(57)【要約】  対象において、血管関連黄斑症、またはその症状を診断および治療するための方法および組成物が本明細書で開示される。対象において開示された血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を診断および治療するための方法および組成物が本明細書で開示される。対象において重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を診断および治療するための方法および組成物が本明細書で開示される。対象において異常脈絡毛細管小葉を診断するため、および消散する治療のための方法および組成物が本明細書で開示される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において血管関連黄斑症を治療する方法であって、有効量のエラスターゼ阻害剤を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記エラスターゼ阻害剤はα１アンチトリプシン、ＺＤ０８９２、ＳＰＩＰｍ２、ＯＮＯ−５０４６、１，４−ビスフェニル−１，４−ジヒドロピリジン、２−ヒドロキシおよび２−アミノジヒドロピリジン、ドラスタチンもしくはドラスタチン類似体、またはリングビアスタチンもしくはリングビアスタチン類似体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記エラスターゼ阻害剤は、ＨＴＲＡ１のエラスターゼ活性を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記エラスターゼ阻害剤はＤＰＭＦＫＬｂｏｒｏＶである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
対象において（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する、または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散する方法であって、有効量のエラスターゼ阻害剤を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項６】
前記エラスターゼ阻害剤はα１アンチトリプシン、ＺＤ０８９２、ＳＰＩＰｍ２、ＯＮＯ−５０４６、１，４−ビスフェニル−１，４−ジヒドロピリジン、２−ヒドロキシおよび２−アミノジヒドロピリジン、ドラスタチンもしくはドラスタチン（ｄｏｌａｓａｔｉｎ）類似体、またはリングビアスタチンもしくはリングビアスタチン類似体である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記エラスターゼ阻害剤は、ＨＴＲＡ１のエラスターゼ活性を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記エラスターゼ阻害剤はＤＰＭＦＫＬｂｏｒｏＶである、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
対象において、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する、または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散する方法であって、有効量のエラスターゼモジュレーターを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項１０】
前記エラスターゼモジュレーターは、α１アンチトリプシン、ＺＤ０８９２、ＳＰＩＰｍ２、ＯＮＯ−５０４６、１，４−ビスフェニル−１，４−ジヒドロピリジン、２−ヒドロキシおよび２−アミノジヒドロピリジン、ドラスタチンもしくはドラスタチン類似体、またはリングビアスタチンもしくはリングビアスタチン類似体である、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
前記エラスターゼモジュレーターは、ＨＴＲＡ１のエラスターゼ活性を阻害する、請求項５に記載の方法。
【請求項１２】
前記エラスターゼモジュレーターはＤＰＭＦＫＬｂｏｒｏＶである、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
前記エラスターゼモジュレーターは、ＨＴＲＡ１のプロテアーゼ認識ポケットにハイブリダイズする、または結合する、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
対象は前記対象の目における異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することにより選択され、異常脈絡毛細管小葉は、（ｉ）血管関連黄斑症；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；または（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を有する対象を特定する、請求項１−９のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記対象の目に存在する前記異常脈絡毛細管小葉は、自己蛍光イメージング技術、赤外線イメージング技術、光干渉断層撮影（ＯＣＴ）、Ｓｔｒａｔｕｓ光干渉断層撮影（Ｓｔｒａｔｕｓ  ＯＣＴ）、フーリエ領域光干渉断層撮影（Ｆｄ−ＯＣＴ）、二光子励起蛍光（ＴＰＥＦ）イメージング、適応光学走査型レーザー眼底検査（ＡＯＳＬＯ）、走査型レーザー眼底検査、スペクトルドメイン光干渉断層撮影（ＳＤ−ＯＣＴ）と組み合わせた近赤外イメージング、カラー眼底写真、眼底自発蛍光イメージング、無赤色イメージング、蛍光眼底造影、インドシアニングリーン血管造影、多焦点網膜電図（ＥＲＧ）記録、微小視野測定、カラードップラー光干渉断層撮影（ＣＤＯＣＴ）、視野評価、ハイデルベルグスペクトラリス（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ）、ツァイス  Ｃｉｒｒｕｓ（Ｚｅｉｓｓ  Ｃｉｒｒｕｓ）、Ｔｏｐｃｏｎ  ３Ｄ  ＯＣＴ  ２０００、Ｏｐｔｉｖｕｅ  ＲＴＶｕｅ  ＳＤ−ＯＣＴ、Ｏｐｋｏ  ＯＣＴ  ＳＬＯ、ＮＩＤＥＫ  Ｆ−１０、またはＯｐｔｏｐｏｌ  ＳＯＣＴ  Ｃｏｐｅｒｎｉｃｕｓ  ＨＲにより特定される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
対象において、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、またはＣＦＨ遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することにより対象が選択され、前記１つ以上のＳＮＰは（ｉ）前記ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８、前記ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１０４９３３１、前記ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ２６７２５８７、前記ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４、前記ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ３７５０８４８、前記ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ１０６１１７０、または前記ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ８００２９２、または（ｉｉ）（ｉ）の前記ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰであり、前記ＳＮＰの１つ以上のバリアントの存在は、（ｉ）血管関連黄斑症；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を有する対象を特定する、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）または（ｉｖ）と診断された対象において異常脈絡毛細管小葉を消散する際に有効な薬剤または薬剤の組み合わせをスクリーニングする方法であって、
ａ）前記対象の目において、異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズを決定すること；
ｂ）ある時間間隔の間、前記対象に薬剤または薬剤の組み合わせを投与すること；
ｃ）前記時間間隔後に、前記ステップａ）の目における異常脈絡毛細管小葉のその後の数またはサイズを決定すること；ならびに
ｄ）前記ステップｃ）の対象の目における異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズを、前記ステップａ）の対象の目における異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズと比較すること、
を含み、
前記ステップｃ）の前記対象の目における、異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズの増加なしの検出は、前記対象において（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散する際に有効な薬剤または薬剤の組み合わせを示す、方法。
【請求項１８】
（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する、（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）もしくは（ｉｖ）と診断された異常脈絡毛細管小葉を消散するための薬剤の有効性を決定する方法であって、
ａ）（１）血管関連黄斑症；（２）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；（３）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症、または（４）異常脈絡毛細管小葉を消散する治療の開始前に対象の目において異常脈絡毛細管小葉の数を決定すること；
ｂ）ある時間間隔の間、（１）、（２）、（３）または（４）の治療を開始すること；
ｃ）前記時間間隔後に、前記ステップａ）の目において異常脈絡毛細管小葉のその後の数を決定すること；ならびに
ｄ）前記ステップｃ）の対象の目における異常脈絡毛細管小葉の数を、前記ステップａ）の対象の目における異常脈絡毛細管小葉の数と比較すること
を含み、
前記ステップｃ）の対象の目における異常脈絡毛細管小葉の数の増加の検出は、前記対象において、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散する際に薬剤が有効でないことを示す、方法。
【請求項１９】
（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する、（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）もしくは（ｉｖ）と診断された異常脈絡毛細管小葉を消散するための薬剤の有効性を決定する方法であって、
ａ）（１）血管関連黄斑症；（２）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；（３）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症、または（４）異常脈絡毛細管小葉の治療の開始前に対象の目において異常脈絡毛細管小葉の数を決定すること；
ｂ）ある時間間隔の間、（１）、（２）、（３）または（４）の治療を開始すること；
ｃ）前記時間間隔後に、ステップａ）の目において異常脈絡毛細管小葉のその後の数を決定すること；ならびに
ｄ）前記ステップｃ）の対象の目における異常脈絡毛細管小葉の数を、前記ステップａ）の対象の目における異常脈絡毛細管小葉の数と比較すること
を含み、
前記ステップｃ）の前記対象の目における異常脈絡毛細管小葉の数の増加なしの検出は、前記対象において、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散する際に薬剤が有効であることを示す方法。
【請求項２０】
（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）もしくは（ｉｖ）と診断された異常脈絡毛細管小葉を消散する治療の有効性を決定する方法であって、
ａ）（１）血管関連黄斑症；（２）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；（３）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症または（４）異常脈絡毛細管小葉の治療の開始前に、対象の目において脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の存在を決定すること；
ｂ）ある時間間隔の間、（１）、（２）、（３）または（４）の治療を開始すること；
ｃ）前記時間間隔後に、前記ステップａ）の目における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生を決定すること；ならびに
ｄ）前記ステップｃ）の対象の目における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生を、前記ステップａ）の対象の目における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生と比較すること
を含み、
前記ステップｃ）の対象の目における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生の変化がないことまたは減少の検出することは、前記対象において、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散する際に薬剤が有効であることを示す、方法。
【請求項２１】
（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）もしくは（ｉｖ）と診断された異常脈絡毛細管小葉を消散する治療の有効性を決定する方法であって、
ａ）（１）血管関連黄斑症；（２）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；（３）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症または（４）異常脈絡毛細管小葉の治療の開始前に、対象の目において、脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の存在を決定すること；
ｂ）ある時間間隔の間、（１）、（２）、（３）または（４）の治療を開始すること；
ｃ）前記時間間隔後に、前記ステップａ）の目における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生を決定すること；ならびに
ｄ）前記ステップｃ）の対象の目における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生を、前記ステップａ）の対象の目における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生と比較すること
を含み、
前記ステップｃ）の対象の目における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生の増加の検出は、前記対象において、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散する際に、薬剤が有効でないことを示す、方法。
【請求項２２】
前記ＲＰＥ細胞の再増殖または再生は、自己蛍光イメージング技術、赤外線イメージング技術、光干渉断層撮影（ＯＣＴ）、Ｓｔｒａｔｕｓ光干渉断層撮影（Ｓｔｒａｔｕｓ  ＯＣＴ）、フーリエ領域光干渉断層撮影（Ｆｄ−ＯＣＴ）、二光子励起蛍光（ＴＰＥＦ）イメージング、適応光学走査型レーザー眼底検査（ＡＯＳＬＯ）、走査型レーザー眼底検査、スペクトルドメイン光干渉断層撮影（ＳＤ−ＯＣＴ）と組み合わせた近赤外イメージング、カラー眼底写真、眼底自発蛍光イメージング、無赤色イメージング、蛍光眼底造影、インドシアニングリーン血管造影、多焦点網膜電図（ＥＲＧ）記録、微小視野測定、カラードップラー光干渉断層撮影（ＣＤＯＣＴ）、視野評価、ハイデルベルグスペクトラリス（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ）、ツァイス  Ｃｉｒｒｕｓ（Ｚｅｉｓｓ  Ｃｉｒｒｕｓ）、Ｔｏｐｃｏｎ  ３Ｄ  ＯＣＴ  ２０００、Ｏｐｔｉｖｕｅ  ＲＴＶｕｅ  ＳＤ−ＯＣＴ、Ｏｐｋｏ  ＯＣＴ  ＳＬＯ、ＮＩＤＥＫ  Ｆ−１０、またはＯｐｔｏｐｏｌ  ＳＯＣＴ  Ｃｏｐｅｒｎｉｃｕｓ  ＨＲにより決定される、請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項２３】
（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する、（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）もしくは（ｉｖ）と診断された異常脈絡毛細管小葉を消散する治療の有効性を決定する方法であって、
ａ）（１）血管関連黄斑症；（２）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；（３）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症または（４）異常脈絡毛細管小葉の治療の開始前に、前記対象の目において脈絡毛細管小葉の灌流を決定すること；
ｂ）ある時間間隔の間、（１）、（２）、（３）または（４）の治療を開始すること；
ｃ）前記時間間隔後に、前記ステップａ）の目における脈絡毛細管小葉の灌流を決定すること；ならびに
ｄ）前記ステップｃ）の対象の目における脈絡毛細管小葉の灌流を、前記ステップａ）の対象の目における脈絡毛細管小葉の灌流と比較すること
を含み、
前記ステップｃ）の対象の目における脈絡毛細管小葉の灌流の増加なしの検出は、前記対象において、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散する際に薬剤が有効でないことを示す、方法。
【請求項２４】
（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する、（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）もしくは（ｉｖ）と診断された異常脈絡毛細管小葉を消散する治療の有効性を決定する方法であって、
ａ）（１）血管関連黄斑症；（２）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；（３）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症または（４）異常脈絡毛細管小葉の治療の開始前に、対象の目において脈絡毛細管小葉の灌流を決定すること；
ｂ）ある時間間隔の間、（１）、（２）、（３）または（４）の治療を開始すること；
ｃ）前記時間間隔後に、前記ステップａ）の目における脈絡毛細管小葉の灌流を決定すること；ならびに
ｄ）前記ステップｃ）の対象の目における脈絡毛細管小葉の灌流を、前記ステップａ）の対象の目における脈絡毛細管小葉の灌流と比較すること
を含み、
前記ステップｃ）の対象の目における脈絡毛細管小葉の灌流の増加の検出は、前記対象において、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散する際に薬剤が有効であることを示す、方法。
【請求項２５】
前記目における脈絡毛細管小葉の灌流は、自己蛍光イメージング技術、赤外線イメージング技術、光干渉断層撮影（ＯＣＴ）、Ｓｔｒａｔｕｓ光干渉断層撮影（Ｓｔｒａｔｕｓ  ＯＣＴ）、フーリエ領域光干渉断層撮影（Ｆｄ−ＯＣＴ）、二光子励起蛍光（ＴＰＥＦ）イメージング、適応光学走査型レーザー眼底検査（ＡＯＳＬＯ）、走査型レーザー眼底検査、スペクトルドメイン光干渉断層撮影（ＳＤ−ＯＣＴ）と組み合わせた近赤外イメージング、カラー眼底写真、眼底自発蛍光イメージング、無赤色イメージング、蛍光眼底造影、インドシアニングリーン血管造影、多焦点網膜電図（ＥＲＧ）記録、微小視野測定、カラードップラー光干渉断層撮影（ＣＤＯＣＴ）、視野評価、ハイデルベルグスペクトラリス（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ）、ツァイス  Ｃｉｒｒｕｓ（Ｚｅｉｓｓ  Ｃｉｒｒｕｓ）、Ｔｏｐｃｏｎ  ３Ｄ  ＯＣＴ  ２０００、Ｏｐｔｉｖｕｅ  ＲＴＶｕｅ  ＳＤ−ＯＣＴ、Ｏｐｋｏ  ＯＣＴ  ＳＬＯ、ＮＩＤＥＫ  Ｆ−１０、またはＯｐｔｏｐｏｌ  ＳＯＣＴ  Ｃｏｐｅｒｎｉｃｕｓ  ＨＲにより決定される、請求項２３または２４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
承認
本発明は、ＮＩＨ（米国国立衛生研究所）により与えられた助成ＥＹＯ１７４０４の下、政府の支援を用いてなされた。政府は本発明において一定の権利を有する。
【０００２】
関連出願の相互参照
本出願は２０１１年３月１５日に出願された米国仮特許出願第６１／４５２，９４４号、２０１１年３月１５に出願された６１／４５２，９６４号、および、２０１１年３月１５日に出願された６１／４５２，９５０号の恩典を主張する。これらの出願の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００３】
発明の分野
本発明は一般に、対象における血管関連黄斑症、およびその症状の診断および治療に関する。特定的には、本発明は、ａ）対象における血管関連黄斑症、およびその症状の診断方法、ｂ）対象における、血管関連黄斑症およびその症状を発症する素因の特定方法、ｃ）対象における血管関連黄斑症、およびその症状の治療方法、およびｄ）対象における血管関連黄斑症、およびその症状の治療に有効な薬剤のスクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
血管関連黄斑症（ＶＡＭ）は以前、様々な血管症状と関連し得る病名を特定できない疾患を表している。現在、血管関連黄斑症を有する患者はしばしば、誤診される。さらに、血管関連黄斑症、ならびにその症状の診断をするのは困難である可能性があり、というのも、個人が呈し得る非常に様々な症状が存在するからである。そのため、対象において血管関連黄斑症およびその関連症状を診断するより有効な方法が必要とされる。さらに、対象において血管関連黄斑症およびその関連症状を治療する方法が必要とされる。
【発明の概要】
【０００５】
対象において血管関連黄斑症、またはその症状を診断する方法が本明細書で記載され、この方法は、対象の眼において脈絡毛細管の小葉性質を再現する異常脈絡毛細管小葉および／または眼病態の存在を検出することを含み、対象の眼において脈絡毛細管の小葉性質を再現する異常脈絡毛細管小葉および／または眼病態の存在は、対象における血管関連黄斑症、またはその症状の存在を示す。
【０００６】
ヒト対象において血管関連黄斑症を有するまたは発症する対象のリスクを予測するための方法もまた、本明細書で記載され、この方法は対象において、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、またはＣＦＨ遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含み、１つ以上のＳＮＰは（ｉ）ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１０４９３３１、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ２６７２５８７、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ３７５０８４８、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ１０６１１７０、またはＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ８００２９２、あるいは（ｉｉ）（ｉ）のＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰであり、１つ以上のＳＮＰの存在は、血管関連黄斑症を有するまたは発症する対象のリスクを予測する。
【０００７】
ヒト対象において、血管関連黄斑症を有するまたは発症する対象のリスクを予測するための方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象の眼の画像を生成させること、画像を使用して対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は、血管関連黄斑症を有するまたは発症する対象のリスクを予測する。
【０００８】
ヒト対象において血管関連黄斑症を有するまたは発症する対象のリスクを予測するための方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象の眼の画像を生成させること、画像を使用して対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は、血管関連黄斑症を有するまたは発症する対象のリスクを予測する。
【０００９】
血管関連黄斑症を有する対象を診断するための方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象から取得した試料において、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、またはＣＦＨ遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含み、１つ以上のＳＮＰは、（ｉ）ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１０４９３３１、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ２６７２５８７、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ３７５０８４８、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ１０６１１７０、またはＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ８００２９２、または（ｉｉ）（ｉ）のＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰであり、よって、（ｉ）または（ｉｉ）におけるＳＮＰの１つ以上のバリアントの存在に基づき対象を診断する。
【００１０】
血管関連黄斑症を有する対象を診断する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象の眼の画像を生成させること、対象の眼の画像において異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は、血管関連黄斑症の診断となる。
【００１１】
ヒト対象において重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を有するまたは発症する対象のリスクを予測するための方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象において、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、またはＣＦＨ遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含み、１つ以上のＳＮＰは（ｉ）ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１０４９３３１、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ２６７２５８７、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ３７５０８４８、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ１０６１１７０、またはＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ８００２９２、あるいは（ｉｉ）（ｉ）のＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰであり、１つ以上のＳＮＰの存在は、重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を有するまたは発症する対象のリスクを予測する。
【００１２】
ヒト対象において重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を有するまたは発症する対象のリスクを予測するための方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象の眼の画像を生成させること、画像を使用して対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は、重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を有するまたは発症する対象のリスクを予測する。
【００１３】
重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を有する対象を診断するための方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象から得た試料において、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、またはＣＦＨ遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含み、１つ以上のＳＮＰは（ｉ）ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１０４９３３１、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ２６７２５８７、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ３７５０８４８、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ１０６１１７０、またはＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ８００２９２、あるいは（ｉｉ）（ｉ）のＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰであり、よって、（ｉ）または（ｉｉ）における１つ以上のＳＮＰの存在に基づき対象を診断する。
【００１４】
重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を有する対象を診断するための方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象の眼の画像を生成させること、画像を使用して対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在を検出すること、よって、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在に基づき対象を診断することを含む。
【００１５】
ヒト対象において異常脈絡毛細管小葉を有するまたは発症する対象のリスクを予測するための方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象において、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、またはＣＦＨ遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含み、１つ以上のＳＮＰは、（ｉ）ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１０４９３３１、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ２６７２５８７、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ３７５０８４８、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ１０６１１７０、またはＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ８００２９２、あるいは（ｉｉ）（ｉ）のＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰであり、１つ以上のＳＮＰの存在は、異常脈絡毛細管小葉を有するまたは発症する対象のリスクを予測する。
【００１６】
血管関連黄斑症、またはその症状を発症する対象のリスクを決定する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象において、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、またはＰＬＥＫＨＡ１遺伝子における１つ以上の一塩基多型（ＳＮＰ）のアイデンティティーを決定することを含み、ある一定のＳＮＰは、血管関連黄斑症、またはその症状を発症するリスクの増加または減少を示す。
【００１７】
対象において、血管関連黄斑症、またはその症状を発症する対象のリスクを決定する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象において、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、またはＰＬＥＫＨＡ１遺伝子における１つ以上の一塩基多型（ＳＮＰ）のアイデンティティーを決定することを含み、ある一定のＳＮＰは、血管関連黄斑症、またはその症状を発症するリスクのまたは減少を示す。
【００１８】
対象において血管関連黄斑症、またはその症状を発症する対象のリスクを決定する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象において、ＣＦＨ、Ｃ３、Ｃ２、ＣＦＢ、またはＡＰＯＥ遺伝子における１つ以上の一塩基多型（ＳＮＰ）のアイデンティティーを決定することを含み、ある一定のＳＮＰは、血管関連黄斑症、またはその症状を発症するリスクの増加または減少を示す。
【００１９】
対象において血管関連黄斑症、またはその症状を診断する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象において、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、ＰＬＥＫＨＡ１における１つ以上の一塩基多型（ＳＮＰ）、ＣＦＨ、Ｃ３、Ｃ２、ＣＦＢ、またはＡＰＯＥ遺伝子における一塩基多型（ＳＮＰ）のアイデンティティーを決定することを含み、ある一定のＳＮＰは、血管関連黄斑症、またはその症状の存在を示す。
【００２０】
対象において血管関連黄斑症、またはその症状を診断する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象において、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、ＰＬＥＫＨＡ１、ＣＦＨ、Ｃ３、Ｃ２、ＣＦＢ、またはＡＰＯＥ遺伝子における１つ以上の一塩基多型（ＳＮＰ）のアイデンティティーを決定することを含み、ある一定のＳＮＰは、血管関連黄斑症、またはその症状の発症の欠如またはそれからの保護を示す。
【００２１】
対象において血管関連黄斑症、またはその症状を発症する素因を特定する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象の眼において異常脈絡毛細管小葉を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の検出は、対象における組織または器官での、血管関連黄斑症、またはその症状を発症する素因を示す。
【００２２】
対象において重篤なまたは後期黄斑症を発症する素因を特定する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象の眼において異常脈絡毛細管小葉を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の検出は、対象において重篤なまたは後期黄斑症を発症する素因を示す。
【００２３】
対象において異常脈絡毛細管小葉を発症する素因を特定する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象において、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子において特定のＳＮＰを検出することを含み、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における特定のＳＮＰの検出は、対象において異常脈絡毛細管小葉を発症する素因を示す。
【００２４】
対象において血管関連黄斑症、またはその症状を治療する方法もまた本明細書で記載され、この場合、異常脈絡毛細管小葉が対象の眼に存在し、この方法は、対象に、脈絡毛細管小葉および／または脈絡毛細管の脈管構造内の上流のより大きな細動脈および動脈の閉塞または閉鎖を阻止する治療的有効量の１つ以上の活性または治療薬を投与することを含む。
【００２５】
臨床試験を増強する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、それらの臨床試験に対して適切な患者集団を選択することを含む。１つの態様では、その方法を使用して、患者が、研究される１つまたは複数の実験治療薬に応答する可能性があるかないかに基づき、臨床試験に参加することが確実に確認することができる。
【００２６】
対象の核酸試料において１つ以上のＳＮＰを検出するためのアッセイを含むキットもまた本明細書で記載され、ＳＮＰは（ｉ）ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１０４９３３１、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ２６７２５８７、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ３７５０８４８、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ１０６１１７０、またはＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ８００２９２；（ｉｉ）（ｉ）のＳＮＰの組み合わせ；あるいは（ｉｉｉ）（ｉ）のＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰである。
【００２７】
血管関連黄斑症の非ヒト動物モデルもまた本明細書で記載され、この場合、動物の１つ以上の細胞が組換えＨＴＲＡ１ポリペプチドを発現する。
【００２８】
異常脈絡毛細管小葉を特定するためのシステムもまた本明細書で記載され、このシステムは、異常脈絡毛細管小葉の認識可能な画像を提供するように構成された、眼を撮像するための装置、および異常脈絡毛細管小葉を特定するための説明書を備える。
【００２９】
対象において、血管関連黄斑症を治療する、血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；重篤な黄斑症を治療する、後期黄斑症を治療するまたは異常脈絡毛細管小葉を消散する方法もまた本明細書で記載される。
【００３０】
対象において、血管関連黄斑症を治療する、血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；重篤な黄斑症を治療する、後期黄斑症を治療するまたは異常脈絡毛細管小葉を消散する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、有効量の１つ以上の開示組成物、治療薬、活性剤、または機能性核酸を対象に投与することを含む。
【００３１】
対象において、血管関連黄斑症、またはその症状を治療する方法もまた本明細書で記載され、この場合、異常脈絡毛細管小葉が対象の眼に存在し、この方法は、対象に治療的有効量の、対象の眼における脈絡毛細管小葉での灌流を増加させる１つ以上の活性または治療薬を投与することを含む。
【００３２】
対象において、血管関連黄斑症、またはその症状を治療する方法もまた本明細書で記載され、この場合、異常脈絡毛細管小葉が対象の眼に存在し、この方法は、対象に、治療的有効量の、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２核酸またはペプチドの活性を模倣し、これにハイブリダイズし、またはそうでなければこれを修飾する１つ以上の活性または治療薬を投与することを含む。
【００３３】
対象において血管関連黄斑症、重篤な黄斑症または後期黄斑症を治療する、または異常脈絡毛細管小葉を消散する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、有効量のエラスターゼ阻害剤を対象に投与することを含む。
【００３４】
対象において血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、有効量のエラスターゼ阻害剤を対象に投与することを含む。
【００３５】
（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療するまたは（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散する、開示された方法のための対象を選択する方法もまた本明細書で記載される。
【００３６】
（ｉ）血管関連黄斑症；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を有する対象を診断する方法もまた本明細書で記載される。
【００３７】
（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散するのに有効な薬剤または薬剤の組み合わせをスクリーニングする方法もまた本明細書で記載される。
【００３８】
血管関連黄斑症、またはその症状と診断された対象において、血管関連黄斑症、またはその症状の治療の有効性を決定する方法もまた本明細書で記載される。
【００３９】
この明細書に組み込まれ、その一部を構成する添付の図面は、いくつかの態様を図示し、記述と共に、発明の原理を説明するために用いられる。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】近赤外（ＩＲ）、眼底自発蛍光（ＡＦ）、および無赤色（ＲＦ）画像上の異常脈絡毛細管小葉を、対応する蛍光眼底造影写真（ＦＡ）およびインドシアニングリーン血管造影写真（ＩＣＧ）と共に示した図である。
【図２】軽度の高反射率のバックグラウンドに対する、明確な高反射中心「スポット」を有する、および有しない、低反射率の明確な単位としての赤外撮像（ＩＲ）異常脈絡毛細管小葉を示す。
【図３】時間に伴う表現型の進行を示す。
【図４】時間に伴う表現型の進行を示す。
【図５】ＳＤ−ＯＣＴにより可視化された、網膜下腔における異常脈絡毛細管小葉を示す。
【図６】脈絡毛細管小葉の灌流不良および／または蛍光シグナルのマスキングを示す。
【図７】眼底において観察された全体パターンは、黄斑脈絡毛細管組織構造のパターンを再現することを示す。
【図８】黄斑異常脈絡毛細管小葉を有する患者から取得された高解像度ＯＣＴ「Ｃ」走査を示す。
【図９】中心窩に集中した異常脈絡毛細管小葉の「分節状」分布を示す。
【図１０】２０１１年３月に撮られ、異常脈絡毛細管小葉の存在を示すカラー、ＦＡおよびＩＲ画像を示す。
【図１１】内層を明らかにするために開かれた、死亡後３時間４５分のドナーから取得された眼を示す。
【図１２】標準組織切片（Ｍａｌｌｏｒｙトリクロームで染色）を示す。
【図１３】より高倍率で観察された脈絡毛細管の明確な形態的特徴を示す。
【図１４】黄斑網膜機能の低下の一例（右パネルにおける暗色領域）を示す。
【図１５】ＨｔｒＡ１プロテアーゼドメイン構造のアライメントを示す。
【図１６】ＨＴＲＡ１の構造アライメントの３つの表示を示す。
【図１７】黄斑外および黄斑領域でのＨＴＲＡ１発現データを示す。
【図１８】黄斑外および黄斑領域でのＨＴＲＡ１発現データを示す。
【図１９】ＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２発現のウエスタンブロットを示す。
【図２０】血清におけるＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２の抗体検出を示す。
【図２１】異なる遺伝子型を有する患者由来の血清試料を、ウエスタンブロットにより、下記抗体を用いて分析したことを示す：Ａ−ＳＣ−１５４６５（左）、ＳＣ−５０３３５（右）、Ｂ−ＮＥＰ−１６８８（左）、ＮＥＰ−１６９３（右）、Ｃ−ＮＥＰ−１６９４（左）、ＮＥＰ−１６９５（右）、Ｄ−ＮＥＰ−２４１４。
【図２２】抗ＨｔｒＡ１抗体を用いたウエスタンブロットプロービングを示す。
【図２３】抗ＨｔｒＡ１抗体を用いたウエスタンブロットプロービングを示す。
【図２４】網膜／ＲＰＥタンパク質抽出およびウエスタンブロットにおけるＨｔｒＡ１およびＡＲＭＳ２タンパク質の検出を示す。
【図２５】エラスチンのＨＴＲＡ１分解を示す。
【図２６】ＨＴＲＡ１エラスターゼ活性を示す。
【図２７】ＨＴＲＡ１エラスターゼ活性の阻害を示す。
【図２８】マウス系統の作製に使用されたＨＴＲＡ１導入遺伝子コンストラクトを示す。
【図２９】ｈＨＴＲＡ１+マウスがＰＣＶの主特徴を示したことを示す。
【図３０】ｈＨＴＲＡ１+マウスがＰＣＶの主特徴を示したことを示す。
【図３１】ｈＨＴＲＡ１+マウスにおけるＢｒｕｃｈ膜の弾性板の分解を示す。
【図３２】ｈＨＴＲＡ１+マウスにおける脈絡膜血管の弾性板の分解を示す。
【図３３】ＮＰを注射された眼は、対照と比較して、毒性の徴候のない、正常網膜構造を有したことを示す。
【図３４】ｈＨＴＲＡ１+マウスをＨＴＲＡ１阻害剤で処置すると、ＰＣＶ表現型が逆転したことを示す。
【図３５】ＣＡＧプロモーター下、ＡＡＶシャトルベクターｐＡＡＶ−ＣＡＧ−Ｓｈｕｔｔｌｅ−ＷＰＲＥにサブクローニングされた、全長コード領域およびＣ末端ｍｙｃ−Ｈｉｓ6  ｔａｇ2を含むヒトＨＴＲＡ１  ｃＤＮＡを示す。
【図３６】ＰＣＶ病変がＡＡＶ２−ＨＴＲＡ１感染マウスにおいて観察されたことを示す。
【図３７】エラスチンの可溶性前駆体であるトロポエラスチンのレベルは、ｈＨＴＲＡ１+マウスおよびＷＴの両方において同様であったことを示す。
【図３８】ＡＣＬの最も大きなリスクは、染色体１０でのホモ接合リスクである任意のディプロタイプであることを示す。
【図３９】相補体領域（ＣＦＨ−〜−Ｆ１３Ｂ）、ならびにＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、Ｃ３、ＣＦＢ、Ｃ２およびＡＰＯＥ遺伝子の制御におけるＳＮＰに対してスクリーニングされたＤＮＡ試料から得られた結果を示す。
【図４０】異常脈絡毛細管小葉コホートにおいて特徴づけられる、異常脈絡毛細管小葉のない４１６の個体のコホートと比較した、様々なＳＮＰのアレル頻度を示す。
【図４１】異常脈絡毛細管小葉コホートにおいて特徴づけられる、異常脈絡毛細管小葉のない４１６の個体のコホートと比較した、様々なＳＮＰのアレル頻度を示す。
【図４２】異常脈絡毛細管小葉コホートにおいて特徴づけられる、異常脈絡毛細管小葉のない４１６の個体のコホートと比較した、様々なＳＮＰのアレル頻度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
発明の追加の利点は、下記説明において一部明記され、一部、その説明から明らかになり、あるいは発明の実行により学習され得る。発明の利点は、添付の特許請求の範囲において特に指摘される要素および組み合わせにより実現され、達成されるであろう。前記概要および下記詳細な説明の両方とも、例示であり、説明にすぎず、特許請求される発明を制限しないことが理解されるべきである。
【００４２】
本発明は、発明の下記詳細な説明およびその中に含まれる実施例を参照することによりより容易に理解することができる。
【００４３】
明確に別記されない限り、本明細書で明記されるいずれの方法または態様も、そのステップが特定の順序で実施されることを要求すると解釈されるべきであるということは全く意図されない。したがって、方法クレームが、特許請求の範囲および説明において、ステップが特定の順序に限定されることを特定的に記載していない場合、いかなる点においても、順序が暗示されていることは全く意図されない。これは、ステップの配列または操作の流れ、文法構成または句読点から誘導される平易な意味、または明細書で記載される態様の数または型に関する論理の問題を含む、解釈のための任意の可能な明確でない基盤に適用できる。
【００４４】
定義
明細書および添付の特許請求の範囲において使用されるように、単数形「１つの（ａ、ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈で明確に別記されない限り、複数の指示対象を含む。よって、例えば、「１つの医薬担体」への言及は、２つ以上のそのような担体の混合物、などを含む。
【００４５】
範囲は、本明細書で、「約」１つの特定の値から、および／または「約」別の特定の値までとして表現することができる。そのような範囲が表現される場合、別の実施形態は１つの特定の値から、および／または他の特定の値までを含む。同様に、値が先行詞「約」の使用により近似値として表現される場合、特定の値は別の実施形態を形成することが理解されるであろう。範囲の各々の終点は、他の終点との関連で、および他の終点とは独立して、有意であることがさらに理解されるであろう。多くの値が本明細書で記載され、各値はまた本明細書では、その値自体に加えて、「約」その特定の値として開示されることもまた理解される。例えば、値「１０」が開示される場合、「約１０」もまた開示される。その値「未満かそれに等しい」値が開示される場合、当業者により適切に理解されるように、「その値より大きいかそれに等しい」およびその値間の可能な範囲もまた開示されることもまた理解される。例えば、値「１０」が開示された場合、「１０未満かそれに等しい」ならびに「１０より大きいかそれに等しい」もまた開示される。出願を通して、データは多くの異なる形式で提供されこと、これらのデータは、終点、開始点、およびデータ点の任意の組み合わせに対する範囲を表すこともまた理解される。例えば、特定のデータ点「１０」および特定のデータ点１５が開示される場合、１０および１５より大きい、より大きいかそれに等しい、未満、未満かそれに等しい、およびに等しい、ならびに１０〜１５が開示されたと考えられることが理解される。２つの特定の単位間の各単位もまた開示されることもまた理解される。例えば、１０および１５が開示される場合、１１、１２、１３、および１４もまた開示される。
【００４６】
「任意的な」または「任意で」は、その後に記載される事象または状況が、起こる可能性がある、またはないこと、その記載は、前記事象または状況が起こる場合、起こらない場合を含むことを意味する。
【００４７】
「または」という用語は、本明細書では特定のリストの任意の１つの成員を意味し、そのリストの成員の任意の組み合わせも含む。
【００４８】
「重篤な黄斑症」または「後期黄斑症」は、本明細書では、任意の地図状萎縮（グレード４Ａ）、新生血管ＡＭＤ（ＲＰＥ剥離、網膜［周囲］出血、および／または他の網膜［血管］障害のない瘢痕；グレード４Ｂ；ＣＮＶの全ての表現型、例えば潜在性、古典的、ポリープ状脈絡膜症［ＰＰＣＶ］、および網膜血管腫増殖［ＲＡＰ］）を含む、または両方（グレード４Ｃ；ＧＡの全ての表現型を含む）を意味する。
【００４９】
「ＨＴＲＡ１」は、本明細書では高温要求セリンペプチダーゼ１（ＨＴＲＡ１）遺伝子を意味する。ＨＴＲＡ１はまた、ＨＴＲＡ１遺伝子によりコードされる任意のＨＴＲＡ１タンパク質を意味することができる。ＨＴＲＡ１のＮＣＢＩ遺伝子識別番号は５６５４である。
【００５０】
「ＡＲＭＳ２」は、本明細書では、加齢黄斑症感受性２（ＡＲＭＳ２）遺伝子を意味する。ＡＲＭＳ２はまた、ＡＲＭＳ２遺伝子によりコードされる任意のＡＲＭＳ２タンパク質を意味することができる。ＡＲＭＳ２のＮＣＢＩ遺伝子識別番号は３８７７１５である。
【００５１】
Ａ．血管関連黄斑症およびその症状を診断する方法
本開示は、異常脈絡毛細管小葉は、網膜下ドルーゼン様沈着物ではなく、新規疾患、血管関連黄斑症、ならびに黄斑変性症の徴候を表すという驚くべき発見を明らかにする。古典的ドルーゼンのように細胞破片、補体タンパク質または脂質から構成されるのではなく、異常脈絡毛細管小葉は、ヒトの眼における脈絡毛細管小葉内毛細血管および脈絡膜内の小細動脈の閉鎖または閉塞の領域を覆い、これに対応する網膜視細胞、網膜色素上皮、およびＢｒｕｃｈ膜の外節への虚血傷害および損傷の領域を表す。ヒトの眼における脈絡膜内の脈絡毛細管毛細血管および／または小脈絡膜細動脈の閉鎖または閉塞は、血管関連黄斑症の発生率増加と関連し、脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）、網膜下出血、および中心視野の損失としてとして現れ得る。異常脈絡毛細管小葉の検出は、眼の疾患、ならびに対象の体内の他の組織および器官に影響する血管疾患を診断する以前は認識されていない手段を表す。
【００５２】
現在、血管関連黄斑症を有する患者はしばしば、誤診される。さらに、血管関連黄斑症、ならびにその症状の診断をするのは困難である可能性があり、というのも、個人が呈し得る非常に様々な症状が存在するからである。そのため、対象において血管関連黄斑症およびその関連症状を診断するより有効な方法が必要とされる。さらに、対象において血管関連黄斑症およびその関連症状を治療する方法が必要とされる。
【００５３】
１．異常脈絡毛細管小葉
対象において血管関連黄斑症、またはその症状を診断する方法が本明細書で記載され、この方法は、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は、対象における、血管関連黄斑症、またはその症状もしくは結果を示す。
【００５４】
ヒト対象において血管関連黄斑症を有するまたは発症する対象のリスクを予測するための方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象の眼の画像を生成させること、画像を使用して対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は、血管関連黄斑症、重篤なまたは後期黄斑症、あるいは異常脈絡毛細管小葉を有するまたは発症する対象のリスクを予測する。本明細書では血管関連黄斑症はさらに、血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を含むことができ、血管関連黄斑症の１つ以上の症状は、黄斑変性症、加齢黄斑変性症、心細小血管障害、Ｓｔａｒｇａｒｄｔ病、弾性線維性仮性黄色腫（ＰＸＥ）、Ａｌａｇｉｌｌｅ症候群、皮質下白質脳症、子癇前症、高血圧、真性糖尿病、心筋虚血、動脈瘤、自己免疫疾患または感染病原体による血管炎、深部静脈血栓症、リンパ浮腫、静脈瘤、末梢動脈疾患、腎動脈疾患、Ｒａｙｎａｕｄ病、バージャー病、末梢静脈疾患、静脈血餅、アテローム性動脈硬化、動脈硬化症、細動脈硬化、冠動脈疾患、狭心症、うっ血性心不全、動脈の硬化、血栓性または塞栓性脳卒中、または心筋梗塞である。
【００５５】
１つの態様では、本明細書で記載される方法はさらに、対象において、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、またはＣＦＨ遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含み、１つ以上のＳＮＰは（ｉ）ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１０４９３３１、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ２６７２５８７、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ３７５０８４８、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ１０６１１７０、またはＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ８００２９２、または（ｉｉ）（ｉ）のＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰであり、ＳＮＰの１つ以上のバリアントの存在は、血管関連黄斑症、重篤なまたは後期黄斑症、または異常脈絡毛細管小葉を有するまたは発症する対象のリスクを予測する。１つの態様では、ｒｓ１１２００６３８  ＳＮＰでのＡ、ｒｓ１０４９３３１  ＳＮＰでのＴ、ｒｓ２６７２５８７  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ１０４９０９２４  ＳＮＰでのＴ、ｒｓ３７５０８４８  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ１０６１１７０  ＳＮＰでのＣ、またはｒｓ８００２９２  ＳＮＰでのＧのアイデンティティーの決定は、血管関連黄斑症、重篤なまたは後期黄斑症、あるいは異常脈絡毛細管小葉を有するまたは発症する対象のリスクまたはリスクの増加を予測することができる。
【００５６】
１つの態様では、ｒｓ１１２００６３８  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ１０４９３３１  ＳＮＰでのＣ、ｒｓ２６７２５８７  ＳＮＰでのＣ、ｒｓ１０４９０９２４  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ３７５０８４８  ＳＮＰでのＴ、ｒｓ１０６１１７０  ＳＮＰでのＴ、またはｒｓ８００２９２  ＳＮＰでのＡのアイデンティティーの決定は、血管関連黄斑症、重篤なまたは後期黄斑症、あるいは異常脈絡毛細管小葉を有するまたは発症する対象のリスクまたはリスクの減少を予測することができる。
【００５７】
対象における組織または器官での、血管関連黄斑症と関連する症状を発症する素因を特定する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象の眼において異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在の検出は、対象における組織または器官での血管関連黄斑症と関連する症状を発症する素因を示す。組織または器官としては、心臓、血管、脳、脊髄、筋肉、骨、眼、耳、腎臓、子宮、胎盤、皮膚、粘膜、胃、肝臓、肺、胆嚢、脾臓、虫垂、小腸、大腸、膵臓、前立腺、または膀胱が挙げられるが、それらに限定されない。
【００５８】
「対象」という用語は個体を意味する。１つの態様では、対象は、哺乳動物、例えば霊長類、より好ましくは、ヒトである。非ヒト霊長類としては、数例を挙げると、マーモセット、サル、チンパンジー、ゴリラ、オランウータン、およびテナガザルが挙げられる。「対象」という用語はまた、飼育動物、例えばネコ、イヌ、など、家畜（例えば、ウシ（乳牛）、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、など）、実験動物（例えば、フェレット、チンチラ、マウス、ウサギ、ラット、スナネズミ、モルモット、など）およびトリ種（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル、キジ、ハト、はと、オウム、バタンインコ、ガチョウ、など）を含む。対象としてはまた、魚（例えば、ゼブラフィッシュ、キンギョ、ティラピア、サケ、およびマス）、両生類および爬虫類が挙げられるが、それらに限定されない。本明細書では、「対象」は、「患者」と同じであり、これらの用語は同じ意味で使用することができる。
【００５９】
本明細書では、「異常」は標準または予想される型とは異なることを意味する。異常は、「異常（ａｂｎｏｒｍａｌまたはａｎｏｍａｌｏｕｓ）」と同じであり、これらの用語は同じ意味で使用することができる。１つの態様では、異常はまた、再現を意味することもある。
【００６０】
「脈絡毛細管小葉」は、本明細書では、眼の黄斑に特有の円形状毛細血管床、すなわち、脈絡膜内の毛細血管である。酸素化された血液が、各脈絡毛細管小葉の中心に入り、脱酸素化された血液が、各小葉の周辺のほとんどを取り囲む静脈ドレナージ領域を介して出て行く。ドレナージ領域は、脈絡毛細管小葉と同じ直径であり得る。
【００６１】
「異常脈絡毛細管小葉」は、異常に見える、および／または正常に機能しない脈絡毛細管小葉であり得る。異常脈絡毛細管小葉はまた、黄斑脈絡毛細管の小葉性質を再現する病態であり得、例えば、死網膜色素上皮（ＲＰＥ）、Ｂｒｕｃｈ膜またはＲＰＥ下腔における変化、視細胞間または網膜下腔における変化、異常脈絡毛細管小葉の発症と関連する他の網膜異常または病態、例えば脈絡膜ストローマにおける変化、上流脈管構造における変化、下流脈管構造における変化、または虚血、死視細胞、または眼の周辺における敷石萎縮が挙げられるがそれらに限定されない。異常脈絡毛細管小葉は当技術分野で知られている様々な機器により撮像することができ、例えば、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ、Ｚｅｉｓｓ  Ｃｉｒｒｕｓ、Ｔｏｐｃｏｎ  ３Ｄ  ＯＣＴ  ２０００、Ｏｐｔｉｖｕｅ  ＲＴＶｕｅ  ＳＤ−ＯＣＴ、Ｏｐｋｏ  ＯＣＴ  ＳＬＯ、ＮＩＤＥＫ  Ｆ−１０、またはＯｐｔｏｐｏｌ  ＳＯＣＴ  Ｃｏｐｅｒｎｉｃｕｓ  ＨＲが挙げられるがそれらに限定されない。異常脈絡毛細管小葉の機能上の結果は、例えば、限定はされないが、血管造影、ＥＲＧ、血流、またはカラードップラー光干渉断層撮影（ＣＤＯＣＴ）を用いて検出することができる。１つの態様では、不適当な機能は、小葉の閉塞によるものであり得る。したがって、「異常脈絡毛細管小葉」は、閉塞され、部分的に閉塞され、または機能的に閉塞された脈絡毛細管小葉であり得る。小葉の「閉塞」は、小葉の完全または部分「閉鎖」と同じものを意味する。例えば、脈絡毛細管小葉は、部分的にまたは全体的に閉鎖または閉塞され得る。「閉塞」はまた、機能的に閉塞されたことを意味する。本明細書では、機能的閉塞は、上流脈管構造、例えば、限定はされないが、脈絡毛細管に送り込む細動脈の閉塞を意味することができる。脈絡毛細管小葉の閉塞は、管腔の一部または全てを閉塞させる血管壁の異常な肥厚；脈絡膜血管と関連する支持マトリクスの分解、例えばエラスチンおよび／または細胞外マトリクスの分解による；血管の内表面上での脂質、カルシウム、線維組織、血小板、フィブリン、または血栓の蓄積による；あるいは、血管の管腔内の血流を部分的にまたは全体的に妨害する、阻害する、または減少させる塞栓によるものであり得る。正常条件下では、例えば、対象が血管関連黄斑症、またはその症状を患っていない場合、異常脈絡毛細管小葉は、対象の眼の黄斑に存在しない、または見られ得ない。さらなる態様では、対象が視覚障害を患うが、血管関連黄斑症、またはその症状を患っていない場合、異常脈絡毛細管小葉は、対象の眼において存在する、または見られる可能性があり、よって、血管関連黄斑症およびその関連症状の早期予後因子として機能する。本明細書では、「視覚障害」は、視覚の正常から離れた変化を引き起こす任意の状態を意味し、例えば、限定はされないが、霧視、光ぼけ、盲点、飛蚊症、および他の症状である。
【００６２】
対象の眼の黄斑における異常脈絡毛細管小葉の存在は、１つの態様では、対象の眼の脈絡膜における脈絡毛細管小葉の灌流減少または欠如により特徴づけられる、血管関連黄斑症、またはその症状を診断する、以前に認識されていない方法を示す。本明細書では、「灌流減少」は、脈絡毛細管小葉中の血流が正常レベル未満に低減され、あるいは、黄斑領域の全てまたは一部において欠如することを意味する。「灌流減少」はまた、標的組織、例えば、限定はされないが、例として、脈絡膜、強膜、Ｂｒｕｃｈ膜、網膜色素上皮、または網膜視細胞の外節に必要な酸素および栄養分を提供するのに、脈絡毛細管小葉において血流が不十分であることを意味することができる。
【００６３】
脈絡毛細管小葉における灌流減少または灌流欠如は、脈絡毛細管毛細血管、脈絡膜細動脈、または脈絡膜に供給するさらに大きな動脈、例えば、限定はされないが、例として、毛様体動脈、眼動脈、内頸動脈、および総頸動脈の部分的または完全閉鎖または閉塞と関連し得る。脈絡毛細管小葉の灌流減少または欠如は、眼に向かう、またはそこから出て行く血管の部分または全体閉塞が、様々な位置、例えば、限定はされないが、対象の眼窩または視神経領域で起きた場合、検出することができる。我々はまた、「血管樹の下方」または静脈側について発言したい。
【００６４】
１つの態様では、本明細書で記載される、対象において、血管関連黄斑症、またはその症状を診断する、または血管関連黄斑症、またはその症状を発症する素因を特定する方法はさらに、対象を眼科手順を用いて検査することを含むことができる。
【００６５】
当業者に知られている様々な眼科手順は、異常脈絡毛細管小葉の存在を検出するために実施することができ、例えば、自己蛍光イメージング技術、赤外線イメージング技術、光干渉断層撮影（ＯＣＴ）、Ｓｔｒａｔｕｓ光干渉断層撮影（Ｓｔｒａｔｕｓ  ＯＣＴ）、フーリエ領域光干渉断層撮影（Ｆｄ−ＯＣＴ）、二光子励起蛍光（ＴＰＥＦ）イメージング、適応光学走査型レーザー眼底検査（ＡＯＳＬＯ）、走査型レーザー眼底検査、スペクトルドメイン光干渉断層撮影と組み合わせた近赤外イメージング（ＳＤ−ＯＣＴ）、カラー眼底写真、眼底自発蛍光イメージング、無赤色イメージング、蛍光眼底造影、インドシアニングリーン血管造影、多焦点網膜電図（ＥＲＧ）記録、微小視野測定、カラードップラー光干渉断層撮影（ＣＤＯＣＴ）、および視野評価が挙げられるがそれらに限定されない。加えて、異常脈絡毛細管小葉の存在は、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ、Ｚｅｉｓｓ  Ｃｉｒｒｕｓ、Ｔｏｐｃｏｎ  ３Ｄ  ＯＣＴ  ２０００、Ｏｐｔｉｖｕｅ  ＲＴＶｕｅ  ＳＤ−ＯＣＴ、Ｏｐｋｏ  ＯＣＴ  ＳＬＯ、ＮＩＤＥＫ  Ｆ−１０、またはＯｐｔｏｐｏｌ  ＳＯＣＴ  Ｃｏｐｅｒｎｉｃｕｓ  ＨＲを使用して検出することができる。
【００６６】
１つの態様では、異常脈絡毛細管小葉の存在は、脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応する網膜色素上皮（ＲＰＥ）における変化を観察することにより検出することができる。ＲＰＥの観察は例えば、限定はされないが、当技術分野で知られている自己蛍光イメージング技術を使用して達成することができる。異常脈絡毛細管小葉が存在する場合、異常小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞は死んでしまう可能性がある。よって、異常脈絡毛細管小葉の存在は、脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応する死ＲＰＥ細胞を観察することにより検出することができる。当業者に知られている様々な手順を使用して、死ＲＰＥ細胞を検出することができ、例えば、自己蛍光イメージング技術、赤外線イメージング技術、光干渉断層撮影（ＯＣＴ）、Ｓｔｒａｔｕｓ光干渉断層撮影（Ｓｔｒａｔｕｓ  ＯＣＴ）、フーリエ領域光干渉断層撮影（Ｆｄ−ＯＣＴ）、二光子励起蛍光（ＴＰＥＦ）イメージング、適応光学走査型レーザー眼底検査（ＡＯＳＬＯ）、走査型レーザー眼底検査、スペクトルドメイン光干渉断層撮影と組み合わせた近赤外イメージング（ＳＤ−ＯＣＴ）、カラー眼底写真、眼底自発蛍光イメージング、無赤色イメージング、蛍光眼底造影、インドシアニングリーン血管造影、多焦点網膜電図（ＥＲＧ）記録、微小視野測定、カラードップラー光干渉断層撮影（ＣＤＯＣＴ）、および視野評価が挙げられるがそれらに限定されない。加えて、ＲＰＥは、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ、Ｚｅｉｓｓ  Ｃｉｒｒｕｓ、Ｔｏｐｃｏｎ  ３Ｄ  ＯＣＴ  ２０００、Ｏｐｔｉｖｕｅ  ＲＴＶｕｅ  ＳＤ−ＯＣＴ、Ｏｐｋｏ  ＯＣＴ  ＳＬＯ、ＮＩＤＥＫ  Ｆ−１０、またはＯｐｔｏｐｏｌ  ＳＯＣＴ  Ｃｏｐｅｒｎｉｃｕｓ  ＨＲを使用して観察することができる。
【００６７】
さらなる態様では、異常脈絡毛細管小葉の存在は、黄斑脈絡毛細管の小葉性質を再現する他の病態、例えば、限定はされないが、Ｂｒｕｃｈ膜またはＲＰＥ下腔における変化、視細胞間または網膜下腔における変化、異常脈絡毛細管小葉の発症と関連する他の網膜異常または病態、例えば脈絡膜ストローマにおける変化、上流脈管構造における変化、下流脈管構造における変化、または虚血、死視細胞、または眼の周辺における敷石萎縮を観察することにより、検出することができる。当業者に知られている、および本明細書で記載される様々な手順を使用して黄斑脈絡毛細管の小葉性質を再現する病態を検出することができる。
【００６８】
１つの態様では、本明細書で記載される方法は、対象の眼において異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含む、対象において血管関連黄斑症、またはその症状を診断することを含むことができ、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は、対象における血管関連黄斑症、またはその症状の診断を示し、血管関連黄斑症の症状は、黄斑変性症、加齢黄斑変性症、心細小血管障害、Ｓｔａｒｇａｒｄｔ病、弾性線維性仮性黄色腫（ＰＸＥ）、Ａｌａｇｉｌｌｅ症候群、皮質下白質脳症、子癇前症、高血圧、真性糖尿病、心筋虚血、動脈瘤、自己免疫疾患または感染病原体による血管炎、深部静脈血栓症、リンパ浮腫、静脈瘤、末梢動脈疾患、腎動脈疾患、Ｒａｙｎａｕｄ病、バージャー病、末梢静脈疾患、静脈血餅、アテローム性動脈硬化、動脈硬化症、細動脈硬化、冠動脈疾患、狭心症、うっ血性心不全、動脈の硬化、血栓性または塞栓性脳卒中、あるいは心筋梗塞である。さらなる態様では、血管関連黄斑症の症状は、黄斑脈絡毛細管の小葉性質を再現する病態であり得、例えば、死網膜色素上皮（ＲＰＥ）、Ｂｒｕｃｈ膜またはＲＰＥ下腔における変化、視細胞間または網膜下腔における変化、異常脈絡毛細管小葉の発症と関連する他の網膜異常または病態、例えば脈絡膜ストローマにおける変化、上流脈管構造における変化、下流脈管構造における変化、または虚血、死視細胞、または眼の周辺における敷石萎縮が挙げられるがそれらに限定されない。
【００６９】
さらなる態様では、本明細書で記載される方法は、対象の眼において異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含む、対象における組織または器官での、血管関連黄斑症の症状を発症する素因を特定することを含むことができ、対象の眼の黄斑における異常脈絡毛細管小葉の検出は、対象における組織または器官での血管関連黄斑症の症状を発症する素因を示し、症状は加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、心細小血管障害、皮質下白質脳症、または子癇前症である。
【００７０】
本明細書では、「血管関連黄斑症の症状」は、対象の循環系に影響する任意の状態を意味する。例えば、限定はされないが、血管関連黄斑症の症状は、黄斑変性症、加齢黄斑変性症、心細小血管障害、Ｓｔａｒｇａｒｄｔ病、弾性線維性仮性黄色腫（ＰＸＥ）、Ａｌａｇｉｌｌｅ症候群、皮質下白質脳症、子癇前症、高血圧、真性糖尿病、心筋虚血、動脈瘤、自己免疫疾患または感染病原体による血管炎、深部静脈血栓症、リンパ浮腫、静脈瘤、末梢動脈疾患、腎動脈疾患、Ｒａｙｎａｕｄ病、バージャー病、末梢静脈疾患、静脈血餅、アテローム性動脈硬化、動脈硬化症、細動脈硬化、冠動脈疾患、狭心症、うっ血性心不全、動脈の硬化、血栓性または塞栓性脳卒中、あるいは心筋梗塞であり得る。「血管関連黄斑症の症状」はまた、黄斑脈絡毛細管の小葉性質を再現する病態である可能性があり、例えば、死網膜色素上皮（ＲＰＥ）、Ｂｒｕｃｈ膜またはＲＰＥ下腔における変化、視細胞間または網膜下腔における変化、異常脈絡毛細管小葉の発症と関連する他の網膜異常または病態、例えば脈絡膜ストローマにおける変化、上流脈管構造における変化、下流脈管構造における変化、または虚血、死視細胞、あるいは眼の周辺における敷石萎縮が挙げられるがそれらに限定されない。「血管関連黄斑症の症状」はまた、視覚の正常から離れた変化を引き起こす任意の視覚的状態である可能性があり、例えば、限定はされないが、霧視、光ぼけ、盲点、飛蚊症、および他の症状である。
【００７１】
血管関連黄斑症の症状は、一般に心臓と関連する。しかしながら、状態はまた、様々な他の組織または器官、例えば脳、脊髄、筋肉、骨、眼、耳、腎臓、子宮、胎盤、皮膚、粘膜、胃、肝臓、肺、胆嚢、脾臓、虫垂、小腸、大腸、膵臓、前立腺、または膀胱に影響し得る。
【００７２】
心臓において現れる血管関連黄斑症の症状、例えば冠微小血管疾患は、対象の冠動脈において重大な疾患が存在しなくても、ヒト対象で心筋梗塞に至らしめる可能性がある。さらに、血管関連黄斑症を有するヒト対象は、例えば、皮質下白質脳症を発症する可能性があり、これは認知症の形態として現れ得る。加えて、脳で現れる血管関連黄斑症の症状は、発作、記憶喪失、歩行障害、神経筋萎縮、麻痺、脳卒中、および失明となり得る。ヒト対象の胎盤で現れる血管関連黄斑症の症状は、高血圧およびタンパク尿の徴候および症状を伴う子癇前症として現れ得る。
【００７３】
血管関連黄斑症の症状により影響され得る組織または器官の例としては、心臓、血管、脳、脊髄、筋肉、骨、眼、耳、腎臓、子宮、胎盤、皮膚、粘膜、胃、肝臓、肺、胆嚢、脾臓、虫垂、小腸、大腸、膵臓、前立腺、または膀胱が挙げられるが、それらに限定されない。
【００７４】
１つの態様では、血管関連黄斑症の症状は、小血管疾患であり得る。「小血管疾患」または「ＳＶＤ」は、本明細書では、器官または組織へ、またはそこから血流を提供するより小さな血管の狭小化を引き起こす状態を示す。ＳＶＤの例としては、皮質下梗塞および白質脳症を伴う常染色体劣性脳動脈症（ＣＡＲＡＳＩＬ）、脳白質ジストロフィーを伴う網膜脈管障害（ＲＶＣＬ）およびＩＶ型コラーゲン、α１（ＣＯＬ４Ａ１）関連障害が挙げられるが、それらに限定されない。皮質下梗塞および白質脳症を伴う常染色体優性脳動脈症（ＣＡＤＡＳＩＬ）は、細胞シグナル伝達受容体をコードするＮＯＴＣＨ３遺伝子における１９０超の異なる突然変異により引き起こされる最も一般的な遺伝性小血管疾患（ＳＶＤ）のままである。
【００７５】
そのため、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は、医師に対し、対象の身体における他の組織または器官、例えば、限定はされないが、心臓、血管、脳、脊髄、筋肉、骨、眼、耳、腎臓、子宮、胎盤、皮膚、粘膜、胃、肝臓、肺、胆嚢、脾臓、虫垂、小腸、大腸、膵臓、前立腺、または膀胱に影響する小血管疾患の可能性を特定することができる。
【００７６】
例えば、心臓で現れる血管関連黄斑症の症状としては、冠微小血管疾患が挙げられ、これは、対象の冠動脈において重大な疾患が存在しなくても、ヒト対象で心筋梗塞に至らしめる可能性がある。冠微小血管疾患は、心臓の小動脈が狭くなり、心臓疾患の徴候および症状、例えば胸痛（狭心症）を引き起こす状態である。小血管疾患は、医師が冠動脈疾患を引き起こす心臓の大動脈の封鎖をチェックし、狭小化がほとんどないか全くないことを見出した後、通常診断される。よって眼の黄斑における異常脈絡毛細管小葉の存在は、対象の徴候および症状を引き起こす心臓の小血管疾患のような、血管関連黄斑症の症状を有する対象の可能性を医師に警告することができる。
【００７７】
さらに、血管関連黄斑症を有する対象は、例えば、認知症の形態として現れ得る皮質下白質脳症を発症する可能性がある。脳で現れる血管関連黄斑症の他の神経症状の非制限的例としては、失語症、発作、記憶喪失、歩行障害、神経筋萎縮、麻痺、平衡感覚の損失、聴力損失、脳卒中、および失明が挙げられるが、それらに限定されない。
【００７８】
対象の胎盤で現れる血管関連黄斑症の症状は、高血圧およびタンパク尿の徴候および症状を伴う子癇前症として現れ得る。
【００７９】
１つの態様では、血管関連黄斑症の症状は黄斑変性症として現れ得る。例えば、限定はされないが、黄斑変性症は、加齢黄斑障害（ＡＭＤ）、Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ黄斑ジストロフィー、Ｓｏｒｓｂｙ眼底変性症、Ｓｔａｒｇａｒｄｔ病、パターンジストロフィー、Ｂｅｓｔ病、優性ドルーゼン、マラッチアレベンチネーゼ、漿液性網膜剥離、脈絡網膜変性、網膜変性、視細胞変性、網膜色素上皮（ＲＰＥ）変性、ムコ多糖症、杆体錐体ジストロフィー、錐体杆体ジストロフィー、錐体変性であり得る。
【００８０】
１つの態様では、血管関連黄斑症は、眼の黄斑の脈絡毛細管小葉において灌流減少を引き起こし得る。さらなる態様では、血管関連黄斑症は、眼の黄斑における脈絡毛細管小葉の部分または全体閉鎖を引き起こし得る。脈絡毛細管小葉、脈絡膜細動脈、毛様体動脈、眼動脈、内頸動脈、および総頸動脈の部分または全体閉鎖または閉塞を引き起こし得る血管関連黄斑症の症状の例としては、アテローム性動脈硬化、動脈硬化症、細動脈硬化、血管炎、真性多血症、白血病、過粘稠度症候群、血栓塞栓性疾患、真性糖尿病、感染症、敗血症性塞栓、真菌性塞栓、アレルギー疾患、新生物、自己免疫疾患、などが挙げられるが、それらに限定されない。
【００８１】
加えて、脈絡毛細管小葉、脈絡膜細動脈、毛様体動脈、眼動脈、内頸動脈、または総頸動脈の部分または全体閉塞は、血管関連黄斑症と関連する様々な症状、例えば、限定はされないが、アテローム性動脈硬化、動脈硬化症、細動脈硬化、血管炎、真性多血症、白血病、過粘稠度症候群、血栓塞栓性疾患、真性糖尿病、感染症、敗血症性塞栓、真菌性塞栓、アレルギー疾患、新生物、自己免疫疾患、などを引き起こし得る。脈絡毛細管小葉、脈絡膜細動脈、毛様体動脈、眼動脈、内頸動脈、および総頸動脈の部分または全体閉鎖または閉塞の他の原因としては、外傷、物理的作用物質、放射線、毒素、および薬物が挙げられるが、それらに限定されない。
【００８２】
１つの態様では、血管関連黄斑症の症状は、眼以外の組織または器官において現れ得る。そのため、対象において血管関連黄斑症の症状を診断する方法もまた本明細書で記載され、この方法は対象の眼において異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は、対象における血管関連黄斑症の症状の診断を示し、血管関連黄斑症の症状は眼の疾患または血管疾患として現れない。
【００８３】
加えて、対象における組織または器官での血管関連黄斑症の症状を発症する素因を特定する方法が本明細書で記載され、この方法は、対象の眼において異常脈絡毛細管小葉を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の検出は、対象における組織または器官での血管関連黄斑症の症状を発症する素因を示し、血管関連黄斑症の症状は、眼の疾患または血管疾患として現れない。
【００８４】
１つの態様では、本明細書で記載される方法は、網膜動脈（Ａ）または静脈（Ｖ）の直径の比を決定することをさらに含むことができ、約０．６０〜約１．４８の直径の比（Ａ：Ｖ）はさらに、血管関連黄斑症、またはその症状の診断を示す。さらなる態様では、約０．６０〜約１．４８の直径の比（Ａ：Ｖ）はまた、対象が異常脈絡毛細管小葉を有する可能性が高いことを示し得る。さらなる態様では、約０．８の直径の比（Ａ：Ｖ）はさらに、血管関連黄斑症、またはその症状の診断を示すことができ、または対象が異常脈絡毛細管小葉を有する可能性が高いことを示し得る。さらに別の態様では、正常でない動脈および静脈の個々の測定を決定することは、血管関連黄斑症、またはその症状の診断を示すことができ、または対象が異常脈絡毛細管小葉を有する可能性が高いことを示し得る。さらに別の態様では、血管関連黄斑症、またはその症状の診断、あるいは異常脈絡毛細管小葉の診断は、例えば、眼窩血管、頸動脈、眼動脈、または後毛様体動脈における血流を測定することにより成し得る。血流はドップラーまたは当技術分野で知られている他の技術を用いて測定することができる。さらに別の態様では、血管関連黄斑症、またはその症状の診断、または異常脈絡毛細管小葉の診断は、眼窩における血管構造を、例えば、３Ｔ  ＭＲＩまたは当技術分野で知られている他の技術を用いて評価することにより成すことができる。
【００８５】
対象において重篤なまたは後期黄斑症を特定する方法もまた本明細書で記載され、この方法は対象の眼において異常脈絡毛細管小葉を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の検出は、対象における重篤なまたは後期黄斑症を発症する素因を示す。この方法さらに、対象の眼において地図状萎縮の領域を検出することを含むことができる。地図状萎縮は、脈絡毛細管の大部分の損失に起因し得る。そのため、１つの態様では、本明細書で記載される方法を使用して、対象において黄斑疾患が進行する速度を予測することができる。この方法は、対象の眼において脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）を検出することをさらに含むことができる。ＣＮＶは、網膜または脈絡膜において異常脈絡毛細管小葉によって引き起こされる虚血に起因し得る。
【００８６】
対象において血管関連黄斑症の症状を特定する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象の眼において異常脈絡毛細管小葉を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の検出は、対象において血管関連黄斑症の症状を発症する素因を示す。この方法は、対象の眼において地図状萎縮の領域を検出することをさらに含むことができる。地図状萎縮は、脈絡毛細管の大部分の損失に起因し得る。そのため、１つの態様では、本明細書で記載される方法を使用して、血管関連黄斑症の症状または黄斑疾患が対象において進行する速度を予測することができる。
【００８７】
血管関連黄斑症、重篤なまたは後期黄斑症、または異常脈絡毛細管小葉を有する対象を診断するための方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象の眼の画像を生成させること、対象の眼の画像において異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含み、よって、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在により、血管関連黄斑症、重篤なまたは後期黄斑症、または異常脈絡毛細管小葉の診断が得られる。１つの態様では、対象の眼に異常脈絡毛細管小葉がないと、対象は血管関連黄斑症、重篤なまたは後期黄斑症、または異常脈絡毛細管小葉を有さないという診断が得られる。
【００８８】
１つの態様では、方法は、対象から得た試料において、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、またはＣＦＨ遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することをさらに含むことができ、１つ以上のＳＮＰは（ｉ）ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１０４９３３１、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ２６７２５８７、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ３７５０８４８、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ１０６１１７０、またはＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ８００２９２、あるいは（ｉｉ）（ｉ）のＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰであり、よって（ｉ）または（ｉｉ）における１つ以上のＳＮＰの存在に基づき対象が診断される。
【００８９】
異常脈絡毛細管小葉を特定するためのシステムもまた本明細書で記載され、このシステムは、異常脈絡毛細管小葉の認識可能な画像を提供するように構成された、眼を撮像するための装置、および異常脈絡毛細管小葉を特定するための説明書を備える。眼を撮像するための、本明細書で記載される、または当技術分野で知られている任意の装置は、このシステムと共に使用することができる。例えば、限定はされないが、装置は近赤外反射およびＳＤ−ＯＣＴ装置またはドップラーイメージング装置とすることができる。
【００９０】
２．ＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２一塩基多型
ＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２遺伝子における複数のバリエーションから構成される多型およびハプロタイプのコレクションが本明細書で記載される。これらの多型およびハプロタイプの１つ以上が、血管関連黄斑症、またはその症状と関連する。これらのおよび他の多型ならびに多型の組（例えば、ハプロタイプ）の検出は、血管関連黄斑症、またはその症状のための診断アッセイを設計および実施するのに有用であり得る。多型および多型の組は、核酸の分析により、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２コード配列によりコードされるポリペプチド（スプライスバリアントによりコードされるポリペプチドを含む）の分析により、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２非コード配列の分析により、または当技術分野で知られている他の手段により検出することができる。そのような多型およびハプロタイプの分析は、血管関連黄斑症、またはその症状のための予防および治療レジームを設計するのに有用であり得る。
【００９１】
「多型」という用語は、集団における１つ以上の遺伝的に決定される代替配列またはアレルの発生を示す。「多型部位」は、配列相違が起こる座位である。多型部位は少なくとも１つのアレルを有する。ジアレル多型は２つのアレルを有する。トリアレル多型は３つのアレルを有する。二倍体生物はアレル型に対しホモ接合またはヘテロ接合とすることができる。多型部位は１塩基対ほどの小さいものであり得る。多型部位の例としては、以下が挙げられる：制限断片長多型（ＲＦＬＰ）、タンデム反復数（ＶＮＴＲ）、高頻度可変領域、ミニサテライト、ジヌクレオチド反復、トリヌクレオチド反復、テトラヌクレオチド反復、および単純配列反復。本明細書では、「多型」への言及は、多型の組（すなわち、ハプロタイプ）を含むことができる。
【００９２】
「一塩基多型（ＳＮＰ）」は、単一のヌクレオチドにより占有された多型部位で起こり得、それはアレル配列間のバリエーション部位である。その部位は、アレルの高度に保存された配列に先行され、およびそれらがその後に続くことができる。ＳＮＰは通常、多型部位での１つのヌクレオチドの別のものとの置換により生じる。１つのプリンの別のプリンによる、または１つのピリミジンの別のピリミジンによる置換は塩基転移と呼ばれる。プリンのピリミジンによる置換またはその反対は、塩基転換と呼ばれる。同義ＳＮＰは、コード化ポリペプチドのアミノ酸配列を変化させない、コード領域における１つのヌクレオチドの別のものとの置換を示す。非同義ＳＮＰはコード化ポリペプチドのアミノ酸配列を変化させる、コード領域における１つのヌクレオチドの別のものとの置換を示す。ＳＮＰはまた、参照アレルに対する１つまたは複数のヌクレオチドの欠失または挿入から生じ得る。
【００９３】
多型の「組」は、例えば、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子において知られている１つ以上の多型、例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、または６を超える多型を意味する。
【００９４】
本明細書では、「ハプロタイプ」は、個体の単一の染色体の小領域上に含まれる対象となる１つ以上の多型を含むＤＮＡ配列を意味する。ハプロタイプは、単一遺伝子、遺伝子間配列、または遺伝子および遺伝子間配列の両方を含むより大きな配列、例えば、遺伝子、または遺伝子および遺伝子間配列のコレクションにおける多型の組を示すことができる。例えば、ハプロタイプは、染色体１０ｑ２６座位における多型の組を示すことができ、それはＡＲＭＳ２、ＨＴＲＡ１に対する遺伝子配列、および遺伝子間配列（すなわち、遺伝子領域における多型と連鎖不平衡にある、介在遺伝子間配列、上流配列、および下流配列）を含む。「ハプロタイプ」という用語は、単一の染色体上で統計的に互いに関連することが見出される一塩基多型（ＳＮＰ）の組を示すことができる。ハプロタイプはまた、単一の染色体上で統計的に互いに関連することが見出された多型（例えば、ＳＮＰ）および他の遺伝子マーカー（例えば、挿入または欠失）の組み合わせを示すことができる。「ディプロタイプ」は、ハプロタイプ対である。例えば、ディプロタイプは保護およびリスクハプロタイプ、２つの保護ハプロタイプ、２つのリスクハプロタイプ、中立およびリスクハプロタイプ、中立および保護ハプロタイプ、または２つの中立ハプロタイプを含むことができる。状況次第で、１つのハプロタイプが優性となり、または１つのハプロタイプが劣性となり得る。
【００９５】
ＨｔｒＡセリンペプチダーゼ１、Ｌ５６、ＨｔｒＡ、ＡＲＭＤ７、ＯＲＦ４８０またはＰＲＳＳ１１としても知られているＨＴＲＡ１は、セリンプロテアーゼのトリプシンファミリーのメンバーのタンパク質であるＨＴＲＡ１タンパク質をコードする遺伝子である。ＨＴＲＡ１のＮＣＢＩ遺伝子識別番号は５６５４であり、当業者はｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｅｎｅ／にアクセスし、ＨＴＲＡ１を検索することにより、ＨＴＲＡ１に関するさらなる情報を容易に入手することができる。例えば、限定はされないが、ＨＴＲＡ１のためのＮＣＢＩ  Ｇｅｎｅページにアクセスすることにより、当業者は容易に情報、例えば、ＨＴＲＡ１のゲノム位置、ＨＴＲＡ１タンパク質の特性の概要、ＨＴＲＡ１の細胞局在に関する情報、ＨＴＲＡ１の相同体およびバリアント（例えば、スプライスバリアント）に関する情報、ならびに多数のＨＴＲＡ１参照配列、例えばＨＴＲＡ１のゲノム配列、ＨＴＲＡ１のｍＲＮＡ配列およびＨＴＲＡ１のタンパク質配列を入手することができる。ＨＴＲＡ１  ＮＣＢＩ  Ｇｅｎｅエントリから容易に入手される情報の全ておよび本明細書で明記されるＮＣＢＩ遺伝子番号は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００９６】
加齢黄斑症感受性２またはＡＲＭＤ８としても知られているＡＲＭＳ２は、ＡＲＭＳ２タンパク質をコードする遺伝子である。ＡＲＭＳ２のＮＣＢＩ遺伝子識別番号は３８７７１５であり、当業者はｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｅｎｅ／にアクセスし、ＡＲＭＳ２を検索することにより、ＡＲＭＳ２に関するさらなる情報を容易に入手することができる。ＡＲＭＳ２のためのＮＣＢＩ  Ｇｅｎｅページにアクセスすることにより、当業者は容易に情報、例えばＡＲＭＳ２のゲノム位置、ＡＲＭＳ２タンパク質の特性の概要、ＡＲＭＳ２の細胞局在に関する情報、ＡＲＭＳ２の相同体およびバリアント（例えば、スプライスバリアント）に関する情報、ならびに多数のＡＲＭＳ２参照配列、例えばＡＲＭＳ２のゲノム配列、ＡＲＭＳ２のｍＲＮＡ配列およびＡＲＭＳ２のタンパク質配列を入手することができる。ＡＲＭＳ２  ＮＣＢＩ  Ｇｅｎｅエントリから容易に入手される情報の全ておよび本明細書で明記されるＮＣＢＩ遺伝子番号は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００９７】
別記されない限り、「ＨＴＲＡ１」または「ＡＲＭＳ２」は、本明細書では、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２の少なくとも１つの活性を保持する任意の生物に由来する、任意のＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子、核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）、あるいはタンパク質を含む。加えて、「ＨＴＲＡ１」または「ＡＲＭＳ２」は、本明細書では、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子のゲノムＤＮＡまたはＲＮＡ中に存在する任意の非コード配列またはそれらの間に存在する遺伝子間配列を含む。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２に言及する場合、これはまた、血管関連黄斑症、またはその症状と関連するＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２核酸またはタンパク質として機能することができる任意の生物に由来する、任意のＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子、核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）、またはタンパク質を含む。例えば、核酸またはタンパク質配列は対象の細胞に由来し、またはその中に存在することができる。
【００９８】
本明細書では、「核酸」、「ポリヌクレオチド」または「オリゴヌクレオチド」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマ形態でありＤＮＡまたはＲＮＡであってもよく、一本鎖または二本鎖であってもよい。核酸は、プロモーターまたは他の制御配列を含み得る。オリゴヌクレオチドは通常、合成手段により調製される。核酸は、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子において知られている多型部位のいずれか１つに及ぶまたは隣接するＤＮＡのセグメント、またはそれらの相補体を含む。セグメントは通常、５〜１００の近接塩基であり、しばしば５、１０、１５、２０、または２５ヌクレオチドの下限〜１０、１５、２０、２５、３０、５０、または１００ヌクレオチドの上限に及ぶ（ここで、上限は下限より大きい）。５〜１０、５〜２０、１０〜２０、１２〜３０、１５〜３０、１０〜５０、２０〜５０、または２０〜１００塩基の核酸が一般的である。多型部位は、セグメントの任意の位置内で起こり得る。二本鎖核酸の一本鎖の配列への言及は相補配列を規定し、文脈から明確に別記されない場合を除き、核酸の一本鎖への言及はまた、その相補体を示す。
【００９９】
ある一定の適用では、核酸（例えば、ＲＮＡ）分子は細胞内安定性および半減期を増加させるように修飾され得る。可能な修飾としては、分子の骨格内でのホスホジエステラーゼ結合ではなくホスホロチオエートまたは２’−Ｏ−メチルの使用が挙げられるが、それらに限定されない。修飾核酸としては、ペプチド核酸（ＰＮＡ）および非伝統的塩基、例えばイノシン、クエオシンおよびワイブトシンならびにアデニン、シチジン、グアニン、チミン、およびウリジンのアセチル−、メチル−、チオ−、および同様に修飾された形態を有する核酸が挙げられ、これらは内在性エンドヌクレアーゼにより容易に認識されない。
【０１００】
本明細書では「ハイブリダイゼーションプローブ」は、塩基特異的様式で核酸の相補鎖に結合することができる核酸である。そのようなプローブは、核酸およびペプチド核酸を含む（Ｎｉｅｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１）。ハイブリダイゼーションは当技術分野で知られているストリンジェント条件下で実施され得る。例えば、Ｂｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｋｉｍｍｅｌ  （１９８７）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  １５２：  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ：  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．；  Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ２ｎｄ  Ｅｄ．，  Ｖｏｌｓ．  １−３，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；  Ｓａｍｂｏｏｋ  （２００１）  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ；  Ｒｙｃｈｌｉｋ，  Ｗ．  ａｎｄ  Ｒｈｏａｄｓ，  Ｒ．  Ｅ．，  １９８９，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １７，  ８５４３；  Ｍｕｅｌｌｅｒ，  Ｐ．  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｉｎ：  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １５．５，  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，  Ｉｎｃ．  ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；  およびＡｎｄｅｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｙｏｕｎｇ，  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  （１９８５））を参照されたい。本明細書では、「プローブ」という用語は、プライマーを含む。プローブおよびプライマーは時として「オリゴヌクレオチド」と呼ばれる。
【０１０１】
「プライマー」という用語は、適切な緩衝液中、好適な温度での適切な条件下でのテンプレート指向ＤＮＡ合成の開始点として作用することができる一本鎖オリゴヌクレオチドを示す。プライマーの適切な長さは、プライマーの使用目的に依存するが、典型的には１５〜３０ヌクレオチドの範囲である。プライマー配列は、テンプレートに正確に相補的である必要はないが、テンプレートとハイブリダイズするのに十分相補的でなければならない。「プライマー部位」という用語は、プライマーがハイブリダイズする標的ＤＮＡの領域を示す。「プライマー対」という用語は、増幅されるＤＮＡ配列の５’端にハイブリダイズする５’上流プライマーおよび増幅される配列の３’端の相補体にハイブリダイズする３’下流プライマーを含むプライマーの組を意味する。
【０１０２】
短プローブおよびプライマーのための例となるハイブリダイゼーション条件は約５〜１２℃、計算されたＴｍ未満である。Ｔｍを計算するための式は知られており、以下を含み：１４塩基未満のオリゴに対しＴｍ＝４゜Ｃｘ（プライマー中のＧおよびＣの数）＋２゜Ｃｘ（プライマー中のＡおよびＴの数）、反応は５０ｍＭ一価カチオンの存在下で実施されると仮定する。より長いオリゴでは、以下の式を使用することができ：Ｔｍ＝６４．９℃＋４１℃ｘ（プライマー中のＧおよびＣの数−１６．４）／Ｎ、ここでＮはプライマーの長さである。別の一般に使用される式は、反応の塩濃度を考慮し（Ｒｙｃｈｌｉｋ、上記、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、上記、Ｍｕｅｌｌｅｒ、上記）：Ｔｍ＝８１．５℃＋１６．６℃ｘ（ｌｏｇ１０［Ｎａ＋］＋［Ｋ＋］）＋０．４１℃ｘ（％ＧＣ）−６７５／Ｎ、ここでＮはオリゴ中のヌクレオチドの数である。前記式は、ある一定の適用に対する開始点を提供する。しかしながら、特定のプローブおよびプライマーの設計は、追加のまたは異なる要因を考慮し得る。発明の方法において使用するためのプローブおよびプライマーの設計のための方法は、当技術分野でよく知られている。
【０１０３】
本明細書では、「リスク」、「保護」、および「中立」という用語は、バリエーション、ＳＮＰ、ハプロタイプ、ディプロタイプ、およびバリエーションのそのようなパターンにより特徴づけられる遺伝子によりコードされる集団におけるタンパク質を説明するために使用される。リスクＳＮＰは、血管関連黄斑症、またはその症状を発症するリスクの増加と関連する少なくとも１つのバリアント多型を含む、遺伝子、例えばＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子のアレル型である。「バリアント」という用語は、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子への言及において使用される場合、配列が集団において最も一般的な配列とは異なるヌクレオチド配列を示す。バリアント多型は、遺伝子のコードまたは非コード部分に存在することができる。リスクＨＴＲＡ１  ＳＮＰの例は、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８ＳＮＰでのＡアレルである。リスクＳＮＰは、天然に存在することができ、または組換え技術により合成することができる。保護ＳＮＰは、血管関連黄斑症、またはその症状を発症するリスクの減少と関連する少なくとも１つのバリアント多型を含む、遺伝子、本明細書ではＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子のアレル型である。例えば、１つの保護ＨＴＲＡ１  ＳＮＰは、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８ＳＮＰでのＧアレルである。保護ＳＮＰは天然に存在するまたは組換え技術により合成することができる。よって、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２の「保護」形態は、例えば、血管関連黄斑症を有するまたは血管関連黄斑症を発症するリスクのある対象に投与されると治療効果を提供することができ、よって、対象を疾患から「保護」することができる。
【０１０４】
「バリアント」という用語はまた、本明細書で記載されるＳＮＰの場合、配列が、集団において最も一般的な配列と、例えば１ヌクレオチドだけ異なるヌクレオチド配列を示すことができる。例えば、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子のヌクレオチド配列におけるいくつかのバリエーションまたは置換は、コドンを変化させ、よって、異なるアミノ酸がコードされ、バリアントポリペプチドが得られる。「バリアント」という用語はまた、配列がコード化ポリペプチドのアミノ酸配列を変化させない（すなわち、保存変化）位置で、集団において最も一般的な配列と異なるポリペプチドを示すことができる。バリアントポリペプチドは、リスクハプロタイプによりコードされ、保護ハプロタイプによりコードされ、または中立ハプロタイプによりコードされ得る。バリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドは、リスクと関連し、保護と関連することができ、または中立であり得る。
【０１０５】
「単離核酸」または「精製核酸」により、発明のＤＮＡが誘導される生物の天然に存在するゲノムにおいてその遺伝子に隣接する、遺伝子のないＤＮＡが意味される。そのため、その用語は、例えば、ベクター、例えば自己複製プラスミドまたはウイルスに組み込まれる；または原核生物または真核生物のゲノムＤＮＡに組み込まれる（例えば、導入遺伝子）；または個別の分子（例えば、ＰＣＲ、制限エンドヌクレアーゼ消化、または化学もしくはインビトロ合成により生成されたｃＤＮＡまたはゲノムまたはｃＤＮＡ断片）として存在する組換えＤＮＡを含む。これはまた、追加のポリペプチド配列をコードするハイブリッド遺伝子の一部である組換えＤＮＡを含む。「単離核酸」という用語はまた、単離ＤＮＡ分子によりコードされる、または化学的に合成される、少なくともいくつかの細胞成分から分離された、もしくはそれらを実質的に含まないＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ分子、例えば、他の型のＲＮＡ分子またはポリペプチド分子を指す。
【０１０６】
「単離ポリペプチド」または「精製ポリペプチド」は、ポリペプチドに通常、自然に伴う物質を実質的に含まないポリペプチド（またはその断片）が意味する。発明のポリペプチド、またはその断片は、例えば、天然源（例えば、哺乳動物細胞）からの抽出により、（例えば、細胞において、または無細胞翻訳系において）ポリペプチドをコードする組換え核酸の発現により、またはポリペプチドを化学的に合成することにより得ることができる。加えて、ポリペプチド断片は、これらの方法のいずれかにより、または全長ポリペプチドを切断することにより得ることができる。
【０１０７】
２つのアミノ酸配列は、少なくとも約８０％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９５％同一、少なくとも約９８％同一、または少なくとも約９９％同一である場合、「実質的同一性」を有すると見なされる。配列相同性パーセンテージは、典型的には、２つの配列の間の最適アライメントを決定し、２つの配列を比較することにより計算される。配列の最適アライメントは、目視により、またはＳｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，  １９８１，  Ａｄｖ．  Ａｐｐｌ．  Ｍａｔｈ．  ２：  ４８２の局所相同性アルゴリズムを使用して、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，  １９７０，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ４８：  ４４３の相同性アライメントアルゴリズムを使用して、Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，  １９８８，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８５：  ２４４４の類似法の検索を使用して、これらのアルゴリズムのコンピュータ化実行により（例えば、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，  ５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，  Ｍａｄｉｓｏｎ，  Ｗｉｓ．において）アミノ酸比較のため（例えば、ギャップスコアリングなどのため）にデフォルトパラメータを使用して実施することができる。特定の長さまたは領域に関して２つの配列間の配列相同性を記載することが時としてことが望ましい（例えば、２つの配列が少なくとも５００塩基対の長さにわたって少なくとも９５％のアイデンティティーを有すると記載することができる）。通常、長さは少なくとも約５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１０００アミノ酸、または参照タンパク質の全長である。２つのアミノ酸配列はまた、１、２、または３残基だけ、あるいは２〜２０残基、２〜１０残基、３〜２０残基、または３〜１０残基だけ異なる場合、実質同一であると考えることができる。
【０１０８】
ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における多型部位は、血管関連黄斑症、またはその症状と関連する可能性があり、血管関連黄斑症の症状は黄斑変性症、加齢黄斑変性症、心細小血管障害、Ｓｔａｒｇａｒｄｔ病、弾性線維性仮性黄色腫（ＰＸＥ）、Ａｌａｇｉｌｌｅ症候群、皮質下白質脳症、子癇前症、高血圧、真性糖尿病、心筋虚血、動脈瘤、自己免疫疾患または感染病原体による血管炎、深部静脈血栓症、リンパ浮腫、静脈瘤、末梢動脈疾患、腎動脈疾患、Ｒａｙｎａｕｄ病、バージャー病、末梢静脈疾患、静脈血餅、アテローム性動脈硬化、動脈硬化症、細動脈硬化、冠動脈疾患、狭心症、うっ血性心不全、動脈の硬化、血栓性または塞栓性脳卒中、心筋梗塞、皮質下梗塞および白質脳症を伴う常染色体劣性脳動脈症（ＣＡＲＡＳＩＬ）、脳白質ジストロフィーを伴う網膜脈管障害（ＲＶＣＬ）およびＩＶ型コラーゲン、α１（ＣＯＬ４Ａ１）関連障害、または皮質下梗塞および白質脳症を伴う常染色体優性脳動脈症（ＣＡＤＡＳＩＬ）であり得ることが理解されるべきである。
【０１０９】
ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における例となる多型部位は、例として本明細書で記載され、限定することを意図しない。これらの多型部位、またはＳＮＰはまた、発明の方法を実施するのに使用することができる。さらに、これらのＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２多型は、連鎖および連関研究、臨床集団の遺伝子型判定、遺伝子型情報の表現型情報との相関、ヘテロ接合性損失分析、細胞試料源の特定に有用であり、可能性のある治療法を細胞に標的とするのにも有用であり得ることが認識されるであろう。
【０１１０】
本明細書の表において明確に記載されていない、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における追加の多型部位はさらにこの解析を精密にし得ることが認識されるであろう。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における非同義多型を使用するＳＮＰ解析は、バリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドを特定するのに有用であり得る。リスクと関連する他のＳＮＰは、中立または保護ＳＮＰによりコードされるタンパク質と同じ配列を有するタンパク質をコードすることができるが、プロモーターまたはイントロン中にアレルを含み、例えば、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２発現のレベルまたは部位を変化させる。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における多型は、隣接遺伝子のバリエーションに関連し得ることもまた、認識されるであろう。隣接遺伝子のバリエーションは、コードされるタンパク質の発現または形態を変化させ、保有者において有害または保護効果を有する可能性がある。
【０１１１】
本明細書で提供される方法および材料は、対象（例えば、ヒト）のＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２核酸が多型、例えば一塩基多型（ＳＮＰ）を含むかどうかを決定するために使用することができる。例えば、本明細書で提供される方法および材料は、対象がバリアントＳＮＰを有するかどうかを決定するために使用することができる。任意の方法を使用して、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２核酸における多型を検出することができる。例えば、多型は、エクソン、イントロン、または非翻訳配列の配列決定、変性高速液体クロマトグラフィー（ＤＨＰＬＣ）、アレル特異的ハイブリダイゼーション、アレル特異的制限消化、突然変異特異的ポリメラーゼ連鎖反応、一本鎖高次構造多型検出、およびそのような方法の組み合わせにより検出することができる。
【０１１２】
ヒト対象において血管関連黄斑症を有するまたは発症する対象のリスクを予測するための方法が本明細書で記載され、この方法は、対象において、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、またはＣＦＨ遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含み、１つ以上のＳＮＰは（ｉ）ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１０４９３３１、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ２６７２５８７、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ３７５０８４８、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ１０６１１７０、またはＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ８００２９２、あるいは（ｉｉ）（ｉ）のＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰであり、１つ以上のＳＮＰの存在は、血管関連黄斑症を有するまたは発症する対象のリスクを予測する。１つの態様では、方法は重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を有するまたは発症する対象のリスクを予測することができる。さらなる態様では、方法は異常脈絡毛細管小葉を有するまたは発症する対象のリスクを予測することができる。
【０１１３】
１つの態様では、ｒｓ１１２００６３８  ＳＮＰでのＡ、ｒｓ１０４９３３１  ＳＮＰでのＴ、ｒｓ２６７２５８７  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ１０４９０９２４  ＳＮＰでのＴ、ｒｓ３７５０８４８  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ１０６１１７０  ＳＮＰでのＣ、またはｒｓ８００２９２  ＳＮＰでのＧのアイデンティティーの決定は、血管関連黄斑症、重篤なまたは後期黄斑症、または異常脈絡毛細管小葉を有するまたは発症する対象のリスクを予測することができる。
【０１１４】
別の態様では、ｒｓ１１２００６３８  ＳＮＰでのＡ、ｒｓ１０４９３３１  ＳＮＰでのＴ、ｒｓ２６７２５８７  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ１０４９０９２４  ＳＮＰでのＴ、ｒｓ３７５０８４８  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ１０６１１７０  ＳＮＰでのＣ、またはｒｓ８００２９２  ＳＮＰでのＧのアイデンティティーの決定は、血管関連黄斑症、重篤なまたは後期黄斑症、または異常脈絡毛細管小葉を有するまたは発症する対象のリスクの増加を予測することができる。
【０１１５】
さらなる態様では、ｒｓ１１２００６３８  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ１０４９３３１  ＳＮＰでのＣ、ｒｓ２６７２５８７  ＳＮＰでのＣ、ｒｓ１０４９０９２４  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ３７５０８４８  ＳＮＰでのＴ、ｒｓ１０６１１７０  ＳＮＰでのＴ、またはｒｓ８００２９２  ＳＮＰでのＡのアイデンティティーの決定は、血管関連黄斑症、重篤なまたは後期黄斑症、または異常脈絡毛細管小葉を有するまたは発症する対象のリスクを予測することができる。
【０１１６】
さらに別の態様では、ｒｓ１１２００６３８  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ１０４９３３１  ＳＮＰでのＣ、ｒｓ２６７２５８７  ＳＮＰでのＣ、ｒｓ１０４９０９２４  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ３７５０８４８  ＳＮＰでのＴ、ｒｓ１０６１１７０  ＳＮＰでのＴ、またはｒｓ８００２９２  ＳＮＰでのＡのアイデンティティーの決定は、血管関連黄斑症、重篤なまたは後期黄斑症、または異常脈絡毛細管小葉を有するまたは発症する対象のリスクの減少を予測することができる。
【０１１７】
１つの態様では、本明細書で記載される方法は、対象の眼の画像を生成させること、画像を使用して対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することをさらに含むことができ、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は、血管関連黄斑症を有するまたは発症する対象のリスクを予測する。本明細書では、血管関連黄斑症は、血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状をさらに含むことができ、血管関連黄斑症の１つ以上の症状は、黄斑変性症、加齢黄斑変性症、心細小血管障害、Ｓｔａｒｇａｒｄｔ病、弾性線維性仮性黄色腫（ＰＸＥ）、Ａｌａｇｉｌｌｅ症候群、皮質下白質脳症、子癇前症、高血圧、真性糖尿病、心筋虚血、動脈瘤、自己免疫疾患または感染病原体による血管炎、深部静脈血栓症、リンパ浮腫、静脈瘤、末梢動脈疾患、腎動脈疾患、Ｒａｙｎａｕｄ病、バージャー病、末梢静脈疾患、静脈血餅、アテローム性動脈硬化、動脈硬化症、細動脈硬化、冠動脈疾患、狭心症、うっ血性心不全、動脈の硬化、血栓性または塞栓性脳卒中、または心筋梗塞である。
【０１１８】
さらなる態様では、本明細書で記載される方法は、網膜動脈または静脈の直径の比を決定することをさらに含むことができ、約０．６０〜約１．４８の網膜動脈（Ａ）または静脈（Ｖ）の直径の比は、血管関連黄斑症、重篤なまたは後期黄斑症、または異常脈絡毛細管小葉を有するまたは発症する対象のリスクを予測することができる。
【０１１９】
血管関連黄斑症を有する対象を診断するための方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象から得た試料において、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、またはＣＦＨ遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含み、１つ以上のＳＮＰは、（ｉ）ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１０４９３３１、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ２６７２５８７、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ３７５０８４８、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ１０６１１７０、またはＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ８００２９２、または（ｉｉ）（ｉ）のＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰであり、よって、（ｉ）または（ｉｉ）におけるＳＮＰの１つ以上のバリアントの存在に基づき対象が診断され、ｒｓ１１２００６３８  ＳＮＰでのＡ、ｒｓ１０４９３３１  ＳＮＰでのＴ、ｒｓ２６７２５８７  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ１０４９０９２４  ＳＮＰでのＴ、ｒｓ３７５０８４８  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ１０６１１７０  ＳＮＰでのＣ、またはｒｓ８００２９２  ＳＮＰでのＧは、血管関連黄斑症、重篤なまたは後期黄斑症、または異常脈絡毛細管小葉を有する対象を診断することができる。１つの態様では、ｒｓ１１２００６３８  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ１０４９３３１  ＳＮＰでのＣ、ｒｓ２６７２５８７  ＳＮＰでのＣ、ｒｓ１０４９０９２４  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ３７５０８４８  ＳＮＰでのＴ、ｒｓ１０６１１７０  ＳＮＰでのＴ、またはｒｓ８００２９２  ＳＮＰでのＡのアイデンティティーの決定は、血管関連黄斑症、重篤なまたは後期黄斑症、または異常脈絡毛細管小葉のない対象を診断することができる。
【０１２０】
対象において血管関連黄斑症、またはその症状を診断する方法が本明細書で記載され、この方法は、対象において、表１で特定される１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含む。
【０１２１】
対象において血管関連黄斑症、またはその症状を診断する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象において、ＨＴＲＡ１またはＡＭＲＳ２遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含む。例えば、ＳＮＰとしては、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８およびＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４が挙げられるが、それらに限定されず、ＨＴＲＡ１  ＳＮＰでのＡアレルおよびＡＲＭＳ２  ＳＮＰでのＴアレルは血管関連黄斑症の存在を示す。
【０１２２】
対象において、血管関連黄斑症、またはその症状を診断する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象において、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８およびＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４のアイデンティティーを決定することを含み、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８でのＡアレルおよびＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４でのＴアレルは、血管関連黄斑症、またはその症状の存在を示す。
【０１２３】
加えて、対象において血管関連黄斑症、またはその症状を診断する方法が本明細書で記載され、この方法は、対象においてＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含む。例えば、ＳＮＰとしては、ｒｓ１０４９３３１、ｒｓ３７５０８４８、またはｒｓ２６７２５８７が挙げられるが、それらに限定されず、１つ以上のｒｓ１０４９３３１、ｒｓ３７５０８４８、またはｒｓ２６７２５８７の存在は血管関連黄斑症、またはその症状の存在を示す。
【０１２４】
１つの態様では、対象において血管関連黄斑症、またはその症状を診断することは、本明細書で記載されるＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２多型と連鎖不平衡にあるＳＮＰ、または複数のＳＮＰを検出することを含むことができる。
【０１２５】
さらに、対象において血管関連黄斑症、またはその症状を診断する方法が本明細書で記載され、この方法は、対象において、１つ以上の異常脈絡毛細管小葉関連ＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含む。本明細書では、異常脈絡毛細管小葉関連ＳＮＰは、異常脈絡毛細管小葉の存在、またはこれを発症する可能性を示すＳＮＰを意味する。例えば、ＳＮＰとしては、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８  ＳＮＰでのＡアレル、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４  ＳＮＰでのＴアレル、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ１０６１１７０でのＣアレル、またはＣ３遺伝子におけるｒｓ２２３０１９９  ＳＮＰでのＧアレルが挙げられるが、それらに限定されず、１つ以上の異常脈絡毛細管小葉関連ＳＮＰの存在は、血管関連黄斑症、またはその症状の存在を示す。
【０１２６】
１つの態様では、「異常脈絡毛細管小葉関連ＳＮＰ」はまた本明細書で記載されるＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、ＣＦＨ、またはＣ３多型と連鎖不平衡にある１つまたは複数のＳＮＰを意味することができる。異常脈絡毛細管小葉関連ＳＮＰの例としては、表１および図３９〜４２で列挙されるＳＮＰが挙げられるが、それらに限定されない。
【０１２７】
対象の核酸試料において１つ以上のＳＮＰを検出するためのアッセイを含むキットもまた本明細書で記載され、ＳＮＰは（ｉ）ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１０４９３３１、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ２６７２５８７、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ３７５０８４８、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ１０６１１７０、またはＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ８００２９２；（ｉｉ）（ｉ）のＳＮＰの組み合わせ；あるいは（ｉｉｉ）（ｉ）のＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰである。１つの態様では、キットは、アッセイ結果を血管関連黄斑症、重篤なまたは後期黄斑症、または異常脈絡毛細管小葉を有するまたは発症する対象のリスクと相関させるための説明書をさらに含むことができる。
【０１２８】
【表１】
2014515012.tif 000002
2014515012.tif 000003
【０１２９】
本明細書では、「連鎖」は、遺伝子、アレル、座位または遺伝子マーカーの、同じ染色体上のそれらの位置の結果として共に受け継がれる傾向を説明する。連鎖は、２つの遺伝子、アレル、座位または遺伝子マーカー間の組換えパーセントにより測定することができる。典型的には、互いの５０センチモルガン（ｃＭ）距離内で起こる座位は連鎖する。連鎖マーカーは、同じ遺伝子または遺伝子クラスター内で起こり得る。本明細書では、「連鎖不平衡」は、２つ以上の座位のアレルの非ランダム連関であり、必ずしも同じ染色体上にない。連鎖と同じでなく、これは、染色体上の２つ以上の座位の連関を説明し、それらの間には制限された組換えが存在する。連鎖不平衡は、アレルまたは遺伝子マーカーのいくつかの組み合わせが、それらの頻度に基づき、アレルからのハプロタイプのランダム形成から予測されるものより、集団においてより多くの、またはより少ない頻度で起こる状況を説明する。異なる座位の多型間の非ランダム連関は連鎖不平衡（ＬＤ）度により測定される。連鎖不平衡レベルは、多くの要因、例えば遺伝子連鎖、組換え率、突然変異率、ランダム・ドリフト、非ランダム交配、および集団構造により影響され得る。よって、「連鎖不平衡」または「アレル連関」は、集団における任意の特定のアレル頻度の可能性により予測されるものよりも、より頻度の高い、特定のアレルまたは遺伝子マーカーの別の特定のアレルまたは遺伝子マーカーとの非ランダム連関を意味する。情報価値のあるマーカー、例えば本明細書で記載されるＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２  ＳＮＰの１つと連鎖不平衡にあるマーカーは、血管関連黄斑症、またはその症状に対する感受性を検出するのに有用であり得る。本明細書で記載されるリスク、保護、または他の情報価値のあるＳＮＰまたは遺伝子マーカーと連鎖不平衡にあるＳＮＰは、「代理」または「代替」ＳＮＰと呼ばれ得る。代理ＳＮＰは、本明細書で記載されるリスク、保護、または他の情報価値のあるＳＮＰまたは遺伝子マーカーと少なくとも５０％、６０％、または７０％連鎖不平衡にある可能性があり、１つの態様では少なくとも約８０％、９０％、別の態様では９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または約１００％、本明細書で記載されるリスク、保護、または他の情報価値のあるＳＮＰまたは遺伝子マーカーとＬＤにある。
【０１３０】
公的に入手可能なデータベース例えば、ＨａｐＭａｐデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｆｔｐ．ｈａｐｍａｐ．ｏｒｇ／ｌｄ＿ｄａｔａ／ｌａｔｅｓｔ／）およびＨａｐｌｏｖｉｅｗ（Ｂａｒｒｅｔｔ，  Ｊ．  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２１，  ２６３  （２００５））を使用して、２つのＳＮＰ間の連鎖不平衡を計算することができる。疾患対対照集団における特定されたアレルの頻度は、本明細書で記載される方法を使用して決定することができる。統計分析を使用して、２つのＳＮＰ間の非ランダム連関の有意性を決定することができる（例えば、Ｈａｒｄｙ−Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡、遺伝子型尤度比（遺伝子型ｐ値）、カイ二乗分析、フィッシャー直接確率法）。２つのＳＮＰ間の統計的に有意な非ランダム連関は、それらが連鎖不平衡にあること、および１つのＳＮＰが第２のＳＮＰの代理として機能することができることを示す。
【０１３１】
加えて、対象が血管関連黄斑症、またはその症状を発症するリスクを決定する方法が本明細書で記載され、この方法は、対象において、１つ以上の異常脈絡毛細管小葉関連ＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含み、これらとしては、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ８００２９２  ＳＮＰでのＡアレル、ＣＦＢ遺伝子におけるｒｓ６４１１５３  ＳＮＰでのＡアレル、またはＣＦＢ遺伝子におけるｒｓ４１５１６６７  ＳＮＰでのＡアレルが挙げられるが、それらに限定されず、１つ以上のＳＮＰの存在は、血管関連黄斑症、またはその症状を発症するリスクの減少を示す。
【０１３２】
さらに、対象が血管関連黄斑症、またはその症状を発症するリスクを決定する方法が本明細書で記載され、この方法は、対象において、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８  ＳＮＰでのＧアレル、またはＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４  ＳＮＰでのＴアレルのアイデンティティーを決定することを含み、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８  ＳＮＰでのＧアレルおよびＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４  ＳＮＰでのＴアレルは、血管関連黄斑症、またはその症状を発症するリスクの減少を示す
【０１３３】
１つの態様では、本明細書で記載される方法は、網膜動脈（Ａ）または静脈（Ｖ）の直径の比を決定することをさらに含むことができ、約０．６０〜約１．４８の直径の比（Ａ：Ｖ）はさらに、血管関連黄斑症、またはその症状の診断を示す。さらなる態様では、約０．６０〜約１．４８の直径の比（Ａ：Ｖ）はまた、対象が異常脈絡毛細管小葉を有する可能性があることを示し得る。さらなる態様では、約０．８の直径の比（Ａ：Ｖ）はさらに、血管関連黄斑症、またはその症状の診断を示すことができ、あるいは対象が異常脈絡毛細管小葉を有する可能性があることを示し得る。さらに別の態様では、正常でない動脈および静脈の個々の測定を決定することは、血管関連黄斑症、またはその症状の診断を示すことができ、あるいは対象が異常脈絡毛細管小葉を有する可能性があることを示し得る。さらに別の態様では、血管関連黄斑症、またはその症状の診断、あるいは異常脈絡毛細管小葉の診断は、例えば、眼窩血管、頸動脈、眼動脈、または後毛様体動脈において血流を測定することにより行うことができる。血流は当技術分野で知られているドップラーまたは他の技術を使用して測定することができる。さらに別の態様では、血管関連黄斑症、またはその症状の診断、あるいは異常脈絡毛細管小葉の診断は、眼窩内の血管構造を、例えば、３Ｔ  ＭＲＩまたは当技術分野で知られている他の技術を使用して評価することによりすることができる。
【０１３４】
ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における多型部位が血管関連黄斑症、またはその症状と関連するという発見は、多くの特定応用を有し、例えば、血管関連黄斑症、またはその症状を発症するリスク確認するための個体のスクリーニング、および血管関連黄斑症、またはその症状に苦しむ、またはこれを発症するリスクが増加した個体に対する新規および最適治療アプローチの特定が挙げられるがそれらに限定されない。特定のメカニズムに限定されることを意図しないが、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における多型は、違った様式で個体の表現型の一因となり得る。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２のタンパク質コード領域内で起こる多型は、タンパク質構造および／または機能に影響することにより表現型の一因となり得る。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２の非コード領域で起こる多型は、複製、転写および／または翻訳へのそれらの影響を介して間接的に表現型的影響を与え得る。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子におけるある一定の多型は、個体に、因果的に血管関連黄斑症、またはその症状と関連する明確な突然変異を生じやすくする可能性がある。また、上記のように、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における多型は、隣接遺伝子（例えば、限定はされないが、ＰＬＥＫＨＡ１）におけるバリエーションと関連し得る。隣接遺伝子におけるバリエーションは、コード化タンパク質の発現または形態の変化を引き起こし、保有者において有害または保護効果を有する可能性がある。
【０１３５】
多型は、対象から単離された標的核酸において検出することができる。典型的にはゲノムＤＮＡが分析される。ゲノムＤＮＡのアッセイでは、例えば有核細胞等の、ゲノムＤＮＡまたはＲＮＡを含む実質的にいかなる生物試料も好適である。例えば、本明細書における実施例セクションにおいて記載される実験では、ゲノムＤＮＡは、症例および対照群から収集した末梢血白血球から取得した（ＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｘｉ  キット、Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、Ｃａｌｉｆ．）。他の好適な試料としては、以下が挙げられるが、それらに限定されない：唾液、頬擦過物、網膜、腎臓または肝臓または他の器官または組織の生検；皮膚生検；羊水またはＣＮＳ試料；など。１つの態様では、ＲＮＡまたはｃＤＮＡがアッセイされ得る。１つの態様では、アッセイはバリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２タンパク質を検出することができる。診断または他のアッセイにおいて使用するための、患者試料由来の核またはタンパク質の精製または部分精製のための方法は、当技術分野で知られている。
【０１３６】
ＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２遺伝子における多型部位を占める塩基のアイデンティティーは、個体、例えば、分析される患者において、当技術分野で知られているいくつかの方法のいずれかを使用して決定することができる。例えば、限定はされないが、アレル特異的プローブの使用、アレル特異的プライマーの使用、直接配列分析、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動法（ＤＧＧＥ）分析、一本鎖高次構造多型分析多型分析（ＳＳＣＰ）、および変性高速液体クロマトグラフィー（ＤＨＰＬＣ）分析。ＤＮＡにおける多型を検出する他のよく知られた方法としては、以下の使用が挙げられる：分子ビーコン技術（例えば、Ｐｉａｔｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８；  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １６：３５９−６３；  Ｔｙａｇｉ，  ａｎｄ  Ｋｒａｍｅｒ，  １９９６，  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：３０３−３０８；  ａｎｄ  Ｔｙａｇｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １６：４９−５３を参照されたい）、インベーダー技術（例えば、Ｎｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００，  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ３８２６：１１７−１２５および米国特許第６，７０６，４７１号を参照されたい）、核酸配列に基づく増幅（Ｎａｓｂａ）（Ｃｏｍｐｔｏｎ，  １９９１）、Ｓｃｏｒｐｉｏｎ技術（Ｔｈｅｌｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００，  Ｎｕｃ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，  ２８：３７５２−３７６１およびＳｏｌｉｎａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  “Ｄｕｐｌｅｘ  Ｓｃｏｒｐｉｏｎ  ｐｒｉｍｅｒｓ  ｉｎ  ＳＮＰ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  ＦＲＥＴ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”  Ｎｕｃ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，  ２９：２０．）、制限断片長多型（ＲＦＬＰ）分析、など。追加の方法は当業者に明らかである。
【０１３７】
多型を分析するためのアレル特異的プローブの設計および使用は、例えば、Ｓａｉｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８６；  Ｄａｔｔａｇｕｐｔａ，  ＥＰ２３５，７２６号、Ｓａｉｋｉ，  ＷＯ８９／１１５４８号により記載される。簡単に言うと、アレル特異的プローブは、２つのセグメントが異なる多型形態を表す場合、１つの個体由来の標的ＤＮＡのセグメントにハイブリダイズするが、別の個体由来の対応するセグメントにはハイブリダイズしないように設計される。一定のプローブが本質的に、２つのアレルのうちの１つのみにハイブリダイズするように十分ストリンジェントであるハイブリダイゼーション条件が選択される。典型的には、アレル特異的プローブは、多型部位がプローブの中心位置と合致するように、標的ＤＮＡのセグメントにハイブリダイズするように設計することができる。
【０１３８】
アレル特異的プローブは対で使用することができ、対の１つのメンバーは標的配列の基準アレルにハイブリダイズするように設計され、もう一方のメンバーは、バリアントアレルにハイブリダイズするように設計される。プローブのいくつかの対は、同じ標的遺伝子配列内の複数の多型の同時分析のために同じ支持体上に固定化することができる。
【０１３９】
多型の分析のためのアレル特異的プライマーの設計および使用は、例えば、ＷＯ９３／２２４５６号およびＧｉｂｂｓ，  １９８９により記載される。簡単に言うと、アレル特異的プライマーは、多型にオーバーラップする標的ＤＮＡ上の部位にハイブリダイズするように、プライマーが特定のアレル型に完全な相補性を示した場合にのみ、標準ＰＣＲプロトコルによるＤＮＡ増幅を刺激するように設計される。一塩基ミスマッチはＤＮＡ増幅を妨げ、検出可能なＰＣＲ産物が形成されない。この方法は、多型部位がプライマーの極度３’端に位置する場合に最も効果的であり、というのは、この位置は、プライマーからの伸長に対し最も不安定であるからである。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、ゲノムＤＮＡは、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２多型を検出するために使用することができる。ゲノムＤＮＡは、典型的には試料、例えば末梢血試料または組織試料から抽出される。標準方法を使用して、ゲノムＤＮＡを試料から抽出することができ、例えばフェノール抽出である。場合によっては、ゲノムＤＮＡは、市販のキット（例えば、Ｑｉａｇｅｎ、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、Ｃａｌｉｆ．；Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．；またはＧｅｎｔｒａ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、Ｍｉｎｎより）を使用して抽出することができる。
【０１４１】
多型を検出するための他の方法は、対象から得られた試料由来の核酸を増幅すること（例えば、ＨＴＲＡ１特異的プライマーを使用して、個体のＨＴＲＡ１遺伝子のセグメントを増幅すること）および増幅遺伝子を分析することを含むことができる。これは、標準ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ＆ＲＴ−ＰＣＲ）プロトコルまたは当技術分野で知られている他の方法により達成することができる。増幅により、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２アレル特異的オリゴヌクレオチドが生成され得、これらはＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における一塩基多型部位に及ぶ。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２特異的プライマー配列およびＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２アレル特異的オリゴヌクレオチドは、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子のコード（エクソン）または非コード（プロモーター、５’非翻訳、イントロンまたは３’非翻訳）領域から誘導され得る。１つの態様では、全ての対象由来のはゲノムＤＮＡは、末梢血白血球からＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｘｉキット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を用いて単離することができる。ＤＮＡ試料は、ＣＦＨ（Ｉ６２Ｖ、ｒｓ８００２９２；  Ｙ４０２Ｈ、ｒｓ１０６１１７０）、ＨＴＲＡ１（プロモーター、ｒｓ１１２００６３８）、ＡＲＭＳ２（Ａ６９Ｓ、ｒｓ１０４９０９２４）、Ｃ３（Ｒ８０Ｇ、ｒｓ２２３０１９９）、ＣＦＢ（Ｌ９Ｈ、ｒｓ４１５１６６７；Ｒ３２Ｑ、ｒｓ６４１１５３）、Ｃ２（ＩＶＳ１０、ｒｓ５４７１５４；Ｅ３１８Ｄ、ｒｓ９３３２７３９）、またはＡＰＯＥにおけるＳＮＰに対してスクリーニングすることができる。遺伝子型判定は、ＴａｑＭａｎアッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）により、５ｕＬ反応物中１０ｎｇのテンプレートＤＮＡを用いて実施することができる。３８４ウェルサーモサイクラー（ＰＴＣ−２２５、ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）における熱サイクル条件は、最初９５℃で１０分の保持、続いて１５秒９５℃の変性ステップならびに１分６０℃のアニーリングおよび伸長ステップの４０サイクルから構成することができる。プレートは、７９００ＨＴ  Ｆａｓｔ  Ｒｅａｌ−ＴｉｍｅＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に読み取ることができる。
【０１４２】
ＰＣＲを用いて生成された増幅産物は、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動法（ＤＧＧＥ）の使用により分析することができる。異なるアレルは、配列依存性融解特性および溶液中での電気泳動的移動に基づき特定することができる。Ｅｒｌｉｃｈ，  ｅｄ．，  ＰＣＲ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，  Ｃｈａｐｔｅｒ  ７  （Ｗ．Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９２）を参照されたい。
【０１４３】
標的配列のアレルは、一本鎖高次構造多型分析多型（ＳＳＣＰ）分析を用いて区別することができる。異なるアレルは一本鎖ＰＣＲ産物の配列および構造依存性電気泳動的移動に基づき特定することができる（Ｏｒｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９）。増幅ＰＣＲ産物は、標準プロトコルに従い生成させることができ、加熱されるか、別の方法で変性され、一本鎖産物を形成し、これは折り畳まれ、または塩基配列に部分的に依存する２次構造を形成し得る。
【０１４４】
標的配列のアレルは、変性高速液体クロマトグラフィー（ＤＨＰＬＣ）分析を用いて区別することができる。異なるアレルは、一本鎖ＰＣＲ産物のクロマトグラフィー移動における変化により塩基差に基づき特定することができる（Ｆｒｕｅｈ  ａｎｄ  Ｎｏｙｅｒ−Ｗｅｉｄｎｅｒ，  ２００３）。増幅ＰＣＲ産物は、標準プロトコルに従い生成させることができ、加熱され、または別の方法で変性され、一本鎖産物を形成し、これは折り畳まれ、または塩基配列に部分的に依存する２次構造を形成し得る。
【０１４５】
多型の直接配列分析は、当技術分野でよく知られているＤＮＡ配列決定手順を用いて達成することができる。Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  （２ｎｄ  Ｅｄ．，  ＣＳＨＰ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８９）  およびＺｙｓｋｉｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  （Ａｃａｄ．  Ｐｒｅｓｓ，  １９８８）を参照されたい。
【０１４６】
生物試料において多型を検出するため多種多様な他の方法が当技術分野で知られている。例えば、Ｕｌｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  “Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｓｉｎｇｌｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ”米国特許第６，６３２，６０６号；  Ｓｈｉ，  ２００２，  “Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ  ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ：  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ｉｎ  ｄｒｕｇ  ｔａｒｇｅｔｓ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｇｅｎｅｓ”  Ａｍ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ  ２：１９７−２０５；  Ｋｗｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  “Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｉｎｇｌｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ”  Ｃｕｒｒ  Ｉｓｓｕｅｓ  Ｂｉｏｌ．  ５：４３−６０）を参照されたい。
【０１４７】
ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２多型部位に隣接する、またはこれに及ぶ核酸、疾患多型部位が本明細書で記載される。核酸はＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２多型を検出するために、プローブまたはプライマー（インベーダー、分子ビーコンおよび他の蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）型プローブを含む）として使用することができる。
【０１４８】
全長ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むベクターもまた本明細書で記載される。ベクターはまた、ＨＴＲＡ１ポリペプチドのサブドメインをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。そのため、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドは、ＮＣＢＩタンパク質受入番号ＮＰ＿００２７６６またはＮＰ＿００１０９３１３７、またはそれらのバリアント（例えば、リスクバリアントまたは保護バリアント）で見出されるアミノ酸配列を含むことができ、全長型または切断型とすることができる。核酸はＤＮＡまたはＲＮＡであってもよく、一本鎖または二本鎖であってもよい。
【０１４９】
いくつかの核酸は、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドの全長、バリアント形態をコードすることができる。バリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドは、ＮＰ＿００２７６６．１またはＮＰ＿００１０９３１３７．１と、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子において知られている任意の非同義多型位置の１つを含むコドンによりコードされるアミノ酸において異なり得る。１つの態様では、バリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドは、ＮＰ＿００２７６６．１またはＮＰ＿００１０９３１３７．１と、本明細書で記載される非同義多型位置の１つを含むコドンによりコードされるアミノ酸において異なる。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における複数の多型部位で別のアミノ酸を有するバリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドをコードするバリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子を生成させることができることが理解される。
【０１５０】
組換えタンパク質およびペプチドの生成のための発現ベクターは当技術分野でよく知られている（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい）。そのような発現ベクターは、調節エレメント、例えばプロモーターに連鎖されたＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドをコードする核酸配列を含むことができ、調節エレメントはプロモーターはＤＮＡの転写を駆動し、原核生物（例えば、大腸菌）および真核生物（例えば、酵母、昆虫または哺乳動物細胞）宿主における発現のために適合される。バリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドは、バリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子がプロモーターに動作可能に連鎖される発現ベクターにおいて発現させることができる。プロモーターは、哺乳動物細胞における発現のための真核生物プロモーターとすることができる。転写制御配列は、異種プロモーターおよび任意でエンハンサーを含むことができ、これは宿主細胞により認識される。市販の発現ベクターを使用することができる。発現ベクターとしては、宿主認識複製系、増幅可能な遺伝子、選択可能なマーカー、宿主ゲノムへの挿入のために有用な宿主配列、などが挙げられる。例えば、限定はされないが、ＨＴＲＡ１−Ｓ３２８Ａプラスミドは、ＰＣＲにより、オリゴヌクレオチドをテンプレートとして使用して合成することができ、大腸菌菌体における発現のために最適化されたコドンしてヒトＨｔｒＡ１アミノ酸配列が生成される。配列はＳ３２８Ａ突然変異を含むことができる。ＰＣＲ産物は、ＰＣＲ産物をｐＥＴ−２１ａ（＋）プラスミド中に連結させるのに使用することができる末端に、ＮｄｅＩおよびＸｈｏＩ制限部位を含むことができる。
【０１５１】
全長ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドをコードするベクターを含む単離宿主細胞もまた本明細書で記載される。宿主細胞はまた、ＨＴＲＡ１ポリペプチドのサブドメインをコードするベクターを含むことができる。好適は宿主細胞としては、細菌、例えば大腸菌、酵母、糸状菌、昆虫細胞、および哺乳動物細胞（これらは典型的には不死化される）、例えばマウス、ハムスター、ヒト、およびサル細胞株、ならびにそれらの誘導体が挙げられる。宿主細胞はＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子産物をプロセシングすることができ、適切にプロセシングされた、成熟ポリペプチドを生成させる。そのようなプロセシングとしては、グリコシル化、ユビキチン化、ジスルフィド結合形成、などが挙げられる。
【０１５２】
ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子を含む発現コンストラクトは、特定の構成および標的宿主によって、宿主細胞に導入することができる。適切な方法、および原核生物および真核生物の両方の宿主細胞が当技術分野でよく知られている。例えば、全長ヒトＨＴＲＡ１およびＨＴＲＡ１のサブドメインは、ＮＥＢ  Ｔ７  Ｅｘｐｒｅｓｓ  ｌｙｓＹ細胞において発現され、全長ヒトＡＲＭＳ２もまたＮＥＢ  Ｔ７  Ｅｘｐｒｅｓｓ  ｌｙｓＹ細胞において発現された。Ａｒｍｓ２タンパク質を発現するコンストラクトは、ＢＬ２１−ＡＩ（商標）Ｏｎｅ  Ｓｈｏｔ（登録商標）ケミカルコンピテント大腸菌（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃Ｃ６０７００３）を用いて形質転換および発現させることができる。天然折り畳みがジスルフィド結合を含むタンパク質を産生するコンストラクト、例えば、ヌクレオチド配列がＩＧＦＢＰ  および／または  Ｋａｚａｌサブドメインをコードする全てのＨｔｒＡ１コンストラクトは、Ｔ７プロモーターを介するタンパク質発現を駆動するコンストラクトのための、ＮＥＢ  ＳＨｕｆｆｌｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓコンピテント大腸菌（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂ  ＃Ｃ３０２８Ｈ）またはＮＥＢ  ＳＨｕｆｆｌｅ  Ｔ７  Ｅｘｐｒｅｓｓコンピテント大腸菌（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ  ＃Ｃ３０２６Ｈ）のいずれかを使用して発現させることができる。
【０１５３】
バリアントを含む、全長ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むアデノウイルスベクターもまた本明細書で記載される。１つの態様では、全長またはバリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドをコードする感染性アデノウイルス粒子が本明細書で記載される。発明はさらに、その中に、全長またはバリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドをコードするアデノウイルス粒子を含む単離宿主細胞を含む。好適な宿主細胞としては、哺乳動物細胞、例えばマウス、ハムスター、ヒト、およびサル細胞株、およびそれらの誘導体が挙げられる。宿主細胞は、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子産物をプロセシングすることができ、適切にプロセシングされた、成熟ポリペプチドを生成する。そのようなプロセシングとしては、グリコシル化、ユビキチン化、ジスルフィド結合形成、などが挙げられる。アデノウイルスコンストラクトは、哺乳動物系においてＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドの発現を可能にすることができる。１つの態様では、マウスはアデノウイルス粒子に感染させることができ、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドまたはそのバリアントは、血管関連黄斑症、またはその症状と関連する表現型を駆動するために発現され得る。
【０１５４】
全長ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドのアミノ酸配列を含む、精製または単離タンパク質もまた本明細書で記載される。１つの態様では、精製または単離タンパク質は、ＨＴＲＡ１ポリペプチドサブドメインのアミノ酸配列を含むことができる。タンパク質を特定し、対象のＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における多型を特徴づけるためにタンパク質アッセイを実施することができる。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２タンパク質の検出のために適合させることができる方法はよく知られている。これらの方法としては、分析生物化学法、例えば電気泳動（キャピラリー電気泳動および二次元電気泳動を含む）、クロマトグラフィー法、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、高拡散クロマトグラフィー、質量分析、および様々な免疫学的方法、例えば流体またはゲル沈降素反応、免疫拡散法（一重または二重）、免疫電気泳動、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光アッセイ、ウエスタンブロッティングなどが挙げられる。例えば、限定はされないが、発明の実施に好適な多くの確立した免疫学的結合アッセイの形式が知られている（例えば、Ｈａｒｌｏｗ，  Ｅ．；  Ｌａｎｅ，  Ｄ．  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ．  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．：  ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；  １９８８；およびＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００４）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  ＹｏｒｋＮ．Ｙを参照されたい。アッセイは競合的または非競合的とすることができる。典型的には、免疫学的結合アッセイ（またはイムノアッセイ）は、分析物に特異的に結合する、しばしば、これを固定化するために「捕捉剤」を使用する。１つの態様では、捕捉剤は、バリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドまたは部分配列に特異的に結合する部分とすることができる。結合タンパク質は、例えば、検出可能に標識された抗ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２抗体を使用して検出することができる。１つの態様では、抗体の少なくとも１つがＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドのバリアント型に特異的である。１つの態様では、バリアントポリペプチドは免疫ブロット（ウエスタンブロット）の形式を用いて検出することができる。
【０１５５】
ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドに結合する精製ポリクローナル抗体またはその断片もまた本明細書で記載される。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドに結合する単離抗体またはその断片もまた本明細書で記載される。
【０１５６】
ＨＴＲＡ１の異なるエピトープに結合する抗体が本明細書で記載され、例えば、ＨＴＲＡ１のＩＧＦＢＰ（インスリン様増殖因子結合タンパク質ドメイン）、Ｋａｚａｌ、リンカー−プロテアーゼ、プロテアーゼ−リンカー、またはＰＤＺ（シナプス後膜肥厚タンパク質（ＰＳＤ９５）、ショウジョウバエディスクラージ腫瘍抑制因子（Ｄｌｇ１）、および閉鎖帯−１タンパク質（Ｚｏ−１））ドメインに結合する抗体が挙げられるがそれらに限定されない。
【０１５７】
例えば、ＨＴＲＡ１の異なるアミノ酸３６〜４９、９６〜１０６、１１９〜１２９、１３６〜１４８、１５５〜１６８、３６７〜３７９、４１９〜４３１に結合する抗体が本明細書で記載される（ＮＣＢＩ遺伝子受入番号５６５４を参照されたい）。
【０１５８】
ＡＲＭＳ２にハイブリダイズする抗体もまた本明細書で記載され、例えばＡＲＭＳ２のアミノ酸４２〜５８に結合する抗体が挙げられるがそれらに限定されない（ＮＣＢＩ遺伝子受入番号３８７７１５を参照されたい）。
【０１５９】
ＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．１、２、３、４、５、６、７、または８の１つ以上にハイブリダイズする抗体もまた本明細書で記載される。
【０１６０】
本明細書で記載される抗体は、参照ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドまたはバリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチド（１つ以上の非同義一塩基多型（ＳＮＰ）がＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２コード領域に存在する）を認識し、これにハイブリダイズすることができる。１つの態様では、抗体は、バリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドまたはその断片に特異的にハイブリダイズすることができるが、多型部位にバリエーションのないＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドにはハイブリダイズしない。抗体はポリクローナルとすることができ、標準プロトコルに従い生成させることができる。抗体は、好適な動物に野生型またはバリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチド、またはその断片、またはその合成ペプチド断片を注射することにより生成させることができる。
【０１６１】
対象においてＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２を検出する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２に特異的にハイブリダイズする抗体を使用してＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２レベルを検出することを含む。ポリペプチドに特異的にハイブリダイズする抗体を特定する方法は、当技術分野でよく知られている。方法、例えば抗体スクリーニングおよびサブトラクション方法に対しては；  Ｈａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ，  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８８）；  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （Ｊ．  Ｅ．  Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．，  １９９９，  ２００５からの補足を含む）；  Ｇｏｄｉｎｇ，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  （２ｄ  ｅｄ．）  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８６）；  Ｂｕｒｉｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  “Ａ  ｎｅｗ  ｓｕｂｔｒａｃｔｉｏｎ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ  ｆｏｒ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｒａｒｅ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｉｅｓ  ｆｒｏｍ  ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ”  Ｒｅｓ  Ｖｉｒｏｌ．  １４９（５）：３２７−３０；  Ａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４，  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ  ａｎｔｉ−Ｃ５ａ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｒｏｍ  ａ  ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ  ｐｈａｇｅ  ｍｏｎｏｖａｌｅｎｔ  Ｆａｂ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｌｉｂｒａｒｙ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５２（９）：４５７２−８１；  Ｓｈｉｎｏｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇ  ｒａｒｅ  ａｎｄ  ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｅｐｉｔｏｐｅｓ  ｉｎ  ｐｌａｎｔ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｃｅｌｌ  ｗａｌｌｓ  ｂｙ  ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｓｕｂｔｒａｃｔｉｏｎ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２６４（１−２）：１８７−９４を参照されたい。免疫化またはスクリーニングは、全長タンパク質に対してまたは、その代わりに（しばしばより便宜的に）、バリアントおよび野生型形態間で異なることが知られているエピトープを含むペプチドまたはポリペプチド断片に対して向けられ得る。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドに特異的なポリクローナル抗体は、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２のバリアント形態の検出のための診断アッセイにおいて、または医薬組成物における活性成分として有用であり得る。
【０１６２】
ヒトＨＴＲＡ１を過剰発現するトランスジェニック非ヒト動物を含む動物モデルもまた本明細書で記載される。１つの態様では、マウスＲＰＥにおいてヒトＨＴＲＡ１を過剰発現するトランスジェニックマウスが本明細書で記載される。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ノックアウトを含む動物モデルもまた本明細書で記載され、ここで動物はマウスである。トランスジェニック非ヒト動物は、不活化された内在性ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子のアレルの１つまたは両方を有し得る。さらなる態様では、動物の１つ以上の細胞は、ＲＰＥ特異的ヒト卵黄様黄斑変性症２プロモーターに操作可能に結合された組換えＨＴＲＡ１ポリペプチドをコードする核酸を含むことができる。外因性バリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子の発現は、標準プロトコルに従い、遺伝子をプロモーター、任意でエンハンサーに操作可能に結合させ、その後、コンストラクトを接合体にマイクロインジェクトすることにより達成することができる。“Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，”  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙを参照されたい。内在性ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子は、当技術分野で知られている方法により不活化させることができる（Ｃａｐｅｃｃｈｉ，  １９８９）。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２欠損マウスは、外因性ヒトバリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２の導入のために使用可能である。ヒトまたは非ヒトバリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドを発現するトランスジェニック動物は、有用な薬物スクリーニング系を提供することができ、血管関連黄斑症、またはその症状、および他の関連疾患のモデルとして機能することができる。トランスジェニック動物はまた、本明細書で記載される組換えＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２タンパク質の生成のために使用され得る（例えば、米国特許第６，０６６，７２５号；６，０１３，８５７号；５，９９４，６１６号；および５，９５９，１７１号；  Ｌｉｌｌｉｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５；  Ｈｏｕｄｅｂｉｎｅ，  ２０００を参照されたい）。
【０１６３】
本明細書で記載される、リスク、保護、またはそれ以外で情報価値のあるＳＮＰまたは遺伝子マーカー、例えば、限定はされないが、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における多型部位と連鎖不平衡にある他の遺伝子における多型部位をスクリーニングする方法もまた本明細書で記載される。これらの方法は、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における多型部位と連鎖不平衡にある遺伝子における多型部位を特定することを含むことができ、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における多型部位の多型形態は、血管関連黄斑症、またはその症状と関連し（例えば、リスクの増加または減少）、ならびに、個体の集団においてハプロタイプを決定し、連鎖多型部位が、血管関連黄斑症表現型と相関するＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子の多型形態と連鎖不平衡にある多型形態かどうかを示すことを含むことができる。
【０１６４】
ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における多型、例えば本明細書で記載されるものは、対象となる形質と関連する遺伝子座と形質と関連しない多型マーカーの間の物理的連鎖を確立するのに使用することができるが、形質の原因となる遺伝子座と物理的に近接し、これと同時分離する。対象となる形質と関連する遺伝子座のマッピングは、当技術分野でよく知られている手順に従い、形質の原因となる遺伝子（複数可）のクローニングを促進する。
【０１６５】
１つの態様では、同年齢の対照群（疾患を有さない個体）と比べて、血管関連黄斑症、またはその症状を有する対象由来の試料において差別的に存在する生物学的化合物、特に、タンパク質、ペプチド、または核酸が本明細書で記載される。別の態様では、同年齢の対照群（疾患を有さない個体）と比べて、血管関連黄斑症、またはその症状を有する対象において差別的に存在し得る生物学的状態、例えば、限定はされないが、子癇前症、高血圧、脳卒中、または心筋梗塞が本明細書で記載される。そのため、これらのタンパク質または状態は、血管関連黄斑症、またはその症状と関連し得、血管関連黄斑症関連バイオマーカーまたはバイオマーカーと呼ばれる。別の態様では、これらのタンパク質または状態は、血管関連黄斑症の症状、例えば小血管血管疾患と関連し得、小血管血管疾患関連バイオマーカーと呼ばれる。さらに別の態様では、これらのタンパク質または状態は、異常脈絡毛細管小葉の存在またはこれを発症するリスクと関連し得、異常脈絡毛細管小葉関連バイオマーカーと呼ばれる。これらのバイオマーカーは、疾患を有さない個体と比べて、血管関連黄斑症、またはその症状を有する個体において異なるレベルで存在し得る。これらのバイオマーカーは、血管関連黄斑症、またはその症状を有する個体において、健康な個体に比べて上昇または減少したレベルで存在し得る。血管関連黄斑症、またはその症状を有する個体において、同年齢の対照個体に比べ異なるレベルで存在することが示されている例となるバイオマーカーはＨＴＲＡ１および／またはＡＲＭＳ２である。そのため、対象においてＨＴＲＡ１および／またはＡＲＭＳ２発現レベルを決定する方法が本明細書で記載される。本明細書で記載される方法の実施において、バイオマーカーは、個体の試料、好ましくは流体試料中で得ることができる。バイオマーカーは、個体の唾液、頬擦過物、網膜、腎臓もしくは肝臓または他の器官または組織の生検；皮膚生検；羊水またはＣＮＳ試料；などの試料中で選択的に得られる。
【０１６６】
本明細書では、「バイオマーカー」という用語は、血管関連黄斑症、またはその症状を有する対象由来の試料中に、同年齢の対照群に比べ、異なるレベルで見出されるタンパク質を指すことができる。「バイオマーカー」という用語はまた、核酸配列、例えばＤＮＡまたはＲＮＡ配列、例えば本明細書で記載されるＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２核酸配列を指すことができる。
【０１６７】
本明細書で記載されるバイオマーカーは発明のバリアントまたはＳＮＰの有無に関する情報を提供する任意の形態をとることができる。例えば、開示されるバイオマーカーは、核酸分子、例えばＤＮＡまたはＲＮＡ分子、ポリペプチド、または抗体とすることができるが、これらに限定されない。
【０１６８】
「レベル」という用語は、個体から得られた試料中のバイオマーカーの量を示す。バイオマーカーの量は、当技術分野で知られている任意の方法により決定することができ、バイオマーカーの性質に部分的に依存する（例えば、電気泳動、例えばキャピラリー電気泳動、１および２次元電気泳動、２次元ディファレンスゲル電気泳動ＤＩＧＥ、その後のＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量分析、クロマトグラフィー法、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、高拡散クロマトグラフィー、質量分析（ＭＳ）、様々な免疫学的方法、例えば流体またはゲル沈降素反応、一重または二重免疫拡散法、免疫電気泳動、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光アッセイ、ウエスタンブロッティングなど、および酵素または機能に基づく活性アッセイ）。バイオマーカーの量は、絶対的に決定される必要はなく、相対的に決定することができることが理解される。例えば、バイオマーカーの量は、試料中のその濃度により、バイオマーカーに結合する抗体の濃度により、またはバイオマーカーの機能活性（すなわち、結合または酵素活性）により表すことができる。
【０１６９】
バイオマーカー（複数可）のレベル（複数可）は、単一のバイオマーカーまたはバイオマーカーの「組」に対して、上記のように決定することができる。バイオマーカーの組は、例えば、限定はされないが、共通の特性、例えば血管関連黄斑症患者における、対照に比べて上昇したレベルでのそれらの存在により、血管関連黄斑症患者における、対照に比べて減少したレベルでのそれらの存在により、血管関連黄斑症患者と対照の間でのレベルの比および差により（例えば、１．２５〜２倍の間の差、２〜３倍の間の差、３〜５倍の間の差、および少なくとも５倍の差）、または機能により、グループ化された１を超えるバイオマーカーの群を示す。
【０１７０】
本発明のバイオマーカーのレベルと関連する「差」という用語は、統計的に異なる差を示す。例えば、限定はされないが、期待が＜０．０５である場合、スチューデントｔ検定を使用して決定されるｐ値が＜０．０５である場合、またはスチューデントｔ検定を使用して決定されるｐ値が＜０．１である場合、差は統計的に異なる。血管関連黄斑症、またはその症状を有する個体と対照個体または集団の間のバイオマーカーのレベルの差は、例えば、限定はされないが、少なくとも１０％異なる（１．１０倍）、少なくとも２５％異なる（１．２５倍）、少なくとも５０％異なる（１．５倍）、少なくとも１００％異なる（２倍）、少なくとも２００％異なる（３倍）、少なくとも４００％異なる（５倍）、少なくとも１０倍異なる、少なくとも２０倍異なる、少なくとも５０倍異なる、少なくとも１００倍異なる、少なくとも１５０倍、または少なくとも２００倍異なる可能性がある
【０１７１】
血管関連黄斑症バイオマーカーは、免疫学的アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）、分離に基づく方法（例えば、ゲル電気泳動）、タンパク質に基づく方法（例えば、質量分析）、機能に基づく方法（例えば、酵素または結合活性）、などを含む多くの方法のいずれかにおいて検出することができる。１つの態様では、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２発現レベルを決定することは、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２に特異的に結合する抗体を使用することを含む。他の方法がこの明細書により案内される分野の当業者に知られている。レベルを決定するための特定の方法は、バイオマーカータンパク質が何であるか、および特質に部分的に依存する。１つの態様では、正常またはベースライン値（または範囲）を、バイオマーカー発現レベルに対して確立させることができる。正常レベルは、当業者によく知られている標準方法に従い、生物の任意の特定の集団、副集団、または群に対し決定することができる。一般に、バイオマーカーのベースライン（正常）レベルは、正常（健康）対象から得られた生物試料（例えば、流体、細胞または組織）中のバイオマーカーの量を定量することにより決定することができる。医学において使用される標準統計法の適用により、発現のベースラインレベル、ならびにそのようなベースラインレベルからの有意偏差の決定が可能になる。アッセイ方法は、バイオマーカーの絶対値の測定を、そのように望まれない限り、必ずしも必要としないことが認識されるであろう。というのも、本明細書で記載される方法の多くの適用では相対値で十分であり得るからである。定量化が望ましい場合、遺伝子産物を定量するための実質的に任意の公知の方法が使用できるように試薬が本明細書で記載される。
【０１７２】
１つの態様では、本明細書で記載される１つ以上のバイオマーカー、例えば、限定はされないが、ＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２のレベルを分離し、決定するための方法は、個体から生物試料を取得すること、２次元ディファレンスゲル電気泳動（ＤＩＧＥ）によりバイオマーカーのレベルを決定すること、ＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量分析によりバイオマーカーを特定することを含むことができる。別の態様では、ＤＩＧＥにより分離されたバイオマーカーは、バイオマーカーの公知の分離パターンとＤＩＧＥを用いて比較することにより特定することができる。
【０１７３】
さらなる態様では、本明細書で記載されるバイオマーカー、例えば、限定はされないが、ＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２のレベルを分離し、検出し、決定するための方法は、個体から生物試料を取得すること、タンパク質をクロマトグラフィーにより分離すること、適切な場合、タンパク質をバイオチップ（すなわち、ＳＥＬＤＩプローブの吸着剤）上で捕捉すること、捕捉されたバイオマーカーのレベルを質量分析（すなわち、ＴｏＦ−ＭＳ）により検出し、決定することを含む。
【０１７４】
バイオチップは固体基材を含むことができ、一般に捕捉試薬（吸着剤または親和性試薬とも呼ばれる）を付着させることができる平面を有することができる。しばしば、バイオチップの表面は、複数のアドレス可能な位置を含み、その各々がそれに結合された捕捉試薬を有することができる。
【０１７５】
「タンパク質バイオチップ」は、本明細書では、タンパク質の捕捉のために適合されたバイオチップを示す。タンパク質バイオチップは当業者に知られており、例えば、Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｍｏｎｔ、Ｃａｌｉｆ．）、Ｐａｃｋａｒｄ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｍｅｒｉｄｅｎ，Ｃｏｎｎ．）、Ｚｙｏｍｙｘ  （Ｈａｙｗａｒｄ、Ｃａｌｉｆ．）、Ｐｈｙｌｏｓ  （Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ、Ｍａｓｓ．）およびＢｉａｃｏｒｅ  （Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）により生成されたものが挙げられるがそれらに限定されない。そのようなタンパク質バイオチップの例は、例えば、米国特許第６，２２５，０４７号、６，３２９，２０９号および５，２４２，８２８号、およびＰＣＴ国際公開第ＷＯ９９／５１７７３号およびＷＯ００／５６９３４号に記載される。
【０１７６】
１つの態様では、発明のバイオマーカーは質量分析（ＭＳ）法により検出することができる。質量分析計の例としては、飛行時間型（ＴｏＦ）、磁場型、四重極フィルタ、イオントラップ、イオンサイクロトロン共鳴、静電型分析計、およびこれらのハイブリッドが挙げられるが、それらに限定されない。
【０１７７】
１つの態様では、質量分析計は、レーザー脱離／イオン化質量分析計とすることができる。レーザー脱離／イオン化質量分析では、分析物（すなわち、タンパク質）が、ＭＳプローブの表面上に置かれ、これは質量分析計のプローブ界面と係合し、分析物にイオン化のためのイオン化エネルギーを提供し、質量分析計に導入させる。レーザー脱離質量分析計は、典型的には紫外線レーザーからであるが、赤外線レーザーからでもよいレーザーエネルギーを使用し、これは分析物を表面から脱離させ、分析物を揮発させ、イオン化させ、よって、これらは質量分析計のイオン光学で利用可能なものとされる。
【０１７８】
本明細書で記載される方法において使用するための質量分析法は、例えば、米国特許第５，７１９，０６０号および６，２２５，０４７号において記載される「表面増強レーザー脱離およびイオン化」または「ＳＥＬＤＩ」とすることができる。ＳＥＬＤＩは脱離／イオン化気相イオン分光法の方法を示し、この場合、分析物（すなわち、バイオマーカーの少なくとも２つ）がＳＥＬＤＩ  ＭＳプローブの表面上に捕捉される。ＳＥＬＤＩのいくつかのバージョンがあり、「アフィニティーキャプチャー質量分析」、「表面増強アフィニティーキャプチャー」、または「ＳＥＡＣ」、「表面増強ニート脱離」または「ＳＥＮＤ」、および「表面増強感光性付着および放出」または「ＳＥＰＡＲ」が挙げられる。
【０１７９】
ＳＥＡＣは、材料と分析物の間の非共有結合性親和性相互作用（すなわち、吸着）により、分析物（すなわち、タンパク質）を捕捉するプローブ表面上の材料を有するプローブの使用を含む。材料は、「吸着剤」、「捕捉試薬」、「親和性試薬」、または「結合部分」と様々に呼ばれる。そのようなプローブは、「吸着剤表面」を有する「親和捕捉プローブ」と呼ばれる。捕捉試薬は、分析物に結合する任意の材料とすることができる。捕捉試薬は、選択表面の基材に直接付着させることができ、あるいは基材は、例えば、共有または配位共有結合を形成する反応を介して捕捉試薬に結合することができる反応部分を有する反応性表面を有することができる。エポキシドおよびカルボジイミダゾ−ルは、タンパク質捕捉試薬、例えば抗体または細胞受容体に共有結合するために使用される反応性部分とすることができる。ニトリロ酢酸およびイミノ二酢酸は、ヒスチジン含有ペプチドと非共有結合的に相互作用する金属イオンに結合するキレート剤として機能する反応性部分となり得る。吸着剤は、一般にクロマトグラフィー吸着剤と生物特異的吸着剤とに分類され得る。
【０１８０】
「クロマトグラフィー吸着剤」は、クロマトグラフィーにおいて典型的に使用される吸着剤材料を示す。クロマトグラフィー吸着剤としては、例えば、アニオンおよびカチオン交換材料、金属キレート剤（例えば、ニトリロ酢酸またはイミノ二酢酸）、固定化金属キレート、疎水性相互作用吸着剤、親水性相互作用吸着剤、色素、単純な生体分子（例えば、ヌクレオチド、アミノ酸、単純な糖類および脂肪酸）ならびに混合様式の吸着剤（例えば、疎水性引力／静電反発力吸着剤）が挙げられる。
【０１８１】
「生物特異的吸着剤」は、生体分子、例えば、核酸分子（例えば、アプタマー）、ポリペプチド、多糖、脂質、ステロイドまたはこれらの結合体（例えば、糖タンパク質、リポタンパク質、糖脂質、または核酸（例えば、ＤＮＡ）−タンパク質結合体）を含む吸着剤を示す。いくつかの態様では、生物特異的吸着剤は、高分子構造、例えば多タンパク質複合体、生体膜またはウイルスであり得る。生物特異的吸着剤の例としては、抗体、受容体タンパク質および核酸が挙げられるが、それらに限定されない。生物特異的吸着剤は、標的分析物に対して、クロマトグラフィー吸着剤よりも高い特異性を有し得る。ＳＥＬＤＩにおける使用のための吸着剤のさらなる例は、米国特許第６，２２５，０４７号において見出され得る。「生物特異的吸着剤」は、典型的には少なくとも１０-8Ｍの親和性で分析物に結合する吸着剤を指す。
【０１８２】
Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．によって製造されるタンパク質バイオチップは、アドレス可能な位置で表面に結合するクロマトグラフィーもしくは生物特異的吸着剤を有する表面を含む。Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎ  ＰＲＯＴＥＩＮＣＨＩＰアレイとしては、以下が挙げられる：ＮＰ２０（親水性）；Ｈ４およびＨＳＯ（疎水性）；ＳＡＸ２、Ｑ１０およびＬＳＡＸ３０（アニオン交換）；ＷＣＸ２、ＣＭ１０およびＬＷＣＸ３０（カチオン交換）；ＩＭＡＣ３、ＩＭＡＣ３０およびＩＭＡＣ４０（金属キレート）；ならびにＰＳ１０、ＰＳ２０（カルボジイミダゾール、エポキシドを有する反応性の表面）およびＰＧ２０（カルボジイミダゾールを介して結合したタンパク質Ｇ）。疎水性ＰＲＯＴＥＩＮＣＨＩＰアレイは、イソプロピルまたはノニルフェノキシ−ポリ（エチレングリコール）メタクリレート官能基を有する。アニオン交換ＰＲＯＴＥＩＮＣＨＩＰアレイは、第四級アンモニウム官能基を有する。カチオン交換ＰＲＯＴＥＩＮＣＨＩＰアレイは、カルボン酸官能基を有する。固定化金属キレートＰＲＯＴＥＩＮＣＨＩＰアレイは、ニトリロ酢酸官能基を有し、この官能基は遷移金属イオン、例えば銅、ニッケル、亜鉛およびガリウムを、キレート化によって吸着する。事前活性化ＰＲＯＴＥＩＮＣＨＩＰアレイは、カルボジイミダゾールまたはエポキシド官能基を有し、これは、共有結合のためにタンパク質上の基と反応し得る。
【０１８３】
タンパク質バイオチップはさらに米国特許第６，５７９，７１９号および６，５５５，８１３号、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ００／６６２６５号およびＷＯ０３／０４０７００号、米国特許出願第ＵＳ２００３００３２０４３Ａ１号、ＵＳ２００３０２１８１３０Ａ１号およびＵＳ２００５００５９０８６Ａ１号で記載される。
【０１８４】
１つの態様では、吸着剤表面を有するプローブは、試料中に存在するタンパク質を吸着剤に結合させるのに十分な期間、試料と接触させられ得る。インキュベーション期間後、基材は洗浄されて、未結合材料は除去され得る。任意の好適な洗浄溶液が使用され得；例えば、水溶液が使用され得る。タンパク質が吸着剤に結合し続ける程度は、洗浄のストリンジェンシーを調節することにより操作され得る。洗浄溶液の溶離特性は、例えば、ｐＨ、イオン強度、疎水性、カオトロピズムの程度、洗浄剤の強度、温度、などに依存し得る。プローブがＳＥＡＣおよびＳＥＮＤ特性（本明細書で記載される）の両方を有する場合を除き、次いで、結合タンパク質を有する基材にエネルギー吸収分子が適用され得る。
【０１８５】
基材に結合されたバイオマーカーは気相イオン分光分析計、例えばＴｏＦ質量分析計において検出することができる。バイオマーカーは、イオン化源、例えばレーザーによってイオン化させることができ、生成されたイオンはイオン光学アセンブリにより収集することができ、次いで、質量分析計は通過するイオンを分散させ、そして分析することができる。次いで、検出器は検出されたイオンの情報を質量電荷比に変換することができる。バイオマーカーの検出は、シグナル強度の検出を含むことができる。よって、バイオマーカーの量および質量の両方が決定され得る。
【０１８６】
ＳＥＮＤは、プローブ表面に化学的に結合されたエネルギー吸収分子を含むプローブ（「ＳＥＮＤプローブ」）の使用を含む。「エネルギー吸収分子」（ＥＡＭ）という句は、レーザー脱離／イオン化源からのエネルギーを吸収することができ、その後、これと接触している分析物分子の脱離およびイオン化に寄与する分子を示す。ＥＡＭカテゴリーは、しばしば「マトリクス」と呼ばれる、ＭＡＬＤＩにおいて使用される分子を含み、これは、ケイ皮酸誘導体、シナピン酸（ＳＰＡ）、シアノ−ヒドロキシ−ケイ皮酸（ＣＨＣＡ）およびジヒドロキシ安息香酸、フェルラ酸、ならびにヒドロキシアセト−フェノン誘導体によって例示される。１つの態様では、ＥＡＭは、直鎖もしくは架橋ポリマー、例えば、ポリメタクリレート内に組み込まれ得る。例えば、組成物はα−シアノ−４−メタクリロイルオキシケイ皮酸とアクリレートとのコポリマーであり得る。別の態様では、組成物は、α−シアノ−４−メタクリロイルオキシケイ皮酸、アクリレートおよび３−（トリ−エトキシ）シリルプロピルメタクリレートのコポリマーである。別の態様では、組成物は、α−シアノ−４−メタクリロイルオキシケイ皮酸とオクタデシルメタクリレートのコポリマーであり得る（「Ｃ１８  ＳＥＮＤ」）。ＳＥＮＤはさらに、米国特許第６，１２４，１３７号およびＰＣＴ国際公開第ＷＯ０３／６４５９４号において記載される。
【０１８７】
ＳＥＡＣ／ＳＥＮＤは、ＳＥＬＤＩの１バージョンであり、ここで、捕捉試薬およびＥＡＭの両方が試料提示表面に付着され得る。ＳＥＡＣ／ＳＥＮＤプローブは、したがって、アフィニティーキャプチャーおよびイオン化／脱離を介して分析物の捕捉を可能にし、外部マトリクスの適用を必要としない。Ｃ１８  ＳＥＮＤバイオチップは、ＳＥＡＣ／ＳＥＮＤの１バージョンであり、捕捉試薬として機能するＣ１８部分、およびＥＡＭとして機能するＣＨＣＡ部分を含む。
【０１８８】
ＳＥＰＡＲは、分析物に共有結合し、次いで光、例えば、レーザー光への暴露後にこの部分における感光性結合の破壊を介して分析物を放出することができる表面に付着された部分を有するプローブの使用を含む（米国特許第５，７１９，０６０号を参照されたい）。ＳＥＰＡＲおよびＳＥＬＤＩの他の形態は、本明細書で記載される方法にしたがってバイオマーカーまたはバイオマーカープロファイルを検出するように容易に適合され得る。
【０１８９】
別のＭＳ方法において、バイオマーカーは、バイオマーカーに結合するクロマトグラフィー特性を有する樹脂上に最初に捕捉され得る。これは様々な方法を含み得る。例えば、バイオマーカーを、カチオン交換樹脂、例えばＣＭ  ＣＥＲＡＭＩＣ  ＨＹＰＥＲＤ  Ｆ樹脂上に捕捉させることができ、この樹脂を洗浄し、バイオマーカーを溶離させ、溶離したバイオマーカーはＭＡＬＤＩにより検出することができる。また、この方法は、カチオン交換樹脂への適用の前に、アニオン交換樹脂、例えばＱ  ＣＥＲＡＭＩＣ  ＨＹＰＥＲＤ  Ｆ樹脂上での試料の分画を先行させることができる。別の態様では、アニオン交換樹脂上の試料は分画され、ＭＡＬＤＩにより直接検出され得る。さらに別の態様では、バイオマーカーを特定のバイオマーカーに結合する抗体を含むイムノクロマトグラフィー樹脂上で捕捉することができ、樹脂を洗浄して未結合材料を除去することができ、バイオマーカーを樹脂から溶離させ、溶離したバイオマーカーをＭＡＬＤＩまたはＳＥＬＤＩにより検出することができる。
【０１９０】
ＴｏＦ−ＭＳによる分析物の分析は、飛行時間型スペクトルを生成させる。最終的に分析された飛行時間型スペクトルは、典型的には試料に対するイオン化エネルギーの単一のパルスからのシグナルを表さず、むしろ、多くのパルスからのシグナルの合計を表す。このことは、ノイズを低減し、そしてダイナミックレンジを増大する。この飛行時間型データは、その後、ＣｉｐｈｅｒｇｅｎのＰＲＯＴＥＩＮＣＨＩＰソフトウェア、または任意の等価のデータ処理ソフトウェアを用いて、データ処理に供せられ得る。データ処理は質量スペクトルを生成するためのＴＯＦからＭ／Ｚへの変換、機器オフセットを除去するためのベースラインサブトラクションおよび高周波ノイズを低減するための高周波ノイズフィルタリングを含み得る。
【０１９１】
バイオマーカーの脱離および検出により生成されるデータは、プログラム可能なデジタルコンピュータの使用により分析され得る。コンピュータプログラムはデータを分析して、検出されたバイオマーカーの数、検出された各バイオマーカーのシグナルの強度、または決定された分子量を示すことができる。データ分析は、バイオマーカーのシグナル強度を決定するステップおよび所定の統計的分布から逸脱しているデータを除去するステップを含むことができる。例えば、観察されたピークは、各ピークの高さをある参照に対して計算することにより正規化され得る。この参照は、機器および化学物質、例えばエネルギー吸収分子により生成されたバックグラウンドノイズとすることができ、これは、目盛りにおいて０として設定され得る。
【０１９２】
コンピュータは得られたデータを表示のための様々な形式に変換し得る。標準スペクトルが表示され得るが、１つの態様では、ピーク高さおよび質量対電荷情報のみをスペクトル表示から維持することができ、よって、より明瞭な画像が得られ、ほぼ同一の分子量を有するバイオマーカーがより容易に見えるようにできる。別の態様では、２つ以上のスペクトルが比較され、好都合なことに、独特のバイオマーカーおよび試料間で上方または下方制御されたバイオマーカーが強調される。これらの形式のいずれかを用いて、特定のバイオマーカーが試料中に存在するか否かを容易に決定することができる。
【０１９３】
分析は、分析物からのシグナルを表すスペクトル中のピークの特定を含み得る。ピーク選択は、視覚的になされ得るが、ソフトウェアが、例えば、ＣｉｐｈｅｒｇｅｎのＰＲＯＴＥＩＮＣＨＩＰソフトウェアパッケージの一部として利用可能であり、これはピークの検出を自動化することができる。一般に、このソフトウェアは、選択された閾値を超えるシグナル対ノイズ比を有するシグナルを特定し、ピークシグナルの中心におけるピークの質量をラベリングすることにより機能する。１つの態様では、多くのスペクトルが比較され、質量スペクトルのある選択されたパーセンテージで存在する同一のピークを特定する。このソフトウェアの１つのバージョンは、所定の質量範囲内の様々なスペクトルで現れる全てのピークをクラスター化し、質量（Ｍ／Ｚ）クラスターの中央点付近の全てのピークに対して質量（Ｍ／Ｚ）を割り当てる。
【０１９４】
データを分析するために使用されるソフトウェアは、シグナルの分析にアルゴリズムを適用し、シグナルが本明細書で記載されるバイオマーカーに対応するシグナルにおけるピークを表すか否かを決定すコードを含むことができる。ソフトウェアはまた、観察されたバイオマーカーピークに関するデータを、分類木またはＡＮＮ分析に供し、バイオマーカーピークまたはバイオマーカーピークの組み合わせが存在するか否かを決定し、これは、検査下の特定の臨床パラメータの状態を示す。データの分析は、試料の質量分析法による分析から直接的もしくは間接的のいずれかで得られた様々なパラメータに対して「適合させられ（ｋｅｙｅｄ）」得る。これらのパラメータとしては、少なくとも２つのピークの有無、ピークまたはピーク群の形状、少なくとも２つのピークの高さ、少なくとも２つのピークの高さの対数、およびピーク高さデータの他の算術的操作が挙げられるが、それらに限定されない。
【０１９５】
本明細書で記載されるバイオマーカーの検出のためのプロトコル例は以下の通りである。試験される生物試料は、対象から入手し、アルブミンおよびＩｇＧを欠乏させまたは、必要に応じて、アニオン交換クロマトグラフィー樹脂または他のクロマトグラフィー樹脂上で前分画させ、その後、カチオン交換吸着剤（例えば、Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．製のＣＭ１０またはＷＣＸ２  ＰＲＯＴＥＩＮＣＨＩＰアレイ）、アニオン交換吸着剤（例えば、Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．製のＱ１０  ＰＲＯＴＥＩＮＣＨＩＰアレイ）、疎水性交換吸着剤（例えば、Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．製のＨＳＯ  ＰＲＯＴＥＩＮＣＨＩＰアレイ）、またはＩＭＡＣ吸着剤（例えば、Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．製のＩＭＡＣ３またはＩＭＡＣ３０  ＰＲＯＴＥＩＮＣＨＩＰアレイ）を含むアフィニティーキャプチャーＳＥＬＤＩプローブと接触させることができる。ＳＥＬＤＩプローブは発明のバイオマーカーを保持する好適な緩衝液で洗浄することができ、未結合生体分子が洗い流される。ＳＥＬＤＩプローブ上に特異的に保持されたバイオマーカーはその後、レーザー脱離／イオン化質量分析により検出され得る。
【０１９６】
生物試料、例えば、血清、血漿または尿は、アルブミンおよびＩｇＧを欠乏させ、またはＳＥＬＤＩプローブに結合する前に事前分画に供することができる。１つの態様では、事前分画は、生物試料をアニオン交換クロマトグラフィー樹脂と接触させることを含み得る。結合生体分子はその後、様々なｐＨの緩衝液を使用して、段階的ｐＨ溶離に供することができる。生体分子を含む様々な画分は、収集され、ＳＥＬＤＩプローブへの結合に供され得る。
【０１９７】
さらなる態様では、特定のタンパク質およびその様々な形態の分析が望ましい場合、特異的タンパク質を認識する抗体が、ＳＥＬＤＩプローブの表面に付着され得る（例えば、Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ製の事前活性化ＰＳ１０またはＰＳ２０  ＰＲＯＴＥＩＮＣＨＩＰアレイ）。抗体は生物試料由来の標的タンパク質をＳＥＬＤＩプローブ上に捕捉する。捕捉されたタンパク質はその後、例えば、レーザー脱離／イオン化質量分析により検出することができる。抗体はまた、固定化サポート上で標的タンパク質を捕捉することができ、本明細書で記載されるように、標的タンパク質は溶離され、ＳＥＬＤＩプローブ上に捕捉され、検出され得る。
【０１９８】
タンパク質を標的とする抗体は、市販されているか、あるいは当技術分野で知られている方法により、例えば、動物を標準精製技術により単離された標的タンパク質または標的タンパク質の合成ペプチドで免疫化することにより生成させることができる。
【０１９９】
いくつかの態様では、バイオマーカー発現レベルに対する正常またはベースライン値（または範囲）を確立することが望ましい。正常レベルは、当業者によく知られている標準方法に従い、生物の任意の特定の集団、副集団、または群に対し決定することができる。一般に、バイオマーカーのベースライン（正常）レベルは、正常（健康）対象から得られた生物試料（例えば、流体、細胞または組織）中のバイオマーカーの量を定量することにより決定される。医学において使用される標準統計法の適用により、発現のベースラインレベル、ならびにそのようなベースラインレベルからの有意偏差の決定が可能になる。
【０２００】
本明細書で記載される診断および予後方法の実施においては、「診断」および「予後」値を参照することが時として有用となる。本明細書では、「診断値」は、バイオマーカー遺伝子産物の正常（または「ベースライン」）範囲と比べた場合に、疾患の存在を示す、試料中で検出されるバイオマーカー遺伝子産物に対して決定される値を示す。「予後値」は、疾患に対する特定の診断および予後と一致するバイオマーカーの量を示す。試料中で検出されるバイオマーカー遺伝子産物の量は、バイオマーカーに対する予後値と比較され、よって、値の相対比較は、疾患の存在または疾患進行の可能性のある転帰を示す。１つの態様では、例えば、血管関連黄斑症予後を評価するために、データが収集され、バイオマーカーレベルの血管関連の異なる症状との統計的に有意な相関が得られる。バイオマーカーレベルの所定の範囲が知られている臨床転帰を有する対象から確立される。十分な数の測定が統計的に有意な値（または値の範囲）を生成させるためになされ、これと比較が行われる。
【０２０１】
本明細書で記載されるアッセイ方法は、バイオマーカーの絶対値の測定を、そのように望まれない限り、必ずしも要求しないことが認識されるであろう。というのも、本明細書で記載される方法の多くの適用では相対値で十分であるからである。定量化が望ましい場合、ここで記載される方法は、遺伝子産物を定量するための実質的に任意の公知の方法が使用できるように試薬を提供する。
【０２０２】
１つの態様では、個体由来の試料中の少なくとも１つの血管関連黄斑症関連バイオマーカーのレベルを決定し、試料中のバイオマーカーのレベルを、血管関連黄斑症を有さない個体の対照集団に特徴的なバイオマーカーの参照レベルと比較することにより、対象が血管関連黄斑症、またはその症状を発症し得るリスクを診断または決定するための方法が本明細書で記載され、ここで、個体由来の試料と対照集団の間のバイオマーカーのレベルの差は、個体が血管関連黄斑症、またはその症状を有する、またはこれを有するリスクの増加を示す。バイオマーカーは、限定はされないが、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２タンパク質とすることができる。例えば、バイオマーカーは、血管関連黄斑症、またはその症状を有する個体において上昇したレベルで発現されるＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２タンパク質とすることができる。別の態様では、バイオマーカーはＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２核酸、例えばＤＮＡまたはＲＮＡとすることができる。
【０２０３】
（ａ）治療前、または薬剤による治療後の第１の時間点のいずれかで、個体由来の試料において少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定する、および（ｂ）治療中のより遅い時間点または薬剤による治療後に個体由来の試料中のバイオマーカーのレベルを決定することにより、個体における、血管関連黄斑症、またはその症状の治療の有効性を評価するための方法もまた本明細書で記載され、ここで、血管関連黄斑症、またはその症状を有さない個体の対照集団に特徴的なバイオマーカーの参照レベルにより近づく、（ａ）と比較した（ｂ）で測定されたバイオマーカーのレベルの差は、治療が有効であることを示す。少なくとも１つのバイオマーカーはＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２タンパク質とすることができる。
【０２０４】
さらに、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）もしくは（ｉｖ）と診断された異常脈絡毛細管小葉を消散するための薬剤の有効性を決定する方法が本明細書で記載され、この方法は、ａ）（１）血管関連黄斑症；（２）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；（３）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症の、または（４）異常脈絡毛細管小葉を消散する治療の開始前に対象の眼において異常脈絡毛細管小葉の数を決定すること；ｂ）ある時間間隔の間、（１）、（２）、（３）または（４）の治療を開始すること；ｃ）時間間隔後に、ステップａ）の眼において異常脈絡毛細管小葉のその後の数を決定すること；ならびにｄ）ステップｃ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数を、ステップａ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数と比較することを含み、ステップｃ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数の増加の検出は、薬剤が、対象において、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散するのに有効でないことを示す。
【０２０５】
（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）もしくは（ｉｖ）と診断された異常脈絡毛細管小葉を消散するための薬剤の有効性を決定する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、ａ）（１）血管関連黄斑症；（２）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；（３）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症または（４）異常脈絡毛細管小葉の治療の開始前に対象の眼において異常脈絡毛細管小葉の数を決定すること；ｂ）ある時間間隔の間、（１）、（２）、（３）または（４）の治療を開始すること；ｃ）時間間隔後に、ステップａ）の眼において異常脈絡毛細管小葉のその後の数を決定すること；ならびにｄ）ステップｃ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数を、ステップａ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数と比較することを含み、ステップｃ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数の増加なしの検出は、薬剤が対象において、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散するのに有効であることを示す。
【０２０６】
加えて、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）もしくは（ｉｖ）と診断された異常脈絡毛細管小葉を消散する治療の有効性を決定する方法が本明細書で記載され、この方法は、ａ）（１）血管関連黄斑症；（２）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；（３）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症または（４）異常脈絡毛細管小葉の治療の開始前に、対象の眼における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の存在を決定すること；ｂ）ある時間間隔の間、（１）、（２）、（３）または（４）の治療を開始すること；ｃ）時間間隔後に、ステップａ）の眼における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生を決定すること；ならびにｄ）ステップｃ）の対象の眼における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生を、ステップａ）の対象の眼における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生と比較することを含み、ステップｃ）の対象の眼における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生の変化なし、または減少の検出は、薬剤が対象において、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散するのに有効であることを示す。
【０２０７】
（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）もしくは（ｉｖ）と診断された異常脈絡毛細管小葉を消散する治療の有効性を決定する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、ａ）（１）血管関連黄斑症；（２）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；（３）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症または（４）異常脈絡毛細管小葉のの治療の開始前に、対象の眼における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の存在を決定すること；ｂ）ある時間間隔の間、（１）、（２）、（３）または（４）の治療を開始すること；ｃ）時間間隔後に、ステップａ）の眼における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生を決定すること；ならびにｄ）ステップｃ）の対象の眼における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生を、ステップａ）の対象の眼における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生と比較することを含み、ステップｃ）の対象の眼における脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生の増加の検出は、薬剤が対象において、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散するのに有効でないことを示す。ＲＰＥ細胞の再増殖または再生は、自己蛍光イメージング技術、赤外線イメージング技術、光干渉断層撮影（ＯＣＴ）、Ｓｔｒａｔｕｓ光干渉断層撮影（Ｓｔｒａｔｕｓ  ＯＣＴ）、フーリエ領域光干渉断層撮影（Ｆｄ−ＯＣＴ）、二光子励起蛍光（ＴＰＥＦ）イメージング、適応光学走査型レーザー眼底検査（ＡＯＳＬＯ）、走査型レーザー眼底検査、スペクトルドメイン光干渉断層撮影と組み合わせた近赤外イメージング（ＳＤ−ＯＣＴ）、カラー眼底写真、眼底自発蛍光イメージング、無赤色イメージング、蛍光眼底造影、インドシアニングリーン血管造影、多焦点網膜電図（ＥＲＧ）記録、微小視野測定、カラードップラー光干渉断層撮影（ＣＤＯＣＴ）、視野評価、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ、Ｚｅｉｓｓ  Ｃｉｒｒｕｓ、Ｔｏｐｃｏｎ  ３Ｄ  ＯＣＴ  ２０００、Ｏｐｔｉｖｕｅ  ＲＴＶｕｅ  ＳＤ−ＯＣＴ、Ｏｐｋｏ  ＯＣＴ  ＳＬＯ、ＮＩＤＥＫ  Ｆ−１０、またはＯｐｔｏｐｏｌ  ＳＯＣＴ  Ｃｏｐｅｒｎｉｃｕｓ  ＨＲにより決定される。
【０２０８】
さらに、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）もしくは（ｉｖ）と診断された異常脈絡毛細管小葉を消散する治療の有効性を決定する方法が本明細書で記載され、この方法は、ａ）（１）血管関連黄斑症；（２）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；（３）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症または（４）異常脈絡毛細管小葉の治療の開始前に、対象の眼における脈絡毛細管小葉の灌流を決定すること；ｂ）ある時間間隔の間、（１）、（２）、（３）または（４）の治療を開始すること；ｃ）時間間隔後に、ステップａ）の眼における脈絡毛細管小葉の灌流を決定すること；ならびにｄ）ステップｃ）の対象の眼における脈絡毛細管小葉の灌流を、ステップａ）の対象の眼における脈絡毛細管小葉の灌流と比較することを含み、ステップｃ）の対象の眼における脈絡毛細管小葉の灌流の増加なしの検出は、薬剤が対象において、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散するのに有効でないことを示す。
【０２０９】
（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）もしくは（ｉｖ）と診断された異常脈絡毛細管小葉を消散する治療の有効性を決定する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、ａ）（１）血管関連黄斑症；（２）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；（３）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症または（４）異常脈絡毛細管小葉の治療の開始前に、対象の眼における脈絡毛細管小葉の灌流を決定すること；ｂ）ある時間間隔の間、（１）、（２）、（３）または（４）の治療を開始すること；ｃ）時間間隔後に、ステップａ）の眼における脈絡毛細管小葉の灌流を決定すること；ならびにｄ）ステップｃ）の対象の眼における脈絡毛細管小葉の灌流を、ステップａ）の対象の眼における脈絡毛細管小葉の灌流と比較することを含み、ステップｃ）の対象の眼における脈絡毛細管小葉の灌流の増加の検出は、薬剤が対象において、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散するのに有効であることを示す。眼における脈絡毛細管小葉の灌流は、自己蛍光イメージング技術、赤外線イメージング技術、光干渉断層撮影（ＯＣＴ）、Ｓｔｒａｔｕｓ光干渉断層撮影（Ｓｔｒａｔｕｓ  ＯＣＴ）、フーリエ領域光干渉断層撮影（Ｆｄ−ＯＣＴ）、二光子励起蛍光（ＴＰＥＦ）イメージング、適応光学走査型レーザー眼底検査（ＡＯＳＬＯ）、走査型レーザー眼底検査、スペクトルドメイン光干渉断層撮影と組み合わせた近赤外イメージング（ＳＤ−ＯＣＴ）、カラー眼底写真、眼底自発蛍光イメージング、無赤色イメージング、蛍光眼底造影、インドシアニングリーン血管造影、多焦点網膜電図（ＥＲＧ）記録、微小視野測定、カラードップラー光干渉断層撮影（ＣＤＯＣＴ）、視野評価、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ、Ｚｅｉｓｓ  Ｃｉｒｒｕｓ、Ｔｏｐｃｏｎ  ３Ｄ  ＯＣＴ  ２０００、Ｏｐｔｉｖｕｅ  ＲＴＶｕｅ  ＳＤ−ＯＣＴ、Ｏｐｋｏ  ＯＣＴ  ＳＬＯ、ＮＩＤＥＫ  Ｆ−１０、またはＯｐｔｏｐｏｌ  ＳＯＣＴ  Ｃｏｐｅｒｎｉｃｕｓ  ＨＲにより決定される。
【０２１０】
ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２、またはバリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２、コード核酸に特異的に結合するイメージング剤もまた開示される。例えば、本明細書で記載される１つ以上のリスク、保護、または中立ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２  ＳＮＰに特異的にハイブリッドすることができるポリヌクレオチドを含むアレイが開示される。１つ以上のリスクまたは保護ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２  ＳＮＰ、例えば、限定はされないが、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８、ｒｓ１０４９３３１、またはｒｓ２６７２５８７、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４またはｒｓ３７５０８４８、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ１０６１１７０、Ｃ３遺伝子におけるｒｓ２２３０１９９、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ８００２９２  ＳＮＰ、ＣＦＢ遺伝子におけるｒｓ６４１１５３  ＳＮＰ、またはＣＦＢ遺伝子におけるｒｓ４１５１６６７  ＳＮＰの１つ以上に特異的にハイブリッドすることができるイメージング剤もまた開示される。
【０２１１】
対象において異常脈絡毛細管小葉を発症する素因を特定する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象において１つ以上のＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２  ＳＮＰを検出することを含み、対象における１つ以上のＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２  ＳＮＰの検出は、対象において異常脈絡毛細管小葉を発症する素因を示す。例えば、限定はされないが、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８またはＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４の１つ以上の検出（ＡアレルがＨＴＲＡ１  ＳＮＰに存在する、またはＴアレルがＡＲＭＳ２  ＳＮＰに存在する）は、異常脈絡毛細管小葉の存在またはこれを発症するリスクの増加を示し得る。さらなる態様では、方法は、対象において、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティー、例えば、限定はされないが、ｒｓ１０４９３３１、ｒｓ３７５０８４８、またはｒｓ２６７２５８７を決定すること含むことができ、１つ以上のＳＮＰの存在は、異常脈絡毛細管小葉の存在またはこれを発症するリスクの増加を示す。さらに別の態様では、方法は、本明細書で記載されるリスク、保護、または他の情報価値のあるＳＮＰまたは遺伝子マーカー、例えば、限定はされないが、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２  ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰを検出することを含むことができ、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２  ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰの検出は、異常脈絡毛細管小葉の存在またはこれを発症するリスクの増加を示すことができる。
【０２１２】
対象において、本明細書で記載される１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含む、血管関連黄斑症、またはその症状を発症する対象の素因を診断および／または決定する、本明細書で記載される方法は、本明細書で記載される他の方法のいずれかと組み合わせて実施することができることが理解される。そのため、血管関連黄斑症、またはその症状を発症する対象の素因を診断および／または決定する方法が本明細書で記載され、この方法は、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は、血管関連黄斑症、またはその症状を発症する対象の診断またはリスクの増加を示し、さらに、対象において、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティー、例えば、限定はされないが、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８またはＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４を決定することを含み、ＨＴＲＡ１  ＳＮＰでのＡアレルまたはＡＲＭＳ２  ＳＮＰでのＴアレルは、血管関連黄斑症、またはその症状の存在、またはこれを発症するリスクの増加を示す。
【０２１３】
血管関連黄斑症、またはその症状を発症する対象の素因を診断および／または決定する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象の眼において異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は、対象における、血管関連黄斑症、またはその症状の診断またはこれを発症するリスクの増加を示し、さらに、対象において、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８またはＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４のアイデンティティーを決定することを含み、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８でのＡアレルまたはＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４でのＴアレルは血管関連黄斑症、またはその症状の存在、またはこれを発症するリスクの増加を示す。
【０２１４】
加えて、対象において血管関連黄斑症、またはその症状を診断する方法が本明細書で記載され、この方法は対象の眼において異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は、対象における血管関連黄斑症、またはその症状の診断を示し、さらに、対象において、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティー、例えば、限定はされないが、ｒｓ１０４９３３１、ｒｓ３７５０８４８、またはｒｓ２６７２５８７を決定することを含み、１つ以上のＳＮＰの存在は、血管関連黄斑症、またはその症状の存在を示す。
【０２１５】
さらに、対象において血管関連黄斑症、またはその症状を診断する方法が本明細書で記載され、この方法は、対象の眼において異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は、対象における血管関連黄斑症、またはその症状の診断を示し、さらに、対象において、１つ以上の異常脈絡毛細管小葉関連ＳＮＰのアイデンティティー、例えば、限定はされないが、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８  ＳＮＰでのＡアレル、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４  ＳＮＰでのＴアレル、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ１０６１１７０でのＣアレル、またはＣ３遺伝子におけるｒｓ２２３０１９９  ＳＮＰでのＧアレルを決定することを含み、１つ以上の、異常脈絡毛細管小葉関連ＳＮＰの存在は、血管関連黄斑症、またはその症状の存在を示す。
【０２１６】
対象において血管関連黄斑症、またはその症状を診断する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象の眼において異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は、対象における血管関連黄斑症、またはその症状の存在を示し、方法はさらに、対象において、本明細書で記載されるリスク、保護、または他の情報価値のあるＳＮＰまたは遺伝子マーカー、例えば、限定はされないが、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２  ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含み、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２  ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰの検出は、血管関連黄斑症、またはその症状のリスクの増加を示す。
【０２１７】
対象において血管関連黄斑症、またはその症状を診断する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象の眼において異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は対象における血管関連黄斑症、またはその症状の存在を示し、方法はさらに、対象において、本明細書で記載されるリスク、保護、または他の情報価値のあるＳＮＰまたは遺伝子マーカー、例えば、限定はされないが、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２  ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含み、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２  ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰの検出は、血管関連黄斑症、またはその症状の存在を示す。
【０２１８】
さらに、対象において血管関連黄斑症、またはその症状を診断する方法が本明細書で記載され、この方法は、対象の眼において異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は対象における血管関連黄斑症、またはその症状の存在を示し、さらに対象において、１つ以上の異常脈絡毛細管小葉関連ＳＮＰ、例えば、限定はされないが、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ８００２９２  ＳＮＰでのＡアレル、ＣＦＢ遺伝子におけるｒｓ６４１１５３  ＳＮＰでのＡアレル、またはＣＦＢ遺伝子におけるｒｓ４１５１６６７  ＳＮＰでのＡアレルのアイデンティティーを決定することを含み、１つ以上のＳＮＰの存在は、血管関連黄斑症、またはその症状を発症するリスクの減少を示す。
【０２１９】
対象において血管関連黄斑症、またはその症状を診断する方法もまた本明細書で記載され、この方法は対象の眼において異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することを含み、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在は、対象における血管関連黄斑症、またはその症状の存在を示し、さらに対象において、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８  ＳＮＰのＧアレルのアイデンティティーを決定することを含み、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８  ＳＮＰでのＧアレルは、血管関連黄斑症、またはその症状を発症するリスクの減少を示す。
【０２２０】
Ｂ．血管関連黄斑症、またはその症状を治療する方法
対象において、血管関連黄斑症、またはその症状を治療する方法が本明細書で記載され、異常脈絡毛細管小葉は対象の眼の黄斑に存在し、この方法は、対象に、治療的有効量の、対象の眼の黄斑における脈絡毛細管小葉の灌流減少および／または閉鎖を阻止する１つ以上の薬剤を投与することを含む。１つの態様では、血管関連黄斑症の症状は対象の眼において現れ得る。そのため、対象の眼において血管関連黄斑症の症状を治療する方法もまた本明細書で記載され、異常脈絡毛細管小葉は対象の眼において存在し、この方法は、対象に治療的有効量の、対象の眼における脈絡毛細管小葉の閉鎖を阻止する１つ以上の薬剤を投与することを含む。
【０２２１】
対象において、血管関連黄斑症を治療する、血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；重篤な黄斑症を治療する、後期黄斑症を治療するまたは異常脈絡毛細管小葉を消散する方法もまた本明細書で記載される。
【０２２２】
さらに、対象において、血管関連黄斑症を治療する、血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；重篤な黄斑症を治療する、後期黄斑症を治療するまたは異常脈絡毛細管小葉を消散する方法が本明細書で記載され、この方法は、有効量の、１つ以上の開示組成物、治療薬、活性剤、または機能性核酸を対象に投与することを含む。
【０２２３】
本明細書では、「治療する」は、疾患、病態、または障害を治癒、寛解、安定化、または防止する目的での、患者の医学的管理を示す。この用語は、積極的治療、すなわち、疾患、病態、または障害の改善に向けて特定的に進められる治療を含み、原因治療、すなわち、関連疾患、病態、または障害の原因の除去に向けて進められる治療も含む。加えて、この用語は、対症療法、すなわち、疾患、病態、または障害の治癒よりもむしろ、症状の軽減のために設計された治療；予防的治療、すなわち、関連疾患、病態、または障害の発症を最小に抑えるまたは部分的にもしくは完全に阻止するように進められる治療；および支持療法、すなわち、関連疾患、病態、または障害の改善に向けて進められる別の特定の治療を補充するために使用される治療を含む。様々な態様では、用語は対象、例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）の全ての治療に及び以下を含む：（ｉ）疾患にかかりやすいが、まだこれを有していると診断されていない対象において、疾患が起こらないように防止すること；（ｉｉ）疾患を阻止する、すなわち、その発症を抑止すること；または（ｉｉｉ）疾患を軽減する、すなわち、疾患の退行を引き起こすこと。
【０２２４】
「投与する」および「投与」という用語は、医薬調製物を対象に提供する任意の方法を示す。そのような方法は、当業者によく知られており、経口投与、舌下投与、経頬粘膜投与、経皮投与、吸入による投与、経鼻投与、局所投与、腟内投与、点眼、耳内投与、脳内投与、くも膜下腔内投与、直腸投与、腹腔内投与、および非経口投与、例えば、注射用、例として静脈内投与、動脈内投与、筋内投与、皮内投与、および皮下投与が挙げられるが、それらに限定されない。点眼としては、局所投与、結膜下投与、テノン嚢下投与、眼球上投与、眼球後投与、眼窩内投与、および眼内投与（硝子体内投与を含む）が挙げられる。投与は連続または間欠とすることができる。様々な態様では、調製物は、治療的に投与する；すなわち、存在する疾患または状態を治療するために投与することができる。さらに様々な態様では、調製物は、予防的に投与する；すなわち、疾患または状態の防止のために投与することができる。
【０２２５】
本明細書では、「治療的有効量」という用語は、所望の結果を達成する、または望ましくない状態に効果を与えるのに十分な量を示す。例えば、「治療的有効量」は、所望の結果を達成する、例えば脈絡毛細管小葉の閉鎖を阻止する、または脈絡毛細管小葉における灌流を増加させるのに十分な量を示すことができる。
【０２２６】
ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２の発現または活性を調節する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象に治療的有効量の、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、ペプチド、または小分子の１つ以上を投与することを含む。例えば、調節は、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２の発現または活性の増加または減少のいずれかを意味することができる。本明細書で記載される方法では、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２転写の阻止、またはＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子産物の翻訳の阻止は、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２の発現または活性を調節することができる。同様に、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子産物（例えば、ｍＲＮＡ、ポリペプチドまたはタンパク質）の活性は、直接的もしくは間接的のいずれかで阻止することができる。発現または活性の調節は、完全である必要はない。例えば、発現または活性は、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２の発現または活性が調節されていない対照細胞と比べて、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、１００％またはその間の任意のパーセンテージだけ調節することができる。
【０２２７】
「調節する」、「調節すること」または「調節された」により、増加または減少させることにより変化することが意味される。
【０２２８】
本明細書では、「モジュレーター」は、遺伝子または遺伝子産物、例えばペプチドの発現または活性を増加または減少させることができる組成物を意味することができる。発現または活性の調節は、完全である必要はない。例えば、発現または活性は、遺伝子または遺伝子産物の発現または活性が組成物によって調節されていない対照細胞と比べて、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、１００％またはその間の任意のパーセンテージだけ調節することができる。例えば、「候補モジュレーター」は、活性剤または治療薬とすることができる。
【０２２９】
「活性剤」または「治療薬」という用語は、薬剤、例えば、薬物、化学療法薬、化学化合物、などとして規定される。例えば、限定はされないが、活性剤または治療薬は、天然に存在する分子とすることができ、あるいは合成化合物、例えば例として、限定はされないが、小分子（例えば、１０００未満の分子量を有する分子）、ペプチド、タンパク質、抗体、または核酸、例えばｓｉＲＮＡもしくはアンチセンス分子であってもよい。活性剤または治療薬は、個々にまたは任意の他の活性剤または治療薬と組み合わせて使用することができる。
【０２３０】
対象において、血管関連黄斑症を治療する、血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；重篤な黄斑症を治療する、後期黄斑症を治療するまたは異常脈絡毛細管小葉を消散する方法が本明細書で記載され、この方法は、有効量の、脈絡毛細管小葉の灌流減少および／または閉鎖を阻止する、脈絡膜細動脈もしくは脈絡毛細管毛細血管の閉鎖（解剖学的もしくは機能的）または閉塞を阻止する、脈絡膜細動脈および脈絡毛細管毛細血管における灌流を増加させる、ＨＴＲＡ１の発現を調節する、ＡＲＭＳ２の発現を調節する、ＨＴＲＡ１の活性を調節する、ＡＲＭＳ２の活性を調節する、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２転写を調節する、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子産物の翻訳を調節する、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２の発現または活性を調節する、エラスターゼ活性を調節する、あるいはＨＴＲＡ１のエラスターゼ活性を調節する１つ以上の薬剤を投与し、よって、対象において、血管関連黄斑症を治療する、血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；重篤な黄斑症を治療する、後期黄斑症を治療するまたは異常脈絡毛細管小葉を消散することを含む。
【０２３１】
脈絡毛細管小葉の灌流減少および／または閉鎖を阻止する、脈絡膜細動脈もしくは脈絡毛細管毛細血管の閉鎖（解剖学的もしくは機能的）または閉塞を阻止する、脈絡膜細動脈および脈絡毛細管毛細血管における灌流を増加させる、ＨＴＲＡ１の発現を調節する、ＡＲＭＳ２の発現を調節する、ＨＴＲＡ１の活性を調節する、ＡＲＭＳ２の活性を調節する、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２転写を調節する、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子産物の翻訳を調節する、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２の発現または活性を調節する、エラスターゼ活性を調節する、あるいはＨＴＲＡ１のエラスターゼ活性を調節する１つ以上の薬剤としては、以下が挙げられるが、それらに限定されない：アスピリン、抗炎症薬、コレステロール低下薬、抗高血糖薬、血管拡張薬、昇圧剤、利尿剤、抗凝固薬、血栓溶解薬、抗血管内皮増殖因子薬、抗虚血後傷害薬、降圧薬、異常凝固治療薬、他の血管治療薬、Ａｍｔｕｒｎｉｄｅ（アリスキレン＋アムロジピン＋ヒドロクロロチアジド）、Ｐｒａｄａｘａ（ダビガトランエテキシレートメタンスルホン酸塩）、Ｔｅｋａｍｌｏ（アリスキレン＋アムロジピン）、Ｔｒｉｂｅｎｚｏｒ（オルメサルタンメドキソミル＋アムロジピン＋ヒドロクロロチアジド）、Ｃｉａｌｉｓ（タダラフィル）、Ａｔｒｙｎ（再構成のためのアンチトロンビン組換え凍結乾燥粉末）、Ｅｆｉｅｎｔ（プラスグレル）、Ｌｉｖａｌｏ（ピタバスタチン）、Ｍｕｌｔａｑ（ドロネダロン）、Ｔｙｖａｓｏ（トレプロスチニル）、Ｃｌｅｖｉｐｒｅｘ（クレビジピン）、Ｔｒｉｌｉｐｉｘ（フェノフィブリン酸）、Ａｚｏｒ（アムロジピンベシル酸塩；オルメサルタンメドキソミル）、フェノフィブラート、Ｌｅｔａｉｒｉｓ（アンブリセンタン）、Ｓｏｌｉｒｉｓ（エクリズマブ）、Ｔｅｋｔｕｒｎａ（アリスキレン）、Ｒａｎｅｘａ（ラノラジン）、ＢｉＤｉｌ（二硝酸イソソルビド／ヒドララジン塩酸塩）、Ｃａｄｕｅｔ（アムロジピン／アトルバスタチン）、Ｃｒｅｓｔｏｒ（ロスバスタチンカルシウム）、Ｌｅｖｉｔｒａ（バルデナフィル）、Ａｌｔｏｃｏｒ（ロバスタチン）、Ｂｅｎｉｃａｒ、Ｉｍａｇｅｎｔ（パーフレキサン脂質ミクロスフェア）、Ｉｎｓｐｒａ（エプレレノン錠剤）、Ｐｌａｖｉｘ（クロピドグレル二硫酸塩）、Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎ（トレプロスチニル）、Ａｄｖｉｃｏｒ（徐放性ナイアシン／ロバスタチン）、Ｄｉｏｖａｎ（バルサルタン）、Ｎａｔｒｅｃｏｒ（ネシリチド）、Ｔｅｖｅｔｅｎ（エプロサルタンメシル酸塩＋ヒドロクロロチアジド）、Ｔｒｉｃｏｒ（フェノフィブラート）、Ａｎｇｉｏｍａｘ（ビバリルジン）、アルガトロバン注、Ａｔａｃａｎｄ（カンデサルタンシレキセチル）、Ｂｅｔａｐａｃｅ  ＡＦ錠剤、Ｄｉｌｔｉａｚｅｍ  ＨＣＬ、Ｉｎｎｏｈｅｐ（チンザパリンナトリウム）、Ｌｅｓｃｏｌ  ＸＬ（フルバスタチンナトリウム）、Ｍｉｃａｒｄｉｓ  ＨＣＴ（テルミサルタンおよびヒドロクロロチアジド）、Ｎｉｔｒｏｓｔａｔ（ニトログリセリン）、Ｌｅｓｃｏｌ（フルバスタチンナトリウム）、Ｍｅｖａｃｏｒ（ロバスタチン）、Ｎｉａｓｐａｎ、Ａｇｒｙｌｉｎ（アナグレリドＨＣＬ）、Ａｔａｃａｎｄ（カンデサルタンシレキセチル）、Ａｔａｃａｎｄ（���ンデサルタンシレキセチル）、ＣｅｌｌＣｅｐｔ、Ｄｉｏｖａｎ  ＨＣＴ（バルサルタン）、Ｉｎｔｅｇｒｉｌｉｎ、Ｍｉｃａｒｄｉｓ（テルミサルタン）、Ｒｙｔｈｍｏｌ、Ｔｉａｚａｃ（ジルチアゼム塩酸塩）、Ｔｉａｚａｃ（ジルチアゼム塩酸塩）、Ｔｒｉｃｏｒ（フェノフィブラート）、Ｖｉａｇｒａ、Ｂａｙｃｏｌ（セリバスタチンナトリウム）、カプトプリルおよびヒドロクロロチアジド、Ｃａｒｄｉｚｅｍ、Ｃｏｒｌｏｐａｍ、Ｄｉｏｖａｎ（バルサルタン）、ＤｙｎａＣｉｒｃ  ＣＲ、ＥＤＥＸ、Ｌｅｓｃｏｌ（フルバスタチンナトリウム）、Ｌｅｘｘｅｌ（エナラプリルマレイン酸塩フェロジピンＥＲ）、Ｍｉｃｒｏｚｉｄｅ（ヒドロクロロチアジド）、Ｎｏｒｍｉｆｌｏ、Ｐｅｎｔｏｘｉｆｙｌｌｉｎｅ、Ｐｉｎｄｏｌｏｌ、Ｐｌａｖｉｘ（クロピドグレル二硫酸塩）、Ｐｏｓｉｃｏｒ、ＲｅｏＰｒｏ、ＲＥＰＲＯＮＥＸ（注射用メノトロピン、ＵＳＰ）、Ｔｅｖｅｔｅｎ（エプロサルタンメシル酸塩）、ベラパミル、ワルファリンナトリウム、Ｚｏｃｏｒ、Ｃｏｖｅｒａ−ＨＳ（ベラパミル）、Ｍａｖｉｋ（トランドラプリル）、Ｍｕｓｅ、Ｐｒａｖａｃｈｏｌ（プラバスタチンナトリウム）、Ｐｒａｖａｃｈｏｌ（プラバスタチンナトリウム）、ＰｒｏＡｍａｔｉｎｅ（ミドドリン）、Ｐｒｏｃａｎｂｉｄ（プロカインアミド塩酸塩徐放性錠剤）、Ｒｅｔａｖａｓｅ（レテプラーゼ）、Ｔｅｃｚｅｍ（エナラプリルマレイン酸塩／ジルチアゼムリンゴ酸塩）、Ｔｉａｚａｃ（ジルチアゼム塩酸塩）、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（イオジキサノール）、Ａｎｄｒｏｄｅｒｍ（テストステロン経皮系）、Ｃｏｒｖｅｒｔ注（イブチリドフマル酸塩注）、ＰｒｉｎｉｖｉｌまたはＺｅｓｔｒｉｌ（リシノプリル）、またはＴｏｐｒｏｌ−ＸＬ（メトプロロールコハク酸塩）、β−アドレナリン遮断薬、例えばベタキソロール、プロプラノロール、ナドロール、メトプロロール、アテノロール、カルベジロール、メトプロロール、ネビボロール、ラベタロール、ソタロール、チモロール、エスモロール、カルテオロール、ペンブトロール、アセブトロール、ピンドロール、およびビソプロロール；異常凝固薬物、例えば、ヘパリン、エノキサパリン、ダルテパリン、クマジン、ＴＰＡ、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、ジピラミドール、チクロピジン（Ｔｉｃｌｉｄ）、クロピドグレル（Ｐｌａｖｉｘ）、アブシキシマブ（Ｒｅｏｐｒｏ）、エプチフィバチド（Ｉｎｔｅｇｒｉｌｉｎ）、およびチロフィバン（Ａｇｇｒａｓｔａｔ）；利尿剤、例えばアセタゾラミド、ジクロフェナミド、メタゾラミド、トルセミド、フロセミド、ブメタニド、エタクリン酸、パマブロム、スピロノラクトン、スピロノラクトン、アミロライド、トリアムテレン、インダパミド、メチクロチアジド、ヒドロクロロチアジド、クロロチアジド、メトラゾン、ベンドロフルメチアジド、ポリチアジド、ヒドロフルメチアジド、およびクロルタリドン；Ｃａ2+チャネル遮断薬、例えばジルチアゼム、ニモジピン、ベラパミル、ニフェジピン、アムロジピン、フェロジピン、イスラジピン、クレビジピン、ベプリジル、およびニソルジピン；ニトロ拡張薬、例えばニトログリセリン、アルプロスタジル、ヒドララジン、ミノキシジル、ネシリチド��一硝酸イソソルビド、およびニトロプルシド；α−アドレナリン受容体拮抗薬またはα−遮断薬、例えばドキサゾシン、プラゾシン、テラゾシン、アルフゾシン、タムスロシン、およびシロドシン；アンジオテンシン変換酵素阻害剤、例えばトランドラプリル、ホシノプリル、エナラプリル、ラミプリル、カプトプリル、モエキシプリル、リシノプリル、キナプリル、ベナゼプリル、およびペリンドプリル；アンジオテンシン受容体遮断薬またはＡＲＢ、例えばエプロサルタン、オルメサルタン、テルミサルタン、ロサルタン、バルサルタン、イルベサルタン、およびカンデサルタン；レニン阻害剤、例えばアリスキレン；末梢昇圧薬、例えばシクランデレート、パパベリン、およびイソクスプリン；β−作動薬、例えばエピネフリン、ノルエピネフリン、ドパミン、ドブタミン、およびイソプロテレノール；強心配糖体、例えばウアバイン、ジギタリス、ジゴキシン、およびジギトキシン；ホスホジエステラーゼ阻害剤、例えばミルリノン、イナムリノン、シロスタゾール、シルデナフィル、およびタダラフィル；バソプレシン類似体、例えばアルギニンバソプレシンおよびテルリプレシン；抗凝固薬；クマリンおよびインダンジオン、例えばワルファリンおよびアニシンジオン；第Ｘａ因子インヒビター、例えばフォンダパリヌクス；ヘパリン、例えばダルテパリン、チンザパリン、エノキサパリン、アルデパリン、およびダナパロイド；血小板凝集阻害剤、例えばアスピリン、プラスグレル、シロスタゾール、クロピドグレル、ジピリダモール、およびチクロピジン；トロンビン阻害剤、例えばアルガトロバン、ビバリルジン、デシルジン、およびレピルジン；抗炎症薬；ステロイド、例えばプレドニゾン、プレドニゾロン、およびヒドロコルチゾン；眼用抗炎症薬、例えばネパフェナク、ケトロラク、フルルビプロフェン、スプロフェン、シクロスポリン、トリアムシノロン、ジクロフェナク、およびブロムフェナク；非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）、例えばイブプロフェン、ケトプロフェン、エトドラク、フェノプロフェン、ナプロキセン、スリンダク、インドメタシン、ピロキシカム、メフェナム酸、オキサプロジン、およびトルメチン；コレステロール低下薬；スタチン、例えばアトルバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、セリバスタチン、ピタバスタチン、およびロスバスタチン；ナイアシン、アスピリン、エゼチミブ、およびデキストロチロキシン；フィブリン酸、例えばゲムフィブロジル、フェノフィブラート、およびクロフィブラート；抗高血糖薬；分泌促進物質、例えばグリピジド、グリメピリド、グリブリド、クロルプロパミド、アセトヘキサミド、トルブタミド、トラザミド、レパグリニド、およびナテグリニド；インスリン感受性改善薬、例えばロシグリタゾン、ピオグリタゾン、トログリタゾン、メトホルミン、ブホルミン、およびフェンホルミン；α−グルコシダーゼ阻害剤、例えばミグリトール、アカルボース；ペプチド類似体、例えばエクセナチド、サクサグリプチン、シタグリプチン、リラグルチド、タスポグルチド、およびプラムリンチド；および虚血後傷害を阻止する薬物、例えばリコピン、グルタメート、抗Ｔ−リンパ球グロブリン、ＥＰＯ、ピルビン酸エチル、ジアネキシン、Ａ−００２（Ａｔｈｅｒａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＰＬＡ２阻害）、Ｐｙｃｎｏｇｅｎｏｌ（登録商標）、ＤＰ−ｂ９９（Ｄ−Ｐｈａｒｍ、金属キレート剤）、リバーロキサバン（単独またはまたはチエノピリジンと組み合わせて）、Ｖｉｐｒｉｎｅｘ（商標）（Ａｎｃｒｏｄ）、Ｏｍｅｃａｍｔｉｖ  ｍｅｃａｒｂｉｌ（ＣＫ−１８２７４５２）、ジンセノサイド−Ｒｄ、テネクテプラーゼ、ロチガプチド、デスモテプラーゼ、Ｏｔａｍｉｘａｂａｎ（ＸＲＰ０６７３）、エプレレノン、ＳＣＨ  ５３０３４８、ラニビズマブ、Ａｌｔｅｐｌａｓｅ、アルガトロバン、ヒト組換え線維芽細胞増殖因子１（ＦＧＦ１−１４１）、エプチフィバチド、ＦＸ０６（フィブリン由来ペプチド）、アピキサバン、機能性核酸、アプタマー、リボザイム、三本鎖形成分子、および外部ガイド配列、ペプチド核酸、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、モルフォリノ、抗体、ペプチド、小分子、α１アンチトリプシン、ＺＤ０８９２、ＳＰＩＰｍ２、ＯＮＯ−５０４６、１，４−ビスフェニル−１，４−ジヒドロピリジン、２−ヒドロキシおよび２−アミノジヒドロピリジン、ドラスタチンもしくはドラサチン類似体、またはリングビアスタチンもしくはリングビアスタチン類似体またはＤＰＭＦＫＬｂｏｒｏＶ。
【０２３２】
血管関連黄斑症の症状、またはその症状を治療または軽減する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象に、治療的有効量の活性剤または治療薬、例えば、１つ以上のアンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、ペプチド、または小分子を投与することにより、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２の発現または活性を調節することを含む。例えば、限定はされないが、治療薬はＤＰＭＦＫＬｂｏｒｏＶとすることができる。
【０２３３】
１つの態様では、血管関連黄斑症、またはその症状を治療または軽減する方法は、対象に、治療的有効量の、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２にハイブリダイズすることができるアンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、ペプチド、または小分子の１つ以上を投与することによりＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２の発現または活性を調節することを含み、さらに、対象に、治療的有効量の、脈絡膜細動脈もしくは脈絡毛細管毛細血管の閉鎖または閉塞を阻止する１つ以上の薬剤を、対象において脈絡膜細動脈および脈絡毛細管毛細血管における灌流を増加させる１つ以上の薬剤と組み合わせて投与することを含むことができる。
【０２３４】
滲出性ＡＭＤのための治療を受けている患者における活性剤または治療薬の成功を予測する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含み、ＳＮＰの存在は、患者が活性剤または治療薬に応答する可能性が低いことを示す。例えば、限定はされないが、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８またはＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４の１つ以上（ＨＴＲＡ１  ＳＮＰでのＡアレルまたはＡＲＭＳ２  ＳＮＰでのＴアレル）を検出することは、患者が、活性剤または治療薬に応答する可能性が低いことを示し得る。さらなる態様では、方法は、対象において、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティー、例えば、限定はされないが、ｒｓ１０４９３３１、ｒｓ３７５０８４８、またはｒｓ２６７２５８７を決定することを含むことができ、１つ以上のＳＮＰの存在は、患者が活性剤または治療薬に応答する可能性が低いことを示す。さらに別の態様では、方法は、本明細書で記載されるリスク、または他の情報価値のあるＳＮＰまたは遺伝子マーカー、例えば、限定はされないが、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２  ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰを検出することを含むことができ、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２  ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰの検出は、患者が活性剤または治療薬に応答する可能性が低いことを示し得る。
【０２３５】
滲出性ＡＭＤのための治療を受けている患者における抗ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）療法の成功を予測する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、ＡＲＭＳ２遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することを含み、ＡＲＭＳ２遺伝子における１つ以上のＳＮＰの存在は、患者が抗ＶＥＧＦ療法に応答する可能性が低いことを示す。例えば、限定はされないが、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４（このＡＲＭＳ２  ＳＮＰでのＴアレル）の検出は、患者が抗ＶＥＧＦ療法に応答する可能性が低いことを示し得る。さらなる態様では、方法は、対象において、ＡＲＭＳ２遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティー、例えば、限定はされないがｒｓ３７５０８４８を決定することを含むことができ、このＡＲＭＳ２  ＳＮＰでのＧアレルは、患者が抗ＶＥＧＦ療法に応答する可能性が低いを示す。さらに別の態様では、方法は、本明細書で記載されるリスク、または他の情報価値のあるＳＮＰまたは遺伝子マーカー、例えば、限定はされないが、ＡＲＭＳ２  ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰを検出することを含むことができ、ＡＲＭＳ２  ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰの検出は、患者が抗ＶＥＧＦ療法に応答する可能性が低いことを示し得る。
【０２３６】
ＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２の発現または活性を調節する方法もまた本明細書で記載され、この方法は対象に、治療的有効量の、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、ペプチド、または小分子の１つ以上を投与することを含む。
【０２３７】
血管関連黄斑症、またはその症状を治療または軽減する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、ＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２の発現または活性を、対象に治療的有効量の、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、ペプチド、または小分子の１つ以上を投与することにより調節することを含む。
【０２３８】
１つの態様では、血管関連黄斑症、またはその症状を治療または軽減する方法は、対象に、治療的有効量の、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、ペプチド、または小分子の１つ以上を投与することにより、ＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２の発現または活性を調節することを含むことができ、さらに、対象に、治療的有効量の、脈絡膜細動脈もしくは脈絡毛細管毛細血管の閉鎖を阻止する１つ以上の薬剤を、対象において、脈絡膜細動脈および脈絡毛細管毛細血管における灌流を増加させる１つ以上の薬剤と組み合わせて投与することを含むことができる。
【０２３９】
１．ＨＴＲＡ１−エラスターゼ
ＨＴＲＡ１のエラスターゼ活性を調節する方法もまた本明細書で記載され、この方法は対象に治療的有効量の、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、ペプチド、または小分子の１つ以上を投与することを含む。１つの態様では、この方法は、対象に、治療的有効量の、１つ以上の活性剤または治療薬を投与することによりＢｒｕｃｈ膜の分解を防止することを含む。例えば、限定はされないが、薬剤はＤＰＭＦＫＬｂｏｒｏＶとすることができる。
【０２４０】
構造タンパク質エラスチンおよびコラーゲンから構成される細胞外層であるＢｒｕｃｈ膜は、脈絡膜からＲＰＥ下および網膜下腔への細胞および血管の放出に対する物理的障壁として機能する。この障壁の破壊、またはこれへの損傷は、ＡＭＤにおける視力喪失と関連し、これはしばしば新しい血管の脈絡膜からＲＰＥ下および／または網膜下腔への増殖に起因する（脈絡膜血管新生、またはＣＮＶと呼ばれる過程）。さらに、ＡＭＤを有するおよび有しないヒトドナーの眼の黄斑および黄斑外領域の形態計測評価は、黄斑と黄斑外領域の間のＢｒｕｃｈ膜のエラスチン含有層（ＥＬ）の完全性および厚さの両方における、統計的に有意な差を明らかにした。重要なことには、基質認識において重要な役割を果たす、ＨＴＲＡ１のプロテアーゼ認識ポケットは、エラスターゼのそれに類似し、およびタンパク質の調節領域の不可欠な部分であるＫａｚａｌドメインは、Ａｎｅｍｏｎｉａ製の知られているエラスターゼ阻害剤と構造相同性を共有する。そのため、本明細書で記載される方法は、対象に、治療的有効量のエラスターゼ阻害剤を投与することにより、Ｂｒｕｃｈ膜の分解を防止することを含むことができる。例えば、限定はされないが、エラスターゼ阻害剤はα１アンチトリプシン、ＺＤ０８９２、ＳＰＩＰｍ２、ＯＮＯ−５０４６、１，４−ビスフェニル−１，４−ジヒドロピリジン、２−ヒドロキシおよび２−アミノジヒドロピリジン、ドラスタチンもしくはドラサチン類似体、またはリングビアスタチンもしくはリングビアスタチン類似体とすることができる。
【０２４１】
対象において血管関連黄斑症を治療する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、有効量のエラスターゼ阻害剤を対象に投与することを含む。
【０２４２】
１つの態様では、対象において血管関連黄斑症を治療する方法は、有効量の、α１アンチトリプシン、ＺＤ０８９２、ＳＰＩＰｍ２、ＯＮＯ−５０４６、１，４−ビスフェニル−１，４−ジヒドロピリジン、２−ヒドロキシおよび２−アミノジヒドロピリジン、ドラスタチンもしくはドラサチン類似体、またはリングビアスタチンもしくはリングビアスタチン類似体またはＤＰＭＦＫＬｂｏｒｏＶを対象に投与することを含むことができる。
【０２４３】
対象において血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する方法もまた本明細書で記載され、この方法は有効量のエラスターゼ阻害剤を対象に投与することを含む。
【０２４４】
１つの態様では、対象において血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する方法は、有効量の、α１アンチトリプシン、ＺＤ０８９２、ＳＰＩＰｍ２、ＯＮＯ−５０４６、１，４−ビスフェニル−１，４−ジヒドロピリジン、２−ヒドロキシおよび２−アミノジヒドロピリジン、ドラスタチンもしくはドラサチン類似体、またはリングビアスタチンもしくはリングビアスタチン類似体またはＤＰＭＦＫＬｂｏｒｏＶを対象に投与することを含むことができる。
【０２４５】
対象において重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、有効量のエラスターゼ阻害剤を対象に投与することを含む。
【０２４６】
１つの態様では、対象において重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する方法は、有効量の、α１アンチトリプシン、ＺＤ０８９２、ＳＰＩＰｍ２、ＯＮＯ−５０４６、１，４−ビスフェニル−１，４−ジヒドロピリジン、２−ヒドロキシおよび２−アミノジヒドロピリジン、ドラスタチンもしくはドラサチン類似体、またはリングビアスタチンもしくはリングビアスタチン類似体またはＤＰＭＦＫＬｂｏｒｏＶを対象に投与することを含むことができる。
【０２４７】
対象において異常脈絡毛細管小葉を消散する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、有効量のエラスターゼ阻害剤を対象に投与することを含む。
【０２４８】
１つの態様では、対象において異常脈絡毛細管小葉を消散する方法は、有効量のα１アンチトリプシン、ＺＤ０８９２、ＳＰＩＰｍ２、ＯＮＯ−５０４６、１，４−ビスフェニル−１，４−ジヒドロピリジン、２−ヒドロキシおよび２−アミノジヒドロピリジン、ドラスタチンもしくはドラサチン類似体、またはリングビアスタチンもしくはリングビアスタチン類似体またはＤＰＭＦＫＬｂｏｒｏＶを対象に投与することを含むことができる。
【０２４９】
対象において、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療するまたは（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散する方法もまた本明細書で記載され、この方法は（ａ）（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療するまたは（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散する対象を選択すること；（ｂ）有効量の、１つ以上の開示組成物、治療薬、活性剤、または機能性核酸を対象に投与し、よって対象において（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療するまたは（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散することを含む。
【０２５０】
さらに、対象において、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療するまたは（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散する方法が本明細書で記載され、この方法は（ａ）（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療するまたは（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散する対象を選択すること；ならびに（ｂ）有効量の、１つ以上の開示組成物、治療薬、活性剤、または機能性核酸および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を対象に投与し、よって対象において（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療するまたは（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散することを含む。
【０２５１】
対象において血管関連黄斑症、またはその症状を治療または回復させる方法もまた本明細書で記載され、この場合、異常脈絡毛細管小葉が対象の眼に存在し、この方法は、対象に、治療的有効量の、対象の眼において脈絡毛細管小葉における灌流を増加させる１つ以上の薬剤を投与することを含む。１つの態様では、血管関連黄斑症の症状は、対象の眼において現れ得る。そのため、対象の眼において血管関連黄斑症の症状を治療または回復させる方法もまた本明細書で記載され、この場合、異常脈絡毛細管小葉が対象の眼において存在し、この方法は、対象に、治療的有効量の、対象の眼において脈絡毛細管小葉における灌流を増加させる１つ以上の薬剤を投与することを含む。
【０２５２】
加えて、対象において血管関連黄斑症、またはその症状を治療または回復させる方法が本明細書で記載され、異常脈絡毛細管小葉が対象の眼において存在し、この方法は、対象に、治療的有効量の、対象の眼において脈絡毛細管小葉の閉鎖を阻止する１つ以上の薬剤を、対象の眼において脈絡毛細管小葉における灌流を増加させる１つ以上の薬剤と組み合わせて投与することを含む。１つの態様では、血管関連黄斑症の症状は対象の眼において現れ得る。そのため、対象の眼において血管関連黄斑症の症状を治療または回復させる方法もまた本明細書で記載され、この場合、異常脈絡毛細管小葉が対象の眼において存在し、この方法は、対象に、治療的有効量の、対象の眼において脈絡毛細管小葉の閉鎖を阻止する１つ以上の薬剤を、対象の眼において脈絡毛細管小葉における灌流を増加させる１つ以上の薬剤と組み合わせて投与することを含む。
【０２５３】
さらに、対象において血管関連黄斑症、またはその症状を治療または回復させる方法が本明細書で記載され、この場合、異常脈絡毛細管小葉が対象の眼に存在し、この方法は、対象に、治療的有効量の、抗血管内皮増殖因子（抗ＶＥＧＦ）剤を、対象の眼において脈絡毛細管小葉の閉鎖または灌流減少を阻止する１つ以上の薬剤あるいは対象の眼において脈絡毛細管小葉における灌流を増加させる１つ以上の薬剤と組み合わせて投与することを含む。１つの態様では、血管関連黄斑症の症状は対象の眼において現れ得る。そのため、対象の眼において血管関連黄斑症の症状を治療または回復させる方法もまた本明細書で記載され、この場合、異常脈絡毛細管小葉が対象の眼において存在し、この方法は、対象に、治療的有効量の、抗血管内皮増殖因子（抗ＶＥＧＦ）剤を、対象の眼において脈絡毛細管小葉の閉鎖を阻止する１つ以上の薬剤、または対象の眼において脈絡毛細管小葉における灌流を増加させる１つ以上の薬剤と組み合わせて投与することを含む。抗ＶＥＧＦ剤は、限定はされないが、ベバシズマブ、ラニビズマブ、ラムシルマブ、アフリベルセプト、スニチニブ、ソラフェニブ、バンデタニブ、バタラニブ、チボザニブ、アキシチニブ、イマチニブまたはパゾパニブとすることができる。
【０２５４】
１つの態様では、本明細書で記載される、血管関連黄斑症、またはその症状を治療または回復させる方法はさらに、対象の眼において異常脈絡毛細管小葉をモニタするステップを含むことができる。
【０２５５】
対象において血管関連黄斑症、またはその症状のリスクを減少させる方法もまた本明細書で記載され、この場合、異常脈絡毛細管小葉が対象の眼に存在し、この方法は、対象に、治療的有効量の、対象の眼において脈絡毛細管小葉の閉鎖を阻止する１つ以上の薬剤を投与することを含む。１つの態様では、血管関連黄斑症の症状は対象の眼において現れ得る。そのため、対象の眼において血管関連黄斑症の症状のリスクを減少させる方法もまた本明細書で記載され、この場合、異常脈絡毛細管小葉は対象の眼に存在し、この方法は、対象に、治療的有効量の、対象の眼において脈絡毛細管小葉の、閉鎖、解剖学的または機能的閉鎖のいずれかを阻止する１つ以上の薬剤を投与することを含む。
【０２５６】
本明細書では、「リスクを減少させる」という句は、「防止する」または「防止すること」と同じことを意味することができ、とりわけ事前作用により、何かが起こるのを妨げる、防ぐ、除去する、未然に防ぐ、中止する、遅延させるまたは妨害することを示す。減少させる、阻止するまたは防止するが本明細書で使用される場合、特定的に別記されない限り、他の２つの用語の使用もまた、明示的に開示されることが理解される。
【０２５７】
１つの態様では、脈絡毛細管小葉の閉鎖を阻止する１つ以上の薬剤は、眼に直接投与することができる。点眼として知られているこの投与経路は、当業者に知られている様々な手段により達成することができる。例えば、限定はされないが、１つまたは複数の薬剤は、治療の必要な対象の眼にクリーム、軟膏、または液滴調製物を対象の眼瞼内側に、対象の眼に噴霧されるミストの使用により、または硝子体内注射により置くことにより、提供され得る。点眼はさらに、局所投与、結膜下投与、テノン嚢下投与、眼球上投与、眼球後投与、眼窩内投与、眼周囲注射、および眼内投与（硝子体内投与を含む）を含むことができる。
【０２５８】
１つの態様では、１つまたは複数の薬剤の点眼は全身送達、例えば静脈内送達、一方向性強膜上インプラント、中空マイクロニードル、固体コートマイクロニードル、浮遊性硝子体内インプラント、または強膜に固定された硝子体内インプラントの使用により達成することができる。１つまたは複数の薬剤の点眼はまた、局所イオン導入の使用により達成することができる。イオン導入は、化合物を眼内に送達する非侵襲的方法である。これは、化合物と同じ電荷を有する小電流を適用し、反発起電力を発生させ、化合物の前眼部および後眼部への送達を可能にすることにより実施することができる。Ｅｄｅｌｈａｕｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ：  Ｂａｓｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｔｏ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  ＩＯＶＳ  ２０１０：  ５１（１１）  ５４０３−５４１９（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）は、これらの様々な点眼方法を記載する。
【０２５９】
「治療の必要な対象」という句は、障害の治療の必要性に基づく対象の選択を示す。例えば、対象は、熟練者による診断に基づいて、血管関連黄斑症、またはその症状、重篤な黄斑症、後期黄斑症、または異常脈絡毛細管小葉の治療の必要性を有するものとして特定することができ、その後、障害のための治療に供せられ得る。特定は、１つの態様では、診断をする個人とは異なる個人により実施され得ることが企図される。さらなる態様では、投与は、その後に投与を実施したものにより実施され得ることもまた、企図される。
【０２６０】
（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する、または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散する開示された方法のための対象を選択する方法もまた本明細書で記載される。
【０２６１】
（ｉ）血管関連黄斑症；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を有する対象を診断する方法もまた本明細書で記載される。
【０２６２】
１つの態様では、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の存在を検出することにより対象が選択または診断される方法が本明細書で記載され、この場合、異常脈絡毛細管小葉は、（ｉ）血管関連黄斑症；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；または（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を有する対象を特定する。対象の眼における異常脈絡毛細管小葉は、本明細書で開示される方法のいずれかを用いて特定することができ、例えば、対象の眼における異常脈絡毛細管小葉は、自己蛍光イメージング技術、赤外線イメージング技術、光干渉断層撮影（ＯＣＴ）、Ｓｔｒａｔｕｓ光干渉断層撮影（Ｓｔｒａｔｕｓ  ＯＣＴ）、フーリエ領域光干渉断層撮影（Ｆｄ−ＯＣＴ）、二光子励起蛍光（ＴＰＥＦ）イメージング、適応光学走査型レーザー眼底検査（ＡＯＳＬＯ）、走査型レーザー眼底検査、スペクトルドメイン光干渉断層撮影と組み合わせた近赤外イメージング（ＳＤ−ＯＣＴ）、カラー眼底写真、眼底自発蛍光イメージング、無赤色イメージング、蛍光眼底造影、インドシアニングリーン血管造影、多焦点網膜電図（ＥＲＧ）記録、微小視野測定、カラードップラー光干渉断層撮影（ＣＤＯＣＴ）、視野評価、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ、Ｚｅｉｓｓ  Ｃｉｒｒｕｓ、Ｔｏｐｃｏｎ  ３Ｄ  ＯＣＴ  ２０００、Ｏｐｔｉｖｕｅ  ＲＴＶｕｅ  ＳＤ−ＯＣＴ、Ｏｐｋｏ  ＯＣＴ  ＳＬＯ、ＮＩＤＥＫ  Ｆ−１０、またはＯｐｔｏｐｏｌ  ＳＯＣＴ  Ｃｏｐｅｒｎｉｃｕｓ  ＨＲにより特定することができる。
【０２６３】
さらに、対象が、対象においてＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、またはＣＦＨ遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することにより選択または診断される方法が本明細書で記載され、１つ以上のＳＮＰは（ｉ）ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１０４９３３１、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ２６７２５８７、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ３７５０８４８、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ１０６１１７０、またはＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ８００２９２、または（ｉｉ）（ｉ）のＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰであり、ＳＮＰの１つ以上のバリアントの存在は、（ａ）血管関連黄斑症；（ｂ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；（ｃ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症または（ｄ）異常脈絡毛細管小葉を有する対象を特定する。例えば、対象が、対象において、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、またはＣＦＨ遺伝子における１つ以上のＳＮＰのアイデンティティーを決定することにより選択される方法が本明細書で開示され、ｒｓ１１２００６３８  ＳＮＰでのＡ、ｒｓ１０４９３３１  ＳＮＰでのＴ、ｒｓ２６７２５８７  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ１０４９０９２４  ＳＮＰでのＴ、ｒｓ３７５０８４８  ＳＮＰでのＧ、ｒｓ１０６１１７０  ＳＮＰでのＣ、またはｒｓ８００２９２  ＳＮＰでのＧが、（ａ）血管関連黄斑症；（ｂ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状；（ｃ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症または（ｄ）異常脈絡毛細管小葉を有する対象を特定する。
【０２６４】
脈絡毛細管小葉の閉鎖、解剖学的または機能的閉鎖のいずれかを阻止することができる薬剤の例としては、アスピリン、抗炎症薬、コレステロール低下薬、抗高血糖薬、血管拡張薬、昇圧剤、利尿剤、抗凝固薬、血栓溶解薬、血管内皮増殖因子薬、抗虚血後傷害薬、降圧薬、異常凝固治療薬、または他の血管治療薬が挙げられるが、それらに限定されない。
【０２６５】
血管治療薬の例としては以下が挙げられるが、それらに限定されない：Ａｍｔｕｒｎｉｄｅ（アリスキレン＋アムロジピン＋ヒドロクロロチアジド）、Ｐｒａｄａｘａ（ダビガトランエテキシレートメタンスルホン酸塩）、Ｔｅｋａｍｌｏ（アリスキレン＋アムロジピン）、Ｔｒｉｂｅｎｚｏｒ（オルメサルタンメドキソミル＋アムロジピン＋ヒドロクロロチアジド）、Ｃｉａｌｉｓ（タダラフィル）、Ａｔｒｙｎ（再構成のためのアンチトロンビン組換え凍結乾燥粉末）、Ｅｆｉｅｎｔ（プラスグレル）、Ｌｉｖａｌｏ（ピタバスタチン）、Ｍｕｌｔａｑ（ドロネダロン）、Ｔｙｖａｓｏ（トレプロスチニル）、Ｃｌｅｖｉｐｒｅｘ（クレビジピン）、Ｔｒｉｌｉｐｉｘ（フェノフィブリン酸）、Ａｚｏｒ（アムロジピンベシル酸塩；オルメサルタンメドキソミル）、フェノフィブラート、Ｌｅｔａｉｒｉｓ（アンブリセンタン）、Ｓｏｌｉｒｉｓ（エクリズマブ）、Ｔｅｋｔｕｒｎａ（アリスキレン）、Ｒａｎｅｘａ（ラノラジン）、ＢｉＤｉｌ（二硝酸イソソルビド／ヒドララジン塩酸塩）、Ｃａｄｕｅｔ（アムロジピン／アトルバスタチン）、Ｃｒｅｓｔｏｒ（ロスバスタチンカルシウム）、Ｌｅｖｉｔｒａ（バルデナフィル）、Ａｌｔｏｃｏｒ（ロバスタチン）、Ｂｅｎｉｃａｒ、Ｉｍａｇｅｎｔ（パーフレキサン脂質ミクロスフェア）、Ｉｎｓｐｒａ（エプレレノン錠剤）、Ｐｌａｖｉｘ（クロピドグレル二硫酸塩）、Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎ（トレプロスチニル）、Ａｄｖｉｃｏｒ（徐放性ナイアシン／ロバスタチン）、Ｄｉｏｖａｎ（バルサルタン）、Ｎａｔｒｅｃｏｒ（ネシリチド）、Ｔｅｖｅｔｅｎ（エプロサルタンメシル酸塩＋ヒドロクロロチアジド）、Ｔｒｉｃｏｒ（フェノフィブラート）、Ａｎｇｉｏｍａｘ（ビバリルジン）、アルガトロバン注、Ａｔａｃａｎｄ（カンデサルタンシレキセチル）、Ｂｅｔａｐａｃｅ  ＡＦ錠剤、ジルチアゼムＨＣＬ、Ｉｎｎｏｈｅｐ（チンザパリンナトリウム）、Ｌｅｓｃｏｌ  ＸＬ（フルバスタチンナトリウム）、Ｍｉｃａｒｄｉｓ  ＨＣＴ（テルミサルタンおよびヒドロクロロチアジド）、Ｎｉｔｒｏｓｔａｔ（ニトログリセリン）、Ｌｅｓｃｏｌ（フルバスタチンナトリウム）、Ｍｅｖａｃｏｒ（ロバスタチン）、Ｎｉａｓｐａｎ、Ａｇｒｙｌｉｎ（アナグレリドＨＣＬ）、Ａｔａｃａｎｄ（カンデサルタンシレキセチル）、Ａｔａｃａｎｄ（カンデサルタンシレキセチル）、ＣｅｌｌＣｅｐｔ、Ｄｉｏｖａｎ  ＨＣＴ（バルサルタン）、Ｉｎｔｅｇｒｉｌｉｎ、Ｍｉｃａｒｄｉｓ（テルミサルタン）、Ｒｙｔｈｍｏｌ、Ｔｉａｚａｃ（ジルチアゼム塩酸塩）、Ｔｉａｚａｃ（ジルチアゼム塩酸塩）、Ｔｒｉｃｏｒ（フェノフィブラート）、Ｖｉａｇｒａ、Ｂａｙｃｏｌ（セリバスタチンナトリウム）、カプトプリルおよびヒドロクロロチアジド、Ｃａｒｄｉｚｅｍ、Ｃｏｒｌｏｐａｍ、Ｄｉｏｖａｎ（バルサルタン）、ＤｙｎａＣｉｒｃ  ＣＲ、ＥＤＥＸ、Ｌｅｓｃｏｌ（フルバスタチンナトリウム）、Ｌｅｘｘｅｌ（エナラプリルマレイン酸塩フェロジピンＥＲ）、Ｍｉｃｒｏｚｉｄｅ（ヒドロクロロチアジド）、Ｎｏｒｍｉｆｌｏ、Ｐｅｎｔｏｘｉｆｙｌｌｉｎｅ、ピンドロール、Ｐｌａｖｉｘ（クロピドグレル二硫酸塩）、Ｐｏｓｉｃｏｒ、ＲｅｏＰｒｏ、ＲＥ��ＲＯＮＥＸ（注射用メノトロピン、ＵＳＰ）、Ｔｅｖｅｔｅｎ（エプロサルタンメシル酸塩）、ベラパミル、ワルファリンナトリウム、Ｚｏｃｏｒ、Ｃｏｖｅｒａ−ＨＳ（ベラパミル）、Ｍａｖｉｋ（トランドラプリル）、Ｍｕｓｅ、Ｐｒａｖａｃｈｏｌ（プラバスタチンナトリウム）、Ｐｒａｖａｃｈｏｌ（プラバスタチンナトリウム）、ＰｒｏＡｍａｔｉｎｅ（ミドドリン）、Ｐｒｏｃａｎｂｉｄ（プロカインアミド塩酸塩徐放性錠剤）、Ｒｅｔａｖａｓｅ（レテプラーゼ）、Ｔｅｃｚｅｍ（エナラプリルマレイン酸塩／ジルチアゼムリンゴ酸塩）、Ｔｉａｚａｃ（ジルチアゼム塩酸塩）、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（イオジキサノール）、Ａｎｄｒｏｄｅｒｍ（テストステロン経皮系）、Ｃｏｒｖｅｒｔ注（イブチリドフマル酸塩注）、ＰｒｉｎｉｖｉｌまたはＺｅｓｔｒｉｌ（リシノプリル）、またはＴｏｐｒｏｌ−ＸＬ（メトプロロールコハク酸塩）。
【０２６６】
本明細書で記載される方法で使用することができる追加の治療薬としては以下が挙げられるが、それらに限定されない：β−アドレナリン遮断薬、例えばベタキソロール、プロプラノロール、ナドロール、メトプロロール、アテノロール、カルベジロール、メトプロロール、ネビボロール、ラベタロール、ソタロール、チモロール、エスモロール、カルテオロール、ペンブトロール、アセブトロール、ピンドロール、およびビソプロロール；異常凝固薬物、例えば、ヘパリン、エノキサパリン、ダルテパリン、クマジン、ＴＰＡ、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、ジピラミドール、チクロピジン（Ｔｉｃｌｉｄ）、クロピドグレル（Ｐｌａｖｉｘ）、アブシキシマブ（Ｒｅｏｐｒｏ）、エプチフィバチド（Ｉｎｔｅｇｒｉｌｉｎ）、およびチロフィバン（Ａｇｇｒａｓｔａｔ）；利尿剤、例えばアセタゾラミド、ジクロフェナミド、メタゾラミド、トルセミド、フロセミド、ブメタニド、エタクリン酸、パマブロム、スピロノラクトン、スピロノラクトン、アミロライド、トリアムテレン、インダパミド、メチクロチアジド、ヒドロクロロチアジド、クロロチアジド、メトラゾン、ベンドロフルメチアジド、ポリチアジド、ヒドロフルメチアジド、およびクロルタリドン；Ｃａ2+チャネル遮断薬、例えばジルチアゼム、ニモジピン、ベラパミル、ニフェジピン、アムロジピン、フェロジピン、イスラジピン、クレビジピン、ベプリジル、およびニソルジピン；ニトロ拡張薬、例えばニトログリセリン、アルプロスタジル、ヒドララジン、ミノキシジル、ネシリチド、一硝酸イソソルビド、およびニトロプルシド；α−アドレナリン受容体拮抗薬またはα−遮断薬、例えばドキサゾシン、プラゾシン、テラゾシン、アルフゾシン、タムスロシン、およびシロドシン；アンジオテンシン変換酵素阻害剤、例えばトランドラプリル、ホシノプリル、エナラプリル、ラミプリル、カプトプリル、モエキシプリル、リシノプリル、キナプリル、ベナゼプリル、およびペリンドプリル；アンジオテンシン受容体遮断薬またはＡＲＢ、例えばエプロサルタン、オルメサルタン、テルミサルタン、ロサルタン、バルサルタン、イルベサルタン、およびカンデサルタン；レニン阻害剤、例えばアリスキレン；末梢昇圧薬、例えばシクランデレート、パパベリン、およびイソクスプリン；β−作動薬、例えばエピネフリン、ノルエピネフリン、ドパミン、ドブタミン、およびイソプロテレノール；強心配糖体、例えばウアバイン、ジギタリス、ジゴキシン、およびジギトキシン；ホスホジエステラーゼ阻害剤、例えばミルリノン、イナムリノン、シロスタゾール、シルデナフィル、およびタダラフィル；バソプレシン類似体、例えばアルギニンバソプレシンおよびテルリプレシン；抗凝固薬；クマリンおよびインダンジオン、例えばワルファリンおよびアニシンジオン；第Ｘａ因子インヒビター、例えばフォンダパリヌクス；ヘパリン、例えばダルテパリン、チンザパリン、エノキサパリン、アルデパリン、およびダナパロイド；血小板凝集阻害剤、例えばアスピリン、プラスグレル、シロスタゾール、クロピドグレル、ジピリダモール、およびチクロピジン；トロンビン阻害剤、例えばアルガトロバン、ビバリルジン、デシルジン、およびレピルジン；��炎症薬；ステロイド、例えばプレドニゾン、プレドニゾロン、およびヒドロコルチゾン；眼用抗炎症薬、例えばネパフェナク、ケトロラク、フルルビプロフェン、スプロフェン、シクロスポリン、トリアムシノロン、ジクロフェナク、およびブロムフェナク；非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）、例えばイブプロフェン、ケトプロフェン、エトドラク、フェノプロフェン、ナプロキセン、スリンダク、インドメタシン、ピロキシカム、メフェナム酸、オキサプロジン、およびトルメチン；コレステロール低下薬；スタチン、例えばアトルバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、セリバスタチン、ピタバスタチン、およびロスバスタチン；ナイアシン、アスピリン、エゼチミブ、およびデキストロチロキシン；フィブリン酸、例えばゲムフィブロジル、フェノフィブラート、およびクロフィブラート；抗高血糖薬；分泌促進物質、例えばグリピジド、グリメピリド、グリブリド、クロルプロパミド、アセトヘキサミド、トルブタミド、トラザミド、レパグリニド、およびナテグリニド；インスリン感受性改善薬、例えばロシグリタゾン、ピオグリタゾン、トログリタゾン、メトホルミン、ブホルミン、およびフェンホルミン；α−グルコシダーゼ阻害剤、例えばミグリトール、アカルボース；ペプチド類似体、例えばエクセナチド、サクサグリプチン、シタグリプチン、リラグルチド、タスポグルチド、およびプラムリンチド；ならびに虚血後傷害を阻止する薬物、例えばリコピン、グルタメート、抗Ｔ−リンパ球グロブリン、ＥＰＯ、ピルビン酸エチル、ジアネキシン、Ａ−００２（Ａｔｈｅｒａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＰＬＡ２阻害）、Ｐｙｃｎｏｇｅｎｏｌ（登録商標）、ＤＰ−ｂ９９（Ｄ−Ｐｈａｒｍ、金属キレート剤）、リバーロキサバン（単独またはまたはチエノピリジンと組み合わせて）、Ｖｉｐｒｉｎｅｘ（商標）（Ａｎｃｒｏｄ）、Ｏｍｅｃａｍｔｉｖ  ｍｅｃａｒｂｉｌ（ＣＫ−１８２７４５２）、ジンセノサイド−Ｒｄ、テネクテプラーゼ、ロチガプチド、デスモテプラーゼ、Ｏｔａｍｉｘａｂａｎ（ＸＲＰ０６７３）、エプレレノン、ＳＣＨ  ５３０３４８、ラニビズマブ、Ａｌｔｅｐｌａｓｅ、アルガトロバン、ヒト組換え線維芽細胞増殖因子１（ＦＧＦ  １−１４１）、エプチフィバチド、ＦＸ０６（フィブリン由来ペプチド）、およびアピキサバン。
【０２６７】
本明細書で記載される薬剤の多くは、１を超える効果および機能を有し得ることは当技術分野でよく知られている。特定的には、記載される薬剤の多くは、脈絡毛細管小葉の閉鎖または閉塞を防止または阻止し、脈絡毛細管小葉における血流を増加させ、標的組織および器官、例えば、ヒトの眼の脈絡膜、心臓、脳、脊髄、筋肉、骨、眼、耳、腎臓、子宮、胎盤、皮膚、粘膜、胃、肝臓、肺、胆嚢、脾臓、虫垂、小腸、大腸、膵臓、前立腺、または膀胱などへの灌流を増加させることができる。
【０２６８】
虚血後傷害に至らしめる様々な経路の妨害に向けられる薬剤は、開示された方法において使用することができることもまた、企図される。そのような経路の例としては、ＮＦ−κΒに関連するもの、塩基性線維芽細胞増殖因子、キナーゼ経路（ＰＩ３、Ａｋｔ、Ｒａｓ、ＭＡＰＫ）、および他の経路（カスパーゼ、ＳＯＤ、カタラーゼ、プロスタグランジンＥ１、プロスタグランジンＥ２、トロンボスポンジン、およびＦａｓ受容体）、などが挙げられるが、それらに限定されない。
【０２６９】
１つの態様では、脈絡毛細管小葉の閉鎖を阻止する１つ以上の薬剤は、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２核酸またはペプチドにハイブリダイズする１つまたは複数の薬剤と併用することができる。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２標的剤は、限定はされないが、核酸、機能性核酸、アプタマー、リボザイム、三本鎖形成分子、および外部ガイド配列、ペプチド核酸、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、モルフォリノ、抗体、ペプチド、または小分子とすることができる。さらに、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２標的剤は、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２の発現または活性を阻止する薬剤とすることができる。例えば、限定はされないが、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２発現または活性は、約５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％だけ阻止することができる。よって、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２発現または活性は、約５％〜約１００％（５％〜１００％の間の全ての阻害パーセンテージ値を含む）だけ阻止することができる。
【０２７０】
２．機能性核酸
開示されるポリヌクレオチドと相互作用することができる機能性核酸が開示される。機能性核酸は、例えば、標的分子に結合する、または特異反応を触媒するなどの特定の機能を有する核酸分子である。機能性核酸分子は、以下のカテゴリーに分けることができるが、これらは限定することを意味しない。例えば、機能性核酸としては、アンチセンス分子、アプタマー、リボザイム、三本鎖形成分子、および外部ガイド配列が挙げられる。機能性核酸分子は、標的分子が有する比活性のエフェクター、阻害剤、モジュレーター、および刺激装置として作用することができ、または機能性核酸分子は、任意の他の分子と独立した新規活性を有し得る。
【０２７１】
機能性核酸分子は、任意の高分子、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ、ポリペプチド、または糖鎖と相互作用することができる。よって、機能性核酸は、本明細書で記載されるポリヌクレオチド配列のｍＲＮＡまたは本明細書で記載されるポリヌクレオチド配列のゲノムＤＮＡと相互作用することができ、あるいはこれらは本明細書で記載されるポリヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチドと相互作用することができる。しばしば、機能性核酸は、標的分子と機能性核酸分子の間の配列相同性に基づき、他の核酸と相互作用するように設計される。他の状況では、機能性核酸分子と標的分子の間の特異的認識は、機能性核酸分子と標的分子の間の配列相同性に基づかず、むしろ特異的認識が起こるのを可能にする三次構造の形成に基づく。
【０２７２】
３．アンチセンス分子
開示されるポリヌクレオチドと相互作用するアンチセンス分子が本明細書で記載される。アンチセンス分子は、正準または非正準塩基対形成のいずれかを介して標的核酸分子と相互作用するように設計される。アンチセンス分子および標的分子の相互作用は、例えば、ＲＮＡｓｅＨ媒介ＲＮＡ−ＤＮＡハイブリッド分解を介して標的分子の破壊を促進するように設計される。また、アンチセンス分子は、標的分子上で正常に起こるプロセシング機能、例えば転写または複製を妨害するように設計される。アンチセンス分子は標的分子の配列に基づいて設計することができる。標的分子の最もアクセス可能な領域を見出すことによるアンチセンス効率の最適化のための多数の方法が存在する。例となる方法は、インビトロ選択実験ならびにＤＭＳおよびＤＥＰＣを使用するＤＮＡ修飾研究である。アンチセンス分子が、１０-6、１０-8、１０-10、または１０-12未満かそれに等しい解離定数（ｋd）で標的分子に結合することが好ましい。アンチセンス分子の設計および使用を助ける方法および技術の代表サンプルが、以下の米国特許の非限定的リストで見出され得る：５，１３５，９１７号、５，２９４，５３３号、５，６２７，１５８号、５，６４１，７５４号、５，６９１，３１７号、５，７８０，６０７号、５，７８６，１３８号、５，８４９，９０３号、５，８５６，１０３号、５，９１９，７７２号、５，９５５，５９０号、５，９９０，０８８号、５，９９４，３２０号、５，９９８，６０２号、６，００５，０９５号、６，００７，９９５号、６，０１３，５２２号、６，０１７，８９８号、６，０１８，０４２号、６，０２５，１９８号、６，０３３，９１０号、６，０４０，２９６号、６，０４６，００４号、６，０４６，３１９号、および６，０５７，４３７号（これらの各々は、改変およびこれに関連する方法の教示のために、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０２７３】
一般に、「アンチセンス」という用語は、いくらかの配列相補性のおかげでＲＮＡ配列の一部分（例えばｍＲＮＡ）にハイブリダイズすることができる核酸分子を示す。本明細書で記載されるアンチセンス核酸は、二本鎖もしくは一本鎖であるオリゴヌクレオチド、ＲＮＡもしくはＤＮＡまたはその修飾物もしくは誘導体とすることができ、これらは直接細胞に投与することができ（例えば、アンチセンス分子を対象に投与することによる）、またはこれらは外因性の、導入された配列の転写により細胞内で産生させることができる（例えば、対象に、アンチセンス分子を含むベクターを、プロモーターの制御下で投与することによる）。
【０２７４】
アンチセンス核酸は、少なくとも６ヌクレオチドの長さ、少なくとも１０ヌクレオチド、少なくとも１５ヌクレオチド、少なくとも２０ヌクレオチド、少なくとも１００ヌクレオチド、少なくとも２００ヌクレオチド、例えば６〜１００ヌクレオチドであるポリヌクレオチド、例えば核酸分子である。しかしながら、アンチセンス分子はずっと長くすることができる。特定の例では、ヌクレオチドは、１つ以上の塩基部分、糖部分、またはリン酸骨格（またはそれらの組み合わせ）で修飾され、他の付加基、例えばペプチド、または細胞膜（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １９８９、８６：６５５３−６；  Ｌｅｍａｉｔｒｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １９８７、８４：６４８−５２；ＷＯ  ８８／０９８１０）または血液脳関門（ＷＯ  ８９／１０１３４）を横切る輸送を促進する薬剤、ハイブリダイゼーション誘発切断剤（Ｋｒｏｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １９８８，  ６：９５８−７６）、または挿入剤（Ｚｏｎ、Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．  ５：５３９−４９、１９８８）を含むことができる。追加の修飾としては、米国特許第６，６０８，０３５号、７，１７６，２９６号；７，３２９，６４８号；７，２６２，４８９号、７，１１５，５７９号；および７，１０５，４９５号において明記されているものが挙げられる。
【０２７５】
修飾塩基部分の例としては以下が挙げられるが、それらに限定されない：５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、アセチルシトシン、５（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルクエオシン、イノシン、Ｎ〜６−ソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、メトキシアルニノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルクエオシン、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸、シュードウラシル、クエオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−Ｓ−オキシ酢酸、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、および２，６−ジアミノプリン。
【０２７６】
修飾糖部分の例としては、以下が挙げられるが、それらに限定されない：アラビノース、２−フルオロアラビノース、キシロース、およびヘキソース、またはリン酸骨格の修飾構成要素、例えばホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホラミドチオエート、ホスホラミデート、ホスホルジアミデート、メチルホスホネート、アルキルホスホトリエステル、またはホルムアセタールあるいはそれらの類似体。
【０２７７】
特定の例では、アンチセンス分子はα−アノマーオリゴヌクレオチドである。α−アノマーオリゴヌクレオチドは、相補ＲＮＡと特異的二本鎖ハイブリッドを形成し、この場合、通常のβ−ユニットに反して、鎖は互いに平衡に走っている（Ｇａｕｔｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １５：６６２５−４１、１９８７）。オリゴヌクレオチドは、別の分子、例えばペプチド、ハイブリダイゼーション誘発架橋剤、輸送剤、またはハイブリダイゼーション誘発切断剤に結合させることができる。オリゴヌクレオチドは、宿主細胞による分子の取り込みを増強する標的部分を含むことができる。標的部分は、特異的結合分子、例えば宿主細胞の表面上に存在する分子を認識する抗体またはその断片とすることができる。
【０２７８】
特定の例では、本明細書で明記される核酸を認識するアンチセンス分子は、触媒ＲＮＡまたはリボザイムを含む（例えば、ＷＯ  ９０／１１３６４；ＷＯ  ９５／０６７６４；およびＳａｒｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：１２２２−５，  １９９０を参照されたい）。アンチセンスの金属錯体、例えばターピリジルＣｕ（ＩＩ）との結合体は、ｍＲＮＡ加水分解を媒介することができ、Ｂａｓｈｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  （Ａｐｐｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ５４：４３−５６，  １９９５）において記載される。１つの例では、アンチセンスヌクレオチドは２’−０−メチルリボヌクレオチド（Ｉｎｏｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １５：６１３１−４８，  １９８７）、またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡ類似体（Ｉｎｏｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ２１５：３２７−３０，  １９８７）である。
【０２７９】
アンチセンス分子は、統合ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．（１７１０  Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ Ｐａｒｋ，  Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ，  ＩＡ ５２２４１ ＵＳＡ；  （ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｄｔｄｎａ．ｃｏｍ／Ｓｃｉｔｏｏｌｓ／Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ／ＡｎｔｉＳｅｎｓｅ／Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ．ａｓｐｘ／）のアンチセンス設計アルゴリズムを使用することにより生成させることができる。
【０２８０】
４．ｓｉＲＮＡ
低分子干渉（Ｓｈｏｒｔ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ）ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、低分子干渉（ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ）ＲＮＡとしても知られており、配列特異的転写後遺伝子サイレンシングを誘導し、よって遺伝子発現を減少させることができる二本鎖ＲＮＡである（例えば、米国特許第６，５０６，５５９号、７，０５６，７０４号、７，０７８，１９６号、６，１０７，０９４号、５，８９８，２２１号、６，５７３，０９９号、および欧州特許第１．１４４，６２３号を参照されたい、これらは全てこの参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ｓｉＲＮａは、それらの機能を維持する限り様々な長さを有することができる。いくつかの例では、ｓｉＲＮＡ分子は約１９〜２３ヌクレオチドの長さ、例えば少なくとも２１ヌクレオチド、例えば少なくとも２３ヌクレオチドである。１つの例では、ｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡおよび標的ＲＮＡの両方の間の配列相同性の領域内の相同ＲＮＡ分子、例えばｍＲＮＡの特異的分解を誘発する。例えば、ＷＯ  ０２／４４３２１は、３’オーバーハング端と塩基対形成されると、標的ｍＲＮＡの配列特異的分解を可能にするｓｉＲＮＡを開示する。ｄｓＲＮＡプロセシングの向きは、センスまたはアンチセンスのいずれの標的ＲＮＡが、生成されたｓｉＲＮＡエンドヌクレアーゼ複合体により切断され得るかを決定する。よって、ｓｉＲＮＡは、例えば、表１に明記される遺伝子の発現を減少させることにより、転写または翻訳を調節するために使用することができる。ｓｉＲＮＡの効果は、様々な生物、例えばショウジョウバエ、Ｃ．エレガンス、昆虫、カエル、植物、真菌、マウスおよびヒト由来の細胞において証明されている（例えば、ＷＯ  ０２／４４３２１；  Ｇｉｔｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ４１８：４３０−４，  ２００２；  Ｃａｐｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ９８：９７４２−９７４７，  ２００１；  ａｎｄ  Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ４１１：４９４−８，  ２００１）。
【０２８１】
配列分析ツールを使用して、当業者は、遺伝子発現の減少のために、表１に明記される任意の遺伝子を特異的に標的とするｓｉＲＮＡを設計することができる。遺伝子発現を阻止または停止させるｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡを合成する多数の商業的実体、例えば、Ａｍｂｉｏｎ  Ｉｎｃ．（２１３０  Ｗｏｏｄｗａｒｄ  Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ  ７８７４４−１８３２，ＵＳＡ）、Ｑｉａｇｅｎ  Ｉｎｃ．（２７２２０  Ｔｕｒｎｂｅｒｒｙ  Ｌａｎｅ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ  ＵＳＡ）およびＤｈａｒｍａｃｏｎ  Ｉｎｃ．（６５０  Ｃｒｅｓｃｅｎｔ  Ｄｒｉｖｅ，＃１００  Ｌａｆａｙｅｔｔｅ，ＣＯ  ８００２６，ＵＳＡ）から得ることができる。Ａｍｂｉｏｎ  Ｉｎｃ．、Ｑｉａｇｅｎ  Ｉｎｃ．またはＤｈａｒｍａｃｏｎ  Ｉｎｃにより合成されるｓｉＲＮＡは、これらのおよび他の事業体から、表１に明記される任意の遺伝子のｍＲＮＡに対するＧｅｎＢａｎｋ受入番号を提供することにより、容易に入手することができる。加えて、ｓｉＲＮＡは、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＢＬＯＣＫ−ＩＴ（商標）ＲＮＡｉ  Ｄｅｓｉｇｎｅｒ  ｈｔｔｐｓ：／／ｒｎａｉｄｅｓｉｇｎｅｒ．ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ．ｃｏｍ／ｒｎａｉｅｘｐｒｅｓｓを使用することにより生成させることができる。
【０２８２】
５．ｓｈＲＮＡ
ｓｈＲＮＡ（低分子ヘアピン型ＲＮＡ）は、ＲＮＡｉ干渉研究のために、発現ベクターにクローン化され、ｓｉＲＮＡ（典型的には１９−２９  ｎｔ  ＲＮＡ二本鎖）を発現することができるＤＮＡ分子である。ｓｈＲＮＡは以下の構造特徴を有する：標的遺伝子由来の約１９〜２９ヌクレオチドの範囲の短いヌクレオチド配列、続いて約４〜１５ヌクレオチドの短いスペーサー（すなわち、ループ）および最初の標的配列の逆転相補体である約１９〜２９ヌクレオチド配列。
【０２８３】
６．モルフォリノ
モルフォリノは他の分子のリボ核酸（ＲＮＡ）の小（約２５塩基）領域へのアクセスを遮断することができる合成アンチセンスオリゴである。モルフォリノはしばしば、逆遺伝学法を用いて、ｍＲＮＡへのアクセスを遮断することにより、遺伝子機能を決定するために使用される。モルフォリノは、通常約２５塩基の長さであり、ＲＮＡの相補配列に、標準核酸塩基対形成により結合する。モルフォリノは、それらの標的ＲＮＡ分子を分解しない。代わりに、モルフォリノは「立体障害」により、ＲＮＡ内の標的配列に結合して、単純に、そうでなければＲＮＡと相互作用する分子を妨害して作用する。モルフォリノは、マウスからヒトにわたる哺乳動物において使用されている。
【０２８４】
メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の５’−非翻訳領域に結合され、モルフォリノは５’キャップから開始コドンへのリボソーム開始複合体の進行を妨害し得る。これは、標的転写物のコード領域の翻訳を防止する（遺伝子発現を「ノックダウンする」と呼ばれる）。モルフォリノはまた、ｍＲＮＡ前駆体プロセシングステップを、通常スプライス指向ｓｎＲＮＰ複合体がそれらの標的に、ＲＮＡ前駆体の鎖上のイントロンの境界で結合しないように防止することにより妨害し得る。Ｕ１（ドナー部位）またはＵ２／Ｕ５（ポリピリミジン部分およびアクセプター部位）の結合の防止は、修飾スプライシングを引き起こし得、一般に、エクソンの成熟ｍＲＮＡからの排除に至らしめる。いくつかのスプライス標的を標的とするとイントロン包含となり、一方、隠れたスプライス部位の活性化は、部分包含または排除に至らしめ得る。Ｕ１１／Ｕ１２  ｓｎＲＮＰの標的もまた、遮断され得る。スプライス修飾は、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）により都合よくアッセイすることができ、ＲＴ−ＰＣＲ産物のゲル電気泳動後にバンドシフトとして見られる。モルフォリノの設計、製造および使用方法は米国特許第６，８６７，３４９号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）において開示される。
【０２８５】
７．アプタマー
開示されるポリヌクレオチドと相互作用するアプタマーもまた開示される。アプタマーは標的分子と、好ましくは特異的様式で相互作用する分子である。典型的にはアプタマーは、規定される二次および三次構造、例えばステムループまたはＧ−カルテットに折り畳まれた、１５〜５０塩基の長さの小核酸である。アプタマーは小分子、例えばＡＴＰ（米国特許５，６３１，１４６号）およびテオフィリン（米国特許５，５８０，７３７号）、ならびに大分子、例えば逆転写酵素（米国特許５，７８６，４６２号）およびトロンビン（米国特許５，５４３，２９３号）に結合することができる。アプタマーは、１０-12Ｍ未満の標的分子にｋdで非常に強固に結合することができる。アプタマーは標的分子に１０-6、１０-8、１０-10、または１０-12未満のｋdで結合することが好ましい。アプタマーは、標的分子に非常に高い特異度で結合することができる。例えば、標的分子と、分子上の単一の位置のみが異なる別の分子の間の結合親和性で１００００倍より大きい差を有するアプタマーが単離されている（米国特許５，５４３，２９３号）。アプタマーはバックグラウンド結合分子とのｋdよりも少なくとも１０、１００、１０００、１０，０００、または１００，０００倍低い、標的分子とのｋdを有することが好ましい。例えばポリペプチドに対して、比較する場合、バックグラウンド分子は異なるポリペプチドであることが好ましい。例えば、アプタマーの特異性を決定する場合、バックグラウンドタンパク質はｅｆ−１αとすることができる。様々な異なる標的分子に結合させるためのアプタマーの製造および使用方法の代表例は、米国特許の、以下の非限定的リストにおいて見出され得る：５，４７６，７６６号、５，５０３，９７８号、５，６３１，１４６号、５，７３１，４２４号、５，７８０，２２８号、５，７９２，６１３号、５，７９５，７２１号、５，８４６，７１３号、５，８５８，６６０号、５，８６１，２５４号、５，８６４，０２６号、５，８６９，６４１号、５，９５８，６９１号、６，００１，９８８号、６，０１１，０２０号、６，０１３，４４３号、６，０２０，１３０号、６，０２８，１８６号、６，０３０，７７６号、および６，０５１，６９８号。
【０２８６】
８．リボザイム
開示されるポリヌクレオチドと相互作用するリボザイムもまた開示される。リボザイムは、化学反応を分子内または分子間のいずれかで触媒することができる核酸分子である。よって、リボザイムは触媒核酸である。リボザイムは、分子間反応を触媒することが好ましい。ヌクレアーゼまたは核酸ポリメラーゼ型反応を触媒する多くの異なる型のリボザイムが存在し、それらは、以下に基づく：自然系において見出されるリボザイム、例えばハンマーヘッド型リボザイム、（例えば、限定はされないが、下記米国特許：５，３３４，７１１号、５，４３６，３３０号、５，６１６，４６６号、５，６３３，１３３号、５，６４６，０２０号、５，６５２，０９４号、５，７１２，３８４号、５，７７０，７１５号、５，８５６，４６３号、５，８６１，２８８号、５，８９１，６８３号、５，８９１，６８４号、５，９８５，６２１号、５，９８９，９０８号、５，９９８，１９３号、５，９９８，２０３号、ＬｕｄｗｉｇおよびＳｐｒｏａｔによるＷＯ  ９８５８０５８号、ＬｕｄｗｉｇおよびＳｐｒｏａｔによるＷＯ  ９８５８０５７号、ならびにＬｕｄｗｉｇおよびＳｐｒｏａｔによるＷＯ  ９７１８３１２号）ヘアピンリボザイム（例えば、限定はされないが、下記米国特許：５，６３１，１１５号、５，６４６，０３１号、５，６８３，９０２号、５，７１２，３８４号、５，８５６，１８８号、５，８６６，７０１号、５，８６９，３３９号、および６，０２２，９６２号）、ならびにテトラヒメナリボザイム（例えば、限定はされないが下記米国特許：５，５９５，８７３号および５，６５２，１０７号）。自然系で見出されない多くのリボザイムもまた存在するが、それらは、新規特異反応を触媒するように操作されている（例えば、限定はされないが以下米国特許：５，５８０，９６７号、５，６８８，６７０号、５，８０７，７１８号、および５，９１０，４０８号）。好ましいリボザイムはＲＮＡまたはＤＮＡ基質を切断し、より好ましくはＲＮＡ基質を切断する。リボザイムは典型的には、標的基質の認識および結合、その後の切断を介して、核酸基質を切断する。この認識は、主に正準または非正準塩基対相互作用にしばしば基づく。この特性により、リボザイムは核酸の標的特異的切断のために特に良好な候補となる。というのは、標的基質の認識は、標的基質の配列に基づくからである。様々な異なる反応を触媒するリボザイムの製造および使用方法の代表例は、米国特許の下記非限定的リストにおいて見出され得る：５，６４６，０４２号、５，６９３，５３５号、５，７３１，２９５号、５，８１１，３００号、５，８３７，８５５号、５，８６９，２５３号、５，８７７，０２１号、５，８７７，０２２号、５，９７２，６９９号、５，９７２，７０４号、５，９８９，９０６号、および６，０１７，７５６号。
【０２８７】
９．三本鎖形成機能性核酸分子
開示されるポリヌクレオチドと相互作用する三本鎖形成機能性核酸分子もまた開示される。三本鎖形成機能性核酸分子は二本鎖または一本鎖核酸のいずれかと相互作用することができる分子である。三本鎖分子が標的領域と相互作用すると、三本鎖と呼ばれる構造が形成され、この場合、Ｗａｔｓｏｎ−ＣｒｉｃｋおよびＨｏｏｇｓｔｅｅｎ塩基対形成の両方に依存する複合体を形成するＤＮＡの３つの鎖が存在する。三本鎖分子は高い親和性および特異性で標的領域に結合することができるので好ましい。三本鎖形成分子は標的分子に、１０-6、１０-8、１０-10、または１０-12未満のｋdで結合することが好ましい。様々な異なる標的分子に結合する三本鎖形成分子の製造および使用方法の代表例は米国特許の非限定的リストにおいて見出され得る：５，１７６，９９６号、５，６４５，９８５号、５，６５０，３１６号、５，６８３，８７４号、５，６９３，７７３号、５，８３４，１８５号、５，８６９，２４６号、５，８７４，５６６号、および５，９６２，４２６号。
【０２８８】
１０．外部ガイド配列
開示されるポリヌクレオチドと複合体を形成する外部ガイド配列もまた開示される。外部ガイド配列（ＥＧＳ）は標的核酸分子に結合し、複合体を形成する分子であり、この複合体は、標的分子を切断するＲＮａｓｅ  Ｐにより認識される。ＥＧＳは、選択されたＲＮＡ分子を特異的に標的にするように設計することができる。ＲＮＡｓｅ  Ｐ細胞内での転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）のプロセシングを助ける。細菌ＲＮＡｓｅ  Ｐは、標的ＲＮＡ：ＥＧＳ複合体に天然ｔＲＮＡ基質を模倣させるＥＧＳを使用することにより、実質的に全てのＲＮＡ配列を切断するように動員され得る（ＹａｌｅによるＷＯ  ９２／０３５６６号、ならびにＦｏｒｓｔｅｒ  ａｎｄ  Ａｌｔｍａｎ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：４０７−４０９  （１９９０））。
【０２８９】
同様に、ＲＮＡの真核生物ＥＧＳ／ＲＮＡｓｅ  Ｐ依存性切断を利用して、真核生物細胞内の所望の標的を切断することができる。（Ｙｕａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８９：８００６−８０１０  （１９９２）；ＹａｌｅによるＷＯ  ９３／２２４３４号；  ＹａｌｅによるＷＯ  ９５／２４４８９号；  Ｙｕａｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｍａｎ，  ＥＭＢＯ  Ｊ  １４：１５９−１６８  （１９９５）、およびＣａｒｒａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （ＵＳＡ）  ９２：２６２７−２６３１  （１９９５））。様々な異なる標的分子の切断を促進するＥＧＳ分子の製造および使用方法の代表例は米国特許の以下の非限定的リストにおいて見出され得る：５，１６８，０５３号、５，６２４，８２４号、５，６８３，８７３号、５，７２８，５２１号、５，８６９，２４８号、および５，８７７，１６２号。
【０２９０】
１１．ペプチド核酸
ペプチド核酸（ＰＮＡ）組成物を含むポリヌクレオチドもまた開示される。ＰＮＡは、核酸塩基がプソイドペプチド骨格に付着されたＤＮＡ模倣物である（Ｇｏｏｄ  ａｎｄ  Ｎｉｅｌｓｅｎ，  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．  １９９７；  ７（４）  ４３１−３７）。ＰＮＡは、従来ＲＮＡまたはＤＮＡを使用してきた多くの方法において使用することができる。しばしば、ＰＮＡ配列は、対応するＲＮＡまたはＤＮＡ配列よりも技術においてより良好に機能し、ＲＮＡまたはＤＮＡに備わっていない有用性を有する。製造方法、特徴、使用方法を含むＰＮＡの概説が、Ｃｏｒｅｙにより提供される（Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １９９７  Ｊｕｎｅ；  １５（６）：２２４−９）。したがって、ある一定の実施形態では、開示されるポリヌクレオチドに基づくＲＮＡ配列の１つ以上の部分に相補的であるＰＮＡ配列を調製することができ、そのようなＰＮＡ組成物は、開示されるポリヌクレオチド、転写されるｍＲＮＡの翻訳を制御し、変化させ、減少させ、または低減させるため使用することができ、よって、そのようなＰＮＡ組成物が投与された宿主細胞において、開示されるポリヌクレオチドの活性のレベルが変化する。
【０２９１】
ＰＮＡは、ＤＮＡの正常なホスホジエステル骨格にとって代わる２−アミノエチル−グリシン結合を有する（Ｎｉｅｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｅｃ．  ６，  １９９１；  ２５４（５０３７）：１４９７−５００；  Ｈａｎｖｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ．  Ｎｏｖ．  ２７，  １９９２；  ２５８（５０８７）：１４８１−５；  Ｈｙｒｕｐ  ａｎｄ  Ｎｉｅｌｓｅｎ，  Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．  １９９６  Ｊａｎｕａｒｙ；  ４（１）：５−２３）。この化学は、３つの重要な結果を有する。第１に、ＤＮＡまたはホスホロチオエートオリゴヌクレオチドとは対照的に、ＰＮＡは中性分子であり；第２に、ＰＮＡはアキラルであり、これにより立体選択的合成を開発する必要性が回避され；第３に、ＰＮＡ合成は、他の方法、例えば改良Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ方法が使用されていたが、固相ペプチド合成のための標準ＢｏｃまたはＦｍｏｃプロトコルを使用する。
【０２９２】
ＰＮＡモノマまたは既製オリゴマーがＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，Ｍａｓｓ．）から市販されている。ＢｏｃまたはＦｍｏｃプロトコルのいずれかによるＰＮＡ合成は、手動または自動化プロトコルを使用する直接的なものである（Ｎｏｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．  １９９５  Ａｐｒｉｌ；  ３（４）：４３７−４５）。手動プロトコルは、化学修飾されたＰＮＡの生成または密接に関係するＰＮＡのファミリーの同時合成に役立つ。
【０２９３】
ペプチド合成のように、特定のＰＮＡ合成の成功は選択した配列の特性に依存する。例えば、理論的には、ＰＮＡはヌクレオチド塩基の任意の組み合わせを組み込むことができるが、隣接するプリンの存在は、生成物において１つ以上の残基の欠失に至らしめ得る。この困難を見越して、隣接するプリンを有するＰＮＡの生成においては、非効率的に添加される可能性のある残基のカップリングを繰り返すべきであることが示唆される。この後、逆相高速液体クロマトグラフィーによりＰＮＡが精製されるべきであり、ペプチド合成中に観察されるものと同様の生成物の収率および純度が得られる。
【０２９４】
所与の適用のためのＰＮＡの修飾は、固相合成中にアミノ酸をカップリングさせることにより、またはカルボン酸基を含む化合物を、暴露されたＮ末端アミンに付着させることにより達成され得る。また、ＰＮＡは、合成後に、導入されたリジンまたはシステインへのカップリングにより修飾することができる。ＰＮＡを修飾することができる容易さが、より良好な溶解度または特定の機能的要求のための最適化を促進する。いったん合成されると、ＰＮＡおよびそれらの誘導体が何であるかは、質量分析により確認することができる。いくつかの研究がＰＮＡの修飾を実施し、利用した（例えば、Ｎｏｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．  １９９５  Ａｐｒｉｌ；  ３（４）：４３７−４５；  Ｐｅｔｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｓｃｉ．  １９９５  Ｍａｙ−Ｊｕｎｅ；  １（３）：１７５−８３；  Ｏｒｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．  １９９５  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ；  １９（３）：４７２−８０；  Ｆｏｏｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．  Ａｕｇ．  ２０，  １９９６；  ３５（３３）：  １０６７３−９；  Ｇｒｉｆｆｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  Ａｕｇ．  １１，  １９９５；  ２３（１５）：３００３−８；  Ｐａｒｄｒｉｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  Ｊｕｎ．  ６，  １９９５；  ９２（１２）：５５９２−６；  Ｂｏｆｆａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  Ｍａｒ．  １４，  １９９５；  ９２（６）：１９０１−５；  Ｇａｍｂａｃｏｒｔｉ−Ｐａｓｓｅｒｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ．  Ａｕｇ．  １５，  １９９６；  ８８（４）：１４１１−７；  Ａｒｍｉｔａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  Ｎｏｖ．  １１，  １９９７；  ９４（２３）：１２３２０−５；  Ｓｅｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．  １９９７  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ；  ２３（３）：５１２−７）。米国特許第５，７００，９２２号は、ＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡキメラ分子ならびにそれらの、診断、生物におけるタンパク質の調節、および治療薬に反応する状態の治療における使用を記載する。
【０２９５】
ＰＮＡのアンチセンス結合特性を特徴づける方法は、Ｒｏｓｅ（Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ．  Ｄｅｃ．  １５，  １９９３；  ６５（２４）：３５４５−９）およびＪｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．  Ａｐｒ．  ２２，  １９９７；  ３６（１６）：５０７２−７）において記載される。Ｒｏｓｅは、ＰＮＡのそれらの相補オリゴヌクレオチドへの結合を決定するためにキャピラリーゲル電気泳動を使用し、相対結合動態および化学量論を測定する。同様の型の測定が、Ｊｅｎｓｅｎらにより、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）技術を用いてなされた。
【０２９６】
記載されており、当業者に明らかになるであろうＰＮＡの他の適用は、ＤＮＡ鎖侵入、アンチセンス阻害、変異解析、転写のエンハンサー、核酸精製、転写的に活性な遺伝子の単離、転写因子結合の遮断、ゲノム切断、バイオセンサ、インサイチューハイブリダイゼーション、などにおける使用を含む。
【０２９７】
１２．抗体
本明細書では、「抗体」という用語は、二重または複数の抗原またはエピトープ特異性を有するキメラ抗体およびハイブリッド抗体、ならびに断片、例えばＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂなど（ハイブリッド断片を含む）を含む。よって、それらの特異抗原に結合する能力を保持する抗体の断片が提供される。そのような抗体および断片は、当技術分野で知られている技術により作製することができ、実施例において明記される方法に従い、ならびに抗体を生成させる、および特異性および活性に対して抗体をスクリーニングするための一般的方法において、特異性および活性に対してスクリーニングすることができる（Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ．  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．  ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  （１９８８）を参照されたい）。
【０２９８】
例えば、米国特許第４，７０４，６９２号（その内容は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、抗体断片および抗原結合タンパク質（単鎖抗体）の結合体もまた、「抗体」の意味内に含まれる。
【０２９９】
任意で、抗体は他の種において生成され、およびヒトにおいて投与するために「ヒト化」される。１つの態様では、「ヒト化」抗体は、生殖細胞系列変異動物により生成される抗体のヒトバージョンである。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体の他の抗原−結合部分配列）（非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含む）である。ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含み、そこでは、レシピエントのＣＤＲ由来の残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）、例えばマウス、ラットまたはウサギのＣＤＲ由来の残基により置換される。１つの実施形態では、本明細書で明記される遺伝子によりコードされるタンパク質またはその断片に特異的に結合するモノクローナル抗体の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つまたは全てまでのＣＤＲを含む抗体のヒト化バージョンが本明細書で記載される。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が、対応する非ヒト残基により置換される。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤまたはフレームワーク配列にも見出されない残基を含み得る。一般に、ヒト化抗体は、実質的に全て、または少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインを含むことができ、この場合、全てまたは実質的に全てのＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、全てまたは実質的に全てのＦＲ領域は、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体はまた、最適に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含むことができる（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；  Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３３２：３２３−３２７  （１９８８）；  ａｎｄ  Ｐｒｅｓｔａ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．，  ２：５９３−５９６  （１９９２））。
【０３００】
非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当技術分野でよく知られている。一般に、ヒト化抗体は、非ヒトである源からこれに導入された１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基はしばしば、「移入」残基と呼ばれ、これらは典型的には「移入」可変ドメインから取られる。ヒト化は、本質的にはＷｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法に従い（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；  Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３３２：３２３−３２７  （１９８８）；  Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２３９：１５３４−１５３６  （１９８８））、ヒト抗体の対応する配列の代わりにげっ歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列を使用することにより、実施することができる。したがって、そのような「ヒト化」抗体はキメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号）、こそこでは、実質的に無傷に満たないのヒト可変ドメインが、非ヒト種由来の対応する配列により置換されている。実際には、ヒト化抗体は典型的には、いくつかのＣＤＲ残基およびおそらくいくつかのＦＲ残基がげっ歯類抗体における類似部位由来の残基により置換されるヒト抗体である。
【０３０１】
１３．ペプチド
ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチドは、組換えＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチド、合成ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチド、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチド、精製ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチド、または市販のＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチドとすることができる。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチドは、天然に存在しない配列を有し得、または任意の種（例えば、ヒト、ラット、またはマウス）中に存在する配列を有し得る。場合によっては、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチドは１つ以上のアミノ酸類似体または他のペプチド模倣薬を含むことができる。本明細書では、「ペプチド模倣薬」という用語は、ポリペプチドの生物活性を模倣するが、化学的性質がペプチド性ではない分子を意味する。一方、ある一定の態様では、ペプチド模倣薬は、ペプチド結合（すなわち、アミノ酸間のアミド結合）を含まない分子とすることができ、ペプチド模倣薬という用語は、特性が完全にはペプチド性ではない分子、例えばプソイドペプチド、半ペプチドおよびペプトイドを含むことができる。特性において完全にまたは部分的に非ペプチドであるかどうかに関係なく、本明細書で記載されるペプチド模倣薬は、ポリペプチド中の活性基の三次元配列に酷似する反応性化学部分の空間配置を提供することができる。この類似する活性部位幾何学の結果、ペプチド模倣薬は、ポリペプチドの生物活性に類似する生物学的効果を示すことができる。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチドのサブユニットは、ペプチド結合または他の結合、例えば、例として、エステルもしくはエーテル結合により連結させることができる。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチドは、全長ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチド、前駆体ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチド、またはＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチドの断片とすることができる。場合によっては、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチドは、１つ以上の修飾を含むことができる。例えば、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチドは、ペグ化され、または追加のアミノ酸配列、例えばアルブミン配列（例えば、ヒトアルブミン配列）を含むように修飾することができる。場合によっては、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチドは、融合ポリペプチド、例えば、アルブミン配列の断片を含む融合ポリペプチドとすることができる。場合によっては、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチドはオリゴマー、例えば短い、両親媒性オリゴマーに共有結合により付着させることができ、結合ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチドの経口投与が可能になり、または薬物動態または薬力学的プロファイルが改善される。オリゴマーは、水溶性ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および脂溶性アルキル（短鎖脂肪酸ポリマ）を含むことができる。例えば、様々な状態の治療において使用することができるバリアントおよび修飾ペプチドならびにペプチド類似体を記載する、国際特許出願公開番号第ＷＯ  ２００４／０４７８７１号を参照されたい。場合によっては、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチドは、免疫グロブリン分子（例えば、ＩｇＧ１分子）のＦｃドメインに融合させることができ、よって、融合ポリペプチドの能動輸送がＦｃ受容���を介し上皮細胞障壁を横切って起こる。
【０３０２】
１つの態様では、ＨＴＲＡ１もしくはＡＭＲＳ２ペプチドを対象に投与することは、対象においてＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２抗体を産生させるように設計することができる。例えば、対象の免疫系にとって異質であるＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドを、対象に投与することができ、よって、対象は、対象においてＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドの活性を阻止することができるＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２抗体を産生する。対象に投与することができるポリペプチドとしては、以下が挙げられるが、それらに限定されない：Ａｃ−ＥＰＡＲＳＰＰＱＰＥＨＣＥＧ−アミド（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１）、ＨＴＲＡ１  ３６−４９  ＩＧＦＢＰドメインに対応；Ａｃ−ＰＡＳＡＴＶＲＲＲＡＱＣ−アミド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２）、ＨＴＲＡ１  ９６−１０６  ＩＧＦＢＰドメインに対応；Ａｃ−ＣＧＳＤＡＮＴＹＡＮＬ−アミド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．４）、ＨＴＲＡ１  １１９−１２９  Ｋａｚａｌドメインに対応；Ａｃ−ＳＲＲＳＥＲＬＨＲＰＰＶＩＣ−アミド（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３）、ＨＴＲＡ１  １３６−１４８  Ｋａｚａｌドメインに対応；Ａｃ−ＣＧＱＧＱＥＤＰＮＳＬＲＨＫ−ＯＨ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．５）、ＨＴＲＡ１  １５５−１６８リンカー−プロテアーゼドメインに対応；Ａｃ−ＳＨＤＲＱＡＫＧＫＡＩＴＫＣ−アミド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．６）、ＨＴＲＡ１  ３６７−３７９プロテアーゼ−リンカードメインに対応；Ａｃ−ＣＰＤＴＰＡＥＡＧＧＬＫＥＮ−アミド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．７）、ＨＴＲＡ１  ４１９−４３１  ＰＤＺドメインに対応；またはＡｃ−ＬＤＰＧＶＧＧＥＧＡＳＤＫＱＲＳＫＣ−アミド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．８）、ＡＲＭＳ２  ４２−５８ドメインに対応。さらなる態様では、自己ＨＴＲＡ１もしくはＡＭＲＳ２ポリペプチドは、異質Ｔ細胞エピトープを含むように設計することができ、よって、ポリペプチドの投与は、対象においてＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドの活性を阻止することができるＨＴＲＡ１またはＡＭＲＳ２抗体を産生させる。アジュバント、例えばミョウバンを、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドと組み合わせて使用することができる。ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチド活性は、任意の量だけ阻害することができる。例えば、限定はされないが、ペプチド活性は、約５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１��０％だけ、および約５％〜１００％の間の任意のパーセンテージだけ、阻害することができる。
【０３０３】
対象において血管関連黄斑症を治療する方法もまた本明細書で記載され、この方法は、対象にデコイ可溶性エラスチン（エラスチントラップ）を投与することを含む。デコイエラスチンの投与は、エラスターゼ、例えばＨＴＲＡ１が、それらの正常基材に結合しないように妨害することができ、よって、それらのエラスターゼ活性が遮断される。
【０３０４】
対象において、血管関連黄斑症、またはその症状を治療する方法もまた本明細書で記載され、この場合、異常脈絡毛細管小葉が対象の眼に存在し、この方法は、対象に、治療的有効量の、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、ＣＦＨ、またはＣ３保護ハプロタイプによりコードされる１つ以上のポリペプチドを投与することを含む。１つの態様では、血管関連黄斑症の症状は対象の眼において現れ得る。そのため、対象の眼において、血管関連黄斑症の症状を治療する方法もまた本明細書で記載され、この場合、異常脈絡毛細管小葉が対象の眼に存在し、この方法は、対象に、治療的有効量の、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、ＣＦＨ、またはＣ３保護ハプロタイプによりコードされる１つ以上のポリペプチドを投与することを含む。
【０３０５】
加えて、対象において、血管関連黄斑症、またはその症状を治療する方法が本明細書で記載され、この場合、異常脈絡毛細管小葉が対象の眼に存在し、この方法は、対象に、治療的有効量の、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、ＣＦＨ、またはＣ３突然変異ハプロタイプによりコードされる１つ以上のポリペプチドを投与することを含む。１つの態様では、血管関連黄斑症の症状は対象の眼において現れ得る。そのため、対象の眼において血管関連黄斑症の症状を治療する方法もまた本明細書で記載され、この場合、異常脈絡毛細管小葉は対象の眼に存在し、この方法は、対象に、治療的有効量の、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、ＣＦＨ、またはＣ３突然変異ハプロタイプによりコードされる１つ以上のポリペプチドを投与することを含む。
【０３０６】
突然変異ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、ＣＦＨ、またはＣ３ハプロタイプは、一塩基多型（ＳＮＰ）を有するＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、ＣＦＨ、またはＣ３ヌクレオチド配列によりコードされ得る。より特定的には、ＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、ＣＦＨ、またはＣ３ヌクレオチド配列は、ＨＴＲＡ１遺伝子におけるｒｓ１１２００６３８  ＳＮＰでのＡアレル、ＡＲＭＳ２遺伝子におけるｒｓ１０４９０９２４  ＳＮＰでのＴアレル、ＣＦＨ遺伝子におけるｒｓ１０６１１７０  ＳＮＰでのＣアレル、またはＣ３遺伝子におけるｒｓ２２３０１９９  ＳＮＰでのＧアレルを有し得る。
【０３０７】
１４．小分子
本明細書で記載される方法では、直接的もしくは間接的のいずれかで、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２核酸またはペプチドを標的にする任意の小分子が使用され得る。これらの分子は、科学文献において、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅから入手可能なＳｔａｒＬｉｔｅデータベースにおいて、ＤｒｕｇＢａｎｋ（Ｗｉｓｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２００６  Ｊａｎ  １；３４  （Ｄａｔａｂａｓｅ  ｉｓｓｕｅ）：Ｄ６６８−７２）、添付文書、小冊子、化学物質製造業者（例えば、数例を挙げるとＳｉｇｍａ、Ｔｏｃｒｉｓ、Ａｕｒｏｒａ  Ｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、または任意の他の手段により特定することができ、そのため、当業者は、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２とＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２の阻害の連関を、直接または間接のいずれかで、分子により生成させる。好ましい小分子は、約１ｍＭ未満、約１００μＭ未満、約７５μＭ未満、約５０μＭ未満、約２５μＭ未満、約１０μＭ未満、約５μＭ未満または約１μＭ未満のＩＣ５０値を有する小分子である。半数最大阻害濃度（ＩＣ５０）は、生物または生物化学機能を阻止する際の化合物の有効性の測定値である。この定量的測定値は、一定の生物学的過程（または過程の構成要素、すなわち、酵素、細胞、細胞受容体または微生物）を半分だけ阻止するのに必要とされる特定の化合物または他の物質（阻害剤）の量を示す。言い換えれば、これは物質の半数最大（５０％）阻害濃度（ＩＣ）（５０％ＩＣ、またはＩＣ５０）である。
【０３０８】
Ｃ．治療薬の有効性を決定する方法
血管関連黄斑症、またはその症状と診断された対象において、血管関連黄斑症、またはその症状の治療の有効性を決定する方法が本明細書で記載され、この方法は、ａ）疾患、またはその症状の治療の開始前に対象の眼において異常脈絡毛細管小葉の数を決定すること；ｂ）ある時間間隔の間、疾患の治療を開始すること；ｃ）時間間隔後に、ステップａ）の眼において異常脈絡毛細管小葉のその後の数を決定すること；ならびにｄ）ステップｃ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数を、ステップａ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数と比較することを含み、ステップｃ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数の増加なしまたは減少の検出は、対象における血管関連黄斑症、またはその症状の治療の有効性を示す。
【０３０９】
１つの態様では、対象において血管関連黄斑症、またはその症状の治療の有効性を決定する方法は、血管関連黄斑症、またはその症状の治療後に、脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生を検出することを含むことができ、ＲＰＥ細胞の再増殖または再生の検出は、治療の有効性を示す。当業者に知られている様々な手順を使用して、ＲＰＥ細胞の再増殖または再生を検出することができ、例えば、自己蛍光イメージング技術、赤外線イメージング技術、光干渉断層撮影（ＯＣＴ）、Ｓｔｒａｔｕｓ光干渉断層撮影（Ｓｔｒａｔｕｓ  ＯＣＴ）、フーリエ領域光干渉断層撮影（Ｆｄ−ＯＣＴ）、二光子励起蛍光（ＴＰＥＦ）イメージング、適応光学走査型レーザー眼底検査（ＡＯＳＬＯ）、走査型レーザー眼底検査、スペクトルドメイン光干渉断層撮影と組み合わせた近赤外イメージング（ＳＤ−ＯＣＴ）、カラー眼底写真、眼底自発蛍光イメージング、無赤色イメージング、蛍光眼底造影、インドシアニングリーン血管造影、多焦点網膜電図（ＥＲＧ）記録、微小視野測定、カラードップラー光干渉断層撮影（ＣＤＯＣＴ）、視野評価、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ、Ｚｅｉｓｓ  Ｃｉｒｒｕｓ、Ｔｏｐｃｏｎ  ３Ｄ  ＯＣＴ  ２０００、Ｏｐｔｉｖｕｅ  ＲＴＶｕｅ  ＳＤ−ＯＣＴ、Ｏｐｋｏ  ＯＣＴ  ＳＬＯ、ＮＩＤＥＫ  Ｆ−１０、またはＯｐｔｏｐｏｌ  ＳＯＣＴ  Ｃｏｐｅｒｎｉｃｕｓ  ＨＲが挙げられるが、それらに限定されない。
【０３１０】
さらなる態様では、対象において血管関連黄斑症、またはその症状の治療の有効性を決定する方法は、血管関連黄斑症、またはその症状の治療後に、脈絡毛細管小葉の灌流増加を検出することを含むことができ、脈絡毛細管小葉の灌流増加の検出は治療の有効性を示す。当業者に知られている様々な手順を使用して、脈絡毛細管小葉の灌流増加を検出することができ、例えば、自己蛍光イメージング技術、赤外線イメージング技術、光干渉断層撮影（ＯＣＴ）、Ｓｔｒａｔｕｓ光干渉断層撮影（Ｓｔｒａｔｕｓ  ＯＣＴ）、フーリエ領域光干渉断層撮影（Ｆｄ−ＯＣＴ）、二光子励起蛍光（ＴＰＥＦ）イメージング、適応光学走査型レーザー眼底検査（ＡＯＳＬＯ）、走査型レーザー眼底検査、スペクトルドメイン光干渉断層撮影と組み合わせた近赤外イメージング（ＳＤ−ＯＣＴ）、カラー眼底写真、眼底自発蛍光イメージング、無赤色イメージング、蛍光眼底造影、インドシアニングリーン血管造影、多焦点網膜電図（ＥＲＧ）記録、微小視野測定、カラードップラー光干渉断層撮影（ＣＤＯＣＴ）、視野評価、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ、Ｚｅｉｓｓ  Ｃｉｒｒｕｓ、Ｔｏｐｃｏｎ  ３Ｄ  ＯＣＴ  ２０００、Ｏｐｔｉｖｕｅ  ＲＴＶｕｅ  ＳＤ−ＯＣＴ、Ｏｐｋｏ  ＯＣＴ  ＳＬＯ、ＮＩＤＥＫ  Ｆ−１０、またはＯｐｔｏｐｏｌ  ＳＯＣＴ  Ｃｏｐｅｒｎｉｃｕｓ  ＨＲが挙げられるがそれらに限定されない。
【０３１１】
さらに別の態様では、対象において、血管関連黄斑症、またはその症状の治療の有効性を決定する方法は、血管関連黄斑症、またはその症状の治療後の、補体経路、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２関連活性、例えば発現レベル、生物化学活性（例えば、補体成分の酵素活性）、または補体経路、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２関連分子に対する血清自己抗体の、異常レベルからの、または正常レベルに向かう回復を検出することを含むことができ、補体経路、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２関連活性の正常レベルまでの、またはこれに向かう回復の検出は治療の有効性を示す。
【０３１２】
本明細書では、「診断された」という用語は、熟練者、例えば、医師による理学的検査、例えば、限定はされないが遺伝子検査に供せられ、本明細書で記載される化合物、組成物、または方法により診断または治療され得る状態を有することが見出されたことを意味する。例えば、「血管関連黄斑症、またはその症状と診断された」は、本明細書で記載される方法を使用する、熟練者、例えば、医師による理学的検査に供せられ、血管関連黄斑症、またはその症状と診断され得る状態を有することが見出されたことを意味する。
【０３１３】
本明細書では、「診断された」という用語はまた、対象のＤＮＡ、ＲＮＡ、または場合によっては、タンパク質を検査し、本明細書で記載される様々なＳＮＰの有無を評価し（１つの態様では、他のＳＮＰおよび遺伝的または行動特性）、対象が血管関連黄斑症、またはその症状を有するかどうかを決定したことを意味することができる。
【０３１４】
本明細書では、「増加なし」または「減少」は、眼が当業者により、当技術分野でよく知られている眼科手順、例えば本明細書で記載される手順を使用して検査された時に、異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズに有意のまたは認知可能な増加がないことを意味する。治療は、１つ以上の治療薬を対象に、単独で、または他の治療形態、例えば、限定はされないが、運動、減煙もしくは禁煙、アルコール摂取の低減もしくは排除、ストレスの低減、減量、血圧管理、または食事および栄養摂取の改善と組み合わせて投与する形態とすることができる。
【０３１５】
よって、当業者は、対象を様々な時間間隔で追跡し、対象の眼を検査して、各検査での異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズを、最初の検査時（対象において血管関連黄斑症、またはその症状が初めて診断された時）に決定された異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズと比較することにより、対象において、血管関連黄斑症、またはその症状の治療過程が有効であるかどうかを決定することができる。当業者は、当技術分野でよく知られている眼科手順、例えば本明細書で記載される手順を使用して、片もしくは両眼において、対象の黄斑の出現を撮影および記録し、その後、黄斑において、異常脈絡毛細管小葉のサイズを測定しまたは異常脈絡毛細管小葉の数を計数することができる。異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズに増加がない場合、当業者は、治療組成物および方法は有効であると決定することができる。
【０３１６】
血管関連黄斑症と診断された対象において、血管関連黄斑症、またはその症状の治療の有効性を決定する方法もまた本明細書で記載され、この方法はａ）血管関連黄斑症、またはその症状の治療の開始前に対象の眼において異常脈絡毛細管小葉の数を決定すること；ｂ）ある時間間隔の間、血管関連黄斑症、またはその症状の治療を開始すること；ｃ）時間間隔後に、ステップａ）の眼において異常脈絡毛細管小葉のその後の数を決定すること；ならびにｄ）ステップｃ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数を、ステップａ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数と比較することを含み、ステップｃ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数の増加の検出は、薬剤が対象において血管関連黄斑症、またはその症状を治療するのに有効でないことを示す。
【０３１７】
１つの態様では、対象において、血管関連黄斑症、またはその症状の治療の有効性を決定する方法は、血管関連黄斑症、またはその症状の治療後の、脈絡毛細管小葉上に存在し、これに対応するＲＰＥ細胞の再増殖または再生を検出することを含むことができ、ＲＰＥ細胞の再増殖または再生なしの検出は、薬剤が血管関連黄斑症、またはその症状を治療するのに有効でないことを示す。当業者に知られている様々な手順を使用して、ＲＰＥ細胞の再増殖または再生を検出することができ、例えば、自己蛍光イメージング技術、赤外線イメージング技術、光干渉断層撮影（ＯＣＴ）、Ｓｔｒａｔｕｓ光干渉断層撮影（Ｓｔｒａｔｕｓ  ＯＣＴ）、フーリエ領域光干渉断層撮影（Ｆｄ−ＯＣＴ）、二光子励起蛍光（ＴＰＥＦ）イメージング、適応光学走査型レーザー眼底検査（ＡＯＳＬＯ）、走査型レーザー眼底検査、スペクトルドメイン光干渉断層撮影と組み合わせた近赤外イメージング（ＳＤ−ＯＣＴ）、カラー眼底写真、眼底自発蛍光イメージング、無赤色イメージング、蛍光眼底造影、インドシアニングリーン血管造影、多焦点網膜電図（ＥＲＧ）記録、微小視野測定、カラードップラー光干渉断層撮影（ＣＤＯＣＴ）、視野評価、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ、Ｚｅｉｓｓ  Ｃｉｒｒｕｓ、Ｔｏｐｃｏｎ  ３Ｄ  ＯＣＴ  ２０００、Ｏｐｔｉｖｕｅ  ＲＴＶｕｅ  ＳＤ−ＯＣＴ、Ｏｐｋｏ  ＯＣＴ  ＳＬＯ、ＮＩＤＥＫ  Ｆ−１０、またはＯｐｔｏｐｏｌ  ＳＯＣＴ  Ｃｏｐｅｒｎｉｃｕｓ  ＨＲが挙げられるがそれらに限定されない。
【０３１８】
さらなる態様では、対象において、血管関連黄斑症、またはその症状の治療の有効性を決定する方法は、血管関連黄斑症、またはその症状の治療後に、脈絡毛細管小葉の灌流の増加なしを検出することを含むことができ、脈絡毛細管小葉の灌流の増加なしの検出は、薬剤が血管関連黄斑症、またはその症状を治療するのに有効でないことを示す。当業者に知られている様々な手順を使用して、脈絡毛細管小葉の灌流増加を検出することができ、例えば、自己蛍光イメージング技術、赤外線イメージング技術、光干渉断層撮影（ＯＣＴ）、Ｓｔｒａｔｕｓ光干渉断層撮影（Ｓｔｒａｔｕｓ  ＯＣＴ）、フーリエ領域光干渉断層撮影（Ｆｄ−ＯＣＴ）、二光子励起蛍光（ＴＰＥＦ）イメージング、適応光学走査型レーザー眼底検査（ＡＯＳＬＯ）、走査型レーザー眼底検査、スペクトルドメイン光干渉断層撮影と組み合わせた近赤外イメージング（ＳＤ−ＯＣＴ）、カラー眼底写真、眼底自発蛍光イメージング、無赤色イメージング、蛍光眼底造影、インドシアニングリーン血管造影、多焦点網膜電図（ＥＲＧ）記録、微小視野測定、カラードップラー光干渉断層撮影（ＣＤＯＣＴ）、視野評価、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ、Ｚｅｉｓｓ  Ｃｉｒｒｕｓ、Ｔｏｐｃｏｎ  ３Ｄ  ＯＣＴ  ２０００、Ｏｐｔｉｖｕｅ  ＲＴＶｕｅ  ＳＤ−ＯＣＴ、Ｏｐｋｏ  ＯＣＴ  ＳＬＯ、ＮＩＤＥＫ  Ｆ−１０、またはＯｐｔｏｐｏｌ  ＳＯＣＴ  Ｃｏｐｅｒｎｉｃｕｓ  ＨＲが挙げられるがそれらに限定されない。
【０３１９】
さらに別の態様では、対象において、血管関連黄斑症、またはその症状の治療の有効性を決定する方法は、血管関連黄斑症、またはその症状の治療後に、補体経路、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２関連活性、例えば発現レベル、生物化学活性（例えば、補体成分の酵素活性）、または補体経路、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２関連分子に対する血清自己抗体の、異常なレベルから、正常レベルまで、またはこれに向かう回復なしを検出することを含むことができ、補体経路、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２関連活性の、正常レベルまで、またはこれに向かう回復なしの検出は、薬剤が血管関連黄斑症、またはその症状を治療するのに有効でないことを示す。
【０３２０】
当業者は、対象を様々な時間間隔で追跡し、対象の黄斑を検査して、各検査での異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズを、最初の検査時（血管関連黄斑症、またはその症状が初めて診断された時）に決定された異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズと比較することにより、対象において、血管関連黄斑症、またはその症状の治療過程が有効であるかどうかを決定することができる。当業者は、当技術分野でよく知られている眼科手順、例えば本明細書で記載される手順を使用して、片もしくは両眼において対象の黄斑の出現を撮影および記録し、その後、異常脈絡毛細管小葉のサイズを測定し、または黄斑における異常脈絡毛細管小葉の数を計数することができる。異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズの増加がある場合、当業者は、治療組成物および方法は有効でないことを決定することができる。
【０３２１】
さらに、血管関連黄斑症、またはその症状と診断された対象において、血管関連黄斑症、またはその症状を治療するのに有効な薬剤または薬剤の組み合わせをスクリーニングする方法が本明細書で記載され、この方法は、ａ）対象の眼において異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズを決定すること；ｂ）ある時間間隔の間、対象に薬剤または薬剤の組み合わせを投与すること；ｃ）時間間隔後に、ステップａ）の眼において異常脈絡毛細管小葉のその後の数またはサイズを決定すること；ならびにｄ）ステップｃ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズを、ステップａ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズと比較することを含み、ステップｃ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズの増加なしの検出は、薬剤または薬剤の組み合わせが、対象において、血管関連黄斑症、またはその症状を治療するのに有効であることを示す。本明細書で記載されるスクリーニング法はまた、治療薬の、他の治療、例えば、限定はされないが、運動、減煙もしくは禁煙、アルコール摂取の低減もしくは排除、ストレスの低減、減量、血圧管理、または食事および栄養摂取の改善との組み合わせをスクリーニングするために使用することができる。
【０３２２】
（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散するのに有効な薬剤または薬剤の組み合わせをスクリーニングする方法もまた本明細書で記載される。
【０３２３】
さらに、（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）または（ｉｖ）と診断された対象において、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散するのに有効な薬剤または薬剤の組み合わせをスクリーニングする方法が本明細書で記載され、この方法は：ａ）対象の眼において異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズを決定すること；ｂ）ある時間間隔の間、薬剤または薬剤の組み合わせを対象に投与すること；ｃ）時間間隔後に、ステップａ）の眼において、異常脈絡毛細管小葉のその後の数またはサイズを決定すること；ならびにｄ）ステップｃ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズを、ステップａ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズと比較することを含み、ステップｃ）の対象の眼における異常脈絡毛細管小葉の数またはサイズの増加なしの検出は、薬剤または薬剤の組み合わせが、対象において、（ｉ）血管関連黄斑症を治療する；（ｉｉ）血管関連黄斑症と関連する１つ以上の症状を治療する；（ｉｉｉ）重篤な黄斑症もしくは末期黄斑症を治療する；または（ｉｖ）異常脈絡毛細管小葉を消散するのに有効であることを示す。
【０３２４】
臨床試験を増強する方法であって、それらの臨床試験のために適切な患者集団を選択することを含む方法もまた本明細書で記載される。１つの態様では、方法は、患者が、研究される１つまたは複数の実験治療薬に応答性であるかどうかに基づき、臨床試験に参加することを特定されることを確認するために使用することができる。方法は、血管関連黄斑症、またはその症状のための治療を受ける対象の状態をモニタすることを含むことができる。成功した治療転帰は、補体経路、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２関連活性、例えば発現レベル、生物化学活性（例えば、補体成分の酵素活性）、または補体経路、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２関連分子に対する血清自己抗体の、異常なレベルから、正常レベルまでの、またはこれに向かう回復により示され得る。１つの態様では、方法は、対象が治療を受ける前に、異常な活性のレベル（例えば、自己抗体の異常な存在、または補体経路、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２分子の異常なレベル）に対する初期値を測定することを含むことができる。その後、反復測定をある期間にわたって実施することができる。例えば、限定はされないが、期間は約１日、２日、５日、１週、２週、３週、１月、２月、３月、４月、６月、９月、１年、または１年超とすることができる。対照集団における平均レベルに比べて高い場合、その後の測定におけるレベルの有意の低減は、プラスの治療転帰を示すことができる。同様に、測定マーカーの初期レベルが対照集団の平均に比べ低減している場合、初期レベルに対する測定レベルの有意の増加は、プラスの治療転帰を示すことができる。その後の測定レベルが、初期レベルの反復測定の平均から１を超える標準偏差だけ異なっている場合、その後の測定レベルは、初期レベルに比べ、著しく変化したとみなされる。モニタリングによりプラスの治療転帰が明らかになった場合、それは、その特定の１つまたは複数の治療薬のための臨床試験に参加するように選択することができる患者を示す。モニタリングによりマイナスの治療転帰が明らかになった場合、それは、特定の１つまたは複数の治療薬のための臨床試験に参加するように選択してはならない患者を示す。
【０３２５】
Ｄ．治療組成物
発明の組成物を調製するために使用される構成要素、ならびに本明細書で記載される方法で使用される組成物自体が本明細書で記載される。これらのおよび他の材料は本明細書で記載され、これらの材料の組み合わせ、サブセット、相互作用、群、などが開示されている場合、各々の様々な個々のおよび集合的な組み合わせならびにこれらの化合物の順列の特定の言及が明確に開示され得ないが、それぞれが、特定的に企図され、本明細書で記載されることが理解される。例えば、特定の指示試薬が開示され、記載され、その指示試薬の改変もまた記載されている場合、反対のことが特に記載されない限り、指示試薬の各および全ての組み合わせおよび順列ならびに可能な改変が特定的に企図される。よって、指示試薬Ａ、Ｂ、およびＣのクラス、ならびに指示試薬Ｄ、Ｅ、およびＦのクラスが開示され、指示試薬Ａ−Ｄの組み合わせの例が開示される場合、各々が個々に列挙されていなくても、各々は、個々におよび集合的に企図され、Ａ−Ｅ、Ａ−Ｆ、Ｂ−Ｄ、Ｂ−Ｅ、Ｂ−Ｆ、Ｃ−Ｄ、Ｃ−Ｅ、およびＣ−Ｆの組み合わせが開示されることが意味される。同様に、これらのいずれのサブセットまたは組み合わせもまた開示される。よって、例えば、Ａ−Ｅ、Ｂ−Ｆ、およびＣ−Ｅの副群は、開示されると考えられる。この概念は、この出願の全ての態様、例えば、限定はされないが、発明の組成物の製造および使用方法におけるステップに当てはまる。よって、実施することができる様々な追加のステップが存在する場合、これらの追加のステップの各々は、発明の方法の任意の特定の実施形態またはまたは実施形態の組み合わせと共に実施することができることが理解される。
【０３２６】
本明細書で記載される組成物は、ある一定の機能を有し、例えば血管関連黄斑症を治療する、または血管関連黄斑症と関連する症状を寛解する。開示される機能を実施するためのある一定の構造要件が本明細書で記載され、開示される構造と関連する同じ機能を実施することができる様々な構造が存在すること、ならびにこれらの構造は、典型的には同じ結果を達成する、例えば血管関連黄斑症、またはその症状を治療することが理解される。
【０３２７】
１つの態様では、血管関連黄斑症、またはその症状を治療する治療薬は生物療法、例えば遺伝子療法を含む。例えば、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ポリペプチドのためのコード配列の全てまたは一部を含むＤＮＡは、好適宿主細胞におけるコード化ポリペプチドの発現のためにベクターに組み込まれ得る。多くのベクター、例えば細菌、酵母、および哺乳動物ベクターが、当技術分野で、様々な宿主細胞または無細胞系での複製および／または発現のために知られており、遺伝子療法のために使用され得る。発現ベクターは、遺伝子を細胞に送達させるために使用される（例えば、プラスミド）、または遺伝子を送達させる一般戦略の一部として、例えば組換えレトロウイルスまたはアデノウイルスの一部として使用される（Ｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５３：８３−８８，  （１９９３））任意のヌクレオチド構成とすることができる。例えば、調節エレメントに操作可能に結合された、本明細書で記載される１つ以上の遺伝子の配列を含む単離ポリヌクレオチドを含む発現ベクターが本明細書で開示される。
【０３２８】
本明細書では、プラスミドまたはウイルスベクターは、開示される核酸、例えば、本明細書で開示される１つ以上のポリペプチドをコードすることができる単離ポリヌクレオチドを分解なしで、細胞に輸送する媒介物であり、これが送達された細胞内で遺伝子の発現を生じさせるプロモーターを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で開示される単離ポリヌクレオチドは、ウイルスまたはレトロウイルスのいずれかに由来する。
【０３２９】
１．医薬品の医薬担体／送達
本明細書で記載される組成物（また、組成物と呼ばれる）はまた、インビボで、薬学的に許容される担体中で投与することができる。「薬学的に許容される」により、生物学的に、または他の意味で望ましくなくない物質が意味され、すなわち、物質は、対象に、本明細書で記載される薬剤、例えば、ペプチドと共に投与することができ、いずれの望ましくない生物学的効果も引き起こされず、医薬組成物中に含まれる医薬組成物の他の構成要素のいずれとも有害な様式で相互作用しない。担体は、当業者によく知られているように、活性成分のいずれの分解も最小に抑えるように、かつ、対象におけるいずれの有害副作用を最小に抑えるように自然に選択される。
【０３３０】
組成物は、経口投与、経皮投与、吸入による投与、経鼻投与、局所投与、腟内投与、点眼、耳内投与、脳内投与、直腸投与、および非経口投与、例えば注射、例えば静脈内投与、動脈内投与、筋内投与、および皮下投与により投与することができる。本明細書では、「局所鼻腔内投与」は、組成物の、領域の１つまたは両方を介する鼻および鼻腔内への送達を意味し、噴霧メカニズムもしくは液滴メカニズムによる、またはエアロゾル化を介する送達を含むことができる。吸入薬による組成物の投与は、噴霧または液滴メカニズムによる送達を介して、鼻または口を通して行うことができる。送達はまた、呼吸器系（例えば、肺）の任意の領域に挿管を介して直接行うことができる。組成物は点眼により投与することができる。点眼は、当業者に知られている様々な手段により達成することができる。例えば、限定はされないが、１つまたは複数の薬剤は、治療の必要な対象の眼に、クリーム、軟膏、または液滴調製物を対象の眼瞼内側に置くことにより、対象の眼に噴霧されるミストの使用により、または硝子体内注射により提供することができる。点眼はさらに、限定はされないが、局所投与、結膜下投与、テノン嚢下投与、眼球上投与、眼球後投与、眼窩内投与、および眼内投与（硝子体内投与を含む）を含むことができる。
【０３３１】
１つの態様では、１つまたは複数の薬剤の点眼は、全身送達、例えば静脈内送達、一方向性強膜上インプラント、中空マイクロニードル、固体コートマイクロニードル、浮遊性硝子体内インプラント、または強膜に固定された硝子体内インプラントの使用により達成することができる。１つまたは複数の薬剤の点眼はまた、局所イオン導入の使用により達成することができる。イオン導入は、化合物を眼内に送達する非侵襲的方法である。これは、化合物と同じ電荷を有する小電流を適用し、反発起電力を発生させ、これにより、化合物の、前眼部もしくは後眼部への送達を可能にすることにより達成することができる。Ｅｄｅｌｈａｕｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ：  Ｂａｓｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｔｏ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  ＩＯＶＳ  ２０１０：  ５１（１１）  ５４０３−５４１９（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）は、これらの様々な点眼方法を記載する。
【０３３２】
必要とされる組成物の正確な量は、対象の種、年齢、体重および全身状態、疾患の重篤度、その投与様式などによって対象間で変動する。よって、全ての組成物に対する正確な量を特定するのは可能でない。しかしながら、適切な量は、本明細書の教示が与えられれば、日常実験のみを使用して当業者により決定することができる。
【０３３３】
組成物の非経口投与は、使用される場合、一般に注射により特徴づけられる。注射剤は、従来の形態、液体溶液もしくは懸濁液、注射前に液体中で懸濁溶液とするのに好適な固体形態、またはエマルジョンのいずれかで調製することができる。非経口投与のための、より最近に修正されたアプローチは、持続放出または徐放システムの使用を含み、よって、一定投与が維持される。例えば、米国特許３，６１０，７９５号（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。さらなる態様では、開示組成物は、Ｉ．Ｖ．により、注射および／またはＩ．Ｖ．点滴により投与される。
【０３３４】
ａ．薬学的に許容される担体
本明細書で記載される組成物は、薬学的に許容される担体と組み合わせて治療的に使用することができる。
【０３３５】
好適な担体およびそれらの製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  （１９ｔｈ  ｅｄ．）  ｅｄ．  Ａ．Ｒ．  Ｇｅｎｎａｒｏ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ  １９９５において記載される。典型的には、適切な量の薬学的に許容される塩が、製剤中で使用され、製剤が等張となる。薬学的に許容される担体の例としては、生理食塩水、Ｒｉｎｇｅｒ液およびデキストロース溶液が挙げられるが、それらに限定されない。溶液のｐＨは約５〜約８、より好ましくは約７〜約７．５とすることができる。さらなる担体としては、徐放調製物、例えばペプチドを含む固体疎水性ポリマの半透性マトリクスが挙げられ、このマトリクスは、成形物品、例えば、フィルム、リポソーム、ナノ粒子、またはミクロ粒子の形態をとる。ある一定の担体が、例えば、投与される組成物の投与経路および濃度によって、より好ましいものとなり得ることは当業者には明らかであろう。
【０３３６】
医薬担体は当業者に知られている。これらのほとんどは、典型的には、薬物のヒトへの投与のための標準担体となり、溶液、例えば滅菌水、生理食塩水、Ｒｉｎｇｅｒ液、水中デキストロース、平衡塩類溶液、および生理的ｐＨの緩衝溶液が挙げられる。使用される医薬担体はまた、例えば、固体、液体、または気体とすることができる。固体担体の例としては、ラクトース、白土、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウム、およびステアリン酸が挙げられる。液体担体の例は、液糖、ピーナッツ油、オリーブ油、および水である。気体担体の例としては、二酸化炭素および窒素が挙げられる。
【０３３７】
医薬組成物は、選択した１つ以上の分子に加えて、担体、増粘剤、希釈剤、緩衝液、保存剤、表面活性剤などを含み得る。医薬組成物はまた、１つ以上の活性成分、例えば抗菌薬、抗炎症薬、麻酔薬、などを含み得る。
【０３３８】
非経口投与のための調製物としては、滅菌水溶液または非水溶液、懸濁液、およびエマルジョンが挙げられる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油、および注射用有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体としては、水、アルコール／水溶液、エマルジョンまたは懸濁液（生理食塩水および緩衝媒質を含む）が挙げられる。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、Ｒｉｎｇｅｒデキストロース、デキストロースと塩化ナトリウム、乳酸Ｒｉｎｇｅｒ、または固定油が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、流体および栄養分補充薬、電解質補充薬（例えば、デキストロースに基づくもの）、などが挙げられる。保存剤および他の添加物、例えば、例として、抗菌薬、抗酸化剤、キレート剤、および不活性ガスなどもまた、存在し得る。
【０３３９】
局所投与のための製剤としては軟膏、ローション、クリーム、ゲル、液滴、坐薬、噴霧剤、液体および粉末が挙げられる。従来の医薬担体、水性、粉末または油性ベース、増粘剤などが必要である、または望ましい場合もある。
【０３４０】
経口剤形のための組成物の調製において、任意の好都合な医薬媒質が使用され得る。例えば、水、グリコール、油、アルコール、香味剤、保存剤、着色剤などが、経口液体調製物、例えば懸濁液、エリキシル剤および溶液を形成させるために使用され得；一方、担体、例えばデンプン、糖、結晶セルロース、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、などが、経口固体調製物、例えば粉末、カプセルおよび錠剤を形成させるために使用され得る。投与の容易さのために、錠剤およびカプセルが、固体医薬担体が使用される好ましい経口投与ユニットである。任意で、錠剤は、標準水性または非水性技術によりコートすることができる。
【０３４１】
組成物のいくつかは、潜在的に、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、過塩素酸酸、硝酸、チオシアン酸、硫酸、およびリン酸、および有機酸、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、およびフマル酸との反応により、または無機塩基、例えば水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム、および有機塩基、例えばモノ、ジ、トリアルキルおよびアリールアミンおよび置換エタノールアミンとの反応により形成された、薬学的に許容される酸または塩基付加塩として投与され得る。
【０３４２】
本明細書で記載されるある一定の材料、化合物、組成物、および構成要素は、市販されており、または一般に当業者に知られている技術を使用して容易に合成され得る。
【０３４３】
ｂ．用量
本明細書で記載される組成物を投与するための有効用量およびスケジュールは、経験的に決定することができ、そのような決定は、当技術分野における技術の範囲内である。組成物の投与のための用量範囲は、障害の症状が影響される所望の効果を生成させるのに十分大きなものである。用量は、有害副作用、例えば望まれない交差反応、アナフィラキシー反応、などを引き起こすほど大きいものであってはならない。一般に、用量は、患者における年齢、状態、性別および血管関連黄斑症、またはその症状の程度、投与経路、または他の薬物がレジメンに含まれるか否かと共に変動し、当業者により決定され得る。用量は、いずれの禁忌の事象においても、個々の医師により調節され得る。用量は変動し、毎日１以上の投与回数で１または数日間投与することができる。指針が一定のクラスの医薬品、特にペプチドのための適切な用量に対する文献において見出され得る。そのような指針の例は、文献を通して見出され得る。
【０３４４】
１つの態様では、用量レベルは約０．１〜約２５０ｍｇ／ｋｇ／日；より好ましくは０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ／日とすることができる。好適な用量レベルは、約０．０１〜２５０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０５〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、または約０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ／日とすることができる。この範囲内で、用量は０．０５〜０．５、０．５〜５．０または５．０〜５０ｍｇ／ｋｇ／日とすることができる。経口投与では、組成物は好ましくは、治療される患者の用量の症状調節のために、１．０〜１０００ミリグラムの活性成分、特に１．０、５．０、１０、１５、２０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、６００、７５０、８００、９００および１０００ミリグラムの活性成分を含む錠剤の形態で提供される。化合物は、１〜４回／日、好ましくは１回もしくは２回／日のレジメンで投与され得る。この投与レジメンは、最適治療反応を提供するように調節することができる。
【０３４５】
しかしながら、任意の特定の患者のための特定の用量レベルは様々な要因に依存することが理解される。そのような要因としては、患者の年齢、体重、全体的な健康、性別、および食事が挙げられる。他の要因としては、投与時間および経路、排泄速度、薬物の組み合わせ、ならびに療法を受ける特定の疾患の型および重篤度が挙げられる。
【０３４６】
Ｅ．アレイ
ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２またはバリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２をコードする核酸に特異的にハイブリッドすることができるポリヌクレオチドを含むアレイもまた本明細書で記載される。例えば、本明細書における表１および図３９−４２に記載される１つ以上のリスクまたは保護ＳＮＰに特異的にハイブリッドすることができるポリヌクレオチドを含むアレイが記載される。本明細書における表１および図３９−４２に記載される１つ以上のリスクまたは保護ＳＮＰの１つ以上に特異的にハイブリッドすることができるポリヌクレオチドを含むアレイもまた開示される。
【０３４７】
ＨＴＲＡ２もしくはＡＲＭＳ２またはバリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチドに特異的にハイブリッドすることができる１つ以上のポリペプチドを含む固体支持体もまた本明細書で記載される。
【０３４８】
固体支持体は、分子、例えば分析物および分析物結合分子がこれと結合され得る、固体基材または支持体である。分析物、例えば石灰化ナノ粒子およびタンパク質は、固体支持体と直接的にまたは間接的に結合することができる。例えば、分析物は、固体支持体上に直接固定化され得る。分析物捕捉剤、例えば捕捉化合物もまた、固体支持体上に固定化することができる。例えば、ＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２またはバリアントＨＴＲＡ１もしくはＡＲＭＳ２ペプチドに特異的に結合することができる抗原結合剤が本明細書で記載される。
【０３４９】
固体支持体の好ましい形態はアレイである。固体支持体の別の形態はアレイ検出手段である。アレイ検出手段は、複数の異なる捕捉化合物または検出化合物が、アレイ、格子、または他の組織化パターンで結合された固体支持体である。
【０３５０】
固体支持体における使用のための固体基材は、分子が結合され得る任意の固体材料を含む。これとしては、例えば以下の材料が挙げられる：アクリルアミド、アガロース、セルロース、ニトロセルロース、ガラス、ポリスチレン、ポリエチレン酢酸ビニル、ポリプロピレン、ポリメタクリレート、ポリエチレン、ポリエチレンオキシド、ポリシリケート、ポリカーボネート、テフロン、フルオロカーボン、ナイロン、シリコンゴム、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリオルトエステル、ポリオルトプロピルフメレート、コラーゲン、グリコサミノグリカン、およびポリオルトアミノ酸。固体基材は、任意の有用な形態、例えば薄フィルム、膜、ビン、皿、ファイバー、織り繊維、成形ポリマ、粒子、ビーズ、ナノ粒子、ミクロ粒子、または組み合わせを有することができる。固体基材および固体支持体は多孔性または非多孔性とすることができる。固体基材のための好ましい形態は、マイクロタイター皿、例えば標準９６ウェル型である。好ましい実施形態では、通常、１ウェルあたり１アレイを含むマルチウェルガラススライドが使用され得る。この特徴により、アッセイ再現性のより優れた制御、スループットおよび試料取扱いの増加、ならびに自動化の容易さが可能になる。
【０３５１】
異なる化合物は共に１組として使用することができる。セットは、別々の反応において別々に使用される化合物の全てまたはサブセットの混合物として使用することができ、または１つのアレイに固定化され得る。別々にまたは混合物として使用される化合物は、例えば、固体支持体との結合、またはこれ上での固定化により物理的に分離可能である。アレイは、アレイ上の特定された、または予め決められた位置に固定化された複数の化合物を含むことができる。アレイ上の予め決められた位置は各々、一般に１つの型の構成要素を有することができる（すなわち、その位置の構成要素は全て同じである）。各位置は、構成要素の複数のコピーを有する。アレイ内での異なる構成要素の空間的分離により、本明細書で記載されるポリヌクレオチまたはポリペプチドの別々の検出および特定が可能になる。
【０３５２】
一定のアレイが単一ユニットまたは構造であることは好ましいが、要求はされない。化合物の組は、任意の数の固体支持体にわたって分配され得る。例えば、１つの極端例では、各化合物は別々の反応管または容器内、あるいは別々のビーズまたはミクロ粒子またはナノ粒子上に固定化され得る。開示された方法の異なる様式が、固体支持体上に固定化された異なる構成要素（例えば、異なるタンパク質に特異的な異なる化合物）を用いて実施することができる。
【０３５３】
いくつかの固体支持体は、固体基材に付着された捕捉化合物、例えば抗体を有することができる。そのような捕捉化合物は、石灰化ナノ粒子または石灰化ナノ粒子上のタンパク質に特異的とすることができる。捕捉された石灰化ナノ粒子またはタンパク質はその後、第２の検出化合物、例えば抗体の結合により検出され得る。検出化合物は、石灰化ナノ粒子上の同じかまたは異なるタンパク質に特異的とすることができる。
【０３５４】
抗体（および他のタンパク質）を固体基材に固定化するための方法は確立されている。固定化は、例えば、標準固定化化学を使用したアミノ化表面、カルボキシル化表面またはヒドロキシル化表面への付着により達成することができる。付着剤の例は、臭化シアン、スクシンイミド、アルデヒド、塩化トシル、アビジン−ビオチン、光架橋性剤、エポキシドおよびマレイミドである。好ましい付着剤は、ヘテロ二官能性架橋剤Ｎ−［γ−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）である。これらのおよび他の付着剤、ならびに付着におけるそれらの使用方法は、Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ：  ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｆ．  Ｔａｙｌｏｒ，  ｅｄ．  （Ｍ．  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９１）；，  Ｊｏｈｎｓｔｏｎｅ  ａｎｄ  Ｔｈｏｒｐｅ，  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｉｎ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  （Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｏｘｆｏｒｄ，  Ｅｎｇｌａｎｄ，  １９８７）  ｐａｇｅｓ  ２０９−２１６  ａｎｄ  ２４１−２４２，  ａｎｄ  Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｌｉｇａｎｄｓ；  Ｃｒａｉｇ  Ｔ．  Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．  （Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９２）（固体基材への抗体の付着方法のために、参照によりその全体が組み込まれる）において記載される。抗体は、抗体上の遊離アミノ基を、固体基材内に存在する反応性側基に化学的に架橋させることにより、基材に付着させることができる。例えば、抗体は、それぞれ、グルタルアルデヒド、カルボジイミド、またはＧＭＢＳを架橋剤として使用することにより、遊離アミノ、カルボキシル、または硫黄基を含む基材に化学的に架橋され得る。この方法では、遊離抗体を含む水溶液は、固体基材と共に、グルタルアルデヒドまたはカルボジイミドの存在下でインキュベートされる。
【０３５５】
抗体または他のタンパク質を固体基材に付着させるための好ましい方法は、基材をアミノ−またはチオール−シランで官能化させ、その後、官能化させた基材をホモ二官能性架橋剤、例えば（ビス−スルホ−スクシンイミジルスベラート（ＢＳ3）またはヘテロ二官能性架橋剤、例えばＧＭＢＳで活性化させるものである。ＧＭＢＳと架橋させるために、ガラス基材が、メルカプトプロピルトリメトキシシランの溶液（１％ｖｏｌ／ｖｏｌを含む９５％エタノール、ｐＨ５．５）に１時間浸漬し、９５％エタノール中ですすぎ、１２０℃で４時間加熱することにより、化学的に官能化される。チオール誘導体化スライドは、１％ジメチルホルムアミド、９９％エタノール中のＧＭＢＳの０．５ｍｇ／ｍｌ溶液中で、１時間、室温で浸漬することにより活性化される。抗体またはタンパク質は、活性化基材に直接付加され、これはその後、作用物質、例えば２％ウシ血清アルブミンを含む溶液でブロックされ、空気乾燥される。他の標準固定化化学は当業者に知られている。
【０３５６】
好ましくは固体支持体上に固定化された構成要素（例えば、化合物）の各々は、固体支持体の異なる予め決められた領域内に配置される。異なる予め決められた領域の各々は他の異なる領域の各々とは物理的に分離させることができる。固体支持体の異なる予め決められた領域間の距離は、固定または可変のいずれかとすることができる。例えば、アレイでは、構成要素の各々は、互いに固定された距離で配置することができるが、ビーズと結合された構成要素は、固定された空間関係にない。特に、複数の固体支持体ユニットの使用（例えば、複数のビーズ）では可変距離となる。
【０３５７】
構成要素は、固体支持体上に任意の密度で結合または固定化され得る。構成要素は好ましくは固体支持体に、１立方センチメートルあたり４００を超える異なる構成要素の密度で固定化される。構成要素のアレイは、任意の数の構成要素を有することができる。例えば、アレイは固体支持体上に固定化された少なくとも１，０００の異なる構成要素、固体支持体上に固定化された少なくとも１０，０００の異なる構成要素、固体支持体上に固定化された少なくとも１００，０００の異なる構成要素、または固体支持体上に固定化された少なくとも１，０００，０００の異なる構成要素を有することができる。
【０３５８】
任意で、固体支持体上の少なくとも１つのアドレスは本明細書で記載される核酸配列のいずれかにおいて明記される配列または配列の一部である。少なくとも１つのアドレスが、本明細書で記載されるペプチド配列のいずれかにおいて明記される配列または配列の一部である固体支持体もまた開示される。固体支持体はまた少なくとも１つのアドレスを、本明細書で記載される核酸配列のいずれかにおいて明記される配列または配列の一部のバリアントとして含み得る。固体支持体はまた、少なくとも１つのアドレスを、本明細書で記載されるペプチド配列のいずれかにおいて明記される配列または配列の一部のバリアントとして含み得る。
【０３５９】
抗体応答の多重特徴づけのための抗原マイクロアレイもまた開示される。例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｕｔｏａｎｔｉｇｅｎ  ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ  ｆｏｒ  ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，  Ｎａｔ  Ｍｅｄ．，  ８（３）：２９５−３０１  （２００２）において記載されるように、サブマイクロリットル量の生物試料を使用して、本明細書で記載されるポリペプチド、ポリヌクレオチドおよび抗体に対して向けられる抗体応答の大規模多重特徴づけを実施するための抗原アレイおよび小型化抗原アレイが開示され、これは、マイクロリットル未満量の生物試料を使用して、構造的に異なる抗原に対して向けられ抗体応答の大規模多重特徴づけを実施するための抗原アレイの構築および使用の教示のために、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０３６０】
タンパク質バリアントおよび誘導体は、当業者によく理解されており、アミノ酸配列修飾を含むことができる。例えば、アミノ酸配列修飾は典型的には以下の３つのクラスの１つ以上に入る：置換、挿入または欠失バリアント。本明細書で記載されるポリペプチドバリアントは、それらの長さに沿って、本明細書で明記されるポリペプチド配列に対し典型的には少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％またはそれ以上のアイデンティティー（下記で記載されるように決定される）を示すであろう。
【０３６１】
Ｆ．実施例
下記実施例は、当業者に、本明細書で特許請求される化合物、組成物、物品、装置および／または方法がどのように製造され、評価されるかの完全な開示および説明を提供するために提示され、発明の純粋な例示であることを意図し、発明者らがかれらの発明であると考える範囲を制限することを意図しない。数（例えば、量、温度、など）に関しては正確さを確保する努力をしたが、いくらかの誤差および逸脱が認められるべきである。別記されない限り、部は重量部であり、温度は℃で表され、または周囲温度であり、圧力は大気圧、または大気圧付近である。
【０３６２】
１．異常脈絡毛細管小葉の性質
近赤外（ＩＲ）、眼底自発蛍光（ＡＦ）、および無赤色（ＲＦ）画像上での異常脈絡毛細管小葉の特徴的症状が、対応する蛍光眼底造影写真（ＦＡ）およびインドシアニングリーン血管造影写真（ＩＣＧ）と共に、図１で図示される。異常脈絡毛細管小葉は、カラーおよび無赤色眼底写真／画像において観察することができるが、これらの技術による可視化はそれらの罹患率を著しく過小評価する。異常脈絡毛細管小葉は、カラーおよび無赤色眼底写真／画像において、比較的低コントラストの規則的な、白色〜黄色の、交絡ネットワークとして規定される。
【０３６３】
異常脈絡毛細管小葉は特に明瞭であり、他のイメージング様式と比べて、スペクトルドメイン光干渉断層撮影と組み合わせた近赤外イメージング（ＳＤ−ＯＣＴ）（Ｚｗｅｉｆｅｌ  ｅｔ  ａｌ  ２０１０を参照されたい）により、最も明確に可視化される。赤外撮像（ＩＲ）異常脈絡毛細管小葉は、軽度の高反射率のバックグラウンドに対して、明確な高反射中央「スポット」を有するおよび有しないの両方である、低反射率の、明確な、直径１５０〜４００μｍ（または、時として、より小さい、もしくはより大きい）単位として規定される（図２）。これらは今や、時間に伴う病変表現型の進行における別個の段階として認識される（図３および４）。
【０３６４】
ＳＤ−ＯＣＴ（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓおよび他の機器）により可視化されるように、網膜下腔において、赤外線画像によるドーナツ形状構造として現れる異常脈絡毛細管小葉の１つの発達表現型の特徴的な「位置」が図示される（図５）。ここで重要な発見は、ＯＣＴ画像において観察される「網膜下スパイク」は、近ＩＲにより観察されるドーナツ形状小葉の中心に対応することであった（図５）。よって、三次元的に投影させた場合、異常脈絡毛細管小葉の分布は、ＳＤ−ＯＣＴ画像単独で予測されるようにランダムではなく、むしろ、脈絡毛細管のサイズおよび分布を再現する１５０−４００ミクロン直径（時としてより大きいまたはより小さい直径）の球状構造の規則パターンを示すことが認識される（図５）。
【０３６５】
異なるイメージング様式により検出された異常脈絡毛細管小葉の評価は、画像レジストレーションを用いて行われた。異なるイメージング技術により観察された個々の小葉は、高い空間対応を有した（図１）。近赤外反射画像における異常脈絡毛細管小葉の測定は、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  ＨＲＡ＋ＯＣＴ／Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ機器を用いて行われた。
【０３６６】
蛍光およびＩＣＧ血管造影写真の初期充満（０．３９および０．５３ｓｅｃ）および後期（９．３８および１０．２０ｍｉｎ）相の両方が、異常脈絡毛細管小葉は、これらの脈絡毛細管小葉の灌流不良および／または蛍光シグナルのマスキングを示す後期低蛍光により特徴づけられることを示す（図１および６）。重要なことには、眼底において観察される全体パターンは黄斑脈絡毛細管解剖のものを繰り返し、脈絡膜の他の領域に比べ独特である（図７）。
【０３６７】
様々な一連の証拠が、異常脈絡毛細管小葉は灌流が不足した、灌流がない、死んだおよび／または機能障害性の黄斑毛細血管小葉を表すという観察を支持する。第１に、個々の病変の概球状形態およびサイズはこれを支持する。第２に、黄斑異常脈絡毛細管小葉を有する患者から取られた高解像度ＯＣＴ「Ｃ」走査はより正確に、再び黄斑脈絡毛細管形態を再現する、異常脈絡毛細管小葉の小葉性質および組織構造を規定する（図８）。
【０３６８】
第３に、中心窩に集中した異常脈絡毛細管小葉の「分節状」分布を示す２５を超える対象患者が検査された（図９）。これらの対象患者はしばしば、異常脈絡毛細管小葉の存在により特徴づけられる黄斑に囲まれた、正常黄斑の一時的なウェッジを示す。ＩＧＧ血管造影では、正常黄斑の領域内での脈絡膜の充満は正常であり、一方、異常脈絡毛細管小葉関連黄斑の充満は遅延し、または存在せず（図９；右パネル）、異常脈絡毛細管小葉病態において影響されるのは脈絡膜血管床であることがさらに支持される。さらに、これらの分節状パターンは、Ｈａｙｒｅｈ（Ｂｒｉｔ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ５９：６３１，  １９７５）により特徴づけられる、一時的／黄斑脈絡膜短後側毛様体動脈およびそれらの関連分水界ゾーンの分布のそれを模倣する（図９；挿入図）。
【０３６９】
黄斑脈絡毛細管小葉の変性に対する追加の証拠がまた、死亡時に眼を提供した６人のユタ州の対象患者から得られた。６人の患者全てがＪｏｈｎ  Ａ．  Ｍｏｒａｎ  Ｅｙｅ  Ｃｅｎｔｅｒ（ＪＭＥＣ）で診察されており、死亡時前に、カラー、ＩＲ、ＡＦ、および無赤色画像、ならびに対応するＦＡおよび／またはＩＣＧ血管造影イメージングに基づいて異常脈絡毛細管小葉を有すると決定された。これらの患者のうち３人が、異常脈絡毛細管小葉により特徴づけられる初期ＡＭＤを示し、３人が異常脈絡毛細管小葉の存在と関連する疾患のより後期を示した。これらの眼のドナーの一人の例が本明細書で記載される。この患者はＪＭＥＣで２００９年２月に初めて診察され、ＪＭＥＣで２０１１年３月に最後に診察され、腸閉塞で２０１１年５月に死亡した。高血圧および心筋梗塞の以前の病歴が記録された。２０１１年３月に撮られ、異常脈絡毛細管小葉の存在を示すカラー、ＦＡおよびＩＲ画像が図１０に示される（異常脈絡毛細管小葉が右のパネルで見られ；点線は下記組織切片が作られた領域を表す）。患者は異常脈絡毛細管小葉に加え、ソフトドルーゼンおよびＲＰＥ変化と診断された。
【０３７０】
死亡後３時間および４５分にこのドナーからとられ、内層を明らかにするために開かれた眼が図１１で図示される。眼は、遠い周辺の玉石（敷石）変性の存在により特徴づけられ、これは患者を異常脈絡毛細管小葉で特徴づける別の特性である。周辺玉石（敷石）はまた、網膜周辺における脈絡膜血管床の異常な変性／機能に由来し得る。
【０３７１】
標準組織切片（Ｍａｌｌｏｒｙトリクロームで染色）は上で記載される領域から取られ、図１２、左パネルで図示される。異常脈絡毛細管小葉またはＡＭＤの病歴のない同年齢ドナーから取られた切片が、図１２、右パネルにおいて同じ倍率で図示される。単一の脈絡毛細管小葉の平均直径を表す３００μｍスケールバーが示される。顕著なことに、異常脈絡毛細管小葉を有するドナーの脈絡膜は、対照ドナーに比べ極度に薄い。黄斑脈絡膜の菲薄化はまた異常脈絡毛細管小葉（平均厚さ１１５．３μｍ）を有する５０人の患者において、異常脈絡毛細管小葉（平均厚さ１５８．２μｍ）を有さない５０人の患者と比べて評価し、異常脈絡毛細管小葉を有する患者における菲薄化脈絡膜の観察のための追加の支持を提供した。さらに、脈絡膜血管、とりわけ中間サイズの血管の喪失が、これらの画像で明らかであり、異常脈絡毛細管小葉の病歴を有するドナーにおける脈絡膜ストローマの線維化性質も同様である（右パネルにおける透明ストローマと比べて、左パネルにおける暗いピンクのストローマ）。加えて、異常脈絡毛細管小葉を有するドナーにおける視細胞の喪失も明らかである。
【０３７２】
多くの明確な形態的特徴がより高倍率で観察される（図１３）。重要なことには、異常脈絡毛細管小葉が臨床的に存在する後極における脈絡毛細管は、激しく変性され（その毛細血管のほとんどが完全にそうなる）、黄斑ＲＰＤ病変が異常脈絡毛細管小葉を表すという血管造影所見が支持される（図１３、左パネル）。さらに、脈絡膜ストローマは線維性であり、排出細静脈が拡張され、赤血球で充填され、正常脈絡膜血管構造の多くがなくなり、網膜は重篤な視細胞変性を示す（図１３、左パネル）。網膜下破片の沈着物、または網膜下ドルーゼン様沈着物は存在しない（図１３、左パネル）。中央血管層に位置を占め、脈絡毛細管小葉に送る細動脈はしばしば、ヒアリン化され、管腔の低減および非存在を示す（図１３、右パネル）。同様の毛細血管病態が脳内のアテローム性動脈硬化に特有であり、そこでは、親血管に直角に生じる小細動脈の壁の肥厚およびヒアリン化がしばしば観察される。結果として生じる狭い管腔は、収縮、拡張および流れに影響し、しばしば、高血圧および／またはアテローム性動脈硬化という結果となる。
【０３７３】
２．ヒトドナーの眼リポジトリにおける「異常脈絡毛細管小葉」の評価
４，０００より多いヒトドナーからの眼、ＤＮＡ、血液、医学および眼科記録からなるリポジトリを使用して、「異常脈絡毛細管小葉」（ＡＣＬ）の性質を確立し、特定的には、ＡＣＬが網膜下ドルーゼン様沈着物とも呼ばれる網膜下破片により明らかかどうかを決定した。リポジトリ内の全ての眼の８５％超が、死亡４時間以内に処理された。このリポジトリ内の全ての眼の肉眼的病理特徴、ならびに、入手可能な場合、対応する眼底写真および血管造影図が読み取られ、網膜専門家により分類された。眼底は国際ＡＭＤ評点方式の修正バージョンに従い、分類された（Ｃｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  ２００５）。ドナーは、死亡時に６５歳を超えている場合、ＡＭＤに影響されないと分類され、黄斑病態の肉眼または眼底徴候あるいは任意の実証されたＡＭＤの眼病歴を有さなかった。
【０３７４】
光学顕微鏡評価では、後極全体、または後極のウエッジが、前に記載されるように（Ｈａｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  １９９９）、４％（パラ）ホルムアルデヒドを含む１００ｍｍｏｌ／Ｌカコジル酸ナトリウム、ｐＨ７．４中で固定されされた。固定液中で２〜４時間後、眼を１００ｍｍｏｌ／Ｌカコジル酸ナトリウムに移し、アクリルアミドおよび／またはパラフィン中に埋め込んだ。鋸状縁と網膜黄斑の間に広がる組織（ほとんどの場合、中隔側頭および下側頭四分円の両方において）が、ミクロトームまたはクリオスタット上で６μｍ〜８μｍの厚さに切片化された。
【０３７５】
検査された全ての眼の強膜−脈絡膜−ＲＰＥ−網膜の指向性の、４ｍｍ直径の全層パンチを、中隔側頭四分円における２つの規定された位置−中心窩中心から１〜２ｍｍおよび１２〜１３ｍｍで、トレフィンパンチを用いて得た。透過電子顕微鏡観察のために使用されるパンチは、２分の１強度Ｋａｒｎｏｖｓｋｙ固定液中での、最低２４時間の浸漬固定により固定された。トレフィン−パンチされた標本は、前に記載されるように（Ｃｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  ２００５；  Ｈａｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  １９９９）、固定され、１００ｍｍｏｌ／Ｌカコジル酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．４に移され、その後脱水され、エポキシ樹脂に埋め込まれ、切片化され、写真撮影された。これらの顕微鏡写真の検査に基づき、特定された任意の型の網膜下破片は、量にかかわらず「網膜下ドルーゼン様沈着物」として含められた。
【０３７６】
光学および電子顕微鏡写真の両方が存在する、ヒトドナーリポジトリ中の全ての眼が網膜下ドルーゼン様沈着物の存在について、再調査された。有効な光学および電子顕微鏡写真の両方が存在するリポジトリ内のドナーは２，３７９を数えた。これらのドナーのうち、４０２（１６．９％）が、実証されたＡＭＤの臨床歴を有し、１，９７７（８３．１％）が、ＡＭＤの臨床歴または組織学的証拠を有さなかった。検査した２，３７９ドナーのうち、２２（０．９２％）がＲＰＥの尖端面に隣接する網膜下腔内に存在する網膜下破片の証拠を有した。網膜下破片は、ＡＭＤドナーの１４（３．４％）および１，９７７の非ＡＭＤドナーの９（０．５％）で確認された。網膜下破片を有するＡＭＤドナーのうちの６が進行症例であり（３が地図状萎縮を有し、３がＣＮＶを有した）、８が初期疾患であった。データは本明細書で表２にまとめて示す。
【０３７７】
構造未満レベルの解像度で観察すると、網膜下破片は、存在する場合、薄く、比較的均一な厚さで（Ｚｗｅｉｆｅｌおよび共同研究者の命名法により「平坦凝集物」）、パッチ状で、ＲＰＥの尖端面に限定された。網膜下破片は視細胞内節または内境界膜のレベルまで延在することはなく、ドナーのいずれにおいても、光学または電子顕微鏡検査のいずれによっても円錐隆起は観察されなかった。１つ（ヘムであった）を除き全ての場合において、材料は膜破片および視細胞外節の特定可能部分から構成された。重要なことには、網膜下沈着物は存在するが、それらはＩＲ−撮像異常脈絡毛細管病変のそれを再現する、適切なサイズ、数または組織分布を有さない。
表２．形態学的に検出可能な網膜下破片を有するドナーにおける網膜下ドルーゼン様沈着物の分布
【表２】
2014515012.tif 000004
【０３７８】
第２のアプローチでは、リポジトリは、Ｋｌｅｉｎおよび同僚 (Klein et al.、2008）により規定される臨床「網状偽ドルーゼン」、すなわち広い、交絡リボンの黄色がかったネットワーク−を特異的に発現するドナーに対して評価された。異常脈絡毛細管小葉が、死亡前にとられたカラー眼底写真、ならびに後側眼底の死後写真において確認された。この場合、規定された基準を満たす異常脈絡毛細管小葉が場合によっては確認される。
【０３７９】
肉眼および／または死亡前眼底写真が入手可能なドナーは３，５６５を数えた。Ｋｌｅｉｎおよび同僚（２００８）により規定されるように、異常脈絡毛細管小葉の納得のいく証拠は４２ドナー、あるいは、検査した総ドナーの１．２％において確認された；このうち、１０が死亡前眼底写真から、３２が肉眼写真により確認された。異常脈絡毛細管小葉を有するドナーの１９（８３．３％）が確認されたＡＭＤ臨床歴を有し、４（９．５％）が疑わしいＡＭＤ歴を有し、３（７．２％）がＡＭＤの証拠または病歴を有さなかった。光学および電子顕微鏡写真はどちらも、異常脈絡毛細管小葉の写真による証拠を有する４２ドナーのうち３０に使用可能であり；これらは、網膜下破片、または「網膜下ドルーゼン様沈着物」の存在に対して評価された。これらの３０の異常脈絡毛細管小葉ドナーのうち２のみが、網膜下破片または「網膜下ドルーゼン様沈着物」のいずれかの証拠を有した。データは本明細書において表３にまとめて示す。
表３．異常脈絡毛細管小葉の写真による証拠を有するドナーにおける網膜下ドルーゼン様沈着物の分布
【表３】
2014515012.tif 000005
【０３８０】
３．カラー写真のみに基づくアイオワ州およびメルボルン症例対照コホートにおける異常脈絡毛細管小葉の評価
２，６００を超えるＡＭＤ症例およびＡＭＤに影響されない、同年齢対照からなるコホートを確認した。
【０３８１】
このコホートを評価し、カラー眼底写真のみで検出可能な異常脈絡毛細管小葉の人口統計を決定した。この同じコホートは、ＡＭＤとの遺伝的関連を評価するために多くの以前の研究において使用されている（Ｈａｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  ２００５を参照されたい）。このコホート内の個人は、ヨーロッパ−アメリカ家系で、６０を超える年齢で、血縁関係がない。ＡＭＤ症例および対照は年齢が同じである。患者は訓練された眼科医により検査され、写真撮影された。カラー眼底写真は、前に記載されるように（Ｈａｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００５）、標準分類系（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ  １９９５；  Ｋｌａｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ  ２００１）に従い類別され；最も悪い眼の分類がこの分析で使用された。２，６００の対象からの眼底写真は、カラー写真に対して確立された基準（Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００８；  Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ  ２００９）に基づいて、異常脈絡毛細管小葉の有無に対して、評価された。異常脈絡毛細管小葉が、２，６００研究参加者のうち８２で確認された（３．２％）。規定された異常脈絡毛細管小葉を有する８２対象のうち、６８（８３％）が女性であり、１４（１７％）が男性であった。異常脈絡毛細管小葉を有する全患者の６．１％が、ＡＭＤの実証された診断を有さず、２．４％が種々の理由で類別されなかた。残りの対象は、臨床的に実証されたＡＭＤの診断を有し；８．５％がＡＭＤ（グレード１ａ）を有し、２２．０％が初期ＡＭＤ（グレード１ｂ、２ａ、２ｂおよび３）を有し、７．３％が地図状萎縮（グレード４ａ）を有し、４１．５％がＣＮＶ（グレード４ｂ）を有し、１２．２％がＧＡおよびＣＮＶの両方（グレード４ｃ）を有した。
【０３８２】
異常脈絡毛細管小葉を有する患者のおよそ６０％が、「豹紋状」パターンを示し、一方、残りの４０％が「点状」パターンをカラー写真上で示した。小葉は「点状」表現型を示す個体のおよそ５０％において、眼底の中央領域で生じた（残りは４０％が上方および１０％が側頭である）。それらは「豹紋状」表現型を示す個体のおよそ７０％では、眼底の上方領域で生じた（残りはおよそ１２％が側頭、１２％が中央であり、残りは鼻である）。カラー眼底写真上で検出された異常脈絡毛細管小葉を有する患者の７０％超が、地図状萎縮および／または脈絡膜新生血管を含む後期ＡＭＤを示した。近視は異常脈絡毛細管小葉を有する患者の２８％に伴い；遠視および正視眼は同様に分布していた。しかしながら我々は今や、より進歩したイメージング様式（ユタ州コホートに関するセクションを参照されたい）に基づき、カラーおよび無赤色眼底写真／画像を用いる異常脈絡毛細管小葉の検出は、患者コホートにおけるこの表現型の罹患率を１０〜２０倍だけ、著しく過小評価することを知っている。同様の観察がメルボルン大学からの症例対照コホートを用いて実施された。２，０００超の対象コホートのうち１０５患者のみが、カラー写真上で異常脈絡毛細管小葉表現型を示した。このコホートからの多くの患者が再勧誘され、ＳＤ−ＯＣＴを用いて撮像された。予備的評価では、カラー写真により、異常脈絡毛細管小葉表現型を示さなかった多くの追加の患者がＳＤ−ＯＣＴにより、異常脈絡毛細管小葉表現型の存在を示す。まとめると、これらの研究は、異常脈絡毛細管小葉表現型との臨床関連についていくらかの情報を提供するが、カラー写真のみを使用した場合、集団におけるこの表現型の罹患率を著しく過小評価する。
【０３８３】
４．ガーナ人コホートにおける異常脈絡毛細管小葉の評価
個人（７７症例、１９１対照、５５未定）から構成される症例／対照コホートが、Ａｃｃｒａ、Ｇｈａｎａｕｎｄｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ承認プロトコルにおいて確認された。このコホートは、カラー眼底写真のみにより検出可能な異常脈絡毛細管小葉の人口統計を決定するために評価された。このコホートにおける個体はアフリカ家系で、６０を超える年齢で、血縁関係はなかった。ＡＭＤ症例および対照は年齢が同じであった。患者は、訓練された眼科医およびスタッフにより検査され、写真撮影された。カラー眼底写真は、前に記載されるように（Ｈａｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００５）、標準分類系（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ  １９９５；  Ｋｌａｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ  ２００１）に従い類別され；最も悪い眼の分類がこの分析で使用された。３２３対象（平均年齢＝６７）からの眼底写真は、カラー写真に対して確立された基準（Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００８；  Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ  ２００９）に基づいて、異常脈絡毛細管小葉の有無に対して評価された。異常脈絡毛細管小葉の１つの推定症例のみが指摘された。
【０３８４】
表１に列挙されるＳＮＰに対する遺伝子型が、コホート全体に対して評価された。４２症例および１０７対照からなるコホートの一部分がＡＭＤ疾患関連について分析された。単一のマーカー関連が標準カイ二乗、２ｘ２表、および両側Ｆｉｓｈｅｒ直接確率法を使用して評価された。ハプロタイプは、Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｈａｐｌｏｖｉｅｗ）ソフトウェアを使用して構築された。
【０３８５】
５．Ｕｔａｈ臨床コホートにおける異常脈絡毛細管小葉罹患率／頻度のレトロスペクティブ評価
レトロスペクティブカルテ審査はＷｉｌｌｏｗデータベースに参加した全ての患者に対して実施され、それは、２００７年４月以来診察された患者に関するマルチモーダル画像および臨床情報を含む。２００７年４月〜２０１０年６月の間にカラー、近赤外反射およびＳＤ−ＯＣＴで撮像されたこのデータベース内の患者のみが評価に含められた。データベースは、対象の以下の２つの群に対し特定的にスクリーニングされた：１）ＡＭＤのいずれかの形態と診断された患者；および２）対照群として機能する、黄斑円孔と診断された同年齢患者。
【０３８６】
分析に含めるために、近赤外反射およびＳＤ−ＯＣＴ画像の組み合わせ上での異常脈絡毛細管小葉の存在が確認される（「異常脈絡毛細管小葉」）かまたは、明確に排除されなければならなかった（「非異常脈絡毛細管小葉」）。異常脈絡毛細管小葉の診断は、厳密に以下に基づいた：１）ＳＤ−ＯＣＴ画像における「網膜下スパイク」の存在（Ｓｐａｉｄｅ（Ｒｅｆ）により記載）、および２）ＩＲ画像における適切なサイズの明確に視認可能な実体。カラー、無赤色、およびＡＦ写真における異常脈絡毛細管小葉の存在は記録されたが、分類のための基準として使用されなかった。排除基準は、低品質の画像、糖尿病性網膜症の徴候、網膜血管閉塞歴および遺伝性網膜ジストロフィーの任意の徴候または病歴により、異常脈絡毛細管小葉の存在を確認し、または排除することができなかった状況を含んだ。異常脈絡毛細管小葉の存在および関連特徴（例えば、位置、黄斑関与の程度、疾患関連）が、両方の群に対し評価され、記録された。
【０３８７】
ＡＭＤと診断され、近赤外反射およびＳＤ−ＯＣＴにより撮像された２４８の対象が特定された。２４８の対象のうち、２０４（８２．３％）において異常脈絡毛細管小葉の証拠があり、４４（１７．７％）において異常脈絡毛細管小葉の証拠がなかった。データは本明細書において表４で示される。実証されたＣＮＶを有する全ての患者の９２．５％および実証された地図状萎縮を有するものの９７％が異常脈絡毛細管小葉を示した。異常脈絡毛細管小葉を有さない患者の大部分が初期−進行していない−ＡＭＤの病歴を有した。
【０３８８】
黄斑円孔と診断され、近赤外反射およびＳＤ−ＯＣＴにより撮像された９７の対象（平均年齢＝７２．２）が特定された。６の患者（６．２％）において異常脈絡毛細管小葉の証拠があり、９１（９３．８％）において異常脈絡毛細管小葉の証拠がなかった。
【０３８９】
ユタ州のコホートの評価は、異常脈絡毛細管小葉表現型の以下の特性を明らかにした。異常脈絡毛細管小葉表現型は、女性に著しく傾斜している（ユタ州のコホートのおよそ７０％およびＭｅｌｂｏｕｒｎｅで確認されたコホートの９０％が女性）。加えて、異常脈絡毛細管小葉を有する患者のおよそ７７％が、異常脈絡毛細管小葉を有さない患者のわずか３７％に比べ、重篤なまたは後期黄斑症を有する。
表４．異常脈絡毛細管小葉を有する眼疾患の分布
【表４】
2014515012.tif 000006
【０３９０】
６．見込みのあるユタ州の症例および対照コホートにおけるＳＤ−ＯＣＴにより確認された異常脈絡毛細管小葉の評価
全段階のＡＭＤと診断された患者、ならびに黄斑円孔を有する、および有さないの両方である対象からなる同年齢対照群が、外来クリニックから募集された。全ての研究はＨｅｌｓｉｎｋｉ宣言の教義に従った。インフォームドコンセントが各患者から、研究の性質および可能性のある結果の説明後に得られた。眼科歴および病歴が、標準質問表および記録の再調査を使用して記録された。血液試料または唾液が、遺伝分析のために、血清が未来のバイオマーカー分析のために採取された。
【０３９１】
瞳孔を、１．０％トロピカミドおよび２．５％フェニレフリンで拡張し、研究対象をｃＳＬＯ、近赤外およびＳＤ−ＯＣＴの組み合わせにより撮像した。カラー眼底写真、眼底自発蛍光画像および無赤色画像が、ほとんどの患者から収集された。蛍光眼底造影、インドシアニングリーン血管造影、多焦点ＥＲＧ記録、微小視野測定および視野評価が、選択された症例において実施された。
【０３９２】
提示される研究データに含めるために、近赤外反射およびＳＤ−ＯＣＴ画像の組み合わせ上の網状パターンの存在が確認され（異常脈絡毛細管小葉ＡＭＤ；異常脈絡毛細管小葉非ＡＭＤ）、あるいは明確に排除されなければならなかった（非異常脈絡毛細管小葉ＡＭＤ；非異常脈絡毛細管小葉対照）。排除基準は糖尿病性網膜症の徴候、網膜血管閉塞歴、および遺伝性網膜ジストロフィーの任意の徴候または病歴を含んだ。
【０３９３】
ａ．カラー眼底写真
カラー眼底写真は、標準プロトコル通り、散瞳（ＺｅｉｓｓＦＦ４５０  ５０°フィールドまたはＺｅｉｓｓ  ＦＦ４  ３０°フィールド）および／または非散瞳（Ｎｉｄｅｋ  ＡＦＣ−２１０）デジタル眼底カメラを使用して得られた。
【０３９４】
ｂ．ＳＬＯおよびＳＤ−ＯＣＴイメージング
高解像度イメージングを、ｃＳＬＯおよびＳＤ−ＯＣＴ画像の同時記録を可能にするＨｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  ＨＲＡ＋ＯＣＴ／Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ走査型レーザー検眼鏡（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて実施した（Ｈｅｌｂ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９）。併用イメージングのために、最小標準化イメージングプロトコルを全ての患者において実施し、これは近赤外反射（８３０ｎｍ；視野、３０°ｘ３０°；画像解像度、７６８ｘ７６８画素）および走査ミラーの第２の、独立した対を使用する同時ＳＤ−ＯＣＴ走査（８７０ｎｍ；獲得速度、４０，０００Ａ−走査／秒；走査深さ、１．８ｍｍ；デジタル深さ解像度、およそ３．５μｍ／画素）の獲得を含んだ。ＳＤ−ＯＣＴ走査は、含まれるＨｅｉｄｅｌｂｅｒｇソフトウェア（Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ  Ｖｉｅｗｉｎｇ  Ｍｏｄｕｌｅ  ４．０．０．０；Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）を用いて観察された。後極内の異常脈絡毛細管小葉病態の領域が、各々が１００までの平均走査を含むセクションを用いて撮像された。眼球運動は登録され、自動的に較正され；これにより、ｃＳＬＯおよびＯＣＴ画像の画素間相関が可能になった。この機器の２地点間相関特徴を使用して近赤外およびＳＤ−ＯＣＴ画像間の対応する病態を特録した。異なる様式（それぞれ、高解像度および高速）によって、ＯＣＴ走査の縦位は、最大４倍まで拡大された。したがって、ＳＤ−ＯＣＴ画像は、垂直次元、またはＺ軸で不釣り合いなほど高く現れる。
【０３９５】
ｃ．自己蛍光イメージング
ＡＦ画像を、同じＨｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  ＨＲＡ＋ＯＣＴ／Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ機器で、照明のための４８８ｎｍの青色レーザー光および５００ｎｍの障壁フィルタを使用して、獲得した。各画像は、ＳＬＯソフトウェアにより構成された６〜９走査の平均を表す。
【０３９６】
ｄ．無赤色イメージング
ＲＦ画像を、同じＨｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  ＨＲＡ＋ＯＣＴ／Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ機器で、照明のための４８８ｎｍの青色レーザー光を使用して、獲得された。ＲＦ画像はまた、Ｚｅｉｓｓデジタル眼底カメラを使用し、標準化プロトコルを用いて捕捉した。
【０３９７】
ｅ．蛍光眼底造影
５ｍｌの１０％フルオレセインナトリウム溶液（Ａｋｏｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；Ｌａｋｅ  Ｆｏｒｅｓｔ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）の静脈内注射後、高速デジタル画像が、最初の２０〜３０秒期間にわたり獲得され、その後、１分、５分、１０分、時々、２０分に静止写真が、Ｚｅｉｓｓ眼底カメラで青色フィルタを用いて、あるいはＨｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  ＨＲＡ＋ＯＣＴ／Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ機器で、照明のための４８８ｎｍの青色レーザー光および５３０ｎｍの障壁フィルタを用いて取得された。
【０３９８】
ｆ．インドシアニングリーン血管造影
１２．５−２５．０ｍｇのＩＣＧを含む２〜４ｍｌの溶液（Ａｋｏｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；Ｌａｋｅ  Ｆｏｒｅｓｔ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）の静脈内注射後、高速デジタル画像が、最初の２０−３０秒期間にわたり取得され、その後、１分、５分、１０分、時々、２０分に静止写真がＺｅｉｓｓ眼底カメラで青色フィルタを用いて、あるいはＨｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  ＨＲＡ＋ＯＣＴ／Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ機器で、照明のための４８８ｎｍの青色レーザー光および５３０ｎｍの障壁フィルタを用いて取得された。
【０３９９】
ｇ．多焦点網膜電図検査
眼を、多焦点網膜電図検査（ｍＥＲＧ）により網膜応答／感受性に対して分析した。ｍＥＲＧ応答は、Ｖｅｒｉｓバージョン６．３多焦点システム（Ｅｌｅｃｔｒｏ−Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｉｎｃ；  Ｒｅｄｗｏｏｄ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）により、１０３六角形フィールド４０°水平および３５°垂直を用いて得られた。幾人かの患者を、ＲＥＴＩ走査システム（Ｒｏｌａｎｄ  Ｃｏｎｓｕｌｔ、Ｅｌｅｋｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｓｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｋ  Ｓｙｓｔｅｍｅ、Ｂｒａｎｄｅｎｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて分析した。要素は、短い較正されたバイナリｍ−シーケンスに従い２つの輝度レベル間で独立して修正され、全ての刺激された網膜領域の局所応答が合計応答から抽出された。
【０４００】
ｈ．眼底制御微小視野測定
眼を、ＭＡＩＡ黄斑完全性評価機器（Ｅｌｌｅｘ；ＣｅｎｔｅｒＶｕｅ  ＳｐＡ；Ｐａｄｏｖａ、Ｉｔａｌｙ）、眼底視野測定を使用して、視野測定値を得るために可視光投射のためのシステムと組み合わされた、共焦点、赤外検眼鏡を使用して実行される眼底制御微小視野測定を用いて網膜機能に対して分析した。標準３７の刺激フィールドが、製造者により提供される「専門家試験」プロトコルを使用して採用された。いくらかの患者がＭｉｃｒｏｐｅｒｉｍｅｔｅｒ  １（ＭＰ１；Ｎｉｄｅｋ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｐａｄｏｖａ、Ｉｔａｌｙ）を使用して評価され、これにより、明順応機能の眼底制御光増加感受性（ＬＩＳ）が可能になる。統合赤外眼底カメラは、モニタ上での実時間眼底イメージングを可能にする。予め決められた試験格子に加えて、眼底画像上の個々の試験点が試験者により選択された；眼底画像は、視野測定検査前に取得された。統合眼トラッキングシステムは患者の眼球運動を連続してモニタし、標認点と視野測定感受性地図の間の正確な空間相関を確保した。
【０４０１】
７．画像の解釈および分析
網状パターンの空間評価では、ｃＳＬＯおよびＳＤ−ＯＣＴ走査の両方が同時に並行して研究された。分析は、後極にわたるｃＳＬＯ画像面での網状パターンのトポグラフィー分布およびシグナル特性、１００〜４００μｍのおおよそのサイズを有する円形または卵形不規則性の交絡ネットワークとして視認可能な明確なパターンを含んだ。ＲＰＥ／視細胞レベルでの、および、より内側の網膜層内のＳＤ−ＯＣＴ走査上の対応する構造変化が評価された。前者では、外顆粒層の低反射バンドより下の個々のバンドが、以下のようにＰｉｒｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）に従い分析された：（１）おそらく外境界膜に対応する薄い高反射バンド、（２）おそらく視細胞層の内節および外節の界面（ＩＰＲＬ）に対応するわずかに厚い高反射バンド、（３）おそらく外節−ＲＰＥ嵌合に対応する薄い−ごくまれに視認可能な−高反射バンド、および（４）ＲＰＥＢｒｕｃｈ膜複合体に対応すると考えられる広い高反射バンド。
【０４０２】
異常脈絡毛細管小葉（ＡＣＬ）の見込みのある症例および対照コホートとの関連を、表１０にまとめて示す。ＡＣｌの染色体１０（ｒｓ１０４９０９２４）リスクアレルとの関連が高い（ＭＡＦ＝０．４３４）。染色体１リスク（ｒｓ１０６１１７０）との関連はより強くない。ＡＣＬのｒｓ１０４９０９２４およびｒｓ１０６１１７０の様々なホモ接合体の組み合わせとの関連もまた表１０に示される。最も著しい関連は、ホモ接合リスク遺伝子型（ＴＴ；６９．９％〜７５．０％）によって分離する。ＡＣＬは、このコホートでは女性（６６．２％）に偏っており、今日まで研究された全てのコホートにおいて我々が検出した関連であった。最後に、ＡＣＬは、地図状萎縮（４Ａ）、ＣＮＶ（４Ｂ）、または両方（４Ｃ）の後期黄斑変性症表現型と強く関連する。例えば、全ＣＮＶ症例の５８．２％がＡＣＬと関連する。
表１０
【表５】
2014515012.tif 000007
2014515012.tif 000008
【０４０３】
８．異常脈絡毛細管小葉の機能的意義：多焦点網膜電図
１つの研究では、対応試料ｔ検定が実施され、異常脈絡毛細管小葉を有さない対照群と比べて、上黄斑が現れる異常脈絡毛細管小葉を有する患者における上方および下方網膜からの多焦点網膜電図（ＭＥＲＧ）応答（Ｎ１−Ｐ１振幅およびＰ１潜時）が比較された。各上方半リングを分析のために同じ偏心の下方半リングと対とし、５対を形成させた。上方および下方群間の分散は、Ｌｅｖｅｎｅ検定による有意差を示さず、正常性の侵害はなかった。対照眼ではそれらの下方対応物と比べて上方半リング１および２（１〜８°）において振幅の著しい低下（−１０．２６、−２．３５ｎＶ／ｄｅｇ２）があり、異常脈絡毛細管小葉眼では上方半リング１のみであった。振幅差が、対照および異常脈絡毛細管小葉眼の両方で、上方および下方網膜間中央で見られた（１〜８°）が、周辺では振幅差はほとんど〜全く見られなかった。対照および偽ドルーゼン眼はどちらも、半リング３での上方および下方網膜間で、平均潜時において有意差を示した（８〜１２°の偏心）。最も興味深いことに、潜時における有意の遅延が異常脈絡毛細管小葉眼において、下方半リング４（３１．１±１．９）に比べ、上方半リング４に対して見出された（３２．３±１．９）；ｔ（２２）＝３．１３、ｐ＝０．００５。同様の有意の遅延が、ＲＰＤ眼のみにおける下方半リング５（３１．０±２．０）に比べ、上方半リング５（３１．７±２．０）間で見出された；ｔ（２２）＝２．３０、ｐ＝０．０３２。下方周辺（１２−２２°）網膜と比較した、上方周辺網膜のこれらのＰ１−潜在時間遅延は、異常脈絡毛細管小葉眼においてのみ見出されたが、対照眼では見出されなかった。その後の研究が、異常脈絡毛細管小葉を有する黄斑領域にわたって、網膜機能における著しい障害―ＭＥＲＧにより評価される―を記録するために続けられた。中央黄斑において広範な異常脈絡毛細管小葉を有する患者における黄斑網膜機能の低減（図１４の右パネルにおける暗色領域）の例が図１４に示される。
【０４０４】
９．異常脈絡毛細管小葉の機能的意義：眼底制御微小視野測定
２５患者において、異常脈絡毛細管小葉の領域にわたる視細胞機能を、異常脈絡毛細管小葉を有さない領域と比較した。視細胞機能は、異常脈絡毛細管小葉を有さない領域と比べて異常脈絡毛細管小葉の領域において一貫して損なわれた。
【０４０５】
１０．異常脈絡毛細管小葉およびＲＡＰ
Ｕｔａｈ大学のＪｏｈｎＭｏｒａｎＥｙｅＣｅｎｔｅｒのＷｉｌｌｏｗデータベース内の、網膜血管腫増殖（ＲＡＰ）の診断を有する全ての患者の検査を実施した。観察した全症例において、ＲＡＰは、異常脈絡毛細管小葉の存在と関連し、血管新生のこの特異的表現型は異常脈絡毛細管小葉形成の結果として得られ得ることが示唆される。ＡＭＤを有する患者において観察される脈絡膜新生血管の典型的な形態は、網膜色素上皮を侵食し、神経感覚網膜を浸潤する。対照的に、ＲＡＰは、網膜の深層にその起源を有し、増殖は、網膜下腔内に進行し、その後、脈絡膜血管ネットワークと連絡し、網膜−脈絡膜吻合を形成する（Ｙａｎｎｕｚｚｉ  Ｌ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ａｎｇｉｏｍａｔｏｕｓ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，  Ｒｅｔｉｎａ  ２００１，  ２１（５）：４１６−３４）。
【０４０６】
１１．カラー写真のみで検出された小コホートにおける、ＡＭＤ関連遺伝子における多型の、異常脈絡毛細管小葉との関連
ＣＦＨ（Ｖ６２Ｉ、ｒｓ８００２９２；Ｙ４０２Ｈ、ｒｓ１０６１１７０）、ＨＴＲＡ１（プロモーター、ｒｓ１１２００６３８）、ＡＲＭＳ２（Ａ６９Ｓ、ｒｓ１０４９０９２４）、Ｃ３（Ｒ１０２Ｇ、ｒｓ２２３０１９９）、ＣＦＢ（Ｌ９Ｈ、ｒｓ４１５１６６７；Ｒ３２Ｑ、ｒｓ６４１１５３）、Ｃ２（ＩＶＳ１０、ｒｓ５４７１５４；Ｅ３１８Ｄ、ｒｓ９３３２７３９）、およびＡＰＯＥ遺伝子内の様々なＳＮＰの関連を、カラー写真に基づく、異常脈絡毛細管小葉表現型を有する４９患者の小コホートにおいて、ＡＭＤおよび対照コホートのための前に確立したベースラインデータと比べて、最初に決定した。このコホートでは、対象の１０．２％が男性であり、８９．８％が女性であり、平均年齢は７４．２歳で、８２％が進行ＡＭＤを有した。
【０４０７】
全対象由来のゲノムＤＮＡを、末梢血白血球からＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｘｉキット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を用いて単離した。ＤＮＡ試料を、ＣＦＨ（Ｖ６２Ｉ、ｒｓ８００２９２；Ｙ４０２Ｈ、ｒｓ１０６１１７０）、ＨＴＲＡ１（プロモーター、ｒｓ１１２００６３８）、ＡＲＭＳ２（Ａ６９Ｓ、ｒｓ１０４９０９２４）、Ｃ３（Ｒ１０２Ｇ、ｒｓ２２３０１９９）、ＣＦＢ（Ｌ９Ｈ、ｒｓ４１５１６６７；Ｒ３２Ｑ、ｒｓ６４１１５３）、Ｃ２（ＩＶＳ１０、ｒｓ５４７１５４；Ｅ３１８Ｄ、ｒｓ９３３２７３９）、およびＡＰＯＥにおけるハプロタイプ−タギングＳＮＰ（ｈｔ−ＳＮＰ）に対してスクリーニングした。遺伝子型判定をＴａｑＭａｎアッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）により、１０ｎｇのテンプレートＤＮＡを含む５μＬ反応を用いて実施した。３８４ウェルサーモサイクラー（ＰＴＣ−２２５、ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）における熱サイクル条件は、最初、９５℃で１０分の保持、続いて、１５秒の９５℃の変性ステップならびに１分の６０℃アニーリングおよび伸長ステップの４０サイクルから構成した。プレートは７９００ＨＴ高速実時間ＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）において読み取った。
【０４０８】
ＳＮＰのアレルおよび遺伝子型頻度を、異常脈絡毛細管小葉コホートにおいて特徴づけ、およそ９００のＡＭＤ症例および４００の年齢および民族性が同じ対照のコホートで以前に獲得された同じＳＮＰに対するデータと比較した（Ｈａｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００５）。統計分析を標準カイ二乗、２ｘ２表、および両側Ｆｉｓｈｅｒ直接確率法により実施した。
【０４０９】
ＨＴＲＡ１プロモーターアレル（ｒｓ１１２００６３８）の頻度は、網状コホートでは５２％、一般ＡＭＤコホートでは４０％であった（ｐ＜０．０１）。ＡＲＭＳ２に対するリスクアレルの対応する頻度は５４％および４１％（ｐ＜０．０１）であった。対照的に、ＣＦＨＹ４０２Ｈリスクアレルの頻度は異常脈絡毛細管小葉コホートでは５６％、一般ＡＭＤコホートでは５４％であり、保護Ｉ６２Ｖアレルに対する頻度は異常脈絡毛細管小葉患者では１６％であり、一般ＡＭＤコホートでは１５％であり；これらのデータは有意ではなかった。同様に、異常脈絡毛細管小葉患者と前に発表されたＡＭＤコホートの間でスクリーニングされたＣ３およびＣＦＢ  ＳＮＰに対するアレル頻度には有意差はなかった。異常脈絡毛細管小葉対象のこの小コホートにおける女性対男性比の増加（１０．２％男性および８９．８％女性）は、前の研究において見られたものと一致することもまた注意されたい。
【０４１０】
これらのデータは２つの遺伝子ＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２を含む、染色体１０座位は、ＡＭＤとよりも、異常脈絡毛細管小葉とより強く関連する証拠を提供した。
【０４１１】
１２．完全撮像された見込みのあるユタ州の症例および対照コホートにおけるＡＭＤ関連遺伝子における多型の異常脈絡毛細管小葉との関連
全段階のＡＭＤと診断された患者、ならびに黄斑円孔を有する、および有しないの両方の対象からなる同年齢対照群が、外来クリニックから募集され、本明細書の別の部分で記載されるように撮像した。染色体１補体座位（ＣＦＨ−〜−Ｆ１３Ｂ）、ならびにＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、Ｃ３、ＣＦＢ、Ｃ２およびＡＰＯＥ遺伝子内の様々なＳＮＰの連関（図３９Ａ−３９Ｃ）を、ＳＤ−ＯＣＴおよびＩＲにより撮像されるように、異常脈絡毛細管小葉表現型を有する３８８の患者および異常脈絡毛細管小葉のない４１６個体からなるユタ州のコホートにおいて決定した。異常小葉コホートでは、対象の３９．８％が男性であり、６０．２％が女性であり、平均年齢は７９．７歳であり、７７．４％が進行ＡＭＤを有した。
【０４１２】
全対象由来のゲノムＤＮＡを、末梢血白血球からＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｘｉキット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を用いて単離した。ＤＮＡ試料を、補体領域（ＣＦＨ−〜−Ｆ１３Ｂ）、ならびにＨＴＲＡ１、ＡＲＭＳ２、Ｃ３、ＣＦＢ、Ｃ２およびＡＰＯＥ遺伝子の制御におけるＳＮＰに対してスクリーニングした（図３９Ａ〜３９Ｃ）。遺伝子型判定をＴａｑＭａｎアッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）により、１０ｎｇのテンプレートＤＮＡを含む５μＬ反応を用いて実施した。３８４ウェルサーモサイクラー（ＰＴＣ−２２５、ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）における熱サイクル条件は、最初、９５℃で１０分の保持、続いて、１５秒の９５℃の変性ステップならびに１分の６０℃アニーリングおよび伸長ステップの４０サイクルから構成した。プレートは７９００ＨＴ高速実時間ＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）において読み取った。
【０４１３】
ＳＮＰのアレル頻度を、異常脈絡毛細管小葉コホートにおいて特徴づけ、異常脈絡毛細管小葉のない４１６の個体のコホートと比較した。統計分析を標準カイ二乗、２ｘ２表、および両側Ｆｉｓｈｅｒ直接確率法より実施した（図３９Ａ〜３９Ｃ）。ＳＮＰが有意性を示した場合、ハプロタイプが構築され、頻度が計算された。統計分析を標準カイ二乗、２ｘ２表、および両側Ｆｉｓｈｅｒ直接確率法により実施した（図４０〜４２）。
【０４１４】
ＨＴＲＡ１プロモーターリスクアレル（ｒｓ１１２００６３８）の頻度は網状コホートで４４％であり、非網状コホートで３２％であった（ｐ＜０．０００００１）。ＡＲＭＳ２に対するリスクアレルの対応する頻度は４４％および３０％であった（ｐ＜０．００００００１）。対照的に、ＣＦＨＹ４０２Ｈリスクアレルの頻度は、異常脈絡毛細管小葉コホートで５６％であり、非網状コホートで５０％であり（ｐ＝０．０２６）、保護ＣＦＨ  Ｉ６２Ｖアレルに対する頻度は、異常脈絡毛細管小葉患者で１４％であり、異常小葉なしのコホートでは１８％であった（ｐ＝０．０２０）。異常脈絡毛細管小葉患者と、異常小葉のないコホートの間でスクリーニングしたＣ２、Ｃ３およびＣＦＢ  ＳＮＰに対するアレル頻度には有意差はなかった。異常脈絡毛細管小葉対象のこのコホートにおける偏った女性対男性比（３９．８％男性および６０．２％女性）は他のコホートで見られるものと一致することもまた注意されたい。
【０４１５】
これらのデータは、ＡＭＤ関連染色体１  ＳＮＰは、異常脈絡毛細管小葉との有意の関連を示すが、染色体１０座位、とりわけ、２つの遺伝子ＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２は異常脈絡毛細管小葉と最も強く関連することを示唆する証拠を提供する。しかしながら、これらの座位は異常脈絡毛細管小葉の全症例を説明することはできない。
【０４１６】
１３．異常脈絡毛細管小葉、ＧＡおよびＣＮＶを区別するものとしてのＡ６９Ｓ／Ｙ４０２Ｈ遺伝子型
染色体１および１０はＡＭＤの全てのサブタイプと最も強く、かつ一貫して関連するＳＮＰを持つが、これらの座位のアレルの組み合わせがどのように、ＡＭＤサブ表現型リスク、例えば異常脈絡毛細管小葉に寄与するかは明らかではない。データは、ＡＭＤサブ表現型間の識別因子となるのは、これらの２つの主要座位での遺伝子型またはディプロタイプの組み合わせであることを示唆する。明示的に、Ａ６９ＳおよびＹ４０２Ｈの特異的な遺伝子型の組み合わせを有することは、異常脈絡毛細管小葉のような表現型に対するより大きなリスクを示し得る。これら２つの座位の各々でのアレルの組み合わせに基づくリスクの標準化およびランク付けを用いて、染色体１０  Ａ６９Ｓバリアント（ｒｓ１０４９０９２４）に対するリスクアレルは、染色体１上のリスクアレル（ｒｓ１０６１１７０）を超える駆動ＡＣＬリスクであることが明らかになる。これは、ＡＣＬに対する最も大きなリスクは、染色体１０でのホモ接合リスクである任意のディプロタイプであるという事実により証明される。図３８を参照されたい。
【０４１７】
１４．ＨＴＲＡ１眼遺伝子発現
ＨＴＲＡ１遺伝子発現を、ＡＭＤの眼病歴を有する、および有しないヒトドナー眼のＲＰＥ−脈絡膜複合体において評価した。ＲＰＥ−脈絡膜および網膜試料を、アイオワ大学のＬｉｏｎアイバンクまたはＬｉｏｎのオレゴンアイバンクから得られたヒトの眼から単離した。アイオワ眼は、網膜専門家により、肉眼的病理学的特徴、入手可能な場合、対応する眼病歴、例えば眼底写真および血管造影図を用いて分類された。ＤＮＡを含まないＲＮＡを、オンカラム消化およびＱｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙプレップ（Ｑｉａｇｅｎ、Ｉｎｃ．、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を用いて精製した。網羅的トランスクリプトームプロファイリングを、Ａｇｉｌｅｎｔ全ヒトゲノム４ｘ４４Ｋインサイチューオリゴヌクレオチドアレイ（Ｇ４１１２Ｆ、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ、ＣＡ）を用い、製造者の方法に従い実施した。データ処理方法および追加の技術情報はＮｅｗｍａｎ  ＡＭ  ｅｔ  ａｌ．（Ｓｙｓｔｅｍｓ−ｌｅｖｅｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｇｌｏｂａｌ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ａｎｄ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｎｅｔｗｏｒｋｓ，  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｍｅｄ  ２０１２，  ２４；４（２）：１６）において提供される。試料情報、詳細なマイクロアレイ方法、およびマイクロアレイデータはＧｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｍｎｉｂｕｓより入手可能である（受入：ＧＳＥ２９８０１）。
【０４１８】
黄斑外および黄斑領域におけるＨＴＲＡ１発現データが図１７および１８で示されるグラフにおいて提示される。発現データは、疾患状態（上部チャートでのＡＭＤグレード［ＧＡ、ＣＮＶ、ＭＤ１ＭＤ２）］および対照［標識されず］ならびに中央チャートでのＡＭＤおよび対照）および染色体１０ｒｓ１１２００６３８  ＳＮＰでの遺伝子型（「Ａ」はリスクアレルであり、「Ｇ」は非リスクアレルである）に基づいて示される。ＡＭＤ*は、ＣＳＭＤのアイオワ眼を示し、これには、グレードがない。遺伝子型の発現レベルとの関連は下部バーチャートで図示される。誤差バーは平均の標準誤差であり、ｐ値はスチューデントｔ検定を用いて決定された。黄斑外におけるヘテロ接合体「ＧＡ」とホモ接合体非リスク「ＧＧ」遺伝子型を有するドナー間の発現レベルにはずかな有意差（ｐ＝０．０１５）があったが、黄斑領域ではなかった。ＣＮＶまたはＧＡを有するドナーの発現レベルでは、初期ＡＭＤと比べて差はないように考えられる。図１７および１８を参照されたい。
【０４１９】
１５．ＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２コンストラクト／プラスミドの生成
ＨＴＲＡ１−４およびＡＲＭＳ２の部分を発現するように設計されたコンストラクトを生成させた。これらのコンストラクトは、細菌において効率的に発現するようにコドンが最適化された。生成された全コンストラクトの概要のために本明細書における表５を参照されたい。ＨＴＲＡ１の各ドメインに対して表５において与えられたアミノ酸対応物は、コドンが最適化されたヌクレオチド配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．９に関連する。これらのコンストラクトをウエスタンブロット分析によりタンパク質の発現に対し試験した。簡単に言うと、非誘導および誘導（ＩＰＴＧで３時間）から得られた細胞ペレットを、１ｘ試料緩衝液中で再懸濁させ、２０分間煮沸し、続いて遠心分離した。５μｌ試料を、１レーンあたりＳＤＳ−ＰＡＧＥのために装填した。ゲルをその後、ニトロセルロース膜に転写し、５％脱脂乳を含むＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ  ２０（ＰＢＳＴ）を用いてブロックした。膜をその後、抗ＨｉｓＨＲＰ結合抗体（１：２０００）でプロービングし、タンパク質をＥＣＬ試薬（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌＷｅｓｔ  Ｄｕｒａ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ、Ｔｈｅｒｍｏ＃３４０７６）を用いて間接的に検出した。それらの結果の概要のために本明細書における図４を参照されたい。コンストラクトを、ＮＥＢ  Ｔ７  Ｅｘｐｒｅｓｓ  ｌｙｓＹ細胞において発現させ、３時間ＩＴＰＧにより誘導した。発現を抗ＨＩＳタグ抗体（ＨＩＳタグは、全融合タンパク質に結合させた）を用いて検出した。予期されるバンドをＨＴＲＡ３（少量のタンパク質しか誘導されなかった）、およびＨＴＲＡ２（バンドは見られなかった）を除く全てのコンストラクトに対し特定した。コドンが最適化されたＨＴＲＡ２およびＨＴＲＡ３は追加のベクターにクローン化させた。
【表６】
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【０４２０】
１６．ＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２アデノウイルスコンストラクトの生成
以下のアデノウイルスコンストラクトをＶｉｒａＱｕｅｓｔを用いて、設計し、構築した：Ｍｙｃ−ＨＩＳタグを有する、および有しないＨＴＲＡ１、Ｍｙｃ−ＨＩＳタグを有する、および有しないＨＴＲＡ１−Ｓ３２８Ａ（タンパク分解的に不活性）、ならびにＭｙｃ−ＨＩＳタグを有する、および有しないＡＲＭＳ２。生成させたアデノウイルスコンストラクトの概要のために本明細書における表６を参照されたい。全コンストラクトは全長ヒトＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２配列（それぞれ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１０および１１）を用いて生成され、ｐＶＱＡｄ  ＣＭＶベクターにクローン化された。ウイルス粒子は６つ全てのアデノウイルスコンストラクトに対して受理された。
【表７】
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【０４２１】
１７．Ａｒｃｔｉｃ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  ＤＥ３細胞を用いたＨＴＲＡ１の発現および精製
Ａｒｃｔｉｃ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  ＤＥ３細胞を使用して、ＧｅｎｅＡｒｔ  ＨＴＲＡ１  プラスミドを発現させた。汚染物質タンパク質の凝集および共溶離が、いくつかの異なるクロマトグラフィー戦略を使用してＨＴＲＡ１を精製する以前の試みににおいて観察されている。凝集物防止／溶解のための方法が研究された。ＨＴＲＡ１  ＩＭＡＣ溶離液画分をおよそ１０倍濃縮し、ＳＥＣカラム上で流した。いくつかのピークがクロマトグラム上で分離された。ＨＴＲＡ１は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロットで分析した場合全てのピークで見られたが、共溶離タンパク質は異なるピークで異なっていた。ＨＴＲＡ１は、ピークのいずれにおいても単一バンドとして溶離しなかった。いくつかの薬剤を評価し、凝集物破壊するかどうかを確かめた：０．０５％  Ｂｒｉｊ−３５（非イオン性洗浄剤）、２００ｍＭ  ＭｇＳＯ４（Ｋｏｓｍｏｔｒｏｐｅ）、１００ｍＭ  ＣａＣｌ２、および１Ｍ尿素（Ｃｈａｏｔｒｏｐｅｓ）。全てをＩＭＡＣ溶離液に添加し、その後、３０，０００ｍｗカットオフフィルタを通過させた。各症例において、膜を通過すると予測される低ｍｗタンパク質を含む全タンパク質が保持された。
【０４２２】
ベンズアミジンカラムがＨＴＲＡ１精製のために以前試みられていた。いくつかの汚染物質が観察され、ＨＴＲＡ１タンパク質は溶液から沈殿した。沈殿はｐＨ変化により引き起こされ、タンパク質が溶離し（ｐＨ３）、その後、酸性ｐＨが中和された（ｐＨ９トリス）。ＨＴＲＡ１に対する理論ｐＩは８．０９である。ベンズアミジンカラム実験を、ｐＨ８．２より低いトリス緩衝液を用いて分画チューブ中で繰り返した。体積を追加して、最終ｐＨ７．４とし、ＨＴＲＡ１のｐＩを通過しないように回避した。この実行では、沈殿物は見られなかった。
【０４２３】
Ａｒｃｔｉｃ  Ｅｘｐｒｅｓｓ細胞を、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅにより供給されたプロトコルに従い、増殖させ、誘導した。細胞ペレットは、−８０℃で貯蔵した。解凍されたペレットをＢｅｎｚｏｎａｓｅヌクレアーゼを含むタンパク質試料緩衝液中に再懸濁させ、Ａｖｅｓｔｉｎホモジナイザーを用いて溶解させた。ＣＨＡＰＳ（最終１０ｍＭ）を添加し、その後、遠心分離し、除去されたライセートを固定化金属イオンアフィニティーカラム（ＩＭＡＣ）上で移動させ、続いてイミダゾールを用いてタンパク質を溶離させた。溶離液画分を、Ｓｙｐｒｏｓｔａｉｎ（ＢｉｏＲａｄ）を用いるＳＤＳ−ＰＡＧＥまたはＨＴＲＡ１抗体＃１６９３（１：１０００希釈および３分曝露）を用いる免疫ブロット法により分析した。ＩＭＡＣ溶離液は、ベンズアミジンセファロースと共に１時間、４℃でインキュベートした。スラリーをＢｉｏＲａｄ  カラムに入れ、結合緩衝液で洗浄した。タンパク質を２０ｍＭパラ−アミノベンズアミジンを含む結合緩衝液により溶離した。ＨＴＲＡ１発現および精製結果については、本明細書における図５を参照されたい。
【０４２４】
個々のドメインおよびドメインの特定の組み合わせを発現するように設計されたＨＴＲＡ１発現コンストラクトを生成させた。これらを使用して、抗体の特異性を試験し、結晶構造決定のためにタンパク質を生成させた。これらのＨＴＲＡ１発現コンストラクトの概要のために本明細書における表７を参照されたい。ＨＴＲＡ１の各ドメインに対する表７で提供されるアミノ酸対応物はコドンが最適化されたヌクレオチド配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．９に関連する。
【表８】
2014515012.tif 000012
【０４２５】
１８．ＡＲＭＳ２の発現および精製
ＡＲＭＳ２指向性４２−５８抗体を使用するウエスタンブロット分析では、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＤＥ３細胞におけるＡＲＭＳ２発現コンストラクトの発現を示さなかった。ＢＬ２１  ＡＩ細胞は、ＡＲＭＳ２のほとんどが、細胞ライセートの不溶部分に存在し、少量が可溶性画分で見られるにすぎないことを示した。可溶性ＡＲＭＳ２は、ＮｉＮＴＡ磁気ビーズを用いて抽出し、１５０ｍＭイミダゾールを用いて溶離した。その不溶性のために、ＡＲＭＳ２はチオレドキシンタグおよびエンテロキナーゼ切断部位（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と共にベクターにクローン化した。培養物をＤＥ３細胞中で増殖させ、１ｍＭ  ＩＰＴＧで誘導し、誘導後４時間で収集した。細胞ライセートは、２３ＫＤａの予想される分子量で強いバンドを示したが、クーマシー染色されたＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上の誘導前の対照ではバンドは見られなかった。ウエスタンブロットはまた、抗ＡＲＭＳ２抗体を使用して強い２３ＫＤａシグナルを与えた。ＡＲＭＳ２発現および精製結果の概要のために本明細書における図６を参照されたい。
【０４２６】
追加のＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２発現実験を実施した。ＨＥＫ２９３細胞を５％ウシ胎仔血清および１ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘを有するＡｄｖａｎｃｅｄ  ＭＥＭで培養した。トランスフェクションの日に、細胞をＰＢＳ中で洗浄し、０．２５％トリプシンで処理し、エレクトロポレーション緩衝液「Ｒ」中に４ｘ１０7細胞／ｍｌで再懸濁させた。ｐＣＭＶ６−Ｅｎｔｒｙ−ＭｙｃＤＤＫ、ｐＣＭＶ６−ＨＴＲＡ１−ＭｙｃＤＤＫ（Ｏｒｉｇｅｎｅカタログ番号ＲＣ２２２３６２）またはｐＣＭＶ６−ＡＲＭＳ２−ＭｙｃＤＤＫ（Ｏｒｉｇｅｎｅカタログ番号ＲＣ２２３７４７）をコードする１０μｇのプラスミドＤＮＡを１０μｌの体積で、１００μｌの細胞に添加した。細胞を、Ｎｅｏｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用し、９００または１０００ボルト、２０ｍｓでの２つのパルスを用いて電気穿孔した。また、細胞を、１１００ボルト、２０ｍｓの単一パルスを用いてパルス処理した。陰性対照として、細胞はまた、パルス処理なしとした。細胞を、１０ｍｌの培地に再懸濁させ、３７℃でインキュベートした。２４時間（１０００および１１００ｖ試料）または４８時間（９００ｖ試料）に、細胞をＰＢＳ中で洗浄し、プロテアーゼ阻害剤カクテルを含む０．５ｍｌ  Ｍ−ＰＥＲ溶解緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ  ＰＩ−７８５０１）に溶解した。遠心分離後、上清中のタンパク質収量をＢｒａｄｆｏｒｄアッセイにより定量した。各試料に対し合計１０μｇのタンパク質を、４−１２％ＮｕＰａｇｅゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）上で電気泳動し、ウエスタンブロットによりニトロセルロース膜に転写し、１時間、Ｓｔａｒｔｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃ＰＩ−３７５３９）中でインキュベートした。膜を１時間、ＰＢＳ＋０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０中で１：１０００希釈した抗ＤＤＫ抗体（ｃａｔ．ｎｏ．ＴＡ５００１１）を用いてプロービングした。ＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０中で洗浄した後、膜をその後、ＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０中で１：１０，０００希釈されたＨＲＰ−結合ヤギ−抗マウス抗体を用いてプロービングした。再び、膜を洗浄し、その後、Ｓｕｐｅｒ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｄｕｒａ（Ｔｈｅｒｍｏ  ＃３４０７６）を用いて処理した。膜を５分間曝露させ、ＬＡＳ４０００上で撮像した。図１９を参照されたい。
【０４２７】
１９．ＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２抗体の生成
ポリクローナル抗体を、様々なＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２タンパク質を区別するために生成させた。ＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２のためのエピトープを、構造に基づき設計した。ＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２タンパク質における６つのエピトープをウサギにおける抗血清の生成のために使用した。ウサギを、２８日期間にわたり３回の注射で免疫化した。生成血を３５および４０日に製造させ、ＥＬＩＳＡを使用して力価を決定した。動物を、６８日に４次免疫化し、７８日に失血させ、血液を収集し、抗体を、親和性精製により免疫原として使用したものと同じペプチドで製造されたカラムを用いて調製した。これらの抗体生成データの概要のために本明細書における表８を参照されたい。
【表９】
2014515012.tif 000013
【０４２８】
特異的ドメインを認識するように設計された５つのＨＴＲＡ１指向性抗体のうち、５つ全てが血清中のＨＴＲＡ１を検出した。ＡＲＭＳ２抗体は、細菌で発現されたＡＲＭＳ２タンパク質を検出した。血清試料を−８０℃の貯蔵から取り出し、氷上で解凍した。各試料を、ＰＢＳおよび等体積の５０ｍＭＤＴＴを含む２ｘ試料緩衝液（還元状態）またはＤＴＴを欠く試料緩衝液（非還元状態）で１／４０希釈した。試料を７分間９５℃、続いて５分間４℃で変性させた。組換えＨtrＡ１タンパク質の試料を陽性対照として調製した。試料を、４−１２％  Ｂｉｓ−ＴｒｉｓＮｕＰａｇｅゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）上に、ＭａｇｉｃＭａｒｋ分子量マーカー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と共にロードした。ゲルを抗酸化剤を有するＭＥＳ泳動用緩衝液中で３５分間、２００Ｖで移動させた。タンパク質を、１５％メタノールを含む転写緩衝液中で、ウエスタンブロットにより、ニトロセルロース膜に１時間、３０Ｖで転写させた。膜を１時間Ｓｔａｒｔｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃ＰＩ−３７５３９）でブロックした。膜を１時間、室温で、ＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０中で１：１０００希釈した一次抗体を用いてプロービングした。ＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０中での洗浄後、その後、膜をＰＢＳ＋０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０中で１：１０，０００希釈したＨＲＰ−結合二次抗体を用いてプロービングした。最後に、膜を洗浄し、Ｓｕｐｅｒ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｄｕｒａ（Ｔｈｅｒｍｏ＃３４０７６）で処理した。膜を様々な量の時間の間曝露させ、ＦｕｊｉＦｉｌｍＬＡＳ−４０００分析計上で撮像した。ＨＴＲＡ１およびＡＲＭＳ２検出データの概要のために本明細書における。表９および図２０を参照されたい。
【表１０】
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【０４２９】
２０．ＨＴＲＡ１の血清レベルおよびＡＭＤ
ＡＭＤを有する、および有しない対象由来の血清および血漿試料中のＨＴＲＡ１および任意の可能性のあるＨＴＲＡ１ペプチドの分布を検査した。各遺伝子型群からの１０のＡＭＤ対象および１０の対照群由来の試料を、６の市販の、ドメイン特異的ＨＴＲＡ１指向性抗体を用いて評価した。
【０４３０】
血清試料を−８０℃の貯蔵から取り出し、氷上で解凍した。２μＬの各試料を、マイクロプレートＣｏｏｍａｓｓｉｅ  Ｐｌｕｓタンパク質アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いたタンパク質濃度決定のために、ＰＢＳ中で１００倍希釈した。その後、各試料をＰＢＳで希釈し、１５０μＬ中２μｇ／μＬの最終タンパク質濃度を得た。等体積の、ＤＴＴを含む２ｘ試料緩衝液（最終５０ｍＭ）、およびロード対照タンパク質、ＦＵＳ１（最終１ｎｇ／レーン）を各試料に添加した。試料をＰＣＲプレート中２ｘ１５０μＬアリコートに分割し、ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＰＣＲ機器にロードし、７分間９５℃で、続いて５分間４℃で変性させた。各試料をその後、１２．５μｌアリコートに分割し、−８０℃で貯蔵した。ＨｔｒＡ１タンパク質試料を、陽性対照のために、細胞培養上清を、ヒト組換えＨｔｒＡ１タンパク質を発現するＨＥＫ２９３細胞から収集することにより調製した。合計２０８μｌの４８時間上清を、２５μｌの５００ｍＭジチオスレイトールおよび７５ｍｌの４Ｘ試料緩衝液と混合した。混合物を、９５℃で７分変性させ、その後ゲル上にロードした。タンパク質混合物をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離するために、血清試料を、９５℃で７分間変性させた。合計１０μｌの血清試料を４−１２％  Ｂｉｓ−ＴｒｉｓＮｕＰａｇｅゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）上に１０μｌのＨｔｒＡ１陽性対照および分子量マーカーと共にロードした。ゲルをその後、抗酸化剤を有するＭＥＳ泳動用緩衝液中で３５分間、２００Ｖで移動させた。タンパク質を、１５％メタノールを含む転写緩衝液中で、ウエスタンブロットにより、ニトロセルロース膜に１時間、３０Ｖで転写させた。膜を１時間Ｓｔａｒｔｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃ＰＩ−３７５３９）でブロックした。膜を１時間、室温で、ＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０中で１：１０００希釈した一次抗体を用いてプロービングした。ＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０中での洗浄後、その後、膜をＰＢＳ＋０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０中で１：１０，０００希釈したＨＲＰ−結合二次抗体を用いてプロービングした。再び、膜を洗浄し、その後、Ｓｕｐｅｒ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｄｕｒａ（Ｔｈｅｒｍｏ＃３４０７６）で処理した。膜を様々な量の時間の間曝露させ、ＬＡＳ４０００上で撮像した。図２１を参照されたい。異なる遺伝子型を有する患者由来の血清試料を、ウエスタンブロットにより下記抗体を用いて分析した：Ａ−ＳＣ−１５４６５（左）、ＳＣ−５０３３５（右）、Ｂ−ＮＥＰ−１６８８（左）、ＮＥＰ−１６９３（右）、Ｃ−ＮＥＰ−１６９４（左）、ＮＥＰ−１６９５（右）、Ｄ−ＮＥＰ−２４１４。
【０４３１】
図２１では、ＨｔｒＡ１バンドの強度が異なるブロット上で変動した。これが異なる遺伝子型を有するＨｔｒＡ１のレベルによるものであったのか、またはタンパク質のニトロセルロースへの転写効率の差によるものであったのかを決定するために、各遺伝子型群由来の２試料を選択し、同じウエスタンブロット上で移動させた。抗ＨｔｒＡ１抗体によるプロービングは、異なる遺伝子型群間のＨｔｒＡ１レベルの差を証明できなかった。よって、図２１で示される差は、おそらく転写効率によるものであった。図２２を参照されたい。
【０４３２】
加えて、図２１では、正確なサイズではないかなりの数のバンドが存在した。これが一次または二次抗体の非特異的反応性によるものかどうかを決定するために、試料をゲル上で移動させ、ニトロセルロース膜に転写し、膜をＳｔａｒｔｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋでブロックし、二次抗体単独（ＰＢＳ＋０．１％  ｔｗｅｅｎ−２０中で１：１０，０００希釈した）でプロービングした。また、ブロックされた膜を、最初に一晩中ウサギ免疫前血清とインキュベートし、その後、ＰＢＳ＋０．１％  ｔｗｅｅｎ−２０中で１：１０，０００希釈した二次抗体とインキュベートした。結果により、図２１で見られるバックグラウンドバンドの多くが、二次抗体の非特異的反応性によるものであったことが示された。図２３を参照されたい。
【０４３３】
２１．網膜／ＲＰＥタンパク質抽出およびウエスタンブロットにおけるＨｔｒＡ１およびＡＲＭＳ２タンパク質の検出
網膜およびＲＰＥ（パンチ９）を、死後４時間に収集し、液体窒素中で凍結させ、−８０℃で貯蔵し、その後タンパク質抽出を実施した。組織を氷上で解凍した。網膜をＰＢＳで洗浄し、過剰硝子体を除去した。３つの抽出緩衝液を比較した：ＲＩＰＡ、ＴＰｅｒ、およびＳＤＳ−ＰＡＧＥ試料緩衝液。氷冷タンパク質抽出緩衝液を、コンプリートプロテアーゼ阻害剤と共に、試料に添加した（１ｍｌ／４０ｍｇ組織）。試料を、マイクロチューブ内でポリプロピレン乳棒を用いて粉砕し、遠心分離した。上清をウエスタンブロットのためにゲル上にロードした。ウエスタンブロットを抗ＨＴＲＡ１抗体＃１６９３および＃１６９５の組み合わせ、または＃１６９５単独（全て、１：１０００希釈）でプロービングした。図２４Ａを参照されたい。
【０４３４】
胎盤組織、ＲＰＥ、および網膜の抽出物を、上記で記載されるＲＩＰＡ緩衝液を用いて調製し、ＢＣＡアッセイキットを用いて定量化した。合計５０〜３００μｇのタンパク質を、４−１２％  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ  ＳＤＳゲル上で移動させ、ウエスタンブロットによりニトロセルロース膜に転写し、示された希釈の様々な抗ＡＲＭＳ２抗体を用いて免疫ブロットした。陽性対照として、組換えＡＲＭＳ２タンパク質もまた、ゲル上で移動させた。組換えＡＲＭＳ２タンパク質を、試験した全抗体を用いて検出した。Ｅ．  Ｋｏｒｔｖｅｌｙ  ｅｔ  ａｌ．（Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ＆  Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ５１：  ７９−８８、２０１０）により提供されたＡＲＭＳ２抗体は、ＲＰＥおよび胎盤において、組換えＡＲＭＳ２およびおそらく、同様のサイズのバンドを検出したが、それは非常にかすかであった。図２４Ｂを参照されたい。胎盤、ＲＰＥ、および網膜組織由来の様々な量の抽出物（括弧内で、タンパク質の総μｇとして示される）を、免疫ブロット法により、抗ＡＲＭＳ２抗体を用いて分析した。組換えＡＲＭＳ２タンパク質（ｒＡＲＭＳ２）を、陽性対照として含んだ。ＮＥＰ−１６８５抗体を表８に記載されるように生成させた。Ａｂｃａｍ＃８０２６６抗体をＡｂｃａｍから購入した。
【０４３５】
２２．成人および胎児ヒト組織におけるＨｔｒＡ１およびＡＲＭＳ２タンパク質発現の検出
成人および胎児組織におけるＨｔｒＡ１およびＡＲＭＳ２タンパク質の性質を検査し、染色体１０最優先候補標的に対する発現パターンおよびレベルの基本的理解を提供した。ＡＲＭＳ２とＨｔｒＡ１の間の翻訳後修飾および／またはｍＲＮＡスプライスバリアントによる他のサイズのＨｔｒＡ１（「ＨｔｒＡ１−断片」）の特定は、ＡＣＬのリスクの増加と染色体１０ハプロタイプの間の因果関係を提供した。この仮説を、ＨｔｒＡ１および／またはＡＲＭＳ２の新規タンパク質／ｍＲＮＡの特定により試験した。
【０４３６】
これらの研究で使用された抗体を、本明細書における表９に列挙する。ＨｔｒＡ１およびＡＲＭＳ２を標的にするポリクローナル抗体の生成が前の報告において記載された。簡単に言うと、ＨｔｒＡ１およびＡＲＭＳ２の抗原性領域に対応するペプチドを合成し、ウサギを免疫化するために使用した。ポリクローナル抗体をウサギ血清からアフィニティーカラム精製を介して、オリジナルペプチド抗原を使用して、濃縮した。組織パネルブロットをＢｉｏＣｈａｉｎＩｎｃ．（Ｃａｔ．＃  Ｗ１２３４４０４およびＷ１２４４４２５）から購入した。膜ブロックを、２％脱脂乳（ＮＦＭ）を含むＰＢＳ−Ｔを用いて実施した。ブロットを個々の抗体（１：１００または１：１０００）で１時間室温（ＲＴ）で、または一晩中４℃でプロービングした。ブロットをその後、３×５分、ＰＢＳ−Ｔ中で洗浄し、ＨＲＰに結合させた二次抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚヤギ抗ウサギ；成人組織に対して１：１０，０００および胎児組織に対して１：５０００）を１時間室温でまたは一晩中４℃で添加した。ブロットをその後、３×５分、ＰＢＳ−Ｔ中で洗浄し、Ｐｉｅｒｃｅ製のＳｕｐｅｒ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｄｕｒａ  ＥＣＬ試薬（Ｃａｔ．  ＃３４０７５）を用いて１０分まで展開させた。ブロットをシグナル強度によって、１０分から２時間、ＦｕｊｉＦｉｌｍＬＡＳ４０００デジタル撮像装置を用いて曝露させた。ブロット１５分間、Ｒｅｓｔｏｒｅ  Ｐｌｕｓ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔ  Ｓｔｒｉｐｐｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃａｔ．＃４６４３０）を使用して剥離し、追加の抗体で４回まで、シグナルの明らかな損失なしで再プロービングした。より長い曝露実験のいくつかは、一次抗体の不完全剥離に由来する残留シグナルを示さず、バンドは星印で示してある。前の実験からの全ての「漏れ」を追跡するために、我々はブロットをＡ、Ｂ、またはＣとして標識し、ブロットがプロービングされた順に、連続して１、２、３、または４と番号をつけた。ＧＡＰＤＨをブロットのために試験される最終抗体として使用し、組織ライセートの等量ローディングおよび、タンパク質が剥離手順中に不注意に除去されなかったことを確認した。
【０４３７】
試験した７つのＨｔｒＡ１抗体のうち、約２５、約３０、約５２、および約７０ｋＤａで移動する４つの主要バンドが存在した。全長ＨｔｒＡ１の予想されるサイズは約５２ｋＤａであった。他の免疫反応性バンドは、翻訳後薬物適用またはＨｔｒＡ１  ｍＲＮＡの他のスプライシング、ＡＲＭＳ２とのｍＲＮＡハイブリッドまたは上記の任意の組み合わせにより生成されたＨｔｒＡ１の異なる形態を表し得る。また、これらの抗体は、交差反応エピトープおよび抗体力価が低いことによる極度に長い曝露時間のために、異なるサイズのバンドを認識し得る。
【０４３８】
ＨｔｒＡ１のＮ末端から開始して、ＩＧＦＢＰドメインを標的とする抗体＃２４１４は、約５２ｋＤａで１つの主要バンド、および第２のより強くないバンド約７０ｋＤａを全ての胎児ヒト組織において検出した。約５２ｋＤａは、全長ＨｔｒＡ１タンパク質であると予測された。成人組織ブロットのみが約２５〜３０ｋＤａのバンドを示し、それらは他の組織において一貫して観察された。
【０４３９】
抗体＃１６８８は、Ｋａｚａｌドメインを認識し、約２５ｋＤａの主要抗原を有する、胎児組織で多数のバンドを検出し、いくつかの組織では、約４０〜５０ｋＤａのバンドを検出した。成人組織ブロットでは、骨格筋のみが約５２ｋＤａで陽性シグナルを示し、全ての他の組織はＨｔｒＡ１発現に対し陰性であった。この抗体は、患者試料由来の還元血清試料において、約５２ｋＤａで組換えＨｔｒＡ１タンパク質（１：１００希釈）および適切なサイズのバンドを検出するのにうまく使用されている。
【０４４０】
新たに生成されたＫａｚａｌドメイン特異抗体＃２４１３はいくつかの異なる胎児組織において、約３０ｋＤａの主要バンドおよびより小さなバンドと反応した。約２５、約５２および約７０ｋＤａで検出されたかすかなバンドは、前のブロットから残ったシグナルを表し得る。成人組織ブロットは、陽性バンドを示さなかった。
【０４４１】
リンカー−プロテアーゼ領域を標的とする＃１６９３抗体は、試験した全ての胎児組織において、主要バンド約７０ｋＤａを検出した。約７０ｋＤａの強いバンドは、脳を除く全ての成人組織で大量に発現された。複数のより小さな、より大量でないバンドもまた、いくつかの成人組織において検出された。約７０ｋＤａバンドはＨｔｒＡ１と一致しなかったが、ＲＰＥおよび網膜タンパク質ライセートを使用する前のウエスタンブロットは、この抗体を用いて約７０ｋＤａバンドを検出した。
【０４４２】
抗体＃１６９５は、胎児組織においていくつかのバンドを検出したが、一貫したバンド形成パターンは認識するされなかった。逆に、成人組織は、非常にきれいなバンド形成パターンを示し、ほとんどの組織において単一のバンド約３０ｋＤａが存在し、わずかな組織が約１５と３５ｋＤａの間の追加のバンドを示した。約３０ｋＤａバンドはまた前の研究では、ＲＰＥ、網膜、脳、および血清源由来のタンパク質ライセートを用いて検出された。最適条件下では、適切なサイズのバンドが還元血清試料状態で検出された。
【０４４３】
ＮＥＰにより生成された＃１６９４抗体は、ＰＤＺドメインを認識した（図６）。抗体はいくつかの胎児組織において約７０および〜５２ｋＤａの非常に弱いバンドを示した。成人組織は全ての組織において支配的な約７０ｋＤａバンドを発現し、ほとんどの組織型において約５２ｋＤａのより強くないバンドを有した。いくつかの追加のバンドが、この抗体を用いて検出された。約５２ｋＤａに対応するかすかなバンドが、患者血清試料において、還元条件下、Ｓｔａｒｔｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋをブロッキング剤として検出された。
【０４４４】
ＮＥＰにより発現されたポリクローナル抗体に対する比較として、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ（ＳＣ−５０３３５）製の市販のＨｔｒＡ１ポリクローナル抗体もまた試験した。ペプチドにより生成されたＮＥＰ抗体と異なり、この抗体はＰＤＺドメイン全体を抗原として使用して発現された。抗体は成人組織において約７０および約５２ｋＤａの２つの主要バンドを検出した。ほとんどの組織がこれらのバンドの両方を発現したが、脳を含むいくらかは発現しなかった。肝臓は、主により大きな約７０ｋＤａバンドを発現したが、高レベルのＨｔｒＡ１を発現することが報告された胎盤は、主に約５２ｋＤａタンパク質バンドを発現した。
【０４４５】
内在性ＡＲＭＳ２タンパク質が、ウエスタンブロッティングにより検出された。ヒト胎児組織パネルを使用する、抗体＃１６８５によるウエスタンブロットは、肝臓組織において約１０と２５ｋＤａの間のいくつかのバンドを示した。パネル内の他の胎児組織は、いずれも陽性シグナルを示さなかった。成人組織パネルは、肝臓組織において陽性シグナル約１７ｋＤａを示した。約２８ｋＤａバンドもまた、骨格筋において検出された。全ての他の組織はＡＲＭＳ２ｍＲＮＡを示した胎盤を含め、ＡＲＭＳ２発現に対して陰性であった。
【０４４６】
この予備的評価では、いくつかのＨｔｒＡ１指向性抗体は、全長ＨｔｒＡ１タンパク質を認識しなかった（例えば、＃１６８８、＃２４１３、および＃１６９５）が、他は、全長タンパク質を検出した（＃２４１４、＃１６９３、＃１６９４およびＳＣ−５０３３５）。ＡＲＭＳ２指向性抗体は、肝臓において、予想されるよりもわずかに大きないくつかのバンドを検出した。
【０４４７】
２３．ＨＴＲＡ１タンパク質のエラスターゼ活性
ＨＴＲＡ１タンパク質は、４つの異なるモジュールから構成され：ＩＧＦＢＰ、Ｋａｚａｌ、セリンプロテアーゼ、およびＰＤＺ（それらの正確なドメイン境界線は明確に規定されていない）、他のセリンプロテアーゼからこれを区別するいくつかの特有の特徴を有し、これにより現実的な治療「標的」となっている。これらの特徴としては以下が挙げられる：１）およそ２００残基を含む、そのクラスの最も小さなプロテアーゼドメインを有する；２）全ての他のセリンプロテアーゼとは異なり、プロテアーゼドメインまたは認識ポケットのジスルフィド−媒介安定化を有しない；３）前酵素として合成されない；４）酵素前駆体活性化は立体構造変化の結果として起こる；５）活性化は可逆である；６）活性化過程ならびに基質認識に関与し得るＰＤＺドメインを含む；ならびに７）プロテアーゼドメインは、他のＨｔｒＡｓの対応するドメインのみに対し高い配列相同性を示し、任意の他のセリンプロテアーゼに対しては示さない。
【０４４８】
ＨＴＲＡ１発現データは、リスクハプロタイプは、ＡＭＤの実証された臨床歴およびリスクＨＴＲＡ１ハプロタイプを有するドナー由来の眼組織において、ｍＲＮＡおよびタンパク質のレベルを増加させることを示唆する。様々な一連の証拠が、Ｂｒｕｃｈ膜、構造タンパク質エラスチンおよびコラーゲンから構成される細胞外層は、細胞および血管の脈絡膜からＲＰＥ下および網膜下腔への放出に対する物理的障壁として機能することを示唆した。この障壁の破壊、またはこれへの損傷は、しばしば、脈絡膜からＲＰＥ下および／または網膜下腔内への新しい血管の増殖（脈絡膜血管新生、またはＣＮＶと呼ばれる過程）に起因する、ＡＭＤにおける視力喪失と関連する。さらに、脈絡膜新生血管膜（ＣＮＶＭ）形成は、レーザー光凝固後、またはヒトＣＮＶＭのレーザー治療後、正常サル眼におけるＢｒｕｃｈ膜への熱損傷により経験的に誘導することができる。黄斑外レーザー処置は、誘導ＣＮＶでは比較的無効であり、黄斑Ｂｒｕｃｈ膜は、唯一損傷を受けやすいことが示唆される。最近の研究は、この感受性に対する仮説を提供している。ＡＭＤを有する、および有しないヒトドナー眼の黄斑および黄斑外領域の形態計測評価は、黄斑と黄斑外領域との間で、Ｂｒｕｃｈ膜のエラスチン−含有層（ＥＬ）の完全性および厚さにおける統計学的に有意な差を明らかにした。ＥＬは、全ての年齢の個体において、黄斑では、周辺よりも３〜６倍薄く、２〜５倍量が少なかった。重要なことには、黄斑ＥＬの完全性および厚さは、初期ＡＭＤを有するドナーにおいても、同年齢対照と比べて著しく低い（Ｃｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５）。黄斑ＥＬのこれらの構造特性（薄い、多孔性）は、ＡＭＤと関連する黄斑病変の分布に空間的に対応し、エラスチンの分解は、１）ＡＭＤの病理生物学において重要な役割を果たす、および２）ＣＮＶＭ発生および増殖の重要な「誘発因子」である可能性がある強い証拠を提供する。ＡＭＤ患者―とりわけ進行期の疾患を有する患者―の血漿および尿中のより高レベルのエラスチン分解ペプチド、またはＥＤＰの存在を示す追加の研究は、この概念に対する追加のサポートを提供する。加えて、ＨＴＲＡ１のプロテアーゼ認識ポケットは、基質認識において重要な役割を果たしており、エラスターゼのそれに類似する。Ｋａｚａｌドメイン、タンパク質の調節領域の不可欠な部分は、アネモニア由来の公知のエラスターゼ阻害剤と構造相同性を共有することもまた示されている。
【０４４９】
そのため、ＨＴＲＡ１がエラスチン、Ｂｒｕｃｈ膜の主構成要素を分解するかどうかを決定するために研究を実施した。組換えＨＴＲＡ１を、色素標識エラスチンと３７℃で２時間インキュベートし、放出されたエラスチンペプチドの蛍光を、５１３ｎｍでモニタした。ＨＴＲＡ１は色素標識エラスチンを分解したことが見出された。追加の陽性対照アッセイでは、ＨＴＲＡ１エラスターゼ活性を、蛍光により、様々な濃度のエラスターゼ酵素を用い、０．０４ｎｇ／ウェルのブタ膵エラスターゼおよび１００ｎｇ／ウェルのＰｒｏｔｅａＩｍｍｕｎ  ＨｔｒＡ１から開始して測定した。ＤＱエラスチン基質は２５μｇ／ｍｌであった。結果については図２５を参照されたい。
【０４５０】
Ｓｆ９細胞から発現させ、精製した組換えＨｔｒＡ１タンパク質を、ＰｒｏｔｅａＩｍｍｕｎ（Ｃａｔ．＃３０６００１０３）から購入した。ＨｔｒＡ１エラスターゼ活性を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｔ．＃Ｅ１２０５６）製の蛍光ＥｎｚＣｈｅｋエラスターゼアッセイキットを使用し、基質濃度が１２．５μｇ／ｍＬであることを除き、提供されたプロトコルを用いて測定した。ＨｔｒＡ１濃度を２００から１２．５ｎｇ／ウェルまで２倍希釈で滴定した。活性を３０分インクリメントで合計２時間測定した。結果については図２６を参照されたい。
【０４５１】
ＨＴＲＡ１エラスターゼ活性の阻害を試験するために、ＨｔｒＡ１もまた、いくつかのプロテアーゼ阻害剤に対して実行した。Ｓｆ９細胞から発現させ、精製した組換えＨｔｒＡ１タンパク質をＰｒｏｔｅａＩｍｍｕｎ（Ｃａｔ．＃３０６００１０３）から購入した。ＨｔｒＡ１エラスターゼ活性を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｔ．＃Ｅ１２０５６）製の蛍光ＥｎｚＣｈｅｋエラスターゼアッセイキットを使用し、基質濃度が１２．５μｇ／ｍＬであることを除き、提供されたプロトコルを用いて測定した。プロテアーゼ阻害剤研究では、１００ｎｇ／ウェルの組換えＨｔｒＡ１を使用した。下記阻害剤をＨｔｒＡ１阻害に対して試験した；アプロチニン、ペプスタチンＡ、および大豆トリプシンインヒビター（ＳＴＩ）（全てＳｉｇｍａから購入）。阻害剤濃度を１０から０．０１μＭまで２倍希釈で滴定し、パーセント阻害を２時間後に測定し、未処理試料に対して、正規化した。結果については図２７を参照されたい。
【０４５２】
２４．ＨＴＲＡ１モデリング
ＨｔｒＡ１プロテアーゼドメイン（プロテインデータバンクＩＤ  ３ＮＺＩ）を、ＨｔｒＡ１  Ｋａｚａｌドメイン（アネモニアエラスターゼ阻害剤に基づく相同モデル、プロテインデータバンクＩＤ  １Ｙ１Ｃ．）と複合してモデル化した。大きなリボン（中央）が、ＤＰＭＦＫＬｂｏｒｏＶペプチドを表し、これは活性部位セリンに付着する。
【０４５３】
ＨｔｒＡ１プロテアーゼドメイン（水色、プロテインデータバンクＩＤ  ３ＮＺＩ）はＨｔｒＡ１  Ｋａｚａｌドメイン（暗青色、アネモニアエラスターゼ阻害剤に基づく相同モデル、プロテインデータバンクＩＤ  １Ｙ１Ｃ．）と複合してモデル化した。赤色リボンはＤＰＭＦＫＬｂｏｒｏＶペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１３）を表し、これは、活性部位セリンに付着する。特定的には、ＨｔｒＡ１プロテアーゼドメインをウシトリプシノーゲンおよびイノシシ膵分泌性トリプシンインヒビターの共構造と、３ＮＺＩ  Ｂ鎖残基３２６−３４０および１ＴＧＳ  Ｚ鎖残基１９３−２１０を使用して整列させた。その後、ＨｔｒＡ１  Ｋａｚａｌ相同モデルを１ＴＧＳ  Ｉ鎖上に重ねた。構造アライメントをＤｅｅｐＶｉｅｗ４．０を用いて実施した。ホモロジーモデリングをＳｗｉｓｓ−Ｍｏｄｅｌ（２−４）を使用して実施した。トリプシノーゲンとＨｔｒＡ１プロテアーゼドメインの間の配列に基づく相同性を、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを用いて特定した。図１５および１６を参照されたい。
【０４５４】
ａ．ＨｔｒＡ１プロテアーゼドメインのエラスターゼ相同体との構造比較
ＮＣＢＩ構造比較ツールＶＡＳＴ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ）に、構造７ＥＳＴを用いてクエリーを行った（ペプチドＣｆ３−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｎｈ−Ｃ６ｈ４−Ｃｆ３（Ｔｆｌａ）のブタ膵エラスターゼとの相互作用）。中程度の冗長性のデータセットから７つの構造を選択し、ＨｔｒＡ１プロテアーゼドメイン構造３ＮＺＩ、ならびに１ＴＧＳと整列させた（これは、ＨｔｒＡ１プロテアーゼとＫａｚａｌドメインの間の複合体をモデル化するのに使用される膵分泌性阻害剤（Ｋａｚａｌ型）と複合されたトリプシノーゲンの共構造である）。構造アライメントの３つの図が図１５および１６に示される；構造は、７ＥＳＴ、１ＥＬＴ、１ＧＩ３、１ＡＺＺ、３ＧＯＶ、２ＢＺ６、１ＴＧＳ、３ＮＺＩ、および２ＨＡＬを含んだ。
【０４５５】
ＮＣＢＩ構造比較ツールＶＡＳＴ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ）に、構造７ＥＳＴを用いてクエリーを行った（ペプチドＣｆ３−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｎｈ−Ｃ６ｈ４−Ｃｆ３（Ｔｆｌａ）のブタ膵エラスターゼとの相互作用）。中程度の冗長性のデータセットから７つの構造を選択し、ＨｔｒＡ１プロテアーゼドメイン構造３ＮＺＩ、ならびに１ＴＧＳと整列させた（これは、ＨｔｒＡ１プロテアーゼとＫａｚａｌドメインの間の複合体をモデル化するのに使用される膵分泌性阻害剤（Ｋａｚａｌ型）と複合されたトリプシノーゲンの共構造である）。構造アライメントの３つの図が図１６に示される；構造は、７ＥＳＴ、１ＥＬＴ、１ＧＩ３、１ＡＺＺ、３ＧＯＶ、２ＢＺ６、１ＴＧＳ、３ＮＺＩ、および２ＨＡＬを含んだ。
【０４５６】
ｂ．ＨｔｒＡ１  Ｋａｚａｌドメイン−エラスターゼ阻害剤相同体との構造比較および境界の再定義
ＨｔｒＡ１  Ｋａｚａｌドメインの構造モデリングのためのテンプレートを、ＨｔｒＡ１残基１１４〜１５５をクエリー配列として使用して、プロテインデータバンクに貯蔵された構造に対するタンパク質ＢＬＡＳＴを介して特定した。それは、現在、ＮＣＢＩによりＨｔｒＡ１  Ｋａｚａｌドメインとして特定されている領域である。全ての貯蔵構造のうち、アネモニアエラスターゼ阻害剤構造１Ｙ１Ｂおよび１Ｙ１Ｃの配列が、クエリー配列に最もよく一致する。１Ｙ１Ｂおよび１Ｙ１Ｃのアミノ酸配列は、整列された領域を通して同一であり、それはＨｔｒＡ１残基１１６−１５５に及ぶ。アライメント統計は下記であった：アイデンティティー＝１８／４０（４５％）；陽性＝２４／４０（６０％）；ギャップ＝４／４０（１０％）。これらの分析は、ＨｔｒＡ１  Ｋａｚａｌドメインは、エラスターゼ阻害剤として機能し、エラスターゼとして機能する「プロテアーゼ」ドメインを阻害する能力を有することを示唆した。
【０４５７】
プログラムＳｗｉｓｓ−Ｍｏｄｅｌ（２−４）用いて、配列に基づく構造アライメントを生成させるために、１Ｙ１Ｃ構造を選択した。構造モデリングは、１Ｙ１Ｃにおけるジスルフィド結合の存在を示した。これは、ＨｔｒＡ１残基１１４−１５５を用いて形成させることができなかった。Ｋａｚａｌ配列を、近位システイン残基を含む残基１１１〜１５５まで拡張させると、欠損ジスルフィドをモデル化させることができた。よって、残基１１１−１５５は、ＨｔｒＡ１  Ｋａｚａｌドメインの境界をより正確に反映し得る。
【０４５８】
２５．ＨＴＲＡ１トランスジェニックマウス
マウスＲＰＥにおいてヒトＨＴＲＡ１（ｈＨＴＲＡ１）を過剰発現するトランスジェニックマウス（ｈＨＴＲＡ１+）を生成させた。導入遺伝子をＲＰＥ特異的ヒト卵黄様黄斑変性症２（ＶＭＤ２）プロモーターにより駆動させた。ＨＴＲＡ１導入遺伝子を生成させるために、１．５−ｋｂヒトＨＴＲＡ１  ｃＤＮＡ（ＴＡＧ終止コドンを除去）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１２）を、ｐｃＤＮＡ３．１−ＣＭＶ−ＶＭＤ−ｈＨｔｒａ１−ｍｙｃ−Ｈｉｓ6由来のＢａｍＨＩおよびＸｈｏＩオーバーハングを有するプライマーを使用して増幅させた。これは、Ｊｏｎｅｓ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １０８，  １４５７８−１４５８３  （２０１１）に記載されている。ｍｙｃ−ｈｉｓ6断片を、同じテンプレートから、ＸｈｏＩおよびＥｃｏＲＩオーバーハングを有するプライマーを用いて増幅させた。目的プラスミド、ｐＡＡＶ−ＣＡＧ−Ｓｈｕｔｔｌｅ−ＷＰＲＥをＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩで消化し、増幅させたヒトＨＴＲＡ１  ｃＤＮＡおよびｍｙｃ−ｈｉｓ断片と、３断片連結反応において連結させた。その後、ヒトＶＭＤ２プロモーター（−５８５〜＋３８ｂｐ）を、ＨＴＲＡ１  ｃＤＮＡ前に、ＫｐｎＩ−ＢａｍＨＩ断片として挿入した。ＶＭＤ２プロモーター、ｈＨＴＲＡ１−ｍｙｃ−Ｈｉｓ6、ウッドチャック転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）、およびヒト成長ホルモンポリ（Ａ）を含む導入遺伝子領域を配列確認した。図２８を参照されたい。導入遺伝子コンストラクトをＫｐｎＩ−ＲｓｒＩＩ消化により切除し、ゲル−精製し、Ｃ５７ＢＬ／６×ＣＢＡ胚にユタ大学トランスジェニック／ジーンターゲティングコア施設で注射した。
【０４５９】
新しいトランスジェニックｈＨＴＲＡ１+マウスの表現型は、Ｊｏｎｅｓ、Ａ．  ｅｔ  ａｌに記載されているものと同様であった。網膜色素上皮における多機能セリンプロテアーゼ、ＨＴＲＡ１の発現の増加は、マウスにおいてポリープ状脈絡膜血管症を誘発する。Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １０８，  １４５７８−１４５８３  （２０１１）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４６０】
ａ．ＰＣＶ表現型
インドシアニングリーン血管造影（ＩＣＧＡ）において、ｈＨＴＲＡ１+マウス（１−４月齢）は、以下のＰＣＶの主特徴を両側的に示した：１）毛細血管瘤拡張と一致する多数の小さな高蛍光ドット（直径０．２５ｍｍ未満）；２）ブドウの房に類似する大きなポリープ状病変（０．４５ｍｍを超える直径）。上記特徴のいずれも、野生型（ＷＴ）同腹子において観察されなかった。図２９を参照されたい。蛍光眼底造影（ＦＡ）は正常であり、網膜脈管構造はそれらのマウスにおいて影響されなかったことが示唆された。図３０を参照されたい。
【０４６１】
ｂ．Ｂｒｕｃｈ膜の弾性板の分解
超微細構造分析では、ｈＨＴＲＡ１+マウスの弾性板（ＥＬ）を断片化し，様々なサイズのギャップにより妨害した。ＥＬの分解は、ＡＭＤ病変と関連する黄斑ＥＬ破壊と酷似する（Ｃｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  ２００５を参照されたい）。図３１を参照されたい。
【０４６２】
ｃ．ｈＨＴＲＡ１＋マウスにおける脈絡膜血管の弾性板の分解
ｈＨＴＲＡ１+マウスにおけるＰＣＶ病変は、損なわれた脈絡膜血管の滲出液に起因した。ｈＨＴＲＡ１+マウスの超微細構造分析は、脈絡膜血管の顕著な減弱を示した。萎縮領域における脈絡膜動脈は、弾性内側および弾性外側の両方においてエラスチン量の減少を有した。中膜は激しく変性され、または欠損した。図３２を参照されたい。
【０４６３】
ＨＴＲＡ１マウスにおけるＢｒｕｃｈ膜および脈絡膜血管の両方におけるエラスチン分解に対する説明は、ＲＰＥから分泌された、過剰発現されたＨＴＲＡ１のプロテアーゼ活性が、変性を引き起こしたというものである。ＨＴＲＡ１は、エラスターゼ活性を有することが知られていなかったので、インビトロエラスチン分解アッセイを、ＤＱエラスチン、消光されたＢＯＤＩＰＹＦＬ色素で標識された可溶性エラスチンを基質として使用して実施した。精製組換えヒトＨＴＲＡ１は、４．４±０．８μ／ｍｇ（ｎ＝３）の比活性でエラスチンを分解した。この活性は、ブタ膵臓エラスターゼのもの（１３５±５．５ｕ／ｍｇ、ｎ＝４）よりも、約３０倍低く、ＨＴＲＡ１の基本エラスターゼ活性は低いことが示唆された。脈絡膜血管およびＢｒｕｃｈ膜の弾性層の欠乏が、エラスチン発現の下方制御の結果である可能性を排除するために、我々はｈＨＴＲＡ１+およびＷＴマウスのＲＰＥ／脈絡膜における可溶性エラスチンのタンパク質レベルをウエスタンブロットにより分析した。トロポエラスチン、エラスチンの可溶性前駆体のレベルは、ｈＨＴＲＡ１+マウスおよびＷＴの両方で同様であり（図３７）、エラスチンの生合成は、ＨＴＲＡ１過剰発現により変化しないことが示唆された。しかしながら、ＷＴおよびＰＣＶ−マウスと比べて、ｈＨＴＲＡ１+−ＰＣＶ＋マウスにおいて分解されたエラスチン生成物が増加し（図３１、ブラケット）、エラスチン下方制御ではなく、エラスチン分解がおそらく、ＰＣＶ＋マウスにおけるＢｒｕｃｈ膜および脈絡膜血管で観察された病変の原因であることが示唆された。これは、ＡＭＤおよび異常脈絡毛細管小葉を有するヒトドナーにおいて観察されるものと同様である。
【０４６４】
ｄ．マウスＲＰＥにおけるＨＴＲＡ１発現
マウスＲＰＥにおけるヒトＨＴＲＡ１の発現レベルは、発表されたマウス系統におけるＨＴＲＡ１発現（Ｊｏｎｅｓ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．）（これは、ヒトＲＰＥにおけるＨＴＲＡ１タンパク質の５．３倍であった）の５０％８０％であると推定した。言い換えれば、トランスジェニック系統のマウスＲＰＥにおけるヒトＨＴＲＡ１の発現レベルは、ヒトＲＰＥにおけるＨＴＲＡ１タンパク質の２．７〜４．２倍であった。
【０４６５】
ｅ．陰性対照ｈＨＴＲＡ１−Ｓ３２８Ａ+マウス
ＨＴＲＡ１のプロテアーゼ活性が、ＰＣＶにおけるその役割に関与するという仮説を試験するために、我々は陰性対照マウス、ｈＨＴＲＡ１−Ｓ３２８Ａ+を生成させた。突然変異ｈＨＴＲＡ１−Ｓ３２８Ａ+マウスを生成させる際の方法は、導入遺伝子のＳ３２８残基が、ＰＣＲに基づく変異誘発方法によりアラニンに突然変異されたことを除き、ｈＨＴＲＡ１+マウスを生成させるのに使用したものと同じであった。
【０４６６】
ＩＣＧＡにより、ｈＨＴＲＡ１−Ｓ３２８Ａ+マウスにおいてＰＣＶの証拠はなかった。ＦＡもまた正常であった。加えて、マウスＲＰＥにおけるＨＴＲＡ１−Ｓ３２８Ａ（系統２６）の発現レベルは、新しいトランスジェニックｈＨＴＲＡ１+マウスにおけるＨＴＲＡ１のそれのおよそ３倍であった。
【０４６７】
ｆ．ＨＴＲＡ１阻害剤によるｈＨＴＲＡ１+マウスの処置は、ＰＣＶ表現型を逆転する
Ｔｒｕｅｂｅｓｔｅｉｎら（Ｎａｔ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １８，  ３８６−３８８，  ２０１１）はペプチド、ＤＰＭＦＫＬｂｏｒｏＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１３）を特定した。これは、共有結合によりＨＴＲＡ１の活性部位セリンにそのＣ末端ボロン酸基を介して結合する（ＩＣ５０＝２．６μＭ）。ＰＣＶは脈絡膜で起こるので、生分解性ポリマに基づくナノ粒子（ＮＰ）を使用して、ＤＰＭＦＫＬｂｏｒｏＶをｈＨＴＲＡ１＋マウスの後眼部に送達させ、長期徐放を達成した。前の研究は、硝子体内に投与されたＮＰは、一過性に網膜を横切って移動し、選択的にＲＰＥに局在したことを証明した。ＮＰは１回の注射後数週間から数カ月の間ＲＰＥに留まった。２つの型のＮＰを、ポリ乳酸／ポリ乳酸−ポリエチレンオキシド（ＰＬＡ／ＰＬＡ−ＰＥＯ）を使用し、発表された手順に従い、以下を調製した：１）親油性蛍光マーカー、６−クマリンを封入するＮＰ；２）クマリンおよびＨＴＲＡ１阻害剤を封入するＮＰ。ＮＰは電子顕微鏡観察に基づくと約１００ｎｍのサイズであった。図３４を参照されたい。
【０４６８】
成体ＷＴマウスに、１．５μＬの、クマリンを含むＮＰを硝子体内注射した。図３３を参照されたい。注射後４日に、ＮＰをＲＰＥおよび外節で濃縮させた。ＮＰは以後、主にＲＰＥに位置し、注射後少なくとも３６日、検出可能であった。前の研究と一致して、ＮＰが注射された眼は、対照の眼に比べ、正常網膜構造を有し、毒性の徴候はなかった。ｈＨＴＲＡ１＋マウス（２月齢）に、阻害剤およびクマリンを含むＮＰまたはクマリンのみを含むＮＰを注射した。阻害剤注射後１５日に、病変数が著しく減少した。対照のＮＰを注射した眼では、ＰＣＶ病変が残ったままであった。この観察サポートは、ＨＴＲＡ１のエラスターゼ／プロテアーゼ活性は、ＰＣＶの発症の一因であるという仮説をサポートした。
【０４６９】
ｇ．ＡＡＶ２−ＨＴＲＡ１感染マウス
全長コード領域およびＣ末端ｍｙｃ−Ｈｉｓ6  ｔａｇ2を含むヒトＨＴＲＡ１  ｃＤＮＡを、ＡＡＶシャトルベクターｐＡＡＶ−ＣＡＧ−Ｓｈｕｔｔｌｅ−ＷＰＲＥに、ＣＡＧプロモーター下でサブクローニングさせた。図３５を参照されたい。ＡＡＶ２−ＨＴＲＡ１ウイルスを商用に生成させた。ウイルス力価は７．６×１０12ＧＣ／ｍＬであった。ＣＤ１マウスに、２μＬのＡＡＶ２−ＨＴＲＡ１または対照ＡＡＶ２−ＧＦＰを、網膜下注射により、約２月齢で、前記のように注射した。注射後１月に、マウスをＩＣＧＡにより撮像した。ｈＨＴＲＡ１+マウスにおけるものと同様のＰＣＶ病変を観察した。図３６を参照されたい。
【０４７０】
２６．滲出性ＡＭＤを有する患者における遺伝子型＆抗ＶＥＧＦ療法に対する応答
３３９の研究参加者を、滲出性ＡＭＤのための初期または維持抗ＶＥＧＦ療法（ペガプタニブ、ラニビズマブ、および／またはベバシズマブ）に参加している継続患者から募集した。対象を、２００５と２００８の間の滲出性ＡＭＤに対する現行方式パターンに従う４つの研究関連硝子体網膜手術の１つにより治療した。参加医師により使用された治療戦略はＰＲＯＮＴＯ研究（Ｆｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７）において使用された「必要に応じた」治療戦略に最も酷似した。１つの眼における初期抗ＶＥＧＦ療法時に登録された対象に対し、全てのデータを予期的に収集した。維持療法中に登録された対象に対し、データは、初期抗ＶＥＧＦ治療のための評価時に対して回顧的に、および登録時から予期にの両方で収集した。本明細書で示される分析のための眼は、１つ以上の以下の排除基準のために排除した：Ｖｉｓｕｄｙｎｅを用いた以前の光線力学的療法、硝子体内トリアムシノロンを用いた以前の療法、酢酸アネコルタブを用いた以前の眼周囲注射、硝子体内抗ＶＥＧＦ療法の開始時の進行性円板状瘢痕、または研究終点の１つを満たす不十分な追跡。データ収集は、視力、ＣＮＶ漏出の評価（ＯＣＴ上、または蛍光眼底造影により決定される網膜下流体）、網膜色素上皮剥離（ＲＰＥＤ）状態（遺残または消散）、カラー写真、および抗ＶＥＧＦ治療薬を用いた初期治療後１年以上の間の治療中の治療レジメン分析を含んだ。視力は、ＳｎｅｌｌｅｎまたはＥＴＤＲＳチャート上で測定し、値をＬｏｇＭａｒ値に変換した。視力における０．２ＬｏｇＭａｒ変化（２系統変化に対応する）は、視力の有意変化であると考えた。ＣＮＶ漏出を、主に光干渉断層撮影（ＯＣＴ）により、使用可能な場合、蛍光眼底造影により評価した。ＯＣＴをほぼ全ての眼に対し、Ｓｔｒａｔｕｓ  ＯＣＴ３機器を用いて実施した。ＣＮＶ漏出を、各走査に対し１つ以上の下記変数を使用して評価した：中央黄斑厚さ、網膜下流体、網膜内流体、およびＲＰＥＤ状態。大量の網膜下流体、大きなＲＰＥＤ、または不十分な固定を有するいくつかの眼では、中央黄斑厚さ測定は、利用できない（測定限界超）または不十分な固定のために信頼できないのいずれかであった。そのようなものとして、絶対中央黄斑厚さ測定ではなく、質的特徴（すなわち、流体または嚢胞の減少または消散）に基づく評価をすることが必要であった。
【０４７１】
対象を、以下の４つの抗ＶＥＧＦ応答パターン（ＰＩおよび臨床協力者により発生された厳格な基準に基づく）の１つに従い分類した：１）維持のない早期レスポンダー：網膜／網膜下／ＲＰＥＤ流体状態にかかわらず、＜３注射後、＞０．２ＬｏｇＭａｒの視力（ＶＡ）改善または網膜内／網膜下／ＲＰＥＤ流体の完全な消散および治療前ＶＡの０．２ＬｏｇＭａｒ以内のＶＡ。加えて、これらの対象は、３回目の注射後再発性網膜下流体を決して発症せず、そのため、維持を必要とするものとして指定されなかった（たとえ、何人かの研究者が他の理由、例えば患者の要求または単眼状態のために注射を続けた場合であっても）；２）維持のある早期レスポンダー：網膜／網膜下／ＲＰＥＤ流体状態にかかわらず、＜３注射後、＞０．２ＬｏｇＭａｒ視力（ＶＡ）改善または網膜内／網膜下／ＲＰＥＤ流体の完全な消散および治療前ＶＡの０．２ＬｏｇＭａｒ以内のＶＡ。加えて、これらの対象は、治療を中止するまたは延長するための試みがなされるたびに、再発性網膜下流体を発症し、そのため、３回めの注射を越えて維持療法を必要とするものとして指定された；３）遅延レスポンダー：１年の期間にわたる４回以上の治療による＞０．２  ＬｏｇＭａｒの視力、または０．２ＬｏｇＭａｒ以内のＶＡ（視力の変化なし）で、網膜内／網膜下流体の消失を伴う（ＲＰＥＤは、持続し得るが、増加しない）；あるいは４）ノンレスポンダー：１年の期間内で３回以上の注射後、＞２ＬｏｇＭａｒ悪化した視力、または０．２ＬｏｇＭａｒ以内のＶＡ（視力の変化なし）で、１年の期間内で３回以上の注射後、網膜下流体またはＲＰＥＤの無変化、または悪化を伴う。
【０４７２】
ＣＦＨ（ｒｓ８００２９２、ｒｓ１２０２９７８５、ｒｓ５５１３９７およびｒｓ１０６１１７）、ＡＲＭＳ２（ｒｓ１０４９０９２３、ｒｓ２７３６９１１、およびｒｓ１０４９０９２４）、Ｃ３（ｒｓ２２３０１９９）、ＣＦＢ（ｒｓ４１５６６７）ならびにＡＰＯＥ遺伝子におけるＳＮＰは、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）Ｔａｑｍａｎ（登録商標）５’ヌクレオチダーゼアッセイ、ＳＳＣＰ、直接配列決定、およびＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｖｅｒｓｉｏｎ  Ｐｒｏｂｅ  Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ（ＰａｒＡｌｌｅｌｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）の組み合わせにより遺伝子型を特定した。遺伝子型および抗ＶＥＧＦ応答カテゴリーを、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌにおいて作表し、ＳＡＳ９．１．３に移入した。分析を観察ユニットとして、各適格眼を使用して実施した。ＳＡＳ手順ＦＲＥＱを使用して、遺伝子型頻度を交差作表した。Ｐｅａｒｓｏｎカイ二乗試験を使用して、評価したＳＮＰの各々に対するカテゴリー変数および遺伝子型頻度の各々を比較した。アレル頻度を、Ｐｅａｒｓｏｎカイ二乗およびＦｉｓｈｅｒ直接確率法の両方を使用して試験した。全てのＰ値を、両側試験を用いて計算し、複数の試験に対し較正はしなかった。３つの応答カテゴリー（「早期レスポンダー、維持なし」、「早期レスポンダー、維持あり」および「遅延レスポンダー」）を個々に、および「ノンレスポンダー」と組み合わせて比較した。ロジスティック回帰分析を使用して、オッズ比および有意の遺伝子型のオッズに関する９５％信頼区間を推定した。カテゴリー変数に対するオッズ比を、参照カテゴリーとの関連で推定した。データをＳＡＳ統計ソフトウェアパッケージ、バージョン９．１．３．の使用により分析した。
【０４７３】
滲出性ＡＭＤのために抗ＶＥＧＦ療法を受けており（アイオワ大学コホート）、排除基準を有さなかった合計２４２の眼を、この分析に含めた。特筆すべきことに、分析により、Ｃ３遺伝子型と既存の滲出性ＡＭＤの硝子体内抗ＶＥＧＦ治療薬を用いた治療への応答の間の非常に有意な（Ｐ＝０．００３４）関連が明らかになった。具体的には、共通の機能的多型ｒｓ２２３０１９９（Ａｒｇ８０Ｇｌｙ）は、それぞれ、Ｃ３Ｓ（遅い）およびＣ３Ｆ（速い）タンパク質アイソフォームをコードし、これは、「レスポンダー」の３つ全てのカテゴリーを「ノンレスポンダー」と比べた場合、治療への異なる応答と関連した。個体は、ｒｓ２２３０１９９  Ｃ３バリアントに対して、ＧＣ［Ｐ＝０．００１６；オッズ比（ＯＲ）＝５．４８、９５％信頼区間（１．９０−１５．７５）］またはＣＣ［Ｐ＝０．０１；ＯＲ＝３．６５、９５％ＣＩ（１．３５−９．８６）］である場合、抗ＶＥＧＦ療法に応答する可能性がより高い。言い換えれば、患者は、ＧＧ遺伝子型を有した場合、抗ＶＧＦ剤による療法に応答しない可能性が高くなる。レスポンダーのサブカテゴリー間で識別する場合、Ｃ３関連は「早期レスポンダー、維持あり」群では最も有意であった（Ｐ＝０．０００４）。
【０４７４】
レスポンダーとノンレスポンダー群の間の治療に対する応答では、評価したＣＦＨ、ＣＦＢ、ＡＲＭＳ２またはＡＰＯＥ遺伝子型のいずれに対しても関連が観察されなかった。しかしながら、ＡＲＭＳ２  ｒｓ１０４９０９２３バリアントでは、レスポンダーとノンレスポンダーの間には有意性（Ｐ＝０．０３５）への傾向が存在した。
【０４７５】
２７．網膜動脈または静脈の直径の比はさらに、異常脈絡毛細管小葉疾患の診断を示す
網膜動脈および静脈の直径、ならびにこれらのパラメータの比（Ａ：Ｖ）を、１９の異常脈絡毛細管小葉を有する患者の眼底写真において、ＩＶＡＮ（血管測定システム、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ大学、眼科、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）、デジタル（またはデジタル化）網膜画像から網膜血管幅を測定するために使用される半自動化システムを用いて測定した（Ｋｎｕｄｔｓｏｎ、ＭＤ  ｅｔ  ａｌ；  Ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｖｅｓｓｅｌ  ｄｉａｍｅｔｅｒｓ  ａｔ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｐｏｉｎｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｕｌｓｅ  ｃｙｃｌｅ  ２００４；  Ｂｒ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ８８：５７）。この研究を実施し、写真からの網膜血管内径の客観的評価が、特異的表現型に特有の心血管リスク情報を提供するかどうかを決定した。実施例のコンピュータ支援の測定は、網膜細動脈狭小化は、女性における偶発冠動脈心疾患（Ｗｏｎｇ  ＴＹ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｒｅｔｉｎａｌ  ａｒｔｅｒｉｏｌａｒ  ｎａｒｒｏｗｉｎｇ  ａｎｄ  ｉｎｃｉｄｅｎｔ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  ｍｅｎ  ａｎｄ  ｗｏｍｅｎ：  Ｔｈｅ  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  Ｒｉｓｋ  ｉｎ  Ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ  Ｓｔｕｄｙ，  ＪＡＭＡ  ２００２；  ２８７：１１５３５９）ならびに男性および女性における偶発脳卒中および糖尿病（Ｗｏｎｇ  ＴＹ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｒｅｔｉｎａｌ  ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｃｉｄｅｎｔ  ｓｔｒｏｋｅ：  Ｔｈｅ  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  Ｒｉｓｋ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ  Ｓｔｕｄｙ，  Ｌａｎｃｅｔ  ２００１；３５８：１１３４４０；  Ｗｏｎｇ  ＴＹ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｒｅｔｉｎａｌ  ａｒｔｅｒｉｏｌａｒ  ｎａｒｒｏｗｉｎｇ  ａｎｄ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ  ｉｎ  ｍｉｄｄｌｅ−ａｇｅｄ  ｐｅｒｓｏｎｓ，  ＪＡＭＡ  ２００２；  ２８７：２５２８３３；  Ｄｅ  Ｓｉｌｖａ  ＤＡ，  ｅｔ  ａｌ．  ，  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ２０１１  Ａｕｇ  ３０；  ７７：８９６−９０３）と関連したことを示す。
【０４７６】
自動化構成要素は、視神経円板を中心とするオーバーレイ格子の配置、血管型が何であるか、および血管のための幅測定を含んだ。スクリーン表示では、青色を使用して、静脈／細静脈（Ｖ）を示し、および赤色を使用して動脈／細動脈（Ａ）を示した。コントロールウィンドウ上のデータ表は、各測定血管に対する平均幅および標準偏差を示し、°（度）で表した時計回りの角度により、各血管を位置づけた。血管は、ＡまたはＶとして自動的に分類し；不確定症例では、血管はＡと分類した。
【０４７７】
手動構成要素は、初期自動化決定または測定のいずれかを無効にする選択を含んだ。これは、格子の配置を調節すること、血管型を変更すること、血管を削除すること、血管を再測定すること、および初期自動化で見逃された重要な血管を追加することを含んだ。修正ＡＲＩＣ格子は、３つの同心円から構成され、これは平均視神経円板の境界を画定し、円板辺縁から、円板から１／２直径までの領域として規定されるゾーンＡ、および円板からの１／２円板直径から、円板からの１円板直径として規定されるゾーンＢ領域であった。全ての網膜血管をゾーンＢで測定した。ＩＶＡＮは１８００ミクロンの中心円（円板直径）を有する格子を表すようにコードされ、そのサイズは、スケール因子により設定された。スケール因子を使用して、カメラ光学、スキャナ解像度、または患者位置により導入される倍率差を調節した。構成手順を使用して、各データセットに対する血管トレーシングのためのパラメータを設定した（すなわち、同じ写真方法を使用して取得した同じ研究からの画像）。Ｋｎｕｄｔｓｏｎ式を使用してＡ：Ｖ比を計算するには、６つの最大Ｖおよび６つの最大Ａからの幅データのみが要求される。分岐（娘）幅データは要求されない。
【０４７８】
異常脈絡毛細管小葉を有する患者は、０．８８（０．６０〜１．４８）の平均Ａ：Ｖ比を示した（Ｓｃｏｔｔ  ＆  Ｊａｓｏｎ  −ファイル‘ＲＰＤ＿ＡｒｔｅｒｙＶｅｉｎＲａｔｉｏｓ＿２．２２．１０．ｘｌｓｘ’を参照されたい）。この比は、ＡＭＤを有しない患者（平均Ａ：Ｖ＝０．６４）、初期ＡＭＤを有する患者（平均Ａ：Ｖ＝０．６３）、後期ＡＭＤを有する患者（平均Ａ：Ｖ＝０．６４）に対して前に発表されたものとは著しく異なった（Ｊｅｇａｎｔｈａｎ  Ｖ．Ｓ．Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｃａｌｉｂｅｒ  ａｎｄ  Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ  Ｍａｌａｙ  Ｅｙｅ  Ｓｔｕｄｙ，  Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２００８，  １４６：９５４−９５９）。
【０４７９】
カラー写真で検出された異常脈絡毛細管小葉（上黄斑においてのみ視認可能）を有する２０の患者、ＡＭＤを有するが異常脈絡毛細管小葉を有しない２０の患者、およびＡＭＤまたは異常脈絡毛細管小葉を有しない２０の患者の予備的評価を実施した。円板から出てくる平均６の血管の測定を行った。上動脈（上静脈ではない）は、上異常脈絡毛細管小葉を有する患者においてのみ、下動脈に比べ著しく拡張された。これらのデータは異常脈絡毛細管小葉が上黄斑においてのみ起こる場合、網膜／脈絡膜は虚血性であり、動脈拡張を引き起こすという概念を支持する。
【０４８０】
発明の範囲または精神から逸脱せずに、本発明において、様々な改変および変更が可能であることは当業者には明らかであろう。発明の他の態様は、明細書および本明細書で記載される発明の実施を考慮すれば、当業者に明らかであろう。明細書および実施例は、例示にすぎず、発明の真の範囲および精神は下記特許請求の範囲により示されることが意図される。
【０４８１】
この出願を通して、様々な出版物が参照される。これらの出版物の開示は、これが関連する当技術分野の状態をより完全に記載するために、全体として、本明細書において、参照により本出願に組み込まれる。開示される参考文献はまた、参照が依存する文において記載される、それらの中に含まれる材料について、個々にかつ特定的に参照により本明細書に組み込まれる。本明細書の何事も、本発明が、以前の発明ために、そのような文献に先行する権利を与えられないことを認めるものと解釈されるべきではない。さらに、本明細書で提供される発表日は、実際の発表日とは異なる可能性があり、独立した確認が必要とされ得る。
【０４８２】
参考文献
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５．Ｃｈｏｎｇ  ＮＨ，  Ｋｅｏｎｉｎ  Ｊ，  Ｌｕｔｈｅｒｔ  ＰＪ，  Ｆｒｅｎｎｅｓｓｏｎ  ＣＩ，  Ｗｅｉｎｇｅｉｓｔ  ＤＭ，  Ｗｏｌｆ  ＲＬ，  Ｍｕｌｌｉｎｓ  ＲＦ，  Ｈａｇｅｍａｎ  ＧＳ．  Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ  ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍａｃｕｌａｒ  ｅｌａｓｔｉｃ  ｌａｙｅｒ  ｏｆ  Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｅｓｉｏｎｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．    Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．  ２００５  Ｊａｎ；１６６（１）：２４１−５１．
６．Ｃｏｈｅｎ  ＳＹ，  Ｄｕｂｏｉｓ  Ｌ，  Ｔａｄａｙｏｎｉ  Ｒ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ  ｏｆ  ｒｅｔｉｃｕｌａｒ  ｐｓｅｕｄｏｄｒｕｓｅｎ  ｉｎ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｎｅｗｌｙ  ｄｉａｇｎｏｓｅｄ  ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ．  Ｂｒ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２００７；９１（３）：３５４−９．
７．Ｆｕｎｇ  ＡＥ，  Ｌａｌｗａｎｉ  ＧＡ，  Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ  ＰＪ，  Ｄｕｂｏｖｙ  ＳＲ，  Ｍｉｃｈｅｌｓ  Ｓ，  Ｆｅｕｅｒ  ＷＪ，  Ｐｕｌｉａｆｉｔｏ  ＣＡ，  Ｄａｖｉｓ  ＪＬ，  Ｆｌｙｎｎ  ＨＷ  Ｊｒ，  Ｅｓｑｕｉａｂｒｏ  Ｍ．  Ａｎ  ｏｐｔｉｃａｌ  ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ−ｇｕｉｄｅｄ，  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｓｉｎｇ  ｒｅｇｉｍｅｎ  ｗｉｔｈ  ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ  ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ  （Ｌｕｃｅｎｔｉｓ）  ｆｏｒ  ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．  Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ２００７；１４３（４）：５６６−８３．
８．Ｈａｇｅｍａｎ  ＧＳ，  Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＤＨ，  Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＬＶ，  ｅｔ  ａｌ．  Ａ  ｃｏｍｍｏｎ  ｈａｐｌｏｔｙｐｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｇｅｎｅ  ｆａｃｔｏｒ  Ｈ  （ＨＦ１／ＣＦＨ）  ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｅｓ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ  ｔｏ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ２００５；１０２（２０）：７２２７−３２．
９．Ｈａｇｅｍａｎ  Ｇ，  Ｍｕｌｌｉｎｓ  Ｒ．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｒｕｓｅｎ  ａｓ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｓｕｂｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．  Ｍｏｌ  Ｖｉｓ．  １９９９；５：２８．
１０．Ｈａｇｅｍａｎ  Ｇ，  Ｍｕｌｌｉｎｓ  Ｒ，  Ｒｕｓｓｅｌｌ  Ｓ，  Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｌ，  Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｄ．  Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ  ｉｓ  ａ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ  ｏｆ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｓｅｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ  ｇｅｎｅ  ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ．  ＦＡＳＥＢ  Ｊ．  １９９９；１３：４７７４８４．
１１．Ｈｅｌｂ，  Ｈ．  Ｍ．，  Ｐ．  Ｃ．  Ｉｓｓａ，  Ｍ．  Ｆｌｅｃｋｅｎｓｔｅｉｎ，  Ｓ．  Ｓｃｈｍｉｔｚ−Ｖａｌｃｋｅｎｂｅｒｇ，  Ｈ．  Ｐ．  Ｓｃｈｏｌｌ，  Ｃ．  Ｈ．  Ｍｅｙｅｒ，  Ｎ．  Ｅｔｅｒ，  ａｎｄ  Ｆ．  Ｇ．  Ｈｏｌｚ．  ２００９．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ  ｃｏｎｆｏｃａｌ  ｓｃａｎｎｉｎｇ  ｌａｓｅｒ  ｏｐｈｔｈａｌｍｏｓｃｏｐｙ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｗｉｔｈ  ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ，  ｓｐｅｃｔｒａｌ−ｄｏｍａｉｎ  ｏｐｔｉｃａｌ  ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ．  Ａｃｔａ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．
１２．Ｋｌａｖｅｒ  ＣＣ，  Ａｓｓｉｎｋ  ＪＪ，  ｖａｎ  Ｌｅｅｕｗｅｎ  Ｒ，  Ｗｏｌｆｓ  ＲＣ，  Ｖｉｎｇｅｒｌｉｎｇ  ＪＲ，  Ｓｔｉｊｎｅｎ  Ｔ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｒａｔｅｓ  ｏｆ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌｏｐａｔｈｙ：  ｔｈｅ  Ｒｏｔｔｅｒｄａｍ  Ｓｔｕｄｙ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ２００１  Ｓｅｐ；４２（１０）：２２３７４１．
１３．Ｋｌｅｉｎ  Ｒ，  Ｍｅｕｅｒ  ＳＭ，  Ｋｎｕｄｔｓｏｎ  ＭＤ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｒｅｔｉｃｕｌａｒ  ｄｒｕｓｅｎ．  Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２００８；１４５（２）：３１７−２６．
１４．Ｌｅｖｅｚｉｅｌ  Ｎ，  Ｐｕｃｈｅ  Ｎ，  Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｆ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ  ｏｎ  ｓｅｖｅｒｉｔｙ  ｏｆ  ｅｘｕｄａｔｉｖｅ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  Ｅｐｕｂ  ２００９  Ｄｅｃ  ３０：０９−４４２３．
１５．Ｍｉｍｏｕｎ  Ｇ，  Ｓｏｕｂｒａｎｅ  Ｇ，  Ｃｏｓｃａｓ  Ｇ．  Ｍａｃｕｌａｒ  ｄｒｕｓｅｎ  ［ｉｎ  Ｆｒｅｎｃｈ］．  Ｊ  Ｆｒ  Ｏｐｈｔａｌｍｏｌ  １９９０；１３：５１１３０．
１６．Ｐｉｒｃｈｅｒ，  Ｍ．，  Ｅ．  Ｇｏｔｚｉｎｇｅｒ，  Ｏ．  Ｆｉｎｄｌ，  Ｓ．  Ｍｉｃｈｅｌｓ，  Ｗ．  Ｇｅｉｔｚｅｎａｕｅｒ，  Ｃ．  Ｌｅｙｄｏｌｔ，  Ｕ．  Ｓｃｈｍｉｄｔ−Ｅｒｆｕｒｔｈ，  ａｎｄ  Ｃ．  Ｋ．  Ｈｉｔｚｅｎｂｅｒｇｅｒ．  ２００６．  Ｈｕｍａｎ  ｍａｃｕｌａ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｗｉｔｈ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｏｐｔｉｃａｌ  ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ４７  （１２）：５４８７−５４９４．
１７．Ｐｒｅｎｎｅｒ  ＪＬ，  Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ  ＢＪ，  Ｔｏｌｅｎｔｉｎｏ  ＭＪ，  Ｙｉｎｇ  ＧＳ，  ＪａｖｏｒｎｉｋＮＢ，  Ｍａｇｕｉｒｅ  ＭＧ，  Ｈｏ  ＡＣ；  ＣＮＶＰＴ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｒｏｕｐ．  Ｒｉｓｋ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｖｉｓｉｏｎ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｆｅｌｌｏｗ  ｅｙｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ＣＮＶＰＴ．    Ｒｅｔｉｎａ．  ２００３  Ｊｕｎ；２３（３）：３０７−１４．
１８．Ｒｉｖｅｒａ  Ａ，  Ｆｉｓｈｅｒ  ＳＡ，  Ｆｒｉｔｓｃｈｅ  ＬＧ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｈｙｐｏｔｈｅｔｉｃａｌ  ＬＯＣ３８７７１５  ｉｓ  ａ  ｓｅｃｏｎｄ  ｍａｊｏｒ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｇｅｎｅ  ｆｏｒ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｎｇ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｆａｃｔｏｒ  Ｈ  ｔｏ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｒｉｓｋ．  Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  ２００５；１４（２１）：３２２７−３６．
１９．Ｒｕｄｏｌｆ  Ｍ，  Ｍａｌｅｋ  Ｇ，  Ｍｅｓｓｉｎｇｅｒ  ＪＤ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｕｂ−ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｒｕｓｅｎｏｉｄ  ｄｅｐｏｓｉｔｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｒｅｔｉｎａ：  ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ．  Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２００８；８７：４０２  ８．
２０．Ｒｕｓｓｅｌｌ  Ｓ，  Ｍｕｌｌｉｎｓ  Ｒ，  Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  Ｂ，  Ｈａｇｅｍａｎ  Ｇ．  Ｂａｓａｌ  ｌａｍｉｎａｒ  ｄｒｕｓｅｎ  ａｒｅ  ｉｎｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈａｂｌｅ  ｉｎ  ｌｏｃａｔｉｏｎ，  ｓｕｂｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  ａｎｄ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｄｒｕｓｅｎ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．  Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ２００２；１２９：２０５２１４．
２１．Ｓｍｉｔｈ  ＲＴ，  Ｓｏｈｒａｂ  Ｍ，  Ｂｕｓｕｉｏｃ  Ｍ，  Ｂａｒｉｌｅ  Ｇ．  Ｒｅｔｉｃｕｌａｒ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２００９；１４８（５）：７３３−４３．
２２．Ｓｍｉｔｈ  ＲＴ，  Ｃｈａｎ  ＪＫ，  Ｂｕｓｕｏｉｃ  Ｍ，  ｅｔ  ａｌ．  Ａｕｔｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  ｏｆ  ｅａｒｌｙ，  ａｔｒｏｐｈｉｃ，  ａｎｄ  ｈｉｇｈ−ｒｉｓｋ  ｆｅｌｌｏｗ  ｅｙｅｓ  ｉｎ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ２００６；４７（１２）：５４９５−５０４．
２３．Ｔｕｏ  Ｊ，  Ｒｏｓｓ  ＲＪ，  Ｒｅｅｄ  ＧＦ，  Ｙａｎ  Ｑ，  Ｗａｎｇ  ＪＪ，  Ｂｏｊａｎｏｗｓｋｉ  ＣＭ，  Ｃｈｅｗ  ＥＹ，  Ｆｅｎｇ  Ｘ，  Ｏｌｓｅｎ  ＴＷ，  Ｆｅｒｒｉｓ  ＦＬ  ３ｒｄ，  Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  Ｐ，  Ｃｈａｎ  ＣＣ．  Ｔｈｅ  ＨｔｒＡ１  ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，  ｓｍｏｋｉｎｇ，  ａｎｄ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｃａｓｅ−ｃｏｎｔｒｏｌ  ｓａｍｐｌｅｓ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  ２００８；１１５（１１）：１８９１−８．
２４．Ｗａｎｇ  ＪＪ，  Ｒｏｃｈｔｃｈｉｎａ  Ｅ，  Ｌｅｅ  ＡＪ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｅｎ−ｙｅａｒ  ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌｏｐａｔｈｙ：  ｔｈｅ  Ｂｌｕｅ  Ｍｏｕｎｔａｉｎｓ  Ｅｙｅ  Ｓｔｕｄｙ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ２００７；１１４：９２  ８１６．
２５．Ｙａｎｇ  Ｚ，  Ｃａｍｐ  ＮＪ，  Ｓｕｎ  Ｈ，  Ｔｏｎｇ  Ｚ，  Ｇｉｂｂｓ  Ｄ，  Ｃａｍｅｒｏｎ  ＤＪ，  Ｃｈｅｎ  Ｈ，  Ｚｈａｏ  Ｙ，  Ｐｅａｒｓｏｎ  Ｅ，  Ｌｉ  Ｘ，  Ｃｈｉｅｎ  Ｊ，  Ｄｅｗａｎ  Ａ，  Ｈａｒｍｏｎ  Ｊ，  Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  ＰＳ，  Ｓｈｒｉｄｈａｒ  Ｖ，  Ｚａｂｒｉｓｋｉｅ  ＮＡ，  Ｈｏｈ  Ｊ，  Ｈｏｗｅｓ  Ｋ，    Ｚｈａｎｇ  Ｋ．  Ａ  ｖａｒｉａｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＨＴＲＡ１  ｇｅｎｅ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００６；３１４（５８０１）：９９２−３．
２６．Ｚｗｅｉｆｅｌ  ＳＡ，  Ｓｐａｉｄｅ  ＲＦ，  ＣｕｒｃｉｏＣＡ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｒｅｔｉｃｕｌａｒ  ｐｓｅｕｄｏｄｒｕｓｅｎ  ａｒｅ  ｓｕｂｒｅｔｉｎａｌ  ｄｒｕｓｅｎｏｉｄ  ｄｅｐｏｓｉｔｓ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ２０１０ａ；１１７：３０３１２．
２７．Ｚｗｅｉｆｅｌ  ＳＡ，  Ｉｍａｍｕｒａ  Ｙ，  Ｓｐａｉｄｅ  ＴＣ，  Ｆｕｊｉｗａｒａ  Ｔ，  Ｓｐａｉｄｅ  ＲＦ．  Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  Ｓｕｂｒｅｔｉｎａｌ  Ｄｒｕｓｅｎｏｉｄ  Ｄｅｐｏｓｉｔｓ  （Ｒｅｔｉｃｕｌａｒ  Ｐｓｅｕｄｏｄｒｕｓｅｎ）  ｉｎ  Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  ２０１０ｂ  Ｍａｙ  １４．  ［Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ］
【図２１Ａ１】
2014515012.tif 000015
【図２１Ａ２】
2014515012.tif 000016
【図２１Ａ３】
2014515012.tif 000017
【図２１Ｂ１】
2014515012.tif 000018
【図２１Ｂ２】
2014515012.tif 000019
【図２１Ｂ３】
2014515012.tif 000020
【図２１Ｃ１】
2014515012.tif 000021
【図２１Ｃ２】
2014515012.tif 000022
【図２１Ｃ３】
2014515012.tif 000023
【図２１Ｄ１】
2014515012.tif 000024
【図２１Ｄ２】
2014515012.tif 000025
【図３８】
2014515012.tif 000026
【図３９Ａ】
2014515012.tif 000027
【図３９Ｂ】
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【図３９Ｃ】
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【図４０Ａ】
2014515012.tif 000030
【図４１Ａ】
2014515012.tif 000031
【図４１Ｂ】
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【図４２】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2014515012.tif 000039
【図７】
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【図８】
2014515012.tif 000041
【図９】
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【図１０】
2014515012.tif 000043
【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
2014515012.tif 000048
【図１６】
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【図１７Ａ】
2014515012.tif 000050
【図１７Ｂ】
2014515012.tif 000051
【図１７Ｃ】
2014515012.tif 000052
【図１７Ｄ】
2014515012.tif 000053
【図１８】
2014515012.tif 000054
【図１９】
2014515012.tif 000055
【図２０】
2014515012.tif 000056
【図２１Ｄ３】
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【図２２】
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【図２３Ａ】
2014515012.tif 000059
【図２３Ｂ】
2014515012.tif 000060
【図２３Ｃ】
2014515012.tif 000061
【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
2014515012.tif 000063
【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
2014515012.tif 000069
【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図４０Ｂ】
2014515012.tif 000077
【配列表】
2014515012000001.app
【国際調査報告】
2014515012.tif 000078
2014515012.tif 000079
2014515012.tif 000080
2014515012.tif 000081
2014515012.tif 000082