(57)【要約】がんおよび他の疾患の処置および予防のために有効な療法が、本明細書に開示される。これらの方法は、腫瘍病変の中でエフェクター細胞を誘引するケモカインの局所生成を増加させ、同時に調節性Ｔ（ｒｅｇ）細胞を誘引する望ましくないケモカインの局所生成を抑制する薬剤の治療的有効量の投与を含む。これらの方法は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストまたはＮＦ−κＢ経路の他の活性化剤の治療的有効量を、プロスタグランジン合成の遮断薬もしくはプロスタグランジンシグナル伝達の遮断薬と、１型インターフェロンと、またはプロスタグランジンの合成もしくはシグナル伝達の遮断薬および１型インターフェロンの両方と組み合わせて被験体に投与し、それによって被験体においてがんまたは感染性疾患を処置もしくは予防するか、またはそれらの再発を予防することを含む。
2014521608.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＮＦ−κＢ活性化剤、（２）治療的有効量のプロスタグランジン合成の遮断薬またはプロスタグランジン応答性の遮断薬、および（３）治療的有効量のインターフェロンを投与することを含む方法。
【請求項２】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、（２）治療的有効量のプロスタグランジン合成の遮断薬またはプロスタグランジン応答性の遮断薬、および（３）治療的有効量のインターフェロンを投与することを含む方法。
【請求項３】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＮＦ−κＢ活性化剤および（２）治療的有効量のプロスタグランジン合成の遮断薬またはプロスタグランジン応答性の遮断薬を投与することを含む方法。
【請求項４】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストおよび（２）治療的有効量のプロスタグランジン合成の遮断薬またはプロスタグランジン応答性の遮断薬を投与することを含む方法。
【請求項５】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＮＦ−κＢ活性化剤および（２）治療的有効量のインターフェロンを投与することを含む方法。
【請求項６】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストおよび（２）治療的有効量のインターフェロンを投与することを含む方法。
【請求項７】
自己免疫疾患、慢性炎症性疾患、移植拒絶反応またはＧｖＨを処置するか、またはその開始もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＮＦ−κＢ活性化剤および（２）治療的有効量のプロスタグランジンまたはｃＡＭＰシグナル伝達経路の他の活性化剤を投与することを含む方法。
【請求項８】
自己免疫疾患、慢性炎症性疾患、移植拒絶反応またはＧｖＨを処置するか、またはその開始もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＴＬＲリガンドおよび（２）治療的有効量のプロスタグランジンまたはｃＡＭＰシグナル伝達経路の他の活性化剤を投与することを含む方法。
【請求項９】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＮＦ−κＢ活性化剤、（２）治療的有効量のプロスタグランジン合成の遮断薬またはプロスタグランジン応答性の遮断薬、（３）治療的有効量のインターフェロンおよび（４）治療的有効量の化学療法剤を投与することを含む方法。
【請求項１０】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、（２）治療的有効量のプロスタグランジン合成の遮断薬またはプロスタグランジン応答性の遮断薬、（３）治療的有効量のインターフェロンおよび（４）治療的有効量の化学療法剤を投与することを含む方法。
【請求項１１】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＮＦ−κＢ活性化剤、（２）治療的有効量のプロスタグランジン合成の遮断薬またはプロスタグランジン応答性の遮断薬、および（３）治療的有効量の化学療法剤を投与することを含む方法。
【請求項１２】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、（２）治療的有効量のプロスタグランジン合成の遮断薬またはプロスタグランジン応答性の遮断薬、および（３）治療的有効量の化学療法剤を投与することを含む方法。
【請求項１３】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＮＦ−κＢ活性化剤、（２）治療的有効量のインターフェロンおよび（３）治療的有効量の化学療法剤を投与することを含む方法。
【請求項１４】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、（２）治療的有効量のインターフェロンおよび（３）治療的有効量の化学療法剤を投与することを含む方法。
【請求項１５】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＮＦ−κＢ活性化剤、（２）治療的有効量のプロスタグランジン合成の遮断薬またはプロスタグランジン応答性の遮断薬、（３）治療的有効量のインターフェロンおよび（４）治療的有効量の腫瘍特異的Ｔ細胞上でＣＣＲ５またはＣＸＣＲ３の発現レベルを増強するためのワクチンまたは他の療法を投与することを含む方法。
【請求項１６】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、（２）治療的有効量のプロスタグランジン合成の遮断薬またはプロスタグランジン応答性の遮断薬、（３）治療的有効量のインターフェロンおよび（４）治療的有効量の腫瘍特異的Ｔ細胞上でＣＣＲ５またはＣＸＣＲ３の発現レベルを増強するためのワクチンまたは他の療法を投与することを含む方法。
【請求項１７】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防する方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＮＦ−κＢ活性化剤、（２）治療的有効量のプロスタグランジン合成の遮断薬またはプロスタグランジン応答性の遮断薬、および（３）治療的有効量の腫瘍特異的Ｔ細胞上でＣＣＲ５またはＣＸＣＲ３の発現レベルを増強するためのワクチンまたは他の療法を投与することを含む方法。
【請求項１８】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、（２）治療的有効量のプロスタグランジン合成の遮断薬またはプロスタグランジン応答性の遮断薬、および（３）治療的有効量の腫瘍特異的Ｔ細胞上でＣＣＲ５またはＣＸＣＲ３の発現レベルを増強するためのワクチンまたは他の療法を投与することを含む方法。
【請求項１９】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＮＦ−κＢ活性化剤、（２）治療的有効量のインターフェロンおよび（３）治療的有効量の腫瘍特異的Ｔ細胞上でＣＣＲ５またはＣＸＣＲ３の発現レベルを増強するためのワクチンまたは他の療法を投与することを含む方法。
【請求項２０】
被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、該被験体に、（１）治療的有効量のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、（２）治療的有効量のインターフェロンおよび（３）治療的有効量の腫瘍特異的Ｔ細胞上でＣＣＲ５またはＣＸＣＲ３の発現レベルを増強するためのワクチンまたは他の療法を投与することを含む方法。
【請求項２１】
前記ＴＬＲアゴニストがＴＬＲ−３リガンドである、請求項２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８または２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＴＬＲ−３リガンドがポリＩ：Ｃである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＴＬＲ−３リガンドがＴＬＲ３に結合することが可能であるポリＩ：Ｃの誘導体である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＴＬＲ−３リガンドがＴＬＲ３に結合することが可能である二本鎖ＲＮＡである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＴＬＲ−３リガンドが小分子である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＴＬＲ−３リガンドが抗体である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＴＬＲアゴニストがＴＬＲ−４リガンドである、請求項２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８または２０に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＴＬＲアゴニストがＴＬＲ−７リガンドである、請求項２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８または２０に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＴＬＲアゴニストがＴＬＲ−８リガンドである、請求項２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８または２０に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＴＬＲアゴニストがＴＬＲ−９リガンドである、請求項２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８または２０に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＴＬＲアゴニストがＴＬＲ−５リガンドである、請求項２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８または２０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＴＬＲアゴニストがＴＬＲ−２リガンドである、請求項２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８または２０に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＴＬＲアゴニストがＴＬＲ−１リガンドである、請求項２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８または２０に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＮＦ−κＢ活性化剤が、ＴＮＦα、ＩＬ−１βまたは他の炎症誘発性サイトカイン、またはＮＦ−κＢを活性化するパターン認識受容体の内因性もしくは外因性のリガンドである、請求項１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７または１９に記載の方法。
【請求項３５】
前記プロスタグランジン合成の遮断薬がシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）阻害剤である、請求項１、２、３、４、９、１０、１１、１２、１５、１６、１７または１８に記載の方法。
【請求項３６】
前記プロスタグランジン合成の遮断薬がシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）−１およびシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）−２の両方の阻害剤である、請求項１、２、３、４、９、１０、１１、１２、１５、１６、１７または１８に記載の方法。
【請求項３７】
前記プロスタグランジン合成の遮断薬がシクロオキシゲナーゼ２（ＣＯＸ−２）阻害剤の選択的阻害剤である、請求項１、２、３、４、９、１０、１１、１２、１５、１６、１７または１８に記載の方法。
【請求項３８】
前記プロスタグランジン合成の遮断薬がセレコキシブである、請求項１、２、３、４、９、１０、１１、１２、１５、１６、１７または１８に記載の方法。
【請求項３９】
前記プロスタグランジン合成の遮断薬がロフェコキシブである、請求項１、２、３、４、９、１０、１１、１２、１５、１６、１７または１８に記載の方法。
【請求項４０】
前記プロスタグランジン合成の遮断薬がインドメタシンである、請求項１、２、３、４、９、１０、１１、１２、１５、１６、１７または１８に記載の方法。
【請求項４１】
前記プロスタグランジン応答性の遮断薬がプロスタグランジンＥ２受容体ＥＰ２またはＥＰ４の阻害剤である、請求項１、２、３、４、９、１０、１１、１２、１５、１６、１７または１８に記載の方法。
【請求項４２】
前記インターフェロンが１型インターフェロンである、請求項１、２、５、６、９、１０、１３、１４、１５、１６、１９または２０に記載の方法。
【請求項４３】
前記インターフェロンがインターフェロンアルファまたはインターフェロンベータである、請求項１、２、５、６、９、１０、１３、１４、１５、１６、１９または２０に記載の方法。
【請求項４４】
前記インターフェロンがインターフェロンガンマである、請求項１、２、５、６、９、１０、１３、１４、１５、１６、１９または２０に記載の方法。
【請求項４５】
前記ワクチンがアルファ−ＤＣ１を含む、請求項１５、１６、１７、１８、１９または２０に記載の方法。
【請求項４６】
前記ワクチンが任意の型の１型極性化ＤＣ、例えばＬＰＳおよびＩＦＮγの組合せまたはＴＮＦαおよびＩＦＮγの組合せによって誘導されるものを含む、請求項１５、１６、１７、１８、１９または２０に記載の方法。
【請求項４７】
前記プロスタグランジンがプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）である、請求項７または８に記載の方法。
【請求項４８】
前記ｃＡＭＰを上昇させる薬剤が、ＰＧＥ２のＥＰ２またはＥＰ４受容体のアゴニストである、請求項７または８に記載の方法。
【請求項４９】
前記ｃＡＭＰを上昇させる薬剤が、ヒスタミン、アドレナリン、ノルアドレナリン、またはヒスタミン、アドレナリンもしくはノルアドレナリンのｃＡＭＰを上昇させる受容体のアゴニストである、請求項７または８に記載の方法。
【請求項５０】
前記ｃＡＭＰシグナル伝達経路の活性化剤が、アデニル酸シクラーゼ、ＣＲＥＢまたはＣＲＥＢシグナル伝達経路の下流エレメントの活性化剤である、請求項７または８に記載の方法。
【請求項５１】
前記プロスタグランジン応答性の遮断薬が、ｃＡＭＰ合成の阻害剤、ホスホジエステラーゼ活性のインデューサーまたはｃＡＭＰ分解の他のプロモーター、またはＣＲＥＢもしくはＣＲＥＢシグナル伝達経路の下流エレメントの阻害剤である、請求項１、２、３または４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権の宣言
本願は、２０１１年７月２２日に出願された米国仮出願第６１／５１０，８５５号の利益を主張する。この出願は、本明細書に参考として援用される。
【０００２】
政府支援の陳述
本発明は、米国国立衛生研究所からの補助金１ＰＯ１  ＣＡ１３２７１４による米国政府支援を受けてなされた；米国政府は、本発明において一定の権利を有する。
【０００３】
分野
本願は、がんの処置、がん発生の予防またはがん再発の予防のための方法を含む、腫瘍治療の分野に関連する。さらに、記載される方法は、感染性疾患、自己免疫疾患、アレルギーおよび炎症の処置でも、移植拒絶反応および移植関連障害を処置または予防するためにも用いることができる。
【背景技術】
【０００４】
背景
毎年米国だけでも、無数の人々が、以下に記すような新生物の一形態である前がん性病変を発達させている。そのような病変は、悪性腫瘍またはがんに発達する強い傾向を示す。そのような病変には、乳房の病変（乳がんに発達することができる）、皮膚の病変（悪性黒色腫または基底細胞がん腫に発達することができる）、結腸腺腫性ポリープ（結腸がんに発達することができる）、頸部上皮の前悪性病変（子宮頸がんに発達することができる）および他のそのような新生物が含まれる。既存の前がん性もしくはがん性の病変またはがん腫を予防するかまたはその寛解を誘導するか、あるいは、外科手術、化学療法、放射線療法および生物学的療法による処置の後のそれらの再発を予防するかまたは遅らせる化合物は、がんによる病気および死を大いに低減するであろう。
【０００５】
例えば、およそ６０，０００人が結腸がんで死亡し、結腸がんの１５０，０００よりも多くの新症例が毎年診断される。アメリカの人口全体では、個体は、６パーセントの生涯結腸がん発症危険率を有し、それを、米国で２番目に多発するがんの形にしている。結腸がんは、西欧でも多発している。食餌性脂肪消費の増加が、日本での結腸がんの危険率を上昇させていると考えられている。
【０００６】
過去数十年の間に５年生存率の変化がないかまたは中程度の変化しか見られないことによって反映されているように、今日まで、結腸直腸がん、卵巣がん、前立腺がん、乳がん、肺がん、頭頸部がん、子宮頸がん、脳がん、膵がん、腎臓がん、血液悪性腫瘍および黒色腫を含む進行がんの予防および処置で、ほとんど進展は見られない。このがんの唯一の治療法は、極めて早期の段階の外科手術である。残念なことに、これらのがんのほとんどは、外科的治療法のためにはあまりに遅く発見される。多くの場合に、がんが悪性段階に進行するまで、患者は症状を経験しない。
【０００７】
結腸直腸がん（ＣＲＣ）、卵巣がんおよび黒色腫を含む複数のがん型でのエフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞の予後診断価値を強調する研究によって明白に示されるように、ＣＤ８＋  Ｔ細胞のがん病変浸潤能力は抗腫瘍免疫のために必須である。対照的に、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）による異なる型のがんの浸潤は、不良な転帰を予測する。ケモカインおよびそれらのそれぞれの受容体は、Ｔ細胞の移動およびホーミングのために決定的である。
【０００８】
いくつかの群からのデータは、ケモカイン（ＣＫ）の異なる群が、がんおよび慢性感染症において望ましい炎症誘発性免疫細胞（エフェクターＴ（ｅｆｆ）細胞（ＣＴＬ、Ｔｈ１細胞）およびＮＫ細胞）、またはがんおよび慢性感染症で有害であると考えられる調節性Ｔ（ｒｅｇ）細胞、のいずれかを優先的に誘引することを実証している。炎症誘発性免疫細胞は高レベルのＣＸＣＲ３およびＣＣＲ５（それぞれ、ＣＸＣＲ９、ＣＸＣＲ１０、ＣＸＣＲ１１について、ならびにＣＣＬ３、ＣＣＬ４およびＣＣＬ５およびＣＣＬ５についてのケモカイン受容体）を発現するが、Ｔｒｅｇは高レベルのＣＣＲ４およびＣＸＣＲ４を発現する。Ｔｒｅｇは、ＣＣＲ４（ＣＣＬ１７およびＣＣＬ２２についての受容体）、ＣＸＣＲ４（ＣＸＣＬ１２についての受容体）およびＣＣＲ６（ＣＣＬ２０についての受容体）を優先的に発現する。
【０００９】
腫瘍組織での高レベルのＣＣＬ５／ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＲ５リガンド）およびＣＸＣＬ９／ＭＩＧ、ならびにＣＸＣＬ１０／ＩＰ１０（ＣＸＣＲ３についてのリガンド）は、ＣＲＣ、黒色腫および胃がんでＣＤ８＋  Ｔ細胞の浸潤の増強と関連している。ＣＣＬ５およびＣＸＣＬ９−１１の腫瘍内発現の恩恵と対照的に、Ｔｒｅｇを優先的に誘引するＣＣＲ４リガンドである高レベルのＣＣＬ２２／ＭＤＣは、卵巣がん患者で見られるように、生存率の低下と関連付けられることができる。がんの進行は、ＣＸＣＬ１２およびＣＣＬ２２依存性機構での機能的ＣＴＬの不足、ならびに骨髄由来のサプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）および調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の蓄積と関連していることが公知である。これらの考慮事項は、局所の免疫監視機構を回復させるために、ｅｘ  ｖｉｖｏで誘導されたＣＴＬのワクチン接種または養子移入をがんの有効な免疫療法が含む必要があるかもしれないことを示唆する。我々は、ＭＤＳＣがＯｖＣａでのＰＧＥ２および他の抑制因子の鍵となるソースであること、ならびに、ＣＯＸ２発現を増強するＰＧＥ２のＥＰ２およびＥＰ４によって媒介される能力は、ＯｖＣａ環境でＭＤＳＣの抑制機能の維持のために必要とされる、ＰＧＥ２と、ＰＧＥ２合成の鍵となる調節因子であるＣＯＸ２との間で正のフィードバックをもたらすことを以前に示した。さらに、我々は、ＰＧＥ２によって誘導されるＳＤＦ１／ＣＸＣＬ１２生成およびＣＸＣＲ４発現は、ＯｖＣａ腹水でＭＤＳＣの局所の蓄積および保持に寄与することができることを近年報告した。同様に、別の型の抑制性免疫細胞である多数のＴｒｅｇ細胞および低いＣＴＬ／Ｔｒｅｇ比は、がん患者についての負の予後診断因子であることも示された。ＣＣＲ４を発現するＴｒｅｇをＯｖＣａに引き寄せることでのＣＣＬ２２の鍵となる役割、ＣＣＬ２２の負の予後診断価値、およびＰＧＥ２が鍵となるＣＣＬ２２誘発因子を構成するとの本発明者らの観察は、がん環境でＰＧＥ２の生成を制限することが、Ｔｒｅｇの流入を低減することによって治療的価値を有するかもしれないことを示唆する。ＥＰ２受容体およびＥＰ４受容体を通して作用するＰＧＥ２は、Ｔｒｅｇの発達を促進することもできる。さらに、本発明者らおよび他の研究者は、ＰＧＥ２がＤＣとナイーブ細胞、記憶細胞およびエフェクター細胞との相互作用を損なうことができ、その一方でＴｒｅｇとのそれらの相互作用を促進することを示した。ＰＧＥ２は、Ｔｒｅｇの抑制活性を媒介することにも関与する。
【００１０】
黒色腫生存の独立した予後診断因子であることが公知であるヒト黒色腫のＴ細胞浸潤レベルは、ＣＸＣＲ３リガンド；ＣＸＣＬ９および（より少ない量で生成される）ＣＸＣＬ１０の発現と最も強い相関を示す。腫瘍浸潤性マクロファージによるＣＸＣＬ９の生成は、転移性組織より原発性黒色腫病変で特に有効であり、原発性および転移性腫瘍が浸潤性ＡＰＣでのＣＫ生成を鑑別的にモジュレートすることができる可能性を提示する。Ｔ細胞によって発現されるＣＸＣＲ３が長期生存と相関することを示すデータと一致して、これらのデータは、ＣＸＣＲ３リガンドが黒色腫へのＴ細胞浸入を可能にする重要なＣＫを構成することを示唆し、ワクチン接種によって誘導されるＴ細胞上でのＣＸＣＲ３の誘導、および非浸潤腫瘍病変上でのＣＸＣＲ３リガンドの誘導を、がん免疫療法の興味深い標的にする。
【００１１】
臨床試験と類似して、マウス試験も大部分の抗腫瘍活性がＬ−セレクチンｌｏｗ発現Ｔ細胞と関連していることを示し、いくつかのグループは、腫瘍拒絶における腫瘍関連ケモカインの重要な役割を近年実証した。アデノウイルストランスフェクション、またはケモカインによる直接的な注射の抗腫瘍活性が、腺がん、Ｐ８１５肥満細胞腫のマウスモデル、乳がんおよびリンパ腫の異なるマウスモデルで、ＣＣＬ３（ＭＩＰ１α；ＣＣＲ１およびＣＣＲ５についてのリガンド）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ３；ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３についてのリガンド）、ＣＣＬ１６（ＬＥＣ；ＣＣＲ１についてのリガンド）、ＣＣＬ１９（ＭＩＰ３β；ＣＣＲ７についてのリガンド）およびＣＸＣＬ１１（ＩＴＡＣ：ＣＸＣＲ３リガンド）の場合に実証されている。ＸＣＬ１（リンフォタクチン；ＸＣＲ１についてのリガンド）形質導入ＤＣが、Ｂ１６黒色腫に対して優れた治療効力を示すことが示された。ＳＰ２／０骨髄腫モデルでは、ＣＸＣＬ１（リンフォタクチン；ＣＸＣＲ１についてのリガンド）による骨髄腫細胞の直接的なトランスフェクションが、ＣＸＣＲ１陽性ＣＤ４＋およびＣＤ８−Ｔ細胞によって媒介される腫瘍拒絶を誘導することも示された。Ｋｅｓｈａｗおよび同僚は、黒色腫によるＣＸＣＬ１（Ｇｒｏ−α）の頻繁な発現を実証し、Ｔ細胞へこのケモカイン（ＣＸＣＲ２）についての受容体をトランスフェクトすることによってがん免疫療法の有効性を増強しようと試みた。
【００１２】
異なる腫瘍型へのＴ細胞の異なるサブセットの誘引は、複数のケモカインの複雑なネットワークによって調節されることが公知であるが、我々の現在の機能データ（詳細な説明および図面を参照）は、全ての腫瘍病変での腫瘍関連ＣＸＣＲ３−リガンドおよびＣＣＲ５リガンドの均一な増強を目指すレジメンが、エフェクターＣＤ８＋  Ｔ細胞の流入を促進することができることを示す（両方とも自然発生のＴＩＬであり、腫瘍特異的ＣＴＬ  ＣＴＬ上でのＣＣＲ５およびＣＸＣＲ３の発現を増強することが公知であるαＤＣ１ワクチンを含む、がんワクチンによって誘導される）。Ｔｈ１細胞およびＮＫ細胞の誘引でのＣＸＣＲ３およびＣＣＲ５の公知の役割は、そのようなレジメンが腫瘍へのこれらの追加の型の望ましい細胞の浸入を促進することもできるかもしれないことを示唆する。
【００１３】
自然発生の腫瘍特異的エフェクター細胞だけでなく、アルファ−ＤＣ１または他の型の１型極性化ＤＣ（例えばＬＰＳおよびＩＦＮγの組合せ、またはＴＮＦαおよびＩＦＮγもしくはＴＮＦαおよびＩＬ−１βおよびＩＦＮγの組合せによって誘導されるもの）を含む異なるがんワクチンによって誘導される腫瘍特異的エフェクター細胞も、腫瘍特異的Ｔ細胞上で高レベルのＣＣＲ５またはＣＸＣＲ３を発現するので、腫瘍組織でのＣＣＲ５リガンドまたは／およびＣＸＣＲ３リガンドの誘導は、そのようなワクチンの適用との組み合わせで特に有効であり得る。
【００１４】
異なるＴ細胞サブセットのホーミング特性の差は１５年以上の間知られているが、一連の近年の研究はこれに関する鍵となる役割のＤＣを実証した。パイエル板から単離されたか、またはレチノイドで処理されたＤＣは、ナイーブＴ細胞で腸ホーミング特性を誘導する能力を示す。同様に、遊走性のＡＰＣは、中枢神経系へホーミングするＴ細胞の能力の刷込みを担うことが近年実証された。ヒト黒色腫特異的Ｔ細胞の遊走能力にＤＣ関連の因子（「シグナル４」の送達）が影響を及ぼすことができるとの考えを支持するように、機能的ＣＬＡ（皮膚ホーミング受容体；皮膚内皮で発現されるＥＬＡＭのリガンド）の発現の増強、および皮膚の転移性黒色腫病変へのエフェクターＣＴＬの遊走の増強は、全身のＩＬ−１２による患者の処置によって誘導することができることが明らかになった。実際、Ｏｇｇおよび同僚は、白斑患者からのＣＴＬ上のＣＬＡの高い発現が、これらの細胞が皮膚に効率的に入り、メラノサイトの破壊を開始することを可能にすることを示した。Ｂｅｒｇｅｒおよび同僚は、単球由来のＤＣによるワクチン接種が、皮膚および内臓の両方の転移物へホーミングする黒色腫特異的Ｔ細胞を誘導することができることを近年報告した。
【００１５】
しかし、エフェクター型Ｔ細胞の腫瘍への浸入を促進するために、腫瘍部位でケモカインのパターンをモジュレートすることによって、Ｔ細胞の養子移入を含むがん免疫療法の効力を増強する可能性は探究されていない。同様に、これまで、ワクチンによって誘導されるか、または患者において自然発生する、エフェクター型Ｔ細胞の腫瘍浸入を促進するために、腫瘍部位でケモカインのパターンをモジュレートすることによってがん免疫療法の効力を増強する可能性に取り組んだ研究はまだない。
【００１６】
多くの型のがん組織の一般的な特徴である、ＮＦ−κＢの過剰活性化。一般的に複数のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ；二本鎖ＲＮＡの受容体であるＴＬＲ３を含む）のリガンド；およびＴＮＦαまたはＩＬ１βを含む複数の他の炎症誘発性刺激によって誘発されるＮＦ−κＢシグナル伝達は、ケモカインのＴｒｅｇ誘引およびＴｅｆｆ誘引の両クラスの誘導のための重要な必要条件である。しかし、ここまで、Ｔｅｆｆ細胞を腫瘍に選択的に導くために、辺縁組織ではなく腫瘍組織でのＴｅｆｆ誘引ケモカインの生成を選択的に、または少なくとも優先的に増強するために、ＮＦ−κＢシグナル伝達のパターンを利用する方法およびそれをモジュレートする方法はまだ知られていない。
【００１７】
いくつかの研究が、ＣＣＲ５およびＣＸＣＲ３リガンドを含むＴｅｆｆ補充ケモカインの生成を促進するＩＦＮおよびＴＬＲリガンドの能力を以前に実証した。他方、ＣＲＣおよび他の腫瘍によって過剰に生産され、負の予後診断と関連する因子であるＰＧＥ２は、以前にそのようなＴｅｆｆ誘引ＣＫの抑制、およびＴｈ２／Ｔｒｅｇ補充ＣＫの促進と関係づけられている。しかし、炎症性因子のこれらの異なる群が、原発がん組織および転移がん組織でＴｅｆｆ対Ｔｒｅｇ誘引ＣＫの生成の均衡に影響を及ぼすかどうか、これらの因子のいずれかが任意の相乗活性を示すかどうか、および、Ｔｅｆｆ誘引ＣＫの生成を（Ｔｒｅｇ誘引ＣＫの生成を増強することなく）選択的に増強するためにＣＫをモジュレートする因子の任意の組合せを適用することが可能かどうか、および、望ましい型の免疫細胞を疾患部位に集中させるために（健康な組織ではなく）腫瘍組織へとそのような作用の選択性を保証する方法についてはわかっていない。
【００１８】
そのような可能性は、腫瘍微小環境が自然発生的にＮＦ−κＢを過活性化するだけでなく、ＮＦ−κＢ活性化のさらに増強されたレベルによる提案された処置にも応答することを実証する我々の現データによって提供されている。腫瘍の生存および増殖に決定的に関与するＮＦ−κＢ活性化は多くの腫瘍型の固有の特徴を表すので、現データは、腫瘍微小環境の現記載のＮＦ−κＢを標的にするモジュレーションが複数の型のがんに適用可能であるかもしれないことを示唆する。
【００１９】
エフェクター免疫細胞の優先的な動員が有益であると考えられているがん場面と対照的に、骨髄移植の後の慢性炎症、自己免疫疾患、移植拒絶反応または移植片対宿主病の場面では、エフェクター免疫細胞が病状の原因であり、一方、抑制性細胞、例えばＴｒｅｇおよびＭＤＳＣが有益であると考えられている。そのような場合、エフェクター細胞を誘引するケモカインの選択的な抑制、ならびにＴｒｅｇ誘引ケモカインおよびＭＤＳＣ誘引ケモカインの増強は、治療有益性をもたらす可能性が高い。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２０】
概要
がんおよび他の疾患の処置および予防のために有効な療法が、本明細書に開示される。これらの方法には、望ましくない調節性Ｔ細胞を誘引することが公知であるケモカインＣＣＬ２２の生成に対して（反対の作用または無変化）、相乗的に作用して腫瘍組織（または他の罹患組織）でＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）およびＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）の生成を鑑別的にモジュレートする少なくとも２つの異なる薬剤の治療的有効量の投与が含まれる。
【００２１】
我々の新規でかつ予想外のデータは、ＮＦ−κＢによって作動される、Ｔｅｆｆ誘引クラスのケモカインの生成パターンに対するＴｒｅｇ誘引クラスのケモカインの生成パターンが、ＩＦＮおよびプロスタグランジンの合成を標的にすることによって鑑別的に調節することができることを実証する。プロスタグランジンおよびＩＦＮの両方はケモカインの生成を調節することが公知であるが、Ｔｅｆｆ誘引クラスのケモカインに対するＴｒｅｇ誘引クラスのケモカインの相互調節でのＴＬＲリガンドおよびＮＦ−κＢ経路の他の活性化剤とのそれらの相互作用は、治療目的のために用いられていない。いくつかの研究は、ＣＯＸ２を過剰発現させ、ＣＯＸ２生成物ＰＧＥ２を過剰生産するという複数の型の腫瘍の傾向を示しているので、Ｔｅｆｆ細胞を腫瘍へ選択的に導くために、辺縁組織ではなく腫瘍組織でＴｅｆｆ誘引ケモカインの生成を選択的に増強するための提案されている戦略が、ＮＦ−κＢ不均衡と関連する複数の型の腫瘍および他の疾患、例えば感染症、慢性炎症、前悪性状態、自己免疫現象、または、移植拒絶反応および移植片対宿主（ＧｖＨ）病を含む、移植された臓器、組織および単離細胞の拒絶反応を含む移植拒絶反応に適用できる可能性が高い。
【００２２】
がん、一部の前悪性状態および多くの感染症の予防または処置の場合、我々のデータは、Ｔｒｅｇ誘引ケモカインの生成を抑制する一方で、Ｔｅｆｆ誘引ケモカインの生成を選択的に増強するために、ＴＬＲリガンドまたはＮＦ−κＢ経路の他の活性化剤と、プロスタノイドの阻害剤（および潜在的にプロスタグランジン受容体の阻害剤および／または他のｃＡＭＰ増強薬剤の生成の阻害剤またはｃＡＭＰシグナル伝達の阻害剤）との併用適用、ならびにＩＦＮαおよび／または他のＩ型およびＩＩ型インターフェロンの事前投与、同時投与または事後投与との併用適用の有益性を示唆する。
【００２３】
他方、免疫系の望ましくない過活性化と関連する状態（慢性炎症、一部の前悪性状態、自己免疫現象、または、移植拒絶反応および移植片対宿主（ＧｖＨ）病を含む、移植された臓器、組織および単離細胞の拒絶反応を含む移植拒絶反応）の予防または処置の場合は、我々のデータは、Ｔｅｆｆ誘引ケモカインの生成を抑制する一方で、Ｔｒｅｇ誘引ケモカインの生成を選択的に増強するために、ＴＬＲリガンドまたはＮＦ−κＢ経路の他の活性化剤と、プロスタノイドまたは他のｃＡＭＰ増加剤（ｃＡＭＰ−ｅｌｅｖａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（およびＩＦＮ応答性のＩＦＮ生成の潜在的阻害剤）との併用適用の有益性を示唆する。
【００２４】
一部の実施形態では、被験体において、結腸直腸がん、黒色腫、非黒色腫皮膚がん、神経膠腫、卵巣がん、乳がん、肺がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、胃がん、食道がん、膵がん、胆道がん、腎臓がん、膀胱がん、外陰部がん、神経内分泌がん、前立腺がん、頭頸部がん、軟部組織肉腫、骨がん、中皮腫、内皮起源のがん、血液悪性腫瘍（例えば、多発性骨髄腫、リンパ腫および白血病が挙げられるがそれらに限定されない）、がん発達の危険率の上昇と関連することが公知である前悪性病変、または他の形のがんを処置するかまたはその発生もしくは再発を予防する方法が提供される。これらの方法は、少なくとも２つの異なる薬剤（例えば、インターフェロン、プロスタノイド合成の阻害剤およびＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストが挙げられるがそれらに限定されない）を治療的有効量で被験体に投与することを含む。
【００２５】
一部の実施形態では、被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法であって、治療的有効量でのプロスタグランジン阻害剤（プロスタグランジン合成またはプロスタグランジン応答性の阻害剤など）またはＩＰ−１０／ＣＸＣＬ１０生成を増加させてＭＤＣ／ＣＣＬ２２生成を阻害する他のｃＡＭＰ抑制剤、および治療的有効量のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストを被験体に投与することを含む方法が提供される。
【００２６】
他の実施形態では、インターフェロンまたはＩＰ−１０の活性を増加させる薬剤の治療的有効量、およびプロスタグランジン合成阻害剤の治療的有効量を被験体に投与し、それによって被験体で結腸直腸がんを処置または予防することにより、被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防するための方法が提供される。
【００２７】
自然発生の腫瘍特異的エフェクター細胞だけでなく、アルファ−ＤＣ１または他の型の１型極性化ＤＣ（例えばＬＰＳおよびＩＦＮγの組合せ、またはＴＮＦαおよびＩＦＮγの組合せによって誘導されるもの）を含む、異なるがんワクチンによって誘導される腫瘍特異的エフェクター細胞も、腫瘍特異的Ｔ細胞上で高レベルのＣＣＲ５またはＣＸＣＲ３を発現するので、腫瘍組織でのＣＣＲ５リガンドまたは／およびＣＸＣＲ３リガンドの腫瘍選択的誘導は、そのようなワクチンの適用と組み合わせると特に有効であり得る。
【００２８】
上記および他の特徴および利点は、添付図面を参照して進行する、以下のいくつかの実施形態の詳細な説明からより明白になる。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】ＣＸＣＲ３およびＣＣＲ５を発現する機能的ＣＴＬの誘導での１型極性化樹状細胞（αＤＣ）の優れた活性。Ａ〜Ｃ：αＤＣ１は、複数の腫瘍関連エピトープに対するＣＤ８＋  Ｔ細胞応答の優れたインデューサーである。（Ａ）αＤＣ１またはｓＤＣに、ＨＬＡ−Ａ２によって提示される黒色腫関連ＣＴＬエピトープ（ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００およびチロシナーゼ）を負荷し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ感作（ＩＶＳ）系でＨＬＡ−Ａ２＋黒色腫患者（ＩＶ期）からの自家ＣＤ８＋  Ｔ細胞を感作するために用いた。ＰＢＭＣによる追加の１回の刺激（差の安定性を試験するため）の後、個々のペプチドに応答性であるＣＤ８＋  Ｔ細胞をＥＬＩＳＰＯＴによって検出した。（Ｂ）αＤＣ１で初回刺激されたＣＴＬは、ＨＬＡ−Ａ２が一致した黒色腫細胞を殺傷する。鑑別的に感作されたＣＤ８＋  Ｔ細胞のＨＬＡ−Ａ２＋メラノーマ細胞系殺傷能力を、クロム遊離アッセイを用いて２０日目に試験した。（Ｃ）αＤＣ１は、ＣＥＡ（ＣＡＰ−１エピトープ）に対するＣＤ８＋  Ｔ細胞応答の優れたインデューサーである。結腸直腸がん患者の血液によるＩＶＳ。（Ｄ）αＤＣ１は、ＩＶＳ系（パネルＡに記載される）で、黒色腫特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞上でのＣＸＣＲ３およびＣＣＲ５の優れたインデューサーである。ＭＡＲＴ−１−テトラマー＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞上でのケモカイン受容体の発現を、フローサイトメトリーによって分析した。（Ｄ）自家ＣＬＬ細胞を負荷したαＤＣ１またはｓＤＣを用いた、ＩＶＳ系でのαＤＣ１の高いＣＴＬ誘導活性。２回のＤＣ刺激を用い、ＰＢＭＣ刺激は用いなかった。（Ｅ）Ｔ細胞活性化のＳＥＢ作動モデルを用いたＩＶＳ系での、αＤＣ１および標準（ｓ）ＤＣによって初回刺激されたＣＤ８＋  Ｔ細胞上での鑑別的なＣＣＲ５発現およびＣＣＬ５応答性。
【図２】異なる腫瘍でのＴｅｆｆまたはＴｒｅｇを誘引するケモカインの不均質な発現。結腸がんまたは黒色腫の患者からの腫瘍生検材料を溶解し、ＲＮＡを抽出し、Ｔａｑｍａｎ分析を実施した。（Ａ）黒色腫の皮膚、リンパ節および皮膚の病変でのＴｒｅｇおよびＴｅｆｆを誘引するケモカインの不均質な発現。（Ｂ）異なる結腸直腸がん病変でのＣＸＣＬ１０／ＩＰ１０およびＣＣＬ２２の不均質な発現。
【図３】腫瘍でのＴｅｆｆマーカーおよびＴｒｅｇマーカーの存在は、それぞれＴｅｆｆ誘引ケモカインまたはＴｒｅｇ誘引ケモカインの腫瘍内発現と相関する。結腸がん患者からの腫瘍生検材料を溶解し、ＲＮＡを抽出し、様々なマーカーのＴａｑｍａｎ分析を実施した。（Ａ）腫瘍病変でのＴｅｆｆマーカー（ＣＤ８およびグランザイムＢ；ＧＺＭＢ）とＴｅｆｆ誘引ケモカイン（ＣＣＬ５およびＣＸＣＬ１０）との間の相関。（Ｂ）腫瘍病変でのＴｒｅｇマーカー（ＦＯＸＰ３およびＧＩＴＲ）とケモカインＣＣＬ２２との間の相関。
【図４】腫瘍でのＴｒｅｇマーカーおよびＴｅｆｆマーカーの存在は、Ｔｅｆｆ誘引ケモカインおよびＴｒｅｇ誘引ケモカインの腫瘍内発現と相関する。（Ａ）代替のＣＸＣＲ３リガンドであるＣＸＣＬ９の発現は、ＣＸＣＬ１０の局所発現と、ならびにＴｅｆｆマーカーであるＣＤ８およびＧＺＭＢと相関する。（Ｂ）ＣＣＬ２２とＣＯＸ−２との間の相関、（Ｃ）例：ＣＣＬ２２とＣＸＣＬ１３との間の相関の欠如。
【図５】単離細胞培養物でのケモカイン発現の望ましいパターンの誘導における、ＣＯＸ阻害剤インドメタシン、ＩＦＮαおよびポリ−Ｉ：Ｃの間の相互作用。（Ａ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏで生成されるマクロファージ（「材料および方法」を参照）による、および線維芽細胞（Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌから得た）でのＴｅｆｆ誘引ケモカインおよびＴｒｅｇ誘引ケモカインの生成に及ぼすＩＦＮαおよびポリ−Ｉ：Ｃの用量依存的影響。３つのうち１つの代表的実験からのデータ。（Ｂ）ＥＬＩＳＡ分析による、マクロファージによって生成されたＴｅｆｆ誘引ケモカインおよびＴｒｅｇ誘引ケモカインに及ぼすインドメタシンの影響（Ｎ＝３）。４８時間培養物でのケモカインの濃度は、ＥＬＩＳＡによって分析した。インドメタシンによるＣＣＬ２２生成の抑制に注意されたい。
【図６−１】個々のケモカインモジュレーターへの異なる腫瘍組織の不均質な応答パターン、ならびにＩＦＮα、ポリ−Ｉ：Ｃおよびインドメタシンの組合せへのそれらの均一な応答。（Ａ）１１人の転移性結腸直腸がん患者からの新鮮な腫瘍試料を処理しないか、または個々かもしくは組合せたＩＦＮαおよびポリ−Ｉ：Ｃで４８時間にわたって処理した。培地へのＣＣＬ５およびＣＸＣＬ１０の放出を、ＥＬＩＳＡによって分析した。数字は、各ケモカインパターン（それぞれのパターンＡ、ＢまたはＣ）の腫瘍の発生率を示す。（Ｂ）未処理であるか、またはインドメタシン有りもしくは無しでＩＦＮα＋ｐＩ：Ｃで処理した腫瘍でのＣＣＬ５、ＣＣＬ２２およびＣＸＣＬ１０のＥＬＩＳＡ分析。（Ｃ）同じ患者からの異なる腫瘍病変の、ケモカインモジュレートカクテルの個々の構成成分への不均質な応答（ＣＣＬ５およびＣＸＣＬ１０の生成）。（Ｄ）インドメタシンおよびセレコキシブは、結腸直腸がん病変でのＩＦＮα／ポリ−Ｉ：Ｃによって誘導されるＴｅｆｆ誘引ケモカイン発現を増強するが、Ｔｒｅｇ誘引ケモカイン発現を抑制する。全ての培養物は、４８時間についてであった。３人の異なる患者（ｎ＝３）の腫瘍からの合わせたデータ。
【図６−２】個々のケモカインモジュレーターへの異なる腫瘍組織の不均質な応答パターン、ならびにＩＦＮα、ポリ−Ｉ：Ｃおよびインドメタシンの組合せへのそれらの均一な応答。（Ａ）１１人の転移性結腸直腸がん患者からの新鮮な腫瘍試料を処理しないか、または個々かもしくは組合せたＩＦＮαおよびポリ−Ｉ：Ｃで４８時間にわたって処理した。培地へのＣＣＬ５およびＣＸＣＬ１０の放出を、ＥＬＩＳＡによって分析した。数字は、各ケモカインパターン（それぞれのパターンＡ、ＢまたはＣ）の腫瘍の発生率を示す。（Ｂ）未処理であるか、またはインドメタシン有りもしくは無しでＩＦＮα＋ｐＩ：Ｃで処理した腫瘍でのＣＣＬ５、ＣＣＬ２２およびＣＸＣＬ１０のＥＬＩＳＡ分析。（Ｃ）同じ患者からの異なる腫瘍病変の、ケモカインモジュレートカクテルの個々の構成成分への不均質な応答（ＣＣＬ５およびＣＸＣＬ１０の生成）。（Ｄ）インドメタシンおよびセレコキシブは、結腸直腸がん病変でのＩＦＮα／ポリ−Ｉ：Ｃによって誘導されるＴｅｆｆ誘引ケモカイン発現を増強するが、Ｔｒｅｇ誘引ケモカイン発現を抑制する。全ての培養物は、４８時間についてであった。３人の異なる患者（ｎ＝３）の腫瘍からの合わせたデータ。
【図７】ＩＦＮα、ポリ−Ｉ：Ｃおよびインドメタシンの組合せは、腫瘍組織において、Ｔｅｆｆ誘引ケモカインを一貫して上方制御し、Ｔｒｅｇ誘引ケモカインを一貫して抑制する。（Ａ）未処理のままか、またはインドメタシン、ＩＦＮαおよびポリ−Ｉ：Ｃの組合せ（ＩＡＰ）で処理された腫瘍生検材料でのそれぞれのケモカインｍＲＮＡ（黒いつぶ）のｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション。（Ｂ）１０人の異なる患者からの４８時間培養腫瘍組織（未処理であるかまたは処理された）の上清中のケモカイン含有量のＥＬＩＳＡ分析。
【図８】ＩＦＮα、ポリ−Ｉ：Ｃおよびインドメタシンの組合せへの曝露の後の異なる腫瘍組織での、ＣＸＣＬ１０生成のＮＦ−κＢ依存性の選択的増強。（Ａ）未処理である（左パネル）かまたは処理された（右パネル）、１０人の異なる患者からの、一致させた正常肝臓および肝臓転移組織でのＣＸＣＬ１０発現のＥＬＩＳＡ。（Ｂ）未処理かまたは処理された（右パネル）正常肝臓または肝臓転移組織での、ＮＦ−κＢの核転位を示す１視野あたりの計数された平均細胞数（共焦点顕微鏡法；合計１０視野）。各状態の代表像を、左パネルに示す。（Ｃ）未処理であるかまたは２０μＭのＣＡＹ１０４７０（ＮＦ−κＢ阻害剤）の不在下もしくは存在下で処理された（ＩＦＮα、ポリ−Ｉ：Ｃおよびインドメタシン）、一致させた正常肝臓および肝臓転移結腸直腸がん組織によるＣＸＣＬ１０生成のＥＬＩＳＡ分析。（Ｄ）黒色腫病変でのケモカインモジュレーションの（健康な皮膚に対しての）選択性。異なる黒色腫病変または辺縁の健康な皮膚をＩＦＮα＋ポリ−Ｉ：Ｃで処理し、ＣＸＣＬ１０／ＩＰ１０の分泌レベルをＥＬＩＳＡで測定した。
【図９】正常肝組織と比較した肝転移物でのＣＸＣＬ１０およびＣＣＬ５の選択的誘導：ＮＦ−κＢの役割。辺縁の肝臓組織および肝臓転移結腸直腸がん組織（２４ウェルプレートの１ｍｌに３つの生検材料）の一致された試料を、未処理で、またはＩＦＮα＋ポリ−Ｉ：Ｃ＋インドメタシンで処理して２４時間培養し、（Ａ）ＴａｑｍａｎによってＣＣＬ５およびＣＸＣＬ１０の発現について分析した。（Ｂ）組織を処理しなかったか、または２０μＭのＣＡＹ１０４７０（ＮＦ−κＢ阻害剤）の不在下もしくは存在下で、ＩＦＮα＋ポリ−Ｉ：Ｃ＋インドメタシンで処理した。ＥＬＩＳＡによって、上清をＣＣＬ５生成について分析した（図４の一致させたＣＸＣＬ１０データを参照）。（Ｃ）一致させた辺縁肝臓組織および肝臓転移結腸直腸がんでの肝グリコーゲンホスホリラーゼｍＲＮＡの発現に及ぼすＣＡＹ１０４７０（２０μＭ）の影響。
【図１０】ＩＦＮα、ポリ−Ｉ：Ｃおよびインドメタシンで処理された腫瘍は、Ｔｅｆｆを誘引する増強された能力を示すが、Ｔｒｅｇを誘引する強く低減された能力を示す。（Ａ）トランスウェル走化性アッセイにおいて、ｅｘ  ｖｉｖｏで生成されたＴｅｆｆ（左）または単離されたＣＤ８＋腫瘍浸潤性リンパ球（右）（材料および方法を参照）を、３人の異なる患者からの未処理のまたは処理された腫瘍からの上清へと遊走させた。（Ｂ）負に単離した全ＣＤ４＋  Ｔ細胞を、処理されたかまたは未処理の腫瘍上清へと遊走させた。遊走細胞を溶解し、ＴａｑｍａｎによってＦＯＸＰ３発現について分析した。Ｕ．Ｄ．：検出不能。
【図１１】ＩＦＮによるＴＬＲセンサーのモジュレーション。全腫瘍組織試料、血液から単離したＮＫ細胞または単球由来のＤＣを、ＴＬＲ３およびＭｙＤ８８のｍＲＮＡの自然発生の、およびＩＦＮα（またはＰＧＥ２）で誘導可能な発現について分析した（Ｔａｑｍａｎ）。
【図１２】異なるＴＬＲリガンドおよび代替のＮＦ−κＢ活性化剤は、ＩＰ１０／ＣＸＣＬ１０の誘導においてＩ型インターフェロンおよびＩＩ型インターフェロンと相乗的に作用する。単離細胞を、ＩＦＮαまたはＩＦＮγにより単独で、またはポリ−Ｉ：Ｃ（ＴＬＲ３リガンド）、ＬＰＳ（ＴＬＲ４リガンド）もしくは炎症誘発性サイトカインＴＮＦαと組み合わせて処理した。（Ｂ）ＩＰ１０／ＣＸＣＬ１０遺伝子（ｇｅｔｅ）の誘導は、Ｔａｑｍａｎによって測定した。
【図１３】セレコキシブ（ＣＯＸ２阻害剤）、ＩＦＮαおよびポリ−Ｉ：Ｃの組合せは、化学療法剤メルファランによって処理された黒色腫組織で、Ｔｒｅｇ誘引ケモカインとＴｅｆｆ誘引ケモカインとの間の比（ＣＣＬ２２／ＣＸＣＬ１０間の比）の望ましくない上昇を打ち消す。セレコキシブ、ＩＦＮαおよびポリ−Ｉ：Ｃの三重組合せ（ＣＡＰ）の不在下または存在下で、腫瘍生検材料を漸増濃度のメルファランの存在下でｅｘ  ｖｉｖｏで培養した。ＣＣ２２およびＣＸＣＬ１０の分泌レベルを、ＥＬＩＳＡによって測定した。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
詳細な説明
がんおよび他の疾患の処置および予防のために有効な療法が、本明細書に開示される。これらの方法は、腫瘍病変の中でエフェクター細胞を誘引するケモカインの局所生成を増加させ、同時に調節性Ｔ（ｒｅｇ）細胞を誘引する望ましくないケモカインの局所生成を抑制する薬剤の治療的有効量の投与を含む。これらの方法は、治療的有効量のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストを、プロスタグランジン合成の遮断薬と、１型インターフェロンと、またはプロスタグランジン合成の遮断薬および１型インターフェロンの両方と組み合わせて被験体に投与し、それによって被験体でがんまたは感染性疾患を処置もしくは予防するか、またはそれらの再発を予防することを含む。あるいは、同じパラダイムに由来するが、自己免疫疾患、慢性炎症性疾患または移植拒絶反応を処置または予防することを目的とする方法は、それに限定されずにプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）を含むプロスタグランジン、またはアデニル酸（adelylate）シクラーゼ／ｃＡＭＰ／ＣＲＥＢシグナル伝達経路の他の活性化剤と組み合わせた、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストの組合せを含む。
【００３１】
Ｉ．一般用語
【００３２】
特に明記しない限り、技術用語は従来の用法に従って用いられる。分子生物学での一般用語の定義は、Benjamin  Lewin、Genes  V、発行元Oxford  University  Press、１９９４年（ISBN  0-19-854287-9）；Kendrewら（編）、The  Encyclopedia  of  Molecular  Biology、発行元Blackwell  Science  Ltd.、１９９４年（ISBN  0-632-02182-9）；およびRobert  A.  Meyers（編）、Molecular  Biology  and  Biotechnology:  a  Comprehensive  Desk  Reference、発行元VCH  Publishers,  Inc.、１９９５年（ISBN  1-56081-569-8）に見ることができる。
【００３３】
この開示の様々な実施形態のレビューを容易にするために、具体的な用語の以下の説明が提供される：
【００３４】
ケモカイン：そのソース（勾配に反して）の方への免疫細胞の遊走を誘導する免疫化学誘引物質。ＩＰ１０／ＣＸＣＬ１０、ＲＡＮＴＥＳ／ＣＣＬ５およびＭＤＣ／ＣＣＬ２２は、ケモカインの例である。ＩＰ１０（２つの関連したケモカインＭＩＧ／ＣＸＣＬ９およびＩ−ＴＡＣ／ＣＸＣＬ１１と一緒に）は、全て、Ｔｈ１細胞、ＢＫ細胞およびＣＴＬなどの、全て腫瘍拒絶反応を促進することが公知であるエフェクター型免疫細胞上で主に発現される同じケモカイン受容体：ＣＸＣＲ３に結合する。ＲＡＮＴＥＳ／ＣＣＬ５は、ＣＣＲ５、ＣＣＲ３およびＣＣＲ１に結合する。ＣＸＣＲ３リガンドに類似して、それは、主に免疫エフェクター細胞を誘引し、腫瘍拒絶反応を促進することが公知である。ＭＤＣ／ＣＣＬ２２は、腫瘍を免疫破壊から保護することに関与し、腫瘍進行を促進することが公知である細胞型である調節性Ｔ（ｒｅｇ）細胞上で主に発現されるＣＣＬ４に結合する。「望ましい」ケモカインＩＰ１０、ＭＩＧ、ＩＴＡＣおよびＲＡＮＴＥＳと対照的に、「望ましくない」ケモカインには、望ましくないＴｒｅｇ細胞の誘引を媒介するＭＤＣ／ＣＣＬ２２、ならびに望ましくないＴｒｅｇ細胞およびＭＤＳＣの誘引を媒介するＳＤＦ１／ＣＸＣＬ１２が含まれる。
【００３５】
化学療法剤：異常な細胞成長を特徴とする疾患の処置で治療的有用性を有するあらゆる化学薬剤。そのような疾患には、腫瘍、新生物およびがんが含まれる。一実施形態では、化学療法剤は、結腸直腸がん、黒色腫または別の腫瘍の処置で有用な薬剤である。一実施形態では、化学療法剤は放射性化合物である。当業者は、有用な化学療法剤を容易に特定することができる（例えば、Slapak  and  Kufe、Principles  of  Cancer  Therapy、Harrison’s  Principles  of  Internal  Medicine、１４版の８６章；Perryら、Chemotherapy、Abeloff、Clinical  Oncology２版の１７章、（著作権）２０００年Churchill  Livingstone,  Inc.；Baltzer,  L.、Berkery,  R.（編）：Oncology  Pocket  Guide  to  Chemotherapy、２版St.  Louis、Mosby-Year  Book、１９９５年；Fischer,  D.S.、Knobf,  M.F.、Durivage,  H.J.（編）：The  Cancer  Chemotherapy  Handbook、４版St.  Louis、Mosby-Year  Book、１９９３年を参照）。
【００３６】
併用化学療法は、がんを処置するための複数の薬剤の投与である。一例は、放射性または化学的化合物と併用される、抗体またはその断片の投与である。
【００３７】
シクロオキシゲナーゼ阻害剤：シクロオキシゲナーゼ−２酵素および／またはシクロオキシゲナーゼ−１酵素を選択的に阻害し、プロスタノイドの生成を低減する化合物。
【００３８】
シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）選択阻害剤：シクロオキシゲナーゼ−１酵素よりもシクロオキシゲナーゼ−２酵素を選択的に阻害する化合物。一実施形態では、この化合物は、ヒト全血ＣＯＸ−２アッセイ（Brideauら、Inflamm  Res.、４５巻：６８〜７４頁（１９９６年）に記載される）でシクロオキシゲナーゼ−２の約２μＭ未満のＩＣ５０およびシクロオキシゲナーゼ−１の約５μＭを超えるＩＣ５０を有し、さらに、少なくとも約１０、例えば少なくとも約４０の、シクロオキシゲナーゼ−１阻害に対するシクロオキシゲナーゼ−２阻害の選択性の比を有する。別の実施形態では、この化合物は、シクロオキシゲナーゼ−１の約１μＭを超える、好ましくは２０μＭを超えるＩＣ５０を有する。この化合物は、酵素、リポオキシゲナーゼを阻害することもできる。そのような選択性は、一般的な、ＮＳＡＩＤによって誘導される副作用の発生を低減する能力を示すことができる。
【００３９】
インターフェロン誘導可能タンパク質−１０（ＩＰ−１０）：免疫タンパク質−１０としても公知のサイトカイン；１０ｋＤａのインターフェロン誘導可能タンパク質、さらに：ガンマ−ＩＰ−１０、ＩＮＰ−１０またはＣ７。このタンパク質のラット相同体は、ｍｏｂ−１と呼ばれる。この因子のために、名称ＣＸＣＬ１０も提案されている。遺伝子記号は、ＳＣＹＢ１０である。保存された三次元モチーフおよび直接的な殺微生物活性の存在に基づき、ＩＰ−１０はキノシジン（殺微生物性ケモカイン）に分類されている。
【００４０】
ヒトでは、天然のタンパク質は、９８アミノ酸の長さを有する。それはＰＦ４（血小板因子−４）に相同性を有し、ケモカインとして公知の化学走性サイトカインのファミリーに属する。ＩＰ−１０は、ＣＲＧ−２と呼ばれる遺伝子にも関係している（ＣＲＧ、サイトカイン応答性遺伝子を参照）。マウスＣＲＧ−２およびヒトＩＰ−１０は、相同性であるとみなされる。ヒトＩＰ−１０遺伝子は４つのエクソンを含有し、ケモカインをコードする他の遺伝子の近くの染色体４ｑ１２−２１にマッピングされる。
【００４１】
ＩＰ−１０の受容体は、ＣＸＣＲ３である。ＩＰ−１０は、ウイルスによってコードされるビロセプター（viroceptor）Ｍ３に結合することが明らかにされている。単球、内皮細胞、ケラチノサイトおよび線維芽細胞を含む様々な細胞からのＩＰ−１０の発現は、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αによって誘導される。ヒト好中球は、ＴＮＦ−αまたは細菌性リポ多糖のいずれかと一緒のＩＦＮ−γに応じてＩＰ−１０を生成する。
【００４２】
新生物、悪性腫瘍、がんまたは腫瘍：細胞の異常で無制御の成長の結果。新生物、悪性腫瘍、がんおよび腫瘍は、しばしば互換的に用いられる。個体における腫瘍の量は、腫瘍の数、体積または重量で測定することができる「腫瘍負荷」である。転移しない腫瘍は、「良性」と呼ばれる。周囲の組織に侵入し、および／または転移することができる腫瘍は、「悪性」と呼ばれる。血液学的腫瘍の例には、白血病、例えば急性白血病（例えば、１１ｑ２３陽性急性白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球白血病、急性骨髄性白血病および骨髄芽球、前骨髄球性、骨髄単球性、単核球性および赤白血病）、慢性白血病（例えば、慢性骨髄球（顆粒球）白血病、慢性骨髄性白血病および慢性リンパ球性白血病）、真性赤血球増加症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（無痛性およびハイグレード形）、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、骨髄異形成症候群、毛様細胞性白血病および脊髄形成異常が含まれる。
【００４３】
肉腫およびがん腫などの固形腫瘍の例には、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、および他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、骨髄原発性肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸がん、リンパ系悪性腫瘍、膵がん、乳がん（基底乳がん、腺管がんおよび小葉乳がんを含む）、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、肝細胞がん、扁平上皮がん、黒色腫基底細胞がん、腺がん、汗腺がん、髄様甲状腺がん、乳頭状甲状腺がん、褐色細胞腫脂腺がん、乳頭状がん、乳頭状腺がん、髄様がん、気管支がん、腎細胞がん、肝がん、胆管がん、絨毛がん、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、セミノーマ、膀胱がんおよびＣＮＳ腫瘍（例えば、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣細胞腫、松果体腫、血管芽腫、聴覚神経腫、希突起膠細胞腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫および網膜芽細胞腫）が含まれる。
【００４４】
疾患を予防、処置または改善すること：疾患を「予防する」ことは、疾患の完全な発達を阻害すること、または疾患の発達を遅らせることを指す。「処置すること」は、疾患または病的状態の、それが発達し始めた後の徴候または症状を改善する治療的介入を指す。「改善する」ことは、がんなどの疾患の徴候または症状の数または重症度の低減を指す。
【００４５】
ＰＧＥ２生成。ＰＧＥ２合成の過程は、細胞膜からアラキドン酸を移動させるホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）ファミリーメンバー、アラキドン酸をプロスタグランジンＨ２（ＰＧＨ２）に変換するシクロオキシゲナーゼ（構成的に活性なＣＯＸ１および誘導可能なＣＯＸ２）、およびＰＧＥ２の最終製剤のために必要とされるプロスタグランジンＥ合成酵素（ＰＧＥＳ）を含む。ＰＧＥ２合成および生じる炎症過程の速度はＡＡの局所利用可能性などのさらなる因子の影響を受ける可能性があるが、ほとんどの生理条件では、ＰＧＥ２合成の速度は、ＣＯＸ２の局所の発現および活性によって制御される。
【００４６】
ＰＧＥ２分解。ＰＧＥ２分解の速度は１５−ヒドロキシプロスタグランジンデヒドロゲナーゼ（１５−ＰＧＤＨ）によって制御され、ＰＧＥ２合成の速度に加えて、ＰＧＥ２減衰の速度も免疫調節のための標的となることを示唆する。
【００４７】
ＰＧＥ２応答性。４つの異なるＰＧＥ２受容体は、ＥＰ１、ＥＰ２、ＥＰ３およびＥＰ４である。２つのＧｓ共役型受容体ＥＰ２およびＥＰ４を通してのシグナル伝達は、ＰＧＥ２の抗炎症性および抑制性活性の支配的態様を媒介する、アデニル酸シクラーゼによって誘発されるｃＡＭＰ／ＰＫＡ／ＣＲＥＢ経路によって媒介される。ＥＰ２はほとんどｃＡＭＰ依存性の方法でシグナル伝達すると考えられるが、ＥＰ４はＰＩ３Ｋ依存性ＥＲＫ１／２経路も活性化する。しかし、ＥＰ２およびＥＰ４は、両方ともＧＳＫ３／β−カテニン経路を活性化することが明らかにされている。
【００４８】
特発性の肺線維症患者で観察されるように、ＥＰ２の発現およびそこから生じるＰＧＥ２への応答性は、過メチル化によって抑制することができる。これらの観察は、ＰＧＥ２生成およびその分解の調節に加えて、個々のＰＧＥ２受容体の発現のレベルでのＰＧＥ２応答性の調節もヒト疾患の病因に寄与することができ、それらの療法で活用することもできるという可能性を提議する。この可能性を支持するように、ＥＰ２、ＥＰ３またはＥＰ４シグナル伝達に優先的に影響を及ぼす合成阻害剤の使用は、ＰＧＥ２活性の異なる態様の鑑別的抑制を可能にする（中でレビューされる）。
【００４９】
プロスタグランジン（ＰＧ）合成阻害剤：ＰＧ一般の合成または特定の型のＰＧの合成を阻害する因子。ＰＧ合成阻害剤には、ＰＧ合成経路の２つの鍵酵素ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の非選択的阻害剤、ならびにＣＯＸ−２により特異的であり、より低毒性であると考えられている、ＣＯＸ−２の選択的阻害剤が含まれる。非選択的ＰＧ阻害剤の例には、アスピリン、インドメタシンまたはイブプロフェン（Ａｄｖｉｌ、Ｍｏｔｒｉｎ）が含まれる。ＣＯＸ−２選択的阻害剤の例には、セレコキシブ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ）およびロフェコキシブ（Ｖｉｏｘｘ）が含まれる。ＣＯＸ−１特異的阻害剤の例は、スリンダク（Ｃｌｉｎｏｒｉｌ）である。プロスタグランジン合成を抑制する他の薬剤には、ステロイド（例：ヒドロコルチゾン、コルチゾール、プレドニゾンまたはデキサメタゾン）およびアセトアミノフェン（Ｔｙｌｅｎｏｌ、Ｐａｎａｄｏｌ）が含まれ、一般的に抗炎症剤、解熱剤および鎮痛剤として用いられる。最も一般的に用いられる選択的ＣＯＸ２阻害剤の例には、セレコキシブ、アレコキシブ、バルデコキシブおよびロフェコキシブが含まれる。
【００５０】
最も一般的に用いられる非選択的ＣＯＸ１およびＣＯＸ２阻害剤の例には、以下のものが含まれる：アセチルサリチル酸（アスピリン）および他のサリチル酸塩、アセトアミノフェン（Ｔｙｌｅｎｏｌ）、イブプロフェン（Ａｄｖｉｌ、Ｍｏｔｒｉｎ、Ｎｕｐｒｉｎ、Ｒｕｆｅｎ）、ナプロキセン（Ｎａｐｒｏｓｙｎ、Ａｌｅｖｅ）、ナブメトン（Ｒｅｌａｆｅｎ）またはジクロフェナク（Ｃａｔａｆｌａｍ）。
【００５１】
プロスタグランジン（ＰＧ）シグナル伝達阻害剤：プロスタグランジンは多数の受容体を通してシグナル伝達し、鍵となる免疫抑制作用は、アデニル酸シクラーゼの活性化、そこから生じる細胞内環状（ｃ）ＡＭＰ、ＰＫＡの上昇、および下流でのＰＫＡ／ＣＲＥＢ経路の活性化によって媒介される。
【００５２】
ＰＧ応答性に対する別のレベルの干渉には、ＰＧ受容体へのそれらの結合に対する干渉が含まれる。ＰＧＥ２の場合には、２つの鍵となるｃＡＭＰ活性化受容体はＥＰ２およびＥＰ４であり、それらに対していくつかの特異的阻害剤が存在する。
【００５３】
プロスタグランジンまたは他の因子によって誘導されるｃＡＭＰレベルの増加は、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ；現在公知の６つの型、ＰＤＥ１〜ＰＤＥ５およびＰＤＥ１０、それらは細胞内ｃＡＭＰのレベルを低減する）によって阻止することができる。ＰＤＥはホスホジエステラーゼ阻害剤によって制御することができ、それらには、キサンチン（カフェイン、アミノフィリン、ＩＢＭＸ、ペントキシフィリン、テオブロミン、テオフィリンまたはパラキサンチン）のような物質が含まれ、それらは全て、細胞内ｃＡＭＰ、ならびに、ビンポセチン、シロスタゾール、イナムリノン、シロスタゾール、メセンブリン、ロリプラム、イブジラスト、ドロタベリン、ピクラミラスト、シルダフェニル、タダラフィル、ベルデナフィルまたはパパベリンを含むより選択的な合成および天然の因子のレベルを増加させる。
【００５４】
さらに、ＰＧＥ２シグナル伝達に対する（または、ベータアドレナリンアゴニストの、ヒスタミンなどの他のｃＡＭＰ上昇因子のシグナル伝達に対する）干渉は、ＰＫＡまたはＣＲＥＢなどのｃＡＭＰの下流シグナルの阻害によって達成することができる。
【００５５】
治療的有効量：がんの発達の危険率を低下させるか、またはがんの徴候および症状を減少させることなどの所望の応答を、単独で、または１つまたは複数のさらなる治療薬と一緒に誘導する、治療薬（例えば、ＩＰ−１０、またはＩＰ−１０／ＣＸＣＬ１０および／もしくはＲＡＮＴＥＳ／ＣＣＬ５の生成を増加させるか、ＣＣＬ２２の生成を減少させるか、またはＣＸＣＲ３および／もしくはＣＣＲ５を発現し、ＣＸＣＬ１０もしくはＣＣＬ５の方へ遊走することが可能な免疫細胞の数もしくは特質を増加させる薬剤）の量。一例において、それは、被験体で黒色腫または結腸直腸がんなどの腫瘍の発達を予防するかまたは遅らせるのに必要な薬剤の量である。別の例では、それは、黒色腫または結腸直腸がんを有する被験体などの被験体で、腫瘍の転移を予防するかもしくは遅らせるか、既存の腫瘍の退行を引き起こすか、または腫瘍と関連する１つまたは複数の徴候もしくは症状を処置するのに必要な薬剤の量である。理想的には、治療的有効量は、被験体で実質的な有害作用を引き起こすことなく、治療効果を提供する。本明細書に開示される調製物は、治療的有効量で投与される。
【００５６】
一例において、所望の応答は、腫瘍の発達を予防することである。別の例では、所望の応答は、例えば少なくとも約３カ月、少なくとも約６カ月、少なくとも約１年、少なくとも約２年、少なくとも約５年または少なくとも約１０年、腫瘍の発達、進行または転移を遅らせることである。さらなる例では、所望の応答は、結腸直腸がんまたは黒色腫などのがんの発生を減少させることである。別の例では、所望の応答は、腫瘍または転移のサイズ、体積または数などの、がんの徴候および症状を減少させることである。例えば、一部の例では、組成物は、治療的組成物の不在下での応答と比較して、腫瘍（結腸直腸腫瘍など）のサイズ、体積または数を、所望の量、例えば少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、またはさらに少なくとも９０％減少させることができる。
【００５７】
一般に、ヒト被験体に投与される組成物の有効量は、その被験体と関連するいくつかの因子、例えば被験体の全体の健康状態、処置される状態または状態の重症度によって異なる。組成物の有効量は、製品の投薬量を変えて、生じた治療応答、例えば結腸直腸がんもしくは黒色腫などのがんの発生の減少、または腫瘍のサイズ、体積もしくは数の減少を測定することによって判断することができる。いかなる薬剤も、所望の応答を得るために必要に応じて単一の用量で、または数用量で投与することができる。しかし、有効量は、適用されるソース、処置される被験体、処置される状態の重症度および型、ならびに投与の経路、速度および頻度を含む投与様式、ならびに活性化合物の各々またはそれらの組合せの製剤、ならびにお互いの、および全体的な患者ケア（外科手術、放射線療法、化学療法、生物学的療法または症状管理の任意の手段）の他の構成要素に対する各構成成分の投与の相対的タイミングに依存してもよい。
【００５８】
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）：病原体認識および先天性免疫の活性化で基本的な役割をする受容体のファミリー。ＴＬＲはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａからヒトまで高度に保存され、構造的および機能的類似点を共有する。それらは、感染因子上で発現される病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を認識し、有効な免疫の発達のために必要なサイトカインの生成を媒介する。広く研究されて、ＮＦ−κＢ経路を活性化することが公知である９個（ＴＬＲ１〜９）を含む、合計１３個の哺乳動物のＴＬＲがある。
【００５９】
Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）：Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）ファミリーのメンバー。そのアミノ酸配列は、２００９年１月２日現在、ＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿００３２５６で示され、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。ＴＬＲ３は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のメンバーである。この受容体は胎盤およびすい臓で最も豊富に発現され、白血球の樹状亜集団に制限される。それはウイルス感染と関連するｄｓＲＮＡを認識し、ＮＦ−κＢの活性化およびＩ型インターフェロンの生成を誘導する。ＴＬＲ３のｍＲＮＡ配列はＮＣＢＩ受託番号ＮＭ＿００３２６５に記載され、２００９年１月２日現在、それも参照により組み込まれる。ＴＬＲ３はＷＯ９８／５０５４７に記載され、その開示も参照により本明細書に組み込まれる。用語「ＴＬＲ３遺伝子」は、Ｔｏｌｌ様受容体３遺伝子、ならびにその対立遺伝子（例えば、生殖細胞系突然変異）を含む、その変異体、類似体および断片を称す。そのような変異体には、例えば、個体間での対立遺伝子の変異により天然に存在する変異体（例えば、多型）、選択的スプライシング形などが含まれる。いくつかの実施形態では、変異体はＮＣＢＩ受託番号ＮＭ＿００３２６５の配列に実質的に相同的であり、例えば、参照配列と少なくとも約６５％、少なくとも約７５％、少なくとも約８５％、または少なくとも約９５％のヌクレオチド配列同一性を有する。ＴＬＲ３遺伝子の変異体および類似体には、上で定義される配列（またはその相補鎖）と、高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする核酸配列も含まれる。ヒトＴＬＲ３のＤＮＡ配列の遺伝子多型、例えばＴＬＲ３遺伝子の細胞質領域およびＴＬＲ３遺伝子の直近５’配列での対立遺伝子の変異（Pirielら（２００５年）Tissue  Antigens６６巻（２号）：１２５頁を参照、その開示は参照により本明細書に組み込まれる）、例えば、ＴＬＲ３遺伝子の２５９３位のＣ／Ｔ多型、２６４２位のＣ／Ａ多型および２６９０位のＡＪＧ多型が公知である。
【００６０】
ＩＩ．Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−β）およびＩＩ型インターフェロン（ＩＦＮ−γ）などの、ＣＸＣＲ３リガンドおよびＣＣＲ５リガンドの生成を増加させる薬剤
【００６１】
本明細書で用いられる用語「インターフェロン−α」は、ウイルス複製および細胞増殖を阻害し、免疫応答をモジュレートする関連したポリペプチドのファミリーを指す。用語「ＩＦＮ−α」、「ＩＦＮ−アルファ」または「ＩＦＮ−ａ」には、天然に存在するＩＦＮ−ａポリペプチド；天然に存在しないＩＦＮ−ａポリペプチド；および親の天然に存在するかまたは天然に存在しないＩＦＮ−ａの抗ウイルス活性を保持する、天然に存在するかまたは天然に存在しないＩＦＮ−ａの類似体が含まれる。
【００６２】
適するアルファインターフェロンには、それらに限定されないが、天然に存在するＩＦＮ−ａ（天然に存在するＩＦＮ−ａ２ａ、ＩＦＮ−ａ２ｂを含むがこれらに限定されない）；組換え体インターフェロンα−２ｂ、例えばイントロンＡ、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ、Ｎ．Ｊ．から入手できるインターフェロン；組換え体インターフェロンα−２ａ、例えばＨｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ、Ｎｕｔｌｅｙ、Ｎ．Ｊ．から入手できるＲｏｆｅｒｏｎ（ｇ）インターフェロン；組換え体インターフェロンα−２Ｃ、例えばＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ，Ｉｎｃ．、Ｒｉｄｇｅｆｉｅｌｄ、Ｃｏｎｎ．から入手できるＢｅｒｏｆｏｒアルファ２インターフェロン；インターフェロンα−ｎ１、天然のアルファインターフェロンの精製されたブレンド、例えばＳｕｍｉｔｏｍｏ、Ｊａｐａｎから入手できるＳｕｍｉｆｅｒｏｎ、または、Ｇｌａｘｏ−Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  Ｌｔｄ．、Ｌｏｎｄｏｎ、Ｇｒｅａｔ  Ｂｒｉｔａｉｎから入手できるＷｅｌｌｆｅｒｏｎインターフェロンアルファ−ｎ１（ＩＮＳ）；およびインターフェロンアルファ−ｎ３、Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓによって作製され、Ｐｕｒｄｕｅ  Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ  Ｃｏ．、Ｎｏｒｗａｌｋ、Ｃｏｎｎ．から入手できる天然のアルファインターフェロンの混合物が含まれる。
【００６３】
ＩＦＮ−アルファは、コンセンサスＩＦＮ−ａも包含する。「コンセンサスＩＦＮ−ａ」は、天然に存在しないポリペプチドを指し、それは、全ての天然に存在するヒト白血球ＩＦＮ−ａサブタイプ配列に共通するアミノ酸残基を含み、それは、全てのサブタイプに共通するアミノ酸がない位置の１つまたは複数に、その位置に主に出現するアミノ酸を含むが、ただし、全てのサブタイプに共通するアミノ酸がないそのような位置では、ポリペプチドは少なくとも１つの天然に存在するサブタイプに存在しないいかなるアミノ酸残基も排除する。全ての天然に存在するヒト白血球ＩＦＮ−ａサブタイプ配列に共通するアミノ酸残基（「共通アミノ酸残基」）、および非共通残基に圧倒的に出現するアミノ酸残基（「コンセンサスアミノ酸残基」）は、当技術分野で公知である。コンセンサスＩＦＮ−ａ（「ＣＩＦＮ」および「ＩＦＮ−ｃｏｎ」および「コンセンサスインターフェロン」とも呼ばれる）は、それらに限定されずに、米国特許第４，６９５，６２３号および第４，８９７，４７１号に開示されるＩＦＮ−ｃｏｎ１、ＩＦＮ−ｃｏｎ２およびＩＦＮ−ｃｏｎ３と呼ばれるアミノ酸配列；ならびに天然に存在するインターフェロンアルファ（例えば、Ｉｎｆｅｒｇｅｎ（ｇ）、ＩｎｔｅｒＭｕｎｅ，Ｉｎｃ．、Ｂｒｉｓｂａｎｅ、Ｃａｌｉｆ．）のコンセンサス配列の判定によって規定されるコンセンサスインターフェロンを包含する。ＩＦＮ−ｃｏｎ１は、Ｉｎｆｅｒｇｅｎ（Ｄ  ａｌｆａｃｏｎ−１製品）中のコンセンサスインターフェロン薬剤である。Ｉｎｆｅｒｇｅｎコンセンサスインターフェロン製品は、本明細書ではその商標名（Ｉｎｆｅｒｇｅｎ（Ｚ）またはその一般名（インターフェロンａｌｆａｃｏｎ−１））で呼ばれる。ＩＦＮ−ｃｏｎをコードするＤＮＡ配列は、前記の特許または他の標準方法に記載されているように合成することができる。ＣＩＦＮの使用は、特に興味がある。
【００６４】
ＩＦＮ−ａおよび異種ポリペプチドを含む融合体ポリペプチドも、本明細書に開示される方法で用いるのに適する。適するＩＦＮ−ａ融合体ポリペプチドには、それに限定されないが、Ａｌｂｕｆｅｒｏｎ−アルファ（ヒトアルブミンおよびＩＦＮ−ａの融合生成物；Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；例えば、Osbornら（２００２年）J  Pharmacol.  Exp.  Therap.３０３巻：５４０〜５４８頁を参照）が含まれる。ＩＦＮ−ａの遺伝子シャッフル形も、本発明で用いるのに適する。例えば、Masciら（２００３年）Curr.  Oncol.  Rep.５巻：１０８〜１１３頁を参照。
【００６５】
ＩＦＮ−ａポリペプチドは、任意の公知の方法によって生成することができる。ＩＦＮ−ｃｏｎをコードするＤＮＡ配列は、上記の特許または他の標準方法に記載されているように合成することができる。多くの実施形態では、ＩＦＮ−ａポリペプチドは、細菌宿主、例えばＥ．ｃｏｌｉ、または真核生物の宿主細胞（例えば、酵母；ＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞；など）に形質転換またはトランスフェクトされた、製造されたＤＮＡ配列の発現生成物である。これらの実施形態では、ＩＦＮ−ａは組換え体である。宿主細胞が細菌宿主細胞である場合、ＩＦＮ−ａはＮ末端メチオニンを含むように改変される。Ｅ．ｃｏｌｉで生成されるＩＦＮ−ａは、当業者に公知であり、ＩＦＮ−ｃｏｎ１に関してKleinら（（１９８８年）J  Chromatog.４５４巻：２０５〜２１５頁）で概説される手法によって一般に精製される。
【００６６】
細菌で生成されたＩＦＮ−ａは、Ｎ−末端アミノ酸残基に関してアイソフォームの混合物を含むことができる。例えば、精製されたＩＦＮ−ｃｏｎは、Ｎ−末端メチオニン状態に関してアイソフォームの混合物を含むことができる。例えば、一部の実施形態では、ＩＦＮ−ｃｏｎは、Ｎ末端メチオニルＩＦＮ−ｃｏｎ、未ブロック化Ｎ末端を有するデス−メチオニルＩＦＮ−ｃｏｎ、およびブロック化Ｎ末端を有するデス−メチオニルＩＦＮ−ｃｏｎの混合物を含む。一非限定例として、精製されたＩＦＮ−ｃｏｎ１は、メチオニルＩＦＮ−ｃｏｎ１デス−メチオニルＩＦＮ−ｃｏｎ１およびブロック化Ｎ末端を有するデス−メチオニルＩＦＮ−ｃｏｎ１の混合物を含む。Kleinら（（１９９０年）Arch.  Biochemistry  &amp;  Biophys.２７６巻：５３１〜５３７頁）。あるいは、ＩＦＮ−ｃｏｎは、特定の単離されたアイソフォームを含むことができる。ＩＦＮ−ｃｏｎのアイソフォームは、当業者に公知である等電集束法などの技術によって互いから切り離される。本明細書に記載されるＩＦＮ−ａは、１つまたは複数の改変アミノ酸残基、例えば、グリコシル化、化学的改変などを含むことができる。
【００６７】
用語「ＩＦＮ−ａ」は、血清半減期などの特定の特性を変更するために誘導体化される（例えば、化学改変される）、ＩＦＮ−ａの誘導体も包含する。このように、用語「ＩＦＮ−ａ」には、グリコシル化ＩＦＮ−ａ；ポリエチレングリコールで誘導体化されたＩＦＮ−ａ（「ペグ化ＩＦＮ−ａ」）；などが含まれる。ペグ化ＩＦＮ−ａ、およびこの分子の作製方法は、米国特許第５，３８２，６５７号；第５，９８１，７０９号；および第５，９５１，９７４号で議論される。ペグ化ＩＦＮ−ａは、ＰＥＧおよび上記のＩＦＮ−ａ分子のいずれかのコンジュゲート、例えば、それらに限定されないが、インターフェロンアルファ−２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ、Ｈｏｆｆｍａｎ  Ｌａ−Ｒｏｃｈｅ、Ｎｕｔｌｅｙ、Ｎ．Ｊ．）、インターフェロンアルファ−２ｂ（Ｉｎｔｒｏｎ、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、インターフェロンアルファ−２ｃ（Ｂｅｒｏｆｏｒ  Ａｌｐｈａ、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ、Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）とコンジュゲートしたＰＥＧ；ならびに天然に存在するインターフェロンアルファ（Ｉｎｆｅｒｇｅｎ＆ｃｏｍｍａｔ；ＩｎｔｅｒＭｕｎｅ，Ｉｎｃ．、Ｂｒｉｓｂａｎｅ、Ｃａｌｉｆ．）のコンセンサス配列の判定によって規定されるコンセンサスインターフェロンとコンジュゲートしたＰＥＧを包含する。
【００６８】
前述のＩＦＮ−ａポリペプチドのいずれも、１つまたは複数のポリエチレングリコール部分で改変する、例えばペグ化することができる。ペグ化されたＩＦＮ−ａポリペプチドのＰＥＧ分子は、ＩＦＮ−ａポリペプチドの１つまたは複数のアミノ酸側鎖とコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ペグ化されたＩＦＮ−ａは、ただ１つのアミノ酸上にＰＥＧ部分を含有する。他の実施形態では、ペグ化ＩＦＮ−ａは、２つ以上のアミノ酸上にＰＥＧ部分を含有し、例えば、ＩＦＮ−ａは、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の異なるアミノ酸残基に付着するＰＥＧ部分を含有する。
【００６９】
ＩＦＮ−ａは、アミノ基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基またはカルボキシル基を通して、ＰＥＧに直接に（例えば連結基なしで）結合することができる。一部の実施形態では、ペグ化されたＩＦＮ−ａは、ＩＦＮ−ａポリペプチドのアミノ末端（Ｎ末端）で、またはその近くでペグ化され、例えば、ＰＥＧ部分はアミノ酸１からアミノ酸４まで、またはアミノ酸５から約１０までの１つまたは複数のアミノ酸残基でＩＦＮ−ａポリペプチドとコンジュゲートされる。他の実施形態では、ペグ化ＩＦＮ−ａは、約１０から約２８までの１つまたは複数のアミノ酸残基でペグ化される。他の実施形態では、ペグ化ＩＦＮ−ａは、ＩＦＮ−ａポリペプチドのカルボキシル末端（Ｃ末端）、またはその近くで、例えばアミノ酸１５６〜１６６、またはアミノ酸１５０〜１５５の１つまたは複数の残基でペグ化される。他の実施形態では、ペグ化ＩＦＮ−ａは、アミノ酸１００〜１１４の１つまたは複数の残基の１つまたは複数のアミノ酸残基でペグ化される。ＩＦＮ−ａ上のポリエチレングリコールの付着部位の選択は、当業者に公知であるように、タンパク質の受容体結合および／または活性部位ドメインの中での部位の各々の役割によって判断される。一般に、ペグ化を避けるべきアミノ酸には、アミノ酸３０からアミノ酸４０までのアミノ酸残基；およびアミノ酸１１３からアミノ酸１４９までのアミノ酸残基が含まれる。一部の実施形態では、ＰＥＧは連結基を通じてＩＦＮ−ａに付着する。連結基は任意の生体適合性の連結基であり、そこで、「生体適合性」は、化合物または基が非毒性であり、損傷、病気、疾患または死を引き起こすことなくｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで利用することができることを示す。ＰＥＧは、例えばエーテル結合、エステル結合、チオール結合またはアミド結合を通して、連結基に結合することができる。適する生体適合性の連結基には、それらに限定されないが、エステル基、アミド基、イミド基、カルバメート基、カルボキシル基、ヒドロキシル基、炭水化物、スクシンイミド基（例えば、スクシンイミジルスクシネート（ＳＳ）、スクシンイミジルプロピオネート（ＳＰＡ）、スクシンイミジルカルボキシメチレート（ＳＣＭ）、スクシンイミジルスクシンアミド（ＳＳＡ）またはＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を含む）、エポキシド基、オキシカルボニルイミダゾール基（例えば、カルボニルジミダゾール（ＣＤＩ）を含む）、ニトロフェニル基（例えば、ニトロフェニルカルボネート（ＮＰＣ）またはトリクロロフェニルカルボネート（ＴＰＣ）を含む）、トリシレート基、アルデヒド基、イソシアネート基、ビニルスルホン基、チロシン基、システイン基、ヒスチジン基または一級アミンが含まれる。スクシンイミジルプロピオネート（ＳＰＡ）およびスクシンイミジルブタノエート（ＳＢＡ）エステル活性化ＰＥＧを作製する方法は、米国特許第５，６７２，６６２号（Harrisら）およびＷＯ９７／０３１０６に記載されている。ＰＥＧをＩＦＮ−ａポリペプチドに付着させる方法は当技術分野で公知であり、任意の公知の方法を用いることができる。例えば、Parkら、Anticancer  Res、１巻：３７３〜３７６頁（１９８１年）；ZaplipskyおよびLee、Polyethylene  Glycol  Chemistry:  Biotechnical  and  Biomedical  Applications、J.  M.  Harris編、Plenum  Press、NY、２１章（１９９２年）；および米国特許第５，９８５，２６５号を参照。ペグ化ＩＦＮ−ａは、米国特許第５，３８２，６５７号；第５，９８１，７０９号；第５，９８５，２６５号；および第５，９５１，９７４号でも開示される。ペグ化ＩＦＮ−ａは、ＰＥＧおよび上記のＩＦＮ−ａ分子のいずれかのコンジュゲート、例えば、それらに限定されないが、インターフェロンアルファ−２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ、Ｈｏｆｆｍａｎ  ＬａＲｏｃｈｅ、Ｎｕｔｌｅｙ、Ｎ．Ｊ．）、そこでペグ化されたＲｏｆｅｒｏｎはＰＥＧＡＳＹＳＸ（Ｈｏｆｆｍａｎ  ＬａＲｏｃｈｅ）として公知である；インターフェロンアルファ−２ｂ（Ｉｎｔｒｏｎ、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、そこでペグ化されたＩｎｔｒｏｎはＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮＯ（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）として公知である；インターフェロンアルファ−２ｃ（Ｂｅｒｏｆｏｒ  Ａｌｐｈａ、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ、Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）とコンジュゲートされるＰＥＧを包含する。
【００７０】
インターフェロンベータ（ＩＦＮβまたはＩＦＮ−β）：同じ受容体（インターフェロンＩ型受容体）を通してシグナル伝達し、ＩＦＮ−ａと類似した生物学的機能を有すると考えられている１型ＩＦＮファミリーのメンバー。インターフェロンベータは、Ａｖｏｎｅｘ（Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）、Ｒｅｂｉｆ（Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ）またはＣｉｎｎｏＶｅｘ（ＣｉｎｎａＧｅｎは生物学的に類似する）の名称の下で販売される。
【００７１】
インターフェロンガンマ（ＩＦＮγまたはＩＦＮ−γ）：ＩＩ型ＩＦＮとも呼ばれ、別々の受容体によってシグナル伝達することが公知であるが、Ｉ型インターフェロンのように部分重複するシグナル伝達経路を活性化し、エフェクター細胞を誘引するケモカインの生成を促進するそれらの能力を共有する。
【００７２】
ＩＩＩ．ＴＬＲ３アゴニスト
【００７３】
ＴＬＲ３アゴニストは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてＴＬＲ３および／またはＴＬＲ３活性化と関連する生化学事象の以降のカスケードを活性化する任意の適する薬剤から選択することができる。ＴＬＲ３アゴニスト活性を検出するアッセイは当技術分野で公知であり、例として、ＮＦ−κＢリポータープラスミドからのルシフェラーゼ（ｌｕｃ）生成または内因性のＩＬ−８の誘導の検出が含まれる（K.  Karikoら、J.  Immunol.２００４年、１７２巻：６５４５〜４９頁、その開示は参照により本明細書に組み込まれる）。試験化合物のＴＬＲ３アゴニズムを検出するためのアッセイも、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ０３／３１５７３、ＷＯ０４／０５３０５７、ＷＯ０４／０５３４５２およびＷＯ０４／０９４６７１に記載され、それぞれの開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【００７４】
使用される特定のアッセイに関係なく、化合物によるアッセイの実施が、ＴＬＲ３によって媒介されることが公知である一部の生物学的活性の少なくとも閾値の増加をもたらす場合は、その化合物はＴＬＲ３のアゴニストとして同定することができる。反対に、ＴＬＲ３によって媒介される生物学的活性を検出するように設計されたアッセイを実施するために用いられるとき、化合物が生物学的活性の閾値の増加を導き出すのに失敗する場合は、その化合物はＴＬＲ３のアゴニストとして作用しないと特定することができる。特に明記しない限り、生物学的活性の増加とは、適当な対照で観察されるものを超える、同じ生物学的活性の増加を指す。アッセイは、適当な対照と一緒に実施されても、実施されなくてもよい。経験上、対照を実施することが特定のアッセイで化合物のＴＬＲ３アゴニズムを判断するのに必ずしも必要でないように、当業者は、特定のアッセイで十分な熟知を発達させることができる（例えば、特定のアッセイ条件下で適当な対照で観察される値の範囲）。所与のアッセイで特定の化合物がＴＬＲ３のアゴニストであるかないかを判断するためのＴＬＲ３媒介生物学的活性の正確な閾値増加は、当技術分野で公知の因子、例えば、それらに限定されないが、アッセイのエンドポイントとして観察される生物学的活性、アッセイのエンドポイントを測定または検出するために用いられる方法、アッセイのＳＮ比、アッセイの精度、および複数のＴＬＲに対する化合物のアゴニズムを判断するために同じアッセイが用いられているかどうか、によって異なることができる。当業者は、そのような因子を熟慮して適当な閾値を容易に判断することができる。しかし、使用される特定のアッセイに関係なく、化合物によるアッセイの実施が、ＴＬＲ３によって媒介される一部の生物学的活性の少なくとも閾値の増加をもたらす場合は、化合物はＴＬＲ３のアゴニストとして一般に同定することができる。
【００７５】
発現可能なＴＬＲ３構造遺伝子でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞を使用するアッセイは、細胞にトランスフェクトされたＴＬＲ３のアゴニストとして化合物を同定するために、化合物が、例えば約１μＭから約１０μＭの濃度で提供されるとき、例えば、ＴＬＲ３によって媒介される生物学的活性（ＮＦ−κＢ活性化など）の少なくとも３倍の増加の閾値を用いることができる。しかし、特定の状況では、異なる閾値および／または異なる濃度範囲が適することがある。
【００７６】
ＴＬＲ３アゴニストは、アゴニスト抗体、そのような抗体のアゴニスト断片、そのような抗体もしくは断片のキメラバージョン、または別の活性抗体誘導体であってよい。本発明で有益なＴＬＲ３アゴニスト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術のいずれかによって生成することができる。一般的に、それらは、マウスなどのヒト以外の動物の、ＴＬＲ３タンパク質またはＴＬＲ３ペプチドを含む免疫原による免疫化によって生成される。免疫原は、原状のＴＬＲ３を発現する腫瘍細胞、ＴＬＲ３発現細胞からの細胞膜、ＴＬＲ３タンパク質（組換えで生成されるか、天然のソースから単離される）の完全長配列、またはその断片もしくは誘導体、一般的には免疫原性断片、例えばＴＬＲ３を発現する細胞の表面で曝露されるエピトープを含むポリペプチドの一部を含むことができる。
【００７７】
一部の実施形態では、免疫原は、野生型ヒトＴＬＲ３ポリペプチドまたはその免疫原性断片を、一般的にＴＬＲ−３発現細胞の膜分画に由来する脂質膜に含む。具体的な実施形態では、免疫原は、原状のままであるか、任意選択で化学的または物理的に溶解された、全ＴＬＲ３を発現する腫瘍細胞を含む。
【００７８】
モノクローナルまたはポリクローナル抗体の調製は当技術分野で周知であり、多数の利用可能な技術のいずれかを用いることができる（例えば、Kohler  &  Milstein、Nature２５６巻：４９５〜４９７頁（１９７５年）；Kozborら、Immunology  Today４巻：７２頁（１９８３年）；Coleら、７７〜９６頁、Monoclonal  Antibodies  and  Cancer  Therapy（１９８５年）を参照）。免疫原でヒト以外の哺乳動物を免疫化するステップは、当技術分野で周知である任意の様式で実行することができる（例えば、E.  HarlowおよびD.  Lane、Antibodies:  A  Laboratory  Manual.、Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press、Cold  Spring  Harbor、NY（１９８８年）を参照）。一般に、免疫原は、任意選択で完全フロイントアジュバントなどのアジュバントと一緒に、緩衝液に懸濁されるか溶解される。免疫原の量、緩衝液の型およびアジュバントの量を決める方法は当業者に周知であり、本発明を制限するものでは決してない。同様に、抗体生成を刺激するのに十分な免疫化の場所および頻度も、当技術分野で周知である。一般的な免疫化プロトコルでは、１日目および約１週後に再び、ヒト以外の動物に抗原を腹腔内に注射する。これの後に、２０日目頃に、任意選択で不完全フロイントアジュバントなどのアジュバントと一緒の抗原のリコール注射が続く。リコール注射は静脈内に実施され、数日連続して繰り返すことができる。これの後に、４０日目に一般的にアジュバントなしで、静脈内または腹腔内へのブースター注射が続く。このプロトコルは、約４０日後に抗原特異的抗体産生Ｂ細胞の生成をもたらす。免疫化で用いられる抗原に対する抗体を発現するＢ細胞の生成をもたらす限り、他のプロトコルを利用することもできる。別の実施形態では、非免疫化のヒト以外の哺乳動物からのリンパ球を単離し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで増殖させ、次に細胞培養で免疫原に曝露させる。リンパ球を次に収集し、下記の融合ステップを実行する。
【００７９】
本方法で使用するためのアゴニスト抗体を生成するのに好ましいモノクローナル抗体のために、次のステップは、免疫化されたヒト以外の哺乳動物からの細胞、例えばリンパ球、脾細胞またはＢ細胞の単離、および抗体産生ハイブリドーマを形成するための、それらの脾細胞またはＢ細胞またはリンパ球の不死化細胞との以降の融合である。例えばヒト以外の哺乳動物からの脾細胞の単離は当技術分野で周知であり、麻酔下のヒト以外の哺乳動物から脾臓を取り出すこと、それを小片に切断すること、および、単一細胞懸濁液を生成するために、脾臓莢膜から、細胞ストレーナーのナイロンメッシュを通して脾細胞を適当な緩衝液に絞り出すことを一般に含む。細胞を洗浄し、遠心分離し、赤血球を溶解する緩衝液に再懸濁させる。溶液を再び遠心分離し、ペレット中の残りのリンパ球は新鮮な緩衝液に最後に再懸濁させる。単離され、単一細胞懸濁液に存在すると、抗体産生細胞を不死細胞系と融合させる。これは一般的にマウス骨髄腫細胞系であるが、ハイブリドーマを作製するのに有益な他の多くの不死細胞系が当技術分野で公知である。好ましいマウス骨髄腫系には、それらに限定されないが、ＳａＩｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．Ｕ．Ｓ．Ａ．から入手できるＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍に由来するもの、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ  Ｕ．Ｓ．Ａ．から入手できるＸ６３  Ａｇ８６５３およびＳＰ−２細胞に由来するものが含まれる。融合は、ポリエチレングリコールまたはその他を用いて実行される。生じるハイブリドーマは、未融合の親の骨髄腫細胞の増殖または生存を阻害する１つまたは複数の物質を含有する選択培地で次に増殖させる。例えば、親の骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスフォリボシル転移酵素（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合は、ハイブリドーマのための培地はヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを一般的に含み（ＨＡＴ培地）、それらの物質はＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を阻止する。
【００８０】
ハイブリドーマは、マクロファージのフィーダー層上で増殖させることができる。マクロファージは、好ましくは、脾細胞を単離するために用いられるヒト以外の哺乳動物の腹子からのものであり、ハイブリドーマを平板培養する数日前に不完全フロイントアジュバントなどで一般的に初回刺激される。融合方法は、例えば（Goding、「Monoclonal  Antibodies:  Principles  and  Practice」、５９〜１０３頁（Academic  Press  、１９８６年））に記載され、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。細胞は、コロニー形成および抗体産生に十分な時間、選択培地で増殖させる。これは、通常７日から１４日の間である。ハイブリドーマコロニーからの上清は、次にＴＬＲ３タンパク質を特異的に活性化する抗体の生成について試験される。１つまたは複数の異なるコロニーが存在するかどうか判断するために、所望の抗体産生に陽性なウェルを検査する。複数のコロニーが存在する場合は、単一の細胞だけが所望の抗体を生成するコロニーを生成したことを保証するために、細胞を再クローニングして増殖させることができる。単一の明白なコロニーを有する陽性ウェルは、ただ１つのモノクローナル抗体が検出され、生成されることを保証するために、一般的に再クローニングされ、再試験される。
【００８１】
ＴＬＲ３アゴニストモノクローナル抗体を生成することが確認されるハイブリドーマは、次に、適当な培地、例えばＤＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０でより大きな量で成長させる。あるいは、ハイブリドーマ細胞は、動物で腹水腫瘍としてｉｎ  ｖｉｖｏで増殖させることができる。所望のモノクローナル抗体の生成に十分な増殖の後、モノクローナル抗体含有増殖培地（または腹水液）を細胞から分離し、その中に存在するモノクローナル抗体を精製する。精製は、ゲル電気泳動、透析、プロテインＡまたはプロテインＧ−セファロースを用いるクロマトグラフィー、アガロースまたはセファロースビーズなどの固体支持体に連結された抗マウスＩｇによって一般的に達成される（全ては、例えば、Antibody  Purification  Handbook、Amersham  Biosciences、刊行物番号１８−１０３７−４６、AC版に記載され、その開示は参照により本明細書に組み込まれる）。結合抗体は、低ｐＨ緩衝液（ｐＨ３．０以下のグリシンまたは酢酸緩衝液）を用いて、抗体含有分画の即時中和により、プロテインＡ／プロテインＧカラムから一般的に溶出される。これらの分画をプールし、透析して、必要に応じて濃縮する。特定の実施形態では、ＴＬＲ３をアゴナイズする抗体をコードするＤＮＡをハイブリドーマから単離し、適当な宿主へのトランスフェクションのために適当な発現ベクターに入れる。宿主は次に、抗体の抗原認識部分を含む抗体、その変異体、その活性断片またはヒト化もしくはキメラ抗体の組換え生成のために用いられる。本発明のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手法を用いて（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能であるオリゴヌクレオチドプローブを用いて）、容易に単離し、配列決定をすることができる。単離されると、ＤＮＡを発現ベクターに入れることができ、それは、さもなければ免疫グロブリンタンパク質を生成しないＥ．ｃｏｌｉ細胞、サルのＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞または骨髄腫細胞などの宿主細胞に次にトランスフェクトさせて、組換え体宿主細胞でのモノクローナル抗体の合成を得る。抗体をコードするＤＮＡの細菌での組換え発現は、当技術分野で周知である（例えば、Skerraら（１９９３年）Curr.  Op.  Immunol.５巻：２５６頁；およびPluckthun（１９９２年）Immunol.  Revs.１３０巻：１５１頁を参照）。
【００８２】
例えばWardら（１９８９年）Nature３４１巻：５４４頁に開示されるように、抗体は、免疫グロブリンの組合せライブラリーの選択によって生成することもできる。ＴＬＲ３アゴニスト抗体は、完全長抗体または抗体の断片もしくは誘導体であってよい。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片；ダイアボディ；単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；１つの軽鎖可変ドメインだけ、または軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含有するその断片を含有し、会合する重鎖部分を含有しない単鎖ポリペプチド；１つの重鎖可変ドメインだけ、または重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含有するその断片を含有し、会合する軽鎖部分を含有しない単鎖ポリペプチド；ならびに、抗体断片から生じた多重特異的抗体が含まれる。そのような断片および誘導体、ならびにそれらの調製方法は、当技術分野で周知である。例えば、ヒンジ領域のジスルフィド結合の下で抗体を消化して、Ｆ（ａｂ）’２、それ自体ジスルフィド結合によってＶＨ−ＣＨ１に連結される軽鎖であるＦａｂの二量体、を生成するためにペプシンを用いることができる。Ｆ（ａｂ）’２を温和条件下で還元して、ヒンジ領域のジスルフィド結合を切断し、それによってＦ（ａｂ）’２二量体をＦａｂ’単量体に変換することができる。Ｆａｂ’単量体は、ヒンジ領域の一部を有する事実上Ｆａｂである（Fundamental  Immunology（Paul編、３版、１９９３年）を参照）。原状抗体の消化に関して様々な抗体断片が規定されるが、そのような断片は、化学的にかまたは組換えＤＮＡ方法を用いることのいずれかにより、新規に合成することができることを当業者は認める。
【００８３】
小分子ＴＬＲ３アゴニストは、約１５００ダルトン未満の有機分子であってよい。小分子ＴＬＲ３アゴニストの設計および選択（例えば、組合せライブラリーからの）または合成は、ＴＬＲ３の公知の結晶構造を用いることにより達成することができる（Choeら、Science.、３０９巻、５８１〜８５頁（２００５年）、その開示は参照により本明細書に組み込まれる）。この設計または選択は、公知の二本鎖ＲＮＡアゴニストが結合する推定上の結合ポケット（複数可）を満たす、様々な部分の選択から始めることができる。個々の結合ポケットを満たすために部分を選択するために、いくつかの方法がある。これらには、結晶構造、および選択された部分のモデルの様々な結合ポケットへの手動ドッキングから解明される活性部位の物理的モデルまたはコンピュータモデルの目視検査が含まれる。当技術分野で周知であり、入手できるモデル化ソフトウェアを用いることができる。これらには、ＱＵＡＮＴＡ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ、Ｍａｓｓ．、１９９２年）およびＳＹＢＹＬ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｔｒｉｐｏｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．、１９９２年）が含まれる。このモデル化ステップの後に、ＣＨＡＲＭＭおよびＡＭＢＥＲなどの標準の分子力学力場によるエネルギー最小化が続くことができる。（Weinerら、J.  Am.  Chem.  Soc、１９８４年、１０６巻、７６５頁；Brooksら、J.  Comp.  Chem.１９８３年、４巻、１８７頁）。さらに、完全な分子または分子断片のいずれかをＴＬＲ３アゴニスト結合部位に最適に入れる過程で支援するために、いくつかのより専門化したコンピュータプログラムがある。これらには以下が含まれる：ＧＲＩＤ（Goodford,  P.  J.  A  Computational  Procedure  for  Determining  Energetically  Favorable  Binding  Sites  on  Biologically  Important  Macromolecules.、J.  Med.  Chem.１９８５年、２８巻、８４９〜８５７頁）。ＧＲＩＤは、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｏｘｆｏｒｄ、ＵＫから入手できる；ＭＣＳＳ（Mariner,  A.；Karplus,  M.  Functionality  Maps  of  Binding  Sites:  A  Multiple  Copy  Simultaneous  Search  Method.、Proteins:  Structure,  Function  and  Genetics１９９１年、１１巻、２９〜３４頁）。ＭＣＳＳは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ、Ｍａｓｓ．から入手できる；およびＤＯＣＫ（Kuntz,  I.  D.；Blaney,  J.  M.；Oatley,  S.  J.；Langridge,  R.；Ferrin,  T.  E.  A  Geometric  Approach  to  Macromolecule-Ligand  Interactions.、J.  Mol.  Biol.１９８２年、１６１巻、２６９〜２８８頁）。ＤＯＣＫは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｃａｌｉｆ．から入手できる。
【００８４】
適する結合配向が選択されると、生物学的評価のために完全な分子を選択することができる。分子断片の場合、それらは単一のアゴニストに組み立てることができる。このアセンブリーは、様々な部分を中心の足場と接続することによって達成することができる。アセンブリー過程は、例えば、目視検査と、続くＱｕａｎｔａまたはＳｙｂｙｌなどのソフトウェアを再び用いる手動モデル設定によって行うことができる。様々な部分を接続するための方法を選択するのを助けるために、いくつかの他のプログラムを用いることもできる（Bartlettら、CAVEAT:  A  Program  to  Facilitate  the  Structure-  Derived  Design  of  Biologically  Active  Molecules.、「Molecular  Recognition  in  Chemical  and  Biological  Problems」、Special  Pub.、Royal  Chem.  Soc.１９８９年、７８巻、１８２〜１９６頁）。アゴニスト化合物の上記のコンピュータ支援モデル化に加えて、ＴＬＲ３の空のアゴニスト結合部位を用いるかまたは公知のアゴニストのいくつかの部分を任意選択で含めることによって、ＴＬＲ３アゴニストを「新規に」構築することができる。そのような方法は当技術分野で周知である。
【００８５】
薬剤のモデル化のために一般的に用いられるいくつかの技術を、使用することができる（レビューについては、Cohenら、「Molecular  Modeling  Software  and  Methods  for  Medicinal  Chemistry」、J.  Med.  Chem.、１９９０年、３３巻、８８３頁を参照）。同様に、特定の薬剤設計プロジェクトに適用することができる技術の化学文献には、いくつかの例がある。レビューについては、Navia,  M.  A.およびMurcko,  M.  A.、Current  Opinions  in  Structural  Biology、１９９２年、２巻、２０２頁を参照。これらの特定の適用のいくつかの例には、以下が含まれる：Baldwin,  J.  J.ら、J.  Med.  Chem.、１９８９年、３２巻、２５１０頁；Appelt,  K.ら、J.  Med.  Chem.、１９９１年、３４巻、１９２５頁；およびEalick,  S.  E.ら、Proc.  Nat.  Acad.  Sci.  USA、１９９１年、８８巻、１１５４０頁。小分子ＴＬＲ３アゴニストの設計またはモデル化の代替手段は、ＴＬＲ３アゴニストの既存の小分子化学ライブラリーをスクリーニングすることである。そのようなライブラリーは、本明細書に記載されるものを含む、当技術分野で公知である任意のＴＬＲ３アゴニストアッセイでスクリーニングすることができる。化合物ライブラリーは、より高いスループットのアッセイ、例えば公知の標識ＴＬＲ３アゴニスト、例えば二本鎖ＲＮＡ分子ｐｏｌｙＬｐｏｌｙＣまたはポリＡ：ｐｏｌｙＵによる競合アッセイを用いて、最初にスクリーニングすることができる。競合アッセイで陽性である化合物は、次に、ＴＬＲ３を活性化して、生化学事象の以降のカスケードを引き起こすそれらの能力についてさらに試験される。
【００８６】
核酸をベースとしたＴＬＲ３アゴニストは、二本鎖リボ核酸の領域を含む。用語「二本鎖」は、リボヌクレオチドが相補的なリボヌクレオチドに水素結合して（塩基対）二本鎖構造を形成するアゴニストの部分を意味する。好ましくは、核酸をベースとしたＴＬＲ３アゴニスト全体は、リボヌクレオチドおよび化学改変されたリボヌクレオチド（「ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニスト」）からなる。より好ましくは、ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストの少なくとも５０％は、ｉｎ  ｖｉｖｏ条件下で二本鎖の立体構造である。さらに好ましいのは、ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストの少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９７％がｉｎ  ｖｉｖｏ条件下で二本鎖の立体構造である場合である。ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストのどのくらいの百分率が二本鎖立体構造であるかについての判断は、塩基対をなしているヌクレオチドの数を分子中のヌクレオチドの総数で割ることによって達成される。したがって、３’末端および５’末端の両方で２つのヌクレオチドオーバーハングを有する２１塩基対分子は、塩基対をなす４２ヌクレオチドおよび塩基対をなしていない４ヌクレオチドを有し、それを４２／４６または９１．３％二本鎖にするであろう。同様に、各鎖の中央の２つのヌクレオチドを除いて全てのヌクレオチドでお互いに相補的である２つの２１ヌクレオチド鎖で構成される分子は、塩基対をなす３８（１９＋１９）ヌクレオチドおよび塩基対をなしていない４（２＋２）ヌクレオチドを有するであろう。そのような分子は、３８／４２または９０．５％二本鎖であろう。
【００８７】
ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストの二本鎖領域は、単一のＲＮＡ分子（例えば、ステムアンドループ構造、例えばヘアピンＲＮＡおよびｓｈＲＮＡ）の自己相補領域によって、全体または一部においてお互いとハイブリダイズする２つのＲＮＡ分子（二本鎖ＲＮＡのように）によって、または両方の混合物（例えば、ＲＮＡの部分的自己相補的分子、およびヘアピンの形成後一本鎖のままである前者の領域とハイブリダイズする第２のＲＮＡ分子）によって形成することができる。ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストは、アゴニストのいずれかの末端の３’および／もしくは５’オーバーハングなどの一本鎖領域、ならびに／またはアゴニストの中の「ミスマッチ」もしくは「ループ外」構造を含むこともできる。ｓｈＲＮＡの場合、ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストは、発現ベクターに存在するＤＮＡ配列によってコードされる。発現ベクターは、被験体に投与される分子である。発現ベクターは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩまたはＥｌによって活性化されるプロモーター、およびターミネーター配列を一般的に含み、それぞれはその適切な転写を保証するためにｓｈＲＮＡコード配列に作動可能に連結される。ＲＮＡポリメラーゼπによって活性化されるプロモーターには、Ｕ６、ｔＲＮＡｖａｌ、Ｈ１および前述のものの改変バージョンが含まれるが、これらに限定されない。ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩによって活性化されるプロモーターには、ＣＭＶおよびＥＦ  １αが含まれるが、これらに限定されない。一実施形態では、プロモーターは誘導可能なプロモーターまたは腫瘍細胞特異的プロモーターである。本明細書に用いられる文脈の中で、用語「ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニスト」は、二本鎖領域を含む任意の治療的または予防的に有効なＲＮＡ化合物を指す。そのような化合物は、それ自体が一般的に活性である；それらはポリペプチドをコードしないか、活性であるために翻訳を必要としない。ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストは、いかなる長さであってもよい。好ましくは、ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストは、少なくとも約１０塩基対（ｂｐ）、２０ｂｐ、３０ｂｐ、５０ｂｐ、８０ｂｐ、１００ｂｐ、２００ｂｐ、４００ｂｐ、６００ｂｐ、８００ｂｐまたは１０００ｂｐの長さを有する。一態様では、ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストは、３０ｂｐ、５０ｂｐ、８０ｂｐ、１００ｂｐまたは２００ｂｐ未満の鎖長を有する短いｄｓＲＮＡである。別の実施形態では、ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストはより長いｄｓＲＮＡであるが、４００ｂｐ、６００ｂｐ、８００ｂｐまたは１０００ｂｐ未満の鎖長を有する。別の実施形態では、ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストは、１０００ｂｐを超える鎖長を有する長いｄｓＲＮＡである。一態様では、ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストは、ｄｓＲＮＡ分子の不均質な混合物を含む組成物であり、そこで、複数の分子は異なる長さを有する。好ましくは、そのような組成物中のｄｓＲＮＡ分子は、平均すると少なくとも約１０ｂｐ、２０ｂｐ、３０ｂｐ、５０ｂｐ、８０ｂｐ、１００ｂｐ、２００ｂｐ、４００ｂｐ、６００ｂｐ、８００ｂｐまたは１００ｂｐの長さを有する。別の実施形態では、ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニスト組成物は、複数のｄｓＲＮＡ分子を含み、そこで��ｄｓＲＮＡ分子の少なくとも２０％、５０％、８０％、９０％または９８％は、１鎖につき少なくとも約１０ｂｐ、２０ｂｐ、３０ｂｐ、５０ｂｐ、８０ｂｐ、１００ｂｐ、２００ｂｐ、４００ｂｐ、６００ｂｐ、８００ｂｐまたは１０００ｂｐの長さを有する。一例において、ｄｓＲＮＡは、１鎖につき１０〜３０、より好ましくは２０〜３０ｂｐを有する短いｄｓＲＮＡである。別の例では、ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニスト組成物は、ｄｓＲＮＡ分子の実質的に均質な混合物を有し、そこで、各鎖上の実質的に全ての分子が、３０ｂｐ、５０ｂｐ、８０ｂｐ、１００ｂｐまたは２００ｂｐを超えて鎖長が異なることはない。組成物中のｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストの平均鎖長は、例えばゲル浸透クロマトグラフィーによって容易に求めることができる。そのような組成物中のｄｓＲＮＡ分子の１つまたは複数は、任意選択で、がん抗原を標的にするｓｉＲＮＡ分子である。ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニスト中のリボヌクレオチドは、天然物であるか合成物であってよく、天然ヌクレオチドの化学改変された誘導体または類似体であってよい。改変には安定化改変が含まれ、したがって、ホスホジエステル結合および／または糖、および／または塩基上の少なくとも１つの改変を含むことができる。例えば、ｄｓＲＮＡの片方または両方の鎖は、１つまたは複数のホスホロチオエート結合、ホスホロジチオエート結合、および／またはメチルホスホネート結合；糖の２’位の改変、例えば２’−Ｏ−メチル改変、２’−Ｏ−メトキシエチル改変、２’−アミノ改変、２’−デオキシ改変、２’−ハロゲン改変、例えば２’−フルオロ；上記の組合せ、例えば２’−デオキシ−２’−フルオロ改変；非環式ヌクレオチド類似体を独立して含むことができ、少なくとも１つのホスホジエステル結合を含むこともできる。
【００８８】
ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストで用いられるオリゴヌクレオチドは、塩基の改変または置換を含むこともできる。改変塩基には、他の合成のおよび天然に存在する塩基、例えば、５−メチルシトシン（５−Ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンおよびイノシンの６−メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびイノシンの２−プロピルおよび他のアルキル誘導体、２−チオウラシルおよび２−チオシトシン、５−ハロウラシルおよびシトシン、ピリミジン塩基の５−プロピニル（−Ｃ＝Ｃ−ＣＨ３）ウラシルおよびシトシンおよび他のアルキニル誘導体、６−アゾウラシルおよびシトシン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、Ｓ−チオアルキル、８−ヒドロキシルおよび他の８−置換アデニンおよびイノシン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチルおよび他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルイノシンおよび７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザイノシンおよび８−アザアデニン、７−デアザイノシンおよび７−デアザアデニンおよび３−デアザイノシンおよび３−デアザアデニンが含まれる。
【００８９】
他の改変には、３’および／または５’末端キャップ、末端の３’−５’結合、および５’末端のリン酸基または改変リン酸基が含まれる。末端キャップ部分の例には、反転デオキシ無塩基部分、反転デオキシヌクレオチド、またはグリセリル部分が含まれるが、これらに限定されない。さらに、片方または両方の鎖（二本鎖ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストの場合）は、リンカー（複数可）で連結される２つ以上のオリゴヌクレオチド配列からなるコンカテマーであってよいか、それを含むことができる。これらの改変の全ては、当技術分野で周知である（例えば、Kandimallaら（（２００３年）Nucl.  Acid.  Res.３１巻（９号）：２３９３〜２４００頁）を参照）。有効なインターフェロン誘起物質となるそれらの能力を評価する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）の以前の研究は、ｄｓＲＮＡ薬剤が二重らせんの二次構造を保有しなければならないことを示唆した。ＴＬＲ３アゴニストとして適することも示された他のｄｓＲＮＡ薬剤には、相補的でないか完全には相補的でない二本鎖ポリヌクレオチドが含まれ；これらは、いわゆる「ミスマッチ」または「ループ外」構造として公知であり、転移ｔＲＮＡ、リボソームＲＮＡおよびウイルスＲＮＡ二次構造などの天然に存在するＲＮＡに存在する。１つの一般的に引用されるｄｓＲＮＡ化合物、Ａｍｐｌｉｇｅｎは、ポリＬｐｏｌｙ  Ｃ構造中のシチジンのいくつかの部分がウリジンと交換される構造（すなわちミスマッチＲＮＡ）を含む；この化合物は、親のポリＩｉｐｏｌｙＣのそれと類似した生理活性を有することが報告されている。しかし、いかなる型および構成のＴＬＲ３アゴニストも、開示される方法に従って用いることができることが理解される。一般に、ポリヌクレオチドは、十分な時間巨大分子のままでいるためにヌクレアーゼに抵抗性である必要がある；それらがらせん複合体の状態であるとき、ポリヌクレオチドは、ヌクレアーゼ攻撃により感受性でない。しかし、Ａｍｐｌｉｇｅｎ（商標）などの特定の類似体は、それらのＴＬＲ３アゴニスト活性を保持するようである。特定の実施形態では、これらのｄｓＲＮＡの各鎖は、約５〜５０塩基、より好ましくは５から４０、３５、３０、２５または２０の間の塩基を含む長さを有することができる。各鎖は、好ましくは他に完全に相補的である。そのようなｄｓＲＮＡの好ましい例は、ホモポリＲＮＡ、例えば各鎖が同じ塩基の反復を事実上含むか；またはホモポリＲＮＡ領域を含むｄｓＲＮＡである。
【００９０】
そのようなホモポリＲＮＡ鎖中の塩基は、任意の天然に存在する塩基（例えば、ポリＡ、ポリＵ、ポリＣ、ポリＧ）または天然に存在しない（例えば、化学的に合成されたか改変された）塩基（例えば、ポリＩ）であってよい。ポリイノシン−ポリシチジル酸、すなわち、ポリ（Ｉ）：ポリ（Ｃ）またはポリＬＣおよびポリアデニル−ポリウリジル酸、すなわち、ポリ（Ａ）：ポリ（Ｕ）またはポリＡ：Ｕによって象徴されるポリヌクレオチドは、当技術分野で周知の化合物であり、免疫細胞によるインターフェロン生成を誘導することが公知である。したがって一部の実施形態では、本発明による使用のためのＴＬＲ３アゴニストは、以下からなる群から選択される二本鎖ＲＮＡである：ポリイノシン酸およびポリシチジル酸、ポリアデニル酸およびポリウリジル酸、ポリイノシン酸類似体およびポリシチジル酸、ポリイノシン酸およびポリシチジル酸類似体、ポリイノシン酸類似体およびポリシチジル酸類似体、ポリアデニル酸類似体およびポリウリジル酸、ポリアデニル酸およびポリウリジル酸類似体、ならびにポリアデニル酸類似体およびポリウリジル酸類似体。本明細書で用いられる用語「類似体」は、上記のヌクレオチド改変のいずれかを意味する。ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストは、塩基の任意の組合せを含むことができ、任意の適する方法を用いて設計することができることが理解されよう。好ましくは、二本鎖の領域の塩基要件、ヌクレアーゼ攻撃に対する安定性および抵抗性、ならびに鎖長に対する好みが考慮される。例えばｒＡｎ：ｒＵｎまたはｒＩｎ：ｒＣｎ複合体に関して、任意のｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストのこれらの特性、ならびに相対的ＴＬＲ３アゴニスト活性を試験し、評価することができる。ヌクレアーゼに対する安定性および抵抗性を増加させるか、またはインターフェロン誘導作用を増加させるか任意選択で減少させるための処置をとることができる。
【００９１】
ｄｓＲＮＡの他の例には、米国特許第５，２９８，６１４号および第６，７８０，４２９号に記載される核酸が含まれる。米国特許第５，２９８，６１４号は、二本鎖核酸誘導体の鎖長が特定の範囲内に限定される場合は、生じる物質が所望の生理活性を著しくより少ない毒性で示し、塩基対の数によって計算するとき、約５０〜１０，０００の長さを有するポリヌクレオチドを提供することを開示する。核酸ポリマー中のプリンまたはピリミジン環が少なくとも１つのＳＨ基で置換される誘導体も記載され、または、前記誘導体は、ジスルフィド結合または両方を含有する（ポリＣに存在する硫黄原子とシチジル酸の好ましい数比は１：６から３９である）。米国特許第６，７８０，４２９号は、塩基対の数によって計算するとき、約１００〜１，０００、好ましくは２００〜８００、より好ましくは３００〜６００の長さを有する「短縮鎖」である、特定の型のｄｓＲＮＡ化合物を記載する。後者の化合物は、ポリヌクレオチドの加水分解の間に起こり、２’−５’ホスホジエステル結合によってとって代わられる短縮鎖ポリヌクレオチド分子中の３’−５’ホスホジエステル結合の部分をもたらすことができる、疑似回転と呼ばれる機構を通して３’位置から２’位置への分子内転位を同時に引き起こすリン酸基を避けるように設計された方法により、少数の２’−５’ホスホジエステル結合を含有すると報告されている。
【００９２】
ＴＬＲ３アゴニストとしての使用に適することができる他の核酸アゴニストは、以下で提供される：Fieldら：Proc.  Nat.  Acad.  Sci.  U.S.５８巻、１００４頁（１９６７年）；Fieldら：Proc.  Nat.  Acad.  Sci.  U.S.５８巻、２１０２頁（１９６７年）；Fieldら：Proc.  Nat.  Acad.  Sci.  U.S.６１巻、３４０頁（１９６８年）；Tytellら：Proc.  Nat.  Acad.  Sci.  U.S.５８巻、１７１９頁（１９６７年）；Fieldら：J.  Gen.  Physiol.５６巻、９０５頁（１９７０年）；De  Clercqら：Methods  in  Enzymology、７８巻、２９１頁（１９８１年）。いくつかの合成核酸誘導体が記載され、例えば、ホモポリマー−ホモポリマー複合体がある（ポリＩ：ＣまたはポリＡ：Ｕが親構造であるものなどの二本鎖核酸ポリマー、そこで、これらのホモポリマー−ホモポリマー複合体は以下を含有する：（１）ポリイノシン酸−ポリ（５−ブロモシチジル酸）、ポリイノシン酸−ポリ（２−チオシチジル酸）、ポリ（７−デアザイノシン酸）−ポリシチジル酸、ポリ（７−デアザイノシン酸）−ポリ（５−ブロモシチジル酸）、およびポリイノシン酸−ポリ（５−チオウリジル酸）によって例示される塩基改変；（２）ポリ（２’−アジドイノシン酸）−ポリシチジル酸によって例示される糖改変；ならびに（３）ポリイノシン酸−ポリ（シチジル−５’−チオリン酸）によって例示されるリン酸改変。記載されている他の合成核酸誘導体には、ポリ（アデニル酸−ウリジル酸）によって例示される交互コポリマー；ならびにポリイノシン酸−ポリ（シチジル酸−ウリジル酸）およびポリイノシン酸−ポリ（シチジル酸−４−チオウリジル酸）によって例示されるホモポリマー−コポリマー複合体が含まれる。記載されている他の合成核酸誘導体には、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸−ポリ−Ｌ−リシンカルボキシ−メチルセルロース複合体（「ポリＩＣＬＣ」と呼ばれる）によって例示される、合成核酸とポリカチオンとの複合体が含まれる。合成核酸誘導体のさらに別の例は、ポリイノシン酸−ポリ（１−ビニルシトシン）である。
【００９３】
ＴＬＲ３アゴニストの一例は、ＡＭＰＬＩＧＥＮ（商標）（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍｄ．、Ｕ．Ｓ．Ａ．のＨｅｍｉｓｐｈｅｒｘ，Ｉｎｃ．）、ｒＩｎ：ｒ（Ｃｘ、ＵまたはＧ）ｎなどのポリリボイノシン酸およびポリリボシチジル酸／ウリジル酸の複合体によって形成されるｄｓＲＮＡであり、式中、ｘは４から２９までの値を有する、例えばｒＩｎ：ｒ（Ｃｊ２Ｕ）ｎ−。ＡＭＰＬＩＧＥＮ（商標）と同様にふるまう多くのミスマッチｄｓＲＮＡポリマーが研究されている；ポリＬＣに基づくミスマッチｄｓＲＮＡは、一定割合のウラシル塩基またはグアニジン塩基、例えばそのような塩基を５個中１個から３０個中１個を含有する、ポリイノシネートおよびポリシチジレートの複合体を含んでいた。他の形の天然および／または合成のｄｓＲＮＡに対するミスマッチｄｓＲＮＡの鍵となる治療的利点は、米国特許第３，６６６，６４６号に記載されるものなどの化合物に勝る、報告された毒性低減である。本発明による二本鎖ＲＮＡの具体例には、Ｐｏｌｙａｄｅｎｕｒ（Ｉｐｓｅｎ）およびＡｍｐｌｉｇｅｎ（Ｈｅｍｉｓｐｈｅｒｘ）がさらに含まれる。ＰｏｌｙａｄｅｎｕｒはポリＡ／Ｕ  ＲＮＡ分子であり、すなわち、ポリＡ鎖およびポリＵ鎖を含有する。Ｐｏｌｙａｄｅｎｕｒは、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染の可能な処置のために開発された。ＡＭＰＬＩＧＥＮ（商標）は、ポリＩ／ポリＣ化合物（または、ポリＩ／ポリＣ１２Ｕ  ＲＮＡ分子を含むその変異体）のものである。ＡＭＰＬＩＧＥＮ（商標）は、例えば、ＥＰ２８１３８０またはＥＰ１１３１６２に開示されている。ＡＭＰＬＩＧＥＮ（商標）は、がん、ウイルス感染症および免疫障害の処置のために提案されている。それは、筋痛性脳脊髄炎（ＭＥ、または慢性疲労症候群／慢性疲労免疫不全症候群、ＣＦＳ／ＣＦＩＤＳ）の可能な処置のために主に開発された。
【００９４】
使用のためのｄｓＲＮＡの特定の例は、ポリＡ／ポリＵ領域を含むｄｓＲＮＡであり、前記ｄｓＲＮＡの各鎖は２５未満の塩基を含有する。使用のためのｄｓＲＮＡの別の特定の例は、ポリＩ／ポリＣ（Ｕ）領域を含むｄｓＲＮＡであり、前記ｄｓＲＮＡの各鎖は２５未満の塩基を含有する。さらなるｄｓＲＮＡが文献に開示されているか開発することができ、それらは本方法で用いることができる。より一般には、任意の合成二本鎖のホモポリＲＮＡ、ならびに本明細書に記載される他の任意のｄｓＲＮＡを用いることができる。一実施形態では、ｄｓＲＮＡは、１９〜３０塩基対（例えば、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または、３０塩基対）からなり、１〜３０個の安定化改変ならびに／または３’および／もしくは５’キャップを含む、完全に二本鎖（例えば、平滑末端；無オーバーハング）のポリＡ：ポリＵ分子である。安定化改変およびキャップは上に記載され、当技術分野で周知である。安定化改変および／またはキャップの存在は、ｄｓＲＮＡを血清分解に対してより抵抗性にする。安定化改変には、ホスホロチオエートのヌクレオチド間結合、２’−デオキシリボヌクレオチド、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−フルオロリボヌクレオチド、「ユニバーサル塩基」ヌクレオチド、「非環式」ヌクレオチド、５−Ｃ−メチルヌクレオチドおよび末端グリセリルおよび／または反転デオキシ無塩基残基組込みが含まれる。これらの化学的改変は、ｄｓＲＮＡ化合物の血清安定性を劇的に増加させることが公知である。安定化ｄｓＲＮＡの一例は、ＳＴＥＡＬＴＨ（商標）ＲＮＡｉ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡから市販されている）である。安定化ｄｓＲＮＡの別の例は、ポリ−ＩＣＬＣ（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ、Ｏｎｃｏｖｉｒによって生産される）である。
【００９５】
別の実施形態では、ｄｓＲＮＡ  ＴＬＲ３アゴニストは、腫瘍細胞抗原または腫瘍増殖に関与する別のタンパク質をコードするｍＲＮＡと特異的にハイブリダイズするように設計される、ｓｉＲＮＡ分子またはｓｈＲＮＡ分子である。この実施形態では、ｄｓＲＮＡ分子は、がんの処置で二重の役割を演ずる。それは、ＴＬＲ３のアゴニストでもあり、特異的腫瘍抗原発現のサプレッサーでもある。細胞タンパク質を標的にするｓｉＲＮＡ分子およびｓｈＲＮＡ分子は、ＴＬＲ３を介する配列依存性遺伝子抑制および配列非依存性作用の両方を示すことが実証されている（K.  Karikoら、J.  Immunol.、２００４年、１７２巻：６５４５〜６５４９頁）。したがって、腫瘍抗原または腫瘍増殖特異的ｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡ分子は、がん細胞ではＴＬＲ３のアゴニストでもあると予想される。
【００９６】
ＮＦ−κＢ経路を活性化することも公知である代替Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ１〜９）のリガンド：広く研究されて、ＮＦ−κＢ経路を活性化することが公知である９個（ＴＬＲ１〜９）を含む、哺乳動物で同定された合計１３個のＴＬＲがある。
【００９７】
活性化ＴＬＲは、シグナル伝達を開始するために、細胞細胞質中でアダプター分子を動員する。少なくとも４つのアダプター分子、ＭｙＤ８８、ＴＩＲＡＰ（Ｍａ１）、ＴＲＩＦおよびＴＲＡＭが、シグナル伝達に関与することが公知である。
【００９８】
ＴＬＲシグナル伝達は、２つの異なるシグナル伝達経路、ＭｙＤ８８依存性およびＴＲＩＦ依存性経路に分けられる。ＭｙＤ８８依存性応答はＴＬＲ受容体の二量体化によって起こり、ＴＬＲ３以外のあらゆるＴＬＲによって利用される。ＭｙＤ８８活性化の主な作用は、ＮＦ−κＢの活性化である。ＭｙＤ８８（ＴＩＲファミリーのメンバー）は、ＩＲＡＭキナーゼＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２およびＩＲＡＫ４を動員する。ＩＲＡＫキナーゼは、シグナル伝達タンパク質ＴＲＡＦ６をリン酸化および活性化し、それは次に、ＩＫＫβへの結合を促進するためにタンパク質ＴＡＫ１ならびにそれ自体をポリユビキチン化する。結合後、ＴＡＫ１はＩＫＫβをリン酸化し、それは次にＩκＢをリン酸化してその分解を引き起こし、ＮＦ−κＢが細胞核に入って転写を活性化することを可能にする。
【００９９】
ＴＲＬ３およびＴＲＬ４の両方は、ＴＲＩＦ依存性経路を利用し、それはｄｓＲＮＡおよびＬＰＳによってそれぞれ誘発される。ＴＲＬ３については、ｄｓＲＮＡは受容体の活性化につながり、アダプターＴＲＩＦを動員する。ＴＲＩＦは、キナーゼＴＢＫ１およびＲＩＰ１を活性化する。ＴＲＩＦ／ＴＢＫ１シグナル伝達複合体はＩＲＦ３をリン酸化して、核へのその浸入およびＩ型ＩＦＮの生成を促進する。ＲＩＰ１の活性化は、ＴＡＫ１のポリユビキチン化および活性化を引き起こす（ＭｙＤ８８シグナル伝達およびＮＦ−κＢ転写との接続経路、他のＴＬＲシグナル伝達のＭｙＤ８８依存性経路に類似する）。
【０１００】
ＩＶ．プロスタグランジン合成阻害剤
【０１０１】
プロスタグランジン、特にプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）は、多くの多様な生理的および病態生理学的機能に関与する。これらのエイコサノイドは、アラキドン酸へのプロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼの作用によって生成される。プロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ活性は、プロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ−１およびプロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ−２と呼ばれる２つの別個の、独立して調節されるアイソザイムから生じ、２つの異なる遺伝子によってコードされる。
【０１０２】
プロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ−１は構成的に発現され、特に血小板凝集、胃での細胞防護および正常な腎臓機能の調節で生理的役割を演ずると考えられる。プロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ−２（ＰＧＥ２）は誘導可能なアイソザイムであり、プロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ−２の発現は、エンドトキシン、サイトカインおよびマイトジェンを含む様々な薬剤によって誘導される。重要なことに、プロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ−２は、炎症誘発性刺激によりｉｎ  ｖｉｖｏでかなりのレベルで誘導される。
【０１０３】
プロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ−２選択的阻害剤の２つの一般構造クラスが、文献に一般に報告されている。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの選択的なプロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ−２阻害に加えて、これらの化合物の多くは、既存の抗炎症剤と比較して、ラットのアジュバント誘導関節炎モデルで強力な抗炎症性活性を、特別な安全性プロファイルとともに有する。構造クラスには、三環系非酸性アリールメチルスルホン（ＤｕＰ６９７およびＳＣ８０９２によって例示される）および酸性スルホンアミド（フロスリドおよびＮＳ−３９８によって例示される）が含まれる（図２）。対応するスルフィド官能基へのＳＣ８０９２のスルホン基の還元がプロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ−１選択的阻害剤であるＳＣ８０７６を生成するので、ＳＣ８０９２などの三環系非酸性化合物中のアリールメチルスルホニル部分は、これらの化合物による選択的なプロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ−２阻害で重要な役割を演じることができる。
【０１０４】
ＰＧＥ２阻害剤には、Ｃｏｘ−２阻害剤が含まれる。本発明で用いるのに適するＣＯＸ−２阻害剤には、以下の化合物またはその誘導体または薬学的に許容されるその塩または任意のその水和物を含めることができる：ロフェコキシブ、エトリコキシブ、セレコキシブ、バルデコキシブ、パレコキシブ。本発明に用いられるＣｏｘ−２阻害剤化合物の代替クラスは、メタンスルホンアニリドクラスの阻害剤であり、そのうちＮＳ−３９８、フロスリド、ニメスリドはメンバーの例である。ＣＯＸ−２阻害剤のさらなるクラスは、三環系阻害剤クラスであり、それは、中心の環状炭素環を有する三環系阻害剤のサブクラス（例には、ＳＣ−５７６６６、１および２がある）；中心の単環式複素環を有するもの（例には、ＤｕＰ６９７、ＳＣ−５８１２５、ＳＣ−５８６３５、ＳＣ−２３６および３、４および５がある）；ならびに中心の二環式複素環を有するもの（例には、６、７、８、９および１０がある）にさらに分けることができる。化合物３、４および５は、米国特許第５，４７４，９９５号に記載される。ＣＯＸ−２阻害剤のさらに他のクラスは、構造的に改変されたＮＳＡＩＤであるものと呼ぶことができる。構造クラス、サブクラス、特異的ＣＯＸ−２阻害剤化合物例に加えて、シクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害する化合物の例も以下の特許公報に記載され、その全ては参照により本明細書に組み込まれる：米国特許第５，３４４，９９１号；米国特許第５，３８０，７３８号；米国特許第５，３９３，７９０号；米国特許第５，４０９，９４４号；米国特許第５，４３４，１７８号；米国特許第５，４３６，２６５号；米国特許第５，４６６，８２３号；米国特許第５，４７４，９９５号；米国特許第５，５１０，３６８号；米国特許第５，５３６，７５２号；米国特許第５，５５０，１４２号；米国特許第５，５５２，４２２号；米国特許第５，６０４，２５３号；米国特許第５，６０４，２６０号；米国特許第５，６３９，７８０号；および国際特許明細書第９４／１３６３５号、第９４／１５９３２号、第９４／２０４８０号、第９４／２６７３１号、第９４／２７９８０号、第９５／００５０１号、第９５／１５３１６号、第９６／０３３８７号、第９６／０３３８８号、第９６／０６８４０号；および国際公開第ＷＯ９４／２０４８０号、国際公開第ＷＯ９６／２１６６７号、国際公開第ＷＯ９６／３１５０９号、国際公開第ＷＯ９６／３６６２３号、国際公開第ＷＯ９７／１４６９１号、国際公開第ＷＯ９７／１６４３５号。上記の化合物のいくつかは、以下の化学名によって同定することもできる：３：３−フェニル（４−（メチルスルホニル）フェニル）−２−（５Ｈ）−フラノン；４：３−（３，４−ジフルオロフェニル）−４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−２−（５Ｈ）−ファラノン；５：５，５−ジメチル−４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−３−（３−フルオロフェニル）−Ｈ−フラン−２−オン；１２：５，５−ジメチル−４−（４（メチルスルホニル）フェニル）−３−（２−プロポキシ）−５Ｈ−フラン−２−オン；１３：５−クロロ−３−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−２−（２−メチル−５−ピリジニル）ピリジン；１４：２−（３，５−ジフルオロフェニル）−３−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−２−シクロペンテン−１−オン；１５：５（Ｓ）−５−エチル−５−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル）−３−（２−プロポキシ）−５Ｈ−フラン−２−オン；１６：５−エチル−５−メチル−４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−３−（３，４−ジフルオロフェニル）−５Ｈ−フラン−２−オン；１７：３−（（２−チアゾリル）メトキシ）−４−（４−メチルスルホニル）フェニル）−５，５−ジメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；１８：３−プロピルオキシ−４−（４−メチルスルホニル）フェニル）−５，５−ジメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；１９：３−（１−シクロプロピルエトキシ）−５，５−ジメチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル）−５Ｈ−フラン−２−オン；２０：ナトリウム２−（４−クロロフェニル）−３−（４−メチルスルホニル）フェニル）−４−オキソ−２−ペンテノエート；２１：３−（シクロプロピルメトキシ）−５，５−ジメチル−４（４−メチルスルホニル）フェニル）−５Ｈ−フラン−２−オン；２２：３−（シクロプロピルメトキシ）−５，５−ジメチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル）−２，５−ジヒドロフラン−２−オール；２３：３３−イソプロポキシ−５，５−ジメチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル）−２，５−ジヒドロフラン−２−オール；２４：５，５−ジメチル−３−（３−フルオロフェニル）−２−ヒドロキシ−４−（４−メチルスルホニル）フェニル）−２，５−ジヒドロフラン；２５：５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル）−２−（３−ピリジニル）ピリジン。参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，３４５，０８８号を参照。
【０１０５】
最も一般的に用いられる選択的ＣＯＸ２阻害剤の例には、セレコキシブ、アレコキシブ、バルデコキシブおよびロフェコキシブが含まれる。
【０１０６】
最も一般的に用いられる非選択的ＣＯＸ１およびＣＯＸ２阻害剤の例には、以下のものが含まれる：アセチルサリチル酸（アスピリン）および他のサリチル酸塩、アセトアミノフェン（Ｔｙｌｅｎｏｌ）、イブプロフェン（Ａｄｖｉｌ、Ｍｏｔｒｉｎ、Ｎｕｐｒｉｎ、Ｒｕｆｅｎ）、ナプロキセン（Ｎａｐｒｏｓｙｎ、Ａｌｅｖｅ）、ナブメトン（Ｒｅｌａｆｅｎ）またはジクロフェナク（Ｃａｔａｆｌａｍ）。
【０１０７】
Ｖ．プロスタグランジン応答性阻害剤
【０１０８】
プロスタグランジンの鍵となる抑制および腫瘍促進作用は、アデニル酸シクラーゼの活性化、そこから生じる細胞内環状（ｃ）ＡＭＰ、ＰＫＡの上昇、および下流でのＰＫＡ／ＣＲＥＢ経路の活性化によって媒介される。
【０１０９】
ＰＧ応答性に対する別のレベルの干渉には、ＰＧ受容体へのそれらの結合に対する干渉が含まれる。ＰＧＥ２の場合には、２つの鍵となるｃＡＭＰ活性化受容体はＥＰ２およびＥＰ４であり、それらに対していくつかの特異的阻害剤が存在する。
【０１１０】
プロスタグランジンまたは他の因子によって誘導されるｃＡＭＰレベルの増加は、ホスホジエステラーゼによって阻止することができる（ＰＤＥ；現在公知の６つの型、ＰＤＥ１〜ＰＤＥ５およびＰＤＥ１０、それらは細胞内ｃＡＭＰのレベルを低減する）。ＰＤＥはホスホジエステラーゼ阻害剤によって制御することができ、それらには、キサンチン（カフェイン、アミノフィリン、ＩＢＭＸ、ペントキシフィリン、テオブロミン、テオフィリンまたはパラキサンチン）のような物質が含まれ、それらは全て、細胞内ｃＡＭＰ、ならびに、ビンポセチン、シロスタゾール、イナムリノン、シロスタゾール、メセンブリン、ロリプラム、イブジラスト、ドロタベリン、ピクラミラスト、シルダフェニル、タダラフィル、ベルデナフィルまたはパパベリンを含むより選択的な合成および天然の因子のレベルを増加させる。
【０１１１】
さらに、ＰＧＥ２シグナル伝達に対する（または、ベータアドレナリンアゴニストの、ヒスタミンなどの他のｃＡＭＰ上昇因子のシグナル伝達に対する）干渉は、ＰＫＡまたはＣＲＥＢなどのｃＡＭＰの下流シグナルの阻害によって達成することができる。
【０１１２】
ＶＩ．組成物および治療方法
【０１１３】
がん、ならびに炎症、自己免疫、移植拒絶反応および移植片対宿主病（ＧｖＨ）を含む他の疾患を予防または処置する方法が本明細書に開示される。開示される方法を適用することができるがんの型の例には、限定されずに以下が含まれる：結腸直腸がん、肺がん、喉頭がん、黒色腫、非黒色腫皮膚がん、神経膠腫、卵巣がん、乳がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、胃がん、食道がん、膵がん、胆道がん、腎臓がん、膀胱がん、外陰部がん、神経内分泌がん、前立腺がん、頭頸部がん、軟部組織肉腫、骨がん、中皮腫、内皮起源のがん、血液悪性腫瘍、例えば、それらに限定されずに、多発性骨髄腫、リンパ腫、白血病、または発がんの危険率の上昇と関連することが公知である前悪性病変。本方法は、ＩＰ１０／ＣＸＣＬ１０、ＭＩＧ／ＣＸＣＬ９、ＲＡＮＴＥＳ／ＣＣＬ５および他の炎症誘発性ケモカインの生成を増加させる薬剤の治療的有効量を投与することを含む。そのような方法は、プロスタグランジン合成もしくはｃＡＭＰ依存性プロスタグランジンシグナル伝達の阻害剤の治療的有効量の投与、インターフェロンの治療的有効量の投与、または、二成分アジュバントもしくは三次アジュバントをもたらす両方の投与と組み合わせた、ＮＦ−κＢ経路のＴｏｌｌ様受容体アゴニストまたは代替活性化剤の投与を含む。
【０１１４】
治療薬の量は、１つまたは複数のさらなる治療薬と一緒にそれが所望の応答を誘導する場合、例えば発がんの危険率を低下させるか、またはがんの徴候および症状を減少させる場合に有効であるとみなされる。一例において、それは、被験体で腫瘍の発達を予防するかまたは遅らせるのに必要な薬剤の量である。別の例では、それは、黒色腫または結腸直腸がんを有する被験体などの被験体で、腫瘍の転移を予防するかもしくは遅らせるか、既存の腫瘍の退行を引き起こすか、または腫瘍と関連する１つまたは複数の徴候もしくは症状を処置するのに必要な薬剤の量である。理想的には、治療的有効量は、被験体で実質的な細胞毒性作用を引き起こすことなく、治療効果を提供する。本明細書に開示される調製物は、治療的有効量で投与される。
【０１１５】
一例において、所望の応答は、腫瘍の発達を予防することである。別の例では、所望の応答は、例えば少なくとも約３カ月、少なくとも約６カ月、少なくとも約１年、少なくとも約２年、少なくとも約５年または少なくとも約１０年、腫瘍の発達、進行または転移を遅らせることである。さらなる例では、所望の応答は、結腸直腸がんまたは黒色腫などのがんの発生を減少させることである。別の例では、所望の応答は、腫瘍または転移のサイズ、体積または数などの、がんの徴候および症状を減少させることである。例えば、一部の例では、組成物は、治療的組成物の不在下での応答と比較して、腫瘍（結腸直腸腫瘍など）のサイズ、体積または数を、所望の量、例えば少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、またはさらに少なくとも９０％減少させることができる。
【０１１６】
本明細書に開示される、本明細書に開示される薬剤の１つまたは複数を担体中に含む組成物が提供される。組成物は、被験体への投与のために単位剤形で調製されてよい。投与の量およびタイミングは、所望の目的を達成するために、治療にあたる医師の裁量で決められる。薬剤は、全身または局所（腫瘍内など）投与のために製剤化することができる。一例において、薬剤は、静脈内投与などの非経口投与のために製剤化される。
【０１１７】
投与のための組成物は、薬学的に許容される担体、例えば水性担体、またはリポソームもしくは他の生体適合性のベシクルの生体適合性の製剤、または他の徐放性マトリックスおよびビヒクルに溶解される有用な薬剤の溶液を含むことができる。様々な水溶性担体、例えば、緩衝食塩水などを用いることができる。これらの溶液は無菌であり、望ましくない物質を一般に含まない。これらの組成物は、従来の、周知の滅菌技術によって滅菌することができる。組成物は、生理条件に近づけるのに必要とされる薬学的に許容される補助物質、例えばｐＨ調整および緩衝剤、毒性調整剤など、例えば酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどを含むことができる。これらの製剤中の抗体濃度は大きく異なることができ、選択される投与の特定の様式および被験体の必要性に従って、液量、粘度、体重などに主に基づいて選択される。
【０１１８】
静脈内投与のための一般的な医薬組成物は、１被験体につき１日約０．１〜１０ｍｇの抗体を含む。特に循環またはリンパ系でなく人目につかない部位に、例えば体腔または器官の内腔に薬剤が投与される場合は、１被験体につき１日０．１から約１００ｍｇまでの投薬量を用いることができる。投与可能な組成物を調製するための実際の方法は、当業者にわかるか明らかであり、より詳細にはRemington’s  Pharmaceutical  Science、１９版、Mack  Publishing  Company、Easton、PA（１９９５年）のような出版物に記載されている。
【０１１９】
タンパク質などの薬剤は凍結乾燥された形で提供することができ、投与の前に滅菌水で再水和することができるが、それらは公知の濃度の滅菌溶液でも提供される。次に、０．９％の塩化ナトリウムＵＳＰを含有する注入バッグにタンパク質溶液を加え、一般的に体重１ｋｇにつき０．５〜１５ｍｇの投薬量で投与する。１９９７年のＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）の承認以来米国で販売されている抗体薬の投与においては、当技術分野でかなりの経験が利用できる。薬剤は、静脈内プッシュ剤またはボーラス剤ではなく、遅い注入によって投与することができる。一例において、より高い負荷用量が投与され、以降の維持量はより低いレベルで投与される。例えば、４ｍｇ／ｋｇの早期負荷用量を約９０分間にわたって注入し、その後、前の用量が良好な耐容性を示すならば、４〜８週の間、３０分間にわたって注入される２ｍｇ／ｋｇの週１回の維持量が続くことができる。
【０１２０】
薬剤は、がん細胞などの細胞の増殖を遅らせるかまたは阻害するために投与することができる。これらの適用では、抗体の治療的有効量は、がん細胞の増殖、複製もしくは転移を阻害するか、または黒色腫もしくは結腸直腸がんなどのそのがんの徴候もしくは症状を阻害するのに十分な量で被験体に投与される。一部の実施形態では、転移の発達を阻害もしくは予防するか、または所属リンパ節への微小転移物などの微小転移物の数を減少させるために、薬剤は被験体に投与される（Gotoら、Clin.  Cancer  Res.１４巻（１１号）：３４０１〜３４０７頁、２００８年）。
【０１２１】
有用な薬剤の治療的有効量は、疾患の重症度および患者の健康の全身状態による。結腸直腸がんまたは黒色腫を有する被験体に投与するときの薬剤の治療的有効量は、症状（複数可）の主観的な軽減、または臨床医もしくは他の資格のあるオブザーバーが気づくような客観的に識別可能な改善のいずれかを提供するものである。これらの組成物は、別の化学療法剤と同時または逐次的に併用して投与することができる。
【０１２２】
現在、当技術分野で多くの化学療法剤が公知である。これらは、開示された方法と併用して投与することができる。一実施形態では、化学療法剤は、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗物質、挿入抗生物質、増殖因子阻害剤、細胞周期阻害剤、酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、抗生存薬剤、生体応答調節剤、抗ホルモン、例えば抗アンドロゲン、および抗血管形成剤からなる群から選択される。
【０１２３】
患者によって必要とされ、許容される投薬量および頻度に従い、組成物の単一または複数の投与が投与される。投薬量は一度に投与することができるが、治療結果が達成されるまでか、副作用が療法の中止を正当化するまで、定期的に適用することができる。一例において、薬剤の用量は、一日おきに３０分の間注入される。この例では、約１〜約１０用量を投与することができ、例えば３または６用量を一日おきに投与することができる。さらなる例では、連続注入が約５〜約１０日の間投与される。所望の治療結果が達成されるまで、一定の間隔で、例えば毎月被験体を処置することができる。一般に、用量は、患者に受け入れがたい毒性をもたらさずに、疾患の症状または徴候を処置するかまたは寛解させるのに十分である。
【０１２４】
薬物の最適な活性はそれらの長期にわたる投与をしばしば必要とし、異なる薬物の組合せ投与の場合には、それは特定の順番でのそれらの投与を必要とすることがある。これらの必要条件の両方とも、同じ時点で開始されるか逐次的に、類似したか異なる動態を有する処置の構成成分の１つ、３つまたはそれ以上を放出する、制御された送達系の適用によって満たすことができる。
【０１２５】
制御放出非経口製剤は、インプラント、油性注射または粒状系として作製することができる。タンパク質送達系の広い概観のためには、参照により本明細書に組み込まれる、Banga,  A.J.、Therapeutic  Peptides  and  Proteins:  Formulation,  Processing,  and  Delivery  Systems、Technomic  Publishing  Company,  Inc.、Lancaster、PA、（１９９５年）を参照。粒状系には、マイクロスフェア、微小粒子、マイクロカプセル、ナノカプセル、ナノスフェアおよびナノ粒子が含まれる。マイクロカプセルは、細胞毒または薬物などの治療的タンパク質を、中心コアとして含有する。マイクロスフェアでは、治療薬は粒子全体に分散させられる。約１μｍより小さな粒子、マイクロスフェアおよびマイクロカプセルは、それぞれナノ粒子、ナノスフェアおよびナノカプセルと一般に呼ばれる。毛細血管は約５μｍの直径を有するので、ナノ粒子だけが静脈内に投与される。微小粒子は直径が一般的に１００μｍ前後であって、皮下または筋内に投与される。例えば、Kreuter,  J.、Colloidal  Drug  Delivery  Systems、J.  Kreuter編、Marcel  Dekker,  Inc.、New  York、NY、２１９〜３４２頁（１９９４年）；およびTice  &  Tabibi、Treatise  on  Controlled  Drug  Delivery、A.  Kydonieus編、Marcel  Dekker,  Inc.、New  York、NY、３１５〜３３９頁（１９９２年）を参照、両方とも参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２６】
ポリマーは、本明細書に開示される組成物のイオン制御放出のために用いることができる。制御された薬物送達に用いられる様々な分解性および非分解性のポリマーマトリックスが、当技術分野で公知である。（Langer、Accounts  Chem.  Res.２６巻：５３７〜５４２頁、１９９３年）。例えば、ブロックコポリマーであるｐｏｌａｘａｍｅｒ４０７は、低温では粘性であるが移動性の液体として存在するが、体温では半固体のゲルを形成する。それは、組換え体インターロイキン−２およびウレアーゼの製剤化および持続性送達のために有効なビヒクルであることが示された（Johnstonら、Pharm.  Res.９巻：４２５〜４３４頁、１９９２年；およびPecら,  J.  Parent.  Sci.  Tech.４４巻（２号）：５８〜６５頁、１９９０年）。あるいは、タンパク質の制御放出のためのマイクロキャリアとして、ヒドロキシアパタイトが用いられている（Ijntemaら、Int.  J.  Pharm.１１２巻：２１５〜２２４頁、１９９４年）。さらに別の態様では、脂質封入薬の制御放出ならびに薬物ターゲッティングのために、リポソームが用いられる。（Betageriら、Liposome  Drug  Delivery  Systems、Technomic  Publishing  Co.,  Inc.、Lancaster、PA（１９９３年））。治療的タンパク質の制御された送達のための多数のさらなる系が公知である（米国特許第５，０５５，３０３号；米国特許第５，１８８，８３７号；米国特許第４，２３５，８７１号；米国特許第４，５０１，７２８号；米国特許第４，８３７，０２８号；米国特許第４，９５７，７３５号；米国特許第５，０１９，３６９号；米国特許第５，０５５，３０３号；米国特許第５，５１４，６７０号；米国特許第５，４１３，７９７号；米国特許第５，２６８，１６４号；米国特許第５，００４，６９７号；米国特許第４，９０２，５０５号；米国特許第５，５０６，２０６号；米国特許第５，２７１，９６１号；米国特許第５，２５４，３４２号および米国特許第５，５３４，４９６号参照）。
【０１２７】
特に説明されない限り、本明細書で用いられる全ての技術用語および科学用語は、この開示が属する分野の当業者が通常理解するのと同じ意味を有する。単数用語「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに別に指示しない限り、複数の対象物を含む。同様に、単語「または」は、文脈が明らかに別に指示しない限り、「および」を含むものとする。核酸またはポリペプチドのために与えられる全ての塩基サイズまたはアミノ酸サイズ、および全ての分子量または分子質量値は概算であり、記載のために提供されることをさらに理解するべきである。本明細書に記載されるそれらに類似するかまたは同等である方法および材料は、この開示の実施または試験で用いることができるが、適する方法および材料が以下に記載される。用語「含む（comprise）」は「含む（include）」を意味する。本明細書で指摘される全ての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、その全体が参照により組み込まれる。紛争の場合、用語の説明を含む本明細書が支配する。さらに、材料、方法および例は例示されるだけであり、限定するものではない。
【実施例】
【０１２８】
ＶＩＩ．非限定的な実施例
【０１２９】
この開示された発明は、以下の非限定的な実施例によって例証される。
【０１３０】
（実施例１）
エフェクター型の免疫細胞が高レベルのＣＣＲ５およびＣＸＣＲ３を発現する
【０１３１】
我々は、ＩＦＮαおよびＩＦＮγの組合せの存在下でのＤＣの成熟が、後の刺激に際してＩＬ−１２ｐ７０を生成する能力が「消耗」しているよりもむしろ強力に高められた、安定な１型極性化ＤＣ（ＤＣ１）の発生をもたらすことを観察した。我々の元のプロトコルにおけるＤＣ１の誘導はウシ血清の存在に依存していた。
【０１３２】
我々のＤＣ１生成の基本的プロトコル（ＩＬ−１β／ＴＮＦα／ＩＦＮγ）へのＩＦＮαおよびポリＩ：Ｃ（ＩＦＮα誘導活性を有するｄｓＲＮＡの合成類似体）の付加は、臨床的に許容できる無血清培地中でのＤＣ１（すなわち、αＤＣ１）の発生を可能とする。我々は、黒色腫および結腸直腸がん患者の血液を用いて、ＣＲＣまたは黒色腫に特異的な定義されたエピトープおよび関連する腫瘍細胞を認識することのできる、黒色腫またはＣＲＣに特異的なＩＦＮγを生成するＣＴＬの優れた増殖を、ＤＣ１が誘導することを観察した（図１Ａ〜Ｃ）。我々のデータは、αＤＣ１により誘導されたＣＴＬが、ＨＬＡ−Ａ２＋がん細胞を死滅させるその能力に関しても機能的であることを実証し（図１Ｂ）、腫瘍ホーミング関連ケモカイン受容体：ＣＸＣＲ３およびＣＣＲ５の発現の強力な上昇（約１０倍）を示す（図１Ｄ）。さらに、我々は、αＤＣ１およびｓＤＣにより初回刺激されたＣＴＬの間のＣＫＲ発現の相違が鑑別的なＣＫ応答性に導くことを示す（ポリクローナルモデルでの）関数データを得た（図１Ｅ）。
【０１３３】
（実施例２）
【０１３４】
エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）動員ケモカインの結腸直腸腫瘍試料中での発現は、エフェクターＣＤ８＋  Ｔ細胞マーカーと相関するが、ＣＯＸ２レベルは、Ｔｒｅｇを誘引するＣＫの過剰発現ならびにＴｅｆｆを誘引するＣＫおよびＴｒｅｇマーカーの抑制と密接に相関する。
【０１３５】
黒色腫および結腸直腸がん病変を含む、新たに得られた未処置の腫瘍は、「望ましい」ケモカイン（ＣＣＲ５リガンドおよびＣＸＣＲ３リガンド）ならびに「望ましくない」ＣＣＬ２２の高い異種発現を示す（図２）。組織学的な型が同じ（黒色腫またはＣＲＣ）で位置が類似する腫瘍群内でさえ、異なる腫瘍試料が個々のＣＫの発現に関して顕著な不均質性を示したことは重要である。利用可能な試料の数が比較的少ない（原発性および転移性病変間の正式な統計比較が不可能である）にもかかわらず、肝転移ＣＲＣは、低Ｔｅｆｆ／高ＴｒｅｇのＣＫパターンへのバイアスの可能性を示した（データ非表示）。
【０１３６】
これらのデータは、一部の腫瘍が、特別なケモカインの生成パターンのおかげで、Ｔｅｆｆを除外し（Ｔｅｆｆ浸潤は、切除されたＣＲＣ患者における長期の再発のない生存を予測することが示されている）、優先的にＴｒｅｇ細胞を誘引することによって、免疫攻撃を回避しうることを示唆する。それらはさらに、全ての腫瘍病変でのＴｅｆｆを誘引するケモカインの標準化された過剰発現が、自然発生の抗腫瘍応答の転帰を改善することができ、Ｔｅｆｆ細胞を腫瘍病変へ選択的に導くことによるがんの免疫療法を容易にしうることを暗示する。それらは、（主にＣＸＣＲ３およびＣＣＲ５を発現することが公知である）望ましいエフェクター型の免疫細胞の誘導において有効ながんワクチンが、（ＣＸＣＲ３およびＣＣＲ５リガンドを発現する）腫瘍のごく一部の退縮を誘導しうるが、自然発生的にＴｅｆｆ細胞を誘引せず、代わりにＴｒｅｇを誘引するＣＫを過剰発現するさらなる腫瘍の退縮を誘導するためには、腫瘍特異的ＣＫモジュレートレジメンとの組合せを必要としうることを暗示する。
【０１３７】
進行した結腸直腸がんを有する７２人の患者（６８人の患者においては転移性）由来の切除された腫瘍材料を用いて、我々は、２つのＴｅｆｆ細胞マーカー（ＣＤ８およびＧｒａｎｚｙｍｅ  Ｂ；ＧＺＭＢ）の局所発現が、Ｔｅｆｆを誘引する２つのケモカイン、ＣＣＬ５およびＣＸＣＬ１０の発現と強く相関することを観察した（図３Ａ）。対照的に、Ｔｒｅｇマーカー、ＦＯＸＰ３およびＧＩＴＲは、公知のＴｒｅｇ誘引物質であるＣＣＬ２２と相関した（図３Ｂ）。ＣＸＣＬ９（別のＣＸＣＲ３リガンド）とＴｅｆｆマーカーの間、およびＣＣＬ２２とＣＣＬ２２誘導因子（２２）ＣＯＸ２の間にさらなる相関が観察された（図４）。
【０１３８】
そのような結腸がん患者から得られたＣＤ８＋腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）の表現型分析は、ＣＤ８＋ＴＩＬの大半が実際にＣＣＲ５−ＣＸＣＲ３＋およびＧｒａｎｚｙｍｅ  Ｂ＋である（表示せず）ことを明らかにし、これはさらに、ＣＣＲ５およびＣＸＣＲ３リガンドの腫瘍内発現がエフェクターＴ細胞の腫瘍中への動員に関与したことを示す。
【０１３９】
（実施例３）
【０１４０】
ポリＩ：Ｃ、ＩＦＮαおよびＣＯＸ阻害剤の組合せは、腫瘍組織中のＴｅｆｆ動員ケモカインの生成を選択的に増強し、Ｔｒｅｇ動員ケモカインを抑制する。
【０１４１】
我々は、Ｔｅｆｆを誘引するケモカインのＴｒｅｇを誘引するケモカインに対する比の低い腫瘍内のケモカイン環境を矯正する可能性を試験するために、ＩＦＮα、インドメタシン（ＣＯＸ１／２阻害剤）およびポリＩ：Ｃの様々な組合せを用いて、マクロファージまたは線維芽細胞などの（腫瘍に浸潤することが公知である）個々の腫瘍関連細胞集団中でのそれらの生成をモジュレートする実行可能性を予備研究で試験した。我々は、ＣＣＬ５およびＣＸＣＬ１０の誘導におけるＩＦＮαとポリＩ：Ｃの間の強力な相乗作用ならびにマクロファージおよび線維芽細胞中のＣＣＬ２２の生成に対するＩＦＮαの強力な抑制効果を観察した（図５Ａ）。これらの望ましい効果は、インドメタシンの存在下でさらに強化された（図５Ｂ）。
【０１４２】
全ての上記細胞型およびそれらの相互作用を含む腫瘍組織全体の複雑な微小環境を操作するためにこれらの因子を使用する実行可能性を試験するために、我々は、ＤＣの遊走を研究するために先に開発されたｅｘ  ｖｉｖｏの腫瘍／組織外植片培養系を使用した。この系は、我々が腫瘍解離の間のケモカインを生成する細胞の非特異的活性化を回避することを可能とした。
【０１４３】
図６に示すように、ＩＦＮαまたはポリＩ：Ｃ単独で処理した異なる腫瘍組織は、可変性のケモカイン発現を示し、３つの異なるパターン：ＣＣＬ５およびＣＸＣＬ１０の最小の誘導；ＣＣＬ５の最小の誘導、しかしＣＸＣＬ１０の顕著な誘導；またはＣＣＬ５およびＣＸＣＬ１０両方の顕著な誘導に分類される（図６Ａ）。この不均質性は、異なる患者由来の腫瘍間、および一人の患者内の異なる病変間でも観察された（図６Ａおよび６Ｃ）。しかしながら、ＩＦＮαおよびポリＩ：Ｃを併用すると、試験した全ての腫瘍でＣＣＬ５およびＣＸＣＬ１０両方の均一に高い発現をもたらした（図６Ａおよび６Ｃ）。
【０１４４】
（ＣＯＸ１およびＣＯＸ２を遮断する）インドメタシンへの追加の曝露は、選択的ＣＯＸ２遮断薬を用いて得られた同様の結果とともに、腫瘍組織全体でＩＦＮαおよびポリＩ：Ｃの組合せにより誘導されたＣＣＬ５およびＣＸＣＬ１０の生成をさらに増強し、ＣＣＬ２２レベルを低減した（図６Ｂおよび６Ｄ）。
【０１４５】
これらのデータに基づいて、我々は、全ての後続の実験のための好ましい処理として、ＩＦＮα、ポリＩ：Ｃおよびインドメタシンの３つの組合せを選択した。この組合せは、全ての腫瘍試料で一貫して、ＣＸＣＬ１０およびＣＣＬ５の生成を増強し、ＣＣＬ２２の生成を抑制した（図７）。ＣＸＣＬ９の場合においても同様のことを観察した（データ非表示）。
【０１４６】
ＨＬＡ−ＤＲ（免疫組織化学）およびケモカインｍＲＮＡ（ＩＳＨ）に関する二重染色は、ＣＣＬ２２がＨＬＡ−ＤＲ＋ＡＰＣにより優勢に発現されたが、ＣＸＣＬ１０およびＣＣＬ５がＨＬＡ−ＤＲ−およびＨＬＡ−ＤＲ−細胞の両方により発現されたことを実証し（非表示）、腫瘍微小環境内でのＴｅｆｆ動員ケモカインの生成への複数の型の腫瘍関連細胞の寄与を示す。
【０１４７】
（実施例４）
【０１４８】
ケモカインモジュレートレジメンによる腫瘍関連ＮＦ−κＢ活性化の増強は、辺縁健康組織よりも腫瘍において選択的なまたは少なくとも優先的なＣＸＣＬ１０の誘導をもたらす：腫瘍選択的なケモカインモジュレーションの実行可能性
【０１４９】
我々は、転移性結腸がんを有する１０人の患者からの一致させた組織試料を用いて、肝転移腫瘍組織および辺縁組織間でケモカインモジュレートレジメンに対する応答性を比較した。図８および図９に示す通り、未処理の肝転移腫瘍および辺縁肝臓組織間でケモカイン生成のベースラインの相違は有意性に達しなかった（Ｐ＝０．１２）が、ＩＦＮα、ポリＩ：Ｃおよびインドメタシンの組合せによる腫瘍の処理は、辺縁組織に比較してかなり明白な腫瘍組織によるＣＸＣＬ１０の分泌を誘導した（Ｐ＜０．０１）。ＣＣＬ５の場合において、タンパク質およびケモカイン遺伝子発現レベルで同様のことを観察した。この辺縁組織に比較して増加した腫瘍の応答性は、グリコーゲンホスホリラーゼの発現レベルが妨害されないことにより判定して、辺縁組織の生存の減少によるものではなかった（図９Ｃ）。
【０１５０】
ケモカインモジュレーションのこの予想外の選択性は黒色腫病変および隣接する健康な皮膚の場合においても観察され、我々の発見の一般的適用性を実証している（図８Ｄ）。
【０１５１】
先に報告されたＣＸＣＬ１０および他のケモカインの誘導におけるＮＦ−κＢの主要な役割ならびに腫瘍の生存および成長に決定的に必要とされるがん病変中のＮＦ−κＢシグナル伝達の普遍的増強を受けて、我々は、ＮＦ−κＢ活性化における潜在的な相違が腫瘍対辺縁組織のケモカインモジュレートレジメンに応答する能力の差に関与しうるかを試験した。
【０１５２】
この可能性にしたがって、我々は、結腸直腸がん組織が、（その核転位の割合により測定した）ＮＦ−κＢ活性化のベースラインレベルの上昇（図８Ｂ）だけでなく、ＩＦＮα／ポリＩ：Ｃ／インドメタシン処理後にさらにＮＦ−κＢを活性化するより明白な能力を示したことを観察した（図８Ｂ、右）。腫瘍組織によるＣＸＣＬ１０生成におけるＮＦ−κＢの主要な役割を、ＮＦ−κＢ阻害剤、ＣＡＹ１０４７０を使用することによって確認し、これはＣＸＣＬ１０の誘導を完全に抑止した（図８Ｃ）。
【０１５３】
ＣＣＬ５の調節は、同様のパターン（辺縁組織におけるよりも腫瘍における、処理により誘導された上方制御）を示し、ＣＡＹ１０４７０によっても遮断され（補足図Ｓ５Ｂ）、ケモカインモジュレートレジメンによるＴｅｆｆ誘引ケモカインの選択的誘導における腫瘍関連ＮＦ−κＢの調節解除の一般的役割を示している。これらの実験において（２０μＭで）使用したＣＡＹ１０４７０は、未処理および処理組織でのグリコーゲンホスホリラーゼｍＲＮＡの同様の発現によって示された通り、無毒性であった（図９Ｃ）。
【０１５４】
興味深いことに、我々の共焦点顕微鏡分析は、ＣＣＬ５を生成したＣＤ３２６／ＥｐＣＡＭ＋がん細胞のより少ない関与（非表示）とともに、ＮＦ−κＢの核転座を示し、ＣＣＬ５およびＣＸＣＬ１０を生成したほとんどの細胞が、ＣＤ４５＋浸潤性炎症細胞および腫瘍関連線維芽細胞に相当したことを明らかにした。
【０１５５】
（実施例５）
【０１５６】
ＩＦＮα／ポリＩ：Ｃ／インドメタシンで処理した結腸直腸腫瘍が、優先的にエフェクターＣＤ８＋  Ｔ細胞を誘引する：提示されたケモカインモジュレーションの方法を用いる、自然発生またはワクチン接種により誘導されたＣＴＬの腫瘍病変への腫瘍選択的誘引の実行可能性
【０１５７】
ＩＦＮα、ポリＩ：Ｃおよびインドメタシンの組合せにより達成されたケモカインのモジュレーションが、異なるＴ細胞サブセットを誘引する腫瘍の能力に影響を及ぼすのに実際に十分であることを実証するために、我々は、鑑別的処理をした腫瘍からの上清および増殖した腫瘍浸潤性ＣＤ８＋  Ｔ細胞（ＴＩＬ）またはスーパー抗原負荷αＤＣ１により誘導したポリクローナルのｅｘ  ｖｉｖｏで誘導されたエフェクターＣＤ８＋  Ｔ細胞のいずれかを含むｅｘ  ｖｉｖｏ化学走性アッセイを使用した。図１０Ａ〜Ｂに示す通り、両方の型のエフェクターＣＤ８＋  Ｔ細胞は全てのＩＦＮα／ポリＩ：Ｃ／インドメタシン処理した腫瘍に対して均一に、強力に増強された遊走応答性を示した。対照的に、遊走した血液から単離したＣＤ４＋  Ｔ細胞のＴａｑｍａｎ分析（図１０Ｃ）またはフローサイトメトリー（非表示）により判定したように、ＣＤ４+ＦＯＸＰ３＋  Ｔ細胞は優先的に未処理腫瘍に向かって遊走した。
【０１５８】
（実施例６）
ＮＦ−κＢ、ＰＧＥ２／ｃＡＭＰ、およびＩＦＮシグナル伝達経路のさらなるエレメントを標的化する実行可能性
【０１５９】
異なるクラスのケモカインの腫瘍選択的調節における、プロスタグランジン、ＴＬＲおよびインターフェロン系のモジュレーターの間の相乗作用の機構は、ＣＯＸ２活性およびＰＧＥ受容体発現（ＥＰ１〜４）の局所的相違、ＴＬＲ３発現細胞による異なる浸潤、ならびに図１１に例示したＴＬＲの発現および応答性の調節を含む可能性がある。複数のＴＬＲアゴニストおよび（ＴＮＦαを含む）ＮＦ−κＢの追加の活性化剤を使用する可能性は、図１２に表される我々のデータによって直接裏付けられる。
【０１６０】
（実施例７）
化学療法の間にＮＦ−κＢ、ＰＧＥ２／ｃＡＭＰおよびＩＦＮシグナル伝達経路のエレメントを標的化するための理由づけ
【０１６１】
図１３に表すデータは、化学療法剤メルファランによって処理した黒色腫組織中のＴｒｅｇ誘引ケモカインおよびＴｅｆｆ誘引ケモカインの間の比（ＣＣＬ２２／ＣＸＣＬ１０の間の比）の望ましくない上昇、ならびにそのような望ましくない化学療法の効果のセレコキシブ（ＣＯＸ２阻害剤）、ＩＦＮαおよびポリＩ：Ｃの組合せによる逆転を示す。これらの結果は、がん患者に適用される化学療法レジメンへの提示された方法の組込みおよび提示された因子の化学療法薬の製剤への組込み（送達系の組合せ；物理的連結による製剤の組合せ）のための直接的な理由づけを提供する。
【０１６２】
ＶＩＩＩ．実施例に表されたデータの解釈およびさらなる議論
【０１６３】
我々のデータは、がんの臨床経過に鑑別的に影響することが公知の免疫細胞の型である、腫瘍浸潤性ＴｅｆｆおよびＴｒｅｇ細胞間のバランスを矯正するための、臨床的に適用できる薬理学的および生物学的因子の組合せを用いるケモカイン環境の腫瘍選択的モジュレーションの実行可能性を実証する。この戦略の臨床応用のために重要なことには、（同じ患者内でさえ）個々の腫瘍病変の個々のケモカインモジュレーターへの応答は（個々に適用されるそのような因子の限定された臨床的有効性と一貫して）非常に可変であったが、ＩＦＮα、ポリＩ：Ｃおよびシクロオキシゲナーゼ阻害剤の組合せは、Ｔｒｅｇ誘引ケモカインである局所的ＣＣＬ２２の付随する均一な抑制とともに、試験した腫瘍病変内のＴｅｆｆ誘引ケモカイン（ＣＣＬ５およびＣＸＣＬ９〜１０）の高度に一貫した選択的増強を可能とすることを我々は観察した。
【０１６４】
ＩＦＮα／ポリＩ：Ｃ／インドメタシンにより誘導されたＴｅｆｆ誘引ケモカインの生成は腫瘍選択性が高く、これらのケモカインモジュレート因子の全身投与でさえ、優先的にエフェクター細胞を腫瘍に導くことができることを示唆している。Ｔ細胞の異なるサブセットの異なる腫瘍型への誘引が、我々の現在の分析に含まれないさらなるケモカインの複雑なネットワークにより調節され、ＣＣＲ５多形などによるケモカイン受容体発現のレベルでの調節に供されうるということが公知であるが、我々の現在の関数データは、提案されたレジメンがエフェクターＣＤ８＋  Ｔ細胞（自然発生のＴＩＬおよびαＤＣ１ワクチンにより誘導されたＣＴＬの両方）の流入を均一に促進しうることを示す。Ｔｈ１細胞およびＮＫ細胞の誘引におけるＣＸＣＲ３およびＣＣＲ５の公知の役割は、提案されたレジメンがこれらのさらなる型の望ましい細胞の腫瘍への浸入も促進しうることを示唆する。
【０１６５】
我々は、提案されたレジメンの腫瘍選択性が、腫瘍関連線維芽細胞および（腫瘍細胞自体の関与のより少ない）浸潤性炎症細胞の、自然発生的にＮＦ−κＢを過活性化するだけでなく、さらに増強されたレベルのＮＦ−κＢ活性化による処置にも応答する性向に依存することを観察した。腫瘍の生存および成長に決定的に関与するＮＦ−κＢ活性化は多くの腫瘍型の内因性の特徴を表すので、現データは、腫瘍微小環境の現記載のＮＦ−κＢを標的にするモジュレーションが複数の型のがんに適用可能であることを示唆する。
【０１６６】
これまで実施した我々の分析は、腫瘍および辺縁組織の間のＩＦＮα受容体、ＴＬＲ３、ＩＲＦ１またはＩＲＦ３の発現のいかなる相違も明らかにしなかったが（データ非表示）、我々の現在の研究は、腫瘍組織全体および異なる型の腫瘍関連細胞中の各経路の鑑別的調節（ポリＩ：Ｃ、ＩＦＮαおよびＰＧＥ２応答性）に焦点を当てる。同様に、我々は、ＮＦ−κＢを活性化するための腫瘍関連細胞の感受性の増大の根底にある機構およびポリＩ：Ｃの活性化の必要性に関する異なる腫瘍の相対的不均質性も評価しており、これは、腫瘍の治療法におけるケモカインの調節およびＮＦ−κＢ標的化の新しい戦略を我々が同定することを助けうる。
【０１６７】
好ましい実施形態の説明
以下は、ＴＬＲ（または他の公知のＮＦ−κＢ活性化剤の受容体）、プロスタグランジン／ｃＡＭＰ系ならびにインターフェロンおよびインターフェロンシグナル伝達を標的にする、腫瘍微小環境（または治療被験体である他の組織）のモジュレーション方法の一部の好ましい実施形態の説明である。
【０１６８】
好ましい一実施形態は、がん、前がん性病変または先に処置されたがんを有する患者への、相乗的に作用して腫瘍組織（または他の罹患組織）でＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）およびＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）などのエフェクター細胞を誘引するケモカインの生成を選択的に誘導する一方、望ましくない調節Ｔ細胞を誘引することが公知であるケモカインＣＣＬ２２の生成を抑制するかまたはそれに影響しない、少なくとも２つの異なる薬剤の治療的有効量の投与である。
【０１６９】
がん、一部の前悪性状態および多くの感染症の予防または処置の場合、本発明の好ましい実施形態は、Ｔｒｅｇ誘引ケモカインの生成を抑制する一方で、Ｔｅｆｆ誘引ケモカインの生成を選択的に増強するための、ＴＬＲリガンドまたはＮＦ−κＢ経路の別の活性化剤と、プロスタノイドの阻害剤（あるいはプロスタグランジン受容体の阻害剤および／または別のｃＡＭＰを上昇させる薬剤の阻害剤もしくはｃＡＭＰシグナル伝達の阻害剤）との併用適用、ならびにＩＦＮαおよび／または他のＩ型もしくはＩＩ型インターフェロンの事前投与、同時投与または事後投与との併用適用である。
【０１７０】
免疫系の望ましくない過剰活性化と関連する疾患状態（慢性炎症、一部の前悪性状態、自己免疫現象、または、移植拒絶反応および移植片対宿主（ＧｖＨ）病を含む、移植された臓器、組織および単離細胞の拒絶反応を含む移植拒絶反応）の予防または処置の場合は、本発明の好ましい実施形態は、Ｔｅｆｆ誘引ケモカインの生成を抑制する一方で、Ｔｒｅｇ誘引ケモカインの生成を選択的に増強するための、ＴＬＲリガンドまたはＮＦ−κＢ経路の他の活性化剤と、プロスタノイドまたは他のｃＡＭＰを上昇させる薬剤との（およびＩＦＮ応答性のＩＦＮ生成の阻害剤の潜在的な追加の使用との）併用適用である。
【０１７１】
一部の実施形態において、被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防する方法であって、治療的有効量のプロスタグランジン阻害剤またはＩＰ−１０／ＣＸＣＬ１０生成を増加させてＭＤＣ／ＣＣＬ２２生成を阻害する他のｃＡＭＰ抑制剤、および治療的有効量のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストを被験体に投与することを含む方法が提供される。
【０１７２】
他の実施形態において、治療的有効量のインターフェロンまたはＩＰ−１０の活性を増加させる薬剤、および治療的有効量のプロスタグランジン合成阻害剤を被験体に投与し、それによって被験体において結腸直腸がんを処置または予防することにより、被験体においてがんを処置するか、またはがんの発生もしくは再発を予防する方法が提供される。
【０１７３】
本発明のある実施形態は、被験体に、（１）治療的有効量のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストと、（２）治療的有効量のプロスタグランジン合成の遮断薬、ＰＧＥ２受容体の遮断薬もしくはｃＡＭＰシグナル伝達の遮断薬および／または（３）治療的有効量のインターフェロンの組合せを、一般的な送達系または異なる動態を有する各因子の放出を可能とする送達系の組合せを用いて同時または逐次的に適用して投与することである。
【０１７４】
本発明の別の実施形態は、被験体に、（１）治療的有効量のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、（２）治療的有効量のプロスタグランジン合成の遮断薬、ＰＧＥ２受容体の遮断薬もしくはｃＡＭＰシグナル伝達の遮断薬および／または（３）治療的有効量のインターフェロンまたはＩ型もしくはＩＩ型インターフェロン受容体アゴニスト（抗体または小分子）を組み込んだ複合分子を投与することである。関連する実施形態は、一般的媒体（エマルジョン、リポソーム、ナノベシクル、徐放性マトリックス、多孔質材料）を用いる２つまたは３つの上記因子の適用である。
【０１７５】
本発明の別の実施形態は、被験体に、（１）治療的有効量のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、（２）治療的有効量のプロスタグランジン合成の遮断薬、ＰＧＥ２受容体の遮断薬もしくはｃＡＭＰシグナル伝達の遮断薬および／または（３）治療的有効量のインターフェロンまたはＩ型もしくはＩＩ型インターフェロン受容体アゴニスト（抗体または小分子）を組み込んだ複合分子を、逐次的または同時に、同じカテーテルを通して投与することである。
【０１７６】
本発明の別の実施形態は、被験体に、（１）治療的有効量のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、（２）治療的有効量のプロスタグランジン合成の遮断薬、ＰＧＥ２受容体の遮断薬もしくはｃＡＭＰシグナル伝達の遮断薬および／または（３）治療的有効量のインターフェロンまたはＩ型もしくはＩＩ型インターフェロン受容体アゴニスト（抗体または小分子）を組み込んだ複合分子を、逐次的または同時に、埋込ポンプまたは２つ以上のポンプを用いて投与することである。
【０１７７】
自然発生の腫瘍特異的エフェクター細胞（または感染因子に対するエフェクター細胞）だけでなく、アルファ−ＤＣ１または他の型の１型極性化ＤＣ（例えばＬＰＳおよびＩＦＮγの組合せ、またはＴＮＦαおよびＩＦＮγの組合せによって誘導されるもの）を含む異なるがんワクチンによって誘導される腫瘍特異的エフェクター細胞も、腫瘍特異的Ｔ細胞上で高レベルのＣＣＲ５またはＣＸＣＲ３を発現するので、腫瘍組織でのＣＣＲ５リガンドまたは／およびＣＸＣＲ３リガンドの腫瘍選択的誘導は、そのようなワクチンの適用と組み合わせて特に有効であろう。
【０１７８】
免疫系の望ましくない活性化過剰と関連する疾患（慢性炎症、一部の前悪性状態、自己免疫現象、または、移植拒絶反応および移植片対宿主（ＧｖＨ）病を含む、移植された臓器、組織および単離細胞の拒絶反応を含む移植拒絶反応）の予防または処置の場合は、本発明の好ましい実施形態は、一般的媒体（エマルジョン、リポソーム、ナノベシクル、徐放性マトリックス、多孔質材料）、同じカテーテル、埋込ポンプもしくは数個のポンプを用いるかまたは物理的に連結された形態での、ＴＬＲリガンドまたはＮＦ−κＢ経路の他の活性化剤と、プロスタノイドまたは他のｃＡＭＰを上昇させる薬剤との（およびＩＦＮ応答性のＩＦＮ生成の潜在的阻害剤との）併用適用（同時または逐次的）である。
【０１７９】
さらに、本発明の実施形態は以下も含む：
【０１８０】
・がんまたは感染症に対する天然に存在する免疫をブーストするための独立型の処置としての、腫瘍選択的（健康組織よりも腫瘍組織に対して優先的な）ケモカインモジュレーション。
【０１８１】
・腫瘍組織に浸入し、がんの退縮または安定化を媒介するための、がんまたは感染因子に対するワクチン接種により誘導されたＴ細胞（または養子移入されたＴ細胞）の能力をブーストするための方法としての、腫瘍選択的ケモカインモジュレーション。
【０１８２】
・感染症に対する天然に存在する免疫をブーストするための独立型の処置としての、（病原体に侵された組織に一致した）病原体特異的かつ（健康組織よりも侵された組織に関して優先的な）腫瘍選択的ケモカインモジュレーション。
【０１８３】
・Ｔｒｅｇの浸潤およびＴｅｆｆ誘引ＣＫの抑制のブーストを目的とする相互アプローチが、移植、自己免疫疾患または一部の慢性炎症過程に適用されうる。
【０１８４】
記載された方法または組成物の正確な詳細が、記載された発明の精神から離れることなく、変更されまたは改変されうることは明らかであるだろう。我々は、以下の請求項の範囲および精神に含まれる全てのそのような改変および変更の権利を主張する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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