(57)【要約】  本発明は、医薬として許容される媒体中に、5〜30重量%のエチルセルロースと、0.1〜10重量%の皮膜形成助剤と、0.1〜20重量%の1種又は複数の三酸であって、そのうち1種がホウ酸である三酸と、60〜95重量%の有機溶媒とを含み、百分率が組成物の総重量に対する重量で表される、局所用皮膜形成組成物に関する。本発明はまた、ヘルペス、特に口唇ヘルペスの治療のための方法におけるこのような組成物の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬として許容される媒体中に、
5〜30重量%のエチルセルロースと、
0.1〜20重量%の皮膜形成助剤と、
0.1〜5重量%の1種又は複数の三酸であって、そのうち1種がホウ酸である三酸と、
60〜95重量%の有機溶媒と
を含み、百分率が組成物の総重量に対する重量で表される、局所用皮膜形成組成物。
【請求項２】
エチルセルロースが、組成物の総重量に対して8〜20重量%、好ましくは8〜15重量%の範囲の含有率で存在することを特徴とする、請求項1に記載の組成物。
【請求項３】
皮膜形成助剤が、オキシエチレン化誘導体、例えば、オキシエチレン化油、特に植物油、例えば、ヒマシ油から選択されることを特徴とする、請求項1又は2に記載の組成物。
【請求項４】
皮膜形成助剤が、組成物の総重量に対して2〜12重量%の範囲の含有率で存在することを特徴とする、請求項1から3のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
三酸が、ホウ酸とクエン酸との、好ましくは1:2〜2:1の重量比の混合物を含むことを特徴とする、請求項1から4のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
有機溶媒が、周囲温度で液体であるアルコール、例えば、エタノール、イソプロパノール、ジアセトンアルコール、2-ブトキシエタノール、シクロヘキサノール及びそれらの混合物から選択され、好ましくはエタノールから選択されることを特徴とする、請求項1から5のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
有機溶媒が、組成物の総重量に対して65〜85重量%に相当することを特徴とする、請求項1から6のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
水を、好ましくは、1〜20重量%、好ましくは5〜15重量%の範囲の含有率で含むことを特徴とする、請求項1から7のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
ヘルペスの治療のための医薬として活性な薬剤を含有しないことを特徴とする、請求項1から8のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
ヘルペス、特に口唇ヘルペスの治療のための方法における使用のための、請求項1から6のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の主題は、皮膚又は粘膜上における保護皮膜の形成を可能にするエチルセルロースをベースとする皮膜形成組成物であり、また、皮膚病変、特にヘルペスの治療におけるその使用でもある。
【背景技術】
【０００２】
ヘルペスウイルス(単純ヘルペスウイルス又はHSV)は、人口の大部分に認められる。ほとんどの場合、感染は無症状であるが、特に粘膜レベルでの、小水疱性皮疹の形態の皮膚病変を生じ得る。これらの皮疹は、単純なそう痒及び発赤の出現から始まるが、数時間で丘疹の発現につながる。成熟するにつれて、丘疹は水疱、次いで透明な液体を含む小水疱となる。小水疱は最終的に破裂し、したがって液体を放出する。この段階で、ウイルスの伝染又は伝播のリスクは特に高い。次に、小水疱は創傷を残し、創傷は、治癒前に痂皮を形成する。さらに、皮疹の発現後期は特に有痛性であることがわかっている。
【０００３】
口唇ヘルペスの場合の、一般に単純疱疹と称される局所的庖疹性皮疹は、活性薬剤を含む軟膏剤、膏薬又はゲル剤の形態の組成物を適用することによって治療するのが最も一般的である。しかし、当該治療部位にみられる動き及び/又は摩擦のため、これらの組成物は、創傷局所にとどまらない傾向があり、したがって活性薬剤の作用が制限される。このため、治療部位へのこれらの組成物の適用は、頻繁に繰り返す必要がある。
【０００４】
さらに、この型のガレノス製剤は、ヘルペスウイルスに対して有効なバリアの形成を可能にしないが、ヘルペスウイルスは極めて伝染性である。したがって、より閉鎖性のパッチ型の組成物が、口唇ヘルペスの治療のために提示されたが、これらのパッチは、治療部位に適用した場合に、不快な異物感を引き起こす。
【０００５】
他の解決法は、皮膜形成組成物の使用からなる。例えば、文献US 5 081 158は、治療部位への活性薬剤の維持の延長を可能にするヒドロキシプロピルセルロース(HPC)をベースとする皮膜形成組成物を記載している。
【０００６】
文献EP-A-679390について言えば、皮膚又は粘膜、特にヘルペス性病変を治療するための、セルロース系ポリマーの水溶液中に分散された活性薬剤を含む噴霧可能な局所製剤を記載している。この組成物によって、特に、非常に有痛性であることが示される可能性がある、適用中における指による病変の接触を避けることができる。
【０００７】
文献EP-A-289900は、抗細菌剤の皮膚浸透を、この抗細菌剤を水不溶性ポリマー、植物油及び揮発性溶媒を含む皮膜形成組成物中に入れて投与することによって改善できることを開示している。
【０００８】
しかし、これらの文献において提示されている組成物によって形成される皮膜は、ヘルペスウイルスの伝播に対して有効なバリアを形成しないという欠陥を有する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】US 5 081 158
【特許文献２】EP-A-679390
【特許文献３】EP-A-289900
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
したがって、HSV及び外部細菌に対して不透過性である皮膜を形成することによって、治療するヘルペス創傷の汚染及びウイルス保因者でない個人へのHSVのあらゆる蔓延を防止する、ヘルペス、特に口唇ヘルペスの治療を意図する皮膜形成組成物が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
したがって、出願人たる本会社は、ヘルペスウイルスの伝播に対して有効なバリアを形成する皮膜の形成を可能にする皮膜形成組成物を開発した。さらにまた、本発明による組成物は、感染病原体に対して不透過性であるという利点を有する。
【００１２】
このようにして得られた皮膜によって、細菌の侵入から病変を保護し、それによって重複感染のリスクを防止することが可能であると共に、病変の原因であるヘルペスウイルスを健常者に伝播させないですむ。
【００１３】
したがって、本発明は、医薬として許容される媒体中に、
- 5〜30重量%、好ましくは8〜20重量%のエチルセルロースと、
- 0.1〜20重量%、好ましくは2〜12重量%の皮膜形成助剤と、
- 0.1〜5重量%、好ましくは0.5〜2重量%の1種又は複数の三酸であって、そのうち1種がホウ酸である三酸と、
- 60〜95重量%、好ましくは65〜85重量%の有機溶媒と
を含み、百分率が組成物の総重量に対する重量で表される、局所用皮膜形成組成物に関する。
【００１４】
本発明による組成物を用いて得られる皮膜は、柔軟且つ快適であり、治療部位への適用時に不快感も異物感も特に引き起こさない。
【００１５】
好ましい一実施形態によれば、本発明による組成物によって得られる皮膜は無色である。
【００１６】
本出願の目的で、用語「局所用組成物」は、身体の所定領域への組成物の投与形態を意味するものとする。本発明によれば、局所用組成物は、液剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤又はワニス剤でもよい。
【００１７】
本発明はまた、ヘルペス、特に口唇ヘルペスの治療のためのこのような組成物の使用に関する。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
エチルセルロース
本発明による組成物は、少なくとも1種の皮膜形成性エチルセルロースポリマーを含む。局所用の医薬組成物又は皮膚科用組成物中にエチルセルロースを導入すると、これらの組成物の粘着性、耐摩擦性、粘度及び疎水性の改善が可能となることが、実際に観察された。
【００１９】
エチルセルロースは、皮膜形成性ポリマーである。用語「皮膜形成性ポリマー」は、単独で又は皮膜形成助剤の存在下で、支持体上に、特に皮膚又は粘膜上に連続した粘着性皮膜を形成できるポリマーを意味するものとする。
【００２０】
エチルセルロースは、セルロースのエチルエーテルであり、アセタール基で互いに連結された無水グルコース単位からなる長鎖を含むポリマーの形態である。
【００２１】
各無水グルコース単位は、以下の反応スキーム
RONa + C2H5Cl  →  ROC2H5 + NaCl
に従って反応し得る3つの全置換又は部分置換可能なヒドロキシル基を有する。
【００２２】
3つのヒドロキシル基の置換により、各無水グルコース単位は置換度3又はエトキシル含有率54.88%となるであろう。
【００２３】
本発明による組成物において使用可能なエチルセルロースポリマーは、特に、そのヒドロキシル基の置換度が無水グルコース単位当たり2.5〜2.60であるか、又は無水グルコース単位当たりのエトキシル含有率が44〜50%であるものである。
【００２４】
本出願との関連で使用できるエチルセルロースポリマーの非限定的な例として、Dow Chemical Corporation(Midland、Michigan)によって製造され、「Ethocel」の名称で販売されているもの、又はHercules, Inc.(Wilmington、Delaware)によって製造されているものを挙げることができる。
【００２５】
本発明による組成物は、組成物の総重量に対して5〜30重量%、好ましくは8〜20重量%、より優先的には8〜15重量%のエチルセルロースを含む。
【００２６】
皮膜形成助剤
組成物の皮膜形成性を改善するために、皮膜形成助剤を有利に添加できる。
【００２７】
言うまでもなく、皮膜形成助剤は、有機溶媒とは異なる。
【００２８】
このような皮膜形成助剤は、所望の機能を果たすことができる、当業者に知られている全ての化合物から選択し得る。これは特に、皮膜形成性ポリマーの可塑剤及び癒合剤から選択される。
【００２９】
したがって、組成物はまた、少なくとも1種の可塑剤及び/又は少なくとも1種の癒合剤を含むことができる。特に、単独で又は混合物として、通常の可塑剤及び癒合剤、例えば、以下を挙げることができる:
-  脂肪族アルコール、例えば、オクチルドデカノール、2-ブチルオクタノール、2-ヘキシルデカノール、2-ウンデシルペンタデカノール又はオレイルアルコール、
-  グリコール及びその誘導体、例えば、グリセロール、ジエチレングリコールエチルエーテル、ジエチレングリコールメチルエーテル、ジエチレングリコールブチルエーテル又は他にジエチレングリコールヘキシルエーテル、エチレングリコールエチルエーテル、エチレングリコールブチルエーテル又はエチレングリコールヘキシルエーテル、
-  脂肪酸、例えば、オレイン酸、リノール酸又はリノレン酸、
-  グリコールエステル、例えば、トリアセチン(又は三酢酸グリセリル)、
-  プロピレングリコール誘導体、特にプロピレングリコールフェニルエーテル、プロピレングリコールジアセテート、ジプロピレングリコールエチルエーテル、トリプロピレングリコールメチルエーテル及びプロピレングリコールブチルエーテル、
-  酸エステル、特にカルボン酸エステル、例えば、クエン酸エステル、フタル酸エステル、アジピン酸エステル、炭酸エステル、酒石酸エステル、リン酸エステル又はセバシン酸エステル、特にモノカルボン酸エステル、例えば、イソノナン酸イソノニル、エルカ酸オレイル又はネオペンタン酸2-オクチルドデシル、
-  オキシエチレン化誘導体、例えば、オキシエチレン化油、特に植物油、例えば、ゴマ油、ヒマシ油、アーモンド油、カノーラ油、ヘイゼルナッツ油、ピスタチオ油、リンシード油、ルリヂサ油、フラックスシード油、ホホバ油、ヒマワリ油、小麦胚芽油、コーン油及び/又はコーン胚芽油、ラッカセイ油、アボカド油、ベニバナ油、ナタネ油、オリーブ油、アルガン油、ヒマワリ油、グレープシード油、大豆油、クルミ油、マローシード油、パーム油、ココナッツ油並びにそれらの混合物(油はまた、前記植物油のうちの1種の誘導体であってもよく、これは、水素化されていても水素化されていなくてもよく、過酸化された油、又は過酸化されてない油であってもよい)、
並びにそれらの混合物。
【００３０】
好ましい一実施形態によれば、皮膜形成助剤は、オキシエチレン化誘導体、例えば、オキシエチレン化油、特に植物油、例えば、ヒマシ油から選択される。
【００３１】
より好ましい一実施形態によれば、皮膜形成助剤は、ヒマシ油である。
【００３２】
皮膜形成助剤は、本発明による組成物中に、組成物の総重量に対して0.1〜20重量%、好ましくは2〜12重量%の範囲の含有率で存在する。
【００３３】
三酸
本発明による組成物はまた、1種又は複数の三酸を含み、そのうちの少なくとも1種はホウ酸である。
【００３４】
三酸は、特に、皮膜の凝集力、結果として機械的性質の改善を可能にする。
【００３５】
有利には、三酸は、1種又は複数の無機又は有機三酸、例えば、リン酸、ホウ酸若しくはクエン酸又はそれらの混合物から選択される。
【００３６】
特に、本発明による組成物は好ましくは、ホウ酸とクエン酸との、好ましくは重量比1:2〜2:1、好ましくは1:1の混合物を含む。
【００３７】
三酸は、本発明による組成物中に、組成物の総重量に対して0.1〜5重量%、好ましくは0.5〜2重量%の範囲の含有率で存在する。
【００３８】
本発明による組成物中における、エチルセルロースポリマーと有機溶媒と少なくとも1つの三酸との組合せは、得られる皮膜に特に予想外の性質、例えば特に、ウイルス及び細菌に対する皮膜の優れた不透過性並びに適用全体わたる皮膜の構造完全性を与える。
【００３９】
有機溶媒
本発明による組成物は、少なくとも1種の有機溶媒を含む。
【００４０】
有機溶媒は特に、以下から選択できる:
-  ケトン、例えば、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、ジイソブチルケトン、イソホロン、シクロヘキサノン又はアセトン、
-  周囲温度で液体であるアルコール、例えば、エタノール、イソプロパノール、ジアセトンアルコール、2-ブトキシエタノール、シクロヘキサノール、n-プロパノール又はn-ブタノール、
-  周囲温度で液体であるプロピレングリコールエーテル、例えば、プロピレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコールモノメチルエーテルアセテート又はジプロピレングリコールモノ-(n-ブチル)エーテル、
-  グリコール、例えば、エチレングリコール、プロピレングリコール、ペンチレングリコール又はグリセロール、
-  環状エーテル、例えば、γ-ブチロラクトン、
-  短鎖エステル(全体で3〜8個の炭素原子を有する)、例えば、酢酸エチル、酢酸ブチル、酢酸メチル、酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソペンチル、メトキシ-プロピルアセテート又は乳酸ブチル、
-  エーテル、例えば、ジエチルエーテル、ジメチルエーテル又はジクロロジエチルエーテル、
-  周囲温度で液体であるアルカン、例えば、デカン、ヘプタン、ドデカン又はシクロヘキサン、
-  アルキルスルホキシド、例えば、ジメチルスルホキシド、
-  周囲温度で液体であるアルデヒド、例えば、ベンズアルデヒド又はアセトアルデヒド、
-  3-エトキシプロピオン酸エチル、
-  炭酸エステル、例えば、プロピレンカーボネート又は炭酸ジメチル、
-  アセタール、例えば、メチラール、
及びそれらの混合物。
【００４１】
好ましい一実施形態によれば、有機溶媒は揮発性である。
【００４２】
用語「揮発性有機溶媒」は、周囲温度及び大気圧において皮膚との接触時に1時間未満で蒸発できる有機溶媒を意味するものとする。揮発性有機溶媒は、周囲温度で液体であり、特に、周囲温度及び大気圧において非ゼロ蒸気圧を有する。特に、それは0.13Pa〜40000 Pa(10-3〜300mmHg)の範囲、好ましくは1.3Pa〜8000Pa(0.01〜60mmHg)の範囲の蒸気圧を有する。
【００４３】
特に好ましい一実施形態によれば、有機溶媒は、周囲温度で液体であるアルコール、例えば、エタノール、イソプロパノール、ジアセトンアルコール、2-ブトキシエタノール、シクロヘキサノール及びそれらの混合物から選択され、好ましくはエタノールから選択される。
【００４４】
より好ましい一実施形態によれば、本発明による組成物中に使用する有機溶媒は、エタノールである。
【００４５】
有機溶媒は、組成物の総重量に対して60〜95重量%、好ましくは65〜85重量%、好ましくは、65〜80重量%に相当し得る。
【００４６】
医薬として許容される媒体
本発明による組成物は、水を含み得る医薬として許容される媒体を含む。
【００４７】
本出願の目的で、用語「医薬として許容される媒体」は、皮膚と適合性の媒体を意味するものとする。
【００４８】
水は特に、本発明による組成物中に、1〜20重量%、好ましくは5〜15重量%の範囲の含有率で存在し得る。
【００４９】
特に、組成物は、水(即ち、医薬として許容される媒体として)とエタノール(即ち、有機溶媒として)との、重量比1:2〜1:10、好ましくは1:4〜1:8、より好ましくは1:5〜1:6の混合物を含む。
【００５０】
添加剤
本発明による組成物は、1種又は複数の医薬として許容される添加剤、例えば、香料、矯臭剤、染料、顔料、艶消剤、レオロジー剤、保存剤、脱色素剤、保湿剤、日焼け防止剤及び再構築剤(restructuring agent)を含むことができる。
【００５１】
活性薬剤
特定の一実施形態において、本発明による組成物は、医薬として活性な薬剤を含有しない。
【００５２】
これは、本発明者らが、庖疹性皮疹を有する皮膚又は粘膜の部位に本発明による組成物を適用することによって形成された皮膜が、特に本発明による組成物が医薬として活性な薬剤を含んでいない場合であっても、その治療を可能にすることを、驚くべきことに観察したためである。
【００５３】
組成物の使用
特定の一実施形態によれば、本発明の主題は、ヘルペス、特に口唇ヘルペスを治療するための方法における使用のための、前記で定義した組成物である。
【００５４】
別の実施形態によれば、本発明の主題はまた、皮膚又は粘膜上の、ヘルペスウイルスによって引き起こされた創傷を治癒させるための方法における使用のための、前記で定義した組成物である。
【００５５】
病変の最初の前兆(そう痒、刺痛、発赤)が起こったらすぐに、本発明による組成物を庖疹性皮疹に適用することによって、丘疹の形成を制限することが可能である。丘疹の形成後に適用する場合には、本発明による組成物は、小水疱及び痂皮の形成の制限に寄与する。
【００５６】
最後に、本発明の組成物を用いて得られた皮膜はまた、庖疹性皮疹の治癒の促進を可能にする。
【００５７】
以下に記載する非限定的な例において、本発明をより詳細に例示する。
【００５８】
(実施例)
(実施例1)
組成物Aの調製
本発明による組成物Aを、以下のように調製した。
【００５９】
【表１】
2014517060.tif 000002
【００６０】
撹拌しながら10分間保持された水/エタノール混合物に、ヒマシ油、ホウ酸及びクエン酸を加えた。次いで、エチルセルロースを混合物中に分散させた。混合物を30分間撹拌後、組成物Aを回収した。
【００６１】
(実施例2)
組成物Aを用いて得られた皮膜の、感染病原体に対する不透過性の評価
1.材料
使用した細胞は、ATCC CCL-81又はMedical Virology Laboratory of the Institut Pasteur (Yasumunra Y.ら、1962年)に由来するベロ(Vero)細胞である。これらの細胞は、アフリカミドリザルの腎臓に由来する。
【００６２】
培養培地及び力価測定培地は、グルタミン2%、FCS 4%及び硫酸ゲンタマイシン1%が補充されたDMEM培地(「ダルベッコ/フォークト変法イーグル基礎培地(Dulbecco/Vogt modified Eagle's Minimal Essential Medium)」)である。
【００６３】
希釈培地は、グルタミン2%又は硫酸ゲンタマイシン1%が補充されたDMEM培地である。
【００６４】
使用したウイルスは、仮性狂犬病ウイルス(PseudoRabies Virus)(PRV)(オーエスキー(Aujesky)病ウイルス):ATCC VR-135(Aujesky A.、1902年;Roiznan R.ら、1981年)である。
【００６５】
PRVは、ヘルペスウイルス科(Herpesviridae)、アルファヘルペスウイルス亜科(Alphaherpesvirinae)、ヴァルセロウイルス属(Varicellovirus)に属する。
【００６６】
このウイルスは、ヒトヘルペスウイルス1型のモデルとして使用される。
【００６７】
使用した培養プレート及びウェルインサートは、供給業者Dutscherから入手したものである。これらのプレート及びウェルインサートの参照番号は次の通りである。
- Multiwell 6ウェル:参照番号:3502。
- Filter:参照番号:3091。
【００６８】
2.組成物Aを用いて得られた皮膜の気密性(leaktightness)及び完全性の評価
形成された皮膜のヘルペスウイルスに対する不透過性を評価する前に、培養培地に対する皮膜の気密性及び前記培養培地との長期接触中のその完全性を立証した。
【００６９】
組成物Aを、6ウェルプレートの1つのウェルに導入した。添加量(0.5〜1cm)は、ウェルインサートを高さ約3mmまで浸漬できる充分な量であるはずである。
【００７０】
気泡が形成されないように、組成物を斜面上に保持しながら、ピンセットを用いてウェルインサートを組成物中に浸漬した。ウェルインサートの底部表面が組成物と完全に接触したら、ウェルインサートを慎重に取り出した。
【００７１】
ウェルインサートの底部をスパチュラで擦過することによって、余剰生成物を除去した。
【００７２】
次いで、ウェルインサートを逆さまに置くことにより、皮膜を乾燥させた。
【００７３】
こうして形成された皮膜の厚さは、約30μmであった。
【００７４】
このようにして、8個の「皮膜で被覆された」ウェルインサートを調製した。
【００７５】
a.組成物Aを用いて得られた皮膜の気密性試験
2個の「皮膜で被覆された」ウェルインサート及び1個の皮膜を含まない対照ウェルインサートを、生理食塩水(9g/l NaCl)を含む培養プレートのウェル中に導入した。
【００７６】
DMEM培養培地を、各ウェルインサートに導入した。本試験に使用したDMEM培養培地は、ピンク色である。
【００７７】
37℃で24時間後、対照ウェルインサートを含むウェルの生理食塩水がピンク色になったのが観察された。したがって、対照ウェルインサートのDMEMは、生理食塩水培地に移動した。
【００７８】
「皮膜で被覆された」ウェルインサートを含むウェルの生理食塩水について言えば、無色のままであった:DMEMは移動しなかった。
【００７９】
これらの結果は、本発明による組成物を用いて形成された皮膜は、培養培地を漏らさないことを示している。
【００８０】
b.組成物Aを用いて得られた皮膜の完全性試験
組成物Aを用いて得られた皮膜を、DMEM培養培地と37℃において24時間接触させた。
【００８１】
24時間後、皮膜は無傷のままであり、ほんのわずかに不透明になる。
【００８２】
c.本発明による皮膜の、ヘルペスウイルスに対するバリア効果の試験
i.方法
DMEM培養培地3mlを、6ウェルプレートの16個のウェル中に導入した。
【００８３】
8個の「皮膜で被覆された」ウェルインサート及び8個の皮膜で被覆されていないウェルインサート(陽性対照)をウェル中に入れた。
【００８４】
PRVウイルス懸濁液200μlを、各ウェルインサートに加えた。
【００８５】
プレート及びウェルインサートを、37℃±2℃において5±0.5%のCO2の存在下でインキュベートした。
【００８６】
1時間、2時間、4時間及び6時間のインキュベート後に、1時間当たり、2個の「皮膜で被覆された」ウェルインサート及び2個の皮膜で被覆されていないウェルインサートをプレートから取り出して、経時変化を確かめた。
【００８７】
力価を測定するために、各上清を個別に採取した。
【００８８】
ii.力価測定プロトコール
以下に記載するようにして、「皮膜で被覆された」ウェルインサートを含むウェルから収集した各上清を希釈培地中で、被験生成物の無毒性で殺ウイルス性のない希釈物に、即ち、1/10及び1/100に希釈し、2枚の96ウェルプレート上で力価測定した。
【００８９】
即ち、合計32枚の96ウェルプレート。
【００９０】
・  手順
各96ウェルプレートについて、希釈培地50μlを各ウェルに加えた。次いで、各希釈上清又は陽性対照25μlを、第1のプレートの第1のカラムの8個のウェルに加え、ホモジナイズした。
【００９１】
次に、25μlを、カラム1からカラム2に移し(1/3に希釈)、溶液をホモジナイズした。この工程を、カラム2からカラム11まで繰り返した。
【００９２】
その後、25μlをカラム11(第1のプレート)からカラム1(第2のプレート)に移した。この工程を、カラム2からカラム11まで繰り返した。
【００９３】
カラム12を細胞対照とした。細胞2.5×105個/mlのベロ細胞懸濁液50μlをウェル全てに加えた。
【００９４】
次いで、プレートを37℃±2℃において5%±0.5%のCO2の存在下で6〜9日間インキュベートした。
【００９５】
・力価測定対照
PRVウイルスストックを、1枚の96ウェルプレート上で同時に力価測定した。
【００９６】
iii.結果
陽性対照及び被験物の力価測定の結果を下記table 1(表2)に示す。
【００９７】
【表２】
2014517060.tif 000003
【００９８】
陽性対照とは逆に、本発明による組成物Aを用いて「皮膜で被覆された」ウェルインサートを用いた試験では、細胞変性効果が観察されなかった。
【００９９】
したがって、これらの結果から、本発明による組成物によって形成された皮膜のPRV、ヒトヘルペスウイルス1型のモデルに対する不透過性、及び適用全体にわたる不透過性の一貫性が確認された。
【０１００】
(実施例3)
本発明による組成物(実施例1の組成物A)から形成された皮膜と、ホウ酸を含まない比較組成物(組成物B及びC)から形成された皮膜の破壊強度の比較試験。
組成物B(ホウ酸を含まない)は以下を含んでいた。
【０１０１】
【表３】
2014517060.tif 000004
【０１０２】
撹拌しながら10分間保持された水/エタノール混合物に、ヒマシ油及びクエン酸を加えた。次いで、エチルセルロースを混合物中に分散させた。混合物を30分間撹拌後、組成物Bを回収した。
【０１０３】
さらに、組成物C(ホウ酸及びクエン酸を含まない)を調製した。
【０１０４】
【表４】
2014517060.tif 000005
【０１０５】
撹拌しながら10分間保持された水/エタノール混合物に、ヒマシ油を加えた。次いで、エチルセルロースを混合物中に分散させた。混合物を30分間撹拌後、組成物Cを回収した。
【０１０６】
皮膜の破壊強度の測定
組成物A、B及びCを、シリコーンポリエステルに被覆し、開放空気中で乾燥させた。これらの被覆は、所望の皮膜の厚さの調節を可能にするコーティングテーブルを用いて行った。この場合に、皮膜は50μmの厚さを有していた。
【０１０７】
幅15mm及び長さ150mmの皮膜の長方形ストリップを、穴開け器を用いて切り抜いた。次いで、この長方形ストリップを、100mmの間隔を開けたMTS動力計(10ニュートン力センサーを有するモデルDY30)のジョーの間に入れた。次に、300mm/分の速度で試験片の破壊までの引張試験を実施した。
【０１０８】
曲線の極大点(破壊)を取ることによって、Testworkソフトウェアを用いて歪を計算した。こうして、ソフトウェアによって、破壊に必要な力が求められた。結果を、下記Table 2(表5)に報告した。
【０１０９】
【表５】
2014517060.tif 000006
【０１１０】
本発明による皮膜形成組成物は、歪むのに必要な力が他より大きいため、適用全体にわたってより良好な完全性を皮膜に与える。
【国際調査報告】
2014517060.tif 000007
2014517060.tif 000008
2014517060.tif 000009
2014517060.tif 000010
2014517060.tif 000011
2014517060.tif 000012
2014517060.tif 000013
2014517060.tif 000014