(57)【要約】  本発明は、治療のための、プロドラッグ活性化方法に関連し、互いに生体直交反応性を示す非生物的反応性化学グループの使用がなされる。本発明はまた、少なくとも１つのプロドラッグ及び少なくとも１つのアクチベータを含むプロドラッグキットに関連し、前記プロドラッグは、薬物及び第１の生体直交型反応基（トリガー）を含み、前記アクチベータは、第２の生体直交型反応基を含む。本発明はまた、上述された方法及びキットで使用される標的化治療学に関連する。本発明は、具体的には、抗体−薬物共役物及び二−又は三特異的抗体断片誘導体に関係する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロドラッグの投与及び活性化に関するキットであって、当該キットは、
トリガー部分に、直接的に又は非直接的に結合された薬物、及び前記トリガー部分に関するアクチベータを含み、
前記トリガー部分は、ジエノフィルを含み、
前記アクチベータは、ジエンを含み、
前記ジエノフィルは、下記式（１ａ）を満たす：
キット。
【化７０】
2014513717.tif 000079
（ただし、Ｔ、Ｆは、各々独立して、Ｈ又はアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩから構成される群から選択される置換基を意味し；記号Ａ、Ｐ、Ｑ、Ｘ、Ｙ及びＺの意味は、下記（１）〜（６）から構成される群から選択され、
（１）結合ＰＱ、ＱＰ、ＱＸ、ＸＱ、ＸＺ、ＺＸ、ＺＹ、ＹＺ、ＹＡ、ＡＹの１つは、−ＣＲａＸＤ−ＣＲａＹＤ−から構成され、Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ、Ｐによって構成される残基は、各々独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓから構成される群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；ＸＤはＯ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；かつＹＤはＮＨＲｃ、ＯＨ、ＳＨであり；又はＸＤはＣ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；かつＹＤはＣＲｃ２ＮＨＲｃ、ＣＲｃ２ＯＨ、ＣＲｃ２ＳＨ、ＮＨ−ＮＨ２、Ｏ−ＮＨ２又はＮＨ−ＯＨである；
（２）ＡはＣＲａＸＤでありかつＺはＣＲａＹＤである、又はＺはＣＲａＸＤでありかつＡはＣＲａＹＤである、又は、ＰはＣＲａＸＤでありかつＸはＣＲａＹＤである、又はＸはＣＲａＸＤでありかつＰはＣＲａＹＤであり、ＸＤ及びＹＤは互いに関連してトランス型に配置され；Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ、及びＰによって構成される残基は、互いに独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓから構成される群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；ＸＤは、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、かつＹＤはＮＨＲｃ、ＯＨ、ＳＨ、ＣＲｃ２ＮＨＲｃ、ＣＲｃ２ＯＨ、ＣＲｃ２ＳＨ、ＮＨ−ＮＨ２、Ｏ−ＮＨ２又はＮＨ−ＯＨである；又はＸＤはＣＲｃ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＣＲｃ２−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＣＲｃ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＣＲｃ２−Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＣＲｃ２−ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＣＲｃ２−ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、かつＹＤはＮＨＲｃ、ＯＨ、ＳＨである；又はＸＤはＣ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；かつＹＤはＣＲｃ２ＮＨＲｃ、ＣＲｃ２ＯＨ、ＣＲｃ２ＳＨ、ＮＨ−ＮＨ２、Ｏ−ＮＨ２、ＮＨ−ＯＨである；
（３）ＡはＣＲａＹＤであり、かつ、Ｐ、Ｑ、Ｘ、Ｚの１つはＣＲａＸＤであり、又は、ＰはＣＲａＹＤ  であり、かつ、Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘの１つはＣＲａＸＤである、又はＹはＣＲａＹＤ  であり、かつＸ又はＰはＣＲａＸＤである、又は、ＱはＣＲａＹＤであり、かつ、Ｚ又はＡはＣＲａＸＤである、又は、Ｚ又はＸのいずれかはＣＲａＹＤであり、かつ、Ａ又はＰはＣＲａＸＤであり、ＸＤ及びＹＤは互いに関連してトランス型に配置され；Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ及びＰによって構成される残基は、各々独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡ  はＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓを構成する群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；  ＸＤは（Ｏ−Ｃ（Ｏ））ｐ−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、ＹＤはＣＲｃ２ＮＨＲｃ、ＣＲｃ２ＯＨ、ＣＲｃ２ＳＨ、ＮＨ−ＮＨ２、Ｏ−ＮＨ２、ＮＨ−ＯＨであり；  ｐは０又は１である；
（４）ＰはＣＲａＹＤであり、かつ、ＹはＣＲａＸＤである、又はＡはＣＲａＹＤであり、かつ、ＱはＣＲａＸＤである、又はＱはＣＲａＹＤであり、かつ、ＡはＣＲａＸＤである、又はＹはＣＲａＹＤであり、かつＰはＣＲａＸＤであり、ＸＤ及びＹＤは、互いに関連してトランス型に配置され；Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ及びＰから構成される残基は、互いに独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓから構成される群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；  ＸＤは（Ｏ−Ｃ（Ｏ））ｐ−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；ＹＤはＮＨＲｃ、ＯＨ、ＳＨであり；ｐは０又は１である；
（５）ＹはＹＤであり、かつ、ＰはＣＲａＸＤである、又はＱはＹＤであり、かつ、ＡはＣＲａＸＤであり；Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ及びＰによって構成される残基は、各々独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓから構成される群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；ＸＤは（Ｏ−Ｃ（Ｏ））ｐ−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；ＹＤはＮＨであり；  ｐは０又は１である；
（６）ＹはＹＤであり、かつ、Ｐ又はＱはＸＤである、又は、ＱはＹＤであり、かつ、Ａ又はＹはＸＤであり；Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ及びＰによって構成される残基は、各々独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ、及びＳ−Ｓから構成される群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；ＸＤはＮ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｎ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；ＹＤはＮＨであり；
ここで、各々のＲａは、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、ＯＲ’、ＳＲ’、Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、Ｓｉ−Ｒ’’’、Ｓｉ−Ｏ−Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｎ３、ＳＯ２Ｈ、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ４Ｈ、ＰＯ３Ｈ、ＰＯ４Ｈ、ＮＯ、ＮＯ２、ＣＮ、ＯＣＮ、ＳＣＮ、ＮＣＯ、ＮＣＳ、ＣＦ３、ＣＦ２−Ｒ’、ＮＲ’Ｒ”、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’−Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’−Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’−Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’−Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’’−Ｒ’’、ＣＲ’ＮＲ’’から構成される群から選択され、各々のＲ’及び各々のＲ’’は、独立して、Ｈ、アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は、独立して、アリール又はアルキルであり；各々のＲｂは、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＯＨから構成される群から選択され；各々のＲｃは、独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル及びＣ１−６アリールから選択され；  ２つ以上のＲａ，ｂ，ｃ部分は、結合して環を形成しても良く；  及び（ＬＤ）ｎは、好ましくはＳ、Ｎ、ＮＨ又はＯを介してＴＲに結合された、ｎ＝  ０又は１を有する任意のリンカーであり、ここで、これらＳ、Ｎ、ＮＨ又はＯ原子はリンカーの一部であり、直鎖状に及び／又は分枝状に配置された複数のユニットを構成しても良く；ＤＤは、好ましくはＳ、Ｎ、ＮＨ又はＯを介して結合された１つ以上の治療的部分又は薬物であり、ここでこれらＳ、Ｎ、ＮＨ又はＯ原子は、前記治療的部分の一部である）。
【請求項２】
Ａ、Ｐ、Ｑ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、結合ＰＱ、ＱＰ、ＱＸ、ＸＱ、ＸＺ、ＺＸ、ＺＹ、ＹＺ、ＹＡ、ＡＹの１つが−ＣＲａＸＤ−ＣＲａＹＤ−から構成されるように選択され、Ａ，Ｙ，Ｚ，Ｘ，Ｑ，Ｐによって構成される残基は、互いに独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓから構成される群から選択されて存在し、Ｓｉが存在する場合にはＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；ＸＤはＯ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；かつＹＤはＮＨＲｃ、ＯＨ、ＳＨである；又はＸＤがＣ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；かつＹＤがＣＲｃ２ＮＨＲｃ、ＣＲｃ２ＯＨ、ＣＲｃ２ＳＨ、ＮＨ−ＮＨ２、Ｏ−ＮＨ２又はＮＨ−ＯＨである、
請求項１に記載のキット。
【請求項３】
ＰＱ、ＱＰ、ＡＹ又はＹＡが、−ＣＲａＸＤ−ＣＲａＹＤ−であり、ＸＤ及びＹＤが互いに関連してトランスに位置する、
請求項２に記載のキット。
【請求項４】
ＺＸ又はＸＺが−ＣＲａＸＤ−ＣＲａＹＤ−であり、ＸＤ及びＹＤが互いに関連してシスに位置する、
請求項２に記載のキット。
【請求項５】
ＸＤがＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、ＹＤがＮＨＲｃである、
請求項１乃至４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項６】
前記ジエノフィルが、次構造から選択される化合物である、
請求項５に記載のキット。
【化７１】
2014513717.tif 000080
（ただし、波線は、結合されたＤＤ、ＬＤ−ＤＤの残りであり、場合により、ＴＴ又はＳＰ−ＴＴ又はＭＭ又はＳＰ−ＭＭを含む。）
【請求項７】
前記アクチベータは、式（２）−（４）に係る、前記ジエンから選択されるジエンを含む、請求項１乃至６のいずれか一項に記載のキット。
【化７２】
2014513717.tif 000081
（ただし、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＦ３、ＣＦ２−Ｒ’、ＯＲ’、ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’’Ｒ’’から構成される群から選択され、各々のＲ’及び各々のＲ’’は、独立して、Ｈ、アリール又はアルキルであり；Ａ及びＢは、各々独立して、アルキル置換炭素、アリール置換炭素、窒素、Ｎ＋Ｏ−、Ｎ＋Ｒ（ただしＲがアルキルである）から構成される群から選択され、ただし、Ａ及びＢは両方が炭素ではなく；Ｘは、Ｏ、Ｎ−アルキル及びＣ＝Ｏから構成される群から選択され、及びＹはＣＲであり（但し、Ｒは、Ｈ、アルキル、アリール、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’から構成される群から選択され、Ｒ’及びＲ’’は各々独立して、Ｈ、アリール又はアルキルである）；
【化７３】
2014513717.tif 000082
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、各々独立して、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＦ３、ＣＦ２−Ｒ’、ＮＯ２、ＯＲ’、ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’、  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’’Ｒ’’から構成される群から選択され、ここで、各々のＲ’及び各々のＲ’’は、独立して、Ｈ、アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は、独立して、アリール又はアルキルであり；Ａは、Ｎ−アルキル、Ｎ−アリール、Ｃ＝Ｏ及びＣＮ−アルキルから構成される群から選択され；Ｂは、Ｏ又はＳであり；Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリール、ＣＣ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＣＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、から構成される群から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、各々独立して、Ｈ、アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は、独立して、アリール又はアルキルであり；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリール、Ｎ及びＮ＋Ｏ−から構成される群から選択される）；
【化７４】
2014513717.tif 000083
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、各々独立して、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＦ３、ＣＦ２−Ｒ’、ＮＯ、ＮＯ２、ＯＲ’、ＳＲ’、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲ’、ＰＯ３Ｒ’Ｒ’’、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’、  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’’Ｒ’’から構成される群から選択され、ここで、各々のＲ’及び各々のＲ’’は、独立して、Ｈ、アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は、独立して、アリール又はアルキルであり；ＡはＮ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリール及びＮ＋Ｏ−から構成される群から選択され；ＢはＮであり；Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリール、ＣＣ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｒ’、  ＣＳ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＣＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’から構成される群から選択され、ここでＲ’及びＲ’’は、各々独立して、Ｈ、アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は、独立して、アリール又はアルキルであり；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリール、Ｎ及びＮ＋Ｏ−から構成される群から選択される；）
【請求項８】
前記ジエンは、発明の詳細な説明で与えられるように、式（７）を満たし、Ｒ１及びＲ２でパラ置換されたテトラジエンである、
請求項７に記載のキット。
（ただし式中、Ｒ１及びＲ２は、各々独立して、Ｈ、アルキル、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲ２、ＣＯＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＯＲ、ＳＯ２ＮＲ２、ＰＯ３Ｒ２、ＮＯ、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２，６−ピリミジル、３，５−ピリミジル、２，４−ピリミジル、２，４イミダジル、２，５イミダジル及びフェニルから構成される群から選択される置換基であり、場合により、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲ、ＣＯＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＯＲ、ＳＯ２ＮＲ２、ＰＯ３Ｒ２、ＮＯ及びＡｒから構成される群から選択される１つ以上の電子求引性基で置換されており、ここで、ＲはＨ又はＣ１−Ｃ６アルキルであり、Ａｒはフェニル、ピリジル又はナフチルである）。
【請求項９】
前記ジエンは、
【化７５】
2014513717.tif 000084
【化７６】
2014513717.tif 000085
2014513717.tif 000086
2014513717.tif 000087
から構成される群から選択される、
請求項７に記載のキット。
【請求項１０】
前記ジエンは、
【化７７】
2014513717.tif 000088
2014513717.tif 000089
から構成される群から選択される、
請求項７に記載のキット。
【請求項１１】
前記薬物ＤＤ又は前記リンカーＬＤ又は前記トリガー部分ＴＲの少なくとも１つは、好ましくは抗体である、標的化試薬ＴＴを含む、
請求項１乃至１０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１２】
前記ＬＤ又は前記トリガー部分ＴＲの少なくとも一方は、好ましくはペプチドである、マスキング部分ＭＭを含む、
請求項１乃至１０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１３】
前記薬物は、Ｔ−細胞係合抗体構成物である、
請求項１乃至１２のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１４】
前記プロドラッグは、抗体−トキシン又は抗体−薬物共役物を含む、
請求項１乃至１１のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１５】
請求項１乃至６のいずれか一項に記載の式（１ａ）のジエノフィル部分に、直接的に又は非直接的に結合された薬物化合物を含む、プロドラッグ。
【請求項１６】
薬物を供し、該薬物を請求項１乃至６のいずれか一項に記載の式（１ａ）のジエノフィル部分に化学的に結合させることを含む、非生物的、生体直交型反応によって引き起こされ得る、プロドラッグへと薬物化合物を変化させる方法。
【請求項１７】
治療方法であって、
薬物によって調節され得る疾患を患っている患者が、前記患者に、活性化後に前記薬物が放出されるトリガー部分を含むプロドラッグを投与することによって治療され、
前記トリガー部分は、トランス−シクロオクテン環を含み、該環は、場合によって、１つ以上のヘテロ原子を含み、前記ジエンは、逆電子要請型ディールスアルダー反応で、前記ジエノフィルと反応し得るように選択され、前記トリガー部分は、請求項１乃至６のいずれか一項に記載の式（１ａ）を満たす、
治療方法。
【請求項１８】
請求項１乃至６のいずれか一に記載の式（１ａ）を満たす化合物であって：
【化７８】
2014513717.tif 000090
前記化合物は、動物又はヒトでのプロドラッグ治療での使用のために、薬物に対する結合を含む、化合物。
【請求項１９】
請求項１乃至６のいずれか一項に記載の式（１ａ）を満たす化合物に結合された物質の、生理的環境での、放出のためのアクチベータとしての、テトラジンの使用。
【請求項２０】
請求項１乃至６のいずれか一項に記載の式（１ａ）を満たす化合物と、化学的に結合された形態で投与された物質の、生理的環境での、放出のための化学的ツールとしてのテトラジンと、の間の逆電子要請型ディールスアルダー反応の使用であって、
前記物質は、式（１ａ）を満たす化合物に結合されている、
使用。
【請求項２１】
請求項１乃至６のいずれか一項に記載の式（１ａ）を満たし、治療用化合物のためのキャリアとしての、トランス−シクロオクテンの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非生物的、生体直交型化学反応の手段により活性化される、プロドラッグなどの不活性化薬物に基づく治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
医学分野において、ヒト又は動物の体内の特定の場所で活性化されるプロドラッグなどの不活性化化合物の使用はよく知られている。また、プロドラッグなどの不活性化物の標的化（ターゲット）送達は広く研究されている。多くの努力が薬物送達システムに向けられており、これは薬物の放出を、選択的に標的位置（サイト）及び／又は望ましい時間（タイミング）に有効に行うものである。１つの方法は、局所的及び特異的に酵素活性により特異的に（全身性）プロドラッグを活性化することである。しかし多くの場合に、興味の対象となる標的サイトは好適な過剰発現酵素を持たない。他の方法は、酵素を標的化組織に、抗体指向酵素プロドラッグ治療（ＡＤＥＰＴ）と呼ばれる技術で送達するものである。この方法では、酵素は、腫瘍サイトに、腫瘍関連抗原に結合する抗体と共役することで、標的化される。前記共役物の全身投与、前記標的での局在化及び非結合共役物の脱離後、設計されたプロドラッグが全身に投与され局所的に活性化される。この方法は、内因性酵素によっては達成されてはならない反応触媒を必要とする。これらの要求に応じる非哺乳類由来の酵素は、非常に免疫原性であり得るものであって、実際繰り返し投与を不可能にする。又は、プロドラッグは疾患サイトに標的化され、次に疾患特異的又は非特異的内因性活性化プロセスを受ける（例えば、ｐＨ、酵素、チオール含有化合物など）。
【０００３】
標的化抗がん治療は、従来のがん化学療法に比較して、低減された非特異的毒性及び改善された有効性を有するように設計される。この方法は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の、がん細胞への高能力の共役小分子治療物を特異的に送達する強力な標的化能力により実施される。毒性の問題に対応する試みで、化学療法剤（医薬）は、抗体又はタンパク質レセプターリガンドなどの標的化分子と結合し、これは腫瘍細胞に高い特異性で結合し、抗体−薬物共役物（ＡＤＣ）又は免疫共役物と参照される化合物を形成する。理論上では免疫共役物の毒性は低いが、というのはこれらは前記細胞毒性薬物を、前記特定に細胞表面抗原又はレセプターを発現する腫瘍に直接向けられるからである。この戦略の成功は限定的であったが、その理由のひとつとしては、細胞毒性薬物が大きな抗体又はタンパク質レセプターリガンドと共役する際に不活性化又は活性低下を起こす傾向があるからである。免疫共役物の有望な進展は、リンカーを介して抗体へ結合された（リンクされた）細胞毒性薬物であり、これは腫瘍サイト又は腫瘍細胞内部で開裂する（（Ｓｅｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２０１０，１４：５２９‐５３７）。理想的には、前記ｍＡｂは、腫瘍細胞上の実質的に発現し、正常組織には限定的に発現する抗原への特異的結合である。特異性は、そうでなければ臨床応用のためには毒性すぎる薬物の利用を可能にする。この分野での最近の研究のほとんどが、高度に強力な毒性試薬の使用に向けられている。これは、条件付き安定性を与え、薬物送達が循環中ではなく、腫瘍結合後に起こるようなリンカー技術の開発を必要とする。
【０００４】
共役物として前記薬物は不活性であるが、標的に局在化されると前記薬物が、例えばｐＨ又は酵素により放出され、これは標的特異的であり、かつまたより一般的となり得る。前記薬物放出は、腫瘍細胞内の低ｐＨ、低酸素、特定酵素などの外部機構により活性化され得るが、一般にはより選択的薬物放出は、細胞内、ほとんどはリソソーマル放出機構を通じて達成され得るものであって、最初に内在化されるべき前記抗体共役物を必要とする（例えば、グルタチオン、プロテアーゼ、カタボリズム）。特定の細胞内放出機構（例えばグルタチオン、カテプシン）は通常は、その性質に依存するが親薬物が前記細胞を逃げ出して近隣の細胞を攻撃する結果となり得る。このことは、抗体−薬物共役物の範囲についての重要な作用機構として示され、特に異種のレセプター発現性又は不十分なｍＡｂ浸透性を有する腫瘍ではそうである。開裂可能なリンカーの例は：ヒドラゾン（酸不安定）、ペプチドリンカー（カセプシンＢ開裂可能）、立体障害性ジスルフィド部分（チオール開裂可能）である。又は非開裂可能リンカーがｍＡｂ−薬物共役物で使用され得る。これらの構成物は、カタボリズムでその薬物を放出し、その結果薬物分子はなお１つのアミノ酸に結合されていると考えられる。薬物のほんの一部のみがかかる共役物として活性化を取り戻す。又はこれらのアミノ酸結合薬物は細胞を逃げ出すことができない。それでも、前記リンカーが安定である場合、これらの構成物は一般に、最も安全と考えられ、及び前記薬物及び標的に依存して非常に有効であり得る。
【０００５】
現在の抗体−薬物共役物放出戦略は限界を有する。細胞外薬物放出機構は通常は、大きく非特異的であり（ｐＨ感受性リンカー）毒性を与える結果となる。細胞内放出は、前記ｍＡｂ−薬物の効率（例えばレセプター−介在内在化）に依存し、一方いくつかの癌は、十分な高複製数で存在する癌特異的及び効果的な内在化標的を持たない。細胞内放出はさらに、十分高濃度で、活性化酵素（プロテアーゼ）又は分子（グルタチオンなどのチオール）の存在に依存する。細胞内放出の次に、前記薬物は、ある場合には、前記細胞から標的近隣細胞へ逃げ出す。この効果は、全ての細胞が十分な量の標的レセプターを発現していない不均一な腫瘍には有利であると考えられる。さらに、薬物を浸透させることが難しい腫瘍において重要なことは、対流を妨げる高間質圧である。これは特に、ｍＡｂ（共役物）などの大きな構成物について問題となる。この機構はまた、結合サイトバリアが生じる場合に重要となる。標的化試薬が血管系に放出され、レセプターに結合すると、前記腫瘍内での動きは制限される。血管周囲空間内で制限されるｍＡｂ共役物の可能性はその標的の親和性に比例する。前記浸透性は、前記ｍＡｂ投与量の増加により改善されるが、この方法は、例えば肝臓への毒性を制限する投与量により制限される。さらには、死亡中細胞から出る抗原が、腫瘍間質空間に存在し、そこでこれらｍＡｂ−共役物がその標的細胞に結合することを妨げ得る。また、多くの標的が、非効率的内在によって妨害され、及び異なる薬物は同様にはｍＡｂへリンクされ得ない。さらには、前記標的内で内因性要素で選択的開裂され一方で、前記標的への途中での内因性要素には安定化である（特に、全ｍＡｂの遅い脱離の場合）ようにリンカーを設計することは手間がかかる。その結果として、最適化された、薬物、リンカー、ｍＡｂ及び標的の組み合わせが選択され、各々の場合により最適化されることが必要となる。
【０００６】
効果的なプロドラッグ方法から利益となり得る他の応用分野は、Ｔ−細胞係合抗体構成物（例えば、二−又は三特異的抗体断片）であり、これは免疫システムに係合することで癌に作用する。活性化Ｔ細胞をがん細胞と直接接触させることは、がん細胞を殺す強力な方法を与えることであると、長く考えられてきた（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ３６６（２００８）  ５２６−５３１）。このために作成されてきた多くに二特異性抗体において、大部分は２つの抗体結合サイトからなり、１つのサイトはス用を標的とし、他のサイトはＴ細胞を標的とする（Ｔｈａｋｕｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ２０１０，１２（３），３４０−３４９）。しかし、活性Ｔ細胞結合サイトを含む二特異性抗体では末梢Ｔ細胞結合が生じ得る。これは、前記共役物が前記腫瘍へ近づくことを妨げるだけでなく、またサイトカイン・ストームを起こしてＴ細胞を枯渇させ得る。光活性化可能な抗−Ｔ細胞抗体であって、必要とされる際及び場所でのみ、ＵＶ光の照射に続いて回復される（即ち、腫瘍結合アームを介した腫瘍局在化後）前記抗−Ｔ細胞抗体は、これらの問題を解決するために使用されていきた。抗ヒトＣＤ３（Ｔ細胞標的化）抗体は、光開裂性１−（２−ニトロフェノール）エタノール（ＮＰＥ）コーティングにより可逆的に抑制された（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ３６６（２００８）５２６−５３１）。しかし、光系活性化は、光が浸透し得る身体の領域に制限され、転移性癌などの全身性疾患を治療するために変更することは容易ではない。プロドラッグ方法から利益を得る強く関連する構成物は、三特異性Ｔ細胞係合抗体構成物であり、これは例えば癌標的化試薬に加えてＣＤ３及びＣＤ２８Ｔ細胞係合部分を有する。そのような構成物は、ＣＤ３又はＣＤ２８のいずれか又は両方が結合する領域として使用するには毒性が高く、マスクする必要性がある。
【０００７】
標的化薬物を選択的かつ予想可能に前記標的サイトで活性化し、さらに均一な浸透性及び標的化に依存せず、さらに前記標的への途中及び標的内で変化させる内因性パラメータに依存せず、及び指標、患者ごとに依存しない、活性化できることが望ましい。
【０００８】
現在のプロドラッグ活性化の欠点を解消するために、非生物的、生体直行型化学反応、即ちＳｔａｕｄｉｎｇｅｒ反応を使用して前記プロドラッグの活性化を引き起こすことが提案されている（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ  ２００８，１９，７１４−７１８）。簡単に、導入された概念では、前記プロドラッグは薬物とトリガーの共役物であり、この薬物−トリガー共役物は、例えば酵素や特定のｐＨなどの内因性要素では活性化されず、前記アクチベータ、即ち前記プロドラッグ内のトリガー部分と反応する成分の制御された投与により、前記トリガーから薬物を放出する（又は逆に、薬物からトリガーを放出するが、この放出プロセスの別の見方である）。この概念の提案されたＳｔａｕｄｉｎｇｅｒ方法は、しかし、十分作用しないことが分かり、応用分野も、Ｓｔａｕｄｉｎｇｅｒ反応により実行される放出機構に特定の性質からみて限定的である。Ｓｔａｕｄｉｎｇｅｒ反応を使用する他の欠点は、反応速度が限定されておりことであり、これらの反応のリン化合物が酸化に不安定であることである。従って、非生物的、生体直交型反応で、生理的条件で安定であり、お互いに対してより反応性であり、及び種々の機構の手段により結合された薬物放出を誘導することができる反応物を提供し、それにより、非常に広い活性化薬物放出方法を提供することが望ましい。
【０００９】
選択的プロドラッグ活性化の内因性活性化機構（例えばｐＨ、酵素）に依存しない生体適合性化学反応の使用は、がん治療の強力な新規なツールとなる。必要なときに必要な位置でプロドラッグを選択的に活性化することは、癌を含めて身体内に多くのプロセスを広く制御することが可能になる。抗腫瘍抗体治療などの治療は、それにより、より特異的となり、正常細胞と腫瘍との違いを増加させ、望ましい副作用を低減させる。Ｔ細胞係合抗癌抗体においては、本発明は、不活性抗体構成物（即ちこれは次にプロドラッグ）の全身投与及び腫瘍標的化を可能にし、さらに標的毒性を低減させることを可能にする。十分な腫瘍への取り込みと非標的化領域からの脱離に続いて、腫瘍結合抗体はアクチベータの投与により活性化され、これは前記抗体又は特定の抗体領域の前記トリガーと反応し、その結果トリガーを脱離して前記Ｔ細胞結合機能を回復させる。この結果、Ｔ細胞活性化及び抗癌作用が起こることとなる（即ち、これは次に薬物放出である）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｓｅｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２０１０，１４：５２９−５３７
【非特許文献２】Ｔｈａｋｕｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ２０１０，１２（３），３４０−３４９）
【非特許文献３】Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ３６６（２００８）５２６−５３１
【非特許文献４】Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ  ２００８，１９，７１４−７１８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、非生物的、生体直交型化学反応の手段により活性化される、プロドラッグなどの不活性化に基づく治療方法に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
前記要望により良く対処するために、本発明は、
プロドラッグの投与及び活性化に関するキットであって、当該キットは、
トリガー部分に、直接的に又は非直接的に結合された薬物、及び前記トリガー部分に関するアクチベータを含み、
前記トリガー部分は、ジエノフィルを含み、
前記アクチベータは、ジエンを含み、
前記ジエノフィルは、下記式（１ａ）を満たす：
キット。
【００１３】
【化１】
2014513717.tif 000002
（ただし、Ｔ、Ｆは、各々独立して、Ｈ又はアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩから構成される群から選択される置換基を意味し；記号Ａ、Ｐ、Ｑ、Ｘ、Ｙ及びＺの意味は、下記（１）〜（６）から構成される群から選択され、
（１）結合ＰＱ、ＱＰ、ＱＸ、ＸＱ、ＸＺ、ＺＸ、ＺＹ、ＹＺ、ＹＡ、ＡＹの１つは、−ＣＲａＸＤ−ＣＲａＹＤ−から構成され、Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ、Ｐによって構成される残基は、各々独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓから構成される群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；ＸＤはＯ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；かつＹＤはＮＨＲｃ、ＯＨ、ＳＨであり；又はＸＤはＣ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；かつＹＤはＣＲｃ２ＮＨＲｃ、ＣＲｃ２ＯＨ、ＣＲｃ２ＳＨ、ＮＨ−ＮＨ２、Ｏ−ＮＨ２又はＮＨ−ＯＨである；
（２）ＡはＣＲａＸＤでありかつＺはＣＲａＹＤである、又はＺはＣＲａＸＤでありかつＡはＣＲａＹＤである、又は、ＰはＣＲａＸＤでありかつＸはＣＲａＹＤである、又はＸはＣＲａＸＤでありかつＰはＣＲａＹＤであり、ＸＤ及びＹＤは互いに関連してトランス型に配置され；Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ、及びＰによって構成される残基は、互いに独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓから構成される群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；ＸＤは、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、かつＹＤはＮＨＲｃ、ＯＨ、ＳＨ、ＣＲｃ２ＮＨＲｃ、ＣＲｃ２ＯＨ、ＣＲｃ２ＳＨ、ＮＨ−ＮＨ２、Ｏ−ＮＨ２又はＮＨ−ＯＨである；又はＸＤはＣＲｃ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＣＲｃ２−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＣＲｃ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＣＲｃ２−Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＣＲｃ２−ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＣＲｃ２−ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、かつＹＤはＮＨＲｃ、ＯＨ、ＳＨである；又はＸＤはＣ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；かつＹＤはＣＲｃ２ＮＨＲｃ、ＣＲｃ２ＯＨ、ＣＲｃ２ＳＨ、ＮＨ−ＮＨ２、Ｏ−ＮＨ２、ＮＨ−ＯＨである；
（３）ＡはＣＲａＹＤであり、かつ、Ｐ、Ｑ、Ｘ、Ｚの１つはＣＲａＸＤであり、又は、ＰはＣＲａＹＤ  であり、かつ、Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘの１つはＣＲａＸＤである、又はＹはＣＲａＹＤ  であり、かつＸ又はＰはＣＲａＸＤである、又は、ＱはＣＲａＹＤであり、かつ、Ｚ又はＡはＣＲａＸＤである、又は、Ｚ又はＸのいずれかはＣＲａＹＤであり、かつ、Ａ又はＰはＣＲａＸＤであり、ＸＤ及びＹＤは互いに関連してトランス型に配置され；Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ及びＰによって構成される残基は、各々独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡ  はＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓを構成する群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；  ＸＤは（Ｏ−Ｃ（Ｏ））ｐ−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、ＹＤはＣＲｃ２ＮＨＲｃ、ＣＲｃ２ＯＨ、ＣＲｃ２ＳＨ、ＮＨ−ＮＨ２、Ｏ−ＮＨ２、ＮＨ−ＯＨであり；  ｐは０又は１である；
（４）ＰはＣＲａＹＤであり、かつ、ＹはＣＲａＸＤである、又はＡはＣＲａＹＤであり、かつ、ＱはＣＲａＸＤである、又はＱはＣＲａＹＤであり、かつ、ＡはＣＲａＸＤである、又はＹはＣＲａＹＤであり、かつＰはＣＲａＸＤであり、ＸＤ及びＹＤは、互いに関連してトランス型に配置され；Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ及びＰから構成される残基は、互いに独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓから構成される群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；  ＸＤは（Ｏ−Ｃ（Ｏ））ｐ−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；ＹＤはＮＨＲｃ、ＯＨ、ＳＨであり；ｐは０又は１である；
（５）ＹはＹＤであり、かつ、ＰはＣＲａＸＤである、又はＱはＹＤであり、かつ、ＡはＣＲａＸＤであり；Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ及びＰによって構成される残基は、各々独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓから構成される群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；ＸＤは（Ｏ−Ｃ（Ｏ））ｐ−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；ＹＤはＮＨであり；  ｐは０又は１である；
（６）ＹはＹＤであり、かつ、Ｐ又はＱはＸＤである、又は、ＱはＹＤであり、かつ、Ａ又はＹはＸＤであり；Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ及びＰによって構成される残基は、各々独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ、及びＳ−Ｓから構成される群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；ＸＤはＮ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｎ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；ＹＤはＮＨであり；
ここで、各々のＲａは、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、ＯＲ’、ＳＲ’、Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、Ｓｉ−Ｒ’’’、Ｓｉ−Ｏ−Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｎ３、ＳＯ２Ｈ、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ４Ｈ、ＰＯ３Ｈ、ＰＯ４Ｈ、ＮＯ、ＮＯ２、ＣＮ、ＯＣＮ、ＳＣＮ、ＮＣＯ、ＮＣＳ、ＣＦ３、ＣＦ２−Ｒ’、ＮＲ’Ｒ”、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’−Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’−Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’−Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’−Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’’−Ｒ’’、ＣＲ’ＮＲ’’から構成される群から選択され、各々のＲ’及び各々のＲ’’は、独立して、Ｈ、アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は、独立して、アリール又はアルキルであり；各々のＲｂは、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＯＨから構成される群から選択され；各々のＲｃは、独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル及びＣ１−６アリールから選択され；  ２つ以上のＲａ，ｂ，ｃ部分は、結合して環を形成しても良く；  及び（ＬＤ）ｎは、好ましくはＳ、Ｎ、ＮＨ又はＯを介してＴＲに結合された、ｎ＝  ０又は１を有する任意のリンカーであり、ここで、これらＳ、Ｎ、ＮＨ又はＯ原子はリンカーの一部であり、直鎖状に及び／又は分枝状に配置された複数のユニットを構成しても良く；ＤＤは、好ましくはＳ、Ｎ、ＮＨ又はＯを介して結合された１つ以上の治療的部分又は薬物であり、ここでこれらＳ、Ｎ、ＮＨ又はＯ原子は、前記治療的部分の一部である）、を供する。
【００１４】
他の側面において、本発明は、上記式（１ａ）を満たすトランス−シクロオクテン部分に対して、直接又は間接的に結合される薬物化合物を含むプロドラッグを提供する。
【００１５】
また他の側面では、本発明は、非生物的、生体直交型反応で引き起こされ得るプロドラッグ内に薬物化合物を変更する方法を提供し、前記方法は、薬物を提供するステップと、上記式（１ａ）を満たす環状部分に前記薬物を化学的に結合させるステップと、を含む。
【００１６】
更に他の側面では、本発明は、薬物により調節され得る疾患に羅患する患者が、前記患者に、トリガー部分を含むプロドラッグが投与され、前記アクチベータの投与により前記薬物が放出される活性化後に治療され、前記トリガー部分が、上記式（１ａ）を満たす環状構造を含む、治療方法を提供する。
【００１７】
更に他の側面では、本発明は、８員環非芳香族環モノアルケニレン部分（好ましくはシクロオクテン部分、及びより好ましくはトランス−シクロオクテン部分）を含む化合物であり、前記部分は、動物又はヒトのプロドラッグ治療で使用するために、薬物への結合（リンケージ）を含む。
【００１８】
他の側面では、本発明はジエンの使用、好ましくはテトラジンの、生理的環境下で、式（１ａ）を満たす化合物に結合された物質の放出のためのアクチベータとしての使用である。これに関連して本発明はまた、生理的環境下で、式（１ａ）を満たす化合物に結合された物質の放出のためのアクチベータとしての使用のための、テトラジン、及び、生理的環境下で、テトラジンがアクチベータとして使用される、式（１ａ）を満たす化合物に結合される物質の放出を活性化するための方法に関連する。
【００１９】
他の側面では、本発明は、生理的環境下で、共有結合形で投与された物質の放出のための化学的ツールとしての、式（１ａ）を満たす化合物と、ジエン、好ましくはテトラジンとの間の逆電子要請型ディールスアルダー反応の使用を提供し、前記物質は式（１ａ）を満たす化合物に結合される。
【００２０】
逆電子要請型（“レトロ”）ディールスアルダー反応
式（１ａ）のジエノフィルとジエンとは、逆電子要請型ディールスアルダー反応の可能性を有する。トリガーのアクチベータとのレトロディールスアルダー反応によるプロドラッグの活性化は、薬物の放出を導く。
【００２１】
以下の反応式は、（３，６）−ジ−（２−ピリジル）−ｓ−テトラジンジエン及びトランス−シクロオクテンジエノフィルとの間の［４＋２］ディールスアルダー反応、続いて、生成物と二窒素とが形成されるレトロディールスアルダー反応に関して与えられる。反応生成物は、互変異性化し得、これも式中に示される。トランスシクロオクテン誘導体は、古典的なディールスアルダー反応のように電子吸引基を有さず、この型のディールスアルダー反応は、古典的な反応とは区別され、しばしば、「逆電子要請型ディールスアルダー反応」として参照される。以下の記載では、一連の両方の反応ステップ、即ち、最初のディールスアルダーシクロ付加（通常、逆電子要請型ディールスアルダーシクロ付加）及びこれに続くレトロディールスアルダー反応は、短く「レトロディールスアルダー反応」又は「レトロＤＡ」として参照されるであろう。以下、時々、「ｒＤＡ」反応として省略される。反応の生成物は、このとき、レトロディールスアルダー付加物又はｒＤＡ付加物である。
【００２２】
【化２】
2014513717.tif 000003
【発明を実施するための形態】
【００２３】
一般的な意味において、本発明は、薬物が、式（１ａ）を満たすトランス−シクロオクテン誘導体から、テトラジン誘導体などの適合性のあるジエンとのシクロ付加反応で放出され得る、という認識に基づく。式（１ａ）のジエノフィルは、それが実質的に任意のジエンと反応する（及び薬物放出をもたらす）という利点を有する。
【００２４】
理論に縛られることなく、本発明者らは、レトロディールスアルダー付加物の分子構造が、このｒＤＡ付加物内での同時の脱離又は環化反応が薬物を放出する、と考えている。特に、本発明者らは、即ち本発明に係る、好適に変化さえたｒＤＡ成分が、ｒＤＡ付加物を導き、ジエノフィルから生じる部分上への薬物に対する結合は、ジエノフィルから生じる前記部分上への求核試薬との反応によって破壊され、一方、そのようなジエノフィルから生じる前記部分内の分子内反応は、ジエンとのｒＤＡ反応に先立っては除外されると考えている。
【００２５】
プロドラッグ活性化におけるレトロディールスアルダー反応を使用する一般的な概念は、スキーム１で説明される。
スキーム１：
【００２６】
【化３】
2014513717.tif 000004
このスキームにおいて、「ＴＣＯ」は、トランス−シクロオクテンを意味する。用語トランスシクロオクテンは、ここでは、１又は複数のヘテロ原子を含み得るように使用され、特に、式（１ａ）を満たす構造を参照する。広い意味で、本発明者らは、シュタウディンガー（Ｓｔａｕｄｉｎｇｅｒ）反応に基づいて行った試み以外に、プロドラッグのためのトリガー部分としてＴＣＯを選択することは、薬物（活性）部分をプロドラッグ（活性化可能）部分に導入するための有用なツールを提供することを見出し、前記活性化は、ジエノフィル（トリガー）のジエン（アクチベータ）との強力な、非生物的、生体直交型反応、例えば、前記レトロディールスアルダー反応を通じて生じ、かつ、前記プロドラッグは、薬物−ジエノフィル共役物である。
【００２７】
理解されるべきことは、スキーム１で、レトロディールスアルダー付加物で、最終生成物同様に、指標ＴＣＯ基及び指標ジエン基が、これらの基がレトロディールスアルダー反応で変換された後で、それぞれＴＣＯ及びジエン基の残基である、ということである。
【００２８】
非生物的、生体直交型化学反応の適用を成功させるために必要なことは、２つの関与する官能基が、良好に調整された反応性を有し、共存する官能性との干渉を防止することである。理想的には、反応相手は、非生物的で、生理的条件で反応性であり、お互いにのみ反応性であって、その細胞／生理的環境を無視できる（生体直交性）ものである。生理的環境で課される選択性の要求は、ほとんどの従来の反応の使用を除外する。
【００２９】
逆電子要請型ディールスアルダー反応は、しかしながら、低濃度及び準当量条件で、動物内で有効であることが示された（Ｒ．Ｒｏｓｓｉｎ  ｅｔ  ａｌ、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  ２０１０、４９、３３７５−３３７８）。本発明に対する反応相手は、歪ずみのかかったトランス−シクロオクテン（ＴＣＯ）誘導体及びテトラジン誘導体等の好適なジエンである。ＴＣＯとテトラジンとの間のシクロ付加反応は、迅速に進行し、その後、レトロディールスアルダー反応で二窒素の放出によって再構築し、ジヒドロピリダジン共役物を形成する。これとその互変異性体は、レトロディールスアルダー付加物である。
【００３０】
ｒＤＡ反応の適合性を鑑みると、本発明は、一側面において、生理的環境において、トランス−シクロオクテンに結合された物質の放出のためのアクチベータとしてテトラジンの使用を供する。これと関連して、本発明はまた、生理的環境において、トランス−シクロオクテンに結合された物質の放出のためのアクチベータとしての使用のためのテトラジン、及び、生理的環境における、テトラジンがアクチベータとして使用される、トランス−シクロオクテンに結合された物質の放出を活性化する方法に関連する。
【００３１】
本発明者らは、さらに、式（１ａ）のＴＣＯの構造が、非常に好適に、ＴＣＯジエノフィル内で利用可能な二重結合及びジエンを伴う反応の結果として、それに結合される薬物の放出を引き起こすに適しているということを、非自明性に考えている。これを可能にすると思われる特徴は、ｒＤＡ付加物内の８員環のものと比較して、ジエノフィル反応物内のＴＣＯの８員環の本質の変化である。ｒＤＡ内の８員環は、実質的に、より立体配座的自由度を有し、ｒＤＡ反応に先立つ大きく歪められたＴＣＯ内の８員環と比較して、実質的に異なる構造を有する。ｒＤＡ反応に先立つジエノフィル内の求核サイトは、ジエノフィル内の特定の構造にロックされ、したがって、分子内で反応し、それによって薬種を放出するためには、適切に配置されない。一方、８員環の変化された特質により、この求核サイトは、ｒＤＡ付加物ないに適切に配置され、分子内で反応し、それによって薬物を放出するであろう。上記により、しかしながら理論によって制限されることなく、我々は、薬物放出は、ジエンアクチベータとのｒＤＡ反応の後及び反応により、ＴＣＯ−ジエノフィルの歪み放出によって投与されると考えている。
【００３２】
本発明はしたがって、特定の化学構造よりはるかに優れた範囲を有するということが強調され得る。広い意味では、本発明は、式（１ａ）のジエノフィルを使用して、ｒＤＡ反応が、ｒＤＡ付加物と同様に、生体直交型反応で引き起こされる薬物放出を可能とする有効なプラットフォームを具体化するものである。
【００３３】
これを鑑みると、本発明はまた、生理的環境における、結合物の放出のための化学的ツールとして、トランス−シクロオクテンとテトラジンとの間の逆電子要請型ディールスアルダー反応の使用を供する。
【００３４】
前記反応が生体直交型であるという事実及び多くの反応選択肢が反応物相手に存在するという事実は、当業者には明らかであろう。例えば、ｒＤＡ反応は、プレターゲット医薬の分野で知られている。国際公開第２０１０／１１９３８２号、国際公開第２０１０／１１９３８９号及び国際公開第２０１０／０５１５３０号を参照文献とする。本発明は前記反応の完全に異なる使用を提供するものであるが、理解されるべきことは、前標的化で使用されるｒＤＡ反応物対として利用可能な種々の構造可能性はまた、本発明の分野で利用可能である、ということである。
【００３５】
本発明で使用されるジエノフィルトリガー部分は、トランス−シクロオクテン環を含み、前記環は場合により１又は複数のヘテロ原子を含む。以下、読みやすさのために、この８員環部分は、トランス−シクロオクテン部分として定義され、「ＴＣＯ」部分として省略される。理解されるべきことは、本質は、ジエノフィルとして作用し、反応によりその共役された薬物から放出される８員環の可能性にある、ということである。当業者は、ジエノフィル活性が、前記環の全ての炭素原子の存在に依存することは必要ではないという事実を知っているが、これは、また、ヘテロ環モノアルケニレン８−員環もジエノフィル活性を有することが知られているからである。
【００３６】
したがって、一般的には、本発明は、薬物置換トランス−シクロオクテンに厳密に限定されるものではない。有機化学の当業者は、他の８員環系ジエノフィルが存在し、これはトランス−シクロオクテンとして同様の環内二重結合を含むが、前記環内のいずれかに１又は複数のヘテロ原子を有し得る、ということを認識しているであろう。即ち、本発明は、一般的に、８員環非芳香族性環状アルケニレン部分、好ましくはシクロオクテン部分、より好ましくはトランス−シクロオクテン部分で、共役された薬物を含む、ものに関連する。
【００３７】
インビボ作用がしばしば僅かな構造変化で変化される例えば医薬的活性物質を含む場合以外では、本発明は、薬物共役の好適な設計と組み合わせられる正しい化学反応性を何よりもまず要求する。したがって、可能な構造は、当業者によってこれらがジエノフィルとして反応可能であることをよく知っているものに拡張される。
【００３８】
留意すべきことは、命名法の選択に依存して、ＴＣＯジエノフィルはまた、Ｅ−シクロオクテンとして記載され得るということである。従来の命名法を参照して、理解されるべきことは、シクロオクテン環上での置換の結果として、前記構造の位置及び分子量に依存して、同じシクロオクテン異性体が、形式的にＺ−異性体として記載され得るということである。本発明においては、本発明の任意の置換体は、形式的に「Ｚ」又は「Ｅ」、「シス」又は「トランス」異性体であろうと、無置換トランス−シクロオクテン又は無置換Ｅ−シクロオクテンの誘導体として考えられる。用語「トランス−シクロオクテン」（ＴＣＯ）は、Ｅ−シクロオクテン同様に、交換可能に使用され、また、置換基が形式的に逆の命名法を必要とする場合でも、本発明に係る全てのジエノフィルに関して維持される。即ち、本発明は、以下番号付けされたように炭素原子１と６とがＥ−（エントゲーゲン）又はトランス配置であるシクロオクテンに関連する。
【００３９】
【化４】
2014513717.tif 000005
式（１）
【００４０】
本発明はさらに、具体的な実施態様に関して説明され、図面を参照するが本発明はこれらに限定されるものではなく特許請求の範囲にのみ限定されるものでる。不定冠詞また定冠詞「ひとつの」、「前記」を伴って使用される限定的又は非限定的物の単数名詞形は、特に記載がない限り複数を含む。記載された図面は模式的でありなんらを限定するものではない。図面において、ある要素のサイズは誇張されており、説明することを目的とするだけのものである。特許請求の範囲の全ての参照番号は、本発明を限定するものではない。
【００４１】
さらに留意されるべきことは、明細書や特許請求の範囲で使用される用語「含む」は、列記される手段に限定されるべきではなく、他の要素やステップを含むことを除外するものではない。従って、表現「手段Ａ及びＢを含む装置」とは、部品ＡとＢのみからなる装置に限定されるべきではない。これは、本発明においては、関連する部品がＡ及びＢであることのみを意味する。
【００４２】
以下いくつかの化学式で、「アルキル」及び「アリール」が参照される。
ここで、「アルキル」は、それぞれ独立して、１０炭素原子までの脂肪族、直鎖、分岐、飽和、不飽和及び／又は環状ヒドロカルビル基を示し、１〜１０のＯ、Ｎ又はＳなどのヘテロ原子を含むことができ、「アリール」は、それぞれ独立して、２０炭素原子までの芳香族基又はヘテロ芳香族基を示し、置換されていてよく、及び１〜１０のＯ、Ｎ又はＳなどのヘテロ原子を含むことができる。「アリール」基はまた、「アルキルアリール」又は「アリールアルキル」基（簡単な例ではベンジル基）を含む。「アルキル」、「アリール」、「アルキルアリール」及び「アリールアルキル」が含む炭素原子の数は、かかる用語の前に指定されることで示される（即ち、Ｃ１−１０アルキルは、前記アルキルが１から１０の炭素原子を含み得ることを意味する）。本発明のある化合物は、キラル中心及び互変異性体を含み、及び全てのエナンチオマー、ジアステレオマー及び互変異性は、それらの混合物も含めて本発明の範囲に含まれる。いくつかの式で、基又は置換基は、「Ａ」、「Ｂ」、「Ｘ」、「Ｙ」などの文字で参照され、種々の（数字付き）「Ｒ」基で参照される。これらの文字の定義は、各々の式について読まれるべきものであり、即ち異なる式ではこれらの文字は特に断りがない限り、それぞれ独立して、異なる意味を持ち得る。
【００４３】
ここで記載される本発明の全ての実施態様では、アルキルは好ましくは低級アルキルであり（Ｃ１−４アルキル）であり、各々のアリールは好ましくはフェニルである。
【００４４】
初期の研究で、前（プレ）標的化放射線免疫イメージングのために前記逆電子要請型ディールスアルダー反応の利用が示された（Ｒ．Ｒｏｓｓｉｎ  ｅｔ  ａｌ、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  ２０１０、４９、３３７５−３３７８）。この特定のシクロ付加反応は、（３、６）−ジ−（２−ピリジル）−ｓ−テトラジン誘導体とＥ−シクロオクテンとの間で生じ、続いてレトロディールスアルダー反応が起こって前記生成物と窒素を形成する。前記トランスシクロオクテン誘導体は、古典的なディールスアルダー反応として電子吸引基を含まないことから、このタイプのディールスアルダー反応は、古典的な反応とは区別され、しばしば、「逆電子要請型ディールスアルダー反応」と参照されている。以下の記載で、一連の両方の反応ステップ、即ち前記最初のディールスアルダーシクロ付加（通常は逆電子要請型ディールスアルダーシクロ付加）及び続くレトロディールスアルダー反応は短く「レトロディールスアルダー反応」と参照される。
【００４５】
レトロディールスアルダー反応
レトロディールスアルダーカップリング化学は、一般的に、一組の反応物がカップリングして不安定な中間体を形成し、この中間体がレトロディールスアルダー反応による唯一の副生成物として小分子（出発原料に依存して、これは例えば、Ｎ２、ＣＯ２、ＲＣＮになり得る）を放出して、レトロディールスアルダー付加物を形成する。一組の反応物は、１つの反応物として（即ち１つの生体直交型反応基）、例えば電子不足テトラジンなどのテトラジン誘導体といった好適なジエン及び、他の反応物として（即ち、他の生体直交型反応基）、歪ずみのかかったシクロオクテン（ＴＣＯ）といった適切なジエノフィルを含む。
【００４６】
例えば電子不足（置換）テトランジンのＴＣＯ部分との非常に速い反応は、連結中間体をもたらし、これは、［４＋２］レトロディールスアルダーシクロ付加の唯一の副生成物としてのＮ２を放出することによって、ジヒドロピリダジンレトロディールスアルダー付加物に再配置される。水生環境においては、最初に形成される４，５−ジヒドロピリダジン生成物は、１，４−ジヒドロピリダジン生成物に互変異性化し得る。
【００４７】
２つの反応種は、非生物的であり、インビボで迅速な代謝又は副反応を受けない。それらは生体直交型であり、例えばそれらは、生理的媒体中で選択的に各々と反応する。したがって、本発明の化合物及び方法は、生きている有機体中で使用され得る。さらに、反応基は比較的小さく、生体的サンプル中又は生きている有機体中に、それらの中の生体分子のサイズを大きく変更することなく導入され得る。逆電子要請型ディールスアルダー反応及び一組の反応種の挙動についての参照文献は：Ｔｈａｌｈａｍｍｅｒ、Ｆ；Ｗａｌｌｆａｈｒｅｒ、Ｕ；Ｓａｕｅｒ、Ｊ、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９９０、３１（４７）、６８５１−６８５４；Ｗｉｊｎｅｎ、ＪＷ；Ｚａｖａｒｉｓｅ、Ｓ；Ｅｎｇｂｅｒｔｓ、ＪＢＦＮ、Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９６、６１、２００１−２００５；Ｂｌａｃｋｍａｎ、ＭＬ；Ｒｏｙｚｅｎ、Ｍ；Ｆｏｘ、ＪＭ、Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、２００８、１３０（４１）、１３５１８−１９）、Ｒ．Ｒｏｓｓｉｎ、Ｐ．ＲｅｎａｒｔＶｅｒｋｅｒｋ、ＳａｎｄｒａＭ．ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｏｓｃｈ、Ｒ．Ｃ．Ｍ．Ｖｕｌｄｅｒｓ、ｌ．Ｖｅｒｅｌ、Ｊ．Ｌｕｂ、Ｍ．Ｓ．Ｒｏｂｉｌｌａｒｄ、Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  ２０１０、４９、３３７５、Ｎ．Ｋ．Ｄｅｖａｒａｊ、Ｒ．Ｕｐａｄｈｙａｙ、Ｊ．Ｂ．Ｈａｕｎ、Ｓ．Ａ．Ｈｉｌｄｅｒｂｒａｎｄ、Ｒ．Ｗｅｉｓｓｌｅｄｅｒ、Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  ２００９、４８、７０１３、及びＤｅｖａｒａｊ  ｅｔ  ａｌ．、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．、２００９、４８、１−５を含む。
【００４８】
理解されるべきことは、広い意味で、本発明により、前記レトロディールスアルダーカップリング及び続く薬物活性化化学は、基本的に任意の分子、基又は部分の組に適用でき、これらは、プロドラッグ治療に使用され得るものである、ということである。即ち、かかる一組の１つは、ジエノフィル（トリガー）に結合される薬物を含むであろう。他の１つは、前記ジエノフィルとの反応で使用するための相補的ジエンであろう。
【００４９】
トリガー
プロドラッグは、ＴＲとして示されるトリガー部分に、直接的に又は間接的に、結合されたＤＤとして示される薬物を含み、前記トリガー部分はジエノフィルである。ジエノフィルは、広い意味で、８員環非芳香族性環アルケニレン部分（好ましくはシクロオクテン部分、及びより好ましくはトランス−シクロオクテン部分）である。
【００５０】
本発明において、１又は複数の薬物の放出は、ＴＣＯジエノフィルから生じるレトロディールスアルダー付加物の分子内環化／脱離反応によって引き起こされる。ＴＣＯ上に存在する求核サイト（即ち、ジエノフィル、具体的には、このトリガー内のＹＤ基からの、上記参照）は、このＴＣＯがアクチベータと反応し、ｒＤＡ付加物を形成する後に、同じＴＣＯ上の求核サイト（具体的には、このトリガー内のＸＤ基からの）と反応する。ＴＣＯから生じるｒＤＡ付加物の部分、即ち、ｒＤＡ付加物の８員環、は、ｒＤＡ反応に先立つＴＣＯ内の８員環と比較して、異なる構造及び増加した立体配座的自由度を有し、求核反応を引き起こし得、それによって脱離基として薬物を放出する。求核サイト及び求電子サイトが、レトロディールスアルダー付加物内で近接近して集まるように、分子内環化／脱離反応が起こり、少ない歪ずみで、所望の構造を生み出す。さらに、環状構造の形成はまた、行われる分子内反応に関する駆動力になり得、したがって、脱離基の効果的な放出、即ち、薬物の放出にも寄与し得る。両方のサイトは、比較的リジッドな立体配座的に再歪められたＴＣＯ環により、そのような反応に関して不利に配置されるので、求核サイトと求電子サイトとの間の反応は起こらない又はレトロディールスアルダー反応に先立って比較的効果的でない。プロドラッグそれ自身は、それ自体としては比較的安定であり、放出は、アクチベータ及びプロドラッグが分子内反応にさらされるレトロディールスアルダー付加物内に到達し、結集した後だけに有利に働く。好ましい実施形態において、ＴＣＯ環は、クラウン構造である。下記の例は、本発明に関連する放出機構を説明する。
【００５１】
【化５】
2014513717.tif 000006
上記例は、どのようにしてレトロディールスアルダー付加物内で分子内環化／脱離反応が、薬種の放出をもたらし得るかを説明する。ｒＤＡ反応は、Ｂ及びＣを製造するために互変異性化し得る、Ａを製造する。構造体Ｂ及びＣはまた、互いに互変異性化し得る（図示しない）。ｒＤＡ生成物Ａ、Ｂ及びＣは、分子内で環化し、結合した薬物を放出し、任意に酸化し得て生成物Ｇを形成する、構造体Ｄ、Ｅ及びＦを提供する。水中でのＡのＢ及びＣへの互変異性化は非常に速い（数秒のオーダ内）ので、発明者らの考えでは、薬物放出は、主に構造体Ｂ及びＣから起こる。しかし、実際には、（安定な）環状構造を形成することなく、求核サイトは、求電子サイトへの求核攻撃、続く薬物放出によって薬種を放出する際に補助するということもあり得る。この場合、例えば、環状構造は、短命であり、不安定であり、求核サイトの再形成で崩壊するので、環状でない構造が形成され、求核サイトは失われた部分がないままである。いかなる場合において、プロセスが考えられるどのような方法でも、薬種（ここでは、アルコール「薬物−ＯＨ」）は、レトロディールスアルダー付加物から効果的に追い出され、一方、単独でプロドラッグからは追い出されない。
【００５２】
理論に制限されることを望むことなく、上記例は、どのように立体障害及び結果としてのＴＣＯトリガー内の求核及び求電子サイトの好ましくない配置が解放され、ｒＤＡ付加物形成に続き、脱離／環化反応及び薬物の放出につながるかを説明する。
【００５３】
ＴＣＯ上の求核サイトに関して、人は、前記サイトが、（人間の）体の中に存在し得る条件下で、例えば、ｐＨ＝約７．４生理的条件で又は例えばｐＨ値が７．４より小さくなり得る悪性組織内で普及する条件で、求核試薬として作用可能である必要があるということを考えなければならない。好ましい求核試薬は、アミン、チオール又はアルコール基であり、これらは一般的に、本来最も求核性であり、したがって、最も効果的である。
【００５４】
本発明において、ＴＣＯは、次の式（１ａ）を満たす：
【００５５】
【化６】
2014513717.tif 000007
（１ａ）
【００５６】
実施形態１において、結合ＰＱ，  ＱＰ，  ＱＸ，  ＸＱ，  ＸＺ，  ＺＸ，  ＺＹ，  ＹＺ，  ＹＡ，  ＡＹの１つは、−ＣＲａＸＤ−ＣＲａＹＤ−から構成され、残基（Ａ，Ｙ，Ｚ，Ｘ，Ｑ，Ｐからの）は、各々独立して、ＣＲａ２，  Ｓ，  Ｏ，  ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡは、ＣＲａ２であり、非隣接ペアの原子は、Ｏ−Ｏ，  Ｏ−Ｓからなる群から選択されてあり、もし存在する場合は、Ｓｉは、ＣＲａ２  ｏｒ  Ｏに隣接する。
【００５７】
ＸＤは、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり，その場合ＹＤは、ＮＨＲｃ，  ＯＨ，  ＳＨである；又は、ＸＤはＣ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、その場合ＹＤは、ＣＲｃ２ＮＨＲｃ，  ＣＲｃ２ＯＨ，  ＣＲｃ２ＳＨ，  ＮＨ−ＮＨ２，  Ｏ−ＮＨ２，  ＮＨ−ＯＨである。
【００５８】
好ましくは、ＸＤは、ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、ＹＤはＮＨＲｃである。
【００５９】
この実施形態１において、ＸＤ及びＹＤ基は、互いに関連してシス又はトランスに配置されても良く、ＴＣＯ上の位置に依存して、シス又はトランスが好まれる：もしＰＱ，  ＱＰ，  ＡＹ又はＹＡが−ＣＲａＸＤ−ＣＲａＹＤ−であるなら、その時、ＸＤ及びＹＤは、好ましくは互いに関連してトランスで配置される；もしＺＸ又はＸＺが−ＣＲａＸＤ−ＣＲａＹＤ−であるなら、その時、ＸＤ及びＹＤは、好ましくは、互いに関連してシスで配置される。
【００６０】
実施形態２において、ＡはＣＲａＸＤであり、ＺはＣＲａＹＤである、又は、ＺはＣＲａＸＤであり、ＡはＣＲａＹＤである、又は、ＰはＣＲａＸＤであり、ＸはＣＲａＹＤである、又はＸはＣＲａＸＤであり、ＰはＣＲａＹＤである、そして、ＸＤ及びＹＤは、互いに関連してトランス型（ｔｒａｎｓ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）に配置され、残基（Ａ，Ｙ，Ｚ，Ｘ，Ｑ，Ｐからの）は、互いに独立して、ＣＲａ２，  Ｓ，  Ｏ，  ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡは、ＣＲａ２であり、非隣接ペアの原子は、Ｏ−Ｏ，  Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓからなる群から選択されてあり、もし存在するならＳｉは、ＣＲａ２又はＯに隣接し；ＸＤはＯ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、その場合、ＹＤはＮＨＲｃ，  ＯＨ，  ＳＨ，  ＣＲｃ２ＮＨＲｃ，  ＣＲｃ２ＯＨ，  ＣＲｃ２ＳＨ，  ＮＨ−ＮＨ２，  Ｏ−ＮＨ２，  ＮＨ−ＯＨであり、又は、ＸＤはＣＲｃ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  ＣＲｃ２−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  ＣＲｃ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  ＣＲｃ２−Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  ＣＲｃ２−ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  ＣＲｃ２−ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、その場合、ＹＤはＮＨＲｃ，  ＯＨ，  ＳＨであり、又は、ＸＤはＣ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、その場合、ＹＤはＣＲｃ２ＮＨＲｃ，  ＣＲｃ２ＯＨ，  ＣＲｃ２ＳＨ，  ＮＨ−ＮＨ２，  Ｏ−ＮＨ２，  ＮＨ−ＯＨである。
【００６１】
好ましくは、ＸＤは、ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、ＹＤはＮＨＲｃである。
【００６２】
実施形態３において、ＡはＣＲａＹＤであり、Ｐ，  Ｑ，  Ｘ，  Ｚの１つはＣＲａＸＤである、又は、ＰはＣＲａＹＤであり、Ａ，  Ｙ，  Ｚ，  Ｘの１つはＣＲａＸＤである、又は、ＹはＣＲａＹＤであり、Ｘ又はＰはＣＲａＸＤである、又は、ＱはＣＲａＹＤであり、Ｚ又はＡはＣＲａＸＤである、又は、Ｚ又はＸのいずれか一方がＣＲａＹＤであり、Ａ又はＰがＣＲａＸＤであり、ＸＤ及びＹＤは、田がいい関連してトランス型で配置され、残基（Ａ，Ｙ，Ｚ，Ｘ，Ｑ，Ｐからの）は、各々独立して、ＣＲａ２，  Ｓ，  Ｏ，  ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡは、ａｒｅ  ＣＲａ２であり、非隣接ペアの原子は、Ｏ−Ｏ，  Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓからなる群から選択されてあり、もし存在するならＳｉは、ＣＲａ２  ｏｒ  Ｏに隣接する。
【００６３】
ＸＤは、（Ｏ−Ｃ（Ｏ））ｐ−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；  ＹＤは、ＣＲｃ２ＮＨＲｃ，  ＣＲｃ２ＯＨ，  ＣＲｃ２ＳＨ，  ＮＨ−ＮＨ２，  Ｏ−ＮＨ２，  ＮＨ−ＯＨであり；ｐは０又は１である。
【００６４】
好ましくは、ＸＤ  ｉｓ  （Ｏ−Ｃ（Ｏ））ｐ−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、ｐは１で、ＹＤはＣＲｃ２ＮＨＲｃである。
【００６５】
実施形態４において、ＰはＣＲａＹＤであり、ＹはＣＲａＸＤである又はＡはＣＲａＹＤであり、ＱはＣＲａＸＤである、又は、ＱはＣＲａＹＤであり、ＡはＣＲａＸＤである、又は、ＹはＣＲａＹＤであり、ＰはＣＲａＸＤである、そして、ＸＤ及びＹＤは、互いに関連して、トランス型で配置され；残基（Ａ，Ｙ，Ｚ，Ｘ，Ｑ，Ｐからの）は、各々独立して、ＣＲａ２，  Ｓ，  Ｏ，  ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、非隣接ペアの原子は、Ｏ−Ｏ，  Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓからなる群から選択されてあり、もし存在するならＳｉは、ＣＲａ２又はＯに隣接する。
【００６６】
ＸＤは、（Ｏ−Ｃ（Ｏ））ｐ−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；ＹＤはＮＨＲｃ，  ＯＨ，  ＳＨであり；  ｐは０又は１である。
【００６７】
好ましくはＸＤは（Ｏ−Ｃ（Ｏ））ｐ−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、ｐは１で、ＹＤはＮＨＲｃである。
【００６８】
実施形態５において、ＹはＹＤであり、ＰはＣＲａＸＤである、又は、ＱはＹＤであり、ＡはＣＲａＸＤである；残基（Ａ，Ｙ，Ｚ，Ｘ，Ｑ，Ｐからの）は、各々独立して、ＣＲａ２，  Ｓ，  Ｏ，  ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、非隣接ペアの原子は、Ｏ−Ｏ，  Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓからなる群から選択されてあり、もし存在するならＳｉは、ＣＲａ２  ｏｒ  Ｏに隣接する。
【００６９】
ＸＤは、（Ｏ−Ｃ（Ｏ））ｐ−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；ＹＤはＮＨであり；  ｐは０又は１である。
【００７０】
好ましくは、ＸＤはＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）又は（Ｏ−Ｃ（Ｏ））ｐ−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、ｐは０又は１である。
【００７１】
実施形態６において、ＹはＹＤであり、Ｐ又はＱはＸＤである、又は、ＱはＹＤであり、Ａ又はＹはＸＤである；残基（Ａ，Ｙ，Ｚ，Ｘ，Ｑ，Ｐからの）は、各々独立して、ＣＲａ２，  Ｓ，  Ｏ，  ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、非隣接ペアの原子は、Ｏ−Ｏ，  Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓからなる群から選択されてあり、もし存在するならＳｉは、ＣＲａ２又はＯに隣接する。
【００７２】
ＸＤは、Ｎ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ），  Ｎ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；ＹＤはＮＨであり；好ましくはＸＤはＮ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）である。
【００７３】
Ｔ、Ｆは各々独立して、Ｈ又はアルキル，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ又はＩからなる群から選択される置換基を意味する。（ＬＤ）ｎは、ｎが０又は１の必要に応じたリンカーであり、直鎖的に及び／又は分岐して配置された複数の部分を含み得る。ＤＤは、１又は複数の治療的部分又は薬物であり、好ましくは、Ｓ，  Ｎ，  ＮＨ又はＯを介して結合され、これらの原子は、前記治療的部分の一部である。
【００７４】
好ましい実施形態において、式（１Ａ）のＴＣＯは、全て炭素環である。他の好ましい実施態様では、前記式（１ａ）のＴＣＯはヘテロ環炭素環であり、前記環に１又は２の酸素原子、好ましくは１つの酸素原子を含む。
【００７５】
好ましくは、ＤＤがＴＲ又はＬＤにＮＨを介して結合される場合、このＮＨはＤＤからの一級アミン（−ＮＨ２）残基であり、及びＤＤがＮを介して結合される場合には、前記ＮはＤＤからの二級アミン（−ＮＨ−）残基である。同様に、好ましくは、ＤＤがＯ又はＳを介して結合される場合には、前記Ｏ又はＳは、それぞれ、ＤＤからのヒドロキシル（−ＯＨ）残基又はスルフヒドリル（−ＳＨ）残基である。
【００７６】
さらに好ましくは、ＤＤに含まれる前記Ｓ、Ｎ、ＮＨ、又はＯ部分がＤＤの脂肪族性又は芳香族性炭素に結合されている。
【００７７】
好ましくはＬＤがＴＲにＮＨを介して結合される場合、このＮＨはＬＤからの一級アミン（−ＮＨ２）残基であり、及びＬＤを介して結合されている場合には、このＮはＬＤからの二級アミン（−ＮＨ−）残基である。同様に、好ましくは、ＬＤがＯ又はＳを介して結合される場合には、前記Ｏ又はＳは、それぞれ、ＬＤからのヒドロキシル（−ＯＨ）残基又はスルフヒドリル（−ＳＨ）残基である。さらに好ましくは、ＬＤに含まれる前記Ｓ、Ｎ、ＮＨ、又はＯ部分がＤＤの脂肪族性又は芳香族性炭素に結合されている。
【００７８】
本発明においてリンカーＬＤが参照される場合、これは自壊性であるか又はそうでないか、又はそれらの組み合わせであり得るものであり、及び複数の自壊性ユニットからなることができる。さらに明確にする方法で、ｐ＝０及びｎ＝０である場合、薬物ＤＤは直接前記脱離反応の脱離基を構成し、及びｐ＝０及びｎ＝１の場合、前記自壊性リンカーは前記脱離反応の脱離基を構成する。リンカーＬＤと薬物ＤＤの結合位置及び方法は当業者に知られている（例えば、Ｐａｐｏｔ  ｅｔ  ａｌ、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００８、８、６１８−６３７を参照）。それにもかかわらず、自壊性リンカーＬＤの典型的な、限定的ではない例はベンジル誘導体であり例えば以下に示される。右側に、複数のユニットを持つ自壊性リンカーが示され、このリンカーは、ＣＯ２と４−アミノベンジルアルコールに分解するだけでなく、また１、３−ジメチルイミダゾリジン−２−オンユニットへ分解する。
【００７９】
【化７】
2014513717.tif 000008
前記自壊性リンカーＬＤのベンジル基を、好ましくは２−及び／又は６−位置上で、置換することにより、分子内環化／脱離反応における立体効果及び／又は電子的効果のいずれかによって引き起こされる、薬種ＤＤの放出速度を調整することが可能となり得る。そのような置換ベンジル−誘導体を準備するための合成法は、当業者に知られている（例えばＧｒｅｅｎｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  １９９９，  ４２，  ３６５７−３６６７  ａｎｄ  Ｔｈｏｒｎｔｈｗａｉｔｅ    ｅｔ  ａｌ，  Ｐｏｌｙｍ．  Ｃｈｅｍ．，  ２０１１，  ２，  ７７３−７９０参照）。種々の放出速度を有する置換ベンジル−誘導体のいくつかの例が下記に示される。
【００８０】
【化８】
2014513717.tif 000009
前記示される各々のＲａは独立して、Ｈ，  アルキル，  アリール，  ＯＲ’，  ＳＲ’，  Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’’’，  Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’，  Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’，  Ｓｉ−Ｒ’’’，  Ｓｉ−Ｏ−Ｒ’’’，  ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’，  ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’，  ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’，  ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  Ｎ３，  ＳＯ２Ｈ，  ＳＯ３Ｈ，  ＳＯ４Ｈ，  ＰＯ３Ｈ，  ＰＯ４Ｈ，  ＮＯ，  ＮＯ２，  ＣＮ，  ＯＣＮ，  ＳＣＮ，  ＮＣＯ，  ＮＣＳ，  ＣＦ３，  ＣＦ２−Ｒ’，  ＮＲ’Ｒ”，  Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’，  Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’，  Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”，  Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ’’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）−Ｒ’’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’’’，  ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’−Ｒ’’’，  ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’−Ｒ’’’，  ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’−Ｒ’’’，  ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’−Ｒ’’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ”−Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ”−Ｒ’’，  ＣＲ’ＮＲ’’であり、各々のＲ’及び各々のＲ’’は独立して、Ｈ、アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は独立してアリール又はアルキルであり；
前記示される各々のＲｂは独立して、Ｈ，  アルキル，  アリール，  Ｏ−アルキル，  Ｏ−アリール，  ＯＨからなる群から選択され；
前記示される各々のＲｃは独立して、Ｈ，  Ｃ１−６アルキル及びＣ１−６アリールから選択され；
２以上のＲａ’ｂ’ｃ部分は共に環を形成し得；
好ましくは、各々のＲａは独立して、Ｈ、アルキル、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ’’’からなる群から選択され、Ｒ’及びＲ’’は各々独立してＨ、アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は独立してアルキル又は又はアリールである。
【００８１】
前記全ての実施態様で、場合によりＡ、Ｐ、Ｑ、Ｙ、Ｘ、及びＺ又はその置換体、又は又は自壊性リンカーＬＤ、又は薬物ＤＤのひとつは、場合によりスペーサーＳＰを介して１又は複数の標的化試薬ＴＴ又はマスキング試薬ＭＭに結合される。
【００８２】
上述されたＴＣＯの合成は当業者には十分利用可能なものである。これはまた、前記歪のあるシクロアルケン環で１又は複数のヘテロ元素を有するＴＣＯについても明示的に保持される。これについては参照文献を参照すること（Ｃｅｒｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９８０、４５、２６１及びＰｒｅｖｏｓｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ２００９、１３１、１４１８２）。
【００８３】
更に好ましい実施形態において、ジエノフィルは、次の構造から選択される化合物である：
【００８４】
【化９】
2014513717.tif 000010
波線は、結合されたＤＤ、ＬＤ−ＤＤの残りであり、場合によりＴＴ又はＳＰ−ＴＴ又はＭＭ又はＳＰ−ＭＭを含む。
【００８５】
代替的な実施形態において、ジエノフィルは、次の構造から選択される化合物である：
【００８６】
【化１０】
2014513717.tif 000011
波線は、結合されたＤＤ、ＬＤ−ＤＤの残りであり、場合によりＴＴ又はＳＰ−ＴＴ又はＭＭ又はＳＰ−ＭＭを含む。
【００８７】
キャリアとしてのＴＣＯの使用
本発明はまた、全ての実施形態において、式（１ａ）を満たすトランス−シクロオクテンの、治療用化合物のキャリアとしての使用を含む。トランスシクロオクテンは、上述されるように、広い意味でＴＣＯとして記載されており、好ましくは全ての炭素環又は１又は２のヘテロ原子を含む。治療用化合物は、薬物又はその他の化合物又は治療応用を有することが意図されている部分である。本発明のこの側面に係るキャリアとしてのＴＣＯの使用は、治療用化合物の治療活性とは関連しない。実際に、また、治療用化合物が薬物として開発されることが意図される薬物質である場合、多くの場合には実際には失敗し得るものであるが、キャリアとしてのＴＣＯの応用は、薬物の試験において有用である。この意味で、キャリアの許容性でのＴＣＯは、医薬賦形剤と同様であると考えられ、薬物を被験者に導入する場合にキャリアとして作用する。
【００８８】
キャリアとしてのＴＣＯの使用は、ジエン、具体的にはテトラジンとの生体直交型反応を開始する部分により担持された薬物の、被験者への投与を可能にするという利点を有する。これは、身体へと担持された薬物の運命に影響を与えるためだけでなく、その運命に続いて（例えば、続いてラベル化ジエンをそれと反応させることが可能になることによって）又はその運命を変化させる（例えば、ｐＫ変性剤をそれと結合させることが可能になることによって）ための強力なツールを提供することとなる。これは全て、上述されたｒＤＡ反応内で、ジエンをＴＣＯと反応させる可能性に基づいている。キャリアは、以下十分に説明されるように、ＴＣＯから治療化合物の放出を引き起こすために、好ましくは、以下説明するアクチベータと反応する。
【００８９】
アクチベータ
アクチベータは、生体直交型反応基を含み、このアクチベータの生体直交型反応基はジエンである。このジエンは、他の生体直行型反応基、トリガー、ここではジエノフィルと反応する（上記参照）。アクチベータのジエンは、レトロディールスアルダー付加物を与える、レトロディールスアルダー反応に続く、ディールスアルダーシクロ付加反応を経る、トリガーのジエノフィルとの反応を可能にするように選択される。この中間的付加物は、その後、１以上の薬物を放出するが、この薬物放出は、レトロディールスアルダー付加物の特定の分子構造に関連する、種々の環境や条件下で引き起こされ得る。
【００９０】
ジエン
当業者は、レトロディールスアルダー反応で活性であるジエンの効果（ｗｅａｌｔｈ）に気付く。アクチベータ内に含まれるジエンは、テトラジン（本発明に係る好ましいアクチベータである）等の第３の二重結合を含む環構造の部分であり得る。
【００９１】
一般的にアクチベータは、少なくとも２つの共役二重結合を含むヘテロ環部分を含む分子である。
【００９２】
好ましいジエンは、式（２）−（４）で参照される、下記に示される。
【００９３】
【化１１】
2014513717.tif 000012
式（２）において、Ｒ１は、Ｈ，  アルキル，  アリール，  ＣＦ３，  ＣＦ２−Ｒ’，  ＯＲ’，  ＳＲ’，  Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’，  Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’，  Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’’，  Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，  Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＮＲ’Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’’Ｒ’’からなる群から選択され、各々のＲ’及び各々のＲ’’は、独立して、Ｈ，  アリール又はアルキルであり；Ａ及びＢは、各々独立して、アルキル−置換炭素、アリール置換炭素、窒素、Ｎ＋Ｏ−、Ｎ＋Ｒからなる群から選択され、Ｒはアルキルであり、但しＡ及びＢは共に炭素ではない；Ｘは、Ｏ，  Ｎ−アルキル及びＣ＝Ｏからなる群から選択され、ＹはＣＲであり、Ｒは、Ｈ，  アルキル，  アリール，  Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’，  Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’，  Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’，  Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’，  Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’からなる群から選択され、Ｒ’及びＲ’’は、各々独立してＨ，  アリール又はアルキルである。
【００９４】
【化１２】
2014513717.tif 000013
シクロオクテンに関する反応相手として具体的に適切なジエンは、式（３）で与えられ、ここで、Ｒ１及びＲ２は、各々独立して、Ｈ，  アルキル，  アリール，  ＣＦ３，  ＣＦ２−Ｒ’，  ＮＯ２，  ＯＲ’，  ＳＲ’，  Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’，  Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’，  ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’，  ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’，  ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’，  ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’，  Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’，  Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’，  Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’，  Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，  Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＮＲ’Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’，    ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’，  ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’’Ｒ’’からなる群から選択され、各々のＲ’及び各々のＲ’’は、独立してＨ，  アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は独立してアリール又はアルキルであり；ＡはＮ−アルキル，  Ｎ−アリール，  Ｃ＝Ｏ，  ａｎｄ  ＣＮ−アルキルからなる群から選択され；ＢはＯ又はＳであり；Ｘは、Ｎ，  ＣＨ，  Ｃ−アルキル，  Ｃ−アリール，  ＣＣ（＝Ｏ）Ｒ’，  ＣＣ（＝Ｓ）Ｒ’，  ＣＳ（＝Ｏ）Ｒ’，  ＣＳ（＝Ｏ）２Ｒ’’’，  ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’，  ＣＣ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’，  ＣＣ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’，  ＣＣ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’，  ＣＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＣＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’からなる群から選択され、Ｒ’及びＲ’’は各々独立して、Ｈ，  アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は独立してアリール又はアルキルであり；Ｙは、ＣＨ，  Ｃ−アルキル，  Ｃ−アリール，  Ｎ，  ａｎｄ  Ｎ＋Ｏ−からなる群から選択される。
【００９５】
【化１３】
2014513717.tif 000014
シクロオクテンに関する反応相手として具体的に適切な他のジエンは、ジエン（４）であり、ここで、Ｒ１及びＲ２は、各々独立して、Ｈ，  アルキル，  アリール，  ＣＦ３，  ＣＦ２−Ｒ’，  ＮＯ，  ＮＯ２，  ＯＲ’，  ＳＲ’，  ＣＮ，  Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’，  Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’，  ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’，  ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’，  ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’，  ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’，  Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’，  Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’，  Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲ’，  ＰＯ３Ｒ’Ｒ’’，  Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’，  Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，  Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＮＲ’Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’，  ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’’Ｒ’’からなる群から選択され、各々のＲ’及び各々のＲ’’は、独立して、Ｈ，  アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は、独立して、アリール又はアルキルであり；Ａは、Ｎ，  Ｃ−アルキル，  Ｃ−アリール及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；  ＢはＮであり；  Ｘは、Ｎ，  ＣＨ，  Ｃ−アルキル，  Ｃ−アリール，  ＣＣ（＝Ｏ）Ｒ’，  ＣＣ（＝Ｓ）Ｒ’，    ＣＳ（＝Ｏ）Ｒ’，  ＣＳ（＝Ｏ）２Ｒ’’’，  ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’，  ＣＣ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’，  ＣＣ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’，  ＣＣ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’，  ＣＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＣＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’からなる群から選択され、Ｒ’及びＲ’’は、各々独立して、Ｈ，  アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は、独立して、アリール又はアルキルであり；  Ｙは、ＣＨ，  Ｃ−アルキル，  Ｃ−アリール，  Ｎ，及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択される。
【００９６】
【化１４】
2014513717.tif 000015
本発明によると、特に有用なジエンは、各々、式（５）、（６）及び（７）で与えられる、１，２−ジアジン、１，２，４−トリアジン及び１，２，４，５−テトラジン誘導体である。
【００９７】
１，２−ジアジンは、（５）で与えられ、ここで、Ｒ１及びＲ２は、各々独立して、Ｈ，  アルキル，  アリール，  ＣＦ３，  ＣＦ２−Ｒ’，  ＮＯ２，  ＯＲ’，  ＳＲ’，  Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’，  Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’，  ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’，  ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’，  ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’，  ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’，  Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’，  Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’，  Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’，  Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’，  Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，  Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＮＲ’Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’，    ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’，  ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’’Ｒ’’からなる群から選択され、各々のＲ’及び各々のＲ’’は、独立して、Ｈ，  アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は独立して、アリール又はアルキルであり、；Ｘ及びＹは、各々独立して、Ｏ，  Ｎ−アルキル，  Ｎ−アリール，  Ｃ＝Ｏ，  ＣＮ−アルキル，  ＣＨ，  Ｃ−アルキル，  Ｃ−アリール，  ＣＣ（＝Ｏ）Ｒ’，  ＣＣ（＝Ｓ）Ｒ’，  ＣＳ（＝Ｏ）Ｒ’，  ＣＳ（＝Ｏ）２Ｒ’’’，  ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’，  ＣＣ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’，  ＣＣ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’，  ＣＣ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’，  ＣＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，  ＣＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’からなる群から選択され、Ｒ’及びＲ’’は、各々独立して、Ｈ，  アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は、独立して、アリール又はアルキルであり、Ｘ−Ｙは、痰結合又は二重結合であっても良く、Ｘ及びＹは、６員環ジアジンから離れた第２の環に結合されていても良い。好ましくは、Ｘ−Ｈがエステル基（Ｘ＝Ｏ及びＹ＝Ｃ＝Ｏ；Ｘ−Ｙは単結合）又はＸ−Ｙシクロアルカン基を表し（Ｘ＝ＣＲ’及びＹ＝ＣＲ’’であり；Ｘ−Ｙは単結合であり；Ｒ’及びＲ’’は結合されている）、好ましくはシクロプロパン環であり、Ｒ’及びＲ’’は、１，２−ジアジンの外側で第１の炭素で互いに結合されている。
【００９８】
前記１，２，４−トリアジンは、（６）で与えられ、ここで、Ｒ１及びＲ２は、互いに独立して、Ｈ，アルキル，アリール，ＣＦ３，ＣＦ２−Ｒ’，ＮＯ２，ＯＲ’，ＳＲ’，Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’，Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’，ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’，ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’，ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’，ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’，Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’，Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’，Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’，Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’，Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’，Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’，Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’，Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’，ＮＲ’Ｒ’’，ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’，ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’，ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’，ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’，ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’，ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’，ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’，ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’，ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’，ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’’Ｒ’’からなる群から選択され，各々のＲ’及び各々のＲ’’は独立して，Ｈ，アリール又はアルキルであり，Ｒ’’’は独立して，アリール又はアルキル又はであり；Ｘは，ＣＨ，Ｃ−，Ｃ−アリール，ＣＣ（＝Ｏ）Ｒ’，ＣＣ（＝Ｓ）Ｒ’，ＣＳ（＝Ｏ）Ｒ’，ＣＳ（＝Ｏ）２Ｒ’’’，ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’，ＣＣ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’，ＣＣ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’，ＣＣ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’，ＣＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，ＣＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’からなる群から選択され，Ｒ’及びＲ’’は各々独立して、Ｈ，アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は独立してアリール又はアルキルである。
【００９９】
１，２，４，５−テトラジンは（７）で与えられ、ここでＲ１及びＲ２は、各々独立して、Ｈ，アルキル，アリール，ＣＦ３，ＣＦ２−Ｒ’，ＮＯ，ＮＯ２，ＯＲ’，ＳＲ’，ＣＮ，Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’，Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’，ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’，ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’，ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’，ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’，Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’，Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’，Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲ’，ＰＯ３Ｒ’Ｒ’’，Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’，Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’，Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’，Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’，Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’，Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’，ＮＲ’Ｒ’’，ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’，ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’，ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’，ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’，ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’，ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’，ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’，ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’，ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’，ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’，ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’’Ｒ’’からなる群から選択され，各々のＲ’及び各々のＲ’’は独立して、Ｈ、アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は独立してアリール又はアルキルである。
【０１００】
電子不足１，２−ジアジン（５）、１，２，４−トリアジン（６）又は１，２，４，５−テトラジン（７）は、特に興味があり、かかるジエンは、一般的には、ジエノフィルに対して、より高い反応性を有するからである。ジ−、トリ−又はテトラアジンは、それらが一般的に電子供与体とはされない基又は部分で置換されるか、又は、電子吸引基で置換される場合に、電子不足である。例えば、Ｒ１及び／又はＲ２は、Ｈ，  アルキル，  ＮＯ２，  Ｆ，  Ｃｌ，  ＣＦ３，  ＣＮ，  ＣＯＯＲ，  ＣＯＮＨＲ，  ＣＯＮＲ２，  ＣＯＲ，  ＳＯ２Ｒ，  ＳＯ２ＯＲ，  ＳＯ２ＮＲ２，  ＰＯ３Ｒ２，  ＮＯ，  ２−ピリジル，  ３−ピリジル，  ４−ピリジル，  ２，６−ピリミジル，  ３，５−ピリミジル，  ２，４−ピリミジル，  ２，４  イミダジル（ｉｍｉｄａｚｙｌ），  ２，５  イミダジル又はフェニルからなる群から選択され、  場合により、ＮＯ２，  Ｆ，  Ｃｌ，  ＣＦ３，  ＣＮ，  ＣＯＯＲ，  ＣＯＮＨＲ，  ＣＯＮＲ，  ＣＯＲ，  ＳＯ２Ｒ，  ＳＯ２ＯＲ，  ＳＯ２ＮＲ２，  ＰＯ３Ｒ２，  ＮＯ，  Ａｒ等の１又は複数の電子吸引基で置換され、ここでＲは、Ｈ又はアルキルであり、Ａｒは芳香族性基であり、特にフェニル、ピリジル又はナフチルである。
【０１０１】
式（７）の１，２，４，５−テトラジンは、アクチベータジエンとして最も好ましく、というのは、これらの分子は、一般的に、好ましいＴＣＯジエノフィル等のジエノフィルとのレトロディールスアルダー反応において、最も反応性が高いからであり、たとえＲ１及び／又はＲ２基が必ずしも電子吸引性でない場合であっても、たとえＲ１及び／又はＲ２が実際に電子供与性であってもである。電子供与基は、例えば、ＯＨ，  ＯＲ’，  ＳＨ，  ＳＲ’，  ＮＨ２，  ＮＨＲ’，  ＮＲ’Ｒ’’，  ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’，  ＮＨＣ（＝Ｓ）Ｒ’’，  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’，  ＮＨＳＯ２Ｒ’’，  ＮＲ’ＳＯ２Ｒ’’であり、ここでＲ’及びＲ’’は、各々独立して、アルキル又はアリール基である。他の電子供与基の例は、前記リストで記載されるような、１又は複数の電子供与基で置換されたフェニル基であり、特に、前記フェニル基の２−，４−及び／又は６−位置で置換される場合である。
【０１０２】
本発明によると、２つの電子吸引残基を有する１，２，４，５−テトラジン、又は、１つの電子吸引基を有し、電子吸引でも電子供与でもない１つの残基を有する１，２，４，５−テトラジンは、電子不足と呼ばれる。同様に、２つの電子供与残基を有する１，２，４，５−テトラジン、又は、１つの電子供与残基を有し、電子吸引でも電子供与でもない１つの残基を有する１，２，４，５−テトラジンは、電子不足と呼ばれる。共に電子吸引でも電子供与でもない２つの残基を有する１，２，４，５−テトラジン、又は、１つの電子吸引残基と１つの電子供与残基とを有する１，２，４，５−テトラジンは、電子不足でも電子十分でもない。
【０１０３】
１，２，４，５−テトラジンは、実際は、非対称的でも対称的でも良く、即ち、式（７）におけるＲ１及びＲ２基は、各々、異なる基であっても良いし、同一の基であっても良い。対称的な１，２，４，５−テトラジンは、これらのアクチベータが、合成法を介してより容易に入手可能であるので、より便利である。
【０１０４】
我々は、脱離プロセスを介してプロドラッグからモデル医薬化合物（例えばフェノール）を放出するアクチベータとしての能力に関して、いくつかの１，２，４，５−テトラジンを試験し、電子不足、電子十分又は電子不足でも電子十分でもないテトラジンが、薬物放出を導くことが可能であることを見出した。さらに、対称的テトラジン及び非対象的テトラジン両方が、効果的であった。
【０１０５】
電子不足１，２，４，５−テトラジン及び電子不足でも電子十分でもない１，２，４，５−テトラジンは、一般的に、ジエノフィル（ＴＣＯｓ等）とのレトロディールスアルダー反応において、より反応性が高く、これら２分類の１，２，４，５−テトラジンは、電子十分の１，２，４，５−テトラジンに対して好ましく、これは、たとえ後者がプロドラッグ内で薬物放出を導くことが可能であってもである。
【０１０６】
したがって、特に有益なテトラジン誘導体は、電子不足テトラジン、即ち、一般的に電子供与性として適用しない基又は部分で置換され、好ましくは、電子吸引置換基を有さない、テトラジンである。式（７）を参照すると、電子不足テトラジンに関して、Ｒ１及びＲ２は、各々独立して、２−ピリジル，  ３‐ピリジル，  ４−ピリジル，  ２，６−ピリミジル，  ３，５−ピリミジル，  ２，４−ピリミジル又はフェニルからなる群から選択された置換基を意味し、場合により、ＮＯ２，  Ｆ，  Ｃｌ，  ＣＦ３，  ＣＮ，  ＣＯＯＨ，  ＣＯＯＲ，  ＣＯＮＨ２，  ＣＯＮＨＲ，  ＣＯＮＲ２，  ＣＨＯ，  ＣＯＲ，  ＳＯ２Ｒ，  ＳＯ２ＯＲ，  ＮＯ，  Ａｒ等の１つ又は複数の電子吸引基で置換され、ここでＲは、Ｃ１−Ｃ６  アルキルであり、Ａｒは、具体的にはフェニル、ピリジル又はナフチルの芳香族基を意味する。
【０１０７】
式（２）−（７）の各々にかかる化合物において、Ｒ１及びＲ２基は、更にここで述べられる適切なリンカー又はスペーサー部分を有し得る。
【０１０８】
次のパラグラフにおいて、１，２，４，５−テトラジンアクチベータの特定の例が、式（７）内のＲ１及びＲ２残基を定義することによって、強調される。
【０１０９】
電子吸引残基を有する対称的電子不足１，２，４，５−テトラジンは、例えば、Ｒ１  ＝  Ｒ２  ＝  Ｈ，  ２−ピリジル，  ３−ピリジル，  ４−ピリジル，  ２，４−ピリミジル，  ２，６−ピリミジル，  ３，５−ピリミジル，  ２，３，４−トリアジル又は２，３，５−トリアジルを有するものである。他の例は、Ｒ１＝Ｒ２＝フェニルの場合であって、ＣＯＯＨ又はＣＯＯＭｅカルボキシレート、又はＣＮニトリル又はＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＣＨ３又はＣＯＮ（ＣＨ３）２アミド、又はＳＯ３Ｈ又はＳＯ３Ｎａスルホネート、又はＳＯ２ＮＨ２、ＳＯ２ＮＨＣＨ３又はＳＯ２Ｎ（ＣＨ３）２スルホンアミド、又はＰＯ３Ｈ２又はＰＯ３Ｎａ２ホスホネート置換基を、フェニル基の２−、３−又は４−位置、又はフェニル基の３−及び５−位置、又は２−及び４−位置、又は２、−及び６−位置に持つ、フェニル基であるものである。他の置換基のパターンも可能であり、テトラジンが対称的である限り、種々の置換基の使用を含む。これらの構造のいくつかの例に関して下記を参照。
【０１１０】
【化１５】
2014513717.tif 000016
電子供与残基を有する対称的電子十分１，２，４，５−テトラジンは、例えば、Ｒ１  ＝  Ｒ２  ＝  ＯＨ，  ＯＲ’，  ＳＨ，  ＳＲ’，  ＮＨ２，  ＮＨＲ’，  ＮＲ’２，  ＮＨ−ＣＯ−Ｒ’，  ＮＨ−ＳＯ−Ｒ’，  ＮＨ−ＳＯ２−Ｒ’，  ２−ピリル（ｐｙｒｒｙｌ），  ３−ピリル，  ２−チオフェン，  ３−チオフェンを有するものであり、ここでＲ’は、メチル、エチル、フェニル又はトルイル基である。他の例は、Ｒ１  ＝  Ｒ２  ＝  フェニルを有するものであり、ここでフェニルは、ＯＨ，  ＯＲ’，  ＳＨ，  ＳＲ’，  ＮＨ２，  ＮＨＲ’，  ＮＲ’２，  ＮＨ−ＣＯ−Ｒ’，  ＮＲ’’−ＣＯ−Ｒ’，  ＮＨ−ＳＯ−Ｒ’又はＮＨ−ＳＯ２−Ｒ’置換基を有し、ここでＲ’は、メチル、エチル、フェニル又はトルイル基であり、Ｒ’’は、メチル又はエチル基であり、前記の置換は、２−又は３−又は４−又は２−及び３−又は２−及び４−又は２−及び５−又は２−及び６−又は３−及び４−又は３−及び５−又は３−，  ４−及び５−位置でされたものである。これらの構造のいくつかの例に関して下記を参照。
【０１１１】
【化１６】
2014513717.tif 000017
電子吸引残基も電子供与残基も有さない対称的１，２，４，５−テトラジンは、例えば、Ｒ１  ＝  Ｒ２  ＝  フェニル，  メチル，  エチル，  （イソ）プロピル，  ２，４−イミダジル，  ２，５−イミダジル，  ２，３−ピラジル又は３，４−ピラジルを有するものである。他の例は、Ｒ１＝Ｒ２＝ヘテロ（芳香族性）環を持つものであり、例えばオキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール又はオキサゾリン環である。他の例は、Ｒ１  ＝  Ｒ２  ＝  フェニルを有するものであり、このフェニルは、ＣＯＯＨ，  ＣＯＯＭｅ，  ＣＮ，  ＣＯＮＨ２，  ＣＯＮＨＣＨ３，  ＣＯＮ（ＣＨ３）２，  ＳＯ３Ｈ，  ＳＯ３Ｎａ，  ＳＯ２ＮＨ２，  ＳＯ２ＮＨＣＨ３，  ＳＯ２Ｎ（ＣＨ３）２，  ＰＯ３Ｈ２  ｏｒ  ＰＯ３Ｎａ２から選択される１つの電子吸引性置換基と、ＯＨ，  ＯＲ’，  ＳＨ，  ＳＲ’，  ＮＨ２，  ＮＨＲ’，  ＮＲ’２，  ＮＨ−ＣＯ−Ｒ’，  ＮＲ’’−ＣＯ−Ｒ’，  ＮＨ−ＳＯ−Ｒ’又はＮＨ−ＳＯ２−Ｒ’置換基から選択される１つの電子供与性置換基と、を有し、ここで、Ｒ’は、メチル、エチル、フェニル又はトルイル基であり、Ｒ’’は、メチル又はエチル基である。置換基は、２−及び３−，  ２−及び４−，  ２−及び５−，  ２−及び６，  ３−及び４−，  並びに３−及び５−位置でなされ得る。更に他の例は、Ｒ１  ＝  Ｒ２  ＝ピリジル又はピリミジル部分であり、１つの電子供与性置換基が、ＯＨ，  ＯＲ’，  ＳＨ，  ＳＲ’，  ＮＨ２，  ＮＨＲ’，  ＮＲ’２，  ＮＨ−ＣＯ−Ｒ’，  ＮＲ’’−ＣＯ−Ｒ’，  ＮＨ−ＳＯ−Ｒ’又はＮＨ−ＳＯ２−Ｒ’置換基から選択され、ここでＲ’は、メチル、エチル、フェニル又はトルイル基であり、Ｒ’’は、メチル又はエチル基である。いくつかの例に関して下記を参照。
【０１１２】
【化１７】
2014513717.tif 000018
非対称的１，２，４，５−テトラジンが考慮される場合には、所与のＲ１及びＲ２残基の任意の組み合わせを選択しても良く、これらは、式（７）による対称的テトラジンについて強調され、列記されているものである。ただし、もちろん、Ｒ１及びＲ２は異なっている。好ましい非対称的１、２、４、５−テトラジンは、実際は、少なくとも１つの残基Ｒ１又はＲ２が電子吸引性である。いくつかの例示構造が下記に示されている。
【０１１３】
【化１８】
2014513717.tif 000019
アクチベータに関する更なる考察
上記において、アクチベータは、本発明のどちらの２つの好ましい実施形態に関しても述べられ、定義されており、両方の実施形態に関して、１，２−ジアジン、１，２，４−トリアジン及び１，２，４，５−テトラジン、具体的には１，２，４，５−テトラジンが好ましいジエンアクチベータである。下記において、アクチベータのいくつかの関連する特徴が強調され、ここで全ての特定の用途に関して正しいアクチベータ剤を設計するために、多くの選択肢があるということが明らかになるであろう。
【０１１４】
本発明によると、アクチベータ、例えば１，２，４，５−テトラジンは、有用で有益な、薬理学的及び薬物動態的特性を有し、これは次のことを意味する。即ち、アクチベータは、非毒性又は少なくとも十分に低い毒性であり、また十分に低い毒性である代謝物を生成し、生理的溶液に十分溶解性であり、薬学的に通常使用される水性又は他の処方で使用でき、及び、適切なｌｏｇＤ値を有する（ここで、この値は、生理的ｐＨでのアクチベータ分子の親水性／疎水性バランスを反映する）、ということである。当該技術分野で知られているように、ｌｏｇＤ値は、負（親水性分子）又は正（疎水性分子）であり得るが、ここでｌｏｇＤ値がより低い又はより高いと、各々、その分子はより親水性又はより疎水性となる。ｌｏｇＤ値は、大抵の分子に関してかなり正確に予測することができ、アクチベータのｌｏｇＤは、その設計において、極性又は非極性基を付加すること又は除くことによって調整することができる。以下、計算されたｌｏｇＤ値（ｐＨ＝７．４）に対応するいくつかのアクチベータ設計について示す。留意すべきことは、メチル、シクロアルキレン、ピリジン、アミン、アルコール又はスルホネート基を加えること、又はフェニル基を除くことは、ｌｏｇＤ値を変更し、非常に広い範囲のｌｏｇＤ値を得ることを可能にする、ということである。
【０１１５】
【化１９】
2014513717.tif 000020
【０１１６】
【化２０】
2014513717.tif 000021
与えられたｌｏｇＤ数は、加重方法から、「ＶＧ」（Ｖｉｓｗａｎａｄｈａｎ，  Ｖ．  Ｎ．；  Ｇｈｏｓｅ，  Ａ．  Ｋ．；  Ｒｅｖａｎｋａｒ，  Ｇ．  Ｒ．；  Ｒｏｂｉｎｓ，  Ｒ．  Ｋ．，  Ｊ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｆ．  Ｃｏｍｐｕｔ．  Ｓｃｉ．，  １９８９，  ２９，  １６３−１７２）、「ＫＬＯＰ」（Ｋｌｏｐｍａｎ，  Ｇ．；  Ｌｉ，  Ｊｕ−Ｙｕｎ．；  Ｗａｎｇ，  Ｓ．；  Ｄｉｍａｙｕｇａ，  Ｍ．：  Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｆ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ｓｃｉ．，  １９９４，  ３４，  ７５２）及び「ＰＨＹＳ」（ＰＨＹＳＰＲＯＰ（Ｃ）データベース）法を等しく重視して、０．１ＭのＮａ＋／Ｋ＋Ｃｌ−中で水溶液に基づいて計算された。
【０１１７】
本発明に係るアクチベータは、プロドラッグに適切な反応性を有し、これは、ジエン、特に１，２，４，５−トリアジンを十分に電子不足にすることによって管理され得る。十分な反応性は、アクチベータがプロドラッグに到達するとすぐに、プロドラッグとの迅速なレトロディールスアルダー反応が生じることを保証する。
【０１１８】
本発明に係るアクチベータは、優れた生体利用性を有し、これは、意図された目的を実行するために、（ヒト）身体内で利用可能であることを意味し；プロドラッグが第１ターゲットに効果的に到達することを意味する。したがって、アクチベータは、非標的でない血液成分又は組織に大きくとどまらない。アクチベータは、血液中に存在するアルブミンタンパク質へと結合するように設計され得るが（当該分野で知られているように、血液循環時間を増加させるために）、同時にプロドラッグに到達することが可能な血液流から効果的に放出されるべきである。したがって、血液結合及び血液放出は、適切にバランスされるべきである。アクチベータの血液循環時間は、アクチベータの分子量を大きくすることによって増加され得る。例えば、アクチベータにポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基を付加することによって（ペグ化）。または、アクチベータのＰＫ／ＰＤが、アクチベータに、ポリマー、タンパク質、（短い）ペプチド、炭水化物等の他の部分を共役させることで、変更され得る。
【０１１９】
本発明に係るアクチベータは、マルチマー性であっても良く、複数のジエン部分が、分子足場（ｓｃａｆｆｏｌｄ）、特に例えば多官能性分子、炭水化物、ポリマー、デンドリマー、タンパク質又はペプチドに結合され得、ここでこれらの足場は、好ましくは水溶性である。使用され得る足場の例は、（多官能性）ポリエチレングリコール、ポリ（プロピレンイミン）（ＰＰＩ）デンドリマー、ＰＡＭＡＭデンドリマー、グリコール系デンドリマー、ヘパリン誘導体、ヒアルロン酸誘導体又はＨＳＡ等の血清アルブミンタンパク質である。
【０１２０】
プロドラッグ活性が分子外領域で起こる用途に関して、ジエンは、比較的親水性である。
【０１２１】
好ましくは、アクチベータは、次の式から選択されるテトラジンである：
【０１２２】
【化２１】
2014513717.tif 000022
【０１２３】
【化２２】
2014513717.tif 000023
プロドラッグの位置に依存して（例えば、細胞内又は細胞外；標的にされる特定の器官）、アクチベータは、このプロドラッグに効果的に到達することができるように設計される。したがって、アクチベータは、例えば、そのｌｏｇＤ値、その反応性又はその電荷を変化させることで、調整され得る。アクチベータはさらに、標的化試薬（例えば、タンパク質、ペプチド及び／又は糖部分）を有して設計されても良く、第１のターゲットに、受動的でなく能動的に到達し得る。標的化試薬が使用される場合には、好ましくは、それは単純な部分である（即ち、短いペプチド又は単純な糖）。
【０１２４】
本発明によると、異なるアクチベータの混合物が使用されても良い。これは、薬物の放出プロファイルを制御するために関連し得る。
【０１２５】
本発明に係るアクチベータは、第１のターゲットで薬物放出を生じさせ制御するが、更にアクチベータに、インビトロ又はインビボ研究又は応用のいずれかのために、追加の機能を与える部分で変性されても良い。例えば、アクチベータは、色素部分又は蛍光部分で変性されても良く（例えば、Ｓ．  Ｈｉｌｄｅｒｂｒａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，  ２００８，  １９，  ２２９７−２２９９  ｆｏｒ  ３−（４−ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｏ）−１，２，４，５−ｔｅｔｒａｚｉｎｅ  ｔｈａｔ  ｉｓ  ａｍｉｄａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｎｅａｒ−ｉｎｆｒａｒｅｄ  （ＮＩＲ）  ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅ  ＶＴ６８０参照）、又は、イメージングプローブで機能化されても良く、ここでこれらのプローブは、ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴの核イメージング技術等のイメージングモダリティで有用であり得る。この方法で、アクチベータは、薬物放出を引き起こすだけでなく、また、（ヒト）身体内部に局在化され、それによりプロドラッグを（ヒト）身体内部に局在化させるために使用され得る。結果として、薬物放出の位置と量はモニターされ得る。例えば、アクチベータがＤＯＴＡ（又はＤＴＰＡ）リガンドで変性され得るが、これらのリガンドは、核イメージングに関して、１１１Ｉｎ３＋−イオンとの錯体形成のために、理想的に好適なものである。他の例では、アクチベータは、１２３Ｉ又は１８Ｆ部分に結合され得るが、各々、ＳＰＥＣＴ又はＰＥＴイメージングでの使用に関して、良好に確立されている。さらに、例えばＬｕ−１７７又はＹ−９０等のベータ線放射性同位体等と組み合わせて使用される場合、プロドラッグ活性は、前標的化フォーマット内で局所的放射線治療と組み合わせることが可能である。
【０１２６】
上記アクチベータに対する合成経路は、当該分野の標準的な知識に基づいて、当業者が容易に利用可能である。テトラジン合成経路に対する参考文献は、Ｌｉｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．，  １９６５，  ３０，  ３１８−３１９；  Ｈｏｒｗｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  １９５８，  ８０，  ３１５５−３１５９；  Ｈａｐｉｏｔ  ｅｔ  ａｌ，  Ｎｅｗ．  Ｊ．  Ｃｈｅｍ．，  ２００４，  ２８，  ３８７−３９２，  Ｋａｉｍ  ｅｔ  ａｌ，  Ｚ．  Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ．，  １９９５，  ５０ｂ，  １２３−１２７を含む。
【０１２７】
プロドラッグ
プロドラッグは、薬物ＤＤ及びトリガーＴＲの共役物であり、したがって、トリガーから放出後の治療作用が可能になる薬物を含む。そのようなプロドラッグは、場合により、疾患標的に特異性を有する。
【０１２８】
プロドラッグの一般式は、式（８ａ）及び（８ｂ）で下記に示される。
【０１２９】
【化２３】
2014513717.tif 000024
部分ＹＭは、標的化試薬ＴＴ又はマスキング部分ＭＭのいずれかであり得；ＳＰはスペーサーであり；ＴＲはトリガーであり、ＬＤはリンカーであり、ＤＤは薬物である。
【０１３０】
薬物が標的化試薬から放出される用途に関して：ＹＭは標的化試薬ＴＴであり；
式（８ａ）：ｋ＝１；ｍ，ｒ≧１；ｔ，ｎ≧０；
式（８ｂ）：ｋ＝１；ｍ，ｎ，ｒ≧１；ｔ≧０である。
【０１３１】
マスク薬物がマスクされていない用途に関して、ＹＭはマスキング部分ＭＭであり；
式（８ａ）及び（８ｂ）：ｒ＝１；ｍ≧１；ｋ，ｎ，ｔ≧０である。
【０１３２】
前記式では明確性のために省略されているが、ＤＤは更にＴＴ及び／又はＭＭを、場合によってＳＰを介して含んでも良い。
【０１３３】
本発明に関連するプロドラッグで使用することができる薬物は、制限されないが：抗体、抗体誘導体、抗体断片、例えばＦａｂ２、Ｆａｂ、ｓｃＦＶ、二重特異性抗体、三重特異性抗体、抗体（断片）融合体（例えば二重特異的及び三重特異的ｍＡｂ断片）、タンパク質、アプタマー、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド、オリゴ糖、同様にペプチド、ペプトイド、ステロイド、有機薬物化合物、トキシン、ホルモン、ウイルス、全細胞、ファージを含む。本発明に適する典型的薬物は、制限されないが：二重特異的及び三重特異的ｍＡｂ断片、例えばリシンＡ、ジフテリアトキシン、コレラトキシンを含む免疫トキシンを含む。他の実施形態は、アウリスタチン、メイタンシン、カリケアマイシン、ディオカルマイシン、マイタンシノイドＤＭ１及びＤＭ４、アウリスタチンＭＭＡＥ、ＣＣ１０６５及びその類似体、カンプトセチンとその類似体、ＳＮ−３８及びその類似体；抗増殖／抗腫瘍薬、抗生物質、抗炎症性薬、抗ウイルス剤、降圧剤、化学増感剤及び放射線増感剤を使用する。他の実施形態において、放出薬物ＤＤは、それ自体更なる薬物ＤＤを放出するように設計されたプロドラッグである。薬物は、場合により、膜転移部分（アダマンチン、ポリリシン／アルギニン、ＴＡＴ）及び／又は標的化試薬（例えば、腫瘍細胞レセプターに対する）を含み、これらは場合により安定な又は不安定なリンカーで結合されている。
【０１３４】
ＴＣＯ誘導体への共役物としての使用に関し、アクチベータとのレトロディールスアルダー反応で放出され得る例示的な薬物は、限定されないが：細胞毒性薬物、特に癌治療で使用されるものが含まれる。そのような薬物は、一般的に、ＤＮＡ損傷剤、抗代謝剤、天然物質及びそれらの類似体が含まれる。細胞毒性薬物の例示的分類は、ジヒドロホーレートレタクターゼインヒビター及びチミディレートシンターゼインヒビター等の酵素インヒビター、ジヒドロホーレートレダクターゼインヒビター、及びチミディレートシンターゼインヒビターなどの酵素インヒビター、ＤＮＡアルキレーター、放射線増感剤、ＤＮＡインターカレーター、ＤＮＡ開裂剤、抗チューブリン剤、トポイソメラーゼインヒビター、白金系薬物、アントラサイクリンファミリー薬物、ビンカ薬物、マイトマイシン、ブレオマイシン、細胞毒性ヌクレオチド、タキサン、レキシトロプシン、プテリジンファミリー薬物、ジイネン、ポドフィロトキシン、ダラスタチン、マイタンシノイド、識別導入剤及びタキソールが含まれる。これらの分類で特に有用なものは、例えば、デュオカルマイシン、メトトレキサート、メトプテリン、ジクロロメトトレキサート、５−フルオロウラシルＤＮＡマイナーグルーブバインダー、６−メルカプトプリン、サイトシンアラビノシド、メルファラン、ロイロシン、ロイロシダイン、アクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ミトマイシンＣ、ミトマイシンＡ、カミノマイシン、アミノプテリン、タリソマイシン、ポドフィロトキシン及びポドフィロトキシン誘導体（エトポシド又はエトポシドフォスフェート）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、タキソール、タキソテールレチノイン酸、酪酸、Ｎ８−アセチルスペルミジン、カンプトセシン、カリキアマイシン、エスペラマイシン、エンジイン及びそれらの類似体を含む。
【０１３５】
例示的薬物は、ドラスタチン及びその類似体を含み、これには：ドラスタチンＡ（米国特許第４，４８６，４１４号）、ドラスタチンＢ（米国特許第４，４８６，４１４号）、ドラスタチン１０（米国特許第４，４８６，４４４号、５，４１０，０２４号、５，５０４，１９１号、５，５２１，２８４号、５，５３０，０９７号、５，５９９，９０２号、５，６３５，４８３号、５，６６３，１４９号、５，６６５，８６０号、５，７８０，５８８号、６，０３４，０６５号、６，３２３，３１５号）、ドラスタチン１３（米国特許第４，９８６，９８８号）、ドラスタチン１４（米国特許第５，１３８，０３６号）、ドラスタチン１５（米国特許第４，８７９，２７８号）、ドラスタチン１６（米国特許第６，２３９，１０４号）、ドラスタチン１７（米国特許第６，２３９，１０４号）、及びドラスタチン１８（米国特許第６，２３９，１０４号）が含まれ、これらの特許文献の全内容は全て参照されて本明細書に援用される。
【０１３６】
本発明の例示的な実施形態において、薬物部分は、マイトマイシン、ビンカアルカロイド、タキソール、アントラサイクリン、カリケアミシン、メイタンシノイド又はアウリスタチンである。
【０１３７】
理解されるべきことは、本発明の共役物を製造する目的で、化合物の反応をより簡便にするために、化学変性が、所望の化合物になされ得るということである。ＴＣＯへカップリングさせるアミン官能基を含む薬物は、ミトマイシン−Ｃ、ミトマイシン−Ａ、ダウノルビシン、ドキソルビシン、アミノプテリン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、９−アミノカンプトセチン、Ｎ８−アセチルスペルミジン、１−（２−クロロエチル）１，２−ジメタンスルフォニルヒドラジド、タリソマイシン、シタラビン、ドラスタチン（アウリスタチンを含む）及びその誘導体を含む。
【０１３８】
ＴＣＯにカップリングするためのヒドロキシ官能基を含む薬物は、エトプシド、カンプトセシン、タキソール、エスペラミシン、１，８−ジヒドロキシ−ビシクロ［７．３．１］トリデカ−４−９−ジエン−２，６−ジイイン−１３−オン（米国特許第５，１９８，５６０号）、ポドフィロトキシン、アングイジン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、モルフォリン−ドキソルビシン、ｎ−（５，５−ジアセトキシ−ペンチル）ドキソルビシン及びその誘導体を含む。
【０１３９】
ＴＣＯをカップリングするためのスルフヒドリル官能基を含む薬物は、エスペラマイシン及び６−メルカプトプリン及びその誘導体である。
【０１４０】
理解されるべきことは、薬物は、場合により、リンカーＬＤ又は自壊性リンカーＬＤ、又はこの組み合わせを介してＴＣＯ誘導体に結合され得るものであり、複数の（自壊性又は非自壊性の）ユニットから構成され得る。
【０１４１】
更に理解されるべきことは、１又は複数の標的化試薬ＴＴ又はマスキング部分ＭＭが、場合により、薬物ＤＤ、トリガーＴＲ又はリンカーＬＤに、場合によりスペーサーＳＰを介して結合され得る。
【０１４２】
いくつかの薬物は、薬物標的化及び放出を測定するために、イメージング可能なラベルで置換され得る。
【０１４３】
本発明の更に具体的な実施形態によると、プロドラッグは、例えば、癌、炎症、感染、心血管疾患（例えば血栓アテローム性動脈硬化症）、低酸素サイト（ｓｉｔｅ）（例えば、脳卒中）、腫瘍、心血管障害、脳障害、アポトーシス、血管新生、器官及びレポーター遺伝子／酵素等の疾患に標的化又は対処するように選択される。
【０１４４】
一実施形態によると、プロドラッグ及び／又はアクチベータは、マルチマー性化合物であり、複数の薬物及び／又は生体直交型反応部分を含み得る。これらのマルチマー性化合物は、ポリマー、デンドリマー、リポソーム、ポリマー粒子又は他のポリマー性構成物であり得る。
【０１４５】
プロドラッグにおいて、薬物ＤＤ及びトリガーＴＲ−ＴＣＯ誘導体−は、互いに直接的に結合される。これらはまた、リンカー又は自壊性リンカーＬＤを介して互いに結合され得る。理解されるべきことは、本発明は、ジエノフィルトリガーが薬物に結合される如何なる考え得る方法を含むということである。このことは、選択的な標的化試薬ＴＴ又はマスキング部分ＭＭをプロドラッグへと結合するためについても同様である。例えば、タンパク質の場合に、リジン又はシステイン等の反応性アミノ酸を介して、これらの薬物へ効果的に共役させる方法は、当業者に知られている。
【０１４６】
理解されるべきことは、薬物部分は、薬物が、レトロディールスアルダー付加物の形成後、最終的に放出され得るような方法で、ＴＣＯに結合されるということである。一般的に、このことは、薬物とＴＣＯとの間の結合、又はリンカーの場合には、ＴＣＯとリンカーＬＤと野間の結合、又は自壊性ＬＤの場合には、リンカーとＴＣＯとの間の結合及び薬物とリンカーとの間の結合は、開裂可能であるべきであるということを意味する。主に、薬物と場合によるリンカーとは、ヘテロ原子、好ましくはＯ、Ｎ、ＮＨ又はＳを解して結合される。開裂結合は、好ましくはカーバメイト、チオカーバメイト、カーボネート、エーテル、エステル、アミン、アミド、チオエーテル、チオエステル及びスルホキシド及びスルホンアミド結合からなる群から選択される。
【０１４７】
したがって、本発明において、リンカー概念は、当業者が知る概念に同様に適用され得る。多くの報告されているプロドラッグは、３つの成分から構成され：トリガー、リンカー、親薬物、場合によりターゲット分子が、リンカー又はトリガーのいずれかに結合される。トリガーは、例えばサイト特異的酵素に関する基質又はｐＨ不安定基であっても良く、しばしば、自壊性リンカーを介して親薬物に結合されている。このリンカーは、トリガーの酵素的開裂を容易にし、活性サイトへの接近を改善し、結合薬物からの立体障害を低減するために導入される。また、リンカーは、同じトリガーと組み合わせて、プロドラッグの広範で簡単な使用を容易にする。さらに、リンカーは、プロドラッグ安定性、薬物動態学、器官分布、酵素認識及び放出動力学を調節する。トリガー活性化／除去後、リンカーは、親薬物を放出するために、同時に脱離しなければならない。結合された薬物に依存して、リンカー又はその一部は、その作用を失うことなく、薬物上に残り得る。一般的概念が、スキーム２に示される。
【０１４８】
スキーム２：
【０１４９】
【化２４】
2014513717.tif 000025
２つのタイプの自己脱離リンカー、（ａ）電子カスケードリンカー（ｂ）環化リンカーが区別される。カスケードリンカーの最も有望な例は、スキーム３で示される、抗癌剤９−アミノカンプトセンのβ−グルクロニドプロドラッグにおける、１，６脱離スペーサーである。酵素β−グルクロニダーゼ（ある壊死腫瘍領域に存在する）による芳香族性ヒドロキシ官能基の脱マスク後、この基は電子供与基になり、電子カスケードを開始し、脱離基を放出し、ＣＯ２を放出した後遊離薬物を放出する。キノン−メチド再配列に基づく、このカスケードは、また、ヒドロキシル基の代わりのマスクされていないアミン又はチオールの孤立電子対により開始され得る。形成されるキノン−メチド種は、水に捕捉され、フェニル誘導体を形成する。
【０１５０】
スキーム３：
【０１５１】
【化２５】
2014513717.tif 000026
いくつかの他のトリガー−リンカー概念が、スキーム４に示される。Ａ内のトリガーは、血漿エステラーゼによって活性化される。ｔｅｒｔ−ブチルエステルの加水分解は、遊離の芳香族ヒドロキシル基を与え、キノン−メチドカスケードを開始させる。この構成物は、抗体（Ｒ）への共役によって標的化される。Ｂでは、セファロスポリンの、β−ラクタマーゼ酵素による加水分解がトリガーとして使用される。ラクタム環の加水分解は、その遊離基特性に依存して、薬物置換基の放出を導き得る。薬物は、エステル、アミド、スルフィド、アミン及びカーバメートリンクを介して共役される。芳香族性環化系リンカーの２つの例は、Ｃ及びＤである。Ｃでは、ペニシリンＧ−アミダーゼによる開裂が、カルボニル上のアミンの分子内攻撃を起こさせ、薬物を放出する。Ｄは、ホスファターゼ感受性プロドラッグを示す。ヒトアルカリホスファターゼによるリン酸エステルの開裂は、ヒドロキシルを与え、ラクタムと反応し、薬物を放出する。Ｅでは、ニトロ基のアミンへの還元によって引き起こされるプロドラッグの例を示す。この還元は、ＮＡＤＰＨの存在下でニトロレダクターゼにより実行され得る。さらに、低酸素（腫瘍）組織で還元される、知られた（Ｆ）いくつかのヘテロ環ニトロ構成物が、酵素の助けなく、カスケードを開始することができる。プロドラッグ治療で使用される他のトリガーは、プラスミン、チロシンヒドロキシラーゼ（神経芽細胞腫で高発現）、チロシナーゼ又はカセプシンＢに感受性である。
【０１５２】
スキーム４：Ｘ＝Ｏ，Ｎ，Ｓ
【０１５３】
【化２６】
2014513717.tif 000027
【０１５４】
ＴＣＯ−トリガーとアクチベータとの組み合わせ及び反応
次のスキームは、ｒＤＡ反応に関する選択に基づき、プロドラッグの活性化に適用され得る種々のメカニズムを説明するための、非制限的な例を示す。留意すべきことは、アミン官能性薬物の放出の場合において、これらは、例えば、一級又は二級アミン、アニリン、イミダゾール又はピロールタイプの薬物であり、薬物は、脱離基の性質で変わり得るということである。対応する加水分解に安定なＴＣＯプロドラッグが適用される場合には、他の官能基を有する薬物の放出も、起こり得る（例えば、チオール官能性薬物）。示される縮合環生成物は、他のより好ましい互変異性体に対して互変異性であっても良いし、そうでなくても良い。
【０１５５】
【化２７】
2014513717.tif 000028
好ましい実施形態において、薬物は、免疫毒素共役物の形態で提供される。共役物は、上述されたようにＴＣＯ部分が供され、生体直交型化学活性化毒素放出を可能にする。他の実施形態において、薬物は、腫瘍細胞に結合し、Ｔ細胞を補充及び活性化する働きを有する、二重又は三重特異性抗体誘導体であり、このＴ細胞結合機能は、上述されたように、ＴＣＯ部分に結合されることによって非活性化される。また、後者は、生体直交型化学活性薬物活性化を可能にする働きを有する。
【０１５６】
標的化（ターゲット化）
本発明のキット及び方法は、薬物の標的化送達での使用に非常に適する。
【０１５７】
本発明で使用される「第１の標的」は、治療のための標的化試薬に対する標的に関する。例えば、第１の標的は、有機体、組織又は細胞内に存在する如何なる分子であっても良い。標的は、細胞表面標的を含み、例えば、レセプター、糖タンパク質、構造タンパク質、例えばアミロイドプラーク；間質等の豊富な細胞外標的；成長因子等の細胞外マトリックス標的及びプロテアーゼ；細胞内標的、例えばゴルジア体表面、ミトコンドリア表面、ＲＮＡ、ＤＮＡ、酵素、細胞信号伝達経路成分；及び／又は身体外部、例えばウイルス、細菌、真菌、酵母又はそれらの断片を含む。第１の標的の例は、例えばタンパク質等の成分であり、その存在又は発現量がある組織又は細胞型に関連し、又はその発現量がある疾患でアップレギュレーション又はダウンレギュレーションされている。本発明の具体的な実施形態によると、第１の標的は、（内在性又は非内在性）レセプター等のタンパク質である。
【０１５８】
本発明によると、第１の標的は、ヒト又は動物身体内の、又は病原体又は寄生虫上の任意の好適な標的から選択され得るものであり、例えば、細胞膜及び細胞壁等の細胞、細胞膜レセプター等のレセプター、ゴルジ体又はミトコンドリア等の細胞内構造物、酵素、レセプター、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ウイルス又はウイルス粒子、抗体、タンパク質、炭水化物、単糖類、多糖類、サイトカイン、ホルモン、ステロイド、ソマトスタチンレセプター、モノアミンオキシダーゼ、ムスカリニンレセプター、心筋交感神経神経系、ロイコサイトなどのロイコトリエンレセプター、ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーターレセプター（μＰＡＲ）、ホレートレセプター、アポトーシスマーカー、（抗体−）血管新生マーカー、ガストリンレセプター、ドパミン作動系、セロトニン作動系、ＧＡＢＡ作動系、アドレナリン作動系、コリン作動系、オピオイドレセプター、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａレセプター及び他の血栓関連レセプター、フィブリン、カルシトニンレセプター、タフシンレセプター、インテグリンレセプター、フィブロネクチン、ＶＥＧＦ／ＥＧＦ及びＶＥＧＦ／ＥＧＦレセプター、ＴＡＧ７２、ＣＥＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ７４、ＣＤ７９、ＣＤ１０５、ＣＤ１３８、ＣＤ１７４、ＣＤ２２７、ＣＤ３２６、ＣＤ３４０、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＧＰＮＭＢ、ＰＳＭＡ、Ｃｒｉｐｔｏ、ＴｅｎａｓｃｉｎＣ、メラノコルチン−１レセプター、ＣＤ４４ｖ６、Ｇ２５０、ＨＬＡＤＲ、ＥＤ−Ｂ、ＴＭＥＦＦ２、ＥｐｈＢ２、ＥｐｈＡ２、ＦＡＰ、メソテリン、ＧＤ２、ＣＡＩＸ、５Ｔ４、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、Ｐ／Ｅ／Ｌ−セレクチンレセプター、ＬＤＬレセプター、Ｐ−糖タンパク質、ニューロテンシンレセプター、ニューロタンパク質レセプター、物質Ｐレセプター、ＮＫレセプター、ＣＣＫレセプター、シグマレセプター、インターロイキンレセプター、ヘルペスシンプレクスウイルスチロシンキナーゼ、ヒトチロシンキナーゼを含む群から選択され得る。列記された第１の標的の具体的な標的化を可能にするため、標的化試薬ＴＴは、制限されないが、抗体、Ｆａｂ２、Ｆａｂ、ｓｃＦＶなどの抗体断片、ダイアボディ、トリアボディ、ＶＨＨ、抗体（断片）融合体（例えば二特異的及び三特異的ｍＡｂ断片）、タンパク質、オクトレオチド等のペプチド及びその誘導体、ＶＩＰ、ＭＳＨ、ＬＨＲＨ、走化性ペプチド、ボンベシン、エラスチン、ペプチド模倣物、炭水化物、単糖類、多糖類、ウイルス、全細胞、薬物、ポリマー、リポソーム、薬物治療剤、レセプターアゴニスト及びアンタゴニスト、サイトカイン、ホルモン、ステロイドを含む化合物を含み得る。本発明の範囲に含まれる有機化合物の例は、エステラジオール等のエストロゲン、アンドロゲン、プロゲスチン、コルチコステロイド、メトトレキサート、葉酸及びコレストロールである、又はこれらから誘導される。好ましい実施形態において、標的化試薬ＴＴは抗体である。本発明の具体的な実施形態によると、第１の標的はレセプターであり、第１の標的に特異的に結合し得る標的化試薬が使用される。好適な標的化試薬は、制限されないが、レセプター又はその部分等のリガンドであ���、前記部分はなお、レセプターに結合し得るものであり、例えば、レセプター結合タンパク質リガンドの場合にはレセプター結合ペプチドである。タンパク質特性の標的化試薬の他の例は、例えばアルファ、ベータ及びガンマインターフェロン、インターロイキン等のインターフェロン、アルファ、ベータ腫瘍成長因子等の腫瘍成長因子、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）等のタンパク質成長因子、μＰＡＲ標的化タンパク質、アポリポタンパク質、ＬＤＬ、アネキシンＶ、エンドスタチン及びアンジオスタチンを含む。標的化試薬の他の例は、例えば第１の標的と相補的である、ＤＮＡ，ＲＮＡ、ＰＮＡ及びＬＮＡを含む。
【０１５９】
本発明の更に具体的な実施形態によると、第１の標的及び穂湯的化試薬は、癌、炎症、感染、例えば血栓等の心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、脳卒中等の低酸素サイト、腫瘍、心血管障害、脳障害、アポトーシス、血管形成、臓器及びレポーター遺伝子／酵素等の組織又は疾患の特異的又は増加の結果となるように、選択される。これは、組織、細胞又は疾患特異的発現を有する第１の標的を選択することによって達成され得る。例えば、膜葉酸レセプターは、メトトレキサート等の葉酸及びその類似体の細胞内蓄積を媒介する。発現は、正常組織内で制限されているが、種々の腫瘍細胞型では過剰発現されている。
【０１６０】
マスキング部分
マスキング部分ＭＭは、タンパク質、ペプチド、ポリマー、ポリエチレングリコール、炭水化物、有機構成物であり得、これらは更に、結合された薬物ＤＤ又はプロドラッグを封止する。この封止は、例えば立体障害に基づくものであり得るが、薬物ＤＤとの非共有結合相互作用に基づくものであっても良い。このようなマスキング部分はまた、ＤＤ又はプロドラッグのインビボ特性（例えば血液からの除去；免疫系による認識）に影響を及ぼすように使用され得る。
【０１６１】
スペーサー
スペーサーＳＰは、限定されないが、２から２００までの、具体的には３から１１３までの、好ましくは５から５０までの繰り返し単位で変わる、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を含む。他の例は、オリゴ又はポリペプチド又はポリアクチド等の生体ポリマー断片である。更に好ましい例は、例９で示される。
【０１６２】
投与
本発明のコンテクストにおいて、プロドラッグは通常は最初に投与され、ある時間後に、プロドラッグが第１の標的に到達する。この時間間隔は応用により異なり、分から日又は週に亘り得る。選択された時間が経過した後、アクチベータが投与され、これは、プロドラッグを見つけて反応し、それにより第１の標的で薬物放出を活性化する。
【０１６３】
本発明の組成物は、静脈注射、腹腔内注射、経口投与、直腸投与及び吸入を含む種々の経路を介して投与され得る。これらの種々のタイプの投与に好適な処方設計は、当業者に知られている。本発明に係るプロドラッグ又はアクチベータは、薬学的に許容され得るキャリアと共に投与され得る。ここで使用される適切な薬学的キャリアは、医学的又は獣医学的目的に関して適切であり、毒性でなく許容されないもののもないキャリアに関する。そのようなキャリアは、当該技術分野で良く知られており、生理食塩水、緩衝生理食塩水、ブドウ糖、水グリセロール、エタノール及びこれらの組み合わせを含む。処方設計が、投与の投与方法に適合させるべきである。
【０１６４】
理解されるべきことは、投与される化学物質、即ちプロドラッグ及びアクチベータは、例えば、その塩、水和物又は溶媒和等の前記化学物質の化学的機能を変化させない、変性型であっても良い。
【０１６５】
プロドラッグ投与後かつアクチベータ投与の前に、循環中のプロドラッグ活性化が望ましくない場合及び天然プロドラッグ除去が不十分である場合には、過剰のプロドラッグを除去剤によって除去することが好ましい。除去剤は、過剰物が循環系から除去された投与試薬（この場合ではプロドラッグ）に結合させる又は錯体形成させる目的で、被験者に投与される試薬、化合物又は部分である。除去剤は、循環系から除去するために向けられ得る。後者は、一般的に肝臓レセプター系機構により達成されるが、循環系から分泌の他の方法が存在し、これは当業者には知られている。本発明において、循環しているプロドラッグを除去するための除去剤は、好ましくは、前述したように、プロドラッグのＴＣＯ部分を反応することができる、ジエン部分を含む。
【０１６６】
実施例
以下の実施例は、本発明又は本発明の側面を説明するものであり、本発明の範囲又は特許請求の範囲を定め又は限定するものではない。
【０１６７】
方法
１Ｈ−ＮＭＲ及び１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルはＶａｒｉａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ（１Ｈ−ＮＭＲは１００ＭＨｚで、１３Ｃ−ＮＭＲは４００ＭＨｚで測定）スペクトル装置を用いて２９８Ｋで記録された。化学シフトは、室温で、ＴＭＳから下方磁場へのｐｐｍ（ｐｐｍ  ｄｏｗｎｆｉｅｌｄ）において記録される。分裂パターンに関して使用される略号は、ｓ＝シングレット、ｄ＝ダブレット、ｔ＝トリプレット、ｑ＝カルテット、ｍ＝マルチプレット及びｂｒ＝ブロードである。Ｉｒスペクトルは、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ１６００ＦＴ−ＩＲ（ＵＡＴＲ）で記録された。ＬＣ−ＭＳは、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−１０  ＡＤ  ＶＰシリーズＨＰＬＣで、ダイオードアレイ検出器（Ｆｉｎｎｉｇａｎ  Ｓｕｒｖｅｙｏｒ  ＰＤＡ  Ｐｌｕｓ  ｄｅｔｅｃｔｏｒ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）及びＩｏｎ−Ｔｒａｐ（ＬＣＱ  Ｆｌｅｅｔ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて記録された。分析は、Ａｌｌｔｅｃｈ  Ａｌｌｔｉｍａ  ＨＰＣ１８３μカラムを用いて、注入容量１−４μＬとし、流速は０．２ｍＬ／分及び通常は、２５℃で、Ｈ２Ｏ中ＣＨ３ＣＮ（共に０．１％ギ酸を含む）のグラジエント（５％から１００％へ１０分間で、１００％でさらに３分間保持）を用いて行った。分取用ＲＰ−ＨＰＬＣ（０．１％ギ酸ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ５μＣ１８１１０Ａカラムで、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＳＣＬ−１０Ａ  ＶＰと２つのＳｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−８Ａポンプ及びＳｈｉｍａｄｚｕ  ＳＰＤ−１０ＡＶ  ＶＰ紫外−可視光検出器を用いて行った。サイズ排除（ＳＥＣ）ＨＰＬＣは、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００システムとＧａｂｉ放射線検出器を用いて行った。サンプルは、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ−２００  １０／３００  ＧＬカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に負荷し、１０ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ７．４で０．３５〜０．５ｍＬ／分で溶出させた。ＵＶ波長は２６０ｎｍと２８０ｎｍに設定した。抗体溶液の濃度は、ＮａｎｏＤｒｏｐ  １０００  ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、３２２ｎｍ及び２８０ｎｍでのそれぞれの吸光度から決定された。
【０１６８】
材料
全ての試薬、化学物、材料及び溶媒は、市販品から入手しそのまま使用した：（重水素化）溶媒は、Ｂｉｏｓｏｌｖｅ、Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｉｓｏｔｏｐｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから；及び化学物、材料及び試薬は、Ａｌｄｒｉｃｈ、Ａｃｒｏｓ、ＡＢＣＲ、Ｍｅｒｃｋ及びＦｌｕｋａから入手した。全ての溶媒は、ＡＲ品質であった。４−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル）−２，６−ジメチルフェノールは文献の手順に従って合成した（Ｙ．Ｈ．Ｃｈｏｅ、Ｃ．Ｄ．Ｃｏｎｏｖｅｒ、Ｄ．Ｗｕ、Ｍ．Ｒｏｙｚｅｎ、Ｙ．Ｇｅｒｖａｃｉｏ、Ｖ．Ｂｏｒｏｗｓｋｉ、Ｍ．Ｍｅｈｌｉｇ、Ｒ．Ｂ．Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ２００２、７９、５５−７０）。ドキソルビシン塩化水素はＡｖａｃｈｅｍ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手した。
【０１６９】
例１
テトラジンアクチベータの合成
一般的手順
以下に詳細に説明されるテトラジンとは別に、一連の他のテトラジンが準備された。ピナー型反応が使用され、適当なニトリルをヒドラジンと反応させ、ジヒドロ１，２，４，５−テトラジン中間体を合成した。当該分野で知られているように、ニトリルの代わりに、アミジンも反応物として使用されている。この反応で硫黄の使用も知られており、ある場合には、これにより、１，２，４，５−テトラジンの形成を促進される。この中間体の酸化によりテトラジンジエンアクチベータが得られる。下記反応は、いくつかの合成されたテトラジン及びテトラジンの合成及び単離可能性を説明する（例えば、溶媒、濃度、温度、反応物の当量、酸化反応の選択、等）。当該分野で知られる他の反応も、テトラジン又は他のアクチベータを製造するために使用されても良い。
【０１７０】
３，６−ビス（２−ピリジル）−１，２，４，５−テトラジン（２）の合成
【０１７１】
【化２８】
2014513717.tif 000029
２−シアノピリジン（１０．００ｇ、９６．０ｍｍｏｌ）及びヒドラジン水和物（１５．１ｇ；３００ｍｍｏｌ）を、一晩不活性雰囲気下、９０℃で撹拌した。濁った混合物を室温に冷却し、ろ過して、残渣と続いて水（２０ｍＬ）及びエタノール（２０ｍＬ）で洗浄し、さらに真空で乾燥して、粗ジヒドロテトラジン１をオレンジ色固体として得た（７．３５ｇ；６５％）。
【０１７２】
ジヒドロテトラジン（１、１００ｍｇ；０．４１９ｍｍｏｌ）を酢酸（３ｍＬ）に分散させ（ｓｕｓｐｅｎｄｅｄ）、亜硝酸ナトリウム（８７ｍｇ；１．２６ｍｍｏｌ）を添加した。すぐにオレンジ色から暗赤色への色変化が観測され、酸化生成物はろ過して単離された。残渣を水（１０ｍＬ）で洗浄し、次に真空乾燥して、紫色固体として表題の化合物を得た（２、９２ｍｇ；９３％）。
【０１７３】
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝９．００（ｄ，２Ｈ），８．７６（ｄ，２Ｈ），８．０２（ｔ，２Ｈ），７．６０（ｄｄ，２Ｈ）ｐｐｍ。１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝１６３．９，１５１．１，１５０．１，１３７．５，１２６．６，１２４．５ｐｐｍ。ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＰＤＡ：クロマトグラムで１ピーク，ｍ／ｚ＝２３７．００（Ｍ＋Ｈ＋），λｍａｘ＝２９６及び５２８ｎｍ。
【０１７４】
３−（５−アセタミド−２−ピリジル）−６−（２−ピリジル）−１，２，４，５−テトラジン（５）の合成
【０１７５】
【化２９】
2014513717.tif 000030
２−シアノピリジン（５．００ｇ、４８．０ｍｍｏｌ）、５−アミノ−２−シアノピリジン（５．７２ｇ；４８．０ｍｍｏｌ）及びヒドラジン水和物（１５．１ｇ；３００ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下、９０℃で一晩撹拌した。濁った混合物を室温に冷却し、ろ過し、残渣を水（２０ｍＬ）及びエタノール（２０ｍＬ）で洗浄し真空で乾燥した。オレンジ色の固体をアセトン（２００ｍＬ）に分散させ、これをシリカゲル（２０グラム）に吸収させ、アセトンとヘプタンのグラジエント（０％から７０％）を用いてカラムクロマトグラフィーを行い、ジヒドロテトラジン３を、オレンジ色固体として得た（１．４６ｇ；収率１２％）。
【０１７６】
ジヒドロテトラジン（３、９０ｍｇ；０．３５５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１ｍＬ）に溶解し、無水アセトン（５４．４ｍｇ；０．５３３ｍｍｏｌ）を加えた。溶媒を加熱し、１８時間不活性雰囲気下で還流した。オレンジ色沈殿をろ過して分離し、ＴＨＦ（３ｍＬ）で洗浄して、ジヒドロテトラジンのアセタミドを得た（４、９０ｍｇ；８６％）
アセタミド４（５０ｍｇ、０．１６９ｍｍｏｌ）を酢酸（１ｍＬ））に分散させ、亜硝酸ナトリウム（３５ｍｇ；０．５０８ｍｍｏｌ）を添加した。すぐにオレンジ色から暗赤色への色変化が観測され、酸化生成物をろ過して分離した。残渣を水（５ｍＬ）で洗浄し、真空で乾燥して、表記の化合物を紫色固体として得た（５、４２ｍｇ；８４％）。
【０１７７】
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝９．０３（ｄ，１Ｈ），８．９３（ｄ，１Ｈ），８．６１（ｄｄ，２Ｈ），８．４２（ｄｄ，１Ｈ），８．１６（ｄｔ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，１Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。１３ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１６９．５，１６３．０，１６２．８，１５０．６，１５０．２，１４３．８，１４１．２，１３８．５，１３７．８，１２６．６，１２６．１，１２４．９，１２４．２，２４．１ｐｐｍ。ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＰＤＡ：クロマトグラムで１ピーク，ｍ／ｚ＝２９３．９（Ｍ＋Ｈ＋），lｍａｘ＝３２３及び５２９ｎｍ。
【０１７８】
３−（２−ピリジン）−６−メチル−１，２，４，５−テトラジン（７）の合成
【０１７９】
【化３０】
2014513717.tif 000031
２−シアノピリジン（５００ｍｇ、４．８ｍｍｏｌ）、アセタミジン塩化水素（２．００ｇ、２１．２ｍｍｏｌ）及び硫黄（１５５ｍｇ、４．８ｍｍｏｌ）をエタノール（５ｍＬ）で、アルゴン不活性雰囲気下撹拌した。ヒドラジン水和物（２．７６ｇ；５５．２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２０℃で一晩撹拌した。濁った混合物をろ過し、ろ液を蒸発乾固し、オレンジ色粗生成物６を２．９ｇ得た。
【０１８０】
続いて、６（８００ｍｇ）をＴＨＦ（３ｍＬ）と酢酸（４ｍＬ）の混合物中に懸濁させた。水（３ｍＬ）中のＮａＮＯ２（２．０ｇ；２９．０ｍｍｏｌ）溶液を、０℃で添加した。すぐに赤／紫色懸濁物への着色が観察された。０℃で撹拌５分後、クロロホルム及び水を添加そた。紫色クロロホルム層を２回水で洗浄し次に濃縮した。固体残渣を、１：１のクロロホルムとヘキサンの混合物中で撹拌し、次にろ過した。ろ液を濃縮し、溶出液としてクロロホルム／アセトン混合物を用いて粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、精製生成物７（４８ｍｇ、２−シアノピリジンから計算した合計収率２１％）を得た。
【０１８１】
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝８．９６（ｄ，１Ｈ），８．６５（ｄ，１Ｈ），７．９９（ｔ，１Ｈ），７．５６（ｄｄ，１Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝１６８．１，１６３．６，１５０．９，１５０．３，１３７．４，１２６．３，１２３．９，２１．４ｐｐｍ。ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＰＤＡ：クロマトグラフィーで１つのピーク、ｍ／ｚ＝１７４．３（Ｍ＋Ｈ＋）、λｍａｘ＝２７４及び５２４ｎｍ。
【０１８２】
３，６−ビス（２−アミノフェノール）−１，２，４，５−テトラジン（９）の合成
【０１８３】
【化３１】
2014513717.tif 000032
２−アミノベンゾニトリル（１．００ｇ；８．４６ｍｍｏｌ）をエタノール（３ｍＬ）中に溶解し、ヒドラジン水和物（２．０６ｇ；４１．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃に冷却し、硫黄（０．１７ｇ；５．３０ｍｍｏｌ）を添加した。撹拌を１５分間続け、次に混合物を９０℃に加熱した。３時間後、黄色沈殿物をろ過で分離し、エタノール（１０ｍＬ）で洗浄し、次にクロロホルムで２回取り出し（２回、１０ｍＬ）て黄色中間物８（３４３ｍｇ、３０％）を得た。
【０１８４】
中間物８（１０５ｍｇ；０．３９４ｍｍｏｌ）をエタノール（１５ｍＬ）に溶解し、次に５０℃でこの溶液中に酸素を吹き込んだ。数分で色が黄色から暗オレンジ／赤色に変化し、沈殿物が生成した。２時間後、沈殿物をろ過し、エタノールで洗浄し、乾燥して生成物９を暗赤色結晶として得た（８９ｍｇ、８６％）。
【０１８５】
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．３９（ｄ，２Ｈ），７．３２（ｔ，２Ｈ），７．０４（ｓ，４Ｈ），６．９３（ｄ，２Ｈ），６．７５（ｔ，２Ｈ）ｐｐｍ。１３ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１６２．７，１４９．６，１３３．０，１２９．０，１１７．１，１１５．８，１１１．６ｐｐｍ。ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＰＤＡ：クロマトグラフィーで１ピーク、ｍ／ｚ＝２６５．４（Ｍ＋Ｈ＋）、λｍａｘ＝２３７，２９３，４０３及び５３５ｎｍ。
【０１８６】
３，６−ビス（４−ヒドロキシフェニル）−１，２，４，５−テトラジン（１１）の合成
【０１８７】
【化３２】
2014513717.tif 000033
４−ヒドロキシベンゾニトリル（１．０６ｇ；８．９０ｍｍｏｌ）をヒドラジン水和物（３．０９ｇ；６１．７ｍｍｏｌ）に溶解し、混合物を９０℃で１６時間加熱した。黄色沈殿物をろ過して水（２５ｍＬ）及びエタノール（１０ｍＬ）で洗浄して粗生成物中間物１０を黄色粉末として得た（８７０ｍｇ；６２％）。
【０１８８】
中間物（１０、１７３ｍｇ；０．６４５ｍｍｏｌ）をエタノール（１０ｍＬ）中に懸濁させ、この混合物中に５０℃で酸素を吹き込んだ。色は、数分で黄色から暗オレンジ／赤色に変化した。６時間後、沈殿物をろ過し、エタノールで洗浄し、乾燥して生成物１１を暗赤色結晶として得た（１３６ｍｇ、８０％）。
【０１８９】
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１０．３５（ｂｒ．ｓ，２Ｈ），８．３６（ｄ，４Ｈ），７．０２（ｄ，４Ｈ）ｐｐｍ。１３ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１６２．６，１６１．５，１２９．２，１２２．６，１１６．３ｐｐｍ。ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＰＤＡ：クロマトグラムで１ピーク、ｍ／ｚ＝２６７．１（Ｍ＋Ｈ＋）、λｍａｘ＝２３５，３３０及び５３５ｎｍ。
【０１９０】
３，６−ビス（４−ヒドロキシフェニル）−１，２，４，５−テトラジン（１３）の合成
【０１９１】
【化３３】
2014513717.tif 000034
４−アミノベンゾニトリル（１．００ｇ；８．４６ｍｍｏｌ）をエタノール（３ｍＬ）に溶解し、次にヒドラジン水和物（２．１２ｇ；４２．２ｍｍｏｌ）と硫黄（０．１７６ｇ；５．５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を９０℃で９０分間加熱し、黄色沈殿物をろ過して分離し、エタノール（１０ｍＬ）で洗浄し、次にアセトン（１２ｍＬ）で取り出して黄色中間物１２を得た（１９０ｍｇ、１７％）。
【０１９２】
中間物１２（５０ｍｇ；０．１８８ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１ｍＬ）に溶解し、次にこの溶液中に酸素を２０℃で吹き込んだ。５分後、反応混合物を食塩水（１３ｍＬ）に入れて、赤色沈殿物をろ過し、水（１０ｍｌ）で洗浄し、真空乾燥した。赤色粉末を、さらにアセトン（１５ｍｌ）で取り出し精製して、生成物１３を赤色固体として得た（１３．７ｍｇ、２７％）。
【０１９３】
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．１７（ｄ，２Ｈ），７．７５（ｄ，２Ｈ），６．０２（ｓ，４Ｈ）ｐｐｍ。１３ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１６２．３，１５２．８，１２８．５，１１８．３，１１３．８ｐｐｍ。ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＰＤＡ：クロマトグラフィーで１ピーク、ｍ／ｚ＝２６５．２（Ｍ＋Ｈ＋）、λｍａｘ＝２４１，３７０及び５３０ｎｍ。
【０１９４】
３，６−ビス（３−アミノフェニル）−１，２，４，５−テトラジン（１５）の合成
【０１９５】
【化３４】
2014513717.tif 000035
３−アミベンゾニトリル（１．００ｇ；８．４６０ｍｍｏｌ）をヒドラジン水和物（２．５０ｍＬ；５１．４ｍｍｏｌ）に溶解し、次に混合物を９０℃で３日間加熱した。水（５ｍＬ）を添加し、次に黄色沈殿物をろ過して分離し、水（１５ｍＬ）及びエタノール（１０ｍＬ）で洗浄して、粗中間物１４をオレンジ色粉末として得た（９１０ｍｇ；８１％）。
【０１９６】
中間物１４（５０ｍｇ；０．１８８ｍｍｏｌ）をエタノール（４ｍＬ）中に懸濁させ、次にこの混合物中に５０℃で酸素を吹き込んだ。数分で、色が黄色から赤色に変化した。１６時間後、沈殿物をろ過して分離し、エタノールで洗浄して生成物１５を赤色粉末として得た（３１ｍｇ、６２％）。
【０１９７】
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝７．７７（ｓ，２Ｈ），７．６６（ｄ，２Ｈ），７．３０（ｔ，２Ｈ），６．８５（ｄ，２Ｈ），５．５３（ｓ，４Ｈ）ｐｐｍ。ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＰＤＡ：クロマトグラフで１ピーク、ｍ／ｚ＝２６５．２（Ｍ＋Ｈ＋），λｍａｘ＝２４０、２９６及び５２７ｎｍ。
【０１９８】
３，６−ビス（３−アミノメチル）−１，２，４，５−テトラジン（２０）の合成
【０１９９】
【化３５】
2014513717.tif 000036
Ｂｏｃ−アミノアセトニトリル（１．００ｇ；６．４０ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（２５％ＭｅＯＨ中０．１４５ｍＬ；０．６４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２０℃で１８時間撹拌し、次に塩化アンモニウム（０．３４ｇ；６．４０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２０℃で３日間撹拌した。溶液をジエチルエーテル（４０ｍＬ）で沈殿させ、次に沈殿物をろ過して集め、洗浄し乾燥させてアミジン塩化水素１７を得た。
【０２００】
アミジン塩化水素（１７、２４１ｍｇ；１．１５ｍｍｏｌ）をヒドラジン水和物（３ｍＬ；６１．９ｍｍｏｌ）に溶解し、次に溶液を２０℃で１６時間撹拌した。次にこれを水（１０ｍＬ）で希釈し、沈殿物を遠心分離で集めて乾燥した。無色固体を酢酸（１．５ｍＬ）に溶解して、亜硝酸ナトリウム（２８ｍｇ；０．４１ｍｍｏｌ）を添加した。ピンク色混合物を１５分間撹拌し、次にクロロホルム（１５ｍＬ）及び飽和重炭酸ナトリウム（３０ｍＬ）を添加した。オレンジ色層を分離し、水（１５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、次に蒸発させて乾燥してＢｏｃ−保護化テトラジンをピンク色固体として得た（１９、７０ｍｇ；３５％）。この化合物（１２ｍｇ；０．０３５ｍｍｏｌ）をクロロホルム（１ｍＬ）に溶解して、ＴＦＡ（１ｍＬ）を添加した。混合物を１５分間撹拌して、ジエチルエーテル（１５ｍＬ）で沈殿させた。ピンク色沈殿物をろ過して分離し、洗浄、乾燥して表題の化合物をＴＦＡ塩として得た（２０、１０ｍｇ、７８％）。
【０２０１】
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ＝５．０６（ｓ，４Ｈ）ｐｐｍ。１３ＣＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ＝１６４．５，４１．１ｐｐｍ。ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＰＤＡ：クロマトグラムで１ピーク、ｍ／ｚ＝１４１（Ｍ＋Ｈ＋），λｍａｘ＝２６７及び５１７ｎｍ。
【０２０２】
２，２’，２’’−（１０−（２−オキソ−２−（６−オキソ−６−（６−（６−（ピリジン−２−イル）−１，２，４，５−テトラジン−３−イル）ピリジン−３−イルアミノ）ヘキシルアミノ）エチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリイル）三酢酸（２７）及び２，２’，２’’−（１０−（２−オキソ−２−（１１−オキソ−１１−（６−（６−（ピリジン−２−イル）−１，２，４，５−テトラジン−３−イル）ピリジン−３−イルアミノ）ウンデシルアミノ）エチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリイル）三酢酸（２８）の合成
【０２０３】
【化３６】
2014513717.tif 000037
５−アミノ−２−シアノピリジン２１（１．０２ｇ；８．６０ｍｍｏｌ）、Ｎ−Ｂｏｃ−６−アミノ−ヘキサン酸２２（０．９９ｇ；４．３０ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（１．７７ｇ；８．６０ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１．０５ｇ；８．６０ｍｍｏｌ）、及びＰＰＴＳ（０．３７ｇ；１．４７ｍｍｏｌ）をクロロホルム（１５ｍＬ）中に懸濁させた。混合物を室温で１８時間撹拌し、蒸発させて乾燥させ、アセトニトリル（２０ｍＬ）中で撹拌した。沈殿物をろ過して除き、ろ液を蒸発させて乾燥し、クロロホルム（２０ｍＬ）に溶解して、水溶液クエン酸（１５ｍＬ０．５Ｍ）、水溶性炭酸水素カリウム（１５ｍＬ、１Ｍ）及び水（１５ｍＬ）の各々で洗浄した。オレンジ層を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン／酢酸エチル＝１：１）で精製して生成物２３を白色固体として得た（０．９５ｇ；６１％）。
【０２０４】
ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）：計算値Ｃ１７Ｈ２５Ｎ４Ｏ３＋（［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３３．１９、実測値：３３３．１７。
【０２０５】
Ｔｅｒｔ−ブチル６−（６−シアノピリジン−３−イルアミノ）−６−オキソヘキシルカーバメート２３（０．７０ｇ；２．１ｍｍｏｌ）、２−シアノピリジン（０．８７ｇ；８．４ｍｍｏｌ）、ヒドラジン水和物（１．２５ｇ；２０ｍｍｏｌ）をエタノール（２ｍＬ）中に溶解し、次に硫黄（０．２２ｇ；７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を７０℃で、アルゴン不活性雰囲気下で２時間撹拌し、次に５０℃で１６時間撹拌した。オレンジの懸濁物をクロロホルム（１０ｍＬ）で希釈し、次に得られた溶液を水（２回、１５ｍＬ）で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカ、クロロホルム／アセトン＝４：１）で精製して、生成物２４をオレンジ色固体として得た（０．６５ｇ；６６％）。ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）：計算値Ｃ２３Ｈ３１Ｎ８Ｏ３＋（［Ｍ＋Ｈ］＋）：４６７．２５、実測値：４６７．３３。
【０２０６】
Ｔｅｒｔ−ブチル６−オキソ−６−（６−（６−（ピリジン−２−イル）−１，２−ジヒドロ−１，２，４，５−テトラジン−３−イル）ピリジン−３−イルアミノ）ヘキシルカーバメート２４（０．３０ｇ；０．６４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、酢酸（２ｍＬ）を添加した。亜硝酸ナトリウム（０．２５ｇ；３．６２ｍｍｏｌ）を水（１ｍＬ）に溶解、滴下した。赤色溶液を水溶性炭酸水素カリウム（５０ｍＬ；１Ｍ）に入れて、生成物をクロロホルム（５０ｍＬ）で抽出した。オレンジ色層を水（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固させて、生成物２５を紫固体として得た（０．２５ｇ；８３％）。
【０２０７】
ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）：計算値Ｃ２３Ｈ２９Ｎ８Ｏ３＋（［Ｍ＋Ｈ］＋）：４６５．２３、実測値：４６５．４２。
【０２０８】
ｔｅｒｔ−ブチル６−オキソ−６−（６−（６−（ピリジン−２−イル）−１，２，４，５−テトラジン−３−イル）ピリジン−３−イルアミノ）ヘキシルカーバメート２５（６６ｍｇ；０．１４ｍｍｏｌ）をクロロホルム（６ｍＬ）中に溶解し、ＴＦＡ（６ｍＬ）を添加した。溶液を室温で２時間撹拌し、続いて蒸発乾固させて生成物２６をそのＴＦＡ塩として得た（５２ｍｇ；１００％）。
【０２０９】
ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）：計算値Ｃ１８Ｈ２１Ｎ８Ｏ＋（［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６５．１９、実測値：３６５．３３。
【０２１０】
６−アミノ−Ｎ−（６−（６−（ピリジン−２−イル）−１，２，４，５−テトラジン−３−イル）ピリジン−３−イル）ヘキサンアミド２６（５２ｍｇ；０．１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２．５ｍＬ）中に溶解し、ＤＩＰＥＡを添加した（３２０ｍｇ；２．０ｍｍｏｌ）。Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド活性化ＤＯＴＡ（１６１ｍｇ；０．２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で５時間撹拌した。溶液を蒸発乾固させ、粗生成物をアセトニトリルと水の混合物中に溶解し、分取用ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。凍結乾燥後、精製された紫生成物２７を、ピンクの綿状固体として得た（８０ｍｇ、収率７６％）。
【０２１１】
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ中３０％アセトニトリル−ｄ３）：δ＝８．９０（ｍ，２Ｈ，ＡｒＨ）、８．６８（ｄ，１Ｈ，ＡｒＨ），８．６０（ｄｄ，１Ｈ，ＡｒＨ），８．３１（ｍ，１Ｈ，ＡｒＨ），８．２４（ｔ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．８２（ｔ，１Ｈ，ＡｒＨ），３．８０（ｂｒｓ，６Ｈ，ＮＣＨ２ＣＯＯＨ），３．７２（ｂｒｓ，２Ｈ，ＮＣＨ２ＣＯＮＨ），３．３４−３．２３（ｂｒｍ，１８Ｈ，ＮＣＨ２ＣＨ２Ｎ，ＣＨ２ＮＨＣＯ）、２．４９（ｔ，２Ｈ，ＮＨＣＯＣＨ２），１．７０（ｍ，２Ｈ，ＮＨＣＯＣＨ２ＣＨ２），１．５９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＯ），１．４１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＯ）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ中３０％アセトニトリル−ｄ３）：δ＝１７５．５，１７１．５（ｂｒ），１６２．６，１６２．５，１５０．１，１４８．１，１４２．９，１４１．６，１３９．６，１３８．４，１２８．０，１２７．９，１２５．４，１２４．８，５５．４，５４．３（ｂｒ），４９．４（ｂｒ），３９．４，３６．５，２８．２，２５．９，２４．６ｐｐｍ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ，Ｃ３４Ｈ４７Ｎ１２Ｏ８＋（［Ｍ＋Ｈ］＋）：７５１．３７；実測値［Ｍ＋Ｈ］＋７５１．５８，［Ｍ＋Ｎａ］＋７７３．５０，［Ｍ＋２Ｈ］２＋３７６．４２，［Ｍ＋３Ｈ］３＋２５１．３３。ＦＴ−ＩＲ（ＡＴＲ）：ν＝３２６３，３０９４，２９４１，２８６２，１６６７，１６３７，１５８２，１５４０，１４６０，１４３１，１３９５，１３２４，１２９６，１２７２，１２５１，１２２６，１１９８，１１２８，１０８７，１０６０，１０２０，９９２，９７７，９２０，８６０，８３１，７９８，７８２，７４２，７１８，６７９，６６３ｃｍ−１。
【０２１２】
２８に関して、２、２’、２’’−（１０−（２−オキソ−２−（６−オキソ−６−（６−（６−（ピリジン−２−イル）−１，２，４，５−テトラジン−３−イル）ピリジン−３−イルアミノ）ヘキシルアミノ）エチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリイル）三酢酸（２７）の合成に相当する手順を用いた。凍結乾燥後、精製生成物２８をピンク色綿状固体として得た（９０ｍｇ、収率７８％）。
【０２１３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１０．６５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．０６（ｄ，１Ｈ，ＡｒＨ），８．９３（ｄ，１Ｈ，ＡｒＨ），８．６１（ｔ，２Ｈ，ＡｒＨ），８．４４（ｄｄ，１Ｈ，ＡｒＨ），８．１６（ｔ，２Ｈ，ＡｒＨ，ＮＨ），７．７３（ｄｄ，１Ｈ，ＡｒＨ），３．５１（ｂｒ  ｓ，６Ｈ，ＮＣＨ２ＣＯＯＨ），３．２８（ｂｒ  ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ２ＣＯＮＨ），３．０６（ｑ，２Ｈ，ＣＨ２ＮＨＣＯ），３．３４−３．２３（ｂｒ  ｍ，１６Ｈ，ＮＣＨ２ＣＨ２Ｎ），２．４３（ｔ，２Ｈ，ＮＨＣＯＣＨ２），１．６４（ｍ，２Ｈ，ＮＨＣＯＣＨ２ＣＨ２），１．４２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＯ），１．３８−１．２２（ｍ，１２Ｈ，ＣＨ２）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１７３．０，１７１．０（ｂｒ），１６９．１（ｂｒ），１６３．５，１６３．２，１５１．０，１５０．６，１４４．２，１４１．７，１３９．１，１３８．２，１２７．０，１２６．５，１２５．３，１２４．６，５７．３（ｂｒ），５５．２（ｂｒ），５０．７，３９．０，３６．８，２９．５，２９．４，２９．３，２９．１９，２９．１７，２９．１，２６．９，２５．３ｐｐｍ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ計算値Ｃ３９Ｈ５７Ｎ１２Ｏ８＋（［Ｍ＋Ｈ］＋）：８２１．４４；実測値［Ｍ＋Ｎａ］＋８４３．５８，［Ｍ＋Ｈ］＋８２１．５８，［Ｍ＋２Ｈ］２＋４１１．４２，［Ｍ＋３Ｈ］３＋２７４．６７。ＦＴ−ＩＲ（ＡＴＲ）：ν＝３２６１，３０６７，２９２５，２８５１，１６３３，１５８３，１５４１，１４５８，１４３３，１３９４，１３２４，１２９８，１２７０，１２４９，１２２８，１２００，１１６５，１１２８，１０８８，１０５９，１０１６，９９１，９２０，８８５，８６０，８３２，７９８，７８２，７６４，７４２，７１９，６８７，６６１ｃｍ−１。
【０２１４】
ＤＯＴＡ−テトラジンアクチベータ２９
【０２１５】
【化３７】
2014513717.tif 000038
上記テトラジン２９はＲｏｂｉｌｌａｒｄらにより詳細に記載されている（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，２０１０，１２２，３４４７−３４５０）。これはまた、本発明に係るアクチベータとして使用され得る構造の一例である。１，２，４，５−テトラジン部分の２−ピリジル基の１つ上のアミド官能基は電気供与基であり、又両方のピリジン基は電子吸引性であると考えられ得る。テトラジンは、従って、僅かに電子不足とみられ得る。
【０２１６】
アクチベータ２９は適切かつ好適な薬理学的性質を示す：２９は、ＰＢＳ溶液中で安定であり、２時間以内ではほとんど分解されず、一晩インキュベーション後でもなお、材料のほとんどが変化しない（ｉｎｔａｃｔ）；マウスでは１０分の血液除去（クリアランス）半減期を有する；マウスでの部分分布容量（Ｖｄ）は、細胞内に有意に入らないことから、全細胞外水分画（ｗａｔｅｒ  ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）に対応する。アクチベータ２９は、ＤＯＴＡリガンドを含み、かかるリガンドは、種々のイメージングモダリティ（例えばＭＲＩ、ＳＰＥＣＴ，
ＰＥＴ）で有用である。結果として、アクチベータ２９は、薬物放出に好適のみならず、同時にイメージング目的でも使用され得る。事実、アクチベータ２９は、１１１Ｉｎ３＋と錯体化後、ＳＰＥＣＴ／ＣＴイメージングプローブとして使用されてきた。さらに詳細については、Ｒｏｂｉｌｌａｒｄらの文献を参照のこと（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，２０１０，１２２，３４４７−３４５０）。
【０２１７】
留意すべきことは、アクチベータ２７から２９に含まれるアミノ−１，２，４，５−テトラジン部分は、糖、ＰＥＧ、ポリマー、ペプチド（ＲＧＤ又はｃ−ＲＧＤなど）、タンパク質、蛍光分子又は色素分子などの一連の追加官能基と共役するために使用され得る、ということである。
【０２１８】
例２
（Ｅ）−シクロオクテンモデルプロドラッグ及びプロドラッグの合成
シス−（Ｅ）−シクロオクタ−５−エン−１，２−ジアミン（３５）の合成
【０２１９】
【化３８】
2014513717.tif 000039
エポキシシクロオクテンを、酢酸及びジクロロメタン中での１，５−シクロオクタジエンの過ホウ酸ナトリウムとの反応により合成した（Ｇｕｅｎｅｓ，  Ｙ．；  Ｓｅｎｏｃａｋ，  Ｅ．；  Ｔｏｓｕｎ，  Ｃ．；  Ｔａｓｋｅｓｅｎｌｉｇｉｌ，  Ｙ．，  Ｏｒｇ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  ２００９，  ２：３，  ７９−８３）。粗生成物自体を使用した。エポキシシクロオクテン（８０．０ｇ，０．６４５ｍｏｌ）１４０ｍｌアセトン溶液を、アジ化ナトリウムの２００ｍＬ水溶液に、４５分間に亘って添加した。添加じょうごは、２０ｍＬアセトンで洗い流し、混合物を還流下で７６時間加熱した。アセトンの大部分を回転蒸発によって除去し、１００ｍＬ水を残渣に添加し、混合物を、３×２５０ｍＬのＴＢＭＥで抽出した。有機層を、１００ｍＬ水で洗浄し、その後、乾燥及び回転蒸発し、粗トランス−（Ｚ）−８−アジドシクロオクタ−４−エノール（３０）（エポキシドで混合されて）を得、それ自体を次工程で使用した。
【０２２０】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：d＝１．６−２．６（ｍ，  ８Ｈ），３．６５−３．８（ｍ，  ２Ｈ），５．５−５．６５（ｍ，  ２Ｈ）ｐｐｍ。
【０２２１】
トルエン（２００ｍＬ）を３０の全量に添加し、回転蒸発によって１５０ｍＬの溶媒を除去した。３００ｍＬのトルエンを残渣（アジドアルコール３０及び始動エポキシドの約１／１混合物）に加え、溶液を氷で冷却した。トリエチルアミン（８６．１ｇ，０．８５２ｍｏｌ）を添加し、続いて、１００ｍＬトルエン中の塩化メタンスルホニル（９３．８ｇ，０．８１９ｍｏｌ）を、１時間に亘って機械的攪拌しながら添加した。懸濁液を２日間攪拌し、その後２００ｍＬの水を添加した。層が分離し、有機層を２×５０ｍＬの水で洗浄した。一連の水層を２５０ｍＬのトルエンで抽出した。乾燥及び回転蒸発し、アジドメシラート及び始動エポキシドの混合物である残渣を得た。
【０２２２】
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）：  δ  ＝１．９５−２．６（ｍ，  ８Ｈ），３．９５（ｄｔ，  １Ｈ），４．８（ｄｔ，  １Ｈ），５．５−５．６５（ｍ，  ２Ｈ）  ｐｐｍ。
【０２２３】
残渣の半分を、１００ｍＬＤＭＦ及びアジ化ナトリウム（２０ｇ，０．３０７ｍｏｌ）で、７５℃で４４時間、その後、８５℃で３時間温めた。混合物を、２００ｍＬの水に注ぎ、その後、３×２００ｍＬのＴＢＭＥで抽出した。有機層は、３×５０ｍＬの水で洗浄し、その後、乾燥及び回転蒸発して、シス−（Ｚ）−５，６−ジアジドシクロオクタ−１−エン（３１）、エポキシシクロオクテン及び不純物の混合物である残渣を得た。
【０２２４】
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）：  δ  ＝１．８（ｍ，  ２Ｈ），１．９５−２．１（ｍ，  ４Ｈ），２．５−２．６５（ｍ，  ２Ｈ），３．８（ｄｔ，  ２Ｈ），５．６−５．７（ｍ，  ２Ｈ）  ｐｐｍ。
【０２２５】
上記得られた粗ジアジド３１を１５０ｍＬのＴＨＦ中に溶解し、９０分間に亘って、２００ｍＬのＴＨＦ中の水素化リチウムアルミニウム（１２．０ｇ，０．３１５ｍｏｌ）に添加し、冷水を用いて冷却した。反応混合物を、還流下で８時間加熱し、その後、冷却し、６ｍＬの水及び３０％水酸化ナトリウム溶液でゆっくりとクエンチした。ろ過、ＴＨＦでの洗浄及び回転蒸発し、１５０ｍＬジクロロメタン中に溶解した残渣３２を得、その後、氷で冷却した。トリフルオロ酢酸無水物（６９．０ｇ，０．３２８ｍｏｌ）を３０分間に亘って添加した。溶液を４時間攪拌し、その後回転蒸発した。残渣を２５０ｇシリカゲルカラムでクロマトグラフし、酢酸エチルを含むヘプタン（酢酸エチル量を増やしながら）で溶出を実行した。第１の画分は、シクロオクタ−２−１−オルのトリフルオロ酢酸塩であった。所望のシス−（Ｚ）−Ｎ，Ｎ’−（シクロオクタ−５−エン−１，２−ジイル）ビス（２，２，２−トリフルオロアセトアミド）（３３）を有する画分を合わせて、ＴＢＭＥ及びペプタンの混合物から再結晶させ、１８．８５ｇの生成物（３３，５６．７４ｍｍｏｌ，エポキシシクロオクテンに基づいて１８％）。
【０２２６】
ジアミン３２の１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝１．６５（ｍ，  ２Ｈ），１．８（ｍ，  ２Ｈ），２．０（ｍ，  ２Ｈ），２．４（ｍ，  ２Ｈ），３．０（ｄｔ，  ２Ｈ），５．６（ｍ，  ２Ｈ）  ｐｐｍ。
【０２２７】
ビスアミド３３の１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：  δ＝１．６５（ｍ，  ２Ｈ），２．０（ｍ，  ２Ｈ），２．２（ｍ，  ２Ｈ），２．３５（ｍ，  ２Ｈ），４．１５（ｄｔ，  ２Ｈ），５．９（ｍ，  ２Ｈ），７．５（ｍ，  ２Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：２３（ＣＨ２），３２（ＣＨ２），５４（ＣＨ），１１０−１２２（ｑ，  ＣＦ３），１３２（ＣＨ），  １５７−１５９（ｑ，  Ｃ＝Ｏ）ｐｐｍ。１９Ｆ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝−７６ｐｐｍ。
【０２２８】
３．５０ｇ（２５．０ｍｍｏｌ）シス−（Ｚ）−シクロオクタ−５−エン−１，２−ジアミン３２及びトリフルオロ酢酸無水物（１２．３ｇ，５８．６ｍｍｏｌ）からの反応生成物の蒸発の後に得られた粗トリフルオロアセトアミド３３を、４．０ｇ安息香酸メチル及び約５００ｍＬヘプタン／エーテル（約２：１）で混合した。混合物を４２時間照射し、一方溶液を、連続的に、シリカゲルカラム（約４．１ｇ硝酸銀を含む）に埋め込まれた４１ｇの硝酸銀を通じてフラッシュクロマトした（ｆｌｕｓｈｅｄ）。カラムは、１５０ｍＬのＴＢＭＥでフラッシュされ、その後、いくらかのメタノールを含む１５０ｍＬのＴＢＭＥでフラッシュされた。画分を１００ｍＬの１５％アンモニアで洗浄し、乾燥及び回転蒸発した。第１の画分は、Ｚ及びＥアルケンの１：２混合物を得、第２の画分は、少量のＥアルケンを得た。カラム材料をＴＢＭＥ及びアンモニアで攪拌し、その後、ろ過し、層を分離した。固体を水層及びＴＢＭＥでもう一度処理し、その後、ろ過し、層を分離した。有機層を乾燥し、回転蒸発して、３．０７ｇのＥアルケン  シス−（Ｅ）−Ｎ，Ｎ’−（シクロオクタ−５−エン−１，２−ジイル）ビス（２，２，２−トリフルオロアセトアミド）（３４，９．２５ｍｏｌ，アミンに基づいて３７％）を得た。
【０２２９】
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）：  δ＝１．６−１．９（ｍ，  ４Ｈ），２．１−２．５（ｍ，  ４Ｈ），３．８（ｍ，  １Ｈ），４．１（ｔ，  １Ｈ），５．４−５．５５（ｍ，  １Ｈ），５．６５−５．８（ｍ，  １Ｈ），６．４（ｂｓ，  １Ｈ），７．９（ｂｓ，  １Ｈ）  ｐｐｍ。
【０２３０】
上記得られたアミド３４を、４０ｍＬメタノール、５．０ｇ水酸化ナトリウム及び１０ｍＬ水と混合した。混合物を略還流下で９０分温め、その後、回転蒸発し、残渣を３０ｍＬの水で希釈した。３×５０ｍＬのジクロロメタンで抽出し、乾燥及び回転蒸発して、少量の溶媒を含む所望のジアミン  シス−（Ｅ）−シクロオクタ−５−エン−１，２−ジアミン（３５）を得た（１．３８ｇ，約１００％）。
【０２３１】
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）：δ＝１．４−２．５（ｍ，  ８Ｈ），２．８（ｂｓ，  １Ｈ），２．９（ｄ，  １Ｈ），５．４−５．６（ｍ，  ２Ｈ）ｐｐｍ。
【０２３２】
シス−（Ｅ）−フェニル（８−アミノシクロオクタ−４−エン−１−イル）カーバメート（３６）の合成
【０２３３】
【化３９】
2014513717.tif 000040
【０２３４】
炭酸ジフェニル（５００ｍｇ，２．３３ｍｍｏｌ）を、ジアミン３５（３００ｍｇ，２．１４ｍｍｏｌ）の１０ｍＬジクロロメタン溶液に添加し、溶液を室温で４日間攪拌した。溶液を２５ｇシリカでクロマトグラフし、メタノールを含むジクロロメタン（メタノール量を増やしながら）で溶出した。生成物画分を合わせて、１５ｍＬのＴＢＭＥで２時間攪拌した。１５ｍＬヘプタンを添加し、混合物をろ過した。固体を１５ｍＬのＴＢＭＥで攪拌し、その後ろ過した。混ぜ合わせられたろ液を回転蒸発し、残渣をヘプタンで一晩攪拌し、固体を得た。ろ過して、所望の生成物シス−（Ｅ）−フェニル（８−アミノシクロオクタ−４−エン−１−イル）カーバメート（３６）を得た。
【０２３５】
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）：  δ  ＝１．５（ｂｓ，  ４Ｈ），１．８−２．３５（ｍ，  ６Ｈ），３．１（ｂｓ，  １Ｈ），３．６（ｔ，  １Ｈ），５．５（ｂｄ，  １Ｈ），５．６（ｍ，  ２Ｈ），７．０５−７．４（ｍ，  ５Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）：δ＝２８．４（ＣＨ２），３３．０（ＣＨ２），３６．７（ＣＨ２），４０．７（ＣＨ２），５７．７（ＣＨ），５８．４（ＣＨ），１２１．８（ＣＨ），１２５．４（ＣＨ），１２９．５（ＣＨ），１３３．２（ＣＨ），１３３．３（ＣＨ），１５１．３（Ｃ），１５４．０（Ｃ）  ｐｐｍ。
【０２３６】
シス−（Ｅ）−３，４，５−トリメトキシベンジル（８−アミノシクロオクタ−４−エン−１−イル）カーバメート（３７）の合成
【０２３７】
【化４０】
2014513717.tif 000041
３，４，５−トリメトキシベンジルアルコール（６．２０ｇ，３１．３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液を、ＣＤＩ（５．４４ｇ，３３．５８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２５ｍＬ）溶液に１５分で添加し、氷−水浴内で冷却した。混合物をその後３日間室温で攪拌した。溶媒を真空下で除去し、ＴＢＭＥ（１００ｍＬ）を添加した。混合物を１時間攪拌し、デカンテーション及びろ過した。残渣をＴＢＭＥ（２５ｍＬ）で５時間攪拌し、デカンテーション及びろ過した。複合ＴＢＭＥろ液を濃縮し、ＣＤＩ−付加物（１０．４５ｇ，３５．７８ｍｍｏｌ，遊離イミダゾールに関して補正されていない）を、ゆっくり凝固されたオイルとして得た。ＮＭＲにより、それは、１当量の遊離イミダゾールを含む。
【０２３８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝３．８５（ｓ，  ３Ｈ），３．９（ｓ，  ６Ｈ），５．３５（ｓ，  ２Ｈ），６．６５（ｓ，  ２Ｈ），７．０５（ｓ，  １Ｈ），７．４５（ｓ，  １Ｈ），８．２（ｓ，  １Ｈ）ｐｐｍ。
【０２３９】
ＣＤＩ−誘導体（７０５ｍｇ，２．４１ｍｍｏｌ）を、ジアミン３５のジクロロメタン（１５ｍＬ）溶液に添加し、混合物を１時間室温で攪拌した。混合物を濃縮し、エチル酢酸（２０ｍＬ）を残渣に添加し、混合物を温かいうちにろ過した。残渣を温かいエチル酢酸で洗浄し、複合ろ液を氷で、沈殿物が現れ始めるまで冷却し、その後、それを１時間攪拌した。混合物を−１５℃で３０分冷却し、ろ過によって集められた沈殿物を冷たいエチル酢酸で洗浄し、乾燥して、シス−（Ｅ）−３，４，５−トリメトキシベンジル（８−アミノシクロオクタ−４−エン−１−イル）カーバメート３７（１７０ｍｇ，０．４７ｍｏｌ，２０％）を得た。
【０２４０】
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）：δ＝１．４−２．３（ｍ，  １０Ｈ），３．０５（ｂｓ，  １Ｈ），３．５５（ｔ，  １Ｈ），３．８（ｓ，  ３Ｈ），３．８５（ｓ，  ６Ｈ），５．０（ｓ，  ２Ｈ），５．２（ｍ，  １Ｈ），５．６（ｍ，  ２Ｈ），６．６（ｓ，  ２Ｈ），７．４５（ｓ，  １Ｈ），８．２（ｓ，  １Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）：δ＝２８（ＣＨ２），３３（ＣＨ２），３７（ＣＨ２），４１（ＣＨ２），５６（ＣＨ），５８（ＣＨ），５８．５（ＣＨ），６１（ＣＨ），６７（ＣＨ２），１０６（ＣＨ），１３２．５（Ｃ），１３３（ＣＨ），１３３．５（ＣＨ），１３８（Ｃ），１５３．５（Ｃ），１５５．５（Ｃ）ｐｐｍ。
【０２４１】
シス２−メチルフェニル（（Ｅ）−８−アミノシクロオクタ−４−エン−１−イル）カーバメート（３９）の合成
【０２４２】
【化４１】
2014513717.tif 000042
シス−（Ｅ）−シクロオクタ−５−エン−１，２−ジアミン（３５，９．７ｍｇ；０．０６９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解し、０℃まで冷却した。ＮＨＳ−活性化したｏ−クレゾール３８（１７．２ｍｇ；０．０６９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）中に溶解して、添加した。混合物を０℃で３０分攪拌した。沈殿物をろ過によって除去し、ろ液を蒸発乾固した。オイル性残渣をジクロロメタン（２ｍＬ）中に溶解し、水（１ｍＬ）で洗浄した。生成物を０．５Ｍクエン酸（１．５ｍＬ）で抽出し、水相を分離し、食塩水（２ｍＬ）で中和した。生成物をジクロロメタン（２ｍＬで２回）抽出した。複合有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固して、粘着性オイルとして生成物３９を得た（６．１ｍｇ，３２％）。
【０２４３】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝７．２−７．０（ｍ，  ４Ｈ），５．６２（ｍ，  ２Ｈ），５．５７（ｓ，  １Ｈ），３．５９（ｔ，  １Ｈ），３．１４（ｄ，  １Ｈ），２．１９（ｓ，  ３Ｈ），２．３−１．８（ｍ，  ８Ｈ），１．６（ｂｒ．  ｓ，  ２Ｈ）ｐｐｍ。ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＰＤＡ：クロマトグラムで１ピーク，ｍ／ｚ  ＝  ２７５  （Ｍ＋Ｈ＋），lｍａｘ＝２６１ｎｍ。
【０２４４】
シス２−メトキシフェニル（（Ｅ）−８−アミノシクロオクタ−４−エン−１−イル）カーバメート（４１）の合成
【０２４５】
【化４２】
2014513717.tif 000043
シス−（Ｅ）−シクロオクタ−５−エン−１，２−ジアミン（３５，９．７ｍｇ；０．０６９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）中に溶解し、０℃まで冷却した。ＮＨＳ活性化された２−メトキシフェニル（４０，１８．３ｍｇ；０．０６９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）中に溶解し、添加した。混合物を０℃で４５分間攪拌した。沈殿物をろ過で除去し、ろ液を蒸発乾固した。オイル性残渣をジクロロメタン（２ｍＬ）中に溶解し、水（１ｍＬ）で洗浄した。生成物を０．５Ｍクエン酸（１．５ｍＬ）で抽出し、水相を分離し、食塩水（２ｍＬ）で中和した。生成物を、ジクロロメタン（２ｍＬで２回）抽出した。複合有機層を、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固し、粘着性オイルとして生成物４１（９．０ｍｇ，４５％）を得た。
【０２４６】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝７．２２（ｍ，  ２Ｈ），６．９７（ｍ，  ２Ｈ），５．６２（ｍ，  ２Ｈ），５．７１（ｓ，  １Ｈ），３．８９（ｓ，  ３Ｈ），３．５９（ｔ，  １Ｈ），３．１４（ｄ，  １Ｈ），２．３−１．８（ｍ，  ８Ｈ），１．６（ｂｒ．  ｓ，  ２Ｈ）ｐｐｍ。ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＰＤＡ：  クロマトグラムで１ピーク，ｍ／ｚ＝２９１（Ｍ＋Ｈ＋），lｍａｘ＝２６９ｎｍ。
【０２４７】
シス２，６−ジメチルフェニル（（Ｅ）−８−アミノシクロオクタ−４−エン−１−イル）カーバメート（４３）の合成
【０２４８】
【化４３】
2014513717.tif 000044
シス−（Ｅ）−シクロオクタ−５−エン−１，２−ジアミン（３５，２６．５ｍｇ；０．１８９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１．５ｍＬ）中に溶解し、０℃まで冷却した。ＮＨＳ活性化された２，６−ジメチルフェニル（４２，５０ｍｇ；０．１８９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１時間攪拌した。沈殿物をろ過で除去し、ろ液を蒸発乾固した。オイル性残渣をジクロロメタン（３ｍＬ）中に溶解し、水（１．５ｍＬ）で洗浄した。生成物を０．５Ｍクエン酸（２ｍＬ）で抽出し、水相を分離し、食塩水（３ｍＬ）で中和した。生成物を、ジクロロメタン（３ｍＬで２回）抽出した。複合有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固し、粘着性オイルとして生成物４３（３２ｍｇ，６０％）を得た。
【０２４９】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝７．０２（ｍ，  ３Ｈ），５．５７（ｍ，  ２Ｈ），５．４９（ｓ，  １Ｈ），３．５８（ｔ，  １Ｈ），３．１０（ｄ，  １Ｈ），２．１７（ｓ，  ６Ｈ），２．３−１．８（ｍ，  ８Ｈ），１．６（ｂｒ．  ｓ，  ２Ｈ）ｐｐｍ。ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＰＤＡ：クロマトグラムで１ピーク，ｍ／ｚ＝２８９（Ｍ＋Ｈ＋），lｍａｘ＝２５９ｎｍ。
【０２５０】
シス２−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル（（Ｅ）−８−アミノシクロオクタ−４−エン−１−イル）カーバメート（４５）の合成
【０２５１】
【化４４】
2014513717.tif 000045
シス−（Ｅ）−シクロオクタ−５−エン−１，２−ジアミン（３５，２６．５ｍｇ；０．１８９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１．５ｍＬ）中に溶解し、０℃まで冷却した。ＮＨＳ−活性化された２−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール（４４，５５ｍｇ；０．１８９ｍｏｌ）を添加し、混合物を１時間攪拌し、その後、蒸発乾固した。オイル性残渣をジクロロメタン（３ｍＬ）中に溶解し、水（１．５ｍＬ）で洗浄した。生成物を、０．５Ｍクエン酸（２ｍＬ）で抽出し、水相を分離して、食塩水（３ｍＬ）で中和した。生成物を、ジクロロメタン（３ｍＬで２回）抽出した。複合有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固して、粘着性のオイルとして生成物４５（１５ｍｇ，２５％）を得た。
【０２５２】
ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＰＤＡ：クロマトグラムで１ピーク，ｍ／ｚ＝３１７（Ｍ＋Ｈ＋），lｍａｘ＝２５９ｎｍ。
【０２５３】
シスフェニル（（Ｅ）−８−アミノシクロオクタ−４−エン−１−イル）ウレア（４７）の合成
【０２５４】
【化４５】
2014513717.tif 000046
シス−（Ｅ）−シクロオクタ−５−エン−１，２−ジアミン（３５，２３．４ｍｇ；０．１６７ｍｍｏｌ）をクロロホルム（１ｍＬ）中に溶解した。３，５−ジメチルフェニルイソシアネート（４６，２４．５ｍｇ；０．１６７ｍｍｏｌ）をクロロホルム（１ｍＬ）中に溶解し、２０℃でゆっくり添加した。混合物を２０℃で３０分間攪拌し、続いて真空中で濃縮した。粗材料を続いて分取用ＨＰＬＣによって精製し、２つの異性体生成物４７を、
ｍ／ｚ＝２８８（Ｍ＋Ｈ＋），lｍａｘ＝２４３  ｎｍ：１０．９  ｍｇの主異性体（２３％収率）及び１．９  ｍｇの副異性体（４％収率）で得た。
【０２５５】
トランス  フェニル（Ｅ）−２−アミノシクロオクタ−３−エン−１−イル  カーバメート（５６）の合成
【０２５６】
【化４６】
2014513717.tif 000047
１，３−シクロオクタジエン（２１．７２ｇ，０．２０１ｍｏｌ）、２００ｍＬジクロロメタン、７５ｍＬ酢酸及び３５．１６ｇペルオキソホウ酸ナトリウム四水和物（０．２２８ｍｏｌ）の混合物を室温で２日間、その後、３５℃で２８時間攪拌した。混合物を１５０ｍＬ水及び２００ｍＬジクロロメタン内に注いだ。層が分離し、有機層を５０ｍＬ水で、そして１００ｍＬの２０％水酸化ナトリウム水溶液で洗浄した。一連の水性層を２００ｍＬジクロロメタンで抽出した（セライトでのろ過が必要である）。有機層を乾燥し、回転蒸発した。（Ｚ）−９−オキサビシクロ［６．１．０］ノン−２−エン（４８）を含む残渣それ自体を使用した。
【０２５７】
上記得られたエポキシシクロオクテン４８の６５ｍＬアセトン溶液を、アジ化ナトリウム（２４．０ｇ，０．３６９ｍｏｌ）の６０ｍＬ水溶液に、３０分間に亘って添加した。混合物を、４日後に約３０ｍＬのアセトンを蒸留して取り除きながら、還流下で７日間加熱した（留意）。５０ｍＬの水を残渣に添加し、混合物を２×２００ｍＬのＴＢＭＥで抽出した。有機層を２５ｍＬの水で洗浄し、その後、乾燥及び回転蒸発して、ｔｒａｎｓ−（Ｚ）−２−アジドシクロオクタ−３−エノール（４９）を含む残渣１９．６ｇを得た。留意：アジ化ナトリウムでの開環は、シクロヘキセンオキシドに関してＯｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ２０１０，  ８７，  １６１で述べられた。我々は、有機溶媒としてのアセトンの報告された使用について疑問を抱いている。なぜならＯｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓの合成手順は、８５℃の還流温度を報告しているのだが、これはアセトンよりも溶媒としてのアセトニトリルの使用に、より好適に対応していると思われるからである。
【０２５８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝１．２−２．４（ｍ，  ８Ｈ），３．５５（ｍ，  １Ｈ），４．３５（ｔ，  １Ｈ），５．５５（ｍ，  １Ｈ），５．８５（ｍ，  １Ｈ）ｐｐｍ。
【０２５９】
上記得られた粗物（ｃｒｕｄｅ）４９を、１３０ｍＬのＴＢＭＥ及び２８ｍＬのトリエチルアミン（０．２０２ｍｏｌ）に溶解した。溶液をエタノール−ドライアイスで冷却し、３０ｍＬのＴＢＭＥ中の塩化メタンスルホニル（２１．２ｇ，０．１８５ｍｏｌ）を−１０℃から０℃までで３０分間に亘って添加した。結果の懸濁液を一晩攪拌し、その後、１００ｍＬの水を添加した。層が分離し、有機層を５０ｍＬの水で洗浄した。一連の水層を２００ｍＬのＴＢＭＥで抽出した。乾燥及び回転蒸発し、７５ｍＬのＤＭＦ中に溶解した２０．３ｇのアジドメシラート（ａｚｉｄｏｍｅｓｙｌａｔｅ）残渣を得た。酢酸カリウム（１９．６５ｇ，０．２０ｍｏｌ）を添加し、混合物を８０℃で２時間加熱した。更に５０ｍＬのＤＭＦを添加し、加熱を９０℃で１７時間続けた。冷却後、混合物を１５０ｍＬの希アンモニアへと注ぎ、生成物を３×２００ｍＬのＴＢＭＥで抽出した。一連の有機層を、３×２５ｍＬの水で洗浄し、その後、乾燥及び回転蒸発した。残渣を１５０ｇシリカでクロマトグラフし、ヘプタン／酢酸エチルで溶出し、シス（Ｚ）−２−アジドシクロオクタ−３−エン−１−イル  アセテート（５０）を得た。
【０２６０】
アジドメシラートの１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝１．２−２．４（ｍ，  ８Ｈ），３．１（ｓ，  ３Ｈ），４．５−４．６５（ｍ，  ２Ｈ），５．４（ｍ，  １Ｈ），６．０（ｍ，  １Ｈ）ｐｐｍ。
【０２６１】
アジドアセテート５０の１Ｈ−ＮＭＲ  ５０（ＣＤＣｌ３）：δ＝１．２−２．０（ｍ，  ８Ｈ），２．０５（ｓ，  ３Ｈ），４．３５（ｍ，  １Ｈ），５．４５−５．７（ｍ，  ３Ｈ）ｐｐｍ。
【０２６２】
アジドアセテート５０を５０ｍＬのメタノール及び１５ｍＬの３０％水酸化ナトリウム水溶液で、１時間攪拌した。その後、メタノールの大部分を回転蒸発で除去した。残渣を、２×１００ｍＬのＴＢＭＥで抽出した。有機層を乾燥し、回転蒸発して、１０．５ｇのアジドアルコールを得た。
【０２６３】
この残渣を１００ｍＬのＴＢＭＥで溶解し、トリエチルアミン（２１ｍＬ，０．１５１ｍｏｌ）を添加した。混合物を氷中で冷却し、５０ｍＬＴＢＭＥ中の塩化メタンスルホニル（１３．７５ｇ，０．１２０ｍｏｌ）を、１時間に亘って添加した。結果の懸濁液を一晩攪拌し、その後、１００ｍＬの水を添加した。層が分離し、有機層を５０ｍＬの水で洗浄した。一連の水層を１００ｍＬのＴＢＭＥで抽出した。乾燥及び回転蒸発して、４５ｍＬのＤＭＦ中に溶解したアジドメシラート誘導体を得た。アジ化ナトリウム（１１．０ｇ，０．１６９ｍｏｌ）を添加し、混合物を７０℃で１８時間、その後９０℃で３時間加熱した。冷却後、混合物を１５０ｍＬの水に注ぎ、生成物を３×１５０ｍＬのＴＢＭＥで抽出した。一連の有機層を２×５０ｍＬの水で洗浄し、その後、乾燥及び回転蒸発した。トランス−（Ｚ）−３，４−ジアジドシクロオクタ−１−エンを含む残渣（５１，１１．２８ｇ）それ自体を、次ステップで使用した。
【０２６４】
アジドアルコールの１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝１．２−２．２（ｍ，  ８Ｈ），４．２５（ｍ，  １Ｈ），４．５５（ｍ，  １Ｈ），５．４５（ｍ，  １Ｈ），５．７（ｍ，  １Ｈ）ｐｐｍ。
【０２６５】
アジドメシラートの１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝１．２−２．３（ｍ，  ８Ｈ），３．０（ｓ，  ３Ｈ），４．２５（ｍ，  １Ｈ），５．４（ｍ，  １Ｈ），５．５５−５．８（ｍ，  １Ｈ）ｐｐｍ。
【０２６６】
ジアジド５１の１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝１．２−２．４（ｍ，  ８Ｈ），３．４５（ｍ，  １Ｈ），４．３５（ｍ，  １Ｈ），５．４５（ｍ，  １Ｈ），５．９５（ｍ，  １Ｈ）ｐｐｍ。
【０２６７】
上記得られた粗ジアジド５１を１００ｍＬのＴＨＦ中に溶解し、１００ｍＬＴＨＦ中の水素化リチウムアルミニウム（５．４ｇ，０．１４２ｍｏｌ）に、３０分間に亘って添加し、冷水で冷却した。反応混合物を還流下で１８時間加熱し、その後、冷却し、６ｍＬの水及び６ｍＬの３０％水酸化ナトリウム水溶液でゆっくりクエンチした。
【０２６８】
ろ過、ＴＨＦでの洗浄及び回転蒸発し、１００ｍＬのジクロロメタン中に溶解した、７．８ｇの粗ジアミン５２を得、その後、氷中で冷却した。トリフルオロ酢酸無水物（２０．８７ｇ，０．０９９ｍｏｌ）を３０分間に亘って添加した。溶液を３０分間攪拌し、還流下で１時間加熱し、回転蒸発した。残渣を１００ｇシリカでクロマトグラフし、溶出は酢酸エチルを含むヘプタンを用いて（酢酸エチル量を増やしながら）実行した。生成物画分を合わせて、残渣はＴＢＭＥ及びヘプタンの混合物を用いて攪拌し、懸濁液を得た。ろ過して、５．８６ｇのトランスＮ，Ｎ’−（（Ｚ）−シクロオクタ−３−エン−１，２−ジイル）ビス（２，２，２−トリフルオロアセトアミド）（５３，１７．６４ｍｏｌ，１，３−シクロオクタジエンに基づいて９％）を得た。
【０２６９】
ジアミン５２の１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝１．２−  ２．３（ｍ，  ８Ｈ），２．５５（ｍ，  １Ｈ），３．４（ｔ，  １Ｈ），５．３５（ｍ，  １Ｈ），５．６（ｍ，  １Ｈ）ｐｐｍ。
【０２７０】
ビスアミド５３の１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝１．３−２．０（ｍ，  ６Ｈ），２．２５（ｍ，  ２Ｈ），４．０５（ｍ，  １Ｈ），５．０（ｑ，  １Ｈ），５．４（ｔ，  １Ｈ），５．９（ｑ，  １Ｈ），７．０（ｂｓ，  １Ｈ），７．１（ｂｓ，  １Ｈ）ｐｐｍ。
【０２７１】
トリフルオロアセトアミド５３（５．８６ｇ，１７．６４ｍｍｏｌ）を、６．２５ｇの安息香酸メチル及び約５００ｍＬのヘプタン／エーテル（約１：２）と混合した。懸濁液を７８時間照射し、一方、混合物を、連続的に、シリカゲルカラム（約３．２ｇ硝酸銀を含む）に埋め込まれた３２．２ｇの硝酸銀を通じてフラッシュクロマトした。溶解していないアミド５３をカラムのトップで集め、照射及びフラッシュプロセスの間非常にゆっくり溶解したが、照射の最後ではまだ完全には溶解していなかった。カラム材料は、３００ｍＬヘプタン／ＴＢＭＥ（１：１）、その後３００ｍＬＴＢＭＥでフラッシュした。画分を、１００ｍＬの１５％アンモニアで洗浄し、乾燥及び回転蒸発し、５３及び５４の混合物を得た（５４は、ヘプタン：ＴＢＭＥで攪拌することによって精製され得る）。カラム材料をジクロロメタン及びアンモニアで攪拌し、その後ろ過し、層を分離した。固体を水層及びジクロロメタンでもう１度処理し、その後、ろ過し、層を分離した。複合有機層を乾燥し、回転蒸発して、トランスアルケン５４（０．９１ｇ，１６％）を得た。
【０２７２】
５４の１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝０．８−２．５（ｍ，  ８Ｈ），４．３５（ｍ，  １Ｈ），４．５５（ｍ，  １Ｈ），５．７−６．０（ｍ，  ２Ｈ）ｐｐｍ。１９Ｆ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝−７５．９，−７６．１ｐｐｍ（さらに、−７６．４及び−７６．６ｐｐｍで２つの小さい信号があり、恐らく他のＥ−異性体）。
【０２７３】
アミド５４（４３０ｍｇ，１．２９ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのメタノールと混合し、１．６５ｇの５０％水酸化ナトリウム溶液を添加した。混合物を略還流で９０分間温め、それを回転蒸発し、残渣を１５ｍＬの水で希釈した。４×３０ｍＬのジクロロメタンで抽出し、乾燥及び回転蒸発して、所望のトランス（Ｅ）−シクロオクタ−３−エン−１，２−ジアミン（５５，１２８ｍｇ，０．９１ｍｍｏｌ，７１％）を得た。
【０２７４】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝１．１−２．１（ｍ，  ９Ｈ），２．４５（ｍ，  １Ｈ），３．１５（ｄ，  １Ｈ），３．４５（ｓ，  １Ｈ），５．９５（ｍ，  １Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝２０．０（ＣＨ２），３０．６（ＣＨ２），３５．９（ＣＨ２），３６．２（ＣＨ２），５９．２（ＣＨ），６３．７（ＣＨ），１３０．８（ＣＨ），１３３．４（ＣＨ）ｐｐｍ。
【０２７５】
炭酸ジフェニル（２００ｍｇ，０．９３ｍｍｏｌ）をジアミン５５（９５ｍｇ，０．６８ｍｍｏｌ）の１０ｍＬジクロロメタン溶液に添加し、溶液を室温で３日間攪拌した（反応はまだ完了していない）。溶液を回転蒸発し、残渣を１３ｇシリカでクロマトグラフし、メタノールを有するジクロロメタンで（メタノールの量を増やしながら）溶出した。これにより、所望の生成物トランス−フェニル（Ｅ）−２−アミノシクロオクタ−３−エン−１−イル）カーバメートを得た。わずかに小さいＲｆ値を有する画分は、２‐アミノ位置でのカルバミン酸塩であると仮定された。この生成物は、完全に純粋な携帯で得られなかった（２６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ，１５％）。
【０２７６】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝０．８−２．２（ｍ，  ９Ｈ），２．４５（ｍ，  １Ｈ），３．８−３．９５（ｍ，  ２Ｈ），５．３５（ｂｄ，  １Ｈ，  ａｍｉｄｅ  ＮＨ），５．７５（ｄｄ，  １Ｈ），６．０−６．１５（ｍ，  １Ｈ），７．１−７．４（ｍ，  ５Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝２１．９（ＣＨ２），２８．１（ＣＨ２），３６．１（ＣＨ２），３６．２（ＣＨ２），５６．４（ＣＨ），６３．２（ＣＨ），１２１．８（ＣＨ），１２５．６（ＣＨ），１２９．５（ＣＨ），１３１．７（ＣＨ），１３２．７（ＣＨ），１５１．２（Ｃ），１５４．３（Ｃ＝Ｏ）ｐｐｍ。ＭＳ：２６１．０（Ｍ＋１）。
【０２７７】
別の異性体であると仮定される化合物は、次の１Ｈ−ＮＭＲ信号を有している。
【０２７８】
δ１．０−２．２（ｍ，  ７Ｈ），２．４５（ｍ，  １Ｈ），３．６（ｂｓ，  １Ｈ），３．８（ｂ，  ２Ｈ），４．２５（ｂｓ，  １Ｈ），５．６（ｂｓ，  １Ｈ），５．７（ｍ，  １Ｈ），６．０（ｄ，  １Ｈ），７．１−７．４（ｍ，  ５Ｈ）ｐｐｍ。ＭＳ２６１．０（Ｍ＋１）。
【０２７９】
（Ｅ）−フェニル２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−ジアゾシン−１（８Ｈ）−カルボキシレート（６１）の合成
【０２８０】
【化４７】
2014513717.tif 000048
トリフルオロ酢酸無水物（９２．６９ｇ，０．４４１ｍｏｌ）をエチレンジアミン（１２．０９ｇ，０．２０ｍｏｌ）の５０ｍＬジクロロメタン氷冷溶液に、１時間に亘って添加した。混合物を１時間温めて還流し、その後、回転蒸発した。水（１００ｍＬ）及びＴＢＭＥ（２５０ｍＬ）を添加し、混合物を１時間攪拌した。ろ過及びＴＢＭＥでの洗浄を行い、生成物を得た。ろ液層を分離し、有機層を回転蒸発し、残渣を幾分かのＴＢＭＥで攪拌した。ろ過して、更なる量のＮ，Ｎ’−（エタン−１，２−ジイル）ビス（２，２，２−トリフルオロアセトアミド）（５７）（全収率が４７．２３ｇ（０．１８７ｍｏｌ，９３％）である）を得た。
【０２８１】
上記得られた生成物５７を、４００ｍＬのアセトニトリル、１００ｇの炭酸カリウム、及び３．２ｇのベンジルトリエチルアンモニウムクロリドと、１５分間攪拌した。５０ｍＬのアセトニトリル中に溶解した、シス−１，４−ジクロロ−２−ブテン（２６．９７ｇ，９５％，０．２０５ｍｏｌ）を、３０分間に亘って添加した。混合物を３時間に亘って７１℃まで温め、その温度に６４時間保持し、その後、７７℃で２４時間加熱した。温めながら混合物をろ過し、固体をアセトニトリルで洗浄した。回転蒸発して残渣を得、これを、ジクロロメタン及び溶離剤としていくらかのトリエチルアミンを含むジクロロメタンを使用して、２５０ｇのシリカゲルでクロマトグラフした。これにより、２３．２５ｇの（Ｚ）−１，１’−（２，３−ジヒドロ−１，４−ジアゾシン−１，４（５Ｈ，８Ｈ）−ジイル）ビス（２，２，２−トリフルオロエタノン）（５８，７６，４３ｍｍｏｌ，４１％）を得た。
【０２８２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝３．６５−３．９５（ｍ，  ５．４Ｈ），４．０５−４．２（ｍ，  １．１Ｈ），４．２５（ｂｓ，  １．５Ｈ），５．６（ｍ，  ０．８Ｈ），５．８（ｂｓ，  ０．５Ｈ），６．１５（ｍ，  ０．７Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝４５（２  ＣＨ２），４７（ＣＨ２），４８（ＣＨ２），４８．５（ＣＨ２），４９（ＣＨ２），５０（ＣＨ２），５３（ＣＨ２），１１０−１２２（２ｑ，  ＣＦ３），１２６（ＣＨ），１２７（ＣＨ），１２８（ＣＨ），１２８．５（ＣＨ），１５５−１５８（２ｑ，  Ｃ＝Ｏ）ｐｐｍ。１９Ｆ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝−６９．２，−６９．４，−６９．８，−７０．０ｐｐｍ。ＭＳ：３０５．０（Ｍ＋１），３０３．０（Ｍ−１）。
【０２８３】
トリフルオロアセトアミド５８（１４．０ｇ，４６．０ｍｏｌ）を８．０ｇの安息香酸メチル及び約５００ｍＬのヘプタン／エーテル（約１０：１）と混合した。混合物を９２時間照射し、一方、溶液を、連続的に、シリカゲルカラム（約７．０ｇ硝酸銀を含む）に埋め込まれた７０ｇの硝酸銀を通じてフラッシュクロマトした。カラム材料をその後、１つあたり（ｐｏｒｔｉｏｎｓ）３００ｍＬのヘプタン／ＴＢＭＥ（５：１，３：１，２：１，１：１の比率で）で、その後３００ｍＬの水でフラッシュし、各々の画分を２００ｍＬの１０％アンモニアで洗浄し、乾燥及び回転蒸発した。残っているカラム材料を、ＴＢＭＥ及びアンモニアで攪拌し、その後ろ過し、層を分離した。固体を、水層及びＴＢＭＥでもう一度処理し、その後ろ過し、層を分離した。複合有機層を乾燥し、回転蒸発して、３．４８ｇの（Ｅ）−１，１’−（２，３−ジヒドロ−１，４−ジアゾシン−１，４（５Ｈ，８Ｈ）−ジイル）ビス（２，２，２−トリフルオロエタノン）（５９）を、凝固しているオイル（ｓｏｌｉｄｉｆｙｉｎｇ  ｏｉｌ）として得た（１１．４５ｍｍｏｌ，２５％）。
【０２８４】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝２．６（ｔ，  １Ｈ），２．９５（ｔ，  １Ｈ），３．４−３．５５（ｍ，  １Ｈ），３．７５−３．９（ｍ，  １Ｈ），４．０−４．３（ｍ，  １Ｈ），４．３５−４．６（ｍ，  １Ｈ），４．６５（ｄ，  １Ｈ），５．２５（ｄ，  １Ｈ），５．８−６．０（ｍ，  ２Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝４９．４（ＣＨ２），４９．６（ＣＨ２），５０．０（ＣＨ２），５０．１（ＣＨ２），５１．９（ＣＨ２），５２．０（ＣＨ２），５３．９（ＣＨ２），５４．１（ＣＨ２），１１０−１２２（２ｑ，  ＣＦ３），１３６．０（ＣＨ），１３６．１（ＣＨ），１５５−１５８（２ｑ，  Ｃ＝Ｏ）ｐｐｍ。１９Ｆ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝−６９．２，−６９．２５，−６９．４，−６９．４５ｐｐｍ。
【０２８５】
上記得られたアミド５９（５２０ｍｇ，１．７１ｍｏｌ）を、１０ｍＬのメタノール及び１．６０ｇの５０％水酸化ナトリウム水溶液と混合し、その後、５５℃で１時間温めた。大部分のメタノールを回転蒸発で除去し、残渣を２０ｍＬの水で希釈した。５×２５ｍＬのジクロロメタンで抽出し、乾燥及び回転蒸発して、所望の（Ｅ）−１，２，３，４，５，８−ヘキサヒドロ−１，４−ジアゾシン（６０，１５０ｍｇ，１．３４ｍｍｏｌ，７８％）を得た。
【０２８６】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝２．４５（ｄ，  ２Ｈ），３．１５（ｄ，  ２Ｈ），３．３（ｍ，  ２Ｈ），３．５５（ｄｄ，  ２Ｈ），６．０（ｍ，  ２Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ：δ＝５３．０（ＣＨ２），５４．０（ＣＨ２），１４０．０（ＣＨ）ｐｐｍ。
【０２８７】
ジフェニルカーボネート（２．６６ｍｇ，１．２４ｍｍｏｌ）を、上記得られたジアミン６０の１０ｍＬジクロロメタン溶液に添加し、溶液を３０℃で２日間攪拌した。溶液を１７ｇシリカでクロマトグラフし、メタノールを含むジクロロメタンで（メタノールの量を増やしながら）溶出した。生成画分を合わせて、回転蒸発した。残渣を２０ｇのシリカでクロマトグラフし、メタノールを含むＴＢＭＥで（メタノールの量を増やしながら）溶出した。更にジクロロメタン−メタノールで溶出し、生成物（Ｅ）−フェニル２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−ジアゾシン−１（８Ｈ）−カルボキシレート（６１）を得た。
【０２８８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝２．５−２．８５（ｍ，  ２Ｈ），３．２５−３．４（ｍ，  ２Ｈ），３．４−３．５５（ｍ，  ２Ｈ），４．２５（ｍ，  １Ｈ），４．９  （ｍ，  １Ｈ），５．８−６．１（ｍ，  ２Ｈ），７．０−７．４（ｍ，  ５Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝５０．２（ＣＨ２），５０．８（ＣＨ２），５２．５（ＣＨ２），５２．６（ＣＨ２），５３．５（ＣＨ２），１２１．９（ＣＨ），１２５．５（ＣＨ），１２９．５（ＣＨ），１３５．３（ＣＨ），１３５．４（ＣＨ），１４１．３（ＣＨ），１４１．６（ＣＨ），１５１．６（Ｃ），１５５．０（Ｃ＝Ｏ）ｐｐｍ。ＭＳ：２３２．９（Ｍ＋１）。
【０２８９】
（Ｅ）−シクロオクテン−ドキソルビシン共役物６４の合成
【０２９０】
【化４８】
2014513717.tif 000049
４−（ヒドロキシメチル）フェニル４−ニトロフェニルカーボネート（６２）を、文献の手順を改良して合成した（Ｋ．  Ｈａｂａ，  Ｍ．  Ｐｏｐｋｏｖ，  Ｍ．  Ｓｈａｍｉｓ，  Ｒ．  Ａ．  Ｌｅｒｎｅｒ，  Ｃ．  Ｆ．  Ｂａｒｂａｓ  ＩＩＩ，  ａｎｄ  Ｄ．  Ｓｈａｂａｔ，  Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  ２００５，  ４４，  ７１６−７２０）。２５ｍＬの丸底フラスコ内で、４−ヒドロキシベンジルアルコール（０．３ｇ，２．３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（４００μＬ，０．３ｇ，２．３ｍｍｏｌ，１当量）を、ドライＴＨＦ（３ｍＬ）に溶解した。フラスコを氷浴内に置き、ドライＴＦＨ（２ｍＬ）内のクロロギ酸４−ニトロフェニル（０．５２ｇ，２．５ｍｍｏｌ，１．０５当量）を滴下し、混合物を室温で１時間攪拌した。形成された白色沈殿物（ＤＩＰＥＡ・ＨＣｌ塩）のろ過後、溶媒を真空除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に再溶解した。有機層を水及び食塩水（共に２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、溶媒を真空除去した。精製は、カラムクロマトグラフィー（フラッシュクロマトフラフィ  シリカ，クロロホルム内１０％ＴＨＦ，化合物を３０ｍＬの溶離剤でカラムの頂上に添加した）及び沈殿（アセトン→ペンタン）を使用して実行された。これにより、純粋な６２（０．５７ｇ，２．０ｍｍｏｌ，８４％）を白色固体として得た。そのスペクトル特性は、報告されたデータと一致する。
【０２９１】
１０ｍＬの丸底フラスコ内で、６２（５０ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）を、Ａｒ雰囲気下でドライＴＨＦ（１ｍＬ）に溶解した。ホスゲンの添加後（トルエン内１．９Ｍ溶液の１７９μＬ，０．３４ｍｍｏｌ，２当量）、フラスコを封止し、混合物を室温で１５時間攪拌した。溶媒を真空除去し、結果得られたオイルを、トルエン（×３）及びクロロホルムでフラッシュした。これにより、類縁（ａｎａｌｏｇｏｕｓ）のクロロギ酸エステルを無色のオイルとして得、これは更なる精製無しで即座に使用された。
【０２９２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝８．３３（ｄ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），７．４９（ｄ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），７．４８（ｄ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），７．３３（ｄ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），５．３１（ｓ，  ２Ｈ，  ＣＨ２）ｐｐｍ。
【０２９３】
続いて、２５ｍＬの丸底フラスコ内で、塩酸ドキソルビシン（８６ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）をドライＴＨＦ（２ｍＬ）に溶解し、クロロギ酸エステル（６１ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ，１．２当量）のドライＴＨＦ（４ｍＬ）溶液を添加した。ＤＩＰＥＡ（１１５μＬ，０．６５ｍｏｌ，４．４当量）の添加後、混合物を室温で２３時間攪拌した。溶液をセライトでろ過し、溶媒を真空除去した。残渣をクロロホルム（６０ｍＬ）に再溶解し、水（×２）及び食塩水（全て２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、溶媒を真空除去した。精製は、カラムクロマトグラフィー（フラッシュ  シリカ）を使用して、クロロホルム中２％ＭｅＯＨのクロロホルム中１２％ＭｅＯＨまでのグラジエントを使用して、実行された。これにより、純水な６３（７３ｍｇ，８２μｍｏｌ，５６％）をオレンジ色固体として得た。
【０２９４】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝１３．９７（ｓ，  １Ｈ，  ＡｒＯＨ），１３．２２，（ｓ，  １Ｈ，  ＡｒＯＨ），８．３０（ｄ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），８．０３（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＨ），７．７８（ｔ，  １Ｈ，  ＡｒＨ），７．４６（ｄ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），７．３９（ｍ，  ３Ｈ，  ＡｒＨ），７．２３（ｄ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），５．５０（ｄ，  １Ｈ，  ＯＣＨＯ），５．２８（ｓ，  １Ｈ，  ＣＣＨＨＣＨ），５．１７（ｄ，  １Ｈ，  ＮＨ），５．０４（ｓ，  ２Ｈ，  ＡｒＣＨ２Ｏ），４．７５（ｓ，  ２Ｈ，  ＣＨ２ＯＨ），４．５４（ｓ，  １Ｈ，  ＣＯＨ），４．１４（ｍ，  １Ｈ，  ＣＨＣＨ３），４．０８（ｓ，  ３Ｈ，  ＯＣＨ３），３．８７（ｍ，  １Ｈ，  ＮＨＣＨ），３．６６（ｓ，  １Ｈ，  ＣＨＯＨ），３．２７（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＣＨＨ），３．０２（ｓ，  １Ｈ，  ＣＨ２ＯＨ），３．００（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＣＨＨ），２．３３（ｄ，  １Ｈ，  ＣＣＨＨ），２．１７（ｄ，  １Ｈ，  ＣＣＨＨ），１．９８（ｂｒ，  １Ｈ，  ＣＨＯＨ），１．８８（ｍ，  １Ｈ，  ＮＨＣＨＣＨＨ），１．７７（ｍ，  １Ｈ，  ＮＨＣＨＣＨＨ），１．２９（ｄ，  ３Ｈ，  ＣＨＣＨ３）ｐｐｍ。
【０２９５】
帰属（ａｓｓｉｇｎｍｅｎｔｓ）は、２Ｄ（１Ｈ−１Ｈ）相関分光法（ｇＣＯＳＹ）によって確認された。１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）：δ＝２１３．８，１８７．１，１８６．６，１６１．０，１５６．２，１５５．６，１５５．３，１５５．２，１５０．９，１５０．３，１４５．６，１３５．８，１３５．４，１３５．１，１３３．６，１３３．５，１２９．５，１２５．４，１２５．３，１２１．７，１２０．８，１１９．９，１１８．５，１１１．６，１１１．４，１００．７，６９．７，６９．６，６７．２，６５．８，６５．５，５６．７，４７．０，３５．６，３４．０，３０．２，１６．８ｐｐｍ．ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ計算値８５８．２１；実測値［Ｍ＋Ｎａ］＋８８１．４２。
【０２９６】
２５ｍＬの丸底フラスコ内で、シス−５，６−ジアミノ−トランス−シクロオクテン＊３５（１６．５ｍｇ，７１μｍｏｌ，１．１当量）をアルゴン雰囲気下でドライＴＨＦ（４ｍＬ）に溶解した。６３（５５ｍｇ，６４μｍｏｌ）のドライＴＨＦ（４ｍＬ）溶液を添加し、フラスコを封止し、混合物を室温で１時間攪拌した。溶媒を真空除去し、残渣をＲＰ−ＨＰＬＣ（０．１％ギ酸を有するＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）を使用して、更にλ＝２５３及び３１７  ｎｍで測定して、精製した。グラジエントは、％ＣＨ３ＣＮ  （ｍｉｎ）：  ２８  （１−１１），  ２８  ｔｏ  １００  （１１−１２），  １００  （１２−１３），  １００  ｔｏ  ２８  （１３−１４），  ２８  （１４−１５）から構成した。これにより、凍結乾燥後に、純粋な（Ｅ）−シクロオクテン−ドキソルビシン共役物６４（１９ｍｇ，２２μｍｏｌ，３５％）を、オレンジ色固体として得た。
【０２９７】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３／ＭｅＯＤ−ｄ４  ９５：５）：δ＝７．９８（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＨ），７．７４（ｔ，  １Ｈ，  ＡｒＨ），７．３５（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＨ），７．２３（ｄ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），６．９９（ｄ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），５．７５（ｍ，  １Ｈ，  ＣＨ＝ＣＨ），５．６４（ｍ，  １Ｈ，  ＣＨ＝ＣＨ），５．４３（ｓ，  １Ｈ，  ＯＣＨＯ），５．２３（ｓ，  １Ｈ，  ＣＣＨＨＣＨ），４．９７（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＣＨＨＯ），４．９１（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＣＨＨＯ），４．７１（ｓ，  ２Ｈ，  ＣＨ２ＯＨ），４．０９（ｍ，  １Ｈ，  ＣＨＣＨ３），４．０８（ｓ，  ３Ｈ，  ＯＣＨ３），３．８０（ｍ，  １Ｈ，  ＮＨＣＨ），３．７０（ｍ，  １Ｈ，  ＮＨＣＨＣＨＮＨ２），３．５６（ｓ，  １Ｈ，  ＣＨＯＨ），３．４０（ｍ，  １Ｈ，  ＣＨＮＨ２），３．２２（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＣＨＨ），２．９８（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＣＨＨ），２．３８−１．９６（ｍ，  １０Ｈ，  トランス−シクロオクテンＣＨ２，  ＣＣＨＨ），１．７７（ｍ，  ２Ｈ，  ＮＨＣＨＣＨＨ），１．２２（ｄ，  ３Ｈ，  ＣＨＣＨ３）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４）：δ＝２１３．２，  １８６．１，１８５．９，１６０．８，１５６．５，１５５．７，１５５．１，１５４．５，１５０．６，１３５．７，１３４．６，１３４．２，１３４．１，１３３．６，１３３．１，１３２．８，１２８．６，１２１．２，１１９．７，１１９．０，１１８．７，１１０．８，１１０．６，１００．８，７８．０，７６．０，６９．７，６８．７，６７．２，６５．４，６４．３，５７．３，５５．９，５５．６，３５．９，３５．７，３５．５，３２．６，３１．６，２９．４，２７．６，１５．９  ｐｐｍ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  計算値８５９．３２；  実測値［Ｍ＋Ｈ］＋  ８６０．５０。ＦＴ−ＩＲ  （ＡＴＲ）：υ＝３３４７，２９７２，２９４０，２８７２，１６７６，１６１７，１５７９，１５２５，１５０３，１４４４，１４２９，１４１３，１３４６，１２８５，１２６１，１２０１，１１３４，１０６９，１０１６，９８５，９５２，９１６，８９４，８７５，８３６，８２１，７９９，７６５，７３７，７２１，７０６，６９３，６７３ｃｍ−１。
【０２９８】
＊  推定されるバッチ純度  ６０％
（Ｅ）−シクロオクテン−ドキソルビシン共役物６８の合成
【０２９９】
【化４９】
2014513717.tif 000050
２５ｍＬの丸底フラスコ内で、４−（ｔ−ブチルジメチルシロキシメチル）−２，６−ジメチルフェノール（８４ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ；Ｙ．Ｈ．  Ｃｈｏｅ，  Ｃ．Ｄ．  Ｃｏｎｏｖｅｒ，  Ｄ．  Ｗｕ，  Ｍ．  Ｒｏｙｚｅｎ，  Ｙ．  Ｇｅｒｖａｃｉｏ，  Ｖ．  Ｂｏｒｏｗｓｋｉ，  Ｍ．  Ｍｅｈｌｉｇ，  Ｒ．Ｂ．  Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，  Ｊ．  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２００２，  ７９，  ５５−７０）及びＤＩＰＥＡ（１１１μＬ，８２ｍｇ，０．６３ｍｍｏｌ，２当量）をドライＴＨＦ（０．５ｍＬ）に溶解し、混合物を氷浴上で冷却した。ドライＴＨＦ（０．５ｍＬ）中のクロロギ酸４−ニトロフェニル（１３２ｍｇ，０．６３ｍｍｏｌ，２当量）を滴下し、混合物を４５℃で２時間攪拌した。１Ｈ−ＮＭＲはη≒７８％を示したので、追加のＤＩＰＥＡ（５５μＬ，４１ｍｇ，０．３１ｍｍｏｌ，１当量）及びクロロギ酸４−ニトロフェニル（６６ｍｇ，０．３１ｍｍｏｌ，１当量）を添加し、混合物を４５℃で３０分間攪拌した。形成された白色沈殿物（ＤＩＰＥＡ  ＨＣＬ塩）のセライトでのろ過後、溶媒を真空除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（１４０ｍＬ）に再溶解した。有機層を水及び食塩水（共に４５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、溶媒を真空除去した。精製は、カラムクロマトグラフィー（フラッシュ  シリカ）を使用して、１：１クロロホルム／ペンタンのクロロホルムまでのグラジエントを使用して実行された。これにより、純粋な２，６−ジメチル−４−（ｔ−ブチルジメチルシロキシメチル）フェニル４−ニトロフェニルカーボネート（６５）（７５ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ，５５％）を無色固体として得た。
【０３００】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝８．３１（ｄ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），７．４８（ｄ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），７．０６（ｓ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），４．６８（ｓ，  ２Ｈ，  ＣＨ２），２．２８（ｓ，  ６Ｈ，  ＡｒＣＨ３），０．９５（ｓ，  ９Ｈ，  ＣＣＨ３），０．１１（ｓ，  ６Ｈ，  ＳｉＣＨ３）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝１５５．５，１５０．４，１４６．９，１４５．６，１３９．８，１２９．５，１２６．６，１２５．４，１２１．６，６４．３，２６．０，１８．４，１６．２，−５．３ｐｐｍ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  計算値４３１．１８；  実測値［Ｍ＋２Ｈ−ＴＢＤＭＳ−Ｈ２Ｏ］＋３００．１７。ＦＴ−ＩＲ（ＡＴＲ）：υ＝２９５４，２９２９，２８８５，２８５７，１７７７，１６１６，１５９４，１５２６，１４９１，１４７１，１４６２，１４４４，１４０７，１３４６，１３２３，１２９２，１２２０，１１７７，１１６４，１１２８，１１００，１００３，９４７，９１０，８８３，８３４，８１５，７７５，７３６，７００，６７３，６５７ｃｍ−１。
【０３０１】
２５ｍＬの丸底フラスコ内で、６５（１６６ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）をエタノール（６ｍＬ）に溶解し、溶液を氷浴上で冷却した。エタノール中濃塩酸（１％ｖ／ｖ，４．５ｍＬ）を添加し、混合物を室温で７５分攪拌した。溶媒を真空除去し、残渣をクロロホルムでフラッシュした。これにより、純粋な２，６−ジメチル−４−（ヒドロキシメチル）フェニル４−ニトロフェニルカーボネート（６６）を、無色オイルとして得た（１３６ｍｇ，最大０．３８ｍｍｏｌ，１００％）。
【０３０２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝８．３２（ｄ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），７．４７（ｄ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），７．１３（ｓ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），４．６５（ｓ，  ２Ｈ，  ＣＨ２），２．３０（ｓ，  ６Ｈ，  ＡｒＣＨ３）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝１５５．４，１５０．４，１４７．３，１４５．６，１３９．３，１３０．０，１２７．５，１２５．４，１２１．６，６４．６，１６．１ｐｐｍ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ計算値３１７．０９；実測値［Ｍ＋Ｈ−Ｈ２Ｏ］＋  ３００．１７。ＦＴ−ＩＲ（ＡＴＲ）：υ＝３５５５，３３６６，３１１９，３０８６，２９２４，２８６７，１７７２，１６１６，１５９３，１５２３，１４９０，１４５４，１３８０，１３４６，１３２４，１３１１，１２９３，１２２０，１１７６，１１６４，１１２６，１０５６，１０３５，１００３，９５５，９４１，９１０，８８４，８５７，８４５，７６４，７３２，７０２，６７９，６６４ｃｍ−１。
【０３０３】
１０ｍＬ丸底フラスコ内で、６６（５１ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）をＡｒ雰囲気下でドライＴＨＦ（１ｍＬ）に溶解した。ホスゲンの添加後（トルエン中の１．９Ｍ溶液の１８０μＬ，０．３４ｍｍｏｌ，２当量）、フラスコを封止し、混合物を室温で１５時間撹拌した。溶媒を真空除去後、結果のオイルをトルエン（×３）及びクロロホルムでフラッシュした。これにより、類縁のクロロギ酸エステルを、無色のオイルとして得、これは、更なる精製無しで即座に使用した。
【０３０４】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝８．３３（ｄ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），７．４８（ｄ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），７．１６（ｓ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），５．２４（ｓ，  ２Ｈ，  ＣＨ２），２．３１（ｓ，  ６Ｈ，  ＣＨ３）ｐｐｍ。
【０３０５】
続いて、１０ｍＬの丸底フラスコ内で、塩酸ドキソルビシン（８９ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）をドライＴＨＦ（２ｍＬ）に溶解し、クロロギ酸エステル（最大０．１６ｍｍｏｌ，１．１当量）のドライＴＦＨ（４ｍＬ）溶液を添加した。ＤＩＰＥＡ（１１８μＬ，８８ｍｇ，０．６７ｍｍｏｌ，４．４当量）の添加後、混合物を室温で２４時間撹拌した。溶液をセライトでろ過し、溶媒を真空除去した。残渣をクロロホルム（１２０ｍＬ）に再溶解し、水（×２）及び食塩水（全て４０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、溶媒を真空除去した。精製を、カラムクロマトグラフィ（フラッシュ  シリカ）を使用して、クロロホルム中２％ＭｅＯＨのクロロホルム中３％ＭｅＯＨまでのグラジエントを使用して実行した。これにより、純粋な６７（８２ｍｇ，９２μｍｏｌ，６１％）をオレンジ色固体として得た。
【０３０６】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝１３．９８（ｓ，  １Ｈ，  ＡｒＯＨ），１３．２５，（ｓ，  １Ｈ，  ＡｒＯＨ），８．３０（ｄ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），８．０５（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＨ），７．７９（ｔ，  １Ｈ，  ＡｒＨ），７．４５（ｄ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），７．４０（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＨ），７．０６（ｓ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），５．５１（ｓ，  １Ｈ，  ＯＣＨＯ），５．３０（ｓ，  １Ｈ，  ＣＣＨＨＣＨ），５．１１（ｄ，  １Ｈ，  ＮＨ），４．９７（ｓ，  ２Ｈ，  ＡｒＣＨ２Ｏ），４．７５（ｓ，  ２Ｈ，  ＣＨ２ＯＨ），４．５３（ｓ，  １Ｈ，  ＣＯＨ），４．１４（ｍ，  １Ｈ，  ＣＨＣＨ３），４．０８（ｓ，  ３Ｈ，  ＯＣＨ３），３．８７（ｍ，  １Ｈ，  ＮＨＣＨ），３．６７（ｄ，  １Ｈ，  ＣＨＯＨ），３．２８（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＣＨＨ），３．０３（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＣＨＨ），２．９８（ｔ，  １Ｈ，  ＣＨ２ＯＨ），２．３３（ｄ，  １Ｈ，  ＣＣＨＨ），２．２５（ｓ，  ６Ｈ，  ＡｒＣＨ３），２．１７（ｄ，  １Ｈ，  ＣＣＨＨ），１．８７（ｍ，  ２Ｈ，  ＮＨＣＨＣＨＨ，  ＣＨＯＨ），１．７７（ｍ，  １Ｈ，  ＮＨＣＨＣＨＨ），１．２９（ｄ，  ３Ｈ，  ＣＨＣＨ３）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）：δ＝２１３．８，１８６．９，１８６．５，１６１．０，１５６．１，１５５．５，１５５．４，１５５．３，１５０．２，１４７．７，１４５．６，１３５．８，１３５．４，１３４．８，１３３．６，１３３．５，１３０．１，１２８．８，１２５．４，１２１．６，１２０．７，１１９．８，１１８．５，１１１．５，１１１．３，１００．７，７７．２，７６．６，６９．７，６９．５，６７．３，６６．０，６５．５，５６．６，４７．０，３５．６，３３．９，３０．１，１６．８，１６．０ｐｐｍ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ計算値８８６．２４；実測値［Ｍ＋Ｎａ］＋  ９０９．３３。ＦＴ−ＩＲ（ＡＴＲ）：υ＝３４９２，３４３１，３０５８，２９３７，１７７７，１７１９，１６１６，１５７９，１５２５，１４９１，１４４４，１４２９，１４１２，１３８１，１３４７，１３２５，１２８３，１２２５，１２０９，１１８３，１１３２，１０７１，１０１５，９８２，９４８，９１７，８７９，８５８，８４７，８２０，７９１，７６５，７３４，７０２，６８１ｃｍ−１。
【０３０７】
２５ｍＬの丸底フラスコ内で、シス−５，６−ジアミノ−トランスシクロオクテン＊（３５，１４．６ｍｇ，１０４μｍｏｌ，１．１当量）をアルゴン雰囲気下でドライＴＨＦ（４ｍＬ）に溶解した。６７（８２ｍｇ，９２μｍｏｌ）のドライＴＨＦ（２ｍＬ）溶液を添加し、フラスコを封止し、混合物を室温で９０分間撹拌した。１Ｈ−ＮＭＲはη  ≒  ７５％を示したので、追加の５，６−ジアミノ−トランス−シクロオクテン（４．４ｍｇ，３１μｍｏｌ，０．３当量）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した（最終的には１Ｈ−ＮＭＲに基づいてη  ≒  ９０％）。溶媒を真空除去し、残渣（１００ｍｇ）の一部（２２ｍｇ）をＲＰ−ＨＰＬＣ（０．１％ギ酸を有するＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）を使用し、更にλ＝２５３及び３１７ｎｍで測定して、精製した。グラジエントは、％ＣＨ３ＣＮ（分）：２５から４５まで（１−１１），４５から１００まで（１１−１２），１００（１２−１３），１００から２５まで（１３−１４），２５（１４−１５）から構成した。これにより、凍結乾燥後、純粋なシス−（Ｅ）−シクロオクテン−ドキソルビシン−共役物６８（１０ｍｇ，１１μｍｏｌ，５５％）をオレンジ色固体として得た。
【０３０８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３／ＭｅＯＤ−ｄ４  ９５：５）：δ＝８．０２（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＨ），７．８０（ｔ，  １Ｈ，  ＡｒＨ），７．４１（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＨ），６．９８（ｓ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ），５．８２（ｍ，  １Ｈ，  ＣＨ＝ＣＨ），５．６６（ｍ，  １Ｈ，  ＣＨ＝ＣＨ），５．４９（ｓ，  １Ｈ，  ＯＣＨＯ），５．３２（ｓ，  １Ｈ，  ＣＣＨＨＣＨ），４．９５（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＣＨＨＯ），４．８８（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＣＨＨＯ），４．７７（ｓ，  ２Ｈ，  ＣＨ２ＯＨ），４．１４（ｍ，  １Ｈ，  ＣＨＣＨ３），４．０８（ｓ，  ３Ｈ，  ＯＣＨ３），３．８４（ｍ，  １Ｈ，  ＮＨＣＨ），３．７４（ｍ，  １Ｈ，  ＮＨＣＨＣＨＮＨ２の），３．６０（ｓ，  １Ｈ，  ＣＨＯＨ），３．４０（ｍ，  １Ｈ，  ＣＨＮＨ２），３．２６（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＣＨＨ），３．０２（ｄ，  １Ｈ，  ＡｒＣＨＨ），２．３８−１．９６（ｍ，  １０Ｈ，  ｔｒａｎｓ−ｃｙｃｌｏｏｃｔｅｎｅ  ＣＨ２，  ＣＣＨＨ），２．１１（ｓ，  ６Ｈ，  ＡｒＣＨ３），１．８１（ｍ，  ２Ｈ，  ＮＨＣＨＣＨＨ），１．２８（ｄ，  ３Ｈ，  ＣＨＣＨ３）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３／ＭｅＯＤ−ｄ４  ９：１）：δ＝２１３．９，１８７．１，１８６．７，１６１．０，１５５．８，１５５．３，１５３．９，１４７．７，１３５．８，１３５．４，１３３．８，１３３．６，１３３．２，１３２．８，１３０．９，１２８．３，１２０．８，１１９．７，１１８．５，１１１．５，１１１．３，１００．６，７６．４，６９．３，６９．０，６７．９，６７．４，６６．２，６５．２，５７．８，５６．６，５５．９，４６．８，３６．５，３６．１，３５．７，３３．７，３２．６，２９．９，２８．０，２５．５，１６．６，１５．９ｐｐｍ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  計算値８８７．３５；実測値［Ｍ＋Ｈ］＋８８８．５８。ＦＴ−ＩＲ（ＡＴＲ）：υ＝３４３２，２９４０，１６７８，１６１７，１５８２，１５１５，１４１２，１３５０，１２８５，１２３６，１２０１，１１４０，１０７５，１０１７，９８３，９４９，９１２，８７３，８３６，８２０，７９９，７６５，７２９，６７２ｃｍ−１。
【０３０９】
＊  推定されるバッチ純度  ９８％
例３
テトラジンアクチベータの安定性及び反応性
テトラジンの加水分解安定性試験
特定のテトラジンのＤＭＳＯ（２５ｍＭ）溶液の１０μＬをＰＢＳ緩衝液（３ｍＬ）（又は、水溶性があまりに小さい場合には、ＰＢＳ及びアセトニトリルの混合物）に希釈した。この溶液をろ過し、５２５ｎｍでの吸収バンドの減少を、ＵＶスペクトル計を使用して測定した。加水分解の速度及び半減期をこれらのデータから決定した。
【０３１０】
トランス−シクロオクタ−４−エン−１−オール（アキシャル異性体）へのテトラジンの反応性
競争実験を実施して、特定のテトラジンと３−（５−アセタミド−２−ピリジル）−６−（２−ピリジル）−１，２，４，５−テトラジン（参考テトラジンとして選択された）との、トランス−シクロオクタ−４−エン−１−オール（アキシャル位置でのＯＨを有する「副」異性体：ＷｈｉｔｈａｍらのＪ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（Ｃ）、１９７１，８８３−８９６を参照）との逆電子要請型ディールスアルダー反応での、反応比率を決定した。
【０３１１】
アセトニトリル（０．１００ｍＬ）に、特定のテトラジンのＤＭＳＯ（２５ｍＬ）溶液の５μＬ及び参照テトラジンのＤＭＳＯ（２５ｍＬ）溶液の５μＬを添加した。この混合物を水（０．９ｍＬ）で希釈され、両方のテトラジンの絶対量をＨＰＬＣ−ＭＳ／ＰＤＡ分析で決定した。続いて、トランス−シクロオクタ−４−エン−オール（アキシャル異性体）のＤＭＳＯ溶液（２５μＬ，２．５ｍＭ）をゆっくりと添加し、混合物を５分間撹拌した。さらに、両方のテトラジンの絶対量をＨＰＬＣ−ＭＳ／ＰＤＡ分析によって決定し、両方のテトラジンに関する変換を計算した。これらの変換から、両方のテトラジンの反応性比（Ｒ＝ｋ２、ＴＣＯ／ｋ２、Ｒｅｆ）を、Ｉｎｇｏｌｄ及びＳｈａｗからの数学手順を用いて計算した（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９２７，２９１８−２９２６）。
【０３１２】
以下の表は、置換基を変更することによって、テトラジンの反応性及び安定性プロファイルを、どう、ある特性に調節することができ得るかを示す。
【０３１３】
【表１】
2014513717.tif 000051
2014513717.tif 000052
＊この値は、ＰＢＳ及びアセトニトリルの５０：５０混合物で決定された。
【０３１４】
例４
トランス−シクロオクテンモデルプロドラッグ及びプロドラッグの安定性と反応性
安定性
１０μＬの特定のトランス−シクロオクテン誘導体のジオキサン（２５ｍＭ）溶液をＰＢＳ緩衝液（３ｍＬ）で希釈し、この溶液を暗所、２０℃で保存した。ＴＣＯ化合物の運命（ｆａｔｅ）をＨＰＬＣ−ＭＳ分析で測定し、モデルのプロドラッグの放出に基づいて半減期を評価した。
【０３１５】
【化５０】
2014513717.tif 000053
トランス−シクロオクテン誘導体のビス（２−ピリジル）−１，２，４，５−テトラジンへの反応性：二次反応速度定数決定
トランス−シクロオクテン誘導体の３−（５−アセトアミド−２−ピリジル）−６−（２−ピリジル）−１，２，４，５−テトラジンとの、アセトニトリル中２０℃で実行された、逆電子要請型ディールスアルダー反応の速度論を、ＵＶ−可視スペクトル装置を用いて決定した。キュベットをアセトニトリル（３ｍＬ）で満たし２０℃で平衡した。３−（５−アセトアミド−２−ピリジル）−６−（２−ピリジル）−１，２，４，５−テトラジン（２．５０´１０−７ｍｏｌ）を添加し、次にトランス−シクロオクテン誘導体（２．５０×１０−７ｍｏｌ）を添加した。λ＝５４０ｎｍでの吸収の減衰をモニターし、この曲線から二次反応速度定数ｋ２を、二次反応速度論を仮定して決定した。
【０３１６】
トランス−シクロオクテン誘導体のビス（２−ピリジル）−１，２，４，５−テトラジンとの反応性：
競争反応
競争反応を、特定のトランス−シクロオクテン誘導体と、トランス−シクロオクタ−４−エン−１−オール（アキシャル異性体）（これはトランス−シクロオクテンの参照として選択された）との、ビス（２−ピリジル）−１，２，４，５−テトラジンとの逆電子要請型ディールスアルダーでの反応比を決定するために実行した。
【０３１７】
アセトニトリル（０．０５ｍＬ）に、特定のトランス−シクロオクテン誘導体のジオキサン溶液（５μＬ、２５ｍＭ；１．２５´１０−７ｍｏｌ）及び参照トランス−シクロオクテンのジオキサン溶液（５μＬ、２５ｍＭ；１．２５´１０−７ｍｏｌ）に添加した。この混合物を水（０．４５ｍＬ）で希釈した。次に、ビス（２−ピリジル）−１，２，４，５−テトラジン（６．２５´１０−８ｍｏｌ）のアセトニトリル（０．０５ｍＬ）及び水（０．４５ｍＬ）の混合物溶液を激しく撹拌しながらゆっくりと添加した。添加後、混合物をさらに５分間撹拌した。両方のトランス−シクロオクテン誘導体の変換を、ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＰＤＡ分析で決定し、これらの変換から、特定のトランス−シクロオクテン誘導体の反応性比率（Ｒ＝ｋ２、ＴＣＯ／ｋ２、Ｒｅｆ）を、Ｉｎｇｏｌｄ及びＳｈａｗの文献により数学的手順を用いて計算した（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９２７，２９１８−２９２６）。
【０３１８】
【表２】
2014513717.tif 000054
2014513717.tif 000055
＊アセトニトリル中で、ＵＶ−可視スペクトル装置によって、２０℃で決定した。  
＊＊競争実験によって決定した。
【０３１９】
例５
モデルプロドラッグの活性化（アクティベーション）
（（Ｅ）−８−アミノシクロオクタ−４−エン−１−イル）カーバメート（３６）
【０３２０】
【化５１】
2014513717.tif 000056
３，６−ビス（２−ピリジニル）−１，２，４，５−テトラジン（２，２．５０×１０−７ｍｏｌ）を、ＰＢＳ緩衝液（１ｍＬ）で溶解した。次に、フェニル（（Ｅ）−８−アミノシクロオクタ−４−エン−１−イル）カーバメート（３６，２．５０×１０−７ｍｏｌ）を添加した。溶液を２０℃で撹拌し、反応進行をＨＰＬＣ−ＭＳ分析でモニタし、ｒＤＡ−付加物のほぼ瞬間的な形成、続いて、ｍ／ｚ＝＋３７５Ｄａ（Ｍ＋Ｈ＋）を有する環状ウレアの形成、及びフェノール：λｍａｘ＝２７０ｎｍの放出を明示した。この放出の半減期は４０分だった。
【０３２１】
３，６−ビス（２−ピリジニル）−１，２，４，５−テトラジン（２）及びフェニル（（Ｅ）−２−アミノシクロオクタ−３−エン−１−イル）カーバメート（５６）
【０３２２】
【化５２】
2014513717.tif 000057
３，６−ビス（２−ピリジニル）−１，２，４，５−テトラジン（２，２．５０×１０−７ｍｏｌ）をＰＢＳ緩衝液（１ｍＬ）に溶解した。次に、フェニル（（Ｅ）−２−アミノシクロオクタ−３−エン−１−イル）カーバメート（５６，２．５０×１０−７ｍｏｌ）を添加した。溶液を２０℃で撹拌し、反応進行をＨＰＬＣ−ＭＳ分析でモニタし、ｒＤＡ−付加物のおおよそ瞬間的な形成、続いて、ｍ／ｚ＝＋３７５Ｄａ（Ｍ＋Ｈ＋）を有する環状ウレアの形成、及びフェノール：λｍａｘ＝２７０ｎｍの放出がわかった。この放出の半減期は４０分だった。
【０３２３】
例６
ドキソルビシンプロドラッグの活性化（アクティベーション）
３，６−ビス（２−ピリジニル）−１，２，４，５−テトラジン（２）及び（Ｅ）−シクロオクテン−ドキソルビシン共役物（６４）
【０３２４】
【化５３】
2014513717.tif 000058
３，６−ビス（２−ピリジニル）−１，２，４，５−テトラジン（２，１．１８×１０−５ｇ；５．００×１０−８ｍｏｌ）をＰＢＳ緩衝液（１ｍＬ）に溶解した。次に、シス
−（Ｅ）−シクロオクテン−ドキソルビシン共役物（６４，２．６７×１０−５ｇ；２．５０×１０−８ｍｏｌ）を添加した。溶液を２０℃で撹拌し、反応進行をＨＰＬＣ−ＭＳ分析でモニタし、ｍ／ｚ＝＋３７５Ｄａ（Ｍ＋Ｈ＋）を有する環状ウレアの形成、及びドキソルビシン：ｍ／ｚ＝＋５４４Ｄａ（Ｍ＋Ｈ＋）及びλｍａｘ＝４７８ｎｍの放出がわかった。この放出の半減期は２時間だった。
【０３２５】
３７℃でこの反応を実行し、４０分の半減期のドキソルビシン放出を得た。
【０３２６】
３−（５−アセトアミド−２−ピリジル）−６−（２−ピリジニル）−１，２，４，５−テトラジン（５）及び（Ｅ）−シクロオクテン−ドキソルビシン共役物（６４）
【０３２７】
【化５４】
2014513717.tif 000059
前の反応と同じ手順である。
【０３２８】
２０℃で１時間後、３０％ドキソルビシンを放出した。
【０３２９】
３−（５−ブチルアミド−２−ピリジル）−６−（２−ピリミジル）−１，２，４，５−テトラジン及び（Ｅ）−シクロオクテン−ドキソルビシン共役物（６４）
【０３３０】
【化５５】
2014513717.tif 000060
前の反応と同じ手順である。
【０３３１】
２０℃で１時間後、２０％ドキソルビシンを放出した。
【０３３２】
４−（１，２，４，５−テトラジン−３−イル）フェニルメタンアミン及び（Ｅ）−シクロオクテン−ドキソルビシン共役物（６４）
【０３３３】
【化５６】
2014513717.tif 000061
前の反応と同じ手順である。
【０３３４】
２０℃で１時間後、５０％ドキソルビシンを放出した。
【０３３５】
３−メチル−６−（２−ピリジル）−１，２，４，５−テトラジン（７）及び（Ｅ）−シクロオクテン−ドキソルビシン共役物（６４）
【０３３６】
【化５７】
2014513717.tif 000062
前の反応と同じ手順である。
【０３３７】
２０℃で１時間後、５２％ドキソルビシンを放出した。
【０３３８】
３，６−ジフェニル−１，２，４，５−テトラジン及び（Ｅ）−シクロオクテン−ドキソルビシン共役物（６４）
【０３３９】
【化５８】
2014513717.tif 000063
前の反応と同じ手順である。
【０３４０】
２０℃で１時間後、４８％ドキソルビシンを放出した。
【０３４１】
３，６−ビス（２−ピリジニル）−１，２，４，５−テトラジン（２）及び（Ｅ）−シクロオクテン−ドキソルビシン共役物（６８）
【０３４２】
【化５９】
2014513717.tif 000064
３，６−ビス（２−ピリジニル）−１，２，４，５−テトラジン（２，１．１８×１０−５ｇ；５．００×１０−８ｍｏｌ）をＰＢＳ緩衝液（１ｍＬ）に溶解した。次に、（Ｅ）−シクロオクテン−ドキソルビシン共役物（６８，２．６７×１０−５ｇ；２．５０×１０−８ｍｏｌ）を添加した。溶液を２０℃で撹拌し、反応進行をＨＰＬＣ−ＭＳ分析でモニタし、ｍ／ｚ＝＋３７５Ｄａ（Ｍ＋Ｈ＋）を有する環状ウレアの形成、及びドキソルビシン：ｍ／ｚ＝＋５４４Ｄａ（Ｍ＋Ｈ＋）及びλｍａｘ＝４７８ｎｍの放出がわかった。この放出の半減期は４日間だった。
【０３４３】
３７℃でのこの反応を実行し、１６時間の半減期を得た。
【０３４４】
例７
ドキソルビシンプロドラッグ６４及びテトラジン２９との細胞増殖アッセイ
Ａ４３１扁平上皮癌細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎児血清及びペニシリン及びストレプトマイシン存在０．０５％グルタマックス（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を添加したＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で、３７℃で、加湿ＣＯ２インキュベーター内に維持された。実験を開始する２４時間前に、細胞を９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ）に、２０００細胞／ウェル密度で植えた。ドキソルビシン（Ｄｏｘ）及びプロドラッグ６４（ＤＭＳＯ中１ｍＭ）を、実験開始及びウェルに添加する直前に、加温培地内で連続希釈された（最終容積は２００μｌ；ｔ＝０）。プロドラッグを、単独又は１０μＭテトラジン２９との組み合わせのいずれかで添加された。３７℃で６時間インキュベーション後、培地を静かに吸い取り、２００μＬの新しい培地を各々のウェルに添加し、細胞を更に６６時間以上インキュベーションした。並列実験において、テトラジン２９の溶液（ＰＢＳ中２ｍＭ）を加温培地内で連続希釈し、９６ウェルプレート内のＡ４３１細胞に添加し、３７℃で７２時間インキュベーションした。各々の実験の終了後、細胞増殖をＭＴＴアッセイによって評価した。簡単には、メチルチアゾリルジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を５ｍｇ／ｍｌでＰＢＳに溶解し、０．２２μｍを通じてろ過し、２５μＬを各々のウェルに添加した。３７℃での１２０分のインキュベーション後、培地をゆっくり吸い取った。形成されたホルマザン結晶を１００μｌＤＭＳＯにときに、溶解し、吸収を５６０ｎｍでプレートリーダー（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ）で、測定した。ＩＣ５０値（±標準偏差、表参照）を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ｖｅｒｓｉｏｎ５．０１）を用いて作成した標準細胞成長曲線（図参照）から誘導した。細胞増殖アッセイは、Ａ４３１細胞がプロドラッグ単体（ＩＣ５０＝１２８±１７ｎＭ）又はテトラジン２９（ＩＣ５０＞１００μＭ）と比して、プロドラッグ６４及びテトラジン２９の組み合わせに曝された時に、重大な毒性増大を示す。これは、ドキソルビシンが放出され、続いてプロドラッグのトランス−シクロオクテンとテトラジンアクチベータとのディールスアルダー反応を確認する。
【０３４５】
Ａ４３１細胞系で決定された、ドキソルビシン（Ｄｏｘ）と、テトラジン２９による活性化を有する又は有さないプロドラッグ６４とに関するＩＣ５０値
【０３４６】
【表３】
2014513717.tif 000065
ａ３７℃での６時間インキュベーション、続いて培地交換ｂ３７℃での７２時間インキュベーション
【０３４７】
【表４】
2014513717.tif 000066
ドキソルビシン（Ｄｏｘ）及びテトラジン２９（１０μＭ）による活性化を有する又は有さないプロドラッグ６４存在下でインキュベーションされたＡ４３１腫瘍上で実行された細胞増殖アッセイ
例８
例示的なＬＤ部分の構造
【０３４８】
【化６０】
2014513717.tif 000067
リンカーＬＤは、所謂自壊的リンカーであり、トリガーのアクチベータとの反応で、リンカーは、分子内反応を介して分解し、それによって薬物ＤＤを放出するであろう。上記のいくつかも、ＳＰを含む。
【０３４９】
例９
例示的なＳＰ部分の構造
【０３５０】
【化６１】
2014513717.tif 000068
破線は結合したプロドラッグの残基
留意すべきことは、マレイミド、活性エステル及びブロモアセトアミド基は、目標部分ＴＴ及びマスキング部分ＭＭが、場合によっては更なるスペーサーＳＰを介して結合され得る活性基であるということである。マレイミド及びブロモアセトアミド基は、通常、チオールと反応し、活性エステルは、通常、一級又は二級アミンにカップリングするに公的である。
【０３５１】
例１０
例示されたＬＤ部分を有するＴＣＯトリガーの構造
この例で示されるＴＴは、場合によってＭＭによって置換されても良い。
【０３５２】
【化６２】
2014513717.tif 000069
例１１
例示されたＬＤ部分及び／又はＳＰ部分を有するＴＣＯトリガーの構造
トリガーは、ＴＴのアミン又はチオールを介してＴＴに共役した。この例で示されたＴＴは、場合によってＭＭによって置換されても良い。
【０３５３】
【化６３】
2014513717.tif 000070
例１２
抗体−薬物共役物の構造
アウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）トキシンを、自壊性リンカーＬＤを介してＴＣＯトリガーに結合し、及びＳＰを介して標的抗体又は断片（システイン又はリジン残基を介して共役）に結合される。Ａｂ＝抗体又は抗体断片；ｑ＝Ａｂ変性＃であり、通常は＃は１と１０の間である。
【０３５４】
【化６４】
2014513717.tif 000071
例１３
抗体−薬物共役物の構造
メイタンシントキシンを、自壊性リンカーＬＤを介してＴＣＯトリガーに結合し、及びＳＰを介して標的抗体又は断片（システイン又はリジン残基を介して共役）に結合される。Ａｂ＝抗体又は抗体断片；ｑ＝Ａｂ変性＃であり、通常は＃は１と１０の間である。
【０３５５】
【化６５】
2014513717.tif 000072
2014513717.tif 000073
例１４
アミン又はチオール部分を介して標的試薬ＴＴ等に共役され得るトリガー−薬物構成物の構造
アウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）トキシンを、自壊性リンカーＬＤを介してＴＣＯトリガーに結合し、及びＳＰを介してＴＴ共役物のための反応部分に結合される。
【０３５６】
【化６６】
2014513717.tif 000074
例１５
アミン又はチオール部分を介して標的試薬ＴＴ等に共役され得るトリガー−薬物構成物の構造
メイタンシントキシンを、自壊性リンカーＬＤを介してＴＣＯトリガーに結合し、及びＳＰを介してＴＴ共役物のための反応部分に結合される。
【０３５７】
【化６７】
2014513717.tif 000075
2014513717.tif 000076
例１６
腫瘍結合ＣＣ４９−アウリスタチンＥ共役物の活性化
ｍＡｂ又はｍＡｂ断片としてのＣＣ４９は、非内在化汎固形腫瘍マーカーＴＡＧ７２へ結合する。プロドラッグ投与、腫瘍結合及び血液から除去後、アクチベータが注入される。アクチベータのＴＣＯトリガーとの、プロドラッグ中での反応の結果、アウリスタチンＥをＣＣ４９（抗体又は抗体断片）から放出し、これはがん細胞を浸透して抗癌作用を発揮する。
【０３５８】
【化６８】
2014513717.tif 000077
例１７
腫瘍結合Ｔ−細胞係合三抗体の活性化
三抗体は、腫瘍−結合部分、ＣＤ３Ｔ−細胞係合部分、及びＣＤ２８Ｔ−細胞共刺激部分を含む。１つの分子に結合されたＣＤ３及びＣＤ２８が標的に許容されない毒性効果を生じる結果となり、抗−ＣＤ２８ドメインはマスキング部分ＭＭでブロックされ、これはＣＤ２８結合ドメインに類似するペプチドであり、抗−ＣＤ２８部分への親和性を持つ。このペプチドは、更なるペプチド又はＰＥＧ鎖ＳＰを通じてＴＣＯトリガーに結合され、これ自体が、特別に設計されたシステインサイトへ共役されている。プロドラッグ投与、腫瘍結合及び血液からの除去後、アクチベータが注入される。アクチベータのプロドラッグ内のＴＣＯトリガーとの反応は、抗−ＣＤ２８ドメインからマスキング部分を放出し、Ｔ−細胞のＣＤ２８共刺激を可能とし、Ｔ−細胞介在抗癌作用を促進し、標的への毒性を防止する。
【０３５９】
【化６９】
2014513717.tif 000078
【手続補正書】
【提出日】平成25年11月19日(2013.11.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロドラッグの投与及び活性化に関するキットであって、当該キットは、
トリガー部分ＴＲに、直接的に又は非直接的に結合された薬物ＤＤ、及び前記トリガー部分に関するアクチベータを含み、
前記トリガー部分は、ジエノフィルを含み、
前記アクチベータは、ジエンを含み、
前記ジエノフィルは、当該ジエノフィルに結合された前記薬物を含み、下記式（１ａ）を満たす：
キット。
【化７０】
2014513717.tif 000091
（ただし、Ｔ、Ｆは、各々独立して、Ｈ又はアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩから構成される群から選択される置換基を意味し；記号Ａ、Ｐ、Ｑ、Ｘ、Ｙ及びＺの意味は、下記（１）〜（６）から構成される群から選択され、
（１）結合ＰＱ、ＱＰ、ＱＸ、ＸＱ、ＸＺ、ＺＸ、ＺＹ、ＹＺ、ＹＡ、ＡＹの１つは、−ＣＲａＸＤ−ＣＲａＹＤ−から構成され、Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ、Ｐによって構成される残基は、各々独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓから構成される群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；ＸＤはＯ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；かつＹＤはＮＨＲｃ、ＯＨ、ＳＨであり；又はＸＤはＣ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；かつＹＤはＣＲｃ２ＮＨＲｃ、ＣＲｃ２ＯＨ、ＣＲｃ２ＳＨ、ＮＨ−ＮＨ２、Ｏ−ＮＨ２又はＮＨ−ＯＨである；
（２）ＡはＣＲａＸＤでありかつＺはＣＲａＹＤである、又はＺはＣＲａＸＤでありかつＡはＣＲａＹＤである、又は、ＰはＣＲａＸＤでありかつＸはＣＲａＹＤである、又はＸはＣＲａＸＤでありかつＰはＣＲａＹＤであり、ＸＤ及びＹＤは互いに関連してトランス型に配置され；Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ、及びＰによって構成される残基は、互いに独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓから構成される群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；ＸＤは、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、かつＹＤはＮＨＲｃ、ＯＨ、ＳＨ、ＣＲｃ２ＮＨＲｃ、ＣＲｃ２ＯＨ、ＣＲｃ２ＳＨ、ＮＨ−ＮＨ２、Ｏ−ＮＨ２又はＮＨ−ＯＨである；又はＸＤはＣＲｃ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＣＲｃ２−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＣＲｃ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＣＲｃ２−Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＣＲｃ２−ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＣＲｃ２−ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、かつＹＤはＮＨＲｃ、ＯＨ、ＳＨである；又はＸＤはＣ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；かつＹＤはＣＲｃ２ＮＨＲｃ、ＣＲｃ２ＯＨ、ＣＲｃ２ＳＨ、ＮＨ−ＮＨ２、Ｏ−ＮＨ２、ＮＨ−ＯＨである；
（３）ＡはＣＲａＹＤであり、かつ、Ｐ、Ｑ、Ｘ、Ｚの１つはＣＲａＸＤであり、又は、ＰはＣＲａＹＤ  であり、かつ、Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘの１つはＣＲａＸＤである、又はＹはＣＲａＹＤ  であり、かつＸ又はＰはＣＲａＸＤである、又は、ＱはＣＲａＹＤであり、かつ、Ｚ又はＡはＣＲａＸＤである、又は、Ｚ又はＸのいずれかはＣＲａＹＤであり、かつ、Ａ又はＰはＣＲａＸＤであり、ＸＤ及びＹＤは互いに関連してトランス型に配置され；Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ及びＰによって構成される残基は、各々独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡ  はＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓを構成する群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；  ＸＤは（Ｏ−Ｃ（Ｏ））ｐ−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、ＹＤはＣＲｃ２ＮＨＲｃ、ＣＲｃ２ＯＨ、ＣＲｃ２ＳＨ、ＮＨ−ＮＨ２、Ｏ−ＮＨ２、ＮＨ−ＯＨであり；  ｐは０又は１である；
（４）ＰはＣＲａＹＤであり、かつ、ＹはＣＲａＸＤである、又はＡはＣＲａＹＤであり、かつ、ＱはＣＲａＸＤである、又はＱはＣＲａＹＤであり、かつ、ＡはＣＲａＸＤである、又はＹはＣＲａＹＤであり、かつＰはＣＲａＸＤであり、ＸＤ及びＹＤは、互いに関連してトランス型に配置され；Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ及びＰから構成される残基は、互いに独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓから構成される群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；  ＸＤは（Ｏ−Ｃ（Ｏ））ｐ−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；ＹＤはＮＨＲｃ、ＯＨ、ＳＨであり；ｐは０又は１である；
（５）ＹはＹＤであり、かつ、ＰはＣＲａＸＤである、又はＱはＹＤであり、かつ、ＡはＣＲａＸＤであり；Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ及びＰによって構成される残基は、各々独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓから構成される群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；ＸＤは（Ｏ−Ｃ（Ｏ））ｐ−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；ＹＤはＮＨであり；  ｐは０又は１である；
（６）ＹはＹＤであり、かつ、Ｐ又はＱはＸＤである、又は、ＱはＹＤであり、かつ、Ａ又はＹはＸＤであり；Ａ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｑ及びＰによって構成される残基は、各々独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ、及びＳ−Ｓから構成される群から選択されて存在し、Ｓｉがもし存在する場合には、ＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；ＸＤはＮ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｎ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；ＹＤはＮＨであり；
ここで、各々のＲａは、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、ＯＲ’、ＳＲ’、Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、Ｓｉ−Ｒ’’’、Ｓｉ−Ｏ−Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｎ３、ＳＯ２Ｈ、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ４Ｈ、ＰＯ３Ｈ、ＰＯ４Ｈ、ＮＯ、ＮＯ２、ＣＮ、ＯＣＮ、ＳＣＮ、ＮＣＯ、ＮＣＳ、ＣＦ３、ＣＦ２−Ｒ’、ＮＲ’Ｒ”、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’−Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’−Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’−Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’−Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’−Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’’−Ｒ’’、ＣＲ’ＮＲ’’から構成される群から選択され、各々のＲ’及び各々のＲ’’は、独立して、Ｈ、アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は、独立して、アリール又はアルキルであり；各々のＲｂは、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、ＯＨから構成される群から選択され；各々のＲｃは、独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル及びＣ１−６アリールから選択され；  ２つ以上のＲａ，ｂ，ｃ部分は、結合して環を形成しても良く；  及び（ＬＤ）ｎは、好ましくはＳ、Ｎ、ＮＨ又はＯを介してＴＲに結合された、ｎ＝  ０又は１を有する任意のリンカーであり、ここで、これらＳ、Ｎ、ＮＨ又はＯ原子はリンカーの一部であり、直鎖状に及び／又は分枝状に配置された複数のユニットを構成しても良く；ＤＤは、好ましくはＳ、Ｎ、ＮＨ又はＯを介して結合された１つ以上の薬物であり、ここでこれらＳ、Ｎ、ＮＨ又はＯ原子は、治療的部分の一部である）。
【請求項２】
Ａ、Ｐ、Ｑ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、結合ＰＱ、ＱＰ、ＱＸ、ＸＱ、ＸＺ、ＺＸ、ＺＹ、ＹＺ、ＹＡ、ＡＹの１つが−ＣＲａＸＤ−ＣＲａＹＤ−から構成されるように選択され、Ａ，Ｙ，Ｚ，Ｘ，Ｑ，Ｐによって構成される残基は、互いに独立して、ＣＲａ２、Ｓ、Ｏ、ＳｉＲｂ２であり、Ｐ及びＡはＣＲａ２であり、原子の非隣接ペアは、Ｏ−Ｏ、Ｏ−Ｓ及びＳ−Ｓから構成される群から選択されて存在し、Ｓｉが存在する場合にはＳｉはＣＲａ２又はＯに隣接し；ＸＤはＯ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｏ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｓ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、ＮＲｃ−Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；かつＹＤはＮＨＲｃ、ＯＨ、ＳＨである；又はＸＤがＣ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）、Ｃ（Ｓ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり；かつＹＤがＣＲｃ２ＮＨＲｃ、ＣＲｃ２ＯＨ、ＣＲｃ２ＳＨ、ＮＨ−ＮＨ２、Ｏ−ＮＨ２又はＮＨ−ＯＨである、
請求項１に記載のキット。
【請求項３】
ＰＱ、ＱＰ、ＡＹ又はＹＡが、−ＣＲａＸＤ−ＣＲａＹＤ−であり、ＸＤ及びＹＤが互いに関連してトランスに位置する、
請求項２に記載のキット。
【請求項４】
ＺＸ又はＸＺが−ＣＲａＸＤ−ＣＲａＹＤ−であり、ＸＤ及びＹＤが互いに関連してシスに位置する、
請求項２に記載のキット。
【請求項５】
ＸＤがＮＲｃ−Ｃ（Ｏ）−（ＬＤ）ｎ−（ＤＤ）であり、ＹＤがＮＨＲｃである、
請求項１乃至４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項６】
前記ジエノフィルが、次構造から選択される化合物である、
請求項５に記載のキット。
【化７１】
2014513717.tif 000092
（ただし、波線は、結合されたＤＤ、ＬＤ−ＤＤの残りであり、場合により、ＴＴ又はＳＰ−ＴＴ又はＭＭ又はＳＰ−ＭＭを含む。）
【請求項７】
前記アクチベータは、式（２）−（４）に係る、前記ジエンから選択されるジエンを含む、請求項１乃至６のいずれか一項に記載のキット。
【化７２】
2014513717.tif 000093
（ただし、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＦ３、ＣＦ２−Ｒ’、ＯＲ’、ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’’Ｒ’’から構成される群から選択され、各々のＲ’及び各々のＲ’’は、独立して、Ｈ、アリール又はアルキルであり；Ａ及びＢは、各々独立して、アルキル置換炭素、アリール置換炭素、窒素、Ｎ＋Ｏ−、Ｎ＋Ｒ（ただしＲがアルキルである）から構成される群から選択され、ただし、Ａ及びＢは両方が炭素ではなく；Ｘは、Ｏ、Ｎ−アルキル及びＣ＝Ｏから構成される群から選択され、及びＹはＣＲであり（但し、Ｒは、Ｈ、アルキル、アリール、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’から構成される群から選択され、Ｒ’及びＲ’’は各々独立して、Ｈ、アリール又はアルキルである）；
【化７３】
2014513717.tif 000094
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、各々独立して、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＦ３、ＣＦ２−Ｒ’、ＮＯ２、ＯＲ’、ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’、  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’’Ｒ’’から構成される群から選択され、ここで、各々のＲ’及び各々のＲ’’は、独立して、Ｈ、アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は、独立して、アリール又はアルキルであり；Ａは、Ｎ−アルキル、Ｎ−アリール、Ｃ＝Ｏ及びＣＮ−アルキルから構成される群から選択され；Ｂは、Ｏ又はＳであり；Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリール、ＣＣ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＣＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、から構成される群から選択され、ここで、Ｒ’及びＲ’’は、各々独立して、Ｈ、アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は、独立して、アリール又はアルキルであり；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリール、Ｎ及びＮ＋Ｏ−から構成される群から選択される）；
【化７４】
2014513717.tif 000095
（ただし、Ｒ１及びＲ２は、各々独立して、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＦ３、ＣＦ２−Ｒ’、ＮＯ、ＮＯ２、ＯＲ’、ＳＲ’、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲ’、ＰＯ３Ｒ’Ｒ’’、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’、  ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’’Ｒ’’から構成される群から選択され、ここで、各々のＲ’及び各々のＲ’’は、独立して、Ｈ、アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は、独立して、アリール又はアルキルであり；ＡはＮ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリール及びＮ＋Ｏ−から構成される群から選択され；ＢはＮであり；Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリール、ＣＣ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｒ’、  ＣＳ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＣＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’から構成される群から選択され、ここでＲ’及びＲ’’は、各々独立して、Ｈ、アリール又はアルキルであり、Ｒ’’’は、独立して、アリール又はアルキルであり；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリール、Ｎ及びＮ＋Ｏ−から構成される群から選択される；）
【請求項８】
前記ジエンは、式（７）を満たし、Ｒ１及びＲ２でパラ置換されたテトラジエンである、
請求項７に記載のキット。
【化７５】
2014513717.tif 000096
（７）
（ただし式中、Ｒ１及びＲ２は、各々独立して、Ｈ、アルキル、ＮＯ２、ＣＦ３、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲ２、ＣＯＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＯＲ、ＳＯ２ＮＲ２、ＰＯ３Ｒ２、ＮＯ、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２，６−ピリミジル、３，５−ピリミジル、２，４−ピリミジル、２，４イミダジル、２，５イミダジル及びフェニルから構成される群から選択される置換基であり、場合により、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲ、ＣＯＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＯＲ、ＳＯ２ＮＲ２、ＰＯ３Ｒ２、ＮＯ及びＡｒから構成される群から選択される１つ以上の電子求引性基で置換されており、ここで、ＲはＨ又はＣ１−Ｃ６アルキルであり、Ａｒはフェニル、ピリジル又はナフチルである）。
【請求項９】
前記ジエンは、
【化７６】
2014513717.tif 000097
【化７７】
2014513717.tif 000098
2014513717.tif 000099
2014513717.tif 000100
から構成される群から選択される、
請求項７に記載のキット。
【請求項１０】
前記ジエンは、
【化７８】
2014513717.tif 000101
2014513717.tif 000102
から構成される群から選択される、
請求項７に記載のキット。
【請求項１１】
前記薬物ＤＤ又は前記リンカーＬＤ又は前記トリガー部分ＴＲの少なくとも１つは、好ましくは抗体である、標的化試薬ＴＴを含む、
請求項１乃至１０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１２】
前記ＬＤ又は前記トリガー部分ＴＲの少なくとも一方は、好ましくはペプチドである、マスキング部分ＭＭを含む、
請求項１乃至１０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１３】
前記薬物は、Ｔ−細胞係合抗体構成物である、
請求項１乃至１２のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１４】
前記プロドラッグは、抗体−トキシン又は抗体−薬物共役物を含む、
請求項１乃至１１のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１５】
請求項１乃至６のいずれか一項に記載の式（１ａ）のジエノフィル部分に、直接的に又は非直接的に結合された薬物化合物を含む、プロドラッグ。
【請求項１６】
薬物を供し、該薬物を、請求項１乃至６のいずれか一項に記載の式（１ａ）のプロドラッグを形成するように、ジエノフィル部分に化学的に結合させることを含む、非生物的、生体直交型反応によって引き起こされ得る、プロドラッグへと薬物化合物を変化させる方法。
【請求項１７】
治療方法であって、
薬物によって調節され得る疾患を患っている患者が、前記患者に、活性化後に前記薬物が放出されるトリガー部分を含むプロドラッグを投与することによって治療され、
前記トリガー部分は、トランス−シクロオクテン環を含み、該環は、場合によって、１つ以上のヘテロ原子を含み、前記ジエンは、逆電子要請型ディールスアルダー反応で、前記ジエノフィルと反応し得るように選択され、前記トリガー部分は、請求項１乃至６のいずれか一項に記載の式（１ａ）を満たす、
治療方法。
【請求項１８】
請求項１乃至６のいずれか一に記載の式（１ａ）を満たす化合物であって：
【化７９】
2014513717.tif 000103
前記化合物は、動物又はヒトでのプロドラッグ治療での使用のために、薬物に対する結合を含む、化合物。
【請求項１９】
請求項１乃至６のいずれか一項に記載の式（１ａ）を満たす化合物に結合された物質の、生理的環境での、放出のためのアクチベータとしての、テトラジンの使用。
【請求項２０】
請求項１乃至６のいずれか一項に記載の式（１ａ）を満たす化合物と、化学的に結合された形態で投与された物質の、生理的環境での、放出のための化学的ツールとしてのテトラジンと、の間の逆電子要請型ディールスアルダー反応の使用であって、
前記物質は、式（１ａ）を満たす化合物に結合されている、
使用。
【請求項２１】
請求項１乃至６のいずれか一項に記載の式（１ａ）を満たし、治療用化合物のためのキャリアとしての、トランス−シクロオクテンの使用。
【国際調査報告】
2014513717.tif 000104
2014513717.tif 000105
2014513717.tif 000106
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