(57)【要約】  本開示は、細胞増殖、分化、アポトーシス、老化、および生存などのＲａｓ誘導または媒介細胞プロセスから生じた状態の治療に有用な新規Ｒａｓ阻害剤またはアンタゴニストについて記載する。これらの細胞プロセスは、非悪性または悪性疾患、障害、もしくは病理学的状態に関連するものであってもよい。また、本開示は、このようなＲａｓ誘導または媒介細胞プロセスを抑制する方法を記載する。方法は、このような細胞プロセスを抑制するのに有効な量のＲａｓアンタゴニストを投与することを伴う。
2014528453.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｒ４            （Ｉ）
で表されるＲａｓアンタゴニストであって、
式中、
Ｒ３が、Ｓ、Ｏ、Ｎ、ＳＯ、ＳＯ２、またはＳｅであり、および
Ｒ４が、ファルネシルまたはゲラニルゲラニルであり、
さらに
Ｒ２が、少なくとも１個のヘテロ原子を有する５員ヘテロ環であり、および／または
Ｒ１が、少なくとも１個のヘテロ原子を有する５または６員ヘテロ環である、
Ｒａｓアンタゴニスト。
【請求項２】
Ｒ２またはＲ１の前記ヘテロ原子が、Ｏ、Ｎ、Ｓ、ＳＯ、およびＳＯ２からなる群より選択される請求項１に記載のＲａｓアンタゴニスト。
【請求項３】
Ｒ２が、１個または２個のヘテロ原子を有する５員ヘテロ環である場合、Ｒ１が、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ５、Ｓ（＝Ｏ）（＝Ｏ）Ｒ５、ＣＯ２Ｍ、ＳＯ３Ｍ、またはＮ（Ｒ８）置換テトラゾールであり、
式中、
Ｒ５が、水素、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルオキシ、Ｃ２〜Ｃ４アルケニルオキシ、Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキルオキシ、Ｃ１〜Ｃ４アミノアルキルオキシ、またはＮＲ６Ｒ７であり、
Ｒ６が、水素、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４アミノアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルオキシ、もしくはＣ１〜Ｃ４アルキルアミノであり、およびＲ７が、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４アミノアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルオキシ、もしくはＣ１〜Ｃ４アルキルアミノであるか、またはＲ６およびＲ７が、一緒に、モルホリン、ピペラジン、またはピペルジンを含む環を形成し、
Ｍが、塩形成有機または無機対イオンであり、さらに
Ｒ８が、水素またはＣ１〜Ｃ４アルキルである、
請求項１に記載のＲａｓアンタゴニスト。
【請求項４】
式（３）： 
2014528453.tif 000014
を有する請求項３に記載のＲａｓアンタゴニスト。
【請求項５】
Ｒ１が、少なくとも１個のヘテロ原子を有する５または６員ヘテロ環である場合、Ｒ２が、フェニル環または任意に置換されてもよいフェニル環である請求項１に記載のＲａｓアンタゴニスト。
【請求項６】
Ｒ１が、イミダゾリン、イミダゾール、ピラゾール、ピロール、オキサゾール、チアゾール、１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン、トリアゾール、またはＮ（Ｒ９）置換テトラゾールであり、さらに
式中、
Ｒ９が、水素またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
前記任意に置換されてもよいフェニル環が、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ、アミノ、モノまたはジ置換アミノで置換され、および
前記フェニル環の窒素置換基が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルである、
請求項５に記載のＲａｓアンタゴニスト。
【請求項７】
式（５）：
2014528453.tif 000015
を有する請求項５に記載のＲａｓアンタゴニスト。
【請求項８】
式（１）：
2014528453.tif 000016
を有する請求項５に記載のＲａｓアンタゴニスト。
【請求項９】
式（９）：
2014528453.tif 000017
を有する請求項５に記載のＲａｓアンタゴニスト。
【請求項１０】
Ｒ２が、少なくとも３個のヘテロ原子を有する５員ヘテロ環である場合、Ｒ１が、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１０であり、およびＲ１０が、水素、ヒドロキシル、またはＣ１〜Ｃ４アルキルオキシである、
請求項１に記載のＲａｓアンタゴニスト。
【請求項１１】
Ｒ２が、チアジアゾール基またはオキサジアゾール基である、
請求項１０に記載のＲａｓアンタゴニスト。
【請求項１２】
式（４）：
2014528453.tif 000018
を有する請求項１０に記載のＲａｓアンタゴニスト。
【請求項１３】
悪性もしくは非悪性疾患または病理学的状態に関連するＲａｓ誘導細胞増殖を抑制する方法であって、
前記増殖を抑制するのに有効な量の請求項１に記載のＲａｓアンタゴニストを患者に投与すること、
を含む方法。
【請求項１４】
前記患者が、全身性のエリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症（ＭＳ）、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、関節リウマチ、１型糖尿病、臓器拒絶反応、および慢性移植片対宿主病の内の少なくとも１種に繋がる免疫系の調節障害を患っている請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記患者が、２型糖尿病に繋がる内分泌系および内分泌ホルモンの標的の内の少なくとも１つの調節障害を患っている請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記患者が、粥状動脈硬化症に繋がる組織傷害、組織損傷、および局所血管炎症の内の少なくとも１種を患っている請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記投与するステップが、非経口、経口、局所、鼻腔内、経鼻、口腔、または経皮により行われる請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
悪性疾患または病理学的状態に関連するＲａｓ誘導細胞増殖を抑制する方法であって、
前記細胞を、前記増殖を抑制するのに有効な量の請求項１に記載のＲａｓアンタゴニストと接触させることを含む、
方法。
【請求項１９】
前記悪性疾患が、神経膠芽腫、腺癌、軟部肉腫、および白血病の内の少なくとも１種である請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
非悪性疾患または病理学的状態に関連するＲａｓ誘導細胞増殖を抑制する方法であって、
前記細胞を、前記増殖を抑制するのに有効な量の請求項１に記載のＲａｓアンタゴニストと接触させることを含む、
方法。
【請求項２１】
前記非悪性疾患が、乾癬、神経線維腫症１型（ＮＦ−１）、ＮＦ−１関連悪性腫瘍、多発性嚢胞腎疾患（ＰＫＤ）、血管形成術後再狭窄、組織線維症、および筋ジストロフィーの内の少なくとも１種である請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
Ｒａｓ誘導細胞増殖を抑制する方法であって、
前記細胞を、前記増殖を抑制するのに有効な量の請求項１に記載のＲａｓアンタゴニストと接触させることを含み、
前記増殖が、組織傷害または組織損傷により開始される、
方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願への相互参照】
【０００１】
本出願は、２０１１年１０月７日出願の米国特許仮出願第６１／５４４，４７１号の優先権を主張する。この特許出願の開示内容は、参照によってその全体が明示的に本明細書に組み込まれる。
【技術分野】
【０００２】
本開示は、悪性および非悪性（すなわち、良性）疾患、障害、または病理学的状態のＲａｓアンタゴニストによる治療に関する。
【背景技術】
【０００３】
Ｒａｓは、細胞増殖、アポトーシス、分化、老化、および生存を含む多くの細胞プロセスで重要な役割を果たす膜結合性グアニンヌクレオチド結合タンパク質である。Ｒａｓは、このような細胞プロセスに対するＯＮ−ＯＦＦスイッチである。通常、それは休止状態（ＯＦＦ）で、グアノシン二リン酸（ＧＤＰ）ヌクレオチドと結合しているが、種々の標的に作用する細胞外の信号伝達分子の作用によりグアノシン三リン酸（ＧＴＰ）ヌクレオチドに結合すると、Ｒａｓは、活性化（ＯＮ）する。
【０００４】
Ｒａｓタンパク質は、チロシンキナーゼ増殖因子受容体信号伝達に関し重要な役割を果たす（非特許文献１；非特許文献２）。ＧＴＰ結合型として活性化すると、Ｒａｓタンパク質は、増殖因子の信号をマップキナーゼカスケードに伝達する。Ｒａｓタンパク質は、細胞膜と結合し、そこで、直接Ｒａｓ／Ｒａｆ相互作用を介してＲａｆキナーゼの活性化が起こる（非特許文献３；非特許文献４）。
【０００５】
増殖因子信号伝達の終止は、活性な、ＧＴＰ結合型Ｒａｓの不活性なＧＤＰ結合型Ｒａｓへの加水分解を伴う。しかし、変異または発癌性Ｒａｓタンパク質は、ＧＴＰを加水分解せず、従って、持続的（ＯＮ）状態になる。ＧＴＰを加水分解できないことにより、種々の無制御細胞性機能に影響を与える可能性がある。
【０００６】
活性化Ｒａｓは、活性化Ｒａｓタンパク質を発現する腫瘍細胞を含む腫瘍細胞の悪性細胞増殖を開始し、進行させることができる。変異Ｒａｓタンパク質は、ヒト癌中で高頻度に見つかっている（非特許文献５；非特許文献６）。結腸および膵癌などの一部の腫瘍のタイプでは、活性化Ｒａｓの発生率は、５０％を越える。変異または発癌性Ｒａｓの制御不能の作用から生ずる腫瘍に加えて、Ｒａｓを活性（ＯＮ）位置に保持する常時活性型の増殖因子受容体（例えば、上皮増殖因子受容体、繊維芽細胞増殖因子受容体、および血小板由来増殖因子受容体）が原因の腫瘍も存在する。従って、特定のタイプのヒト癌の治療に対し、Ｒａｓ活性に影響を与える薬理学的方法が、有用である可能性がある。
【０００７】
悪性癌に加えて、活性化Ｒａｓは、非悪性（すなわち、良性の）細胞増殖を開始し、進行させることができる。Ｒａｓ誘導、非悪性細胞増殖の一例は、乾癬病巣である。患者の乾癬病巣中で、活性化Ｒａｓレベルの増加が認められた（非特許文献７）。さらに、Ｒａｓ／ＭＡＰＫカスケードを介した受容体信号伝達は、乾癬病巣で重要な役割を果たしていることが特定された（非特許文献８）。
【０００８】
Ｒａｓ誘導、非悪性細胞増殖の他の例は、種々の遺伝性疾患（例えば、神経線維腫症１型（ＮＦ−１）および多発性嚢胞腎疾患（ＰＫＤ））ならびに肝臓、腎臓、および心臓線維症、などの多岐にわたる散発的な問題において認められる。例えば、ニューロフィブロミンは、ＲａｓをＯＦＦにするタンパク質であり、従って、腫瘍抑制因子である。ニューロフィブロミンの非存在または減少の原因となる遺伝子変異は、神経組織で腫瘍が成長する状態であるＮＦ−１を引き起こす。これらの腫瘍は、非悪性（すなわち、良性）である場合もあるが、それらの部位によっては、周辺の組織に重大な損傷を生ずる可能性がある。さらに、これらの腫瘍は、神経線維肉腫または白血病などの悪性状態に変化する場合がある。別の例として、常染色体優性ＰＫＤでは、腎臓上皮細胞の増殖およびその後の嚢腫形成が起こる。Ｒａｓの抑制は、これらの細胞の異常増殖を止める（非特許文献９）。
【０００９】
Ｒａｓ誘導、非悪性細胞増殖のさらに別の例は、動脈中へのステントの留置後の血管形成術後再狭窄の病理学的状態において認められ、これは、血管内皮細胞の増殖に起因する。このような細胞増殖は、例えば、組織傷害もしくは損傷（例えば、ステントの挿入が原因の損傷）または局所的血管炎症により開始される場合がある。
【００１０】
細胞増殖および腫瘍形成の進行に加えて、Ｒａｓ活性化は、自己免疫疾患で見られるものなどのいくつかの免疫現象および免疫機能異常を媒介する。これらの自己免疫疾患は、Ｒａｓ依存性である場合がある。自己免疫疾患は、自らが加えた組織損傷を特徴とする。免疫複合体の沈積、細胞性免疫、またはサイトカインなどの炎症促進性の免疫ホルモンの不適切な生成もしくは作用を介したプロセスによって、どの臓器でも罹患する可能性がある。自己免疫疾患は、これに罹患する多くの患者数と、これが原因となる罹患率および死亡率の理由から、大きな公衆衛生問題である。このグループでよくある慢性の全身性疾患には、１型糖尿病、橋本甲状腺炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、原発性抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、および重症筋無力症、ランバート・イートン筋無力症症候群、ギラン・バレー症候群、多発性筋炎、ならびに多発性硬化症、などの中枢および末梢神経系を冒す種々の疾患が含まれる。さらに、全身性の自己免疫疾患の神経学的合併症がある。１型糖尿病に関連する感覚性ニューロパチーは、一例である。自己免疫疾患に関与する因子には、遺伝性素因および環境要因（例えば、特定の感染および医薬品）が含まれる。臓器移植後の細胞および組織の拒絶反応は、Ｒａｓに結び付けられているもう一つの免疫系媒介現象（非特許文献１０）であり、例えば、慢性移植片対宿主病（非特許文献１１）がそうである。
【００１１】
Ｒａｓ信号伝達の異常が病理学的免疫応答を進行させるのと全く同じように、活性化Ｒａｓは、内分泌系および血管系などの他の体組織の調節障害に対しても関与する場合がある。一例は、末梢組織のインスリン感受性の制御不良であり、最終的には、２型糖尿病で膵不全に至る。この疾患の動物モデルでは、Ｒａｓアンタゴニストは、インスリン抵抗性を逆転させることができる（非特許文献１２）。別の例は、糖尿病および粥状動脈硬化症の病理学に関与する炎症促進性アディポカインにより促進される血管炎症である（非特許文献１３）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｅｇａｎ、Ｓ．Ｅ．ａｎｄ  Ｗｅｉｎｂｅｒｇ、Ｒ．Ａ．Ｎａｔｕｒｅ  ３６５、７８１−７８２（１９９３）
【非特許文献２】ＭｃＣｏｒｍｉｃｋ、Ｆ．、Ｎａｔｕｒｅ、３６３、１５−１６（１９９３）
【非特許文献３】Ｚｈｅｎｇ、Ｘ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ、３６４、３０８−３１３（１９９３）
【非特許文献４】Ｗａｒｎｅ、Ｐ．Ｈ．、Ｎａｔｕｒｅ、３６４、３５２−３５３（１９９３）
【非特許文献５】Ｂｏｓ、Ｊ．Ｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、４９、６８２−４６８９（１９８９）
【非特許文献６】Ｂａｒｂａｃｉｄ、Ｍ．、Ａｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ、５６、７７９−８２９（１９８７）
【非特許文献７】Ｌｉｎ  Ｆ．、Ｂａｌｄａｓｓａｒｅ、Ｊ．Ｊ．、Ｖｏｏｒｈｅｅｓ、Ｊ．Ｊ．、Ｆｉｓｈｅｒ、Ｇ．Ｊ．「乾癬病巣中のＲａｓの活性化の増加（Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒａｓ  ｉｎ  ｐｓｏｒｉａｔｉｃ  ｌｅｓｉｏｎｓ）」、Ｓｋｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ａｐｐｌ  Ｓｋｉｎ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  １９９９  Ｊａｎ−Ａｐｒ；１２（１−２）：９０−７
【非特許文献８】Ｍａｒｋ、Ｅ．Ｂ．、Ｊｏｎｓｓｏｎ、Ｍ．、Ａｓｐ、Ｊ．、Ｗｅｎｎｂｅｒｇ、Ａ．Ｍ．、Ｍｏｌｎｅ、Ｌ．、Ｌｉｎｄａｈｌ、Ａ．「乾癬のある皮膚のｐ１６の調節に関与する遺伝子の発現（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐ１６  ｉｎ  ｐｓｏｒｉａｔｉｃ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｓｋｉｎ）」、ＡｒｃｈＤｅｒｍａｔｏｌＲｅｓ２００６Ａｐｒ；２９７（１０）：４５９−６７．Ｅｐｕｂ２００６Ｍａｒ２２
【非特許文献９】Ｐａｒｋｅｒ、Ｅ．、Ｎｅｗｂｙ、Ｌ．Ｊ．、Ｓｈａｐｒｐｅ、Ｃ．Ｃ．、Ｒｏｓｓｅｔｔｉ、Ｓ．、Ｓｔｒｅｅｔｓ、Ａ．Ｊ．、Ｈａｒｒｉｓ、Ｐ．Ｃ．、Ｏ’Ｈａｒｅ、Ｍ．Ｊ．、Ｏｎｇ、Ａ．Ｃ．「ＰＫＤ−１嚢胞性細胞の過剰増殖は、Ｒａｓ／Ｒａｆ信号伝達系のインスリン様増殖因子Ｉ活性化により誘導される（Ｈｙｐｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＰＫＤ−１  ｃｙｓｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｉｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−１  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｒａｓ／Ｒａｆ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ）」、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ  ２００７  Ｊｕｌ：７２（２）：１５７−６５．Ｅｐｕｂ  ２００７  Ｍａｒ  ２８
【非特許文献１０】Ｔｒｕｊｉｌｌｏ、Ｊ．Ｉ．、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｉｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｐａｔ．２１、１０４５−１０６９（２０１１）
【非特許文献１１】Ｓｖｅｇｌｉａｔｉ  Ｓ、Ｏｌｉｖｉｅｒｉ  Ａ、Ｃａｍｐｅｌｌｉ  Ｎ、Ｌｕｃｈｅｔｔｉ  Ｍ、Ｐｏｌｏｎｉ  Ａ、Ｔｒａｐｐｏｌｉｎｉ  Ｓ、Ｍｏｒｏｎｃｉｎｉ  Ｇ、Ｂａｃｉｇａｌｕｐｏ  Ａ、Ｌｅｏｎｉ  Ｐ、Ａｖｖｅｄｉｍｅｎｔｏ  ＥＶ、ａｎｄ  Ｇａｂｒｉｅｌｌｉ  Ａ．Ｂｌｏｏｄ１１０、２３７−２４１（２００７）
【非特許文献１２】Ｍｏｒ、Ａ．、Ａｉｚｍａｎ、Ｅ．、Ｇｅｏｒｇｅ、Ｊ．、Ｋｌｏｏｇ、Ｙ．「Ｒａｓ抑制は、インスリン感受性およびグルコース取り込みを誘導する（Ｒａｓ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｕｐｔａｋｅ）」、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１１６（６）：ｅ２１７１２．Ｅｐｕｂ  ２０１１  Ｊｕｎ  ２９
【非特許文献１３】Ｇｅｏｒｇｅ、Ｊ．、Ａｆｅｋ、Ａ．、Ｋｅｒｅｎ、Ｐ．、Ｈｅｒｚ、Ｉ．、Ｇｏｌｄｂｅｒｇ、Ｉ．、Ｈａｋｌａｉ、Ｒ．、Ｋｌｏｏｇ、Ｙ．、Ｋｅｒｅｎ、Ｇ．「ＲａｓアンタゴニストによるＲａｓの機能抑制により、アポリポタンパク質Ｅノックアウトマウスの粥状動脈硬化症が緩和される」、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００２、１０５（２０）：２４１６−２４２２
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本開示は、細胞増殖、分化、アポトーシス、老化、および生存、などのＲａｓ誘導または媒介細胞プロセスに起因する状態の治療に有用な、Ｒａｓの新規阻害剤またはアンタゴニストについて記載する。これらの細胞プロセスは、非悪性もしくは悪性疾患、障害、または病理学的状態に関連するものであってよい。
【００１４】
また、本開示は、このようなＲａｓ誘導または媒介細胞プロセスを抑制する方法を記載する。この方法は、このような細胞プロセスを抑制するのに有効な量のＲａｓアンタゴニストを投与することを伴う。
【００１５】
Ｒａｓ癌遺伝子ファミリーは、多くの細胞信号伝達ネットワーク中の重要な要素である。このような細胞信号伝達阻害剤は、このような細胞プロセスの機能制御を提供する上流信号伝達および下流エフェクター経路の両方をもたらすであろう。
【００１６】
膵臓癌、白血病、メルケル細胞癌、および神経膠芽細胞腫、などの悪性癌に加えて、本開示は、特に、肝臓の肝硬変、ステント留置後の血管の再狭窄、ＰＫＤ、および乾癬、などの多様な細胞増殖を特徴とする非悪性疾患に適用可能である。Ｒａｓ活性化は、免疫系の機能障害を進行させるので、本開示のアンタゴニストは、１型糖尿病、ループス、関節リウマチ、および多発性硬化症、ならびに疾患状態（例えば、腎不全）に応答して外部抗原（例えば、移植片）の提示により誘導された移植片拒絶反応のような病理学的状態、などの自己免疫疾患の治療にも使用可能である。同様に、本開示のアンタゴニストを用いて、内分泌器官のＲａｓ媒介異常（例えば、２型糖尿病）および血管のＲａｓ媒介異常（例えば、動脈硬化症）を治療できる。
【００１７】
本開示の代表的実施形態では、Ｒａｓアンタゴニストは、式（Ｉ）：
Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｒ４        （Ｉ）
により提供され、
式中、
Ｒ３は、Ｓ、Ｏ、Ｎ、ＳＯ、ＳＯ２、またはＳｅであり、Ｒ４は、ファルネシルまたはゲラニルゲラニルであり、さらに、Ｒ２は、少なくとも１個のヘテロ原子を有する５員ヘテロ環であり、および／または、Ｒ１は、少なくとも１個のヘテロ原子を有する５または６員ヘテロ環である。Ｒ２またはＲ１のヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、Ｓ、ＳＯ、およびＳＯ２からなる群より選択できる。
【００１８】
Ｒ２が１個または２個のヘテロ原子を有する５員ヘテロ環である場合の実施形態では、Ｒ１は、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ５、Ｓ（＝Ｏ）（＝Ｏ）Ｒ５、ＣＯ２Ｍ、ＳＯ３Ｍ、またはＮ（Ｒ８）−置換テトラゾールであってもよく、この場合、Ｒ５は、水素、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルオキシ、Ｃ２〜Ｃ４アルケニルオキシ、Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキルオキシ、Ｃ１〜Ｃ４アミノアルキルオキシ、またはＮＲ６Ｒ７であり；Ｒ６は、水素、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４アミノアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルオキシ、またはＣ１〜Ｃ４アルキルアミノであり；およびＲ７は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４アミノアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルオキシ、またはＣ１〜Ｃ４アルキルアミノであり；またはＲ６およびＲ７は、一緒に、モルホリン、ピペラジン、またはピペルジンなどの環を形成し；Ｍは、塩形成有機もしくは無機対イオンであり；さらにＲ８は、水素またはＣ１〜Ｃ４アルキルである。代表的Ｒａｓアンタゴニストは、下記の化合物（３）およびその類似体を含む。
【００１９】
Ｒ１が少なくとも１個のヘテロ原子を有する５または６員ヘテロ環である実施形態では、Ｒ２は、フェニル環でも、または任意に置換されてもよいフェニル環であってもよい。Ｒ１は、イミダゾリン、イミダゾール、ピラゾール、ピロール、オキサゾール、チアゾール、１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン、トリアゾール、またはＮ（Ｒ９）−置換テトラゾールであってもよく、この場合、Ｒ９は、水素またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり；任意に置換されてもよいフェニル環は、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ、アミノ、モノもしくはジ置換アミノで置換され；さらにフェニル環の窒素置換基は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルである。代表的Ｒａｓアンタゴニストは、下記の化合物（１）、（５）、および（９）、ならびにそれらの類似体を含む。
【００２０】
Ｒ２が少なくとも３個のヘテロ原子を有する５員ヘテロ環である実施形態では、Ｒ１は、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１０であってもよく、この場合、Ｒ１０は、水素、ヒドロキシル、またはＣ１〜Ｃ４アルキルオキシである。Ｒ２は、例えば、チアジアゾール基またはオキサジアゾール基であってもよい。代表的Ｒａｓアンタゴニストは、下記化合物（４）およびその類似体を含む。
【００２１】
本開示の別の代表的実施形態では、悪性もしくは非悪性疾患または病理学的状態に関連するＲａｓ誘導細胞増殖を抑制する方法が提供される。方法は、患者に増殖を抑制するのに有効な量の式（Ｉ）のＲａｓアンタゴニストを投与することを含む。投与ステップは、非経口、経口、局所、鼻腔内、経鼻、バッカル、または経皮経由で行ってもよい。一実施形態では、患者は、全身性のエリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症（ＭＳ）、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、関節リウマチ、１型糖尿病、臓器拒絶反応、および慢性移植片対宿主病、の内の少なくとも１種に繋がる免疫系の調節障害を患っている。別の実施形態では、患者は、２型糖尿病に繋がる、内分泌ホルモンの内分泌系および標的の内の少なくとも１つの調節障害を患っている。別の実施形態では、患者は、粥状動脈硬化症を生ずる組織傷害、組織損傷、および局部血管炎症の内の少なくとも１種を患っている。
【００２２】
本開示のさらに別の代表的実施形態では、悪性疾患または病理学的状態に関連するＲａｓ誘導細胞増殖を抑制する方法が提供される。この方法は、細胞を、増殖を抑制するのに有効な量の式（Ｉ）のＲａｓアンタゴニストと接触させることを含む。悪性疾患は、神経膠芽腫、腺癌、軟部肉腫、および／または白血病、を含んでもよい。
【００２３】
本開示のさらに別の代表的実施形態では、非悪性疾患または病理学的状態に関連するＲａｓ誘導細胞増殖を抑制する方法が提供される。この方法は、細胞を、増殖を抑制するのに有効な量の式（Ｉ）のＲａｓアンタゴニストと接触させることを含む。非悪性疾患には、乾癬、神経線維腫症１型（ＮＦ−１）、ＮＦ−１関連悪性腫瘍、多発性嚢胞腎疾患（ＰＫＤ）、血管形成術後再狭窄、組織線維症、および／または筋ジストロフィー、を含んでもよい。
【００２４】
本開示のまたさらに別の代表的実施形態では、Ｒａｓ誘導細胞増殖を抑制する方法が提供される。この方法は、細胞を、増殖を抑制するのに有効な量の式（Ｉ）のＲａｓアンタゴニストを接触させることを含み、増殖は、組織傷害または組織損傷により開始される。
【００２５】
付随する図と併せて行われる次の本発明の実施形態の説明を参照することにより、上述および他の特徴、ならびに本開示の利点、ならびに、それらを得る方法が、より明らかになり、また、本発明それ自体も、より良く理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】特定の本開示の発明化合物に種々の用量で暴露した場合に、対照試料と比較して、Ｕ８７ＭＧ細胞増殖の抑制を示す図である。
【図２】特定の発明化合物に種々の図１より少ない用量で暴露した場合に、対照試料と比較して、Ｕ８７ＭＧ細胞増殖の抑制を示す図である。
【図３】特定の本開示の発明化合物に種々の用量で暴露した場合に、対照試料と比較して、ＰＡＮＣ−１細胞増殖を抑制することを示す図である。
【図４Ａ】本開示の発明化合物に種々の用量で暴露した場合に、対照試料と比較して、マスト細胞での活性化Ｒａｓの抑制を示すウェスタンブロットの結果である。
【図４Ｂ】本開示の発明化合物に種々の用量で暴露した場合に、対照試料と比較して、マスト細胞増殖の抑制を示す図である。
【図５Ａ】本開示の発明化合物に種々の用量で暴露した場合に、対照試料と比較して、シュワン細胞での活性化Ｒａｓの抑制を示すウェスタンブロットの結果である。
【図５Ｂ】本開示の発明化合物に種々の用量で暴露した場合に、対照試料と比較して、シュワン細胞増殖の抑制を示す図である。
【００２７】
いくつかの図を通して、対応する参照記号は、対応する部分を示している。本明細書で記載された例示は、本発明の代表的実施形態を示し、このような例示は、本発明の範囲を何ら限定するものと解釈されるべきではない。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
記載された式中で使用される一般的化学用語は、通常使われる意味を持つ。例えば、用語の「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、およびｔｅｒｔ−ブチルを含む。用語の「Ｃ１〜Ｃ４アルキルオキシ」は、酸素原子を介して親分子結合したＣ１〜Ｃ４アルキル基を意味し、メトキシ基、エトキシ基、イソプロポキシ基、などが含まれる。用語の「Ｃ２〜Ｃ４アルケニル」は、ビニル、アリル、およびクロチルを含む。用語の「Ｃ１〜Ｃ４アミノアルキル」は、１つの炭素原子を介して親分子に結合し、窒素原子が１つの遠位の炭素原子に結合しているＣ１〜Ｃ４アルキル基を意味し、これには、アミノメチレン、アミノエチレン、アミノプロピレン、アルファ−アミノエチレン、ベータ−アミノエチレン、などの基が含まれる。用語の「Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキル」は、１つの炭素原子を介して親分子に結合し、酸素原子が１つの遠位の炭素原子に結合しているＣ１〜Ｃ４アルキル基を意味し、これには、ヒドロキシメチレン、ヒドロキシエチレン、ヒドロキシプロピレン、アルファ−ヒドロキシエチレン、ベータ−ヒドロキシエチレン、などの基が含まれる。用語のアミノは、親構造に結合し、１つの（用語の「モノ−」で指定される）または２つの（用語の「ジ−」で指定される）追加の化学の成分、または、一緒にすると、モルホリンもしくはピペルジン、またはピペラジン、などの環を形成できる成分で任意に置換されてもよい窒素原子を意味する。用語の「Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノ」は、窒素原子を介して親分子に結合したＣ１〜Ｃ４アルキル基を意味し、これには、メチルアミン、エチルアミン、イソプロピルアミン、ブチルアミン、イソブチルアミン、ｓｅｃ−ブチルアミン、およびｔｅｒｔ−ブチルアミンなどの基が含まれる。用語の「Ｃ２〜Ｃ４アルケニルオキシ」は、酸素原子を介して親分子に結合したＣ２〜Ｃ４アルケニル基を意味し、これには、ビニルオキシ、アリルオキシ、およびクロチルオキシ基が含まれる。用語の「Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキルオキシ」は、酸素原子を介して親分子に結合し、酸素原子が１つの遠位の炭素原子に結合しているＣ１〜Ｃ４アルキル基を意味し、これには、ヒドロキシメトキシ、ヒドロキシエトキシ、ヒドロキシプロポキシ、ベータ−ヒドロキシエトキシ、などの基が含まれる。用語の「Ｃ１〜Ｃ４アミノアルキルオキシ」は、酸素原子を介して親分子に結合し、窒素原子が１つの遠位の炭素原子に結合しているＣ１〜Ｃ４アルキル基を意味し、これには、アルファ−ヒドロキシメチルアミン、ベータ−ヒドロキシエチルアミン、ガンマ−ヒドロキシプロピルアミン、ベータ−ヒドロキシエチルアミン、などの基が含まれる。
【００２９】
当業者なら、特定の式Ｉの化合物は、幾何学的なシスおよびトランス異性体として存在しうることを理解するであろう。本開示は、全ての個別異性体、ならびに前記化合物の幾何異性体の混合物を意図している。式Ｉの化合物が単一の幾何異性体として存在することが好ましい。当業者なら、個別異性体が、例えば、既知の方法により選択的に調製できること、または、異性体の混合物が標準的クロマトグラフィーまたは結晶化技術により分離できることを認識しているであろう。
【００３０】
当業者なら、少なくとも１個のキラル中心を含む特定の式Ｉの化合物が存在可能であることを理解するであろう。本発明は、すべての個別鏡像異性体またはジアステレオマー、ならびにラセミ化合物を含む前記化合物の鏡像異性体とジアステレオマーの混合物を意図している。少なくとも１個のキラル中心を含む式Ｉの化合物が、単一の鏡像異性体またはジアステレオマーとして存在することが好ましい。単一の鏡像異性体またはジアステレオマーは、キラル試薬から出発して、または立体選択的もしくは立体特異的合成技術により調製できる。あるいは、単一の鏡像異性体またはジアステレオマーは、標準的クロマトグラフィー、または結晶化技術により混合物から単離できる。
【００３１】
当業者なら、特定の式Ｉの化合物は、互変異性体として存在できることを理解するであろう。本開示は、全ての互変異性型を意図している。
【００３２】
当業者なら、特定の式Ｉの化合物が、塩を形成できることを理解するであろう。全てのケースで、全ての化合物の薬学的に許容可能な塩が意図されている。例えば、本開示の化合物がアミンを含む場合には、その化合物は、多くの無機または有機酸と反応し、薬学的に許容可能な付加塩を形成できる。
【００３３】
当業者なら、式Ｉの化合物の薬学的に許容可能な溶媒和物が本開示の一部として意図され、従来の方法、例えば、式Ｉの化合物を適切な溶媒（例えば、水、メタノール、エタノール、など）中に溶解し、別の結晶化技術を使って溶質を再結晶化することにより調製できることを理解するであろう。あるいは、過剰溶媒を蒸発させて除去し、溶媒和物を得ることができる。
【００３４】
用語の「Ｒａｓ」は、タンパク質のＲａｓスーパーファミリー中のｈＲａｓ、ｋＲａｓ、およびｎＲａｓと呼ばれる３つの遺伝子産物を意味する。
【００３５】
用語の「Ｒａｓアンタゴニスト」は、細胞増殖、分化、アポトーシス、老化、および生存、などの１つまたは複数の細胞プロセスを標的とし、このような細胞プロセスを縮小、抑制、または阻害する化合物または薬剤を意味する（Ｓａｔｏｈ  Ｔ  ａｎｄ  Ｋａｚｉｒｏ  Ｙ．（１９９２）．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．、３、１６９±１７７；Ｋｈｏｓｒａｖｉ−Ｆａｒ  Ｒ  ａｎｄ  ＤｅｒＣ  Ｊ．（１９９４）．Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．１３、６７−８９）。Ｒａｓタンパク質は、ホルモン／増殖因子受容体および細胞分裂を刺激する調節カスケードの間のＯＮ／ＯＦＦスイッチの作用をする。Ｒａｓが活性化される（ＯＮ）ためには、細胞膜の内側に付着しなければならない。従って、一実施形態では、本開示のＲａｓアンタゴニストは、Ｒａｓの細胞膜との会合を妨害し、それにより、Ｒａｓの活性化を遮断するか、または活性化Ｒａｓを阻害する（Ｋｌｏｏｇ、ｅｔ  ａｌ．、Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ８（１２）：２１２１−２１４０（１９９９））。
【００３６】
本開示は、Ｒａｓ誘導細胞機能を特徴とするか、あるいは、これを含む悪性疾患、障害、または病理学的状態、の治療に関する。Ｒａｓ遺伝子の変異が、全ヒト腫瘍の内の約３０％で特定されている。これらの悪性状態の例には、例えば、膵臓、子宮頸部、結腸、前立腺、および胃を含む腺癌；膀胱、乳房、肝臓、肺、皮膚（例えば、メルケル細胞癌）、および甲状腺を含む癌腫；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、および若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）を含む白血病；血管肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、横紋筋肉腫、および粘液腫を含む軟部肉腫；ならびに腎臓、肝臓、および脳を含む芽細胞腫（例えば、神経膠芽細胞腫）、が含まれる。
【００３７】
さらに、本開示は、非悪性疾患、障害、またはＲａｓ誘導細胞機能を特徴とするか、あるいはこれを含む病理学的状態、の治療に関する。活性化Ｒａｓは、例えば、乾癬に見られるように、非悪性細胞増殖を開始し、進行させることができる。活性化Ｒａｓは、ＮＦ−１などの種々の遺伝性疾患中に認められ、ＲａｓのＰＫＤ阻害剤はまた、変異がＲａｓ信号伝達経路で発生する種々の家族性発生症候群の治療に有用である可能性がある。これらの障害の追加の例には、例えば、レオパード症候群、ヌーナン症候群、レギウス症候群、ステロ症候群、心顔皮膚症候群、遺伝性歯肉増殖症１型、自己免疫性リンパ増殖症候群、および毛細血管奇形−動静脈奇形、を含むこともできる。血管形成術後再狭窄では、動脈内ステント挿入が損傷、増殖因子の放出、および正常な平滑筋細胞の増殖を引き起こす。追加の例には、肝臓の肝硬変が含まれ、これは、正常な肝細胞、星状細胞および結合組織細胞、の増殖を伴う。Ｒａｓ活性化細胞増殖の追加の例には、例えば、末期の腎疾患、肝臓の肝硬変、および筋ジストロフィーで見られる肝臓、腎臓、および心臓線維症（例えば、心筋線維症）を含む組織線維症などの多様な散発的な問題が含まれる。
【００３８】
さらに、本開示は、自己免疫疾患で見られるものなどのＲａｓ活性化または媒介免疫現象および免疫機能異常の治療に関する。このグループでよくある慢性全身性疾患には、１型糖尿病、橋本甲状腺炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、原発性抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、および、重症筋無力症、ランバート・イートン筋無力症症候群、ギラン・バレー症候群、多発性筋炎、および多発性硬化症（ＭＳ）などの中枢および末梢神経系を冒す種々の疾患が含まれる。さらに、全身性の自己免疫疾患の神経学的合併症がある。１型糖尿病に関連する感覚性ニューロパチーは、この一例である。自己免疫疾患に関与する因子には、遺伝性素因および環境要因（例えば、特定の感染および医薬品）が含まれる。臓器移植後の細胞および組織の慢性拒絶反応は、もう一つの免疫系媒介現象である。移植片拒絶反応は、レシピエント（「宿主」）の免疫系による外部細胞の認識を伴う障害であり、移植片対宿主病としても知られている。このような細胞を攻撃することは、適切な免疫応答であるが、臓器移植後では、これは、宿主にとって実に有害である。
【００３９】
さらに、本開示は、Ｒａｓ活性化または媒介現象、および２型糖尿病で見られるような内分泌機能の調節障害の治療に関する。２型糖尿病では、末梢組織でのインスリン感受性の制御不良が存在し、最終的には膵不全になる。
【００４０】
さらに、本開示は、局所的血管炎症および損傷などのＲａｓ媒介組織炎症および損傷、により開始される疾患カテゴリーの治療に関する。肥満動物およびヒトの炎症促進性のアディポカインにより促進される血管炎症は、糖尿病および粥状動脈硬化症の病態に関与する。
【００４１】
本開示のＲａｓアンタゴニストは、下記の式（Ｉ）：
Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｒ４          （Ｉ）
で表され、
式中、
Ｒ３は、Ｓ、Ｏ、Ｎ、ＳＯ、ＳＯ２、またはＳｅであり、および
Ｒ４は、ファルネシルまたはゲラニルゲラニルである。
【００４２】
式（Ｉ）は、カルボン酸のプレニル誘導体として記載でき、また、分子構造は、発癌性Ｒａｓタンパク質に共通のカルボキシル末端ファルネシルシステインに似ている。このような薬剤は、Ｒａｓカスケードを介した細胞内の信号伝達を競合的に遮断し、従って、例えば、癌の治療に有用である。本開示は、特に、一般式（Ｉ）のファルネシル、ゲラニルゲラニルアリールおよびゲラニルゲラニルヘテロアリール類似体の使用と調製について記載する。これらのタイプの薬剤は、Ｒａｓカスケードを介した細胞内の信号伝達を競合的に遮断することが知られており、従って、例えば、癌の治療に有用である。
【００４３】
本開示の第１の代表的実施形態では、式（Ｉ）は、さらに下記のように定義される：
Ｒ２は、Ｏ、Ｎ、Ｓ、ＳＯ、およびＳＯ２などの１個または２個のヘテロ原子を有する５員ヘテロ環であり、さらに
Ｒ１は、ＣＮまたはＣ（＝Ｏ）Ｒ５、Ｓ（＝Ｏ）（＝Ｏ）Ｒ５、ＣＯ２Ｍ、ＳＯ３Ｍ、およびＮ（Ｒ８）置換テトラゾールの内の１個の基であり、
式中、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルオキシ、Ｃ２〜Ｃ４アルケニルオキシ、Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキルオキシ、Ｃ１〜Ｃ４アミノアルキルオキシ、またはＮＲ６Ｒ７であり、
Ｒ６は、水素、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４アミノアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルオキシ、またはＣ１〜Ｃ４アルキルアミノであり、および
Ｒ７は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４アミノアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルオキシ、またはＣ１〜Ｃ４アルキルアミノであり、
または、Ｒ６およびＲ７は、一緒に、モルホリン、ピペラジン、もしくはピペルジンなどの環を形成し、
Ｍは、塩形成有機または無機の対イオン、例えば、限定されないが、ナトリウム、カリウム、有機アミンまたはグルコースおよびアルキルアミンから調製されたＮ−アルキル化グルカミン（例えば、アルキルアミンがＣ１〜Ｃ４であるＮ−メチルグルカミン）としての可溶化有機物質であり、さらに
Ｒ８は、水素またはＣ１〜Ｃ４アルキルである。
【００４４】
この第１の代表的実施形態に基づくと、式（Ｉ）は、例えば、３−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル］スルファニル｝チオフェン−２−カルボン酸（３）（下記）およびその類似体を含むことができ、この場合、Ｒ１はカルボン酸、Ｒ２はチオフェン環、Ｒ３はＳ、およびＲ４はファルネシルである。
2014528453.tif 000003
【００４５】
このクラスの好ましい類似体は、Ｎ−メチル−３−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル］スルファニル｝チオフェン−２−カルボキサミド（８）（下記）で表され、これは、Ｒ１がカルボン酸Ｎ−メチルアミドであることを除いて、上記（３）と類似である。
2014528453.tif 000004
【００４６】
本開示の第２の代表的実施形態では、式（Ｉ）が下記のようにさらに定義される：
Ｒ２は、フェニル環または任意に置換されてもよいフェニル環であり、および
Ｒ１は、少なくとも１個のヘテロ原子を有する５または６員ヘテロ環、例えば、イミダゾリン、イミダゾール、ピラゾール、ピロール、オキサゾール、チアゾール、もしくは、１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン、または複数の窒素原子を有する、５員ヘテロ環、例えば、トリアゾールもしくは、Ｎ（Ｒ９）置換テトラゾールであり、
式中、
Ｒ９は、水素またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、任意に置換されてもよいフェニル環は、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ、アミノ、モノもしくはジ置換アミノで置換されてもよく、さらに
フェニル環の窒素置換基は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルである。
【００４７】
この第２の代表的実施形態に基づくと、式（Ｉ）は、例えば、２−（２−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル］スルファニル｝フェニル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール（５）（下記）およびその類似体を含むことができ、この場合、Ｒ１は４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール基、Ｒ２はフェニル環、Ｒ３はＳ、およびＲ４はファルネシルである。
2014528453.tif 000005
【００４８】
このクラスの２個の好ましい類似体の構造は、下記の通りである：
（ｉ）１−メチル−２−（２−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル］スルファニル｝フェニル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール（６）（下記）。これは、Ｒ１の４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール基がメチル基で置換されていることを除いて、上記（５）と類似である。
2014528453.tif 000006
（ｉｉ）１−（プロパン−２−イル）−２−（２−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル］スルファニル｝フェニル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール（７）（下記）、これは、Ｒ１の４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール基がイソプロピル基で置換されていることを除いて、上記（５）と類似である。
2014528453.tif 000007
【００４９】
また、この第２の代表的実施形態に基づくと、式（Ｉ）は、例えば、５−（２−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル］スルファニル｝フェニル）−２Ｈ−１，２，３，４−テトラゾール（１）（下記）および類似体を含むことが基で、この場合、Ｒ１はテトラゾール基、Ｒ２はフェニル環、Ｒ３はＳ、およびＲ４はファルネシルである。
2014528453.tif 000008
【００５０】
このクラスの好ましい類似体は、２−メチル−５−（２−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル］スルファニル｝フェニル）−２Ｈ−１，２，３，４−テトラゾールおよび１−メチル−５−（２−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル］スルファニル｝フェニル）−１Ｈ−１，２，３，４−テトラゾール（２）（下記）で表され、これは、Ｒ１がメチル置換テトラゾール基であることを除いて、上記（１）と類似である。
2014528453.tif 000009
【００５１】
また、この第２の代表的実施形態に基づくと、式（Ｉ）は、例えば、２−（２−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル］スルファニル｝フェニル）−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン（９）（下記）およびその類似体を含むことができ、この場合、Ｒ１は１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン、Ｒ２はフェニル環、Ｒ３はＳ、およびＲ４はファルネシルである。
2014528453.tif 000010
【００５２】
このクラスの好ましい類似体は、１−メチル−２−（２−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル］スルファニル｝フェニル）−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン（１０）（下記）で表され、これは、Ｒ１の１，４，５，６−テトラヒドロピリミジンがメチル基で置換されていることを除いて、上記（９）と類似である。
2014528453.tif 000011
【００５３】
本開示の第３の代表的実施形態では、式（Ｉ）は、さらに下記のように定義される：
Ｒ２は、Ｏ、Ｎ、およびＳから選択される少なくとも３個のヘテロ原子を有する５員ヘテロ環、例えば、チアジアゾール基またはオキサジアゾール基であり、さらに
Ｒ１は、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１０であり、
式中、Ｒ１０は、水素、ヒドロキシル、またはＣ１〜Ｃ４アルキルオキシである。
【００５４】
この第３の代表的実施形態に基づくと、式（Ｉ）は、例えば、エチル５−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル］スルファニル｝−１，２，３−チアジアゾール−４−カルボキシラート（４）（下記）およびその類似体を含むことができ、この場合、Ｒ１はエチル置換カルボキシラート基、Ｒ２は１，２，３−チアジアゾール、Ｒ３はＳ、およびＲ４はファルネシルである。
2014528453.tif 000012
【００５５】
この第３の代表的実施形態に基づくと、例えば、式（Ｉ）のＲ１は、カルボン酸を含んでもよく、式（Ｉ）のＲ２は、１，２，３−オキサジアゾールまたは１，２，５−オキサジアゾールを含んでもよい。
【００５６】
本開示の第４の代表的実施形態では、Ｒ１およびＲ２の両方が、少なくとも１個のヘテロ原子を有するヘテロ環である。例えば、Ｒ１は、少なくとも１個のヘテロ原子を有する５または６員ヘテロ環であってもよく、Ｒ２は、少なくとも１個のヘテロ原子を有する５員ヘテロ環であってもよい。
【００５７】
当業者なら、特定の本開示の化合物は、Ｒａｓ阻害剤として有用であるのみでなく、追加の本開示の化合物の調製用の有用な中間体でもあることを理解するであろう。１つの化学成分をもう一つの成分に変換する方法は、当業者には明確に理解されている。当業者なら式（Ｉ）の化合物の全ての置換基が化合物合成に採用された特定の反応条件に耐えられるわけではないことを理解するであろう。これらの成分は、合成中の都合の良い時点で導入するか、または保護して、その後、必要に応じ、または目的に応じ、脱保護することができる。当業者なら、保護基は、本開示の化合物合成中のいずれかの都合の良い時点で除去できることを理解するであろう。これらの成分を導入または除去するこのような方法は、当技術分野でよく知られている。当業者なら多くの環境下で、成分が導入される順番は、重大ではないことを理解するであろう。式（Ｉ）の化合物を生成するのに必要な特定のステップの順番は、合成される特定の化合物、出発化合物、および置換成分の相対的不安的性または安定性に依存する。
【００５８】
本開示化合物の経口投与が意図されている。しかし、経口投与は、唯一の経路でも、好ましい経路でもない。例えば、疾患様乾癬を患っている患者に対しては、経皮パッチ経由などの経皮投与が望ましい。また、患者が経口製剤の摂取を怠りがちな、またはそれができない場合には、経皮は、好ましい投与経路となりうる。病院での都合上、または経口剤形に関連する起こりうる合併症を避けるために、静脈内経路が好ましい場合がある。本開示で記載の化合物は、特定の環境下では、経皮、筋肉内、鼻腔内、経鼻、バッカル、または直腸内経路により投与できる。投与経路は、化合物の物理学的性質、患者や介護者の都合、および他の関連する環境により限定されるどれかの方法の内で変えてもよい（レミントンの薬学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）：１８ｔｈ版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（１９９０））。
【００５９】
本開示の医薬組成物は、医薬品技術分野でよく知られた方法で調製される。キャリアまたは賦形剤は、有効成分に対するビークルまたは溶媒として機能できる固体、半固形、または液体材料であってよい。適切なキャリアまたは賦形剤は、当技術分野でよく知られている。医薬組成物は、経口、吸入、非経口、または局所使用のために適合されてもよく、また、錠剤、カプセル剤、噴霧剤、吸入剤、坐剤、液剤、懸濁剤、などの形で患者に投与されてもよい。
【００６０】
本開示の化合物は、例えば、不活性の希釈剤を一緒に、もしくはカプセル剤で、または錠剤に圧縮して、経口投与できる。経口投与のために、化合物は、賦形剤と一緒に混合され、錠剤、トローチ、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエハ、チューインガム、などの形で使用できる。製剤は、特定の剤形に応じて種々の量の有効成分を含み、通常は、４％〜約７０重量％であってよい。組成物中に存在する有効成分の量は、適切な投与量が得られるような量である。本発明の好ましい組成物および製剤は、当業者によく知られた方法により決定できる。
【００６１】
また、錠剤、ピル、カプセル剤、トローチ、などは、次記のアジュバントの内の１種または複数を含むことができる：ポビドン、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、またはゼラチンなどの結合剤；デンプン、ラクトース、結晶セルロースもしくはジリン酸カルシウムなどの賦形剤または希釈剤、クロスカルメロース、クロスポビドン、デンプングリコール酸ナトリウム、コーンスターチ、などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、滑石または水素添加植物油などの潤滑剤；コロイド状二酸化ケイ素などの滑剤；ラウリル硫酸ナトリウムおよびポリソルベート８０などの湿潤剤。また、ショ糖、アスパルテームまたはサッカリンなどの甘味料、またはペパーミント、メチルサリシクラートもしくはオレンジ調味料などの香味料を加えてもよい。投与ユニット形態がカプセルの場合には、上記タイプの材料に加えて、ポリエチレングリコールまたは脂肪油などの液体キャリアを含んでもよい。他の投与ユニット形態は、投与ユニットの物理的性質を変える他の種々の材料を、例えば、コーティングとして含んでもよい。従って、錠剤またはオイルが、糖、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリメタクリラート、またはその他のコーティング剤でコートされてもよい。シロップ剤は、本発明の化合物に加えて、甘味料としてのショ糖および特定の防腐剤、染料、顔料および着香料を含んでもよい。これらの種々の組成物の調製に使用する材料は、薬学的に純粋で、使用される量で非毒性であるべきである。
【００６２】
本開示の化合物は、通常、広い投与量範囲にわたり有効である。例えば、１日当たりの投与量は、通常、約０．０００１〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内である。一部の例では、前述の範囲の下限値未満の投与量レベルで充分であり、一方、他の例では、さらに多くの用量を何ら有害副作用なしに採用できる。従って、上記の投与量範囲は、本発明の範囲を何ら限定する意図はない。実際に投与される化合物の量は、治療される状態、選択投与経路、実際の化合物または投与される化合物、個別患者の年齢、重量、および反応、ならびに患者の症状の重症度、などの当該の環境を考慮して、医師により決定されることは理解されよう。
【００６３】
当業者なら、本開示に包含される疾患の治療に対し、多くの治療オプションが存在することを理解するであろう。例えば、抗癌療法には、化学療法、放射線療法、免疫療法または遺伝子療法、およびこれらの組み合わせが含まれる。化学療法は、特定の疾患の患者に投与される既存薬物療法を意味する。当業者なら、既存の治療オプションに対し、本開示に記載の化合物を加える価値を認識するであろう。既存治療オプションおよび本開示に記載の合物の組み合わせは、本明細書記載のＲａｓ推進疾患において特別な価値を有するであろう。化学療法剤の例には、限定されないが、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、シスプラチン、カルボプラチン（パラプラチン（登録商標）））、ゲムシタビン塩酸塩（ジェムザール（登録商標））、ドキソルビシン塩酸塩、エトポシド（Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（登録商標）、ベプシド（登録商標））、ペメトレキセド（アリムタ（登録商標））、トポテカン（ハイカムチン（登録商標））、ビンブラスチン（ベルベ（登録商標））、ビンデシン（エルディシン（登録商標））、ビノレルビン（ナベルビン（登録商標））、イホスファミド（ミトキサーナ（登録商標））、およびマイトマイシンが含まれる。本明細書記載の非悪性疾患に対する化学療法剤の例には、限定されないが、酢酸グラチラマー（コパクソン）、メトホルミン（グルコファージ）、クロロキン、２−デオキシグルコース、バルプロ酸ナトリウム、コレステロール、スタチン、およびクロピドグレル（プラビックス（登録商標））が含まれる。
【実施例】
【００６４】
次の実施例は、本開示のＲａｓアンタゴニストの作製および使用方法を説明する。
【００６５】
1.  実施例１：５−（２−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル］スルファニル｝フェニル）−２Ｈ−１，２，３，４−テトラゾール（１）の調製
Ａ． ステップ１（Ａ）：２−（ベンジルチオ）ベンゾニトリルの調製
３０ｍＬの無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に、２−ニトロベンゼンニトリル（５．０ｇ、３３．７５ｍｍｏｌ）を含む混合物を、氷水浴（０℃）中で冷却し、Ｎ２雰囲気下に置いた。ベンジルメルカプタン（４．０ｍＬ、３３．７５ｍｍｏｌ）を加えて、続けて、水酸化カリウム水溶液（３．４０ｇ、１０ｍＬの水中の６０．７５ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を０℃で３０分間攪拌した後、室温に暖めた。４時間後、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により反応が完了したと思われた。反応混合物に、氷水（１００ｍＬ）を加えた。溶液をジクロロメタン（２００ｍＬ）で抽出し、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）上で乾燥し、その後、減圧下で濃縮して、赤色オイルを得た。生成物をフラッシュシリカカラムクロマトグラフィーで精製した。ヘプタン中の５％酢酸エチルを使って８０ｇ  Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ（登録商標）フラッシュシリカカートリッジを通して溶出し、鮮黄色固体として標記化合物を得た（６．０８ｇ、８０％）Ｒｆ：０．２４（９５：５  ｖ／ｖ  ヘプタン：酢酸エチル）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ７．６２（ｄｄ、１Ｈ）、７．４７−７．４２（ｄｔ、１Ｈ）、７．３８（ｄｄ、１Ｈ）、７．３２−７．２５（ｍ、６Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ：２２４．１（Ｍｚ−１）。
【００６６】
Ｂ． ステップ１（Ｂ）：２−メルカプトベンゾニトリルの調製
滴下ロートを備えた三ツ口丸底フラスコ中に、ベンゼン（４０ｍＬ）を加えた。フラスコをＮ２雰囲気下に置き、氷水浴（０℃）中で冷却した。このベンゼン溶液に塩化アルミニウム（４．８８ｇ、３６．６１ｍｍｏｌ）を加えた。ステップ１（Ａ）からの２−（ベンジルチオ）ベンゾニトリル（５．０ｇ、２２．１９ｍｍｏｌ）のベンゼン（４０ｍＬ）中溶液を滴下ロートに加えた。溶液を４０分かけて滴下し、反応混合物を０℃で１時間攪拌後、室温で４８時間攪拌した。粗製混合物を氷水（２００ｍＬ）中に注ぎ込み、３０分間攪拌することにより、反応の後処理を行った。１０％ＮａＯＨ（１００ｍＬ）溶液を加え、混合物を１０分間攪拌した。溶液に６Ｎ塩酸（ＨＣｌ）を添加することにより酸性化した（ｐＨ＝２）。溶液を分液漏斗中に入れ、ジクロロメタン（３ｘ１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機成分をＮａ２ＳＯ４上で乾燥後、減圧下濃縮して、褐色オイルを得た。生成物をフラッシュシリカカラムクロマトグラフィーで精製した。ヘプタン中５％酢酸エチルを使って、８０ｇ  Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ（登録商標）フラッシュシリカカートリッジを通して溶出し、褐色オイルとして標記化合物を得た（２．５５ｇ、８５％）；Ｒｆ：０．５６（７０：３０  ｖ／ｖ  ヘプタン：酢酸エチル）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ７．５２（ｄ、１Ｈ）、７．３９−７．３２（ｍ、２Ｈ）、７．１９−７．１４（ｍ、１Ｈ）、４．０１（ｓ、１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ：１３４．０５（Ｍｚ−１）。
【００６７】
Ｃ． ステップ１（Ｃ）：２−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）ベンゼンチオールの調製
２５０ｍＬ丸底フラスコ中に、ステップ１（Ｂ）からの２−メルカプトベンゾニトリル（２．０ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）、続けて、無水ＤＭＦ（３０ｍＬ）を加えた。塩化アンモニウム（１．４２ｇ、２６．６４ｍｍｏｌ）およびアジ化ナトリウム（１．７３ｇ、２６．６４ｍｍｏｌ）を反応フラスコに加え、続けて、追加の１０ｍＬのＤＭＦを加えた。反応混合物をＮ２流中、１０５℃に加熱し、一晩攪拌した。最初に室温に冷却することにより反応の後処理を行った。次に、溶液に５０ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌを加えて酸性化した。この溶液を酢酸エチル（２ｘ１００ｍＬ）で抽出した後、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機成分をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、減圧下濃縮して、白色固形物を得た。ヘプタン／酢酸エチル（７：３、１０ｍＬ）処理物を濾過して固形物を集め、白色固体として標記化合物を得た（１．２１ｇ、４６％）；Ｒｆ：０．０５（９５：５  ｖ／ｖ  ジクロロメタン：メタノール）；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．９１（ｄ、１Ｈ）、７．７８（ｄ、１Ｈ）、７．６４−７．５０（ｍ、２Ｈ）、２．９０（ｓ、１Ｈ）、２．７８（ｓ、１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ：１７７．１（Ｍｚ−１）。
【００６８】
Ｄ． ステップ１（Ｄ）：５−（２−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル］スルファニル｝フェニル）−２Ｈ−１，２，３，４−テトラゾール（１）の最終調製
シンチレーションバイアル中に、ステップ１（Ｃ）からの２−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）ベンゼンチオール（０．１５０ｇ、０．８４２ｍｍｏｌ）を秤量して加えた。固体を１０ｍＬのアセトンと１ｍＬの無水ＤＭＦに溶解した。炭酸グアニジン（０．３７９ｇ、２．１０５ｍｍｏｌ）およびトランス、トランス−ファルネシルブロミド（０．２４ｍＬ、０．８８４ｍｍｏｌ）を反応フラスコに加えた。反応混合物をＮ２流中で４０℃に加熱し、一晩攪拌した。最初に室温に冷却することにより、反応の後処理を行った。反応混合物をジクロロメタン（１００ｍＬ）で希釈後、１Ｎ  ＨＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄した。次に、有機成分をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥後、減圧下濃縮して、粗製オイルを得た。生成物をフラッシュシリカカラムクロマトグラフィーで精製した。ヘプタン中の（５〜１５％）酢酸エチルを使って１２ｇ  Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ（登録商標）フラッシュシリカカートリッジを通して溶出し、オイルとして標記化合物を得た（３２．５ｍｇ、１０％）；Ｒｆ：０．６４（５０：５０  ｖ／ｖ  ヘプタン：酢酸エチル）；Ｃ２２Ｈ３０Ｎ４Ｓ１分子量：３８２．５７ｇ／ｍｏｌ、１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ７．７２（ｄ、１Ｈ）、７．５５（ｔ、１Ｈ）、７．４０（ｔ、１Ｈ）、７．３０（ｄ、１Ｈ）、５．２０（ｔ、１Ｈ）、５．１０（ｔ、１Ｈ）、５．０５（ｔ、１Ｈ）、４．８１（ｄ、２Ｈ）、２．１０−１．９５（ｍ、８Ｈ）、１．７１（ｓ、３Ｈ）、１．６２−１．５５（ｍ、６Ｈ）、１．４３（ｓ、３Ｈ）；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ：３８３．２、７６５、４（Ｍｚ＋１、２Ｍｚ＋１）。
【００６９】
２．  実施例２：２−メチル−５−（２−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル］スルファニル｝フェニル）−２Ｈ−１，２，３，４−テトラゾールおよび１−メチル−５−（２−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−ｔｒｉｅｎ−１−イル］スルファニル｝フェニル）−１Ｈ−１，２，３，４−テトラゾール（２）の調製
シンチレーションバイアル中に、水素化ナトリウム（ミネラルオイル中６０％分散液、５．０ｍｇ）を量り取った。無水ＤＭＦ（１ｍＬ）、続けて、ヨードメタン（０．０１ｍＬ）を加えた。反応混合物を５分攪拌後、ステップ１（Ｄ）からの化合物（１）（０．０４０ｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液として滴下した。反応混合物を室温で１時間攪拌し、この時点で、ＴＬＣにより反応が完了していると判断した。水（６ｍＬ）の添加により反応の終了処理をした。この溶液を酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出後、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）上で乾燥し、濃縮して粗製オイルを得た。生成物をフラッシュシリカカラムクロマトグラフィーで精製した。ヘプタン中（２〜２０％）酢酸エチル勾配を使って１２ｇ  Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ（登録商標）フラッシュシリカカートリッジを通して溶出し、無色オイルとして標記化合物を得た（１５．６ｍｇ、３８％）。Ｃ２３Ｈ３３Ｎ４Ｓ１分子量：３９７．６０ｇ／ｍｏｌ、Ｒｆ：０．６８（５０：５０  ｖ／ｖ  ヘプタン：酢酸エチル）；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ：３９７．１（Ｍｚ）。１Ｈ  ＮＭＲは、生成物の形成（Ｎ−ＣＨ３）が認められた混合画分について測定した。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ３．８５（ｓ、３Ｈ）。
【００７０】
３．  実施例３：３−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル］スルファニル｝チオフェン−２−カルボン酸（３）の調製
３−スルフェニル−２−チオフェンカルボン酸（５０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）をアセトン（５ｍＬ）中に溶解した。室温で炭酸グアニジン（６６ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を加え、続けて、トランス、トランス−ファルネシルブロミド（８８．５ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を一晩攪拌した。反応混合物を留去し、クロロホルム（２０ｍＬ）中に懸濁させた後、２Ｎ  ＨＣｌで酸性化した。反応混合物を水（１０ｍＬ）、続けて、ブラインで洗浄した。反応混合物を５ｇの飽和Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過後、濾液を減圧下留去した。粗製反応混合物を３０：７０の酢酸エチル：ヘキサンを使って、順相シリカゲルカラム（２ｃｍｘ３１ｃｍ）で精製した。最初に１００ｍＬの画分をエルレンマイヤーフラスコに集め、その後、７ｍＬの画分を集めた。全ての画分をＴＬＣで調べた。純粋な生成物を含む画分を合わせて、留去した。収率：５８ｍｇ（５０．９％）、Ｒｆ：０．４７（４０：６０  酢酸エチル：ヘキサン）；Ｃ２０Ｈ２８Ｏ２Ｓ２、分子量：３６４．６ｇ／ｍｏｌ、ＥＳ／Ｍ−Ｈ＋：３６３、ＵＶ  λｍａｘ：２６８、３１４ｎｍ。
【００７１】
４．       実施例４：エチル５−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル］スルファニル｝−１，２，３−チアジアゾール−４−カルボキシラート（４）の調製
エチル−５−メルカプト−１，２，３−チアジアゾール−４−カルボキシラート（５０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）をアセトン（５ｍＬ）に溶解した。室温で酸グアニジン（５６ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を加え、続けて、トランス、トランス−ファルネシルブロミド（７１ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を一晩攪拌した。反応混合物を留去し、クロロホルム（２０ｍＬ）中に懸濁した後、２Ｎ  ＨＣｌで酸性化した。反応混合物を水（１０ｍＬ）、続けて、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。反応混合物を５ｇの飽和Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥後、濾過し、濾液を減圧下留去した。粗製反応混合物を５：９５アセトン：ヘキサンを使って、順相シリカゲルカラム（２ｃｍｘ３５ｃｍ）で精製した。最初の１００ｍＬの画分をエルレンマイヤーフラスコに集め、その後、７ｍＬの画分を集めた。全画分をＴＬＣで調べた。純粋な生成物の画分を合わせて、留去した。収率：４１ｍｇ（３９．４％）、Ｒｆ：０．５１（１０：９０  酢酸エチル：ヘキサン）；Ｃ２０Ｈ３０Ｎ２Ｏ２Ｓ２分子量：３９４．６ｇ／ｍｏｌ、ＡＰＣ／ＭＨ＋：３９４．９、ＵＶ  λｍａｘ：３０３ｎｍ。
【００７２】
５．  実施例５：２−（２−｛［（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル］スルファニル｝フェニル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール（５）の調製
２−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ベンゼンチオール（５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）をアセトン（６ｍＬ）に溶解した。室温で炭酸グアニジン（５８．６ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、続けて、トランス、トランス−ファルネシルブロミド（７５．６ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を一晩攪拌した。反応混合物を留去し、クロロホルム（２０ｍＬ）中に懸濁して、２Ｎ  ＨＣｌで酸性化した。反応混合物を水（１０ｍＬ）、続けて、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。反応混合物を５ｇの飽和Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過して、濾液を減圧下留去した。粗製反応混合物を１０：９０エタノール：酢酸エチルを使って、順相シリカゲルカラム（２ｃｍｘ３１ｃｍ）で精製した。最初の１００ｍＬの画分をエルレンマイヤーフラスコに集め、続けて、７ｍＬの画分を集めた。溶媒勾配を徐々に５０：５０  エタノール：酢酸エチルにまで増加させた。全画分をＴＬＣで調べた。純粋な生成物を有する画分を合わせて、留去した。収率：４０ｍｇ（３７．２％）、Ｒｆ：０．４（８５：１５：２  クロロホルム：メタノール：水）。
【００７３】
６．  実施例６：Ｕ８７ＭＧおよびＰＡＮＣ−１細胞増殖の抑制
本発明の化合物の細胞増殖を抑制する能力が、当業者に既知の標準的アッセイで実証され、簡単に次の段落で記載される。
【００７４】
Ａ．   ステップ６（Ａ）：細胞培養
成体神経膠芽細胞腫細胞株Ｕ８７ＭＧを市販ソース（ＡＴＣＣ）から入手した。膵臓癌細胞株ＰＡＮＣ−１を近くの研究室（Ｉｎｄｉａｎａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）から入手した。両細胞株を１０％胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）を含むイスコフ改変ダルベッコ培地中、３７℃および５％ＣＯ２下で成長させた。
【００７５】
Ｂ．   ステップ６（Ｂ）：試料調製
上記で示し説明した化合物の（１）、（２）、（３）、（４）、および（５）のそれぞれをエタノール中に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で熔解した。測定用の溶液の一部をピペットで微量遠心機チューブに採取した。その後、ＳｐｅｅｄＶａｃ（登録商標）を使って各チューブからエタノールを留去し、チューブ中に化合物のみを残した。適切な量のクロロホルムをチューブに加えて０．１Ｍ濃度とした。この溶液を暗所で氷上に置き、１０−および２０−μＬの一定分量を１．５ｍＬ微量遠心機チューブ中にピペットで採取した。この溶液を、蓋を密閉し、チューブをアルミ箔で覆って、８０℃で凍結した。
【００７６】
細胞の処理の前に、試験化合物のチューブをフリーザーから取り出し、バイオセーフティフード内に入れ、チューブ中のクロロホルムを留去した。その後、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）をチューブに加え、実験に使用する正確な濃度にした（０．１Ｍストック）。チューブをボルテックスし、１０％ＦＢＳを含む温かい培地を徐々に加えて、実験で使う正確な作業濃度にした。処理のために、化合物を各ウエルに直接加えた。
【００７７】
参照用として、類似のファルネシル−チオサリチル酸（ＦＴＳ）（下記）の試料を調製した。ＦＴＳは、Ｋｌｏｏｇの米国特許第５，７０５，５２８号の主題である。
2014528453.tif 000013
【００７８】
Ｃ． ステップ６（Ｃ）：Ｕ８７ＭＧ細胞に対する細胞増殖アッセイ
Ｕ８７ＭＧ細胞を５０００細胞／ウエルで２４ウエルプレートに播種し、無血清培地中、３７℃で一晩インキュベートした。翌日、それらを、５０および１００μＭの各試験化合物（１）、（２）、（３）、（４）、および（５）ならびに参照化合物ＦＴＳで３回ずつ処理した。５日後、細胞をトリプシン処理し（０．５％）、トリパンブルーで染色して計数し、細胞数／ウエルを求めた。ＩＣ５０値を、ＭｉｒａｉＢｉｏ  Ｇｒｏｕｐ、Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ａｍｅｒｉｃａ、Ｌｔｄ．製のＭｕｌｔｉｐｌｅｘ  Ｒｅａｄｅｒ−Ｆｉｔソフトウェアを使って計算した。典型的な実験では、対照ウエルは、平均１３８，０００細胞であった。結果を図１に示す。５０μＭの試験化合物は、対象に比べて、次記のＵ８７ＭＧ細胞増殖を許容した：化合物（１）３７％、化合物（２）１８％、化合物（３）１０％、化合物（４）４０％、および化合物（５）０％。５０μＭの参照化合物ＦＴＳは、対象に比べ、７％の細胞増殖を許容した。
【００７９】
図１で細胞増殖を最も抑制した化合物の（３）および（５）をさらに評価するために、より多くのＵ８７ＭＧ細胞を５０００細胞／ウエルで２４ウエルプレートに播種し、無血清培地中、３７℃で一晩インキュベートした。翌朝、細胞を５％の血清を含む培地中、標準的濃度の６．２５、１２．５、２５、および５０μＭの各試験化合物（３）および（５）ならびに参照化合物ＦＴＳで３回ずつ処理した。処理の５日後、細胞をトリプシン処理（０．５％）し、トリパンブルーで染色した。細胞数／ウエルを測定するために細胞を計数した。ＭｉｒａｉＢｉｏ  Ｇｒｏｕｐ、Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ａｍｅｒｉｃａ、Ｌｔｄ．製のＭｕｌｔｉｐｌｅｘ  Ｒｅａｄｅｒ−Ｆｉｔソフトウェアを使って、再度、ＩＣ５０値を計算した。典型的な実験では、対照ウエルは、平均５６，０００細胞であった。結果を図２に示す。２５μＭの試験化合物は、対照に比較して、次記のＵ８７ＭＧ細胞増殖を許容した：化合物（３）６９％および化合物（５）０％。２５μＭの参照化合物ＦＴＳは、対照に比較して、５０％を越える細胞増殖を許容した。
【００８０】
上記で使った化合物（５）の用量は、全ての細胞を死滅させたので、化合物（５）のさらに低い用量を使って、再度、用量曲線を作成した。Ｕ８７ＭＧ細胞を５０００細胞／ウエルで２４ウエルプレートに播種し、無血清培地中、３７℃で一晩インキュベートした。細胞を、６．２５、１２．５、２５、および５０μＭの参照化合物ＦＴＳならびに０．３１２５、０．６２５、１．２５、２．５、および５．０μＭの試験化合物（５）で３回ずつ、５％血清を含む培地中で５日間処理した。次に、細胞をトリプシン処理し（０．５％）、トリパンブルーで染色して、細胞数／各ウエルを測定した。ＭｉｒａｉＢｉｏ  Ｇｒｏｕｐ、Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ａｍｅｒｉｃａ、Ｌｔｄ．製のＭｕｌｔｉｐｌｅｘ  Ｒｅａｄｅｒ−Ｆｉｔソフトウェアを使って、再度、ＩＣ５０値を計算した。典型的実験では、対照のウエルは、平均５８，０００細胞であった。結果を図２に示す。２．５μＭの試験化合物（５）は、対照に比較して、５６％のＵ８７ＭＧ細胞増殖を許容した。６．２５μＭのより高い用量であっても、参照化合物ＦＴＳは、対照に比較して、８０％を越える細胞増殖を許容した。
【００８１】
Ｄ．   ステップ６（Ｄ）：ＰＡＮＣ−１細胞に対する細胞増殖アッセイ
細胞を７５００細胞／ウエルで２４ウエルプレートに播種し、無血清培地中、３７℃で一晩インキュベートして、ＰＡＮＣ−１細胞に対するＩＣ５０値を測定した。細胞を標準的濃度の６．２５、１２．５、２５、５０、および１００μＭ、ならびに、必要に応じ、５％血清を含む培地中で０．６２５、１．２５、２．５および５．０μＭの各試験化合物（３）および（５）ならびに参照化合物ＦＴＳで３回ずつ、５日間処理した。その後、細胞をトリパンブルーで染色し、細胞数／各ウエルを測定した。ＭｉｒａｉＢｉｏ  Ｇｒｏｕｐ、Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ａｍｅｒｉｃａ、Ｌｔｄ．製のＭｕｌｔｉｐｌｅｘ  Ｒｅａｄｅｒ−Ｆｉｔソフトウェアを使って、再度、ＩＣ５０値を計算した。典型的な実験では、対照のウエルは、平均３２，５００細胞であった。結果を図３に示す。１２．５μＭでの試験化合物（３）は、対照に比較して、４１％のＰＡＮＣ−１細胞増殖を許容し、１．２５μＭの試験化合物（５）は、対照に比較して、５６％のＰＡＮＣ−１細胞増殖を許容した。１２．５μＭであっても、参照化合物ＦＴＳは、対照に比較して、８０％を越える細胞増殖を許容した。
【００８２】
７．  実施例７：ヒト造血性前駆細胞毒性
臍帯血低密度細胞を１ｍＬの完全メチルセルロース培地中、各試験化合物（３）および（５）の存在下、１ｘ１０５細胞／プレートで播種し、ＣＯ２インキュベーター中で１２日間インキュベートした。コロニー形成単位−顆粒球（ＣＦＵ−ＧＭ）、バースト形成単位−赤血球の（ＢＦＵ−Ｅ）、および混合コロニーを倒立顕微鏡下で計数した。試験化合物を、前にＵ８７ＭＧ細胞で測定したＩＣ５０およびＩＣ０．５値、すなわち、化合物（３）では２５および２．５μＭ、ならびに化合物（５）では２．５および０．２５μＭで使用した。試験化合物は、造血性前駆細胞に対し毒性ではなかった。
【００８３】
８．  実施例８：マスト細胞でのＲａｓ活性化および細胞増殖 
精製ＮＦ−１＋／−マスト細胞集団を、１０〜１５μＭの濃度の対照または化合物（５）の存在下、最大刺激濃度の幹細胞因子（ＳＣＦ）で刺激した。ウェスタンブロット分析を使って、３分後に活性化ＧＴＰ結合型Ｒａｓ（Ｒａｓ−ＧＴＰ）を測定した。結果を図４Ａに示す。この図は、対照に比較して、化合物（５）が顕著にＲａｓ−ＧＴＰのレベルを減らすことを示す。平行して行った実験で、０〜１２．５μＭの濃度の対照または化合物（５）の存在下、３Ｈチミジン取り込みを使って、ＳＣＦ刺激２４時間後にマスト細胞増殖を測定した。結果を図４Ｂに示す。この図は、対照に比較して、化合物（５）がマスト細胞増殖を低減したことを示す。図４Ｂ中の各アスタリスクは、対照に対し分散分析による統計的差異があることを表す（Ｙａｎｇ、Ｆｅｎｇ−Ｃｈｕｎ、ｅｔ．ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００３、１１２（１２）、１８５１−１８６１；Ｙａｎｇ、Ｆｅｎｇ−Ｃｈｕｎ、ｅｔ．ａｌ．Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  ２００６、１５（１１）、１９２１−１９３０）。
【００８４】
９．  実施例９：シュワン細胞でのＲａｓ活性化および細胞増殖
遺伝子操作マウス中の蔓状神経線維腫（Ｚｈｕ、Ｙ．ｅｔ  ａｌ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｍａｙ  ２００２、３；２９６（５５６９））：９２０−９２２）から単離された精製ＮＦ−１−／−Ｓ１００＋シュワン細胞集団を、２．５〜５μＭの濃度の対照または化合物（３）の存在下、最大刺激濃度の血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）で刺激した。３分後、ウェスタンブロット分析を使って、Ｒａｓ−ＧＴＰを測定した。結果を図５Ａに示す。この図は、対照に比較して、化合物（３）が、Ｒａｓ−ＧＴＰのレベルを顕著に低減したことを示す。平行して行った実験で、２５〜５０μＭの濃度の対照または化合物（３）の存在下でのＰＤＧＦ刺激の２４時間後に、シュワン細胞増殖を可視分光法を使って測定した。結果を図５Ｂに示す。この図は、対照に比較して、化合物（３）が、シュワン細胞増殖を低減したことを示す。図５Ｂ中の各アスタリスクは、対照に対し分散分析による統計的差異があることを表す（Ｙａｎｇ、Ｆｅｎｇ−Ｃｈｕｎ、ｅｔ．ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００３、１１２（１２）、１８５１−１８６１；Ｙａｎｇ、Ｆｅｎｇ−Ｃｈｕｎ、ｅｔ．ａｌ．Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  ２００６、１５（１１）、１９２１−１９３０）。
【００８５】
本明細書で開示の化合物が、複数のＮＦ−１続発症の病因の中核をなすＲａｓ活性化、および腫瘍化細胞の増殖を制限することを示してきた。腫瘍化細胞の増殖を制限することにより、本明細書で開示の化合物は、このようなＮＦ−１続発症を制限できる。
【００８６】
本開示の好ましいＲａｓアンタゴニストは、化合物（３）および（５）を含む。特に好ましいＲａｓアンタゴニストは、化合物（５）である。本開示で有用な他のＲａｓアンタゴニストは、国際公開第９８／３８５０９号パンフレットに記載の無細胞膜アッセイおよび細胞アッセイを使って特定できる。この特許の開示は、参照によりその全体が明示的に本明細書に組み込まれる。この特許公告は、候補薬剤の、活性化Ｒａｓをその膜から取り外す能力を判定するように設計されたいくつかのアッセイ系を記載している。一般的には、既知の、検出可能な量の膜に係留されたＲａｓを有する特定の膜を含むアッセイ材料が、候補薬剤に暴露される。次に、アッセイ材料は、膜を含む膜画分および特定の膜が除去された後に残されている材料のバランス分のサイトゾル画分に分離される。膜およびサイトゾル画分中に含まれる既知の量の標識Ｒａｓの画分が、Ｒａｓの膜会合を破壊する候補薬剤の能力の尺度として測定される。活性化Ｒａｓ係留膜の特に使いやすいソースは、ＰＡＮＣ−１細胞などのＲａｓ形質転換癌細胞から単離された膜である。
【００８７】
本発明は、代表的なデザインを持つものとして記載されてきたが、本発明は、本開示の趣旨および範囲内でさらに修正可能である。従って、本出願は、それの一般的原理を使った全ての本発明の変化、使用、または適応を包含することが意図されている。さらに、本出願では、本発明が関係し、添付請求項の制限内に入る当技術分野における既知のまたは通常の実施範囲内に入るような本開示からの乖離を包含することも意図されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【国際調査報告】
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