(57)【要約】  本発明は、５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの結晶形態、その製造方法、その医薬としての使用およびアルツハイマー病の処置における使用のための該化合物の結晶形態を含む医薬に関する。
2014502625.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物
【化１】
2014502625.tif 000013
の結晶形態。
【請求項２】
実質的に純粋な、請求項１に記載の化合物の結晶形態。
【請求項３】
ＣｕＫα照射を用いて測定したとき、８．３、９．０、１０．９、１２．９、１３．９、１５．４、１６．２、１７．１、１８．２、および２４．５°から選択される屈折角  ２θ（θ）値を有し、少なくとも１つ、２つまたは３つのピークを有するＸ線粉末回折パターンを有し、該値が、±０．２°  ２θである、請求項１または２に記載の化合物の結晶形態。
【請求項４】
ＣｕＫα照射を用いて測定したとき、図１に示すＸ線粉末回折パターンと実質的に同一のＸ線粉末回折パターンを有する、請求項１または２に記載の化合物の結晶形態。
【請求項５】
少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤と共に、薬学的有効成分として請求項１ないし４のいずれか一項に記載の化合物の結晶形態を含む、医薬組成物。
【請求項６】
別の１種の治療薬または複数の治療薬をさらに含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
医薬としての使用のための、請求項１ないし４のいずれか一項に記載の化合物の結晶形態。
【請求項８】
アルツハイマー病または軽度の認知障害の処置または予防に使用するための、請求項１ないし４のいずれか一項に記載の化合物の結晶形態。
【請求項９】
アルツハイマー病または軽度の認知障害の処置または予防のための医薬の製造を目的とする、請求項１ないし４のいずれか一項に記載の化合物の結晶形態の使用。
【請求項１０】
アルツハイマー病または軽度の認知障害の処置または予防を必要とする対象における該処置または予防方法であって、かかる対象に有効量の請求項１ないし４のいずれか一項に記載の化合物の結晶形態を投与することを含む、方法。
【請求項１１】
同時または連続投与のための、治療的有効量の請求項１ないし４のいずれか一項に記載の化合物の結晶形態および第二の薬物を含む、薬学的組合せ剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
産業上の利用分野
本開示は、包括的に、結晶性５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドに関する。本開示はまた、包括的に、結晶性５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドを含む医薬組成物、ならびにアルツハイマー病の処置における該結晶形態の使用方法、およびかかる結晶性物質を得るための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
アルツハイマー病は、壊滅的な神経変性障害である。その散発型は、高齢者集団で発症し(７５歳を越えると発症率が急増する)、さらに、４０〜５０歳代に発症する種々の家族型がある。病理学的には、アルツハイマー病は、患者の脳内の細胞外老人斑および細胞内神経繊維の縺れ(tangles)の存在によって特徴付けられる。老人斑のコア構成物質は、小さい４ｋＤａのアミロイドペプチドである。それらは、大きな膜貫通タンパク質であるアミロイド前駆体タンパク質(ＡＰＰ)のタンパク質分解性プロセシングによって生じる。β−セクレターゼ(ＢＡＣＥ−１)によるＡＰＰの切断は、溶解性ＡＰＰ−βフラグメントを放出する一方で、９９アミノ酸鎖長のＣ末端は、膜に繋がったままである。このＣ末端フラグメントは、その後、γ−セクレターゼ(膜多酵素複合体)によってタンパク質分解性プロセシングされ、様々な長さの、主に４０および４２アミノ酸鎖長のアミロイドペプチドを生じる (Hardy J, Selkoe DJ (2002) Science; 297 (5580):353−356)。
【０００３】
病理学的状態で、これらのペプチドの形成が加速的に起こる場合、あるいは、脳からのそれらの除去が妨害される場合、脳アミロイドペプチド濃度が増大し、オリゴマー、原繊維および最終的にプラークの形成が起こる(Farris W, et al (2007) Am.J. Pathol.; 171 (1):241−251)。脳内のアミロイドペプチドおよびプラークの蓄積は、アルツハイマー病の病因の中で最初に検出可能な事象であり、シナプス、シナプス結合および神経細胞の喪失を誘発することが示されている (Grimmer T, et al (2009) Neurobiology of Aging; 30 (12):1902−1909)。広範な神経細胞喪失によって引き起こされる脳萎縮に続き、認知、記憶、適応および日常生活を行う能力の喪失、すなわち、臨床的に明白な認知症が起こる (Okello A, et al (2009) Neurology; 73 (10):754−760)。
【０００４】
ＢＡＣＥ−１は、Ａｓｐ２またはメマプシン２としても公知であり、神経細胞内で高発現される膜貫通アスパラギン酸プロテアーゼである。それは、ゴルジ体およびエンドサイトーシス区画(endocytic compartment)内の基質ＡＰＰと共局在している(Willem M, Lammich S, Haass C (2009) Semin.Cell Dev.Biol; 20 (2):175−182)。マウスでのノックアウト研究により、アミロイドペプチド形成が起こらない一方、動物は、健康で繁殖可能であることが証明された (Ohno M, et al (2007) Neurobiol.Dis.; 26 (1):134−145)。ＡＰＰ過剰発現マウスにおけるＢＡＣＥ−１の遺伝子除去により、プラーク形成が起こらず、認知欠損が回復することが証明された (Ohno M, et al (2004) Neuron; 41 (1):27−33)。ＢＡＣＥ−１レベルは、散発型アルツハイマー病患者の脳内で上昇している (Hampel H, Shen Y (2009) Scand. J. Clin. Lab. Invest.; 69 (1):8−12)。
【０００５】
まとめると、これらの発見は、ＢＡＣＥ−１の阻害が、アルツハイマー病の処置ための好ましい治療戦略であり得ることを示唆している。
【発明の概要】
【０００６】
発明の概要
本発明は、ＢＡＣＥ阻害活性を有する新規結晶性オキサジン誘導体、すなわち結晶性５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミド、その製造法、その医学的使用、および該結晶性オキサジン誘導体を含む医薬に関する。
【０００７】
結晶性５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドは、少なくとも化学的に安定であり、製剤が容易である点で、対応する非結晶性化合物よりも利点を有する。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、ＣｕＫα照射を用いて測定したときの、結晶性５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図２】図２は、結晶性５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドのＤＳＣサーモグラムを示す。
【図３】図３は、アモルファス  ５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドのＤＳＣサーモグラムを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明の詳しい説明
第一の局面において、本発明は、５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの結晶形態を提供する。
【００１０】
５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの化学構造は、
【化１】
2014502625.tif 000003
である。
【００１１】
明確にしておくために、本発明は、結晶性５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの遊離形を提供する。用語“遊離形”は、塩を形成していない化合物自体を意味する。
【００１２】
本発明の一態様において、結晶性５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの実質的に純粋な形態を提供する。
【００１３】
本明細書で用いる“実質的に純粋な”は、結晶性５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドについて用いられるとき、化合物の重量に基づき、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８および９９重量％より高い純度を含み、また約１００重量％と等しい純度の５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドを含む、９０重量％より高い純度を有することを意味する。
【００１４】
反応不純物および／または処理不純物の存在は、例えばクロマトグラフィー、核磁気共鳴スペクトル、質量分析または赤外線スペクトルのような当技術分野で公知の分析技術により決定され得る。
【００１５】
さらなる面において、本発明は、ＣｕＫα照射を用いて測定したとき、８．３、９．０、１０．９、１２．９、１３．９、１５．４、１６．２、１７．１、１８．２、および２４．５°から選択される屈折角  ２θ（θ）値を有し、より具体的には、該値が、±０．２°  ２θである、少なくとも１つ、２つまたは３つのピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、結晶形態の５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドに関する。
【００１６】
一態様において、本発明は、ＣｕＫα照射を用いて測定したとき、８．３、９．０、１０．９、１２．９、１３．９、１５．４、１６．２、１７．１、１８．２、および２４．５°から選択される屈折角  ２θ（θ）値を有し、より具体的には、該値が、±０．２°  ２θである、少なくとも１つ、２つ、３つまたは４つのピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する、結晶形態の５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドに関する。
【００１７】
一態様において、本発明は、ＣｕＫα照射を用いて測定したとき、８．３°の屈折角  ２θ（θ）値にピークを有するＸ線粉末回折パターンを有し、より具体的には、該値が、±０．２°  ２θである、結晶形態の５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドに関する。
【００１８】
一態様において、本発明は、ＣｕＫα照射を用いて測定したとき、９．０°の屈折角  ２θ（θ）値にピークを有するＸ線粉末回折パターンを有し、より具体的には、該値が、±０．２°  ２θである、結晶形態の５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドに関する。
【００１９】
一態様において、本発明は、ＣｕＫα照射を用いて測定したとき、１０．９°の屈折角  ２θ（θ）値にピークを有するＸ線粉末回折パターンを有し、より具体的には、該値が、±０．２°  ２θである、結晶形態の５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドに関する。
【００２０】
一態様において、本発明は、ＣｕＫα照射を用いて測定したとき、１２．９°の屈折角  ２θ（θ）値にピークを有するＸ線粉末回折パターンを有し、より具体的には、該値が、±０．２°  ２θである、結晶形態の５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドに関する。
【００２１】
一態様において、本発明は、ＣｕＫα照射を用いて測定したとき、１３．９°の屈折角  ２θ（θ）値にピークを有するＸ線粉末回折パターンを有し、より具体的には、該値が、±０．２°  ２θである、結晶形態の５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドに関する。
【００２２】
一態様において、本発明は、ＣｕＫα照射を用いて測定したとき、１５．４°の屈折角  ２θ（θ）値にピークを有するＸ線粉末回折パターンを有し、より具体的には、該値が、±０．２°  ２θである、結晶形態の５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドに関する。
【００２３】
一態様において、本発明は、ＣｕＫα照射を用いて測定したとき、１６．２°の屈折角  ２θ（θ）値にピークを有するＸ線粉末回折パターンを有し、より具体的には、該値が、±０．２°  ２θである、結晶形態の５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドに関する。
【００２４】
一態様において、本発明は、ＣｕＫα照射を用いて測定したとき、１７．１°の屈折角  ２θ（θ）値にピークを有するＸ線粉末回折パターンを有し、より具体的には、該値が、±０．２°  ２θである、結晶形態の５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドに関する。
【００２５】
一態様において、本発明は、ＣｕＫα照射を用いて測定したとき、１８．２°の屈折角  ２θ（θ）値にピークを有するＸ線粉末回折パターンを有し、より具体的には、該値が、±０．２°  ２θである、結晶形態の５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドに関する。
【００２６】
一態様において、本発明は、ＣｕＫα照射を用いて測定したとき、２４．５°の屈折角  ２θ（θ）値にピークを有するＸ線粉末回折パターンを有し、より具体的には、該値が、±０．２°  ２θである、結晶形態の５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドに関する。
【００２７】
一態様において、本発明は、ＣｕＫα照射を用いて測定したとき、図１に示すＸ線粉末回折パターンと実質的に同一のＸ線粉末回折パターンを有する、結晶形態の５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドに関する。詳細には、実施例７を参照のこと。
【００２８】
Ｘ線粉末回折ピーク位置に関する用語“実質的に同様の”は、典型的なピークの位置および強度の変動性が考慮されることを意味する。例えば、当業者は、ピークの位置（２θ）が、典型的に０．２°程度の、装置間の変動を示し得ることを認識し得る。さらに、当業者は、相対的なピーク強度が、装置間の変動性ならびに結晶化度、好ましい配向性、調整されたサンプル表面、および当業者に公知の他の因子による変動性を示し得ること、定性的な測定値としてのみ解釈されるべきことを認識し得る。
【００２９】
当業者はまた、Ｘ線回折パターンが、用いた測定条件によって、測定エラーとして得られ得ることも認識し得る。特に、Ｘ線回折パターンにおける強度は、用いた測定条件によって変動し得ることが一般的に知られている。相対的強度もまた実験条件によって変わり、従って、強度の正確な順序は考慮されるべきではないことがさらに理解されるべきである。加えて、従来のＸ線回折パターンの回折角の測定エラーは、典型的に、約５％未満であり、そのような測定エラーの程度は、上記の回折角に関して考慮されるべきである。従って、本発明の結晶形態が、本明細書に添付の図１に記載のＸ線回折パターンと完全に同一のＸ線回折パターンを提供する結晶形態に限定されないことは、理解されるべきである。添付の図１に記載のＸ線回折パターンと実質的に同一のＸ線回折パターンを提供する結晶形態は、本発明の範囲内に包含される。Ｘ線回折パターンの実質的同一性を確認する能力は、当業者の能力の範囲内である。
【００３０】
本発明のさらなる面において、本発明は、図２に示す示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムと実質的に同一の該サーモグラムを有する、５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの結晶形態に関する。
【００３１】
以下、「本発明の薬物」または「本発明の化合物」と称される、５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの結晶形態は、インビトロまたはインビボで試験したとき、有益な薬理学的特性を示し、故に、医薬、治療において、または化合物探索、例えばツール化合物としての使用のために有用であり得る。
【００３２】
例えば、本発明の薬物は、アスパラギン酸プロテアーゼの阻害剤であり、当該酵素によるプロセシングに関係する病状、疾患または障害の処置または予防に使用され得る。特に、本発明の薬物は、β−セクレターゼを阻害し、故に、β−アミロイド生成およびそれに続くオリゴマーおよび原繊維への凝集を阻害する。
【００３３】
プロテアーゼに対する本発明の薬物の阻害特性は、下記の試験で評価され得る。
試験１：ヒトＢＡＣＥ−１の阻害
組み換えＢＡＣＥ−１(細胞外ドメイン、バキュロウイルス内で発現させ、標準的な方法を用いて精製)を、０．１〜１０ｎＭの濃度で、種々の濃度の試験化合物と共に、０．１％ ＣＨＡＰＳを含む１０〜１００ｍＭの酢酸緩衝液(ｐＨ４．５)中で、室温にて１時間、インキュベートする。ＡＰＰの配列に由来し、そして適当なフルオロフォア消光対を含む合成蛍光消光ペプチド基質を、１〜５μＭの最終濃度で加え、適当な励起／放出波長で、マイクロプレート分光蛍光光度計において、蛍光の増加を５〜３０分間記録する。ＢＡＣＥ−１活性の％阻害から、試験化合物の濃度の関数として、ＩＣ５０値を計算する。
【００３４】
試験２：ヒトＢＡＣＥ−２の阻害
組み換えＢＡＣＥ−２(細胞外ドメイン、バキュロウイルス内で発現させ、標準的な方法を用いて精製)を、０．１〜１０ｎＭの濃度で、種々の濃度の試験化合物と共に、０．１％ ＣＨＡＰＳを含む１０〜１００ｍＭの酢酸緩衝液(ｐＨ４．５)中で、室温にて１時間、インキュベートする。ＡＰＰの配列に由来し、そして適当なフルオロフォア消光対を含む合成ペプチド基質を、１〜５μＭの最終濃度で加え、適当な励起／放出波長で、マイクロプレート分光蛍光光度計において、５〜３０分間１分間隔で蛍光の増加を記録する。ＢＡＣＥ−２活性の％阻害から、試験化合物の関数として、ＩＣ５０値を計算する。
【００３５】
試験３：ヒトのカテプシンＤの阻害
組み換えカテプシンＤ(バキュロウイルス内でプロカテプシンＤとして発現させ、標準的な方法を用いて精製し、蟻酸ナトリウム緩衝液(ｐＨ３．７)中でインキュベーションすることによって活性化)を、種々の濃度の試験化合物と共に、ｐＨ３．０〜５．０の範囲内の適当なｐＨのギ酸ナトリウム緩衝液または酢酸ナトリウム緩衝液中で、室温にて１時間、インキュベートする。合成ペプチド基質Ｍｃａ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ＤＮＰ）−Ｄ−Ａｒｇ−ＮＨ２を、１〜５μＭの最終濃度で加え、励起３２５ｎｍ、放出４００ｎｍで、マイクロプレート分光蛍光光度計において、５〜３０分間１分間隔で蛍光の増加を記録する。カテプシンＤ活性の％阻害から、試験化合物の濃度の関数として、ＩＣ５０値を計算する。
【００３６】
試験４：アミロイドペプチド１−４０の細胞放出の阻害
チャイニーズハムスター卵巣細胞を、アミロイド前駆体タンパク質の遺伝子でトランスフェクトする。８０００細胞／ウェルの密度で、細胞を９６ウェルマイクロタイタープレートに播種し、１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭ細胞培養培地中で２４時間培養する。試験化合物を種々の濃度で細胞に加え、試験化合物の存在下で細胞を２４時間培養する。上清を集め、免疫アッセイ法、例えばサンドウィッチＥＬＩＳＡ、均一時間分解蛍光(ＨＴＲＦ)免疫アッセイまたは電気化学発光免疫アッセイを用いて、アミロイドペプチド１−４０の濃度を測定する。アミロイドペプチド放出の％阻害から、試験化合物の濃度の関数として、本化合物の力価を計算する。
【００３７】
アモルファスおよび結晶性５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドを、上記の試験１および４で試験した。
【００３８】
実施例の化合物は、試験１において、以下の平均ＩＣ５０を示す。
表１
【表１】
2014502625.tif 000004
【００３９】
実施例の化合物は、試験４において、以下の平均ＩＣ５０値を示す。
表２
【表２】
2014502625.tif 000005
【００４０】
本明細書で用いる用語“薬学的に許容される担体”は、当業者に公知の、何れかおよび全ての溶媒、分散媒体、被覆剤、界面活性剤、抗酸化剤、防腐剤（例えば抗生物質、抗真菌剤）、等張化剤、吸収遅延剤、塩類、防腐剤、薬剤、薬剤安定化剤、結合剤、添加剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味料、風味剤、色素など、およびそれらの組み合わせを含む（例えばRemington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp.1289−1329を参照のこと)。何れの慣用の担体も、有効成分と相溶性である限り、治療用組成物または医薬組成物におけるその使用が意図される。
【００４１】
用語、本発明の化合物の“治療有効量”は、対象の生物学的または医学的応答を生じさせ得る本発明の化合物の量、例えば酵素またはタンパク質の活性を減少させる、または阻害する、あるいは症状を寛解させる、状態を軽減する、疾患の進行を遅らせる（遅延させる）、または疾患を予防するなどの、本発明の化合物の量を意味する。一つの非限定的な態様において、用語“治療有効量”は、対象に投与されたとき、（１）（ｉ）ＢＡＣＥ−１により仲介される、（ｉｉ）ＢＡＣＥ−１活性に関連する、または（ｉｉｉ）ＢＡＣＥ−１の（正常な、または異常な）活性によって特徴付けられる病状、障害または疾患を、少なくとも一部、緩和する、阻害する、予防する、および／または寛解させるか；または（２）ＢＡＣＥ−１活性を低下させる、または阻害するのに有効である、本発明の化合物の量を意味する。別の非限定的な態様において、用語“治療的有効量”は、細胞、組織、非細胞生物学的物質、または培地に投与したとき、ＢＡＣＥ−１活性を少なくとも一部、低下させる、または阻害するのに有効である、本発明の化合物の量を意味する。上記のＢＡＣＥ−１についての態様で説明された用語“治療的有効量”の意味はまた、何れかの他の関連タンパク質／ペプチド／酵素、例えばＢＡＣＥ−２またはカテプシンＤについて同じ意味で適用する。
【００４２】
本明細書で用いる用語“対象”は動物を意味する。典型的には、動物は哺乳動物である。また、対象は、例えば霊長類(例えばヒト、男性または女性)、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、魚類、鳥類などを意味する。ある態様において、対象は、霊長類である。また、他の態様において、対象はヒトである。
【００４３】
本明細書で用いる用語“阻害する”または“阻害”は、示された病状、症状、障害または疾患の軽減または抑制、あるいは、生物活性またはプロセスのベースライン活性の顕著な減少を意味する。
【００４４】
何らかの疾患または障害についての、本明細書で用いる用語“処置する”または“処置”は、一態様において、疾患または障害を寛解させる(すなわち疾患またはその少なくとも１つの臨床症状の発症を遅らせる、阻止する、または減少させる)ことを意味する。別の態様において、“処置する”または“処置”は、患者に認識され得ないものを含む少なくとも一つの身体的パラメーターを緩和するまたは寛解させることを意味する。また、さらに別の態様において、“処置する”または“処置”は、疾患または障害の調節であって、身体的に(例えば認識可能な症候の安定化)、生理学的に(例えば身体パラメーターの安定化)またはその両方を調節することを意味する。
【００４５】
何れかの特定の疾患または障害の、本明細書で用いる用語“予防”は、疾患または障害の何らかの症状が出現する前に、本発明の化合物を対象に投与することを意味する。
【００４６】
本明細書で用いる通り、対象が、処置により、生物学的に、医学的にまたはクォリティー・オブ・ライフにおいて利益を得るならば、処置を“必要とする”。
本明細書で用いる用語、本発明の“薬物”は、用語、本発明の“化合物”と互換的に使用され、その意味に違いはない。
【００４７】
本明細書で用いる、本発明の内容(とりわけ、特許請求の範囲の内容)で用いられる用語は、他に特記しない限り、または、明細書の記載に明らかに矛盾しない限り、単数と複数の双方を含むと解釈されるべきである。何れかの、および全ての例または例示的表現(例えば、“のような”)の使用は、単に本発明をより明示することを意図しており、特に断らない限り、本発明の範囲を限定しない。
【００４８】
プロテアーゼを阻害する性質により、本発明の薬物は、β−アミロイド生成または凝集が役割を果たすか、あるいはＢＡＣＥ−２(β部位ＡＰＰ切断酵素２)またはペプシン型アスパルチルプロテアーゼおよびβ−セクレターゼの密接な相同体であるカテプシンＤの阻害、および腫瘍細胞に関連する転移プロセスの抑制などにおける抗癌剤療法として腫瘍細胞の腫瘍形成または転移の可能性とＢＡＣＥ−２またはカテプシンＤ発現との相関に基づく、多様な無能力化を起こす(disabilitating)精神医学的な、精神病性の、神経のまたは血管の状態、例えば血管系または神経系の状態、疾患または障害の処置または予防に有用であり得る。当該血管系または神経系の病状、疾患または障害の処置または予防に有用であり得る。該血管系または神経系の状態、疾患または障害としては、不安障害、例えば広場恐怖症を伴うまたは伴わないパニック障害、パニック障害の病歴を伴わない広場恐怖症、動物恐怖症または社会恐怖症を含む他の特定の恐怖症、社会不安障害、不安症、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害または急性ストレス障害を含むストレス障害、または、全般性または物質誘発性不安障害；神経症；発作；癲癇、とりわけ部分発作、単純発作、あるいは二次的全般性発作または全般性発作を伴う部分発作[欠神発作(定型または非定型)、ミオクローヌス発作、間代性発作、強直性発作、強直間代発作または脱力発作]；痙攣；偏頭痛；鬱病性障害または双極性障害を含む情動障害、例えば単一エピソードまたは反復性大鬱病性障害、大鬱病、気分変調性障害、気分変調症、特定不能（ＮＯＳ）鬱病性障害、Ｉ型双極性障害またはII型双極性躁状態障害または気分循環性障害；統合失調症または鬱病を含む精神病；神経変性、例えば脳虚血により生じる神経変性；神経系の急性、外傷性または慢性変性プロセス、例えばパーキンソン病、ダウン症、認知症、例えば老人性認知症、レビー小体型認知症または前頭側頭型認知症、認識障害(cognitive disorder)、認知機能障害(cognitive impairment)、例えば軽度認知機能障害、記憶障害、アミロイド神経障害、末梢神経障害、アルツハイマー病、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群、ニーマン・ピック病、例えばニーマン・ピック病Ｃ型、脳炎、脳傷害、脊髄傷害または神経傷害、例えば外傷性脳傷害(ＴＢＩ)、神経外傷または脳外傷、血管性アミロイド症、アミロイド症を伴う脳出血、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症または脆弱Ｘ症候群；スクレイピー；脳アミロイド血管症；脳症、例えば伝播性海綿状脳症；卒中；注意障害、例えば注意欠陥多動障害；トゥレット症候群；吃音を含む発話障害；時差ぼけまたは交代勤務の影響を受けている対象などにおける概日リズム障害；疼痛；侵害受容；掻痒；急性、遅延型または先行性嘔吐を含む嘔吐、例えば化学療法または放射線治療誘発性嘔吐、乗り物酔い、または術後悪心または嘔吐(vomiting)；拒食症または過食症を含む摂食障害；月経前症候群；対麻痺患者における筋痙攣または筋肉の痙直；聴覚障害、例えば耳鳴りまたは加齢性聴覚障害；尿失禁；緑内障；封入体筋炎；あるいは、アルコールのような物質の退薬障害を含む、物質の濫用または依存症を含む、物質関連障害が挙げられ、これらを含むが、これらに限定されない。本発明の薬物はまた、例えばアルツハイマー病のような認知症状態に罹患している対象の認識の増強に；麻酔前または胃の内視鏡検査を含む内視鏡検査などの軽度の医学的介入前の前投薬として；あるいは、リガンド、例えば放射性リガンドまたは陽電子放出断層撮影(ＰＥＴ)リガンドとして有用であり得る。
【００４９】
上記の適応において、適当な投与量は、例えば、薬学的有効成分として用いられた化合物、宿主、投与方法、病状、疾患または障害の性質および重症度、または望ましい効果によって変化し得る。しかしながら、一般的には、約０．１ないし約１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約１ないし約５０ｍｇ／ｋｇ体重の１日投与量で、満足のいく結果が得られる。より大きな哺乳動物、例えばヒトにおいて、示される１日投与量は、例えば１日４回までの分割投与または持続放出形態で好都合に投与される、約０．５ないし約２０００ｍｇ、好ましくは約２ないし約２００ｍｇの範囲の本発明の薬物である。
【００５０】
本発明の薬物は、何れかの慣用の経路によって、特に、経腸的に、好ましくは経口的に、例えば錠剤またはカプセル剤の形態で、あるいは、非経腸的に、例えば注射可能な溶液または懸濁液の形態で投与され得る。
【００５１】
さらなる面において、本発明は、少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤と組み合わせた、さらに所望により他の補助物質、例えばチトクロムＰ４５０酵素阻害剤、チトクロムＰ４５０による薬学的有効成分の分解を予防する薬物、薬学的有効成分の薬物動態を改善または増強する薬物、薬学的有効成分のバイオアベイラビリティーを改善または増強する薬物など、例えばグレープフルーツジュース、ケトコナゾールまたは好ましくはリトナビルと組み合わせた、薬学的有効成分として本発明の薬物を含む医薬組成物に関する。かかる組成物は、慣用の方法で、例えばその成分を混合することによって製造され得る。単位投与量形態は、例えば、約０．１ないし約１０００ｍｇ、好ましくは約１ないし約５００ｍｇの本発明の薬物を含む。
【００５２】
さらに、本発明の医薬組成物は、固体形態(カプセル剤、錠剤、丸薬、顆粒剤、散剤または坐剤を含むが、これらに限定されない)、または液体形態(溶液、懸濁液またはエマルジョンを含むが、これらに限定されない)で製造され得る。医薬組成物は、慣用の薬学的な操作、例えば滅菌が行われてよく、そして／または、慣用の不活性な希釈剤、平滑剤または緩衝剤、ならびにアジュバント、例えば防腐剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤および緩衝剤などを含み得る。
【００５３】
典型的には、医薬組成物は、
ａ）希釈剤、例えば乳糖、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン、
ｂ）滑沢剤、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸またはそのマグネシウム塩もしくはカルシウム塩、および／またはポリエチレングリコール、
錠剤についてはさらに、
ｃ）結合剤、例えばケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン、
望ましいならば、
ｄ）崩壊剤、例えばデンプン、寒天、アルギン酸またはそのナトリウム塩、または起沸性混合物、および／または
ｅ）吸収剤、着色剤、香味剤および甘味剤
と共に有効成分を含む、錠剤またはゼラチンカプセル剤である。
【００５４】
錠剤は、当技術分野で公知の方法に従って、フィルムコートまたは腸溶性コートされ得る。
【００５５】
経口投与に好適な組成物は、錠剤、ロゼンジ、水性または油性懸濁液、分散可能な粉末または顆粒、エマルジョン、硬または軟カプセル、またはシロップまたはエリキシルの形態で、有効量の本発明の化合物を含む。経口使用を意図する組成物は、医薬組成物の製造において当技術分野で公知の何らかの方法に従って製造され、かかる組成物は、薬学的に洗練された、飲み込みやすい製剤を提供するために、甘味料、香味剤、着色剤および防腐剤からなる群から選択される１種以上の薬物を含み得る。錠剤は、錠剤の製造に好適な非毒性の薬学的に許容される添加剤と混合した有効成分を含み得る。これらの添加剤は、例えば、不活性な希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム；造粒剤および崩壊剤、例えばコーンデンプンまたはアルギン酸；結合剤、例えばデンプン、ゼラチンまたはアラビアゴム；および平滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクである。錠剤は、被覆されていないか、あるいは、消化器中での崩壊および吸収を遅らせ、それによって長期間に亘る持続した作用を提供するための既知の技術によって被覆される。例えば時間遅延物質、例えばモノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルが用いられ得る。経口使用のための製剤は、有効成分を不活性な固体希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合した硬ゼラチンカプセル剤として、あるいは、有効成分を水性または油性媒体、例えば落花生油、液体パラフィンまたはオリーブ油と混合した軟ゼラチンカプセル剤として、提供され得る。
【００５６】
ある注射可能な組成物は、水性等張性溶液または懸濁液であり、坐剤は、有利には、脂肪性エマルジョンまたは懸濁液から製造される。該組成物は、滅菌処理されてもよく、そして／または、アジュバント、例えば保存料、安定化剤、湿潤剤または乳化剤、溶解促進剤、浸透圧調整用塩および／または緩衝液を含んでもよい。さらに、それらはまた、他の治療上有益な物質を含んでもよい。該組成物は、それぞれ、慣用の混合法、造粒法または被覆法に従って製造され、約０．１〜７５％、または、約１〜５０％の有効成分を含む。
【００５７】
経皮適用に好適な組成物は、好適な担体と共に、有効量の本発明の化合物を含む。経皮送達に好適な担体は、宿主の皮膚の通過を助ける吸収性の薬理学的に許容される溶媒を含む。例えば、経皮デバイスは、裏打ち部材、化合物を所望により担体と共に含む貯蔵部、所望により制御され予め定められた速度で長時間かけて宿主の皮膚に本化合物を送達するための速度制御障壁、および皮膚に該デバイスを固定するための手段を含むバンデージの形態である。
【００５８】
例えば皮膚および眼への局所適用に好適な組成物としては、水溶液、懸濁液、軟膏、クリーム、ゲル、または、例えばエアロゾルなどによって送達するための噴霧可能な製剤が挙げられる。このような局所送達系は、特に、皮膚適用に適当であり、例えば皮膚癌を処置するために、例えば日焼け止めクリーム、ローション、スプレーなどにおける予防的使用に適当であり得る。従って、それらは、特に、当技術分野で周知の化粧用製剤を含む局所製剤における使用に適している。このような製剤は、可溶化剤、安定化剤、張性増加剤、緩衝剤および防腐剤を含み得る。
【００５９】
本明細書で用いる通り、局所適用はまた、吸入または鼻腔内適用に関し得る。それらは、好都合には、乾燥粉末(単独でまたは混合物として、例えばラクトースとの乾燥混合物で、または例えばリン脂質との混合成分粒子として)の形態で、乾燥粉末吸入器から、あるいは、エアゾールスプレー製剤の形態で、加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザーまたはネブライザーから、好適な噴射剤を使用してまたは使用せずに送達され得る。
【００６０】
水が数種の化合物の分解を促進し得るため、本発明は、さらに、有効成分として本発明の化合物を含む無水の医薬組成物および投与量形態を提供する。
【００６１】
無水の本発明の医薬組成物および投与量形態は、無水または水分含量の低い成分を用いて、そして水分の少ないまたは湿度の低い条件下で製造され得る。無水の医薬組成物は、無水の性質が維持されるように製造され保存され得る。従って、無水の組成物は、好適な製剤キットに包含され得るように、水への曝露を防止するための既知の物質を用いて包装される。適当な包装の例としては、密封されたホイル、プラスチック、単位用量容器(例えばバイアル)、ブリスター・パック、およびストリップ・パックが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６２】
本発明は、さらに、有効成分としての本発明の化合物が分解する速度を低減させる１種またはそれ以上の薬物を含む医薬組成物および投与量形態を提供する。このような薬物は本明細書で“安定化剤”と称され、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、ｐＨ緩衝剤、または塩緩衝剤などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６３】
上記に従って、さらなる面において、本発明は、例えば、β−アミロイド形成または凝集が役割を果たす神経または血管の病状、疾患または障害を処置または予防するための、または、腫瘍細胞に関連した転移プロセスを抑制するための医薬として使用するための、本発明の薬物に関する。さらなる態様において、本発明は、ＢＡＣＥ−１、ＢＡＣＥ−２またはカテプシンＤ活性により仲介される疾患または障害の処置または予防に使用するための本発明の薬物に関する。一態様において、本発明は、アルツハイマー病または軽度の認知障害の処置または予防に使用するための本発明の薬物に関する。
【００６４】
さらなる面において、本発明は、例えば、β−アミロイド形成または凝集が役割を果たす神経または血管の病状、疾患または障害を処置または予防するための、または、腫瘍細胞に関連した転移プロセスを抑制するための医薬における薬学的有効成分としての本発明の薬物の使用に関する。さらなる態様において、本発明は、ＢＡＣＥ−１、ＢＡＣＥ−２またはカテプシンＤ活性により仲介される疾患または障害を処置または予防するための医薬における薬学的有効成分としての本発明の薬物の使用に関する。一態様において、本発明は、アルツハイマー病または軽度の認知障害を処置または予防するための医薬における薬学的有効成分としての本発明の薬物の使用に関する。
【００６５】
さらなる面において、本発明は、β−アミロイド形成または凝集が役割を果たす神経または血管の病状、疾患または障害を処置または予防するための、または、腫瘍細胞に関連した転移プロセスを抑制するための医薬の製造を目的とする、本発明の薬物の使用に関する。さらなる態様において、本発明は、ＢＡＣＥ−１、ＢＡＣＥ−２またはカテプシンＤ活性が介在する疾患または障害を処置または予防するための医薬の製造を目的とする、本発明の薬物の使用に関する。一態様において、本発明は、アルツハイマー病または軽度の認知障害を処置または予防するための医薬の製造を目的とする、本発明の薬物の使用に関する。
【００６６】
さらなる面において、本発明は、処置、予防または抑制を必要とする対象において、β−アミロイド形成または凝集が役割を果たす神経または血管の病状、疾患または障害を処置または予防するための、または、腫瘍細胞に関連した転移プロセスを抑制するための方法であって、当該対象に、有効量の本発明の薬物を投与することを含む方法に関する。一態様において、本発明は、対象において、ＢＡＣＥ−１、ＢＡＣＥ−２またはカテプシンＤ活性を調節する方法であって、該対象に、治療的有効量の本発明の薬物を投与する方法に関する。別の態様において、本発明は、処置または予防を必要とする対象において、ＢＡＣＥ−１、ＢＡＣＥ−２またはカテプシンＤ活性により仲介される疾患を処置または予防する方法であって、当該対象に、有効量の本発明の薬物を投与することを含む方法に関する。また、さらに別の態様において、本発明は、処置または予防を必要とする対象において、アルツハイマー病または軽度の認知障害を処置または予防する方法であって、当該対象に、有効量の本発明の薬物を投与することを含む方法に関する。
【００６７】
本発明の薬物は、単一の薬学的有効成分として投与され得るか、または、例えばβ−アミロイド形成または凝集が役割を果たす神経または血管の状態、疾患または障害を処置または予防するのに、または、腫瘍細胞に関連した転移プロセスを抑制するのに有効である、少なくとも１種の他の薬学的有効成分との組合せ剤として投与され得る。このような薬学的組合せ剤は、少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤と組み合わせた、少なくとも２種の有効成分をそれぞれ予め決められた量で含む、単位投与形の形態であってもよい。あるいは、薬学的組合せ剤は、少なくとも２種の有効成分を別個に含むパッケージの形態、例えば少なくとも２種の有効成分の同時または個別投与に適合させた、これらの有効成分が別々に配置されているパックまたはディスペンサー装置であってもよい。さらなる面において、本発明は、このような薬学的組合せ剤に関する。
【００６８】
従って、さらなる面において、本発明は、同時または連続投与のための、治療的有効量の本発明の薬物および第２薬剤を含む薬学的組合せ剤に関する。
【００６９】
一態様において、本発明は、治療において、同時、別個または連続使用するための組合せ製剤として、本発明の薬物および少なくとも１種の他の治療薬を含む製品を提供する。一態様において、治療は、ＢＡＣＥ−１、ＢＡＣＥ−２またはカテプシンＤ活性により仲介される疾患または病状の処置である。
【００７０】
一態様において、本発明は、本発明の薬物および別の治療薬(複数可)を含む医薬組成物を提供する。所望により、医薬組成物は、上記の薬学的に許容される添加剤を含んでもよい。
【００７１】
一態様において、本発明は、２個またはそれ以上の別個の医薬組成物を含み、その少なくとも１個に本発明の薬物が含まれるキットを提供する。一態様において、キットは、当該組成物を個別に保持する手段、例えば容器、分割されたボトルまたは分割されたホイルの包みを含む。そのようなキットの例は、典型的に錠剤、カプセル剤などの包装に用いられる、ブリスター・パックである。本発明のキットは、例えば経口および非経腸のような異なる投与量形態を投与するために、異なる投与間隔で別個の組成物を投与するために、または、互いに別個の組成物の用量を漸増決定するために用いられ得る。コンプライアンスを補助するために、本発明のキットは、典型的に、投与のための説明書を含む。
【００７２】
本発明の組み合わせ治療において、本発明の薬物および他の治療薬は、同一または異なる製造者によって製造および／または製剤化されてもよい。さらに、本発明の化合物および他の治療薬は、共に、（ｉ）組み合わせ製品が医師に手渡される前に(例えば本発明の化合物および他の治療薬を含むキットの場合)、（ｉｉ）投与直前に医師自身によって(または医師の指導の下で)、（ｉｉｉ）患者自身において、例えば本発明の化合物および他の治療薬の連続投与の間に、併用治療に用いられ得る。従って、本発明は、ＢＡＣＥ−１、ＢＡＣＥ−２またはカテプシンＤ活性により仲介される疾患または状態の処置に使用するための、他の治療薬と共に投与するために製造される本発明の薬物を提供する。本発明はまた、ＢＡＣＥ−１、ＢＡＣＥ−２またはカテプシンＤ活性により仲介される疾患または状態を処置するための、本発明の薬物と共に投与される他の治療薬を提供する。
【００７３】
本発明はまた、ＢＡＣＥ−１、ＢＡＣＥ−２またはカテプシンＤ活性により仲介される疾患または状態を処置する方法に使用するための、他の治療薬と共に投与するために製造される本発明の薬物を提供する。本発明はまた、ＢＡＣＥ−１、ＢＡＣＥ−２またはカテプシンＤ活性により仲介される疾患または状態を処置する方法に使用するための、本発明の薬物と共に投与するために製造される他の治療薬を提供する。本発明はまた、ＢＡＣＥ−１、ＢＡＣＥ−２またはカテプシンＤ活性により仲介される疾患または状態を処置する方法に使用するための、他の治療薬と共に投与される本発明の薬物を提供する。本発明はまた、ＢＡＣＥ−１、ＢＡＣＥ−２またはカテプシンＤ活性により仲介される疾患または状態を処置する方法に使用するための、本発明の薬物と共に投与される他の治療薬を提供する。
【００７４】
本発明はまた、他の治療薬で予め(例えば２４時間以内に)処置された患者における、ＢＡＣＥ−１、ＢＡＣＥ−２またはカテプシンＤ活性により仲介される疾患または状態を処置するための、本発明の薬物の使用を提供する。本発明はまた、本発明の薬物で予め(例えば２４時間以内に)処置された患者における、ＢＡＣＥ−１、ＢＡＣＥ−２またはカテプシンＤ活性により仲介される疾患または状態を処置するための他の治療薬の使用を提供する。
【００７５】
一態様において、本発明は、以下から選択される他の治療薬と組み合わせる本発明の化合物に関する。
（ａ）アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、例えばドネペジル(アリセプト(商標))、リバスチグミン(Exelon(商標))およびガランタミン(Razadyne(商標))、
（ｂ）グルタメートアンタゴニスト、例えばメマンチン(ナメンダ(商標))、
（ｃ）気分の落ち込みおよび易怒性についての抗鬱剤、例えばシタロプラム(セレクサ(商標))、フルオキセチン(プロザック(商標))、パロキセチン(paroxeine)(パキシル(商標))、セルトラリン(ゾロフト(商標))およびトラゾドン(デジレル(商標))、
（ｄ）不安、不穏状態、言語的破壊的行動および抵抗についての抗不安薬、例えばロラゼパム(アチバン(商標))およびオキサゼパム(Serax(商標))、
（ｅ）幻覚、妄想、攻撃性、動揺、敵意および非協力についての抗精神病薬、例えばアリピプラゾール(エビリファイ(商標))、クロザピン(クロザリル(商標))、ハロペリドール(Haldol(商標))、オランザピン(ジプレキサ(商標))、クエチアピン(セロクエル(商標))、リスペリドン(リスパダール(商標))およびジプラシドン(Geodon(商標))、
（ｆ）気分安定化剤、例えばカルバマゼピン(テグレトール(商標))およびジバルプロエクス(Depakote(商標))、
（ｇ）ニコチンα７アゴニスト、
（ｈ）ｍＧｌｕＲ５アンタゴニスト、
（ｉ）Ｈ３アゴニスト、および
（ｊ）アミロイド治療ワクチン類。
【００７６】
別の態様において、本発明は以下を含む医薬組成物を提供する。
ｉ）本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、
ｉｉ）以下から選択される少なくとも１種の治療薬：
ａ）アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、
ｂ）グルタメートアンタゴニスト、
ｃ）抗鬱剤、
ｄ）抗不安薬、
ｅ）抗精神病薬、
ｆ）気分安定化剤、
ｇ）ニコチンα７アゴニスト、
ｈ）ｍＧｌｕＲ５アンタゴニスト、
ｉ）Ｈ３アゴニスト、および
ｊ）アミロイド治療ワクチン類、ならびに
ｉｉｉ）１種またはそれ以上の薬学的に許容される担体または希釈剤。
【実施例】
【００７７】
下記の実施例は、本発明を説明するものである。
実施例
【表３】
2014502625.tif 000006
【００７８】
【表４】
2014502625.tif 000007
【００７９】
実施例１：５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの結晶形態の製造
【化２】
2014502625.tif 000008
ａ）２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−プロパン−２−オール
ＴＨＦ（５００ｍｌ）中のジイソプロピルアミン（５７．３ｍｌ、４０２ｍｍｏｌ）の溶液に、アルゴン下で、−５０℃以下にて、ヘキサン中のｎＢｕＬｉの１．６Ｍ溶液（２６０ｍｌ、４１６ｍｍｏｌ）を添加した。−７５℃にて３０分間撹拌後、４−ブロモ−１−フルオロベンゼン（３１．１ｍｌ、２７７ｍｍｏｌ）を、温度を−７０℃以下に維持しながら添加した。−７５℃にて２時間撹拌後、アセトン（４１．２ｍｌ、５５４ｍｍｏｌ）を−６５℃以下にて添加し、反応混合物を−７５℃にて１時間撹拌し、−５０℃まで温め、１０％ＮＨ４Ｃｌ水溶液に注いだ。混合物をＴＢＭＥで抽出し、有機層をＫＨＳＯ４水溶液、飽和ＮａＨＣＯ３溶液および塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をヘキサンから結晶化して、表題化合物を白色結晶として得た。ＴＬＣ（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  ３：１）：Ｒｆ＝０．４５；ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝１．０４５分；  1H NMR (360 MHz, CDCl3): δ 7.74 (dd, 1H), 7.36 (m, 1H), 6.93 (dd, 1H), 2.04 (d, 1H), 1.63 (s, 6H)．
【００８０】
ｂ）４−ブロモ−１−フルオロ−２−イソプロペニル−ベンゼン
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）中の２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−プロパン−２−オール（１１９．７ｇ、４９８ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドロキノン（２．７４ｇ、２４．９ｍｍｏｌ）および２５０ｍｌの８５％Ｈ３ＰＯ４を添加した。得られた反応混合物を、５０℃にて３．５時間撹拌した。混合物を氷水に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を２ＮのＮａＯＨ水溶液および水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をヘキサン中に溶解し、シリカゲル層を通して濾過し、６００ｍｂａｒで濃縮後に、表題化合物を無色油状物として得た。ＴＬＣ（ヘキサン）：Ｒｆ＝０．５２；ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝１．４１６分； 1H NMR (360 MHz, CDCl3): δ 7.43 (dd, 1H), 7.37 (m, 1H), 6.94 (dd, 1H), 5.27 (d, 2H), 2.13 (s, 3H)．
【００８１】
ｃ）（Ｓ）−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−プロパン−１，２−ジオール
ｔ−ＢｕＯＨ−Ｈ２Ｏ  １：１（１６００ｍｌ）中の、Ｋ３Ｆｅ（ＣＮ）６（１８６ｇ、５６１ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（７８ｇ、５６１ｍｍｏｌ）、（ＤＨＱ）２−ＰＨＡＬ（１．３１１ｇ、１．６７４ｍｍｏｌ）およびＫ２ＯｓＯ２（ＯＨ）４（０．３７８ｇ、１ｍｍｏｌ）の懸濁液に、０℃にて、４−ブロモ−１−フルオロ−２−イソプロペニル−ベンゼン（３６ｇ、１６７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を０℃で１４時間撹拌した。Ｎａ２Ｓ２Ｏ５（１００ｇ）を０−５℃にて注意深く添加後、反応混合物を１時間撹拌し、その後、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物を５％ＮａＳ３Ｏ３溶液および塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物を白色固体として得た。ＴＬＣ（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  １：１）：Ｒｆ＝０．４６；ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝０．７６７分；ＥＳＩＭＳ：２６６、２６８［（Ｍ＋ＮＨ４）＋］；1H NMR (360 MHz, CDCl3): δ 7.71 (dd, 1H), 7.27 (m, 1H), 6.83 (dd, 1H), 3.85 (d, 1H), 3.62 (d, 1H), 2.94 (s, 3H), 2.01 (s, 1H), 1.43 (s, 3H)．
【００８２】
ｄ）（Ｓ）−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−メチル−オキシラン
（Ｓ）−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−プロパン−１，２−ジオール（３７．３５ｇ、１５０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（４００ｍｌ）に、アルゴン下で、０−５℃にて、ＮＥｔ３（４１．８ｍｌ、３００ｍｍｏｌ）を添加し、塩化メシル（１２．８ｍｌ、１６５ｍｍｏｌ）を滴下した。０−５℃にて０．５時間撹拌後、反応混合物を冷却した１Ｎ  ＨＣｌに添加し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせた抽出物を１Ｎ  ＨＣｌ、Ｈ２Ｏおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗メシレートをＴＢＭＥ（５００ｍｌ）および２００ｍｌの２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液に溶解し、２５℃にて２時間撹拌後、混合物をＴＢＭＥで抽出した。合わせた抽出物をＮａＨ２ＰＯ４溶液および塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、（Ｓ）−エナンチオマーを無色油状物として得た。７８％  ｅｅ（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＳ−Ｈ  １２１８、ヘキサン−ＥｔＯＨ  ９７：３、０．４ｍＬ／分）；ＴＬＣ（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  ３：１）：Ｒｆ＝０．６９；ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝１．１８６分；1H NMR (360 MHz, CDCl3): δ 7.46 (dd, 1H), 7.30 (m, 1H), 6.83 (dd, 1H), 2.88 (d, 1H), 2.72 (d, 1H), 1.59 (s, 3H).
【００８３】
ｅ）（Ｓ）−１−アジド−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−プロパン−２−オール
（Ｓ）−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−メチル−オキシラン（５１．８５ｇ、２２４ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（８００ｍｌ）に、ＮａＮ３（３６．８ｇ、５３１ｍｍｏｌ）、ＮＨ４Ｃｌ（６０．６ｇ、１１２２ｍｍｏｌ）および１８−ｃｒｏｗｎ−６（５９．８ｇ、２２４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を還流温度で６時間加熱した。反応混合物を濾過し、その容量を半分まで濃縮した。残った油状物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液および塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物を淡黄色油状物として得た。ＴＬＣ（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  １：１）：Ｒｆ＝０．７０；ＵＰＬＣ ＲｔＨ３＝１．１１５分；1H NMR (360 MHz, CDCl3): δ 7.72 (dd, 1H), 7.32 (m, 1H), 6.85 (dd, 1H), 3.73 (d, 1H), 3.51 (d, 1H), 2.44 (s, 1H), 1.50 (s, 3H).
【００８４】
ｆ）（Ｓ）−１−アミノ−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−プロパン−２−オール
ＴＨＦ（２５０ｍｌ）中のＬｉＡｌＨ４（４．６５ｇ、１２２ｍｍｏｌ）の懸濁液に、アルゴン下で、０−５℃にて、ＴＨＦ（１５０ｍｌ）中に溶解した（Ｓ）−１−アジド−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−プロパン−２−オール（３３．４ｇ、１２２ｍｍｏｌ）の溶液を３０分かけて添加した。０−５℃にて１時間撹拌後、反応を、水（４．７ｍｌ）、４Ｎ  ＮａＯＨ（４．７ｍｌ）および水（１４．１ｍｌ）を注意深く添加することによりクエンチし、再び２５℃にて３時間撹拌した。白色懸濁液をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。固体の生成物をＴＢＭＥ−ヘキサンから再結晶させて、表題化合物をベージュ色結晶として得た。９８％  ｅｅ（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ  ヘキサン−ＥｔＯＨ  ７５−２５＋０．０５％  ＮＥｔ３）；ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ  １０：１）Ｒｆ＝０．１０；ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝０．５５８分；ＥＳＩＭＳ：２４８、２５０［（Ｍ＋Ｈ）＋］；1H NMR (360 MHz, CDCl3): δ 7.76 (dd, 1H), 7.25 (m, 1H), 6.82 (dd, 1H), 4.16 (br s, 1H), 3.19 (d, 1H), 2.72 (d, 1H), 1.44 (s, 3H), 0.95 (br s, 2H).
【００８５】
ｇ）Ｎ−［（Ｓ）−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−プロピル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド
（Ｓ）−１−アミノ−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−ｐｒｏｐａｎ−２−オール（３４．７ｇ、１４０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（４００ｍｌ）に、０−５℃にて、塩化２−ニトロ−ベンゼンスルホニル（３４．９ｇ、１５４ｍｍｏｌ）を添加し、その後、１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液を０．５時間かけて添加した。反応混合物を２０℃にて２時間撹拌した。反応混合物をＴＢＭＥで希釈し、水およびＮａＨ２ＰＯ４溶液および塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、ＴＢＭＥ−ヘキサンから結晶化後に、表題化合物をベージュ色結晶として得た。ＴＬＣ（トルエン−ＥｔＯＡｃ  ３：１）：Ｒｆ＝０．５１；ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝１．１１８分；ＥＳＩＭＳ：４５０、４５２［（Ｍ＋ＮＨ４）＋］；1H NMR (360 MHz, CDCl3): δ 7.98 (m, 1H), 7.81 (m, 1H), 7.65 (m, 2H), 7.59 (dd, 1H), 7.24 (m, 1H), 6.79 (dd, 1H), 5.60 (t, 1H), 4.16 (br s, 1H), 3.55 (dd, 1H), 3.44 (dd, 1H), 2.51 (s, 1H), 1.51 (s, 3H).
【００８６】
ｈ）（Ｒ）−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−メチル−１−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アジリジン
Ｎ−［（Ｓ）−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−プロピル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド（２０．８ｇ、４８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（４００ｍｌ）に、０−５℃にて、ＰＰｈ３（１９．２ｇ、７２．４ｍｍｏｌ）およびアゾジカルボン酸ジエチル（１１．６ｍｌ、７２．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃にて２４時間撹拌し、濃縮した。シリカゲルのクロマトグラフィー精製（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  ２０：１ないし２：１）後に、表題化合物を黄色結晶として得た。ＴＬＣ（トルエン−ＥｔＯＡｃ  ３：１）：Ｒｆ＝０．６９；ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝１．３０８分；1H NMR (360 MHz, CDCl3): δ 8.31 (m, 1H), 7.28 (m, 3H), 7.60 (dd, 1H), 7.42 (m, 1H), 6.91 (dd, 1H), 3.24 (s, 1H), 2.81 (s, 1H), 2.06 (s, 3H)．
【００８７】
ｉ）（Ｒ）−２−［（Ｒ）−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロポキシ］−３，３，３−トリフルオロ−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル
ＤＭＦ（１６０ｍｌ）中のＮａＨ（２．５３ｇ、鉱油中６０％、６３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、アルゴン下で、（Ｒ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル（１１．９９ｇ、６３ｍｍｏｌ）を滴下し、２０℃にて０．５時間撹拌後、（Ｒ）−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−メチル−１−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アジリジン（２１．８５ｇ、５２．６ｍｍｏｌ）を添加した。反応を、１６時間、２５℃に維持した。混合物を冷却した２Ｎ  ＨＣｌ水溶液に添加し、生成物をＴＢＭＥで抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３溶液および塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残った固体をＴＢＭＥ−ヘキサンから再結晶させて、表題化合物を黄色結晶として得た。ＴＬＣ（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  １：１）：Ｒｆ＝０．５９；ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝１．４４４分；ＥＳＩＭＳ：６１８、６２０［（Ｍ＋ＮＨ４）＋］；1H NMR (360 MHz, CDCl3): δ 7.83 (dd, 1H), 7.61 (m, 3H), 7.48 (dd, 1H), 7.27 (m, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.60 (dd, 1H), 4.33 (m, 2H), 3.84 (s, 2H), 1.84 (s, 3H), 1.57 (s, 3H), 1.33 (t, 3H)．
【００８８】
ｊ）（Ｒ）−２−［（Ｒ）−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロポキシ］−３，３，３−トリフルオロ−２−メチル−プロピオンアミド
（Ｒ）−２−［（Ｒ）−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロポキシ］−３，３，３−トリフルオロ−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル（２６．６ｇ、４４．２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ中の７Ｎ  ＮＨ３の溶液（７５ｍｌ）を、５０℃にて１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残った固体をＥｔ２Ｏから再結晶させて、表題化合物を黄色結晶として得た。ＴＬＣ（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  １：１）：Ｒｆ＝０．３５；ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝１．１８４分；ＥＳＩＭＳ：５８９、５９１［（Ｍ＋ＮＨ４）＋］；1H NMR (360 MHz, CDCl3): δ 7.85 (d, 1H), 7.64 (m, 3H), 7.44 (d, 1H), 7.41 (dd, 1H), 7.26 (m, 1H), 6.68 (br s, 1H), 6.57 (dd, 1H), 6.19 (s, 1H), 5.54 (br s, 1H), 4.24 (d, 1H), 3.93 (d, 1H), 1.79 (s, 3H), 1.67 (s, 3H)．
【００８９】
ｋ）Ｎ−［（Ｒ）−１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−（（Ｒ）−１−シアノ−２，２，２−トリフルオロ−１−メチル−エトキシ）−１−メチル−エチル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド
（Ｒ）−２−［（Ｒ）−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロポキシ］−３，３，３−トリ−フルオロ−２−メチル−プロピオンアミド（２０．８３ｇ、３５．６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（３００ｍｌ）に、アルゴン下で、０−５℃にて、ＮＥｔ３（１２．５ｍｌ、８９ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸無水物（６．１５ｍｌ、４２．７ｍｍｏｌ）を添加した。２５℃にて４時間撹拌後、反応混合物を冷却したＮａＨＣＯ３溶液に添加し、生成物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせた抽出物を冷却した０．１Ｎ  ＨＣｌ水溶液、水および飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物を黄色油状物として得て、それをそのまま次工程に用いた。ＴＬＣ（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  １：１）：Ｒｆ＝０．７３；ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝１．３６４分；ＥＳＩＭＳ：５７１、５７３［（Ｍ＋ＮＨ４）＋］；1H NMR (360 MHz, CDCl3): δ 7.89 (d, 1H), 7.62 (ddd, 1H), 7.57 (ddd, 1H), 7.52 (m, 2H), 7.29 (m, 1H), 6.58 (dd, 1H), 6.19 (s, 1H), 4.17 (s, 2H), 1.81 (s, 3H), 1.72 (s, 3H)．
【００９０】
ｌ）（２Ｒ，５Ｒ）−５−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イルアミン
Ｎ−［（Ｒ）−１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−（（Ｒ）−１−シアノ−２，２，２−トリフルオロ−１−メチル−エトキシ）−１−メチル−エチル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド（６．５４ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）およびＮ−アセチル−システイン（２．４ｇ、２６．０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（８０ｍｌ）に、Ｋ２ＣＯ３（３．６２ｇ、２６．０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を８０℃で１６時間加熱した。溶媒を除去後、残渣を水に溶解し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液および塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、シリカゲルのクロマトグラフィー精製（０．０３％ＮＥｔ３を含む、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  １０：１ないし１：２）後に、表題化合物を黄色油状物として得た。ＴＬＣ（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  １：１）：Ｒｆ＝０．５８；ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝０．８４３分；ＥＳＩＭＳ：３６９、３７１［（Ｍ＋Ｈ）＋］；1H NMR (360 MHz, CDCl3): δ 7.66 (dd, 1H), 7.35 (m, 1H), 6.91 (dd, 1H), 3.97 (m, 2H), 1.53 (s, 3H), 1.49 (s, 3H).
【００９１】
ｍ）（２Ｒ，５Ｒ）−５−（２−フルオロ−フェニル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イルアミン
（２Ｒ，５Ｒ）−５−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イルアミン（１．６６ｇ、４．５ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（０．３６９ｇ、４．５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（５０ｍｌ）を、５０℃にて６時間、１０％Ｐｄ−Ｃ下で水素化した。触媒をセライト濾過により除去し、濾液を濃縮した。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３溶液中に溶解し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物を無色油状物として得た。ＴＬＣ（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  １：１）：Ｒｆ＝０．１９；ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝０．７７７分；ＥＳＩＭＳ：２９１［（Ｍ＋Ｈ）＋］；1H NMR (360 MHz, CDCl3): δ 7.41 (dt, 1H), 7.26 (m, 1H), 7.11 (t, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.11 (dd, 1H), 3.94 (dd, 1H), 1.54 (s, 3H), 1.49 (s, 3H).
【００９２】
ｎ）（２Ｒ，５Ｒ）−５−（２−フルオロ−５−ニトロ−フェニル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イルアミン
（２Ｒ，５Ｒ）−５−（２−フルオロ−フェニル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イルアミン（１．０３５ｇ、３．５７ｍｍｏｌ）のＨ２ＳＯ４溶液（６ｍｌ）に、氷水冷却下で、ＫＮＯ３（０．３７９ｇ、３．７４ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。反応混合物を２５℃にて２時間撹拌し、水で希釈し、冷却化でＫ２ＣＯ３を用いて塩基性とした。生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液および塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。シリカゲルのクロマトグラフィー（０．０５％ＮＥｔ３を含む、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  ４：１ないし１：１）により精製して、表題化合物を淡黄色油状物として得た。ＴＬＣ（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  １：１）：Ｒｆ＝０．５０；ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝０．７４９分；ＥＳＩＭＳ：３３６［（Ｍ＋Ｈ）＋］；1H NMR (360 MHz, CDCl3): δ 8.48 (dd, 1H), 8.14 (m, 1H), 7.15 (dd, 1H), 4.20 (br s, 2H), 4.04 (dd, 1H), 3.91 (dd, 1H), 1.54 (s, 3H), 1.49 (s, 3H)．
【００９３】
ｏ）［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（２−フルオロ−５−ニトロ−フェニル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（２Ｒ，５Ｒ）−５−（２−フルオロ−５−ニトロ−フェニル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イルアミン（１．１４ｇ、３．４ｍｍｏｌ）のＡＣＮ溶液（２０ｍｌ）に、Ｂｏｃ２Ｏ（０．８９１ｇ、４．０８ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ３（０．７２ｍｌ、５．１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２５℃にて１６時間撹拌した。反応混合物を蒸発させ、残った油状物をシリカゲルのクロマトグラフィー（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  ２０：１ないし７：３）により精製して、Ｅｔ２Ｏ−ヘキサンから結晶化後、表題化合物をベージュ色結晶として得た。ＴＬＣ（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  ３：１）：Ｒｆ＝０．３７；ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝１．３５５分；ＥＳＩＭＳ：４３６［（Ｍ＋Ｈ）＋］；1H NMR (360 MHz, CDCl3): δ 11.04 (br s, 1H), 8.24 (m, 2H), 7.30 (dd, 1H), 4.41 (dd, 1H), 4.11 (dd, 1H), 1.68 (s, 3H), 1.51 (s, 9H), 1.49 (s, 3H)．
【００９４】
ｐ）［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（２−フルオロ−５−ニトロ−フェニル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．９８ｇ、２．２５ｍｍｏｌ）のイソプロパノール−ＴＨＦ  ２：１（２４ｍｌ）溶液を、５０℃にて４時間、５％  Ｐｄ−Ｃ下で水素化した。触媒をセライト濾過により除去し、濾液を濃縮して、ＴＢＭＥ−ヘキサンから結晶化後、表題化合物をベージュ色結晶として得た。ＴＬＣ（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  １：１）：Ｒｆ＝０．４２；ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝０．９５５分；ＥＳＩＭＳ：４０６［（Ｍ＋Ｈ）＋］；1H NMR (360 MHz, CDCl3): δ 6.82 (dd, 1H), 6.52 (m, 2H), 4.30 (dd, 1H), 3.97 (dd, 1H), 3.06 (br s, 2H), 1.58 (s, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.46 (s, 9H)．
【００９５】
ｑ）（（２Ｒ，５Ｒ）−５−｛５−［（５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル）−アミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−２，５−ジ−メチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８２ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（２ｍｌ）に、５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸（４２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ．ＨＣｌ（５１ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（３１ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０９ｍｌ、０．５２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を２５℃にて１６時間維持した。混合物を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液および塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、シリカゲルのクロマトグラフィー（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  ２０：１ないし１：１）により精製して、表題化合物を淡黄色泡状物として得た。ＴＬＣ（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  １：１）：Ｒｆ＝０．８１；ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝１．４３７分；ＥＳＩＭＳ：５５０［（Ｍ＋Ｈ）＋］；1H NMR (360 MHz, CDCl3): δ 10.96 (br s, 1H), 9.95 (br s, 1H), 8.63 (s, 2H), 7.88 (m, 1H), 7.71 (m, 1H), 7.54 (dd, 1H), 7.08 (dd, 1H), 4.34 (d, 1H), 4.02 (d, 1H), 2.77 (s, 3H), 1.63 (s, 3H), 1.47 (m, 12H)．
【００９６】
ｒ）結晶性５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミド
（（２Ｒ，５Ｒ）−５−｛５−［（５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル）−アミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−２，５−ジ−メチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルのＣＨ２Ｃｌ２溶液（０．３ｍｌ）に、ＴＦＡ（０．６ｍｌ）を添加し、反応混合物を２５℃にて２時間維持した。反応物を冷却した１０％Ｋ２ＣＯ３水溶液に添加し、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、その後、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（１２０ｇ  シリカゲル、ヘキサン−（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  １０：１）勾配  １０：１ないし０：１０）により精製して、５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドを無色泡状物として得た。アモルファス  ５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロメチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミド（２．６ｇ、５．６ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（１５ｍＬ）中に溶解し、４０℃まで温めた後、溶液をＨ２Ｏ（約６−７ｍＬ）で飽和させた。２５℃にて１６時間維持して結晶化し、その後、結晶を集め、冷ＥｔＯＨ−Ｈ２Ｏで洗浄し、高圧下、２５℃にて１６時間乾燥させて、表題化合物を白色針状結晶として得た。ｍｐ  １０１−１０２℃  ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝０．９５７分；ＥＳＩＭＳ：４５０［（Ｍ＋Ｈ）＋］；1H NMR (600 MHz, DMSO−d6): δ 10.73 (br s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.80 (dd, 1H), 7.73 (m, 1H), 7.16 (dd, 1H), 6.08 (s, 2H), 3.92 (d, 1H), 3.80 (d, 1H), 2.54 (s, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.42 (s, 3H)．
【００９７】
５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸の製造
上記の工程ｑ）で用いた５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸は以下の通りに製造され得る。
ａ）５−ブロモ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
１００ｍｌのＴＨＦ中の、１０．２０ｇ（４７．２ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸および２０．６１ｇ（９４ｍｍｏｌ）の二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルの溶液に、０．５７７ｇのＤＭＡＰを添加した。ＣＯ２の発生が直ちに開始し、混合物をＲＴで２時間撹拌した。ＴＢＭＥおよび飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を添加した。層を分離させ、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液および塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４．Ｈ２Ｏで乾燥させた。シリカゲルのクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １−７％）により、表題化合物を黄色液体として得た。
ＨＰＬＣ：ＲｔＨ３＝３．０１８分；ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝２７２、２７４（１  Ｂｒ）；  1H−NMR (360 MHz, CDCl3): δ 8.59 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 2.52 (s, 3H), 1.65 (s, 9H)．
【００９８】
ｂ）５−ブロモ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
６．０ｇ（２２．０５ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、１．８１３ｇ（１５．４３ｍｍｏｌ）のＺｎ（ＣＮ）２、０．１４４ｇのＺｎ粉末（２．２０５ｍｍｏｌ）および０．５７１ｇ（０．５５１ｍｍｏｌ）のＰｄ２（ｄｂａ）３．ＣＨＣｌ３の混合物を、窒素雰囲気下で、１０ｍｌのＤＭＦ中に懸濁した。ｔＢｕ３Ｐ（０．３２１ｍｌ、１．３２３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を６０℃で５時間撹拌した。冷却後、混合物をＴＢＭＥで希釈し、セライトで濾過し、塩水で３回洗浄した。粗生成物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ５−１５％）により精製して、表題化合物を灰白色固体として得た。ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ３：１）：Ｒｆ＝０．３１；ＨＰＬＣ：ＲｔＨ３＝２．４３１分；ＥＳＩＭＳ  ［Ｍ＋Ｎａ］＋＝２４１；1H−NMR (360 MHz, CDCl3): δ 8.78 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 2.56 (s, 3H), 1.67 (s, 9H)；Ｆｔ−ＩＲ：２２３１ｃｍ−１（ＣＮ）．
【００９９】
ｃ）５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸
８．５０ｇ（３８．９ｍｍｏｌ）の５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの５１ｍｌ（３８９ｍｍｏｌ）の１，３−ジメトキシベンゼン溶液に、８５ｍｌのＴＦＡを添加し、６．５時間撹拌した。反応混合物をトルエンで希釈し、蒸発させた。残渣をトルエンに溶解させ、蒸発させた（２ｘ）。生成物をＴＢＭＥ／ヘキサンから結晶化して、表題化合物を白色粉末として得た。ＨＰＬＣ：ＲｔＨ１＝２．３１４分；ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋Ｎａ］＋＝１６３；1H−NMR (360 MHz, CDCl3): δ 8.77 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 2.87 (s, 3H)．
【０１００】
実施例２：５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの結晶形態の製造のための第１の別法
ａ）（（２Ｒ，５Ｒ）−５−｛５−［（５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル）−アミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（実施例１の工程ｐ）（２．２ｇ、５．４３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（２０ｍｌ）に、０−５℃にて、５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸（０．９６８ｇ、５．９７ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（１．０９５ｇ、７．０５ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（１．１８２ｇ、８．６８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を２５℃で１６時間撹拌した。反応混合物を冷却した飽和ＮａＨＣＯ３溶液に添加し、生成物をＴＢＭＥで抽出した。合わせたＴＢＭＥ層をＨ２Ｏおよび塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、ジイソプロピルエーテルから結晶化後、表題化合物を無色結晶として得た。ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝１．４７２分；ＥＳＩＭＳ：５５０；［（Ｍ＋Ｈ）＋］；1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 11.11 (s, 1H), 10.11 (s, 1H), 8.79 (br s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.84 (m, 1H), 7.68 (dd, 1H), 7.21 (dd, 1H), 4.49 (d, 1H), 4.16 (d, 1H), 1.76 (s, 3H), 1.64 (s, 3H), 1.62 (s, 9H)．
【０１０１】
ｂ）５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミド
（（２Ｒ，５Ｒ）−５−｛５−［（５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル）−アミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．２７ｇ、４．１３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（２５ｍｌ）に、ＴＦＡ（４１．３ｍｍｏｌ、３．１８ｍｌ）を添加し、反応混合物を２５℃にて２．５時間撹拌した。反応混合物を１０％ＮａＨＣＯ３水溶液（ｐＨ＞８）に添加し、遊離塩基をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を水および塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を、該物質を５０−６０℃にてＥｔＯＨ（１５ｍｌ）中に溶解することにより、２回再結晶させて、Ｈ２Ｏ（６−８ｍｌ）で飽和後、透明溶液を一晩、環境温度まで冷却させて、濾過および乾燥後、表題化合物を＞９９％純度で白色結晶として得た。ＵＰＬＣ ＲｔＨ５＝０．９０５分；ＥＳＩＭＳ：４５０［（Ｍ＋Ｈ）＋］；1H NMR (600 MHz, DMSO−d6): 10.72 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.71 (m, 1H), 7.15 (t, 1H), 6.08 (br s, 2H), 3.91 (d, 1H), 3.78 (d, 1H), 2.52 (s, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.41 (s, 3H)．
【０１０２】
実施例３：５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの結晶形態の製造のための第２の別法
５．９５４ｍｇのアモルファス ５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドを、室温にて、４００ｕＬの水に分散させ、１６℃か５℃まで２．４℃／時で冷却し、５℃にて１０時間維持し、その後、４０℃まで５℃／分で加熱して、再び５℃まで２．４℃／時で冷却した。固体を遠心により単離し、３７℃／５０ｍｂａｒにて一晩乾燥させた。
【０１０３】
実施例４：５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの結晶形態の製造のための第３の別法
４．９ｍｇのアモルファス ５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドを、室温にて２４時間、４００ｕＬのエタノール／水  ２０／８０中にてスラリー化した。その後、固体を分け、３７℃／５０ｍｂａｒにて一晩乾燥させた。
【０１０４】
実施例５：５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの結晶形態の製造のための第４の別法
４．９ｍｇのアモルファス ５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドを、室温にて２４時間、４００ｕＬのアセトン／水  ２０／８０にてスラリー化した。その後、固体を分け、３７℃／５０ｍｂａｒにて一晩乾燥させた。
【０１０５】
実施例６：５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの結晶形態の製造のための第５の別法
アモルファス ５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミド（３９５ｇ）を、ｉ−ＰｒＯＨ（３Ｌ）中に溶解し、６０℃まで加熱し、この時点で、水（３Ｌ）を６０℃にて添加した。溶液を徐々に０℃まで冷却して、スラリーを形成させた。固体を０−４℃にて濾過により集め、濾過ケーキをｉ−ＰｒＯＨ／水（１：１）（１Ｌ）で洗浄し、真空下で６５℃にて４０時間乾燥させて、結晶性物質を白色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO−d6): δ 10.69 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.72−7.81 (m, 2H), 7.12−7.15 (q, 1H), 6.05 (br s, 2H), 3.78−3.93 (q, 2H), 2.54 (s, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.42 (s, 3H)．
【０１０６】
実施例７：アモルファスおよび結晶性５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドのＸＲＰＤ分析
結晶性５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドを、ＸＲＰＤにより分析し、１０個の最も特徴的なピークを表３に示す（図１も参照のこと）。
【表５】
2014502625.tif 000009
【０１０７】
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）分析を、Ｂｒｕｃｋｅｒ  Ｄ８  Ａｄｖａｎｃｅ  ｘ線回折計を用いて行った。測定を以下の条件下で約３０ｋＶおよび４０ｍＡで行った。
【表６】
2014502625.tif 000010
【０１０８】
Ｘ線回折パターンを、全体のパターンの同定のために、ＣｕＫα照射を用いて２°ないし４０°（２θ）で記録した。
【０１０９】
実施例８：結晶性およびアモルファス ５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドのＤＳＣ分析
結晶性５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドを、TA instrumentsからのＱ１０００  ＤＳＣを用いて示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により分析し、約９３．６℃で融解が始まることを見出した（図２を参照のこと）。
アモルファス ５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドもまた、ＤＳＣにより分析した（図３を参照のこと）。
【０１１０】
実施例９：高温／高湿度で１週間暴露したときの、アモルファス  対  結晶性５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの化学的安定性
アモルファス  対  結晶性５−シアノ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸 ［３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロ−メチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの安定性を、アモルファスまたは結晶性物質を、高温および／または高湿度で１週間暴露することにより試験した。高温および／または高湿度で貯蔵後、バルク  アモルファスまたは結晶性物質を、サンプル採取し、アセトニトリル中に溶解し、純度を、WatersからのＡｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣにおいて以下の条件を用いて分析した。
【表７】
2014502625.tif 000011
【０１１１】
この試験結果を、表４に示す。
【表８】
2014502625.tif 000012
【図１】
2014502625.tif 000014
【図２】
2014502625.tif 000015
【図３】
2014502625.tif 000016
【国際調査報告】
2014502625.tif 000017
2014502625.tif 000018
2014502625.tif 000019