(57)【要約】本発明は、免疫抑制剤として有益であり、炎症状態、アレルギー障害、および免疫障害を治療し、かつ予防する特定の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグに関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2014532656.tif 000027
の化合物
またはその医薬的に許容可能な塩からなる群から選択される化合物。
【請求項２】
医薬的に許容可能なキャリアーおよび請求項１に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項３】
医薬的に許容可能なキャリアーおよび請求項１に記載の化合物を含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
免疫抑制剤、抗炎症剤、ステロイド、非ステロイド性抗炎症剤、抗ヒスタミン剤、鎮痛剤、およびそれらの適切な混合物からなる群から選択される１つ以上の追加の治療剤をさらに含む、請求項２または３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
免疫細胞の活性化を阻害する方法であって、請求項１に記載の化合物を免疫細胞に投与することを含む、方法。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物を免疫細胞に投与することを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
細胞のサイトカイン産生を阻害する方法であって、請求項１に記載の化合物を前記細胞に投与することを含む、方法。
【請求項８】
請求項２６に記載の化合物を前記細胞に投与することを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記サイトカインが、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦα、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
細胞のイオンチャネルを調節する方法であって、前記イオンチャネルは免疫細胞の活性化に関与しており、請求項１に記載の化合物を前記細胞に投与することを含む、方法。
【請求項１１】
請求項２６に記載の化合物を前記細胞に投与することを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記イオンチャネルが、Ｃａ２＋放出活性型Ｃａ２＋チャネル（ＣＲＡＣ）である、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
抗原に応答するＴ細胞および／またはＢ細胞増殖を阻害する方法であって、請求項１に記載の化合物をＴ細胞および／またはＢ細胞に投与することを含む、方法。
【請求項１４】
請求項１に記載の化合物をＴ細胞および／またはＢ細胞に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
その必要のある対象において免疫障害を治療または予防する方法であって、請求項１に記載の化合物の有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１６】
請求項１に記載の化合物の有効量を前記対象に投与することを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記障害が、多発性硬化症、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、自己免疫性ブドウ膜炎、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血、自己免疫性血小板減少症、側頭動脈炎、抗リン脂質抗体症候群、ウェゲナー肉芽腫症などの血管炎、ベーチェット病、乾癬、疱疹状皮膚炎、尋常性天疱瘡、白斑、クローン病、潰瘍性大腸炎、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎、１型糖尿病もしくは免疫介在型糖尿病、グレーヴス病、橋本甲状腺炎、自己免疫性卵巣炎および精巣炎、副腎の免疫障害、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、強直性脊椎炎、ならびにシェーグレン症候群からなる群から選択される、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
その必要のある対象において炎症状態を治療または予防する方法であって、請求項１に記載の化合物の有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１９】
請求項１に記載の化合物の有効量を前記対象に投与することを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記障害が、移植拒絶反応、皮膚移植片拒絶反応、関節炎、関節リウマチ、変形性関節症および骨吸収の増加に関連する骨疾患と、炎症性腸疾患、回腸炎、潰瘍性大腸炎、バレット症候群、クローン病と、喘息、成人呼吸促迫症候群、慢性閉塞性気道疾患と角膜ジストロフィー、トラコーマ、オンコセルカ症、ブドウ膜炎、交感性眼炎、眼内炎と、歯肉炎、歯周炎と、結核、ハンセン病と、尿毒性合併症、糸球体腎炎、ネフローゼと、硬化性皮膚炎、乾癬、湿疹と、神経系の慢性脱髄疾患、多発性硬化症、ＡＩＤＳ−関連神経変性、アルツハイマー病、感染性髄膜炎、脳脊髄炎，パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、ウイルス性もしくは自己免疫性脳炎と、自己免疫性障害、免疫複合体血管炎、全身性ループスおよびエリテマトーデスと、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）と、心筋症、虚血性心疾患高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化、子癇前症と、慢性肝不全、脳および脊髄外傷、ならびに癌とからなる群から選択される、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
その必要のある対象の免疫系を抑制する方法であって、請求項１に記載の化合物の有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２２】
請求項１に記載の化合物の有効量を前記対象に投与することを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
その必要のある対象においてアレルギー障害を治療または予防する方法であって、請求項１に記載の化合物の有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２４】
請求項１に記載の化合物の有効量を前記対象に投与することを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記障害が、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、鼻副鼻腔炎、慢性中耳炎、再発性中耳炎、薬物反応、虫刺されによる反応、ラッテクス反応、結膜炎、蕁麻疹、アナフィラキシー反応、アナフィラキシー様反応、アトピー性皮膚炎、喘息、または食物アレルギーである、請求項２３または２４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２０１１年１０月２８日に出願した米国仮特許出願第６１／５５２，６６２号の利益を主張する。
【０００２】
技術分野
本発明は、免疫抑制のため、または炎症状態および免疫障害を治療または予防するために使用し得る生物学的に活性な化学化合物に関する。
【背景技術】
【０００３】
炎症とは、侵入する病原体から哺乳類を保護する機構である。しかしながら、一過性の炎症は、感染症から哺乳類を保護するために必要であるが、制御できない炎症は、組織を損傷させ、多くの疾患の根底をなす問題となっている。概して炎症は、抗原がＴ細胞抗原受容体に対して結合することにより惹起する。抗原がＴ細胞に結合することにより、Ｃａ２＋放出活性型Ｃａ２＋チャネル（ＣＲＡＣ）などのカルシウムイオンチャネルを介して細胞内にカルシウム流入が惹起される。また、カルシウムイオン流入は、これら細胞の活性化を引き起こすシグナリングカスケードおよびサイトカイン産生により特徴付けられる炎症反応を惹起する。
【０００４】
インターロイキン２（ＩＬ−２）は、細胞内のカルシウムイオン流入に応答してＴ細胞により分泌されるサイトカインである。ＩＬ−２は、免疫系の多くの細胞の免疫作用を調節する。たとえば、ＩＬ−２は、細胞周期のＧ１期からＳ基への進行を促進する、Ｔ細胞増殖に必要なＴ細胞の有糸分裂促進因子であり、ＮＫ細胞の増殖を刺激し、かつ増殖因子としてＢ細胞へ作用して抗体合成を刺激する。
【０００５】
ＩＬ−２は、免疫反応に役立つものであるが、様々な問題を引き起こし得る。ＩＬ−２は、血液脳関門および脳の血管内皮を損傷する。これらの作用は、たとえば、疲労、失見当識およびうつ病といった、ＩＬ−２療法の下で観察される精神神経系の副作用の根底となる原因であり得る。ＩＬ−２はまた、ニューロンの電気生理学的行動を変動させる。
【０００６】
Ｔ細胞およびＢ細胞に対する作用のため、ＩＬ−２は、免疫反応の主要な中心的調節因子であり、炎症反応、腫瘍サーベイランス、および造血発生で役割を果たす。また、ＩＬ−２は、ＩＬ−１、ＴＮＦα、およびＴＮＦ−β分泌を誘導し、かつ末梢白血球中のＩＦＮ−γの合成を刺激するといった、他のサイトカインの産生に影響を与える。
【０００７】
ＩＬ−２を産生できないＴ細胞は不活性（アレルギー性）となる。このことは、将来受ける可能性のあるアレルギー性刺激に対しＴ細胞を潜在的に不活性にさせる。結果として、ＩＬ−２産生を阻害する薬剤は、免疫抑制のため、または、炎症および免疫障害を治療もしくは予防するために使用できる。この手法は、シクロスポリン、ＦＫ５０６、およびＲＳ６１４４３などの免疫抑制薬剤で臨床的に有効であった。この概念実証にも関わらず、ＩＬ−２産生を阻害する薬剤は理想から遠い状態のままである。他の問題と共に、効力の限定ならびに（用量依存型の腎毒性および高血圧を含む）望ましくない副作用が、これらの使用を妨げている。
【０００８】
また、ＩＬ−２以外の炎症誘発性サイトカインの過剰産生は、多くの自己免疫疾患に関わるとされてきた。たとえば、インターロイキン５（ＩＬ−５）は、好酸球の産生を増加させるサイトカインであり、喘息を増悪させるサイトカインである。ＩＬ−５の過剰産生は、アレルギー性炎症の特徴である、喘息性の気管支粘膜内の好酸球の蓄積に関連する。したがって、ＩＬ−５の産生を阻害する新規薬剤を開発することは、好酸球の蓄積を含む喘息および炎症障害を伴う患者に有益である。
【０００９】
インターロイキン４（ＩＬ−４）およびインターロイキン１３（ＩＬ−１３）は、炎症性腸疾患および喘息に見られる平滑筋の過収縮（ｈｙｐｅｒｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｉｔｙ）の介在物質として同定されてきた。したがって、ＩＬ−４およびＩＬ−１３産生を阻害する新規薬剤を開発することは、喘息および炎症性腸疾患を伴う患者に有益である。
【００１０】
顆粒球単球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）は、顆粒球およびマクロファージ系統の集団の成熟に関する調節因子であり、炎症疾患および自己免疫疾患のカギとなる因子とされてきた。抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体遮断により、自己免疫疾患を回復させることが示された。したがって、ＧＭ−ＣＳＦの産生を阻害する新規薬剤を開発することは、炎症および自己免疫疾患を伴う患者に有益である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本開示は、一実施態様において、免疫抑制、または炎症障害、アレルギー障害、および自己免疫障害の治療もしくは予防に現在使用される薬剤の１つ以上の欠点を克服する新規薬剤の継続的必要性に対処する。このような薬剤の望ましい特性は、現在治療が不可能である、もしくは治療が不十分である疾患または障害に対しての効力、新規作用機構、経口生物学的利用能、および／または低減された副作用を含む。したがって、ＣＲＡＣイオンチャネルの活性を阻害し、かつＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、およびＩＦＮ−γの産生を阻害する化合物を本明細書に開示する。これらの化合物は、特に、免疫抑制ならびに／または炎症状態および免疫障害を治療もしくは予防するために有益である。本明細書に記載される化合物の特定の属は、（たとえば、変調したＩＣＲＡＣ電流により測定される）ＣＲＡＣイオンチャネルおよびＩＬ−２を含むサイトカインの阻害、オフターゲット効果の低発生率、ならびに好ましい毒性プロファイルを組み合わせる点において特に有利であると考えられる。
【００１２】
本発明は、以下の式
【化１】
2014532656.tif 000002
の化合物から構成される。
【００１３】
本明細書に例示される化合物は、総じて異なるまたは類似する分類の化合物においてこれまで利用できないとされてきた望ましい特性を特に有する。これらの特性は、以下の、意図される投与方法において望ましくない遺伝毒性断片をもたらす生体内の化合物の分解に対して抵抗性を与えるより高い化学的安定性、生体内でのより長い半減期、および改善された代謝安定性、特にＣＹＰ誘導を低減するもしくは除去する代謝安定性の内の１つ以上を含み、このことにより、薬剤の消失は時間もしくは濃度に依存し、さもなければ薬剤効力が低減する。
【００１４】
他の実施態様において、医薬的に許容可能なキャリアーおよび本発明の化合物を含む医薬組成物が開示される。本組成物は、たとえば免疫抑制剤、抗炎症剤、およびそれらの適切な混合物といった１つ以上の追加的な治療剤をさらに含んでもよい。他の追加的な治療剤は、ステロイド性抗炎症剤、非ステロイド性抗炎症剤、抗ヒスタミン剤、鎮痛剤、およびそれらの適切な混合物を含む。
【００１５】
本明細書に開示される化合物、またはその医薬的に許容な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグは、免疫細胞（たとえば、Ｔ細胞および／またはＢ細胞）の活性化（たとえば、抗原に応答した活性化）の阻害に特に有益である。特に、これらの化合物またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグは、免疫細胞の活性化を調節する特定のサイトカインの産生を阻害できる。たとえば、本発明の化合物またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグは、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＩＦＮ−γ、またはそれらの組み合わせの産生を阻害できる。さらに、本発明の化合物またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグは、ＣＲＡＣイオンチャネルなどの免疫細胞の活性化に関与する１つ以上のイオンチャネルの活性を調節できる。
【００１６】
本発明の化合物またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグは、免疫抑制、または炎症状態、アレルギー障害、および免疫障害の治療もしくは予防に特に有益である。
【００１７】
また、本発明は、本発明の化合物またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグ、ならびに医薬的に許容可能なキャリアーまたはビヒクルを含む医薬組成物を包有する。本組成物は、追加的な薬剤をさらに含んでもよい。これらの組成物は、免疫抑制ならびに、炎症状態、アレルギー障害、および免疫障害の治療または予防に有益である。
【００１８】
本発明は、炎症状態、アレルギー障害、および免疫障害を治療または予防する方法であって、本発明の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグの化合物の有効量、または本発明の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレートもしくはプロドラッグを含む医薬組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法をさらに包有する。また、これらの方法は、本発明の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグを備えた組成物と別に、またはこの組成物と組み合わせて追加的な薬剤を対象に投与することを含んでもよい。
【００１９】
本発明は、対象の免疫系を抑制する方法であって、本発明の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグの有効量、または本発明の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグを含む医薬組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法をさらに包有する。また、これらの方法は、本発明の化合物またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグを備えた組成物と別に、またはこの組成物と組み合わせて追加的な薬剤を対象に投与することを含んでもよい。
【００２０】
本発明は、生体内または生体外で、Ｔ細胞および／またはＢ細胞の増殖を阻害することを含む、免疫細胞活性化を阻害する方法であって、本発明の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグの有効量、または本発明の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグを含む医薬組成物の有効量を、この細胞に投与することを含む、方法をさらに包有する。
【００２１】
本発明は、生体内または生体外で、細胞のサイトカイン産生（たとえば、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、および／またはＩＦＮ―γ産生）を阻害する方法であって、本発明の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグの有効量、または本発明の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグを含む医薬組成物の有効量を、細胞に投与することを含む、方法をさらに包有する。
【００２２】
本発明は、生体内または生体外で、イオンチャネル活性（たとえば、ＣＲＡＣ）を調節する方法であって、本発明の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグの有効量、または、本発明の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグを含む医薬組成物の有効量を投与することを含む、方法をさらに包有する。
【００２３】
本発明の全ての方法は、本発明の化合物単独で実施してもよく、または、他の免疫抑制剤、抗炎症剤、アレルギー障害の治療用薬剤、または免疫障害の治療用薬剤などの他の薬剤と組み合わせて実施してもよい。
【００２４】
本発明は、治療に使用することを目的とする表１の化合物をさらに包有する。さらに、本発明は、免疫障害を伴う対象を治療することを目的とする表１に記載の化合物の使用を包有する。本発明は、炎症状態を治療することを目的とする表１の化合物の使用を包有する。本発明は、免疫系を抑制することを目的とする表１の化合物の使用を包有する。本発明は、アレルギー障害を治療することを目的とする表１の化合物の使用をさらに包有する。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本明細書で使用されるように、用語「対象」、「患者」、および「動物」は、互換的に使用され、限定されるものではないが、雌ウシ、サル、ウマ、ヒツジ、ブタ、ニワトリ、シチメンチョウ、ウズラ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、またはヒトを含む。好ましい対象、患者、または動物はヒトである。
【００２６】
本発明の化合物は、本明細書で化学構造および／または化学名により定義される。化合物が、化学構造および化学名の両方で呼ばれる際、ならびに化学構造および化学名が異なる際、化学構造が化合物の同一性を決定する。
【００２７】
本発明の化合物は、明示的に開示される元素の同位体を含むことができる。たとえば、本発明の化合物上のそれぞれの水素置換基は、１Ｈ、２Ｈ、および３Ｈ同位体から独立して選択される。
【００２８】
本発明により想定される置換基および誘導体の選択ならびに組み合わせは、安定した化合物の形成をもたらすもののみを対象とする。本明細書で使用される用語「安定した」は、製造することが十分に可能である安定性を有し、かつ、本明細書に記載される目的（たとえば対象への治療的または予防的投与）に十分に有益である期間、化合物の完全性を維持する化合物を意味する。概して、このような化合物は、４０℃以下の温度で過度の湿度が存在しない状態で、少なくとも１週間安定である。このような選択および組み合わせは、当業者にとって明らかなものであり、必要以上の実験を行うことなく決定されてもよい。
【００２９】
特に指示のない限り、反応性官能基（限定するものではないが、カルボキシ、ヒドロキシ、およびアミノ部など）を含む本発明の化合物は、それらの保護誘導体をも含む。「保護誘導体」は、反応部位（１つまたは複数）が、１つ以上の保護基で阻害される化合物である。カルボキシ部に適した保護基は、ベンジル、ｔｅｒｔ−ブチルなどを含む。アミノおよびアミノ基に適した保護基は、アセチル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニルなどを含む。ヒドロキシに適した保護基は、ベンジルなどを含む。他の適切な保護基は当業者によく知られており、Ｔ．  Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  １９８１に見いだされる保護基を含み、この文献全体に記載される技術は、参照として本明細書に援用される。
【００３０】
本明細書で使用される用語「本発明の化合物」およびそれと同様の用語は、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグを意味し、かつその保護誘導体をも含む。
【００３１】
特に指示のない限り、本明細書で使用される用語「プロドラッグ」は、生物学的条件（生体内または生体外）下で、加水分解、酸化、または他の反応を行い、本発明の化合物を提供できる化合物の誘導体を意味する。プロドラッグは、生物学的条件下でのこのような反応において活性化するだけでなく、未反応形体で活性を有していてもよい。本発明で考慮されるプロドラッグの例は、限定するものではないが、生物加水分解性（ｂｉｏｈｙｄｒｏｌｙｚａｂｌｅ）アミド、生物加水分解性エステル、生物加水分解性カルバメート、生物加水分解性炭酸塩、生物加水分解性ウレイド、および生物加水分解性リン酸塩の類似体などの生物加水分解性部を含む本発明の化合物の類似体または誘導体を含む。他のプロドラッグの例として、―ＮＯ、―ＮＯ２、―ＯＮＯ、または―ＯＮＯ２部を含む本発明の化合物の誘導体が挙げられる。プロドラッグは、Ｂｕｒｇｅｒ’ｓ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（１９９５）１７２−１７８，９４９−９８２（Ｍａｎｆｒｅｄ  Ｅ．  Ｗｏｌｆｆ  ｅｄ．，  ５ｔｈ  ｅｄ）に記載されるように、概して周知である方法を使用して調製できる。上記文献全体の技術は、参照として本明細書に援用される。
【００３２】
本明細書で使用される用語「医薬的に許容可能な塩」は、本発明の化合物の１つの酸性基および塩基性基から形成される塩である。例示的な塩は、限定するものではないが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカル酸塩（ｇｌｕｃａｒｏｎａｔｅ）、サッカラート、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ―トルエンスルホン酸塩、およびパモ酸塩（すなわち１，１’ ―メチレン―ビス―（２―ヒドロキシ―３―ナフトアート（ｎａｐｈｔｈｏａｔｅ））塩を含む。また、用語「医薬的に許容可能な塩」は、カルボン酸官能基などの酸性官能基および医薬的に許容可能な無機塩基もしくは有機塩基を有する本発明の化合物から調製される塩を意味する。適切な塩基は、限定するものではないが、ナトリウム、カリウム、およびリチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウムおよび亜鉛などの他の金属の水酸化物と、アンモニア、および非置換型もしくはヒドロキシ置換型モノ、ジ、またはトリアルキルアミンなどの有機アミンと、ジシクロへキシルアミンと、トリブチルアミンと、ピリジンと、Ｎ−メチル、Ｎ−エチルアミン、ジエチルアミンと、トリエチルアミンと、モノ‐、ビス‐、トリス‐（２−ヒドロキシエチル）‐アミン、２−ヒドロキシ‐ｔｅｒｔ−ブチルアミン、もしくはトリス−（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどのモノ‐、ビス‐、もしくはトリス−（２−ヒドロキシ‐低級アルキルアミン）と、Ｎ，Ｎ−ジメチル‐Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）‐アミンもしくはトリ―（２−ヒドロキシエチル）アミンなどのＮ，Ｎ，−ジ‐低級アルキル‐Ｎ−（ヒドロキシ低級アルキル）アミン、Ｎ−メチル‐Ｄ−グルカミンと、ならびに、アルギニン、リシンなどのアミノ酸などとを含む。用語「医薬的に許容可能な塩」は、アミノ官能基などの塩基性官能基、および医薬的に許容可能な無機酸または有機酸を有する本発明の化合物から調製される塩をも意味する。適切な酸は、限定するものではないが、硫酸水素、クエン酸、酢酸、シュウ酸、塩酸、臭化水素、ヨウ化水素、硝酸、リン酸、イソニコチン酸、乳酸、サリチル酸、酒石酸、アスコルビン酸、コハク酸、マレイン酸、ベシル酸、フマル酸、グルコン酸、グルクロン酸（ｇｌｕｃａｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、サッカリン酸、ギ酸、安息香酸、グルタミン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびｐ−トルエンスルホン酸を含む。
【００３３】
開示化合物が構造により命名され、または構造により表される際に、本化合物またはその医薬的に許容可能な塩の溶媒和物（たとえば、水和物）も同様に含まれることが理解される。「溶媒和物」は、結晶化の間に、溶媒分子が結晶格子に組み込まれる結晶形体を意味する。溶媒和物は、水、またはエタノール、イソプロパノール、ＤＭＳＯ、酢酸、エタノールアミン、およびＥｔＯＡｃなどの非水性溶媒を含んでもよく、水は、結晶格子に組み込まれる溶媒分子であり、概して「水和物」とされる。水和物は、非共有的な分子間力により結合した化学量論的または非化学量論的量の水を含む。
【００３４】
開示される化合物が構造により命名され、または構造により表される際、その溶媒和物を含む化合物は、結晶形、非結晶形、またはそれらの混合物で存在し得ることが理解される。また、本化合物または溶媒物は、多形（すなわち、異なる結晶形にて起こる性質）で存在してもよい。これらの異なる結晶形は、概して「多形体」として知られている。構造により命名され、または構造により表される際、開示される化合物および溶媒和物（たとえば、水和物）は、そのすべての多形体をも含むことが理解される。本明細書で使用される用語「多形体」は、本発明の化合物の固体の結晶形またはその複合体を意味する。同一の化合物の異なる多形体は、異なる物理学的、化学的、かつ／または分光学的特性を示し得る。異なる物理学的特性は、限定するものではないが、（たとえば、熱または光に対する）安定性、（製剤および生成物の製造に重要な）圧縮性および密度、ならびに（生物学的利用率に影響を与える可能性のある）溶解率を含む。安定性の差異は、化学的反応性（たとえば、ある多形体から構成されている剤形が別の多形体から構成されている際よりも急速に変色するような異なる酸化）または力学的特徴（たとえば、動的に好ましい多形体が熱力学的により安定な多形体に変換するように、保存の際に錠剤が砕ける）またはその両方（たとえば、ある多形体の錠剤は、高湿度でより分解しやすくなる可能性がある）の変化から生じるとすることができる。多形体の異なる物理学的特性は、これら多形体の処理に影響を与えることができる。たとえば粒子の形状またはサイズ分布により、ある多形体は別の多形体よりも溶媒和物を形成しやすく、または別の多形体よりも不純物を除去するため濾過または洗浄することがより困難となり得る。さらに、ある多形体は、特定の条件下で自然に別の多形体に変換してもよい。
【００３５】
開示される化合物が構造により命名され、または構造により表される際に、本化合物のクラスレート（「包摂化合物」）、またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、もしくは多形体をも含むことが理解される。本明細書に記載される「クラスレート」は、補捉されたゲスト分子（たとえば、溶媒または水）を有する空間（たとえばチャネル）を含む結晶格子形体である本発明の化合物またはその塩を意味する。
【００３６】
本明細書で使用される用語「喘息」は、肺疾患、障害、または可逆性気道閉塞、気道の炎症、および様々な刺激に対する気道での反応性の増加により特徴付けられる状態を意味する。
【００３７】
「免疫抑制」は、免疫機能を低下させる免疫系のいずれかの成分の機能障害を意味する。この機能障害は、リンパ球の機能の全血アッセイ、リンパ球増殖の検出、およびＴ細胞表面抗原の発現の評価を含む従来のいずれかの手段により測定してもよい。抗ヒツジ赤血球細胞（ＳＲＢＣ）の一次（ＩｇＭ）抗体反応アッセイ（通常、プラークアッセイを指す）が、ある特定の方法である。この方法および他の方法は、Ｌｕｓｔｅｒ，  Ｍ．Ｉ．，  Ｐｏｒｔｉｅｒ，  Ｃ．，  Ｐａｉｔ，  Ｄ．Ｇ．，  Ｗｈｉｔｅ，  Ｋ．Ｌ．，  Ｊｒ．，  Ｇｅｎｎｉｎｇｓ，  Ｃ．，  Ｍｕｎｓｏｎ，  Ａ．Ｅ．，  ａｎｄ  Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ，  Ｇ．Ｊ．  （１９９２）．  “Ｒｉｓｋ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  Ｉ：  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  Ｐｒｅｄｉｃｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｔｅｓｔｓ．”  Ｆｕｎｄａｍ．  Ａｐｐｌ．  Ｔｏｘｉｃｏｌ．，  １８，  ２００−２１０．  Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ａ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ  ｉｓ  ａｎｏｔｈｅｒ  ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙ  ｕｓｅｆｕｌ  ａｓｓａｙ  （Ｄｅａｎ，  Ｊ．Ｈ．，  Ｈｏｕｓｅ，  Ｒ．Ｖ．，  ａｎｄ  Ｌｕｓｔｅｒ，  Ｍ．Ｉ．  （２００１）．  “Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ：  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ，  ａｎｄ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ，  Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ”  ｉｎ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ：  Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  （Ａ．Ｗ．  Ｈａｙｅｓ，  Ｅｄ．），  ｐｐ．１４１５−１４５０，  Ｔａｙｌｏｒ  ＆  Ｆｒａｎｃｉｓ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）に記載されている。
【００３８】
本発明の化合物を使用して、免疫障害を伴う対象を治療できる。本明細書に記載される用語「免疫障害」または同様の用語は、自己免疫障害を含む、動物の免疫系により引き起こされる疾患、障害、または状態を意味する。免疫障害は、免疫成分を有し、かつ実質的もしく全体的に免疫系が介在する疾患、障害、または状態を含む。自己免疫障害は、動物自身の免疫系が、誤って自身を攻撃し、動物自身の体の細胞、組織、および／または臓器を標的とするものである。たとえば、自己免疫反応は、多発性硬化症では神経系、クローン病では腸を対象とする。全身性エリテマトーデス（ループス）などの他の自己免疫障害では、影響を受ける組織および臓器は、同一の疾患を伴う個体間で様々であろう。ループスを伴うある個体は、皮膚および関節に影響がある可能性があり、別の個体では、皮膚、腎臓、および肺に影響があり得る。最終的に、免疫系による特定の組織への損傷は、１型糖尿病の膵臓のインシュリン産生細胞の破壊と同様に永続的である可能性がある。本発明の化合物および方法を使用して回復させ得る特定の自己免疫障害は、限定するものではないが、神経系の自己免疫障害（たとえば、多発性硬化症、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群などの自己免疫神経障害、および自己免疫性ブドウ膜炎）、血液の自己免疫障害（たとえば、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血、および自己免疫性血小板減少症）、血管の自己免疫障害（たとえば、側頭動脈炎、抗リン脂質抗体症候群、ウェゲナー肉芽腫症などの血管炎、およびベーチェット病）、皮膚の自己免疫障害（たとえば、乾癬、疱疹状皮膚炎、尋常性天疱瘡、および白斑）、胃腸系の自己免疫障害（たとえば、クローン病、潰瘍性大腸炎、原発性胆汁性肝硬変、および自己免疫性肝炎）、内分泌腺の自己免疫障害（たとえば、１型糖尿病または免疫介在性糖尿病、グレーヴス病、橋本甲状腺炎、自己免疫性卵巣炎および精巣炎、ならびに副腎の自己免疫障害）、ならびに（結合組織および筋骨格系疾患を含む）複数の臓器の自己免疫障害（たとえば、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、強直性脊椎炎などの脊椎関節症、およびシェーグレン症候群）を含む。さらに、移植片対宿主病およびアレルギー障害などの他の免疫系介在性疾患も同様に、本明細書の免疫障害の定義に含まれる。多くの免疫障害は炎症により引き起こされるため、免疫障害と考えられる障害と炎症障害との間で一部重複が存在する。本発明の目的として、このように障害が重複するような場合、免疫障害または炎症障害のどちらかを考慮してもよい。本明細書における「免疫障害の治療」は、免疫障害、そのような疾患の症状またはそのような疾患の素因を有する対象に、自己免疫障害、その症状、またはその素因を治癒、軽減、変更、影響、または予防する目的で、本発明の化合物または組成物を投与することを意味する。
【００３９】
本明細書に使用される用語「アレルギー障害」は、通常無害な物質に対するアレルギー反応に関連する疾患、状態、または障害を意味する。これらの物質は環境中に見いだされる（屋内大気汚染物質および空気アレルゲンなど）か、または非環境的（皮膚アレルギーまたは食物アレルギーを引き起こす物質など）であってもよい。アレルゲンは、吸引、経口摂取、皮膚または注射での接触（虫さされによる接触を含む）を含む多くの経路を介して体内に入ることができる。多くのアレルギー障害は、アレルギー性抗体ＩｇＥを産生する素因である、アトピーに関連する。ＩｇＥは、マストＴ細胞を体内のいずれの場所でも感作することができるため、アトピーの個体は、しばしば２つ以上の臓器内で疾患を発現する。本発明の目的として、アレルギー障害は、感作するアレルゲンに再曝露して起こり、今度は炎症性介在物質を放出させる過敏症のいずれかを含む。アレルギー障害は、限定するものではないが、アレルギー性鼻炎（たとえば季節性鼻アレルギー）、副鼻腔炎、鼻副鼻腔炎、慢性もしくは再発性中耳炎、薬物反応、虫刺されによる反応、ラッテクス反応、結膜炎、蕁麻疹、アナフィラキシーおよびアナフィラキシー様反応、アトピー性皮膚炎、喘息、ならびに食物アレルギーを含む。
【００４０】
本発明の化合物を使用して、炎症障害を伴う対象を予防または治療できる。本明細書に使用される「炎症障害」は、体組織の炎症または炎症成分を有することにより特徴付けられる疾患、障害、または状態を意味する。これらは、局所的な炎症反応および全身性の炎症を含む。このような炎症障害の例は、皮膚移植片拒絶反応を含む移植拒絶反応と、関節炎、関節リウマチ、変形性関節症、および骨吸収の増加に関連する骨疾患を含む、関節の慢性炎症障害と、回腸炎、潰瘍性大腸炎、バレット症候群、およびクローン病などの炎症性腸疾患と、喘息、成人呼吸促迫症候群、および慢性閉塞性気道疾患などの炎症性肺疾患と、角膜ジストロフィー、トラコーマ、オンコセルカ症、ブドウ膜炎、交感性眼炎および眼内炎を含む眼の炎症障害と、歯肉炎および歯周炎を含む歯肉の慢性炎症障害と、結核と、ハンセン病と、尿毒性合併症、糸球体腎炎およびネフローゼを含む腎臓の炎症性疾患；硬化性皮膚炎、乾癬および湿疹を含む皮膚の炎症障害；神経系の慢性脱髄疾患、多発性硬化症、ＡＩＤＳ−関連神経変性およびアルツハイマー病、感染性髄膜炎、脳脊髄炎、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、およびウイルス性または自己免疫性脳炎を含む中枢神経系の炎症障害と、自己免疫障害、免疫複合体血管炎、全身性ループスおよびエリテマトーデスと、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）と、および心筋症、虚血性心疾患、高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化などの心臓の炎症障害と、ならびに、子癇前症、慢性肝不全、脳および脊髄外傷、癌を含む顕著な炎症性成分を伴う多様な他の疾患とを含む。また、グラム陽性菌またはグラム陰性菌感染ショック、出血性ショックまたはアナフィラキシーショック、または、たとえば、炎症促進性サイトカインに関連したショックといった、炎症促進性サイトカインに応答する癌化学療法により誘導されるショックにより例示される、身体の全身性の炎症も存在し得る。このようなショックは、たとえば、癌化学療法で使用される化学療法剤により誘導される可能性がある。本明細書中の「炎症障害の治療」は、炎症障害、そのような障害の症状、またはそのような障害の素因を有する対象に、炎症障害、その症状またはその素因を治癒、軽減、変更、影響、または予防する目的で、本発明の化合物または組成物を投与することを意味する。
【００４１】
「有効量」とは、本化合物を対象に投与する際に良好な結果が得られる化合物の量、あるいは生体内または生体外で望ましい活性を有する化合物の量である。炎症障害および自己免疫障害の場合、有益な臨床成績は、疾患もしくは障害に関連する症状の範囲もしくは重症度の低減、および／または治療しないものと比較した対象の寿命延長および／生活の質の向上を含む。また、対象に投与される化合物の正確な量は、対象の疾患または状態の種類および重症度、ならびに一般的な健康状態、年齢、性別、体重、および薬剤への耐性などの対象の特徴に依存する。また、炎症障害または自己免疫障害の程度、重症度および種類あるいは求められる免疫抑制の程度にも依存する。当業者は、これらの要因または他の要因に応じて適切な用量を決定できる。本開示の化合物の有効量は、概して、１日あたり約１ｍｇ／ｍ２〜約１０グラム／ｍ２、および好ましくは１日あたり約１０ｍｇ／ｍ２〜約１グラム／ｍ２の範囲である。
【００４２】
本発明の化合物は、１つ以上のキラル中心および／または二重結合を含んでもよく、したがって、二重結合異性体（すなわち、幾何異性体）、エナンチオマー、またはジアステレオマーなどの構造異性体として存在する。本発明により、本明細書に記載される化合物は、本発明の化合物を含み、対応する化合物の全てのエナンチオマーおよびステレオアイソマーを包有し、すなわち、立体異性的に純粋な形態（たとえば、幾何的に純粋、鏡像異性的に純粋、またはジアステレオ的に純粋）および鏡像異性体、ジアステレオマー、および幾何異性体の混合物の両方を包有する。いくつかの場合、あるエナンチオマー、ジアステレオマー、または幾何異性体は、他と比較して優れた活性または改善された毒性または動的プロファイルを有する。この場合、このような本発明の化合物のエナンチオマー、ジアステレオマー、および幾何異性体が好ましい。
【００４３】
「ＩＬ−２の産生を阻害する」との文言および同様の文言は、ＩＬ−２を産生かつ／もしくは分泌する特性を有する細胞（たとえば、Ｔリンパ球）において、ＩＬ−２合成を阻害し（たとえば転写（ｍＲＮＡ発現）の阻害、または翻訳（タンパク質発現）の阻害による）、かつ／またはＩＬ−２分泌を阻害することを意味する。同様に、「ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦαまたはＩＦＮ−γの産生を阻害する」との文言は、これらのサイトカインを産生かつ／または分泌する特性を有する細胞において、合成を阻害し（たとえば転写または翻訳の阻害による）かつ／または分泌を阻害することを意味する。
【００４４】
本明細書に使用される、ラセミ混合物は、分子中の全てのキラル中心に対して、約５０％のエナンチオマーおよび対応する約５０％のエナンチオマーを意味する。本発明は、光学異性的に純粋であり、エナンチオマーを多く含み、ジアステレオ的に純粋であり、ジアステレオマーを多く含み、かつラセミ体である本発明の化合物の混合物を包有する。
【００４５】
エナンチオマーおよびジアステレオマーの混合物は、キラル相ガスクロマトグラフィー、キラル相高速液体クロマトグラフィー、キラル塩複合体としての化合物の結晶化、またはキラル溶媒中の化合物の結晶化などのよく知られている方法により、これらのエナンチオマーまたはステレオアイソマーの成分に典型的に分解できる。また、エナンチオマーおよびジアステレオマーは、良く知られている不斉合成方法（ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｍｅｔｈｏｄｓ）により、ジアステレオ的または光学異性的に純粋な中間物質、試薬および触媒から得ることができる。
【００４６】
患者に投与する際、たとえば、獣医学的な使用または家畜の改善のためヒトではない動物に投与する際、または臨床用途のためヒトに投与する際に、本発明の化合物は、概して分離した形態で投与されるか、または医薬組成物中の分離した形態として投与される。本明細書に使用される「分離した」は、本発明の化合物を、（ａ）植物または細胞、好ましくは細菌培養液などの天然源、または（ｂ）有機化学合成反応混合物のどちらかの他の成分から分離することを意味する。好ましくは、従来の技術を介して、本明細書の化合物は精製される。本明細書に使用される「精製された」は、分離した際に、分離物を、本発明の単一の化合物を少なくとも９５重量％、好ましくは少なくとも９８重量％含むことを意味する。
【００４７】
安定した構造をもたらす置換基の選択および組み合わせのみが考慮される。このような選択および組み合わせは、当業者には明らかであり、過度な実験を行うことなく決定し得ることは明白である。
【００４８】
本発明は、以下の詳細な説明および例示的な実施例により、参照としてより完全に理解できるものであるが、これらは本発明実施形態を限定するよう例証されるものではない。
【００４９】
特定の実施形態
本発明は、本明細書に記載される化合物、表１の化合物、および免疫抑制、または炎症状態、免疫障害、およびアレルギー障害を治療もしくは予防するために特に有益である医薬組成物に関する。
【００５０】
例示的化合物
本発明の例示的な化合物は、以下の実施例に記載にしたがって作製されたものであり、以下の表１に表される。
【表１】
2014532656.tif 000003
【００５１】
作用機構
抗原に応答するＴリンパ球の活性化は、カルシウムイオン振動に依存する。Ｔリンパ球におけるカルシウムイオン振動は、Ｔ細胞抗原受容体の刺激を介して引き起こされ、貯蔵量に応じて作用するＣａ２＋‐放出−活性化Ｃａ２＋（ＣＲＡＣ）チャネルを介したカルシウムイオン流入を含む。チャネルの詳細な電気生理学的プロファイルが存在するにも関わらず、ＣＲＡＣイオンチャネルの分子構造は、近年のＯｒａｉ１／ＣＲＡＣＭ１  と命名された孔形成ユニット（ｐｏｒｅ−ｆｏｒｍｉｎｇ  ｕｎｉｔ）の同定まで同定されてこなかった（Ｖｉｇ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００６），  ３１２：１２２０−３，  Ｆｅｓｋｅ，  Ｎａｔｕｒｅ  （２００６），  ４４１：１７９−８５）。したがって、ＣＲＡＣイオンチャネルの阻害は、ＩＣＲＡＣ電流の阻害を測定することにより測定できる。Ｔ細胞におけるカルシウムイオン振動は、Ｔ細胞の活性化に重要ないくつかの転写因子（たとえば、ＮＦＡＴ、Ｏｃｔ／ＯａｐおよびＮＦκＢ）の活性化に関連するとされてきた（Ｌｅｗｉｓ，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  （２００３），  ３１：９２５−９２９参照、この文献全体の技術は、参照により本明細書に援用される）。いずれの理論にも縛られるものではないが、本発明の化合物は、ＣＲＡＣイオンチャネルの活性を阻害するので、免疫細胞の活性化を阻害すると考えられる。
【００５２】
治療および予防方法
本発明の化合物、もしくはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、およびプロドラッグの有効量、または本発明の化合物、もしくはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、およびプロドラッグを含む医薬組成物の有効量を、免疫抑制の必要のある患者、または炎症状態、免疫障害、またはアレルギー障害を治療または予防する必要のある患者に投与する。このような患者は、治療を受けていない状態、または部分的に従来の治療を経験しているか、または従来の治療にまったく応答しない状態であってもよい。
【００５３】
対象の特定の免疫状態、免疫障害、またはアレルギー障害の反応性は、直接測定でき（たとえば、本発明の化合物を投与した後、炎症性サイトカイン（ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＩＦＮ−γなど）の血液レベルを測定する）、または疾患の病因および進行の理解に基づき推測できる。本発明の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、およびプロドラッグは、ヒトに使用する前に、望ましい治療もしくは予防活性のために、生体内または生体外でアッセイできる。たとえば、炎症状態、免疫障害、またはアレルギー障害の既知の動物モデルを使用して、本発明の化合物の安全性および効力を実証できる。
【００５４】
医薬組成物および剤形
本発明の医薬組成物および剤形は、相対量中１つ以上の活性成分を含み、所定の医薬組成物または剤形を、免疫抑制のため、または炎症状態、免疫障害、およびアレルギー障害を治療もしくは予防するために使用できるような方法で製剤化される。好ましい医薬組成物および剤形は、本発明の化合物、またはその医薬的に許容可能なプロドラッグ、塩、溶媒和物を含み、任意に、１つ以上の追加的な活性剤と組み合わされる。
【００５５】
本発明の単一剤形は、経口的、粘膜（たとえば経鼻、舌下、膣、頬側、もしくは直腸）を介して、非経口的（たとえば皮下、静脈内、ボーラス注入、筋肉内、動脈内）、または経皮的に患者に投与することに適している。剤形の例は、限定するものではないが、錠剤、カプレット、軟ゼラチンカプセルなどのカプセル、カシェー（ｃａｃｈｅｔ）、トローチ、甘味入り錠剤、分散剤、座薬、軟膏、パップ剤（湿布）、ペースト、散剤、包袋、クリーム、貼付剤、液剤、パッチ、エアロゾル（たとえば経鼻スプレーまたは吸引器）、ゲル、懸濁剤（たとえば水性もしくは非水性液体懸濁剤、油中水エマルジョン、または水中油液体エマルジョン）、液剤、およびエリキシル剤を含む患者の経口または粘膜投与に適した液体剤形、患者の非経口投与に役した液体剤形、ならびに患者への非経口投与に適した液体剤形を提供するために再構成することのできる無菌性の固体（たとえば、結晶質または非晶質の固体）を含む。
【００５６】
本発明の剤形の組成、形状および種類は、概して、本組成物の用途に応じて変動する。たとえば、粘膜投与に適した剤形は、同一の症状を治療するために使用される経口剤形よりも少量の活性成分を含み得る。この本発明の態様は、当業者には容易に明白となるものである。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  （１９９０）  １８ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  Ｅａｓｔｏｎ  ＰＡを参照されたい。
【００５７】
典型的な医薬組成物および剤形は、１つ以上の賦形剤を含む。適切な賦形剤は、薬学の当業者に良く知られており、非限定的な適切な賦形剤の例が本明細書に提供される。ある特定の賦形剤が医薬組成物または剤形への組み込みに適しているかどうかは、限定するものではないが、剤形が患者に投与される方法を含む、当業者に良く知られている様々な要因に依存する。たとえば、錠剤のような経口剤形は、非経口剤形の使用に適していない賦形剤を含んでもよい。
【００５８】
また、特定の賦形剤の適合性は、剤形の特定の活性成分に依存してもよい。たとえば、ラクトースなどのいくつかの賦形剤により、または水に曝露された際に、活性成分の分解が加速する場合がある。一級アミンまたは二級アミン（たとえば、Ｎ−デスメチルベンラファキシンおよびＮ，Ｎ―ジデスメチルベンラファキシン）を含む活性成分は、このような加速分解の影響を特に受けやすい。結果として、本発明は、もしあるとしてもラクトースをほとんど含まない医薬組成物および剤形を包有する。本明細書に使用される用語「ラクトースフリー」は、もし存在したとしても、活性成分の分解速度を実質的に上昇させるには不十分であるラクトース量を意味する。本発明のラクトースフリーの組成物は、当業者に良く知られており、たとえば、米国の薬局（ＵＳＰ）ＳＰ（ＸＸＩ）／ＮＦ（ＸＶＩ）に列挙される賦形剤を含むことができる。一般的に、ラクトースフリーの組成物は、医薬的に適合可能であり、かつ医薬的に許容可能な量の活性成分、結合剤／注入剤、および潤滑剤を含む。好ましいラクトースフリー剤形は、活性成分、結晶セルロース、α化でんぷん、およびステアリン酸マグネシウムを含む。
【００５９】
水はいくつかの化合物の分解を促進できるため、本発明は、活性成分を含む無水物の医薬組成物および剤形を包有する。例として、水の添加（たとえば５％）は、製剤の保存期間または経時的な安定性などの特徴を決定するために、長期間貯蔵をシュミレートする手段として医薬的技術に広く受け入れられている。たとえば、Ｊｅｎｓ  Ｔ．  Ｃａｒｓｔｅｎｓｅｎ（１９９５）  Ｄｒｕｇ  Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ：    Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，  ２ｄ．  Ｅｄ．，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  ＮＹ，  ＮＹ，  ３７９−８０を参照されたい。実際、水および加熱は、いくつかの化合物の分解を加速させる。したがって、一般的に製剤の製造、取扱い、密封、貯蔵、発送、および使用中に水分および／または湿気を受けるため、製剤に対する水の作用は非常に重要である可能性がある。
【００６０】
本発明の無水物の医薬組成物および剤形は、無水物または低水分含有成分、ならびに低水分または低湿度条件を使用して調製できる。ラクトースおよび１級アミンまたは二級アミンを含む少なくとも１つの活性成分を含む医薬組成物ならびに剤形は、製造、密封、および／または貯蔵の間の水分および／または湿度との実質的な接触が予測される場合、無水物であることが好ましい。
【００６１】
無水物の医薬組成物は、無水物の性質が維持されるように調製され、貯蔵されるべきである。したがって、無水物の組成物は、適切な製剤キットに含むことができるように、水への曝露を予防することが知られている物質を使用して包装することが好ましい。適切な包装の例は、限定するものではないが、密封してシールされたホイル、プラスチック、単位用量容器（たとえばバイアル）、ブリスター包装、およびストリップ包装を含む。
【００６２】
本発明は、活性成分が分解する速度を低減する１つ以上の化合物を含む医薬組成物および剤形をさらに含む。このような化合物は、本明細書で「安定化剤」を指し、限定するものではないが、アスコルビン酸などの抗酸化剤、ｐＨ緩衝剤、または塩緩衝剤を含む。
【００６３】
賦形剤の量および種類のように、剤形中の活性成分の量および特定の種類は、限定するものではないが、患者に投与する経路などの要因に依存して異なってもよい。しかしながら、本発明の典型的な剤形は、本発明の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグを、約１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、好ましくは、約５０ｍｇ〜約５００ｍｇ、および最も好ましくは約７５ｍｇ〜約３５０ｍｇ含む。本発明の化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、もしくはプロドラッグの典型的な１日の総用量は、１日あたり約１ｍｇ〜約５０００ｍｇ、好ましくは、１日あたり約５０ｍｇ〜約１５００ｍｇ、より好ましくは、１日あたり約７５ｍｇ〜約１０００ｍｇの範囲とできる。所定の患者にとって適切な用量および剤形を決定することは当業者の範囲内である。
【００６４】
経口剤形
経口投与に適した本発明の医薬組成物は、限定するものではないが、錠剤（たとえばチュアブル錠）、カプレット、カプセル、および液体（たとえば香料のついたシロップ）などの個別の剤形として存在できる。このような剤形は、所定量の活性成分を含み、当業者によく知られている医薬的方法により調製されてもよい。一般的には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  （１９９０）  １８ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  Ｅａｓｔｏｎ  ＰＡを参照されたい。
【００６５】
本発明の典型的な剤形は、従来の医薬構成技術により少なくとも１つの賦形剤と、混合物中の活性成分を組み合わせることにより調製される。賦形剤は、望ましい投与調製物の形態に応じて、幅広い範囲の様々な形態を取ることができる。たとえば、経口用の液体またはエアロゾルの剤形での使用に適した賦形剤は、限定するものではないが、水、グリコール、油、アルコール、香味剤、保存剤、および着色剤を含む。固体の経口剤形（例えば、粉剤、錠剤、カプセル、およびカプレット）での使用に適した賦形剤の例は、限定するものではないが、でんぷん、糖、結晶セルロース、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、および崩壊剤を含む。
【００６６】
投与が簡単であるため、錠剤およびカプセルは、経口単位剤形として最も有益であり、この場合、固体の賦形剤が使用される。望ましい場合、錠剤は、標準的な水性または非水性の物質を使用した技術によりコーティングできる。このような剤形は、薬学方法のいずれかにより調製できる。一般的に医薬組成物および剤形は、液体のキャリアー、細かく分解した固体のキャリアー、またはその両方と活性成分を均一かつ一律に混合し、もし必要である場合には、この生成物を望ましい形に形成することにより調製する。
【００６７】
たとえば、錠剤は、圧縮または成形により調製できる。圧縮錠剤は、粉体または顆粒などの自由に流動する形態の、任意に賦形剤と混合された活性成分を、適切な機械で圧縮することにより調製できる。成形錠剤は、不活性な液体の希釈剤で湿らせた粉体化合物の混合物を、適切な機械で成形することにより作製できる。
【００６８】
本発明の経口剤形で使用できる賦形剤の例は、限定するものではないが、結合剤、注入剤、崩壊剤、および潤滑剤を含む。医薬組成物および剤形の使用に適した結合剤は、限定するものではないが、コーンスターチ、ポテトスターチ、または他のスターチ、ゼラチン、アカシアなどの天然ゴムおよび合成ゴム、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、他のアルギン酸塩、粉体のトラガント、グアルゴム、セルロースおよびその誘導体（たとえば、エチルセルロース、酢酸セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム）、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、α化でんぷん、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（たとえばＮｏｓ．２２０８、２９０６、２９１０）、結晶セルロースならびにそれらの混合物を含む。
【００６９】
微結晶セルロースの適切な形態は、限定するものではないが、ＡＶＩＣＥＬ−ＰＨ−１０１、ＡＶＩＣＥＬ−ＰＨ−１０３  ＡＶＩＣＥＬ  ＲＣ−５８１、ＡＶＩＣＥＬ−ＰＨ−１０５として販売されている物質（ペンシルバニア州マルクスホックのＭＣ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｖｉｓｃｏｓｅ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，  Ａｖｉｃｅｌ  Ｓａｌｅｓから入手可能）およびそれらの混合物を含む。ある特定の結合剤は、ＡＶＩＣＥＬ  ＲＣ−５８１としての微結晶セルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウムの混合物である。適切な無水物または低水分の賦形剤または添加剤は、ＡＶＩＣＥＬ−ＰＨ−１０３Ｊおよびスターチ１５００ＬＭを含む。
【００７０】
本明細書に開示される医薬組成物および剤形の使用に適した注入剤の例は、限定するものではないが、タルク、炭酸カルシウム（たとえば顆粒または粉体）、結晶セルロース、粉体のセルロース、デキストレーツ（ｄｅｘｔｒａｔｅｓ）、カオリン、マンニトール、ケイ酸、ソルビトール、デンプン、α化でんぷん、およびそれらの混合物を含む。本発明の医薬組成物中の結合剤または注入剤は、概して、医薬組成物または剤形の約５５〜約９９重量パーセントで存在する。
【００７１】
崩壊剤は、水性環境に曝露される際に崩壊する錠剤を提供するために、本発明の組成物に使用される。崩壊剤の含量が多すぎる錠剤は、貯蔵の際に崩壊する可能性があり、崩壊剤の含量が少なすぎる場合には、望ましい速度または望ましい条件下で崩壊しない可能性がある。したがって、本活性成分の放出が有害に変化しないように、多すぎず、かつ少なすぎない十分な量の崩壊剤を使用して、本発明の固体の経口剤形を形成すべきである。使用する崩壊剤の量は、製剤の種類に応じて変動し、かつ、当業者が容易に認識できるものである。典型的な医薬組成物は、約０．５〜約１５重量パーセントの崩壊剤、好ましくは約１〜約５重量パーセントの崩壊剤を含む。
【００７２】
本発明の医薬組成物および剤形で使用することのできる崩壊剤は、限定するものではないが、寒天、アルギン酸、炭酸カルシウム、結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポルアクリンカリウム（ｐｏｌａｃｒｉｌｉｎ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ）、でんぷんグリコール酸ナトリウム、ポテトもしくはタピオカスターチ、他のスターチ、α化でんぷん、他のでんぷん、粘土、他のアルギン、他のセルロース、ゴム、およびこれらの混合物を含む。
【００７３】
本発明の医薬組成物および剤形に使用することのできる潤滑剤は、限定するものではないが、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、鉱油、軽油、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、他のグリコール、ステアリン酸、硫酸ラウリルナトリウム、タルク、水素化した植物油（たとえばピーナッツ油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、および大豆油）、ステアリン酸亜鉛、オレイン酸エチル、乳酸エチル（ｅｔｈｙｌ  ｌａｕｒｅａｔｅ）、寒天、およびそれらの混合物を含む。さらなる潤滑剤は、たとえば、シロイドシリカゲル（ｓｙｌｏｉｄ  ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ）（ＡＥＲＯＳＩＬ  ２００。メリーランド州のＷ．Ｒ．  Ｇｒａｃｅ  Ｃｏ．  ｏｆ  Ｂａｌｔｉｍｏｒｅにより製造）、凝固した合成シリカゲルのエアロゾル（テキサス州のＤｅｇｕｓｓａ  Ｃｏ．  ｏｆ  Ｐｌａｎｏにより販売）、ＣＡＢ−Ｏ−ＳＩＬ（メリーランド州のＣａｂｏｔ  Ｃｏ．  ｏｆ  Ｂｏｓｔｏｎにより販売される発熱性二酸化ケイ素産物）、およびそれらの混合物を含む。少しでも使用される場合、潤滑剤は、概して、組む込まれる医薬組成物または剤形の約１重量パーセント未満の量で使用される。
【００７４】
制御放出剤形
本発明の活性成分は、当業者によく知られている制御放出手段または送達装置により投与できる。例として、限定するものではばないが、米国特許公報第３，８４５，７７０号、第３，９１６，８９９号、第３，５３６，８０９号、第３，５９８，１２３号、第４，００８，７１９号、第５，６７４，５３３号、第５，０５９，５９５号、第５，５９１，７６７号、第５，１２０，５４８号、第５，０７３，５４３号、第５，６３９，４７６号、第５，３５４，５５６号、および第５，７３３，５６６号に記載されるものが挙げられ、各内容は、本明細書に参照として援用される。このような剤形を使用して遅効型または制御型放出型の１つ以上の活性成分を提供でき、たとえば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマー物質、ゲル、透過性の膜、浸透圧性システム、多層コーティング、微小粒子、リポソーム、細粒またはそれらの組み合わせを使用して、様々な比率で望ましい放出プロファイルを提供できる。本明細書に記載されるものを含む、当業者に知られている適切な制御放出型製剤を、本発明の活性成分と使用するために容易に選択できる。したがって、本発明は、限定するものではないが、制御放出に適した錠剤、カプセル、ゲルキャップおよびカプレットなどの経口投与に適した単一単位剤形を包有する。
【００７５】
全ての制御型放出医薬産物は、それらの非制御型対応物により達成される目標を上回り薬剤療法を改善するという共通の目標を有する。理想的には、薬物治療において任意に設計される制御型放出調製物の使用は、最小時間で状態を治癒または制御するために使用される最小の薬剤により特徴づけることができる。制御放出製剤の利点は、薬剤の活性上昇、投与回数の低下、および患者の服薬率の上昇を含む。さらに制御放出製剤を使用して、作用発現の時間、または薬物の血中レベルなどの他の特徴に影響を与えることができ、かつ、副（たとえば不都合な）作用の発生率に影響を与えることができる。
【００７６】
最も制御された放出製剤は、はじめに望ましい治療効果を迅速に生じるある量の薬剤（活性成分）を放出し、そして長期間にわたりこの治療効果または予防効果のレベルを維持するために、他の量の薬物をゆっくりと継続して放出するように設計される。体内で薬剤のこの一定レベルを維持するために、この薬剤は、体内から代謝されかつ排泄される薬剤の量に置き換えられる速度で剤形から放出されなければならない。活性成分の制御放出は、限定するものではないが、ｐＨ、温度、酵素、水、または他の生理学的条件もしくは化合物を含む様々な条件により刺激できる。
【００７７】
非経口剤形
非経口剤形は、限定するものではないが、皮下、静脈内（ボーラス注入を含む）、筋肉内、および動脈内を含む様々な経路により患者に投与できる。概してこれらの投与は汚染物質に対する患者本来の防御を迂回するので、非経口剤形は好ましくは滅菌されており、または患者に投与する前に滅菌できる。非経口剤形の例は、限定するものではないが、すぐ注入可能な溶液、医薬的に許容可能な注入用のビヒクルにすぐ溶解または懸濁できる乾燥産物、すぐ注入可能な懸濁液、およびエマルジョンを含む。
【００７８】
本発明の非経口剤形を提供するために使用できる適切なビヒクルは、当業者によく知られている。例として、限定するものではないが、アメリカで特許化された注入用の水；限定するものではないが、生理食塩注入、リンガー液注入、ブドウ糖注入、ブドウ糖および生理食塩注入、ならびに乳酸加リンガー流入用液などの水性ビヒクル；限定するものではないが、エチルアルコール、ポリエチレングリコールおよびポリプロピルグリコールなどの水混和可能なビヒクル；ならびに限定するものではないが、コーン油、綿実油、ピーナッツ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピルおよび安息香酸ベンジルなどの非水性ビヒクルを含む。
【００７９】
また、本明細書に開示される１つ以上の活性成分の可溶性を増加させる化合物を、本発明の非経口剤形に組み込むことができる。
【００８０】
経皮、局所、および粘膜用剤形
本発明の経皮、局所、および粘膜用剤形は、限定するものではないが、点眼液、スプレー、エアロゾル、クリーム、ローション、軟膏、ゲル、液剤、エマルジョン、懸濁液、または当業者に知られている他の形態を含む。たとえば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  （１９８０  ＆  １９９０）  １６ｔｈ  ａｎｄ  １８ｔｈ  ｅｄｓ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  Ｅａｓｔｏｎ  ＰＡ  および  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  （１９８５）  ４ｔｈ  ｅｄ．，  Ｌｅａ  ＆  Ｆｅｂｉｇｅｒ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａを参照されたい。口腔内の粘膜組織の治療に適した剤形は、うがい薬または経口ゲルとして製剤化できる。さらに、経皮的剤形は、「リザーバータイプ」または「マトリックスタイプ」のパッチを含み、これらは皮膚に適用され望ましい量の活性成分の浸透を許容する特定の時間着けられる。
【００８１】
経皮、局所、および粘膜用剤形を提供するために使用できる適切な賦形剤（たとえば、キャリアーおよび希釈剤）ならびに他の物質は、医薬の当業者に良く知られており、所定の医薬組成物または剤形が適用される特定の組織に依存する。このことを考慮した典型的な賦形剤は、限定するものではないが、水、アセトン、エタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブタン−１，３‐ジオール、イソプロピルミリステート、イソプロピルパルミテート、鉱油、およびこれらの混合物を含み、非毒性であり、かつ医薬的に許容可能なローション、チンキ、クリーム、エマルジョン、ゲル、または軟膏を形成する。望ましい場合には、保湿剤（Ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｅｒ）または保湿剤（ｈｕｍｅｃｔａｎｔ）を医薬組成物および剤形に添加できる。このような追加的な成分の例は、当業者によく知られている。たとえば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  （１９８０  ＆  １９９０）  １６ｔｈ  ａｎｄ  １８ｔｈ  ｅｄｓ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  Ｅａｓｔｏｎ  ＰＡを参照されたい。
【００８２】
治療される特定の組織に応じて、追加的な成分を、本発明の活性成分で治療する前に使用してもよく、本発明の活性成分で治療するために併用して使用してもよく、または本発明の活性成分で治療した後に使用してもよい。たとえば、浸透促進剤を使用して、組織への活性成分の送達を補助できる。適切な浸透促進剤は、限定するものではないが、アセトン；エタノール、オレイルおよびテトラヒドロフルイルなどの様々なアルコール；ジメチスルホキシドなどのアルキルスルホキシド；ジメチルアセトアミド；ジメチルホルムアミド；ポリエチレングリコール；ポリビニルピロリドンなどのピロリドン；Ｋｏｌｌｉｄｏｎ等級（ポビドン、ポリビドン）；尿素；ならびにＴｗｅｅｎ  ８０（ポリソルベート８０）およびＳｐａｎ  ６０（モノステアリンソルビタン）などの様々な水に可溶または不溶な糖エステルを含む。
【００８３】
医薬組成物もしくは剤形、または医薬組成物もしく剤形が適用される組織のｐＨは、１つ以上の活性成分の送達を改善するために調整されてもよい。同様に、溶媒キャリアーの極性、イオン強度、または浸透圧は、送達を改善するために調整できる。ステアリン酸塩などの化合物も医薬組成物または剤形に添加して、１つ以上の活性成分の親水性または親油性を有利に変え、送達を改善できる。このことに関して、ステアリン酸塩は、製剤用の脂質ビヒクルとして、乳化剤または界面活性剤として、かつ送達促進剤または浸透促進剤としての役割を果たすことができる。活性成分の異なる塩、水和物、または溶媒和物を使用して、結果として得られる組成物の特性をさらに調整できる。
【００８４】
併用療法
免疫抑制、または炎症状態および免疫障害を治療または予防する方法は、それを必要とし、本発明の化合物が投与される患者に、１つ以上の他の活性成分の有効量を投与することをさらに含むことができる。このような活性剤は、免疫抑制、または炎症状態もしくは免疫障害用に従来使用される活性剤を含んでもよい。また、これらの他の活性剤は、本発明の化合物と併用して投与される際に、他の利点を提供する活性剤であってもよい。たとえば、他の治療剤は、限定するものではないが、ステロイド性抗炎症剤、非ステロイド性抗炎症剤、抗ヒスタミン剤、鎮痛剤、免疫抑制剤、およびそれらの適切な混合物を含んでもよい。このような併用療法の治療では、本発明の化合物および他の薬剤を、従来の方法により、対象（たとえば、ヒト（男性または女性））に投与する。この薬剤は、単一剤形または分離した剤形において投与されてもよい。他の治療剤および剤形の有効量は、当業者によく知られている。他の治療剤の最適有効量の範囲を決定することは、当業者の範囲内である。
【００８５】
本発明の一実施形態において、別の治療剤を対象に投与する場合、本発明の化合物の有効量は、他の治療剤を投与しない場合の有効量よりも少ない。別の実施形態において、この従来の薬剤の有効量は、本発明の化合物を投与しない際の有効量よりも少ない。この方法で、どちらかの薬剤の高用量に関連する望ましくない副作用を最小限にしてもよい。他の潜在的な利点（限定するものではないが、用量レジメンの改善および／または薬剤コストの低下）は、当業者には明らかである。
【００８６】
自己免疫状態および炎症状態に関連する一実施形態において、他の治療剤は、ステロイド性抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤であってもよい。特に有益な非ステロイド性抗炎症剤は、限定するものではないが、アスピリン、イブプロフェン、ジクロフェナク、ナプロキセン、ベノキサプロフェン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、フルブフェン（ｆｌｕｂｕｆｅｎ）、ケトプロフェン、インドプロフェン、ピロプロフェン（ｐｉｒｏｐｒｏｆｅｎ）、カプロフェン、オキサプロジン、プラモプロフェン（ｐｒａｍｏｐｒｏｆｅｎ）、ムロプロフェン（ｍｕｒｏｐｒｏｆｅｎ）、トリオキサプロフェン、スプロフェン、アミノプロフェン（ａｍｉｎｏｐｒｏｆｅｎ）、チアプロフェン酸、フルプロフェン、ブクロキシ酸、インドメタシン、スリンダク、トルメチン、ゾメピラック、チオピナック、ジドメタシン、アセメタシン、フェンチアザク、クリダナク、オキシピナク（ｏｘｐｉｎａｃ）、メフェナム酸，メクロフェナム酸、フルフェナム酸、ニフルム酸、トルフェナム酸、ジフリサル（ｄｉｆｌｕｒｉｓａｌ）、フルフェニサール、ピロキシカム、スドキシカム、イソキシカム；アスピリン、サリチル酸ナトリウム、コリンマグネシウムトリサリチル酸、サルサレート、ジフルニサール、サリチルサリチル酸、スルファサラジンおよびオルサラジンを含むサリチル酸誘導体；アセトアミノフェンおよびフェナセチンを含むパラーアミノフェノール誘導体；インドメタシン、スリンダクおよびエトドラクを含むインドールおよびインデン酢酸；トルメチン、ジクロフェナクおよびケトロラクを含むヘテロアリール酢酸；メフェナム酸およびメクロフェナム酸を含むアントラニル酸（フェナム酸）；オキシカム（ピロキシカム、テノキシカム）およびピラゾリジンジオン（フェニルブタゾン、オキシフェナタゾン（ｏｘｙｐｈｅｎｔｈａｒｔａｚｏｎｅ））を含むエノール酸；ナブメトンを含むアルカノン；ならびにこれらの医薬的に許容可能な塩およびそれらの混合物を含む。ＮＳＡＩＤのより詳細な説明のために、Ｐａｕｌ  Ａ．  Ｉｎｓｅｌ，  “Ａｎａｌｇｅｓｉｃ  Ａｎｔｉｐｙｒｅｔｉｃ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇｓ  Ｅｍｐｌｏｙｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｇｏｕｔ”  ｉｎ  Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ６１７  ５７  （Ｐｅｒｒｙ  Ｂ．  Ｍｏｌｉｎｈｏｆｆ  ａｎｄ  Ｒａｙｍｏｎｄ  Ｗ．  Ｒｕｄｄｏｎ  ｅｄｓ．，  ９ｔｈ  ｅｄ  １９９６）  および  Ｇｌｅｎ  Ｒ．  Ｈａｎｓｏｎ，  “Ａｎａｌｇｅｓｉｃ，  Ａｎｔｉｐｙｒｅｔｉｃ  ａｎｄ  Ａｎｔｉ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｄｒｕｇｓ”  ｉｎ  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  Ｖｏｌ  ＩＩ  １１９６  １２２１  （Ａ．Ｒ．  Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｄ．  １９ｔｈ  ｅｄ．  １９９５）を参照されたい。この文献全体は、参照により本明細書に援用される。
【００８７】
特にアレルギー障害に関連して、他の治療剤は抗ヒスタミン剤であってもよい。有益な抗ヒスタミン剤は、限定するものではないが、ロラタジン、セチリジン、フェキソフェナジン、デスロラタジン、ジフェンヒドラミン、クロルフェニラミン、クロルシクリジン、ピリラミン、プロメタジン、テルフェナジン、ドキセピン、カルビノキサミン、クレマスチン、トリペレナミン、ブロムフェニラミン、ヒドロキシジン、シクリジン、メクリジン、シプロヘプタジン、フェニンダミン、アクリバスチン、アゼラスチン、レボカバスチン、およびそれらの混合物を含む。抗ヒスタミン剤のより詳細な記載は、Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  （２００１）  ６５１―５７，  １０ｔｈ  ｅｄ）を参照されたい。
【００８８】
免疫抑制剤は、グルココルチコイド、コルチコステロイド（プレドニゾンまたはソルメドロール）、Ｔ細胞阻害薬（シクロスポリンＡおよびＦＫ５０６など）、プリン類似体（アザチオプリン（イムラン））、ピリミジン類似体（シトシンアラビノシドなど）、アルキル化剤（ナイトロジェンマスタード、フェニルアラニンマスタード、ブスルファンおよびシクロホスファミドなど）、葉酸拮抗剤（アミノプテリンおよびメトトレキサートなど）、抗菌剤（ラパマイシン、アクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ、ピューラマイシン（ｐｕｒａｍｙｃｉｎ）およびクロラムフェニコール）、ヒトのＩｇＧ、抗リンパ球グロブリン（ＡＬＧ）、ならびに抗体（抗−ＣＤ３（ＯＫＴ３）、抗−ＣＤ４（ＯＫＴ４）、抗−ＣＤ５、抗−ＣＤ７、抗−ＩＬ−２受容体、抗−α／βＴＣＲ、抗−ＩＣＡＭ−１、抗−ＣＤ２０（リツキサン）、抗−ＩＬ−１２および免疫毒素に対する抗体）を含む。
【００８９】
上記および他の有益な併用療法は、当業者に理解され、かつ認識されるものである。このような併用療法の潜在的な利点は、異なる効力のプロファイル、それぞれの活性成分の使用を少なくし毒性副作用を最小限にできること、効力の相乗的改善、各投与または使用しやすさの改善、および／または化合物の調製または製剤化の費用の総計の低下を含む。
【００９０】
他の実施形態
本発明の化合物を、研究道具（たとえば、他の潜在的なＣＲＡＣ阻害剤、またはＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＩＬ−５、ＩＩＬ−１３、ＩＧＭ−ＣＳＦ、ＩＴＮＦαおよび／またはＩＦＮ−γ阻害剤を評価するための陽性対照）として使用してもよい。本発明の化合物および組成物のこれらの使用法および他の使用法ならびに実施形態は当業者に明らかである。
【００９１】
本発明は、本発明の化合物の調製を詳細に記述する以下の実施例を参照としてさらに定義される。物質および方法の多くの修正が、本発明の目的および対象から逸脱することなく実施され得ることは、当業者に明らかである。以下の実施例は、本発明の理解を補助するために設定され、ならびに本明細書に記載され、かつ請求される本発明を特に限定するものとして考えられるものではない。新たに知られているか、または後半で明らかとなるすべての代替物に相当するものを含むような本発明の変形は、当業者の範囲内であり、実験の設計における式の変化または小さな変化は、本明細書に組み込まれる本発明の範囲内であるとされる。
【００９２】
実施例
実験原理
理論に縛られるものではないが、本発明の化合物は、ＣＲＡＣイオンチャネルを阻害することにより、炎症および免疫反応に関与するＩＬ−２および他の鍵となるサイトカインの産生を阻害すると考えられている。これらの特性を以下の実施例で実証する。
【００９３】
材料および一般的な方法
以下に使用される試薬および溶媒は、シグマ・アルドリッチ社（米国ウィスコンシン州ミルウォーキー）などの商業的供給源から得ることができる。１Ｈ―ＮＭＲおよび１３Ｃ―ＮＭＲスペクトルを、Ｖａｒｉａｎ  ３００ＭＨｚ  ＮＭＲスペクトロメータ上で記録した。顕著なピークを、δ（ｐｐｍ）の桁で、化学シフト、多重度（ｓ：シングレット、ｄ：ダブレット、ｔ；トリプレット、ｑ：カルテット、ｍ：マルチプレット、ｂｒ  ｓ：ブロードシングレット）、Ｈｅｒｔｚ（Ｈｚ）の結合定数、およびプロトン数を一覧にする。
【００９４】
手動パッチクランプ実験を、室温（２１−２５℃）で密閉型全細胞形態で行う。パッチピペットは、ホウケイ酸ガラスのキャピラリーチューブから形成され、標準的な細胞内溶液で充填後２〜４ＭΩの抵抗を有する。高分解能の電流の記録は、コンピュータに基づくパッチクランプアンプシステム（ＥＰＣ−１０、ドイツのランブレヒトＨＥＫＡ製）により得られる。すべての電圧を、細胞内アニオンとしてグルタミン酸塩を用いて、外部溶液および内部溶液間で１０ｍＶの液間電位差に補正した。電流を２．９ｋＨｚでフィルタにかけ、１０μｓの間隔でデジタル化する。容量電流および直列抵抗を、ＥＰＣ−１０の自動容量補償を使用して各ランプ電圧（ｖｏｌｔａｇｅ  ｒａｍｐ）前に決定し、補正する。
【００９５】
自動化パッチクランプによる実験を、室温（２１−２５度）でＱＰａｔｃｈ  １６（デンマークバラールップのＳｏｐｈｉｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製）を用いて行う。ギガシールした全細胞構成を確立した直後に、細胞膜の電位を０ｍＶにクランプする。それから５０ｍｓのランプ電圧を、−１００〜＋１００ｍＶの電圧範囲をスパンする間０．３３Ｈｚの比率で与える。電流を２．９ｋＨｚでフィルタにかけ２００μｓの間隔でデジタル化する。容量電流および直列抵抗を、自動容量補償を使用して各ランプ電圧前に決定し、補正する。
【００９６】
実施例１
本発明の例示的な化合物の合成
代表的な合成手順
化合物３、Ｎ−（４，６−ジメチルピリジン−３−ｙｌ）−２’−メチル−５’−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−［１，１’−ビフェニル］−４−カルボキサミドの合成
【化２】
2014532656.tif 000004
メチル−４−ブロモ安息香酸（１）（４３０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）および４，６−ジメチルピリジン−３−アミン（２）（２５０ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）のトルエン溶液（８ｍｌ）を調製し、フラスコを密閉した。窒素でパージした後、２ＭのＡｌ（ＣＨ３）３を含むトルエン（１．５ｍＬ）溶液を反応混合物に滴下した。この添加が終了した後、この反応物を、１１０℃で１５分間マイクロ波処理した。反応混合物を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、２ＮのＮａＯＨ（２×１０ｍＬ）溶液で洗浄した後、鹹水（１×１０ｍＬ）で洗浄した。有機相を収集し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。カラムクロマトグラフィーにより４−ブロモ−Ｎ−（４，６−ジメチルピリジン−３−イル）ベンズアミド（Ａ）を得た（収率８０％超）。
【００９７】
３−ブロモ−４−メチルベンゾニトリル（３）（２．０ｇ、１０ｍｍｏｌ）の、ビス（ピナコラト）ジボロン（３．４ｇ、１３ｍｍｏｌ）、およびＰｄ（ＯＡｃ）２（０．５ｇ、２ｍｍｏｌ）、およびＫＯＡｃ（３ｇ、３０ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（１２ｍＬ）溶液を、８０℃で３時間マイクロ波処理した。その後、この混合物をＨ２Ｏ（２５ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出した。
【００９８】
この有機相を収集し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル９：１）により、油として４−メチル−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンゾニトリル（Ｂ）を得て、真空下で乾燥させる間に凝固させた（収率：９６％）。
【００９９】
（Ａ）（２００ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および（Ｂ）（２５０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）および（Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（１３０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を含むトルエン（６ｍＬ）溶液にＮａ２ＣＯ３（２Ｎ、２ｍＬ）およびエタノール（２ｍＬ）を添加した。この反応混合物を８０℃で１２時間撹拌した。この溶液を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）で洗浄した。この有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、産物５’−シアノ−Ｎ−（４，６−ジメチルピリジン−３−イル）−２’−メチル−［１，１’−ビフェニル］−４−カルボキサミド（Ｃ）を白色固体としてカラムクロマトグラフィーにより分離した（収率：〜６０％）。
【０１００】
（Ｃ）（１４０ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）、ＮａＮ３（１６０ｍｇ，２．４ｍｍｏｌ）およびＮＨ４Ｃｌ（１３０ｍｇ，２．４ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（５ｍＬ）溶液／懸濁液を９０〜９６℃で６時間撹拌した（物質Ｃが消費されるまで）。反応混合物を室温まで冷却し、この固体を濾過により取り出し、ＤＭＦ（２×１ｍＬ）で洗浄した。ＤＭＦ−溶液中に、過剰の（トリメチルシリル）ジアゾメタンを少しずつ添加した（２Ｍのヘキサン溶液、４〜５ｍＬ、気体発生が止まるまで）。
【０１０１】
反応混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、水（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、クロマトグラフィーを行い、Ｎ−（４，６−ジメチルピリジン−３−イル）−２’−メチル−５’−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−［１，１’−ビフェニル］−４−カルボキサミド（主要な同位体）を得た。
【０１０２】
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ）  d  １０．１４  （ｓ，  １Ｈ），  ８．３６  （ｓ，  １Ｈ），  ８．０９−７．９２  （ｍ，  ４Ｈ，），  ７．７２−７．５３  （ｍ，  ３Ｈ），  ７．１７  （ｓ，  １Ｈ，），  ４．４１  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．４２  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．３１  （ｓ，  ３Ｈ，），  ２．２１  （ｓ，  ３Ｈ），  ｐｐｍ；  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２３Ｈ２２Ｎ６Ｏ：  ３９８．２；  ｆｏｕｎｄ：  ３９９．３  （Ｍ  ＋  Ｈ＋）
【０１０３】
以下の類似体を、上述した手順と同様の方法で合成した。
【０１０４】
化合物２  ２’−クロロ−Ｎ−（４，６−ジメチルピリジン−３−イル）−５’−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−［１，１’−ビフェニル］−４−カルボキサミド
【化３】
2014532656.tif 000005
【０１０５】
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ）  d  １０．１４  （ｓ，  １Ｈ），  ８．３５  （ｓ，  １Ｈ），  ８．１３−８．０７  （ｍ，  ４Ｈ），    ７．８２  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝６．３），  ７．６９  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝６），  ７．２  （ｓ，  １Ｈ），  ４．４５  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．４５  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．２３  （ｓ，  ３Ｈ），  ｐｐｍ；  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２２Ｈ１９ＣｌＮ６Ｏ：  ４１８．１；  ｆｏｕｎｄ：  ４１９．２  （Ｍ  ＋  Ｈ＋）
【０１０６】
化合物１、５、および６の一般的な合成手順
【化４】
2014532656.tif 000006
【０１０７】
パージし窒素の不活性雰囲気で維持さる２０００ｍＬの４つ口丸底フラスコ内に、１，４−ジブロモベンゼン（５０ｇ、２１１．８６ｍｍｏｌ、１．００当量）のテトラヒドロフラン／ヘキサン＝１：１０（１０００ｍＬ）溶液を入れた。この結果として得られる溶液を、液体窒素槽で−８０℃まで冷却した。続いて、ｎ−ブチルリチウム（８８．８ｍＬ、１．０５当量）を−８０℃で撹拌しながら滴下した。この結果として得られる溶液を、液体窒素槽において−８０℃で３０分間撹拌した。これにＮ−メトキシ−Ｎ−メチルブチルアミド（４１．７ｇ、３１８．３２ｍｍｏｌ、１．５０当量）のテトラヒドロフラン／ヘキサン＝１：１０（１００ｍＬ）溶液を添加した。この結果として得られる溶液を、液体窒素槽で−８０℃に維持しながらさらに１５分間撹拌して反応させた。この反応を、４００ｍＬの水を添加することにより停止させた。この結果として得られる溶液を、３×４００ｍＬの酢酸エチルで抽出し、有機層を組み合わせた。結果として得られる混合物を、３×４００ｍＬの水および３×４００ｍＬの鹹水で洗浄した。この混合物を、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。この固体を濾過して取り出した。この結果として得られる混合物を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムにかけ、酢酸エチル／石油エーテル（０：１００〜１：１００）で溶出した。この結果、白色固体として３５ｇ（７３％）の１−（４−ブロモフェニル）ブタン−１−ｏｎｅを得た。
【化５】
2014532656.tif 000007
【０１０８】
２００ｍＬの圧力タンク反応器（ＣＯ、１５ａｔｍ）内に１−（４−ブロモフェニル）ブタン−１−ｏｎｅ（５８ｇ、２５５．５１ｍｍｏｌ、１．００当量）のメタノール（１２００ｍＬ）溶液、トリエチルアミン（５１ｇ、５０４．９５ｍｍｏｌ、２．００当量）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリド  ジクロロメタン複合体（９．４２ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、０．０５当量）を入れた。この結果として得られる溶液を、９０℃で１２時間撹拌した。この固体を濾過して取り出した。結果として得られる混合物を減圧下で濃縮した。この残留物をシリカゲルカラムにかけ、酢酸エチル／石油エーテル（１：２０〜１：１０）で溶出した。この結果、白色固体として４５ｇ（８５％）のメチル４−ブチリルベンゾエートを得た。
【化６】
2014532656.tif 000008
【０１０９】
２５０ｍＬの丸底フラスコ内に、メチル４−ブチリルベンゾエート（８ｇ、３６．８９ｍｍｏｌ、１．００当量，９５％）のテトラヒドロフラン（１５０ｍＬ）溶液、ピリミジントリブロミド（１９．２ｇ、６０．００ｍｍｏｌ、１．５０当量）を入れた。この結果として得られる溶液を、油槽で、７５℃で２時間撹拌した。その後この反応を、２００ｍｌの水の添加により停止させた。溶液のｐＨの値を、飽和した炭酸水素ナトリウムで８〜９に調整した。この結果として得られる溶液を、３×２００ｍＬの酢酸エチルで抽出し、有機層を組み合わせた。この結果として得られる混合物を、３×２００ｍLの水および３×２００ｍｌの鹹水で洗浄した。この混合物を、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。この結果、赤褐色の液体として１０ｇ（９５％）のメチル４−（２−ブロモブタノイル）ベンゾエートを得た。
【化７】
2014532656.tif 000009
2014532656.tif 000010
【０１１０】
メチル４−（２−ブロモブタノイル）ベンゾエート（８５０ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ）および５−メチルピラジン−２−カルボチオアミド（５００ｍｇ、３．２８ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ（１５ｍＬ）溶液を、６０分間１２０℃でマイクロ処理した。この溶液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝３／１））により、７５％の収率でメチル４−（５−エチル−２−（５−メチルピラジン−２−イル）チアゾール−４−イル）ベンゾエート（０．７６ｇ、２．２４ｍｍｏｌ）を得た。
【化８】
2014532656.tif 000011
【０１１１】
４−（５−エチル−２−（５−メチルピラジン−２−イル）チアゾール−４−イル）ベンゾエート（７５ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）のトルエン（４ｍＬ）溶液に、４，６−ジメチルピリジン−３−アミン（５３ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）およびＡｌＭｅ３（２Ｍのトルエン溶液、０．２１ｍＬ、０．４２ｍｍｏｌ）を添加した。この反応物を１５分間１１０℃にてマイクロ波で加熱し、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）で希釈し、１ＮのＮａＯＨ（２５ｍＬ×２）で洗浄した。この有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィーにより、８１％の収率で化合物５を得た。
【化９】
2014532656.tif 000012
【０１１２】
１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ９．３４  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ８．７５  （ｓ，  １Ｈ），  ８．４３  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ８．０４  -  ７．９９  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．８９  -  ７．８３  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．７３  （ｓ，  １Ｈ），  ７．０８  （ｓ，  １Ｈ），  ３．０８  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．６４  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．５４  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．３２  （ｓ，  ３Ｈ），  １．４３  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ，  ３Ｈ）．    ＥＳＭＳ  ｃａｃｌｄ  （Ｃ２４Ｈ２３Ｎ５ＯＳ）：    ４２９．２；  ｆｏｕｎｄ：  ４３０．３  （Ｍ＋Ｈ）
【化１０】
2014532656.tif 000013
【０１１３】
メチル４−（２−ブロモブタノイル）ベンゾエート（８５０ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ）および５−メチルイソキサゾール−３−カルボチオアミド（５５０ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ（１５ｍＬ）溶液を、６０分間１２０℃で、マイクロ波で加熱した。この溶液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝３／１））により、６１％の収率でメチル４−（５−エチル−２−（５−メチルイソオキサゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）ベンゾエートを得た。
【化１１】
2014532656.tif 000014
【０１１４】
メチル４−（５−エチル−２−（５−メチルイソオキサゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）ベンゾエート（７３ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）のトルエン（４ｍＬ）溶液に４−メチルピリミジン−５−アミン（４６ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）およびＡｌＭｅ３（２Ｍのトルエン溶液、０．２１ｍＬ、０．４２ｍｍｏｌ）を添加した。この反応物を１５分間１１０℃にてマイクロ波で加熱し、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）で希釈し、１ＮのＮａＯＨ（２５ｍＬ×２）で洗浄した。この有機相を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィーにより、７３％の収率で化合物６を得た。
【化１２】
2014532656.tif 000015
【０１１５】
１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ９．２７  （ｓ，  １Ｈ），  ８．９６  （ｓ，  １Ｈ），  ８．０３  -  ７．９６  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．８７  -  ７．８１  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．７０  （ｓ，  １Ｈ），  ６．６０  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．０７  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．６１  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．５２  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．０  Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．４２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ３Ｈ）．    ＥＳＭＳ  ｃａｃｌｄ  （Ｃ２１Ｈ１９Ｎ５Ｏ２Ｓ）：    ４０５．１；  ｆｏｕｎｄ：  ４０６．３  （Ｍ＋Ｈ）
【化１３】
2014532656.tif 000016
【０１１６】
メチル４−（クロロカルボニル）ベンゾエート（１ｇ、５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液に２，６−ジフルオロアニリン（１．３ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加し、その後、室温でＮａＨＭＤＳ（１Ｍ、１０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を添加した。この反応物を、室温で３時間撹拌した後、ＮＨ４Ｃｌ（塩、５０ｍＬ）で反応停止させた。この有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィーにより、６３％の収率でメチル４−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）ベンゾエートを得た。
【化１４】
2014532656.tif 000017
【０１１７】
ＬｉＮ（ＯＭｅ）Ｍｅ．ＨＣｌ（０．７８ｇ，８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液に、−７８℃でｎ−ＢｕＬｉ（１．６Ｍ、１０ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）を添加した。冷槽を除去し、この反応物を３０分撹拌した後、再び−７８℃の冷槽で冷却した。この反応溶液に、固体状のメチル４−（（２，６−ジフルオロフェニル）カルバモイル）ベンゾエート（０．６ｇ、２ｍｍｏｌ）を添加した。この反応物を、−７８℃で６０分間撹拌した後、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）で反応停止させた。この混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出した。この有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮して粗生成物を得た。この結果として得られる粗生成物をＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶解し、この溶液にＥｔＭｇＢｒ（３Ｍ、２．７ｍＬ、８．１ｍｍｏｌ）を−７８℃で添加した。この反応物をゆっくりと室温まで温めた後、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）で反応停止させた。この有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。再結晶化（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）により、７５％の収率で黄色固体としてＮ−（２，６−ジフルオロフェニル）−４−プロピオニルベンズアミドを得た。
【化１５】
2014532656.tif 000018
【０１１８】
Ｎ−（２，６−ジフルオロフェニル）−４−プロピオニルベンズアミド（０．４ｇ、１．３８ｍｍｏｌ）およびＰｈＭｅ３Ｎ＋Ｂｒ３−（１ｇ、２．６６ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ（８０ｍＬ）溶液を、１時間６０℃で加熱した。この溶液を、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈した。この有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して、粗生成物を得た後、ＥｔＯＨ（８０ｍＬ）に溶解させた。この結果として得られる溶液にチオ尿素（０．１ｇ、１．３６ｍｍｏｌ）を添加し、６０℃で１時間加熱した。この溶液を１ＮのＮａＯＨ（１００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈した。この有機相を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮して粗生成物を得た。ＣｕＢｒ２（０．３４ｇ、１．５２ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（２０ｍＬ）溶液に、０℃でｔＢｕＮＯ２（０．２３ｍＬ、１．９４ｍｍｏｌ）を添加した。５分後、上記の粗生成物のＣＨ３ＣＮ（２０ｍＬ）溶液を添加した。この反応混合物を室温で６０分間撹拌した後、ＮａＨＣＯ３塩（５０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で反応停止させた。この有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィーにより、合計３３％の収率で４−（２−ブロモ−５−メチルチアゾール−４−イル）−Ｎ−（２，６−ジフルオロフェニル）ベンズアミドを得た。
【化１６】
2014532656.tif 000019
【０１１９】
４−（２−ブロモ−５−メチルチアゾール−４−イル）−Ｎ−（２，６−ジフルオロフェニル）ベンズアミド（４０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）（Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２，１５ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）、および２−メチル−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン（３３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ（５ｍＬ）溶液にＮａ２ＣＯ３（２Ｎ、１．０ｍＬ）を添加した。この撹拌混合物を、１６時間、最大７０℃まで加熱した。この溶液を室温まで冷却し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈した。この有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、クロマトグラフィーにより、６５％の収率で化合物１を得た。
【化１７】
2014532656.tif 000020
【０１２０】
１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ９．０５  -  ９．００  （ｍ，  １Ｈ），  ８．１６  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８．１，  ２．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ８．０４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．８８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．５５  （ｓ，  １Ｈ），  ７．２７  -  ７．２１  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．０１  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．１  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．６７  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．６２  （ｓ，  ３Ｈ）．  ＥＳＭＳ  ｃａｃｌｄ  （Ｃ２３Ｈ１７Ｆ２Ｎ３ＯＳ）：    ４２１．１；  ｆｏｕｎｄ：  ４２２．２  （Ｍ＋Ｈ）
【０１２１】
化合物７および８の合成手順
【化１８】
2014532656.tif 000021
【０１２２】
化合物７（Ｎ−（５−（２−クロロ−５−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル）ピラジン−２−イル）−２，３−ジフルオロベンズアミド）
【０１２３】
２−ブロモ−１−クロロ−４−ヨードベンゼン（１０ｍｍｏｌ）、１−メチル−４−テトラメチルジオキサボロラニル−ピラゾール（１０ｍｍｏｌ）、ビス（トリフェニルホスフィン）−パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（０．４ｍｍｏｌ）、およびＫ２ＣＯ３（１０ｍｍｏｌ）を含むジオキサン／水（１０：１、２０ｍｌ）混合物を、２時間９０℃にてマイクロ波で加熱し、この反応混合物に水を注ぎ、この粗生成物をＤＣＭで抽出し、シリカゲルカラムを用いて精製して純粋な４−（３−ブロモ−４−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール（２．１ｇ）を得た。
【０１２４】
４−（３−ブロモ−４−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール（５ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（６．２５ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（２ｍｍｏｌ）、およびＰｄ（ＯＡｃ）２（１ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（１５ｍｌ）の懸濁溶液を、３時間８６℃で加熱し、この反応物を、水で反応停止させ、この混合物をＤＣＭで抽出した。この有機層を、小さなシリカゲルの漏斗でろ過し、ＥｔＯＡｃで溶出して粗生成物４−（４−クロロ−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾールを得て（収率〜６０−８０％）、これを直接次のステップに使用した。
【０１２５】
４−（４−クロロ−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール（２ｍｍｏｌ）、Ｎ−（５−ブロモピラジン−２−イル）−２，３−ジフルオロベンズアミド（２ｍｍｏｌ）、ビス（トリフェニルホスフィン）−パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（０．１ｍｍｏｌ）、およびＫ２ＣＯ３（２ｍｍｏｌ）を含むジオキサン／水（１０：１、２０ｍｌ）混合物を、２時間、１００℃にて、マイクロ波で加熱し、この混合物に水を注ぎ、この粗生成物をＤＣＭで抽出し、シリカゲルカラムで精製して化合物７（４２０ｍｇ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  δ９．８・（ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１．５），  ９．０  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１２．５），  ８．８  （ｄ，  １Ｈ，  １．５），  ７．９５  （ｍ，  １Ｈ），  ７．７９  （ｓ，  １Ｈ），  ７．７５  （ｂｒ．  １Ｈ），  ７．６７  （ｓ，  １Ｈ），  ７．５−７２７  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．９６  （３，  ３Ｈ）．  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２１Ｈ１４ＣｌＦ２Ｎ５Ｏ：    ４２５．１；  ｆｏｕｎｄ：  ４２６．１  （Ｍ＋Ｈ＋）
【０１２６】
Ｎ−（５−ブロモピラジン−２−イル）−２，３−ジフルオロベンズアミドを、２−アミノ−５−ブロモピラジン（１０ｍｍｏｌ）および２，３−ジフルオロベンゾイルクロリド（３０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中で５時間室温にて反応させることにより、形成した（８５％）。
【化１９】
2014532656.tif 000022
【０１２７】
化合物８（Ｎ−（５−（２−クロロ−５−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェニル）ピラジン−２−イル）−２，４−ジフルオロベンズアミド）を、化合物７と同様の手順を使用して調製した。
【０１２８】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  １Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  δ  ９．８（ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１．５），  ９．１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１５），  ８．８  （ｄ，  １Ｈ，  １．５），  ８．３  （ｍ，  １Ｈ），  ７．８−６．９７  （ｍ，  ７Ｈ），  ３．９６  （３，  ３Ｈ）  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２１Ｈ１４ＣｌＦ２Ｎ５Ｏ：    ４２５．１；  ｆｏｕｎｄ：  ４２６．１  （Ｍ＋Ｈ＋）
【０１２９】
化合物４合成の手順
【化２０】
2014532656.tif 000023
【０１３０】
ステップ１および２のワンポット反応
【０１３１】
３−ブロモ−４−クロロベンゾニトリル（１．０８ｇ、５．００ｍｍｏｌ、１．０当量），アジ化ナトリウム（１．９５ｇ、３０．０ｍｍｏｌ、６．０当量）、塩化アンモニウム（１．６０ｇ、３０．０ｍｍｏｌ、６．０当量）および１５ｍＬのＤＭＦを、５０ｍＬの丸底フラスコで混合した。この混合物を、９０℃の油槽に入れ、２時間撹拌した。この反応物を室温まで冷却し、５０ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈して無機の固体を生成させた（ｃｒｕｓｈ  ｏｕｔ）。濾過により固体を除去し、溶液を回転蒸発装置で濃縮して、ＥｔＯＡｃを除去した。清澄なＤＭＦ溶液を、２０ｍＬのｉ−ＰｒＯＨで希釈し、（トリメチルシリル）ジアゾメタン（５ｍＬの２Ｍヘキサン溶液、１０．００ｍｍｏｌ、２．０当量）で０℃にて２時間処理した。通例の水性ＥｔＯＡｃ操作から得られた粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィーにより精製し、白色固体として５−（３−ブロモ−４−クロロフェニル）−２Ｈ−テトラゾール（極性の低いスポット（ｌｅｓｓ  ｐｏｌａｒ  ｓｐｏｔ）、主要物質、０．７４ｇ、２．７０ｍｍｏｌ、５４％）を得た。極性の高いスポットは、位置異性体（ｒｅｇｉｏｎ−ｉｓｏｍｅｒ）（少量）であった。
【０１３２】
ステップ３
【０１３３】
５−（３−ブロモ−４−クロロフェニル）−２Ｈ−テトラゾール（０．４１ｇ、１．５０ｍｍｏｌ，１．００当量）、５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−２−アミン（０．３６３ｇ、１．６５ｍｍｏｌ、１．１０当量）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（０．０４２ｇ、０．０６ｍｍｏｌ、０．０４当量）、炭酸カリウム（０．４１ｇ、３．００ｍｍｏｌ、２．０当量）、ジオキサン（７ｍＬ）、および水（３ｍＬ）を、２０ｍＬの封管で混合した。この混合物を、３サイクルの真空／窒素気体処理し、静置した後、９０℃の油槽で１８時間撹拌した。通例の水性ＥｔＯＡｃ操作およびフラッシュクロマトグラフィー精製により、灰白色固体として５−（２−クロロ−５−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル）ピリジン−２−アミンを得た（０．４３ｇ、１．５０ｍｍｏｌ、１００％）。
【０１３４】
ステップ４および５、ワンポット反応
【０１３５】
５−（２−クロロ−５−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル）ピリジン−２−アミン（０．０．０８６ｇ、０．３０ｍｍｏｌ、１．００当量）、４−メチルコニン酸（０．０８２ｇ、０．６０ｍｍｏｌ，２．００当量）、ＥＤＣ（０．１１６ｇ、０．６０ｍｍｏｌ、２．００当量），およびＤＭＡＰ（０．０１８ｇ、０．１５ｍｍｏｌ、０．５０当量）を２５ｍＬフラスコに入れた。ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）を添加し、この混合物を１８時間室温で撹拌した。溶媒を除去し、残留物を１０ｍＬのＴＨＦおよび５ｍＬの５％  Ｎａ２ＣＯ３溶液を用いて、１時間６５℃で処理して重アシル化アミド（ｄｏｕｂｌｅ−ａｃｙｌａｔｅｄ  ａｍｉｄ）を加水分解して所望の産物を得た。通例の操作およびフラッシュクロマトグラフィー精製により、灰白色固体としてＮ−（５−（２−クロロ−５−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル）ピリジン−２−イル）−４−メチルニコチンアミドを得た（０．０４３ｇ、０．１１ｍｍｏｌ，３５％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３），  d  （ｐｐｍ）：１１．２５  （ｓ，  １Ｈ）；  ８．６７  （ｓ，  １Ｈ）；  ８．５２−８．５５  （ｍ，  ２Ｈ）；  ８．３５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ，  １Ｈ）；  ８．０５−８．１２  （ｍ，  ３Ｈ）；  ７．８３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ，  １Ｈ）；  ７．３６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ３．９  Ｈｚ，  １Ｈ）；  ４．４５  （ｓ，  ３Ｈ）；  ２．４５  （ｓ，  ３Ｈ）．    ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｄ．  ｆｏｒ  Ｃ２０Ｈ１７ＣｌＮ７Ｏ  （Ｍ  ＋  Ｈ）＋：  ４０６；  Ｆｏｕｎｄ：  ４０６
【０１３６】
化合物９、５−シアノ−Ｎ−（５−（５−エチル−２−（５−メチルイソオキサゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−４−メチルニコチンアミドの代表的な手順
【化２１】
2014532656.tif 000024
【０１３７】
プロピル−マグネシウムクロリド（４２ｍｍｏｌ、２１ｍＬ×２．０ＭＴＨＦ中）および２，２’−オキシビス（Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン）（４２ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ（４０ｍＬ）混合物を、０℃に冷却し、６−クロロモニコチノイルクロリド（２８ｍｍｏｌ）を少しずつ添加し、この混合物を、０℃で４０分間保存した。この混合物に水（２００ｍＬ）を注ぎ、ＤＣＭ（２００ＭＬ）で抽出した。この有機層を乾燥させ、濃縮して白色の粗生成物として１−（６−クロロピリジン−３−イル）ブタン−１−オン（ａ，５．１ｇ）を得た。
【０１３８】
上記のケトンａ３．５ｇを、マイクロ波反応器に入れ、２０ｍＬのＮＨ３（水性、濃縮型）を添加し、反応器を密封して２時間１４０℃で加熱した。この反応混合物に水（５０ｍＬ）を注ぎ、ろ過し、ＥｔＯＨ／水（１：１）ですすぎ、白色粗生成物として１−（６−アミノピリジン−３−イル）ブタン−１−オン（ｂ，３．５ｇ）を得た。
【０１３９】
上記のアミンｂ（２．０ｇ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶解させ、Ｂｏｃ２（１．５ｅｑ）およびＤＭＡＰ（０．１ｅｑ）を添加し、この混合物を２時間室温で撹拌した。この混合物を濃縮し、ＤＣＭ／水（それぞれ５０ｍＬ）中に分布させ、ＤＣＭ層を、シリカゲルプラグを通過させて粗生成物（２．４ｇ）を得て、これをＥＡ／ヘキサン（１０ｍＬ／４０ｍＬ）中に粉砕して、純粋な白色固体としてｔｅｒｔ−ブチル（５−ブチリルピリジン−２−イル）カルバメート（ｃ，１．５ｇ）を得た。
【０１４０】
５．０ｇのｃを、トリブロミド（２０．０ｍｍｏＬ）を含む煮沸したＴＨＦ（８０ｍＬ）で、４時間８０℃で処理した。この混合物を冷却し、シリカゲルのプラグを通過させてＥＡ／ヘキサン（１：１）で溶出しオレンジ色の固体として粗生成ブロミド中間体（６．０ｇ）を得て、これを５−メチルイソオキサゾールｅ−３−カルボチオアミド（１６ｍｍｏｌ）とともにＥｔＯＨ（１００ｍＬ）／ＡｃＯＨ（１ｍＬ）中で６時間加熱した。この反応混合物を濃縮し、ＮａＨＣＯ３で中和し、ＤＣＭで抽出した。有機層を、シリカゲルプラグを通過させ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１：９）から溶出した後、得られた粗生成物の再結晶化により白色固体として５−（５−エチル−２−（５−メチルイソオキサゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）ピリジン−２−アミン（ｄ，２．３ｇ）を得た。
【０１４１】
上記のアミンｄ８０ｍｇおよびメチル５−クロロ−４−メチルニコチネート（５０ｍｇ）のトルエン（５ｍＬ）中の混合物にＭｅ３Ａｌ（０．８ｍｍｏｌ、０．４ｍＬ×２．０Ｍ）溶液を添加し、結果として得られる溶液を２時間１１０℃で加熱した。この混合物を、ＤＣＭ（５ｍＬ）／１ＮのＮａＯＨ（５ｍＬ）で希釈し、有機層をカラムにより精製して白色固体として化合物９（１０ｍｇ）を得た。１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  d  ８．９１  （ｓ，  １Ｈ），  ８．６  （ｍ，  ２Ｈ），  ８．４  （ｍ，  ２Ｈ），  ８．１  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ１＝８，  Ｊ２＝２），  ６．６１  （ｓ，  １Ｈ），  ３．０  （ｑ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８），  ２．５７  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．５２  （ｓ，  ３Ｈ），  １．４  （ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ＝８） ｐｐｍ；  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２１Ｈ１８ＣｌＮ５Ｏ２Ｓ：  ４３９．０；  ｆｏｕｎｄ：  ４４０．４  （Ｍ  ＋  Ｈ＋）
【０１４２】
化合物１０、５−シアノ−Ｎ−（５−（５−エチル−２−（５−メチルイソオキサゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−４−メチルニコチンアミド
【化２２】
2014532656.tif 000025
を、化合物９と同様の手順を使用して調製した。
【０１４３】
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３) d  ８．９４  （ｓ，  １Ｈ），  ８．９１  （ｓ，  １Ｈ），  ８．６  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝２），  ８．４  （ｍ，  ２Ｈ），    ８．１  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ１＝８，  Ｊ２＝２），  ６．６１  （ｓ，  １Ｈ），  ３．０  （ｑ，  ２Ｈ，  Ｊ＝８），  ２．７８  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．５２  （ｓ，  ３Ｈ），  １．４  （ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ＝８） ｐｐｍ；  ＥＳＭＳ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２２Ｈ１８Ｎ６Ｏ２Ｓ：  ４３０．１；  ｆｏｕｎｄ：  ４３１．４  （Ｍ  ＋  Ｈ＋）
【０１４４】
実施例２：ＩＬ−２産生の阻害
ジャーカットＴ細胞を、９６ウェルプレートに配置し（１％ＦＢＳ培地中、ウェル当たり０．５×１０６細胞）、本発明の試験化合物を異なる濃度で添加した。１０分後、この細胞を、ＰＨＡ（最終濃度２．５μｌ／ｍＬ）で活性化し、５％のＣＯ２下で、３７℃で２０時間インキュベートした。最終容量は２００μｌであった。インキュベートの後、この細胞を遠心し、上清を収集して、ＩＬ−２産生のアッセイ前に−７０℃で保存した。市販のＥＬＩＳＡキット（ＩＬ−２  Ｅｌｉ−ｐａｉｒ、フランス、ブザンソンのＤｉａｃｌｏｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ製）を使用してＩＬ−２産生を検出し、用量反応曲線を得た。ＩＣ５０値を、刺激されていない対照に対し刺激後の最大IL−２産生の５０％が阻害された濃度として計算した。
【０１４５】
ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦαおよびＩＦＮ−γなどの他のサイトカインの阻害は、各サイトカインの商業的に利用可能なＥＬＩＳＡキットを使用する同様の方法で試験できる。
【表２】
2014532656.tif 000026
【０１４６】
実施例３：ＲＢＬ細胞、ジャーカットＴ細胞、および一次Ｔ細胞でのＩＣＲＡＣ電流阻害の手動パッチクランプ試験
一般的に全細胞パッチクランプ法を使用して、ＩＣＲＡＣを調節するチャネルに対する本発明の効果を試験する。このような実験では、ベースラインとなるＩＣＲＡＣの測定は、パッチされた細胞に対して、７０ランプ電圧以内、または１４０秒以内で確立される。その後、この細胞を試験すべき化合物と灌流させ、ＩＣＲＡＣに対するこの化合物の効果を、少なくともさらに４４０〜５００秒間測定する。ＩＣＲＡＣを調節（たとえば阻害）する化合物は、ＣＲＡＣイオンチャネルの活性化を調節するための本発明に有益な化合物である。
【０１４７】
１．ＲＢＬおよびジャーカットＴ細胞
細胞
ラットの好塩基球性白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）を、９５％の大気および５％のＣＯ２下で１０％のウシ胎児血清を補充したＤＭＥＭ培地中で増殖させる。細胞は、使用する１〜３日前にカバーガラスに播種する。
【０１４８】
ジャーカットＴ細胞を、９５％の大気および５％のＣＯ２下で１０％のウシ胎児血清を補充したＲＰＭＩ培地中で増殖させる。細胞を、遠心により収集し、各実験の直前に記録チャンバーに移す。
【０１４９】
記録条件
各細胞の膜電流は、全細胞形態での手動パッチクランプ技術を使用して記録される。
【０１５０】
細胞内ピペット溶液
細胞内のピペット溶液は、Ｃｓ−グルタミン酸塩１００ｍＭ、ＣｓＣｌ２０ｍＭ、ＮａＣｌ８ｍＭ、ＭｇＣｌ２３ｍＭ、Ｄ−ｍｙｏ−イノシトール  １，４，５−リン酸トリス（ＩｎｓＰ３）０．０２ｍＭ、ＣｓＢＡＰＴＡ  １０ｍＭ、ＨＥＰＥＳ  １０ｍＭを含み、ＣｓＯＨでｐＨ＝７．２に調整される。実験を実行する前に、この溶液は氷上に遮光して保存する。。
【０１５１】
細胞外溶液
細胞外溶液は、ＮａＣｌ１４０ｍＭ、ＫＣｌ５．４ｍＭ、ＣｓＣｌ１０ｍＭ、ＣａＣｌ２１０ｍＭ、ＭｇＣｌ２１ｍＭ、ＨＥＰＥＳ１０ｍＭ、グルコース５．５ｍＭを含み、ＮＡＯＨでｐＨ＝７．４に調整される。
【０１５２】
化合物の処置
各化合物は、１０ｍＭの原液からＤＭＳＯを用いて順次希釈する。最終ＤＭＳＯ濃度は、常に０．１％に保たれる。
【０１５３】
実験手順
ＩＣＲＡＣ電流を、−１００ｍＶ〜＋１００ｍＶの５０ｍｓｅｃランプ電圧を使用して測定する。このランプ電圧は、最初の７０秒の間は２秒ごとに与え、残りの実験では５秒ごとに与える。膜電位は、試験ランプ間で、０ｍＶに保たれる。典型的な実験では、ピーク内向き電流は、５０〜１００秒内に起こる。ＩＣＲＡＣ電流が安定してから、細胞を少なくともさらに５００秒間、細胞外溶液中の化合物と灌流する。
【０１５４】
データ解析
Ｈｅｋａ  ＰａｔｃｈＭａｓｔｅｒソフトウェアのオフライン解析を使用して、細胞の基礎バックグラウンド電流からＩＣＲＡＣ膜電流を分離する。典型的な記録では、ＩｎｓＰ３刺激ＩＣＲＡＣ電流は、全細胞が確立された後６〜１２秒で起こり始める。したがって、最初の１〜４ランプ電圧は、ＩＣＲＡＣの存在しない状態での基礎膜電流を表し、この平均値は、その後のすべての記録から減算される。それから各ランプ記録の−８０ｍVでの電流値を測定し、時間に対してプロットする。得られた電流対時間のデータは、マイクロソフトのエクセルスプレッドシートに記録される。各細胞の％ＩＣＲＡＣ阻害は、細胞を化合物と４４０〜５００秒間灌流した後の電流量と化合物灌流の直前の電流量とを比較することにより計算する。各化合物のＩＣ５０値およびヒル係数は、すべての個々のデータを単一部位ヒル方程式に合わせることにより計算する。
【０１５５】
２．初代Ｔ細胞
初代Ｔ細胞は、１００μｌのＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（商標）ヒトＴ細胞富化カクテルを２ｍＬの全血に添加することにより、ヒトの全血細胞から得る。混合物を室温で２０分間インキュベートし、その後、２％  ＦＢＳを含む等量のＰＢＳで希釈する。この混合物を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（商標）ＤＭ−Ｌ密度培地の上に重ね、室温にて１２２０ｇで２０分間遠心する。濃縮Ｔ細胞を、血漿／密度培地界面から回収し、２％のＦＢＳを含むＰＢＳで２回洗浄し、ＲＢＬ細胞で記述した手順の後パッチクランプ実験に使用する。
【０１５６】
実施例４：ＩＣＲＡＣ阻害の自動化パッチクランプ試験
ＲＢＬ−２Ｈ３−細胞
細胞
ＲＢＬ−２Ｈ３を、９５％の大気および５％のＣＯ２下で、１０％のウシ胎児血清、ペニシリン１００Ｕ／ｍｌおよびストレプトマイシン１００ｇ／ｍｌを補充したＤＭＥＭ培地中で増殖させる。細胞を、１７５ｃｍ２の組織培養フラスコ中にコンフルエンスとなるまで増殖させる。実験当日に、細胞を０．２５％トリプシン／０．０２％ＥＤＴＡで収集し、５×１０６細胞／ｍｌの密度で細胞外溶液中に再懸濁する。
【０１５７】
細胞内溶液
細胞内溶液は、Ｃｓ−グルタミン酸塩９０ｍＭ、ＮａＣｌ８ｍＭ、ＭｇＣｌ２３ｍＭ、ＣｓＣｌ２０ｍＭ、ＣｓＢＡＰＴＡ２０ｍＭ、ＨＥＰＥＳ１０ｍＭ、ＩｎｓＰ３  ０．０２ｍＭを含み、ＣｓＯＨでｐＨ＝７．２に調整する。
【０１５８】
細胞外溶液
細胞外溶液は、ＮＭＤＧＣｌ１２０ｍＭ、ＫＣｌ５．４ｍＭ、ＣｓＣｌ１０ｍＭ、ＣａＣｌ２１０ｍＭ、ＭｇＣｌ２１ｍＭ、ＨＥＰＥＳ１０ｍＭ、グルコース５．５ｍＭを含み、ＨＣｌでｐＨ＝７．２に調整する。
【０１５９】
実験手順
ＩＣＲＡＣ電流を、−１００ｍＶ〜＋１００ｍＶの５０ｍｓｅｃランプ電圧を使用して測定する。このランプ電圧は、少なくとも５７０秒間、３秒ごとに与える。最大ＩＣＲＡＣ電流は、少なくとも１３５秒間展開することが可能である。それから細胞外溶液で希釈した化合物を３０秒間隔で２度適用する。細胞を化合物と４３５秒間インキュベートさせた後、参照溶液を、実験の最後に適用する。参照溶液は、Ｃａ２＋を含まない細胞外溶液である。
【０１６０】
データ解析
Ｑｐａｔｃｈソフトウェアのオフライン解析を使用して、時間に対して、各ランプ記録の−８０ｍＶでの電流値をプロットする。得られた電流対時間のデータを、マイクロソフトエクセルスプレッドシートに記録する。ＩＣＲＡＣ膜電流は、最初の１〜３の記録中の平均膜電流値、または実験の最後に参照溶液で得られる平均膜電流値のどちらかを減算することにより、細胞の基礎となるバックグラウンド電流から分けられる。各細胞の％ＩＣＲＡＣ阻害は、第１の化合物の添加直前の電流量と、細胞が本化合物と少なくとも４００秒間灌流した後の電流量とを比較することにより計算する。
【０１６１】
実施例５：初代ヒトＰＢＭＣでの複数のサイトカインの阻害
人の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配で分離することによりヘパリン処置した人の血液から調製した。
【０１６２】
ＰＢＭＣを、本発明の化合物またはサイトカイン産生の阻害剤として知られているシクロスポリン（ＣｓＡ）の様々な濃度下で、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）で刺激する。製造者の指示にしたがって、商業的に利用可能なヒトのＥＬＩＳＡキット（Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｉｎｃ製）を使用して、サイトカイン産生を測定する。
【０１６３】
あるいは、１．２×１０６／ｍｌで１０％のＦＣＳを備えたＰＢＭＣを、各５μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３（クローン  ＵＣＨＴ１）および抗ＣＤ２８（クローン  ＡＮＣ２８．１／５Ｄ１０）で前処理し、本発明の化合物またはＤＭＳＯ（最大濃度：０．１％）と共にまたはこれらを用いずに刺激する。細胞培養を、５％のＣＯ２、３７℃でインキュベートする。培養液の上清試料を、複数のサイトカイン測定のため、インキュベート後４８〜７２時間に収集する。製造者の指示にしたがいＢｉｏＲａｄ  ＢｉｏＰｌｅｘアッセイを使用して、懸濁液中に存在するサイトカインを定量する。
【０１６４】
本発明の化合物は、初代ヒトＰＢＭ細胞中でのＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−αおよびＴＮＦ−αの有力な阻害剤と予想される。さらに、本発明の化合物は、抗炎症性サイトカインＩＬ−１０を阻害するとは予想されない。
【０１６５】
実施例６：ＲＢＬ細胞での脱顆粒の阻害
手順
本アッセイを実施する前に、９６ウェルプレート中にコンフルエンスとなるまで増殖させたＲＢＬ細胞を、少なくとも２時間３７℃でインキュベートする。各ウェルの培地を、２μｌの抗ＤＮＰ  ＩｇＥを含む１００μｌの新鮮な培地と交換する。
【０１６６】
翌日、この細胞を、ＰＲＳ（グルコース２．６ｍＭおよびＢＳＡ０．１％）で一度洗浄し、１６０μｌのＰＲＳを各ウェルに添加する。望ましい濃度の１０倍濃度の試験化合物２０μｌをウェルに添加し、３７℃で２０〜４０分間インキュベートする。１０倍濃度のマウス抗ＩｇＥ（１０μＬ／ｍＬ）２０μｌを添加する。最大脱顆粒は、抗ＩｇＥの添加後１５〜４０分に起こる。
【０１６７】
本発明の化合物は、脱顆粒を阻害すると予想される。
【０１６８】
実施例７：Ｔ細胞での走化性の阻害
Ｔ細胞の単離
一定分量２０ｍｌのヘパリン処置全血（２匹のブタ、１人のヒト）を、フィコール・ハイパック上で密度勾配遠心する。リンパ球および単核球を含む末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を表す軟膜層を１度洗浄し、１２ｍｌの不完全ＲＰＭＩ  １６４０に再懸濁し、ゼラチンでコーティングされたＴ７５培養フラスコ中に、３７℃で１時間置く。単核球が欠失した末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を表す非粘着性Ｔ細胞を、完全ＲＰＭＩ培地に再懸濁し、温かい培地で平衡化した活性化ナイロンウールをゆるく詰めたカラムに置く。３７℃で１時間置いた後、非粘着性Ｔ細胞の集合を、追加の培地でカラムを洗浄することにより溶出する。このＴ細胞調製物を遠心し、５ｍｌの不完全ＲＰＭＩに再懸濁し、血球計数器を使用して計測する。
【０１６９】
細胞遊走アッセイ
一定分量の各Ｔ細胞調製物を、Ｃａｌｃｉｅｎ  ＡＭ（ＴｅｆＬａｂｓ）で標識し、１．８３ｍＭのＣａＣｌ２および０．８ｍＭのＭｇＣｌ２を含むＨＥＰＥＳ緩衝Ｈａｎｋ’ｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、ｐＨ７．４（ＨＨＢＳＳ）中に、２．４×１０６／ｍｌの濃度で懸濁する。それから０、２０ｎＭ、２００ｎＭまたは２０００ｎＭの化合物１あるいは２０ｎＭのＥＤＴＡを含む等量のＨＨＢＳＳを添加し、この細胞を３７℃で３０分間インキュベートする。一定分量５０μｌの細胞懸濁液（細胞６０，０００個）を、ＨＨＢＳＳ中１０ｎｇ／ｍｌのＭＩＰ−１αを含むウェル上に付着させたＮｅｕｒｏｐｒｏｂｅ  ＣｈｅｍｏＴｘ  ９６ウェル走化性ユニットの膜（孔の寸法：５μｌ）上に置く。このＴ細胞を３７℃で２時間遊走させ、その後膜の先端面から細胞を除去する。この走化性ユニットを、ＣｙｔｏＦｌｕｏｒ  ４０００  （ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ  ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ）に配置し、各ウェルの蛍光を測定する（励起波長および発光波長はそれぞれ４５０および５３０ｎｍ）。各ウェルの遊走細胞数は、膜を付着する前に、走化性ユニットの下のウェルに置いた標識細胞の２倍段階希釈物の蛍光を測定することから作成される標準曲線より決定される。
【０１７０】
本発明の化合物はＴ細胞の走化性反応を阻害すると予測される。
【０１７１】
本明細書に引用されるすべての公開公報、特許出願、特許、および他の文献は、その全体が参照により援用される。これらの情報が矛盾する場合、定義を含む本明細書が支配する。さらに、材料、方法、および実施例は、例示に過ぎず、限定する意図は全くない。
【国際調査報告】
2014532656.tif 000028
2014532656.tif 000029