(57)【要約】  薬剤は、癌またはミスマッチ修復（ＭＭＲ）経路障害により特徴付けられる疾患の治療における、同時、連続または別々の使用のための組合せ製剤としての、機能性遺伝子を有するベクター、該遺伝子の発現産物により細胞毒性剤に変換することができるプロドラッグ、および別の細胞毒性剤を含み、投与レジメンが、プロドラッグ治療を終了後７日以内に別の細胞毒性剤治療を開始することを含む。
2014502992.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫応答性患者における悪性神経膠腫の治療における、同時、連続または別々の使用のための、脳腫瘍の少なくとも部分的切除により形成される空洞の壁に投与される機能性チミジンキナーゼ遺伝子を有するアデノウイルスベクター、ガンシクロビルまたはその類似体を含むプロドラッグ、およびテモゾロマイドを含む別の細胞毒性剤を含む薬剤であって、投与レジメンが、プロドラッグ治療を終了後７日以内に別の細胞毒性剤治療を開始することを含む、薬剤。
【請求項２】
別の細胞毒性剤治療を、プロドラッグ治療を開始後２日以降に開始する、請求項１に記載の薬剤。
【請求項３】
プロドラッグ治療および別の細胞毒性剤治療が重複する、請求項１または請求項２に記載の薬剤。
【請求項４】
治療が少なくとも３日間重複する、請求項３に記載の薬剤。
【請求項５】
プロドラッグ治療が１０から２０日間持続する、請求項１−４のいずれかに記載の薬剤。
【請求項６】
別の細胞毒性剤治療が最大５０日間持続する、請求項１−５のいずれかに記載の薬剤。
【請求項７】
切除が全体の少なくとも９５％である、請求項１に記載の薬剤。
【請求項８】
ベクターが約１ｃｍの深さで投与される、請求項１に記載の薬剤。
【請求項９】
腫瘍への放射線の投与をさらに含む、請求項１に記載の薬剤。
【請求項１０】
ウイルスベクターを該患者に投与することを含む改善、テモゾロマイドを該患者に投与することによる、免疫応答性患者における悪性神経膠腫を処置する方法。
【請求項１１】
該悪性神経膠腫の腫瘍塊の少なくとも部分的切除をさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
該ウイルスベクターが、該腫瘍の該切除により形成される空洞の壁に投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
該ウイルスベクターがアデノウイルスベクターを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
該ウイルスベクターが機能性チミジンキナーゼ遺伝子を含み、ガンシクロビルまたはその類似体を含むプロドラッグを該患者に投与することをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１に記載の１つ以上の特徴をさらに含む、請求項１０に記載の組合せ剤。
【請求項１６】
・該腫瘍を少なくとも部分的に切除し、次に、機能性チミジンキナーゼ遺伝子を有するアデノウイルスベクターを該切除により形成される空洞の壁に投与すること、
・ガンシクロビルまたはその類似体を該患者に投与すること、および
・テモゾロマイドを該患者に投与すること
を含む、免疫応答性患者における脳腫瘍を処置する方法であって
３つの列挙された工程が、任意の時間的順序において行われる、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、癌またはミスマッチ修復(impaired mismatch repair)（ＭＭＲ）経路障害により特徴付けられる疾患の処置のための薬物組合せに関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
単純ヘルペスウイルス１型、チミジンキナーゼ（ＨＳＶ−ｔｋ）遺伝子治療は、非毒性化合物、例えばガンシクロビル（ＧＣＶ）を毒性代謝産物に変換するプロドラッグ活性化酵素に基づく。ＨＳＶ−ｔｋ／ＧＣＶによる細胞破壊は細胞周期依存的であり、分裂する細胞のみが影響される。これは、迅速に分裂する腫瘍細胞が分裂しない正常な脳細胞に囲まれている脳の癌の遺伝子治療において特に有利である。ＨＳＶ−ｔｋによる治療は、ＥＰ１１３５５１３に記載されている。
【０００３】
テモゾロマイド（ＴＭＺ、イミダゾール  テトラジノン）は、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過することができる経口アルキル化剤である。テモゾロマイドは、ダカルバジンの誘導体である経口アルキル化剤である。ＴＭＺは、生理学的ｐＨで自発的に、その活性形態３−メチル−（トリアゼン−１−イル）イミダゾール−４  カルボキシアミド（ＭＴＩＣ）に加水分解する。細胞毒性の主な様式は、グアニンのＯ６−位置でメチル基を付加することによる（Ｏ６−ｍＧ）。
【０００４】
Ｏ６−ｍＧはそれ自体、細胞に対して毒性ではない。しかしながら、Ｏ６−ｍＧは、ミスマッチ修復（ＭＭＲ）経路による修復での無駄な努力の繰り返しサイクルの結果として細胞毒性となる。これは、最後に、ＤＮＡ鎖破壊を引き起こす。機能性ＭＭＲ経路は、活性なＭＧＭＴ修復経路（これは、悪性神経膠腫の５０％において起こる）の非存在下で、細胞をＴＭＺに対して感受性にさせるために必須であることが知られている。さらに、ＭＭＲ経路における欠損は、アルキル化剤、例えば、ＴＭＺに対する約１００倍の耐性に寄与することができる。
【０００５】
Ｒａｉｎｏｖらによる論文（Cancer Gene Therapy, Vol 8, No 9, 2001:pp 662-668）は、ｓＨＳＶ−ｔｋ／ＧＣＶ遺伝子治療およびＴＭＺ化学療法の組合せのいくつかの実験を報告しているが、データは、何ら相乗効果の有力な証拠を示していない。
【発明の概要】
【０００６】
発明の概要
本発明は、ＨＳＶ−ｔｋ遺伝子治療が、重要なミスマッチ修復（ＭＭＲ）経路タンパク質、すなわちＭＳＨ２およびＭＬＨ１の遺伝子発現を増加させることを見出したことに基づく。これにより、ＨＳＶ−ｔｋ／ＧＣＶ遺伝子治療が、細胞を化学療法剤、例えば、テモゾロマイド（ＴＭＺ）に対して感受性にするという知見に至った。
【０００７】
本発明者らにより設計された試験は、ベクター／プロドラッグ遺伝子治療（例えば、ＨＳＶ−ｔｋ／ＧＣＶ）および細胞毒性剤の組合せが、構成要素のいずれか単独、すなわち化学療法またはベクター／プロドラッグ遺伝子治療の使用と比較したとき、特定の疾患（癌が試験されたが、ＭＭＲ経路障害により特徴付けられる全ての疾患に適用することが考えられる）において、有効性を大きく改善させることを確認した。
【０００８】
また、これらの構成要素の投与プロトコールが、本発明において観察される驚くべき技術的効果、すなわち相乗効果の鍵であることを見出した。本発明者らは、ベクター／プロドラッグ遺伝子治療によるＭＭＲ経路の上方調節が、約２日間かかり、プロドラッグ治療を停止後、最大７日間持続することを見出した。したがって、相乗効果を得るために、プロドラッグ治療を終了後７日以内に細胞毒性剤を投与し始めることが必要である。
【０００９】
さらに、処置される状態がＭＭＲ経路障害により特徴付けられるとき、治療的利益が、ベクター／プロドラッグ遺伝子治療のみを投与することによりなし遂げられ得ると考えられる。
【００１０】
第１の局面において、本発明は、新規投与レジメンにより特徴付けられる。したがって、第１の局面において、本発明は、癌またはミスマッチ修復（ＭＭＲ）経路障害により特徴付けられる疾患の治療における同時、連続または別々の使用のための組合せ製剤としての、機能性遺伝子を有するベクター、該遺伝子の発現産物により細胞毒性剤に変換することができるプロドラッグ、および別の細胞毒性剤を含む薬剤であって、投与レジメンが、ベクターが投与された後にプロドラッグ治療を開始すること、およびプロドラッグ治療を終了後７日以内に別の細胞毒性剤治療を開始することを含む、薬剤である。
【００１１】
第２の局面において、本発明は、ミスマッチ修復（ＭＭＲ）経路障害により特徴付けられる疾患の治療における、同時、連続または別々の使用のための組合せ製剤としての、機能性遺伝子を有するベクター、および該遺伝子の発現産物により細胞毒性剤に変換することができるプロドラッグを含む薬剤である。
【００１２】
第３の局面において、多形性グリア芽腫を処置する方法は、
ａ．ヒト患者において多形性グリア芽腫を診断すること；
ｂ．該患者において少なくとも１つの多形性グリア芽腫を同定すること；
ｃ．該多形性グリア芽腫を切除し、該多形性グリア芽腫の少なくとも一部を取り出し、腫瘍床組織を暴露すること；
ｄ．チミジンキナーゼをコードする遺伝子を有するＡｄＨＳＶ−ｔｋアデノウイルスベクターを該腫瘍床組織に投与し、それにより、該ＡｄＨＳＶ−ｔｋアデノウイルスベクターを該腫瘍床組織にトランスフェクトし、該腫瘍床組織がチミジンキナーゼをコードする該遺伝子を発現すること；
ｅ．該アデノウイルスベクターを該ヒト患者に投与後約５から約１９日以内に、ガンシクロビルを該ヒト患者にさらに投与すること；
ｆ．テモゾロマイドを該ヒト患者に経口または静脈内注入により投与すること
の工程を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、異なるＨＳＶ−ｔｋ／ＧＣＶおよびＴＭＺ／投与レジメンに対する２８および４２日目の平均腫瘍容量を示す。
【図２】図２は、異なるＨＳＶ−ｔｋ／ＧＣＶおよびＴＭＺ投与レジメンに対する生存率を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
好ましい態様の記載
本発明は、機能性遺伝子を有するベクター、および該遺伝子の発現産物により細胞毒性剤に変換することができるプロドラッグの投与を必要とする。好ましくは、機能性遺伝子は、機能性チミジンキナーゼ遺伝子である。好ましくは、プロドラッグは、ガンシクロビルまたはその類似体である。プロドラッグ治療がベクターが投与された後に開始するべきであることが理解される。好ましくは、プロドラッグは、ベクターの投与後５から１９日に投与される。
【００１５】
あるいは、自殺遺伝子、例えば、シトシンデアミナーゼ、シトクロム  Ｐ４５０、Ｅ  ｃｏｌｉ  プリンヌクレオシドホスホリラーゼおよびカルボキシペプチダーゼ  Ｇ２が、本発明における使用のために適当である。これらの自殺遺伝子は、適当なプロドラッグ、例えば、５−フルオロシトシン、シクロホスファミド、６−メチルプリン(methylepurine)またはＦ−ａｒａＡＭＰまたは４−ベンゾイル−Ｌ−グルタミン酸（ＣＭＤＡ）またはそれらの化学的類似体のそれぞれと組み合わせて使用することができる。１つの態様において、自殺遺伝子、すなわちベクターは、シトシンデアミナーゼであり、プロドラッグは、５−フルオロシトシンであり、本発明における使用のために適当である。
【００１６】
ベクターは、好ましくは局所的に投与される。治療が癌性腫瘍の治療であるとき、例えば、ベクターは、癌性腫瘍に直接的に投与され得る。あるいは、癌性腫瘍を外科的に取り出し、次に、ベクターを腫瘍空洞の壁に投与することが好ましい場合もある。
【００１７】
本明細書において使用される「腫瘍空洞の壁」なる用語は、腫瘍（または腫瘍の一部）がいったん取り出された後、残存する見掛け上健常な組織（すなわち、外科医の眼で見掛けは健常である組織）の領域を意味する。組織は見掛けは健常であるが、悪性細胞を含み得る。「腫瘍空洞の壁」なる用語は、非腫瘍塊の領域を示す。
【００１８】
好ましくは、腫瘍切除は、可能なかぎり完全、すなわち９０％、９５％または９８％以上である。好ましい態様において、ベクターは、注射により約１ｃｍ（好ましくは０．５ｃｍから５ｃｍ、さらに好ましくは０．８ｃｍから３ｃｍ）の深さで腫瘍空洞の壁に投与される。これは、ベクターが健常組織内、すなわち主に健常細胞を標的とすることを保証する（いくつかの悪性細胞は見掛け上の健常組織の領域に存在し得ることが理解されるが）。
【００１９】
遺伝子を導入するために使用されるベクターは、任意のウイルスベクターであり得る。しかしながら、アデノウイルスまたはレンチウイルスに由来することが好ましい。さらに好ましくは、アデノウイルスに由来する。
【００２０】
本発明は、遺伝子治療ベクター、プロドラッグおよび細胞毒性剤の投与を含む併用療法である。該細胞毒性剤は、好ましくは、プロドラッグの変換（例えば、ガンシクロビルの変換）から生じる細胞毒性剤と異なるが、それ以外は、該胞毒性剤の正確な性質は重要ではなく、好ましくは、その機能がＭＭＲ経路障害によって損なわれる薬物であるはずである。いくつかの好ましい細胞毒性剤は以下のものである：
ａ）クロロエチル化剤、例えば、カルムスチン、ロムスチン、フォテムスチン、ニムスチン、ラニムスチンもしくはストレプトゾシン；
ｂ）非古典的アルキル化剤、例えば、プロカルバジン；
ｃ）メチル化トリアジン、例えば、テモゾロマイド、ダカルバジン、アルトレタミンもしくはミトブロニトール；
ｄ）ＤＮＡ架橋剤、例えば、シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、トリプラチン、テトラナイトレートもしくはサトラプラチン；
ｅ）トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えば、ドキソルビシン、エピルビシン、アクラルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、アムルビシン、ピラルビシン、バルルビシンもしくはゾルビシン、ミトキサントロンもしくはピキサントロン；
ｆ）トポイソメラーゼＩ阻害剤、例えば、トポテカン、カンプトテシン、イリノテカン、ルビテカンもしくはベロテカン；
ｇ）抗代謝産物（ピリミジン類似体）、例えば、５−ＦＵ、カペシタビン、テガフール、カルモフール、フロクスウリジンもしくはシタラビン；
ｈ）抗代謝産物（プリン類似体）、例えば、６−チオグアニンもしくはメルカプトプリン；または
ｉ）細胞毒性ＤＮＡアルキル化剤。
【００２１】
最も好ましい細胞毒性剤はテモゾロマイド（ＴＭＺ）である。
【００２２】
ベクター／プロドラッグ／細胞毒性間の相乗効果について、ＭＭＲ経路が上方制御されることが必要であり、したがって、投与プロトコール／投与レジメンが重要である。
【００２３】
本明細書において使用される「細胞毒性治療」および「プロドラッグ治療」は、細胞毒性およびプロドラッグ投与レジメン、処置過程を意味する。これらの治療は、特定の期間である。しかしながら、ベクターは、１回投与されることのみ必要である。
【００２４】
好ましくは、別の細胞毒性剤治療は、プロドラッグ治療を終了後７日以内に開始する。さらに好ましくは、細胞毒性剤治療は、プロドラッグ治療を終了後６、５、４、３、２または１日以内に開始する。好ましくは、細胞毒性剤治療は、プロドラッグ治療を終了後１日未満に開始する。
【００２５】
誤解を避けるために、細胞毒性治療がプロドラッグ治療を終了後即座に開始される状況、および、細胞毒性治療がプロドラッグ治療を終了前に開始される状況（すなわち、同時投与の期間がある）の両方が、本発明の範囲に含まれる。
【００２６】
細胞毒性治療およびプロドラッグ治療は、同時に開始され得る。けれども、好ましくは、細胞毒性剤治療は、プロドラッグ治療を開始後２日以降に開始する。これは、ＭＭＲ経路が上方調節されると、細胞毒性およびプロドラッグだけが組み合わせられるため、非常に効率的な投与を可能にする。これは、最も効率的な投与レジメンである。
【００２７】
好ましくは、プロドラッグ治療および別の細胞毒性剤治療は、重複する。さらに好ましくは、治療は、少なくとも３日間重複する。さらに好ましくは、それらは、少なくとも７、１０、１４または１８日間重複する。
【００２８】
好ましくは、プロドラッグ治療は、１０から２０日間持続する。さらに好ましくは、それは、１１から１９、１２から１８または１３から１７日間持続する。好ましくは、それは、１４日間持続する。
【００２９】
好ましい態様において、プロドラッグ治療は、ベクター投与（遺伝子導入）後２から５日に開始する。さらに好ましくは、プロドラッグ治療は、遺伝子導入後５日目に開始する。
【００３０】
好ましくは、別の細胞毒性治療は、最も早くて、プロドラッグ治療を開始後２日目に、および最も遅くて、プロドラッグ治療を停止後７日目に、開始するべきである。
【００３１】
別の細胞毒性剤治療は、プロドラッグ治療の開始と同時以降に開始するべきである。別の細胞毒性剤治療がプロドラッグ治療の開始後２日以降に開始することが、好ましいことが理解される。
【００３２】
ＭＭＲ経路の上方調節が本発明の鍵である。したがって、本発明の薬剤が多くの状態の処置において有用であることが理解される。これらの状態の例は、癌、光線性角化症、翼状片糖尿病性網膜症(pterygium diabetic retinopathy)、アテローム性動脈硬化症、喘息、慢性閉塞性肺疾患、サルコイドーシス、特発性肺線維症、リウマチ性関節炎、眼の水晶体落屑症候群およびアルツハイマー病である。
【００３３】
最も好ましい治療は癌である。好ましくは、治療は、癌性腫瘍、例えば、悪性神経膠腫、または前立腺の腫瘍である。本発明の薬剤は、正常またはＭＭＲ経路障害により特徴付けられる癌の治療において使用され得る。
【００３４】
さらなる好ましい態様において、癌性腫瘍を処置するために使用されるとき、本発明の薬剤はまた、放射線の投与を含む。放射線は、好ましくはベクターおよびプロドラッグの投与後に投与され、放射線療法は、好ましくは細胞毒性化学療法剤と同時に開始する（好ましくは、治療が同時である）。
【００３５】
以下の試験は、本発明を説明する。
【実施例】
【００３６】
試験
試験は、ラット神経膠腫モデルにおける腫瘍増殖速度に関して行った。６つの患者グループであった。投与される薬剤および投与レジメンの詳細は、以下の表１に示される。
【表１】
2014502992.tif 000003
【００３７】
結果は図１に示される。グループ５は、腫瘍サイズにおいて最も大きな減少を示す。
【００３８】
第２の試験は、生存率に関してラット神経膠腫モデルにおいて行った。データ（図２）は、グループ６が最も長い生存率を有し、グループ５が密接にそれに続くことを示す。これは、部分的に、本発明者らに本発明の投与レジメンを考え出させた（プロドラッグ／細胞毒性治療のわずかな重複が有益であるため）。
【図１】
2014502992.tif 000004
【図２】
2014502992.tif 000005
【国際調査報告】
2014502992.tif 000006
2014502992.tif 000007
2014502992.tif 000008