(57)【要約】  ウイルスの生育を阻害するまたは改善する剤および方法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルス感染細胞を２つ以上のサーチュインの１つ以上の阻害剤と接触させることを含む、ウイルス生成の阻害方法であって、前記サーチュインがＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２、ＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ６、およびＳＩＲＴ７から選択される、方法。
【請求項２】
前記１つの阻害剤が２つ以上のサーチュインを阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記１つの阻害剤が１つのサーチュインを阻害し、第２の阻害剤が第２のサーチュインを阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ＳＩＲＴ１が阻害される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
ＳＩＲＴ２が阻害される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
ＳＩＲＴ３が阻害される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
ＳＩＲＴ４が阻害される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
ＳＩＲＴ５が阻害される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
ＳＩＲＴ６が阻害される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
ＳＩＲＴ７が阻害される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
ウイルス感染細胞をＳＩＲＴ１阻害剤およびＳＩＲＴ２阻害剤と接触させることを含む、ウイルス生成の阻害方法。
【請求項１２】
前記ＳＩＲＴ１阻害剤および前記ＳＩＲＴ２阻害剤が二重ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２阻害剤である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記二重ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２阻害剤がスラミン（ｓｕｒａｍｉｎ）でない、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記二重ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２阻害剤がカンビノール（ｃａｍｂｉｎｏｌ）、サレルミド（ｓａｌｅｒｍｉｄｅ）、テノビン（ｔｅｎｏｖｉｎ）‐６、テノビン‐１、またはそれらの組み合わせである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＳＩＲＴ１阻害剤および前記ＳＩＲＴ２阻害剤のそれぞれが、段落［００５１］〜［００６６］中に開示される化合物のうちの１つ以上である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＳＩＲＴ２阻害剤がＢ２である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＳＩＲＴ２阻害剤がＡＧＫ２である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＳＩＲＴ２阻害剤がＢＭＬ‐２６６である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＳＩＲＴ１阻害剤がＥＸ‐５２７である、請求項１５〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＳＩＲＴ１阻害剤が（Ｓ）‐３５である、請求項１５〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ウイルスがＨＣＭＶ、ヒトパピローマウイルス、ＨＳＶ１、Ａ型インフルエンザ、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、またはＨＩＶである、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ウイルスがアデノウイルス科、ヘパドナウイルス科、ヘルペスウイルス科、フラビウイルス科、オルトミクソウイルス科、パピローマウイルス科、ポリオーマウイルス科、またはレトロウイルス科である、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記細胞をＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ６、およびＳＩＲＴ７アゴニストのうちの１つ以上と接触させることをさらに含む、請求項１１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記アゴニストがトランス‐スチルベン、シス‐スチルベン、レスベラトロール（ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ）、ピセタノール（ｐｉｃｅａｔａｎｎｏｌ）、ラポンチン（ｒｈａｐｏｎｔｉｎ）、デオキシラポンチン（ｄｅｏｘｙｒｈａｐｏｎｔｉｎ）、ブテイン（ｂｕｔｅｉｎ）、カルコン、イソリキリチゲニン（ｉｓｏｌｉｑｕｉｒｔｉｇｅｎ）、ブテイン、４，２′，４′‐トリヒドロキシカルコン、３，４，２′，４′，６′‐ペンタヒドロキシカルコン、フラボン、モリン（ｍｏｒｉｎ）、フィセチン（ｆｉｓｅｔｉｎ）、ルテオリン（ｌｕｔｅｏｌｉｎ）、クェルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、ケンプフェロール（ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ）、アピゲニン（ａｐｉｇｅｎｉｎ）、ゴシペチン（ｇｏｓｓｙｐｅｔｉｎ）、ミリセチン（ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）、６‐ヒドロキシアピゲニン、５‐ヒドロキシフラボン、５，７，３′，４′，５′‐ペンタヒドロキシフラボン、３，７，３′，４′，５′‐ペンタヒドロキシフラボン、３，６，３′，４′‐テトラヒドロキシフラボン、７，３′，４′，５′‐テトラヒドロキシフラボン、３，６，２′，４′‐テトラヒドロキシフラボン、７，４′‐ジヒドロキシフラボン、７，８，３′，４′‐テトラヒドロキシフラボン、３，６，２′，３′‐テトラヒドロキシフラボン、４′‐ヒドロキシフラボン、５‐ヒドロキシフラボン、５，４′‐ジヒドロキシフラボン、５，７‐ジヒドロキシフラボン、ダイゼイン（ｄａｉｄｚｅｉｎ）、ゲニステイン（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）、ナリンゲニン（ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ）、フラバノン、３，５，７，３′，４′‐ペンタヒドロキシフラバノン、塩化ペラルゴニジン（ｐｅｌａｒｇｏｎｉｄｉｎ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、塩化シアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、塩化デルフィニジン（ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、（−）‐エピカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′）、（−）‐カテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′）、（−）‐ガロカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′，５′）、（＋）‐カテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′）、（＋）‐エピカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′）、ヒノキチオール（ｂ‐ツジャプリシン（ｂ‐Ｔｈｕｊａｐｌｉｃｉｎ）、２‐ヒドロキシ‐４‐イソプロピル‐２，４，６‐シクロヘプタトリエン‐１‐オン）、Ｌ‐（＋）‐エルゴチオネイン（Ｅｒｇｏｔｈｉｏｎｅｉｎｅ）（（Ｓ）‐ａ‐カルボキシ‐２，３‐ジヒドロ‐Ｎ，Ｎ，Ｎ‐トリメチル‐２‐チオキソ‐１Ｈ‐イミダゾール４‐エタナム‐イニウム分子内塩）、コーヒー酸フェニルエステル、ＭＣＩ‐１８６（３‐メチル‐１‐フェニル‐２‐ピラゾリン‐５‐オン）、ＨＢＥＤ（Ｎ，Ｎ′‐ジ‐（２‐ヒドロキシベンジル）エチレンジアミン‐Ｎ，Ｎ′‐ジ酢酸  水）、アンブロキソール（Ａｍｂｒｏｘｏｌ）（トランス‐４‐（２‐アミノ‐３，５‐ジブロモベンジルアミノ）シクロヘキサン‐ＨＣｌ、およびＵ‐８３８３６Ｅ（（−）‐２‐（（４‐（２，６‐ジ‐１‐ピロリジニル‐４‐ピリミジニル）‐１‐ピペラジニル）ｍ‐エチル）‐３，４‐ジヒドロ‐２，５，７，８‐テトラメチル‐２Ｈ‐１‐ベン���ピラン‐６‐オール  ２水）、ベータ‐１′‐５‐メチル‐ニコチンアミド‐２′‐デオキシリボース、ベータ‐Ｄ‐１′‐５‐メチル‐ニコチンアミド‐２′‐デオキシリボフラノシド、ベータ‐１′‐４，５‐ジメチル‐ニコチンアミド‐２′‐デ‐オキシリボース、またはベータ‐Ｄ‐１′‐４，５‐ジメチル‐ニコチンアミド‐２′‐デオキシリボフラノシド、ジピリダモール（ｄｉｐｙｒｉｄａｍｏｌｅ）、ＺＭ３３６３７２（３‐（ジメチルアミノ）‐Ｎ‐［３‐［（４‐ヒドロキシベンゾイル）‐アミノ］‐４‐メチルフェニル］ベンザミド）、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、クメストロール（ｃｏｕｍｅｓｔｒｏｌ）、ノルジヒドログアイアレチン酸（ｎｏｒｄｉｈｙｄｒｏｇｕａｉａｒｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）、エスクレチン（ｅｓｃｕｌｅｔｉｎ）、ＳＲＴ‐１７２０（サートリス（Ｓｉｒｔｒｉｓ））、ＳＲＴ‐１４６０（サートリス）、ＳＲＴ‐２１８３（サートリス）、それらのアナログ、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ウイルスを第２の剤と接触させることをさらに含む、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記第２の剤が抗ウイルス剤である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗ウイルス剤がアシクロビル（ａｃｙｃｌｏｖｉｒ）、ドコサノール（ｄｏｃｏｓａｎｏｌ）、リバリビン（ｒｉｂａｒｉｖｉｎ）、インターフェロン等、酢酸セルロース、カーボポール（ｃａｒｂｏｐｏｌ）およびカラゲナン（ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）、プレコナリル（ｐｌｅｃｏｎａｒｉｌ）、アマンチジン（ａｍａｎｔｉｄｉｎｅ）、リマンチジン（ｒｉｍａｎｔｉｄｉｎｅ）、フォミビルセン（ｆｏｍｉｖｉｒｓｅｎ）、ジドブジン（ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ）、ラミブジン（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）、ザナミビル（ｚａｎａｍｉｖｉｒ）、オセルタミビル（ｏｓｅｌｔａｍｉｖｉｒ）、ブリブジン（ｂｒｉｖｕｄｉｎｅ）、アバカビル（ａｂａｃａｖｉｒ）、アデフォビル（ａｄｅｆｏｖｉｒ）、アンプレナビル（ａｍｐｒｅｎａｖｉｒ）、アルビドール（ａｒｂｉｄｏｌ）、アタザナビル（ａｔａｚａｎａｖｉｒ）、アトリプラ（ａｔｒｉｐｌａ）、シドフォビル（ｃｉｄｏｆｏｖｉｒ）、コンビビル（ｃｏｍｂｉｖｉｒ）、エドクスジン（ｅｄｏｘｕｄｉｎｅ）、エファビレンツ（ｅｆａｖｉｒｅｎｚ）、エムトリシタビン（ｅｍｔｒｉｃｉｔａｂｉｎｅ）、エンフビルチド（ｅｎｆｕｖｉｒｔｉｄｅ）、エンテカビル（ｅｎｔｅｃａｖｉｒ）、ファムシクロビル（ｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒ）、フォサムプレナビル（ｆｏｓａｍｐｒｅｎａｖｉｒ）、フォスカルネット（ｆｏｓｃａｒｎｅｔ）、フォスフォネット（ｆｏｓｆｏｎｅｔ）、ガンシクロビル（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）、ガルダシル（ｇａｒｄａｓｉｌ）、イバシタビン（ｉｂａｃｉｔａｂｉｎｅ）、イムノビル（ｉｍｕｎｏｖｉｒ）、イドクスウリジン（ｉｄｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）、イミキモド（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）、インジナビル（ｉｎｄｉｎａｖｉｒ）、イノシン（ｉｎｏｓｉｎｅ）、インテグラーゼ阻害剤、ラミブジン（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）、ロピナビル（ｌｏｐｉｎａｖｉｒ）、ロビリド（ｌｏｖｉｒｉｄｅ）、ｍｋ‐０５１８、マラビロク（ｍａｒａｖｉｒｏｃ）、モロキシジン（ｍｏｒｏｘｙｄｉｎｅ）、ネルフィナビル（ｎｅｌｆｉｎａｖｉｒ）、ネビラピン（ｎｅｖｉｒａｐｉｎｅ）、ネキサビル（ｎｅｘａｖｉｒ）、ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシドアナログ、オセルタミビル、ペンシクロビル（ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）、ペラミビル（ｐｅｒａｍｉｖｉｒ）、ポドフィロトキシン（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎ）、リマンタジン（ｒｉｍａｎｔａｄｉｎｅ）、リトナビル（ｒｉｔｏｎａｖｉｒ）、サキナビル（ｓａｑｕｉｎａｖｉｒ）、スタブジン（ｓｔａｖｕｄｉｎｅ）、テノフォビル（ｔｅｎｏｆｏｖｉｒ）、テノフォビルジソプロキシル（ｔｅｎｏｆｏｖｉｒ  ｄｉｓｏｐｒｏｘｉｌ）、チプラナビル（ｔｉｐｒａｎａｖｉｒ）、トリフルリジン（ｔｒｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、トリジビル（ｔｒｉｚｉｖｉｒ）、トロマンタジン（ｔｒｏｍａｎｔａｄｉｎｅ）、ツルバダ（ｔｒｕｖａｄａ）、バラシクロビル（ｖａｌａｃｉｃｌｏｖｉｒ）、バルガンシクロビル（ｖａｌｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）、ビクリビロク（ｖｉｃｒｉｖｉｒｏｃ）、ビダラビン（ｖｉｄａｒａｂｉｎｅ）、ビラミジン（ｖｉｒａｍｉｄｉｎｅ）、ザルシタビン（ｚａｌｃｉｔａｂｉｎｅ）、モルフォリノオリゴヌクレオチ���、リボザイム、プロテアーゼ阻害剤、アセンブリー阻害剤（例えば、リファムピシン（ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ））、ジドブジン、またはそれらの組み合わせである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記抗ウイルス剤がオセルタミビルである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記細胞が腫瘍細胞である、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記腫瘍細胞がＨＣＭＶに感染している、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記２つ以上のサーチュインが、前記２つ以上のサーチュインのうちの少なくとも１つの遺伝子発現を阻害することにより阻害される、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記サーチュイン遺伝子が表５中に列挙されるサーチュイン遺伝子から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
サーチュイン遺伝子発現が、前記細胞を表３Ａ中に示されるオリゴヌクレオチドと接触させることにより阻害される、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記サーチュイン遺伝子発現が、前記細胞を表３Ａ中に示される配列を含むオリゴヌクレオチドと接触させることにより阻害される、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記サーチュイン遺伝子発現が、前記細胞を表４中に示されるオリゴヌクレオチドと接触させることにより阻害される、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記サーチュイン遺伝子発現が、前記細胞を表４中に示される配列を含むオリゴヌクレオチドと接触させることにより阻害される、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項３７】
前記接触がインビトロである、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記接触がインビボである、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記接触が前記１つ以上の阻害剤を対象に投与することを含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記対象が哺乳動物である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記対象がヒトである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＳＩＲＴ１阻害剤および前記ＳＩＲＴ２阻害剤が同時に投与される、請求項３９〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＳＩＲＴ１阻害剤および前記ＳＩＲＴ２阻害剤が共に調剤される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＳＩＲＴ１阻害剤および前記ＳＩＲＴ２阻害剤が連続して投与される、請求項３９〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記ＳＩＲＴ１阻害剤が前記ＳＩＲＴ２阻害剤の前に投与される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記ＳＩＲＴ１阻害剤が前記ＳＩＲＴ２阻害剤の後に投与される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
ウイルス感染細胞においてサーチュイン遺伝子発現を阻害することを含む、ウイルス生成の増加方法。
【請求項４８】
前記サーチュイン遺伝子が表５中に列挙されるサーチュイン遺伝子から選択される、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記サーチュイン遺伝子がＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２、ＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ６、およびＳＩＲＴ７から選択されるサーチュインを発現する、請求項４７または４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記サーチュインがＳＩＲＴ１またはＳＩＲＴ２でない、請求項４７に記載の方法。
【請求項５１】
サーチュイン遺伝子発現が、前記細胞を表３Ａ中に示されるオリゴヌクレオチドと接触させることにより阻害される、請求項４７〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記サーチュイン遺伝子発現が、前記細胞を表４中に示されるオリゴヌクレオチドと接触させることにより阻害される、請求項４７〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
前記サーチュイン遺伝子発現が、前記細胞を表３Ａ中に示される配列を含むオリゴヌクレオチドと接触させることにより阻害される、請求項４７〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
前記サーチュイン遺伝子発現が、前記細胞を表４中に示される配列を含むオリゴヌクレオチドと接触させることにより阻害される、請求項４７〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
前記サーチュイン遺伝子発現が、前記細胞をドミナントネガティブサーチュイン遺伝子、コード配列またはタンパク質と接触させることにより阻害される、請求項４７〜５２に記載の方法。
【請求項５６】
前記サーチュイン遺伝子発現がトランスジェニック動物からの細胞において阻害される、請求項４７〜５２に記載の方法。
【請求項５７】
前記サーチュイン遺伝子発現が培養細胞内での突然変異性不活性化により阻害される、請求項４７〜５２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルス生成モジュレーターとしてのサーチュインモジュレーターに関する。
［関連出願の相互参照］
２０１１年２月２日出願の米国仮出願第６１／４３８，８４６号、および２０１１年８月２４日出願の米国仮出願第６１／５２７，１０２号の利益を主張し、当該出願はそれらの全体が参照することにより組み入れられる。
【０００２】
［米国政府の権利の申告］
本発明は、それぞれ国立衛生研究所により付与された認可番号ＣＡ８５７８６およびＤＰ１ＤＡ０２６１９２の下、米国政府の支持を伴ってなされたものである。米国政府は本発明において、ある権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
ヒトはＳＩＲＴ１〜７と呼ばれる７つのサーチュインを発現し、それらの全ては保存された中心ＮＡＤ＋結合および触媒ドメインを含む。サーチュインはＮＡＤ＋依存性脱アセチル化酵素およびＡＤＰ‐リボシルトランスフェラーゼである。サーチュインはヒストンおよび他のタンパク質のアシル‐リジン残基を脱アセチル化する。それらがＮＡＤ＋要求性だとすれば、サーチュインは補助因子を生成する経路により調節され、そしてその結果、細胞の代謝状態に応答性である。それらの発現プロファイルは変化し得る一方で、サーチュインは広い組織範囲で遍在して発現される。サーチュインは異なる細胞区画において見られる。ＳＩＲＴ１、６および７は主に核に存在する。ＳＩＲＴ３〜５はミトコンドリアに存在する。そして、ＳＩＲＴ２は主に細胞質に存在する。レスベラトロール（ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ）の如き、サーチュインを活性化する薬物は非常に耐性であるように見える。
【０００４】
レスベラトロールおよびＳＩＲＴ１のウイルスまたはウイルスプロモーターからの発現に対する効果に関していくつかの報告がある。例えば、レスベラトロールは培養細胞において水痘帯状疱疹ウイルス複製を阻害することが報告されている（Ｄｏｃｈｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ ７２，１７１‐７）。レスベラトロールまたはＳＩＲＴ１の過剰発現は培養細胞において行われたトランスフェクション分析においてＨＩＶ‐１  ＬＴＲのトランスアクチベーションを阻害することが報告されている（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ８５，４８４‐９）。レスベラトロール、ＳＲＴ１７２０またはＳＩＲＴ１の過剰発現は培養神経細胞において複製欠損アデノウイルスからの導入遺伝子発現を阻害することが報告されている（Ｐｉｃｃｈｉｏｎｅ  ａｎｄ  Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｊｅｅ，２０１１，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｖｉｒｏｌ，１７，１８４‐８）。そしてＨＩＶ‐１  Ｔａｔタンパク質はＳＩＲＴ１を負に調節することが示されている（Ｋｗｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ  Ｍｉｃｒｏｂｅ  ３，１５８−６７）。
【発明の概要】
【０００５】
ある態様において、本発明は１つ以上のサーチュインアゴニストを含む組成物に関する。サーチュインアゴニストはポリヒドロキシスチルベン化合物、ポリヒドロキシフラボノイド（例えば、フラボン、フラボノール、イソフラボン等）、ポリヒドロキシカルコン化合物、またはそれらの組み合わせであり得る。企図されるアゴニストの特定の例は
【化１】
2014505705.tif 000002
（カルコン）、（式中、ｘおよびｙはそれぞれ０、１、２、３、４、または５であり、そしてｘ＋ｙ≧１である。）、
【化２】
2014505705.tif 000003
（スチルベン）、（式中、ｗおよびｚはそれぞれ０、１、２、３、４、または５であり、そしてｗ＋ｚ≧１である。）、
【化３】
2014505705.tif 000004
（フラボノイド）、（式中、Ｒ1はＨまたはＯＨであり、そしてＲ2は
2014505705.tif 000005
であるまたはＲ1は
2014505705.tif 000006
であり、そしてＲ2はＨまたはＯＨである。ｎおよびｍはそれぞれ０、１、２、３、４、または５であり、ｎ＋ｍ≧１であり、そして点線は選択的な二重結合を示す）を含む。３，５‐ジヒドロキシ‐４′‐クロロ‐トランス‐スチルベン、ジピリダモール（ｄｉｐｙｒｉｄａｍｏｌｅ）、３，５‐ジヒドロキシ‐４′エチル‐トランス‐スチルベン、３，５‐ジヒドロキシ‐４′‐イソプロピル‐トランス‐スチルベン、３，５‐ジヒドロキシ‐４′‐メチル‐トランス‐スチルベン、レスベラトロール、３，５‐ジヒドロキシ‐４′チオメチル‐トランス‐スチルベン、３，５‐ジヒドロキシ‐４′‐カルボメトキシ‐トランス‐スチルベン、イソリキリチゲニン（ｉｓｏｌｉｑｕｉｒｉｔｉｇｅｎｉｎ）、３，５‐ジヒドロ‐４′ニトロ‐トランス‐スチルベン、３，５‐ジヒドロキシ‐４′アジド‐トランス‐スチルベン、ピセタノール（ｐｉｃｅａｔａｎｎｏｌ）、３‐メトキシ‐５‐ヒドロキシ‐４′アセトアミド‐トランス‐スチルベン、３，５‐ジヒドロキシ‐４′アセトキシ‐トランス‐スチルベン、ピノシルビン（ｐｉｎｏｓｙｌｖｉｎ）、フィセチン（ｆｉｓｅｔｉｎ）、（Ｅ）‐１‐（３，５‐ジヒドロフェニル）‐２‐（４‐ピリジル）エテン、（Ｅ）‐１‐（３，５‐ジヒドロフェニル）‐２‐（２‐ナフチル）エテン、３，５‐ジヒドロキシ‐４′‐アセトアミド‐トランス‐スチルベン、ブテイン、クェルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、３，５‐ジヒドロキシ‐４′‐チオエチル‐トランス‐スチルベン、３，５‐ジヒドロキシ‐４′カルボキシ‐トランス‐スチルベン、および／または３，４′‐ジヒドロキシ‐５‐アセトキシ‐トランス‐スチルベンの如き、サーチュイン５アゴニストもまた特に企図される。そのようなアゴニストは米国特許公開公報第２００６／００１４７０５号中に示され、当該出願はその全体が参照することにより組み入れられる。
【０００６】
ある態様において、本発明は１つ以上のサーチュインアンタゴニストまたは２つ以上のサーチュインアンタゴニストを含む組成物に関する。特に企図されるＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２二重阻害剤はカンビノール（ｃａｍｂｉｎｏｌ）、テノビン（ｔｅｎｏｖｉｎ）１、テノビン６、サレルミド（ｓａｌｅｒｍｉｄｅ）、サーチノール（ｓｉｒｔｉｎｏｌ）、およびそれらの組み合わせを含む。ＳＩＲＴ１阻害剤およびＳＩＲＴ２阻害剤を含む組成物もまた企図される。ＳＩＲＴ１阻害剤、ならびにＳＩＲＴ２阻害剤、ＳＩＲＴ３阻害剤、ＳＩＲＴ４阻害剤、ＳＩＲＴ５阻害剤、ＳＩＲＴ６阻害剤、およびＳＩＲＴ７阻害剤を含む群のうちの１つ以上を含む組成物もさらに企図される。ＳＩＲＴ阻害剤はスクリーニング分析をとおして容易に同定される。
【０００７】
１つの態様において、ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２の両方を１つ以上のアンタゴニスト化合物と接触させることを含む、ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２の両方を阻害する方法が本明細書中に開示される。さまざまな場合において、アンタゴニスト（例えば、ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２二重阻害剤またはＳＩＲＴ１阻害剤およびＳＩＲＴ２阻害剤）はカンビノール、テノビン１、テノビン６、サレルミド、サーチノール、もしくはそれらの組み合わせである、あるいは以下に詳述されるような１つ以上の化合物である。ウイルス感染細胞をＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２二重阻害剤またはＳＩＲＴ１阻害剤およびＳＩＲＴ２阻害剤の組み合わせと接触させることを含む、ウイルス生成の阻害方法がさらに開示される。
【０００８】
ウイルス感染細胞を、例えば、ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２、ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ６、ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ７、ＳＩＲＴ２およびＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ２およびＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ２およびＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ２およびＳＩＲＴ６、ＳＩＲＴ２およびＳＩＲＴ７、ＳＩＲＴ３およびＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ３およびＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ３およびＳＩＲＴ６、ＳＩＲＴ３およびＳＩＲＴ７、ＳＩＲＴ４およびＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ４およびＳＩＲＴ６、ＳＩＲＴ４およびＳＩＲＴ７、ＳＩＲＴ５およびＳＩＲＴ６、ＳＩＲＴ５およびＳＩＲＴ７、ならびにＳＩＲＴ６およびＳＩＲＴ７を阻害する、２つ以上のサーチュインの１つ以上の阻害剤と接触させることを含む、ウイルス生成の阻害方法がさらに開示される。３つ以上のサーチュインを阻害する（例えば、非限定的な例はＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２、およびＳＩＲＴ３を阻害する、ＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２、およびＳＩＲＴ５を阻害する、ならびにＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ３、およびＳＩＲＴ５を阻害する）方法もまた開示される。この阻害剤は同じであり得る、あるいは異なり得る（例えば、ＳＩＲＴ２およびＳＩＲＴ３両方に対する阻害剤またはＳＩＲＴ２阻害剤およびＳＩＲＴ３阻害剤）。ウイルス感染細胞を３つ以上のサーチュインの１つ以上の阻害剤と接触させることを含む、ウイルス生成の阻害方法もまた企図される。
【０００９】
ある態様において、本発明はＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２の両方またはそれぞれの活性を減少させる、１つ以上のサーチュインアンタゴニストを含む組成物に関する。いくつかの場合において、この組成物はＳＩＲＴ１アンタゴニストである第１の化合物およびＳＩＲＴ２アンタゴニストである第２の化合物を含む。例えば、ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２、ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ６、ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ７、ＳＩＲＴ２およびＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ２およびＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ２およびＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ２およびＳＩＲＴ６、ＳＩＲＴ２およびＳＩＲＴ７、ＳＩＲＴ３およびＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ３およびＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ３およびＳＩＲＴ６、ＳＩＲＴ３およびＳＩＲＴ７、ＳＩＲＴ４およびＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ４およびＳＩＲＴ６、ＳＩＲＴ４およびＳＩＲＴ７、ＳＩＲＴ５およびＳＩＲＴ６、ＳＩＲＴ５およびＳＩＲＴ７、ならびにＳＩＲＴ６およびＳＩＲＴ７を阻害する、２つ以上のサーチュインの阻害剤を含む組成物がさらに開示される。３つ以上のサーチュインの阻害剤（例えば、非限定的な例はＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２、およびＳＩＲＴ３阻害剤、ＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２、およびＳＩＲＴ５阻害剤、ならびにＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ３、およびＳＩＲＴ５阻害剤を含む）を含む組成物もまた特に開示される。この阻害剤は同じであり得る、あるいは異なり得る（例えば、ＳＩＲＴ２およびＳＩＲＴ３両方に対する阻害剤またはＳＩＲＴ２阻害剤およびＳＩＲＴ３阻害剤）。
【００１０】
ある態様において、本発明は本明細書中の組成物のうちのいずれかおよび医薬として許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【００１１】
ある態様において、本発明は本明細書中の組成物または医薬組成物のうちのいずれかを対象、例えば、ウイルス感染またはウイルス感染に関連する障害を患う対象に投与することを含む、疾患の治療方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
本発明の好ましい実施形態の以下の詳細な説明は付属の図面と関連して読まれるとき、より良く理解されるであろう。本発明を例示する目的のために、図面中に現時点で好ましい実施形態が示される。しかしながら、本発明は示される正確な組み合わせ方および手段に限定されないことが理解される。図面において、
【図１】サーチュインの阻害が感染性ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）後代の生成を高めることを示す。
【図２】使用されたｓｉＲＮＡが標的サーチュインＲＮＡの値を有効に減少させたことを示す。
【図３】サーチュインアゴニストが感染性ＨＣＭＶ後代の生成を阻害することを示す。
【図４】ＳＩＲＴ１アンタゴニストは感染性ウイルスの生成を高め、その一方で、ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２両方のアンタゴニストは感染性ＨＣＭＶ後代の生成を阻害することを示す。
【図５】ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２二重阻害剤テノビン‐６（左パネル）およびサレルミド（右パネル）がＨＣＭＶの生成を阻害することを示す。
【図６】二重ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２阻害剤（サレルミド）によるＨＣＭＶ複製の阻害はｐ５３を要求することを示す。右パネル：ｐ５３  ｓｈＲＮＡ（ｓｈｐ５３  ＭＲＣ５）または非標的ｓｈＲＮＡ（ＮＴ  ＭＲＣ５）のいずれかを安定的に発現するＭＲＣ５細胞を０．５ＩＵ／細胞の多重度でＡＤ１６９  ＨＣＭＶ株に感染させた。２ｈｐｉで、細胞をＤＭＳＯ中の５０μＭサレルミドまたはＤＭＳＯ単独のいずれかで処理した。この処理を４８ｈｐｉで繰り返した。９６ｈｐｉで、ウイルスを含む上清を回収し、そしてＨＣＭＶタイターをＭＲＣ５細胞において感染中心分析を用いて決定した。この結果は生物学的二重法の代表値である。左パネル：ｓｈｐ５３細胞系におけるｐ５３のノックダウンをウェスタンブロットにより確認した。
【図７】サーチュインの阻害が感染性単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ１）、アデノウイルス５型（Ａｄ５）およびＡ型インフルエンザ（ＦｌｕＡ）後代の生成を高めることを示す。ＭＲＣ５線維芽細胞を７つのサーチュインのそれぞれを標的にするｓｉＲＮＡ（ＨＣＭＶ分析におけるそれらの活性に基づいて最も強いｓｉＲＮＡ）に感染させた。７２時間後、細胞を細胞当たり１感染単位の多重度でＨＳＶ１  ＫＯＳ株に感染させ、そしてさらなる２２時間後、上清を回収し、そしてウイルス収率をＭＲＣ５細胞において感染中心分析により決定した（上パネル）。７２時間後、細胞を細胞当たり５感染単位の多重度でＡｄ５に感染させ、そしてさらなる７２時間後、上清を回収し、そしてウイルス収率をＨｅＬａ細胞において感染中心分析により決定した（中間パネル）。７２時間後、細胞を細胞当たり０．５感染単位の多重度でインフルエンザＷＳＮ／３３／Ａ株に感染させ、そしてさらなる２２時間後、上清を回収し、そしてウイルス収率をＭＤＣＫ細胞においてＴＣＩＤ５０分析により決定した（下パネル）。
【図８】二重Ｓｉｒｔ１／Ｓｉｒｔ２阻害剤、カンビノールおよびサレルミドが感染性Ａ型インフルエンザ後代の生成をブロックすることを示す。ＭＲＣ５線維芽細胞およびＭＤＣＫ細胞を０．０１ＴＣＩＤ50／細胞の多重度でインフルエンザＷＳＮ／３３／Ａ株にまたは０．１ＴＣＩＤ50／細胞の多重度でＰＲ８株に感染させた。細胞の培地を１ｈｐｉで溶媒（ＤＭＳＯ）または溶媒中に溶解された薬物を含む新しい培地と置換し、そしてＡ型インフルエンザの産生をＭＤＣＫ細胞についての標準ＴＣＩＤ50法により２４ｈｐｉで決定した。市販のノイラミニダーゼ阻害剤、オセルタミビル（ｏｓｅｌｔａｍｉｖｉｒ）（ＴａｍｉＦｌｕ（登録商標））を分析において試験された化合物の有効性についての比較対象として使用した。
【図９】二重Ｓｉｒｔ１／Ｓｉｒｔ２阻害剤、カンビノールがオセルタミビルと共に協同して、感染性Ａ型インフルエンザ後代の生成をブロックすることを示す。ＭＤＣＫ細胞を０．００１ＴＣＩＤ50／細胞の多重度でインフルエンザＷＳＮ／３３／Ａ株に感染させた。細胞の培地を１ｈｐｉで溶媒（ＤＭＳＯ）または溶媒中に溶解された薬物を含む新しい培地と置換し、そしてＡ型インフルエンザの産生をＭＤＣＫ細胞についての標準のＴＣＩＤ50法により２４ｈｐｉで決定した。
【図１０】ＳＩＲＴ１アンタゴニストは感染性アデノウイルス（Ａｄ５）後代の生成を高めるが、二重ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２アンタゴニストはその後代の生成をブロックすることを示す。ＭＲＣ５線維芽細胞を５ＩＵ／細胞の多重度でＡｄ５に感染させた。細胞の培地を２ｈｐｉで溶媒（ＤＭＳＯ）または溶媒中に溶解された薬物を含む新しい培地と置換し、そしてＡｄ５の産生を７２ｈｐｉで決定した。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
ある用語は便利のためにのみ以下の記述において使用され、そして限定ではない。単語「右」、「左」、「上」、および「下」は引用がなされる図面における方向を示す。
【００１４】
請求項中でおよび明細書の対応する部分で使用されるとき、単語「ａ」および「ｏｎｅ」は特に別段の定めなき限り、引用された項目のうちの１つ以上を含むと定義される。この用語は上記に特に挙げられる単語、それらの派生語、および同様の意味の単語を含む。「Ａ、Ｂ、またはＣ」の如き２つ以上の項目のリストに続く句「少なくとも１つの」はＡ、Ｂ、またはＣのうちのいずれかの個々の１つおよびそれらのいずれかの組み合わせを意味する。
【００１５】
図１を参照して、ＭＲＣ５線維芽細胞を７つのサーチュインのそれぞれを標的にする３つの異なるｓｉＲＮＡでトランスフェクトした。２４時間後、細胞を０．５ＩＵ／細胞の多重度でＨＣＭＶ  ＡＤ１６９株に感染させ、そしてＨＣＭＶの産生を９６ｈｐｉで決定した。サンプル１（各ｓｉＲＮＡラベルの上の左の棒）およびサンプル２（各ｓｉＲＮＡラベルの上の右の棒）は２つの独立したノックダウン実験を示す。示されるように、７つのサーチュインのそれぞれのｓｉＲＮＡ仲介阻害は培養線維芽細胞においてＨＣＭＶ後代の生成を増加させる。
【００１６】
図２について、ＭＲＣ５細胞を示されるｓｉＲＮＡでトランスフェクトした。２４時間後、細胞を０．５ＩＵ／細胞の多重度でＨＣＭＶ  ＡＤ１６９株に感染させ、そして７２ｈｐｉでサーチュインＲＮＡの値を比較対象としてＧＡＰＤＨを用いることにより定量的ＲＴ‐ｑＰＣＲにより決定した。各サーチュインについてウイルス産生における最も大きな増加を引き起こしたｓｉＲＮＡにより誘導されるノックダウンの値を定量的ＲＴ‐ＰＣＲによりモニターし、そしてｓｉＲＮＡのそれぞれは標的にされたＲＮＡの値を減少させることが証明された。
【００１７】
図３について、ＭＲＣ５線維芽細胞を０．２５ＩＵ／細胞の多重度でＧＦＰタグ付きｐＵＬ９９（遅延ウイルスＵＬ９９遺伝子の産物）を発現するＨＣＭＶ変異体に感染させた。感染４時間後、細胞を示される濃度のレスベラトロール、ＣＡＹ１０６０２、またはそれらの薬物が溶解された担体（エタノールまたはＤＭＳＯ）で処理した。感染９６時間後のウイルス産生を、線維芽細胞を感染させ、そして２４時間後に免疫蛍光法によりＩＥ１発現を分析することにより決定した。１００μＭレスベラトロールまたは２５μＭ  ＣＡＹ１０６０２での処理は検出限界以下（＜１０2ＩＵ／ｍｌ）までウイルス産生を減少させた。
【００１８】
図４について、ＭＲＣ５線維芽細胞を０．２５ＩＵ／細胞の多重度でＧＦＰタグ付きｐＵＬ９９（遅延ウイルスＵＬ９９遺伝子の産物）を発現するＨＣＭＶ変異体に感染させた。感染２時間後、細胞を示される濃度のＳＩＲＴ１阻害剤、ＥＸ‐５２７、二重ＳＩＲＴ１および２阻害剤、カンビノール、またはそれらの薬物が溶解された担体（ＤＭＳＯ）で処理した。感染９６時間後のウイルス産生を、線維芽細胞を感染させ、そして２４時間後に免疫蛍光法によりＩＥ１発現を分析することにより決定した。５０μＭカンビノールでの処理は検出限界以下（＜１０2ＩＵ／ｍｌ）までウイルス産生を減少させた。
【００１９】
これらの結果は、サーチュインファミリーの全てのメンバーがＨＣＭＶ複製を阻害することを示し、そしてそれらは、サーチュインの活性を増加させる薬物（サーチュインアゴニスト）が抗ＨＣＭＶ活性を有するであろうことを強く予測する。ミトコンドリアのサーチュイン、ＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ４、およびＳＩＲＴ５がｓｉＲＮＡにより阻害されたとき、ＨＣＭＶ複製に対する最も顕著な効果が観察された（図１）。これらの酵素は中心炭素代謝を担う鍵となる因子を調節する。例えば、グルタミンをアルファ‐ケトグルタル酸に変換することによりグルタミン流動をトリカルボン酸（ＴＣＡ）サイクルに方向付けるグルタミン酸デヒドロゲナーゼはＳＩＲＴ３および４により標的化される。顕著なことに、グルタミンはＨＣＭＶ感染細胞においてＴＣＡサイクルに供給される主要な炭素源であり、そしてＨＣＭＶ複製に必須である。これらの結果はミトコンドリアサーチュインのアクチベーターは抗ウイルス治療の優先的な標的であることを示す。
【００２０】
１つ以上のサーチュインの活性化は１つの実施形態である。１つ以上のミトコンドリアサーチュインの活性化は１つの実施形態である。サーチュイン活性を増加させる化合物は本明細書中でサーチュインアゴニストと呼ばれる。この化合物は小分子、核酸、タンパク質、またはペプチドであり得る。企図される特定のサーチュインアゴニストはスチルベン、フラボン、イソフラボン、フラバノン、カテキン、フリーラジカル保護化合物、イソニコチンアミド、ジピリダモール、ＺＭ  ３３６３７２（３‐（ジメチルアミノ）‐Ｎ‐［３‐［（４‐ヒドロキシベンゾイル）‐アミノ］‐４‐メチルフェニル］ベンズアミド）、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、クメストロール（ｃｏｕｍｅｓｔｒｏｌ）、ノルジヒドログアイアレチン酸（ｎｏｒｄｉｈｙｄｒｏｇｕａｉａｒｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）、エスクレチン（ｅｓｃｕｌｅｔｉｎ）、ＳＲＴ‐１７２０（サートリス（Ｓｉｒｔｒｉｓ））、ＳＲＴ‐１４６０（サートリス）、ＳＲＴ‐２１８３（サートリス）、それらのアナログ、またはそれらの組み合わせを含む。
【００２１】
いくつかの実施形態において、サーチュインアゴニストはスチルベンである。いくつかの実施形態において、スチルベンはトランス‐スチルベン、シス‐スチルベン、レスベラトロール、ピセタノール、ラポンチン（ｒｈａｐｏｎｔｉｎ）、デオキシラポンチン、ブテイン（ｂｕｔｅｉｎ）、またはそれらの組み合わせである。
【００２２】
いくつかの実施形態において、アゴニストはカルコンである。いくつかの実施形態において、カルコンはカルコン、イソリキリチゲニン、ブテイン、４，２′，４′‐トリヒドロキシカルコン、３，４，２′，４′，６′‐ペンタヒドロキシカルコン、またはそれらの組み合わせである。
【００２３】
いくつかの実施形態において、そのアゴニストはフラボンである。いくつかの実施形態において、フラボンはフラボン、モリン（ｍｏｒｉｎ）、フィセチン、ルテオリン（ｌｕｔｅｏｌｉｎ）、クェルセチン、ケンプフェロール（ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ）、アピゲニン（ａｐｉｇｅｎｉｎ）、ゴシペチン（ｇｏｓｓｙｐｅｔｉｎ）、ミリセチン（ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）、６‐ヒドロキシアピゲニン、５‐ヒドロキシフラボン、５，７，３′，４′，５′‐ペンタヒドロキシフラボン、３，７，３′，４′，５′‐ペンタヒドロキシフラボン、３，６，３′，４′‐テトラヒドロキシフラボン、７，３′，４′，５′‐テトラヒドロキシフラボン、３，６，２′，４′‐テトラヒドロキシフラボン、７，４′‐ジヒドロキシフラボン、７，８，３′，４′‐テトラヒドロキシフラボン、３，６，２′，３′‐テトラヒドロキシフラボン、４′‐ヒドロキシフラボン、５‐ヒドロキシフラボン、５，４′‐ジヒドロキシフラボン、５，７‐ジヒドロキシフラボン、またはそれらの組み合わせである。
【００２４】
いくつかの実施形態において、そのアゴニストはイソフラボンである。いくつかの実施形態において、イソフラボンはダイゼイン（ｄａｉｄｚｅｉｎ）、ゲニステイン（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）、またはそれらの組み合わせである。
【００２５】
いくつかの実施形態において、そのアゴニストはフラバノンである。いくつかの実施形態において、フラバノンはナリンゲニン（ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ）、フラバノン、３，５，７，３′，４′‐ペンタヒドロキシフラバノン、またはそれらの組み合わせである。
【００２６】
いくつかの実施形態において、そのアゴニストはアントシアニジンである。いくつかの実施形態において、アントシアニジンは塩化ペラルゴニジン（ｐｅｌａｒｇｏｎｉｄｉｎ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、塩化シアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、塩化デルフィニジン（ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、またはそれらの組み合わせである。
【００２７】
いくつかの実施形態において、そのアゴニストはカテキンである。いくつかの実施形態において、カテキンは（−）‐エピカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′）、（−）‐カテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′）、（−）‐ガロカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′，５′）、（＋）‐カテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′）、（＋）‐エピカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′）、またはそれらの組み合わせである。
【００２８】
いくつかの実施形態において、そのアゴニストはフリーラジカル保護化合物である。いくつかの実施形態において、そのフリーラジカル保護化合物はヒノキチオール（Ｈｉｎｏｋｉｔｉｏｌ）（ｂ‐ツジャプリシン（Ｔｈｕｊａｐｌｉｃｉｎ）、２‐ヒドロキシ‐４‐イソプロピル‐２，４，６‐シクロヘプタトリエン‐１‐オン）、Ｌ‐（＋）‐エルゴチオネイン（Ｅｒｇｏｔｈｉｏｎｅｉｎｅ）（（Ｓ）‐ａ‐カルボキシ‐２，３‐ジヒドロ‐Ｎ，Ｎ，Ｎ‐トリメチル‐２‐チオキソ‐１Ｈ‐イミダゾール４‐エタナム‐イニウム分子内塩）、コーヒー酸フェニルエステル、ＭＣＩ‐１８６（３‐メチル‐１‐フェニル‐２‐ピラゾリン‐５‐オン）、ＨＢＥＤ（Ｎ，Ｎ′‐Ｄｉ‐（２‐ヒドロキシベンジル）エチレンジアミン‐Ｎ，Ｎ′‐二酢酸  水）、アンブロキソール（Ａｍｂｒｏｘｏｌ）（トランス‐４‐（２‐アミノ‐３，５‐ジブロモベンジルアミノ）シクロヘキサン‐ＨＣｌ、およびＵ‐８３８３６Ｅ（（‐）‐２‐（（４‐（２，６‐ジ‐１‐ピロリジニル‐４‐ピリミジニル）‐１‐ピペラジニル）ｍ‐エチル）‐３，４‐ジヒドロ‐２，５，７，８‐テトラメチル‐２Ｈ‐１‐ベンゾピラン‐６‐オール２ＨＣｌ）、またはそれらの組み合わせである。
【００２９】
いくつかの実施形態において、そのアゴニストはイソニコチンアミドまたはイソニコチンアミドのアナログである。いくつかの実施形態において、イソニコチンアミドのアナログはベータ‐１′‐５‐メチル‐ニコチンアミド‐２′‐デオキシリボース、ベータ‐Ｄ‐１′‐５‐メチル‐ニコ‐チンアミド‐２′‐デオキシリボフラノシド、ベータ‐１′‐４，５‐ジメチル‐ニコチンアミド‐２′‐デ‐オキシリボース、またはベータ‐Ｄ‐１′‐４，５‐ジメチル‐ニコチンアミド‐２′‐デオキシリボフラノシドである。イソニコチンアミドの追加のアナログについては、米国特許第５，９８５，８４８号、同第６，０６６，７２２号、同第６，２２８，８４７号、同第６，４９２，３４７号、同第６，８０３，４５５号、および米国特許公開公報第２００１／００１９８２３号、同第２００２／００６１８９８号、同第２００２／０１３２７８３号、同第２００３／０１４９２６１号、同第２００３／０２２９０３３号、同第２００３／００９６８３０号、同第２００４／００５３９４４号、同第２００４／０１１０７７２号、および同第２００４／０１８１０６３号を参照のこと。当該出願はそれらの開示が参照することにより本明細書に組み入れられる。
【００３０】
サーチュインアゴニストのさらなる例はトランス‐スチルベン、シス‐スチルベン、レスベラトロール、ピセタノール、ラポンチン、デオキシラポンチン、ブテイン、カルコン、イソリキリチゲニン、ブテイン、４，２′，４′‐トリヒドロキシカルコン、３，４，２′，４′，６′‐ペンタヒドロキシカルコン、フラボン、モリン、フィセチン、ルテオリン、クェルセチン、ケンプフェロール、アピゲニン、ゴシペチン、ミリセチン、６‐ヒドロキシアピゲニン、５‐ヒドロキシフラボン、５，７，３′，４′，５′‐ペンタヒドロキシフラボン、３，７，３′，４′，５′‐ペンタヒドロキシフラボン、３，６，３′，４′‐テトラヒドロキシフラボン、７，３′，４′，５′‐テトラヒドロキシフラボン、３，６，２′，４′‐テトラヒドロキシフラボン、７，４′‐ジヒドロキシフラボン、７，８，３′，４′‐テトラヒドロキシフラボン、３，６，２′，３′‐テトラヒドロキシフラボン、４′‐ヒドロキシフラボン、５‐ヒドロキシフラボン、５，４′‐ジヒドロキシフラボン、５，７‐ジヒドロキシフラボン、ダイゼイン、ゲニステイン、ナリンゲニン、フラバノン、３，５，７，３′，４′  ‐ペンタヒドロキシフラバノン、塩化ペラルゴニジン、塩化シアニジン、塩化デルフィニジン、（−）‐エピカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′）、（−）‐カテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′）、（−）‐ガロカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′，５′）、（＋）‐カテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′）、（＋）‐エピカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′）、ヒノキチオール（ｂ‐ツジャプリシン、２‐ヒドロキシ‐４‐イソプロピル‐２，４，６‐シクロヘプタトリエン‐１‐オン）、Ｌ‐（＋）‐エルゴチオネイン（（Ｓ）‐ａ‐カルボキシ‐２，３‐ジヒドロ‐Ｎ，Ｎ，Ｎ‐トリメチル‐２‐チオキソ‐１Ｈ‐イミダゾール４‐エタナム‐イニウム分子内塩）、コーヒー酸フェニルエステル、ＭＣＩ‐１８６（３‐メチル‐１‐フェニル‐２‐ピラゾリン‐５‐オン）、ＨＢＥＤ（Ｎ，Ｎ′‐ジ‐（２‐ヒドロキシベンジル）エチレンジアミン‐Ｎ，Ｎ′  ‐ジ酢酸  水）、アンブロキソール（トランス‐４‐（２‐アミノ‐３，５‐ジブロモベンジルアミノ）シクロヘキサン‐ＨＣｌ、およびＵ‐８３８３６Ｅ（（−）‐２‐（（４‐（２，６‐ジ‐１‐ピロリジニル‐４‐ピリミジニル）‐１‐ピペラジニル）ｍ‐エチル）‐３，４‐ジヒドロ‐２，５，７，８‐テトラメチル‐２Ｈ‐１‐ベンゾピラン‐６‐オール  ２ＨＣｌ）、ベータ‐１′  ‐５‐メチル‐ニコチンアミド‐２′‐デオキシリボース、ベータ‐Ｄ‐１′‐５‐メチル‐ニコ‐チンアミド‐２′‐デオキシリボフラノシド、ベータ‐１′‐４，５‐ジメチル‐ニコチンアミド‐２′‐デ‐オキシリボース、またはベータ‐Ｄ‐１′  ‐４，５‐ジメチル‐ニコチンアミド‐２′  ‐デオキシリボフラノシド、ジピリダモール、ＺＭ  ３３６３７２（３‐（ジメチルアミノ）‐Ｎ‐［３‐［（４‐ヒドロキシベンゾイル）‐アミノ］‐４‐メチルフェニル］ベンザミド）、カンプトテシン、クメストロール、ノルジヒドログアイアレチン酸、エスクレチン、Ｓ��Ｔ‐１７２０（サートリス）、ＳＲＴ‐１４６０（サートリス）、ＳＲＴ‐２１８３（サートリス）、それらのアナログ、またはそれらの組み合わせを含む。
【００３１】
サーチュインの抗ＨＣＭＶ標的としての重要性をさらに調査するために、既知のサーチュイン活性化化合物のＨＣＭＶ複製に対する効果を分析した。さまざまなそのような小分子ＳＩＲＴ１活性化化合物（ＳＴＡＣｓ）が文献（概略についてはＣａｍｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ １７９９，  ７４０‐９を参照のこと。当該出願は参照することにより全体が記載されているかのように本明細書に組み入れられる）中に示されている（以下の表１）。表１中に列挙される化合物に加えて、ジヒドロピリジンおよびイミダゾール‐［１，２‐ｂ］チアゾール誘導体が新規ＳＩＲＴ１アゴニストとして最近同定されている（Ｍｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，  ５２，５４９６‐５０４，当該出願は参照することにより全体が記載されているかのように本明細書に組み入れられる）。ＳＲＴ１７２０は
2014505705.tif 000007
の構造を有する。
ＳＲＴ１４６０は
2014505705.tif 000008
の構造を有する。
【表１】
2014505705.tif 000009
EC1.5：１．５倍活性化するための濃度
*この濃度で２３３％活性化
【００３２】
いくつかの植物において天然に見られるポリフェノールであるレスベラトロールはおそらく最もよく研究されているＳＩＲＴ１アゴニストである。それはＳＩＲＴ１活性を４６μＭ濃度で１．５倍、および１００μＭで１３倍増加させる（Ｈｏｗｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎａｔｕｒｅ  ４２５，１９１‐６）。レスベラトロールは１００μＭでＳＩＲＴ２を活性化しないので、それはＳＩＲＴ１選択的である。ＨＣＭＶ複製に対するその効果を評価するために、その化合物を１０％ウシ胎児血清を含むＨＣＭＶ感染ＭＲＣ５細胞の培養培地に感染４時間後に添加した。レスベラトロールはＨＣＭＶの細胞変性効果を阻害し、そして遅延ウイルスｐＵＬ９９の発現は用量依存的様式で実質的に減少された（データは示されていない）。その化合物は感染性ＨＣＭＶの産生を５０μＭで１８倍超、および１００μＭで１００倍超の係数で減少させた（図３）。
【００３３】
レスベラトロールはＨＣＭＶ複製を阻害することが以前に報告されている（Ｅｖｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ  ６３，８５‐９５）。詳細には、レスベラトロールはウイルス結合およびエントリーのみを阻害することが結論付けられた。対照的に、本明細書中の研究は、ＳＩＲＴ１（レスベラトロールの主要な標的）を含む７つのサーチュインのそれぞれの調節はウイルス複製に影響し、およびそれゆえ、異なる既知のサーチュイン活性のうちのいずれか１つの誘導はＨＣＭＶ後代の生成を阻害するであろうことを予測し得ることを初めて示したものである。
【００３４】
ＳＩＲＴ１活性化のＨＣＭＶに対する抗ウイルス効果は第２のＳＩＲＴ１活性化化合物、ＣＡＹ１０６０２を使用することによりさらに確認され、その化合物は構造：
【化４】
2014505705.tif 000010
を有し、そして構造的にレスベラトロールとは区別される。ＣＡＹ１０６０２はハイスループットスクリーニングにおいてＳＩＲＴ１特異的基質のＳＩＲＴ１仲介脱アセチル化を増加させる化合物として同定され、そしてＳＩＲＴ１の非常に強いアクチベーターである。それはＳＩＲＴ１の活性化に関連するプロセスである腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦアルファ）放出を、レスベラトロールより１０倍強く抑制する。これに従って、ＣＡＹ１０６０２は強い抗ＨＣＭＶ効果を示した。２５μＭで、ＣＡＹ１０６０２はｐＵＬ９９発現をほとんど完全に阻害し、そして感染性ＨＣＭＶの産生を検出限界未満まで減少させた（図３）。これらの結果は、ＳＩＲＴ１を活性化する化合物は感染性ＨＣＭＶの生成をブロックし、そしてそれゆえ、ＨＣＭＶ感染の治療において抗ウイルス薬としての利用性を有することを示す。
【００３５】
次に、ｓｉＲＮＡ実験において観察されたサーチュインの抗ウイルス効果をさらに確認するために、１または複数のサーチュインの活性をブロックする小分子阻害剤をＨＣＭＶ複製に対する効果について評価した。本明細書中で使用されるとき、用語「サーチュインアンタゴニスト」または「サーチュイン阻害剤」はサーチュイン活性を減少させる化合物を言う。その化合物は小分子、核酸、タンパク質、またはペプチドであり得る。いくつかの実施形態において、そのサーチュインアンタゴニストは２つのサーチュインの活性を減少させるその能力について言う、二重アンタゴニストである。より詳細には、非限定的に、カンビノール、テノビン６、テノビン１、サレルミド、サーチノール、およびそれらの組み合わせを含む、ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２二重阻害剤が本明細書中で開示される。ＳＩＲＴ１阻害剤およびＳＩＲＴ２阻害剤の組み合わせが本明細書中でさらに開示される。
【００３６】
いくつかのサーチュイン阻害剤が文献中で報告されている。これらのうち、ＥＸ‐５２７はＳＩＲＴ１に非常に選択的であり（Ｓｏｌｏｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ２６，２８‐３８）、構造
2014505705.tif 000011
を有する。別のＳＩＲＴ１阻害剤は構造
2014505705.tif 000012
を有する（Ｓ）‐３５である。
【００３７】
カンビノールはＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２両方のＮＡＤ依存的脱アセチル化酵素活性を阻害する（Ｈｅｌｔｗｅｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ ６６，４３６８‐７７）。ｓｉＲＮＡ仲介ＳＩＲＴ１ノックダウンの表現型を支持して、１０μＭのＥＸ‐５２７はＭＲＣ５線維芽細胞において〜４倍の係数で遅延ウイルスｐＵＬ９９タンパク質の蓄積（データは示されていない）および感染性ＨＣＭＶ後代の生成を増加させた（図４）。
【００３８】
2014505705.tif 000013
の構造を有する二重ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２阻害剤、カンビノールは５０μＭでｐＵＬ９９蓄積の実質的なブロックを示し（データは示されていない）、そして感染性ＨＣＭＶの産生はこの薬物濃度で検出限界未満（＜１０2ＩＵ／ｍｌ）であった（図４）。カンビノールはマウスで非常に耐性であり、そしてバーキットリンパ腫異種移植片を阻害する。二重ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２阻害剤、テノビン‐６およびサレルミドもまた感染性ＨＣＭＶの生成をブロックする（図５）。ＳＩＲＴ１および２をブロックすることにより、カンビノール、テノビン‐６およびサレルミドはストレス中のｐ５３の活性化のために必要とされるｐ５３腫瘍抑制タンパク質の過アセチル化を誘導する。ｐ５３は細胞周期制御において主な役割を果たし、それはウイルス誘導アポトーシスに寄与し、そしてそれは抗ウイルス防御を誘導するＩ型インターフェロンの直接的なアクチベーターである。いくつかのウイルスは効率的な複製のためにｐ５３の不活性化を要求する。それゆえ、これらの結果は、複数のＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２阻害剤は抗ウイルス活性を有することを示し、そして二重ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２阻害剤はＨＣＭＶおよびｐ５３の不活性化を要求する他のウイルスを阻害するあるクラスの新規抗ウイルス剤を構成することを強く予測する。非限定的な例の阻害剤のリストは表２中に示される。テノビン１は
2014505705.tif 000014
の構造を有する。テノビン６は
2014505705.tif 000015
の構造を有する。サレルミドは
2014505705.tif 000016
の構造を有する。サーチノールは
2014505705.tif 000017
の構造を有する。
【表２】
2014505705.tif 000018
【００３９】
二重ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２阻害剤は部分的にはサーチュインの阻害する能力をブロックし、およびその結果、腫瘍抑制タンパク質ｐ５３を活性化することによりはたらくと考えられている（Ｈｅｌｔｗｅｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００６およびその中の引用文献を参照のこと）。それゆえ、二重ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２阻害剤がＨＣＭＶ後代の生成を阻害するために、ｐ５３活性が必要とされるかどうかを試験した（図６）。結果は、サレルミドはｐ５３を発現する細胞においてＨＣＭＶ後代の生成をほぼ８０の係数で阻害したことを示した。対照的に、その薬物はｐ５３値がｐ５３特異的ｓｈＲＮＡでのノックダウンにより実質的に減少された細胞において、ＨＣＭＶ生成をたったの約５の係数でしか阻害しなかった。この観察は、二重ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２阻害剤は少なくとも部分的にはｐ５３依存的機構をとおしてＨＣＭＶ生成を阻害することを明らかにする。多くのウイルスはそれらの複製の成功のための策の一部としてｐ５３の活性をブロックすることが知られている。そのブロックはｐ５３活性を阻害するウイルスタンパク質との相互作用によるまたはアセチル化状態における変化を含むｐ５３の翻訳後修飾による、細胞ｐ５３の実質的な一部の分解により達成され得る。二重ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２阻害剤は残留活性ｐ５３の過剰活性化または不活性化ｐ５３の再活性化のいずれかによりそのブロックを緩和し得る。それゆえ、ｐ５３の役割の提示は、ｐ５３を不活性化するいずれのウイルスも二重ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２阻害剤に感受性であろうことを予測する。ｐ５３を不活性化する企図されるウイルスは、非限定的に、アデノウイルス科（ｐ５３不活性化タンパク質としてＥ１Ｂ‐５５Ｋを有するアデノウイルス）、ヘパドナウイルス科（ｐ５３不活性化タンパク質としてＸタンパク質を有するＨＢＶ）、ヘルペスウイルス科（ｐ５３不活性化タンパク質としてＬＭＰ１を有するＥＢＶ、ｐ５３不活性化タンパク質としてＩＣＰ０を有するＨＳＶ‐１、ｐ５３不活性化タンパク質としてＩＥ１を有するＨＣＭＶ、ｐ５３不活性化タンパク質としてＬＡＮＡを有するＫＳＨＶ）、フラビウイルス科（ｐ５３不活性化タンパク質としてＮＳ５Ａを有するＨＣＶ）、オルトミクソウイルス科（ｐ５３不活性化タンパク質としてＮＳ１を有するＡ型インフルエンザ）、パピローマウイルス科（ｐ５３不活性化タンパク質としてＥ６を有するＨＰＶ）、ポリオーマウイルス科（ｐ５３不活性化タンパク質としてラージＴ‐抗原を有するＳＶ４０、ｐ５３不活性化タンパク質としてラージＴ‐抗原を有するＪＣウイルス、ｐ５３不活性化タンパク質としてラージＴ‐抗原を有するＢＫウイルス）、およびレトロウイルス科（ｐ５３不活性化タンパク質としてＴａｔを有するＨＩＶ）を含む。
【００４０】
二重ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２阻害剤（または２つ以上のサーチュインの阻害剤）に加えて、サーチュインの二重の阻害を達成するために、２つのサーチュイン阻害剤、例えば、ＳＩＲＴ１阻害剤およびＳＩＲＴ２阻害剤、またはＳＩＲＴ１阻害剤およびＳＩＲＴ３阻害剤、またはＳＩＲＴ２阻害剤およびＳＩＲＴ３阻害剤、または上記に開示されるようなサーチュイン阻害剤の他の組み合わせの組み合わせ投与がさらに企図される。
【００４１】
ＳＩＲＴ１阻害剤は上記に示されるＥＸ‐５２７および（Ｓ）‐３５、ならびに構造
2014505705.tif 000019
を有するＨＲ７３を含む。ＳＩＲＴ２阻害剤は構造
2014505705.tif 000020
を有する、Ｒｏ３１‐８２２０を含む。
【００４２】
企図される他のサーチュイン阻害剤は、以下のものを含むが、スラミンを特に除く（例えば、Ｔｒａｐｐ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，  ２：１４１９−１４３１  （２００７）を参照のこと）。
【化５】
2014505705.tif 000021
【化６】
2014505705.tif 000022
【化７】
2014505705.tif 000023
【化８】
2014505705.tif 000024
【化９】
2014505705.tif 000025
【００４３】
さらに企図されるサーチュイン阻害剤は、以下のものを含む（例えば、Ｍｅｄｄａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５２：２６７３−２６８２（２００９）を参照のこと）。
【化１０】
2014505705.tif 000026
2014505705.tif 000027
【００４４】
ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２阻害剤としてまた企図されるものは、以下のものである（例えば、Ｎａｐｐｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４８：８０４５‐８０５４  （２００５）を参照のこと）。
【化１１】
2014505705.tif 000028
【化１２】
2014505705.tif 000029
【００４５】
以下の構造を有するサーチュイン阻害剤がさらに企図される（例えば、Ｂｏｄｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，１０３（１１）：４２４６‐４２５１（２００６）およびＯｕｔｅｉｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３１７：５１６‐５１９（２００７）を参照のこと）。
【化１３】
2014505705.tif 000030
【００４６】
以下の構造を有するサーチュイン阻害剤もまた企図される（例えば、Ｋｉｖｉｒａｎｔａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４９（２６）：７９０７（２００６）を参照のこと）。
【化１４】
2014505705.tif 000031
【化１５】
2014505705.tif 000032
【化１６】
2014505705.tif 000033
【化１７】
2014505705.tif 000034
【００４７】
以下に示されるようなサーチュイン阻害剤がさらに企図される（例えば、Ｓａｎｄｅｒｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１７（１９）：７０３１‐７０４１（２００９）を参照のこと）。
【化１８】
2014505705.tif 000035
【化１９】
2014505705.tif 000036
【化２０】
2014505705.tif 000037
【化２１】
2014505705.tif 000038
【化２２】
2014505705.tif 000039
【００４８】
以下に開示されるサーチュイン阻害剤がさらに企図される（例えば、Ｓｃｈｌｉｃｋｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｇｉｎｇ，３（９）：８５２  （２０１１）を参照のこと）。
【化２３】
2014505705.tif 000040
【化２４−１】
2014505705.tif 000041
【化２４−２】
2014505705.tif 000042
【化２４−３】
2014505705.tif 000043
【化２４−４】
2014505705.tif 000044
【化２４−５】
2014505705.tif 000045
【化２５−１】
2014505705.tif 000046
【化２５−２】
2014505705.tif 000047
2014505705.tif 000048
【００４９】
ＳＩＲＴ６阻害剤として、以下に開示されるサーチュイン阻害剤、クェルセチンおよびビテキシン（ｖｉｔｅｘｉｎ）がさらに企図される（例えば、Ｙａｓｕｄａ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍ．，８３：７４００‐７４０７（２０１１）を参照のこと）。
【００５０】
以下に開示されるサーチュイン阻害剤：
2014505705.tif 000049
がさらに企図される（例えば、Ｋａｌｌｅ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，４０１：１３‐１９（２０１０）を参照のこと）。
【００５１】
以下に開示されるサーチュイン阻害剤、および詳細には、２ｋがさらに企図される（例えば、Ａｓａｂａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１３１：６９８９‐６９９６  （２００９）を参照のこと）。
【化２６】
2014505705.tif 000050
【００５２】
以下に開示されるようなサーチュイン阻害剤、および詳細には、ＳＩＲＴ２阻害剤としての化合物４、５、およびｅｎｔ‐５がさらに企図される（例えば、Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，７４：５２６７‐５２７５  （２００９）を参照のこと）。
【化２７】
2014505705.tif 000051
【００５３】
以下に開示されるようなサーチュイン阻害剤：
2014505705.tif 000052
（ＡＣ‐９３２５３）がさらに企図される（例えば、Ｚｈａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，３８６：７２９‐７３３（２００９）を参照のこと）。
【００５４】
以下に開示されるようなサーチュイン阻害剤
2014505705.tif 000053
がさらに企図される（例えば、Ｈｕｂｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５３：１３８３‐１３８６（２０１０）を参照のこと）。
【化２８】
2014505705.tif 000054
【００５５】
サーチュイン（単数または複数）の他の阻害剤は環状リポペプチドサーファクチンまたはその誘導体を含む（Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．，１５８：１３９‐１５１（２００８）を参照のこと）。
【００５６】
サーチュイン（単数または複数）の他の阻害剤は例えば、Ｇａｍｂａｒｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，８２：１４１６‐１４２９（２０１１）、Ｙａｍａｋｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，１０５（３６）：１３４２１‐１３４２６（２００８）、Ｘｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９３：４０９‐１２４  （２０１１）中に開示されるような微小ＲＮＡまたはより詳細には、サーチュイン阻害剤としてのｍｉＲ‐３４ａ、ｍｉＲ‐２２、またはそれらの誘導体を含む。
【００５７】
Ｂ２、ＡＧＫ２、およびＢＭＬ‐２６６はそれぞれＳＩＲＴ２阻害剤である。ＥＸ‐５２７および（Ｓ）‐３５はそれぞれＳＩＲＴ１阻害剤である。Ｂ２、ＡＧＫ２、ＢＭＬ‐２６６、またはそれらの組み合わせから選択されるＳＩＲＴ２阻害剤およびＥＸ‐５２７、（Ｓ）‐３５、およびそれらの組み合わせから選択されるＳＩＲＴ１阻害剤の投与が特に企図される。
【００５８】
ｐ５３は二重ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２阻害剤のＨＣＭＶ複製をブロックする能力の少なくとも部分的な原因であり（図６）、そして他のサーチュインはｐ５３の活性を変えることが示されている（例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ５，ｅ１０４８６，２０１０を参照のこと）ので、ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２二重阻害剤に加えてサーチュインの組み合わせを阻害する薬物はＨＣＭＶ複製およびｐ５３の不活性化に依存する他のウイルスの複製を阻害することがさらに企図される。ＳＩＲＴ１とＳＩＲＴ２、ＳＩＲＴ１とＳＩＲＴ２と別のサーチュイン、ＳＩＲＴ１とＳＩＲＴ２を含まない１つ以上のサーチュイン、ＳＩＲＴ２とＳＩＲＴ１を含まない１つ以上のサーチュイン、またはＳＩＲＴ１もしくはＳＩＲＴ２を含まない２つ以上のサーチュインの組み合わせを含む、２つ以上のサーチュインを阻害する薬物の投与が特に企図される。そのように、サーチュイン阻害剤のこれらの組み合わせは抗ウイルス治療として本明細書中に開示される。したがって、本開示は２つ以上のサーチュインの１つ以上の阻害剤を投与することによるウイルス感染の治療方法を含む。複数のサーチュインの阻害剤の投与および阻害されていない1つ以上のサーチュインのうち、１つ以上のアクチベーターまたは異なるサーチュインを阻害するおよび活性化する薬物の組み合わせのさらなる投与の方法がさらに企図される。例えば、投与の必要のある対象にＳＩＲＴ１阻害剤、ＳＩＲＴ２阻害剤、およびＳＩＲＴ３アクチベーター（アゴニスト）を投与することを含む、ウイルス感染の治療方法が企図される。
【００５９】
本開示は７つのサーチュインのいずれか、部分集合、または全てのアクチベーターを用いたＨＣＭＶ感染の治療方法を含む。ＨＣＭＶ感染を治療するためにＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２を同時に阻害する（またはより一般的には、２つ以上のサーチュインを同時に阻害する）治療の使用もまた提供される。これらの阻害剤は、非限定的に、小分子、核酸、タンパク質、およびペプチド含有アクチベーターを含む。本明細書中に示されるものを超えて、追加の小分子アクチベーターは化合物ライブラリーのスクリーニングおよび／またはこれらの酵素の構造中の特定のポケットに結合する分子の設計により発見され得る。これらの分子の特性は合成および実験試験の反復を含む、誘導をとおして最適化され得る。
【００６０】
ＨＣＭＶに加えて、サーチュインが単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ１）、アデノウイルス（Ａｄ５）およびＡ型インフルエンザ（ＦｌｕＡ）ウイルスの複製をも阻害するかどうかを試験するためにｓｉＲＮＡスクリーンを行った。作出されたこれらのウイルスのそれぞれは複数の個々のｓｉＲＮＡのノックダウンに応答して産生を高めた（図７）。この結果は、サーチュインアクチベーターがＨＣＭＶのみでなく、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルスおよびインフルエンザウイルスをも阻害するであろうという結論を導く。これらのウイルスの多様性（遅いおよび速い生育両方、ＲＮＡおよびＤＮＡウイルス両方）を考えると、この結果は、サーチュインアゴニストが広いスペクトルの抗ウイルス活性を示すであろうことを予測する。したがって、本開示は広いスペクトルの抗ウイルス治療としてのサーチュインアゴニストの使用を含む。
【００６１】
ＨＣＭＶに加えて、二重ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２阻害剤、カンビノールおよびサレルミドは２つの異なる細胞型ＭＲＣ５線維芽細胞およびＭＤＣＫ上皮細胞において、２つのＡ型インフルエンザウイルス、ＷＳＮ／３３およびＰＲ８の感染性後代の生成を阻害した。それらの二重阻害剤は比較対象として含まれたオセルタミビル（ＴａｍｉＦｌｕ（商標））より強くウイルス複製を減少させ（図８）、そしてカンビノールはオセルタミビルと協同してＡ型インフルエンザを阻害した（図９）。それらの二重阻害剤はアデノウイルス後代の生成をもまたブロックした（図１０）。したがって、二重ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２阻害剤はＨＣＭＶのみでなく、Ａ型インフルエンザおよびアデノウイルスをも阻害し、そのため、二重ＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２阻害剤は単一の剤としてまたは以下にさらに示されるように、他の剤との組み合わせで治療に有用である広いスペクトルの抗ウイルス剤である。
【００６２】
本明細書中の実施形態は二重ＳＩＲＴ１および２阻害剤（またはより一般的には、２つ以上のサーチュインの阻害剤）を、および場合により別のサーチュインのアクチベーターと組み合わせて用いる、ＨＣＭＶおよびアデノウイルス感染を含む、ウイルス感染の治療方法を含む。これらのサーチュインモジュレーターは非限定的に、小分子、核酸、タンパク質、およびそれらの誘導体を含む。追加の小分子アクチベーターおよび阻害剤は化合物ライブラリーのスクリーニングおよび／またはこれらの酵素の構造中の特定のポケットに結合する分子の設計により発見され得る。これらの分子の特性は合成および実験試験の反復を含む、誘導をとおして最適化され得る。
【００６３】
サーチュインアゴニスト、二重ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２阻害剤、および２つ以上のサーチュインの阻害剤は抗ウイルス薬としての利用性を有する。
【００６４】
本明細書中の研究は、ＨＣＭＶの産生は個々のサーチュインの阻害により誘導されることを初めて示し、そしてそれゆえサーチュイン値もしくは活性または両方の誘導はＨＣＭＶ、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、およびインフルエンザウイルス後代の生成を阻害するであろうことを示す。７つのサーチュインのそれぞれの調節はウイルス複製に影響し得る、およびそれゆえ、異なる既知のサーチュイン活性のうちのいずれか１つの誘導はＨＣＭＶ後代の生成を阻害するであろうことを予測する。これらの結果は、複数のサーチュインの誘導はＨＣＭＶ後代の生成を相乗的に阻害するであろうという可能性をもまたもたらす。重要なことに、ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２の同時阻害は、いずれかの別々の阻害はウイルス産生を増加させるという事実にも関わらず、ＨＣＭＶを阻害する。
【００６５】
実施形態は１つ以上のサーチュイン（ＳＩＲＴ１〜７）のアゴニストによるＨＣＭＶの阻害、およびそのアゴニストを含む。いくつかのアゴニストは１つのサーチュインのみを標的にし得るが、複数のサーチュインを標的にする１つ以上のアゴニストもまた提供され得る。ｓｉＲＮＡデータから、ＳＩＲＴ３およびＳＩＲＴ５の調節はＨＣＭＶ産生に対して最も大きな効果を有することが明らかであるので、１つの実施形態はミトコンドリアサーチュイン（ＳＩＲＴ３〜５）のうちの１つ以上の、それらのアゴニストを含む。
【００６６】
実施形態はＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２のアンタゴニストまたは２つ以上のサーチュイン（ＳＩＲＴ１〜７）のアンタゴニスト、ならびに阻害を引き起こすことができる剤によるウイルスの阻害を含む。そのウイルスはＨＣＭＶであり得る。そのウイルスは感染性後代の最適な産生を作出する、またはそれ自体を感染細胞内に維持するためにｐ５３を不活性化しなければならないものであり得る。そのウイルスはどんなウイルスでもあり得る。阻害は両方のサーチュインを阻害する薬物を用いて、または２つのうちの１つがＳＩＲＴ１を阻害し、そして２つのうちの他方がＳＩＲＴ２を阻害する２つの薬物の組み合わせを用いることにより達成され得る。
【００６７】
実施形態はウイルス感染の治療方法を含む。実施形態はヒト対象におけるＨＣＭＶ感染の治療方法を含む。その方法は対象に、いかなるサーチュインのアゴニストもしくはアクチベーター、ある部分集合のサーチュインのアゴニスト、または全ての７つのサーチュインのアゴニストを投与するステップをも含む。これらのアゴニストは非限定的に、小分子、核酸、タンパク質、またはペプチド含有アクチベーターのうちの少なくとも１つを含む。本明細書中に示されるものを超えて、追加の小分子アクチベーターは化合物ライブラリーのスクリーニングおよび／またはこれらの酵素の構造中の特定のポケットに結合する分子の設計により発見され得る。これらの分子の特性は合成および実験試験の反復を含む、誘導をとおして最適化され得る。
【００６８】
実施形態はウイルス感染の治療方法を含む。実施形態は哺乳動物またはより詳細にはヒト対象におけるＨＣＭＶ感染の治療方法を含む。実施形態はウイルスがｐ５３不活性化を必要とするウイルス感染の治療方法を含む。その方法は対象にサーチュインのアンタゴニスト、より詳細にはＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２両方のアンタゴニストを投与するステップを含む。これらのアンタゴニストは非限定的に、小分子、核酸、タンパク質、またはペプチド含有アクチベーターのうちの少なくとも１つを含む。本明細書中に示されるものを超えて、追加の小分子アンタゴニストは化合物ライブラリーのスクリーニングおよび／またはこれらの酵素の構造中の特定のポケットに結合する分子の設計により発見され得る。これらの分子の特性は合成および実験試験の反復を含む、誘導をとおして最適化され得る。
【００６９】
実施形態はウイルス感染を治療するために使用され得る抗ウイルス薬を含む。その抗ウイルス薬はいかなるサーチュインのアゴニストもしくはアンタゴニスト、ある部分集合のサーチュインのアゴニストもしくはアンタゴニスト、または全ての７つのサーチュインのアゴニストまたはアンタゴニストであり得る。これらのアクチベーターは非限定的に、小分子、核酸、タンパク質、またはペプチド含有アクチベーターを含む。本明細書中に示されるものを超えて、追加の小分子アクチベーターは化合物ライブラリーのスクリーニングおよび／またはこれらの酵素の構造中の特定のポケットに結合する分子の設計により発見され得る。これらの分子の特性は合成および実験試験の反復を含む、誘導をとおして最適化され得る。
【００７０】
ウイルスを第２の剤、例えば、ＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２阻害剤もしくはサーチュインアゴニストでない抗ウイルス剤または本明細書中に開示されるものとは異なるＳＩＲＴ１および／またはＳＩＲＴ２阻害剤もしくはサーチュインアゴニストである第２の剤と接触させることをさらに含む方法が本明細書中でさらに開示される。企図される第２の剤は、非限定的に、アシクロビル（ａｃｙｃｌｏｖｉｒ）、ドコサノール（ｄｏｃｏｓａｎｏｌ）、リバリビン（ｒｉｂａｒｉｖｉｎ）、インターフェロン等、酢酸セルロース、カーボポール（ｃａｒｂｏｐｏｌ）およびカラゲナン（ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）、プレコナリル（ｐｌｅｃｏｎａｒｉｌ）、アマンチジン（ａｍａｎｔｉｄｉｎｅ）、リマンチジン（ｒｉｍａｎｔｉｄｉｎｅ）、フォミビルセン（ｆｏｍｉｖｉｒｓｅｎ）、ジドブジン（ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ）、ラミブジン（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）、ザナミビル（ｚａｎａｍｉｖｉｒ）、オセルタミビル（ｏｓｅｌｔａｍｉｖｉｒ）、ブリブジン（ｂｒｉｖｕｄｉｎｅ）、アバカビル（ａｂａｃａｖｉｒ）、アデフォビル（ａｄｅｆｏｖｉｒ）、アンプレナビル（ａｍｐｒｅｎａｖｉｒ）、アルビドール（ａｒｂｉｄｏｌ）、アタザナビル（ａｔａｚａｎａｖｉｒ）、アトリプラ（ａｔｒｉｐｌａ）、シドフォビル（ｃｉｄｏｆｏｖｉｒ）、コンビビル（ｃｏｍｂｉｖｉｒ）、エドクスジン（ｅｄｏｘｕｄｉｎｅ）、エファビレンツ（ｅｆａｖｉｒｅｎｚ）、エムトリシタビン（ｅｍｔｒｉｃｉｔａｂｉｎｅ）、エンフビルチド（ｅｎｆｕｖｉｒｔｉｄｅ）、エンテカビル（ｅｎｔｅｃａｖｉｒ）、ファムシクロビル（ｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒ）、フォサムプレナビル（ｆｏｓａｍｐｒｅｎａｖｉｒ）、フォスカルネット（ｆｏｓｃａｒｎｅｔ）、フォスフォネット（ｆｏｓｆｏｎｅｔ）、ガンシクロビル（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）、ガルダシル（ｇａｒｄａｓｉｌ）、イバシタビン（ｉｂａｃｉｔａｂｉｎｅ）、イムノビル（ｉｍｕｎｏｖｉｒ）、イドクスウリジン（ｉｄｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）、イミキモド（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）、インジナビル（ｉｎｄｉｎａｖｉｒ）、イノシン（ｉｎｏｓｉｎｅ）、インテグラーゼ阻害剤、ラミブジン（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）、ロピナビル（ｌｏｐｉｎａｖｉｒ）、ロビリド（ｌｏｖｉｒｉｄｅ）、ｍｋ‐０５１８、マラビロク（ｍａｒａｖｉｒｏｃ）、モロキシジン（ｍｏｒｏｘｙｄｉｎｅ）、ネルフィナビル（ｎｅｌｆｉｎａｖｉｒ）、ネビラピン（ｎｅｖｉｒａｐｉｎｅ）、ネキサビル（ｎｅｘａｖｉｒ）、ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシドアナログ、オセルタミビル、ペンシクロビル（ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）、ペラミビル（ｐｅｒａｍｉｖｉｒ）、ポドフィロトキシン（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎ）、リマンタジン（ｒｉｍａｎｔａｄｉｎｅ）、リトナビル（ｒｉｔｏｎａｖｉｒ）、サキナビル（ｓａｑｕｉｎａｖｉｒ）、スタブジン（ｓｔａｖｕｄｉｎｅ）、テノフォビル（ｔｅｎｏｆｏｖｉｒ）、テノフォビルジソプロキシル（ｔｅｎｏｆｏｖｉｒ  ｄｉｓｏｐｒｏｘｉｌ）、チプラナビル（ｔｉｐｒａｎａｖｉｒ）、トリフルリジン（ｔｒｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、トリジビル（ｔｒｉｚｉｖｉｒ）、トロマンタジン（ｔｒｏｍａｎｔａ���ｉｎｅ）、ツルバダ（ｔｒｕｖａｄａ）、バラシクロビル（ｖａｌａｃｉｃｌｏｖｉｒ）、バルガンシクロビル（ｖａｌｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）、ビクリビロク（ｖｉｃｒｉｖｉｒｏｃ）、ビダラビン（ｖｉｄａｒａｂｉｎｅ）、ビラミジン（ｖｉｒａｍｉｄｉｎｅ）、ザルシタビン（ｚａｌｃｉｔａｂｉｎｅ）、モルフォリノオリゴヌクレオチド、リボザイム、プロテアーゼ阻害剤、アセンブリー阻害剤（例えば、リファムピシン（ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ））、およびジドブジンを含む。
【００７１】
ＨＣＭＶまたは対象、例えば、ヒトの腫瘍中に存在する他のウイルス感染の治療方法がさらに本明細書中に開示される。ＨＣＭＶ  ＤＮＡ、ＲＮＡおよびタンパク質は悪性神経膠腫を含むいくつかのヒト腫瘍中に存在することが示されており（Ｃｏｂｂｓ  ＣＳ．Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ２：１０，２０１１）、そしてそのウイルスの存在はこれらの癌の病原を促進すると考えられている。それゆえ、腫瘍細胞（悪性腫瘍細胞または腫瘍関連間質細胞）の少なくとも一部がＨＣＭＶゲノムを含む、癌を有する対象における二重サーチュインアンタゴニストによる（またはより一般的には、２つ以上のサーチュインを同時に阻害することによる）ＨＣＭＶ遺伝子発現、複製、生育または広がりの阻害は治療的に有益であることが予測される。二重サーチュイン阻害剤は単独でまたは他の抗ウイルスもしくは抗腫瘍治療と組み合わせて使用され得る。二重サーチュイン阻害剤のこの治療適用の好ましい実施形態は悪性神経膠腫の治療であり得るが、その細胞の少なくとも一部にＨＣＭＶゲノムを含むいかなる腫瘍もこの治療の標的として本明細書中に開示される。この治療適用の第２の好ましい実施形態はＨＣＭＶゲノムを含む腫瘍の治療であり得るが、複製が二重サーチュイン阻害剤により阻害され得るいかなるウイルスのゲノムを有する腫瘍もこの治療の標的として本明細書中に開示される。好ましい治療適用はＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２の阻害剤、ＳＩＲＴ１とＳＩＲＴ２と別のサーチュインの阻害剤、ＳＩＲＴ１とＳＩＲＴ２を含まない１つ以上のサーチュインの阻害剤、ＳＩＲＴ２とＳＩＲＴ１を含まない１つ以上のサーチュインの阻害剤、またはＳＩＲＴ１もしくはＳＩＲＴ２を含まない２つ以上のサーチュインの阻害剤の組み合わせを含む。
【００７２】
実施形態は本明細書中の抗ウイルス薬のいずれかおよび医薬として許容される担体を含む医薬組成物を含む。その医薬として許容される担体は、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、ヒト血清アルブミン、緩衝液物質、リン酸、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分的なグリセリド混合物、水、塩、電解質、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピローリドン、セルロース含有物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、 ろう、 ポリエチレングリコール、デンプン、ラクトース、リン酸二カルシウム、微晶質セルロース、スクロース、タルク、炭酸マグネシウム、カオリン、非イオン性界面活性剤、食用油、生理食塩水、滅菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（登録商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝塩水（ＰＢＳ）のうちの少なくとも１つを含み得る。
【００７３】
薬物または医薬組成物の投与経路はどんな経路にもより得る。投与経路は、非限定的に、経口、注入、局所、腸、直腸、胃腸、舌下、口唇下、頬、硬膜外、脳内、脳室内、大槽内、皮膚上、皮内、皮下、鼻、静脈内、動脈内、筋内、心内、骨内、包膜内、腹腔内、膀胱内、硝子体内、空洞内、膣内、子宮内、羊水外、経皮、腫瘍内、および経粘膜を含む１つ以上の経路であり得る。
【００７４】
ウイルス産生の増加方法
サーチュイン活性を阻害すること、例えば、ＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２、ＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ６、およびＳＩＲＴ７のうちの１つ以上を阻害することによるウイルス産生の増加方法もまた本明細書中に開示される。ＳＩＲＴ１もＳＩＲＴ２も阻害されない、またはＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２のうちの１つのみが阻害される方法がさらに企図される。さまざまな場合において、ＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ６、およびＳＩＲＴ７のうちの１つ以上が阻害される。
【００７５】
本明細書中の結果は、ＨＣＭＶ、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、およびインフルエンザウイルスの産生がサーチュインの阻害により誘導されることを初めて示し、そしてそれゆえ、サーチュインタンパク質の値もしくは活性または両方の減少はＨＣＭＶ、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、およびインフルエンザウイルス後代およびサーチュイン活性により阻害される他のウイルスの生成を高めるであろうことを示す。重要なことに、本明細書中の結果はまた、７つのサーチュインのそれぞれの調節はウイルス複製に影響し得ることをも初めて示し、そしてそれゆえ、異なる既知のサーチュイン活性のいずれか１つの阻害はＨＣＭＶ、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、およびインフルエンザウイルス後代の生成を高めるであろうという予測を提供する。
【００７６】
非常に異なるウイルス（ＤＮＡゲノムおよびＲＮＡゲノム、むき出しのものおよび封入されたもの）の生成がサーチュイン活性を阻害することにより高められたので、追加のウイルスおよびそれらの減衰された、または別のように改変された誘導体の生育もまたサーチュインの阻害により高められ得ることが企図される。これらの追加のウイルスは、非限定的に、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、狂犬病ウイルス、はしかウイルス、おたふくかぜウイルス、風疹ウイルス、ロタウイルス、水痘ウイルス、黄熱ウイルス、ＨＩＶを含むレンチウイルス、レトロウイルスおよびアデノ関連ウイルスを含む。
【００７７】
ウイルス産生を増加させるためのサーチュインの阻害は、細胞をサーチュインの阻害剤またはサーチュイン発現の阻害剤と接触させることにより達成され得る。サーチュイン発現の阻害はＲＮＡｉ、例えば、１つ以上のｓｉＲＮＡをサーチュインをコードするｍＲＮＡのうちの１つ以上に接触させることにより得る。図１中で試験され、および示される特定のｓｉＲＮＡは表３中に示される。
【表３】
2014505705.tif 000055
【００７８】
サーチュイン遺伝子発現およびウイルス生成における増加の阻害剤としての使用のために企図される表３の配列のある部分集合は以下の表３Ａ中に示される。これらのｓｉＲＮＡおよびサーチュイン発現を阻害することができる他のｓｉＲＮＡの使用が企図される。
【表３Ａ】
2014505705.tif 000056
【００７９】
サーチュイン発現の阻害はＲＮＡｉ、例えば、１つ以上のｓｈＲＮＡをサーチュインをコードするｍＲＮＡのうちの１つ以上に接触させることにより得る。さまざまなサーチュイン遺伝子についてのｓｈＲＮＡの配列は以下の表４中に示される。これらのｓｈＲＮＡおよびサーチュイン発現を阻害することができる他のｓｈＲＮＡの使用が企図される。
【表４−１】
2014505705.tif 000057
【表４−２】
2014505705.tif 000058
【００８０】
さまざまな種におけるサーチュインのそれぞれについての遺伝子配列は以下の表５中に示されるＧｅｎｂａｎｋアクセス番号で見られ得る。そのように、表５中に引用される遺伝子のいずれか、および他の種からのサーチュイン遺伝子の遺伝子発現を阻害するｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡが特に企図される。
【表５】
2014505705.tif 000059
【００８１】
ＲＮＡｉ
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）、二重鎖ＲＮＡの導入により誘導される転写後プロセスは配列特異的な様式で遺伝子サイレンシングを引き起こす。多くの種において、二重鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子の如き、二重鎖構造の導入は遺伝子の機能またはその関連する遺伝子産物の強いおよび特異的なアンチセンス仲介減少を誘導することが示されている。ＲＮＡｉ化合物はしばしば低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）または低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）と呼ばれる。それは実際に、ＲＮＡｉの強い誘導剤であるｓｉＲＮＡのアンチセンス極性の一重鎖ＲＮＡオリゴマーであることが示されている（Ｔｉｊｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２，２９５，６９４‐６９７）。ＲＮＡｉ化合物（すなわち、一重または二重鎖ＲＮＡまたはＲＮＡ様化合物）および一重鎖ＲＮアーゼＨ依存性アンチセンス化合物は塩基対形成（すなわち、ハイブリダイゼーション）によりそれらのＲＮＡ標的に結合し、そして特異的ＲＮアーゼによる標的ＲＮＡの部位特異的切断を誘導する。すなわち、両方ともアンチセンス機構である（Ｖｉｃｋｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７８，７１０８‐７１１８）。ＲＮアーゼＩＩＩおよびリボヌクレアーゼＬ酵素ファミリー中のものの如き、二重鎖リボヌクレアーゼ（ｄｓＲＮアーゼ）もまたＲＮＡ標的分解において役割を果たす。二重鎖リボヌクレアーゼおよびそれらを誘発するオリゴマー化合物は米国特許第５，８９８，０３１号および同第６，１０７，０９４号中にさらに示される。
【００８２】
長期遺伝子サイレンシングを得るために、安定的にトランスフェクトされた哺乳動物細胞においてｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡを継続的に発現する発現ベクターが使用され得る（Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９６：５５０‐５５３，２００２、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：５００‐５０５，２００２、Ｍｉｙａｇｉｓｈｉ，Ｍ，ａｎｄ  Ｔａｉｒａ，Ｋ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：４９７‐５００，２００２、Ｐａｄｄｉｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｄｅｖ．１６：９４８‐９５８，２００２、Ｐａｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：５０５‐５０８，２００２、Ｓｕｉ，  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９９（６）：５５１５‐５５２０，ｅｔ  ａｌ．，２００２、Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９９（９）：６０４７‐６０５２，２００２）。これらのプラスミドの多くはポリ（Ａ）テールを欠くｓｈＲＮＡを発現するよう遺伝子工学で改変されている。ｓｈＲＮＡの転写はポリメラーゼＩＩＩ（ｐｏｌＩＩＩ）プロモーターで開始され得る、そして４〜５‐チミン転写停止部位の位置２で停止されると考えられている。発現に際して、ｓｈＲＮＡは３′ＵＵ‐オーバーハングを伴うステム‐ループ構造に折り畳まれると考えられている。続いて、これらのｓｈＲＮＡの終末がプロセスされ、ｓｈＲＮＡを〜２１ｎｔ  ｓｉＲＮＡ様分子に変換する。そのｓｉＲＮＡ様分子は、今度は、トランスフェクトされた哺乳動物細胞において遺伝子特異的サイレンシングをもたらし得る。
【００８３】
干渉ＲＮＡはそれゆえ標的ＲＮＡ（一般的にはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ））の一部に相補性を有する（すなわち、それとハイブリダイズすることができる）二重鎖オリゴヌクレオチド剤である。一般的に、そのような相補性は１００％であるが、所望の場合、条件が所望の標的に対するｓｉＲＮＡのハイブリダイゼーションを許容する限り、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約７０％、約７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のように、少ない場合もあり得る。例示のために、および限定ではなく、２１塩基のうちの１９塩基は塩基対を形成し得る。したがって、この方法において使用されるオリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡがその標的にハイブリダイズするために、所望の標的核酸に１００％相補的である必要はないことが理解されるであろう。さらに、オリゴヌクレオチドは１つ以上の区画にわたり互いにハイブリダイズし得るので、妨害または近隣区画はハイブリダイゼーション事件に関連しない（例えば、ループ構造またはヘアピン構造）。あるオリゴヌクレオチド間のパーセント相補性は本分野において既知のＢＬＡＳＴプログラム（Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌｓ）およびＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴプログラムを用いることにより日常的に決定され得る（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３‐４１０、Ｚｈａｎｇ  ａｎｄ  Ｍａｄｄｅｎ，１９９７，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．，７：６４９‐６５６）。
【００８４】
いくつかの態様において、少数のヌクレオチドが他の非標的配列変形とは異なる標的の選択が所望される場合、その他の非標的配列からその標的配列を有効に識別するために、その標的配列に対する１００％相補性が必要とされる。ほとんど配列の相違がない標的間の選択では、長さの選択はパーセント相補性および標的と非標的配列を区別する能力に関連する他の因子であるので、長さの選択もまた重要な因子である。
【００８５】
「ハイブリダイゼーション」はワトソン‐クリックＤＮＡ相補性、フーグスティーン結合または本分野において既知の他の配列特異的結合の規則に従う水素結合による核酸の２つまたは３つの鎖の間の相互作用を意味する。ハイブリダイゼーションは本分野において既知の異なる厳密さの条件下で行われ得る。
【００８６】
用語「ＲＮＡ」は２つの別々の鎖の二重鎖および一重鎖、三重鎖、または四重鎖構造を含む。一重鎖ＲＮＡの例はヘアピンループを有するＲＮＡである。阻害性ＲＮＡ配列は低分子干渉ＲＮＡおよび標的ＲＮＡを相補的塩基対形成相互作用をとおして結合させるのに十分な長さのものである必要がある。本明細書中に開示される方法において有用なＲＮＡはさまざまな長さのものであり得る。本明細書中に開示されるように、ＲＮＡは、適切な条件下で標的ポリヌクレオチドに対する単一の鎖のハイブリダイゼーションを許容するのに十分、標的ポリヌクレオチド中の配列に対して相補的な二重鎖のうちの単一の鎖中のドメインを備え、そしてその標的ポリヌクレオチドにおける配列に対する、その二重鎖のうちの単一の鎖のドメインのハイブリダイゼーションはポリペプチドにより認識される基質部位を作出する。この単一の鎖のドメインの長さはいくつかの態様において１０ヌクレオチド以上であり、そして標的ＲＮＡとハイブリダイズするのに十分な長さ、詳細には１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、および１００の如き、１０〜１００ヌクレオチド、より詳細には１０〜８０の間の整数のヌクレオチドのものである。「十分な長さ」は予測される条件下で意図される機能を提供するのに十分長い長さのものである１０以上のヌクレオチドのオリゴヌクレオチドを意味する。
【００８７】
本明細書中で使用されるとき、用語「標的」または「標的ポリヌクレオチド」はあるＲＮＡが方向付けられ得るポリヌクレオチドを言う。
【００８８】
本明細書中で使用されるとき、「二重鎖」は、相補的な、または実質的に相補的なポリヌクレオチド鎖間でワトソン‐クリック塩基対形成または安定化された二重鎖を許容する他の様式により互いに塩基対を形成する、２つの相補的な、または実質的に相補的なポリヌクレオチドにおける領域を言う。例えば、２１個のヌクレオチド単位を有するポリヌクレオチド鎖は２１個のヌクレオチド単位の別のポリヌクレオチドと塩基対形成し得るが、各鎖上の１９塩基のみが相補的または実質的に相補的であるので、その「二重鎖」は１９塩基対を有する。残りの塩基は、例えば、５′および３′オーバーハングとして存在し得る。さらに、その二重鎖内で、１００％相補性は必要とされず、実質的な相補性が二重鎖内で許容される。実質的な相補性は７５％以上の相補性を言う。例えば、１９塩対からなる、ある二重鎖におけるミスマッチは９４．７％相補性をもたらし、そのためこの二重鎖は実質的に相補的である。
【００８９】
ＲＮＡはインビトロで重合化され得る。組換えＲＮＡはキメラ配列またはこれらの基の誘導体を含む。そのＲＮＡは、さまざまな実施形態において、標的遺伝子の発現が阻害されるような、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、合成ヌクレオチドまたは好適な組み合わせを含む。
【００９０】
デリバリーされたＲＮＡは細胞質または核内に存在し得る。そのＲＮＡは細胞にデリバリーされ、内因性または外因性ヌクレオチド配列またはタンパク質の発現を阻害し、または天然ではその細胞に関連しない特異的な生理学的特性に影響し得る。
【００９１】
ＲＮＡは治療的である細胞変化を作出するために細胞にデリバリーされ得る。治療目的のためのＲＮＡまたは他の遺伝物質のデリバリー（疾患の治療または予防を含む動物における健康改善の分野）は遺伝子治療と呼ばれる。ＲＮＡはインサイチュで生物に直接的にまたは後に生物内へ移植されるエックスビボでの細胞への移行により間接的にデリバリーされ得る。細胞へのエントリーには、ＲＮＡがあるタンパク質の生成をブロックすること、またはあるＲＮＡの量を減少させることが必要である。本開示により企図されるポリヌクレオチド配列は以下にさらに示される。
【００９２】
ＲＮＡの特性および修飾
本明細書中で使用されるとき用語「ヌクレオチド」またはその複数形は本明細書中で議論される、またはそうでなければ本分野において、既知の修飾された形態と相互交換可能である。いくつかの場合、本分野は天然ヌクレオチドおよび重合化され得るヌクレオチドの修飾を包含する用語「ヌクレオ塩基」を使用する。したがって、ヌクレオチドまたはヌクレオ塩基は天然ヌクレオ塩基アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）およびウラシル（Ｕ）ならびにキサンチン、ジアミノプリン、８‐オキソ‐Ｎ６‐メチルアデニン、７‐デアザキサンチン、７‐デアザグアニン、Ｎ４，Ｎ４‐エタノシトシン、Ｎ′，Ｎ′‐エタノ‐２，６‐ジアミノプリン、５‐メチルシトシン（ｍＣ）、５‐（Ｃ3‐Ｃ6）‐アルキニル‐シトシン、５‐フルオロウラシル、５‐ブロモウラシル、偽イソシトシン、２‐ヒドロキシ‐５‐メチル‐４‐トリアゾロピリジン、イソシトシン、イソグアニン、イノシンおよびＢｅｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，４３２，２７２号およびＳｕｓａｎ  Ｍ．Ｆｒｅｉｅｒ  ａｎｄ  Ｋａｒｌ‐Ｈｅｉｎｚ  Ａｌｔｍａｎｎ，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ．２５：ｐｐ４４２９‐４４４３中に示される「非天然」ヌクレオ塩基の如き非天然ヌクレオ塩基を意味する。用語「ヌクレオ塩基」は既知のプリンおよびピリミジンヘテロ環のみでなく、そのヘテロ環状アナログおよび互変異性体をもまた含む。さらなる天然および非天然ヌクレオ塩基は米国特許第３，６８７，８０８号（Ｍｅｒｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．）中に、ＳａｎｇｈｖｉによるＡｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｓ．Ｔ．  Ｃｒｏｏｋｅ  ａｎｄ  Ｂ．Ｌｅｂｌｅｕ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９９３中の１５章中に、Ｅｎｇｌｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，３０：６１３‐７２２（特に６２２および６２３ページを参照のこと）中に、およびｔｈｅ  Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｊ．Ｉ．Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ  Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９０，８５８〜８５９ページ、Ｃｏｏｋ，Ａｎｔｉ‐Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １９９１，６，５８５‐６０７中に開示されるものを含み、当該出願はそれらの全体が本明細書に参考として組み入れられる。さまざまな態様において、ポリヌクレオチドは、最も古典的な意味ではヌクレオシド塩基ではないがヌクレオシド塩基としてはたらく、ある「普遍的塩基」を含む、ヌクレオ塩基のようにはたらき得るヘテロ環状化合物の如き化合物を含む１つ以上の「ヌクレオシド塩基」または「塩基単位」をもまた含む。普遍的塩基は３‐ニトロピロール、場合により置換されるインドール（例えば、５‐ニトロインドール）、および場合により置換されるヒポキサンチンを含む。他の所望され得る普遍的塩基は本分野において既知の普遍的塩基を含む、ピロール、ジアゾール、またはトリアゾール誘導体を含む。
【００９３】
ポリヌクレオチドは修飾されたヌクレオ塩基をもまた含み得る。「修飾された塩基」は天然塩基（例えば、アデニン、グアニン、シトシン、ウラシル、および／またはチミン）と塩基対形成し得るおよび／または非天然塩基と塩基対形成し得るものであると本分野において理解される。例示的な修飾された塩基はＥＰ第１０７２６７９号およびＷＯ第９７／１２８９６号中に示され、当該出願は本明細書に参考として組み入れられる。修飾されたヌクレオ塩基は、非限定的に、５‐メチルシトシン（５‐ｍｅ‐Ｃ）、５‐ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２‐アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６‐メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２‐プロピルおよび他のアルキル誘導体、２‐チオウラシル、２‐チオチミンおよび２‐チオシトシン、５‐ハロウラシルおよびシトシン、５‐プロピニルウラシルおよびシトシンならびにピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、６‐アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５‐ウラシル（偽ウラシル）、４‐チオウラシル、８‐ハロ、８‐アミノ、８‐チオール、８‐チオアルキル、８‐ヒドロキシルおよび他の８‐置換アデニンおよびグアニン、５‐ハロ、詳細には５‐ブロモ、５‐トリフルオロメチルおよび他の５‐置換ウラシルおよびシトシン、７‐メチルグアニンおよび７‐メチルアデニン、２‐Ｆ‐アデニン、２‐アミノ‐アデニン、８‐アザグアニンおよび８‐アザアデニン、７‐デアザグアニンおよび７‐デアザアデニンおよび３‐デアザグアニンおよび３‐デアザアデニンを含む。さらなる修飾された塩基はフェノキサジンシチジン（１Ｈ‐ピリミド［５，４‐ｂ］［１，４］ベンゾキサジン‐２（３Ｈ）‐オン）、フェノチアジンシチジン（１Ｈ‐ピリミド［５，４‐ｂ］［１，４］ベンゾチアジン‐２（３Ｈ）‐オン）の如き三環状ピリミジン、置換されるフェノキサジンシチジン（例えば、９‐（２‐アミノエトキシ）‐Ｈ‐ピリミド［５，４‐ｂ］［１，４］ベンゾックス‐アジン‐２（３Ｈ）‐オン）の如きＧ‐クランプ、カルバゾールシチジン（２Ｈ‐ピリミド［４，５‐ｂ］インドール‐２‐オン）、ピリドインドールシチジン（Ｈ‐ピリド［３′，２′：４，５］ピロロ［２，３‐ｄ］ピリミジン‐２‐オン）を含む。修飾された塩基は、プリンまたはピリミジン塩基が他のヘテロ環、例えば、７‐デアザ‐アデニン、７‐デアザグアノシン、２‐アミノピリジンおよび２‐ピリドンと置換されるものをもまた含み得る．追加のヌクレオ塩基は米国特許第３，６８７，８０８号中に開示されるもの、Ｔｈｅ  Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  Ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｐａｇｅｓ８５８‐８５９，Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｉ．，ｅｄ．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９０中に開示されるもの、Ｅｎｇｌｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，３０：  ６１３により開示されるもの、およびＳａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ１５，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐａｇｅｓ２８９‐３０２，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ  Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，ｅｄ．，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ，１９９３により開示されるものを含む。これらの塩基のいくつかは結合アフィニティを増加させるために有用であり、そして５‐置換ピリミジン、６‐アザピリミジンならびに２‐アミノプロピルアデニン、５‐プロピニルウラシルおよび５‐プロピニルシトシンを含む、Ｎ‐２、Ｎ‐６およびＯ‐６置換プリンを含む。５‐メチルシトシン置換は核酸二重鎖安定性を０．６〜１．２℃増加させることが示されており、そして、いくつかの態様において、２′‐Ｏ‐メトキシエチル糖修飾と組み合わせられる。米国特許第３，６８７，８０８号、同第４，８４５，２０５号、同第５，１３０，３０２号、同第５，１３４，０６６号、同第５，１７５，２７３号、同第５，３６７，０６６号、同第５，４３２，２７２号、同第５，４５７，１８７号、同第５，４５９，２５５号、同第５，４８４，９０８号、同第５，５０２，１７７号、同第５，５２５，７１１号、同第５，５５２，５４０号、同第５，５８７，４６９号、同第５，５９４，１２１号、同第５，５９６，０９１号、同第５，６１４，６１７号、同第５，６４５，９８５号、同第５，８３０，６５３号、同第５，７６３，５８８号、同第６，００５，０９６号、同第５，７５０，６９２号および同第５，６８１，９４１号を参照のこと。当該出願は本明細書に参考として組み入れられる。
【００９４】
事前に決定された配列のポリヌクレオチドを作出する方法は周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  （２ｎｄ  ｅｄ．１９８９）およびＦ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ，１ｓｔ  Ｅｄ．（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１）を参照のこと。固体相合成法はポリリボヌクレオチドおよびポリデオキシリボヌクレオチドの両方に好ましい（周知のＤＮＡ合成法はＲＮＡ合成にもまた有用である）。ポリリボヌクレオチドは酵素でもまた調製され得る。非天然ヌクレオ塩基もまたポリヌクレオチドに導入され得る。例えば、米国特許第７，２２３，８３３号、Ｋａｔｚ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，７４：２２３８（１９５１）、Ｙａｍａｎｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８３：２５９９（１９６１）、Ｋｏｓｔｕｒｋｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１３：３９４９（１９７４）、Ｔｈｏｍａｓ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，７６：６０３２（１９５４）、Ｚｈａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２７：７４‐７５（２００５）、およびＺｉｍｍｅｒｍａｎｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２４：１３６８４‐１３６８５（２００２）を参照のこと。
【００９５】
ポリヌクレオチド中のヌクレオチド単位の１つ以上の糖および／または１つ以上のヌクレオチド内結合の両方が「非天然」官能基と置換される修飾されたポリヌクレオチドはナノ粒子を機能化するために企図される。１つの態様において、この実施形態はペプチド核酸（ＰＮＡ）を企図する。ＰＮＡ化合物において、ポリヌクレオチドの糖‐骨格はアミドを含む骨格と置換される。例えば、米国特許第５，５３９，０８２号、同第５，７１４，３３１号、および同第５，７１９，２６２号、ならびにＮｉｅｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９１，２５４，１４９７‐１５００を参照のこと。当該出願は本明細書に参考として組み入れられる。
【００９６】
開示されるポリヌクレオチドについて企図されるヌクレオチドおよび非天然ヌクレオチドの間の他の結合は米国特許第４，９８１，９５７号、同第５，１１８，８００号、同第５，３１９，０８０号、同第５，３５９，０４４号、同第５，３９３，８７８号、同第５，４４６，１３７号、同第５，４６６，７８６号、同第５，５１４，７８５号、同第５，５１９，１３４号、同第５，５６７，８１１号、同第５，５７６，４２７号、同第５，５９１，７２２号、同第５，５９７，９０９号、同第５，６１０，３００号、同第５，６２７，０５３号、同第５，６３９，８７３号、同第５，６４６，２６５号、同第５，６５８，８７３号、同第５，６７０，６３３号、同第５，７９２，７４７号、および同第５，７００，９２０号、米国特許公開公報第２００４０２１９５６５号、国際特許公開公報ＷＯ第９８／３９３５２号およびＷＯ第９９／１４２２６号、Ｍｅｓｍａｅｋｅｒ  ｅｔ．ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ５：３４３‐３５５（１９９５）およびＳｕｓａｎ  Ｍ．Ｆｒｅｉｅｒ  ａｎｄ  Ｋａｒｌ‐Ｈｅｉｎｚ  Ａｌｔｍａｎｎ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２５：４４２９‐４４４３（１９９７）中に示されるものを含み、当該出願は本明細書に参考として組み入れられる。
【００９７】
ポリヌクレオチドの特定の例は修飾された骨格または非天然ヌクレオシド内結合を含むものを含む。修飾された骨格を有するポリヌクレオチドは骨格中にリン原子を保持するものおよび骨格中にリン原子を有しないものを含む。ヌクレオシド内骨格中にリン原子を有しない修飾されたポリヌクレオチドは「ポリヌクレオチド」の意味に入ると考えられる。
【００９８】
リン原子を含む修飾されたポリヌクレオチド骨格は、例えば、フォスフォロチオエート、キラルフォスフォロチオエート、フォスフォロジチオエート、フォスフォトリエステル、アミノアルキルフォスフォトリエステル、３′‐アルキレンフォスフォネート、５′‐アルキレンフォスフォネートおよびキラルフォスフォネートを含むメチルおよび他のアルキルフォスフォネート、フォスフィネート、３′‐アミノフォスフォラミデートおよびアミノアルキルフォスフォラミデートを含むフォスフォラミデート、チオノフォスフォラミデート、チオノアルキルフォスフォネート、チオノアルキルフォスフォトリエスエル、通常の３′‐５′結合を有するセレノフォスフェートおよびボラノフォスフェート、これらの２′‐５′結合アナログ、ならびに１つ以上のヌクレオチド内結合が３′〜３′、５′〜５′、または２′〜２′結合である、逆の極性を有するものを含む。３′‐末端ヌクレオチド内結合での単一の３′〜３′結合を含む逆の極性を有するポリヌクレオチド、すなわち、脱塩基であり得る（そのヌクレオチドは失われる、またはその代わりにヒドロキシル基を有する）単一の逆のヌクレオシド残基もまた企図される。塩、混合塩および遊離酸形もまた企図される。
【００９９】
上記のリン含有結合の調製を教示する代表的な米国特許は、米国特許第３，６８７，８０８号、同第４，４６９，８６３号、同第４，４７６，３０１号、同第５，０２３，２４３号、同第５，１７７，１９６号、同第５，１８８，８９７号、同第５，２６４，４２３号、同第５，２７６，０１９号、同第５，２７８，３０２号、同第５，２８６，７１７号、同第５，３２１，１３１号、同第５，３９９，６７６号、同第５，４０５，９３９号、同第５，４５３，４９６号、同第５，４５５，２３３号、同第５，４６６，６７７号、同第５，４７６，９２５号、同第５，５１９，１２６号、同第５，５３６，８２１号、同第５，５４１，３０６号、同第５，５５０，１１１号、同第５，５６３，２５３号、同第５，５７１，７９９号、同第５，５８７，３６１号、同第５，１９４，５９９号、同第５，５６５，５５５号、同第５，５２７，８９９号、同第５，７２１，２１８号、同第５，６７２，６９７号および同第５，６２５，０５０号を含み、当該出願は本明細書に参考として組み入れられる。
【０１００】
リン原子を含まない修飾されたポリヌクレオチド骨格は短鎖アルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド内結合、混合されたヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド内結合、または１つ以上の短鎖ヘテロ原子もしくはヘテロ環状ヌクレオシド内結合により形成される骨格を有する。これらはモルフォリノ結合、シロキサン骨格、スルフィド、スルフォキシドおよびスルフォン骨格、フォルムアセチルおよびチオフォルムアセチル骨格、メチレンフォルムアセチルおよびチオフォルムアセチル骨格、リボアセチル骨格、アルケンを含む骨格、スルファメート骨格、メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格、スルフォネートおよびスルフォンアミド骨格、アミド骨格、および混合されたＮ、Ｏ、ＳおよびＣＨ2構成部分を有する他のものを有するものを含む。さらに他の実施形態において、フォスフォロチオエート骨格およびヘテロ原子骨格を有するオリゴヌクレオシドを有するポリヌクレオチドが提供され、そして米国特許第５，４８９，６７７号、および同第５，６０２，２４０号中に示される、‐ＣＨ2‐ＮＨ‐Ｏ‐ＣＨ2‐、‐ＣＨ2‐Ｎ（ＣＨ3）‐Ｏ‐ＣＨ2‐、‐ＣＨ2‐Ｏ‐Ｎ（ＣＨ3）‐ＣＨ2‐、‐ＣＨ2‐Ｎ（ＣＨ3）‐Ｎ（ＣＨ3）‐ＣＨ2‐および‐Ｏ‐Ｎ（ＣＨ3）‐ＣＨ2‐ＣＨ2‐を含む。例えば、米国特許第５，０３４，５０６号、同第５，１６６，３１５号、同第５，１８５，４４４号、同第５，２１４，１３４号、同第５，２１６，１４１号、同第５，２３５，０３３号、同第５，２６４，５６２号、同第５，２６４，５６４号、同第５，４０５，９３８号、同第５，４３４，２５７号、同第５，４６６，６７７号、同第５，４７０，９６７号、同第５，４８９，６７７号、同第５，５４１，３０７号、同第５，５６１，２２５号、同第５，５９６，０８６号、同第５，６０２，２４０号、同第５，６１０，２８９号、同第５，６０２，２４０号、同第５，６０８，０４６号、同第５，６１０，２８９号、同第５，６１８，７０４号、同第５，６２３，０７０号、同第５，６６３，３１２号、同第５，６３３，３６０号、同第５，６７７，４３７号、同第５，７９２，６０８号、同第５，６４６，２６９号および同第５，６７７，４３９号を参照のこと。当該出願はそれらの全体が本明細書に参考として組み入れられる。
【０１０１】
さまざまな形態において、オリゴ中の２つの連続した単量体の間の結合は‐ＣＨ2‐、‐Ｏ‐、‐Ｓ‐、‐ＮＲＨ‐、＞Ｃ＝Ｏ、＞Ｃ＝ＮＲＨ、＞Ｃ＝Ｓ、‐Ｓｉ（Ｒ′′）2‐、‐ＳＯ‐、‐Ｓ（Ｏ）2‐、‐Ｐ（Ｏ）2‐、‐ＰＯ（ＢＨ3）‐、‐Ｐ（Ｏ，Ｓ）‐、‐Ｐ（Ｓ）2‐、‐ＰＯ（Ｒ′′）‐、‐ＰＯ（ＯＣＨ3）‐、および‐ＰＯ（ＮＨＲＨ）‐から選択される２〜４、好ましくは３の官能基／原子からなり、ＲＨは水素およびＣ１〜４‐アルキルから選択され、そしてＲ′′はＣ１〜６‐アルキルおよびフェニルから選択される。そのような結合の例示的な例は‐ＣＨ2‐ＣＨ2‐ＣＨ2‐、‐ＣＨ2‐ＣＯ‐ＣＨ2‐、‐ＣＨ2‐ＣＨＯＨ‐ＣＨ2‐、‐Ｏ‐ＣＨ2‐Ｏ‐、‐Ｏ‐ＣＨ2‐ＣＨ2‐、‐Ｏ‐ＣＨ2‐ＣＨ＝（続く単量体への結合として使用されるときＲ５を含む）、‐ＣＨ2‐ＣＨ2‐Ｏ‐、‐ＮＲＨ‐ＣＨ2‐ＣＨ2‐、‐ＣＨ2‐ＣＨ2‐ＮＲＨ‐、‐ＣＨ2‐ＮＲＨ‐ＣＨ2‐、‐Ｏ‐ＣＨ2‐ＣＨ2‐ＮＲＨ‐、‐ＮＲＨ‐ＣＯ‐Ｏ‐、‐ＮＲＨ‐ＣＯ‐ＮＲＨ‐、‐ＮＲＨ‐ＣＳ‐ＮＲＨ‐、‐ＮＲＨ‐Ｃ（＝ＮＲＨ）‐ＮＲＨ‐、‐ＮＲＨ‐ＣＯ‐ＣＨ2‐ＮＲＨ‐Ｏ‐ＣＯ‐Ｏ‐、‐Ｏ‐ＣＯ‐ＣＨ2‐Ｏ‐、‐Ｏ‐ＣＨ2‐ＣＯ‐Ｏ‐、‐ＣＨ2‐ＣＯ‐ＮＲＨ‐、‐Ｏ‐ＣＯ‐ＮＲＨ‐、‐ＮＲＨ‐ＣＯ‐ＣＨ2‐、‐Ｏ‐ＣＨ2‐ＣＯ‐ＮＲＨ‐、‐Ｏ‐ＣＨ2‐ＣＨ2‐ＮＲＨ‐、‐ＣＨ＝Ｎ‐Ｏ‐、‐ＣＨ2‐ＮＲＨ‐Ｏ‐、‐ＣＨ2‐Ｏ‐Ｎ＝（続く単量体への結合として使用されるときＲ５を含む）、‐ＣＨ2‐Ｏ‐ＮＲＨ‐、‐ＣＯ‐ＮＲＨ‐ＣＨ2‐、‐ＣＨ2‐ＮＲＨ‐Ｏ‐、‐ＣＨ2‐ＮＲＨ‐ＣＯ‐、‐Ｏ‐ＮＲＨ‐ＣＨ2‐、‐Ｏ‐ＮＲＨ、‐Ｏ‐ＣＨ2‐Ｓ‐、‐Ｓ‐ＣＨ2‐Ｏ‐、‐ＣＨ2‐ＣＨ2‐Ｓ‐、‐Ｏ‐ＣＨ2‐ＣＨ2‐Ｓ‐、‐Ｓ‐ＣＨ2‐ＣＨ＝（続く単量体への結合として使用されるときＲ５を含む）、‐Ｓ‐ＣＨ2‐ＣＨ2‐、‐Ｓ‐ＣＨ2‐ＣＨ2‐Ｏ‐、‐Ｓ‐ＣＨ2‐ＣＨ2‐Ｓ‐、‐ＣＨ2‐Ｓ‐ＣＨ2‐、‐ＣＨ2‐ＳＯ‐ＣＨ2‐、‐ＣＨ2‐ＳＯ2‐ＣＨ2‐、‐Ｏ‐ＳＯ‐Ｏ‐、‐Ｏ‐Ｓ（Ｏ）2‐Ｏ‐、‐Ｏ‐Ｓ（Ｏ）2‐ＣＨ2‐、‐Ｏ‐Ｓ（Ｏ）2‐ＮＲＨ‐、‐ＮＲＨ‐Ｓ（Ｏ）2‐ＣＨ2‐、‐Ｏ‐Ｓ（Ｏ）2‐ＣＨ2‐、‐Ｏ‐Ｐ（Ｏ）2‐Ｏ‐、‐Ｏ‐Ｐ（Ｏ，Ｓ）‐Ｏ‐、‐Ｏ‐Ｐ（Ｓ）2‐Ｏ‐、‐Ｓ‐Ｐ（Ｏ）2‐Ｏ‐、‐Ｓ‐Ｐ（Ｏ，Ｓ）‐Ｏ‐、‐Ｓ‐Ｐ（Ｓ）2‐Ｏ‐、‐Ｏ‐Ｐ（Ｏ）2‐Ｓ‐、‐Ｏ‐Ｐ（Ｏ，Ｓ）‐Ｓ‐、‐Ｏ‐Ｐ（Ｓ）2‐Ｓ‐、‐Ｓ‐Ｐ（Ｏ）2‐Ｓ‐、‐Ｓ‐Ｐ（Ｏ，Ｓ）‐Ｓ‐、‐Ｓ‐Ｐ（Ｓ）2‐Ｓ‐、‐Ｏ‐ＰＯ（Ｒ′′）‐Ｏ‐、‐Ｏ‐ＰＯ（ＯＣＨ3）‐Ｏ‐、‐Ｏ‐ＰＯ（ＯＣＨ2ＣＨ3）‐Ｏ‐、‐Ｏ‐ＰＯ（ＯＣＨ2ＣＨ2Ｓ‐Ｒ）‐Ｏ‐、‐Ｏ‐ＰＯ（ＢＨ3）‐Ｏ‐、‐Ｏ‐ＰＯ（ＮＨＲＮ）‐Ｏ‐、‐Ｏ‐Ｐ（Ｏ）2‐ＮＲＨ  Ｈ‐、‐ＮＲＨ‐Ｐ（Ｏ）2‐Ｏ‐、‐Ｏ‐Ｐ（Ｏ，ＮＲＨ）‐Ｏ‐、‐ＣＨ2‐Ｐ（Ｏ）2‐Ｏ‐、‐Ｏ‐Ｐ（Ｏ）2‐ＣＨ2‐、および‐Ｏ‐Ｓｉ（Ｒ′′）2‐Ｏ‐であり、とりわけ、‐ＣＨ2‐ＣＯ‐ＮＲＨ‐、‐ＣＨ2‐ＮＲＨ‐Ｏ‐、‐Ｓ‐ＣＨ2‐Ｏ‐、‐Ｏ‐Ｐ（Ｏ）2‐Ｏ‐Ｏ‐Ｐ（‐Ｏ，Ｓ）‐Ｏ‐、‐Ｏ‐Ｐ（Ｓ）2‐Ｏ‐、‐ＮＲＨ  Ｐ（Ｏ）2‐Ｏ‐、‐Ｏ‐Ｐ（Ｏ，ＮＲＨ）‐Ｏ‐、‐Ｏ‐ＰＯ（Ｒ′′）‐Ｏ‐、‐Ｏ‐ＰＯ（ＣＨ3）‐Ｏ‐、および‐Ｏ‐ＰＯ（ＮＨＲＮ）‐Ｏ‐が企図され、ＲＨが水素およびＣ１〜４‐アルキルから選択され、そしてＲ′′がＣ１〜６‐アルキルおよびフェニルから選択される。さらなる例示的な例はＭｅｓｍａｅｋｅｒ  ｅｔ．ａｌ．，１９９５，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，５：  ３４３−３５５およびＳｕｓａｎ  Ｍ．Ｆｒｅｉｅｒ  ａｎｄ  Ｋａｒｌ‐Ｈｅｉｎｚ  Ａｌｔｍａｎｎ，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ２５：ｐｐ  ４４２９‐４４４３中に与えられる。
【０１０２】
ポリヌクレオチドのさらに他の修飾形は米国特許出願第２００４０２１９５６５号中に詳細に示され、当該出願はその全体が本明細書に参考として組み入れられる。
【０１０３】
修飾ポリヌクレオチドは１つ以上の置換された糖基をもまた含み得る。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは２′位で以下のもの、ＯＨ、Ｆ、Ｏ‐、Ｓ‐もしくはＮ‐アルキル；Ｏ‐、Ｓ‐もしくはＮ‐アルケニル；Ｏ‐、Ｓ‐もしくはＮ‐アルキニル；またはＯ‐アルキル‐Ｏ‐アルキルのうちの１つを含み、そのアルキル、アルケニルおよびアルキニルは置換されるまたは置換されないＣ1〜Ｃ10アルキルまたはＣ2〜Ｃ10アルケニルおよびアルキニルであり得る。他の実施形態はＯ［（ＣＨ2）nＯ］mＣＨ3、Ｏ（ＣＨ２）nＯＣＨ3、Ｏ（ＣＨ2）nＮＨ2、Ｏ（ＣＨ2）nＣＨ3、Ｏ（ＣＨ2）nＯＮＨ2、およびＯ（ＣＨ2）nＯＮ［（ＣＨ2）nＣＨ3］2を含み、ｎおよびｍは１〜約１０である。他のポリヌクレオチドは２′位で以下のもの、Ｃ１〜Ｃ１０低アルキル、置換される低アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリール、アラルキル、Ｏ‐アルカリールまたはＯ‐アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ3、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＳＯＣＨ3、ＳＯ2ＣＨ3、ＯＮＯ2、ＮＯ2、Ｎ3、ＮＨ2、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリール、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換されるシリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、ポリヌクレオチドの薬物動態特性を改善する基またはポリヌクレオチドの薬力学的特性を改善する基、および同様の特性を有する他の置換基のうちの１つを含む。１つの態様において、修飾は２′‐メトキシエトキシ（２′‐Ｏ‐ＣＨ2ＣＨ2ＯＣＨ3、２′‐Ｏ‐（２‐メトキシエチル）または２′‐ＭＯＥとしても知られる）（Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，７８：  ４８６‐５０４）、すなわち、アルコキシアルコキシ基を含む。他の修飾は２′‐ジメチルアミノオキシエトキシ、すなわち、２′‐ＤＭＡＯＥとしても知られるＯ（ＣＨ2）2ＯＮ（ＣＨ3）2基、および２′‐ジメチルアミノエトキシエトキシ（２′‐Ｏ‐ジメチル‐アミノ‐エトキシ‐エチルまたは２′‐ＤＭＡＥＯＥとしても本分野において知られる）、すなわち、２′‐Ｏ‐ＣＨ2‐Ｏ‐ＣＨ2‐Ｎ（ＣＨ3）2を含む。
【０１０４】
さらに他の修飾は２′‐メトキシ（２′‐Ｏ‐ＣＨ3）、２′‐アミノプロポキシ（２′‐ＯＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＮＨ2）、２′‐アリル（２′‐ＣＨ2‐ＣＨ＝ＣＨ2）、２′‐Ｏ‐アリル（２′‐Ｏ‐ＣＨ2‐ＣＨ＝ＣＨ2）および２′‐フルオロ（２′‐Ｆ）を含む。２′‐修飾はアラビノ（上）位またはリボ（下）位であり得る。１つの態様において、２′‐アラビノ修飾は２′‐Ｆである。同様の修飾はポリヌクレオチド上の他の位置でも、例えば、３′末端ヌクレオチド上のまたは２′‐５′結合ポリヌクレオチド内の糖の３′位および５′末端ヌクレオチドの５′位でもまたなされ得る。ポリヌクレオチドはペントフラノシル糖の代わりにシクロブチル基の如き糖ミメティックをも有し得る。例えば、米国特許第４，９８１，９５７号、同第５，１１８，８００号、同第５，３１９，０８０号、同第５，３５９，０４４号、同第５，３９３，８７８号、同第５，４４６，１３７号、同第５，４６６，７８６号、同第５，５１４，７８５号、同第５，５１９，１３４号、同第５，５６７，８１１号、同第５，５７６，４２７号、同第５，５９１，７２２号、同第５，５９７，９０９号、同第５，６１０，３００号、同第５，６２７，０５３号、同第５，６３９，８７３号、同第５，６４６，２６５号、同第５，６５８，８７３号、同第５，６７０，６３３号、同第５，７９２，７４７号、および同第５，７００，９２０号を参照のこと。当該出願はそれらの全体が本明細書に参考として組み入れられる。
【０１０５】
１つの態様において、糖の修飾は２′‐ヒドロキシル基が糖環の３′または４′炭素原子に結合されており、それにより二環状糖基を形成するＬｏｃｋｅｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ（ＬＮＡｓ）を含む。その結合は、いくつかの態様において、２′酸素原子および４′炭素原子を架橋するメチレン（‐ＣＨ2‐）n基であり、ｎは１または２である。ＬＮＡｓおよびその調製はＷＯ第９８／３９３５２号およびＷＯ第９９／１４２２６号中に示され、当該出願は参考として本明細書に組み入れられる。
【０１０６】
キメラ
ある化合物における全ての位置が一様に修飾される必要はなく、そして実際に、上記修飾のうちの１超は単一の化合物中にまたは１つのオリゴヌクレオチド内の単一のヌクレオシドでさえも導入され得る。これらの「キメラ」アンチセンス化合物は典型的に本明細書中に示される修飾を含む少なくとも１つの領域を含み、一方でそのオリゴヌクレオチドの残りの部分は「修飾されない」ままである。
【０１０７】
いくつかの態様において、修飾はヌクレアーゼ分解に対する抵抗性の増加、細胞取り込みの増加、安定性の増加および／または標的核酸への結合アフィニティの増加を与える。他の態様において、修飾はＲＮＡ：ＤＮＡまたはＲＮＡ：ＲＮＡハイブリッドを切断することができる酵素の基質としてはたらく。例示のために、ＲＮアーゼＨはＲＮＡ：ＤＮＡ二重鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞エンドヌクレアーゼである。ＲＮアーゼＨの活性化はそれゆえ、ＲＮＡ標的の切断をもたらし、それにより遺伝子発現のオリゴヌクレオチド仲介阻害の有効性を大いに高める。ＲＮＡ：ＲＮＡハイブリッドの切断は、そのような様式で、細胞およびウイルスＲＮＡの両方を切断するＲＮアーゼＬの如きエンドリボヌクレアーゼの活性をとおして達成され得る。ＲＮＡ標的の切断はゲル電気泳動、および必要な場合、本分野において既知の関連する核酸ハイブリダイゼーション技術により日常的に検出され得る。
【０１０８】
キメラ化合物は上記に示されるような２つ以上のオリゴヌクレオチド、修飾オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、および／またはオリゴヌクレオチドミメティックの複合構造として形成され得る。そのような化合物はハイブリッドまたはギャップマーともまた本分野で呼ばれている。例えば、米国特許第５，０１３，８３０号、同第５，１４９，７９７号、同第５，２２０，００７号、同第５，２５６，７７５号、同第５，３６６，８７８号、同第５，４０３，７１１号、同第５，４９１，１３３号、同第５，５６５，３５０号、同第５，６２３，０６５号、同第５，６５２，３５５号、同第５，６５２，３５６号、および同第５，７００，９２２号を参照のこと。当該出願はそれらの全体が本明細書に参考として組み入れられる。
【０１０９】
ＲＮＡ配列およびハイブリダイゼーション
いくつかの態様において、本開示は特定の核酸、例えば、表５中に開示されるようなサーチュイン遺伝子によりコードされる特定のＲＮＡの標的化方法を提供する。その標的核酸は本分野においてまた知られるように、細胞、組織サンプルまたは生物学的流体中に存在し得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ  ｅｄ．１９８９）およびＢ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ  ａｎｄ  Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．，Ｇｅｎｅ  Ｐｒｏｂｅｓ１（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９５）を参照のこと。
【０１１０】
用語「開始コドン領域」および「翻訳開始コドン領域」は翻訳開始コドンからいずれかの方向（すなわち、５′または３′）の連続的なヌクレオチドを含むｍＲＮＡまたは遺伝子の一部を言う。同様に、用語「ストップコドン領域」および「翻訳終止コドン領域」は翻訳終止コドンからいずれかの方向（すなわち、５′または３′）の連続的なヌクレオチドを含むｍＲＮＡまたは遺伝子の一部を言う。したがって、「開始コドン領域」（または「翻訳開始コドン領域」）および「ストップコドン領域」（または「翻訳終止コドン領域」）は機能化ナノ粒子上のオリゴヌクレオチドで有効に標的化され得る全ての領域である。
【０１１１】
他の標的領域は５′非翻訳領域（５′ＵＴＲ）、ｍＲＮＡの５′キャップ部位および翻訳開始コドンの間のヌクレオチド（またはその遺伝子上の対応するヌクレオチド）を含む、翻訳開始コドンから５′方向のｍＲＮＡの部分、および３′非翻訳領域（３′ＵＴＲ）、ｍＲＮＡの翻訳終止コドンおよび３′末端の間のヌクレオチド（またはその遺伝子上の対応するヌクレオチド）を含む、翻訳終止コドンから３′方向のｍＲＮＡの部分を含む。ｍＲＮＡの５′キャップ部位は５′‐５′三リン酸結合を介してｍＲＮＡの５′‐末端残基に結合されたＮ７‐メチル化グアノシン残基を含む。ｍＲＮＡの５′キャップ領域は５′キャップ構造それ自体およびそのキャップ部位に隣接するはじめの５０ヌクレオチドを含むと考えられる。
【０１１２】
サーチュイン活性をブロックするまたは減少させる他の方法
追加の方法によりサーチュイン活性を阻害することによるウイルス産生の増加方法もまた本明細書中に開示される。例えば、ドミナントネガティブタンパク質はサーチュイン活性を阻害するために使用され得る。ドミナントネガティブタンパク質はそれらの通常の相対物の活性を妨害するタンパク質である。ドミナントネガティブタンパク質は、もはやあるタンパク質の通常の機能の全ての局面を仲介せず、そして対応する野生型タンパク質の通常の機能またはそれらが相互作用する他のタンパク質の機能もまた阻害する。ドミナントネガティブタンパク質は本分野において周知のさまざまな方法により細胞に導入され得る。
【０１１３】
１つ以上のサーチュイン遺伝子が欠損しているまたはそうでなければ部分的に、もしくは完全に不活性化されているトランスジェニック動物から単離された細胞または組織（またはニワトリの場合、卵）を用いることによるウイルス産生の増加方法もまた本明細書中に開示される。トランスジェニック動物は本分野において周知の方法により作出され得る。
【０１１４】
細胞に１つ以上のサーチュインの発現を部分的にまたは完全に不活性化する突然変異を導入することによるウイルス産生の増加方法もまた本明細書中に開示される。細胞内の特定の標的に突然変異を方向付けるさまざまな方法、例えば、遺伝子工学で作出された亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼを用いることによる方法（Ｓａｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ８，６７‐９，２０１１）またはＴＡＬＥＮＳを用いることによる方法（Ｃｅｒｍａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３９，ｅ８２）は本分野において周知である。
【０１１５】
この明細書をとおして引用される引用文献は、各引用文献が完全に示されているかのように本明細書中でおよびその引用文献それ自体の中で全て明らかにする目的のために組み入れられる。表示のために、これらの引用文献の特定の１つは本明細書中で特定の位置で引用される。特定の位置での引用文献の引用はその引用文献の教示が組み入れられる様式（単数または複数）を示す。しかしながら、特定の位置での引用文献の引用は引用される引用文献の教示の全てが全ての目的のために組み入れられる様式を限定しない。
【０１１６】
本明細書中の単一の実施形態は本明細書中の１つ以上の他の実施形態からの１つ以上の要素で供給され得る。
【０１１７】
それゆえ、本発明は開示される特定の実施形態に限定されず、付属の請求項、上記説明、および／または付属の図面中に示されるものにより定義される本発明の精神および範囲内である全ての改変を含むと意図されることが理解される。
実施形態の例
付記１    １つ以上のサーチュインアゴニストを含む組成物。
付記２    その１つ以上のサーチュインアゴニストがＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２、ＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ６またはＳＩＲＴ７のいずれか、部分集合または全ての活性を増加させる、付記１に記載の組成物。
付記３    その１つ以上のサーチュインアゴニストが小分子、核酸、タンパク質、ペプチド含有アクチベーター、ＣＡＹ１０６０２、レスベラトロール、クェルセチン、ブテイン、ピセタノール、イソリキリチゲニン、フィセチン、ピロロキノキサリン、オキサゾロピリジン、ＳＲＴ１７２０、ＳＲＴ１４６０、ＳＲＴ２３７９およびＳＲＴ２１０４からなる群から選択される、付記１または２に記載の組成物。
付記４    ＣＡＹ１０６０２、レスベラトロール、クェルセチン、ブテイン、ピセタノール、イソリキリチゲニン、フィセチン、ピロロキノキサリン、オキサゾロピリジン、ＳＲＴ１７２０、ＳＲＴ１４６０、ＳＲＴ２３７９またはＳＲＴ２１０４のうちの１つ以上を含む、前述の付記のいずれかに記載の組成物。
付記５    サーチュイン遺伝子発現アクチベーターを含む組成物。
付記６    サーチュインアロステリックアクチベーターを含む組成物。
付記７    そのアゴニストが小分子、核酸、タンパク質、またはペプチドのうちの少なくとも１つを含み、その発現アクチベーターは小分子、核酸、タンパク質、またはペプチドのうちの少なくとも１つを含み、そしてそのアロステリックアクチベーターは小分子、核酸、タンパク質、またはペプチドのうちの少なくとも１つを含む、前述の付記のいずれかに記載の組成物。
付記８    前述の付記のいずれかに記載のサーチュインアゴニスト、サーチュイン遺伝子発現アクチベーター、またはサーチュインアクチベーターのうちの少なくとも１つを含む組成物。
付記９    １つ以上のサーチュインアンタゴニストを含む組成物。
付記１０  その１つ以上のサーチュインアンタゴニストがＳＩＲＴ１およびＳＩＲＴ２の両方の活性を減少させる、付記９に記載の組成物。
付記１１  そのサーチュインアンタゴニストが小分子、核酸、タンパク質、ペプチド含有アクチベーター単独、またはカンビノール、テノビン１、テノビン６、サレルミドおよびサーチノールのうちの少なくとも１つとの組み合わせからなる群から選択される、付記９または１０に記載の組成物。
付記１２  １つ以上のサーチュイン遺伝子発現阻害剤を含む組成物。
付記１３  １つ以上のサーチュイン競合阻害剤を含む組成物。
付記１４  そのアンタゴニストは小分子、核酸、タンパク質、またはペプチドのうちの少なくとも１つを含み、その発現阻害剤は小分子、核酸、タンパク質、またはペプチドのうちの少なくとも１つを含み、そしてその競合阻害剤は小分子、核酸、タンパク質、またはペプチドのうちの少なくとも１つを含む、付記９〜１３のいずれかに記載の組成物。
付記１５  前述の付記のいずれかに記載のサーチュインアンタゴニスト、サーチュイン遺伝子発現阻害剤、またはサーチュイン競合阻害剤のうちの少なくとも１つを含む組成物。
付記１６  付記１〜１５のいずれかに記載の組成物および医薬として許容される担体を含む医薬組成物。
付記１７  その医薬として許容される担体はイオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、ヒト血清アルブミン、緩衝液物質、リン酸、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分的なグリセリド混合物、水、塩、電解質、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピローリドン、セルロース含有物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、 ろう、 ポリエチレングリコール、デンプン、ラクトース、リン酸二カルシウム、微晶質セルロース、スクロース、タルク、炭酸マグネシウム、カオリン、非イオン性界面活性剤、食用油、生理食塩水、滅菌水、ＣｒｅｍｏｐｈｏｒＥＬ（登録商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）およびリン酸緩衝塩水（ＰＢＳ）からなる群から選択される少なくとも１つの物質を含む、付記１６に記載の医薬組成物。
付記１８  付記１〜１５のいずれかに記載の組成物または付記１６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、疾患の治療方法。
付記１９  付記１〜１５のいずれかに記載の組成物または付記１６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、疾患の治療方法であって、その疾患は１つ以上のウイルスにより引き起こされる、方法。
付記２０  付記１〜１５のいずれかに記載の組成物または付記１６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、疾患の治療方法であって、その疾患は単一のウイルスにより引き起こされる、方法。
付記２１  付記１〜１５のいずれかに記載の組成物または付記１６〜１７のいずれかに記載の医薬組成物を対象に提供することを含む、疾患の治療方法であって、その疾患はＨＣＭＶにより引き起こされる、方法。
付記２２  対象におけるサーチュイン遺伝子発現の誘導を含む、疾患の治療方法。
付記２３  対象におけるサーチュイン遺伝子発現の阻害を含む、疾患の治療方法。
付記２４  ＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２、ＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ６またはＳＩＲＴ７のうちの１つ以上の発現がそれぞれ誘導されるまたは阻害される、２２または付記２３に記載の方法。
付記２５  ウイルスをサーチュインアゴニストと接触させることを含む、ウイルス生成の阻害方法。
付記２６  そのサーチュインアゴニストがポリヒドロキシカルコン、ポリヒドロキシフラボノイド、ポリヒドロキシスチルベン、またはそれらの組み合わせである、付記２５に記載の方法。
付記２７  そのアゴニストが構造
【化２９】
2014505705.tif 000060
【化３０】
2014505705.tif 000061
またはそれらの塩もしくはエステルを有し、Ｒ1はＨもしくはＯＨであり、そしてＲ2は
2014505705.tif 000062
であるまたはＲ1は
2014505705.tif 000063
であり、そしてＲ2はＨもしくはＯＨであり、点線は選択的な二重結合を示し、ｘおよびｙはそれぞれ０、１、２、３、４、または５であり、そしてｘ＋ｙ≧１であり、ｗおよびｚはそれぞれ０、１、２、３、４、または５であり、そしてｗ＋ｚ≧１であり、そしてｎおよびｍはそれぞれ０、１、２、３、４、または５であり、ｎ＋ｍ≧１である、付記２５に記載の方法。
付記２８  その点線は二重結合である、付記２７に記載の方法。
付記２９  Ｒ1がＨまたはＯＨであり、そしてＲ2が
2014505705.tif 000064
である、付記２７または２８に記載の方法。
付記３０  Ｒ2がＨまたはＯＨであり、そしてＲ1が
2014505705.tif 000065
である、付記２７または２８に記載の方法。
付記３１  そのサーチュインアゴニストがレスベラトロール、クェルセチン、ルチン（ｒｕｔｉｎ）、ブテイン、ピセタノール、イソリキリチゲニン、フィセチン、フスチン（ｆｕｓｔｉｎ）、スルフレチン（ｓｕｌｆｕｒｅｔｉｎ）、ゲニステイン、ダイゼイン、タキシフォリン（ｔａｘｉｆｏｌｉｎ）、アロマデドリン（ａｒｏｍａｄｅｄｒｉｎ）、それらの組み合わせ、またはそれらの塩もしくはエステルである、付記２５に記載の方法。
付記３２  そのサーチュインアゴニストがＣＡＹ１０６０２、ピロロキノキサリン、オキサゾロピリジン、ＳＲＴ１７２０、ＳＲＴ１４６０、ＳＲＴ２３７９、ＳＲＴ２１０４またはＧＳＫ１８４０７２である、付記２５に記載の方法。
付記３３  そのサーチュインアゴニストが３，５‐ジヒドロキシ‐４′‐クロロ‐トランス‐スチルベン、ジピリダモール、３，５‐ジヒドロキシ‐４′エチル‐トランス‐スチルベン、３，５‐ジヒドロキシ‐４′‐イソプロピル‐トランス‐スチルベン、３，５‐ジヒドロキシ‐４′‐メチル‐トランス‐スチルベン、レスベラトロール、３，５‐ジヒドロキシ‐４′チオメチル‐トランス‐スチルベン、３，５‐ジヒドロキシ‐４′‐カルボメトキシ‐トランス‐スチルベン、イソリキリチゲニン、３，５‐ジヒドロ‐４′ニトロ‐トランス‐スチルベン、３，５‐ジヒドロキシ‐４′アジド‐トランス‐スチルベン、ピセタノール、３‐メトキシ‐５‐ヒドロキシ‐４′アセトアミド‐トランス‐スチルベン、３，５‐ジヒドロキシ‐４′アセトキシ‐トランス‐スチルベン、ピノシルビン、フィセチン、（Ｅ）‐１‐（３，５‐ジヒドロフェニル）‐２‐（４‐ピリジル）エテン、（Ｅ）‐１‐（３，５‐ジヒドロフェニル）‐２‐（２‐ナフチル）エテン、３，５‐ジヒドロキシ‐４′‐アセトアミド‐トランス‐スチルベン、ブテイン、クェルセチン、３，５‐ジヒドロキシ‐４′‐チオエチル‐トランス‐スチルベン、３，５‐ジヒドロキシ‐４′カルボキシ‐トランス‐スチルベン、３，４′‐ジヒドロキシ‐５‐アセトキシ‐トランス‐スチルベン、またはそれらの組み合わせである、付記２５に記載の方法。
付記３４  そのサーチュインアゴニストがトランス‐スチルベン、シス‐スチルベン、レスベラトロール、ピセタノール、ラポンチン、デオキシラポンチン、ブテイン、カルコン、イソリキリチゲニン、ブテイン、４，２′，４′‐トリヒドロキシカルコン、３，４，２′，４′，６′‐ペンタヒドロキシカルコン、フラボン、モリン、フィセチン、ルテオリン、クェルセチン、ケンプフェロール、アピゲニン、ゴシペチン、ミリセチン、６‐ヒドロキシアピゲニン、５‐ヒドロキシフラボン、５，７，３′，４′，５′‐ペンタヒドロキシフラボン、３，７，３′，４′，５′‐ペンタヒドロキシフラボン、３，６，３′，４′‐テトラヒドロキシフラボン、７，３′，４′，５′‐テトラヒドロキシフラボン、３，６，２′，４′‐テトラヒドロキシフラボン、７，４′‐ジヒドロキシフラボン、７，８，３′，４′‐テトラヒドロキシフラボン、３，６，２′，３′‐テトラヒドロキシフラボン、４′‐ヒドロキシフラボン、５‐ヒドロキシフラボン、５，４′‐ジヒドロキシフラボン、５，７‐ジヒドロキシフラボン、ダイゼイン、ゲニステイン、ナリンゲニン、フラバノン、３，５，７，３′，４′‐ペンタヒドロキシフラバノン、塩化ペラルゴニジン、塩化シアニジン、塩化デルフィニジン、（−）‐エピカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′）、（−）‐カテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′）、（−）‐ガロカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′，５′）、（＋）‐カテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′）、（＋）‐エピカテキン（ヒドロキシ部位：３，５，７，３′，４′）、ヒノキチオール（ｂ‐ツジャプリシン、２‐ヒドロキシ‐４‐イソプロピル‐２，４，６‐シクロヘプタトリエン‐１‐オン）、Ｌ‐（＋）‐エルゴチオネイン（（Ｓ）‐ａ‐カルボキシ‐２，３‐ジヒドロ‐Ｎ，Ｎ，Ｎ‐トリメチル‐２‐チオキソ‐１Ｈ‐イミダゾール４‐エタナム‐イニウム分子内塩）、コーヒー酸フェニルエステル、ＭＣＩ‐１８６（３‐メチル‐１‐フェニル‐２‐ピラゾリン‐５‐オン）、ＨＢＥＤ（Ｎ，Ｎ′‐ジ‐（２‐ヒドロキシベンジル）エチレンジアミン‐Ｎ，Ｎ′‐ジ酢酸  水）、アンブロキソール（トランス‐４‐（２‐アミノ‐３，５‐ジブロモベンジルアミノ）シクロヘキサン‐ＨＣｌ、およびＵ‐８３８３６Ｅ（（−）‐２‐（（４‐（２，６‐ジ‐１‐ピロリジニル‐４‐ピリミジニル）‐１‐ピペラジニル）ｍ‐エチル）‐３，４‐ジヒドロ‐２，５，７，８‐テトラメチル‐２Ｈ‐１‐ベンゾピラン‐６‐オール  ２水）、ベータ‐１′‐５‐メチル‐ニコチンアミド‐２′‐デオキシリボース、ベータ‐Ｄ‐１′‐５‐メチル‐ニコチンアミド‐２′‐デオキシリボフラノシド、ベータ‐１′‐４，５‐ジメチル‐ニコチンアミド‐２′‐デ‐オキシリボース、またはベータ‐Ｄ‐１′‐４，５‐ジメチル‐ニコチンアミド‐２′‐デオキシリボフラノシド、ジピリダモール、ＺＭ  ３３６３７２（３‐（ジメチルアミノ）‐Ｎ‐［３‐［（４‐ヒドロキシベンゾイル）‐アミノ］‐４‐メチルフェニル］ベンザミド）、カンプトテシン、クメストロール、ノルジヒドログアイアレチン酸、エスクレチン、ＳＲＴ‐１７２���（サートリス）、ＳＲＴ‐１４６０（サートリス）、ＳＲＴ‐２１８３（サートリス）、それらのアナログ、またはそれらの組み合わせである、付記２５に記載の方法。
付記３５  そのサーチュインがＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２、ＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ６、ＳＩＲＴ７、またはそれらの組み合わせである、付記２５〜３４のいずれか１つに記載の方法。
付記３６  そのアゴニストが１つのサーチュインのみを活性化する、付記２５〜３５のいずれか１つに記載の方法。
付記３７  その接触がウイルス感染を患う対象にそのアゴニストを投与することを含む、付記２５〜３６のいずれか１つに記載の方法。
付記３８  その対象はヒトである、付記３７に記載の方法。
付記３９  そのウイルスはＨＣＭＶである、付記２５〜３８のいずれか１つに記載の方法。
付記４０  そのウイルスをＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２二重阻害剤と接触させることを含む、ウイルス生成の阻害方法。
付記４１  そのＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２二重阻害剤がカンビノール、サレルミド、テノビン‐６、テノビン‐１、またはそれらの組み合わせである、付記４０に記載の方法。
付記４２  そのウイルスはウイルス複製中にｐ５３を不活性化する、付記４０または４１に記載の方法。
付記４３  そのウイルスはＨＣＭＶである、付記４０〜４２のいずれか１つに記載の方法。
付記４４  そのウイルスはヒトパピローマウイルス、ＨＳＶ１、Ａｄ５、Ａ型インフルエンザ、ヒトアデノウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、またはＨＩＶである、付記４０〜４２のいずれか１つに記載の方法。
付記４５  そのウイルスはアデノウイルス科（ｐ５３不活性化タンパク質としてＥ１Ｂ‐５５Ｋを有するアデノウイルス）、ヘパドナウイルス科（ｐ５３不活性化タンパク質としてＸタンパク質を有するＨＢＶ）、ヘルペスウイルス科（ｐ５３不活性化タンパク質としてＬＭＰ１を有するＥＢＶ、ｐ５３不活性化タンパク質としてＩＣＰ０を有するＨＳＶ‐１、ｐ５３不活性化タンパク質としてＩＥ１を有するＨＣＭＶ、ｐ５３不活性化タンパク質としてＬＡＮＡを有するＫＳＨＶ）、フラビウイルス科（ｐ５３不活性化タンパク質としてＮＳ５Ａを有するＨＣＶ）、オルトミクソウイルス科（ｐ５３不活性化タンパク質としてＮＳ１を有するＡ型インフルエンザ）、パピローマウイルス科（ｐ５３不活性化タンパク質としてＥ６を有するＨＰＶ）、ポリオーマウイルス科（ｐ５３不活性化タンパク質としてラージＴ‐抗原を有するＳＶ４０、ｐ５３不活性化タンパク質としてラージＴ‐抗原を有するＪＣウイルス、ｐ５３不活性化タンパク質としてラージＴ‐抗原を有するＢＫウイルス）、またはレトロウイルス科（ｐ５３不活性化タンパク質としてＴａｔを有するＨＩＶ）である、付記４０〜４２のいずれか１つに記載の方法。
付記４６  そのウイルスを第２の剤と接触させることをさらに含む、付記２５〜４５のいずれか１つに記載の方法。
付記４７  その第２の剤が第２のＳＩＲＴ１／ＳＩＲＴ２二重阻害剤または第２のサーチュインアゴニストである、付記４６に記載の方法。
付記４８  その第２の剤が抗ウイルス剤である、付記４６に記載の方法。
付記４９  その抗ウイルス剤がアシクロビル、ドコサノール、リバリビン、インターフェロン等、酢酸セルロース、カーボポールおよびカラゲナン、プレコナリル、アマンチジン、リマンチジン、フォミビルセン、ジドブジン、ラミブジン、ザナミビル、オセルタミビル、ブリブジン、アバカビル、アデフォビル、アンプレナビル、アルビドール、アタザナビル、アトリプラ、シドフォビル、コンビビル、エドクスジン、エファビレンツ、エムトリシタビン、エンフビルチド、エンテカビル、ファムシクロビル、フォサムプレナビル、フォスカルネット、フォスフォネット、ガンシクロビル、ガルダシル、イバシタビン、イムノビル、イドクスウリジン、イミキモド、インジナビル、イノシン、インテグラーゼ阻害剤、ラミブジン、ロピナビル、ロビリド、ｍｋ‐０５１８、マラビロク、モロキシジン、ネルフィナビル、ネビラピン、ネキサビル、ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシドアナログ、オセルタミビル、ペンシクロビル、ペラミビル、ポドフィロトキシン、リマンタジン、リトナビル、サキナビル、スタブジン、テノフォビル、テノフォビルジソプロキシル、チプラナビル、トリフルリジン、トリジビル、トロマンタジン、ツルバダ、バラシクロビル、バルガンシクロビル、ビクリビロク、ビダラビン、ビラミジン、ザルシタビン、モルフォリノオリゴヌクレオチド、リボザイム、プロテアーゼ阻害剤、アセンブリー阻害剤（例えば、リファムピシン）、ジドブジン、またはそれらの組み合わせである、付記４８に記載の方法。
【図１】
2014505705.tif 000066
【図２】
2014505705.tif 000067
【図３】
2014505705.tif 000068
【図４】
2014505705.tif 000069
【図５】
2014505705.tif 000070
【図６】
2014505705.tif 000071
【図７】
2014505705.tif 000072
【図８】
2014505705.tif 000073
【図９】
2014505705.tif 000074
【図１０】
2014505705.tif 000075
【配列表】
2014505705000001.app
【国際調査報告】
2014505705.tif 000076
2014505705.tif 000077
2014505705.tif 000078
2014505705.tif 000079
2014505705.tif 000080