磨剤とともにタンブルし、剥脱した皮を吸引によって（例えば装置内のポートを通して）除去し、それにより根芯から皮を分離する。
【００１４】
別の態様は、本明細書に記載される方法により作製されたＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根部を提供する。幾つかの実施の形態では、皮を実質的に含まない、ＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた根芯を提供する。幾つかの実施の形態では、根芯には、５％（ｗ／ｗ）以下の水が含まれる。幾つかの実施の形態では、根芯には、ＴｗＨＦ植物の同程度の寸法の未乾燥（fresh）根部の１％未満の皮が含まれる。幾つかの実施の形態では、皮がないことが目視検査により確認される。例えば、ＴｗＨＦ植物の皮剥部上にピンク色／淡赤色の粉末がないことが、皮がないことを示す。
【００１５】
本開示のこの態様による幾つかの実施の形態では、根芯には、ＴｗＨＦ植物の皮に存在する化合物が１０％以下含まれる。このような化合物（例えばセラストロール）は、残留皮がトリプテリジウム・ウィルフォルディ・フックＦ（T. wilfordii Hook F.）の凍結乾燥させた皮剥根部に、又はその抽出物調製物に存在するか否かを確認するマーカーとして使用することができる。このため、ＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根部の調製物に残留する皮を特定する方法であって、該方法が凍結乾燥させた皮剥根部における皮マーカー（例えばセラストロール）の量を決定することを含み、凍結乾燥させた皮剥根部調製物におけるマーカー（例えばセラストロール）の量がより少なければ、根部調製物に含まれる残留皮の量がより少ないと見なす、方法も本明細書に記載される。当業者は、根抽出物への皮の混入に関する好適な閾値レベルが抽出物の性質及びその使用目的に応じて変わり得ることを認識し、したがって本開示は、たとえその閾値が根部におけるマーカーの測定可能な又は検出可能な量を上回っていたとしても、閾値レベル以下のセラストロール等の皮マーカーを含む凍結乾燥させた皮剥根部を考慮するものとする。凍結乾燥させた根部調製物におけるマーカー（例えばセラストロール）の量は、ＮＭＲ又はＨＰＬＣ等の当該技術分野において既知の方法によって決定される。
【００１６】
幾つかの実施の形態では、凍結乾燥させた皮剥根部の調製物には、ＴｗＨＦ植物の同程度の寸法の未乾燥根の皮に存在するセラストロールの量と比較して１０％未満のセラストロールが含まれる。幾つかの実施の形態では、凍結乾燥させた皮剥根部調製物には、ＴｗＨＦ植物の同程度の寸法の未乾燥根の皮に存在するセラストロールの量と比較して５％未満のセラストロールが含まれる。他の実施の形態では、凍結乾燥させた皮剥根部調製物には、ＴｗＨＦ植物の同程度の寸法の未乾燥根の皮に存在するセラストロールの量と比較して１％未満のセラストロールが含まれる。更に他の実施の形態では、凍結乾燥させた皮剥根部調製物には、ＴｗＨＦ植物の同程度の寸法の未乾燥根部の皮に存在するセラストロールの量と比較して０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％未満、又はそれより少ない割合のセラストロールが含まれる。
【００１７】
本明細書に与えられる別の態様は、抽出物１ｍｇ当たり２．５μｇ以下のセラストロールを含む、任意で自由流動性固体の形態のＴｗＨＦ植物の抽出物である。幾つかの実施の形態では、（トリプトリド＋トリプジオリド）／セラストロールの比率が少なくとも１．３６であるＴｗＨＦ植物の抽出物が提供される。幾つかの実施の形態では、ＴｗＨＦ抽出物における（トリプトリド＋トリプジオリド）／セラストロール含量比は少なくとも１．４６である。
【００１８】
本明細書に与えられる別の態様は、ＴｗＨＦ植物の抽出物、例えばアルコール抽出物を
処理し、自由流動性固体にする方法を含む。一態様では、ＴｗＨＦ植物のアルコール抽出物を得ることと、アルコール抽出物中のアルコールを酢酸エチル等の極性有機溶媒に交換することであって、抽出物／酢酸エチル混合物を形成することと、抽出物／酢酸エチル混合物を、５０℃以下の温度で真空下において添加剤と混ぜ合わせることであって、濃縮混合物を作製することと、濃縮混合物を５５℃以下の温度で乾燥することであって、それにより自由流動性固体の形態のアルコール抽出物を作製することとを含む方法が提供される。幾つかの実施の形態では、抽出物は１回又は複数回のエタノール抽出によってＴｗＨＦ植物の根から得られる。幾つかの実施の形態では、根はＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根である。他の実施の形態では、根はＴｗＨＦ植物の未乾燥皮剥根である。本明細書に記載される方法によるＴｗＨＦ植物の抽出物の処理は、トリプテリジウム・ウィルフォルディの皮剥根から調製された抽出物を含む、任意のトリプテリジウム・ウィルフォルディの根又は根調製物から調製された抽出物で行うことができる。その上、このような根は当該技術分野において既知の任意の手段によって皮を剥ぐことができ、そのため必ずしも本明細書の幾つかの実施の形態に記載されるドラム式皮剥器、リング式皮剥器又はフレイル式皮剥器を伴うプロセスのような任意の特定プロセスによって皮を剥ぐ必要はない。例えば、圧縮ローラーの使用、剥離又は機械力を加える他の手段によって皮を剥いだＴｗＨＦ植物の根から作製される抽出物が、本開示に記載される抽出物処理方法を実行するのに考慮される。トリプテリジウム・ウィルフォルディの根及び根部を凍結乾燥する方法、皮剥根から抽出物を調製する方法、並びに既成のトリプテリジウム・ウィルフォルディ抽出物を処理する方法では、当然のことながら皮剥プロセスは全く必要とされないか又は伴うものではない。
【００１９】
別の態様では、上記方法は、天然ＴｗＨＦ植物抽出物をアルコールと混合することであって、抽出物／アルコール混合物を作製することと、抽出物／アルコール混合物を、５０℃以下の温度で真空下において添加剤と混ぜ合わせることであって、濃縮混合物を作製することと、濃縮混合物を５５℃以下の温度で乾燥することであって、それにより自由流動性固体の形態の抽出物を作製することとを含む。幾つかの実施の形態では、アルコールはエタノールである。幾つかの実施の形態では、乾燥工程は０．２気圧（ａｔｍ）以下の圧力で行われる。
【００２０】
本明細書に記載される方法における使用に適した添加剤としては、微結晶性セルロース（ＭＣＣ）、マルトデキストリン、Ａｅｒｏｓｉｌ（商標）（フュームドシリカ）、コーンスターチ、及びＮｅｕｓｉｌｉｎ（メタケイ酸アルミン酸マグネシウム）からなる群から選択される添加剤が挙げられる。幾つかの実施の形態では、添加剤は微結晶性セルロースである。
【００２１】
本明細書に記載される更に別の態様は、ＴｗＨＦ植物のアルコール抽出物を処理し、自由流動性固体にする方法であって、ＴｗＨＦ植物のアルコール抽出物を得ることと、アルコール抽出物中のアルコールを酢酸エチル等の極性有機溶媒に交換することであって、抽出物／酢酸エチル混合物を形成することと、抽出物を非極性有機溶媒と混ぜ合わせることであって、抽出物／非極性有機溶媒混合物を形成することと、抽出物／非極性有機溶媒混合物を濾過することであって、固体沈殿物を単離することと、固体沈殿物を乾燥することであって、それにより自由流動性固体の形態のアルコール抽出物を作製することとを含む、方法である。該方法における使用に適した非極性有機溶媒としては、直鎖アルカン（ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン及びデカンを含むが、それらに限定されない）及び分岐鎖アルカン（イソペンタン、イソヘキサン、イソヘプタン、イソオクタン、イソノナン及びイソデカンを含むが、それらに限定されない）からなる群から選択される非極性有機溶媒が挙げられる。幾つかの実施の形態では、非極性有機溶媒はヘプタンである。
【００２２】
更に別の態様では、ＴｗＨＦ植物の天然抽出物を処理して、自由流動性固体にする方法であって、天然抽出物を非極性有機溶媒と混ぜ合わせることであって、それらの混合物を作製することと、混合物を濾過することであって、固体沈殿物を単離することと、固体沈殿物を乾燥することであって、それにより自由流動性固体の形態の天然抽出物を作製することとを含む、方法が本明細書に記載される。
【００２３】
本開示は、上述の処理方法のいずれかによって作製される自由流動性固体の形態のＴｗＨＦ植物の抽出物も提供する。
【００２４】
以下の数字の付いたパラグラフは、本発明の１つ又は複数の例示的な変形形態を簡潔に規定するものである。
１．抽出物１ｍｇ当たり２.５μｇ以下のセラストロールを含むトリプテリジウム・ウィルフォルディ・フックＦ（ＴｗＨＦ）植物の抽出物。
２．（トリプトリド＋トリプジオリド）／セラストロールの比率（（Ｔ＋Ｔｄ）／Ｃ）が少なくとも１．４６である、パラグラフ１の抽出物。
３．比率（Ｔ＋Ｔｄ）／Ｃが少なくとも１．３６である、パラグラフ２の抽出物。
４．抽出物が自由流動性固体の形態である、パラグラフ１の抽出物。
５．トリプテリジウム・ウィルフォルディ・フックＦ（ＴｗＨＦ）植物の根から凍結乾燥させた根部を作製する方法であって、
（ａ）凍結させたＴｗＨＦ根部を凍結乾燥器内の容器に入れることであって、凍結乾燥器の温度が−３０℃以下であることと、
（ｂ）凍結乾燥器内の圧力を下げることと、
（ｃ）根部中の水を昇華させるのに十分な程度まで、容器を加熱することであって、それによりＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた根部を作製することと、
を含む、方法。
６．複数の根部が使用され、根部間の熱移動を促進するように、複数の根部が容器内で互いに十分に近接している、パラグラフ５の方法。
７．根が３０ヶ月未満栽培したＴｗＨＦ植物から採取される、パラグラフ５の方法。
８．凍結乾燥する前に、根を６インチ以下の長さの根部に加工する、パラグラフ５の方法。
９．根を実質的に線形の根部に加工する、パラグラフ８の方法。
１０．容器を凍結乾燥器内の加熱支持体上に載せる、パラグラフ５の方法。
１１．容器の加熱は凍結乾燥器の直接加熱を伴わない、パラグラフ５の方法。
１２．容器が実質的に平面の棚である、パラグラフ５の方法。
１３．容器内の根部が、約２０℃〜約７０℃の範囲の温度に維持される、パラグラフ５の方法。
１４．凍結乾燥プロセスを、凍結乾燥させた根部に２０％（ｗ／ｗ）以下の水が含まれるまで継続する、パラグラフ５の方法。
１５．根がＴｗＨＦシャイロ変種から採取される、パラグラフ５の方法。
１６．パラグラフ５の方法により作製されるトリプテリジウム・ウィルフォルディ・フックＦ植物の凍結乾燥させた根部。
１７．トリプテリジウム・ウィルフォルディ・フックＦ（ＴｗＨＦ）植物の凍結乾燥させた皮剥根部を作製する方法であって、凍結乾燥させた根部の根芯から皮を分離することであって、それによりＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根部を作製することを含む、方法。
１８．分離工程が根芯から皮を剥脱するのに十分な機械力をＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた根部に加えることを含む、パラグラフ１７の方法。
１９．機械力が、凍結乾燥させた根部を、凍結乾燥させた根部、金属体、ガラス物体、木製物体、セラミック体、ロープ、皮革、砂土、岩石、セメント、コンクリート、ガーネット、酸化アルミニウム、酸化ケイ素、繊維ガラス、ダイアモンド、皮剥ドラムの内部突
起、皮剥ドラムの平らな若しくはザラザラした内面、リング式皮剥器の平らな若しくはザラザラした内面、複数のフレイル鎖、又は複数のフレイル鎖に取り付けられた複数の物体からなる群から選択される研磨剤に接触させることにより生じる、パラグラフ１８の方法。
２０．分離工程がドラム式皮剥器、リング式皮剥器及びフレイル式皮剥器からなる群から選択される装置を含む、パラグラフ１７の方法。
２１．パラグラフ１７の方法により作製されるＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根部又は凍結乾燥させた根芯。
２２．皮を実質的に含まない、ＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた根芯。
２３．ＴｗＨＦ植物の同程度の寸法の未乾燥根部の１％未満の皮が含まれる、パラグラフ２２の凍結乾燥させた根芯。
２４．１０％以下のセラストロールが含まれる、パラグラフ２２の凍結乾燥させた根芯。
２５．  自由流動性固体の形態の抽出物を作製するためにＴｗＨＦ植物の天然抽出物を処理する方法であって、
（ａ）天然抽出物をアルコールと混合することであって、それらの混合物を作製することと、
（ｂ）混合物を５０℃以下の温度で真空下において添加剤と混ぜ合わせることであって、濃縮混合物を作製することと、
（ｃ）濃縮混合物を５５℃以下の温度で乾燥することであって、残留エタノールを除去することによって、自由流動性固体の形態の抽出物を作製することと、
を含む、方法。
２６．抽出物が、１回又は複数回のエタノール抽出によってＴｗＨＦ植物の根から得られる、パラグラフ２５の方法。
２７．天然抽出物が、ＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根部又は凍結乾燥させた根芯から得られる、パラグラフ２５の方法。
２８．添加剤が、微結晶性セルロース、マルトデキストリン、Ａｅｒｏｓｉｌ（商標）（フュームドシリカ）、コーンスターチ、及びＮｅｕｓｉｌｉｎ（メタケイ酸アルミン酸マグネシウム）からなる群から選択される、パラグラフ２５の方法。
２９．添加剤が微結晶性セルロースである、パラグラフ２８の方法。
３０．乾燥工程が、０．２ａｔｍ以下の大気圧を確立する真空下において行われる、パラグラフ２５の方法。
３１．自由流動性固体の形態の抽出物を作製するためにＴｗＨＦ植物の天然抽出物を処理する方法であって、
（ａ）天然抽出物を非極性有機溶媒と混ぜ合わせることであって、それらの混合物を作製することと、
（ｂ）混合物を濾過することであって、固体沈殿物を単離することと、
（ｃ）固体沈殿物を乾燥することであって、それにより自由流動性固体の形態の抽出物を作製することと、
を含む、方法。
３２．天然抽出物が、１回又は複数回のエタノール抽出によってＴｗＨＦ植物の根から得られる、パラグラフ３１の方法。
３３．非極性有機溶媒が、直鎖Ｃ５〜Ｃ１０アルカン及び分岐鎖Ｃ５〜Ｃ１０アルカンからなる群から選択される、パラグラフ３１の方法。
３４．非有機極性溶媒がヘプタンである、パラグラフ３３の方法。
３５．抽出物が、ＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根部から得られる、パラグラフ３１の方法。
３６．パラグラフ２５の方法によって作製される自由流動性固体の形態のＴｗＨＦ植物の抽出物。
３７．抽出物１ｍｇ当たり２.５μｇ以下のセラストロールを含む、パラグラフ３６の
抽出物。
３８．（トリプトリド＋トリプジオリド）／セラストロールの比率（（Ｔ＋Ｔｄ）／Ｃ）が少なくとも１．４６である、パラグラフ３６の抽出物。
３９．比率（Ｔ＋Ｔｄ）／Ｃが少なくとも１．３６である、パラグラフ３６の抽出物。
４０．パラグラフ３１の方法によって作製される自由流動性固体の形態のＴｗＨＦ植物の抽出物。
４１．抽出物１ｍｇ当たり２.５μｇ以下のセラストロールを含む、パラグラフ４０の抽出物。
４２．（トリプトリド＋トリプジオリド）／セラストロールの比率（（Ｔ＋Ｔｄ）／Ｃ）が少なくとも１．４６である、パラグラフ４０の抽出物。
４３．比率（Ｔ＋Ｔｄ）／Ｃが少なくとも１．３６である、パラグラフ４０の抽出物。
４４．自由流動性固体の形態の抽出物を作製するために、ＴｗＨＦ植物のアルコール抽出物を処理する方法であって、
（ａ）ＴｗＨＦ植物のアルコール抽出物を得ることと、
（ｂ）アルコール抽出物中のアルコールを極性有機溶媒に交換することであって、抽出物／極性有機溶媒混合物を形成することと、
（ｃ）抽出物／極性有機溶媒混合物を添加剤と混ぜ合わせることであって、混加物を形成することと、
（ｄ）混加物を５０℃以下の温度で真空下において濃縮することと、
（ｅ）濃縮混合物を５５℃以下の温度で乾燥することであって、それにより自由流動性固体の形態の抽出物を作製することと、
を含む、方法。
４５．極性有機溶媒が酢酸エチルである、パラグラフ４４の方法。
４６．自由流動性固体の形態の抽出物を作製するためにＴｗＨＦ植物のアルコール抽出物を処理する方法であって、
（ａ）ＴｗＨＦ植物のアルコール抽出物を得ることと、
（ｂ）アルコール抽出物中のアルコールを極性有機溶媒に交換することであって、抽出物／極性有機溶媒混合物を形成することと、
（ｃ）アルコール抽出物を、非極性有機溶媒と混ぜ合わせることであって、混加物を形成することと、
（ｄ）混加物を濾過することであって、固体沈殿物を単離することと、
（ｅ）固体沈殿物を乾燥することであって、それにより自由流動性固体の形態の抽出物を作製することと、
を含む、方法。
４７．非極性有機溶媒がヘプタンである、パラグラフ４６の方法。
【００２５】
本発明の他の特徴及び利点は、実施例を含む以下の詳細な説明を参照してより良好に理解される。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本願は、ＴｗＨＦ植物の根の凍結乾燥が根芯からの皮の広域除去を容易にするという発見に基づくものであり、皮に存在する毒性化合物（例えばセラストロール）を実質的に欠いた抽出物の調製を可能にする。
【００２７】
本願は、非極性有機溶媒及び配合添加剤がＴｗＨＦ植物の従来の抽出物を自由流動性固体へと変えることが可能であるという発見にも基づくものである。当該技術分野において既知の方法（例えば任意の更なる処理工程を伴わないＴｗＨＦ植物のアルコール抽出）により作製されたＴｗＨＦ植物の従来の抽出物は、蝋状で非晶質の組成物（すなわち天然抽出物の形態）であり、流動特性が乏しく、それを扱うとともに、使用可能な製剤を作製するのに特別な手段が必要とされる。本明細書に記載される処理方法により作製される自由
流動性固体には、有用なレベルの抽出物化合物（例えばトリプトリド及びトリプジオリド）が含まれており、これらの抽出物化合物を、関節リウマチ等の抗炎症性障害を含む様々な障害の治療用の製剤へと配合することができる。
【００２８】
Ｉ．  定義
当該技術分野における意味と一致するものであるが、「抽出物」という用語は、物理的に引き抜く若しくは押し出すことにより、流体により、又は物質組成物と接触する、好ましくは物質組成物に浸透することが可能な溶媒に少なくとも一部溶解させることにより、物質組成物から引き抜かれる物質を指す。「抽出物」は、抽出時に又は例えば固体を作製するための続く取り扱いの後に存在するような引き抜かれた物質を指すのにも用いられる。したがって、抽出物は、溶液、混合物、濃縮物又は精油の形態とすることができる。固体形態の抽出物には、抽出に使用される流体、例えば溶媒は実質的に含まれず、通常含まれない。「抽出物」は、１回又は複数回の抽出工程から得られる単一抽出物と、個々の抽出がそれぞれ少なくとも１回の抽出工程を含む、複数回の又は一連の別々の抽出の複合産物である抽出物とを含むように本明細書で定義される。
【００２９】
本明細書で用いられる「ＴｗＨＦ植物のアルコール抽出物」という用語は、例えば極性有機溶媒（例えば酢酸エチル）への溶媒の交換、及び／又はアルコール抽出物中での固体粒子の単離を含む更なる処理工程にかけることなく、１回又は複数回のアルコール抽出によりＴｗＨＦ植物（例えばＴｗＨＦ植物の根部）から引き抜かれる物質を指す。アルコール抽出物は、溶液、混合物、濃縮物又は精油の形態とすることができる。通常、アルコール抽出物は蝋状で非晶質の固体ではなく、蝋状で非晶質の固体を含有していないが、アルコールの部分的な又は完全な除去によって、本明細書で天然抽出物の一形態と称している、蝋状で非晶質の固体であるか又はそれを含有する抽出物を作製することができる。
【００３０】
本明細書で用いられる「ＴｗＨＦ植物の天然抽出物」という用語は、当該技術分野において既知の従来の方法により作製される蝋状で非晶質の固体の形態のＴｗＨＦ植物の抽出物を含む。そのため、天然抽出物の一形態は、蝋状で非晶質の固体であるか又はそれを含有するアルコール抽出物である。ＴｗＨＦ植物の他のアルコール抽出物は、必ずしも天然の植物又は植物部位の抽出物である必要はなく、そのため蝋状で非晶質の固体を含んでいなくてもよい。
【００３１】
本明細書で用いられる「濃縮濾液」という用語は、本明細書に記載される抽出プロセス中に生じる１又は複数の濾液を濃縮したものである。
【００３２】
本明細書で用いられる「ＴｗＨＦ植物の未乾燥根」という用語は、乾燥、例えば凍結乾燥していないＴｗＨＦ植物の根を指す。
【００３３】
本明細書で用いられる「根部」という用語は、凍結乾燥器に入れるのに適したサイズのＴｗＨＦ植物の根の一部又は全体を指す。この好適なサイズを達成するために、ＴｗＨＦ根を凍結乾燥器内での凍結乾燥に対応する長さ（又は直径）に加工又は摩砕することができる。
【００３４】
本明細書で用いられる「研磨剤」という用語は、摩擦及び／又は機械的衝撃によって物質（例えばＴｗＨＦ植物の根上の皮）を擦り減らす又は摩滅させることが可能な作用物質を指す。
【００３５】
「皮を実質的に含まない根部」という語句には、概して皮を欠いている根部という当該技術分野における通常の慣習的な意味が与えられる。具体的には、皮を実質的に含まない根部には、ＴｗＨＦ植物の同程度の寸法の未乾燥根部の２％未満の皮（目視検査により確
認されるもの）が含まれることが考慮される。
【００３６】
「自由流動性固体」及び「処理されたＴｗＨＦ抽出物」という用語は、本明細書で区別なく用いられる。幾つかの実施形態では、天然抽出物を非極性有機溶媒と混ぜ合わせて、製剤及び／又は栄養補助食品へと配合するのに適した自由流動性固体抽出物を作製する。理論に束縛されることを望むものではないが、非極性有機溶媒（例えばヘキサン、ヘプタン）が、取り扱い及び送達可能な形態（製剤又は栄養補助食品）への配合を困難にしている、天然抽出物に存在するワックス、脂肪及び油を除去すると考えられる。幾つかの実施形態では、抽出物（例えば酢酸エチル等の極性有機溶媒への溶媒の交換を行ったアルコール抽出物）を、該抽出物を添加剤に接触させることにより処理し、取り扱い及び製剤及び栄養補助食品への配合が行い易い自由流動性固体形態の抽出物を形成する。
【００３７】
ＩＩ．  ＴｗＨＦ植物の根を凍結乾燥する方法
本明細書で与えられる実施例に示されるように、皮を除去する前にＴｗＨＦ植物の根又は根部を凍結乾燥することによって、従来方法と比較して皮の容易な定量的除去が可能となる。凍結乾燥は、植物材料が液体水及び／又は過度の熱の潜在的な有害作用に長期間曝されないように、ＴｗＨＦ植物の根から水を除去する脱水プロセスである。凍結乾燥プロセスを、当該技術分野において既知の任意の方法を用いて、当該技術分野において既知の任意の凍結乾燥装置において行うことができる。
【００３８】
本開示の一態様は、ＴｗＨＦ植物の根から凍結乾燥させた根部を作製する方法であって、複数の凍結させた根部を凍結乾燥器内の容器に入れることであって、熱移動を促進するように、根部同士が容器内で互いに十分に近接していることと、凍結乾燥器内の圧力を下げることと、根部中の水を昇華させるのに十分な量で、容器を加熱することであって、それによりＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた根部を作製することとを含む、方法を提供する。
【００３９】
凍結乾燥プロセスの第１の工程は、根部の凍結である。ＴｗＨＦ植物の根を１２メートルの長さまで生育させることができるが、これは最も広く流通している凍結乾燥器に収めるには大きすぎる。このため、幾つかの実施形態では、より扱い易いサイズの根部を作製するために、凍結乾燥プロセスを開始する前にＴｗＨＦ植物の根を加工又は摩砕することが望まれる。凍結の前後、ただし凍結乾燥の前に、ＴｗＨＦ根を所望の長さ又は長さ範囲に加工する。例えば、幾つかの実施形態では、ＴｗＨＦ植物の根を加工して、約２４インチ以下の長さの根部を作製する。幾つかの実施形態では、ＴｗＨＦ植物の根を加工して、約１２インチ、約１１インチ、約１０インチ、約９インチ、約８インチ、約７インチ、約５インチ、約４インチ、約３インチ、約２インチ、約１インチ、約１／２インチ又はそれ未満の長さの根部を作製する。幾つかの実施形態では、ＴｗＨＦ植物の根を加工して、約６インチの長さの根部を作製する。
【００４０】
幾つかの実施形態では、ＴｗＨＦ植物の根の直径は約１／２インチ以下である。幾つかの実施形態では、根の直径は、約１／３インチ、１／４インチ、１／８インチ、１／１６インチ又はそれ未満である。他の実施形態では、ＴｗＨＦ植物の根の直径は約１インチ以上である。一実施形態では、ＴｗＨＦ植物の根を加工して、長さ約６インチ及び直径約１／２インチの根部を作製する。通常、ＴｗＨＦ根はその平均直径を変えるようには加工しないが、本開示は調製物をより効率的に凍結乾燥するのに、直径の低減及び表面の増大が望ましい（又は少なくとも望ましくなくはない）場合に任意の従来の摩砕法を用いるこのような加工を考慮する。根又は根部を抽出にかける場合、製粉した、浸軟した又は粉砕した根及び根部を含む、様々な長さ及び直径の根及び根部が許容可能である。
【００４１】
幾つかの実施形態では、ＴｗＨＦ植物の根が分岐している。幾つかの実施形態では、ＴｗＨＦ植物の分岐根を加工して、根の分岐部を切り分け実質的に線形の根部を作製する。
【００４２】
本明細書に記載される凍結乾燥プロセスに使用される根部は、任意の齢及び起源のＴｗＨＦ植物から得られる。幾つかの実施形態では、根部は中国由来のＴｗＨＦ植物から得られ、幾つかの実施形態では、根部は米国由来のＴｗＨＦ植物から得られる。幾つかの実施形態では、根部はＴｗＨＦシャイロ変種から得られる。本明細書で用いられる「中国由来のＴｗＨＦ植物」という用語は、中国の産地から得られるＴｗＨＦ植物を指す。この定義には、中国で栽培した植物から採取される根部、野生において中国で生育した植物から採取される根部、及び中国以外の国で栽培されているが、中国原産の（すなわち中国のＴｗＨＦ植物の挿し木（又は種）から生育される）植物から採取される根部が含まれる。本明細書で用いられる「米国由来のＴｗＨＦ植物」という用語は、米国の産地から得られるＴｗＨＦ植物を指す。この定義には、米国で栽培した植物から採取される根部、野生において米国で生育した植物から採取される根部、及び米国以外の国で栽培されているが、米国原産の（すなわち米国のＴｗＨＦ植物の挿し木（又は種）から生育される）植物から採取される根部が含まれる。
【００４３】
根部は任意の齢のＴｗＨＦ植物から得られる。幾つかの実施形態では、根部は約３０ヶ月未満生育させたＴｗＨＦ植物から得られる。関連の実施形態では、根部は、約２９ヶ月、２８ヶ月、２７ヶ月、２６ヶ月、２５ヶ月、２４ヶ月、２３ヶ月、２２ヶ月、２１ヶ月、２０ヶ月、１９ヶ月、１８ヶ月、１７ヶ月、１６ヶ月、１５ヶ月、１４ヶ月、１３ヶ月、１２ヶ月、１１ヶ月、１０ヶ月、９ヶ月、８ヶ月、６ヶ月又はそれ未満栽培したＴｗＨＦ植物から得られる。他の実施形態では、根部は少なくとも３０ヶ月以上生育させたＴｗＨＦ植物から得られる。このような実施形態では、根部は、約３１ヶ月、３２ヶ月、３３ヶ月、３４ヶ月、３５ヶ月、３６ヶ月、３７ヶ月、３８ヶ月、３９ヶ月、４０ヶ月、４１ヶ月、４２ヶ月、４３ヶ月、４４ヶ月、４５ヶ月、４６ヶ月、４７ヶ月、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年又はそれより長く栽培したＴｗＨＦ植物から得られる。
【００４４】
多様なアプローチが、抽出物が調製されるＴｗＨＦの根又は根部を凍結するのに適している。幾つかの実施形態では、凍結プロセスは、根部を容器に入れ、凍結乾燥プロセスを開始する前に一晩、容器を専用の凍結装置（すなわち凍結乾燥器とは別の凍結装置）に入れることにより行われる。凍結乾燥プロセス中の熱移動を促進するように、根部同士は容器内で互いに十分に近接して位置している。好ましくは、伝導による熱移動を促進するように、根部は少なくとも１つの他の根部及び／又は容器に接触している。容器は任意の材料（単数又は複数）、好ましくは伝導性材料（複数の場合もある）でできていてもよい。容器は凍結乾燥器に対応する任意の形状又は設置面積（footprint）を有する。容器は凍結乾燥器の内法に対応する任意の深さを有する。幾つかの実施形態では、容器の深さは２インチ以下、例えば深さは約０．１２５インチ〜約２インチの範囲、又は公称高さである。幾つかの実施形態では、圧力にかかわらず液相材料がなくなるように、根部を共晶点未満に冷却する。
【００４５】
根部の温度を−１０℃〜−７０℃の範囲の温度に低減することが可能な任意の市販の凍結装置（例えば冷凍庫）の使用が具体的に考慮される。幾つかの実施形態では、根部の温度は−２０℃〜約−７０℃の範囲の温度まで低減する。幾つかの実施形態では、根部の温度は、約−２０℃、−２５℃、−３０℃、−３５℃、−４０℃、−４５℃、−５０℃、−５５℃、−６０℃、−６５℃又は約−７０℃の温度まで低減する。幾つかの実施形態では、根部の温度は約−２０℃の温度まで低減する。根を所望の温度で凍結させたら、凍結させた根部の入った容器を凍結乾燥器内に入れ、その温度を約−２０℃以下の温度に維持する。
【００４６】
他の実施形態では、凍結プロセスは、専用の別の凍結装置を用いずに凍結乾燥器内にお
いて行われる。このような実施形態では、根部を直接凍結乾燥器内に入れ、凍結乾燥器の温度を約−２０℃以下に低減する。
【００４７】
凍結乾燥器が所望の温度に達し、根部を凍結乾燥器内に入れたら、根部中の水を昇華させるために、凍結乾燥器内の大気圧を下げる。幾つかの実施形態では、根部からの水の除去を促進するために、根部に熱を加える。このプロセスによって、根部中の水の少なくとも５０％が昇華する。幾つかの実施形態では、根部中の水の少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６＆、９７％、９８％、９９％又はそれを超える割合が昇華する。幾つかの実施形態では、凍結乾燥器の温度を約１０℃から約７０℃へと漸増させ、根部の放射加熱及び幾らかの伝導加熱をもたらすことによって、根部に間接的に熱を加える。幾つかの実施形態では、まず凍結乾燥器の温度を約１０℃まで増大させ、一晩温度を約１０℃で安定させる。次いで凍結乾燥器の温度を約８時間かけて約３５℃に増大させた後、約８時間かけて約５０℃に増大させる。幾つかの実施形態では、凍結乾燥プロセスの終了時において、凍結乾燥させた根部中に最終的に残留する水の含量は約２０％以下である。幾つかの実施形態では、凍結乾燥させた根部には１５％以下の水が含まれる。他の実施形態では、凍結乾燥させた根部には１０％以下の水が含まれる。他の実施形態では、凍結乾燥させた根部には５％以下の水が含まれる。他の実施形態では、凍結乾燥させた根部には２％以下の水が含まれる。
【００４８】
他の実施形態では、凍結乾燥器内の支持体の温度を約１０℃から約７０℃へと漸増させ、主として、限定されるものではないが、根部の伝導加熱をもたらすことによって、根部に直接熱を加える。これらの実施形態の一部では、凍結させた根部を凍結乾燥器内の加熱支持体上にある熱伝導容器に入れ、加熱支持体の温度を漸増させる。凍結乾燥器内の支持体に供給される熱の副次的結果として、凍結乾燥器の温度が増大することはあるが、凍結乾燥器自体は直接加熱しない。幾つかの実施形態では、加熱支持体の温度を一晩かけて約１０℃に増大させた後、再度約６時間〜１２時間かけて温度を（約２０℃から約４０℃へと）増大させ、再度更に６時間〜１２時間かけて温度を（約３０℃から約６０℃へと）増大させる。凍結乾燥器内の根部の温度は約３８℃の温度に維持する。幾つかの実施形態では、加熱支持体を断続的に加熱し、それにより根部に間欠的な熱を与える。このような実施形態では、通常根部に熱を２〜３秒間隔で与える。幾つかの実施形態では、加熱支持体は、５秒、１０秒、１５秒、２０秒、２５秒、３０秒、３５秒、４０秒、４５秒、５０秒、５５秒、１分、５分、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、３５分、４０分、４５分、５０分、５５分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間又はそれより長い間隔で根部に間欠的な熱を与える。直前に示された実施形態では通常、凍結乾燥器を加熱しないが、根部の入った容器用の支持体を加熱することに加えて加熱される凍結乾燥器内においてＴｗＨＦ根部を凍結乾燥することができることが考慮される。幾つかの実施形態では、凍結乾燥プロセスの終了時において、凍結乾燥させた根部中に最終的に残留する水の含量は約２０％以下である。幾つかの実施形態では、凍結乾燥させた根部には、１５％以下の水、１０％以下の水、５％以下の水又はそれ未満の水が含まれる。
【００４９】
凍結乾燥器の圧力を真空の適用によって制御する。真空は昇華を促進するのに用いられる。幾つかの実施形態では、凍結乾燥器内の圧力は約３ミリバール〜約１０ミリバールの範囲である。幾つかの実施形態では、凍結乾燥器内の圧力は０．０１ａｔｍ以下である。
【００５０】
幾つかの実施形態では、水蒸気が含まれ得る及び／又は回収され得る表面を提供するのに、冷却凝縮器及び／又は凝縮プレートが使用される。凝縮器を用いることで、ポンプの性能を低下させ得る水蒸気が真空ポンプに達するのを防ぐ。凝縮器は当該技術分野において除湿に有用であるとして知られる温度に維持する。幾つかの実施形態では、凝縮器の温度は−５０℃以下に維持する。幾つかの実施形態では、凝縮器の温度は−３０℃以下に維
持する。
【００５１】
ＴｗＨＦ植物の得られる凍結乾燥させた根部には根芯と皮とが含まれるが、根芯への皮の付着が変わることで、同程度の寸法の未乾燥ＴｗＨＦ根部と比べて、根芯への皮の付着の強度が低減している。いかなる特定の理論に束縛されることを望むものではないが、例えば本明細書に記載される凍結乾燥方法によって調製されるＴｗＨＦ植物の完全に乾燥させた根部では、根芯からの皮のより定量的な除去が可能であることが考慮される。このような凍結乾燥させた皮剥根芯から得られる抽出物には、初めに凍結乾燥しない従来方法によって皮を除去した根芯から得られる、又は凍結乾燥するが、凍結乾燥プロセスでは根部中の水の実質的な昇華が起こらなかった根芯から得られる抽出物と比較して、かなり低いレベルの毒性化合物（例えばセラストロール）が含まれることが期待される。
【００５２】
ＩＩＩ．  ＴｗＨＦ植物の根の皮を剥ぐ方法
ＴｗＨＦ根の皮を剥ぐ方法に関する本開示の態様は、ＴｗＨＦ根を凍結乾燥する方法、ＴｗＨＦ抽出物を作製する方法、及びこのような抽出物を処理して自由流動性固体にする方法のような本開示の他の態様とは異なるものである。しかし、本開示のこれらの態様はモジュール構成であり、凍結乾燥方法と皮剥方法と抽出物作製方法とを含む抽出物を作製する方法のように、様々な組合せで考慮される。
【００５３】
したがって、本開示の別の態様は、マチェーテ、ナイフ又は野菜ピーラー等の皮剥刃を用いて根から皮を剥離する又は根から皮を切り取るよりも労力を必要としない、ＴｗＨＦ植物の根から皮を除去する方法である。これらの既知の方法は煩雑であり、工業生産には適していない。本明細書に記載される方法は、工業生産環境への移行に適しており、凍結乾燥させた根部の根芯から皮を分離し、それによりＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根部を作製することを含むものである。本皮剥方法は、ＴｗＨＦ植物部位（例えば根）の皮を剥ぐのに有用であるとして考慮されるが、本明細書に開示される皮剥方法は、植物又は植物の一部分から除去されるのが望まれる皮を含む、多様な裸子植物及び被子植物の植物部位（例えば根又は茎）の皮を剥ぐのにも有用であるとして考慮される。
【００５４】
凍結乾燥させた根部の皮は、当該技術分野において既知の任意の手段によって根芯から分離される。例えば、幾つかの実施形態では、根芯からの皮の分離は、根芯への凍結乾燥させた皮の付着を機械力によって機械的に破壊することを含む。幾つかの実施形態では、機械力は、凍結乾燥させた根部を圧縮ローラー又は根部を圧縮する他の手段に接触させることによって生じる。幾つかの実施形態では、機械力は、凍結乾燥させた根部を研磨剤と接触させることによって生じる。研磨剤の例としては、凍結乾燥させた根部、金属体、ガラス物体、木製物体、セラミック体、ロープ、皮革、砂土、岩石、セメント、コンクリート、ガーネット、繊維ガラス、酸化アルミニウム、酸化ケイ素、ダイアモンド、及び当該技術分野において既知の任意の他の研磨剤が挙げられるが、それらに限定されない。幾つかの実施形態では、研磨剤はボルト、スクリュー、釘又は金属片等の金属体である。このような金属体は、任意の金物店から入手することができる。一実施形態では、研磨剤はボルトである。幾つかの実施形態では、ボルトは長さが少なくとも３インチである。他の実施形態では、ボルトは長さが１インチ未満、例えば長さが１／２インチ以下のボルトである。一実施形態では、ボルトは長さが１／２インチであり、頭部が３／８インチである。
【００５５】
凍結乾燥させた皮剥根を作製する方法は、当該技術分野において既知の任意の好適な装置において行うことができる。幾つかの実施形態では、装置は、好ましくは根部に適用可能な圧力量を調整することができる圧縮ローラーを備える任意の適当なサイズの機器である。他の実施形態では、装置は、ドラム式皮剥器、リング式皮剥器及びフレイル式皮剥器からなる群から選択される機器である。或る特定の実施形態では、装置はドラム式皮剥器であり、研磨剤は１２：１という研磨剤と凍結乾燥させた根部との重量比で存在するばら
材料である。幾つかの実施形態では、研磨剤と凍結乾燥させた根部との重量比は、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１又は１：１である。研磨剤と凍結乾燥させた根部との重量比は、根部のサイズと研磨剤の密度とに依存するものであり、当業者により決定することができる。幾つかの実施形態では、研磨剤は分離した作用物質ではなく、皮剥ドラムの内部突起、皮剥ドラムの平らな若しくはザラザラした内面、リング式皮剥器の平らな若しくはザラザラした内面、複数のフレイル鎖、又は複数のフレイル鎖に取り付けられた複数の物体である。
【００５６】
幾つかの実施形態では、分離工程は、凍結乾燥させた根部から皮を剥脱するのに十分な時間、凍結乾燥させた根部を真空下で研磨剤と混ぜ合わせることであって、剥脱した皮を吸引によってポートを通して除去し、それにより根芯から皮を分離することを含む。幾つかの実施形態では、凍結乾燥させた根部を、少なくとも５分、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、３５分、４０分、４５分、５０分、５５分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、又はそれより長い間、研磨剤とタンブルする。
【００５７】
根部から皮を除去するのに使用される装置又は機器に関わらず、皮剥プロセスは、根部上に皮がないことが目視検査から明らかになった時点で終わらせる。任意で、皮剥プロセスの期間は、以下で示されるセラストロール等のＴｗＨＦ根皮のマーカーに関するアッセイを用いて決定される。
【００５８】
幾つかの実施形態では、本方法は研磨剤と皮剥根部とを分けることを更に含む。研磨剤と皮剥根部とを分けるために、幾つかの実施形態では、研磨剤に磁性（例えば強磁性）金属体を用いることが望ましい。このような実施形態では、皮剥プロセスが終了したら、装置の内側又は外側のいずれかにある磁石を用いて磁力により金属体を取り出す。幾つかの実施形態では、皮剥プロセスが終了したら、タンブラーを磁化し、磁性金属体をタンブラー内に残しながら、皮剥根部をタンブラーから取り出す。
【００５９】
さらに、皮を実質的に含まない、トリプテリジウム・ウィルフォルディ・フックＦシャイロ変種植物等のＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根部が本明細書において提供される。幾つかの実施形態では、ＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根部には、ＴｗＨＦ植物の同程度の寸法の未乾燥根部の２％未満又は１％未満の皮が含まれる。皮の存在は、目視によって又は以下に示される皮マーカーを使用することで確認することができる。幾つかの実施形態では、凍結乾燥させた根部には、ＴｗＨＦ植物の同程度の寸法の未乾燥根部の１％未満の皮が含まれる。幾つかの実施形態では、凍結乾燥させた皮剥根部には、ＴｗＨＦ植物の同程度の寸法の未乾燥根部の０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％未満又はそれより少ない割合の皮が含まれる。
【００６０】
ＴｗＨＦ植物の皮に存在する化合物を、測定可能な量の皮が、凍結乾燥させた皮剥根部に存在するかを決定するマーカーとして使用することができる。セラストロールは、ＴｗＨＦ植物の皮に存在するトリテルペノイド抗酸化化合物である。このため、幾つかの実施形態では、ＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根部の調製物に残留する皮を特定する方法は、凍結乾燥させた皮剥根部の調製物における皮マーカー（例えばセラストロール）の量を決定することを含み、凍結乾燥させた皮剥根部の調製物におけるマーカーの量がより少なければ、調製物に含まれる残留皮の量がより少ないと見なす。凍結乾燥させた根部におけるセラストロールの量は、ＮＭＲ、ＨＰＬＣ又はＡｎｎｅｘｉｎ  Ｖ／ＰＴ染色アッセイ（セラストロールはＮＦ−κβ阻害剤である）等の当該技術分野において既知の方法によって決定することができる。
【００６１】
幾つかの実施形態では、凍結乾燥させた皮剥根部には、ＴｗＨＦ植物の同程度の寸法の未乾燥根部の皮に存在するセラストロールの量と比較して、１０％未満のセラストロールが含まれる。幾つかの実施形態では、凍結乾燥させた皮剥根部には、ＴｗＨＦ植物の同程度の寸法の未乾燥根の皮に存在するセラストロールの量と比較して５％、４％、３％、２％、１％、０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％未満、又はそれより少ない割合のセラストロールが含まれる。幾つかの実施形態において、皮を除去するプロセスがドラム及び研磨剤の使用を含み、残留皮が根部上で特定される場合、セラストロールが検出不能になるまで、タンブリングプロセスを繰り返す。
【００６２】
ＩＶ．  ＴｗＨＦ植物の抽出物を作製する方法
ＴｗＨＦ植物の根から抽出物を作製する方法は当該技術分野において既知である。従来の抽出方法は、植物材料（例えばＴｗＨＦ植物の皮剥根）の製粉、摩砕又は粉砕と、十分量の抽出液（例えばアルコール）を含む溶液での植物材料の抽出と、抽出物混合物（例えばアルコール抽出物）を得るための抽出液の回収とを含む。抽出物混合物を、抽出物混合物から固形物を除去することにより更に処理することができる。固形物は、濾過及び遠心分離を含むが、それらに限定されない当該技術分野において既知の任意の方法によって、抽出物から除去される。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される凍結乾燥方法及び皮剥方法を用いて、ＴｗＨＦ植物の根又は根部の皮を剥ぐ。他の実施形態では、ＴｗＨＦ植物の根又は根部は、当該技術分野において既知の方法を用いて皮を剥いだ未乾燥の根又は根部である。
【００６３】
ＴｗＨＦ植物の皮剥根の製粉、摩砕又は粉砕は、抽出液に曝される根芯の表面積を増大させるために、任意の従来の摩砕プロセスによって行うことができる。
【００６４】
幾つかの実施形態では、抽出方法に使用される抽出液は溶媒である。好適な抽出液としては、水、アルコール、水溶液、ハロカーボン、エステル及び超臨界流体が挙げられるが、それらに限定されない。好適なアルコールとしては、エタノール、Ｎ−プロパノール、Ｎ−ブタノール、Ｎ−ペンタノール、Ｎ−ヘキサノール、Ｎ−オクタノール、Ｎ−ノナノール及びＮ−デカノール等の第一級アルコールと、イソプロパノール、イソブタノール等の第二級アルコールと、例えばブタンからデカンまでのいずれかの第二級アルコール誘導体とが挙げられる。室温で約１気圧（ａｔｍ）において気体であるこれらのより低分子量の化合物に関しては、化合物を液体状態とする加圧抽出が考慮される。一実施形態では、抽出液はエタノールである。抽出プロセス中にエタノール液を組み込む利点は、エタノール液が摂取可能な製品に対応するものであり、そのためピル、カプセル、錠剤、及び当該技術分野において既知の他の摂取可能な形態に組み込む抽出物を調製する際の使用に適していることである。
【００６５】
一態様では、抽出工程は、必要に応じて摩砕された皮剥根を、磨砕根の単位体積当たり２体積〜２０体積の抽出液といった過剰量の抽出液と混ぜ合わせることを含み、混ぜ合わせた材料を、磨砕根から対象の化合物を抽出するのに十分な時間撹拌する。幾つかの実施形態では、抽出液と磨砕根とを含む混合物を、約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間又はそれより長い間、撹拌する。任意で、混合物を還流しながら撹拌する。抽出プロセスを、室温と抽出液の沸点との間の温度で実施する。
【００６６】
幾つかの実施形態では、混合物を濾過し、濾液を、濃縮濾液が最初の濾液の体積の何分の１かになるまで濃縮する。幾つかの実施形態では、濃縮濾液は、最初の濾液に対して１体積、０．９体積、０．８体積、０．７体積、０．６体積、０．５体積、０．４体積、０．３体積、０．２体積、０．１体積未満、又はそれより少ない体積である。幾つかの実施
形態では、必要に応じて摩砕された根を、抽出液による一連の抽出にかける。このような実施形態では、根を更に過剰量の抽出液と混ぜ合わせて、抽出プロセスを繰り返す。次いで様々な抽出から得られた濾液を組み合わせ、以下に示されるように濃縮する。
【００６７】
濾液（複数の場合もある）の濃縮は、揮発性液、例えば溶媒を除去するための真空の使用といった当該技術分野において既知の方法によって達成される。濾液の濃縮はいずれの温度でも行われる。幾つかの実施形態では、温度は５０℃を超えない。約２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃、４５℃、５５℃、６０℃、６５℃、又は７０℃の温度での濾液の濃縮も考慮される。
【００６８】
幾つかの実施形態では、溶媒の交換は抽出に含まれる（米国特許第５，２９４，４４３号、同第５，５００，３４０号、同第５，５８０，５６２号、同第５，８４６，７４２号、同第５，９１６，５６４号、それらの開示は引用することによりその全体が本明細書の一部をなすものとする）。このような実施形態では、抽出工程は、濃縮濾液を、元の根の質量と比べて過剰量（ｖ／ｖ）の極性有機溶媒（例えば酢酸エチル）と混ぜ合わせて、抽出物混合物（これは上記したように濃縮されていてもよい）を作製することを含む。極性有機溶媒（例えば酢酸エチル）は、抽出工程において抽出物を調製するのに使用されるアルコール溶媒とは異なるものである。このプロセスは、溶媒の交換によって抽出物混合物中の抽出液の濃度が１５重量％以下まで低減するまで繰り返す。幾つかの実施形態では、このプロセスは、抽出物混合物中の抽出液の濃度が１０重量％、９重量％、８重量％、７重量％、６重量％、５重量％、４重量％、３重量％、２重量％、１重量％又はそれより低い重量％になるまで繰り返す。抽出液の濃度は、当該技術分野において既知の方法（例えばＮＭＲ）によって決定することができる。
【００６９】
幾つかの実施形態では、抽出物混合物を、不溶性成分を除去するために濾過し、濾過した抽出物溶液を、本明細書に記載される方法の１つによって更に処理する。
【００７０】
Ｖ．  ＴｗＨＦ植物のアルコール抽出物を処理して、自由流動性固体にする方法
別の態様では、ＴｗＨＦ植物のアルコール抽出物を処理して、自由流動性固体にする方法が本明細書に記載される。幾つかの実施形態では、本方法は、ＴｗＨＦ植物のアルコール抽出物を得ることと、アルコール抽出物を非極性有機溶媒と混ぜ合わせることであって、抽出物／非極性有機溶媒混合物を作製することと、抽出物／非極性有機溶媒混合物を濾過することであって、固体沈殿物を単離することと、固体沈殿物を乾燥することであって、それによりアルコール抽出物を処理して、自由流動性固体の形態にすることとを含む。幾つかの実施形態では、アルコール抽出物は、混ぜ合わせ工程の前に溶媒の交換を行った混合物であり、溶媒の交換はアルコール抽出物中のアルコールを極性有機溶媒（例えば酢酸エチル等）に交換することを含む。このような実施形態では、抽出物／酢酸エチル混合物を、混ぜ合わせ工程において非極性有機溶媒と混ぜ合わせる。
【００７１】
好適な非極性有機溶媒としては、Ｃ４〜Ｃ１０の直鎖又は分岐鎖のアルカン及びシクロアルカンのいずれかが挙げられる。幾つかの実施形態では、非極性有機溶媒は、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン又はデカン等の直鎖アルカンである。幾つかの実施形態では、非極性有機溶媒はヘプタンである。他の実施形態では、非極性有機溶媒は、イソペンタン、イソヘキサン、イソヘプタン、イソオクタン、イソノナン又はイソデカン等の分岐鎖アルカンである。幾つかの実施形態では、非極性有機溶媒はイソオクタンである。
【００７２】
混ぜ合わせ工程は、アルコール抽出物（又は抽出物／酢酸エチル混合物）と、２体積〜２０体積といった元の根の質量と比べて過剰な体積の非極性有機溶媒とを接触させ、混合し、又は合わせて、混加物を作製することを含む。幾つかの実施形態では、混ぜ合わせ工
程を真空下で行う。幾つかの実施形態では、混ぜ合わせ工程は、混加物中の非極性有機溶媒のレベルが検出不能になるまで繰り返す。混加物を濾過し、固体沈殿物材料を単離又は回収して、その固体沈殿物材料を非極性有機溶媒で１回又は複数回洗浄する。混加物の濾過は、当該技術分野において既知の従来の方法によって行うことができ、また必要に応じて繰り返すことができる。
【００７３】
代替的な態様では、本方法は、抽出物を真空下で添加剤と混ぜ合わせることであって、抽出物／添加剤混合物を作製することと、濃縮混合物を乾燥することであって、それにより自由流動性固体の形態の抽出物を作製することとを含む。混ぜ合わせ工程は、抽出物と、０．５倍〜２０倍（ｗ／ｗ）といった適当な量の添加剤（抽出物中の全固形分と比較して）とを接触させる、混合させる、又は合わせること、及び任意で添加剤と抽出物とを混合させるのに十分な時間撹拌することを含む。抽出物の固形分に対して約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍過剰（ｗ／ｗ）の量で添加剤を使用することも考慮される。本明細書に記載される方法に使用するのに適した添加剤としては、微結晶性セルロース（ＭＣＣ）、マルトデキストリン、Ａｅｒｏｓｉｌ（商標）（フュームドシリカ）、コーンスターチ、及びＮｅｕｓｉｌｉｎ（メタケイ酸アルミン酸マグネシウム）が挙げられる。幾つかの実施形態では、添加剤はＭＣＣである。幾つかの実施形態では、混ぜ合わせ工程は、およそ８０％の乾燥固形分が、濃縮添加剤混合物において達成されるまで、５０℃を超えない温度（例えば約２０℃、３０℃、３５℃、３６℃、３７℃、３８℃、３９℃、４０℃、４１℃、４２℃、４３℃、４４℃、４５℃、４６℃、４７℃、４８℃又は約４９℃）で高真空下において抽出物／添加剤混合物を濃縮することを含む。
【００７４】
上記した処理方法の乾燥工程は、洗浄固体又は濃縮添加剤混合物を、洗浄固体又は濃縮添加剤混合物から溶媒を除去するのに十分な時間乾燥することを含む。幾つかの実施形態では、乾燥工程を、約８時間〜２４時間の期間行う。約９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間又はそれより長い間の洗浄固体又は濃縮添加剤混合物の乾燥が特に考慮される。８時間未満の洗浄固体又は濃縮添加剤混合物の乾燥も考慮される。洗浄固体又は濃縮添加剤混合物を、トレー式乾燥機、真空オーブン又はオーブンを含むが、それらに限定されない、当該技術分野において既知の任意の乾燥装置において乾燥することができる。幾つかの実施形態では、洗浄固体（又は濃縮添加剤混合物）を、約２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃、４５℃又は約５０℃の温度で乾燥する。乾燥プロセスが終了すると、乾燥固体は自由流動性固体の形態となる。
【００７５】
ＴｗＨＦの抽出物には、ジテルペノイド、トリテルペノイド、セスキテルペノイド、β−シトステロール、ズルシトール及びグリコシドを含む２００を超える化合物が含まれる。化合物の例としては、トリプトリド、トリプジオリド、ポルプノン酸（ウィルホルトリン）及びそのメチルエステル、トリプトフェノリド、トリプトフェノリドメチルエーテル、トリプトノテルペノール、ウィルホルミン、ウィルホリン、ウィルホルギン、及びウィルホルジンが挙げられるが、それらに限定されない。幾つかの実施形態では、自由流動性固体におけるこれらの化合物の１つ又は複数の量を決定することが望まれる。サンプルにおける化合物の決定は、ＮＭＲ又はＨＰＬＣ等の当該技術分野において既知の方法によって決定することができる。
【００７６】
本明細書に記載される方法により作製される自由流動性固体には、濃縮レベルのトリプトリド及びトリプジオリドが含まれる。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される方法により作製される自由流動性固体には、自由流動性固体１ｇ当たり少なくとも１００μｇ、少なくとも２００μｇ、少なくとも３００μｇ、少なくとも４００μｇ、少なくとも５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ、１０００μｇ，１１０
０μｇ、１２００μｇ、１３００μｇ、１４００μｇ、１５００μｇ、１６００μｇ、１７００μｇ、１８００μｇ、２０００μｇ又はそれを超える量の濃度でトリプトリドが含まれる。幾つかの実施形態では、自由流動性固体には、自由流動性固体１ｇ当たり少なくとも５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ、１０００μｇ、１１００μｇ、１２００μｇ、１３００μｇ、１４００μｇ、１５００μｇ、１６００μｇ、１７００μｇ、１８００μｇ、２０００μｇ又はそれを超える量の濃度でトリプジオリドが含まれる。
【００７７】
本明細書に記載される方法（抽出プロセスにおける出発材料として凍結乾燥させた皮剥根部、又は凍結乾燥させた皮剥根芯を使用する）により作製される自由流動性固体には、低レベルのセラストロール等の皮化合物が含まれる。このため、自由流動性固体には低レベルの任意の皮毒素が含まれる。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される方法により作製される自由流動性固体には、自由流動性固体１ｍｇ当たり２．５μｇ以下のセラストロールが含まれる。
【００７８】
幾つかの実施形態では、自由流動性固体の（トリプトリド＋トリプジオリドの総重量）／（セラストロールの総重量）の比は１以上である。幾つかの実施形態では、該比は１．３を上回る（例えば１．３５、１．３６、１．３７、１．３８、１．３９、１．４、１．４１、１．４２、１．４３、１．４４、１．４５、１．４６、１．４７、１．４８、１．４９、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０又はそれを超える）。幾つかの実施形態では、（トリプトリド＋トリプジオリド）／セラストロールの重量比は少なくとも１．４６である。幾つかの実施形態では、（トリプトリド＋トリプジオリド）／セラストロールの重量比は少なくとも１．３６である。
【００７９】
ＶＩ．  ＴｗＨＦ植物の天然抽出物を処理して、自由流動性固体にする方法
ＴｗＨＦ植物の天然抽出物は、使用可能な製剤を作製するのに特別な手段を必要とする蝋状で非晶質の固体である。ＴｗＨＦ植物の天然抽出物を処理して、自由流動性固体（例えば流動性粉末）にする改善された方法が本明細書に記載される。
【００８０】
一態様では、本方法は天然抽出物を非極性有機溶媒と混ぜ合わせることであって、それらの混合物を作製することと、混合物を濾過することであって、固体沈殿物を単離又は回収することと、固体沈殿物を乾燥することであって、それにより自由流動性固体の形態の抽出物を作製することとを含む。好適な非極性有機溶媒としては、Ｃ４〜Ｃ１０の直鎖又は分岐鎖のアルカン及びシクロアルカンのいずれかが挙げられる。幾つかの実施形態では、非極性有機溶媒は、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン又はデカン等の直鎖アルカンである。幾つかの実施形態では、非極性有機溶媒はヘプタンである。他の実施形態では、非極性有機溶媒は、イソペンタン、イソヘキサン、イソヘプタン、イソオクタン、イソノナン又はイソデカン等の分岐鎖アルカンである。幾つかの実施形態では、非極性有機溶媒はイソオクタンである。
【００８１】
幾つかの実施形態では、非極性有機溶媒／抽出物混合物を濾過して、固体沈殿物材料を単離又は回収する。非極性有機溶媒／抽出物混合物の濾過は、当該技術分野において既知の従来の方法によって行うことができる。回収した後、固体を非極性有機溶媒で１回又は複数回洗浄する。
【００８２】
別の態様では、本方法はＴｗＨＦ植物の天然抽出物を極性有機溶媒（例えばアルコール）と混合することであって、抽出物／極性有機溶媒混合物を作製することと、抽出物／極性有機溶媒混合物を、５０℃以下の温度で真空下において添加剤と混ぜ合わせることであって、濃縮混合物を作製することと、濃縮混合物を混合物から残留する極性溶媒を除去す
るのに適した温度で乾燥することであって、それにより自由流動性固体の形態の天然抽出物を作製することとを含む。この処理方法に使用するのに適した極性有機溶媒としては、エタノール、酢酸エチル、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｎ−プロパノール及びメタノールが挙げられるが、それらに限定されない。幾つかの実施形態では、極性有機溶媒はエタノールである。
【００８３】
幾つかの実施形態では、添加工程は、０．５倍〜２０倍といった過剰量の添加剤（ｗ／ｖ）を極性溶媒／抽出物混合物に組み込むこと、及び任意で添加剤を極性溶媒／抽出物混合物と混合して、添加剤混合物を作製するのに十分な時間撹拌することとを含む。極性溶媒／抽出物混合物に対して約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍過剰（ｗ／ｖ）の添加剤の混合量も考慮される。本明細書に記載される方法に使用するのに適した添加剤としては、微結晶性セルロース（ＭＣＣ）、マルトデキストリン、Ａｅｒｏｓｉｌ（商標）（フュームドシリカ）、コーンスターチ、及びＮｅｕｓｉｌｉｎ（メタケイ酸アルミン酸マグネシウム）が挙げられる。幾つかの実施形態では、添加剤はＭＣＣである。
【００８４】
添加剤が有機溶媒／抽出物混合物に添加される実施形態では、濾過工程は行わない。
【００８５】
次いで洗浄固体又は添加剤混合物を、それぞれ固体又は添加剤混合物から有機溶媒を除去するのに十分な時間乾燥する。幾つかの実施形態では、乾燥工程を、約８時間〜２４時間の期間行う。約９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間又はそれより長い間の洗浄固体又は添加剤混合物の乾燥が特に考慮される。８時間未満の洗浄固体又は添加剤混合物の乾燥も考慮される。洗浄固体又は添加剤混合物を、空気中、又はトレー式乾燥機、真空オーブン若しくはオーブンを含むが、それらに限定されない、当該技術分野において既知の任意の乾燥装置において乾燥することができる。幾つかの実施形態では、洗浄固体又は添加剤混合物を、約２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃、４５℃又は約５０℃の温度で乾燥装置において乾燥する。
【００８６】
ＶＩＩ．  ＴｗＨＦ抽出物の医薬組成物及び投与経路
本開示は、錠剤化、カプセル封入又は経口投与のために別の形で配合される、本明細書に記載される方法により作製された自由流動性固体を含む組成物を考慮する。組成物は、米国食品医薬品局により規定されるように、医薬組成物、栄養補助組成物（例えば栄養補助食品）として、又は食品添加物若しくは飲料添加物として与えられ得る。上記の組成物の剤形は特に限定されない。例えば、懸濁液、エマルション、錠剤、ピル、カプセル、持続放出配合物、粉末、坐剤、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル等が全て、好適な剤形として考慮される。
【００８７】
組成物には、通常１つ又は複数の好適な希釈剤、増量剤、塩、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、流動促進剤、湿潤剤、制御放出基剤、着色剤、香料、担体、賦形剤、緩衝剤、安定剤、可溶化剤、市販の補助剤、及び／又は当該技術分野において既知の他の添加物が含まれる。
【００８８】
賦形薬、賦形剤又は媒体として働く、任意の薬学的に許容可能な（すなわち当該技術分野において知られるように滅菌され、許容可能な程度に非毒性である）液体、半固体又は固体の希釈剤を使用することができる。希釈剤の例としては、ソルビタンモノラウリン酸ポリオキシエチレン、ステアリン酸マグネシウム、リン酸カルシウム、鉱油、ココアバター及びカカオ脂、メチルヒドロキシベンゾエート及びプロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、アルギネート、炭水化物、特にマンニトール、α−ラクトース、無水ラクトース
、セルロース、スクロース、デキストロース、ソルビトール、変性デキストラン、アカシアゴム、及びデンプンが挙げられるが、それらに限定されない。このような組成物は、物理的状態、安定性、ｉｎ  ｖｉｖｏでの放出速度、及びｉｎ  ｖｉｖｏでの機能化合物のクリアランス速度に影響を与える場合がある。
【００８９】
薬学的に許容可能な増量剤としては、例えばラクトース、微結晶性セルロース、リン酸二カルシウム、リン酸三カルシウム、硫酸カルシウム、デキストロース、マンニトール、及び／又はスクロースが挙げられ得る。三リン酸カルシウム、炭酸マグネシウム、及び塩化ナトリウムを含む塩も、医薬組成物の増量剤として使用することができる。
【００９０】
結合剤は、自由流動性固体を含有する組成物を保持し、硬錠剤を形成するのに使用することができる。結合剤の例としては、アカシア、トラガカント、デンプン及びゼラチン等の有機産物由来の材料が挙げられる。他の好適な結合剤としては、メチルセルロース（ＭＣ）、エチルセルロース（ＥＣ）及びカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）が挙げられる。
【００９１】
処理されたＴｗＨＦ抽出物の量及び投与計画は、投与目的に関連する様々な因子、例えばヒト若しくは動物の年齢、性別、体重、ホルモンレベル、又はヒト若しくは動物の栄養必要量に基づくものである。幾つかの実施形態では、ＴｗＨＦ抽出物を、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ〜体重１ｋｇ当たり約１０ｇの量で動物に毎日投与する。幾つかの実施形態では、処理されたＴｗＨＦ抽出物を、体重１ｋｇ当たり１日約０．００５ｍｇ、又は体重１ｋｇ当たり１日約０．０１ｍｇ、又は約０．０５ｍｇ、又は約０．１ｍｇ、又は約０．２ｍｇ、又は約０．３ｍｇ、又は約０．４ｍｇ、又は約０．５ｍｇ、又は約０．６ｍｇ、又は約０．７ｍｇ、又は約０．８ｍｇ、又は約０．９ｍｇ、又は約１ｍｇ、又は約２ｍｇ、又は約３ｍｇ、又は約４ｍｇ、又は約５ｍｇ、又は約６ｍｇ、又は約７ｍｇ、又は約８ｍｇ、又は約９ｍｇ、又は約１０ｍｇの量で動物に投与する。
【００９２】
通常の計画には、処理されたＴｗＨＦ抽出物の複数回投与が含まれ得る。一実施形態では、処理されたＴｗＨＦ抽出物を１日１回投与する。他の実施形態では、処理されたＴｗＨＦ抽出物を１日２回又は３回投与する。処理されたＴｗＨＦ抽出物は、どの時点で被験体に投与してもよい。幾つかの実施形態では、処理されたＴｗＨＦ抽出物を、食事の摂取と同時に、摂取前に又は摂取後に投与する。
【００９３】
処理されたＴｗＨＦ抽出物による治療は、少なくとも約１週間継続する。約２週間、３週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年、５年続く治療期間、又は生涯治療も考慮される。
【００９４】
本明細書に記載される処理されたＴｗＨＦ抽出物は、人間医学及び獣医学の分野において、例えばトリプトリド又はトリプジオリド（又はＴｗＨＦ植物の皮剥根から得ることができる他の治療用化合物）を、それを必要とする被験体に与えるのに有用であることが当業者によって認識されている。このため、治療対象の被験体又は個体はヒト等の哺乳動物とすることができる。他の好適な被験体としては、例えばウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ及びヤギ等の家畜、イヌ及びネコ等の伴侶動物、エキゾチックアニマル及び／又は動物園の動物、マウス、ラット、ウサギ、モルモット及びハムスターを含む実験動物、並びにニワトリ、七面鳥、アヒル及びガチョウ等の家禽が挙げられる。
【００９５】
以下の実施例は、本発明をより詳細に説明するために与えられており、説明することを意図するものであり、添付の特許請求の範囲を限定するものではない。実施例１は、例示的な凍結乾燥方法、並びに続いてＴｗＨＦ植物の根から皮を除去するための例示的な方法及び例示的な装置の両方を記載している。実施例２はＴｗＨＦ植物の根を凍結乾燥する代
替方法を記載している。実施例３は、処理剤にヘキサンを用いた、ＴｗＨＦ植物の最初の流体ベースの抽出物からの（正：from）自由流動性固体形態の抽出物の調製を記載している。実施例４は、処理剤にヘキサンを用いた、ＴｗＨＦ植物の抽出物からの自由流動性固体の調製を記載している。実施例５は、処理剤にヘキサンを用いて、ＴｗＨＦ植物のエタノール抽出物から自由流動性固体を調製する代替方法を記載している。実施例６は、共処理剤（co-processing agent）にヘキサンを用いた、ＴｗＨＦ植物のエタノール抽出物からの自由流動性固体の大規模調製を記載している。実施例７は、処理剤に配合添加剤を用いて、ＴｗＨＦの抽出物から自由流動性固体を調製する方法を記載している。実施例８は、処理剤に微結晶性セルロースを用いて、ＴｗＨＦ植物のエタノール抽出物から自由流動性固体を作製する代替方法を開示している。実施例９は実施例５で調製された自由流動性固体を含む医薬組成物を開示している。
【実施例】
【００９６】
実施例１．  ＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根の調製
本開示による改善されたＴｗＨＦ抽出物は、流動特性が改善された結果としてより扱いやすくなり、トリプテリジウム・ウィルフォルディの皮成分からの毒素の混入を低減した結果として安全性プロファイルの改善を示す。毒素含量の低減は、定量的又はほぼ定量的な皮の除去を効率的に促進するような方法で、トリプテリジウム・ウィルフォルディの根及び根部を調製することによって達成される。より具体的には、皮を剥ぐのに備えて、ＴｗＨＦの根及び／又は根部を凍結乾燥する。
【００９７】
合計３０８ｇの未乾燥ＴｗＨＦ根材料（９１ｇの中型の根（長さ３ｍｍ〜１０ｍｍ）、１５ｇの小型の根（長さ１．００ｍｍ〜３．００ｍｍ）、２９ｇの根毛（長さ１．００ｍｍ以下）、３０ｇの基部及び１４３ｇの大型の根（長さ１０．００ｍｍ以上））をＰｙｒｅｘトレーに入れ、−２０℃で一晩凍結させた。凍結乾燥器（Labconco）を−５０℃に調整し、一晩温度を均一にした。次いで根材料を凍結乾燥器に入れ、真空を３ミリバール〜１０ミリバールの圧力に設定した。器内の温度を４時間１０℃に上げ、それから更に４時間２５℃に上げた後、最後に一晩３５℃に上げた。得られた凍結乾燥させた根材料を凍結乾燥器から取り出した。
【００９８】
根材料を凍結乾燥することによって、根芯の皮に亀裂が生じた。これは凍結乾燥させた根材料の目視検査によって観察された。皮を除去するために、凍結乾燥させた根材料を平板上で軽く押すことによって圧迫して、又は圧縮器（例えばパスタローラー）において圧延して、根芯から皮を除去した。皮を除去するプロセスによって、皮に起因するものであるベージュ色からピンク色の細かい粉塵／粉末が生じた。１７ｇの乾燥皮剥根材料が得られた。
【００９９】
軽い加圧では、ＴｗＨＦの根及び／又は根部が粉砕されることはなく、これらの材料を任意の残留する粉塵又は粉末から容易に分離することができ、これによって任意の続く根抽出物に見られる皮の毒素を最小限にした。多くの他の機械的操作及び電気機械的操作が、凍結乾燥させた根及び／又は根部から皮を除去するのに適していることが分かっており、当該技術分野において既知のこのような操作が全て本開示で考慮されていることは、当業者にとって明らかであろう。
【０１００】
上述の実施例によって、当該技術分野において知られている、ＴｗＨＦ根部を凍結乾燥する任意の既知の方法が、本明細書に記載される方法における使用に適していることが実証されている。さらに、凍結乾燥プロセスは、ＴｗＨＦ根部を直接取り巻く大気圧を制御することが可能な任意の装置を伴い得る。その上、ほとんどの凍結乾燥法と同様に、初めに凍結させたＴｗＨＦ根部が凍結乾燥プロセスに曝される時間の長さは様々なものであると考えられるが、根部の含水量を許容可能なレベル、例えば２％未満まで低減させるのに
十分な時間であるとされる。
【０１０１】
実施例２−ＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた根を調製する代替方法
上述の考察及びその説明と一致して、ＴｗＨＦの根及び／又は根部を凍結乾燥する代替方法は、根部を載せた加熱棚の使用を伴うものである。凍結乾燥分野の当業者であれば、水が材料の任意の自由表面から離れて位置するのに十分な寸法を有する材料の凍結乾燥には、材料を効率的に凍結乾燥する能力を損なうことなく、凍結乾燥対象の材料（すなわちＴｗＨＦの根及び／又は根部）を比較的穏やかに加熱することによる利点があることを認識するであろう。理論に束縛されることを望むものではないが、穏やかな加熱によって、物質の内部から表面への水の移動が促進され、表面において昇華が起き得る、また起こると考えられる。
【０１０２】
本実施例は、ＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた根を作製するこのような代替方法の１つを記載している。簡潔に述べると、凍結乾燥器（Labconco）の温度を−２０℃に設定し、一晩温度を均一にした。約１０００ｇの未乾燥根材料（長さ約３０ｃｍ及び直径約１ｍｍ〜１０ｍｍ）を容器に入れ、根の温度がおよそ−２０℃になるまで、従来型の冷凍庫（Frigidaire）内で一晩凍結させた。翌日、凍結させた根の入った容器を、凍結乾燥器内の加熱棚上に載せ、凍結乾燥器の圧力を３ミリバール〜１０ミリバールに設定した。加熱棚の温度を一晩１０℃に上昇させ、８時間３５℃に上昇させた後、更に８時間５０℃に上昇させた。凍結乾燥させた根部を凍結乾燥器から取り出した。凍結乾燥させた根部には、乾燥減量（ＬＯＤ）により決定されたように２０％未満の水が含まれていた。
【０１０３】
本実施例で与えられるデータによって、凍結乾燥プロセス中のＴｗＨＦ根部の穏やかな加熱が許容され、それにより凍結乾燥させたＴｗＨＦ根部が作製されることが確認される。ＴｗＨＦ根部を凍結乾燥するこのアプローチは、凍結乾燥プロセス中に穏やかな加熱が適用されない凍結乾燥と比較して、ＴｗＨＦ根部を凍結乾燥するより迅速でかつ同様に効果的な方法を与えると考えられる。
【０１０４】
実施例３．  共処理剤に非極性有機液を用いた、ＴｗＨＦ植物の天然抽出物からの自由流動性固体の調製
本開示に従って皮を剥いだＴｗＨＦ根部は、効率的な徹底した皮剥が、ＴｗＨＦ抽出物に混入され得る皮毒素を最小限に抑えるか又は排除するため、抽出物の調製に望ましい基材となる。改善された皮剥手順を提供することによって毒素の問題に対処することに加えて、本開示は皮剥ＴｗＨＦ根部から調製された抽出物の流動特性を改善するプロセスを提供している。本実施例は、共処理剤に非極性有機液（例えばヘキサン）を用いて、ＴｗＨＦ植物の抽出物から自由流動性固体を作製する方法を記載している。
【０１０５】
簡潔に述べると、中国のＴｗＨＦ植物（すなわち中国で生育させたＴｗＨＦ植物）由来の皮剥根から得られた１０ｇの天然抽出物を２５０ｍＬ容のビーカー内において１００ｍＬのヘキサン（Fisher、試薬用）と混ぜ合わせた。ステンレス鋼製のスパチュラを用いて、抽出物を細かく砕いた。次いでヘキサン／抽出物混合物を室温で３０分間、超音波処理した。それからヘキサン／抽出物混合物をブフナー漏斗に入れ、濾過して、１００ｍＬのヘキサンで洗浄したところ、ヘキサン洗浄液通過分を含む濾液（色は黄色／橙色であった）と、ヘキサン／抽出物混合物中に固体を含む残余分（色は褐色／赤色であった）とが得られた。ヘキサン／抽出物混合物を、残余分が乾燥状態になるまで濾過した。次いで無色の濾液が観察されるまで、１００ｍＬのヘキサンでの残余分の洗浄を繰り返した。残余分を真空オーブン（１００ミリバール、４０℃）において一晩乾燥させ、残余分から全ての残留ヘキサンを除去した。乾燥させた残余分は自由流動性固体の形態であり、収量は６.７ｇであった。
【０１０６】
この方法の工業的な量への拡張性を評価するために、プロセスをより大量の天然抽出物にも適用した。中国のＴｗＨＦ植物の皮剥根から得られた５０ｇのエタノール抽出物を５００ｍＬ容のビーカー内において２５０ｍＬのヘキサンと混ぜ合わせた。エタノール抽出物等のＴｗＨＦの単純抽出物は、取り扱いが難しい、粘性で、ほとんどがタール状の非晶質塊である。ステンレス鋼製のスパチュラを用いて、抽出物を細かく砕いた。次いでヘキサン／抽出物混合物を室温で３０分間撹拌した。それからヘキサン／抽出物混合物をブフナー漏斗に入れ、濾過して、１００ｍＬのヘキサンで洗浄したところ、流したヘキサン洗浄水を含む濾液（色は黄色／橙色であった）と、ヘキサン／抽出物混合物中に固体を含む残余分（色は褐色／赤色であった）とが得られた。ヘキサン／抽出物混合物を、残余分が乾燥状態になるまで濾過した。次いで無色の濾液が観察されるまで、１００ｍＬのヘキサンでの残余分の洗浄を繰り返した。残余分を真空オーブン（CascadeTek、１００ミリバール）において室温で一晩乾燥させ、残余分から全ての残留ヘキサンを除去した。乾燥させた残余分は自由流動性固体の形態であり、収量は３５.５ｇであった。その結果から、本方法を工業的に有用な量まで拡張することができることが確認された。
【０１０７】
これらの結果は、ヘキサン等の非極性有機液に曝すことによって処理されたＴｗＨＦ抽出物によって、カプセル、錠剤、ゲル、クリーム等のような形態を含むが、それらに限定されない、栄養補助又は治療に適した形態の抽出物を配合するのに扱い易い自由流動性固体であるＴｗＨＦ抽出物が得られることを示していた。任意のＣ４〜Ｃ１０の直鎖又は分岐鎖のアルカン又はアルケンが、自由流動性の抽出物固体を得るためにＴｗＨＦ抽出物を処理するのに適していると予測される。
【０１０８】
実施例４．  共処理剤に別の非極性有機液を用いた、ＴｗＨＦ植物の天然抽出物からの自由流動性固体の調製
任意のＣ４〜Ｃ１０の直鎖又は分岐鎖のアルカン又はアルケンが、自由流動性固体形態のＴｗＨＦ抽出物を作製するのに有用であるという実施例３で言及された予測と一致して、本実施例は、共処理剤に非極性有機液（例えばヘプタン）を用いて、ＴｗＨＦ植物の抽出物から自由流動性固体を作製する方法を記載している。
【０１０９】
中国のＴｗＨＦ植物の根由来の１０ｇの天然抽出物を、２５０ｍＬ容のビーカー内において１００ｍＬのヘプタン（Fisher、試薬用）と混ぜ合わせた。ステンレス鋼製のスパチュラを用いて、抽出物を細かく砕いた。次いで抽出物が溶解されるまで、ヘプタン／抽出物混合物を室温で約２０〜３０分間撹拌した。それからヘプタン／抽出物混合物をブフナー漏斗に入れ、濾過して、１００ｍＬのヘプタンで洗浄したところ、流したヘプタン洗浄水を含む濾液（色は黄色／淡橙色であった）と、ヘプタン／抽出物混合物中に固体を含む残余分とが得られた。残余分が乾燥状態になるまで、ヘプタン／抽出物混合物を濾過した。次いで無色の濾液が観察されるまで、１００ｍＬのヘプタンでの残余分の洗浄を繰り返した。残余分を真空オーブン（１００ミリバール、５０℃）において一晩乾燥させ、残余分から全ての残留ヘプタンを除去した。乾燥させた残余分は自由流動性固体の形態であり、収量は６.４ｇであった。
【０１１０】
次に本実験を拡張させ、繰り返した。中国のＴｗＨＦ植物の皮剥根から得られた天然抽出物（５０ｇ）を、５００ｍＬ容のビーカー内において３００ｍＬのヘプタンと混ぜ合わせた。ステンレス鋼製のスパチュラを用いて、抽出物を細かく砕いた。次いで抽出物が溶解されるまで、ヘプタン／抽出物混合物を室温で約２０〜３０分間撹拌した。それからヘプタン／抽出物混合物をブフナー漏斗に入れ、濾過して、１００ｍＬのヘプタンで洗浄したところ、流したヘプタン洗浄水を含む濾液（色は黄色／淡橙色であった）と、ヘプタン／抽出物混合物中に固体を含む残余分とが得られた。残余分が乾燥状態になるまで、ヘプタン／抽出物混合物を濾過した。次いで無色の濾液が観察されるまで、１００ｍＬのヘプタンでの残余分の洗浄を繰り返した。残余分を真空オーブン（CascadeTek、１００ミリバ
ール、５０℃）において一晩乾燥させ、残余分から全ての残留ヘプタンを除去した。乾燥させた残余分は自由流動性固体の形態であり、収量は３０.０ｇであった。これにより、本方法が工業的に有用な量に適していることが確認された。
【０１１１】
ヘキサン（実施例３）又はヘプタン（実施例４）のいずれかで処理されたＴｗＨＦ抽出物の自由流動性によって、ＴｗＨＦ抽出物をＣ４〜Ｃ１０の直鎖又は分岐鎖のアルカン等の非極性有機液に接触させることが、栄養補助食品又は治療薬へと配合し易い自由流動性固体形態の抽出物をもたらすことが確認される。
【０１１２】
実施例５．  共処理剤にヘプタンを用いて、ＴｗＨＦ植物の根のエタノール抽出物から自由流動性固体を作製する代替方法
本実施例は、ＴｗＨＦ植物のエタノール抽出物から自由流動性固体を作製する代替方法を記載している。ＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根を摩砕した後、根の体積に対して８体積のエタノールと混ぜ合わせて、還流しながら（７８℃）６時間撹拌した。次いでエタノール抽出物を濾過して、第１の濾液を作製し、保持タンクに移した。それから、摩砕した皮剥根を第２のエタノール抽出において更に８体積のエタノールと混ぜ合わせて、還流しながら（７８℃）６時間撹拌した。第２のエタノール抽出物を濾過して、第２の濾液を作製した。第１の濾液と第２の濾液とを混ぜ合わせた後、室温で真空下において濃縮して、濃縮濾液混合物を作製した。得られた濃縮濾液混合物は、元の根の質量に比べておよそ０．９体積であった。
【０１１３】
次いで濃縮濾液混合物を、元の根の体積に対して１．２体積の酢酸エチルと混ぜ合わせて、真空下において濃縮して、エタノールを蒸留により除去した。溶媒交換により、ＮＭＲにより決定されるエタノール濃度が１５重量％未満に低減されるまで、このプロセスを繰り返し、酢酸エチル混合物を得た。酢酸エチル混合物を、元の根の体積に対して３．３体積のヘプタンと混ぜ合わせて、ヘプタン混合物を作製し、該混合物を真空下において濃縮して、酢酸エチルを蒸留により除去した。溶媒交換により、ＮＭＲにより決定される酢酸エチル濃度が検出不能なレベルに低減されるまで、このプロセスを繰り返した。次いで、ヘプタン混合物を濾過して、固体を回収した。通過分が無色になるまで、固体をヘプタンで洗浄した。それから、洗浄固体をトレー式乾燥機内において約４０℃で約８〜１２時間乾燥させた。
【０１１４】
乾燥材料は自由流動性固体であった。本実施例によって、ＴｗＨＦ植物の抽出物の直鎖Ｃ４〜Ｃ１０アルカン、すなわちヘプタンによる処理が、治療用配合物又は栄養配合物に適した自由流動性固体をもたらすことが確認される。その上、本実施例によって、ＴｗＨＦ抽出物を非極性有機液に曝して、自由流動性固体の形態の抽出物を作製する代替方法が存在することが確認される。
【０１１５】
実施例６．  共処理剤にヘプタンを用いた、ＴｗＨＦ植物の根のエタノール抽出物からの自由流動性固体の大規模調製
実施例５に記載されたプロセスを、およそ１００ｋｇ（ｎ＝３）、２５０．４ｋｇ（ｎ＝２）、２５０．２ｋｇ（ｎ＝３）、２１１．２ｋｇ（ｎ＝１）及び２８６．６ｋｇ（ｎ＝１）の量の中国のＴｗＨＦ植物の皮剥根部を用いて複数回繰り返し、自由流動性固体を作製した。出発根材料及び得られる自由流動性固体材料をＨＰＬＣにより分析して、抽出物の成分を分画化するとともに、様々な試験サンプルにおけるトリプトリド及びトリプジオリドの濃度を決定した。実験結果を表１に示す。
【０１１６】
【表１】
2014516338.tif 000002
【０１１７】
さらに実施例６に記載される実験を、米国で数世代にわたって栽培したＴｗＨＦ植物の
皮剥根部を用いて数回繰り返して、自由流動性固体を作製した。出発根材料及び得られる自由流動性固体材料をＨＰＬＣにより分析して、抽出物の成分を分画化するとともに、様々な試験サンプルにおけるトリプトリド、トリプジオリド及びセラストロールの濃度を決定した。実験結果を表２に示す。
【０１１８】
【表２】
2014516338.tif 000003
【０１１９】
別の実験では、実施例５に記載されたプロセスを、およそ２５０ｋｇの量の中国のＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根部を用いて繰り返して、自由流動性固体を作製した。得られた自由流動性固体材料を、ＨＰＬＣにより分析して、抽出物の成分を分画化するとともに、自由流動性固体におけるトリプトリド及びトリプジオリドの複合濃度（Ｔ＋Ｔｄ）
と、セラストロールの濃度とを決定した。結果は、自由流動性固体には、自由流動性固体１ｍｇ当たり３．７６μｇのトリプトリド及びトリプジオリド（Ｔ＋Ｔｄ）と、自由流動性固体１ｍｇ当たり２．５７μｇのセラストロールとが含まれており、１．４６という（Ｔ＋Ｔｄ）／セラストロール比が得られることを示していた。
【０１２０】
更に別の実験では、ＴｗＨＦの様々な抽出物におけるトリプトリド及びトリプジオリドの濃度も分析した。結果を表３に示す。
【０１２１】
【表３】
2014516338.tif 000004
【０１２２】
表１〜表３によって、自由流動性固体には、試験未乾燥根サンプルと比較して濃縮されたトリプトリド及びトリプジオリドが含まれることが明らかになる。ＴｗＨＦの天然抽出物をヘプタンで処理することにより作製される自由流動性固体に存在するトリプトリド及びトリプジオリドの濃縮レベルが、従来方法により処理されたＴｗＨＦの抽出物と比較してより低投与量の自由流動性固体を、トリプトリド及び／又はトリプジオリドによる治療を必要とする被験体に投与することを可能にする。
【０１２３】
加えて、本実施例のデータによって、皮を除去する前に凍結乾燥した根部から得られた抽出物におけるセラストロール含量が低いことが実証される。このため、皮を除去する前のＴｗＨＦ根部の凍結乾燥は、濃縮レベルの生物活性物質（例えばトリプトリド及びトリプジオリド）を含むだけでなく、皮を剥ぐ前に凍結乾燥しなかった根部の処理ＴｗＨＦ抽出物の毒性と比較して毒性（例えばセラストロール含量）が低下した抽出物の調製を可能にする。
【０１２４】
実施例７．  共処理剤に様々な配合添加剤を用いた、ＴｗＨＦ植物の天然抽出物からの自由流動性固体の調製
本実施例は、マルトデキストリン、Ａｅｒｏｓｉｌ（商標）、コーンスターチ、微結晶性セルロース（ＭＣＣ）、及びＮｅｕｓｉｌｉｎ（メタケイ酸アルミン酸マグネシウム）を含む様々な配合添加剤を用いてＴｗＨＦ植物の天然抽出物を処理して、自由流動性固体であり、そのため栄養補助食品及び治療薬の形成における更なる取り扱いがし易いＴｗＨＦ抽出物を得ることを記載している。
【０１２５】
中国のＴｗＨＦ植物の根部の７つの抽出物サンプル（それぞれ１ｇ）を、個々に７つの
２５０ｍＬ容のガラスビーカー内で１００ｍＬのエタノールと混ぜ合わせた。抽出物が溶解するまで、抽出物／エタノール混合物を、ステンレス鋼のスパチュラを用いて手で混合した。次いで、マルトデキストリン（５ｇ）、Ａｅｒｏｓｉｌ（商標）（０．２ｇ）、コーンスターチ（５ｇ）、ＭＣＣ（５ｇ）、ＭＣＣ（１０ｇ）、Ｎｅｕｓｉｌｉｎ（５ｇ）又はＮｅｕｓｉｌｉｎ（１０ｇ）を別々の抽出物／エタノール混合物に添加し、添加剤が抽出物／エタノール混合物内に均一に分散するまでステンレス鋼のスパチュラを用いて手で混合した。それから、添加剤／抽出物／エタノール混合物を耐熱性ガラストレーに注ぎ、均一な層へと広げ、真空オーブン（CascadeTek）において５０℃、０．１５５ａｔｍで一晩乾燥させて、添加剤／抽出物／エタノール混合物からエタノールを除去した。各種実験結果を表４に示す。
【０１２６】
【表４】
2014516338.tif 000005
【０１２７】
結果は、微結晶性セルロース（ＭＣＣ）が、非粉状の流動性固体の形態のＴｗＨＦ抽出物を作製するという点で任意の他の試験添加剤よりも良好に作用することを示していた。他の添加剤が、自由流動性固体形態のＴｗＨＦ抽出物を調製する際の使用に適していると証明されることが予測されるが、本明細書に記載される更なる研究では、ＭＣＣを用いて自由流動性固体を作製することに取り組んだ。ＭＣＣで処理された抽出物の流動性に基づ
き、ＭＣＣによる抽出物の処理を、実施例４及び実施例５に記載される工業規模の実験と類似の方法で拡張し、得られた自由流動性固体におけるトリプトリド及びトリプジオリドの濃度を分析した。結果を表５に示す。
【０１２８】
【表５】
2014516338.tif 000006
【０１２９】
結果は、ＴｗＨＦの抽出物をＭＣＣで処理することにより、高レベルのトリプジオリド及びトリプトリドを含む自由流動性固体が作製されることを示していた。ＴｗＨＦの天然抽出物をＭＣＣで処理することにより作製された自由流動性固体に存在する高レベルのトリプトリド及びトリプジオリドは、より正確に配合されたより低投与量の自由流動性固体を、トリプトリド及び／又はトリプジオリドによる治療を必要とする被験体に投与することを可能にする。他の添加剤も、ＴｗＨＦ抽出物に見られる所望のレベルの生物活性化合物、例えばトリプトリド及びトリプジオリドを示す自由流動性固体形態のＴｗＨＦ抽出物をもたらすことが予測される。
【０１３０】
実施例８．  共処理剤に微結晶性セルロースを用いて、ＴｗＨＦ植物のエタノール抽出物から自由流動性固体を作製する代替方法
ＴｗＨＦ植物のエタノール抽出物をＭＣＣ等の添加剤に曝すことにより、自由流動性固体形態のＴｗＨＦ抽出物を作製する代替方法が本実施例に記載されている。ＴｗＨＦ植物の凍結乾燥させた皮剥根部を磨砕した後、根部の質量（およそ５００ｇ）に対して８体積のエタノール（およそ４Ｌ）と混ぜ合わせて、還流しながら（７８℃）６時間撹拌した。次いでエタノール抽出物を濾過して、第１の濾液を作製して、保持タンクへと移した。それから、磨砕した皮剥根部を第２のエタノール抽出において更に８体積のエタノールと混ぜ合わせて、還流しながら（７８℃）６時間撹拌した。第２のエタノール抽出物を濾過して、第２の濾液を作製した。第１の濾液と第２の濾液とを混ぜ合わせた後、真空下で濃縮して、濃縮濾液を作製した。得られた濃縮濾液は元の根の体積に対しておよそ０．９体積であった。
【０１３１】
次いで濃縮濾液を、元の根の質量に対して１．２体積の酢酸エチルと混ぜ合わせて、真空下において５０℃で濃縮して、エタノールを蒸留により除去した。溶媒交換により、ＮＭＲにより決定されるエタノール濃度が１５重量％以下に低減されるまで、このプロセスを繰り返し、酢酸エチル混合物を得た。それから、酢酸エチル混合物を、（酢酸エチル混合物における全固形分に対して）適切な量の添加剤と混ぜ合わせて、十分に混合した。その後、酢酸エチル／添加剤混合物における乾燥固形分がおよそ８０％に達するまで、酢酸エチル／添加剤混合物を、５５℃を超えない温度で高真空下において濃縮した。次に、濃縮混合物を、真空乾燥機内で５５℃を超えない温度で高真空下において乾燥し、濃縮混合物から酢酸エチルを除去した。乾燥プロセスが終了したら、乾燥固体は自由流動性固体の形態であった。
【０１３２】
本実験を、配合添加剤として５×コーンスターチ又は１０×コーンスターチ、ＭＣＣ、マルトデキストリン、及びＮｅｕｓｉｌｉｎを用いて繰り返し、様々なサンプルにおけるトリプトリド及びトリプジオリドの濃度を決定するために、得られた固体を分析した。混合処理添加剤としてコーンスターチを含む２つのサンプル（１つは５×サンプル及び１つは１０×サンプル）は、固体を乾燥する前にヘプタン洗浄を行い、これらのサンプルの流動性を改善した。分析結果を表６に示す。
【０１３３】
【表６】
2014516338.tif 000007
【０１３４】
さらに、抽出物をＭＣＣで処理することにより、高レベルのトリプトリド及びトリプジオリドを含む非粉状の自由流動性固体が作製されるが、幾つかの他の混合処理助剤によっても有用な流動性の固体形態のＴｗＨＦ抽出物が得られることが観察された。したがって、流動性固体形態のＴｗＨＦの根抽出物は、ＴｗＨＦ抽出物、例えばエタノール抽出物を添加剤に曝した後、任意で流体交換を行い、最後に材料を乾燥することによって得られることが予測される。
【０１３５】
実施例９−医薬組成物
本明細書に開示される方法のいずれかに従って調製される自由流動性固体形態のＴｗＨＦ抽出物は、医薬配合物に適している。
【０１３６】
医薬配合物は、１２％という自由流動性固体の濃度、４：１というＡｖｉｃｅｌ  ＰＨ
２００とＬａｃｔｏｓｅ  １４ＳＤとの比率、及び５％というタルク濃度で調製された
。１８ｇの自由流動性固体を医薬組成物又は医薬配合物に使用した。含量均一性試験のブレンドから上部／中部／底部のサンプルを採取した。得られたブレンドは均一であった。
【０１３７】
バッチを自動カプセル充填機へと十分に流した。特定のカプセル重量に達したら、運転中、カプセルの重量を相対的に一定に保った。２００個を超えるカプセルを、各カプセルに１６６．６７ｍｇのブレンドという目的充填量で、また２０ｍｇの自由流動性固体という目的用量で作製した。平均カプセル充填量は総重量２２８．１ｍｇであった。２号のカプセルの平均の空のカプセル重量は５９．０ｍｇであり、ブレンドの平均充填量は各カプセルにつき１６９．１ｍｇであった。これらの結果によって、本明細書に開示されるＴｗＨＦの自由流動性固体抽出物は、従来の技術及び従来の方法を用いて医薬配合し易いことが確認される。当業者であれば、カプセル、及び治療薬を包装する他の形態が自由流動性固体形態のＴｗＨＦ抽出物を包装するのに適していることを認識し、また当業者であれば、様々な医薬包装形態が栄養補助食品及び／又は治療薬として自由流動性固体形態のＴｗＨＦ抽出物を包装するのに適していることを更に理解するであろう。
【０１３８】
本明細書に開示される実施形態を考慮して、本発明の実施において多くの変更形態及び変形形態が当業者に想到されることが予測される。結果として、本発明の範囲に課されるとされる限定は、添付の特許請求の範囲に見られるものだけである。
【０１３９】
本明細書に言及される及び／又は出願データシートに挙げられる、米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願及び非特許刊行物は全て、引用することによりその全体が本明細書の一部をなすものとする。
【０１４０】
上述のことから、本発明の特定の実施形態を例示目的で本明細書に記載しているが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更を行うことができることが理解されるであろう。
【国際調査報告】
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