(57)【要約】  本発明は、アルツハイマー病に罹患している患者の疾患進行を評価する目的および治療レジメンの治療有効性を決定する目的のための客観的尺度として、患者の血液中の特定のサイトカイン濃度を使用することに関する。アルツハイマー病を治療する方法および治療有効性を観察する方法を提供する。
2014513284.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療の必要のある被験者のアルツハイマー病を治療する方法であって、
（ａ）前記被験者の血液中のサイトカイン量を決定し、それによって前記サイトカイン濃度のベースライン値を得るステップと、
（ｂ）第１の期間の間に、アルツハイマー病を治療する目的で前記被験者に脳保護治療薬を投与するステップと、
（ｃ）前記被験者の血液中の前記サイトカイン量を決定し、それによって前記サイトカイン濃度の最初の中間値を得るステップと、
（ｄ）ステップ（ｃ）から得た前記中間値とステップ（ａ）から得た前記ベースライン値とを比較するステップと、
（ｅ）ステップ（ｄ）が前記ベースライン値から前記最初の中間値まで増加を示さない場合、前記脳保護治療薬を投与する用量または頻度を増加するか、または、ステップ（ｄ）が前記ベースライン値から前記最初の中間値まで増加を示す場合、前記脳保護治療薬を投与する用量または頻度を維持するステップと、
の前記逐次的ステップを含む方法。
【請求項２】
ステップ（ｂ）から（ｄ）を少なくとも一回さらに繰り返し、各繰り返しにおいて、最新の中間値と２番目に新しい中間値とを比較し、ステップ（ｅ）と同じ方法で前記治療薬の今後の投与を決定する請求項１に記載の方法。
【請求項３】
請求項１または２に記載の方法であって、いずれの繰り返しの間も、ステップ（ｄ）が１つの中間値からその次の中間値まで全く増加を示さず、前記脳保護治療薬を投与する用量または頻度を増加し、
（ｆ）前記治療薬を前記被験者に投与する追加期間の後で前記被験者の血液中の前記サイトカイン濃度を決定し、それによって前記サイトカイン濃度の追加の中間値を得るステップと、
（ｇ）前記追加の中間値とその前の中間値とを比較するステップと、
（ｈ）ステップ（ｇ）が前記前の中間値から前記追加の中間値まで増加を示さない場合、前記治療薬のさらなる投与を中止するか、または、ステップ（ｇ）が前記前の中間値から前記追加の中間値まで増加を示す場合、前記脳保護治療薬を投与する用量または頻度を維持するステップと、
をさらに含む方法。
【請求項４】
前記第１の期間が、３か月、６か月、９か月、１２か月または１８か月である請求項１に記載の方法。
【請求項５】
第２またはその後の期間が、３か月、６か月、９か月、１２か月または１８か月である請求項１または３に記載の方法。
【請求項６】
前記サイトカインが、ＩＬ−１Ａ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１３、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＥＧＦ、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１７、ＭＩＰ−１Ａ、ＭＩＰ−１ＢまたはＩＰ−１０である請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記治療薬が静注用免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）組成物である請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ＩＶＩＧ組成物を皮下に投与する請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ＩＶＩＧ組成物を静脈内に投与する請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＩＶＩＧ組成物を、１か月につき前記被験者の体重１ｋｇ当たり約０．２から２グラムまで投与する請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＩＶＩＧ組成物を週に一度、週に二度、月に一度または月に二度投与する請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＩＶＩＧ組成物を、月に二度、前記被験者の体重１ｋｇ当たり約０．４グラム投与する請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
ステップ（ａ）、（ｃ）または（ｆ）をイムノアッセイによって実施する請求項１または３に記載の方法。
【請求項１４】
ステップ（ａ）、（ｃ）または（ｆ）を質量分析法によって実施する請求項１または３に記載の方法。
【請求項１５】
アルツハイマー病の治療を意図した治療の有効性を評価する方法であって、
（ａ）アルツハイマー病に罹患しているが前記治療を受けてない前記被験者の血液中の前記サイトカインの平均濃度を決定し、それによって前記サイトカインの非治療濃度を得るステップと、
（ｂ）アルツハイマー病に罹患していて前記治療を受けている前記被験者の血液中の前記サイトカインの前記平均濃度を決定し、それによって前記サイトカインの治療濃度を得るステップと、
（ｃ）前記治療濃度と前記非治療濃度とを比較し、それによって前記治療の前記有効性を決定し、
前記治療濃度が前記非治療濃度より高い場合、前記治療は効果的であるとみなし、前記治療濃度が前記非治療濃度と同等、または前記非治療濃度より低い場合、前記治療は効果がないとみなすステップと、
を含む、治療の有効性を評価する方法。
【請求項１６】
前記サイトカインが、ＩＬ−１Ａ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１３、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＥＧＦ、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１７、ＭＩＰ−１Ａ、ＭＩＰ−１ＢまたはＩＰ−１０である請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記治療が静注用免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）組成物の投与である請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＩＶＩＧ組成物を皮下に投与する請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＩＶＩＧ組成物を静脈内に投与する請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＩＶＩＧ組成物を、１か月につき前記被験者の体重１ｋｇ当たり約０．２から２グラムまで投与する請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＩＶＩＧ組成物を、週に一度週、週に二度、月に一度または月に二度投与する請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＩＶＩＧ組成物を月に二度、前記被験者の体重１ｋｇ当たり約０．４グラム投与する請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
ステップ（ａ）または（ｂ）の前記サイトカイン濃度を、約３か月、６か月、９か月、１２か月または１８か月の期間にわたり決定する請求項１５に記載の方法。
【請求項２４】
ステップ（ａ）または（ｂ）をイムノアッセイによって実施する請求項１５に記載の方法。
【請求項２５】
ステップ（ａ）または（ｂ）を質量分析法によって実施する請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許仮出願第６１／４７０，８１９号（２０１１年４月１日出願）の優先権を主張し、その内容の全体があらゆる目的で本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病は、認知症の最も一般的な型であり、５３０万人もの米国人が患っている。この疾患は、一般に、脳のβ−アミロイド斑の蓄積によって引き起こされ、その結果、神経細胞死およびそれに伴う神経伝達物質濃度の減少をもたらすと考えられている。記憶、認知、推理および判断障害が、情動安定性の低下および問題行動の発生とともに生じる。この疾患は進行性であり、重大な精神機能低下をもたらし、最終的に死に至る。
【０００３】
アルツハイマー病のための公知の治療法は全く存在しない。患者の介護は、主としてこの疾患症状の管理に焦点を合わせている。アルツハイマー患者の疾患進行を、脳組織容積の減少（脳室容積の拡大）または経時的に低下し続ける認知能力に関して観察することができる。磁気共鳴画像（ＭＲＩ）などの技術によって生み出されたこれらの画像に基づく観察技術は、脳状態の任意の変化の管理および定量化を容易にするのに有利である。β−アミロイドに対する抗体はヒト免疫グロブリン製剤（例えば、静注用免疫グロブリンまたはＩＶＩＧ）に存在し、β−アミロイドの神経毒性効果を阻害することができるという最近の発見は、アルツハイマー患者の臨床試験につながるものである。疾患安定化および中程度の認知能力改善が示された。
【０００４】
２００６年には、世界中に２６６０万人のアルツハイマー病患者がいた。２０５０年までに、地球規模で８５人に１人が診断されると予測される。この疾患の恐ろしい性質、大きな患者集団、および介護者のすさまじい負担を考えると、新規で、より効果的な治療薬および治療法の差し迫った必要性が存在する。本発明は、この必要性および他の関連する必要性を満たす改善を提供する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、アルツハイマー病の脳保護治療（ｂｒａｉｎ  ｐｒｅｓｅｒｖｉｎｇ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）の効果を観察し、さらなる治療計画を組み立てる際の指標とするための、患者の血液中の特定のサイトカイン濃度の変化の使用に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一態様において、本発明は、治療の必要のある被験者にアルツハイマー病の治療法を提供する。この方法は、これらの逐次的ステップ、すなわち、（ａ）被験者の血液中のサイトカイン量を決定し、それによってサイトカイン濃度のベースライン値を得るステップと、（ｂ）第１の期間の間にアルツハイマー病を治療する目的で被験者に脳保護治療薬を投与するステップと、（ｃ）被験者の血液中のサイトカイン量を決定し、それによってサイトカイン濃度の最初の中間値を得るステップと、（ｄ）ステップ（ｃ）から得た中間値とステップ（ａ）から得たベースライン値とを比較するステップと、および（ｅ）ステップ（ｄ）がベースライン値から最初の中間値まで増加を示さない場合、脳保護治療薬を投与する用量または頻度を増加するか、またはステップ（ｄ）がベースライン値から最初の中間値まで増加を示す場合、脳保護治療薬を投与する用量または頻度を維持するステップと、を含む。典型的に、ステップ（ａ）またはサイトカイン量の定量化と同等のステップを、被験者から採取した血液サンプルのサイトカイン濃度を決定することにより実施する。このようなサンプルは全血、血清または血漿サンプルであってもよい。
【０００７】
場合によっては、ステップ（ｂ）から（ｄ）を少なくとも１回さらに繰り返し、各繰り返しにおいて、最新の中間値を２番目に新しい中間値と比較し、ステップ（ｅ）と同じ方法で治療薬の今後の投与を決定する。場合によっては、任意の繰り返しの間のステップ（ｄ）が１つの中間値からその次の中間値まで増加を示さず、脳保護治療薬を投与する用量または頻度を増加する場合、この方法はさらに次のステップ、すなわち、（ｆ）被験者に治療薬を追加投与する期間の後、被験者の血液中のサイトカイン濃度を決定し、それによってサイトカイン濃度の追加の中間値を得るステップと、（ｇ）追加の中間値とその前の中間値とを比較するステップと、（ｈ）ステップ（ｇ）が前の中間値から追加の中間値まで増加を示さない場合、治療薬のさらなる投与を中止するか、またはステップ（ｇ）が前の中間値から追加の中間値まで増加を示す場合、脳保護治療薬を投与する用量または頻度を維持するステップと、を含む。
【０００８】
場合によっては、第１の期間は、３か月、６か月、９か月、１２か月または１８か月である。他の場合では、第２の期間またはその次の期間は、３か月、６か月、９か月、１２か月または１８か月である。場合によっては、クレームした方法で観察するサイトカインはＩＬ−１Ａ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１３、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＥＧＦ、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１７、ＭＩＰ−１Ａ、ＭＩＰ−１ＢまたはＩＰ−１０であるが、同一期間に２つ以上を観察してもよい。
【０００９】
場合によっては、治療薬は静注用免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）組成物であり、１か月につき被験者の体重１ｋｇ当たり約０．２から２グラムまで、週に一度、週に二度、月に一度または月に二度の頻度でなど、異なるスケジュールに従って投与してもよい。特定の一実施例では、ＩＶＩＧ組成物を、月に二度、被験者の体重１ｋｇ当たり約０．４グラム投与する。さらに、ＩＶＩＧ組成物を、皮下、静脈内、および鼻腔内などの異なる経路で投与してもよい。
【００１０】
上記の方法の一部の実施形態では、ステップ（ａ）、（ｃ）または（ｆ）などの、サイトカイン濃度を決定する任意のステップを免疫学的アッセイとして実施してもよく、マイクロアレイタンパク質チップなどのマイクロ流体デバイスの使用、ゲル電気泳動法および特異抗体を使用するウエスタンブロット解析法による検出、ならびにＥＬＩＳＡなどの他の抗体に基づくアッセイが含まれていてもよい。さらに、サイトカイン濃度を決定するステップを、質量解析法に基づく方法の任意の１つによって実施してもよい。
【００１１】
別の態様において、本発明は、アルツハイマー病の治療を意図した治療の有効性を評価する方法を提供する。本方法は、これらのステップ、すなわち、（ａ）アルツハイマー病に罹患しているが治療を受けていない被験者の血液中のサイトカインの平均濃度を決定し、それによってサイトカインの非治療濃度を得るステップと、（ｂ）アルツハイマー病に罹患していて治療を受けている被験者の血液中のサイトカインの平均濃度を決定し、それによってサイトカインの治療濃度を得るステップと、および（ｃ）治療濃度と非治療濃度とを比較し、それによって治療の有効性を決定するステップであって、治療濃度が非治療濃度より高い場合、治療は効果的であるとみなし、治療濃度が非治療濃度と同等または非治療濃度より低い場合、治療は効果がないとみなすステップ、とを含む。典型的に、ステップ（ａ）および（ｂ）またはサイトカイン量を定量化する任意の同等のステップを、アルツハイマー患者から採取した血液サンプル中のサイトカインの平均濃度を決定することにより実施する。このようなサンプルは全血、血清または血漿サンプルであってもよい。
【００１２】
場合によっては、サイトカインは、ＩＬ−１Ａ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１３、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＥＧＦ、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１７、ＭＩＰ−１Ａ、ＭＩＰ−１ＢまたはＩＰ−１０であるが、同時に２つ以上を観察してもよい。場合によっては、治療は静注用免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）組成物の投与であり、１か月につき被験者の体重１ｋｇ当たり約０．２から２グラムまでなど、異なるスケジュールに従って投与してもよい。場合によっては、投与頻度は、週に一度、週に二度、月に一度または月に二度であってもよい。特定の一実施例では、ＩＶＩＧ組成物を、月に二度、被験者の体重１ｋｇ当たり約０．４グラム投与する。場合によっては、約３か月、６か月、９か月、１２か月または１８か月のうちの１期間にわたり、ステップ（ａ）または（ｂ）のサイトカイン濃度を決定する。さらに、ＩＶＩＧ組成物を皮下、静脈内および鼻腔内などの異なる経路で投与してもよい。
【００１３】
場合によっては、ステップ（ａ）または（ｂ）などのサイトカイン濃度を決定する任意のステップを免疫学的アッセイとして実施してもよく、マイクロアレイタンパク質チップなどのマイクロ流体デバイスの使用、ゲル電気泳動法および特異抗体を使用するウエスタンブロット解析法による検出、およびＥＬＩＳＡなどの他の抗体に基づくアッセイが含まれていてもよい。さらに、サイトカイン濃度を決定するステップを、質量解析法に基づく方法の任意の１つによって実施してもよい。
【００１４】
抗アルツハイマー治療の治療効果を評価するための上記の方法では、複数の被験者（例えば、少なくとも５個体を含む被験者）を使用することがしばしばあるが、このような方法を一個体にも実施して、任意の特定の治療手段または治療スケジュールがその個体に効果的かどうかを決定してもよい。より具体的には、被験者のアルツハイマー病を治療することを意図した治療の有効性を決定する方法は、これらのステップ、すなわち、（ａ）アルツハイマー病に罹患しているが治療を受けたことがない被験者から採取した血液サンプル中のサイトカイン濃度を決定し、それによってサイトカインのベースライン濃度を得るステップと、（ｂ）ある期間治療を受けた後に被験者から採取した血液サンプル中のサイトカイン濃度を決定し、それによってサイトカインの治療濃度を得るステップと、および（ｃ）治療濃度とベースライン濃度とを比較し、それによって被験者における治療の有効性を決定するステップと、を含む。治療濃度がベースライン濃度より高い期間において、治療は被験者に効果的であるとみなし、治療濃度がベースライン濃度と同等またはベースライン濃度より低い期間において、治療は被験者に効果がないとみなす。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−１Ａ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１３、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＥＧＦ、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１７、ＭＩＰ−１Ａ、ＭＩＰ−１ＢまたはＩＰ−１０である。一部の実施形態では、治療は静注用免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）組成物の投与であり、皮下および静脈内を含む様々な手段で投与してもよい。一部の実施形態では、ＩＶＩＧ組成物を、１か月につき被験者の体重１ｋｇ当たり約０．２から２グラムまで投与する。例えば、ＩＶＩＧ組成物を週に一度、週に二度、月に一度または月に二度投与する。特定の一実施例では、ＩＶＩＧ組成物を、月に二度、被験者の体重１ｋｇ当たり約０．４グラム投与する。一部の実施形態では、ステップ（ｂ）の期間は、約３か月、６か月、９か月、１２か月または１８か月である。患者を治療している医師は、治療効果を決定し次第、治療の効果が認められる場合には治療薬を投与する用量または頻度を維持するか、または治療の効果が認められない場合には治療薬の用量または頻度を増加して投与するかのどちらか一方をなすべきである。投与の増加／有効性の評価を少なくとも１回、場合により２回以上追加した後、上記の有効性評価方法の任意の１つによって決定したように治療の効果がないままである場合、医師は、患者の治療を中止すべきである。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】６か月間ＩＶＩＧ治療を受けた後のＡＤ患者の血漿サイトカインの変化間の相関。
【図２】６か月間ＩＶＩＧ治療を受けた後のＡＤ患者のほとんどのサイトカインの血漿濃度に変化はない。
【図３】ＩＬ−１７、ＭＩＰ−１ＡおよびＩＬ−１２ｐ７０の３つのサイトカインは、６か月間ＩＶＩＧ治療を受けた後のＡＤ患者のこれらの血漿濃度に有意な増加傾向を示した。
【図４】ＩＬ−１Ａ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１３、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦおよびＥＧＦの９つのサイトカインは、６か月間ＩＶＩＧ治療を受けた後のＡＤ患者のこれらの血漿濃度に非常に有意な変化を示した。
【図５】サイトカイン血漿濃度の変化は、６か月間ＩＶＩＧ治療を受けた後のＡＤ患者でＩＶＩＧの用量依存性であった。
【図６】６か月間ＩＶＩＧ治療を受けた後のＡＤ患者の臨床成績と血漿サイトカイン濃度との間の相関。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
定義
「アルツハイマー病（ＡＤ）」は、典型的に６５歳より上の人々の間で観察される認知症の一般的な型であるが、早期発症の種類ではずっと早く起こることがある。不治性、不可逆性、進行性の脳疾患であるアルツハイマー病は、特定の一般的症状に基づいて診断される。初期段階で、最も一般的に認められるＡＤの症状は、最近学習した事実を思い出すのが困難であるような記憶喪失である。医師は、典型的に、行動評価および認知テスト、しばしば、その後の脳スキャンでＡＤの診断を確認することとなる。疾患進行につれて、錯乱、易刺激性および攻撃性、気分変動、言語崩壊、長期記憶喪失ならびに患者の感覚が低下して一般的な引きこもり（ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ）を含むさらなる症状が明らかになることになる。本明細書で使用するとき、アルツハイマー病またはＡＤを罹患している患者は、脳障害のどんな変化および現在使用されている診断基準に従って診断されるような症状のいずれの段階で患っていてもよい。
【００１７】
本明細書で使用するとき、「サイトカイン」は、分子および細胞レベルで体内の生物学的プロセスの基板範囲（ｂｏａｒｄ  ｒａｎｇｅ）を調節するシグナル伝達分子として作用する、免疫系の様々な細胞によって分泌される低分子量タンパク質を包含する。「サイトカイン」は、リンホカイン、インターロイキンまたはケモカインクラスに属する個々の免疫調節性タンパク質を含む。例えば、ＩＬ−１ＡおよびＩＬ−１Ｂは、ヒトインターロイキン１（ＩＬ−１）ファミリーの２つの特徴的なメンバーである。成熟ＩＬ−１Ａは、線維芽細胞活性化因子（ＦＡＦ）、リンパ球活性化因子（ＬＡＦ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦ）、白血球内因性伝達物質（ＬＥＭ）などとしても知られている１８ｋＤａのタンパク質である。ＩＬ−４は、Ｔヘルパー２（Ｔｈ２）細胞の分化を誘導するサイトカインであり、ＩＬ−１３と密接に関連しており、類似した機能を有している。ＩＬ−５は、Ｔｈ２細胞およびマスト細胞によって産生され、Ｂ細胞の成長を刺激して免疫グロブリンの分泌を高めるように作用する。ＩＬ−５は、好酸球の活性化にも関与している。ＩＬ−６は、炎症促進性または抗炎症性サイトカインのいずれかとして作用することができるインターロイキンである。ＩＬ−６は、Ｔ細胞およびマクロファージによって分泌され、炎症につながる外傷または他の組織損傷に対して免疫応答を刺激する。ＩＬ−６は筋収縮に応答して筋肉からも産生される。ＩＬ−８は、マクロファージならびに上皮細胞および内皮細胞などの他の細胞種によって産生されるケモカインであり、自然免疫システム応答における免疫反応の重要なメディエーターとして作用する。ＩＬ−１２は、Ｔヘルパー（Ｔｈ１またはＴｈ２）細胞へのナイーブＴ細胞の分化に関与している。ヘテロ二量体サイトカインであるＩＬ−１２は、２つの独立した遺伝子、すなわちＩＬ−１２Ａ（ｐ３５）およびＩＬ−１２Ｂ（ｐ４０）によってコードされる２つのサブユニットが、タンパク質合成に次いで二量体化した後、形成される。ＩＬ−１２ｐ７０は、このヘテロ二量体組成物を指す。ＩＬ−１３は、多くの細胞種、特にＴｈ２細胞によって分泌されるサイトカインで、アレルギー性の炎症および疾患の重要なメディエーターである。ＩＬ−１７は、Ｔヘルパー細胞によって産生されるサイトカインであり、ＩＬ−２３によって誘導され、遅延型反応において破壊的組織損傷をもたらす。ＩＬ−１７は、細胞外の病原体による免疫系の浸潤に応答して病原体の細胞マトリックスの破壊を誘導する、炎症促進性サイトカインとして機能する。ＩＰ−１０、すなわちインターフェロンガンマ誘導タンパク質（１０ｋＤａ）は、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１０（ＣＸＣＬ１０）またはｓｍａｌｌ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｂ１０としても知られている。ＣＸＣケモカインファミリーに属する低分子サイトカインであるＩＰ−１０は、ＩＦＮ−γに応答していくつかの細胞種（単核細胞、内皮細胞および線維芽細胞を含む）によって分泌される。マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）はケモカインファミリーに属している。ヒトＭＩＰには、ＭＩＰ−１αおよびＭＩＰ−１βという２つの主な型があり、それぞれケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド３（ＣＣＬ３）およびＣＣＬ４としても知られている。両方とも、菌体内毒素による刺激の後、マクロファージによって産生される。コロニー刺激因子３（ＣＳＦ３）としても知られている顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦまたはＧＣＳＦ）は、コロニー刺激因子ホルモンである。Ｇ−ＣＳＦは、糖タンパク質であり、成長因子であり、顆粒球および幹細胞を産生する骨髄を刺激するためにいくつかの異なる組織によって産生されるサイトカインである。Ｇ−ＣＳＦは、さらに好中球前駆体ならびに成熟好中球の生存、増殖、分化、および機能を刺激する。上皮成長因子またはＥＧＦは、成長因子であり、受容体ＥＧＦＲに対する高親和性によって結合して、細胞成長、増殖および分化の調節に重要な役割を果たす。血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）は、成長因子の−ファミリーであり、脈管形成（胚循環系の新規形成）および血管新生（既存の脈管構造からの血管の成長）の両方に関与する重要なシグナル伝達タンパク質である。
【００１８】
「静注用免疫グロブリン」または「ＩＶＩＧ」は、多数（しばしば千人を上回る）の供血者の血漿からプールされた免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）免疫グロブリンを含有している血液製剤を指す。ＩＶＩＧは、典型的に、無傷のＦｃ依存性エフェクター機能を有する９５％を超える非修飾ＩｇＧおよび極微量の免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）または免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）を含有し、特定の病状を治療するのに使用する無菌の精製ＩｇＧ生成物である。「静脈内の」という語は典型的に、静脈注射による投与を指すが、用語、「ＩＶＩＧ」または「ＩＶＩＧ組成物」は、本特許出願で使用するとき、皮下または鼻腔内投与を含む追加経路での投与に処方するＩｇＧ組成物も包含する。
【００１９】
用語「免疫グロブリン」または「抗体」（本明細書に互換的に使用する）は、２本の重鎖および２本の軽鎖からなる基本的な４ポリペプチド鎖構造を有する抗原結合タンパク質を指し、例えば、特異的抗原結合能を有する鎖間ジスルフィド結合によって、前記鎖は安定化している。重鎖および軽鎖の両方はドメインに折り畳まれる。
【００２０】
用語「抗体」は、抗体の抗原およびエピトープ結合断片、例えば、免疫学的親和性アッセイで使用することができるＦａｂ断片も指す。かなり特徴的な抗体断片がいくつかある。したがって、例えば、ペプシンは、ヒンジ領域のジスルフィド結合に対する抗体Ｃ末端を消化して、Ｆ（ａｂ）’２というそれ自体がジスルフィド結合によってＶＨ−ＣＨ１に連結された軽鎖であるＦａｂ二量体を産生する。Ｆ（ａｂ）’２を温和な条件下で還元させてヒンジ領域のジスルフィド結合を壊し、それによって（Ｆａｂ’）２二量体をＦａｂ’単量体に変換することができる。Ｆａｂ’単量体は、本質的にヒンジ領域の一部を有するＦａｂである（他の抗体断片に関するより詳細な説明については、例えばＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｐａｕｌ，編，  Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎ．Ｙ．  （１９９３）を参照のこと）。様々な抗体断片が、無傷の抗体の消化に関して定義されているが、当業者は化学的か、または組換えＤＮＡ方法論を利用するかのどちらか一方で、断片を新たに合成することができることを認識されたい。したがって、抗体という用語は、抗体全体の修飾によって産生されるか、または組換えＤＮＡ方法論を用いて合成されるかのどちらか一方の抗体断片をも含む。
【００２１】
本明細書で使用する場合「増加」または「減少」は、それぞれ、量に関する比較対照（サイトカイン濃度のベースライン値などの）からの正または負の変化を指す。増加は、典型的に少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または５０％または１００％であり、少なくとも２倍または少なくとも５倍またはさらに１０倍もの高さであることができる。同様に、減少は典型的に、比較対照の濃度から少なくとも１０％または少なくとも２０％、３０％、またはなお５０％以上もの高さの減少である。
【００２２】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、本明細書に互換的に使用してアミノ酸残基のポリマーを指す。この用語を、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の人工化学模倣体であるアミノ酸ポリマーの他に、天然アミノ酸ポリマーおよび非天然アミノ酸ポリマーにも適用する。
【００２３】
用語「アミノ酸」は、天然および合成アミノ酸の他に、アミノ酸類似体、および、天然アミノ酸と同様の方法で機能するアミノ酸模倣体を指す。天然アミノ酸は、遺伝子コードによってコードされたものの他、後で修飾されるこれらのアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタマート、およびＯ−ホスホセリンである。アミノ酸類似体は、化合物を指し、天然アミノ酸、つまり、水素、カルボキシル基、アミノ基およびＲ基（例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウム）に結合するα炭素と同じ基本的化学構造を有している。このような類似体は、修飾されたＲ基（例えばノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有しているが、天然アミノ酸と同じ基本的化学構造を保持している。アミノ酸模倣体は、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有しているが、天然アミノ酸と同様の方法で機能する構造を有している化合物を指す。
【００２４】
本明細書では、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生化学命名法委員会（ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ）が勧告している、公知の３文字記号または１文字記号が、アミノ酸を指してもよい。同様に、一般に認められている１文字コードがヌクレオチドを指してもよい。
【００２５】
「標識」、「検出可能な標識」または「検出可能な部分（ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ  ｍｏｉｅｔｙ）」は、分光的手段、光化学的手段、生化学的手段、免疫化学的手段、化学的手段、または他の物理的手段によって検出可能な組成物である。例えば、有用な標識は、３２Ｐ、蛍光色素、高電子密度の試薬、酵素（例えば、ＥＬＩＳＡで一般に使用されるような）、ビオチン、ジゴキシゲニンまたは、ハプテンおよびタンパク質（例えば、ペプチドに放射性成分を組み込むことによって検出可能にすることができるか、もしくはペプチドと特異的に反応する抗体を検出するために使用する）を含む。
【００２６】
本明細書で使用するとき、用語「血液」は、サイトカイン濃度およびアルツハイマー病の進行の評価をテストしている被験者由来の血液サンプルまたは製剤を指す。本出願における「血液サンプル」は、全血中に存在する全細胞の少なくとも９５％が除去された血液の任意の画分を指してもよく、従来法で定義されるように血清および血漿などの画分を包含する。「同じ種類の血液サンプル」は、異なる個体から得たか、または同じ個体であるが同じ処理ステップ後の異なる時点で得た血液サンプルを指す。
【００２７】
語句「特異的に結合する」は、タンパク質またはペプチドを指す場合、タンパク質および他の生物製剤の異種集団中のタンパク質の存在を決定する結合反応を指す。したがって、イムノアッセイと称される条件下で、特異的結合物質（例えば、抗体）は、特定のタンパク質にバックグラウンドの少なくとも２倍結合し、サンプル中に存在する他のタンパク質には実質的に有意な量で結合しない。このような条件下での抗体への特異的結合には、特定のタンパク質、またはタンパク質であるがそれと同様の「姉妹（ｓｉｓｔｅｒ）」タンパク質ではないタンパク質に対する特異性のために選択される抗体が必要となることがある。例えば、抗体を、インターフェロン−β（ＩＦＮ−β）タンパク質ではなくインターフェロン−α（ＩＦＮ−α）タンパク質に特異的に結合するように産生させてもよい。別の方法では、抗体を産生させて、ＩＦＮ−αタンパク質ではなくＩＦＮ−βタンパク質に特異的に結合するように選択させることができる。様々なイムノアッセイフォーマットを使用して、特定のタンパク質と、または特定の型に、特異的免疫反応性である抗体を選択してもよい。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイは、タンパク質と特異的に免疫反応性がある抗体を選択するために常用的に使用される（例えば、特異的免疫反応性を決定するために使用することができるイムノアッセイフォーマットおよび条件の説明についてはＨａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ，  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  （１９８８）を参照のこと）。特異的または選択的結合反応は、典型的には、バックグラウンドシグナルまたはノイズの少なくとも２倍、より典型的にはバックグラウンドの１０から１００倍よりも多いこととなる。
（発明を実施するための形態）
Ｉ．序論
【００２８】
アルツハイマー病（ＡＤ）には治療法は全くないが、ＡＤに伴う精神機能低下を遅らせるか、または停止させることさえできるいくつかの脳保護治療方法が、ＡＤ症状の治療および緩和に使用するために現在試験されている。静注用免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）免疫療法はこのような治療のうちの１つである。ＩＶＩＧ治療により、ＡＤ患者間で認知衰退と評価されることの減少が示されており、この効果はＩＶＩＧの用量によって異なることが観察されている。様々な認知テストが患者の脳機能の評価に利用可能であり、したがって、ＡＤを治療するための治療レジメンの有効性の評価に有用であるが、脳保護治療に応答してＡＤ患者の認知能力の任意の変化を観察する迅速で客観的な手段として代替法、特に投与が簡単な代替法が要望されている。本発明者は、一部の期間、例えば、３か月、６か月または１２か月後に、脳保護治療を受けているＡＤ患者の血液中の特定のサイトカイン濃度に統計的に有意な変化を観察した。これらの変化は認知テストによって測定されたＡＤ患者の脳機能と相関しており、ＩＶＩＧの用量依存性であるので、したがって、サイトカイン観察方法は、ＡＤ患者の脳保護治療の有効性を決定するのが比較的早く、かつ客観的である。さらに、認知力テスト方法の変動性および不正確性のために、より短い期間（例えば、３か月、６か月または１２か月）にわたる個々の患者の低下の観察では、認知力テストで臨床的に相違を決定するのは困難であり得るので、このようなサイトカインシグナルを使用して、認知テストよりも早くＡＤ患者の脳保護治療の有効性を決定してもよい。
ＩＩ．アルツハイマー病のＩＶＩＧ治療
Ａ．治療を受ける患者
【００２９】
本発明に係るＩＶＩＧ組成物（または他の抗アルツハイマー脳保護治療薬）による治療を受ける患者は、アルツハイマー病に罹患していると診断される。アルツハイマー病の発症は通常漸進的であり、ゆっくり進行する。記憶、特に短期記憶に関する問題は、アルツハイマー病の過程の初期に一般的に見られる。自発性の減少、無感情、および社会的相互関係から引きこもる傾向などの、軽度の人格変化が疾患の初期に起こることもある。疾患が進行するにつれて、抽象的思考および他の知的機能の問題が現れる。患者は、支払いを計算しているときの数字、何を読んでいるかの理解、または、その日の仕事の計画に困難を抱え始めることがある。この時点で、激越、易刺激性、爆発性人格異常および適切な着衣能力の減少など、行動および様子にさらなる障害が見られることもある。障害の過程の後期に、罹患者は、何月かまたは何年かについて困惑したり混乱したりするようになったり、自分が住んでいるところを正確に述べることができなかったり、または、訪れている場所を言うことができなかったりすることがある。最終的に、患者は徘徊し、会話に関与することができなくなり、気分が不安定になり、非協力的になり、失禁するようになることがある。疾患の後期には、自分の世話が全くできなくなることがある。次いで、恐らく肺炎または極度に悪化した健康状態に起こるいくつかの他の問題の後、死が続くことがあり得る。人生の後期に障害を発症する人は、アルツハイマー病の結果死ぬよりもむしろ他の疾患（心疾患などの）で死ぬほうが多い。
【００３０】
アルツハイマー病を診断する臨床基準は、開業医に周知である。アルツハイマー病は以下のとき診断される。すなわち、（１）認知症の基準に合致する十分な認知力低下がある人、（２）臨床過程がアルツハイマー病のものと一致している、および（３）他の脳疾患または他の過程が認知症に関するより良い説明にならないときである。アルツハイマー病の診断を適切に下し得るには、先に認知力の問題に関する他の原因を除外しなければならない。こうした他の原因には、パーキンソン病などの神経障害、脳血管疾患および脳卒中、脳腫瘍、血餅、および多発性硬化症、中枢神経系の感染症、投薬の副作用、精神障害、物質乱用、代謝疾患、外傷、毒性因子などを含む。要するに、正しい診断に到達するには包括的な臨床評価が不可欠である。このような評価には少なくとも３つの主要構成要素が含まれるべきである。すなわち、（１）徹底した一般的医学的精密検査、（２）記憶および他の思考機能のテストを含む神経学的検査、および（３）気分、不安、および思考の明瞭さを評価する精神医学的評価である。さらに、評価目的で脳の画像診断を使用することもある。非造影ＣＴスキャンおよびＭＲＩを含む画像診断技術を使用することが多い。他の画像検査法（ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴおよびｆＭＲＩなどの）は脳機能の情報（機能的な神経画像処理）を提供することができるが、それほど頻繁に使用しない。
【００３１】
本発明の方法を実施する目的で、抗アルツハイマー治療（例えば、ＩＶＩＧ投与）を受けているアルツハイマー患者は、典型的に、症状が軽度から中程度で、疾患進行が比較的初期段階にあるので、治療薬による症状の改善を決定するのがより簡単となり、したがって、患者の今後の治療計画を適切に調整することができる。場合によっては、アルツハイマー病を発症し始めた疑いのある個体または、この疾患を発症するリスクがあるとみなされる個体も、このような治療を受けてもよい。というのは、疾患の発症への進行が停止したり逆戻りしたりすることがあるか、または、疾患を発症するリスクが低下したり排除されたりすることがあるためである。換言すれば、抗アルツハイマー治療（例えば、ＩＶＩＧ投与）は、アルツハイマー病を防止する方法または、症状が全くなかったり疑わしかったりするだけのリスク個体の疾患の発症を阻害したり遅らせたりする方法として用いることができる。
【００３２】
場合によっては、アルツハイマー病の治療を意図した治療薬を、その有効性に関して評価する。その場合、比較目的、例えば、治療薬の効果に起因し得る患者の血液中に見出される１つ以上のサイトカイン濃度の任意の変化を証明するために、アルツハイマー患者を治療および非治療群に割り当てる。２つの群に割り当てられた患者は、好ましくは患者の年齢、性別、病歴、民族的背景、教育レベル、アルツハイマー病の重症度などの全般的特性が合理的に一致していることとなろう。
Ｂ．ＩＶＩＧ投与
【００３３】
近代医療で常用的に実施されるように、これらの３つの主なクラス、すなわち免疫欠損、炎症性および自己免疫疾患、ならびに急性感染症に属する病状の治療には、濃縮免疫グロブリン（特にＩｇＧ）の無菌製剤が使用される。ＩｇＧ生成物、すなわち静注用免疫グロブリンまたはＩＶＩＧは、一般に静脈内投与用に処方される。濃縮免疫グロブリンは、他の経路での投与（例えば、皮下または鼻腔内投与）用に処方されてもよいが、考察を容易にするために、本出願における用語「ＩＶＩＧ」または「ＩＶＩＧ組成物」には、このような代わりとして処方されるＩｇＧ組成物も含まれている。本発明の実施に使用するのに適切なＩＶＩＧ生成物を、Ｂａｘｔｅｒ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ、Ｔａｌｅｃｒｉｓ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｇｒｉｆｏｌｓ  ＵＳＡ、Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ  ＵＳＡ、およびＺＬＢ  Ｂｅｈｒｉｎｇを含むいくつかの商業的供給業者から入手してもよい。
【００３４】
疾患または症状の治療を成功させるには、有効量の治療薬を投与しなければならない。用語「有効量」は、被験者が治療している病状（例えば、アルツハイマー病）の検出可能な改善または治療をもたらすＩＶＩＧ製剤などの治療薬の量を指す。被験者に投与する有効量は、年齢、体重、疾患重症度、投与用量および投与頻度、ならびに治療に対する個別反応の個体差を考慮して、医師が決定することができる。特定の実施形態において、ＩＶＩＧ生成物を、毎回、患者の体重１キログラム当たり約０．２ｇから患者の体重１キログラム当たり約４ｇまでの範囲内で被験者に投与することができ、投与頻度は、週に二度、週に一度、月に二度、月に一度または１か月おきの範囲であってもよい。ＩＶＩＧの１つの好例となる用量範囲は、患者の体重１ｋｇ当たり約０．１ｇから約１ｇまでの間、または約０．２ｇから約０．８ｇまでの間で、典型的に月に二度または月に一度の頻度で投与する。例えば、ＩＶＩＧを、月に二度のスケジュールに従って、体重１ｋｇ当たり０．２、０．４または０．８ｇの用量で一部のアルツハイマー患者に投与する。他の場合では、ＩＶＩＧを、月に一度のスケジュールに従って、体重１ｋｇ当たり０．２、０．４または０．８ｇの用量で投与する。
【００３５】
アルツハイマー病のＩＶＩＧ治療の期間を、変更することができる。すなわち、３または６か月という短期間、または、１８か月、２年、５年もしくは１０年もの長期間であってもよい。場合によっては、患者の寿命のある限りＩＶＩＧ治療を続けてもよい。ＩＶＩＧ治療の有効性を、全投与過程の間の特定期間の後に、（例えば、１８か月の治療計画に対して３か月ごとまたは６か月ごと）、評価してもよい。他の場合では、より長期の治療過程に対して９または１２か月ごとに有効性を評価してもよい。したがって、任意のその後の投与のために投与スケジュール（用量および頻度）を調整してもよい。この評価および調整スキームをアルツハイマー病のＩＶＩＧ治療に限定する必要はない。すなわち、アルツハイマー病治療に使用したり、提唱する他の脳保護治療薬を解析したりしてもよく、同一または同様の方法で達成してもよい。
ＩＩＩ．サイトカイン濃度の観察および治療有効性の評価
【００３６】
本発明者は、ＩＶＩＧ治療を受けているＡＤ患者の血液中に見出される特定のサイトカイン濃度の変化が、ＩＶＩＧ治療に対するＡＤ患者の応答と緊密に相関することを発見した。より具体的には、治療介入ＩＶＩＧ投与は、いくつかのサイトカインの血漿濃度に有意な増加を示す。神経心理学評価によって示されたように、これは、認知機能の改善に相関する。したがって、血漿サイトカイン濃度のこのような増加は、治療効果の有用な指標として役に立つ。一方、治療レジメンの後、血漿サイトカイン濃度が変化しなかったり減少したりするのは、投与用量および／もしくは頻度が不適切である（その後の治療期間の用量および／もしくは頻度の増加を示唆している可能性がある）か、またはＡＤを治療するためのこの連隊の有効性が本質的に欠如している（治療の終了を示唆している可能性がある）かのいずれかのために、特定の治療レジメンには効果がないことを示している。認知能力を評価するために一般に用いられている方法は、投与に時間がかかり、解析に関しては投与者の主観的判断に頼っている。それに比べて、イムノアッセイまたは質量解析法に基づく方法では、患者の血液中のサイトカイン濃度の変化を容易に検出し、定量化することができる。したがって、サイトカイン濃度の観察は、ＡＤ患者のＩＶＩＧ治療に対する応答の評価にとってはるかに客観的でより信頼できる標準型を提供し、より早く確認することができる治療に対する応答の指標を提供することができる。
【００３７】
例えば、ＡＤ患者が脳保護治療（ＩＶＩＧ投与などの）を受けていた間のある期間の後、以下のサイトカイン、すなわちＩＬ−１Ａ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１３、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＥＧＦ、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１７、ＭＩＰ−１Ａ、ＭＩＰ−１ＢまたはＩＰ−１０のいずれか１つ以上の、患者の血漿濃度を測定して治療の有効性を評価する。サイトカインの血中または血漿濃度の増加は、治療が効果的であったことを示すが、血中もしくは血漿濃度が変化しなかったり減少したりするのは、治療の効果がなかったことを示唆している。これらの各サイトカインから、治療効果の正当な指標を別々に得てもよいが、より信頼できる有効性評価のためには、典型的に複数のサイトカイン濃度を観察する。例えば、サイトカインＩＬ−４、ＩＬ−６およびＩＬ−１３の濃度を観察してもよく、場合によりＩＬ−１Ａ、ＩＬ−５、ＩＬ−８、ＶＥＧＦ、ＧＣＳＦおよびＥＧＦ濃度をさらに含んでもよい。さらに、この目的で、ＩＬ−１７、ＭＩＰ−１ＡおよびＩＬ−１２ｐ７０の血漿濃度を観察することができる。ＭＩＰ−１Ｂは、治療効果の指標を得るために測定する、さらに別のマーカーである。
Ａ．サンプルの入手
【００３８】
本発明を実行する最初のステップは、テストしている被験者由来の血液サンプル、例えば、アルツハイマー病に罹患している患者由来の血清または血漿サンプルを得ることである。同じ種類のサンプルを、対照群（いかなる種類の脳保護治療も受けていないＡＤ患者）および治療群（ＩＶＩＧ投与などの脳保護治療を受けているＡＤ患者）の両方から採取すべきである。病院または診療所で常用的に用いられている標準手順に、この目的で典型的に従う。例えば、患者由来の血液サンプルの回収を診療所で日常的に実施する。適切な量のサンプル、例えば、５から２０ｍｌまでの間の末梢血を回収し、さらなる調製の前に標準的な医学実験室テスト手順に従って保管されるだろう。
【００３９】
脳保護治療を受けているＡＤ患者の疾患進行を観察し、治療効果を評価する目的で、個々の患者の血液サンプルを治療過程の前、最中および後の異なる時点で採取してもよい。それにより、１つ以上の関連サイトカイン濃度を測定して疾患の状態を示す情報を提供し、今後の治療レジメンを変更するためのガイダンスを与えることができる。例えば、治療を受け次第、ある期間にわたって患者の関連サイトカイン濃度の増加が観察されない場合、主治医は次の治療期間の投与用量および／または頻度を上げてもよいが、増加が観察される場合、投与用量および／または頻度を維持してもよい。このような観察および評価をいくつかの期間（例えば３か月、６か月、９か月、または１２か月ごと）の間に繰り返し実施してもよい。場合によっては、２つ以上の治療期間にわたる投与用量および／または頻度の継続的な増加によっても、患者の血中サイトカイン濃度が全く増加しない場合、医師は、この特定の種類の治療は患者のＡＤの治療に効果的でないか、または適切ではないと結論を下し、したがって、治療を終了してもよい。
Ｂ．サイトカイン検出のためのサンプル調製
【００４０】
被験者由来の血液サンプルの血清または血漿は本発明に適しており、公知の方法によって得ることができる。例えば、血液凝固を防止するＥＤＴＡまたはバキュテナーＳＳＴ（Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ  ＳＳＴ）（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，  Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，  ＮＪ）などの特定の商品が入っている管に血液サンプルを入れることができ、次いで、遠心分離により全血由来の血漿を得ることができる。一方、血清は血液が凝固した後、遠心分離によって得る。遠心分離は、適切な速度（例えば１，５００から３，０００ｘｇ）で冷蔵の環境（例えば約４から１０℃の温度）で典型的に行われる。タンパク質の量に関する特定のサイトカイン濃度を測定するための新しい管に移す前に、血漿または血清に追加の遠心分離工程を実施してもよい。場合によっては、ｍＲＮＡの量を使用して患者の血液中のサイトカインタンパク質の存在および量を示してもよい。
【００４１】
本発明の特定の用途では、血漿または血清が好ましいサンプル種類であることがある。本発明の他の用途では、全血が好ましいことがある。
Ｃ．サイトカインのタンパク質濃度の決定
【００４２】
上記で同定したものの中のサイトカインなど、任意の特定の同一タンパク質を、様々な免疫学的アッセイを使用して検出することができる。一部の実施形態では、サイトカインに対する特異的結合親和性を有している抗体で、テストサンプル由来のサイトカインタンパク質を捕獲することによって、サンドイッチアッセイを実施することができる。次いで、サイトカインに対する特異的結合親和性を有している標識抗体で、サイトカインを検出することができる。このような免疫学的アッセイは、マイクロアレイタンパク質チップなどのマイクロ流体デバイスを使用して実施することができる。サイトカインは、ゲル電気泳動法（２次元ゲル電気泳動法などの）および特異的抗体を使用するウエスタンブロット解析法によって検出することもできる。代わりに、標準的な免疫組織化学の技術を使用することにより、適切な抗体を使用して、サイトカインタンパク質を検出することができる。モノクローナルおよびポリクローナル抗体の両方（所望の結合特異性を有する抗体断片を含む）をサイトカインタンパク質の特異的検出に使用することができる。特定のサイトカインに対する特異的結合親和性を有するこのような抗体および抗体の結合断片を、公知の技術によって生成することができる。
【００４３】
本発明の実施では、サイトカイン濃度の測定のために他の方法も用いてもよい。例えば、多数のサンプルでさえも迅速かつ正確に標的タンパク質を定量化する質量分析技術に基づく様々な方法が開発されている。これらの方法には、複数の反応観察（ＭＲＭ）技術を使用した三重四極（３重Ｑ）測定器、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析装置（ＭＡＬＤＩ  ＴＯＦ／ＴＯＦ）、選択的イオン観察（ＳＩＭ）モードを使用したイオントラップ測定器、およびＱＴＯＰ質量分析計に基づくエレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＩ）などの非常に精巧な装置が関与している。例えば、Ｐａｎら、Ｊ  Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｒｅｓ．  ２００９  Ｆｅｂｒｕａｒｙ；  ８（２）：７８７−７９７を参照のこと。
ＩＶ．比較対照の確立
【００４４】
サイトカイン濃度の対照値を確立するために、まず、アルツハイマー病の診断を受けたことのある被験者の群を選択する。これらの個体は場合により、性別が同一で、年齢が同一または同様であり、生物学的特徴（例えば民族的背景）および／または病歴が試験群（脳保護治療を受けているＡＤ患者）と一致していてもよい。さらに、十分に確立されており常用的に用いられている方法によって、対照群に選択した個体の神経学的および／または精神的健康状態を検査し、一般に試験群と一致させるべきである。
【００４５】
さらに、対照群に選択される個体は合理的なサイズであるべきである。それにより、この群から得たサイトカインの平均濃度を、特定の疾患段階のアルツハイマー病に罹患していて、抗アルツハイマー治療を受けたことがあるが現在は受けていない個体の間の、このサイトカインの平均濃度の代表として、合理的にみなすことができる。好ましくは、選択される群は少なくとも１０人の被験者を含む。典型的に、所与のサイトカインの平均濃度を異なる種類の各サンプルに対して確立する。
【００４６】
選択された群の各個体に見出される、個体の値に基づいたサイトカイン濃度に関して、一旦、平均対照値を確立すると、この値はこの種類のサンプルに関するサイトカイン濃度の基準とみなされる。例えば、血漿サンプル中に見出されるサイトカイン濃度は、血漿サイトカイン濃度の対照値とのみ比較するために使用すべきである。
（実施例）
【００４７】
以下の実施例は例示のためだけに提供するものであって、限定するためのものではない。当業者は、変化させたり修飾したりして本質的に同一または同様の結果を生じ得る、様々な非臨界パラメータを容易に認識するであろう。
実施例１：アルツハイマー病（ＡＤ）の患者における静注用免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）治療後の血漿サイトカインの変化
【００４８】
目的：（１）ＡＤ患者へのＩＶＩＧ投与に伴う血漿サイトカイン濃度の変化の調査、（２）軽度から中程度のＡＤに対するガンマガード（Ｇａｍｍａｇａｒｄ）ＩＶＩＧのプラセボ対照無作為化第ＩＩ相試験における臨床成績とサイトカインの変化との関連付け。
【００４９】
方法：軽度から中程度のＡＤに対するＩＶＩＧの第ＩＩ相試験の被験者全員から血漿サンプルを採取した。ベースラインおよび６か月において、注入の前に静脈切開術によって血漿サンプルを採取した。試験はインフォームドコンセントを得て実施した。
【００５０】
ＩＶＩＧ注入に続いて起こることが報告されている、サイトカインの急性流動の潜在的交絡効果を避けるために、最初および最後の注入の前に採血を行った。
【００５１】
選択したサイトカインおよびケモカインの濃度を、Ｌｕｍｉｎｅｘプラットフォーム用に最適化されたアッセイを使用して解析した。正確性を促進するために、適切な標準値および二重測定値を用いた。報告したデータは全て、少なくとも２つの測定値の平均値を表す。
【００５２】
サイトカインデータはベースラインから治療６か月までのパーセント変化で表された。両側検定スチューデントｔ検定を使用して変化の統計学的有意性を確立し、Ｅｘｃｅｌ２００７のデータ分析統計パッケージを使用して相関解析を実施した。
【００５３】
結果：図１から６に示し、詳細を以下に記載する。
【００５４】
図１に示すように、テストした様々なサイトカイン間でいくつかの顕著な相関を観察した。すなわち、ＩＬ−４、ＩＬ−６およびＩＬ−１３の変化には強い相関が認められ、ＩＬ−１ＡおよびＩＬ−８の変化には強い相関が認められ、ＶＥＧＦおよびＥＧＦの変化には中程度の相関が認められた。この試験では複数分析物アッセイプラットフォーム（Ｌｕｍｉｎｅｘ）を使用したので、チャネル間のクロストークが一部可能であるが、これらの相関の排他的原因にはなりそうもない。
【００５５】
ほとんどの血漿サイトカインはＩＶＩＧ治療の６か月後のＡＤ患者に有意な変化を示さなかったが、ＩＬ−１ｒａ、ＭＩＰ−１ＢおよびＩＰ−１０を含むいくつかのサイトカインが、顕著な変化（つまり、未治療の対照被験者で観察された、これらのサイトカインが対応する濃度からの顕著な増加）を証明した（図２を参照）。
【００５６】
ＩＬ−１７、ＭＩＰ−１ａ、およびＩＬ−１２ｐ７０の３血漿サイトカインは、ＩＶＩＧ治療の６か月後のＡＤ患者で、有意な変化に向かう傾向を示した（図３）。
【００５７】
ＩＬ−１Ａ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１３、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦおよびＥＧＦの９サイトカインの血漿濃度の非常に有意な変化を、ＩＶＩＧ治療の６か月後のＡＤ患者で観察した。（図４を参照）。
【００５８】
この試験の間に、ＩＶＩＧ治療の６か月後のサイトカインＩＬ１Ａ、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１３、ＥＧＦおよびＶＥＧＦの血漿濃度の有意な変化はＩＶＩＧの用量依存的方法にあった（図５を参照）という別の観察をした。
【００５９】
さらに、臨床成績と血漿サイトカイン測定値との間の相関をこの試験で確立した。６か月での包括的な成績において、ＣＧＩＣスコアはＩＬ−１３濃度と中程度（ｒ＝０．３２）に相関した。サイトカインに関して評価した１１人の被験者間でＧ−ＣＳＦのより強い相関（ｒ＝０．７４）を観察した。
【００６０】
６か月での認知成績で、ＭＭＳＥ変化スコアは、ＩＬ−８の血漿濃度の変化と中程度（ｒ＝０．４５）の正相関を示した。３ＭＳ変化スコアは、ＩＬ−５（ｒ＝０．４５）およびＩＬ−６（ｒ＝０．４５）と正に相関した。ＡＤＡＳ−Ｃｏｇは、Ｇ−ＣＳＦ、ＴＮＦアルファおよびエオタキシン濃度と相関したが、後者の２つは、プラセボに対してＩＶＩＧ治療後に有意に変化したサイトカインの中にはなかった。
【００６１】
６か月での行動成績において、ＮＰＩの結果はＩＬ−８（ｒ＝０．３２）およびＩＬ−５（ｒ＝０．３１）と中程度に相関した。
【００６２】
６か月での機能成績において、ＡＤＬスケールは、ＩＬ−４（ｒ＝０．４２）、ＩＬ−５（ｒ＝０．５４）、ＩＬ−６（ｒ＝０．４）、ＩＬ−８（ｒ＝０．４９）、ＩＬ−１３（ｒ＝０．５２）、ＶＥＧＦ（ｒ＝０．５５）、ＩＬ−１ａ（ｒ＝０．４１）およびＧ−ＣＳＦ（ｒ＝０．６４）と相関した。ＴＮＦアルファ、エオタキシン、ｓＣＤ４０ＬおよびＭＩＰ−１ａとも相関した。臨床成績と血漿サイトカイン濃度との間の相関を図６に示す。
【００６３】
結論：ＡＤの被験者の６か月のＩＶＩＧ注入の後で、特定の一組の血漿サイトカインの発現が有意に変化した。これらのサイトカインには、ＩＬ−１Ａ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１３、ＧＣＳＦ、ＥＧＦおよびＶＥＧＦが含まれる。他の３サイトカイン（ＩＬ−１７、ＭＩＰ−１ＡおよびＩＬ−１２Ｐ７０）の変化は有意性に向かう傾向を示した。これらの変化はＩＶＩＧの用量依存性であった。すなわち、プラセボ群では経時的に小さな変化しか起こらず、ＩＶＩＧ投与被験者の間の最も小さな数的変化は、２週間ごとに１ｋｇ当たり０．２ｇのＩＶＩＧで見られたが、その用量でさえ、かなりの変化であった。臨床成績と血漿サイトカイン濃度の変化との間に強い相関は観察されなかった。しかしながら、いくつかの低から中程度の相関（ｒ＝０．３から０．５）が見出された。ＩＬ−５およびＩＬ−８は、認知、行動および機能成績と相関したが、ＩＬ−１３およびＧＣＳＦは包括的な成績と相関した。
【００６４】
考察：これらの知見は、ＩＶＩＧはＡＤ患者の免疫調節に効果があるという仮設を立証するものである。ＩＶＩＧは、サイトカインを有意量含有しておらず、そのため、この試験で観察した血漿サイトカイン濃度の上昇は、したがって、外因性サイトカインの蓄積よりもむしろＩＶＩＧ中の抗体の遠位効果を表しているに違いない。この試験の血漿サイトカインの変化と臨床成績との間の相関は比較的中程度（ｒ＝０．３から０．５）であるが、同一被験者の、臨床成績とＣＳＦ抗−アミロイドオリゴマー抗体との間に観察された相関（ｒ＝約０．４１）のレベルに近似している。本結果は、２週間に体重１ｋｇ当たりプラセボ０．２ｇ用量の群と、２週間に体重１ｋｇ当たり０．４ｇ用量の群との間のサイトカイン発現量の差は、容易に識別可能である場合があることを示唆している。
【００６５】
ＧｅｎＢａｎｋ受託番号を含む、本出願に引用された全ての特許、特許出願および他の刊行物は、あらゆる目的でその全体が参照により組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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