(57)【要約】  同時、個別または逐次投与のための、（ａ）ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）少なくとも１種のマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）阻害剤またはその薬学的に許容される塩と、任意選択的に少なくとも１種の薬学的に許容される担体とを含む医薬的な組合せ；増殖性疾患の処置におけるこのような組合せの使用；およびこのような組合せの治療有効量を投与することを含む、増殖性疾患に罹患している患者を処置する方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
同時、個別または逐次投与のための、
（ａ）ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）またはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）阻害化合物またはその薬学的に許容される塩と、
任意選択的に少なくとも１種の薬学的に許容される担体と
を含む医薬的な組合せ。
【請求項２】
ＭＥＫ阻害化合物が、６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の医薬的な組合せ。
【請求項３】
それを必要とする患者における増殖性疾患の処置における使用のための、請求項１に記載の医薬的な組合せ。
【請求項４】
増殖性疾患の処置のための薬剤の調製における使用のための、請求項１に記載の医薬的な組合せ。
【請求項５】
前記増殖性疾患が、がんである、請求項３または４に記載の医薬的な組合せ。
【請求項６】
前記増殖性疾患が、メラノーマ、肺がん、大腸がん（ＣＲＣ）、乳がん、腎がん、例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝がんまたは肝細胞癌、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、甲状腺がん、膵がん、食道がん、および神経線維腫症である、請求項３または４に記載の医薬的な組合せ。
【請求項７】
（ａ）ＰＩ３Ｋ阻害化合物および（ｂ）少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物が、増殖性疾患の処置のための相乗的有効量で提供される、請求項１に記載の医薬的な組合せ。
【請求項８】
増殖性疾患の処置のための薬剤の製造のための、請求項１に記載の組合せの使用。
【請求項９】
ＭＥＫ阻害化合物が、６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド、またはその薬学的に許容される塩である、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
増殖性疾患を処置する方法であって、それを必要とする増殖性疾患を有する患者に、６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物またはその薬学的に許容される塩と組み合わせて、ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を、同時、個別または逐次投与することを含む、方法。
【請求項１１】
増殖性疾患が、メラノーマ、肺がん、大腸がん（ＣＲＣ）、乳がん、腎がん、例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝がんまたは肝細胞癌、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、甲状腺がん、膵がん、食道がん、および神経線維腫症である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ＭＥＫ阻害化合物が、６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１０に記載の処置する方法。
【請求項１３】
（ａ）ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）またはその薬学的に許容される塩の１つまたは複数の単位剤形、および（ｂ）少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物またはその薬学的に許容される塩の１つまたは複数の単位剤形を含む組合せ製剤。
【請求項１４】
同時、個別または逐次投与のための、
（ａ）ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）またはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物またはその薬学的に許容される塩と、
を含む医薬組成物。
【請求項１５】
ＰＩ３Ｋ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤が、増殖性疾患の処置のための相乗的有効量で提供される、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
増殖性疾患の進行の遅延または処置における使用のための、治療剤として請求項１または２に記載の医薬的な組合せを、その同時、個別または逐次投与のための使用説明書と一緒に含む、市販用パッケージ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
（ａ）ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）阻害化合物、またはその薬学的に許容される塩と、任意選択的に少なくとも１種の薬学的に許容される担体とを含む医薬的な組合せ；がんなどの増殖性疾患の処置または予防におけるこのような組合せの使用；および治療有効量のこのような組合せを投与することを含む、がんなどの増殖性疾患に罹患している対象を処置する方法。
【０００２】
発明の背景
マイトジェン活性化プロテイン（ＭＡＰ）キナーゼおよびホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／ＡＫＴ経路を経るシグナル伝達は、細胞外刺激によって誘発され、様々な生物学的過程、例えば、増殖、分化および細胞死を調節する。両経路は、上流分子の変異または過剰発現によってがんの多くでしばしば活性化される。これらの経路は、互いに相互作用して腫瘍増殖を調節し、したがって、それらは、がんの処置における潜在的な標的である。
【０００３】
ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、イノシトール脂質のＤ−３’位へのホスフェートの転移を触媒して、ホスホイノシトール−３−リン酸（ＰＩＰ）、ホスホイノシトール−３，４−二リン酸（ＰＩＰ２）およびホスホイノシトール−３，４，５−トリホスフェート（ＰＩＰ３）を産生する脂質キナーゼのファミリーを含み、これらは、次に、プレクストリン相同性、ＦＹＶＥ、Ｐｈｏｘおよび他のリン脂質結合ドメインを含むタンパク質を、種々のシグナル伝達複合体中に、しばしば原形質膜に結合させることにより、シグナル伝達カスケードにおける二次メッセンジャーとして働く(Vanhaesebroeckら、Annu. Rev. Biochem 70:535頁(2001年)；Katsoら、Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615頁(2001年)。２つのクラス１  ＰＩ３Ｋの中で、クラス１Ａ  ＰＩ３Ｋは、ｐ８５α、ｐ５５α、Ｐ５０α、ｐ８５βまたはｐ５５γであり得る調節サブユニットと構成的に会合した触媒的ｐ１１０サブユニット（α、β、δアイソフォーム）からなるヘテロ二量体である。クラス１Ｂサブクラスは、２つの調節サブユニットｐ１０１またはｐ８４の一方と会合した触媒的ｐ１１０γサブユニットからなるヘテロ二量体である、一つのファミリーメンバーを有する(Frumanら、Annu Rev. Biochem. 67:481頁(1998年); Suireら、Curr. Biol. 15:566頁(2005年))。ｐ８５／５５／５０サブユニットのモジュラードメインは、活性化受容体および細胞質チロシンキナーゼ上の特定の配列構成中のホスホチロシン残基に結合し、クラス１Ａ  ＰＩ３Ｋの活性化および局在化をもたらすＳｒｃ相同（ＳＨ２）ドメインを含む。クラス１Ｂ  ＰＩ３Ｋは、多様なレパートリーのペプチドおよび非ペプチドリガンドに結合するＧタンパク質共役受容体によって直接活性化される(Stephensら、Cell 89:105(1997年); Katsoら、Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615〜675頁(2001年))。結果として、得られるクラス１  ＰＩ３Ｋのリン脂質産物は、上流受容体と、増殖、生存、走化性、細胞輸送、運動性、代謝、炎症性およびアレルギー性応答、転写ならびに翻訳を含む下流細胞活動と結びつける(Cantleyら、Cell 64:281頁(1991年); EscobedoおよびWilliams、Nature 335:85頁(1988年); Fantlら、Cell 69:413(1992年))。
【０００４】
ＰＩＰ２およびＰＩＰ３は、ウイルス腫瘍遺伝子ｖ−Ａｋｔのヒトホモログの産物であるＡｋｔを原形質膜にしばしば動員し、そこで、増殖および生存に重要な多くの細胞内シグナル伝達経路の節点として働く(Fantlら、Cell 69:413〜423頁(1992年); Baderら、Nature Rev. Cancer 5:921頁(2005年); VivancoおよびSawyer、Nature Rev. Cancer 2:489頁(2002年))。ＰＩ３Ｋの異常調節は、しばしばＡｋｔ活性化を介して生存を高め、ヒトがんにおける最も一般的な事象の一つであり、多くのレベルで起こることが示されている。イノシトール環の３’位でホスホイノシチドを脱リン酸化し、その際にＰＩ３Ｋ活性に拮抗する腫瘍抑制遺伝子ＰＴＥＮは、様々な腫瘍において機能的に欠失している。他の腫瘍において、ｐ１１０α、アイソフォーム、ＰＩＫ３ＣＡ、およびＡｋｔのための遺伝子は増幅され、それらの遺伝子産物のタンパク質発現の増加は、いくつかのヒトがんで実証されている。さらに、ｐ８５〜ｐ１１０複合体を上流調節するように働くｐ８５αの変異および転座が、ヒトがんにおいて記載されている。最後に、下流シグナル伝達経路を活性化するＰＩＫ３ＣＡにおける体細胞ミスセンス変異が、多種多様なヒトがんにおいて相当な頻度で記載されている(Kangら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:802頁(2005年); Samuelsら、Science 304:554頁(2004年); Samuelsら、Cancer Cell 7:561〜573頁(2005年))。これらの観察は、ホスホイノシトール−３キナーゼおよびこのシグナル伝達経路の上流および下流要素の脱調節が、ヒトがんおよび増殖性疾患と関連する最も一般的な脱調節の一つであることを示す(Parsonsら、Nature 436:792頁(2005年); Hennesseyら、Nature Rev. Drug Disc. 4:988〜1004頁(2005年))。
【０００５】
さらに、マイトジェン活性化プロテイン（ＭＡＰ）キナーゼカスケードの過剰活性化は、細胞増殖および分化において重要な役割を果たすことが知られている。この経路は、増殖因子がその受容体チロシンキナーゼに結合するときに活性化され得る。この相互作用は、ＲＡＳとＲＡＦとの会合を促進し、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）を介してＥＲＫへのリン酸化カスケードを開始する。ＭＥＫのリン酸化は、ＡＴＰに対するその親和性に加えて、ＥＲＫに対するその親和性およびその触媒活性を高めるようにみえる。
【０００６】
ＭＡＰキナーゼ経路は、ヒトがんの約１／３で、異所性タンパク質活性化をもたらす変異をしばしば介して、脱調節される。この脱調節は、次に、限定されるものではないが、増殖の促進およびアポトーシスの回避を含めて、がん表現型の病因論および維持に不可欠である多様な細胞変化をもたらす(Dhillonら、Oncogene、2007年、26:3279〜3290頁)。この経路の阻害は、増殖性疾患において有益であることが知られている。ＭＥＫリン酸化のためのわずかに知られた基質が、ＭＡＰキナーゼ、ＥＲＫ１およびＥＲＫ２であるので、ＭＥＫは魅力的な治療標的である。ＭＥＫは、ＲＡＳまたはＲＡＦ腫瘍遺伝子において変異を有する腫瘍で頻繁に活性化される。ＭＥＫ／ＥＲＫの構成的活性化は、膵臓、結腸、肺、腎臓および卵巣の原発腫瘍試料に見出されている。
【０００７】
ＭＥＫの阻害は、（ａ）腫瘍および白血病：腫瘍モデルにおける効力の証拠(Nature-Medicine 5(7):810〜816頁、1999年; Tracetら、AACR 4月6〜10日、2002年、ポスター番号5426; Tecle, H. IBC 2nd International Conferece of Protein Kinases、9月9〜10日、2002年、J. Clin. Invest. 108(6)、851〜859頁、2001年)、（ｂ）疼痛：疼痛モデルにおける効力の証拠(J. Neurosci. 22:478頁、2002年; Acta Pharmaceutical Sin. 26:789頁 2005年; Expert Opin Ther Targets、9:699頁、2005年; Mol. Pain. 2:2頁、2006年)、（ｃ）卒中：ＭＥＫの阻害による虚血性脳損傷に対する卒中モデルの有意な神経保護における効力の証拠(J. Pharmacol. Exp. Ther. 304:172頁、2003年; Brain Res. 996:55頁、2004年)、（ｄ）糖尿病：糖尿病合併症における証拠(Am. J. Physiol. Renal. 286、F120 2004年)、（ｅ）炎症：炎症モデルにおける効力の証拠(Biochem Biophy. Res. Com. 268:647頁、2000年)、ならびに（ｆ）関節炎：実験的骨関節炎における効力の証拠(Arthritis & (J. Clin. Invest. 116:163頁、2006年)などのいくつかの研究で様々な疾患において潜在的な治療利益を有することが示されている。
【０００８】
ＰＩ３Ｋ経路は、ＭＡＰＫ経路と広範囲に相互作用する。これらの経路は、共通の上流活性化物質を共有し、それらは両方とも、腫瘍形成性ＲＡＳにより活性化され、一方または他方が阻害される場合、いくらかの代償的シグナル伝達を提供すると思われる。
【０００９】
がんの患者にとっての多数の処置選択肢にもかかわらず、がんの有効な長期処置のために投与することができる有効で安全な治療剤に対する必要性および新規な組合せ治療に対する必要性が依然として残されている。
【００１０】
驚くべきことに、本発明の、有効量のｐ１１０α−特異的ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル）−アミドと、有効量の少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物、特に６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミドまたは（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミドとの組合せが、増殖性疾患、特にがんの処置において予想外の改善をもたらすことが発見された。同時、逐次または個別に投与される場合、本発明のこの特異的なホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害化合物とＭＥＫ阻害化合物とが相乗的に相互作用して、細胞増殖を強力に抑制する。この予想外の相乗的反応は、それぞれの化合物に必要な用量の低減を可能にし、副作用の低減および処置における化合物の長期臨床の有効的増強をもたらす。
【００１１】
発明の概要
本発明は、特に増殖性疾患の処置または予防のための、同時、個別または逐次投与のための、（ａ）ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（化合物Ｃ）、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）阻害剤またはその薬学的に許容される塩と、任意選択的に少なくとも１種の薬学的に許容される担体とを含む医薬的な組合せに関する。
【００１２】
本発明の好ましい実施形態において、組合せパートナーは、（ａ）ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩、および（ｂ）６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）もしくは（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（化合物Ｃ）からなる群から選択される少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物またはその薬学的に許容される塩、である。
【００１３】
本発明の別の好ましい実施形態において、組合せパートナーは、（ａ）ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩、および（ｂ）少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）またはその薬学的に許容される塩、である。
【００１４】
本発明はさらに、（ａ）ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（化合物Ｃ）、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のＭＥＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩と、任意選択的に少なくとも１種の薬学的に許容される担体とを含む組合せ製剤または医薬組成物に関する。一実施形態において、本発明は、（ａ）組合せパートナー（ａ）の１つまたは複数の単位剤形、および（ｂ）組合せパートナー（ｂ）の１つまたは複数の単位剤形を含む、組合せ製剤に関する。
【００１５】
本発明は特に、増殖性疾患の処置または予防を必要とする対象における増殖性疾患の処置または予防に有用な、（ａ）ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（化合物Ｃ）、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のＭＥＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩と、任意選択的に少なくとも１種の薬学的に許容される担体とを含む医薬的な組合せに関する。
【００１６】
本発明はまた、増殖性疾患の処置または予防を必要とする対象における増殖性疾患の処置または予防のための医薬組成物または薬剤の調製における使用のための、（ａ）ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（化合物Ｃ）、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のＭＥＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩と、任意選択的に少なくとも１種の薬学的に許容される担体とを含む医薬的な組合せに関する。
【００１７】
本発明はさらに、増殖性疾患の処置または予防のための医薬組成物または薬剤の調製のための、６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（化合物Ｃ）、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のＭＥＫ阻害剤と組み合わせた、ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩の使用に関する。
【００１８】
本発明は、増殖性疾患を有する対象を処置する方法であって、前記対象に、（ａ）ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（化合物Ｃ）、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のＭＥＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩と、任意選択的に少なくとも１種の薬学的に許容される担体とを含む組合せを、増殖性疾患に対して共同で治療に有効である量で投与されることを含む方法に関する。
【００１９】
本発明はさらに、増殖性疾患の進行の遅延または処置における使用のための、治療剤として（ａ）ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（化合物Ｃ）、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のＭＥＫ阻害剤またはその薬学的に許容される塩とを含む組合せを、その同時、個別または逐次投与のための使用説明書と一緒に含む市販用パッケージを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、ＮＣＩ−Ｈ２１２２非小細胞肺がん細胞株における、（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）と６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）との組合せについて５０％阻害におけるアイソボログラム等高線を示す。
【図２】図２は、別の試験から得られた高分解能データについて、ＮＣＩ−Ｈ２１２２非小細胞肺がん細胞株における、（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）と６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）との組合せについて５０％阻害におけるアイソボログラム等高線を示す。
【００２１】
発明の詳細な説明
本発明は、特に増殖性疾患の処置または予防における使用のための、同時、個別または逐次投与のための、（ａ）ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（以下、「化合物Ａ」と称される）またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）阻害化合物またはその薬学的に許容される塩と、任意選択的に少なくとも１種の薬学的に許容される担体とを含む医薬的な組合せに関する。
【００２２】
本明細書で使用される一般用語は、明示的に断りのない限り、以下の意味によって定義される。
【００２３】
「含む（comprising）」および「含む（including）」という用語は、特に断りのない限り、それらの制限のない（open-ended）、かつ非限定的な意味において本明細書で使用される。
【００２４】
本発明を説明する文脈における（特に以下の特許請求の範囲の文脈における）「ａ」および「ａｎ」ならびに「ｔｈｅ」という用語ならびに同様の言及は、本明細書で特に断りのないかまたは文脈により明らかに否定されない限り、単数および複数の両方に及ぶように解釈されるべきである。複数形が化合物、塩などについて使用される場合、これは、単一の化合物、塩なども意味するように解釈される。
【００２５】
「組合せ」または「医薬的な組合せ」という用語は、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物またはその薬学的に許容される塩が、同時、同じ時間に独立して、またはその組合せパートナーが協同的、例えば、相乗的効果を示すことを可能にする時間間隔内で個別に投与されてもよい、組合せ投与のための、１つの単位剤形での配合剤、非固定の組合せまたは要素のキットのいずれかを指すように本明細書で定義される。「配合剤」という用語は、活性成分、例えば、化合物Ａと組合せパートナーの両方が、単一の実体または調剤（dosage）の形態で同時に患者に投与されることを意味する。「非固定の組合せ」という用語は、活性成分（例えば、本発明の化合物と組合せパートナー）の両方が、同時に、共にまたは特定の時間制限なしに逐次にのいずれかで個別の実体として患者に投与され、このような投与が、患者の体内で２種の化合物の治療有効レベルをもたらすことを意味する。後者はまた、カクテル治療、例えば、３種以上の活性成分の投与にも適用される。
【００２６】
「ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ阻害剤」という用語は、ＰＩ３−キナーゼを標的とする、減少させるまたは阻害する化合物を指すように本明細書で定義される。ＰＩ３−キナーゼ活性は、インスリン、血小板由来増殖因子、インスリン様増殖因子、上皮細胞増殖因子、コロニー刺激因子、および肝細胞増殖因子を含めて、多くのホルモンおよび増殖因子の刺激に反応して増加することが示され、および細胞の増殖および形質転換に関連する過程に関与してきた。
【００２７】
「ＭＥＫ阻害剤」という用語は、ＭＡＰキナーゼ（ＭＥＫ）のキナーゼ活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物を指すように本明細書で定義される。ＭＥＫ阻害剤の標的には、限定されるものではないが、ＥＲＫが含まれる。ＭＥＫ阻害剤の間接的標的には、限定されるものではないが、サイクリンＤ１が含まれる。
【００２８】
「医薬組成物」という用語は、哺乳動物に影響を与える特定の疾患または状態を予防または処置するために、対象（例えば、哺乳動物またはヒト）に投与される少なくとも１種の治療剤を含有する混合物または溶液を指すように本明細書で定義される。
【００２９】
「薬学的に許容される」という用語は、妥当な医学的判断の範囲内で、合理的な利益／危険比に対して過剰な毒性、刺激アレルギー反応および他の問題となる合併症なしに、対象（例えば、哺乳動物またはヒト）の組織と接触させるのに適した化合物、材料、組成物および／または剤形を指すように本明細書で定義される。
【００３０】
本明細書で使用される場合の「共投与」または「組合せ投与」という用語は、単独の患者への選択した治療剤の投与を包含するように定義され、その薬剤が同一の投与経路によりまたは同時に、必ずしも投与されるとは限らない処置レジメンを含むことが意図される。
【００３１】
本明細書で使用される場合の「処置する」または「処置」という用語は、対象における少なくとも１つの症状を軽減、減少もしくは緩和する、または疾患の進行の遅延に効果をもたらす処置を含む。例えば、処置は、がんなどの、障害の１つもしくはいくつかの症状の減退または障害の完全な根絶であり得る。本発明の意味の範囲内で、「処置する」という用語も、発症（すなわち、疾患の臨床症状前の期間）を停止する、遅延させるおよび／または疾患の進行もしくは悪化の危険を減少させることを意味する。「保護する」という用語は、必要に応じて、対象における疾患の進行または継続または憎悪を、予防する、遅延させるもしくは処置すること、またはすべてを意味するように本明細書で使用される。
【００３２】
本明細書で使用される場合の「予防する（prevent）」、「予防する（preventing）」または「予防」という用語は、予防される状態、疾患または障害に伴うまたはそれらによって引き起こされる少なくとも１つの症状の予防を含む。
【００３３】
本明細書で使用される場合の「共同して治療に活性の」または「共同の治療効果」という用語は、治療剤が、処置される温血動物、特にヒトが好み、なおかつ（好ましくは相乗的な）相互作用（共同の治療効果）を示す時間間隔で、個別に（時間的にずらされた仕方、特に順序によって異なる仕方で）与えられ得ることを意味する。これがその場合であるかどうかは、とりわけ、化合物が両方とも、少なくともある一定の時間間隔の間、処置されるヒトの血液中に存在することを示す血中濃度を追跡することによって決定され得る。
【００３４】
治療剤の組合せの「治療有効量」または「臨床有効量」という用語は、その組合せで処置される障害の臨床的に観察可能な徴候および症状の基準を上回る、観察可能な改善をもたらすために十分な量である。
【００３５】
本明細書で使用される場合の「相乗効果」という用語は、ある効果、例えば、それら自体で投与されるそれぞれの薬剤の効果の単なる相加より大きい、増殖性疾患、特にがん、またはその症状の症候性進行を遅延させる効果をもたらす、例えば、本発明の式（Ｉ）の化合物、例えば、化合物Ａと、少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物となどの２つの治療剤の作用を指す。相乗効果は、適当な方法、例えば、Sigmoid-Emax方程式(Holford, N.H.G.およびScheiner,L.B.、Clin. Pharmacokinet. 6:429〜453頁(1981年))、Loewe additivity方程式(Loewe, S.およびMuischnek, H.、Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114:313〜326頁(1926年))およびmedian-effect方程式(Chou, T. C.およびTalalay, P.、Adv. Enzyme Regul. 22:27〜55頁(1984年))などの適切な方法を用いて計算され得る。上に言及された各方程式は、実験データに適用して、薬剤の組合せの効果の評価において助けとなる対応するグラフを生成し得る。上に言及された方程式に関連した対応するグラフは、濃度効果曲線、アイソボログラム曲線および組合せ指数曲線である。
【００３６】
本明細書で使用される場合の「対象」または「患者」という用語は、がん、またはがんを直接または間接に含む任意の障害に罹患し得るまたは苦しめられ得る動物を含む。対象の例には、哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ  ラット、およびトランスジェニック非ヒト動物が含まれる。好ましい実施形態において、対象は、ヒト、例えば、がんに罹患している、がんに罹患するリスクがある、または潜在的にがんに罹患し得るヒトである。
【００３７】
「約」または「およそ」という用語は、所与の値または範囲の１０％以内、より好ましくは５％以内の意味を有するものとする。
【００３８】
本発明の医薬的な組合せは、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ阻害剤（ＰＩ３Ｋ）化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（以下、（「化合物Ａ」）と称される）を含む。化合物Ａは、式Ｉ
【００３９】
【化１】
2014525454.tif 000002
のｐ１１０α−選択的ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害化合物である。化合物Ａは、その遊離の塩基形態の合成が記載された国際公開第２０１０／０２９０８２号に最初に記載された。化合物Ａの合成は、例えば、実施例１５として国際公開第２０１０／０２９０８２号に記載されており、これは、その全体が参照により本明細書によって組み込まれる。
【００４０】
化合物Ａに言及する場合、「塩（単数）」または「塩（複数）」という用語は、個々にまたは遊離の式（Ｉ）の化合物との混合物で存在することができ、好ましくは薬学的に許容される塩である、化合物Ａの塩であることが理解される。このような塩は、例えば、塩基性窒素原子を有する式（Ｉ）の化合物、特にその薬学的に許容される塩から、好ましくは有機または無機酸によって、酸付加塩として形成される。好適な無機酸は、例えば、ハロゲン酸（例えば、塩酸）、硫酸、またはリン酸である。好適な有機酸は、例えば、カルボン酸またはスルホン酸、例えば、フマル酸またはメタンスルホン酸である。単離または精製目的のために、薬学的に許容されない塩、例えば、ピクリン酸塩または過塩素酸塩を使用することも可能である。治療用途の場合、薬学的に許容される塩または遊離の化合物だけが、用いられ（適用可能な場合、医薬製剤の形態で）、したがって、これらが好ましい。遊離形態のこの新規化合物と、それらの塩の形態（例えば、この新規化合物の精製または同定において中間体として使用され得る塩を含めて）のものとの間の密接な関係を考慮すると、以上および以下でのこの遊離化合物への言及はいずれも、必要および便宜に応じて、対応する塩にも言及すると理解されるべきである。化合物Ａの塩は、好ましくは薬学的に許容される塩であり；好適な対イオン形成性の薬学的に許容される塩が、当技術分野で公知である。
【００４１】
本発明の医薬的な組合せは、６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物またはその薬学的に許容される塩を含む。
【００４２】
ＭＥＫ阻害化合物６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）は、式（ＩＩ）
【００４３】
【化２】
2014525454.tif 000003
の化合物である。ＭＥＫ阻害化合物６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）は、ＰＣＴ出願国際公開第０３／０７７９１４号に記載されており、その調製方法は、例えば、その中の実施例１８に記載されている。
【００４４】
本明細書に開示される場合を除いて、本発明で使用される化合物は、１つまたは複数の不斉中心を有してもよく、ＰＣＴ出願国際公開第０３／０７７９１４号に記載されたとおりに個々の（Ｒ）−もしくは（Ｓ）−立体異性体としてまたはそれらの混合物として生成され得る。別に示される場合を除いて、本明細書および特許請求の範囲における特定の化合物の記述または命名は、それらの個々のエナンチオマーの両方、ジアステレオマー混合物、ラセミ化合物またはそうでないものを含むことが意図される。したがって、本発明は、本発明の化合物のジアステレオマー混合物および分割したエナンチオマーを含めて、このような異性体のすべても含む。ジアステレオマー混合物は、当業者に知られた方法、例えば、クロマトグラフィーまたは分別結晶によって、それらの物理化学的差異に基づいて、それらの個々のジアステレオマーに分離され得る。エナンチオマーは、適当な光学活性化合物（例えば、アルコール）と反応させることによってエナンチオマー混合物をジアステレオマー混合物に転換し、そのジアステレオマーを分離し、個々のジアステレオマーを対応する純粋エナンチオマーに転換する（例えば、加水分解する）ことによって分離され得る。立体化学の決定および立体異性体の分離のための方法は、当技術分野で周知である（「Advanced organic Chemistry」、第4版、J. March、John Wiley and Sons、New York、1992年の第4章における検討を参照されたい）。
【００４５】
ＭＥＫ阻害化合物（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（化合物Ｃ）は、式（ＩＩＩ）
【００４６】
【化３】
2014525454.tif 000004
の化合物である。ＭＥＫ阻害化合物（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（化合物Ｃ）は、ＰＣＴ出願国際公開第２００７／０４４０８４号の実施例２５−ＢＢに記載されており、その調製方法は、その中に記載されている。
【００４７】
本発明の組合せで用いられてもよいさらなるＭＥＫ阻害剤には、限定されるものではないが、ＰＤ０３２５９０１（Ｐｆｉｚｅｒ）（ＰＣＴ公開第０２／０６２１３号参照）、ＰＤ−１８４３５２（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＲＤＥＡ１１９（Ａｒｄｅａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＧＳＫ１１２０２１２（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）（ＰＣＴ公開第０５／１２１１４２号参照）、ＸＬ５１８（Ｅｘｅｌｅｘｉｓ）、ＡＳ−７０１２５５（Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ）、ＡＳ−７０１１７３（Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ）、ＡＳ７０３０２６（Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ）、ＲＤＥＡ４３６（Ａｒｄｅａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｅ６２０１（Ｅｉｓａｉ）(Gotoら，Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，3331(2):485〜495頁(2009年)参照)、ＲＯ４９８７６５５（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ）、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、および／またはＲＧ７４２０が含まれる。
【００４８】
好ましくは、本発明の組合せで用いられるＭＥＫ阻害化合物は、６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（化合物Ｃ）、またはその薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００４９】
ＭＥＫ阻害剤に関する場合、「塩（単数）」または「塩（複数）」という用語は、特に断りのない限り、本発明の化合物において存在してもよい酸性および塩基性基の塩を含む。事実上塩基性である本発明の化合物は、種々の無機および有機酸と多種多様な塩を形成することができる。本発明のこのような塩基性化合物の薬学的に許容される酸付加塩を調製するために用いられてもよい酸は、非毒性酸付加塩、すなわち、薬学的に許容されるアニオンを有する塩、例えば、酢酸塩、安息香酸塩、臭化物、塩化物、クエン酸塩、フマル酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化物、乳酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、および酒石酸塩を形成するものである。本発明の単一化合物は２つ以上の酸性または塩基性部分を含んでいてもよいので、本発明の化合物は、単一化合物中にモノ、ジまたはトリ塩を含み得る。
【００５０】
本発明の化合物における酸性部分の場合、塩は、本発明の化合物を、塩基性化合物、特に無機塩基で処理することによって形成されてもよい。好ましい無機塩は、アルカリおよびアルカリ土類金属、例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、バリウムおよびカルシウムと形成されるものである。好ましい有機塩基塩には、例えば、アンモニウム、ジベンジルアンモニウム、ベンジルアンモニウム、２−ヒドロキシエチルアンモニウム、ビス（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム、フェニルエチルベンジルアミン、ジベンジルエチレンジアミンなどの塩が含まれる。酸性部分の他の塩には、例えば、プロカイン、キニンおよびＮ−メチルグルソアミンと形成される塩に加えて、塩基性アミノ酸、例えば、グリシン、オルニチン、ヒスチジン、フェニルグリシン、リシンおよびアルギニンと形成される塩が含まれ得る。特に好ましい塩は、本発明の化合物のナトリウムまたはカリウム塩である。
【００５１】
塩基性部分に関して、塩は、本発明の化合物を、酸性化合物、特に無機酸で処理することによって形成される。この種の好ましい無機塩には、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸などの塩が含まれ得る。この種の好ましい有機塩には、例えば、酢酸、コハク酸、クエン酸、マレイン酸、フマル酸、Ｄ−グルタミン酸、グリコール酸、安息香酸、桂皮酸などの有機酸と形成される塩が含まれ得る。この種の特に好ましい塩は、本発明の化合物Ｂの塩酸塩または硫酸塩の塩である。
【００５２】
本発明に適した化合物Ｂおよび化合物Ｃのさらなる薬学的に許容される塩には、ＰＣＴ出願国際公開第０３／０７７９１４号およびＰＣＴ出願国際公開第２００７／０４４０８４号に開示された塩が含まれ、これらは両方とも参照により本出願中に本明細書によって組み込まれる。
【００５３】
特に断りがないか、または本文により明らかに示されない限り、本発明の医薬的な組合せに有用な治療剤への言及は、化合物の遊離塩基と、化合物の薬学的に許容される塩のすべての両方を含む。
【００５４】
コード番号、一般名または商品名で同定される化合物の構造は、標準大要「The Merck Index」の現行版またはデータベース、例えば、Patents International(IMS World Publications)から採用されてもよい。その対応する内容は、参照により本明細書によって組み込まれる。
【００５５】
特許出願の引用が上に示されるそれぞれの場合に、本化合物に関する主題は、参照により本出願中に本明細書によって組み込まれる。本発明の医薬的な組合せに治療剤として用いられる化合物は、それぞれ、引用された文書に記載されたとおりに調製および投与され得る。
【００５６】
また本発明の範囲内に、上に示されたとおりの２つの個別の治療剤の組合せもあり、すなわち、本発明の範囲内の医薬的な組合せは、３つまたはそれを超える治療剤を含み得る。
【００５７】
（ａ）ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（化合物Ｃ）、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物またはその薬学的に許容される塩と、任意選択的に少なくとも１種の薬学的に許容される担体と、を含む医薬的な組合せは、以下に、本発明の組合せと称される。
【００５８】
本発明の好ましい実施形態において、組合せパートナーは、（ａ）ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩、および（ｂ）６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）もしくは（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（化合物Ｃ）からなる群から選択される少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物またはその薬学的に許容される塩、である。
【００５９】
本発明の別の好ましい実施形態において、組合せパートナーは、（ａ）ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩、および（ｂ）少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）またはその薬学的に許容される塩、である。
【００６０】
本発明はまた、（ａ）ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のＭＥＫ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩と、任意選択的に少なくとも１種の薬学的に許容される担体と、を含む組合せ製剤または医薬組成物に関する。
【００６１】
一実施形態において、本発明は、（ａ）組合せパートナー（ａ）の１つまたは複数の単位剤形、および（ｂ）組合せパートナー（ｂ）の１つまたは複数の単位剤形を含む組合せ製剤に関する。
【００６２】
本発明は特に、増殖性疾患の処置または予防を必要とする対象における増殖性疾患の処置または予防に有用な本発明の組合せに関する。本発明のこの実施形態において、本発明の組合せは、ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩、および６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量を含む組合せ治療を対象に投与することを含む、増殖性疾患の処置または予防に使用される。好ましくは、ＭＥＫ阻害化合物は、組み合わされる場合に有益な効果をもたらす治療有効用量で投与される。投与は、同時または逐次であってもよい。
【００６３】
本発明の組合せで処置または予防される増殖性疾患は、主に腫瘍および／またはがんである。増殖性疾患の例には、メラノーマ、肺がん、大腸がん（ＣＲＣ）、乳がん、腎がん、例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝がんまたは肝細胞癌、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、甲状腺がん、膵がん、食道、および神経線維腫症が含まれる。
【００６４】
本発明の一実施形態において、増殖性疾患は固形腫瘍である。「固形腫瘍」という用語は特に、メラノーマ、甲状腺がん、乳がん、膵がん、卵巣がん、結腸および概してＧＩ（胃腸）管のがん、子宮頚がん、腎がん、例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝がんまたは肝細胞癌、肺がん、特に小細胞肺がんおよび非小細胞肺がん、頭頚部がん、膀胱がん、前立腺のがん、食道、またはカポジ肉腫を意味する。本組合せは、固形腫瘍だけでなく、液性腫瘍の増殖も阻害する。さらに、腫瘍タイプおよび使用される特定の組合せに応じて、腫瘍体積が減少され得る。本明細書で開示される組合せは、腫瘍の転移拡大および微小転移の増殖または発症を予防するためにも適する。本明細書で開示される組合せは、予後不良患者、特に転移性メラノーマまたは膵がんを有するような予後不良患者の処置に特に適する。
【００６５】
処置されるがんは、ＰＩ３Ｋアルファの過剰発現もしくは増幅、ＰＩＫ３ＣＡの変異、および／またはＭＡＰシグナル伝達経路における遺伝子変化、例えば、ＨＲＡＳ、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳまたはＢＲＡＦ変異もしくは遺伝子増幅などを有し得る。一実施形態において、処置されるがんは、ＫＲＡＳ変異を有し、例えば、ＫＲＡＳ変異の膵がん、結腸がん、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）または白血病である。
【００６６】
さらなる実施形態において、増殖性疾患は、膵がん、大腸がん、メラノーマ、食道、または肺がん、特に非小細胞肺がんである。
【００６７】
本発明の組合せは、本発明に従って、単独で、増殖性疾患の処置に使用され得ることが理解される。
【００６８】
ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩、および６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物またはその薬学的に許容される塩、特に６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）もしくは（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（化合物Ｃ）またはその薬学的に許容される塩、を含む組合せ治療は、単剤治療と比較して増殖性疾患の処置または予防における予想外の改善をもたらすことが見出された。同時、逐次または個別に投与される場合、ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）とＭＥＫ阻害剤とは相乗的に相互作用して、細胞増殖を阻害する。本発明の組合せは、標準的な全身治療に失敗した進行がんの患者の処置に特に適する。これは、単剤治療に耐性を示す、または本明細書で開示されるものと異なる組合せに耐性を示す腫瘍タイプを有する患者を含む。
【００６９】
増殖性疾患の性質は、多因子性である。特定の状況下で、作用の異なる機構を有する薬剤が組み合わされてもよい。しかしながら、異なる作用様式を有する治療剤の任意の組合せを単に考慮することは、有利な効果を有する組合せを必ずしももたらすとは限らない。
【００７０】
本発明の医薬的な組合せの投与は、本発明の組合せで使用される薬学的治療剤の一つだけを適用する単剤治療と比較して、例えば、症状の緩和、進行遅延または阻害に関して、有益な効果、例えば、相乗的な治療効果だけでなく、さらなる驚くべき有益な効果、例えば、より少ない副作用、生活の質の改善または疾病率の減少ももたらし得る。
【００７１】
さらなる利益は、本発明の組合せの治療剤は比較的低い用量で使用され得る、例えば、必要用量は、しばしば比較的小さいだけでなく、より少ない頻度でも適用されるか、または組合せパートナーの一方のみで観察される副作用の発生率を減少させるために使用され得ることである。これは、処置される患者の要望および要求と一致している。
【００７２】
それは、本発明の組合せが、先に記載した有益な効果をもたらすという確立された試験モデルで示すことができる。当業者は、このような有益な効果を立証するために関連する試験モデルを選択することが十分に可能である。本発明の組合せの薬理学的活性は、例えば、臨床試験においてまたは以下に実質的に記載されるとおりの試験手順において実証され得る。
【００７３】
適切な臨床試験は、特に、例えば、増殖性疾患の患者における非盲検の用量漸増試験である。このような試験は、特に本発明の組合せの治療剤の相乗作用を立証する。増殖性疾患に対する有益な効果は、当業者にそのようなものとして知られているこれらの試験の結果によって直接決定され得る。このような試験は、特に、いずれかの治療剤を用いる単剤治療と本発明の組合せとの効果を比較するために適切であり得る。
【００７４】
一実施形態において、ＰＩ３Ｋ阻害化合物Ａの用量は、最大耐用量（Maximum Tolerated Dosage）に達するまで段階的に増加させ、本発明の少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物は、固定用量で投与される。代替として、ＰＩ３Ｋ阻害化合物Ａは、固定用量で投与されてもよく、本発明の少なくともＭＥＫ阻害剤の用量は段階的に増加させてもよい。各患者は、ＰＩ３Ｋ阻害化合物Ａおよび／または本発明の少なくとも１種のＭＥＫ阻害剤の用量を毎日または間欠的に受けてもよい。処置の効力は、このような試験において、例えば、１２週、１８週または２４週後に、６週間毎の症状スコアの評価によって決定され得る。
【００７５】
好ましい実施形態において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物Ｂもしくは化合物Ｃまたはその薬学的に許容される塩である。
【００７６】
１つまたは複数の成分間の相乗的相互作用を決定するときに、効果についての最適範囲および効果についての各成分の絶対用量範囲は、異なるｗ／ｗ比範囲および処置を必要とする患者への用量にわたって成分を投与することによって明確に測定され得る。ヒトの場合、患者に対して臨床試験を実施する複雑さおよび費用は、相乗効果の一次モデルとしてのこの試験形式の使用を非実用的にさせ得る。しかしながら、一つの種における相乗効果の観察は、他の種における効果を予測することができ、動物モデルは、本明細書で記載されるとおりに、相乗的効果を測定するために存在し、このような試験の結果は、薬物動態学的／薬力学的方法の適用によって他の種で必要とされる有効な用量および血漿濃度比範囲ならびに絶対的な用量および血漿濃度を予測するためにも使用され得る。腫瘍モデルとヒトで見られる効果との間の確立された相関は、動物における相乗効果が、例えば、
【００７７】
以下の実施例に記載されるとおりの、ＢＲＡＦ変異：ＳＷ１４１７、ＣＯＬＯ２０５、ＬＳ４１１Ｎ、ＨＣＴ−２９、およびＲＫＯ；ＫＲＡＳ変異：ＮＣＩ−Ｈ２３、ＮＣＩ−Ｈ２１２２、ＮＣＩ−Ｈ３５８、ＮＣＩ−Ｈ４６０、ＨＣＴ−１５、ＳＷ４８０、ＳＷ６２０、ＳＷ８３７、ＣＯＬＯ−６７８、ＬＳ１２３、ＮＣＩ−Ｈ７４７、ＨＣＴ−１１６、Ｔ８４、ＬＳ１８０、ＳＷ９４８、およびＧＰ２ｄ；ＰＩＫ３ＣＡ変異：ＮＣＩ−Ｈ４６０、ＨＣＴ−１５、ＨＣＴ−１１６、ＨＣＴ−２９、ＲＫＯ、Ｔ８４、ＳＷ４８；ならびにＴＰ５３変異：Ｃ２ＢＢｅＩのがん腫瘍モデル
において実証され得ることを示唆する。
【００７８】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の組合せは、ＰＩ３Ｋアルファの過剰発現もしくは増幅、ＰＩＫ３ＣＡ変異、および／またはＨＲＡＳ、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳもしくはＢＲＡＦ変異を含む、増殖性疾患、好ましくはがんの処置または予防における使用のために、ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩と、６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（化合物Ｃ）、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、および／またはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物またはその薬学的に許容される塩と、を含む。好ましくは、ＰＩ３Ｋアルファの過剰発現もしくは増幅、ＰＩＫ３ＣＡ変異、および／またはＨＲＡＳ、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳもしくはＢＲＡＦ変異を含むがんは、メラノーマ、膵臓、大腸、食道、または肺である。
【００７９】
一態様において、本発明は、相乗的相互作用を特定するために使用される、例えば、以下の実施例に記載されるとおりの腫瘍モデルで実測される範囲に対応する組合せ範囲（ｗ／ｗ）で、（ａ）ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）本発明の少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物、好ましくは化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩とを含む、ヒト投与のための相乗的組合せを提供する。適切には、ヒトにおける比の範囲は、５０：１から１：５０重量部、５０：１から１：２０、５０：１から１：１０、５０：１から１：１、２０：１から１：５０、２０：１から１：２０、２０：１から１：１０、２０：１から１：１、１０：１から１：５０、１０：１から１：２０、１０：１から１：１０、１０：１から１：１、１：１から１：５０、１：１から１：２０および１：１から１：１０から選択される非ヒトの範囲に対応する。より適切には、ヒト範囲は、１０：１から１：１、５：１から１：１または２：１から１：１重量部のオーダーの非ヒトの範囲に対応する。
【００８０】
別の態様において、本発明は、相乗的相互作用を特定するために使用される、例えば、以下の実施例に記載されるとおりの腫瘍モデルで実測される範囲に対応する組合せ範囲（ｗ／ｗ）で、（ａ）ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）本発明の少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物、好ましくは化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩とを含む、ヒト投与のための相乗的組合せを提供する。
【００８１】
さらなる態様によれば、本発明は、主に相乗的相互作用を特定するために使用される、それぞれの成分の用量範囲が適切な腫瘍モデル、例えば、以下の実施例に記載される腫瘍モデルで実測される相乗的範囲に対応する、（ａ）ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）本発明の少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物、好ましくは化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩とを含む、ヒトへの投与のための相乗的組合せを提供する。
【００８２】
本発明の１つの目的は、本発明の組合せを含み、増殖性疾患に対して共同で治療に有効である量を含む医薬組成物を提供することである。この組成物において、組合せパートナー（ａ）と（ｂ）とは、任意の適切な経路によって、単一製剤もしくは単位剤形で投与される、同時だが個別に投与される、または逐次に投与される、のいずれかであり得る。単位剤形は、配合剤であってもよい。
【００８３】
両方の組合せパートナーの個別投与のための、または配合剤での投与のための、すなわち、本発明の組合せを含む単一のガレヌス組成物（galenical composition）での投与のための医薬組成物は、それ自体既知の方法で調製されてもよく、治療有効量の少なくとも１種の薬理学的に活性な組合せパートナーを、例えば、上記に示されたとおりに、単独で、または特に経腸もしくは非経口適用に適した、１種もしくは複数の薬学的に許容される担体と組み合わせて含み、ヒトを含めて哺乳動物（温血動物）への経口または直腸などの経腸投与、および非経口投与に適したものである。
【００８４】
この新規な医薬組成物は、約０．１％から約９９．９％、好ましくは約１％から約６０％の治療剤（単数または複数）を含有し得る。
【００８５】
経腸または非経口投与のための組合せ治療のための適切な医薬組成物は、例えば、糖衣錠、錠剤、カプセル剤もしくは坐剤、またはアンプル剤などの単位剤形のものである。特に断りのない限り、これらは、それ自体既知の方法で、例えば、様々な従来の、混合、粉砕、直接圧縮、造粒、糖衣、溶解、凍結乾燥の工程、または当業者に容易に明らかな作製技術によって調製される。必要な有効量は、複数の投薬単位の投与によって達せられてもよいので、各剤形の個々の用量中に含有される組合せパートナーの単位含有量は、それ自体で有効量を構成する必要はないことが理解される。
【００８６】
薬剤の組合せ、または薬剤の組合せの個々の薬剤を含有する単位剤形は、カプセル、例えば、ゼラチンカプセル内に封入されたマイクロ錠剤の形態であってもよい。この場合、医薬製剤に用いられるゼラチンカプセル、例えば、Ｐｆｉｚｅｒから入手できる、ＣＡＰＳＵＧＥＬとして知られた硬質ゼラチンカプセルが用いられ得る。
【００８７】
本発明の単位剤形は、任意選択的に、医薬品に用いられるさらなる従来の担体または賦形剤をさらに含んでもよい。このような担体の例には、限定されるものではないが、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、流動促進剤、安定剤、ならびに充填剤、希釈剤、着色剤、香味剤および保存剤が含まれる。当業者は、日常的実験によってかつ過度の負担がまったくなしに、剤形の特定の所望の特性に対して前述の担体の１種または複数を選択し得る。用いられる各担体の量は、当技術分野において従来の範囲内で変わり得る。すべて参照により本明細書によって組み込まれる以下の参考文献には、経口剤形を製剤化するために用いられる技術および賦形剤が開示されている。The Handbook of Pharmaceutical Excipients、第4版、Roweら編、American Pharmaceuticals Association(2003年); およびRemington: the Science and Practice of Pharmacy、第20版、Gennaro編、Lippincott Williams & Wilkins(2003年)を参照されたい。
【００８８】
これらの任意選択のさらなる従来の担体は、１種もしくは複数の従来の担体を造粒前またはその間に初期混合物中に組み込むことによって、または１種もしくは複数の従来の担体を経口剤形中に薬剤の組合せ、もしくは薬剤の組合せの個々の薬剤を含む顆粒剤と一緒に混合することによってのいずれかで経口剤形中に組み込まれてもよい。後者の実施形態において、組合せ混合物は、例えば、Ｖ−ブレンダーによってさらにブレンドされ、その後に錠剤、例えば、モノリシック錠剤に圧縮または成形され、カプセルにより封入され、またはサシェに充填され得る。
【００８９】
薬学的に許容される崩壊剤の例には、限定されるものではないが、デンプン；クレー；セルロース；アルギン酸塩；ガム；架橋ポリマー、例えば、架橋ポリビニルピロリドンまたはクロスポビドン、例えば、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｗａｙｎｅ、ＮＪ）からのＰＯＬＹＰＬＡＳＤＯＮＥ  ＸＬ；架橋カルボキシメチルセルロースナトリウムまたはクロスカルメロースナトリウム、例えば、ＦＭＣからのＡＣ−ＤＩ−ＳＯＬ；および架橋カルボキシメチルセルロースカルシウム；ダイズ多糖類；ならびにグアーガムが含まれる。崩壊剤は、組成物の約０重量％から約１０重量％の量で存在し得る。一実施形態において、崩壊剤は、組成物の約０．１重量％から約５重量％の量で存在する。
【００９０】
薬学的に許容される結合剤の例には、限定されるものではないが、デンプン；セルロースおよびその誘導体、例えば、微結晶性セルロース、例えば、ＦＭＣ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ）からのＡＶＩＣＥＬ  ＰＨ、ヒドロキシプロピルセルロースヒドロキシルエチルセルロースおよびＤｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．（Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩ）からのヒドロキシルプロピルメチルセルロースＭＥＴＨＯＣＥＬ；スクロース；デキストロース；トウモロコシシロップ；多糖類；ならびにゼラチンが含まれる。結合剤は、組成物の約０重量％から約５０重量％、例えば、２〜２０重量％の量で存在し得る。
【００９１】
薬学的に許容される滑沢剤および薬学的に許容される流動促進剤の例には、限定されるものではないが、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、デンプン、タルク、リン酸三カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸カルシウム、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、ポリエチレングリコール、粉末状セルロースおよび微結晶性セルロースが含まれる。滑沢剤は、組成物の約０重量％から約１０重量％の量で存在し得る。一実施形態において、滑沢剤は、組成物の約０．１重量％から約１．５重量％の量で存在し得る。流動促進剤は、約０．１重量％から約１０重量％の量で存在し得る。
【００９２】
薬学的に許容される充填剤および薬学的に許容される希釈剤の例には、限定されるものではないが、粉砂糖、圧縮可能な糖、デキストレート類、デキストリン、デキストロース、ラクトース、マンニトール、微結晶性セルロース、粉末状セルロース、ソルビトール、スクロース、およびタルクが含まれる。充填剤および／または希釈剤は、例えば、組成物の約０重量％から約８０重量％の量で存在し得る。
【００９３】
一実施形態において、本発明はまた、それを必要とする患者における増殖性疾患の処置または予防のための医薬組成物または薬剤の調製における使用のための本発明の組合せに関する。
【００９４】
さらなる実施形態において、本発明は、それを必要とする対象における増殖性疾患の処置または予防のための医薬組成物または薬剤の調製のための、ＰＩ３Ｋ阻害化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（{４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル}−アミド）（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド、（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ−１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９、ＧＳＫ１１２０２１２、ＸＬ５１８、ＡＳ−７０１２５５、ＡＳ−７０１１７３、ＡＳ７０３０２６、ＲＤＥＡ４３６、Ｅ６２０１、ＲＯ４９８７６５５、ＪＴＰ−７４０５７、ＲＧ７１６７、もしくはＲＧ７４２０を含む群から選択される少なくとも１種のＭＥＫ阻害化合物またはその薬学的に許容される塩との使用に関する。６−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（化合物Ｂ）、または（Ｓ）−５−フルオロ−２−（２−フルオロ−４−（メチルチオ）フェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロポキシ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（化合物Ｃ）から選択されるＭＥＫ阻害剤が好ましい。
【００９５】
本発明によれば、本発明の組合せの組合せパートナーのそれぞれの治療有効量は、同時、または逐次にかつ任意の順序で投与されてもよく、成分は、個別にまたは配合剤として投与されてもよい。例えば、本発明によって増殖性疾患を処置する方法は、共同で治療有効量で、好ましくは相乗的に有効量で、例えば、本明細書に記載される量に対応して毎日または間欠的用量で、同時、または任意の順序で逐次に、（ｉ）遊離または薬学的に許容される塩の形態で第１の薬剤（ａ）を投与すること、および（ｉｉ）遊離または薬学的に許容される塩の形態で薬剤（ｂ）を投与することを含み得る。本発明の組合せの個々の組合せパートナーは、治療の過程の間に異なる時間で個別に、または分割もしくは単一組合せ形態で同時に投与されてもよい。さらに、「投与する」という用語は、インビボでそのままで組合せパートナーに変換する、組合せパートナーのプロドラッグの使用も包含する。したがって、本発明は、このような同時または交互処置（alternating treatment）のレジメンのすべてを包含すると理解されるべきであり、「投与する」という用語は、それに応じて解釈されるべきである。
【００９６】
本発明の組合せで用いられる組合せパートナーのそれぞれの有効用量は、用いられる特定の化合物または医薬組成物、投与の様式、処置される状態、および処置される状態の重症度に応じて変わり得る。したがって、本発明の組合せの投与レジメンは、投与の経路ならびに患者の腎および肝機能を含む様々な要因に従って選択される。通常の技術の臨床医または医師は、状態の進行を緩和する、それに対抗するまたはそれを停止させるために必要な単一治療剤の有効量を容易に決定し、処方することができる。
【００９７】
毒性なしに効力をもたらす、本発明の組合せの組合せパートナー（ａ）および（ｂ）の最適比、個々のおよび組み合せた用量、ならびに濃度は、部位を標的とする治療剤の利用能の動力学に基づいており、当業者に既知の方法を用いて決定される。
【００９８】
組合せパートナーのそれぞれの有効用量は、組合せ中の化合物（単数または複数）の一方の、他方の化合物（単数または複数）と比較してより頻繁な投与を必要とし得る。したがって、適切な投与を可能にするために、包装された医薬製品は、化合物の組合せを含有する１つまたは複数の剤形、および化合物の組合せの一方を含有するが、組合せの他方の化合物（単数または複数）を含有しない１つまたは複数の剤形を含み得る。
【００９９】
本発明の組合せで用いられる組合せパートナーが、単一の薬剤として市販されている形態で適用される場合、それらの用量および投与の様式は、本明細書で別に言及がない場合、それぞれの市販薬剤の添付文書で提供される情報に従うことができる。
【０１００】
ＰＩ３Ｋ阻害化合物（化合物Ａ）は、適切な患者に、単回または分割投与で１日当たり体重１ｋｇ当たり約０．０５から約５０ｍｇ、好ましくは約０．１〜２５ｍｇ／ｋｇ／日、より好ましくは約０．５〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の有効用量で、単回または分割投与で毎日投与され得る。７０ｋｇのヒトの場合、これは、合計で１日当たり約３５〜７００ｍｇの好ましい用量範囲になる。
【０１０１】
ＭＥＫ阻害化合物（化合物Ｂ）は、適切な対象に、単回または分割投与で１日当たり体重１ｋｇ当たり約０．００１から約１００ｍｇ、好ましくは約１〜３５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の有効用量で、単回または分割投与で毎日投与され得る。７０ｋｇのヒトの場合、これは、合計で約０．０５から〜７ｇ／日、好ましくは約０．０５から約２．５ｇ／日の好ましい用量範囲になる。
【０１０２】
ＭＥＫ阻害化合物（化合物Ｃ）は、適切な対象に、単回または分割投与で１日当たり体重１ｋｇ当たり約０．００１から約１００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ／日から約３５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の有効用量で、単回または分割投与で毎日投与され得る。７０ｋｇのヒトの場合、これは、合計で約０．０７から〜２．４５ｇ／日、好ましくは約０．０５から約１．０ｇ／日の好ましい用量範囲になる。
【０１０３】
増殖性疾患の処置のためのそれぞれの組合せパートナーの最適用量は、既知の方法を用いてそれぞれの個体について実験的に決定することができ、限定されるものではないが、疾患の進行度；個体の年齢、体重、一般健康状態、性別および食事；投与の時間および経路；個体が取っている他の医薬品を含めて、様々な要因に依存する。最適用量は、当技術分野で周知である日常的試験および手順を用いて確立され得る。
【０１０４】
単一剤形を作製するために担体材料と組み合わせてもよいそれぞれの組合せパートナーの量は、処置される個体および特定の投与の様式に依存して変わるであろう。一部の実施形態において、本明細書で記載されるとおりの薬剤の組合せを含有する単位剤形は、組合せのそれぞれの薬剤を、その薬剤が単独で投与される場合に通常投与される量で含有するであろう。
【０１０５】
投薬の頻度は、使用される化合物および処置または予防される特定の状態に依存して変わり得る。一般に、有効治療を提供するために十分である最小用量の使用が好ましい。患者は一般に、処置または予防される状態に適したアッセイを用いて、治療有効性についてモニターされ得、これは、当業者によく知られている。
【０１０６】
本発明は、増殖性疾患を有する対象を処置する方法であって、増殖性疾患に対して共同で治療に有効である量で、本発明の組合せを前記対象に投与されることを含む方法に関する。特に、本発明の組合せで処置される増殖性疾患は、メラノーマ、大腸がんまたは肺がん、特に非小細胞肺がんである。さらに、処置は、手術または放射線治療を含み得る。
【０１０７】
本発明はさらに、増殖性疾患、特にがんの処置における使用のための本発明の組合せに関する。
【０１０８】
本発明はさらに、それを必要とする対象における増殖性疾患の進行の遅延または処置における使用のための、治療剤として本発明の組合せを、その同時、個別または逐次投与のための使用説明書と一緒に含む、市販用パッケージを提供する。
【０１０９】
以下の実施例は、上に記載された本発明を例証するが；しかしながら、それらは、本発明の範囲を限定することを決して意図するものではない。本発明の医薬的な組合せの有益な効果は、当業者にそのようなものとして知られた他の試験モデルによっても決定することができる。
【実施例１】
【０１１０】
材料および方法
大腸がん細胞株ＳＷ１４１７、ＣＯＬＯ２０５、ＬＳ４１１Ｎ、ＨＴ−２９、ＲＫＯ、ＯＵＭＳ−２３、ＳＷ６２０、ＬｏＶｏ、ＳＷ４８０、ＳＷ８３７、ＣＯＬＯ−６７８、ＬＳ１２３−ＮＣＩ−Ｈ７４７、ＨＣＴ−１５、ＨＣＴ１１６、ＤＬＤ−１、Ｔ８４、ＳＷ９４８、ＬＳ１８０、ＧＰ２ｄ、ＨｕＴｕ８０、ＣＷ−２、ＳＷ４８、ＮＣＩ−Ｈ７１６、Ｃ２Ｂｂｅｌ、ＳＮＵ−Ｃ１およびＫＭ１２は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から得て、供給者により指定されたとおりにそれぞれの培地に維持する。これらの大腸がん細胞株は、以下の変異状態を有する：
【０１１１】
【表１】
2014525454.tif 000005
【０１１２】
変異（ｍｕｔ）および野性型（ｗｔ）は、既知の機能的に関連する変異を示す。Ｍｕｔ§は、分析から発現の欠如に基づく。Ｍｕｔ＃は、未知の機能的重要性を有する変異を示す。Ｎｄは、データなしを示す。＊は、データが、中央値および平均値の計算から除かれた、試験の最後に行われた繰返し実験を示す。＊＊は、いくらかの散乱を示す重複データ点および用量応答を示す。
【０１１３】
組合せ効果の評価のために、細胞を５００個細胞／ウェルで３８４−ウェルプレート中に播種し、一晩インキュベートした。化合物マスタープレートの内容物を１：２００（１μＬの化合物溶液対２００μＬの、１０％ウシ胎仔血清を含有する細胞ＲＰＭＩ−１６０培地）で前希釈し、その後、この前希釈液の５μＬを２０μＬの細胞培地が入っている細胞プレートに移して、目標最終化合物濃度および０．０９％のビヒクル（ＤＭＳＯ）濃度を得る。
【０１１４】
細胞生存率に対する単剤およびそれらのチェッカーボード状の組合せの効果は、試薬２５μＬ／ウェルおよび１状態当たりｎ＝２の複製プレートを用いて細胞ＡＴＰレベルの定量化（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ、Ｐｒｏｍｅｇａ）によって、３７℃／５％ＣＯ２でインキュベーション７２時間後に評価する。化合物添加の時間における細胞の数／生存率を同様に評価し、特定の細胞株の個体群の倍加時間を推定するために用いた。単剤ＩＣ５０を、標準４パラメータ曲線フィッティング（ＳＬＦｉｔ、モデル２０５）を用いて計算する。化合物の組合せ間の潜在的な相乗的相互作用は、Ｌｏｅｗｅ相加性モデルに従う過剰阻害２次元マトリックス（Excess Inhibition 2D matrix）を用いて評価し、相乗効果スコアとして報告する。さらに、化合物の組合せは、５０％阻害においてアイソボログラムグラフから誘導した組合せ指数分析によって評価し、アイソボログラムで最低値に対応する最良組合せ指数（ＣＩ）として報告する。相乗効果計算のすべては、ＣＨＡＬＩＣＥソフトウェア（Ｌｅｈａｒら、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２００９年７月）、２７（４）：６９：６６）を用いて行う。組合せ指数および相乗効果スコアの値の解釈を、以下に提供する：
【０１１５】
【表２】
2014525454.tif 000006
【０１１６】
結果グループの多重対比較は、一元配置ＡＮＯＶＡ（Neuman-Keuls法）によりＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５  （GraphPad Software Inc.）を用いて行われた。
結果
この試験について、大腸細胞株のすべてにおける主要結果の要約を以下のとおり示す：
【０１１７】
【表３】
2014525454.tif 000007
【０１１８】
ＰＩ３Ｋ阻害化合物ＡとＭＥＫ阻害化合物Ｂとは、２７の試験した大腸がん細胞株のうちから１７で相乗的相互作用を示す。平均して、ＰＩＫ３ＣＡ変異を有する細胞株における最高の相乗効果度。ＰＴＥＮに対して無効な細胞株を除いて、主要なＭＡＰキナーゼ（ＢＲＡＦ／ＫＲＡＳ）またはＰＩ３Ｋ（ＰＩＫ３ＣＡ／ＰＴＥＮ）経路記録の変異状態は、実測された相乗効果スコアに対して統計的に有意な影響を示さなかった。要約すると、これらの結果は、化合物Ａと化合物Ｂについての相乗的相互作用を、野性型またはＢＲＡＦ、ＫＲＡＳおよびＰＩＫ３ＣＡに対して変異した大腸細胞株において示唆するが、ＰＴＥＮに対して無効なものにおいては示唆しない。
【実施例２】
【０１１９】
材料および方法
この試験に用いた細胞株は、非小細胞肺がん細胞株ＮＣＩ−Ｈ２３およびＮＣＩ−Ｈ２１２２（これらは、ＫＲＡＳとＬＫＢ１変異の両方を保有する）、ＮＣＩ−Ｈ３５８（これは、ＫＲＡＳ変異を保有する）、ＮＣＩ−Ｈ４６０（これは、ＫＲＡＳ、ＬＫＢ１およびＰＩ３ＫＣＡ変異を保有する）、および大腸がん細胞株ＳＷ４８０（これは、ＫＲＡＳ変異を保有する）、ＨＣＴ−１５（これは、ＫＲＡＳ  ＰＩＫ３ＣＡ変異を保有する）を含めて、アメリカンタイプセルコレクションから購入した。すべての細胞株を、３７℃で５％ＣＯ２インキュベータ中、１０％ウシ胎仔血清、２ｍｍｏｌ／Ｌグルタミンおよび１％ピルビン酸ナトリウムで補充したＲＰＭＩ  １６４０（ＡＴＣＣ＃３０−２００１）培地で培養した。
【０１２０】
細胞増殖アッセイ：細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｇｍｅｇａ＃Ｇ７５７３）を用いて、製造者のプロトコルに従って細胞ＡＴＰ含量を測定することによって決定した。簡単には、５００〜９００個細胞／ウェルを、３０μｌ／ウェル成長培地を有して四通りまたは二通りに透明底３８４−ウェル黒色プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ＃７８１０９１）上に播種し、細胞を一晩付着させ、続いて、様々な濃度の薬剤または薬剤組合せ（１０μｌ／ウェル）で７２時間インキュベートし、薬剤処理の最後に、各ウェルに３０μｌ／ウェルのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬を添加し、細胞を溶解させ、発光シグナルをＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーに記録した。
【０１２１】
組合せの効果を計算する方法：化合物Ｂと化合物Ａの組合せ効果を先入観なしに評価し、すべての可能な濃度で相乗的効果を同定するために、組合せ試験を「用量マトリックス（dose matrix）」で行い、組合せは、すべての組合せアッセイにおいて、連続希釈した化合物Ｂおよび化合物Ａの単剤用量のすべての可能な順列で試験し、化合物は同時に適用した。この「用量マトリックス」は、以下のとおりである：化合物Ｂを、１１用量の２×連続希釈（最高用量は５μＭ、低い用量は約５ｎＭである）下に置き、化合物Ａを、９用量の２×連続希釈（高い用量は５μＭ、低い用量は約２０ｎＭである）下に置く。単剤の用量応答曲線、ＩＣ５０、ＩＣ９０、および相乗効果は、すべてＣｈａｌｉｃｅソフトウェア（ＣｏｍｂｉｎａｔｏＲｘ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＭＡ）を用いて分析する。相乗効果は、薬剤それ自体の用量相加性基準モデル（drug-with-itself dose-additive reference model）に対して、組合せの応答をその単剤のものと比較することによって計算した。用量相加性からのずれは、アイソボログラム上で視覚的に、または組合せ指数によって数値的に評価することができる。相加効果と比べて超過する阻害を、全用量マトリックス図としてプロットし、どこで相乗効果が起こるかを記録することもできる。組合せ効果の全体強度を定量化するために、体積スコアＶＨＳＡ＝ΣＸ，ＹＩｎｆＸＩｎｆＹ（Ｉｄａｔａ−ＩＨＳＡ）もデータと単剤最高表面の間で計算し、単剤の希釈係数ｆＸ、ｆＹに対して正規化する。
【０１２２】
細胞増殖アッセイ結果：要約すると、相乗効果は、調べた６つの細胞株すべてに認められ、２．０９から５．４９の範囲の相乗効果スコアを生じ、相乗的領域は広く、典型的には化合物Ａについて１５０ｎＭ超の用量で、および化合物Ｂについて８０ｎＭ以上の用量で認められる。これらの結果は、ＫＲＡＳ変異を保有するＣＲＣおよびＮＳＣＬＣ細胞株において、化合物Ｂと化合物Ａについて潜在的な相乗的相互作用を示唆する。
【０１２３】
【表４】
2014525454.tif 000008
【実施例３】
【０１２４】
材料および方法
細胞株試験：上に定義したとおりの、ＰＩ３Ｋ阻害化合物ＡとＭＥＫ阻害化合物Ｂの組合せを、３つの組織型から３８個の細胞株にわたって試験した（膵臓７個、肺１０個、およびメラノーマ２１個）。各組合せを、以下のとおりに構築した部分的に満たした「用量マトリックス」において試験した：各単剤を最大濃度（化合物Ａについて１１μＭまたは化合物Ｂについて２．７μＭ）で増殖培地中に分注し、３×で連続希釈して、濃度において７２９の因子に及ぶ７点シリーズを作製する。次いで、化合物を第２濃度乃至第６濃度のすべての対で組み合わせ、この用量マトリックスを最高および最低濃度を互いに組み合せることによっても拡張した。比較的高い分解能試験も、一部のＮＳＣＬＣ細胞株で実施し、化合物Ａの９つの用量および化合物Ｂの１１の用量を試験し、それぞれの場合に５μＭで開始して２×希釈を用いた。細胞株のすべてを、３７℃で５％ＣＯ２インキュベータ中、１０％ウシ胎仔血清、２ｍｍｏｌ／Ｌグルタミンおよび１％ピルビン酸ナトリウムで補充したＲＰＭＩ  １６４０（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｎｏ．３０−２００１）培地で培養した。それぞれのこのような用量マトリックスを個別のアッセイプレート上で、三通りで試験した。細胞毒性処理を同定するために、本発明者らは、薬剤処理の開始時に「０日目」細胞個体群も決定した。
【０１２５】
組合せ効果の測定：各処理における細胞応答を、単純な阻害Ｉ＝１−Ｔ／Ｖ（ここで、Ｔは、処理されたウェルの生応答であり、Ｖは、プレート上の同型ウェル間の未処置レベル中央値である）を用いて測定した。細胞毒性測定値は、「増殖阻害」ＧＩ＝１−（Ｔ−Ｖ０）／［Ｔ＜Ｖ０？Ｖ０：（Ｖ−Ｖ０）］（ここで、Ｖ０は、１日目生レベル中央値であり、［Ｃ？Ａ：Ｂ］という表記法は、条件Ｃが真である場合、Ａを、それが偽である場合、Ｂを生じる）を用いて測定した。ＧＩ＝０、１、および２は、それぞれ、有効でない、細胞増殖抑制性、および完全に細胞毒性の処理に相当する。Ｃｈａｌｉｃｅ分析ソフトウェア（ＣｏｍｂｉｎａｔｏＲｘ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＭＡ）を用いて、薬剤応答を用量でシグモイド関数に当てはめ、高用量での最大効果Ａｍａｘ、遷移的な濃度ＥＣ５０、およびその遷移の急勾配性のヒル係数でパラメータ化し、ＩＣ５０の点を横切る５０％阻害に補間した。組合せ効果は、用量マトリックスにおける最大阻害およびＧＩ値を用いて、および用量相加性Ｌｏｅｗｅモデルによって、組合せの応答を、その単剤のものに対して比較することによって表した。「相乗効果スコア」ＳＬｏｅｗｅ＝ΣＸ，ＹＩｎｆＸＩｎｆＹｍａｘ（０，Ｉｄａｔａ）ｍａｘ（０，Ｉｄａｔａ−ＩＬｏｅｗｅ）を、組み合わせた濃度Ｘ、Ｙのすべてにわたって、データＩｄａｔａと用量−相加性表面（dose-additive surface）ＩＬｏｅｗｅとの差から計算し、測定された阻害および単剤希釈係数ｆＸ、ｆＹによって重み付けした。相乗効果に加えて、５０％阻害における用量シフト（dose shifting）は、それぞれの化合物のＩＣ５０値と比較して、組合せ指数ＣＩ５０＝ＣＸ／ＩＣ５０Ｘ＋ＣＹ／ＩＣ５０Ｙ（ここで、ＣＸ、ＣＹは、組合せにおいて５０％阻害をもたらす単剤の最低濃度である）を用いて決定した。
【０１２６】
細胞増殖アッセイ結果：試験細胞株にわたって得られた組合せ効果を、各細胞株についての系統および変異状態とともに、以下の表に示す（ｍｕｔ＝既知のドライバー損傷（driver lesion）、ｍｕｔ？＝未知の損傷、ｗｔ＝野性型）。
【０１２７】
【表５】
2014525454.tif 000009
2014525454.tif 000010
【０１２８】
それらは、定義によりゼロの相乗効果を有すべきなので、薬剤それ自体の用量マトリックスのスコア（対照としての実験）は、実験誤差と一致するレベルを示す。薬剤それ自体の相乗効果スコアの標準偏差は、約０．４であったので、ＳＬｏｅｗｅ＞１を有する組合せは、有意に相乗的とみなすことができる。ＣＩ５０＝０．３の用量シフトを有する相乗的組合せは、（用量マトリックスが３×希釈を有するため）本発明のデータにおける微小な変動から容易に生じることができ、したがって、本発明者らは、ＣＩ５０＜０．３が有用な用量節約を示唆するように単に考えるだけである。最後に、有用な組合せは、組合せにおいて実質的な阻害を有することが必要であり、したがって、本発明者らは、Ｉｍａｘ＞０．８を必要とし、ＣＩｍａｘ＞１．５が特に有望であると考える。
【０１２９】
膵臓細胞株：膵臓細胞株において、それらのほとんどすべては、ＫＲＡＳ変異であり、化合物Ａ＋化合物Ｂの組合せは、一様に相乗的であり、７例のうち４例で有用な用量シフトを示した。相乗効果の最良の例は、ＨＰＡＣであり、これは、組合せで５倍の用量減少を示し（ＣＩ５０＝０．２）、最高濃度において細胞分裂停止を大きく超える（ＧＩｍａｘ＞１．５）強い相乗効果を示す（図１）。驚くべきことに、ＫＲＡＳ野性型株の一つであるＢｘＰＣ−３において、相乗効果パターンは、ＨＰＡＣで見られるものと非常に類似している。最弱の相乗効果は、ＰＡＮＣ−１に見出され、これは、用量マトリックス全体にわたって、決して５０％を超えて阻害されない（図２）。
【０１３０】
ＮＳＣＬＣ肺株：非小細胞肺がん株（これらのすべては、ＫＲＡＳ変異である）において、やはり相乗効果は一様に強く、十分な阻害レベルを有した例の大部分で、約５×用量シフト（ＣＩ５０約０．２）であった。（図１参照）。最良の組合せ効果の多くは、ＮＳＣＬＣ応答において実験の不自然な結果を示したので、個別の試験からの高分解能データも、分析に含め（図２参照）、これにより、すべての例で、相乗効果決定が確認および強化された。
【０１３１】
メラノーマ細胞株：メラノーマ細胞株は、それらの遺伝子的背景に依存して様々な相互作用様式を示した（図３）。相乗効果は概して、活性化ＮＲＡＳ変異を有するものについて、およびＢＡＦ変異について見出された。しかしながら、これらの背景は、単剤としての化合物Ａに対して弱い応答を示し、相乗効果は、膵がんおよび肺がんのＫＲＡＳ変異に見られたものよりも非常により低いレベルであり、通常は非常に高い組合せ薬剤濃度に限られた。強い相乗効果が、ＣＯＬＯ７９２およびＭｅＷｏ（両方ともＲａｓ、ＢＲＡＦ、およびＰＴＥＮにおいて野生型である）に見られたが、それらの非常に異なる単剤感受性のために明確に異なる相互作用様式であった。いずれの単剤に対しても耐性であったＰＴＥＮ変異について、相乗効果はまったく不在であった。最後に、相違する細胞株ＬＯＸ  ＩＭＶＩは、他のＢＲＡＦ変異に対して非常に異なる単剤応答を示し、まさに最高の組合せ濃度を除いて、相互作用は、よりＰＴＥＮ変異組合せのようにみえる。
【０１３２】
全般的なこれらの結果は、それぞれの細胞株の遺伝子的背景に依存する様々な相互作用があることを示す。しかしながら、特に、ＮＳＣＬＣおよび膵臓株のＫＲＡＳ変異は、化合物Ａ＋化合物Ｂの組合せに対する応答において有用な用量シフトおよび現れたいくつかの細胞毒性とともに良好な相乗効果を示す傾向がある。
【図１】
2014525454.tif 000011
【図２】
2014525454.tif 000012
【国際調査報告】
2014525454.tif 000013
2014525454.tif 000014
2014525454.tif 000015
2014525454.tif 000016
2014525454.tif 000017