(57)【要約】  皮膚創傷を治療するための組成物及び創傷包帯が開示される。該組成物及び包帯は、薬学的に許容される担体；カリウム塩、亜鉛塩、カルシウム塩、及びルビジウム塩を含む無機固体の有効な量の活性成分；並びに創傷部位における生存微生物の数を減少させるのに有効な量を含む抗菌性ビグアニド化合物を含む。使用方法は、創傷部位を該組成物及び／又は包帯と接触させることを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
組成物であって、
薬学的に許容される担体と、
カリウム塩、亜鉛塩、カルシウム塩、及びルビジウム塩を含む無機固体の有効な量の活性成分と、
創傷部位における生存微生物の数を減少させるのに有効な量を含む抗菌性ビグアニド化合物と、を含み、
前記塩の各々が、薬学的に許容されるアニオンを含む、組成物。
【請求項２】
無機固体の前記活性成分が、１０〜８０部のカリウムイオン、０．００００１〜２０部の亜鉛イオン、０．０１〜１０部のカルシウムイオン、及び最大４０部までのルビジウムイオンを含み、前記部が無機固体の重量部として表される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ビグアニド化合物が、ポリヘキサメチレンビグアニド、クロルヘキシジン、オクテニジン、それらの誘導体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１又は請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物が、約０．１重量パーセント〜約０．５重量パーセントの前記ビグアニド化合物を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記ビグアニド成分を有しない組成物と比較して、前記ビグアニド化合物を有する前記組成物が、炎症に関連したポリペプチドの蓄積を抑制する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記活性成分を有しない組成物と比較して、前記活性成分を有する前記組成物が、炎症に関連したポリペプチドの蓄積を抑制する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
炎症に関連した前記ポリペプチドが、サイトカインを含む、請求項５又は請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記サイトカインが、インターロイキン−８を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物と、
支持体と、を含む、創傷包帯。
【請求項１０】
前記支持体が、繊維状物質、膜、ゲル、発泡体、親水コロイド、アルギン酸塩、ヒドロゲル、多糖類ペースト、複数の顆粒、複数のビーズ、又は前述ものの中の任意の２つ以上の組み合わせを含む、請求項９に記載の創傷包帯。
【請求項１１】
裏打ち層を更に含む、請求項９又は請求項１０に記載の創傷包帯。
【請求項１２】
創傷を請求項１〜８のいずれか一項に記載の前記組成物と接触させることを含む、創傷を治療する方法。
【請求項１３】
創傷を請求項９〜１１のいずれか一項に記載の前記創傷包帯と接触させることを含む、創傷を治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、参照によりその全てが本明細書に組み込まれる、２０１１年７月２８日出願の米国仮特許出願第６１／５１２，６５５号の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
水性オーク樹皮抽出物の組成物、及びオーク樹皮抽出物の主要な活性成分を含有する合成組成物は、真菌感染症、軽度の感染症、虫刺され、軽い火傷、日焼け、有毒オーク、毒ツタ、毒ウルシ、創傷治癒、膿皮症、皮膚炎、掻痒性皮膚病、湿疹、褥瘡性潰瘍、熱帯性潰瘍、褥瘡、乾癬、膿痂疹、カポジ肉腫、イボ、壊疽、虚血性潰瘍、角化症、及び皮膚癌を含む様々な皮膚状態の治療のために開示されている。
【０００３】
皮膚潰瘍、具体的には、褥瘡性潰瘍又は褥瘡の治療に用いるオーク樹皮抽出物が、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，０８０，９００号に記載されている。ＷＨＩＴＦＩＥＬＤ医薬軟膏ベースのこの物質は、軽度の皮膚のかぶれの治療に用いる、商標名ＢＥＮＣＥＬＯＫ（登録商標）でも販売されている（Ｗｈｉｔｆｉｅｌｄ及びＢｅｎｃｅｌｏｋは、医薬軟膏の商標である）。しかしながら、これらの物質中のオーク樹皮抽出物の量は、比較的低かった。例えば、ＢＥＮＣＥＬＯＫ（登録商標）調製物は、その調製物の総重量に基づいて、０．２５〜３重量％の灰由来の成分を含有している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ある皮膚創傷は、最終的に創傷治癒につながる生物学的事象の進行を維持することができない。これらの皮膚創傷は、「膠着状態の創傷」と指定されている。この治癒不足の根本的な原因（複数を含む）は、十分に理解されていない。膠着状態の創傷の治療の必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
一般に、本発明は、概して、皮膚創傷（例えば、外科創傷、褥瘡、切開、摩耗等）の治療に関する。具体的には、本開示は、皮膚創傷を治療するための組成物及び包帯並びにそれらの使用方法に関する。本発明の組成物は、抗菌性ビグアニド化合物、並びにカリウム、亜鉛、カルシウム、及びルビジウムの塩を含む無機固体の活性成分を含む。単独で、又は創傷包帯と組み合わせて使用され得る本発明の組成物は、創傷治癒に関連した生物学的プロセスを直接的及び／又は間接的に促進する。
【０００６】
一態様において、本開示は、組成物を提供する。この組成物は、薬学的に許容される担体、無機固体の有効な量の活性成分、及び創傷部位における生存微生物の数を減少させるのに有効な量を含むビグアニド化合物を含み得る。この活性成分は、カリウム塩、亜鉛塩、カルシウム塩、及びルビジウム塩を含み得、これらの塩の各々が、薬学的に許容されるアニオンを含む。
【０００７】
組成物の任意の実施形態において、無機固体の活性成分は、１０〜８０部のカリウムイオン、０．００００１〜２０部の亜鉛イオン、０．０１〜１０部のカルシウムイオン、及び最大４０部までのルビジウムイオンを含み得、前記部は、無機固体の重量部として表される。上述の実施形態のうちのいずれかにおいて、ビグアニド化合物は、ポリヘキサメチレンビグアニド、クロルヘキシジン、オクテニジン、それらの誘導体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。上述の実施形態のうちのいずれかにおいて、ビグアニド成分を有しない組成物と比較して、ビグアニド化合物を有する組成物は、炎症に関連したポリペプチドの蓄積を抑制し得る。いくつかの実施形態において、活性成分を有しない組成物と比較して、活性成分を有する組成物は、炎症に関連したポリペプチドの蓄積を抑制する。
【０００８】
別の態様において、本開示は、創傷包帯を提供する。創傷包帯は、組成物及び支持体の上述の実施形態のうちのいずれかを含み得る。包帯の任意の実施形態において、支持体は、繊維状物質、膜、ゲル、発泡体、親水コロイド、アルギン酸塩、ヒドロゲル、多糖類ペースト、複数の顆粒、複数のビーズ、又は上述のうちの任意の２つ以上の組み合わせを含み得る。
【０００９】
更に別の態様では、本開示は、創傷を治療する方法を提供する。本方法は、創傷を上述の組成物の実施形態のうちのいずれかと接触させることを含み得る。
【００１０】
更に別の態様では、本開示は、創傷を治療する方法を提供する。本方法は、創傷を上述の創傷包帯の実施形態のうちのいずれかと接触させることを含み得る。
【００１１】
用語「好ましい」及び「好ましくは」とは、特定の状況下で、特定の利益をもたらすことができる、本発明の実施形態を指す。しかしながら、他の実施形態もまた、同じ状況又は他の状況下で、好ましい場合がある。更には、１つ以上の好ましい実施形態の詳細説明は、他の実施形態が有用ではないことを意味するものではなく、かつ本発明の範囲から他の実施形態を排除することを意図するものではない。
【００１２】
本明細書で使用される「皮膚創傷」は、例えば、外傷（例えば、穿刺、裂傷、若しくは摩耗）又は手術に起因し得る一続きの皮膚バリアの破損を指す。
【００１３】
本明細書で使用される「慢性創傷」、治癒しない創傷」、「治癒に時間のかかる創傷」、又は「膠着状態の創傷」は、創傷の初めから創傷部位における皮膚の完全な閉鎖までの典型的な期間（例えば、８〜１２週間）にわたって治癒できない創傷のカテゴリを指す。
【００１４】
用語「含む」及びその変化形は、これらの用語が、本説明及び特許請求の範囲に現れる場合、限定する意味を有するものではない。
【００１５】
本明細書で使用するところの「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、「少なくとも１つの」及び「１つ以上の」は、互換可能に使用される。したがって、例えば、ポリペプチドは、「１つ以上の」ポリペプチドという意味に解釈され得る。
【００１６】
用語「及び／又は」とは、列記される要素のうちの１つ若しくは全て、又は列記される要素のうちの任意の２つ以上の組み合わせを意味する。
【００１７】
また本明細書では、終端点による数値範囲の詳細説明は、その範囲内に含まれる全ての数を包含する（例えば、１〜５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５などを包含する）。
【００１８】
上記の本発明の課題を解決するための手段は、開示される実施形態のそれぞれ、又は本発明のあらゆる実施を説明することを意図するものではない。以下の説明により、例示的実施形態を、より具体的に例示する。本出願の全体にわたる幾つかの箇所で、実施例のリストを通じて指針が提供され、それらの実施例は、様々な組み合わせで使用することができる。いずれの場合でも、記載されるリストは、代表的な群としての役割のみを果たすものであり、排他的なリストとして解釈するべきではない。
【００１９】
これらの及び他の実施形態の更なる詳細が、添付の図面及び以下の説明に記載されている。他の特徴、目的、及び利点は、その説明と図面、及び特許請求の範囲から明らかとなろう。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
「慢性」若しくは「治癒に時間のかかる」創傷、「治癒しない」創傷、又は「膠着状態の創傷」と指定される皮膚創傷は、静脈性潰瘍、糖尿病性潰瘍、具体的には、糖尿病性足部潰瘍、又はこれらの２つの実体の組み合わせとして臨床現場で共通して観察される。同様の治癒しない創傷は、頻度の低い状態、例えば、自己免疫障害において観察され得るが、病因にかかわらず、創傷は、臨床的に期待される期間内に治癒することができないという特徴を共有する。経験的に、創傷の最初の観察から治癒までにかかる期間が１２週間よりも長い創傷は、「慢性」、「治癒しない」、又は「治癒に時間のかかる」カテゴリに該当すると見なされる。「膠着状態の創傷」という用語は、治癒できないいくつかの創傷も含む。しかしながら、「膠着状態の創傷」は、より一般的に、治癒し始める一方で、理由は分からないが、創傷の完全な閉鎖の前に治癒を停止する創傷と関連している。この治癒不足の根本的な原因（複数を含む）は、十分に理解されていない。自然治癒が生じ得ないため、これらの種類の創傷のうちのいずれかの治療の必要性が存在する。
【００２１】
微生物学的感染に付随し得る過度の炎症は、皮膚創傷における正常な治癒プロセスを阻害し得る。本開示は、皮膚創傷を治療するための組成物、物品、及び方法に関する。組成物及び物品は、抗菌性ビグアニド化合物、並びにカリウム、亜鉛、カルシウム、及びルビジウムの塩を含む無機固体の活性成分を含む。本発明の組成物の成分は、驚いたことに、炎症に関連した生化学的マーカー（例えば、ポリペプチド、例えばインターロイキン−８（ＩＬ−８）等のサイトカイン）の蓄積の抑制をもたらす相乗効果を提供する。
【００２２】
本開示の組成物は、無機固体の活性成分を含む。本開示の無機固体の例示の活性成分は、それぞれ参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第６，１４９，９４７号及び同第７，０１４，８７０号に記載されるように、オーク樹皮灰及び関連合成組成物で見いだされ得る。
【００２３】
オーク樹皮抽出物の様々な成分の治療活性が分析されており、結果では、好適な対イオンと組み合わせた、カリウム、亜鉛、及びカルシウムイオンのみを含有する組成物に対して治療効果が示される。したがって、合成製剤は、薬学的に許容される対イオン（例えば、Ｃｌ−、Ｓ０４−、Ｃ０３−、ＯＨ−、Ｂｒ−）とともに、無機固体の１０〜８０重量部、好ましくは、３０〜５０重量部のカリウムイオン；０．００００１〜２０重量部、好ましくは、１〜１０重量部の亜鉛イオン；０．０１〜１０重量部、好ましくは、１〜５重量部のカルシウムイオン；及び０〜４０重量部、好ましくは、１〜３０重量部のルビジウムイオンを含有する。任意に、組成物は、硫黄元素又は硫酸アニオンの形態で、最大５部の硫黄を更に含み得る。溶液は、他の無機カチオン、例えば、無機固体の最大１０重量部のコバルト、銅、鉄、マンガン、ニッケル、ストロンチウム、又はアルミニウムイオンも含有し得、好ましくは、前述のうちのいずれかが、最大１重量部まで組成物中に存在し得る。更に、組成物は、水又は軟膏又はクリーム基剤等の薬学的に許容される担体を含み得、約４〜７（境界値も含む）の範囲のｐＨを有する治療組成物をもたらす。好ましくは、組成物は、約４．５〜５．５（境界値も含む）の範囲のｐＨを有する。本明細書で使用される「ＰＨＩ塩」を含む組成物は、薬学的に許容される対イオンとともに、カリウム、亜鉛、カルシウム、及びルビジウムカチオンを含む組成物を指す。
【００２４】
オーク樹皮抽出物又は無機固体の関連合成混合物は、本明細書に記載されるように、様々な皮膚状態の治療に様々な有益な治療特性を提供することが見出されている。
【００２５】
本発明に従う組成物は、摩耗及び他の部分的に厚みのある創傷の治療にも有用である。有用な組成物は、例えば、少なくともカリウム、亜鉛、及びカルシウムイオンを含む。この組成物は、ある一定の期間（例えば、数時間〜数日間）、クリーム又は軟膏基剤で有利に適用される。
【００２６】
任意の特定の作用機構によって束縛されることを意図することなく、オーク樹皮抽出物及びオーク樹皮抽出物の主要な成分を含有する合成混合物が、アルカリ性ホスファターゼ、炭酸脱水酵素、カルボキシペプチダーゼ、様々なデヒドロゲナーゼ、アルギナーゼ、カルノシナーゼ、デヒドロペプチダーゼ、グリシンジペプチダーゼ、ヒスチジンデアミナーゼ及びトリペプチダーゼ、オキサロ酢酸カルボキシラーゼ、並びにいくつかのレシチナーゼ及びエノラーゼを含むが、これらに限定されない生体膜及び／又は酵素と相互作用する錯化イオンを提供することによって創傷治癒を高める機能を果たすようである。これらの酵素は、創傷治癒、例えば、コラーゲン生合成に必要な多数の生合成経路に関与しており、錯化イオンの存在下でより効率的に機能すると考えられている。
【００２７】
本開示の組成物は、抗菌性ビグアニド化合物を更に含む。例示の抗菌性ビグアニド化合物は、例えば、ポリヘキサメチレンビグアニド（ＰＨＭＢ）である。生合成セルロース創傷包帯におけるＰＨＭＢの使用は、Ｍｕｌｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（参照によりその全てが本明細書に組み込まれる、「Ｐｏｌｙｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  Ｂｉｇｕａｎｉｄｅ（ＰＨＭＢ）：Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｗｏｕｎｄ  Ｃａｒｅ」；Ｗｏｕｎｄｓ；１９（７）：１７３〜１８２；２００７）によって説明されている。他の好適なビグアニドには、例えば、クロルヘキシジン及びオクテニジンが含まれる。ビグアニド化合物の組み合わせを含む組成物も含まれる。
【００２８】
ビグアニド化合物は、創傷部位において抗菌作用（例えば、殺菌作用及び／又は静菌作用）を提供するのに有効な量で組成物中に存在する。本開示の組成物は、約０．１重量パーセント〜約０．５重量パーセントのビグアニド化合物（例えば、ポリヘキサメチレンビグアニド）を含み得る。
【００２９】
組成物の成分のうちの１つ以上は、薬学的に許容される担体中に溶解及び／又は懸濁され得る。任意の実施形態において、担体は、水、ゲル、又は軟膏（例えば、ＷＨＩＴＦＩＥＬＤの軟膏）であり得る。本明細書で使用される「薬学的に許容される」は、担体が接触する創傷の治癒プロセスを実質的に妨害する成分を含まない担体を指す。いくつかの実施形態において、担体は、エチルヘキシルグリセリン、コカミドプロピルヒドロキシスルタイン、乳酸、水酸化ナトリウム、グリセリン、キシリトール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシステアリン酸ポリエチレングリコール６６０、又は上述のうちの任意の２つ以上の組み合わせの水性溶液又は水性懸濁液も含み得る。有利に、上述の薬学的に許容される担体は、創傷への組成物の浸透も促進し、且つ／又は創傷治癒の利益となり得る局所ｐＨ変化も提供し得る。
【００３０】
本開示は、創傷包帯を更に提供する。創傷包帯は、支持体及び本明細書に開示の組成物のうちのいずれかを含み、該組成物は、薬学的に許容される担体；カリウム塩、亜鉛塩、カルシウム塩、及びルビジウム塩を含む無機固体の有効な量の活性成分；並びに創傷部位における生存微生物の数を減少させるのに有効な量を含むビグアニド化合物を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、コーティング（例えば、使用時に創傷に向かって配置される包帯の表面上のコーティング）として包帯に適用され得る。いくつかの実施形態において、創傷包帯は、組成物が染み込んでいる（例えば、組成物で飽和した状態である）場合がある。
【００３１】
本開示の創傷包帯は、繊維状物質、膜、ゲル、発泡体、親水コロイド、アルギン酸塩、ヒドロゲル、多糖類ペースト、複数の顆粒、複数のビーズ、又は上述のうちの任意の２つ以上の組み合わせを含むが、これらに限定されない様々な支持体物質を含み得る。いくつかの実施形態において、包帯は、裏打ち（例えば、創傷包帯を保護し、且つ任意に、患者の皮膚に包帯の接着安定性を提供するための接着性裏打ち）を更に含み得る。
【００３２】
本開示は、創傷を治療する方法を更に提供する。いくつかの実施形態において、該方法は、創傷を任意の本開示の組成物と接触させることを含み、該組成物は、薬学的に許容される担体；カリウム塩、亜鉛塩、カルシウム塩、及びルビジウム塩を含む無機固体の有効な量の活性成分；並びに創傷部位における生存微生物の数を減少させるのに有効な量を含むビグアニド化合物を含む。該組成物は、例えば、液体（例えば、液体で創傷を洗浄することによって）で、又はゲル若しくは軟膏で創傷に適用され得る。液体組成物は、治癒組織へのイオンの実質的に即時の直接送達を提供し得る。対照的に、ゲル及び軟膏は、長時間にわたるイオンの送達を提供し得る。いくつかの実施形態において、組成物は、創傷と実質的に接触する創傷包帯に適用され得る。有利に、該組成物を含む包帯は、ある一定の期間（例えば、数時間〜１日間、又はそれ以上）、創傷と接触し、それによって、ＰＨＩカチオン及び抗菌性ビグアニドで濃縮された湿潤環境を提供して、皮膚の治癒を促進し得る。
【００３３】
実施形態
実施形態１は、組成物であり、
薬学的に許容される担体と、
カリウム塩、亜鉛塩、カルシウム塩、及びルビジウム塩を含む無機固体の有効な量の活性成分と、
創傷部位における生存微生物の数を減少させるのに有効な量を含む抗菌性ビグアニド化合物と、を含み、
前記塩の各々が、薬学的に許容されるアニオンを含む、組成物である。
【００３４】
実施形態２は、前記無機固体の活性成分が、１０〜８０部のカリウムイオン、０．００００１〜２０部の亜鉛イオン、０．０１〜１０部のカルシウムイオン、及び最大４０部までの量のルビジウムイオンを含み、前記部は、無機固体中の重量部として表される、実施形態１に記載の組成物である。
【００３５】
実施形態３は、前記ビグアニド化合物が、ポリヘキサメチレンビグアニド、クロルヘキシジン、オクテニジン、それらの誘導体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態１又は実施形態２に記載の組成物である。
【００３６】
実施形態４は、前記組成物が、約０．１重量パーセント〜約０．５重量パーセントのビグアニド化合物を含む、実施形態１〜３のいずれか一項に記載の組成物である。
【００３７】
実施形態５は、前記ビグアニド成分を有しない組成物と比較して、前記ビグアニド化合物を有する組成物が、炎症に関連したポリペプチドの蓄積を抑制する、実施形態１〜４のいずれか一項に記載の組成物である。
【００３８】
実施形態６は、前記活性成分を有しない組成物と比較して、前記活性成分を有する組成物が、炎症に関連したポリペプチドの蓄積を抑制する、実施形態１〜４のいずれか一項に記載の組成物である。
【００３９】
実施形態７は、前記炎症に関連したポリペプチドが、サイトカインを含む、実施形態５又は実施形態６に記載の方法である。
【００４０】
実施形態８は、前記サイトカインが、インターロイキン−８を含む、実施形態７に記載の方法である。
【００４１】
実施形態９は、
実施形態１〜８のいずれか一項に記載の組成物と、
支持体と、を含む、創傷包帯である。
【００４２】
実施形態１０は、前記支持体が、繊維状物質、膜、ゲル、発泡体、親水コロイド、アルギン酸塩、ヒドロゲル、多糖類ペースト、複数の顆粒、複数のビーズ、又は上述のうちの任意の２つ以上の組み合わせを含む、実施形態９に記載の創傷包帯である。
【００４３】
実施形態１１は、裏打ち層を更に含む、実施形態９又は実施形態１０に記載の創傷包帯である。
【００４４】
実施形態１２は、創傷を実施形態１〜８のいずれか一項に記載の組成物と接触させることを含む、創傷を治療する方法である。
【００４５】
実施形態１３は、創傷を実施形態９〜１１のいずれか一項に記載の創傷包帯と接触させることを含む、創傷を治療する方法である。
【実施例】
【００４６】
本発明の目的及び利点は、以下の実施例によって更に例示されるが、これらの実施例において列挙された特定の材料及びその量は、他の諸条件及び詳細と同様に本発明を過度に制限するものと解釈されるべきではない。特に指示がない限り、部及び百分率は全て重量基準であり、水は全て蒸留水であり、分子量は全て重量平均分子量である。
【００４７】
材料．実施例の調製において利用される物質が、表１〜３に示される。
【００４８】
【表１】
2014521649.tif 000002
【００４９】
【表２】
2014521649.tif 000003
【００５０】
【表３】
2014521649.tif 000004
【００５１】
ＭＳＳＡ調製物
メチシリン感受性黄色ブドウ球菌（ＭＳＳＡ、菌株ＭＮ８、毒素性ショック症候群毒素１（ＴＳＳＴ−１＋）を産生する臨床的粘膜単離株）を凍結原料由来の寒天プレート上に画線した。この寒天プレートから、一晩経った細菌培養物をＴＨブロス中で調製した。この培養物を洗浄し、新鮮なＲＰＭＩ  １６４０中に希釈して、約５×１０８ＣＦＵ／ｍＬの濃度にした。
【００５２】
組織調製物
正常なブタ膣粘膜の検体を食肉処理場の動物から切除し、ＲＰＭＩ−１６４０ですすいだ。５ｍｍの生検パンチを用いて、均一な大きさの組織プラグをブタ膣組織から得た。外科用メスを用いて過度の筋肉組織を切り落とした。組織外植片をＲＰＭＩ−１６４０培地中で洗浄した。この外植片を、粘膜面を上にして滅菌ペトリ皿に設置し、新鮮なＲＰＭＩ−１６４０で洗浄した。外植片を３７℃で３０分間インキュベートし、その後、０．７５ｍＬのＲＰＭＩ−１６４０を含有する０．４μｍの細胞培養トランスウェル挿入物を用いて、粘膜面を上にして６ウェルプレートに移した。
【００５３】
ピペットを用いて、希釈したＭＳＳＡ調製物をそれぞれの組織サンプルの粘膜表面に塗布した。３７℃で２時間インキュベートした後、感染組織をインキュベータから除去し、ＴＥＧＡＤＥＲＭマトリックス（３Ｍ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃａｒｅ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）及び／又はＰＨＭＢゲルで処理した。
【００５４】
ＰＨＭＢゲル
表３の成分を用いてＰＨＭＢゲルを調製した。簡潔に、ヒドロキシエチルセルロース及びグリセロールを除く全ての成分を、水の約８０％と混合した。この混合物を透明になるまで撹拌し、その後、乳酸又は水酸化ナトリウムを用いてｐＨを３．５に調整した。残りの水をこの混合物に添加した。グリセロール及びヒドロキシエチルセルロースを混合してスラリーを形成し、このスラリーを撹拌しながら水性混合物に添加した。結果として生じた溶液を、室温で一晩撹拌及び濃厚化させた。
【００５５】
実施例１．無機イオン（ＰＨＩ塩）の活性成分を含む包帯及びビグアニド化合物を含む組成物での組織外植片の治療
ブタ膣組織を上述のようにＭＲＳＡで感染させた。その後、１０マイクロリットルのＰＨＭＢゲルを組織に塗布した。ＰＨＭＢゲルの塗布直後、小さい正方形（０．５ｃｍ２）のＴＥＧＡＤＥＲＭマトリックス包帯を組織上のＰＨＭＢゲルに適用した。組織外植片を１８時間、３７℃のインキュベータに戻した。２つの別個の実験を行い、それぞれの実験で異なる動物由来の外植片物質を用いた。別個の実験由来のサンプルを、微生物阻害試験及びインターロイキン−８蓄積試験（以下に説明される）に供し、別個の実験の結果を、それぞれ、表４及び表５に示す。
【００５６】
比較例１．無機イオンの活性成分を含む包帯での組織外植片の治療。
小さい正方形（０．５ｃｍ２）のＴＥＧＡＤＥＲＭマトリックス包帯をＭＳＳＡに感染させた組織に塗布した。組織外植片を１８時間、３７℃のインキュベータに戻した。２つの別個の実験を行い、それぞれの実験で異なる動物由来の外植片物質を用いた。別個の実験由来のサンプルを、微生物阻害試験及びインターロイキン−８蓄積試験（以下に説明される）に供し、別個の実験の結果を、それぞれ、表４及び表５に示す。
【００５７】
比較例２．ＰＨＭＢゲルでの組織外植片の治療。
ブタ膣組織を上述のようにＭＲＳＡで感染させた。その後、１０マイクロリットルのＰＨＭＢゲルを組織に塗布した。ＰＨＭＢゲルを塗布した後、組織外植片を１８時間、３７℃のインキュベータに戻した。サンプルを微生物阻害試験及びインターロイキン−８蓄積試験（以下に説明される）に供し、それらの結果を表５に示す。
【００５８】
対照
微生物阻害試験の対照は、上述のように感染させた寒天プレートから成り、ＰＨＩ及びＰＨＭＢが塗布されていないものであった。
【００５９】
ＩＬ−８試験用の対照は、上述のようにＭＲＳＡに感染させた膣組織から成り、ＰＨＩ及びＰＨＭＢが塗布されていないものであった。バックグラウンド読み取り値も記録し、これは、非感染膣組織由来のＩＬ−８濃縮物から成った。
【００６０】
試験方法
微生物阻害試験
実施例の項で説明されたＴＥＧＡＤＥＲＭマトリックス及び／又はＰＨＭＢゲルでの治療後、並びにインキュベーション工程後、外植片をトランスウェルから取り出し、２５０μＬのＰＨＭＢ中和剤溶液で均質化した。この均質化された組織の連続希釈物を滅菌ＰＢＳ中で調製し、５％のヒツジ血液を有するトリプシン大豆寒天（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）上に蒔いた。このプレートを３７℃で２４時間インキュベートした後、それぞれのプレート上の細菌コロニーの数を計数して記録した。
【００６１】
インターロイキン−８（ＩＬ−８）蓄積試験
微生物阻害試験において説明されたように調製されたサンプルを２５０μＬのＰＢＳ緩衝液中に設置し、均質化し、遠心分離して透明にした。上清を１．５ｍＬの管に移し、ＥＬＩＳＡ分析まで凍結させた。ブタＩＬ−８  ＥＬＩＳＡ開発キット（カタログ番号ＤＹ５３５、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いて、均質化された組織由来の上清中のＩＬ−８を測定した。ＰＨＭＢ中和溶液中の希釈されていないＰＨＭＢサンプルがＩＬ−８を検出する能力を妨害したため、これらのサンプルを、滅菌水で１：４に希釈した後に、ＩＬ−８を測定したことに留意する。
【００６２】
【表４】
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＊  微生物阻害は、対照プレート上のコロニー数と比較した、ＭＳＳＡコロニー形成単位の数のＬｏｇ１０減少として報告される。
【００６３】
【表５】
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＊  微生物阻害は、対照プレート上のコロニー数と比較した、ＭＳＳＡコロニー形成単位の数のＬｏｇ１０減少として報告される。
＊＊  これらのサンプルにおいて得られた吸収度読み取り値は、バックグラウンド対照を下回り、したがって、ＩＬ−９８蓄積は、「０」と報告される。
【００６４】
表４及び表５に示された結果は、ＰＨＭＢを有するＰＨＩ塩を含む組成物を塗布することで、ＰＨＩ塩又はＰＨＭＢで処理されていない対照と比較して、感染組織上の細菌の数の１．２７〜４．３３のＬｏｇ１０減少をもたらしたことを示す。対照的に、ＰＨＩ塩のみで処理された感染組織は、細菌を阻害しないように見え、ＰＨＭＢゲルのみで処理された感染組織は、微生物の数のより小さいＬｏｇ１０減少（０．７３）をもたらした。更に、ＰＨＩ塩及びＰＨＭＢを含む組成物で処理された組織は、ＰＨＩ塩のみ又はＰＨＭＢのみで処理された組織と比較して、より低い（すなわち、事実上検出不可能な）ＩＬ−８蓄積を示した。
【００６５】
本明細書に引用する全ての特許、特許出願及び公開公報、並びに電子的に入手可能な資料の開示内容の全体を援用する。本出願の開示内容と本明細書に援用されたいずれかの文書の開示内容との間になんらかの矛盾が存在する場合には、本出願の開示内容が優先するものとする。上記の詳細な説明及び実施例はあくまで理解を助けるために示したものである。これらによって不要な限定をするものと理解されるべきではない。本発明は、図示及び説明された厳密な詳細に限定されるものではなく、当業者には明らかな変形例は特許請求の範囲によって定義された本発明に含まれるものとする。
【００６６】
全ての見出しは、読者の利便性のためであり、指定のない限り、その見出しに続く本文の意味を限定するために使用するべきではない。
【００６７】
本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な修正を行ってもよい。これらの及び他の実施形態は、以下の特許請求の範囲に含まれる。
【国際調査報告】
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