(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）：    【化１】2014506251.tif 000034（式中、Ｒｊ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘｉ、Ｘ２、Ｘ３及びＺは請求項１に規定したとおりである）に関する。該化合物は細菌感染症の予防及び／又は治療において有用である。【選択図】なし
2014506251.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ａ）：
【化１】
2014506251.tif 000028
（式中、
Ｒ１はＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル又はＣ２〜Ｃ６アルキニルであり、該アルキル、アルケニル又はアルキニルは必要に応じてＳＲ５、ＮＲ５Ｒ５Ａ又はＯＲ５によって置換され、
Ｒ２はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲ６又はＮＨＲ７であり、
Ｒ３はＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、ＯＲ８又はＮＨＲ９であり、
Ｒ４はＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、ＣＨ３、ＳＣＨ２ＣＯＯＨ、ＳＲ１０、ＳｅＲ１１、ＣＨ２Ｒ１２、Ｃ≡ＣＲ１３、ＣＨ＝ＣＨＲ１４又はＳ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）Ｒ１７であり、
Ｘ１は−Ｓ−、−Ｓｅ−、−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−又は−Ｃ≡Ｃ−であり、
Ｘ２は単結合、Ｃ１〜Ｃ４アルキレン、Ｃ２〜Ｃ４アルケニレン又はＣ２〜Ｃ４アルキニレンであり、
Ｘ３は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＲ１５−、−ＳＯ２ＮＨ−、−ＮＨＳＯ２−、−ＣＨ２−、−Ｏ−、−Ｓ−であり、
Ｚは
【化２】
2014506251.tif 000029
から選択されるか、又は、
ＺはＣ６〜Ｃ１０アリール、５員〜７員のヘテロアリール、アリールアルキル若しくはヘテロアリールアルキルであり、該アリール及びヘテロアリールは必要に応じて１個〜３個のＲ０基で置換され、
Ｒ０はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル又はＣ２〜Ｃ６アルキニルであり、
Ｒ５、Ｒ５Ａ、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１５は各々独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル又はＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択され、
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４は各々独立してＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル又はＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択され、
Ｒ１６はＯＨ、ＮＨ２、Ｎ３又はＯＣＨ２ＣＨ≡ＣＨであり、
Ｒ１７はＯＨ又はＮＨ（ＣＨ２）ｐＡｒであり、ここでＡｒは必要に応じてＢｒ、Ｃ≡ＣＨによって置換されたアリール基であり、
ｍは０又は１であり、
ｎは１、２又は３であり、
ｐは１、２又は３である）
の化合物、及びその互変異性体、立体異性体、立体異性体混合物又は薬学的に許容される塩形態。
【請求項２】
式（Ｉａ）：
【化３】
2014506251.tif 000030
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘ３が−Ｏ−又は−ＮＨ−である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
式（Ｉｂ）：
【化４】
2014506251.tif 000031
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘ２が−ＣＨ２−である、請求項１〜４のいずれか一項に記載に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１６がＮＨ２又はＯＨである、請求項１〜５のいずれか一項に記載に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２がＨである、請求項１〜６のいずれか一項に記載に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１がＨである、請求項１〜７のいずれか一項に記載に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ３がＨである、請求項１〜８のいずれか一項に記載に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ４がＨである、請求項１〜９のいずれか一項に記載に記載の化合物。
【請求項１１】
５’−アミノ−５’−デオキシアデノシン−８−イル−チオ−Ｎ−［（５’−アミノ−５’−デオキシアデノシン）メチル］アセトアミド、
８−［３−Ｎ−（５’−デオキシアデノシル）アミノプロプ−１−イニル］アデノシン、及び、
８−［３−（５’−デオキシアデノシル）メトキシプロプ−１−イニル］アデノシン、
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の式（Ａ）の化合物を１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤と混合して含む医薬組成物。
【請求項１３】
細菌感染症の予防及び／又は治療において使用される請求項１〜１１のいずれか一項に記載の式（Ａ）の化合物。
【請求項１４】
請求項２に記載の式（Ｉａ）の化合物を調製する方法であって、
ｉ．式（ＩＩａ）の化合物と式（ＩＩＩａ）の化合物とをカップリングする工程と、
【化５】
2014506251.tif 000032
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ２及びＸ３は上記に規定したとおりであり、
ＨａｌはＢｒ、Ｉ又はＣｌであり、
Ｚは上記に規定したとおりであり、ヒドロキシル基は存在する場合、ヒドロキシル保護基（Ｐｒ）によって保護される）
ｉｉ．得られた化合物のヒドロキシル基を脱保護する工程と、必要に応じて、
ｉｉｉ．得られた式（Ｉａ）の化合物を回収する工程と、
を含む、方法。
【請求項１５】
請求項４に記載の式（Ｉｂ）の化合物を調製する方法であって、
ｉ．式（ＩＩｂ）の化合物と式（ＩＩＩｂ）の化合物とをカップリングする工程と、
【化６】
2014506251.tif 000033
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ２、Ｘ３は上記に規定したとおりであり、
Ｒ１７はＯＲ１８又はＨａｌであり、
Ｒ１８はＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであるか、又はＣ（＝Ｏ）ＯＲ１８が活性化エステルを形成するようなものであり、
Ｚは上記に規定したとおりであり、ヒドロキシル基は存在する場合、ヒドロキシル保護基によって保護される）
ｉｉ．得られた生成物のヒドロキシル基を脱保護する工程と、必要に応じて、
ｉｉｉ．得られた式（Ｉｂ）の化合物を回収する工程と、
を含む、方法。
【請求項１６】
検出可能な標識とカップリングした請求項１〜１１のいずれか一項に記載の式（Ａ）の化合物を含む化学プローブ。
【請求項１７】
ＮＡＤキナーゼ阻害剤のｉｎ  ｖｉｔｒｏスクリーニングのための請求項１６に記載の化学プローブの使用。
【請求項１８】
ＮＡＤキナーゼを阻害する分子をスクリーニングする方法であって、
ｉ．ＮＡＤキナーゼと、請求項１６に記載の化学プローブとをスクリーニング対象の分子とともに接触させる工程と、
ｉｉ．前記ＮＡＤキナーゼに結合した又は結合していない化学プローブの量を決定する工程と、
ｉｉｉ．それによりスクリーニングした分子が前記ＮＡＤキナーゼの阻害剤であるかを推定する工程と、
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細菌感染症の予防及び／又は治療において使用される化合物、それを含む医薬組成物、並びにそれを調製するプロセスに関する。
【背景技術】
【０００２】
新たな抗菌化合物の探索が世界的な抗生物質耐性の出現とともにますます重要となっている（１）。
【０００３】
この点に関して、ＮＡＤキナーゼ（ＮＡＤＫ、ＥＣ  ２．７．１．２３）は抗生物質の発見のための魅力的な新規の薬剤標的である。ＮＡＤＫは、ＡＴＰ及びＭｇ２＋の両方の存在下で基質ＮＡＤへのリン酸基の転移を触媒してＮＡＤＰを生成する、ＮＡＤＰの生合成の最終段階に関与する普遍的な酵素である。ＮＡＤＫはＮＡＤＨ／ＮＡＤＰＨ比の厳密な調節にも関与している（８）。ＮＡＤ（Ｐ）及びＮＡＤ（Ｐ）Ｈはどちらも、酸化還元酵素等の様々な代謝経路に関与する多数の酵素の必須補因子である。したがって、近年、ＮＡＤＫがマイコバクテリウム・ツベルクローシス（Mycobacterium tuberculosis）（５）、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）（６）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Streptococcus pneumoniae）（７）、サルモネラ・エンテリカ（Salmonella enterica）（８）及びシュードモナス・エルジノーサ（Pseudomonas aeruginosa）等の様々なヒト病原体を含む多くの細菌（２〜４）の成長にとって極めて重要であると示されていることは驚くにはあたらない。その上、ＮＡＤＫの活性は何十年も前から知られているが、その遺伝子のクローニングはごく最近になってからであり（９）、その結果、細菌、古細菌、植物及びヒトの多くの生物におけるＮＡＤＫのオーソログが急速に同定されている（Ｐｆａｍ  ＰＦ０１５１３）。好都合なことに、細菌酵素とヒト酵素とが機能及び配列の顕著な相違を示し、ヒト細胞におけるＮＡＤＫ活性が低いことが示されている（１０）。したがって、ＮＡＤＫの阻害剤が抗生物質として有用であることが判明し、かかる阻害剤の探索が支持されるはずである。
【０００４】
そのため、近年、リステリア・モノサイトゲネス（Listeria monocytogenes）に由来するＮＡＤＫの合成阻害剤としてジ−５’−チオアデノシン（ＤＴＡ）が報告されている（１１）。この化合物はマイクロモルの親和性（Ｋｉ≒０．０２ｍＭ）でＮＡＤＫを阻害する。しかしながら、抗生物質としてのその抗菌活性、したがってその潜在的有効性は評価されていない。
【発明の概要】
【０００５】
したがって、本発明の一目的は細菌感染症の治療に有用な代替的化合物を提供することである。
【０００６】
このため、本発明は一態様において、構造：
【０００７】
【化１】
2014506251.tif 000003
【０００８】
（式中の構成要素については以下に規定する）
の様々な化合物、及びその互変異性体、立体異性体、立体異性体混合物、又はその薬学的に許容される塩形態に関する。
【０００９】
本発明の別の目的は、本発明の化合物を含む医薬組成物であって、１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤と、治療的に有効な量の本発明の化合物の少なくとも１つ又は薬学的に許容されるその塩と、を含む、医薬組成物を提供することである。
【００１０】
本発明の別の目的は、細菌感染症の予防及び／又は治療において使用される式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物を提供することである。
【００１１】
本発明の別の目的は、細菌感染症を治療又は予防する方法であって、治療的に有効な量の式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法を提供することである。
【００１２】
式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物のこれら及び他の目的、特徴及び利点は、以下の本開示の詳細な説明において開示される。
【００１３】
式（Ａ）及び式（Ｉ）の化合物
第１の目的では、本発明は、式（Ａ）：
【００１４】
【化２】
2014506251.tif 000004
【００１５】
（式中、
Ｒ１はＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル又はＣ２〜Ｃ６アルキニルであり、該アルキル、アルケニル又はアルキニルは必要に応じてＳＲ５、ＮＲ５Ｒ５Ａ又はＯＲ５によって置換され、
Ｒ２はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲ６又はＮＨＲ７であり、
Ｒ３はＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、ＯＲ８又はＮＨＲ９であり、
Ｒ４はＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、ＣＨ３、ＳＣＨ２ＣＯＯＨ、ＳＲ１０、ＳｅＲ１１、ＣＨ２Ｒ１２、Ｃ≡ＣＲ１３、ＣＨ＝ＣＨＲ１４又はＳ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）Ｒ１７であり、
Ｘ１は−Ｓ−、−Ｓｅ−、−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−又は−Ｃ≡Ｃ−であり、
Ｘ２は単結合、Ｃ１〜Ｃ４アルキレン、Ｃ２〜Ｃ４アルケニレン又はＣ２〜Ｃ４アルキニレンであり、
Ｘ３は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＲ１５−、−ＳＯ２ＮＨ−、−ＮＨＳＯ２−、−ＣＨ２−、−Ｏ−、−Ｓ−であり、
Ｚは
【００１６】
【化３】
2014506251.tif 000005
【００１７】
から選択されるか、又は、
ＺはＣ６〜Ｃ１０アリール、５員〜７員のヘテロアリール、アリールアルキル若しくはヘテロアリールアルキルであり、該アリール及びヘテロアリールは必要に応じて１個〜３個のＲ０基で置換され、
Ｒ０はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル又はＣ２〜Ｃ６アルキニルであり、
Ｒ５、Ｒ５Ａ、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１５は各々独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル又はＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択され、
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４は各々独立してＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル又はＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択され、
Ｒ１６はＯＨ、ＮＨ２、Ｎ３又はＯＣＨ２ＣＨ≡ＣＨであり、
Ｒ１７はＯＨ又はＮＨ（ＣＨ２）ｐＡｒであり、ここでＡｒは必要に応じてＢｒ、Ｃ≡ＣＨによって置換されたアリール基であり、
ｍは０又は１であり、
ｎは１、２又は３であり、
ｐは１、２又は３である）
の化合物、及びその互変異性体、立体異性体、立体異性体混合物又は薬学的に許容される塩形態を提供する。
【００１８】
本発明は別の態様において、式（Ｉ）：
【００１９】
【化４】
2014506251.tif 000006
【００２０】
（式中、
Ｒ１はＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル又はＣ２〜Ｃ６アルキニルであり、該アルキル、アルケニル又はアルキニルは必要に応じてＳＲ５、ＮＲ５Ｒ５Ａ又はＯＲ５によって置換され、
Ｒ２はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲ６又はＮＨＲ７であり、
Ｒ３はＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、ＯＲ８又はＮＨＲ９であり、
Ｒ４はＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、ＣＨ３、ＳＣＨ２ＣＯＯＨ、ＳＲ１０、ＳｅＲ１１、ＣＨ２Ｒ１２、Ｃ≡ＣＲ１３、又はＣＨ＝ＣＨＲ１４であり、
Ｘ１は−Ｓ−、−Ｓｅ−、−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−又は−Ｃ≡Ｃ−であり、
Ｘ２はＣ１〜Ｃ４アルキレン、Ｃ２〜Ｃ４アルケニレン又はＣ２〜Ｃ４アルキニレンであり、
Ｘ３は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＲ１５−、−ＳＯ２ＮＨ−、−ＮＨＳＯ２−、−ＣＨ２−、−Ｏ−、−Ｓ−であり、
Ｚは
【００２１】
【化５】
2014506251.tif 000007
【００２２】
であるか、又は、
ＺはＣ６〜Ｃ１０アリール若しくは５員〜７員のヘテロアリールであり、該アリール及びヘテロアリールは必要に応じて１個〜３個のＲ０基で置換され、
Ｒ０はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル又はＣ２〜Ｃ６アルキニルであり、
Ｒ５、Ｒ５Ａ、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１５は各々独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル又はＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択され、
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４は各々独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル又はＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択され、
Ｒ１６はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ２、Ｎ３又はＯＣＨ２Ｃ≡ＣＨである）
の化合物、及びその互変異性体、立体異性体、立体異性体混合物又は薬学的に許容される塩形態を提供する。
【００２３】
或る特定の態様では、−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−が−Ｓ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ２−ＮＨ−、−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｃ≡Ｃ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−又は−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−から選択される、式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物が挙げられる。
【００２４】
或る特定の態様では、式（Ｉａ）：
【００２５】
【化６】
2014506251.tif 000008
【００２６】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ２、Ｘ３及びＺは上記に規定したとおりである）
の化合物が挙げられる。
【００２７】
別の態様では、Ｘ３が−Ｏ−又は−ＮＨ−である、式（Ｉａ）の化合物が挙げられる。
【００２８】
更に別の態様では、式（Ｉｂ）：
【００２９】
【化７】
2014506251.tif 000009
【００３０】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ２及びＺは上記に規定したとおりである）
の化合物が挙げられる。
【００３１】
好ましい態様では、Ｘ２がＣ１〜Ｃ４アルキレン、好ましくは−ＣＨ２−である、式（Ａ）又は（Ｉ）の化合物が挙げられる。
【００３２】
本発明の他の態様では、Ｚが
【００３３】
【化８】
2014506251.tif 000010
【００３４】
である、式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物が挙げられる。
【００３５】
本発明の他の態様では、Ｒ１６がＯＨ又はＮＨ２、とりわけＮＨ２である、式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物が挙げられる。
【００３６】
本発明の更なる態様では、Ｒ１がＨである、式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物が挙げられる。
【００３７】
或る特定の態様では、Ｒ３がＨである、式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物が挙げられる。
【００３８】
本発明の他の態様では、Ｒ２がＨである、式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物が挙げられる。
【００３９】
本発明の他の態様では、Ｒ４がＨである、式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物が挙げられる。
【００４０】
好ましくは、細菌感染症の予防又は治療において使用される式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物は以下のものから選択される：
５’−アミノ−５’−デオキシアデノシン−８−イル−チオ−Ｎ−［（５’−アミノ−５’−デオキシアデノシン）メチル］アセトアミド、
８−［３−Ｎ−（５’−デオキシアデノシル）アミノプロプ−１−イニル］アデノシン、
８−［３−（５’−デオキシアデノシル）メトキシプロプ−１−イニル］アデノシン。
【００４１】
医薬組成物
別の目的では、本発明は、上記に規定した式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物を、１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤と混合して含む医薬組成物に関する。
【００４２】
細菌感染症の治療及び／又は予防において使用される式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物
別の目的では、本発明は、細菌感染症、とりわけグラム陽性感染症、特にグラム陽性球菌感染症の予防及び／又は治療において使用される式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物に関する。
【００４３】
式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物を調製する方法
本発明の化合物は、下記に記載のものを含むが、それらに限定されない当業者に既知の多数の方法で、又はそれらの方法を有機合成の当業者に既知の標準的な技法を適用することによって改変して調製することができる。試薬及び出発物質は市販されているか、又は当業者によって既知の技法で容易に合成される。全ての置換基は特に指定のない限り、先に規定したとおりである。本発明と関連して開示される全てのプロセスは、ミリグラム規模、グラム規模、マルチグラム規模又は商工業規模を含む任意の規模で行われることが企図される。
【００４４】
本発明の化合物が１つ又は複数の非対称に置換された炭素原子を含有し、光学活性体又はラセミ体で単離される場合があることが理解されよう。そのため、特定の立体化学又は異性体が具体的に示されない限り、構造の全てのキラル体、ジアステレオマー体、ラセミ体及び全ての幾何異性体が意図される。かかる光学活性体を調製する方法は当該技術分野で既知である。例えば、立体異性体混合物は、ラセミ体の分割、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー及びキラルクロマトグラフィー、優先晶出法（preferential salt formation）、再結晶化等を含むが、これらに限定されない標準的な技法、又は活性出発物質からのキラル合成若しくは標的中心の意図的なキラル合成によって分離することができる。
【００４５】
容易に理解されるように、式Ｉの化合物上に存在する官能基は保護基を含有し得る。保護基は、ヒドロキシル基及びカルボキシル基等の官能基から選択的に付加及び除去することのできる化学官能基としてそれ自体が既知である。これらの基は化学化合物中に存在し、かかる官能基を該化合物が曝露される化学反応条件に対して不活性にする。任意の様々な保護基を本発明に用いることができる。本発明による他の好ましい保護基は、Greene, T.W. and Wuts, P.G.M., "Protective Groups in Organic Synthesis" 2d. Ed., Wiley & Sons, 1991、又はP.J. Kocienski, "Protecting Groups", 3rd. Ed., Thieme, Stuttgart, NY, 2004に見ることができる。
【００４６】
このようにして調製した化合物は、従来の手段によって反応混合物から回収することができる。例えば、化合物は、溶媒を反応混合物から留去するか、又は必要に応じて溶媒を反応混合物から留去した後に残留物を水に注加し、続いて非水混和性有機溶媒で抽出し、溶媒を抽出物から留去することによって回収することができる。さらに、生成物を所望に応じて様々な既知の技法、例えば再結晶化、再沈殿、又は様々なクロマトグラフィー法、とりわけカラムクロマトグラフィー又は分取薄層クロマトグラフィー、特に高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって更に精製することができる。
【００４７】
別の目的では、本発明は、上記に規定した式（Ｉａ）の化合物を調製する方法であって、
ｉ．式（ＩＩａ）の化合物と式（ＩＩＩａ）の化合物とをカップリングする工程と、
【００４８】
【化９】
2014506251.tif 000011
【００４９】
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ２、Ｘ３及びＺは上記に規定したとおりであり、
ＨａｌはＢｒ、Ｉ又はＣｌであり、
ヒドロキシル基は存在する場合、ヒドロキシル保護基（Ｐｒ）によって保護される）
ｉｉ．得られた化合物のヒドロキシル基を脱保護する工程と、必要に応じて、
ｉｉｉ．得られた式（Ｉａ）の化合物を回収する工程と、
を含む、方法に関する。
【００５０】
好ましい態様では、工程ｉ）は当業者に既知の方法である薗頭カップリングである。特に、このカップリングはＴＨＦ等の極性非プロトン性溶媒中、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、ＣｕＩ及びＰｄ（ＰＰｈ３）４の存在下で行うことができる。
【００５１】
ヒドロキシル基はアセチル基（Ａｃ）によって保護することができる。工程ｉ）によるカップリング後に、これらの保護基を、例えば得られた生成物をメタノール中のアンモニア水と５０℃で接触させることによって除去することができる。
【００５２】
また更なる態様では、式（ＩＩＩａ）の化合物は対応する式（ＩＶａ）：
【００５３】
【化１０】
2014506251.tif 000012
【００５４】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４及びＸ３は上記に規定したとおりである）
の化合物から得ることができる。
【００５５】
概して、（ＩＶａ）から（ＩＩＩａ）への変換反応は極性非プロトン性溶媒中、ＨＣ≡Ｃ−Ｘ２−Ｂｒ、例えば臭化プロパルギル、塩基の存在下で行われる。
【００５６】
別の目的では、本発明は、上記に規定した式（Ｉｂ）の化合物を調製する方法であって、
ｉ．式（ＩＩｂ）の化合物と式（ＩＩＩｂ）の化合物とをカップリングする工程と、
【００５７】
【化１１】
2014506251.tif 000013
【００５８】
（式中、
Ｒ１７はＯＲ１８又はＨａｌであり、
ＨａｌはＢｒ、Ｃｒ又はＩ、好ましくはＣｌであり、
Ｒ１８はＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであるか、又はＣ（＝Ｏ）ＯＲ１８が活性化エステルを形成するようなものであり、
Ｚは上記に規定したとおりであり、ヒドロキシル基は存在する場合、ヒドロキシル保護基によって保護される）
ｉ．得られた生成物のヒドロキシル基を脱保護する工程と、必要に応じて、
ｉｉ．得られた式（Ｉｂ）の化合物を回収する工程と、
を含む、方法に関する。
【００５９】
本明細書中で使用される場合、「活性化エステル」は、容易に式（ＩＩＩｂ）のアミンとのペプチドカップリングを受けることのできるエステルを意味する。そのため、対応するカルボン酸基の求電子性を高めるために、初めに負に帯電した酸素をより良好な脱離基へと「活性化」する。かかる活性化エステルは、当業者に既知の方法に従って、とりわけカルボン酸化合物と活性化剤とを反応させることによって得ることができる。活性化剤の例としては、とりわけカルボジイミド、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ．ＨＣｌ）、又はトリアゾール、例えば１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）又は１−ヒドロキシ−７−アザ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）を挙げることができる。
【００６０】
更なる態様によると、式（ＩＩｂ）の化合物を式（ＩＶｂ）:
【００６１】
【化１２】
2014506251.tif 000014
【００６２】
（式中、Ｒ３及びＺは上記に規定したとおりであり、ＨａｌはＣｌ、Ｂｒ又はＩである）の対応する化合物から得ることができる。
【００６３】
概して、反応は室温、すなわち２０℃〜２５℃でＤＭＦ等の極性非プロトン性溶媒中、チオグリコール酸、ＮａＨの存在下で行われる。
【００６４】
本発明の更なる態様では、式（ＩＶｂ）の化合物を式（Ｖｂ）:
【００６５】
【化１３】
2014506251.tif 000015
【００６６】
（式中、Ｒ３及びＺは上記に規定したとおりである）の対応する化合物から得ることができる。
【００６７】
概して、化合物（Ｖｂ）を（ＩＶｂ）へと変換する反応はＤＭＦ等の極性非プロトン性溶媒中、ＮＢＳの存在下で行われる。
【００６８】
当業者は上記の反応を、以下の実施例に説明する方法を適用するか又は適合させることによって行うことができる。
【００６９】
化学プローブ及びスクリーニング方法
別の目的では、本発明は、検出可能な標識とカップリングした、上記に規定した式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物を含む化学プローブにも関する。
【００７０】
好ましくは、式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物は、Ｒ１６がＮＨ２又はＮ３である化合物である。
【００７１】
様々な種類の検出可能な標識、例えばとりわけ"The Molecular Probes(R)Handbook", 11th Editionに開示されるものを使用することができる。そのため、式（Ｉ）の化合物は蛍光分子、例えばフルオレセイン又はローダミンと直接、又はホモ二官能性リンカー若しくはヘテロ二官能性リンカー、例えばビオチンを介して間接的にカップリングすることができる。
【００７２】
検出可能な標識は式（Ｉ）の化合物と直接、又はホモ二官能性物質若しくはヘテロ二官能性物質、例えばグルタルアルデヒドを介して間接的に共有結合によってカップリングするのが好ましい。この共有結合はとりわけ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−結合であり得る。
【００７３】
別の目的では、本発明は、ＮＡＤキナーゼを阻害する分子をスクリーニングする方法であって、
ｉ．ＮＡＤキナーゼと、上記に規定した化学プローブとをスクリーニング対象の分子とともに接触させる工程と、
ｉｉ．上記ＮＡＤキナーゼに結合した又は結合していない化学プローブの量を決定する工程と、
ｉｉｉ．それによりスクリーニングした分子が上記ＮＡＤキナーゼの阻害剤であるかを推定する工程と、
を含む、方法にも関する。
【００７４】
定義
本明細書中に含まれる以下の用語及び表現は、以下のように規定される。
【００７５】
本明細書中で使用される場合、「アルキル」という用語は、１個〜８個の炭素原子を有する直鎖又は分岐アルキル基、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソアミル、ネオペンチル、１−エチルプロピル、３−メチルペンチル、２，２−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、ヘキシル、オクチル等を指す。アルキル含有基、例えばアルコキシ基、アルコキシカルボニル基及びアルキルアミノカルボニル基のアルキル部分は、上記に規定したアルキルと同じ意味を有する。好ましい低級アルキル基は、１個〜４個の炭素を含有する上記に規定したアルキル基である。「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」等の指定は、１個〜６個の炭素原子を含有するアルキル基を指す。
【００７６】
本明細書中で使用される場合、「アルケニル」という用語は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する炭素原子数２〜６の直鎖又は分岐炭化水素鎖を指す。「Ｃ２〜Ｃ６アルケニル」という指定は、２個〜６個の炭素原子を含有するアルケニル基を指す。アルケニル基の例としては、エテニル、プロペニル、イソプロペニル、２，４−ペンタジエニルが挙げられる。「Ｃ２〜Ｃ４アルケニル」が特に好ましい。
【００７７】
本明細書中で使用される場合、「アルキニル」という用語は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する炭素原子数２〜６の直鎖又は分岐炭化水素鎖を指す。「Ｃ２〜Ｃ６アルキニル」という指定は、２個〜６個の炭素原子を含有するアルキニル基を指す。例としては、エチニル、プロピニル、イソプロピニルが挙げられる。「Ｃ２〜Ｃ４アルキニル」が特に好ましい。
【００７８】
本明細書中で使用される場合、「アルキレン」という用語は、２個の水素原子の除去によって形成される、置換された又は非置換の炭素原子数１〜４の分岐又は直鎖炭化水素を指す。「Ｃ１〜Ｃ４アルキレン」等の指定は、１個〜４個の炭素原子を含有するアルキレン基を指す。例としては、メチレン（−ＣＨ２−）、プロピリデン（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ＝）、１，２−エタンジイル（−ＣＨ２ＣＨ２−）等が挙げられる。
【００７９】
本明細書中で使用される場合、「アルケニレン」は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する直鎖又は分岐鎖炭化水素に由来する二価の基を指す。アルケニレンの例としては、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−等が挙げられる。
【００８０】
本明細書中で使用される場合、「アルキニレン」は、炭素−炭素三重結合を含有する直鎖又は分岐鎖非環式炭化水素基からの２個の水素原子の除去によって得られる二価の基を指す。
【００８１】
本明細書中で使用される場合、「アリール」という用語は、６個〜１０個の環炭素原子を有する置換された又は非置換の単環式又は二環式炭化水素の芳香族環系を指す。例としては、フェニル及びナフチルが挙げられる。
【００８２】
本明細書中で使用される場合、「ヘテロアリール」という用語は、５個〜１０個、好ましくは５個〜７個の環炭素原子を含有する芳香族基を指し、ここで、１つ又は複数の環炭素原子は−Ｏ−、−Ｎ−又は−Ｓ−等の少なくとも１つのヘテロ原子によって置き換えられる。ヘテロアリール基の例としては、ピロリル、フラニル、チエニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、オキサチオリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、オキサトリアゾリル、フラザニル、テトラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、トリアジニル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、プリニル、キナゾリニル、キノリル、イソキノリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチオフェニル、チアナフテニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、シンノリニル、フタラジニル、ナフチリジニル及びキノキサリニルが挙げられる。縮合環系、例えば芳香環がヘテロシクロアルキル環と縮合した環系も「ヘテロアリール」の定義に含まれる。かかる縮合環系の例としては、例えばフタルアミド、無水フタル酸、インドリン、イソインドリン、テトラヒドロイソキノリン、クロマン、イソクロマン、クロメン及びイソクロメンが挙げられる。
【００８３】
本明細書中で使用される場合、「アリールアルキル」という用語はアリール基で置換されたアルキル基を指し、該アリール基及びアルキル基は上記に規定したとおりである。好ましくは、アルキルは低級アルキル基である。アリールアルキル基の例としては、ベンジル、フェネチル又はナフチルメチルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８４】
本明細書中で使用される場合、「ヘテロアリールアルキル」という用語はヘテロアリール基で置換されたアルキル基を指し、該アリール基及びアルキル基は上記に規定したとおりである。好ましくは、アルキルは低級アルキル基である。
【００８５】
本明細書中で使用される場合、「被験体」という用語は、本明細書に記載の１つ又は複数の疾患及び病態を患うか、又は患う可能性のある温血動物、例えば哺乳動物、好ましくはヒト又はヒトの小児を指す。
【００８６】
本明細書中で使用される場合、「治療的に有効な量」は、特定の障害の症状を予防又は治療するのに有効な本発明の化合物の量を指す。かかる障害としては、本明細書に記載の受容体の異常な活性と関連する病理学的障害及び神経学的障害が挙げられるが、これらに限定されず、治療又は予防は、受容体を本発明の化合物に接触させることによってその活性を阻害、誘導又は増強することを含む。
【００８７】
本明細書中で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で過度の毒性、刺激、アレルギー反応又は他の問題となる合併症なしにヒト及び動物の組織と接触させるのに好適な、妥当なリスク対効果比に相応する化合物、材料、組成物及び／又は剤形を指す。
【００８８】
本発明の説明において使用される他の全ての用語の意味は当該技術分野で既知である。
【００８９】
別の態様では、本発明は上記に記載の化合物の薬学的に許容される塩に関する。本明細書中で使用される場合、「薬学的に許容される塩」は、本発明の化合物と非毒性の酸付加塩又は塩基付加塩との組合せに由来するかかる化合物の塩を含む。
【００９０】
酸付加塩としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸及びリン酸等の無機酸、並びに酢酸、クエン酸、プロピオン酸、酒石酸、グルタミン酸、サリチル酸、シュウ酸、メタンスルホン酸、パラトルエンスルホン酸、コハク酸及び安息香酸等の有機酸、並びに関連の無機酸及び有機酸が挙げられる。
【００９１】
塩基付加塩としては、無機塩基、例えばアンモニウム及びアルカリ金属及びアルカリ土類金属の水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩等に由来する塩、並びに塩基性有機アミン、例えば脂肪族アミン及び芳香族アミン、脂肪族ジアミン、ヒドロキシアルカミン等に由来する塩が挙げられる。このため、本発明の塩の調製に有用なかかる塩基としては、水酸化アンモニウム、炭酸カリウム、重炭酸ナトリウム、水酸化カルシウム、メチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、シクロヘキシルアミン、エタノールアミン等が挙げられる。
【００９２】
薬学的に許容される塩に加えて、他の塩も本発明に含まれる。それらの塩は化合物の精製、他の塩の調製、又は化合物若しくは中間体の同定及び特性化において中間体となることができる。
【００９３】
本発明の他の特徴は、以下の例示的な実施形態の説明において明らかとなる。これらの実施例は本発明の例示のために与えられ、本発明の限定を意図するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００９４】
【図１】スタフィロコッカス・アウレウス（S. aureus）に対するＮＡＤＫ阻害剤１７の抗菌効果を示す図である。２×１０３個の細菌に相当する１００μＬのスタフィロコッカス・アウレウスの懸濁液を、漸増濃度の阻害剤（１μｇ／ｍＬから１００μｇ／ｍＬまで）とともに３７℃で一晩インキュベートした。殺菌能（％）を、阻害剤とのインキュベーション後のコロニー形成単位とバッファー単独とのインキュベーション後のコロニー形成単位との比率として決定した。データは３回の別個の実験による平均値±ＳＤである。＊はｐ＜０．０５のスチューデントｔ検定における統計的有意性を示す。
【図２】スタフィロコッカス・アウレウスに対するＮＡＤＫ阻害剤１９の抗菌効果を示す図である。２×１０３個の細菌に相当する１００μＬのスタフィロコッカス・アウレウスの懸濁液を、漸増濃度の阻害剤（１μｇ／ｍＬから１００μｇ／ｍＬまで）とともに３７℃で一晩インキュベートした。殺菌能（％）を、阻害剤とのインキュベーション後のコロニー形成単位とバッファー単独とのインキュベーション後のコロニー形成単位との比率として決定した。データは３回の別個の実験による平均値±ＳＤである。＊はｐ＜０．０５のスチューデントｔ検定における統計的有意性を示す。
【図３】スタフィロコッカス・アウレウスに対するＮＡＤＫ阻害剤２２の抗菌効果を示す図である。２×１０３個の細菌に相当する１００μＬのスタフィロコッカス・アウレウスの懸濁液を、漸増濃度の阻害剤（１μｇ／ｍＬから１００μｇ／ｍＬまで）とともに３７℃で一晩インキュベートした。殺菌能（％）を、阻害剤とのインキュベーション後のコロニー形成単位とバッファー単独とのインキュベーション後のコロニー形成単位との比率として決定した。データは３回の別個の実験による平均値±ＳＤである。＊はｐ＜０．０５のスチューデントｔ検定における統計的有意性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００９５】
実施例
Ｉ．化学合成
Ａ．概要
合成のための試薬及び溶媒は商業供給業者から入手し、更に精製することなく使用した。標準のヌクレオシド及びヌクレオチドは商業供給業者から入手した。５’−メチルチオ−５’−デオキシアデノシン（ＭＴＡ、１）は市販のものであった。フラッシュクロマトグラフィーは、シリカゲル６０（Merck）及び指定の溶媒混合物を用いて行った。分取ＨＰＬＣ及び分析ＨＰＬＣは、Agilentのシステム（１１００シリーズ）で４．０ｍｌ／分又は１ｍｌ／分の流量、及び２０ｍＭトリエチルアンモニウムアセテートバッファー（ＴＥＡＡ）（ｐＨ７．０）中のＣＨ３ＣＮの線形勾配で、Ｃ１８逆相カラム（Ｋｒｏｍａｓｉｌ、５μ  １００Å）を用いて２０分かけて行った。１Ｈ  ＮＭＲスペクトル及び１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルは、BrukerのＡｖａｎｃｅ  ４００分光計で、それぞれ４００．１３ＭＨｚ及び１００．６２ＭＨｚで作動させて記録した。化学シフトはｐｐｍ（δ）で示し、カップリング定数（Ｊ）はヘルツで報告し、通常の略語を使用する。高分解能質量スペクトルは、WatersのＱ−ＴＯＦマイクロＭＳ装置で０．１％ギ酸を含むアセトニトリル／水の移動相を用いて記録した。
【００９６】
Ｂ．モノマーブロックの合成
【００９７】
【化１４】
2014506251.tif 000016
【００９８】
５’−ブロモ−５’−デオキシアデノシン（２）をアデノシンの直接ハロゲン化［１２］によって合成した。５’−フルオロ−５’−デオキシアデノシン（３）［１３］及び５’−アジド−５’−デオキシアデノシン（６）を、２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシンから出発して調製した。５’−アミノ−５’−デオキシアデノシン（７）を、５’−アジド−５’−デオキシアデノシン（６）の接触水素化によって得た。８−ブロモヌクレオシド８及び９を、６及び７を無水ＤＭＦ中でＮＢＳと反応させることによって得た。５’−Ｏ−プロパルギル誘導体４を、報告されている手順［１４］に従って、臭化プロパルギルをＮａＨの存在下でＮ６−ベンゾイル−２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシンと反応させることによって得て、続いて保護基を除去した。
【００９９】
５’−Ｎ−プロパルギルアミノ−５’−デオキシアデノシン（５）
【０１００】
【化１５】
2014506251.tif 000017
【０１０１】
スキーム１：１）ＮＨ２ＮＨ２・Ｈ２Ｏ、無水ＥｔＯＨ、８０℃、９０分；２）臭化プロパルギル、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、０℃、１８時間；３）８０％ギ酸、３０℃、一晩。
【０１０２】
化合物５の合成の概略をスキーム１に示す。アミノ１２を、Kolb及び共同研究者らの方法［１５］に従って２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシンからフタルイミドアデニレート１１を介して二段階で合成した。無水ＤＭＦ（８ｍＬ）中の１２（０．３１ｇ、０．８ｍｍｏｌ）の溶液に、臭化プロパルギル（トルエン中８０％）（１．１当量）及びＤＩＥＡ（４当量）を０℃で添加した。４℃で一晩撹拌した後、反応混合物を蒸発乾固し、フラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、９／１）によって精製して、１３（０．１８ｇ、６５％）を得た。１３（９０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を３０℃で一晩、水（３ｍＬ）中の８０％ギ酸で処理して、フラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ、９０／１０／１）による精製後に５（６８ｍｇ、８５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）δ２．７３（ｔ，１Ｈ，ＣＨ）、３．１０（ｄ，２Ｈ，Ｈ５’及びＨ５’）、３．５３（ｔ，２Ｈ，ＮＣＨ２）、４．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’）、４．３４（ｔ，１Ｈ，Ｈ３’）、４．８７（ｔ，１Ｈ，Ｈ２’）、５．９８（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’，Ｊ＝４．４Ｈｚ）、８．２５（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、８．２９（ｓ，１Ｈ，Ｈ８）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）δ３７．１７（ＮＣＨ２）、４９．８５（Ｃ５’）、７１．９５（Ｃ３’）、７２．６０（ＣＨ）、７３．２０（Ｃ２’）、７９．９０（Ｃｑ）、８３．４８（Ｃ４’）、８９．５１（Ｃ１’）、１１９．４８（Ｃ５）、１４０．６３（Ｃ８）、１４９．０６（Ｃ４）、１５２．４４（Ｃ２）、１５５．９６（Ｃ６）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ  Ｃ１３Ｈ１６Ｎ６Ｏ３（Ｍ＋Ｈ）の計算値３０５．１３６２；実測値３０５．１３４８。
【０１０３】
８−カルボキシメチルチオ−５’−アジド−５’−デオキシアデノシン（１０）
【０１０４】
【化１６】
2014506251.tif 000018
【０１０５】
無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中のチオグリコール酸（０．２ｍｍｏｌ）及びＮａＨ（０．４ｍｍｏｌ、油中６０％）の溶液を１０分間撹拌した後、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の８−ブロモ−５’−アジド−５’−デオキシアデノシン（８）（５０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。室温で８時間後、更にＤＭＦ中のチオグリコレート（０．２ｍｍｏｌ）を添加した。一晩撹拌した後、反応混合物を濃縮乾固し、残留物を逆相ＨＰＬＣ（２０分かけてＴＥＡＡ中１０％→３０％のＡＣＮ）によって精製して、１０（２８ｍｇ、５６％）を得た。ＵＶ  λｍａｘ  ２７９ｎｍ；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ  Ｃ１２Ｈ１４Ｎ８Ｏ５Ｓ（Ｍ＋Ｈ）の計算値３８３．０８８６；実測値３８３．０８９０。
【０１０６】
Ｃ．リガンド１７、リガンド１９及びリガンド２１の合成
５’−アミノ−５’−デオキシアデノシン−８−イル−チオ−Ｎ−［（５’−アミノ−５’−デオキシアデノシン）メチル］アセトアミド（１７）
【０１０７】
【化１７】
2014506251.tif 000019
【０１０８】
スキーム２：１）ＮＢＳ、ＤＭＦ、室温、２日；２）チオグリコール酸、ＮａＨ、ＤＭＦ、室温、１８時間；３）１２、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、室温、１８時間；４）ＮＨ２ＮＨ２・Ｈ２Ｏ、８０℃、９０分；次いで８０％ギ酸、３０℃、５時間。
【０１０９】
二重リガンド１７の合成の概略をスキーム２に示す。フタルイミドアデニレート１１４とＮＢＳ（２当量）とを無水ＤＭＦ中、室温で２日間反応させて、フラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、９５／５）による精製後に１４を収率４０％で得た。無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のチオグリコール酸（２ｍｍｏｌ）及びＮａＨ（油中６０％、４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の化合物１４（０．５１ｇ、１ｍｍｏｌ）を添加した。室温で一晩撹拌した後、反応混合物を濃縮乾固した。残留物を水に取り、ＡｃＯＥｔで抽出した（３回）。有機層を乾燥させ、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）によって精製して、１５（０．２７ｇ、５１％）を得た。無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中の化合物１５（２９ｍｇ）及び５’−アミノ−２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシン（１２）（２２ｍｇ、１．３当量）に、ＰｙＰＯＢ（２９ｍｇ、１当量）及びＤＩＥＡ（３当量）を添加した。室温で一晩撹拌した後、反応混合物を濃縮乾固した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、９５／５）によって精製して、１６（３８ｍｇ、８５％）を得た。化合物１６（３４ｍｇ）を無水エタノール（２ｍＬ）中のヒドラジン水和物（０．０２ｍＬ、１６当量）で処理した。８０℃で９０分後、反応を終了させ、溶媒を蒸発除去した。残留物を水に取り、酢酸をｐＨが４となるまで添加した後、反応混合物を凍結乾燥した。粗生成物（３０ｍｇ）を３０℃で５時間、８０％ギ酸水溶液（１．５ｍＬ）で処理した。反応混合物をアンモニア水の添加によって中和した後、凍結乾燥した。逆相ＨＰＬＣ（２０分かけてＴＥＡＡ中５％→４０％のＡＣＮ）による精製によって、化合物１７（１０ｍｇ、二段階で３８％）を得た。Ｒｔ（２０分かけてＴＥＡＡ中５％→４０％のＡＣＮ）５．１分；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２．８２（ｍ，２Ｈ，Ｈ５’ａ及びＨ５’’ａ）、３．４７（ｍ，２Ｈ，Ｈ５’ｂ及びＨ５’’ｂ）、３．８８（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’ａ）、４．０１（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’ｂ）、４．１２（ｍ，３Ｈ，Ｈ３’ｂ及びＣＨ２）、４．２１（ｄｄ，２Ｈ，Ｈ３’ａ）、４．７１（ｔ，１Ｈ，Ｈ２’ｂ）、５．０４（ｔ，１Ｈ，Ｈ２’ａ）、５．７７（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’ａ，Ｊ＝６．２Ｈｚ）、５．８７（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’ｂ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）、７．０７（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ２）、７．２８（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ２）、８．０８（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、８．２８（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、８．３３（ｓ，１Ｈ，Ｈ８）、８．６３（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：３６．６１（ＣＨ２）、４１．９７（Ｃ５’ａ）、４４．１１（Ｃ５’ｂ）、７０．７５（ＣＨ２）、７１．２６（Ｃ３’ｂ）、７１．４７（Ｃ２’ｂ）、７１．７０（Ｃ３’ａ）、７３．１５（Ｃ２’ａ）、８３．７７（Ｃ４’ａ）、８６．４８（Ｃ４’ｂ）、８８．６４（Ｃ１’ａ）、８９．０５（Ｃ１’ｂ）、１１９．７１及び１１９．９９（Ｃ５）、１４０．８７（ＣＨ８）、１４８．８１、１４９．６５及び１５１．６９（Ｃ８，Ｃ４）、１５２．１７及び１５３．１５（Ｃ２）、１５４．７３及び１５６．６３（Ｃ６）、１６７．４７（ＣＯ）；Ｕ���  λｍａｘ  ２８７ｎｍ；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ  Ｃ２２Ｈ２９Ｎ１２Ｏ７Ｓ（Ｍ＋Ｈ）の計算値６０４．２０３０；実測値６０４．２０１２。
【０１１０】
【化１８】
2014506251.tif 000020
【０１１１】
スキーム３：１）ＮＨ２ＮＨ２・Ｈ２Ｏ、無水ＥｔＯＨ、８０℃、９０分；２）臭化プロパルギル、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、４℃、１８時間；３）８−ブロモ−２’，３’，５’−トリ−Ｏ−アセチル−アデノシン、ＣｕＩ、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、ＴＨＦ、６０℃；４）３６％ＮＨ４ＯＨ水溶液、ＭｅＯＨ、５０℃、３時間；５）８０％ギ酸、３０℃、７時間。
８−［３−Ｎ−（５’−デオキシアデノシン−５’−イル）アミノプロプ−１−イン−１−イル］アデノシン（１９）
市販の８−ブロモ−アデノシンをピリジン中、無水酢酸（４当量）で処理することによって、フラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）による精製後に８−ブロモ−２’，３’，５’−トリ−Ｏ−アセチル−アデノシンを収率６２％で得た。ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のブロモ誘導体（０．２１ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）、アルキン１３（０．２０ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３当量）の脱気した（３回）溶液に、ＣｕＩ（１０ｍｏｌ％）及びＰｄ（ＰＰｈ３）４（５ｍｏｌ％）を添加した。Ａｒ下、６０℃で一晩撹拌した後、溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）によって精製し、カップリング生成物１８（０．１７ｇ、５２％）を得た。ＭｅＯＨ（４ｍＬ）及び３６％アンモニア水（２ｍＬ）中の１８（０．１３ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液を５０℃で加熱した。３時間後、反応を終了させ、溶媒を減圧下で蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）による精製によって、脱アセチル化生成物（５８ｍｇ、収率５１％）を得た。この化合物（４８ｍｇ）を８０％ギ酸水溶液（１ｍＬ）を用いて３０℃で処理した。７時間後、反応を終了させ、反応混合物をアンモニア水の添加によって中和した後、凍結乾燥した。粗生成物を逆相ＨＰＬＣによって精製して、１９（６ｍｇ、１６％）を白色の粉末として得た。Ｒｔ（２０ｍＭ  ＴＥＡＡバッファ中５％→２５％のＡＣＮ）１２．３分；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２．８８（ｍ，１Ｈ，Ｈ５’ａ）、３．０１（ｍ，１Ｈ，Ｈ５’ａ）、３．５３（ｍ，１Ｈ，Ｈ５’ｂ）、３．７０（ｍ，１Ｈ，Ｈ５’ｂ）、３．７６（ｄ，２Ｈ，ＮＣＨ２）、３．９８（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’ｂ）、４．０６（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’ａ）、４．１７（ｍ，１Ｈ，Ｈ３’ａ）、４．２１（ｍ，１Ｈ，Ｈ３’ｂ）、４．７２（ｍ，１Ｈ，Ｈ２’ａ）、４．９９（ｍ，１Ｈ，Ｈ２’ｂ）、５．１８（ｂｓ，２Ｈ，ＯＨ）、５．４０（ｂｓ，２Ｈ，ＯＨ）、５．５０（ｂｓ，１Ｈ，ＯＨ）、５．８６（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’ａ，Ｊ＝６．１Ｈｚ）、５．９６（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’ｂ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）、７．２４（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ２）、７．５７（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ２）、８．１５（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、８．１７（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、８．３５（ｓ，１Ｈ，Ｈ８）；ＵＶ  λｍａｘ  ２６２ｎｍ、２７９ｎｍ；１ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ  Ｃ２３Ｈ２８Ｎ１１Ｏ７（Ｍ＋Ｈ）の計算値５７０．２１７３；実測値５７０．２１７４。
【０１１２】
【化１９】
2014506251.tif 000021
【０１１３】
スキーム４：１）臭化プロパルギル、ＮａＨ、ＴＨＦ、４℃、１８時間；２）８−ブロモ−２’，３’，５’−トリ−Ｏ−アセチル−アデノシン、ＣｕＩ、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、ＴＨＦ、６０℃；３）３６％ＮＨ４ＯＨ水溶液、ＭｅＯＨ、室温、１８時間；４）８０％ギ酸、３０℃、２時間。
８−［３−（アデノシン−５’−イル）メトキシプロプ−１−イン−１−イル］アデノシン（２２）
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の８−ブロモ−２’，３’，５’−トリ−Ｏ−アセチル−アデノシン（０．１４ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、アルキン２０［３］（０．２０ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３当量）の脱気した（３回）溶液に、ＣｕＩ（１０ｍｏｌ％）及びＰｄ（ＰＰｈ３）４（５ｍｏｌ％）を添加した。Ａｒ下、６０℃で一晩撹拌した後、溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）によって精製して、２１（０．１５ｇ、６１％）及び副生成物としてジアルキン化合物（２５％）を得た。化合物２１（５４ｍｇ）を、メタノール（２ｍＬ）中の３６％アンモニア水（２ｍＬ）と室温で一晩反応させた。溶媒を蒸発させた後、粗生成物を８０％ギ酸水溶液（１．５ｍｌ）を用いて３０℃で処理した。２時間後、反応を終了させ、反応混合物を希酢酸の添加によって中和した後、凍結乾燥した。逆相ＨＰＬＣ（１３％アイソクラチック）による粗生成物の精製によって、二重リガンド２２を４６％で得た。Ｒｔ（２０分でＴＥＡＡ中５％→４０％のＡ）１３．０分。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：３．５４（ｍ，１Ｈ，Ｈ５’ａ）、３．６７（ｍ，１Ｈ，Ｈ５’’ａ）、３．７７（ｍ，１Ｈ，Ｈ５’ｂ）、３．８５（ｍ，１Ｈ，Ｈ５’’ｂ）、４．００（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’ａ）、４．１０（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’ｂ）、４．２１（ｍ，２Ｈ，Ｈ３’ａ及びＨ３’ｂ）、４．６０（ｍ，２Ｈ，ＣＣＨ２）、４．６２（ｍ，１Ｈ，Ｈ２’ａ）、５．００（ｍ，１Ｈ，Ｈ２’ｂ）、５．５０（ｂｓ，５Ｈ，ＯＨ）、５．９２（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’ａ，Ｊ＝５．３Ｈｚ）、５．９５（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’ｂ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）、７．２３（ｂｓ，４Ｈ，ＮＨ２）、７．６３（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ２）、８．１７及び８．１６（それぞれｓ，２Ｈ，２Ｈ２）、８．３２（ｓ，１Ｈ，Ｈ８）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：５８．７５（Ｃ５’ａ）、６２．６５（Ｃ５’ｂ）、７０．７５（ＣＨ２）、７１．０３及び７１．４４（Ｃ４’ａ，Ｃ４’ｂ）、７２．１５（Ｃ２’ａ）、７３．７１（Ｃ２’ｂ）、８３．３０（Ｃ４’ａ）、８７．１８（Ｃ４’ｂ）、８７．９４（Ｃ１’ｂ）、８９．９４（Ｃ１’ａ）、１１９．５０及び１１９．８４（Ｃ５）、１３３．４３（Ｃ８）、１３９．８３（ＣＨ８）、１４８．９０及び１４９．９６（Ｃ４）、１５３．１９及び１５３．９０（Ｃ２）、１５４．７３及び１５６．６４（Ｃ６）；ＵＶ  λｍａｘ  ２６５ｎｍ、２７９ｎｍ；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ  Ｃ２３Ｈ２７Ｎ１０Ｏ８（Ｍ＋Ｈ）の計算値５７１．２０１３；実測値５７１．１９９３。
【０１１４】
【化２０】
2014506251.tif 000022
【０１１５】
８−ブロモ−Ｎ９−ベンジルアデニン（２３）
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のＮ９−ベンジルアデニン(Lambertucci, et al. Bioorganic and Medicinal Chemistry, 2009, 17, p 2812 - 2822)（０．２２ｇ、１．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＨＳ（０．５３ｇ、３．０ｍｍｏｌ）を室温で添加した。一晩撹拌した後、溶媒を蒸発させ、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中１％→３％のＭｅＯＨで溶出させる）によって精製して、２３（０．１５ｇ、５０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：５．３６（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）、７．２４（ｍ，２Ｈ，Ｈ芳香族）、７．３０（ｍ，１Ｈ，Ｈ芳香族）、７．３５（ｍ，２Ｈ，Ｈ芳香族）、７．４１（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ２）、８．１７（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：４７．０７（ＣＨ２）、１１９．４７（Ｃ５）、１２６．９１（Ｃ８）、１２７．５８、１２８．２６及び１２９．２１（ＣＨ）、１３６．４３（Ｃｑ）、１５１．４４（Ｃ４）、１５３．５６（Ｃ２）、１５５．２９（Ｃ６）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ  ［Ｃ１２Ｈ１０Ｎ５Ｂｒ＋Ｈ］の計算値３０４．０１９８及び３０６．０１７８；実測値３０４．０１８４及び３０６．０１６７。
【０１１６】
８−カルボキシメチルチオ−Ｎ９−ベンジルアデニン（２４）
無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中のチオグリコール酸（０．０５ｍＬ、０．６８ｍｍｏｌ）及びＮａＨ（０．０５ｇ、１．３５ｍｍｏｌ、油中６０％）の溶液をアルゴン下、０℃で３０分間撹拌した後、ＤＭＦ（３ｍＬ）中の２３（０．１３ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を添加した。室温で一晩撹拌した後、反応混合物を濃縮乾固し、粗生成物を逆相ＨＰＬＣ（２０分かけてＴＥＡＡ中５％→５０％のＡＣＮ）によって精製して、２４（０．０７ｇ、５０％）を得た。Ｒｔ（２０分かけてＢ中０％→１０％のＡ）１０．３６分；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：４.１７（ｓ，２Ｈ，ＳＣＨ２）、５．３１（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）、７．１０（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ２）、７．２９（ｍ，３Ｈ，Ｈ芳香族）、７．３５（ｍ，２Ｈ，Ｈ芳香族）、８．１２（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：３４．９１（ＳＣＨ２）、４５．９７（ＣＨ２）、１１９．１７（Ｃ５）、１２７．７７、１２８．２２及び１２９．１５（ＣＨ）、１３６．６３（Ｃｑ）、１４７．７７（Ｃ８）、１５２．０２（Ｃ４）、１５２．５１（Ｃ２）、１５４．６２（Ｃ６）；１６９．８５（ＣＯ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ  ［Ｃ１４Ｈ１３Ｎ５Ｏ２Ｓ＋Ｈ］の計算値３１６．０８６８；実測値３１６．０８５５。
【０１１７】
化合物２６
無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中の２４（３２ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）及びアミノ誘導体１２（４０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の混合物に、ＰｙＰＯＢ（５２ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（５１μＬ、０．３０ｍｍｏｌ）を添加した。室温で４時間撹拌した後、反応を終了させ、溶媒を蒸発除去した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０％→７％のＭｅＯＨ）によって精製して、化合物２５（６０ｍｇ）を得た。次いで、２５（３０ｍｇ）をトリフルオロ酢酸（１ｍＬ、水中７５％）で処理することによってイソプロピリデン基を除去した。０℃で３時間後、反応を終了させ、溶媒を蒸発乾固した。粗物質を水に取り、数滴のＮＨ４ＯＨでｐＨを調整した後、凍結乾燥した。逆相ＨＰＬＣ（２０分かけてＴＥＡＡ中１０％→５０％のＡＣＮ）による精製によって、化合物２６（１９ｍｇ、６８％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：３．４６（ｍ，２Ｈ，Ｈ５’及びＨ５’’）、３．９９（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’）、４．０９（ｍ，３Ｈ，ＣＨ２及びＨ３’）、４．６４（ｍ，１Ｈ，Ｈ２’）、５．３５（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）、５．８９（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’）、７．２５（ｍ，２Ｈ，Ｈ芳香族）、７．３４（ｍ，３Ｈ，Ｈ芳香族）、８．３３（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、８．４０（ｂｓ，４Ｈ，ＮＨ２）、８．４９（ｍ，１Ｈ，ＮＨ）、８．５３（ｓ，１Ｈ，Ｈ８）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ  ［Ｃ２４Ｈ２５Ｎ１１Ｏ４Ｓ＋Ｈ］の計算値５６４．１８９０；実測値５６４．１８９１。
【０１１８】
【化２１】
2014506251.tif 000023
【０１１９】
化合物２７
無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中の２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシン−５’−カルボン酸（Meyer, Scott Cet al. Journal of the American Chemical Society, 2007, 129, p13812 - 13813）（９６ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及びプロパルギルアミン（２６μＬ、０．３９ｍｍｏｌ）の混合物に、ＰｙＰＯＢ（１５６ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（１５０μＬ、０．９０ｍｍｏｌ）を添加した。室温で３時間撹拌した後、反応を終了させ、溶媒を蒸発除去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０％→７％のＭｅＯＨ）によって精製した。トリフルオロ酢酸（４ｍＬ、水中７５％）で処理することによってイソプロピリデン基を除去した。０℃で３時間後、反応を終了させ、溶媒を蒸発乾固した。逆相ＨＰＬＣ（２０分かけてＴＥＡＡ中０％→５０％のＡＣＮ）による精製によって、化合物２７（６２ｍｇ、二段階で６６％）を得た。Ｒｔ（２０分かけてＢ中０％→１５％のＡ）５．９分；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：３．１７（ｔ，１Ｈ，ＣＨ）、４．０４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、４．１４（ｍ，１Ｈ，Ｈ３’）、４．３７（ｓ，１Ｈ，Ｈ４’）、４．５７（ｍ，１Ｈ，Ｈ２’）、５．５８（ｂｓ，１Ｈ，ＯＨ）、５．８０（ｍ，１Ｈ，ＯＨ）、５．９７（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’）、７．４３（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ２）、８．２６（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、８．３６（ｓ，１Ｈ，Ｈ８）、９．６２（ｔ，１Ｈ，ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２８．３５（ＣＨ２）、７２．３９（Ｃ２’）、７３．７１及び７３．６３（Ｃ３’及びＣＨ）、８１．２２（Ｃｑ）、８５．１３（Ｃ４’）、８８．４７（Ｃ１’）、１２０．１５（Ｃ５）、１４１．１８（Ｃ８）、１４９．０６（Ｃ４）、１５２．９４（Ｃ２）、１５６．８４（Ｃ６）、１６９．８６（ＣＯ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ  ［Ｃ１３Ｈ１４Ｎ６Ｏ４＋Ｈ］の計算値３１９．１１５５；実測値３１９．１１４７。
【０１２０】
化合物２８
無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中の２７（３５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、８−ブロモアデノシン（３５ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（３１μＬ、０．２２ｍｍｏｌ）の脱気した溶液に、ＣｕＩ（２ｍｇ、１０％）及びＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（４ｍｇ、５％）を添加した。６０℃で２時間撹拌した後、溶媒を蒸発除去した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー、続いてＨＰＬＣ（２０分かけてＢ中０％→５０％のＡ）によって精製して、化合物２８（１３ｍｇ、２３％）を得た。Ｒｔ（２０分かけてＢ中０％→５０％のＡ）１０．７分；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：３．６７（ｍ，１Ｈ，Ｈ５’）、３．６８（ｍ，１Ｈ，Ｈ５’’）、３．９９（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’）、４．２１（ｍ，２Ｈ，２Ｈ３’）、４．４４（ｍ，３Ｈ，Ｈ４’及びＣＨ２）、４．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ２’）、４．９９（ｍ，１Ｈ，Ｈ２’）、５．１７（ｄ，１Ｈ，ＯＨ３’）、５．３７（ｄ，１Ｈ，ＯＨ２’）、５．５０（ｔ，１Ｈ，ＯＨ５’）、５．５７（ｄ，１Ｈ，ＯＨ２’）、５．８０（ｄ，１Ｈ，ＯＨ３’）、５．９４（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’）、６．００（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’）、７．４２（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ２）、７．５８（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ２）、８．１５（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、８．２９（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、８．３８（ｓ，１Ｈ，Ｈ８）、９．８１（ｔ，１Ｈ，ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２９．１０（ＣＨ２）、６２．６６（ＣＨ２）、７１．４２（Ｃ３’）、７１．４７（Ｃｑ）、７２．０９及び７２．５４（Ｃ２’）、７３．６２（Ｃ３’）、８５．０４及び８７．１０（Ｃ４’）、８８．３９及び８９．８３（Ｃ１’）、９３．５１（Ｃｑ）、１１９．７５及び１２０．１５（Ｃ５）、１３３．７２（Ｃ８）、１４１．０６（ＣＨ８）、１４８．８４及び１４９．１３（Ｃ４）、１５３．０６及び１５３．７８（Ｃ２）、１５６．５５及び１５６．８２（Ｃ６）、１７０．２６（ＣＯ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ  ［Ｃ２３Ｈ２５Ｎ１１Ｏ８＋Ｈ］の計算値５８４．１９６６；実測値５８４．１９５７。
【０１２１】
【化２２】
2014506251.tif 000024
【０１２２】
スキーム７：ａ）ＮＢＳ、ＤＭＦ、２日；ｂ）ＰＰｈ３、ピリジン、２時間；ＮＨ４ＯＨ、１２時間；ｃ）チオグリコール酸、ＮａＨ、ＤＭＦ、１８時間；ｄ）９ａ又は７ａ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、２時間〜３時間；ｅ）８０％ＴＦＡ水溶液、２時間。
５’−アジド−５’−デオキシ−２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシン（６ａ）
ピリジン（１００ｍＬ）中の２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシン（１０．０ｇ、３２．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（１５ｍＬ）中のｐ−トルエンスルホニルクロリド（７．４４ｇ、７．８ｍｍｏｌ）の溶液を−２０℃で滴下した。暗所で４８時間後、水（１０ｍＬ）を反応混合物に−２０℃で添加した。１５分後、水（５００ｍＬ）を更に室温で添加し、反応混合物を酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥させ、蒸発乾固した（１３．５３ｇの粗化合物）。無水ＤＭＦ（１１０ｍＬ）中の粗５’−Ｏ−トシル化アデノシン（５．１５ｇ）及びアジ化ナトリウム（２．９０ｇ、４４．６ｍｍｏｌ）の混合物をアルゴン下、８０℃で加熱した。２時間後、反応を終了させ、溶媒を除去した。残留物を酢酸エチルに取り、水で洗浄した（２回）。有機層を乾燥させ、蒸発させ、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０％→４％のＭｅＯＨで溶出させる）によって精製して、６ａ（１．５０ｇ、二段階で４１％）を得た。ＮＭＲスペクトルは既報のデータ（Comstock, L. R., Rajski, S. R. Tetrahedron 58, 6019-6026 (2002)）に一致する。
【０１２３】
５’−アジド−８−ブロモ−５’−デオキシ−２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシン（８ａ）
ＤＭＦ（ｍＬ）中の６ａ（１．００ｇ、３．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＨＳ（１．６０ｇ、９．０ｍｍｏｌ）を室温で添加した。一晩撹拌した後、２回目のＮＨＳ（０．５３ｇ、３．０ｍｍｏｌ）の添加を行った。室温で更に１８時間撹拌した後、溶媒を蒸発させ、油性残留物をＣＨ２Ｃｌ２に取った。有機層を水で洗浄し（×３）、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後、蒸発乾固した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中１％→３％のＭｅＯＨで溶出させる）によって精製して、８ａ（０．５０ｇ、４１％）を得た。
【０１２４】
５’−アミノ−８−ブロモ−５’−デオキシ−２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシン（９ａ）
８ａ（０．２６ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）をＰＰｈ３（０．２５ｇ、０．９４ｍｍｏｌ）とピリジン中で反応させ、続いて３３％ＮＨ４ＯＨ水溶液（７ｍＬ）で処理することによって、フラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中５％→２０％のＭｅＯＨで溶出させる）による精製後に９ａ（０．２０ｇ、８１％）を得た。
５’−アジド−８−カルボキシメチルチオ−５’−デオキシ−２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシン（２９）
無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のチオグリコール酸（０．１２ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）及びＮａＨ（０．１５ｇ、３．６ｍｍｏｌ、油中６０％）の溶液をアルゴン下、０℃で１０分間撹拌した後、ＤＭＦ（２ｍＬ）中の５’−アジド−８−ブロモ−５’−デオキシ−２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシン（８ａ）（０．４８ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を添加した。室温で一晩撹拌した後、反応混合物を濃縮乾固し、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２＋１％ＮＨ４ＯＨ中１％→２０％のＭｅＯＨで溶出させる）によって精製して、２９（０．３７ｇ、７５％）を淡黄色の粉末として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）δ１．４０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．６０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．４６（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ５’）、３．５９（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ５’’）、４．０６（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）、４．２９（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’）、５．１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ３’）、５．７３（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ２’）、６．２０（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’，Ｊ＝２．３Ｈｚ）、８．１３（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）δ２４．０９（ＣＨ３）、２６．０１（ＣＨ３）、３７．１３（ＳＣＨ２）、５１．７０（Ｃ５’）、８２．０４（Ｃ３’）、８３．１２（Ｃ２’）、８５．７８（Ｃ４’）、８９．６１（Ｃ１’）、１１４．２８（Ｃ５）、１５０．３８（Ｃ８）、１５０．５７（Ｃ４）、１５１．１９（Ｃ２）、１５４．２５（Ｃ６）、１７３．１７（ＣＯ）。
【０１２５】
５’−アジド−５’−デオキシアデノシン−８−イル−チオ−Ｎ−［（５’−アミノ−８−ブロモ−５’−デオキシアデノシン）メチル］アセトアミド（３２）
無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中の５’−アミノ−８−ブロモ−５’−デオキシ−２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシン（９ａ）（５８ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）及び５’−アジド−８−カルボキシメチルチオ−５’−デオキシ−２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシン（２９）（７０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の混合物に、ＰｙＰＯＢ（８６ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（５８μＬ、０．４５ｍｍｏｌ）を添加した。室温で２時間撹拌した後、反応を終了させ、溶媒を蒸発除去した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０％→５％のＭｅＯＨ）によって精製して、Ｏ−保護３０を得た。次いで、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ、水中７５％）で処理することによってイソプロピリデン基を除去した。０℃で２時間後、反応を終了させ、溶媒を蒸発乾固した。粗物質を水に取り、数滴のＮＨ４ＯＨでｐＨを調整した後、凍結乾燥した。逆相ＨＰＬＣ（２０分かけてＴＥＡＡ中０％→５０％のＡＣＮ）による精製によって、化合物３２（２３ｍｇ、二段階で２８％）を白色の泡状物として得た。Ｒｔ（２０分かけてＴＥＡＡ中０％→５０％のＡＣＮ）１１．５分；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ３．４８（ｍ，２Ｈ，Ｈ５’ａ及びＨ５’’ａ）、３．５３（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ５’ｂ）、３．６９（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ５’’ｂ）、４．０２（ｍ，２Ｈ，Ｈ４’）、４．１４（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）、４．２１（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ３’ａ）、４．３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ３’ａ）、５．１６（ｍ，２Ｈ，Ｈ２’）、５．８０（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’ａ，Ｊ＝５．３Ｈｚ）、５．８５（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’ｂ，Ｊ＝６．１Ｈｚ）、７．１０（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ２）、７．５１（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ２）、８．１２（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、８．３１（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、８．５６（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ３６．６６（ＳＣＨ２）、４６．１２（Ｃ５’ａ）、５１．９２（Ｃ５’ｂ）、７１．２８、７１．３６、７１．５６（Ｃ２’及びＣ３’）、８３．６９（Ｃ４’ａ）、８４．２０（Ｃ４’ｂ）、８９．６４（Ｃ１’ａ）、９０．０５（Ｃ１’ｂ）、１１９．７０及び１２０．１３（Ｃ５）、１２７．６９（ＣＨ８）、１４８．９１、１５０．６５及び１５１．４６（Ｃ８，Ｃ４）、１５２．２４及び１５３．３８（Ｃ２）、１５４．６９及び１５５．５２（Ｃ６）、１６７．２７（ＣＯ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ  ［Ｃ２２Ｈ２５Ｎ１４Ｏ７ＳＢｒ＋Ｈ］の計算値７０９．１０１３及び７０９．０９９５；実測値７０９．１０１８及び７０９．１０１６。
【０１２６】
５’−アジド−５’−デオキシアデノシン−８−イル−チオ−Ｎ−［（５’−アミノ−５’−デオキシアデノシン）メチル］アセトアミド（３３）
無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中の２９（４３ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）及び５’−アミノ−８−ブロモ−５’−デオキシ−２’，３’−Ｏ−イソプロピリデン−アデノシン（１７）４（４４ｍｇ、１．３当量）の混合物に、ＰｙＰＯＢ（５７ｍｇ、１当量）及びＤＩＥＡ（５６μＬ、３当量）を添加した。室温で２時間撹拌した後、反応を終了させ、溶媒を蒸発除去した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中１０％→２０％のＭｅＯＨ）によって精製して、Ｏ−保護２２（６５ｍｇ）を得た。３０と同様のイソプロピリデン基の除去の後、粗物質を逆相ＨＰＬＣ（２０分かけてＴＥＡＡ中０％→８０％のＡＣＮ）によって精製して、純粋な３３（２９ｍｇ、４６％）を得た。Ｒｔ（２０分でＴＥＡＡ中０％→５０％のＡＣＮ）８．５分；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ３．４６（ｍ，２Ｈ，Ｈ５’ａ及びＨ５’’ａ）、３．５３（ｍ，１Ｈ，Ｈ５’ｂ）、３．６９（ｍ，１Ｈ，Ｈ５’’ｂ）、４．０２（ｍ，２Ｈ，Ｈ４’）、４．１３（ｍ，３Ｈ，Ｈ３’ｂ及びＣＨ２）、４．３１（ｄｄ，２Ｈ，Ｈ３’ａ）、４．７２（ｔ，１Ｈ，Ｈ２’ｂ）、５．１５（ｔ，１Ｈ，Ｈ２’ａ）、５．８０（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’ａ，Ｊ＝５．４Ｈｚ）、５．８８（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’ｂ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）、７．１０（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ２）、７．３０（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ２）、８．１１（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、８．２９（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、８．３４（ｓ，１Ｈ，Ｈ８）、８．６３（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ３６．６２（ＳＣＨ２）、４１．９９（Ｃ５’ａ）、５１．９３（Ｃ５’ｂ）、７１．２９、７１．３６、７１．７１（Ｃ２’及びＣ３’）、７３．１０（Ｃ２’）、８３．６９（Ｃ４’ａ）、８３．７６（Ｃ４’ｂ）、８８．５９（Ｃ１’ａ）、８９．６４（Ｃ１’ｂ）、１１９．７０及び１２０．０１（Ｃ５）、１４０．９０（ＣＨ８）、１４８．９２、１４９．６４及び１５１．４５（Ｃ８，Ｃ４）、１５２．２４及び１５３．１６（Ｃ２）、１５４．７２及び１５６．６３（Ｃ６）、１６７．３８（ＣＯ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ  ［Ｃ２２Ｈ２６Ｎ１４Ｏ７Ｓ＋Ｈ］の計算値６３１．１９０８；実測値６３１．１９２９。
【０１２７】
５’−アミノ−５’−デオキシアデノシン−８−イル−チオ−Ｎ−［（５’−アミノ−８−ブロモ−５’−デオキシアデノシン）メチル］アセトアミド（３４）
ピリジン（２ｍＬ）中の３２（６０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフェニルホスフィン（３３ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を添加した。室温で２時間撹拌した後、反応を終了させ、次いで３３％アンモニア水（２ｍＬ）を添加した。一晩撹拌した後、反応混合物を蒸発乾固し、粗物質をＣＨ２Ｃｌ２中でトリチュレートした（triturated）。残留物を逆相ＨＰＬＣ（２０分かけてＴＥＡＡ中５％→１５％のＡＣＮ）によって精製して、３４（２２ｍｇ、４０％）を得た。Ｒｔ（２０分でＴＥＡＡ中５％→１５％のＡＣＮ）９．７分；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２．９５（ｍ，２Ｈ，Ｈ５’ａ及びＨ５’’ａ）、３．４７（ｍ，２Ｈ，Ｈ５’’ｂ，Ｈ５’ｂ）、３．９７（ｍ，２Ｈ，Ｈ４’ａ）、４．０２（ｍ，２Ｈ，Ｈ４’ｂ）、４．１２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、４．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ３’ｂ）、４．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ３’ａ）、５．００（ｔ，１Ｈ，Ｈ２’ａ）、５．１５（ｔ，１Ｈ，Ｈ２’ｂ）、５．７８（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’ａ，Ｊ＝６．１Ｈｚ）、５．８５（ｄ，１Ｈ，Ｈ１’ｂ，Ｊ＝６．１Ｈｚ）、７．１３（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ２）、７．５１（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ２）、８．０９（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、８．２９（ｓ，１Ｈ，Ｈ２）、８．５８（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ３６．６６（ＳＣＨ２）、４１．６７（Ｃ５’ａ）、４６．０２（Ｃ５’ｂ）、７１．２９、７１．３６、７１．５５及び７１．６２（Ｃ２’及びＣ３’）、８４．２２（Ｃ４’）、８９．２６（Ｃ１’ｂ）、９０．８８（Ｃ１’ａ）、１１９．７３及び１２０．１３（Ｃ５）、１２７．６８（Ｃ８）、１４８．７０、１５０．６３及び１５１．４８（Ｃ８，Ｃ４）、１５２．１７及び１５３．３４（Ｃ２）、１５４．７６及び１５５．５１（Ｃ６）、１６７．３３（ＣＯ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）ｍ／ｚ  ［Ｃ２２Ｈ２７Ｎ１２Ｏ７ＳＢｒ＋Ｈ］の計算値６８３．１１０８及び６８５．１０９０；実測値６８３．１１１８及び６８５．１０９３。
【０１２８】
ＩＩ．生化学的評価
Ａ．材料及び方法
発現、精製及び活性アッセイ
Ｈｉｓタグ付きＬｍＮＡＤＫ１野生型及びＨｉｓタグ付きＳａＮＡＤＫを発現させ、既に公表されているようにコバルトベースのＩＭＡＣ樹脂（Clontech）で精製した１３。３４０ｎｍでの吸光度を測定することによってＮＡＤキナーゼ活性を決定し、カップリング酵素（酵母に由来するグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ）によって生成する還元型ＮＡＤＰの形成を追跡した。カップリング酵素及びその基質は、Sigma-Aldrichから購入した。アッセイは、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ＥＣＯＭ  ６１２２分光光度計を用いて３０℃で、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ及びＮＡＤＫを含有する０．５ｍＬのサンプル（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭグルコース−６−リン酸、２ｍＭクエン酸ナトリウム）において行った。
【０１２９】
ＮＡＤＫリガンドの阻害能力
阻害剤アッセイのために、１ｍＭ  ＮＡＤ及び４ｍＭ  ＡＴＰ（ＬｍＮＡＤＫ１に対する）又は２ｍＭ  ＡＴＰ（ＳａＮＡＤＫに対する）の存在下でＩＣ５０を決定した。ディクソンプロットを使用して、４ｍＭ  ＡＴＰ（ＬｍＮＡＤＫ１に対する）又は２ｍＭ  ＡＴＰ（ＳａＮＡＤＫに対する）及び３つのＮＡＤ濃度（０．２ｍＭ、０．５ｍＭ及び１ｍＭ）の存在下でＫＩを決定した。阻害剤がカップリング酵素の活性に対して影響を有しないことも確認した。
【０１３０】
殺菌活性アッセイ
ヒト臨床分離株であるスタフィロコッカス・アウレウスＳ２５株を、ブレインハートインフュージョン（ＢＨＩ）ブロス中、２００ｒｐｍ及び３７℃で一晩成長させた。一晩培養物をＯＤ６００ｎｍ＝０．０５となるまでＢＨＩ−リン酸緩衝生理食塩水（２５％（ｖ／ｖ））で希釈した。細菌を２００ｒｐｍ及び３７℃で、培養物がＯＤ６００ｎｍ＝０．５に達するまで成長させた。細菌懸濁液を２×１０５細菌／ｍＬの濃度に調整した。マイクロタイタープレート内で、２×１０３個の細菌を１ウェル当たり０．１ｍＬのＢＨＩ−リン酸緩衝生理食塩水（２５％（ｖ／ｖ））中の漸増濃度のＮＡＤＫ阻害剤とともに、２００ｒｐｍ及び３７℃で一晩インキュベートした。殺菌活性を定量化するために、各々の細菌懸濁液をＢＨＩで段階希釈し、ＢＨＩ寒天プレート上に二連でプレーティングした。プレートを３７℃で２４時間〜４８時間インキュベートし、コロニー形成単位の数を決定した。
【０１３１】
ヒト細胞の細胞毒性
ヒト子宮頸がんＨｅＬａ細胞を、７５ｃｍ２のプラスチックフラスコ内の１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、APP）、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン及び１０μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを添加したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ、Gibco）中、３７℃、５％ＣＯ２、加湿雰囲気下で維持した。化学化合物の細胞毒性を評価するために、ＨｅＬａ細胞を、１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭの存在下で９６ウェルプレート内に低密度で播種し、１０μＭの種々の化合物で９６時間処理した。培養培地中のＤＭＳＯの最終濃度は、溶媒の毒性を回避するために０．１％（ｖ／ｖ）とした。細胞の形状及び接着性をモニタリングし、全てのアッセイを二連で行った。ＤＭＳＯを陰性対照として使用した。
【０１３２】
Ｂ．結果
ＬｍＮＡＤＫ１の阻害
アデノシン誘導体１〜１０を、既に記載されているように精製酵素に対して試験した［１１］。化合物９のみが非常に弱い阻害を示した（０．３ｍＭのＩＣ５０値）。
【０１３３】
対照的に、マイクロモル範囲での阻害が二重リガンド１７、二重リガンド１９及び二重リガンド２２で検出された（表１を参照されたい）。このため、これらの化合物は、これまでに記載の細菌ＮＡＤキナーゼの最良の阻害剤であると考えられる。
【０１３４】
【表１】
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【０１３５】
表１：リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｍ）及びスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓａ）に由来するＮＡＤＫ阻害剤２２、ＮＡＤＫ阻害剤１７及びＮＡＤＫ阻害剤１９のＫｉ
スタフィロコッカス・アウレウスに対するＮＡＤＫ阻害剤の抗菌活性
ＮＡＤＫ阻害剤１７、ＮＡＤＫ阻害剤１９及びＮＡＤＫ阻害剤２２を、スタフィロコッカス・アウレウスのヒト病原株に対する殺菌活性についてアッセイした。
【０１３６】
図１〜図３から、これらのＮＡＤＫ阻害剤が、阻害剤１７及び阻害剤２２については１μｇ／ｍＬ、阻害剤１９については１０μｇ／ｍＬで顕著な殺菌活性を示すことが分かる。その上、阻害剤の濃度の更なる増大は殺菌活性を増大させなかった。これらの効率は、バンコマイシン等の参照化合物の効率（８μｇ／ｍＬ）に引けを取らない。
【０１３７】
細胞毒性
並行して、培養物中で９６時間、Ｈｅｌａ細胞に対する細胞毒性をアッセイした。１０マイクロモルで試験した場合に細胞の形状及び増殖速度の変化は観察されなかった。
【０１３８】
【表２】
2014506251.tif 000026
【０１３９】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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2014506251.tif 000039