(57)【要約】  本明細書に提供されるのは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物及び薬学的製剤、及びその使用の方法である。
2014533700.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）が約５０ｎｇ／ｍｇ以下で存在する、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物であって、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、配列ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡ（配列番号１）を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２）を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列ＱＱＹＹＡＹＰＷＴ（配列番号３）を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列ＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列ＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹ（配列番号６）を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は単一の抗原結合腕を含み、Ｆｃ領域を含み、Ｆｃ領域は第一及び第二Ｆｃポリペプチドを含み、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは複合体中に存在する組成物。
【請求項２】
抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物であって、ここでＨＣＰは約５０ｎｇ／ｍｇ以下で存在し、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のＤＮＡレベルは、約０．３ｐｇ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のＬｐＡは約２ｎｇ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のカブトガニ血球抽出成分(Limulus Amebocyte Lysate)（ＬＡＬ）は、約０．０１ＥＵ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の凝集体の割合は約０．３％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の単量体の割合は約９９．５％以上であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の断片の割合は約０．３％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の酸性変異体の割合は約２０％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の主要ピークの割合は約７５％以上であり、そして抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の塩基性変異体の割合は約２．０％以下であり、ここで抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、配列ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡ（配列番号１）を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２）を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列ＱＱＹＹＡＹＰＷＴ（配列番号３）を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列ＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列ＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹ（配列番号６）を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は単一の抗原結合腕を含み、Ｆｃ領域を含み、Ｆｃ領域は第一及び第二Ｆｃポリペプチドを含み、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは複合体中に存在する組成物。
【請求項３】
抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物であって、ここでＨＣＰは約１５ｎｇ／ｍｇ以下で存在し、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のＤＮＡレベルは、約０．３ｐｇ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のＬｐＡは約２ｎｇ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のカブトガニ血球抽出成分(Limulus Amebocyte Lysate)（ＬＡＬ）は、約０．０１ＥＵ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の凝集体の割合は約０．３％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の単量体の割合は約９９．５％以上であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の断片の割合は約０．３％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の酸性変異体の割合は約２０％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の主要ピークの割合は約７５％以上であり、そして抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の塩基性変異体の割合は約２．０％以下であり、ここで抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、配列ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡ（配列番号１）を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２）を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列ＱＱＹＹＡＹＰＷＴ（配列番号３）を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列ＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列ＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹ（配列番号６）を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は単一の抗原結合腕を含み、Ｆｃ領域を含み、Ｆｃ領域は第一及び第二Ｆｃポリペプチドを含み、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは複合体中に存在する組成物。
【請求項４】
抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保つことを含む抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法であって、ここで抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、配列ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡ（配列番号１）を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２）を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列ＱＱＹＹＡＹＰＷＴ（配列番号３）を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列ＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列ＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹ（配列番号６）を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は単一の抗原結合腕を含み、Ｆｃ領域を含み、Ｆｃ領域は第一及び第二Ｆｃポリペプチドを含み、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは複合体中に存在する方法。
【請求項５】
方法は抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離することを更に含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
方法は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ樹脂上にロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを更に含む、請求項４又は５の何れか一項に記載の方法。
【請求項７】
抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ樹脂上にロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを含む、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法であって、ここで抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、配列ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡ（配列番号１）を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２）を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列ＱＱＹＹＡＹＰＷＴ（配列番号３）を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列ＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列ＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹ（配列番号６）を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は単一の抗原結合腕を含み、Ｆｃ領域を含み、Ｆｃ領域は第一及び第二Ｆｃポリペプチドを含み、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは複合体中に存在する方法。
【請求項８】
抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を弱陰イオン交換樹脂上にロードし、フロースルー中に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収することを更に含む、請求項４から７の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
弱陰イオン交換樹脂は、フロースルーモードで実行される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を弱陰イオン交換樹脂上にロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体をフロースルー中に回収することを含む、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法であって、ここで抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、配列ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡ（配列番号１）を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２）を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列ＱＱＹＹＡＹＰＷＴ（配列番号３）を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列ＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列ＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹ（配列番号６）を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は単一の抗原結合腕を含み、Ｆｃ領域を含み、Ｆｃ領域は第一及び第二Ｆｃポリペプチドを含み、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは複合体中に存在する方法。
【請求項１１】
弱陰イオン交換樹脂は、フロースルーモードで実行される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を強陽イオン交換樹脂上にロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを更に含む、請求項４から１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を強陰イオン交換樹脂上にロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを更に含む、請求項４から１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を限外濾過及び／又は透析濾過することを更に含む、請求項４から１３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
請求項４から１４に記載の方法の何れかにより精製された又は得ることができる抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物であって、ここで抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、配列ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡ（配列番号１）を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２）を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列ＱＱＹＹＡＹＰＷＴ（配列番号３）を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列ＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列ＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹ（配列番号６）を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は単一の抗原結合腕を含み、Ｆｃ領域を含み、Ｆｃ領域は第一及び第二Ｆｃポリペプチドを含み、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは複合体中に存在する組成物。
【請求項１６】
宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）が約５０ｎｇ／ｍｇ以下で存在する、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
ＨＣＰが約１ｎｇ／ｍｇと１５ｎｇ／ｍｇの間で存在する、請求項１又は２、又は１６に記載の組成物。
【請求項１８】
ＨＣＰが大腸菌タンパク質（ＥＣＰ）である、請求項１から３、又は１６又は１７の何れか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
抗ｃ−ｍｅｔ抗体が、（ａ）配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９）を含む重鎖可変ドメイン、及び（ｂ）配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＡＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号２０）を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項１から１８の何れか一項に記載の組成物又は方法。
【請求項２０】
Ｆｃ領域は、前記抗原結合腕を含むＦａｂ分子と比較して、前記抗体断片の安定性を増加させる、請求項１９に記載の組成物又は方法。
【請求項２１】
第一Ｆｃポリペプチドは、図１に示されるＦｃ配列（配列番号１７）を含み、第二Ｆｃポリペプチドは図２に示されるＦｃ配列（配列番号１８）を含む、請求項１から２０の何れか一項に記載の組成物又は方法。
【請求項２２】
抗ｃ−ｍｅｔ抗体がオナルツズマブである、請求項１から２１の何れか一項に記載の組成物又は方法。
【請求項２３】
抗ｃ−ｍｅｔ抗体がオナルツズマブと同じエピトープに結合する、請求項１から２２の何れか一項に記載の組成物又は方法。
【請求項２４】
抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．０と約８．５の間のｐＩを有する、請求項１から２３の何れか一項に記載の組成物又は方法。
【請求項２５】
請求項１から３又は１５から２４の何れか一項に記載の組成物を含む薬学的製剤。
【請求項２６】
ｃ−ｍｅｔ活性化細胞増殖を阻害する方法であって、前記方法が請求項２５に記載の薬学的製剤の有効量を細胞又は組織と接触させることを含む方法。
【請求項２７】
ＨＧＦ／ｃ−ｍｅｔシグナル伝達系の調節不全に関連する疾患を調節する方法であって、前記方法が請求項２５に記載の薬学的製剤の有効量を被験体に投与することを含む方法。
【請求項２８】
増殖性疾患を有する被験体を治療する方法であって、前記方法が請求項２５に記載の薬学的製剤の有効量を被検体に投与することを含む方法。
【請求項２９】
増殖性疾患が癌である、請求項２８に記載の方法。．
【請求項３０】
癌が、肺癌、グリア芽腫、膵臓癌、肉腫、腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌、結腸直腸癌及び／又は乳癌である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
第二治療薬を投与することを更に含む、請求項２６から３０の何れか一項に記載の方法。
【請求項３２】
請求項２５に記載の薬学的製剤をその中に含有する容器を含む製造品。
【請求項３３】
請求項３２の製造品を作成する方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１１年１１月２１日に出願された米国仮出願第６１／５６２，４２９号、及び２０１１年１１月２２日に出願された米国仮出願第６１／５６２，９２５号の利益を主張し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【技術分野】
【０００２】
本明細書に提供されるのは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物及び薬学的製剤、及びその使用の方法である。
【背景技術】
【０００３】
治療用抗体などの生物製剤は、成分の複雑に濃縮された混合物を含み、従って、治療用抗体を製造するために使用される宿主細胞系の成分で汚染され得る組換え系から生成される。しばしば、複数の精製工程の後でさえも、それらの汚染物質の有意なレベルが存在し得る。患者の安全性は、安全性と有効性の問題が起きるのを防ぐために、汚染物質が除去され又は最低レベルまで低減されることを必要とする。汚染物質を同定し十分に除去できないと、薬効の減少又は有害な免疫反応などの有害な患者の反応をもたらすこととなる。例えば、大腸菌(E. coli)は、内毒素として機能することができ、除去されていない場合には、強い免疫応答、高熱を引き出すリポ多糖（ＬＰＳ）を含む。汚染物質の除去は、薬剤開発及び製造プロセスにおいてかなりのコストの意味合いを持ちうる。
【０００４】
大腸菌で培養された治療用抗体においては、汚染物質は、増殖のために使用される増殖培地及び／又は宿主細胞の成分、ＤＮＡ又はＲＮＡベクター、大腸菌タンパク質（ＥＣＰ）、脂質、及び／又はＬＰＳでありうる。薬物の効力及び／又は安全性に直接的に影響を与える可能性に加えて、ＥＣＰ、リン脂質、エンドトキシン、及びＤＮＡ／ＲＮＡ（ベクター配列を含む）を含む多数の汚染物質は、治療用抗体の凝集につながり得る疎水性相互作用、金属架橋、及び／又は電荷錯体形成の結果として、治療用抗体との複合体を形成することができる。更に、大腸菌で生産された治療用抗体は、ペリプラズム内部に蓄積し、治療用抗体を単離するために細胞は破壊する必要がある。宿主のプロテアーゼ活性は、一般に細胞破壊の間に起き、実質的に収率を減少させ、効率的な精製をすることなく治療用抗体のタンパク質分解をもたらしうる。クロマトグラフィー及び精製の複数回の工程が、治療用抗体から増殖培地及び／又は宿主細胞汚染物質を分離するために必要とされる。
【０００５】
増殖培地及び／又は宿主細胞の汚染物質に加えて、回収及び精製プロセスそれ自体が、クロマトグラフィー法で利用される吸着剤のタイプに応じて汚染物質を導入しうる。例えば、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーの間、プロテインＡのリガンドは、治療用抗体と共溶出することができる。更に、プロテインＡの場合、プロテインＡは、有害な生理学的事象を引き起こし得ることを示唆するいくらかの証拠がある。M. Gomez et al. Nat. Med. 10:842 (2004)．汚染物質を除去するプロセスは広範囲である場合があり、回収及び精製の各工程は、収率の有意な損失とさらなる汚染物質の潜在的な導入をもたらす。  
【０００６】
汚染物質を除去することの重要性にもかかわらず、全てのポリペプチドに対して効果的であろう普遍的な精製スキームは存在しない。例えば、分子量、等電点（ｐＩ）、疎水性、プロテアーゼ感受性、電荷特性及び分布、翻訳後修飾、及び／又は溶解性などのポリペプチド特性は、ポリペプチドの間で著しく変化する。これらの特性は、精製スキームおよび汚染物質を除去する能力に著しく影響を与えることができる。
【０００７】
ＨＧＦ／Ｃ−ｍｅｔ経路をターゲットとした数々の分子が報告されている。これらの分子は、ｃ−ｍｅｔの細胞外ドメインの一部、及び例えば米国特許第５，６８６，２９２号、Martens, T. et al., Clin. Cancer Res. 12 (20 Pt. 1):6144 (2006)；米国特許第６，４６８，５２９号；米国特許第２００６／０１５３７１号；米国特許第２００７／０６３８１６号、及びＷＯ２０１０／０４５３４５に記載される抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む。抗ｃ−ｍｅｔ抗体の二価の形態は二量体化を促進することが示されており、ｃ−ｍｅｔ（アゴニスト機能）の活性化につながるが、逆に、一価抗体はｃ−ｍｅｔ活性（拮抗的機能）を阻害することが示されている。拮抗機能を必要とする病的状態の治療のために、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の二価性は所望されないアゴニスト作用をもたらす可能性があり、従って、病的状態の治療のために、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の標的への結合に際し、一価の特性はアンタゴニスト活性を確実にするために必要とされる。Ｆａｂ断片と片腕抗体は一価抗体の例である。片腕の抗体は、一般的にＦａｂよりも長い半減期を有する。しかしながら、単一の軽鎖及び単一の重鎖（並びに付加的Ｆｃ領域）を含む片腕抗体の利用における懸念事項は、片腕抗体構造を維持できない可能性である。生成および精製中に、２本の重鎖と２本の軽鎖を持つ二価抗体よりも、一価抗体の凝集（多量体およびオリゴマーの形成）及び／又は一価の構造を維持できないことは、所望されないアゴニスト作用をもたらす可能性がある。このように、精製中及び精製物中における一価構造の抗ｃ−Ｍｅｔ抗体の凝集を最小にし安定化することは特に重要である。
【０００８】
オナルツズマブ(onartuzumab)は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体であり、大腸菌で生産される片腕抗体である。抗体精製の多くの従来の方法は、分離を容易にするために、抗体と宿主細胞の不純物／汚染物質との間の静電的性質の違いに依存しているので、オナルツズマブの精製プロセスは、オナルツズマブ及び宿主細胞の不純物／汚染物質の非常に類似した静電特性によって更に複雑である。そのため、一般的に生物製剤の生産及び精製における著しい進歩及びＨＧＦ／Ｃ−ｍｅｔ経路を標的とする分子の開発にもかかわらず、特に片腕形態の抗ｃ−ｍｅｔ抗体のアンタゴニスト活性を保持しつつ、汚染物質及び不純物を最小限に抑える効率的な精製方法が、依然として必要とされている。
【０００９】
本明細書に引用される全ての参考文献は、特許出願および刊行物を含み、その全体が参考により援用される。
【発明の概要】
【００１０】
本明細書において提供されるのは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法及び精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物である。本明細書において提供されるのは、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）が約５０ｎｇ／ｍｇ以下で存在する、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物である。本明細書において更に提供されるのは、ＨＣＰが約５０ｎｇ／ｍｇ以下で存在する、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）である。
【００１１】
本明細書において提供されるのは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保つことを含む抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法である。幾つかの実施態様において、本方法は抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離することを更に含む。幾つかの実施態様において、本方法は、アガロースマトリックスを含むプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上に、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを更に含む。
【００１２】
本明細書に提供されるのは、アガロースマトリックスを含むプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上に、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを含む抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法である。幾つかの実施態様において、本方法は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を弱陰イオン交換樹脂上にロードし、フロースルー中に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収することを更に含む。幾つかの実施態様において、弱陰イオン交換樹脂は、フロースルーモードで実行される。
【００１３】
本明細書に提供されるのは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を弱陰イオン交換樹脂上にロードし、フロースルー中に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収することを含む、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法である。幾つかの実施態様において、弱陰イオン交換樹脂は、フロースルーモードで実行される。
【００１４】
精製方法の何れかの幾つかの実施態様において、本方法は、強陽イオン交換樹脂上に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを更に含む。
【００１５】
精製方法の何れかの幾つかの実施態様において、本方法は、強陰イオン交換樹脂上に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを更に含む。
【００１６】
精製方法の何れかの幾つかの実施態様において、本方法は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を限外濾過及び／又は透析濾過することを更に含む。
【００１７】
本明細書に更に提供されるのは、上述の精製方法の何れかによって精製され又は得ることができる抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物である。更に、本明細書に更に提供されるのは、上述の精製方法の何れかによって精製され又は得ることができる抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）である。
【００１８】
また提供されるのは、上述の組成物の何れかの組成物又はロットを含む薬学的製剤である。幾つかの実施態様において、薬学的製剤は液体の薬学的製剤である。幾つかの実施態様において、薬学的製剤は、個体（例えば、ヒト）に対する投与に適している。
【００１９】
組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のＨＣＰは約５０ｎｇ／ｍｇ以下である。組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）中の平均的なＨＣＰは約５０ｎｇ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約３４ｎｇ／ｍｇ、３０ｎｇ／ｍｇ、約２５ｎｇ／ｍｇ、約２０ｎｇ／ｍｇ、約１９ｎｇ／ｍｇ、約１８ｎｇ／ｍｇ、約１７ｎｇ／ｍｇ、約１６ｎｇ／ｍｇ、約１５ｎｇ／ｍｇ、約１４ｎｇ／ｍｇ、約１３ｎｇ／ｍｇ、約１２ｎｇ／ｍｇ、約１１ｎｇ／ｍｇ、約１０ｎｇ／ｍｇ、約又は９ｎｇ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約５ｎｇ／ｍｇと約２０ｎｇ／ｍｇの間、約５ｎｇ／ｍｇと約２５ｎｇ／ｍｇの間、約５ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約３０ｎｇ／ｍｇ，の間、約１ｎｇ／ｍｇと約２５ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約２０ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間、又は約１ｎｇ／ｍｇと１０ｎｇ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約５、約５．５、約６．５、約７、約７．５、約８、約８．５、約９、約９．５、約１０、約１０．５、約１１、約１１．５、約１２、約１２．５、約１３、約１３．５、約１４、約１４．５、約１５、約１５．５、約１６、約１６．５、約１７、又は約１７．５ｎｇ／ｍｇの何れかである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、大腸菌の細胞タンパク質（例えば、ＥＣＰ）及び／又は平均的なＥＣＰである。
【００２０】
組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のＤＮＡレベルは約０．３ｐｇ／ｍｇ以下である。組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）中の平均的なＤＮＡレベルは約０．３ｐｇ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、ＤＮＡレベル及び／又は平均的なＤＮＡレベルは、約０．３ｐｇ／ｍｇ、約０．２５ｐｇ／ｍｇ、約０．２ｐｇ／ｍｇ、約０．１５ｐｇ、又は約０．１ｐｇ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、ＤＮＡレベル及び／又は平均的なＤＮＡレベルは、約０．００１ｐｇ／ｍｇと約０．３ｐｇ／ｍｇの間、約０．００１ｐｇ／ｍｇと約０．２ｐｇ／ｍｇの間、約０．００１ｐｇ／ｍｇと約０．１ｐｇ／ｍｇの間、約０．０１ｐｇ／ｍｇと約０．３ｐｇ／ｍｇの間、約０．０１ｐｇ／ｍｇと約０．２ｐｇ／ｍｇの間、又は約０．０１ｐｇ／ｍｇと約０．１ｐｇ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＤＮＡレベル及び／又は平均的なＤＮＡレベルは、約０．３、約０．２５、約０．２、約０．１５、又は約０．１ｐｇ／ｍｇの何れかである。
【００２１】
組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の濾過されたプロテインＡ（即ち、ＬｐＡ）は、約２ｎｇ／ｍｇ以下である。組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）中の平均的なＬｐＡは約２ｎｇ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、ＬｐＡ及び／又は平均的なＬｐＡは、約０．００１ｎｇ／ｍｇと約２ｎｇ／ｍｇの間、約０．０１ｎｇ／ｍｇと約２ｎｇ／ｍｇの間、約０．１ｎｇ／ｍｇと約２ｎｇ／ｍｇの間、又は約１ｎｇ／ｍｇと約２ｎｇ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＬｐＡ及び／又は平均的なＬｐＡは、約１、約１．２５、約１．５、約１．７５、又は約２ｎｇ／ｍｇの何れかである。
【００２２】
組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のカブトガニ血球抽出成分（Limulus Amebocyte Lysate)（即ち、ＬＡＬ）は、約０．０１ＥＵ／ｍｇ以下である。組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）中の平均的なＬＡＬは約０．０１ＥＵ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、ＬＡＬ及び／又は平均的なＬＡＬは、約０．００７ＥＵ／ｍｇ、約０．００６ＥＵ／ｍｇ、約０．００５ＥＵ／ｍｇ、約０．００２ＥＵ／ｍｇ又は約０．００１ＥＵ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、ＬＡＬ及び／又は平均的なＬＡＬは、約０．０００１ＥＵ／ｍｇと約０．０１ＥＵ／ｍｇの間、約０．０００１ＥＵ／ｍｇと約０．００７ＥＵ／ｍｇの間、約０．０００１ＥＵ／ｍｇと約０．００６ＥＵ／ｍｇの間、又は約０．０００１ＥＵ／ｍｇと約０．００５ＥＵ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＬＡＬ及び／又は平均的なＬＡＬは、約０．０１、約０．００７、約０．００６、約０．００５、約０．００４、約０．００３、又は約０．００２ＥＵ／ｍｇの何れかである。
【００２３】
組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の凝集体の割合は約０．３％以下である。組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）中の凝集体の平均割合は約０．３％以下である。幾つかの実施態様において、凝集体の割合及び／又は凝集体の平均割合は、約０．２％又は約０．１％の何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、凝集体の割合及び／又は凝集体の平均割合は、約０．００１％と約０．３％の間、約０．０１％と約０．３％の間、約０．００１％と約０．２％の間、又は約０．０１％と約０．２％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、凝集体の割合及び／又は凝集体の平均割合は、約０．３％、約０．２５％、約０．２％、約０．１５％、又は約０．１％の何れかである。
【００２４】
組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の単量体の割合は約９９．５％以上である。組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）中の単量体の平均割合は約９９．５％以上である。幾つかの実施態様において、単量体の割合及び／又は単量体の平均割合は、約９９．６％、約９９．７％、約９９．８％、又は約９９．９％の何れかに等しいか又はそれ以上である。幾つかの実施態様において、単量体の割合及び／又は単量体の平均割合は、約９９．５％と約９９．９９９％の間、約９９．５％と約９９．９９％の間、約９９．６％と約９９．９９９％の間、約９９．６％と約９９．９９％の間、約９９．７％と約９９．９９９％の間、約９９．７％と約９９．９９％の間、約９９．８％と約９９．９９９％の間、約９９．８％と約９９．９９％の間、又は約９９．９％と約９９．９９９％の間、約９９．９％と約９９．９９％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、単量体の割合及び／又は単量体の平均割合は、約９９．５％、約９９．６％、約９９．７％、約９９．８％、又は約９９．９％の何れかである。
【００２５】
組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の断片の割合は約０．３％以下である。組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）中の断片の平均割合は約０．３％以下である。幾つかの実施態様において、断片の割合及び／又は断片の平均割合は、約０．２％又は約０．１％の何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、断片の割合及び／又は断片の平均割合は、約０．００１％と約０．３％の間、約０．０１％と約０．３％の間、約０．００１％と約０．２％の間、又は約０．０１％と約０．２％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、断片の割合及び／又は断片の平均割合は、約０．３％、約０．２５％、約０．２％、約０．１５％、約０．１％、又は０％の何れかである。幾つかの実施態様において、断片は検出可能ではない。
【００２６】
組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の酸性変異体の割合は約２０％以下である。組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）中の酸性変異体の平均割合は約２０％以下である。幾つかの実施態様において、酸性変異体の割合及び／又は酸性変異体の平均割合は、約２０％、約１８．５％、約１７．５％、約１５％、又は約１２．５％の何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、酸性変異体の割合及び／又は酸性変異体の平均割合は、約１％と約２０％の間、約５％と約２０％の間、又は約１０％と約２０％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、酸性変異体の割合及び／又は酸性変異体の平均割合は、約２０％、約１８．５％、約１７．５％、約１５％、又は約１２．５％の何れかである。
【００２７】
組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の主要ピークの割合は約７５％以上である。組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）中の主要ピークの平均割合は約７５％以上である。幾つかの実施態様において、主要ピークの割合及び／又は主要ピークの平均割合は、約７７．５％、約８０％、約８２．５％、又は約８５％の何れかに等しいか又はそれ以上である。幾つかの実施態様において、主要ピークの割合及び／又は主要ピークの平均割合は、約７５％と約９５％の間、約７７．５％と約９５％の間、約８０％と約９５％の間、約８２．５％と約９５％の間、又は約８５％と約９５％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、主要ピークの割合及び／又は主要ピークの平均割合は、約７５％、約７７．５％、約８０％、約８２．５％、又は約８５％の何れかである。
【００２８】
組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の主要ピークの割合は約２．０％以下である。組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）中の塩基性変異体の平均割合は約２．０％以下である。幾つかの実施態様において、塩基性変異体の割合及び／又は塩基性変異体の平均割合は、約１．５％、約１．２５％、約１．１％、又は約１％の何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、塩基性変異体の割合及び／又は塩基性変異体の平均割合は、約０．００１％と約２％の間、約０．０１％と約２％の間、約０．００１％と約１．５％の間、約０．０１％と約１．５％の間、約０．００１％と約１．０％の間、又は約０．０１％と約１．０％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、塩基性変異体の割合及び／又は塩基性変異体の平均割合は、約２％、約１．５％、約１．２５％、約１．１％、又は約１％の何れかである。
【００２９】
例えば、提供されるのは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物及び／又はロット（例えば、バッチ）であり、ここでＨＣＰは約５０ｎｇ／ｍｇ以下で存在し、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のＤＮＡレベルは、約０．３ｐｇ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のＬｐＡは約２ｎｇ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のカブトガニ血球抽出成分(Limulus Amebocyte Lysate)（ＬＡＬ）は、約０．０１ＥＵ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の凝集体の割合は約０．３％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の単量体の割合は約９９．５％以上であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の断片の割合は約０．３％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の酸性変異体の割合は約２０％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の主要ピークの割合は約７５％以上であり、そして抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の塩基性変異体の割合は約２．０％以下である。更に、本明細書に提供されるのは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物及び／又はロット（例えば、バッチ）であり、ここでＨＣＰは約１５ｎｇ／ｍｇ以下で存在し、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のＤＮＡレベルは、約０．３ｐｇ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のＬｐＡは約２ｎｇ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のカブトガニ血球抽出成分(Limulus Amebocyte Lysate)（ＬＡＬ）は、約０．０１ＥＵ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の凝集体の割合は約０．３％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の単量体の割合は約９９．５％以上であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の断片の割合は約０．３％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の酸性変異体の割合は約２０％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の主要ピークの割合は約７５％以上であり、そして抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の塩基性変異体の割合は約２．０％以下である。
【００３０】
組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、第ＩＶ節で説明する抗体である。組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約８．２、約８．３、及び／又は約８．４のｐＩを有する。組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ｃ−ｍｅｔに結合することができる単一の抗原結合腕を含む。組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は一価である。組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブである。
【００３１】
組成物、及び／又は薬学的製剤を精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、配列ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡ（配列番号１）を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２）を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列ＱＱＹＹＡＹＰＷＴ（配列番号３）を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列ＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列ＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹ（配列番号６）を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、（ａ）配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９）を含む重鎖可変ドメイン、及び（ｂ）配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＡＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号２０）を含む軽鎖可変ドメインを含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は一価である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は抗ｃ−ｍｅｔ抗体断片である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、片腕抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、単一の抗原結合腕を含み、かつＦｃ領域を含み、ここでＦｃ領域は、第一及び第二Ｆｃポリペプチドを含み、前記第一及び第二Ｆｃポリペプチドは複合体中に存在する。幾つかの実施態様において、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは、前記抗原結合腕を含むＦａｂ分子と比較して、前記抗体断片の安定性を増加させるＦｃ領域を形成する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列、ＣＨ１配列、及び第一Ｆｃポリペプチドを含む第一ポリペプチド、及び（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列及びＣＬ１配列を含む第二ポリペプチドを含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は（ｃ）第二Ｆｃポリペプチドを含む第三ポリペプチドを更に含む。幾つかの実施態様において、第一Ｆｃポリペプチドは、図１に示されるＦｃ配列（配列番号１７）を含み、第二Ｆｃポリペプチドは図２に示されるＦｃ配列（配列番号１８）を含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブと同じエピトープに結合する。
【００３２】
本明細書で提供されるのは、ｃ−ｍｅｔ活性化細胞増殖を阻害する方法であり、前記方法は上述される組成物、ロット及び／又は薬学的製剤の有効量を細胞又は組織と接触させることを含む。
【００３３】
本明細書で提供されるのは、ＨＧＦ／ｃ−ｍｅｔシグナル伝達系の調節不全に関連する疾患を調節する方法であり、前記方法は、上述される組成物、ロット及び／又は薬学的製剤の有効量を被験体に投与することを含む。
【００３４】
本明細書で提供されるのは、増殖性疾患を有する被験体を治療する方法であり、前記方法は、上述される組成物、ロット及び／又は薬学的製剤の有効量を被験体に投与することを含む。
【００３５】
任意の方法の幾つかの実施態様において、増殖性疾患は癌である。幾つかの実施態様において、癌は、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、グリア芽腫、膵臓癌、肉腫、腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌、結腸直腸癌及び／又は乳癌である。何れかの方法の幾つかの実施態様において、方法は第二の治療用薬剤の投与を含む。何れかの方法の幾つかの実施態様において、細胞、組織、ＨＧＦ／ｃ−ｍｅｔシグナル伝達系の調節不全に関連する疾患、増殖性及び／又は癌は、ｃ−ｍｅｔの発現又は活性によって特徴付けられる。幾つかの実施態様において、ｃ−ｍｅｔの発現はｃ−ｍｅｔ過剰発現である。
【００３６】
加えて、本明細書に提供されるのは、上述される組成物、ロット、又は薬学的製剤をその中に含む容器を含む製造品である。本明細書に更に提供されるのは製造品を作成する方法である。
【００３７】
本明細書に提供されるのは、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）が約５０ｎｇ／ｍｇ以下で存在する、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物であって、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、配列ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡ（配列番号１）を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２）を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列ＱＱＹＹＡＹＰＷＴ（配列番号３）を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列ＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列ＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹ（配列番号６）を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は単一の抗原結合腕を含み、Ｆｃ領域を含み、Ｆｃ領域は第一及び第二Ｆｃポリペプチドを含み、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは複合体中に存在する。
【００３８】
また本明細書に提供されるのは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物であり、ここでＨＣＰは約５０ｎｇ／ｍｇ以下で存在し、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のＤＮＡレベルは、約０．３ｐｇ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のＬｐＡは約２ｎｇ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のカブトガニ血球抽出成分(Limulus Amebocyte Lysate)（ＬＡＬ）は、約０．０１ＥＵ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の凝集体の割合は約０．３％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の単量体の割合は約９９．５％以上であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の断片の割合は約０．３％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の酸性変異体の割合は約２０％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の主要ピークの割合は約７５％以上であり、そして抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の塩基性変異体の割合は約２．０％以下であり、ここで抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、配列ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡ（配列番号１）を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２）を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列ＱＱＹＹＡＹＰＷＴ（配列番号３）を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列ＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列ＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹ（配列番号６）を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は単一の抗原結合腕を含み、Ｆｃ領域を含み、Ｆｃ領域は第一及び第二Ｆｃポリペプチドを含み、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは複合体中に存在する。
【００３９】
また本明細書に提供されるのは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物であり、ここでＨＣＰは約１５ｎｇ／ｍｇ以下で存在し、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のＤＮＡレベルは、約０．３ｐｇ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のＬｐＡは約２ｎｇ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のカブトガニ血球抽出成分(Limulus Amebocyte Lysate)（ＬＡＬ）は、約０．０１ＥＵ／ｍｇ以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の凝集体の割合は約０．３％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の単量体の割合は約９９．５％以上であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の断片の割合は約０．３％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の酸性変異体の割合は約２０％以下であり、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の主要ピークの割合は約７５％以上であり、そして抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の塩基性変異体の割合は約２．０％以下であり、ここで抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、配列ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡ（配列番号１）を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２）を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列ＱＱＹＹＡＹＰＷＴ（配列番号３）を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列ＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列ＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹ（配列番号６）を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は単一の抗原結合腕を含み、Ｆｃ領域を含み、Ｆｃ領域は第一及び第二Ｆｃポリペプチドを含み、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは複合体中に存在する。
【００４０】
本明細書に提供されるのは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保つことを含む抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法であって、ここで抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、配列ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡ（配列番号１）を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２）を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列ＱＱＹＹＡＹＰＷＴ（配列番号３）を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列ＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列ＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹ（配列番号６）を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は単一の抗原結合腕を含み、Ｆｃ領域を含み、Ｆｃ領域は第一及び第二Ｆｃポリペプチドを含み、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは複合体中に存在する。幾つかの実施態様において、本方法は抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離することを更に含む。幾つかの実施態様において、本方法は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ樹脂上にロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを更に含む。
【００４１】
本明細書に更に提供されるのは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ樹脂上にロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを含む、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法であって、ここで抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、配列ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡ（配列番号１）を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２）を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列ＱＱＹＹＡＹＰＷＴ（配列番号３）を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列ＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列ＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹ（配列番号６）を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は単一の抗原結合腕を含み、Ｆｃ領域を含み、Ｆｃ領域は第一及び第二Ｆｃポリペプチドを含み、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは複合体中に存在する。
【００４２】
幾つかの実施態様において、本方法は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を弱陰イオン交換樹脂上にロードし、フロースルー中に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収することを更に含む。幾つかの実施態様において、弱陰イオン交換樹脂は、フロースルーモードで実行される。
【００４３】
また本明細書に提供されるのは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を弱陰イオン交換樹脂上にロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体をフロースルー中に回収することを含む、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法であって、ここで抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、配列ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡ（配列番号１）を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２）を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列ＱＱＹＹＡＹＰＷＴ（配列番号３）を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列ＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列ＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹ（配列番号６）を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は単一の抗原結合腕を含み、Ｆｃ領域を含み、Ｆｃ領域は第一及び第二Ｆｃポリペプチドを含み、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは複合体中に存在する。幾つかの実施態様において、弱陰イオン交換樹脂は、フロースルーモードで実行される。
【００４４】
幾つかの実施態様において、本方法は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を強陽イオン交換樹脂上にロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを更に含む。幾つかの実施態様において、本方法は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を強陰イオン交換樹脂上にロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを更に含む。幾つかの実施態様において、本方法は抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を限外濾過及び／又は透析濾過することを更に含む。
【００４５】
また本明細書に提供されるのは、請求項４から１４に記載の方法の何れかにより精製された又は得ることができる抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物であって、ここで抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、配列ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡ（配列番号１）を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２）を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列ＱＱＹＹＡＹＰＷＴ（配列番号３）を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列ＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列ＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹ（配列番号６）を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は単一の抗原結合腕を含み、Ｆｃ領域を含み、Ｆｃ領域は第一及び第二Ｆｃポリペプチドを含み、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは複合体中に存在する。
【００４６】
本発明の組成物の幾つかの実施態様において、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）は約５０ｎｇ／ｍｇ以下で存在する。幾つかの実施態様において、ＨＣＰは約１ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間で存在する。幾つかの実施態様において、ＨＣＰは大腸菌タンパク質である。
【００４７】
本発明の組成物と方法の幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、（ａ）配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９）を含む重鎖可変ドメイン、及び（ｂ）配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＡＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号２０）を含む軽鎖可変ドメインを含む。幾つかの実施態様において、Ｆｃ領域は、前記抗原結合腕を含むＦａｂ分子と比較して、前記抗体断片の安定性を増加させる。幾つかの実施態様において、第一Ｆｃポリペプチドは、図１に示されるＦｃ配列（配列番号１７）を含み、第二Ｆｃポリペプチドは図２に示されるＦｃ配列（配列番号１８）を含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブと同じエピトープに結合する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．０と約８．５の間のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は一価である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は抗ｃ−ｍｅｔ抗体断片である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、片腕抗体である。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】図１は、短半減期と長半減期のアゴニスト及びｃ−ｍｅｔのアンタゴニストの一般構造を示す。
【図２】図２は、オナルツズマブ（ＭｅｔＭＡｂ又はＯＡ５Ｄ５．ｖ２）のフレームワーク（ＦＲ）、超可変領域（ＨＶＲ）、第一定常領域（ＣＬ又はＣＨ１）及びＦｃ領域（Ｆｃ）のアミノ酸配列を示す。示されるＦｃ配列は、国際公開第２００５／０６３８１６号に記載される「ホール」（空洞）変異のＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む。
【図３】図３は、国際公開第２００５／０６３８１６号に記載される「ノブ」（突起）変異のＴ３６６Ｗを含むＦｃポリペプチドの配列を示す。幾つかの実施態様において、この配列を含むＦｃポリペプチドは、図１のＦｃ配列を含むＦｃポリペプチドと複合体を形成しＦｃ領域を生成する。
【図４】図４は、勾配溶出条件の下で実行された、強ＡＥ樹脂（ＱセファロースＦＦ）上にロードされたオナルツズマブを含む弱ＣＥ樹脂プール（ＣＭセファロースＦＦ）のクロマトグラムを示す。
【図５】図５Ａは、Ｃａｐｔｏ ＤＥＡＥとオナルツズマブ（ＭｅｔＭＡｂ）ｌｏｇ１０ ＫＰｉのロボットスクリーニングの等高線図の結果を示す（ｘ軸はｐＨでｙ軸はイオン強度、ボックスはオペレーティング・ウィンドウ用である）。図５Ｂは、Ｃａｐｔｏ ＤＥＡＥとＥＣＰ ｎｇ／ｍＬのロボットスクリーニングの等高線図の結果を示す（ｘ軸はｐＨでｙ軸はイオン強度、青いボックスはオペレーティング・ウィンドウ用である）。
【図６】図６ＡとＢは、（Ａ）トリス、ＮａＣｌ平衡化／洗浄緩衝液及び（Ｂ）グリシン、リン酸塩、トリス（ＧＰＴ）平衡化／洗浄緩衝液を用いたＣａｐｔｏ ＤＥＡＥ平衡化／洗浄緩衝液のクロマトグラムを示す。
【図７】図７は、Ｑセファロースファーストフローの最終クロマトグラフィー工程上で実施された一部実施要因多変数ＤＯＥを示す（ｘ軸は伝導率、ｙ軸はｐＨ）。
【００４９】
詳細な説明
本明細書において提供されるのは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法及び精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、アンタゴニスト抗ｃ−ｍｅｔ抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、一価の抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、片腕抗体）である。更に、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む製造品及び精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物の使用が提供される。
【００５０】
Ｉ．定義
本明細書において使用される、用語「汚染物質」又は「不純物」は交換可能に使用され、所望の抗体単量体産物とは異なる物質を意味する。不純物は、限定されないが、抗体変異体（例えば、酸性または塩基性抗体変異体）、抗体断片、ポリエチレンイミン（すなわち、ＰＥＩ）、凝集体、又は所望の抗体単量体の誘導体、濾過したプロテインＡ、宿主細胞不純物（例えば、ＥＣＰ）、脂質、核酸、及び／又はエンドトキシンを含む。
【００５１】
本明細書で使用される用語「宿主細胞不純物」又は「宿主細胞汚染物質」は、宿主細胞株、細胞培養液及び／又は細胞培養によって導入される任意のタンパク質性汚染物質又は副生成物を指す。実施例は、限定されないが、チャイニーズハムスター卵巣タンパク質（ＣＨＯＰ）、大腸菌タンパク質（ＥＣＰ）、酵母タンパク質、サルＣＯＳタンパク質、又は骨髄腫細胞タンパク質（例えば、ＮＳ０タンパク質（ＢＡＬＢ／ｃマウスに由来するマウス形質細胞腫細胞））を含む。幾つかの実施態様において、宿主細胞不純物はＥＣＰである。
【００５２】
「宿主細胞」は、抗体を産生するためのポリヌクレオチド挿入物の取り込みのためのベクターのレシピエントであり得るか、又は、レシピエントであった個々の細胞又は細胞培養物を含む。宿主細胞は単一の宿主細胞の子孫を含み、その子孫は、自然の、偶発的な、又は意図的な変異に起因して、元の親細胞と（形態又はゲノムＤＮＡ相補体において）完全に同一でなくてもよい。幾つかの実施態様において、宿主細胞は、大腸菌である。
【００５３】
本明細書で使用されるように、用語「単量体」は、抗体の単一ユニットを指す。例えば、片腕抗体の場合、単量体は、ａ）重鎖と第一Ｆｃ領域を含むポリペプチド、ｂ）軽鎖を含むポリペプチド、及びｃ）第二Ｆｃ領域を含むポリペプチドからなる。
【００５４】
本明細書で使用されるように、用語「凝集体」は、抗体又はその断片の何れかの多量体を指す。例えば、凝集体は、二量体、三量体、四量体、又は四量体より大きな多量体などであり得る。
【００５５】
「緩衝液」は、その酸−塩基共役成分の作用によってｐＨの変化に抵抗する緩衝溶液である。例えば緩衝液（Ｂｕｆｆｅｒｓ）に記述されている緩衝液の所望のｐＨに応じて、様々な緩衝液を使用することができる。生体系における緩衝液の調製および使用のためのガイド(A Guide for the Preparation and Use of Buffers in Biological Systems)、Mohan, C., Calbiochem Corporation (2007)。
【００５６】
溶液の「ｐＨ」は水性試料のイオン化に対する酸性又はアルカリ性を測定する。
【００５７】
抗体などの分子の「ｐＩ」又は「等電点」とは、分子が正電荷と負電荷の等しい数を含有するｐＨを意味する。ｐＩは、分子（例えば、抗体）のアミノ酸残基の正味の電荷から計算することができるか、等電点電気泳動法によって決定することができる。
【００５８】
用語「導電率」は、２つの電極間に電流を伝導する溶液の能力を意味する。導電率の基本単位は、以前はモー（ｍｈｏ）と呼ばれたジーメンス（Ｓ）である。導電率は、一般にｍＳ／ｃｍの単位で表される。溶液中のイオンの電荷は、電流の伝導性を助長するので、溶液の導電率は、そのイオン濃度に比例する。
【００５９】
「流量」は、通常時間あたりの樹脂体積（ＣＶ／ｈ）として記載される。
【００６０】
「負荷密度(load density)」は、リットルあたりの樹脂で処理された組成物のグラムとしてしばしば表される。
【００６１】
分子（例えば、抗体又は汚染物質）を樹脂に「結合」させるとは、分子（例えば、抗体又は汚染物質）が樹脂中又は樹脂上に可逆的に固定されるよう適切な条件下（例えば、ｐＨ及び／又は導電率）で、分子（例えば、抗体又は汚染物質）を樹脂に対して曝露することを意味する。
【００６２】
「洗浄」とは、樹脂を介して又は樹脂上に、適切な緩衝液を通過させることを意味する。
【００６３】
樹脂から分子（抗体又は汚染物質）を「溶出する」とは、分子がそこから除去することを意味する。
【００６４】
「フロースルー」とは、第二分子（例えば、抗体又は汚染物質）は保持されない、第一分子（例えば、抗体又は汚染物質）の樹脂への結合を指す。
【００６５】
本明細書の「平衡化緩衝液」とは、目的の分子（例えば、抗体）を含む組成物の負荷(loading)のための樹脂を調製するのに使用されるものである。
【００６６】
「洗浄緩衝液」は、目的の分子（例えば、抗体）の負荷後で溶出の前に樹脂に通される緩衝液を指すために本明細書で使用される。
【００６７】
用語「負荷密度(load density)」又は「負荷密度(loading density)」とは、クロマトグラフィー樹脂のリットル当たり目的の分子（例えば、抗体）の密度（Ｇ）又はメンブレン／フィルター容量（Ｌ）のリットル当たりの目的の分子（例えば、抗体）の密度である。幾つかの実施態様において、負荷密度はｇ／Ｌで測定される。
【００６８】
「イオン交換クロマトグラフィー」なる句は、化合物がそれらの正味電荷に基づいて分離される分離技術を指す。
【００６９】
抗体及び一又は複数の汚染物質を含む組成物から抗体を「精製すること」とは、組成物から少なくとも一の汚染物質を（完全に又は部分的に）除去することにより、組成物中の抗体の純度を増加させることを指す。
【００７０】
用語「抗ｃ−ｍｅｔ抗体」及び「ｃ−ｍｅｔに結合する抗体」は、ｃ−ｍｅｔを標的とし、診断薬剤及び／又は治療的薬剤として有用であるように、十分な親和性でｃ−ｍｅｔに結合することができる抗体を指す。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の、無関係な、非ｃ−ｍｅｔタンパク質への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、抗体のｃ−ｍｅｔへの結合の約１０％未満である。幾つかの実施態様において、ｃ−ｍｅｔへ結合する抗体は、解離定数（Ｋｄ）は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）を有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、異なる種由来のｃ−ｍｅｔの間で保存されているｃ−ｍｅｔのエピトープに結合する。
【００７１】
用語「抗体」は最も広い意味で使用され、特にモノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、一価抗体、多価抗体、及びそれらが所望の生物学的活性を示す限り抗体断片（例えばＦａｂ及び／又は単一腕抗体）を網羅する。
【００７２】
抗体の「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体の５つの主要なクラスがあり：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ；これらのうちのいくつかは、「サブクラス」（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）へとさらに分割され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００７３】
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原を結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖状抗体、単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体を含む。
【００７４】
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」及び「全抗体」は、本明細書中で互換的に使用され、天然型抗体構造と実質的に類似の構造を有するか、又は本明細書で定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
【００７５】
「遮断抗体」又は「アンタゴニスト抗体」は、結合する抗原の生物学的活性を（部分的又は完全にのどちらかで）著しく阻害する抗体である。
【００７６】
参照抗体として「同一のエピトープに結合する抗体」とは、競合アッセイにおいて５０％以上、参照抗体のその抗原への結合をブロックする抗体、逆に競合アッセイにおいて５０％以上、その抗体のその抗原への結合をブロックするその参照抗体を指す。典型的な競合アッセイが、本明細書において提供される。
【００７７】
本明細書における目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」とは、下記に定義されるように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークから得られる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含有するフレームワークである。ヒト免疫グロブリンのフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同一のアミノ酸配列を含んでもよく、又はそれはアミノ酸配列の変化を含み得る。幾つかの実施態様において、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。幾つかの実施態様において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、Ｖはヒト免疫グロブリンのフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列に、配列が同一である。
【００７８】
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然型抗体の可変重鎖ドメイン及び軽鎖（それぞれＶＨおよびＶＬ）は、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む各ドメインを持ち、一般的に似たような構造を有する。（例えば、Kindt et al. Kuby Immunology, 第６版, W.H. Freeman and Co., 91頁 (2007)を参照）。単一のＶＨ又はＶＬドメインが、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。更に、特定の抗原に結合する抗体は、相補的なＶＬ又はＶＨドメインのそれぞれのライブラリーをスクリーニングするために、抗原に特異的に結合する抗体由来のＶＨ又はＶＬドメインを用いて単離することができる。例えば、Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)を参照。
【００７９】
本明細書で使用される用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、配列が超可変であるか、及び／又は構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの各領域を指す。一般的に、天然型４本鎖抗体体は、ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）に３つ、及びＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に３つの６つのＨＶＲを含む。ＨＶＲは、一般的に超可変ループ由来及び／又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、最高の配列可変性であり、及び／又は抗原認識に関与している。典型的な超可変ループはアミノ酸残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）、９１−９６（Ｌ３）、２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）、及び９６−１０１（Ｈ３）で生じる。(Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))。典型的なＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の２４−３４、Ｌ２の５０−５６、Ｌ３の８９−９７、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−６５、及びＨ３の９５−１０２で生じる。Kabatら、免疫学的に興味のあるタンパク質の配列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)、第五版, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991)。ＶＨのＣＤＲ１の例外を除いて、ＣＤＲは一般的に超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲは、抗原に接触する残基である「特異性決定残基」又は「ＳＤＲ」をも含む。ＳＤＲは、略称(abbreviated-)ＣＤＲ、又はａ−ＣＤＲと呼ばれる、ＣＤＲの領域内に含まれている。典型的なａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の３１−３４、Ｌ２の５０−５５、Ｌ３の８９−９６、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−５８、及びＨ３の９５−１０２で生じる。（ Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)を参照のこと）。特に断らない限り、可変ドメイン内のＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、上掲のKabatらに従い、本明細書において番号が付けられる。
【００８０】
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般的に４つのＦＲのドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。従って、ＨＶＲ及びＦＲ配列は一般にＶＨ（又はＶＬ）の以下の配列に現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
【００８１】
「Ｎ末端切断重鎖」なる句は本明細書で使用される場合、完全長免疫グロブリン重鎖の全てではないが一部を含むポリペプチドを指し、ここで欠損部分は重鎖のＮ末端領域上に通常位置しているものである。欠損部分は、限定されないが、可変ドメイン、ＣＨ１、及びヒンジ配列の一部又は全てを含む。一般に、野生型ヒンジ配列が存在しない場合には、Ｎ末端切断重鎖の残りの定常ドメインは、別のＦｃ配列（即ち本明細書に記載される「第一」Ｆｃポリペプチド）への結合が可能である成分を含むであろう。例えば、前記成分はジスルフィド結合を形成することができる改変された残基又は付加されたシステイン残基でありうる。
【００８２】
本明細書で使用される用語「Ｆｃ領域」は、一般に、免疫グロブリン重鎖のＣ末端ポリペプチドを含む二量体複合体を指し、ここで、Ｃ末端ポリペプチド配列は、インタクトな抗体のパパイン消化により得ることができるものである。Ｆｃ領域は、天然型又は変異体Ｆｃ配列を含んでもよい。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｆｃ配列の位置Ｃｙｓ２２６のアミノ酸残基から、又はＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端へ伸展するように定義される。しかし、Ｆｃ配列のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は存在しているか又は存在していない場合がある。免疫グロブリンのＦｃ配列は、一般に、２つの定常ドメイン、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含み、任意でＣＨ４ドメインを含む。本明細書の「Ｆｃポリペプチド」により、Ｆｃ領域を構成するポリペプチドの一つを意味する。Ｆｃポリペプチドは、任意の適切な免疫グロブリン、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４サブタイプ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ又はＩｇＭから得られ得る。幾つかの実施態様において、Ｆｃポリペプチドは、野生型ヒンジ配列の一部又は全部を（一般に、そのＮ末端で）含む。幾つかの実施態様において、Ｆｃポリペプチドは、機能性又は野生型ヒンジ配列を含まない。
【００８３】
「Ｆｃレセプター」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを記述する。幾つかの実施態様において、ＦｃＲは天然型ヒトＦｃＲである。いくつかの実施態様では、ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマレセプター）と結合するもので、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスのレセプターを含み、これらのレセプターの対立遺伝子変異体、選択的にスプライシングされた形態のものも含まれる。ＦｃγＲＩＩレセプターには、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性型レセプター」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害型レセプター」）が含まれ、主としてその細胞質ドメインは異なるが、類似のアミノ酸配列を有するものである。活性型レセプターＦｃγＲＩＩＡは、細胞質ドメインにチロシン依存性免疫レセプター活性化モチーフ（immunoreceptor tyrosine-based activation motif ;ＩＴＡＭ）を含んでいる。活性化レセプターＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに、免疫レセプターチロシン−ベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む。（例えば、Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)を参照）。ＦｃＲは、例えば、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4: 25-34 (1994)；及びde Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995)に総説される。他のＦｃＲは、将来同定されるべきものを含み、本明細書にて用語「ＦｃＲ」により網羅される。
【００８４】
用語「Ｆｃレセプター」には、母性ＩｇＧの胎児への移送を担い（Guyer等, J. Immunol. 117:587 (1976)及びＫｉｍ等, J. Immunol.24:249 (1994)）、免疫グロブリンのホメオスタシスを調節する新生児性レセプターＦｃＲｎも含まれる。ＦｃＲｎへの結合を測定する方法は既知である（例えば、Ghetie and Ward., Immunol. Today 18(12):592-598 (1997); Ghetie et al., Nature Biotechnology, 15(7):637-640 (1997); Hinton et al., J. Biol. Chem. 279(8):6213-6216 (2004)；国際公開第２００４／９２２１９号 (Hinton et al.)を参照）。
【００８５】
インビボでのヒトＦｃＲｎへの結合とヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドの血清半減期は、例えばヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウス又は形質転換されたヒト細胞株、又は変異形Ｆｃ領域を有するポリペプチドを投与された霊長類動物においてアッセイすることができる。国際公開公報２０００／４２０７２(Presta)にＦｃＲへの結合を向上又は減弱させた抗体変異型が述べられている。例としてShields等, J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)も参照のこと。
【００８６】
「ヒンジ領域」、「ヒンジ配列」、及びそれらの変形は、本明細書にて使用される場合、当技術分野で既知の意味を含み、例えば、Janewayら、免疫生物学：健康および疾患の免疫システム(Immuno Biology: the immune system in health and disease)、(Elsevier Science Ltd., NY) (第4版、1999); Bloom et al., Protein Science (1997), 6:407-415; Humphreys et al., J. Immunol. Methods (1997), 209:193-202に説明されている。
【００８７】
他に示されない限り、「多価抗体」なる表現は、３つ以上の抗原結合部位を含む抗体を指すために本明細書を通して使用される。多価抗体は、３つつ以上の抗原結合部位を有するように好ましくは操作されており、一般的に天然配列のＩｇＭ又はＩｇＡ抗体ではない。  
【００８８】
「Ｆｖ」断片は、完全な抗原認識及び結合部位を含む抗体断片である。この領域は、密接な会合をなした一つの重鎖と１つの軽鎖可変ドメインの二量体であって、例えばｓｃＦｖにおいては本質的に共有結合することができる二量体からなる。各可変ドメインの３つのＨＶＲが、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上で抗原結合部位を定めるために相互作用するのはこの立体配置においてである。まとめると、６つのＨＶＲ又はそのサブセットは、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的な３つのＨＶＲのみを含んでなるＦｖの半分）でさえ、通常結合部位全体よりは低い親和性ではあるが、抗原を認識し結合する能力を持つ。
【００８９】
「Ｆａｂ」断片は、軽鎖の可変及び定常ドメインと重鎖の可変ドメイン及び第一定常領域（ＣＨ１）を含む。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は一対のＦａｂ断片を含み、一般にそれらの間のヒンジシステインによってそのカルボキシ末端近傍に共有結合して連結される。抗体断片の他の化学結合も当該分野で知られている。
【００９０】
語句「抗原結合腕」は、本明細書で使用する場合、対象の標的分子に特異的に結合する能力を有する抗体断片の構成部分を指す。一般的にかつ好ましくは、抗原結合腕は免疫グロブリンポリペプチド配列、例えば、ＨＶＲ及び／又は免疫グロブリン軽鎖及び重鎖の可変ドメイン配列の複合体である。
【００９１】
「単鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。一般に、ｓＦｖポリペプチドはＶＨ及びＶＬドメイン間にポリペプチドリンカーを更に含み、それはｓＦＶが抗原結合に望まれる構造を形成するのを可能にする。ｓｃＦｖの総説については、Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, 第１１３巻、Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, 269-315頁 (1994)を参照。
【００９２】
用語「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を持つ小さな抗体断片を指し、その断片は、同一ポリペプチド鎖（ＶＨ及びＶＬ）の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同一鎖の２つのドメイン間に対合を可能にするには短すぎるリンカーを用いることにより、そのドメインは別の鎖の相補的ドメインと強制的に対合し、２つの抗原結合部位を作り出す。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４０９７号；国際公開９３／１１１６１号；及びHollinger等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)により十分に記載されている。
【００９３】
「線形抗体」という表現は、Zapata等, Protein Eng. 8(10):1057-1062 (1995)に記載された抗体を意味する。簡単に言えば、これらの抗体は、相補的な軽鎖ポリペプチドと共に抗原結合領域の対を形成する一対の直列のＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）  を含む。直鎖状抗体は二重特異性であっても単一特異性であってもよい。
【００９４】
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を意味し、即ち、例えば、天然に生じる変異を含み、又はモノクローナル抗体製剤の製造時に発生し、一般的に少量で存在している変異体などの、可能性のある変異体抗体を除き、集団を構成する個々の抗体は同一であり、及び／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を一般的に含む、ポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。従って、修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、モノクローナル抗体は、限定されないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含む様々な技術によって作成され、モノクローナル抗体を作製するためのそのような方法及び他の例示的な方法は、本明細書に記載されている。
【００９５】
用語「キメラ」抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の起源又は種から由来し、一方重鎖及び／又は軽鎖の残りが異なる起源又は種から由来する抗体を指す。
【００９６】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的には、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。一般的には、配列のサブグループは、Kabatら、免疫学的に興味のあるタンパク質の配列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)、第五版, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), 1~3巻にあるサブグループである。一実施態様において、ＶＬについて、サブグループは上掲のKabatらにあるサブグループカッパＩである。一実施態様において、ＶＨについて、サブグループは上掲のKabatらにあるサブグループＩＩＩである。
【００９７】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及びヒトＦＲ由来アミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。所定の実施態様において、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には２つの可変ドメインの全てを実質的に含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが、非ヒト抗体のものに対応し、全てまたは実質的にＦＲの全てが、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意で、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体の「ヒト化型」、例えば、非ヒト抗体は、ヒト化を遂げた抗体を指す。
【００９８】
「ヒト抗体」は、ヒト又はヒト細胞により産生されるか、又はヒト抗体のレパートリー又は他のヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト起源に由来する抗体のそれに対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
【００９９】
「ネイキッド抗体」とは、異種の部分（例えば、細胞傷害性部分）又は放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体は薬学的製剤中に存在してもよい。
【０１００】
「天然型抗体」は、天然に生じる様々な構造をとる免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然型ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２つの同一の軽鎖と２つの同一の重鎖から成る約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端に、各重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端に、各軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、定常軽鎖（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）とラムダ（λ）と呼ばれる、２つのタイプのいずれかに割り当てることができる。
【０１０１】
「親和性」は、分子（例えば抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば抗原）との間の非共有結合的な相互作用の総合的な強度を意味する。本明細書で使用する場合、特に断らない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映している本質的な結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般的に解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載したものを含む、当技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例示であって典型的な実施態様は、以下で説明される。
【０１０２】
「親和性成熟」抗体とは、その改変を有していない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性に改良を生じせしめる、その一又は複数のＨＶＲにおいて一又は複数の改変を持つものである。
【０１０３】
指定された抗体の「生物学的特徴」を有する抗体は、同じ抗原に結合する他の抗体とは区別したその抗体の生物学的特徴の一以上を有するものである。
【０１０４】
抗体の「機能的抗原結合部位」は標的抗原に結合することができるものである。抗原結合部位の抗原結合親和性は、必ずしも抗原結合部位が由来する親抗体ほど強くないが、しかし、抗原に結合する能力は、抗原への抗体結合を評価するための公知の種々の方法の何れかを用いて測定可能でなければならない。更に本明細書において多価抗体の抗原結合部位の各々の抗原結合親和性は、定量的に同じである必要はない。本明細書中の多量体抗体に対して、機能的抗原結合部位の数は、米国特許出願公開第２００５０１８６２０８号の実施例２に記載したように超遠心分離分析を用いて評価することができる。分析のこの方法によれば、多量体抗体に対する標的抗原の異なった比率を組み合わせて、複合体の平均分子量は機能的結合部位の異なった数を仮定して計算される。これらの理論値を、機能的結合部位の数を評価するために得られた実際の実験値と比較する。
【０１０５】
「種依存性抗体」は、二番目の哺乳動物種からの抗原の相同体に対して有している結合親和性よりも、一番目の哺乳動物種からの抗原に対してより強力な結合親和性を有する抗体である。通常、種依存性抗体は、ヒト抗原（すなわち、約１×１０−７Ｍ以下、好ましくは約１×１０−８以下、最も好ましくは約１×１０−９Ｍ以下の結合親和性（Ｋｄ）値を有する）と「特異的に結合」するが、その非ヒト抗原に対する結合親和性よりも、少なくとも約５０倍、又は少なくとも約５００倍、又は少なくとも約１０００倍弱い、二番目の非ヒト哺乳動物種からの抗原の相同体に対する結合親和性を有する。種依存性抗体は、上で定義した種々の型の抗体の何れかとすることができる。幾つかの実施態様において、種依存性抗体は、ヒト化又はヒト抗体である。
【０１０６】
本明細書で用いる「実質的に類似」、「実質的に同じ」なる用語は、当業者が、２つの値の間の差異が、その値（例えばＫｄ値）によって測定される生物学的特性という脈絡の中で、わずかに又は全く生物学的及び／又は統計学的有意性がないと考慮するであろうほどに、２つの数値（例えば、一つは抗体に関連するもの、他方は参照／比較抗体に関連するもの）の間の十分高度な類似性を指す。
【０１０７】
本明細書で用いる「実質的に減少」、「実質的に異なる」という句は、当業者が、２つの値の間の差異が、その値（例えばＫｄ値）によって測定される生物学的特性という脈絡の中で、統計学的に有意であると考慮するであろうほどに、２つの数値（一般には、一つは分子に関連するもの、他方は参照／比較分子に関連するもの）の間の十分に高度な違いを指す。
【０１０８】
「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞障害（ＡＤＣＣ）；貪食、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション、及びＢ細胞の活性化を含む。
【０１０９】
用語「薬学的製剤」は、活性化合物の生物学的活性が有効であることを許容するような形態であって、製剤を投与する被検体にとって毒性である他の成分を含まない調製物を指す。「薬学的に許容される」賦形剤（ビヒクル、添加剤）は、活性化合物の有効用量を提供するために合理的に被験体に投与することができるものである。
【０１１０】
「薬学的に許容される担体」は、被検体に非毒性であり、有効成分以外の製剤処方中の成分を指す。薬学的に許容される担体は、限定されないが、緩衝剤、賦形剤、安定剤、又は保存剤を含む。
【０１１１】
「障害」は本明細書に記述される物質／分子又は方法による治療から利益を得る任意の状態である。これには、哺乳動物に問題の疾患に罹らせる病的状態を含む慢性及び急性の障害又は疾患が含まれる。ここで治療されるべき障害の非限定的な例としては、悪性及び良性腫瘍；非白血病及びリンパ系の悪性腫瘍；神経細胞、グリア、星状細胞、視床下部及び他の腺、マクロファージ、上皮、間質及び胞胚腔の障害；及び炎症性、免疫性、その他の血管新生に関連する障害を含む。
【０１１２】
用語「細胞増殖性障害」及び「増殖性疾患」は、ある程度の異常な細胞増殖に関連する障害を言う。一実施態様において、細胞増殖性疾患は癌である。
【０１１３】
本明細書で用いられる「腫瘍」は、悪性又は良性に関わらず、全ての新生細胞成長及び増殖、及び全ての前癌性及び癌性の細胞及び組織を意味する。「癌」、「癌性」、「細胞増殖性疾患」、「増殖性疾患」及び「腫瘍」という用語はここで意味するように相互排他的ではない。
【０１１４】
用語「癌」及び「癌性」は、無秩序な細胞成長／細胞増殖を典型的に特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を記述する。癌の例には、限定されないが、癌腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫と非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、及び白血病を含む。そのような癌のより具体的な例は、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺がん、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化器癌、膵臓癌、神経膠腫を含む、子宮頚癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜、子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、白血病、及びその他のリンパ増殖性疾患、及び様々な型の頭頸部癌を包含する。幾つかの実施態様において、癌はトリプルネガティブ（ＥＲ−、ＰＲ−、ＨＥＲ２−）癌である。幾つかの実施態様において、癌は局所再発又は転移性疾患を有する乳房の任意の組織学的に確認されたトリプルネガティブ（ＥＲ−、ＰＲ−、ＨＥＲ２−）腺癌を含むトリプルネガティブ転移性乳癌であり、例えばここで局所再発疾患は治癒を目的とした切除に適していない。
【０１１５】
「転移」とは、身体のその原発部位から他の場所への癌の広がりを意味する。癌細胞は、原発腫瘍から離脱してリンパ管や血管に浸透し、血流を介して循環し、体の他の部分の正常組織中の離れた病巣で増殖する（転移する）ことができる。転移は局所的又は離れていることも可能である。転移は、腫瘍細胞が原発腫瘍から離脱し、血流を介して移動し、離れた部位で停止することを条件とした逐次プロセスである。新しい部位で、細胞は血液供給を確立し、そして増殖して生命を脅かす塊を形成することができる。腫瘍細胞内の刺激性と抑制性の両方の分子経路がこの挙動を制御し、離れた部位における腫瘍細胞と宿主細胞間の相互作用もまた重要である。
【０１１６】
本明細書で用いられるように、「治療」（及び「治療する(treat)」又は「治療している（treating)」など文法上の変形）は、治療されている個体の自然経過を変えようと試みる臨床的介入を指し、予防のために、または臨床病理の過程においてのいずれかで実行できる。治療の望ましい効果は、限定されないが、疾患の発症又は再発を予防すること、症状の緩和、疾患の直接的または間接的な病理学的帰結の縮小、転移を予防すること、疾患の進行の速度を遅らせること、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善を含む。幾つかの実施態様において、抗体は、疾患の発症を遅延させるか又は疾患の進行を遅くするために使用される。
【０１１７】
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」とは、所望の治療的又予防的結果を達成するために必要な用量及び期間での、有効な量を指す。
【０１１８】
「治療有効量」は、哺乳動物における疾患又は障害を治療又は予防する治療薬の量を指す。腫瘍の場合は、治療的有効量の治療薬は、癌細胞の数を減少させる、腫瘍の大きさを小さくする、癌細胞の周辺器官への浸潤を阻害する（すなわち、ある程度遅くする、好ましくは止める）、腫瘍の転移を阻害する（すなわち、ある程度遅くする、好ましくは止める）、腫瘍の成長をある程度阻害する、及び／又は疾患に関連する一又は複数の症状をある程度和らげうる。薬物が、成長を妨げ及び／又は現存の癌細胞を死滅させる範囲において、それは細胞分裂停止性及び／又は細胞障害性である。癌治療においては、インビボにおける効力は、例えば生存期間、病状の進行時間（ＴＴＰ）、応答速度（ＲＲ）、応答期間、及び／又は生活の質の測定により測定される。
【０１１９】
「個体」又は「被検体」は、哺乳動物である。哺乳動物は、限定されないが、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウマ）、霊長類（例えば、ヒト、サルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、げっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含む。所定の実施態様において、個体又は被検体はヒトである。
【０１２０】
用語「抗癌治療法」は、癌を治療するのに有用な治療法を指す。抗癌治療剤の例には、限定されないが、例えば、化学療法剤、増殖阻害剤、細胞傷害性薬剤、放射線療法に用いられる薬剤、抗血管新生剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、及び癌を治療するための他の薬剤、抗ＣＤ２０抗体、血小板由来成長因子阻害剤（例えば、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭ（メシル酸イマチニブ））、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、サイトカイン、次の標的、ＰＤＧＦＲ−ｂｅｔａ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ受容体、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２の一以上に特異的に結合するアンタゴニスト（例えば中和抗体）、及び他の生物活性薬剤及び有機化学薬剤などが含まれる。その組合せもまた含まれる。
【０１２１】
「イムノコンジュゲート」は、一以上の異種分子にコンジュゲートした抗体であり、限定されないが、細胞傷害性薬物を含む。
【０１２２】
本明細書で用いられる「細胞傷害性薬物」という用語は、細胞の機能を阻害又は阻止し及び／又は細胞死又は破壊を生ずる物質を指す。細胞傷害性薬物は、限定されないが、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体）：化学療法剤又は薬物（例えば、メトトレキセート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他の挿入剤）、成長阻害剤、酵素及びその断片、例えば核酸分解酵素など、抗生物質、小分子毒素などの毒素、又は細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素活性毒素（それらの断片及び／又はその変異体を含む）、及び以下に開示される様々な抗腫瘍剤又は抗癌剤を包含する。
【０１２３】
「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化合物を指す。化学療法剤の例には、アルキル化剤、例えばチオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））；スルホン酸アルキル、例えばブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン(piposulfan)；アジリジン類、例えばベンゾドーパ(benzodopa)、カルボコン、メツレドーパ(meturedopa)、及びウレドーパ(uredopa)；アルトレトアミン(altretamine)、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド(triethylenethiophosphaoramide)及びトリメチローロメラミン(trimethylolomelamine)を含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；デルタ−９−テトラヒドロカナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標）；βラパチョーネ；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトセシン（合成アナログトポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標）、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）を含む）、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン(scopolectin)及び９−アミノカンプトテシン；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成アナログを含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸(podophyllinic acid)；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；ドゥオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エロイテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンギスタチン；クロランブシル、クロロナファジン(chlornaphazine)、チョロホスファミド(cholophosphamide)、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン(novembichin)、フェネステリン(phenesterine)、プレドニムスチン(prednimustine)、トロフォスファミド(trofosfamide)、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン(chlorozotocin)、フォテムスチン(fotemustine)、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニトロスレアス(nitrosureas)；抗生物質、例えばエネジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン(calicheamicin)、特にカリケアマイシンγ１Ｉ及びカリケアマイシンωＩ１（例えばNicolaou et al., Agnew Chem Intl. Ed. Engl. 33:183-186(1994)参照）；ＣＤＰ３２３、経口α−４インテグリン阻害剤；ダイネマイシン(dynemicin)Ａを含むダイネマイシン；エスペラマイシン；並びにネオカルチノスタチン発色団及び関連する色素タンパクエネジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン類(aclacinomysins)、アクチノマイシン、オースラマイシン（authramycin)、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン(cactinomycin)、カラビシン(carabicin)、カルミノマイシン、カルジノフィリン(carzinophilin)、クロモマイシン類、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン(detorbicin)、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射剤（ＤＯＸＩＬ（登録商標）、リポソームドキソルビシンＴＬＣＤ−９��（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標）、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マーセロマイシン(marcellomycin)、マイトマイシンＣのようなマイトマイシン、マイコフェノール酸(mycophenolic acid)、ノガラマイシン（nogalamycin)、オリボマイシン(olivomycins)、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン(potfiromycin)、ピューロマイシン、ケラマイシン(quelamycin)、ロドルビシン(rodorubicin)、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン(tubercidin)、ウベニメクス、ジノスタチン(zinostatin)、ゾルビシン(zorubicin)；代謝拮抗剤、例えばメトトレキセート、ゲムシタビン(gemcitabine)（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフル(tegafur)（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン(capecitabine)（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン(epothilone)、及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸アナログ、例えばデノプテリン(denopterin)、メトトレキセート、プテロプテリン(pteropterin)、トリメトレキセート（trimetrexate)；プリンアナログ、例えばフルダラビン(fludarabine)、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えばアンシタビン、アザシチジン(azacitidine)、６−アザウリジン(azauridine)、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン(enocitabine)、フロキシウリジン(floxuridine)；アンドロゲン類、例えばカルステロン(calusterone)、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン(testolactone)；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸リプレニッシャー(replenisher)、例えばフロリン酸(frolinic acid)；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン(amsacrine)；ベストラブシル(bestrabucil)；ビサントレン(bisantrene)；エダトラキセート(edatraxate)；デフォファミン(defofamine)；デメコルシン(demecolcine)；ジアジコン(diaziquone)；エルフォルニチン(elfornithine)；酢酸エリプチニウム(elliptinium)；エポチロン；エトグルシド(etoglucid)；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン(lonidainine)；メイタンシン(maytansine)及びアンサマイトシン類(ansamitocins)のようなメイタンシノイド類(maytansinoids)；ミトグアゾン(mitoguazone)；ミトキサントロン；モピダンモール(mopidanmol)；ニトラクリン(nitracrine)；ペントスタチン；フェナメット(phenamet)；ピラルビシン；ロソキサントロン(losoxantron)；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体(JHS Natural Products, Eugene, OR)；ラゾキサン(razoxane)；リゾキシン(rhizoxin)；シゾフィラン；スピロゲルマニウム(spirogermanium)；テニュアゾン酸(tenuazonic acid)；トリアジコン(triaziquone)；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン(trichothecenes)（特に、Ｔ−２トキシン、ベラキュリンＡ(verracurin A)、ロリジンＡ(roridin A)及びアングイジン(anguidine)）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン(mannomustine)；ミトブロニトール；ミトラクトール(mitolactol)；ピポブロマン(pipobroman)；ガシトシン(gacytosine）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥＴＭ）、及びドキセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））；クロランブシル；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；プラチナ剤、例えばシスプラチン、オキサリプラチン（例えばＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））及びカルボプラチン；ビンカ類でチューブリン重合の微小管形成を阻害するもの、例えばビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標）、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、及びビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボビン(leucovovin)；ノバントロン（novantrone)；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロナート(ibandronate)；トポイソメラーゼ阻害薬ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロールニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド、例えば、ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））；ビスホスホネート、例えばクロドロネート（例えばＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）又はＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロン酸（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロン酸（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロン酸（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、又はリセドロン酸（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））；トロキサシタビン(troxacitabine)（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常な細胞増殖に結びつくシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えばＰＫＣ−α、Ｒａｆ、及びＨ−Ｒａｓ、及び上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子治療ワクチン等のワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害薬（例えばＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えばＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ＢＡＹ４３９００６（ソラフェニブ；Bayer）；ＳＵ−１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Pfizer）；ペリフォシン(perifosine)、ＣＯＸ−２阻害剤（例えばセレコキシブ又はエトリコキシブ）、プロテオゾーム阻害剤（例えばＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ−７７９；チピファルニブ(tipifarnib)（Ｒ１１５７７）；オラフィニブ(orafenib)、ＡＢＴ５１０；ＢＣＬ−２阻害剤、例えばオブリメルセンナトリウム(oblimersen sodium)（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））；ピクサントロン；ＥＧＦＲ阻害剤（以下の定義を参照）；チロシンキナーゼ阻害剤；セリン−スレオニンキナーゼ阻害剤、例えばラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えばロナファーニブ（ＳＣＨ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲＴＭ）；及び上述したものの何れかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体：並びに上記のうち２以上の組合せ、例えば、シクロフォスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニソロンの併用療法の略称であるＣＨＯＰ；及び５−ＦＵ及びロイコボリンとオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮＴＭ）を組合せた治療法の略称であるＦＯＬＦＯＸが含まれる。
【０１２４】
ここで定義された化学療法剤には、癌の増殖を促進しうるホルモンの作用を調節、低減、遮断、又は阻害するように働く「抗ホルモン剤」又は「内分泌治療剤」が含まれる。それらはそれ自体がホルモンであってもよく、限定するものではないが、混合アゴニスト／アンタゴニストプロファイルを持つ抗エストロゲン、例えばタモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標））、４−ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））、イドキシフェン、ドロロキシフェン、ラロキシフェン(raloxifene)（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、トリオキシフェン(trioxifene)、ケオキシフェン(keoxifene)、及びＳＥＲＭ３などの選択的なエストロゲン受容体調節因子（ＳＥＲＭ）；アゴニスト特性を有さない純粋な抗エストロゲン類、例えばフルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））、及びＥＭ８００（このような薬剤はエストロゲン受容体（ＥＲ）二量体化をブロックし、ＤＮＡ結合を阻害し、ＥＲ代謝回転を増加させ、及び／又はＥＲレベルを抑制しうる）；アロマターゼインヒビター、例えば、ホルメスタン及びエキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））などのステロイド系アロマターゼインヒビター、及びアナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））及びアミノグルテチミドなどの非ステロイド性アロマターゼインヒビター、及びボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、メゲストロールアセテート（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、ファドロゾール及び４（５）−イミダゾールを含む他のアロマターゼインヒビター；黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト、例えばロイプロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、ゴセレリン、ブセレリン、及びトリプトレリン；性ステロイド、例えばプロゲスチン、例えばメゲストロールアセテート及びメドロキシプロゲステロンアセテート、エストロゲン、例えばジエチルスチルベストロール及びプレマリン、及びアンドロゲン／レチノイド、例えばフルオキシメステロン、全てのトランスレチオニン酸及びフェンレチニド；オナプリストン；抗プロゲステロン；エストロゲン受容体下方制御因子（ＥＲＤ）；抗アンドロゲン類、例えばフルタミド、ニルタミド及びビカルタミド；及び上記の何れかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体；並びに、上記のうちの２以上の組合せを含む。
【０１２５】
この出願で用いられる用語「プロドラッグ」なる用語は、親薬剤と比較して腫瘍細胞に対する細胞障害性が低く、酵素的に活性化又はより活性な親形態に変換されうる薬学的に活性な物質の前駆体又は誘導体の形態を指す。例として、Wilman, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, 375-382頁, 615th Meeting Belfast (1986)及びStella et al., "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery," Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), 247-267頁, Humana Press (1985)を参照のこと。プロドラッグには、限定するものではないが、ホスファート含有プロドラッグ、チオホスファート含有プロドラッグ、スルファート含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸修飾プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、β−ラクタム含有プロドラッグ、任意に置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグ、又は任意に置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、より活性のある細胞毒のない薬剤に転換可能な５−フルオロシトシン及び他の５−フルオロウリジンプロドラッグを含む。限定はしないが、使用されるプロドラッグ形態に誘導体化可能な細胞障害性剤の例には、前記の化学療法剤が含まれる。
【０１２６】
本明細書で使用する「増殖阻害剤」は、細胞（例えばインビトロ又はインビボの何れかにおいて増殖がＨＧＦ／ｃ−ｍｅｔの活性化に依存している細胞）の増殖を阻害する化合物又は組成物を指す。よって、増殖阻害剤は、Ｓ期でＨＧＦ／ｃ−ｍｅｔ依存性細胞の割合を有意に減少させるものである。増殖阻害剤の例は、細胞周期の進行を（Ｓ期以外の位置で）阻害する薬剤、例えばＧ１停止又はＭ期停止を誘発する薬剤を含む。古典的なＭ期ブロッカーには、ビンカ（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン、及び例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤が含まれる。またＧ１停止させるこれらの薬剤は、Ｓ期停止にも波及し、例えば、ＤＮＡアルキル化剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、５−フルオロウラシル、及びアラ−Ｃである。更なる情報は、The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn及びIsrael, 編, 第１章, 表題「細胞周期の調節、癌遺伝子、及び抗悪性腫瘍薬（Cell cycle regulation, oncogene, and antineoplastic drugs）」、Murakami等、(WB Saunders: Philadelphia, 1995)、特に１３頁に見出すことができる。タキサン類（パクリタキセル及びドセタキセル）は、共にイチイに由来する抗癌剤である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Rhone-Poulenc Rorer）は、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Bristol-Myers Squibb）の半合成類似体である。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリン二量体から微小管の集合を促進し、細胞の有糸分裂を阻害する結果となる脱重合を防ぐことによって微小管を安定化にする。
【０１２７】
「放射線療法」とは、正常に機能する能力を制限するか、又は完全に細胞を破壊するために、細胞に十分な損傷を誘導するために指定されたγ線又はβ線の使用を意味する。治療の用量及び持続時間を決定するための当技術分野で公知の多くの方法が存在することが理解されるであろう。典型的な治療法は一回の投与として与えられ、典型的な投与量は、１日あたり１０から２００単位（グレイ）の範囲である。
【０１２８】
用語「同時に」は、投与の少なくとも一部が時間的に重なる二以上の治療剤の投与を意味するために使用される。従って、同時投与とは、一以上の他の薬剤の投与を中止した後に一以上の薬剤投与が継続する場合の投与計画を含む。
【０１２９】
「低減する又は阻害する」とは、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又はそれ以上の全体的減少を引き起こす能力を意味する。低減する又は阻害するとは、治療する疾患の症状、転移の存在又は大きさ、又は原発腫瘍の大きさを指しうる。
【０１３０】
用語「パッケージ挿入物」は、効能、用法、用量、投与、併用療法、禁忌についての情報、及び／又はそのような治療用製品の使用に関する警告を含む、治療用製品の商用パッケージに慣習的に含まれている説明書を指すために使用される。
【０１３１】
本明細書に記載される本発明の態様及び実施態様は、態様及び実施態様を「含む」及び／又は「から本質的になる」を含む。
【０１３２】
本明細書で使用されるように、単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に指示がない限り、複数への参照が含まれる。
【０１３３】
当業者によって理解されるように、本明細書中の「およそ」の値又はパラメーターへの言及は、その値又はパラメーター自体に対する実施態様を含む（記載する）。例えば、「およそＸ」との記載には「Ｘ」の記載が含まれる。
【０１３４】
ＩＩ．精製の方法と精製された組成物
本明細書において提供されるのは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法及び精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１３５】
特に、本明細書において提供されるのは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保つことを含む抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を精製する方法である。抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保つこととは、本明細書において「凝集工程」と呼ばれる。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物は更にカチオン性高分子を含む。幾つかの実施態様において、カチオン性高分子はＰＥＩである。幾つかの実施態様において、（組成物中の）ＰＥＩの濃度は０．１％（ｖ／ｖ）、０．２％（ｖ／ｖ）、０．２５％（ｖ／ｖ）、０．３％（ｖ／ｖ）、０．３５％（ｖ／ｖ）、０．４％（ｖ／ｖ）、０．４５％（ｖ／ｖ）、又は０．５％（ｖ／ｖ）である。幾つかの実施態様において、ＰＥＩの濃度は約０．１％−約０．４％（ｖ／ｖ）、約０．２％−約０．６％（ｖ／ｖ）、約０．２％−約０．４％（ｖ／ｖ）の何れかである。幾つかの実施態様において、ＰＥＩの濃度は約０．２％（ｖ／ｖ）である。幾つかの実施態様において、ＰＥＩの濃度は約０．４％（ｖ／ｖ）である。例えば、本明細書において提供されるのは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保つことを含む抗ｃ−ｍｅｔ抗体とＰＥＩを含む組成物を精製する方法である。幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）遠心分離及び／又はｂ）希釈及び遠心分離及び／又はｃ）希釈、遠心分離及び濾過を更に含む。
【０１３６】
幾つかの実施態様において、凝集工程で抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物は、約２８°Ｃ−約３２°Ｃの間、約２８°Ｃ−約３１°Ｃの間、約２８°Ｃ−約３０°Ｃの間、約２９°Ｃ−約３２°Ｃの間、約２９°Ｃ−約３１°Ｃの間、約２８°Ｃ−約３４°Ｃの間、約２８°Ｃ−約３５°Ｃの間、約３０°Ｃ−約３４°Ｃの間、約３０°Ｃ−約３５°Ｃの間の何れかの温度で保たれる。幾つかの実施態様において、凝集工程で抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物は、約２８°Ｃ、約２９°Ｃ、約３０°Ｃ，、約３１°Ｃ、約３２°Ｃ、約３３°Ｃ、約３４°Ｃ、約３５°Ｃ、又は約３６°Ｃの何れかの温度で保たれる。
【０１３７】
幾つかの実施態様において、凝集工程で抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物は、約６−約７の間、約６−約７．５の間、約６．５−約８の間、約６．５−約７．５の間、又は約６．５−約７の間の何れかのｐＨで保たれる。幾つかの実施態様において、凝集工程で抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物は、約６、約６．２、約６．４、約６．５、約６．６、約６．８、約７、約７．２、約７．４、約７．５、約７．６、約７．８、又は約８の何れかのｐＨで保たれる。
【０１３８】
幾つかの実施態様において、凝集工程で抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物は、約６．５、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、又は約２０時間の何れかより長時間、上述された温度及び／又は上述されたｐＨで保たれる。幾つかの実施態様において、凝集工程で抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物は、約６．５、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、又は約２０時間の何れかの時間、上述された温度及び／又は上述されたｐＨで保たれる。幾つかの実施態様において、凝集工程で抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物は、約６−約４８、約６−約２４、約６−約２０、約６−約１２、約６−約１５、約６−約１６、約６−約１８、約６−約１０、又は約６−約８時間の何れかの時間、上述された温度及び／又は上述されたｐＨで保たれる。幾つかの実施態様において、凝集工程で抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物は、約６．５、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、又は約２０時間の何れかの時間、上述された温度及び／又は上述されたｐＨで保たれる。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物は更にカチオン性高分子を含む。幾つかの実施態様において、カチオン性高分子はＰＥＩである。幾つかの実施態様において、（組成物中の）ＰＥＩの濃度は０．１％（ｖ／ｖ）、０．２％（ｖ／ｖ）、０．２５％（ｖ／ｖ）、０．３％（ｖ／ｖ）、０．３５％（ｖ／ｖ）、０．４％（ｖ／ｖ）、０．４５％（ｖ／ｖ）、又は０．５％（ｖ／ｖ）である。幾つかの実施態様において、ＰＥＩの濃度は約０．１％−約０．４％（ｖ／ｖ）、約０．２％−約０．６％（ｖ／ｖ）、約０．２％−約０．４％（ｖ／ｖ）の何れかである。幾つかの実施態様において、ＰＥＩの濃度は約０．２％（ｖ／ｖ）である。幾つかの実施態様において、ＰＥＩの濃度は約０．４％（ｖ／ｖ）である。
【０１３９】
幾つかの実施態様において、凝集工程で抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物は、約１２、約１４、約１６、約１８、約２０又は約２２時間、温度が約２８℃及びｐＨが約６に保たれる。幾つかの実施態様において、凝集工程で抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物は、約１２、約１４、約１６、約１８、約２０又は約２２時間、温度が約３０°Ｃ及びｐＨが約６に保たれる。幾つかの実施態様において、凝集工程で抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物は、約１２、約１４、約１６、約１８、約２０又は約２２時間、温度が約３４°Ｃ及びｐＨが約６に保たれる。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物は更にカチオン性高分子を含む。幾つかの実施態様において、カチオン性高分子はＰＥＩである。幾つかの実施態様において、（組成物中の）ＰＥＩの濃度は０．１％（ｖ／ｖ）、０．２％（ｖ／ｖ）、０．２５％（ｖ／ｖ）、０．３％（ｖ／ｖ）、０．３５％（ｖ／ｖ）、０．４％（ｖ／ｖ）、０．４５％（ｖ／ｖ）、又は０．５％（ｖ／ｖ）である。幾つかの実施態様において、ＰＥＩの濃度は約０．１％−約０．４％（ｖ／ｖ）、約０．２％−約０．６％（ｖ／ｖ）、約０．２％−約０．４％（ｖ／ｖ）の何れかである。幾つかの実施態様において、ＰＥＩの濃度は約０．２％（ｖ／ｖ）である。幾つかの実施態様において、ＰＥＩの濃度は約０．４％（ｖ／ｖ）である。幾つかの実施態様において、カチオン性高分子は約０．６％（ｖ／ｖ）の濃度でのＰＥＩである。
【０１４０】
幾つかの実施態様において、凝集工程で抗ｃ−ｍｅｔ抗体及びカチオン性高分子を含む組成物は、約１２、約１４、約１６、約１８、約２０又は約２２時間、温度が約２８℃及びｐＨが約６に保たれる。幾つかの実施態様において、凝集工程で抗ｃ−ｍｅｔ抗体及びカチオン性高分子を含む組成物は、約１２、約１４、約１６、約１８、約２０又は約２２時間、温度が約３０°Ｃ及びｐＨが約６に保たれる。幾つかの実施態様において、凝集工程で抗ｃ−ｍｅｔ抗体及びカチオン性高分子を含む組成物は、約１２、約１４、約１６、約１８、約２０又は約２２時間、温度が約３４°Ｃ及びｐＨが約６に保たれる。幾つかの実施態様において、カチオン性高分子は約０．２％（ｖ／ｖ）の濃度でのＰＥＩである。幾つかの実施態様において、カチオン性高分子は約０．４％（ｖ／ｖ）の濃度でのＰＥＩである。幾つかの実施態様において、カチオン性高分子は約０．６％（ｖ／ｖ）の濃度でのＰＥＩである。
【０１４１】
幾つかの実施態様において、凝集工程で抗ｃ−ｍｅｔ抗体及びカチオン性高分子を含む組成物は、約１６時間又は約２０時間以上の間、温度が約２８℃及びｐＨが約６に保たれる。幾つかの実施態様において、凝集工程で抗ｃ−ｍｅｔ抗体及びカチオン性高分子を含む組成物は、約１６時間又は約２０時間以上の間、温度が約３０°Ｃ及びｐＨが約６に保たれる。幾つかの実施態様において、凝集工程で抗ｃ−ｍｅｔ抗体及びカチオン性高分子を含む組成物は、約１６時間又は約２０時間以上の間、温度が約３４°Ｃ及びｐＨが約６に保たれる。幾つかの実施態様において、カチオン性高分子は約０．２％（ｖ／ｖ）の濃度でのＰＥＩである。幾つかの実施態様において、カチオン性高分子は約０．４％（ｖ／ｖ）の濃度でのＰＥＩである。幾つかの実施態様において、カチオン性高分子は約０．６％（ｖ／ｖ）の濃度でのＰＥＩである。
【０１４２】
抗ｃ−ｍｅｔ抗体の精製における凝集工程の使用は、下記に提供される一以上の改善をもたらし得る。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保つことは、（例えば、凝集工程がない場合の精製方法と比較して）凝集の有効性を改善する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保つことは、（例えば、凝集工程がない場合の精製方法と比較して）より良好な遠心分離をもたらす。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保つことは、（例えば、凝集工程がない場合の精製方法と比較して）より良好な濃縮物及び／又はプロテインＡプールの安定性をもたらす。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保つことは、濃縮物のプール及び／又はプロテインＡプールが１５℃−２５℃に（例えば、約１５℃、約２０℃、又は約２５℃の何れか）保たれることができるように安定性の改善をもたらす。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保つことは、（例えば、凝集工程がない場合の精製方法と比較して）濃縮物の濾過、プロテインＡ負荷、及び／又はその後のクロマトグラフィー工程を改善する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保つことは（例えば、凝集工程がない場合の精製方法と比較して）、限定されないが、ＤＮＡ及びＨＣＰ、例えばＥＣＰなどを含む不純物を減少する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保つことは（例えば、凝集工程がない場合の精製方法と比較して）、固体含有量の割合を減少させるために追加の希釈を可能にする。幾つかの実施態様において、追加の希釈は（例えば、凝集工程がない場合の同じ方法と比較して）、遠心分離の収率を改善する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保つことはは（例えば、凝集工程がない場合の同じ方法と比較して）、遠心分離の流量を増加させる。幾つかの実施態様において、遠心分離の流量の増加は（例えば、凝集工程がない場合の同じ方法と比較して）、より短い処理時間と実質的に同等な分離を可能にする。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保つことは、（例えば、凝集工程がない場合の精製方法と比較して）凝集の有効性を改善する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物は更にカチオン性高分子を含む。幾つかの実施態様において、カチオン性高分子はＰＥＩである。幾つかの実施態様において、（組成物中の）ＰＥＩの濃度は０．１％（ｖ／ｖ）、０．２％（ｖ／ｖ）、０．２５％（ｖ／ｖ）、０．３％（ｖ／ｖ）、０．３５％（ｖ／ｖ）、０．４％（ｖ／ｖ）、０．４５％（ｖ／ｖ）、又は０．５％（ｖ／ｖ）である。幾つかの実施態様において、ＰＥＩの濃度は約０．１％−約０．４％（ｖ／ｖ）、約０．２％−約０．６％（ｖ／ｖ）、約０．２％−約０．４％（ｖ／ｖ）の何れかである。幾つかの実施態様において、ＰＥＩの濃度は約０．２％（ｖ／ｖ）である。幾つかの実施態様において、ＰＥＩの濃度は約０．４％（ｖ／ｖ）である。
【０１４３】
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の精製における凝集工程の使用は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物が、約１０、約１２、約１４、約１６、約１８、約２０、約２２、又は約２４時間、温度が約３０℃及びｐＨが約６に保たれるときに、一以上の任意の改善を生じうる。幾つかの実施態様において、組成物は、３０℃以上の温度でかつｐＨが約６のｐＨで約１６時間以上保たれる。幾つかの実施態様において、組成物は、３０℃以上の温度でかつｐＨが約６のｐＨで約１０時間以上保たれる。幾つかの実施態様において、組成物は、３０℃以上の温度でかつｐＨが約６のｐＨで約１２時間以上保たれる。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物は更にカチオン性高分子を含む。幾つかの実施態様において、カチオン性高分子はＰＥＩである。幾つかの実施態様において、（組成物中の）ＰＥＩの濃度は０．１％（ｖ／ｖ）、０．１％（ｖ／ｖ）、０．２％（ｖ／ｖ）、０．２５％（ｖ／ｖ）、０．３％（ｖ／ｖ）、０．３５％（ｖ／ｖ）、０．４％（ｖ／ｖ）、０．４５％（ｖ／ｖ）、又は０．５％（ｖ／ｖ）である。幾つかの実施態様において、ＰＥＩの濃度は約０．１％−０．４％（ｖ／ｖ）、０．２％−０．６％（ｖ／ｖ）、０．２％−０．４％（ｖ／ｖ）の何れかである。幾つかの実施態様において、ＰＥＩの濃度は約０．２％（ｖ／ｖ）である。幾つかの実施態様において、ＰＥＩの濃度は約０．４％（ｖ／ｖ）である。
【０１４４】
幾つかの実施態様において、本方法は更に遠心分離を含む。幾つかの実施態様において、本方法は更に、以下に記載されるような親和性クロマトグラフィー（例えば、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー）を含む。幾つかの実施態様において、本方法は更に、以下のもののいずれかのような一以上のイオン交換クロマトグラフィー工程を含む。幾つかの実施態様において、本方法は更に、限外濾過及び／又は透析濾過を含む。抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法の工程は、任意の順番で完了することができる。幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）凝集工程と遠心分離（例えば、６０００ｒｐｍ、２０ｌｐｍ、Ｑ／σ＝６ｘ１０−３Ｌ／ｈｒ／ｍ２）、続いてｂ）親和性クロマトグラフィー（例えば、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー）を含む。
【０１４５】
幾つかの実施態様において、本方法は更に（例えば遠心分離後に）濾過を含む。幾つかの実施態様において、濾過は、深層濾過である。
【０１４６】
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物は、細胞培養物の均質化によって生成される。幾つかの実施態様において、細胞培養物は大腸菌細胞培養物である。幾つかの実施態様において、細胞培養物は均質化され、それによって抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む得られた組成物は約８−約２０パーセントの固体を含む。
【０１４７】
更に、本明細書に提供されるのは、親和性クロマトグラフィー（例えば、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー）を用いて抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を精製する方法である。幾つかの実施態様において、本方法は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂上にロードすることを含む。幾つかの実施態様において、本方法は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂上にロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを含む。
【０１４８】
プロテインＡ樹脂の例としては、限定されないが、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＴＭ、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕｒｅＴＭ、Ｐｒｏｓｅｐ ｖＡ、Ｐｒｏｓｅｐ Ｕｌｔｒａ−Ｐｌｕｓ、及び／又はＰＯＲＯＳ ＭａｂＣａｐｔｕｒｅ Ａが挙げられる。幾つかの実施態様において、プロテインＡ樹脂はアガロースマトリックスを含む。幾つかの実施態様において、アガロースマトリックスを含むプロテインＡ樹脂は、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲＴＭ及びＭａｂＳｅｌｅｃｔＴＭである。幾つかの実施態様において、プロテインＡ樹脂はＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂(GE Healthcare (Piscataway, NJ)；アガロースマトリックスに結合したアルカリ耐性プロテインＡ由来のリガンドを含む樹脂）である。例えば、幾つかの実施態様において、本方法は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂上にロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを含む。
【０１４９】
幾つかの実施態様において、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーの流量は、約５−４０ＣＶ／１時間の間、約１５−４０ＣＶ／１時間の間、約２０−４０ＣＶ／１時間の間、又は約２５−４０ＣＶ／１時間の間の何れかである。
【０１５０】
プロテインＡ樹脂は、平衡化緩衝液で平衡化することができ、次いで様々な不純物（例えば、回収された細胞タンパク質（ＥＣＰなど））を含む未精製及び／又は一部精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は平衡化樹脂上にロードすることができる。抗ｃ−ｍｅｔ抗体が樹脂を通じて流れると、抗ｃ−ｍｅｔ抗体及び種々の不純物が固定化したプロテインＡに吸着される。洗浄緩衝液は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体でなく、宿主細胞不純物などの一部の不純物を取り除くために用いることができる。抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、溶出緩衝液を用いて樹脂から溶出される。
【０１５１】
プロテインＡ親和性クロマトグラフィーのための平衡化緩衝液は、トリス及び塩を含んでもよい。有用な塩の例としては、限定されないが、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、及び／又は塩化カリウムが含まれる。幾つかの実施態様において、塩は、塩化カリウムである。幾つかの実施態様において、塩は、塩化ナトリウムである。幾つかの実施態様において、平衡化緩衝液中のトリスの濃度は、約０．０１Ｍから約０．１Ｍの間である。例えば、幾つかの実施態様において、トリスの濃度は、約０．０１Ｍ、約０．０２５Ｍ、約０．０５Ｍ、約０．０７５Ｍ、又は約０．１Ｍの何れかである。幾つかの実施態様において、塩の濃度は、約０．０１Ｍから約０．１Ｍの間である。例えば、幾つかの実施態様において、塩の濃度は、約０．０１Ｍ、約０．０２５Ｍ、約０．０５Ｍ、約０．０７５Ｍ、又は約０．１Ｍの何れかである。幾つかの実施態様において、平衡化緩衝液のｐＨは、約０．１、約７．３、約７．５、約７．７、又は約７．９の何れかである。
【０１５２】
プロテインＡ親和性クロマトグラフィーのための洗浄緩衝液は、緩衝液を含んでもよい。有用な緩衝剤の例としては、限定されないが、アルギニン緩衝液、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、及び／又はリン酸緩衝液が含まれる。幾つかの実施態様において、緩衝液はリン酸緩衝液である。幾つかの実施態様において、リン酸緩衝液はリン酸カリウムである。幾つかの実施態様において、リン酸緩衝液はリン酸ナトリウムである。幾つかの実施態様において、リン酸緩衝液の濃度は、約０．１Ｍから約１．０Ｍの間である。例えば、幾つかの実施態様において、リン酸緩衝液の濃度は、約０．２Ｍ、約０．４Ｍ、約０．６Ｍ、約０．８Ｍ、又は約０．１Ｍの何れかである。幾つかの実施態様において、洗浄緩衝液のｐＨは、約７．０、約７．２５、約７．５、約７．７５、又は約８．０の何れかである。
【０１５３】
プロテインＡ親和性クロマトグラフィーのための溶出緩衝液は、緩衝液を含んでもよい。有用な緩衝剤の例としては、限定されないが、アルギニン緩衝液、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、及び／又はリン酸緩衝液が含まれる。幾つかの実施態様において、緩衝液はリン酸緩衝液である。幾つかの実施態様において、リン酸緩衝液はリン酸カリウムである。幾つかの実施態様において、リン酸緩衝液はリン酸ナトリウムである。幾つかの実施態様において、リン酸緩衝液はグリシン残基(Glycine Phosphate)である。幾つかの実施態様において、リン酸緩衝液の濃度は、約０．０１Ｍから約０．１Ｍの間である。例えば、幾つかの実施態様において、リン酸緩衝液の濃度は、約０．０１Ｍ、約０．０２５Ｍ、約０．０５Ｍ、約０．０７５Ｍ、又は約０．０１Ｍの何れかである。幾つかの実施態様において、溶出緩衝液のｐＨは、約３．１、約３．３、約３．５、又は約３．７の何れかである。幾つかの実施態様において、溶出緩衝液の伝導率は、約０．９ｍＳ／ｃｍから約１．１ｍＳ／ｃｍの間である。幾つかの実施態様において、溶出緩衝液の伝導率は、約０．９ｍＳ／ｃｍ、約１．０ｍＳ／ｃｍ、又は約１．１ｍＳ／ｃｍの何れかである。例えば、幾つかの実施態様において、本方法は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードすること、及び溶出緩衝液で抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを含み、ここで溶出緩衝液はグリシン残基(Glycine Phosphate)を、約０．０７５Ｍの濃度及び約０．９ｍＳ／ｃｍから約１．１ｍＳ／ｃｍの間の伝導率で含む。ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂は、エポキシ活性化を介してアルカリ耐性の組換えプロテインＡリガンドに結合した高度に架橋されたアガロースマトリックスである。
【０１５４】
幾つかの実施態様において、本方法は、上述したような凝集工程を更に含む。幾つかの実施態様において、本方法は更に遠心分離を含む。幾つかの実施態様において、本方法は更に、本明細書に記載されるものの何れかのような一以上のイオン交換クロマトグラフィー工程を含む。幾つかの実施態様において、本方法は更に、限外濾過及び／又は透析濾過を含む。抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法の工程は、任意の順番で完了することができる。幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）凝集工程及び遠心分離、続いてｂ）プロテインＡ親和性クロマトグラフィー（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）、続いてｃ）一以上のイオン交換クロマトグラフィーを含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１５５】
幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保ち、ｂ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離し、ｃ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードし、及びｄ）プロテインＡ親和性樹脂から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを含み、ここでＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は１８００ｎｇ／ｍｇ未満に減少する。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、約１，７００ｎｇ／ｍｇ、約１，６００ｎｇ／ｍｇ、約１，５００ｎｇ／ｍｇ、約１，４００ｎｇ／ｍｇ、約１，３００ｎｇ／ｍｇ、約１，２００ｎｇ／ｍｇ、又は約１，１００ｎｇ／ｍｇ又は約１，０００ｎｇ／ｍｇの何れか未満に減少する。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、約８００ｎｇ／ｍｇと１２００ｎｇ／ｍｇの間、又は約９００ｎｇ／ｍｇと約１１００ｎｇ／ｍｇの間に減少する。幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保ち、ｂ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離し、ｃ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードし、及びｄ）プロテインＡ親和性樹脂から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを含み、ここでＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、凝集工程の無い場合での同じ精製法及び／又は凝集工程及びプロテインＡ親和性クロマトグラフィー樹脂としてＰｒｏｓｅｐ ｖＡが無い場合での同じ精製法と比較して、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、又は２０％に減少する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、ＥＣＰ及び／又は平均的なＥＣＰである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１５６】
幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保ち、ｂ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離し、ｃ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードし、及びｄ）プロテインＡ親和性樹脂から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを含み、ここでプロテインＡ親和性クロマトグラフィー後のＰＥＩは、約５０μｇ／ｍＬ、約４５μｇ／ｍＬ、約３５μｇ／ｍＬ、又は約３０μｇ／ｍＬの何れか未満に減少する。幾つかの実施態様において、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー後のＰＥＩは検出不能である。幾つかの実施態様において、プロテインＡ親和性樹脂はアガロースマトリックスである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１５７】
本明細書に更に提供されるのは、一以上のイオン交換クロマトグラフィー工程を含む抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を精製する方法である。幾つかの実施態様において、イオン交換クロマトグラフィーは、陰イオン交換（ＡＥ）クロマトグラフィーである。幾つかの実施態様において、イオン交換クロマトグラフィーは、陽イオン交換（ＣＥ）クロマトグラフィーである。
【０１５８】
例えば、本明細書に提供されるのは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を弱ＡＥ樹脂上にロードし、フロースルー中に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収することを含む、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を精製する方法である。幾つかの実施態様において、弱ＡＥ樹脂は、フロースルーモードで実行される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１５９】
弱ＡＥ樹脂は、一般に、第三級又は第二級アミン官能基、例えば、ＤＥＡＥ（ジエチルアミノエチル）を含む。弱ＡＥ樹脂の例は当該技術分野で知られており、限定されないが、ＤＥＡＥセファロースファーストフロー、Ｃａｐｔｏ ＤＥＡＥ、ＰＯＲＯＳ Ｄ、ＤＥＡＥ ６５０Ｃ、トヨパールＤＥＡＥ ６５０Ｍ、トヨパールＤＥＡＥ ６５０Ｓ、ＴＳＫｇｅｌ ＤＥＡＥ ５ＰＷ ３０、及び／又はＴＳＫｇｅｌ ＤＥＡＥ ５ＰＷ ２０を含む。幾つかの実施態様において、弱ＡＥ樹脂は、Ｃａｐｔｏ ＤＥＡＥ（化学的に修飾された、高流量アガロースマトリックスに結合した弱いジエチルアミノエチル陰イオン交換体）である。幾つかの実施態様において、弱ＡＥ樹脂は、ＤＥＡＥセファロースファストフローである。
【０１６０】
幾つかの実施態様において、弱ＡＥクロマトグラフィーの流量は、約１００ｃｍ／１時間、約１２５ｃｍ／１時間、約１５０ｃｍ／１時間、約１７５ｃｍ／１時間、約２５０ｃｍ／１時間、約５００ｃｍ／１時間、約７５０ｃｍ／１時間、約１０００ｃｍ／１時間、約１２５０ｃｍ／１時間、又は約１４００ｃｍ／１時間の何れかである。
【０１６１】
弱ＡＥ樹脂は、平衡化緩衝液で平衡化することができ、次いで様々な不純物（例えば、回収された細胞タンパク質（ＥＣＰなど））を含む未精製又は一部精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は平衡化樹脂上にロードすることができる。抗ｃ−ｍｅｔ抗体が樹脂を介して流れるときに、不純物は弱ＡＥ樹脂に吸着されるが、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、フロースルー中に存在している。
【０１６２】
弱ＡＥクロマトグラフィーの平衡化緩衝液は、限定されないが、トリス緩衝液、グリシン緩衝液、ＣＡＰＳＯ、ＣＡＰＳ、ＣＨＥＳ、ＴＡＰＳ、および／またはリン酸緩衝液を含む。幾つかの実施態様において、弱ＡＥクロマトグラフィーの平衡化緩衝液は、トリス及び塩を含む。平衡化緩衝液中で有用な塩の例としては、限定されないが、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、及び／又は塩化カリウムが含まれる。幾つかの実施態様において、塩は、塩化カリウムである。幾つかの実施態様において、塩は、塩化ナトリウムである。幾つかの実施態様において、弱ＡＥクロマトグラフィーの平衡化緩衝液は、グリシン、リン酸塩、及びトリスを含む。幾つかの実施態様において、平衡化緩衝液中のトリスの濃度は、約０．０１Ｍから約０．１５Ｍの間、又は約０．０１Ｍから約０．１Ｍの間である。例えば、幾つかの実施態様において、トリスの濃度は、約０．０１Ｍ、約０．０２５Ｍ、約０．０５Ｍ、約０．０７５Ｍ、又は約０．１Ｍの何れかである。幾つかの実施態様において、塩の濃度は、約０．００１Ｍから約０．０１Ｍの間である。例えば、幾つかの実施態様において、塩の濃度は、約０．００１Ｍ、約０．００２５Ｍ、約０．００５Ｍ、約０．００７５Ｍ、又は約０．０１Ｍの何れかである。幾つかの実施態様において、グリシンの濃度は、約２５〜１００ｍＭの間である。幾つかの実施態様において、リン酸の濃度は約２．５ｍＭ、約５．０ｍＭ、約７．５ｍＭ、又は約１０．０ｍＭの何れかである。幾つかの実施態様において、リン酸の濃度は、約２．５−１０．０ｍＭの間である。幾つかの実施態様において、グリシンの濃度は約２５ｍＭ、約５０ｍＭ、約７５ｍＭ、又は約１００ｍＭの何れかである。幾つかの実施態様において、平衡化緩衝液のｐＨは、対象のポリペプチド（例えば、抗ｃ−ｍｅｔ抗体）のｐＩよりも高い。幾つかの実施態様において、平衡化緩衝液のｐＨは、約８．７から約９．１の間である。幾つかの実施態様において、平衡化緩衝液のｐＨは、約８．７、約８．８、約８．９、又は約９．０の何れかである。幾つかの実施態様において、対象のポリペプチド（例えば、抗ｃ−ｍｅｔ抗体）のｐＩより高いｐＨは、対象のポリペプチド上で正味の負電荷を生じさせる。幾つかの実施態様において、対象のポリペプチド（例えば、抗ｃ−ｍｅｔ抗体）上の正味の負電荷は、対象のポリペプチドと弱陰イオン樹脂の間に引力を生じる。幾つかの実施態様において、対象のポリペプチド（例えば、抗ｃ−ｍｅｔ抗体）は、約８．２から約８．４の間（例えば、約８．２、約８．３、及び／又は約８．４）のｐＩを有する。
【０１６３】
幾つかの実施態様において、本方法は、上述したような凝集工程を更に含む。幾つかの実施態様において、本方法は更に遠心分離を含む。幾つかの実施態様において、本方法は、上述したようなプロテインＡ親和性クロマトグラフィーを更に含む。幾つかの実施態様において、本方法は更に、本明細書に記載されるものの何れかのような一以上の更なるイオン交換クロマトグラフィー工程を含む。幾つかの実施態様において、本方法は更に、限外濾過及び／又は透析濾過を含む。幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）凝集工程、ｂ）遠心分離工程、続いてｃ）親和性クロマトグラフィー（例えば、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー）、続いてｄ）弱陽イオン交換クロマトグラフィーを含む。幾つかの実施態様において、本明細書において、ａ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保ち、ｂ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離し、ｃ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードし、及びｄ）プロテインＡ親和性樹脂から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出し、ｄ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ親和性樹脂（例えば、ＤＥＡＥセファロースファストフロー又はＣａｐｔｏ ＤＥＡＥ）上にロードし、及びｅ）弱ＡＥ樹脂からフロースルー中に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収することを含む、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を精製する方法が提供される。抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法の工程は、任意の順番で完了することができる。幾つかの実施態様において、工程は逐次的に行われる。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１６４】
幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保ち、ｂ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離し、ｃ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードし、ｄ）プロテインＡ親和性樹脂から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出し、ｅ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ親和性樹脂（例えば、ＤＥＡＥセファロースファストフロー又はＣａｐｔｏ ＤＥＡＥ）上にロードし、及びｆ）弱ＡＥ樹脂からフロースルー中に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収することを含み、ここで、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は約２００ｎｇ／ｍｇ未満に減少する。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、約３００ｎｇ／ｍｇ、約２７５ｎｇ／ｍｇ、約２５０ｎｇ／ｍｇ、約２２５ｎｇ／ｍｇ、約２００ｎｇ／ｍｇ、約１９０ｎｇ／ｍｇ、又は約１８０ｎｇ／ｍｇ又は約１７０ｎｇ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満に減少する。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、約１５０ｎｇ／ｍｇと１９０ｎｇ／ｍｇの間、又は約１６０ｎｇ／ｍｇと約１８０ｎｇ／ｍｇの間に減少する。幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保ち、ｂ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離し、ｃ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードし、ｄ）プロテインＡ親和性樹脂から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出し、ｅ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ親和性樹脂（例えば、ＤＥＡＥセファロースファストフロー又はＣａｐｔｏ ＤＥＡＥ）上にロードし、及びｆ）弱ＡＥ樹脂からフロースルー中に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収することを含み、ここで、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、凝集工程及びプロテインＡ親和性クロマトグラフィー樹脂としてＰｒｏｓｅｐ ｖＡ、及び／又は弱ＣＥ樹脂（例えば、ＣＭセファロース）が無い場合での同じ方法と比較して、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、又は約５５％を超えて減少する。幾つかの実施態様において、工程は逐次的に行われる。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、ＥＣＰ及び／又は平均的なＥＣＰである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１６５】
幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保ち、ｂ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離し、ｃ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードし、ｄ）プロテインＡ親和性樹脂から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出し、ｅ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ親和性樹脂（例えば、ＤＥＡＥセファロースファストフロー又はＣａｐｔｏ ＤＥＡＥ）上にロードし、及びｆ）弱ＡＥ樹脂からフロースルー中に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収することを含み、ここで、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は約２００ｎｇ／ｍｇ未満に減少する。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、約３００ｎｇ／ｍｇ、約２７５ｎｇ／ｍｇ、約２５０ｎｇ／ｍｇ、約２２５ｎｇ／ｍｇ、約２００ｎｇ／ｍｇ、約１９０ｎｇ／ｍｇ、又は約１８０ｎｇ／ｍｇ又は約１７０ｎｇ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満に減少する。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、約１５０ｎｇ／ｍｇと１９０ｎｇ／ｍｇの間、又は約１６０ｎｇ／ｍｇと約１８０ｎｇ／ｍｇの間に減少する。幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保ち、ｂ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離し、ｃ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードし、ｄ）プロテインＡ親和性樹脂から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出し、ｅ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ親和性樹脂（例えば、ＤＥＡＥセファロースファストフロー又はＣａｐｔｏ ＤＥＡＥ）上にロードし、及びｆ）弱ＡＥ樹脂からフロースルー中に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収することを含み、ここで、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、凝集工程及びプロテインＡ親和性クロマトグラフィー樹脂としてＰｒｏｓｅｐ ｖＡ、及び／又は弱ＣＥ樹脂（例えば、ＣＭセファロース）が無い場合での同じ方法と比較して、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、又は約５５％を超えて減少する。幾つかの実施態様において、工程は逐次的に行われる。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、ＥＣＰ及び／又は平均的なＥＣＰである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１６６】
記述された精製方法の何れかの幾つかの実施態様において、本方法は、強ＣＥ樹脂上に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを更に含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１６７】
強ＣＥ交換樹脂は一般にスルホニウムイオンを含む。強ＣＥ樹脂の例は当該技術分野で知られており、限定されないが、ＭｉｎｉＳ ＰＣ ３．２／３、Ｍｉｎｉ Ｓ ４．６／５０ ＰＥ、Ｍｏｎｏ Ｓ ５／５０ＧＬ、ＲＥＳＯＵＲＣＥ Ｓ、ＳＯＵＲＣＥ １５Ｓ、ＳＯＵＲＣＥ ３０Ｓ、ＳＰ セファロースファストフロー、ＰＯＲＯＳ ＨＳ ５０、ＭａｃｒｏＣａｐ ＳＰ、ＨｉＴｒａｐ ＳＰＦＦ、ＨｉＴｒａｐ Ｃａｐｔｏ Ｓ、ＳＰセファロースＸＬ、トヨパールＳＰ ５５０ｃ、ＳＰセファロースＢＢ、ＴＳＫＧｅｌ ＳＰ−５ＰＷ−ＨＲ２０、トヨパールＳＰ ６５０ｃ、トヨパールＭｅｇａＣａｐ ＩＩ ＳＰ−５５０ＥＣ、トヨパールＳＰ−５５０Ｃ、トヨパールＧｉｇａＣａｐ Ｓ−６５０Ｍ、トヨパールＳＰ−６５０Ｍ、トヨパールＳＰ−６５０Ｓ、ＴＳＫｇｅｌ ＳＰ−３ＰＷ ３０、ＴＳＫｇｅｌ ＳＰ ５Ｐ＠ ３０、ＴＳＫｇｅｌ ＳＰ−５ＰＷ ２０、Ｃａｐｔｏ Ｓ、及び／又はＦｒａｃｔｏｇｅｌ ＳＯ３を含む。幾つかの実施態様において、強ＣＥ樹脂は、ＰＯＲＯＳ ＨＳ５０（架橋したポリ（スチレン−ジビニルベンゼン）支持マトリクスに結合したスルホプロピル表面官能基）である。幾つかの実施態様において、強ＣＥ樹脂は、ＳＰセファロースファストフローである。幾つかの実施態様において、強ＣＥ樹脂は、トヨパールＳＰ５５０ｃである。
【０１６８】
幾つかの実施態様において、強ＣＥクロマトグラフィーの流量は、約５０ｃｍ−約５００ｃｍの間／１時間、約５０ｃｍ−約２５０ｃｍの間／１時間、及び／又は約２５０ｃｍ−約５００ｃｍの間／１時間の何れかである。幾つかの実施態様において、流量は、１０５ｃｍ／１時間、１２５ｃｍ／１時間、１３５ｃｍ／１時間、１４５ｃｍ／１時間、１５５ｃｍ／１時間、１６５ｃｍ／１時間、１８５ｃｍ／１時間、及び／又は２５０ｃｍ／１時間の何れかである。
【０１６９】
幾つかの実施態様において、強ＣＥクロマトグラフィーの伝導率は、ｐＨが約８．９−約９．０において約１．９ｍＳ／ｃｍ未満、及び／又はｐＨが９．０以上において約２．４ｍＳ／ｃｍ未満である。幾つかの実施態様において、伝導率は、ｐＨが約８．９−約９．０において約１．４ｍＳ／ｃｍから約１．９ｍＳ／ｃｍの間、及びｐＨが約８．９−約９．５において約１．９ｍＳ／ｃｍである。
【０１７０】
強ＣＥ樹脂は、平衡化緩衝液で平衡化することができ、次いで様々な不純物（例えば、回収された細胞タンパク質（ＥＣＰなど））を含む未精製又は一部精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は平衡化樹脂上にロードすることができる。抗ｃ−ｍｅｔ抗体が樹脂を介して流れるときに、抗ｃ−ｍｅｔ抗体と様々な不純物は固定化された強ＣＥ樹脂に吸着される。洗浄緩衝液は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体でなく、宿主細胞の不純物などの一部の不純物を除去するために用いることができる。幾つかの実施態様において、平衡化緩衝液は洗浄緩衝液として利用される。抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、溶出緩衝液を用いて樹脂から溶出される。
【０１７１】
強ＣＥクロマトグラフィー用の平衡化緩衝液はＭＯＰＳを含む。幾つかの実施態様において、平衡化緩衝液中のＭＯＰＳの濃度は、約０．０１Ｍから約０．１Ｍの間である。例えば、幾つかの実施態様において、ＭＯＰＳの濃度は、約０．０１Ｍ、約０．０２５Ｍ、約０．０５Ｍ、約０．０７５Ｍ、又は約０．１Ｍの何れかである。幾つかの実施態様において、平衡化緩衝液のｐＨは、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、又は約７．４の何れかである。
【０１７２】
強ＣＥクロマトグラフィー用の平衡化緩衝液はＭＯＰＳ及び酢酸塩を含む。幾つかの実施態様において、塩は、酢酸カリウムである。幾つかの実施態様において、塩は、酢酸ナトリウムである。幾つかの実施態様において、平衡化緩衝液中のＭＯＰＳの濃度は、約０．０１Ｍから約０．１Ｍの間である。例えば、幾つかの実施態様において、ＭＯＰＳの濃度は、約０．０１Ｍ、約０．０２５Ｍ、約０．０５Ｍ、約０．０７５Ｍ、又は約０．１Ｍの何れかである。幾つかの実施態様において、酢酸塩の濃度は、約０．１Ｍ、約０．１５Ｍ、約０．２Ｍ、約０．２５Ｍ、又は約０．３Ｍの何れかである。幾つかの実施態様において、平衡化緩衝液のｐＨは、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、又は約７．４の何れかである。
【０１７３】
幾つかの実施態様において、本方法は、上述したような凝集工程を更に含む。幾つかの実施態様において、本方法は更に遠心分離を含む。幾つかの実施態様において、本方法は、上述したようなプロテインＡ親和性クロマトグラフィーを更に含む。幾つかの実施態様において、本方法は更に、本明細書に記載されるものの何れかのような一以上の更なるイオン交換クロマトグラフィー工程を含む。幾つかの実施態様において、本方法は更に、限外濾過及び／又は透析濾過を含む。幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）凝集工程、続いてｂ）遠心分離工程、続いてｃ）親和性クロマトグラフィー（例えば、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー）、続いてｄ）弱陽イオン交換クロマトグラフィー、続いてｅ）強陽イオン交換クロマトグラフィーを含む。例えば、幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を精製する方法は、ａ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保ち、ｂ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離し、ｃ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードし、ｄ）プロテインＡ親和性樹脂から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出し、ｅ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ親和性樹脂（例えば、ＤＥＡＥセファロースファストフロー又はＣａｐｔｏ ＤＥＡＥ）上にロードし、ｆ）弱ＡＥ樹脂からフロースルー中に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収し、ｇ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を強ＣＥ樹脂（例えば、ＳＰセファロースファストフロー、ＰＯＲＯＳ ＨＳ ５０、又はトヨパールＳＰ ５５０ｃ）上にロードし、及びｈ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を強ＣＥ樹脂から溶出することを含む。抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法の工程は、任意の順番で完了することができる。幾つかの実施態様において、工程は逐次的に行われる。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１７４】
幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保ち、ｂ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離し、ｃ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードし、ｄ）プロテインＡ親和性樹脂から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出し、ｅ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ親和性樹脂（例えば、ＤＥＡＥセファロースファストフロー又はＣａｐｔｏ ＤＥＡＥ）上にロードし、及び弱ＡＥ樹脂からフロースルー中に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収し、ｄ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を強ＣＥ樹脂（例えば、ＳＰセファロースファストフロー、ＰＯＲＯＳ ＨＳ ５０、又はトヨパールＳＰ ５５０ｃ）上にロードし、及びｅ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を強ＣＥ樹脂から溶出することを含み、ここで、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は約７０ｎｇ／ｍｇ未満に減少する。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、約６０ｎｇ／ｍｇ、約５５ｎｇ／ｍｇ、約５０ｎｇ／ｍｇ、約４５ｎｇ／ｍｇ、約４０ｎｇ／ｍｇ、約３５ｎｇ／ｍｇ、又は約３０ｎｇ／ｍｇ又は約３０ｎｇ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満に減少する。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、約３０ｎｇ／ｍｇと５０ｎｇ／ｍｇの間、又は約３５ｎｇ／ｍｇと約４５ｎｇ／ｍｇの間に減少する。幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保ち、ｂ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離し、ｃ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードし、ｄ）プロテインＡ親和性樹脂から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出し、ｅ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ親和性樹脂（例えば、ＤＥＡＥセファロースファストフロー又はＣａｐｔｏ ＤＥＡＥ）上にロードし、及びｆ）弱ＡＥ樹脂からフロースルー中に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収し、ｇ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を強ＣＥ樹脂（例えば、ＳＰセファロースファストフロー、ＰＯＲＯＳ ＨＳ ５０、又はトヨパールＳＰ ５５０ｃ）上にロードし、及びｅ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を強ＣＥ樹脂から溶出することを含み、ここで、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、凝集工程、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー樹脂としてＰｒｏｓｅｐ ｖＡ、及び／又は弱ＣＥ樹脂（例えば、ＣＭセファロース）が無い場合での同じ方法と比較して、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、又は約６０％だけ減少する。幾つかの実施態様において、工程は逐次的に行われる。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、ＥＣＰ及び／又は平均的なＥＣＰである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１７５】
幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保ち、ｂ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離し、ｃ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードし、ｄ）プロテインＡ親和性樹脂から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出し、ｅ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を強ＣＥ樹脂（例えば、ＳＰセファロースファストフロー、ＰＯＲＯＳ ＨＳ ５０、又はトヨパールＳＰ ５５０ｃ）上にロードし、ｆ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を強ＣＥ樹脂から溶出し、ｇ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を弱ＡＥ樹脂（例えば、ＤＥＡＥセファロースファストフロー又はＣａｐｔｏ ＤＥＡＥ）上にロードし、及びｈ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を弱ＡＥ樹脂からフロースルー中に回収することを含み、ここで、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は約７０ｎｇ／ｍｇ未満に減少する。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、約６０ｎｇ／ｍｇ、約５５ｎｇ／ｍｇ、約５０ｎｇ／ｍｇ、約４５ｎｇ／ｍｇ、約４０ｎｇ／ｍｇ、約３５ｎｇ／ｍｇ、又は約３０ｎｇ／ｍｇ又は約３０ｎｇ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満に減少する。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、約３０ｎｇ／ｍｇと５０ｎｇ／ｍｇの間、又は約３５ｎｇ／ｍｇと約４５ｎｇ／ｍｇの間に減少する。幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保ち、ｂ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離し、ｃ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードし、ｄ）プロテインＡ親和性樹脂から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出し、ｅ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を強ＣＥ樹脂（例えば、ＳＰセファロースファストフロー、ＰＯＲＯＳ ＨＳ ５０、又はトヨパールＳＰ ５５０ｃ）上にロードし、ｆ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を強ＣＥ樹脂から溶出し、ｇ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を弱ＡＥ樹脂（例えば、ＤＥＡＥセファロースファストフロー又はＣａｐｔｏ ＤＥＡＥ）上にロードし、及びｈ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を弱ＡＥ樹脂からフロースルー中に回収することを含み、ここで、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、凝集工程、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー樹脂としてＰｒｏｓｅｐ ｖＡ、及び／又は弱ＣＥ樹脂（例えば、ＣＭセファロース）が無い場合での同じ精製方法と比較して、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、又は約６０％を超えて減少する。幾つかの実施態様において、工程は逐次的に行われる。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、ＥＣＰ及び／又は平均的なＥＣＰである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１７６】
記述された精製方法の何れかの幾つかの実施態様において、本方法は、強ＡＥ樹脂上に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をロードし、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出することを更に含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１７７】
強ＡＥ交換樹脂は一般に第四級アンモニウムイオンを含む。強ＡＥ樹脂の例は当該技術分野で知られており、限定されないが、Ｍｉｎｉ Ｑ ＰＣ ３．２／３、Ｍｉｎｉ Ｑ ４．６／５０ ＰＥ、Ｍｏｎｏ Ｑ ５／５０ ＧＬ、Ｍｏｎｏ Ｑ ＰＣ １．６／５、ＲＥＳＯＵＲＣＥ Ｑ、ＨｉＴｒａｐ Ｑ ＨＰ、ＨｉＴｒａｐ Ｑ ＦＦ、ＨｉＰｒｅｐ ＳＰ ＦＦ、Ｑセファロースファストフロー、Ｃａｐｔｏ Ｑ、ＨｉＴｒａｐ Ｑ ＸＬ、ＰＯＲＯＳ ＨＱ ５０、トヨパールスーパーＱ−６５０Ｃ、トヨパールＱＡＥ−５５０Ｃ、トヨパール Ｑ−６００ＣＡＲ、トヨパールＧｉｇａＣａｐ Ｑ−６５０Ｍ、トヨパールスーパーＱ−６５０Ｍ、トヨパールスーパーＱ−６５０Ｓ、ＴＳＫｇｅｌスーパーＱ−５ＰＷ ３０、ＴＳＫｇｅｌスーパーＱ−５ＰＷ ２０、及び／又はＦｒａｃｔｏｇｅｌ ＴＭＡＥを含む。幾つかの実施態様において、強ＡＥ樹脂は、Ｑセファロースファストフロー（高度に架橋されたアガロース支持マトリクスに結合した、−Ｏ−ＣＨ２ＣＨＯＨＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨＯＨＣＨ２Ｎ＋（ＣＨ３）表面官能基）である。幾つかの実施態様において、強ＡＥ樹脂はＣａｐｔｏ Ｑである。幾つかの実施態様において、強ＡＥ樹脂はＱセファロースファストフローである。
【０１７８】
幾つかの実施態様において、強ＡＥクロマトグラフィーの流量は、約５０ｃｍ−約５００ｃｍの間／１時間、約５０ｃｍ−約２５０ｃｍの間／１時間、及び／又は約２５０ｃｍ−約５００ｃｍの間／１時間の何れかである。幾つかの実施態様において、流量は、１０５ｃｍ／１時間、１２５ｃｍ／１時間、１３５ｃｍ／１時間、１４５ｃｍ／１時間、１５５ｃｍ／１時間、１６５ｃｍ／１時間、１８５ｃｍ／１時間、及び／又は２５０ｃｍ／１時間の何れかである。
【０１７９】
幾つかの実施態様において、強ＡＥクロマトグラフィーの伝導率は、ｐＨが約８．９−約９．０において約１．９ｍＳ／ｃｍ未満、及び／又はｐＨが９．０以上において約２．４ｍＳ／ｃｍ未満である。幾つかの実施態様において、伝導率は、ｐＨが約８．９−約９．０において約１．４ｍＳ／ｃｍから約１．９ｍＳ／ｃｍの間、及びｐＨが約８．９−約９．５において約１．９ｍＳ／ｃｍである。
【０１８０】
強ＡＥ樹脂は、事前平衡化緩衝液、続いて平衡化緩衝液で平衡化することができ、次いで様々な不純物（例えば、回収された細胞タンパク質（ＥＣＰなど））を含む未精製又は一部精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は平衡化樹脂上にロードすることができる。抗ｃ−ｍｅｔ抗体が樹脂を介して流れるときに、抗ｃ−ｍｅｔ抗体と様々な不純物は固定化された強ＡＥ樹脂に吸着される。洗浄緩衝液は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体でなく、宿主細胞の不純物などの一部の不純物を除去するために用いることができる。幾つかの実施態様において、平衡化緩衝液は洗浄緩衝液として利用される。抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、溶出緩衝液を用いて樹脂から溶出される。
【０１８１】
強ＡＥクロマトグラフィーのための事前平衡化緩衝液は、トリス及び塩を含んでもよい。事前平衡化緩衝液中で有用な塩の例としては、限定されないが、塩化カリウム、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、及び／又はクエン酸ナトリウムが含まれる。幾つかの実施態様において、塩は、塩化カリウムである。幾つかの実施態様において、塩は、塩化ナトリウムである。幾つかの実施態様において、平衡化緩衝液中のトリスの濃度は、約０．０１Ｍから約０．１Ｍの間である。例えば、幾つかの実施態様において、トリスの濃度は、約０．０１Ｍ、約０．０２５Ｍ、約０．０５Ｍ、約０．０７５Ｍ、又は約０．１Ｍの何れかである。幾つかの実施態様において、塩の濃度は、約０．１Ｍから約１．０Ｍの間である。例えば、幾つかの実施態様において、塩の濃度は、約０．１Ｍ、約０．２５Ｍ、約０．５Ｍ、約０．７５Ｍ、又は約１．０Ｍの何れかである。幾つかの実施態様において、事前平衡化緩衝液のｐＨは、約８．７、約８．８、約８．９、約９．０、約９．１、又は約９．２の何れかである。
【０１８２】
強ＡＥクロマトグラフィーのための平衡化緩衝液は、トリス及び塩を含んでもよい。平衡化緩衝液中で有用な塩の例としては、限定されないが、塩化カリウム、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、及び／又はクエン酸ナトリウムが含まれる。幾つかの実施態様において、塩は、塩化カリウムである。幾つかの実施態様において、塩は、塩化ナトリウムである。幾つかの実施態様において、平衡化緩衝液中のトリスの濃度は、約０．０１Ｍから約０．１Ｍの間である。例えば、幾つかの実施態様において、トリスの濃度は、約０．０１Ｍ、約０．０２５Ｍ、約０．０５Ｍ、約０．０７５Ｍ、又は約０．１Ｍの何れかである。幾つかの実施態様において、塩の濃度は、約０．０１Ｍから約０．１Ｍの間である。例えば、幾つかの実施態様において、塩の濃度は、約０．０１Ｍ、約０．０２５Ｍ、約０．０５Ｍ、約０．０７５Ｍ、又は約０．１Ｍの何れかである。幾つかの実施態様において、平衡化緩衝液のｐＨは、約８．７、約８．８、約８．９、約９．０、約９．１、又は約９．２の何れかである。
【０１８３】
強ＡＥクロマトグラフィーのための洗浄緩衝液は、トリス及び塩を含んでもよい。洗浄緩衝液中で有用な塩の例としては、限定されないが、塩化カリウム、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、及び／又はクエン酸ナトリウムが含まれる。幾つかの実施態様において、塩は、塩化カリウムである。幾つかの実施態様において、塩は、塩化ナトリウムである。幾つかの実施態様において、平衡化緩衝液中のトリスの濃度は、約０．０１Ｍから約０．１Ｍの間である。例えば、幾つかの実施態様において、トリスの濃度は、約０．０１Ｍ、約０．０２５Ｍ、約０．０５Ｍ、約０．０７５Ｍ、又は約０．１Ｍの何れかである。幾つかの実施態様において、塩の濃度は、約０．０１Ｍから約０．１Ｍの間である。例えば、幾つかの実施態様において、塩の濃度は、約０．０１Ｍ、約０．０２５Ｍ、約０．０５Ｍ、約０．０７５Ｍ、又は約０．１Ｍの何れかである。幾つかの実施態様において、洗浄緩衝液のｐＨは、約８．７、約８．８、約８．９、約９．０、約９．１、又は約９．２の何れかである。
【０１８４】
強ＡＥクロマトグラフィーのための溶出緩衝液は、トリス及び塩を含んでもよい。事前平衡化緩衝液中で有用な塩の例としては、限定されないが、塩化カリウム、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、及び／又はクエン酸ナトリウムが含まれる。幾つかの実施態様において、塩は、塩化カリウムである。幾つかの実施態様において、塩は、塩化ナトリウムである。幾つかの実施態様において、平衡化緩衝液中のトリスの濃度は、約０．０１Ｍから約０．１Ｍの間である。例えば、幾つかの実施態様において、トリスの濃度は、約０．０１Ｍ、約０．０２５Ｍ、約０．０５Ｍ、約０．０７５Ｍ、又は約０．１Ｍの何れかである。幾つかの実施態様において、塩の濃度は、約０．０１５Ｍから約０．１５Ｍの間である。例えば、幾つかの実施態様において、塩の濃度は、約０．０１５Ｍ、約０．０４５Ｍ、約０．０７５Ｍ、約０．０９５Ｍ、又は約０．１１５Ｍの何れかである。幾つかの実施態様において、洗浄緩衝液のｐＨは、約８．７、約８．８、約８．９、約９．０、約９．１、又は約９．２の何れかである。
【０１８５】
幾つかの実施態様において、本方法は、上述したような凝集工程を更に含む。幾つかの実施態様において、本方法は更に遠心分離を含む。幾つかの実施態様において、本方法は、上述したようなプロテインＡ親和性クロマトグラフィーを更に含む。幾つかの実施態様において、本方法は更に、本明細書に記載されるものの何れかのような一以上の更なるイオン交換クロマトグラフィー工程を含む。幾つかの実施態様において、本方法は更に、限外濾過及び／又は透析濾過を含む。幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）凝集工程、続いてｂ）遠心分離工程、続いてｃ）親和性クロマトグラフィー（例えば、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー）、続いてｄ）弱ＡＥクロマトグラフィー、続いてｅ）強ＣＥクロマトグラフィー、続いてｆ）強ＡＥクロマトグラフィーを含む。例えば、幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を精製する方法は、ａ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保ち、ｂ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離し、ｃ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードし、ｄ）プロテインＡ親和性樹脂から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出し、ｅ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ親和性樹脂（例えば、ＤＥＡＥセファロースファストフロー又はＣａｐｔｏ ＤＥＡＥ）上にロードし、ｆ）弱ＡＥ樹脂からフロースルー中に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収し、ｇ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を強ＣＥ樹脂（例えば、ＳＰセファロースファストフロー、ＰＯＲＯＳ ＨＳ ５０、又はトヨパールＳＰ ５５０ｃ）上にロードし、及びｈ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を強ＣＥ樹脂から溶出し、ｉ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を強ＡＥ樹脂（例えば、Ｑセファロースファストフロー、Ｃａｐｔｏ Ｑ、又はＰＯＲＯＳ ＨＱ ５０）上にロードし、及びｊ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を強ＡＥ樹脂から溶出することを含む。抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法の工程は、任意の順番で完了することができる。幾つかの実施態様において、工程は逐次的に行われる。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１８６】
幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保ち、ｂ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離し、ｃ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードし、ｄ）プロテインＡ親和性樹脂から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出し、ｅ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ親和性樹脂（例えば、ＤＥＡＥセファロースファストフロー又はＣａｐｔｏ ＤＥＡＥ）上にロードし、ｆ）弱ＡＥ樹脂からフロースルー中に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収し、ｇ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を強ＣＥ樹脂（例えば、ＳＰセファロースファストフロー、ＰＯＲＯＳ ＨＳ ５０、又はトヨパールＳＰ ５５０ｃ）上にロードし、及びｈ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を強ＣＥ樹脂から溶出し、ｉ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を強ＡＥ樹脂（例えば、Ｑセファロースファストフロー、Ｃａｐｔｏ Ｑ、又はＰＯＲＯＳ ＨＱ ５０）上にロードし、及びｊ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を強ＡＥ樹脂から溶出することを含み、ここで、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は約５０ｎｇ／ｍｇ未満に減少する。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、約３４ｎｇ／ｍｇ、約３０ｎｇ／ｍｇ、約２５ｎｇ／ｍｇ、約２０ｎｇ／ｍｇ、約１５ｎｇ／ｍｇ、約１４ｎｇ／ｍｇ、又は約１３ｎｇ／ｍｇ、約１２ｎｇ／ｍｇ、約１１ｎｇ／ｍｇ又は約１０ｎｇ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満に減少する。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、約１ｎｇ／ｍｇと１５ｎｇ／ｍｇの間、又は約５ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間に減少する。幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保ち、ｂ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離し、ｃ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードし、ｄ）プロテインＡ親和性樹脂から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出し、ｅ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ親和性樹脂（例えば、ＤＥＡＥセファロースファストフロー又はＣａｐｔｏ ＤＥＡＥ）上にロードし、ｆ）弱ＡＥ樹脂からフロースルー中に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収し、ｇ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を強ＣＥ樹脂（例えば、ＳＰセファロースファストフロー、ＰＯＲＯＳ ＨＳ ５０、又はトヨパールＳＰ ５５０ｃ）上にロードし、ｈ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を強ＣＥ樹脂から溶出し、ｉ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を強ＡＥ樹脂（例えば、Ｑセファロースファストフロー、Ｃａｐｔｏ Ｑ、又はＰＯＲＯＳ ＨＱ ５０）上にロードし、及びｊ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を強ＡＥ樹脂から溶出することを含み、ここで、ＨＣＰ（例えば、平均的なＨＣＰ）は、凝集工程、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー樹脂としてＰｒｏｓｅｐ ｖＡ、及び／又は弱ＣＥ樹脂（例えば、ＣＭセファロース）が無い場合での同じ方法と比較して、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、又は約３０％だけ減少する。幾つかの実施態様において、工程���逐次的に行われる。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、ＥＣＰ及び／又は平均的なＥＣＰである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１８７】
本明細書に記載される何れかの方法の幾つかの実施態様において、本方法は更にに、限外濾過及び／又は透析濾過を含む。幾つかの実施態様において、本方法は、ａ）凝集工程、続いてｂ）遠心分離工程、続いてｃ）親和性クロマトグラフィー（例えば、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー）、続いてｄ）弱ＡＥクロマトグラフィー、続いてｅ）強ＣＥクロマトグラフィー、続いてｆ）強ＡＥクロマトグラフィー、続いてｇ）限外濾過及び／又は透析濾過を含む。例えば、幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を精製する方法は、ａ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を、２８℃を超える温度で、ｐＨが約６とｐＨが約８の間のｐＨで、６時間を超えて保ち、ｂ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を遠心分離し、ｃ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ樹脂）上へロードし、ｄ）プロテインＡ親和性樹脂から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を溶出し、ｅ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物をプロテインＡ親和性樹脂（例えば、ＤＥＡＥセファロースファストフロー又はＣａｐｔｏ ＤＥＡＥ）上にロードし、ｆ）弱ＡＥ樹脂からフロースルー中に抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収し、ｇ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を強ＣＥ樹脂（例えば、ＳＰセファロースファストフロー、ＰＯＲＯＳ ＨＳ ５０、又はトヨパールＳＰ ５５０ｃ）上にロードし、及びｈ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を強ＣＥ樹脂から溶出し、ｉ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を強ＡＥ樹脂（例えば、Ｑセファロースファストフロー、Ｃａｐｔｏ Ｑ、又はＰＯＲＯＳ ＨＱ ５０）上にロードし、ｊ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を強ＡＥ樹脂から溶出すること、及びｋ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む強ＡＥ樹脂からの溶出物を、限外濾過（例えば、１０ＫＤａの再生されたセルロース限外濾過膜）及び／又は透析濾過に供することを含む。抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法の工程は、任意の順番で完了することができる。幾つかの実施態様において、工程は逐次的に行われる。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。
【０１８８】
精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中に存在するＨＣＰは約５０ｎｇ／ｍｇ以下である。精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）に存在する平均的なＨＣＰは約５０ｎｇ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約３４ｎｇ／ｍｇ、３０ｎｇ／ｍｇ、約２５ｎｇ／ｍｇ、約２０ｎｇ／ｍｇ、約１９ｎｇ／ｍｇ、約１８ｎｇ／ｍｇ、約１７ｎｇ／ｍｇ、約１６ｎｇ／ｍｇ、約１５ｎｇ／ｍｇ、約１４ｎｇ／ｍｇ、約１３ｎｇ／ｍｇ、約１２ｎｇ／ｍｇ、約１１ｎｇ／ｍｇ、約１０ｎｇ／ｍｇ、約又は９ｎｇ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約５ｎｇ／ｍｇと約２０ｎｇ／ｍｇの間、約５ｎｇ／ｍｇと約２５ｎｇ／ｍｇの間、約５ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約３０ｎｇ／ｍｇ，の間、約１ｎｇ／ｍｇと約２５ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約２０ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間、又は約１ｎｇ／ｍｇと１０ｎｇ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約５、約５．５、約６．５、約７、約７．５、約８、約８．５、約９、約９．５、約１０、約１０．５、約１１、約１１．５、約１２、約１２．５、約１３、約１３．５、約１４、約１４．５、約１５、約１５．５、約１６、約１６．５、約１７、又は約１７．５ｎｇ／ｍｇの何れかである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、ＥＣＰ及び／又は平均的なＥＣＰである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１８９】
精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のＤＮＡレベルは約０．３ｐｇ／ｍｇ以下である。精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の平均的なＤＮＡレベルは約０．３ｐｇ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、ＤＮＡレベル及び／又は平均的なＤＮＡレベルは、約０．３ｐｇ／ｍｇ、約０．２５ｐｇ／ｍｇ、約０．２ｐｇ／ｍｇ、約０．１５ｐｇ、又は約０．１ｐｇ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、ＤＮＡレベル及び／又は平均的なＤＮＡレベルは、約０．００１ｐｇ／ｍｇと約０．３ｐｇ／ｍｇの間、約０．００１ｐｇ／ｍｇと約０．２ｐｇ／ｍｇの間、約０．００１ｐｇ／ｍｇと約０．１ｐｇ／ｍｇの間、約０．０１ｐｇ／ｍｇと約０．３ｐｇ／ｍｇの間、約０．０１ｐｇ／ｍｇと約０．２ｐｇ／ｍｇの間、又は約０．０１ｐｇ／ｍｇと約０．１ｐｇ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＤＮＡレベル及び／又は平均的なＤＮＡレベルは、約０．３、約０．２５、約０．２、約０．１５、又は約０．１ｐｇ／ｍｇの何れかである。幾つかの実施態様において、ＤＮＡレベルはＰＣＲによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１９０】
精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の濾過したプロテインＡ（ＬｐＡ）は約２ｎｇ／ｍｇ以下である。精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の平均的なＬｐＡは約２ｎｇ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、ＬｐＡ及び／又は平均的なＬｐＡは、約０．００１ｎｇ／ｍｇと約２ｎｇ／ｍｇの間、約０．０１ｎｇ／ｍｇと約２ｎｇ／ｍｇの間、約０．１ｎｇ／ｍｇと約２ｎｇ／ｍｇの間、又は約１ｎｇ／ｍｇと約２ｎｇ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＬｐＡ及び／又は平均的なＬｐＡは、約１、約１．２５、約１．５、約１．７５、又は約２ｎｇ／ｍｇの何れかである。幾つかの実施態様において、ＬｐＡの割合は、濾過したプロテインＡリガンドのアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１９１】
精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のカブトガニ血球抽出成分(Limulus Amebocyte Lysate)（ＬＡＬ）は約０．０１ＥＵ／ｍｇ以下である。精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の平均的なＬＡＬは約０．０１ＥＵ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、ＬＡＬ及び／又は平均的なＬＡＬは、約０．００７ＥＵ／ｍｇ、約０．００６ＥＵ／ｍｇ、約０．００５ＥＵ／ｍｇ、約０．００２ＥＵ／ｍｇ又は約０．００１ＥＵ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、ＬＡＬ及び／又は平均的なＬＡＬは、約０．０００１ＥＵ／ｍｇと約０．０１ＥＵ／ｍｇの間、約０．０００１ＥＵ／ｍｇと約０．００７ＥＵ／ｍｇの間、約０．０００１ＥＵ／ｍｇと約０．００６ＥＵ／ｍｇの間、又は約０．０００１ＥＵ／ｍｇと約０．００５ＥＵ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＬＡＬ及び／又は平均的なＬＡＬは、約０．０１、約０．００７、約０．００６、約０．００５、約０．００４、約０．００３、又は約０．００２ＥＵ／ｍｇの何れかである。幾つかの実施態様において、ＬＡＬの割合はＬＡＬアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１９２】
精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の凝集体の割合は約０．３％以下である。精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の凝集体の平均割合は約０．３％以下である。幾つかの実施態様において、凝集体の割合及び／又は凝集体の平均割合は、約０．２％又は約０．１％の何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、凝集体の割合及び／又は凝集体の平均割合は、約０．００１％と約０．３％の間、約０．０１％と約０．３％の間、約０．００１％と約０．２％の間、又は約０．０１％と約０．２％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、凝集体の割合及び／又は凝集体の平均割合は、約０．３％、約０．２５％、約０．２％、約０．１５％、又は約０．１％の何れかである。幾つかの実施態様において、凝集体の割合は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１９３】
精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の単量体の割合は約９９．５％以上である。精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の単量体の平均割合は約９９．５％以上である。幾つかの実施態様において、単量体の割合及び／又は単量体の平均割合は、約９９．６％、約９９．７％、約９９．８％、又は約９９．９％の何れかに等しいか又はそれ以上である。幾つかの実施態様において、単量体の割合及び／又は単量体の平均割合は、約９９．５％と約９９．９９９％の間、約９９．５％と約９９．９９％の間、約９９．６％と約９９．９９９％の間、約９９．６％と約９９．９９％の間、約９９．７％と約９９．９９９％の間、約９９．７％と約９９．９９％の間、約９９．８％と約９９．９９９％の間、約９９．８％と約９９．９９％の間、又は約９９．９％と約９９．９９９％の間、約９９．９％と約９９．９９％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、単量体の割合及び／又は単量体の平均割合は、約９９．５％、約９９．６％、約９９．７％、約９９．８％、又は約９９．９％の何れかである。幾つかの実施態様において、単量体の割合はＳＥＣアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１９４】
精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の断片の割合は約０．３％以下である。精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の断片の平均割合は約０．３％以下である。幾つかの実施態様において、断片の割合及び／又は断片の平均割合は、約０．２％又は約０．１％の何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、断片の割合及び／又は断片の平均割合は、約０．００１％と約０．３％の間、約０．０１％と約０．３％の間、約０．００１％と約０．２％の間、又は約０．０１％と約０．２％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、断片の割合及び／又は断片の平均割合は、約０．３％、約０．２５％、約０．２％、約０．１５％、約０．１％、又は０％の何れかである。幾つかの実施態様において、断片は検出可能ではない。幾つかの実施態様において、断片の割合はＳＥＣアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１９５】
精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の酸性変異体の割合は約２０％以下である。精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の酸性変異体の平均割合は約２０％以下である。幾つかの実施態様において、酸性変異体の割合及び／又は酸性変異体の平均割合は、約２０％、約１８．５％、約１７．５％、約１５％、又は約１２．５％の何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、酸性変異体の割合及び／又は酸性変異体の平均割合は、約１％と約２０％の間、約５％と約２０％の間、又は約１０％と約２０％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、酸性変異体の割合及び／又は酸性変異体の平均割合は、約２０％、約１８．５％、約１７．５％、約１５％、又は約１２．５％の何れかである。幾つかの実施態様において、酸性変異体の割合はＨＰＩＥＣアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１９６】
精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の主要ピークの割合は約７５％以上である。精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の主要ピークの平均割合は約７５％以上である。幾つかの実施態様において、主要ピークの割合及び／又は主要ピークの平均割合は、約７７．５％、約８０％、約８２．５％、又は約８５％の何れかに等しいか又はそれ以上である。幾つかの実施態様において、主要ピークの割合及び／又は主要ピークの平均割合は、約７５％と約９５％の間、約７７．５％と約９５％の間、約８０％と約９５％の間、約８２．５％と約９５％の間、又は約８５％と約９５％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、主要ピークの割合及び／又は主要ピークの平均割合は、約７５％、約７７．５％、約８０％、約８２．５％、又は約８５％の何れかである。幾つかの実施態様において、主要ピークの割合はＨＰＩＥＣアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１９７】
精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の塩基性変異体の割合は約２．０％以下である。精製する方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の塩基性変異体の平均割合は約２．０％以下である。幾つかの実施態様において、塩基性変異体の割合及び／又は塩基性変異体の平均割合は、約１．５％、約１．２５％、約１．１％、又は約１％の何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、塩基性変異体の割合及び／又は塩基性変異体の平均割合は、約０．００１％と約２％の間、約０．０１％と約２％の間、約０．００１％と約１．５％の間、約０．０１％と約１．５％の間、約０．００１％と約１．０％の間、又は約０．０１％と約１．０％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、塩基性変異体の割合及び／又は塩基性変異体の平均割合は、約２％、約１．５％、約１．２５％、約１．１％、又は約１％の何れかである。幾つかの実施態様において、塩基性変異体の割合はＨＰＩＥＣアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１９８】
本明細書に更に提供されるのは、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体と精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物である。幾つかの実施態様において、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は本明細書に記載される精製方法の何れかにより精製される。幾つかの実施態様において、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は本明細書に記載される精製方法の何れかにより入手可能である。幾つかの実施態様において、本明細書に記載される精製方法の何れかにより精製され及び／又は入手可能である精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中に存在するＨＣＰは、約５０ｎｇ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、本明細書に記載される精製方法の何れかにより精製され及び／又は入手可能である精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を含むロット（例えば、バッチ）中にに存在する平均的なＨＣＰは、約５０ｎｇ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約３４ｎｇ／ｍｇ、３０ｎｇ／ｍｇ、約２５ｎｇ／ｍｇ、約２０ｎｇ／ｍｇ、約１９ｎｇ／ｍｇ、約１８ｎｇ／ｍｇ、約１７ｎｇ／ｍｇ、約１６ｎｇ／ｍｇ、約１５ｎｇ／ｍｇ、約１４ｎｇ／ｍｇ、約１３ｎｇ／ｍｇ、約１２ｎｇ／ｍｇ、約１１ｎｇ／ｍｇ、約１０ｎｇ／ｍｇ、約又は９ｎｇ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約５ｎｇ／ｍｇと約２０ｎｇ／ｍｇの間、約５ｎｇ／ｍｇと約２５ｎｇ／ｍｇの間、約５ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約３０ｎｇ／ｍｇ，の間、約１ｎｇ／ｍｇと約２５ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約２０ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間、又は約１ｎｇ／ｍｇと１０ｎｇ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約５、約５．５、約６．５、約７、約７．５、約８、約８．５、約９、約９．５、約１０、約１０．５、約１１、約１１．５、約１２、約１２．５、約１３、約１３．５、約１４、約１４．５、約１５、約１５．５、約１６、約１６．５、約１７、又は約１７．５ｎｇ／ｍｇの何れかである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、ＥＣＰ及び／又は平均的なＥＣＰである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０１９９】
本明細書において提供されるのは、組成物中に存在するＨＣＰが約５０ｎｇ／ｍｇ以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物である。本明細書において更に提供されるのは、ロット（例えば、バッチ）中に存在する平均的なＨＣＰが約５０ｎｇ／ｍｇ以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）である。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約３４ｎｇ／ｍｇ、３０ｎｇ／ｍｇ、約２５ｎｇ／ｍｇ、約２０ｎｇ／ｍｇ、約１９ｎｇ／ｍｇ、約１８ｎｇ／ｍｇ、約１７ｎｇ／ｍｇ、約１６ｎｇ／ｍｇ、約１５ｎｇ／ｍｇ、約１４ｎｇ／ｍｇ、約１３ｎｇ／ｍｇ、約１２ｎｇ／ｍｇ、約１１ｎｇ／ｍｇ、約１０ｎｇ／ｍｇ、約又は９ｎｇ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約５ｎｇ／ｍｇと約２０ｎｇ／ｍｇの間、約５ｎｇ／ｍｇと約２５ｎｇ／ｍｇの間、約５ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約３０ｎｇ／ｍｇ，の間、約１ｎｇ／ｍｇと約２５ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約２０ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間、又は約１ｎｇ／ｍｇと１０ｎｇ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約５、約５．５、約６．５、約７、約７．５、約８、約８．５、約９、約９．５、約１０、約１０．５、約１１、約１１．５、約１２、約１２．５、約１３、約１３．５、約１４、約１４．５、約１５、約１５．５、約１６、約１６．５、約１７、又は約１７．５ｎｇ／ｍｇの何れかである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、ＥＣＰ及び／又は平均的なＥＣＰである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０２００】
組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のＤＮＡレベルは約０．３ｐｇ／ｍｇ以下である。組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の平均的なＤＮＡレベルは約０．３ｐｇ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、ＤＮＡレベル及び／又は平均的なＤＮＡレベルは、約０．３ｐｇ／ｍｇ、約０．２５ｐｇ／ｍｇ、約０．２ｐｇ／ｍｇ、約０．１５ｐｇ、又は約０．１ｐｇ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、ＤＮＡレベル及び／又は平均的なＤＮＡレベルは、約０．００１ｐｇ／ｍｇと約０．３ｐｇ／ｍｇの間、約０．００１ｐｇ／ｍｇと約０．２ｐｇ／ｍｇの間、約０．００１ｐｇ／ｍｇと約０．１ｐｇ／ｍｇの間、約０．０１ｐｇ／ｍｇと約０．３ｐｇ／ｍｇの間、約０．０１ｐｇ／ｍｇと約０．２ｐｇ／ｍｇの間、又は約０．０１ｐｇ／ｍｇと約０．１ｐｇ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＤＮＡレベル及び／又は平均的なＤＮＡレベルは、約０．３、約０．２５、約０．２、約０．１５、又は約０．１ｐｇ／ｍｇの何れかである。幾つかの実施態様において、ＤＮＡレベルはＰＣＲによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０２０１】
組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の濾過したプロテインＡ（ＬｐＡ）は約２ｎｇ／ｍｇ以下である。組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の平均的なＬｐＡは約２ｎｇ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、ＬｐＡ及び／又は平均的なＬｐＡは、約０．００１ｎｇ／ｍｇと約２ｎｇ／ｍｇの間、約０．０１ｎｇ／ｍｇと約２ｎｇ／ｍｇの間、約０．１ｎｇ／ｍｇと約２ｎｇ／ｍｇの間、又は約１ｎｇ／ｍｇと約２ｎｇ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＬｐＡ及び／又は平均的なＬｐＡは、約１、約１．２５、約１．５、約１．７５、又は約２ｎｇ／ｍｇの何れかである。幾つかの実施態様において、ＬｐＡの割合は、濾過したプロテインＡリガンドのアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０２０２】
組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のカブトガニ血球抽出成分(Limulus Amebocyte Lysate)（ＬＡＬ）は約０．０１ＥＵ／ｍｇ以下である。組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の平均的なＬＡＬは約０．０１ＥＵ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、ＬＡＬ及び／又は平均的なＬＡＬは、約０．００７ＥＵ／ｍｇ、約０．００６ＥＵ／ｍｇ、約０．００５ＥＵ／ｍｇ、約０．００２ＥＵ／ｍｇ又は約０．００１ＥＵ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、ＬＡＬ及び／又は平均的なＬＡＬは、約０．０００１ＥＵ／ｍｇと約０．０１ＥＵ／ｍｇの間、約０．０００１ＥＵ／ｍｇと約０．００７ＥＵ／ｍｇの間、約０．０００１ＥＵ／ｍｇと約０．００６ＥＵ／ｍｇの間、又は約０．０００１ＥＵ／ｍｇと約０．００５ＥＵ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＬＡＬ及び／又は平均的なＬＡＬは、約０．０１、約０．００７、約０．００６、約０．００５、約０．００４、約０．００３、又は約０．００２ＥＵ／ｍｇの何れかである。幾つかの実施態様において、ＬＡＬの割合はＬＡＬアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０２０３】
組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の凝集体の割合は約０．３％以下である。組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の凝集体の平均割合は約０．３％以下である。更に、本明細書において提供されるのは、組成物中に存在する凝集体の割合が約０．３％以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物である。本明細書において更に提供されるのは、組成物中に存在する凝集体の平均割合が約０．３％以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）である。幾つかの実施態様において、凝集体の割合及び／又は凝集体の平均割合は、約０．２％又は約０．１％の何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、凝集体の割合及び／又は凝集体の平均割合は、約０．００１％と約０．３％の間、約０．０１％と約０．３％の間、約０．００１％と約０．２％の間、又は約０．０１％と約０．２％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、凝集体の割合及び／又は凝集体の平均割合は、約０．３％、約０．２５％、約０．２％、約０．１５％、又は約０．１％の何れかである。幾つかの実施態様において、凝集体の割合は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０２０４】
組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の単量体の割合は約９９．５％以上である。組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の単量体の平均割合は約９９．５％以上である。更に、本明細書において提供されるのは、組成物中に存在する単量体の割合が約９９．５％以上である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物である。本明細書において更に提供されるのは、組成物中に存在する単量体の平均割合が約０．３％以上である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）である。幾つかの実施態様において、単量体の割合及び／又は単量体の平均割合は、約９９．６％、約９９．７％、約９９．８％、又は約９９．９％の何れかに等しいか又はそれ以上である。幾つかの実施態様において、単量体の割合及び／又は単量体の平均割合は、約９９．５％と約９９．９９９％の間、約９９．５％と約９９．９９％の間、約９９．６％と約９９．９９９％の間、約９９．６％と約９９．９９％の間、約９９．７％と約９９．９９９％の間、約９９．７％と約９９．９９％の間、約９９．８％と約９９．９９９％の間、約９９．８％と約９９．９９％の間、又は約９９．９％と約９９．９９９％の間、約９９．９％と約９９．９９％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、単量体の割合及び／又は単量体の平均割合は、約９９．５％、約９９．６％、約９９．７％、約９９．８％、又は約９９．９％の何れかである。幾つかの実施態様において、単量体の割合はＳＥＣアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０２０５】
組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の断片の割合は約０．３％以下である。組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の断片の平均割合は約０．３％以下である。更に、本明細書において提供されるのは、組成物中に存在する断片の割合が約０．３％以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物である。本明細書において更に提供されるのは、組成物中に存在する断片の平均割合が約０．３％以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）である。幾つかの実施態様において、断片の割合及び／又は断片の平均割合は、約０．２％又は約０．１％の何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、断片の割合及び／又は断片の平均割合は、約０．００１％と約０．３％の間、約０．０１％と約０．３％の間、約０．００１％と約０．２％の間、又は約０．０１％と約０．２％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、断片の割合及び／又は断片の平均割合は、約０．３％、約０．２５％、約０．２％、約０．１５％、約０．１％、又は０％の何れかである。幾つかの実施態様において、断片は検出可能ではない。幾つかの実施態様において、断片の割合はＳＥＣアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０２０６】
組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の酸性変異体の割合は約２０％以下である。組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の酸性変異体の平均割合は約２０％以下である。更に、本明細書において提供されるのは、組成物中に存在する酸性変異体の割合が約２０％以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物である。本明細書において更に提供されるのは、組成物中に存在する酸性変異体の平均割合が約２０％以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）である。幾つかの実施態様において、酸性変異体の割合及び／又は酸性変異体の平均割合は、約２０％、約１８．５％、約１７．５％、約１５％、又は約１２．５％の何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、酸性変異体の割合及び／又は酸性変異体の平均割合は、約１％と約２０％の間、約５％と約２０％の間、又は約１０％と約２０％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、酸性変異体の割合及び／又は酸性変異体の平均割合は、約２０％、約１８．５％、約１７．５％、約１５％、又は約１２．５％の何れかである。幾つかの実施態様において、酸性変異体の割合はＨＰＩＥＣアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０２０７】
組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の主要ピークの割合は約７５％以上である。組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の主要ピークの平均割合は約７５％以上である。更に、本明細書において提供されるのは、組成物中に存在する主要ピークの割合が約７５％以上である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物である。本明細書において更に提供されるのは、組成物中に存在する主要ピークの平均割合が約７５％以上である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）である。幾つかの実施態様において、主要ピークの割合及び／又は主要ピークの平均割合は、約７７．５％、約８０％、約８２．５％、又は約８５％の何れかに等しいか又はそれ以上である。幾つかの実施態様において、主要ピークの割合及び／又は主要ピークの平均割合は、約７５％と約９５％の間、約７７．５％と約９５％の間、約８０％と約９５％の間、約８２．５％と約９５％の間、又は約８５％と約９５％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、主要ピークの割合及び／又は主要ピークの平均割合は、約７５％、約７７．５％、約８０％、約８２．５％、又は約８５％の何れかである。幾つかの実施態様において、主要ピークの割合はＨＰＩＥＣアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０２０８】
組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の塩基性変異体の割合は約２．０％以下である。組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の塩基性変異体の平均割合は約２．０％以下である。更に、本明細書において提供されるのは、組成物中に存在する塩基性変異体の割合が約２．０％以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物である。本明細書において更に提供されるのは、組成物中に存在する塩基性変異体の平均割合が約２．０％以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）である。幾つかの実施態様において、塩基性変異体の割合及び／又は塩基性変異体の平均割合は、約１．５％、約１．２５％、約１．１％、又は約１％の何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、塩基性変異体の割合及び／又は塩基性変異体の平均割合は、約０．００１％と約２％の間、約０．０１％と約２％の間、約０．００１％と約１．５％の間、約０．０１％と約１．５％の間、約０．００１％と約１．０％の間、又は約０．０１％と約１．０％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、塩基性変異体の割合及び／又は塩基性変異体の平均割合は、約２％、約１．５％、約１．２５％、約１．１％、又は約１％の何れかである。幾つかの実施態様において、塩基性変異体の割合はＨＰＩＥＣアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０２０９】
組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約１．５ｍｇ／ｍＬ、又は約２ｍｇ／ｍＬの何れかに等しいか又はそれ以上である。組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）中の抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約１．５ｍｇ／ｍＬ、又は約２ｍｇ／ｍＬの何れかに等しいか又はそれ未満である。
【０２１０】
ＨＣＰ（例えば、ＥＣＰ）のレベルは、当該技術分野で公知の方法により測定することができる。例えば、大腸菌タンパク質のマルチプロダクトサンドイッチＥＬＩＳＡ(multiproduct sandwich ELISA)は、ＥＣＰのレベルを定量化するために用いることができる。親和性精製ヤギ抗全ＥＣＰ抗体は、マイクロタイタープレートウェル上に固定化される。プールサンプルの希釈物をウェル中でインキュベート、続いて西洋ワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートした親和性精製したヤギ抗全ＥＣＰとインキュベートした。西洋ワサビペルオキシダーゼ酵素活性は、ｏ−フェニレンジアミン二塩酸塩を用いて検出される。ＥＣＰは、マイクロタイタープレートリーダーで４９０ｎｍの吸光度を読み取ることによって定量される。４パラメータ曲線フィッティングコンピュータープログラムは、標準曲線を作成し、サンプル濃度を自動的に計算するために使用される。アッセイに先立って、サンプルをアッセイ希釈液で希釈する。アッセイ希釈液による連続２倍希釈は、吸光度の読み取りが標準曲線の範囲内に収まるように行われ得る。ＥＬＩＳＡのアッセイ範囲は、典型的には１．５６ｎｇ／ｍＬから１００ｎｇ／ｍＬである。
【０２１１】
更に、ＤＮＡレベルは、限外されないが、実施例に記載されるようにＰＣＲまたはｒｔＰＣＴを含む当該技術分野で公知の方法により測定することができる。ＬｐＡレベルは、限外されないが、実施例に記載されるようにＥＬＩＳＡを含む当該技術分野で公知の方法により測定することができる。速度論的発色法ＬＡＬアッセイが、実施例に記載されるカブトガニ血球抽出成分（ＬＡＬ）のような本明細書に記載される菌体内毒素を測定するために用いることができる。単量体、凝集体、及び断片の割合は、限外されないが、実施例に記載されるようにサイズ排除クロマトグラフィーを含む当該技術分野で公知の方法により測定することができる。主要ピーク、酸性変異体、及び塩基性変異体の割合は、限外されないが、実施例に記載されるように陽イオン交換クロマトグラフィーを含む当該技術分野で公知の方法により測定することができる。
【０２１２】
ＩＩＩ．組換え法
本明細書に記載される精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物及び／又は精製法において使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、例えば米国特許第４，８１６，５６７号に記載される組換え法及び組成物により産生され得る。一実施態様において、抗体をコードする単離された核酸が提供される。このような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードし得る。更なる実施態様において、そのような核酸を含む一以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施態様において、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。一実施態様において、宿主細胞は以下を含む（例えば、以下で形質転換される）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第一ベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第二ベクター。更なる実施態様において、宿主細胞は以下を含む（例えば、以下で形質転換される）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列、及びＦｃ領域を含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第一ベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第二ベクター、及びＦｃ領域を含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第三ベクター。一腕抗体の産生は、例えば国際公開第２００５／０６３８１６号に記載される。
【０２１３】
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現に適切な宿主細胞は、本明細書に記載の原核細胞又は真核細胞を含む。例えば、特に、グリコシル化およびＦｃエフェクター機能が必要ない場合には、抗体は、細菌で産生することができる。細菌における抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、第５，７８９，１９９号及び第５，８４０，５２３号、国際公開第０５／０６３８１６号を参照。（また、大腸菌における抗体の発現を説明している、Charlton, Methods in Molecular Biology, 第２４８巻(B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003)、頁２４５−２５４も参照）。発現の後、抗体は可溶性画分において細菌の細胞ペーストから単離され得、更に精製することができる。
【０２１４】
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母菌のような真核微生物は、菌類や酵母菌株を含む抗体をコードするベクターのための、適切なクローニング宿主又は発現宿主であり、そのグリコシル化経路が、「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の生成をもたらす。Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004)、及びLi et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)を参照。
【０２１５】
グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物と脊椎動物）から派生している。無脊椎動物細胞の例としては、植物および昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス株が同定され、これらは特にSpodoptera frugiperda細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と組み合わせて使用することができる。
【０２１６】
植物細胞培養を宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５９５９１７７号、第６０４０４９８号、第６４２０５４８号、第７１２５９７８号及び第６４１７４２９号（トランスジェニック植物における抗体産生に関するＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＴＭ技術を記載）を参照。
【０２１７】
脊椎動物細胞もまた宿主として用いることができる。例えば、懸濁液中で増殖するように適合されている哺乳動物細胞株は有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胚腎臓株(Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)に記載された２９３細胞又は２９３細胞；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスのセルトリ細胞(Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載されるＴＭ４細胞）；サル腎細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頚癌細胞（ＨｅＬａ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）；例えばMather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)に記載されるＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)）を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；及びＹ０、ＮＳ０およびＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株を含む。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞系の総説については、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ)、頁255-268 (2003）を参照。
【０２１８】
一実施態様において、宿主細胞は原核生物、例えば大腸菌である。一実施態様において、抗体を作成する方法が提供され、その方法は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の発現に適した条件下で、抗ｃ−ｍｅｔ抗体をコードする核酸を含む大腸菌宿主細胞を培養すること、及び上述される方法によって大腸菌宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収することを含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０２１９】
一実施態様において、宿主細胞は、真核生物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又はリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施態様において、抗体を作成する方法が提供され、その方法は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の発現に適した条件下で、抗ｃ−ｍｅｔ抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養すること、及び上述される方法によって宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から抗ｃ−ｍｅｔ抗体を回収することを含む。
【０２２０】
抗体の組換え生産のために、例えば上述したように、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／又は発現のために一以上のベクターに挿入される。このような核酸は、容易に単離され、従来の手順を用いて（例えば、抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定することができる。
【０２２１】
ＩＶ．抗Ｃ−Ｍｅｔ抗体
本明細書で提供されるのは、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物及び／又は本明細書に記載される精製法で使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体である。有用な抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ｃ−ｍｅｔに十分な親和性および特異性で結合し、一つ以上のｃ−ｍｅｔ活性を低減又は阻害することができる抗体を含む。精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物の抗ｃ−ｍｅｔ抗体及び／又は精製法において使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、限定されないがｃ−ｍｅｔの活性化、下流分子のシグナル伝達（例えば、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）のリン酸化）、細胞増殖、細胞遊走、細胞生存、細胞形態形成および血管新生を含むＨＧＦ／ｃ−ｍｅｔに関連する作用の一以上の態様を調節することに使用することができる。これらの作用は、ｃ−ｍｅｔへのリガンド（例えばＨＧＦ）結合の破壊、ｃ−ｍｅｔのリン酸化、及び／又はｃ−ｍｅｔの多量体化を含む生物学的に関連する任意の機構によって調節することができる。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、アンタゴニスト抗ｃ−ｍｅｔ抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はｃ−ｍｅｔ／ＨＧＦが関与している疾患又は状態を干渉する。
【０２２２】
本明細書に記載される精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体の何れかの幾つかの実施態様において及び／又は精製法の幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はアンタゴニスト抗ｃ−ｍｅｔ抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は抗ｃ−ｍｅｔ抗体断片である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はＩｇＧ１抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はＩｇＧ２抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はｃ−ｍｅｔに特異的な単一の抗原結合腕を有する。
【０２２３】
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は一価である。一価抗体はまた、限外されないが、例えば、全体が参照により本明細書中に援用される、国際公開第２００７／１４７９０１号（イオン性相互作用を記述）、国際公開第２００７／０５９７８２号、国際公開第２００７／０４８０３７号、国際公開第２００８／１４５１３７号（非グリコシル化一価抗体）、国際公開第２００９／０８９００４号（静電的ステアリング効果を記述）、国際公開第２０１０／１２９３０４号（ポリペプチド間の界面で接触しているアミノ酸に置換を導入することによりヘテロ多量体分子を作製するための方法を記載）、国際公開第２０１０／０６３７８５号、国際公開第２０１１／１３３８８６号、及び／又は国際公開第２００５／０６３８１６号を含む、当該技術分野で公知の方法により作成することができる。
【０２２４】
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体断片は単一の抗原結合腕及びＦｃ領域を含む。抗ｃ−ｍｅｔ抗体断片は本明細書に記載され、片腕形態で当該技術分野で知られている。従って、幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体断片は、Ｆｃ領域を含む片腕抗体（即ち重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは単一抗原結合腕を形成する）であり、Ｆｃ領域は、第一及び第二Ｆｃポリペプチドを含み、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは複合体中に存在する。幾つかの実施態様において、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは、前記抗原結合腕を含むＦａｂ分子と比較して、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の安定性を増加させるＦｃ領域を形成する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列、ＣＨ１配列、及び第一Ｆｃポリペプチドを含む第一ポリペプチド、及び（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列及びＣＬ１配列を含む第二ポリペプチドを含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は（ｃ）第二Ｆｃポリペプチドを含む第三ポリペプチドを更に含む。
【０２２５】
幾つかの実施態様において、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物の抗ｃ−ｍｅｔ抗体断片及び／又は精製法において使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体断片は、二価抗体の抗原結合部位を含み、よって抗原に結合する能力を保持する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体断片はＦｃ領域を含み、二価抗体中に存在するときＦｃ領域に通常関連する生物学的機能、例えばＦｃＲｎ結合、抗体半減期の調節、ＡＤＣＣ機能及び補体結合などの少なくとも一を保持する幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体断片はＡＤＣＣ機能及び／又は補体結合活性を持たない。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体断片は、二価抗体に実質的に類似したインビトロでの半減期を有する一価抗体である。例えば、そのような抗体断片は、その断片にインビトロで安定性を付与することができるＦｃ配列に連結された抗原結合腕を含む。幾つかの実施態様において、Ｆｃポリペプチドは、野生型ヒンジ配列の一部又は全部を（一般に、そのＮ末端で）含む。幾つかの実施態様において、Ｆｃポリペプチドは、機能性又は野生型ヒンジ配列を含まない。
【０２２６】
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体断片は国際公開第２００５／０６３８１６号に記述される片腕抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体のＦｃ領域は第一及び第二ポリペプチドを含み、第一及び第二ポリペプチドの各々は、野生型ヒトＦｃに関して一以上の変異を含む。幾つかの実施態様において、空洞の変異はＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及び／又はＹ４０７Ｖである。幾つかの実施態様において、突起の変異はＴ３６６Ｗである。幾つかの実施態様において、第一ポリペプチドは、図１に示されるＦｃ配列を含み、第二ポリペプチドは図２に示されるＦｃ配列を含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ホモ二量体化を最小限にしつつ、抗体断片内のＦｃ配列のヘテロ二量体化を促進する少なくとも一の特徴を含み得る。
【０２２７】
本明細書に記載される精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体の何れかの幾つかの実施態様において及び／又は精製法の幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はアンタゴニスト抗ｃ−ｍｅｔ抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体又はアンタゴニスト抗ｃ−ｍｅｔ抗体をブロッキングすることは抗原の生物学的活性を完全に阻害する。アンタゴニスト機能を必要とする病的状態の治療のために、そして抗ｃ−ｍｅｔ抗体の二価性が、標的抗原への結合の際に望ましくないアゴニスト作用を生じる場合（それがＦａｂ断片としてアンタゴニスト抗ｃ−ｍｅｔ抗体あるにもかかわらず）、片腕抗体（すなわち、単一の抗原結合腕を含む抗体）の一価の特性は、標的分子への抗ｃ−ｍｅｔ抗体の結合に際し、アンタゴニスト機能を生じ及び／又は確実にする。更に、Ｆｃ領域を含む片腕抗体は、類似した／実質的に同一の抗原結合特性を有するＦａｂの形態に比べて、優れた薬物動態学的属性（生体内の半減期の拡張及び／又はクリアランス速度の減少など）により特徴付けられ、従って、従来の一価Ｆａｂ抗体の使用における主な欠点を克服している。
【０２２８】
精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体の抗ｃ−ｍｅｔ抗体（片腕抗体として提供されてもよい）及び／又は精製法で使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体は当技術分野で知られているものが含まれる（例えば、全体が参考として援用されるMartens, T. et al., Clin. Cancer Res. 12 (20 Pt. 1):6144 (2006)；米国特許第６，４６８，５２９号；国際公開第２００６／０１５３７１号；国際公開第２００７／０６３８１６号、及び国際公開第２０１０／０４５３４５号を参照）。幾つかの実施態様において、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体の抗ｃ−ｍｅｔ抗体及び／又は精製法において使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）受託番号ＡＴＣＣ ＨＢ−１１８９４（ハイブリドーマ１Ａ３．３．１３）又はＨＢ−１１８９５（ハイブリドーマ５Ｄ５．１１．６）の元に寄託されたハイブリドーマ細胞株により産生されるモノクローナル抗体のＨＶＲ配列を一以上含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＡＴＣＣ ＨＢ−１１８９４（ハイブリドーマ１Ａ３．３．１３）又はＨＢ−１１８９５（ハイブリドーマ５Ｄ５．１１．６）の軽鎖可変ドメインのＨＶＲの一以上及び／又は重鎖可変ドメインのＨＶＲの一以上、及びＦｃポリペプチドを含む片腕抗体である。
【０２２９】
精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体の何れかの及び／又は精製法の幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は図１に示されるＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及びＨＶＲ３−ＬＣ配列（配列番号１〜３）の一以上を含む軽鎖可変ドメインを含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は図１に示されるＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及びＨＶＲ３−ＨＣ配列（配列番号４〜６）の一以上を含む重鎖可変ドメインを含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、図１に示されるＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及びＨＶＲ３−ＬＣ配列（配列番号１〜３）の一以上を含む軽鎖可変ドメイン及び図１に示されるＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及びＨＶＲ３−ＨＣ配列（配列番号４〜６）を含む。幾つかの実施態様において、重鎖可変ドメインは、図１に示されるＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及びＨＶＲ３−ＨＣ配列（配列番号４〜６）の一以上、及び図１に示されるＦＲ１−ＨＣ、ＦＲ２−ＨＣ、ＦＲ３−ＨＣ及びＦＲ４−ＨＣ配列（配列番号１１〜１４）の一以上を含む。幾つかの実施態様において、軽鎖可変ドメインは、図１に示されるＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及びＨＶＲ３−ＬＣ配列（配列番号１〜３）の一以上、及び図１に示されるＦＲ１−ＨＣ、ＦＲ２−ＨＣ、ＦＲ３−ＨＣ及びＦＲ４−ＨＣ配列（配列番号７〜１０）の一以上を含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、軽鎖可変ドメインのＨＶＲの一以上（配列番号１〜３）及び／又は重鎖可変ドメインのＨＶＲの一以上（配列番号４〜６）及びＦｃポリペプチドを含む片腕抗体である。
【０２３０】
精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物の何れかの幾つかの実施態様及び／又は本明細書に記載される精製法の幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、（ａ）（ｉ）Ａ１−Ａ１７がＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡ（配列番号２３）である配列Ａ１−Ａ１７を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｉｉ）Ｂ１−Ｂ７がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２４）である配列Ｂ１−Ｂ７を含むＨＶＲ−Ｌ２；（ｉｉｉ）Ｃ１−Ｃ９がＱＱＹＹＡＹＰＷＴ（配列番号２５）であるＨＶＲ−Ｌ３；（ｉｖ）Ｄ１−Ｄ１０がＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨ（配列番号２６）であるＨＶＲ−Ｈ１；Ｅ１−Ｅ１８がＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤ（配列番号２７）であるＨＶＲ−Ｈ１；（ｖ）Ｅ１−Ｅ１８がＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤ（配列番号２７）であるＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｖｉ）Ｆ１−Ｆ１１がＸＹＧＳＹＶＳＰＬＤＹ（配列番号２８）であってＸがＲでないＨＶＲ−Ｈ３からなる群から選択される少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、又は五つのＨＶＲ配列；及び（ｂ）変異体ＨＶＲ配列が配列番号２３、２４、２５、２６、２７、又は２８に示される配列の少なくとも一残基の修飾を含む、少なくとも一の変異体ＨＶＲを含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体のＨＶＲ−Ｌ１は配列番号２３の配列を含む。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号２４の配列を含む。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号２５の配列を含む。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２６の配列を含む。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２７の配列を含む。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２８の配列を含む。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ３は、ＴＹＧＳＹＶＳＰＬＤＹ（配列番号２９）を含む。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ３は、ＳＹＧＳＹＶＳＰＬＤＹ（配列番号３０）を含む。幾つかの実施態様において、これらの配列を（本明細書に記載のように組み合わせて）含む抗ｃ−ｍｅｔ抗体はヒト化又はヒトのものである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、軽鎖可変ドメインのＨＶＲの一以上（配列番号２３〜２５）及び／又は重鎖可変ドメインのＨＶＲの一以上（配列番号２６〜２０）及びＦｃポリペプチドを含む片腕抗体である。
【０２３１】
また本明細書に提供されるのは、一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体の抗ｃ−ｍｅｔ抗体及び／又は本明細書に記載される精製法で使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体であり、ここで各ＨＶＲは配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８，及び２９からなる群から選択される配列を含む、からなる、又はから本質的になり、配列番号２３はＨＶＲ−Ｌ１に対応し、配列番号２４はＨＶＲ−Ｌ２に対応し、配列番号２５はＨＶＲ−Ｌ３に対応し、配列番号２６はＨＶＲ−Ｈ１に対応し、配列番号２７はＨＶＲ−Ｈ２に対応し、及び配列番号２６、２７又は２８はＨＶＲ−Ｈ３に対応する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２，及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、ここで各々は順番に配列番号２３、２４、２５、２６、２７、及び２９を含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２，及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、ここで各々は順番に配列番号２３、２４、２５、２６、２７、及び３０を含む。
【０２３２】
変異体ＨＶＲはＨＶＲ中に一以上の残基の修飾を含み得る。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｌ２変異体は、以下の位置：Ｂ１（Ｍ又はＬ）、Ｂ２（Ｐ、Ｔ、Ｇ又はＳ）、Ｂ３（Ｎ、Ｇ、Ｒ又はＴ）、Ｂ４（Ｉ、Ｎ又はＦ）、Ｂ５（Ｐ、Ｉ、Ｌ又はＧ）、Ｂ６（Ａ、Ｄ、Ｔ又はＶ）及びＢ７（Ｒ、Ｉ、Ｍ又はＧ）の任意の組み合わせにおいて１〜５（１、２、３、４又は５）の置換を含む。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ１変異体は、以下の位置：Ｄ３（Ｎ、Ｐ、Ｌ、Ｓ、Ａ、Ｉ）、Ｄ５（Ｉ、Ｓ又はＹ）、Ｄ６（Ｇ、Ｄ、Ｔ、Ｋ、Ｒ）、Ｄ７（Ｆ、Ｈ、Ｒ、Ｓ、Ｔ又はＶ）及びＤ９（Ｍ又はＶ）の任意の組み合わせにおいて１〜５（１、２、３、４又は５）の置換を含む。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ２変異体は、以下の位置：Ｅ７（Ｙ）、Ｅ９（Ｉ）、Ｅ１０（Ｉ）、Ｅ１４（Ｔ又はＱ）、Ｅ１５（Ｄ、Ｋ、Ｓ、Ｔ又はＶ）、Ｅ１６（Ｌ）、Ｅ１７（Ｅ、Ｈ、Ｎ又はＤ）及びＥ１８（Ｙ、Ｅ又はＨ）の任意の組み合わせにおいて１〜４（１、２、３、又は４）の置換を含む。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ３変異体は、以下の位置：Ｆ１（Ｔ、Ｓ）、Ｆ３（Ｒ、Ｓ、Ｈ、Ｔ、Ａ、Ｋ）、Ｆ４（Ｇ）、Ｆ６（Ｒ、Ｆ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｋ、Ａ、Ｌ、Ｗ）、Ｆ７（Ｌ、Ｉ、Ｔ、Ｒ、Ｋ、Ｖ）、Ｆ８（Ｓ、Ａ）、Ｆ１０（Ｙ、Ｎ）及びＦ１１（Ｑ、Ｓ、Ｈ、Ｆ）の任意の組み合わせにおいて１〜５（１、２、３、４又は５）の置換を含む。各位置に続く括弧内の文字は説明的置換（即ち置換(replacement)）アミノ酸を示し；当業者には明らかなように、本明細書に記載される文脈における置換アミノ酸としての他のアミノ酸の適合性は、当技術分野で公知及び／又は本明細書に記載の技術を用いてルーチン的に評価することができる。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号２３の配列を含む。幾つかの実施態様において、変異体ＨＶＲ−Ｈ３におけるＦ１はＴである。幾つかの実施態様において、変異体ＨＶＲ−Ｈ３におけるＦ１はＳである。幾つかの実施態様において、変異体ＨＶＲ−Ｈ３におけるＦ３はＲである。幾つかの実施態様において、変異体ＨＶＲ−Ｈ３におけるＦ３はＳである。幾つかの実施態様において、変異体ＨＶＲ−Ｈ３におけるＦ７はＴである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、Ｆ１がＴ又はＳ，Ｆ３がＲ又はＳ，及びＦ７がＴである変異体ＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０２３３】
幾つかの実施態様において、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物の抗ｃ−ｍｅｔ抗体及び／又は精製法において使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、Ｆ１がＴ，Ｆ３がＲ及びＦ７がＴである、変異体ＨＶＲ−Ｈ３を含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、Ｆ１がＳである変異体ＨＶＲ−Ｈ３を含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、Ｆ１がＴ，及びＦ３がＲである変異体ＨＶＲ−Ｈ３を含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、Ｆ１がＳ，Ｆ３がＲ及びＦ７がＴである、変異体ＨＶＲ−Ｈ３を含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、Ｆ１がＴ，Ｆ３がＳ、Ｆ７がＴ、及びＦ８がＳである、変異体ＨＶＲ−Ｈ３を含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、Ｆ１がＴ，Ｆ３がＳ、Ｆ７がＴ、及びＦ８がＡである、変異体ＨＶＲ−Ｈ３を含む。幾つかの実施態様において、前記変異体ＨＶＲ−Ｈ３抗体は、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１及びＨＶＲ−Ｈ２を更に含み、各々は順番に配列番号１、２、３、４、及び５に示される配列を含む。幾つかの実施態様において、これらの抗体は更に、ヒトサブグループＩＩＩ重鎖フレームワークコンセンサス配列を含む。これらの抗体の幾つかの実施態様において、フレームワークコンセンサス配列は、位置７１、７３、及び／又は７８に置換を含む。これらの抗体の幾つかの実施態様において、位置７１はＡ，７３はＴ及び／又は７８はＡである。これらの抗体の幾つかの実施態様において、これらの抗体はヒトκＩ軽鎖フレームワークコンセンサス配列を更に含む。
【０２３４】
幾つかの実施態様において、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物の抗ｃ−ｍｅｔ抗体及び／又は精製法において使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、Ｂ６がＶである変異体ＨＶＲ−Ｌ２を含む。幾つかの実施態様において、前記変異体ＨＶＲ−Ｌ２抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を更に含み、ここで各々は順番に配列番号２３、２５、２６、２７及び２８に示される配列を含む。幾つかの実施態様において、前記変異体ＨＶＲ−Ｌ２抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を更に含み、各々は順番に配列番号２３、２５、２６、２７、及び２９に示される配列を含む。幾つかの実施態様において、前記変異体ＨＶＲ−Ｌ２抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を更に含み、各々は順番に配列番号２３、２５、２６、２７、及び３０に示される配列を含む。幾つかの実施態様において、これらのｃ−ｍｅｔ抗体は更に、ヒトサブグループＩＩＩ重鎖フレームワークコンセンサス配列を含む。これらのｃ−ｍｅｔ抗体の幾つかの実施態様において、フレームワークコンセンサス配列は、位置７１、７３、及び／又は７８に置換を含む。幾つかの実施態様において、位置７１はＡ，７３はＴ及び／又は７８はＡである。これらのｃ−ｍｅｔ抗体の幾つかの実施態様において、これらの抗体はヒトκＩ軽鎖フレームワークコンセンサス配列を更に含む。
【０２３５】
幾つかの実施態様において、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物の抗ｃ−ｍｅｔ抗体及び／又は精製法において使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、Ｅ１４がＴ、Ｅ１５がＫ及びＥ１７がＥである、変異体ＨＶＲ−Ｈ２を含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、Ｅ１７がＥである変異体ＨＶＲ−Ｈ２を含む。幾つかの実施態様において、前記変異体ＨＶＲ−Ｈ３抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、及びＨＶＲ−Ｈ３を更に含み、ここで各々は順番に配列番号２３、２４、２５、２６及び２８に示される配列を含む。幾つかの実施態様において、前記変異体ＨＶＲ−Ｈ２抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１，及びＨＶＲ−Ｈ３を更に含み、各々は順番に配列番号２３、２４、２５、２６、及び２９に示される配列を含む。幾つかの実施態様において、前記変異体ＨＶＲ−Ｈ２抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１，及びＨＶＲ−Ｈ３を更に含み、各々は順番に配列番号２３、２４、２５、２６、及び３０に示される配列を含む。幾つかの実施態様において、これらのｃ−ｍｅｔ抗体は更に、ヒトサブグループＩＩＩ重鎖フレームワークコンセンサス配列を含む。これらのｃ−ｍｅｔ抗体の幾つかの実施態様において、フレームワークコンセンサス配列は、位置７１、７３、及び／又は７８に置換を含む。幾つかの実施態様において、位置７１はＡ，７３はＴ及び／又は７８はＡである。これらのｃ−ｍｅｔ抗体の幾つかの実施態様において、これらのｃ−ｍｅｔ抗体はヒトκＩ軽鎖フレームワークコンセンサス配列を更に含む。
【０２３６】
幾つかの実施態様において、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物の抗ｃ−ｍｅｔ抗体及び／又は精製法において使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、（ａ）配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９）を含む重鎖可変ドメイン及び／又は（ｂ）配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＡＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号２０）を含む軽鎖可変ドメインを含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は（ａ）軽鎖可変ドメイン（配列番号２０）及び／又は（ｂ）重鎖可変ドメイン（配列番号１９）及び（ｃ）Ｆｃポリペプチドを含んでなる片腕抗体である。
【０２３７】
幾つかの実施態様において、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物の抗ｃ−ｍｅｔ抗体及び／又は精製法において使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、（ａ）配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９）を含む重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ及び／又は（ｂ）配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＡＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号２０）を含む軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は（ａ）軽鎖可変ドメイン（配列番号２０）及び／又は（ｂ）重鎖可変ドメイン（配列番号１９）及び（ｃ）Ｆｃポリペプチドを含んでなる片腕抗体である。幾つかの実施態様において、Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、２、３又は４）のものである。幾つかの実施態様において、第一Ｆｃポリペプチドは、図１に示されるＦｃ配列（配列番号１７）を含み、第二Ｆｃポリペプチドは図２に示されるＦｃ配列（配列番号１８）を含む。幾つかの実施態様において、第一Ｆｃポリペプチドは、図２に示されるＦｃ配列（配列番号１８）を含み、第二Ｆｃポリペプチドは図１に示されるＦｃ配列（配列番号１７）を含む。
【０２３８】
幾つかの実施態様において、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物の抗ｃ−ｍｅｔ抗体及び／又は精製法において使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体断片であり、抗体断片は（ａ）配列番号１９を含む重鎖可変ドメイン、ＣＨ１配列（例えば配列番号１６）、及び第一Ｆｃポリペプチドを含む第一ポリペプチド；及び（ｂ）配列番号２０を含む軽鎖可変ドメイン、及びＣＬ１配列（配列番号１５）を含む第二ポリペプチドを含む。幾つかの実施態様において、Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、２、３又は４）のものである。幾つかの実施態様において、第一Ｆｃポリペプチドは、図１に示されるＦｃ配列（配列番号１７）を含む。幾つかの実施態様において、第一Ｆｃポリペプチドは、図２に示されるＦｃ配列（配列番号１８）を含む。
【０２３９】
幾つかの実施態様において、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物の抗ｃ−ｍｅｔ抗体及び／又は精製法において使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体断片であり、ここで抗体断片は（ａ）配列番号１９を含む重鎖可変ドメイン、ＣＨ１配列（例えば配列番号１６）及び第一Ｆｃポリペプチドを含む第一ポリペプチド；（ｂ）配列番号２０を含む軽鎖可変ドメイン、及びＣＬ１配列（例えば配列番号１５）を含む第二ポリペプチド；及び（ｃ）第二Ｆｃポリペプチドを含む第三ポリペプチドを含み、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインは複合体として存在し単一抗原結合腕を形成し、かつ第一及び第二Ｆｃポリペプチドが複合体中に存在する。幾つかの実施態様において、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは、前記抗原結合腕を含むＦａｂ分子と比較して、前記抗体断片の安定性を増加させるＦｃ領域を形成する。幾つかの実施態様において、Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、２、３又は４）のものである。幾つかの実施態様において、第一Ｆｃポリペプチドは、図１に示されるＦｃ配列（配列番号１７）を含み、第二Ｆｃポリペプチドは図２に示されるＦｃ配列（配列番号１８）を含む。幾つかの実施態様において、第一Ｆｃポリペプチドは、図２に示されるＦｃ配列（配列番号１８）を含み、第二Ｆｃポリペプチドは図１に示されるＦｃ配列（配列番号１７）を含む。
【０２４０】
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体又はそのｃ−ｍｅｔ抗体断片であって、ここでその抗体は（ａ）配列番号１９を含む重鎖可変ドメイン、ＣＨ１配列、及び第一Ｆｃポリペプチドを含む第一ポリペプチド；（ｂ）配列番号２０を含む軽鎖可変ドメイン、及びＣＬ１配列を含む第二ポリペプチド；及び（ｃ）第二Ｆｃポリペプチドを含む第三ポリペプチドを含み、ここで重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインは複合体として存在して単一抗原結合腕を形成し、かつ第一及び第二Ｆｃポリペプチドが複合体中に存在し、前記抗原結合腕を含むＦａｂ分子と比較して前記抗体断片の安定性を増加させるＦｃ領域を形成する。幾つかの実施態様において、Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、２、３又は４）のものである。幾つかの実施態様において、第一Ｆｃポリペプチドは、図１に示されるＦｃ配列（配列番号１７）を含み、第二Ｆｃポリペプチドは図２に示されるＦｃ配列（配列番号１８）を含む。幾つかの実施態様において、第一Ｆｃポリペプチドは、図２に示されるＦｃ配列（配列番号１８）を含み、第二Ｆｃポリペプチドは図１に示されるＦｃ配列（配列番号１７）を含む。
【０２４１】
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、（ａ）重鎖を含む第一ポリペプチド（該ポリペプチドは配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＬＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＭＩＤＰＳＮＳＤＴＲＦＮＰＮＦＫＤＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＹＲＳＹＶＴＰＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２１）を含む）；（ｂ）軽鎖を含む第二ポリペプチド（該ポリペプチドは配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＴＳＳＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＡＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２２）を含む）；及びＦｃを含む第三ポリペプチド（該ポリペプチドは配列：ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１８）を含む）を含む。幾つかの実施態様において、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは複合体として存在し、単一抗原結合腕を形成し、ここで第一ポリペプチド及び第二ポリペプチドは複合体中に存在する。幾つかの実施態様において、第一及び第二Ｆｃポリペプチドは、前記抗原結合腕を含むＦａｂ分子と比較して、前記抗体断片の安定性を増加させるＦｃ領域を形成する。
【０２４２】
幾つかの実施態様において、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物の抗ｃ−ｍｅｔ抗体及び／又は精製法において使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、一価抗体である。幾つかの実施態様において、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物の抗ｃ−ｍｅｔ抗体及び／又は精製法において使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ヒト化、ヒト、又はキメラ抗体である。
【０２４３】
幾つかの実施態様において、本明細書に記載される抗ｃ−ｍｅｔ抗体の何れかをコードするポリヌクレオチドは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体が産生されるように発現される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の何れかをコードするポリヌクレオチドはインビトロ又はインビボで（例えばＣＨＯ細胞又は大腸菌細胞中で）発現される。
【０２４４】
幾つかの実施態様において、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物の抗ｃ−ｍｅｔ抗体及び／又は本明細書に記載される精製法において使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、オナルツズマブ（同義的にＭｅｔＭＡｂと称す）、Ｆｃ領域を含む片腕抗体である。オナルツズマブの配列は図１及び２に示される。オナルツズマブ（ＯＡ５Ｄ５ｖ２及びＭｅｔＭＡｂとも称す）はまた例えば国際公開第２００６／０１５３７１号；国際公開第２０１０／０４３４５号；及びJin et al, Cancer Res (2008) 68:4360に記述される。オナルツズマブのバイオシミラー版も考慮され、薬学的製剤で使用するために本明細書に包含される。
【０２４５】
幾つかの実施態様において、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物の抗ｃ−ｍｅｔ抗体及び／又は本明細書に記載される精製法において使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ｃ−ｍｅｔセマドメイン又はその変異体の少なくとも一部に特異的に結合する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、アンタゴニストである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔアンタゴニスト抗体は、ＬＤＡＱＴ（配列番号３１）（例えばｃ−ｍｅｔの残基２６９−２７３）、ＬＴＥＫＲＫＫＲＳ（配列番号３２）（例えばｃ−ｍｅｔの残基３００−３０８）、ＫＰＤＳＡＥＰＭ（配列番号３３）（例えばｃ−ｍｅｔの残基３５０−３５７）及びＮＶＲＣＬＱＨＦ（配列番号３４）（例えばｃ−ｍｅｔの残基３８１−３８８）からなる群から選択される配列の少なくとも一に特異的に結合する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔアンタゴニスト抗体は、ＬＤＡＱＴ（配列番号３１）（例えばｃ−ｍｅｔの残基２６９−２７３）、ＬＴＥＫＲＫＫＲＳ（配列番号３２）（例えばｃ−ｍｅｔの残基３００−３０８）、ＫＰＤＳＡＥＰＭ（配列番号３３）（例えばｃ−ｍｅｔの残基３５０−３５７）及びＮＶＲＣＬＱＨＦ（配列番号３４）（例えばｃ−ｍｅｔの残基３８１−３８８）からなる群から選択される配列の少なくとも一のうちの一部又は全てにより形成される高次構造エピトープに特異的に結合する。幾つかの実施態様において、アンタゴニスト抗体は、配列ＬＤＡＱＴ（配列番号３１）、ＬＴＥＫＲＫＫＲＳ（配列番号３２）、ＫＰＤＳＡＥＰＭ（配列番号３３）及び／又はＮＶＲＣＬＱＨＦ（配列番号３４）と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％の配列同一性又は類似性を有するアミノ酸配列に特異的に結合する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、アンタゴニスト抗ｃ−ｍｅｔ抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、片腕抗体である。関心のある抗体が結合した抗原上のエピトープに結合する抗体をスクリーニングするために、Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)に記載されるようにルーチンのクロスブロッキングアッセイを行うことができる。
【０２４６】
本発明の方法における使用に適した他の抗ｃ−ｍｅｔ抗体は本明細書に記載され、当該技術分野で公知である。例えば、国際公開第０５／０１６３８２号に開示される抗ｃ−ｍｅｔ抗体（限定されないが、抗体１３．３．２、９．１．２、８．７０．２、８．９０．３を含む）；ジェノアのＣＢＡでＩＣＬＣ番号ＰＤ０３００１で預けられたハイブリドーマ細胞株により生成される抗ｃ−ｍｅｔ抗体、又はＨＧＦ受容体のβ鎖の細胞外ドメイン上のエピトープ（該エピトープはモノクローナル抗体により認識されるものと同じである）を認識する抗ｃ−ｍｅｔ抗体；国際公開第２００７／１２６７９９号に開示される抗ｃ−ｍｅｔ抗体（限定されないが、０４５３６、０５０８７、０５０８８、０５０９１、０５０９２、０４６８７、０５０９７、０５０９８、０５１００、０５１０１、０４５４１、０５０９３、０５０９４、０４５３７、０５１０２、０５１０５、０４６９６、０４６８２を含む）；国際公開第２００９／００７４２７号に開示される抗ｃ−ｍｅｔ抗体（限定されないが、ＣＮＣＭ、フランス、パリ、パスツール研究所に、２００７年３月１４日に番号Ｉ−３７３１、２００７年３月１４日に番号Ｉ−３７３２、２００７年７月６日に番号Ｉ−３７８６、２００７年３月１４日に番号Ｉ−３７２４のもとに預けられた抗体）；２０１１０１２９４８１に開示された抗ｃ−ｍｅｔ抗体；米国特許出願公開第２０１１０１０４１７６号に開示された抗ｃ−ｍｅｔ抗体；国際公開第２００９／１３４７７６号に開示された抗ｃ−ｍｅｔ抗体；国際公開第２０１０／０５９６５４号に開示された抗ｃ−ｍｅｔ抗体；国際公開第２０１１／０２０９２５号に開示された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（限定されないが、ＣＮＣＭ、フランス、パリ、パスツール研究所に、２００８年３月１２日に番号Ｉ−３４８９、２０１０年１月１４日に番号Ｉ−４２７３のもとに預けられた抗体）；国際公開第２０１１／１１０６４２号に開示された抗ｃ−ｍｅｔ抗体；国際公開第２０１１／０９０７５４号に開示された抗ｃ−ｍｅｔ抗体；国際公開第２００７／０９０８０７号に開示された抗ｃ−ｍｅｔ抗体；国際公開第２０１２０５９５６１号Ａ１に開示された抗ｃ−ｍｅｔ抗体。
【０２４７】
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、目的の抗体の重鎖の可変ドメインとＩｇＧのＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む第一タンパク質鎖、及び目的の抗体の軽鎖の可変ドメインと前記ＩｇＧのＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む第一タンパク質鎖のヘテロ二量体を含む一価抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、可変軽鎖領域および定常軽鎖領域を含む軽鎖を含む一価抗体であって、ここではジスルフィド結合を形成することができるアミノ酸を含まないように定常軽鎖領域が改変される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、可変重鎖領域および定常重鎖領域を含む一価抗体であって、ここではジスルフィド結合を形成することができるアミノ酸を含まないように定常重鎖領域が改変される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ノブ：ホール型変異を含む一価抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、Ｒ２３８Ｑ、Ｒ２３８Ｑ、Ｄ２３９Ｅ、Ｋ２９２Ｒ、Ｑ３０２Ｅ、Ｐ３２８Ｌ、Ｒ２８５Ｑ、Ｓ３１４Ｎ、Ｎ３２２Ｋ、Ｍ３２７Ｖ、Ｋ３３９Ｒ、Ｑ３４９Ｅ、Ｉ３５２Ｖ、Ｒ３６５Ｈ、Ｆ３６６Ｙ、及びＰ３７５Ｌからなる群から選択される一以上のＣＨ３変異を含む一価抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、軽鎖Ｆｃ融合を含む一価抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ヒンジ欠損を含む一価抗体である。
【０２４８】
本明細書に記載される精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物及び／又は精製法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、限定されないがｃ−ｍｅｔの細胞外部分へのＨＧＦの結合及び受容体多量体化を含むＨＧＦ／ｃ−ｍｅｔの活性化を妨害し得る。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はＨＧＦ／ｃ−ｍｅｔの異常で所望されないシグナル伝達と関連した病的状態を治療または診断するのに有用である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ｃ−ｍｅｔリガンド結合、ｃ−ｍｅｔ二量体化、活性化、及びＨＧＦ／ｃ−ｍｅｔシグナル伝達と関連した他の生物学的／生理学的活性の調節を含むＨＧＦ／ｃ−ｍｅｔ経路を調節しうる。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はＨＧＦ／ｃ−ｍｅｔシグナル伝達経路を破壊し得る。本明細書に記載される抗ｃ−ｍｅｔ抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体のｃ−ｍｅｔへの結合はＨＧＦによるｃ−ｍｅｔ活性化を阻害する。抗ｃ−ｍｅｔ抗体の何れかの幾つかの実施態様において、細胞中で抗ｃ−ｍｅｔ抗体のｃ−ｍｅｔへの結合は、細胞の増殖、生存、飛散、形態形成及び／又は運動性を阻害する。
【０２４９】
幾つかの場合、リガンド（例えばＨＧＦなど）のｃ−ｍｅｔへの結合を阻害しない抗ｃ−ｍｅｔ抗体を有することが有利であり得る。従って、幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ｃ−ｍｅｔ上のＨＧＦ結合部位に結合しない。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ｃ−ｍｅｔに対するＨＧＦ結合を実質的に阻害しない。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ｃ−ｍｅｔに対する結合についてＨＧＦと実質的に競合しない。一例では、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、１つ又は複数の他のアンタゴニストと組み合わせて使用することができ、ここでアンタゴニストは、ＨＧＦ／ｃ−ｍｅｔの軸内の異なるプロセス及び／又は機能を標的としていることを特徴とする。このように、幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、（例えばアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション寄託番号ＡＴＣＣ ＨＢ−１１８９４（ハイブリドーマ１Ａ３．３．１３）の下で寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体のＦａｂ断片のような）別のｃ−ｍｅｔアンタゴニストが結合するエピトープとは異なるｃ−ｍｅｔ上のエピトープに結合する。別の実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション寄託番号ＡＴＣＣ ＨＢ−１１８９４（ハイブリドーマ１Ａ３．３．１３）で寄託されたハイブリドーマ細胞株により産生されるモノクローナル抗体のＦａｂ断片とは区別される（即ちＦａｂ断片ではない）。
【０２５０】
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は第一動物種に結合し、第二動物種のｃ−ｍｅｔ抗体には特異的に結合しない。幾つかの実施態様において、第一動物種は、ヒト及び／又は霊長類（例えば、カニクイザル）であり、第二動物種はネズミ科（例えば、マウス）及び／又はイヌである。幾つかの実施態様において、第一動物種はヒトである。幾つかの実施態様において、第一動物種は、霊長類、例えば、カニクイザルである。幾つかの実施態様において、第一動物種は、ネズミ科、例えば、マウスである。幾つかの実施態様において、第一動物種はイヌである。
【０２５１】
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、前記被験体において免疫原性応答をほとんど又は全く誘発しない。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は臨床的に受容可能なレベル又はそれ未満で免疫原性応答を誘発する。
【０２５２】
精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物及び／又は精製法の何れかの幾つかの実施態様において、改変された抗体は、全てではないが一部のエフェクター機能を有している。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は補体枯渇及び／又はＡＤＣＣ活性を持たない。幾つかの実施態様において、産生される免疫グロブリンのＦｃ活性は、所望の特性のみが維持されていること（例えば、補体枯渇及び／又はＡＤＣＣ活性ではなく半減期）を確認するために測定される。インビトロ及び／又はインビボでの細胞毒性アッセイを、ＣＤＣ活性及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認するために行うことができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合を欠くが（それゆえ、おそらくＡＤＣＣ活性を欠く）、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確認するために行うことができる。ＡＤＣＣ、ＮＫ細胞を媒介する初代細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロでのアッセイの一例が、米国特許第５，５００，３６２号又は米国特許第５，８２１，３３７号に記載されている。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、又は更に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Clynes et al., PNAS USA 95:652-656 (1998)に開示されるように、インビボで、例えば動物モデルにおいて評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイはまた、抗体が体Ｃ１ｑを結合することができないこと、したがって、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために行うことができる。補体活性を評価するために、ＣＤＣアッセイが、例えばGazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996)に記載されるように実施することができる。ＦｃＲｎ結合、及びインビボでのクリアランス／半減期の測定はまた、当該分野で公知の方法を用いて行うことができる。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はグリコシル化されている。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は非グリコシル化(aglycosylated)されている。
【０２５３】
精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物の抗ｃ−ｍｅｔ抗体及び／又は精製法に使用のための抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、当該分野で公知の種々のアッセイにより、それらの物理的／化学的性質及び生物学的機能について特徴づけることができる。精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、限定されないが、Ｎ末端配列決定、アミノ酸分析、非変性サイズ排除高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、質量分析法、イオン交換クロマトグラフィー及びパパイン消化を含む、一連のアッセイによって更に特徴づけることができる。
【０２５４】
本明細書に記載される精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物及び／又は精製法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、（１）ローリー法により判定して抗体の９５重量％超、および最も好ましくは９９重量％超まで、（２）スピニングカップシークエネーターを使用することにより、Ｎ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、又は（３）クーマシーブルーもしくは銀染色を用いる還元もしくは非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥにより均一になるまで精製される。
【０２５５】
更に、本明細書に記載される精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物及び／又は精製法の何れかの幾つかの実施態様において、以下のセクション１−８で説明されるように、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、単独または組み合わせで、任意の特徴を組み込むことができる。
【０２５６】
１．抗体親和性
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、解離定数（Ｋｄ）が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）である。
【０２５７】
その受容体へのリガンドの結合親和性は、種々のアッセイの何れかを用いて決定し、様々な定量値で表すことができる。当該分野で公知であり、本明細書で使用することができる抗原結合アッセイは、限定されないが、例えば、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、「サンドイッチ」免疫アッセイ、表面プラズモン共鳴に基づくアッセイ（例えば、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２００５／０１２３５９に記載のようにＢＩＡｃｏｒｅアッセイなど）、免疫沈降アッセイ、蛍光イムノアッセイ、及びプロテインＡイムノアッセイなどの技術を用いた任意の直接的又は競合的結合アッセイを含む。
【０２５８】
従って、幾つかの実施態様において、結合親和性はＫｄ値として表され、（最小化結合活性効果を持つなど）固有の結合親和性を反映している。選択される抗ｃ−ｍｅｔ抗体はｃ−ｍｅｔに対する十分強い結合親和性を通常有し、例えば、抗体はヒトｃ−ｍｅｔにＫｄ値が１００ｎＭ−１ｐＭの間で結合し得る。
【０２５９】
２．抗体断片
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は抗体断片である。抗体断片は、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一腕抗体、及びｓｃＦｖ断片、及び下記の他の断片を含む。所定の抗体断片の総説については、Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)を参照。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、Pluckthuen, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)を参照；また、国際公開第９３／１６１８５号；及び米国特許第５，５７１，８９４号及び第５，５８７，４５８号も参照。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつインビボ半減期を増加させたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の議論については、米国特許第５８６９０４６号を参照のこと。他の一価抗体形式は、例えば国際公開第２００７０４８０３７号、国際公開第２００８１４５１３７号、国際公開第２００８１４５１３８号及び国際公開第２００７０５９７８２号に記載される。一腕抗体は例えば国際公開第２００５／０６３８１６号に記載される。ダイアボディは２価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号；国際公開第１９９３／０１１６１号；Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 及びHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)を参照。トリアボディ及びテトラボディもまたHudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)に記載されている。
【０２６０】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て又は一部、又は軽鎖可変ドメインの全て又は一部を含む抗体断片である。幾つかの実施態様において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Domantis, Inc., Waltham, MA; 例えば、米国特許第６，２４８，５１６号Ｂ１を参照）。
【０２６１】
抗体断片は様々な技術で作成することができ、限定されないが、本明細書に記載するように、インタクトな抗体の分解、並びに組換え宿主細胞（例えば、大腸菌やファージ）による生産を含む。
【０２６２】
３．キメラ及びヒト化抗体
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、キメラ抗体である。所定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)に記載されている。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサル等の非ヒト霊長類由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。更なる例において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変更された「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
【０２６３】
幾つかの実施態様において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減するために、親の非ヒト抗体の特異性と親和性を保持したまま、ヒト化されている。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはその一部）が、非ヒト抗体から由来し、ＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列に由来する、一以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、任意で、ヒト定常領域の少なくとも一部をも含む。幾つかの実施態様において、ヒト化抗体の幾つかのＦＲ残基は、例えば抗体特異性又は親和性を回復もしくは改善するめに、非ヒト抗体（例えば、ＣＤＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換されている。
【０２６４】
ヒト化抗体およびそれらの製造方法は、例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)に総説され、更に、 Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989); 米国特許第５，８２１，３３７号、第７，５２７，７９１号、第６，９８２，３２１号、及び第７，０８７，４０９号； Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) （ＳＤＲ（ａ−ＨＶＲ）グラフティングを記述）； Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) （「リサーフェシング」を記述）； Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) （「ＦＲシャッフリング」を記述）；及びOsbourn et al., Methods 36:61-68 (2005)及びKlimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) （ＦＲのシャッフリングへの「誘導選択」アプローチを記述）に記載されている。
【０２６５】
ヒト化に用いられ得るヒトフレームワーク領域は、限定されないが、「ベストフィット」法を用いて選択されるフレームワーク領域（例えば、Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)）；軽鎖または重鎖の可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワーク領域（例えば、Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；及びPresta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)を参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)を参照）；及びＦＲライブラリスクリーニング由来のフレームワーク領域（例えば、Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997）及び Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)を参照）を含む。
【０２６６】
４．ヒト抗体
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術を用いて生産することができる。ヒト抗体は一般的にvan Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 及びLonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)に記載されている。
【０２６７】
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を持つ又はインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することにより調製することができる。このような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換するか、又は染色体外に存在するかもしくは動物の染色体にランダムに組み込まれている、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含む。このようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に不活性化される。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、 Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)を参照。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ技術を記載している、米国特許第６，０７５，１８１号及び第６，１５０，５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載している米国特許第５，７７０，４２９号；Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許第７，０４１，８７０号及び、ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号）も参照のこと。このような動物で生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることにより、更に改変される可能性がある。
【０２６８】
ヒト抗体は、ハイブリドーマベース法によって作成することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ細胞株が記載されている。（例えば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications、頁51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987);及びBoerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)を参照）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体はまた、Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006）に記載されている。更なる方法は、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載している）及びNi, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006) （ヒト−ヒトハイブリドーマを記載している）に記載されたものを含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）もまた、Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 及びVollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)に記載される。
【０２６９】
ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成され得る。このような可変ドメイン配列は、次に所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術が、以下に説明される。
【０２７０】
５．ライブラリー由来の抗体
抗ｃ−ｍｅｔ抗体体は、所望の活性または活性（複数）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離することができる。例えば、様々な方法が、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてのライブラリーをスクリーニングするために、当該技術分野で知られている。そのような方法は、例えば、Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)に総説され、更に、例えば、McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 及びLee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)に概説されている。
【０２７１】
幾つかのファージディスプレイ法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーがポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により個別にクローニングされ、ファージライブラリーにランダムに再結合され、その後、Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、通常、抗体断片を、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、またはＦａｂ断片のいずれかとして提示する。免疫された起源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要性を伴うことなく免疫原に高親和性抗体を提供する。別法として、Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)に記載されるように、ナイーブなレパートリーが、任意の免疫感作無しで、広範囲の非自己抗原及び自己抗原に対して、抗体の単一起源を提供するために、（例えば、ヒトから）クローン化することができる。最後に、ナイーブなライブラリはまた、Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)に記載されるように、非常に可変なＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再構成を達成するために、幹細胞由来の未転位Ｖ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用することにより合成することができる。ヒト抗体ファージライブラリーを記述する特許公報は、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、及び米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、第２００５／０１１９４５５号、第２００５／０２６６０００号、第２００７／０１１７１２６号、第２００７／０１６０５９８号、第２００７／０２３７７６４号、第２００７／０２９２９３６号及び第２００９／０００２３６０号を含む。
【０２７２】
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書でヒト抗体又はヒト抗体の断片とみなされる。
【０２７３】
６．多重特異性抗体
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも二つの異なる部位に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。幾つかの実施態様において、結合特異性の一つは抗原に対してであり、他は、任意の他の抗原に対してである。幾つかの実施態様において、二重特異性抗体は、抗原の２つの異なるエピトープに結合することができる。二重特異性抗体はまた、抗原を発現する細胞に細胞傷害性薬物を局所化するために用いることができる。二重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
【０２７４】
多重特異性抗体を作製するための技術は、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え共発現(Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983))、国際公開第９３／０８８２９号、及びTraunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)を参照）及び「ノブ・イン・ホール(knob-in-hole)」エンジニアリング（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照）を含む。多重特異抗体はまた、抗体のＦｃ−ヘテロ２量体分子を作成するための静電ステアリング効果を操作すること（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）；２つ以上の抗体又は断片を架橋すること（例えば米国特許第４，６７６，９８０号、及びBrennan et al., Science, 229: 81 (1985)を参照）；２重特異性抗体を生成するためにロイシンジッパーを使用すること（例えば、Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)を参照）；二重特異性抗体断片を作製するため、「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)を参照）；単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）ダイマーを使用すること（例えば、Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)を参照）；及び、例えばTutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)に記載されているように、三重特異性抗体を調製することによって作成することができる。
【０２７５】
「オクトパス抗体」を含む、３つ以上の機能性抗原結合部位を持つ改変抗体もまた本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６Ａ１号を参照）。
【０２７６】
本明細書中の抗体又は断片はまた、ｃ−ｍｅｔ並びにその他の異なる抗原（例えば米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号参照）に結合する抗原結合部位を含む、「２重作用(Dual Acting) ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」を含む。
【０２７７】
７．抗体変異体
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体のアミノ酸配列変異体が検討される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望まれ得る。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することにより、又はペプチド合成によって調製することができる。このような改変は、例えば、抗体のアミノ酸配列内における、残基の欠失、及び／又は挿入及び／又は置換を含む。最終コンストラクトが所望の特性、例えば、抗原結合を有していることを条件として、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせが、最終コンストラクトに到達させるために作成され得る。
【０２７８】
ａ．置換、挿入、及び欠失変異体
幾つかの実施態様において、一つ以上のアミノ酸置換を有する抗ｃ−ｍｅｔ抗体変異体が提供される。置換型変異誘発の対象となる部位は、ＨＶＲとＦＲを含む。保存的置換は、表１の「保存的置換」の見出しの下に示されている。より実質的な変更が、表１の「典型的な置換」の見出しの下に与えられ、アミノ酸側鎖のクラスを参照して以下に更に説明される。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入することができ、その産物は、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の減少、又はＡＤＣＣ又はＣＤＣの改善についてスクリーニングされる。
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【０２７９】
アミノ酸は共通の側鎖特性に基づいてグループに分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０２８０】
非保存的置換は、これらの分類の一つのメンバーを他の分類に交換することを必要とするであろう。
【０２８１】
置換変異体の一つのタイプは、親抗体（例えば、ヒト化又はヒト抗体など）の一以上の高頻度可変領域残基の置換を含む。一般的には、更なる研究のために選択され得られた変異体は、親抗体と比較して、特定の生物学的特性の改変（例えば、改善）（例えば、親和性の増加、免疫原性を減少）を有し、及び／又は親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持しているであろう。典型的な置換型変異体は、親和性成熟抗体であり、例えば、本明細書に記載されるファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を用いて、簡便に生成され得る。簡潔に言えば、一つ以上のＨＶＲ残基が変異し、変異体抗体は、ファージ上に表示され、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０２８２】
変更（例えば、置換）は、例えば抗体の親和性を向上させるために、ＨＶＲで行うことができる。このような変更は、ＨＶＲの「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程中に高頻度で変異を受けるコドンにコードされた残基で（例えばChowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)を参照）、及び／又はＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）で行うことができ、得られた変異体ＶＨ又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリから構築し選択し直すことによる親和性成熟が、例えばHoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)に記載されている。親和性成熟の幾つかの実施態様において、多様性が、種々の方法（例えば、変異性ＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチドを標的とした突然変異誘発）の何れかにより、成熟のために選択された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリーが作成される。次いで、ライブラリーは、所望の親和性を持つ抗体変異体を同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するするもう一つの方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４から６残基）がランダム化されたＨＶＲ指向型のアプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えばアラニンスキャニング突然変異誘発、またはモデリングを用いて、特異的に同定され得る。ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３がしばしば標的にされる。
【０２８３】
幾つかの実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、そのような改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限りにおいて、一以上のＨＶＲ内で生じる可能性がある。例えば、実質的に結合親和性を低下させない保存的改変（例えば本明細書で与えられる保存的置換）をＨＶＲ内で行うことができる。このような改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」又はＳＤＲの外側であってもよい。上記に与えられた変異体ＶＨ又はＶＬ配列の幾つかの実施態様において、各ＨＶＲは不変であるか、又はわずか１個、２個または３個のアミノ酸置換が含まれているかの何れかである。
【０２８４】
突然変異誘発のために標的とすることができる抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085により説明されるように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基またはグループ（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ及びｇｌｕなどの荷電残基）が同定され、抗原と抗体との相互作用が影響を受けるかどうかを判断するために、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）に置換される。更なる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入され得る。代わりに、又は更に、抗原抗体複合体の結晶構造が、抗体と抗原との接触点を同定する。そのような接触残基及び隣接残基が、置換の候補として標的とされるか又は排除され得る。変異体はそれらが所望の特性を含むかどうかを決定するためにスクリーニングされ得る。
【０２８５】
アミノ酸配列挿入は、一残基から百以上の残基を含有するポリペプチド長にわたるアミノ及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニン残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異体は、酵素に対する抗体のＮ末端またはＣ末端への融合（例えばＡＤＥＰＴの場合）、または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの融合を含む。
【０２８６】
ｂ．グリコシル化変異体
幾つかの実施態様において、本明細書で提供される抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少するように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、一以上のグリコシル化部位が作成または削除されるようにアミノ酸配列を変えることによって簡便に達成することができる。
【０２８７】
抗体がＦｃ領域を含む場合には、それに付着する糖を変えることができる。哺乳動物細胞によって生成された天然型抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ−結合により一般的に付着した分岐鎖、二分岐オリゴ糖を含んでいる。例えばWright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、二分岐オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合した、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、シアル酸、並びにフコースを含み得る。幾つかの実施態様において、抗体のオリゴ糖の改変は、一定の改善された特性を有する抗体変異体を作成するために行われ得る。
【０２８８】
幾つかの実施態様において、抗体変異体は、Ｆｃ領域に（直接または間接的に）付着されたフコースを欠いた糖鎖構造を有して提供される。例えば、このような抗体のフコース量は、１％から８０％、１％から６５％、５％から６５％、または２０％から４０％であり得る。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定されるＡｓｎ２９７に付着しているすべての糖構造の合計（例えば、コンプレックス、ハイブリッド及び高マンノース構造）に対して、Ａｓｎ２９７の糖鎖中のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）でおよそ２９７の位置に位置するアスパラギン残基を指し、しかし、Ａｓｎ２９７もまた位置２９７の上流または下流のおよそ±３アミノ酸に、すなわち抗体の軽微な配列変異に起因して、位置２９４と３００の間に配置され得る。このようなフコシル化変異体はＡＤＣＣ機能を改善させた可能性がある。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Presta, L.）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）を参照。「フコース非修飾」又は「フコース欠損」抗体変異体に関連する出版物の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、国際公開第２０００／６１７３９号、国際公開第２００１／２９２４６号、米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号、米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号、米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号、米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号、米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号、米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号、国際公開第２００３／０８５１１９号、国際公開第２００３／０８４５７０号、国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第２００５／０３５７７８号、国際公開第２００５／０５３７４２号、国際公開第２００２／０３１１４０号、Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が含まれる。非フコシル化抗体を産生する能力を有する細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号Ａ１，Presta, L；及び国際公開第２００４／０５６３１２号Ａ１、Adams et al., 特に実施例１１）、及びノックアウト細胞株、アルファ−１、６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)；及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照）を含む。
【０２８９】
抗体変異体は、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている二分オリゴ糖を更に備えている。このような抗体変異体はフコシル化を減少させ、及び／又はＡＤＣＣ機能を改善している可能性がある。そのような抗体変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Jean-Mairettら）；米国特許第６，６０２，６８４号（Umanaら）；及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Umanaら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を持つ抗体変異体も提供される。このような抗体変異体はＣＤＣ機能を改善させた可能性がある。このような抗体変異体は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Patelら）；国際公開第１９９８／５８９６４号（Raju, S.）；及び国際公開第１９９９／２２７６４号（Raju, S.）に記載されている。
【０２９０】
ｃ．Ｆｃ領域変異体
幾つかの実施態様において、１つまたは複数のアミノ酸改変を、抗ｃ−ｍｅｔ抗体のＦｃ領域に導入することができ、それによってＦｃ領域変異体を生成する。Ｆｃ領域の変異体は、１つまたは複数のアミノ酸位置においてアミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域の配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃ領域）を含んでもよい。
【０２９１】
幾つかの実施態様において、考慮されるのは、インビボにおける抗体の半減期が重要であるが、ある種のエフェクター機能（例えば補体およびＡＤＣＣなど）が不要または有害である用途のための望ましい候補とならしめる、全てではないが一部のエフェクター機能を有する抗体変異体である。インビトロ及び／又はインビボでの細胞毒性アッセイを、ＣＤＣ活性及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認するために行うことができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合を欠くが（それゆえ、おそらくＡＤＣＣ活性を欠く）、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確認するために行うことができる。ＡＤＣＣ、ＮＫ細胞を媒介する初代細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロでのアッセイの一例が、米国特許第５，５００，３６２号又は米国特許第５，８２１，３３７号に記載されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)を参照）及びHellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); 5,821,337 （例えば、Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)を参照）に説明される。あるいは、非放射性アッセイ法を用いることができる（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩＴＭ非放射性細胞毒性アッセイ（CellTechnology, Inc. Mountain View, CA；及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ(Promega, Madison, WI)を参照。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。別法として、又は更に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Clynes et al., PNAS USA 95:652-656 (1998)に開示されるように、インビボで、例えば動物モデルにおいて評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイはまた、抗体が体Ｃ１ｑを結合することができないこと、したがって、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために行うことができる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003);及びCragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)を参照）。ＦｃＲｎ結合、及びインビボでのクリアランス／半減期の測定はまた、当該分野で公知の方法を用いて行うことができる（例えば、Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照）。
【０２９２】
エフェクター機能が減少した抗体は、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、３２９の一つ以上の置換を有するものが含まれる（米国特許第６７３７０５６号）。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７の２以上での置換を有するＦｃ変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【０２９３】
ＦｃＲへの結合を改善又は減少させた特定の抗体変異体が記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、及びShields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)を参照）。
【０２９４】
幾つかの実施態様において、抗体変異体はＡＤＣＣを改善する１つまたは複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、及び／又は３３４における置換（ＥＵの残基番号付け）を含む。
【０２９５】
幾つかの実施態様において、改変された（すなわち改善されたか減少した）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を生じる、Ｆｃ領域における改変がなされ、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びIdusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)に説明される。
【０２９６】
半減期が増加し、胎仔への母性ＩｇＧの移送を担う、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体(Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 及びKim et al., J. Immunol. 24:249 (1994))が、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号Ａ１ (Hinton et al.)に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する一つまたは複数の置換を有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃ変異体は、Ｆｃ領域の残基の１以上の置換を有するものが含まれる：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４、例えば、Ｆｃ領域の残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号）。
【０２９７】
Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；及び、Ｆｃ領域の変異体の他の例に関しては国際公開第９４／２９３５１号も参照のこと。
【０２９８】
ｄ．システイン操作抗体変異体
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作抗体、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂ」を作成することが望まれ得る。特定の実施態様において、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位で生じる。それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は、それによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書中でさらに記載されるように、イムノコンジュゲーを作成するために、例えば薬物部分またはリンカー−薬剤部分などの他の部分に抗体をコンジュゲートするために使用することができる。ある実施態様において、一以上の以下の残基がシステインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Kabatの番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン改変抗体は、例えば、米国特許第７５２１５４１号に記載のように生成され得る。
【０２９９】
ｅ．抗体誘導体
幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、当技術分野で知られ、容易に入手される付加的な非タンパク質部分を含むように更に改変することができる。抗体の誘導体化に適した部分としては、限定されないが、水溶性ポリマーを含む。水溶性ポリマーの非限定的な例は、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリアミノ酸（単独重合体又はランダム共重合体の何れか）及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコール単独重合体、プロピレンオキシド／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール及びこれらの混合物を包含する。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドはその水中での安定性に起因して製造における利点を有し得る。ポリマーは何れかの分子量のものであってよく、そして分枝鎖又は未分枝鎖であってよい。抗体に結合するポリマーの数は変動してよく、そして、一以上の重合体が結合する場合は、それらは同じか又は異なる分子であることができる。一般的に、誘導体化に使用するポリマーの数及び／又は種類は、限定されないが、向上させるべき抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が限定された条件下で治療に使用されるのか等を含む検討事項に基づいて決定することができる。
【０３００】
別の実施態様において、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る抗ｃ−ｍｅｔ抗体と非タンパク質部分とのコンジュゲートが提供される。幾つかの実施態様において、非タンパク質部分はカーボンナノチューブである（Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005）。放射線は、任意の波長であって良いが、限定されないものの、通常の細胞に害を与えないが、抗体−非タンパク質部分の近位細胞が死滅される温度に非タンパク質部分を加熱する波長が含まれる。
【０３０１】
８．イムノコンジュゲート
化学療法剤又は薬物、成長抑制剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、または動物起源の酵素活性毒素、又はそれらの断片）、又は放射性同位元素など、一以上の細胞傷害性薬物にコンジュゲートした抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含むイムノコンジュゲートが、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物及び／又は本明細書に記載される精製法の使用のために考慮される。
【０３０２】
幾つかの実施態様において、イムノコンジュゲートは、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、そこでは抗体は、限定されないが、メイタンシノイド（米国特許第５２０８０２０号、第５４１６０６４号及び欧州特許ＥＰ０ ４２５２３５ Ｂ１を参照）；モノメチルアウリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）（米国特許第５６３５４８３号及び第５７８０５８８号及び第７４９８２９８号を参照）などのアウリスタチン；ドラスタチン、カリケアマイシン又はその誘導体（米国特許第５７１２３７４号、第５７１４５８６号、第５７３９１１６号、第５７６７２８５号、第５７７０７０１号、第５７７０７１０号、第５７７３００１号、及び第５８７７２９６号を参照；Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993)；及びLode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998))；ダウノマイシン又はドキソルビシンなどのアントラサイクリン (Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002)；及び米国特許第６，６３０，５７９号を参照）；メトトレキサート；ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセルなどのタキサン；トリコテセン；及びＣＣ１０６５を含む一つ以上の薬物とコンジュゲートしている。
【０３０３】
幾つかの実施態様において、イムノコンジュゲートは、酵素的に活性な毒素又はその断片にコンジュゲートした、本明細書に記載の抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含み、限定されないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、（緑膿菌からの）外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシン(modeccin)Ａ鎖、アルファ−サルシン、アレウリテス・フォーディ(Aleurites fordii)タンパク質、ジアンチン(dianthin)タンパク質、フィトラカ・アメリカーナ(Phytolaca americana)タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、モモルディカ・チャランチア(momordica charantia)インヒビター、クルシン(curcin)、クロチン(crotin)、サパオナリア・オフィシナリス(sapaonaria oficinalis)インヒビター、ゲロニン(gelonin)、ミトゲリン(mitogellin)、レストリクトシン(restrictocin)、フェノマイシン(phenomycin)、エノマイシン(enomycin)及びトリコテセン(tricothecene)が含まれる。
【０３０４】
幾つかの実施態様において、イムノコンジュゲートは、放射性コンジュゲートを形成するために放射性原子にコンジュゲートした本明細書に記載されるような抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む。様々な放射性同位体が放射性コンジュゲートの生産のために入手可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体を含む。検出のためにコンジュゲートを使用するとき、それはシンチグラフィー試験のための放射性原子、例えばｔｃ９９ｍ又はＩ１２３、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像化（磁気共鳴画像化ｍｒｉとしても知られている）のためのスピン標識、例えば再び、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含んでよい。
【０３０５】
抗ｃ−ｍｅｔ抗体と細胞傷害性薬物のコンジュゲートは、様々な二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの２官能性誘導体（例えばジメチルアジピミデートＨＣｌ）、活性エステル（例えばジスクシンイミジルズベレート）、アルデヒド（例えばグルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えばビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビスジアゾニウム誘導体（例えばビス（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えばトルエン２，６−ジイソシアネート）及びビス活性フッ素化合物（例えば１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）などを使用して作成され得る。Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)に記載されるように、例えば、リシンイムノトキシンを調製することができる。カーボン−１４−標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体へのコンジュゲーションのためのキレート剤の例である国際公開第９４／１１０２６号を参照。リンカーは、細胞中に細胞毒性薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であり得る。例えば、酸に不安定なリンカー、ペプチダーゼ過敏性リンカー、光解離性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー(Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992)；米国特許第５，２０８，０２０号）が使用され得る。
【０３０６】
本明細書において、イムノコンジュゲート又はＡＤＣは、限定されないが、市販の（例えばPierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.Aからの）、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ＳＶＳＢ（スクシンイミジル（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）を含むクロスリンカー試薬を用いて調製されるコンジュゲートを明示的に意図する。
【０３０７】
Ｖ．薬学的製剤
また本明細書において提供されるのは、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物を含む薬学的製剤及び／又は本明細書に記載される方法により精製される抗体である。幾つかの実施態様において、薬学的製剤は安定した液体の薬学的製剤である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、アンタゴニスト抗ｃ−ｍｅｔ抗体である。幾つかの実施態様において、薬学的製剤は液体の薬学的製剤である。幾つかの実施態様において、薬学的製剤は、個体（例えば、ヒト）に対する投与に適している。
【０３０８】
薬学的組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を含む薬学的製剤中のＨＣＰは約５０ｎｇ／ｍｇ以下である。薬学的組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を含む薬学的製剤のロット（例えば、バッチ）中の平均的なＨＣＰは約５０ｎｇ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約３４ｎｇ／ｍｇ、３０ｎｇ／ｍｇ、約２５ｎｇ／ｍｇ、約２０ｎｇ／ｍｇ、約１９ｎｇ／ｍｇ、約１８ｎｇ／ｍｇ、約１７ｎｇ／ｍｇ、約１６ｎｇ／ｍｇ、約１５ｎｇ／ｍｇ、約１４ｎｇ／ｍｇ、約１３ｎｇ／ｍｇ、約１２ｎｇ／ｍｇ、約１１ｎｇ／ｍｇ、約１０ｎｇ／ｍｇ、約又は９ｎｇ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約５ｎｇ／ｍｇと約２０ｎｇ／ｍｇの間、約５ｎｇ／ｍｇと約２５ｎｇ／ｍｇの間、約５ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約３０ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約２５ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約２０ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間、又は約１ｎｇ／ｍｇと１０ｎｇ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約５、約５．５、約６．５、約７、約７．５、約８、約８．５、約９、約９．５、約１０、約１０．５、約１１、約１１．５、約１２、約１２．５、約１３、約１３．５、約１４、約１４．５、約１５、約１５．５、約１６、約１６．５、約１７、又は約１７．５ｎｇ／ｍｇの何れかである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、ＥＣＰ及び／又は平均的なＥＣＰである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０３０９】
薬学的組成物の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のＤＮＡレベルは約０．３ｐｇ／ｍｇ以下である。薬学的製剤の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の平均的なＤＮＡレベルは約０．３ｐｇ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、ＤＮＡレベル及び／又は平均的なＤＮＡレベルは、約０．３ｐｇ／ｍｇ、約０．２５ｐｇ／ｍｇ、約０．２ｐｇ／ｍｇ、約０．１５ｐｇ、又は約０．１ｐｇ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、ＤＮＡレベル及び／又は平均的なＤＮＡレベルは、約０．００１ｐｇ／ｍｇと約０．３ｐｇ／ｍｇの間、約０．００１ｐｇ／ｍｇと約０．２ｐｇ／ｍｇの間、約０．００１ｐｇ／ｍｇと約０．１ｐｇ／ｍｇの間、約０．０１ｐｇ／ｍｇと約０．３ｐｇ／ｍｇの間、約０．０１ｐｇ／ｍｇと約０．２ｐｇ／ｍｇの間、又は約０．０１ｐｇ／ｍｇと約０．１ｐｇ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＤＮＡレベル及び／又は平均的なＤＮＡレベルは、約０．３、約０．２５、約０．２、約０．１５、又は約０．１ｐｇ／ｍｇの何れかである。幾つかの実施態様において、ＤＮＡレベルはＰＣＲによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０３１０】
薬学的製剤の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の濾過したプロテインＡ（ＬｐＡ）は約２ｎｇ／ｍｇ以下である。薬学的製剤の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の平均的なＬｐＡは約２ｎｇ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、ＬｐＡ及び／又は平均的なＬｐＡは、約０．００１ｎｇ／ｍｇと約２ｎｇ／ｍｇの間、約０．０１ｎｇ／ｍｇと約２ｎｇ／ｍｇの間、約０．１ｎｇ／ｍｇと約２ｎｇ／ｍｇの間、又は約１ｎｇ／ｍｇと約２ｎｇ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＬｐＡ及び／又は平均的なＬｐＡは、約１、約１．２５、約１．５、約１．７５、又は約２ｎｇ／ｍｇの何れかである。幾つかの実施態様において、ＬｐＡの割合は、濾過したプロテインＡリガンドのアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０３１１】
薬学的製剤の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中のカブトガニ血球抽出成分(Limulus Amebocyte Lysate)（ＬＡＬ）は約０．０１ＥＵ／ｍｇ以下である。薬学的製剤の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の平均的なＬＡＬは約０．０１ＥＵ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、ＬＡＬ及び／又は平均的なＬＡＬは、約０．００７ＥＵ／ｍｇ、約０．００６ＥＵ／ｍｇ、約０．００５ＥＵ／ｍｇ、約０．００２ＥＵ／ｍｇ又は約０．００１ＥＵ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、ＬＡＬ及び／又は平均的なＬＡＬは、約０．０００１ＥＵ／ｍｇと約０．０１ＥＵ／ｍｇの間、約０．０００１ＥＵ／ｍｇと約０．００７ＥＵ／ｍｇの間、約０．０００１ＥＵ／ｍｇと約０．００６ＥＵ／ｍｇの間、又は約０．０００１ＥＵ／ｍｇと約０．００５ＥＵ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＬＡＬ及び／又は平均的なＬＡＬは、約０．０１、約０．００７、約０．００６、約０．００５、約０．００４、約０．００３、又は約０．００２ＥＵ／ｍｇの何れかである。幾つかの実施態様において、ＬＡＬの割合はＬＡＬアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０３１２】
薬学的製剤の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の凝集体の割合は約０．３％以下である。薬学的製剤の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の凝集体の平均割合は約０．３％以下である。更に、本明細書において提供されるのは、組成物中に存在する凝集体の割合が約０．３％以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を含む薬学的製剤である。本明細書において更に提供されるのは、組成物中に存在する凝集体の平均割合が約０．３％以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）を含む薬学的製剤である。幾つかの実施態様において、凝集体の割合及び／又は凝集体の平均割合は、約０．２％又は約０．１％の何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、凝集体の割合及び／又は凝集体の平均割合は、約０．００１％と約０．３％の間、約０．０１％と約０．３％の間、約０．００１％と約０．２％の間、又は約０．０１％と約０．２％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、凝集体の割合及び／又は凝集体の平均割合は、約０．３％、約０．２５％、約０．２％、約０．１５％、又は約０．１％の何れかである。幾つかの実施態様において、凝集体の割合は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０３１３】
薬学的製剤の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の単量体の割合は約９９．５％以上である。薬学的製剤の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の単量体の平均割合は約９９．５％以上である。更に、本明細書において提供されるのは、組成物中に存在する単量体の割合が約９９．５％以上である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を含む薬学的製剤である。本明細書において更に提供されるのは、組成物中に存在する単量体の平均割合が約０．３％以上である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）を含む薬学的製剤である。幾つかの実施態様において、単量体の割合及び／又は単量体の平均割合は、約９９．６％、約９９．７％、約９９．８％、又は約９９．９％の何れかに等しいか又はそれ以上である。幾つかの実施態様において、単量体の割合及び／又は単量体の平均割合は、約９９．５％と約９９．９９９％の間、約９９．５％と約９９．９９％の間、約９９．６％と約９９．９９９％の間、約９９．６％と約９９．９９％の間、約９９．７％と約９９．９９９％の間、約９９．７％と約９９．９９％の間、約９９．８％と約９９．９９９％の間、約９９．８％と約９９．９９％の間、又は約９９．９％と約９９．９９９％の間、約９９．９％と約９９．９９％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、単量体の割合及び／又は単量体の平均割合は、約９９．５％、約９９．６％、約９９．７％、約９９．８％、又は約９９．９％の何れかである。幾つかの実施態様において、単量体の割合はＳＥＣアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０３１４】
薬学的製剤の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の断片の割合は約０．３％以下である。薬学的製剤の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の断片の平均割合は約０．３％以下である。更に、本明細書において提供されるのは、組成物中に存在する単量体の割合が約０．３％以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を含む薬学的製剤である。本明細書において更に提供されるのは、組成物中に存在する断片の平均割合が約０．３％以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）を含む薬学的製剤である。幾つかの実施態様において、断片の割合及び／又は断片の平均割合は、約０．２％又は約０．１％の何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、断片の割合及び／又は断片の平均割合は、約０．００１％と約０．３％の間、約０．０１％と約０．３％の間、約０．００１％と約０．２％の間、又は約０．０１％と約０．２％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、断片の割合及び／又は断片の平均割合は、約０．３％、約０．２５％、約０．２％、約０．１５％、約０．１％、又は０％の何れかである。幾つかの実施態様において、断片は検出可能ではない。幾つかの実施態様において、断片の割合はＳＥＣアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０３１５】
薬学的製剤の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の酸性変異体の割合は約２０％以下である。薬学的製剤の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の酸性変異体の平均割合は約２０％以下である。更に、本明細書において提供されるのは、組成物中に存在する酸性変異体の割合が約２０％以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を含む薬学的製剤である。本明細書において更に提供されるのは、組成物中に存在する酸性変異体の平均割合が約２０％以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）を含む薬学的製剤である。幾つかの実施態様において、酸性変異体の割合及び／又は酸性変異体の平均割合は、約２０％、約１８．５％、約１７．５％、約１５％、又は約１２．５％の何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、酸性変異体の割合及び／又は酸性変異体の平均割合は、約１％と約２０％の間、約５％と約２０％の間、又は約１０％と約２０％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、酸性変異体の割合及び／又は酸性変異体の平均割合は、約２０％、約１８．５％、約１７．５％、約１５％、又は約１２．５％の何れかである。幾つかの実施態様において、酸性変異体の割合はＨＰＩＥＣアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０３１６】
薬学的製剤の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の主要ピークの割合は約７５％以上である。薬学的製剤の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の主要ピークの平均割合は約７５％以上である。更に、本明細書において提供されるのは、組成物中に存在する主要ピークの割合が約７５％以上である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を含む薬学的製剤である。本明細書において更に提供されるのは、組成物中に存在する主要ピークの平均割合が約７５％以上である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）を含む薬学的製剤である。幾つかの実施態様において、主要ピークの割合及び／又は主要ピークの平均割合は、約７７．５％、約８０％、約８２．５％、又は約８５％の何れかに等しいか又はそれ以上である。幾つかの実施態様において、主要ピークの割合及び／又は主要ピークの平均割合は、約７５％と約９５％の間、約７７．５％と約９５％の間、約８０％と約９５％の間、約８２．５％と約９５％の間、又は約８５％と約９５％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、主要ピークの割合及び／又は主要ピークの平均割合は、約７５％、約７７．５％、約８０％、約８２．５％、又は約８５％の何れかである。幾つかの実施態様において、主要ピークの割合はＨＰＩＥＣアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０３１７】
薬学的製剤の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物中の塩基性変異体の割合は約２．０％以下である。薬学的製剤の何れかの幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えばバッチ）中の塩基性変異体の平均割合は約２．０％以下である。更に、本明細書において提供されるのは、組成物中に存在する塩基性変異体の割合が約２．０％以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物を含む薬学的製剤である。本明細書において更に提供されるのは、組成物中に存在する塩基性変異体の平均割合が約２．０％以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）を含む薬学的製剤である。幾つかの実施態様において、塩基性変異体の割合及び／又は塩基性変異体の平均割合は、約１．５％、約１．２５％、約１．１％、又は約１％の何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、塩基性変異体の割合及び／又は塩基性変異体の平均割合は、約０．００１％と約２％の間、約０．０１％と約２％の間、約０．００１％と約１．５％の間、約０．０１％と約１．５％の間、約０．００１％と約１．０％の間、又は約０．０１％と約１．０％の間の何れかである。幾つかの実施態様において、塩基性変異体の割合及び／又は塩基性変異体の平均割合は、約２％、約１．５％、約１．２５％、約１．１％、又は約１％の何れかである。幾つかの実施態様において、塩基性変異体の割合はＨＰＩＥＣアッセイによって決定される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０３１８】
薬学的製剤は、所望の程度の純度を有するその抗体とRemington's Pharmaceutical Sciences 18th edition, Osol, A. Ed.: Williams and Wilkins PA, USA (1990)に記載されるものなどの任意の薬学的に許容される一以上の担体とを、凍結乾燥製剤または水性溶液の形態で混合することによって調製される。薬学的に許容される担体は、使用される投薬量および濃度でレシピエントに毒性でなく、そしてこれには、限定しないが、リン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸のような緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジン；マンノサッカライド、ジサッカライド、およびグルコース、マンノースまたはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。本明細書における典型的な薬学的に許容される担体は、介在性薬物分散剤、例えば、水溶性の中性アクティブヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Baxter International, Inc.）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質を更に含む。所定の典型的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用法は、ｒＨｕＰＨ２０を含み、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び第２００６／０１０４９６８に開示されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つまたは複数の追加のグルコサミノグリカンと組み合わされる。
【０３１９】
典型的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性の抗体製剤は、米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されているものが含まれ、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝液を含む。
【０３２０】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合法によって、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート(methylmethacylate)）マイクロカプセル）により、コロイド薬物送達系に（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフィア、ミクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロ・エマルジョンで調製されたマイクロカプセルに封入されてもよい。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示される。
【０３２１】
徐放性製剤が調製されてもよい。徐放性製剤の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、そのマトリックスが成形品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形をしている。
【０３２２】
インビボ投与に使用される薬学的製剤は無菌でなければならない。これは、滅菌濾過膜を通す濾過を製剤の調製の前後に含む、ヒト被験体への投与に適した無菌の医薬製剤を生成するための当業者に公知の手順に従って達成することができる。
【０３２３】
また、本明細書中の薬学的製剤は、治療される特定の徴候の必要に応じて、一よりも多い活性な化合物、好ましくは互いに悪影響を与えない相補的活性を有するものを含有してもよい。そのような分子は意図する目的に有効な量で適切に組み合わせる。
【０３２４】
幾つかの実施態様において、薬学的製剤は、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製される抗体、ポリソルベート、糖類、及び緩衝液を含む。ポリソルベートの例には、限定されないが、ポリソルベート２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、ポリソルベート４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）、ポリソルベート６０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート）、及び／又はポリソルベート８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）を含む。糖類は、限定されないが、グルコース、スクロース、トレハロース、ラクトース、フルクトース、マルトース、デキストラン、グリセリン、デキストラン、エリスリトール、グリセロール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、メリビオース、メレジトース、ラフィノース、マンノトリオース、スタキオース、マルトース、ラクツロース、マルツロース、グルシトール、マルチトール、ラクチトール、イソ−マルツロースなどが含まれる。ヒスチジン緩衝液の例としては、限定されないが、ヒスチジン塩化物、ヒスチジンコハク酸塩、ヒスチジン酢酸塩、ヒスチジンリン酸塩、ヒスチジン硫酸塩を含む。幾つかの実施態様において、薬学的製剤は、（ａ）精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）及び／又は本明細書に記載の方法により精製される抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物（抗ｃ−ｍｅｔ抗体が約５０ｍｇ／ｍＬから約７５ｍｇ／ｍＬの間の濃度で存在する）；（ｂ）ヒスチジン酢酸塩緩衝液が約１ｍＭから約２０ｍＭの間の濃度であるｐＨ５．０から５．４のヒスチジン酢酸塩緩衝液；（ｃ）スクロースが約１００ｍＭから約１５０ｍＭの間の濃度であるスクロース；（ｄ）ポリソルベート２０の濃度が０．０２％ｗ／ｖより大きいポリソルベート２０を含む。幾つかの実施態様において、薬学的製剤は、（ａ）精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）及び／又は本明細書に記載の方法により精製される抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物（抗ｃ−ｍｅｔ抗体が約６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する）；（ｂ）ヒスチジン酢酸塩緩衝液が約１０ｍＭの間の濃度であるｐＨ５．４のヒスチジン酢酸塩緩衝液；（ｃ）スクロースが約１２０ｍＭの濃度であるスクロース；（ｄ）ポリソルベート２０の濃度が約０．０４％ｗ／ｖであるポリソルベート２０を含む。幾つかの実施態様において、薬学的製剤は投与の前に希釈される（例えば、生理食塩水で１ｍｇ／ｍＬに希釈）。
【０３２５】
更に、本明細書に提供されるのは、バイアル及び薬学的製剤を含むバイアルを充填する方法である。幾つかの実施態様において、薬学的製剤は、注射器による穿孔可能な栓付きのバイアル中に、好ましくは水性形態で提供される。バイアルは約２〜８℃で並びに上限３０℃までで２４時間、それを必要としている被験体に投与されるまで好ましく貯蔵される。バイアルは、例えば１５ｃｃのバイアル（例えば６００ｍｇの用量について）又は２０ｃｃのバイアル（例えば９００ｍｇの用量について）であってよい。
【０３２６】
ＶＩ．治療の用途及び方法
精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物を含む薬学的製剤、及び／又は本明細書に提供される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、ＨＧＦ／ｃ−ｍｅｔシグナル伝達系の調節不全に関連する疾患状態を調節するために有用である。ＨＧＦ／ｃ−ｍｅｔシグナル伝達経路は、例えば、細胞増殖及び血管新生を含む複数の生物学的及び生理学的機能に関与する。
【０３２７】
本明細書に提供されるのは、ｃ−ｍｅｔ活性化細胞増殖を阻害する方法であり、前記方法は、細胞又は組織と、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物を含む薬学的製剤、及び／又は本明細書に記載の方法により精製されて抗ｃ−ｍｅｔ抗体の有効量を含む抗ｃ−ｍｅｔ抗体とを接触させることを含み、それによってｃ−ｍｅｔ活性化に関連する細胞増殖が阻害される。幾つかの実施態様において、細胞増殖性疾患は、ｃ−ｍｅｔの発現又活性の増加又は肝細胞増殖、又はその両方に関連している。幾つかの実施態様において、癌は、ｃ−ｍｅｔ陽性である（例えば、免疫組織化学によりｃ−ｍｅｔの高レベルを発現する）。幾つかの実施態様において、細胞増殖は癌である。幾つかの実施態様において、癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、グリア芽腫、膵臓癌、肉腫、腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌、結腸直腸癌又は乳癌である。幾つかの実施態様において、癌は、ステージＩＩＩｂ及び／又はステージＩＶである。幾つかの実施態様において、癌は局所進行性または転移性の癌である。幾つかの実施態様において、治療は第二選択又は第三選択治療（例えば第二選択又は第三選択ＮＳＣＬＣ治療）である。幾つかの実施態様において、癌はＥＧＦＲ変異体である。幾つかの実施態様において、癌はＥＧＦＲ野生型である。幾つかの実施態様において、癌は、ｃ−ｍｅｔ陽性である（例えば、免疫組織化学（ＩＨＣ）によりｃ−ｍｅｔの高レベルを発現する）。
【０３２８】
本明細書に提供されるのは、被験体においてｃ−ｍｅｔ活性化の調節不全に関連する病的状態を治療する方法であり、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物を含む薬学的製剤、及び／又は本明細書に記載の方法により精製されて抗ｃ−ｍｅｔ抗体の有効量を含む抗ｃ−ｍｅｔ抗体を被験体に投与することを含み、それによって前記状態が治療される。幾つかの実施態様において、病的状態は癌である。幾つかの実施態様において、癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、グリア芽腫、膵臓癌、肉腫、腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌、結腸直腸癌又は乳癌である。幾つかの実施態様において、癌は、ステージＩＩＩｂ及び／又はステージＩＶの癌である。幾つかの実施態様において、癌は局所進行性または転移性の癌である。幾つかの実施態様において、治療は第二選択又は第三選択治療（例えば第二選択又は第三選択ＮＳＣＬＣ治療）である。ｃ−ｍｅｔ活性化（及びシグナル伝達）の調節不全は多数の細胞変化に起因することができ、例えばＨＧＦ（ｃ−ｍｅｔの同族のリガンド）及び／又はｃ−ｍｅｔ自体の過剰発現が含まれる。幾つかの実施態様において、癌はＥＧＦＲ変異体である。幾つかの実施態様において、癌はＥＧＦＲ野生型である。幾つかの実施態様において、癌は、ｃ−ｍｅｔ陽性である（例えば、ＩＨＣによりｃ−ｍｅｔの高レベルを発現する）。
【０３２９】
また本明細書に提供されるのは、ｃ−ｍｅｔ又は肝細胞増殖因子、またはその両方を発現する細胞の増殖を阻害する方法であり、前記方法は、前記細胞と、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物を含む薬学的製剤、及び／又は本明細書に記載の方法により精製され、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の有効量を含む抗ｃ−ｍｅｔ抗体とを接触させることを含み、それによって前記細胞の増殖の阻害を引き起こす。幾つかの実施態様において、前記細胞の増殖は、ｃ−ｍｅｔまたは肝細胞増殖因子またはその両方の増殖増強作用に少なくとも部分的に依存する。幾つかの実施態様において、細胞は（パラクリン作用を通じて）異なる細胞によって発現されるＨＧＦにより接触される。
【０３３０】
また本明細書に提供されるのは、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物を含む薬学的製剤、及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を投与することを含む、癌を治療する又は予防するための方法である。幾つかの実施態様において、癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、グリア芽腫、膵臓癌、肉腫、腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌、結腸直腸癌又は乳癌である。幾つかの実施態様において、癌は、ステージＩＩＩｂ及び／又はステージＩＶの癌である。幾つかの実施態様において、癌は局所進行性または転移性の癌である。幾つかの実施態様において、治療は第二選択又は第三選択治療（例えば第二選択又は第三選択ＮＳＣＬＣ治療）である。幾つかの実施態様において、癌はＥＧＦＲ変異体である。幾つかの実施態様において、癌はＥＧＦＲ野生型である。幾つかの実施態様において、癌は、ｃ−ｍｅｔ陽性である（例えば、ＩＨＣによりｃ−ｍｅｔの高レベルを発現する）。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は約１５ｍｇ／ｋｇである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は、２１日のサイクルの第１日に投与される約１５ｍｇ／ｋｇである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は約１０ｍｇ／ｋｇである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は、２８日のサイクルの第１日及び第１５日に投与される約１０ｍｇ／ｋｇである。
【０３３１】
何れかの方法の幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物、及び／又は精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物を含む薬学的製剤中のＨＣＰは約５０ｎｇ／ｍｇ以下である。何れかの方法の幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）、及び／又は精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物を含む薬学的製剤のロット（例えば、バッチ）中の平均的なＨＣＰは約５０ｎｇ／ｍｇ以下である。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約３４ｎｇ／ｍｇ、３０ｎｇ／ｍｇ、約２５ｎｇ／ｍｇ、約２０ｎｇ／ｍｇ、約１９ｎｇ／ｍｇ、約１８ｎｇ／ｍｇ、約１７ｎｇ／ｍｇ、約１６ｎｇ／ｍｇ、約１５ｎｇ／ｍｇ、約１４ｎｇ／ｍｇ、約１３ｎｇ／ｍｇ、約１２ｎｇ／ｍｇ、約１１ｎｇ／ｍｇ、約１０ｎｇ／ｍｇ、約又は９ｎｇ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約５ｎｇ／ｍｇと約２０ｎｇ／ｍｇの間、約５ｎｇ／ｍｇと約２５ｎｇ／ｍｇの間、約５ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約３０ｎｇ／ｍｇ，の間、約１ｎｇ／ｍｇと約２５ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約２０ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間、又は約１ｎｇ／ｍｇと１０ｎｇ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約５、約５．５、約６．５、約７、約７．５、約８、約８．５、約９、約９．５、約１０、約１０．５、約１１、約１１．５、約１２、約１２．５、約１３、約１３．５、約１４、約１４．５、約１５、約１５．５、約１６、約１６．５、約１７、又は約１７．５ｎｇ／ｍｇの何れかである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、ＥＣＰ及び／又は平均的なＥＣＰである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．２、約８．３及び／又は約８．４のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０３３２】
本明細書に記載される方法は、任意の適切な病理学的状態、例えば、ＨＧＦ／ｃ−ｍｅｔシグナル伝達経路の調節不全に関連する細胞及び／又は組織に作用するように使用することができる。本明細書に記載される方法の何れかの幾つかの実施態様において、本明細書に記載の方法において標的とされる細胞は癌細胞である。例えば、癌細胞は、乳癌細胞、結腸直腸癌細胞、肺癌細胞、（例えば甲状腺の）乳頭癌細胞、大腸癌細胞、膵臓癌細胞、卵巣癌細胞、子宮頸部癌細胞、中枢神経系癌細胞、骨肉腫細胞、腎癌細胞、肝細胞癌細胞、膀胱癌細胞、胃癌細胞、頭頸部扁平上皮癌細胞、メラノーマ細胞及び白血病細胞からなる群から選択されるものであり得る。幾つかの実施態様において、本明細書に記載の方法において標的とされる細胞は、過剰増殖性及び／又は過形成性細胞である。幾つかの実施態様において、本明細書に記載の方法において標的とされる細胞は、異形成細胞である。更に別の実施態様において、本明細書に記載の方法において標的とされる細胞は、転移細胞である。
【０３３３】
方法の何れかの幾つかの実施態様において、この方法はさらに、追加の治療工程を含む。例えば、幾つかの実施態様において、この方法は、標的細胞及び／又は組織（例えば癌細胞）が放射線治療又は第二治療薬（例えば、化学療法剤）に曝露されることを特徴とするさらなる工程を含む。例えば、（ｉ）精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体及び（ｉｉ）第二の治療薬を投与することを含む、癌を治療又は予防するための方法が提供される。幾つかの実施態様において、第二治療薬はＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ）、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ）、タキサン（例えば、パクリタキセル）である。
【０３３４】
本明細書に記載される任意の方法の幾つかの実施態様において、この方法はさらに、第二の治療薬の有効量を投与することを含む。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は約１５ｍｇ／ｋｇである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は約１０ｍｇ／ｋｇである。
【０３３５】
幾つかの実施態様において、第二治療薬は、ＥＧＦＲ阻害剤である。幾つかの実施態様において、ＥＧＦＲ阻害剤はエルロチニブ（Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン）である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は、２１日のサイクルの第１日に投与される約１５ｍｇ／ｋｇである。例えば、（ｉ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体が３週間毎に１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体；及び（ｉｉ）エルロチニブが３週間のサイクルの各日に、１５０ｍｇの用量で投与される、エルロチニブ（Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン）を投与することを含む癌（例えば、ＮＳＣＬＣ）を治療するための方法が提供される。
【０３３６】
幾つかの実施態様において、第二治療薬は、タキサン（例えば、パクリタキセル）である。幾つかの実施態様において、癌は乳癌である。幾つかの実施態様において、乳癌は、ＥＲ陰性、ＰＲ陰性、及びＨＥＲ２陰性（ＥＲ−、ＰＲ−、及びＨＥＲ２−；又はトリプルネガティブ）転移性乳癌である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は、２８日のサイクルの第１日及び第１５日に約１０ｍｇ／ｋｇである。例えば、（ｉ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体が２８日サイクルの第１日及び第１５日に１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体；及び（ｉｉ）パクリタキセルが２８日サイクルの第１日、第８日、及び第１５日に静脈内注入により９０ｍｇ／ｍ２の用量で投与されるパクリタキセルを投与することを含む、癌（例えば、乳癌）を治療する方法が提供される。幾つかの実施態様において、本方法は、患者の生存を増加させ、癌の再発の患者のリスクを減少させ、及び／又は患者の生存の可能性を増加させる。幾つかの実施態様において、本方法はさらに、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ベバシズマブ）の投与を含む。例えば、（ｉ）抗ｃ−ｍｅｔ抗体が２８日サイクルの第１日及び第１５日に１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体；（ｉｉ）抗ＶＥＧＦ抗体が２８日サイクルの第１日及び第１５日に１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ベバシズマブ）；及び（ｉｉ）パクリタキセルが２８日サイクルの第１日、第８日、及び第１５日に静脈内注入により９０ｍｇ／ｍ２の用量で投与されるパクリタキセルを投与することを含む、癌（例えば、乳癌）を治療する方法が提供される。
【０３３７】
精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、治療において単独又は他の薬剤と併用して用いることができる。例えば、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、第二治療薬（例えば、別の抗体、化学療法剤）（化学療法剤のカクテルを含む）、他の細胞傷害性薬物、抗血管新生剤、サイトカイン、及び／又は増殖阻害剤）と同時投与することができる。幾つかの実施態様において、第二治療薬は同時または逐次投与される。第二の治療薬は、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体とは別々に投与されるが、同じ治療レジメンの一部として投与することができる。精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、腫瘍増殖を阻害するが、腫瘍増殖を同様に阻害する一以上の他の治療薬とそれを組み合わせることが特に望ましい。例えば、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、例えば結腸直腸癌、転移性乳癌及び腎臓癌を含む本明細書に記載の疾患の何れか治療における治療計画でＥＧＦＲ阻害剤、抗ＶＥＧＦ抗体及び／又は抗ＥｒｂＢ抗体と組み合わせてもよい。
【０３３８】
上記のこうした併用療法は、併用投与（２つ以上の薬剤が、同一または別々の製剤に含まれている）を同時に、及び、薬学的製剤の投与が、追加の治療薬及び／又はアジュバントの投与の前、及び／又はその後に起きうる分離投与を包含する。
【０３３９】
従って、本明細書に記載の任意の方法の幾つかの実施態様において、本方法は、細胞を標的とすることを含み、ここで、ｃ−ｍｅｔ又は肝細胞増殖因子若しくはその両方が、同じ組織起源の正常細胞と比較して前記細胞（例えば癌細胞）によってより豊富に発現されることを特徴とする。ｃ−ｍｅｔ発現細胞は、種々の供給源由来のＨＧＦによって、即ち自己分泌的又は傍分泌的に調節することができる。ｃ−ｍｅｔの活性化及び／又はシグナル伝達はまた、リガンドとは独立して生じる可能性がある。それゆえ、幾つかの実施態様において、標的細胞におけるｃ−ｍｅｔの活性化は、リガンドとは独立して生じる。
【０３４０】
精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、治療用目的のために、ヒト被験体に投与することができる。更に、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、獣医学的目的のために、又はヒト疾患の動物モデルとして、免疫グロブリンが交差反応する抗原を発現する非ヒト哺乳動物（例えば、霊長類、ブタ又はマウス）に投与することができる。
【０３４１】
精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、限定されないが、悪性及び良性腫瘍；非白血病及びリンパ系の悪性腫瘍；神経細胞、グリア、星状細胞、視床下部及び他の腺、マクロファージ、上皮、間質及び胞胚腔の障害；及び炎症性、血管新生及び免疫学的疾患を含む、一以上の抗原分子の異常な発現及び／又は活性に関連する疾患、障害を治療し、阻害し、その進行を遅らせ、その再発を予防／遅延させ、寛解又は予防するために使用することができる。
【０３４２】
本方法の何れかの幾つかの実施態様において、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含むイムノコンジュゲートは細胞傷害性薬物とコンジュゲートし、患者に投与される。幾つかの実施態様において、細胞に結合し内部移行するイムノコンジュゲート及び／又は抗原は、結合した標的細胞を死滅させることにおいてイムノコンジュゲートの治療的有効性の増大をもたらす。幾つかの実施態様において、細胞傷害性薬剤は、標的又は標的細胞内の核酸と干渉する。
【０３４３】
精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（および任意の追加の治療薬）は、任意の適切な手段によって投与することができ、経口、肺内、および鼻腔内、及び局所治療が所望される場合、病巣内投与が含まれる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が含まれる。幾つかの実施態様において、抗体は静脈内に投与される。投薬は、その投与が短期間か又は長期であるかどうかに部分的に依存し、任意の適切な経路、例えば、静脈内または皮下注射などの注射により行うことができる。限定されないが、様々な時間点にわたる、単一または複数回投与、ボーラス投与、パルス注入を含む様々な投与スケジュールが本明細書で考えられている。
【０３４４】
精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、良好な医療行為と一致した方法で服用・投与される。この観点において考慮すべき要因は、治療すべき特定の障害、治療すべき特定の哺乳類、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤送達部位、投与方法、投与日程及び医療従事者が知る他の要因を包含する。精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、必要ではないが任意で、問題となる障害の予防又は治療のために、現在使用中の一又は複数の薬剤ともに処方される。そのような他の薬剤の有効量は製剤中の抗体の量、障害又は治療の種類及び上記した他の要因に依存する。これらは一般的には上文で使用されるのと同じ用量及び投与経路において、又は、これまでに用いられた用量の１％から９９％で、又は経験的に／臨床的に妥当であると決定された任意の用量及び任意の経路により使用される。
【０３４５】
疾患の予防又は治療のためには、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体の適切な用量（単独で使用されるか、又は、一以上の更なる治療的薬剤との組み合わされる場合）は、治療すべき疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を予防又は治療目的のいずれにおいて投与するか、以前の治療、患者の臨床的履歴及び抗ｃ−ｍｅｔ抗体に対する応答性、及び担当医の判断に依存する。精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、患者に対して一時に又は一連の治療にわたって適切に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば一回以上の別個の投与によるか、連続注入によるかに関わらず、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上（例えば１５−２０ｍｇ／ｋｇ）用量が患者へ投与される。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は約１５ｍｇ／ｋｇである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は、２１日のサイクルの第１日に投与される約１５ｍｇ／ｋｇである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は約１０ｍｇ／ｋｇである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は、２８日のサイクルの第１日及び第１５日に投与される約１０ｍｇ／ｋｇである。
【０３４６】
投与量は、断続的に、例えば、毎週、隔週、３週間ごと又は４週間ごとの何れかについて投与することができ得る。
【０３４７】
数日間以上に渡る反復投与の場合には、状態に応じて、治療は疾患症状の望まれる抑制が起こるまで持続するであろう。しかしながら他の投薬計画が有用であってもよい。この治療の進行は、従来技術及びアッセイにより容易にモニターされる。
【０３４８】
ＶＩＩ．製造品
精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物を含む製造品、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む薬学的製剤及びそれらの使用、障害の予防及び／又は診断が提供される。製造品は、容器と容器上ないしは容器に付随するラベルないしはパッケージ挿入物を含んでなる。好適な容器は、例としてボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ輸液バッグ等を含む。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な物質から形成されうる。容器は、疾患の治療、予防、及び／又は診断に有効であり、それ自体か、又はその他の組成物と併用される、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を収容し、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は皮下注射針による穴あきストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってよい）。例えば、本明細書に与えられるのは、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む容器を含む製造品及びキットである。ラベルまたはパッケージ挿入物は、組成物が選択される疾患、例えば癌の治療のために使用されることを示している。幾つかの実施態様において、癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、グリア芽腫、膵臓癌、肉腫、腎細胞癌、胃癌、結腸直腸癌又は乳癌である。幾つかの実施態様において、癌は、ステージＩＩＩｂ及び／又はステージＩＶの癌である。幾つかの実施態様において、癌は局所進行性または転移性の癌である。幾つかの実施態様において、治療は第二選択又は第三選択治療（例えば第二選択又は第三選択ＮＳＣＬＣ治療）である。幾つかの実施態様において、癌はＥＧＦＲ変異体である。幾つかの実施態様において、癌はＥＧＦＲ野生型である。幾つかの実施態様において、癌は、ｃ−ｍｅｔ陽性である（例えば、免疫組織化学によりｃ−ｍｅｔの高レベルを発現する）。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は約１５ｍｇ／ｋｇである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は、２１日のサイクルの第１日に投与される約１５ｍｇ／ｋｇである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は約１０ｍｇ／ｋｇである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は、２８日のサイクルの第１日及び第１５日に投与される約１０ｍｇ／ｋｇである。
【０３４９】
提供されるのは、組成物及び／又は薬学的製剤中のＨＣＰが５０ｎｇ／ｍｇ以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物及び／又は精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物を含む薬学的製剤を追加することを含む製造品をこん包する方法である。更に提供されるのは、ロット中の平均的ＨＣＰが５０ｎｇ／ｍｇ以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）及び／又は精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物を含む薬学的製剤のロット（例えば、バッチ）を追加することを含む製造品をこん包する方法である。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約３４ｎｇ／ｍｇ、３０ｎｇ／ｍｇ、約２５ｎｇ／ｍｇ、約２０ｎｇ／ｍｇ、約１９ｎｇ／ｍｇ、約１８ｎｇ／ｍｇ、約１７ｎｇ／ｍｇ、約１６ｎｇ／ｍｇ、約１５ｎｇ／ｍｇ、約１４ｎｇ／ｍｇ、約１３ｎｇ／ｍｇ、約１２ｎｇ／ｍｇ、約１１ｎｇ／ｍｇ、約１０ｎｇ／ｍｇ、約又は９ｎｇ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約５ｎｇ／ｍｇと約２０ｎｇ／ｍｇの間、約５ｎｇ／ｍｇと約２５ｎｇ／ｍｇの間、約５ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約３０ｎｇ／ｍｇ，の間、約１ｎｇ／ｍｇと約２５ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約２０ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間、又は約１ｎｇ／ｍｇと１０ｎｇ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約５、約５．５、約６．５、約７、約７．５、約８、約８．５、約９、約９．５、約１０、約１０．５、約１１、約１１．５、約１２、約１２．５、約１３、約１３．５、約１４、約１４．５、約１５、約１５．５、約１６、約１６．５、約１７、又は約１７．５ｎｇ／ｍｇの何れかである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、ＥＣＰ及び／又は平均的なＥＣＰである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．３、約８．４及び／又は約８．５のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０３５０】
組成物又は薬学的製剤中のＨＣＰは約５０ｎｇ／ｍｇ以下で組成物中に存在する、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物及び／又は抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物を含む薬学的製剤を含む容器（例えば、バイアル）もまた提供される。また提供されるのは、ロット中の平均的ＨＣＰが５０ｎｇ／ｍｇ以下である、抗ｃ−ｍｅｔ抗体を含む組成物のロット（例えば、バッチ）及び／又は抗ｃ−ｍｅｔ抗体組成物を含む薬学的製剤のロット（例えば、バッチ）を含む容器である。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約３４ｎｇ／ｍｇ、３０ｎｇ／ｍｇ、約２５ｎｇ／ｍｇ、約２０ｎｇ／ｍｇ、約１９ｎｇ／ｍｇ、約１８ｎｇ／ｍｇ、約１７ｎｇ／ｍｇ、約１６ｎｇ／ｍｇ、約１５ｎｇ／ｍｇ、約１４ｎｇ／ｍｇ、約１３ｎｇ／ｍｇ、約１２ｎｇ／ｍｇ、約１１ｎｇ／ｍｇ、約１０ｎｇ／ｍｇ、約又は９ｎｇ／ｍｇの何れかに等しいか又はそれ未満である。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約５ｎｇ／ｍｇと約２０ｎｇ／ｍｇの間、約５ｎｇ／ｍｇと約２５ｎｇ／ｍｇの間、約５ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約３０ｎｇ／ｍｇ，の間、約１ｎｇ／ｍｇと約２５ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約２０ｎｇ／ｍｇの間、約１ｎｇ／ｍｇと約１５ｎｇ／ｍｇの間、又は約１ｎｇ／ｍｇと１０ｎｇ／ｍｇの間の何れかである。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、約５、約５．５、約６．５、約７、約７．５、約８、約８．５、約９、約９．５、約１０、約１０．５、約１１、約１１．５、約１２、約１２．５、約１３、約１３．５、約１４、約１４．５、約１５、約１５．５、約１６、約１６．５、約１７、又は約１７．５ｎｇ／ｍｇの何れかである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、大腸菌で産生される。幾つかの実施態様において、ＨＣＰ及び／又は平均的なＨＣＰは、ＥＣＰ及び／又は平均的なＥＣＰである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はセクションＩＶにおいて記述される抗体である。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は、約１００ｋＤａである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体は約８．３、約８．４及び／又は約８．５のｐＩを有する。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体はオナルツズマブ(onartuzumab)である。
【０３５１】
本実施態様の製造品は、第一及び第二抗体組成物が、特定の状態、例えば癌を治療するために使用することができることを示したパッケージ挿入物を更に含む。幾つかの実施態様において、癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、グリア芽腫、膵臓癌、肉腫、腎細胞癌、胃癌、結腸直腸癌又は乳癌である。幾つかの実施態様において、癌は、ステージＩＩＩｂ及び／又はステージＩＶである。幾つかの実施態様において、癌は局所進行性または転移性の癌である。幾つかの実施態様において、治療は第二選択又は第三選択治療（例えば第二選択又は第三選択ＮＳＣＬＣ治療）である。幾つかの実施態様において、癌はＥＧＦＲ変異体である。幾つかの実施態様において、癌はＥＧＦＲ野生型である。幾つかの実施態様において、癌は、ｃ−ｍｅｔ陽性である（例えば、免疫組織化学によりｃ−ｍｅｔの高レベルを発現する）。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は約１５ｍｇ／ｋｇである。幾つかの実施態様において、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の用量は、２１日のサイクルの第１日に投与される約１５ｍｇ／ｋｇである。
【０３５２】
別法として、または加えて、任意の製造品の幾つかの実施態様において、製造品は、薬学的に許容されるバッファー、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化生理食塩水、リンガー溶液およびデキストロース溶液を含む第二（または第三）の容器をさらに含んでもよい。これは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的およびユーザーの立場から望まれる他の物質を更に含んでもよい。
【０３５３】
更に、製造品は、（ａ）精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体をその中に含む第一容器；及び（ｂ）組成物が更なる細胞障害性薬剤を含有する組成物をその中に含む第二の容器を含み得る。
【０３５４】
幾つかの実施態様において、第二治療薬は、ＥＧＦＲ阻害剤である。幾つかの実施態様において、ＥＧＦＲ阻害剤はエルロチニブ（Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン）である。幾つかの実施態様において、製造品は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体製剤の２１日サイクルの初日に投与される約１５ｍｇ／ｋｇの投与のため、及びエルロチニブの３週間のサイクルの各日に１５０ｍｇの投与のための説明書を含む。幾つかの実施態様において、製造品は癌（例えばＮＳＣＬＣ）の治療のための説明書を含む。
【０３５５】
幾つかの実施態様において、第二治療薬は、タキサン（例えば、パクリタキセル）である。幾つかの実施態様において、製造品は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体製剤の２８日サイクルの第１日及び第１５日で約１０ｍｇ／ｋｇの投与、及びパクリタキセルの２８日サイクルの第１日、第８日及び第１５日で静脈注射による９０ｍｇ／ｍ２の投与についての説明書を含む。幾つかの実施態様において、製造品は組成物をその中に含む第三容器を含み、ここで該組成物は第三治療薬を含み、該第三治療薬は抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ベバシズマブ）である。幾つかの実施態様において、製造品は、抗ｃ−ｍｅｔ抗体製剤の２８日サイクルの第１日及び第１５日で約１０ｍｇ／ｋｇの投与、及びパクリタキセルの２８日サイクルの第１日、第８日及び第１５日で静脈注射による９０ｍｇ／ｍ２の投与、及び抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ベバシズマブ）の２８日サイクルの第１日及び第１５日で１０ｍｇ／ｋｇの投与についての説明書を含む。幾つかの実施態様において、製造品は癌の治療のための説明書を含む。幾つかの実施態様において、乳癌（例えば、ＥＲ陰性、ＰＲ陰性、及びＨＥＲ２陰性（ＥＲ−、ＰＲ−、及びＨＥＲ２−；又はトリプルネガティブ）転移性乳癌）である。幾つかの実施態様において、本方法は、患者の生存を増加させ、癌の再発の患者のリスクを減少させ、及び／又は患者の生存の可能性を増加させる。
【０３５６】
上記の製造品のいずれかは、抗ｃ−ｍｅｔ抗体の代わりか又はそれに加えて、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は本明細書に記載される方法により精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体のイムノコンジュゲートを含み得ることが理解される。
【０３５７】
本明細書に更に提供されるのは本明細書に記載される任意の製造品を作成する方法である。
【０３５８】
以下は、精製された抗ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）組成物及び／又は抗ｃ−ｍｅｔ抗体を精製する方法の実施例である。上記提供される一般的な説明を前提として、他の様々な実施態様が実施され得ることが理解される。
【実施例】
【０３５９】
実施例−オナルツズマブの精製プロセス
材料と方法
大腸菌タンパク質（ＥＣＰ）レベルアッセイ
【０３６０】
サンドイッチＥＬＩＳＡが、製品サンプル中に存在するとき大腸菌タンパク質を検出及び定量するために使用された。ＥＣＰに対して特異的な親和性精製した抗体を、マイクロタイタープレートウェル上に固定化した。ＥＣＰは、サンプル中に存在する場合、コーティングされた抗体に結合する。結合したＥＣＰは、基質３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）と反応し、比色シグナルを生成する西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）にコンジュゲートした抗ＥＣＰを用いて検出した。抗ＥＣＰ試薬が、大腸菌タンパク質の複雑な混合物に対して社内で開発された。５つのパラメータ曲線フィッティングプログラムを標準曲線を生成するために使用し、サンプル濃度は標準曲線から外挿される。
【０３６１】
ＤＮＡレベルアッセイ
生成物サンプル中の大腸菌ＤＮＡを検出して定量化するために、サンプルからＤＮＡを抽出し、そしてＰＣＲプライマーとプローブを使用してＴａｑＭａｎリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に供した。アンプリコン（増幅産物）は、ＤＮＡ増幅中に連続的に測定される蛍光発光の増加に直接比例して定量化した。標準曲線は、サンプル中の大腸菌ＤＮＡの量を定量するために使用した。
【０３６２】
ＬｐＡレベルアッセイ
この試験手順は、ときに生成物サンプル中に存在するプロテインＡを検出および定量化するために、サンドイッチＥＬＩＳＡを用いて行った。ニワトリ抗ブドウ球菌プロテインＡ抗体をマイクロタイターウェルに固定化した。サンプル、標準物質、及び対照物質は、ウェル中（そこでコーティングされた抗体にプロテインＡが結合する）でのインキュベーションの前に調製された。結合したプロテインＡは、基質である３，３’，５，５’−ＴＭＢと反応し、比色シグナルを生成するＨＲＰにコンジュゲートしたニワトリ抗プロテインＡにより検出された。この前処置は、プロテインＡをその検出試薬へ完全にアクセス可能とする、プロテインＡ／ＩｇＧの複合体からのプロテインＡの解離に基づいていた（Zhu-Shimoni et al., J. Immunol. Methods 341:59-67 (2009）。従って、サンプル中で過剰の生成物分子からの干渉なしにプロテインＡを検出することができた。プロテインＡカラムに固定化されたリガンドに対応する特異的リガンド（例えば、ＰｒｏＳｅｐ−ｖＡ又はＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭ）をアッセイにおける標準物質として使用した。５つのパラメータ曲線フィッティングプログラムを標準曲線を生成するために使用し、サンプル濃度は標準曲線から外挿された。
【０３６３】
ＬＡＬレベルアッセイ
細菌のエンドトキシンは、微生物細胞の破壊によって、又は生細胞から脱落することによって放出させることができるグラム陰性細菌の細胞壁のリポ多糖（ＬＰＳ）成分である。速度論的発色法が、カブトガニ血球抽出成分(Limulus Amebocyte Lysate)（ＬＡＬ）による細菌のエンドトキシンの検出及び定量化のために用いられた。このアッセイは、米国薬局方及びヨーロッパ薬局方に照らして適格とされている。
【０３６４】
速度論的発色法は、細菌エンドトキシンの存在による、ＬＡＬ試薬中のプロ酵素の活性化に基づいていた。活性化の際に、酵素は、分光光度法で定量した黄色の色を生成する、発色団の切断を触媒する。色変化の速度は、存在するエンドトキシンと反応時間の量に正比例した。標準曲線は、エンドトキシンの濃度と色の有意な量を生成するのに必要な反応時間との間のｌｏｇ／ｌｏｇ相関から生成された。
【０３６５】
単量体、断片及び凝集体アッセイ
オナルツズマブのサイズの不均一性を天然の条件下でモニターするために、ＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ３０００ＳＷＸＬカラムを用いることによるサイズ排除クロマトグラフィーが用いられ、オナルツズマブの高分子量種（凝集体）、主要ピーク（単量体）、及び低分子量種（断片）を分離した。
【０３６６】
主要ピーク、酸性変異体及び塩基性変異体のアッセイ
定量的に電荷の不均一性をモニターするために、Ｄｉｏｎｅｘ ＰｒｏＰａｃ弱陽イオン交換カラムを用いることによる陽イオン交換クロマトグラフィーが用いられ、オナルツズマブを酸性領域、主要ピーク、及び塩基性領域へと分離した。
【０３６７】
結果
オナルツズマブは、大腸菌(E.coli)で産生される、片腕で一価の抗ｃ−ｍｅｔ抗体である。（２本の重鎖と２本の軽鎖を有するアゴニスト二価抗体の形成よりも）一価の構造を維持するために、及び／又はオナルツズマブ及び宿主細胞の不純物／汚染物質の非常に類似した静電特性に起因した、一価抗体の凝集（多量体及びオリゴマーの形成）を最小化する必要性を考慮して、表２に詳述されるように、オナルツズマブの複数の精製プロセスを追求した。
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【０３６８】
上述される工程によって、表３に記載されるような属性を持つオナルツズマブを含む組成物のバッチを得た。
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【０３６９】
プロセスＡと工程Ｂを比較すると、その違いは、表４に概説されるように観察されたオナルツズマブを含む組成物の精製プロセス及び／又は純度において著しい改善をもたらした。
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【０３７０】
表４に記載されているように、工程Ｂと比較してプロセスＡの精製における一つの違いは、強ＣＥカラムから弱ＣＥカラムへのクロマトグラフィー工程２（Ｃｈｒｏｍ ２）の変更であった。工程Ｂの開発において、潜在的なＣＥ樹脂を評価した。ＣＥ樹脂のスクリーニングを、ＣＭセファロースＦＦ（弱ＣＥ樹脂）、ＳＰセファロースＦＦ（強ＣＥ樹脂）、及びＸＰ ＸＬ樹脂（強ＣＥ樹脂）を用いて実施した。表５に示されるように、弱ＣＥ樹脂は、ＳＰセファロースＦＦ（強ＣＥ樹脂）と比較して、良好なＥＣＰクリアランスを実証した。また、弱ＣＥ樹脂は再生されてその元の外観に戻すことができたが、他の樹脂は、ベース再生後に茶色ががった色のままであった。更に、０．５−０．５ＯＤをプールするとき、弱ＣＥ樹脂及び強ＣＥ樹脂（ＳＰセファロースＦＦ）の実行からの最後の画分は５０％を凝集させる。対照的に、１−１ＯＤをプールするとき、この凝集体はプールから除去され、１％未満の凝集体レベルが、生成物の収率に著しく影響を与えることなく、これらのプールに見られた。
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【０３７１】
更に、工程Ｂの開発において、可能性のある疎水性相互作用的クロマトグラフィー（ＨＩＣ）樹脂が最終クロマトグラフィー工程について評価された。表６に示すように、GE Health ScienceからのＨＩＣ樹脂、フェニルセファロースＦＦ ＨｉＳｕｂ（樹脂１）、東ソーからのトヨパールフェニル−６５０Ｍ（樹脂２）、東ソーからのトヨパールヘキシル−６５０Ｃ（樹脂３）、及び東ソーからのトヨパールブチル−６５０Ｍ（樹脂４）が、ＡＫＴＡスカウト法(AKTA scouting method)を介して評価し、次の実行条件を用いて処理した：モード：フロースルー、ｐＨ７．０、流量：１５０ｃｍ／時、最大負荷密度：５０ｍｇ／ｍｌ。樹脂は、緩衝液（０．３ＭのＮａ２ＳＯ４、５０ｍＭのＮａ３ＰＯ４、ｐＨ７．０）の５カラム体積（ＣＶ）に平衡化された。サンプル、調整されたＳＰセファロースＸＬプール（０．６ＭのＮａ２ＳＯ４、０．１ＭのＮａ３ＰＯ４、ｐＨ７．０の緩衝液により１：１に調整；開始プール基準：０．５ＯＤ）がカラムにロードされ、目的のタンパク質（オナルツズマブ）は緩衝液（０．３ＭのＮａ２ＳＯ４、５０ｍＭのＮａ３ＰＯ４、ｐＨ７．０）の１５−２０ＣＶを用いて、終末プール基準を０．５ＯＤとして溶出した。
【０３７２】
表６に示される結果に基づいて、ＨＩＣ樹脂、フェニルセファロースＨｉＳｕｂは、ＨｉＰｒｏｐｙｌによる工程収率７０％に対して８２％の工程収率を、そして１２１ｐｐｍのＥＣＰと１．４％の凝集体の不純物クリアランスを達成することによって全体的に最良の成績であった。
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【０３７３】
プロセスＢとプロセスＣを比較すると、その違いは、表７に概説されるように観察されたオナルツズマブを含む組成物の精製プロセス及び／又は純度において著しい改善をもたらした。
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【０３７４】
プロセスＣの開発において、強ＣＥ樹脂負荷に必要とされるｐＨ調整を除くために、弱ＣＥカラムと強ＣＥカラムで用いる緩衝液をＭＥＳからＭＯＰＳに変更した。これはまた、処理を容易にすることを促進する利点を持っていた。以下の表８は、同様のＥＣＰ値をもたらす弱ＣＥ樹脂上での更なる精製による、ＭＯＰＳとＭＥＳの比較を示す。プロセスＢの条件（２５ｍＭのＭＥＳ、６０ｍＭのＮａＯＡｃ ｐＨ６．５）から２５ｍＭ ＭＯＰＳ、５０ｍＭのＮａＯＡｃ ｐＨ７．１へ変更すると、同等の結果が見られた。
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【０３７５】
更に、ｐＨ６．５又は７．０のどちらかでの負荷により強ＣＥ樹脂を作動させると、表９に示すように、より高いｐＨ負荷は良好なＥＣＰクリアランスを与えるように見えた。更に、表２に示すように収率は同等であった。
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【０３７６】
図４に示すように勾配溶出条件下で作動された強ＡＥ樹脂（ＱセファロースＦＦ）はＥＣＰと凝集体の良好な分解能をもたらした。図４のクロマトグラムは、ＥＣＰ（ｎｇ／ｍＬによる）と凝集体の％の追跡を含む（図４のＯＡ５Ｄ５はオナルツズマブであることに留意）。ＥＣＰと凝集体の分布は、強ＡＥ樹脂は十分にＥＣＰを除去し、最終クロマトグラフィー工程としてＨＩＣ樹脂を置換することが可能であることを示していた。図１０も参照。
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【０３７７】
強ＡＥ樹脂のパラメータ及び動作範囲は、生成物の純度と回収に影響を与えることなく実行することができるかどうかを決定するために、以下の条件を検討した。実施は溶出緩衝液中のＮａＣｌが４０ｍＭ、４５ｍＭ及び５０ｍＭで行った。溶出緩衝液のｐＨは、８．７、８．９及び９．２で試験した。洗浄緩衝液の塩濃度は、ＮａＣｌが１０ｍＭ、２５ｍＭ及び３０ｍＭで試験した。強ＡＥカラムの負荷不足の影響もまた１５ｇ／Ｌの負荷密度による実行により試験された。表１１に示すように、全ての実行は、最終の強ＡＥ樹脂の作動条件の頑健性を証明した。
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【０３７８】
プロセスＣとプロセスＤを比較すると、その違いは、表１２に概説されるように観察されたオナルツズマブを含む組成物の精製プロセス及び／又は純度において著しい改善をもたらした。
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【０３７９】
プロセスＣと比較すると、遠心分離前に希釈液の１０％の増加を利用する場合、プロセスＤのプロテインＡプール生成物の回収はおよそ１０％増加した（平均のプロテインＡプール質量（正規化）：工程Ｃ−１Ｘ及び工程Ｄ−１．１Ｘ）。この実施例では、遠心分離工程に関する生成物回収における正味の改善は、下流においてプロテインＡに関する生成物の回収における正味の増加へ置き換えられた。
【０３８０】
工程Ｄと工程Ｅを比較すると、その違いは、表１３に概説されるように観察されたオナルツズマブを含む組成物の精製プロセス及び／又は純度において著しい改善をもたらした。
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【０３８１】
凝集工程を工程Ｄに追加した。工程Ｅのように長期間、表１４に示すように高温で遠心分離液を保持すると、そうしなければプロテインＡプール中に溶出した幾つかの不純物の凝集をもたらした。しかし、凝集工程はプロテインＡの負荷工程を妨げる濁度の増加をもたらす。上流の凝集工程を誘導するために使用される複数の温度及び時間をテストすることにより、任意の付加された濁度は、強化された精製で妥協をすることなしにそのプロセス内で既存の遠心分離及び濾過技術を用いて最小化及び／又は除去することができた。
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【０３８２】
また、プロテインＡ樹脂は、異なるプロテインＡ樹脂をスクリーニングした後、プロセスＤ及びプロセスＥの間で変更した。表１５に示すように、プロテインＡ樹脂の比較は、プロテインＡ樹脂２（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕｒｅＴＭ）は、プロテインＡ樹脂１及びＰｒｏｓｅｐ Ｕｌｔａ Ｐｌｕｓ（ＰＵＰ）と比較して著しく低いＥＣＰを生じたことを示している。更に、プロテインＡ樹脂２は検出可能なレベル以下にＰＥＩを排除したが、一方プロテインＡ樹脂１及びＰＵＰは排除しなかった。残留ＰＥＩは、下流の樹脂上でドメインの結合を生成物と競合し、それによって生成物の結合能力を減少させ、異常な挙動をもたらすので、残留ＰＥＩは問題となる可能性がある。更に小さな濃度の残留ＰＥＩの存在は、精製効率に有害であり得る。プロテインＡ樹脂としてプロテインＡ樹脂１を用いるプロセスＤにおいて、生成物はまずプロテインＡ樹脂２に匹敵するＰＥＩのレベルを達成するために、弱ＣＥ工程において処理しなければならない。オナルツズマブを含むプロテインＡ樹脂負荷から残留カチオン性高分子凝集体（ＰＥＩ）を除去するプロテインＡ樹脂２の性能は独特で予想外であった。プロテインＡ樹脂２の有効性は、それが与える強化された柔軟性とプロセスの堅牢性のため価値がある。更に、プロテインＡ樹脂２は、プロテインＡリガンドを、プロテインＡ樹脂１（平均すると２１ｎｇ／ｍｇになる）に比して、濾過せず（結果＜２ｎｇ／ｍｇ）、そしてプロテインＡ樹脂２のプールは、Ｐｒｏｓｅｐ ｖＡ及びＰＵＰと比較して、色を薄めている（データ非表示）。
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【０３８３】
更に、プロテインＡ溶出緩衝液との間の比較は、グリシン／リン酸は（下流の弱ＡＥ樹脂を充填するための高ｐＨに調整後）低い伝導率、及び表１６に示されるようにアセテート／酢酸溶出緩衝液に相当するプール体積、プールのｐＨ、滴定剤体積及び収率で調整されたプールを生じることを示した。グリシン／リン酸溶出緩衝液で実現された調整されたプール伝導率の低下は、プールは１：１の希釈を必要とせず、プロセスＤに比較して負荷体積／負荷プロセス時間の５０％減少をもたらしたので、製造効率の有意な改善を示した。
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【０３８４】
第二のクロマトグラフィー工程（Ｃｈｒｏｍ ２）もまた、プロセスＤ及びＥ．プロセスの間で変更された。弱ＣＥ樹脂（Ｃｈｒｏｍ２工程）に対してより効果的な代替手段を同定することを目指して、２８樹脂のハイスループットロボットスクリーニングを行った。弱ＣＥ樹脂は、ＥＣＰの除去において最も効果が小さい工程であり、残留ＰＥＩを扱うその性能に起因して以前は大いに必要とされた。プロテインＡ樹脂２に起因して残留ＰＥＩはもはや問題ではなく、より有効なＣｈｒｏｍ２樹脂が望まれた。最初に、１２のＡＥ樹脂、８のＣＥ樹脂、及び８のＨＩＣ樹脂が生成物の結合についてスクリーニングされた。このスクリーニングから、８のＡＥ樹脂、８のＣＥ樹脂、及び４のＨＩＣ樹脂が、プロテインＡ樹脂２プールを負荷として使用してＥＣＰ結合について更に試験された。各樹脂については、４８の条件が試験され、２３００を超えるデータ点の集合を得た。驚くべきことに、事実上試験された全ての樹脂について、生成物とＥＣＰ吸着の間には強い相関があった。これらの観察は、最終のクロマトグラフィー（最終Ｃｈｒｏｍ）プール（データ非表示）で実行された他の分析の結果と結合され、問題のあるＥＣＰ（即ちプロセスを通じて保持されるもの）は、生成物に対して類似した静電的及び疎水的特性を共有し、従って非常に困難な分離に役だつことを示唆している。ロボットによるスクリーニングから、オナルツズマブ生成物とＥＣＰの間の識別可能な違いを示す唯一の樹脂は弱ＡＥ樹脂であり、ここにおいてさえも図５に示すようにオペレーティング・ウィンドウ(operating window)は小さかった（Ｃａｐｔｏ ＤＥＡＥについて上のグラフを、オペレーティング・ウィンドウについて青いボックスを参照）。
【０３８５】
プロセスＥとプロセスＦを比較すると、その違いは、表１７に概説されるように観察されたオナルツズマブを含む組成物の精製プロセス及び／又は純度において著しい改善をもたらした。
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【０３８６】
弱ＡＥ平衡化／洗浄緩衝液の間の比較では、グリシン、リン酸塩、トリス（ＧＰＴ）緩衝液は、リーディングエッジ上の屈曲を取り除くことにより、より箱状の、フロースルー工程をもたらし、クロマトグラムの裏面で洗浄ピークを分離することを示した。ＧＰＴは、プロセスＦにおいてより効果的な緩衝液であり、それを使用する利点は、プール及び緩衝液の体積の２５％の減少、負荷ｐＨの小さな変動に起因するクロマトグラム形状の変動の低減、及び図６に示すように、体積の代わりに光学濃度に基づく堅牢なエンドプーリングが含まれた。
【０３８７】
強ＡＥ最終クロマトグラフィー工程で実施された一部実施要因多変数ＤＯＥは、図７に示すように、許容範囲の右下隅で、負荷伝導率と負荷ｐＨとの間の好ましくない相互作用を明らかにした。この隅の近傍における作動は、他の条件（〜９０％）と比較して有意に低い収率（６０−７０％）を示した。この隅の近傍において、収率の損失と一致して、ロード・フェーズ（load phase）の終了に向かって、クロマトグラム上の吸光度シグナルにおいてオナルツズマブタンパク質の著しいブレークスルーが観察され（データ非表示）、生成物と樹脂との間の不十分な電荷−電荷相互作用に起因する結合能力の減少を示唆している。時期尚早なブレークスルーとその後の収率損失のリスクを軽減するために、伝導率について標的の作動条件は、プロセスＦにおいて隅の近傍を避けるために左に移された。
【０３８８】
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【０３８９】
前述の発明は、理解を明確にする目的のために例示および実施例によってある程度詳細に説明してきたが、説明や例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。すべての特許および本明細書に引用される科学文献の開示は、参照によりその全体が援用される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図５】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2014533700.tif 000029
2014533700.tif 000030
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