(57)【要約】  本発明は、新規のビスアミノキノリン化合物、それらの新規化合物を含む医薬組成物、及び生体系におけるオートファジー（自食作用）を阻害する方法に関する。本発明の化合物及び／又は組成物を単独で又は少なくとも１つの更なる抗癌剤と組み合わせて用いて必要な患者での癌を治療する方法は、本発明の更なる態様である。本発明の化合物でオートファジー阻害が好ましい治療上の役割を果たす病態及び／又は状態（関節リウマチ、マラリア、抗リン脂質抗体症候群、ループス、慢性じんましん、及びシェーグレン症候群を含む）を治療する方法は、本発明の更なる態様である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の化学構造Ｉの化合物であって、
【化１】
2014513101.tif 000014
式中、Ｒ1及びＲ1'は、それぞれ独立してＨ、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩ）、ＣＮ、ＮＯ2、任意で置換されるＣ1−Ｃ6アルキル（置換される場合、好ましくは１つ若しくは２つの水酸基又は３つ〜５つのフルオロ基を用いて置換される）、任意で置換されるＯ−Ｃ1−Ｃ6アルキル（好ましくはＯＣＨ3）、任意で置換されるＣ2−Ｃ7アシル（好ましくはアセチル）、又は任意で置換されるＣ2−Ｃ7エステル（オキシカルボニルエステル又はカルボキシエステル、好ましくはカルボキシエステル）であり、
Ｒ及びＲ’は、それぞれ独立してＨ、Ｃ1−Ｃ6の任意で置換されるアルキル基、Ｃ1−Ｃ7（好ましくはＣ2−Ｃ7）の任意で置換されるアシル基、Ｃ2−Ｃ7の任意で置換されるカルボキシエステル基（Ｒ又はＲ’が結合した窒素原子と一緒になってウレタン基を形成する）であり、
Ｌは、−（ＣＨ2Ｙ）n−Ｘ−（Ｙ’ＣＨ2）n−基又はＡ−（ＣＨ2−ＣＨ2−Ｚ）n−Ａ’基（Ａ又Ａ’のいずれか一方は、化学構造Ｉの化合物における２つのアミン基のいずれか一方に結合することができる）であり、ＬにおけるＣＨ2基の少なくとも１つは、Ｃ1−Ｃ3アルキル基（これ自体も１つ又は２つの水酸基を用いて任意で置換される）を用いて任意で置換され、
Ｘは、存在しないか、（ＣＨ2）jＯ、Ｓ、又はＮ−Ｒ’’であり、
Ｙは、存在しないか、ＣＨ2、Ｏ、ＣＨ2Ｏ、又はＮ−Ｒ’’であり、Ｙ’は、存在しないか、ＣＨ2、Ｏ、ＯＣＨ2、又はＮ−Ｒ’’であり、但しＸ、Ｙ、及びＹ’のうちの１つ以上が存在する場合には、Ｘ及びＹ、Ｘ及びＹ’、又はＹ及びＹ’のそれぞれ（存在する場合）は安定な結合を形成し、
Ｒ’’は、Ｈ、又は任意で置換されるＣ1−Ｃ6（好ましくはＣ1−Ｃ3）アルキル基であり、
ｊは、１、２、又は３（好ましくは１又は２）であり、
ｎは、０、１、２、３、又は４であり、但しｎが０の場合、Ｘは（ＣＨ2）jであり、ここでｊは少なくとも１であり、少なくとも１つのＣＨ2基がＣ1−Ｃ3アルキル基（これ自体も１つ又は２つの水酸基を用いて任意で置換される）を用いて任意で置換され、
Ａは、結合（存在しない）又は（ＣＨ2）jであり、Ａ’は、結合（存在しない）又は（ＣＨ2）jであり、ここでＡ又はＡ’における少なくとも１つのＣＨ2基は、Ｃ1−Ｃ3アルキル基（これ自体も１つ又は２つの水酸基を用いて任意で置換される）を用いて任意で置換され、
Ｚは、Ｏ又はＮ−Ｒzであり、
Ｒzは、Ｈ、又は任意で置換されるＣ1−Ｃ3アルキル基である、
化合物、又はその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物、若しくは多形体。
【請求項２】
Ｒ1及びＲ1'が、それぞれ独立してＨ、ハロ基、ニトロ基、又はトリフルオロメチル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ及びＲ’が、それぞれ独立してＨ、少なくとも１つの水酸基を用いて置換されるＣ1−Ｃ3のアルキル基、アルコキシ基、アミン基、モノアルキルアミン基、又はジアルキルアミン基であり、前記アミン基又は前記モノアルキルアミン基は、アミンの位置において７−置換−４−キノリニル基を用いて任意で置換され、前記アミンは前記キノリニル基の４位に結合し、前記キノリニル基の７位は請求項１のＲ1又はＲ1'によって置換され、前記モノアルキルアミン又は前記ジアルキルアミンの１つ又は両方のアルキル基が、それ自体も少なくとも１つの水酸基、アルコキシ基、アミン、モノアルキルアミン、又はジアルキルアミンを用いて更に任意で置換され、該アミン又は該モノアルキルアミンは、アミンの位置において１つ又は２つの７−置換−キノリニル基を用いて任意で置換され、該アミンは該キノリニル基の４位に結合し、該キノリニル基の７位は請求項１のＲ1又はＲ1'によって置換され、前記アルコキシ基のそれぞれは、アルコキシ基、好ましくはメトキシ基を用いて任意で更に置換されることができ、それによりジエーテル置換基を形成する、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｌが−（ＣＨ2Ｙ）n−Ｘ−（Ｙ’ＣＨ2）n−基であり、ここでＸはＮ−Ｒ’’であり、ｎは１、２又は３であり、Ｙ及びＹ’は、それぞれ独立して存在しないか又はＣＨ2であり、Ｒ’’は、Ｈ又はＣ1−Ｃ3アルキル基であり、該Ｃ1−Ｃ3アルキル基は、少なくとも１つの水酸基、アルコキシ基、アミン基、モノアルキルアミン基、又はジアルキルアミン基を用いて任意で置換され、前記アミン基又は前記モノアルキルアミン基は、アミンの位置において７−置換−４−キノリニル基を用いて任意で置換され、前記アミンは前記キノリニル基の４位に結合し、前記キノリニル基の７位は請求項１のＲ1又はＲ1'によって置換され、前記モノアルキルアミン又は前記ジアルキルアミンの１つ又は両方のアルキル基が、それ自体も少なくとも１つの水酸基、アルコキシ基、アミン、モノアルキルアミン、又はジアルキルアミンを用いて更に任意で置換され、該アミン又は該モノアルキルアミンは、アミンの位置において１つ又は２つの７−置換−キノリニル基を用いて任意で置換され、該アミンは該キノリニル基の４位に結合し、該キノリニル基の７位は請求項１のＲ1又はＲ1'によって置換され、前記アルコキシ基のそれぞれは、別のアルコキシ基を用いて任意で更に置換されることができ、それによりジエーテル置換基を形成する、請求項１から３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
前記Ｃ1−Ｃ3アルキル基がアミン基で置換され、該アミン基自体が１つの７−置換−４−キノリニル基を用いて置換されている、請求項３又は４に記載の化合物。
【請求項６】
前記アルキル基がＣ2アルキル基である、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
前記Ｃ1−Ｃ3アルキル基がアルコキシ基で置換され、該アルコキシ基自体が別のアルコキシ基を用いて置換されてジエーテル基を形成している、請求項３又は４に記載の化合物。
【請求項８】
前記別のアルコキシ基が、メトキシ基又はエトキシ基である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
本願明細書のスキーム１、３〜１０に記載された化合物。
【請求項１０】
本願明細書のスキーム３の化合物２８〜４０のいずれか１つである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
本願明細書のスキーム４の化合物４１〜４６のいずれか１つである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１２】
本願明細書のスキーム５の化合物４７、４８のいずれかである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１３】
本願明細書のスキーム６の化合物４９、５０のいずれかである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１４】
本願明細書のスキーム７の化合物５１〜５８のいずれか１つである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１５】
本願明細書のスキーム８の化合物６３〜７０のいずれか１つである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１６】
本願明細書のスキーム９の化合物７１〜７８のいずれか１つである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１７】
本願明細書のスキーム１０の化合物７９〜８２のいずれか１つである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１８】
本願明細書のスキーム１の化合物３である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１９】
本願明細書の図１４、１５又は１５Ａに記載された化合物。
【請求項２０】
次の化合物又はその薬学的に許容される塩。
・Ｎ1−（７−クロロキノリン−４−イル）−Ｎ2−（２−（（７−クロロキノリン−４−イル）アミノ）エチル）−Ｎ2−メチルエタン−１，２−ジアミン
・Ｎ1−（７−クロロキノリン−４−イル）−Ｎ2−（２−（（７−クロロキノリン−４−イル）アミノ）エチル）エタン−１，２−ジアミン
・Ｎ，Ｎ’−（（エタン−１，２−ジイルビス（オキシ））ビス（エタン−２，１−ジイル））ビス（７−クロロキノリン−４−アミン）
・Ｎ1−（７−メトキシキノリン−４−イル）−Ｎ2−（２−（（７−メトキシキノリン−４−イル）アミノ）エチル）−Ｎ2−メチルエタン−１，２−ジアミン
・Ｎ，Ｎ’−（（エタン−１，２−ジイルビス（オキシ））ビス（エタン−２，１−ジイル））ビス（７−クロロキノリン−４−アミン）
・Ｎ1−（７−クロロキノリン−４−イル）−Ｎ2−（２−（（７−クロロキノリン−４−イル）アミノ）エチル）−Ｎ2−メチルエタン−１，２−ジアミン三塩酸塩
・Ｎ1−（７−クロロキノリン−４−イル）−Ｎ2−（２−（（７−クロロキノリン−４−イル）（メチル）アミノ）エチル）−Ｎ1，Ｎ2−ジメチルエタン−１，２−ジアミン
・Ｎ，Ｎ’−（（メチルアザンジイル）ビス（エタン−２，１−ジイル））ビス（Ｎ−（７−クロロキノリン−４−イル）アセトアミド）
・（Ｓ）−Ｎ2−（７−クロロキノリン−４−イル）−Ｎ1−（（ｓ）−２−（（７−クロロキノリン−４−イル）アミノ）プロピル）−Ｎ1−メチルプロパン−１，２−ジアミン
・２−（ビス（２−（（７−クロロキノリン−４−イル）アミノ）エチル）アミノ）エタノール
・Ｎ1−（７−クロロキノリン−４−イル）−Ｎ2，Ｎ2−ビス（２−（（７−クロロキノリン−４−イル）アミノ）エチル）エタン−１，２−ジアミン
【請求項２１】
Ｎ1−（７−クロロキノリン−４−イル）−Ｎ2−（２−（（７−クロロキノリン−４−イル）アミノ）エチル）−Ｎ2−メチルエタン−１，２−ジアミン又はその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｎ1−（７−クロロキノリン−４−イル）−Ｎ2−（２−（（７−クロロキノリン−４−イル）アミノ）エチル）−Ｎ2−メチルエタン−１，２−ジアミン三塩酸塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２３】
請求項１から２２のいずれかに記載された少なくとも１つの化合物の有効量を、薬学的に許容される担体、添加剤、又は賦形剤と組み合わせて含み、更に任意で少なくとも１つの更なる抗癌剤と組み合わせて含む、医薬組成物。
【請求項２４】
オートファジーの阻害が望まれる生体系においてオートファジーを阻害する方法であって、前記方法は、前記生体系を請求項１から２２のいずれかに記載された少なくとも１つの化合物の有効量に曝すことを含む、方法。
【請求項２５】
必要とする患者において癌を阻害又は治療する方法であって、前記患者に請求項１から２２のいずれかに記載された少なくとも１つの化合物の有効量を、任意で少なくとも１つの更なる抗癌剤と組み合わせて投与することを含む、方法。
【請求項２６】
前記癌が転移性である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記癌が薬剤耐性癌である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
患者で癌が発生する可能性又は患者で癌が転移する可能性を低減する方法であって、請求項１から２２のいずれかに記載された少なくとも１つの化合物を、任意で少なくとも１つの更なる抗癌剤と組み合わせて投与することを含む、方法。
【請求項２９】
前記癌が、癌腫、食道、頭部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、頸部、卵巣、膵臓、前立腺、及び胃の癌、白血病、悪性のリンパ腫、悪性のメラノーマ、骨髄増殖性疾患、肉腫、中枢神経系の腫瘍、生殖系腫瘍、肺癌、卵巣癌、精巣癌、甲状腺癌、星状細胞腫、食道癌、膵臓癌、胃癌、肝臓癌、結腸癌、メラノーマ、混合型の新生物である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
前記白血病が、急性骨髄性白血病、急性リンパ球性白血病、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、急性Ｔ細胞リンパ芽球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、好塩基球性白血病、好酸球性白血病、顆粒球性白血病、有毛細胞白血病、白血球減少性白血病、リンパ性白血病、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、巨核球性白血病、小骨髄芽球性白血病、単球性白血病、好中球性白血病、及び肝細胞性白血病である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記リンパ腫が、バーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、又はＢ細胞リンパ腫である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記肉腫が、ユーイング肉腫、血管肉腫、カポジ肉腫、脂肪肉腫、筋肉腫、末梢性神経上皮腫、又は滑膜肉腫である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３３】
前記中枢神経系の腫瘍が、グリオーマ、星状細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫、膠芽腫、神経芽細胞腫、神経節神経腫、神経節膠腫、髄芽細胞腫、松果体細胞腫瘍、髄膜腫、髄膜肉腫、神経線維腫、又はシュヴァン鞘腫である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
前記生殖系腫瘍が、腸癌、乳癌、前立腺癌、子宮頸部癌、又は子宮癌である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３５】
前記肺癌が、小細胞肺癌、小細胞癌及び非小細胞癌の混合、胸膜中皮腫、転移胸膜中皮腫、小細胞肺癌、又は非小細胞肺癌である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３６】
前記混合型の新生物が癌肉腫及びホジキン病であり、前記混合起源の腫瘍がウィルムス腫瘍及び奇形癌腫である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３７】
前記癌が、卵巣癌、乳癌、結腸癌、頭部癌、頸部癌、髄芽細胞腫、又はＢ細胞リンパ腫である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３８】
前記癌が、メラノーマ又は非小細胞肺癌である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３９】
前記更なる抗癌剤が、エベロリムス、トラベクテジン、アブラキサン、ＴＬＫ２８６、ＡＶ−２９９、ＤＮ−１０１、パゾパニブ、ＧＳＫ６９０６９３、ＲＴＡ７４４、ＯＮ０９１０．Ｎａ、ＡＺＤ６２４４（ＡＲＲＹ−１４２８８６）、ＡＭＮ−１０７、ＴＫＩ−２５８、ＧＳＫ４６１３６４、ＡＺＤ１１５２、エンザスタウリン、バンデタニブ、ＡＲＱ−１９７、ＭＫ−０４５７、ＭＬＮ８０５４、ＰＨＡ−７３９３５８、Ｒ−７６３、ＡＴ−９２６３、ＦＬＴ−３インヒビター、ＶＥＧＦＲインヒビター、ＥＧＦＲ−ＴＫインヒビター、オーロラキナーゼインヒビター、ＰＩＫ−１修飾剤、Ｂｃｌ−２インヒビター、ＨＤＡＣインヒビター、ｃ−ＭＥＴインヒビター、ＰＡＲＰインヒビター、Ｃｄｋインヒビター、ＥＧＦＲ−ＴＫインヒビター、ＩＧＦＲ−ＴＫインヒビター、抗ＨＧＦ抗体、ＰＩ３キナーゼインヒビター、ＡＫＴインヒビター、ＪＡＫ／ＳＴＡＴインヒビター、チェックポイント−１又は２のインヒビター、接着斑キナーゼインヒビター、Ｍａｐキナーゼキナーゼ（ｍｅｋ）インヒビター、ＶＥＧＦトラップ抗体、ペメトレキセド、エルロチニブ、ダサタニブ（dasatanib）、ニロチニブ、デカタニブ（decatanib）、パニツムマブ、アムルビシン、オレゴボマブ、Ｌｅｐ−ｅｔｕ、ノラトレキシド、ａｚｄ２１７１、バタブリン、オファツムマブ、ザノリムマブ、エドテカリン、テトランドリン、ルビテカン、テスミリフェン、オブリメルセン、チシリムマブ、イピリムマブ、ゴシポール、Ｂｉｏ１１１、１３ｌ−Ｉ−ＴＭ−６０１、ＡＬＴ−１１０、ＢＩＯ１４０、ＣＣ８４９０、シレンギチド、ギマテカン、ＩＬ１３−ＰＥ３８ＱＱＲ、ＩＮＯ１００１、ＩＰｄＲ1ＫＲＸ−０４０２、ルカントン、ＬＹ３１７６１５、ノイラジアブ（neuradiab）、ビテスペン、Ｒｔａ７４４、Ｓｄｘ１０２、タランパネル、アトラセンタン、Ｘｒ３１１、ロミデプシン、ＡＤＳ−１００３８０、スニチニブ、５−フルオロウラシル、ボリノスタット、エトポシド、ゲムシタビン、ドキソルビシン、イリノテカン、リポソームドキソルビシン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、ビンクリスチン、テモゾロミド、ＺＫ−３０４７０９、セリシクリブ；ＰＤ０３２５９０１、ＡＺＤ−６２４４、カペシタビン、Ｌ−グルタミン酸、Ｎ−［４−［２−（２−アミノ−４，７−ジヒドロ−４−オキソ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル］−二ナトリウム塩（七水和物）、カンプトテシン、ＰＥＧ標識イリノテカン、タモキシフェン、トレミフェンクエン酸塩、アナストラゾール、エキセメスタン、レトロゾール、ＤＥＳ（ジエチルスチルベストロール）、エストラジオール、エストロゲン、結合型エストロゲン、ベバシズマブ、ＩＭＣ−１Ｃ１１、ＣＨＩＲ−２５８，）；３−［５−（メチルスルホニルピペラジンメチル）−インドリル−キノロン、バタラニブ、ＡＧ−０１３７３６、ＡＶＥ−０００５、［Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）６，Ａｚｇｌｙ１０］酢酸塩（ピロ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｚｇｌｙ−ＮＨ2酢酸［Ｃ59Ｈ84Ｎ18Ｏｉ4−（Ｃ2Ｈ4Ｏ2）x、ｘ＝１〜２．４］、ゴセレリン酢酸塩、リュープロリド酢酸塩、トリ��トレリンパモ酸塩、酢酸メドロキシプロゲステロン、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、ラロキシフェン、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド、酢酸メゲストロール、ＣＰ−７２４７１４；ＴＡＫ−１６５、ＨＫＩ−２７２、エルロチニブ、ラパタニブ、カネルチニブ、ＡＢＸ−ＥＧＦ抗体、アービタックス、ＥＫＢ−５６９、ＰＫＩ−１６６、ＧＷ−５７２０１６、ロナファルニブ、ＢＭＳ−２１４６６２、チピファルニブ；アミホスチン、ＮＶＰ−ＬＡＱ８２４、ヒドロキサミン酸サブエロイルアニリド、バルプロ酸、トリコスタチンＡ、ＦＫ−２２８、ＳＵ１１２４８、ソラフェニブ、ＫＲＮ９５１、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナグレリド、Ｌ−アスパラギナーゼ、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチン、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエチルスチルベストロール、エピルビシン、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオキシメステロン、フルタミド、ゲムシタビン、グリベック（gleevac）、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、ロイプロリド、レバミゾール、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、ミトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ニルタミド、オクトレオチド、オキサリプラチン、パミドロネート、ペントスタチン、プリカマイシン、ポルフィマー、プロカルバジン、ラルチトレキセド、リツキシマブ、ストレプトゾシン、テニポシド、テストステロン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トレチノイン、ビンデシン、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、フェニルアラニンマスタード、ウラシルマスタード、エストラムスチン、アルトレタミン、フロクスウリジン、５−デオキシウリジン、シトシンアラビノシド、６−メルカプトプリン、デオキシコホルマイシン、カルシトリオール、バルルビシン、ミトラマイシン、ビンブラスチン、ビノレルビン、トポテカン、ラゾキシン、マリマスタット、ＣＯＬ−３、ネオバスタット、ＢＭＳ−２７５２９１、スクアラミン、エンドスタチン、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＥＭＤ１２１９７４、インターロイキン−１２、ＩＭ８６２、アンギオスタチン、ビタキシン、ドロロキシフェン、イドキシフェン、スピロノラクトン、フィナステリド、シメチジン、トラスツズマブ、デニロイキンジフチトクス、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、パクリタキセル、イリノテカン、トポテカン、ドキソルビシン、ドセタキセル、ビノレルビン、ベバシズマブ（モノクローナル抗体）及びアービタックス、クレモホール非含有パクリタキセル、エピチロン（epithilone）Ｂ、ＢＭＳ−２４７５５０、ＢＭＳ−３１０７０５、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、ピペンドキシフェン、ＥＲＡ−９２３、アルゾキシフェン、フルベストラント、アコルビフェン、ラソフォキシフェン、イドキシフェン、ＴＳＥ−４２４、ＨＭＲ−３３３９、ＺＫ１８６６１９、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４、ＶＸ−７４５、ＰＤ１８４３５２、ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、テムシロリムス、ＡＰ−２３５７３、ＲＡＤ００ｌ、ＡＢＴ−５７８、ＢＣ−２１０、ＬＹ２９４００２、ＬＹ２９２２２３、ＬＹ２９２６９６、ＬＹ２９３６８４、ＬＹ２９３６４６、ワートマニン、ＺＭ３３６３７２、Ｌ−７７９，４５０、ＰＥＧ−フィルグラスチム、ダルベポエチン、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、ゾレンドロネート（zolendronate）、プレドニゾン、セツキシマブ、顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子、ヒストレリン、ＰＥＧ化インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ａ、ＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂ、インターフェロンα−２ｂ、アザシチジン、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、レナリドマイド、ゲムツズマブ、ヒドロコルチゾン、インターロイキン−１１、デクスラゾキサン、アレムツズマブ、全トランスレチノイン酸、ケトコナゾール、インターロイキン−２、メガストロール、免疫グロブリン、ナイトロジェンマスタード、メチルプレドニゾロン、イブリツモマブチウキセタン、エンドロゲン、デシタビン、ヘキサメチルメラミン、ベキサロテン、トシツモマブ、三酸化ヒ素、コルチゾン、エチドロン酸、ミトタン、シクロスポリン、ダウノルビシンリポソーム、エルウィニア−アスパラギナーゼ、ストロンチウム８９、カソピタント、ネツピタント、ＮＫ−１受容体アンタゴニスト、パロノセトロン、アプレピタント、ジフェンヒドラミン、ヒドロキシジン、メトクロプラミド、ロラゼパム、アルプラゾラム、ハロペリドール、ドロペリドール、ドロナビノール、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プロクロルペラジン、グラニセトロン、オンダンセトロン、ドラセロトン、トロピセトロン、ペグフィルグラスチム、エリスロポエチン、エポエチンα及びダルベポエチンα、イピリムマブ、ベムラフェニブ、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項２５から３８のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
前記更なる抗癌剤が、ＦＬＴ−３インヒビター、ＶＥＧＦＲインヒビター、ＥＧＦＲ−ＴＫインヒビター、オーロラキナーゼインヒビター、ＰＩＫ−１修飾剤、Ｂｃｌ−２インヒビター、ＨＤＡＣインヒビター、ｃ−ＭＥＴインヒビター、ＰＡＲＰインヒビター、Ｃｄｋインヒビター、ＥＧＦＲ−ＴＫインヒビター、ＩＧＦＲ−ＴＫインヒビター、抗ＨＧＦ抗体、ＰＩ３キナーゼインヒビター、ＡＫＴインヒビター、ＪＡＫ／ＳＴＡＴインヒビター、チェックポイント−１若しくは２のインヒビター、接着斑キナーゼインヒビター、Ｍａｐキナーゼキナーゼ（ｍｅｋ）インヒビター、ＶＥＧＦトラップ抗体、又はそれらの混合物である、請求項２５から３８のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
必要とする患者における病態又は状態を治療する方法であって、請求項１から２２のいずれかに記載された少なくとも１つの化合物の有効量を前記患者に投与することを含み、前記病態又は状態はオートファジーの阻害に好ましく応答する、方法。
【請求項４２】
前記病態又は状態が、関節リウマチ、マラリア、抗リン脂質抗体症候群、ループス、慢性じんましん、又はシェーグレン症候群である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記病態がマラリアである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
オートファジーの阻害が望まれる生体系においてオートファジーを阻害するための医薬の製造における請求項１から２２のいずれかに記載された化合物の使用。
【請求項４５】
必要とする患者において癌の抑制又は治療に使用するための医薬の製造における、任意で少なくとも１つの更なる抗癌剤と組み合わせての請求項１から２２のいずれかに記載された化合物の使用。
【請求項４６】
前記癌が転移性である、請求項４５に記載の使用。
【請求項４７】
前記癌が薬剤耐性である、請求項４５に記載の使用。
【請求項４８】
患者で癌が発生する可能性又は患者で癌が転移する可能性を低減するための医薬の製造における、任意で少なくとも１つの更なる抗癌剤と組み合わせての請求項１から２２のいずれかに記載された化合物の使用。
【請求項４９】
前記癌が、癌腫、食道、頭部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、頸部、卵巣、膵臓、前立腺、及び胃の癌、白血病、悪性のリンパ腫、悪性のメラノーマ、骨髄増殖性疾患、肉腫、中枢神経系の腫瘍、生殖系腫瘍、肺癌、卵巣癌、精巣癌、甲状腺癌、星状細胞腫、食道癌、膵臓癌、胃癌、肝臓癌、結腸癌、メラノーマ、混合型の新生物である、請求項４５から４８のいずれかに記載の使用。
【請求項５０】
前記白血病が、急性骨髄性白血病、急性リンパ球性白血病、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、急性Ｔ細胞リンパ芽球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、好塩基球性白血病、好酸球性白血病、顆粒球性白血病、有毛細胞白血病、白血球減少性白血病、リンパ性白血病、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、巨核球性白血病、小骨髄芽球性白血病、単球性白血病、好中球性白血病、及び肝細胞性白血病である、請求項４９に記載の使用。
【請求項５１】
前記リンパ腫が、バーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、又はＢ細胞リンパ腫である、請求項４９に記載の使用。
【請求項５２】
前記肉腫が、ユーイング肉腫、血管肉腫、カポジ肉腫、脂肪肉腫、筋肉腫、末梢性神経上皮腫、又は滑膜肉腫である、請求項４９に記載の使用。
【請求項５３】
前記中枢神経系の腫瘍が、グリオーマ、星状細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫、膠芽腫、神経芽細胞腫、神経節神経腫、神経節膠腫、髄芽細胞腫、松果体細胞腫瘍、髄膜腫、髄膜肉腫、神経線維腫、又はシュヴァン鞘腫である、請求項４９に記載の使用。
【請求項５４】
前記生殖系腫瘍が、腸癌、乳癌、前立腺癌、子宮頸部癌、又は子宮癌である、請求項４９に記載の使用。
【請求項５５】
前記肺癌が、小細胞肺癌、小細胞癌及び非小細胞癌の混合、胸膜中皮腫、転移胸膜中皮腫、小細胞肺癌、又は非小細胞肺癌である、請求項４９に記載の使用。
【請求項５６】
前記混合型の新生物が癌肉腫及びホジキン病であり、前記混合起源の腫瘍がウィルムス腫瘍及び奇形癌腫である、請求項４９に記載の使用。
【請求項５７】
前記癌が、卵巣癌、乳癌、結腸癌、頭部癌、頸部癌、髄芽細胞腫、又はＢ細胞リンパ腫である、請求項４９に記載の使用。
【請求項５８】
前記癌が、メラノーマ又は非小細胞肺癌である、請求項４９に記載の使用。
【請求項５９】
前記更なる抗癌剤が、エベロリムス、トラベクテジン、アブラキサン、ＴＬＫ２８６、ＡＶ−２９９、ＤＮ−１０１、パゾパニブ、ＧＳＫ６９０６９３、ＲＴＡ７４４、ＯＮ０９１０．Ｎａ、ＡＺＤ６２４４（ＡＲＲＹ−１４２８８６）、ＡＭＮ−１０７、ＴＫＩ−２５８、ＧＳＫ４６１３６４、ＡＺＤ１１５２、エンザスタウリン、バンデタニブ、ＡＲＱ−１９７、ＭＫ−０４５７、ＭＬＮ８０５４、ＰＨＡ−７３９３５８、Ｒ−７６３、ＡＴ−９２６３、ＦＬＴ−３インヒビター、ＶＥＧＦＲインヒビター、ＥＧＦＲ−ＴＫインヒビター、オーロラキナーゼインヒビター、ＰＩＫ−１修飾剤、Ｂｃｌ−２インヒビター、ＨＤＡＣインヒビター、ｃ−ＭＥＴインヒビター、ＰＡＲＰインヒビター、Ｃｄｋインヒビター、ＥＧＦＲ−ＴＫインヒビター、ＩＧＦＲ−ＴＫインヒビター、抗ＨＧＦ抗体、ＰＩ３キナーゼインヒビター、ＡＫＴインヒビター、ＪＡＫ／ＳＴＡＴインヒビター、チェックポイント−１又は２のインヒビター、接着斑キナーゼインヒビター、Ｍａｐキナーゼキナーゼ（ｍｅｋ）インヒビター、ＶＥＧＦトラップ抗体、ペメトレキセド、エルロチニブ、ダサタニブ（dasatanib）、ニロチニブ、デカタニブ（decatanib）、パニツムマブ、アムルビシン、オレゴボマブ、Ｌｅｐ−ｅｔｕ、ノラトレキシド、ａｚｄ２１７１、バタブリン、オファツムマブ、ザノリムマブ、エドテカリン、テトランドリン、ルビテカン、テスミリフェン、オブリメルセン、チシリムマブ、イピリムマブ、ゴシポール、Ｂｉｏ１１１、１３ｌ−Ｉ−ＴＭ−６０１、ＡＬＴ−１１０、ＢＩＯ１４０、ＣＣ８４９０、シレンギチド、ギマテカン、ＩＬ１３−ＰＥ３８ＱＱＲ、ＩＮＯ１００１、ＩＰｄＲ1ＫＲＸ−０４０２、ルカントン、ＬＹ３１７６１５、ノイラジアブ（neuradiab）、ビテスペン、Ｒｔａ７４４、Ｓｄｘ１０２、タランパネル、アトラセンタン、Ｘｒ３１１、ロミデプシン、ＡＤＳ−１００３８０、スニチニブ、５−フルオロウラシル、ボリノスタット、エトポシド、ゲムシタビン、ドキソルビシン、イリノテカン、リポソームドキソルビシン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、ビンクリスチン、テモゾロミド、ＺＫ−３０４７０９、セリシクリブ；ＰＤ０３２５９０１、ＡＺＤ−６２４４、カペシタビン、Ｌ−グルタミン酸、Ｎ−［４−［２−（２−アミノ−４，７−ジヒドロ−４−オキソ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル］−二ナトリウム塩（七水和物）、カンプトテシン、ＰＥＧ標識イリノテカン、タモキシフェン、トレミフェンクエン酸塩、アナストラゾール、エキセメスタン、レトロゾール、ＤＥＳ（ジエチルスチルベストロール）、エストラジオール、エストロゲン、結合型エストロゲン、ベバシズマブ、ＩＭＣ−１Ｃ１１、ＣＨＩＲ−２５８，）；３−［５−（メチルスルホニルピペラジンメチル）−インドリル−キノロン、バタラニブ、ＡＧ−０１３７３６、ＡＶＥ−０００５、［Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）６，Ａｚｇｌｙ１０］酢酸塩（ピロ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｚｇｌｙ−ＮＨ2酢酸［Ｃ59Ｈ84Ｎ18Ｏｉ4−（Ｃ2Ｈ4Ｏ2）x、ｘ＝１〜２．４］、ゴセレリン酢酸塩、リュープロリド酢酸塩、トリ��トレリンパモ酸塩、酢酸メドロキシプロゲステロン、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、ラロキシフェン、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド、酢酸メゲストロール、ＣＰ−７２４７１４；ＴＡＫ−１６５、ＨＫＩ−２７２、エルロチニブ、ラパタニブ、カネルチニブ、ＡＢＸ−ＥＧＦ抗体、アービタックス、ＥＫＢ−５６９、ＰＫＩ−１６６、ＧＷ−５７２０１６、ロナファルニブ、ＢＭＳ−２１４６６２、チピファルニブ；アミホスチン、ＮＶＰ−ＬＡＱ８２４、ヒドロキサミン酸サブエロイルアニリド、バルプロ酸、トリコスタチンＡ、ＦＫ−２２８、ＳＵ１１２４８、ソラフェニブ、ＫＲＮ９５１、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナグレリド、Ｌ−アスパラギナーゼ、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチン、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエチルスチルベストロール、エピルビシン、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオキシメステロン、フルタミド、ゲムシタビン、グリベック（gleevac）、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、ロイプロリド、レバミゾール、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、ミトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ニルタミド、オクトレオチド、オキサリプラチン、パミドロネート、ペントスタチン、プリカマイシン、ポルフィマー、プロカルバジン、ラルチトレキセド、リツキシマブ、ストレプトゾシン、テニポシド、テストステロン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トレチノイン、ビンデシン、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、フェニルアラニンマスタード、ウラシルマスタード、エストラムスチン、アルトレタミン、フロクスウリジン、５−デオキシウリジン、シトシンアラビノシド、６−メルカプトプリン、デオキシコホルマイシン、カルシトリオール、バルルビシン、ミトラマイシン、ビンブラスチン、ビノレルビン、トポテカン、ラゾキシン、マリマスタット、ＣＯＬ−３、ネオバスタット、ＢＭＳ−２７５２９１、スクアラミン、エンドスタチン、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＥＭＤ１２１９７４、インターロイキン−１２、ＩＭ８６２、アンギオスタチン、ビタキシン、ドロロキシフェン、イドキシフェン、スピロノラクトン、フィナステリド、シメチジン、トラスツズマブ、デニロイキンジフチトクス、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、パクリタキセル、イリノテカン、トポテカン、ドキソルビシン、ドセタキセル、ビノレルビン、ベバシズマブ（モノクローナル抗体）及びアービタックス、クレモホール非含有パクリタキセル、エピチロン（epithilone）Ｂ、ＢＭＳ−２４７５５０、ＢＭＳ−３１０７０５、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、ピペンドキシフェン、ＥＲＡ−９２３、アルゾキシフェン、フルベストラント、アコルビフェン、ラソフォキシフェン、イドキシフェン、ＴＳＥ−４２４、ＨＭＲ−３３３９、ＺＫ１８６６１９、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４、ＶＸ−７４５、ＰＤ１８４３５２、ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、テムシロリムス、ＡＰ−２３５７３、ＲＡＤ００ｌ、ＡＢＴ−５７８、ＢＣ−２１０、ＬＹ２９４００２、ＬＹ２９２２２３、ＬＹ２９２６９６、ＬＹ２９３６８４、ＬＹ２９３６４６、ワートマニン、ＺＭ３３６３７２、Ｌ−７７９，４５０、ＰＥＧ−フィルグラスチム、ダルベポエチン、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、ゾレンドロネート（zolendronate）、プレドニゾン、セツキシマブ、顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子、ヒストレリン、ＰＥＧ化インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ａ、ＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂ、インターフェロンα−２ｂ、アザシチジン、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、レナリドマイド、ゲムツズマブ、ヒドロコルチゾン、インターロイキン−１１、デクスラゾキサン、アレムツズマブ、全トランスレチノイン酸、ケトコナゾール、インターロイキン−２、メガストロール、免疫グロブリン、ナイトロジェンマスタード、メチルプレドニゾロン、イブリツモマブチウキセタン、エンドロゲン、デシタビン、ヘキサメチルメラミン、ベキサロテン、トシツモマブ、三酸化ヒ素、コルチゾン、エチドロン酸、ミトタン、シクロスポリン、ダウノルビシンリポソーム、エルウィニア−アスパラギナーゼ、ストロンチウム８９、カソピタント、ネツピタント、ＮＫ−１受容体アンタゴニスト、パロノセトロン、アプレピタント、ジフェンヒドラミン、ヒドロキシジン、メトクロプラミド、ロラゼパム、アルプラゾラム、ハロペリドール、ドロペリドール、ドロナビノール、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プロクロルペラジン、グラニセトロン、オンダンセトロン、ドラセロトン、トロピセトロン、ペグフィルグラスチム、エリスロポエチン、エポエチンα及びダルベポエチンα、イピリムマブ、ベムラフェニブ、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項４５から５９のいずれかに記載の使用。
【請求項６０】
前記更なる抗癌剤が、ＦＬＴ−３インヒビター、ＶＥＧＦＲインヒビター、ＥＧＦＲ−ＴＫインヒビター、オーロラキナーゼインヒビター、ＰＩＫ−１修飾剤、Ｂｃｌ−２インヒビター、ＨＤＡＣインヒビター、ｃ−ＭＥＴインヒビター、ＰＡＲＰインヒビター、Ｃｄｋインヒビター、ＥＧＦＲ−ＴＫインヒビター、ＩＧＦＲ−ＴＫインヒビター、抗ＨＧＦ抗体、ＰＩ３キナーゼインヒビター、ＡＫＴインヒビター、ＪＡＫ／ＳＴＡＴインヒビター、チェックポイント−１若しくは２のインヒビター、接着斑キナーゼインヒビター、Ｍａｐキナーゼキナーゼ（ｍｅｋ）インヒビター、ＶＥＧＦトラップ抗体、又はそれらの混合物である、請求項４５から５８のいずれかに記載の使用。
【請求項６１】
必要とする患者における病態又は状態を治療するための医薬の製造における請求項１から２２のいずれかに記載された化合物の使用であって、前記病態又は状態はオートファジーの阻害に好ましく応答する、使用。
【請求項６２】
前記病態又は状態が、関節リウマチ、マラリア、抗リン脂質抗体症候群、ループス、慢性じんましん、又はシェーグレン症候群である、請求項６１に記載の使用。
【請求項６３】
前記病態又は状態がマラリアである、請求項６２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願及び助成金による支援）
本出願は、本出願と同一名称の２０１１年４月２９日出願の米国仮出願第６１／４８０６４１号明細書の優先権の利益を主張し、その全内容が参照により本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は、国立癌研究所が交付するアブラムソン癌センターの試験研究助成金による政府支援を受けてなされた。政府は、本発明について一定の権利を有する。
【０００３】
本発明は、新規のビスアミノキノリン化合物、それらの新規化合物を含む医薬組成物、及び生体系におけるオートファジー（自食作用）を阻害する方法に関する。本発明の化合物及び／又は組成物を単独で又は少なくとも１つの更なる抗癌剤と組み合わせて用いて必要な患者での癌を治療する方法は、本発明の更なる態様である。単独又は本明細書に別に記載の更なる抗癌剤と組み合わせた本発明の化合物と組み合わせて放射線治療を使用することは、本発明の更なる態様である。オートファジー阻害が好ましい治療上の役割を果たす病態及び／又は状態（関節リウマチ、マラリア、抗リン脂質抗体症候群、ループス、慢性じんましん、及びシェーグレン症候群を含む）を本発明の化合物で治療する方法は、本発明の更なる態様である。
【背景技術】
【０００４】
オートファジーは、オートファジー小胞（ＡＶ）中へのオルガネラ及び蛋白質の隔離とリソソーム融合によるこのカーゴの分解とからなる（非特許文献１）。オートファジーは、腫瘍細胞が代謝ストレスや治療ストレスに耐えることを可能にする（非特許文献２〜５）。多数の刊行物が、治療誘発性のオートファジーが多くの抗癌剤に対する主要な耐性メカニズムであることを示している。クロロキン（ＣＱ；図１の化合物１）の誘導体は、リソソームを阻害することによってオートファジーをブロックする（非特許文献３、６、７）。グリオーマ患者に対してカルムスチン及び放射線を用いてのプラセボと対照したＣＱのランダム化臨床第ＩＩＩ相試験からは、ＣＱで治療した患者の生存期間倍増傾向が報告されている（非特許文献８）。これらの知見に基づいて、癌療法とヒドロキシクロロキン（ＨＣＱ：図１の化合物２）（ＣＱよりも用量の漸増が安全である）とを併用した臨床試験が開始されている。暫定的結果はこれらの併用が活性を有することを示すが（非特許文献９）、この活性が常にＨＣＱの追加の結果なのかどうかは未だ不明である。オートファジーを阻害するには、高ミクロモル濃度のＨＣＱが必要とされる。癌患者でのＨＣＱを用いたオートファジー阻害についていくつかの薬力学的証拠が存在しているが、全ての患者において十分な濃度が達成されるわけではないので一貫性はない（非特許文献１０）。オートファジーのより効能のある阻害剤を開発するという、未だ満たされない必要性が存在している。ＣＱの二量体アナログの設計及び合成は、多価性がもたらす熱力学的利点を利用しており（非特許文献１１及び１２）、１０年超に渡って集中的な研究の対象となっている（非特許文献１３〜１５）。Vennerstromによる初期の報告（非特許文献１４）には、潜在的な抗マラリア剤としてのヘテロアルカンで架橋されたビスキノリン類の合成が記載されているが、それらの化合物はいずれも、更なる研究を正当化するのに十分な抗マラリア活性を有さなかった。それに続いてSergheraert（非特許文献１３）は、テトラキノリン、即ちビスキノリンの二量体が強力な抗マラリア剤をもたらすことを報告しており、多価性方策の適用によって、少なくとも抗マラリア活性に関しては増大した効能がもたらされる可能性を確認している。
【０００５】
更に最近になって、Lee（非特許文献１６）は、フッ化キノリンアナログによるＡＫＴ阻害剤の増強作用を記載している。Solomon（非特許文献１７）は、ピペラジンコネクタの使用に基づいて「リポジショニングされた」クロロキン二量体の調製を報告している。これらの結果は、有効な癌の化学療法薬の新規グループ開発の主成分として、これらのクロロキンアナログが役立ち得るということを示唆する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Lum JJ, DeBerardinis RJ, Thompson CB. 後生動物におけるオートファジー：豊かな場所での細胞生存、Nat Rev Mol Cell Biol 2005;6: 439-48.
【非特許文献２】Amaravadi RK, Thompson CB. 癌治療における治療誘発性のオートファジー及び壊死の役割、Clin Cancer Res 2007;13: 7271-9.
【非特許文献３】Amaravadi RK, Yu D, Lum JJら、Ｍｙｃにより誘導されるリンパ腫モデルにおいてオートファジー阻害は治療誘発性のアポトーシスを増強する、J Clin Invest 2007 ;1 17: 326-36.
【非特許文献４】Degenhardt K, Mathew R, Beaudoin Bら、オートファジーは腫瘍細胞の生存を促進し、壊死、炎症、及び腫瘍形成を制限する、Cancer Cell 2006;10: 51-64.
【非特許文献５】Amaravadi RK. 卵巣癌においてオートファジーによって誘導される腫瘍休眠、J Clin Invest 2008.
【非特許文献６】Carew JS, Nawrocki ST, Kahue CNら、オートファジーを標的にすることによって、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤ＳＡＨＡの抗癌活性が増大し、Ｂｃｒ−Ａｂｌによる薬剤耐性を克服する、Blood 2007.
【非特許文献７】Degtyarev M, De Maziere A, Orr Cら、Ａｋｔ阻害はオートファジーを促進し、ＰＴＥＮヌル腫瘍をリソソーム作用剤に対して増感させる、J Cell Biol 2008; 183: 101-16.
【非特許文献８】Sotelo J, Briceno E, Lopez-Gonzalez MA. 多形性膠芽腫についての従来療法へのクロロキンの追加：ランダム化二重盲検プラセボ対照試験、Ann Intern Med 2006;144: 337-43.
【非特許文献９】Amaravadi RK, Lippincott-Schwartz J, Yin XMら、癌治療に関してオートファジーを標的にすることについての原理と最新戦略、Clin Cancer Res 2011 ; 17: 654-66.
【非特許文献１０】Rosenfeld MR GS, Brem S, Mikkelson T, Wang D, Piao S, Davis L, O'Dwyer PJ, Amaravadi RK. 新たに神経膠芽腫と診断され、ヒドロキシクロロキンとアジュバントのテモゾロミド及び放射線との併用治療の第Ｉ相試験（ＡＢＴＣ−０６０３）で治療された患者における、オートファジー阻害の薬物動態解析及び薬力学的証拠、J Clin Oncol 2010;28: Abstract # 3086.
【非特許文献１１】Vance D, Shah M, Joshi A, Kane RS. 多価性：薬物設計の有望な戦略、Biotechnol Bioeng 2008; 101 : 429-34.
【非特許文献１２】Shrivastava A, Nunn AD, Tweedle MF. デザイナーペプチド：自然に学ぶ、Curr Pharm Des 2009;15: 675-81.
【非特許文献１３】Girault S, Grellier P, Berecibar Aら、線状又は環状のアミノリンカーを有するビス、トリ、及びテトラキノリンの抗プラスモジウム活性並びに細胞毒性、J Med Chem 2001 ;44: 1658-65.
【非特許文献１４】Vennerstrom JL, Ager AL, Jr., Dorn Aら、ビスキノリン類、２．抗マラリア性のＮ，Ｎ−ビス（７−クロロキノリン−４−イル）ヘテロアルカンジアミン、J Med Chem 1998;41 : 4360-4.
【非特許文献１５】Burnett JC, Schmidt J J, Stafford RGら、ボツリヌス神経毒素Ａのメタロプロテアーゼ活性に対する新規低分子量阻害剤、Biochem Biophys Res Commun 2003 ;310: 84-93.
【非特許文献１６】Hu C, Raja Solomon V, Cano P, Lee H. Ａｋｔ阻害剤による腫瘍細胞の死滅を顕著に増感し、非癌細胞に対する細胞毒性は最小限である４−アミノキノリン誘導体、Eur J Med Chem 2010;45: 705-9.
【非特許文献１７】Solomon VR, Hu C, Lee H. 抗乳癌特性を有するクロロキンアナログの設計と合成、Eur J Med Chem 2010;45: 3916-23.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の１つの目的は、生体系（特に必要な患者又は対象を含む）のオートファジーを阻害するための新規化合物を提供することである。
【０００８】
本発明の別の目的は、オートファジー阻害が患者又は対象の病態及び／又は状態に対して有益であるような病態及び／又は状態を治療することである。
【０００９】
本発明の更なる目的は、オートファジー、特に癌やその転移を含む病態及び／又は状態に関連したオートファジーを阻害するのに用いられる医薬組成物を提供することである。
【００１０】
本発明のまた更なる目的は、本明細書に示す化合物、組成物、及び／又は方法を用いて、必要な患者又は対象の癌（癌の転移を含む）を抑制、治療、又は予防することである。
【００１１】
本発明のまた別の目的は、オートファジー阻害が好ましい効果を提供する疾患（特に関節リウマチ、マラリア、抗リン脂質抗体症候群、ループス、慢性じんましん、及びシェーグレン症候群を含む）を抑制、治療、又は予防することである。
【００１２】
本発明のこれらの及び／又はその他の目的のいずれか１つ以上は、以下の本発明の説明から容易に得られる。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は化学構造Ｉの化合物、又はその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物、若しくは多形体に関する。
【００１４】
【化１】
2014513101.tif 000002
【００１５】
式中、Ｒ1及びＲ1'は、それぞれ独立してＨ、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩ）、ＣＮ、ＮＯ2、任意で置換されるＣ1−Ｃ6アルキル（置換される場合、好ましくは１つ若しくは２つの水酸基又は３つ〜５つのフルオロ基を用いて置換される）、任意で置換されるＯ−Ｃ1−Ｃ6アルキル（好ましくはＯＣＨ3）、任意で置換されるＣ2−Ｃ7アシル（好ましくはアセチル）、又は任意で置換されるＣ2−Ｃ7エステル（オキシカルボニルエステル又はカルボキシエステル、好ましくはカルボキシエステル）であり、
Ｒ及びＲ’は、それぞれ独立してＨ、Ｃ1−Ｃ6の任意で置換されるアルキル基、Ｃ1−Ｃ7（好ましくはＣ2−Ｃ7）の任意で置換されるアシル基、Ｃ2−Ｃ7の任意で置換されるカルボキシエステル基（Ｒ又はＲ’が結合した窒素原子と一緒になってウレタン基を形成する）であり、
Ｌは、−（ＣＨ2Ｙ）n−Ｘ−（Ｙ’ＣＨ2）n−基又はＡ−（ＣＨ2−ＣＨ2−Ｚ）n−Ａ’基（Ａ又Ａ’のいずれか一方は、化学構造Ｉの化合物における２つのアミン基のいずれか一方に結合することができる）であり、ＬにおけるＣＨ2基の少なくとも１つは、Ｃ1−Ｃ3アルキル基（これ自体も１つ又は２つの水酸基を用いて任意で置換される）を用いて任意で置換され、
Ｘは、存在しないか、（ＣＨ2）jＯ、Ｓ、又はＮ−Ｒ’’であり、
Ｙは、存在しないか、ＣＨ2、Ｏ、ＣＨ2Ｏ、又はＮ−Ｒ’’であり、Ｙ’は、存在しないか、ＣＨ2、Ｏ、ＯＣＨ2、又はＮ−Ｒ’’であり、但しＸ、Ｙ、及びＹ’のうちの１つ以上が存在する場合には、Ｘ及びＹ、Ｘ及びＹ’、又はＹ及びＹ’のそれぞれ（存在する場合）は安定な結合を形成し、
Ｒ’’は、Ｈ、又は任意で置換されるＣ1−Ｃ6（好ましくはＣ1−Ｃ3）アルキル基であり、
ｊは、１、２、又は３（好ましくは１又は２）であり、
ｎは、０、１、２、３、又は４であり、但しｎが０の場合、Ｘは（ＣＨ2）jであり、ここでｊは少なくとも１であり、少なくとも１つのＣＨ2基がＣ1−Ｃ3アルキル基（これ自体も１つ又は２つの水酸基を用いて任意で置換される）を用いて任意で置換され、
Ａは、存在しないか又は（ＣＨ2）jであり、Ａ’は（ＣＨ2）jであり、ここでＡ又はＡ’における少なくとも１つのＣＨ2基は、Ｃ1−Ｃ3アルキル基（これ自体も１つ又は２つの水酸基を用いて任意で置換される）を用いて任意で置換され、
Ｚは、Ｏ又はＮ−Ｒzであり、
Ｒzは、Ｈ、又は任意で置換されるＣ1−Ｃ3アルキル基である。
【００１６】
本発明の好ましい態様においては、Ｒ１及びＲ１’は、それぞれ独立してＨ、ハロ基、ニトロ基、又はトリフルオロメチル基であり、好ましくはクロロ基である。Ｒ及びＲ’は、好ましくはそれぞれ独立してＨ、Ｃ1−Ｃ3の任意で置換されるアルキル基（これ自体も好ましくは少なくとも１つの水酸基を用いて置換される）、アルコキシ基、アミン基、モノアルキルアミン基、又はジアルキルアミン基である。ここで、アミン基又はモノアルキルアミン基は、アミンの位置において１つ又は２つの７−置換−４−キノリニル基を用いて任意で置換され、アミンはキノリニル基の４位に結合し、各キノリニル基の７位は任意で置換される（好ましくは上記の一般構造Ｉについて概述したように、Ｒ1基及び／又はＲ1'基を用いて）。または、モノアルキルアミン又はジアルキルアミンの１つ又は両方のアルキル基が、それ自体も少なくとも１つの水酸基、アルコキシ基、アミン、モノアルキルアミン、又はジアルキルアミンを用いて更に任意で置換され、ここでアミン又はモノアルキルアミンは、アミンの位置において１つ又は２つの７−置換−キノリニル基を用いて任意で置換され、アミンはキノリニル基の４位に結合し、各キノリニル基の７位は任意で置換される（好ましくは上記の一般構造Ｉについて概述したように、Ｒ1基及び／又はＲ1'基を用いて）。上記アルコキシ基（例えばメトキシ又はエトキシ）のそれぞれは、アルコキシ基（好ましくはメトキシ基）を用いて任意で更に置換されてジエーテル置換基を形成する。
【００１７】
本発明の一部の好ましい態様においては、Ｌは−（ＣＨ2Ｙ）n−Ｘ−（Ｙ’ＣＨ2）n−基であり、ここでＸはＮ−Ｒ’’であり、Ｙ及びＹ’は、それぞれ独立して存在しないか又はＣＨ2であり、Ｒ’’は、Ｈ又はＣ1−Ｃ3アルキル基であり、このＣ1−Ｃ3アルキル基は、少なくとも１つの水酸基、アルコキシ基、アミン基、モノアルキルアミン基、又はジアルキルアミン基を用いて任意で置換される。ここで、アミン基又はモノアルキルアミン基は、アミンの位置において１つ又は２つの７−置換−４−キノリニル基を用いて任意で置換され、アミンはキノリニル基の４位に結合し、各キノリニル基の７位は任意で置換される（好ましくは上記の一般構造Ｉについて概述したように、Ｒ1及び／又はＲ1'を用いて）。または、モノアルキルアミン又はジアルキルアミンの１つ又は両方のアルキル基が、それ自体も少なくとも１つの水酸基、アルコキシ基、アミン、モノアルキルアミン、又はジアルキルアミンを用いて更に任意で置換され、ここでアミン又はモノアルキルアミンは、１つ又は２つの７−置換キノリニル基を用いてアミンの位置において任意で置換され、アミンはキノリニル基の４位に結合し、各キノリニル基の７位は任意で置換される（好ましくは上記の一般構造Ｉについて概述したように、Ｒ1及び／又はＲ1'を用いて）。上記アルコキシ基（例えばメトキシ又はエトキシ）のそれぞれは、アルコキシ基（好ましくはメトキシ基）を用いて任意で更に置換されてジエーテル置換基を形成する。
【００１８】
本発明の更に好ましい化合物には、本明細書に示すスキーム１及びスキーム３〜１０、並びに図１４、１５及び１５Ａに示される種々のスキーム中に示されるものが含まれる。
【００１９】
本発明の別の態様においては、医薬組成物が上記の式Ｉの化合物又は本明細書に別に記載の化合物を、薬学的に許容される担体、添加剤、又は賦形剤と組み合わせて含み、任意で少なくとも１つの更なる抗癌剤と組み合わされる。
【００２０】
生体系、特に患者又は対象においてオートファジーを阻害する方法は、本発明の更なる一態様である。本発明のこの態様においては、オートファジーを阻害するために、本明細書に別に記載のビスアミノキノリン化合物を、必要な患者又は対象に投与するなどして、生体系に与える。もたらされる阻害は、生体系において観察又は利用されて、癌（癌の転移を含む）の抑制、治療及び／又は予防、あるいはオートファジー阻害が好ましい結果をもたらす１つ以上の病態若しくは状態（特に関節リウマチ、マラリア、抗リン脂質抗体症候群、ループス、慢性じんましん、及びシェーグレン症候群を含む）の抑制、治療及び／又は予防を含め、好ましい結果をもたらすことができる。
【００２１】
癌（癌の転移及び薬剤耐性癌を含む）を抑制し、治療し及び／又はその可能性を低減する方法は、少なくとも１つの本発明の化合物を、任意で本明細書に別に記載の少なくとも１つの更なる抗癌剤と組み合わせて、必要な患者に投与することを含む。
【００２２】
本発明はまた、オートファジー阻害が好ましい結果を提供する、必要な患者における疾患、病態及び／又は状態（関節リウマチ、マラリア、抗リン脂質抗体症候群、ループス、慢性じんましん、及びシェーグレン症候群を含む）を治療、抑制、及び／又は予防することにも関する。この方法は、患者に少なくとも１つの本発明の化合物を投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】モノアミノキノリン及びビスアミノキノリンの化学構造である。
【図２】ビスアミノキノリンの合成スキームである。
【図３】ＬＣ３のイムノブロッティングに及ぼすＬｙｓ０１〜Ｌｙｓ０４の影響、並びに４時間処理したＬＮ２２９細胞由来のライセートにおけるイムノブロッティング及びＬＣ３ＩＩ／ＬＣ３Ｉ比の定量を示す。グラフは、各実験について、対照処理した細胞のＬＣ３ＩＩ／ＬＣ３Ｉ比に対して正規化した各処理のＬＣ３ＩＩ／ＬＣ３Ｉ比（平均＋／−標準偏差）を示す。
【図４】ＨＣＱと比較したＬｙｓ０１のオートファジー阻害及び細胞毒性を示す。（Ａ）は、４時間に渡って図示のように処理されたＬＮ２２９（ＧＦＰ−ＬＣ３）細胞の代表的な映像である。白色矢印は小さい斑点、赤色矢印は密集した斑点である。グラフは、斑点個数／細胞（平均＋／−標準誤差）を示す。（Ｂ）は、ＤＭＳＯ、ＨＣＱ（１０μΜ）、又はＬｙｓ０ｌ（１０μΜ）を用いて処理（４時間）されたＬＮ２２９（ＧＦＰ−ＬＣ３）細胞の代表的な電子顕微鏡写真である。矢印はオートファジー小胞である。（Ｃ）は、２４時間に渡って図示のように処理されたＬＮ２２９細胞のＬＣ３のイムノブロッティング、バフィロマイシン併用処理と対照併用処理とを対比したＬＣ３ＩＩ／ＬＣ３Ｉ比の計算比である。点線より上はオートファジー誘導剤又は対照を示しており、点線より下はオートファジー阻害剤を示している。（Ｄ）は、４つの細胞株のＭＴＴ試験（７２時間）である。赤色はＬｙｓ０１、青色はＬｙｓ０２、紫色はＬｙｓ０３、緑色はＬｙｓ０４、橙色はＨＣＱである。図示の値は、５レプリケート／処理での平均＋／−標準誤差である。
【図５】Ｌｙｓ０５（Ｌｙ０１水溶性塩）のオートファジー阻害及び細胞毒性を示す。（Ａ）は、図示のように処理したｃ８１６１細胞のＬＣ３及びｐ６２のイムノブロッティングである。（Ｂ）は、７２時間の時点でのｃ８１６１細胞のＭＴＴ試験である。ＨＣＱはヒドロキシクロロキンである。図示の値は、５レプリケート／処理条件での平均＋／−標準偏差である。＊分析用の細胞は残らなかった。
【図６】Ｌｙｓ０５のインビボのオートファジー阻害及び抗腫瘍活性を示す。（Ａ）は、ＰＢＳ、ＨＣＱ（６０ｍｇ／ｋｇ）、又はＬｙｓ０５（７６ｍｇ／ｋｇ）を用いた２日間のｉ．ｐ．処理後に回収したｃ８１６１異種移植腫瘍の代表的な電子顕微鏡写真（１２，０００×）である。矢印はオートファジー小胞である。スケールバー２μｍ。（Ｂ）は、各処理群からの２つの代表的な腫瘍によるオートファジー小胞個数／細胞（平均±標準誤差）の定量である。（Ｃ〜Ｄ）では、１２０５Ｌｕ異種移植片を、ＰＢＳ（青色）、ＨＣＱ（６０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．）（緑色）、又はＬｙｓ０５（７６ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．）（赤色）を用いて毎５日中の３日処理した。（Ｃ）は、１４日間の腫瘍体積である。（Ｄ）は、１日当たりの腫瘍成長速度である。（Ｅ〜Ｇ）では、ＨＴ２９異種移植片をヌードマウスの脇腹に作成し、ＰＢＳ、Ｌｙｓ０５（各日１０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．）、Ｌｙｓ０５（各日４０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．）、又はＬｙｓ０５（毎５日中の３日の８０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．）で処理した。（Ｅ）は、１日当たりの平均腫瘍成長速度である。（Ｆ）は、１４日間の腫瘍体積である。（Ｇ）は、切除した腫瘍の重量である。＊ｐ＜０．０５。
【図７】Ｌｙｓ０５又はＨＣＱで処理したメラノーマ及び結腸癌の異種移植片におけるオートファジー阻害及び腫瘍壊死を示す。（Ａ）は、４８時間に渡り毎日ｉ．ｐ．注射をして図示のように処理した個々のｃ８１６１腫瘍由来のライセートでのＬＣ３のイムノブロッティング、ＬＣ３ＩＩ／ＬＣ３Ｉ比の定量（平均＋／−標準誤差）である。（Ｂ）は、１４日間の処理後に回収した１２０５Ｌｕ腫瘍異種移植片のＨ＆Ｅ染色切片中における腫瘍壊死（矢印）、メラノーマ腫瘍細胞の電子顕微鏡写真（７０００〜１２０００×）である。矢印は、オートファジー小胞（白色）、アポトーシス細胞（橙色）である。（Ｃ）は、毎日投薬（１０、４０ｍｇ／ｋｇ）又は５日中の３日（８０ｍｇ／ｋｇ）で１４日間処理したＨＴ２９異種移植片におけるＬＣ３のイムノブロッティングである。
【図８】Ｌｙｓ０５（毎５日中の３日の７６ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．）に関する毒性を示す。（Ａ）では、マウスは３日間の投薬後に背を丸めて不活発となった。（Ｂ）では、１０匹中３匹のマウスが腸閉塞を発症した。（Ｃ）は、１匹のマウスの回腸末端部に存在した異形症のパネート細胞（矢印）を示す。
【図９】最高用量のＬｙｓ０５処理が遺伝的なオートファジー欠損の腸表現型を再現することを示す。（Ａ〜Ｆ）では、ＰＢＳ、Ｌｙｓ０５（１０〜８０ｍｇ／ｋｇ）で処理したＨＴ２９異種移植片を保持したマウスの体重及び腸を分析した。（Ａ）は、毎日の体重である。（Ｂ）は、１４日間の処理後に切除した代表的な消化管である。（Ｃ）は、ＨＴ２９異種移植片を１４日間保持させたマウス回腸陰窩を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した代表的な画像（４０倍）である。（４０倍）矢印は、パネート細胞である。（Ｄ）は、パネート細胞数／陰窩である。（Ｅ）は、パネート細胞機能不全スコアである（＊ｐ＜０．０５）。（Ｆ）は、リゾチーム陽性細胞のスコアである（＊ｐ＝０．００１）。ＰＢＳ及びＬｙｓ０５で処理（毎５日中の３日の８０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．）したマウスにおける回腸のリゾチーム免疫蛍光（緑色）の代表的な画像である。
【図１０】パネート細胞機能不全の程度を示す。４０倍率下において、エオシン好性顆粒の大きさ及び個数／パネート細胞を、１試料当たり１０パネート細胞についてスコアリングした。Ａ０＝正常な大きさ及び数、Ａ１：減少した大きさ、正常個数、Ａ２：正常な大きさ、減少した個数、Ａ３：減少した大きさ及び個数である。
【図１１】Ｌｙｓ０５が、リソソーム中に蓄積してリソソームを中性化することによってオートファジーを阻害することを示す。（Ａ）は、１２０５Ｌｕ細胞（ＰＢＳ、ＨＣＱ（１０μΜ）、又はＬｙｓ０５（１０μΜ）で２４時間処理したもの）及び回収した１２０５Ｌｕ異種移植腫瘍（ＰＢＳ、ＨＣＱ（毎５日中の３日の６０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．）、又はＬｙｓ０５（毎５日中の３日の７６ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．）を用いて１４日間処理したもの）をホモジナイズし、全細胞（ＷＣ）及びリソソーム（Ｌ）の画分に分画した。分析用の濃縮したリソソームの単離をＬＡＭＰ２のイムノブロッティングによって確認した。（Ｂ）は、細胞及び腫瘍の全細胞ホモジネート中並びにリソソームホモジネート中における、ＨＣＱ又はＬｙｓ０５の濃度である。（Ｃ）は、３０分間に渡って図示のように処理し、リソトラッカーレッドを用いて染色した１２０５Ｌｕ細胞の蛍光画像である。細胞ごとのリソトラッカーの斑点（赤色）を、３つの高倍率視野についてスコアリングした。青色は、核のＤＡＰＩ染色である。図中のデータは、平均±標準誤差である。（Ｄ）は、２４時間に渡って図示のように処理してアクリジンオレンジ（ＡＯ）で染色したｃ８１６１細胞の蛍光画像である。橙色は凝集したＡＯ、緑色は散在したＡＯである。
【図１２】ＨＣＱ及びＬｙｓ０５についての高速液体クロマトグラフィータンデム質量分析試験である。１２０５Ｌｕ細胞（２４時間）及び１２０５Ｌｕ腫瘍（１４日）。ＷＣは全細胞ホモジネート、Ｌはリソソーム亜画分、ＨＣＱはヒドロキシクロロキンである。
【図１３】Ｌｙｓ０５処理に伴うリソソーム酵素の障害及びリソソーム外への漏出を示す。（Ａ）は、ＰＢＳ、ＨＣＱ（１０μΜ）、Ｌｙｓ０５（１０μΜ）を用いて２４時間処理した１２０５Ｌｕ細胞の全細胞（白色、ＷＣ）及びリソソーム（黒色、Ｌ）の画分の酸性ホスファターゼ活性であり、（Ｂ）は、それらの画分のカテプシンＤイムノブロッティングである。グラフは、３つの独立した実験の平均＋／−標準誤差を示す。（Ｃ）は、ＰＢＳ、ＨＣＱ（６０ｍｇ／ｋｇ）、Ｌｙｓ０５（７６ｍｇ／ｋｇ）のｉ．ｐ．で毎５日中の３日処理した１２０５Ｌｕ異種移植片（腫瘍）の全細胞（白色、ＷＣ）及びリソソーム（黒色、Ｌ）の画分における酸性ホスファターゼ活性であり、（Ｄ）は、それらの画分のカテプシンＤイムノブロッティングである。全細胞ホモジネート（白色）及びリソソームホモジネート（黒色）は、３つの別々の腫瘍から調製され、まとめてプールした。＊ｐ＜０．０５。
【図１４】合成化合物Ｌｙｓ０６〜Ｌｙｓｌ２の化学構造である。Ｌｙｓ０６〜Ｌｙｓｌ２の化学構造を示す。
【図１５】合成化合物Ｌｙｓ１３〜Ｌｙｓ１８の化学構造である。Ｌｙｓ１３〜Ｌｙｓ１８の化学構造を示す。
【図１５Ａ】研究中のいくつかの更なるビスアミノキノリン系オートファジー阻害剤を示す。
【図１６】図示した本発明の選ばれた化合物について、ＬＮ２２９でのＭＴＴ試験のＩＣ50値を示す表１である。
【図１７】熱帯熱マラリア原虫での本発明のいくつかの化合物のＩＣ50（Ｍ）値を示す表２である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
次の用語は、本明細書において本発明を説明するために用いられる。用語が本明細書で特に定義されない場合には、その用語は当業者による使用と一致した方法で用いられるものと理解される。
【００２５】
ある数値の範囲が与えられた場合には、その範囲の上限値と下限値との間にある各値は、文中に別に明記しない限り下限値の単位の１０分の１まで、及びその記載された範囲におけるいずれかの他の記載された値又は介在値は、本発明に包含されるものと理解される。これらのより狭い範囲の上限値及び下限値は、そのより狭い範囲に独立して含まれてもよく、同様に本発明に包含され、記載された範囲でのいずれかの具体的に除外された限界値に従う。記載された範囲が限界値の一方又は両方を含む場合には、それらの限界値の一方又は両方を除外した範囲も本発明に含まれる。ある置換基が１つ以上のマーカッシュ群で可能であるものである場合には、安定な結合を形成する置換基のみが用いられるものと理解される。
【００２６】
別に定義されない限り、本明細書で用いる全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者よって通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似又は同等のいずれかの方法及び材料も本発明の実施又は試験に用いることができるが、ここでは好ましい方法及び材料を説明する。
【００２７】
本明細書及び特許請求の範囲で用いられる場合、単数形の「ある」（a、an）、及び「その（前記）」（the）には、文脈において明白に別に指示がない限り、複数への言及が包含されることに留意しなければならない。
【００２８】
更に、次の用語は以下に示す定義を有する。
【００２９】
用語「患者」又は「対象」は、本明細書全体にわたって、文脈により動物、通常は哺乳動物（特に家畜及び好ましくはヒトを含む）を記すために用いられ、本発明の化合物又は組成物を用いた治療（予防的治療（予防）を含む）が提供される。ヒト患者などの特定の動物に特異的な感染、状態又は病態の治療については、用語「患者」はその特定の動物を指す。殆どの場合、本発明の患者又は対象は、一方又は両方の性別のヒト患者である。
【００３０】
用語「有効（な）」は、別に示されない限り、その結果が感染及び／又は病態の予防及び／又は治療法に関するか、あるいは本明細書に別に記載の予防及び／又は治療法に関するかを問わず、その使用の文脈において用いられる場合に所期の結果を生じる又はもたらす量の化合物又は成分を記すために用いられる。用語「有効（な）」は、本出願において別に記載される又は使用される全てのその他の有効量又は有効濃度の用語（用語「治療的に有効」を含む）を包含する。
【００３１】
用語「化合物」は、本明細書で開示されるいずれかの特定の化合物又は生物活性剤を記すために用いられ、いずれか及び全ての立体異性体（ジアステレオマーを含む）、個々の光学異性体（エナンチオマー）又はラセミ混合物、医薬的に許容される塩、並びにプロドラッグの形態を含む。用語「化合物」は、本明細書においては安定な化合物を指す。文脈におけるその使用の範囲内で、用語「化合物」は本明細書に別に記載の単一の化合物又は化合物の混合物を指し得る。マーカッシュ群又は置換基又は結合のその他の群に属する置換基又は結合の選択肢は、そのマーカッシュ群又はその他の群に属するそれらの選択肢から安定な化合物を形成するために提供されると理解される。
【００３２】
用語「生物活性剤」は、本発明における使用のために処方可能ないずれかの生理的に活性な化合物又は薬物を指す。生物活性剤の例としては、オートファジーを阻害し癌を治療するために用いられる本発明の化合物が含まれ、本明細書に別に記載するその他の化合物又は薬剤も含まれる。
【００３３】
用語「治療する」（treat）、「治療すること」（treating）、及び「治療」（treatment）は、疾患のおそれがある又は疾患に罹患した患者に利益を提供するいずれかの行為を指すために同義的に用いられ、少なくとも１つの症状の緩和又は抑制による状態の改善、疾患の進行の遅延、疾患の発症の予防又は遅延などが含まれる。
【００３４】
「治療」は、本明細書で用いる場合、主に癌の予防的及び治癒的な治療の両方を包含する。
本発明の化合物は、例えば疾患発生の前に哺乳動物に予防的に投与して、その疾患の可能性を低減することができる。予防的な投与は、哺乳動物での疾患のその後の発生の可能性を低減若しくは減少させ、又はその後に発生する疾患（特に癌の転移を含む）の重症度を減少させるのに有効である。あるいは、本発明の化合物は、例えば既に疾患に罹患している哺乳動物に治療的に投与できる。治療的な投与の一実施形態においては、本発明の化合物の投与は疾患を除去し、及び癌の緩解をもたらし又はその転移の可能性を実質的に除去するのに有効である。本発明の化合物の投与は、癌の場合に、疾患の重症度を減少させるのに又は罹患した哺乳動物の寿命を延ばすのに有効である。
【００３５】
用語「医薬的に許容される」は、本明細書で用いる場合、本明細書に記載の治療を達成するために化合物又は組成物が対象への投与に適し、疾患の重症度及び治療の必要性に照らして不当に有害な副作用を有さないことを意味する。
【００３６】
用語「抑制（阻害）」は、本明細書で用いる場合、起こり得る結果の部分的又は完全な除去を指す。「抑制（阻害）剤（インヒビター）」は、抑制（阻害）する能力を有する化合物である。
【００３７】
用語「予防」は、文脈で用いられる場合、本発明の１つ以上の化合物若しくは組成物の単独又は別の薬剤との組み合わせての投与又は同時投与の結果として、「可能性を低減すること」又は疾患、状態若しくは病態が起こることを予防することを意味する。「予防」が１００％有効であることは、ほとんどないことに注意されたい。従って用語「予防」及び「可能性を低減すること」は、患者又は対象の一定の集団において、本発明の化合物の投与が特定の状態若しくは病態（特に癌の増殖若しくは転移のような病態の悪化）又は疾患進行のその他の一般に認められた指標が起こる可能性を低減する、あるいはそれらが起こることを抑制するという事実を示すために用いられる。
【００３８】
用語「オートファジー」又は「自家食作用（オートファゴサイトーシス）」は、リソソームによる細胞自身の成分の分解を伴う細胞内の異化プロセスを表すために用いられる。オートファジーは細胞の増殖、発生、及びホメオスタシスにおいて通常での役割を果たす生体系の高度に制御されたプロセスであって、細胞生産物の合成、分解、及びその後の再生の間のバランスを維持するのに役立っている。オートファジーは、不必要なプロセスからもっと重要なプロセスへと細胞が栄養分を配分する主要なメカニズムである。
【００３９】
自然界においては多数のオートファジープロセスが起こり、それらの全ては、リソソームを介する細胞内成分の分解を共通の特徴として有する。オートファジーの周知のメカニズムは、細胞の標的領域の周囲に膜を形成して、その内容物を細胞質の他部分から隔離することを伴う。その結果生ずる小胞は次にリソソームと融合し、リソソームは続いて内容物を分解する。
【００４０】
オートファジーは、オートファジー小胞（ＡＶ）中へのオルガネラ及び蛋白質の隔離とリソソーム融合によるこのカーゴの分解とからなる（参考文献１）。オートファジーは、腫瘍細胞が代謝ストレスや治療ストレスに耐えることを可能にする（参考文献２〜５）。多数の刊行物が、治療誘発性のオートファジーが多くの抗癌剤に対する主要な耐性メカニズムであることを示している。
【００４１】
オートファジー阻害が有益な疾患、病態、及び／又は状態には、癌（癌の転移を含む）、関節リウマチ、マラリア、抗リン脂質抗体症候群、ループス、慢性じんましん、及びシェーグレン症候群が含まれる。
【００４２】
用語「癌」は、無秩序な増殖、分化の欠如、局部組織浸潤、及び／又は転移をもたらす、正常な制御の喪失という独特の特質を有する腫瘍細胞の増殖を指す。本明細書で用いる場合、「新生物」は限定することなく、同種の組織における正常な増殖と比べての、対象又は宿主の組織中の細胞の形態上の異常、及び対象の組織中の細胞の病的増殖を含む。更に、新生物は、良性腫瘍、及び浸潤性又は非浸潤性の悪性腫瘍（例えば結腸腫瘍）を含む。悪性新生物は、より高度の異形成、又は細胞の分化及び配向の喪失を示し、更に浸潤及び転移の性質を有する点において、良性新生物と区別される。用語「癌」は文脈によって、多剤耐性癌を含めた薬物耐性癌も含む。本発明の標的細胞が生じる新生物又は異常増殖の例は、限定ではないがとりわけ、癌腫（例えば扁平上皮細胞癌、腺癌、肝細胞癌、及び腎細胞癌）、特に膀胱、骨、腸、乳房、子宮頸管、結腸（大腸）、食道、頭部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、頸部、卵巣、膵臓、前立腺、及び胃の癌腫；白血病、例えば急性骨髄性白血病、急性リンパ球性白血病、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、急性Ｔ細胞リンパ芽球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、好塩基球性白血病、好酸球性白血病、顆粒球性白血病、有毛細胞白血病、白血球減少性白血病、リンパ性白血病、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、巨核球性白血病、小骨髄芽球性白血病、単球性白血病、好中球性白血病、及び肝細胞性白血病；良性及び悪性のリンパ腫、特にバーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、及びＢ細胞リンパ腫；良性及び悪性のメラノーマ；骨髄増殖性疾患；肉腫、特にユーイング肉腫、血管肉腫、カポジ肉腫、脂肪肉腫、筋肉腫、末梢性神経上皮腫、及び滑膜肉腫；中枢神経系の腫瘍（例えば、グリオーマ、星状細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫、膠芽腫、神経芽細胞腫、神経節神経腫、神経節膠腫、髄芽細胞腫、松果体細胞腫瘍、髄膜腫、髄膜肉腫、神経線維腫、及びシュヴァン鞘腫）；生殖系腫瘍（例えば、腸癌、乳癌、前立腺癌、子宮頸部癌、子宮癌）、肺癌（例えば、小細胞肺癌、小細胞癌及び非小細胞癌の混合、胸膜中皮腫（転移胸膜中皮腫を含む）、小細胞肺癌、及び非小細胞肺癌）、卵巣癌、精巣癌、甲状腺癌、星状細胞腫、食道癌、膵臓癌、胃癌、肝臓癌、結腸癌、及びメラノーマ；混合型の新生物、特に癌肉腫及びホジキン病；並びに混合起源の腫瘍、例えばウィルムス腫瘍及び奇形癌腫を含む。留意すべきことに、特にいくつかの上皮腫瘍（卵巣、乳房、結腸、頭部、及び頸部を含む）、髄芽細胞腫、並びにＢ細胞リンパ腫は、増大したオートファジーを示すことが示されており、本発明の化合物及び治療法の主要な標的の癌である。
【００４３】
用語「更なる抗癌剤」は、癌の治療において本発明の１つ以上の化合物と共投与し得る更なる化合物を記すために用いられる。このような薬剤には、例えば特にエベロリムス、トラベクテジン、アブラキサン、ＴＬＫ２８６、ＡＶ−２９９、ＤＮ−１０１、パゾパニブ、ＧＳＫ６９０６９３、ＲＴＡ７４４、ＯＮ０９１０．Ｎａ、ＡＺＤ６２４４（ＡＲＲＹ−１４２８８６）、ＡＭＮ−１０７、ＴＫＩ−２５８、ＧＳＫ４６１３６４、ＡＺＤ１１５２、エンザスタウリン、バンデタニブ、ＡＲＱ−１９７、ＭＫ−０４５７、ＭＬＮ８０５４、ＰＨＡ−７３９３５８、Ｒ−７６３、ＡＴ−９２６３、ＦＬＴ−３インヒビター、ＶＥＧＦＲインヒビター、ＥＧＦＲ−ＴＫインヒビター、オーロラキナーゼインヒビター、ＰＩＫ−１修飾剤、Ｂｃｌ−２インヒビター、ＨＤＡＣインヒビター、ｃ−ＭＥＴインヒビター、ＰＡＲＰインヒビター、Ｃｄｋインヒビター、ＥＧＦＲ−ＴＫインヒビター、ＩＧＦＲ−ＴＫインヒビター、抗ＨＧＦ抗体、ＰＩ３キナーゼインヒビター、ＡＫＴインヒビター、ＪＡＫ／ＳＴＡＴインヒビター、チェックポイント−１又は２のインヒビター、接着斑キナーゼインヒビター、Ｍａｐキナーゼキナーゼ（ｍｅｋ）インヒビター、ＶＥＧＦトラップ抗体、ペメトレキセド、エルロチニブ、ダサタニブ（dasatanib）、ニロチニブ、デカタニブ（decatanib）、パニツムマブ、アムルビシン、オレゴボマブ、Ｌｅｐ−ｅｔｕ、ノラトレキシド、ａｚｄ２１７１、バタブリン、オファツムマブ、ザノリムマブ、エドテカリン、テトランドリン、ルビテカン、テスミリフェン、オブリメルセン、チシリムマブ、イピリムマブ、ゴシポール、Ｂｉｏ１１１、１３ｌ−Ｉ−ＴＭ−６０１、ＡＬＴ−１１０、ＢＩＯ１４０、ＣＣ８４９０、シレンギチド、ギマテカン、ＩＬ１３−ＰＥ３８ＱＱＲ、ＩＮＯ１００１、ＩＰｄＲ1ＫＲＸ−０４０２、ルカントン、ＬＹ３１７６１５、ノイラジアブ（neuradiab）、ビテスペン、Ｒｔａ７４４、Ｓｄｘ１０２、タランパネル、アトラセンタン、Ｘｒ３１１、ロミデプシン、ＡＤＳ−１００３８０、スニチニブ、５−フルオロウラシル、ボリノスタット、エトポシド、ゲムシタビン、ドキソルビシン、イリノテカン、リポソームドキソルビシン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、ビンクリスチン、テモゾロミド、ＺＫ−３０４７０９、セリシクリブ；ＰＤ０３２５９０１、ＡＺＤ−６２４４、カペシタビン、Ｌ−グルタミン酸、Ｎ−［４−［２−（２−アミノ−４，７−ジヒドロ−４−オキソ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル］−二ナトリウム塩（七水和物）、カンプトテシン、ＰＥＧ標識イリノテカン、タモキシフェン、トレミフェンクエン酸塩、アナストラゾール、エキセメスタン、レトロゾール、ＤＥＳ（ジエチルスチルベストロール）、エストラジオール、エストロゲン、結合型エストロゲン、ベバシズマブ、ＩＭＣ−１Ｃ１１、ＣＨＩＲ−２５８，）；３−［５−（メチルスルホニルピペラジンメチル）−インドリル−キノロン、バタラニブ、ＡＧ−０１３７３６、ＡＶＥ−０００５、［Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）６，Ａｚｇｌｙ１０］酢酸塩（ピロ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−��ｒｏ−Ａｚｇｌｙ−ＮＨ2酢酸［Ｃ59Ｈ84Ｎ18Ｏｉ4−（Ｃ2Ｈ4Ｏ2）x、ｘ＝１〜２．４］、ゴセレリン酢酸塩、リュープロリド酢酸塩、トリプトレリンパモ酸塩、酢酸メドロキシプロゲステロン、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、ラロキシフェン、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド、酢酸メゲストロール、ＣＰ−７２４７１４；ＴＡＫ−１６５、ＨＫＩ−２７２、エルロチニブ、ラパタニブ、カネルチニブ、ＡＢＸ−ＥＧＦ抗体、アービタックス、ＥＫＢ−５６９、ＰＫＩ−１６６、ＧＷ−５７２０１６、ロナファルニブ、ＢＭＳ−２１４６６２、チピファルニブ；アミホスチン、ＮＶＰ−ＬＡＱ８２４、ヒドロキサミン酸サブエロイルアニリド、バルプロ酸、トリコスタチンＡ、ＦＫ−２２８、ＳＵ１１２４８、ソラフェニブ、ＫＲＮ９５１、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナグレリド、Ｌ−アスパラギナーゼ、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチン、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエチルスチルベストロール、エピルビシン、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオキシメステロン、フルタミド、ゲムシタビン、グリベック（gleevac）、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、ロイプロリド、レバミゾール、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、ミトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ニルタミド、オクトレオチド、オキサリプラチン、パミドロネート、ペントスタチン、プリカマイシン、ポルフィマー、プロカルバジン、ラルチトレキセド、リツキシマブ、ストレプトゾシン、テニポシド、テストステロン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トレチノイン、ビンデシン、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、フェニルアラニンマスタード、ウラシルマスタード、エストラムスチン、アルトレタミン、フロクスウリジン、５−デオキシウリジン、シトシンアラビノシド、６−メルカプトプリン、デオキシコホルマイシン、カルシトリオール、バルルビシン、ミトラマイシン、ビンブラスチン、ビノレルビン、トポテカン、ラゾキシン、マリマスタット、ＣＯＬ−３、ネオバスタット、ＢＭＳ−２７５２９１、スクアラミン、エンドスタチン、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＥＭＤ１２１９７４、インターロイキン−１２、ＩＭ８６２、アンギオスタチン、ビタキシン、ドロロキシフェン、イドキシフェン、スピロノラクトン、フィナステリド、シメチジン、トラスツズマブ、デニロイキンジフチトクス、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、パクリタキセル、イリノテカン、トポテカン、ドキソルビシン、ドセタキセル、ビノレルビン、ベバシズマブ（モノクローナル抗体）及びアービタックス、クレモホール非含有パクリタキセル、エピチロン（epithilone）Ｂ、ＢＭＳ−２４７５５０、ＢＭＳ−３１０７０５、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、ピペンドキシフェン、ＥＲＡ−９２３、アルゾキシフェン、フルベストラント、アコルビフェン、ラソフォキシフェン、イドキシフェン、ＴＳＥ−４２４、ＨＭＲ−３３３９、ＺＫ１８６６１９、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４、ＶＸ−７４５、ＰＤ１８４３５２、ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、テムシロリムス、ＡＰ−２３５７３、ＲＡＤ００ｌ、ＡＢＴ−５７８、ＢＣ−２１０、ＬＹ２９４００２、ＬＹ２９２２２３、ＬＹ２９２６９６、ＬＹ２９３６８４、ＬＹ２９３６４６、ワートマニン、ＺＭ３３６３７２、Ｌ−７７９，４５０、ＰＥＧ−フィルグラスチム、ダルベポエチン、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、ゾレンドロネート（zolendronate）、プレドニゾン、セツキシマブ、顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子、ヒストレリン、ＰＥＧ化インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ａ、ＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂ、インターフェロンα−２ｂ、アザシチジン、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、レナリドマイド、ゲムツズマブ、ヒドロコルチゾン、インターロイキン−１１、デクスラゾキサン、アレムツズマブ、全トランスレチノイン酸、ケトコナゾール、インターロイキン−２、メガストロール、免疫グロブリン、ナイトロジェンマスタード、メチルプレドニゾロン、イブリツモマブチウキセタン、エンドロゲン、デシタビン、ヘキサメチルメラミン、ベキサロテン、トシツモマブ、三酸化ヒ素、コルチゾン、エチドロン酸、ミトタン、シクロスポリン、ダウノルビシンリポソーム、エルウィニア−アスパラギナーゼ、ストロンチウム８９、カソピタント、ネツピタント、ＮＫ−１受容体アンタゴニスト、パロノセトロン、アプレピタント、ジフェンヒドラミン、ヒドロキシジン、メトクロプラミド、ロラゼパム、アルプラゾラム、ハロペリドール、ドロペリドール、ドロナビノール、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プロクロルペラジン、グラニセトロン、オンダンセトロン、ドラセロトン、トロピセトロン、ペグフィルグラスチム、エリスロポエチン、エポエチンα及びダルベポエチンα、イピリムマブ、ベムラフェニブが含まれる。
【００４４】
用語「アルキル」は、炭素及び水素（最大１０個の炭素原子又は別に示すとおり）を含む完全に飽和した１価ラジカルを指すために本明細書において用いられ、それは直鎖、分枝状、又は環状であってもよい。アルキル基の例は、メチル、エチル、ｎ−ブチル、ｎ−ヘプチル、イソプロピル、２−メチルプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシルなどである。
【００４５】
用語「置換（された）」が上記のアルキル基に関する場合には、１つ以上の官能基が含まれる。官能基は、例えば１〜６個の炭素原子を含む低級アルキル基（１若しくは２個の水酸基又は１〜５個（好ましくは３〜５個）のフルオロ基を用いて任意で置換される）、アシル（Ｃ1−Ｃ6）、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、例えばアルキルハロ、ＣＦ3など）、アミド、ヒドロキシル、カルボキシ／カルボン酸、チオアミド、シアノ、ニトロ、アルケニル（Ｃ2−Ｃ6）、アルキニル（Ｃ2−Ｃ6）、アジド、アルコキシ（Ｃ1−Ｃ6）（Ｃ1−Ｃ6アルコキシ基を用いて更に置換されてジエーテル基を生成するアルコキシ基を含む）、アミノ、Ｃ1−Ｃ6のアルキルアミノ及びジアルキルアミノ（アルキル基は、１つ若しくは２つの水酸基、アミン基、アミノアルキル基、又はアミノジアルキル基（これ自体も１つ若しくは２つのアルキル基、又は７−置換−４−キノリニル基を用いて置換される）を用いて任意で置換されてもよい）、Ｃ2−Ｃ6アシルアミノ、Ｃ2−Ｃ6のオキシアシルエステル又はカルボキシエステル、アリールオキシ、アリールオキシ（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、カルボキサミド、チオ、Ｃ2−Ｃ6のエーテル又はチオエーテル、７−置換−４−アミノキノリニル基（又は７−置換−４−アミノキノリニル基を形成するアミン基での置換）などが挙げられる。アルキル基（文脈において、特に７−置換−４−アミノキノリンのアミノ基）での又は少なくとも１つのアミン基を含有するリンカーでの好ましい置換基には、例えば少なくとも１つの水酸基、アミン、モノアルキルアミン若しくはジアルキルアミン（一方又は両方のアルキル基自体が、ジアルキルアミン又はアミンで置換され、このアミンは１つ若しくは２つの（好ましくは１つの）７−置換−４−キノリニル基で置換され、アミン基がキノリニル基の４位に結合する）、又はアルコキシ基（例えばメトキシ又はエトキシ）（アルコキシ基（好ましくはメトキシ基）を用いて更に置換されることでジエーテル置換基を形成してもよい）が含まれる。
【００４６】
用語「アリール」は、単環（例えばフェニル）若しくは多環式縮合環（例えばナフチル）を有する置換又は未置換の１価の芳香族ラジカルを指す。その他の例には、１つ以上の窒素、酸素、又は硫黄の原子を環中に含む複素環芳香族（ヘテロ芳香族又はヘテロアリール）の環基（特にキノリン基であって、特に７−置換アミノキノリン基）が含まれるが、その他の基も含まれる。
【００４７】
用語「置換（された）」が、本明細書において用語「置換アリール、置換芳香族、置換ヘテロアリール、又は置換ヘテロ芳香族」で用いられる場合、４−アミノキノリンの７位における置換が存在してもよく、この置換基は原子及び基から選択され、置換が存在する場合にはオートファジーの阻害剤としての化合物の活性を増強することを意味する。置換芳香族基中又は置換ヘテロ芳香族基中に存在できる置換基の例には、限定ではないが、Ｈ、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩ）、ＣＮ、ＮＯ2、任意で置換されるＣ1−Ｃ6アルキル（置換される場合、好ましくは１若しくは２個の水酸基又は３〜５個のフルオロ基を用いて置換される）、任意で置換されるＯ−Ｃ1−Ｃ6アルキル（好ましくはＯＣＨ3）、任意で置換されるＣ2−Ｃ7アシル（好ましくはアセチル）、又は任意で置換されるＣ2−Ｃ7エステル（オキシカルボニルエステル若しくはカルボキシエステル、好ましくはカルボキシエステル）のような基が含まれる。本明細書に開示される各置換基は、それ自体も置換され得ることに注意されたい。
【００４８】
用語「共投与」又は「補助療法」は、少なくとも２つの化合物又は組成物を患者に同時に投与して、その２つ以上の化合物のそれぞれの有効量又は有効濃度が、所与の時点において患者体内に見られるようにすることを意味する。本発明の化合物は患者に同時に共投与されてもよいが、この用語は、２つ以上の薬剤の同時又は異なる時における投与の両方を包含し、連続投与も含まれる。好ましくは、全ての共投与した化合物又は組成物の有効濃度が所与の時点において対象内に見られる。用語「共投与」又は「補助療法」は、本発明の医薬組成物と共投与されるその他の生理活性剤も意図しており、これは特に癌が転移しているか又は転移のおそれがある場合である。
【００４９】
用語「放射線治療」又は「放射線療法」は、本発明の化合物と組み合わせて使用可能な癌療法を記すのに用いられる。放射線治療では、癌細胞を殺すために高線量の放射線、例えばＸ線、又は放射性同位体などのその他のエネルギー源（γ、β、若しくはα放射体））を用いる。放射線は細胞の遺伝物質にダメージを与えるため、細胞は増殖できなくなる。放射線は正常細胞にも癌細胞にもダメージを与えるものの、正常細胞は自己修復して活動することができるが、癌細胞はできない。
【００５０】
放射線治療は、治療対象の癌に応じて、単独又は本明細書に別に記載の更なる抗癌化合物と組み合わせた本願発明の化合物と組み合わせて用いられることができる。放射線治療は、原発癌の部位から外側に広がっていない癌を治療するのに最も有効であるが、癌が近傍組織に広がっている場合にも用いることができる。場合によっては、いずれかの残存癌細胞を殺したり転移癌の痛みを緩和したりするために、外科手術後に放射線治療が用いられる。
【００５１】
＜医薬組成物＞
本発明の化合物は医薬組成物に容易に製剤されることができ、この医薬組成物は、生体系のオートファジー阻害、並びに／又はオートファジー阻害が有益な病態及び／若しくは状態（癌（及びその転移）、関節リウマチ、マラリア、抗リン脂質抗体症候群、ループス（全身性エリテマトーデス）、慢性じんましん、及びシェーグレン症候群を含む）の抑制、治療、又は予防に有用である。医薬組成物は、本発明の１つ以上の化合物の有効量を、薬学的に許容される担体、添加剤、又は賦形剤と組み合わせて含み、任意で少なくとも１つの更なる薬剤と組み合わせて含み、これは癌の場合には好ましくは本明細書に別に記載の抗癌剤である。
【００５２】
上記のように、本発明の化合物及び方法は、本明細書に別に記載されるオートファジーを阻害するために用いられることができ、癌及びその転移、関節リウマチ、マラリア、抗リン脂質抗体症候群、ループス（全身性エリテマトーデス）、慢性じんましん、及びシェーグレン症候群の抑制（予防も含む）並びに／又は治療に有用である。癌又はマラリアの治療は、本発明の重要な態様である。
【００５３】
本発明の方法においては、本明細書に別に記載の病態、状態、及び／若しくは感染を抑制し、その可能性を低減し、又は治療するために、必要とする対象又は患者を本発明の化合物、医薬組成物を用いて治療する。本発明の化合物及び組成物によって治療される病態、状態、並びに感染は、当業者によって容易に認識され又は診断され、本発明の１つ以上の化合物の有効量を患者に投与することによって治療される。
【００５４】
通常、上記化合物の投与用量及び投与経路は対象の大きさ及び状態によって決まり、標準的な薬務プラクティスに従って決まる。用いられる用量レベルは非常にさまざまであり、当業者によって容易に決定されることができる。通常、ミリグラム〜グラム量の量が用いられる。組成物は対象に対して種々の経路、例えば特に経口的、経皮的、神経周囲、又は非経口的、即ち静脈内注射、皮下注射、腹腔内注射、又は筋肉内注射によって投与されることができ、口腔、直腸、及び経皮の投与が含まれる。本発明の方法の治療が意図される対象には、ヒト、ペット、実験動物などが含まれる。
【００５５】
本発明の化合物を含有する製剤は、固体、半固体、凍結乾燥粉末、又は液体の剤形、例えば錠剤、カプセル剤、粉末剤、徐放性製剤、溶液、懸濁液、エマルション、座薬、クリーム、軟膏、ローション、エアロゾル、パッチ剤などであり、好ましくは正確な用量の簡単な投与に好適な単位剤形である。
【００５６】
本発明の医薬組成物は、通常は従来の医薬用の担体又は賦形剤を含み、更にその他の医薬品、担体、アジュバント、添加剤などを含んでもよい。好ましくは、組成物は、約０．１ｗｔ％〜約８５ｗｔ％、約０．５ｗｔ％〜約７５ｗｔ％が本発明の１つ又は複数の化合物であり、残りは主として適した医薬品賦形剤からなる。経口投与のためには、そのような賦形剤としては製薬等級のマンニトール、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、グルコース、ゼラチン、スクロース、炭酸マグネシウムなどが挙げられる。必要に応じて、組成物は少量の無毒の補助物質、例えば湿潤剤、乳化剤、又は緩衝剤を含んでもよい。
【００５７】
液体製剤は、化合物（約０．５ｗｔ％〜約２０ｗｔ％又はそれ以上）及び任意の医薬用アジュバントを担体（例えば水性生理食塩水、水性デキストロース、グリセロール、又はエタノールなど）中に溶解又は分散して溶液又は懸濁液を作ることによって調製できる。経口液体製剤での使用については、組成物は溶液、懸濁液、エマルション、又はシロップとして調製されることができ、液体形態又は水若しくは通常生理食塩水での水和に適した乾燥形態で供給されることができる。
【００５８】
組成物を経口投与用の固形製剤の形態で用いる場合、製剤は錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などであってよい。錠剤の場合、組成物は通常は添加剤、例えば賦形剤（糖類又はセルロースの調合剤など）、結合剤（澱粉ペースト又はメチルセルロースなど）、充填剤、崩壊剤、及び医療用製剤の製造に通常用いられるその他の添加剤を用いて製剤される。
【００５９】
非経口投与のための注射用組成物は、通常は化合物を好適な静脈用溶剤（例えば無菌生理食塩水）中に含む。組成物は、脂質若しくはリン脂質、リポソーム懸濁液、又は水性エマルションでの懸濁液として製剤されてもよい。
【００６０】
このような剤形を調製する方法は、当業者に公知又は明らかである。例えばレミントンの薬学、第１７版、Mack Pub. Co.、1985年参照）。投与される組成物は、選択した化合物を、生体系（本発明による患者又は対象を含む）のオートファジーを阻害するための薬学的有効量で含む。
【００６１】
［本発明の化合物の合成］
＜二価性のアミノキノリンオートファジー阻害剤の合成方法＞
本発明者は、二量体クロロキン（図１の化合物３：Ｌｙｓ０１）を市販原料から調製することによって、多価性の方法（参考文献１１、１２）を新規オートファジー阻害剤の合成に応用することを検討した。本発明者は、以前の文献（参考文献１４）に基づいて、図２に逆合成的に略示するように、１当量の化合物５と２当量の化合物６とから化合物３を調製することを想定した（参考文献１４）。
【００６２】
化合物４（Ｒ＝Ｃｌ）は公知の化合物であるが（参考文献１４）、ビスキノリン化合物３（Ｒ2＝Ｍｅ）は文献に記載されていない。その推定されるリソソーム作用性（lysosomotropism）ゆえに、本発明者は化合物３をＬｙｓ０１と呼ぶ。化合物５と２当量の化合物４との反応によって、所望の生成化合物３と若干量のモノキノリン化合物７（図１、Ｌｙｓ０２、図２）との混合物が生成した。モノキノリン化合物７の合成は、Higuchiによって以前に記載されている（参考文献１８）。化合物３のＣ−７位塩素置換基の役割を検討するために、化合物３のジメトキシアナログである化合物９（図１の化合物９：Ｌｙｓ０３）を調製した。
【００６３】
化合物３のポリアミンコネクタの重要性を明らかにするために、本発明者は、化合物３のポリエーテルアナログ化合物１１（図１の化合物１１、Ｌｙｓ０４）を市販の２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）１０から調製した（図２参照）。
【００６４】
リード化合物３（Ｌｙｓ０１）のＳＡＲデータを得るために、本発明者は、図１５ＡのスキームＡに略示するように、化合物３（即ち１２、Ｒ＝Ｃｌ）の構造の系統的改変を検討した。当初の試みでは、検討対象の化合物１２の構造の３つの異なる部位での改変に焦点を当てた。即ち、１）化合物３中に存在するＣ−７位塩素置換基（図１５Ａの化合物１２中のＸ）の改変、２）Ｃ−４位窒素置換基の改変（即ちＮ−アルキル化又はアシル化）及び隣接炭素原子（ＣＱ及びＨＣＱの立体中心を含む（図１））の改変、並びに３）化合物１２に含まれるＮ−メチル基（図１５Ａ）の改変である。
【００６５】
図１５Ａに略示する必要な出発化合物（化合物１３〜１６）のそれぞれは、公知であるか又は市販されており、Leeの研究（参考文献１６）に基づいて、様々な電子吸引性基を組み込むことによって、化合物３（１２、Ｒ＝Ｃｌ）と異なる一群のアナログの合成を容易にする。
【００６６】
本発明者は、化合物１２、化合物１７、及び化合物１８（図１５Ａ）のＮ−アルキル化アナログ及びＮ−アシル化アナログの生理活性も検討する。これらの新規化合物の調製は、直接アルキル化、還元的アルキル化、又はアシル化のいずれかによって、１２（Ｒ＝Ｃｌ）から直接的に進行すると考えられる。
【００６７】
本発明者は、化合物１９（図１５ＡのスキームＣ）で略示するように、ＣＱ中及びＨＣＱ中に存在するキラリティー（図１）を化合物１２に導入することも検討する。必要なリンカー化合物２０は、Kokotosの方法を用いて得ることができた（J. Chem. Res, Synopses 1992, 12, 391）。
【００６８】
最後に、Ｎ−メチル基（図１５ＡのスキームＡ）を他の官能基で置き換えることによる化合物１２の構造の改変を検討する。２つの興味深い可能性、即ち化合物２１及び化合物２２を図１５ＡのスキームＤに示す。これらにおいては、Ｎ−メチル基をＨＣＱ中に存在するヒドロキシエチル基で置き換えている。また、Ｎ−メチル基を新たなキノリン部分で置き換えてトリキノリン化合物２２を生成する。２１及び２２の生成のための合成経路は、それぞれLee（参考文献１９）及びSolomon（参考文献１７）の研究に密接に基づく。
【００６９】
【化２】
2014513101.tif 000003
【００７０】
上記の第２世代化合物の特徴付けが継続している一方で、より効能のあるオートファジー阻害剤となると考えられる更なる化合物も存在する。リード化合物を化合物１２（スキーム１、Ｌｙｓ０１）として、一般構造２３（上記参照）に略示するように、１２の構造の３つの部分のより大規模な系統的改変を、ＳＡＲ分析における次の論理的ステップとして説明する。構造の３つの部分（Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３）それぞれを、下記に略示するように改変する。
【００７１】
＜Ｒ１の役割＞
クロロキン１の塩素部分を置換（スキーム２）する効果は、Eganらによって検討されている（参考文献２０）。
【００７２】
【化３】
2014513101.tif 000004
【００７３】
彼らは、電子吸引性基がこれらの７−置換キノリンの抗プラスモジウム活性にとって重要であることを立証した。そこで本発明者は、それらと同じ置換を一般構造２３の場合について検討し、２３のＲ1及びＲ1'の両方を置換し、更にモノ置換の効果も検討した。この場合、Ｒ1'置換基は、１２のようにＣｌであるか、又は水素（Ｘ＝Ｈ）である。Eganの研究は、必要な４−クロロ−７−置換−キノリンの全てが公知であることを示すため、スキーム３に示す化合物のそれぞれの調製は容易である。連結されたビスキノリン（Ｒ１＝Ｈ）の合成は記載されているが（参考文献２１）、スキーム３に略示する化合物はいずれも知られていない。
【００７４】
【化４】
2014513101.tif 000005
【００７５】
＜Ｒ２の役割＞
アセチル化（Ｒ２＝ＭｅＣＯ−、モノ若しくはジ）又はメチル化（Ｒ2＝Ｍｅ、モノ若しくはジ）によってスキーム４に示す構造４１〜４４を得ることによって、リード構造３におけるＲ2＝Ｈの役割を検討する。同族体のアナログ４５及び４６（窒素原子間に１つ又は２つのプロピレン鎖を含む）は公知であるが（フランス国特許第１３４５５７３号明細書、ＣＡＮ６０：６８１８１）、アナログ４１〜４４はそれぞれ、新規の構造である。
【００７６】
【化５】
2014513101.tif 000006
【００７７】
Ｒ2の位置における十分許容される置換によって、ヒドロキシクロロキン２に見られるように（スキーム５）、ヒドロキシエチル部分を用いてＲ2の置換を更に行う。対応するヒドロキシエチル化合物を生ずるアニリンと酸化エチレンとの反応については、十分な先例がある（参考文献２２）。そのため、リード構造３からモノヒドロキシエチル化アナログ４７又はジヒドロキシエチル化アナログ４８のいずれかへの変換は、容易に達成される。
【００７８】
【化６】
2014513101.tif 000007
【００７９】
本発明者は、４７及び４８での一級アルコールの酸化によって対応するアルデヒドを得ることによって、トリキノリン含有構造及びテトラキノリン含有構造の調製も検討する。この調製では、Baileyらの研究（参考文献２３）に基づき、７−クロロ−４−アミノキノリンを用いた還元的アルキル化によってスキーム６に示すトリキノリン４９及びテトラキノリン５０を生ずる。
【００８０】
【化７】
2014513101.tif 000008
【００８１】
本発明者は、スキーム７のリード構造におけるＲ2の位置に、親油性基（即ち長鎖アルキル）及びより極性の置換基の両方を取り入れることの効果も検討する。これは、Drefahl及びKonigの研究（Chem. Ber. 1954, 87, 1632-4）に基づき、市販のアルキル化剤５９〜６２を用いて二級アミン（Ｒ2＝Ｈ）をアルキル化することによって、２つの二級アミン官能基のモノアルキル化及びジアルキル化による５１〜５８の調製をもたらす。
【００８２】
【化８】
2014513101.tif 000009
【００８３】
本発明者らは、リード構造２３（上記スキーム１参照）におけるＲ3を改変することの効果を検討する。例えば下記のスキーム８の６３〜６５に示すように、Ｒ3のいくつかの置換は既に公知である。本発明者らは、スキーム７に示すアルキル化剤（５９〜６２）を用いた公知の二級アミン６３（参考文献１３）のアルキル化に基づいて一連の新規アナログを調製し、新規の構造（６６〜６９）を生成する。Ｒ3＝ＣＨ2ＣＨ2ＯＨである基質７０、即ちヒドロキシクロロキンに最も密接に対応する６３のアナログを検討する。この化合物は、スキーム５に示すアナログを調製するのに用いたのと同じシーケンス、又は６６の脱メチル化によって得られる。
【００８４】
【化９】
2014513101.tif 000010
【００８５】
リード構造３とクロロキン１との間のもう１つの重要な違い（スキーム９）は、１での窒素原子に隣接した立体中心の存在である。本発明者らは、複数の混成構造も調製し、それらにおいては、例えば７１／７２及び７３／７４のように、２３の片側のいずれか一方がよりよく１に似ている。いずれの場合も必要なジアミンは（Ｌ）、Craigがクロロキンの立体選択的合成に用いた方法に従い（J.Org.Chem. 1988, 53, 1167-1170）、グルタミン酸から出発して調製される。
【００８６】
【化１０】
2014513101.tif 000011
【００８７】
本発明者らは、Charltonらの方法（参考文献２４）を用いた還元的アルキル化によって、クロロキン１中に存在する立体中心を含むリード構造３のアナログ、即ちアラニン及びセリンからそれぞれ得られる７５／７６及び７７／７８を調製する。
【００８８】
最後に本発明者らは、３の連結鎖中に存在する３つの窒素原子（スキーム９）の代わりに、下記のスキーム１０に例示するように、キノリン環を連結する架橋鎖中に４つの窒素原子を含む一連の化合物を検討する。Dennyら（参考文献２４）は、必要なテトラミン８１及び８２の合成を記載している。８０に存在する追加のクロロキン部分の結合は、スキーム８において６５の合成に用いたのと同じ方法によって行われる。
【００８９】
【化１１】
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【００９０】
＜治療の方法＞
本発明の一態様においては、哺乳類の患者又は対象を治療するために、その患者又は対象のオートファジーを阻害する方法を提供する。本明細書に記載される本発明の化合物を用いてオートファジーを阻害することができ、それは癌（癌の転移を含む）、関節リウマチ、マラリア、抗リン脂質抗体症候群、ループス、慢性じんましん、及びシェーグレン症候群を含む病態及び／若しくは状態を抑制、治療、並びに／又は予防する方法と一致する。
【００９１】
本発明によれば、治療を必要とする患者又は対象は、本発明の１つ以上の化合物の有効量を、任意でその病態又は状態を治療するのに有用な少なくとも１つの更なる生理活性剤と組み合わせて患者又は対象に投与することによって治療される。本発明の化合物を用いて、そのような治療が必要な患者又は対象の癌（癌の転移を含む）を抑制し、治療し、又はその可能性を低減することができる。この治療は、オートファジー阻害が好ましい結果を示すような又は転移がリスク因子であるようないずれの癌にとっても有用である。本明細書に記載の少なくとも１つの更なる抗癌剤を用いる療法も、本発明の方法においては意図している。本発明の方法に従って治療できる多くの癌は、上述されている。
【００９２】
別の態様において本発明は、関節リウマチ、マラリア、抗リン脂質抗体症候群、ループス、慢性じんましん、及びシェーグレン症候群を含む、オートファジー阻害が有益な病態及び／又は状態を治療するための方法に関する。この方法においては、本明細書に別に記載の化合物の有効量を、任意で薬学的に許容される担体、添加剤、若しくは賦形剤と組み合わせて治療が必要な患者又は対象に投与して、上記の病態又は状態を抑制、治療、及び／又は予防する。
【００９３】
本発明において、治療方法は、下記Ｉの化合物の有効量を薬学的に許容される担体中で、治療が必要な対象に投与することを含む。
【００９４】
【化１２】
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【００９５】
式中、Ｒ1及びＲ1'は、それぞれ独立してＨ、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩ）、ＣＮ、ＮＯ2、任意で置換されるＣ1−Ｃ6アルキル（置換される場合、好ましくは１つ若しくは２つの水酸基又は３つ〜５つのフルオロ基を用いて置換される）、任意で置換されるＯ−Ｃ1−Ｃ6アルキル（好ましくはＯＣＨ3）、任意で置換されるＣ2−Ｃ7アシル（好ましくはアセチル）、又は任意で置換されるＣ2−Ｃ7エステル（オキシカルボニルエステル又はカルボキシエステル、好ましくはカルボキシエステル）であり、
Ｒ及びＲ’は、それぞれ独立してＨ、Ｃ1−Ｃ6の任意で置換されるアルキル基、Ｃ1−Ｃ7（好ましくはＣ2−Ｃ7）の任意で置換されるアシル基、Ｃ2−Ｃ7の任意で置換されるカルボキシエステル基（Ｒ又はＲ’が結合した窒素原子と一緒になってウレタン基を形成する）であり、
Ｌは、−（ＣＨ2Ｙ）n−Ｘ−（Ｙ’ＣＨ2）n−基又はＡ−（ＣＨ2−ＣＨ2−Ｚ）n−Ａ’基（Ａ又Ａ’のいずれか一方は、化学構造Ｉの化合物における２つのアミン基のいずれか一方に結合することができる）であり、ＬにおけるＣＨ2基の少なくとも１つは、Ｃ1−Ｃ3アルキル基（これ自体も１つ又は２つの水酸基を用いて任意で置換される）を用いて任意で置換され、
Ｘは、存在しないか、（ＣＨ2）jＯ、Ｓ、又はＮ−Ｒ’’であり、
Ｙは、存在しないか、ＣＨ2、Ｏ、ＣＨ2Ｏ、又はＮ−Ｒ’’であり、Ｙ’は、存在しないか、ＣＨ2、Ｏ、ＯＣＨ2、又はＮ−Ｒ’’であり、但しＸ、Ｙ、及びＹ’のうちの１つ以上が存在する場合には、Ｘ及びＹ、Ｘ及びＹ’、又はＹ及びＹ’のそれぞれ（存在する場合）は安定な結合を形成し、
Ｒ’’は、Ｈ、又は任意で置換されるＣ1−Ｃ6（好ましくはＣ1−Ｃ3）アルキル基であり、
ｊは、１、２、又は３（好ましくは１又は２）であり、
ｎは、０、１、２、３、又は４であり、但しｎが０の場合、Ｘは（ＣＨ2）jであり、ここでｊは少なくとも１であり、少なくとも１つのＣＨ2基がＣ1−Ｃ3アルキル基（これ自体も１つ又は２つの水酸基を用いて任意で置換される）を用いて任意で置換され、
Ａは、存在しないか又は（ＣＨ2）jであり、Ａ’は（ＣＨ2）jであり、ここでＡ又はＡ’における少なくとも１つのＣＨ2基は、Ｃ1−Ｃ3アルキル基（これ自体も１つ又は２つの水酸基を用いて任意で置換される）を用いて任意で置換され、
Ｚは、Ｏ又はＮ−Ｒzであり、
Ｒzは、Ｈ、又は任意で置換されるＣ1−Ｃ3アルキル基である。
【００９６】
本発明の一部の好ましい方法においては、Ｒ１及びＲ１’は、それぞれ独立してＨ、ハロ基、ニトロ基、又はトリフルオロメチル基であり、好ましくはクロロ基である。Ｒ及びＲ’は、好ましくはそれぞれ独立してＨ、Ｃ1−Ｃ3の任意で置換されるアルキル基（これ自体も好ましくは少なくとも１つの水酸基を用いて置換される）、アミン基、モノアルキルアミン基、又はジアルキルアミン基である。ここで、アミン基又はモノアルキルアミン基は、アミンの位置において７−置換−４−キノリニル基を用いて任意で置換され、アミンはキノリニル基の４位に結合し、あるいはモノアルキルアミン又はジアルキルアミンの１つ又は両方のアルキル基が、それ自体も少なくとも１つの水酸基、アミン、モノアルキルアミン、又はジアルキルアミンを用いて更に任意で置換され、ここでアミン又はモノアルキルアミンは、１つ若しくは２つの７−置換−キノリニル基（各キノリニル基の７位は、上記の一般構造Ｉについて概述したように、Ｒ1基及び／又はＲ1'基を用いて置換されることができる）、又はアルコキシ基（例えばメトキシ又はエトキシ）（このアルコキシ基は、アルコキシ基、好ましくはメトキシ基を用いて任意で更に置換される（それによりジエーテル置換基を形成することができる））を用いてアミンの位置において任意で置換される。
【００９７】
本発明の別の好ましい態様においては、Ｌは−（ＣＨ2Ｙ）n−Ｘ−（Ｙ’ＣＨ2）n−基であり、ここでＸはＮ−Ｒ’’であり、Ｙ及びＹ’は、それぞれ独立して存在しないか又はＣＨ2であり、Ｒ’’は、Ｈ又はＣ1−Ｃ3アルキル基であり、このＣ1−Ｃ3アルキル基は、少なくとも１つの水酸基、アミン基、モノアルキルアミン基、又はジアルキルアミン基を用いて任意で置換される。ここで、アミン基又はモノアルキルアミン基は、アミンの位置において７−置換−４−キノリニル基を用いて任意で置換され、アミンはキノリニル基の４位に結合し、あるいはモノアルキルアミン又はジアルキルアミンの１つ又は両方のアルキル基が、それ自体も少なくとも１つの水酸基、アミン、モノアルキルアミン、又はジアルキルアミンを用いて更に任意で置換され、ここでアミン又はモノアルキルアミンは、１つ若しくは２つの７−置換−キノリニル基（各キノリニル基の７位は、上記の一般構造Ｉについて概述したように、Ｒ1基及び／又はＲ1'基を用いて置換されることができる）、又はアルコキシ基（例えばメトキシ又はエトキシ）（このアルコキシ基は、アルコキシ基、好ましくはメトキシ基を用いて任意で更に置換される（それによりジエーテル置換基を形成することができる））を用いてアミンの位置において任意で置換される。
【００９８】
更に好ましい方法は、本明細書でのスキーム１及びスキーム３〜１０並びに図１４、１５及び１５Ａに示される様々なスキームに示される本発明の化合物の使用及び投与に関する。
【００９９】
癌若しくは癌の転移を治療又は抑制する方法では、上記化合物は、少なくとも１つの更なる抗癌剤と共投与することができる。更なる抗癌剤は、例えば特にエベロリムス、トラベクテジン、アブラキサン、ＴＬＫ２８６、ＡＶ−２９９、ＤＮ−１０１、パゾパニブ、ＧＳＫ６９０６９３、ＲＴＡ７４４、ＯＮ０９１０．Ｎａ、ＡＺＤ６２４４（ＡＲＲＹ−１４２８８６）、ＡＭＮ−１０７、ＴＫＩ−２５８、ＧＳＫ４６１３６４、ＡＺＤ１１５２、エンザスタウリン、バンデタニブ、ＡＲＱ−１９７、ＭＫ−０４５７、ＭＬＮ８０５４、ＰＨＡ−７３９３５８、Ｒ−７６３、ＡＴ−９２６３、ＦＬＴ−３インヒビター、ＶＥＧＦＲインヒビター、ＥＧＦＲ−ＴＫインヒビター、オーロラキナーゼインヒビター、ＰＩＫ−１修飾剤、Ｂｃｌ−２インヒビター、ＨＤＡＣインヒビター、ｃ−ＭＥＴインヒビター、ＰＡＲＰインヒビター、Ｃｄｋインヒビター、ＥＧＦＲ−ＴＫインヒビター、ＩＧＦＲ−ＴＫインヒビター、抗ＨＧＦ抗体、ＰＩ３キナーゼインヒビター、ＡＫＴインヒビター、ＪＡＫ／ＳＴＡＴインヒビター、チェックポイント−１又は２のインヒビター、接着斑キナーゼインヒビター、Ｍａｐキナーゼキナーゼ（ｍｅｋ）インヒビター、ＶＥＧＦトラップ抗体、ペメトレキセド、エルロチニブ、ダサタニブ（dasatanib）、ニロチニブ、デカタニブ（decatanib）、パニツムマブ、アムルビシン、オレゴボマブ、Ｌｅｐ−ｅｔｕ、ノラトレキシド、ａｚｄ２１７１、バタブリン、オファツムマブ、ザノリムマブ、エドテカリン、テトランドリン、ルビテカン、テスミリフェン、オブリメルセン、チシリムマブ、イピリムマブ、ゴシポール、Ｂｉｏ１１１、１３ｌ−Ｉ−ＴＭ−６０１、ＡＬＴ−１１０、ＢＩＯ１４０、ＣＣ８４９０、シレンギチド、ギマテカン、ＩＬ１３−ＰＥ３８ＱＱＲ、ＩＮＯ１００１、ＩＰｄＲ1ＫＲＸ−０４０２、ルカントン、ＬＹ３１７６１５、ノイラジアブ（neuradiab）、ビテスペン、Ｒｔａ７４４、Ｓｄｘ１０２、タランパネル、アトラセンタン、Ｘｒ３１１、ロミデプシン、ＡＤＳ−１００３８０、スニチニブ、５−フルオロウラシル、ボリノスタット、エトポシド、ゲムシタビン、ドキソルビシン、イリノテカン、リポソームドキソルビシン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、ビンクリスチン、テモゾロミド、ＺＫ−３０４７０９、セリシクリブ；ＰＤ０３２５９０１、ＡＺＤ−６２４４、カペシタビン、Ｌ−グルタミン酸、Ｎ−［４−［２−（２−アミノ−４，７−ジヒドロ−４−オキソ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル］−二ナトリウム塩（七水和物）、カンプトテシン、ＰＥＧ標識イリノテカン、タモキシフェン、トレミフェンクエン酸塩、アナストラゾール、エキセメスタン、レトロゾール、ＤＥＳ（ジエチルスチルベストロール）、エストラジオール、エストロゲン、結合型エストロゲン、ベバシズマブ、ＩＭＣ−１Ｃ１１、ＣＨＩＲ−２５８，）；３−［５−（メチルスルホニルピペラジンメチル）−インドリル−キノロン、バタラニブ、ＡＧ−０１３７３６、ＡＶＥ−０００５、［Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）６，Ａｚｇｌｙ１０］酢酸塩（ピロ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒ��−Ａｚｇｌｙ−ＮＨ2酢酸［Ｃ59Ｈ84Ｎ18Ｏｉ4−（Ｃ2Ｈ4Ｏ2）x、ｘ＝１〜２．４］、ゴセレリン酢酸塩、リュープロリド酢酸塩、トリプトレリンパモ酸塩、酢酸メドロキシプロゲステロン、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、ラロキシフェン、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド、酢酸メゲストロール、ＣＰ−７２４７１４；ＴＡＫ−１６５、ＨＫＩ−２７２、エルロチニブ、ラパタニブ、カネルチニブ、ＡＢＸ−ＥＧＦ抗体、アービタックス、ＥＫＢ−５６９、ＰＫＩ−１６６、ＧＷ−５７２０１６、ロナファルニブ、ＢＭＳ−２１４６６２、チピファルニブ；アミホスチン、ＮＶＰ−ＬＡＱ８２４、ヒドロキサミン酸サブエロイルアニリド、バルプロ酸、トリコスタチンＡ、ＦＫ−２２８、ＳＵ１１２４８、ソラフェニブ、ＫＲＮ９５１、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナグレリド、Ｌ−アスパラギナーゼ、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチン、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエチルスチルベストロール、エピルビシン、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオキシメステロン、フルタミド、ゲムシタビン、グリベック（gleevac）、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、ロイプロリド、レバミゾール、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、ミトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ニルタミド、オクトレオチド、オキサリプラチン、パミドロネート、ペントスタチン、プリカマイシン、ポルフィマー、プロカルバジン、ラルチトレキセド、リツキシマブ、ストレプトゾシン、テニポシド、テストステロン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トレチノイン、ビンデシン、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、フェニルアラニンマスタード、ウラシルマスタード、エストラムスチン、アルトレタミン、フロクスウリジン、５−デオキシウリジン、シトシンアラビノシド、６−メルカプトプリン、デオキシコホルマイシン、カルシトリオール、バルルビシン、ミトラマイシン、ビンブラスチン、ビノレルビン、トポテカン、ラゾキシン、マリマスタット、ＣＯＬ−３、ネオバスタット、ＢＭＳ−２７５２９１、スクアラミン、エンドスタチン、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＥＭＤ１２１９７４、インターロイキン−１２、ＩＭ８６２、アンギオスタチン、ビタキシン、ドロロキシフェン、イドキシフェン、スピロノラクトン、フィナステリド、シメチジン、トラスツズマブ、デニロイキンジフチトクス、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、パクリタキセル、イリノテカン、トポテカン、ドキソルビシン、ドセタキセル、ビノレルビン、ベバシズマブ（モノクローナル抗体）及びアービタックス、クレモホール非含有パクリタキセル、エピチロン（epithilone）Ｂ、ＢＭＳ−２４７５５０、ＢＭＳ−３１０７０５、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、ピペンドキシフェン、ＥＲＡ−９２３、アルゾキシフェン、フルベストラント、アコルビフェン、ラソフォキシフェン、イドキシフェン、ＴＳＥ−４２４、ＨＭＲ−３３３９、ＺＫ１８６６１９、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４、ＶＸ−７４５、ＰＤ１８４３５２、ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、テムシロリムス、ＡＰ−２３５７３、ＲＡＤ００ｌ、ＡＢＴ−５７８、ＢＣ−２１０、ＬＹ２９４００２、ＬＹ２９２２２３、ＬＹ２９２６９６、ＬＹ２９３６８４、ＬＹ２９３６４６、ワートマニン、ＺＭ３３６３７２、Ｌ−７７９，４５０、ＰＥＧ−フィルグラスチム、ダルベポエチン、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、ゾレンドロネート（zolendronate）、プレドニゾン、セツキシマブ、顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子、ヒストレリン、ＰＥＧ化インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ａ、ＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂ、インターフェロンα−２ｂ、アザシチジン、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、レナリドマイド、ゲムツズマブ、ヒドロコルチゾン、インターロイキン−１１、デクスラゾキサン、アレムツズマブ、全トランスレチノイン酸、ケトコナゾール、インターロイキン−２、メガストロール、免疫グロブリン、ナイトロジェンマスタード、メチルプレドニゾロン、イブリツモマブチウキセタン、エンドロゲン、デシタビン、ヘキサメチルメラミン、ベキサロテン、トシツモマブ、三酸化ヒ素、コルチゾン、エチドロン酸、ミトタン、シクロスポリン、ダウノルビシンリポソーム、エルウィニア−アスパラギナーゼ、ストロンチウム８９、カソピタント、ネツピタント、ＮＫ−１受容体アンタゴニスト、パロノセトロン、アプレピタント、ジフェンヒドラミン、ヒドロキシジン、メトクロプラミド、ロラゼパム、アルプラゾラム、ハロペリドール、ドロペリドール、ドロナビノール、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プロクロルペラジン、グラニセトロン、オンダンセトロン、ドラセロトン、トロピセトロン、ペグフィルグラスチム、エリスロポエチン、エポエチンα及びダルベポエチンα、並びにそれらの混合物を含む。
【０１００】
関節リウマチ、マラリア、抗リン脂質抗体症候群、ループス、慢性じんましん、及びシェーグレン症候群に起因する感染、病態、及び／又は状態に関連する方法においては、本発明の化合物は、これらの病態及び／又は状態の治療において従来用いられる更なる薬剤と共投与されてもよい。
【実施例】
【０１０１】
次の例は本発明を例示して説明しており、いかなる意味でも本発明を限定することを意図しない。
【０１０２】
＜化合物３（Ｌｙｓ０１）の合成＞
丸底フラスコを４−ブロモ−７−クロロキノリン（化合物５）（７３４ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）2（２３ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１２５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、Ｋ3ＰＯ4（１．０６ｇ、５．０ｍｍｏｌ）、及びトリアミン（化合物６）（１１７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を入れた。セプタムを通してジオキサン（１０ｍＬ）を注入した。得られた懸濁液をアルゴン下において９０℃で１８時間撹拌してから、冷却した。この混合物をシリカゲルに吸着し、フラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ：９０／９／１）によって精製して化合物３（３８７ｍｇ、８８％）を黄色固体として得た。ｍｐ＝１９９〜２００℃；Ｒf＝０．２８（シリカゲル、ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ／ＮＨ4ＯＨ：９０／９／１）；）：1Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３：δ８．５３（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ）、７．９４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．４１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）、６．９８（ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．０Ｈｚ，２Ｈ）、６．３９（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ）、５．４４（ｓ，２Ｈ）、３．４２（ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，４Ｈ）、２．９０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、２．４６（ｓ，９Ｈ）。13Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１５２．１、１４９．５、１４９．１、１３５．１、１２８．９、１２５．５、１２０．６、１１７．１、９９．３、５５．５、４２．４、４０．３。ＦＴＩＲ（薄膜）：３２１５、２９１７、１６０９、１５７９、１４４９。ＨＲＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：Ｃ23Ｈ24Ｎ5Ｃｌ2［Ｍ＋Ｈ］+計算値：４４０．１４０９、実測値：４４０．１４０６。
【０１０３】
＜化合物１１（Ｌｙｓ０５）の合成＞
化合物３の水溶性塩を生成するために、化合物３（８９６ｍｇ、２．０４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ中の懸濁液（４０ｍＬ）を、ＨＣｌガスを用いて０℃で１０分間バブリングした。この混合物を更に１２時間室温で撹拌した。溶媒を回転蒸発によって除去し、残渣を真空下において５０℃で一晩乾燥し、塩３（１．１３ｇ、１００％）を黄色固体として得た。ｍｐ＝２７０℃（分解）；1Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）：δ８．１２（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．７３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．５８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．２６（ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．０Ｈｚ，２Ｈ）、６．６２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．８９（ｂｒ，４Ｈ）、３．６８（ｂｒ，４Ｈ）、３．１２（ｓ，３Ｈ）。13Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）：δ１５５．８、１４２．８、１４０．２、１３７．２、１２８．１、１２３．８、１１９．１、１１４．８、９８．７、５２．９、４２．７、３８．２。ＦＴＩＲ（薄膜）：３３７６、３０１９、２９１４、１６３１、１６１２、１２１５ｃｍ-1。ＨＲＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：Ｃ23Ｈ24Ｎ5Ｃｌ2［Ｍ−３ＨＣｌ＋Ｈ］+計算値：４４０．１４０９、実測値：４４０．１４０８。
【０１０４】
［生物学的試験］
＜Ｌｙｓ０１はＨＣＱ又はＣＱよりも有効なオートファジー阻害剤である＞
Ｌｙｓ０１並びに誘導体Ｌｙｓ０２、Ｌｙｓ０３、Ｌｙｓ０４、ＨＣＱ、及びＣＱを用いて、ＬＮ２２９（ヒト膠芽腫）を処理した。Ｌｙｓ０１（１０μΜ以上の濃度）を用いて４〜２４時間処理した細胞では、培養細胞のほぼ完全な細胞死が観察された。ＬＣ３はユビキチン様蛋白質であって、非共役形態として存在する（ＬＣ３Ｉ）か、又はＡＶ膜に共役して存在する（ＬＣ３ＩＩ）（参考文献２５）。ＬＣ３ＩＩ／ＬＣ３Ｉの比は、細胞中のＡＶ蓄積、従って有効なオートファジー阻害を反映する。ＬＣ３のイムノブロッティング（図３）から、Ｌｙｓ０１は濃度１０μΜにおいてＨＣＱ又はＣＱよりも＞１０倍有効なオートファジー阻害剤であることが立証された。Ｌｙｓ０２及びＬｙｓ０３は、ＨＣＱ又はＣＱに類似したＬＣ３のイムノブロッティングの用量反応関係を示した。一方でＬｙｓ０４は、Ｌｙｓ０１中に存在する２つのクロロキノリン環を保持し、ＬＣ３のオートファジー試験において中間的な有効性を示した。
【０１０５】
Ｌｙｓ０１がオートファジーに及ぼす効果を更に明らかにするため、Ｌｙｓ０１又はＨＣＱを用いてＬＮ２２９（ＧＦＰ−ＬＣ３）細胞を処理した（図４Ａ）。４時間の処理内に、ＨＣＱ（１μΜ）処理した細胞においては、効果のないオートファジー小胞の蓄積を示す斑点状の蛍光が少数の細胞について観察された。１０μΜのＨＣＱでは多数の小さい斑点が生じ、１００μΜのＨＣＱでは、蓄積したオートファジー小胞の融合を示すより大きい密集した斑点が生じた。１μΜのＬｙｓ０１では多数の小さい斑点が生じ、１０μΜのＬｙｓ０１で処理した細胞では、１００μΜのＨＣＱで処理した細胞で観察されたものと外見上同様な密集した斑点がはっきりと見えた。Ｌｙｓ０１（１００μΜ）で処理した細胞は、全て４時間以内に死んだ。ＧＦＰ−ＬＣ３斑点個数／細胞の定量は、１０μΜのＨＣＱ処理と比較して、１０μΜのＬｙｓ０１処理ではＧＦＰ−ＬＣ３斑点数の著しい５倍の増大を示した。１０μΜのＬｙｓ０１で処理した細胞中の小胞の平均個数／細胞は、１００μΜのＨＣＱで処理した細胞よりも多かった（図４Ａ）。ＤＭＳＯ、ＨＣＱ、又はＬｙｓ０１で処理したＬＮ２２９（ＧＦＰ−ＬＣ３）細胞の電子顕微鏡写真から、これらの薬剤によるオートファジーのブロックによって生じた小胞の大きさ及び個数の大きな形態的差異を更に特徴付けた（図４Ｂ）。このようにＬｙｓ０１は、１０倍低い濃度でＨＣＱ（公知のリソソーム阻害剤）よりも顕著な形態的変化をもたらす。Ｌｙｓ０１処理が新たなオートファジー小胞の産生を誘発するのか（オートファジー誘発剤）、又はオートファジー小胞の排除をブロックするのか（オートファジー阻害剤）を明らかにするために、バフィロマイシンでのクランプ実験を行った（図４Ｃ）。バフィロマイシンの存在下又は非存在下で、ＤＭＳＯ、ラパマイシン、ＨＣＱ（１０μΜ）、及びＬｙｓ０１（１０μΜ）を用いてＬＮ２２９（ＧＦＰ−ＬＣ３）細胞を処理した。２４時間の時点で、ラパマイシン処理は、対照細胞と比較して、バフィロマイシン処理した細胞におけるＬＣ３ＩＩ／ＬＣ３比の更なる増大をもたらした。一方で、ＨＣＱ処理した細胞又はＬｙｓ０５処理した細胞は、対照と比較して、バフィロマイシン処理した細胞におけるＬＣ３ＩＩ／ＬＣ３比の増大を示さず、Ｌｙｓ０１がオートファジー阻害剤であるという更なる証拠を示した（図４Ｃ）。
【０１０６】
細胞毒性に関してより有効なオートファジー阻害の関係を明らかにするために、ＬＮ２２９（グリオーマ）、１２０５Ｌｕ細胞（メラノーマ）、ＨＴ−２９（結腸）、及びｃ８１６１（メラノーマ）の細胞を、濃度０．０１〜１００μΜでのＬｙｓ０１、Ｌｙｓ０２、Ｌｙｓ０３、Ｌｙｓ０４、及びＨＣＱで処理した（図４Ｄ）。ＭＴＴ試験を用いて７２時間の時点での生細胞数を評価した。用いた４つの細胞株においては、Ｌｙｓ０１のＩＣ５０は４〜８μΜであった（補足の表２）。１０μΜのＬｙｓ０１で処理した１２０５Ｌｕ及びＨＣＣ８２７（ＨＣＱに対して非常に耐性の細胞株）細胞では、２４時間後にほぼ完全な細胞死が観察された。対照的に、単官能性のＣＱ誘導体であるＬｙｓ０２（３５〜９１μΜ）、塩素をメトキシ基で置換したビスアミノキノリンＬｙｓ０３（２４〜５３μΜ）、又はＨＣＱ（１５〜４２μΜ）のＩＣ５０は、Ｌｙｓ０１よりも全体的に９〜３０倍有効性が低かった。二価アミノキノリン環を保持しているが改変されたリンカーを有するＬｙｓ０４は、中間的な活性を有し、ＩＣ５０は１０〜１７μΜであった。これらの研究は、試験した他のアミノキノリン又はＨＣＱよりもＬｙｓ０１は一貫して細胞毒性であることを示している。ＬＣ３のウェスタンブロットデータと併せると、これらの結果は、最も有効な細胞毒性のオートファジー阻害剤は、２つのアミノキノリン環、Ｌｙｓ０１中に存在するトリアミンリンカー、及びアミノキノリン環のＣ−７位の塩素置換基が含まれることを示している。
【０１０７】
＜インビボのオートファジー阻害及び抗腫瘍有効性（Ｌｙｓ０５）＞
水溶性を増大させてインビボ研究を可能にするために、Ｌｙｓ０１の三塩酸塩であるＬｙｓ０５を合成した。Ｌｙｓ０１及びＬｙｓ０５は、ＬＣ３ＩＩ／ＬＣ３Ｉ比及びオートファジーカーゴ蛋白質ｐ６２の蓄積（参考文献２６）については用量依存的な同等の増大を示し、ＭＴＴ試験での等しいＩＣ５０値を示した（図５Ａ、Ｂ）。Ｌｙｓ０５の安全性及びオートファジーに及ぼすそのインビボでの効果を調べるために、腫瘍の大きさに合わせたｃ８１６１異種移植片を、ＰＢＳ又は等モル用量のＨＣＱ又はＬｙｓ０５（ＨＣＱは６０ｍｇ／ｋｇ（１３８ｎｍｏｌ／ｇ）、Ｌｙｓ０５は７６ｍｇ／ｋｇ（１３８ｎｍｏｌ／ｇ））を用いて、毎日の腹腔内（ｉ．ｐ．）投与で４８時間処理した。この高用量、短期間の処理ではいずれのマウスも死ななかったが、２日間の投薬後には、Ｌｙｓ０５（７６ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．）で処理したマウスは背を丸めて不活発になる様子が観察された。４８時間の処理後にマウスを安楽死させ、腫瘍を電子顕微鏡法（ＥＭ）用に処理した。形態的には、Ｌｙｓ０５処理した腫瘍中では、損なわれていない核膜及び細胞質膜を有する細胞は大きいＡＶを含むことがＥＭによって示された（図６Ａ）。各処理群から得た２つの代表的な腫瘍における平均ＡＶ個数／細胞の定量で、Ｌｙｓ０５処理した腫瘍では、対照処理した腫瘍又はＨＣＱ処理した腫瘍と比較して、平均ＡＶ個数／細胞の著しい＞２倍の増大が見られた（図６Ｂ）。Ｌｙｓ０５処理した腫瘍では、対照処理した腫瘍又はＨＣＱ処理した腫瘍よりも著しく高いＬＣ３ＩＩ／ＬＣ３Ｉレベルが観察され、インビボのオートファジー阻害の更なる証拠を示した（図７Ａ）。４８時間の処理後には、切断型カスパーゼ３のレベル（アポトーシスの指標）は、ＨＣＱ又はＰＢＳで処理した腫瘍と比較してＬｙｓ０５処理した腫瘍では上昇していた。
【０１０８】
膵臓癌の一部のモデルを除いて（参考文献２７）、多くの動物腫瘍モデル（未処理の腫瘍中に高程度のオートファジーが存在している可能性が高い（参考文献４、２８））においては、単剤ＨＣＱを用いた処理は腫瘍成長を阻害しない（参考文献２９、３０）。例えばＬｙｓ０５のようなより有効なオートファジー阻害剤が単剤として大きく腫瘍成長を阻害するかどうかを明らかにするために、１２０５Ｌｕ異種移植片をヌードマウスの脇腹に作成した。ｃ８１６１異種移植片は自然に潰瘍を生じ、腫瘍測定や安全性解析を混乱させるため、長期処理実験のために、ｃ８１６１異種移植片モデルではなく１２０５Ｌｕ細胞メラノーマモデルを選択した。コホート毎に腫瘍体積に合わせた１２０５Ｌｕ異種移植片を保持させた１０匹のマウスを、ＰＢＳ、ＨＣＱ（６０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．）、又はＬｙｓ０５（７６ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．（等モル投薬））に割り当て、症状回復を可能にし且つ過剰な毒性を避けるために、３つの処理群全てについて３日間の連日投与＋２日間の休薬（「毎５日中の３日」）で投与した。このスケジュールは、期間１４日間については忍容性良好であった。３つの群のそれぞれの腫瘍成長曲線からは、対照と比較するとＬｙｓ０５処理した腫瘍では腫瘍成長が大きく阻害されることが示された（図６Ｃ）。Ｌｙｓ０５処理によって、ビヒクル処理した対照と比較して、１日当たりの平均腫瘍成長速度の５３％減少がもたらされた（３１．２ｍｍ3／日対１４．６ｍｍ3／日、ｐ＝０．００２、図６Ｄ）。ＨＣＱ処理した腫瘍及びＬｙｓ０５処理した腫瘍のいずれにおいても、１４日間の処理の最後にはＡＶの著しい蓄積が観察された。しかし、対照処理した腫瘍と比較すると、Ｌｙｓ０５処理した腫瘍はＡＶ／細胞での６倍の増大を有したが、ＨＣＱ処理した腫瘍はＡＶ／細胞での３倍の増大を有した（図７Ｂ）。Ｌｙｓ０５処理した腫瘍の中心部では、大規模な腫瘍壊死が観察された（図７Ｂ）。
【０１０９】
より低い用量のＬｙｓ０５が抗腫瘍活性をもたらすかどうかを明らかにするために、ＨＴ−２９結腸癌異種移植片を保持させたマウスを、ＰＢＳ又はＬｙｓ０５により１０ｍｇ／ｋｇの各日ｉ．ｐ．、４０ｍｇ／ｋｇの各日ｉ．ｐ．、若しくは毎５日中の３日の８０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．で処理した。臨床的毒性は８０ｍｇ／ｋｇのコホートでのみ観察され、腸閉塞のため２／８のマウスを早期に安楽死させた。１０ｍｇ／ｋｇ及び４０ｍｇ／ｋｇのコホートに対する各日投与は忍容性良好であった。１日当たりの平均腫瘍成長速度は、Ｌｙｓ０５処理によって用量依存的に大きく阻害された（図６Ｅ）。腫瘍成長曲線は、全ての３種類のＬｙｓ０５用量は対照と比較して大きな腫瘍成長の阻害をもたらすことを示した（図６Ｆ）。実験の最後において、切除した腫瘍の重量から、１０ｍｇ／ｋｇの各日投薬では大きな抗腫瘍活性が見られるることが明らかとなった（図６Ｇ）。１４日間の処理後に回収した腫瘍ライセートのＬＣ３のイムノブロッティングからは、１０ｍｇ／ｋｇを投薬した腫瘍を含めて全てのＬｙｓ０５処理した腫瘍につおいて、対照と比較して、ＬＣ３ＩＩ／ＬＣ３Ｉ比の著しい増大が示された（図７Ｃ）。
【０１１０】
＜Ｌｙｓ０５の最大投与用量で見られる腸毒性は、遺伝的なオートファジー欠損に類似する＞
１２０５１ｕ異種移植片実験において、Ｌｙｓ０５（毎５日中の３日の７６ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．）で処理した個々の動物は背を丸めて不活発となる様子が見られた（図８Ａ）。Ｌｙｓ０５で処理したマウス１０匹中３匹は腸閉塞の徴候を示した（図８Ｂ）。腸の検査によって、回腸末端部の偽狭窄を伴う膨張した近位小腸が発見された。回腸の組織学的検査では、過度の炎症、線維化、又は物理的閉塞の証拠は見られず、マウスで観察された腸閉塞の徴候は偽性閉塞又は機能性腸閉塞によるものであることが示された。腸絨毛及び陰窩構造は健全であったが、異形症のパネート細胞（図８Ｃ）が観察された。パネート細胞機能不全（例えば、エオシン好性のリゾチーム含有顆粒の減少した大きさ及び個数）は、必須のオートファジー遺伝子ＡＴＧ１６Ｌ１の遺伝的な欠損を有するマウスと一部のクローン病患者とにおけるオートファジー欠損の特徴的徴候として、以前に記載されている（参考文献３１）。
【０１１１】
ＨＴ２９異種移植片の用量設定実験においては、いずれの用量コホートでも大きな体重減少は見られなかった（図９Ａ）。ＨＴ−２９腫瘍を保持させたマウスから１４日間の処理後に消化管全体を切除することによって、腸壁肥厚及び腸閉塞が８０ｍｇ／ｋｇ用量のコホートに限られることが示された（図９Ｂ）。ＨＴ−２９異種移植片を保持させ、ＰＢＳ（各日ｉ．ｐ．）、又はＬｙｓ０５（１０ｍｇ／ｋｇの各日ｉ．ｐ．、４０ｍｇ／ｋｇの各日ｉ．ｐ．、及び毎５日中の３日の各日８０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．）で１４日間処理したマウスから切除された回腸末端部の組織学的検査によって、パネート細胞の形態に及ぼす用量依存的効果が立証された（図９Ｃ）。パネート細胞数／陰窩は処理によって変化しなかったが（図９Ｄ）、顆粒の大きさ及び個数は用量依存的に減少した。パネート細胞機能不全の程度（図１０）によるスコアリングから、用いた全てのＬｙｓ０５用量でパネート細胞機能不全が見られることが示された。但し、毒性の徴候や症状は、用量８０ｍｇ／ｋｇに限られた（図９Ｅ）。４０ｍｇ／ｋｇ若しくは８０ｍｇ／ｋｇのＬｙｓ０５で処理したマウスでは、パネート細胞中のリゾチームは大きく減少したか、又は存在しなかったが、１０ｍｇ／ｋｇでは起こらなかった（図９Ｆ）。まとめると、これらの知見は、Ｌｙｓ０５に関連したパネート細胞機能不全がＡＴＧ１６Ｌ１欠損を模倣すること、及びより低用量のＬｙｓ０５では、用量制限毒性を伴わずに大きな抗腫瘍活性がもたらされることを示している。
【０１１２】
＜Ｌｙｓ０５はリソソームを中性化することによってオートファジーを阻害する＞
ＨＣＱと比較してのＬｙｓ０５の相対的なリソソーム蓄積を比べるために、ＰＢＳ、ＨＣＱ（１０μΜ）、又はＬｙｓ０５（１０μΜ）で処理した１２０５Ｌｕ細胞、及びＰＢＳ、ＨＣＱ（６０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．）、又はＬｙｓ０５（７６ｍｇ．／ｋｇのｉ．ｐ．）で１４日間に渡って毎５日中の３日処理した後に回収した１２０５Ｌｕ腫瘍からリソソームを亜分画した。リソソームマーカーＬＡＭＰ２のイムノブロッティングによって、細胞試料及び腫瘍試料のいずれについても、リソソーム及び全細胞の集団の十分な分離が確認された（図１２Ａ）。ＨＰＬＣタンデム質量分析（ＭＳ／ＭＳ）測定（図１１）によって、Ｌｙｓ０５（１０μΜ）又はＨＣＱ（１０μΜ）で２４時間処理した全細胞ホモジネート中のＬｙｓ０５及びＨＣＱの濃度は、それぞれ５７μΜ及び８μΜであることが測定され、ＨＣＱよりも６倍高濃度の細胞内Ｌｙｓ０５が示された。Ｌｙｓ０５（１０μΜ）又はＨＣＱ（１０μΜ）で処理した細胞のリソソーム画分中のＬｙｓ０５及びＨＣＱの濃度は、それぞれ１０５μΜ及び１３μΜであり、ＨＣＱよりも８倍高濃度のリソソーム中Ｌｙｓ０５が示された。Ｌｙｓ０５及びＨＣＱの細胞内蓄積及びリソソーム内蓄積におけるこの違いは、腫瘍組織においてより顕著であった。腫瘍においては、ＨＣＱと比べて１１倍高濃度のＬｙｓ０５及び３４倍高濃度のＬｙｓ０５が、それぞれ全細胞ホモジネート及びリソソーム中に存在した（図１２Ｂ）。
【０１１３】
Ｌｙｓ０５がＨＣＱよりも効果的にリソソーム中に蓄積することが確認されたので、この蓄積の機能的影響を検討した。ビヒクル、Ｌｙｓ０５、及びＨＣＱを用いて１２０５Ｌｕ細胞を処理し、リソトラッカーレッドで染色した（図１２Ｃ）。３０分間の処理の間、１０μΜ及び１００μΜの濃度のＬｙｓ０５のいずれで処理した細胞でも、より少ないリソトラッカー陽性の斑点が観察された。対照的に、リソトラッカー陽性の斑点の大きな減少は、１００μΜのＨＣＱで処理した細胞では観察されたが、１０μΜのＨＣＱで処理した細胞では観察されなかった。このより強力で完全なリソソーム阻害の結果を理解するために、ビヒクル、Ｌｙｓ０５、又はＨＣＱを用いて１２０５Ｌｕ細胞を処理し、２４時間の時点でアクリジンオレンジ（ＡＯ、全ての小胞内の酸性コンパートメント中に凝集する色素）を用いて染色した（図１２Ｄ）。ＨＣＱは、酸性小胞の用量依存的蓄積を生じた。対照的にＬｙｓ０５は、更に低用量（１０μΜ）で酸性小胞の蓄積をもたらしたものの、より高用量（５０μΜ）では酸性小胞は観察されず、小胞内系の完全な中性化が示された。
【０１１４】
最後に、酸性ホスファターゼの酵素活性を測定することによって、リソソームの中性化の機能的な結果が検討された。ＰＢＳ、ＨＣＱ（１０μΜ）、又はＬｙｓ０５（１０μΜ）で処理した１２０５Ｌｕ細胞では、ＰＢＳ処理した細胞と対比して、Ｌｙｓ０５処理した細胞のリソソーム画分では酸性ホスファターゼ活性が２４時間以内に４３％減少している（図１３Ａ）。例えば活性化カテプシンなどの一部のリソソーム酵素の漏出は、オートファジーに依存しない細胞死に至り得る。ＰＢＳ、ＨＣＱ、又はＬｙｓ０５を用いた１２０５Ｌｕ細胞の２４時間の処理中には、ＨＣＱ処理した細胞又はＰＢＳ処理した細胞と比較して、Ｌｙｓ０５処理した細胞ではリソソーム内で未成熟なカテプシンＤから成熟した活性化形態への酸依存性プロセスが減少した（図１３Ｂ）。１２０５Ｌｕ異種移植腫瘍では、１４日間の処理後に、Ｌｙｓ０５処理した腫瘍においてリソソーム外の酸性ホスファターゼ活性が１．７５倍増大しており、長期的な処理によってリソソーム外への酵素の漏出が起こり得ることが示唆された（図１３Ｃ）。しかし、Ｌｙｓ０５処理した腫瘍において、全細胞ホモジネート中のカテプシンＤの増大した酸依存性プロセスは観察されなかった（図１３Ｄ）。これらの結果は、高用量のＬｙｓ０５は、リソソームを中性化してリソソーム酵素の障害に至ることによってリソソーム機能不全及び有効なオートファジー阻害をもたらし、その一方で高用量のＨＣＱは、リソソームを不十分に中性化して、より少ない細胞死を伴う不完全なオートファジー阻害に至ることを示している。
【０１１５】
＜更なる化合物Ｌｙｓ０６〜Ｌｙｓ１８＞
更なるＬｙｓ０１誘導体を合成して試験した（図１４、図１５）。７２時間のＭＴＴ試験においては、化合物Ｌｙｓ０１〜Ｌｙｓ１３のＩＣ５０は、ＨＣＱ及びＣＱと比較して増大した活性又は減少した活性を示す（表１、図１６）。殆どの場合、Ｌｙｓ０１誘導体は、ＣＱ又はＨＣＱよりも活性である。これらの知見によって、Ｌｙｓ０１誘導体の更なる薬剤開発のための出発点が、更に精選される。
【０１１６】
＜マラリアに関するＬｙｓ０１誘導体の活性＞
表２及び図１７は、ヒト癌細胞ＬＮ２２９と、ヒトＲＢＣでインビトロ培養された多数のの熱帯熱マラリア原虫株とにおける、Ｌｙｓ０１誘導体により誘発される細胞死のＩＣ５０値を示す。Ｌｙｓ０１誘導体の抗癌活性及びマラリア細胞毒性については、類似した活性プロファイルが存在した。Ｌｙｓ０１は、一部のＣＱ耐性細胞株に対してはアーテスネートよりも高活性であった。
【産業上の利用可能性】
【０１１７】
＜見込まれる商業用途及び応用＞
Ｌｙｓ０１及びＬｙｓ０５は、新規のオートファジー阻害剤としての有効性について更に最適化される大きな潜在能力を有するリード化合物である。オートファジー阻害は、全ての癌に適用可能な癌の新しい治療方法である。現在のところ、殆ど全ての腫瘍タイプに関して癌患者でのＨＣＱの治験は３０超存在している。その低い有効性や貧弱な薬理作用ゆえに、ヒトにおいてＨＣＱは、実験モデルで観察されるような抗癌療法の有望な増強をもたらさないと考えられる。Ｌｙｓ０１の最適な誘導体は、第２世代のオートファジー阻害剤として開発された。Ｌｙｓ０５のＬＤ３０用量で観察されたパネート細胞機能不全に関連したＧＩ毒性は、その薬剤の作用機序を支持し、更に多くの場合にパネート細胞と特徴を共有する結腸癌が、Ｌｙｓ０５及びその最適誘導体に対して特に感受性であり得る腫瘍タイプであることも示唆する。検討に値する更なる癌には、メラノーマ及び非小細胞肺癌が含まれる。これは、メラノーマ細胞株は、ＨＣＱと比較してＬｙｓ０１に対する感受性で最も大きな違いを示し、ＥＧＦＲ変異肺癌細胞株は、ＨＣＱ及びＬｙｓ０５のいずれに対しても感受性を示すためである。Ｌｙｓ０１の合成の設計は、他の特許された及び／又は公表されたアミノキノリン化合物と重複しない。薬剤開発を導く薬力学的試験を特定すべく、更なる反応機序研究を計画している。マウスで計画される薬物動態分析では、最初のインビボ・プロファイルを確認する。
【０１１８】
＜他の類似の技術及び競合製品＞
抗癌剤としての使用のための新規クロロキン誘導体は、活発な研究領域である（参考文献１６）。オートファジーは、ＮＩＨが今後数年に渡って投資を行う予定であるトップ１０の研究領域のうちの１つとして認定されている。今までの研究で、本発明者が本明細書で提供するような二価性の潜在能力を活用したものはない。更に、殆どの研究は、薬剤開発のためのリード化合物を最適化して一層の開発を導くことができる、本明細書で報告したインビボ研究や反応機序研究を欠いている。
【０１１９】
＜他の類似の技術及び製品に優る利点＞
以上、本出願は、開示した一連のビスアミノキノリンがインビボの腫瘍モデルにおいて、単剤での抗腫瘍活性を有する有効なオートファジー阻害剤であることを示した。
【０１２０】
＜参考文献＞
１. Lum JJ, DeBerardinis RJ, Thompson CB. 後生動物におけるオートファジー：豊かな場所での細胞生存、Nat Rev Mol Cell Biol 2005;6: 439-48.
２. Amaravadi RK, Thompson CB. 癌治療における治療誘発性のオートファジー及び壊死の役割、Clin Cancer Res 2007;13: 7271-9.
３. Amaravadi RK, Yu D, Lum JJら、Ｍｙｃにより誘導されるリンパ腫モデルにおいてオートファジー阻害は治療誘発性のアポトーシスを増強する、J Clin Invest 2007 ;1 17: 326-36.
４. Degenhardt K, Mathew R, Beaudoin Bら、オートファジーは腫瘍細胞の生存を促進し、壊死、炎症、及び腫瘍形成を制限する、Cancer Cell 2006;10: 51-64.
５. Amaravadi RK. 卵巣癌においてオートファジーによって誘導される腫瘍休眠、J Clin Invest 2008.
６. Carew JS, Nawrocki ST, Kahue CNら、オートファジーを標的にすることによって、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤ＳＡＨＡの抗癌活性が増大し、Ｂｃｒ−Ａｂｌによる薬剤耐性を克服する、Blood 2007.
７. Degtyarev M, De Maziere A, Orr Cら、Ａｋｔ阻害はオートファジーを促進し、ＰＴＥＮヌル腫瘍をリソソーム作用剤に対して増感させる、J Cell Biol 2008; 183: 101-16.
８. Sotelo J, Briceno E, Lopez-Gonzalez MA. 多形性膠芽腫についての従来療法へのクロロキンの追加：ランダム化二重盲検プラセボ対照試験、Ann Intern Med 2006;144: 337-43.
９. Amaravadi RK, Lippincott-Schwartz J, Yin XMら、癌治療に関してオートファジーを標的にすることについての原理と最新戦略、Clin Cancer Res 2011 ; 17: 654-66.
１０. Rosenfeld MR GS, Brem S, Mikkelson T, Wang D, Piao S, Davis L, O'Dwyer PJ, Amaravadi RK. 新たに神経膠芽腫と診断され、ヒドロキシクロロキンとアジュバントのテモゾロミド及び放射線との併用治療の第Ｉ相試験（ＡＢＴＣ−０６０３）で治療された患者における、オートファジー阻害の薬物動態解析及び薬力学的証拠、J Clin Oncol 2010;28: Abstract # 3086.
１１. Vance D, Shah M, Joshi A, Kane RS. 多価性：薬物設計の有望な戦略、Biotechnol Bioeng 2008; 101 : 429-34.
１２. Shrivastava A, Nunn AD, Tweedle MF. デザイナーペプチド：自然に学ぶ、Curr Pharm Des 2009;15: 675-81.
１３. Girault S, Grellier P, Berecibar Aら、線状又は環状のアミノリンカーを有するビス、トリ、及びテトラキノリンの抗プラスモジウム活性並びに細胞毒性、J Med Chem 2001 ;44: 1658-65.
１４. Vennerstrom JL, Ager AL, Jr., Dorn Aら、ビスキノリン類、２．抗マラリア性のＮ，Ｎ−ビス（７−クロロキノリン−４−イル）ヘテロアルカンジアミン、J Med Chem 1998;41 : 4360-4.
１５. Burnett JC, Schmidt J J, Stafford RGら、ボツリヌス神経毒素Ａのメタロプロテアーゼ活性に対する新規低分子量阻害剤、Biochem Biophys Res Commun 2003 ;310: 84-93.
１６. Hu C, Raja Solomon V, Cano P, Lee H. Ａｋｔ阻害剤による腫瘍細胞の死滅を顕著に増感し、非癌細胞に対する細胞毒性は最小限である４−アミノキノリン誘導体、Eur J Med Chem 2010;45: 705-9.
１７. Solomon VR, Hu C, Lee H. 抗乳癌特性を有するクロロキンアナログの設計と合成、Eur J Med Chem 2010;45: 3916-23.
１８. T. Higuchi HO, M. Umezawa, H. Kim, Y. Wataya. 抗マラリア活性を有する化合物とそれを活性成分として含む抗マラリア剤、WO/2007/097450.
１９. Lee WW, Berridge BJ, Jr., Ross LO, Goodman L. プトレシン、カダベリン、及び１，３−ジアミノプロパンからのマスタードの合成、J Med Chem 1963;6: 567-9.
２０. Kaschula CH, Egan TJ, Hunter Rら、４−アミノキノリン抗マラリア薬の構造活性関係、７位の基の役割、J Med Chem 2002;45: 3531-9.
２１. Adams A, Jarrott B, Elmes BC, Denny WA, Wakelin LP. ＤＮＡインターカレーション抗腫瘍剤とアドレノセプターとの相互作用、Mol Pharmacol 1985; 27: 480-91.
２２. Gourdie TA, Valu KK, Gravatt GLら、ＤＮＡ指向性アルキル化剤、１．アクリジン修飾アニリンマスタードの構造活性関係：マスタードの反応性の改変シーケンス、J Med Chem 1990; 33 : 1 177-86.
２３. Bailey DM, DeGrazia CG, Hoff SJら、ビスピリジナミン：歯垢阻害剤としての新たな分類の局所抗菌剤、J Med Chem 1984; 27: 1457-64.
２４. Vicker N, Burgess L, Chuckowree ISら、新規の折れ曲がりベンゾフェナジン：抗癌剤としての可能性を有するトポイソメラーゼＩ・トポイソメラーゼＩＩ二重阻害剤、J Med Chem 2002; 45: 721-39.
２５. Tanida I, Ueno T, Kominami E. 哺乳類のオートファジーにおけるＬＣ３コンジュゲーションシステム、Int J Biochem Cell Biol 2004; 36: 2503-18.
２６. Pankiv S, Clausen TH, Lamark Tら、ｐ６２／ＳＱＳＴＭ１はＡｔｇ８／ＬＣ３に対して直接結合し、オートファジーによるユビキチン化蛋白質凝集体の分解を促進する、J Biol Chem 2007; 282: 24131-45.
２７. Yang S, Wang X, Contino Gら、膵臓癌は腫瘍成長にはオートファジーが必要である、Genes Dev 2011; 25: 717-29.
２８. Ma X, Piao S, Wang DWら、腫瘍細胞オートファジーの測定によってメラノーマでの侵潤性、化学療法に対する耐性、及び生存が予測される、Clin Cancer Res 201 1.
２９. Fan QW, Cheng C, Hackett Cら、Ａｋｔとオートファジーとは協調して薬剤耐性グリオーマの生存を促進する、Sci Signal 2010; 3: ra81.
３０. Saleem A, Dvorzhinski D, Santanam Uら、前立腺癌におけるアポトーシス及びオートファジーの二重阻害の効果、Prostate 2012.
３１. Cadwell K, Liu JY, Brown SLら、マウス及びヒトの腸管パネート細胞におけるオートファジー及びオートファジー遺伝子Ａｔｇ１６１１の主要な役割、Nature 2008; 456: 259-63.
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４（１）】
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【図４（２）】
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【図４（３）】
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【図４（４）】
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【図５】
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【図６（１）】
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【図６（２）】
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【図７（１）】
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【図７（２）】
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【図８】
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【図９（１）】
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【図９（２）】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２（１）】
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【図１２（２）】
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【図１３（１）】
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【図１３（２）】
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【図１４】
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【図１５（１）】
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【図１５（２）】
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【図１６】
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【図１７】
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【国際調査報告】
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