(57)【要約】  本発明は、硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ）を含有する化合物、又はその医薬として許容される塩の、手術又は治療によるヒト又は動物の処置における使用。また、本発明は、植物の処理における当該化合物の使用、及び当該化合物の所定の形態にも関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ）を含有する化合物、又はその医薬として許容される塩の、手術又は治療によるヒト又は動物の処置における使用。
【請求項２】
前記ミトコンドリア標的化基が、ホスホニウムカチオン、アルソニウムカチオン、アンモニウムカチオン、フルプリチン、ＭＫＴ−０７７、ピリジニウムセラミド、キノリウム、リポソーマルカチオン、ソルビトールグアニジン、サイクリックグアニジン及びローダミンから選択される親油性カチオンである、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項３】
前記硫化水素を放出する基が、チオカルバモイル基、５−チオキソ−５Ｈ−１，２−ジチオール−３−イル基、５−チオキソ−５Ｈ−１，２−ジチオール−４−イル基、５−オキソ−５Ｈ−１，２−ジチオール−３−イル基、５−オキソ−５Ｈ−１，２−ジチオール−４−イル基、５−ヒドロキシイミノ−５Ｈ−１，２−ジチオール−３−イル基、５−ヒドロキシイミノ−５Ｈ−１，２−ジチオール−４−イル基、ホスフィノジチオエート基又はホスフィノジチオ酸基を含む、請求項１又は２のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項４】
前記化合物が以下の式：
ＭＴＧ−Ｌ−Ｓ
［式中、
Ｓは、
【化１】
2014528950.tif 000019
（式中、
ＸはＳ、Ｏ又はＮ−ＯＨを表し；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して水素、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ１−１２アルコキシ又はＣ６−１０アリールを表し、それぞれＣ１−１２アルキル、Ｃ１−１２アルコキシ又はＣ６−１０アリール基は、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルコキシ、Ｃ１−１２アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−１２−アルキル、ハロ−Ｃ１−１２−アルキル及びハロ−Ｃ１−１２−アルコキシ置換基から選択される１つ以上の置換基で置換され、又は置換されない）
から選択される硫化水素を放出する基であり；
Ｌは、直接結合又はリンカーであり、当該リンカーは、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルコキシ、Ｃ１−１２アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−１２−アルキル、ハロ−Ｃ１−１２−アルキル及びハロ−Ｃ１−１２−アルコキシから選択される１つ以上の置換基で置換され、又は置換されたＣ１−２０アルキレンであり、ここで、当該アルキレン鎖中の０又は１〜１０個の炭素原子が、Ｃ６−１０アリーレン、−０−、−Ｓ−、−ＮＲ４−、−Ｃ（０）ＮＲ４−、−ＮＲ４Ｃ（０）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（０）０−部分から選択されるスペーサー部分で置換され、当該Ｒ４は水素又はＣ１−１２アルキルであり、当該Ｃ６−１０アリーレン部分は、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルキル及びＣ１−１２アルコキシ基から選択される１、２、３又は４個の置換基で置換され、又は置換されない；そして
ＭＴＧは、ミトコンドリア標的化基を表す］
で表される化合物、又はその医薬として許容される塩である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項５】
前記Ｌが、以下の式：
−Ｌ’−Ｙ−Ｚ−
［式中、
Ｌ’は、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルコキシ、Ｃ１−１２アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−１２−アルキル、ハロ−Ｃ１−１２−アルキル及びハロ−Ｃ１−１２−アルコキシ基から選択される１つ以上の置換基で置換された、又は置換されない分岐鎖又は直鎖Ｃ１−２０アルキレン基を表し；
Ｙは、直接結合、−ＯＣ（Ｏ）−又は−Ｃ（０）０−を表し；
Ｚは、直接結合、又はハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルキル及びＣ１−１２アルコキシ基から選択される１、２、３又は４つの置換基で置換された、若しくは置換されないフェニレン基である］
で表されるリンカーである、請求項４に記載の化合物の使用。
【請求項６】
Ｌ’が、以下の式
−（ＣＨ２）ｎ−
［式中
ｎは１〜１９の整数である］
で表される直鎖アルキレン基であって、
−Ｙ−Ｚ−部分が、以下の式
【化２】
2014528950.tif 000020
で表され、
Ｓが、
【化３】
2014528950.tif 000021
から選択され、かつミトコンドリア標的化基ＭＴＧがＰｈ３Ｐである、請求項５に記載の化合物の使用。
【請求項７】
硫化水素のインビボ放出により改善が見込まれる疾患又は障害の治療又は予防に使用される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項８】
前記疾患又は障害が：
（ｉ）炎症性関節疾患、関節リウマチ、喘息、慢性閉塞性肺疾患、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、肝炎又はアテローム性動脈硬化を含む、慢性炎症性疾患又は障害；
（ｉｉ）内毒素性ショック、敗血症、又は出血性ショックを含む、急性炎症性疾患又は障害；
（ｉｉｉ）変形性関節炎、骨粗鬆症、又はＩ型若しくはＩＩ型糖尿病に関連する疾患又は障害；
（ｉｖ）肥満の血管系合併症、糖尿病、代謝症候群、自然の加齢、高血圧、心筋梗塞、虚血、虚血性心疾患、再かん流傷害、低酸素症、虚血再かん流傷害、低酸素再かん流傷害、網膜症又は神経障害を含む、大小の血管症に関連する疾患又は障害；
（ｖ）アルツハイマー症、筋萎縮性側索硬化症、運動ニューロン疾患、パーキンソン症、ハンチンドン症、タウオパシー（ｔａｕｏｐａｔｈｙ）、錐体外路及び運動障害、又は、毛細血管拡張性運動失調、大脳皮質基底核変性症若しくは進行性核上まひを含むニューロン、アストロサイト又はグリア細胞の死滅が顕著な神経疾患を含む、神経変性疾患；
（ｖｉ）大小の血管症、又は血管性認知症を含む、加齢に関連する疾患又は障害；
（ｖｉｉ）腎臓又は肝臓を含む臓器不全に関連する疾患又は障害；
（ｖｉｉｉ）虚血再かん流傷害、高ホモシステイン血症及び高脂血症を含む、慢性及び／又は急性腎損傷に関連する疾患又は障害；又は
（ｉｘ）癌を含む細胞の異常増殖に関連する疾患又は障害；
である、請求項７に記載の化合物の使用。
【請求項９】
請求項７又は８に記載された疾患又は障害に罹患し、又はその恐れがある患者を治療する方法であって、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物を当該患者に投与することを含む、方法。
【請求項１０】
植物の生育を促進するための植物の処理における、植物の除草処理における、又は植物の気孔の閉口を防止又は減少させるための、若しくは気孔の開口を引き起こすための、硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物、又はその医薬として許容される塩の使用。
【請求項１１】
前記ミトコンドリア標的化基が、ホスホニウムカチオン、アルソニウムカチオン、アンモニウムカチオン、フルプリチン、ＭＫＴ−０７７、ピリジニウムセラミド、キノリウム、リポソーマルカチオン、ソルビトールグアニジン、サイクリックグアニジン及びローダミンから選択される親油性カチオンである、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記硫化水素を放出する基が、チチオカルバモイル基、５−チオキソ−５Ｈ−１，２−ジチオール−３−イル基、５−チオキソ−５Ｈ−１，２−ジチオール−４−イル基、５−オキソ−５Ｈ−１，２−ジチオール−３−イル基、５−オキソ−５Ｈ−１，２−ジチオール−４−イル基、５−ヒドロキシイミノ−５Ｈ−１，２−ジチオール−３−イル基、５−ヒドロキシイミノ−５Ｈ−１，２−ジチオール−４−イル基、ホスフィノジチオエート基又はホスフィノジチオ酸基を含む、請求項１０又は１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
前記化合物が、
ＭＴＧ−Ｌ−Ｓ
［式中、
Ｓは、
【化４】
2014528950.tif 000022
（式中、
ＸはＳ、Ｏ又はＮ−ＯＨを表し；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して水素、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ１−１２アルコキシ又はＣ６−１０アリールを表し、それぞれＣ１−１２アルキル、Ｃ１−１２アルコキシ又はＣ６−１０アリール基は、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルコキシ、Ｃ１−１２アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−１２−アルキル、ハロ−Ｃ１−１２−アルキル及びハロ−Ｃ１−１２−アルコキシ置換基から選択される１つ以上の置換基で置換され、又は置換されない）
から選択される硫化水素を放出する基であり；
Ｌは、直接結合又はリンカーであり、当該リンカーは、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルコキシ、Ｃ１−１２アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−１２−アルキル、ハロ−Ｃ１−１２−アルキル及びハロ−Ｃ１−１２−アルコキシから選択される１つ以上の置換基で置換され、又は置換されたＣ１−２０アルキレンであり、ここで、当該アルキレン鎖中の０又は１〜１０個の炭素原子が、Ｃ６−１０アリーレン、−０−、−Ｓ−、−ＮＲ４−、−Ｃ（０）ＮＲ４−、−ＮＲ４Ｃ（０）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（０）０−部分から選択されるスペーサー部分で置換され、当該Ｒ４は水素又はＣ１−１２アルキルであり、当該Ｃ６−１０アリーレン部分は、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルキル及びＣ１−１２アルコキシ基から選択される１、２、３又は４個の置換基で置換され、又は置換されない；そして
ＭＴＧは、ミトコンドリア標的化基を表す］
で表される化合物、又はその医薬として許容される塩である、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
前記Ｌが、以下の式：
−Ｌ’−Ｙ−Ｚ−
［式中、
Ｌ’は、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルコキシ、Ｃ１−１２アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−１２−アルキル、ハロ−Ｃ１−１２−アルキル及びハロ−Ｃ１−１２−アルコキシ基から選択される１つ以上の置換基で置換された、又は置換されない分岐鎖又は直鎖Ｃ１−２０アルキレン基を表し；
Ｙは、直接結合、−ＯＣ（Ｏ）−又は−Ｃ（０）０−を表し；
Ｚは、直接結合、又はハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルキル及びＣ１−１２アルコキシ基から選択される１、２、３又は４つの置換基で置換された、若しくは置換されないフェニレン基である］
で表されるリンカーである、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
Ｌ’が、以下の式
−（ＣＨ２）ｎ−
［式中
ｎは１〜１９の整数である］
で表される直鎖アルキレン基であって、
−Ｙ−Ｚ−部分が、以下の式
【化５】
2014528950.tif 000023
で表され、
Ｓが、
【化６】
2014528950.tif 000024
から選択され、かつミトコンドリア標的化基ＭＴＧがＰｈ３Ｐである、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
以下の式：
ＭＴＧ−Ｌ−Ｓ
［式中、
Ｓは、
【化７】
2014528950.tif 000025
（式中、
ＸはＳ、Ｏ又はＮ−ＯＨを表し；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して水素、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ１−１２アルコキシ又はＣ６−１０アリールを表し、それぞれＣ１−１２アルキル、Ｃ１−１２アルコキシ又はＣ６−１０アリール基は、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルコキシ、Ｃ１−１２アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−１２−アルキル、ハロ−Ｃ１−１２−アルキル及びハロ−Ｃ１−１２−アルコキシ置換基から選択される１つ以上の置換基で置換され、又は置換されない）
から選択される硫化水素を放出する基であり；
Ｌは、以下の式：
−Ｌ’−Ｙ−Ｚ−
（式中、
Ｌ’は、以下の式
−（ＣＨ２）ｎ−
（式中
ｎは１〜１９の整数である）
で表される直鎖アルキレン基であり；
Ｙは、直接結合、−ＯＣ（Ｏ）−又は−Ｃ（０）０−を表し；
Ｚは、直接結合、又はハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルキル及びＣ１−１２アルコキシ基から選択される１、２、３又は４つの置換基で置換された、若しくは置換されないフェニレン基である）
で表されるリンカーであり；かつ
ＭＴＧは、ミトコンドリア標的化基を表す］
で表される化合物、又はその医薬として許容される塩。
【請求項１７】
前記ミトコンドリア標的化基が、ホスホニウムカチオン、アルソニウムカチオン、アンモニウムカチオン、フルプリチン、ＭＫＴ−０７７、ピリジニウムセラミド、キノリウム、リポソーマルカチオン、ソルビトールグアニジン、サイクリックグアニジン及びローダミンから選択される親油性カチオンである、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
前記−Ｙ−Ｚ−部分が、以下の式
【化８】
2014528950.tif 000026
で表される、請求項１６又は１７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１９】
前記Ｓが、以下の式
【化９】
2014528950.tif 000027
から選択される、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２０】
前記ミトコンドリア標的化基ＭＴＧがＰｈ３Ｐ＋である、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２１】
以下の式
【化１０】
2014528950.tif 000028
から選択されるカチオンを含む、請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ）を含有する化合物の、手術又は治療によるヒト又は動物の身体の処置における使用、植物の処理における当該化合物の使用、及び新規化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｈ２Ｓがヒト及び動物において生理的ガスメディエーターであることは周知である。最近、Ｈ２Ｓが植物におけるガスメディエーターであることも見出された（Ｍ．  Ｌｉｓｊａｋ  ｅｔ  ａｌ，  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  ２０１０，  ４８（１２），  ９３１−５）。
【０００３】
ヒト及び動物において、Ｈ２Ｓは、第一にＬ−システイン及びホモシステインから、ピリドキサールリン酸依存酵素のシスタチオニン−Ｐ−シンターゼ（ＣＢＳ）及びシスタチオニン−γ−リアーゼ（ＣＳＥ）により合成される。現在、神経組織においてＣＢＳが優勢に見られ、ＣＳＥは血管系及び炎症性細胞に発現することが考えられている（Ｍ．  Ｗｈｉｔｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．，  ２００９；１３：４８８−５０７；及びＭ．  Ｗｈｉｔｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，  ２０１１，  ４，１３−３２）。ヒト及び他の哺乳類の組織中のＨ２Ｓの生産は、緩慢かつ定常的な速度で起こっているようで、高血圧、炎症、浮腫及び出血性ショック等の幾つかのプロセスが関与すると考えられている（Ｇ．  Ｃａｌｉｅｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  ２０１０，  ５３（１７），  ６２７５−６２８６）。インビボで緩慢にＨ２Ｓを放出する化合物は、従って、そのようなプロセスが関与する疾患又は障害の治療において、治療的用途を有する可能性がある。
【０００４】
インビボで緩慢にＨ２Ｓを放出する化合物が植物において気孔の閉口を防止することも見出されている（Ｍ．  Ｌｉｓｊａｋ  ｅｔ  ａｌ，  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  ２０１０，  ４８（１２），  ９３１−５）。植物中でインビボで緩慢にＨ２Ｓを放出する化合物は、植物の生育を促進する薬剤、又は除草処理剤として使用出来る可能性がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
硫化水素は主に細胞のミトコンドリア中で迅速に酸化され、最初にチオ硫酸塩となり、その後亜硫酸塩及び硫酸塩となる。ミトコンドリアは、細胞死に関与する細胞内小器官であり（細胞の生存、アポトーシス又はネクローシス細胞死）、健康及び疾患における細胞及び組織の機能の重要な制御機構である。
【０００６】
本発明は、硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物又はその医薬として許容される塩の使用に関する。当該化合物は、選択的かつ緩慢にインビボで、細胞内のミトコンドリアに対して、又はその付近に、Ｈ２Ｓを放出する。当該化合物は、細胞内の硫化水素の強力な生体利用効率を提供するのに使用され得る。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の一つの側面において、前記硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物又はその医薬として許容される塩は、手術又は治療によるヒト又は動物の処置に使用される。
【０００８】
一つの態様において、前記化合物は、硫化水素のインビボ放出により改善が見込まれる疾患又は障害の治療又は予防に使用される。
【０００９】
本発明の更なる側面において、前記硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物の、硫化水素のインビボ放出により改善が見込まれる疾患又は障害の処置における使用が提供される。
【００１０】
本発明の更なる側面において、硫化水素のインビボ放出により改善が見込まれる疾患又は障害に罹患し、又はその恐れがある患者を治療する方法が提供され、当該方法は、前記硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物又はその医薬として許容される塩を当該患者に投与することを含む。
【００１１】
本発明の更なる側面において、前記硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物又はその医薬として許容される塩、希釈剤又は担体を含有する医薬組成物が提供される。
【００１２】
本発明の更なる側面において、（ｉ）前記硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物又はその医薬として許容される塩、及び（ｉｉ）手術又は治療によるヒト又は動物の処置に使用される適切な有効成分を含有する組み合わせ薬剤が提供される。
【００１３】
本発明の更なる側面において、前記硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物又はその医薬として許容される塩の、植物の生育を促進するための植物の処理における使用が提供される。
【００１４】
本発明の更なる側面において、前記硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物又はその医薬として許容される塩の、植物の除草処理における使用が提供される。
【００１５】
本発明の更なる側面において、前記硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物の、植物の気孔の閉口を防止又は減少させるための、若しくは気孔の開口を引き起こすための使用が提供される。
【００１６】
植物の気孔の閉口を防止又は減少させ、若しくは気孔の開口を引き起こすこと等による植物の処理に関する本発明の使用は、下記化合物で植物を処理する工程を含む方法にも関する。当該方法は、植物の生育を促進するために植物を処理するものであり；又は植物の気孔の閉口を防止又は減少させるための、若しくは気孔の開口を引き起こすためのものであってもよい。
【００１７】
本発明の更なる側面において、以下の式：
ＭＴＧ−Ｌ−Ｓ
［式中、
Ｓは、
【化１】
2014528950.tif 000002
（式中、
ＸはＳ、Ｏ又はＮ−ＯＨを表し；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して水素、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ１−１２アルコキシ又はＣ６−１０アリールを表し、それぞれＣ１−１２アルキル、Ｃ１−１２アルコキシ又はＣ６−１０アリール基は、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルコキシ、Ｃ１−１２アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−１２−アルキル、ハロ−Ｃ１−１２−アルキル及びハロ−Ｃ１−１２−アルコキシ置換基から選択される１つ以上の置換基で置換され、又は置換されない）
から選択される硫化水素を放出する基であり；
Ｌは、以下の式：
−Ｌ’−Ｙ−Ｚ−
［式中、
Ｌ’は、以下の式
−（ＣＨ２）ｎ−
［式中
ｎは１〜１９の整数である］
で表される直鎖アルキレン基であって、
Ｙは、直接結合、−ＯＣ（Ｏ）−又は−Ｃ（０）０−を表し；
Ｚは、直接結合、又はハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルキル及びＣ１−１２アルコキシ基から選択される１、２、３又は４つの置換基で置換された、若しくは置換されないフェニレン基である］
で表されるリンカーであって；かつ
ＭＴＧがミトコンドリア標的化基を表す］
で表される化合物、又はその医薬として許容される塩が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、化合物ＡＰ３９（実施例１参照）及びＡＰ１２３（実施例８参照）の、亜鉛トラップ分光光度法により測定したＨ２Ｓ放出速度を示すグラフである。
【００１９】
【図２】図２は、ＡＰ３９存在下でインキュベーションしたヒト脳毛細血管内皮細胞（ＨＭＥＣ）の細胞生存率％を示すグラフである。
【００２０】
【図３】図３は、ＡＰ１２３存在下でインキュベーションしたＨＭＥＣの細胞生存率％を示すグラフである。
【００２１】
【図４】図４は、ＨＣＭＥＣ／Ｄ３細胞における、４−ヒドロキシノネナル（４−ＨＮＥ）及び３−モルホリノシドノニミン塩酸塩（ＳＩＮ−１）により誘導された細胞死に対する、標的化した、又は標的化していないＨ２Ｓ供与剤による細胞保護の比較である。ＧＹＹ４１３７は、標的化していないＨ２Ｓ供与剤のモルホリン−４−イウム４−メトキシフェニル（モルホリノ）ホスフィノジチオエートである。
【００２２】
【図５】図５は、シスタチオニン−β−シンターゼ（ＣＢＳ）阻害剤のアミノオキシ酢酸塩（ＡＯＡＡ）の、単独での、及びＨ２Ｓを放出する化合物のＧＹＹ４１３７及びＡＰ３９と組み合わせての、内在的Ｈ２Ｓ生産に対する効果を示すグラフである。
【００２３】
【図６】図６は、シスタチオニン−γ−リアーゼ（ＣＳＥ）阻害剤のプロパルギルグリシン（ＰＡＧ）の、単独での、及びＨ２Ｓを放出する化合物のＧＹＹ４１３７及びＡＰ３９と組み合わせての、内在的Ｈ２Ｓ生産に対する効果を示すグラフである。
【００２４】
【図７】図７は、ＰＡＧ及びＡＯＡＡの、単独での、及びＨ２Ｓを放出する化合物のＧＹＹ４１３７及びＡＰ３９と組み合わせての、内在的Ｈ２Ｓ生産に対する効果を示すグラフである。
【００２５】
【図８】図８は、Ｈ２０２（５０〜２００μΜ）により誘導される酸化ストレスに対するＧＹＹ４１３７及びＡＰ３９の保護効果を示すグラフである。
【００２６】
【図９】図９は、ＳＩＮ−１（５００μΜ）により誘導される酸化ストレスに対するＧＹＹ４１３７の保護効果を示すグラフである。
【００２７】
【図１０】図１０は、ＳＩＮ−１（５００μΜ）により誘導される酸化ストレスに対するＡＰ３９の保護効果を示すグラフである。
【００２８】
【図１１】図１１は、４−ＨＮＥ（１０μΜ）により誘導される酸化ストレスに対するＧＹＹ４１３７の保護効果を示すグラフである。
【００２９】
【図１２】図１２は、４−ＨＮＥ（１０μΜ）により誘導される酸化ストレスに対するＡＰ３９の保護効果を示すグラフである。
【００３０】
【図１３】図１３は、酸化ストレス剤（Ｈ２０２、  ＳＩＮ−１又は４−ＨＮＥ）及びＨ２Ｓを放出する化合物ＧＹＹ４１３７及びＡＰ３９の存在下の、ヒト脳毛細血管内皮細胞（ＨＣＭＥｃ）のミトコンドリア膜電位（ΔΨｍ）を示すグラフである。
【００３１】
【図１４】図１４は、ジクロロフルオレセインアッセイ（ＤＣＦＤＡアッセイ）による、４−ＨＮＥにより誘導される細胞質の酸化ストレスを示すグラフである。ＧＹＹ４１３７（１００μΜ）及びＡＰ３９（１００ｎＭ）は、４−ＨＮＥが媒介する細胞内酸化種の増大を顕著に低下させた。
【００３２】
【図１５】図１５は、細胞内酸かストレスの時間依存的増大が、ＧＹＹ４１３７（１００μＭ）又はＡＰ３９（１００ｎＭ）のいずれかで細胞を前処理することにより低下したことを示すグラフである。
【００３３】
【図１６】図１６は、ＭｉｔｏＳＯＸレッドアッセイ（ミトコンドリア特異的なスーパーオキシドの指標）により決定されるミトコンドリア酸化ストレスを示すグラフである。
【００３４】
【図１７】図１７は、ＭｉｔｏＳＯＸレッドアッセイ（ミトコンドリア特異的なスーパーオキシドの指標）により決定されるミトコンドリア酸化ストレスを示すグラフである。ＧＹＹ４１３７及びＡＰ３９は、Ｈ２０２  により誘導されるミトコンドリアスーパーオキシドを減少させた。
【００３５】
【図１８】図１８は、  ＭｉｔｏＳＯＸレッドアッセイ（ミトコンドリア特異的なスーパーオキシドの指標）により決定されるミトコンドリア酸化ストレスを示すグラフである。
【００３６】
【図１９】図１９は、ＧＹＹ４１３７（１００μＭ）又はＡＰ３９（１００ｎＭ）が、酸化ストレス剤４−ＨＮＥの存在下での細胞内酸化ストレスを阻害する効果を有することを示すグラフである。
【００３７】
【図２０】図２０は、Ｈ２Ｓ  を放出する薬物ＡＰ３９及びＮａ２Ｓ  の、麻酔Ｗｉｓｔａｒラットの血圧、心拍及び呼吸速度に対する効果を示すグラフのセットである。
【００３８】
【図２１】図２１は、ＡＰ３９の、麻酔ＳＨＲ（１年齢４５０ｇ）ラットの血圧、心拍及び呼吸速度に対する効果の比較を示すグラフのセットである。
【００３９】
【図２２】図２２は、図２０のときよりも高濃度で用いたＡＰ３９の、麻酔Ｗｉｓｔａｒラットの血及び心拍に対する効果の比較を示すグラフのセットである。
【００４０】
【図２３】図２３は、ＡＰ３９の濃度増大（１−５μＭ）の、アドレナリンを事前に添加したラットの大動脈（Ａ〜Ｃ）、及び腸間膜動脈（Ｄ）に対する血管拡張効果を示すグラフのセットである。
【００４１】
【図２４】図２４は、０ｍＶにおけるラット心筋小胞体由来の単一塩化物チャンネルを通じての電流の大きさに対するＡＰ３９（２０及び４０μＭ）の効果を示すグラフである。
【００４２】
【図２５】図２５は、０ｍＶにおけるラット心筋小胞体由来の単一塩化物チャンネルを通じての電流の大きさに対するＡＰ３９（２０及び４０μＭ）の効果を示すグラフである。
【００４３】
【図２６】図２６は、ラット心臓の心筋小胞体由来の塩化物チャンネルの伝導性に対するＡＰ３９の効果を示すグラフである。対照のチャンネルの伝導性は、１２５ｐＳであった。
【００４４】
【図２７】図２７は、ＡＰ３９（２０μｍｏｌ／ｌ）の、チャンネル開口の数と開口チャンネルの滞留時間に対する効果を示すグラフである。
【００４５】
【図２８】図２８は、塩化物チャンネル開口の頻度に対するＡＰ３９の濃度依存的な効果を示すグラフである。
【００４６】
【図２９】図２９は、ヒト胚性腎臓細胞（ＨＥＫ２９３）のＣＡｖ３．１Ｔ型カルシウムチャンネルに対するＡＰ３９の濃度依存的な効果を示すグラフのセットである。
【００４７】
【図３０】図３０は、ヒト胚性腎臓細胞（ＨＥＫ２９３）のＣＡｖ３．１Ｔ型カルシウムチャンネルに対するＡＰ３９の時間依存的な効果を示すグラフのセットである。
【００４８】
【図３１】図３１は、ヒト胚性腎臓細胞（ＨＥＫ２９３）のＣＡｖ３．１Ｔ型カルシウムチャンネルに対するＡＰ３９の濃度依存的な効果を示すグラフのセットである。
【００４９】
【図３２】図３２は、ヒトＴＨＰ−１（単球）細胞における様々な濃度のＡＰ３９による、ミトコンドリアマトリックス中に位置する、酵素ペルオキシレドキシン３（Ｐｒｘ３）の水素ペルオキシド誘導酸化の阻害を示すウエスタンブロットである。
【００５０】
【図３３】図３３は、ヒトＴＨＰ−１（単球）細胞における様々な濃度のＡＰ３９による、ミトコンドリアマトリックス中に位置する、酵素ペルオキシレドキシン３（Ｐｒｘ３）の水素ペルオキシド誘導酸化の阻害を示すウエスタンブロットである。
【００５１】
【図３４】図３４は、Ｎｒｆ−２ルシフェラーゼをトランスフェクションしたＭＣＦ−７細胞（ＡＲＥｃ３２）におけるＡＰ３９によるＮｒｆ２の活性化を示すグラフである。当該図は、非ミトコンドリア標的化緩慢Ｈ２Ｓ供与化合物及び陽性対照（スルホラファン）の効果を比較するものでもある。
【００５２】
【図３５】図３５は、ＡＰ３９のヒトＴＨＰ−１細胞におけるインフラマソーム（ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ）の活性化の効果を示すグラフである。
【００５３】
【図３６】図３６は、ヒトＴＨＰ−１細胞におけるＬＰＳ及びＡＴＰによる活性化後のインフラマソーム活性に対するＡＰ３９の効果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
発明の詳細な説明
本発明は、硫化水素を放出する基を含有する化合物に関する。典型的には、当該基は、インビボで硫化水素を放出する。一般に、当該基は、インビボでＨ２Ｓ又はＨＳを生産する反応を行う。
【００５５】
一般に、前記基は、ミトコンドリア標的化基と直接、又はリンカー（Ｌ）を介して連結した、硫化水素を放出する部分である。当該ミトコンドリア標的化基は、硫化水素を放出する化合物上の任意の適切な位置で連結する。
【００５６】
硫化水素を放出する基は、当業者に周知であり、例えばＧ．  Ｃａｌｉｅｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ  （Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  ２０１０，  ５３（１７），  ６２７５−６２８６）を参照されたい。硫化水素を放出する化合物の例として、Ｎ−アセチル−ペニシラミン、Ｓ−アリル−システイン、ブシラミン、カルボシステイン、システアミン、シスタチオニン、ホモシステイン、メシステイン、メチオニン、パンテテイン、ペニシラミン、ペニシラミンジスルフィド、チオ酢酸、チオジグリコール酸、チオグリコール酸、チオ乳酸、２−チオールヒスチジン、チオリンゴ酸、チオサリチル酸、チオプロニン、５−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−３Ｈ−１，２−ジチオール−３−チオン、１，３−ジチオール−２−チオン−５−カルボン酸、３−チオキソ−３Ｈ−１，２−ジチオール−５−カルボン酸及び３−チオキソ−３Ｈ−１，２−ジチオール−４−カルボン酸が挙げられる。
【００５７】
硫化水素を放出する基は、例えば、スルフィド、ジスルフィド又はポリスルフィド部分を含有してもよい。
【００５８】
一つの態様において、硫化水素を放出する基は、チオカルバモイル基、５−チオキソ−５Ｈ−１，２−ジチオール−３−イル基、５−チオキソ−５Ｈ−１，２−ジチオール−４−イル基、５−オキソ−５Ｈ−１，２−ジチオール−３−イル基、５−オキソ−５Ｈ−１，２−ジチオール−４−イル基、５−ヒドロキシイミノ−５Ｈ−１，２−ジチオール−３−イル基、５−ヒドロキシイミノ−５Ｈ−１，２−ジチオール−４−イル基、ホスフィノジチオエート基又はホスフィノジチオ酸基を含む。一つの態様において、硫化水素を放出する基は、チオベンザミド基（チオベンザミジル）又は５−チオキソ−５Ｈ−１，２−ジチオール−３−イル基である。
【００５９】
一つの態様において、硫化水素を放出する基（Ｓ）は、以下の式：
【化２】
2014528950.tif 000003
（式中、
ＸはＳ、Ｏ又はＮ−ＯＨを表し；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して水素、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ１−１２アルコキシ又はＣ６−１０アリールを表し、それぞれＣ１−１２アルキル、Ｃ１−１２アルコキシ又はＣ６−１０アリール基は、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルコキシ、Ｃ１−１２アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−１２−アルキル、ハロ−Ｃ１−１２−アルキル及びハロ−Ｃ１−１２−アルコキシ置換基から選択される１つ以上の置換基で置換され、又は置換されない）
で表されるものから選択される。
【００６０】
一つの態様において、ＸはＳ又はＯである。一つの態様において、ＸはＳである。
【００６１】
一つの態様において、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して水素、Ｃ１−１２アルキル、又はＣ１−１２アルコキシである。一つの態様において、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して水素又はＣ１−１２アルキルである。一つの態様において、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して水素である。
【００６２】
一つの態様において、硫化水素を放出する基（Ｓ）は、以下の式：
【化３】
2014528950.tif 000004
で表されるものから選択される。
【００６３】
ミトコンドリア標的化基は、細胞のミトコンドリア中に化合物を濃縮する基である。例えば、ミトコンドリア標的化基を含有する化合物と細胞をインキュベーションすると、ミトコンドリア中の当該化合物の濃度が、細胞質中の濃度と比較して高くなる。ミトコンドリア標的化基は周知であり、適切なミトコンドリア標的化基の例は、Ｓｏｕｚａ  ｅｔ  ａｌ  （Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉｏｎ  ５  （２００５）  ３５２−３５８），  Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ  （Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，  １１９，  ３，  ４５４−４６４），  Ｈｏｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ  （Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １５，  ３７５−３８２），  Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ  （Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  ２００７，  ５０  （２１），  ５０５７−５０６９），  Ｓｏｕｚａ  ｅｔ  ａｌ  （Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ９２  （２００３）  １８９−１９７），  Ｍａｉｔｉ  ｅｔ  ａｌ  （Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．，  ２００７，  ４６，  ５８８０−５８８４），  Ｋａｎａｉ  ｅｔ  ａｌ  （Ｏｒｇ．  Ｂｉｏｍｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２００７，  ５，  ３０７−３０９），  Ｓｅｎｋａｌ  ｅｔ  ａｌ  （Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．，  ３１７（３），  １１８８−１１９９），  Ｗｅｉｓｓ  ｅｔ  ａｌ  （Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，  ８４，  ５４４４−５４８８），  Ｚｉｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ  （Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，  １９９８，  １２３（６），  １１５４−８），  Ｍｏｄｉｃａ−Ｎａｐｏｌｉｔａｎｏ  ｅｔ  ａｌ  （Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  １９９６，  ５６，  ５４４−５５０），  Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ  （Ａｎｎ  Ｒｅｖ．  Ｐｈａｒｍ  Ｔｏｘｉｃｏｌ，  （２００７），  ４７，  ６２９−６５６），  及びＨｏｙｅ  ｅｔ  ａｌ  （Ａｃｃｏｕｎｔｓ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ４１，  １，  ８７−９７）に議論されている。
【００６４】
上記文献は全て参照により援用される。疑義を避けるため、これらの文献中に開示されるミトコンドリア標的化基の全ては、硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物において使用され得る。
【００６５】
一つの態様において、前記ミトコンドリア標的化基は、細胞のミトコンドリアマトリックス中に前記化合物を特異的に濃縮する基である。
【００６６】
一つの態様において、ミトコンドリア標的化基（ＭＴＧ）は、親油性カチオン又はミトコンドリア標的化ペプチドである。一つの態様において、前記親油性カチオンは、ホスホニウムカチオン、アルソニウムカチオン、アンモニウムカチオン、フルプリチン、ＭＫＴ−０７７、ピリジニウムセラミド、キノリウム、リポソーマルカチオン、ソルビトールグアニジン、サイクリックグアニジン及びローダミンである。
【００６７】
フルプリチン、ＭＫＴ−０７７は、Ｚｉｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，  １９９８，  １２３（６），  １１５４−８）及びＭｏｄｉｃａ−Ｎａｐｏｌｉｔａｎｏ  ｅｔ  ａｌ  （Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  １９９６，  ５６，  ５４４−５５０）に記載されている。ミトコンドリア標的化ペプチドは、Ｈｏｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ  （Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １５，  ３７５−３８２）及びＨｏｙｅ  ｅｔ  ａｌ  （Ａｃｃｏｕｎｔｓ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ４１，  １，  ８７−９７）に記載されている。
【００６８】
一つの態様において、ミトコンドリア標的化基（ＭＴＧ）は、ホスホニウムカチオンである。一つの態様において、当該ホスホニウムカチオンは、以下の式
【化４】
2014528950.tif 000005
［式中、
Ｘｌ、Ｘ２及びＸ３は、それぞれ独立してＣ１−１２アルキル、Ｃ６−１０アリール、又はＣ１−１２アルキレン−Ｃ６−１０−アリールを表し、ここでアルキル及びアルキレン基及び部分は、１、２又は３つのハロゲン原子、ヒドロキシル、Ｃ１−１２アルコキシ又はハロ−Ｃ１−１２−アルコキシ基で置換され、又は置換されず、各アリール基又は部分は、１、２又は３つのハロゲン原子、ヒドロキシル、Ｃ１−１２アルコキシ又はハロ−Ｃ１−１２−アルコキシ基で置換され、又は置換されない］
で表される。
【００６９】
一つの態様において、各アルキル又はアルキレン基又は部分は、１つ以上の例えばハロゲン原子で置換されず、又は置換される。一つの態様において、当該アルキル及び／又はアルキレン基又は部分は、置換されない。
【００７０】
一つの態様において、Ｘｌ、Ｘ２及びＸ３は、それぞれＣ６−１０アリール基、例えばフェニル基である。一つの態様において、Ｘｌ、Ｘ２及びＸ３は同一である。
【００７１】
一つの態様において、ミトコンドリア標的化基は、以下の式
【化５】
2014528950.tif 000006
で表されるトリフェニルホスホニウムカチオンである。
【００７２】
硫化水素を放出する基は、１つ、２つ又は３つ以上のミトコンドリア標的化基と連結してもよい。硫化水素を放出する基が１つ以上のミトコンドリア標的化基と連結する場合、各ミトコンドリア標的化基は、同一であってもなくてもよい。一つの態様において、硫化水素を放出する基は、１つのミトコンドリア標的化基と連結している。
【００７３】
一つの態様において、ミトコンドリア標的化基は、硫化水素を放出する基と共有結合している。
【００７４】
各ミトコンドリア標的化基は、硫化水素を放出する基と、直接、又はリンカー（Ｌ）を介して連結する。２つ以上のミトコンドリア標的化基が存在する場合、全てのミトコンドリア標的化基は、硫化水素を放出する基と直接連結してもよく、又は全てのミトコンドリア標的化基は、硫化水素を放出する基とリンカーを介して連結してもよい。
【００７５】
一つの態様において、１つのミトコンドリア標的化基が、硫化水素を放出する基と、リンカーを介して連結している。
【００７６】
前記リンカー（Ｌ）は、硫化水素を放出する基と、ミトコンドリア標的化基とを連結する、任意の部分である。
【００７７】
前記リンカー（Ｌ）は、分子量１４〜１０００、例えば２８〜５００、例えば４４〜３００である。
【００７８】
一つの態様において、前記リンカー（Ｌ）は、直接結合、又はハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルコキシ、Ｃ１−１２アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−１２−アルキル、ハロ−Ｃ１−１２−アルキル及びハロ−Ｃ１−１２−アルコキシ基から選択される１つ以上の置換基で置換され、又は置換されないＣ１−２０アルキレンである。当該アルキレン鎖中の０個又は１〜１０個の炭素原子は、Ｃ６−１０アリーレン、−０−、−Ｓ−、−ＮＲ４−、−Ｃ（０）ＮＲ４−、−ＮＲ４Ｃ（０）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（０）０−部分から選択されるスペーサー部分により置き換えられる。は、水素又はＣ１−１２アルキルであり、Ｃ６−１０アリーレンは、置換されない、又はハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルキル及びＣ１−１２アルコキシ基から選択される１、２、３、４個の置換基により置換される。
【００７９】
一つの態様において、前記スペーサー部分は、Ｃ６−１０アリーレン、−０−、−Ｓ−、−ＮＲ４−、−Ｃ（０）ＮＲ４−、−ＮＲ４Ｃ（０）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（０）０−部分から選択される。一つの態様において、アルキレン基は、１、２、３、４又は５個のスペーサー部分からなる基からなる。一つの態様において、当該アルキレン基は、１〜３個のスペーサー部分からなる。一つの態様において、当該アルキレン基は、１又は２個のスペーサー部分からなる。
【００８０】
一つの態様において、スペーサー部分は、０〜２個のＣ６−１０アリーレン、０〜２個の−Ｓ−、０〜２個の−０−、０〜２個の−ＮＲ４−、０〜２個の−Ｃ（０）ＮＲ４−、０〜２個の−ＮＲ４Ｃ（０）−、０〜２個の−Ｃ（Ｏ）−、０〜２個の−ＯＣ（Ｏ）−、及び０〜２個の−Ｃ（０）０−部分を含む。一つの態様において、前記リンカーは１つ以上のＣ６−１０アリーレン及び１つ以上のスペーサー部分を含む。
【００８１】
一つの態様において、前記アルキレン基はＣ１−２０アルキレンである。一つの態様において、当該アルキレン基は、Ｃ２−１８アルキレン、例えばＣ３−１６アルキレンである。
【００８２】
一つの態様において、前記アルキレンは、直鎖アルキレンである。
【００８３】
一つの態様において、前記アルキレンは、置換されない、又は１つ以上、例えば１又は２個のハロゲン原子で置換される。一つの態様において、当該アルキレン基は、置換されない。
【００８４】
一つの態様において、前記アリーレンスペーサー部分は、置換されない、１、２、３個のハロゲン原子、ヒドロキシ基又はＣ１−１２アルキル基で置換される。アリーレンスペーサー部分が２つ以上の置換基を担持する場合、当該置換基は同一であってもなくてもよい。一つの態様において、アリーレンスペーサー部分は置換されない。
【００８５】
一つの態様において、前記リンカー（Ｌ）は、以下の式
−Ｌ’−Ｙ−Ｚ−
［式中、
Ｌ’は直接結合又は直鎖Ｃ１−２０アルキレン基、例えば直鎖Ｃ２−１８アルキレン基であり、当該基は、置換されない、又はハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルコキシ、Ｃ１−１２アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−１２−アルキル、ハロ−Ｃ１−１２−アルキル及びハロ−Ｃ１−１２−アルコキシ基から選択される１つ以上の置換基で置換される；
Ｙは、直接結合、−ＯＣ（Ｏ）−又は−Ｃ（０）０−を表し；
Ｚは、直接結合又はフェニレン基を表し、当該基は、置換されない、又はハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルキル及びＣ１−１２アルコキシ基から選択される１、２、３、４個の置換基で置換される］
で表される。
【００８６】
一つの態様において、前記アルキレン基は、置換されない、又はハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルコキシ、Ｃ１−１２アルキルから選択される１，２、３個の置換基で置換される。一つの態様において、当該アルキレン基は置換されない。
【００８７】
一つの態様において、Ｌ’は、以下の式
−（ＣＨ２）ｎ−
［式中、
Ｎは１〜１９の整数である］
で表される直鎖アルキレン基である。
【００８８】
一つの態様において、ｎは２〜１９の整数である。一つの態様において、ｎは２〜１８、２〜１７、２〜１６、２〜１５、３〜１９、３〜１８、３〜１７、３〜１６、３〜１５、４〜１９、４〜１８、４〜１７、４〜１６、又は４〜１５の整数である。一つの態様において、ｎは２、４、５、７、９、１１又は１５のいずれかである。
【００８９】
一つの態様において、Ｙは−Ｃ（０）０−基である。
【００９０】
一つの態様において、Ｚはパラフェニレン基である。
【００９１】
一つの態様において、−Ｙ−Ｚ−部分は、以下の式
【化６】
2014528950.tif 000007
で表される。
【００９２】
一つの態様において、硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含む化合物は、以下の式
ＭＴＧ−Ｌ−Ｓ
［式中、
Ｓは、
【化７】
2014528950.tif 000008
（式中、
ＸはＳ、Ｏ又はＮ−ＯＨを表し；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して水素、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ１−１２アルコキシ又はＣ６−１０アリールを表し、それぞれＣ１−１２アルキル、Ｃ１−１２アルコキシ又はＣ６−１０アリール基は、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルコキシ、Ｃ１−１２アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−１２−アルキル、ハロ−Ｃ１−１２−アルキル及びハロ−Ｃ１−１２−アルコキシ置換基から選択される１つ以上の置換基で置換され、又は置換されない）
から選択される硫化水素を放出する基であり；
Ｌは、直接結合又はリンカーであり、当該リンカーは、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルコキシ、Ｃ１−１２アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−１２−アルキル、ハロ−Ｃ１−１２−アルキル及びハロ−Ｃ１−１２−アルコキシから選択される１つ以上の置換基で置換され、又は置換されたＣ１−２０アルキレンであり、ここで、当該アルキレン鎖中の０又は１〜１０個の炭素原子が、Ｃ６−１０アリーレン、−０−、−Ｓ−、−ＮＲ４−、−Ｃ（０）ＮＲ４−、−ＮＲ４Ｃ（０）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（０）０−部分から選択されるスペーサー部分で置換され、当該Ｒ４は水素又はＣ１−１２アルキルであり、当該Ｃ６−１０アリーレン部分は、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１−１２アルキル及びＣ１−１２アルコキシ基から選択される１、２、３又は４個の置換基で置換され、又は置換されない；そして
ＭＴＧは、ミトコンドリア標的化基を表す］
で表される化合物、又はその医薬として許容される塩である。
【００９３】
式ＭＴＧ−Ｌ−Ｓで表される化合物において、ミトコンドリア標的化基（ＭＴＧ）、リンカー（Ｌ）及び硫化水素を放出する基（Ｓ）は、上記のように定義される。
【００９４】
一つの態様において、前記化合物は、以下：
【化８】
2014528950.tif 000009
から選択されるカチオンを含む。
【００９５】
一つの態様において、硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含む化合物は、上記の構造を有するカチオン及びハロゲンであるアニオン（即ちＦ−、Ｃｌ−又はＢｒ−）を含有する。一つの態様において、当該アニオンは、臭素アニオンである。
【００９６】
化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含む化合物は、本明細書中に記載の方法を使用して、又はそのありふれた変法により、又は当該技術分野で既知の方法を使用して、調製されてもよい。
【００９７】
ヒト又は動物の治療
硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含む化合物は、手術又は治療によるヒト又は動物の処置に使用されてもよい。一つの態様において、当該動物は哺乳類である。
【００９８】
硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含む化合物は、硫化水素のインビボ放出により改善が見込まれる疾患又は障害の治療又は予防に使用されてもよい。
【００９９】
本発明は、硫化水素のインビボ放出により改善が見込まれる疾患又は障害の治療又は予防に使用される医薬の製造における前記化合物の使用にも関する。
【０１００】
本発明は、硫化水素のインビボ放出により改善が見込まれる疾患又は障害に罹患した患者を治療する方法も提供し、当該方法は、硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含む化合物を患者に投与することを含む。
【０１０１】
驚くべきことに、硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含む化合物は、細胞内の硫化水素の生体利用効率を、特にミトコンドリア標的化基を有しない硫化水素を放出する他の化合物と比較して、促進する。
【０１０２】
一つの態様において、硫化水素の放出により改善が見込まれる疾患又は障害は、慢性炎症性疾患又は障害、急性炎症性疾患又は障害、ミトコンドリア機能不全に関連する疾患又は障害、大小の血管症に関連する疾患又は障害、神経変性疾患、加齢に関連する疾患又は障害、臓器不全に関連する疾患又は障害、急性及び／又は慢性の腎損傷に関連する疾患又は障害、又は細胞の異常増殖に関連する疾患又は障害である。
【０１０３】
慢性炎症性疾患又は障害の例は、炎症性関節疾患、関節リウマチ、喘息、慢性閉塞性肺疾患、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、肝炎又はアテローム性動脈硬化を含む。
【０１０４】
急性炎症性疾患又は障害の例は、内毒素性ショック、敗血症、又は出血性ショックを含む。
【０１０５】
ミトコンドリア機能不全に関連する疾患又は障害の例は、変形性関節炎、骨粗鬆症、又は糖尿病（Ｉ型及びＩＩ型、例えばＩＩ型糖尿病）を含む。
【０１０６】
大小の血管症に関連する疾患又は障害の例は、肥満の血管系合併症、糖尿病、代謝症候群、自然の加齢、高血圧、心筋梗塞、虚血、虚血性心疾患、再かん流傷害、低酸素症、虚血再かん流傷害、低酸素再かん流傷害、網膜症又は神経障害を含む。
【０１０７】
神経変性疾患の例は、アルツハイマー症、筋萎縮性側索硬化症、運動ニューロン疾患、パーキンソン症、ハンチンドン症、タウオパシー（ｔａｕｏｐａｔｈｙ）、錐体外路及び運動障害、又はニューロン、アストロサイト又はグリア細胞の死滅が顕著な神経疾患（例えば毛細血管拡張性運動失調、大脳皮質基底核変性症若しくは進行性核上まひ）を含む。
【０１０８】
加齢に関連する疾患又は障害の例は、大小の血管症、又は血管性認知症を含む。
【０１０９】
臓器不全に関連する疾患又は障害の例は、肺、腎臓又は肝臓の臓器不全に関連する。
【０１１０】
慢性及び／又は急性腎損傷に関連する疾患又は障害の例は、虚血再かん流傷害、高ホモシステイン血症及び高脂血症を含む。
【０１１１】
細胞の異常増殖に関連する疾患又は障害の例は、癌を含む。
【０１１２】
Ｈ２Ｓの生産は、抗癌活性と連関している。具体的には、非標的化Ｈ２Ｓ供与化合物ＧＹＹ４１３７（モルホリン−４−イウム４−メトキシフェニル（モルホリノ）ホスフィノジチオエート）は、インビトロ及びインビボで、抗癌作用を示すことが報告されている（Ｚ．Ｗ．  ｅｔ  ａｌ，  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ，  ２０１１，  ６（６）：  ｅ２１０７７）。
【０１１３】
一般に、非標的化Ｈ２Ｓ供与剤ＧＹＹ４１３７は、ミトコンドリア標的化Ｈ２Ｓ供与剤ＡＰ３９により示されるべきものとも予想され、ＡＰ３９は、通常、ＧＹＹ４１３７よりも顕著に低い濃度で関連する効果を誘導することが見出されるべきことが期待される（例えば図４、１４、１５及び１６のデータとそれらの考察を参照されたい）。
【０１１４】
Ｈ２Ｓの血漿レベルが加齢に伴い低下すること、並びにＨ２Ｓレベルが全身的な高血圧及び毛細血管の機能不全と強く相関することが報告されている。内生的及び外生的Ｈ２Ｓが血管拡張作用を有することも報告されている（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ，  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，  ２００８，  １  １７，  ２３５１−６０）。
【０１１５】
Ｈ２Ｓがインビボで抗酸化剤として作用することを示す証拠が存在する。細胞培養実験において、ＮａＳＨから生産されるＨ２Ｓ又はＨＳ−が、有害な炎症促進酸化剤、例えば過酸化水素（Ｈ２０２）、スーパーオキシド（０２−）及び一酸化窒素（ＮＯ）等を「掃除」することが示されている。インビボで硫化水素を放出する化合物は、更に、炎症性疾患又は過剰に活性なアポトーシス（即ちコントロール不能な細胞死）により引き起こされる疾患の治療における治療用途を有し得る。また、Ｈ２Ｓを緩慢に放出する化合物が、内毒素性ショックにおける抗炎症効果を有することも示されている（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ，  Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ２００９，  ４７，  １０３−１１３）。
【０１１６】
Ｈ２Ｓの血漿レベルは加齢とともに低下する。Ｈ２Ｓの血漿レベルは、肥満の患者において低いことも見出されている。
【０１１７】
一つの態様において、当該患者は高齢の患者である。一つの態様において、当該患者は５０歳以上、例えば５５歳以上、例えば６０歳以上である。
【０１１８】
一つの態様において、前記患者のＢＭＩは２３ｋｇ／ｍ２以上、例えば２５ｋｇ／ｍ２以上、例えば３０ｋｇ／ｍ２以上である。ＢＭＩは、体重を身長の二乗で割って求める。
【０１１９】
硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含む化合物をヒト又は動物に投与するために、経口、直腸、膣内、非経口（例えば筋肉内、腹腔内、動脈内、静脈内、気管支内、皮下、真皮内、血管内又は動脈内等）、経鼻、口腔又は舌下投与経路等の、任意の適切な投与方法が使用される。投与の具体的な様式や投与計画は、患者の年齢、体重及び状態を含む多くの要素を考慮して、担当医により選択され得る。
【０１２０】
硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含む化合物を有効成分として含有する医薬組成物は、通常、使用される具体的な投与の方式に依存して、適切な医薬として許容される賦形剤、担体、又は希釈剤を用いて製剤化され得る。例えば、非経口製剤は、通常、生理食塩水又はバランス塩溶液等の医薬的に又は生理的に許容される液体をビヒクルとして使用する注射液である。一方、経口製剤は、錠剤又はカプセル等の固体又は溶液又は懸濁液等の液体であってもよい。
【０１２１】
本発明は、硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含む化合物、又はその医薬として許容される塩、及び医薬として許容される賦形剤、希釈剤又は担体を含有する、医薬組成物を提供する。
【０１２２】
前記医薬組成物は、単位投与形態、即ち単位用量、又は単位用量の数倍若しくは数分の一の有効成分を含有する個別のポーションの形態で製剤化されてもよい。適切な投与形態として、錠剤、トローチ、分散剤、懸濁剤、溶液、カプセル、クリーム、軟膏及びエアロゾルが挙げられる。
【０１２３】
患者に提供される化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含む化合物の量は、問題の具体的な化合物の活性に依存し得る。更なる要素として、治療される状態、治療中の患者の体質、及び治療中の状態の重症度が挙げられる。前記化合物の投与のタイミングは、その使用に依存して、医療関係者により決定されるべきである。通常の医師は、他の薬物と同様に、前記化合物も極端な高用量で毒性を生じ得ることを認識し得る。
【０１２４】
本発明は、（ｉ）前記硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物又はその医薬として許容される塩、及び（ｉｉ）手術又は治療によるヒト又は動物の処置に使用される適切な有効成分を含有する組み合わせにも関する。手術又は治療によるヒト又は動物の処置に使用される適切な有効成分は、硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物又はその医薬として許容される塩と異なる。
【０１２５】
一つの態様において、前記有効成分は、上記に記載したような、慢性炎症性疾患又は障害、急性炎症性疾患又は障害、ミトコンドリア機能不全に関連する疾患又は障害、大小の血管症に関連する疾患又は障害、神経変性疾患、加齢に関連する疾患又は障害、又は臓器不全に関連する疾患又は障害の治療に用いられるものである。
【０１２６】
適切な有効成分の例として、ニフェディピン及びリトドリンが挙げられる。
【０１２７】
硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物は、単独で、又は硫化水素のインビボ放出により改善が見込まれる疾患又は障害を治療するのに有用な１つ以上の追加の有効成分と組み合わせて提供されてもよい。２つ以上の化合物（即ち有効成分）が、同時に、個別に、又は連続で投与されてもよい。前記有効成分は、組み合わせ組成物として投与されてもよい。
【０１２８】
植物の処理
インビボで緩慢に硫化水素を放出する化合物は、植物において気孔の閉口を防止することが見出されている（Ｍ．  Ｌｉｓｊａｋ  ｅｔ  ａｌ，  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｃｏｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  ２０１０，  ４８（１２），  ９３１−５）。ミトコンドリアは、気孔の開口のサイズを制御する孔辺細胞等の植物細胞中に存在する。硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物は、植物において、気孔の閉口の防止又は減少、気孔の開口を引き起こすのに使用され得る。当該化合物は、植物の生育の促進又は植物の除草的処理のため、植物を処理するのに使用され得る。
【０１２９】
本発明の一つの側面は、気孔を持つ植物等の植物に関する。気孔は、苔類を除く全ての地上植物のグループの胞子体世代に存在する。
【０１３０】
一つの態様において、前記植物は苔類ではない胞子体世代の植物である。
【０１３１】
一つの態様において、前記植物は単子葉類又は双子葉類である。
【０１３２】
一つの態様において、前記植物は単子葉類である。適切な単子葉類の例として、穀物（例えばイネ、ムギ、トウモロコシ等）、牧草、サトウキビ、竹、椰子の仲間（Ａｒｅｃａｃｅａｅ）、バナナの仲間（Ｍｕｓａｃｅａｅ）、生姜の仲間（Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ）、ニンニクの仲間（Ａｌｌｉａｃｅａｅ）、ユリ、ラッパズイセン、アイリス、アマリリス、ラン、カンナ、ツリガネスイセン及びチューリップが挙げられる。
【０１３３】
一つの態様において、前記植物は根菜（即ち地下の植物構造が食用となる植物）である。根菜である適切な植物の例として、キャッサバ、サツマイモ、甜菜、ニンジン、ルタバガ、蕪、パースニップ、大根、ヤムイモ、ホースラディッシュ、ササフラス、アンゼリカ、サルサパリラ及びリコリスが挙げられる。
【０１３４】
一つの態様において、前記植物は、アラビドプシス（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）属の仲間である。
【０１３５】
一つの態様において、前記植物は、カプシクム（Ｃａｐｓｉｃｕｍ）属の仲間である。
【０１３６】
一つの態様において、前記植物は、０．５μΜ〜２５０μΜの濃度、例えば１μΜ〜２００μΜ、例えば１０μΜ〜２００μΜの濃度の、水溶液の状態の前記化合物で処理される。
【０１３７】
一つの態様において、前記植物は、０．０１μΜ〜１５００μΜの濃度、例えば０．１μΜ〜１０００μΜの濃度の、水溶液の状態の前記化合物で処理される。
【０１３８】
一つの態様において、前記植物は、１０ｎＭ〜４５０ｎＭの濃度、例えば５０ｎＭ〜３５０ｎＭ、例えば１００ｎＭ〜２５０ｎＭの濃度の、水溶液の状態の前記化合物で処理される。
【０１３９】
一つの態様において、前記植物は、（ｉ）１つ以上の植物栄養素、又は（ｉｉ）１つ以上の除草剤と、同時に、並行して（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）、別々に、又は連続して、前記化合物で処理される。
【０１４０】
本発明の１つの側面は、植物の生育を促進させるための植物の処理に関する。植物の生育環境にとって、植物の生育を促進するようにコントロールすることは必須である。例えば、当該生育環境は、温室又は圃場内でコントロールされてもよい。一般に、これは、植物の環境条件のモニタリング及び必要に応じての１つ以上の植物栄養素の供給を含んでもよい。
【０１４１】
一つの態様において、前記植物は屋内で生育する。
【０１４２】
一つの態様において、植物の生育環境をコントロールする場合、温度、湿度、土壌の含水量、光量、光照射時間、ＣＯ２濃度及び／又は植物に供給する植物栄養素の量がコントロールされる。
【０１４３】
植物の光周期及び応答は様々で、適切な光強度も様々である。生育を促進するための具体的な生育環境の条件及び使用される硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物の量は、処理される具体的な植物の種類に依存し得る。しかしながら、これらは、一般的に利用可能な技術を使用して当業者により容易に決定され得る。
【０１４４】
一つの態様において、前記生育環境の相対湿度は６０％以上、例えば７５％以上、例えば８０％以上である。
【０１４５】
一つの態様において、前記生育環境の温度は１５〜３０℃、例えば１８〜２５℃である。
【０１４６】
一つの態様において、前記植物は、Ｃ０２濃度４００ｐｐｍ〜１２００ｐｐｍ、例えば４５０ｐｐｍ〜１０００ｐｐｍ、例えば５００ｐｐｍ〜８００ｐｐｍ、又は５５０ｐｐｍ〜６００ｐｐｍの条件下で、で処理される。Ｃ０２の量を表すｐｐｍは、一般に、植物の生育環境の大気中のＣ０２の量を意味する。
【０１４７】
北半球において、晩秋、冬及び早春の季節に、植物は一般に、相対的に低いレベルの日照に曝される。そのような条件下、生育光等の人工の光源の助けがなければ植物の生育は困難となり得る。本発明は、人工光源の補助を要さず相対的に低レベルの光で植物に光合成させて生育を続行させることを可能にし得る。
【０１４８】
一つの態様において、前記植物は、１ｌｕｘ〜１０００ｌｕｘ、例えば５ｌｕｘ〜５００ｌｕｘ、例えば５０ｌｕｘ〜２５０ｌｕｘの光量の条件下、硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物で処理される。
【０１４９】
本発明は、通常暗黒又は低光量下で起こる、植物の蒸散を促進することにより、植物の生育を促進してもよい。
【０１５０】
一つの態様において、前記植物は、１０−４ｌｕｘ〜０．５ｌｕｘ、例えば１０−３ｌｕｘ〜０．２５ｌｕｘ、例えば０．０１〜０．１ｌｕｘの光量の条件下、本発明の化合物で処理される。
【０１５１】
本発明は、光が充分で植物に十分に栄養素が供給される条件下の日中に植物の生育を改善してもよい。
【０１５２】
一つの態様において、前記植物は、２０００ｌｕｘ〜５０００ｌｕｘ、例えば２５００ｌｕｘ〜４０００ｌｕｘ、例えば３０００ｌｕｘ〜３５００ｌｕｘの光量の条件下、硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物で処理される。
【０１５３】
一つの態様において、前記植物は、一日あたり８〜１６時間光にさらされる。
【０１５４】
硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物は、植物の生育促進を補助する１つ以上の植物栄養素と共に使用されてもよい。適切な植物栄養素は、窒素（例えば硝酸）、リン（例えばリン酸塩）、カリウム、カルシウム（例えば石灰）、マグネシウム、硫黄、鉄、マンガン、亜鉛、銅、ホウ素、塩素、及び／又はモリブデンの供給源を提供する鉱物又は化合物である。肥料は、１つ以上の植物栄養素を含んでもよい。
【０１５５】
本発明の他の側面は、植物の除草処理に関する。硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物で植物を処理すると、その気孔は開口が妨げられる。高温で乾燥した条件で、当該植物は乾燥又は枯死するまで蒸散を継続する。当該処理は、病原体が気孔を通じて植物内に侵入することを可能とし、当該植物を枯死させ得る疾患を引き起こしてもよい。
【０１５６】
一つの態様において、前記植物は、日中の平均気温が２５℃、例えば３０℃以上の条件下で、本発明の化合物で処理される。
【０１５７】
一つの態様において、前記植物の環境の相対湿度は５０％未満、例えば４０％未満、例えば３０％未満、又は２０％未満、又は１０％未満である。
【０１５８】
一つの態様において、前記植物は、光強度が１０，０００ｌｕｘ以上、例えば２５，０００ｌｕｘ以上、例えば５０，０００ｌｕｘ以上、例えば１００，０００ｌｕｘ以上、例えば１２０，０００ｌｕｘ以上の条件下で、硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物で処理される。
【０１５９】
一つの態様において、前記植物は、雑草、例えばアイランサス・アルティシマ（Ａｉｌａｎｔｈｕｓ  ａｌｔｉｓｓｉｍａ）、ギョウギシバ（Ｂｅｒｍｕｄａ  ｇｒａｓｓ）、ヒルガオ（ｂｉｎｄｗｅｅｄ）オニオオバコ（ｂｒｏａｄｌｅａｆ  ｐｌａｎｔａｉｎ）、ゴボウ（ｂｕｒｄｏｃｋ）、クローバー、クリーピングチャーリー（ｃｒｅｅｐｉｎｇ  Ｃｈａｒｌｉｅ）、タンポポ、アキノキリンソウ、イタドリ（Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｋｎｏｔｗｅｅｄ）、クズ（ｋｕｄｚｕ）、リーフィトウダイグサ（ｌｅａｆｙ  ｓｐｕｒｇｅ）オオアザミ（ｍｉｌｋ  ｔｈｉｓｔｌｅ）、ツタウルシ（ｐｏｉｓｏｎ  ｉｖｙ）、ブタクサ（ｒａｇｗｅｅｄ，  ｓｏｒｒｅｌ）、オトギリソウ（Ｓｔ  Ｊｏｈｎ’ｓ  ｗｏｒｔ）、ウルシ（ｓｕｍａｃ）、ノラニンジン（ｗｉｌｄ  ｃａｒｒｏｔ）、カタバミ（ｗｏｏｄ  ｓｏｒｒｅｌ）、コモンサワギク（ｃｏｍｍｏｎ  ｒａｇｗｏｒｔ）、スペアアザミ（ｓｐｅａｒ  ｔｈｉｓｔｌｅ）、クリーピング又は野生アザミ（ｃｒｅｅｐｉｎｇ  ｏｒ  ｆｉｅｌｄ  ｔｈｉｓｔｌｅ）、ナガバギシギシ（ｃｕｒｌｅｄ  ｄｏｃｋ）、ブロードリーフドック（ｂｒｏａｄ  ｌｅａｖｅｄ  ｄｏｃｋ）、ハコベ（ｃｈｉｃｋｗｅｅｄ）、又はイヌビエ（ｂａｒｎｙａｒｄ  ｇｒａｓｓ）等である。
【０１６０】
硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物は、１つ以上の除草剤と共に使用されてもよい。当該化合物は植物の気孔の閉口を妨げることにより除草剤の効果を増大させるものであってもよい。
【０１６１】
一つの態様において、前記除草剤は、発芽後（ｐｏｓｔ−ｅｍｅｒｇｅｎｔ）除草剤である。発芽後除草剤は、一般に、植物又は作物が発芽した後に施用される。
【０１６２】
適切な除草剤の例として、アセトクロール（ａｃｅｔｏｃｈｌｏｒ）、アシフルオルフェン（ａｃｉｆｌｕｏｒｆｅｎ）、アクロニフェン（ａｃｌｏｎｉｆｅｎ）、アクロレイン（ａｃｒｏｌｅｉｎ）、アラクロール（ａｌａｃｈｌｏｒ）、アロキシジム（ａｌｌｏｘｙｄｉｍ）、アメトリン（ａｍｅｔｒｙｎ）、アミカルバゾン（ａｍｉｃａｒｂａｚｏｎｅ）、アミドスフフロン（ａｍｉｄｏｓｕｌｆｕｒｏｎ）、アミノピラリド（ａｍｉｎｏｐｙｒａｌｉｄ）、アミトロール（ａｍｉｔｒｏｌｅ）、アニロフォス（ａｎｉｌｏｆｏｓ）、アスラム（ａｓｕｌａｍ）、アトラジン（ａｔｒａｚｉｎｅ）、アジムスルフロン（ａｚｉｍｓｕｌｆｕｒｏｎ）、ベフルブチアミド（ｂｅｆｌｕｂｔｉａｍｉｄ）、ベナゾリン（ｂｅｎａｚｏｌｉｎ）、ベネフィン（ｂｅｎｅｆｉｎ）、ベンスルフロン（ｂｅｎｓｕｌｆｕｒｏｎ）、ベンスリド（ｂｅｎｓｕｌｉｄｅ）、ベンタゾン（ｂｅｎｔａｚｏｎ）、ベンゾフェナプ（ｂｅｎｚｏｆｅｎａｐ）、ビフェノクス（ｂｉｆｅｎｏｘ）、ビスピリバック（ｂｉｓｐｙｒｉｂａｃ）、ブロマシル（ｂｒｏｍａｃｉｌ）、ブロモキシニル（ｂｒｏｍｏｘｙｎｉｌ）、ブタクロール（ｂｕｔａｃｈｌｏｒ）、ブタフェナシル（ｂｕｔａｆｅｎａｃｉｌ）、ブトロキシジム（ｂｕｔｒｏｘｙｄｉｍ）、ブチレート（ｂｕｔｙｌａｔｅ）、カコジル酸（ｃａｃｏｄｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）、カルベタミド（ｃａｒｂｅｔａｍｉｄｅ）、カルフェントラゾン（ｃａｒｆｅｎｔｒａｚｏｎｅ）、クロルスルフロン（ｃｈｌｏｒｓｕｌｆｕｒｏｎ）、クロルトルロン（ｃｈｌｏｒｔｏｌｕｒｏｎ）、シンメチリン（ｃｉｎｍｅｔｈｙｌｉｎ）、クレトジム（ｃｌｅｔｈｏｄｉｍ）、クロジンフォプ（ｃｌｏｄｉｎｆｏｐ）、クロマゾン（ｃｌｏｍａｚｏｎｅ）、クロピラリド（ｃｌｏｐｙｒａｌｉｄ）、クロランスラム−メズチル（ｃｌｏｒａｎｓｕｌａｍ−ｍｅｚｔｈｙｌ）、シアナジン（ｃｙａｎａｚｉｎｅ）、シクロエート（ｃｙｃｌｏａｔｅ）、シクロスフファムロン（ｃｙｃｌｏｓｕｌｆａｍｕｒｏｎ）、シクロキシジム（ｃｙｃｌｏｘｙｄｉｍ）、シハロフォップ（ｃｙｈａｌｏｆｏｐ）、ＤＣＰＡ、２，４−Ｄ、ダゾメット（ｄａｚｏｍｅｔ）、デスメジファム（ｄｅｓｍｅｄｉｐｈａｍ）、デスメトリン（ｄｅｓｍｅｔｒｙｎ）、ジカムバ（ｄｉｃａｍｂａ）、ヂクロベニル（ｄｉｃｈｌｏｂｅｎｉｌ）、ジクロルプロップ（ｄｉｃｈｌｏｒｐｒｏｐ）、ジエロフォップ（ｄｉｅｌｏｆｏｐ）、ジクロスラム（ｄｉｃｌｏｓｕｌａｍ）、ジフェンズクアト（ｄｉｆｅｎｚｏｑｕａｔ）、ジフルフェニカン（ｄｉｆｌｕｆｅｎｉｃａｎ）、ジフルフェンゾピル（ｄｉｆｌｕｆｅｎｚｏｐｙｒ）、ジメテナミド（ｄｉｍｅｔｈｅｎａｍｉｄ）、ジクアト（ｄｉｑｕａｔ）、ジチオピル（ｄｉｔｈｉｏｐｙｒ）、ジウロン（ｄｉｕｒｏｎ）、ＤＳＭＡ、エントタル（ｅｎｄｏｔｈａｌｌ）、ＥＰＴＣ、エタルフルラリン（ｅｔｈａｌｆｌｕｒａｌｉｎ）、エタメトスルフロン（ｅｔｈａｍｅｔｓｕｌｆｕｒｏｎ）、エトフメサート（ｅｔｈｏｆｕｍｅｓａｔｅ）、エトキシスルフロン（ｅｔｈｏｘｙｓｕｌｆｕｒｏｎ）、フェノキサプロップ（ｆｅｎｏｘａｐｒｏｐ）、フェントラザミド（ｆｅｎｔｒ���ｚａｍｉｄｅ）、フラザスルフロン（ｆｌａｚａｓｕｌｆｕｒｏｎ）、フロラスラム（ｆｌｏｒａｓｕｌａｍ）、フルアジフォップ−Ｐ（ｆｌｕａｚｉｆｏｐ−Ｐ）、フルカルバゾン−ナトリウム（ｆｌｕｃａｒｂａｚｏｎｅ−ｓｏｄｉｕｍ）、フルフェナセット（ｆｌｕｆｅｎａｃｅｔ）、フルメツラム（ｆｌｕｍｅｔｓｕｌａｍ）、フルミクロラック（ｆｌｕｍｉｃｌｏｒａｃ）、フルミオキサジム（ｆｌｕｍｉｏｘａｚｉｎ）、フルオメツロン（ｆｌｕｏｍｅｔｕｒｏｎ）、フルピルスルフロン（ｆｌｕｐｙｒｓｕｌｆｕｒｏｎ）、フルルクロリドン（ｆｌｕｒｃｈｌｏｒｉｄｏｎｅ）、フルリドン（ｆｌｕｒｉｄｏｎｅ）、フルロキシピル（ｆｌｕｒｏｘｙｐｙｒ）、フルチアセット（ｆｌｕｔｈｉａｃｅｔ）、フォラムスルフロン（ｆｏｒａｍｓｕｌｆｕｒｏｎ）、フォサミド（ｆｏｓａｍｉｎｅ）、グルフォシネート（ｇｌｕｆｏｓｉｎａｔｅ）、グリホセート（ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ）、ハロスルフロン（ｈａｌｏｓｕｌｆｕｒｏｎ）、ハロキシフォップ（ｈａｌｏｘｙｆｏｐ）、ヘキサジノン（ｈｅｘａｚｉｎｏｎｅ）、イマザメタベンズ（ｉｍａｚａｍｅｔｈａｂｅｎｚ）、イマザモクス（ｉｍａｚａｍｏｘ）、イマザピック（ｉｍａｚａｐｉｃ）、イマザピル（ｉｍａｚａｐｙｒ）、イマザキン（ｉｍａｚａｑｕｉｎ）、イマゼタピル（ｉｍａｚｅｔｈａｐｙｒ）、ヨードスルフロン（ｉｏｄｏｓｕｌｆｕｒｏｎ）、イソキサベン（ｉｓｏｘａｂｅｎ）、イソキサフルトール（ｉｓｏｘａｆｌｕｔｏｌｅ）、ラクトフェン（ｌａｃｔｏｆｅｎ）、リヌロン（ｌｉｎｕｒｏｎ）、メコプロップ（ｍｅｃｏｐｒｏｐ）、メフルイジド（ｍｅｆｌｕｉｄｉｄｅ）、メソトリオン（ｍｅｓｏｔｒｉｏｎｅ）、メタム（ｍｅｔｈａｍ）、メトラクロール（ｍｅｔｏｌａｃｈｌｏｒ）、メトリブジン（ｍｅｔｒｉｂｕｚｉｎ）、メツルフロン（ｍｅｔｓｕｌｆｕｒｏｎ）、ＭＳＭＡ、ナプロパミド（ｎａｐｒｏｐａｍｉｄｅ）、マプタラム（ｎａｐｔａｌａｍ）、ニコスルフロン（ｎｉｃｏｓｕｌｆｕｒｏｎ）、ノルフルラゾン（ｎｏｒｆｌｕｒａｚｏｎ）、オリザリン（ｏｒｙｚａｌｉｎ）、オキサジアゾン（ｏｘａｄｉａｚｏｎ）、オキサスルフロン（ｏｘａｓｕｌｆｕｒｏｎ）、オキシフルオルフェン（ｏｘｙｆｌｕｏｒｆｅｎ）、パラコート（ｐａｒａｑｕａｔ）、ペブレート（ｐｅｂｕｌａｔｅ）、ペラルゴン酸（ｐｅｌａｒｇｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ペンジメタリン（ｐｅｎｄｉｍｅｔｈａｌｉｎ）、フェンメジファム（ｐｈｅｎｍｅｄｉｐｈａｍ）、ピクロラム（ｐｉｃｌｏｒａｍ）、ピコリナフェン（ｐｉｃｏｌｉｎａｆｅｎ）、ピノキサデン（ｐｉｎｏｘａｄｅｎ）、プリミスルフロン（ｐｒｉｍｉｓｕｌｆｕｒｏｎ）、プロジアミン（ｐｒｏｄｉａｍｉｎｅ）、プロメトン（ｐｒｏｍｅｔｏｎ）、プロメトリン（ｐｒｏｍｅｔｒｙｎ）、プロナミド（ｐｒｏｎａｍｉｄｅ）、プロパニル（ｐｒｏｐａｎｉｌ）、プロパキザフォップ（ｐｒｏｐａｑｕｉｚａｆｏｐ）、プロポキシカルバゾン（ｐｒｏｐｏｘｙｃａｒｂａｚｏｎｅ）、プロスルフォカルブ（ｐｒｏｓｕｌｆｏｃａｒｂ）、プロパジン（ｐｒｏｐａｚｉｎｅ）、プロスルフロン（ｐｒｏｓｕｌｆｕｒｏｎ）、ピラゾン（ｐｙｒａｚｏｎ）、ピ��スルフロン−エチル（ｐｙｒａｓｕｌｆｕｒｏｎ−ｅｔｈｙｌ）、ピリデート（ｐｙｒｉｄａｔｅ）、ピリチオバック（ｐｙｒｉｔｈｉｏｂａｃ）、ピロスラム（ｐｙｒｏｓｕｌａｍ）、キンクロラック（ｑｕｉｎｃｌｏｒａｃ）、キンメラック（ｑｕｉｎｍｅｒａｃ）、キザロフォップ（ｑｕｉｚａｌｏｆｏｐ）、リムスルフロン（ｒｉｍｓｕｌｆｕｒｏｎ）、セトキシジム（ｓｅｔｈｏｘｙｄｉｍ）、シズロン（ｓｉｄｕｒｏｎ）、シマジン（ｓｉｍａｚｉｎｅ）、スルコトリオン（ｓｕｌｃｏｔｒｉｏｎｅ）、スルフェントラゾン（ｓｕｌｆｅｎｔｒａｚｏｎｅ）、スルフォメツロン（ｓｕｌｆｏｍｅｔｕｒｏｎ）、スルホスルフロン（ｓｕｌｆｏｓｕｌｆｕｒｏｎ）、テブチウロン（ｔｅｂｕｔｈｉｕｒｏｎ）、テパロキシジム（ｔｅｐａｌｏｘｙｄｉｍ）、テルバシル（ｔｅｒｂａｃｉｌ）、テルブトリン（ｔｅｒｂｕｔｒｙｎ）、チアゾピル（ｔｈｉａｚｏｐｙｒ）、チフェンスルフロン（ｔｈｉｆｅｎｓｕｌｆｕｒｏｎ）、チオベンカルブ（ｔｈｉｏｂｅｎｃａｒｂ）、トプラメゾン（ｔｏｐｒａｍｅｚｏｎｅ）、トラルコキシジム（ｔｒａｌｋｏｘｙｄｉｍ）、トリアレート（ｔｒｉａｌｌａｔｅ）、トリアスルフロン（ｔｒｉａｓｕｌｆｕｒｏｎ）、トリベンウロン（ｔｒｉｂｅｎｕｒｏｎ）、トリクロピル（ｔｒｉｃｌｏｐｙｒ）、トリフロキシスルフロン（ｔｒｉｆｌｏｘｙｓｕｌｆｕｒｏｎ）、トリフルラリン（ｔｒｉｆｌｕｒａｌｉｎ）、トリフルスルフロン（ｔｒｉｆｌｕｓｕｌｆｕｒｏｎ）及びベルノレート（ｖｅｒｎｏｌａｔｅ）が挙げられる。
【０１６３】
植物の処理に使用される硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物の量は、具体的な化合物の活性、処理される植物の性質、及び所望される効果に依存してもよい。更なる要素として、処理される植物の環境条件が含まれる。例えば、処理される植物の環境条件が植物の生育促進を支持するものでない場合、特に、除草効果を発揮するために高用量の前記化合物を用いる必要がある。当業者は、当該技術分野で周知の基礎的な試験又は標準的な試験を使用して、本発明の使用に従って効果を達成するための化合物の量を容易に決定することが出来る。
【０１６４】
定義
本明細書中の化学構造又は部分において、下記のような波線は、当該構造又は部分の接続点を示す。
【化９】
2014528950.tif 000010
【０１６５】
本明細書中、硫化水素を「放出する」化合物、又は「放出する」基若しくは化合物という記載は、例えばインビボで、Ｈ２Ｓ、ＨＳ−及び／又はＳ２−を生産する化学反応を実行する基又は化合物を意味する。水溶液中、Ｈ２Ｓは解離して、水硫化物アニオン（ＨＳ−）及び硫化物アニオン（Ｓ２−）の２つの解離状態を形成する。当該基又は化合物は、従って、植物又は動物中の生理条件に依存して、Ｈ２Ｓ、ＨＳ−及び／又はＳ２−を生産し得る。
【０１６６】
硫化水素を放出する基と連結したミトコンドリア標的化基を含有する化合物は、医薬として許容される塩の形態で存在してもよい。医薬としての使用において、前記化合物の塩は、無毒性の「医薬として許容される塩」を指す。医薬として許容される塩の例はＢｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ  （Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．，  １９７７，  ６６，  １−１９）に論じられている。
【０１６７】
医薬として許容される塩の形態は、医薬として許容される酸性／アニオン性又は塩基性／カチオン性塩を含む。
【０１６８】
医薬として許容される酸性／アニオン性塩の例として、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、酸性酒石酸塩、臭化物、エデト酸カルシウム、カムシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストル酸塩（ｅｓｔｏｌａｔｅ）、エシル酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩（ｇｌｙｃｅｐｔａｔｅ）、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ムチン酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、パモ酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロ酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩及びトリエチオジド塩が挙げられる。
【０１６９】
医薬として許容される塩基性／カチオン性塩の例として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、ジエタノールアミン、Ｎ―メチル―Ｄ−グルカミン、Ｌ−リシン、Ｌ−アルギニン、アンモニウム、エタノールアミン、ピペラジン、及びトリエタノールアミン塩が挙げられる。
【０１７０】
前記化合物がアニオン性である場合、又はアニオン性であってもよい官能基を有する場合、適切なカチオンと共に塩が形成され得る。適切な無機カチオンの例として、Ｎａ＋及びＫ＋等のアルカリ金属イオン、Ｃａ２＋及びＭｇ２＋等のアルカリ土類カチオン、及び他のＡｌ３＋等のカチオンが挙げられる。適切な有機カチオンの例として、アンモニウムイオン（即ちＮＨ４＋）及び置換アンモニウムイオン（例えば、ＮＨ３Ｒ、ＮＨ２Ｒ２、ＮＨＲ３、ＮＲ４ここでＲはアルキル基）が挙げられる。
【０１７１】
前記化合物がカチオン性である場合、又はカチオン性であってもよい官能基を有する場合、塩は、適切なアニオンと共に形成されてもよい。適切な無機アニオンの例として、以下の無機酸：塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン酸及び亜リン酸由来のものが挙げられる。適切な有機アニオンの例として、以下の有機酸：２アセトキシ安息香酸、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、安息香酸、カンファ―スルホン酸、桂皮酸、クエン酸、エデト酸、エタン二スルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルケプトン酸（ｇｌｕｃｈｅｐｔｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフタレンカルボン酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオ酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、粘液酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、フェニルスルホン酸、プロピオン酸、ピルビン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、酒石酸、トルエンスルホン酸及び吉草酸由来のものが挙げられる。
【０１７２】
前記化合物が、カチオン性官能基又はカチオン性になり得る官能基と、アニオン性官能基又はアニオン性になり得る官能基の両方を有している場合、当該化合物は、双性イオン（ｚｗｉｔｔｅｒｉｏｎ）と呼ばれる。
【０１７３】
「水素」又は「水素原子」は、本明細書中で使用されるとき、−Ｈ部分を意味する。
【０１７４】
「ハロゲン」又は「ハロゲン原子」は、本明細書中で使用されるとき、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ又は−Ｉ部分を意味する。
【０１７５】
「ヒドロキシ」は、本明細書中で使用されるとき、−ＯＨ部分を意味する。
【０１７６】
「アルキル」は、本明細書中で使用されるとき、１〜１２個の炭素原子を有する（他の言及が無い場合）、炭化水素の１つの炭素原子から水素原子を除くことにより得られる一価の部分を意味し、脂肪族又は脂環式であってもよく、飽和でも不飽和でもよい（例えば部分的不飽和又は完全不飽和）。従って、「アルキル」は、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル及びシクロアルキニルのサブクラスを含む。
【０１７７】
アルキル基の表記において、接頭語Ｃ１−１２は、その基に存在する炭素原子の数、又は炭素原子の数の範囲を示す。したがって、「Ｃ１−１２アルキル」は、アルキル基が１〜１２個の炭素原子を有することを示す。アルキル基の種類に従い、接頭語は様々である。従って、アルキル基がアルケニルやアルキニル基である場合、接頭語は２以上になる（例えばＣ２−１２）。環式（例えばシクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル）、又は分岐アルキル基において、接頭語は３以上となる（例えばＣ３−１２）。
【０１７８】
飽和アルキル基の例として、メチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、プロピル（Ｃ３）、ブチル（Ｃ４）、ペンチル（Ｃ５）、ヘキシル（Ｃ６）、ヘプチル（Ｃ７）、オクチル（Ｃ８）、ノニル（Ｃ９）及びデシル（Ｃ１０）が挙げられる。飽和直鎖アルキル基の例として、限定されないが、メチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、ｎ−プロピル（Ｃ３）、ｎ−ブチル（Ｃ４）、ｎ−ペンチル（Ｃ５）、ｎ−ヘキシル（Ｃ６）及びｎ−ヘプチル（Ｃ７）が挙げられる。飽和分岐アルキル基の例として、限定されないが、ｉｓｏ−プロピル（Ｃ３）、ｉｓｏ−ブチル（Ｃ４）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ４）、ｉｓｏ−ペンチル（Ｃ５）及びｎｅｏ−ペンチル（Ｃ５）が挙げられる。
【０１７９】
「アルケニル」は、１つ以上の炭素−炭素二重結合を有するアルキル基を示す。不飽和アルケニル基の例として、エテニル（ビニル、−ＣＨ＝ＣＨ２）、１−プロペニル（−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３）及び２−プロペニル（アリル、−ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ２）が挙げられる。
【０１８０】
「アルキニル」は、１つ以上の炭素−炭素三重結合を有するアルキル基を示す。不飽和アルキニル基の例として、限定されないが、エチニル（エチニル、−Ｃ≡ＣＨ）及び２−プロピニル（プロパルギル、−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ）が挙げられる。
【０１８１】
「シクロアルキル」は、環式基ともいうアルキル基であり、炭素環式化合物（即ち環を構成する全ての原子が炭素の化合物）の脂環式環原子から１つの水素原子を除去して得られる一価の部分である。当該環は、飽和又は不飽和（部分不飽和又は完全不飽和）であり、当該部分は３〜１２個の炭素原子を有する（他の言及が無い場合）。従って、「シクロアルキル」は、シクロアルケニル及びシクロアルキニルのサブクラスを含む。一つの態様において、各環は、３〜７個の環炭素原子を有する。シクロアルキル基の例として、（ｉ）飽和単環式炭化水素化合物由来のもの：シクロプロパン（Ｃ３）、シクロブタン（Ｃ４）、シクロペンタン（Ｃ５）、シクロヘキサン（Ｃ６）、シクロヘプタン（Ｃ７）及びメチルシクロプロパン（Ｃ４）、（ｉｉ）不飽和単環式炭化水素化合物由来のもの：シクロプロペン（Ｃ３）、シクロブテン（Ｃ４）、シクロペンテン（Ｃ５）、シクロヘキセン（Ｃ６）、メチルシクロプロペン（Ｃ４）  及びジメチルシクロプロペン（Ｃ５）、（ｉｉｉ）飽和多環式炭化水素化合物由来のもの：ツジャン（ｔｈｕｊａｎｅ）（Ｃ１０）、カラン（ｃａｒａｎｅ）（Ｃ１０）、ピアン（ｐｉｎａｎｅ）（Ｃ１０）、ボルナン（ｂｏｒｎａｎｅ）（Ｃ１０）、ノルカラン（ｎｏｒｃａｒａｎｅ）（Ｃ７）、ノルピナン（ｎｏｒｐｉｎａｎｅ）（Ｃ７）、ノルボルナン（ｎｏｒｂｏｒｎａｎｅ）（Ｃ７）、アダマンタン（ａｄａｍａｎｔａｎｅ）（Ｃ１０）、デカリン（ｄｅｃａｌｉｎ）（Ｃ１０）、（ｉｖ）不飽和多環式炭化水素化合物由来のもの：カンフェン（ｃａｍｐｈｅｎｅ（Ｃ１０）、リモネン（ｌｉｍｏｎｅｎｅ）（Ｃ１０）、ピネン（ｐｉｎｅｎｅ）（Ｃ１０）、及び（ｖ）芳香環を有する多環式炭化水素化合物由来のもの：インデン（ｉｎｄｅｎｅ）（Ｃ９）、インダン（ｉｎｄａｎｅ）（Ｃ９）及びテトラリン（ｔｅｔｒａｌｉｎｅ）（Ｃ１０）が挙げられる。
【０１８２】
一つの態様において、本明細書中に記載のアルキル基は、Ｃ１−１２アルキル基、例えばＣ１−８アルキル基、例えばＣ１−６アルキル基、又はＣ１−４アルキル基である。本発明のアルキル基は、飽和アルキル基又は不飽和アルキル基であり、例えば飽和非分岐アルキル基である。
【０１８３】
「任意で置換された」は、本明細書中、基が置換されなくても、又は置換基で置換されてもよいことを示す。
【０１８４】
「置換基」は、本明細書中公知の意味で用いられ、基と共有結合する、又は適切な場合融合する化学部分を意味する。
【０１８５】
本明細書中、「アリール」は、６〜１０環炭素原子（他に言及無い場合）を有する芳香族化合物の芳香環原子から１つの水素原子を除去して得られる一価の部分を示す。一つの態様において、アリール基はフェニル基である。
【０１８６】
「アルコキシ」は、アルキル−オキシ基を意味し、当該アルキル基は上記のものであり、１〜１２個の炭素原子（他に言及無い場合）を有する。一つの態様において、当該アルコキシ基中のアルキル部分は、飽和アルキル基又は飽和シクロアルキル基であってもよい。一つの態様において、当該アルキル基は飽和非分岐アルキル基である。Ｃ１−１２アルコキシ基の例として、−ＯＭｅ（メトキシ）、−ＯＥｔ（エトキシ）、−Ｏ（ｎＰｒ）（ｎ−プロポキシ）、−Ｏ（ｉＰｒ）（イソプロポキシ）、−０（ｎＢｕ）（ｎ−ブトキシ）、−０（ｓＢｕ）（ｓｅｃ−ブトキシ）、−Ｏ（ｉＢｕ）（イソブトキシ）、及び−０（ｔＢｕ）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）が挙げられる。
【０１８７】
「アルキレン」は、本明細書中で使用されるとき、１〜２０個の炭素原子（他に言及無い場合）を有する炭化水素の同一又は別の炭素原子から２つの水素原子を除去して得られる二歯（ｂｉｄｅｎｔａｔｅ）部分を指す。脂肪族又は脂環式であり得、また飽和、部分不飽和、又は完全不飽和でもあり得る。つまり、この用語「アルキレン」には、以下で議論される、下位群であるアルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレン、他も含まれる。接頭語（例えばＣ１−４、Ｃ１−７、Ｃ１−２０）は、炭素原子の数又は炭素原子の数の範囲を示す。例えば「Ｃ１−２０アルキレン」は、１〜２０個の炭素原子を有するアルキレン基を意味する。
【０１８８】
直鎖飽和Ｃ１−２０アルキレン基の例として、−（ＣＨ２）ｎ−、ここでｎは１〜２０の整数、例えば−ＣＨ２−（メチレン）、−ＣＨ２ＣＨ２−（エチレン）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−（プロピレン）及び−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−（ブチレン）が挙げられる。分岐飽和Ｃ１−２０アルキレン基の例として、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２−が挙げられる。直鎖部分不飽和Ｃ２−２０アルキレン基の例として、−ＣＨ＝ＣＨ−（ビニレン）、−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２−、及び−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ２−が挙げられる。分岐部分不飽和Ｃ１−２０アルキレン基の例として、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨＣＨ２−及び−ＣＨ＝ＣＨＣＨ（ＣＨ３）−が挙げられる。脂環式飽和Ｃ３−２０アルキレン基の例として、シクロペンチレン（例えばシクロペント−１，３−イレン）及びシクロヘキシレン（例えばシクロヘクス１，４イレン）が挙げられる。脂環式部分不飽和Ｃ２−２０アルキレン基の例として、シクロペンテニレン（例えば４−シクロペンテン−１，３−イレン）、シクペヘキセニレン（例えば２シクロヘキセン−１，４−イレン；３シクロヘキセン−１，２−イレン；２，５シクロヘキサジエン−１，４−イレン）が挙げられる。
【０１８９】
一つの態様において、本明細書中のアルキレンの記載は、Ｃ１−２０アルキレン基、例えばＣ１−１２アルキレン基、例えばＣ２−８アルキレン基、又はＣ３−７アルキレン基を意味する。一つの態様において、前記アルキレン基は、飽和アルキル基又は飽和シクロアルキル基、例えば飽和非分岐アルキル基（即ち直鎖アルキレン基）であってもよい。
【０１９０】
「アリーレン」は、本明細書中、６〜１０個（他に言及無い場合）の環原子を有する芳香族化合物の芳香環の同一又は異なる環原子から２つの水素原子を除去して得られる二歯部分を意味する。ここで、接頭語（Ｃ６−１０）は、環炭素原子の数又は環炭素原子の数の範囲を示す。
【０１９１】
幾つかの態様において、置換基自体が置換されていてもよい。例えばＣ１−１２アルキル基は、例えばヒドロキシ（ヒドロキシＣ１−１２アルキル基と呼ぶ）又はハロゲン原子（ハロＣ１−１２アルキル基と呼ぶ）で置換されてもよく、Ｃ１−１２アルコキシ基は、例えばハロゲン原子（ハロＣ１−１２アルコキシ基と呼ぶ）で置換されてもよい。
【０１９２】
「アルキレン−アリーレン」は、アリーレン部分、−アリーレン−と連結したアルキレン部分、−アルキレン−を含む二歯部分、−アルキレン−アリーレン−を指す。アルキレン−アリーレンの例として、Ｃ１−２０アルキレン−  Ｃ６−２０アリーレン、例えばメチレン−フェニレン、エチレン−フェニレン、プロピレン−フェニレン及びエチニレン−フェニレン（ビニレン−フェニレンともいう）が挙げられる。
【０１９３】
本明細書中、「ホスフィノジチオエート」は、＞Ｐ（Ｓ）Ｓ−基を意味する。
【０１９４】
本明細書中「ホスフィノジチオ酸」は、＞Ｐ（Ｓ）ＳＨ基を意味する。
【０１９５】
幾つかの化合物は、１つ以上の特定の幾何、鏡像、ジアステリオメリック、互変異性、又は立体構造で存在してもよい。他に言及が無い場合、特定の化合物は全ての異性体を含み、ラセミ体及び他のそれらの混合物を（全体又は部分的に）含む。そのような異性体の調製及び分離は、当該技術分野で公知である。
【０１９６】
「植物生育の促進」は、本明細書中、本発明の化合物を使用しないこと以外同一の条件下で得られた植物体と比較した、植物体の乾燥重量の増大又は作物重量の増大を意味する。
【０１９７】
「処理」は、本明細書中、植物の処理に関して使用される場合、本発明の化合物又は組成物を、植物に、又は植物の周囲に、溶液又は本発明の組成物を噴霧すること等により施用することを意味する。
【０１９８】
「除草剤の効率の増大」は、本明細書中、除草剤の除草効果の増大を意味する。故に、本発明の化合物と共に除草剤が使用された場合、本発明の化合物を使用しないこと以外同一の条件下で得られた植物体と比較してより多くの植物が枯死させられてもよい。あるいは、本発明の化合物と共に除草剤が使用された場合、本発明の化合物を使用しないこと以外同一の条件下で得られた植物体と比較して、特定の数又は量の植物を枯死させるのに使用される除草剤の量又は濃度が低下してもよい。
【０１９９】
本発明は、下記の限定されない例により、更に例示される。
【実施例】
【０２００】
実施例１
【化１０】
2014528950.tif 000011
［ＡＰ３９］
ＡＰ３９の合成
１０−ブロモデカン酸（５００ｍｇ、１．９９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（５ｍＬ）を、撹拌したトリフェニルホスフィン（５２２ｍｇ、１．９９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（５ｍＬ）に添加した。当該溶液を７０時間還流で加熱し、室温に冷却し、減圧濃縮した。得られた材料をトルエンで洗浄し（２ｘ１０ｍＬ），減圧濃縮し、そしてジクロロメタン（３０ｍＬ）に溶解した。この撹拌した溶液に、５−ｐ−ヒドロキシフェニル−１，２−ジチオール−３−チオン（ＡＤＴ−ＯＨ）（４５６ｍｇ、１．９９ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（４３１ｍｇ、２．０９ｍｍｏｌ）及び４−ジメチルアミノピリジン（１２ｍｇ、０．０９９５ｍｍｏｌ）を添加した。２２時間後、得られた溶液をコットンウールでろ過し、濾過物を減圧濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、ジクロロメタン溶液として充填し、酢酸エチル、メタノールで溶出して、ホスホニウム塩とシリカの混合物を得た。ジクロロメタン中の再分解、紙による濾過及び減圧濃縮を行い、橙色の泡として、純粋なホスホニウム塩を得た（１．０５ｇ、７３％）。
【０２０１】
Ｒｆ  ＝  ０．７  （メタノール）；  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１３）：  δ  ＝  ７．９５−７．６５  （ｍ，  １７Ｈ；  ３  Ｐｈ  ａｎｄ  Ａｒ  ２−  ａｎｄ  ６−Ｈ），  ７．４２  （ｓ，  １Ｈ；  ＝ＣＨ），  ７．２３  （ｄ，  Ｊ＝  ８．０  Ｈｚ，  ２Ｈ；  Ａｒ  ３−  ａｎｄ  ５−Ｈ），  ３．９０−３．７９  （ｍ，  ２Ｈ；  ＣＨ２Ｃ＝０），  ２．５８  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  ２Ｈ；  ＣＨ２Ｐ），  １．８０−１．５５  （ｍ，  ４Ｈ；  ２  ｘ  ＣＨ２），  １．４２−１．１９  ｐｐｍ  （ｍ，  １０Ｈ；  ５  ｘ  ＣＨ２）；  ３１Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１３）：  δ  ＝  ２５．７  ｐｐｍ；  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  Ｃ３７Ｈ３８０２ＰＳ３  ［Ｍ−Ｂｒ］＋  ｒｅｑｕｉｒｅｓ  ６４１．１７６６，  ｆｏｕｎｄ  ６４１．１７５１．  
【０２０２】
ＡＤＴ−ＯＨは、ＵＳ  ２００８／０００４２４５に記載の方法を使用して調製出来る。
【０２０３】
実施例２
【化１１】
2014528950.tif 000012
実施例１の方法を使用したが、１０−ブロモデカン酸に代えて３−ブロモプロピオン酸（１５３ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）が使用された。橙色の泡として、ホスホニウム塩が取得された（４８２ｍｇ、７７％）。
【０２０４】
Ｒｆ  ＝  ０．７  （メタノール）；  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１３）：  δ  ＝  ７．９６−７．６０  （ｍ，  １７Ｈ；  ３  Ｐｈ  ａｎｄ  Ａｒ  ２−  ａｎｄ  ６−Ｈ），  ７．３６  （ｓ，  １Ｈ；  ＝ＣＨ），  ７．１８  （ｄ，  Ｊ＝  ８．０  Ｈｚ，  ２Ｈ；  Ａｒ  ３−  ａｎｄ  ５−Ｈ），  ４．４９−４．３６  （ｍ，  ２Ｈ；  ＣＨ２Ｃ＝０），  ３．４０−３．２６  ｐｐｍ  （ｍ，  ２Ｈ；  ＣＨ２Ｐ）．
【０２０５】
実施例３
【化１２】
2014528950.tif 000013
実施例１の方法を使用したが、１０−ブロモデカン酸に代えて５−ブロモ吉草酸（１８１ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）が使用された。橙色の泡として、ホスホニウム塩が取得された（３９６ｍｇ、６１％）。
【０２０６】
Ｒｆ  ＝  ０．８  （メタノール）；  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１３）：  δ  ＝  ７．９３−７．６５  （ｍ，  １７Ｈ；  ３  Ｐｈ  ａｎｄ  Ａｒ  ２−  ａｎｄ  ６−Ｈ），  ７．４１  （ｓ，  １Ｈ；  ＝ＣＨ），  ７．２１  （ｄ，  Ｊ＝  ８．０  Ｈｚ，  ２Ｈ；  Ａｒ  ３−  ａｎｄ  ５−Ｈ），  ４．１１−３．９９  （ｍ，  ２Ｈ；  ＣＨ２Ｃ＝０），  ２．８１  （ｔ，  Ｊ＝  ８．５  Ｈｚ，  ２Ｈ；  ＣＨ２Ｐ），  ２．２２−２．１２  （ｍ，  ２Ｈ；  ＣＨ２），  １．９０−１．７７  ｐｐｍ  （ｍ，  ２Ｈ；  ＣＨ２）．  
【０２０７】
実施例４
【化１３】
2014528950.tif 000014
実施例１の方法を使用したが、１０−ブロモデカン酸に代えて６−ブロモヘキサン酸（１９５ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）が使用された。橙色の泡として、ホスホニウム塩が取得された（４４７ｍｇ、６７％）。
【０２０８】
Ｒｆ  ＝  ０．８  （メタノール）；  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１３）：  δ  ＝  ７．８５−７．５９  （ｍ，  １７Ｈ；  ３  Ｐｈ  ａｎｄ  Ａｒ  ２−  ａｎｄ  ６−Ｈ），  ７．３２  （ｓ，  １Ｈ；  ＝ＣＨ），  ７．１８  （ｄ，  Ｊ＝  ８．０  Ｈｚ，  ２Ｈ；  Ａｒ  ３−  ａｎｄ  ５−Ｈ），  ３．８５−３．７０  （ｍ，  ２Ｈ；  ＣＨ２Ｃ＝０），  ２．５６  （ｔ，  Ｊ＝  ８．５  Ｈｚ，  ２Ｈ；  ＣＨ２Ｐ），  １．８７−１．５２  ｐｐｍ  （ｍ，  ６Ｈ；  ３  ＣＨ２）．
【０２０９】
実施例５
【化１４】
2014528950.tif 000015
実施例１の方法を使用したが、１０−ブロモデカン酸に代えて８−ブロモオクタン酸（２２３ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）が使用された。橙色の泡として、ホスホニウム塩が取得された（５２９ｍｇ、７６％）。
【０２１０】
Ｒｆ  ＝  ０．８  （メタノール）；  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１３）：  δ  ＝  ７．９５−７．６７  （ｍ，  １７Ｈ；  ３  ｘ  Ｐｈ  ａｎｄ  Ａｒ  ２−  ａｎｄ  ６−Ｈ），  ７．４２  （ｓ，  １Ｈ；  ＝ＣＨ），  ７．２２  （ｄ，  Ｊ＝  ８．０  Ｈｚ，  ２Ｈ；  Ａｒ  ３−  ａｎｄ  ５−Ｈ），  ３．９７−３．８８  （ｍ，  ２Ｈ；  ＣＨ２Ｃ＝０），  ２．５８  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  ２Ｈ；  ＣＨ２Ｐ），  １．８０−１．５２  （ｍ，  ４Ｈ；  ２  ｘ  ＣＨ２），  １．４５−１．３２  ｐｐｍ  （ｍ，  ６Ｈ；  ３  ｘ  ＣＨ２）；  ３１Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１３）：  δ  ＝  ２９．２  ｐｐｍ．
【０２１１】
実施例６
【化１５】
2014528950.tif 000016
実施例１の方法を使用したが、１０−ブロモデカン酸に代えて１２−ブロモドデカン酸（２７９ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）が使用された。橙色の泡として、ホスホニウム塩が取得された（５０３ｍｇ、６７％）。
【０２１２】
Ｒｆ  ＝  ０．７  （メタノール）；  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１３）：  δ  ＝  ７．９５−７．６８  （ｍ，  １７Ｈ；  ３  Ｐｈ  ａｎｄ  Ａｒ  ２−  ａｎｄ  ６−Ｈ），  ７．４０  （ｓ，  １Ｈ；  ＝ＣＨ），  ７．２１  （ｄ，  Ｊ＝  ８．０  Ｈｚ，  ２Ｈ；  Ａｒ  ３−  ａｎｄ  ５−Ｈ），  ３．９１−３．７９  （ｍ，  ２Ｈ；  ＣＨ２Ｃ＝０），  ２．６０  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  ２Ｈ；  ＣＨ２Ｐ），  １．８２−１．６１  （ｍ，  ４Ｈ；  ２  ｘ  ＣＨ２），  １．４５−１．１５  ｐｐｍ  （ｍ，  １４Ｈ；  ７  ｘ  ＣＨ２）．
【０２１３】
実施例７
【化１６】
2014528950.tif 000017
実施例１の方法を使用したが、１０−ブロモデカン酸に代えて１０−ブロモヘキサデカン酸（３３５ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）が使用された。橙色の泡として、ホスホニウム塩が取得された（３３４ｍｇ、４１％）。
【０２１４】
Ｒｆ  ＝  ０．７  （メタノール）；  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１３）：  δ  ＝  ７．９７−７．６５  （ｍ，  １７Ｈ；  ３  ｘ  Ｐｈ  ａｎｄ  Ａｒ  ２−  ａｎｄ  ６−Ｈ），  ７．３９  （ｓ，  １Ｈ；  ＝ＣＨ），  ７．２２  （ｄ，  Ｊ＝  ８．０  Ｈｚ，  ２Ｈ；  Ａｒ  ３−  ａｎｄ  ５−Ｈ），  ３．９０−３．７５  （ｍ，  ２Ｈ；  ＣＨ２Ｃ＝０），  ２．６１  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  ２Ｈ；  ＣＨ２Ｐ），  １．８０−１．５５  （ｍ，  ４Ｈ；  ２  ｘ  ＣＨ２），  １．４７−１．１１  ｐｐｍ  （ｍ，  ２２Ｈ；  １１  ｘ  ＣＨ２）．
【０２１５】
実施例８
【化１７】
2014528950.tif 000018
［ＡＰ１２３］
ＡＰ１２３の合成
実施例１の方法を使用したが、ＡＤＴ−ＯＨに代えて４−ヒドロキシチオベンザミド（１２３ｍｇ、０．８０３ｍｍｏｌ）が使用された。橙色の泡として、ホスホニウム塩が取得された（２０８ｍｇ、４０％）。
【０２１６】
Ｒｆ  ＝  ０．４  （メタノール）；  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１３）：  δ  ＝  ８．１５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  ２Ｈ；  Ａｒ２−  ａｎｄ  ６−Ｈ），  ７．８５−７．６０  （ｍ，  １５Ｈ；  ３  Ｐｈ），  ６．９６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  ２Ｈ；  Ａｒ  ３−  ａｎｄ  ５−Ｈ），  ３．５１−３．３８  （ｍ，  ２Ｈ；  ＣＨ２Ｃ＝０），  ２．５８−２．４１  （ｍ，  ２Ｈ；  ＣＨ２Ｐ），  １．７２−１．５５  （ｍ，  ４Ｈ；  ２  ｘ  ＣＨ２），  １．４２−１．１３  ｐｐｍ  （ｍ，  １０Ｈ；  ５  ｘ  ＣＨ２）；  ３１Ｐ  ＮＭＲ  （１２１  ＭＨｚ，  ＣＤＣ１３）：  ５  ＝  ２５．１  ｐｐｍ．
【０２１７】
実験方法及び結果
Ｈ２Ｓ生産アッセイ
ＡＰ３９及びＡＰ１２３からのＨ２Ｓの生産は、Ｂ．  Ｆｏｘ  ｅｔ  ａｌ  （Ｆｏｘ，  Ｂ．，  Ｓｃｈａｎｔｚ，  Ｊ−Ｔ．，  Ｈａｉｇｈ，  Ｒ．，  Ｗｏｏｄ，  Ｍ．  Ｅ．，  Ｍｏｏｒｅ，  Ｐ．  Ｋ．，  Ｖｉｎｅｒ，  Ｎ．，  Ｓｐｅｎｃｅｒ，  Ｊ．  Ｐ．，  Ｗｉｎｙａｒｄ，  Ｐ．  Ｇ．  ＆  Ｗｈｉｔｅｍａｎ，  Ｍ．；  “Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｓｕｌｆｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｉｎ  ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ：  Ｉｓ  Ｈ２Ｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃｙｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｎｆｌａｍｅｄ  ｊｏｉｎｔ？”，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ．  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．，  ２０１１，  Ｉｎ  Ｐｒｅｓｓ）等に記載されるジンクトラップスペクトロメトリーにより判定された。
【０２１８】
２００μｌのＡＰ３９又はＡＰ１２３をリン酸緩衝剤（ｐＨ７．４、２５℃）に添加し、蓋をしたエッペンドルフチューブ中で一時間置いた。２５０μｌの酢酸亜鉛（１％ｗ／ｖ）を添加し、続いて１３３μｌのＮ，Ｎ−ジメチル−ｐ−フェニレンジアミン硫酸（２０ｍＭ）及び１３３μｌのＦｅＣｌ３（３０ｍＭ）を添加した。室温暗黒で６０分間置いた後、Ｇｅｍｉｎｉ  Ｍ２ｅマイクロプレートリーダーを使用して吸光度（６７０ｎｍ）を判定した。各試料のＨ２Ｓ濃度は、Ｎａ２Ｓの校正曲線に対して計算された。結果を図１に示す。
【０２１９】
細胞死アッセイ
最初の実験はＨ２Ｓ供与化合物が毒性か否かを判定するために実施された。ヒト脳微小血管内皮細胞（ＨＭＥＣ）をＨ２Ｓ供与化合物の濃度を増大させながら２４時間インキュベーションした。そして、Ａｌａｍｅｒ  Ｂｌｕｅアッセイにより、細胞の生存率を評価した。Ｇｅｍｉｎｉ  Ｍ２ｅマイクロプレートリーダーを使用して、蛍光（励起波長５４０ｎｍ、放射波長６１２ｎｍ）を検出した。当該方法は、Ｄ．  Ｖａｕｚｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ  （Ｊ．  Ａｇｒｉｃ．  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．，  ２００７，  ５５  （８），  ２８５４−２８６０）に記載の方法に従い実施された。
【０２２０】
酸化剤により誘導される細胞死の防止
ＨＭＥＣをＨ２Ｓ供与化合物と共に５時間インキュベートし、そして酸化剤を添加して２４時間置いた。その後、Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅアッセイにより細胞の生存率を評価した。３−モルホリノシドノンイミン塩酸塩（ＳＩＮ−１）を使用して、過酸化亜硝酸（ＯＮＯＯ−）、過酸化水素（Ｈ２０２）及び脂質過酸化４−ヒドロキシノネナル（ＨＮＥ）の流束を生産し、酸化ストレス及び細胞死を誘導した。当該方法は、Ｄ．  Ｖａｕｚｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ  （Ｊ．  Ａｇｒｉｃ．  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．，  ２００７，  ５５  （８），  ２８５４−２８６０）に記載された方法に従い実施された。
【０２２１】
細胞内酸化ストレス測定
ＨＭＥＣをＨ２Ｓ供与化合物と共に５時間インキュベートし、そしてＨ２０２、ＨＮＥ又はＳＩＮ−１を添加して２時間置いた。そして、ジクロロフルオレセインジアセテート（最終濃度１０μＭ）を使用して細胞内酸化ストレスを評価した。蛍光は、３７℃のＧｅｍｉｎｉ  Ｍ２ｅマイクロプレートリーダーを使用して検出した（励起波長４８８ｎｍ、放射波長５２５ｎｍ）。当該方法は、Ｍ．  Ｗｈｉｔｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ  （Ｍｅｔｈｓ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ，  ２００８，  ４７６，  ２９−５０）に記載の方法に従い実施された。
【０２２２】
ミトコンドリア酸化ストレス測定
ＨＭＥＣをＨ２Ｓ供与化合物と共に５時間インキュベートし、そしてＨ２０２、ＨＮＥ又はＳＩＮ−１を添加して２時間置いた。ミトコンドリア選択的酸化プローブＭｉｔｏＳｏｘ  Ｒｅｄ  （最終濃度５μＭ）を使用して、ミトコンドリア由来の酸化種を、Ｇｅｍｉｎｉ  Ｍ２ｅマイクロプレートリーダーを使用した蛍光測定により検出した（励起波長５１０ｎｍ、放射波長５８０ｎｍ）。当該方法は、Ｍ．  Ｗｈｉｔｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ  （Ｍｅｔｈｓ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ，  ２００８，  ４７６，  ２９−５０）及びＲ．  Ａ．  Ｑｕｉｎｔａｎｉｌｌａ  ｅｔ  ａｌ  （Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．，  ２００８，  ２８４，  １８７５４−１８７６６）に記載の方法に従い実施された。
【０２２３】
ミトコンドリア膜電位  （ΔΨｍ）
ＨＭＥＣをＨ２Ｓ供与化合物と共に５時間インキュベートし、そして酸化剤Ｈ２０２（５０μΜ）、ＨＮＥ（１０μΜ）又はＳＩＮ−１（５００μΜ）を添加して２４時間置いた。そして、ミトコンドリア特異的電位差定量色素（ｐｏｔｅｎｔｉｏｍｅｔｒｉｃ  ｄｙｅ）テトラメチルローダミンメチルエステル（２００ｎＭ）を添加し、蛍光をＧｅｍｉｎｉ  Ｍ２ｅマイクロプレートリーダーを使用して判定した（励起波長５４８ｎｍ、放射波長５７３ｎｍ）。当該方法は、Ｍ．  Ｗｈｉｔｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ  （ＦＡＳＥＢ  Ｊ，  ２００４，  １８，  １３９５−１３９７）に記載の方法に従い実施された。
【０２２４】
ＡＰ３９のラット血圧、心拍及び呼吸拍に対する効果の測定（インビボ）
硫化水素供与分子あ、心臓血管の病理の管理において治療的価値を潜在する。しかしながら、それらの分子基盤は充分に理解されていない。
【０２２５】
この実験の目的は、迅速なＨ２Ｓ放出薬物Ｎａ２Ｓと新しい緩慢にＨ２Ｓを放出する化合物ＡＰ３９の、ラット血管系における薬理効果；特に血圧、心拍（インビボ）及び呼吸拍を比較することであった。当該効果の分子基盤を探索するため、大動脈環オーガンバスを使用して、血管の反応性に対するＡＰ３９の影響（エクスビボ）（下記「収縮したラット大動脈環の弛緩に対するＡＰ３９の効果の測定」を参照されたい）、及びラット心筋小胞体由来の塩化物チャンネルの単一チャンネル特性に対するＡＰ３９の効果（下記「ラット心筋小胞体由来の塩化物チャンネルの単一チャンネル特性に対するＡＰ３９の測定」を参照されたい）を研究した。
【０２２６】
麻酔したＷｉｓｔａｒラットの平均動脈血圧（ＭＡＰ）を、頸動脈中の圧力トランスデューサーにより測定した。エクスビボ実験において、ＡＰ３９の効果は、ノルアドレナリンで収縮させたラット大動脈環に対して研究された（下記）。ラット心臓からの細胞内塩化物チャンネルの単一チャンネル特性は、脂質二重膜法を使用して研究された（下記）。
【０２２７】
雄のＷｉｓｔａｒラット又は雄の自然発生高血圧（ＳＨＲ）ラットの右頸静脈にカテーテルを右心房まで挿入した。麻酔（脚にＺＯＬＥＬＩＴ，  ＶＩＲＢＡＣ，  ４０ｍｇ／ｋｇ  ｔｏ  ｌｅｇ）及びキシラジン２％。４μｌＤＭＳＯ中でＡＰ３９溶液を調製し、１００μｌＫｒｅｂｓ溶液と混合し、すぐに１０秒間適用した。（図２０、２１及び２２）
【０２２８】
血圧、心拍及び呼吸拍は、全て同時に、Ｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１７  ２３５１−２３６０に従い測定された。
【０２２９】
アドレナリン収縮したラット大動脈環の弛緩に対するＡＰ３９の効果の測定
雄Ｗｉｓｔａｒラットから調製した胸部大動脈（直径約３〜４ｍｍ）又は腸間膜動脈の環を、等尺性張力のニューモキシド−酸素化（９５％  ０２：Ｃ０２，  ３７℃）Ｋｒｅｂｓ−重炭酸塩溶液中での変化の記録のために、Ｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１７  ２３５１−２３６０に記載されているように、マウントした。大動脈環は、２００  ｎｍｏｌ／ｌのアドレナリンで収縮し、ＡＰ３９の効果が評価された（図２３）
【０２３０】
ラット心筋小胞体由来の塩化物チャンネルの単一チャンネル特性に対するＡＰ３９の効果の測定
塩化物チャンネルは、血圧制御、細胞周期、アポトーシス、筋緊張、量調節、シナプス伝達、及び細胞の興奮性において一定の役割を果たす。
【０２３１】
ラット心臓から単離した筋小胞体（ＳＲ）小胞をシス及びトランスチャンバーを隔離する脂質二重膜に融合させ、単一の塩化物チャンネルを通る電流を測定した。当該溶液の組成は（ｍＭ）：トランスが、５０  ＫＣｌ、１  ＭｇＣｌ２、０．１  ＣａＣｌ２、０．３  ＥＧＴＡ、１０／５  Ｈｅｐｅｓ／Ｔｒｉｓ、７．４  ｐＨ  （−腔側）及びシスが、２５０  ＫＣｌ、１  ＭｇＣｌ２、０．３  ＣａＣｌ２、１０／５  Ｈｅｐｅｓ／Ｔｒｉｓ、７．４  ｐＨ（−細胞質側）である。
【０２３２】
単一チャンネルパラメーター：開口率、電流−電圧の関係、逆電位、平均の開口及び閉口時間、並びに単一の電流振幅が評価された（図２４〜２８）。
【０２３３】
Ｔ型カルシウムチャンネルＣＡｖ３．１に対するＡＰ３９の効果の測定
ＣＡｖ３．１カルシウムチャンネルをヒト胚腎臓細胞（ＨＥＫ２９３）に恒常的にトランスフェクションし、全細胞コンフィギュレーションにおいて、保持電位１００ｍＶからパッチクランプ法により、カルシウム電流を測定した。
【０２３４】
Ｃａｖ３．１チャンネルを通る電流に対する４種類の濃度のＡＰ３９の効果を試験した（図２９〜３１。
【０２３５】
ミトコンドリア特異的タンパク質のウエスタンブロット解析
ヒトＴＨＰ−１（単球）細胞を、ミトコンドリア標的化Ｈ２Ｓ供与剤ＡＰ３９の存在下又は非存在下、酸化ストレス誘導剤（過酸化水素；Ｈ２０２、２５μΜ）に曝した。
【０２３６】
図３２に結果を示す実験において、ヒトＴＨＰ−１（単球）細胞は、様々な濃度のＡＰ３９（μＭで示す）の存在下又は非存在下、２５μΜのＨ２０２に４時間曝された。
【０２３７】
図３３に結果を示す実験において、ヒトＴＨＰ−１（単球）細胞は、様々な濃度のＡＰ３９（μＭで示す）に曝された後、２５μΜのＨ２０２が１分間添加された。
【０２３８】
両実験において、実験後、通常のミトコンドリアマトリックスタンパク質のペルオキシレドキシン３（Ｐｒｘ３）（ダイマー、分子量３７ｋＤａ）のレベル及び超酸化Ｐｒｘ３（モノマー、分子量２５ｋＤａ）のレベルを、標準的なウエスタンブロット手順（Ｍ  Ｗｈｉｔｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ  （ＦＡＳＥＢ  Ｊ，  ２００４，  １８，  １３９５−１３９７）により判定した（図３２及び３３）
【０２３９】
Ｎｒｆ２活性化の判定
Ｎｒｆ２活性化を、ＡＲＥｃ３２細胞において実験した。当該ステーブル細胞系は、８コピーのラットグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ−Ａ２抗酸化剤応答２１１エレメント（ＡＲＥ）及びホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子の上流のＳＶ４０プロモーターを含有するコンストラクト（Ｗａｎｇ，  Ｘ．  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ，  ２００６，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，  ６６，  １０９８３−９４）をトランスフェクションしたＭＣＦ−７細胞由来のものである。当該細胞を非ミトコンドリア標的化遅延放出Ｈ２Ｓ供与剤ＧＹＹ４１３７（６．２５μΜ）及びミトコンドリア標的化Ｈ２Ｓ供与剤ＡＰ３９（６．２５μΜ）で４時間前処理した。前処理後、細胞をＮｒｆ２活性化剤である妖精対照のスルホラファン（１２．５μΜ）で２４時間処理した。Ｎｒｆ−２活性化（ルシフェラーゼ活性）は、ＢＭＧ  ｌａｂｔｅｃｈ  Ｏｍｅｇａマイクロプレートリーダーを用いて発光により評価された（図３４）。データは細胞バイオマス（スルホローダミンＢ）に対して平均化されたルシフェラーゼ活性の倍数として表現される。
【０２４０】
インフラマソーム活性化の阻害の判定
ヒトＴＨＰ−１細胞をＲＰＭＩ培地で培養し、ＡＰ３９及び細菌エンドトキシン（リポ多糖類；ＬＰＳ）（１μｇ／ｍｌ）と共に２４時間インキュベーションし、その後ＡＴＰ（５ｍＭ）を２４時間添加した。その後、細胞培養培地を回収し、当該培地中のＩＬ−１βレベルを市販のＥＬＩＳＡ  （Ｈｕｍａｎ  ＩＬ−１  ｂｅｔａ  ＥＬＩＳＡ  Ｒｅａｄｙ−ＳＥＴ−Ｇｏ，  ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）により測定して判定した（図３５）。データは、平均±標準偏差である（ｎ＝３）。
【０２４１】
インフラマソームが活性化された後のインフラマソームの活性の阻害の判定
ヒトＴＨＰ−１細胞をＲＰＭＩ培地で培養し、細菌エンドトキシン（リポ多糖類；ＬＰＳ）（１μｇ／ｍｌ）と共に２４時間インキュベーションし、その後ＡＴＰ（５ｍＭ）及びＡＰ３９を２４時間添加した。その後、細胞培養培地を回収し、当該培地中のＩＬ−１βレベルを市販のＥＬＩＳＡ  （Ｈｕｍａｎ  ＩＬ−１  ｂｅｔａ  ＥＬＩＳＡ  Ｒｅａｄｙ−ＳＥＴ−Ｇｏ，  ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）により測定して判定した（図３６）。データは、平均±標準偏差である（ｎ＝３）。
【０２４２】
結果の考察
上記図の結果は、ＡＰ３９及びＧＹＹ４１３７が細胞死、ミトコンドリア機能不全、細胞が様々な生理的酸化種に曝されたときのミトコンドリア及び細胞質の酸化ストレスを阻害することを示す。ＡＰ３９は、非ミトコンドリア標的化Ｈ２Ｓ供与剤（ＧＹＹ４１３７）よりも、これらの効果の誘導が強力であった。例えばＡＰ３９の有効濃度が５０−２００ｎＭであったのに対し、ＧＹＹ４１３７は１００−５００μΜであった。
【０２４３】
図１は、リン酸緩衝剤ｐＨ７．４中室温で１時間インキュベーションした後のＡＰ３９及びＡＰ１２３から生産されたＨ２Ｓの量を示す。
【０２４４】
図２及び３は、５μＭのＡＰ３９又は１０μＭのＡＰ１２３でのＨＭＥＣのインキュベーションがＨＭＥＣにおける顕著な細胞毒性を誘導しなかったことを示す（即ち、本願のアッセイで採用される実験条件において、ＡＰ３９及びＡＰ１２３は毒性ではない）。
【０２４５】
図４に示す結果は、ＧＹＹ４１３７（５００μＭ、非ミトコンドリア標的化Ｈ２Ｓ供与剤、対照）とＡＰ３９（最終濃度５０ｎＭ）の、酸化剤ＳＩＮ−１及び４−ＨＮＥの単独又は組み合わせにより誘導される細胞死に対する効果を直接比較することが出来る。ＡＰ３９とＧＹＹ４１３７のいずれも、ＳＩＮ−１及び４−ＨＮＥに誘導される細胞死を顕著に阻害した。ＡＰ３９は、最終濃度５０ｎＭで添加したときに有効であったが、ＧＹＹ４１３７では同程度の細胞保護を達成するのに５００μＭを要した。斯かるデータは、６個の別個の判定の平均±標準偏差として示される（＊＊＊＝ｐ＜０．００１酸化剤処理細胞との比較）。
【０２４６】
図４のデータは、Ｈ２Ｓのミトコンドリア標的化が、非標的化供与剤分子よりも強力な細胞保護をもたらすことを示唆する。
【０２４７】
図５〜７は、ＣＢＳ阻害剤のＡＯＡＡ（図５）、ＣＳＥ阻害剤のＰＡＧ（図６）又はＡＯＡＡとＰＡＧの組み合わせ（図７）によるＨＭＥＣのインキュベーションによる内生的Ｈ２Ｓ合成の阻害が、顕著に細胞生存率を低下させたことを示し、これは、内生的Ｈ２Ｓ合成が、細胞生存に必要であることを示唆する（＃＃＃  ＝  ｐ  ＜  ０．００１対照と比較；  ＊＊＊  ＝  ｐ  ＜  ０．００１阻害剤と比較）。ＨＭＥＣをＧＹＹ４１３７（１００μＭ）又はＡＰ３９（１００ｎＭ）と共にインキュベーションした場合、ＣＢＳ阻害剤のＡＯＡＡ（図５）、ＣＳＥ阻害剤のＰＡＧ（図６）又はＡＯＡＡとＰＡＧの組み合わせ（図７）が誘導する細胞死が顕著に阻害され、これは、内生的Ｈ２ＳをＨ２Ｓ供与剤由来のものに置き換えても、細胞保護が得られることを示唆する。
【０２４８】
図８は、５０μＭの酸化剤Ｈ２０２によるＨＭＥＣのインキュベーションが細胞毒性を顕著に誘導したことを示す。Ｈ２０２誘導細胞毒性は、細胞を非標的化Ｈ２Ｓ供与剤ＧＹＹ４１３７（１００−５００μΜ）又はミトコンドリア標的化Ｈ２Ｓ供与剤ＡＰ３９（５０−２００ｎＭ）のいずれかで処理することにより阻害された。
【０２４９】
図９及び１０は、ＧＹＹ４１３７（１００μΜ及び５００μΜ；図９）及びＡＰ３９（５０−２００ｎＭ；図１０）が、ＳＩＮ−１（５００μΜ）により誘導される細胞死を顕著に阻害したことを示す。
【０２５０】
図１１及び１２は、ＧＹＹ４１３７（１００μΜ及び５００μΜ；図１１）及びＡＰ３９（５０−２００ｎＭ；図１２）が、４−ＨＮＥ（１０μΜ）により誘導される細胞死を顕著に阻害したことを示す。
【０２５１】
図１３は、酸化剤誘導性のミトコンドリア膜電位（Δψｍ）の崩壊（ｃｏｌｌａｐｓｅ）がＧＹＹ４１３７（１００μΜ）及びＡＰ３９（１００ｎＭ）により阻害されることを示し、これは、ＡＰ３９によるＨ２Ｓのミトコンドリアへの送達が、非標的化Ｈ２Ｓ供与分子よりも顕著な細胞保護をもたらすことを示唆する（図１３）。（＃＝ｐ＜０．００１対照と比較；＊＝ｐ＜０．００１酸化ストレス剤と比較）
【０２５２】
図１４及び１５は、４−ＨＮＥによる細胞質酸化種の生産を示す。ＧＹＹ４１３７（１００μΜ）及びＡＰ３９（１００ｎＭ）のいずれも、４−ＨＮＥ由来の細胞内の酸化剤の形成を顕著に減少させ、これは、これらの化合物によるＨ２Ｓの放出が、有害な酸化種と相互作用して、細胞死を防止することを示唆する。
【０２５３】
図１６は、４−ＨＮＥが、有害な酸化種であるスーパーオキシドのミトコンドリアにおける生産を誘導したことを示す。ＧＹＹ４１３７及びＡＰ３９のいずれも、ミトコンドリアによるスーパーオキシドの形成を減少させ、これは、Ｈ２Ｓによるミトコンドリア由来の細胞内酸化ストレスの減少が、ＧＹＹ４１３７及びＡＰ３９が媒介する細胞保護のメカニズムであることを示唆する。４−ＨＮＥは、１０μＭの濃度で使用され、ＧＹＹ４１３７は１００μＭの濃度で使用され、そしてＡＰ３９は、０．１μＭの濃度で使用された。ＡＰ３９がＧＹＹ４１３７の１０００分の１の濃度でスーパーオキシド形成を阻害したことは、ＡＰ３９のミトコンドリア標的化（ＡＰ３９由来のＨ２Ｓ）が、両者が使用される濃度の差に寄与することを示唆する。
【０２５４】
図１７は、いずれのＨ２Ｓ供与剤も、細胞が非特異的酸化剤のＨ２０２で処理されたときの細胞内酸化ストレス（細胞質、ＤＣＦＤＡアッセイを使用）を減少させるのにそれほど効果的でなかったことを示す。対照的に、ＡＰ３９（１００ｎＭ）は、ミトコンドリアストレス及び細胞死を誘導することが周知な細胞毒性脂質ペルオキシドである４−ＨＮＥ（図１８）により誘導されるミトコンドリア由来酸化剤生産（ＭｅｔｏＳｏｘ  Ｒｅｄアッセイ）を顕著に減少させた。Ｈ２０２は５０μΜの濃度で使用され、ＳＩＮ−１は５００μΜの濃度で使用され、ＧＹＹ４１３７は、１００μΜの濃度で使用され、そしてＡＰ３９は、０．１μΜの濃度で使用された。
【０２５５】
図１９は、ＧＹＹ４１３７（１００μΜ）又はＡＰ３９（１００ｎＭ）が、酸化ストレス剤４−ＨＮＥの存在下での細胞内酸化ストレスを阻害する効果を有することを示す。
【０２５６】
図２０は、１．６μΜ／ｋｇ及び２．７μΜ／ｋｇのＡＰ３９又は３μΜ／ｋｇのＮａ２Ｓを麻酔したＷｉｓｔａｒ（正常血圧）ラットに注射した効果の比較を示す。ＡＰ３９は、（ａ）血圧及び（ｂ）心拍を減少させ、一時的に呼吸拍を増大させた。対照的に、Ｎａ２Ｓは、これらのいずれのパラメーターにも効果が無く、ミトコンドリア標的化遅延放出Ｈ２Ｓ供与分子と、「迅速放出」及び非ミトコンドリア標的化Ｈ２Ｓ生産化合物であるＮａ２Ｓのボーラス添加との間の相違を強調している。
【０２５７】
図２１は、自然発生高血圧ラット（ＳＨＲ）への１．５μΜ／ｋｇのＡＰ３９の注射の、血圧（Ａ）、心拍（Ｂ）及び呼吸拍（Ｃ）に対する効果を示す。持続的な血圧の下降作用が認められる（Ａ）。
【０２５８】
図２２は、麻酔したＷｉｓｔａｒラットにより高濃度のＡＰ３９（４μΜ／ｋｇ）を投与した場合の、血圧（Ａ）及び心拍（Ｂ）に対する効果を示す。持続的な血圧（Ａ）及び心拍（Ｂ）の下降が認められる。これは、「迅速放出」及び非ミトコンドリア標的化Ｈ２Ｓ生産化合物であるＮａ２Ｓでは観察されなかった（図２０）。
【０２５９】
図２０〜２２は、ＡＰ３９の、ラットの血圧、心拍及び呼吸拍に対する影響が、Ｎａ２Ｓの１０〜５０倍強いことを示す。
【０２６０】
図２３は、ＡＰ３９の濃度増大の（１−５μΜ）、アドレナリンで収縮させたラット大動脈（Ａ〜Ｃ）及び腸間膜動脈（Ｄ）に対する血管拡張効果を示す。
【０２６１】
図２４及び２５は、ＡＰ３９の、０ｍＶにおけるラット心筋小胞体由来の単一塩化物チャンネルを通る電流の振幅に対する効果を示し；ＡＰ３９は、当該チャンネルを通じての塩化物の流れの振幅を増大させた。
【０２６２】
図２６は、ＡＰ３９が、Ｃｌ−チャンネルの伝導率を増大させたことを示す。対照チャンネルの逆電位は〜−３１ｍＶであり、これは、Ｃｌ−／Ｋ＋の透過性の比率が９．６であることを示す。ＡＰ３９は、チャンネル逆電位（−３１ｍＶ）に影響を与えず、即ち、単離されたラット心筋小胞体においてＣｌ−／Ｋ＋チャンネルの透過性の比率に影響しなかった。
【０２６３】
図２７は、前記チャンネルの平均開口時間が０ｍＶで１１ｍｓであったことを示す。ＡＰ３９（２０μｍｏｌ／ｌ）は当該平均開口時間を３３ｍｓまで増大させ、これは、ＡＰ３９がラット心筋小胞体における塩化物チャンネルの開口ステージを安定化させる傾向を有することを示す。
【０２６４】
図２８は、ＡＰ３９が、ラット心筋小胞体において濃度依存的に塩化物チャンネルの平均の開口時間を増大させることを示す。
【０２６５】
図２４〜２８は、ＡＰ３９がラット心筋小胞体由来の塩化物チャンネルと相互作用し、その単一チャンネル活性を変化させることを示す。ＡＰ３９は、当該チャンネルを、Ｃｌ−電流振幅及び伝導率を増大させることにより活性化させる。更に、ＡＰ３９は、チャンネルの平均開口時間を増大させることにより、チャンネルの開口時間を増大させた。
【０２６６】
図２９〜３１は、ＡＰ３９（＞３００ｎＭ）が、ヒト胚腎臓細胞（ＨＥＫ２９３）において、ＣＡｖ３．１  Ｔ−型カルシウムチャンネルを、濃度（図２９及び３１）並びに時間（図３０）依存的に阻害したことを示す。
【０２６７】
上記データは、ミトコンドリア標的化Ｈ２Ｓ供与分子のＡＰ３９が、インビボで血管作用性であること、正常血圧（Ｗｉｓｔａｒ）及び高血圧（ＳＨＲ）ラットにおいて、血圧及び心拍を降下させること、また単離されたラット大動脈及び腸間膜動脈を使用してエクスビボで血管拡張性であることを示す。対照的に、非ミトコンドリア標的化Ｈ２Ｓ供与剤であるＮａ２Ｓは、Ｗｉｓｔａｒ又はＳＨＲラットにおいて、血圧の下降及び心拍の減少を示さなかった。これらの知見のメカニズムの一部は、平滑筋小胞体イオンチャンネルに対する作用、具体的には塩化物チャンネルの開口及びＴ型カルシウムチャンネルの阻害に基づく。
【０２６８】
図３２及び３３は、酸化ストレス誘導剤のＨ２０２に暴露し、ＡＰ３９の濃度を増大させたときのヒトＴＨＰ−１細胞における、ミトコンドリアマトリックスの抗酸化酵素ペルオキシレドキシン３（Ｐｒｘ３）のウエスタンブロット解析を示す。当該ウエスタンブロットアッセイは、ＡＰ３９が、ミトコンドリアマトリックスタンパク質Ｐｒｘ３の過剰酸化モノマー形態のレベルを低下させることを示す。図３３の実験結果（ヒトＴＨＰ−１細胞を様々な濃度のＡＰ３９に４時間晒した後、Ｈ２０２を一分間添加した）において、Ｈ２０２によるＰｒｘ３の酸化は、５μＭのＡＰ３９により減少した。図３２及び３３は、ＡＰ３９が酵素Ｐｒｘ３の活性を保持させたことを示し、ＡＰ３９がミトコンドリアマトリックスを標的化して、ミトコンドリアマトリックス内に効果を誘導したことを示す。
【０２６９】
図３４は、スルホラファン（陽性対照）、非ミトコンドリア標的化遅延放出Ｈ２Ｓ供与剤（ＧＹＹ４１３７）及びＡＰ３９の存在下、ヒトＡＲＥｃ３２細胞において、転写因子Ｎｒｆ２が活性化されることを示す。Ｎｒｆ２は、酸化ストレスに対する細胞の防御機構に関する他の事象を制御する中核的な転写因子である。当該図は、ＡＰ３９が転写因子Ｎｒｆ２を活性化すること、及び等モル量の濃度では、ＡＰ３９が、Ｎｒｆ２転写因子活性化において、ＧＹＹ４１３７よりも強力であることを示す。
【０２７０】
図３５は、ＴＨＰ−１細胞におけるＬＰＳ／ＡＴＰにより誘導されるインフラマソーム活性化に対するＡＰ３９の効果を示す。ＡＰ３９は、培養培地中のＩＬ−Ｉβレベルを低下させ、これは、ＡＰ３９がインフラマソームの活性を阻害したことを示す。
【０２７１】
図３６は、ＴＨＰ−１細胞におけるインフラマソーム活性に対するＡＰ３９の効果を示す。インフラマソームは、ＬＰＳ／ＡＴＰを使用して活性化され、インフラマソーム活性を阻害する指標とした、ＡＰ３９が実質的にＩＬ−Ｉβレベルを減少させる能力は、ＥＬＩＳＡにより判定された。当該図は、ＡＰ３９が、ＬＰＳ／ＡＴＰによるインフラマソーム活性化後のインフラマソーム活性を阻害したことを示す。
【０２７２】
図３５及び３６は、ＡＰ３９が、インフラマソーム活性の阻害（図３６）と同様に、インフラマソーム活性化（図３５）を防止することを示す。いずれも、ＡＰ３９の抗炎症作用と一致する。図３６は、インフラマソームが活性化されてからの、炎症促進性シグナリングの減少における、ＡＰ３９の治療的能力を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【国際調査報告】
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