(57)【要約】  本発明は、脳血管障害または外傷性脳損傷後の機能回復における医薬品としてのレボミルナシプランの使用に関する。レボミルナシプランを含有する医薬組成物は、デキストロミルナシプランのα遮断特性による機能回復の妥協を避けるために、もっぱらデキストロミルナシプランをレボミルナシプラン／デキストロミルナシプラン混合物の５重量％を超える割合までは含有しないものである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
急性神経学的イベントおよびその再発後の回復および機能復帰のための医薬品としての使用のためのレボミルナシプラン／デキストロミルナシプラン混合物であって、デキストロミルナシプランをその混合物の５重量％を超えない割合で含有する、混合物。
【請求項２】
虚血性または出血性起源の脳血管障害と診断された患者における使用のための、請求項１に記載の混合物。
【請求項３】
外傷性脳損傷と診断された患者における使用のための、請求項１に記載の混合物。
【請求項４】
急性神経学的イベントおよびその再発後の回復および機能復帰のための医薬品としての使用のための医薬組成物であって、少なくとも１種類の薬学上許容可能な賦形剤と、有効成分としてのレボミルナシプラン／デキストロミルナシプラン混合物とを含んでなり、該混合物が、デキストロミルナシプランをその混合物の５重量％を超えない割合で含有する、医薬組成物。
【請求項５】
脳血管障害と診断された患者における、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
外傷性脳損傷と診断された患者における、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項７】
レボミルナシプランの１日量が５０〜２００ｍｇである、請求項４〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
１日当たり単回用量の投与を可能とする改良腸管吸収形態である、請求項４〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
運動および認知の欠陥をもたらす急性神経学的イベントには２つのタイプがあり、１つは血管起源のもの、すなわち、脳血管障害（脳卒中）であり、もう１つは外傷起源のもの、すなわち、外傷性脳損傷である。
【０００２】
ＷＨＯによれば、脳血管障害（ＣＶＡ）は、「脳機能の限局的（時には全体的)障害の臨床徴候を急速に起こし、２４時間より長く持続するか、または血管起源であること以外には明らかな原因を持たない死をもたらす」。脳発作または脳出血という用語も用いられる。ＣＶＡは、「塞栓または血栓によると思われる持続が２４時間未満の、脳または眼の機能の突然の低下」と定義される一過性虚血発作（ＴＩＡ）とは区別される。ＣＶＡは、最も多いタイプの神経疾患であり、西洋諸国では、３番目の死因（冠動脈疾患および癌に次ぐ）であり、成年期に獲得される身体障害の主因であり、そして、認知症の２番目の原因である(Murray CJ, Lopez AD, Mortality by cause for eight regions of the world: Global Burden of Disease Study, Lancet, 1997; 349:1269-1276)。
【０００３】
ＣＶＡでは、関連する血管の問題は、動脈の閉塞により血液供給が断たれることによる血栓−塞栓（ＣＶＡの８０％）または動脈の破裂による出血（ＣＶＡの２０％）のいずれかである。脳血栓は、動脈硬化症（血管壁の硬化および炎症）により引き起こされることが最も多い。動脈血栓（血餅による閉塞）に続発する循環の中断は梗塞（死亡、関連領域の壊死）の原因であり、対応する領域の軟化を伴い、この領域はもはや供給を受けることはない。死滅した組織は徐々にグリア細胞から形成される結合組織に置き換わる。梗塞のもう１つの原因は脳塞栓であり、この場合、アテローム斑（脂肪がそれ自体大血管から剥がれるか、または例えば、塞栓性心臓障害（心筋梗塞、弁膜症、心房細動による不整脈）において血餅が形成され、脳動脈を閉塞させるようになり、梗塞が起こる。脳出血もまた動脈硬化によるものであり得、動脈性高血圧症を伴う場合が最も多い。脳出血はまた、先天性動脈奇形、感染、脳腫瘍により、または動揺する出来事、感情もしくは懸命の努力によっても引き起こされることがある。出血は血腫の形成の起源であり、徐々に消散する。
【０００４】
ＣＶＡ診断は、第一に臨床的なものである。全身または身体の一部の運動能および感受性の検査により診断を病巣部位に向け、これを脳画像法により確認する。診断は、昏睡患者、失語症患者または健忘症患者では問題を生じる場合がある。臨床徴候の重篤度は、顕著ないずれかの徴候の欠如から数日以内の死まで様々であり、運動、協調および歩行障害、ならびに感受性、言語、視野、記憶および精神の障害を含み得る。
【０００５】
ＣＶＡの処置は、イベント後すぐに開始し、虚血または出血起源を考慮し、造影剤を用いるまたは用いない脳ＣＴスキャン、および磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を用いた脳画像法により調べる。虚血性ＣＶＡを処置するための目標は、ヒドロエレクトリックバランス(hydroelectrolytic balance)および動脈圧を調節すること、ならびにＣＶＡが最初の徴候から４時間３０分内に処置が講じられる場合には、抗血小板剤（アスピリン）および繊維素溶解剤（例えば、ｒｔ−ＰＡ（組換え組織プラスミノーゲン活性化因子））などの血小板溶解剤を用いて損傷領域の再潅流を得ることである。出血性ＣＶＡについては、局所解剖および血腫の体積、患者の意識レベルおよび健康状態を考慮して、可能であれば、手術が指示される。急性期後の回復は極めて段階的に進行し、数ヶ月または数年かかる場合がある。言語障害および／または歩行障害を治療するためには、リハビリテーションを必要とする場合が多い。運動障害（運動）および感覚障害（感覚）は一般に回復させることができるが、知的後遺症は不可逆的であり得る。
【０００６】
外傷性脳損傷（ＴＢＩ）は、４５歳までの死亡および重度身体障害の主要な原因である。主な原因は、交通事故（約５０％）、スポーツ事故、職業事故、家庭内事故、発作、自然災害および戦争行為である。下記のように様々なタイプのＴＢＩが存在する。
【０００７】
・脳震盪：脳への激しい打撃に続く脳の震動、初期のまたは一過性の意識喪失を伴うか伴わないにかかわらず、脳への可視的な放射線学的病変を伴わない。意識回復は、衝撃の程度に関連して外傷イベントの数秒後、数分後または数時間後に自然に起こり、一過性の記憶障害、続発合併症、すなわち、硬膜外血腫、硬膜下血腫、脳浮腫が残る場合がある。
【０００８】
・脳挫傷：この場合には、必ずしも衝撃の部位ではないが、脳浮腫と合併し得る脳の解剖学的病変（浮腫を伴う出血性壊死）が存在する。
【０００９】
・即時深昏睡：これは脳震盪の最も重篤な形態である。患者は上行性毛様体賦活系の機能不全がより深層にあるために、衝撃後に深い持続的昏睡状態となる。除脳の徴候は、脳の中央部に向かう衝撃波の同心性の伝播および濃度に関連するび慢性の中脳および軸策病変の存在を示す可能性がある（定位的現象）。
【００１０】
ＴＢＩの管理には、外科的に治癒可能な病変（血腫）に関する脳画像法による探索、手術可能な病変に対する手術、または集中治療でない場合には、特殊な装置での医学的処置（抗浮腫、肺蘇生など）が含まれる。脳浮腫を軽減するためには利尿剤が用いられ、また、脳組織から除水するためにはマンニトールが用いられる。時には、脳浮腫は脳ヘルニア（脳の下部が、反対側の大脳半球に向かって大脳鎌の下へ嵌入し、脳の下部が大後頭孔へ嵌入すること）の発症に十分に広範囲となる。髄膜出血も脳挫傷に関連し、頭痛、肩こりおよび覚醒障害として現れることもある。臨床的および放射線学的モニタリングは救急処置後に設定される。予後は、初期病変、患者の年齢およびイベント前の健康状態によって異なる。昏睡が浅いほど、また、若く、イベント前の健康状態が良好な患者ほど、回復の機会は大きい。しかしながら、昏睡は場合によっては脳死に至ることもある。
【００１１】
ＣＶＡの場合のように、外傷イベントおよび意識回復の後に続く危険期の後、機能回復の期間があり、神経学的後遺症、すなわち、脳神経への障害の徴候である、麻痺(plegia or paralysis)、平衡障害、失語型または失認型の記号障害；神経内分泌障害、すなわち、尿崩症、体重減少、疲労、めまい、性欲消失および性的不能症；精神病、すなわち、潜在的不可逆的後遺症の感知後の不安、無快感症が残る場合がある。他の結果としては、頻度は少ないが、続発性の、外傷後癲癇、動脈瘤破裂などの血管障害、または脳動脈血栓がある。
【００１２】
本発明の分野は、ＣＶＡであれＴＢＩであれ急性神経学的イベント後の回復および機能復帰を改善することを目的とする医療行為に関する。本発明において、回復および機能復帰の改善とは、神経学的イベントの際に発症した運動症状、神経生理学的症状、認知症状、もしくは精神医学的症状、またはこれらの症状の１以上の消散を加速化または増幅することを意味する。本発明によれば、運動症状、神経生理学的症状、認知症状および精神医学的症状としては、限定されるものではないが、
・半身麻痺および四肢麻痺を含む麻痺(paralysis and plegia)；
・感覚異常または感受性障害；
・協調障害、四肢および歩行の運動失調；
・眼球運動障害；
・嚥下障害；
・知覚および理解に関わるものであれ表現に関わるものであれ言語障害；
・失行症および空間定位の混乱；
・視力障害および視野障害；
・瞳孔異常；
・注意障害；
・短期記憶（最近の出来事）または長期記憶（過去の出来事）に影響を及ぼす記憶障害；
・知覚障害、特に、対象物、描かれたイメージまたは人相の視覚関連認識；
・行動計画などの未履行機能の障害；
・不安；
・無快感症および抑鬱症状；
・忍耐；
・衝動性
が挙げられる。
【００１３】
本発明はまた、最初の神経学的イベントの後に起こる、姿勢バランス、視力喪失または視空間無視に対するその結果によって引き起こされる再発性神経学的イベントの後の回復および機能復帰に関する。
【００１４】
動物およびヒトにおける研究では、イベント直後、または数日から数ヶ月の期間の後であっても、医学的処置を施与することによって、急性神経学的イベント後の機能回復を加速化または増幅することができることが示された。ＣＶＡを模倣する中大脳動脈片側閉塞の動物モデル、およびＴＢＩを模倣する限局性皮質病変のモデル(Goldstein LB. Basic and clinical studies of pharmacological effects on recovery from brain injury, J. Neural Transplant & Plasticity, 1993, 4:175-192; Feeney DM, de Smet AM, Rai S, Noradrenergic modulation of hemiplegia: facilitation and maintenance of recovery. Restor Neurol & Neurosci, 2004, 22:175-190)において、ラットおよびネコにおいて活性があることが分かっている医学的処置は、
・ノルアドレナリン、セロトニンおよびドーパミンの細胞外レベルを高める製品であるアンフェタミン；
・ノルアドレナリンを分泌するクロム親和細胞の移植；
・ノルアドレナリン（セロトニンまたはドーパミンではない）の大脳内注入；
・ノルアドレナリン前駆体の投与；
・α−アドレナリン作動性作用薬の投与
である。
【００１５】
小規模な患者群における臨床試験では、アンフェタミン(Sonde L, Nordstrom M, Nilsson CG, Lokk J, Viitanen M, A double-blind placebo-controlled study of the effects of amphetamine and physiotherapy after stroke. Cerebrovasc Dis, 2001,12:253-257)；ノルアドレナリン前駆体であるＬ−ＤＯＰＳ(Nishino K, Sasaki T, Takahashi K, Chiba M, Ito T, The norepinephrine precursor L-threo-3,4-dihydroxyphenylserine facilitates motor recovery in chronic stroke patients. J. Clin Neurosci, 2001, 8:547-550)；これもまたノルアドレナリン、セロトニンおよびドーパミンの細胞外割合を高める薬剤であるメチルフェニデート(Tardy J, Pariente J, Leger A, Dechamont-Palacin S, Gerdelat A, Guiraud V, Conchou F, Albucher JF, Marque P, Franceries X, Cognard C, Rascol O, Chollet F, Loubinoux I, Methylphenidate modulates cerebral post-stroke reorganization, Neuroimage, 2006, 33: 913-922)；ノルアドレナリン再取り込みの選択的阻害剤であるレボキセチン(Zitel S, Weiller C, Liepert J, Reboxetine improves motor function in chronic stroke. A pilot study, J. Neurol, 2007, 254:197-201)、セロトニン再取り込みの選択的阻害剤であるフルオキセチン(Pariente J, Loubinoux I, Carel C, Albucher JF, Leger A, Ma
nelfe C, Rascol O, Chollet F, Fluoxetine modulates motor performance and cerebral activation of patients recovering from stroke, Ann Neurol, 2001, 50:718-729)による処置によってＣＶＡ後の運動回復を改善する可能性が示された。３か月間投与されたフルオキセチンの効果は、より大規模な二重盲検プラセボ対照臨床試験で確認された(Chollet F, Tardy J, Albucher JF, Thalamas C, Berard E, Lamy C, Bejot Y, Deltour S, Jaillard A, Niclot P, Guillon B, Moulin T, Marque P, Pariente J, Arnaud C, Loubinoux I, Fluoxetine for motor recovery after acute ischaemic stroke (FLAME): a randomized placebo-controlled trial. Lancet Neurol, 2011, 10:123-30)。
【００１６】
これらの治療アプローチは、損傷を受けた脳領域を回復させるまたは保護することではなく、ある程度の可塑性を持つ脳が、非損傷領域に、運動機能であれ、神経生理学的機能であれ、認知機能であれ、損傷を受けた領域によって通常遂行される機能を確保させるためにその回路を再編成できるようにすることを意図したものであることを指摘しておくことが重要である。これはＣＶＡおよびＴＢＩ後の機能イメージによって確認された。これらのモノアミン類（ノルアドレナリン、セロトニン、ドーパミン）の、脳の機能再編成を促進する能力は、ニューロンの分化および生存を確保するようにニューロンを発達させるための既知の神経組織栄養的役割と符合している。
【００１７】
機能回復におけるセロトニンおよびノルアドレナリンの重要な役割を示すこれらのデータから、急性神経学的イベント後の処置には、ノルアドレナリンおよびセロトニン両方の細胞外レベルの上昇をもたらす医薬品が、フルオキセチンなどの、セロトニンレベルを高めるだけの医薬品よりも有利となると結論付けられる。
【００１８】
レボミルナシプランは、特許ＷＯ２００４／０７５８８６およびＷＯ２００９／１２７７３７に記載されているミルナシプラン（Ｚ（±）−２−アミノメチル）−Ｎ，Ｎ’−ジエチル−１−フェニルシクロプロパンカルボキサミド）の（１Ｓ，２Ｒ）鏡像異性体である。ミルナシプランは、これら２種類の神経伝達物質に対してバランスの取れた効果を有する、ノルアドレナリンおよびセロトニン再取り込みの阻害剤である(Briley M, Prost JF, Moret C, Preclinical pharmacology of milnacipran. Int Clin Psychopharmacol, 1996 Suppl 4:9-14; Preskorn SH, Milnacipran: a dual norepinephrine and serotonin reuptake pump inhibitor, J Psychiatr Pract, 2004, 10:119-26)。ミルナシプランは、鬱病(Spencer CM and Wilde MI, Milnacipran: a review of its use in depression. Drugs, 1998, 56:405-427)線維筋痛症(Owen RT, Milnacipran hydrochloride: its efficacy, safety and tolerability profile in fibromyalgia syndrome. Drugs Today (Barc) 2008, 44:653-60)において用いられる薬物である。また、特許出願ＷＯ２００３／０３９５９８、ＷＯ２００３／０６８２１１、ＷＯ２００３／０７７８９７、ＷＯ２００３／０９０７４３、ＷＯ２００４／００９０６９、ＷＯ２００４／０３０６３３、ＷＯ２００４／０４５７１８、ＷＯ／２００７／０３８６２０、ＷＯ２００８／０１９３８８、ＷＯ２００８／０２１９３２およびＷＯ２００８／１４７８４３には、慢性疲労症候群、多動性を伴う注意欠陥、内臓痛症候群、機能性身体症候群、認知および睡眠障害、過敏性腸症候群、慢性腰痛、慢性骨盤疼痛、間質性膀胱炎、非心臓性胸痛、神経因性疼痛、顎関節障害、非定型顔面痛、緊張型頭痛、多種化学物質過敏症、医学的処置もしくは放射線療法に関連する慢性疼痛、または慢性疼痛の他の兆候におけるミルナシプランおよびその鏡像異性体の使用が記載されているが、特に、これらの特許出願は、ＣＶＡおよびＴＢＩの処置のためのミルナシプランの使用を記載するものではない。
【００１９】
レボミルナシプランは、ミルナシプランの活性型異性体であると思われる異性体であり、他の鏡像異性体デキストロミルナシプランに比べてノルアドレナリンおよびセロトニン輸送体に対して最も高い親和性を有し、デキストロミルナシプランが必要とする濃度よりも低い濃度でノルアドレナリンおよびセロトニンの再取り込みを遮断する（実施例１）。しかしながら驚くことに、デキストロミルナシプランは、ラットまたはヒトにおいて、α１−アドレナリン受容体に対して最も強力な異性体である（実施例１）。さらに、デキストロミルナシプランはα１拮抗挙動も有し、組換えヒトα１受容体を活性化せず、アドレナリンの作用に拮抗する（実施例２）。
【００２０】
前臨床データおよび臨床データは、α１−アドレナリン受容は神経学的イベント後の機能回復に重要な役割を果たすことを示している。実際に、α１受容体の選択的拮抗薬であるプラゾシン(Hoffman and Lefkowitz, Catecholamines, sympathomimetic drugs and adrenergic receptor antagonists, in Goodman and Gilman’s, The Pharmacological Basis of Therapeutics, Hardman JG, Limbird LE, Molinoff P B, Ruddon RW publishers, 9th edition, 1995, McGraw-Hill, New York, pp. 229)の単回投与は、ラットにおける感覚運動野の片側限局性外傷性挫傷後の機能回復を遅延させ(Feeney DM and Westerberg VS, Norepinephrine and brain damage: alpha noradrenergic pharmacology alters functional recovery after cortical trauma. Can J Psychology, 1990, 44: 233-252)、運動機能回復が効果的であった場合には、ラットの片側前頭病変後６か月まで、運動症状の再発症を促進する(Stibick DL and Fennec DM, Enduring vulnerability to transient reinstatement of hemiplegia by prazosin after traumatic brain injury, J. Neurotrauma, 2001, 18:303-312)。健康なボランティアでは、プラゾシンの投与により、皮質運動性の興奮に変化がない状態で皮質に脳の可塑性を誘導する運動訓練の有効性が低下する(Sawaki L, Werhahn KJ, Barco R, Kopylev L, Cohen LG, Effect of an alpha1-adrenergic blocker on plasticity elicited by motor training, Exp Brain Res, 2003, 148:504-508)。訓練により誘導される可塑性は、急性神経学的イベン後の運動機能回復に寄与するものと思われる。Goldstein et al (The influence of drugs on the recovery of sensorimotor function after stroke, J Neuro Rehab, 1990, 4:137-144)は、ＣＶＡ患者で試験を行い、実験動物の機能回復に対して悪影響を持つ薬物（特に、プラゾシンを含んでいた）を処方された患者が、登録後３０日間の前向き試験にわたって、悪影響を持つこれらの薬物を与えなかった患者よりも、Ｆｕｇｌ−Ｍｅｙｅｒ評価表での運動スコアが低かったことを見出した。これらの前臨床データおよび臨床データは総て、α１−アドレナリン作動性拮抗薬が、急性神経学的イベント後の機能回復期の患者に投与されてはならないことを示す。
【００２１】
従って、驚くことに、ＣＶＡであれＴＢＩであれ、急性神経学的イベント後の機能回復状態の患者に、本発明の開発中にα１−アドレナリン作動性拮抗薬であることが判明したデキストロミルナシプランを投与することは禁忌となることが見出された。よって、特許出願ＷＯ２００６／００６６１７で行った提案に反して、等割合のレボミルナシプランとデキストロミルナシプランを含有するミルナシプランラセミ化合物は、上述の臨床状況では処方してはならない。対照的に、実質的に純粋なレボミルナシプラン、またはデキストロミルナシプランをその混合物の５重量％を超えない割合で含有するレボミルナシプラン／デキストロミルナシプラン混合物（実施例３）は、ＣＶＡであれＴＢＩであれ、急性神経学的イベント後の機能回復中に使用されるべきである。
【００２２】
特許ＷＯ２００４／０７５８８６は、レボミルナシプランがイヌにおいてミルナシプランラセミ体よりも引き起こす血流力学的現象が少ないという所見に基づき、心血管リスクを示す患者における様々な病態に対する薬剤を調製するためのレボミルナシプランの使用を請求している。しかしながら、この特許は、α１−アドレナリン受容体に対するデキストロミルナシプランの特定の活性を開示しておらず、ＣＶＡまたはＴＢＩ後の機能回復のためのレボミルナシプランの使用もなおのこと開示されてない。
【００２３】
さらに、本発明によれば、レボミルナシプランは、投与を受ける患者に無毒な無機酸付加塩の中から選択される薬学上許容可能な塩の形態で使用される。「薬学上許容可能な」とは、ヒトまたは動物に投与する際に有害作用もしくいはアレルギー作用、または他の望ましくない反応をもたらさない分子実体および組成物を意味する。薬学上許容可能な酸付加塩の例としては、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩などが挙げられる（例えば、Berge SM, Bighley LD, Monkhouse DC, Pharmaceutical salts, 1977, 66:1-19参照）。しかしながら、本発明において好ましい塩は、塩酸レボミルナシプランである。
【００２４】
本発明はまた、有効成分としてのレボミルナシプランと少なくとも１種類の薬学上許容可能な賦形剤とを含有することを特徴とする医薬組成物に関する。本明細書で用いる場合、薬学上許容可能な賦形剤という用語には、任意の希釈剤、アジュバントまたは賦形剤、例えば、保存剤、増量剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、抗菌剤もしくは抗真菌剤、または腸管吸収および消化吸収および再吸を遅延し得る薬剤が含まれる。これらの媒体または媒介物の使用は当業者に周知である。
【００２５】
医薬組成物は実質的に純粋なレボミルナシプランまたはレボミルナシプランとデキストロミルナシプランの混合物を含有してよく、ただし、デキストロミルナシプランの割合は、α１−アドレナリン作動性拮抗薬活性が有意となるには至らず、かつ、患者がα１−アドレナリン受容体の遮断に曝されるには至らないものである。試験データによって確認されたレボミルナシプラン／デキストロミルナシプラン混合物の活性のシミュレーションは、５％を超えるデキストロミルナシプランを含有する混合物で抗α１活性が有意となることを示す（実施例３）。従って、レボミルナシプラン／デキストロミルナシプラン混合物中のデキストロミルナシプランの割合は、前記混合物の５重量％を超えてはならない。
【００２６】
本発明による医薬組成物は、ヒトを含む哺乳動物への投与向けに処方することができる。本発明の組成物は、経口、舌下、皮下、筋肉内、静脈内、経皮、局所または直腸経路によって投与することができる。この場合、有効成分は、動物またはヒトに、従来製薬担体との混合物として、単位投与形で投与することができる。好適な単位投与形は、それぞれ所定量のレボミルナシプランを含有する錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤などの、経口経路による形態を含んでなり、好適な単位投与形にはまた、水性液もしくは非水性液中の経口溶液もしくは懸濁液、または油／水または水／油液体エマルション、舌下および口腔投与液形、皮下もしくは経皮、局所、筋肉内、静脈内、鼻腔内または眼内投与形および直腸投与形が含まれる。固体組成物が錠剤形態で調製される場合、レボミルナシプランは、ゼラチン、デンプン、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、アラビアガムまたはシリカなどの製薬ビヒクルと混合される。錠剤はスクロースまたは他の好適な材料でコーティングすることができる。
【００２７】
前記有効成分の放出は、単回一日用量の投与を可能とするために、徐放性が得られるように遅延させることができる。前記生薬処方物は、特許ＥＰ９３９６２６に記載されている方法または他の任意の方法に従って得ることができる。
【００２８】
カプセル剤形は、有効成分を希釈剤と混合し、得られた混合物を軟カプセルまたは硬カプセルに注入することによって得られる。
【００２９】
シロップまたはエリキシル形態の剤形は、有効成分を甘味剤、抗菌剤、ならびに好適な香味剤および着色剤を組み合わせて含有することができる。
【００３０】
散剤または水分散性顆粒は、有効成分を分散剤もしくは湿潤剤、または沈殿防止剤、およびまた香味増強剤または甘味剤との混合物として含有することができる。
【００３１】
直腸投与には、直腸温度で融解する結合剤、例えば、カカオ脂またはポリエチレングリコールで調製した坐剤が使用される。
【００３２】
非経口投与（静脈内、筋肉内、皮内、皮下）、鼻腔内または眼内投与には、薬学上適合する分散剤および／または湿潤剤を含有する水性懸濁液、等張生理食塩水または無菌注射溶液が使用される。
【００３３】
有効成分はまた、所望により１以上の添加担体とともに、マイクロカプセルの形態で処方してもよい。
【００３４】
有利には、本発明による医薬組成物は、経口経路による投与用に意図される。
【００３５】
本発明の組成物中にレボミルナシプランを含有する医薬組成物の用量は、投与経路に特定の組成物に対して所望の治療応答を得るのに十分な量の有効物質が得られるように調節される。従って、選択される用量レベルは、所望の治療効果、選択される投与経路、所望の処置の長さ、患者の体重、年齢および性別、処置される個々の感受性によって異なる。結果として、最適用量は、当技術分野の専門家により関連すると思われるパラメーターに関して決定しなければならない。
【００３６】
好ましくは、レボミルナシプランは薬学上許容可能な組成物として投与され、塩基量として表されるレボミルナシプランの一日用量は、単回投与または１日当たり数回で摂取され、２５〜２００ｍｇである。さらに好ましくは、医薬組成物は腸管吸収の改良が可能であるので、１日当たり単回投与で十分である。
【実施例】
【００３７】
実施例１
ミルナシプランの２つの異性体の、ノルアドレナリンおよびセロトニン輸送体に対する、ならびにα１−アドレナリン受容体に対する親和性の測定
レボミルナシプランおよびデキストロミルナシプランの親和性を、ノルアドレナリンおよびセロトニンの組換えヒト輸送体に対する結合について、ならびにヒト組換えα１受容体に対する結合について測定した。これら２つの製品による、ノルアドレナリン［３Ｈ］およびセロトニン［３Ｈ］の再取り込みの阻害も測定した。
【００３８】
方法：
・ノルアドレナリン輸送体に対する結合：  結合は、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒから購入したこの輸送体を発現するＭＤＣＫ細胞の膜（バッチ番号４１８−１６５−Ａ）を、１２０ｍＭ  ＮａＣＬおよび５ｍＭ  ＫＣｌを含有する５０ｍＭ  ＴＲＩＳ−ＨＣｌバッファー中に５μｇタンパク質の濃度で希釈したものに対して、２ｍＭ  Ｎ−メチル−ニソキセチン［３Ｈ］および漸増濃度のレボミルナシプランまたはデキストロミルナシプラン（１０−１１〜１０−５Ｍ）の存在下で測定した。結合した画分を濾過および冷却したＴＲＩＳ＋ＮａＣｌ＋ＫＣｌバッファー中での洗浄により分離した。非特異的結合は、１０μＭデシプラミンの存在下で測定した。
【００３９】
・セロトニン輸送体に対する結合：  結合は、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒから購入したこの輸送体を発現するＭＤＣＫ細胞の膜（バッチ番号３１６−１９９−Ａ）を、１２０ｍＭ  ＮａＣｌおよび５ｍＭ  ＫＣｌを含有する５０ｍＭ  ＴＲＩＳ−ＨＣｌバッファー中に５μタンパク質の濃度で希釈したものに対して、２ｎＭシタロプラム［３Ｈ］および漸増濃度のレボミルナシプランまたはデキストロミルナシプラン（１０−１１〜１０−５Ｍ）の存在下で測定した。結合した画分を濾過および冷却したＴＲＩＳ＋ＮａＣｌ＋ＫＣｌバッファー中での洗浄により分離した。非特異的結合は、１０μＭフルオキセチンの存在下で測定した。
【００４０】
・組換えヒトα１受容体に対する結合：  結合は、ヒトα１Ｂ受容体を発現するＣＨＯ細胞（チャイニーズハムスター卵巣）の膜(Wurch T, Boutet-Robinet EA, Palmier C, Colpaert FC, Pauwels PJ, Constitutive coupling of chimeric dopamine D2/alpha1B receptor to the phospholipase C pathway: inverse agonism to silent antagonism of neuroleptic drugs, J Pharmacol Exp Ther, 2003, 304:380-390)を、５０ｍＭ  ＴＲＩＳ−ＨＣｌバッファー中に７．８μタンパク質の濃度で希釈したものに対して、０．１ｎＭプラゾシン［３Ｈ］および漸増濃度のレボミルナシプランまたはデキストロミルナシプラン（１０−１１〜１０−５Ｍ）の存在下で測定した。結合した画分を濾過および冷却したＴＲＩＳバッファー中での洗浄により分離した。非特異的結合は、１０μＭフェントラミンの存在下で測定した。
【００４１】
・ノルアドレナリン［３Ｈ］の再取り込み：  ＣＨＯ−Ｋ１細胞を、電気パルス（Ｂｉｏｒａｄジーンパルサー）によりノルアドレナリンのヒト輸送体遺伝子で永続的にトランスフェクトし、次に、トランスフェクトしたクローンをジェネティシン中でのインキュベーションにより選択した。再取り込みを測定するために、トランスフェクト細胞を２４ウェルプレートで培養し、次に、パルギリンおよびアスコルビン酸塩（１００μＭ）およびノルアドレナリン［３Ｈ］（比活性＝４０．７Ｃｉ／モル）の存在下、１０ｎＭ濃度でインキュベートした。再取り込みを培地の吸引およびすすぎにより停止させ、細胞により捕捉された放射能を液体シンチレーションにより計数した。非特異的シグナルは、１０μＭデシプラミンの存在下で測定した。
【００４２】
・セロトニン［３Ｈ］の再取り込み：  ＣＨＯ−Ｋ１細胞を、電気パルス（Ｂｉｏｒａｄジーンパルサー）によりセロトニンのヒト輸送体遺伝子で永続的にトランスフェクトし、次に、トランスフェクトしたクローンをジェネティシン中でのインキュベーションにより選択した。再取り込みを測定するために、トランスフェクト細胞を２４ウェルプレートで培養し、次に、パルギリンおよびアスコルビン酸塩（１００μＭ）およびセロトニン［３Ｈ］（比活性＝３２．７Ｃｉ／モル）の存在下、１０ｎＭ濃度でインキュベートした。再取り込みを培地の吸引およびすすぎにより停止させ、細胞により捕捉された放射能を液体シンチレーションにより計数した。非特異的シグナルは、１０μＭフルオキセチンの存在下で測定した。
【００４３】
結果：
表１は、セロトニンおよびノルアドレナリン輸送体に対する、ならびにα１−アドレナリン受容体に対するレボミルナシプランおよびデキストロミルナシプランの阻害定数（Ｋｉ）の値を示す。
【００４４】
【表１】
2014521627.tif 000002
【００４５】
実施例２
組換えヒトα１Ａおよびα１Ｂ受容体に対するデキストロミルナシプランの固有活性の測定
デキストロミルナシプランの固有機能活性を、ヒトα１Ａおよびα１Ｂ受容体を発現する細胞に対して測定し、その作用薬／拮抗薬特性を調べた。
【００４６】
方法：
ヒトα１Ａ受容体またはヒトα１Ｂ受容体の安定発現を示すＣＨＯ−Ｋ１細胞を、記載の方法(Vicentic et al. Biochemistry and pharmacology of epitope-tagged alpha1a-adrenergic receptor subtype, J Pharm Exp Ther, 2002, 302-58-65)を用いて得た。蛍光カルシウムキレーターおよびフルオロメトリックイメージャープレートリーダー(FLIPR, Molecular Devices, Saint-Gregoire, France)によるシグナル読み取りを用いた従来技術に従って、カルシウムの細胞内濃度の蛍光測定により、作用薬活性を評価した。陽性参照として（−）アドレナリンを用い、その後、応答を（−）アドレナリンの１０μＭ濃度での応答に対して正規化した。
【００４７】
結果：
３．１０−７Ｍ〜１０−３Ｍの濃度範囲にわたって、デキストロミルナシプランは、α１Ａ受容体に対してであれα１Ｂ受容体に対してであれ、（−）アドレナリン活性の１０％より高い作用薬活性を示さなかった。次に、（−）アドレナリンを、３００μＭ濃度のレボミルナシプランまたはデキストロミルナシプランの存在下、漸増濃度（３．１０−１０〜３．１０−５Ｍ）でインキュベートした。図１は、（−）アドレナリンの濃度反応曲線がデキストロミルナシプランよって、α１Ａサブタイプでは約１００倍、α１Ｂサブタイプでは約１０倍、右方向にシフトすることを示している。レボミルナシプランの場合、このシフトはα１Ａサブタイプでは約３倍、α１Ｂサブタイプでは２倍に過ぎない。デキストロミルナシプランは、α１−アドレナリン受容体のこれら２つのサブタイプに対する拮抗薬であることが結論付けられる。レボミルナシプランもα１Ａおよびα１Ｂ受容体の拮抗薬であるが、デキストロミルナシプランよりも効能程度がはるかに小さい。
【００４８】
実施例３
レボミルナシプランおよびデキストロミルナシプランの、様々な割合の鏡像異性体との混合物の薬理学的特徴
目的
レボミルナシプラン（鏡像異性体１Ｓ，２Ｒ）は、ラセミ体ミルナシプラン（２２０７）および他の１Ｒ，２Ｓ鏡像異性体（デキストロミルナシプラン）とは異なる薬理学的プロフィールを有する。レボミルナシプランは、所望の標的に対して最も活性の高い鏡像異性体であるが（ノルアドレナリン輸送体（ＮＥＴ）との結合、セロトニン輸送体（ＳＥＲＴ）およびＰＣＰ部位（ＮＭＤＡ受容体、グルタミン酸系）との結合）、所望でない標的、すなわち、α１Ａおよびα１Ｂアドレナリン受容体に対しては最も活性が低い。本発明者らは、種々の混合物（様々なパーセンテージのデキストロミルナシプランを含有する）の薬理学的特性を評価した。まず、結合アッセイのシミュレーションを行い、ＮＥＴ、ＳＥＲＴおよびα１Ａ受容体に対するこれらの混合物の見掛けの阻害定数を計算した。次に、このシミュレーションに対し、レボミルナシプランのバリエーションが最も大きな影響を及ぼしたα１Ａ受容体に関して試験的バリデーションを行った。
【００４９】
方法
シミュレーション
主要な標的に対するレボミルナシプランおよびデキストロミルナシプランの阻害定数（Ｋｉ値）を、特異的放射性リガンドと組換えヒトタンパク質を用いた従来の結合アッセイを用いて試験的に決定した（実施例１参照）。
【００５０】
各標的について、結合した放射性リガンドの合計を、各阻害剤の阻害作用を考慮して計算した。各占有標的の合計は、従来の質量作用の法則を用いて表される。
【数１】
2014521627.tif 000003
【００５１】
式中、Ｒは、フリーの結合部位の濃度であり；Ｂｍａｘは、部位の合計濃度であり；Ｂは、放射性リガンドと結合した部位の濃度であり；Ｓは、放射性リガンド濃度であり；Ｋｄは、放射性リガンドの解離定数であり；ｉ１は、阻害剤１の濃度であり；Ｋｉ１は、阻害剤１の阻害定数であり；ＲＩ１は、阻害剤１に占有された部位の濃度であり；ｉ２は、阻害剤２の濃度であり；Ｋｉ２は、阻害剤２の阻害定数であり；ＲＩ２は、阻害剤２に占有された部位の濃度である。
【００５２】
式（１）〜（４）に基づけば下式が得られる。
【数２】
2014521627.tif 000004
【００５３】
Ｂの値は、Ｋｉ１およびＫｉ２の実際の値（上の表を参照）を考慮し、混合物中のデキストロミルナシプランの割合を０．０１％〜３０％で変化させ、混合物中の濃度を０．０１から５２．０μＭまで変化させて計算した。使用したＫｄおよびＳの値は、結合アッセイの値と同様であった。従って、種々のパラメーターの値の各組合せを用いて理論阻害曲線をプロットした。次に、各曲線の見掛けのＩＣ５０値をロジスティック方程式：
Ｙ＝１００／１＋１０（ｉ−ＬｏｇＩＣ５０）
（式中、ｉは阻害剤（混合物）の濃度である）
に従う非線形回帰により計算し、Ｋｉの見掛けの値を、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｓｏｆｆ方程式：ＩＣ５０＝Ｋｉ（１＋Ｓ／Ｋｄ）を用いて導いた。
【００５４】
２．２  結合アッセイ
種々の割合のデキストロミルナシプランを含む、レボミルナシプランとデキストロミルナシプランの一連の混合物を調製し、放射性リガンドとしてプラゾシン［３Ｈ］を用い、各混合物を様々な濃度で、組換えヒトα１Ａ受容体を発現する細胞の膜とともにインキュベートした。各曲線の見掛けのＩＣ５０値をロジスティック方程式：
Ｙ＝１００／１＋１０（ｉ−ＬｏｇＩＣ５０）
（式中、ｉは阻害剤（混合物）の濃度である）
に従う非線形回帰により計算し、Ｋｉの見掛けの値を、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｓｏｆｆ方程式：ＩＣ５０＝Ｋｉ（１＋Ｓ／Ｋｄ）を用いて導いた。
【００５５】
結果
結果を、デキストロミルナシプランパーセンテージの関数としての見掛けのＫｉ値として表す（図１）。
【００５６】
図２は、デキストロミルナシプランの割合が漸増するレボミルナシプラン（Ｆ２６９５）とデキストロミルナシプラン（Ｆ２６９６）の混合物の、ＮＥＴ、ＳＥＲＴまたはα１Ａ受容体標的に対する、シミュレーションアッセイの見掛けのＫｉ値（Ａ、ＢおよびＣ）ならびに測定値（Ｄ）を示す。
【００５７】
ＮＥＴおよびＳＥＲＴに対するＫｉの値は、デキストロミルナシプランの割合が異なってもそれほど影響を受けなかった。対照的に、α１Ａ受容体に対するＫｉの見掛けの値は、シミュレーションアッセイであれ実際のアッセイであれ、デキストロミルナシプランのパーセンテージが増えた場合には劇的に影響を受けたが、このことは、α１受容体に対する影響が無視できないものであることを示す。Ｋｉの値が半分まで落ちる場合に影響は無視できないものとなると考えれば、デキストロミルナシプランの最大パーセンテージは約５％である。
【００５８】
結論
この５％よりも高い割合のデキストロミルナシプランを含む混合物は、「実質的に純粋な」レボミルナシプラン、またはそれより低い割合のデキストロミルナシプランを含む混合物とは生物学的に等価でないと思われる。５％より高い割合のデキストロミルナシプランを含む混合物の、α１Ａ受容体に対する影響は無視できないものであり、このような混合物は脳卒中後の機能回復処置に使用すべきでない。
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】
【図２】
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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