(57)【要約】化合物に対する応答、好ましくは、前記化合物（ここで、該化合物は一般式（Ｉ）のフラザノベンゾイミダゾール化合物である）に対する被験体における癌などの疾患の耐性を予測するためのバイオマーカーとしてのｇｌｕチューブリンの使用。
2014505876.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物に対する応答を予測するためのバイオマーカーとしてのｇｌｕ−チューブリンの使用であって、該化合物が、一般式（Ｉ）：
【化２２】
2014505876.tif 000038
［式中、
Ｒは、フェニル、チエニル又はピリジニルを表し
ここで、フェニルは、アルキル、ハロ−低級アルキル、ヒドロキシ−低級アルキル、低級アルコキシ−低級アルキル、アシルオキシ−低級アルキル、フェニル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、ヒドロキシ−低級アルコキシ、低級アルコキシ−低級アルコキシ、フェニル−低級アルコキシ、低級アルキルカルボニルオキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、低級アルコキシカルボニルアミノ、低級アルキルカルボニルアミノ、置換アミノ（窒素上の２個の置換基が、窒素と一緒になって、ヘテロシクリルを形成する）、低級アルキルカルボニル、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、シアノ、ハロゲン及びニトロから独立して選択される１又は２個の置換基により場合により置換されており；そして、２個の隣接する置換基は、メチレンジオキシであり；
そして、ピリジニルは、低級アルコキシ、アミノ又はハロゲンにより場合により置換されており；
Ｘは、基Ｃ＝Ｙを表し、ここで、Ｙは、酸素、又はヒドロキシもしくは低級アルコキシにより置換されている窒素を表し；
Ｒ１は、水素、低級アルキルカルボニル、ヒドロキシ−低級アルキル又はシアノ−低級アルキルを表し；
Ｒ２、Ｒ３及びＲ６は、水素を表し；
Ｒ４及びＲ５は、互いに独立して、水素、低級アルキル又は低級アルコキシを表すか；
又はＲ４及びＲ５は、一緒になって、メチレンジオキシを表す］
で表される化合物及びその薬学的に許容しうる誘導体であるか；又は
［式中、
Ｒは、フェニル又はピリジニルを表し
ここで、フェニルは、アルキル、ハロ−低級アルキル、ヒドロキシ−低級アルキル、低級アルコキシ−低級アルキル、アシルオキシ−低級アルキル、フェニル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、ヒドロキシ−低級アルコキシ、低級アルコキシ−低級アルコキシ、フェニル−低級アルコキシ、低級アルキルカルボニルオキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、低級アルコキシカルボニルアミノ、低級アルキルカルボニルアミノ、置換アミノ（窒素上の２個の置換基が、窒素と一緒になって、ヘテロシクリルを形成する）、低級アルキルカルボニル、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、ホルミル、シアノ、ハロゲン及びニトロから独立して選択される１又は２個の置換基により場合により置換されており；そして、２個の隣接する置換基は、メチレンジオキシであり；
そして、ピリジニルは、低級アルコキシ、アミノ又はハロゲンにより場合により置換されており；
Ｘは、酸素を表し；
Ｒ１は、水素、低級アルキルカルボニル、ヒドロキシ−低級アルキル又はシアノ−低級アルキルを表し；
Ｒ２、Ｒ３及びＲ６は、水素を表し；
Ｒ４及びＲ５は、互いに独立して、水素、低級アルキル又は低級アルコキシを表すか；
又はＲ４及びＲ５は、一緒になって、メチレンジオキシを表す］
で表される化合物及びその薬学的に許容しうる誘導体である、使用（そして、ここで、接頭語の低級は、最大７個、とりわけ、最大４個の炭素原子を有する基を意味する）。
【請求項２】
応答が、被験体における疾患の応答であり、そして、バイオマーカーのｇｌｕ−チューブリンが、人体又は動物体から採取、好ましくは人体から採取した試料（１つ又は複数）中、ex vivoで測定される、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
化合物が、
Ｒが、フェニル又はピリジニルを表し；
ここで、フェニルが、低級アルキル、低級アルコキシ、アミノ、アセチルアミノ、ハロゲン及びニトロから独立して選択される１又は２個の置換基により場合により置換されており；
そして、ピリジニルが、アミノ又はハロゲンにより場合により置換されており；
Ｘが、基Ｃ＝Ｏを表し；
Ｒ１が、水素又はシアノ−低級アルキルを表し；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６が、水素を表す
（そして、ここで、接頭語の低級は、最大７個、とりわけ、最大４個の炭素原子を有する基を意味する）、一般式（Ｉ）の化合物及びその薬学的に許容しうる誘導体である、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
化合物が、下記式：
【化２３】
2014505876.tif 000039
（式中、Ｒ、Ｙ及びＲ１は、以下のように定義される）
【表１０】
2014505876.tif 000040
により示されるか又はその薬学的に許容しうる誘導体である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
化合物が、以下：
【化２４】
2014505876.tif 000041
又はその薬学的に許容しうる誘導体である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
薬学的に許容しうる誘導体が、請求項１〜５のいずれか一項に定義される一般式（Ｉ）の化合物の塩、溶媒和物、プロドラッグ、プロドラッグの塩、多形及び異性体からなる群より選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
プロドラッグが、請求項１〜５のいずれか一項に定義される一般式（Ｉ）の化合物のＲ基内に存在するアミノ基と、グリシン、アラニン又はリシンのカルボキシ基から形成されるアミドである、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
化合物が、以下；
【化２５】
2014505876.tif 000042
又はその薬学的に許容しうる塩、好ましくはその塩酸塩、最も好ましくは、その二塩酸塩である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記化合物に対する被験体における疾患の耐性を予測するための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
疾患が、新生物疾患又は自己免疫疾患、好ましくは、癌である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
疾患が、乳癌、前立腺癌、子宮頸癌、卵巣癌、胃癌、結腸直腸癌、膵臓癌、肝臓癌、脳腫瘍、神経内分泌癌、肺癌、腎臓癌、血液悪性腫瘍、黒色腫及び肉腫からなる群より選択され、好ましくは、疾患が、乳癌、子宮頸癌、卵巣癌、結腸直腸癌、肺癌及び黒色腫からなる群より、より好ましくは、卵巣癌、結腸直腸癌、肺癌及び黒色腫からなる群より選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
被験体からの試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルが、標準値又は標準値のセットに対してより高い場合に耐性であると予測する、請求項２〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
試料（１つ又は複数）中のｇｌｕ−チューブリンレベルが、
ｉ）  同じ腫瘍組織型を有する被験体からの標準値又は標準値のセットに対して；又は
ii）  処置開始後に採取され、処置開始前に同じ被験体から採取された試料（１つ又は複数）と比較され；又は
iii）  正常な細胞又は組織からの標準値又は標準値のセットに対して；
より高い場合に、耐性であると予測される、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
バイオマーカーが、請求項１〜８のいずれか一項に定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体で処置するために、疾患、好ましくは、癌を患っている又は患う可能性がある被験体を選択するために使用される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
試料が、正常な組織、腫瘍組織又は循環腫瘍細胞に由来し、好ましくは、腫瘍組織に由来する、請求項２〜１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
請求項１〜８のいずれか一項に定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体に対する、被験体における疾患の応答を予測するための方法であって、
ａ）  被験体から事前に得られた試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルを測定して、このレベルを表す値（１つ又は複数）を得る工程；及び
ｂ）  工程ａ）からの値（１つ又は複数）と標準値又は標準値のセットを比較する工程
を含む方法。
【請求項１７】
予測される応答が、耐性である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
被験体からの試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルが標準値又は標準値のセットに対してより高い場合に、耐性であると予測する、請求項１６又は１７に記載の方法。
【請求項１９】
それを必要とする被験体において新生物疾患又は自己免疫疾患、好ましくは癌を処置する方法であって、被験体からの試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルを測定して、このレベルを表す値（１つ又は複数）を得る工程、及び前記試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルが、標準値又は標準値のセットより高くない場合、被験体を請求項１〜８のいずれか一項に定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体で処置する工程を含む、方法。
【請求項２０】
被験体からの試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルを測定して、このレベルを表す値（１つ又は複数）を得る工程、及びｇｌｕ−チューブリンレベルが、標準値又は標準値のセットより高くない場合、被験体を請求項１〜８のいずれか一項に定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体で処置する工程を含む、新生物疾患又は自己免疫疾患、好ましくは癌の処置において使用するためのｇｌｕ−チューブリン。
【請求項２１】
ｇｌｕ−チューブリンレベルが標準レベル又は標準レベルのセットと比較してより高い試料を有する被験体中のｇｌｕ−チューブリンレベルを最初に低下させて、次に、被験体を請求項１〜８のいずれか一項に定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体で処置することにより、新生物疾患又は自己免疫疾患、好ましくは癌を処置する方法。
【請求項２２】
請求項１〜８のいずれか一項に定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体に対する応答を予測するためのキットであって、試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルを測定するために必要な試薬を含み、好ましくは、試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルと比較するための標準値又は標準値のセットを含む比較測定基準をさらに含む、キット。
【請求項２３】
試薬が、ｇｌｕ−チューブリンのための検出部を含む捕捉試薬及び検出試薬を含み、好ましくは、捕捉試薬が、抗体である、請求項２２に記載のキット。
【請求項２４】
キットが、下記式：
【化２６】
2014505876.tif 000043
で表される化合物又はその薬学的に許容しうる塩、特に、その二塩酸塩を含む、請求項２２又は２３に記載のキット。
【請求項２５】
請求項１〜８のいずれか一項に定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体に対する応答を予測するための装置であって、試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルを測定するために必要な試薬、及び試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルと比較するための標準値又は標準値のセットを含む比較測定基準を含む、装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般式（Ｉ）の化合物、例えば、３−（４−｛１−［２−（４−アミノ−フェニル）−２−オキソ−エチル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−フラザン−３−イルアミノ）−プロピオニトリル（ＢＡＬ２７８６２）に対する、新生物疾患又は自己免疫疾患などの疾患、好ましくは、癌の応答を予測するためのバイオマーカーとしてのｇｌｕ−チューブリンの使用に関する。他の態様においては、本発明は、方法及びキットならびにバイオマーカーの使用を含む処置方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
微小管は、細胞骨格の構成成分の１つであり、α−チューブリンとβ−チューブリンの二量体から構成されている。微小管を標的とする薬剤は、広域スペクトル活性を有する最も効果的な細胞傷害性化学療法剤の１つである。微小管不安定化剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン及びビノレルビンなどのビンカアルカロイド）は、例えば、リンパ芽球性白血病及びリンパ腫などの血液悪性腫瘍ならびに肺癌などの固形腫瘍のいくつかのタイプの処置において使用される。微小管安定化剤（例えば、パクリタキセル、ドセタキセルなどのタキサン類）は、例えば、乳癌、肺癌及び前立腺癌を含む固形腫瘍の処置において使用される。
【０００３】
しかし、これらの公知の微小管標的薬剤に対して耐性が生じる恐れがある。耐性は、本来備わっているものか、又はこれらの薬剤に曝露された後に獲得されるものでありうる。従って、そのような耐性は、患者の生存率ならびに処置計画の選択に影響を及ぼす。耐性のいくつかの潜在的メカニズムが特定されており、これには、タキサンの結合を減少させることが知られている、β−チューブリンサブタイプＩＩＩのレベルの上昇及びβ−チューブリンサブタイプＩの突然変異の獲得などの微小管標的の欠陥が含まれる。さらに、他の細胞タンパク質の欠陥が、排出ポンプであるＰ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐポンプ、多剤耐性タンパク質１又はＭＤＲ１としても知られている）の過剰発現などの、特定の微小管標的薬剤に対する耐性と関連していることが示唆されている。そのため、そのような因子を、これらの従来の微小管標的薬剤に対する耐性のバイオマーカーとして使用してもよい。
【０００４】
比較的最近発見された微小管不安定化剤のクラスは、下記式：
【化１】
2014505876.tif 000003
［式中、
Ｒは、フェニル、チエニル又はピリジニルを表し
ここで、フェニルは、アルキル、ハロ−低級アルキル、ヒドロキシ−低級アルキル、低級アルコキシ−低級アルキル、アシルオキシ−低級アルキル、フェニル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、ヒドロキシ−低級アルコキシ、低級アルコキシ−低級アルコキシ、フェニル−低級アルコキシ、低級アルキルカルボニルオキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、低級アルコキシカルボニルアミノ、低級アルキルカルボニルアミノ、置換アミノ（窒素上の２個の置換基が、窒素と一緒になって、ヘテロシクリルを形成する）、低級アルキルカルボニル、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、シアノ、ハロゲン及びニトロから独立して選択される１又は２個の置換基により場合により置換されており；そして、２個の隣接する置換基は、メチレンジオキシであり；
そして、ピリジニルは、低級アルコキシ、アミノ又はハロゲンにより場合により置換されており；
Ｘは、基Ｃ＝Ｙを表し、ここで、Ｙは、酸素、又はヒドロキシもしくは低級アルコキシにより置換されている窒素を表し；
Ｒ１は、水素、低級アルキルカルボニル、ヒドロキシ−低級アルキル又はシアノ−低級アルキルを表し；
Ｒ２、Ｒ３及びＲ６は、水素を表し；
Ｒ４及びＲ５は、互いに独立して、水素、低級アルキル又は低級アルコキシを表すか；
又はＲ４及びＲ５は、一緒になって、メチレンジオキシを表す］
により包含される化合物及びその薬学的に許容しうる塩であるか；又は
［式中、
Ｒは、フェニル又はピリジニルを表し
ここで、フェニルは、アルキル、ハロ−低級アルキル、ヒドロキシ−低級アルキル、低級アルコキシ−低級アルキル、アシルオキシ−低級アルキル、フェニル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、ヒドロキシ−低級アルコキシ、低級アルコキシ−低級アルコキシ、フェニル−低級アルコキシ、低級アルキルカルボニルオキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、低級アルコキシカルボニルアミノ、低級アルキルカルボニルアミノ、置換アミノ（窒素上の２個の置換基が、窒素と一緒になって、ヘテロシクリルを形成する）、低級アルキルカルボニル、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、ホルミル、シアノ、ハロゲン及びニトロから独立して選択される１又は２個の置換基により場合により置換されており；そして、２個の隣接する置換基は、メチレンジオキシであり；
そして、ピリジニルは、低級アルコキシ、アミノ又はハロゲンにより場合により置換されており；
Ｘは、酸素を表し；
Ｒ１は、水素、低級アルキルカルボニル、ヒドロキシ−低級アルキル又はシアノ−低級アルキルを表し；
Ｒ２、Ｒ３及びＲ６は、水素を表し；
Ｒ４及びＲ５は、互いに独立して、水素、低級アルキル又は低級アルコキシを表すか；
又はＲ４及びＲ５は、一緒になって、メチレンジオキシを表す］
により包含される化合物及びその薬学的に許容しうる塩であり；
そして、ここで、接頭語の低級は、最大７個、とりわけ、最大４個の炭素原子を有する基を意味する。
【０００５】
これらの化合物は、WO2004/103994 A1（相互参照により本明細書に組み入れられる）に開示されている。これらの化合物は、腫瘍細胞増殖を停止させ、アポトーシスを誘導することが示されている。
【０００６】
式（Ｉ）の化合物の合成は、WO2004/103994 A1（相互参照により本明細書に組み入れられる）において、概要として、２９〜３５ページに、具体的には、３９〜５５ページに記載されている。これらは、本明細書に開示されるように、又は本明細書に記載のプロセスと類似の方法により調製してもよい。
【０００７】
ＢＡＬ２７８６２として知られ、そして、WO2004/103994 A1の実施例５８として示されるこのクラスの範囲内の一つの化合物（具体的に参照により本明細書に組み入れられる）は、下記構造式及び化学名を有する：
【化２】
2014505876.tif 000004
化学名：３−（４−｛１−［２−（４−アミノ−フェニル）−２−オキソ−エチル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−フラザン−３−イルアミノ）−プロピオニトリル。
又は本明細書において、化合物Ａとして示される。
【０００８】
WO2004/103994 A1の実施例５０及び７９としてそれぞれ例示されるさらなる化合物（また、具体的に相互参照により本明細書に組み入れられる）は、下記構造式及び化学名を有する：
【化３】
2014505876.tif 000005
化学名：２−［２−（４−アミノ−フラザン−３−イル）−ベンゾイミダゾール−１−イル］−１−（４−アミノ−フェニル）−エタノン
又は本明細書において、化合物Ｂとして示され、そして
【化４】
2014505876.tif 000006
化学名：３−（４−｛１−［２−（６−アミノ−ピリジン−３−イル）−２−オキソ−エチル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−フラザン−３−イルアミノ）−プロピオニトリル
又は本明細書において、化合物Ｃとして示される。
【０００９】
ＢＡＬ２７８６２は、広範な実験的固形腫瘍異種移植モデルに対して活性を有する。さらに、その活性は、従来の微小管標的薬剤（ビンカアルカロイド微小管不安定剤ならびに微小管安定剤のパクリタキセル及びエポチロンＢを含む）に対して耐性を有するものとして選択された腫瘍モデルに対してもなお保持される。ＢＡＬ２７８６２の活性は、in vitroで試験したいずれのモデルにおいても、ヒトの乳腺腫瘍異種移植片においても、Ｐ−ｇｐポンプの過剰発現により影響を受けない。また、ＢＡＬ２７８６２は、β−チューブリンサブタイプＩＩＩのレベルの上昇及びチューブリンサブタイプＩの突然変異にもかかわらずその活性を保持する。
【００１０】
従って、ＢＡＬ２７８６２の活性は、従来の微小管標的薬剤に対する耐性を付与する多くの因子により影響を受けない。
【００１１】
さらに、一般式（Ｉ）の化合物は、細胞の表現型に対して、他の微小管標的薬剤（他の微小管不安定剤を含む）と比較して、異なる効果を及ぼすことが知られている。図１に示されるように、様々な器官、例えば、肺、頸部及び乳房に由来する腫瘍細胞株を一般式（Ｉ）の化合物で処置することによって、一貫した微小管表現型が誘導される。これらの細胞の微小管を抗α−チューブリン抗体で染色すると、未処置細胞では有糸分裂紡錘体が可視化されるが、処置細胞においてはドット様構造のみが可視化されることが示される。この同じ効果は、肺癌細胞株Ａ５４９に対して、化合物Ｃ及びＢを使用することによっても示される（それぞれ図２Ａ及び２Ｂ）。しかし、これは、図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ及び４にそれぞれ示されるように、従来の微小管標的薬剤のビンブラスチン、コルヒチン、パクリタキセル及びノコダゾールで観察されるものとは大きく異なっている。微小管を抗α−チューブリン抗体で染色して、細胞を１０００×倍率で観察した（図３、４）。ＢＡＬ２７８６２で処置した細胞では、複数のドット様構造が可視化されるが、全く対照的に、他の従来の薬物では、フィラメント状の微小管構造又は高密度の微小管凝集構造が生成される。表現型レベルでのこれらの相違は、増殖抑制作用について最適と考えられる化合物用量では、分子レベルでの作用機序の相違を示唆する。
【００１２】
さらに、ＢＡＬ２７８６２が、他の微小管標的薬剤の存在下で優性な微小管表現型を導くことが知られている。ビンブラスチン、コルヒチン、パクリタキセル又はノコダゾールの単独処置では、これらの薬剤に特徴的な微小管表現型が誘導される（それぞれ、図５Ａ、５Ｄ、５Ｇ、６Ｃ〜６Ｆ）。しかし、最後の４時間、ＢＡＬ２７８６２と併用処置すると、ビンブラスチン、コルヒチン、パクリタキセル又はノコダゾールが存在し続けているにもかかわらず、これらの表現型が崩壊した（それぞれ、図５Ｂ、５Ｅ、５Ｈ、６Ｇ〜６Ｊ）。対照的に、最初にＢＡＬ２７８６２で処置し、続いて、ビンブラスチン、コルヒチン、パクリタキセル又はノコダゾールと４時間併用処置しても、ＢＡＬ２７８６２による処置と一致する表現型の生成に影響を及ぼさなかった（それぞれ、図５Ｃ、５Ｆ、５Ｉ、６Ｋ〜６Ｎ）。
【００１３】
これらの全てのデータは、ＢＡＬ２７８６２が従来の微小管標的薬剤とは異なる機序で微小管生物学に影響を及ぼすことを実証している。
【００１４】
従って、従来の微小管標的薬剤に関する情報からは、特定の遺伝子が式（Ｉ）の化合物の作用に関与しているかどうか、又はどのように関与しているかについて予測することができない。
【００１５】
本発明の目的は、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体に対する応答と関連する因子を同定すること、例えば、下記で定義される一般式（Ｉ）の化合物、特に、ＢＡＬ２７８６２又はその薬学的に許容しうる誘導体に対する耐性と関連する因子を同定することである。
【００１６】
驚くべきことに、ｇｌｕ−チューブリンを、下記で定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体による処置に対する応答のバイオマーカーとして使用してもよいことが見出された。
【００１７】
本発明の１つの好ましい実施態様においては、腫瘍試料中の比較的高いｇｌｕ−チューブリンレベルは、以下に記載されるように、ＢＡＬ２７８６２に対する自然耐性及び獲得耐性と関連している。
【００１８】
チューブリンは、脱チロシン化／チロシン化、アセチル化、グルタミン酸化、ポリグリシン化、セリン残基のリン酸化、及びチロシン残基のリン酸化を含む、様々な翻訳後修飾を受けることから、最も多く修飾されるタンパク質の１つとして知られている。これまでに記載された多くのα−チューブリン遺伝子から、チューブリンのカルボキシ末端にチロシンが存在することが予測される。近年、チューブリンが重合して、微小管を構築すると、いくつかの場合では、カルボキシペプチダーゼ（チューブリンカルボキシペプチダーゼ又はチューブリンチロシンカルボキシペプチダーゼ、ＴＴＣＰ）が作用し、α−チューブリンからＣ−末端のチロシンが除去されて、最後から２番目のグルタミン酸がむき出しになると考えられている。別の酵素のチューブリンチロシンリガーゼ（ＴＴＬ）が、このチロシンと再結合することができる。細胞におけるこの脱チロシン化／チロシン化サイクルの正確な機能は、まだ解明されていない。
【００１９】
Ｃ−末端にチロシンではなく、グルタミン酸を有するα−チューブリンの形態は、ｇｌｕ−チューブリン又はｇｌｕチューブリン又は脱チロシン化チューブリンとして知られている。ｇｌｕ−チューブリンという用語は、本明細書において、Ｃ−末端における最後のアミノ酸としてグルタミン酸を有するα−チューブリンの形態を指すために使用するものとする。ｇｌｕ−チューブリンという表示は、また、他の翻訳後修飾が追加的に存在しうる形態を包含するものとする。ｇｌｕ−チューブリンの基礎をなすα−チューブリンは、複数の変異体、サブタイプ及びイソフォームで存在することが知られており、同様に、これらを生じさせる複数のα−チューブリン遺伝子があり、そして、これらの全ては、また、ｇｌｕ−チューブリンという表示に含まれるものとする（但し、グルタミン酸が、Ｃ−末端における最後のアミノ酸である）。好ましくは、α−チューブリンのヒト変異体、サブタイプ及びイソフォームに関する（但し、グルタミン酸が、Ｃ−末端における最後のアミノ酸である）。さらに好ましい実施態様においては、チロシンではなくグルタミン酸が、翻訳後修飾後のα−チューブリンのＣ−末端における最後のアミノ酸である。α−チューブリンのサブタイプとしては、チューブリンα１Ａ、チューブリンα１Ｂ、チューブリンα１Ｃ及びチューブリンα３Ｃ／Ｄが挙げられるが、これらに限定されない。これらのサブタイプのタンパク質配列は、それぞれ、国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）の下記の参照番号：NP_006000、NP_006073、NP_116093及びNP_005992から入手可能である。これらは、また、それぞれ、図１１〜１４（NP_006000.2、NP_006073.2、NP_116093.1、NP_005992.1）にSEQ. ID No.１〜４として列挙されている。ｇｌｕ−チューブリンは、上述するように、SEQ. ID No.１〜４で表される配列のＣ−末端の最後のアミノ酸はチロシンではない。
【００２０】
本発明の一態様は、化合物に対する応答を予測するためのバイオマーカーとしてのｇｌｕ−チューブリンの使用であって、該化合物が、一般式（Ｉ）：
【化５】
2014505876.tif 000007
［式中、
Ｒは、フェニル、チエニル又はピリジニルを表し
ここで、フェニルは、アルキル、ハロ−低級アルキル、ヒドロキシ−低級アルキル、低級アルコキシ−低級アルキル、アシルオキシ−低級アルキル、フェニル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、ヒドロキシ−低級アルコキシ、低級アルコキシ−低級アルコキシ、フェニル−低級アルコキシ、低級アルキルカルボニルオキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、低級アルコキシカルボニルアミノ、低級アルキルカルボニルアミノ、置換アミノ（窒素上の２個の置換基が、窒素と一緒になって、ヘテロシクリルを形成する）、低級アルキルカルボニル、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、シアノ、ハロゲン及びニトロから独立して選択される１又は２個の置換基により場合により置換されており；そして、２個の隣接する置換基は、メチレンジオキシであり；
そして、ピリジニルは、低級アルコキシ、アミノ又はハロゲンにより場合により置換されており；
Ｘは、基Ｃ＝Ｙを表し、ここで、Ｙは、酸素、又はヒドロキシもしくは低級アルコキシにより置換されている窒素を表し；
Ｒ１は、水素、低級アルキルカルボニル、ヒドロキシ−低級アルキル又はシアノ−低級アルキルを表し；
Ｒ２、Ｒ３及びＲ６は、水素を表し；
Ｒ４及びＲ５は、互いに独立して、水素、低級アルキル又は低級アルコキシを表すか；
又はＲ４及びＲ５は、一緒になって、メチレンジオキシを表す］
で表される化合物及びその薬学的に許容しうる誘導体であるか、又は
［式中、
Ｒは、フェニル又はピリジニルを表し
ここで、フェニルは、アルキル、ハロ−低級アルキル、ヒドロキシ−低級アルキル、低級アルコキシ−低級アルキル、アシルオキシ−低級アルキル、フェニル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、ヒドロキシ−低級アルコキシ、低級アルコキシ−低級アルコキシ、フェニル−低級アルコキシ、低級アルキルカルボニルオキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、低級アルコキシカルボニルアミノ、低級アルキルカルボニルアミノ、置換アミノ（窒素上の２個の置換基が、窒素と一緒になって、ヘテロシクリルを形成する）、低級アルキルカルボニル、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、ホルミル、シアノ、ハロゲン及びニトロから独立して選択される１又は２個の置換基により場合により置換されており；そして、２個の隣接する置換基は、メチレンジオキシであり；
そして、ピリジニルは、低級アルコキシ、アミノ又はハロゲンにより場合により置換されており；
Ｘは、酸素を表し；
Ｒ１は、水素、低級アルキルカルボニル、ヒドロキシ−低級アルキル又はシアノ−低級アルキルを表し；
Ｒ２、Ｒ３及びＲ６は、水素を表し；
Ｒ４及びＲ５は、互いに独立して、水素、低級アルキル又は低級アルコキシを表すか；
又はＲ４及びＲ５は、一緒になって、メチレンジオキシを表す］
で表される化合物及びその薬学的に許容しうる誘導体である、使用に関し；
そして、ここで、接頭語の低級は、最大７個、とりわけ、最大４個の炭素原子を有する基を意味する。
【００２１】
好ましくは、応答は、被験体における疾患の応答でありうる。また、好ましくは、応答は、処置に対する、すなわち、一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体による処置に対する応答でありうる。
【００２２】
バイオマーカーのｇｌｕ−チューブリンは、人体又は動物体から採取、好ましくは、人体から採取した試料（１つ又は複数）中、ex vivoで測定される。
【００２３】
好ましい実施態様においては、本発明は、上記で定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体に対する、被験体における疾患の耐性を予測するためのバイオマーカーとしてのｇｌｕ−チューブリンの使用に関する。
【００２４】
好ましくは、薬学的に許容しうる誘導体は、上記で定義される一般式（Ｉ）の化合物の塩、溶媒和物、プロドラッグ、プロドラッグの塩、多形及び異性体からなる群より選択される。プロドラッグは、好ましくは、天然アミノ酸、低分子ペプチド又はペグ化ヒドロキシ酸のエステル及びアミドである。より好ましくは、プロドラッグは、一般式（Ｉ）の化合物のＲ基内に存在するアミノ基と、グリシン、アラニン又はリシンのカルボキシ基から形成されるアミドである。
【００２５】
特に好ましくは、本化合物は、以下：
【化６】
2014505876.tif 000008
又はその薬学的に許容しうる塩、好ましくは、その塩酸塩、最も好ましくは、その二塩酸塩である。
【００２６】
本発明の別の態様は、上記で定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体に対する、被験体における疾患の応答を予測するための方法であって、
ａ）被験体から事前に得られた試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルを測定して、このレベルを表す値（１つ又は複数）を得る工程；及び
ｂ）工程ａ）からの値（１つ又は複数）と標準値又は標準値のセットを比較する工程
を含む方法に関する。
【００２７】
さらに好ましくは、予測される応答が、耐性である。
【００２８】
ｇｌｕ−チューブリンのレベル（１つ又は複数）の測定は、被験体から事前に得られた試料（１つ又は複数）中、ex-vivoで実施される。「事前に得られた」は、試料が、バイオマーカーのレベルの測定を含む任意の方法に付与する前に得られることを指し、そして、「事前に得られた」は、処置に関連するものとして理解すべきではない。好ましい実施態様においては、被験体からの試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルが標準値又は標準値のセットに対してより高い場合に、耐性であると予測される。
【００２９】
また、好ましくは、疾患は、新生物疾患又は自己免疫疾患である。より好ましくは、疾患は、癌である。とりわけ好ましくは、癌は、乳癌、前立腺癌、子宮頸癌、卵巣癌、胃癌、結腸直腸癌（すなわち、結腸癌及び直腸癌を含む）、膵臓癌、肝臓癌、脳腫瘍、神経内分泌癌、肺癌、腎臓癌、血液悪性腫瘍、黒色腫及び肉腫からなる群より選択される。さらに、とりわけ好ましくは、癌は、乳癌、子宮頸癌、卵巣癌、結腸直腸癌、黒色腫及び肺癌からなる群より選択される。とりわけ好ましい実施態様においては、癌は、肺癌、黒色腫、卵巣癌及び結腸直腸癌からなる群より選択される。自然耐性が決定される特に好ましい実施態様においては、癌は、肺癌、黒色腫又は結腸直腸癌からなる群より選択される。獲得耐性が決定される別の特に好ましい実施態様においては、癌は、肺癌又は卵巣癌である。
【００３０】
さらなる態様においては、本発明は、それを必要とする被験体において新生物疾患又は自己免疫疾患、好ましくは癌を処置する方法であって、被験体からの試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルを測定して、このレベルを表す値（１つ又は複数）を得る工程、及び前記試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルが、標準値又は標準値のセットより高くない場合、被験体を上記で定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体で処置する工程を含む、方法に関する。
【００３１】
なおさらなる態様においては、本発明は、被験体からの試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルを測定して、このレベルを表す値（１つ又は複数）を得る工程、及びｇｌｕ−チューブリンレベルが、標準値又は標準値のセットより高くない場合、被験体を上記で定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体で処置する工程を含む、新生物疾患又は自己免疫疾患、好ましくは癌の処置において使用するためのｇｌｕ−チューブリンに関する。
【００３２】
ｇｌｕ−チューブリンレベルの測定は、被験体から事前に得られた試料中、ex-vivoで実施される。
【００３３】
本発明は、また、別の態様においては、ｇｌｕ−チューブリンレベルが標準レベル又は標準レベルのセットと比較してより高い試料を有する被験体中のｇｌｕ−チューブリンレベルを最初に低下させて、次に、被験体を上記で定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体で処置することにより、新生物疾患又は自己免疫疾患、好ましくは癌を処置する方法に関する。
【００３４】
さらに別の態様においては、本発明は、試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルを測定するために必要な試薬を含む、上記で定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体に対する応答を予測するためのキットに関する。より好ましくは、キットは、また、試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルと比較するための標準値又は標準値のセットを含む比較測定基準（comparator module）を含む。
【００３５】
より好ましくは、キットは、上記で定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体を含む。とりわけ好ましい実施態様においては、キットは、下記式の化合物又はその薬学的に許容しうる塩を含む：
【化７】
2014505876.tif 000009
化学名：Ｓ−２，６−ジアミノ−ヘキサン酸［４−（２−｛２−［４−（２−シアノ−エチルアミノ）−フラザン−３−イル］−ベンゾイミダゾール−１−イル｝−アセチル）−フェニル］−アミド
【００３６】
特に好ましい実施態様においては、薬学的に許容しうる塩は、二塩酸塩である。
【００３７】
本発明の別のさらなる態様は、上記で定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体に対する応答を予測するための装置であって、試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルを測定するために必要な試薬、及び試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルと比較するための標準値又は標準値のセットを含む比較測定基準を含む、装置に関する。
【００３８】
好ましい実施態様においては、キット又は装置中の試薬は、ｇｌｕ−チューブリンのための検出部を含む捕捉試薬、及び検出試薬を含む。とりわけ好ましくは、捕捉試薬は、抗体である。また、好ましくは、疾患は、ｇｌｕ−チューブリンが標準値又は標準値のセットに対してより高いときに、前記化合物による処置に耐性であると予測される。好ましい実施態様においては、比較測定基準は、キットの使用説明書に含まれる。別の好ましい実施態様においては、比較測定基準は、表示装置の形態である。
【００３９】
ここで、本発明の実施態様を、添付の図面を参照し、例を挙げて説明する。しかし、本発明は、これらの実施態様に限定されるものと理解すべきではない。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】５０nMのＢＡＬ２７８６２による異なる組織型からのヒト腫瘍細胞株の処置を示す。有糸分裂又はＧ２／Ｍ停止細胞の微小管を、５０nMのＢＡＬ２７８６２又はビヒクルコントロールによる２４時間処置後に染色した。図１Ａ及び１Ｂ：Ａ５４９ ＮＳＣＬＣ細胞；図１Ｃ及び１Ｄ：ＨｅＬａ子宮頸癌細胞；図１Ｅ及び１Ｆ：ＳＫＢＲ３乳癌細胞ビヒクルコントロール処置：図１Ａ、１Ｃ及び１Ｅ、ＢＡＬ２７８６２処置：図１Ｂ、１Ｄ及び１Ｆ。
【図２】化合物Ｂ及びＣによるＡ５４９ ＮＳＣＬＣ細胞の処置を示す。有糸分裂又はＧ２／Ｍ停止Ａ５４９ ＮＳＣＬＣ細胞の微小管を、それぞれ、８０nM又は２０nMの化合物Ｂ及びＣによる２４時間処置後に染色した。白色のスケールバーは、１０マイクロメートルを表す。図２Ａ：２０nMの化合物Ｃによる処置；図２Ｂ：８０nMの化合物Ｂによる処置。
【図３】従来の微小管標的薬剤と比較したＢＡＬ２７８６２による細胞の処置の比較を示す。有糸分裂又はＧ２／Ｍ停止Ａ５４９ ＮＳＣＬＣ細胞の微小管を、５０nMのＡ：ＢＡＬ２７８６２；Ｂ：ビンブラスチン；Ｃ：コルヒチン；Ｄ：パクリタキセルによる２４時間処置後に染色した。１μmごとに撮影した画像のスタックを、ImageJ softwareを使用することにより処理した。
【図４】ノコダゾールと比較したＢＡＬ２７８６２によるＡ５４９ ＮＳＣＬＣ細胞の処置の比較を示す。有糸分裂又はＧ２／Ｍ停止細胞の微小管を、様々な濃度のノコダゾール（Ｂ、Ｃ及びＤ）及びＢＡＬ２７８６２（Ｅ、Ｆ及びＧ）による２４時間処置後に染色した。Ａ：コントロール、Ｂ：５０nMのノコダゾール、Ｃ：１００nMのノコダゾール、Ｄ：２００nMのノコダゾール、Ｅ：２０nMのＢＡＬ２７８６２；Ｆ：３０nMのＢＡＬ２７８６２、及びＧ：５０nMのＢＡＬ２７８６２。白色のスケールバーは、１０マイクロメートルを表す。観察される微小管表現型の代表的な画像を示す。
【図５】ＢＡＬ２７８６２と従来の微小管標的薬剤の併用処置を示す。有糸分裂又はＧ２／Ｍ停止Ａ５４９ ＮＳＣＬＣ細胞の微小管を、以下に表示する時間で処置した後に染色した。５０nMのＢＡＬ２７８６２、５０nMのビンブラスチン、５０nMのコルヒチン及び２５nMのパクリタキセルを使用した。白色のスケールバーは、１０マイクロメートルを表す。図５Ａ：２４時間のビンブラスチン処置；図５Ｂ：２４時間のビンブラスチン処置、最後の４時間は、ＢＡＬ２７８６２を含む；図５Ｃ：２４時間のＢＡＬ２７８６２処置、最後の４時間は、ビンブラスチンを含む；図５Ｄ：２４時間のコルヒチン処置；図５Ｅ：２４時間のコルヒチン処置、最後の４時間は、ＢＡＬ２７８６２を含む；図５Ｆ：２４時間のＢＡＬ２７８６２処置、最後の４時間は、コルヒチンを含む；図５Ｇ：２４時間のパクリタキセル処置；図５Ｈ：２４時間のパクリタキセル処置、最後の４時間は、ＢＡＬ２７８６２を含む；図５Ｉ：２４時間のＢＡＬ２７８６２処置、最後の４時間は、パクリタキセルを含む。
【図６】ＢＡＬ２７８６２とノコダゾールの併用処置を示す。有糸分裂又はＧ２／Ｍ停止Ａ５４９ ＮＳＣＬＣ細胞の微小管を、以下に表示する時間で処置した後に染色した。２５nMのＢＡＬ２７８６２及び以下に示す濃度のノコダゾールを使用した。白色のスケールバーは、１０マイクロメートルを表す。図６Ａ：２４時間のコントロール処置；図６Ｂ：２４時間の２５nMのＢＡＬ２７８６２処置；図６Ｃ：２４時間の５０nMのノコダゾール処置；図６Ｄ：２４時間の１００nMのノコダゾール処置；図６Ｅ：２４時間の１５０nMのノコダゾール処置；図６Ｆ：２４時間の２００nMのノコダゾール処置；図６Ｇ：２４時間の５０nMのノコダゾール処置、最後の４時間は、２５nMのＢＡＬ２７８６２を含む；図６Ｈ：２４時間の１００nMのノコダゾール処置、最後の４時間は、２５nMのＢＡＬ２７８６２を含む；図６Ｉ：２４時間の１５０nMのノコダゾール処置、最後の４時間は、２５nMのＢＡＬ２７８６２を含む；図６Ｊ：２４時間の２００nMのノコダゾール処置、最後の４時間は、２５nMのＢＡＬ２７８６２を含む；図６Ｋ：２４時間の２５nMのＢＡＬ２７８６２処置、最後の４時間は、５０nMのノコダゾールを含む；図６Ｌ：２４時間の２５nMのＢＡＬ２７８６２処置、最後の４時間は、１００nMのノコダゾールを含む；図６Ｍ：２４時間の２５nMのＢＡＬ２７８６２処置、最後の４時間は、１５０nMのノコダゾールを含む；図６Ｎ：２４時間の２５nMのＢＡＬ２７８６２処置、最後の４時間は、２００nMのノコダゾールを含む。
【図７】皮下異種移植マウスから得られた患者由来の結腸直腸癌（図７Ａ）、肺癌（図７Ｂ）及び黒色腫（図７Ｃ）腫瘍から調製されたタンパク質抽出物、ならびに、ローディングコントロールとしてアクチンを含めたイムノブロットによる、ｇｌｕ−チューブリンの発現の分析を示す。３つの独立した腫瘍をそれぞれ分析した（１〜３）。ＢＡＬ２７８６２、パクリタキセル及びビンブラスチン耐性及び感受性は、表１に記載のとおりである。
【図８】腫瘍細胞中のｇｌｕ−チューブリンレベルが、ex vivoのコロニー増殖分析によりＢＡＬ２７８６２耐性として定義された患者由来の異種移植結腸直腸腫瘍において増加することを免疫組織化学により示す。患者由来の腫瘍異種移植片（ヌードマウスで維持した）を作製し、固定し、そして、免疫組織化学を使用してｇｌｕ−チューブリンタンパク質の発現を染色した。ＢＡＬ２７８６２、パクリタキセル及びビンブラスチン耐性及び感受性を表１に記載する。
【図９】化合物の存在下でのin vitro培養によって、ＢＡＬ２７８６２に対する耐性について選択された腫瘍細胞株を示す。ＩＣ５０測定に基づいて、親株に対するＢＡＬ２７８６２の耐性係数は、Ａ５４９（３．０倍）；ＳＫＯＶ３（７．６倍〜耐性１株）；Ｈ４６０（５．３倍）であった（表２を参照）。全細胞タンパク質抽出物を親株及び耐性株から調製し、イムノブロットによりｇｌｕ−チューブリンの発現を分析した。アクチンレベルをローディングコントロールとして含めた。
【図１０】ｇｌｕ−チューブリンタンパク質レベルの増加が、耐性発現の間ＳＫＯＶ３腫瘍株で維持されることを示す。ＳＫＯＶ３腫瘍細胞株は、ＢＡＬ２７８６２の存在下で培養時間を増加させながらのin vitro培養によって、ＢＡＬ２７８６２に対する耐性について選択した。ＩＣ５０測定に基づいて、親株に対するＢＡＬ２７８６２の耐性係数は、ＳＫＯＶ３耐性１（７．６倍）、ＳＫＯＶ３耐性２（１１．６倍）であった（表２を参照）。全細胞タンパク質抽出物を親株及び耐性株から調製し、イムノブロットによりｇｌｕ−チューブリンの発現を分析した。アクチンレベルは、ローディングコントロールとして作用する。
【図１１】チューブリンα１Ａ鎖［ヒト］のタンパク質配列（SEQ. ID No.１）を示す。
【図１２】チューブリンα１Ｂ鎖［ヒト］のタンパク質配列（SEQ. ID No.２）を示す。
【図１３】チューブリンα１Ｃ鎖［ヒト］のタンパク質配列（SEQ. ID No.３）を示す。
【図１４】チューブリンα３Ｃ／Ｄ鎖［ヒト］のタンパク質配列（SEQ. ID No.４）を示す。
【００４１】
詳細な説明
式（Ｉ）の化合物
本発明の化合物は、一般式（Ｉ）：
【化８】
2014505876.tif 000010
［式中、
Ｒは、フェニル、チエニル又はピリジニルを表し
ここで、フェニルは、アルキル、ハロ−低級アルキル、ヒドロキシ−低級アルキル、低級アルコキシ−低級アルキル、アシルオキシ−低級アルキル、フェニル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、ヒドロキシ−低級アルコキシ、低級アルコキシ−低級アルコキシ、フェニル−低級アルコキシ、低級アルキルカルボニルオキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、低級アルコキシカルボニルアミノ、低級アルキルカルボニルアミノ、置換アミノ（窒素上の２個の置換基が、窒素と一緒になって、ヘテロシクリルを形成する）、低級アルキルカルボニル、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、シアノ、ハロゲン及びニトロから独立して選択される１又は２個の置換基により場合により置換されており；そして、２個の隣接する置換基は、メチレンジオキシであり；
そして、ピリジニルは、低級アルコキシ、アミノ又はハロゲンにより場合により置換されており；
Ｘは、基Ｃ＝Ｙを表し、ここで、Ｙは、酸素、又はヒドロキシもしくは低級アルコキシにより置換されている窒素を表し；
Ｒ１は、水素、低級アルキルカルボニル、ヒドロキシ−低級アルキル又はシアノ−低級アルキルを表し；
Ｒ２、Ｒ３及びＲ６は、水素を表し；
Ｒ４及びＲ５は、互いに独立して、水素、低級アルキル又は低級アルコキシを表すか；
又はＲ４及びＲ５は、一緒になって、メチレンジオキシを表す］
により表される化合物及びその薬学的に許容しうる誘導体であるか、又は
［式中、
Ｒは、フェニル又はピリジニルを表し
ここで、フェニルは、アルキル、ハロ−低級アルキル、ヒドロキシ−低級アルキル、低級アルコキシ−低級アルキル、アシルオキシ−低級アルキル、フェニル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、ヒドロキシ−低級アルコキシ、低級アルコキシ−低級アルコキシ、フェニル−低級アルコキシ、低級アルキルカルボニルオキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、低級アルコキシカルボニルアミノ、低級アルキルカルボニルアミノ、置換アミノ（窒素上の２個の置換基が、窒素と一緒になって、ヘテロシクリルを形成する）、低級アルキルカルボニル、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、ホルミル、シアノ、ハロゲン及びニトロから独立して選択される１又は２個の置換基により場合により置換されており；そして、２個の隣接する置換基は、メチレンジオキシであり；
そして、ピリジニルは、低級アルコキシ、アミノ又はハロゲンにより場合により置換されており；
Ｘは、酸素を表し；
Ｒ１は、水素、低級アルキルカルボニル、ヒドロキシ−低級アルキル又はシアノ−低級アルキルを表し；
Ｒ２、Ｒ３及びＲ６は、水素を表し；
Ｒ４及びＲ５は、互いに独立して、水素、低級アルキル又は低級アルコキシを表すか；
又はＲ４及びＲ５は、一緒になって、メチレンジオキシを表す］
により表される化合物及びその薬学的に許容しうる誘導体であり；
そして、ここで、接頭語の低級は、最大７個、とりわけ、最大４個の炭素原子を有する基を意味する。
【００４２】
ヘテロシクリルは、好ましくは、窒素、酸素及び硫黄から選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含む４〜１０個の原子を含有する、飽和、部分飽和又は不飽和の単環式又は二環式環を指し、これは、特に指定しない限り、炭素結合型又は窒素結合型であってもよく、その環窒素原子は、低級アルキル、アミノ−低級アルキル、アリール、アリール−低級アルキル及びアシルから選択される基により場合により置換されていてもよく、そして、その環炭素原子は、低級アルキル、アミノ−低級アルキル、アリール、アリール−低級アルキル、ヘテロアリール、低級アルコキシ、ヒドロキシ又はオキソにより置換されていてもよい。ヘテロシクリルの例は、ピロリジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、ジオキソラニル及びテトラヒドロピラニルである。
【００４３】
アシルは、例えば、アルキルカルボニル、シクロヘキシルカルボニル、アリールカルボニル、アリール−低級アルキルカルボニル又はヘテロアリールカルボニルを指す。低級アシルは、好ましくは、低級アルキルカルボニルであり、特に、プロピオニル又はアセチルである。
【００４４】
好ましくは、本発明の一般式（Ｉ）の化合物は、Ｒ１が、水素、アセチル、ＣＨ２ＣＨ２ＣＮ及びＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＨからなる群より選択されると定義される。
【００４５】
１つの好ましい実施態様においては、本発明の一般式（Ｉ）の化合物は、以下からなる群より選択される：
４−（１−フェナシル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−フラザン−３−イルアミン、
４−［１−（４−ブロモフェナシル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］−フラザン−３−イルアミンオキシム、
Ｎ−｛４−［１−（４−クロロフェナシル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］−フラザン−３−イル｝−アセトアミド、
４−［１−（４−クロロフェナシル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］−フラザン−３−イル−Ｎ−（２−シアノエチル）−アミン、
４−［１−（４−クロロフェナシル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］−フラザン−３−イル−Ｎ−（３−ヒドロキシプロピル）−アミン、
４−［１−（３−アミノ−４−クロロフェナシル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］−フラザン−３−イルアミン、
４−［１−（３−メトキシ−４−メトキシメトキシ−フェナシル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］−フラザン−３−イルアミン
及びその薬学的に許容しうる誘導体。
【００４６】
別の好ましい実施態様においては、本発明の一般式（Ｉ）の化合物は、以下からなる群より選択される：
【化９】
2014505876.tif 000011
（式中、Ｒ、Ｙ及びＲ１は、以下のように定義される）
【表１】
2014505876.tif 000012
2014505876.tif 000013
2014505876.tif 000014
2014505876.tif 000015
2014505876.tif 000016
又はその薬学的に許容しうる誘導体。
【００４７】
さらに別の好ましい実施態様においては、本発明の一般式（Ｉ）の化合物は、以下からなる群より選択される：
４−（１−フェノキシメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−フラザン−３−イルアミン、
４−［１−（４−フルオロフェノキシメチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］−フラザン−３−イルアミン、
４−［１−（３，４−ジメチルフェノキシメチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］−フラザン−３−イル−Ｎ−（２−シアノエチル）−アミン
及び下記式により表される化合物：
【化１０】
2014505876.tif 000017
（式中、Ｒ及びＲ１は、下記のように定義される）
【表２】
2014505876.tif 000018
2014505876.tif 000019
及びその薬学的に許容しうる誘導体。
【００４８】
なおさらに別の好ましい実施態様においては、本発明の一般式（Ｉ）の化合物は、以下である：
【化１１】
2014505876.tif 000020
（式中、Ｒ、Ｒ４及びＲ５は、下記のように定義される）
【表３】
2014505876.tif 000021
又はその薬学的に許容しうる誘導体。
【００４９】
より好ましくは、本発明の化合物は、一般式（Ｉ）：
【化１２】
2014505876.tif 000022
［式中、
Ｒは、フェニル又はピリジニルを表し
ここで、フェニルは、低級アルキル、低級アルコキシ、アミノ、アセチルアミノ、ハロゲン及びニトロから独立して選択される１又は２個の置換基により場合により置換されており；
そして、ピリジニルは、アミノ又はハロゲンにより場合により置換されており；
Ｘは、基Ｃ＝Ｏを表し；
Ｒ１は、水素又はシアノ−低級アルキルを表し；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、水素を表す］
で表される化合物及びその薬学的に許容しうる誘導体であり；
そして、ここで、接頭語の低級は、最大７個、とりわけ、最大４個の炭素原子を有する基を意味する。
【００５０】
とりわけ好ましくは、本発明の化合物は、下記式：
【化１３】
2014505876.tif 000023
（式中、Ｒ、Ｙ及びＲ１は、以下のように定義される）
【表４】
2014505876.tif 000024
により表される化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体である。
【００５１】
さらに、とりわけ好ましくは、本発明の化合物は、下記式：
【化１４】
2014505876.tif 000025
（式中、Ｒ、Ｙ及びＲ１は、以下のように定義される）
【表５】
2014505876.tif 000026
により表される化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体である。
【００５２】
特に好ましくは、本発明の化合物は、
【化１５】
2014505876.tif 000027
又はその薬学的に許容しうる誘導体である。
【００５３】
一般式（Ｉ）の化合物の語句「薬学的に許容しうる誘導体」（１つ又は複数）中の誘導体（１つ又は複数）という用語は、それらの塩、溶媒和物及び錯体、そして、それらの塩の溶媒和物及び錯体、ならびにそれらのプロドラッグ、多形及び異性体（光学、幾何及び互変異性体を含む）、また、それらのプロドラッグの塩に関する。さらに好ましい実施態様においては、これは、それらの塩及びプロドラッグ、ならびにプロドラッグの塩に関する。
【００５４】
塩は、好ましくは、酸付加塩である。塩は、好ましくは、塩基性窒素原子を有する式（Ｉ）の化合物から有機酸又は無機酸と形成され、とりわけ、薬学的に許容しうる塩である。好適な無機酸は、例えば、塩酸などのハロゲン酸、硫酸又はリン酸である。好適な有機酸は、例えば、カルボン酸、ホスホン酸、スルホン酸又はスルファミン酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、グリコール酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、グルタミン酸又はアスパラギン酸などのアミノ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、メチルマレイン酸、シクロヘキサンカルボン酸、アダマンタンカルボン酸、安息香酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、フタル酸、フェニル酢酸、マンデル酸、ケイ皮酸、メタン−又はエタン−スルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、１，５−ナフタレン−ジスルホン酸、２−、３−又は４−メチルベンゼンスルホン酸、メチル硫酸、エチル硫酸、ドデシル硫酸、Ｎ−シクロヘキシルスルファミン酸、Ｎ−メチル−、Ｎ−エチル−又はＮ−プロピル−スルファミン酸、あるいは、アスコルビン酸などの他の有機プロトン酸である。
【００５５】
本発明の化合物は、人体又は動物体中で分解されて、式（Ｉ）の化合物を与えるプロドラッグの形態で投与してもよい。プロドラッグの例としては、式（Ｉ）の化合物のin vivoで加水分解可能なエステル及びアミドが挙げられる。考慮される特定のプロドラッグは、天然アミノ酸のエステル及びアミド、低分子ペプチドの、特に、最大５個、好ましくは、２個又は３個のアミノ酸からなる低分子ペプチドのエステル又はアミド、ならびにペグ化ヒドロキシ酸、好ましくは、ヒドロキシ酢酸及び乳酸のエステル及びアミドである。プロドラッグエステルは、アミノ酸の酸官能基又はペプチドのＣ−末端と式（Ｉ）の化合物中の好適なヒドロキシ基から形成される。プロドラッグアミドは、アミノ酸のアミノ官能基又はペプチドのＮ−末端と式（Ｉ）の化合物中の好適なカルボキシ基から形成されるか、又はアミノ酸の酸官能基又はペプチドのＣ−末端と式（Ｉ）の化合物中の好適なアミノ基から形成される。特に好ましくは、プロドラッグアミドは、式（Ｉ）のＲ基内に存在するアミノ基から形成される。
【００５６】
より好ましくは、プロドラッグは、式（Ｉ）の化合物にグリシン、アラニン又はリシンを付加させることにより形成される。
【００５７】
さらにより好ましくは、一般式（Ｉ）の化合物は、式：
【化１６】
2014505876.tif 000028
で表される化合物から選択されるプロドラッグの形態である。
【００５８】
とりわけ好ましい実施態様においては、一般式（Ｉ）の化合物は、下記式：
【化１７】
2014505876.tif 000029
を有するプロドラッグの形態である。
【００５９】
とりわけ最も好ましい実施態様においては、本発明の化合物は、下記式：
【化１８】
2014505876.tif 000030
で表される化合物の薬学的に許容しうる塩、好ましくは塩酸塩、最も好ましくは二塩酸塩である。
【００６０】
この場合のin vivoで薬学的に活性な代謝物は、ＢＡＬ２７８６２である。
【００６１】
これらのプロドラッグは、それ自体公知の方法、特に、式（ＩＩ）：
【化１９】
2014505876.tif 000031
（式中、Ｒ１は、式（Ｉ）に関して定義され、Ｚは、ＣＨ又はＮである）
で表される化合物、又は保護形態の官能基を含むそのような化合物の誘導体、
又はそれらの塩を、
（１）  式（ＩＩＩ）：
【化２０】
2014505876.tif 000032
（式中、Ｒ１０は、水素（Ｇｌｙ）；メチル（Ａｌａ）及び保護アミノブチル（Ｌｙｓ）から選択され、そして、Ｒ１１は、好適なアミノ保護基である）
で表されるアミノ酸でアシル化して、そして
（２）  得られた化合物の保護誘導体中の任意の保護基を除去して、上記で示されるプロドラッグを得て、所望であれば、
（３）  前記プロドラッグを酸で処理することにより塩に変換するか、又は式（ＩＩ）の化合物の塩を対応する式（ＩＩ）の遊離化合物に、又は別の塩に変換し、そして／又は異性体生成化合物の混合物を個々の異性体に分離する方法により調製してもよい。
【００６２】
式（ＩＩＩ）のアミノ酸による式（ＩＩ）の化合物のアシル化は、それ自体公知の手法によって、通常、好適な極性又は双極性非プロトン性溶媒の存在下、必要であれば、例えば、約−８０℃〜約＋１５０℃、より好ましくは、−３０℃〜＋１２０℃の温度範囲、とりわけ、約０℃前後〜使用する溶媒の還流温度の範囲で冷却又は加熱しながら実施される。場合により、好適な塩基、特に、ピリジンもしくはコリジンのような芳香族塩基、又はトリエチルアミンもしくはジイソプロピルエチルアミンなどの第三級アミン塩基、又は無機塩基性塩、例えば、炭酸カリウムもしくは炭酸ナトリウムを加える。
【００６３】
アシル化は、ペプチド化学において、それ自体公知のアミド形成に使用される条件下、例えば、カルボキシ基の活性化剤、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジエチル−、Ｎ，Ｎ’−ジプロピル−、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド及びＮ−（３−ジメチルアミノイソプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド−塩酸塩（ＥＤＣ）などのカルボジイミドを用いて、又は１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、Ｏ−（７−アザ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、２−（２−オキソ−１−（２Ｈ）−ピリジル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＰＴＵ）などの試薬を用いて、場合により、好適な塩基、触媒又は共試薬の存在下で達成してもよい。カルボキシ基は、また、例えば、塩化チオニル又は塩化オキサリルと反応させることにより、ハロゲン化アシルとして、好ましくは塩化アシルとして、あるいは、例えば、場合により、好適な塩基、触媒又は共試薬の存在下で、クロロギ酸エチルなどのハロゲン化ギ酸エステルと反応させることにより、対称又は非対称無水物として活性化してもよい。
【００６４】
式（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物中に１つ又は複数の他の官能基、例えば、カルボキシ、ヒドロキシ又はアミノが、これらを反応に関与させないために、保護されるか又はされる必要がある場合、これらは、特に、当業者に公知のペプチド化合物、セファロスポリン、ペニシリン、核酸誘導体及び糖のようなアミドの合成に通常適用されるような保護基である。アミノ基の好適な保護基は、例えば、カルバミン酸ｔ−ブチル、カルバミン酸ベンジル又はカルバミン酸９−フルオレニルメチルである。
【００６５】
保護基は、前駆体中に既に存在していてもよく、そして、アルキル化、アシル化、エーテル化、エステル化、酸化、加溶媒分解及び類似の反応などの望まない第二の反応に対して関係する官能基を保護すべきである。すなわち、保護基がそれ自体、望まない第二の反応を受けずに、典型的には、加溶媒分解、還元、光分解により、又は例えば、生理学的条件に似た条件下で酵素活性により容易に除去されること、そして、これらが、最終生成物中に存在しないことが保護基の特徴である。どの保護基が本明細書において上述及び後述される反応に適しているかどうかは、当業者にとって公知であるか又は容易に確証することができる。
【００６６】
そのような保護基によるそのような官能基の保護、保護基自体、及びそれらの除去反応は、例えば、ペプチド合成の標準参考書及び保護基に関する専門書、例えば、J. F. W. McOmie, 「Protective Groups in Organic Chemistry」, Plenum Press, London and New York 1973, in 「Methoden der organischen Chemie」 (Methods of organic chemistry), Houben-Weyl, 4th edition, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974 及び T. W. Greene, G. M. Wuts 「Protective Groups in Organic Synthesis」, Wiley, New York, 2006 に記載されている。
【００６７】
疾患
本発明の一般式（Ｉ）の化合物は、細胞増殖を停止させ、且つ、例えば、アポトーシスによる細胞死を誘導することが示された。
【００６８】
細胞増殖の調節異常又は適切な細胞死の欠如は、広範な臨床的意義を有する。そのような調節異常を伴う疾患の多くは、過剰増殖、炎症、組織再構築及び修復を引き起こす。このカテゴリーでよく知られた適応症としては、癌、再狭窄、新生内膜過形成、血管新生、子宮内膜症、リンパ増殖性疾患、移植関連病変（移植片拒絶）、ポリープ症、組織再構築の症例での神経機能喪失などが挙げられる。
【００６９】
癌は、異常な細胞増殖及び細胞死率を伴う。ほとんどの種類の増殖性新生物疾患でアポトーシスが阻害又は遅延されるので、アポトーシスの誘導は、癌、とりわけ、古典的な化学療法、放射線療法及び免疫療法に耐性を示す癌タイプを処置するための選択肢の１つである（Apoptosis and Cancer Chemotherapy, Hickman and Dive, eds., Blackwell Publishing, 1999）。また、自己免疫及び移植関連の疾患及び病変では、正常な細胞死プロセスを回復するためにアポトーシスを誘導する化合物を使用してもよく、それによって、それらの症状を取り除くことができ、疾患が治癒することができる。さらに、アポトーシスを誘導する化合物を、再狭窄、すなわち、動脈壁内の血管平滑筋細胞の蓄積、ならびに細菌及びウイルス感染細胞の根絶に失敗することによって引き起こされる持続感染に適用してもよい。さらに、アポトーシスは、上皮細胞、内皮細胞、筋細胞、及び細胞外マトリックスと接触していないその他の細胞において、誘導又は再構築することができる。
【００７０】
一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体は、人体又は動物体の予防的処置、又はとりわけ治療的処置のために、特に、新生物疾患、自己免疫疾患、移植関連病変及び／又は変性疾患を処置するために使用してもよい。そのような新生物疾患の例としては、上皮性新生物、扁平上皮細胞新生物、基底細胞新生物、移行細胞乳頭腫及び移行細胞癌、腺腫及び腺癌、付属器及び皮膚付属器新生物、粘膜表皮新生物、嚢胞性新生物、粘液性及び漿液性新生物、導管性、小葉性及び髄様新生物、腺房細胞新生物、複合上皮性新生物、特殊な性器新生物、傍神経節腫及びグロムス腫瘍、母斑及び黒色腫、軟部組織腫瘍及び肉腫、線維腫性新生物、粘液腫性新生物、脂肪腫性新生物、筋腫性新生物、複合性混合性新生物及び間質性新生物、線維上皮性新生物、滑膜様新生物、中皮性新生物、胚細胞新生物、トロホブラスト性新生物、中腎腫、血管腫瘍、リンパ管腫瘍、骨及び軟骨新生物、巨細胞腫、混合型骨腫瘍、歯原性腫瘍、グリオーマ、神経上皮腫性新生物、髄膜腫、神経鞘性腫瘍、顆粒細胞性腫瘍及び胞巣性軟部肉腫、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、他のリンパ網状新生物、形質細胞腫瘍、肥満細胞腫瘍、免疫増殖性疾患、白血病、混合型骨髄増殖性疾患、リンパ増殖性疾患ならびに骨髄異形成症候群が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７１】
一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体は、自己免疫疾患を処置するために使用してもよい。そのような自己免疫疾患の例としては、全ての器官（皮膚、心臓、腎臓、骨髄、目、肝臓、脾臓、肺、筋肉、中枢及び末梢神経系、結合組織、骨、血管及びリンパ管、尿生殖器系、耳、軟骨、一次及び二次リンパ系（骨髄、リンパ節、胸腺を含む）、胃腸管（口−咽頭、食道、胃、小腸、結腸及び直腸を含む）であって、上述の器官の一部から単一細胞レベル及び下部構造、例えば、幹細胞までを含む）が関与する、全身性、円板状又は亜急性皮膚エリテマトーデス、関節リウマチ、抗リン脂質症候群、ＣＲＥＳＴ、全身性進行性硬化症、混合性結合組織疾患（Sharp症候群）、Reiter症候群、若年性関節炎、寒冷凝集素病、本態性混合性クリオグロブリン血症、リウマチ熱、強直性脊椎炎、慢性多発性関節炎、重症筋無力症、多発性硬化症、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、Guillan-Barre症候群、皮膚筋炎／多発性筋炎、自己免疫性溶血性貧血、血小板減少性紫斑症、好中球減少症、Ｉ型糖尿病、甲状腺炎（Hashimoto病及びGrave病を含む）、Addison病、多腺性症候群、天疱瘡（尋常性、落葉状、皮脂性及び増殖性）、水疱性及び瘢痕性類天疱瘡、妊娠性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、線状ＩｇＡ病、硬化性萎縮性苔癬、Duhring病、尋常性乾癬、滴状、汎発性膿疱性及び局所性膿疱性乾癬、白斑、円形脱毛症、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎、全ての形態の糸球体腎炎、肺出血（グッドパスチャー症候群）、ＩｇＡ腎症、悪性貧血及び自己免疫性胃炎、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎及びCrohn病を含む）、Behcet病、Celic-Sprue病、自己免疫性ブドウ膜炎、自己免疫性心筋炎、肉芽腫性睾丸炎、睾丸炎を伴わない精子形成欠如、特発性及び続発性肺線維症、自己免疫性病変の可能性のある炎症性疾患、例えば、壊疽性膿皮症、扁平苔癬、サルコイドーシス（Lofgren及び皮膚／皮下型を含む）、環状肉芽腫、アレルギー性Ｉ型およびＩＶ型免疫反応、気管支喘息、花粉症、アトピー性、接触性及び空中性皮膚炎（airborne dermatitis）、大血管炎（巨細胞及び高安動脈炎）、中血管炎（結節性多発性動脈炎、川崎病）、小血管炎（Wegener肉芽腫症、Churg Strauss症候群、顕微鏡的多発性血管炎、HenochSchoenlein紫斑病、本態性クリオグロブリン性血管炎、皮膚白血球破砕性血管炎）、過敏症症候群、中毒性表皮壊死（Stevens-Johnson症候群、多形性紅斑）、薬物副作用による疾患、Ｉ−ＶＩ型（Coombs分類）免疫学的反応形態による全形態の皮膚的、器官特異的及び全身的影響、急性及び慢性の対宿主性移植片病及び対移植片性宿主病などの移植関連病変が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７２】
特に好ましくは、本発明の疾患は、新生物疾患又は自己免疫疾患である。とりわけ好ましい実施態様においては、疾患は、癌である。
【００７３】
罹患した器官及び体の部位についての癌の例としては、乳癌、子宮頸癌、卵巣癌、結腸癌、直腸癌、（結腸及び直腸、すなわち、結腸直腸癌を含む）、肺癌、（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、大細胞肺癌及び中皮腫を含む）、骨肉腫、内分泌系癌、副腎癌、胸腺癌、肝臓癌、胃癌、腸（胃癌を含む）、膵臓癌、骨髄癌、血液悪性腫瘍（リンパ腫、白血病、骨髄腫又はリンパ性悪性疾患など）、膀胱癌、尿路癌、腎臓癌、皮膚癌、甲状腺癌、脳腫瘍、頭部癌、頸部癌、前立腺癌及び精巣癌が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、癌は、乳癌、前立腺癌、子宮頸癌、卵巣癌、胃癌、結腸直腸癌、膵臓癌、肝臓癌、脳腫瘍、神経内分泌癌、肺癌、腎臓癌、血液悪性腫瘍、黒色腫及び肉腫からなる群より選択される。とりわけ好ましくは、癌は、乳癌、子宮頸癌、卵巣癌、結腸直腸癌、黒色腫及び肺癌からなる群より選択される。さらに、とりわけ好ましくは、癌は、肺癌、黒色腫、卵巣癌及び結腸直腸癌からなる群より選択される。別の好ましい実施態様においては、予測される耐性が獲得耐性である場合、癌は、肺癌又は卵巣癌である。さらに別の好ましい実施態様においては、予測される耐性が自然耐性である場合、癌は、結腸直腸癌、肺癌又は黒色腫からなる群より選択される。
【００７４】
試料
ｇｌｕ−チューブリンレベルの測定は、被験体由来の生物組織の試料でin vitroで実施してもよい。試料は、例えば、正常な組織、腫瘍組織、細胞株、全血、血清、血漿、脳脊髄液、リンパ液、循環腫瘍細胞、細胞溶解物、組織溶解物、尿及び吸引物などの身体から分離された任意の生体材料であってもよい。好ましくは、試料は、正常な組織、腫瘍組織又は循環腫瘍細胞に由来する。より好ましくは、試料は、腫瘍組織又は循環腫瘍細胞に由来する。１つの特に好ましい実施態様においては、試料は、腫瘍組織に由来する。例えば、ｇｌｕ−チューブリンレベルは、新鮮な腫瘍組織試料、凍結した腫瘍組織試料又はホルマリン固定／パラフィン包埋した腫瘍組織試料で測定してもよい。
【００７５】
試料は、試料をバイオマーカーのレベルの測定を含む方法の工程に供する前に、被験体から事前に得られる。試料を取り出す方法は当技術分野においてよく知られており、例えば、生検、例えば、パンチ生検、コア生検又は微細針吸引生検、内視鏡生検又は擦過生検によって被験体から取り出してもよい。血液は、静脈穿刺により採血して、標準的な技術に従ってさらに処理してもよい。循環腫瘍細胞は、また、例えば、大きさ（例えば、ＩＳＥＴ−上皮腫瘍細胞の大きさによる単離）又は免疫磁性細胞濃縮（例えば、Cellsearch（登録商標）、Veridex、Raritan、ＮＪ）に基づいて血液から得てもよい。
【００７６】
試料の比較
本発明の被験体は、ヒト又は動物であってもよい。好ましくは、被験体は、ヒトである。
【００７７】
バイオマーカーのｇｌｕ−チューブリンは、人体又は動物体から採取、好ましくは人体から採取した試料（１つ又は複数）中、ex vivoで測定される。試料（１つ又は複数）は、試料をバイオマーカーのレベルの測定を含む方法の工程に供する前に、人体又は動物体から事前に得られ、好ましくは人体から事前に得られる。
【００７８】
バイオマーカーは、一般的に、生物学的応答の指標として、好ましくは、所与の処置に対する感受性の指標として使用される物質であり、該処置は、本願において、一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体による処置である。
【００７９】
特に好ましい実施態様においては、試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルが標準値又は標準値のセットに対してより高い場合に、耐性であると予測される。
【００８０】
本明細書において使用されるように、標準レベル又は標準レベルのセットに対して、増加、又は比較的高い、又は高い、又はより高いレベルは、試料中のバイオマーカーの量又は濃度が、標準レベル又は標準レベルのセットに対して、試料において検出可能な程度により大きいことを意味する。これは、標準に対して少なくとも約１％の増加又はより高いレベル、好ましくは、標準に対して少なくとも約５％の増加を包含する。より好ましくは、標準に対して少なくとも約１０％の増加又はより高いレベルである。さらに、特に好ましくは、標準に対して少なくとも約２０％の増加又はより高いレベルである。例えば、そのような増加又はより高いレベルは、標準に対して、少なくとも約１％、約１０％、約２０％、約３０％、約５０％、約７０％、約８０％、約１００％、約１５０％又は約２００％又はそれ以上の増加又はより高いレベルを含んでもよいが、これらに限定されない。
【００８１】
好ましくは、試料（１つ又は複数）中のｇｌｕ−チューブリンレベルが、
ｉ）  同じ腫瘍組織型を有する被験体からの標準値又は標準値のセットに対して；又は
ii）  処置開始後に採取され、処置開始前に同じ被験体から採取された試料（１つ又は複数）と比較され；又は
iii）  正常な細胞又は組織からの標準値又は標準値のセットに対して；
より高い場合に、耐性であると予測される。
【００８２】
ｇｌｕ−チューブリンレベルの測定は、被験体から事前に得られた試料中、ex-vivoで実施される。さらに好ましくは、予測される応答は、耐性である。
【００８３】
より好ましくは、試料（１つ又は複数）中のｇｌｕ−チューブリンレベルが、
ｉ）  同じ腫瘍組織型を有する被験体からの標準値又は標準値のセットに対して；又は
ii）  処置開始後に採取され、処置開始前に同じ被験体から採取された試料（１つ又は複数）と比較され；
より高い場合に、耐性であると予測される。
【００８４】
とりわけ好ましくは、試料（１つ又は複数）中のｇｌｕ−チューブリンレベルが、同じ腫瘍組織型を有する被験体からの標準値又は標準値のセットに対してより高い場合に、耐性であると予測される。
【００８５】
１つの好ましい実施態様においては、ｉ）試料（１つ又は複数）において、測定値を、比較されるべき試料と同じ腫瘍組織型を有する被験体からの試料からの標準値又は標準値のセットに対して比較する場合、標準値又は標準値のセットは、その癌タイプを有する被験体集団からの試料から確立される。これらの標準的な被験体からの試料は、試料の起源が標準と比較されるべき試料間で一致するならば、例えば、腫瘍組織、循環腫瘍細胞又は血液由来であってもよい。
【００８６】
別の好ましい実施態様においては、ii）処置開始後に採取した試料（１つ又は複数）において、測定値を、処置開始前に同じ被験体から採取した試料（１つ又は複数）と比較する場合、好ましくは、獲得耐性を予測するために測定される。試料は、同じ生物学的起源からの細胞又は組織と比較される。獲得耐性が予測された場合、それは、化合物による処置を中断すべきであることを示す。従って、バイオマーカーは、化合物によるさらなる処置が獲得応答（例えば、異常細胞の減少）を与える可能性があるか否か、又は細胞がそのような処置に対して非応答性又は耐性になったか否かをモニタリングするために使用される。
【００８７】
さらに別の好ましい実施態様においては、iii）試料（１つ又は複数）において測定値を、正常な細胞又は組織からの標準値又は標準値のセットに対して比較する場合、標準値又は標準値のセットは、正常（例えば、非腫瘍性）細胞又は組織又は体液の試料から確立してもよい。そのようなデータは、標準値又は標準値のセットを構築するために被験体集団から収集してもよい。
【００８８】
標準値又は標準値のセットは、事前に得られた試料（少なくとも１つの被検体からの、より好ましくは被検体の平均（例えば、ｎ＝２〜１０００以上）からの細胞株、又は好ましくは、生体材料からでありうる）からex-vivoで確立される。標準値又は標準値のセットは、次に、一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体による処置に対する同じ細胞株又は同じ被験体の応答データと相関させてもよい。この相関から、例えば、場合によりカットオフ又は閾値を含む、相対的なスケール又は採点システムの形態での比較測定基準を確立して、それによって、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体に対する応答レベルのスペクトルと関連するバイオマーカーのレベルを示すことができる。応答レベルのスペクトルは、化合物の治療活性に対する相対的感受性（例えば、高感受性〜低感受性）、ならびに治療活性に対する耐性を含んでもよい。好ましい実施態様においては、この比較測定基準は、カットオフ値又は処置に対して耐性であると予測する値のセットを含む。
【００８９】
例えば、試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルを測定するために免疫組織化学法を使用する場合、標準値は、採点システムの形態であってもよい。そのようなシステムは、ｇｌｕ−チューブリン染色が存在する細胞のパーセントを考慮してもよい。そのシステムは、また、個々の細胞の染色の相対強度を考慮してもよい。ｇｌｕ−チューブリンレベルの標準値又は標準値のセットは、それから、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体の治療活性に対する被検体又は組織又は細胞株の応答、とりわけ、耐性を示すデータと相関させてもよい。そのようなデータは、それから、比較測定基準の一部を形成してもよい。
【００９０】
応答は、一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体の治療活性に対する、細胞株の、又は好ましくは被験体の、又はより好ましくは被検体における疾患の反応である。応答レベルのスペクトルは、化合物の治療活性に対する相対的感受性（例えば、高感受性〜低感受性）、ならびに治療活性に対する耐性を含んでもよい。応答データは、例えば、客観的応答割合、疾患が進行する時間、無憎悪生存及び生存全体についてモニタリングしてもよい。
【００９１】
癌性疾患の応答は、例えば、非限定的に、以下の癌治療分野の当業者によく知られる基準を使用することにより評価してもよい：
固形癌の治療効果判定のためのガイドライン(ＲＥＣＩＳＴ)、情報源：Eisenhauer EA, Therasse P, Bogaerts J, Schwartz LH, Sargent D, Ford R, Dancey J, Arbuck S, Gwyther S, Mooney M, Rubinstein L, Shankar L, Dodd L, Kaplan R, Lacombe D, Verweij J. New response evaluation criteria in solid tumours: revised RECIST guideline (version 1.1). Eur J Cancer.2009; 45:228-47；
高悪性度グリオーマのＲＡＮＯ基準、情報源：Wen PY、Macdonald DR, Reardon DA, Cloughesy TF, Sorensen AG, Galanis E, Degroot J, Wick W, Gilbert MR, Lassman AB, Tsien C, Mikkelsen T, Wong ET, Chamberlain MC, Stupp R, Lamborn KR, Vogelbaum MA, van den Bent MJ, Chang SM．高悪性度グリオーマの最新の応答評価基準：神経腫瘍学ワーキンググループの応答評価、J Clin Oncol. 2010;28(11):1963-72；
卵巣癌応答のCA-125 Rustin 基準、情報源： Rustin GJ, Quinn M, Thigpen T, du Bois A, Pujade-Lauraine E, Jakobsen A, Eisenhauer E, Sagae S, Greven K, Vergote I, Cervantes A, Vermorken J. Re：固形腫瘍（卵巣癌）の処置に対する応答を評価する新ガイドライン、J Natl Cancer Inst. 2004; 96(6):487-8；及び
前立腺癌応答のＰＳＡワーキンググループ２基準、情報源：Scher HI, Halabi S, Tannock I, Morris M, Sternberg CN, Carducci MA, Eisenberger MA, Higano C, Bubley GJ, Dreicer R, Petrylak D, Kantoff P, Basch E, Kelly WK, Figg WD, Small EJ, Beer TM, Wilding G, Martin A, Hussain M；前立腺癌の臨床試験ワーキンググループ。進行性前立腺癌及びテストステロンの去勢レベルを有する患者の臨床試験のデザイン及びエンドポイント：前立腺癌の臨床試験ワーキンググループの勧告、J Clin Oncol.2008 ; 26(7):1148-59。
【００９２】
耐性は、下記の１つ又は複数の観察可能及び／又は測定可能な減少がないこと、又は不存在がないことと関連する：異常細胞、好ましくは癌性細胞の数の減少；又は異常細胞、好ましくは癌性細胞の不存在；癌性疾患の場合：腫瘍サイズの減少；さらなる腫瘍成長の阻害（すなわち、ある程度まで遅らせる、好ましくは停止させる）；ＰＳＡ及びＣＡ−１２５などの腫瘍マーカーのレベルの低下、他の器官への癌細胞浸潤（軟組織及び骨への癌の拡大を含む）の阻害（すなわち、ある程度まで遅らせる、好ましくは停止させる）；腫瘍転移の阻害（すなわち、ある程度まで遅らせる、好ましくは停止させる）；特定の癌と関連する１つ又は複数の症状の緩和；ならびに罹患率及び死亡率の低下。
【００９３】
好ましい実施態様においては、耐性は、下記の基準の１つ又は複数の観察可能及び／又は測定可能な減少がないこと、又は不存在がないことを意味する：腫瘍サイズの減少；さらなる腫瘍成長の阻害、他の器官への癌細胞浸潤の阻害；及び腫瘍転移の阻害。
【００９４】
さらに好ましい実施態様においては、耐性は、下記の基準の１つ又は複数を指す：腫瘍サイズの減少がないこと；さらなる腫瘍成長の阻害がないこと、他の器官への癌細胞浸潤の阻害がないこと；及び腫瘍転移の阻害がないこと。
【００９５】
前述の耐性基準の測定は、癌性疾患の応答を測定する上記に列挙したような、癌治療分野の当業者によく知られる臨床ガイドラインに従う。
【００９６】
応答は、また、細胞増殖及び／又は細胞死を評価することによりin vitroで確立してもよい。例えば、細胞死又は増殖に対する効果は、下記の１つ又は複数のよく確立されたアッセイによりin vitroで評価してもよい：Ａ）Hoechst 33342色素による核の染色（アポトーシスに特徴的な核形態学及びＤＮＡ断片化についての情報が得られる）。Ｂ）アネキシンＶ結合アッセイ（細胞膜の外側の脂質二重層のホスファチジルセリン含量を反映する。この事象は、アポトーシスの早期の特徴と考えられる）。Ｃ）ＴＵＮＥＬアッセイ（末端デオキシヌクレオチド転移酵素媒介ｄＵＴＰニック末端標識法。核酸の末端を標識してＤＮＡ断片化を測定することにより、アポトーシス又は壊死を受けている細胞を評価する蛍光法）。Ｄ）細胞の代謝活性を測定するＭＴＳ増殖アッセイ（生存細胞は代謝的に活性であるが、呼吸鎖異常の細胞は、この試験で低い活性を示す）。Ｅ）クリスタルバイオレット染色アッセイ（細胞数に及ぼす効果が細胞成分の直接染色を介してモニタリングされる）。Ｆ）ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の取り込みを介してＤＮＡ合成をモニタリングする増殖アッセイ（成長／増殖に及ぼす阻害効果を直接決定することができる）。Ｇ）ＹＯ−ＰＲＯアッセイ（細胞の生存を妨害することなく、死細胞（例えば、アポトーシスを起こした）を分析することが可能な、膜非透過性のシアニンモノマー核酸蛍光染色を含む。また、細胞数に及ぼす全体の効果を、細胞透過化の後に分析することができる）。Ｈ）細胞周期分布のヨウ化プロピジウム染色（細胞周期の異なるフェーズ間の分布の変化を示す。細胞周期停止点を決定することができる）。Ｉ）足場非依存性増殖アッセイ（例えば、軟寒天中、単一細胞懸濁液がコロニーへ成長する能力を評価するコロニー成長アッセイ）。
【００９７】
in vitroでの耐性の決定に関する好ましい実施態様においては、耐性は、異常細胞の増殖率の低下及び／又は異常細胞の数の減少がないことを意味する。より好ましくは、耐性は、癌性細胞の増殖率の低下がない、及び／又は癌性細胞の数の減少がないことを意味する。異常細胞、好ましくは癌性細胞の数の減少は、様々なプログラム及び非プログラム細胞死メカニズムを介して起こりうる。アポトーシス、カスパーゼ非依存性プログラム細胞死及びオートファジー細胞死は、プログラム細胞死の例である。しかし、本発明の実施態様に含まれる細胞死の基準は、任意の１つの細胞死メカニズムに限定されるものと解釈すべきではない。
【００９８】
ｇｌｕ−チューブリン
α−チューブリン（ヒトα−チューブリン）のタンパク質配列の好ましい例を、図１１〜１４のSEQ. ID No.１〜４に列挙する。α−チューブリンは、ｇｌｕ−チューブリンの前駆体である。上述したように、ｇｌｕ−チューブリンそれ自体は、Ｃ−末端のチロシンが除去されている。ｇｌｕ−チューブリンという用語は、また、SEQ. ID No.１〜４により表される配列の相同体、突然変異型、対立遺伝子変異体、イソフォーム、スプライス変異体及び等価体（但し、グルタミン酸が、Ｃ−末端における最後のアミノ酸である）を包含する。より好ましくは、これは、前記配列に対して少なくとも約７５％の同一性、とりわけ好ましくは、少なくとも約８５％の同一性、特に好ましくは、少なくとも約９５％の同一性、さらに特に好ましくは、約９９％の同一性を有する配列（但し、各場合で、グルタミン酸が、Ｃ−末端における最後のアミノ酸である）を包含する。
【００９９】
ｇｌｕ−チューブリンのレベル
ｇｌｕ−チューブリンのレベルは、当業者によく知られたタンパク質分析技術により、試料中でアッセイしてもよい。ｇｌｕ−チューブリンのレベルをタンパク質レベルで測定するために好適な当技術分野において公知の方法の例としては、ｉ）免疫組織化学（ＩＨＣ）分析、ii）ウエスタンブロット、iii）免疫沈降、iv）酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、ｖ）ラジオイムノアッセイ、ｖｉ）蛍光活性化細胞選別法（ＦＡＣＳ）、vii）質量分析法（マトリックス支援レーザー脱離／イオン化（ＭＡＬＤＩ、例えば、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）及びエレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ-ＭＳ）を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１００】
上記方法のいくつかに含まれる抗体は、モノクローナルもしくはポリクローナル抗体、抗体フラグメント、及び／又はキメラ抗体を含む様々なタイプの合成抗体であってもよい。抗体は、その抗体を検出できるように、又は例えば、標識された又は検出可能な結果を生成することが可能な二次抗体を使用して、１つもしくは複数のさらなる種との次の反応を検出可能なように標識されてもよい。α−チューブリンのｇｌｕ−チューブリン形態に特異的な抗体は、Miliporeから市販品として入手するか、又は当業者によく知られた従来の抗体生成法を介して調製することができる。
【０１０１】
タンパク質分析の好ましい方法は、ＥＬＩＳＡ、質量分析技術、免疫組織化学及びウエスタンブロットであり、より好ましくは、ウエスタンブロット及び免疫組織化学である。イムノブロットとしても知られるウエスタンブロットでは、タンパク質レベルを評価するために標識抗体を使用してもよく、その方法において、検出可能な標識からのシグナルの強度はタンパク質の量に相当し、これを、例えば、密度測定により定量することができる。
【０１０２】
免疫組織化学もまた、バイオマーカーの存在及び相対量を検出するために標識抗体を使用する。これは、バイオマーカーが存在する細胞のパーセントを評価するために使用することができる。これは、また、個々の細胞中のバイオマーカーの局在又は相対量を評価するために使用することができ、後者は、染色強度の関数と見なされる。
【０１０３】
ＥＬＩＳＡは、特異的なタンパク質を検出するために抗体又は抗原に結合した酵素を使用する、酵素結合免疫吸着法の略称である。ＥＬＩＳＡは、典型的には、以下のように実施される（しかし、他の変法もある）：９６ウェルプレートなどの固体基板を、バイオマーカーを認識する一次抗体でコートする。次に、結合したバイオマーカーを、バイオマーカーに特異的な二次抗体により認識する。これを酵素に直接連結するか、又は酵素に連結させた三次抗免疫グロブリン抗体を使用してもよい。基質を加えると、酵素が反応を触媒して、特定の色を生成する。この色の光学密度を測定することにより、バイオマーカーの存在及び量を決定することができる。
【０１０４】
バイオマーカーの使用
バイオマーカーは、上記で定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体に対する、被検体における疾患の自然耐性を予測するために使用してもよい。
【０１０５】
バイオマーカーは、上記で定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体に対する、被検体における疾患の獲得耐性を予測するために使用してもよい。
【０１０６】
バイオマーカーは、上記で定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体で処置するために、疾患、好ましくは、癌を患っている又は患う可能性がある被験体を選択するために使用してもよい。そのようなバイオマーカーのレベルは、そのような薬剤による処置に応答する、又は応答しない、又は応答し続ける、または応答し続けない可能性がある被検体を特定するために使用してもよい。不必要な処置計画を避けるために、被験体の層別化を実施してもよい。特に、バイオマーカーは、被験体からの試料（１つ又は複数）が、標準レベル又は標準レベルのセットに対して、より高いｇｌｕ−チューブリンレベルを示さない被験体を特定するために使用してもよく、それによって、そのような被験体を、上記で定義される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体で処置するために選択してもよい。
【０１０７】
バイオマーカーは、また、投薬量及び計画に関して処置計画の決定を補助するために使用してもよい。また、バイオマーカーは、被験体に与えられる、一般式（Ｉ）の化合物（１つ又は複数）又はその薬学的に許容しうる誘導体と別の化学療法薬（細胞毒性薬）（１つ又は複数）とを含む、薬物併用の選択を補助するために使用してもよい。さらに、バイオマーカーは、一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体を、標的療法、内分泌療法、放射線療法、免疫療法もしくは外科的介入又はこれらの組み合わせと併用して投与するか否かを含む、被験体における治療方針の決定を補助するために使用してもよい。
【０１０８】
ｇｌｕ−チューブリンは、また、一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体に対する応答を予測するため、そして、処置計画を決定するために他のバイオマーカーと組み合わせて使用してもよい。これは、さらに、耐性を予測するため、そして、処置計画を決定するために化学療法剤感受性試験と組み合わせて使用してもよい。化学療法剤感受性試験は、一般式（Ｉ）の化合物に対する細胞の応答を決定するために、被験体から、例えば、血液悪性腫瘍又は接触可能な固形腫瘍、例えば、乳房、頭部及び頸部癌又は黒色腫を有する被験体から採取した細胞に一般式（Ｉ）の化合物を直接適用することを含む。
【０１０９】
処置方法
本発明は、また、いくつかの態様に、処置方法及び処置方法において使用するためのｇｌｕ−チューブリンを関与させるが、ここでは、最初に、ｇｌｕ−チューブリンレベルを、標準レベルもしくは標準レベルのセット、又は処置開始前のレベルに対して確立して、次に、前記試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルが、それぞれ、標準値又は標準値のセットより高くない場合、又は処置開始前のレベルに対して増加していない場合に、上記で定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体を投与する。式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体は、当業者によく知られているように、医薬組成物で投与してもよい。好適な組成物及び投薬量は、例えば、WO 2004/103994 A1（参照により本明細書に明確に組み入れられる）の３５〜３９ページに開示されている。温血動物、とりわけヒトに対しては、腸内投与、例えば、鼻腔内、口腔、直腸、又はとりわけ経口投与用の組成物、及び非経口投与、例えば、静脈内、筋肉内又は皮下投与用の組成物がとりわけ好ましい。より具体的には、静脈内投与用の組成物が好ましい。
【０１１０】
本組成物は、活性成分及び薬学的に許容しうる担体を含む。組成物の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：５０００個の軟ゼラチンカプセル剤（各々、活性成分として一般式（Ｉ）の化合物の１つを０．０５ｇ含む）は、以下のように調製される：微粉化した活性成分２５０ｇを、Lauroglykol（登録商標）（ラウリン酸プロピレングリコール、Gattefosse S.A., Saint Priest, France）２リッターに懸濁し、湿式造粒機中で製粉して、粒径約１〜３μmの粒子を製造する。次に、カプセル充填機を用いて、混合物を０．４１９ｇずつ軟ゼラチンカプセルに注入する。
【０１１１】
本発明は、また、一態様においては、新生物疾患又は自己免疫疾患、好ましくは癌を処置する方法であって、ｇｌｕ−チューブリンレベルが標準レベルもしくは標準レベルのセット、又は処置開始前のレベルと比較してより高い試料を有する被験体中のｇｌｕ−チューブリンレベルを最初に低下させて、次に、被験体を、上記で定義される一般式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容しうる誘導体で処置することによる方法に関する。ｇｌｕ−チューブリンレベルは、直接的又は間接的な化学又は遺伝学的方法により低下させてもよい。そのような方法の例は、ｇｌｕ−チューブリンの発現を減少させる薬物、ウイルス、プラスミドもしくはペプチド構築物の標的送達、又はｇｌｕ−チューブリンレベルをダウンレギュレートする抗体もしくはｓｉＲＮＡもしくはアンチセンスによる処置である。例えば、ｓｉＲＮＡをＴＴＣＰのレベルを低下させるために使用して、又はプラスミドの送達をＴＴＬの発現を増加させるために使用して、それによって、細胞中のｇｌｕ−チューブリンレベルを低下させてもよい。次に、一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体で被験体を処置してもよい。
【０１１２】
一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体は、単独で又は１つもしくは複数の他の治療薬と併用して投与することができる。可能な併用療法は、固定された組み合せ剤の形態であるか、あるいは、本発明の化合物と１つもしくは複数の他の治療薬を交互に又は互いに独立して投与する形態、あるいは、固定された組み合せ剤と１つもしくは複数の他の治療薬の併用投与の形態であってもよい。
【０１１３】
一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体は、さらに又は加えて、とりわけ、化学療法（細胞傷害性療法）、標的療法、内分泌療法、放射線療法、免疫療法、外科的介入又はこれらの組み合わせと併用して、腫瘍治療のために投与することができる。長期療法は、上述するような他の処置方針に関連するアジュバント療法であるので同様に可能である。他の可能な処置は、腫瘍退縮後の患者の状態を維持するための治療、又は例えば、リスクを有する患者における化学予防治療である。
【０１１４】
キット及び装置
本発明は、試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルを測定するために必要な試薬を含む、上記で定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体に対する被験体における応答、好ましくは疾患の応答を予測するための、一態様においてはキットに、別の態様においては装置に関する。好ましくは、試薬は、ｇｌｕ−チューブリンのための検出部を含む捕捉試薬及び検出試薬を含む。
【０１１５】
キット及び装置は、また、好ましくは、試料中のｇｌｕ−チューブリンレベルと比較する標準値又は標準値のセットを含む比較測定基準を含んでもよい。好ましい実施態様においては、比較測定基準は、キットの使用説明書に含まれる。別の好ましい実施態様においては、比較測定基準は、表示装置、例えば、縞模様のカラーコード化又は数値コード化された材料の形態であり、耐性レベルを表示するための試料測定の表示器の隣に位置するように設計されている。標準値又は標準値のセットは、上述するように決定してもよい。
【０１１６】
試薬は、好ましくは、ｇｌｕ−チューブリンに選択的に結合する抗体又は抗体フラグメントである。これらは、例えば、ｇｌｕ−チューブリンに結合する１つの特異的一次抗体と、一次抗体に結合し、且つ、それ自体検出のために標識されている二次抗体の形態であってもよい。あるいは、一次抗体は、また、直接検出のために標識されていてもよい。キット又は装置は、また、場合により、捕捉試薬に結合しているバイオマーカーを他のバイオマーカーよりも、洗浄後に選択的に保持させることができる洗浄液を含有してもよい。そのようなキットは、次に、バイオマーカーのレベルを検出するために、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、フローサイトメトリー、免疫組織化学又は他の免疫化学的方法において使用することができる。
【０１１７】
より好ましくは、キットは、上記で定義される一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容しうる誘導体を含む。次に、キットに含まれる試薬により測定される被験体からの試料中のバイオマーカーのレベルに従って、この化合物を被験体に投与してもよい。従って、本発明のキットは、上記で定義される本発明の処置方法において使用してもよい。とりわけ好ましい実施態様においては、キットは、下記式の化合物又はその薬学的に許容しうる塩を含む。
【化２１】
2014505876.tif 000033
【０１１８】
キットの特に好ましい実施態様においては、薬学的に許容しうる塩は二塩酸塩である。別の態様においては、本発明は、上述するそのようなキットの使用に関する。
【０１１９】
さらに、装置は、測定シグナルをさらに処理し、これらを比較測定基準のスケールに変換する撮像装置又は測定装置（例えば、非限定的に、蛍光の測定）を含んでもよい。
【０１２０】
本願において、語「含む（comprise）」又は「含む（comprises）」又は「含む（comprising）」は、記述された項目又は項目群を包含するが、任意の他の項目又は項目群を包含しないわけではないことを意図するものと理解されたい。
【実施例】
【０１２１】
実験手法
培養細胞の免疫蛍光染色
Ａ５４９ヒト非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ、ＡＴＣＣ参照番号ＣＣＬ−１８５）細胞、ＨｅＬａ子宮頸癌細胞（ＡＴＣＣ参照番号ＣＣＬ−２）及びＳＫＢＲ３乳癌細胞（ＡＴＣＣ参照番号ＨＴＢ−３０）を円形の顕微鏡カバースリップ上に５０％の密度で播種し、１０％ ＦＣＳ（ＦＢＳとも呼ばれる）を含有するＲＰＭＩ−１６４０中、３７℃、５％ ＣＯ２で２４時間培養した。試験化合物をＤＭＳＯに溶解した。細胞培養培地を、希釈化合物（パクリタキセル、ビンブラスチン、コルヒチン及びノコダゾールは、Sigma-Aldrichから購入した）又はビヒクルを含有する培地に交換した。図面の簡単な説明に示した時間で処置した後、カバースリップを洗浄し、メタノール／アセトン（１：１）中、室温で５分間細胞を固定し、続いて、ブロッキング緩衝液（ＰＢＳ中０．５％ ＢＳＡ及び０．１％ＴＸ−１００）中、室温で３０分間インキュベートした。次に、標本を、ブロッキング緩衝液中、抗α−チューブリン（Sigma、１：２０００）と室温で１時間インキュベートした。数回洗浄した後、細胞を、AlexaFluor−４８８ヤギ抗マウスＩｇＧ（Molecular Probes、１：３０００）と室温で１時間インキュベートし、続いて、ブロッキング緩衝液で数回洗浄した。次に、標本をProLong Gold antifade（Molecular Probes）で封入し、マニキュア液でシールして、Leica免疫蛍光顕微鏡で観察した。冷却ＣＣＤカメラで撮像し、ImageJソフトウェアで処理した。
【０１２２】
コロニー成長アッセイ：
患者由来の腫瘍異種移植片（ヌードマウスで維持した）の単一細胞懸濁液を調製した。コロニー成長アッセイでは、Hamburger & Salmon（Primary bioassay of human tumour stem cells, Science, 1977, 197:461-463）により紹介されたアッセイに従って、細胞を２４ウェルプレートの軟寒天にプレーティングした。０．４％寒天を含有する培地０．２mL中の２×１０４〜６×１０４個の細胞を、０．７５％寒天の最下層に沈着させた。試験化合物を培養培地０．２mL中に適用した。２４ウェルプレートごとに、未処理コントロールと試料を３連で含めた。培養物を３７℃及び７．５％ ＣＯ２で５〜２８日インキュベートした。分析の２４時間前に、生きているコロニーを代謝可能なテトラゾリウム塩の溶液で染色し（Alley MC et al, Life Sci. 1982, 31:3071-3078）、自動画像解析システム（Omnicon 3600, Biosys GmbH)でカウントした。
【０１２３】
相対薬物効果を、処置ウェルとコントロールウェルにおけるコロニーの平均数の比で表した。化合物濃度と相対コロニーカウントをプロットすることによりＩＣ７０値を決定した。
【０１２４】
ＢＡＬ２７８６２耐性細胞株の生成及びクリスタルバイオレットアッセイ
ヒト非小細胞肺癌（Ｈ４６０、ＡＴＣＣ参照ＨＴＢ−１７７；Ａ５４９、ＡＴＣＣ参照ＣＣＬ−１８５）、卵巣癌（ＳＫＯＶ３、ＡＴＣＣ参照ＨＴＢ−７７）株のＢＡＬ２７８６２耐性亜系株を、完全細胞培養培地（１０％ ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ−１６４０；Sigma-Aldrich）中、ＢＡＬ２７８６２の濃度を段階的に増加させることによる長期選択により生成させた。３〜１１．６の耐性係数（耐性細胞株と適切な野生型細胞株のＩＣ５０の比）を達成するために、細胞株に応じて選択プロセスを８〜１２ヶ月間実施した。耐性亜系株を最大許容濃度のＢＡＬ２７８６２で増殖させ、その後、液体窒素中に凍結保存した。
【０１２５】
細胞を９６ウェルプレートに以下の濃度：Ａ５４９：２０００、Ｈ４６０：１０００、ＳＫＯＶ３：２０００で播種し、２４時間インキュベートした後、完全培地で希釈したＤＭＳＯ、ＢＡＬ２７８６２、コルヒチン、ノコダゾール、パクリタキセル又はビンブラスチン（最終濃度ＤＭＳＯmax．０．５％）と７２時間インキュベートした。培地を除去した後、細胞を固定し、１ウェルあたりクリスタルバイオレット染色液（５０％メタノール中０．２％クリスタルバイオレット）５０μlを加えることにより染色した。プレートを室温で１時間インキュベートした。その後、染色液をデカントし、プレートを再蒸留水で４回洗浄した。プレートを数時間風乾させた。１ウェルあたり緩衝液（０．１ＭのTris（ｐＨ７．５）、０．２％ ＳＤＳ、２０％エタノール）１００μｌを加え、プレートを振とうすることにより染色液を溶解した。SpectraMax M2eプレートリーダー（Molecular Devices）を使用して５９０nmの吸光度を測定した。GraphPad Prismソフトウェアを使用して、濃度応答曲線から抗増殖ＩＣ５０値を算出した。耐性係数をＢＡＬ２７８６２耐性株変異体のＩＣ５０と親株のＩＣ５０の比として算出した。
【０１２６】
タンパク質抽出
腫瘍抽出：腫瘍を、５０mMのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１５０mMのＮａＣｌ、２５mMのβ−グリセロリン酸塩、２５mMのＮａＦ、５mMのＥＧＴＡ、１mMのＥＤＴＡ、０．１％ＮＰ４０、１５mMのピロリン酸塩、２mMのオルトバナジウム酸ナトリウム、１０mMのモリブデン酸ナトリウム、ロイペプチン（１０μg/mL）、アプロチニン（１０μg/mL）及び１mMのフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）を含有する氷冷溶解緩衝液（腫瘍４５mgあたり抽出体積１mL）中に抽出した。Polytronによりホモジナイズした後、溶解物を１％ ＮＰ４０に調整し、氷上で２０分間インキュベートした。溶解物を遠心により清澄化し、−８０℃で凍結した。
【０１２７】
腫瘍細胞株の抽出：細胞を１mMのＰＭＳＦを含有する氷冷ＰＢＳで、そして、ＮＰ４０不含の氷冷溶解緩衝液（上記を参照）で洗浄した。１％ ＮＰ４０を含有する同じ溶解緩衝液中に細胞を抽出した。ホモジナイズした後、溶解物を遠心により清澄化し、−８０℃で凍結した。
【０１２８】
イムノブロット／ウエスタンブロット
１レーンあたり総タンパク質２０μgを使用して、イムノブロットを実施した。総タンパク質濃度は、BCA Protein Assay（Pierce）で決定した。タンパク質を１０％ ＳＤＳゲルで分離し、半乾式ブロッティングを用いてＰＶＤＦメンブランに転写した（９０分間、５０mA／ゲル）。イムノブロットに使用する一次抗体は以下のとおりである：
【０１２９】
ｇｌｕ−チューブリン抗体（Miliporeから入手、参照番号AB3201）、ウサギポリクローナル、１：１０００希釈、緩衝液条件：ＰＢＳ／０．１％ Tween中３％ ＢＳＡ。
【０１３０】
アクチン抗体（Chemiconから入手、参照番号MAB1501）、マウスモノクローナル、１：５０００希釈、緩衝液条件：ＰＢＳ／０．１％ Tween中３％ ＢＳＡ。
【０１３１】
イムノブロットに使用する二次抗体は、ペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギ又はヤギ抗マウス（Jackson ImmunoResearch Laboratories INCから入手：参照番号111-035-144 JIR及び115-035-146 JIR）、１：５０００希釈、緩衝液条件：ＰＢＳ／０．１％ Tween中０．５％ミルクであった。標識バンドは、Raytest Stella 3200 High Performance Imaging Systemを使用して明らかにした。
【０１３２】
免疫組織化学
患者由来の腫瘍異種移植片（ヌードマウスで維持した）の固定は、４％ホルムアルデヒドを含有する１０％中性緩衝ホルマリン中、室温で２０〜２８時間実施した。固定した標本を７０％エタノール溶液中に最大１週間維持した後、下記の条件を用いた標準プロセスに従って脱水とパラフィン包埋を行った：
【０１３３】
【表６】
2014505876.tif 000034
【０１３４】
約２μmのパラフィン切片を切り取り、自動免疫染色装置Benchmark XT（登録商標）（Roche）を使用し、標準プロセス工程を実行して処理した。特異的抗体染色の可視化は、発色性基質としてＤＡＢ（３，３−ジアミノベンジジン）を用い、５mg/mlの濃度で行った。以下の一次抗体及び処理条件を染色に使用した：
【表７】
2014505876.tif 000035
【０１３５】
詳細な実施例
実施例１：一般式（Ｉ）の化合物により誘導される異なる有糸分裂表現型
【０１３６】
化合物Ａ（ＢＡＬ２７８６２）又は化合物Ｂ又は化合物Ｃによる処置は、全ての試験腫瘍細胞株で高い再現性及び異なる微小管表現型を誘導した（Ａ５４９、ＨｅＬａ及びＳＫＢＲ３細胞での化合物Ａについては図１、そして、Ａ５４９細胞での化合物Ｂ及び化合物Ｃについては図２に示す）。分裂細胞では、有糸分裂紡錘体の明らかな分裂が起こり、ドット様構造の形成をもたらした（図１）。この表現型は、従来の微小管標的薬剤、例えば、微小管安定化剤のパクリタキセルならびに微小管不安定剤のビンブラスチン及びコルヒチン（図３）及びノコダゾール（図４）を用いた場合に観察される表現型と異なることが示された。
【０１３７】
実施例２：ＢＡＬ２７８６２は、従来の微小管標的薬物により優性的に誘導される微小管表現型に打ち勝つ
【０１３８】
微小管に及ぼすその活性の独自性を示すために、Ａ５４９細胞を使用して、ＢＡＬ２７８６２をビンブラスチン、コルヒチン及びパクリタキセル（図５）ならびにノコダゾール（図６）と併用して試験した。ビンブラスチン、コルヒチン、パクリタキセル又はノコダゾールの単独処置では、これらの薬剤に特徴的な有糸分裂微小管表現型を誘導した。しかし、最後の４時間のＢＡＬ２７８６２との併用処置は、微小管構造の崩壊をもたらし；ビンブラスチン、コルヒチン、パクリタキセル又はノコダゾールが継続的に存在していたにもかかわらず、ＢＡＬ２７８６２の単独処置と一致する表現型を生成した。対照的に、最初に、ＢＡＬ２７８６２で処置し、その後、ビンブラスチン、コルヒチン、パクリタキセル又はノコダゾールと４時間併用処置したところ、観察される微小管表現型（その表現型は、ＢＡＬ２７８６２による処置と一致した）に影響を及ぼさなかった。
【０１３９】
これらのデータから、式（Ｉ）の化合物は、微小管生物学に常に影響を及ぼすが、従来の微小管標的薬剤とは異なる機序で影響を及ぼすことが実証される。
【０１４０】
本発明の詳細な実施例
実施例３：高いｇｌｕ−チューブリン発現レベルとＢＡＬ２７８６２処置に耐性の患者由来の腫瘍細胞の関連性
【０１４１】
コロニー成長アッセイに基づいて、マウスにおいて異種移植片として維持した６種類の患者由来腫瘍に由来する腫瘍細胞を使用し、ＢＡＬ２７８６２に感受性又は比較的耐性の腫瘍細胞を黒色腫ならびに結腸直腸及び肺癌から同定した（表１を参照）。コントロールに対して７０％の成長阻害が観察される濃度（ＩＣ７０）を表１に示す。この表では、ＢＡＬ２７８６２に感受性の腫瘍細胞は、低いナノメートル範囲のＩＣ７０値を有するが、ＢＡＬ２７８６２に耐性の腫瘍細胞は、ＩＣ７０値＞６００ナノメートルと確定される。同じex vivoアッセイを使用したパクリタキセル及びビンブラスチンのデータは、６つの腫瘍モデルうち５つで有用であった。これらの５つのモデルの全てが、パクリタキセルによる処置に耐性であったが、これらの腫瘍の５つのうち４つは、ビンブラスチンによる処置に感受性であった。
【０１４２】
【表８】
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【０１４３】
異種移植片として維持した同じ腫瘍においてｇｌｕ−チューブリンレベルを測定するために、Milipore抗体を使用してイムノブロット分析を実施した（図７）。イムノブロットのローディングコントロールとしてアクチンレベルを含めた。
【０１４４】
ｇｌｕ−チューブリンレベルの分析から、ｇｌｕ−チューブリンの発現が、測定した腫瘍の全てで劇的に変化したことが示された（図７）。
【０１４５】
コロニー成長アッセイ及び同じＩＣ７０基準から、パクリタキセル又はビンブラスチン耐性と高いｇｌｕ−チューブリンレベルとの関連性は認められなかった。これは、例えば、黒色腫の腫瘍タイプでは、両方のモデルがパクリタキセルに耐性であって、さらにＭＥＸＦ１３４１のｇｌｕ−チューブリンレベルがＭＥＸＦ２７６よりも明らかに低かったことから明白である。同じ関連性の欠如は、黒色腫モデルのビンカアルカロイドのビンブラスチンの場合にも、これらの腫瘍の両方がビンブラスチンに感受性であったことから当てはまった。従って、ｇｌｕ−チューブリンレベルは、患者由来の腫瘍モデルにおいて、従来の微小管薬剤のパクリタキセル及びビンブラスチンに対する耐性の信頼性の高いバイオマーカーとして不適当であることが示された。
【０１４６】
驚くべきことに、一方で、ＢＡＬ２７８６２耐性データをｇｌｕ−チューブリンレベルと比較したとき、ｇｌｕ−チューブリンは、耐性腫瘍においてのみより高く、そして、同じ腫瘍組織型由来の感受性腫瘍ではそうでないことが示される。そのため、レベルの増加は、ＢＡＬ２７８６２に対する耐性を一貫して示した。従って、ｇｌｕ−チューブリンレベルは、本発明の化合物ＢＡＬ２７８６２に対する耐性のバイオマーカーであることが示された。
【０１４７】
実施例４：結腸直腸腫瘍異種移植片の免疫組織化学分析
【０１４８】
結腸直腸腫瘍異種移植片で免疫組織化学分析を実施し（図８）、腫瘍モデルＣＸＦ２４３においてｇｌｕ−チューブリンが高レベルであることが明らかとなった。さらに、高レベルのｇｌｕ−チューブリンとＢＡＬ２７８６２に対する耐性との間に明らかな相関関係が見られた（腫瘍モデルＣＸＦ２４３は、ＢＡＬ２７８６２に耐性であったが、腫瘍モデルＣＸＦ１１０３は、ＢＡＬ２７８６２に感受性であった；コロニー成長アッセイにより確定される）。従って、ｇｌｕ−チューブリンレベルは、この場合も本発明の化合物ＢＡＬ２７８６２に対する耐性のバイオマーカーであることが示された。
【０１４９】
実施例５：より高いｇｌｕ−チューブリンの発現が、一般式（Ｉ）の化合物に対して耐性を有するものとして選択された腫瘍株において観察される
ＢＡＬ２７８６２に対する耐性についてのin vitro選択は、親株に対して下記の耐性係数を有する３種類の比較的耐性の腫瘍細胞株を生成させた（クリスタルバイオレットアッセイを使用したＩＣ５０測定に基づく）：Ａ５４９（３．０倍）；ＳＫＯＶ３耐性１（７．６倍）；ＳＫＯＶ３耐性２（１１．６倍）；Ｈ４６０（５．３倍）（表２）。
【０１５０】
【表９】
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【０１５１】
一般的に、これらのＢＡＬ２７８６２耐性細胞は、他の微小管不安定化剤、例えば、コルヒチン、ノコダゾール及びビンブラスチンに対して、ＢＡＬ２７８６２とは異なるレベルの応答を示し；そして、全ての株で、微小管安定化剤のパクリタキセルに対する感受性が実際に増加したことが観察された（表２）。
【０１５２】
これらの株を抽出及びイムノブロット分析して、ｇｌｕ−チューブリンレベルを測定し、続いて、ＢＡＬ２７８６２耐性データと比較することによって、また、ｇｌｕ−チューブリンが親株と比較して耐性株でより高いことが示される（図９）。これは、ＳＫＯＶ３細胞では耐性発現を通して維持された（図１０）。これらのデータから、ｇｌｕ−チューブリンの発現レベルの増加とＢＡＬ２７８６２に対する獲得耐性の関連性が示される。
【０１５３】
略語のリスト
Ａ５４９              ヒト非小細胞肺癌細胞株
アネキシンＶ          ホスファチジルセリン結合タンパク質
ＢＣＡ                ビシンコニン酸
Ｂｃｌ−２            Ｂ細胞リンパ腫２タンパク質
ＢＲＣＡ１            １型乳癌感受性タンパク質
ＢｒｄＵ              ブロモデオキシウリジン
ＢＳＡ                ウシ血清アルブミン
ＣＡ−１２５          癌抗原１２５
ｃＤＮＡ              相補的デオキシリボ核酸
ＣＲＥＳＴ            局限性強皮症
ＣＯ２                 二酸化炭素
ＣＸＦ２４３          患者由来の結腸直腸腫瘍
ＣＸＦ１１０３        患者由来の結腸直腸腫瘍
ＤＡＢ                ３，３−ジアミノベンジジン
ＤＭＳＯ              ジメチルスルホキシド
ＤＮＡ                デオキシリボ核酸
ｄＵＴＰ              ２’−デオキシウリジン５’−三リン酸
ＥＬＩＳＡ            酵素結合免疫吸着アッセイ
ＥｒｂＢ−２          ヒト上皮成長因子受容体２
ＥＳＩ−ＭＳ          エレクトロスプレーイオン化質量分析法
ＥｔＯＨ              エタノール
ＦＡＣＳ              蛍光活性化細胞スキャン／選別法
ＦＣＳ／ＦＢＳ        ウシ胎児／ウシ胎仔血清
Ｇ２／Ｍ              細胞周期のＧ２から分裂期への移行
ＨｅＬａ              ヒト扁平上皮癌細胞株
ＨＥＰＥＳ            ４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸
Ｈｏｅ３３３４２      ２’−（４’−エトキシフェニル）−５−（４−メチルピペラジン−１−イル）−２，５’−ビス−１Ｈ−ベンゾイミダゾール三塩酸塩三水和物
Ｈ４６０              ヒト非小細胞肺癌細胞株
ＩｇＧ                免疫グロブリンＧ
ＩＨＣ                免疫組織化学
ＬＸＦＥ２１１        患者由来の肺腫瘍
ＬＸＦＥ３９７        患者由来の肺腫瘍
ＭＡＬＤＩ            マトリックス支援レーザー脱離／イオン化質量分析法
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ    マトリックス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分析法
ＭＥＸＦ２７６        患者由来の黒色腫
ＭＥＸＦ１３４１      患者由来の黒色腫
ｍＲＮＡ              メッセンジャーリボ核酸
ＭＴＳ                ３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム
ＮａＣｌ              塩化ナトリウム
ＮａＦ                フッ化ナトリウム
ＮＣＢＩ              国立生物工学情報センター
ＮＳＣＬＣ            非小細胞肺癌
ＮＰ４０              ノニデットＰ４０
ＰＢＳ                リン酸緩衝生理食塩水
ＰＣＲ                ポリメラーゼ連鎖反応
Ｐ−ｇｐ              Ｐ−糖タンパク質
ＰＭＳＦ              フッ化フェニルメチルスルホニル
ＰＳＡ                前立腺特異的抗原
ＰＶＤＦ              フッ化ポリビニリデン
ＲＡＮＯ              高悪性度グリオーマの応答評価
ＲＥＣＩＳＴ          固形腫瘍の応答評価基準
ＲＮＡ                リボ核酸
ＲＰＭＩ−１６４０    形質転換及び非形質転換真核細胞及び細胞株の培養に使用される細胞培養培地
ＳＤＳ                ドデシル硫酸ナトリウム
ＳＥＱ． ＩＤ Ｎｏ．  配列識別番号
ｓｉＲＮＡ            低分子阻害性リボ核酸
ＳＫＢＲ３            ヒト乳癌細胞株
ＳＫＯＶ３            ヒト卵巣癌細胞株
ＴＴＣＰ              チューブリンチロシンカルボキシペプチダーゼ
ＴＴＬ                チューブリンチロシンリガーゼ
ＴＵＮＥＬ            末端デオキシヌクレオチド転移酵素ｄＵＴＰニック末端標識法
Tween−２０           洗剤、ポリオキシエチレンソルビタンラウリン酸モノエステル
ＴＸ−１００          Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００
ＹＯ−ＰＲＯ          シアニンモノマー核酸蛍光染色
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図８】
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【図７】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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