(57)【要約】  本発明は一般に骨関節症（ＯＡ）および／または疼痛の治療および／または予防方法に関する。本発明によると、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストが骨関節症および／または疼痛の治療に有効である。Ｍ−ＣＳＦのアンタゴニストは、限定しないが、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−３４またはｃ−Ｆｍｓに特有の抗体を含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨関節痛または疼痛の治療に用いるための、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニスト。
【請求項２】
前記疼痛が、外科的手術後の疼痛であることを特徴とする請求項１に記載のアンタゴニスト。
【請求項３】
前記疼痛が、骨肉腫の疼痛であることを特徴とする請求項１に記載のアンタゴニスト。
【請求項４】
前記疼痛が、リウマチ性関節痛であることを特徴とする請求項１に記載のアンタゴニスト。
【請求項５】
前記疼痛が、骨関節症の疼痛であることを特徴とする請求項１に記載のアンタゴニスト。
【請求項６】
前記疼痛が、炎症性疼痛であることを特徴とする請求項１に記載のアンタゴニスト。
【請求項７】
前記アンタゴニストがヒトに用いられることことを特徴とする請求項１乃至６のいずれかに記載のアンタゴニスト。
【請求項８】
前記アンタゴニストは、Ｍ−ＣＳＦに特異的な抗体であることを特徴とする請求項１乃至７のいずれかに記載のアンタゴニスト。
【請求項９】
前記アンタゴニストは、ｃ−Ｆｍｓに特異的な抗体であることを特徴とする請求項１乃至７のいずれかに記載のアンタゴニスト。
【請求項１０】
前記アンタゴニストは、ＩＬ−３４に特異的な抗体であることを特徴とする請求項１乃至７のいずれかに記載のアンタゴニスト。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１１年７月１８日提出の米国暫定出願第６１／５０８，７１７号の利益を主張するものであり、その全体を参照により組み込んでいる。
【０００２】
本発明は一般に骨関節症（ＯＡ）および／または疼痛の治療および／または予防方法に関する。本発明によると、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストが骨関節症および／または疼痛の治療に有効である。ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストは、限定しないが、ｃ−Ｆｍｓまたはｃ−Ｆｍｓリガンドに特有の抗体、例えばＭ−ＣＳＦまたはＩＬ−３４を含む。
【背景技術】
【０００３】
［骨関節症］
骨関節症（ＯＡ）は変形性関節症としても知られており、老人や肥満者に多い疾病である。ＯＡは関節の疾病であるが、慢性関節リウマチ（ＲＡ）と異なり、全身性ではなく、通常は１またはいくつかの関節のみに影響する。この疾病は関節軟骨の完全崩壊、下の骨の硬化、および骨増殖体の形成に繋がり、結果として動きが悪くなり痛みが出る。最終的には関節を完全に交換する必要があることもある。
【０００４】
ＯＡは、米国では約２１００万人が罹患しており、そのうち２５％が医者の一時診療にかかり、全体の５０％にＮＳＡＩＤ（非ステロイド抗炎症薬）が処方される。現在では症状の進行を遅らせたり止める有効な治療はなく、今日の薬は単に対症的なものである。この疾病の発生率と重症度は、年齢によって増加する。６５歳では、アメリカ人の８０％がＸ線撮影でエビデンスがみられるが、そのうちの６０％のみに症候が出る。６５歳におけるすべての関節症の６５％がＯＡである。２００６年のＯＡに関連する米国の入院患者は７３５，０００人である。
【０００５】
現在のＯＡ薬剤は、ＯＡの症状を鎮めるもので、疾病そのものを治療するものではない。ＯＡ治療でよく用いられる薬剤は、ディアセリン、ボルタレン、モビック、およびアルスロテック（ジェネリック名：ディクロフナック、ミソプロストル、メロキシカム）といった非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）である。ＮＳＡＩＤは主に経口薬であり、中枢神経系（ＣＮＳ）のプロスタグランジン合成を抑制作用がある。他のよく用いられる薬剤は、ウルトラム（トラマドール）といった非麻薬性鎮痛薬、セレブラックスやアルコキシア（セレコキシブ、エトリコキシブ）といったＣＯＸ−２抑制剤、デュラジェシック（プロポキシフェンフェンタニル）といった麻薬性鎮痛薬、スパーツ、ヒアルガン、オルソビスク、およびシンビスク（Ｈｙｌａｎ  Ｇ−Ｆ２０）といったヒアルロン酸、および、プレディニソロンやメチルプレディニソロンといったコルチコステロイドを含む。現在のＯＡ治療は、軟骨細胞の移植などの組織工学を通じて手術の必要性を回避している。しかしながら、これらの治療はＯＡの最終ステージの治療としてのみ適用可能である。ＯＡ治療の考えられる他のアプローチは、デキストローゼといった刺激薬を罹患関節に注射し、急性の炎症反応を起こさせ、同時に組織、靱帯、腱、および軟骨の強化と治癒の期待をもたらす増殖療法がある。したがって、ＯＡ治療には未だ対処されていない医療上の高い必要性があった。
【０００６】
［疼痛］
様々な種類の疼痛が、米国の医師への相談において最も高頻度の理由であり、毎年全アメリカ人の半数が医療的ケアを求めている。それは、内科的疾患において、人間の生活の質及び一般的な機能を著しく妨げる主要な症状である。診断は、持続時間、強度、種類（鈍い、焼けるような又は刺すような）、原因又は体の位置により、色々な方法で疼痛を特徴的付けることに基づいている。一般に疼痛は治療をせずに治まり、又は休息や鎮痛剤服用などの簡単な対策に反応するものであり、それはその後急性疼痛と言われる。しかし、疼痛がもはや症状ではなく、疼痛そのものが病気である慢性疼痛と呼ばれる難治性の進行性の状態になる場合もある。
【０００７】
疼痛は、多くのスキームや状況によって分類される。疼痛には二つの基本タイプ：急性と慢性がある。急性疼痛は短い期間生じ、一時的な疾患に関連する。しかし、これは通常どこか悪いところがあるとの警告である。慢性疼痛は、継続的で再発性のものである。これは慢性的な病気に関連しており、それらの症状の一つである。疼痛の強さは、それを生じさせた刺激の種類だけでなく、疼痛の主観的な知覚によっても左右される。主観的な知覚は幅広いが、以下に基づいて疼痛の種類をいくつかに分類する：
・疼痛を生じさせた刺激
・疼痛の持続時間
・疼痛の特徴（強さ、場所、等）
【０００８】
もう一つの分類システムは、以下の通りである。
・絶え間ない疼痛。一定の強さが連続する。通常運動することによって悪化する。
・ズキズキする疼痛。片頭痛の典型である。脳の血管の拡張と収縮が原因である。
・突き刺すような疼痛。強く激しい疼痛である。機械的刺激が原因である。
・焼けるような疼痛。例えば胸焼けのような、絶えず焼けるような感覚である。
・圧迫されるような疼痛。血管又は筋肉の収縮が原因である。
【０００９】
また、特殊な種類の疼痛もある。
・筋肉の疼痛。筋肉痛として知られており、筋肉に作用し過度の運動の後や炎症時に生じる。
・疝痛。月経期間の子宮のように特定の器官の筋肉収縮が原因である。
・関連痛。体から受けた情報を脳がどのように解釈するかにより、実際に生じた場所ではない場所で痛みが生じる。
・外科的手術後又は手術後の疼痛。外科的手術後に生じ、外科的措置の損傷によるものである。
・骨肉腫の疼痛。前立腺、乳房、又は他の軟部組織の腫瘍といった特定の種類の癌は、転移性骨疾患として知られる骨の痛みを伴う疾患に進行する場合がある。
【００１０】
［痛みの治療の標準ケア］
痛みを治療するにはいくつもの方法がある。治療は痛みの原因によって変化する。主な治療オプションは以下の通りである：
アセトアミノフェン：タイレノール（アセトアミノフェン）を疼痛治療に用いる。他の痛み止めと異なり、タイレノールは抗炎症作用がない。しかしながら、慢性痛の場合はしばしば疼痛部位に炎症がないため、タイレノールが適切な治療となる。タイレノールは適切に用いれば安全であるが、過度に用いると危険となりうる。また、タイレノールは特定の他の薬剤と共に用いると、望まない副作用を生じることがある。
【００１１】
非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）：ＮＳＡＩＤ（例えばイブプロフェン、モトリン、アレーブなど）は、急性痛の場合や、慢性痛患者の再発時に最も有益となる。ＮＳＡＩＤはまた、腱炎、滑液包炎、および関節炎を含む炎症状態の治療によく効く。一般に、ＮＳＡＩＤは胃の問題が進展する可能性があるため、慢性痛の患者用に限られている。この問題を回避するために、新たにセレブレックスといったＣＯＸ−２抑制剤が開発されているが、これらの薬剤を長期にわたり使用する場合には未だに警告が必要である。
【００１２】
コルチコステロイド：ＮＳＡＩＤと同様に、コルチコステロイドは強い抗炎症薬であり、急性痛や、慢性的な炎症問題の再発に最もよく用いられる。コルチコステロイドは経口でも（例えばメドロール、プレドニソン）、軟組織または関節に注射されてもよい（コルチゾン注射）。
【００１３】
麻薬：麻薬を使用しないと疼痛が制御できない場合に麻薬の使用を考慮すべきである。多くの麻薬は、危険であり中毒になる。麻薬の投与は、急性疼痛に有用であるが、重大な副作用も有している。これらの薬の短時間作用型は、乱用と耐性を生じさせることがある。長時間作用型の選択は副作用が少なく、慢性疼痛を制御するのにより優れている。麻薬は、投与量を徐々に減らさずに長期間使用したり、疼痛以外の理由で薬を摂取した場合に中毒になる場合がある。
【００１４】
抗けいれん誘発剤：抗けいれん誘発剤は、神経痛を緩和するカテゴリーの薬剤である。これらの薬は、神経や脳に送られる信号の機能を変化させる。神経痛の抗けいれん誘発剤で最も一般的に処方されているのは、Ｎｅｕｒｏｎｔｉｎ（ガバペンチン）と呼ばれるものである。線維筋痛治療専用で近年浮上している別の選択は、リリカ（プレガバリン）と呼ばれるものである。
【００１５】
局所麻酔：局所麻酔は、ある領域に一次的な疼痛回復をもたらす。慢性痛の調整に用いる場合、局所麻酔はしばしば疼痛領域への局所的なパッチとして適用される。パッチとなったリドダーム（Ｌｉｄｏｄｅｒｍ）が皮膚上に適用され、この領域の感度を鈍らせる。
【００１６】
上述したすべての治療オプションは欠点や、副作用があり、あるいは特定の種類の痛みに限定される。したがって、解消されない疼痛治療に高い医療上の必要性があった。
【００１７】
［ｃ−Ｆｍｓとそのリガンド］
ｃ−Ｆｍｓ（ＣＳＦＲ１、Ｍ−ＣＳＦＲｃ−Ｆｍｓ）は、マクロファージの生成、分化、および機能を制御するサイトカインである、群体刺激因子１の受容体である（後述）。ｃ−Ｆｍｓは、Ｍ−ＣＳＦの生物学上の作用の殆どあるいはすべてを媒介する。リガンド結合は、オリゴマー化とトランスリン酸化のプロセスを介してＣＳＦＲ１を活性化する。コード化された蛋白質はチロシンキナーゼ膜受容体であり、チロシン−蛋白質キナーゼのＣＳＦ１／ＰＤＧＦ受容体ファミリのメンバーである。ＣＳＦＲ１遺伝子の第１イントロンは、転写不活性リボソーム蛋白質Ｌ７処理偽遺伝子を含み、これはＣＳＦＲ１遺伝子の反対方向に配置されている。
【００１８】
ＣＳＦ１Ｒの変異は、慢性的な骨髄性単球性白血病と、Ｍ４種急性顆粒球性白血病に関連する。アルツハイマー症や、脳の損傷後にＣＳＦ１Ｒ１のレベル増大が小膠細胞でみられる。受容体発現の増大は、小膠細胞をより活性化させる。ＣＳＦ１Ｒもそのリガンド群体刺激因子１も乳腺の発達に重要な役割を果たし、乳腺の発癌プロセスに関わりがある。
【００１９】
Ｍ−ＣＳＦ（ＣＳＦ−１）は、単球、マクロファージ、および骨髄前駆細胞の増殖、分化、および生存に関わる造血成長因子である。胎盤の栄養膜の受容体ＣＳＦ１Ｒの高レベルと同様に、高レベルのＣＳＦ−１の発現が、妊娠した子宮内膜の被覆組織でもみられる。研究により、局部的な高レベルのＣＳＦ−１による栄養膜ＣＳＦ１Ｒの活性化は、通常の胚移植と胎盤成長に必須のものと示されている。近頃では、ＣＳＦ−１とその受容体ＣＳＦ１Ｒは、乳腺の通常の成長と腫瘍の成長に関係すると考えられている。
【００２０】
ＩＬ−３４は、ｃ−Ｆｍｓの代替的なリガンドである（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００８），３２０，８０７−１１）。破骨細胞形成におけるＩＬ−３４の役割の一つが説明されている（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ（２０１１）６，  ｅ１８６８９）。ネズミのＩＬ−３４が、ｃ−Ｆｍｓに結合するネズミのＭ−ＣＳＦに匹敵することが示されている（Ｗｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｌｅｕｋｏｋ  Ｂｉｏｌ（２０１０）８８，４９５−５０５）。これは、成長因子Ｍ−ＣＳＦまたはＩＬ−３４により引き起こされる増殖が、抗ｃ−Ｆｍｓ抗体によりブロックされる観察と矛盾がない。Ｗｅｉらが用いた抗体ＡＦＳ−９８は、本願でも用いられている。
【００２１】
Ｄｅｖａｌａｒａｊａら（ＵＳ２００２０１４１９９４Ａ１）は、多くのリストのなかでＯＡは潜在的に、群体刺激因子のアンタゴニストを用いる治療に適した兆候を示すと述べている。この兆候リストは、アテローム性動脈硬化、セプシス、自己免疫疾患、骨粗鬆症、および慢性関節リウマチを含む。Ｍ−ＣＳＦは、Ｄｅｖａｌａｒａｊａらが述べる多くの群体刺激因子のうちの一つである。しかしながら、実験的なサポートがなく実施可能な開示内容がない。同様に、Ｐａｔｅｌら（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００９）９，５９９−６１０）は、炎症性疾患においてｃ−Ｆｍｓを述べているが、何らの実験データも実施可能な開示もない。同様に、ＷＯ０６／０９６４６１は特定のＭ−ＣＳＦ特異の抗体を開示する。しかしながら、ＷＯ０６／０９６４６１はＭ−ＣＳＦ特異の抗体の単離、精製、および調合を記載するだけであり、開示されたバインダとインヴィトロあるいはインヴィヴォでのデータを開示するものではない。したがって、ＷＯ０６／０９６４６１は実施可能ではない。
【００２２】
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【発明の概要】
【００２３】
本発明は、初めて、ｃ−Ｆｍｓ、Ｍ−ＣＳＦ、およびＩＬ−３４がＯＡおよび疼痛の治療に有効なターゲットであることを示すものである。Ｍ−ＣＳＦとＩＬ−３４はｃ−Ｆｍｓのリガンドであり、これらの分子の中和はＯＡおよび疼痛の治療に有効である。この発見は新規であり、いずれの従来技術もＯＡおよび疼痛の治療にこの関係を類推させるものを提供あるいは示唆するものはない。したがって、本発明は、対象者の骨関節症の治療方法を提供し、この方法は、前記対象者に有効量のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを投与するステップを含む。本発明はまた、対象者の疼痛を治療する方法を提供し、この方法は、対象者に有効量のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを投与するステップを含む。
【００２４】
本発明の他の態様は、対象者の骨関節症の予防方法を企図するものであり、この方法は対象者に有効量のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを投与するステップを含む。
【００２５】
本発明の別の態様は、対象者の疼痛の予防方法を企図するものであり、この方法は対象者に有効量のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを投与するステップを含む。
【００２６】
本発明の別の態様は、Ｍ−ＣＳＦの能力における、骨関節症に罹患したか骨関節症の罹患が疑われる対象者の細胞の活性化、増殖、成長促進、および／または生存を弱めるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを含む組成物に関し、この組成物はさらに、１またはそれ以上の薬学的に許容可能な担体および／または希釈剤を含む。別の態様では、本発明は、ＩＬ−３４の能力における、骨関節症に罹患したか骨関節症の罹患が疑われる対象者の細胞の活性化、増殖、成長促進、および／または生存を弱めるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを含む組成物に関し、この組成物はさらに、１またはそれ以上の薬学的に許容可能な担体および／または希釈剤を含む。
【００２７】
本発明の別の態様は、Ｍ−ＣＳＦの能力における、疼痛に苦しむか疼痛が疑われる対象者の細胞の活性化、増殖、成長促進、および／または生存を弱めるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを含む組成物に関し、この組成物はさらに、１またはそれ以上の薬学的に許容可能な担体および／または希釈剤を含む。別の態様では、本発明は、ＩＬ−３４の能力における、疼痛に苦しむか疼痛が疑われる対象者の細胞の活性化、増殖、成長促進、および／または生存を弱めるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを含む組成物に関し、この組成物はさらに、１またはそれ以上の薬学的に許容可能な担体および／または希釈剤を含む。
【００２８】
本発明の別の態様は、骨関節症の治療に用いるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを含む組成物に関し、この組成物はさらに１またはそれ以上の薬学的に許容可能な担体および／または希釈剤を含む。
【００２９】
本発明の別の態様は、疼痛の治療に用いるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを含む組成物に関し、この組成物はさらに１またはそれ以上の薬学的に許容可能な担体および／または希釈剤を含む。
【００３０】
本発明の別の態様は、骨関節症の治療用の薬剤の製造へのｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの使用に関する。
【００３１】
本発明の別の態様は、疼痛の治療用の薬剤の製造へのｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの使用に関する。
【００３２】
本発明の別の態様は、骨関節症の治療方法に関し、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを対象者に投与するステップを含む。
【００３３】
本発明の別の態様は、疼痛の治療方法に関し、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを対象者に投与するステップを含む。
【００３４】
本発明の特定の態様において、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストは、Ｍ−ＣＳＦに特異的な抗体である。
【００３５】
本発明の別の態様において、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストは、ｃ−Ｆｍｓに特異的な抗体である。
【００３６】
本発明の別の態様において、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストは、ＩＬ−３４に特異的な抗体である。
【００３７】
本発明の特定の態様は、骨関節症または疼痛の治療に用いられるｃ−Ｆｍｓのアンタゴニストを提供する。
【００３８】
本発明の特定の態様は、骨関節症または疼痛の治療に用いられる、Ｍ−ＣＳＦに特異的な抗体を提供する。
【００３９】
本発明の特定の態様は、骨関節症または疼痛の治療に用いられる、ｃ−Ｆｍｓに特異的な抗体を提供する。
【００４０】
本発明の特定の態様は、骨関節症または疼痛の治療に用いられる、ＩＬ−３４に特異的な抗体を提供する。
【００４１】
本発明の特定の態様において、本発明のアンタゴニストはヒトに用いられる。
【００４２】
本明細書を通じて、用語「具える」、「有する」、および「含む」や、「具えている」「有している」、「含んでいる」等の派生語は、記載された要素、要素や完全体の群を含むが、他の要素や完全体およびその群を除外しないと解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】図１は、コラゲナーゼ誘発ＯＡのマウスで判定した疼痛の測定の体重配分（ｗｅｉｇｈｔ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）である。結果は平均＋標準誤差として示している。マウスは２０日目に有意な疼痛を示した。マウスは２０日目以降は２ｘ／週で処置した。異なる２つの治療群は統計的に異なる（ｔ−テスト）：抗ＣＳＦＲ１対コントロールｍＡｂ：２８日目と３１日目でｐ＜０．０５。抗ＣＳＦＲ１対０日目：ｐ＞０．０１、２０日目：ｐ＜０．０５、２４日目。
【図２】図２は、コラゲナーゼ誘発ＯＡのマウスにおける骨関節症スコアの組織学的評価である。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝１５匹／群）がコラゲナーゼを受けた（０日と２日目）。マウスは、２０日目（ｔ＝０から疼痛の読みが有意に異なる初日）から抗ｃ−ＦｍｓまたはコントロールｍＡｂ（２ｘ／週）で処置された。結果は平均±標準誤差として示している。ＬＴ＝外側頸骨、ＬＦ＝横大腿骨、ＭＴ＝内側脛骨、ＭＦ＝内側大腿骨。抗ｃＦｍｓ対コントロール：ＭＴ−ｐ＝０．０１（マンホイットニー２サンプルランクテスト）。
【図３】図３は、コラゲナーゼ誘発ＯＡのマウスにおける疼痛の測定の体重配分である。結果は平均＋標準誤差として示している。マウスは２０日目に有意な疼痛を示した。マウスは２０日目以降は２ｘ／週で処置した。抗Ｍ−ＣＳＦ抗体で処置されたマウスは、アイソトープコントロール抗体と比べて疼痛度合いの増加が見られなかった。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
本発明は、ｃ−Ｆｍｓ、Ｍ−ＣＳＦ、およびＩＬ−３４がＯＡおよび疼痛の治療の有効なターゲットであることを示す。Ｍ−ＣＦＳとＩＬ−３４はｃ−Ｆｍｓのリガンドであり、これらの分子の中和はＯＡおよび疼痛の治療に有効である。これに関し、本発明は一態様において、ＯＡおよび／または疼痛の分野で予防あるいは治療に有益なｃ−Ｆｍｓのアンタゴニストの使用方法を提供する。
【００４５】
本発明は、治療が必要な対象者に薬学的な有効量のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを投与することを含む、治療方法を提供する。本書において「薬学的な有効量」または「有効量」とは、所望の生理学的反応を誘発するのに必要なｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの量をいう。本発明によると、治療上有効な量は、骨関節症および／または疼痛の治療および／または予防に必要なｃ−Ｆｍｓの量をいう。
【００４６】
本発明の特定の態様は、手術後の疼痛の治療方法を提供する。本発明の他の態様は、骨癌の治療方法を提供する。本発明のさらなる他の態様は、鎮痛作用のあるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを提供する。本発明のさらなる他の態様は、リウマチ性関節痛の治療方法が提供される。ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストは、リウマチ性の関節炎に関する疼痛を阻害または阻止する効果がある。本発明の他の態様では、リウマチ性関節痛の発生を減少し、リウマチ性関節痛を抑制し、リウマチ性関節痛を鎮静させ、リウマチ性関節痛を和らげ、および／または、対象者のリウマチ性関節痛の出始め、進行、または悪化を遅らせる方法が提供され、この方法は対象者に有効量のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを投与することを含む。本発明の他の態様では、個人に有効量のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを投与することにより個人の骨関節症の疼痛を予防または治療する方法が提供される。本発明の他の態様では、リウマチ性関節炎に関する炎症性悪液質（体重減少）の治療方法が提供され、有効量のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを投与することを含む。本発明の他の態様は、骨関節痛の発生を減らし、骨関節痛を改善し、骨関節痛を鎮静させ、骨関節痛を和らげ、および／または個人の骨関節痛の出始め、進行、または悪化を遅らせる方法が提供され、この方法は個人に有効量のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを投与することを含む。
【００４７】
疼痛あるいは疼痛の１以上の症状（例えばリウマチ性関節痛や骨関節痛）を「緩和する」とは、本発明にかかるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストで処置された個人または個体群の術後痛の１以上の望まない臨床症状の程度を緩和することを意味する。
【００４８】
特定の態様では、疼痛はＭ−ＣＳＦアンタゴニストの投与後に約２４時間で緩和される。他の態様では、疼痛はｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの投与後に約４日で緩和される。
【００４９】
本書でいう「ｃ−Ｆｍｓアンタゴニスト」は、広義でのｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを含み、ｃ−Ｆｍｓまたはそのリガンドのいずれかの活動または機能を抑制し、あるいは別の様々な方法でｃ−Ｆｍｓが含まれるものに治療効果を奏する様々な分子を含む。ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの語は、ｃ−Ｆｍｓシグナル伝達を遮断あるいは抑制する様々な分子を含む。ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの語は、限定しないが、ｃ−Ｆｍｓに特異的に結合する抗体、ｃ−Ｆｍｓに特異的な阻害性核酸、またはｃ−Ｆｍｓに特定的な小有機分子を含む。また、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの語の意味は、Ｍ−ＣＳＦに特異的に結合する抗体、Ｍ−ＣＳＦに特異的な阻害性核酸、またはＭ−ＣＳＦに特異的な小有機分子を含む。さらに、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの語の意味には、ＩＬ−３４に特異的に結合する抗体、ＩＬ−３４に特異的な阻害性核酸、またはＩＬ−３４に特異的な小有機分子が含まれる。
【００５０】
阻害性核酸は、限定しないが、アンチセンスＤＮＡ、三重鎖形成性オリゴヌクレオチド、外部ガイド配列、低分子干渉ＲＮＡおよびミクロＲＮＡを含む。有用な阻害性核酸は、ｃ−Ｆｍｓ、Ｍ−ＣＳＦ、またはＩＬ−３４をコードするＲＮＡの発現をコントロールに比べて少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または９５％低減するものを含む。阻害性核酸およびその製造方法はこの技術分野で公知である。低分子干渉ＲＮＡの設計ソフトウェアが入手可能である。
【００５１】
Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−３４、またはＭ−ＣＳＦ受容体に特異的な小有機分子（ＳＭＯＬ）は、天然物スクリーニングまたは化合物ライブラリーで同定またはスクリーニングすることができる。通常、ＳＭＯＬの分子量は５００ダルトン未満であり、より典型的には１６０−４８０ダルトンである。ＳＭＯＬの他の代表的な特徴は以下の１以上である：
・分配係数の対数Ｐが、−０．４から＋５．６の範囲内
・モル屈折率が４０から１３０
・原子数が２０から７０
検証するには、Ｇｈｏｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｏｍｂｉｎ  Ｃｈｅｍ：１：５５−６８，１９９９およびＬｉｐｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ  Ｒｅｖ  ２３：３−２５，１９９７を参照されたい。
【００５２】
好適には、本発明で使用されるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストは、Ｍ−ＣＳＦに特異的、ＩＬ−３４に特異的、あるいはＭ−ＣＳＦ受容体に特異的な抗体である。そのような抗体は、マウス、ラット、キメラ、ヒト化、又はヒト抗体などの、任意の種類の抗体であってもよい。ここでは「ヒト」抗体又は機能性ヒト抗体断片を、キメラではなく（例えば「ヒト化」ではない）、かつ非ヒト種由来（全体あるいは一部に拘わらず）ではないものと定義する。ヒト抗体又は機能性抗体断片は、ヒト由来又は合成ヒト抗体でもよい。ここでは「合成ヒト抗体」を、既知のヒト抗体配列の分析に基づきシリコン内で合成された合成配列由来の配列を全体又は一部に有する抗体と定義する。シリコン内でのヒト抗体配列又はその抗体の設計は、例えばヒト抗体又は抗体断片の配列のデータベースを分析し、そこから得られたデータを利用してポリペプチド配列を構築することにより得られる。ヒト抗体又は機能性抗体断片の別の例は、ヒト由来の抗体配列ライブラリ（例えばヒトなど天然ソース由来の抗体に基づくライブラリ）から単離された核酸でコードされたものである。
【００５３】
本書において、「ヒト化抗体」または機能性ヒト化抗体フラグメントは、（ｉ）非ヒトソース（例えば異種免疫系を担う遺伝子組み換えマウス）由来のヒト生殖系配列の基づく抗体、（ｉｉ）可変領域は非ヒト由来であり、定常領域はヒト由来であるキメラ、（ｉｉｉ）可変領域のＣＤＲｓが非ヒト由来であり、可変領域の一又はそれ以上のフレームワークがヒト由来であり、定常領域（もしあれば）がヒト由来である移植ＣＤＲと定義する。特定の態様では、本発明で用いる抗体はヒト化抗体である。
【００５４】
本書において、「キメラ抗体」または機能性キメラ抗体フラグメントは、一つの種に見られる配列に由来又は対応する定常抗体領域を有する抗体分子及びもう一つの種に由来する可変抗体領域を有する抗体分子と定義する。定常抗体領域は、例えばヒト生殖系又は体細胞のようなヒトに見られる配列に由来又は対応し、可変抗体領域（例えばＶＨ、ＶＬ、ＣＤＲ又はＦＲ領域）は、例えばマウス、ラット、ウサギ又はハムスターのような非ヒト動物に見られる配列に由来するものが好ましい。特定の態様では、本発明で用いられる抗体はキメラ抗体である。
【００５５】
本書において、「単クローン」とは、この分野で、例えばＢ細胞といった抗体産生細胞の単クローンから発生し、結合された抗原に単一のエピトープを認める抗体または抗体フラグメントの意味を有する。特定の態様では、本発明で用いる抗体は、単クローン抗体である。
【００５６】
結合の特異性は絶対的でなく相対的であるため、本書において、「特異的に結合した」抗体とは、抗体がこのような抗原と１以上の基準抗原との間の識別が可能である場合に、その抗原（ここでは、Ｍ−ＣＳＦ受容体またはＭ−ＣＳＦあるいはＩＬ−３４）に「特異的な」または「特に認められる」ことをいう。基準抗原は、１以上の近い関係の抗原であり、基準点として用いられ、例えばＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ−４、ＩＬ１３、またはＧＭ−ＣＳＦがある。最も一般的な形では（規定された基準が記載されていない場合）、「特定結合」は、例えば、後述する１以上の方法により、抗体が関心のある抗原と関係のない抗原と識別される機能をいう。このような方法は、ウェスタンブロット法に限定しないが、ＥＬＩＳＡ−、ＲＩＡ−、ＥＣＬ−、ＩＲＭＡ−テストとペプチド走査を含む。例えば、標準ＥＬＩＳＡ検査を行うことができる。スコアは、標準発色により行われる（例えば西洋ワサビペルオキシターゼ及び過酸化水素が添加されたテトラメチルベンジンを有した二次抗体）。特定のウェル中での反応は、例えば４５０ｎｍで光学密度により計測される。一般的なバックグランド（＝陰性反応）は０．１ＯＤであり、典型的な陽性反応は１ＯＤである。これは陰性／陽性の違いは１０倍以上であることを示している。一般に特異的な結合を判定するときは、単一の標準抗原を使用せず、粉ミルク、ＢＳＡ、トランスフェリン、又は同様なものなどの約３から５の無関係の抗原を使用する。さらに、「特異的な結合」は、例えばＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３４、またはＭ−ＣＳＦ受容体の異なるドメインや領域といった、ターゲット抗原の異なる部分間を識別するか、一以上のキーアミノ酸残基あるいはＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３４またはＭ−ＣＳＦ受容体のアミノ酸残基の伸長を識別する能力に関連する。
【００５７】
また、本書において「免疫グロブリン」（Ｉｇ）を、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、又はＩｇＤのクラス（又は任意のそのサブクラス）に属し、従来より知られた抗体及びその機能性断片を全て含むタンパク質と定義する。ここでは抗体／免疫グロブリンの「機能性断片」を、抗原結合領域を保持する抗体／免疫グロブリン（例えばＩｇＧの可変領域）断片と定義する。抗体の「抗原結合領域」は、通常抗体の一又はそれ以上の超可変領域、即ちＣＤＲ−１、−２、及び／又は−３領域に見られるが、可変「フレームワーク」領域はまた、ＣＤＲｓの足場を提供するという抗原結合で重要な役割を果たすことができる。「抗原結合領域」は、少なくとも可変軽（ＶＬ）鎖の４から１０３アミノ酸残基及び可変重（ＶＨ）鎖の５から１０９アミノ酸残基を具えるのが好ましく、ＶＬの３から１０７アミノ酸残基及びＶＨの４から１１１アミノ酸残基を具えるのがさらに好ましく、ＶＬ及びＶＨ鎖（ＶＬのアミノ酸位置１から１０９及びＶＨのアミノ酸位置１から１１３；番号はＷＯ９７／０８３２０に従う）を完全に具えるのが特に好ましい。本発明で使用する免疫グロブリンの好ましいクラスはＩｇＧである。本発明の「機能性断片」はＦ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ断片、ｓｃＦｖの領域、又は例えば単一の重鎖可変領域又は単一の軽鎖可変領域といった単一の免疫グロブリン可変領域又は単一の領域抗体ポリペプチド具える構成体を含んでいる。Ｆ（ａｂ’）２又はＦａｂは、ＣＨ１とＣＬ領域間に生じる分子間ジスルフィド相互作用を最小化する又は完全に除去するよう設計されている。
【００５８】
本発明の抗体は、シリコン内で設計されたアミノ酸配列に基づいて合成的に作られた核酸でコードされた組み換え体抗体ライブラリ由来のものであってもよい。シリコン内での抗体の設計は、例えばヒト抗体のデータベースを分析し、そこから得られたデータを利用してポリペプチド配列を構築することにより得ることができる。例えば、Ｋｎａｐｐｉｋら、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ  ２９６」、５７頁、２０００年、Ｋｒｅｂｓら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．２５４」、６７頁、２００１年、Ｒｏｔｈｅら、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３７６」、１１８２頁、２００８年、及び参照によりその全体が組み込まれる２０００年にＫｎａｐｐｉｋらに発行された米国特許第６，３００，０６４号にシリコン内で作製された配列の設計及び取得方法が開示され、その全体が参照により組み込まれる。
【００５９】
Ｍ−ＣＳＦに特異的な様々な抗体を、本発明に使用することができる。典型的な抗体は、ＷＯ９０／００９４００、ＷＯ９９／０１７７９８、ＷＯ０１／３０３８１、ＷＯ０５／０３０１２４、ＵＳ２００２０１４１９９４、ＷＯ０６／０９６４６１、ＷＯ０６／０９６４９０、ＷＯ０６／０９６４８９、ＷＯ０４／０４５５３２、ＷＯ０７／０５９１３５、ＷＯ０５／０４６６５７、ＷＯ０５／０６８５０３、ＷＯ０７／０１６２４０、ＷＯ０７／０１６２８５およびＷＯ０７／０８１８７９に開示されたものが含まれ、これらはすべて参照により本書に組み込まれる。
【００６０】
同様に、Ｍ−ＣＳＦ受容体に特異的な抗体を本発明に用いることができる。
【００６１】
同様に、ＩＬ−３４に特異的な抗体を本発明に用いることができる。
【００６２】
特定の態様において、本発明は、対象における骨関節症の治療のための方法を提供し、この方法は、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを投与する工程を含む。他の態様において、本発明は、対象における疼痛を治療するための方法を提供し、この方法は、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを投与する工程を含む。この文脈で使用される「対象」とは、マウスやラットなどのげっ歯類、ならびにカニクイザル（マカク属カニクイザル）、アカゲザル（マカク属アカゲザル）またはヒト（ホモサピエンス）などの霊長類を含む任意の哺乳動物をいう。好ましくは、被験体は霊長類であり、最も好ましくはヒトである。
【００６３】
特定の態様において、本発明は、骨関節症に罹患しているか罹患が疑われる対象において、細胞の活性化、増殖、成長誘発、および／または生存にかかるＭ−ＣＳＦの機能を弱めるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを含む組成物を提供し、この組成物はさらに、１以上の薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む。本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、骨関節症におけるＭ−ＣＳＦの役割のいずれかに拮抗することができる。
【００６４】
特定の態様において、本発明は、骨関節症に罹患しているか罹患が疑われる対象において、細胞の活性化、増殖、成長誘発、および／または生存にかかるＩＬ−３４の機能を弱めるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを含む組成物を提供し、この組成物はさらに、１以上の薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む。本発明の抗ＩＬ−３４抗体は、骨関節症におけるＩＬ−３４の役割のいずれかに拮抗することができる。
【００６５】
特定の態様において、本発明は、骨関節症に罹患しているか罹患が疑われる対象において、細胞の活性化、増殖、成長誘発、および／または生存にかかるｃ−Ｆｍｓの機能を弱めるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを含む組成物を提供し、この組成物はさらに、１以上の薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む。本発明の抗ｃ−Ｆｍｓ抗体は、骨関節症におけるｃ−Ｆｍｓの役割のいずれかに拮抗することができる。
【００６６】
特定の態様において、本発明は、疼痛に苦しむか疼痛の苦痛が疑われる対象において、細胞の活性化、増殖、成長誘発、および／または生存にかかるＭ−ＣＳＦの機能を弱めるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを含む組成物を提供し、この組成物はさらに、１以上の薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む。本発明の抗Ｍ−ＣＳＦ抗体は、骨関節症におけるＭ−ＣＳＦの役割のいずれかに拮抗することができる。
【００６７】
特定の態様において、本発明は、疼痛に苦しむか疼痛の苦痛が疑われる対象において、細胞の活性化、増殖、成長誘発、および／または生存にかかるＩＬ−３４の機能を弱めるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを含む組成物を提供し、この組成物はさらに、１以上の薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む。本発明の抗ＩＬ−３４抗体は、骨関節症におけるＩＬ−３４の役割のいずれかに拮抗することができる。
【００６８】
特定の態様において、本発明は、疼痛に苦しむか疼痛の苦痛が疑われる対象において、細胞の活性化、増殖、成長誘発、および／または生存にかかるｃ−Ｆｍｓの機能を弱めるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを含む組成物を提供し、この組成物はさらに、１以上の薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む。本発明の抗ｃ−Ｆｍｓ抗体は、骨関節症におけるｃ−Ｆｍｓの役割のいずれかに拮抗することができる。
【００６９】
特定の態様において、本発明は、骨関節症の治療に使用するためのｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを提供する。他の態様において、本発明は、疼痛の治療において使用するためのｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを提供する。特定の態様において、本発明は、骨関節症又は疼痛の治療において使用するためのｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを提供する。
【００７０】
特定の態様において、本発明は、骨関節症の治療に使用するためのＭ−ＣＳＦに特異的な抗体を提供する。他の態様において、本発明は、疼痛の治療において使用するためのＭ−ＣＳＦに特異的な抗体を提供する。特定の態様において、本発明は、骨関節症又は疼痛の治療における使用のためのＭ−ＣＳＦに特異的な抗体を提供する。
【００７１】
特定の態様において、本発明は、骨関節症の治療に使用するためのｃ−Ｆｍｓに特異的な抗体を提供する。他の態様において、本発明は、疼痛の治療において使用するためのｃ−Ｆｍｓに特異的な抗体を提供する。特定の態様において、本発明は、骨関節症又は疼痛の治療において使用するためのｃ−Ｆｍｓに特異的な抗体を提供する。
【００７２】
特定の態様において、本発明は、骨関節症の治療に使用するためのＩＬ−３４に特異的な抗体を提供する。他の態様において、本発明は、疼痛の治療において使用するためのＩＬ−３４に特異的な抗体を提供する。特定の態様において、本発明は、骨関節症又は疼痛の治療に使用するためのＩＬ−３４に特異的な抗体を提供する。
【００７３】
特定の態様において、本発明のアンタゴニストおよび抗体は、術後痛の治療に使用される。別の態様において、アンタゴニストおよび抗体は、骨癌性疼痛の治療に使用される。別の態様ではアンタゴニストおよび抗体は、関節リウマチ痛の治療に使用される。別の態様では、アンタゴニストおよび抗体は骨関節症の痛みの治療に使用される。別の態様において、アンタゴニストおよび抗体は、炎症性疼痛の治療に使用される。
【００７４】
特定の態様において、本発明のアンタゴニストおよび抗体はヒトの治療に使用される。
【００７５】
他の態様において、本発明は、対象における骨関節症の予防方法を提供し、この方法はｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを投与することを含む。他の態様において、本発明は、被験体における疼痛の予防方法を提供し、該方法は、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを投与することを含む。この文脈で使用される「予防」は、疾患の発症を防ぐか、その疾患の発症を遅延させることを目的とすることをいう。
【００７６】
特定の態様において、本発明は、骨関節症の治療に使用するためのｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを含む組成物を提供し、この組成物はさらに、１以上の薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む。
【００７７】
特定の態様において、本発明は、疼痛の治療に使用するためのｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを含む組成物を提供し、この組成物はさらに、１以上の薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む。
【００７８】
他の態様において、本発明は、骨関節症の治療における医薬の調製におけるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの使用を提供する。
【００７９】
他の態様において、本発明は、疼痛の治療における医薬の調製におけるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの使用を提供する。
【００８０】
他の態様において、本発明は、骨節症の治療のためのｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを提供する。
【００８１】
他の態様において、本発明は、疼痛の治療のためのｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを提供する。
【００８２】
本発明の組成物は、好適には、骨関節症および／または疼痛の治療用の、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストと、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む医薬組成物である。このような担体、希釈剤および賦形剤は、当技術分野において周知であり、当業者は、本発明のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストで対象を治療するのに適した製剤および投与方法を見つけるであろう。
【実施例１】
【００８３】
例１：ＯＡおよび疼痛の処置におけるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの治療有効性
この実験において、ｃ−Ｆｍｓに特異的な単クローン抗体を使用して、Ｍ−ＣＳＦアンタゴニストが骨関節症を治療するのに有効であり得ることを実証した。同様の実験が、疼痛の治療におけるｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの有用性を実証する。
【００８４】
コラーゲン誘発ＯＡマウスモデル：  
コラゲナーゼ誘発ＯＡモデル（Ｂｌｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｉｒｉｔｉｓ  Ｃａｒｔｉｌａｇｅ．１２；６２７−６３５；Ｂｌｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ａｒｔｈｉｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．５６，１４７−５７）は、片側の関節内にコラゲナーゼを注射することにより、関節不安定性を誘発させるモデルである。これは、一般に関節の安定を補助する靭帯の弱体化の原因となり、誘導後６週間以内にＯＡの病状が発生する。このモデルでは、注入されたコラゲナーゼによる軟骨の直接の被害は観察されない。ＯＡの病状の特徴は、軟骨破壊、滑膜線維症および骨棘形成が含まれる。骨棘形成を媒介する滑膜マクロファージに伴う滑膜の活性化がある。ＯＡ進行の初期段階では（０−１４日）、骨棘形成および線維症がみられる。関節内で骨の形成が最初に起こる場所（軟骨表面に近い骨膜と、骨と靭帯の接合部位）は、ヒトのＯＡで見られるものと同様である。新骨形成のプロセスも同様であり、骨膜の活性化があり、続いて軟骨様組織の生成、さらに軟骨内骨化となる。疾病の最初の２週間には骨膜病変もみられ、滑膜の肥厚につながるマクロファージの流入、そして深い滑膜層の一部の炎症細胞がある。軟骨基質の侵食を含む完全なＯＡの病理は、ＯＡ誘導の６週間後までは見られない。
【００８５】
実験の概要：  
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、関節不安定性を誘導するために０日目および２日目に右膝にコラゲナーゼタイプ関節内ＶＩＩを１単位与えた（Ｂｌｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｃａｒｔｉｌａｇｅ．  １２６２７−３５を参照）。
【００８６】
疼痛は、ＯＡモデルにおける指標として使用した。疼痛の尺度としての体重配分を、インキャパシタンスメータを用いて記録した。この測定値は、処置済みと、対側性の無処置の後肢の体重配分の変化を測定する。マウスは、実験前に機器に３回順応させた。各後肢に配分された重さを、５秒間にわたって測定した。マウス毎に各時点で３回別々に測定した。
【００８７】
疼痛読み出しの平均が０日目よりも有意に低かった後（すなわちＯＡの導入前）、マウスを無作為に２つの群に分け（１５匹／群）、疼痛読み出しの平均±ＳＥＭが各群で同様となり、かつ各ケージが各治療群からのマウスを含むようにした（すなわち６匹／ケージ、各処置群に２匹のマウス）。これは、同じケージからのすべてのマウスが同じ処置群からとなり、結果に影響を与える可能性を避けるためである。
【００８８】
抗ｃ−Ｆｍｓ抗体処置：  
３０匹のマウスを以下のように無作為に２つの群（１５匹／群）に分けた：
・グループ１（ｎ＝１５）：抗ｃ−Ｆｍｓ抗体
・グループ２（ｎ＝１５）：ＩｇＧ２ａアイソタイプコントロール抗体
【００８９】
抗ｍ−Ｆｍｓ抗体の例として、ＡＳＦ９８（ＩｇＧ２ａアイソタイプ）を使用した（京都大学、Ｓ．西川教授、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（１９９５）１１，  ２４６９−７６。ＡＦＳ９８は米国サンディエゴのｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号１４−１１５２−８１で入手可能である）。ＡＳＦ９８は、マウスのｃ−Ｆｍｓに反応する抗体である。ＡＳＦ９８は、Ｍ−ＣＳＦシグナル伝達を無効にすることが報告されている（Ｓｕｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（１９９５）１１，２４６９−７６）。
【００９０】
マウスは６週間後に実験が終了するまで、週に２回、３００μｇの抗ｃ−Ｆｍｓ抗体／マウス／処置で腹膜内に処置され、２０日目に疼痛が開始した。コントロール抗体と抗ｃ−Ｆｍｓ抗体の両方が、１０未満のエンドトキシン単位／ｍｌを含有するように精製された。
【００９１】
結果
ＯＡ導入後２０日目の平均の疼痛の読みは、０日目（すべてのマウスでｐ＜０．０００１）に比べて顕著に高かった（すなわち、関節症の膝から体重が有意にシフトしている）。マウスは２０日目で２つの治療群に分けられ、４２日目まで、２ｘ／週で適切なｍＡｂで処置された。
【００９２】
ｍＡｂ処置（２０日目）の開始後、コントロールｍＡｂで処置したマウスは、実験の終わりまで、０日目と比べて有意な疼痛を示し続けた。抗ＣＳＦ１Ｒ処置後、痛みの読みは増加し続けず（すなわち、関節症の膝から体重のシフトが増加しない）、２８日目と３１日目には、抗ＣＳＦ１ＲｍＡｂ処置群とコントロールｍＡｂ処置群には顕著な違いがあった（ｐ≦０．０５）。
【００９３】
結果を図１に示す。インキャパシタンスによって特定されるように、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストで処置されたマウスは、コントロール抗体で処置したマウスと比較して、症状がより少なかった。これは、ｃ−ＦｍｓアンタゴニストはＯＡおよび疼痛の治療に有効であることを示している。
【実施例２】
【００９４】
組織学的観察
実施例１のサンプルを、組織学的にも調べた。
【００９５】
最後の注射から６週間後に、マウスの膝関節について組織研究を行った。膝関節を回収し、固定、脱石灰化し、パラフィンに包埋し、ミクロトームで７μｍに切断した。スライドは、関節の病理を示すべく、サフラニン−Ｏ／ファストグリーン、ヘマトキシリン？？およびエオシンで染色した。調査された病理は、軟骨損傷、滑膜炎、骨棘形成や関節の変形が含まれる。
【００９６】
軟骨の病状に用いるスコアリングシステムは以下の通りである：
グレード  
０      通常  
１      不規則だが無傷
１．５  不規則で粗面
２      表面が繊維状
２．５  表面が繊維状で軟骨層の細胞が減少
３      垂直に割れ目
３．５  亀裂および／または水平に割れ目、タイドマーク（ｔｉｄｅｍａｒｋ）が破断
４      軟骨損傷がタイドマークまで到達しない
４．５  軟骨損傷がタイドマークまで到達
５      軟骨損傷がタイドマークを越えているが骨に至らない
５．５  軟骨損傷が骨に至る
６      骨の損傷／リモデリング／変形
【００９７】
ステージ  
１    損傷を受けた領域が１０％以下
２    損傷を受けた領域が１０−２５％
３    損傷を受けた領域が２５−５０％
４    損傷を受けた領域が５０−７５％
グレードはステージで乗算されてスコアが得られる。
【００９８】
このスコアリングシステムは、臨床的および実験的ＯＡでのＯＡ組織病理を評価する認められた方法に基づいている。Ｐｒｉｔｚｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｃａｒｔｉｌａｇｅ；１４；１３−２９参照。グレードは、軟骨へのＯＡの深さの進行として規定される。ステージは、軟骨の水平方向の範囲として規定され、すなわちどれだけ軟骨が影響を受けているかを示す。グレードはステージで乗算されてスコアが得られ、全体のスコアが得られてＯＡの重篤度と範囲の評価が合わせ示される。マウスあたり最大６つの部分をスコアリングした。
【００９９】
グレードはステージで乗算されスコアが得られる。
【０１００】
以下のスコアリングシステムを、滑膜炎に使用した（滑膜層スコアリングシステム）：
０    正常な関節に比べて変わりなし
１    滑膜の肥厚やいくらかの炎症性細胞の流入
２    滑膜の肥厚や中程度の炎症性細胞の流入
３    滑膜の大きな肥厚と最大級の炎症性細胞の流入
【０１０１】
結果：  
抗ｃ−Ｆｍｓ抗体治療が関節炎の発達に影響したかどうかを判定するために、４２日目に膝関節に組織診断を行った（図２参照）。抗ｃ−Ｆｍｓ抗体処置マウスは、コントロールｍＡｂ処置マウスと比較して内側頸骨の症状が顕著に穏やかだった（ｐ≦０．０１）。一般的に、抗ｃ−Ｆｍｓ抗体で処置したマウスは、アイソタイプコントロール抗体と比較して、組織学的に分析されたすべての関節領域で重症度が低かった（図２参照）。
【実施例３】
【０１０２】
ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストは、術後疼痛の治療に有効である。
ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを用いる処置の有効性を評価すべく、術後痛を想定した疼痛モデルを用いた。
【０１０３】
動物：  
２２０−２４０グラムの体重のオスのＳＤラットを、手術前に１週間動物施設でならしておく。
【０１０４】
手術：  
手術は、Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐａｉｎ  ６４：４９３−５０１，１９９６に記載の処置に基づいている。動物をノーズコーンを介して手術中は維持されている２％イソフルラン混合空気で麻酔する。右後足の底側面をポビドンヨードパッドで処理し、かかとの端０．５ｃｍからつま先に向かって、皮膚と筋膜を通して１ｃｍの中央の縦方向の切開を設ける。屈曲状態に保持された足を定規で測定する。湾曲鉗子を使用して足底筋を持ち上げ、縦に切開する。始点と挿入の間の深さ全体を通して筋肉が切開される。出血はガーゼパッドを介して圧力をかけて、手術を通じて制御される。傷は２つの刺し縫い縫合で閉鎖される（５−０ｅｔｈｉｌｏｎ黒モノフィラメント）。これらの縫合糸は最初のノットはゆるく結ばれ、５−６回結ばれる。創傷部位はバシトラシン液で消毒される。動物は、行動試験を開始する前に、清潔なケージで２時間以上休ませて回復させる。
【０１０５】
安静時の痛みの評価：  
蓄積した疼痛スコアは、体重荷重に関して疼痛を評価するために使用される。動物を持ち上げられたプラットフォーム（高さ１８インチ）上の透明なプラスチックケージ内でプラスチックメッシュ（グリッド：８ｍｍ２）に載置し、足の下の検査を可能にする。２０分の順応期間の後、０から２のスケールで体重荷重を測定する。スコア０は、足がメッシュに沈んでいるか押しつけられている場合であり、完全に荷重がかかっていることを示す。スコア１は、足がかばわれてメッシュに触れる程度であり、皮膚の沈みやくぼみがない。スコア２は、足が完全にメッシュから離して保持されている場合である。ラットがまだ休息している場合、足が畏縮していれば２と考えられる。動物はそれぞれ５分毎に１分間観察される。１／２時間で得られる６つのスコアの合計（０〜１２）を用いて障害のある足が検査される。スコア２の頻度も計算され、激しい疼痛の影響あるいは動物が足を完全にかばっているのを判定するのに用いられる。動物はそれぞれ術前２４時間（ベースライン）、術後２時間、２４時間、４８時間、７２時間と試験される。この実験結果は、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストで処置された動物で観察された安静時疼痛累積スコアが対照動物と比較して有意に減少していることを示す。荷重は動物がその肢を使用したいかによく相関しており、そのため疼痛緩和の測定に有効である。好ましくは、このｃ−Ｆｍｓアンタゴニストは、ｃ−Ｆｍｓ、特にＩＬ−３４またはＭ−ＣＳＦの特異的な抗体である。このような抗体は、切開の１５時間前に、様々な濃度（例えば動物の体重のキロ当たり０．００４、０．０１、０．０２、０．１、０．６および１ｍｇ）で腹腔内（ｉ．ｐ．）に注射される。陰性コントロール群は抗体を受けないが、生理食塩水を腹腔内注入する。０．０１ｍｇ＼ｋｇのフェンタニルを、手術後２４時間かつ試験前の３０分に、陽性対照として腹腔内注射する。各実験に各状況の８の動物を用い（群ごとにｎ＝８）、コントロール群は５６匹の動物を有する。手術が行われ、上記のように累積疼痛スコアを測定する。安静時の疼痛を、２４時間の手術後に評価する。
【０１０６】
ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストは、０．０２ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した場合、手術後の安静時疼痛を大幅に低減する。
【０１０７】
別の実験では、手術後にｃ−Ｆｍｓを投与した場合に、術後痛の軽減についての有効性が試験された。Ｍ−ＣＳＦに特異的、ＩＬ−３４に特異的またはｃ−Ｆｍｓに特異的な抗体を、静脈内（ｉ．ｖ．）に手術の２時間後に注入する。コントロール群は抗体を受けないが、生理食塩水を静脈注射する。手術を行い、手術後２４時間に累積疼痛スコアとして安静時疼痛を評価した。ｃ−Ｆｍｓの処置により、抗体が手術後２時間で投与された場合に２４時間後の安静時疼痛が大幅に低減した。この結果は、手術後に投与した場合のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストが効果的に術後痛を軽減することを示している。
【０１０８】
熱痛覚過敏症の評価：  
熱痛覚過敏症は、Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）の改変方法の後のラットプランタ試験（Ｕｇｏ  Ｂａｓｉｌｅ、イタリア）によって評価される。ラットを高架ガラステーブルの上に４つの個別のプレキシガラスのボックスで構成される装置に慣らしておく。モバイル式放射熱源をテーブルの下に位置し、後足にフォーカスする。動物は安静であるが寝ていない状態で、コントロールボックスのボタンを押して放射熱源を作動させ、熱源から動物が逃げようとする時間を自動記録する。この足撤退潜時（ＰＯＯＬ）は、放射源の反射率の変化によって、放射熱源に組み込まれラットの足の動きを感知する光検出器によって検出される。足離脱潜時（ＰＷＬ）は、秒単位で記録された。ここで、組織の損傷を防止するために、２２．５秒の自動カットオフ点を設けた。動物のそれぞれの両後足毎に３〜４回ＰＷＬをとり、左右の後足についてベースラインを表す平均をとった。結果は、左足に対する右足（手術部位）の測定スコア比率で示される。装置は（研究の開始時に）一度較正され、６秒の通常ＰＷＬを得るために強度４０に設定した。動物はそれぞれ、術前２４時間（ベースライン）、術後３時間、２４時間、４８時間、７２時間で試験された。熱痛覚過敏の測定は、接触異痛症の測定後に行われた。結果は、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストによる治療が大幅に手術後の熱痛覚過敏症を減少させることを実証した。
【実施例４】
【０１０９】
ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストは、骨癌性疼痛の治療に有効である。
例えば、Ｍ−ＣＳＦ特異的抗体、ＩＬ−３４特異的抗体またはｃ−Ｆｍｓ特異的抗体などのｃ−Ｆｍｓアンタゴニストは、骨転移を伴う癌の疼痛の治療に有効である。
【０１１０】
ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストでの処置の有効性を評価するために、マウスの骨癌性疼痛モデルを使用する。この骨癌性疼痛のマウスモデルは、マウスの大腿骨に溶骨性肉腫細胞を髄内注射し、針穴に骨に腫瘍を封じ込める歯科用アマルガムを充填することによって得る（Ｓｃｈｗｅｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ：Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  １９：１０８８６−１０８９７，１９９９、Ｌｕｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｐａｉｎ  ９９：３９７−４０６，２００２参照）。実験は成体のＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスに行った。０日目に、ペントバルビタールナトリウムで全身麻酔（腹腔内に５０ｍｇ／ｋｇ）の導入後に、関節切開を行った。肉腫細胞の経路を作成するために針が髄管内に挿入される。その後、空気式歯科用高速ハンドピースを用いて凹みが形成される。施術されていない動物（ｎ＝５）に加え、大腿骨の髄内空間に最小必須媒体（２０μｌ、Ｓｉｇｍａ、ミズーリ州セントルイス）を注入して偽動物（ｎ＝５）が生成され（指定の偽物）、さらに１０５  ２４７２溶骨性肉腫細胞を含む媒体が肉腫動物（試験条件ごとにｎ＝５）に注射された（２０μｌ、ＡＴＣＣ、メリーランド州ロックヴィル）。すべての動物について、注射部位は骨髄内管の中に細胞または注入された媒体を閉じ込めるために歯科用アマルガムプラグで封され、滅菌水（低張性溶液）で洗浄した。最後に、創傷クリップで切開を閉鎖した。クリップは、行動試験を妨げないように５日目に除去される。肉腫注入した動物の第２群は、６日目および１３日目に、Ｍ−ＣＳＦ特異的、ＩＬ−３４特異的、あるいはｃ−Ｆｍｓ特異的な抗体で処置した（例えば１０ｍｇ／ｋｇで腹腔内）。
【０１１１】
行動分析：  
動物は、腫瘍移植から１０日目と１４日目に痛みに関連する行動について試験する。動物の行動が以下の試験によりテストされた：継続的な痛み（自発的な防御と畏縮）、歩行痛（四肢の使用およびロータロッド）、および運動誘発痛（接触誘発による防御や、接触誘発による畏縮）。動物は、ワイヤメッシュ床の透明なプラスチック観察箱に入れ、３０分間慣れさせる。順化後に、自発的防御、自発的畏縮、解放空間の通常の四肢使用歩行、および強制歩行時の防御を評価した。接触誘発による防御と畏縮が、肉腫注射および偽注射した動物における遠位大腿骨への通常は有害でない接触から２分間測定された。
【０１１２】
自発的な畏縮と防御の期間は、痛覚反応の表れであり、同時に２分の観察期間記録される。防御は、後足を上げたままの時間と定義され、歩行と畏縮は動物が肢を上げた回数と定義される。自発的な畏縮中の通常の肢の使用が５から０の段階で採点され、（５）が肢の通常使用、（０）が完全に不使用である。
【０１１３】
強制歩行の防御は、ロータロッドを用いて判定される（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、オハイオ州コロンバス）。このロータロッド装置は回転ロッドを有し、速度、加速度、および感度コントロールを具える。動物は４倍速、加速度８．０、及び感度２．５でロッド上に配置された。強制歩行の防御は５−０の段階で評価され、（５）が通常使用、（０）が完全に不使用である。動物の遠位大腿骨への通常は有害でない接触の後、２分間の毎秒、動物を観察ボックス内に入れて、さらなる２分間の接触誘発性防御と接触誘発性畏縮を測定する。
【０１１４】
ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストによる治療：  
６日目と１３日目に、肉腫を注入した動物は、例えば抗Ｍ−ＣＳＦ、抗ＩＬ−３４または抗ｃ−Ｆｍｓ受容体抗体といったＭ−ＣＳＦアンタゴニストを腹腔内に注入し（ｎ＝５）、あるいは肉腫注射と偽注射を行った胴部は、生理食塩水を腹腔内に注入した（各条件でｎ＝５）。１０日目と１４日目のすべての動物の行動分析を行った。
【０１１５】
継続的な疼痛行動の評価：  
（生理食塩水を投与した）肉腫注入動物は、（生理食塩水を投与した）偽注射した動物と比較して、統計的に有意に継続する疼痛を示しており、これは自発的防御および自発的畏縮により査定される。
【０１１６】
肉腫移植から１０日目と１４日目において、生理食塩水を投与した肉腫注入マウスと比べて、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを投与した肉腫注入マウスにおける自発的防御および自発的畏縮が大幅に減った。
【０１１７】
歩行痛の行動評価：  
（生理食塩水を投与した）肉腫注入動物は、（生理食塩水を投与した）偽注入動物と比較して、肢の使用と歩行防御で評価して（ロータロッド）歩行痛がみられた。肉腫移植から１０日目と１４日目において、生理食塩水を投与した肉腫注入マウスと比べて、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを投与した肉腫注入マウスにおける肢使用スコアと強制歩行防御スコアは大幅に増大する。これらの結果は、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストは肉腫注入マウスにおける歩行痛を軽減することを示している。
【０１１８】
接触誘発痛の行動評価：  
（生理食塩水を投与した）肉腫注入動物は、（生理食塩水を投与した）偽注入動物と比較して、接触誘発防御および接触誘発畏縮の評価において、接触惹起疼痛行動がみられた。肉腫移植から１０日目と１４日目において、生理食塩水を投与した肉腫注入マウスと比べて、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを投与した肉腫注入マウスにおける接触誘発防御および接触誘発畏縮が大幅に低減する。これらの結果は、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストは肉腫注入マウスにおける接触惹起疼痛を軽減することを示している。
【実施例５】
【０１１９】
ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの鎮痛効果
ラットにおける完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）誘発性慢性関節炎を、インドメタシンを基準物質とした場合と比較して、調査した。
【０１２０】
１５０ｇ−２２０ｇの５０匹のオスのＬｅｗｉｓラット（ＬＥＷＩＳ  ＬＥＷ／Ｃｒｌ  ｌｃｏ）を、本研究の実験段階の最初に用意した。すべての動物を実験前５日以上、一定の温度（１９．５〜２４．５°Ｃ）と相対湿度（４５−６５％）で明暗サイクルが１２時間のコントロール室に保持し、研究を通して濾過水道水および標準ペレット型実験飼料への無制限アクセスを可能とした。動物は個別に尾で識別される。
【０１２１】
０日目（Ｄ０）、ミネラルオイル（１０ｍｇ／ｍｌ）に懸濁したマイコバクテリウム・ブチリカムを０．０５ｍｌ、ラットの尾に内注射することにより関節炎を誘導した。１４日目（Ｄ１４）に、後足をゆるく曲げた場合の発声能力や、前足と後足それぞれの炎症スコアを用いて評価される関節炎指数（Ｋｕｚｕｎａ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．（Ｔｏｋｙｏ）２３：１  １８４−１１９１，１９７５，Ｐｅａｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．２：４４０−４５９，１９５９参照）により、関節症のラットが研究に組み込まれた。
【０１２２】
動物は、次の基準に基づいて採点された。スコア０：正常な態様、スコア１：紅斑、スコア２：わずかに浮腫を伴う紅斑、スコア３：強直はないが強い炎症、スコア４：強直。ゆるく曲げた場合に鳴くことができ、スコアが２または３の動物だけを研究に含めた。
【０１２３】
研究では、１０匹づつ４つの群を用いた。グループ１（媒体）には、選別後１４日目（Ｄ１４）に、ラットを、媒体（生理食塩水）によって静脈内投与した。１８日目（Ｄ１８）に、侵害受容強度を後足の緩い屈曲によって評価し、発声レベルの強さを各動物について記録した。グループ２（４日間）は、選別後Ｄ１４に、ラットにＭ−ＣＳＦ特異的抗体を静脈内投与した。１８日目（Ｄ１８）に、侵害受容強度を後足の緩い屈曲によって評価し、発声レベルの強さを各動物について記録した。グループ３（２４時間）は、ＣＦＡ注射後１７日目に、ラットにＭ−ＣＳＦ特異的抗体またはＭ−ＣＳＦ受容体に特異的な抗体を静脈内投与した。２４時間後に後足の緩い屈曲によって侵害受容強度を評価し、発声のレベルの強さを各動物について記録した。グループ４（インドメタシン）は、１８日目（Ｄ１８）に、インドメタシン（１０ｍｇ／ｋｇ）を経口投与した後１時間で、後足の緩い屈曲によって侵害受容強度を評価した。発声レベルの強さを、各動物について記録した。試験物質は５ｍｌ／ｋｇの量を静脈内経路によりブラインドかつランダムに投与され、一方でインドメタシンは１０ｍｌ／ｋｇの量で経口経路で投与される。
【０１２４】
ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストは、顕著な鎮痛効果を示す。処置グループと媒体グループの間の統計的有意性が、一元分散分析後に、残差分散を用いてダネット検定で判定される。Ｍ−ＣＳＦ特異的抗体とＭ−ＣＳＦ受容体特異的抗体は、抗体の単回投与後２４時間または４日後のラットモデルにおいて痛みを顕著に低減した。同様の結果がＩＬ−３４特異的抗体で達成される。
【実施例６】
【０１２５】
ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストは、炎症性疼痛／ｍＢＳＡモデルの治療に有効である
以下の実験は、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストは、炎症性疼痛の治療にも有効であることを示している。これを行うべく、ｍＢＳＡ／ＩＬ−１単関節関節炎をＭ−ＣＳＦノックアウトマウスおよびコントロールマウスに誘発させた。インキャパシタンステスタを使用して、様々な時点で、疼痛緩和物質であるインドメタシンの投与の有無について評価した。
【０１２６】
マウス  
２４匹のオスのＣ５７ＢＬ／６マウスと、２４匹のオスのＭ−ＣＳＦ−／−マウスを４つの処置群に用いた。
グループ１：Ｍ−ＣＳＦ  ＫＯ（ｎ＝１２）：メチル化ＢＳＡ／ＩＬ−１
グループ２：Ｍ−ＣＳＦ  ＫＯ（ｎ＝１２）：メチル化ｍＢＳＡ／ＩＬ−１＋インドメタシン
グループ３：Ｃ５７ＢＬ／６  野生型（ｎ＝１２）：メチル化ＢＳＡ／ＩＬ−１
グループ４：Ｃ５７ＢＬ／６  野生型（ｎ＝１２）：メチル化ｍＢＳＡ／ＩＬ−１＋インドメタシン
【０１２７】
単関節関節炎の誘発  
１０μｌのｍＢＳＡ（２０ｍｇ／ｍｌ）を膝関節に関節内注射して単関節関節炎を誘発させ、反対側の膝関節に１０μｌの生理食塩水を注射する。２０μｌのＩＬ−１β（２５０ｎｇ）を３日間毎日皮下投与する。反応は一般にｍＢＳＡ注射後４日から７日間で発生し、２８日目までに鎮静する。２、３、４、５、および７日目にインキャパシタンスで試験される。
【０１２８】
インドメタシン（Ｓｉｇｍａ）は、一般的に発熱、疼痛、こわばり、腫脹を低減するために使用される非ステロイド性抗炎症薬である。これは、プロスタグランジンの産生を阻害することにより作用する。１ｍｇ／ｋｇのインドメタシンが、グループ２と４に、キャパシタンスメータで疼痛を評価する１時間前に投与される。
【０１２９】
疼痛の読み取り
インキャパシタンステスタ（Ｄｕａｌ  Ｗｅｉｇｈｔ  Ａｖｅｒａｇｅｒ）は、２本の後ろ足における体重分配を測定することで、鎮痛効果を自動的に再現性よく評価するのに使用した。使用者が選択した期間にわたり、各足によってもたらされる力（グラム単位で測定）の平均をとり、動物の片方の足からもう片方の足に体重移動する傾向を提示し、インキャパシタンスの定量的測定を提供する。
【０１３０】
それぞれの後足にかけられた体重は、５秒にわたって測定される。マウス１匹につき各時点で３回別個に測定し、次いで平均をとる。結果は、注入された後足／コントロール後足×１００で表す。値が１００であれば、右足と左足にかけられた体重が等しいことを意味する。１００以下の値は、コントロールの足（右）と比較すると、注入された足（左）に体重がかかっていないことを意味する。
【０１３１】
結果  
このモデルは、ｍＢＳＡを注入されることにより、膝関節に滑膜炎が誘発される。７日目に膝関節は、視覚的に検査され、０（正常）から３（重度の炎症）のスコアが与えられる。ｍＢＳＡが注入された左の膝は、右の膝（生理食塩水が注入された）と比較して、著しい炎症を起こした。実際、（生理食塩水が注入された）右膝はすべてスコア０だった。インドメタシンで治療したマウスとそれらで治療しない間には、顕著な違いはみられなかった。
【０１３２】
ｍＢＳＡ／ＩＬ−１単関節痛関節炎が誘発されたとき、Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、Ｍ−ＣＳＦ−／−マウスと比較して、著しい疼痛（ｍＢＳＡを注入した膝からの体重移動を計測することにより）を示した（図４参照）。
【０１３３】
インドメタシンで治療されたＣ５７ＢＬ／６マウスは、インドメタシンで治療されないマウスと比較して、ｍＢＳＡ／ＩＬ−１単関節痛関節炎が誘発された後の疼痛が著しく軽いことを示し、この表示は、Ｍ−ＣＳＦ−／−マウスと類似する。Ｍ−ＣＳＦ−／−は疼痛を示さないので、インドメタシン治療は効果を有さない。
【０１３４】
これらの結果は、ｍＢＳＡ／ＩＬ−１単関節痛関節炎モデルにおいて、Ｍ−ＣＳＦ−／−マウスは、全く疼痛の兆候を示さないのに対し、Ｃ５７ＢＬ／６マウスは４日目以降に著しい疼痛を示した。したがって、ｃ−Ｆｍｓのアンタゴニストは、炎症性疼痛の治療に顕著な効果を有する。
【実施例７】
【０１３５】
ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストは炎症性疼痛／ＣＦＡモデルの治療に有効である
以下の実験は、炎症性疼痛の治療において、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの有効性を明らかにする追加の実験である。ここで炎症性疼痛は、完全フロイドアジュバントで誘発されるものである。実施例６のように、疼痛を疼痛緩和物質であるインドメタシンの投与にかかわらず、インキャパシタンス検査装置を用いて様々な時点で評価した。
【０１３６】
［マウス］
１２匹のオスのＣ５７ＢＬ／６マウス及び１２匹のオスのＭ−ＣＳＦ−／−マウスがそれぞれ３つの治療グループで使用された。
グループ１：Ｃ５７ＢＬ／６野生型（ｎ＝１２）：ＣＦＡ
グループ２：Ｃ５７ＢＬ／６野生型（ｎ＝１２）：ＣＦＡ＋インドメタシン
グループ３：Ｍ−ＣＳＦ  ＫＯ（ｎ＝１２）：ＣＦＡ
【０１３７】
［炎症性疼痛の誘発］
完全フロインドアジュバント（ＣＦＡ）（Ｓｉｇｍａ）は、１ｍｇ／ｍｌの濃度の鉱油中に、熱滅菌したヒト型結核菌株、Ｈ３７Ｒａを含む。熱滅菌したバクテリアが完全に懸濁液に組み込まれるように、ボルテックスでＣＦＡを完全に混合した（Ｋａｍａｌａ  Ｔ  Ｈｏｃｋ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ：ａ  ｈｕｍａｎｅ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｔｏ  ｍｏｕｓｅ  ｆｏｏｔｐａｄ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３２８：２０４−２１４、２００７）。ボルテックスの後すぐに、アジュバントを、１９ゲージ針を用いたガラスシリンジで吸い取った。気泡をシリンジから丁寧に取り除いてから、針を取り去った。各マウスは、ＣＦＡエマルション２０μｌを左後ろ足（足蹠）に皮下注射された。疼痛評価１時間前にグループ２のマウスの腹腔内に、１ｍｇ／ｋｇのインドメタシンを投与した（実施例６参照）。
【０１３８】
［疼痛の読み取り］
実施例６のように、インキャパシタンステスタ（Ｄｕａｌ  Ｗｅｉｇｈｔ  Ａｖｅｒａｇｅｒ）を、２本の後足の体重分配を計測することで自動的で再現性のある鎮痛効果の評価をするために使用した。各後足が体重をかけた場所を５秒にわたって測定した。マウス１匹につき各時点で３回別個に測定し、次いで平均をとった。結果は、注入した足／コントロールの足×１００として表示する。値が１００であれば、右足と左足にかけられた体重が等しいことを意味する。１００以下の値は、コントロールの足（右）と比較すると、注入された足（左）に体重がかかっていないことを意味する。ＣＦＡ注入の２４、４８、７２時間後にインキャパシタンスによる検査をした。
【０１３９】
［結果］
左の足蹠にＣＦＡを皮下注射した後、Ｃ５７ＢＬ／６（グループ１）とＭ−ＣＳＦ−／−（グループ３）マウスで同様な大きさの腫れが、左の足蹠に示された。インドメタシンで治療されたＣ５７ＢＬ／６マウス（グループ２）も、腫れの程度に違いはなかった。いずれのグループも対側（右）の足に腫れは見られなかった。
【０１４０】
疼痛の測定としての体重分配評価は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、徐々に疼痛を示し、ＣＦＡ注入の４８時間と７２時間後にＭ−ＣＳＦ−／−マウスより顕著になる。Ｍ−ＣＳＦ−／−マウスは、全く疼痛を示さなかった。インドメタシンで治療されたＣ５７ＢＬ／６マウスは、疼痛が緩和され、Ｍ−ＣＳＦ−／−マウスの読み取りと違いがなかった。ＣＦＡ注入の７２時間後に、インドメタシンで治療されたＣ５７ＢＬ／６マウスは、インドメタシンで治療されないＣ５７ＢＬ／６マウスより著しく疼痛が少なかった。
【０１４１】
ＣＦＡ注入後に起こる足蹠の腫れの度合いは、Ｍ−ＣＳＦ−／−マウスとＣ５７ＢＬ／６マウスでは違いがなかった。さらに、インドメタシンで治療されたＣ５７ＢＬ／６マウスに腫れの影響はなく、これはおそらくインキャパシタンス読み取りの１時間前に与えられたからである。したがって、腫れの大部分が、最初のインドメタシン注入前の２４時間に既に形成されていた。
【０１４２】
対称的に、ＣＦＡ注入後、Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、インドメタシンにより軽減された疼痛が、顕著に示された。その一方で、Ｍ−ＣＳＦ−／−マウスは、疼痛の兆候を全く示さなかった。従って、これらの実験結果は、ＣＦＡ注入の後の全てのマウスの足蹠に炎症が見られたのに、Ｍ−ＣＳＦ−／−マウスには、疼痛の兆候が全く見られなかった。
【実施例８】
【０１４３】
臨床試験
膝の骨関節症を患っている成人患者に臨床試験を行った。ランダムで二重盲式のプラセボ対照臨床試験の目的は、膝の骨関節症（ＯＡ）と診断された患者３０人の総サンプルにおいて、本発明のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストとプラセボの疼痛緩和とクオリティオブライフ全般の比較差を判定することである。別の目的は、本発明のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの安全性および忍容性を、有害事象、身体検査およびバイタルサインによるように決定することである。
【０１４４】
方法：  
３０人の患者（およそ１５人の成人男性と１５人の成人女性）は、４０歳以上であり、膝の骨関節症と診断されており、研究試験の前に、月に少なくとも１５日間膝の痛みが証明されている。患者は、ｃ−Ｆｍｓアンタゴニストまたはプラセボの治療上有効な量を受ける（約６ヶ月間、例えば２週間に１回）。
【０１４５】
ウェスタンオンタリオおよびマクマスター大学骨関節症指数（ＷＯＭＡＣ：ベラミーら、Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  １５（１２）：１８３３−４０、１９８８）と、ＳＦ−３６ｖ２クオリティオブライフ測定（Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｍｅｔｒｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｕｔｃｏｍｅｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｌｉｎｃｏｌｎ，Ｒｌ）を本研究で使用する。ＷＯＭＡＣは疾患に特異的な、自己管理型の、健康状態の尺度である。これは、臀部および／または膝の骨関節症患者における痛み、こわばりおよび身体機能の分野で臨床的に重要な症状を実証する。指標は２４の質問（５−痛み、２−こわばり、１７−身体機能）で構成され、５分未満で完了することができる。ＷＯＭＡＣは、様々な干渉（薬理学的、栄養学、外科、理学療法など）の後の健康状態の有意な臨床的変化を検出するための、有効で、信頼性があり、感度の高い測定である。ＷＯＭＡＣのアンケートは、股関節または膝の骨関節症に対する干渉の影響を評価するために有効である。ＳＦ−３６ｖ２クオリティオブライフ測定は多目的な、３６の質問からなる短い形式の健康調査である。これは機能性健康プロフィールと幸福度スコアと同様に、精神測定に基づいた心身と精神の健康サマリの測定の８の段階と、好みに基づいた健康幸福指標を与える。これは、特定の年齢、疾患、または治療群を標的とするものには対照的に、一般的な尺度である。したがって、ＳＦ−３６ｖ２は、一般および特定の集団の調査において、疾患の相対的な負荷を比較し、幅広い範囲の異なる治療による健康上の利益を差別化することに有用性を実証してきた。ＳＦ−３６ｖ２は、健康上の以下の側面とサブセットに情報を与える：体の健康（肉体機能、肉体の役割、体の痛み、および一般的な健康を含む）と、精神の健康（バイタリティ、社会的役割、感情の役割、および精神の健康）である。
【０１４６】
結果：  
身体の痛みの変化：プラセボと比較して、本発明のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストによる治療を受けた患者では、ＳＦ−３６ｖ２の身体の痛みの改善が統計的に顕著である。高いスコアは、患者が製品を用いた後に疼痛が弱まっていることを意味するため、優れている。プラセボ群に対して本発明のｃ−Ｆｍｓ拮抗を受けた群では、身体・疼痛スコアにおいて統計学的に顕著な改善がある。
【０１４７】
肉体の役割スコアの変化：プラセボと比較した場合の本発明のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの優れた効果は、肉体的な健康（肉体の役割）による役割限定という意味において、８週間目、１２週間目、および２０週間目に統計的に顕著である。高いスコアは、患者が肉体的な改善や日常生活の活動における限界の苦しみの減少に気づいたことを意味するので、優れている。プラセボ群に対し、本発明のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストを受けた群では、肉体の役割スコアに統計上顕著な改善がある。
【０１４８】
総ＷＯＭＡＣスコアの変化：本発明のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストで処置されたグループの総ＷＯＭＡＣスコアは、プラセボ群の総ＷＯＭＡＣスコアより統計上有意に優れている（低いスコアが優れている）。
【０１４９】
ＷＯＭＡＣ  ＡＤＬの変化：日常生活における動作の改善（ＷＯＭＡＣ  ＡＤＬサブスコアとして測定）は、プラセボ群に比べて、本発明のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストで治療した群の方が大きい。プラセボ群と比較して、本発明のｃ−Ｆｍｓ拮抗で処置された群ではＷＯＭＡＣ  ＡＤＬに統計的に有意な改善がある（低いスコアが優れている）。
【０１５０】
結論：  
臨床試験は、膝の骨関節症患者の生活の質を改善するのに、本発明のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの有効性を示した。臨床試験の結果はまた、重篤な有害作用は見られず、製品の安全性および耐性を示している。
【０１５１】
本発明のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの有効性はまた、本発明のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストが交差反応性であるので他の種における研究（例えば、関節の動きを評価するためのウマで）により実証可能であり、また軟骨の培養検査を行ってＩＬ−１誘発アグレカン分解を阻害する本発明のｃ−Ｆｍｓアンタゴニストの機能を判定するためのインビトロの研究を用いても実証可能である。
【実施例９】
【０１５２】
ＯＡおよび疼痛の治療におけるＭ−ＣＳＦに特異的な抗体の治療有効性
実施例１を、Ｍ−ＣＳＦに特異的な抗体を用いて繰り返した。本書で上述したように、コラゲナーゼ誘発性のＯＡモデルは、Ｂｌｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｃａｒｔｉｌａｇｅ．１２；６２７−３５  ａｎｄ  Ｂｌｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．５６；１４７−５７に基づくものである。特に示さない限り、実験の詳細は実施例１で概説したものと同様である。
【０１５３】
抗体ＭＯＲ１３５０３を、Ｍ−ＣＳＦに特異的な抗体として使用した。ＭＯＲ１３５０３はＩｇＧ２ａアイソタイプの組換え抗マウスＭ−ＣＳＦ抗体である。この抗体は、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ  ＡＧ（マルティンスリート、ドイツ）により生成された。
【０１５４】
３０匹のマウスを無作為に２つのグループ（１５匹／グループ）に分けた。
グループ１（ｎ＝１５）：抗Ｍ−ＣＳＦ抗体  
グループ２（ｎ＝１５）：ＩｇＧ２ａアイソタイプコントロール抗体。
【０１５５】
マウスは２０日目に疼痛が始まってから６週間後に実験が終了するまで、週に２度、１５０μｇの抗Ｍ−ＣＳＦ抗体／マウス／処置で腹腔内処置を行った。コントロール抗体および抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の両方が、１０未満のエンドトキシン単位／ｍｌを含有するように精製された。
【０１５６】
痛みは関節炎の誘発から２０日目に認められた（ｐ＜０．００４、２０日目対０日目、すべてのマウス）。抗Ｍ−ＣＳＦ抗体による治療は、アイソタイプコントロール抗体と比較して、痛みの程度が増大するのを防止することが観察された（図３参照）。
【０１５７】
当業者は、本明細書に記載の発明は、具体的に記載されたもの以外の変更および修正が可能であることを理解するであろう。本発明はこのような全ての変形および変更を含むと理解されるべきである。本発明はまた、単独あるいは組み合わせで、本明細書で参照されるか示されたすべてのステップ、特徴、組成物および化合物を含み、またこれらのステップや特徴の２以上のすべての組み合わせを含む。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2014520873.tif 000009
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