(57)【要約】  角膜菲薄化および強膜伸張等の角膜または強膜異常に伴う疾患、障害、および状態の光線力学治療（ＰＤＴ）で用いるクロロフィルまたはバクテリオクロロフィル化合物を含む眼科組成物が提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
角膜または強膜異常に伴う疾患、障害、および状態の光線力学的治療（ＰＤＴ）で用いるクロロフィルまたはバクテリオクロロフィル化合物。
【請求項２】
角膜または強膜異常は、角膜菲薄化および強膜脆弱化である、請求項１に記載のクロロフィルまたはバクテリオクロロフィル。
【請求項３】
式Ｉ、ＩＩ、またはＩＩＩを有するクロロフィルまたはバクテリオクロロフィルの誘導体であって、
【化１】
2014524465.tif 000016
【化２】
2014524465.tif 000017
【化３】
2014524465.tif 000018
式中、
Ｍは、２ＨまたはＭｇ、Ｐｄ、Ｐｔ、Ｚｎ、Ｉｎ、Ｇｄ、およびＹｂからなる群から選択される原子を表し、
Ｘは、ＯまたはＮ−Ｒ７であり、
Ｒ１、Ｒ’２、およびＲ６はそれぞれ独立して、Ｙ−Ｒ８、−ＮＲ９Ｒ’９、または−Ｎ＋Ｒ９Ｒ’９Ｒ”９Ａ−であり、
Ｙは、ＯまたはＳであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、またはＣＯＯＲ９であり、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、またはＣ１−Ｃ１２アルコキシであり、
Ｒ４は、−ＣＨ＝ＣＲ９Ｒ’９、−ＣＨ＝ＣＲ９Ｈａｌ、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＮＲ９Ｒ’９、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−Ｎ＋Ｒ９Ｒ’９Ｒ”９Ａ−、−ＣＨＯ、−ＣＨ＝ＮＲ９、−ＣＨ＝Ｎ＋Ｒ９Ｒ’９Ａ−−、−ＣＨ２−ＯＲ９、−ＣＨ２−ＳＲ９、−ＣＨ２−Ｈａｌ、−ＣＨ２−Ｒ９、−ＣＨ２−ＮＲ９Ｒ’９、−ＣＨ２−Ｎ＋Ｒ９Ｒ’９Ｒ”９Ａ−、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｒ９、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｈａｌ、−ＣＨ２−ＣＨ２ＯＲ９、−ＣＨ２−ＣＨ２ＳＲ９、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ９Ｒ’９、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋Ｒ９Ｒ’９Ｒ”９Ａ−、−ＣＯＣＨ３、Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＲ９Ｒ’９、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＲ９Ｈａｌ、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＮＲ９、−ＣＨ（ＣＨ３）＝Ｎ＋Ｒ９Ｒ’９Ａ−−、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｈａｌ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＯＲ９、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＳＲ９、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＲ９Ｒ’９、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｎ＋Ｒ９Ｒ’９Ｒ”９Ａ−、または−Ｃ≡ＣＲ９であり、
Ｒ’４は、メチルまたはホルミルであり、
Ｒ５は、Ｏ、Ｓ、Ｎ−Ｒ９、Ｎ＋Ｒ９Ｒ’９Ａ−、ＣＲ９Ｒ’９、またはＣＲ９−Ｈａｌであり、
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ’９、およびＲ”９はそれぞれ独立して、
（ａ）Ｈ、
（ｂ）Ｃ１−Ｃ２５ヒドロカルビル、
（ｃ）ハロゲン、ニトロ、オキソ、ＯＲ、ＳＲ、エポキシ、エピチオ、−ＣＯＮＲＲ’、−ＣＯＲ、ＣＯＯＲ”、−ＯＳＯ３Ｒ、−ＳＯ３Ｒ”、−ＳＯ２Ｒ、−ＮＨＳＯ２Ｒ、−ＳＯ２ＮＲＲ’、−ＮＲＲ’、＝Ｎ−ＯＲ、＝Ｎ−ＮＲＲ’、−Ｃ（＝ＮＲ）−ＮＲＲ’、−ＮＲ−ＮＲＲ’、−（Ｒ）Ｎ−Ｃ（＝ＮＲ）−ＮＲＲ’、Ｏ←ＮＲ−、＞Ｃ＝ＮＲ、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ−ＣＯＲ’、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＲＲ’、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＲ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ、−ＰＲＲ’、−ＯＰＯ３ＲＲ’、−ＰＯ２ＨＲ、および−ＰＯ３Ｒ”Ｒ”からなる群から選択される１つ以上の官能基によって置換されたＣ１−Ｃ２５ヒドロカルビルであって、式中、ｎは、１〜１０の整数であり、ＲおよびＲ’はそれぞれ独立して、Ｈ、ヒドロカルビル、またはヘテロシクリルであるか、またはＲおよびＲ’は、それらが結合するＮ原子と一緒になって、Ｏ、Ｓ、およびＮから選択されるさらなるヘテロ原子を任意に含有する飽和３〜７員環を形成し、前記さらなるＮ原子は置換されてもよく、Ｒ”は、Ｈ、カチオン、ヒドロカルビル、またはヘテロシクリルである、Ｃ１−Ｃ２５ヒドロカルビル、
（ｄ）正に荷電した基、負に荷電した基、生理学的条件下で正に荷電した基に変換される塩基性基、および生理学的条件下で負に荷電した基に変換される酸性基からなる群から選択される１つ以上の官能基によって置換されたＣ１−Ｃ２５ヒドロカルビル、
（ｅ）１つ以上のヘテロ原子および／または１つ以上の炭素環式部分もしくは複素環式部分を含有するＣ１−Ｃ２５ヒドロカルビル、
（ｆ）１つ以上のヘテロ原子および／または１つ以上の炭素環式部分もしくは複素環式部分を含有し、かつ上の（ｃ）および（ｄ）において定義された１つ以上の官能基によって置換されたＣ１−Ｃ２５ヒドロカルビル、
（ｇ）アミノ酸、ペプチド、タンパク質、単糖類、オリゴ糖、もしくは多糖類の残基によって置換されたＣ１−Ｃ２５ヒドロカルビル、または
（ｈ）アミノ酸、ペプチド、タンパク質、単糖類、オリゴ糖、もしくは多糖類の残基であり、
Ｒ７はさらに、−ＮＲＲ’であってもよく、式中、ＲおよびＲ’はそれぞれ、Ｈまたは負に荷電した基、好ましくは、ＳＯ３−によって任意に置換されたＣ１−Ｃ２５ヒドロカルビルであり、
Ｒ８はさらに、Ｒ１、Ｒ’２、およびＲ６がそれぞれ独立してＹ−Ｒ８であるとき、Ｈ＋またはカチオンＲ＋１０であってもよく、
Ｒ＋１０は、金属カチオン、アンモニウム基、または有機カチオンであり、
Ａ−は、生理学的に許容されるアニオンであり、
ｍは、０または１であり、
７位〜８位の点線は、任意の二重結合を表す、クロロフィルまたはバクテリオクロロフィルの誘導体、ならびに
その薬学的に許容される塩および光学異性体である、請求項１または２に記載のクロロフィルまたはバクテリオクロロフィル化合物。
【請求項４】
７位〜８位の点線は、二重結合を表し、前記化合物は、式Ｉ、ＩＩ、またはＩＩＩのクロロフィル誘導体である、請求項３に記載のクロロフィルまたはバクテリオクロロフィル化合物。
【請求項５】
７位〜８位の点線が存在せず、前記化合物は、式Ｉ、ＩＩ、またはＩＩＩのバクテリオクロロフィル誘導体である、請求項３に記載のクロロフィルまたはバクテリオクロロフィル化合物。
【請求項６】
（ａ）ＣＯＯ−、ＣＯＳ−、ＳＯ３−、もしくはＰＯ３２−から選択される負に荷電した基、
（ｂ）ＣＯＯＨ、ＣＯＳＨ、ＳＯ３Ｈ、もしくはＰＯ３Ｈ２から選択される、生理学的ｐＨで負に荷電した基に変換される酸性基、またはその塩、
（ｃ）正に荷電した基、好ましくは、（ｉ）−Ｏ＋（ＲＲ’）、−Ｓ＋（ＲＲ’）、−Ｓｅ＋（ＲＲ’）、−Ｔｅ＋（ＲＲ’）、−Ｐ＋（ＲＲ’Ｒ”）、−Ａｓ＋（ＲＲ’Ｒ”）、−Ｓｂ＋（ＲＲ’Ｒ”）、および−Ｂｉ＋（ＲＲ’Ｒ”）等のＮ原子を含有しないオニウム基、（ｉｉ）−Ｎ＋（ＲＲ’Ｒ”）、−（Ｒ）Ｎ−Ｎ＋（ＲＲ’Ｒ”）、Ｏ←Ｎ＋（ＲＲ’Ｒ”）−、＞Ｃ＝Ｎ＋（ＲＲ’）、−Ｃ（＝ＮＲ）−Ｎ＋ＲＲ’Ｒ”、もしくは−（Ｒ）Ｎ−Ｃ（＝ＮＲ）−Ｎ＋ＲＲ’Ｒ”基から選択されるＮ含有基、好ましくは、Ｎ＋（ＲＲ’Ｒ”）由来のカチオン、または（ｉｉｉ）ピラゾリウム、イミダゾリウム、オキサゾリウム、チアゾリウム、ピリジニウム、キノリニウム、イソキノリニウム、ピリミジニウム、１，２，４−トリアジニウム、１，３，５−トリアジニウム、もしくはプリニウム等の１つ以上のＮ原子および任意にＯ原子もしくはＳ原子を含有する芳香族複素環化合物由来のカチオンから選択される末端基またはアルキル鎖内に位置する基、または
（ｄ）生理学的条件下で正に荷電した基に変換される塩基性基であって、前記塩基性基は、末端基またはアルキル鎖内に位置する基であり、−ＮＲＲ’、−Ｃ（＝ＮＲ）−ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ−ＮＲ’Ｒ”、−（Ｒ）Ｎ−Ｃ（＝ＮＲ）−ＮＲ’Ｒ”、Ｏ←ＮＲＲ’−、もしくは＞Ｃ＝ＮＲから選択されるか、または前記塩基性基は、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ピリジル、キノリニル、イソキノリニル、ピリミジル、１，２，４−トリアジニル、１，３，５−トリアジニル、もしくはプリニルから選択されるＮ含有芳香族複素環ラジカルであり、
式中、Ｒ、Ｒ’、およびＲ”はそれぞれ独立して、Ｈ、任意に置換されたヒドロカルビルもしくはヘテロシクリルであるか、またはＲ、Ｒ’、およびＲ”のうちの２つは、それらが結合するＮ原子と一緒になって、Ｏ、Ｓ、もしくはＮから選択される１つ以上のヘテロ原子を任意に含有し、かつ前記さらなるＮ原子でさらに任意に置換された飽和３〜７員環を形成し、前記環は、ハロ、ヒドロキシル、もしくはアミノによって任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルによって前記さらなるＮ原子で任意に置換されたアジリジン、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、チオモルホリン、アゼピン、もしくはピペラジンからなる群から選択される、塩基性基、
から選択される少なくとも１つの基を含有する、請求項４または５に記載のクロロフィルまたはバクテリオクロロフィル化合物。
【請求項７】
前記化合物は、式ＩＩのクロロフィルまたはバクテリオクロロフィルであり、Ｒ６は、−ＮＲ９Ｒ’９であり、式中、Ｒ９は、Ｈであり、Ｒ’９は、正に荷電した基、負に荷電した基、生理学的条件下で負に荷電した基に変換される酸性基、好ましくは、ＳＯ３Ｈもしくはそのアルカリ塩、または生理学的条件下で正に荷電した基に変換される塩基性基、好ましくは、−ＮＲＲ’もしくは−ＮＨ−（ＣＨ２）２−６−ＮＲＲ’から選択される少なくとも１つの基によって置換されたＣ１−Ｃ１０アルキルであり、式中、ＲおよびＲ’はそれぞれ独立して、Ｈ、ＮＨ２によって任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであるか、またはＲおよびＲ’は、Ｎ原子と一緒になって、Ｏ原子またはＮ原子を任意に含有し、かつ前記さらなるＮ原子で−（ＣＨ２）２−６−ＮＨ２によってさらに任意に置換された飽和５〜６員環を形成する、請求項６に記載のクロロフィルまたはバクテリオクロロフィル化合物。
【請求項８】
前記化合物は、式ＩＩのバクテリオクロロフィルであり、式中、
Ｍは、２Ｈ、Ｍｇ、Ｐｄ、またはＺｎ、好ましくは、２ＨまたはＰｄ、より好ましくは、Ｐｄであり、
Ｒ１は、
（ｉ）−Ｏ−Ｒ１０＋、
（ｉｉ）式中、Ｙが、ＯもしくはＳであり、Ｒ８が、アミノ酸、ペプチド、もしくはタンパク質の前記残基である、Ｙ−Ｒ８、
（ｉｉｉ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２ＯＨ、
（ｉｖ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、
（ｖ）−ＮＨ−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ３、
（ｖｉ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、
（ｖｉｉ）グリコシルアミノ、または
（ｖｉｉｉ）Ｒ６について定義されたようなＮＨＲ’９から選択され、
Ｒ’２は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、またはブトキシ、より好ましくは、メトキシ等のＣ１−Ｃ６アルコキシであり、
Ｒ４は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３、−ＣＨ＝Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋、−ＣＨ＝Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−Ｒ１０＋、−ＣＨ＝Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３２−（Ｒ１０＋）２、−ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−Ｒ１０＋、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３２−（Ｒ１０＋）２、または−Ｃ（ＣＨ３）＝ＮＲ９、好ましくは、Ｃ（ＣＨ３）＝Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２、または−Ｃ（ＣＨ３）＝Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ）３＋Ａ−であり、
Ｒ６は、
（ａ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋、好ましくは、−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＳＯ３Ｒ１０＋または−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＳＯ３Ｒ１０＋、
（ｂ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−Ｒ１０＋、
（ｃ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３２−（Ｒ１０＋）２、
（ｄ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｂ、
【化４】
2014524465.tif 000019
【化５】
2014524465.tif 000020
、好ましくは、−ＮＨ−（ＣＨ２）２−１−モルホリノまたは−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ピペラジノ、
【化６】
2014524465.tif 000021
（ｈ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ”）−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲＲ’、好ましくは、−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＮＨ２、
（ｊ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲＲ’、好ましくは、−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲＲ’、      から選択される（ｉ）ＮＨＲ’９から選択され、
Ｒ１０＋は、Ｈ＋、またはＫ＋、Ｎａ＋、Ｌｉ＋、もしくはＮＨ４＋、より好ましくは、Ｋ＋等の一価カチオンであり、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＮＨであり、
Ｂは、アンモニウム−Ｎ＋ＲＲ’Ｒ”、好ましくは、−Ｎ（ＣＨ３）３＋Ａ−、グアニジニウム、スルホニウム、ホスホニウム、アルソニウムから選択される正に荷電した基であるか、またはＢは、アミノ−−ＮＲＲ’、好ましくは、−ＮＨ２、グアニジノ、ホスフィノ、もしくはアルシノから選択される、生理学的条件下で正に荷電した基に変換される塩基性基であり、
ｍは、１であり、ｎは、１〜１０、好ましくは、２または３の整数であり、
Ａ−は、生理学的に許容されるアニオンであり、
式中、Ｒ、Ｒ’、およびＲ”はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである、請求項７に記載のクロロフィルまたはバクテリオクロロフィル化合物。
【請求項９】
前記化合物は、以下の化合物の一価もしくは二価アルカリまたはアルカリ土類金属カチオンを有する前記薬学的に許容される塩、またはＮＨ４＋を有する前記薬学的に許容される塩から選択される式ＩＩのバクテリオクロロフィルである、請求項８に記載のクロロフィルまたはバクテリオクロロフィル化合物：
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（２−スルホエチル）アミド、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（−スルホプロピル）アミド、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（２−スルホエチル）アミド、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（３−スルホプロピル）アミド、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（２−スルホエチル）アミド、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（−スルホプロピル）アミド、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（２−スルホエチル）アミド、および
３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（３−スルホプロピル）アミド。
【請求項１０】
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（２−スルホエチル）アミドジカリウム塩（本明細書において、ＷＳＴ１１）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（−スルホプロピル）アミドジカリウム塩（本明細書において、化合物１）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（２−スルホエチル）アミドジカリウム塩（本明細書において、化合物２）、および
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（３−スルホプロピル）アミドジカリウム塩（本明細書において、化合物３）、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（２−スルホエチル）アミドジカリウム塩、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（−スルホプロピル）アミドジカリウム塩、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（２−スルホエチル）アミドジカリウム塩、および
３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（３−スルホプロピル）アミドジカリウム塩、
からなり選択される、請求項８に記載の化合物。
【請求項１１】
前記化合物は、式Ｉのバクテリオクロロフィルであり、式中、
Ｍは、Ｐｄであり、
Ｒ１は、ＯＲ１０＋、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−Ｒ１０＋、または−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３２−（Ｒ１０＋）２であり、
Ｒ２は、ＣＯＯＣＨ３であり、
Ｒ３は、Ｈであり、
Ｒ４は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３であり、
Ｒ５は、Ｏであり、
Ｒ１０＋は、Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｌｉ＋、またはＮＨ４＋等の一価カチオンであり、
ｎは、１〜１０、好ましくは、２または３の整数である、
請求項３に記載のクロロフィルまたはバクテリオクロロフィル化合物。
【請求項１２】
前記化合物は、パラジウムバクテリオフェオホルビド、あるいは一価アルカリもしくはアルカリ土類金属カチオンまたはＮＨ４＋を有するパラジウムバクテリオフェオホルビドａ１７３−（３−スルホプロピル）アミドの薬学的に許容される塩、好ましくはそのカリウム塩である、請求項１１に記載のクロロフィルまたはバクテリオクロロフィル化合物。
【請求項１３】
前記化合物は、式ＩＩＩのクロロフィルまたはバクテリオクロロフィルであり、Ｘは、−ＮＲ７であり、Ｒ７は、−ＮＲＲ’であり、Ｒは、Ｈであり、Ｒ’は、ＳＯ３−またはそのアルカリ塩によって置換されたＣ２−Ｃ６アルキルであり、好ましくは、Ｒ７は、−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＳＯ３−Ｒ１０＋であり、式中、Ｒ＋１０は、金属カチオン、アンモニウム基、または有機カチオン、好ましくは、Ｋ＋である、請求項３に記載のクロロフィルまたはバクテリオクロロフィル化合物。
【請求項１４】
角膜または強膜異常に伴う疾患、障害、および状態の光線力学的治療（ＰＤＴ）用の薬学的に許容される担体および請求項１〜１３のいずれか１項に記載のクロロフィルまたはバクテリオクロロフィル化合物を含む薬学的組成物。
【請求項１５】
角膜または強膜異常は、角膜菲薄化および強膜伸張である、請求項１４に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
前記製剤の粘度を高め、かつ角膜への前記クロロフィルまたはバクテリオクロロフィル化合物の透過を制限するための粘性剤をさらに含む、請求項１４または１５に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
前記粘性剤は、ポリマー、好ましくは、バイオポリマーである、請求項１６に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
前記バイオポリマーは、デキストラン、スクレログルカンおよびその誘導体、ジェランガム、グアーガム、またはメチルセルロースから選択される多糖類である、請求項１７に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
上皮を通る前記クロロフィルまたはバクテリオクロロフィル化合物の前記透過を高めるための経上皮透過促進剤をさらに含む、請求項１４または１５に記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
局所適用のための請求項１４〜１９のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
赤外または近赤外（ＮＩＲ）波長の光で眼を局部照射する前に前記光線力学的治療で用いる、請求項１４〜２０のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
（ａ）角膜菲薄化に苦しむ個体に、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のクロロフィルもしくはバクテリオクロロフィル化合物、または請求項１４〜２２のいずれか１項に記載の薬学的組成物を投与するステップと、（ｂ）赤外または近赤外（ＮＩＲ）波長の光で眼を照射するステップと、を含む、角膜菲薄化の光線力学的治療のための方法。
【請求項２３】
（ａ）強膜伸張に苦しむ個体に、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のクロロフィルもしくはバクテリオクロロフィル化合物、または請求項１４〜２２のいずれか１項に記載の薬学的組成物を投与するステップと、（ｂ）赤外または近赤外（ＮＩＲ）波長の光で眼を照射するステップと、を含む、強膜伸張の光線力学的治療のための方法。
【請求項２４】
（ａ）角膜および／または強膜疾患または脆弱化に苦しむことが予測される個体に、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のクロロフィルもしくはバクテリオクロロフィル化合物、または請求項１４〜２２のいずれか１項に記載の薬学的組成物を投与するステップと、（ｂ）赤外または近赤外（ＮＩＲ）波長の光で眼を照射するステップと、を含む、介入手順前、介入手順中、または介入手順後に角膜および／または強膜疾患または脆弱化を予防するための方法。
【請求項２５】
角膜または強膜異常に伴う前記疾患、障害、および状態は、円錐角膜、レーザー角膜切削形成術（ＬＡＳＩＫ）後拡張、レーザー屈折矯正角膜切除術（ＰＲＫ）後拡張、感染後拡張、周辺拡張、角膜のリウマチ状態、変性近視、正乱視、強膜ぶどう腫、高眼圧緑内障、低眼圧緑内障、およびこれらの組み合わせから選択される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のクロロフィルもしくはバクテリオクロロフィル化合物、請求項１４〜２１のいずれか１項に記載の薬学的組成物、または請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記強膜脆弱化疾患、障害、および状態は、近視、黄斑変性、萎縮、または視力喪失から選択される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のクロロフィルもしくはバクテリオクロロフィル化合物、請求項１４〜２１のいずれか１項に記載の薬学的組成物、または請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、眼科および光線力学的治療（ＰＤＴ）の分野であり、光増感剤、具体的には、水溶性クロロフィルおよびバクテリオクロロフィル化合物を用いた角膜または強膜異常に伴う疾患、障害、および状態の光線力学的治療に関する。
【０００２】
定義および略語
Ｂｃｈｌ  ａ：バクテリオクロロフィルａ：第５の同素環式環、中心Ｍｇ原子、１７３位のフィチル基またはゲラニルゲラニル基、１３２位のＣＯＯＣＨ３基、１３２位のＨ原子、２、７、１２、１８位のメチル基、３位のアセチル基、および８位のエチル基を有する五環性７，８，１７，１８−テトラヒドロポルフィリン（本明細書において、化合物１）；Ｂｐｈｅ：バクテリオフェオフィチンａ（そこで中心Ｍｇが２つのＨ原子によって置換されるＢｃｈｌ）；Ｂｐｈｅｉｄ：バクテリオフェオホルビドａ（中心金属原子を有しないＢｐｈｅ由来のＣ−１７２を含まないカルボン酸）；Ｃｈｌ：クロロフィル；ロドバクテリオクロリン：１７位の−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ基、１３位の−ＣＯＯＨ、２、７、１２、１８位のメチル基、８位のエチル基、および３位のビニルを有する四環性７，８，１７，１８−テトラヒドロポルフィリン；Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄ：Ｐｄ−バクテリオフェオホルビドａ；ＷＳＴ１１：パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（２−スルホエチル）アミドジカリウム塩；ＲＯＳ：活性酸素種；ＮＩＲ：近赤外；ＲＦ：リボフラビン。
【０００３】
バクテリオクロロフィル誘導体のＩＵＰＡＣ番号付けは、本明細書を通して使用される。
【背景技術】
【０００４】
紫外線Ａ（ＵＶＡ、３７０ｎｍ）照射後のリボフラビン（ＲＦ）での処理は、恐らくコラーゲン架橋（ＣＸＬ）のため、角膜硬化および強膜硬化をもたらす。この処理は、円錐角膜の進行およびレーザー屈折手術後の角膜拡張を食い止めるためにますます使用されている（Ｗｏｌｌｅｎｓａｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００３（ａ）、Ｈａｆｅｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００７、Ｒａｉｓｋｕｐ−Ｗｏｌｆ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。しかしながら、この処理にはいくつかの欠点、すなわち、（１）長時間のＲＦ処理（３０分間）、（２）長時間のＵＶＡ照射への眼の曝露（３０分間）、最後に（３）角膜実質細胞（Ｗｏｌｌｅｎｓａｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００４（ａ）、Ｗｏｌｌｅｎｓａｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００４（ｂ）、Ｗｏｌｌｅｎｓａｋ，２０１０（ａ））および角膜内皮細胞（Ｗｏｌｌｅｎｓａｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００３（ｃ）、Ｓｐｏｅｒｌ  ｅｔ  ａｌ．２００７）への毒性が存在し、４００ミクロンよりも薄い角膜の治療を困難にする（Ｈａｆｅｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００９、Ｗｏｌｌｅｎｓａｋ，２０１０（ｂ））。したがって、患者への危険性を低下させながら角膜を硬化することができるより安全な治療が必要とされている（Ａｖｉｌａ  ａｎｄ  Ｎａｖｉａ，２０１０、国際公開第ＷＯ２００８／０５２０８１号）。１つの可能性として、バクテリオクロロフィル誘導体を光増感剤として用いることによって近赤外線（ＮＩＲ）での照射時に角膜硬化を与える光増感剤の使用がある。
【０００５】
近眼とも称される近視は、調節が弛緩したときに平行光が網膜の前に画像焦点を作り出す眼の屈折異常である。全世界の近視患者数は、８億人〜２３億人と推定されている。中国、インド、およびマレーシア等の一部の国では、成人人口の最大４１％が−１ｄｐｔの近視度であり、約８０％が−０．５ｄｐｔの近視度である。近視は、コラーゲン強膜の伸張と関連している。眼球の伸長は眼球後区で生じ、強膜を巻き込む。そのような眼球の伸長は、近視の傾向がある子供および青少年の近視の進行を引き起こす。それは、通常、身体組織の成熟が自然な硬化とともに生じる２０歳代に減速し、止まる。この硬化は、糖化媒介架橋に関連している。
【０００６】
現在のところ、近視の進行を止め、変性近視に起因する視力喪失を減少させる効果的な治療が存在しない。眼球周囲に補強ベルトを適用し、それらを強膜に縫合することによって近視の進行を止める外科的解決策が報告された。これらの外科的解決策は、論議の的となり、技術的に困難であり、好評を博することはなかった。介入の臨界年齢は、幼少期または青年期早期である。したがって、強膜を硬化するより簡潔なアプローチが適用されるべきである。
【０００７】
近視の進行が眼球後区の伸長ならびにその後の強膜および脈絡網膜組織の伸張と関連しているため、コラーゲン架橋による強膜の硬化は、この疾患および黄斑の伸張および萎縮または出血ならびに視力喪失等の関連障害の進行を遅らせる／止めることが期待されている。ＷｏｌｌｅｎｓａｋおよびＳｐｏｅｒｌは、ＲＦ／ＵＶＡ処理を使用して、インビトロでヒトおよびブタの強膜においてそのような架橋および強化を達成したと報告した。架橋硬化は、ウサギのインビボで実証されており、数ヶ月続くことが示された。この処理は、近視の進行を止めるために適用され得る。
【０００８】
しかしながら、そのような処理は、有害であり得るＵＶＡの危険性にさらされる。加えて、紫外線の組織透過が制限されている。強膜の紫外線照射は、外的アプローチを必要とし、外科的露出を余儀なくさせる。したがって、より安全で良好な赤外または近赤外（ＮＩＲ）透過波長でコラーゲン架橋を誘発することができる代替の光増感剤の必要性が存在する。
【０００９】
バクテリオクロロフィル（ＢＣｈｌ）に基づくＰＤＴにおけるＮＩＲ等のより深い組織を透過することができる無害の光は、腫瘍学および加齢による眼の黄斑変性（ＡＭＤ）において効率的で安全な抗癌治療を提供することが示されている（米国第７，９４７，６７２号、国際公開第ＷＯ２００５／１２０５７３号）。
【００１０】
ＰＤＴにおける増感剤としての新規の水溶性クロロフィル（Ｃｈｌ）およびバクテリオクロロフィル（ＢＣｈｌ）誘導体の適用が、近年、本発明者（米国第７，９４７，６７２号、国際公開第ＷＯ２００５／１２０５７３号、Ａｓｈｕｒ  ｅｔ  ａｌ．２００９、Ｍａｚｏｒ  ｅｔ  ａｌ．２００５、Ｂｒａｎｄｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）、および他者（Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９、Ｂｏｕｒｇｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００６、Ｂｅｒｄｕｇｏ  ｅｔ  ａｌ．２００８）によって報告されている。ＮＩＲ照射時、これらの水溶性誘導体は、Ｏ２−および・ＯＨラジカルを生成し（Ａｓｈｕｒ  ｅｔ  ａｌ．２００９、Ｍａｚｏｒ  ｅｔ  ａｌ．２００５、Ｂｒａｎｄｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００５、Ｖａｋｒａｔ−Ｈａｇｌｉｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）、これまでのところ、治療される患者への静脈内投与後、前立腺癌治療の前臨床試験（Ｍａｚｏｒ  ｅｔ  ａｌ．２００５）および高次な臨床試験（現在、第ＩＩＩ相）（Ｔｒａｃｈｔｅｎｂｅｒｇ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．２００７、Ｌｅｐｏｒ  Ｈ．２００８、Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）における癌の血管標的化光線力学的治療（ＶＴＰ）において使用されている。タンパク質架橋の前駆体としての酸素ラジカルの効果的な生成（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）、ならびに水溶性ＢｃｈｌｓおよびＣｈｌｓ誘導体で確立された臨床経験によって、これらの増感剤が、コラーゲン架橋、具体的には、局所適用後のＮＩＲ照射時の角膜および強膜硬化によって媒介される処理での適用の有力候補となる。
【発明の概要】
【００１１】
本発明に従って、今では、米国第７，９４７，６７２号および国際公開第ＷＯ２００５／１２０５７３号に記載の水溶性（バクテリオ）クロロフィル誘導体は、局所適用後、ＮＩＲ照射時にウサギ眼の角膜および強膜の硬化を促進することが見出されている。ある特定の水溶性スルホン化バクテリオクロロフィル誘導体を用いたウサギ眼のエクスビボおよびインビボ処理についての非限定的な例示的な結果が本明細書に開示される。これらの光増感剤を用いたウサギ眼の角膜および強膜の処理は、安全であるように見え、角膜および強膜の生体力学的強度を著しく増加させた。
【００１２】
したがって、本発明は、角膜または強膜異常、具体的には、角膜菲薄化または強膜伸張に伴う疾患、障害、および状態の低侵襲的光線力学的治療（ＰＤＴ）用のクロロフィルおよびバクテリオクロロフィル誘導体の使用に関する。
【００１３】
主な態様において、本発明は、ＮＩＲ照射時に角膜および強膜硬化を著しく促進する、本明細書の式Ｉ、ＩＩ、またはＩＩＩの（バクテリオ）クロロフィル誘導体を含む眼のＰＤＴで用いる眼科組成物を提供する。
【００１４】
別の態様では、本発明は、眼疾患、障害、および状態、具体的には、円錐角膜、眼圧上昇、および外傷に起因する角膜拡張等の角膜菲薄化に伴う障害、ならびに近視等の眼球伸長および黄斑伸張に伴う障害の治療のための方法に関する。
【００１５】
本発明は、介入手順前、介入手順中、または介入手順後に角膜および／または強膜疾患または脆弱化を予防するための方法をさらに提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】マイクロコンピュータ制御の生体材料試験装置の顎部を６ｍｍ間隔でクランプ固定した細長い角膜片の写真である。
【図２】直径８ｍｍの角膜ディスク中央の写真であり、ＷＳＴ１１／ＮＩＲおよびＲＦ／ＵＶＡ処理後の蛍光分光測定のために石英キュベット内に斜めに設置されたスライドガラス上に載置されている。
【図３】生理食塩水中のＷＳＴ１１の溶液に１０、２０、および３０分間曝露された脱上皮化したウサギ角膜に蓄積したＷＳＴ１１の光吸収スペクトル（７５５ｎｍ）である。
【図４Ａ−４Ｈ】蛍光顕微鏡写真（図４Ａ、４Ｂ、４Ｅ、４Ｆ）およびそれらに関連したグラフ（図４Ｃ、４Ｄ、４Ｇ、４Ｈ）であり、生理食塩水中のＷＳＴ１１にエクスビボで１０分間（４Ａおよび４Ｃ）ならびに３０分間（４Ｂおよび４Ｄ）曝露され、かつＷＳＴ１１およびデキストラン−５００の溶液に１０分間（４Ｅおよび４Ｇ）ならびに３０分間（４Ｆおよび４Ｈ）曝露された脱上皮化しウサギ角膜への透過深度に対する蛍光強度を示す。角膜中央の矢状薄片（１２μｍ）の蛍光は、７４０ｎｍでの励起時に７６０ｎｍで検出された。
【図５】７５５ｎｍ、１０ｍＷ／ｃｍ２で指定の期間照射する前にＷＳＴ１１溶液で２０分間エクスビボ処理した角膜からのＷＳＴ１１の光吸収スペクトルである。
【図６】それぞれ、ＮＩＲまたはＵＶＡ照射後のエタノール（８％）およびＷＳＴ１１（黒色）またはＲＦ（薄青色）を含有する溶液中のα−（４−ピリジルＮ−オキシド）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン（４−ＰＯＢＮ、６５ｍＭ）の電子スピン共鳴（ＥＳＲ）スペクトルである。黒色の矢印は、４−ＰＯＢＮによる一重項酸素の捕捉時に形成された四重項を示し、星印は、ヒドロキシルおよびスーパーオキシドラジカルの捕捉時に形成された二重三重項を示す。
【図７】４−ＰＯＢＮ（６５ｍＭ）エタノール（８％）溶液中に浸漬した後にエクスビボでＷＳＴ１１／ＮＩＲ（黒色）またはＲＦ／ＵＶＡ（薄青色）で処理した角膜から得られた４−ＰＯＢＮのＥＳＲスペクトルである。
【図８Ａ−８Ｂ】ＷＳＴ１１と３０分間インキュベートし、その後、３０分間ＮＩＲ照射（ｎ＝１０）するか、またはＲＦ−Ｄ溶液とインキュベートし、その後、ＵＶＡ照射（ＲＦ−Ｄ／ＵＶＡ）した後の極限応力単位の角膜硬度のエクスビボでの応力ひずみ測定値（８Ａ）および角膜のヤング率（８Ｂ）を示すグラフである。
【図９Ａ−９Ｂ】ウサギ角膜をＷＳＴ１１（２．５ｍｇ／ｍＬ）で１０、２０、もしくは３０分間処理し、その後、３０分間ＮＩＲ照射（７５５ｎｍ、１０ｍＷ／ｃｍ２）するか、またはＲＦ／ＵＶＡで処理した１ヶ月後の極限応力単位の角膜硬度のインビボでの応力ひずみ測定値（９Ａ）およびヤング率（９Ｂ）を示すグラフである。
【図１０Ａ−１０Ｂ】ウサギ角膜をデキストラン（ＷＳＴ１１）を有しない生理食塩水中のＷＳＴ１１（２．５ｍｇ／ｍＬ）またはデキストラン５００（ＷＳＴ−Ｄ）を有するＷＳＴ１１のいずれかで２０分間処理し、その後、３０分間ＮＩＲ照射（７５５ｎｍ、１０ｍＷ／ｃｍ２）するか、あるいはデキストランを用いて、または用いることなくＲＦで処理し、その後、３０分間ＵＶＡ照射した１ヶ月後の極限応力単位の角膜硬度のインビボでの応力ひずみ測定値（１０Ａ）およびヤング率（１０Ｂ）を示すグラフである。対照：未処理の眼。
【図１１Ａ−１１Ｃ】インビボでのＷＳＴ１１／ＮＩＲ照射処理（２０倍の倍率）後にヘマトキシリン−エオシンで２日間（１１Ａ〜１１Ｃ）または１週間（１１Ｄ）染色したウサギ角膜の組織学的切片である。１１Ａ：対照、１１Ｂ：生理食塩水中のＷＳＴ１１（ＷＳＴ１１−Ｓ／ＮＩＲプロトコル）で処理した角膜、１１Ｃ：ＷＳＴ１１およびデキストラン（ＷＳＴ１１−Ｄ／ＮＩＲ）で処理した角膜、１１Ｄ：ＷＳＴ１１−Ｄ／ＮＩＲ処理から１週間後。
【図１２Ａ−１２Ｂ】生理食塩水中のＷＳＴ１１でインビボ処理し、その後、ＮＩＲ照射してから１日後のアポトーシスのために染色したウサギ角膜の組織学的切片である。１２Ａ：対照、未処理の角膜、１２Ｂ：ＷＳＴ１１−Ｓ／ＮＩＲで処理した角膜。
【図１３】ＷＳＴ１１およびＮＩＲ照射（ＷＳＴ１１／ＮＩＲ）で処理したウサギ角膜、またはリボフラビンおよびＵＶＡ照射（ＲＦ／ＵＶＡ）で処理したウサギ角膜の蛍光スペクトルを示す。
【図１４】ＷＳＴ１１の透過を示すウサギ強膜の蛍光顕微鏡写真である。
【図１５Ａ−１５Ｂ】３０分間ＷＳＴ１１とインキュベートし、その後、処理した強膜後部に３０分間直接ＮＩＲ照射（７５５ｎｍ、１０ｍＷ／ｃｍ２）した後の極限応力単位の赤道上（ｕｐｐｅｒ  ｅｑｕａｔｏｒｉａｌ）強膜硬度のエクスビボでの応力ひずみ測定値（１５Ａ）および角膜のヤング率（１５Ｂ）を示すグラフである。対照：未処理の赤道下（ｌｏｗｅｒ  ｅｑｕａｔｏｒｉａｌ）強膜。
【図１６Ａ−１６Ｂ】２０分間ＷＳＴ１１とインキュベートし、その後、前角膜に３０分間ＮＩＲ照射（７５５ｎｍ、１０ｍＷ／ｃｍ２）した後の極限応力単位の赤道上強膜硬度のエクスビボでの応力ひずみ測定値（１５Ａ）および角膜のヤング率（１５Ｂ）を示すグラフである。対照：未処理の赤道下強膜。
【図１７Ａ−１７Ｂ】強膜にエクスビボで薬物を送達するために使用される装置ならびに外部または直接照射（１７Ａ）および前角膜への照射（１７Ｂ）の略図である。
【図１８Ａ−１８Ｃ】前角膜の照射で処理したウサギ眼の強膜後部のＮＩＲ照射のために使用される３鏡眼底レンズ（ｔｈｒｅｅ  ｍｉｒｒｏｒ  ｆｕｎｄｕｓ  ｌｅｎｓ）装置の写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
ある特定の水溶性クロロフィルおよびバクテリオクロロフィル誘導体が、極めて速く、かつ時間依存的様式で、強膜および脱上皮化した角膜に透過し、適切な照射による増感時に、エクスビボおよびインビボの両方において、角膜および強膜の一貫した著しい硬化を誘発することが本発明者によって見出されている。これらの光増感剤が光化学的に活性であったという事実は、照射中のそれらの酸化形態への連続的な退色およびスペクトル変形に反映された。
【００１８】
したがって、角膜または強膜異常に伴う疾患、障害、および状態の低侵襲的光線力学的治療（ＰＤＴ）で用いるクロロフィルまたはバクテリオクロロフィル光増感剤を含む薬学的組成物を提供することが、本発明の主な目的である。具体的には、本発明によって提供される薬学的組成物は、角膜菲薄化および／または強膜伸張の治療のためのものである。
【００１９】
好ましい実施形態において、本発明の目的に有用な光増感剤は、式Ｉ、ＩＩ、またはＩＩＩの水溶性（バクテリオ）クロロフィルであって、
【化１】
2014524465.tif 000002
【化２】
2014524465.tif 000003
【化３】
2014524465.tif 000004
式中、
Ｍは、２ＨまたはＭｇ、Ｐｄ、Ｐｔ、Ｚｎ、Ｉｎ、Ｇｄ、およびＹｂからなる群から選択される原子を表し、
Ｘは、ＯまたはＮ−Ｒ７であり、
Ｒ１、Ｒ’２およびＲ６はそれぞれ独立して、Ｙ−Ｒ８、−ＮＲ９Ｒ’９、または−Ｎ＋Ｒ９Ｒ’９Ｒ”９Ａ−であり、
Ｙは、ＯまたはＳであり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、またはＣＯＯＲ９であり、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、またはＣ１−Ｃ１２アルコキシであり、
Ｒ４は、−ＣＨ＝ＣＲ９Ｒ’９、−ＣＨ＝ＣＲ９Ｈａｌ、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＮＲ９Ｒ’９、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−Ｎ＋Ｒ９Ｒ’９Ｒ”９Ａ−、−ＣＨＯ、−ＣＨ＝ＮＲ９、−ＣＨ＝Ｎ＋Ｒ９Ｒ’９Ａ−、−ＣＨ２−ＯＲ９、−ＣＨ２−ＳＲ９、−ＣＨ２−Ｈａｌ、−ＣＨ２−Ｒ９、−ＣＨ２−ＮＲ９Ｒ’９、−ＣＨ２−Ｎ＋Ｒ９Ｒ’９Ｒ”９Ａ−、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｒ９、−ＣＨ２−ＣＨ２Ｈａｌ、−ＣＨ２−ＣＨ２ＯＲ９、−ＣＨ２−ＣＨ２ＳＲ９、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ９Ｒ’９、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋Ｒ９Ｒ’９Ｒ”９Ａ−、−ＣＯＣＨ３、Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＲ９Ｒ’９、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＲ９Ｈａｌ、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＮＲ９、−ＣＨ（ＣＨ３）＝Ｎ＋Ｒ９Ｒ’９Ａ−−、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｈａｌ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＯＲ９、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＳＲ９、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＲ９Ｒ’９、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｎ＋Ｒ９Ｒ’９Ｒ”９Ａ−、または−Ｃ≡ＣＲ９であり、
Ｒ’４は、メチルまたはホルミルであり、
Ｒ５は、Ｏ、Ｓ、Ｎ−Ｒ９、Ｎ＋Ｒ９Ｒ’９Ａ−、ＣＲ９Ｒ’９、またはＣＲ９−Ｈａｌであり、
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ’９およびＲ”９はそれぞれ独立して、
（ａ）Ｈ、
（ｂ）Ｃ１−Ｃ２５ヒドロカルビル、
（ｃ）ハロゲン、ニトロ、オキソ、ＯＲ、ＳＲ、エポキシ、エピチオ、−ＣＯＮＲＲ’、−ＣＯＲ、ＣＯＯＲ”、−ＯＳＯ３Ｒ、−ＳＯ３Ｒ”、−ＳＯ２Ｒ、−ＮＨＳＯ２Ｒ、−ＳＯ２ＮＲＲ’、−ＮＲＲ’、＝Ｎ−ＯＲ、＝Ｎ−ＮＲＲ’、−Ｃ（＝ＮＲ）−ＮＲＲ’、−ＮＲ−ＮＲＲ’、−（Ｒ）Ｎ−Ｃ（＝ＮＲ）−ＮＲＲ’、Ｏ←ＮＲ−、＞Ｃ＝ＮＲ、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ−ＣＯＲ’、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＲＲ’、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＲ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ、−ＰＲＲ’、−ＯＰＯ３ＲＲ’、−ＰＯ２ＨＲ、および−ＰＯ３Ｒ”Ｒ”からなる群から選択される１つ以上の官能基によって置換されたＣ１−Ｃ２５ヒドロカルビルであって、式中、ｎは、１〜１０の整数であり、ＲおよびＲ’はそれぞれ独立して、Ｈ、ヒドロカルビル、またはヘテロシクリルであるか、またはＲおよびＲ’は、それらが結合するＮ原子と一緒になって、Ｏ、Ｓ、およびＮから選択されるさらなるヘテロ原子を任意に含有する飽和３〜７員環を形成し、このさらなるＮ原子は置換されてもよく、Ｒ”は、Ｈ、カチオン、ヒドロカルビル、またはヘテロシクリルである、Ｃ１−Ｃ２５ヒドロカルビル、
（ｄ）正に荷電した基、負に荷電した基、生理学的条件下で正に荷電した基に変換される塩基性基、および生理学的条件下で負に荷電した基に変換される酸性基からなる群から選択される１つ以上の官能基によって置換されたＣ１−Ｃ２５ヒドロカルビル、
（ｅ）１つ以上のヘテロ原子および／または１つ以上の炭素環式部分もしくは複素環式部分を含有するＣ１−Ｃ２５ヒドロカルビル、
（ｆ）１つ以上のヘテロ原子および／または１つ以上の炭素環式部分もしくは複素環式部分を含有し、かつ上の（ｃ）および（ｄ）において定義された１つ以上の官能基によって置換されたＣ１−Ｃ２５ヒドロカルビル、
（ｇ）アミノ酸、ペプチド、タンパク質、単糖類、オリゴ糖、または多糖類の残基によって置換されたＣ１−Ｃ２５ヒドロカルビル、または
（ｈ）アミノ酸、ペプチド、タンパク質、単糖類、オリゴ糖、または多糖類の残基であり、
Ｒ７はさらに、−ＮＲＲ’であってもよく、式中、ＲおよびＲ’はそれぞれ、Ｈまたは負に荷電した基、好ましくは、ＳＯ３−によって任意に置換されたＣ１−Ｃ２５ヒドロカルビルであり、
Ｒ８はさらに、Ｒ１、Ｒ’２、およびＲ６がそれぞれ独立してＹ−Ｒ８であるとき、Ｈ＋またはカチオンＲ＋１０であってもよく、
Ｒ＋１０は、金属カチオン、アンモニウム基、または有機カチオンであり、
Ａ−は、生理学的に許容されるアニオンであり、
ｍは、０または１であり、
７位〜８位の点線は、任意の二重結合を表す、水溶性（バクテリオ）クロロフィル、ならびに
その薬学的に許容される塩および光学異性体である。
【００２０】
ある特定の実施形態において、７位〜８位の点線は、二重結合を表し、光増感剤は、式Ｉ、ＩＩ、またはＩＩＩのクロロフィルである。
【００２１】
式Ｉの五環性クロロフィル化合物（式中、ＭがＭｇであり、１７３位のＲ１がフィチルオキシであり、１３２位のＲ２がＣＯＯＣＨ３であり、１３２位のＲ３がＨ原子であり、Ｒ５がＯであり、３位のＲ４がビニルであり、７位〜８位の点線が二重結合を表し、Ｒ’４が７位でメチルまたはホルミルであり、Ｒ４が８位でエチルである）は、それぞれ、クロロフィルａおよびｂであり、それらの誘導体は、異なる金属原子ならびに／または異なる置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ’４、および／もしくはＲ５を有する。
【００２２】
式ＩＩの四環性化合物（４つのメチン結合を介してカップリングされた３つのピロールおよび１つのピロリン）（式中、Ｍが存在せず、１７３位のＲ１がプロピオン酸であり、１５位のＲ’２が−ＣＨ２ＣＯＯＨであり、１３２位のＲ６が−ＣＯＯＨであり、３位のＲ４がビニルであり、７位〜８位の点線が二重結合を表し、Ｒ’４が７位でメチルでありおよびＲ４が８位でエチルである）は、塩素であり、その誘導体は、異なる金属原子ならびに／または異なる置換基Ｒ１、Ｒ’２、Ｒ４、Ｒ’４、および／もしくはＲ６を有する。
【００２３】
式ＩＩＩの五環性化合物（式中、Ｍが存在せず、Ｘが酸素であり、１７３位のＲ１がプロピオン酸であり、３位のＲ４がビニルであり、７位〜８位の点線が二重結合を表し、Ｒ’４が７位でメチルであり、Ｒ４が８位でエチルである）は、プルプリン−１８であり、その誘導体は、異なる金属原子ならびに／または異なる置換基Ｒ１、Ｒ４、Ｒ’４、および／もしくは酸素以外のＸを有する。
【００２４】
ある特定の他の実施形態では、７位〜８位は、水素化され、光増感剤は、式Ｉ、ＩＩ、またはＩＩＩのバクテリオクロロフィルである。式Ｉの五環性化合物（式中、ＭがＭｇであり、１７３位のＲ１がフィチルオキシまたはゲラニルゲラニルオキシであり、１３２位のＲ２がＣＯＯＣＨ３であり、１３２位のＲ３がＨ原子であり、Ｒ５がＯであり、３位のＲ４がアセチルであり、８位のＲ４がエチルであり、７位〜８位の点線が存在しない）は、バクテリオクロロフィルａ（Ｂｃｈｌａ）であり、その任意の誘導体は、異なる金属原子ならびに／または異なる置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ’４、および／もしくはＲ５を有する。
【００２５】
式ＩＩの四環性（４つのメチン結合を介してカップリングされた２つのピロールおよび２つのピロリン）化合物（式中、Ｍが存在せず、メチル基が２、７、１２、１８位に存在し、１７３位のＲ１がプロピオン酸であり、１３位のＲ’２がＣＯＯＣＨ３であり、３位のＲ４がアセチルであり、８位のＲ４がエチルであり、７位〜８位の点線が存在しない）は、バクテリオ塩素ａである。ビニル基が３位で結合するとき、化合物は、ロドバクテリオクロリン（（３１−ビニル）−バクテリオ塩素ａ）である。バクテリオ塩素ａおよびロドバクテリオクロリンの誘導体は、異なる金属原子ならびに／または異なる置換基Ｒ１、Ｒ’２、３位のＲ４、および／もしくはＲ６を有する。
【００２６】
式ＩＩＩの五環性化合物（式中、Ｍが存在せず、Ｘが酸素であり、１７３位のＲ１がプロピオン酸であり、３位のＲ４がアセチルであり、８位のＲ４がエチルであり、７位〜８位の点線が存在しない）は、バクテリオプルプリン−１８であり、その誘導体は、異なる金属原子ならびに／または異なる置換基Ｒ１、Ｒ４、Ｒ’４、および／もしくは酸素以外のＸを有する。
【００２７】
本明細書で使用される際、「ヒドロカルビル」という用語は、任意の直鎖または分岐鎖、飽和または不飽和、非環式または環式ヒドロカルビルを意味し、１〜２５個の炭素原子、好ましくは、１〜２０または１〜１０、より好ましくは、１〜６、最も好ましくは、２〜３個の炭素原子を有する芳香族ヒドロカルビルラジカルを含む。ヒドロカルビルは、１〜６、好ましくは、１〜４個の炭素原子を有する低級アルキルラジカル、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、またはアルケニル、アルキニルまたはシクロアルキルであってもよく、または式Ｉ、ＩＩ、またはＩＩＩの化合物の１７位で、ヒドロカルビルは、天然のＣｈｌおよびＢｃｈｌ化合物、例えば、ゲラニルゲラニル（２，６−ジメチル−２，６−オクタジエニル）またはフィチル（２，６，１０，１４−テトラメチル−ヘキサデカ−１４−エン−１６−イル）由来のラジカルである。
【００２８】
一実施形態において、アルキル基は、１０個以上の炭素原子、例えば、−Ｃ１０Ｈ２１、−Ｃ１５Ｈ３１、−Ｃ１６Ｈ３３、−Ｃ１７Ｈ３５、−Ｃ１８Ｈ３７、−Ｃ２０Ｈ４１等を有する。
【００２９】
別の実施形態において、Ｃ１−Ｃ２５ヒドロカルビルは、好ましくは２〜６個の炭素原子を有する、直鎖または分岐鎖Ｃ２−Ｃ２５アルケニルまたはアルキニルラジカル、例えば、ビニル、プロプ−２−エン−１−イル、ブト−３−エン−１−イル、ペント−４−エン−１−イル、ヘキサ−５−エン−１−イル、エチニル、プロパルギル等である。
【００３０】
さらに別の実施形態において、Ｃ１−Ｃ２５ヒドロカルビルは、Ｃ３−Ｃ２５単環式または多環式シクロアルキルまたは部分不飽和シクロアルキル、好ましくは、Ｃ３−Ｃ１４、より好ましくは、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロヘプチルである。
【００３１】
ヒドロカルビルはさらに、アリールまたはアラルキルであってもよく、「アリール」という用語は、本明細書で使用される際、フェニル、ナフチル、カルバゾリル、アントリル、フェナントリル等の単一の二環または三環式環系からなる６〜１４個の炭素原子、好ましくは６〜１０個の炭素原子を有する「Ｃ６−Ｃ１４」芳香族炭素環式基を指し、「アラルキル」という用語は、アリールアルキル化合物由来のラジカルを指し、アリール部分は、好ましくは、Ｃ６−Ｃ１４アリール、より好ましくは、ベンジル、フェナントリル等のＣ６−Ｃ１０アリールである。
【００３２】
「複素環」または「ヘテロシクリル」という用語は、Ｏ、Ｓ、および／またはＮから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有するその環に３〜１２員、好ましくは、５〜１０員、より好ましくは、５〜６員有する飽和、部分不飽和、任意置換、単環式、二環式、または三環式複素環由来のラジカルを意味する。具体的な例として、ジヒドロフリル、テトラヒドロフリル、ピロリニル、ピロリジニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロピリジル、ピペリジニル、キノリニル、ピペラジニル、モルホリノ、または１，３−ジオキサニルが挙げられる。
【００３３】
「ヘテロアリール」または「芳香族複素環部分」という用語は、Ｏ、Ｓ、および／またはＮから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有し、かつ任意に置換された炭素環式環および複素環式環の両方を含み得る単環式または多環式芳香族複素環を指す。具体的な例として、ピロリル、フリル、チエニル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ピリジル、キノリニル、イソキノリニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、１，３，４−トリアジニル、１，２，３−トリアジニル、１，３，５−トリアジニル、ベンゾフリル、イソベンゾフリル、インドリル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾジアゼピニル、およびさらなる多環式芳香族複素環由来の他のラジカルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３４】
任意の「カルボシクリル」、「ヘテロシクリル」、「アリール」、または「ヘテロアリール」は、ハロゲン、Ｃ６−Ｃ１４アリール、Ｃ１−Ｃ２５アルキル、ニトロ、ＯＲ、ＳＲ、−ＣＯＲ、−ＣＯＯＲ、ＣＯＯＲ”、−ＳＯ３Ｒ、−ＳＯ３Ｒ”、−ＳＯ２Ｒ、−ＮＨＳＯ２Ｒ、−ＮＲＲ’、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ−ＣＯＲ’、および−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＲＲ’（式中、ｎ、Ｒ、Ｒ’、およびＲ”は、上で定義されたものである）等の１つ以上のラジカルによって置換され得る。多環式芳香族複素環が置換されるとき、置換が炭素環式環および／または複素環式環のうちのいずれかで行われ得ることを理解されたい。
【００３５】
「アルコキシ」という用語は、本明細書で使用される際、（Ｃ１−Ｃ２５）アルキル−Ｏ−基を指し、式中、Ｃ１−Ｃ２５アルキルは、上で定義されたものである。アルコキシの例として、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペントキシ、ヘキソキシ、−ＯＣ１２Ｈ２５、−ＯＣ１５Ｈ３１、−ＯＣ１６Ｈ３３、−ＯＣ１７Ｈ３５、−ＯＣ１８Ｈ３７等が挙げられる。「アリールオキシ」という用語は、本明細書で使用される際、（Ｃ６−Ｃ１８）アリール−Ｏ−基を指し、式中、Ｃ６−Ｃ１８アリールは、上で定義されたもの、例えば、フェノキシおよびナフトキシである。
【００３６】
「ハロゲン」という用語は、本明細書で使用される際、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを指す。
【００３７】
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ’９、および／またはＲ”９の炭化水素鎖は、Ｏ、Ｓ、および／もしくはＮＨ等の１つ以上のヘテロ原子、ならびに／または１つ以上の炭素環式環または複素環式環部分を任意に含有し得、「炭素環式」は、本明細書で使用される際、本明細書で定義されるシクロアルキルおよびアリールを包含する。一実施形態において、ヒドロカルビル鎖は、１つ以上のＯ原子を含有し、４〜１０個の炭素原子を有するオリゴオキシエチレングリコール残基、好ましくは、ペンタオキシエチレングリコールによって表されるＯＨ末端基を有する。他の実施形態では、ヒドロカルビルは、フェニルまたはピリジルを含有する。
【００３８】
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ’９、および／またはＲ”９は、ハロゲン等、例えば、Ｃｌ、Ｂｒ、ＦまたはＩ、ニトロ、オキソ、アルコキシ（ＯＲ）、ＳＲ、エポキシ、エピチオ、−ＣＯＮＲＲ’、−ＣＯＲ、ＣＯＯＲ”、ＣＯＳＲ、−ＯＳＯ３Ｒ、−ＳＯ３Ｒ”、−ＳＯ２Ｒ、−ＮＨＳＯ２Ｒ、−ＳＯ２ＮＲＲ’−ＮＲＲ’、＝Ｎ−ＯＲ、＝Ｎ−ＮＲＲ’、−Ｃ（＝ＮＲ）−ＮＲＲ’、−ＮＲ−ＮＲＲ’、−（Ｒ）Ｎ−Ｃ（＝ＮＲ）−ＮＲＲ’、Ｏ←ＮＲ−、＞Ｃ＝ＮＲ、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ−ＣＯＲ’、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＲＲ’、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＲ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ、−ＰＲＲ’、−ＯＰＯ３ＲＲ’、−ＰＯ２ＨＲ、および−ＰＯ３Ｒ”Ｒ”等の１つ以上の官能基によって置換されたヒドロカルビルでもあり得、ｎは、１〜１０の整数であり、ＲおよびＲ’はそれぞれ独立して、Ｈ、ヒドロカルビル、またはヘテロシクリルであるか、またはＲおよびＲ’は、それらが結合するＮ原子と一緒になって、Ｏ、Ｓ、またはＮからなる群から選択される１つ以上のヘテロ原子を任意に含有し、かつさらなるＮ原子でさらに任意に置換された飽和３〜７員環を形成し、Ｒ”は、Ｈ、カチオン、ヒドロカルビル、またはヘテロシクリルである。
【００３９】
ある特定の実施形態において、上の官能基のうちのいくつかは、生理学的ｐＨ下で負に荷電した基に変換し得る酸性基、例えば、ＣＯＯＨ、ＣＯＳＨ、ＳＯ３Ｈ、ＰＯ３Ｈ２であるか、または官能基は、ＣＯＯ−、ＣＯＳ−、ＳＯ３−、またはＰＯ３２−等の負に荷電した基である。負に荷電した基および酸性基は、末端基またはヒドロカルビル鎖内の基であり得る。最も好ましい実施形態において、ヒドロカルビルは、２個または３個の炭素原子およびＣＯＯ−、ＰＯ３２−、または最も好ましくはＳＯ３−から選択される末端基を有する。
【００４０】
本明細書で使用される際、「生理学的条件」は、身体の異なる組織および細胞区画における条件を指す。
【００４１】
ある特定の実施形態において、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ’９、および／またはＲ”９は、少なくとも１つの正に荷電した基および／または生理学的条件下で正に荷電した基に変換される少なくとも１つの塩基性基によって置換され得る。好ましい実施形態において、少なくとも１つの正に荷電した基は、Ｎ含有基由来のカチオン、例えば、アンモニウム−Ｎ＋（ＲＲ’Ｒ”）、ヒドラジニウム−（Ｒ）Ｎ−Ｎ＋（Ｒ’Ｒ”）、アンモニウムオキシＯ←Ｎ＋（ＲＲ’）−、イミニウム＞Ｃ＝Ｎ＋（ＲＲ’）、アミジニウム−Ｃ（＝ＲＮ）−Ｎ＋Ｒ’Ｒ”、またはグアニジニウム−（Ｒ）Ｎ−Ｃ（＝ＮＲ）−Ｎ＋Ｒ’Ｒ”基等であり得るが、これらに限定されず、式中、Ｒ、Ｒ’、およびＲ”は、上で定義されたものである。正に荷電したＮ含有基が末端基、ヒドロカルビル鎖内の基、または以下に定義されるようにそこでＮがプロトン化される飽和環の一部であり得ることを理解されたい。加えて、少なくとも１つの正に荷電した基は、以下に定義されるＮ含有芳香族複素環ラジカル由来のカチオンでもあり得る。
【００４２】
好ましい一実施形態において、ヒドロカルビル鎖は、式−Ｎ＋（ＲＲ’Ｒ”）のアンモニウム基によって置換され、式中、Ｒ、Ｒ’、およびＲ”はそれぞれ独立して、Ｈ、ヒドロカルビル、好ましくは、Ｃ１−Ｃ２５アルキル、より好ましくは、Ｃ１−Ｃ１０もしくはＣ１−Ｃ６アルキル、またはヘテロシクリルである。Ｒ、Ｒ’、またはＲ”のうちの１つがＯＨであるとき、基は、ヒドロキシルアンモニウム基である。好ましくは、アンモニウム基は、第４級アンモニウム基であり、式中、Ｒ、Ｒ’、およびＲ”はそれぞれ独立して、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、またはヘキシル等のＣ１−Ｃ６アルキルである。
【００４３】
ある特定の実施形態において、式−Ｎ＋（ＲＲ’Ｒ”）のアンモニウム基は、環式基であり、式中、Ｒ、Ｒ’、およびＲ”のうちの２つはＮ原子と一緒になって、Ｏ、Ｓ、およびＮ原子からなる群から選択されるさらなるヘテロ原子を任意に含有し、かつ以下に定義されるようにさらなるＮ原子でさらに任意に置換された飽和３〜７員環を形成する。そのような環式アンモニウム基の例には、アジリジニウム、ピロリジニウム、ピペリジニウム、ピペラジニウム、モルホリニウム、チオモルホリニウム、アゼピニウム等が挙げられる。
【００４４】
ある特定の実施形態において、正に荷電した基は、Ｏ、Ｓ、またはさらなるＮ原子をさらに含有し得る単環式または多環式化合物であり得るＮ−芳香族複素環化合物由来のカチオンである。そのカチオンが由来する環は、少なくとも１つのＮ原子を含有し、かつ芳香族でなければならないが、他の環（複数を含む）は、存在する場合、部分飽和環であってもよい。Ｎ−芳香族複素環カチオンの例には、ピラゾリウム、イミダゾリウム、オキサゾリウム、チアゾリウム、ピリジニウム、ピリミジニウム、キノリニウム、イソキノリニウム、１，２，４−トリアジニウム、１，３，５−トリアジニウム、およびプリニウムが挙げられる。
【００４５】
カチオンは、Ｎを含有しないオニウム基でもあり得、例えば、ホスホニウム［−Ｐ＋（ＲＲ’Ｒ”）］、アルソニウム［−Ａｓ＋（ＲＲ’Ｒ”）］、オキソニウム［−Ｏ＋（ＲＲ’）］、スルホニウム［−Ｓ＋（ＲＲ’）］、セレノニウム［−Ｓｅ＋（ＲＲ’）］、テルロニウム［−Ｔｅ＋（ＲＲ’）］、スチボニウム［−Ｓｂ＋（ＲＲ’Ｒ”）］、またはビスムトニウム［−Ｂｉ＋（ＲＲ’Ｒ”）］基等であるが、これらに限定されず、式中、Ｒ、Ｒ’、およびＲ”は、上で定義されたものである。好ましい実施形態において、Ｒ、Ｒ’、およびＲ”は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ペンチルまたはヘキシル、アリール基、好ましくは、フェニル、またはアラルキル基、例えば、ベンジルおよびフェネチルである。
【００４６】
ある特定の他の実施形態では、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ’９、および／またはＲ”９は、生理学的条件下で正に荷電した基に変換される少なくとも１つの塩基性基によって置換される。本明細書で定義される際、「生理学的条件下で正に荷電した基に変換される塩基性基」は、少なくとも理論上、生理学的条件下で本明細書で定義される正に荷電した基を生成する任意の塩基性基であり、生理学的条件は、本明細書で使用される際、血清のみを指すのではなく、身体の異なる組織および細胞区画を指す。
【００４７】
ある特定の実施形態において、塩基性基は、Ｎ含有基である。そのようなＮ含有塩基性基の例には、アンモニウム基を生成する任意のアミノ基、イミニウム基を生成する任意のイミン基、ヒドラジニウム基を生成する任意のヒドラジン基、アンモニウムオキシ基を生成する任意のアミノオキシ基、アミジニウム基を生成する任意のアミジン基、グアニジニウム基を生成する任意のグアニジン基が挙げられるが、これらに限定されず、すべて本明細書で定義されるものである。他の例として、ホスフィノおよびメルカプト基が挙げられる。
【００４８】
したがって、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ’９、および／またはＲ”９は、−ＮＲＲ’、−Ｃ（＝ＮＲ）−ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ−ＮＲ’Ｒ”、−（Ｒ）Ｎ−Ｃ（＝ＮＲ）−ＮＲ’Ｒ”、Ｏ←ＮＲ−、または＞Ｃ＝ＮＲ等の少なくとも１つの塩基性基によって置換され得、式中、Ｒ、Ｒ’、およびＲ”は、上で定義されたものであるが、好ましくは、Ｃ１−Ｃ２５アルキル、より好ましくは、Ｃ１−Ｃ１０もしくはＣ１−Ｃ６アルキル、またはヘテロシクリルである。好ましい実施形態において、塩基性基は、式中、ＲおよびＲ’のうちの１つのみがＨである第２級アミノまたはＲおよびＲ’のいずれもＨではない第３級アミノであり得る、末端基またはヒドロカルビル鎖内の基であるアミノ基−ＮＲＲ’であるか、または塩基性基は、ＲおよびＲ’がＮ原子と一緒になって、Ｏ、Ｓ、およびＮ原子からなる群から選択されるさらなるヘテロ原子を任意に含有し、かつさらなるＮ原子でさらに任意に置換された飽和３〜７員環を形成する環式アミノであり得る。
【００４９】
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ’９、および／またはＲ”９について定義されたＣ１−Ｃ２５ヒドロカルビルはまた、グリコシル等の単糖類、オリゴ糖、もしくは多糖類の残基、またはアミノ酸、ペプチド、もしくはタンパク質の残基によって置換され得る。加えて、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ’９、およびＲ”９はそれぞれ独立して、オリゴ糖部分、もしくは多糖部分、好ましくは、グルコサミン等の単糖部分、および／またはアミノ酸、ペプチド、もしくはタンパク質の残基であり得る。好ましい一実施形態において、いずれかの位であるが、好ましくは１７３位のＲ８、Ｒ９、Ｒ’９、またはＲ”９は、アミノ酸、ペプチド、またはタンパク質の残基である。アミノ酸、ペプチド、またはタンパク質は、それらが、末端遊離カルボキシル基および／または非末端遊離カルボキシル基を含有するアミノ酸、例えば、アスパラギン酸もしくはグルタミン酸の残基を含有するとき、負に荷電し得る。
【００５０】
一実施形態において、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ’９、またはＲ”９は、エステル、例えば、アルキル、好ましくは、メチル、エステル、およびＮ−保護誘導体から選択されるセリン、トレオニン、およびチロシン、またはそれらの誘導体等のヒドロキシ基を含有するアミノ酸の残基であり、Ｎ−保護基は、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルオキシ、カルボベンゾキシ、もしくはトリチル、またはそのようなアミノ酸および／もしくはアミノ酸誘導体を含有するペプチド（オリゴペプチドまたはポリペプチド）である。ヒドロキシル化アミノ酸またはペプチドは、そのヒドロキシ基を介して（バクテリオ）クロロフィル誘導体のＣＯＯ−基（好ましくは、１７３位）に結合される。そのようなアミノ酸誘導体の例には、セリンメチルエステル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−セリン、Ｎ−トリチル−セリンメチルエステル、チロシンメチルエステル、およびＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−チロシンメチルエステルが挙げられ、前記アミノ酸誘導体を含有するペプチドの例には、Ｎ−カルボベンゾキシ−セリルセリンメチルエステルが挙げられ、これらはすべて、本明細書に完全に開示されているかのように参照により本明細書に組み込まれる欧州特許第０５８４５５２号に記載されるように調製される。
【００５１】
ある特定の実施形態において、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ’９、またはＲ”９は、ペプチドおよびタンパク質から選択される細胞特異的または組織特異的リガンドの残基であり、これらは、ホルモンペプチドおよび抗体、例えば、免疫グロブリンによって例示されるが、これらに限定されない。ペプチドまたはタンパク質は、エステル、チオエステル、もしくはアミド結合を介して−ＣＯ基に直接結合され得るか、またはエステルもしくはアミド結合を介してＯＨ、ＣＯＯＨ、およびＮＨ２から選択されるＣ１−Ｃ２５ヒドロカルビルラジカルの末端官能基に結合され得る。
【００５２】
ある特定の実施形態において、本発明に従って使用される（バクテリオ）クロロフィル誘導体は、それぞれ、ＯＨもしくはＳＨ、Ｏ−Ｒ１０＋、またはＳ−Ｒ１０＋である、すなわち、カルボキシル基もしくはチオカルボキシル基またはカルボン酸またはチオカルボン酸アニオンが、１３１位、１５１位（ｍが０である）、１５２位（ｍが１である）、および／または１７３位に存在するときに、Ｒ１、Ｒ’２、およびＲ６由来のＣＯＯＨ、ＣＯＳＨ、ＣＯＯ−、および／またはＣＯＳ−基を含有する。
【００５３】
ある特定の実施形態において、Ｒ１、Ｒ’２、および／もしくはＲ６は、塩基性基−ＮＲ９Ｒ’９またはアンモニウム基−Ｎ＋Ｒ９Ｒ’９Ｒ”９であるか、またはＲ５は、Ｎ−Ｒ９もしくはＮ＋Ｒ９Ｒ’９である。
【００５４】
ある特定の実施形態において、Ｒ１、Ｒ’２、および／またはＲ６は、Ｙ−Ｒ８であり、式中、Ｙは、Ｏであり、Ｒ８は、遊離−ＮＨ２基を介するアミド結合を介して結合されたアミノ酸またはペプチド（オリゴまたはポリペプチド）の残基である。
【００５５】
カチオンＲ１０＋は、Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｌｉ＋、Ｃａ＋、より好ましくは、Ｋ＋等のアルカリまたはアルカリ土類金属由来の一価または二価カチオンであり得るか、またはＲ１０＋は、「Ｎ含有基由来のカチオン」について本明細書で定義されるカチオン等の有機カチオンである。好ましくは、有機カチオンは、アミン、例えば、ＮＨ４＋由来である。
【００５６】
本明細書で定義される際、Ａ−は、生理学的に許容されるアニオン、例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、または有機アニオン、例えば、酢酸塩、安息香酸塩、カプリル酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、シル酸塩、シュウ酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、トシル酸塩等である。
【００５７】
本明細書で定義される際、それらが結合するＮ原子と一緒になってＲおよびＲ’によって形成される「飽和３〜７員環」は、アジリジン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、もしくはアゼピン等のＮのみを含有する環であり得るか、またはモルホリンまたはチオモルホリン等のＯおよびＳから選択されるさらなるヘテロ原子を含有し得る。ピペラジン環内のさらなるＮ原子は、ハロゲン、ＯＨ、またはアミノによって置換され得るアルキル、例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキルによって任意に置換され得る。前記飽和環由来のオニウム基には、アジリジニウム、ピロリジニウム、ピペリジニウム、ピペラジニウム、モルホリニウム、チオモルホリニウム、およびアゼピニウムが含まれる。
【００５８】
ある特定の実施形態において、本発明に従って使用される（バクテリオ）クロロフィル誘導体は、非メタル化であり、すなわち、Ｍは、２Ｈである。好ましい実施形態において、光増感剤は、メタル化されており、Ｍは、Ｍｇ、Ｐｄ、Ｐｔ、Ｚｎ、Ｉｎ、Ｇｄ、またはＹｂ、より好ましくは、Ｐｄである。
【００５９】
好ましい一実施形態において、本発明によって提供される角膜菲薄化または強膜伸張に伴う眼疾患および障害の治療用の眼科組成物は、式Ｉのクロロフィルまたはバクテリオクロロフィル誘導体を含み、式中、Ｍは、二価Ｐｄを表し、Ｒ１は、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−Ｒ１０＋、または−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３２−（Ｒ８＋）２であり、Ｒ２は、メトキシであり、Ｒ３は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３であり、Ｒ５は、Ｏであり、Ｒ１０＋は、Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｌｉ＋、またはＮＨ４＋等の一価カチオンであり、ｎは、１〜１０、好ましくは、２または３の整数である。好ましくは、この実施形態に従って、Ｒ１は、−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＳＯ３−Ｋ＋である。
【００６０】
より好ましい実施形態において、光増感剤は、化合物パラジウムバクテリオフェオホルビドａ１７３−（３−スルホプロピル）アミドカリウム塩によって表される１７位に唯一の負に荷電した基（ＳＯ３−）を有する式Ｉのバクテリオクロロフィルである。
【００６１】
ある特定の実施形態において、角膜菲薄化または強膜伸張の治療用の眼科組成物は、Ｒ６またはＲ１およびＲ６の両方が−ＮＲ９Ｒ’９である式ＩＩのクロロフィルまたはバクテリオクロロフィルの誘導体を含む。好ましくは、これらの実施形態に従って、Ｒ９は、Ｈであり、Ｒ’９は、正に荷電した基、負に荷電した基、生理学的条件下で負に荷電した基に変換される酸性基、または生理学的条件下で正に荷電した基に変換される塩基性基から選択される少なくとも１つの基によって置換されたＣ１−Ｃ１０アルキルである。より具体的な実施形態において、Ｒ’９は、酸性ＳＯ３Ｈ基もしくはそのアルカリ塩、または塩基性基−ＮＲＲ’もしくは−ＮＨ−（ＣＨ２）２−６−ＮＲＲ’によって置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、式中、ＲおよびＲ’はそれぞれ独立して、Ｈ、ＮＨ２によって任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであるか、またはＲおよびＲ’はＮ原子と一緒になって、Ｏ原子またはＮ原子を任意に含有し、かつ−（ＣＨ２）２−６−ＮＨ２によってさらなるＮ原子でさらに任意に置換された飽和５〜６員環を形成する。
【００６２】
ある特定の実施形態において、本発明の眼科組成物は、式ＩＩのバクテリオクロロフィル誘導体を含み、式中、
Ｍは、２Ｈ、Ｍｇ、Ｐｄ、またはＺｎであり、
Ｒ１は、
（ｉ）−Ｏ−Ｒ１０＋、
（ｉｉ）Ｙ−Ｒ８（式中、ＹがＯまたはＳであり、Ｒ８がアミノ酸、ペプチド、またはタンパク質の残基である）、
（ｉｉｉ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２ＯＨ、
（ｉｖ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、
（ｖ）−ＮＨ−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ３、
（ｖｉ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、
（ｖｉｉ）グリコシルアミノ、または
（ｖｉｉｉ）Ｒ６について定義されたようなＮＨＲ’９から選択され、
Ｒ’２は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、またはブトキシ、より好ましくは、メトキシ等のＣ１−Ｃ６アルコキシであり、
Ｒ４は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３、−ＣＨ＝Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋、−ＣＨ＝Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−Ｒ１０＋、−ＣＨ＝Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３２−（Ｒ１０＋）２、−ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−Ｒ１０＋、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３２−（Ｒ１０＋）２、または−Ｃ（ＣＨ３）＝ＮＲ９、好ましくは、Ｃ（ＣＨ３）＝Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２、または−Ｃ（ＣＨ３）＝Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ）３＋Ａ−であり、
Ｒ６は、
（ａ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋、好ましくは、−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＳＯ３Ｒ１０＋または−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＳＯ３Ｒ１０＋、
（ｂ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−Ｒ１０＋、
（ｃ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３２−（Ｒ１０＋）２、
（ｄ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｂ、
【化４】
2014524465.tif 000005
【化５】
2014524465.tif 000006
好ましくは、−ＮＨ−（ＣＨ２）２−１−モルホリノまたは−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ピペラジノ、
【化６】
2014524465.tif 000007
（ｈ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ”）−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲＲ’、好ましくは、−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＮＨ２、
（ｊ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲＲ’、好ましくは、−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲＲ’から選択される（ｉ）ＮＨＲ’９から選択され、
Ｒ１０＋は、Ｈ＋、またはＫ＋、Ｎａ＋、Ｌｉ＋、もしくはＮＨ４＋、より好ましくは、Ｋ＋等の一価カチオンであり、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＮＨであり、
Ｂは、アンモニウム−Ｎ＋ＲＲ’Ｒ”、好ましくは、−Ｎ（ＣＨ３）３＋Ａ−、グアニジニウム、スルホニウム、ホスホニウム、アルソニウムから選択される正に荷電した基であるか、またはＢは、アミノ−−ＮＲＲ’、好ましくは、−ＮＨ２、グアニジノ、ホスフィノ、またはアルシノから選択される生理学的条件下で正に荷電した基に変換される塩基性基であり、
ｍは、１であり、ｎは、１〜１０、好ましくは、２または３の整数であり、
Ａ−は、生理学的に許容されるアニオンであり、
式中、Ｒ、Ｒ’、およびＲ”はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【００６３】
好ましい実施形態において、薬学的組成物は、式ＩＩのバクテリオ塩素またはロドバクテリオクロリン誘導体を含み、式中、Ｒ６のみ、またはＲ１およびＲ６は両方ともに、−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＳＯ３Ｒ１０＋、−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＳＯ３Ｒ１０＋、−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＮＨ２、−ＮＨ−（ＣＨ２）２−１−モルホリノ、または−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ピペラジノ−（ＣＨ２）３−ＮＨ２から選択され、Ｒ１０＋は、Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｌｉ＋、ＮＨ４＋、好ましくは、Ｋ＋等の一価カチオンである。ある特定のより好ましい実施形態において、Ｒ１およびＲ６は両方ともに、−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＳＯ３Ｒ１０＋または−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＳＯ３Ｒ１０＋である。
【００６４】
他の好ましい実施形態では、式ＩＩの塩素または（ロード）バクテリオ塩素誘導体は、本発明に従って使用され、少なくとも１つの負に荷電した基を有し、Ｍは、存在しないか、または二価ＰｄもしくはＺｎイオン、好ましくは、Ｐｄである。これらの実施形態において、Ｒ１は、−Ｏ−Ｒ１０＋、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−Ｒ１０＋、もしくは−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３２−（Ｒ１０＋）２から選択されるか、またはＲ１は、Ｙ−Ｒ８であり、式中、Ｙは、Ｏ、Ｓであり、Ｒ８は、アミノ酸、ペプチド、またはタンパク質の残基であり、Ｒ’２は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、より好ましくは、メトキシ等のＣ１−Ｃ６アルコキシであり、Ｒ４は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３、−ＣＨ＝Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋、−ＣＨ＝Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−Ｒ１０＋、−ＣＨ＝Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３２−（Ｒ１０＋）２、または−ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋から選択され、Ｒ６は、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−Ｒ１０＋、または−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３２−（Ｒ１０＋）２であり、Ｒ１０＋は、Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｌｉ＋、またはＮＨ４＋、より好ましくは、Ｋ＋等の一価カチオンであり、ｍは、１であり、ｎは、１〜１０、好ましくは、２または３の整数である。
【００６５】
より好ましい実施形態において、本発明に従って使用される負に荷電した光増感剤は、式ＩＩのバクテリオ塩素誘導体であり、式中、Ｍは、Ｐｄであり、Ｒ１は、−Ｏ−Ｒ１０＋、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋、またはＹ−Ｒ８であり、式中、Ｙは、ＯまたはＳであり、Ｒ８は、タンパク質、好ましくは、免疫グロブリンの残基であり、Ｒ’２は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、より好ましくは、メトキシ等のＣ１−Ｃ６アルコキシであり、Ｒ４は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３、−ＣＨ＝Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋、または−ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋であり、Ｒ６は、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋、ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−Ｒ１０＋、またはＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３２−（Ｒ８＋）２であり、Ｒ１０＋は、Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｌｉ＋、またはＮＨ４＋、より好ましくは、Ｋ＋等の一価カチオンであり、ｍは、１であり、ｎは、２または３、より好ましくは、２である。
【００６６】
３、１３、および／または１７位で１つ、２つ、または３つの負に荷電した基を有する式ＩＩのロドバクテリオクロリン誘導体の例には、以下のものが挙げられる：
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（２−スルホエチル）アミドジカリウム塩（本明細書でＷＳＴ１１と指定される）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（−スルホプロピル）アミドジカリウム塩（化合物１）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（２−スルホエチル）アミドジカリウム塩（化合物２）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（３−スルホプロピル）アミドジカリウム塩（化合物３）、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（２−スルホエチル）アミドジカリウム塩（化合物４）、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（−スルホプロピル）アミドジカリウム塩（化合物５）、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（２−スルホエチル）アミドジカリウム塩（化合物６）、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（３−スルホプロピル）アミドジカリウム塩（化合物７）、
亜鉛３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（２−スルホエチル）アミドジカリウム塩、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（２−スルホエチル）アミド、１７３−（Ｎ−免疫グロブリンＧ）アミドカリウム塩、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（２−カルボキシエチル）アミドジカリウム塩、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（３−ホスホプロピル）アミドトリカリウム塩、
パラジウム３１−（３−スルホプロピルイミノ）−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ（３−スルホプロピル）アミドトリカリウム塩、
パラジウム３１−（３−スルホプロピルアミノ）−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ（３−スルホプロピル）アミドトリカリウム塩、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ（３−プロピオニル）アミド塩、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ［２−（３−プロピオニルアミノ）−スルホエチル］アミドジカリウム塩、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ［２−（３−プロピオニルアミノ）−ホスホエチル］アミドジカリウム塩、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ（３−チオプロピオニル）アミドジカリウム塩３１−ヒドロキシ−３１−デオキソ−バクテリオフェオホルビドａ、
３１−（ピリジン−４−イルメトキシ）−３１−デオキソ−バクテリオフェオホルビドａ、
バクテリオフェオホルビドａ１７３−［（２，６−ジクロロ−４−メトキシフェニル）（２，４−ジクロロ−フェニル）］メチルエステル、
３１−ヒドロキシ−３１−デオキソ−バクテリオフェオホルビドａ１７３−［（２，６−ジクロロ−４−メトキシ−フェニル）（２，４−ジクロロフェニル）］メチルエステル、
３１−トリフルオロアセトキシ−３１−デオキソ−バクテリオフェオホルビドａ１７３−［（２，６−ジクロロ−４−メトキシフェニル）（２，４−ジクロロフェニル）］メチルエステル、
３１−ブロモ−３１−デオキソ−バクテリオフェオホルビドａ、
３−ビニル−３−デアセチル−バクテリオフェオホルビド、
３１−（２−ヒドロキシエトキシ）−３１−デオキソ−バクテリオフェオホルビドａ、
３１−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−３１−デオキソ−バクテリオフェオホルビドａ、
３１−（２−メルカプトエチルスルファニル）−３１−デオキソ−バクテリオフェオホルビドａ、
３１−（２−ヒドロキシエチルアミノ）−３１−デオキソ−バクテリオフェオホルビドａ、
コバルト（ＩＩＩ）３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（２−スルホエチル）アミドジカリウム塩、
鉄（ＩＩＩ）３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（２−スルホエチル）アミドジカリウム塩、および
ニッケル（ＩＩ）バクテリオフェオホルビドａ、
白金（ＩＩ）バクテリオフェオホルビドａ。
【００６７】
好ましい実施形態において、本発明に従って使用される化合物は、以下のものから選択される一価もしくは二価アルカリまたはアルカリ土類金属カチオンあるいはＮＨ４＋を有するタウリン化またはホモタウリン化バクテリオ塩素誘導体の薬学的に許容される塩である：
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（２−スルホエチル）アミド、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（−スルホプロピル）アミド、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（２−スルホエチル）アミド、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（３−スルホプロピル）アミド、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（２−スルホエチル）アミド、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（−スルホプロピル）アミド、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（２−スルホエチル）アミド、および
３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（３−スルホプロピル）アミド。
【００６８】
最も好ましい化合物は、ＷＳＴ１１および化合物１〜７である。
【００６９】
本発明で使用されるバクテリオクロロフィル誘導体は、米国第７，９４７，６７２号または国際公開第ＷＯ２００５／１２０５７３号に記載の方法によって調製され得る。化合物（式中、Ｒ８がアミノ酸、ペプチド、またはタンパク質の残基である）の調製において、欧州特許第０５８４５５２号に記載の方法が適用され得る。負に荷電したバクテリオ塩素誘導体（式中、Ｒ８がアミノ酸の残基である）の調製において、欧州特許第０５８４５５２号に記載の方法が、米国第７，９４７，６７２号のスキーム１に記載の方法と組み合わせられ得る。
【００７０】
式ＩＩの負に荷電した化合物の調製のための方法が、上述の米国第７，９４７，６７２号に開示される。例えば、バクテリオ塩素化合物（式中、Ｒ１が−Ｏ−Ｒ１０＋であり、Ｒ’２が−ＯＣＨ３であり、Ｒ３がアセチルであり、Ｒ６が基−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−Ｒ１０＋、または−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３２−（Ｒ１０＋）２であり、Ｒ１０＋が一価カチオンであり、ｍが１であり、ｎが１〜１０である）の調製は、（ｉ）本明細書の式Ｉの対応するメタル化バクテリオフェオホルビド（Ｍ−バクテリオフェオホルビド）（式中、Ｒ１がＯＨである）を、Ｒ１０＋緩衝液中で、それぞれ、式Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ（例えば、タウリンＨ２Ｎ−（ＣＨ２）２−ＳＯ３Ｈ）のアミノスルホン酸、または式Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨのホモタウリンＨ２Ｎ−（ＣＨ２）３−ＳＯ３Ｈ）アミノカルボン酸、または式Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２のアミノホスホン酸と反応させることと、（ｉｉ）所望の式ＩＩの化合物を単離することとを含む。
【００７１】
１３および１７位に上述の同一の負に荷電した基を有する式ＩＩのバクテリオ塩素は、対応するＭ−バクテリオフェオホルビドと、過剰量の試薬である上述のアミノスルホン酸、アミノカルボン酸、またはアミノホスホン酸との反応、および所望の１３，１７−二置換誘導体の単離によって調製され得るか、または米国第７，９４７，６７２号に開示される異なる経路に従い得る。例えば、式ＩＩのバクテリオ塩素（式中、Ｒ１およびＲ６がそれぞれ、基−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｒ１０＋であり、Ｒ２が−ＯＣＨ３であり、Ｒ３がアセチルであり、Ｒ１０＋が一価カチオンであり、ｍが１であり、ｎが１〜１０である）は、（ｉ）式Ｉの対応するＭ−バクテリオフェオホルビド（式中、Ｒ１がＯＨである）を、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で、Ｎ−ヒドロキシ−スルホスクシンイミド（スルホＮＨＳ）とカップリングさせることと、（ｉｉ）結果として生じるＭ−バクテリオフェオホルビド−１７３−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステルを、Ｒ８＋緩衝液中で、式Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈの過剰量のアミノスルホン酸と反応させて、１７位に唯一の負に荷電した基を有する式Ｉ化合物を得ることと、（ｉｉｉ）この生成物を、Ｒ８＋緩衝液中で、過剰量のＨ２Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈと反応させ、所望の式ＩＩのバクテリオ塩素を単離することとによって調製される。アミノスルホン酸がアミノカルボン酸またはアミノホスホン酸によって置換されるとき、対応するカルボン酸およびホスホン酸誘導体が得られる。
【００７２】
他の実施形態では、本発明に従って使用される光増感剤は、式ＩＩＩのプルプリン−１８またはバクテリオプルプリン−１８誘導体（式中、Ｘが−ＮＲ７であり、Ｒ７が−ＮＲＲ’であり、ＲがＨであり、Ｒ’がＳＯ３−またはそのアルカリ塩によって置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである）であり、好ましくは、光増感剤は、バクテリオプルプリン−１８（式中、Ｘが−ＮＲ７であり、Ｒ７が−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＳＯ３−Ｒ１０＋であり、式中、Ｒ＋１０が金属カチオン、アンモニウム基、または有機カチオン、好ましくは、Ｋ＋である）である。
【００７３】
ある特定の実施形態において、本発明に従って使用される薬学的組成物は、少なくとも１つの正に荷電した基および／または生理学的ｐＨで正に荷電した基に変換される少なくとも１つの塩基性基を含有する式Ｉ、ＩＩ、またはＩＩＩのクロロフィルまたはバクテリオクロロフィル誘導体を含み、式中、正に荷電した基および塩基性基は、上で定義されたものである。
【００７４】
ある特定の実施形態において、光増感剤は、式ＩＩのクロロフィルまたは（ロード）バクテリオクロロフィル誘導体であり、式中、Ｒ６は、−ＮＲ９Ｒ’９であり、Ｒ９は、Ｈであり、Ｒ’９は、ＨＯＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−である。
【００７５】
ある特定の好ましい実施形態において、本発明に従って使用される薬学的組成物は、式ＩＩのバクテリオ塩素またはロドバクテリオクロリン誘導体を含み、式中、Ｒ１は、ＯＨ、−ＮＲ９Ｒ’９、または−ＮＲ９−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２ＯＨから選択され、Ｒ６は、−ＮＲ９Ｒ’９または−ＮＲ９−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２ＯＨから選択され、式中、Ｒ９は、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、Ｒ’９は、少なくとも１つの正に荷電した基および／または生理学的条件下で正に荷電した基に変換される少なくとも１つの塩基性基によって置換されたＣ１−Ｃ２５ヒドロカルビルである。好ましい実施形態において、Ｒ’９は、少なくとも１つの正に荷電した基、より好ましくは、−Ｎ＋ＲＲ’Ｒ”、または少なくとも１つの塩基性基、好ましくは、−ＮＲＲ’によって置換され、かつ−Ｎ（Ｒ”）−基によって任意に中断されたＣ１−Ｃ２５アルキル、好ましくは、Ｃ１−Ｃ１０、より好ましくは、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、式中、ＲおよびＲ’はそれぞれ独立して、Ｈ、ＮＲ”Ｒ”によって任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、もしくはピリジル等のヘテロシクリルであるか、またはＲおよびＲ’はＮ原子と一緒になって、Ｏ、Ｓ、またはＮ原子をさらに含有する６員環を形成し、Ｒ”は、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【００７６】
これらの好ましい実施形態に従って使用される特定の化合物は、正に荷電したバクテリオクロロフィル誘導体であり、式中、Ｍは、存在しないか、またはＰｄであり、Ｒ’２は、−ＯＲ８であり、式中、Ｒ８は、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、Ｒ４は、−ＣＯＣＨ３であり、
（ａ）Ｒ１は、ＯＨであり、Ｒ６は、−ＮＨＲ’９であり、
（ｂ）Ｒ１およびＲ６は両方ともに、同一の−ＮＨＲ’９基であり、
（ｃ）Ｒ１は、−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ６は、−ＮＨＲ’９基であり、
（ｄ）Ｒ１は、ＮＨＲ’９基であり、Ｒ６は、−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２ＯＨであり、
（ｅ）Ｒ６は、−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲＲ’であり、Ｒ１は、
−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、
−ＮＨ−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ３、
−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、または
−グリコシルアミノからなる群から選択される。
【００７７】
−ＮＨＲ’９基は、以下のものから選択され：
（ｉ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲＲ’または−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ＋ＲＲ’Ｒ”、
（ｉｉ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ’’）−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲＲ’、
【化７】
2014524465.tif 000008
【化８】
2014524465.tif 000009
【化９】
2014524465.tif 000010
式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＮＲであり、
Ｒ、Ｒ’、およびＲ”は、上で定義されたものであるが、好ましくは、それぞれ独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキル、より好ましくは、メチルまたはエチルであり、
ｎは、１〜１０、好ましくは、２〜６、より好ましくは、２または３の整数であり、およびｍは、１〜６、好ましくは、１〜３の整数である。
【００７８】
そのような正に荷電した化合物または生理学的ｐＨ下で正に荷電するようになる化合物の具体的な例には、本明細書で化合物４’〜７’、８〜１２、および２４〜７５と指定される化合物を含む化合物が挙げられる：
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−Ｎ３−トリメチルアンモニウムエチル）アミド塩化物塩（化合物１２）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−Ｎ３−（トリメチルアンモニウムエチル）アミド酢酸塩（化合物２４）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−Ｎ２−ジメチルアミノエチル）アミド（化合物２５）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（３−Ｎ２−ジメチルアミノプロピル）アミド（化合物２６）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−［（２−アミノエチル）アミノ］エチル）アミド（化合物２７）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（［２−ビス（２−アミノエチル）アミノ］エチル）アミド（化合物２８）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−モルホリノ−Ｎ−エチル）アミド（化合物２９）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−ピペラジノ−Ｎ−エチル）アミド（化合物３０）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−［（２−Ｎ２−ジエチルアミノエチル）アミノ］エチル）アミド（化合物３１）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（３−［（３−アミノプロピル）アミノ］プロピル）アミド（化合物３２）、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（２−アミノエチル）アミド（化合物４’）、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（２−Ｎ３−トリメチルアンモニウムエチル）アミド二クエン酸塩（化合物５’）、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（３−アミノプロピル）アミド（化合物６’）、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（３−Ｎ３−トリメチルアンモニウムプロピル）アミド二クエン酸塩（化合物７’）、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（６−アミノヘキシル）アミド（化合物８）、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（６−Ｎ３−トリメチルアンモニウムヘキシル）アミド二クエン酸塩（化合物９）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ（２−アミノエチル）アミド（化合物１０）、
パラジウム３１−オキソ−１５−ｉメトキシカルボニルメチル−ロードバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ（２−Ｎ３−トリメチルアンモニウムエチル）アミド二リン酸塩（化合物１１）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（２−Ｎ３−トリメチルアンモニウムエチル）アミド二酢酸塩（化合物３３）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（３−アミノプロピル）アミド（化合物３４）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（４−アミノブチル）アミド（化合物３５）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（２−Ｎ２−ジメチルアミノエチル）アミド（化合物３６）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（３−Ｎ２−ジメチルアミノプロピル）アミド（化合物３７）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ−（２−［（２−アミノエチル）アミノ］エチル）アミド（化合物３８）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ−（２−［（２−Ｎ２−ジエチルアミノエチル）アミノ］エチル）アミド（化合物３９）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（２−モルホリノ−Ｎ−エチル）アミド（化合物４０）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（２−ピペラジノ−Ｎ−エチル）アミド（化合物４１）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ−（３−［（３−アミノプロピル）アミノ］プロピル）アミド（化合物４２）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（［２−ビス（２−アミノエチル）アミノ］エチル）アミド（化合物４３）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（２−Ｎ−（２’−ピリジル）アミノエチル）アミド（化合物４４）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（２−Ｎ２−ジエチルアミノエチル）アミド（化合物４５）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−アミノエチル）アミド−１７３−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド（化合物４８）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−Ｎ２−ジメチルアミノエチル）アミド−１７３−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド（化合物５０）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−［（２−アミノエチル）アミノ］エチル）アミド−１７３−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド（化合物５５）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−Ｎ−（２’−ピリジル）アミノエチル）アミド−１７３−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド（化合物５７）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（［２−ビス（２−アミノエチル）アミン］エチル）アミド−１７３−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド（化合物５９）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（３−アミノプロピル）アミド−１７３−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド（化合物６０）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（４−アミノブチル）アミド−１７３−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド（化合物６１）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−Ｎ２−ジエチルアミノエチル）アミド−１７３−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド（化合物６２）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−Ｎ−エチルアミノエチル）アミド−１７３−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド（化合物６３）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（３−Ｎ−メチルアミノプロピル）アミド−１７３−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド（化合物６４）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（３−Ｎ−（２’−ピリジル）アミノプロピル）アミド−１７３−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド（化合物７１）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（４−Ｎ−（２’−ピリジル）アミノブチル）アミド−１７３−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド（化合物７２）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド−１７３−（２−トリメチルアンモニウムエチル）アミド（化合物４６）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド−１７３−（２−アミノエチル）アミド（化合物４７）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド−１７３−（２−Ｎ２−ジメチルアミノエチル）アミド（化合物４９）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド−１７３−（２−［（２−アミノエチル）アミノ］エチル）アミド（化合物５１）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド−１７３−（２−［（２−Ｎ２−ジエチルアミノエチル）アミノ］エチル）アミド（化合物５２）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド−１７３−（２−モルホリノ−Ｎ−エチル）アミド（化合物５３）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド−１７３−（２−ピペラジノ−Ｎ−エチル）アミド（化合物５４）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド−１７３−（２−Ｎ−（２’−ピリジル）アミノエチル）アミド（化合物５６）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド−１７３−（［２−ビス（２−アミノエチル）アミノ］エチル）アミド（化合物５８）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド−１７３−（３−Ｎ−（２’−ピリジル）アミノプロピル）アミド（化合物７３）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミド−１７３−（４−Ｎ−（２’−ピリジル）アミノブチル）アミド（化合物７４）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−Ｎ２−ジメチルアミノエチル）アミド−１７３−（２−ヒドロキシエチル）アミド（化合物６５）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−Ｎ２−ジメチルアミノエチル）アミド−１７３−（３−ヒドロキシプロピル）アミド（化合物６６）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−Ｎ２−ジメチルアミノエチル）アミド−１７３−（２−ヒドロキシプロピル）アミド（化合物６７）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−Ｎ２−ジメチルアミノエチル）アミド−１７３−（（Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル）アミド（化合物６８）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−Ｎ２−ジメチルアミノエチル）アミド−１７３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシプロピル）アミド（化合物６９）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−Ｎ２−ジメチルアミノエチル）アミド−１７３−（２−（２−ヒドロキシエチルアミノ）エチル）アミド（化合物７０）、および
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−Ｎ２−ジメチルアミノエチル）アミド−１７３−（グリコシル）アミド（化合物７５）。
【００７９】
上に列記される化合物は、例えば、上述の国際公開第ＷＯ２００５／１２０５７３号で詳細に説明されるように調製され得る。
【００８０】
他の正に荷電したバクテリオ塩素誘導体および生理学的ｐＨ下で正に荷電するようになる塩基性バクテリオ塩素誘導体は、式ＩＩの化合物であり、式中、Ｍは、Ｐｄであり、Ｒ’２は、−ＯＲ８であり、式中、Ｒ８は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、好ましくは、メチルであり、Ｒ４は、−ＣＯＣＨ３であり、Ｒ１および／またはＲ６は、−ＮＲ９Ｒ’９であり、式中、Ｒ９は、Ｈであり、Ｒ’９は、（ｉ）グアニジノ基またはグアニジニウム基、（ｉｉ）スルホニウム基、（ｉｉｉ）ホスフィノ基またはホスホニウム基、（ｉｖ）アルシノ基またはアルソニウム基によって置換されたＣ１−Ｃ２５ヒドロカルビル、好ましくは、Ｃ１−Ｃ２５アルキル、より好ましくは、Ｃ１−Ｃ１０アルキルである。
【００８１】
より好ましい実施形態において、Ｒ１およびＲ６は両方ともに、（ｉ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２もしくは−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−Ｎ＋（Ｒ）３Ａ−、より好ましくは、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−Ｎ（ＣＨ３）３＋Ａ−、
（ｉｉ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ＋（Ｒ）２Ａ−、より好ましくは、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ（ＣＨ３）２＋Ａ−、
（ｉｉｉ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐ（Ｒ）２、より好ましくは、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐ（ＣＨ３）２もしくはＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐ＋（Ｒ）３Ａ−、より好ましくは、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｐ＋（ＣＨ３）３Ａ−、または
（ｉｖ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ａｓ（Ｒ）２、より好ましくは、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ａｓ（ＣＨ３）２もしくはＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ａｓ＋（Ｒ）３Ａ−、より好ましくは、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ａｓ＋（ＣＨ３）３Ａ−から選択される同一の基であり、式中、ｎは、１〜１０、好ましくは、２、３、または６の整数である。
【００８２】
そのような化合物の例には、本明細書で化合物１４、１４ａ、１５〜１９と指定される化合物が挙げられる：
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ（２−グアニジノエチル）アミド（化合物１４）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ（２−トリメチルグアニジニウムエチル）アミド（化合物１４ａ）、
パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１−（２−Ｓ２−ジメチルスルホニウムエチル）アミドクエン酸塩（化合物１５）、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（２−Ｐ３−トリメチルホスホニウムエチル）アミド二クエン酸塩（化合物１７）、
３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（２−ジメチルホスフィノエチル）アミド（化合物１８）、および
３１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（２−Ａｓ３−トリメチルアルソニウムエチル）アミド二クエン酸塩（化合物１９）。
【００８３】
上述の化合物は、国際公開第ＷＯ２００５／１２０５７３号に教示されるように調製され得る。
【００８４】
なおさらに好ましい実施形態において、本発明に従って使用されるＢｃｈｌ誘導体は、式ＩＩのバクテリオ塩素誘導体であり、式中、Ｍは、２ＨまたはＰｄであり、Ｒ’２は、−ＯＲ８であり、式中、Ｒ８は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、好ましくは、メチルであり、Ｒ４は、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＮＲ９であり、Ｒ１および／またはＲ６は、−ＮＲ’９Ｒ”９であり、式中、Ｒ’９は、Ｈであり、Ｒ９およびＲ”９は、少なくとも１つのアミノ末端基または正に荷電した基、より好ましくは、式−Ｎ＋（ＲＲ’Ｒ”）Ａ−のアンモニウム末端基によって置換されたＣ１−Ｃ２５ヒドロカルビル、好ましくは、Ｃ１−Ｃ２５アルキル、より好ましくは、Ｃ１−Ｃ１０アルキルであり、式中、Ｒ、Ｒ’、およびＲ”は、好ましくは、同一のＣ１−Ｃ６アルキル、好ましくは、メチルであり、Ａ−は、アニオンである。本発明のより好ましい実施形態において、Ｒ４は、式−Ｃ（ＣＨ３）＝Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２または−Ｃ（ＣＨ３）＝Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ）３＋Ａ−、最も好ましくは、−Ｃ（ＣＨ３）＝Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（ＣＨ３）３＋Ａ−の基であり、Ｒ１およびＲ６は、式−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２またはＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ）３＋Ａ−、より好ましくは、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（ＣＨ３）３＋Ａ−の基であり、式中、ｎは、１〜１０であるが、好ましくは、２、３、または６の整数である。そのような化合物の例には、本明細書で化合物２０〜２３と指定される化合物が挙げられる：
３１−（アミノエチルイミノ）−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン−１３１，１７３−ジ（２−アミノエチル）アミド（化合物２０）、
パラジウム３１−（アミノエチルイミノ）−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ（２−アミノエチル）アミド（化合物２１）、
３１−（トリメチルアンモニウムエチルイミノ）−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ（２−トリメチルアンモニウムエチル）アミド（化合物２２）、および
パラジウム３１−（トリメチルアンモニウムエチルイミノ）−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ（２−トリメチルアンモニウムエチル）アミド（化合物２３）。
【００８５】
上述の化合物は、国際公開第ＷＯ２００５／１２０５７３号に説明されるように調製され得る。
【００８６】
ある特定の実施形態において、本発明に従って使用される正に荷電した光増感剤は、式ＩのＢｃｈｌ誘導体であり、式中、Ｍは、Ｐｄであり、Ｒ２は、−ＣＯＯＣＨ３であり、Ｒ３は、Ｈであり、Ｒ４は、−ＣＯＣＨ３であり、Ｒ５は、＝Ｏであり、Ｒ１は、−ＯＲ８であり、式中、Ｒ８は、ヒドロキシ基を含有するアミノ酸の残基、好ましくは、セリン、またはその誘導体、好ましくは、アルキル、より好ましくは、メチル、エステル、または前記アミノ酸もしくはその誘導体を含有するペプチドであり、そこでアミノ酸残基の遊離アミノ基がトリメチルアンモニウム基として四級化され得る。そのような式Ｉの誘導体の例として、本明細書で化合物１３：Ｏ−［Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄ］−［Ｎ３−トリメチルアンモニウム−２−メチル］−セリンメチルエステルヨウ化物塩と指定される化合物が挙げられる。
【００８７】
本発明に従って、式Ｉ〜ＩＩＩの（バクテリオ）クロロフィル化合物の薬学的に許容される塩は、眼のＰＤＴ治療に使用され、これらの塩はいずれも、分子中に存在する任意のカルボキシ基、および塩基、ならびに酸付加塩によって形成される。
【００８８】
薬学的に許容される塩は、金属またはアミンカチオン、例えば、アルカリおよびアルカリ土類金属または有機アミンのカチオン等とともに形成される。カチオンとして使用される金属の例には、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等が挙げられる。好適なアミンの例には、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、およびプロカインが挙げられる（例えば、Ｂｅｒｇｅ  Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，”（１９７７）Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６：１−１９を参照のこと）。
【００８９】
塩基性光増感剤の酸付加塩には、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸等の無機酸由来の塩、ならびに脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、アルカン二酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸等の有機酸由来の塩が含まれる。したがって、そのような塩には、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、一水素リン酸塩、二水素リン酸塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、カプリル酸塩、イソ酪酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、フタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩等が含まれる。アルギン酸塩等およびグルコン酸塩またはガラクツロン酸塩等のアミノ酸の塩も企図される（例えば、Ｂｅｒｇｅ  Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，”（１９７７）Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６：１−１９を参照のこと）。
【００９０】
前記塩基性化合物の酸付加塩は、遊離塩基形態を十分な量の所望の酸と接触させて、従来の様式で塩を生成することによって調製される。遊離塩基形態は、塩形態を塩基と接触させ、従来の様式で遊離塩基を単離することによって再生され得る。遊離塩基形態は、極性溶媒中の溶解度等のある特定の物理的性質の点でそれらの各塩形態とは若干異なるが、さもなければ、その塩は、本発明の目的において、それらの各遊離塩基と同等である。
【００９１】
本発明に従って使用される酸性光増感剤の塩基付加塩は、遊離酸形態を十分な量の所望の塩基と接触させて、従来の様式で塩を生成することによって調製される。遊離酸形態は、塩形態を酸と接触させ、従来の様式で遊離酸を単離することによって再生され得る。遊離酸形態は、極性溶媒中の溶解度等のある特定の物理的性質の点でそれらの各塩形態とは若干異なるが、さもなければ、その塩は、本発明の目的において、それらの各遊離酸と同等である。
【００９２】
本発明に従って使用される負に荷電したクロロフィルおよびバクテリオクロロフィル化合物ならびに正に荷電したクロロフィルおよびバクテリオクロロフィル化合物、ならびに薬学的に許容されるその塩は、高度に水溶性であり、界面活性剤を添加することなく水性製剤を調製することを可能にする。
【００９３】
本発明に従って使用される薬学的組成物は、眼科組成物、好ましくは、液体、例えば、溶液、懸濁液、およびエマルジョンであるか、または患者の眼に局所適用され、かつＰＤＴ適用前の角膜または強膜への透過を可能にするゲルである。眼科組成物は、通常、当技術分野で周知の薬学的に許容される不活性担体および賦形剤を含む。薬学的組成物は、例えば、活性薬剤の透過深度を媒介するために１つ以上の機能的賦形剤をさらに含有し得る。光増感剤の透過深度を制限することは、治療を目的とする領域に限定し、それによって、光増感剤の照射時に形成される活性酸素種（ＲＯＳ）に起因する周囲組織への悪影響を最小限に抑えるため、有利であり得る。
【００９４】
薬学的組成物の調製について、光増感剤は、例えば、マンニトールで凍結乾燥され、乾燥粉末は、患者への局所適用または試料インビトロ標的上での適用のために、生理食塩水または任意の他の薬学的に許容される水溶液中に直接可溶化される。組成物の調製は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ，１９９０に要約されるような当技術分野で周知の技法によって行われる。
【００９５】
本発明者は、光増感剤に１０分間または３０分間曝露されたウサギ角膜および強膜へのいくつかのバクテリオクロロフィル誘導体の透過が、賦形剤を有する光増感剤が適用されたときよりも、デキストラン−５００を有しない光増感剤が適用されたときに著しく深かったことを見出した。図４Ａ〜４Ｈに示されるウサギ角膜の蛍光顕微鏡測定は、負に荷電したバクテリオ塩素誘導体ＷＳＴ１１が、デキストランの不在下で、１０分間のインキュベーション後に角膜間質の半分を横断し、３０分間のインキュベーション後にその間質の全深さを横断することを示す。対照的に、デキストラン−５００を有するＷＳＴ１１の適用は、透過深度を１０分間のインキュベーション後に角膜間質の外側３分の１に、かつ３０分間のインキュベーション後には約５０％に制限した。他のスルホン化Ｂｃｈｌｓ誘導体、すなわち、化合物１〜７の透過深度を製剤中のデキストランの存在下で測定したときに、同様の結果が得られた。
【００９６】
デキストラン−５００を混合したＷＳＴ１１（または化合物１〜７）での処理は、デキストランを有しないＷＳＴ１１と比較して、硬化効果を変化させなかった。しかしながら、それは、この処理の悪影響を大いに減少させた。臨床的に、角膜浮腫および上皮治癒の期間および程度は、著しく低下した。また、いくつかの処理した角膜に生じる上皮のかすみは、デキストランの不在下でのみ現れた。しかしながら、最も重要な影響は、内皮層の保護および処理した角膜内の角膜実質細胞の機能障害の減少であるように見える。これは、本明細書の図１１Ａ〜１１Ｃに示されるウサギ眼の組織学的切片において明確に実証される。デキストラン５００を混合したＷＳＴ１１（または化合物１〜７）で処理し、その後、ＮＩＲ照射した後の組織学試験は、内皮細胞に損傷を与えることなく前角膜内の角膜実質細胞集団を減少させることを示した。
【００９７】
この保護、ならびに浮腫の弱毒化および治癒時間の短縮は、恐らく、減少されたＷＳＴ１１透過深度、続いて、空間的に限定された光生成ラジカルの影響に関連している。驚いたことに、生理食塩水中のＷＳＴ１１が１０分間のインキュベーション後に角膜間質の半分に透過した一方で、これは、角膜の同様の深さまで透過した後にデキストランとともに適用されたＷＳＴ１１よりも低い硬化率をもたらした。この観察結果は、角膜の中心層におけるＷＳＴ１１の蓄積、およびデキストランの不在下でＷＳＴ１１をより拡散して分布するときよりもよりもこの領域において高いＲＯＳ濃度をもたらすという可能性と定性的に相関し得る。
【００９８】
デキストランの保護的役割は、恐らく、角膜を硬化するための当技術分野で既知のリボフラビン（ＲＦ）／ＵＶＡ処理において維持される。デキストラン−５００を有するＲＦの製剤が溶液等浸透圧の維持に役立つと主張されているが（Ｌｅｔｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）、最近になって、ＲＦ−デキストラン溶液（ＲＦ−Ｄ）の間質透過が、長時間曝露したときでさえ前部２００μｍに制限されることが報告された（Ｓｏｎｄｅｒｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。この所見は、本発明者によって得られたデータを裏付け、かつデキストランが光増感剤の角膜への前部透過を制限し、それによって、光毒性作用から内皮細胞を保護するという結論を立証する。この効果の分子的性質はまだ決定されていないが、多糖類は、天然コラーゲンと一緒になってマトリックスを形成するようであり、これは、より深い層への光増感剤の移動を阻止する障壁の役割を果たす。
【００９９】
デキストランは、消化可能および分解可能なグルコースの高分子量ポリマーであり、これは、眼科製剤の賦形剤、例えば、人工涙液および点眼剤としての使用において幅広い割合を占める。デキストラン画分は、天然デキストランの部分的酸加水分解から得られ、それらは、様々な特性および用途を有し、１０００〜２００万の範囲の分子量で供給される。この画分の分子量は、大抵の場合、主要な特性である。デキストラン５、デキストラン１０等の記号表示は、１０００で割った平均分子量を表す。したがって、デキストラン１０は、平均分子量１０，０００に相当する。ある特定の実施形態において、デキストラン画分は、デキストラン５０、デキストラン７０、デキストラン１００、デキストラン２００、デキストラン５００、デキストラン１０００、およびデキストラン２０００から選択される。本発明の眼科組成物の調製に使用される最も好ましいデキストラン画分は、デキストラン５００である。
【０１００】
２０％のデキストラン５００が製剤に添加されると、それは、製剤の粘度を約１７９ｃＰまで増加させる。デキストランとの同時投与の際の光増感剤の透過深度の減少を説明するための代替的アプローチは、製剤の粘度の増加である。本発明者は、２０％のデキストラン溶液との同時投与の効果と比較して、光増感剤と２００ｃＰの粘度を有する６５％のグルコース溶液または９２％のグリセロール溶液との同時投与の効果を試験した。６５％のグルコース溶液または９２％のグリセロール溶液が光増感剤の透過深度をデキストランと同一の程度まで制限することが分かった。
【０１０１】
したがって、より好ましい実施形態において、本発明は、角膜菲薄化の治療用の粘性眼科組成物を提供する。これらの実施形態に従って、眼科組成物は、製剤の粘度を高め、それによって、活性薬剤の角膜への透過を制限するか、または遅延させる賦形剤として粘性剤を含む。眼科製剤に使用される任意の粘性剤は、本発明の目的に好適である。粘性剤としての機能を果たす好ましい機能的賦形剤は、バイオポリマー、好ましくは、多糖類、より好ましくは、天然の生物学的プロセスの結果として体内で生分解性の高い天然多糖類である。天然多糖類は、それらの一意の物理化学的特性、比較的低費用、それらが特定のニーズを満たすように化学修飾され得るといった理由からも有利である。ポリマー粘性剤の非限定的な例として、デキストラン、スクレログルカンおよびその誘導体、ジェランガム、グアーガム、メチルセルロース（ＭＣ）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、カルボマー等が挙げられる。好ましい粘性剤には、デキストラン、およびエキソ多糖類ヒドロゲルスクレログルカン、具体的には、そのカルボン酸化誘導体、ジェランガム、およびグアーガムがある。
【０１０２】
本発明の眼科製剤で使用され得る非ポリマー粘性剤には、グルコースおよびグリセロールが含まれる。
【０１０３】
あるいは、この組成物は、２０％のデキストラン溶液または６５％のグルコース溶液または９２％のグリセロール溶液等であるが、これらに限定されない不活性の粘性溶液と同時投与され得る。
【０１０４】
ウサギ角膜および強膜におけるバクテリオクロロフィル誘導体の局所適用、その後の６００〜９００ｎｍでの照射、ならびに角膜および強膜における光生成酸素ラジカルの捕捉は、エクスビボおよびインビボにおいて一貫した角膜および強膜硬化をもたらした光化学反応、恐らく、重合反応を誘発した。ウサギ眼に適用されたバクテリオクロロフィル誘導体の光化学反応は、照射中の連続的な退色およびスペクトル変形として観察された可能性がある（漂白は、本明細書の図５に示される）。
【０１０５】
ウサギ角膜について、照射前にエクスビボでＷＳＴ１１と３０分間インキュベートすることによって、ヤング率および極限応力をそれぞれ、３６９％および２６７％増加させた。インビボで行われる同一のパラメータでの処理は、ヤング率および極限応力をそれぞれ、１７４％および１１１％上昇させた。ヤング率は、インビボで処理した角膜の場合、インキュベーション時間とともに増加した。
【０１０６】
ウサギ強膜について、照射前にエクスビボでＷＳＴ１１と３０分間インキュベートすることによって、ヤング率および極限応力をそれぞれ、３００％および２７４％増加させた。
【０１０７】
したがって、水溶性（バクテリオ）クロロフィル誘導体で前処理した角膜および強膜のＰＤＴは、内皮細胞に損傷を与えることなく、極限応力およびヤング率を少なくとも２倍に高めた。この処理は、動物モデルにおいて安全であるように見え、したがって、屈折矯正手術後の円錐角膜および角膜拡張の治療の臨床試験が考慮され得る。
【０１０８】
したがって、別の態様では、本発明は、角膜菲薄化または強膜伸張に伴う眼疾患、障害、および状態の光線力学的治療のための方法を提供し、本方法は、（ａ）角膜菲薄化または強膜伸張に苦しむ個体に、上で定義された式Ｉ、ＩＩ、またはＩＩＩの（バクテリオ）クロロフィルまたはそれを含む薬学的組成物である光増感剤を投与するステップ、および（ｂ）赤外または近赤外（ＮＩＲ）波長の光で眼を照射するステップを含む。
【０１０９】
本発明によって提供される方法は、ＲＦ／ＵＶＡ処理に対して有利である。ＵＶＡ照射は、いくつかの報告書によって、適用されたＲＦの透過深度が制限された場合であっても、角膜内皮細胞に有害であり（Ｗｏｌｌｅｎｓａｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００４（ａ）、Ｗｏｌｌｅｎｓａｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００４（ｂ）、Ｗｏｌｌｅｎｓａｋ  ２０１０（ａ））かつ角膜実質細胞の完全喪失をもたらす（Ｓｐｏｅｒｌ  ｅｔ  ａｌ、２００７、Ｈａｆｅｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００９、Ｗｏｌｌｅｎｓａｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０（ｂ））ことが示された。
【０１１０】
バクテリオクロロフィル／ＮＩＲ処理による角膜硬化に関与する機構は、ＲＦ／ＵＶＡによって強いられる機構とは異なり得る。ＷＳＴ１１等の光励起された水溶性バクテリオクロロフィル誘導体は、ＲＦ／ＵＶＡ処理の主なＲＯＳ生成物である最小量の一重項酸素を有するスーパーオキシドおよびヒドロキシルラジカルを生成する（図６を参照のこと）。
【０１１１】
一実施形態において、本発明の方法は、円錐角膜、外傷に起因する角膜拡張、例えば、レーザー角膜切削形成術（ＬＡＳＩＫ）後拡張、レーザー屈折矯正角膜切除術（ＰＲＫ）後拡張、感染後拡張、周辺拡張、萎縮、眼圧上昇、または角膜間質が約２５０μｍよりも薄い状態のまま放置された光屈折矯正手術の合併症から選択される角膜菲薄化疾患、障害、および状態の治療のために適用される。
【０１１２】
本発明の方法によって治療され得る強膜および／または角膜異常の結果として生じる視力喪失に伴う他の非限定的な疾患および状態には、角膜のリウマチ状態、変性近視、正乱視、強膜ぶどう腫、高眼圧緑内障、低眼圧緑内障、およびこれらの組み合わせが含まれる。
【０１１３】
（バクテリオ）クロロフィル光増感剤および眼の赤外またはＮＩＲ照射の併用治療は、介入手順を受ける予定であるか、または介入手順をすでに受けた患者における予測される強膜脆弱化または角膜菲薄化を予防するために使用され得る。
【０１１４】
したがって、さらなる態様において、本発明は、介入手順前、介入手順中、または介入手順後に、角膜および／または強膜疾患または脆弱化を予防するための方法を提供し、本方法は、（ａ）角膜および／または強膜疾患または脆弱化に苦しむことが予測される個体に、上で定義されたクロロフィルもしくはバクテリオクロロフィル化合物またはその薬学的組成物を投与するステップ、および（ｂ）赤外または近赤外（ＮＩＲ）波長の光で眼を照射するステップを含む。
【０１１５】
ＰＤＴ治療のために投与される（バクテリオ）クロロフィル誘導体の量は、ＰＤＴにおいて使用される他のＢｃｈｌ誘導体で蓄積された経験に従って熟練した医師によって定められ、活性成分として用いる誘導体の選択、治療される状態、投与方法、患者の年齢および状態、ならびに医師の判断によって異なる。
実施例
【０１１６】
物質および方法
（ｉ）化合物。パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（２−スルホエチル）アミド一価塩（例えば、ジカリウム塩ＷＳＴ１１）は、ＳＴＥＢＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｓｒａｅｌから供給された。パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（−スルホプロピル）アミド二価塩（例えば、ジカリウム塩化合物１）、パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（２−スルホエチル）アミド二価塩（例えば、ジカリウム塩化合物２）、パラジウム３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（３−スルホプロピル）アミド塩（例えば、ジカリウム塩化合物３）、３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（２−スルホエチル）アミド塩（例えば、ジカリウム塩化合物４）、３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１−（−スルホプロピル）アミド塩（例えば、ジカリウム塩化合物５）、３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（２−スルホエチル）アミド二価塩（例えば、ジカリウム塩化合物６）、および３１−オキソ−１５−メトキシカルボミルメチル−ロドバクテリオクロリン１３１，１７３−ジ−（３−スルホプロピル）アミド二価塩（例えば、ジカリウム塩化合物７）を、米国第７，９４７，６７２号に記載されるように調製した。他のバクテリオクロロフィル誘導体、例えば、負に荷電した基または正に荷電した基を含有する誘導体を、米国第７，９４７，６７２号および国際公開第ＷＯ２００５／１２０５７３号に記載されるように調製した。バクテリオクロロフィル誘導体の溶液を、２つの形態で調製した：（ａ）２．５ｍｇ／ｍＬの濃度であり、かつｐＨが７．３に調整された生理食塩水中でのみ（本明細書において「Ｂｃｈｌ−Ｓ溶液」または「Ｂｃｈｌ−Ｓ」と称される）、（ｂ）２０％のデキストラン５００（３１３９２  Ｆｌｕｋａ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を有し、かつｐＨが７．３に調整された生理食塩水中の２．５ｍｇ／ｍＬのバクテリオクロロフィル誘導体（本明細書において「Ｂｃｈｌ−Ｄ溶液」または「Ｂｃｈｌ−Ｄ」と称される）。
【０１１７】
リボフラビン（ＲＦ）溶液の２つの形態を用いた：（ａ）ｐＨが７．３に調整された生理食塩水中のリボフラビン−５’−リン酸塩の０．１％溶液（本明細書において「ＲＦ溶液」と称される）、（ｂ）測定されたｐＨが６．８である２０％のデキストランＴ−５００中のリボフラビン−５’−リン酸塩の市販（Ｍｅｄｉｏ  Ｃｒｏｓｓ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の０．１％溶液（本明細書において「ＲＦ−Ｄ溶液」またはＲＦ−Ｄ」）。
【０１１８】
（ｉｉ）光源、（ａ）７５５ｎｍで最大１Ｗの波長可変出力を有するダイオードレーザー（ＣｅｒａｍＯｐｔｅｃ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、（ｂ）７６０ｎｍで２×１８ｍＷのＬＥＤ系（Ｒｏｉｔｈｎｅｒ  Ｌａｓｅｒｔｅｃｈｎｉｋ，Ａｕｓｔｒｉａ）、および（ｃ）３７０ｎｍで２×３ｍＷのＬＥＤ系（Ｒｏｉｔｈｎｅｒ  Ｌａｓｅｒｔｅｃｈｎｉｋ，Ａｕｓｔｒｉａ）。
【０１１９】
（ｉｉｉ）動物。ワイツマン科学研究所の動物中核施設（Ｒｅｈｏｖｏｔ，Ｉｓｒａｅｌ）でニュージーランド白色（ＮＺＷ）ウサギを収容し、食物および水に随意にアクセスさせた。すべての実験手順は、施設内動物管理および使用委員会の承認済みであった。すべての実験を、眼科および視力研究における動物使用に関するＡＲＶＯ記述に従って行った。
【０１２０】
方法
（ａ）角膜の研究
角膜硬度の生体力学的試験
（ｉ）角膜硬化のエクスビボ生体力学的研究のための試料調製。ウサギ（１５〜１６週齢、体重３〜４ｋｇ）の死後、眼を摘出した。その後の切削配向を維持するために、摘出前に１２および６ｈ位置を強膜上に印をつけた。角膜をＰＫＲスクレーパー（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ，ＵＳＡ）を用いて機械的に脱上皮化した。通常、約１０匹のウサギを、バクテリオクロロフィル／ＮＩＲ処理に割り当て（本明細書において「試験群」（例えば、ＷＳＴ１１／ＮＩＲ））、比較するために、２匹のウサギをＲＦ／ＵＶＡで処理した（本明細書において「ＲＦ／ＵＶＡ群」）。試験群において、１０匹のウサギの１０個の眼を逆さまにして試験化合物生理食塩水溶液（Ｂｃｈｌ−Ｓ）に３０分間浸し、その後、１０ｍＷ／ｃｍ２のダイオードレーザーで３０分間ＮＩＲ照射（６００〜９００ｎｍ）した。未処理の対側眼を対照とした。ＲＦ／ＵＶＡ基において、ＲＦ−Ｄ溶液を２匹のウサギの２個の眼に１０分間毎に３０分間局所適用し、その後、３ｍＷ／ｃｍ２の二重ダイオードで３０分間ＵＶＡ照射（３７０ｎｍ）した。処理後、角強膜輪部を除去し、一致した形状を有するパラフィン半球ボタン（ｐａｒａｆｆｉｎ  ｈｅｍｉｓｐｈｅｒｅ  ｂｕｔｔｏｎ）上に設置して、組織を伸張することなく正確に切開した。幅４±０．２ｍｍの細長い角膜片を、自己構成型二重刃カッターを用いて上下方向に上皮側から切削した。これらの細長い角膜片は、両端に２ｍｍの強膜を含んだ。角膜中央の厚さを超音波パキメトリー（Ｈｕｍｐｈｒｅｙ  ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ  ｐａｃｈｏｍｅｔｅｒ，ＵＳＡ）で測定した。その後、細長い角膜片を生体力学的試験装置に移した。
【０１２１】
（ｉｉ）インビボ研究のための試料調製
１２〜２５週齢のウサギ（体重２．５〜３ｋｇ）を使用した。それらを、３５ｍｇ／ｋｇのケタミン（Ｒｈｏｎｅ  Ｍｅｒｉｅｕｘ，Ｌｙｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）および５ｍｇ／ｋｇのキシラジン（Ｖｉｔａｍｅｄ，Ｂｅｎｙａｍｉｎａ，Ｉｓｒａｅｌ）の筋肉内（ｉ．ｍ．）注入によって麻酔した。通常、バクテリオクロロフィル処理のために１６匹のウサギを割り当てた。脱上皮化後、それぞれのウサギの一方の眼を、アイキャップ（直径１２ｍｍ）を用いて、生理食塩水中の試験化合物で１０、２０、および３０分間局所的に処理し、その後、１０、２０、または３０分間ＮＩＲ照射（７５５ｎｍ、１０ｍＷ／ｃｍ２）した。他方の眼を未処理の対照とした。輪部幹細胞の曝露を阻止するために、照射した領域を、直径８ｍｍの中央開口部を有するアルミホイルで覆って限定した。デキストランの役割を決定するために、１２匹のウサギを各群に３匹のウサギを有する４つの処理群に分け、第１群であるＢｃｈｌ−Ｓ群をバクテリオクロロフィル誘導体の生理食塩水溶液で処理し、第２群であるＢｃｈｌ−Ｄ群をバクテリオクロロフィル−デキストラン溶液で処理した。両群を試験化合物と２０分間インキュベートし、その後、３０分間ＮＩＲ照射（７５５ｎｍ、１０ｍＷ／ｃｍ２）した。第３群であるＲＦ群をデキストランを有しないリボフラビンで処理し、第４であるＲＦ−Ｄ基をＲＦ−デキストラン溶液（ＲＦ−Ｄ）で処理した。両群をＲＦまたはＲＦ−Ｄ溶液と３０分間インキュベートし、その後、３０分間ＵＶＡ照射（３７０ｎｍ、３ｍＷ／ｃｍ２）した。０．１％のデキサメタゾン、ネオマイシン、およびポリミキシンＢ（Ｍａｘｉｔｒｏｌ（登録商標），Ａｌｃｏｎ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を含有する眼軟膏を処理した眼に１日１回、２週間適用した。処理の４週間後にウサギを屠殺し、角強膜環を除去し、一致した形状を有するパラフィン半球ボタン上に設置して、組織を伸張することなく正確に切開した。幅４±０．２ｍｍの細長い角膜片を、エクスビボ切開において上述のように上皮側から切削した。細長い角膜片を直ちに生体力学的試験装置に移した。
【０１２２】
薬物蓄積、透過、および光退色
（ｉ）光増感剤の全体的な蓄積
ウサギ眼を死後すぐに機械的に脱上皮化した。大抵の研究において、６匹のウサギを使用し、６匹のウサギの６個の眼を、アイキャップを用いてバクテリオクロロフィル試験化合物に１０、２０、および３０分間（各試験につき２個の眼）曝露したが、対側眼を未処理のままにし、対照とした。角膜を除去し、直径８ｍｍのボタン中央を円形トレフィンで穿孔し、光ビーム経路の領域内のポリメチルメトキシレートキュベットの外側に設置した。吸収スペクトルを記録し、６００〜９００ｎｍ（大抵の場合、７５５ｎｍ）の光学密度（ＯＤ）をＶ−５７０分光光度計（Ｊａｓｃｏ，Ｊａｐａｎ）を用いて測定した。
【０１２３】
（ｉｉ）透過深度研究
ウサギの死後、眼を摘出し、機械的に脱上皮化した。これらの眼を、アイキャップを用いて、暗所で、Ｂｃｈｌ−Ｓ溶液に５、１０、および３０分間曝露し、Ｂｃｈｌ−Ｄ溶液に１０および３０分間曝露した。対照：未処理の眼、および暗所でデキストラン−５００のみで３０分間処理した１個の眼。この前処理に従って、角膜を生理食塩水で簡単にすすぎ、８ｍｍのボタン中央をトレフィンで切除し、除去し、アルミホイルに包み、さらに使用するまでドライアイス上で凍結させた。連続した角膜中央矢状薄片（１２μｍ）を冷凍ミクロトームで切削し、顕微鏡スライドガラス上に載置し、使用するまで−７０℃で凍結保存した。蛍光測定のために、個々の薄片を顕微鏡台に設置し、直ちに写真撮影して記録した。３連続の冷凍切片由来のＢｃｈｌ−ＳまたはＢｃｈｌ−Ｄで処理した角膜の蛍光強度を、７４０ｎｍでの励起時に、ＣＣＤカメラ（Ｃａｓｃａｄｅ  ５１２Ｂ，Ｒｏｐｅｒ  Ｓｃｉ．，ＵＳＡ）を装備した蛍光顕微鏡（ＢＸ６１  Ｏｌｙｍｐｕｓ，Ｊａｐａｎ）および７６０ｎｍ超の長いパスフィルタを用いて、７６０ｎｍで記録した。デジタルデータをＩｍａｇｅＪソフトウェア（ＮＩＨ，ＵＳＡ）を用いて分析した。
【０１２４】
（ｉｉｉ）光増感剤の光退色
安楽死させたウサギの眼の角膜を脱上皮化した。通常、５匹のウサギを試験し、１０個中８個の眼を、アイキャップを用いて、生理食塩水中のバクテリオクロロフィル誘導体（Ｂｃｈｌ−Ｓ）で２０分間前処理した。溶液の過剰分を慎重に濾紙に吸い込ませた。これらの眼を指定の期間：０、１０、３０、および６０分間（各期間につき２個の角膜）照射した。さらなる２個の眼を対照として使用した。角膜を除去し、直径８ｍｍのボタン中央を円形トレフィンで穿孔した。吸収スペクトルをＶ−５７０分光光度計（Ｊａｓｃｏ，Ｊａｐａｎ）を用いて記録した。
【０１２５】
Ｂｃｈｌ／ＮＩＲおよびＲＦ／ＵＶＡ処理後の蛍光分光
ウサギの死後、眼を摘出した。角膜上皮をスクレーパーで脱上皮化した。通常、２匹のウサギの２個の眼をＢｃｈｌ−ＳまたはＢｃｈｌ−Ｄ溶液に３０分間浸し、その後、ＮＩＲ照射（３０分間）した。ＲＦ−Ｄ溶液を２個の眼に３０分間適用し、その後、ＵＶＡ照射（３０分間）した。２個の眼を対照とした。角膜を除去し、８ｍｍのボタン中央を円形トレフィンで穿孔した。これらのボタンを、蛍光分光計（Ｖａｒｉａｎ−Ｃａｒｙ  Ｅｃｌｉｐｓｅ，ＵＳＡ）に斜め４５度（図２）に設置したスライドガラス上に載置した。励起ビームを２９５、３１５、３２０、３２８、３３５ｎｍに設定し、対応する発光スペクトルを３６０〜４８０ｎｍで読み取った。他の読み取りを、３５０ｎｍの励起および３８０〜４８０ｎｍの発光、ならびに３７０ｎｍの励起および４００〜７００ｎｍの発光で行った。励起スリットは１０ｎｍであり、発光スリットは約１０ｎｍであった。
【０１２６】
組織学
Ｂｃｈｌ−Ｓ、Ｂｃｈｌ−Ｄ、ＲＦ、またはＲＦ−Ｄでの処理の４８時間または１週間後、ウサギを安楽死させ、眼を直ちに摘出し、ダビッドソン固定液（処理後４８時間）または４％のホルムアルデヒド（処理後１週間）中に固定した。６μｍの切片を全眼または角膜のいずれかから調製し、ヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。角膜および網膜切片の病理を試験した。光学顕微鏡（Ｅ−８００  Ｌｅｉｃａ，Ｇｅｒｍａｎｙ）上に載置したこれらの切片をデジタルビデオカメラ（Ｎｉｋｏｎ  ＤＳ−Ｒｉｌ，Ｊａｐａｎ）で写真撮影した。角膜実質細胞および内皮細胞の密度を、Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏソフトウェア（ＭｅｄｉａＣｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ，ＭＤ，ＵＳＡ）を用いて、２個の組織学的切片中央の２つの領域において測定および計算した。
【０１２７】
アポトーシスの染色。アポトーシス検出のために、Ｂｃｈｌ−ＳまたはＢｃｈｌ−Ｄ処理の１日後にウサギを安楽死させた。それらの角膜を除去し、４％のホルムアルデヒド中に固定し、パラフィンに包理した。６μｍの切片中央を角膜から調製し、顕微鏡スライド上に設置し、脱パラフィン化した。ペルオキシダーゼベースの末端デオキシリボヌクレオチジルトランスフェラーゼ媒介ｄＵＴＰ−ジゴキシゲニンニックおよび標識化（ＴＵＮＥＬ）アッセイを、製造業者の指示に従って行った（Ａｐｏｐ−Ｔａｇアッセイ、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ，Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。
【０１２８】
内皮染色。ウサギの角膜内皮損傷の分析を、Ｓｐｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｅｙｍａｎ，１９７６に記載のアリザリンレッドＳおよびトリパンブルー染色法を用いて処理の１日後に行った。この処理は、Ｂｃｈｌ−ＳもしくはＢｃｈｌ−Ｄ溶液での２０分間の前処理、その後、７５５ｎｍでの３０分間照射（２匹のウサギ）、または７６０ｎｍでの３０分間の照射のみ（２匹のウサギ）のいずれかを含んだ。未処理の対側眼を対照とした。
【０１２９】
（ｂ）強膜研究
強膜硬化のエクスビボ生体力学的研究のための試料調製
ウサギ眼を死後すぐに摘出し、生理食塩水中の２．５ｍｇ／ｍＬの試験化合物（Ｂｃｈｌ−Ｓ）を有するアイキャップを上強膜または下強膜に３０分間適用し、その後、１０ｍＷ／ｃｍ２で３０分間ＮＩＲ照射することによって外的に処理した。対側強膜を対照とした。幅４ｍｍの細長い強膜片を、処理した赤道領域および対側強膜で切削し、応力ひずみ測定を生体材料試験装置を用いて行った。
【０１３０】
含浸測定
エクスビボでの含浸：
安楽死させたウサギの眼を摘出し、赤道上強膜（または赤道下強膜）を、試験化合物を充填した直径の１０ｍｍアイキャップを用いて、試験化合物（Ｂｃｈｌ−Ｓ）溶液（２．５ｍｇ／ｍＬ）に１０分間および３０分間曝露した。赤道下強膜（または赤道下に含浸を適用した場合、赤道上強膜）を対照とした。
【０１３１】
Ｉｎ  ｓｉｔｕ含浸：
試験化合物溶液を、グライドの外側に沿って走る管によって接続されたＭｅｒｏｃｅｌ（登録商標）スポンジを取り付けた湾曲したプラスチックまたは金属グライドを用いて、ウサギの上側頭部または下鼻（交互）四分円において適用した。グライドを、縁（図１７Ａ〜１７Ｂを参照のこと）にある結膜孔を通して挿入した。グライドを強膜に取り付けた状態で設置した後、管をシリンジまたはポンプに接続し、試験化合物リザーバを含浸させた強膜に注入した。光増感剤の適用を１０分間または３０分間続けた。その後、Ｍｅｒｏｃｅｌ（登録商標）を有するグライドを引き抜いた。
【０１３２】
以下の技法を光増感剤のエクスビボまたはｉｎ−ｓｉｔｕ含浸後に行った。
【０１３３】
処理した強膜領域および対照である対側強膜を直径８ｍｍの円形皮膚トレフィンおよびハサミで切削し、直ちに凍結させた。２０ミクロンの矢状薄片を強膜ボタンの中央領域で冷凍ミクロトームを用いて薄切した。蛍光顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ，Ｊａｐａｎ）を用いて、７４０ｎｍの励起時に７５５ｎｍの蛍光強度を記録した。
【０１３４】
前区を通したインビボ照射
眼底コンタクトレンズ（Ｖｏｌｋ  ｐａｎ−ｆｕｎｄｏｓｃｏｐｉｃ）を有するダイオードレーザーを用いて、または光ファイバーを倒像検眼鏡に装着し、かつ網膜および色素上皮を介して強膜上に光を適用する＋２０ジオプターレンズを用いて、角膜および水晶体を通るＮＩＲ照射を行った。光の減衰のため、照射強度を適宜に調節した。
【０１３５】
照射後、ウサギを安楽死させ、それらの眼を摘出し、処理した強膜領域および対照である対側強膜を、直径の８ｍｍ円形皮膚トレフィンおよびハサミで切削した。  強膜ボタンを直ちに凍結させた。５０ミクロンの矢状薄片を強膜ボタンの中央領域で冷凍ミクロトームを用いて薄切した。蛍光顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ，Ｊａｐａｎ）を用いて蛍光分光を行い、７４０ｎｍの励起時に７５５ｎｍの蛍光強度を記録した。
【０１３６】
（ｃ）生体力学的試験
角膜および細長い強膜片を、２００ニュートン力セルを有するマイクロコンピュータ制御の生体材料試験装置（Ｍｉｎｉｍａｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の顎部が６ｍｍ間隔になるように水平にクランプ固定した（図１）。トルクを９ｃＮ．ｍにプリセットした目盛り付きのスクリュードライバー（Ｔｏｒｑｕｅｌｅａｄｅｒ，Ｅｎｇｌａｎｄ）を用いて、スクリュー制御締め付けを行った。歪みを１．０ｍｍ／分の速度で直線的に増加させ、組織が破裂するまで測定した。ヤング率を試験機で計算した。極限応力およびヤング率をメガパスカル（ＭＰａ）単位で表した。
【０１３７】
（ｄ）電子スピン共鳴（ＥＳＲ）分光法
Ｘバンドマイクロ波ブリッジを有するＭａｇｎｅｔｔｅｃｈ  ＥＳＲ  Ｍｉｎｉｓｃｏｐｅ  ＭＳ１００分光計（Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いてすべてのＥＳＲ測定を行った。ＥＳＲ分光計は、９．３〜９．５５ＧＨｚ、２０ｍＷのマイクロ波電力で動作する。ＥＳＲ測定を、ガラス毛管または扁平細胞において室温で行った。
【０１３８】
デキストランを有しないバクテリオクロロフィル誘導体またはデキストランを有するバクテリオクロロフィル誘導体（それぞれ、Ｂｃｈｌ−ＳおよびＢｃｈｌ−Ｄ）の水溶液の試料、およびデキストランを有しないリボフラビンまたはデキストランを有するリボフラビン（それぞれ、ＲＦおよびＲＦ−Ｄ）の溶液の水試料の試料を、Ａｓｈｕｒ  ｅｔ  ａｌ，２００９に記載されるように７５５ｎｍで照射した。それぞれの溶液に、スピントラップα−（４−ピリジルＮ−オキシド）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン（４−ＰＯＢＮ、６５ｍＭ）およびエタノール（８％）を添加した。対照には、デキストランを有する／有しない照射された生理食塩水中の４−ＰＯＢＮ、および４−ＰＯＢＮを有する／有しない照射されていないＢｃｈｌ−Ｓ、Ｂｃｈｌ−Ｄ、ＲＦ、およびＲＦ−Ｄ溶液を含有した。
【０１３９】
ウサギ角膜のエクスビボＥＳＲ測定。ウサギの死後、眼を摘出した。角膜を機械的に脱上皮化し、幅５ｍｍの細長い角膜片を自己構成型二重刃カッターで切削した。これらの細長い角膜片を直ちに４−ＰＯＢＮ（６５ｍＭ）およびエタノール（８％）、ならびにＢｃｈｌ−ＳまたはＲＦ−Ｄのいずれかを含有する溶液に３０分間浸した。次に、これらの細長い角膜片を生理食塩水で洗浄し、ＮＩＲ／ＵＶＡ照射のために扁平細胞（０．５×５ｍｍ３）に植え込み、その後、上述のＭｉｎｉｓｃｏｐｅでＥＳＲ測定を行った。
【０１４０】
実施例１．ウサギ角膜組織によるＷＳＴ１１取り込み
（ｉ）ウサギ角膜によるＷＳＴ１１の全体的な蓄積
安楽死させた３匹のウサギの６個の眼を死後すぐに機械的に脱上皮化した。これらの眼のうちの５個を、アイキャップを用いて、生理食塩水中のＷＳＴ１１（ＷＳＴ１１−Ｓ溶液）に１０、２０、および３０分間曝露し、洗浄した角膜の７５５ｎｍでの光吸収を物質および方法に記載されるように決定した。１個の眼を未処理の対照とした。
【０１４１】
図３に示されるように、含浸させた角膜の光学密度は、ＷＳＴ１１の生来のスペクトルを妨害することなく、時間とともに最大１．７１ＯＤ単位まで増加した。
【０１４２】
（ｉｉ）ウサギ角膜へのＷＳＴ１１の透過深度
局所適用時、いくつかのバクテリオクロロフィル誘導体の角膜組織への光化学的影響の透過および深度を決定した。ＷＳＴ１１での測定の結果が本明細書に提供される。
【０１４３】
光増感剤の透過深度は、光力学作用への角膜組織の曝露の程度を決定する。具体的には、透過が深いほど、内皮機能障害の可能性が高い。異なるインキュベーション時間後の試験化合物の透過深度を決定するために、切開した角膜ディスクのデジタル化蛍光を、物質および方法に記載の蛍光顕微鏡を用いて監視した。
【０１４４】
様々なインキュベーション時間後の脱上皮化角膜へのＷＳＴ１１の透過深度を、安楽死させた２０匹のウサギの眼において、ＷＳＴ１１の生理食塩水またはデキストラン溶液（それぞれ、ＷＳＴ１１−ＳまたはＷＳＴ１１−Ｄ溶液）を用いて、デキストランの存在下または不在下において暗所で行った。スライドガラス上に載置した矢状凍結切片を蛍光顕微鏡に供した。角膜全域のＷＳＴ１１の分布を蛍光顕微鏡（励起／発光７４０／７６０ｎｍ）写真で記録した。対照は、４個の未処理の眼およびデキストラン−Ｔ５００のみで３０分間処理した１個の眼であった。
【０１４５】
ＷＳＴ１１−Ｓ溶液に１０分間曝露した後（２個の眼）、ＷＳＴ１１は、間質の全外側半分を通ったことは明らかであった（図４Ａ、４Ｃ）。さらなる曝露（３０分間、５個の眼）は、デスメ膜に至るまで蛍光拡散をもたらした（図４Ｂ、４Ｄ）。この処理は、間質の厚さを３６０〜３８０μｍから６００〜７３０μｍまで増加させた。対照的に、ＷＳＴ１１−Ｄ溶液の適用は、それぞれ、図４Ｅ、４Ｇ、および図４Ｆ、４Ｈに示されるように、１０分間の曝露時間および３０分間の曝露時間の両方ともに（それぞれ、３個の眼および５個の眼を試験した）、透過深度を角膜間質の外側３分の１（５２０μｍ中２００μｍ）に制限した。重要なことには、角膜におけるＷＳＴ１１−Ｄの蛍光は、間質の中央を突破しなかった薬物移行の比較的鋭い前面を示した。しかしながら、２００μｍの深度で、角膜の蛍光レベルは、ＷＳＴ１１−Ｄに３０分間曝露した後も依然として高く、より高い蓄積レベルを示唆する。
【０１４６】
生理食塩水および化合物１〜７のデキストラン溶液でも同様の角膜含浸および透過深度の結果が得られた（データ示されず）。
【０１４７】
実施例２．角膜におけるＷＳＴ１１の光化学
（ｉ）エクスビボで処理した角膜におけるＷＳＴ１１の光退色
血清アルブミンの不在下でのＷＳＴ１１等のある特定のバクテリオクロロフィル誘導体の照射時の酸素ラジカルの生成が、クロロフィル様の分子の光化学生成のため、ＮＩＲ遷移の退色および吸収増加（約６４５ｎｍ）を伴うことが本発明者によって以前に説明された（Ａｓｈｕｒ  ｅｔ  ａｌ．２００９）。したがって、そのような変化は、そのようなバクテリオクロロフィル誘導体のｉｎ  ｓｉｔｕ光化学活性の重要な指標である。したがって、角膜照射中のいくつかのスルホン化バクテリオクロロフィル誘導体の光吸収の変化を脱上皮化したウサギ角膜で監視した。生理食塩水中のＷＳＴ１１で処理した安楽死させた５匹のウサギの１０個の角膜から得られた結果が本明細書に示される。
【０１４８】
８個の脱上皮化した眼をアイキャップを用いてＷＳＴ１１−Ｓで２０分間再処理し、残りの２個の眼を対照とした。図５に示されるように、７５５ｎｍでの角膜のＷＳＴ１１吸収は、それぞれ、１０、３０、および６０分間のＮＩＲ照射後、３０、５０、および７５％減少した（下向きの矢印）。同時に、吸収は６４５ｎｍで増加し（上向き矢印）、ＷＳＴ１１と分子酸素との光化学的相互作用による対応する塩素誘導体形成には典型的である（Ａｓｈｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０１４９】
（ｉｉ）電子スピン共鳴（ＥＳＲ）分光法から推定される角膜における光励起されたＷＳＴ１１による酸素ラジカル形成
ＷＳＴ１１／ＮＩＲ（黒色）およびＲＦ／ＵＶＡ（薄青色）による活性酸素種（ＲＯＳ）の光生成後の水溶液中のα−（４−ピリジルＮ−オキシド）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン（４−ＰＯＢＮ）のＥＳＲスペクトルと４−ＰＯＢＮによるスピン捕捉との比較が図６に示される。観察された四重項は、ＲＦ／ＵＶＡスペクトルにのみ存在する一重項酸素捕捉によるものであるが、六重項は、ＷＳＴ１１／ＮＩＲおよびＲＦ／ＵＶＡの両方においてスーパーオキシドおよびヒドロキシルラジカル形成（星印）を表す。
【０１５０】
ＷＳＴ１１／ＮＩＲで処理したウサギ角膜に捕捉されたＲＯＳのＥＳＲ測定結果が図７に示される。これらのシグナルは、わずかな一重項酸素も有しない水溶液において観察されたシグナルに類似している。ＲＦ／ＵＶＡによって生成されたシグナルは、ノイズレベルであった。
【０１５１】
実施例３．ＷＳＴ１１−Ｓ／ＮＩＲ処理に応答した角膜硬化
エクスビボで処理した眼の応力歪み測定
物質および方法に記載の１２匹のウサギを用いて応力歪み測定を行った。手短に、１０匹のウサギ１０個の眼をＷＳＴ１１／ＮＩＲで処理し、２匹のウサギの２個の眼をＲＦ−Ｄ／ＵＶＡで処理した。対側眼を対照とした。
【０１５２】
ＷＳＴ１１−Ｓと３０分間事前インキュベートし、その後、ＮＩＲ照射した後の応力ひずみ測定結果は、未処理の対照眼と比較して、角膜硬度が約３倍増加した（１０個の眼すべて）ことを示した（図８Ａ〜８Ｂ）。極限応力（Ｐ０．０００１未満）は、平均１．６３メガパスカル（ＭＰａ）（処理前）から５．９８ＭＰａ（処理後）まで最大２６７％増加し、ヤング率（Ｐ０．０００１未満）は、平均３．７６ＭＰａ（処理前）から１７．６５ＭＰａ（処理後）まで３６９％増加した。結果が表１に示される。
【０１５３】
２つのＲＦ−Ｄ／ＵＶＡで処理した角膜の平均極限応力は、１．４４ＭＰａ（処理前）から６．４６ＭＰａ（処理後）まで増加し、平均ヤング率は、３．２８ＭＰａ（処理前）から２０．７２ＭＰａ（処理後）まで増加した。
【０１５４】
したがって、ＷＳＴ１１／ＮＩＲ処理による硬化は、２つのＲＦ−Ｄ／ＵＶＡで処理した角膜で観察された硬化に類似しているように見えた。
【０１５５】
インビボで処理した眼の応力歪み測定
１６匹の生きているウサギの角膜を、ＷＳＴ１１−Ｓ（２．５ｍｇ／ｍＬ）で１０分間（ｎ＝４）、２０分間（ｎ＝６）、および３０分間（ｎ＝６）前処理した。その後、ＮＩＲ照射（７５５ｎｍ、１０ｍＷ／ｃｍ２）を３０分間行った。眼を治癒させ、１ヶ月後、処理した角膜の極限応力を測定し（物質および方法に記載されるように）、未処理の眼と比較して、それぞれ、４５、１１３、および１２６％増加したことが見出された。ＷＳＴ１１−Ｓ／ＮＩＲで処理した角膜の平均ヤング率は、同一の処理時間で、１０、７９、および１７３％の増加を示した。結果が図９Ａ〜９Ｂ、ならびに表１および２に示される。
【０１５６】
ＷＳＴ１１−Ｓ／ＮＩＲで処理した角膜は、処理後１週間浮腫を発現した。角膜上皮欠損は、１０〜１４日後に徐々に治癒した。上皮が治癒した後、角膜は、透明性を取り戻し、いくつかの角膜は、上皮のかすみを示した。
【表１】
2014524465.tif 000011
【表２】
2014524465.tif 000012
【０１５７】
注目すべきことに、インビボ群のウサギは、処理時に１２週齢であり、屠殺時に１６週齢であったが、エクスビボ群のウサギを１２週齢で屠殺した。加齢は、対照眼のヤング率値および極限応力値のベースラインを上昇させ（表１）、これは、恐らく２つの設定において得られたパラメータ間の差を説明する（Ｋｎｏｘ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０、Ｅｌｓｈｅｉｋｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０１５８】
ウサギ角膜の応力歪み測定を上述のようにエクスビボおよびインビボの両方で実行したが、眼を化合物１〜３の生理食塩水溶液に指示された期間曝露し、その後、ＮＩＲ照射した。これらの化合物で得られた極限応力値およびヤング率値は、ＷＳＴ１１−Ｓで得られた極限応力値およびヤング率値と類似した（データ示されず）。
【０１５９】
実施例４．ＷＳＴ１１−Ｄ／ＮＩＲでのインビボ角膜処理
デキストランの役割を決定するために、２０％のデキストランＴ−５００を含有する２．５ｍｇ／ｍＬのＷＳＴ１１の製剤（ＷＳＴ１１−Ｄ）での光化学処理を試験した。６匹のウサギを試験した：３匹のウサギを２０分間ＷＳＴ１１−Ｓ溶液で前処理し、３匹のウサギをＷＳＴ１１−Ｄ溶液で前処理し、その後、３０分間ＮＩＲ照射した。さらなる４匹のウサギをＲＦ（ｎ＝２）またはＲＦ−Ｄ（ｎ＝２）で３０分間処理し、その後、３０分間ＵＶＡ照射（３７０ｎｍ、３ｍＷ／ｃｍ２）した。
【０１６０】
図１０Ａ〜１０Ｂに示されるように、ＷＳＴ１１−ＳまたはＷＳＴ１１−Ｄの適用は、未処理の対側眼の角膜と比較して、平均極限応力およびヤング率の両方において約２倍の増加に影響を与えなかったように見えた。
【０１６１】
しかしながら、ＲＦ−Ｄ／ＵＶＡでの処理と比較して、ＷＳＴ１１での処理が、浮腫および上皮欠損の程度および期間を著しく減少させたことは、重要な所見である。角膜浮腫は５日後になくなり、上皮は、かすみを発現することなく、７〜９日間以内に治癒した。ＲＦおよびＲＦ−Ｄで処理した角膜において、上皮欠損は、４日後に治癒した。ＲＦ−Ｄ群において、浮腫は４日後になくなり、透明性を取り戻したが、ＲＦ群において、浮腫が６日間続き、その後、上皮中央のかすみが２日間続いた。
【０１６２】
実施例５．ＷＳＴ１１−Ｓ／ＮＩＲまたはＷＳＴ１１−Ｄ／ＮＩＲ処理への内皮および角膜実質細胞の応答
ＷＳＴ１１および化合物１〜７の生理食塩水またはデキストラン溶液とのインキュベーション、その後のＮＩＲ照射へのウサギ眼の内皮および角膜実質細胞の応答を試験した。これらの様々なバクテリオクロロフィル溶液の効果は、実質的に同一であった。ＷＳＴ１１での測定における詳細な結果が、本明細書に提供される。
【０１６３】
１匹のウサギは、生理食塩水中のＷＳＴ１１（ＷＳＴ１１−Ｓ、２０分間インキュベーション、７５５ｎｍで３０分間照射）での処理を受けた。６匹のウサギは、上述（インビボ研究の項）のように、ＷＳＴ１１−Ｄ（ｎ＝４、２０分間インキュベーション、７５５ｎｍで３０分間照射）、またはＲＦ−Ｄ（ｎ＝２、３０分間インキュベーション、３７０ｎｍで３０分間照射）での処理を受けた。対側眼を対照として用いた。
【０１６４】
ＷＳＴ１１−Ｓ／ＮＩＲ処理の２日後の角膜の組織学的試験は、著しい浮腫（８９０μｍまで膨張した角膜）、および間質にわたる角膜実質細胞数の減少を示し、前半分においてより顕著であった（図１Ｂを参照のこと）。角膜実質細胞または角膜実質細胞残屑を含有するハチの巣様のラクナ水和パターンが存在した。しかしながら、内皮細胞層は無傷であるように見え、対照との違いはなかった（図１１Ａ）。処理物と対照（Ｐ＝０．４７）との間の内皮数に統計的な差異はなかった。対照的に、ＷＳＴ１１−Ｄで処理した角膜は、最小限の角膜浮腫、中央領域における上皮の不在、および間質の外側半分に制限された角膜実質細胞の数の統計的に著しい減少（対照において１０６０±２１０個の細胞／ｍｍ２と比較して、処理した角膜において４８１±１２１個の細胞／ｍｍ２、Ｐ０．０００１未満）を示した（図１１Ｃ）。対照と比較して、内皮細胞への損傷の証拠は、生体染色後（データ示されず）およびＨ＆Ｅ染色後（図１１Ａ）の両方ともに見られなかった。処理の１週間後、組織学的切片は、前間質の２５０μｍまでの収縮（対照試料のホルムアルデヒド固定後に生じた間質の３４０μｍまでの圧縮に加えて）、上皮が治癒したが、内皮に損傷がなかった間質の前方３分の１（８０μｍ）における角膜実質細胞の喪失を示した（図１１Ｄ）。ＷＳＴ１１−Ｄ／ＮＩＲ処理の２日後の網膜のＨ＆Ｅ染色は、対照と比較して、いかなる形態学的変化も示さなかった（データ示されず）。
【０１６５】
ペルオキシダーゼベースの末端デオキシリボヌクレオチジルトランスフェラーゼ媒介ｄＵＴＰ−ジゴキシゲニンニックおよび標識化（ＴＵＮＥＬ）アッセイを用いて、アポトーシスを試験した。手術の１日後に、図１２Ｂに示されるように、ＴＵＮＥＬ陽性の角膜実質細胞が、処理した角膜の前間質の外側半分において検出された。ＴＵＮＥＬの染色は後間質では観察されず、内皮細胞がなく、間質中央に浮腫があり、対照角膜でも同様であった（図１２Ａ）。
【０１６６】
実施例６．ウサギ角膜の蛍光分光
８匹のウサギの眼を死後摘出し、角膜内皮細胞を脱上皮化した。３個の眼をＳＷＴ１１−Ｓ溶液に浸し、３個の眼をＳＷＴ１１−Ｄ溶液に３０分間浸し、その後、ＮＩＲ照射した。２個の眼をＲＦ−Ｄ溶液で３０分間処理し、その後、ＵＶＡ照射した。対側眼を対照とした。角膜の切片の蛍光を、物質および方法に記載されるように測定した。
【０１６７】
ＲＦ−Ｄ／ＵＶＡで処理した角膜の３２０ｎｍでの励起は、４０５ｎｍで明確な発光シグナルを生成し、これは、恐らく、架橋の既知の特徴であるジチロシンの蛍光（Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）に相当した。そのような発光は、図１３に示されるように、ＷＳＴ１１−Ｓ／ＮＩＲおよびＷＳＴ１１−Ｄ／ＮＩＲで処理した角膜および対照においては存在しなかった。任意の他の波長での励起は、角膜発光特性にいかなる著しい変化ももたらさなかった。
【０１６８】
実施例７．局所適用したＷＳＴ１１−Ｄの体内吸収のパラジウムに基づく測定
６匹のウサギを物質および方法に記載されるように麻酔した。脱上皮化後、それぞれのウサギの１個の角膜を、アイキャップを用いて、２．５ｍｇ／ｍＬのＷＳＴ１１−Ｄ（ｎ＝３）および１０ｍｇ／ｍＬのＷＳＴ１１−Ｄ（ｎ＝３）で２０分間処理した。血液試料（約０．５ｍＬ）を、適用前（０時点）、ならびに適用開始後１０、２０、４０、および６０分時点で耳静脈から採取し、予め秤量した１．５ｍＬのポリエチレン試験管に設置し、秤量し、凍結乾燥させた。乾燥試料を硝酸で消化し、Ｐｄ濃度を、以前に説明されたように（Ｍａｚｏｒ  ｅｔ  ａｌ，２００５）、１組のＰｄ基準（Ｈｉｇｈ−ｐｕｒｉｔｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ，ＵＳＡ）を用いて、誘導結合プラズマ質量分析（ＩＣＰ−ＭＳ）によって決定した。
【０１６９】
ＷＳＴ１１−Ｄの局所適用中および局所適用後にウサギから採取された血液試料のＩＣＰ−ＭＳ測定は、すべての測定時点で処理した動物の血中への薬物の不透過の証拠として、いかなる著しいレベルのＰｄ＋２も検出することができなかった。
【０１７０】
実施例８．角膜表面のサーモグラフィック分析
３匹のウサギをＷＳＴ１１−Ｄで２０分間処理し、その後、３０分間ＮＩＲ照射（７５５ｎｍ、１０ｍＷ／ｃｍ２）した。角膜表面の温度測定を、ＷＳＴ１１−Ｄ／ＮＩＲ処理中に、０．０５℃の熱分解能、±１℃の温度精度、および１２０μｍの空間分解能を有するＩＲサーモカメラ（Ｔｈｅｒｍａｌ  ｉｍａｇｅｒ  ＩｎｆＲｅｃ  Ｒ３００、ＮＥＣ  Ａｖｉｏ  Ｉｎｆｒａｒｅｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を用いて行った。画像を、照射前、照射中７分間毎、および照射終了時に（最後数秒）記録した。選択したサーモグラフィック画像をＩｎｆＲｅＣ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  ＮＳ９５００  Ｌｉｔｅ（ＮＥＣ  Ａｖｉｏ  Ｉｎｆｒａｒｅｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）で処理した。
【０１７１】
Ｔ＝３２℃（角膜中央）からＴ＝３７．５℃（輪部周囲）までの一定した温度勾配を、処理前、処理中、および処理後に測定した。１℃未満の偏差が全手順を通して観察された（データ示されず）。
【０１７２】
実施例９．ウサギ角膜へのＷＳＴ１１の経上皮送達
薬物に対する角膜の透過性は、局所適用される眼科製剤の有効性を決定する主要因子であるため、臨床的に重要である。本発明の眼科製剤の経上皮透過を研究するために、ＮａＣｌを含有する塩化ベンザルコニウム溶液を含む既知の経上皮透過性を高める賦形剤の存在下でＳＷＴ１１の送達を評価した。
【０１７３】
２匹のウサギを麻酔し、以下のように処理した。
【０１７４】
それぞれのウサギの一方の眼において、上皮を除去し、角膜中央領域を、アイキャップを用いて、０．９％の塩化ナトリウム中のＷＳＴ１１の溶液２．５ｍｇ／ｍＬ（ｐＨ７．３）と２０分間インキュベートした。対側眼において、上皮を無傷のまま残し、角膜中央領域を、アイキャップを用いて、０．０２％の塩化ベンザルコニウムを含有する０．４４％の塩化ナトリウム中のＷＳＴ１１の溶液２．５ｍｇ／ｍＬ（ｐＨ７．３）と２０分間インキュベートし、その後、上皮を除去した。
【０１７５】
光増感剤とのインキュベーション後、動物を安楽死させ、直径８ｍｍの角膜ディスク中央を除去し、光増感剤の全体的な蓄積を、物質および方法に記載されるように、吸収スペクトルの記録および７５５ｎｍでのＯＤ測定によって推定した。
【０１７６】
脱上皮化した角膜におけるＷＳＴ１１の蓄積の結果、光学密度（ＯＤ）は、第１のウサギにおいて約０．８６、第２のウサギにおいて約０．７５になった。経上皮角膜蓄積の結果、ＯＤは、第１のウサギにおいて約０．１２（脱上皮化した角膜に蓄積したＷＳＴ１１の約１４％である）、第２のウサギにおいて約０．１６（脱上皮化した角膜に蓄積した光増感剤の約２１％のである）になった。
【０１７７】
したがって、上で適用された条件下で、経上皮角膜インキュベーションによって送達される光増感剤の量は、脱上皮化した角膜に蓄積した量の約６分の１であり得る。
【０１７８】
実施例１０．６５％のショ糖水溶液中のＷＳＴ１１の角膜における透過深度
６５％のショ糖水溶液は、２０％のデキストランＴ−５００と同様の粘度（約１７５ｃＰ）を有する。６５％のショ糖を含む製剤中の局所適用した光増感剤の透過深度をウサギ角膜において試験した。本明細書に記載される結果は、６５％のショ糖溶液中のＷＳＴ１１を対象に得られた。
【０１７９】
２匹のウサギを麻酔し、それらの角膜を脱上皮化、それぞれのウサギの一方の眼を、アイキャップを用いて、６５％のショ糖水溶液中のＷＳＴ１１の溶液２．５ｍｇ／ｍＬ（ｐＨ７．３）で１０分間処理し、対側眼を同様に３０分間処理した。その後、これらの動物を安楽死させ、直径８ｍｍの角膜ディスクの中央を除去し、低温凍結させ、物質および方法に記載されるように矢状薄片に切削した。
【０１８０】
これら両方の動物において、１０分間のインキュベーション後、光増感剤は、間質の外側約３分の１まで透過し、３０分間のインキュベーション後、間質の外側約半分まで透過した（データ示されず）。したがって、６５％のショ糖溶液は、光増感剤の角膜への透過を制限するために、デキストランと同程度に効果的に適用され得る。
【０１８１】
実施例１１．ウサギ強膜へのＷＳＴ１１の透過深度
ウサギ強膜へのＷＳＴ１１の透過深度を、物質および方法に記載の蛍光顕微鏡を用いて評価した。図１４に示される結果は、アイキャップを用いてエクスビボで適用され、かつ強膜組織に透過するＭｅｒｏｃｅｌ（登録商標）スポンジを用いてｉｎ−ｓｉｔｕで適用されたＷＳＴ１１を示す。
【０１８２】
実施例１２．ＷＳＴ１１−Ｓでエクスビボ処理し、かつ外部ＮＩＲ照射したウサギ強膜の生体力学的試験
摘出したウサギ眼の強膜の応力歪み試験を、物質および方法に記載されるようにＷＳＴ１１（２．５ｍｇ／ｍＬ）で処理した後に行った。光増感剤の含浸後、強膜を、図１７Ａに示されるように、湾曲したプラスチックまたは金属グライドに沿って走る平らな光ファイバーを用いて、処理した領域に直接レーザービームを適用して照射した（外部照射）。細長い強膜片を切削し、試験した。
【０１８３】
測定結果は、処理した強膜の硬度の著しい増加を示した。対照強膜の平均最大応力は、２．７７±０．９９ＭＰａであった。ＷＳＴ１１／ＮＩＲで処理した強膜の平均最大応力は、７．６±０．９９ＭＰａ（１７４％の増加）であった。対照強膜の平均ヤング率は、１５．２±７．５ＭＰａであった。ＷＳＴ１１／ＮＩＲで処理した強膜の平均ヤング率は、４５．６±３．９ＭＰａ（２００％の増加）であった。結果が図１５Ａ〜１５Ｂに示される。
【０１８４】
実施例１３．ＷＳＴ１１−Ｓでエクスビボ処理し、かつ眼球前区にわたってＮＩＲ照射したウサギ強膜の生体力学的試験
本発明者は、組織が７５５〜８２０ｎｍの照射に対して極めて透過性であるため、図１８Ａ〜１８Ｃに示される３鏡眼底レンズ装置を用いるか、または図１７Ｂに記載の装置を用いて倒像検眼鏡を通して角膜を照射するかのいずれかによって、角膜および眼球前区を通るＮＩＲ照射によって十分な照射を後部強膜に送ることが可能であるはずであると仮定した。
【０１８５】
３匹のウサギの６個の眼を摘出した。赤道までの眼球後部領域を、アイキャップを用いて、生理食塩水中のＷＳＴ１１の溶液２．５ｍｇ／ｍＬ（ｐＨ７．３）と２０分間インキュベートし、その後、ダイオードレーザー（７５５ｎｍ、０．５Ｗ）および３鏡眼底レンズ（図１８Ａ〜１８Ｃ）を用いて前角膜を通るＮＩＲ照射によって３０分間照射した。細長い強膜片を、物質および方法に記載されるように切削し、試験した。
【０１８６】
測定結果は、処理した強膜の硬度の増加を示した。対照強膜の平均最大応力は、４．６５±１．１５ＭＰａであった。ＷＳＴ１１／ＮＩＲで処理した角膜の平均最大応力は、６．５９±１．３２ＭＰａ（４２％の増加）であった。対照強膜の平均ヤング率は、２５．２５±５．３０ＭＰａであった。ＷＳＴ１１／ＮＩＲで処理した強膜の平均ヤング率は、３８．８３±６．８９ＭＰａ（５４％の増加）であった。結果が図１６Ａ〜１６Ｂに示される。
【０１８７】
実施例１４．前区を通る照射でのインビボ強膜硬化
網膜および眼窩毒性を避けながらインビボでの強膜硬化を、以下のように達成する。
【０１８８】
強膜への光増感剤（Ｂｃｈｌ誘導体）の含浸を、眼球鞘下グライドを４つの四分円の輪部結膜の孔を通して挿入することによって行う。グライドの遠位内側１０ｍｍは多孔性であり、試験化合物のリザーバを含有する。このリザーバは、グライドの外側に沿って走る管によって接続される。グライドを強膜に取り付けた状態で設置した後、管をシリンジまたはポンプに接続し、試験化合物リザーバを注入して強膜に含浸させる。増感剤の濃度および曝露時間を、上の実施例１１に記載されるように凍結した組織学的強膜切片の蛍光分光を用いて摘出されたウサギ眼のエクスビボ測定を介して先験的に最適化する。必要に応じて、デキストランまたはショ糖溶液を用いて透過深度を最適化する。
【０１８９】
網膜の安全性は、横断する光エネルギーに依存する。ＷＳＴ１１での血管標的ＰＤＴ前臨床および第２相臨床試験において、本発明者は、５０〜７０Ｊ（６００ｍＷ／ｃｍ２で８２〜１２０秒）での網膜の照射が安全であると証明されたことを示している。したがって、処理エネルギーを、網膜の最低罹患率が予想される５〜１２Ｊの範囲（１０〜２０ｍＷ／ｃｍ２で２０〜１０分間）に設定する。
【０１９０】
最適化パラメータを用いて、Ｂｃｈｌ−ＳまたはＢｃｈｌ−Ｄを上述のように適用し、その後、２０〜２５０ｍＷの範囲の最適化レーザー出力で７５５ｎｍの正面照射を適用して、眼後区で先験的な最適化光強度を与える。Ｇｏｌｄｍａｎｎ３鏡眼底レンズを通るＨｅ−Ｎｅ照準光を有するＮＩＲレーザー、またはＨｅ−Ｎｅ照準光を有する倒像検眼鏡に取り付けられたＮＩＲレーザーを用いて照射を行う。処理の１ヶ月後、ウサギを安楽死させ、眼を摘出する。未処理の対側眼の一致した強膜と比較して、処理した眼の上および下強膜から摘出した細長い強膜片の歪み応力測定によって、処理が成功したかを評価する。
【０１９１】
実施例１５．前区を通る照射でのインビボ強膜硬化
網膜および眼窩毒性を避けながらインビボでの強膜硬化を実施例１４に記載されるように達成するが、多孔性グライドを用いて光増感剤を送達する代わりに、輪部結膜の孔を通して挿入されたグライドに取り付けられたＭｅｒｏｃｅｌ（登録商標）スポンジを介して光増感剤を強膜に送達する。
【０１９２】
実施例１６．前区を通る照射でのインビボ強膜硬化
インビボでの強膜硬化を実施例１４に記載されるように達成するが、（図１７Ｂ）に図解されるように輪部結膜の孔を通して光ファイバーに接続されるグライドの挿入によって照射を外的に適用する。このグライドを、強膜に向かって指向される光を散光するように設計し、これは、その眼窩側面において遮光性である。照射グライドをＮＩＲレーザーまたはＬＥＤ源に接続して、ＮＩＲ光を送達する。含浸グライドおよび照射グライドの両方をミリメートル定規で印をつけて、挿入深度を検証する。照射グライドの位置を、眼底検査または眼底造影検査によって光送達中に監視することができる。
【０１９３】
インビボ強膜硬化に用いられる代替のグライドは、薬物送達および照射送達の両方を対象に複合型ユニットとして設計されたグライドである。
参考文献
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【図１】
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【図２】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｅ】
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【図４Ｆ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１４】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図３】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｇ】
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【図４Ｈ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１３】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【国際調査報告】
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