(57)【要約】  癌を有するヒトを治療する方法であって、前記ヒトの少なくとも１つの腫瘍細胞から、Ｒａｓタンパク質または少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも１つの突然変異を検出すること、および少なくとも１つのＲａｓタンパク質または少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも１つの突然変異を有する前記ヒトを、構造（Ｉ）の化合物：2014505658.tif 000021またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる少なくとも１つのＭＥＫ阻害剤を含んでなる医薬組成物で治療することを含んでなる方法。
2014505658.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を有する哺乳類を治療する方法であって、前記哺乳類の少なくとも１つの腫瘍細胞から、Ｒａｓタンパク質または少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも１つの突然変異を検出すること、および少なくとも１つのＲａｓタンパク質または少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも１つの突然変異を有する前記哺乳類を、構造（Ｉ）の化合物：
【化１】
2014505658.tif 000016
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる少なくとも１つのＭＥＫ阻害剤を含んでなる医薬組成物で治療することを含んでなる方法。
【請求項２】
前記哺乳類がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記癌が骨髄性悪性癌である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記癌が白血病である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記癌が、急性リンパ性白血病、急性非リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、および慢性骨髄単球性白血病から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項６】
前記ヒトが原因不明性骨髄様化生を有する、請求項２〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記癌が、再発性または難治性である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記癌が、黒色腫、膵臓癌、結腸直腸癌、および非小細胞肺癌から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
構造（Ｉ）が、ナトリウム塩の形態である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
構造（Ｉ）が、ジメチルスルホキシド溶媒和物の形態である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも１つのＢｒａｆ阻害剤を前記ヒトに投与することをさらに含んでなる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記Ｂｒａｆ阻害剤が、構造（ＩＩ）の化合物：
【化２】
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またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
少なくとも１つのｍＴＯＲ阻害剤を前記哺乳類に投与することをさらに含んでなる、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ｍＴＯＲ阻害剤が、ラパマイシン、エベロリムス、デホロリムス、およびテムシロリムスから選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
以下：ラパマイシン、ａｒａ‐Ｃ、ベキサロテンおよびソラフェニブの少なくとも１つを、前記哺乳類に投与することをさらに含んでなる、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
少なくとも１つのＲａｓタンパク質または少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における前記突然変異が、Ｋ‐ｒａｓ、Ｈ‐ｒａｓまたはＮ‐ｒａｓにある、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子における前記突然変異が、エクソン２または３にある、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子が、ｒａｓコドン１２、１３、１４、５９、６０、６１、７６、または１４６の少なくとも１つに突然変異を有する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
少なくともＲａｓタンパク質が、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ１３Ｄ、Ｖ１４Ｉ、Ｇ６０Ｅ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｒ、Ｔ７４Ｐ、Ｅ７６Ｇ、Ｅ７６Ｋ、Ｅ７６ＱおよびＡ１４６Ｔから選択される少なくとも１つの突然変異を有する、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記少なくとも１つのＲａｓタンパク質が、Ｇ１２Ａの突然変異をもつＫ‐ｒａｓである、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記少なくとも１つのＲａｓタンパク質が、Ｇ１２Ｓの突然変異をもつＮ‐ｒａｓである請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記腫瘍細胞がまた、少なくとも１つのＢｒａｆ突然変異を有する、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記Ｂｒａｆ突然変異が、Ｒ４６２Ｉ、Ｉ４６３Ｓ、Ｇ４６４Ｖ、Ｇ４６４Ｅ、Ｇ４６６Ａ、Ｇ４６６Ｅ、Ｇ４６６Ｖ、Ｇ４６９Ａ、Ｇ４６９Ｅ、Ｄ５９４Ｖ、Ｆ５９５Ｌ、Ｇ５９６Ｒ、Ｌ５９７Ｖ、Ｌ５９７Ｒ、Ｔ５９９Ｉ、Ｖ６００Ｅ、Ｖ６００Ｄ、Ｖ６００Ｋ、Ｖ６００Ｒ、Ｔ１１９Ｓ、およびＫ６０１Ｅから選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ヒトが、構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる前記医薬組成物の投与後、骨髄性悪性腫瘍の完全寛解を示す、請求項３〜７または９〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
完全寛解が、前記ヒトが白血病のすべての症状がなく、かつ、絶対好中球数≧１×１０９／Ｌ、血小板数≧１００×１０９／Ｌ、および芽細胞≦５％である正常な骨髄像を有することにより測定される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ヒトが、構造（Ｉ）またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる医薬組成物での少なくとも１週間の治療を受けた後に、骨髄において検出可能な芽細胞を有さない、請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項２７】
構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物の量が、０．１２５ｍｇ〜１０ｍｇから選択される量である、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物の量が、１．０ｍｇ／日、１．５ｍｇ／日および２．０ｍｇ／日から選択される投与量で１日１回投与される、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
ＢＲＡＦ阻害剤の量が、７５ｍｇ〜１，０００ｍｇから選択される量である、請求項１１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる医薬組成物および少なくとも１つのＢｒａｆ阻害剤を含んでなる医薬組成物が、別々に投与される、請求項１１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる医薬組成物が、構造ＩＩまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる医薬組成物と同時に投与される、請求項１１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
白血病を有するヒトにおける骨髄における芽細胞を低減または除去する方法であって、前記ヒトに構造（Ｉ）の化合物：
【化３】
2014505658.tif 000018
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる少なくとも１つのＭＥＫ阻害剤を含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法。
【請求項３３】
骨髄における前記芽細胞が、約５％未満まで低減される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ヒトから単離された白血病細胞が、少なくとも１つのＲａｓタンパク質突然変異を有する、請求項３２または３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記Ｒａｓタンパク質突然変異が、Ｋ‐ｒａｓ、Ｈ‐ｒａｓまたはＮ‐ｒａｓにある、請求項３２〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
以下：化合物Ｂまたは薬学的に許容可能な塩、ラパマイシン、エベロリムス、デホロリムス、およびテムシロリムスの少なくとも１つを前記ヒトに投与することをさらに含んでなる、請求項３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
異常な数の芽細胞が骨髄に存在する癌を有するヒトを治療する方法であって、前記ヒトに、構造（Ｉ）の化合物：
【化４】
2014505658.tif 000019
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる少なくとも１つのＭＥＫ阻害剤を含んでなる医薬組成物を投与すること；
前記ヒトおける骨髄からの芽細胞をモニタリングすること；
前記ヒトからの少なくとも１つの腫瘍細胞から、少なくとも１つのＲａｓ突然変異について遺伝子型決定すること；および
Ｒａｓ突然変異が検出された場合、構造（Ｉ）を含んでなる前記医薬組成物を前記ヒトに少なくとも１つのさらなる投与量を投与すること
を含んでなる方法。
【請求項３８】
少なくとも１つのＲａｓ突然変異の検出と、構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物での治療に対する反応の増加を関連づけることをさらに含んでなる、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
骨髄性癌を有するヒト患者を治療する方法であって、前記患者からの試料が、Ｒａｓタンパク質または少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも１つの突然変異を有するか否かを判定すること、および前記試料が、Ｒａｓタンパク質または少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子に少なくとも１つの突然変異を有すると判定された場合、前記患者を構造（Ｉ）の化合物：
【化５】
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またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる少なくとも１つのＭＥＫ阻害剤を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量で治療することを含んでなる方法。
【請求項４０】
前記患者が白血病を有する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記試料が腫瘍試料である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
前記試料が血液試料である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
少なくともＲａｓタンパク質が、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｒ、Ｖ１４Ｉ、Ｇ６０Ｅ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｒ、Ｔ７４Ｐ、Ｅ７６Ｇ、Ｅ７６Ｋ、Ｅ７６ＱおよびＡ１４６Ｔから選択される少なくとも１つの突然変異を有する、請求項３９〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳類における癌を治療する方法に関する。特に、該方法は、少なくとも１つの腫瘍細胞からのＲａｓタンパク質および／または少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子に少なくとも１つの突然変異を有するヒトを治療することを含んでなる方法であって、ＭＥＫ阻害剤：Ｎ‐｛３‐［３‐シクロプロピル‐５‐（２‐フルオロ‐４‐ヨード‐フェニルアミノ）６，８‐ジメチル‐２，４，７‐トリオキソ‐３，４，６，７‐テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピリド［４，３‐ｄ］ピリミジン‐１‐イル］フェニル｝アセトアミド、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を前記ヒトに投与することを含んでなる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌を含む過剰増殖性障害（ｈｙｐｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）の効果的な治療は、腫瘍学分野における継続的な目標であり、満たされていない医療ニーズである。一般には、癌は、とりわけ細胞増殖、細胞分裂、分化およびアポトーシス細胞死を制御する通常のプロセスの脱制御に起因する。そのようなプロセスの１つは、アポトーシスのキナーゼ調節および細胞表面における成長因子受容体から核への細胞シグナリングにかかわる（Crews and Erikson, Cell, 74:215-17, 1993）。
【０００３】
酵素の大きなファミリーは、プロテインキナーゼ酵素ファミリーである。約５００の異なる公知のプロテインキナーゼがある。プロテインキナーゼは、ＡＴＰ‐Ｍｇ２＋複合体のγ‐ホスフェートを前記アミノ酸側鎖に転移することによって、さまざまなタンパク質におけるアミノ酸側鎖のリン酸化を触媒する役目を果たす。これらの酵素は、細胞内のシグナリングプロセスの大部分を制御し、それにより、細胞機能、増殖、分化およびアポトーシスを、タンパク質中のセリン、スレオニンおよびチロシン残基のヒドロキシル基の可逆的リン酸化を通して管理すると思われる。幾つかの研究では、プロテインキナーゼは、シグナル伝達、転写調節、細胞運動性、および細胞分裂を含む多くの細胞機能を調節することが示されている。また、幾つかの癌遺伝子が、プロテインキナーゼをコードすることが示され、キナーゼが発癌に関与することを示唆している。
【０００４】
例えば、癌、特に結腸直腸癌、膵癌、肺癌、乳癌などおけるＲａｆ‐ＭＥＫ‐ＥＲＫシグナル伝達経路の活性化が観察されている。
【０００５】
ｒａｓファミリーの癌遺伝子（Ｋ‐ｒａｓ、Ｈ‐ｒａｓ、およびＮ‐ｒａｓ）は、ＧＴＰａｓｅ活性を有する膜タンパク質をコードする。これらのタンパク質は細胞シグナル伝達にかかわる。通常はｒａｓコドン１２、１３、または６１内にある特定の点突然変異が、これらのプロトオンコジーンの活性化、それに続く新生組織形成をもたらしうる（Bos, J. L., 1989, Can. Res. 49:4682-4689）。そのすべてが検討されてきたわけではないが、ｒａｓ突然変異の起こる頻度は、異なる腫瘍タイプによってさまざまである。約４０〜５０％の結腸癌は、ｃ‐Ｋ‐ｒａｓ遺伝子に突然変異を呈し、これらの突然変異の８６％はコドン１２および１３に起こることを示す研究がある（Bos, J. L. et al., 1987,Nature 327:(6120)293-7, Vogelstein B. et al., 1988, N. Engl. J. Med. 319:525-532）。Ｒａｓ突然変異は、Ｒａｓタンパク質の本来備わっているＧＴＰ‐ａｓｅ活性の減少に起因して細胞増殖の増加をもたらす。
【０００６】
少なくとも１つのＲａｓタンパク質突然変異を有する癌をもつ人を治療する新規の方法を提供することは、有用であるはずである。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１は、造血癌細胞株のＭＥＫ阻害剤である化合物Ａに対する感度（ｇＩＣ５０）を示す。
【図２】図２は、ＡＭＬ由来の造血癌細胞株に対する、ＭＥＫ阻害剤（化合物Ａ）の異なる薬との組み合わせ効果を示す。
【図３】図３は、Ｔ‐ＭＤＳ＞ＡＭＬである７４歳女性に対する化合物Ａでの治療後の末梢芽球、血小板、白血球数、事前治療：ＤＡＣ＞ＣＲ１５ヶ月を示す。
【発明の概要】
【０００８】
本発明の１つの実施態様では、癌を有する哺乳類を治療する方法であって、前記哺乳類の少なくとも１つの腫瘍細胞から、Ｒａｓタンパク質または少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも１つの突然変異を検出すること、および少なくとも１つのＲａｓタンパク質または少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも１つの突然変異を有する前記哺乳類を、構造（Ｉ）の化合物：
【化１】
2014505658.tif 000003
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる少なくとも１つのＭＥＫ阻害剤を含んでなる医薬組成物で治療することを含んでなる方法が提供される。１つの実施態様では、哺乳類はヒトである。
【発明の具体的説明】
【０００９】
本発明の１つの実施態様では、癌を有する哺乳類を治療する方法であって、前記哺乳類の少なくとも１つの腫瘍細胞から、Ｒａｓタンパク質または少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも１つの突然変異を検出すること、および少なくとも１つのＲａｓタンパク質または少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも１つの突然変異を有する前記哺乳類を、構造（Ｉ）の化合物：
【化２】
2014505658.tif 000004
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる少なくとも１つのＭＥＫ阻害剤を含んでなる医薬組成物で治療することを含んでなる方法が提供される。１つの側面では、哺乳類はヒトである。
【００１０】
癌は、そのなかに異常な数の芽細胞（ｂｌａｓｔ  ｃｅｌｌｓ）が存在する任意の癌、または白血病、骨髄性悪性腫瘍または骨髄異形成症などの血液癌または異形成症、例えば、限定されないが、未分化急性骨髄性白血病、骨髄芽球性白血病、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤白血病および巨核芽球性白血病と診断された任意の癌でありうる。１つの側面では、癌は、骨髄性悪性癌（ｍｙｅｌｏｉｄ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ  ｃａｎｃｅｒ）である。別の側面では、癌は白血病である。白血病は、急性リンパ性白血病、急性非リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性（または骨髄）白血病（ＣＭＬ）、および慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）でありうる。１つの実施態様では、ヒトは、原因不明性骨髄様化生（ａｇｎｏｇｅｎｉｃ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｍｅｔａｐｌａｓｉａ）および／または高いリスクの（ｐｏｏｒ‐ｒｉｓｋ）骨髄異形成（ＭＤＳ）を有する。幾つかの側面では、癌は再発性または難治性である。患者は、構造Ｉを受ける以前に１つ以上の白血病に対する治療を受けたことがあってもよい。
【００１１】
別の実施態様では、Ｎ‐｛３‐［３‐シクロプロピル‐５‐（２‐フルオロ‐４‐ヨード‐フェニルアミノ）‐６，８‐ジメチル‐２，４，７‐トリオキソ‐３，４，６，７‐テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピリド［４，３‐ｄ］ピリミジン‐１‐イル］フェニル｝アセトアミドとも称される構造（Ｉ）、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物（以下、化合物Ａ、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物）は、ナトリウム塩の形態である。別の側面では、化合物Ａは、ジメチルスルホキシド溶媒和物の形態である。
【００１２】
Ｎ‐｛３‐［３‐シクロプロピル‐５‐（２‐フルオロ‐４‐ヨード‐フェニルアミノ）‐６，８‐ジメチル‐２，４，７‐トリオキソ‐３，４，６，７‐テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピリド［４，３‐ｄ］ピリミジン‐１‐イル］フェニル｝アセトアミド、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物（以下、化合物Ａ、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物）は、マイトジェン活性化細胞外シグナル調節キナーゼ１（ＭＥＫ１）およびＭＥＫ２の高度に選択的なアロステリック阻害剤である。ＭＥＫタンパク質は、通常腫瘍細胞において過剰に活性化されている、ある種の細胞外のシグナル関連キナーゼＥＲＫ経路における中心点である。Ｂ‐ｒａｆおよびＲａｓの両方における発癌性の突然変異は、ＭＥＫ１およびＭＥＫ２を経てシグナルを伝える。インビトロでは、活性化されているＢ‐Ｒａｆの突然変異をもつ細胞株の８０％およびＲａｓ変異細胞株の７２％が、細胞増殖アッセイにおいて、Ｎ‐｛３‐［３‐シクロプロピル‐５‐（２‐フルオロ‐４‐ヨード‐フェニルアミノ）‐６，８‐ジメチル‐２，４，７‐トリオキソ‐３，４，６，７‐テトラヒドロ‐２Ｈ‐ピリド［４，３‐ｄ］ピリミジン‐１‐イル］フェニル｝アセトアミド、または薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物に対して感受性があり、急性または慢性骨髄性白血病（それぞれ、ＡＭＬまたはＣＭＬ）に由来する造血癌（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒｓ）の大部分（８３％）もまた非常に感受性がある。
【００１３】
別の実施態様では、本発明は、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物とともに、少なくとも１つのＢｒａｆ阻害剤を投与することを含んでなる、癌を治療する方法を提供する。１つの側面では、Ｂｒａｆ阻害剤は構造（ＩＩ）：
【化３】
2014505658.tif 000005
またはその薬学的に許容可能な塩であり、Ｎ  Ｎ‐｛３‐［５‐（２‐アミノ‐４‐ピリミジニル）‐２‐（１，１‐ジメチルエチル）‐１，３‐チアゾール‐４‐イル］‐２‐フルオロフェニル｝‐２，６‐ジフルオロベンゼンスルホンアミドメタンスルホン酸塩またはその薬学的に許容可能な塩とも称される（以下、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩）。
【００１４】
本発明の別の側面では、白血病を有し、少なくとも１つの腫瘍細胞からのＲａｓタンパク質または少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子に少なくとも１つの突然変異を有するヒトを、構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる医薬組成物ならびに以下：少なくとも１つのｍＴＯＲ阻害剤、ラパマイシン、ａｒａ‐Ｃ、ベキサロテンおよびソラフェニブの少なくとも１つで治療する方法が提供される。場合によっては、ｍＴＯＲ阻害剤は、ラパマイシン、ラパログ、エベロリムス、デホロリムス、およびテムシロリムスから選択される。
【００１５】
１つの側面では、前記腫瘍細胞における少なくとも１つのＲａｓ突然変異は、エクソン２および／またはエクソン３に起こる。別の実施態様では、少なくとも１つのＲａｓタンパク質または少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における突然変異は、Ｋ‐ｒａｓ、Ｈ‐ｒａｓおよび／またはＮ‐ｒａｓにある。少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子は、Ｒａｓコドン１２、１３、１４、５９、６１、７４、７６および１４６の少なくとも１つに突然変異を有しうる。幾つかの側面では、Ｒａｓタンパク質は、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｒ、Ｖ１４Ｉ、Ｇ６０Ｅ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｒ、Ｔ７４Ｐ、Ｅ７６Ｇ、Ｅ７６Ｋ、Ｅ７６ＱおよびＡ１４６Ｔから選択される突然変異を有する。幾つかの側面では、Ｋｒａｓ中の突然変異はＧ１２Ａであり、および／またはＮ‐ｒａｓ中の突然変異はＧ１２Ｓである。
【００１６】
別の側面では、哺乳類はまた、Ｂｒａｆ突然変異を有する。場合によっては、Ｂｒａｆ突然変異は、Ｒ４６２Ｉ、Ｉ４６３Ｓ、Ｇ４６４Ｖ、Ｇ４６４Ｅ、Ｇ４６６Ａ、Ｇ４６６Ｅ、Ｇ４６６Ｖ、Ｇ４６９Ａ、Ｇ４６９Ｅ、Ｄ５９４Ｖ、Ｆ５９５Ｌ、Ｇ５９６Ｒ、Ｌ５９７Ｖ、Ｌ５９７Ｒ、Ｔ５９９Ｉ、Ｖ６００Ｅ、Ｖ６００Ｄ、Ｖ６００Ｋ、Ｖ６００Ｒ、Ｔ１１９Ｓ、およびＫ６０１Ｅから選択される。場合によっては、Ｂｒａｆ突然変異は、同一腫瘍細胞および／または同一タイプの腫瘍細胞中にＲａｓ突然変異として検出される。
【００１７】
別の実施態様では、ヒトは、構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる医薬組成物の投与で骨髄性悪性腫瘍の完全寛解を示す。完全寛解は、ヒトが、すべてまたは実質的すべての白血病の症状がなく、ならびに／または絶対好中球数≧１×１０９／Ｌを有し、および／もしくは血小板数≧１００×１０９／Ｌおよび／もしくは芽細胞≦５％である正常な骨髄像（ｍａｒｒｏｗ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ）を有することを意味することができる。幾つかの側面では、構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる医薬組成物を受けた後、ヒトは骨髄に芽細胞を有さない。幾つかの側面では、ヒトは、構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる医薬組成物の少なくとも１週間の治療を受ける。本発明に想定されているように、構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる医薬組成物を受け、骨髄における≦５％芽細胞および／または完全寛解を示すヒトは、治療が続くある暫らくの期間、芽細胞数を５％未満に維持することができる。例えば、芽細胞は治療で減少または除去され、１週間、１ヶ月、数ヶ月またはそれより長く、および／または治療の継続期間、および／または治療が終わった後に、減少または除去されたままでありうる。幾つかの側面では、ヒトは、構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる医薬組成物での約１週間の治療を受けた後、骨髄に芽細胞を示さない、または検出不能な量を示す。場合によっては、患者は少なくとも８週間治療を続ける。
【００１８】
別の実施態様では、前記ヒトに投与される構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物の量は、０．１２５ｍｇ〜１０ｍｇから選択される量である。幾つかの側面では、前記ヒトに投与される構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物の量は、約１ｍｇ／日〜約２ｍｇ／日で毎日投与される。ＢＲＡＦ阻害剤の量は、７５ｍｇ〜１，０００ｍｇから選択される量である。幾つかの側面では、医薬組成物は、Ｎ  Ｎ‐｛３‐［５‐（２‐アミノ‐４‐ピリミジニル）‐２‐（１，１‐ジメチルエチル）‐１，３‐チアゾール‐４‐イル］‐２‐フルオロフェニル｝‐２，６‐ジフルオロベンゼンスルホンアミドメタンスルホン酸塩またはその薬学的に許容可能な塩（以下、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩）を、約７５ｍｇ〜約１，０００ｍｇの量で含んでなる。幾つかの側面では、構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる医薬組成物および少なくとも１つのＢｒａｆ阻害剤を含んでなる医薬組成物は、個別に投与される。別の側面では、構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる医薬組成物は、構造ＩＩまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる医薬組成物と同時に投与される。
【００１９】
化合物Ａは、薬学的に許容可能な塩およびその溶媒和物とともに、ＭＥＫ活性の阻害剤として、特に癌治療に有用であるとして、国際出願日２００５年６月１０日の国際出願ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１１０８２号；国際公開第２００５／１２１１４２号および国際公開日２００５年１２月２２日に開示および特許請求されており、該文献の開示は参照してその全体が本明細書に組み込まれ、化合物Ａは実施例４‐１の化合物である。化合物Ａは、国際出願ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１１０８２号に記載のように調製することができる。化合物Ａは、２００６年１月１９日に公開された米国特許出願公開第２００６／００１４７６８号に記載のように調製することができ、該開示は参照してその全体が本明細書に組み込まれる。
【００２０】
好適には、化合物Ａは、ジメチルスルホキシド溶媒和物の形態である。好適には、化合物Ａは、ナトリウム塩の形態である。好適には、化合物Ａは、水和物、酢酸、エタノール、ニトロメタン、クロロベンゼン、１−ペンタノール（１‐ｐｅｎｔａｎｃｉ）、イソプロピルアルコール、エチレングリコールおよび３‐メチル‐１‐ブタノールから選択される溶媒和物の形態である。これらの溶媒和物および塩の形態は、例えば国際出願ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１１０８２号または米国特許出願公開第２００６／００１４７６８号の記載から当業者により調製されうる。
【００２１】
化合物Ｂは、その薬学的に許容可能な塩とともに、特に癌治療におけるＢＲａｆ活性の阻害剤として有用であるとして、ＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＵＳ０９／４２６８２号に開示され、特許が請求されている。化合物Ｂは、そこにおいて、該出願の実施例５８ａから５８ｅにより具体化されている。このＰＣＴ出願は、国際公開第２００９／１３７３９１号として２００９年１１月１２日に公開され、参照して本明細書に組み込まれる。
【００２２】
本発明の化合物は、１つ以上のキラル原子を含有することがあり、またはそうでなければ２つの鏡像異性体として存在することができうる。したがって、本発明の化合物は、鏡像異性体の混合物も、精製された鏡像異性体または鏡像異性的に強化された混合物も含む。また、すべての互変異性体および互変異性体の混合物が、化合物Ａおよびその薬学的に許容可能な塩ならびに化合物Ｂおよびその薬学的に許容可能な塩の範囲内に包含されることが理解される。
【００２３】
本発明の化合物は、溶質（本発明では、化合物Ａもしくはその塩および／または化合物Ｂもしくはその塩）ならびに溶媒によって形成される可変化学量論複合物であることが理解される、溶媒和物を形成しうる。発明の目的のためのそのような溶媒は、溶質の生物学的活性を妨げるものではない。好適な溶媒としては、水、メタノール、ジメチルスルホキシド、エタノールおよび酢酸が挙げられるが、これらに限定されない。好適には、使用溶媒は薬学的に許容可能な溶媒である。好適な薬学的に許容可能な溶媒としては、水、ジメチルスルホキシド、エタノールおよび酢酸が挙げられるが、限定されない。好適には、使用溶媒は水である。
【００２４】
本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩は、当業者により容易に調製される。
【００２５】
また、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、および／または化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩が、プロドラッグとして投与される本発明の組み合わせを使用して、癌を治療する方法も本明細書において想定される。本発明の化合物の薬学的に許容可能なプロドラッグは、当業者により容易に調製される。
【００２６】
本明細書において使用する場合、「治療する」という用語およびその文法的変形形態により、治療的療法（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔｈｅｒａｐｙ）が意味される。具体的な状態に関して、治療するとは、（１）１つ以上のその状態の生物学的な兆候の状態を改善するまたは予防すること、（２）（ａ）その状態を招く、もしくは関与する生物学的なカスケードにおける１つ以上の点または（ｂ）１つ以上のその状態の生物学的な兆候を妨げること、（３）１つ以上の状態またはその治療に関連する症状、影響もしくは副作用を軽減すること、または（４）１つ以上のその状態の生物学的な兆候の状態の進行を遅らせることを意味する。予防治療もまたそれによって想定される。「予防」という語が絶対的な用語でないことを、当業者であれば理解するであろう。医学では、「予防」は、実質的に、状態もしくはその生物学的兆候の可能性または重篤度を減少させる、またはその状態もしくはその生物学的兆候の発症を遅らせるのに薬を予防的に投与することを指すことが理解される。例えば、対象が強い癌家系をもつ場合、または対象が発癌性物質に曝されてきた場合などの、対象が癌を発症する高いリスクにあると考えられる場合、予防治療は適している。
【００２７】
高いリスクの骨髄異形成（ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｉａ）の、高いリスクの骨髄異形成‐ＢＰ、慢性骨髄単球性白血病を含む急性白血病をもつ患者では（Cheson, et al. Blood. 2000; 96:3671 - 3674; Cheson, et al. J Clin Oncol. 2003; 21:4642-4649; Cheson, et al. Blood 2006; 108:419-425）、以下の反応定義が使用されうる。
【００２８】
本明細書において使用される場合、「完全寛解」という用語は、高いリスクの骨髄異形成、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、および急性白血病をもつ対象についての結果を説明するのに使用され、患者に白血病の関連するすべての症状がなく、かつ、絶対好中球数が≧１×１０９／Ｌおよび血小板数が≧１００×１０９／Ｌであり、芽細胞≦５％の正常な骨髄像を有することを意味する（Cheson, et al. Blood, 1996; 87:4990-4997）。
【００２９】
本明細書において使用する場合、「部分寛解」とは、骨髄中に６％〜２５％の異常細胞がある、または骨髄芽球の５０％減少した「完全寛解」を意味する。
【００３０】
ＣＲｐ：ＣＲの通り、但し、血小板数＜１００×１０９／Ｌ
【００３１】
本明細書において使用する場合、「形態的白血病のない状態」とは、正常な骨髄像（＜５芽球）を意味し、好中球および血小板数は考慮されない。
【００３２】
本明細書において使用する場合、「骨髄完全奏効（ｍａｒｒｏｗ  ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」は、≦５％骨髄芽球の骨髄、および前治療に対して≧５０％の減少を意味する。
【００３３】
血液学的改善（ＨＩ）：血液学的改善は、個々の良い影響を受けた細胞株の数によって表わされる（例えば、ＨＩ‐Ｅ；ＨＩ‐Ｅ＋ＨＩ‐Ｎ；ＨＩ‐Ｅ＋ＨＩ‐Ｐ＋ＨＩ‐Ｎ）。
【００３４】
赤血球の反応（ＨＩ‐Ｅ）
顕著な反応（Ｍａｊｏｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）：前治療ヘモグロビンが１１ｇ／ｄＬ未満の対象に関して、ヘモグロビンの２ｇ／ｄＬをこえる増加；ＲＢＣ輸血依存対象に関して、輸血非依存性。
やや反応（Ｍｉｎｏｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）：前治療ヘモグロビンが１１ｇ／ｄＬ未満の対象に関して、ヘモグロビンの１〜２ｇ／ｄＬの増加；ＲＢＣ輸血依存対象に関して、輸血必要性の５０％の減少。
【００３５】
血小板の反応（ＨＩ‐Ｐ）
顕著な反応（Ｍａｊｏｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）：前治療血小板数が１００×１０９／Ｌ未満の対象に関して、３０×１０９／Ｌまたはそれ超える絶対的増加；血小板輸血依存対象に関して、血小板輸血非依存性の安定。
やや反応（Ｍｉｎｏｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）：前治療血小板数が１００×１０９／Ｌ未満の対象に関して、血小板数が５０％またはそれを超える増加し、１０×１０９／Ｌを超えて３０×１０９／Ｌ未満の純増加を伴う。
【００３６】
好中球の反応（ＨＩ‐Ｎ）
顕著な反応（Ｍａｊｏｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）：治療前絶対好中球数（ＡＮＣ）が１．５×１０９／Ｌ未満に対して、少なくとも１００％増加、または０．５×１０９／Ｌを超える絶対的増加のどちらか大きい方。
やや反応（Ｍｉｎｏｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）：治療前ＡＮＣが１．５×１０９／Ｌ未満に対して、ＡＮＣは少なくとも１００％増加するが、絶対的増加は０．５×１０９／Ｌ未満。
【００３７】
ＨＩ後の進行／再発：以下の１つ以上：顆粒球もしくは血小板における最大反応レベルからの５０％もしくはそれを超える減少、ヘモグロビン濃度における少なくとも２ｇ／ｄＬの減少、または輸血
【００３８】
慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）をもつ患者では、以下の臨床転帰の定義が使用される（Cheson, et al. Blood, 1996; 87:4990-4997）。
【００３９】
本明細書において使用する場合、「完全奏効（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を有する対象を説明するのに使用され（Cheson, et al. Blood, 1996; 87:4990-4997）、次を意味する：
末梢血‐  絶対リンパ球数（ＡＬＣ）＜４×１０９／Ｌで、Ｈｂ＞１１ｇ／ｄＬ、ＡＮＣ≧１．５×１０９／Ｌおよび血小板数＞１００×１０９／Ｌ；
腫瘍‐  新たな病変が出現することなく、触診可能のリンパ節、脾臓および肝臓すべての消失；ならびに
骨髄‐  ＜３０％の正形成髄におけるリンパ球、リンパ結節が見られる場合、結節性ＣＲと見なされる。
【００４０】
本明細書において使用する場合、「部分奏効（ｐａｒｔｉａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」は、ＣＬＬを有する対象を説明するのに使用され、次を意味する：
末梢血‐  絶対リンパ球数（ＡＬＣ）の前治療ベースライン値から５０％の減少、輸血無しでのＨｂ＞１１ｇ／ｄＬまたはベースラインからの５０％改善、ＡＮＣ≧１．５×１０９／Ｌおよび血小板数またはベースラインを対する５０％の改善、ならびに＞１００×１０９／Ｌの血小板数またはベースラインを対する５０％の改善；
腫瘍‐  前治療測定と比較して、新たな病変が出現することなく測定可能な病変で≧５０％減少、新たな病変が出現することなく触診可能のリンパ節、脾臓および肝臓すべての消失；ならびに
骨髄‐  ＜３０％の正形成髄におけるリンパ球、リンパ結節が見られる場合、結節性ＣＲと見なされる。
【００４１】
本明細書において使用する場合、「安定している疾患（ＳＤ）」とは、ＣＲもＰＲもなく、進行疾患でないことを意味する。
【００４２】
本明細書において使用する場合、「進行性疾患（ＰＤ）」または「疾患の再発」は、ＣＬＬを有する対象を説明するのに使用され、次を意味する：
末梢血：  初回治療におけるベースラインまたはそれ以降の以前の最低値に対してＡＬＣの≧５０％の増加、＞１０×１０９／Ｌのレベルを維持。
腫瘍：  測定した病変の２垂直直径（ｐｅｒｐｅｎｄｉｃｕｌａｒ  ｄｉａｍｅｔｅｒｓ）の積における、試験参加時にあったサイズ、または反応した対象については、最大退行時および／もしくは悪性疾患の新たな領域の出現時のサイズに対する≧５０％の増加。パフォーマンスステータスの悪化または症状の増加は、進行を構成しないが、その出現により、疾患の程度について評価を新たに始めるべきである。
【００４３】
原因不明性骨髄様化生（ＡＭＭ）という疾患については、次の臨床反応が適用される(Tefferi, et al. Blood. 2007; 110: 1092-1097)。
【００４４】
完全奏効: 疾患に兆候または症状の非存在。ＷＢＣが１〜１０×１０９／Ｌで、末梢血芽球、前骨髄球、または骨髄球がなく、骨髄の正常化を伴う（正形成髄または過形成髄において＜５％芽球）
【００４５】
前治療血球減少症の解明：
Ｇ‐ＣＳＦまたはＧＭ‐ＣＳＦなしに、ＡＮＣが≧１．０×１０９／Ｌ。
エリスロポエチンまたは輸血補助なしに、Ｈｇｂ≧１２．０ｇｍ／ｄＬ（女性では１１．０ｇｍ／ｄＬ）。
成長因子または輸血補助なしに、ＰＬＴ≧１００×１０９／Ｌ。
【００４６】
前治療白血球増加症および／または血小板増加症の解明：
ＷＢＣが≦１０×１０９／Ｌで、末梢芽球、前骨髄球、または骨髄球がない。
ＰＬＴが≧１００×１０９／Ｌ、４５０×１０９／Ｌ未満。
【００４７】
部分奏効
以下の２つ以上の改善：
ＡＮＣ：  好中球減少症では１００％増加、および１０９／Ｌを超える。
ＷＢＣ：  １〜１０×１０９／Ｌで、前治療白血球増加症では未熟細胞（芽球、骨髄球、後骨髄球）の残留を伴う。
ヘモグロビン：  １０ｇｍ／ｄＬ未満の場合２ｇｍ／ｄＬの増加、または輸血必要性の少なくとも５０％の減少（頻度および／もしくはボリュームの減少）
血小板数：  治療前のレベル未満、または持続性血小板増加症  ＞４５０×１０９／Ｌで前治療の＜５０％。
骨髄芽球：正形成髄または過形成髄において１０％を超えていた場合、骨髄芽球の５％未満への減少。
臓器肥大症：  脾腫および／または肝腫大の前治療サイズの５０％の減少触診で左肋骨縁下の長さを測定）、困難な症例では画像で確認。
【００４８】
本明細書において使用する場合、「有効量」という用語は、例えば研究者または臨床医により求められている、組織、系、動物、またはヒトの生物学的または医学的応答を惹起するであろう薬剤または医薬品の量を意味する。さらに、「治療上有効な量」という用語は、そのような量を受けていない、対応する対象に比べ、疾患、障害、もしくは副作用の向上した治療、治癒、予防、もしくは寛解、または疾患もしくは障害の進行速度の低下をもたらす量を意味する。また、該用語は、その範囲内に、正常な生理的機能を高めるのに有効な量も含む。
【００４９】
本明細書において使用する場合、「組み合わせ」という用語およびその文法的変形形態によって、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、および化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩の治療上有効な量の同時投与または個別の逐次投与のあらゆる方式のいずれかを意味する。投与が同時ではない場合、化合物は互いに時間的に接近して投与されることが好ましい。さらに、化合物が同じ剤形で投与されるかどうかは問われず、例えば１つの化合物が局所的に投与され、他の化合物が経口で投与されうる。好適には、両化合物は経口的に投与される。
【００５０】
本明細書において使用する場合、「組み合わせキット」という用語によって、化合物Ａ、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、および化合物Ｂ、またはその薬学的に許容可能な塩を、本発明に従って投与するのに使用される医薬組成物または組成物を意味する。両化合物が同時に投与される場合、組み合わせキットは、化合物Ａ、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、および化合物Ｂ、またはその薬学的に許容可能な塩を、錠剤などの単一医薬組成物または個別の医薬組成物に含有することができる。化合物が同時に投与されない場合、組み合わせキットは、化合物Ａ、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、および化合物Ｂ、またはその薬学的に許容可能な塩を、個別の医薬組成物に含有することになる。組み合わせキットは、化合物Ａ、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、および化合物Ｂ、またはその薬学的に許容可能な塩を、単一パッケージ中の個別の医薬組成物、または個別パッケージ中の個別の医薬組成物に含んでなることができる。
【００５１】
１つの側面では、次の構成要素を含んでなる組み合わせキットが提供される：
薬学的に許容可能な担体を伴った、化合物Ａ、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物；および
薬学的に許容可能な担体を伴った、化合物Ｂ、またはその薬学的に許容可能な塩。
【００５２】
本発明の１つの実施態様では、組み合わせキットは構成要素：
薬学的に許容可能な担体を伴った、化合物Ａ、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物；および
薬学的に許容可能な担体を伴った、化合物Ｂ、またはその薬学的に許容可能な塩を含んでなり、
そこでは、構成要素は逐次、個別および／または同時投与に適した形態で提供される。
【００５３】
１つの実施態様では、組み合わせキットは：
薬学的に許容可能な担体を伴った、化合物Ａ、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる第１の容器；および
薬学的に許容可能な担体を伴った、化合物Ｂ、またはその薬学的に許容可能な塩を含んでなる第２の容器、ならびに前記第１および第２の容器を含有する容器手段を含んでなる。
【００５４】
また、「組み合わせキット」は、投与量および投与指示などの取扱説明書も備えることができる。投与量および投与の説明は、例えば薬製品ラベルによって、医師に提供される種類のものであることができ、または患者への使用説明書などの医師によって提供される種類のものであることができる。
【００５５】
本明細書において使用する場合、「化合物Ａ２」という用語は、‐‐‐化合物Ａ、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物‐‐‐を意味する。
【００５６】
本明細書において使用する場合、「化合物Ｂ２」という用語は、‐‐‐化合物Ｂ、またはその薬学的に許容可能な塩‐‐‐を意味する。
【００５７】
好適には、本発明の組み合わせは、「特定の期間」内に投与される。
【００５８】
本明細書において使用する場合、「特定の期間（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｐｅｒｉｏｄ）」という用語およびその文法的変形形態によって、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の一方と化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方の投与の間の時間間隔を意味する。特に別段の定義がない限り、特定の期間は同時投与を包含することができる。特に別段の定義がない限り、特定の期間は、１日の間の化合物Ａ２および化合物Ｂ２の投与をさす。
【００５９】
好適には、化合物が「特定の期間」内に投与され、同時に投与されない場合、それらの化合物の両方は互いに約２４時間以内に投与され、この場合、特定の期間は約２４時間であることになる；好適には、それらの化合物の両方は互いに約１２時間以内に投与され、この場合、特定の期間は約１２時間であることになる；好適には、それらの化合物の両方は互いに約１１時間以内に投与され、この場合、特定の期間は約１１時間であることになる；好適には、それらの化合物の両方は互いに約１０時間以内に投与され、この場合、特定の期間は約１０時間であることになる；好適には、それらの化合物の両方は互いに約９時間以内に投与され、この場合、特定の期間は約９時間であることになる；好適には、それらの化合物の両方は互いに約８時間以内に投与され、この場合、特定の期間は約８時間であることになる；好適には、それらの化合物の両方は互いに約７時間以内に投与され、この場合、特定の期間は約７時間であることになる；好適には、それらの化合物の両方は互いに約６時間以内に投与され、この場合、特定の期間は約６時間であることになる；好適には、それらの化合物の両方は互いに約５時間以内に投与され、この場合、特定の期間は約５時間であることになる；好適には、それらの化合物の両方は互いに約４時間以内に投与され、この場合、特定の期間は約４時間であることになる；好適には、それらの化合物の両方は互いに約３時間以内に投与され、この場合、特定の期間は約３時間であることになる；好適には、それらの化合物は互いに約２時間以内に投与され、この場合、特定の期間は約２時間であることになる；好適には、それらの化合物の両方は互いに約１時間以内に投与され、この場合、特定の期間は約１時間であることになる。本明細書において使用する場合、約４５分未満離れた、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の投与は、同時投与と見なされる。
【００６０】
好適には、本発明の組み合わせが「特定の期間」に投与される場合、化合物は「継続時間（ｄｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｉｍｅ）」の間、共投与されることになる。
【００６１】
本明細書において使用する場合、「継続時間」という用語およびその文法的変形形態によって、本発明の両化合物が、連続した示された日数の間、投与されることを意味される。特に別段の定義がない限り、連続した日数は、治療の開始で始められる必要もなく、治療の終わりで終了される必要もなく、連続した日数が一連の治療の間のある時期にあることが必要なだけである。
【００６２】
「特定の期間」投与に関して：
好適には、両化合物は、特定の期間内に少なくとも１日投与され、この場合、継続期間は、少なくとも１日であることになる；好適には、治療の過程において、両化合物は、特定の期間内に少なくとも３日連続で投与され、この場合、継続期間は、少なくとも３日であることになる；好適には、治療の過程において、両化合物は、特定の期間内に少なくとも５日連続で投与され、この場合、継続期間は、少なくとも５日であることになる；好適には、治療の過程において、両化合物は、特定の期間内に少なくとも７日連続で投与され、この場合、継続期間は、少なくとも７日であることになる；好適には、治療の過程において、両化合物は、特定の期間内に少なくとも１４日連続で投与され、この場合、継続期間は、少なくとも１４日であることになる；好適には、治療の過程において、両化合物は、特定の期間内に少なくとも３０日連続で投与され、この場合、継続期間は、少なくとも３０日であることになる。
【００６３】
好適には、化合物が「特定の期間」の間に投与されない場合、それらの化合物は逐次投与される。本明細書において使用する場合、「逐次投与（ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」という用語およびその派生語によって、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の一方が１日１回、２日以上連続した日の間投与され、それに続いて、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方が、１日１回、２日以上連続した日の間投与されることを意味する。また、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の一方と化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方の逐次投与の間を利用した休薬日も、本明細書において想定される。本明細書において使用する場合、休薬日は、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の一方の逐次投与の後、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方の投与の前の、化合物Ａ２も化合物Ｂ２も投与されない期間である。好適には、休薬日は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日および１４日から選択される期間であることになる。
【００６４】
逐次投与に関して：
好適には、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の一方が、連続した２〜３０日の間投与され、随意の休薬日が続き、その後化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方が、連続した２〜３０日の間投与される。好適には、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の一方が、連続した２〜２１日の間投与され、随意の休薬日が続き、その後化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方が、連続した２〜２１日の間投与される。好適には、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の一方が、連続した２〜１４日の間投与され、１〜１４日の休薬日が続き、その後化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方が、連続した２〜１４日の間投与される。好適には、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の一方が、連続した３〜７日の間投与され、３〜１０日の休薬日が続き、その後化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方が、連続した３〜７日の間投与される。
【００６５】
好適には、化合物Ｂ２が順番の初めに投与され、随意の休薬日が続き、その後化合物Ａ２が投与されることになる。好適には、化合物Ｂ２が連続した３〜２１日の間投与され、随意の休薬日が続き、その後化合物Ａ２が連続した３〜２１日の間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続した３〜２１日の間投与され、１〜１４日の休薬日が続き、その後化合物Ａ２が連続した３〜２１日の間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続した３〜２１日の間投与され、３〜１４日の休薬日が続き、その後化合物Ａ２が連続した３〜２１日の間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続した２１日の間投与され、随意の休薬日が続き、その後化合物Ａ２が連続した１４日の間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続した１４日の間投与され、１〜１４日の休薬日が続き、その後化合物Ａ２が連続した１４日の間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続した７日の間投与され、３〜１０日の休薬日が続き、その後化合物Ａ２が連続した７日の間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続した３日の間投与され、３〜１４日の休薬日が続き、その後化合物Ａ２が連続した７日の間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続した３日の間投与され、３〜１０日の休薬日が続き、その後化合物Ａ２が連続した３日の間投与される。
【００６６】
「特定の期間」投与および「逐次」投与の後には、反復投薬を続けることができ、または代替投薬プロトコールを続けることができ、休薬日を反復投薬または代替投薬プロトコールの前においてもよいことが理解される。
【００６７】
好適には、本発明に記載の組み合わせの一部として投与される化合物Ａ２の量は、約０．１２５ｍｇ〜約１０ｍｇから選択される量であることになり；好適には、その量は約０．２５ｍｇ〜約９ｍｇから選択されることになり；好適には、その量は約０．２５ｍｇ〜約８ｍｇから選択されることになり；好適には、その量は約０．５ｍｇ〜約８ｍｇから選択されることになり；好適には、その量は約０．５ｍｇ〜約７ｍｇから選択されることになり；好適には、その量は約１ｍｇ〜約７ｍｇから選択されることになり；好適には、その量は約５ｍｇであることになる。したがって、本発明に記載の組み合わせの一部として投与される化合物Ａの量は、約０．１２５ｍｇ〜約１０ｍｇから選択される量であることになる。例えば、本発明に記載の組み合わせの一部として投与される化合物Ａ２の量は、０．１２５ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、０．７５ｍｇ、１ｍｇ、１．５ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、３．５ｍｇ、４ｍｇ、４．５ｍｇ、５ｍｇ、５．５ｍｇ、６ｍｇ、６．５ｍｇ、７ｍｇ、７．５ｍｇ、８ｍｇ、８．５ｍｇ、９ｍｇ、９．５ｍｇ、１０ｍｇであることができる。
【００６８】
好適には、本発明に記載の組み合わせの一部として投与される化合物Ｂ２の量は、約７５ｍｇ〜約１，０００ｍｇから選択される量であることになり；好適には、その量は約１００ｍｇ〜約９００ｍｇから選択されることになり；好適には、その量は約１５０ｍｇ〜約８５０ｍｇから選択されることになり；好適には、その量は約２００ｍｇ〜約８００ｍｇから選択されることになり；好適には、その量は約２５０ｍｇ〜約７５０ｍｇから選択されることになり；好適には、その量は約３００ｍｇ〜約６００ｍｇから選択されることになり；好適には、その量は約４５０ｍｇであることになる。したがって、本発明に記載の組み合わせの一部として投与される化合物Ｂ２の量は、約７５ｍｇ〜約１，０００ｍｇから選択される量であることになる。例えば、本発明に記載の組み合わせの一部として投与される化合物Ｂ２の量は、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、４００ｍｇ、４２５ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、５００ｍｇ、５２５ｍｇ、５５０ｍｇ、５７５ｍｇ、６００ｍｇ、６２５ｍｇ、６５０ｍｇ、６７５ｍｇ、７００ｍｇ、７２５ｍｇ、７５０ｍｇ、７７５ｍｇ、８００ｍｇ、８２５ｍｇ、８５０ｍｇ、８７５ｍｇ、９００ｍｇ、９２５ｍｇ、９５０ｍｇ、９７５ｍｇまたは１，０００ｍｇであることができる。
【００６９】
本明細書において使用する場合、化合物Ａ２および化合物Ｂ２について特定される量はすべて、１投与量当たりの遊離した化合物または塩および溶媒和物でない化合物の投与量として示される。
【００７０】
また、本発明の方法は、他の癌治療の治療法とともに用いられうる。
【００７１】
治療に用いて、本発明の組み合わせの治療上有効な量は、未加工の化学物質として投与されうるが、１つまたは複数の医薬組成物として組み合わせを提示するのが好ましい。したがって、本発明は医薬組成物をさらに提供し、それは、化合物Ａ２および／または化合物Ｂ２、ならびに１つ以上の薬学的に許容可能な担体を含む。本発明の組み合わせは上記の通りである。担体は、製剤の他の成分に影響を及ぼさず、製剤処方が可能で、その受容者に有害でないという点で許容可能でなくてはならない。本発明の別の様態によると、化合物Ａ２および／または化合物Ｂ２、１つ以上の薬学的に許容可能な担体を混合することを含む、医薬製剤の調製方法も提供される。上記に指し示したように、そのような利用される医薬品の組み合わせの要素は、個別の医薬組成物で提示されてもよく、１つの医薬製剤にまとめて製剤されてもよい。
【００７２】
医薬製剤は、単位投与量あたりの所定量の活性成分を含有する単位投与量形態で提示されうる。当業者に公知のように、投与量当たりの活性成分の量は、治療される状態、投与のルート、ならびに患者の年齢、体重および状態に依存するであろう。好ましい単位投与量製剤は、活性成分の一日投与量もしくは副投与量（ｓｕｂ  ｄｏｓｅ）、またはそれを適当に分けたものを含有するものである。さらに、そのような医薬製剤は、薬学分野に周知の方法のいずれかによって調製されうる。
【００７３】
化合物Ａ２および化合物Ｂ２は、任意の適切な経路によって投与されうる。好適な経路としては、経口、直腸、経鼻、局所（例えば頬および舌下）、経膣、ならびに非経口（例えば皮下、筋肉内、静脈内、皮内、髄腔内、および硬膜外）が挙げられる。好ましい経路が、例えば組み合わせを受ける者の状態および治療される癌によって異なりうることが理解されよう。また、投与される薬剤をそれぞれ同一または異なる経路によって投与してよく、化合物Ａ２および化合物Ｂ２を医薬組成物／製剤中にまとめて合成してもよいことも理解されよう。
【００７４】
現在の発明の化合物または組み合わせは、カプセル、錠剤または注射可能調製物などの使いやすい剤形に組み込まれる。固体または液体医薬担体が用いられる。固体担体としては、デンプン、乳糖、硫酸カルシウム二水和物、白土（ｔｅｒｒａ  ａｌｂａ）、蔗糖、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、およびステアリン酸が挙げられる。液体担体としては、シロップ、ピーナッツ油、オリーブ油、食塩水、および水が挙げられる。同様に、担体は、モノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリルなどの持続放出材料を単体またはワックスとともに含みうる。固体担体の量は多様であるが、好ましくは、投与量単位当たり約２５ｍｇ〜約１ｇであろう。液体担体が使用される場合、調製物は、好適にはシロップ、エリキシル、エマルション、軟ゼラチンカプセル、アンプルなどの無菌注射可能薬液、または水性もしくは非水性液体懸濁剤の形態であろう。
【００７５】
例えば、錠剤またはカプセルの形態での経口投与に関して、活性薬剤成分は、エタノール、グリセロール、水などの、経口の、毒性のない、製剤として許容可能な不活性担体と混ぜ合わせることができる。化合物を好適な細かいサイズに砕いて、同じように細かく砕いた、例えばデンプンまたはマンニトールといった食用に適する炭水化物などの医薬担体と混ぜ合わせることによって、粉末を調整する。着香料、保存剤、分散剤および着色料もそこに入れることができる。
【００７６】
上記で言及した成分にくわえ、製剤は、対象とする製剤の種類を考慮して当分野に従来から使用される他の薬剤を含むことがあり、例えば、経口投与に好適なものは着香料を含みうることを理解することができる。
【００７７】
適応があれば、本発明の組み合わせ（化合物Ａ２  と組み合わせて化合物Ｂ２）の治療上有効な量がヒトに投与される。典型的には、本発明の投与薬剤の治療上有効な量は、例えば対象の年齢および体重、治療を必要とする正確な病態、その病態の重症度、製剤の性質、ならびに投与経路を含む多くの因子に依存するであろう。最終的には、治療上有効な量は、薬を処方する担当医の裁量によるであろう。
【００７８】
有効性、有利さ、相乗的な性質について、本発明の組み合わせを公知の手順に従って検討する。好適には、有効性、有利さ、相乗的な性質について、本発明の組み合わせを一般には以下の組み合わせ細胞増殖アッセイに従って検討する。細胞を、１０％ＦＢＳおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充した各細胞タイプに適切な培養培地中に、５００細胞／ウェルで３８４‐ウェルプレートに播種し、一晩３７℃、５％ＣＯ２でインキュベーションする。グリッドに沿ったやり方で（ｉｎ  ａ  ｇｒｉｄ  ｍａｎｎｅｒ）、３８４ウェルプレートで左から右に、化合物Ａ２の希釈液（化合物を含まないのもを含む、化合物に応じて１〜２０μＭから開始した２倍希釈液の２０の希釈液）で、また３８４ウェルプレートで上から下に、化合物Ｂ２（化合物を含まないものを含む、化合物に応じて１〜２０μＭから開始した２倍希釈液の２０の希釈液）で、細胞を処理し、さらに７２時間上記のようにインキュベーションする。場合によっては  化合物を互い違いに（ｉｎ  ａ  ｓｔａｇｇｅｒｅｄ  ｍａｎｎｅｒ）加え、インキュベーション時間を最長７日まで延ばすことができる。細胞の増殖を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ‐Ｇｌｏ（商標）試薬を製造業者のプロトコールに従って使用して測定し、０．５秒読み取り発光モードに設定したパーキンエルマー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）ＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）リーダーでシグナルを読み取る。データを下記に記載のように分析する。
【００７９】
結果は、ｔ＝０値の％割合として表わし、化合物濃度に対してプロットする。ｔ＝０値を、１００％の正規化し、化合物添加の時点において存在する細胞の数を示す。細胞反応を、マイクロソフト・エクセル（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ）用ＩＤＢＳ  ＸＬｆｉｔ  ｐｌｕｇ‐ｉｎソフトウェアを使用して、濃度に対する細胞の生存の４‐または６‐パラメーター曲線適合をして各化合物および／または化合物の組み合わせについて決定し、細胞増殖の５０％阻害（ｇＩＣ５０）に必要な濃度を求める。バックグラウンド補正を、細胞を含まないウェルからの値を引くことによって行う。Chou and Talalay (1984) Advances in Enzyme Regulation, 22, 37 to 55; およびBerenbaum, MC (1981) Adv. Cancer Research, 35, 269-335に記載されているような公知の方法に従って、薬の組み合わせのそれぞれについて、組み合わせ指標（Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｉｎｄｅｘ、ＣＩ）、エクセス・オーバー・ハイエスト・シングル・エージェン（Ｅｘｃｅｓｓ Ｏｖｅｒ Ｈｉｇｈｅｓｔ Ｓｉｎｇｌｅ Ａｇｅｎｔ、ＥＯＨＳＡ）およびエクセス・オーバー・ブリス（Ｅｘｃｅｓｓ Ｏｖｅｒ Ｂｌｉｓｓ、ＥＯＢｌｉｓｓ）を算出する。
【００８０】
本発明の組み合わせが上記アッセイにおいて活性があるので、それら組み合わせは、癌を治療するにあたって有利な治療的有用性を呈する。
【００８１】
好適には、本発明は、脳癌（神経膠腫）、神経膠芽腫、バナヤン・ゾナナ（Ｂａｎｎａｙａｎ−Ｚｏｎａｎａ）症候群、カウデン（Ｃｏｗｄｅｎ）病、レルミット・デュクロ（Ｌｈｅｒｍｉｔｔｅ‐Ｄｕｃｌｏｓ）病、乳癌、炎症性乳癌、ウィルムス（Ｗｉｌｍ’ｓ）腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、上衣腫、髄芽腫、結腸癌、頭頸癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、内腫、骨肉腫、骨巨細胞腫、甲状腺癌、
リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞腫、免疫芽細胞性大細胞白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、
悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球性Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、小胞リンパ腫、
神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌、外陰部癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞性癌、胃癌、鼻咽腔癌、頬癌、口腔癌、ＧＩＳＴ（消化管間質腫瘍）および精巣癌から選択される癌を治療するまたは重症度を軽減する方法に関する。
【００８２】
好適には、本発明は、脳癌（神経膠腫）、神経膠芽腫、バナヤン・ゾナナ症候群、カウデン病、レルミット・デュクロ病、乳癌、結腸癌、頭頸癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、内腫、甲状腺癌から選択される癌を治療するまたは重症度を軽減する方法に関する。
【００８３】
好適には、本発明は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌および前立腺癌から選択される癌を治療するまたは重症度を軽減する方法に関する。
【００８４】
好適には、本発明は、白血病および骨髄性悪性腫瘍から選択される癌を治療するまたは重症度を軽減する方法に関する。
【００８５】
本明細書において使用する場合、「癌」、「新生物」および「腫瘍」という用語は、互換可能に使用され、単数形、複数形のいずれでも使用され、宿主生物に対して細胞を病的にする悪性形質転換を経た細胞を指す。原発癌細胞（すなわち、悪性形質転換の場所の近くから得られる細胞）は、確立した手法、特に組織学的検査によって、容易に非癌細胞と識別することができる。本明細書において使用する癌細胞の定義は、原発癌細胞だけでなく、癌細胞の原細胞に由来するあらゆる細胞を含む。これは、転移した癌細胞、ならびに癌細胞由来のインビトロ培養および細胞株を含む。固形腫瘍として通常示される癌のタイプを言及するとき、「臨床的に検出可能な」腫瘍は、腫瘤に基づいて、例えばＣＡＴスキャン、ＭＲイメージング、Ｘ線、超音波もしくは触診などの手段によって検出可能なもの、および／または患者から得られた試料中における１つ以上の癌に特有の抗原の発現から検出可能なものである。腫瘍は、例えば血液細胞の腫瘍などの造血器腫瘍であることがあり、それは液性腫瘍を意味する。そのような腫瘍に基づく臨床症状の具体例としては、慢性骨髄性白血病または急性骨髄性白血病などの白血病；多発性骨髄腫などの骨髄腫；リンパ腫などが挙げられる。
【００８６】
典型的には、治療される感受性のある腫瘍に対して活性を有する任意の抗腫瘍薬が、本発明における癌の治療において同時投与されうる。そのような薬剤の例は、Cancer Principles and Practice of Oncology by V.T. Devita and S. Hellman (editors), 6th edition (February 15, 2001), Lippincott Williams & Wilkins Publishersに見出されることができる。当業者は、関連する薬および癌の具体的な性質に基づいて、どの薬剤の組み合わせが有用であるかを見定めることができる。本発明において有用な典型的な抗腫瘍薬としては、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドなどの微小管阻害薬；白金配位錯体；ナイトロジェンマスタード、オキサザホスホリン、アルキルスルホン酸塩、ニトロソ尿素、およびトリアゼンなどのアルキル化剤；アントラサイクリン、アクチノマイシンおよびブレオマイシンなどの抗生剤；エピポドフィロトキシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤；プリンおよびピリミジン類似体および抗葉酸化合物などの代謝拮抗剤；カンプトセシンなどのトポイソメラーゼＩ阻害剤；ホルモンおよびホルモン類似体；シグナル伝達経路阻害剤；受容体型チロシンキナーゼ阻害剤；セリン‐スレオニンキナーゼ阻害剤；非受容体型チロシンキナーゼ阻害剤；血管新生阻害剤；免疫療法剤；アポトーシス促進剤；ならびに細胞周期シグナルリング阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８７】
また、本発明は、化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩を、例えば、限定されないが、化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物および別の抗新生物薬を含むＢｒａｆ阻害剤とともにまたはＢｒａｆ阻害剤無しに投与することを含んでなる、癌を治療する方法を提供する。
【００８８】
化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩との組み合わせまたは共投与に使用される、さらなる活性成分または成分（抗新生物薬）の例は、化学療法剤である。
【００８９】
抗微小管または抗有糸分裂薬は、細胞周期のＭ期または分裂期中に腫瘍細胞の微小管にして作用する、細胞周期特異的な薬剤である。抗微小管薬としては、例えば、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９０】
天然のソースに由来するジテルペノイドは、細胞周期のＧ２／Ｍ期で作用する細胞周期特異的な抗癌剤である。ジテルペノイドは、微小管のβ‐チューブリンサブユニットに結合することによって、このタンパク質を安定化すると考えられている。次いで、そのタンパク質の分解が阻害され、有糸分裂が停止され、細胞死が続いて起こると思われる。ジテルペノイドとしては、例えば、パクリタキセルおよびその類似体ドセタキセルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９１】
パクリタキセル、５β，２０‐エポキシ‐１，２α，４，７β，１０β，１３α‐ヘキサ‐ヒドロキシタキサ‐１１‐エン‐９‐オン  ４，１０‐ジアセテート  ２‐安息香酸塩  １３‐エステルと（２Ｒ，３Ｓ）‐Ｎ‐ベンゾイル‐３‐フェニルイソセリンは、セイヨウイチイ木であるタイヘイヨウイチイ（Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）から単離された天然のジテルペン生成物であり、注射液タキソール（商標）として市販されている。それは、テルペンのタキサンファミリーのメンバーである。それは、１９７１年にＷａｎｉらによって最初に単離され（J.  Am.  Chem, Soc., 93:2325. 1971）、彼らは、その構造を化学的およびＸ線結晶学的な方法によって明らかにした。その作用の１つの機序は、パクリタキセルのチューブリンに結合する性質に関連し、それによって癌細胞の増殖を阻害する。Schiff et al., Proc.  Natl, Acad, Sci. USA, 77:1561-1565 (1980); Schiff et al., Nature, 277:665-667 (1979); Kumar, J. Biol, Chem, 256: 10435-10441 (1981)。幾つかのパクリタキセル誘導体の合成および抗癌作用の概説に関しては：D. G. I. Kingston et al., Studies in Organic Chemistry vol. 26, entitled “New trends in Natural Products Chemistry 1986", Attaur-Rahman, P.W. Le Quesne, Eds. (Elsevier, Amsterdam, 1986) pp 219-235を参照されたい。
【００９２】
パクリタキセルは、米国では難治性の卵巣癌の治療（Markman et al., Yale Journal of Biology and Medicine, 64:583, 1991; McGuire et al., Ann. lntem, Med., 111:273,1989）、および乳癌の治療（Holmes et al., J. Nat. Cancer Inst., 83:1797,1991.）に臨床での使用が認められている。それは、皮膚の新生物（Einzig et. al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 20:46）および頭頸部癌（Forastire et. al., Sem. Oncol., 20:56, 1990）の治療の有力な候補である。また、その化合物は、多発性嚢胞腎（Woo et. al., Nature, 368:750. 1994）、肺癌およびマラリアの治療についても可能性を示す。パクリタキセルでの患者の治療は、閾値濃度（５０ｎＭ）を超える投薬期間に関連して（Kearns, C.M. et. al., Seminars in Oncology, 3(6) p.16-23, 1995）、骨髄抑制（multiple cell lineages, Ignoff, R.J. et. al, Cancer Chemotherapy Pocket Guide, 1998）を引き起こす。
【００９３】
ドセタキセル、（２Ｒ，３Ｓ）‐Ｎ‐カルボキシ‐３‐フェニルイソセリン，Ｎ‐ｔｅｒｔ‐ブチルエステル、１３‐エステルと５β‐２０‐エポキシ‐１，２α，４，７β，１０β，１３α‐ヘキサヒドロキシタキサ‐１１‐エン‐９‐オン  ４‐アセテート  ２‐安息香酸塩、三水和物は、タキソテール（商標）として注射液で市販されている。ドセタキセルは、乳癌の治療に処理に適応される。ドセタキセルは、ヨーロッパイチイ木の針葉から抽出される、天然の前駆体である１０‐デアセチル‐バッカチンＩＩＩを使用して調製されるパクリタキセル（ｑ．ｖ．）の半合成誘導体である。ドセタキセルの用量制限毒性は、好中球減少症である。
【００９４】
ビンカアルカロイドは、ツルニチニチソウ植物に由来する細胞周期特異的な抗腫瘍薬である。ビンカアルカロイドは、チューブリンに特異的に結合することによって細胞周期のＭ期（有糸分裂）で作用する。結果として、結合されたチューブリン分子は、微小管に重合することができない。有糸分裂は、中期で停止し、細胞死がそれに続くと考えられている。ビンカアルカロイドとしは、例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビノレルビンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９５】
ビンブラスチン、ビンカロイコブラスチン硫酸塩は、注射液としてベルバン（商標）で市販されている。さまざまな固形腫瘍の二次選択治療として適応される可能性もあるが、精巣癌ならびにホジキン病ならびにリンパ性および組織球性リンパ腫を含むさまざまなリンパ腫の治療に主として適応される。骨髄抑制が、ビンブラスチンの用量制限副作用である。
【００９６】
ビンクリスチン、ビンカロイコブラスチン、２２‐オキソ‐、硫酸塩は、オンコビン（商標）として注射液で市販されている。ビンクリスチンは、急性白血病の治療に適応され、またホジキンおよび非ホジキン悪性リンパ腫の治療計画においても使用が見られる。脱毛症および神経学的な影響が、ビンクリスチンの最も頻度の高い副作用であり、より少ない頻度で骨髄抑制および胃腸粘膜炎の影響が起こる。
【００９７】
ビノレルビン酒石酸塩（ナベルビン（商標））の注射液として市販されるビノレルビン、３’，４’‐ジデヒドロ‐４’‐デオキシ‐Ｃ’‐ノルビンカロイコブラスチン［Ｒ‐（Ｒ＊，Ｒ＊）‐２，３‐ジヒドロキシブタンジオアート（１：２）（塩）］は、半合成のビンカアルカロイドである。ビノレルビンは、単剤として、またはシスプラチンなどの他の化学療法剤と組み合せて、さまざまな固形腫瘍、特に非小細胞肺、進行性の乳癌、およびホルモン抵抗性前立腺癌の治療に適応される。骨髄抑制が、ビノレルビンの最も頻度の高い用量制限副作用である。
【００９８】
白金配位錯体は、ＤＮＡと相互に作用する細胞周期非特異的な抗癌剤である。白金錯体は、腫瘍細胞に入り、アクア化を経て、ＤＮＡとの鎖内および鎖間架橋を形成し、腫瘍に有害な生物学的効果を引き起こす。白金配位錯体としては、例えば、シスプラチンおよびカルボプラチンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９９】
シスプラチン、ｃｉｓ‐ジアンミンジクロロ白金は、注射液としてプラチノール（商標）で市販されている。シスプラチンは、転移精巣癌および卵巣癌ならびに進行性膀胱癌の治療に主に適応される。シスプラチンの主な用量制限副作用は、水和および利尿によって制御されうる腎臓毒性、ならびに聴器毒性である。
【０１００】
カルボプラチン、白金、ジアンミン［１，１‐シクロブタン‐ジカルボキシレート（２‐）‐Ｏ，Ｏ’］は、注射液としてパラプラチン（商標）で市販されている。カルボプラチンは、進行性の卵巣癌の１次および２次選択治療に主に適応される。骨髄抑制が、カルボプラチンの用量制限毒性である。
【０１０１】
アルキル化剤は、非期の抗癌特異的薬剤品であり、強い求電子物質である。典型的には、アルキル化剤は、アルキル化によって、リン酸、アミノ、スルフヒドリル、ヒドロキシル、カルボキシル、およびイミダゾール基などのＤＮＡ分子の求核部分を通してＤＮＡとの共有結合を形成する。そのようなアルキル化は、核酸の機能を妨げ、細胞死に導く。アルキル化剤としては、例えば、シクロホスファミド、メルファラン、およびクロラムブシルなどのナイトロジェンマスタード；ブスルファンなどのアルキルスルホン酸塩；カルムスチンなどのニトロソウレア；ならびにダカルバジンなどのトリアゼンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０２】
シクロホスファミド、２‐［ビス（２‐クロロエチル）アミノ］テトラヒドロ‐２Ｈ‐１，３，２‐オキサザホスホリン２‐オキシド一水和物は、注射液または錠剤としてシトキサン（商標）で市販されている。シクロホスファミドは、単剤として、または他の化学療法剤と組み合せて悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、および白血病の治療に適応される。脱毛症、吐き気、嘔吐および白血球減少が、シクロホスファミドの最も頻度の高い用量制限副作用である。
【０１０３】
メルファラン、４‐［ビス（２‐クロロエチル）アミノ］‐Ｌ‐フェニルアラニンは、注射液または錠剤としてアルケラン（商標）で市販されている。メルファランは、多発性骨髄腫および卵巣の切除不能な上皮性腫瘍の緩和治療に適応される。骨髄抑制が、メルファランの最も頻度の高い用量制限副作用である。
【０１０４】
クロラムブシル、４‐［ビス（２‐クロロエチル）アミノ］ベンゼンブタン酸は、リューケラン（商標）錠剤として市販されている。クロラムブシルは、慢性リンパ性白血病、ならびにリンパ肉腫、巨大濾胞性リンパ腫、およびホジキン病のなどの悪性リンパ腫の緩和治療に適応される。骨髄抑制が、クロラムブシルの最も頻度の高い用量制限副作用である。
【０１０５】
ブスルファン、１，４‐ブタンジオールジメタンスルホン酸塩は、ミレラン（商標）錠剤として市販されている。ブスルファンは、慢性骨髄性白血病の緩和治療に適応される。骨髄抑制が、ブスルファンの最も頻度の高い用量制限副作用である。
【０１０６】
カルムスチン、１，３‐［ビス（２‐クロロエチル）‐１‐ニトロソウレアは、ＢｉＣＮＵ（商標）として凍結乾燥物質の単一バイアルで市販されている。カルムスチンは、単剤として、または他の薬剤と組み合せて、脳腫瘍、多発性骨髄腫、ホジキン病、および非ホジキンリンパ腫の緩和治療に適応される。遅発性骨髄抑制が、カルムスチンの最も頻度の高い用量制限副作用である。
【０１０７】
ダカルバジン、５‐（３，３‐ジメチル‐１‐トリアゼノ）‐イミダゾール‐４‐カルボキサミドは、ＤＴＩＣ‐Ｄｏｍｅ（商標）として物質の単一バイアルで市販されている。ダカルバジンは、転移悪性黒色腫の治療、および他の薬剤と組み合せてホジキン病の二次選択治療に適応される。吐き気、嘔吐、および食欲不振が、ダカルバジンの最も頻度の高い用量制限副作用である。
【０１０８】
抗生物質抗新生物薬は、ＤＮＡに結合または挿入する細胞周期非特異的な薬剤である。典型的には、そのような作用により、安定したＤＮＡ複合体または鎖切断が生じ、核酸の通常の機能を妨げ、細胞死に導く。抗生物質抗腫瘍薬としては、例えば、ダクチノマイシンなどのアクチノマイシン、ダウノルビシンおよびドキソルビシンなどのアントラサイクリン、ならびにブレオマイシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０９】
ダクチノマイシンは、アクチノマイシンＤとしても知られ、コスメゲン（商標）として注射可能な形態で市販されている。ダクチノマイシンは、ウィルムス腫瘍および横紋筋肉腫の治療に適応される。吐き気、嘔吐、および食欲不振が、ダクチノマイシンの最も頻度の高い用量制限副作用である。
【０１１０】
ダウノルビシン、（８Ｓ‐ｃｉｓ‐）‐８‐アセチル‐１０‐［（３‐アミノ‐２，３，６‐トリデオキシ‐α‐Ｌ‐リキソ‐ヘキソピラノシル）オキシ］‐７，８，９，１０‐テトラヒドロ‐６，８，１１‐トリヒドロキシ‐１‐メトキシ‐５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、ＤＡＵＮＯＸＯＭＥ（商標）としてリポソームの注射可能な形態、またはＣＥＲＵＢＩＤＩＮＥ（商標）として注射可能物質で市販されている。ダウノルビシンは、急性非リンパ性白血病および進行性ＨＩＶ関連カポジ肉腫の治療における寛解導入に適応される。骨髄抑制が、ダウノルビシンの最も頻度の高い用量制限副作用である。
【０１１１】
ドキソルビシン、（８Ｓ、１０Ｓ）‐１０‐［（３‐アミノ‐２，３，６‐トリデオキシ‐α‐Ｌ‐リキソ‐ヘキソピラノシル）オキシ］‐８‐グリコロイル、７，８，９，１０‐テトラヒドロ‐６，８，１１‐トリヒドロキシ‐１‐メトキシ‐５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、ＲＵＢＥＸ（商標）またはＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ  ＲＤＦ（商標）として注射可能な形態で市販されている。ドキソルビシンは、急性リンパ芽球性白血病および急性骨髄芽球性白血病の治療に主に適応されるが、幾つかの固形腫瘍およびリンパ腫の治療にも有用な成分である。骨髄抑制が、ドキソルビシンの最も頻度の高い用量制限副作用である。
【０１１２】
ブレオマイシン、ストレプトマイセス・バーチシラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｕｓ）株から分離される細胞毒性の糖ペプチド抗生物質混合物は、ブレノキサン（商標）として市販されている。ブレオマイシンは、単剤として、または他の薬剤と組み合せて、扁平上皮癌、リンパ腫、および精巣癌の緩和治療として適応される。肺毒性または皮膚毒性が、ブレオマイシンの最も頻度の高い用量制限副作用である。
【０１１３】
トポイソメラーゼＩＩ阻害剤としては、エピポドフィロトキシンが挙げられるが、これに限定されない。
【０１１４】
エピポドフィロトキシンは、マンドレイク植物に由来する、細胞周期特異的な抗腫瘍薬である。エピポドフィロトキシンは、典型的には、トポイソメラーゼＩＩよびＤＮＡと三重複合体を形成することによって、細胞周期のＳ期およびＧ２期にある細胞に作用し、ＤＮＡ鎖切断を引き起こす。その鎖切断が蓄積し、細胞死が続いて起こる。エピポドフィロトキシンとしては、例えば、エトポシドおよびテニポシドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１５】
エトポシド、４’‐デメチル‐エピポドフィロトキシン９［４，６‐０‐（Ｒ）‐エチリデン‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド］は、ＶｅＰＥＳＩＤ（商標）として注射液またはカプセル剤で市販されており、一般には、ＶＰ‐１６として知られている。エトポシドは、単剤または他の化学療法剤と組み合せて、精巣癌および非小細胞肺癌の治療に適応される。骨髄抑制が、エトポシドの最も頻度の高い副作用である。白血球減少症の発生が、血小板減少症より深刻である傾向にある。
【０１１６】
テニポシド、４’‐デメチル‐エピポドフィロトキシン９［４，６‐０‐（Ｒ）‐テニリデン‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド］は、ＶＵＭＯＮ（商標）として注射液で市販されており、一般にはＶＭ‐２６として知られている。テニポシドは、単剤または他の化学療法剤と組み合せて、小児の急性白血病の治療に適応される。骨髄抑制が、テニポシドの最も頻度の高い用量制限副作用である。テニポシドは、白血球減少症および血小板減少症の両方を誘発しうる。
【０１１７】
代謝拮抗腫瘍剤は、ＤＮＡ合成を阻害すること、またはプリンもしくはピリミジン塩基合成を阻害し、それによりにＤＮＡ合成を制限することによって、細胞周期のＳ期（ＤＮＡ合成）に作用する細胞周期特異的な抗腫瘍薬である。結果として、Ｓ期が進まず、細胞死が続いて起こる。代謝拮抗抗腫瘍薬としては、例えば、フルオロウラシル、メトトレキサート、シタラビン、メルカプトプリン（ｍｅｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）、チオグアニン、およびゲムシタビンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１８】
５‐フルオロウラシル、５‐フルオロ‐２，４‐（１Ｈ，３Ｈ）ピリミジンジオンは、フルオロウラシルとして市販されている。５‐フルオロウラシルの投与は、チミジル酸合成の阻害につながり、またＲＮＡおよびＤＮＡの両方に取り込まれる。その結果は典型的には細胞死である。５‐フルオロウラシルは、単剤または他の化学療法剤と組み合せて、胸部、結腸、直腸、胃および膵臓の上皮性悪性腫瘍の治療に適応される。骨髄抑制および粘膜炎が、５‐フルオロウラシルの用量制限副作用である。他のフルオロピリミジン類似体としては、５‐フルオロデオキシウリジン（フロキシウリジン）および５‐フルオロデオキシウリジンリン酸が挙げられる。
【０１１９】
シタラビン、４‐アミノ‐１‐β‐Ｄ‐アラビノフラノシル‐２（１Ｈ）‐ピリミジノンは、サイトサール‐Ｕ（商標）として市販されており、一般にはＡｒａ‐Ｃとして知られている。シタラビンは、伸びているＤＮＡ鎖へシタラビンを末端で取り込むことによってＤＮＡ鎖伸長を阻害することによって、Ｓ期にて細胞周期の期特異性を示すと考えられている。シタラビンは、単剤または他の化学療法剤と組み合せて、急性白血病の治療に適応される。他のシチジン類似体としては、５‐アザシチジンおよび２’，２’‐ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）が挙げられる。シタラビンは、白血球減少症、血小板減少症、および粘膜炎を誘発する。
【０１２０】
メルカプトプリン、１，７‐ジヒドロ‐６Ｈ‐プリン‐６‐チオン一水和物は、ＰＵＲＩＮＥＴＨＯＬ（商標）として市販されている。メルカプトプリンは、まだ今のところ特定されていない機序によってＤＮＡ合成を阻害することによって、Ｓ期にて細胞周期の期特異性を示す。メルカプトプリンは、単剤または他の化学療法剤と組み合せて、急性白血病の治療に適応される。骨髄抑制および胃腸粘膜炎が、メルカプトプリンの高い投与量での予期される副作用である。有用なメルカプトプリン類似体は、アザチオプリンである。
【０１２１】
チオグアニン、２‐アミノ‐１，７‐ジヒドロ‐６Ｈ‐プリン‐６‐チオンは、ＴＡＢＬＯＩＤ（商標）として市販されている。チオグアニンは、まだ今のところ特定されていない機序によってＤＮＡ合成を阻害することによって、Ｓ期にて細胞周期特異性を示す。チオグアニンは、単剤または他の化学療法剤と組み合せて、急性白血病の治療に適応される。白血球減少症、血小板減少症、および貧血症を含む骨髄抑制が、チオグアニン投与の最も頻度の高い用量制限副作用である。しかし、胃腸の副作用が起こり、用量制限でありうる。他のプリン類似体としては、ペントスタチン、エリスロヒドロキシノニルアデニン、リン酸フルダラビン、およびクラドリビンが挙げられる。
【０１２２】
ゲムシタビン、２’‐デオキシ‐２’、２’‐ジフルオロシチジン一塩酸塩（β‐異性体）は、ＧＥＭＺＡＲ（商標）として市販されている。ゲムシタビンは、Ｇ１／Ｓ期境界を通して細胞の発達を阻止することによって、Ｓ期にて細胞周期特異性を示す。ゲムシタビンは、シスプラチンと組み合せて局所進行性の非小細胞肺癌の治療に適応され、単独で局所進行性の膵癌の治療に適応される。白血球減少症、小板減少症、および貧血症を含む骨髄抑制が、ゲムシタビン投与の最も頻度の高い用量制限副作用である。
【０１２３】
メトトレキサート、Ｎ‐［４［［（２，４‐ｄｉアミノ‐６‐プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］‐Ｌ‐グルタミン酸は、メトトレキサートナトリウムとして市販されている。メトトレキサートは、プリンヌクレオチドおよびチミジルの合成酸に必要とされるジヒドロ葉酸還元酵素（ｄｙｈｙｄｒｏｆｏｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ）の阻害を通してＤＮＡ合成、修復および／または複製を阻害することによって、Ｓ期にて細胞周期作用を特異的に示す。メトトレキサートは、単剤または他の化学療法剤と組み合せて、絨毛癌、髄膜白血病、非ホジキンリンパ腫、ならびに胸部、頭、首、卵巣および膀胱の上皮性悪性腫瘍の治療に適応される。骨髄抑制（白血球減少症、血小板減少症、および貧血症）ならびに粘膜炎が、メトトレキサート投与の予期される副作用である。
【０１２４】
トポイソメラーゼＩ阻害剤として、カンプトセシンおよびカンプトセシン誘導体を含むカンプトセシンが使用可能または開発中である。カンプトセシン細胞毒性活性は、そのトポイソメラーゼＩ阻害活性に関連すると考えられている。カンプトセシンとしては、イリノテカン、トポテカン、および後述の７‐（４‐メチルピペラジノ‐メチレン）‐１０，１１‐エチレンジオキシ‐２０‐カンプトセシンのさまざまな光学的形態が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２５】
イリノテカンＨＣｌ、（４Ｓ）‐４，１１‐ジエチル‐４‐ヒドロキシ‐９‐［（４‐ピペリジノピペリジノ）カルボニルオキシ］‐１Ｈ‐ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２‐ｂ］キノリン‐３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）‐ジオン塩酸塩は、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（商標）として注射液で市販されている。
【０１２６】
イリノテカンは、その活性代謝産物ＳＮ‐３８とともにトポイソメラーゼＩ‐ＤＮＡ複合体に結合するカンプトセシンの誘導体である。細胞毒性は、トポイソメラーゼＩ：ＤＮＡ：イリノテカンまたはＳＮ‐３８三重複合体の複製酵素との相互作用によって引き起こされる修復不可能な二重鎖切断の結果として起こると考えられている。イリノテカンは、結腸または直腸の転移癌の治療に適応される。イリノテカンＨＣｌの用量制限副作用は、好中球減少症を含む骨髄抑制、および下痢を含むＧＩ影響である。
【０１２７】
トポテカンＨＣｌ、（Ｓ）‐１０‐［（ジメチルアミノ）メチル］‐４‐エチル‐４，９‐ジヒドロキシ‐１Ｈ‐ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２‐ｂ］キノリン‐３，１４‐（４Ｈ，１２Ｈ）‐ジオン一塩酸塩は、注射液ＨＹＣＡＭＴＩＮ（商標）として市販されている。トポテカンは、トポイソメラーゼＩ‐ＤＮＡ複合体トポイソメラーゼＩ‐ＤＮＡ複合体に結合し、ＤＮＡ分子のねじれ歪みに応えてトポイソメラーゼＩによって引き起こされる一本鎖切断の再連結を防ぐカンプトセシンの誘導体である。トポテカンは、卵巣癌および小細胞肺癌転移性の上皮性悪性腫瘍の二次選択治療に適応される。トポテカンＨＣｌの用量制限副作用は、骨髄抑制、主に好中球減少症である。
【０１２８】
リツキシマブは、リツキサン（ＲＩＴＵＸＡＮ）（商標）およびマブセラ（ＭＡＢＴＨＥＲＡ）（商標）として販売されているキメラモノクローナル抗体である。リツキシマブはＢ細胞上のＣＤ２０に結合し、細胞アポトーシスを引き起こす。リツキシマブは静脈内投与され、関節リウマチおよびＢ細胞非ホジキンリンパ腫の治療に認可されている。
【０１２９】
オファツムマブは、アーゼラ（ＡＲＺＥＲＲＡ）（商標）として販売されている完全ヒトモノクローナル抗体である。オファツムマブはＢ細胞上のＣＤ２０に結合し、フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ）およびアレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）での治療が無効である成人における慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ；白血球の癌の一種）を治療するのに使用される。
【０１３０】
ｍＴＯＲ阻害剤としては、ラパマイシンおよびラパログ、ＲＡＤ００１またはエベロリムス（Ａｆｉｎｉｔｏｒ）、ＣＣＩ‐７７９またはテムシロリムス、ＡＰ２３５７３、ＡＺＤ８０５５、ＷＹＥ‐３５４、ＷＹＥ‐６００、ＷＹＥ‐６８７ならびにＰｐ１２１が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３１】
ベキサロテンは、ターグレチン（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ）（商標）として販売され、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）を選択的に活性化するレチノイドのサブクラスのメンバーである。これらのレチノイド受容体は、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）の生物学的活性と異なる生物学的活性を有する。化学名は、４‐［１‐（５，６，７，８‐テトラヒドロ‐３，５，５，８，８‐ペンタメチル‐２‐ナフタレニル）エテニル］安息香酸である。ベキサロテンは、少なくとも１つの他の薬剤で成功裏に治療することができなかった疾患をもつ人々における皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ、皮膚癌の一種）を治療するのに使用される。
【０１３２】
ソラフェニブは、ネクサバール（Ｎｅｘａｖａｒ）（商標）として市販されており、マルチキナーゼ阻害剤と呼ばれる薬剤のクラスにある。その化学名は、４‐［４‐［［４‐クロロ‐３‐（トリフルオロメチル）フェニル］カルバモイルアミノ］フェノキシ］‐Ｎ‐メチル‐ピリジン‐２‐カルボキサミドである。ソラフェニブは、進行性腎細胞癌（腎臓で発症する癌の一種）を治療するのに使用される。また、ソラフェニブは、切除不可能な肝細胞癌（手術で治療することができない肝癌の一種）を治療するのに使用される。
【０１３３】
好適には、本発明は、Ｒａｆについては野生型または変異体であり、ＰＩ３Ｋ／Ｐｔｅｎについては野生型または変異体である癌を治療するまたは重症度を軽減する方法に関する。これは、ＲａｆおよびＰＩ３Ｋ／ＰＴＥＮの両方またはいずれかについては野生型である一方でＲａｓが変異体である患者を含む。
【０１３４】
当該技術分野で理解されるように、「野生型」という用語は、自然の集団に存在する遺伝子の変更のないポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列を指す。また、当該技術分野で理解されるように、「変異体」は、野生型ポリペプチドまたはポリヌクレオチドに見出される対応するアミノ酸または核酸とそれぞれ比較して、アミノ酸または核酸に少なくとも１つの変更を有するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列を含む。変異体という用語に含まれるのは、最も高頻度に見られる核酸鎖（野生型）と比較して、単一の塩基対差異が核酸鎖の配列に存在する単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）である。
【０１３５】
本明細書において使用する場合、対象の腫瘍細胞を含む細胞（またはＤＮＡもしくは生体試料）を、遺伝子の突然変異または多型対立遺伝子について「遺伝子型決定すること（ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ）」とは、対立遺伝子もしくは多型の形態および／または遺伝子もしくは遺伝子発現産物（例えばｈｎＲＮＡ、ｍＲＮＡもしくはタンパク質）の野生型もしくは体細胞変異形態の被験者（または試料）における有無を検出することを意味する。そのような遺伝子から発現した関連ＲＮＡまたはタンパク質もまた、多型変形を検出するのに使用されうる。本発明の目的のために、「遺伝子型決定」は、試料からの体細胞の突然変異および遺伝子型の突然変異の決定を含む。本明細書において使用する場合、他の可能性のある対立遺伝子多型が除外されるとき、対立遺伝子が「検出」されうる；例えば、ある特定の核酸の位置がアデニン（Ａ）でもチミン（Ｔ）でもシトシン（Ｃ）でもないとわかったとき、グアニン（Ｇ）がその位置に存在すると結論付けられる（すなわち、対象においてＧが「検出される」または「診断される」）ことができる。配列変異は、（例えばシークエンシング、例えば、ＥＳＴシークエンシングまたは部分もしくは全ゲノムシークエンシングによって）直接的に、または（例えば制限断片長多型解析、もしくは既知配列のプローブのハイブリダイゼーションの検出、もしくは基準鎖高次構造多型法（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｓｔｒａｎｄ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）によって）間接的に、または他の公知の方法を使用することによって検出されうる。
【０１３６】
遺伝子もしくはＰＣＲ産物またはその断片もしくは部分を含む任意の核酸の配列は、当該技術分野において公知の任意の方法（例えば化学的シークエンシングまたは酵素的シークエンシング）によってシークエンシングされうる。ＤＮＡの「化学的シークエンシング」は、個々の塩基に特異的な反応を使用してＤＮＡをランダムに切断する、ＭａｘａｍおよびＧｉｌｂｅｒｔの方法（１９７７年）（Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74:560）を示す。ＤＮＡの「酵素的シークエンシング」は、Ｓａｎｇｅｒの方法（Sanger, et al., (1977) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74:5463）を示す。
【０１３７】
シークエンシング技術を含む、従来の分子生物学、微生物学、および組み換えＤＮＡ技術は、当業者の間で周知である。そのような技術は、文献中に十分に説明されている。例えば、Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (herein "Sambrook, et al., 1989"); DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes I and II (D. N. Glover ed. 1985); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait ed. 1984); Nucleic Acid Hybridization (B. D. Hames & S. J. Higgins eds. (1985)); Transcription And Translation (B. D. Hames & S. J. Higgins, eds. (1984)); Animal Cell Culture (R. I. Freshney, ed. (1986)); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, (1986)); B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); F. M. Ausubel, et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (1994)を参照されたい。
【０１３８】
ペプチド核酸（ＰＮＡ）親和性アッセイは、従来のハイブリダイゼーションアッセイから派生している（Nielsen et al., Science 254:1497-1500 (1991); Egholm et al., J. Am. Chem. Soc. 114:1895-1897 (1992); James et al., Protein Science 3:1347-1350 (1994)）。ＰＮＡは、ワトソン−クリック塩基対合則に従い、標準的なＤＮＡハイブリダイゼーションアッセイに使用される構造的ＤＮＡ模倣物である。ＰＮＡはハイブリダイゼーションアッセイにおいてより強力な特異性を示す。なぜなら、ＰＮＡ／ＤＮＡミスマッチは、ＤＮＡ／ＤＮＡミスマッチより不安定で、相補的ＰＮＡ／ＤＮＡ鎖は、相補的ＤＮＡ／ＤＮＡ鎖より強力な結合を形成するからである。
【０１３９】
ＤＮＡマイクロアレイは遺伝的変異および多型を検出するように開発されてきた（Taton et al., Science 289:1757-60, 2000; Lockhart et al., Nature 405:827-836 (2000); Gerhold et al., Trends in Biochemical Sciences 24:168-73 (1999); Wallace, R. W., Molecular Medicine Today 3:384-89 (1997); Blanchard and Hood, Nature Biotechnology 149:1649 (1996)）。ＤＮＡマイクロアレイは、ガラスまたはナイロン基板上で高速ロボットにより製造され、既知の識別物（「プローブ」）とともにＤＮＡ断片を含有する。マイクロアレイは、従来の塩基対合則に基づいて既知および未知のＤＮＡ断片（「標的（ｔａｒｇｅｔ）」）を一致させるために使用される。
【０１４０】
ポリペプチドまたはポリペプチドをコードする遺伝子における「少なくとも１つの突然変異」という用語、およびその文法的変形形態は、１つ以上の対立遺伝子多型、スプライス変異体、派生変異体、置換変異体、欠失変異体、切断変異体、および／もしくは挿入変異体、融合ポリペプチド、オルソログ、ならびに／または種間のホモログを有するポリペプチドまたはポリペプチドをコードする遺伝子を意味する。例として、Ｒａｓタンパク質の少なくとも１つの突然変異は、細胞中で生成される少なくとも１つのＲａｓタンパク質に、Ｒａｓタンパク質をコードするポリペプチドまたは遺伝子の配列のすべての一部が、細胞中に欠けているまたは発現していないＲａｓタンパク質含むことになる。例えば、Ｒａｓタンパク質は細胞によって切断型で生成されることがあり、その切断型の配列は、切断部の配列をこえて野生型である。欠失は、遺伝子または遺伝子によってコードされるタンパク質のすべてまたは一部が欠けていること意味しうる。くわえて、細胞中に発現されるタンパク質または細胞によってコードされるタンパク質が突然変異する一方で、同一細胞で生成される同一タンパク質の他のコピーは野生型でありうる。別の例として、Ｒａｓタンパク質における突然変異は、同一のＲａｓタンパク質の野生型と比較して、そのアミノ酸配列中に１つ以上のアミノ酸の差異を有するＲａｓタンパク質を含むことになる。
【０１４１】
本明細書において使用する場合、「遺伝的異常」は、対象の細胞の正常な自然の核酸の内容と比べた、欠失、置換、付加、転座、増幅など意味する。
【０１４２】
「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は互換可能に使用され、本明細書において総称語として使用されて、自然のタンパク質、断片、ペプチド、またはポリペプチド配列アナログを指す。よって、自然のタンパク質、断片、およびアナログは、ポリペプチド属の種である。
【０１４３】
ポリペプチド配列における突然変異に関する文脈において、「Ｘ＃Ｙ」という専門用語は、当該技術分野において承認されており、「＃」はポリペプチドのアミノ酸番号に関する突然変異の位置を示し、「Ｘ」は野生型アミノ酸配列中でその位置に見出されるアミノ酸を示し、「Ｙ」はその位置での変異したアミノ酸を示す。例えば、Ｋ‐ｒａｓポリペプチドに関する「Ｇ１２Ｓ」という表記は、野生型Ｋ‐ｒａｓ配列のアミノ酸番号１２にグリシンがあり、そのグリシンが変異体Ｋ‐ｒａｓ配列ではセリンに置換されていることを示す。
【０１４４】
本明細書において使用される場合、「Ｒａｓタンパク質」という用語は、細胞シグナリングにかかわるＧＴＰａｓｅのサブファミリーであるｒａｓサブファミリーのメンバーである任意のタンパク質を意味する。当該技術分野において公知であるように、Ｒａｓの活性化は、細胞増殖、分化および生存をもたらす。Ｒａｓタンパク質としては、Ｈ‐ｒａｓ、Ｋ‐ｒａｓおよびＮ‐ｒａｓが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４５】
本明細書において使用する場合、「Ｒａｓタンパク質をコードする遺伝子」とは、任意のＲａｓタンパク質をコードする遺伝子またはポリヌクレオチドの任意の一部を意味する。Ｒａｓをコードするエクソンは、この用語の意味する範囲内に含まれる。Ｒａｓタンパク質をコードする遺伝子としては、Ｈ‐ｒａｓ、Ｋ‐ｒａｓおよびＮ‐ｒａｓの一部または全部をコードする遺伝子が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４６】
急性骨髄性白血病および少なくとも１つのＲＡＳ突然変異をもつ患者の頻度は、約１２％〜約１５％（約５％ＫＲＡＳおよび約７％〜約１０％ＮＲＡＳ）である。約１０〜１９の異なるＲＡＳ変異体の異型があり、ＲＡＳ変異腫瘍における全変異の約８０〜１００％を占める。すべてのＫＲＡＳ変異事象が、他のＲＡＳに変異がある（ｍｕｔ＋）腫瘍と一致するわけではない。例えば、ある種のＲａｓ突然変異の頻度は、腫瘍タイプ、例えばＡＭＬ、ＮＳＣＬＣ、ＣＲＣ、膵臓腫瘍によって異なる。
【０１４７】
幾つかの腫瘍タイプでは、Ｒａｓ突然変異は、他のＲＡＳ突然変異および他の遺伝子突然変異から相互に排他的（ｅｘｃｌｕｓｉｖｅ）でありうる。例えば、ＮＳＣＬＳ腫瘍では、ＥＧＦＲ突然変異およびＫ‐ＲＡＳ突然変異は相互に排他的である。
【０１４８】
くわえてＡＭＬでは、Ｎ‐ＲＡＳおよびＫ‐ＲＡＳ突然変異は相互に排他的である。よって、腫瘍細胞は、Ｎ‐ＲＡＳおよび／またはＫ‐ＲＡＳに１つ以上の突然変異を有しうる。ＲＡＳ突然変異の状態は、ＦＡＢ細胞遺伝学的分類に相関する。ＲＡＳ突然変異は、ＡＭＬ  Ｍ２およびＭ４群において過剰出現している。ＲＡＳ／ＦＬＴ３突然変異は、相互に排他的である。Ｎ‐ＲＡＳ突然変異は、ｔ（１５；１７）を伴ってＦＡＢ  Ｍ３指標（前骨髄球性白血病）において過少出現し、ＦＬＴ３  ＩＴＤは過剰出現している（Bowen et al., Blood (2005) 106(6):2133-2119）。
【０１４９】
ＡＭＬ腫瘍におけるＮ‐ＲａｓおよびＫ‐Ｒａｓ突然変異の推定される頻度の概要を表１にまとめる。
【０１５０】
【表１】
2014505658.tif 000006
【０１５１】
ＲＡＳ突然変異の異なるＡＭＬ細胞遺伝学的な群との関連の推定される頻度の概要を表２に提示する。
【０１５２】
【表２】
2014505658.tif 000007
【０１５３】
非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍におけるＨ‐Ｒａｓ、Ｎ‐ＲａｓおよびＫ‐Ｒａｓ突然変異の推定される頻度の概要を表３にまとめる。
【０１５４】
【表３】
2014505658.tif 000008
【０１５５】
膵臓癌（腺管癌）腫瘍におけるＨ‐Ｒａｓ、Ｎ‐ＲａｓおよびＫ‐Ｒａｓ突然変異の推定される頻度の概要を表４にまとめる。
【０１５６】
【表４】
2014505658.tif 000009
【０１５７】
結腸直腸腫瘍におけるＫ‐Ｒａｓ突然変異の推定される頻度の概要を表５にまとめる。
【０１５８】
【表５】
2014505658.tif 000010
【０１５９】
「変異Ｋ‐ｒａｓタンパク質」および「変異Ｎ‐ｒａｓタンパク質」ならびに「Ｋ‐ｒａｓ突然変異」および「Ｎ‐ｒａｓ突然変異」という用語は、それぞれ、少なくとも１つの突然変異を有するＫ‐ｒａｓおよびＮ‐ｒａｓタンパク質を指す。ある実施態様では、Ｒａｓ突然変異としては、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｆ、Ｇ１３Ｃ、Ｖ１４Ｉ、Ｇ６０Ｅ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｒ、Ｑ６１Ｅ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｓ６５Ｃ、Ｓ６５Ｒ、Ｔ７４Ｐ、Ｅ７６Ｇ、Ｅ７６Ｋ、Ｅ７６Ｑ、およびＡ１４６Ｔが挙げられる。ある種のＮ‐ｒａｓ突然変異としては、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ６０Ｅ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１ＨおよびＱ６１Ｒが挙げられるが、これらに限定されない。ある種のＫ−ｒａｓ突然変異は、１２、１３、５９、６１、および１４６の位置で起こる可能性があり、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｄ、Ｖ１４Ｉ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｒ、Ｅ７６Ｇ、Ｅ７６Ｋ、Ｅ７６Ｑ、およびＡ１４６Ｔが挙げられるが、これらに限定されない。Ｒａｓタンパク質突然変異は、アミノ酸１２、１３、１４、５９、６０、６１、６５、７６および／または１４６で起こりうる。ある種の例示的な変異Ｋ‐ｒａｓおよびＮ‐ｒａｓポリペプチドとしては、対立遺伝子多型、スプライス変異体、派生変異体、置換変異体、欠失変異体、および／または挿入変異体、融合ポリペプチド、オルソログ、ならびに種間のホモログが挙げられるが、これらに限定されない。ある実施態様では、変異Ｋ‐ｒａｓおよびＮ‐ｒａｓポリペプチドは、限定されないが、リーダー配列残基、標的残基、アミノ末端メチオニン残基、リジン残基、タグ残基および／または融合タンパク質残基などのさらなる残基をＣ末端またはＮ末端に含む。
【０１６０】
くわえて、変異Ｒａｓポリペプチドは、ポリペプチドまたはポリペプチドをコードする遺伝子のすべての一部が細胞から除かれているか、または細胞に欠けているポリペプチドまたはポリペプチドをコードする遺伝子を含む。例えば、Ｒａｓタンパク質は、細胞によって切断型に生成されうる。欠失は、遺伝子または遺伝子によってコードされるタンパク質のすべてまたは一部が欠けていること意味しうる。
【０１６１】
本明細書において使用する場合、「増幅」という用語およびその文法的変形形態は、染色体相補対中に１つ以上の余分な遺伝子コピーが存在することを指す。ある実施態様では、Ｒａｓタンパク質をコードする遺伝子は、細胞中で増幅されうる。ＨＥＲ２遺伝子の増幅は、ある種のタイプ癌と相関している。ＨＥＲ２遺伝子の増幅は、ヒト唾液腺および胃の腫瘍由来の細胞株、胃および結腸腺癌、ならびに乳腺腺癌で見られる。Semba et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:6497-6501 (1985); Yokota et al., Oncogene, 2:283-287 (1988); Zhou et al., Cancer Res., 47:6123-6125 (1987); King et al., Science, 229:974-976 (1985); Kraus et al., EMBO J., 6:605-610 (1987); van de Vijver et al., Mol. Cell. Biol., 7:2019-2023 (1987); Yamamoto et al., Nature, 319:230-234 (1986).
【０１６２】
本明細書において使用する場合、タンパク質またはポリペプチドの「過剰発現された」および「過剰発現」ならびにその文法的変形形態は、所与の細胞が、正常細胞と比べて増加した数のある種のタンパク質を生成することを意味する。例として、ｒａｓタンパク質は、非腫瘍細胞と比べて、腫瘍細胞によって過剰発現されうる。くわえて、変異ｒａｓタンパク質は、細胞中で野生型ｒａｓタンパク質と比較して過剰発現されうる。当該技術分野で理解されるように、細胞中のポリペプチド発現レベルは、アクチンなどのハウスキーピング遺伝子に対して正規化することができる。場合によっては、ある種のポリペプチドは、非腫瘍細胞と比較して腫瘍細胞中で過少発現されうる。
【０１６３】
本明細書において使用する場合、「少なくとも１つの遺伝子産物の発現に必要な核酸」は、遺伝子に任意の部分をコードする、および／または遺伝子産物をコードする核酸に作動可能に連結されるが、必ずしもコード配列を含んでならない核酸配列を指す。例として、少なくとも１つの遺伝子産物の発現に必要な核酸配列としては、エンハンサー、プロモーター、調節配列、開始コドン、終止コドン、ポリアデニル化配列、および／またはコード配列が挙げられるが、これらに限定されない。特定の細胞内のポリペプチドの発現レベルは、限定されないが、細胞ゲノムのさまざまな調節要素および／または非コード配列の突然変異、削除および／または置換によって影響される可能性がある。
【０１６４】
「変異Ｂ‐ｒａｆタンパク質」という用語は、少なくとも１つの突然変異を含んでなるＢ−ｒａｆポリペプチドを指す。ある種の例示的な変異Ｂ‐ｒａｆポリペプチドとしては、対立遺伝子多型、スプライス変異体、派生変異体、置換変異体、欠失変異体、および／または挿入変異体、融合ポリペプチド、オルソログ、ならびに種間のホモログが挙げられるが、これらに限定されない。ある実施態様では、変異Ｂ‐ｒａｆポリペプチドは、限定されないが、リーダー配列残基、標的残基、アミノ末端メチオニン残基、リジン残基、タグ残基および／または融合タンパク質残基などのさらなる残基をＣ末端またはＮ末端に含む。ある種のＢ‐ｒａｆ変異体としては、Ｒ４６２Ｉ、Ｉ４６３Ｓ、Ｇ４６４Ｖ、Ｇ４６４Ｅ、Ｇ４６６Ａ、Ｇ４６６Ｅ、Ｇ４６６Ｖ、Ｇ４６９Ａ、Ｇ４６９Ｅ、Ｄ５９４Ｖ、Ｆ５９５Ｌ、Ｇ５９６Ｒ、Ｌ５９７Ｖ、Ｌ５９７Ｒ、Ｔ５９９Ｉ、Ｖ６００Ｅ、Ｖ６００Ｄ、Ｖ６００Ｋ、Ｖ６００Ｒ、Ｔ１１９Ｓ、およびＫ６０１Ｅからなる群から選択されるアミノ酸置換を有するＢＲＡＦが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｈａｌｉｌｏｖｉｃ  ａｎｄ  Ｓｏｌｖｉｔ（２００８）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ８：４１９‐２６の図２を参照されたい。ＢＲＡＦは、細胞増殖および悪性形質転換キナーゼ経路活性化を媒介するＲＡＳ調節キナーゼをコードする。
【０１６５】
本明細書において言及される場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、少なくとも１０塩基の長さで、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのいずれかのヌクレオチド、または改変された形態のいずれかのタイプのヌクレオチドの多量体を意味する。その用語は、ＤＮＡの一本鎖および二本鎖の形態を含む。
【０１６６】
本明細書において言及される「オリゴヌクレオチド」という用語は、天然、および非天然のオリゴヌクレオチド結合で結合された天然および改変ヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、一般に２００塩基またはそれより少ない長さを含んでなるポリヌクレオチドサブセットである。好ましくは、オリゴヌクレオチドは１０〜６０塩基の長さであり、最も好ましくは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０〜４０塩基の長さである。通常、オリゴヌクレオチドは、例えばプローブ用に一本鎖であるが、オリゴヌクレオチドは、例えば遺伝子変異体の構築用に二重鎖でありうる。オリゴヌクレオチドは、センスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかであることができる。
【０１６７】
オリゴヌクレオチドプローブまたはプローブは、典型的には長さ約８ヌクレオチドから数百ヌクレオチドまでのさまざまなサイズの核酸分子である。そのような分子は、典型的には、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で標的核酸配列にハイブリダイゼーションすることによって、試料中のそのような標的核酸配列を特定するのに使用される。ハイブリダイゼーション条件は、上に詳細に記載されている。
【０１６８】
ＰＣＲプライマーは、典型的には、かなりポリメラーゼ連鎖反応に使用される短い長さのオリゴヌクレオチドであるが、ＰＣＲプライマーもまた、核酸配列である。ＰＣＲプライマーおよびハイブリダイゼーションプローブは、標的配列の配列情報を使用して、当業者によって容易に開発および作製することができる（例えば、Sambrook et al.,上記、またはGlick et al.,上記、を参照されたい）。
【０１６９】
当該技術分野において公知であるように、ＲａｓおよびＢｒａｆ突然変異を検出するＰＣＲでの使用に知られているプライマーが幾つかある。例えば、ＢｒａｆおよびＫ‐ｒａｓにおける突然変異検出用プライマーは、幾つかの研究論文および米国特許、例えば、限定されないが、Brose, et al. Cancer Research 62:6997-7000 (2002), Xu, et al. Cancer research 63:4561-4567 (2003)、および米国特許第７，７４５，１２８号、ならびに幾つかの市販のキット（Dxs Diagnostic Innovations, Applied Biosystems、およびQuest diagnosticsを参照されたい）に示されている。
【０１７０】
Ｒａｓ／Ｒａｆの野生型または変異体のいずれか、およびＰＩ３Ｋ／Ｐｔｅｎの野生型または変異体のいずれかである癌は、公知の方法によって特定される。例えば、野生型または変異体Ｒａｓ／ＲａｆまたはＰＩ３Ｋ／ＰＴＥＮ腫瘍細胞は、ＤＮＡ増幅およびシークエンシング技法、ＤＮＡおよびＲＮＡ検出技法、例えば、制限されないが、それぞれノーザンおよびサザンブロット、ならびに／またはさまざまなバイオチップおよびアレイ技術によって特定することができる。野生型および変異体ポリペプチドは、多様なテクニック、例えば、限定されないが、免疫診断技法ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットまたは免疫細胞化学によって検出することができる。
【０１７１】
本明細書において使用する場合、骨髄における芽細胞を「低減する」または「低減すること」は、構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物の投与後に患者の骨髄に観察される芽細胞の量の減少を指す。当該技術分野で理解されるように、芽細胞は従来の手段によって測定することができる。芽細胞の減少は、個人毎に、または対象群の平均変化として測定および評価することができる。くわえて、芽細胞の平均減少は、ベースラインからの平均変化として、ならびに／または同一薬、比較薬および／もしくはプラシーボの異なる投与量を投与された対象の芽細胞の平均変化と比較した平均変化として、治療された対象群について測定および評価することができる。
【０１７２】
本明細書において使用する場合、骨髄における芽細胞を「除去する」または「除去すること」は、対象からの骨髄における芽細胞の量を、当該技術分野において使用される従来の分析手段によって容易に検出されないレベルまで低減させることを指す。
【０１７３】
よって、本発明はまた、白血病を有するヒトにおける骨髄における芽細胞を減少または除去する方法であって、前記ヒトに構造（Ｉ）の化合物：
【化４】
2014505658.tif 000011
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる少なくとも１つのＭＥＫ阻害剤を含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法を提供する。幾つかの側面では、骨髄における芽細胞は、約５％未満まで低減される。幾つかの側面では、ヒトは、少なくとも１つの白血病細胞に少なくとも１つのＲａｓタンパク質突然変異を有する。Ｒａｓタンパク質突然変異は、Ｋ‐ｒａｓ、Ｈ‐ｒａｓまたはＮ‐ｒａｓにありうる。別の側面では、以下の少なくとも１つ：化合物Ｂまたは薬学的に許容可能な塩、ｍＴＯＲ阻害剤、ラパマイシン、エベロリムス、デホロリムス、およびテムシロリムスを、白血病を有するヒトに投与することをさらに含んでなる方法が提供される。
【０１７４】
また、本発明で提供されるのは、異常な数の芽細胞が骨髄に存在する癌をもつヒトを治療する方法であって、前記ヒトに、構造（Ｉ）の化合物：
【化５】
2014505658.tif 000012
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる少なくとも１つのＭＥＫ阻害剤を含んでなる医薬組成物を投与すること；
前記ヒトおける骨髄からの芽細胞をモニタリングすること、
前記ヒトからの少なくとも１つの腫瘍細胞から、少なくとも１つのＲａｓ突然変異について遺伝子型決定すること；および
Ｒａｓ突然変異が検出された場合、構造（Ｉ）を含んでなる前記医薬組成物を前記ヒトに少なくとも１つのさらなる投与量を投与することを含んでなる方法である。その方法は、少なくとも１つのＲａｓ突然変異の検出と、構造Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物での治療に対する反応の増加を関連付けることをさらに含んでなりうる。
【０１７５】
骨髄性癌を有するヒト患者を治療する方法であって、前記患者からの試料が、Ｒａｓタンパク質または少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも１つの突然変異を有するか否かを決定すること、前記試料が、Ｒａｓタンパク質または少なくとも１つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子に少なくとも１つの突然変異を有すると決定された場合、前記患者を構造（Ｉ）の化合物：
【化６】
2014505658.tif 000013
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる少なくとも１つのＭＥＫ阻害剤を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量で治療することを含んでなる方法もまた提供される。場合によっては、患者は白血病を有する。試料は、腫瘍試料、血液、血清または他の組織試料でありうる。Ｒａｓタンパク質は、限定されないが、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｄ、Ｖ１４Ｉ、Ｇ６０Ｅ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｒ、Ｔ７４Ｐ、Ｅ７６Ｇ、Ｅ７６Ｋ、Ｅ７６ＱおよびＡ１４６Ｔから選択される少なくとも１つの突然変異を有しうる。
【０１７６】
以下の例は、例示のみを意図し、何らかのかたちで本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【０１７７】
実施例１
方法
実験調製物
細胞株
細胞株は、アメリカ培養細胞系統保存機構（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＡＴＣＣ）またはＤＳＭＺ（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ａｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ）、ドイツ生物材料リソースセンター（ｔｈｅ  Ｇｅｒｍａｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍａｔｅｒｉａｌ）（Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、ドイツ）から入手し、供給元による記載の通りに維持した。
【０１７８】
実験プロトコール
細胞増殖／死アッセイ
標準的な細胞増殖アッセイを、さまざまな細胞タイプでＡＥＳＯＰ  ＡＰ５１６１ｖ２に記載のプロトコールに従って行った。簡潔に説明すると、細胞を、１０％ＦＢＳおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充した各細胞タイプに適切な培養培地中に、５００細胞／ウェルで３８４‐ウェルプレートに播種し、一晩３７℃、５％ＣＯ２でインキュベーションした。細胞を、化合物Ａ（７．３３１μＭからに０．１７ｎＭに３倍希釈）で処理し、３７℃で７２時間インキュベーションした。細胞の増殖を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ‐Ｇｌｏ（商標）試薬を製造業者のプロトコールに従って使用して測定し、０．５秒読み取り発光モードに設定したパーキンエルマーＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）リーダーでシグナルを読んだ。データを下記に記載のように分析した。
【０１７９】
薬の組み合わせに関して、各薬の２倍希釈の１６濃度を、８つの異なるＡＭＬ癌細胞株の細胞増殖阻害についてマトリックスでテストした。化合物Ａおよびラパマイシン（ｍＴｏｒ阻害剤）についてのテスト濃度は、５μＭ〜０．１５ｎＭであり、ａｒａ‐Ｃ（ＤＮＡ鎖伸長阻害剤）、ベキサロテン（レチノイドＸ受容体活性剤）およびソラフェニブ（ＶＥＧＦ／Ｒａｆ／Ｋｉｔ／ＰＤＧＦ阻害剤）についてのテスト濃度は、１０μＭ〜０．３ｎＭであった。細胞を上記のようにプロトコールＡＥＳＯＰ  ＡＰ１３７４Ｖ５に従って処理し、データを下記のエクセス・オーバー・ハイエスト・シングル・エージェン（Ｅｘｃｅｓｓ Ｏｖｅｒ Ｈｉｇｈｅｓｔ Ｓｉｎｇｌｅ Ａｇｅｎｔ）（ＥＯＨＳＡ）（方程式１）およびエクセス・オーバー・ブリス（Ｅｘｃｅｓｓ Ｏｖｅｒ Ｂｌｉｓｓ）式（方程式２）を使用して分析した。
【０１８０】
薬および材料
化合物
化合物Ａは、日本たばこ産業株式会社（Ｊａｐａｎ  Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｉｎｃ．）によって合成された。その化合物は、ＤＭＳＯ溶媒和物粉末として提供され、ＤＭＳＯ中で５ｍＭに調製した後、３７℃の熱の下で１５分間ソニケーションした。化合物を暗所で−２０℃にて保存し、水溶液中に選択した濃度に希釈する直前に３７℃で溶解した。ラパマイシン（シロリムス）は、ＬＣ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ｌｏｔ＃ＡＳＷ‐１１４）から購入し、１‐β‐アラビノフラノシルシトシン（ａｒａ‐Ｃ）は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ（ｃａｔ．＃２５１０１０、ｌｏｔ  Ｄ００６０２５８）から購入し、ソラフェニブは合成し、ベキサロテンは、Ｃｈｅｍｉｅ  Ｔｅｋ（ｃａｔ．＃：１５３５５９‐４９‐０、ｌｏｔ＃ＢＥＸ‐０１Ａ）から購入した。
【０１８１】
溶液、培地、および試薬
標準的な試薬溶液および細胞培養培地は、ペンシルベニア州Ｕｐｐｅｒ  ＭｅｒｉｏｎサイトのＧＳＫ  Ｍｅｄｉａ  Ｍｅｄｉａ  Ｌａｂによって調製した。
ガンマ線を照射し、熱不活化したＦＢＳ（ｃａｔ．＃１２１７６‐１０００Ｍ）は、ＳＡＦＣ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｌｅｎｅｘａ、カンザス州から購入した。ペニシリン／ストレプトマイシン（ｃａｔ．＃１５１４０）および０．２５％トリプシン‐ＥＤＴＡ（ｃａｔ．＃２５２００）は、Ｇｉｂｃｏ／インビトロジェン社、カールズバッド、カリフォルニア州から購入した。
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ‐Ｇｌｏ（商標）発光細胞生存性アッセイは、プロメガ社、マディソン（Ｍａｄｉｓｏｎ）、ウィスコンシン州から購入した。
【０１８２】
データ分析
細胞増殖／死アッセイに関する濃度反応曲線
結果は、ｔ＝０値の％割合として表わし、化合物濃度に対してプロットした。ｔ＝０値を、１００％の正規化し、化合物添加の時点において存在する細胞の数を示した。細胞反応を、マイクロソフト・エクセル用ＩＤＢＳ  ＸＬｆｉｔ  ｐｌｕｇ‐ｉｎソフトウェアを使用して、濃度に対する細胞の生存の４‐または６‐パラメーター曲線適合をして各化合物について決定し、細胞増殖の５０％阻害（ｇＩＣ５０）に必要な濃度を求めた。バックグラウンド補正を、細胞を含まないウェルからの値を引くことによって行った。
【０１８３】
薬の組み合わせの分析
エクセス・オーバー・ハイエスト・シングル・エージェン（Ｅｘｃｅｓｓ Ｏｖｅｒ Ｈｉｇｈｅｓｔ Ｓｉｎｇｌｅ Ａｇｅｎｔ）（ＥＯＨＳＡ）の算出
化合物「Ａ」の「ａ」濃度での反応（未処理試料と比較し、培地のみに対して正規化した阻害パーセント）（Ｒａ）および化合物「Ｂ」の「ｂ」濃度での反応（Ｒｂ）を、化合物「Ａ」および「Ｂ」がそれぞれ濃度「ａ」および「ｂ」である混合物の反応（Ｒａｂ）と比べる。ＥＯＨＳＡの方程式は：
方程式１
Ｒａｂ＞ＲａとＲｂとのあいだの高い方の値１０％＝相加作用
Ｒａｂ＜ＲａとＲｂとのあいだの高い方の値の−１０％＝拮抗作用
図２は、「相加作用」および「拮抗作用」を、評価した投与の合計回数に対して測定したときの投与の％割合を要約する。
【０１８４】
エクセス・オーバー・ブリス（Ｅｘｃｅｓｓ Ｏｖｅｒ Ｂｌｉｓｓ）の算出：
上記と同じパラメーターを使用して、ＥＯＢｌｉｓｓの方程式は：
方程式２
デルタ（Ｄｅｌｔａ）＝Ｒａｂ−１００×（Ｒａ／１００＋Ｒｂ／１００−Ｒａ×Ｒｂ／１００００）
デルタ＞１０％の場合、その組み合わせは相加的であり、デルタ＜−１０％の場合、その組み合わせは拮抗的である。ＥＯＨＳＡと比べて、ＥＯＢｌｉｓｓは、薬の組み合わせのより厳密な評価である。
【０１８５】
結果
増殖の阻害
化合物Ａの抗増殖作用を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ‐Ｇｌｏ（商標）３日連続阻害剤曝露成長‐死アッセイを使用してテストした。化合物Ａは、血液由来の９２のヒト癌細胞株のパネルに対してプロファイルした。化合物Ａ感受性の細胞株を、高感度（ｇＩＣ５０＜２００ｎＭ）、中間（ｇＩＣ５０  ２００ｎＭ〜２μＭ）、抵抗性（ｇＩＣ５０＞２μＭ）にグループ化した。
【０１８６】
化合物Ａは強力に（ｇＩＣ５０＜２００  ｎＭ）、急性単球性／骨髄性白血病（ＡＭＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）由来の癌細胞株の８７％（１５細胞株中１３細胞株）および８３％（６細胞株中５細胞株）の増殖を、それぞれ阻害した。しかし、化合物Ａは一般には、Ｂ細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫およびバーキットリンパ腫に対して乏しい作用を示すか、作用を示さなかった。
【０１８７】
ＡＭＬ癌細胞株に対するＭＥＫ阻害剤の臨床的に活性のあるＡＭＬ薬との組み合わせ
ＡＭＬ由来（Ｆ‐３６Ｐ、ＧＤＭ‐１、ＨＥＬ９２．１．７、ＭＬ‐２、ＭＶ‐４‐１、ＯＣＩ‐ＡＭＬ２、ＯＣＩ‐ＡＭＬ３およびＰＬＢ９８５）からの８つの造血癌細胞株の増殖阻害を、ａｒａ‐Ｃ、ベキサロテン、ラパマイシンまたはソラフェニブと組み合わせてＭＥＫ阻害剤、化合物Ａに３日間曝露した後に検討した。エクセス・オーバー・ハイエスト・シングル・エージェン（ＥＯＨＳＡ）およびエクセス・オーバー・ブリス（ＥＯＢｌｉｓｓ）を各薬の組み合わせについて算出し、組み合わせの有効性を定量するのに使用した。１６×１６の薬マトリックス（合計２５６の薬の組み合わせ）をテストしたが、生理学的に適切な薬の組み合わせのみを評価した（各薬について、ＩＣ５０の３倍まで）；化合物Ａおよびラパマイシンについては＜１６０ｎＭ濃度を、ａｒａ‐Ｃおよびベキサロテンについては＜３１０ｎＭ濃度を評価し、ソラフェニブについては最大１０μＭ濃度まで評価した。場合によっては、元のデータから採用した計算のアーチファクトと考えられたために、またはプレート端部の影響（ｐｌａｔｅ  ｅｄｇｅ  ｅｆｆｅｃｔ）のために、２つの化合物のうちの１つの低濃度で観察された拮抗作用を最終分析に含まなかった。
【０１８８】
図２に示す結果は、化合物Ａおよびラパマイシンの薬の組み合わせは、ＥＯＨＳＡとＥＯＢｌｉｓｓから、テストした大部分のＡＭＬ細胞株において相加的であることを示す。６０％を超えるテストしたＡＭＬ細胞株（８細胞株中５細胞株）について、ＥＯＨＳＡ＞１０％が、４０％を超えるテストしたすべての薬の組み合わせで観察され、ＥＯＢｌｉｓｓ（Ｄｅｌｔａ）＞１０％が、３０％を超えるテストしたすべての薬の組み合わせで観察された。有益な効果は、各薬について７８ｎＭ〜０．６２ｎＭの濃度で主に観察された。この組み合わせを使用して、１つの細胞株（ＧＤＭ‐１）のみが、テストした薬の組み合わせの＞１０％で拮抗作用（＜１０％ＥＯＨＳＡ）を示した。予想された通り、相加作用および拮抗作用は、この組み合わせを使用して、化合物Ａ非感受性細胞株であるＨＥＬ．９２．１．７に対してほとんど観察されなかった。
【０１８９】
ａｒａ‐Ｃの化合物Ａとの組み合わせについては、６０％を超えるＡＭＬ細胞株（８細胞株中５細胞株）が、３０％を超えるテストしたすべての薬の組み合わせで、ＥＯＨＳＡ＞１０％を、２０％を超えるテストしたすべての薬の組み合わせで、ＥＯＢｌｉｓｓ＞１０％を有した。ａｒａ‐Ｃの化合物Ａとの組み合わせは、化合物Ａとラパマイシンとの組み合わせの組み合わせと比べて、僅かに弱く相加的で、より強く拮抗的であった。
【０１９０】
ベキサロテンの化合物Ａとの組み合わせは、化合物Ａとａｒａ‐Ｃとの組み合わせと同様であり、８つのＡＭＬ細胞株うち５細胞株が、３０％を超えるテストしたすべての薬の組み合わせで、ＥＯＨＳＡ＞１０％を、２０％を超えるテストしたすべての薬の組み合わせで、ＥＯＢｌｉｓｓ＞１０％を有した。
【０１９１】
化合物Ａとソラフェニブとの組み合わせは、ａｒａ‐Ｃまたはベキサロテンの化合物Ａとの組み合わせと比べて、同様のレベルの相加作用をもたらしたが、ソラフェニブは、ＥＯＢｌｉｓｓ＜−２０％である細胞の数がテストしたなかで最多（５０％）であった。
【０１９２】
考察
化合物Ａは、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞白血病／リンパ腫またはバーキットリンパ腫などの他に由来する造血癌細胞と比較して、ＡＭＬおよびＣＭＬ由来の造血器癌細胞株に対して相加作用を増加した。これらの結果をもとに、ＡＭＬ由来の８つの癌細胞株の感度を、他の臨床的活性薬剤と組み合わせてＭＥＫ阻害剤で処理した後に決定した。結果は、ＭＥＫ阻害剤化合物Ａのラパマイシンとの組み合わせが、一般には臨床的に関連する濃度において相加的であり、拮抗作用を引き起こす薬の組み合わせはほとんどないことを示した。化合物Ａのａｒａ‐Ｃ、ベキサロテンおよびソラフェニブの薬の組み合わせは、同様の相加作用を引き起こすが、ＭＥＫ阻害剤のラパマイシンとの組み合わせと比べて小さい。
【０１９３】
まとめると、これらの結果は、ＡＭＬおよびＣＭＬが、ＭＥＫ阻害剤に敏感な造血癌細胞株であり、ＡＭＬ細胞株における化合物Ａのラパマイシン、ａｒａ‐Ｃ、ベキサロテンおよびソラフェニブとの薬の組み合わせは、各単剤単独より優れた効果を発揮することを示す。
【０１９４】
実施例２
被験者が、第Ｉ相／ＩＩ非盲検、用量漸増試験に参加した。組み入れ基準は、標準的な療法が永続的な寛解をもたらさないと予想される再発性／難治性の白血病をもつ被験者を含んだ。高いリスクの骨髄異形成（ＭＤＳ）［すなわち世界保健機関分類による過剰な芽球（ＲＡＥＢ‐１またはＲＡＥＢ‐２）を伴う難治性の貧血症］およびＣＭＭＬ（ＣＭＭＬ）をもつ被験者もまた、参加する資格があった。再発性／難治性白血病には、世界保健機関分類による急性非リンパ性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、または急性転化における慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）が含まれる。特発性骨髄化生（ＡＭＭ）をもつ被験者もまた、参加する資格があった。
【０１９５】
被験者は、構造Ｉ（化合物Ａ）またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる医薬製剤を１ｍｇ／日の開始投与量で受けた。被験者は投薬を４週間受けた。投与量を漸増し、約５０％の増加で忍容性を評価した。
【０１９６】
一人目の再発性骨髄性悪性腫瘍をもつ７４歳の女性被験者が試験に参加し、彼女には２年間のＣＭＭＬ（ＣＭＭＬ）およびＣＭＭＬに起因する急性骨髄性白血病の病歴があった。この被験者は、治療前骨髄からの芽細胞数が−２日目および−１日目において、それぞれ１１．０および９．０であった。治療前絶対好中球数（ＡＮＣ）は、−２日目および−１日目において、それぞれ１５および１４と測定された。その被験者は、治療１日目において３０．０の芽細胞数を有した。ベースラインにおいて、この患者は、５０％の大芽球集団を有し、芽球は大きなサイズは目立ち、でこぼこで（ｉｎｄｅｎｔｅｄ）、屈曲した（ｃｏｎｖｏｌｕｔｅｄ）核の輪郭、細いクロマチン、１または２の核小体および微細に空洞化した細胞質を示し、アウエル小体は確認されなかった。芽細胞数は、１０日目以降検出されなかった（図３を参照されたい）。この被験者の腫瘍試料は、Ｋ‐ｒａｓにおける突然変異（Ｇ１２Ａ）を示した。１ヶ月の治療を受けた後、この被験者は、急性白血病の形態学的または免疫表現型証拠をもたない３％の骨髄の芽細胞を有した。くわえて、その被験者は、血小板数（ＰＬＴ）が２９日目までに１００×１０９／Ｌを超えて増加したので完全寛解として分類された。治療開始後、ＡＮＣは減少したが、２２日目には１×１０９／Ｌを超えるまで増加し、２９日目まで１×１０９／Ｌ超えたままであり、完全寛解基準を満たした。２ヶ月の治療後、その被験者は、約５％の骨髄からの芽細胞を有した。その被験者の今回の骨髄診断は、急性骨髄性白血病であり、限られた穿刺塗抹標本において９％芽球であった。この患者は、化合物Ａを１日当たり２ｍｇの投与量で受け、少なくとも４週間で完全寛解を得た。
【０１９７】
前記被験者についての２９日目まで通しての完全寛解基準に関連する骨髄からの測定を、試験日ごとに下記の表６に示す。
表６
【表６】
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【０１９８】
二人目の７５歳女性被験者は、持続性急性骨髄性白血病をもち、芽球３３％で本試験に参加した。ベースライン時の骨髄からの芽細胞は、著しく増加し、サイズは中から大で、楕円形から少し不規則な形をした核、分散したクロマチン、はっきりと異なる核小体、少量の無顆粒からわずかに粒状の細胞質が認められた。芽球の多くは、小さい凝集したクラスターの存在し、塗抹標本の羽状の端部（ｆｅａｔｈｅｒｅｄ  ｅｄｇｅ）において濃縮されていた。化合物Ａでの２ヶ月の治療後、その被験者は、骨髄で３％の芽細胞を示し、白血病の兆候はないと診断された。この被験者は、Ｎ‐ｒａｓに少なくとも１つの突然変異（Ｇ１２Ｓ）を有することがわかった。
【０１９９】
三人目の７９歳男性被験者は、持続性急性白血病をもち、ベースライン時の芽球は１４％で本試験に参加した。芽球は大きく、円形、楕円形、または不規則な形の核、大量の好塩基性の細胞質および細かい細胞質の顆粒をもち、骨髄像の１４％を含んでなっていた。また、成熟した単球も増加していた。１ヶ月の治療後、その被験者は骨髄で３％の芽球を示し、低形成髄における急性白血病の形態的証拠はなかった。この患者は化合物Ａでの２８日間の治療を完了した。この被験者は、Ｎ‐ｒａｓに少なくとも１つの突然変異を有することがわかった。
【０２００】
実施例３
１つ以上の以下の疾患：ＡＬＬ、ＡＭＬ、ＭＤＳ、および／またはＣＭＭＬに対して化合物Ａで治療した６７患者についての有効性転帰に関して中間解析を行った。その６７患者のうち、未知の反応がまたは不十分な追跡調査のために、７患者は臨床活性について評価可能ではなかった。ＡＭＬまたはＭＤＳをもつ３５名の患者が、少なくとも１つのＮＲａｓまたはＫＲａｓ突然変異を有した。ＡＭＬ、ＭＤＳまたはＣＭＭＬをもつ３０名の患者はＲａｓ野生型であるか、未知の遺伝子型を有した。ＣＭＭＬをもつ２名の患者が、Ｎ‐ＲａｓまたはＫ‐Ｒａｓ突然変異を有した。
【０２０１】
本明細書において記載されている基準によって定義された臨床活性を、これらの患者について、中間解析の一部として次の表、表７に示した。
表７
【表７】
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【０２０２】
ＡＭＬ／ＭＤＳ  Ｒａｓ突然変異コホート群について、３５名の患者が参加し、治療に反応した者が９名、観察された。試験終了時にＨ０を棄却する予測確率は＞０．９９であり、強い有効性を示唆する。
【０２０３】
ＡＭＬおよび／またはＭＤＳならびに少なくとも１つのＲＡＳ突然変異をもつ患者に関する治療に反応した者（ＣＲ／ＣＲｐ／骨髄ＣＲ／ＭＬＦＳ／ＰＲ）の試験の期間の中央値は、１６．３週である一方で、ＳＤ患者の試験の期間の中央値は８週である。ＡＭＬ、ＭＤＳ、および／またはＣＭＭＬならびにＲＡＳ野生型または未知の遺伝子型のいずれかをもつ、治療に部分的に反応した者の試験の期間の中央値は、３４．１週である一方で、ＳＤ患者の試験の期間の中央値は８．２週である。
【０２０４】
統計学的な見地からのＡＭＬ／ＭＤＳ‐ＮＲＡＳまたはＫＲＡＳ突然変異群からの予備有効性は、確率ＲＲ＞１５％を示し、高く、有効性信号推定（ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｓｉｇｎａｌ  ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ）：＞２５％ＯＲＲは０．５２である。ｒａｓ変異ＡＭＬ患者における奏効率は、１０週を超える試験期間で顕著であった。
【０２０５】
本発明の好ましい実施態様を上記によって説明しているが、本発明は、本明細書において開示されている厳格な指示に限定されるものではなく、以下の請求項の範囲内に入る変更態様のすべてに対する権利を有することを理解すべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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