(57)【要約】  本発明は、治療目的の（５ｓ,８ｓ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−１−アザスピロ［４.５］デカ−３−エン−２−オン、医薬物質、および処置におけるそれらの使用、特に、腫瘍障害の予防および処置のためのものに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬を製造するための、（５ｓ,８ｓ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−１−アザスピロ［４.５］デカ−３−エン−２−オンの使用。
【請求項２】
腫瘍障害の予防および／または治療用の医薬を製造するための、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
乳癌、膵臓癌、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、胃癌および前立腺癌の予防および／または治療用の医薬を製造するための、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
ヒトまたは他の哺乳動物の障害を予防および／または治療するための、（５ｓ,８ｓ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−１−アザスピロ［４.５］デカ−３−エン−２−オンの使用。
【請求項５】
腫瘍障害の予防および／または治療のための、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
乳癌、膵臓癌、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、胃癌および前立腺癌の予防および／または治療のための、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
医薬として使用するための、（５ｓ,８ｓ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−１−アザスピロ［４.５］デカ−３−エン−２−オン。
【請求項８】
腫瘍障害の予防および／または治療のための、（５ｓ,８ｓ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−１−アザスピロ［４.５］デカ−３−エン−２−オン。
【請求項９】
乳癌、膵臓癌、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、胃癌および前立腺癌の予防および／または治療のための、（５ｓ,８ｓ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−１−アザスピロ［４.５］デカ−３−エン−２−オン。
【請求項１０】
乳癌、膵臓癌、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、胃癌および前立腺癌の予防および／または治療のための、（５ｓ,８ｓ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−１−アザスピロ［４.５］デカ−３−エン−２−オンを含む錠剤の形態の医薬製剤。
【請求項１１】
さらなる活性化合物と組み合わせられている、（５ｓ,８ｓ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−１−アザスピロ［４.５］デカ−３−エン−２−オン。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特に腫瘍障害の予防および／または治療のための、治療目的の（５ｓ,８ｓ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−１−アザスピロ［４.５］デカ−３−エン−２−オン（＝化合物Ａ）、化合物Ａを含む医薬組成物および治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）は、細胞の脂肪酸恒常性において重要な役割を果たす。ＡＣＣは、アセチル−ＣｏＡからマロニル−ＣｏＡへのカルボキシル化をＡＴＰ依存的に触媒する、ビオチンを含有する酵素である（Kim, 1997; Harwood, 2005; Tong, 2005）。２つの下位反応、即ちビオチンカルボキシラーゼ（ＢＣ）反応およびカルボキシルトランスフェラーゼ（ＣＴ）反応として進行するこの反応は、脂肪酸生合成の最初の開始段階であり、この経路の速度を決定する段階である。
【０００３】
２種のヒトＡＣＣアイソフォーム、ＡＣＣ１およびＡＣＣ２が知られており、これらは、異なる遺伝子にコードされる（LuTFI ABU-ELHEIGA et al, 1995, Jane WIDMER, et al. 1996）。ＡＣＣ１は、脂質生成の組織（肝臓、脂肪組織）で発現され、細胞質に局在し、ＦＡＳＮおよび後続の鎖伸長による長鎖脂肪酸の新規合成のためのＣ２ユニット供与体として働く、マロニル−ＣｏＡのプールを満たす。ＡＣＣ２は、特に酸化的組織（肝臓、心臓、骨格筋）で発現され（Bianchi et al., 1990; Kim, 1997）、ミトコンドリアに付随し、マロニル−ＣｏＡの第２のプールを調節する。これは、β酸化のために長鎖脂肪酸のミトコンドリアへの輸送を助長する酵素であるカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼＩを阻害することにより、脂肪酸の酸化を調節する（Milgraum LZ, et al., 1997, Widmer J. et al., 1996）。両酵素は、非常に高い配列相同性を有し、転写、翻訳および翻訳後メカニズムの組合せにより、同様に調節される。ヒト並びに動物で、ＡＣＣ活性は、例えば、クエン酸塩による前向きのアロステリックな活性化、長鎖脂肪酸によるフィードバック阻害、可逆的リン酸化、および／または、遺伝子発現の改変による酵素産生の不活性化または変更による、数々の食物性、ホルモン性および他の生理学的なメカニズムの厳密な制御下にある。
【０００４】
ＡＣＣ１ノックアウトマウスは、胚性致死である（Swinnen, et al., 2006, Abu-Elheiga, et al. 2005）。ＡＣＣ２ノックアウトマウスは、骨格筋および心筋におけるマロニル−ＣｏＡ濃度の低下、筋肉における脂肪酸の酸化の増加、肝臓脂質レベルの低下、総体脂肪量の減少、骨格筋におけるＵＣＰ３レベルの上昇（エネルギー出力増加の兆候として）、体重の低下、遊離脂肪酸の血漿濃度の低下、血漿グルコースレベルの低下、組織グリコーゲン量の減少を示し、それらは、食物に誘導される糖尿病および肥満に対して保護される（Abu-Elheiga et al., 2001, 2003; Oh et al., 2005）。
【０００５】
脂肪産生組織における脂肪酸合成および酸化的組織における脂肪酸の酸化に関与することに加え、ＡＣＣの上方調節および脂肪生合成の増加が多くの腫瘍細胞で観察された（Swinnen, et al., 2004, Heemers, et al., 2000, Swinnen, et al., 2002,  Rossi, et al., 2003, Milgraum, et al., 1997, Yahagi, et al., 2005）。高い蓋然性で、この表現型は腫瘍の発生および進行に寄与する；しかしながら、関連する調節メカニズムは、依然として解明が待たれている。
【０００６】
ＥＰ０４５４７８２およびＵＳ５７５９８３７は、腫瘍細胞増殖を阻害するための脂肪酸合成阻害剤の使用を保護する。環状ケトエノール類は開示されていない。
植物および／または昆虫のＡＣＣを阻害できる数々の物質が見つかっている。
【０００７】
ＷＯ９９／４８８６９として公開されたＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＥＰＰ９９／０１７８７は、欧州特許ＥＰ１０６６２５８Ｂ１に対応し、新規のアリールフェニル置換環状ケトエノール類、複数のそれらの製造方法および殺虫剤および除草剤としてのそれらの使用に関する。
【０００８】
３−アシルピロリジン−２,４−ジオン類の医薬的特性は、従来技術において説明された（S. Suzuki et al. Chem. Pharm. Bull. 15 1120 (1967)）。さらに、Ｎ−フェニルピロリジン−２,４−ジオン類は、R. Schmierer および H. Mildenberger により合成された（Liebigs Ann. Chem. 1985, 1095）。これらの化合物の生物学的活性は、まだ記述されていない。
【０００９】
ＥＰ−Ａ−０２６２３９９およびＧＢ−Ａ−２２６６８８８は、類似の構造の化合物を開示する（３−アリールピロリジン−２,４−ジオン類）；しかしながら、これらの化合物は、除草、殺虫または殺ダニ活性を有するとは知られていない。除草、殺虫または殺ダニ活性を有すると知られているのは、非置換二環式３−アリールピロリジン−２,４−ジオン誘導体（ＥＰ−Ａ−３５５５９９、ＥＰ−Ａ−４１５２１１およびＪＰ−Ａ−１２−０５３６７０）、および、置換単環式３−アリールピロリジン−２,４−ジオン誘導体（ＥＰ−Ａ−３７７８９３およびＥＰ−Ａ−４４２０７７）である。
【００１０】
また知られているのは、多環式３−アリールピロリジン−２,４−ジオン誘導体（ＥＰ−Ａ−４４２０７３）および１Ｈ−アリールピロリジンジオン誘導体（ＥＰ−Ａ−４５６０６３、ＥＰ−Ａ−５２１３３４、ＥＰ−Ａ−５９６２９８、ＥＰ−Ａ−６１３８８４、ＥＰ−Ａ−６１３８８５、ＷＯ９５／０１９７１、ＷＯ９５／２６９５４、ＷＯ９５／２０５７２、ＥＰ−Ａ−０６６８２６７、ＷＯ９６／２５３９５、ＷＯ９６／３５６６４、ＷＯ９７／０１５３５、ＷＯ９７／０２２４３、ＷＯ９７／３６８６８、ＷＯ９７／４３２７５、ＷＯ９８／０５６３８、ＷＯ９８／０６７２１、ＷＯ９８／２５９２８、ＷＯ９９／２４４３７、ＷＯ９９／４３６４９、ＷＯ９９／４８８６９、ＷＯ９９／５５６７３、ＷＯ０１／１７９７２、ＷＯ０１／２３３５４、ＷＯ０１／７４７７０、ＷＯ０３／０１３２４９、ＷＯ０３／０６２２４４、ＷＯ２００４／００７４４８、ＷＯ２００４／０２４６８８、ＷＯ０４／０６５３６６、ＷＯ０４／０８０９６２、ＷＯ０４／１１１０４２、ＷＯ０５／０４４７９１、ＷＯ０５／０４４７９６、ＷＯ０５／０４８７１０、ＷＯ０５／０４９５６９、ＷＯ０５／０６６１２５、ＷＯ０５／０９２８９７、ＷＯ０６／０００３５５、ＷＯ０６／０２９７９９、ＷＯ０６／０５６２８１、ＷＯ０６／０５６２８２、ＷＯ０６／０８９６３３、ＷＯ０７／０４８５４５、ＤＥＡ１０２００５０５９８９２、ＷＯ０７／０７３８５６、ＷＯ０７／０９６０５８、ＷＯ０７／１２１８６８、ＷＯ０７／１４０８８１、ＷＯ０８／０６７８７３、ＷＯ０８／０６７９１０、ＷＯ０８／０６７９１１、ＷＯ０８／１３８５５１、ＷＯ０９／０１５８０１、ＷＯ０９／０３９９７５、ＷＯ０９／０４９８５１、ＷＯ０９／１１５２６２、ＷＯ１０／０５２１６１、ＷＯ１０／０６３３７８、ＷＯ１０／０６３６７０、ＷＯ１０／０６３３８０、ＷＯ１０／０６６７８０およびＷＯ１０／１０２７５８）である。
【００１１】
さらに、ケタール−置換１−Ｈ−アリールピロリジン−２,４−ジオン類がＷＯ９９／１６７４８から、そして、（スピロ）−ケタール−置換Ｎ−アルコキシアルコキシ−置換アリールピロリジンジオン類が、ＪＰ−Ａ−１４２０５９８４および Ito M. et al. Bioscience, Biotechnology and Biochemistry 67, 1230-1238, (2003) から知られている。さらに、ＷＯ０６／０２４４１１は、ケトエノール類を含む除草組成物を開示している。
【００１２】
ある種の置換△３−ジヒドロフラン−２−オン誘導体が、除草特性を有することが知られている（ＤＥ−Ａ−４０１４４２０参照）。出発物質として使用されるテトロン酸誘導体（例えば、３−（２−メチルフェニル）−４−ヒドロキシ−５−（４−フルオロフェニル）−△３−ジヒドロフラノン−（２））の合成は、同様に、ＤＥ−Ａ−４０１４４２０に記載されている。同様の構造の化合物は、刊行物 Campbell et al., J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1985,（8）1567-76 から知られているが、殺虫および／または殺ダニ活性は記述されていない。除草、殺ダニおよび殺虫特性を有する３−アリール−△３−ジヒドロフラノン誘導体は、さらに、ＥＰ−Ａ−５２８１５６、ＥＰ−Ａ−６４７６３７、ＷＯ９５／２６９５４、ＷＯ９６／２０１９６、ＷＯ９６／２５３９５、ＷＯ９６／３５６６４、ＷＯ９７／０１５３５、ＷＯ９７／０２２４３、ＷＯ９７／３６８６８、ＷＯ９８／０５６３８、ＷＯ９８／０６７２１、ＷＯ９９／１６７４８、ＷＯ９８／２５９２８、ＷＯ９９／４３６４９、ＷＯ９９／４８８６９、ＷＯ９９／５５６７３、ＷＯ０１／２３３５４、ＷＯ０１／７４７７０、ＷＯ０１／１７９７２、ＷＯ０４／０２４６８８、ＷＯ０４／０８０９６２、ＷＯ０４／１１１０４２、ＷＯ０５／０９２８９７、ＷＯ０６／０００３５５、ＷＯ０６／０２９７９９、ＷＯ０７／０４８５４５、ＷＯ０７／０７３８５６、ＷＯ０７／０９６０５８、ＷＯ０７／１２１８６８、ＷＯ０７／１４０８８１、ＷＯ０８／０６７９１１、ＷＯ０８／０８３９５０、ＷＯ０９／０１５８０１、ＷＯ０９／０３９９７５およびＰＣＴ／ＥＰ２０１０／００３０２０から知られている。
【００１３】
３−アリール−△３−ジヒドロチオフェノン誘導体は、ＷＯ９５／２６３４５、９６／２５３９５、ＷＯ９７／０１５３５、ＷＯ９７／０２２４３、ＷＯ９７／３６８６８、ＷＯ９８／０５６３８、ＷＯ９８／２５９２８、ＷＯ９９／１６７４８、ＷＯ９９／４３６４９、ＷＯ９９／４８８６９、ＷＯ９９／５５６７３、ＷＯ０１／１７９７２、ＷＯ０１／２３３５４、ＷＯ０１／７４７７０、ＷＯ０３／０１３２４９、ＷＯ０４／０８０９６２、ＷＯ０４／１１１０４２、ＷＯ０５／０９２８９７、ＷＯ０６／０２９７９９およびＷＯ０７／０９６０５８から知られている。
【００１４】
フェニル環で置換されていないある種のフェニルピロン誘導体は、既に知られている（A.M. Chirazi, T. Kappe and E. Ziegler, Arch. Pharm. 309, 558 (1976) および K.-H. Boltze and K. Heidenbluth, Chem. Ber. 91, 2849 参照）。フェニル環で置換されており、除草、殺ダニおよび殺虫特性を有するフェニルピロン誘導体は、ＥＰ−Ａ−５８８１３７、ＷＯ９６／２５３９５、ＷＯ９６／３５６６４、ＷＯ９７／０１５３５、ＷＯ９７／０２２４３、ＷＯ９７／１６４３６、ＷＯ９７／１９９４１、ＷＯ９７／３６８６８、ＷＯ９８／０５６３８、ＷＯ９９／４３６４９、ＷＯ９９／４８８６９、ＷＯ９９／５５６７３、ＷＯ０１／１７９７２、ＷＯ０１／７４７７０、ＷＯ０３／０１３２４９、ＷＯ０４／０８０９６２、ＷＯ０４／１１１０４２、ＷＯ０５／０９２８９７、ＷＯ０６／０２９７９９およびＷＯ０７／０９６０５８に記載されている。
【００１５】
フェニル環において非置換である、ある種の５−フェニル−１,３−チアジン誘導体は、既に知られている（E. Ziegler and E. Steiner, Monatsh. 95, 147 (1964), R. Ketcham, T. Kappe and E. Ziegler, J. Heterocycl. Chem. 10, 223 (1973) 参照）。フェニル環において置換されており、除草、殺ダニおよび殺虫特性を有する５−フェニル−１,３−チアジン誘導体は、ＷＯ９４／１４７８５、ＷＯ９６／２５３９５、ＷＯ９６／３５６６４、ＷＯ９７／０１５３５、ＷＯ９７／０２２４３、ＷＯ９７／０２２４３、ＷＯ９７／３６８６８、ＷＯ９９／４３６４９、ＷＯ９９／４８８６９、ＷＯ９９／５５６７３、ＷＯ０１／１７９７２、ＷＯ０１／７４７７０、ＷＯ０３／０１３２４９、ＷＯ０４／０８０９６２、ＷＯ０４／１１１０４２、ＷＯ０５／０９２８９７、ＷＯ０６／０２９７９９およびＷＯ０７／０９６０５８に記載されている。
【００１６】
ある種の置換２−アリールシクロペンタンジオン類は、除草、殺虫および殺ダニ特性を有すると知られている（例えば、ＵＳ−４２８３３４８；４３３８１２２；４４３６６６６；４５２６７２３；４５５１５４７；４６３２６９８；ＷＯ９６／０１７９８；ＷＯ９６／０３３６６、ＷＯ９７／１４６６７並びにＷＯ９８／３９２８１、ＷＯ９９／４３６４９、ＷＯ９９／４８８６９、ＷＯ９９／５５６７３、ＷＯ０１／１７９７２、ＷＯ０１／７４７７０、ＷＯ０３／０６２２４４、ＷＯ０４／０８０９６２、ＷＯ０４／１１１０４２、ＷＯ０５／０９２８９７、ＷＯ０６／０２９７９９、ＷＯ０７／０８００６６、ＷＯ０７／０９６０５８、ＷＯ０９／０１９００５、ＷＯ０９／０１９０１５、ＷＯ０９／０４９８５１、ＷＯ１０／０６９８３４、ＷＯ１０／０００７７３、ＷＯ１０／０５７８８０、ＷＯ１０／０８１８９４、ＷＯ１０／０８９２１０、ＷＯ１０／１０２８４８およびＷＯ１０／１３３２３２参照）。同様の置換を有する化合物も知られている；刊行物 Micklefield et al., Tetrahedron, (1992), 7519-26 から、３−ヒドロキシ−５,５−ジ−メチル−２−フェニルシクロペント−２−エン−１−オン、並びに、刊行物 Edwards et al., J. Chem. Soc. S,（1967）, 405-9 から、天然化合物インボルチン（involutin）（−）−ｃｉｓ−５−（３,４−ジヒドロキシフェニル）−３,４−ジヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）シクロペント−２−エノン。殺虫または殺ダニ作用は記載されていない。さらに、２−（２,４,６−トリメチルフェニル）−１,３−インダンジオンが刊行物 J. Economic Entomology, 66,（1973）, 584 and the laid-open application DE-A 2 361 084 から知られており、除草および殺ダニ活性が述べられている。
【００１７】
ある種の置換２−アリールシクロヘキサンジオン類が、除草、殺虫および殺ダニ特性を有することが知られている（ＵＳ−４１７５１３５、４２５６６５７、４２５６６５８、４２５６６５９、４２５７８５８、４２８３３４８、４３０３６６９、４３５１６６６、４４０９１５３、４４３６６６６、４５２６７２３、４６１３６１７、４６５９３７２、ＤＥ−Ａ２８１３３４１、並びに、Wheeler, T.N., J. Org. Chem. 44, 4906 (1979)）、ＷＯ９９／４３６４９、ＷＯ９９／４８８６９、ＷＯ９９／５５６７３、ＷＯ０１／１７９７２、ＷＯ０１／７４７７０、ＷＯ０３／０１３２４９、ＷＯ０４／０８０９６２、ＷＯ０４／１１１０４２、ＷＯ０５／０９２８９７、ＷＯ０６／０２９７９９、ＷＯ０７／０９６０５８、ＷＯ０８／０７１４０５、ＷＯ０８／１１０３０７、ＷＯ０８／１１０３０８、ＷＯ０９／０７４３１４、ＷＯ０８／１４５３３６、ＷＯ０９／０１５８８７、ＷＯ０９／０７４３１４、ＷＯ１０／０４６１９４、ＷＯ１０／０８１７５５およびＷＯ１０／０８９２１１）。
【００１８】
ある種の置換４−アリールピラゾリジン−３,５−ジオン類は、殺ダニ、殺虫および除草特性を有することが知られている（例えば、ＷＯ９２／１６５１０、ＥＰ−Ａ−５０８１２６、ＷＯ９６／１１５７４、ＷＯ９６／２１６５２、ＷＯ９９／４７５２５、ＷＯ０１／１７３５１、ＷＯ０１／１７３５２、ＷＯ０１／１７３５３、ＷＯ０１／１７９７２、ＷＯ０１／１７９７３、ＷＯ０３／０２８４６６、ＷＯ０３／０６２２４４、ＷＯ０４／０８０９６２、ＷＯ０４／１１１０４２、ＷＯ０５／００５４２８、ＷＯ０５／０１６８７３、ＷＯ０５／０９２８９７、ＷＯ０６／０２９７９９およびＷＯ０７／０９６０５８参照）。
【００１９】
ある種のテトラヒドロピリドン類は、除草特性を有することが知られている（ＪＰ０８３２５３０）。殺ダニ、殺虫および除草特性を有する特定の４−ヒドロキシテトラヒドロピリドン類も知られている（ＪＰ１１１５２２７３）。さらに、４−ヒドロキシテトラヒドロピリドン類は、殺虫剤および除草剤としてＷＯ０１／７９２０４およびＷＯ０７／０９６０５８に開示された。４−ヒドロキシキノロン類は、ＷＯ０３／０１０４５に開示されている。
【００２０】
ある種の５,６−ジヒドロピロン誘導体は、プロテアーゼ阻害剤として抗ウイルス特性を有することが知られている（ＷＯ９５／１４０１２）。さらに、４−フェニル−６−（２−フェネチル）−５,６−ジヒドロピロンは、カワラクトン（kawalactone）誘導体（Kappe et al., Arch. Pharm. 309, 558-564 (1976)）の合成から知られている。さらに、５,６−ジヒドロピロン誘導体は、中間体として知られている（White, J.D., Brenner, J.B., Deinsdale, M. J., J. Amer. Chem. Soc. 93, 281 - 282 (1971)）。作物の保護に適用される３−フェニル−５,６−ジヒドロピロン誘導体は、ＷＯ０１／９８２８８およびＷＯ０７／０９６５８に記載されている。
【００２１】
ウイルス性障害の治療用の４'−ビフェニル−置換テトロン酸誘導体は、ＷＯ２００８／０２２７２５に開示されている。
ＷＯ２００５／０８９１１８およびＷＯ２００７／０３９２８６は、一般的に、治療用の窒素性二環式構造を開示しているが、５'−ビフェニル−置換環状ケトエノール類は、具体的に言及されていない。
【００２２】
除草剤としての４−フェニル−置換［１.２］−オキサジン−３,５−ジオン類は、ＷＯ０１／１７９７２に最初に記載された。さらに、４−アシル−置換［１.２］−オキサジン−３,５−ジオン類は、殺虫剤として、しかし特に除草剤および成長調節剤として、例えば、ＥＰ−Ａ−３９４８８９；ＷＯ９２／０７８３７,ＵＳ５,７２８,８３１に、そして、除草剤および殺虫剤として、ＷＯ０３／０４８１３８に記載されている。
【００２３】
化合物Ａは、ＷＯ２００８／０６７９１０に具体的に開示されている（表１、２６頁、４行）。ＷＯ２００８／０６７９１０は、化合物Ａの治療目的への適合性を開示していない。
【００２４】
本願は、化合物Ａの治療用途に優先権を確立する。その主題が化合物Ａ単独の治療用途であるこの度の優先権を確立する出願と同時に、とりわけ、主題が数々の環状ケトエノール類の治療用途であり、出願番号ＤＥ１０２０１０００８６４４.４を有するドイツ国出願に優先権を主張するＰＣＴ出願を出願した。化合物Ａは、ＰＣＴ出願では実施例１−１１８であるが、ＤＥ１０２０１０００８６４４.４の一部ではない。
【００２５】
構造的に最も近い先行技術は、ビフェニルの外側のフェニル環でフッ素原子が欠けていることのみで化合物Ａと異なる、ＷＯ９９／４８８６９の実施例Ｉ−１−ａ−１６かもしれない。ＷＯ９９／４８８６９の実施例Ｉ−１−ａ−１６の治療用途も、ＤＥ１０２０１０００８６４４.４およびＤＥ１０２０１０００８６４４.４に優先権を主張するＰＣＴ出願の主題の一部を形成する（実施例１−２）。
【００２６】
しかしながら、構造的に最も近い先行技術は、また、ビフェニルの外側のフェニル環でフッ素原子が塩素原子で置き換えられている点で化合物Ａと異なる、ＷＯ０３／０５９０６５の実施例Ｉ−１−ａ−３１かもしれない。ＷＯ０３／０５９０６５の実施例Ｉ−１−ａ−３１の治療用途も、ＤＥ１０２０１０００８６４４.４およびＤＥ１０２０１０００８６４４.４に優先権を主張するＰＣＴ出願の主題の一部を形成する（実施例１−８１）。
【００２７】
この先行技術に基づき、本発明の目的は、障害の治療に特に有効な構造を提供することであった。
本発明による構造は、特に、腫瘍障害の予防および治療に適し、先行技術から知られている構造と比較して有利であるに違いない。
【発明の概要】
【００２８】
驚くべきことに、この度、化合物Ａ
【化１】
2014504624.tif 000002
が、障害の治療に特に適することが見いだされた。
【００２９】
ここで、殺虫剤または除草剤として知られている構造が、本願発明の目的を最大限に達成するか否か、また、それらのどれがこの目的を達成するのか、換言すると、ヒトの障害の治療に最大限使用できる構造を提供するのかは、予見できなかった。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】図１：腫瘍組織および対応する正常組織におけるＡＣＣ１発現
【図２】図２：ホルモン依存性ＭＣＦ−７乳癌異種移植モデルにおける比較例Ｃ.１の治療効力
【図３】図３：ホルモン依存性ＭＣＦ−７乳癌異種移植モデルにおける化合物Ａの治療効力
【図４】図４：化合物Ａの錠剤からの放出曲線
【発明を実施するための形態】
【００３１】
化合物Ａは、構造的に最も近い先行技術であると考え得るＷＯ９９／４８８６９の実施例Ｉ−１−ａ−１６に匹敵する酵素阻害データを有する。しかしながら、驚くべきことに、化合物Ａは、ＭＣＦ７異種移植片（zenograft）モデルにおいて、このモデルで耐容される用量では効果がない先行技術よりも治療域が広いことにより、区別される。
化合物Ａは、同様に構造的に最も近い先行技術であると考え得るＷＯ０３／０５９０６５の実施例Ｉ−１−ａ−３１よりも良好な酵素阻害データを有する。
【００３２】
殺虫剤、殺真菌剤または除草剤として知られている環状ケトエノール類の大きな群から、化合物Ａは、驚くべきことに、耐容される用量での良好な酵素阻害および／または良好なインビボ効力により、区別される。
【００３３】
本発明は、同様に、化合物Ａの生理的に許容される塩の使用も包含する。
化合物Ａの生理的に許容される塩は、例えば、そして好ましくは、アルカリ金属塩（例えばナトリウムおよびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウムおよびマグネシウム塩）、並びに、アンモニアまたは１個ないし１６個のＣ原子を有する有機アミン（例えば、そして好ましくは、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、アルギニン、リシン、エチレンジアミンおよびＮ−メチルピペリジン）から誘導されるアンモニウム塩などの、常套の塩基の塩も含む。
【００３４】
本発明は、さらに、化合物Ａおよび少なくとも１種またはそれ以上の活性化合物を含む医薬、特に、腫瘍障害の予防および／または治療用の医薬を提供する。
【００３５】
化合物Ａは、全身的および／または局所的に作用できる。この目的で、それらは、適当な方法で、例えば、経口で、非経腸で、肺に、鼻腔に、舌下に、舌に、頬側に、直腸に、皮膚に、経皮で、結膜に、耳に、または、インプラントもしくはステントとして、投与され得る。
これらの投与経路のために、化合物Ａは、適する投与形で投与され得る。
【００３６】
経口投与に適するのは、化合物Ａを迅速かつ／または修飾された形態で放出し、化合物Ａを結晶形および／または無定形および／または溶解形で含む、先行技術に準じて作用する投与形、例えば、錠剤（非被覆または被覆錠剤、例えば、本発明の化合物の放出を制御する腸溶性、遅延溶解性または不溶性被覆で被覆されたもの）、口腔で迅速に崩壊する錠剤、または、フィルム／オブラート、フィルム／凍結乾燥剤、カプセル剤（例えば、ハードゼラチンカプセルまたはソフトゼラチンカプセル）、糖衣錠、顆粒剤、ペレット剤、散剤、乳剤、懸濁剤、エアロゾル剤または液剤である。
【００３７】
非経腸投与は、吸収段階を回避して（例えば、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内）、または、吸収を含めて（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内）行い得る。非経腸投与には、適する投与形は、とりわけ、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤または滅菌散剤の形態の注射および点滴製剤である。
【００３８】
他の投与経路に適するのは、例えば、吸入用医薬形（とりわけ、粉末吸入器、噴霧器）、点鼻薬、点鼻液、点鼻スプレー；舌、舌下または頬側に適用するための錠剤、フィルム／オブラートまたはカプセル剤、坐薬、耳または眼用製剤、膣用カプセル剤、水性懸濁剤（ローション、振盪ローション）、親油性懸濁剤、軟膏、クリーム、経皮治療システム（例えば、パッチ）、ミルク、ペースト、フォーム、散布用粉末、インプラントまたはステントである。
【００３９】
化合物Ａを、上述の投与形に変換できる。これは、不活性、非毒性の、薬学的に許容される助剤と混合することにより、それ自体既知の方法で行い得る。これらの助剤には、とりわけ、担体（例えば、結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば、液体ポリエチレングリコール）、乳化剤および分散剤または湿潤剤（例えば、ドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えば、ポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えば、アルブミン）、安定化剤（例えば、アスコルビン酸などの抗酸化剤）、着色剤（例えば、酸化鉄などの無機色素）および香味および／または臭気の矯正剤が含まれる。
【００４０】
本発明は、さらに、化合物Ａを、通常は１種またはそれ以上の不活性、非毒性の薬学的に適する助剤と共に含む医薬、および、上述の目的のためのそれらの使用を提供する。
【００４１】
医薬品をもたらすための化合物Ａの製剤化は、それ自体既知の方法で、有効成分を、医薬技術において慣例の添加物を用いて、所望の投与形に変換することにより行う。
【００４２】
これに関連して用いることができる添加物は、例えば、担体物質、充填剤、崩壊剤、結合剤、保水剤、滑剤、吸収剤および吸着剤、希釈剤、溶媒、共溶媒、乳化剤、可溶化剤、矯味剤、着色剤、防腐剤、安定化剤、湿潤剤、浸透圧を変更する塩またはバッファーである。
これに関連して、Remington's Pharmaceutical Science, 15th ed. Mack Publishing Company, East Pennsylvania（1980）を参照すべきである。
【００４３】
医薬製剤は、
固体形態、例えば、錠剤、被覆錠剤、丸剤、坐薬、カプセル剤、経皮システム、または、
半固体形態、例えば、軟膏、クリーム、ゲル、坐薬、乳剤、または、
液体形態、例えば、液剤、チンキ剤、懸濁剤または乳剤
であり得る。
【００４４】
本発明に関して、添加物は、例えば、塩類、糖類（単糖類、二糖類、三糖類、オリゴ糖類および／または多糖類）、タンパク質、アミノ酸、ペプチド、脂質、蝋、油、炭化水素およびこれらの誘導体であり得、これらの添加物は、天然起源のものでも、合成または部分合成により入手されてもよい。
【００４５】
経口または経口的投与に適するのは、特に、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、トローチ剤、懸濁剤、乳剤または液剤である。非経腸投与に適するのは、特に、懸濁剤、乳剤、および、特に液剤である。
【００４６】
本発明は、ヒトの障害、特に腫瘍障害の予防および治療のための化合物Ａの使用に関する。
化合物Ａは、特に、細胞増殖および／または細胞分裂を阻害または低減するために、かつ／または、アポトーシスを誘導するために、使用できる。
【００４７】
化合物Ａは、特に、過剰増殖性障害、例えば、
−乾癬、
−ケロイドおよび他の皮膚過形成、
−良性前立腺肥大（ＢＰＨ）、
−固形腫瘍、および、
−血液腫瘍
の予防および／または治療に適する。
【００４８】
本発明に従って処置できる固形腫瘍は、例えば、乳房、呼吸管、脳、生殖器、胃腸管、尿路、眼、肝臓、皮膚、頭頸部、甲状腺、副甲状腺、骨および結合組織の腫瘍、並びに、これらの腫瘍の転移である。
【００４９】
処置できる血液腫瘍は、例えば、
−多発性骨髄腫、
−リンパ腫、または
−白血病
である。
【００５０】
処置できる乳房の腫瘍は、例えば、
−ホルモン受容体状態陽性の乳癌
−ホルモン受容体状態陰性の乳癌
−Ｈｅｒ−２陽性乳癌
−ホルモン受容体およびＨｅｒ−２陰性乳癌
−ＢＲＣＡ関連乳癌
−炎症性乳癌
である。
【００５１】
処置できる呼吸管の腫瘍は、例えば、
−非小細胞気管支癌、および
−小細胞気管支癌
である。
【００５２】
処置できる脳の腫瘍は、例えば、
−神経膠腫、
−神経膠芽腫、
−星状細胞腫、
−髄膜腫、および
−髄芽腫
である。
【００５３】
処置できる男性生殖器の腫瘍は、例えば、
−前立腺癌、
−悪性精巣腫瘍、および、
−陰茎癌
である。
【００５４】
処置できる女性生殖器の腫瘍は、例えば、
−子宮内膜癌
−子宮頸癌
−卵巣癌
−膣癌
−外陰癌
である。
【００５５】
処置できる胃腸管の腫瘍は、例えば、
−結腸直腸癌
−肛門癌
−胃癌
−膵臓癌
−食道癌
−胆嚢癌
−小腸癌
−唾液腺癌
−神経内分泌腫瘍
−胃腸間質性腫瘍
である。
【００５６】
処置できる尿路の腫瘍は、例えば、
−膀胱癌
−腎細胞癌
−腎盂および下部尿路の癌
である。
【００５７】
処置できる眼の腫瘍は、例えば、
−網膜芽細胞腫
−眼球内黒色腫
である。
【００５８】
処置できる肝臓の腫瘍は、例えば、
−肝細胞癌
−胆管細胞癌
である。
【００５９】
処置できる皮膚の腫瘍は、例えば、
−悪性黒色腫
−基底細胞腫
−棘細胞腫
−カポジ肉腫
−メルケル細胞癌
である。
【００６０】
処置できる頭頸部の腫瘍は、例えば、
−喉頭癌、
−咽頭および口腔の癌
である。
【００６１】
処置できる肉腫は、例えば、
−軟部組織肉腫
−骨肉腫
である。
【００６２】
処置できるリンパ腫は、例えば、
−非ホジキンリンパ腫
−ホジキンリンパ腫
−皮膚リンパ腫
−中枢神経系のリンパ腫
−ＡＩＤＳ関連リンパ腫
である。
【００６３】
処置できる白血病は、例えば、
−急性骨髄性白血病
−慢性骨髄性白血病
−急性リンパ性白血病
−慢性リンパ性白血病
−ヘアリーセル白血病
である。
【００６４】
有利には、化合物Ａは、乳癌、特に、ホルモン受容体陰性、ホルモン受容体陽性またはＢＲＣＡ関連乳癌、並びに、膵臓癌、腎細胞癌、肝細胞癌、悪性黒色腫および他の皮膚の腫瘍、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、胃癌および前立腺癌の予防および／または治療に使用できる。
特に有利には、化合物Ａは、乳癌、特に、ホルモン受容体陰性およびホルモン受容体陽性乳癌、並びに、膵臓癌、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、胃癌および前立腺癌の予防および／または治療に使用できる。
これらの障害は、ヒトでよく特徴解析されているが、他の哺乳動物にも存在する。
【００６５】
本願は、さらに、特に腫瘍障害の予防および／または治療用の医薬として使用するための、化合物Ａを提供する。
【００６６】
本願は、さらに、乳癌、膵臓癌、腎細胞癌、肝細胞癌、悪性黒色腫および他の皮膚の腫瘍、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、胃癌または前立腺癌の予防および／または治療のための化合物Ａを提供する。
【００６７】
本願は、有利には、乳癌、特に、ホルモン受容体陰性およびホルモン受容体陽性乳癌、並びに、膵臓癌、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、胃癌および前立腺癌の予防および／または治療のための化合物Ａを提供する。
【００６８】
本発明は、さらに、医薬を製造するための化合物Ａの使用を提供する。
本願は、さらに、腫瘍障害の予防および／または治療用の医薬を製造するための化合物の使用を提供する。
【００６９】
本願は、さらに、乳癌、膵臓癌、腎細胞癌、肝細胞癌、悪性黒色腫および他の皮膚の腫瘍、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、胃癌または前立腺癌の予防および／または治療用の医薬を製造するための化合物Ａの使用を提供する。
【００７０】
本願は、有利には、乳癌、特に、ホルモン受容体陰性およびホルモン受容体陽性乳癌、並びに、膵臓癌、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、胃癌および前立腺癌の予防および／または治療用の医薬を製造するための化合物Ａの使用を提供する。
【００７１】
本願は、さらに、腫瘍障害の予防および／または治療のための化合物の使用を提供する。
【００７２】
本願は、さらに、乳癌、膵臓癌、腎細胞癌、肝細胞癌、悪性黒色腫および他の皮膚の腫瘍、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、胃癌または前立腺癌の予防および／または治療のための化合物Ａの使用を提供する。
【００７３】
本願は、有利には、乳癌、特に、ホルモン受容体陰性およびホルモン受容体陽性乳癌、並びに、膵臓癌、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、胃癌および前立腺癌の予防および／または治療のための化合物Ａの使用を提供する。
【００７４】
本願は、さらに、乳癌、膵臓癌、腎細胞癌、肝細胞癌、悪性黒色腫および他の皮膚の腫瘍、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、胃癌または前立腺癌の予防および／または治療のための、化合物Ａを含む錠剤の形態の医薬製剤を提供する。
【００７５】
本願は、有利には、乳癌、特に、ホルモン受容体陰性およびホルモン受容体陽性乳癌、並びに、膵臓癌、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、胃癌および前立腺癌の予防および／または治療のための、化合物Ａを含む錠剤の形態の医薬製剤を提供する。
【００７６】
本発明は、さらに、増殖過程に関連する障害の処置のための化合物Ａの使用を提供する。
【００７７】
化合物Ａは、単独で、または、必要であれば、組合せが望まれず許容されない副作用を導かない限り、１種またはそれ以上の他の薬理学的に活性な物質と組み合わせて用いることができる。従って、本発明は、さらに、特に、上述の疾患の予防および／または治療のための、化合物Ａおよび１種またはそれ以上のさらなる活性化合物を含む医薬を提供する。
【００７８】
例えば、化合物Ａは、がん障害の処置用の既知の抗過増殖性、細胞増殖抑制または細胞毒性物質と組み合わせることができる。化合物Ａと、がん治療に常套の他の物質との組合せ、または、放射線療法との組合せが、特に指示される。
【００７９】
例示的に言及し得る、組合せに適する活性化合物は、以下のものである：
アフィニトール、アルデスロイキン、アレンドロン酸、アルファフェロン（alfaferone）、アリトレチノイン、アロプリノール、アロプリム（aloprim）、アロキシ、アルトレタミン、アミノグルテチミド、アミホスチン、アムルビシン、アムサクリン、アナストロゾール、アンズメト（anzmet）、アラネスプ（aranesp）、アルグラビン（arglabin）、三酸化ヒ素、アロマシン、５−アザシチジン、アザチオプリン、ＢＣＧまたはタイスＢＣＧ、ベスタチン、酢酸ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム、ベキサロテン、硫酸ブレオマイシン、ブロキシウリジン（broxuridine）、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルシトニン、キャンパス、カペシタビン、カルボプラチン、カソデックス、セフェソン（cefesone）、セルモロイキン、セルビジン（cerubidin）、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロン酸、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノキソム（daunoxome）、デカドロン、リン酸デカドロン、デルエストロゲン（delestrogen）、デニロイキンジフチトクス、デポメドロール（depomedrol）、デスロレリン（deslorelin）、デクスラゾキサン、ジエチルスチルベストロール、ジフルカン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドロナビノール、ＤＷ−１６６ＨＣ、エリガード、エリテク（elitek）、エレンス（ellence）、イメンド、エピルビシン、エポエチンアルファ、エポゲン（epogen）、エプタプラチン（eptaplatin）、エルガミソール（ergamisol）、エストラセ（estrace）、エストラジオール、リン酸エストラムスチンナトリウム、エチニルエストラジオール、エチオール（ethyol）、エチドロン酸、エトポホス（etopophos）、エトポシド、ファドロゾール、ファルストン（farstone）、フィルグラスチム、フィナステリド、フリグラスチム（fligrastim）、フロクスウリジン、フルコナゾール、フルダラビン、５−フルオロデオキシウリジン一リン酸、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルオキシメステロン、フルタミド、フォルメスタン、フォステアビン（fosteabine）、ホテムスチン、フルベストラント、ガンマガード、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、グリベック、グリアデル、ゴセレリン、塩酸グラニセトロン、ヒストレリン、ハイカムチン、ハイドロコートン、エリスロ−ヒドロキシノニルアデニン、ヒドロキシウレア、イブリツモマブチウキセタン、イダルビシン、イホスファミド、インターフェロン−アルファ、インターフェロン−アルファ−２、インターフェロン−アルファ−２α、インターフェロン−アルファ−２β、インターフェロン−アルファ−ｎ１、インターフェロン−アルファ−ｎ３、インターフェロン−ベータ、インターフェロン−ガンマ−１α、インターロイキン−２、イントロンＡ、イレッサ、イリノテカン、カイトリル、ラパチニブ、レンチナン硫酸塩、レトロゾール、ロイコボリン、リュープロリド、酢酸リュープロリド、レバミソール、レボフォリン酸（levofolic acid）カルシウム塩、レボスロイド（levothroid）、レボキシル（levoxyl）、ロムスチン、ロニダミン、マリノール、メクロレタミン、メコバラミン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファラン、メネスト、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、メトビックス（metvix）、ミルテホシン、ミノサイクリン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、モドレナル（modrenal）、マイオセット（myocet）、ネダプラチン、ニューラスタ（neulasta）、ニューメガ（neumega）、ニューポジェン、ニルタミド、ノルバデックス、ＮＳＣ−６３１５７０、ＯＣＴ−４３、オクトレオチド、オンダンセトロン塩酸塩、オラプレド（orapred）、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペジアプレド（pediapred）、ペグアスパルガーゼ、ペガシス、ペントスタチン、ピシバニール、ピロカルピン塩酸塩、ピラルビシン、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、プレドニムスチン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレマリン、プロカルバジン、プロクリット、ラルチトレキセド、ＲＤＥＡ１１９、レビフ、エチドロン酸レニウム−１８６、リツキシマブ、ロフェロン（roferon）−Ａ、ロムルチド、サラジェン、サンドスタチン、サルグラモスチム、セムスチン、シゾフィラン、ソブゾキサン、ソルメドロール、ストレプトゾシン、塩化ストロンチウム−８９、シントロイド（synthroid）、タモキシフェン、タムスロシン、タソネルミン、テストラクトン（tastolactone）、タキソテール、テセロイキン、テモゾロミド、テニポシド、プロピオン酸テストステロン、テストレド（testred）、チオグアニン、チオテパ、サイロトロピン、チルドロン酸、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレオスルファン、トレチノイン、トレキサル（trexall）、トリメチルメラミン、トリメトレキサート、酢酸トリプトレリン、パモ酸トリプトレリン、ＵＦＴ、ウリジン、バルルビシン、ベスナリノン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ビルリジン（virulizin）、ジネカルド（zinecard）、ジノスタチンスチマラマー、ゾフラン；ＡＢＩ−００７、アコルビフェン（acolbifen）、アクティミューン、アフィニタック（affinitak）、アミノプテリン、アルゾキシフェン、アソプリスニル、アタメスタン（atamestane）、アトラセンタン、ＢＡＹ４３−９００６（ソラフェニブ）、アバスチン、ＣＣＩ−７７９、ＣＤＣ−５０１、セレブレックス（celebrex）、セツキシマブ、クリスナトール（crisnatol）、酢酸シプロテロン、デシタビン、ＤＮ−１０１、ドキソルビシン−ＭＴＣ、ｄＳＬＩＭ、デュタステリド、エドテカリン（edotecarin）、エフロールニチン、エキサテカン（exatecan）、フェンレチニド、ヒスタミン二塩酸塩、ヒストレリンヒドロゲルインプラント、ホルミウム−１６６ＤＯＴＭＰ、イバンドロン酸、インターフェロン−ガンマ、イントロン−ＰＥＧ、イクサベピロン、キーホールリンペットヘモシアニン、Ｌ−６５１５８２、ランレオチド、ラソフォキシフェン、ライブラ（libra）、ロナファーニブ、ミプロキシフェン（miproxifene）、ミノドロン酸、ＭＳ−２０９、リポソームＭＴＰ−ＰＥ、ＭＸ−６、ナファレリン、ネモルビシン（nemorubicin）、ネオバスタット（neovastat）、ノラトレキセド（nolatrexed）、オブリメルセン、オンコ−ＴＣＳ、オシデム（osidem）、ポリグルタミン酸パクリタキセル、パミドロン酸二ナトリウム、ＰＮ−４０１、ＱＳ−２１、クアゼパム、Ｒ−１５４９、ラロキシフェン、ランピルナス（ranpirnas）、１３−シス−レチノイン酸、サトラプラチン、セオカルシトール（seocalcitol）、Ｔ−１３８０６７、タルセバ、タキソプレキシン（taxoprexin）、チモシン−アルファ−１、チアゾフリン、ティピファニブ、チラパザミン、ＴＬＫ−２８６、トレミフェン、ｔｒａｎｓＭＩＤ−１０７Ｒ、バルスポダル（valspodar）、バプレオチド（vapreotide）、バタラニブ、ベルテポルフィン、ビンフルニン、Ｚ−１００、ゾレドロン酸およびこれらの組み合わせ。
【００８０】
好ましい実施態様では、化合物Ａを、抗過剰増殖剤と組み合わせることができ、それは、例えば以下のものであり得るが、このリストは決定的なものではない：
アミノグルテチミド、Ｌ−アスパラギナーゼ、アザチオプリン、５−アザシチジン、ブレオマイシン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、コラスパーゼ（colaspase）、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエチルスチルベストロール、２',２'−ジフルオロデオキシシチジン、ドセタキセル、ドキソルビシン（アドリアマイシン（adriamycine））、エピルビシン、エポチロンおよびその誘導体、エリスロ−ヒドロキシノニルアデニン、エチニルエストラジオール、エトポシド、リン酸フルダラビン、５−フルオロデオキシウリジン、５−フルオロデオキシウリジン一リン酸、５−フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、ヘキサメチルメラミン、ヒドロキシウレア、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、イダルビシン、イホスファミド、インターフェロン、イリノテカン、ロイコボリン、ロムスチン、メクロレタミン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファラン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、パクリタキセル、ペントスタチン、Ｎ−ホスホノアセチル−Ｌ−アスパラギン酸（ＰＡＬＡ）、プリカマイシン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プロカルバジン、ラロキシフェン、セムスチン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テニポシド、プロピオン酸テストステロン、チオグアニン、チオテパ、トポテカン、トリメチルメラミン、ウリジン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン。
【００８１】
化合物Ａは、また、生物学的治療剤、例えば抗体（例えば、アバスチン、リツキサン、アービタックス、ハーセプチン）および組換えタンパク質と、非常に有望に組み合わせることができる。
【００８２】
化合物Ａは、また、例えば、アバスチン、アキシチニブ、レゴラフェニブ、レセンチン（recentin）、ソラフェニブまたはスニチニブによる、血管新生を対象とする他の治療との組合せで、肯定的な効果を達成できる。プロテアソームおよびｍＴＯＲの阻害剤、および、抗ホルモン薬およびステロイド系代謝酵素阻害剤との組合せは、それらの好都合な副作用のプロフィールのために、特に適する。
【００８３】
一般的に、化合物Ａと細胞分裂阻害または細胞傷害作用を有する他の物質との組合せにより、以下の目的を達成できる：
・個々の活性化合物による処置と比較して改善された、腫瘍の成長の減速、その大きさの減少またはその完全な除去の活性；
・単剤療法よりも少ない用量で使用される化学療法剤を用いる可能性；
・個別投与と比較して少ない副作用を伴う、より耐容される治療の可能性；
・より広い範囲の腫瘍疾患の処置の可能性；
・より高率の治療に対する応答の達成；
・今日の標準的な治療と比較して、より長い患者の生存時間。
【００８４】
化合物Ａは、さらに、放射線療法および／または外科的介入と組み合わせて用いることもできる。
【実施例】
【００８５】
実験の部
１．比較例
表Ｖは、出願人が最も近い先行技術であると考えるＷＯ９９／４８８６９１の実施例Ｉ−１−ａ−１６およびＷＯ０３／０５９０６５の実施例Ｉ−１−ａ−３１を示す。
表Ｖ
【表１】
2014504624.tif 000003
【００８６】
ＬＣ−ＭＳおよびＨＰＬＣの方法
方法１（ＵＰＬＣ−ＭＳ）
装置: Waters Acquity UPLC-MS SQD 3001；カラム：Acquity UPLC BEH C18 1.7 50x2.1mm；移動相Ａ：水＋０.１％ギ酸、移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：０−１.６分１−９９％Ｂ、１.６−２.０分９９％Ｂ；流速０.８ｍｌ／分；温度：６０℃；注入：２μｌ；ＤＡＤスキャン：２１０−４００ｎＭ。
【００８７】
方法２（ＵＰＬＣ−ＭＳ）
装置: Waters Acquity UPLC-MS ZQ4000；カラム：Acquity UPLC BEH C18 1.7 50x2.1mm；移動相Ａ：水＋０.０５％ギ酸、移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.０５％ギ酸；勾配：０−１.６分１−９９％Ｂ,１.６−２.０分９９％Ｂ；流速０.８ｍｌ／分；温度：６０℃；注入：２μｌ；ＤＡＤスキャン：２１０−４００ｎＭ。
【００８８】
方法３（ＵＰＬＣ−ＭＳ）：
装置：Waters Acquity UPLC-MS SQD 3001；カラム：Acquity UPLC BEH C18 1.7 50x2.1mm；移動相Ａ：水＋０.１％ギ酸、移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：０−１.６分１−９９％Ｂ,１.６−２.０分９９％Ｂ；流速０.８ｍｌ／分；温度：６０℃；注入：２μｌ；ＤＡＤスキャン：２１０−４００ｎｍ。
【００８９】
比較例Ｃ.１の製造
ａ）中間体
中間体Ｃ.１.１
（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチルクロライド
【化２】
2014504624.tif 000004
（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）酢酸（ＥＰ２０２９５３１Ａ１およびＵＳ２００９／２９８８２８Ａ１）５.００ｇ（１９.１８ｍｍｏｌ）を、塩化チオニル３６.５１ｇ（３０６.８４ｍｍｏｌ）に溶解した。反応混合物を８０℃で４時間撹拌し、次いで、減圧下に濃縮した。真空下で乾燥させ、表題化合物５.４ｇ（理論値の１００％）を褐色がかった油状物として得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3): δ [ppm] = 2.36 (s, 3H), 4.22 (s, 2H), 7.29 (d, 1H), 7.35 - 7.55 (m, 6H).
【００９０】
中間体Ｃ.１.２
メチル−ｃｉｓ−１−｛［（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチル］アミノ｝−４−メトキシシクロヘキサン−カルボキシレート
【化３】
2014504624.tif 000005
室温で、メチル−ｃｉｓ−１−アミノ−４−メトキシシクロヘキサンカルボキシレート塩酸塩（ＥＰ１７９１８１６Ａ１およびＷＯ２００６／２９７９９Ａ１）５.４１ｇ（２４.２ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ１４.８ｍｇ（１.２１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン８.４ｍｌ（６０.５ｍｍｏｌ）を、窒素下で、ジクロロメタン１１８ｍｌに溶解した。次いで、ジクロロメタン６０ｍｌ中の６.７５ｇ（２４.２ｍｍｏｌ）の中間体Ｃ.１.１の溶液を、滴下して添加した。得られた反応混合物を、室温で終夜撹拌した。後処理に、混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を水性飽和重炭酸ナトリウム溶液および５％濃度のクエン酸水溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、次いで、濾過し、濃縮した。これにより、表題化合物１０.９ｇを得、これをさらにシリカゲルクロマトグラフィー（移動相：ヘキサン／酢酸エチル勾配）により精製した。
1H-NMR (300MHz, DMSO-d6): d [ppm] = 1.31-1.47 (m, 2H), 1.60-1.73 (m, 2H), 1.75-1.86 (m, 2H), 2.00-2.11 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 3.09-3.20 (m, 1H), 3.21 (s, 3H), 3.51 (s, 3H), 3.58 (s, 2H), 7.23 (d, 1H), 7.43 (dd, 1H), 7.46-7.54 (m, 3H), 7.61-7.68 (m, 2H), 8.31 (s, 1H).
LC-MS (方法 1): Rt = 1.38 分; MS (ESIpos): m/z = 430 [M+H]+.
【００９１】
ｂ）最終生成物Ｃ.１
（５ｓ,８ｓ）−３−（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−１−アザスピロ［４.５］デカ−３−エン−２−オン
【化４】
2014504624.tif 000006
室温で、窒素下で、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド４.６３ｇ（４１.３ｍｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド１０３ｍｌ中の８.８７ｇ（２０.６ｍｍｏｌ）の中間体Ｃ.１.２に添加した。反応混合物を８０℃で６０分間撹拌した。後処理に、冷却した反応混合物を氷水１ｌに注ぎ、１Ｎ水性塩酸を使用してｐＨ３に調節し、３時間撹拌し、沈殿を吸引濾過し、水で洗浄し、乾燥させた。粗生成物を、ジエチルエーテルと終夜撹拌し、濾過し、乾燥させることにより、さらに精製した。これにより、表題化合物７.７５ｇ（理論値の９５％）を得た。
1H-NMR (300MHz, DMSO-d6): d [ppm] = 1.39-1.62 (m, 4H), 1.84-2.05 (m, 4H), 2.18 (s, 3H), 3.07-3.20 (m, 1H), 3.26 (s, 3H), 7.30 (d, 1H), 7.34 (d, 1H), 7.45-7.53 (m, 3H), 7.62-7.68 (m, 2H), 8.18 (br. s, 1H), 10.82 (br. s, 1H).
LC-MS (方法 3): Rt = 1.19 min; MS (ESIpos): m/z = 398 [M+H]+.
【００９２】
比較例Ｃ.２
比較例Ｃ.２は、ＷＯ０３／０５９０６５の実施例Ｉ−１−ａ−３１である。
ＷＯ０３／０５９０６５の実施例Ｉ−１−ａ−３１の治療用途も、ＤＥ１０２０１０００８６４４.４およびＤＥ１０２０１０００８６４４.４の優先権を主張するＰＣＴ出願の主題の一部である（実施例１−８１）。
【００９３】
２．化合物Ａ
化合物Ａの製造
ａ）中間体
中間体Ａ.１
（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）酢酸
【化５】
2014504624.tif 000007
アルゴン下、（４−クロロ−３−フルオロフェニル）ボロン酸３３.５ｇ（１９２ｍｍｏｌ）を、脱気した１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液４３７ｍｌ（４３７ｍｍｏｌ）、脱気した水１６０ｍｌおよび脱気したテトラヒドロフラン１６０ｍｌの混合物中の（５−ブロモ−２−メチルフェニル）酢酸（ＥＰ１７９１８１６およびＷＯ２００６／２９７９９）４０.０ｇ（１７５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を１０分間撹拌し、トリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスホニウムテトラフルオロボレート５０７ｍｇ（１.７５ｍｍｏｌ）およびパラジウム（ＩＩ）アセチルアセトネート５３２ｍｇ（１.７５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２０時間撹拌した。次いで、トルエンおよび水を添加し、濃塩酸水溶液を使用してｐＨを１−２に調節し、混合物を１０分間撹拌し、相を分離し、水相をトルエンで２回抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をｎ−ヘキサン／ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルの６／１混合物３００ｍｌ中で３０分間撹拌し、吸引濾過し、ｎ−ヘキサンで洗浄し、減圧下で乾燥させた。これにより、表題化合物３８.０ｇ（理論値の７８％）を得た。
1H-NMR (300MHz, DMSO-d6): d [ppm] = 2.27 (s, 3H), 3.67 (s, 2H), 7.27 (d, 1H), 7.49-7.59 (m, 3H), 7.61-7.75 (m, 2H), 12.4 (s, 1H).
LC-MS (方法 1): Rt = 1.31 min; MS (ESIneg): m/z = 277 [M+H]+.
【００９４】
中間体Ａ.２
メチル−ｃｉｓ−１−｛［（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチル］アミノ｝−４−メトキシシクロヘキサンカルボキシレート
【化６】
2014504624.tif 000008
１０.０ｇ（３５.９ｍｍｏｌ）の中間体Ａ.１を、塩化チオニル１４.９ｍｌ（２０５ｍｍｏｌ）に溶解した。反応混合物を９０℃で１時間撹拌し、次いで濃縮した。これにより、（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチルクロライド１０.８ｇ（理論値の１００％）を得た。（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチルクロライド１０.６ｇ（３５.７ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル１２０ｍｌに溶解した。メチル−ｃｉｓ−１−アミノ−４−メトキシシクロヘキサンカルボキシレート塩酸塩（ＥＰ１７９１８１６およびＷＯ２００６／２９７９９に記載）１２.０ｇ（５３.７ｍｍｏｌ）を酢酸エチルに取り、飽和重炭酸ナトリウム水溶液を添加した。相を分離し、水相を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、メチル−ｃｉｓ−１−アミノ−４−メトキシ−シクロヘキサンカルボキシレート８.５０ｇを得た。炭酸カリウム１７.３ｇ（１２５ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル１２０ｍｌ中のメチル−ｃｉｓ−１−アミノ−４−メトキシシクロヘキサンカルボキシレート８.０２ｇ（４２.８ｍｍｏｌ）に添加した。氷冷しながら、酸塩化物溶液を滴下して添加し、混合物を室温で終夜撹拌した。次いで、混合物を濃縮し、水を残渣に添加し、混合物をジクロロメタンで抽出し、合わせた有機相を１Ｎ塩酸水溶液および飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、表題化合物１５.７ｇ（理論値の９８％）を得、これをさらに精製せずに反応させた。
1H-NMR (300MHz, DMSO-d6): d [ppm] = 1.30-1.47 (m, 2H), 1.60-1.74 (m, 2H), 1.75-1.85 (m, 2H), 1.99-2.11 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 3.09-3.20 (m, 1H), 3.21 (s, 3H), 3.52 (s, 3H), 3.58 (s, 2H), 7.24 (d, 1H), 7.46-7.55 (m, 2H), 7.57 (d, 1H), 7.61-7.72 (m, 2H), 8.30 (s, 1H).
LC-MS (方法 2): Rt = 1.36 分; MS (ESIpos): m/z = 448 [M+H]+.
【００９５】
ｂ）最終生成物化合物Ａ
（５ｓ,８ｓ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−１−アザスピロ［４.５］デカ−３−エン−２−オン
【化７】
2014504624.tif 000009
窒素下で、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド４.３２ｇ（３８.５ｍｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド６０ｍｌ中の１５.７ｇ（３５.０ｍｍｏｌ）の中間体Ａ.２に添加した。反応混合物を室温で２０分間撹拌した。次いで、反応混合物を氷水に添加し、１Ｎ塩酸水溶液１６０ｍｌを滴下して添加し、混合物を３０分間撹拌し、沈殿を吸引濾過し、水で洗浄し、乾燥させた。これにより、表題化合物１４.２ｇ（理論値の９７％）を得た。
1H-NMR (300MHz, DMSO-d6): d [ppm] = 1.40-1.62 (m, 4H), 1.85-2.04 (m, 4H), 2.19 (s, 3H), 3.07-3.20 (m, 1H), 3.27 (s, 3H), 7.31 (d, 1H), 7.39 (d, 1H), 7.48-7.57 (m, 2H), 7.60-7.73 (m, 2H), 8.20 (s, 1H), 10.82 (s, 1H).
LC-MS (方法 1): Rt = 1.22 min; MS (ESIpos): m/z = 416 [M+H]+.
【００９６】
３．アッセイ
ヒトＡＣＣ１酵素アッセイ
２つの異なるアッセイ（Ａ１およびＢ１）を使用して、ＡＣＣ１阻害データを得た。
【００９７】
アッセイＡ１（＝（Ａ１））
本発明の物質のアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ１（ＡＣＣ１）に関する阻害活性を、以下の段落に記載のＡＣＣ１アッセイを使用して測定した。このアッセイの基本原理は、ＨＴＲＦ（登録商標）を基礎とする競合イムノアッセイ（HTRF = Homogeneous Time Resolved Fluorescence（均一時間分解蛍光））を利用する、副生成物として形成されるアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）の測定である。
【００９８】
使用した酵素は、バキュロウイルスで形質移入された昆虫細胞（Ｈｉ５）で発現され、抗ＦＬＡＧ（登録商標）Ｍ２親和性ゲル（Sigma-Aldrich）での親和性クロマトグラフィーで精製された、Ｃ末端にＦＬＡＧタグを付加した組み換えヒトＡＣＣ１（GenBank 受託番号ＮＭ＿１９８８３４、アミノ酸３９−最後）であった。あるいは、BPS Bioscience（San Diego, CA, カタログ番号５０２００、アミノ酸３９−最後）の市販のＣ末端にＨｉｓタグを付加したＡＣＣ１を使用することが可能である。アッセイのために、ＤＭＳＯ中の試験物質の１００倍濃縮溶液５０ｎｌを、黒色低容積３８４ウェルマイクロタイタープレート（Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany）にピペットで加え、アッセイバッファー［５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ ｐＨ７.５、１２ｍＭ重炭酸ナトリウム、２ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ｍＭクエン酸カリウム、０.００５％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）］中のＡＣＣ１溶液２μｌを添加し、混合物を１５分間インキュベートして、酵素反応に先立ち物質を酵素に予め結合させた。次いで、アッセイバッファー中のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ、８３.５μＭ⇒５μｌのアッセイ体積中の最終濃度は５０μＭである、Amersham Pharmacia Biotech # 27-2056-01）およびアセチル−ＣｏＡ（３３.４μＭ⇒５μｌのアッセイ体積中の最終濃度は２０μＭである、Roche Bioscience #10101893001）の溶液３μｌの添加により酵素反応を開始させ、得られた混合物を２２℃で２０分間の反応時間にわたりインキュベートした。ＡＣＣ１の濃度を各酵素活性に対して調節し、アッセイが線形の範囲で実施されるように設定した。典型的な濃度は、２.５ｎｇ／μｌの範囲であった。
【００９９】
ＥＤＴＡを含有するＨＴＲＦ（登録商標）Transscreener（商標）ＡＤＰ検出バッファー（ＨＴＲＦ（登録商標）Transscreener（商標）ＡＤＰキット中に含まれる、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７.０、６０ｍＭ ＥＤＴＡ、０.１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ、０.０２％アジ化ナトリウム、４００ｍＭフッ化カリウム）中のｄ２で標識されたＡＤＰ（ＨＴＲＦ（登録商標）Transscreener（商標）ＡＤＰキット、Cis biointernational, Marcoule, France）の溶液２.５μｌおよびＨＴＲＦ（登録商標）Transscreener（商標）ＡＤＰ検出バッファー中のユーロピウムクリプテートで標識された抗ＡＤＰ抗体（ＨＴＲＦ（登録商標）Transscreener（商標）ＡＤＰキット）の溶液２.５μｌの連続的添加により、反応を停止させた。
【０１００】
得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートし、ユーロピウムクリプテートで標識された抗ＡＤＰ抗体を、酵素反応により形成されたＡＤＰおよびｄ２で標識されたＡＤＰに結合させた。次いで、ユーロピウムクリプテートからｄ２への共鳴エネルギー移動を測定することにより、ｄ２で標識されたＡＤＰおよびユーロピウムクリプテートで標識された抗ＡＤＰ抗体の複合体の量を測定した。この目的のために、３５０ｎｍでの励起後の６２０ｎｍおよび６６５ｎｍの蛍光の放出を、ＨＴＲＦ測定装置、例えば、Rubystar または Pherastar（両方とも BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany）で測定した。６６５ｎｍおよび６２２ｎｍでの放出の比を、ｄ２で標識されたＡＤＰとユーロピウムクリプテートで標識された抗ＡＤＰ抗体の複合体の量の測定値として、従って、間接的に、酵素反応で形成された非標識のＡＤＰの量の測定値として取った（６６５ｎｍおよび６２２ｎｍでの放出の比が高い⇔ｄ２で標識されたＡＤＰとユーロピウムクリプテートで標識された抗ＡＤＰ抗体の複合体が多い⇔ＡＤＰが少ない）。データを標準化した（阻害剤なしでの酵素反応＝０％阻害、すべての他のアッセイ成分、しかし、酵素なし＝１００％阻害）。試験物質を、通常、同じマイクロタイタープレートで、２０μＭないし１ｎＭの範囲の１０種の異なる濃度（２０μＭ、６.７μＭ、２.２μＭ、０.７４μＭ、０.２５μＭ、８２ｎＭ、２７ｎＭ、９.２ｎＭ、３.１ｎＭおよび１ｎＭ、希釈系列は、アッセイに先立ち、１００倍濃縮溶液をベースとして、連続１：３希釈により調製した）で、各濃度で２つ複製して試験し、自家のソフトウェアを使用して、４パラメーターフィットでＩＣ５０値を算出した。
【０１０１】
アッセイＢ１（＝（Ｂ１））
本発明の物質のｈＡＣＣ１−阻害作用を、以下の段落に記載するｈＡＣＣ１アッセイで測定した。
本質的に、酵素反応の副生成物として形成されるアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）を、Promega のＡＤＰ−Ｇｌｏ（商標）検出システムを使用して定量することにより、酵素活性を測定する。この試験では、最初に酵素反応で消費されなかったアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を、アデニル酸シクラーゼ（「ＡＤＰ−ＧＬＯ試薬」）によりｃＡＭＰに定量的に変換し、次いで、アデニル酸シクラーゼを停止させ、続いて、（「キナーゼ検出試薬」）形成されたＡＤＰをＡＴＰに変換し、それを、ルシフェラーゼをベースとする反応でグロー発光シグナルに変換する。
【０１０２】
使用した酵素は、バキュロウイルスに感染した昆虫細胞（Ｈｉ５）で発現され、抗ＦＬＡＧ親和性クロマトグラフィーで精製された、Ｃ末端にＦＬＡＧタグを付加した組み換えヒトＡＣＣ１（アセチル−コエンザイムＡカルボキシラーゼアルファトランスクリプトバリアント１）（GenBank 受託番号ＮＭ＿１９８８３４）（アミノ酸３９−最後）であった。
【０１０３】
アッセイのために、ＤＭＳＯ中の試験物質の１００倍濃縮溶液５０ｎｌを、白色低容積３８４ウェルマイクロタイタープレート（Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany）にピペットで加え、アッセイバッファー［５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ ｐＨ７.５、２ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ｍＭクエン酸カリウム、１２ｍＭ ＮａＨＣＯ３、２ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ）、０.００５％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）］中のｈＡＣＣ１溶液２.５μｌを添加し、混合物を１５分間インキュベートして、酵素反応に先立ち物質を酵素に予め結合させた。次いで、アッセイバッファー中のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ、１００μＭ⇒５μｌのアッセイ体積中の最終濃度：５０μＭ）およびアセチル−ＣｏＡ（２０μＭ⇒５μｌのアッセイ体積中の最終濃度：１０μＭ）の溶液２.５μｌの添加により酵素反応を開始し、得られた混合物を２２℃で４５分間の反応時間にわたりインキュベートした。ｈＡＣＣ１の濃度を各酵素活性に適合させ、アッセイが線形の範囲で行われるように調節した。典型的な濃度は、１.７５ｎｇ／μｌの範囲であった。「ＡＤＰ−ＧＬＯ試薬」（１：１.５倍希釈）２.５μｌの添加により反応を停止させ、得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートし、未反応のＡＴＰを完全にｃＡＭＰに変換した。次いで、「キナーゼ検出試薬」（製造業者の推奨より１.２倍濃い）２.５μｌを添加し、得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートし、次いで、適当な測定装置（Perkin-Elmer の Viewlux または Topcount、あるいは BMG Labtechnologies の Pherastar）を使用して発光を測定した。放出された光の量を、形成されたＡＤＰの量の測定値として、従って、ｈＡＣＣ１の酵素活性として取った。データを標準化した（阻害剤なしでの酵素反応＝０％阻害、すべての他のアッセイ成分、しかし、酵素なし＝１００％阻害）。試験物質を、通常、同じマイクロタイタープレートで、２０μＭないし１ｎＭの範囲の１０種の異なる濃度（２０μＭ、６.７μＭ、２.２μＭ、０.７４μＭ、０.２５μＭ、８２ｎＭ、２７ｎＭ、９.２ｎＭ、３.１ｎＭおよび１ｎＭ、希釈系列は、アッセイの前に、１００倍濃縮溶液をベースとして、連続１：３希釈により調製した）で、各濃度で２つ複製して試験し、自家のソフトウェアを使用して、４パラメーターフィットでＩＣ５０値を算出した。
【０１０４】
ヒトＡＣＣ２酵素アッセイ
２つの異なるアッセイ（Ａ２およびＢ２）を使用して、ＡＣＣ２阻害データを得た。
【０１０５】
アッセイＡ２（＝（Ａ２））
本発明の物質のアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ２（ＡＣＣ２）に関する阻害活性を、以下の段落に記載のＡＣＣ２アッセイを使用して測定した。このアッセイの基本原理は、ＨＴＲＦ（登録商標）を基礎とする競合イムノアッセイ（HTRF = Homogeneous Time Resolved Fluorescence（均一時間分解蛍光））を利用する、副生成物として形成されるアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）の測定である。
【０１０６】
使用した酵素は、BPS Bioscience から購入できる、Ｃ末端にＨｉｓタグを付加されたＡＣＣ２であった（San Diego, CA, カタログ番号５０２０１、アミノ酸３９−最後、バキュロウイルスで形質移入されたＳｆ９昆虫細胞で発現、Ｎｉ−ＮＴＡ親和性クロマトグラフィーにより精製）。
【０１０７】
アッセイのために、ＤＭＳＯ中の試験物質の１００倍濃縮溶液５０ｎｌを、黒色低容積３８４ウェルマイクロタイタープレート（Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany）にピペットで加え、アッセイバッファー［５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ ｐＨ７.５、１２ｍＭ重炭酸ナトリウム、２ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ｍＭクエン酸カリウム、０.００５％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）］中のＡＣＣ２溶液２μｌを添加し、混合物を１５分間インキュベートして、酵素反応に先立ち物質を酵素に予め結合させた。次いで、アッセイバッファー中のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ、８３.５μＭ⇒５μｌのアッセイ体積中の最終濃度は５０μＭである、Amersham Pharmacia Biotech # 27-2056-01）およびアセチル−ＣｏＡ（３３.４μＭ⇒５μｌのアッセイ体積中の最終濃度は２０μＭである、Roche Bioscience #10101893001）の溶液３μｌの添加により酵素反応を開始し、得られた混合物を２２℃で２０分間の反応時間にわたりインキュベートした。ＡＣＣ２の濃度を各酵素活性に対して調節し、アッセイが線形の範囲で実施されるように設定した。典型的な濃度は、０.６ｎｇ／μｌの範囲であった。
【０１０８】
ＥＤＴＡを含有するＨＴＲＦ（登録商標）Transscreener（商標）ＡＤＰ検出バッファー（ＨＴＲＦ（登録商標）Transscreener（商標）ＡＤＰキット中に含まれる、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７.０、６０ｍＭ ＥＤＴＡ、０.１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ、０.０２％アジ化ナトリウム、４００ｍＭフッ化カリウム）中のｄ２で標識されたＡＤＰ（ＨＴＲＦ（登録商標）Transscreener（商標）ＡＤＰキット、Cis biointernational, Marcoule, France）の溶液２.５μｌおよびＨＴＲＦ（登録商標）Transscreener（商標）ＡＤＰ検出バッファー中のユーロピウムクリプテートで標識された抗ＡＤＰ抗体（ＨＴＲＦ（登録商標）Transscreener（商標）ＡＤＰキット）の溶液２.５μｌの連続的添加により、反応を停止させた。
【０１０９】
得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートし、ユーロピウムクリプテートで標識された抗ＡＤＰ抗体を、酵素反応により形成されたＡＤＰおよびｄ２で標識されたＡＤＰに結合させた。次いで、ユーロピウムクリプテートからｄ２への共鳴エネルギー移動を測定することにより、ｄ２で標識されたＡＤＰおよびユーロピウムクリプテートで標識された抗ＡＤＰ抗体の複合体の量を測定した。この目的のために、３５０ｎｍでの励起後の６２０ｎｍおよび６６５ｎｍの蛍光の放出を、ＨＴＲＦ測定装置、例えば、Rubystar または Pherastar（両方とも BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany）で測定した。６６５ｎｍおよび６２２ｎｍでの放出の比を、ｄ２で標識されたＡＤＰとユーロピウムクリプテートで標識された抗ＡＤＰ抗体の複合体の量の測定値として、従って、間接的に、酵素反応で形成された非標識のＡＤＰの量の測定値として取った（６６５ｎｍおよび６２２ｎｍでの放出の比が高い⇔ｄ２で標識されたＡＤＰとユーロピウムクリプテートで標識された抗ＡＤＰ抗体の複合体が多い⇔ＡＤＰが少ない）。データを標準化した（阻害剤なしでの酵素反応＝０％阻害、すべての他のアッセイ成分、しかし、酵素なし＝１００％阻害）。試験物質を、通常、同じマイクロタイタープレートで、２０μＭないし１ｎＭの範囲の１０種の異なる濃度（２０μＭ、６.７μＭ、２.２μＭ、０.７４μＭ、０.２５μＭ、８２ｎＭ、２７ｎＭ、９.２ｎＭ、３.１ｎＭおよび１ｎＭ、希釈系列は、アッセイに先立ち、１００倍濃縮溶液をベースとして、連続１：３希釈により調製した）で、各濃度で２つ複製して試験し、自家のソフトウェアを使用して、４パラメーターフィットでＩＣ５０値を算出した。
【０１１０】
アッセイＢ２（＝（Ｂ２））
本発明の物質のｈＡＣＣ２−阻害作用を、以下の段落に記載するｈＡＣＣ２アッセイで測定した。
本質的に、酵素反応の副生成物として形成されるアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）を、Promega のＡＤＰ−Ｇｌｏ（商標）検出システムを使用して定量することにより、酵素活性を測定する。この試験では、最初に酵素反応で消費されなかったアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を、アデニル酸シクラーゼ（「ＡＤＰ−ＧＬＯ試薬」）によりｃＡＭＰに定量的に変換し、次いで、アデニル酸シクラーゼを停止させ、続いて、（「キナーゼ検出試薬」）形成されたＡＤＰをＡＴＰに変換し、それを、ルシフェラーゼをベースとする反応でグロー発光シグナルに変換する。
【０１１１】
使用した酵素は、バキュロウイルスに感染した昆虫細胞（Ｈｉ５）で発現され、抗ＦＬＡＧ親和性クロマトグラフィーで精製された、Ｃ末端にＦＬＡＧタグを付加した組み換えヒトＡＣＣ２（アセチル−コエンザイムＡカルボキシラーゼ２）（GenBank 受託番号ＮＰ＿００１０８４）（アミノ酸２７−最後）であった。
【０１１２】
アッセイのために、ＤＭＳＯ中の試験物質の１００倍濃縮溶液５０ｎｌを、白色低容積３８４ウェルマイクロタイタープレート（Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany）にピペットで加え、アッセイバッファー［５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ ｐＨ７.５、２ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ｍＭクエン酸カリウム、１２ｍＭ ＮａＨＣＯ３、２ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ）、０.００５％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）］中のｈＡＣＣ２溶液２.５μｌを添加し、混合物を１５分間インキュベートして、酵素反応に先立ち物質を酵素に予め結合させた。次いで、アッセイバッファー中のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ、１００μＭ⇒５μｌのアッセイ体積中の最終濃度：５０μＭ）およびアセチル−ＣｏＡ（２０μＭ⇒５μｌのアッセイ体積中の最終濃度：１０μＭ）の溶液２.５μｌの添加により酵素反応を開始させ、得られた混合物を２２℃で４５分間の反応時間にわたりインキュベートした。ｈＡＣＣ２の濃度を各酵素活性に適合させ、アッセイが線形の範囲で行われるように調節した。典型的な濃度は、２ｎｇ／μｌの範囲であった。「ＡＤＰ−ＧＬＯ試薬」（１：１.５倍希釈）２.５μｌの添加により反応を停止させ、得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートし、未反応のＡＴＰを完全にｃＡＭＰに変換した。次いで、「キナーゼ検出試薬」（製造業者の推奨より１.２倍濃い）２.５μｌを添加し、得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートし、次いで、適当な測定装置（Perkin-Elmer の Viewlux または Topcount、あるいは BMG Labtechnologies の Pherastar）を使用して発光を測定した。放出された光の量を、形成されたＡＤＰの量の測定値として、従って、ｈＡＣＣ２の酵素活性として取った。データを標準化した（阻害剤なしでの酵素反応＝０％阻害、すべての他のアッセイ成分、しかし、酵素なし＝１００％阻害）。試験物質を、通常、同じマイクロタイタープレートで、２０μＭないし１ｎＭの範囲の１０種の異なる濃度（２０μＭ、６.７μＭ、２.２μＭ、０.７４μＭ、０.２５μＭ、８２ｎＭ、２７ｎＭ、９.２ｎＭ、３.１ｎＭおよび１ｎＭ、希釈系列は、アッセイの前に、１００倍濃縮溶液をベースとして、連続１：３希釈により調製した）で、各濃度で２つ複製して試験し、自家のソフトウェアを使用して、４パラメーターフィットでＩＣ５０値を算出した。
【０１１３】
非ヒトＡＣＣａｓｅアッセイ
室温で、透明３８４ウェルマイクロタイタープレート中で、アッセイを実施した。それは、ＡＣＣａｓｅ反応でＡＴＰから放出される無機リン酸を測定した。
試験混合物は、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ８.３、５０ｍＭ ＫＣｌ、２.５ｍＭ ＭｇＣｌ２、０.５ｍＭ ＡＴＰ、０.８ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ）、３０ｍＭ ＮａＨＣＯ３、０.１ｍＭアセチル−ＣｏＡ、０.０４％ウシ血清アルブミンおよび部分的に精製されたＡＣＣａｓｅ酵素０.４μｇを、最終体積４０μｌ中に含有した。４５分間のインキュベーション後、マラカイトグリーン溶液１５０μｌで反応を停止させ、６２０での吸光を３０分間に読み取った。
【０１１４】
蒸留水中の０.６ｍＭ ＭＧ−ＨＣｌ溶液３部を、４Ｍ ＨＣｌ中の８.５ｍＭモリブデン酸アンモニウム１部と混合することにより、マラカイトグリーン（ＭＧ）溶液を調製した。この溶液を３０分間静置した。０.４５μｍポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）フィルターによる濾過後、蒸留水中のＴｒｉｔｏｎＸ−１００（１.５％）０.１部を添加した。
【０１１５】
播種後９日目のエンバク実生からＡＣＣａｓｅ酵素を抽出し、０−４０％硫酸アンモニウムによる沈降と、続くＱ−セファロースでのイオン交換クロマトグラフィーにより、部分的に精製した。
【０１１６】
作用様式の実験
ＭＣＦ−７モデルで活性を測定するのに先立ち、試験物質のいくつかを、「作用様式」実験で調べた。この実験の原理は、生体で経口投与後にＡＣＣ１および／またはＡＣＣ２を阻害できる試験物質の短期適用が、腫瘍のマロニル−ＣｏＡを減少させることである。この目的で、この実験では、２百万個のヒトＭＣＦ−７乳癌細胞を雌のヌードマウス（ＮＭＲＩ−ヌード（nu/nu）マウス、Taconic M&B A/S、１日前に、少なくとも６０日間にわたるエストロゲン放出用のペレットを投与）に皮下注射した。一度腫瘍が約６０−７０ｍｍ２の面積に拡大したら、試験物質を１−３日間にわたり経口投与し、決められた時点で、腫瘍内のマロニル−ＣｏＡ含有量を測定し、媒体の対照と比較した。この方法は、Anal Chem. 2008 Aug 1;80（15）:5736-42. Epub 2008 Jul 9. に記載されている。
【０１１７】
細胞アッセイ
本発明に従い、細胞をベースとするアッセイで、これらの物質の腫瘍細胞増殖を阻害する能力について、これらの物質との９６時間のインキュベーション後に物質を試験した。細胞の生存能を、CellTiter-Glo（登録商標）発光細胞生存能アッセイ（Promega）を使用して試験した。細胞を、細胞２０００−５０００個／ウェル（細胞株による）の密度で、増殖培地１００μｌ中、９６ウェルマイクロタイタープレートに播いた。調べた各細胞株について、細胞を別個のプレートに播き、ｔ＝０時間およびｔ＝９６時間で発光を測定した。終夜３７℃でインキュベートした後、ｔ＝０サンプルの発光の値を測定した。ｔ＝９６時間用の投与プレートを、増殖培地で希釈した物質で処理した。次いで、細胞を３７℃で９６時間インキュベートし、ｔ＝９６時間サンプルの発光の値を測定した。データ分析のために、処理および非処置サンプルについて、ｔ＝０の値をｔ＝９６時間の値から引いた。物質で処理したサンプルと対照の値の間の百分率で示した蛍光の差異を、百分率で示す増殖阻害の決定に使用した。
【０１１８】
例示的に示す適応症を代表する以下の細胞株で物質を試験した：
【表２】
2014504624.tif 000010
【０１１９】
異種移植モデル
免疫抑制マウスにおける異種移植モデルを使用して、生体での抗腫瘍活性を調べた。
この目的で、最初に、以下のプロトコールを使用して最大耐性量（ＭＴＤ）を決定した：
１、２または３週間の期間にわたり、規定した用量の試験物質を雌のヌードマウス（ＮＭＲＩ−ヌード（nu/nu）マウス、Taconic M&B A/S）に経口投与し、マウスを死亡率と体重について毎日観察した。ＭＴＤを、処置期間および７日間の付加観察期間中にどの動物も死亡せず、最初の体重と比較して１０％を超える体重の減少を伴わずに投与し得る最高の用量と定義した。
【０１２０】
次いで、試験物質をＭＴＤおよびそれより低い用量で投与する様々な異種移植モデルを使用して、抗腫瘍活性を測定した。様々な他のモデルに加えて、主としてホルモン依存性乳癌モデルのヒトＭＣＦ−７細胞を、雌のヌードマウス（ＮＭＲＩ−ヌード（nu/nu）マウス、Taconic M&B A/S）で利用した。この目的で、腫瘍細胞移植の前日に、エストロゲン放出用のペレット（１７β−エストラジオール０.３６ｍｇ、６０日間にわたり放出）をマウスに皮下投与した。次いで、翌日、２百万個の腫瘍細胞（培地＋マトリゲルに懸濁）１：１、最終０.１ｍｌ）を、各動物の側面に皮下注射した。腫瘍が２０−２５ｍｍ２の面積に拡大したら、マウスを治療群に無作為化し、治療を開始した。次いで、試験物質の媒体を与えられただけの対照群、または、処置群の１つにおいて、平均腫瘍サイズ１２０ｍｍ２に達するまで、腫瘍面積および体重を週に２、３回測定しながら、治療を継続した。この時点で、すべての群で実験を終了し、摘出した腫瘍の重量を測定した。
【０１２１】
腫瘍重量に対する効果を使用して、または、腫瘍面積に対する効果を使用して、第一の成功パラメーターとしてＴ／Ｃ値を算出した：媒体群の腫瘍重量／面積の平均で除した処置群の平均腫瘍重量／面積。
【０１２２】
腫瘍組織および正常組織におけるＡＣＣ１発現の分析
マイクロアレイを使用してＡＣＣ１発現を測定した。この目的で、様々な腫瘍組織および対応する正常組織のＲＮＡを単離した。この方法は、Trizol ＲＮＡ抽出試薬（Invitrogen）および RNeasy ミニキット（Qiagen）を使用する後続の精製を利用した。さらに、DNase I（Qiagen）分解を実施し、ゲノムＤＮＡを排除した。品質管理のために、RNA LabChip を Agilent Bioanalyzer 2100 Platform（Agilent Technologies）で利用して総ＲＮＡを分析し、Peqlab NanoDrop システムを使用してＲＮＡ濃度を測定した。ハイブリダイゼーションのために、Affymetrix の１サイクルの真核標的標識アッセイを使用し、次いで、AffymetrixGeneChip 3000 スキャナー（Affymetrix）でアレイを読み取った。評価と品質管理は、Expressionist Pro 4.0 Refiner（GeneData）ソフトウェアを使用して実施した。
【０１２３】
４．結果：
４.１．酵素アッセイ
表１は、化合物Ａおよび比較例の酵素アッセイの結果をまとめる。
表１
【表３】
2014504624.tif 000011
これらの値は、化合物Ａおよび比較例Ｃ.１が酵素を同等に強く阻害し、一方、比較例Ｃ.２は劣ることを示す。
【０１２４】
４.２細胞アッセイ
表２は、化合物Ａおよび比較例に関する細胞アッセイの結果をまとめる。
表２
【表４】
2014504624.tif 000012
【表５】
2014504624.tif 000013
【０１２５】
４.３  最大耐性量（ＭＴＤ）
比較例Ｃ.１
比較例Ｃ.１を雌のヌードマウス（NMRI nu/nu）に投与した：
用量：表３参照
投与様式：経口
媒体：ＰＥＧ４００／エタノール／Solutol HS 15（７０／５／２５、ｖ／ｖ／ｖ）（Solutol HS15：１２−ヒドロキシステアリン酸のポリオキシエチレンエステル）
投与体積：１０ｍｌ／ｋｇ
スキーム：表３参照
【０１２６】
処置期間に続き、７日間の観察期間があった。この期間中に生じた死亡および体重に対する効果を表３にまとめる。
表３
【表６】
2014504624.tif 000014
従って、１日２回で１４日間の処置のＭＴＤは、１０ｍｇ／ｋｇ未満であった。
従って、１日１回で２１日間の処置のＭＴＤは、１５ｍｇ／ｋｇ未満であった。
死亡および体重減少がすべての群で生じたので、ＭＴＤを決定することは不可能であった。
【０１２７】
続いて、比較例Ｃ.１を、雌のヌードマウス（NMRI nu/nu）に、ＭＣＦ−７乳癌異種移植モデルで投与した：
用量：７.５ｍｇ／ｋｇ
投与様式：経口
媒体：ＰＥＧ４００／エタノール／Solutol HS 15（７０／５／２５、ｖ／ｖ／ｖ）
投与体積：１０ｍｌ／ｋｇ
スキーム：２７日間、１日２回（２ｑｄ）
マウス：１０匹
【０１２８】
実験３７日目まで、この用量は比較的良好に耐容された（少ない体重減少、１０匹中１匹が死亡）。この用量群では、Ｔ／Ｃ値＜＝０.５と定義される治療効力は、媒体対照と比較して観察できなかった（腫瘍面積に基づくＴ／Ｃ値＝０.８６）。
図２は、腫瘍面積を、腫瘍細胞の移植後の日数の関数として示す。
残っている動物の処置を、１０ｍｇ／ｋｇ ２ｑｄまたは１２.５ｍｇ／ｋｇ ２ｑｄで４３日目まで継続した。しかしながら、これらの２種の高投与量のスキームは、十分に耐容されなかった（各々、４匹中の１匹または５匹中の４匹が死亡）。
まとめると：比較例Ｃ.１の治療幅は、存在するとしたら、非常に小さいと想定せねばならない。
【０１２９】
化合物Ａ
化合物Ａを雌のヌードマウス（NMRI nu/nu）に投与した：
用量：表４参照
投与様式：経口
媒体：ＰＥＧ４００／エタノール／Solutol HS 15（７０／５／２５、ｖ／ｖ／ｖ）
投与体積：１０ｍｌ／ｋｇ
スキーム：表４参照
【０１３０】
処置期間に続き、７日間の観察期間があった。この期間中に生じた死亡および体重に対する効果を表４にまとめる。
表４
【表７】
2014504624.tif 000015
従って、１日１回で２１日間の処置のＭＴＤは、４０ｍｇ／ｋｇ未満であり、３０ｍｇ／ｋｇより高かった。
【０１３１】
続いて、化合物Ａを、雌のヌードマウス（NMRI nu/nu）に、ＭＣＦ−７乳癌異種移植モデルで投与した：
用量：表５参照
投与様式：経口
媒体：ＰＥＧ４００／エタノール／Solutol HS 15（７０／５／２５、ｖ／ｖ／ｖ）
投与体積：１０ｍｌ／ｋｇ
スキーム：３０日間、１日１回（ｑｄ）
用量群当たりのマウス：１０−１３匹
【０１３２】
表５
【表８】
2014504624.tif 000016
【０１３３】
測定値の正規分布がなかったので、実験の統計的評価のために、腫瘍面積に基づくＴ／Ｃ値に、非パラメトリックＡＮＯＶＡ試験を使用した。次いで、Dunns Post 試験を使用して、すべての治療群を媒体群と比較した。得られたｐ値を表に示す（ｎｓ：有意ではない＝ｐ＞０.０５）。腫瘍重量に基づくＴ／Ｃ値には正規分布があったので、パラメトリックな値のためのＡＮＯＶＡ試験を分析に使用した。次いで、Bonferroni Post 試験を使用して、すべての治療群を媒体群と比較した。得られたｐ値を表５に示す。
【０１３４】
使用したすべての用量群がこの実験でＴ／Ｃ（腫瘍重量に基づく）の目標値＜０.５に達したので、この実験を統計的に評価し、評価の結果も表５に示した。化合物Ａは、１日１回投与されると、２５ｍｇ／ｋｇより高い用量で、統計的に有意に腫瘍の増殖を阻害した（腫瘍重量および腫瘍面積の両方に基づく）。腫瘍重量に基づくと、この効果は、１日１回の投与で、２０ｍｇ／ｋｇの用量からでさえ、統計的に有意であった。
図３は、腫瘍面積を、腫瘍細胞の移植後の日数の関数として示す。
【０１３５】
従って、比較例Ｃ.１と化合物Ａの比較は、比較例Ｃ.１が良好に耐容されない用量でさえ抗腫瘍効力を示さなかったのに対し、化合物Ａには、生物学的に意味のある有意な抗腫瘍効果が、耐容される用量範囲の２０ｍｇ／ｋｇ ｑｄないし３５ｍｇ／ｋｇ ｑｄで見られたことを示す。
【０１３６】
腫瘍および正常組織におけるＡＣＣ１発現
腫瘍および対応する正常組織におけるＡＣＣ１発現をマイクロアレイにより測定した（図１）。乳癌、結腸直腸癌、気管支癌および膵臓癌で、ＡＣＣ１の発現は正常組織と比較して有意に上方調節された。
【０１３７】
５．製剤
化合物Ａを含む錠剤
ａ）直接打錠による医薬製剤の製造
化合物Ａを含む表６の組成に従う錠剤を、直接打錠により製造した。
表６
【表９】
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【０１３８】
医薬製剤は、適する方法で、特に、粉末混合および直接打錠により、任意の規模で製造できる。
５０個の錠剤を製造するために、
マンニトール（噴霧乾燥）  ３.３５１ｇ
セルロース（結晶）  ２.００４ｇ
Ｎａ−クロスカルメロース  ０.４９９ｇおよび
例示的化合物１−１１８  ３.９９２ｇ
を、乳鉢中で、注意深く粉砕することにより、予め混合した。混合物を１００ｍｌのスクリューキャップのチューブに移し、Turbula ミキサー中、１０分間にわたりホモジナイズした。ステアリン酸マグネシウム０.１４９ｇの添加後、混合物を Turbula ミキサー中でさらに１分間混合した。
かくして得られた成形用材料を、偏心性の打錠機（Korsch EK 2）で打錠し、直径８ｍｍ、曲率１２ｍｍの両凸の錠剤を得た。
【０１３９】
ｂ）破断荷重
得られた錠剤の破断荷重（Schleuniger 破断荷重テスターを使用）、質量および水中、３７℃での崩壊時間（モノグラフ２.９.１欧州薬局方に記載の器具を使用）を、打錠過程の開始時、中間および終了時に試験した。
【表１０】
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【０１４０】
ｃ）インビトロ溶解
製造した錠剤からの化合物Ａのインビトロ放出を、ＵＳＰに従って器具２（パドル法）を使用して測定した。放出試験は、各場合で、様々な媒体９００ｍｌ中、３７℃で、毎分７５回転の撹拌速度で実施した。各測定を３回重複して実施した。含有量をＨＰＬＣにより測定した。結果を表７および図４に示す。
【０１４１】
表７
【表１１】
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＊ＳＤＳ＝ラウリル硫酸ナトリウム（ｐＨ１およびｐＨ６.８での不十分な溶解度のために添加した）
【０１４２】
ｄ）医薬製剤の短期の安定性
完成した錠剤を、２５℃／６０％相対湿度および４０℃／７５％相対湿度で、１ヶ月の短期安定性試験に付した。いずれの条件下でも、ＨＰＬＣにより調べて、内容物および分解産物に関して、錠剤は安定であった。
【０１４３】
図面：
図１：腫瘍組織および対応する正常組織におけるＡＣＣ１発現
１：健康な乳房組織（２サンプル）
２：乳房腫瘍組織（２６サンプル）
３：健康な結腸組織（３０サンプル）
４：結腸腫瘍組織（７１サンプル）
５：健康な肺組織（２７サンプル）
６：肺腫瘍組織（４０サンプル）
７：健康な膵臓組織（２２サンプル）
８：膵臓腫瘍組織（１９サンプル）
図２：ホルモン依存性ＭＣＦ−７乳癌異種移植モデルにおける比較例Ｃ.１の治療効力
図３：ホルモン依存性ＭＣＦ−７乳癌異種移植モデルにおける化合物Ａの治療効力
図４：化合物Ａの錠剤からの放出曲線
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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2014504624.tif 000026
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