(57)【要約】  本開示は、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を対象に投与することを含む、肥満を治療するまたは予防するまたは体重減少を生じるまたは代謝症候群を治療するまたは予防する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の体重を減少させる方法であって、対象に、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を投与すること含む、前記方法。
【請求項２】
対象における過度の体重もしくは肥満を治療または予防する方法であって、対象に、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を投与することを含む、前記方法。
【請求項３】
集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子が、投与の約４週間後に体重を少なくとも約３％減少させる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
対象における代謝症候群もしくはその症状を治療または予防する方法であって、対象に、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を投与することを含む、前記方法。
【請求項５】
代謝症候群の症状が、トリグリセリドの上昇、低比重リポタンパク質の上昇、高比重リポタンパク質の減少、リポタンパク質指標の減少、空腹時グルコースレベルの上昇、空腹時インスリンの上昇、摂食後のグルコースクリアランスの減少、インスリン耐性、耐糖能異常、肥満およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の投与が、以下の、
（ｉ）トリグリセリドの減少；
（ｉｉ）低比重リポタンパク質の減少；
（ｉｉｉ）高比重リポタンパク質の増加；
（ｉｖ）リポタンパク質指標の増加；
（ｖ）空腹時グルコースレベルの減少；
（ｖｉ）膵臓によるインスリン分泌の増加；
（ｖｉｉ）摂食後のグルコースクリアランスの増加；
（ｖｉｉｉ）インスリン耐性の減少；および
（ｉｘ）体重の減少
の１つまたは複数の結果を生じる、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
ＳＴＲＯ−１強陽性細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を投与することを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子が全身投与される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子が複数回投与される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子が、４週間以上毎に１回投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
以下の、
（ｉ）トリグリセリドの減少；
（ｉｉ）低比重リポタンパク質の減少；
（ｉｉｉ）高比重リポタンパク質の増加；
（ｉｖ）リポタンパク質指標の増加；
（ｖ）空腹時グルコースレベルの減少；
（ｖｉ）膵臓によるインスリン分泌の増加；
（ｖｉｉ）摂食後のグルコースクリアランスの増加；
（ｖｉｉｉ）インスリン耐性の減少；および
（ｉｘ）体重減少
の１つまたは複数を達成するのに十分な用量の、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子を投与することを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
ｋｇあたり０．１×１０６から５×１０６個の間のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはそれの子孫を投与することを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ｋｇあたり０．３×１０６から２×１０６個の間のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫を投与することを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
低用量のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫を投与することを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
低用量のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫が、ｋｇあたり０．１×１０５から０．５×１０６個の間のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
低用量のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫が、ｋｇあたり約０．３×１０６個のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
ＳＴＲＯ−１＋細胞および／または子孫細胞が富化された集団が、オートジェネイック（autogeneic）または同種異系である、および／または可溶性因子がオートジェネイックまたは同種異系細胞に由来しうる、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ＳＴＲＯ−１＋細胞および／または子孫細胞が富化された集団が、投与に先だって、および／または可溶性因子を得るのに先立って培養増殖された、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
ＳＴＲＯ−ｒ細胞が富化された集団が、ＳＴＲＯ−１ｂｒｉであり、および／もしくは組織非特異型アルカリホスファターゼ（ＴＮＡＰ）を発現し、ならびに／または子孫細胞および／もしくは可溶性因子が、ＳＴＲＯ−１ｂｒｉであるおよび／もしくはＴＮＡＰを発現するＳＴＲＯ−１＋細胞に由来する、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫細胞ならびに／またはそれに由来する可溶性因子が、前記ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫細胞および／もしくはそれに由来する可溶性因子ならびに担体および／または賦形剤を含む組成物の形態で投与される、特許請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
肥満および／もしくは代謝症候群および／もしくは代謝症候群の症状の治療または予防において使用する、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子。
【請求項２２】
ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子の、対象における肥満および／もしくは代謝症候群および／もしくは代謝症候群の症状を治療するまたは予防する薬剤の製造のための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願のデータ
本出願は、２０１１年５月１９日に出願された、「肥満および／または代謝症候群を治療する方法」と題された米国特許仮出願第６１／４８８０３７号からの優先権を主張し、その内容全体はここに参照により組み込まれる。
【０００２】
本開示は、肥満および／または代謝症候群を治療するまたは予防する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
代謝症候群
代謝症候群（Ｘ症候群と同義）は、全世界規模で流行していると考えられている、社会経済学的に高いコストがかかる複合的な障害である。米国の人々の約３２％が、代謝症候群を患っていると考えられており、その危険性は、年齢とともに増加している（例えば４０歳と６０歳の間の人の４０％がこの症候群を患っていると考えられている）。代謝症候群は、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化に関連する病患、高血圧、脳卒中および２型糖尿病といった多くの障害の危険性増加に関係している。現在、代謝症候群は、以下の、
○胴囲の上昇：上昇の定義は、人種、国、性別による；
○トリグリセリドの上昇：≧１５０ｍｇ／ｄＬ血液（１．７ｍｍｏｌ／Ｌ血液）またはトリグリセリド上昇の薬物治療；
○高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロールの減少：男性では＜４０ｍｇ／ｄＬ血液（１．０ｍｍｏｌ／Ｌ血液）、女性では＜５０ｍｇ／ｄＬ血液（１．３ｍｍｏｌ／Ｌ血液）または低い高比重リポタンパク質コレステロールの薬物治療；
○血圧の上昇：心臓収縮期≧１３０ｍｍＨｇおよび／または心臓拡張期≧８５ｍｍＨｇまたは高血圧の薬物治療（すなわち高い血圧の薬物治療）；および
○空腹時グルコースの上昇：≧１００ｍｇ／ｄＬ血液（または高血糖症の薬物治療）
の、３つ以上の基準に基づいて診断されている。
【０００４】
代謝症候群の現在の非薬理学的治療には、運動と食事療法が挙げられる。薬学的治療は一般に、代謝症候群の症状の少なくとも一つを目標としている。例えば、トリグリセリドおよびＨＤＬレベルを改善する化合物が、代謝症候群の治療に役立つと考えられている。しかし、これらの医薬は、多様な望ましくない副作用を抱えている。例えば、
●クロフィブラート（フィブリン酸誘導体）は、罹患率および死亡率を増加させる。さらに、造腫瘍性が、げっ歯類で明らかになっている。臨床試験は、いくつかのフィブラート系薬も血清クレアチンレベルの可逆的増加を生じることを示している。
●ナイアシンは、複数の有害作用を有し、その最悪なものは化学性肝炎である。他の副作用には、顔面紅潮、掻痒性、および発疹などがある。
●スタチンは、筋肉痛、横紋筋融解症（腎不全および死に至らしめる可能性がある）、筋力低下、神経障害、および記憶障害を伴う。さらに、スタチンは、半減期が比較的短く、治療的有用性を得るためには定期的な投薬が必要である。例えば、アトルバスタチンは、約２０〜３０時間の有効半減期を有し、長期間作用型スタチンであると考えられている。
である。
【０００５】
以上のことから、本技術分野において、代謝症候群の治療的／予防的方法の必要性があることは明らかであるだろう。例示的な、治療的／予防的方法は、代謝症候群のいくつかの症状を治療または予防するであろう。
【０００６】
肥満
肥満の発生率は、全世界で、とりわけ最近３０年間で劇的に増加している。２０００年までに、全体で３，８８０万人のアメリカ人成人、すなわちその国の人口の３０％が肥満に分類された（すなわち、少なくとも、白人について３０ｋｇ／ｍ２、日本人について２５ｋｇ／ｍ２、および中国人について２８ｋｇ／ｍ２の肥満度指数スコアを有する）。肥満は、いくつかの病患または障害に関係しており、または引き起こすと考えられていて、合衆国で毎年、およそ２８０，０００例の死亡が肥満に関連する障害に起因すると見積もられている。
【０００７】
肥満は、例えば変形性関節症および呼吸器障害といった非致死性の消耗性状態から、例えば高血圧、２型糖尿病、アテローム性動脈硬化症、心血管病患、がんおよび脳卒中のいくつかの形態といった、生命にかかわる慢性障害にまで、肥満関連の多くの合併症の発現に関する危険因子である。
【０００８】
肥満である対象の数は、増加しつつある（米国だけで肥満の発生率は、最近１０年で３分の１増加した）ので、肥満および肥満関連の合併症を抑制する新規の効果的な戦略の必要性が、ますます重要になっている。
【０００９】
肥満の高い有病率と、それがいかに発現するかについての我々の理解の進歩にもかかわらず、現在の治療戦略は、長期の成功を達成するまでには、一貫して至っていない。さらに、体重を実際に減少させる対象の、およそ９０％から９５％は、減少したその体重を増加させている。
【００１０】
肥満の長期治療のためにＦＤＡによって認可された治療薬物は、現在ほとんどない。これらの化合物の１つであるオルリスタット（orlistat）は、体内への脂肪吸収を遮断することにより作用する膵臓リパーゼ阻害剤である。しかし、この薬物の使用はまた、体からの未消化脂肪の排出という不快な副作用を伴っている。
【００１１】
肥満の治療に一般に使用される他の薬物は、シブトラミン（sibutramine）という食欲抑制薬である。シブトラミンは、脳でのノルアドレナリンおよびセロトニンの再摂取を選択的に阻害するβ−フェネチルアミンである。残念なことに、シブトラミンの使用はまた、血圧上昇と心拍数増加を伴う。これらの副作用の結果として、シブトラミンの投薬量は、もっとも効果的な用量以下のレベルに制限されている。
【００１２】
肥満の短期治療ための化合物には、アンフェタミン誘導体といった食欲抑制薬などがある。しかし、これらの化合物は、高度に中毒性である。さらに、対象は、これらの体重減少医薬に異なる応答をし、いくつかの対象は、他の対象より体重減少がより多く、またいくつかの対象は少しの体重減少もない。
【００１３】
当技術分野には、肥満を治療するもしくは予防するまたは体重を減少する必要性があることは、上記のことに基づけは当業者には明らかであるだろう。
【発明の概要】
【００１４】
本発明人は、ＳＴＲＯ−１＋細胞調製物を用いた非ヒト霊長類モデルにおいて、体重を減少させる、および／または肥満を治療する、および／または代謝症候群を治療することが可能であることを発見した。例えば、本発明人は、ＳＴＲＯ−１＋細胞調製物を投与することにより、トリグリセリドのレベルおよび超低比重リポタンパク質（ＶＬＤＬ）のレベルを減少させ、ＨＤＬのレベルを増加させ、耐糖能を改善し、空腹時インスリンおよびグルコースのレベルを減少させ、および体重を減少させたことを発見した。このように、本発明人は、代謝症候群の診断に要求される多くの症状を治療することができた。本発明人はまた、細胞調製物の単回投与が少なくとも３か月間、治療的有用性を提供すること、複数回投与がこの時間を延長し、有用性のレベルを増加させることができることを示した。
【００１５】
本開示は、対象の体重を減少させる方法であって、対象に、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を投与することを含む方法を提供する。
【００１６】
一例では、対象は過体重である。一例では、対象は肥満である。
【００１７】
一例では、対象は２型糖尿病である。他の例では、２型糖尿病を患っていない。
【００１８】
本開示はさらに、対象において肥満を治療また予防する方法であって、対象に、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団、ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を投与する方法を提供する。
【００１９】
一例では、その集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の投与は、投与の約４週間後に少なくとも約３％または３．５％、体重を減少させる。
【００２０】
一例では、その集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の投与は、投与の約８間後に約４％または４．５％、体重を減少させる。
【００２１】
一例では、その集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の投与は、投与の約１２間後に約４％または４．５％、体重を減少させる。
【００２２】
例えば、体重の減少は、細胞の初期投与後である。
【００２３】
一例では、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子を、少なくとも２回、投与することを含む。例えば、各投与は、約１２週の期間、隔てられている。一例では、投与は、体重を少なくとも約５％、初期投与の１６週間後までに減少させる。
【００２４】
一例では、方法は、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子を少なくとも２回、投与することを含み、各投与は、約１２週の期間、隔てられており、投与は、体重を少なくとも約６％、初期投与後２０週までに減少させる。
【００２５】
一例では、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の投与は、対象の顕著に少量の食物消費の原因とはならない、および／または対象の食物消費の欲求を顕著には減少させない。このことは、方法が、（例えば、治療に先立ってまたは対象の治療の初期に摂取される量と比較して）より少量の食物消費をさらに含んでいるということではなく、投与それ自体は、対象の食物消費に影響しないということである。
【００２６】
本開示はまた、対象において代謝症候群もしくはその症状を治療するまたは予防する方法であって、対象に、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を投与する方法も含む。
【００２７】
一例では、代謝症候群の症状は、トリグリセリド上昇、低比重リポタンパク質の上昇、高比重リポタンパク質の減少、リポタンパク質指標の減少、空腹時グルコースレベルの上昇、空腹時インスリンレベルの上昇、摂食後のグルコースクリアランスの減少、インスリン耐性、耐糖能異常、肥満、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００２８】
一例では、方法は、前述の症状の２つまたは３つまたは４つまたは５つまたはすべてを減少または予防する。
【００２９】
一例では、集団のおよび／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の投与は、以下の、
（ｉ）リグリセリドの減少；
（ｉｉ）低比重リポタンパク質の減少；
（ｉｉｉ）高比重リポタンパク質の上昇；
（ｉｖ）リポタンパク質指標の増加；
（ｖ）空腹時グルコースレベルの減少；
（ｖｉ）空腹時インスリンレベルの減少；
（ｖｉｉ）摂食後のグルコースクリアランスの増加；
（ｖｉｉｉ）インスリン耐性の減少；および
（ｉｘ）体重の減少
の一つまたは複数を、結果として生じる。
【００３０】
一例では、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の投与は、前述の２つまたは３つまたは４つまたは５つまたは全部を結果として生じる。
【００３１】
一例では、代謝症候群および／またはその症状の進行または悪化を予防する方法する。
【００３２】
一例では、本明細書でいずれかの実施例に記載される方法は、ＳＴＲＯ−１強陽性（ｂｒｉｇｈｔ）細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を投与することを含む。
【００３３】
一例では、本明細書でいずれかの実施例に記載される方法は、ＳＴＲＯ−１＋および組織非特異型アルカリフォスファティーゼ＋（ＴＮＡＰ）＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を投与することを含む。
【００３４】
一例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子が、全身投与される。例えば、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子は、静脈内投与される。
【００３５】
一例では、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子は、複数回投与される。
【００３６】
例えば、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子は、２以上の週毎に投与される。
【００３７】
例えば、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子は、３以上の週毎に投与される。
【００３８】
例えば、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子は、４以上の週毎に投与される。
【００３９】
一例では、方法は、対象をモニターし、以下の、
（ｉ）トリグリセリドレベルが、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の投与の１か月または２月後に検出された以上のレベル、または集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の初期投与前に検出されたのと同様なレベルに増加する；
（ｉｉ）低比重リポタンパク質レベルが、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の投与の１か月または２か月後に検出された以上のレベル、または集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因の初期投与前に検出されたのと同様なレベルに増加する；
（ｉｉｉ）高比重リポタンパク質レベルが、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の投与の１か月または２か月後に検出された以上のレベル、また集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の初期投与前に検出されたのと同様なレベルに減少する；
（ｉｖ）リポタンパク質指標が、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の投与の１か月または２か月後に検出された以上のレベル、または集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の初期投与前に検出されたのと同様なレベルに減少する；
（ｖ）空腹時グルコースレベルが、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の投与の１か月または２か月後に検出された以上のレベル、または集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の初期投与前に検出されたのと同様なレベルに増加する；
（ｖｉ）空腹時インスリンレベルが、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の投与の１か月または２か月後に検出された以上のレベル、または集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因の初期投与前に検出されたのと同様なレベルに減少する；
（ｖｉｉ）摂食後のグルコースクリアランスが、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の投与の１か月または２か月後に検出された以上のレベル、または集団および／または子孫および／可溶性因子の初期投与前に検出されたのと同様なレベルに減少する；
（ｖｉｉｉ）インスリン耐性が、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の投与の１か月または２か月後に検出された以上のレベル、または集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の初期投与前に検出されたのと同様なレベルに増加する；および
（ｉｘ）体重が、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の投与の１か月または２か月後に検出された以上のレベル、または集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の初期投与前に検出されたのと同様なレベルに増加する、
の一つまたは複数が発生するときに、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子のさらなる用量を投与することを含む。
【００４０】
一例では、本明細書でいずれかの実施例に記載の方法は、以下の、
（ｉ）トリグリセリドの減少；
（ｉｉ）低比重リポタンパク質の減少；
（ｉｉｉ）高比重リポタンパク質の増加；
（ｉｖ）リポタンパク質指標の増加；
（ｖ）空腹時グルコースレベルの減少；
（ｖｉ）空腹時インスリンレベルの減少；
（ｖｉｉ）摂食後のグルコースクリアランスの増加；
（ｖｉｉｉ）インスリン耐性の減少；および
（ｉｘ）体重の減少
の、一つまたは複数を達成するのに十分な投与量の、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子を投与することを含む。
【００４１】
一例では、用量は、前述の少なくとも２つまたは３つまたは４つまたは５つまたはすべてを達成するのに十分である。
【００４２】
一例では、本明細書でいずれかの実施例に記載の方法は、ｋｇあたり０．１×１０６から５×１０６個の間のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫を投与することを含む。
【００４３】
一例では、本明細書でいずれかの実施例に記載の方法は、ｋｇあたり０．３×１０６から２×１０６個の間のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫を含む。例えば、方法は、ｋｇあたり約１×１０６または２×１０６個のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫を投与することを含む。
【００４４】
一例では、本明細書でいずれかの実施例に記載の方法は、低用量のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫を投与することを含む。例えば、低用量のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫は、ｋｇあたり０．１×１０５と０．５×１０６個の間のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫を含む。例えば、低用量のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫は、ｋｇあたり約０．３×１０δ個のＳＴＲＯ−１＋の細胞および／またはそれらの子孫を含む。
【００４５】
一例では、集団および／または子孫細胞は、オートジェネイック（autogeneic）または同種異型であり、および／または可溶性因子は、オートジェネイックまたは同種異系細胞に由来してもよい。一例では、集団および／または子孫は、同種異系であり、および／または可溶性因子は同種異系細胞に由来するものである。
【００４６】
上述の例によれば、方法はさらに、集団および／もしくは子孫細胞ならびに／または可溶性因子を得ることを含んでもよく、またはさらに集団および／もしくは子孫細胞ならびに／または可溶性因子を単離することを含んでいてもよい。一例では、集団および／または子孫細胞は、ＳＴＲＯ−１および／またはＴＮＡＰの発現に基づいている。
【００４７】
一例では、集団および／もしくは子孫細胞ならびに／または可溶性因子は、治療されている対象から得られる。他の例では、集団および／もしくは子孫細胞ならびに／または可溶性因子は、同一種の他の対象から得られる。
【００４８】
一例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／または子孫細胞が富化された集団は、投与に先立って、および／または可溶性因子を得るのに先立って、培養増殖された。
【００４９】
上述の例によれば、本明細書でいずれかの実施例に記載の方法はさらに、集団および／または子孫細胞を培養することを含んでもよい。
【００５０】
一例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫細胞ならびに／またはそれに由来する可溶性因子は、前記ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫細胞および／またはそれに由来する可溶因子ならびに担体および／または賦形剤を含む組成物の形態で投与される。
【００５１】
上述の実施例によれば、本明細書でいずれかの実施例に記載の方法はさらに、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子を組成物に製剤することを含む。
【００５２】
一例では、対象は、肥満を患っている、および／または代謝症候群を患っている。例えば、対象は治療を必要としている。
【００５３】
一例では、対象は、肥満を患うおよび／または代謝症候群を患う危険性がある。
【００５４】
本開示はまた、ＳＴＲＯ−１＋および／もしくはその子孫が富化された集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を提供し、肥満および／もしくは代謝症候群および／もしくは代謝症候群の症状を治療または予防するのに使用する。
【００５５】
本開示はまた、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を、対象における肥満および／もしくは代謝症候群および／もしくは代謝症候群の症状を治療または予防する薬剤を製造する場合に提供する。
【００５６】
本開示はまた、本明細書でいずれかの例に記載の方法における使用説明書と同梱された、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子、を含むキットを提供する。
【００５７】
例えば、本開示は、本明細書でいずれかの実施例に記載の方法における組成物の使用を指示する製品情報と同梱された、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子を含む組成物、を含むキットを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】成人ＢＭＭＮＣによるＴＮＡＰ（ＳＴＲＯ−３）および間葉系前駆細胞マーカー、ＳＴＲＯ−１強陽性（ｂｒｉｇｈｔ）の共発現を示す。ＳＴＲＯ−１  ＭＡＣＳで選別したＢＭＭＮＣのインキュベーション、およびＦＩＴＣに結合したヤギ抗マウスＩｇＭ抗体での間接標識（ｘ軸）、およびＰＥに結合したヤギ抗マウスＩｇＧで間接標識されたＳＴＲＯ−３ｍＡｂ（マウスＩｇＧ１）（ｙ軸）によって、二色免疫蛍光法およびフローサイトメトリーを行った。ドットプロットヒストグラムはリストモードデータとして収集した５×１０４個の事象を表わしている。垂直線および水平線は、同条件下で処置したアイソタイプ一致の対照抗体、１Ｂ５（ＩｇＧ）および１Ａ６．１２（ＩｇＭ）で得られた平均蛍光の１．０％未満の活性レベルに設定した。結果は、少数のＳＴＲＯ−１強陽性（ｂｒｉｇｈｔ）細胞集団がＴＮＡＰを共発現したが（右上の象限）、一方残りのＳＴＲＯ−１＋細胞はＳＴＲＯ−３ｍＡｂと反応しなかったことを示している。
【図２】ヤギ抗マウスＩｇＭまたはＩｇＧ結合型ＦＩＴＣ二次抗体を用いて検出したアイソタイプ（ＩｇＭ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ１）陰性対照（破線）と比較した、間葉系幹細胞マーカー、ＳＴＲＯ−１、ＳＴＲＯ−４およびＣＤ１４６（実線）の陽性細胞表面発現を伴うカニクイザルＭＰＣに由来する培養増殖後骨髄の、単一細胞懸濁液を用いて生成した代表的なフローサイトメトリーのヒストグラムを示すグラフ表現である。代表的なヒストグラムはまた、カニクイザルのＭＰＣが、単球／マクロファージ（ＣＤ１４）、造血幹／前駆体細胞（ＣＤ３４）および成熟白血球ＣＤ４５）のマーカーについて、細胞表面発現を欠いていることを示している。アイソタイプ対照と比較された蛍光の１％より大きいレベルは、陽性を示している。
【図３】初期のインスリン応答（５〜２０分；左側）、および静脈内グルコース負荷試験（ＩＶＧＴＴ）後の後期（３０〜６０分；右側）について、１か月間の反復評価にわたる、平均での曲線下面積（ＡＵＣ）を示すグラフ表現である。試験は、糖尿病および非糖尿動物で実行した（示すとおり）。
【図４】静脈内グルコース注入後の、平均での月ごとの曲線下面積（ＡＵＣ３０−６０ｍｉｎ）後期インスリン応答を示すグラフ表現である。個々のデータを、ＭＰＣ治療の１か月前および６か月後について、糖尿病および糖尿病動物（示すとおり）について示す。矢印は、ＭＰＣが注入された時期を示す。
【図５】ＭＰＣの継続投与が、グルコース負荷に対する後期インスリン応答の漸進的増加を誘導することを示すグラフ表現である。パネル（ａ）にける表現は、非糖尿病および糖尿病動物の群（示すとおり）についての静脈内グルコース注入後の、平均での毎月の曲線下面積（ＡＵＣ３０−６０ｍｉｎ）後期インスリン応答を示す。ＭＰＣ治療の１か月前および６か月後について、非糖尿病および糖尿病群についてのデータを示す。矢印は、ＭＰＣが注入された時期を示す。パネル３（ｂ）にける表現は、未治療ベースラインと比較した群ごとの後期インスリン応答の、平均での毎月のパーセント変化を図示する。
【図６】静脈内グルコース注入後の後期インスリン応答の間（３０〜６０分）での平均での月ごとの血中グルコースクリアランス速度を示すグラフ表現である。個々のデータを、ＭＰＣ治療の１か月前および６か月後について、各非糖尿病および糖尿病動物（示すとおり）について図示する。矢印は、ＭＰＣが注入された時期を示す。
【図７】ＭＰＣが、高グルコース負荷後のグルコースクリアランスの漸進的増加を誘導することを示すグラフ表現である。パネル（ａ）に、静脈内グルコース注入後の後期インスリン応答の間（３０〜６０分）の、平均での月ごとの血中グルコースクリアランス速度を示す。ＭＰＣ治療の１か月前および６か月後について、非糖尿病および糖尿病群についての個々のデータを図示する。矢印は、ＭＰＣが注入された時期を示す。パネル５（ｂ）に、治療前ベースラインと比較した群ごとのグルコース消費速度の、平均での月ごとのパーセント変化を図示する。
【図８】ＭＰＣで治療したサルでの、平均での月ごとの空腹時血中グルコースレベル（一番上のパネル）および平均での月ごとの空腹時インスリンレベル（一番下のパネル）を示すグラフ表現である。ＭＰＣ治療の１か月前および６か月後について、非糖尿病（ベースラインでの空腹時ＢＧＬ＞１１０ｍｇ／ｄＬ）および糖尿病（ベースラインで空腹時ＢＧＬ＜１１０ｍｇ／ｄＬ）動物についての個々のデータを図示する。矢印は、ＭＰＣが注入された時期を示す。各動物についてのＭＰＣ用量を表示する。
【図９】ＭＰＣを投与された動物の、平均での月ごとの空腹時血中グルコースレベル（一番上のパネル）および平均での月ごとの空腹時インスリンレベル（一番下のパネル）を示すグラフ表現である。ＭＰＣ治療の１か月前および６か月後について、非糖尿病（ベースラインでの空腹時ＢＧＬ＞１１０ｍｇ／ｄＬ）および糖尿（ベースラインで空腹時ＢＧＬ＜１１０ｍｇ／ｄＬ）動物群についてのデータを示す。矢印は、ＭＰＣが注入された時期を示す。
【図１０】ＭＰＣ治療が、継続的な高摂食にもかかわらず持続的な体重減少を誘導することを示すグラフ表現である。パネル（ａ）は、非糖尿病および糖尿病動物の両方にける、平均での月ごとの体重変化を示す。ＭＰＣ治療の１か月前および６か月後について、非糖尿病および糖尿病動物についての個々のデータを示す。矢印は、ＭＰＣが注入された時期を示す。各動物に対するＭＰＣの用量を各パネルの一番上に示す。パネル（ｂ）に、体重測定期間をとおした、各個の動物についての食物消費量（週あたりの消費されたペレットの平均数）を示す。パネル（ｃ）に、未治療ベースラインと比較してＭＰＣ治療後の動物のプールされた群における、平均での月ごとの体重減少パーセンテージを示す。体重減少は、ＭＰＣ治療の経過中に４％から６％の範囲にあった。
【図１１】ＭＰＣ治療の１か月前および６か月後について、非糖尿病および糖尿病動物における、月ごとの空腹時脂質プロファイル（示すとおり）を示すグラフ表現である。非糖尿病および糖尿病動物についての個々のデータを示す。矢印は、ＭＰＣが注入された時期を示す。各動物についてのＭＰＣ用量を、各パネルの一番上に示す。
【図１２】非糖尿病および糖尿病動物における、平均での月ごとの空腹時脂質プロファイル（示すとおり）を示すグラフ表現である。ＭＰＣ治療の１か月前および６か月後について、非糖尿病および糖尿病群についてのデータを示す。矢印は、ＭＰＣが注入された時期を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
一般的技術および選択された定義
本明細書を通じて、それ以外に具体的に述べられている場合または文脈がそれ以外に要求する場合を除いて、単一ステップへの参照、物質の組成物、ステップの群または物質の組成物の群は、１つおよび複数（すなわち一つまたは複数）のそれらのステップ、物質の組成物、ステップの群または物質の組成物の群を包含すると解されるものとする。
【００６０】
本明細書に記載される各実施例は、それ以外に具体的に述べられて場合を除き、本開示のそれぞれおよびすべての他の例に準用されるものとする。
【００６１】
当業者は、本開示および個々のそれらの実施例が、具体的に記載されたもの以外の変形および修正を許容することができることを理解するであろう。本開示がそのような変形および修正すべてを含むことを理解すべきである。本開示はまた、本明細書で参照または表示されているステップ、機能、組成物および化合物のすべてを個々にまたは集合的に、ならびに、前記ステップもしくは機能のいずれかのおよびすべての組み合わせまたはいずれか２つ以上の組み合わせを含む。
【００６２】
本開示は、本明細書に含まれる具体的な実施例によって範囲を制限されるものではなく、例示を目的とすることだけを意図している。機能的に等価な生成物、組成物、および方法は、本明細書に記載される場合、明確に、本開示およびそれらの実施例の範囲内にある。
【００６３】
本開示は、それ以外に表示されている場合を除き、分子生物学、微生物学、ウイルス学、ＤＮＡ組み換え技術、溶液中でのペプチド合成、固相ペプチド合成、および免疫学の従来技術を用いて過度の実験なしに実行される。そのような手順は、Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, New York, Second Edition (1989),Vol I,II，およびIIIの全部； DNA Cloning: A Practical Approach, Vols. I and II (D. N. Glover, ed., 1985), IRL Press, Oxford,のテキスト全体； Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach (M. J. Gait, ed, 1984) IRL Press, Oxford，のテキスト全体、および特にその中でのＧａｉｔによる，ｐｐｌ−２２の論文； Atkinson et al, pp35-81; Sproat et al, pp 83-115; および Wu et al, pp 135-151; 4. nucleic Hybridization: A Practical Approach (B. D. Hames & S. J. Higgins, eds., 1985) IRL Press, Oxford，のテキスト全体； Immobilized Cells and Enzymes: A Practical Approach (1986) IRL Press, Oxford,のテキスト全体; Perbal, B., A Practical Guide to Molecular Cloning (1984); Methods In Enzymology (S. Colowick and N. Kaplan, eds., Academic Press, Inc.),のシリーズ全体; J.F. Ramalho Ortigao, “The Chemistry of Peptide Synthesis” In: Knowledge database of Access to Virtual Laboratory website (Interactiva, Germany); Sakakibara, D., Teichman, J., Lien, E. Land Fenichel, R.L. (1976). Biochem. Biophys. Res. Commun. 73 336-342; Merrifield, R.B. (1963). J. Am. Chem. Soc. 85, 2149-2154; Barany, G. and Merrifield, R.B. (1979) in The Peptides (Gross, E. and Meienhofer, J. eds.), vol. 2, pp. 1-284, Academic Press, New York. 12. Wunsch, E., ed. (1974) Synthese von Peptiden in Houben-Weyls Metoden der Organischen Chemie (Muler, E., ed.), vol. 15, 4th edn., Parts 1 and 2, Thieme, Stuttgart; Bodanszky, M. (1984) Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Heidelberg; Bodanszky, M. & Bodanszky, A. (1984) The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Heidelberg; Bodanszky, M. (1985) Int. J. Peptide Protein Res. 25, 449-474; Handbook of Experimental Immunology, VoIs. I-IV (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds., 1986, Blackwell Scientific Publications); および Animal Cell Culture: Practical Approach, Third Edition (John R. W. Masters, ed., 2000), ISBN 0199637970,のテキスト全体、に記載されている。
【００６４】
本明細書をとおして、文脈がそれ以外を要求する場合を除き、「comprise（含む）」という語、または「comprises」もしくは「comprising」といった変化形は、述べられたステップまたは要素または完全体またはステップ（複数）もしくは要素（複数）もしくは完全体（複数）の群の包含を意味するが、あらゆる他のステップまたは要素または完全体または要素もしくは完全体の群の排除を意味するものではないことが理解されるであろう。
【００６５】
本明細書で使用される場合、「由来する（derived from）」の用語は、特定の完全体が、具体的な源から、その源から必ずしも直接的ではないにしても、得られうることを表示すると解されるものとする。ＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫細胞に由来する可溶性因子という文脈では、この用語は、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはそれらの子孫細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養の間に産生される一つまたは複数の因子、例えば、タンパク質、ペプチド、炭水化物等などを意味すると解されるものとする。
【００６６】
本明細書で使用される場合、「トリグリセリドの上昇」という用語は、ｄＬ血液あたり約１５０ｍｇ（１．７ｍｍｏｌ／Ｌ血液）以上のトリグリセリドを意味すると理解されるであろう。対象における脂質および／またはリポタンパク質レベルを評価する方法は、当業者には明らかであろうし、超遠心分離、免疫測定を含む。
【００６７】
本明細書で使用される場合、「低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）の上昇」という用語は、心臓病またはアテローム性動脈硬化症を患う人々について、ｄＬ血液あたり１００ｍｇ以上のＬＤＬ、またはｄＬあたり７０ｍｇ以上のＬＤＬを意味すると理解されるであろう。対象における脂質および／またはリポタンパク質レベルを評価する方法は、当業者には明らかであろうし、超遠心分離、免疫測定を含む。
【００６８】
本明細書で使用される場合、「高比重タンパク質（ＨＤＬ）コレステロールの減少」いう用語は、男性においてｄＬ血液あたり４０ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ／Ｌ血液）以下のＨＤＬ、または女性においてｄＬ血液あたり５０ｍｇ（１．３ｍｍｏｌ／Ｌ血液）以下のＨＤＬを意味すると理解されるであろう。対象における脂質および／またはリポタンパク質レベルを評価する方法は、当業者には明らかであろうし、超遠心分離、免疫測定を含む。
【００６９】
本明細書で使用される場合、「リポタンパク質指標」という用語は、ＨＤＬの非ＨＤＬコレステロールに対する比を意味すると理解されるであろう。このように、ＨＤＬがより高いレベルおよび／または非ＨＤＬコレステロールがより低いレベルになると、この比はより高くなる。
【００７０】
本明細書で使用される場合、「空腹時グルコースレベルの上昇」という用語は、Ｌプラズマあたり５．６ｍｍｏｌグルコース（またはｄＬプラズマあたり１OOｍｇグルコース）から、Ｌプラズマあたり６．９ｍｍｏｌグルコース（またはｄＬプラズマあたり１２５ｍｇグルコース）の空腹時血漿グルコースレベルを意味すると理解されるであろう。
【００７１】
本明細書で使用される場合、「空腹時インスリンレベルの上昇」という用語は、約６０ｐｍｏｌ／Ｌより大きい空腹時インスリンレベルを意味すると理解されるであろう。これはまた、インスリン耐性の証拠である。
【００７２】
本明細書で使用される場合、「耐糖能異常」という用語は、経口用量７５グラムのグルコースを摂取した２時間後における、血漿グルコース濃度７．８ｍｍｏｌ／ｄＬ（１４０ｍｇ／ｄＬ）以上（例えば７．８〜１１ｍｍｏｌ／ｄＬ（１４０〜１９７ｍｇ／ｄＬ）までを意味すると理解されるであろう。この定義はまた、受け入れられている定義、例えば、静脈内グルコース負荷試験を用いた評価を企図している。
【００７３】
本明細書で使用される場合、「インスリン耐性」という用語は、耐糖能異常および／または空腹時インスリンレベルの上昇で特徴づけられる状態を包含する。
【００７４】
本明細書で使用される場合、「過体重」または「過剰な体重」という用語は、肥満度指数２５以上を意味する理解されるであろう。一部の例では、この用語は、肥満を包含すると理解されるであろう。一部の例では、この用語は、前肥満、すなわちＢＭＩ２５〜３０を包含する。「過体重」について他の臨床的に受け入れられている定義もまた、この用語により企図される。過体重である対象はまた、肥満を発症する危険性があると考えられる。
【００７５】
本明細書で「代謝症候群を発症する危険性のある対象」への言及は、５０歳代の対象、ならびに／またはヒスパニック系および／もしくはアジア人種および／もしくは２５才以上の対象、ならびに／または２型糖尿病の家族歴のある、および／もしくは妊娠期間に糖尿病（妊娠性糖尿病）の家族歴のある、および／もしくは肥満の家族歴のある、および／もしくは高血圧、心臓血管系病患もしくは多嚢胞性卵巣症候群の一つもしくは複数の診断のある対象を含む。
【００７６】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、以下の、
（ｉ）トリグリセリドの減少；
（ｉｉ）低比重リポタンパク質の減少；
（ｉｉｉ）高比重リポタンパク質の増加；
（ｉｖ）リポタンパク質指標の増加；
（ｖ）空腹時グルコースレベルの減少；
（ｖｉ）膵臓インスリン分泌の増加；
（ｖｉｉ）摂食後のグルコースクリアランスの増加；
（ｖｉｉｉ）インスリン耐性の減少；および
（ｉｘ）体重の減少、
のうちの一つまたは複数を達成するのに十分な、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫細胞ならびに／またはそれに由来する可溶性因子の量を意味すると解されるものとする。
【００７７】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」という用語は、代謝症候群および／または肥満を治療するのに十分な量、すなわち対象が代謝症候群および／または肥満についての臨床基準をもはや満たさなくなるような量の、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはそれの子孫細胞ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を意味すると解されるものとする。例えば、肥満対象の体重は、その対象がもはや肥満でない程度（例えば、それらは過体重または正常であってもよい）に減少する。
【００７８】
本明細書で使用される場合、「予防有効量」という用語は、代謝症候群および／もしくは肥満を予防するまたは抑制するまたはその開始を遅延させるのに十分な量、例えば、対象が代謝症候群および／または肥満の診断に関する臨床基準を発症するのを防ぐのに十分な量の、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫細胞ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を意味すると解されるものとする。例えば、過体重の対象は、肥満とされる程度まで体重が増加し続けないように治療される。
【００７９】
本明細書で使用される場合、「低用量」という用語は、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫の、１×１０６個より少ないがそれでも本明細書で定義されている「有効量」ならびに／または本明細書で定義される「治療有効量」ならびに／または本明細書で定義される「予防有効量」であるのに十分な量を意味すると理解されるものとする。例えば、低用量は、０．５×１０６個以下の細胞、または０．４×１０６個以下の細胞、または０．３×１０６個以下の細胞または０．１×１０６個以下の細胞を含む。
【００８０】
本明細書で使用される場合、「治療する（treat）」または「治療（treatment）」または「治療すること（treating）」という用語は、治療有効量の可溶性因子および／もしくは細胞を投与すること、ならびに代謝症候群の症状（複数可）を、対象がもはやその症候群を伴うと臨床的に診断されないように減少させるもしくは阻害すること、ならびに／または対象がもはや肥満ではないように対象の体重を減少させることを意味すると理解されるものとする。
【００８１】
本明細書で使用される場合、「予防する（prevent）」、「予防すること（preventing）」、「予防（prevention）」という用語は、予防有効量の可溶性因子および／もしくは細胞を投与すること、ならびに代謝症候群の発症もしくは進行を停止するもしくは妨げるもしくは遅延させること、ならびに／または肥満の発症を停止もしくは妨げるもしくは遅延させることを意味すると解されるものとする。
【００８２】
本明細書で使用される場合、「可溶性因子」という用語は、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫によって産生される、水溶性のあらゆる分子、例えば、タンパク質、ペプチド、糖タンパク質、糖ペプチド、リポタンパク質、リポペプチド、炭水化物を意味すると解されるものとする。そのような可溶性因子は、細胞内にありうる、および／または細胞によって分泌されうる。そのような可溶性因子は、複雑な混合物（例えば上清）および／もしくはその画分であり得る、並びに／または精製された因子であり得る。一例では、可溶性因子は、上清中に含有される。従って、一つまたは複数の可溶性因子の投与を目的とする本明細書のいかなる例も、上清の投与に準用されると解されるものとする。
【００８３】
本明細書で使用される場合、「上清」という用語は、例えば液状培地といった適切な培地においてＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫のｉｎ  ｖｉｖｏでの培養をおこなった後に生成される非細胞性物質をさす。典型的には、上清は、適切な条件と時間のもと培地中で細胞を培養し、その後に遠心分離といった過程により細胞性物質を除去することによって生成される。上清は、投与前にさらなる精製ステップを経ても経なくてもよい。一例では、上清は、１０５個より少ない、さらには１０４個より少ないといった、例えば、１０３個より少ない細胞を含み、例えば生細胞は含まない。
【００８４】
本明細書で使用される場合、「正常または健康な個体」という用語は、当技術分野で既知のおよび／または本明細書に記載のあらゆる方法により評価されている代謝症候群または肥満を患っていない対象を意味すると解されるものとする。一例では、「正常または健康な個体」は、代謝症候群のいかなる症状も患っていない、および／または３５より低いＢＭＩ値を有する。
【００８５】
ＳＴＲＯ−１＋細胞または子孫細胞、およびそれに由来する上清または１つもしくは複数の可溶性因子
ＳＴＲＯ−ｒ細胞は、骨髄、血液、乳歯（例えば、脱落乳歯）、歯髄細胞、脂肪組織、皮膚、脾臓、膵臓、脳、腎臓、肝臓、心臓、網膜、脳、毛包、腸、肺、リンパ節、胸腺、骨、靱帯、腱、骨格筋、真皮、および骨膜に見出される細胞である。
【００８６】
一例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞は、一つまたは複数または２つまたはそれ以上および／または３つの、中胚葉および／または内胚葉および／または外胚葉等の生殖細胞系に分化することができる。
【００８７】
一例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞は、多数の細胞型、例えば、限定はされないが、脂肪組織、骨組織、軟骨組織、弾性組織、筋肉組織、および線維性結合組織に分化可能な多能性細胞である。これらの細胞が迎える具体的な細胞系譜の決定および分化経路は、増殖因子、サイトカイン、および／または宿主組織によって構築される局所的な微小環境の条件等の機械的影響および／または内在性生物活性因子からの種々の影響に依存する。従って、ＳＴＲＯ−１＋多能性細胞は、分裂して、どちらも幹細胞である娘細胞を生じる非造血系前駆細胞であるか、または適切な時期に不可逆的に分化して表現型を持つ細胞（phenotypic cell）を生じる前駆細胞である。
【００８８】
一例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞は、対象、例えば、治療を受ける対象または近縁の（related）対象もしくは非近縁の（unrelated）対象（同一種か異種かに関わらない）から得られた試料から富化される。「富化された」、「富化」という用語またはその変化形は、無処置の細胞集団（例えば、天然環境にある細胞）と比較したときに、ある特定の細胞型の割合またはいくつかの特定の細胞型の割合が増加している細胞集団を記述するために本明細書では使用される。一例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞が富化された集団の割合は、少なくとも約０．１％または０．５％または１％または２％または５％または１０％または１５％または２０％または２５％または３０％または５０％または７５％のＳＴＲＯ−１＋＿細胞を含む。この点において、「ＳＴＲＯ−１＋細胞が富化された細胞集団」という用語は、「Ｘ％のＳＴＲ０１＋細胞を含む細胞集団」という用語について明示的な支持を与えると解されるであろう。ここでＸ％は、本明細で列挙されているようにパーセンテージである。ＳＴＲＯ−１＋細胞は、一部の例では、クローン原生コロニー、例えばＣＦＵ−Ｆ（線維芽細胞）を形成する可能性があり、またはそのサブセット（例えば５０％または６０％または７０％または７０％または９０％または９５％）がこの活性を有する可能性がある。
【００８９】
一例では、細胞集団は、選択可能な形態でＳＴＲＯ−ｒ細胞を含む細胞の調製物から富化される。この点において、「選択可能な形態」という用語は、ＳＴＲＯ−１＋細胞の選択を可能にするマーカー（例えば細胞表面マーカー）を発現することを意味すると理解されるであろう。マーカーは、ＳＴＲＯ−１であってもよいが、しかしそうである必要はない。例えば、本明細書に記載されているおよび／または例示されているように、ＳＴＲＯ−２および／またはＳＴＲＯ−３（ＴＮＡＰ）および／またはＳＴＲＯ−４および／またはＶＣＡＭ−１および／またはＣＤ１４６および／または３Ｇ５を発現する細胞（例えばＭＰＣ）はまた、ＳＴＲＯ−１（そしてＳＴＲＯ−１強陽性（ｂｒｉｇｈｔ）である可能性がある）を発現する。従って、細胞がＳＴＲＯ−１＋であるという表示は、細胞がＳＴＲＯ−１発現によって選択されるということを意味するものではない。一例では、細胞は、少なくともＳＴＲＯ−３発現に基づいて選択され、例えばそれらはＳＴＲＯ−３＋（ＴＮＡＰ＋）である。
【００９０】
細胞またはその集団の選択への言及が、特定の組織源からの選択である必要はない。本名明細書に記載されるように、ＳＴＲＯ−１＋細胞は、非常に多様な源から選択または分離または富化されうる。とはいうものの、一部の例では、これらの用語は、ＳＴＲＯ−１＋細胞（例えばＭＰＣ）を含むあらゆる組織、または血管組織、または周皮細胞（例えばＳＴＲＯ−１＋周皮細胞）を含む組織、または本明細書に列挙される組織のいずれかまたはそれ以上のものに支持を与える。
【００９１】
一例では、本開示の方法で用いられる細胞は、ＴＮＡＰ＋、ＶＣＡＭ−１＋、ＴＨＹ−１＋、ＳＴＲＯ−２＋、ＳＴＲＯ−４＋（ＨＳＰ−９０β）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４６＋、３Ｇ５＋またはそれらのあらゆる組合せからなる群から、個々に、または集合的に選択される一つまたは複数のマーカーを発現する。
【００９２】
「個々に（Individually）」とは、本開示が、列挙されたマーカーまたはマーカー群を個別に包含すること、および、個々のマーカーまたはマーカー群が本明細書に個別には列挙されているわけではないにもかかわらず、添付の特許請求の範囲が、かかるマーカーまたはマーカー群を互いから個別に、且つ可分的に定義してもよいことを意味している。
【００９３】
「集合的に（Collectively）」とは、本開示があらゆる数の、またはあらゆる組合せの一覧にされたマーカーまたはペプチド群を含むこと、および、かかるあらゆる数の、またはあらゆる組合せの列挙されたマーカーまたはマーカー群が本明細書では具体的に一覧にされているわけではないにもかかわらず、添付の特許請求の範囲が、かかる組合せまたは部分的な組合せを、マーカーまたはマーカー群の他のあらゆる組合せから個別に、且つ可分的に定義してもよいことを意味している。
【００９４】
例えば、ＳＴＲＯ−１＋細胞はＳＴＲＯ−１強陽性（ｂｒｉｇｈｔ）（ＳＴＲＯ−１強陽性（ｂｒ）と同義）である。一例では、Ｓｔｒｏ−１強陽性細胞は、ＳＴＲＯ−１弱陽性またはＳＴＲＯ−１中間（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）細胞と比較して優先的に富化される。
【００９５】
一例では、ＳＴＲＯ−１強陽性細胞は、さらに、ＴＮＡＰ＋、ＶＣＡＭ−１＋、ＴＨＹ−１＋、ＳＴＲＯ−２＋、ＳＴＲＯ−４＋（ＨＳＰ−９０Ｐ）、ＳＴＲＯ−２＋および／またはＣＤ１４６＋のうちの一つまたは複数である。例えば、細胞は、１つ以上の前述のマーカーに選択されるおよび／または１つ以上の前記マーカーを発現することが示される。この点において、マーカーを発現することが示された細胞が、具体的に試験される必要はなく、むしろ、これまで富化されたまたは単離された細胞が試験されてもよく、引き続いて使用、単離または富化された細胞もまた、同一のマーカーを発現するものと、妥当に仮定されてもよい。
【００９６】
一例では、前記間葉系前駆細胞は、国際公開第ＷＯ２００４／８５６３０号で定義されたように、血管周囲の間葉系前駆細胞である。
【００９７】
所与のマーカーに関して「陽性」であると見なされる細胞は、用語が蛍光の強度に関連する場合、マーカーが細胞表面上に存在している程度に応じた、低（低（lo）または弱陽性（dim））レベルもしくは高（強陽性（bright、bri））レベルのマーカーどちらかを発現している場合がある。ここで、この用語は、細胞の分取過程で使用される他のマーカーの蛍光強度に関係している。低（または弱陽性もしくは微陽性）および強陽性の差異は、分取されている特定の細胞集団上の使用されるマーカーとの関連で理解されるだろう。所与のマーカーに関して「陰性」であるとみなされる細胞は、必ずしもその細胞に全く存在していないわけではない。この用語は、マーカーが、前記細胞によって相対的に非常に低いレベルで発現されていること、および、検出可能な程度に標識された場合に、マーカーが非常に小さなシグナルを発すること、またはバックグラウンドレベル、例えば、アイソタイプ対照抗体を用いて（suing）検出されたレベル以上には検出不能であること、を意味する。
【００９８】
「強陽性（bright）」という用語は、本明細書で使用される場合、検出可能な程度に標識された場合に、相対的に高いシグナルを発する細胞表面上マーカーを指している。理論に制限されることを望むものではないが、「強陽性」細胞は、試料中の他の細胞よりもいっそう多くの標的マーカータンパク質（例えばＳＴＲＯ−１から識別される抗原）を発現すると提唱されている。例えば、ＳＴＲＯ−１強陽性細胞は、ＦＩＴＣ結合ＳＴＲＯ−１抗体で標識された場合、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）分析によって測定される、非強陽性細胞（ＳＴＲＯ−１微陽性／弱陽性）よりも大きな蛍光シグナルを発する。一例では、「強陽性」細胞は、出発試料中に含まれる最も明るく標識された骨髄単核細胞のうちの少なくとも約０．１％を構成している。他の例では、「強陽性」細胞は、出発試料中に含まれる最も明るく標識された骨髄単核細胞のうちの少なくとも約０．１％、少なくとも約０．５％、少なくとも約１％、少なくとも約１．５％、または少なくとも約２％を構成している。一例では、ＳＴＲＯ−１強陽性細胞は、「バックグラウンド」、すなわちＳＴＲＯ−１−である細胞と比較して、ＳＴＲＯ−１の細胞表面発現が２対数分（2 log magnitude）高い。比較した場合、ＳＴＲＯ−１弱陽性および／またはＳＴＲＯ−１中間細胞は、「バックグラウンド」よりも、ＳＴＲＯ−１の細胞表面発現が２対数未満分高く、典型的には、約１対数以下分高い。
【００９９】
本明細書で使用される場合、「ＴＮＡＰ」という用語は、組織非特異的アルカリホスファターゼの全てのアイソフォームを包含することが意図されている。例えば、その用語には、肝アイソフォーム（ＬＡＰ）、骨アイソフォーム（ＢＡＰ）および腎アイソフォーム（ＫＡＰ）が包含される。一例では、ＴＮＡＰはＢＡＰである。一例では、ＴＮＡＰは、本明細書で使用される場合、ブダペスト条約の規定に基づきＰＴＡ−７２８２の寄託受託番号で２００５年１２月１９日にＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されるＳＴＲＯ−３抗体と結合することができる分子を指す。
【０１００】
さらに、好ましい一例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞はクローン原性のＣＦＵ−Ｆを生じさせることができる。
【０１０１】
かなりの割合のＳＴＲＯ−１＋多能性細胞が、少なくとも２種類の異なる生殖細胞系に分化することができることが好ましい。多能性細胞が分化決定され得る系譜の例としては、限定はされないが、骨前駆細胞；胆管上皮細胞および肝細胞への多分化能を有する肝細胞前駆細胞；乏突起膠細胞および星状膠細胞へと進行するグリア細胞前駆細胞を生じることができる神経限定細胞（neural restricted cell）；ニューロンへと進行する神経前駆細胞；心筋および心筋細胞の前駆細胞、グルコース応答性インスリン分泌膵β細胞株が挙げられる。他の系譜としては、限定はされないが、象牙芽細胞、象牙質産生細胞および軟骨細胞、並びに以下の前駆細胞：網膜色素上皮細胞、線維芽細胞、ケラチノサイト等の皮膚細胞、樹状細胞、毛包細胞、尿細管上皮細胞、平滑筋細胞および骨格筋細胞、精巣前駆細胞、血管内皮細胞、腱、靱帯、軟骨、脂肪細胞、線維芽細胞、骨髄基質、心筋、平滑筋、骨格筋、周皮細胞、血管細胞、上皮細胞、グリア細胞、神経細胞、星状膠細胞および乏突起膠細胞が挙げられる。
【０１０２】
別の例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞は、培養後、造血細胞を生じさせることができない。
【０１０３】
一例では、本細胞は治療を受ける対象から採取され、標準的な技術を用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養され、自己成分または同種異系成分としてその対象に投与するための上清または可溶性因子または増殖した細胞を得るために用いられる。別の例では、樹立されたヒト細胞株のうちの一つまたは複数の細胞が用いられる。本開示の別の有用な例では、非ヒト動物の（または、患者がヒトでない場合は別の種に由来の）細胞が用いられる。
【０１０４】
本開示は、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫細胞（後者は増殖後細胞（expanded cell）とも称される）から得られる、または由来する、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの培養から生成される上清または可溶性因子の使用も企図している。本開示の増殖後細胞は、培養条件（培地中の刺激因子の数および／または種類を含む）、継代数等に応じて、種々様々な表現型を有し得る。ある例では、子孫細胞は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、または約１０回の継代後に、親集団から得られる。もっとも、子孫細胞は、任意の回数の継代後に親集団から得ることができる。
【０１０５】
子孫細胞は任意の適切な培地中で培養することによって得ることができる。「培地」という用語は、細胞培養に関して使用される場合、細胞周辺の環境の成分を含む。培地は固体、液体、気体または相および物質の混合物であってもよい。培地には、液体の増殖培地、および細胞増殖を維持しない液体培地が含まれる。また、培地には、寒天、アガロース、ゼラチンおよびコラーゲン基質等のゼラチン質の培地も含まれる。気体培地の例としては、ペトリ皿または他の固体もしくは半固体の担体上で増殖している細胞が曝される気相が挙げられる。また、「培地」という用語は、それが未だ細胞と接触していない場合であっても、細胞培養での使用を目的としている物質を指す。すなわち、細菌培養用に調製された栄養分に富んだ液体が培地である。水または他の液体と混合されたときに細胞培養に適したものとなる粉末状混合物は、「粉末状培地」と称することができる。
【０１０６】
一例では、本開示の方法に有用な子孫細胞は、ＳＴＲＯ−３抗体で標識した磁気ビーズを用いて、ＴＮＡＰ＋ＳＴＲＯ−１＋細胞を骨髄から単離し、その後、その単離細胞を培養増殖することによって得られる（適切な培養条件の例は、Gronthos et al. Blood 85:929-940, 1995を参照）。
【０１０７】
一例では、そのような増殖後細胞（子孫）（例えば、少なくとも５回継代後）は、ＴＮＡＰ−、ＣＣ９＋、ＨＬＡクラスＩ＋、ＨＬＡクラスＩＩ−、ＣＤ１４−、ＣＤ１９−、ＣＤ３−、ＣＤ１１ａ−ｃ−、ＣＤ３１−、ＣＤ８６−、ＣＤ３４−および／またはＣＤ８０−であり得る。しかし、可能性としては、本明細書に記載の条件とは異なる培養条件下では、種々のマーカーの発現は異なる場合がある。また、これらの表現型の細胞は増殖後の細胞集団において優勢であり得るが、一方で、そのことはこの表現型を有さない細胞の割合が小さいことを意味するものではない（例えば、わずかな比率の増殖後細胞はＣＣ９−であり得る）。一例では、増殖後細胞は異なる細胞型への分化能をまだなお有している。
【０１０８】
一例では、上清もしくは可溶性因子、または細胞それ自体を得るために用いられる消費後（expended）細胞集団が含む細胞は、そのうち少なくとも２５％、例えば少なくとも５０％等がＣＣ９＋である。
【０１０９】
別の例では、上清もしくは可溶性因子、または細胞それ自体を得るために用いられる増殖後細胞集団が含む細胞は、そのうち少なくとも４０％、例えば少なくとも４５％等がＳＴＲＯ−１＋である。
【０１１０】
さらなる例では、増殖後細胞は、ＬＦＡ−３、ＴＨＹ−１、ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、ＰＥＣＡＭ−１、Ｐ−セレクチン、Ｌ−セレクチン、３Ｇ５、ＣＤ４９ａ／ＣＤ４９ｂ／ＣＤ２９、ＣＤ４９ｃ／ＣＤ２９、ＣＤ４９ｄ／ＣＤ２９、ＣＤ９０、ＣＤ２９、ＣＤ１８、ＣＤ６１、インテグリンβ６−１９、トロンボモジュリン、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＳＣＦ、ＰＤＧＦ−Ｒ、ＥＧＦ−Ｒ、ＩＧＦ１−Ｒ、ＮＧＦ−Ｒ、ＦＧＦ−Ｒ、レプチン−Ｒ（ＳＴＲＯ−２はレプチン−Ｒである）、ＲＡＮＫＬ、ＳＴＲＯ−４（ＨＳＰ−９０Ｐ）、ＳＴＲＯ−１強陽性およびＣＤ１４６からなる群から集合的に、もしくは個々に選択される一つもしくは複数のマーカー、またはこれらのマーカーのあらゆる組合せを発現し得る。
【０１１１】
一例では、子孫細胞は、国際公開第ＷＯ２００６／０３２０９２号に定義および／または記載される、多能性増殖後ＳＴＲＯ−１＋多能性細胞子孫（Multipotential Expanded STRO-1+ Multipotential cells Progeny）（ＭＥＭＰ）である。子孫が由来し得るＳＴＲＯ−１＋多能性細胞が富化された集団を調製する方法は、国際公開第ＷＯ０１／０４２６８号および同第ＷＯ２００４／０８５６３０号に記載されている。ｉｎ  ｖｉｔｒｏという文脈では、ＳＴＲＯ−１＋多能性細胞は完全に純粋な調製物として存在することはまれであり、通常は組織特異的分化決定済み（committed）細胞（ＴＳＣＣ）である他の細胞と一緒に存在している。国際公開第ＷＯ０１／０４２６８号は、そのような細胞を骨髄から約０．１％〜９０％の純度レベルで回収することに言及している。子孫が由来するＭＰＣを含む集団は、組織源から直接回収してもよいし、あるいは、ｅｘ  ｖｉｖｏで既に増殖させてある集団であってもよい。
【０１１２】
例えば、子孫は、それらが存在する集団の全細胞の少なくとも約０．１、１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０または９５％を含む、収集され、増殖していない、実質的に精製されたＳＴＲＯ−１＋多能性細胞の集団から得てもよい。このレベルは、例えば、ＴＮＡＰ、ＳＴＲＯ−４（ＨＳＰ−９０Ｐ）、ＳＴＲＯ−１強陽性、３Ｇ５＋、ＶＣＡＭ−１、ＴＨＹ−１、ＣＤ１４６およびＳＴＲＯ−２からなる群から個々に、または集合的に選択される少なくとも１つのマーカーが陽性である細胞を選別することによって達成することができる。
【０１１３】
ＭＥＭＰＳは、ＳＴＲＯ−１強陽性マーカーに対し陽性であり、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）マーカーに対し陰性であるという点で、新たに収集されたＳＴＲＯ−１＋多能性細胞と区別することができる。対照的に、新たに単離されたＳＴＲＯ−１＋多能性細胞は、ＳＴＲＯ−１強陽性およびＡＬＰの両方に対し陽性である。本開示の一例では、投与される細胞のうち少なくとも１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または９５％が、ＳＴＲＯ−１強陽性、ＡＬＰ−の表現型を有する。さらなる一例では、ＭＥＭＰＳはＫｉ６７、ＣＤ４４および／またはＣＤ４９ｃ／ＣＤ２９、ＶＬＡ−３、α３β１マーカーのうちの一つまたは複数に対し陽性である。さらなる例では、ＭＥＭＰはＴＥＲＴ活性を示さず、および／または、ＣＤ１８マーカーに対し陰性である。
【０１１４】
ＳＴＲＯ−１＋細胞出発集団は、国際公開第ＷＯ０１／０４２６８号または同第ＷＯ２００４／０８５６３０号に記載される、あらゆる一つまたは複数の組織型、すなわち、骨髄、歯髄細胞、脂肪組織および皮膚由来、あるいは、より広範に、脂肪組織、歯、歯髄、皮膚、肝臓、腎臓、心臓、網膜、脳、毛包、腸、肺、脾臓、リンパ節、胸腺、膵臓、骨、靱帯、骨髄、腱および骨格筋由来であってもよい。
【０１１５】
本開示に記載の方法を実施する際、任意の所与の細胞表面マーカーを保有している細胞の分別は、例示的な異なる方法によって達成できるが、一部の方法は、結合物質（例えば、抗体またはその抗原結合断片）を関係するマーカーに結合し、高レベル結合、または低レベル結合または結合なしのいずれかである、結合を示す細胞を分別することに依存することは理解されるだろう。最も都合のよい結合物質は、例えばモノクローナル抗体の、抗体または抗体ベースの分子であるか、またはこれらの後者の作用物質の特異性という理由からモノクローナル抗体（例えばその断片に結合する抗原を含むタンパク質）に基づいている。抗体は両方のステップに用いることができるが、他の作用物質を用いてもよく、従って、マーカーを保有している細胞、またはマーカーがない細胞を富化するために、これらのマーカーに対するリガンドを使用してもよい。
【０１１６】
抗体またはリガンドを固体の担体に付着させることで、粗分別が可能となる
例えば、分別技術は、収集される画分の生存能の保持率を最大とする。異なる効率の種々の技術が、比較的粗い分別を行うために使用可能である。使用される具体的な技術は、分別効率、随伴する細胞毒性、実施の容易さおよび速さ、並びに高性能機器および／または技巧の必要性に応じたものとなるだろう。分別の手順には、限定はされないが、抗体被膜磁気ビーズを用いた磁気分別、アフィニティークロマトグラフィーおよび固体の基盤に付着した抗体での「パニング」が含まれ得る。正確な分別を提供する技術としては、限定はされないが、ＦＡＣＳが挙げられる。ＦＡＣＳを実施するための方法は、当業者には明らかであるだろう。
【０１１７】
本明細書に記載のマーカーの各々に対する抗体は市販されており（例えば、ＳＴＲＯ−１に対するモノクローナル抗体はＲ＆Ｄシステム社、米国から購入できる）、ＡＴＣＣまたは他の預託機関から入手可能であり、および／または、当該分野で認知されている技術を用いて作製することができる。
【０１１８】
一例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞を単離するための方法は、例えば、ＳＴＲＯ−１の高レベル発現を認識する磁気細胞分取（ＭＡＣＳ）を利用する固相分取ステップである第一ステップを含む。所望であれば、より高レベルの前駆細胞発現をもたらすために、国際公開第ＷＯ０１／１４２６８号の特許明細書に記載される第二の分取ステップを続けることができる。この第二の分取ステップには、２つ以上のマーカーの使用が含まれ得る。
【０１１９】
ＳＴＲＯ−１＋細胞を得るための方法には、既知の技術を用いた第一富化ステップの前に、細胞の源を収集することが含まれてもよい。従って、組織が外科的に摘出される。源組織を構成する細胞は、その後分別されて、いわゆる単一細胞浮遊液にされる。この分別は、物理的手段および／または酵素的手段によって達成することができる。
【０１２０】
適切なＳＴＲＯ−１＋細胞集団を得た後、細胞を任意の適切な手段で培養または増殖させてＭＥＭＰを得ることができる。
【０１２１】
一例では、前記細胞は治療を受ける対象から採取され、標準的な技術を用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養され、その対象に自己または同種異系間の組成物として投与することを目的とした上清または可溶性因子または増殖後細胞を得るために用いられる。別の例では、樹立されたヒト細胞株のうちの一つまたは複数の細胞が、上清または可溶性因子を得るために使用される。本開示の別の有用な例では、非ヒト動物（または、患者がヒトでない場合は別の種に由来）の細胞が、上清または可溶性因子を得るために使用される。
【０１２２】
本開示の方法および使用は、あらゆる非ヒト動物種由来の細胞、例えば、限定はされないが、非ヒト霊長類細胞、有蹄動物、イヌ、ネコ、ウサギ、げっ歯類、トリ、および魚の細胞を用いて実施できる。本開示の方法を実施することができる霊長類細胞としては、限定はされないが、チンパンジー、ヒヒ、カニクイザル、および他のあらゆる新世界ザルまたは旧世界ザルの細胞が挙げられる。本開示を実施することができる有蹄動物細胞としては、限定はされないが、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、水牛およびバイソンの細胞が挙げられる。本開示を実施することができるげっ歯類細胞としては、限定はされないが、マウス、ラット、モルモット、ハムスターおよびスナネズミの細胞が挙げられる。本開示を実施することができるウサギ種の例としては、家畜化されたウサギ、ノウサギ（jack rabbit、hare）、ワタオウサギ、カンジキウサギ、およびナキウサギが挙げられる。ニワトリ（Gallus gallus）は、本開示の方法を実施することができるトリ種の一例である。
【０１２３】
一例では、細胞はヒト細胞である。
【０１２４】
本開示の方法に有用な細胞は、使用前、または上清もしくは可溶性因子を得る前に、保存することができる。真核細胞、具体的には哺乳類細胞を保存および保管するための方法およびプロトコールは、当該技術分野において周知である（例えば、Pollard, J. W. and Walker, J. M. (1997) Basic Cell Culture Protocols, Second Edition, Humana Press, Totowa, N.J.; Freshney, R. I. (2000) Culture of Animal Cells, Fourth Edition, Wiley-Liss, Hoboken, N.J.を参照）。間葉系幹／前駆細胞、またはその子孫等の単離された幹細胞の生物活性を維持するための方法は、本開示と一緒に利用することができる。一例では、前記細胞は凍結保存を用いて維持および保管される。
【０１２５】
遺伝子改変細胞
一例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫細胞は、遺伝子改変されて、例えば、関心のタンパク質を発現および／または分泌する。例えば、細胞は、代謝症候群または肥満の治療に有用なタンパク質、例えば、グルカゴン類似タンパク質−１（ＧＬＰ−１）またはペプチドＹＹ（ＰＹＹ）またはその活性断片（例えばＰＹＹ［３−３６］）、エクステンディン−４すなわちエクセナチドを発現するように設計される。
【０１２６】
細胞を遺伝子改変する方法は、当業者には明らかであるだろう。例えば、細胞で発現されるべき核酸は、細胞での発現を誘導するためのプロモーターと機能的に連結される。例えば、核酸は、例えば、ウイルスプロモーター、例えば、ＣＭＶプロモーター（例えば、ＣＭＶ−ＩＥプロモーター）またはＳＶ−４０プロモーター等の、対象の種々の細胞中で機能できるプロモーターに連結される。さらなる適切なプロモーターは当該技術分野において周知であり、本開示の本例に準用すると解されるものとする。
【０１２７】
一例では、核酸は発現コンストラクトの形態で提供される。本明細書で使用される場合、「発現コンストラクト」という用語は、細胞中で機能的に連結された核酸（例えば、レポーター遺伝子および／または対抗選択可能な（counter-selectable）レポーター遺伝子）を発現させる能力を有する核酸を指す。本開示の文脈においては、発現コンストラクトは、プラスミド、バクテリオファージ、ファージミド、コスミド、ウイルスのサブゲノム断片もしくはゲノム断片、または異種ＤＮＡを発現可能な形態で維持および／または複製できる他の核酸を含むか、またはそれら自身であってもよいことは理解されるべきである。
【０１２８】
本開示の方法を実施するための適切な発現コンストラクトを構築するための方法は、当業者には明らかであり、例えば、Ausubel et al (In: Current Protocols in Molecular Biology. Wiley Interscience, ISBN 047 150338, 1987)または Sambrook et al (In: Molecular Cloning: Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, New York, Third Edition 2001）に記載されている。例えば、発現コンストラクトの各成分は、例えばＰＣＲを用いて適切な鋳型核酸から増幅され、その後、例えばプラスミドまたはファージミド等の適切な発現コンストラクト中にクローニングされる。
【０１２９】
そのような発現コンストラクトに適切なベクターは、当該技術分野において周知であり、および／または、本明細書に記載されている。例えば、哺乳類細胞における、本発明の方法に適切な発現ベクターは、例えば、ライフテクノロジーズ社より提供されるｐｃＤＮＡベクター一式のベクター、ｐＣＩベクター一式（プロメガ社）のベクター、ｐＣＭＶベクター一式（クロンテック社）のベクター、ｐＭベクター（クロンテック社）、ｐＳＩベクター（プロメガ社）、ＶＰ１６ベクター（クロンテック社）またはｐｃＤＮＡベクター一式（インビトロジェン社）のベクターである。
【０１３０】
当業者は、さらなるベクター、および例えば、ライフテクノロジー社、クロンテック社またはプロメガ社等の、そのようなベクターの供給源は承知しているだろう。
【０１３１】
単離された核酸分子またはそれを含む遺伝子コンストラクトを発現のために細胞に導入する手段は、当業者に周知である。所与の生物体に用いられる技術は、既知の優れた技術に依存する。組換えＤＮＡを細胞に導入するための手段としては、マイクロインジェクション、ＤＥＡＥ−デキストランによって媒介されるトランスフェクション、例えばリポフェクタミン（ギブコ社、米国メリーランド州）および／またはセルフェクチン（ギブコ社、米国メリーランド州）による、リポソームによって媒介されるトランスフェクション、ＰＥＧによって媒介されるＤＮＡの取り込み、エレクトロポレーション、並びに、例えばＤＮＡを被膜したタングステンまたは金粒子（アグラセタス社（Agracetus Inc.）、米国ウィスコンシン州）による微小粒子照射（microparticle bombardment）が特に挙げられる。
【０１３２】
あるいは、本開示の発現コンストラクトはウイルスベクターである。適切なウイルスベクターは当該技術分野において周知であり、市販されている。核酸の運搬および宿主細胞ゲノムへの核酸の組込みを目的とした従来のウイルスベースの系としては、例えば、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターが挙げられる。あるいは、アデノウイルスベクターが、エピソームのままの核酸を宿主細胞に導入するのに有用である。ウイルスベクターは、標的細胞および標的組織における遺伝子導入の、効率的で且つ用途の広い方法である。さらに、高い導入効率が、多くの異なる細胞型および標的組織で確認されている。
【０１３３】
例えば、レトロウイルスベクターは、通常、最大６〜１０ｋｂの外来配列パッケージング容量を有する、シス作動性長末端反復配列（ＬＴＲ）を含む。最小のシス作動性ＬＴＲであってもベクターの複製およびパッケージングには十分であり、その後、発現コンストラクトを標的細胞に組み込むのに使用され、長期発現を提供する。広く使用されているレトロウイルスベクターとしては、マウス白血病ウイルス（ＭｕＬＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳｒＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、およびその組合せをベースとするものが含まれる（例えば、Buchscher et al., J Virol. 56:2731-2739 (1992); Johann et al, J. Virol. 65:1635-1640 (1992); Sommerfelt et al, Virol. 76:58-59 (1990); Wilson et al, J. Virol. 63:274-2318 (1989); Miller et al., J. Virol. 65:2220-2224 (1991); PCT/US94/05700; Miller and Rosman BioTechniques 7:980-990, 1989; Miller, A. D. Human Gene Therapy 7:5-14, 1990; Scarpa et al Virology 75:849-852, 1991; Burns et al. Proc. Natl. Acad. Sci USA 90:8033-8037, 1993を参照）。
【０１３４】
また、様々なアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター系が核酸運搬用に開発されている。ＡＡＶベクターは、当該技術分野において周知の技術を用いて容易に構築することができる。例えば、米国特許第５，１７３，４１４号および同第５，１３９，９４１号；国際公開第ＷＯ９２／０１０７０号および同第ＷＯ９３／０３７６９号；Lebkowski et al. Molec. Cell. Biol. 5:3988-3996, 1988; Vincent et al. (1990) Vaccines 90 (Cold Spring Harbor Laboratory Press);Carter Current Opinion in Biotechnology 5:533-539, 1992; Muzyczka. Current Topics in Microbiol, and Immunol. 755:97-129, 1992; Kotin, Human Gene Therapy 5:793-801, 1994; Shelling and Smith Gene Therapy 7:165-169, 1994;並びにZhou et al. J Exp. Med. 779:1867-1875, 1994を参照されたい。
【０１３５】
本開示の発現コンストラクトを運搬するのに有用なさらなるウイルスベクターとしては、例えば、ワクシニアウイルスおよびトリポックスウイルス等の痘ファミリー（pox family）のウイルス由来のもの、またはアルファウイルス属または複合（conjugate）ウイルスベクター（例えば、Fisher-Hoch et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA 56:317-321, 1989に記載のもの）が挙げられる。
【０１３６】
細胞および可溶性因子の治療／予防における有用性試験
細胞または可溶性因子の、代謝症候群もしくは肥満を治療するまたは予防するまたはその開始もしくは進行を遅延させる能力を測定する方法は、当業者には明らかであるだろう。
【０１３７】
例えば、細胞または可溶性因子（例えば因子または単一因子の混合物または因子の画分（例えばアフィニティー精製またはクロマトグラフィーに由来する））は、代謝症候群および／または肥満のモデルに投与され、１つまたは複数の症状におよぼす影響が評価される。
【０１３８】
代謝症候群の例示的なモデルには、高脂肪食摂取ＫＫ／Ｔａマウス（Akagiri et al., J Clin Biochem Nutr. 42: 150-157, 2008）、Ｃ５７Ｂｌ／６ＮＣｒｌ−Ｌｅｐｒｄｂ−ｌｂ／Ｃｒｌマウス（Charles River Laboratories）、高フルクトース食摂取げっ歯類（Le and Tappy, Current Opinion in Clinical Nutrition and Metabolic Care, 9: 469^175, 2006）、高スクロース食摂取ラット（Coelho et al., Regulatory Peptides, 162: 61-67, 2010）、高脂肪食げっ歯類、並びに高脂肪および高炭水化物食摂取げっ歯類（例えばPanchal and Brown, Journal of Biomedicine and Biotechnology(2011)に概説されている）などが挙げられる。
【０１３９】
肥満の例示的な遺伝モデルには、ｄｂlｄｂマウス、ｏｂｉｏｂマウス、ズッカー糖尿病肥満ラットおよび大塚ロングエバンス徳島肥満ラットなどが挙げられる。
【０１４０】
肥満の例示的な誘導モデルには、高脂肪食げっ歯類ならびに／または高脂肪および高炭水化物食摂取げっ歯類などが挙げられる。
【０１４１】
一実施例においては、代謝症候群及び／又は肥満モデルは、高脂肪食非ヒト霊長類、例えば、カニクイザルである。
【０１４２】
上記のことから当業者には明らかであるが、本開示はまた、代謝症候群もしくは肥満の治療、防止もしくは遅延のための細胞もしくは可溶性因子を同定または単離するための方法を提供し、方法は、
（ｉ）代謝症候群および／または肥満を患っている試験対象に細胞および／または可溶性因子を投与すること、ならびにその対象における代謝症候群の症状および／または体重を評価すること；
（ｉｉ）（ｉ）での対象の代謝症候群の症状および／または体重レベルを、細胞または可溶性因子を投与されていない、代謝症候群および／または肥満を患っている対照となる対象の代謝症候群の症状および／または体重レベルと比較すること、
を含み、
ここで、対照となる対象と比較して、試験対象における症状の改善および／または体重の減少は、細胞または可溶性因子が代謝症候群および／または肥満を治療することを示唆する。
【０１４３】
細胞は、本明細書に記載のいずれかの例に従う、いずれかの細胞であってよい。
【０１４４】
例示的な症状は、本明細書に記載されている。
【０１４５】
細胞性組成物
本開示の一例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫細胞は、組成物の形態で投与される。一例では、かかる組成物は薬剤的に許容できる担体および／または賦形剤を含む。
【０１４６】
「担体」および「賦形剤」という用語は、貯蔵、投与、および／または活性化合物の生物活性を促進するために当該技術分野において従来用いられる組成物を指す（例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16th Ed., Mac Publishing Company (1980)を参照）。担体は活性化合物のあらゆる望ましくない副作用を減らすこともできる。適切な担体は、例えば、安定であり、例えば、担体中の他の成分と反応できない。一例では、担体は、治療に使用された投与量および濃度において、重大な局所的または全身的な有害作用をレシピエントにもたらさない。
【０１４７】
本開示のための適切な担体には、従来的に使用されるものが含まれ、例えば、水、食塩水、水性デキストロース、ラクトース、リンゲル液、緩衝液、ヒアルロナンおよびグリコールは、特に（等張である場合）水剤用に、例示的な液体担体である。適切な医薬担体および賦形剤としては、デンプン、セルロース、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、塩化ナトリウム、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール等が挙げられる。
【０１４８】
別の例では、担体は、例えば、その中で細胞が生育または懸濁される、培地組成物である。例えば、かかる培地組成物は、それを投与された対象においていかなる有害作用も誘導しない。
【０１４９】
例示的な担体および賦形剤は、細胞の生存能、ならびに／または代謝症候群および／もしくは肥満を減少、防止もしくは遅延させる細胞の能力に悪影響を及ぼさない。
【０１５０】
一例では、担体または賦形剤によって緩衝作用（buffering activity）がもたらされ、それにより細胞および／または可溶性因子が適切なｐＨに維持されることで生物活性が発現される。例えば、その担体または賦形剤はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）である。ＰＢＳは、魅力的な担体または賦形剤であるが、その理由は、血流中または組織もしくは組織の周辺もしくは隣接領域中への、例えば、注射による直接的な適用を目的として、本開示の組成物が液体として製造されるような場合に、ＰＢＳが細胞および因子と最小限にしか相互作用せず、細胞および因子の迅速な放出を可能とするためである。
【０１５１】
ＳＴＰｖＯ−１＋細胞および／またはその子孫細胞は、レシピエント適合性であり、レシピエントに対し有害ではない産物に分解される足場に組み込む、または埋め込むこともできる。これらの足場によって、レシピエントである対象に移植されるべき細胞に、支持および保護がもたらされる。天然および／または合成の生分解性足場は、そのような足場の例である。
【０１５２】
種々の異なる足場が、本開示の方法の実施において成功裏に使用され得る。好ましい足場としては、限定はされないが、生物的で、分解可能な足場が挙げられる。天然の生分解性足場としては、コラーゲン、フィブロネクチン、およびラミニン足場が挙げられる。細胞移植の足場のための適切な合成材料は、広範な細胞成長および細胞機能を支持可能なものであるべきである。そのような足場は再吸収可能なものであってもよい。適切な足場としては、例えば、Vacanti, et al. J. Ped. Surg.23:3-9 1988; Cima, et al. Biotechnol. Bioeng. 35:145 1991; Vacanti, et al. Plast. Reconstr. Surg. 88:753-9 1991に記載されるような、ポリグリコール酸の足場；またはポリ酸無水物、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸等の合成高分子が挙げられる。
【０１５３】
別の例では、本細胞はゲル状足場（アップジョン社のゼルフォーム等）に投与され得る。
【０１５４】
本明細書に記載の方法に有用な本細胞性組成物は、単独で、または他の細胞との混合物として投与されてもよい。本開示の組成物と併せて投与され得る細胞としては、限定はされないが、他の多分化能もしくは多能性を有する細胞もしくは幹細胞、または骨髄細胞が挙げられる。異なる型の細胞は、本開示の組成物と、投与の直前または少し前に混合することができ、あるいは、それらを投与前にある一定期間一緒に共培養してもよい。
【０１５５】
一例では、本組成物は、有効量または治療的もしくは予防的に有効量の細胞を含む。例えば、本組成物は、約１×１０５ＳＴＲＯ−１＋細胞／ｋｇ〜約１×１０７ＳＴＲＯ−１＋細胞／ｋｇまたは約１×１０６ＳＴＲＯ−１＋細胞／ｋｇ〜約５×１０６ＳＴＲＯ−１＋細胞／ｋｇを含む。投与されるべき細胞の正確な量は、種々の因子、例えば、患者の年齢、体重、および性別、並びに代謝症候群および／または肥満の範囲および重症度に応じて決定される。
【０１５６】
一例では、低用量の細胞が対象に投与される。例示的な投与量は、ｋｇあたり約０．１×１０４と０．５×１０６個の間の細胞、例えば、ｋｇあたり約０．５×１０５と０．５×１０６個の間の細胞といった、ｋｇあたり約０．１×１０５と０．５×１０６個の間の細胞、例えば、ｋｇあたり約０．１×１０６と０．５×１０６個の間の細胞、ｋｇあたり約０．２×１０６または０．３×１０６または０．４×１０６個の細胞を含む。
【０１５７】
一部の例では、細胞は、細胞が対象の血行路に出て行くことを拒むが、細胞から分泌された因子が血行路に進入することは許すチャンバー内に含まれる。このように、本細胞が対象の血行路に因子を分泌することを可能とさせることにより、可溶性因子は対象に投与され得る。そのようなチャンバーは、対象におけるある部位に均等に埋め込むことで可溶性因子の局所レベルを増加させることができ、例えば、膵臓の中または近くに埋め込まれる。
【０１５８】
本開示の一部の例では、細胞性組成物を用いた治療の開始前に患者を免疫抑制することは、必ずしも必要であったり、望まれたりするわけではない。従って、ＳＴＲＯ−１＋細胞またはその子孫の、同種異系間、さらには異種間での移植であっても、場合によっては許容されることがある。
【０１５９】
しかし、他の場合においては、細胞治療開始前に、患者を薬理学的に免疫抑制することおよび／または細胞組成物に対する対象の免疫応答を減少させることが望ましいか、または適切であり得る。これは、全身的または局所的な免疫抑制剤の使用によって達成することができ、あるいは封入デバイスにて本細胞を送達することによって達成することもできる。本細胞は、細胞および治療因子に必要とされる栄養分および酸素を透過させるが、免疫液性因子および細胞は透過させないカプセルに封入してもよい。例えば、カプセルの材料は、アレルギーを起こしにくいもので、標的組織内に容易に且つ安定して位置し、移植された構造体にさらなる保護を与える。移植細胞に対する免疫応答を低減または除去するためのこれらおよび他の手段は、当該技術分野において周知である。代わりに、本細胞を、それらの免疫原性を低減させるために、遺伝的に改変してもよい。
【０１６０】
可溶性因子
一例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞由来の、および／もしくは子孫細胞由来の上清または可溶性因子は、例えば、適切な担体および／または賦形剤を含む組成物の形態で、投与される。一例では、担体または賦形剤は可溶性因子または上清の生物学的効果に悪影響を及ぼさない。
【０１６１】
一例では、本組成物は、可溶性因子または上清の成分、例えば、プロテアーゼ阻害剤を安定化させるための組成物を含む。一例では、プロテアーゼ阻害剤は、対象に対し有害作用を有するのに十分な量では含まれない。
【０１６２】
ＳＴＲＯ−１＋細胞由来の、および／もしくは子孫細胞由来の上清または可溶性因子を含む組成物は、例えば、培地中で、または安定な担体もしくは緩衝溶液、例えば、リン酸緩衝食塩水中で、適切な液体懸濁液として調製してもよい。適切な担体は本明細書の上記の通りである。別の例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞由来の、および／または子孫細胞由来の上清または可溶性因子を含む懸濁液は、注射用の油状懸濁液である。適切な親油性溶媒またはビヒクルとしては、ゴマ油等の脂肪油；またはオレイン酸エチルもしくはトリグリセリド等の合成脂肪酸エステル；またはリポソームが挙げられる。注射用に使用されるべき懸濁液は、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストラン等の、懸濁液の粘度を増加させる物質を含有してもよい。所望により懸濁液は、化合物の溶解性を増加させ、高濃度での溶液の調製を可能とさせる、適切な安定剤または作用物質を含んでもよい。
【０１６３】
無菌の注射剤は、必要とされる量の上清または可溶性因子を、上記成分のうちの一つまたは組合せと一緒に、適切な溶媒に組み入れ、必要に応じて、その後フィルター滅菌を行うことによって、調製できる。
【０１６４】
通常、分散液は、上清または可溶性因子を、基本（basic）分散媒および上に列挙されたものから必要な他の成分を含有する無菌のビヒクルに組み入れることによって調製される。無菌注射剤調製用の無菌散剤の場合、例示的な調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、それによって、活性成分およびその予め細菌濾過した溶液由来の任意のさらなる所望の成分の粉末が得られる。本開示の別の例によれば、上清または可溶性因子は、その溶解性を増強する一つまたは複数のさらなる化合物と共に製剤化され得る。
【０１６５】
担体または賦形剤の他の例は、例えば、Hardman, et al. (2001) Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N. Y.; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, N. Y.; Avis, et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N. Y.に記載されている。
【０１６６】
治療組成物は、通常、製造および貯蔵の条件下では無菌且つ安定であるべきである。本組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または他の規則構造として製剤化することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール等）、および適切なその混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。例えば、レシチン等の被膜の使用によって、分散の場合に必要とされる粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、適切な流動性を維持することができる。いくつかの場合、本組成物中に等張剤、例えば、糖類、多価アルコール、例えばマンニトール、ソルビトール等、または塩化ナトリウムを含む。注射用組成物の持続的吸収は、本組成物中に、吸収を遅延させる作用物質、例えば、一ステアリン酸塩およびゼラチンを含むことによってもたらされ得る。さらに、可溶性因子を、徐放性製剤、例えば徐放性ポリマーを含む組成物中に、投与してもよい。例えば、移植片およびマイクロカプセル化した送達系を含む徐放性製剤等、活性化合物は化合物を急速な放出から保護する担体と一緒に調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸およびポリ乳酸ポリグリコール酸コポリマー（ＰＬＧ）等の、生分解性、生体適合性の高分子を使用することができる。そのような製剤を調製するための多くの方法が、特許されているか、または当業者に一般的に知られている。
【０１６７】
上清または可溶性因子は、例えば、可溶性因子を除放させるために、適切な基質と併せて投与してもよい。
【０１６８】
組成物のさらなる構成要素
ＳＴＲＯ−１＋細胞由来の上清または可溶性因子、ＳＴＲＯ−１＋細胞またはその子孫は、他の有益な薬物または生化学的分子（増殖因子、栄養因子）とともに投与されてもよい。他の薬剤とともに投与されるとき、それらは、単一の薬剤的組成物で、または独立した薬剤的組成物で、同時にまたは連続して、他の薬剤とともに（他の薬剤の投与の前後に）投与されてもよい。同時投与されてもよい生理活性因子には、反アポトーシス剤（例えばＥＰＯ、ＥＰＯミメチボディ、ＴＰＯ、ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−ＩＩ、ＨＧＦ、カスパーゼ阻害剤）；抗炎症薬（例えばｐ３８ＭＡＰＫ阻害剤、ＴＧＦベータ阻害剤、スタチン、ＩＬ−６およびＩＬ−１阻害剤、ぺミロラスト、トラニラスト、レミケード、シロリムスおよびＮＳＡＩＤ（非ステロイド性の抗炎症薬物；例えば、テポキサリン、トルメン、スプロフェン）；免疫抑制／免疫修飾剤（例えば、シクロスポリン、タクロニムスのようなカルシニューリン阻害剤；ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、シロリムス、エベロリムス）；抗増殖剤（例えばアザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル）；コルチコステロイド（例えばプレドニゾン、ヒドロコルチゾン）；コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン）；モノクローナル抗ＩＬ−２Ｒアルファ受容体抗体（例えば、バシリキシマブ、ダクリズマブ）といった抗体、（例えば、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）；抗リンパ球グロブリン（ＡＬＧ）；モノクローナル抗Ｔ細胞抗体ＯＫＴ３）といったポリクローナル抗Ｔ細胞抗体；反血栓形成剤（例えば、ヘパリン、ヘパリン誘導体、ウロキナーゼ、ＰＰａｃｋ（デキストロフェニルアラニンプロリンアルギニンクロロメチルケトン）、抗トロンビン化合物、血小板受容体拮抗薬、抗トロンビン抗体、抗血小板受容体抗体、アスピリン、ジピリダモール、プロタミン、ヒルジン、プロスタグランジン阻害剤および血小板阻害薬）；および抗酸化剤（例えば、プロブコール、ビタミＡ、アスコルビン酸、トコフェノール、コエンザイムＱ-１０、グルタチオン、Ｌ−システイン、Ｎ−アセチルシステイン）とともに局所麻酔薬、などが挙げられる。
【０１６９】
一例では、本明細書においていずれかの例に記載されているように、組成物は、代謝症候群および／もしくは肥満の治療または予防のためのさらなる因子、本明細書に記載されているように、例えばスタチンを含む。
【０１７０】
代わりに、またはさらに、本明細書に記載のいずれかの例による、細胞、分泌因子および／または組成物は、代謝症候群および／または肥満の既知の治療と組み合わされる。
【０１７１】
一例では、本明細書に記載のいずれかの例による薬剤的組成物は、代謝症候群および／または肥満を治療するのに使用される化合物を含む。代わりに、本明細書に記載の開示のいずれかの例による治療／予防の方法は、代謝症候群および／または肥満を治療するのに使用される化合物を投与することを、さらにふくむ。例示的な化合物が本明細書に記載され、本開示の例に準用されると解されるものとする。
【０１７２】
他の例では、本明細書に記載のいずれかの例による組成物は、前駆体細胞の血管細胞への分化を誘導するまたは促進する因子を、さらに含む。例示的な因子には、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、血小板由来の成長因子（ＰＤＧＦ；例えば、ＰＤＧＦ−ＢＢ）、およびＦＧＦが挙げられる。
【０１７３】
他の例では、本明細書に記載のいずれかの例による組成物は、組織特異的分化決定済み細胞（ＴＳＣＣ）、をさらに含む。この態様では、国際特許出願番号第ＰＣＴ／ＡＵ２００５／００１４４５号が、ＴＳＣＣおよびＳＴＲＯ−１＋細胞の投与が、ＴＳＣＣの増殖の促進を導くことができることを示している。一例では、ＴＳＣＣは、血管細胞である。組成物の対象への投与は、血管系産生の増加、例えば、罹患組織へ送達される栄養物の増加の誘導、を導くこともある。
【０１７４】
医療デバイス
本開示はまた、本明細書に記載のいずれかの例による方法において使用される医療デバイスを提供する。例えば、本開示は、本明細書に記載のいずれかの例による、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはそれらの子孫細胞および／もしくはそれからの可溶性因子ならびに／または組成物を含む、注射器もしくはカテーテルまたは他の適切な送達デバイスを提供する。注射器またはカテーテルは、本明細書に記載のいずれかの例による方法における使用説明書と同梱されていてもよい。
【０１７５】
他の例では、本開示は、本明細書に記載のあらゆる例にように、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫細胞および／もしくはその可溶性因子ならびに／または組成物を含む移植片提供する。移植片は、本明細書に記載のいずれかの例による方法における使用説明書と同梱されてもよい。適切な移植片は、例えば、本明細書で上述の足場、ならびにＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫細胞および／またはその可溶性因子とともに形成されてもよい。
【０１７６】
投与様式
ＳＴＲＯ−１＋細胞由来の上清もしくは可溶性因子、ＳＴＲＯ−１＋細胞またはその子孫は、外科的に移植、注射、送達（例えば、カテーテルまたは注射器を手段として）されてもよいし、あるいは、修復または増強を必要としている部位、例えば脂肪体に直接的または間接的に投与されてもよい。
【０１７７】
一例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞由来の上清または可溶性因子、ＳＴＲＯ−１＋細胞またはその子孫は、対象の血流に送達される。例えば、ＳＴＲＯ−１＋細胞由来の上清または可溶性因子、ＳＴＲＯ−１＋細胞またはその子孫は非経口的に送達される。非経口投与の経路の例としては、限定はされないが、腹腔内、脳室内（intraventricular, intracerebroventricular）、くも膜下腔内、または静脈内が挙げられる。一例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞由来の上清または可溶性因子、ＳＴＲＯ−１＋細胞またはその子孫は、動脈内、大動脈中、心臓の心房もしくは心室中、または血管中に、例えば、静脈内に送達される。
【０１７８】
心臓の心房または心室への細胞送達の場合、肺への急速な細胞送達によって生じ得る合併症を避けるため、細胞は左心房または左心室に投与されることがある。
【０１７９】
一例では、ＳＴＲＯ−１＋由来の上清または可溶性因子、ＳＴＲＯ−１＋細胞またはその子孫は、静脈内に送達される。
【０１８０】
一例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞由来の上清または可溶性因子、ＳＴＲＯ−１＋細胞またはその子孫は、例えば、注射器を用いて、またはカテーテルもしくは中心静脈カテーテル（central line）を通じて、送達部位に注入される。
【０１８１】
治療製剤の投与計画の選択は、いくつかの因子、例えば、血清または組織での実体（entity）の代謝回転速度、症状レベル、および実体（entity）の免疫原性に依存する。一例では、投与計画は、許容できる副作用レベルを一貫させて、患者に送達される治療化合物の量を最大とする。従って、送達される製剤の量は、特定の実体（entity）および治療されている状態の重症度に部分的に依存する。
【０１８２】
一例では、ＳＴＲＯ−１＋細胞由来の上清または可溶性因子、ＳＴＲＯ−１＋細胞またはその子孫は、単回急速投与量として送達される。あるいは、ＳＴＲＯ−１＋細胞由来の上清または可溶性因子、ＳＴＲＯ−１＋細胞またはその子孫は、持続点滴によって、または、例えば、１日、１週間の間隔の、もしくは週に１〜７回の投与によって、投与される。例示的な投与プロトコールは、重大な望ましくない副作用を回避する、最大の投与量または投与頻度を含むものである。週当たりの合計投与量は、使用される化合物／細胞のタイプおよび活性に応じて決定される。適切な投与量の決定は、臨床医によって、例えば、当該技術分野において、治療に影響を与えると知られている、もしくは疑われている、または治療に影響を与えると予想されるパラメーターまたは因子を用いて、行われる。通常、投与はやや適量未満の量から開始され、その後、あらゆる負の副作用と比較して所望の、または最適の効果が達成されるまで、小さな増加量で増加される。
【０１８３】
本発明人は、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫ならびに／またはそれに由来する可溶性因子によって提供される治療的有用性が、対象において少なくとも４週間、認められることを示した。したがって一部の例では、細胞は毎週、２週間ごとに、３週間に１回、または４週間に１回投与される。
【０１８４】
代謝症候群および／もしくは肥満の治療またはその進行を遅延させることを目的とした本開示の例に従って、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫細胞ならびに／またはそれに由来する可溶性因子が、例えばこの技術分野で標準的な既知のまたは本明細書に記載の方法を用いて、障害の診断の後に投与される。
【０１８５】
代謝症候群および／もしくは肥満を予防するまたはその開始を遅延させることを目的としたそれらの例について、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫細胞ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を、障害の臨床診断に先立って投与することができる。
【０１８６】
本開示は、以下の非限定的な実施例を含む。
【実施例】
【０１８７】
実施例１：ＳＴＲＯ−３＋細胞の選択によるＭＰＣの免疫選択
骨髄（ＢＭ）を、健康な正常成人の志願者（２０〜３５歳）から採取する。簡潔には、４０ｍｌのＢＭを、後腸骨稜から、リチウム−ヘパリン抗凝固剤含有チューブに吸引する。
【０１８８】
ＢＭＭＮＣを、前述（Zannettino, A.C. et al. (1998) Blood92: 2613-2628）の通りに、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（商標）（ニコメッドファーマ（Nycomed Pharma）、ノルウェイ、オスロ）を用いて、密度勾配分別によって調製する。４００×ｇ、４℃、３０分間の遠心分離後、淡黄色の層をホールピペットで除去し、５％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ、ＣＳＬリミテッド社（CSL Limited）、オーストラリア、ヴィクトリア）を含有するハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ；ライフテクノロジー社（Life Technologies）、メリーランド州ゲイサーズバーグ）から成る「ＨＨＦ」中で３回洗浄する。
【０１８９】
続いて、ＳＴＲＯ−３＋（またはＴＮＡＰ＋）細胞を、前述（Gronthos et al. (2003) Journal of Cell Science 116: 1827-1835; Gronthos, S. and Simmons, P.J. (1995) Blood 85: 929-940）の通りに、磁気活性化細胞分取で単離した。簡潔には、およそ１〜３×１０８個のＢＭＭＮＣを、ＨＨＦ中１０％（ｖ／ｖ）正常ウサギ血清から成るブロッキング緩衝液中で、２０分間、氷上でインキュベートする。細胞を、ブロッキング緩衝液中１０μｇ／ｍｌのＳＴＲＯ−３ｍＡｂ溶液２００μｌと一緒に、氷上で１時間インキュベートする。続いて、細胞を４００×ｇでの遠心分離によってＨＨＦ中で２回洗浄する。ＨＨＦ緩衝液中１／５０希釈のヤギ抗マウスγ−ビオチン（サザンバイオテクノロジー社（Southern Biotechnology Associates）、英国バーミンガム）を加え、細胞を氷上で１時間インキュベートする。細胞を、上記と同様に、ＭＡＣＳ緩衝液（１％ＢＳＡ、５ｍＭ  ＥＤＴＡおよび０．０１％アジ化ナトリウムを補充したＣａ２＋およびＭｎ２＋を含まないＰＢＳ）中で２回洗浄し、最終体積０．９ｍｌのＭＡＣＳ緩衝液中に再懸濁する。
【０１９０】
１００μｌのストレプトアビジンミクロビーズ（ミルテニーバイオテック社（Miltenyi Biotec）；ドイツ、ベルギッシュグラートバハ）を細胞懸濁液に添加し、氷上で１５分間インキュベートする。細胞懸濁液を２回洗浄し、０．５ｍｌのＭＡＣＳ緩衝液に再懸濁した後、ミニＭＡＣＳカラム（MS Columns、ミルテニーバイオテック社（Miltenyi Biotec））上に充填し、０．５ｍｌのＭＡＣＳ緩衝液で３回洗浄して、ＳＴＲＯ−３ｍＡｂ（２００５年１２月１９日にアメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）にＰＴＡ−７２８２の受託番号で寄託；国際公開第ＷＯ２００６／１０８２２９号を参照）と結合しなかった細胞を回収する。さらに１ｍｌのＭＡＣＳ緩衝液を加えた後、カラムを磁石から取り除き、ＴＮＡＰ＋細胞を陽圧で単離した。各画分からの細胞の一定分量をストレプトアビジン−ＦＩＴＣで染色し、純度をフローサイトメトリーで評価することができる。
【０１９１】
実施例２：ＳＴＲＯ−３ｍＡｂによって選択された細胞はＳＴＲＯ−１強陽性細胞である。
ＳＴＲＯ−３ｍＡｂを、ＳＴＲＯ−１強陽性細胞を単離する単一試薬として用いることの可能性を確認する目的の実験を設計した。
【０１９２】
ＳＴＲＯ−３（ＩｇＧ１）はＳＴＲＯ−１（ＩｇＭ）とは異なるアイソタイプであることを考慮し、ＳＴＲＯ−３のクローン原性ＣＦＵ−Ｆを同定する能力を、ＭＡＣＳ方法を用いて単離されたＳＴＲＯ−１−のその共発現に基づく２色ＦＡＣＳ分析によって評価した（図１）。ドットプロットヒストグラムは、リストモードデータとして収集された５×１０４個の事象を表わしている。垂直線および水平線は、同条件下で処理したアイソタイプ対応対照抗体、１Ｂ５（ＩｇＧ）および１Ａ６．１２（ＩｇＭ）で得られた平均蛍光の１．０％未満の反応性レベルに設定された。結果は、ＳＴＲＯ−１強陽性細胞のうち微量の集団がＴＮＡＰを共発現したが（右上象限）、残りのＳＴＲＯ−１＋細胞はＳＴＲＯ−３ｍＡｂと反応しなかったことを示している。その後、４つの象限全てからＦＡＣＳで単離された細胞をＣＦＵ−Ｆの発生率に対して評価した（表１）。
表１：細胞表面マーカーであるＳＴＲＯ−１およびＴＮＡＰの共発現に基づく２重染色ＦＡＣＳ分析によるヒト骨髄細胞の富化（図１参照）。ＦＡＣＳで分取した細胞を、２０％ＦＣＳを補充したαＭＥＭ中で、標準的なクローン原性条件下で培養した。データは、播種された１０５個細胞当たりの１４日目のコロニー形成細胞（ＣＦＵ−Ｆ）の平均数±ＳＥ（ｎは３つの異なる骨髄穿刺液）を表わしている。これらのデータは、ヒトＭＰＣがＳＴＲＯ−１抗原を明るく共発現するＢＭのＴＮＡＰ陽性画分だけに限定されていることを示している。
【表１】
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【０１９３】
実施例３：カニクイザルＳＴＲＯ−３＋ＭＰＣの評価
サル骨髄前駆細胞（カニクイザル由来；ｃｙｎｏ−ＭＰＣ）は、雌のカニクイザルから収集したおよそ１５ｍｌの骨髄穿刺液から単離した。骨髄穿刺液懸濁液は、フィコール密度勾配遠心を用いて分離し、洗浄して無核細胞（赤血球）を除去した。有核細胞を計数し、その後、ＣＡ１２抗体（抗ＳＴＲＯ−３）およびダイナルビーズ（Dynalbeads）を付着することにより分別した。抗体およびビーズの付着した細胞は、ＭＰＣ−１磁石の磁場により陽性選択した。陽性選択を受けた細胞を計数し、Ｔ型培養瓶に増殖培地（Growth Medium）において継代（ｐ．）０で播種した。事前選択、陽性、および陰性の細胞を、コロニー形成試験（ＣＦＵ−Ｆ）に使用した。
【０１９４】
ｃｙｎｏ−ＭＰＣ細胞に、増殖培地（Growth Media）により栄養を与えた。すべての培養物（ｐ．０〜ｐ．５）に、所望のコンフルエンスに達するまで、２〜４日ごとに栄養を与えた。細胞を、その後、継代し、ＨＢＳＳ洗浄、およびさらにコラゲナーゼに続いてトリプシン／バーゼン液を用いて採取した。ｐ．１の細胞を計数し、Ｔ型培養瓶に播種した。ｐ．１のｃｙｎｏ−ＭＰＣが所望のコンフルエンスに達した時、細胞を採取し、速度制御冷凍庫に保存した。
【０１９５】
継代１の凍結保存ｃｙｎｏ−ＭＰＣを解凍してＴ型培養瓶に播種した（ｐ．２）。ｐ．２の細胞をセルファクトリー（Cell Factory）にて継代してｐ．３とした。ｐ．３の細胞を採取し、セルファクトリーにおいてｐ．４に継代した。余分のｐ．３の細胞は、凍結保存した。ｐ．４の細胞を６×セルファクトリーにおいて継代しｐ．５とした。ｐ．５のｃｙｎｏ−ＭＰＣが所望のコンフルエンスに達した時、細胞を採取し、速度制御冷凍庫を用いて凍結保存した。細胞は、５０％アルファＭＥＭ（AlphaMEM）、４２．５％プロフリーズ（Profreeze）、および７．５％ＤＭＳＯ中で凍結保存した。試料を、ＣＦＵ−Ｆ試験、ＦＡＣＳ、無菌、マイコプラズマ、および内毒素について試験した。
【０１９６】
培養されたｃｙｎｏ−ＭＰＣの免疫表現型をフローサイトメトリー分析した代表的な結果を図２に示す。示されるように、これらの細胞は、ＳＴＲＯ−１＋、ＳＴＲＯ−４＋およびＣＤ１４６＋である。
【０１９７】
ｐ５のＣｙｎｏ−ＭＰＣを解凍し、実施例４に記述されるように、糖尿病および非糖尿病マカクザルの静脈注入に使用した。
【０１９８】
実施例４：ＳＴＲＯ−３ＭＰＣは、低投与量であっても代謝症候群および肥満を治療する点で有効である。
５（５）頭のマカクザルを、治療用に選択した。サルは、食餌由来の代謝症候群（肥満度指数＞３５、トリグリセリド＞７５ｍｇ／ｄＬおよび低ＨＤＬレベルを有していた。サルを、空腹時グルコースレベル、空腹時インスリンレベル、および静脈内グルコース負荷試験（ＩＶＧＴＴ）後のインスリン／グルコース応答に基づいた、糖尿病の明らかな兆候について、１か月の期間にわたり評価した。５頭のうち３頭のサルは、糖尿病（平均の月あたりの空腹時グルコース＞１１０）を有すると確認された。サルのベースライン特性を、表２に示す。
表２：糖尿病および非糖尿病動物の特性
【表２】
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【０１９９】
サルを、１、２、または３群に割り当てた。動物は、同種異型ＭＰＣ（実施例２に記述されるように単離された）の単回遅速静脈内（ＩＶ）注入を、腕頭静脈または適切な末梢静脈に、以下の用量（用量は、記録された最近の体重に合わせた）で、受けた。
表3. 治療群のまとめ
【表３】
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【０２００】
３か月後に、サルはＭＰＣの２回目の注入を同一用量で受けた。
【０２０１】
1回目の注入後の６か月にわたり、サルを２週間ごとに、体重、脂質プロファイル、空腹時血中グルコースレベル、空腹時血中インスリンレベル、ならびにＩＶＧＴＴに対するグルコースおよびインスリン応答について評価した。
【０２０２】
結果
図３は、糖尿病動物が、ＭＰＣの注入に先立つ、グルコース負荷に対する後期インスリン応答不全を示すことを示している。
【０２０３】
図４に示す結果は、非糖尿病動物において、ＭＰＣの1回目投与が、インスリン応答の中程度の変化を誘導し、2回目の投与が、３か月間（すなわち４か目ら６か月目まで）持続した重度のインスリン応答を誘導したことを示している。糖尿病群では、1回目および２回目のＭＰＣ投与が連続して、６か月の間持続した、インスリン応答の増加を示した。これらのデータは、ＭＰＣが、糖尿病および中程度の糖尿病動物における、グルコース負荷後のインスリン応答の誘導に示されるように、膵臓のベータ細胞機能を改善することができるということを支持している。
【０２０４】
図５に示された個々の動物のデータと矛盾せずに、図５（パネルａ）における非糖尿病動物について群分けしたデータは、２回目のＭＰＣ注入が、３か月間（すなわち４か月目から６か月目まで）持続した重度のインスリン応答を誘導したことを示している。このことは、ＭＰＣ注入後の後期インスリン応答の５０〜１００％の誘導が存在することを示す図５（パネルｂ）において裏付けられている。
【０２０５】
しかし、図５（パネルａ）では、プールされた糖尿病群のデータは、1回目と2回目のＭＰＣ投与の両方が、６か月間持続した後期インスリン応答を続けて増加させたことを示している。後期インスリン応答の４０〜７５％および７５〜１７５％の増加が、1回目よ２回目のＭＰＣ注入の後に、それぞれ認められた。これらのデータは、グルコース負荷後のＭＰＣの継続投与が、後期インスリン応答を誘導させることを支持するものである。
【０２０６】
ＭＰＣ治療はまた、非糖尿病動物における1回目と2回目のＭＰＣ治療の後の、グルコースクリアランス速度の増加を生成した（図６）。例えば、2回目の投与は、３か月間（すなわち、4か月目から6か月目）持続した応答を誘導した。さらに、糖尿病動物では、１回目と2回目の両方のＭＰＣ投与が、６か月間持続したグルコースクリアランス速度の増加を続けて示した。これらのデータは、図６に示されるベースライン事前治療値と比較して、グルコース負荷後の後期インスリン応答の誘導が、図４および５に図示されているように、ＭＰＣ治療後のグルコースクリアランスの増加の原因であることを示している。
【０２０７】
グルコースクリアランス速度の増加はまた、1回目と2回目のＭＰＣ治療の後に非糖尿病群において認められた（図７パネルａ）。増加を、グルコースクリアランスの平均パーセント変化（１か月目〜３か月目について５〜１０％に対し、４か月目〜６か月目について１５〜２５％）として、図７（パネルｂ）に示す。
【０２０８】
糖尿病群では、図７（パネルｂ）に示すように、1回目と2回目のＭＰＣ投与量の両方が、ベースラインと比較して、６か月間持続したグルコースクリアランス速度の安定した１０％から２０％の増加を続けて示した。これらデータは、継続したＭＰＣ治療が、ｉｖグルコース負荷後のグルコースクリアランス速度の漸進的増加を誘導することを示唆している。
【０２０９】
ＭＰＣの投与はまた、平均の月ごとの血中グルコースレベルの持続的な減少を誘導し、空腹時インスリンレベルを改善させることが示された（図８）。非糖尿病動物＃１８８０（平均ベースライン８０ｍｇ／ｄＬ）では、ＭＰＣの1回目の投与が、空腹時グルコースレベルの減少を生じた。動物＃１８８０もまた、1回目の投与の後の空腹時インスリンレベルの減少を示した。
【０２１０】
動物＃３３５１は、第２の月の2回目のＭＰＣ投与の後の空腹時ＢＧＬの減少を示した。この動物（ＭＰＣ治療に先立ってベースラインで高インスリン性であった）は、ＭＰＣ注入の６か月後にインスリンレベルの正常化を示した。
【０２１１】
すべての糖尿病動物が、事前治療ベースラインと比較して、ＭＰＣ治療後の空腹時ＢＧＬ値の重度の減少（ベースライン以下に６か月間持続した）を示した。これらのデータは、ＭＰＣ治療が、平均の月ごとの血中グルコースレベルの持続する減少を誘導することを示している。
【０２１２】
図９は、非糖尿病群では、1回目と2回目のＭＰＣ投与の両方が、ＭＰＣ治療に先立つベースライン値と比較して、空腹時グルコースレベルの減少を誘導することを示している。ＭＰＣ注入の後、６か月間持続したインスリンレベルの正常化もまた存在した。糖尿病群では、事前治療ベースライン値と比較して、ＭＰＣ治療後に空腹時ＢＧＬの重度の減少が存在し、ベースライン以下に6か月間持続した。さらに、糖尿病群では、1回目のＭＰＣが、事前治療ベースライン値と比較して、空腹時インスリンレベルを減少させた。これらのデータは、ＭＰＣ治療が、平均での月ごとの空腹時血中グルコースレベルの持続する減少誘導することを示している。代謝症候群を患う非糖尿病動物における空腹時インスリンレベルの６か月間持続する減少が存在したが、この効果は糖尿病群では３か月間の一過性であった。
【０２１３】
図９（ａ）に、非糖尿病と糖尿病動物の両方における、平均での月ごとの体重変化を示す。ＭＰＣ治療の１か月前および６か月後について、非糖尿病および糖尿病動物についての個々のデータを示す。矢印は、ＭＰＣが注入された時期を示す。各動物についてのＭＰＣの投与量を、各パネルの一番上に示す。
【０２１４】
図１０パネル（ａ）に示すように、事前治療体重と比較して、非糖尿病動物＃１８８０において、1回目のＭＰＣ投与は、体重減少対し一過性の影響を有し、ＭＰＣの2回目の投与は、体重減少に対し進行性の影響を有していた。非糖尿病動物＃３３５１は、ＭＰＣの両投与とともに進行性の体重減少パターンを示した。体重減少は驚くべきことに、図１０パネル（ｂ）に示すように、各個々の動物について、体重測定の期間をとおして安定した食物消費にもかかわらず、発現した。
【０２１５】
糖尿病動物＃１６２４および＃７５８１では、1回目と2回目のＭＰＣの投与の後に、一貫した体重減少が存在した。動物＃２８７５の体重は、ＭＰＣ治療をとおして未治療ベースライン以下であった。
【０２１６】
図１０パネル（ｃ）は、プールされた動物の群における、未治療ベースラインと比較した、ＭＰＣ治療後の平均での月ごとの体重減少パーセンテージを示す。体重減少は、ＭＰＣ治療経過期間中、４％から６％までの範囲であった。
【０２１７】
これらのデータは、非糖尿病と糖尿病動物の両方において、ＭＰＣ治療が、空腹時血中グルコースレベルの減少に関連する体重減少を誘導し、グルコースクリアランス速度を増加させ、そしてグルコースに刺激された、ＭＰＣ治療後のインスリン産生を誘導したことを示している。
【０２１８】
図１１は、非糖尿病動物では、事前治療値と比較して、ＭＰＣ治療後の、トリグリセリドおよびＶＬＤＬの持続する減少およびＨＤＬレベルの増加が存在したことを示す。動物＃１８８０では、2回目のＭＰＣ投与の影響の証拠が存在し、これは1回目のＭＰＣ投与量と比較して、2回目のＭＰＣ投与量の後にリポタンパク質指標の増加を示した。非糖尿病動物の両方も、６か月間リポタンパク質指標の持続する増加を示した。図１１に示すデータは、ＭＰＣ治療が、脂質プロファイルを、非糖尿病動物では長期間、そして糖尿病動物では短期間、改善させることを示している。
【０２１９】
非糖尿病群では、事前治療値と比較して、ＭＰＣ治療後の、６か月の持続する、トリグリセリドおよびＶＬＤＬの持続する減少およびＨＤＬレベルの増加が存在した（図１２）。脂質プロファイルに従って、非糖尿病群は、６か月間の持続するリポタンパク質指標の増加を示した。糖尿病動物は、２か月の期間続いた、リポタンパク質指標に対する、ＭＰＣの1回目の投与に続く短期間の効果を示した。これらのデータは、ＭＰＣ治療が、脂質プロファイルを、非糖尿病動物において長期間、そして糖尿病動物において短期間、改善することを示している。
【０２２０】
本明細書で示されたデータは、研究されたモーリタニア産マカクザルが、食餌によって誘導された代謝症候群を有すること、および２型糖尿病への進行が、インスリンレベルの減少、およびグルコース負荷に対する後期インスリンレベル応答不全に関連していることを示している。３か月間隔の継続的なＭＰＣ投与が、６か月にわたりグルコース負荷に対する後期インスリン応答の進行性の増加、およびグルコースクリアランスの改善という結果を生じる。さらに、静脈内ＭＰＣ注入が、いかなる低血糖症も伴わずに、６か月にわたり空腹時血中グルコースレベルを常化する。ＭＰＣ治療はまた、６か月にわたる漸進的な体重減少という結果を生じ、代謝症候群に関連する異常脂質プロファイルを正常化する。脂質低下効果は、糖尿病をともなわない対象において６か月にわたり持続する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年2月18日(2014.2.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の体重を減少させる方法であって、対象に、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を投与すること含む、前記方法。
【請求項２】
対象における過度の体重もしくは肥満を治療または予防する方法であって、対象に、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を投与することを含む、前記方法。
【請求項３】
集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子が、投与の約４週間後に体重を少なくとも約３％減少させる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
対象における代謝症候群もしくはその症状を治療または予防する方法であって、対象に、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を投与することを含む、前記方法。
【請求項５】
代謝症候群の症状が、トリグリセリドの上昇、低比重リポタンパク質の上昇、高比重リポタンパク質の減少、リポタンパク質指標の減少、空腹時グルコースレベルの上昇、空腹時インスリンの上昇、摂食後のグルコースクリアランスの減少、インスリン耐性、耐糖能異常、肥満およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子の投与が、以下の、
（ｉ）トリグリセリドの減少；
（ｉｉ）低比重リポタンパク質の減少；
（ｉｉｉ）高比重リポタンパク質の増加；
（ｉｖ）リポタンパク質指標の増加；
（ｖ）空腹時グルコースレベルの減少；
（ｖｉ）膵臓によるインスリン分泌の増加；
（ｖｉｉ）摂食後のグルコースクリアランスの増加；
（ｖｉｉｉ）インスリン耐性の減少；および
（ｉｘ）体重の減少
の１つまたは複数の結果を生じる、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
ＳＴＲＯ−１強陽性細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子を投与することを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子が全身投与される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子が複数回投与される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子が、４週間以上毎に１回投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
以下の、
（ｉ）トリグリセリドの減少；
（ｉｉ）低比重リポタンパク質の減少；
（ｉｉｉ）高比重リポタンパク質の増加；
（ｉｖ）リポタンパク質指標の増加；
（ｖ）空腹時グルコースレベルの減少；
（ｖｉ）膵臓によるインスリン分泌の増加；
（ｖｉｉ）摂食後のグルコースクリアランスの増加；
（ｖｉｉｉ）インスリン耐性の減少；および
（ｉｘ）体重減少
の１つまたは複数を達成するのに十分な用量の、集団および／もしくは子孫ならびに／または可溶性因子を投与することを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
ｋｇあたり０．１×１０６から５×１０６個の間のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはそれの子孫を投与することを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ｋｇあたり０．３×１０６から２×１０６個の間のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫を投与することを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
低用量のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫を投与することを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
低用量のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫が、ｋｇあたり０．１×１０５から０．５×１０６個の間のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
低用量のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫が、ｋｇあたり約０．３×１０６個のＳＴＲＯ−１＋細胞および／またはその子孫を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
ＳＴＲＯ−１＋細胞および／または子孫細胞が富化された集団が、オートジェネイック（autogeneic）または同種異系である、および／または可溶性因子がオートジェネイックまたは同種異系細胞に由来しうる、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ＳＴＲＯ−１＋細胞および／または子孫細胞が富化された集団が、投与に先だって、および／または可溶性因子を得るのに先立って培養増殖された、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
ＳＴＲＯ−１＋細胞が富化された集団が、ＳＴＲＯ−１ｂｒｉであり、および／もしくは組織非特異型アルカリホスファターゼ（ＴＮＡＰ）を発現し、ならびに／または子孫細胞および／もしくは可溶性因子が、ＳＴＲＯ−１ｂｒｉであるおよび／もしくはＴＮＡＰを発現するＳＴＲＯ−１＋細胞に由来する、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫細胞ならびに／またはそれに由来する可溶性因子が、前記ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫細胞および／もしくはそれに由来する可溶性因子ならびに担体および／または賦形剤を含む組成物の形態で投与される、特許請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
肥満および／もしくは代謝症候群および／もしくは代謝症候群の症状の治療または予防において使用する、ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子。
【請求項２２】
ＳＴＲＯ−１＋細胞および／もしくはその子孫が富化された細胞集団ならびに／またはそれに由来する可溶性因子の、対象における肥満および／もしくは代謝症候群および／もしくは代謝症候群の症状を治療するまたは予防する薬剤の製造のための使用。
【国際調査報告】
2014513701.tif 000017
2014513701.tif 000018