(57)【要約】  本発明は、インビボでのアポトーシス及び他の形態の細胞死の放射性医薬品イメージングに関する。本発明は、アポトーシス細胞の表面に露出しているアミノリン脂質のホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）への選択的結合によってアポトーシス細胞を標的化するＰＥＴイメージング剤を提供する。また、医薬組成物、キット及びインビボイメージング方法も提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式Ｉの化合物を含んでなるイメージング剤。
Ｚ1−（Ｌ）n−［ＬＢＰ］−Ｚ2
（Ｉ）
（式中、
ＬＢＰは次の式ＩＩのランチビオチックペプチドであり、
Ｃｙｓa−Ｘａａ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒb−Ｃｙｓc−Ｓｅｒd−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒc−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｃｙｓb−（ＨＯ−Ａｓｐ）−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｔｈｒa−Ｌｙｓd
（ＩＩ）
（式中、
ＸａａはＡｒｇ又はＬｙｓであり、
Ｃｙｓa−Ｔｈｒa、Ｓｅｒb−Ｃｙｓb及びＣｙｓc−Ｔｈｒcはチオエーテル結合を介して共有結合しており、
Ｓｅｒd−Ｌｙｓdはリシノアラニン結合を介して共有結合しており、
ＨＯ−Ａｓｐはβ−ヒドロキシアスパラギン酸である。）
Ｚ1−（Ｌ）n−はＬＢＰのＣｙｓa及び任意にはＸａａにも結合しており、ここでＺ1は18Ｆ又は金属錯体の金属に配位した18Ｆであり、
Ｚ2はＬＢＰのＣ末端に結合していて、ＯＨ又はＯＢc（式中、Ｂcは生体適合性陽イオンである。）であり、
Ｌは式−（Ａ）m−（式中、各Ａは独立に−ＣＲ2−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ2ＣＯ2−、−ＣＯ2ＣＲ2−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＣＲ＝Ｎ−Ｏ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ2ＮＲ−、−ＮＲＳＯ2−、−ＣＲ2ＯＣＲ2−、−ＣＲ2ＳＣＲ2−、−ＣＲ2ＮＲＣＲ2−、Ｃ4-8シクロヘテロアルキレン基、Ｃ4-8シクロアルキレン基、−Ａｒ−、−ＮＲ−Ａｒ−、−Ｏ−Ａｒ−、−Ａｒ−（ＣＯ）−、アミノ酸、糖又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位であり、ここで各Ａｒは独立にＣ5-12アリーレン基又はＣ3-12ヘテロアリーレン基であり、各Ｒは独立にＨ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、Ｃ1-4アルコキシアルキル及びＣ1-4ヒドロキシアルキルから選択され、ｍは１〜２０の値を有する整数である。）の合成リンカー基であり、
ｎは０又は１の値を有する整数である。）
【請求項２】
Ｚ1がＬＢＰのＣｙｓaのみに結合している、請求項１記載のイメージング剤。
【請求項３】
ＸａａがＡｒｇである、請求項１又は請求項２記載のイメージング剤。
【請求項４】
Ｚ1−（Ｌ）n−が次の式Ｘの基を含む、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載のイメージング剤。
18Ｆ−Ｘ1−（Ａ）x−          （Ｘ）
（式中、
ｘは０〜５の値を有する整数であり、
Ｘ1は−Ａｒ−、−Ａｒ−ＮＲ−、−Ａｒ−Ｏ−、−Ａｒ−（ＣＯ）−及び−Ｓｉ（Ｒa）2−から選択され、
Ａ、Ａｒ及びＲは請求項１でＬ基について定義した通りであり、
各Ｒaは独立にＣ1-9アルキルである。）
【請求項５】
Ｘ1がフェニル環或いはトリアゾール、イソキサゾール及びピリジン環から選択される複素環を含む、請求項１記載のイメージング剤。
【請求項６】
Ｚ1がアミノカルボキシレートリガンドのアルミニウム錯体を含み、18Ｆ放射性ラベルが前記錯体の前記アルミニウムに配位している、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載のイメージング剤。
【請求項７】
次の式ＩＩＩの前駆体。
Ｚ3−（Ｌ）n−［ＬＢＰ］−Ｚ2
（ＩＩＩ）
（式中、
Ｌ、ｎ、ＬＢＰ及びＺ2は請求項１乃至請求項３のいずれか１項で定義した通りであり、
Ｚ3は
（ｉ）アミノオキシ基、
（ｉｉ）アジド基、
（ｉｉｉ）アルキン基、
（ｉｖ）ニトリルオキシド、及び
（ｖ）アミノカルボキシレートリガンドのアルミニウム、インジウム又はガリウム金属錯体
から選択される官能基である。）
【請求項８】
請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載のイメージング剤の製造方法であって、請求項７記載の前駆体又は請求項１乃至請求項３のいずれか１項で定義されたＬＢＰペプチドを適当な溶媒中で適当な化学形態の18Ｆ供給物と反応させることを含んでなる方法。
【請求項９】
請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載のイメージング剤を、哺乳動物への投与に適した形態で生体適合性キャリヤーと共に含んでなる放射性医薬組成物。
【請求項１０】
請求項９記載の放射性医薬組成物を製造するためのキットであって、請求項７記載の前駆体又は請求項１乃至請求項３のいずれか１項で定義されたＬＢＰペプチドを無菌固体形態で含んでいる結果、請求項８で定義された適当な化学形態の無菌18Ｆ供給物で再構成すれば溶解が起こって所望の放射性医薬組成物を与える、キット。
【請求項１１】
無菌固体形態が凍結乾燥固体である、請求項１０記載のキット。
【請求項１２】
ヒト又は動物の身体をイメージングする方法であって、当該方法はＰＥＴを用いて請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載のイメージング剤又は請求項９記載の組成物が分布した前記身体の少なくとも一部の画像を生成する段階を含み、前記イメージング剤又は前記組成物は前記身体に予め投与されている、方法。
【請求項１３】
前記身体の一部が、異常なアポトーシスが関与している疾患状態である、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
薬物によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニターするために繰り返して実施される、請求項１２又は請求項１３記載の方法であって、前記イメージングは前記薬物による治療前及び治療後に実施され、任意には前記薬物による治療中にも実施される、方法。
【請求項１５】
ヒト又は動物の身体の診断方法における、請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載のイメージング剤、請求項９記載の組成物又は請求項１０記載のキットの使用。
【請求項１６】
診断が、異常なアポトーシス又は他の形態の細胞死が関与している疾患状態の診断である、請求項１５記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インビボでのアポトーシス及び他の形態の細胞死の放射性医薬品イメージングに関する。本発明は、アポトーシス細胞の表面に露出しているアミノリン脂質のホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）への選択的結合によってアポトーシス細胞を標的化するＰＥＴイメージング剤を提供する。また、医薬組成物、キット及びインビボイメージング方法も提供される。
【背景技術】
【０００２】
アポトーシス又はプログラム細胞死（ＰＣＤ）は最も普遍的な細胞死経路であり、高度に調節されたエネルギー保存機構によって進行する。健常状態では、アポトーシスは細胞増殖の制御において中心的な役割を果たし、細胞数の調節、形態形成の促進及び有害又は異常な細胞の除去を行う。ＰＣＤ過程のディスレギュレーション（ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）は、癌及び自己免疫障害のようなアポトーシスの阻害に関連するもの、並びに神経変性疾患、血液学的疾患、ＡＩＤＳ、虚血症及び同種移植片拒絶のような過活性アポトーシスに関連するものを含め、多数の疾患状態と関係づけられている。したがって、アポトーシスの可視化及び定量化は、かかるアポトーシス関連病態生理学の診断において有用である。
【０００３】
これらの疾患に関する治療学的処置は、場合に応じてＰＣＤ過程を促進又は抑制することにより、バランスの取れたアポトーシスを回復することを目指している。したがって、細胞及び組織におけるアポトーシスをインビボで非侵襲的にイメージングすることは、治療学的介入に対する応答の早期評価のために非常に大きな価値を有し、破壊的な病理学的過程に対する新しい洞察を与えることができる。特に興味深いのは、癌療法の効力の早期モニタリングにより、状態が末期になる前に悪性増殖を確実に制御することである。
【０００４】
その結果、アポトーシスに関するイメージング剤の開発に大きな関心が寄せられてきた［例えば、Ｚｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，９（９），９８６−９９５（２００９）、Ｚｈａｏ，ｉｂｉｄ，９（９），１０１８−１０２３（２００９）及びＭ．Ｄｅ  Ｓａｉｎｔ−Ｈｕｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ，４８，１７８−１８７（２００９）を参照されたい］。細胞死をイメージングするために利用できるプローブのうち、放射性標識アネキシンＶは最も多くの注目を集めた。アネキシンＶは負に帯電したリン脂質のみに結合し、そのためにアポトーシスと壊死とを識別することができない。
【０００５】
ランチオニン含有抗生物質ペプチド（「ランチビオチック」）であるジュラマイシン及びシンナマイシンは、コンパクトな四環式構造を有する２種の密接に関係した１９量体ペプチドである［Ｚｈａｏ，ＡｍｉｎｏＡｃｉｄｓ，ＤＯＩ  １０．１００７／ｓ００７２６−００９−０３８６−９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ（２００９）及びそこに引用された参考文献］。これらは４つの共有結合した分子内橋によって架橋されており、２位のただ１つのアミノ酸残基のみによって異なっている。ジュラマイシン及びシンナマイシンの構造を下記に模式的に示すが、式中の番号は１９量体配列中における連結アミノ酸の位置を表している。
【０００６】
【化１】
2014505021.tif 000002
プログラム細胞死又はアポトーシスは、細胞の細胞内におけるエネルギー依存性自己破壊である。細胞原形質膜の二重層を横切るリン脂質の再分布は、アポトーシスに関する重要なマーカーである。即ち、生細胞では、アミノリン脂質であるホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）及びホスファチジルセリン（ＰＳ）は主に細胞原形質膜の内側リーフレットの成分である。アポトーシス細胞では、ＰＥ及びＰＳの同時外在化が存在している。
【０００７】
ジュラマイシン及びシンナマイシンは共に、ＰＥ頭部基の回りに嵌合する疎水性ポケットを形成することにより、同様な特異性及び高い親和性をもって中性のアミノリン脂質ＰＥと結合する。かかる結合は、β−ヒドロキシアスパラギン酸残基（ＨＯ−Ａｓｐ15）とエタノールアミン基とのイオン性相互作用によって安定化される。この残基に対する修飾はジュラマイシンを不活性化することが知られている［Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ，４９，１３４５−１３５２（２００８）］。Ｚｈａｏ［Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ，ＤＯＩ  １０．１００７／ｓ００７２６−００９−０３８６−９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ（２００９）］は、Ｗａｋａｍａｔｓｕ  ｅｔ  ａｌ［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２９，１１３−１８８（１９９０）］による初期の研究を引用している。そこでは、ＮＭＲ試験によれば、シンナマイシンの５つの末端アミノ酸の1Ｈ  ＮＭＲ共鳴はいずれもＰＥとの結合後にシフトしないことが示され、これらはＰＥとの相互作用に関与しないことが示唆されている。
【０００８】
米国特許出願公開第２００４／０１４７４４０号（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ  Ｓｙｓｔｅｍ）は、前アポトーシス又はアポトーシス細胞の検出或いは癌のイメージングにおいて使用できる標識抗アミノリン脂質抗体を記載している。また、癌療法用のジュラマイシンとビオチン、タンパク質又は抗ウイルス薬物とのコンジュゲーションも提供されている。
【０００９】
国際公開第２００６／０５５８５５号は、タンパク質のホスファチジルセリン結合Ｃ２ドメインを含む放射性標識化合物を用いたアポトーシスのイメージング方法を開示している。
【００１０】
国際公開第２００９／１１４５４９号は、下記の方法によって製造される放射性医薬品を開示している。かかる方法は、
（ｉ）ＣＫＱＳＣＳＦＧＰＦＴＦＶＣＤＧＮＴＫと７０％以上の配列類似性を有するポリペプチドを用意する段階であって、ポリペプチドはアミノ酸残基１−１８、４−１４及び５−１１の間にチオエーテル結合を含むと共に、アミノ酸残基６−１９の間にアミド結合を含み、かつ次の構造を有する１以上の末端部分がポリペプチドの１位、２位又は１位及び２位のアミノ酸に共有結合している段階、
【００１１】
【化２】
2014505021.tif 000003
（式中、Ｒ1及びＲ2は各々独立に直鎖又は枝分れの飽和又は不飽和Ｃ1-4アルキルである。）
並びに
（ｉｉ）99mＴｃx、（99mＴｃ＝Ｏ）3+、（99mＴｃ≡Ｎ）2+、（Ｏ＝99mＴｃ＝Ｏ）+又は［99mＴｃ（ＣＯ）3］+（式中、ｘは＋７、＋６、＋５、＋４、＋３、＋２、＋１、０及び−１からなる群から選択されるレドックス又は酸化状態である。）或いはその塩、溶媒和物又は水和物で１以上の末端部分をキレート化する段階
を含んでいる。
【００１２】
国際公開第２００９／１１４５４９号の「末端部分」は放射性同位体99mＴｃに対する錯化剤であって、これはヒドラジノニコチンアミド（普通「ＨＹＮＩＣ」と略す）に基づいている。ＨＹＮＩＣは文献中で公知であり［例えば、Ｂａｎｅｒｊｅｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ，３２，１−２０（２００５）を参照されたい。］、ペプチド及びタンパク質を99mＴｃで標識するための好ましい方法である［Ｒ．Ａｌｂｅｒｔｏ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ２，ｐａｇｅｓ  １９−４０  ｉｎ  ＩＡＥＡ  Ｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅｓ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｓｅｒｉｅｓ  １：“Ｔｅｃｈｎｅｔｉｕｍ−９９ｍ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｓｔａｔｕｓ  ａｎｄ  Ｔｒｅｎｄｓ”（２００９）］。
【００１３】
国際公開第２００９／１１４５４９号は、具体的には99mＴｃ−ＨＹＮＩＣ−ジュラマイシンを開示し、そこに教示された放射性医薬品がアポトーシス及び／又は壊死、粥状斑或いは急性心筋梗塞をイメージングするために有用であることを示唆している。
【００１４】
Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ［Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ，４９，１３４５−１３５２（２００８）］は、99mＴｃ−ＨＹＮＩＣ−ジュラマイシンの製法を開示している。Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌは、ジュラマイシンがＨＹＮＩＣへのコンジュゲーションのために利用し得る２つのアミン基、即ちＮ末端（Ｃｙｓ1残基）のアミン基及びＬｙｓ2残基のε−アミン側鎖を有することに注目している。彼らは、99mＴｃでの放射性標識に先立ち、ＨＹＮＩＣ−ジュラマイシンコンジュゲートをＨＰＬＣで精製してビス−ＨＹＮＩＣ官能化ジュラマイシンを除去した。Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌは、試験した99mＴｃ標識モノ−ＨＹＮＩＣ−ジュラマイシンコンジュゲートが恐らくは異性体の混合物の形態であることを認めている。
【００１５】
ＨＹＮＩＣは安定な99mＴｃ錯体を形成するものの、テクネチウム金属錯体の配位球を完成するために追加の補助リガンドを必要とする。ＨＹＮＩＣは、近傍にあるアミノ酸側鎖官能基の性質に応じて単座リガンド又は仁座キレーターとして機能し得る［Ｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｄａｌｔｏｎ  Ｔｒａｎｓ．，４９９８−５００７（２００７）、Ｍｅｓｚａｒｏｓ  ｅｔ  ａｌ［Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，３６３，１０５９−１０６９（２０１０）］。即ち、環境に応じて、ＨＹＮＩＣは１つ又は２つの金属ドナー原子を有する金属錯体を形成する。Ｍｅｓｚａｒｏｓ  ｅｔ  ａｌは、ＨＹＮＩＣと共に使用する補助リガンドの性質が系の挙動に顕著な効果を及ぼし得ることに注目し、いずれの補助リガンドも理想的でないと述べている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】国際公開第２００９／１１４５４９号
【発明の概要】
【００１７】
本発明は、特に異常なアポトーシスが関与している哺乳動物体の疾患状態をイメージングするための放射性医薬品イメージング剤を提供する。かかるイメージング剤は、18Ｆ放射性標識ランチビオチックペプチドを含んでいる。本発明は、高い放射化学純度（ＲＣＰ）で再現可能に生成する放射性トレーサーを提供する。本発明者らはまた、本明細書中の式ＩＩのランチビオチックペプチドのＮ末端（Ｃｙｓa残基）における放射性ラベル錯体の結合が著しく好ましいことも立証した。これは、Ｎ末端に隣接したアミノ酸（式ＩＩのＸａａ）における結合であっても、ホスファチジルエタノールアミンへの結合に対して有害な効果を有するからである。このような効果は、以前には先行技術において認識されておらず、したがって結合親和性に対する影響の程度は新規なものと考えられる。
【００１８】
本発明の18Ｆ標識イメージング剤はＰＥＴ（陽電子放出断層撮影法）のために適しており、これは先行技術のイメージング剤に比べて画像の定量化が一層容易であるという利点を有している。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
第１の態様では、本発明は、次の式Ｉの化合物を含んでなるイメージング剤を提供する。
Ｚ1−（Ｌ）n−［ＬＢＰ］−Ｚ2
（Ｉ）
式中、
ＬＢＰは次の式ＩＩのランチビオチックペプチドであり、
Ｃｙｓa−Ｘａａ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒb−Ｃｙｓc−Ｓｅｒd−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒc−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｃｙｓb−（ＨＯ−Ａｓｐ）−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｔｈｒa−Ｌｙｓd
（ＩＩ）
（式中、
ＸａａはＡｒｇ又はＬｙｓであり、
Ｃｙｓa−Ｔｈｒa、Ｓｅｒb−Ｃｙｓb及びＣｙｓc−Ｔｈｒcはチオエーテル結合を介して共有結合しており、
Ｓｅｒd−Ｌｙｓdはリシノアラニン結合を介して共有結合しており、
ＨＯ−Ａｓｐはβ−ヒドロキシアスパラギン酸である。）
Ｚ1−（Ｌ）n−はＬＢＰのＣｙｓa及び任意には（ＸａａがＬｙｓである場合に）Ｘａａにも結合しており、ここでＺ1は18Ｆ又は金属錯体の金属に配位した18Ｆであり、
Ｚ2はＬＢＰのＣ末端に結合していて、ＯＨ又はＯＢc（式中、Ｂcは生体適合性陽イオンである。）であり、
Ｌは式−（Ａ）m−（式中、各Ａは独立に−ＣＲ2−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ2ＣＯ2−、−ＣＯ2ＣＲ2−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＣＲ＝Ｎ−Ｏ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ2ＮＲ−、−ＮＲＳＯ2−、−ＣＲ2ＯＣＲ2−、−ＣＲ2ＳＣＲ2−、−ＣＲ2ＮＲＣＲ2−、Ｃ4-8シクロヘテロアルキレン基、Ｃ4-8シクロアルキレン基、−Ａｒ−、−ＮＲ−Ａｒ−、−Ｏ−Ａｒ−、−Ａｒ−（ＣＯ）−、アミノ酸、糖又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位であり、ここで各Ａｒは独立にＣ5-12アリーレン基又はＣ3-12ヘテロアリーレン基であり、各Ｒは独立にＨ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、Ｃ1-4アルコキシアルキル及びＣ1-4ヒドロキシアルキルから選択され、ｍは１〜２０の値を有する整数である。）の合成リンカー基であり、
ｎは０又は１の値を有する整数である。
【００２０】
本発明のイメージング剤は、18Ｆ標識ランチビオチックペプチドである。「18Ｆ放射性標識」又は「18Ｆ標識」という用語は、ランチビオチックペプチドがそれに共有結合した放射性同位体18Ｆを有することを意味する。18Ｆは、好適にはＣ−Ｆフルオロアルキル又はフルオロアリール結合によって結合される。これは、かかる結合がインビボで比較的安定であり、したがってペプチドからの18Ｆ放射性ラベルの代謝開裂に対する抵抗性を与えるからである。
【００２１】
「イメージング剤」という用語は、哺乳動物体をイメージングするのに適した化合物を意味する。好ましくは、哺乳動物はインタクトな哺乳動物生体であり、さらに好ましくはヒト被験体である。好ましくは、イメージング剤は最小限に侵襲的なやり方（即ち、職業的な医学専門技術の下で実施した場合に哺乳動物被験体に対して実質的な健康リスクのないやり方）で哺乳動物体に投与できる。かかる最小限に侵襲的な投与は、好ましくは、局所又は全身麻酔の必要なしに行われる、前記被験体の末梢静脈への静脈内投与である。第１の態様のイメージング剤は、第６の態様（下記）に記載されるように、アポトーシス及び他の形態の細胞死をイメージングするため特に適している。
【００２２】
本明細書中で使用される「インビボイメージング」という用語は、哺乳動物被験体の内部構造の全部又は一部の画像を非侵襲的に生成する技法をいう。本発明の好ましいイメージング技法は、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）である。
【００２３】
「金属錯体」という用語は、非放射性金属の配位錯体を意味する。好ましいかかる錯体はキレート化剤を含んでいる。本発明の好ましい非放射性金属には、アルミニウム、ガリウム及びインジウムがある。
【００２４】
「アミノ酸」という用語は、Ｌ−又はＤ−アミノ酸、アミノ酸類似体（例えば、ナフチルアラニン）或いはアミノ酸模倣体を意味し、これらは天然のもの又は純粋に合成由来のものであってよく、光学的に純粋なもの（即ち、単一の鏡像異性体）、したがってキラルなものであるか、或いは鏡像異性体の混合物であってよい。本明細書中では、アミノ酸にする通常の三文字略語又は一文字略語が使用される。好ましくは、本発明のアミノ酸は光学的に純粋なものである。
【００２５】
「単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位」という用語は、次の式ＩＡ又はＩＢのＰＥＧバイオモディファイアーを意味する。
【００２６】
【化３】
2014505021.tif 000004
式ＩＡは１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸であり、ここでｑは１〜１５の整数であり、ｐは１〜１０の整数である。別法として、式ＩＢのプロピオン酸誘導体に基づくＰＥＧ様構造体を使用することもできる。
【００２７】
【化４】
2014505021.tif 000005
式中、ｐ及びｑは式ＩＡについて定義した通りである。式ＩＢ中では、ｐは好ましくは１又は２であり、ｑは好ましくは１〜１２である。
【００２８】
「ペプチド」という用語は、ペプチド結合（即ち、１つのアミノ酸のアミンを別のアミノ酸のカルボキシルに連結するアミド結合）によって連結された（上記に定義したような）２以上のアミノ酸を含む化合物を意味する。
【００２９】
「ランチビオチックペプチド」という用語は、１以上のランチオニン結合を含むペプチドをいう。「ランチオニン」はその通常の意味を有し、下記に示す化学構造を有するシスチンのスルフィド類似体をいう。
【００３０】
【化５】
2014505021.tif 000006
「チオエーテル結合を介して共有結合している」という用語は、関連するＣｙｓ残基のチオール官能基がＳｅｒ又はＴｈｒ残基のヒドロキシル官能基の脱水素によって示されたＳｅｒ又はＴｈｒ残基に対するチオエーテル結合として連結されてランチオニン又はメチルランチオニン結合を与えることを意味する。かかる結合は、Ｗｉｌｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ［Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，６１，４７７−５０１（２００７）］によって記載されている。
【００３１】
「リシノアラニン結合」という用語は、Ｌｙｓ残基のε−アミン基がＳｅｒのヒドロキシル官能基の脱水素によって示されたＳｅｒ残基に対するアミン結合として連結されて、アミノ酸残基の２つのα−炭素原子を連結する−（ＣＨ2）−ＮＨ−（ＣＨ2）4−結合を与えることを意味する。
【００３２】
Ｚ1がＣｙｓaに結合している場合、それはＬＢＰのＮ末端に結合している。Ｚ1がＸａａにも結合している場合、それは、ＸａａがＬｙｓであり、Ｚ1がＬｙｓ残基のε−アミノ基に結合していることを意味する。
【００３３】
Ｚ2基は、ＬＢＰの最後のアミノ酸残基のカルボニル基（即ち、カルボキシ末端）を置換する。したがって、Ｚ2がＯＨである場合、ＬＢＰのカルボキシ末端は最後のアミノ酸残基の遊離ＣＯ2Ｈ基で終わり、Ｚ2がＯＢcである場合、その末端カルボキシ基はＣＯ2Ｂc基としてイオン化されている。
【００３４】
「生体適合性陽イオン」（Ｂc）という用語は、イオン化して負に帯電した基と共に塩を形成する正に帯電した対イオンを意味する。この場合、前記正に帯電した対イオンも無毒性であり、したがって哺乳動物体（特に人体）への投与に適している。好適な生体適合性陽イオンの例には、アルカリ金属であるナトリウム及びカリウム、アルカリ土類金属であるカルシウム及びマグネシウム、並びにアンモニウムイオンがある。好ましい生体適合性陽イオンはナトリウム及びカリウムであり、最も好ましくはナトリウムである。
【００３５】
好ましい実施形態
第１の態様のイメージング剤では、Ｚ1は好ましくはＬＢＰのＣｙｓaのみに結合している。ＸａａがＡｒｇである場合、それはＺ1がＣｙｓa残基の遊離アミン基の位置でＬＢＰのＮ末端に結合されることを意味する。ＸａａがＬｙｓである場合、それは
（ｉ）Ｘａａ残基のε−アミン基に優先して、Ｃｙｓa残基の位置でＬＢＰペプチドを選択的に官能化する段階、又は
（ｉｉ）Ｃｙｓa又はＸａａの位置においてＺ1で官能化されたＬＢＰを含む組成物を調製し、次いでＸａａ官能化化学種を除去する段階
が採用されることを意味する。
【００３６】
第１の態様のイメージング剤では、Ｘａａは好ましくはＡｒｇである。Ｚ2は好ましくはＯＨ又はＯＢｃである。
【００３７】
式Ｉ中では、ｎは好ましくは１であり、即ちリンカー基（Ｌ）は存在している。Ｚ1が18Ｆである場合、好ましい放射性フッ素化置換基18Ｆ−（Ｌ）n−は次の式Ｘを有し、−（Ｌ）n−は−Ｘ1−（Ａ）x−であるように選択される。
18Ｆ−Ｘ1−（Ａ）x−          （Ｘ）
式中、
ｘは０〜５の値を有する整数であり、
Ｘ1は−Ａｒ−、−Ａｒ−ＮＲ−、−Ａｒ−Ｏ−、−Ａｒ−（ＣＯ）−及び−Ｓｉ（Ｒa）2−から選択され、
Ａ、Ａｒ及びＲはＬ基に関して（上記に）定義した通りであり、
各Ｒaは独立にＣ1-9アルキルである。
【００３８】
Ｘ1のＡｒ基は好ましくはＣ1-6アリール基であり、この場合に18Ｆ基は前記アリール基に共有結合している。Ｘ1は好ましくは、フェニル環或いはトリアゾール、イソキサゾール及びピリジン環から選択される複素環を含んでいる。
【００３９】
Ｘ1が−Ｓｉ（Ｒa）2−である場合、Ｒaは線状のもの又は枝分れしたもの或いはこれらの組合せであり得る。Ｒaは好ましくは枝分れしたものであり、好ましくは−Ｃ（ＣＨ3）3である。さらに好ましくは、両Ｒa基が−Ｃ（ＣＨ3）3である。
【００４０】
一実施形態では、式Ｘの最も好ましい置換基は、フッ素化活性エステルによるＬＢＰ中のＣｙｓ残基のＮα−アミノ基又はＬｙｓのＮε−アミノ基のＮ−アシル化、或いはＣｙｓ又はＬｙｓアミン残基のアミノオキシ誘導体と放射性フッ素化ベンズアルデヒドとの縮合から得られ、下記の構造要素を含んでいる。
【００４１】
【化６】
2014505021.tif 000007
別の実施形態では、式Ｘの最も好ましい置換基は、クリック環化から得られるトリアゾール又はイソキサゾール環を含んでいる。
【００４２】
【化７】
2014505021.tif 000008
式中、ｎは１〜６である。上記反応スキーム中では、ｎは好ましくは１〜３である。
【００４３】
別の実施形態では、式Ｘの最も好ましい置換基は、18Ｆ−Ｓｉ結合を有する有機ケイ素誘導体を含んでいる。
【００４４】
【化８】
2014505021.tif 000009
Ｚ1が金属錯体の金属に配位した18Ｆである場合、好ましい金属はアルミニウムである。アルミニウムは、好ましくはアミノカルボキシレートリガンドの金属錯体である。「アミノカルボキシレートリガンド」という用語はその通常の意味を有し、ドナー原子がアミン（Ｎ）ドナーとカルボン酸（Ｏ）ドナーとの混合物であるキレート化剤をいう。かかるキレーターは、開鎖のもの（例えば、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ又はＨＢＥＤ）或いは大環状のもの（例えば、ＤＯＴＡ又はＮＯＴＡ）であり得る。好適なかかるキレーターには、ＤＯＴＡ、ＨＢＥＤ及びＮＯＴＡがあり、これらは当技術分野で公知である。アルミニウムに対する好ましいかかるキレーターはＮＯＴＡである。
【００４５】
好ましくは、イメージング剤は無菌形態で、即ち第４の態様（下記）に記載されるような哺乳動物への投与に適した形態で提供される。
【００４６】
第１の態様のイメージング剤は、第３の態様（下記）に記載するようにして得ることができる。
【００４７】
第２の態様では、本発明は次の式ＩＩＩの前駆体を提供する。
Ｚ3−（Ｌ）n−［ＬＢＰ］−Ｚ2
（ＩＩＩ）
式中、
Ｌ、ｎ、ＬＢＰ及びＺ2は第１の態様で定義した通りであり、
Ｚ3は
（ｉ）アミノオキシ基、
（ｉｉ）アジド基、
（ｉｉｉ）アルキン基、
（ｉｖ）ニトリルオキシド、及び
（ｖ）アミノカルボキシレートリガンドのアルミニウム、インジウム又はガリウム金属錯体
から選択される官能基である。
【００４８】
第２の態様におけるＬ、ｎ、ＬＢＰ及びＺ2及び金属錯体の好ましい態様は、第１の態様（上記）で定義した通りである。
【００４９】
「アミノオキシ基」という用語は、式ＩＩＩのＬＢＰペプチドに共有結合したアミノオキシ官能基を意味する。かかる基は式−Ｏ−ＮＨ2、好ましくは−ＣＨ2Ｏ−ＮＨ2を有するものであり、アミノオキシ基のアミンはアルデヒドと縮合してオキシムエーテルを形成する反応においてＬｙｓアミン基より反応性が高いという利点を有している。かかるアミノオキシ基は、好適にはＬＢＰのＣｙｓ又はＬｙｓ残基の位置に結合している。
【００５０】
第２の態様の前駆体は非放射性である。好ましくは、第４の態様（下記）に記載されるような医薬組成物形態のイメージング剤の製造を容易にするため、前駆体は無菌形態で提供される。
【００５１】
式ＩＩＩ中では、Ｚ3は好ましくはＬＢＰのＣｙｓaに結合しており、任意にはＸａａにも結合している。好ましくは、Ｚ3はＬＢＰのＣｙｓaのみに結合している。
【００５２】
アミノオキシ官能化ＬＢＰペプチドは、Ｐｏｅｔｈｋｏ  ｅｔ  ａｌ［Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，４５，８９２−９０２（２００４）］、Ｓｃｈｉｒｒｍａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１８，２０８５−２０８９（２００７）］、Ｓｏｌｂａｋｋｅｎ  ｅｔ  ａｌ［Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ，１６，６１９０−６１９３（２００６）］又はＧｌａｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１９，９５１−９５７（２００８）］の方法によって製造できる。アミノオキシ基は、任意には２つの段階でコンジュゲートすることができる。第一に、Ｎ−保護アミノオキシカルボン酸又はＮ−保護アミノオキシ活性化エステルをＬＢＰペプチドにコンジュゲートする。第二に、中間のＮ−保護アミノオキシ官能化ＬＢＰペプチドを脱保護して所望の生成物を得る［上記に引用されたＳｏｌｂａｋｋｅｎ及びＧｌａｓｅｒの論文を参照されたい］。Ｂｏｃ−ＮＨ−Ｏ−ＣＨ2（Ｃ＝Ｏ）ＯＨ及びＥｅｉ−Ｎ−Ｏ−ＣＨ2（Ｃ＝Ｏ）ＯＨのようなＮ−保護アミノオキシカルボン酸は、例えばＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社及びＩＲＩＳ社から商業的に入手できる。「保護」という用語は、保護基の使用をいう。「保護基」という用語は、望ましくない化学反応を阻止又は抑制するが、分子の残部を変質させない程度に温和な条件下で問題の官能基から脱離させ得るのに十分な反応性を有するように設計された基を意味する。脱保護後には所望の生成物が得られる。アミン保護基は当業者にとって公知であり、好適にはＢｏｃ（ここでＢｏｃはｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルである。）、Ｅｅｉ（ここでＥｅｉはエトキシエチリデンである。）、Ｆｍｏｃ（ここでＦｍｏｃはフルオレニルメトキシカルボニルである。）、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル、Ｄｄｅ［即ち、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル］及びＮｐｙｓ（即ち、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル）から選択される。さらに他の保護基の使用は、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，４th  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｈｅｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ［Ｗｉｌｅｙ  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，（２００６）］に記載されている。好ましいアミン保護基はＢｏｃ及びＥｅｉであり、最も好ましくはＥｅｉである。
【００５３】
ペプチドをアジド基で官能化する方法は、Ｎｗｅ  ｅｔ  ａｌ［Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｔｈｅｒ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２４（３），２８９−３０２（２００９）］によって記載されている。Ｌｉ  ｅｔ  ａｌは、Ｎ3−Ｌ1−ＣＯ2Ｈ型（式中、Ｌ1は−（ＣＨ2）4−である。）の化合物の合成法及びアミン含有生体分子にコンジュゲートするためのそれの使用を記載している［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１８（６），１９８７−１９９４（２００７）］。Ｈａｕｓｎｅｒ  ｅｔ  ａｌは、Ｎ3−Ｌ1−ＣＯ2Ｈ（式中、Ｌ1は−（ＣＨ2）2−である。）についての関連方法を記載している［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５１（１９），５９０１−５９０４（２００８）］。Ｄｅ  Ｇｒａａｆ  ｅｔ  ａｌ［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，２０（７），１２８１−１２９５（２００９）］は、アジド側鎖を有する非天然アミノ酸及び続くクリックコンジュゲーションのためのペプチド又はタンパク質中へのそれの部位特異的組込みを記載している。
【００５４】
ペプチドをアルキン基で官能化する方法は、Ｎｗｅ  ｅｔ  ａｌ［Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｔｈｅｒ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２４（３），２８９−３０２（２００９）］によって記載されている。Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌはアルキン官能化イサチン前駆体の合成法を記載しており、ここでイサチン化合物はカスパーゼ−３カスパーゼ−７に対して特異的である［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５１（２４），８０５７−８０６７（２００８）］。Ｄｅ  Ｇｒａａｆ  ｅｔ  ａｌ［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，２０（７），１２８１−１２９５（２００９）］は、アルキン側鎖を有する非天然アミノ酸及び続くクリックコンジュゲーションのためのペプチド又はタンパク質中へのそれの部位特異的組込みを記載している。
【００５５】
「ニトリルオキシド」という用語は、式−Ｃ≡Ｎ+−Ｏ-の置換基をいう。上記に記載した条件下で18Ｆ標識アルキンのクリック環付加を行えば、イソキサゾール環が得られる。ニトリルオキシドは、Ｋｕ  ｅｔ  ａｌ［Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，３（２６），４１８５−４１８７（２００１）］及びその引用文献中に記載された方法によって得ることができる。即ち、これらは通例、α−ハロアルドキシムをトリエチルアミンのような有機塩基で処理することによってインサイチュで生成される。好ましい生成方法、並びに続くクリック環化によって所望のイソキサゾールを得るための条件は、Ｈａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ［Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，７０（１９），７７６１−７７６４（２００５）］によって記載されている。また、Ｋ．Ｂ．Ｇ．Ｔｏｒｓｅｌｌ“Ｎｉｔｒｉｌｅ  Ｏｘｉｄｅｓ，Ｎｉｔｒｏｎｅｓ  ａｎｄ  Ｎｉｔｒｏｎａｔｅｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”［ＶＣＨ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８）］も参照されたい。
【００５６】
官能化ＮＯＴＡキレーターの製造方法、それのペプチドとのコンジュゲーション、及び18Ｆによるキレーターコンジュゲートの放射性標識は、ＭｃＢｒｉｄｅ  ｅｔ  ａｌ［Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，５１（３），４５４−４６１（２００９）；Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，２１（７），１３３１−１３４０（２０１０）］及びＬａｖｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ［Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，５１（３），４５４−４６１（２０１０）］によって記載されている。
【００５７】
第３の態様では、本発明は、第１の態様のイメージング剤の製造方法であって、第２の態様の前駆体又は第１の態様で定義されたＬＢＰペプチドを適当な溶媒中で適当な化学形態の18Ｆ供給物と反応させることを含んでなる方法を提供する。
【００５８】
第３の態様における前駆体及びＬＢＰペプチドの好ましい態様は、それぞれ本発明の第１及び第２の態様（上記）に記載した通りである。
【００５９】
「適当な溶媒」は、通例は水性のものであり、好ましくは第４の態様（下記）で定義されるような生体適合性キャリヤー溶媒である。
【００６０】
「適当な化学形態の18Ｆ供給物」は、前駆体又はＬＢＰペプチドの官能基に応じて選択される。Ｌｙｓ残基のアミン基又はＬＢＰペプチドのＣｙｓaのアミノ基を使用する場合には、18Ｆの化学形態は、好適には活性エステル又は活性化剤の存在下での18Ｆ標識カルボン酸である。「活性化剤」という用語は、アミンとカルボン酸とのカップリングによるアミドの生成を容易にするために使用される試薬を意味する。好適なかかる活性化剤は当技術分野で公知であり、ＥＤＣ［Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド］のようなカルボジイミド及びジシクロヘキシルカルボジイミド又はジイソプロピルカルボジイミドのようなＮ，Ｎ’−ジアルキルカルボジイミド、並びにＨＢＴＵ［Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート］、ＨＡＴＵ［Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート］及びＰｙＢＯＰ［ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート］のようなトリアゾールを包含する。かかる活性化剤は商業的に入手できる。さらなる詳細は、“Ｍａｒｃｈ'ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，５th  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐａｇｅｓ  ５０８−５１０，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（２００１）に示されている。好ましいかかる活性化剤はＥＤＣである。
【００６１】
［18Ｆ］ＳＦＢのような18Ｆ標識活性化エステルは、Ｇｌａｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，５２，３２７−３３０（２００９）］及びその中の参考文献に記載された方法、或いはＭａｒｉｋ  ｅｔ  ａｌ［Ａｐｐｌ．Ｒａｄ．Ｉｓｏｔ．，６５（２），１９９−２０３（２００７）］の自動化方法によって製造できる。
【００６２】
【化９】
2014505021.tif 000010
Ｏｌｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５３（４），１７３２−１７４０（２０１０）］は、ペプチドの18Ｆ標識のためには18Ｆ−Ｐｙ−ＴＦＰ（フルオロニコチン酸のテトラフルオロフェニルエステル）が18Ｆ−ＳＦＢより有利であることを報告している。
【００６３】
18Ｆ標識カルボン酸は、上記に引用したＭａｒｉｋ  ｅｔ  ａｌの方法によって得ることができる。
【００６４】
前駆体がアミノオキシ基を含む場合、好適な化学形態は18Ｆ−フッ素化アルデヒド、好ましくは18Ｆ−フルオロベンズアルデヒド又はｐ−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−18Ｆ−フルオロシリル）ベンズアルデヒド（18Ｆ−ＳｉＦＡ−Ａ）、さらに好ましくは18Ｆ−フルオロベンズアルデヒドである。式18Ｆ（ＣＨ2）2Ｏ［ＣＨ2ＣＨ2Ｏ］qＣＨ2ＣＨＯ（式中、ｑは３である。）の18Ｆ標識脂肪族アルデヒドは、Ｇｌａｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１９（４），９５１−９５７（２００８）］の方法によって得ることができる。18Ｆ−フルオロベンズアルデヒドは、Ｇｌａｓｅｒｅｔａｌ［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，５２，３２７−３３０（２００９）］の方法によって得ることができる。18Ｆ−フルオロベンズアルデヒドの前駆体、即ちＭｅ3Ｎ+−Ｃ6Ｈ4−ＣＨＯ・ＣＦ3ＳＯ3-は、Ｈａｋａ  ｅｔ  ａｌ［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２７，８２３−８３３（１９８９）］の方法によって得られる。
【００６５】
18Ｆ−ＳｉＦＡ−Ａ、即ち18Ｆ−Ｓｉ（Ｂｕt）2−Ｃ6Ｈ4−ＣＨＯは、Ｓｃｈｉｒｒｍａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ［Ａｎｇ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，４５（３６），６０４７−６０５０（２００６）、Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１８（６），２０８５−２０８９（２００７）及びＢｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，２０（２），３１７−３２１（２００９）］の方法によって得ることができる。Ｓｃｈｉｒｒｍａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌはまた、18Ｆ−ＳｉＦＡ−Ａを用いてアミノオキシ官能化ペプチド前駆体を18Ｆ放射性標識する方法も開示している。
【００６６】
前駆体がアジド官能化ＬＢＰペプチドからなる場合、好適な化学形態は18Ｆ標識末端アルキンである。かかる放射性フッ素化アルキンは、Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ［Ａｐｐｌ．Ｒａｄ．Ｉｓｏｔｏｐ．，６８（２），３２９−３３３（２０１０）］又はＭａｒｉｋ  ｅｔ  ａｌ［Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．，４７，６６８１−６６８４（２００６）］の方法によって得ることができる。
【００６７】
前駆体がアルキン官能化ＬＢＰペプチドからなる場合、好適な化学形態は18Ｆ標識末端アジドである。好ましいかかる化合物は、Ｇａｅｔａ  ｅｔ  ａｌ［Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，２０（１５），４６４９−４６５２（２０１０）］及びＧｌａｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１８（３），９８９−９９３（２００７）］によって記載されているような18Ｆ−フルオロエチルアジドである。
【００６８】
前駆体がアルキン官能化又はアジド官能化ＬＢＰペプチドからなる場合、放射性フッ素化反応はクリック化学を含んでいる。かかるクリック反応用の好適な溶媒は、例えば、アセトニトリル、Ｃ1-4アルキルアルコール、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン又はジメチルスルホキシド或いはこれらのいずれかの水性混合物又は水である。水性緩衝液は、４〜８のｐＨ範囲内、さらに好ましくは５〜７のｐＨ範囲内で使用できる。反応温度は、好ましくは５〜１００℃、さらに好ましくは７５〜８５℃、最も好ましくは周囲温度（通例１５〜３７℃）である。クリック環付加は、Ｍｅｌｄａｌ  ａｎｄ  Ｔｏｒｎｏｅ［Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１０８，（２００８）２９５２，Ｔａｂｌｅ１（２００８）］によって記載されているように、任意には有機塩基の存在下で実施できる。
【００６９】
クリック反応は、クリック環付加触媒の存在下で実施される。「クリック環付加触媒」という用語は、それぞれトリアゾール又はイソキサゾール環を与えるクリック（アルキン＋アジド）又はクリック（アルキン＋イソニトリルオキシド）環付加反応を触媒することが知られている触媒を意味する。クリック環付加反応で使用するための好適なかかる触媒は、当技術分野で公知である。好ましいかかる触媒はＣｕ（Ｉ）を含むと共に、下記に説明される。好適な触媒のさらなる詳細は、Ｗｕ  ａｎｄ  Ｆｏｋｉｎ［Ａｌｄｒｉｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，４０（１），７−１７（２００７）］及びＭｅｌｄａｌ  ａｎｄ  Ｔｏｒｎｏｅ［Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，１０８，２９５２−３０１５（２００８）］によって記載されている。
【００７０】
好ましいクリック環付加触媒はＣｕ（Ｉ）を含んでいる。Ｃｕ（Ｉ）触媒は、反応が進行するのに十分な量、通例は触媒量又は過剰量（例えば、アジド又はイソニトリルオキシド試薬に対して０．０２〜１．５モル当量）で存在する。好適なＣｕ（Ｉ）触媒には、ＣｕＩ又は［Ｃｕ（ＮＣＣＨ3）4］［ＰＦ6］のようなＣｕ（Ｉ）塩がある。しかし有利には、硫酸銅（ＩＩ）のようなＣｕ（ＩＩ）塩を還元剤の存在下で使用してＣｕ（Ｉ）をインサイチュで生成させることができる。好適な還元剤には、アスコルビン酸又はその塩（例えば、アスコルビン酸ナトリウム）、ヒドロキノン、金属銅、グルタチオン、システイン、Ｆｅ2+及びＣｏ2+がある。Ｃｕ（Ｉ）はまた、元素銅粒子の表面上にも本質的に存在しており、したがって例えば粉末又は顆粒の形態の元素銅を触媒として使用することもできる。管理された粒度を有する元素銅が好ましいＣｕ（Ｉ）触媒源である。さらに好ましいかかる触媒は、０．００１〜１ｍｍの範囲内、好ましくは０．１〜０．７ｍｍの範囲内、さらに好ましくは約０．４ｍｍの粒度を有する銅粉末としての元素銅である。別法として、０．０１〜１．０ｍｍの範囲内、好ましくは０．０５〜０．５ｍｍの範囲内、さらに好ましくは０．１ｍｍの直径を有するコイル銅線を使用することができる。Ｃｕ（Ｉ）触媒は、任意には、クリック化学においてＣｕ（Ｉ）を安定化するために使用されるバトフェナントロリンの存在下で使用することができる。
【００７１】
クリック活性化エステル及び金属錯体方法を用いるペプチドの18F標識のさらなる詳細は、Ｏｌｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５３（４），１７３２−１７４０（２０１０）及びＣｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１０（１６），１６６９−１６７９（２０１０）］によって記載されている。
【００７２】
若干のＬＢＰペプチドは商業的に入手できる。即ち、シンナマイシン及びジュラマイシンはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手できる。ジュラマイシンは、Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｉｎｎａｍｏｎｅｕｓ由来の菌株Ｄ３１６８ Ｄｕｒａｍｙｃｉｎによって産生される。シンナマイシンは、例えばＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｉｎｎａｍｏｎｅｕｓ又はＳｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｇｒｉｓｅｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔｕｍ由来の複数の菌株によって生化学的に産生することができる。Ｃ．Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ  ｅｔ  ａｌ［Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，１０５，６３３−６８３（２００５）］による総説を参照されたい。
【００７３】
他のペプチドは、Ｐ．Ｌｌｏｙｄ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｆ．Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ  ａｎｄ  Ｅ．Ｇｉｒａｌｄ；Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９９７に記載されているような固相ペプチド合成によって得ることができる。
【００７４】
第４の態様では、本発明は、第１の態様のイメージング剤を、哺乳動物への投与に適した形態で生体適合性キャリヤーと共に含んでなる放射性医薬組成物を提供する。
【００７５】
第４の態様におけるイメージング剤の好ましい態様は、本発明の第１の態様（上記）に記載した通りである。
【００７６】
「哺乳動物への投与に適した形態で」という語句は、無菌でパイロジェンフリーであり、毒性又は有害効果を生じる化合物を含まず、生体適合性ｐＨ（およそｐＨ４．０〜１０．５）で製剤化される組成物を意味する。かかる組成物は、インビボで塞栓を生じる危険性を有し得る粒状物質を含まないと共に、生物学的流体（例えば、血液）と接触した際に沈殿が起こらないように製剤化される。かかる組成物はまた、生物学的に適合性の賦形剤のみを含み、好ましくは等張性である。
【００７７】
「生体適合性キャリヤー」とは、組成物が生理学的に認容され得るようにして（即ち、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにして）イメージング剤を懸濁又は好ましくは溶解し得る流体（特に液体）である。生体適合性キャリヤーは、好適には、無菌のパイロジェンフリー注射用水、（有利には注射用の最終生成物が等張性になるように平衡させ得る）食塩水のような水溶液、生体適合性緩衝剤を含む水性緩衝液（例えば、リン酸緩衝液）、或いは１種以上の張度調整物質（例えば、血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。好ましくは、生体適合性キャリヤーはパイロジェンフリー注射用水、等張食塩水又はリン酸緩衝液である。
【００７８】
イメージング剤及び生体適合性キャリヤーはそれぞれ、注射器又はカニューレによる溶液の追加及び抜取りを許しながら、無菌保全性及び／又は放射能安全性の維持、さらに任意には不活性ヘッドスペースガス（例えば、窒素又はアルゴン）の維持を可能にする密封容器からなる適当なバイアル又は容器に入れた状態で供給される。好ましいかかる容器は、気密クロージャーを（通例はアルミニウムからなる）オーバーシールと共にクリンプ加工した隔壁密封バイアルである。クロージャーは、無菌保全性を維持しながら皮下注射針による１回又は数回の穿刺に適したもの（例えば、クリンプ加工した隔壁シールクロージャー）である。かかる容器は、（例えば、ヘッドスペースガスの交換又は溶液のガス抜きのために）所望される場合にはクロージャーが真空に耐え得ると共に、酸素又は水蒸気のような外部大気ガスの侵入を許すことなしに減圧のような圧力変化にも耐え得るという追加の利点を有している。
【００７９】
好ましい複数用量容器は、複数の患者用量を含む（例えば、容積１０〜３０ｃｍ3の）単一のバルクバイアルからなり、したがって臨床的状況に合わせて製剤の実用寿命中に様々な時間間隔で１回分の患者用量を臨床グレードの注射器中に抜き取ることができる。予備充填注射器は１回分のヒト用量又は「単位用量」を含むように設計され、したがって好ましくは臨床用に適した使い捨て注射器又は他の注射器である。本発明の医薬組成物は、好ましくは１人の患者用に適した用量を有し、上述したような適当な注射器又は容器に入れて供給される。
【００８０】
かかる医薬組成物は、抗菌防腐剤、ｐＨ調整剤、フィラー、放射線防護剤、可溶化剤又は重量オスモル濃度調整剤のような追加の任意賦形剤を含むことができる。「放射線防護剤」という用語は、水の放射線分解から生じる含酸素フリーラジカルのような高反応性フリーラジカルを捕捉することにより、レドックス過程のような分解反応を阻止する化合物を意味する。本発明の放射線防護剤は、好適には、アスコルビン酸、ｐ−アミノ安息香酸（即ち、４−アミノ安息香酸）、ゲンチシン酸（即ち、２，５−ジヒドロキシ安息香酸）及びかかる酸と上記に記載した生体適合性陽イオンとの塩から選択される。「可溶化剤」という用語は、溶媒に対するイメージング剤の溶解性を高める、組成物中に存在する添加剤を意味する。好ましいかかる溶媒は水性媒質であり、したがって可溶化剤は好ましくは水に対する溶解性を高める。好適なかかる可溶化剤には、Ｃ1-4アルコール、グリセリン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノオレエート、ポリソルベート、ポリ（オキシエチレン）ポリ（オキシプロピレン）ポリ（オキシエチレン）ブロック共重合体（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標））、シクロデキストリン（例えば、α−、β−又はγ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン或いはヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン）及びレシチンがある。
【００８１】
「抗菌防腐剤」という用語は、潜在的に有害な微生物（例えば、細菌、酵母又はかび）の増殖を阻止する薬剤を意味する。抗菌防腐剤はまた、使用する用量に応じて多少の殺菌性を示すこともある。本発明の抗菌防腐剤の主な役割は、医薬組成物中におけるこのような微生物の増殖を阻止することである。しかし、抗菌防腐剤は、任意には投与に先立って前記組成物を製造するために使用されるキットの１以上の成分中における潜在的に有害な微生物の増殖を阻止するためにも使用できる。好適な抗菌防腐剤には、パラベン類（即ち、メチル、エチル、プロピル又はブチルパラベン或いはこれらの混合物）、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールがある。好ましい抗菌防腐剤はパラベン類である。
【００８２】
「ｐＨ調整剤」という用語は、組成物のｐＨがヒト又は哺乳動物への投与のために許容される範囲（およそｐＨ４．０〜１０．５）内にあることを保証するために有用な化合物又は化合物の混合物を意味する。好適なかかるｐＨ調整剤には、トリシン、リン酸塩又はＴＲＩＳ［即ち、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン］のような薬学的に許容される緩衝剤、及び炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物のような薬学的に許容される塩基がある。組成物をキットの形態で使用する場合には、ｐＨ調整剤を任意には独立のバイアル又は容器に入れて供給することができ、その結果としてキットのユーザーは多段操作の一部としてｐＨを調整することができる。
【００８３】
「フィラー」という用語は、製造及び凍結乾燥中における材料の取扱いを容易にすることができる薬学的に許容される増量剤を意味する。好適なフィラーには、塩化ナトリウムのような無機塩、及びスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースのような水溶性糖又は糖アルコールがある。
【００８４】
第４の態様の放射性医薬組成物は、無菌製造条件下で（即ち、クリーンルーム内で）製造することで、所望の無菌で非発熱性の生成物を得ることができる。基本構成部分、特に関連する試薬並びにイメージング剤に接触する装置部品（例えば、バイアル）は無菌であることが好ましい。かかる構成部分及び試薬は、無菌濾過或いは（例えば、γ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は（例えば、エチレンオキシドによる）化学処理を用いる）終末滅菌をはじめとする、当技術分野で公知の方法によって滅菌できる。一部の構成部分を予め滅菌しておけば、最小数の操作を実施すれば済むので好ましい。しかし、予防策として、医薬組成物の製造における最終段階として少なくとも無菌濾過段階を含めることが好ましい。
【００８５】
本発明の放射性医薬組成物は、以下のような様々な方法によって製造できる。即ち、
（ｉ）18Ｆ放射性標識段階をクリーンルーム環境中で実施する無菌製造技法、
（ｉｉ）無菌製造を用いずに18Ｆ放射性標識を実施した後、最終段階で滅菌［例えば、γ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は（例えば、エチレンオキシドによる）化学処理］を行う終末滅菌方法、
（ｉｉｉ）式ＩＩＩの好適な前駆体及び任意の賦形剤を含む無菌の非放射性キット製剤を適当な18Ｆ供給物と反応させるキット方法、並びに
（ｉｖ）自動化合成装置を用いて18Ｆ放射性標識段階を実施する無菌製造技法。
方法（ｉｖ）が好ましい。この方法で使用するためのキットは第５の実施形態（下記）に記載される。
【００８６】
「自動化合成装置」という用語は、Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙ  ｅｔ  ａｌ［Ｃｌｉｎ．Ｐｏｓｉｔｒ．Ｉｍａｇ．，２（５），２３３−２５３（１９９９）］によって記載されているような単位操作の原理に基づく自動化モジュールを意味する。「単位操作」という用語は、複雑なプロセスが一連の簡単な操作又は反応に還元されることを意味し、これは一定範囲の材料に適用できる。かかる自動化合成装置は、特に放射性医薬組成物が所望される場合、本発明の方法にとって好ましい。これらは、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、ＣＴＩ  Ｉｎｃ、Ｉｏｎ  Ｂｅａｍ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｓ．Ａ．（Ｃｈｅｍｉｎ  ｄｕ  Ｃｙｃｌｏｔｒｏｎ  ３，Ｂ−１３４８  Ｌｏｕｖａｉｎ−Ｌａ−Ｎｅｕｖｅ，ベルギー）、Ｒａｙｔｅｓｔ社（ドイツ）及びＢｉｏｓｃａｎ社（米国）を含む一連の供給業者から商業的に入手できる［Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙ  ｅｔ  ａｌ，上記］。
【００８７】
市販の自動化合成装置はまた、放射性医薬品製造の結果として生じる液体放射性廃棄物用の適当な容器を提供する。通例、自動化合成装置は放射線遮蔽を備えていないが、それはかかる装置が適宜に構成された放射能作業セル内で使用するように設計されているからである。放射能作業セルは、オペレーターを潜在的な放射線量から保護するために適した放射線遮蔽を与えると共に、化学薬品蒸気及び／又は放射性蒸気を除去するための換気を可能にする。自動化合成装置は、好ましくはカセットを含んでいる。「カセット」という用語は、合成装置の可動部分の機械的運動がカセットの外側から（即ち、外部から）カセットの動作を制御するようにして、（上記に定義したような）自動化合成装置上に着脱自在かつ交換可能に装着し得るように設計された装置部分を意味する。好適なカセットは直線状に並んだ弁の列を含み、その各々は倒立隔壁密封バイアルの針穿刺又は気密連結継手によって試薬又はバイアルを装着することができるポートに連結されている。各弁は、自動化合成装置の対応する可動アームとかみ合う雄雌継手を有している。かくして、カセットを自動化合成装置に装着した場合、アームの外部回転が弁の開閉を制御する。自動化合成装置の追加の可動部分は、注射器のプランジャー先端をつかみ、それによって注射器外筒を上昇又は降下させるように設計されている。
【００８８】
カセットは融通性の高いものであって、通例は試薬を装着することができる複数の位置、及び試薬のシリンジバイアル又はクロマトグラフィー用カートリッジ（例えば、固相抽出又はＳＰＥ）を装着するために適した複数のポートを有している。カセットは常に反応器を含んでいる。かかる反応器は好ましくは１〜１０ｃｍ3、最も好ましくは２〜５ｃｍ3の容積を有しており、カセット上の様々なポートからの試薬又は溶媒の移送を可能にするため、カセットの３以上のポートが反応器に連結されるように構成されている。好ましくは、カセットは直線状に並んだ１５〜４０の弁、最も好ましくは２０〜３０の弁を有しており、２５の弁が特に好ましい。カセットの弁は好ましくはそれぞれ同一であり、最も好ましくは三方弁である。かかるカセットは放射性医薬品製造のために適するように設計されており、したがって医薬品グレードの材料であって理想的には放射線分解にも耐える材料で製造されている。
【００８９】
本発明の好ましい自動化合成装置は、放射性フッ素化放射性医薬品の所定バッチの製造を実施するために必要なすべての試薬、反応器及び機器を含む使い捨て又は１回使用のカセットを含んでいる。かかるカセットは、単にカセットを交換するだけで、自動化合成装置が相互汚染のリスクを最小限に抑えながら各種の放射性医薬品を製造できる融通性を有することを意味する。カセットアプローチはまた、次の利点も有する。即ち、装置構成が単純化されてオペレーターエラーのリスクが低減すること、ＧＭＰ（医薬品製造品質管理基準）コンプライアンスが向上すること、マルチトレーサーの使用が可能になること、製造作業間の変更が迅速になること、カセット及び試薬の作業前自動診断検査が行えること、実施すべき合成に対して化学試薬の自動バーコードクロスチェックが行えること、試薬が追跡可能であること、１回使用であるために相互汚染、不正改造及び乱用による耐性のリスクがないことがある。
【００９０】
本発明のこの態様には、第２の態様の放射性医薬組成物を製造するための自動化合成装置の使用も包含される。
【００９１】
第５の態様では、本発明は、第４の態様の放射性医薬組成物を製造するためのキットであって、第２の態様の前駆体又は第１の態様で定義されたＬＢＰペプチドを無菌固体形態で含んでいる結果、適当な化学形態の無菌18Ｆ供給物で再構成すれば溶解が起こって所望の放射性医薬組成物を与えるキットを提供する。
【００９２】
「適当な化学形態」という用語は、第３の態様（上記）で定義した通りである。
【００９３】
第５の態様における前駆体の好ましい態様は、本発明の第２の態様（上記）に記載した通りである。
【００９４】
「キット」という用語は、所望の放射性医薬組成物を製造するために必要な化学薬品を使用説明書と共に含んでなる１以上の非放射性医薬品グレード容器を意味する。キットは、18Ｆで再構成することで、最小限の操作でヒトへの投与に適した溶液を与えるように設計されている。
【００９５】
無菌固体形態は、好ましくは凍結乾燥固体である。
【００９６】
非放射性キットはさらに、上記に記載したようなトランスキレーター、放射線防護剤、抗菌防腐剤、ｐＨ調整剤又はフィラーのような追加成分を任意に含むことができる。
【００９７】
本発明のこの態様には、第５の態様のキットを含むカセットを自動化合成装置と共に使用して第２の態様の放射性医薬組成物を製造するためのカセットの使用も包含される。
【００９８】
第６の態様では、本発明は、ヒト又は動物の身体をイメージングする方法であって、当該方法はＰＥＴを用いて第１の態様のイメージング剤又は第４の態様の組成物が分布した前記身体の少なくとも一部の画像を生成する段階を含み、前記イメージング剤又は前記組成物は前記身体に予め投与されている方法を提供する。
【００９９】
第６の態様におけるイメージング剤又は組成物の好ましい態様は、本発明のそれぞれ第１及び第４の態様（上記）に記載した通りである。第６の態様の方法は、好ましくは、身体の一部が異常なアポトーシスが関与している疾患状態である場合に実施される。「異常なアポトーシス」という用語は、プログラム細胞死過程のディスレギュレーションを意味する。かかるディスレギュレーションは、癌及び自己免疫障害のようなアポトーシスの阻害に関連するもの、並びに神経変性疾患、血液学的疾患、ＡＩＤＳ、虚血症及び同種移植片拒絶のような過活性アポトーシスに関連するものを含む、多数の疾患状態に関係づけられている。
【０１００】
また、アポトーシスがアテローム性動脈硬化病変の不安定性の一因であるという新たな証拠も出現している。破裂しやすいプラークは、通例大きい壊死コア及び薄くなった繊維質キャップを有していて、後者はマクロファージ及びリンパ球の著しい浸潤を受ける。進行病変内での細胞死の結果は明確には決定されていないが、形態学的データは、マクロファージのアポトーシスが壊死コアのサイズに大きく寄与する一方、平滑筋細胞（ＳＭＳ）のアポトーシスが繊維質キャップの薄化をもたらすことを示唆している。マクロファージの顕著なアポトーシスはプラーク破裂の部位で起こると考えられ、恐らくは破裂過程の一因である。したがって、アポトーシスの検出は破裂しやすいアテローム性動脈硬化病変を確認するための助けとなろう。
【０１０１】
したがって、アポトーシスの可視化及び定量化は、かかるアポトーシス関連病態生理学の診断において有用である。
【０１０２】
第６の態様のイメージング方法は、任意には、薬物によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニターするために繰り返して実施できる。この場合、前記イメージングは前記薬物による治療前及び治療後に実施され、任意には前記薬物による治療中にも実施される。これらの疾患に関する治療学的処置は、場合に応じてＰＣＤ過程を促進又は抑制することにより、バランスの取れたアポトーシスを回復することを目指している。特に興味深いのは、癌療法の効力の早期モニタリングにより、状態が末期になる前に悪性増殖を確実に制御することである。
【０１０３】
第７の態様では、本発明は、ヒト又は動物の身体の診断方法における、第１の態様のイメージング剤、第４の態様の組成物又は第５の態様のキットの使用を提供する。
【０１０４】
第７の態様におけるイメージング剤又は組成物の好ましい態様は、本発明のそれぞれ第１及び第４の態様（上記）に記載した通りである。第７の態様の使用は、好ましくはヒト又は動物の身体の診断が、異常なアポトーシスが関与している疾患状態の診断である場合のものである。かかる「異常なアポトーシス」は、第６の態様（上記）に記載した通りである。
【実施例】
【０１０５】
下記に詳述する非限定的な実施例によって本発明を例示する。実施例１及び実施例２はそれぞれ、２種の異なるアミノ保護基で保護された本発明のアミノオキシ官能化ＬＢＰペプチドである前駆体１Ａ及び前駆体１Ｂの合成法を示している。実施例３は、本発明のアミノオキシ官能化ＬＢＰペプチドである前駆体２の合成法を示している。実施例４は、フッ素同位体が19Ｆである本発明の非放射性フッ素化化合物である化合物１の合成法を示している。化合物１は、18Ｆ対応物（化合物１Ａ）の生物学的結合性を決定するために有用である。実施例５は、18Ｆ−ベンズアルデヒドを用いて前駆体１を18Ｆ標識して本発明の18Ｆ標識化合物（化合物１Ａ）を得る方法を示している。実施例６はホスファチジルエタノールアミンに対する結合親和性データを示し、化合物１の生成が結合親和性に対して顕著な効果を有しないことを証明している。化合物１Ａは、ＥＬ４マウスリンパ腫異種移植片モデルにおける体内分布によって評価した。この試験からの結果は実施例７に示されている。
【０１０６】
略語
通常の一文字又は三文字アミノ酸略語が使用される。
Ａｃ：          アセチル
ＡＣＮ：        アセトニトリル
Ｂｏｃ：        ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
ＤＩＰＥＡ：    Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＳＯ：      ジメチルスルホキシド
ＥＯＳ：        合成終了時
Ｆｍｏｃ：      ９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＡＴＵ：      Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’
−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＰＬＣ：      高速液体クロマトグラフィー
ＮＭＰ：        １−メチル−２−ピロリジノン
ＰＢＳ：        リン酸緩衝食塩水
ＰｙＢＯＰ：    ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘ
キサフルオロホスフェート
ＲＡＣ：        放射能濃度
ＲＣＰ：        放射化学純度
ｔＢｕ：        ｔｅｒｔ−ブチル
ＴＦＡ          トリフルオロ酢酸
ＴＦＰ：        テトラフルオロフェニル
ＴR：            保持時間
【０１０７】
【表１】
2014505021.tif 000011
【実施例１】
【０１０８】
実施例１：（Ｂｏｃ−アミノオキシ）アセチル−ジュラマイシン（前駆体１Ａ）の合成
【０１０９】
【化１０】
2014505021.tif 000012
ジュラマイシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、８．０ｍｇ、４．０μｍｏｌ）、（Ｂｏｃ−アミノオキシ）酢酸ＴＦＰエステル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、１．３ｍｇ、３．８μｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２．１μＬ、１２．５μｍｏｌ）をＮＭＰ（１ｍＬ）に溶解した。反応混合物を３０分間振盪した。次いで、混合物を水／０．１％ＴＦＡ（６ｍＬ）で希釈し、分取ＨＰＬＣを用いて生成物を精製した。
【０１１０】
分取ＨＰＬＣ（以下の条件、即ち溶媒Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及び溶媒Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、勾配：４０分で２０〜５０％Ｂ、流量：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μｍ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍを用いるＢｅｃｋｍａｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｇｏｌｄクロマトグラフィーシステム）によって精製することで、３．８ｍｇの純粋な前駆体１Ａ（収率４４％）を得た。精製物質を分析ＬＣ−ＭＳによって分析した（勾配：５分で２０〜７０％Ｂ、ｔR：１．９３分、実測ｍ／ｚ：１０９３．７、予測ＭＨ22+：１０９３．５）。
【０１１１】
前駆体１の位置異性体の分離は、上記の分析又は分取ＨＰＬＣ条件下で達成することはできなかった。各々の場合において、２種の位置異性体は単一のピークてして溶出した。
【０１１２】
しかし、前駆体１Ａの位置異性体の分離は、一層穏やかな溶出条件（即ち、勾配：５分で２５〜３５％）下での分析ＨＰＬＣによって達成できる。ＬＣ−ＭＳは、ｔR：２．０分、実測ｍ／ｚ：１０９３．７及びｔR：２．３分、実測ｍ／ｚ：１０９３．７、予測ＭＨ22+：１０９３．５である。同様な条件は、分取ＨＰＬＣによって各位置異性体を単離するためにも使用できる。
【実施例２】
【０１１３】
実施例２：（Ｅｅｉ−アミノオキシ）アセチル−ジュラマイシン（前駆体１Ｂ）の合成
【０１１４】
【化１１】
2014505021.tif 000013
ジュラマイシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、５０ｍｇ、２５μｍｏｌ）、（Ｅｅｉ−アミノオキシ）酢酸ＮＨＳエステル（Ｉｒｉｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．社、５．１ｍｇ、２０μｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１７μＬ、１００μｍｏｌ）をＮＭＰ（１ｍＬ）に溶解した。反応混合物を４５分間振盪した。次いで、混合物を水／０．１％酢酸（８ｍＬ）で希釈し、分取ＨＰＬＣを用いて生成物を精製した。
【０１１５】
分取ＨＰＬＣ（溶媒Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及び溶媒Ｂ＝ＡＣＮを用いて、勾配：４０分で１４〜４５％Ｂとした点を除き、実施例１と同様）によって精製することで、１４ｍｇの純粋な前駆体１Ｂ（収率２６％）を得た。精製物質をＬＣ−ＭＳによって分析した（勾配：５分で２０〜５０％Ｂ、ｔR：２．５分及び２．７分、実測ｍ／ｚ：１０７８．８、予測ＭＨ22+：１０７８．５）。
【０１１６】
（Ｅｅｉ−アミノオキシ）アセチル−ジュラマイシンの位置異性体のクロマトグラフィー分割は、０．１％ＴＦＡを用いる分析ＨＰＬＣによって達成できた。しかし、Ｅｅｉ保護基は０．１％ＴＦＡ中で不安定であるので、分取分離は実行できなかった。位置異性体は、０．１％酢酸を用いては分割されなかった。
【実施例３】
【０１１７】
実施例３：アミノオキシアセチル−ジュラマイシン（前駆体２）の合成
【０１１８】
【化１２】
2014505021.tif 000014
前駆体１Ｂ（１４ｍｇ）をアルゴン下で２．５％ＴＦＡ／水（２．８ｍＬ）と４０分間反応させた。反応混合物を水（３１ｍＬ）で希釈し、生成物を（イソプロパノール／ドライアイスを用いてアルゴン下で凍結して）凍結乾燥することで、１８ｍｇの前駆体２を得た。凍結乾燥生成物をＬＣ−ＭＳによって分析した（勾配：５分で２０〜５０％Ｂ、ｔR：２．５分及び２．１分、実測ｍ／ｚ：１０４３．８、予測ＭＨ22+：１０４３．５）。
【０１１９】
前駆体２の位置異性体のクロマトグラフィー分割は、０．１％ＴＦＡを用いる分析ＨＰＬＣによって達成できた。しかし、遊離アミノオキシ基が溶媒及び雰囲気中の微量のケトン及びアルデヒドに対して高い反応性を有するため、この段階で位置異性体を分離する試みは行わなかった。
【実施例４】
【０１２０】
実施例４：Ｎ−（４−フルオロベンジリデン）−アミノオキシアセチル−ジュラマイシン（化合物１）の合成
【０１２１】
【化１３】
2014505021.tif 000015
前駆体１Ａ（実施例１、１．０ｍｇ、０．４６μｍｏｌ）をＴＦＡ（１ｍＬ）で３０分間処理した。ＴＦＡを真空中で除去し、残留物を４０％ＡＣＮ／水（１ｍＬ）に溶解した。４−フルオロベンズアルデヒド（１．０μｌ、９．２μｍｏｌ）を添加し、反応混合物を３０分間振盪した。次いで、反応混合物を２０％ＡＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ（６ｍＬ）で希釈し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。
【０１２２】
分取ＨＰＬＣ（勾配：４０分で２０〜５０％Ｂとした点を除き、実施例１と同様）によって精製することで、０．６ｍｇの純粋な化合物１（収率６０％）を得た。精製物質を分析ＬＣ−ＭＳによって分析した（勾配：５分で２０〜７０％Ｂ、ｔR：２．０９分、実測ｍ／ｚ：１０９６．５、予測ＭＨ22+：１０９６．５）。化合物１の位置異性体の分離は、分析又は分取ＨＰＬＣを用いて達成することはできなかった。各々の場合において、２種の位置異性体は単一のピークてして溶出した。
【実施例５】
【０１２３】
実施例５：前駆体２からの化合物１Ａの放射合成
化合物１Ａは、自動化合成装置及びカセット（ＦＡＳＴｌａｂ（商標）、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を用いる２段階操作で製造される。
【０１２４】
段階（ａ）：18Ｆ−ベンズアルデヒドの合成及び精製
銀ターゲットを有するＧＥＭＳ  ＰＥＴトレースサイクロトロンを用いて、［18Ｆ］フッ化物イオンを［18Ｏ］（ｐ，ｎ）［18Ｆ］核反応により生成した。１．５〜３．５ｍＬの総ターゲット体積を使用した。放射性フッ化物イオンを（炭酸塩でプレコンディショニングした）Ｗａｔｅｒｓ  ＱＭＡカートリッジ上に捕捉し、水（８０μＬ）及びアセトニトリル（３２０μＬ）中のＫｒｙｐｔｏｆｉｘ2.2.2（４ｍｇ、１０．７μＭ）及び炭酸カリウム（０．５６ｍｇ、４．１μＭ）の溶液でフッ化物イオンを溶出した。窒素を用いて溶液をＱＭＡカートリッジから反応器に排出した。窒素の定常流及び真空下において、［18Ｆ］フッ化物イオンを１２０℃で９分間乾燥した。ジメチルスルホキシド（１．１ｍＬ）中のトリメチルアンモニウムベンズアルデヒドトリフレート［Ｈａｋａ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２７，８２３−８３３（１９８９）］（３．３ｍｇ、１０．５μＭ）を乾燥した［18Ｆ］フッ化物イオンに添加し、混合物を１０５℃で７分間加熱して４−［18Ｆ］フルオロベンズアルデヒドを生成した。
【０１２５】
次いで、粗標識混合物を水酸化アンモニウム溶液で希釈し、（ＦＡＳＴｌａｂシーケンスの一部として水でプレコンディショニングした）ＭＣＸ＋  ＳＰＥカートリッジ上に装填した。カートリッジを水で洗浄し、窒素ガスで乾燥した後、４−［18Ｆ］フルオロベンズアルデヒドをエタノール（１ｍＬ）で反応器に戻し溶出した。４〜７％（崩壊補正値）の［18Ｆ］フルオロベンズアルデヒドがカートリッジ上に捕捉されたままに残った。
【０１２６】
段階（ｂ）：アミノオキシ誘導体（前駆体２）とのアルデヒド縮合
前駆体２（５ｍｇ）をＦＡＳＴｌａｂ反応器に移した後、４−［18Ｆ］フルオロベンズアルデヒドをＭＣＸ＋カートリッジから溶出した。次いで、混合物を６０℃で５分間加熱した。次いで、粗反応材料を水で希釈し、ｔＣ２  ＳＰＥカートリッジ上に装填した。次いで、これを窒素及び真空で乾燥し、エタノール溶液で洗浄し、再び乾燥した。次いで、化合物１Ａをエタノール、続いて水（全部で６ｍＬ）で収集バイアル中に溶出した。ＥＯＳ収率は１６〜３４％（非崩壊補正値）であった。分析ＨＰＬＣにより、化合物１Ａは９７％のＲＣＰで製造され、少なくとも１８０分間にわたって安定である（ＲＣＰ  ９４％、ＲＡＣ  １５０ＭＢｑ／ｍＬ）ことが確認された。
【０１２７】
ＨＰＬＣ条件
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，Ｊｕｐｉｔｅｒ  ４ｕ，Ｐｒｏｔｅｏ  ９０Ａ，２５０×  ４．６ｍｍ。
勾配：０分      ５０％Ｂ
５分      ５０％Ｂ
２０分    ９０％Ｂ
２５分    ９０％Ｂ
流量：１ｍＬ／分。
ＵＶ検出：２５４ｎｍ。
移動相Ａ：５０ｍＭ酢酸アンモニウム。
移動相Ｂ：メタノール。
化合物１Ａ（ＴR）＝２２．６分。
【実施例６】
【０１２８】
実施例６：ホスファチジルエタノールアミンに対する親和性
Ｂｉａｃｏｒｅ  ３０００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、ウプサラ））にＬ１チップを取り付けた。ＰＯＰＥ／ＰＯＰＣ（２０％ＰＥ）から作製したリポソームを、製造者によって推奨される捕獲技法を用いた親和性試験のために適用した。各ランは、チップ表面の活性化、リポソームの固定化、ペプチドの結合、並びにリポソーム及びペプチドの洗浄除去（再生）からなっていた。同様な適用例は、Ｆｒｏｓｔｅｌｌ−Ｋａｒｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ［Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖ．９４（１），（２００５）］）に見出すことができる。各サイクル後には、流れる緩衝液による針、チューブ及び液体取扱いシステムの完全な洗浄を実施した。
【０１２９】
ＢＩＡＣＯＲＥソフトウェア：すべての方法指示を含むＢＩＡＣＯＲＥ制御ソフトウェアを適用した。予めプログラムされた指示に対する完全な制御を得るため、コマンド付きの方法がＢＩＡＣＯＲＥ  Ｍｅｔｈｏｄ  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ  Ｌａｎｇｕａｇｅ（ＭＤＬ）でも書かれていた。センサーグラムを分析するためには、ＢＩＡＣＯＲＥ評価ソフトウェアを適用した。
【０１３０】
化合物１は、ホスファチジルエタノールアミンに対する良好な結合剤であることが判明した。ジュラマイシン及び化合物１に関するＫDは、共に１００ｎＭ未満であった。結果を下記表２に示す。
【０１３１】
【表２】
2014505021.tif 000016
【実施例７】
【０１３２】
実施例７：腫瘍取込み試験
化合物１Ａを、ＥＬ４マウスリンパ腫異種移植片モデルにおける体内分布によって評価した。簡単に述べれば、Ｃ５７／Ｂ１６マウスにおける腫瘍増殖の確立後、動物を
（ｉ）食塩水／ＤＭＳＯ溶液、又は
（ｉｉ）化学療法剤（５０％食塩水／５０％ＤＭＳＯ中の６７ｍｇ／ｋｇエトポシド及び１００ｍｇ／ｋｇシクロホスファミド）
で処置した。
【０１３３】
療法剤又はビヒクルでの処置から２４時間後、動物を化合物１Ａの体内分布に関して評価した。加えて、腫瘍を摘出し、カスパーゼ活性の測定（カスパーゼ−Ｇｌｏアッセイ）によってアポトーシスのレベルを評価した。化合物１Ａの腫瘍保持の増加が認められたが、これにはアポトーシスの増加が伴っていた。
【配列表】
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【国際調査報告】
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2014505021.tif 000018
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