(57)【要約】【課題】  【解決手段】  本発明は、化学式１の構造を有する２−アミノチアゾール誘導体の調製、およびアルツハイマー病（ＡＤ）へのその治療効果、移植拒絶反応、自己免疫疾患、虚血再かん流傷害、慢性炎症反応、内毒素血症および他の疾患に対するその治療効果に関する。【選択図】図１
2014506897.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の化学式により表わされる２−アミノチアゾール誘導体であって、
2014506897.tif 000035
式中、Ｒ１およびＲ２は夫々シクロアルキルを表わし、或いは、Ｒ１は置換芳香族を、またＲ２はＨ、Ｃ１−Ｃ１１アルキル、ＣＨ２Ｐｈ（ベンジル）、またはＣ１−Ｃ１１アルキルを含むメチルエーテル（−ＣＨ２ＯＲ）を表わし、
Ｒ３はアミノ基であり、
Ｘはカルボニル
2014506897.tif 000036
またはメチレン
2014506897.tif 000037
を表わし、
ｎ＝０〜５である
２−アミノチアゾール誘導体。
【請求項２】
前記シクロアルキルは、３から７の環を含む環式炭化水素である、請求項１の２−アミノチアゾール誘導体。
【請求項３】
前記置換芳香族は置換ベンゼン環（ａ）、置換ピリジン（ｂ）、置換ピロール（ｃ）、置換インドール（ｄ）、または置換イミダゾール（ｅ）であり、
2014506897.tif 000038
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2014506897.tif 000041
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Ｒ４はＣ１−Ｃ１１炭化水素アルキル、３から７の環を含む環式炭化水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキルを含むアルコキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルキルを含むカルボキシレート基、またはハロゲン基（−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＣＮ）であり、
Ｒ４の置換位置は、パラ位、オルト位、またはメタ位である
請求項１の２−アミノチアゾール誘導体。
【請求項４】
Ｘがカルボニルを表わす時には、アミノ基（Ｒ３）を含む基は、ピペラジン誘導体（ｆ）、ピペリジン誘導体（ｇ）、アピロリジン誘導体（ｈ）、ピリジン（ｉ）、またはアミノ誘導体（ｊ）であり、
2014506897.tif 000043
2014506897.tif 000044
2014506897.tif 000045
2014506897.tif 000046
2014506897.tif 000047
Ｒ５は置換ベンゼン環（ａ）、置換ピリジン（ｂ）または置換ピロール（ｃ）であり、
Ａｒは、−ベンジルまたは３−ピリジルメチルである
請求項１の２−アミノチアゾール誘導体。
【請求項５】
Ｘがメチレンを表わす時には、アミノ基（Ｒ５）を含む基は、ピリジン（ｉ）、３−インドール、または４−イミダゾールであり、ｎ＝０である、請求項１の２−アミノチアゾール誘導体。
【請求項６】
請求項１の２−アミノチアゾール誘導体の調製方法であって、
ジエタノールアミンのヒドロキシラジカルをハロゲンと置換して、ビス（２−ジクロロエチル）アミン塩酸塩を生成する工程と、
ビス（２−ジクロロエチル）アミン塩酸塩と置換芳香族アミンを、マイクロ波の存在下で、または一般的な反応条件で反応させて、置換芳香族ピペラジン（中間体１）を生成する工程と、
置換メチル芳香族ケトンおよび置換チオ尿素をヨウ素分子の存在中で加熱して反応させ、２−アミノチアゾール誘導体（中間体２）を生成する工程と、
２−アミノチアゾール誘導体（中間体２）をハロゲン化アシルと置換して、ω−ハロゲン化アミド誘導体（中間体３）を生成する工程と、
中間体（１）を中間体（３）と反応させて、複素環を含む２−アミノチアゾール誘導体（化学式１）を生成する工程、或いは、中間体（３）をベンジルアミンと反応させて生成物を生成し、前記生成物を対応するハロゲン化炭化水素と反応させて、一般的なアミノ酸を含む２−アミノチアゾール誘導体（化学式１）を生成する工程、或いは、中間体（２）およびアルカリにより触媒された置換アルデヒド化合物の間に濃縮反応を行い、メチレン基を含む２−アミノチアゾール誘導体（化学式１）を生成する工程
を含む方法。
【請求項７】
アルツハイマー病および他の神経変性疾患の治療のための薬剤を調製するための請求項１乃至５のいずれかの２−アミノチアゾール誘導体の使用。
【請求項８】
酸化ストレスを含む要因により誘発される神経変性アポトーシスに関連する疾患を治療するために、神経細胞保護剤が使用される、神経細胞保護剤を調製するための請求項１乃至５のいずれかの２−アミノチアゾール誘導体の使用。
【請求項９】
臓器移植後の拒絶反応を低減させるために、ＭｙＤ８８阻害剤が使用される、ＭｙＤ８８阻害剤を調製するための請求項１乃至５のいずれかの２−アミノチアゾール誘導体の使用。
【請求項１０】
自己免疫疾患およびＩ型糖尿病を治療するために免疫調製剤が使用される、免疫調製剤を調製するための請求項１乃至５のいずれかの２−アミノチアゾール誘導体の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化学式（１）により表わされる２−アミノチアゾール誘導体、その調合方法、および酸化ストレスにより生じる神経細胞のアポトーシスを抑止するために、アセチルコリンエステラーゼを阻害することによりアルツハイマー病（ＡＤ）を治療する際のその利用、並びに免疫抑制効果を得るために、骨髄分化タンパク質（ＭＹＤ−８８）を阻害することにより、抗移植拒絶反応、抗自己免疫疾患、抗虚血再かん流傷害、抗慢性炎症、および抗内毒素血症を治療する際のその利用に関する。
【化１】
2014506897.tif 000003
【背景技術】
【０００２】
２−アミノチアゾール環を含む化合物は、抗バクテリア、抗炎症、および抗アレルギーで幅広く利用されており、ドーパミン作動薬、アンジオタンシン受容体拮抗薬などの薬剤にみられる。しかし、神経変性疾患および免疫抑制剤への２−アミノチアゾール環を含む化合物の使用は、殆ど報告されていない。
【０００３】
ＡＤは、初代神経細胞の変性に基づく神経変性疾患である。６０歳よりも高齢の患者の７％以上がＡＤに苦しむのに加えて、より若い人たちもＡＤに罹る傾向にある。従って、ＡＤや他の神経変性疾患を治療するために、効果的な薬剤を開発することは、医学の分野での研究ホットスポットとなっている。
【０００４】
ＡＤには複数の要因がある。コリンアセチルトランスフェラーゼの低活性化およびコリン取り込み能力の低下は、神経突起の移動機能障害を引き起こし、また、ニューロンまたはグリア細胞は十分な栄養素を供給することができないので、皮下ニューロンシステムの機能低下を生じさせる。グルタミン酸受容体の過活動、高レベルの反応性酸素（酸化ストレス）、炎症およびウィルス感染は、代謝経路の機能を損ない、またミトコンドリアのエネルギ生成低下をもたらす。β−セクレターゼおよびγ−セクレターゼが存在する状態では、β−アミロイド前駆体タンパク（ＡＰＰ）がβ−アミロイド（Ａβ）に変換され、アミロイド凝集に至る。タウタンパク質の異常なリン酸化反応は神経線維のもつれや、核およびミトコンドリアでのＤＮＡおよびＲＮＡの突然変異をもたらす。
【０００５】
現在のところ、ＡＤの治療は、疾患の原因と症状の制御に基づくものであり、患者の認識能力の改善や皮下ニューロンシステムの機能低下の減衰を含む。例えば、アセチルコリンをインビボで増加させて、認識能力を改善するために、コリン作動性受容体拮抗薬またはアセチルコリンエステラーゼ阻害剤（アリセプト、タクリン、ドネペジルなど）の使用や、フリーラジカルを低下させると共に、ニューロンやシナプスの機能低下を衰弱させるために細胞内カルシウム過負荷を防ぐことが可能なカルシウム拮抗薬ニモジピン（ＶＥやセレジリンなど）の使用がある。これらの手段は、初期のＡＤの治療では幾分の改善がある。しかし、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤および他の薬剤のいずれでも、理想的な臨床効果を得られていない。
【０００６】
複数の調節因子が神経細胞アポトーシスを誘導するが、神経細胞の急速な機能低下を阻止する薬剤の原理としては、細胞アポトーシスの開始を阻止するために細胞アポトーシス信号を除去することか、或いは細胞アポトーシスの開始後にカスケード反応を阻止することのいずれかに注目するものである。真核細胞に存在する非ヒストン染色体タンパク質ポリ（ＡＤＰ−リボーゼ）ポリ−メラーゼ（ＰＡＲＰ）は、ＤＮＡの修復やゲノム安定性の維持、調節タンパク質発現レベルへの転写調節、複製および分化への影響を含む細胞プロセスの調節を可能にする（非特許文献１）。ＰＡＲＰの阻害は、炎症から臓器への影響を減少させるだけでなく、ＮＭＤＡおよびＫＡの神経興奮毒素を低下させることも可能にする（非特許文献２）。従って、ＰＡＲＰの阻害は神経細胞を保護するので、神経変性疾患、神経炎症および脳虚血の治療において広く注目されている。
【０００７】
ＡＤは多因子性疾患の一種であり、一つをターゲットにした薬剤によって治療できない。薬剤を組み合わせて治療に使用され、また複数をターゲットにした薬剤の効果は注目されている（非特許文献３）。これまで、ラドスチギルやリバスチグミンなどの阻害剤は、ＡＣｈｅや脳ＭＡＯ阻害剤に同時に作用し得るものであり、薬剤の組み合わせの原則に従い調製されている。
【０００８】
加えて、内因性および外因性の危険因子が、自然免疫系のＴＬＲ各々を刺激し、鍵分子骨髄分化タンパク質８８（ＭｙＤ８８）による信号伝達を刺激し、且つＮＦ−Ｂおよび対応する免疫応答を活性化する（非特許文献４）。従って、ＭｙＤ８８は自然免疫系の鍵分子である。ＭｙＤ８８を阻害することは、自然免疫系の主要な反応を阻害することであり、対応する免疫抑制効果を達成することである。ＭｙＤ８８は新しい免疫抑制ターゲット自体であり、利用可能なＭｙＤ８８阻害剤は、主にペプチド模倣化合物または複雑な構造の小分子であるので、ＭｙＤ８８阻害剤の製剤は困難であると共に製造費用が高く、病院での治療では実用化が困難である（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際出願公開第２００６／０６７０９１号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Nguewa, P.A.; Fuertes, M. A.; Valladares, B.; Alonso, C.;Perez, J. M. Poly (ADP-ribose) polymerases: Homology, structural domains andfunctions. Novel Therapeutical Applications [J]. Prog. Biophys. Mol. Biol., 88,143-172 (2005)
【非特許文献２】Kauppinen,TM.; Swanson, RA. The role of poly (ADP-ribose) polymerase-1 in CNS disease.Neuroscience. 145, 1267-1272 (2007)
【非特許文献３】Bolognesi ML, Minarini An, Tumiatti V, Melchiorre C;Mini-Reviews in Medicinal Chemistry (2006), 6 (11), 1269-1274
【非特許文献４】Maria Loiarro, ClaudioSette, Grazia Gallo, J BIO CHEM 280, 16 (2005) 15809-15814
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
コンピュータを利用した医薬品設計および医薬品合成を含む態様に基づき、特にＡＤの原因の研究、関連する医薬品設計、および免疫抑制剤に関して、本発明者は、多因子性神経変性疾患に注目し、神経変性疾患に関連するターゲットのファーマコフォアモデルを確立し、対応する新構造化合物の設計および合成を実現する複数ターゲット薬剤の設計を提案した。２−アミノチアゾールの構造の良好な安定性を考慮すると、２−アミノチアゾールのベース構造は神経細胞保護剤、アセチルコリンエストラーゼ阻害剤、および免疫抑制剤に導入されるので、薬理的活性が改善し、薬物動態特性が明らかに改善する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
化学式１により表わされる本発明の２−アミノチアゾール誘導体は、アセチルコリンエステラーゼおよびアルツハイマー病（ＡＤ）に関連するＰＡＲＰ−１に明らかに影響を及ぼし、その模擬予測活性は臨床薬の場合を越えている。加えて、本発明の２−アミノチアゾール誘導体は、２つのターゲットに同時に作用するので、ＡＤの治療に適用が可能である。一方、化学式１により表わされるアミノチアゾール誘導体は、特異結合を形成するために、ＭｙＤ８８分子の鍵活性部位と適合が可能であるので、ＭｙＤ８８の信号伝達を阻害する。アミノチアゾール誘導体は、抗移植拒絶反応、抗自己免疫疾患、抗虚血再かん流傷害、抗慢性炎症、抗内毒素血症の治療に適用され得る。本発明は、そのような小分子の適用を開発し、内因性免疫疾患を治療するための新薬を見出した。
【００１３】
本発明は更に、新規の２−アミノチアゾール誘導体を提供する。
【００１４】
本発明はまた、２−アミノチアゾール誘導体およびその中間体の製剤方法を提供する。
【００１５】
本発明は更に、ＡＤや他の神経変性疾患などの関連する疾患の治療において、アセチルコリンエステラーゼおよびＰＡＲＰ−１を阻害する２−アミノチアゾール誘導体の使用を提供する。
【００１６】
本発明は更に、抗移植拒絶反応、抗自己免疫疾患、抗虚血再かん流傷害、抗慢性炎症、および抗内毒素血症の治療において、免疫抑制効果を発揮するために、骨髄分化タンパク質（ＭＹＤ−８８）を阻害する２−アミノチアゾール誘導体の使用を提供する。
【００１７】
２−アミノチアゾール誘導体は化学式１により表わされる。
【化１】
2014506897.tif 000004
【００１８】
式中、Ｒ１は置換芳香族基を表わし、Ｒ２はＨを表わす。或いは、Ｒ１およびＲ２は−ＣＨ２（ＣＨ２）２ＣＨ２−を表わす。Ｒ３はアミノ基を含む基である。Ｘはカルボニル
2014506897.tif 000005
またはメチレン
2014506897.tif 000006
であり、ｎ＝０〜５である。
【００１９】
２−アミノチアゾール誘導体の合成は、中間体（１）、中間体（２）および中間体（３）の合成に基づき、以下の工程を含む。ジエタノールアミンのヒドロキシラジカルをハロゲント置換して、ビス（２−ジクロロエチル）アミン塩酸塩を生成する工程。ビス（２−ジクロロエチル）アミン塩酸塩および置換芳香族アミンをマイクロ波の存在中で、或いは一般的な反応条件で反応させて、置換芳香族ピペラジン（中間体１）を生成する工程。置換メチル芳香属ケトンおよび置換チオ尿酸を、ヨウ素分子の存在中で加熱し反応させて、２−アミノチアゾール誘導体（中間体２）を生成する工程。２−アミノチアゾール誘導体（中間体２）をハロゲン化アシルと置換して、ω−ハロゲン化アミド誘導体（中間体３）を生成する工程。対応する中間体のアルキル化反応により、目的化合物を得る工程。例えば、中間体（１）を中間体（３）と反応させると、複素環を含む２−アミノチアゾール誘導体（化学式１）を生成する。または、中間体（３）をベンジルアミンと反応させて生成物を生成し、その生成物を対応するハロゲン化炭化水素と反応させて、一般的なアミノ酸を含む２−アミノチアゾール誘導体（化学式１）を生成する。または、中間体（２）およびアルカリにより触媒された置換アルデヒド化合物の間に濃縮反応を行い、メチレン基を含む２−アミノチアゾール誘導体（化学式１）を生成する。
【００２０】
１．中間体の合成
【化２】
2014506897.tif 000007
【化３】
2014506897.tif 000008
【００２１】
２．目的化合物の合成
【００２２】
Ｘがカルボニルを表わすならば、目的化合物に対応する合成方法は以下のとおりである。
【００２３】
方法１
【化４】
2014506897.tif 000009
【００２４】
方法２
【化５】
2014506897.tif 000010
【００２５】
方法３
【化６】
2014506897.tif 000011
【００２６】
方法４
【化７】
2014506897.tif 000012
【００２７】
Ｘがメチレンを表わすならば、目的化合物に対応する合成方法は以下のとおりである。
【化８】
2014506897.tif 000013
【００２８】
また、本発明はＰＡＲＰ１受容体、ＡｃｈＥおよびＭＹＤ８８受容体をターゲットとして使用することに基づくことから、本発明の化合物は、ＰＡＲＰ１受容体、ＡｃｈＥ、およびＭＹＤ８８受容体に関連するターゲットポイントにより生じる疾患に効果がある。
【００２９】
化学式１により表わす２−アミノチアゾール誘導体は、適切な分子量と安定的な構造を有すると共に、細胞膜を貫通することができる。２−アミノチアゾール誘導体の起こり得る副作用は小さい。
【００３０】
化学式１により表わされる２−アミノチアゾール誘導体は、初期のＡＤや他の神経変性疾患の治療において、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤として使用される。
【００３１】
化学式１により表わされる２−アミノチアゾール誘導体は、酸化ストレスを含む要因により誘発される神経細胞アポトーシスに関連する疾患を治療する際に、神経細胞保護剤として使用される。
【００３２】
化学式１により表わされる２−アミノチアゾール誘導体は、臓器移植後の拒絶反応を減少させるために、ＭｙＤ８８阻害剤として使用される。
【００３３】
化学式１により表わされる２−アミノチアゾール誘導体は、自己免疫疾患および慢性炎症の治療において、免疫調製剤として使用される。
【００３４】
化学式１により表わされる２−アミノチアゾール誘導体は、虚血再かん流傷害の治療において、免疫調節剤として使用される。
【００３５】
本発明の効果は以下のとおりである。本発明は、化学式１により表わす一群の２−アミノチアゾール誘導体を開発し、アセチルコリンエステラーゼおよびＰＡＲＰ−１の阻害、および酸化ストレスから生じる神経細胞アポトーシスの保護に効果があることから、化学式１により表わす２−アミノチアゾール誘導体は、初期のアルツハイマー病（ＡＤ）の治療に効果的な薬剤となり得る。ＭｙＤ８８の特異的阻害剤として使用される２−アミノチアゾール誘導体の実験によれば、本発明の２−アミノチアゾール誘導体は、臓器移植後の拒絶の治療、免疫寛容の誘導、様々な炎症反応の治療、および虚血再かん流傷害の予防に明らかに効果がある。
【００３６】
本発明の２−アミノチアゾール誘導体は、安定的な構造と良好な抗酸化性質を有すると共に、薬理的活性および薬物動態に関する特性の改善に役立つ。従来のアセチルコリンエステラーゼ阻害剤、ＰＡＲＰ−１阻害剤、ＭｙＤ８８阻害剤と比べて、本発明の化学式１により表わす２−アミノチアゾール誘導体の製剤では、ジエタノールアミン、ヨウ素分子、芳香族ケトン、およびチオ尿素などの低コストの原料、簡易な工程、分離および浄化が簡単な生成物を使用する。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】本発明で提供されるアミノチアゾール誘導体のＡｃｈＥへの阻害作用を示す図。
【図２】本発明で提供されるアミノチアゾール誘導体のＰＡＲＰ−１への阻害作用を示す図。
【図３】本発明で提供されるアミノチアゾール誘導体の過酸化水素に対する細胞保護能力（細胞生存率の増加）を示す図。
【図４】本発明で提供されるアミノチアゾール誘導体の塩化コバルトに対する細胞保護能力（細胞生存率の増加）を示す図。
【図５】塩化コバルトにより破壊された後のＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を示す図。
【図６】本発明で提供されるアミノチアゾール誘導体が加えられた塩化コバルト破壊ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を示す図。
【図７】ＬＰＳおよびＣｐＧへのアミノアチアゾール誘導体の阻害により生じる共刺激分子ＣＤ８０の増加を示す図。
【図８】ＬＰＳおよびＣｐＧへのアミノアチアゾール誘導体の阻害により生じる共刺激分子ＣＤ８０の増加を示す図。
【図９】ＬＰＳおよびＣｐＧへのアミノアチアゾール誘導体の阻害により生じる共刺激分子ＣＤ８０の増加を示す図。
【図１０】ＬＰＳおよびＣｐＧへのアミノアチアゾール誘導体の阻害により生じる共刺激分子ＣＤ８０の増加を示す図。
【図１１】アミノチアゾール誘導体による糖尿病の発生減少を示す曲線グラフ。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
添付の図１は本発明で提供されるアミノチアゾール誘導体のアセチルコリンエステラーゼ（ＡｃｈＥ）への阻害効果の試験結果を示すブロック図である。ＡｃｈＥはＳＤラットから回収された。
【００３９】
添付の図２は、本発明で提供されるアミノチアゾール誘導体（１μＭの濃度）のポリＡＤＰ−リボーゼ・ポリメラーゼ−１（ＰＡＲＰ−１）への阻害効果の試験結果を示すブロック図である。
【００４０】
添付の図３は、本発明で提供されるアミノチアゾール誘導体の過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）の酸化ストレスにより誘導される神経細胞アポトーシスに対する細胞保護能力を示すブロック図である。細胞は、人体からのドーパミン作動性神経芽細胞腫腫瘍細胞ＳＨ−ＳＹ５Ｙである。
【００４１】
添付の図４は、本発明で提供されるアミノチアゾール誘導体の塩化コバルト（ＣｏＣｌ２）誘導低酸素障害から生じる神経細胞アポトーシスに対する細胞保護能力を示すブロック図である。細胞は、人体からのドーパミン作動性神経芽細胞腫腫瘍細胞Ｈ−ＳＹ５Ｙである。
【００４２】
添付の図５は、塩化コバルト（ＣｏＣｌ２）誘導低酸素障害により破壊された後のヒトドーパミン作動性神経芽細胞腫腫瘍細胞ＳＨ−ＳＹ５Ｙの写真である。
【００４３】
添付の図６は、本発明で提供されるアミノチアゾール誘導体が加えられた、塩化コバルト（ＣｏＣｌ２）誘導低酸素障害破壊ヒトドーパミン作動性神経芽細胞腫腫瘍細胞ＳＨ−ＳＹ５Ｙを示す写真である。
【００４４】
添付の図７は、一回分のアミノチアゾール誘導体とＴ細胞活性阻害の関係を示す。
【００４５】
添付の図８は、ＬＰＳ、ＣＰＳ、心筋組織均質化溶媒刺激ＤＣについて、一回分のアミノチアゾール誘導体とＣＤ８０への発現阻害の関係を示す。
【００４６】
添付の図９は、一回分のアミノチアゾール誘導体とＣＤ８０表面へのＤＣ発現阻害の関係を示す。
【００４７】
添付の図１０は、一回分のアミノチアゾール誘導体とＣＤ８０表面へのマクロファージ発現阻害の関係を示す。
【００４８】
添付の図１１は、アミノチアゾール誘導体が投与された実験グループ、即ちＭｙＤ８８ＫＯ  ＮＯＤマウス、ＭｙＤ８８ＫＯ／＋ＮＯＤマウス、およびＮＯＤマウスを示す。
【００４９】
１．化合物
【００５０】
本発明で言及される２−アミノチアゾール誘導体（Ｉ）は、化学式１により表わされる。
【化１】
2014506897.tif 000014
【００５１】
Ｒ１およびＲ２は夫々シクロアルキルであり、或いは、Ｒ１は置換アミノ基を表わすと共に、Ｒ２はＨ，Ｃ１〜Ｃ１１アルキル、−ＣＨ２Ｐｈ（ベンジル）、またはＣ１−Ｃ１１アルキルを含むメチルエーテル（−ＣＨ２ＯＲ）を表わし、Ｒ３はアミノ基を含む基である。Ｘはカルボニル
2014506897.tif 000015
またはメチレン
2014506897.tif 000016
を表わし、ｎ＝０〜５である。
【００５２】
Ｒ１およびＲ２は、３から７の環を含む環式炭化水素を含み、或いは、Ｒ２がアルキル（Ｈ，−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２Ｐｈ（ベンジル）、−ＣＨ２ＯＲを含む）である時に、Ｒ１により表わされる置換芳香族は置換ベンゼン環（ａ）、置換ピリジン（ｂ）、置換ピロール（ｃ）、置換インドール（ｄ）、置換イミダゾール（ｅ）である。
【化９】
2014506897.tif 000017
【化１０】
2014506897.tif 000018
【化１１】
2014506897.tif 000019
【化１２】
2014506897.tif 000020
【化１３】
2014506897.tif 000021
【００５３】
Ｒ４はＣ１−Ｃ１１炭化水素アルキル、３から７の環を含む環式炭化水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキルを含むアルコキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルキルを含むカルボキシレート基、ハロゲン基（−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＣＮ）を表わす。
【００５４】
Ｒ４の置換位置は、パラ位、オルト位、またはメタ位である。
【００５５】
化学式１のＸがカルボニルを表わす時には、アミノ基（Ｒ３）を含む基は、ピペラジン誘導体（ｆ）、ピペリジン誘導体（ｇ）、アピロリジン誘導体（ｈ）、ピリジン（ｉ）、アミノ誘導体（ｊ）である。
【化１４】
2014506897.tif 000022
【化１５】
2014506897.tif 000023
【化１６】
2014506897.tif 000024
【化１７】
2014506897.tif 000025
【化１８】
2014506897.tif 000026
【００５６】
式中、Ｒ５は置換ベンゼン環（ａ）、置換ピリジン（ｂ）または置換ピロール（ｃ）である。
【００５７】
Ａｒは、−ベンジルまたは３−ピリジルメチルである。
【００５８】
化学式１のＸがメチレンを表わす時には、アミノ酸（Ｒ５）を含む基は、ピリジン（ｉ）、３−インドール、または４−イミダゾールであり、ｎ＝０である。
【００５９】
２．化合物の合成
【００６０】
化学式１により表わされる２−アミノチアゾール誘導体の合成は、中間体および目的化合物の合成を含む。
【００６１】
中間体の合成
【００６２】
置換フェニルピペラジン（中間体１）の調製は、ジエタノールアミンのヒドロキシラジカルをハロゲンと置換して、ビス（２−ジクロロエチル）アミン塩酸塩を生成する工程と、ビス（２−ジクロロエチル）アミン塩酸塩と置換芳香族アミンの間で環化を行い、置換フェニルピペラジンを生成する工程を含む。調製では、マイクロ波触媒合成または通常の合成を利用する。
【化１９】
2014506897.tif 000027
【００６３】
１）マイクロ波触媒合成は、以下の工程を含む。ビス（２−ジクロロエチル）アミン塩酸塩と置換アニリン（１対１．２のモル比）をｎ−ブタノールに加えて混合物を形成する工程と、混合物を均一に撹拌する工程と、混合物を１９５ｗの出力のマイクロ波放射により２〜８分間処理する工程と、混合物を冷却して一定量の粉末状無水炭酸ナトリウムを加える工程と、マイクロ波放射を１５〜２０分間続ける工程と、高温の混合物をろ過する工程と、ろ液をそのままにして置換フェニルピペラジンを沈殿させる工程。
【００６４】
２）通常の合成は、ビス（２−ジクロロエチル）アミン塩酸塩をｎ−ブタノールに加えて混合物を形成する工程と、混合物を撹拌しつつ、置換アニリンを加える（置換アニリンとビス（２−ジクロロエチル）アミン塩酸塩のモル比は１対１．２）工程と、加熱工程と、還流工程と、撹拌して３０から６０時間反応させる工程と、得られた混合物を冷却して、一定量の粉末状無水炭酸ナトリウムを加える工程と、還流および撹拌を続けて、４８〜１５０時間反応させる工程と、ＴＬＣモニタを使用して反応の完了を確認する工程である。後続の処理は前記のものと同じである。
【００６５】
４，５−置換−２−アミノチアゾール（中間体２）の調製
【００６６】
以下の工程を含む。置換メチル芳香族ケトンおよび置換チオ尿素をヨウ素分子の存在中で加熱して反応させ、４，５−置換−２−アミノチアゾールを生成する工程。本調製では、マイクロ波触媒合成または通常の合成を利用する。
【化２０】
2014506897.tif 000028
【００６７】
粉末状チオ尿素およびヨウ素を２対１のモル比で均一に混合して混合物を形成する工程と、置換ケトン誘導体を混合物に加えつつ撹拌する工程と、得られた混合物をマイクロ波および適切な出力状態で数分間反応させる工程と、少量のエーテルを反応混合物に加える工程と、ろ過工程と、エーテルにより沈殿物を洗浄して２−アミノチアゾールのヨウ化水素酸塩を生成する工程と、２−アミノチアゾールのヨウ化水素酸塩を高温のお湯に溶解させる工程と、計算された量の固形重炭酸ナトリウムを加えつつ撹拌して混合溶液を生成する工程と、混合溶液のｐＨ値を中和させる工程と、混合溶液をろ過する工程と、沈殿物を水で洗浄する工程と、生成物を乾燥させて粗２−アミノチアゾールを生成させる工程。
【００６８】
４，５−置換−２−アミノチアゾール−ω−ハロゲン化アミデ（中間体３）の調製は、以下の工程を含む。４，５−置換−２−アミノチアゾールをハロゲン化アシルと置換して、５−置換−２−アミノチアゾール−ω−ハロゲン化アミデを生成する工程。
【化２１】
2014506897.tif 000029
【００６９】
４，５−置換−２−アミノチアゾールを無水ＴＨＦに加える工程と、ハロゲン化アシル（塩化クロロアセチルなど、ハロゲン化アシルと４，５−置換−２−アミノチアゾールのモル比が１対１．２）を滴下させる工程と、得られた混合物を室温で撹拌して反応させる工程と、反応が完了するまで反応をＴＬＣで監視する工程と、試料をクロマトグラフィにより分離させる工程。
【００７０】
塩化クロロアセチルは、対応する４，５−置換−２−アミノチアゾール−Ｎ−クロロプロピオンアミドを生じさせるために、塩化アクリロイルと取り換えられてもよい。
【００７１】
目的化合物の合成
【００７２】
２−（４−置換ピペラジン−１−イル）−Ｎ−４，５−二置換チアゾール−２−アセトアミドの調製（方法１）は、以下の工程を含む。４，５−置換−２−アミノチアゾール−ω−ハロゲン化アミド（中間体３）と置換ピペラジン塩酸塩（中間体１）の間でアルキル化反応を行い、複素環を含む目的化合物（Ｉ）を生成する工程。
【化２２】
2014506897.tif 000030
【００７３】
４，５−置換−２−アミノチアゾール−ω−ハロゲン化アミド（中間体３）およびモル当量の置換ピペラジン塩酸塩（中間体１）をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解させる工程と、炭酸塩または有機塩基および対応する触媒をＤＭＦに加えて混合物を形成する工程と、混合物を５０から１００℃の温度で反応させて、反応が完了するまでＴＬＣにより反応を監視する工程と、水を得られた溶液に加えて処理を行い、有機溶媒により有機相を取り込み、有機相を水で洗浄し、乾燥させ、且つ有機相をクロマトグラフィにより分離する工程。  
【００７４】
３−（４−置換ピペラジン−１−イル）−Ｎ−４，５−置換チアゾール−２−プロパンアミドの調製（方法２）
【００７５】
４，５−置換−２−アミノチアゾール−Ｎ−アクリルアミドおよびモル当量の置換ピペラジン塩酸塩（中間体１）を関連する溶媒に加え、有機塩基を加え、且つ混合物を５０から１００℃の温度で反応させて、反応が完了するまでＴＬＣにより反応を監視する工程と、水を得られた溶液に加えて処理を行い、有機溶媒により有機相を取り込む工程と、有機相を水で洗浄し、乾燥させ、有機相をクロマトグラフィにより分離する工程。
【化２３】
2014506897.tif 000031
【００７６】
３−（Ｎ，Ｎ−置換アミノ）−Ｎ−４，５−置換チアゾール−２−アミドの調製（方法３）は、以下の工程を含む。４，５−置換−２−アミノチアゾール−ω−ハロゲン化アミドおよび２−アミノメチル誘導体を反応させ、生成物を対応するハロゲン化炭化水素と反応させて、一般的なアミノを含む目的化合物を生成する工程。或いは、４，５−置換２−アミノチアゾール−Ｎ−アクリルアミドと２−アミノメチル誘導体を付加反応させ、生成物をハロゲン化炭化水素により置換して、３−（−Ｎ，Ｎ−置換アミノ）−Ｎ−４，５−置換チアゾール−２−プロピオンアミドを生成する工程。
【化２４】
2014506897.tif 000032
または
【化２５】
2014506897.tif 000033
【００７７】
４，５−置換−２−アミノチアゾール−ω−ハロゲン化アミド（中間体３）およびモル当量の２−アミノメチル誘導体を関連する溶媒に溶解させ、有機塩基を加え、混合物を５０から１００℃の温度で反応させ、反応が完了するまでＴＬＣにより反応を監視する工程と、溶媒を減圧内で蒸発させ、ＤＭＦ、モル当量のハロゲン化炭化水素および対応するアルカリを混合物に加える工程と、得られた混合物を撹拌し５０から１１０℃の温度で反応させ、反応が完了するまで（４から１０時間）ＴＬＣにより反応を監視する工程と、水を得られた溶液に加えて処理を行い、有機溶媒により有機相を取り込み、有機相を水で洗浄し、乾燥させ、有機相をクロマトグラフィにより分離する工程。
【００７８】
アミノチアゾール誘導体（ＩＩ）の調製（方法４）は、以下の工程を含む。４，５−置換−２−アミノチアゾール（中間体２）と有機相により触媒された置換メタノールを凝縮反応させて、アミノチアゾール誘導体（ＩＩ）を生成する工程。本調製方法ではマイクロ波触媒合成または一般的な合成を利用する。
【化２６】
2014506897.tif 000034
【００７９】
３．処理計画および方法
【００８０】
処理に際して、２−アミノチアゾール誘導体（Ｉ）は、直接投与（注射、移植などの局所投与、または目的組織に局所的に塗布）や全身投与（注射投与および経口投与により）などの任意の適当な手段により、患者に提供される。静脈注射、皮下注射、分子内投与、眼内投与、腹腔内投与、筋肉注射、経口投与、皮内注射、経皮投与、気管内投与、脳内投与、頭蓋内投与、脊髄内投与、脳室内投与、髄腔内投与、嚢内投与、包内投与、および吸入により、化合物は非経口経路で特定の部位へ投与され、水溶性または生理学的相溶性懸濁液および水溶液の一部と組み合わされる。
【００８１】
本発明の２−アミノチアゾール誘導体（Ｉ）は、幾つかの神経変性疾患、例えば初期のアルツハイマー病（ＡＤ）、酸化ストレスにより生じる神経細胞の急速なアポトーシスに関連する疾患、自己免疫疾患および慢性炎症、虚血再かん流障害の治療、また移植後の拒絶反応の低減や移植寛容の誘導および維持の治療において適用され得る。薬剤は一回限りの投与或いは連続投与である。新化合物は独立して投与されても、また他の試薬と組み合わされてもよい。例えば、化合物は化合物治療である。新化合物は一定量の有効な新化合物を含む。新化合物の量は、病状に従い調節される。患者の体重、重症度、投与手段、および所定の材料からの薬剤師化合薬剤は、全て薬剤を化合する際に考慮される。
【００８２】
本発明の２−アミノチアゾール誘導体（Ｉ）は、任意の手段により、適当な薬物分子の形態で連続的或いは間欠的に投与できる。経口投与および腹腔内投与が適当な投与手段である。
【００８３】
４．実施例
【００８４】
本発明を更に例証するために、２−アミノチアゾール誘導体の詳細を説明した実施例を、以下に記載する。当然のことながら、以下の実施例は説明を目的としており、本発明の限定を意図するものではない。
【実施例１】
【００８５】
４−フェニル−２−アミノチアゾールの調製
【００８６】
７．６ｇ（０．１ｍｏｌ）のチア尿素、１２．７ｇ（０．０５ｍｏｌ）のヨウ素がすり潰され均一に混合された。６．０ｇ（０．０５ｍｏｌ）のアセトフェノンが加えられて均一に撹拌されて混合物が形成された。混合物は、１５０から２００Ｗの出力のマイクロ波反応器内において、２から３分間反応させられた。反応後、４０から５０ｍＬのエーテルが加えられた。得られた混合物は撹拌およびろ過されて、ろ過ケーキが生成された。ろ過ケーキは次に少量のエーテルで数回洗浄されて、第１淡黄色固体が生成された。第１淡黄色固体は８０℃の温度の１５０ｍＬの水に溶解させられて溶液が生成された。溶液は撹拌されつつ重炭酸ナトリウムの固体が加えられた。ｐＨ値は７から８の間に調節された。溶液は吸引ろ過され、水で数回洗浄した後に、５．５ｇ（０．０３１ｍｏｌ）の第２淡黄色固体が得られ、粗収率は６２．５％であった。第２淡黄色固体は無水エタノールにより再結晶化させられ、収率が３８．６％、融点（ｍｐ）が１５３から１５６℃の間である３．４ｇ（０．０１９ｍｏｌ）の第３淡黄色針状結晶が生成された。ＩＲ（ＫＢｒ，σ／ｃｍ−１）３４３５（ｓ），３２５３（ｍ，υ−ＮＨ２）；３１１３．５５（ｍ，チアゾール環υ−ＨＣ＝）；１５９９（Ｓ,υ−Ｃ＝Ｎ)；１５１７（Ｓ,ベンゼン環スケルトン)；１３３８（ｍ, υＣ−Ｎ；７６８．８（チアゾール環スケルトン）；７１６（δベンゼン環ベンド）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３,３００ＭＨｚ,δ/ｐｐｍ）７．７８（ｄ,Ｊ＝８Ｈｚ,２Ｈ, アリル−Ｈ）,７．４７（ｔ,Ｊ＝２７Ｈｚ，２Ｈ）,７．２８（ｔ,Ｊ＝１５Ｈｚ,１Ｈ,アリル−Ｈ）,６．７３（ｓ,１Ｈ,チアゾール−Ｈ）,５.１１（ｓ,２Ｈ,−ＮＨ２）。
【実施例２】
【００８７】
１−（４−メトキシフェニル）ピペラジンの調製
【００８８】
１）ビス（２−ジクロロエチル）ニコチン酸アミンの合成では、クロロホルムを使用してジエタノールアミンを希釈することにより、第１混合溶液が調製された。塩化スルホキシドをクロロホルムと混合させることにより、第２混合溶液が調製された。第２混合溶液が約０℃の温度まで冷却され、塩化スルホキシドとジエタノールアミンの分子比が１対４に制御された後、第１混合溶液が第２混合溶液に滴下されつつ撹拌された。その後、得られた混合物は、２から５時間撹拌されて反応させられた。次に温度が３０から７０℃の間に上げられ、混合物はその温度で２時間反応させられた。反応後、無水エタノールが加えられた。次に混合物は冷却および吸引ろ過させられて、固体が得られた。次に固体はエタノールおよびエーテルで夫々洗浄され、乾燥させられて、収率９７．８％および融点２０５．１〜２０７．０℃のビス（２−ジクロロエチル）ニコチン酸アミンが得られた。
【００８９】
２）４．３ｇ（２４ｍｍｏｌ）のビス（２−ジクロロエチル）ニコチン酸アミンおよび２．５ｇ（２０ｍｍｏｌ）の４−メトキシアニリン固体が５０ｍＬのｎ−ブタノールに加えられ、均一に撹拌されて混合物が形成された。次に混合物は、１９５Ｗの出力のマイクロ波照射により６分間処理され、冷却させられた。１．３ｇ（１２ｍｍｏｌ）の無水炭酸ナトリウム粉体が加えられ、新しい混合物は更に１９分間マイクロ波照射により処理され、ろ過されてろ過ケーキが生成された。ろ過ケーキは少量の高温のｎ−ブタノールにより洗浄された。ろ液は室温に冷却され、等しい容積の無水エタノールと均一に混合された。ろ過ケーキは無水エタノールおよびエーテル夫々で洗浄され、無水エタノール／エーテル（１対２）により再結晶化させられた。生成物は真空内で乾燥させられ、収率７６．９％および融点が２０３．６〜２０５．２℃である３．２ｇの白色結晶が得られた。ＵＶ（λｎｍ）λｍａｘ＝２４６；ＨＰＬＣ（ｍｉｎ）Ｒｔ＝２．７１７；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−６Ｄ，３００ＭＨｚ，δ／ｐｐｍ）７．０３−６．８９（ｍ，４Ｈ，アリル−Ｈ），４．６９（ｓ，１Ｈ，Ｎ−Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３Ｏ），３．３２−３．３２（ｔ，４Ｈ，ＮＣＨ２），３．２５〜３．２２（ｔ，４Ｈ，ＮＣＨ２）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−６Ｄ，３００ＭＨｚ，δ／ｐｐｍ）１５４．６（Ｃ８），１４３．６（Ｃ５），１１９．８（Ｃ６，１０），１１４．９（Ｃ７，９），５５．６（Ｃ１１），４７．７（Ｃ１，４），４３．２（Ｃ２，３）。
【実施例３】
【００９０】
２−クロロ−Ｎ−（４−フェニルチアゾール−２−イル）アセトアミドの調製
【００９１】
３．５ｇ（０．０２ｍｏｌ）の４−フェニル−２−アミノチアゾールは少量のテトラヒドロフランに溶解させられて溶液が形成された。溶液が淡黄色に変わるまで、２．５ｇ（０．０２４ｍｏｌ）の塩化クロロアセチルが氷状で滴下された。溶液は４時間室温で撹拌されて反応し、ＴＬＣモニタを利用して反応（エチルアセテート：石油エーテルが１：４、Ｒｆ：０．２）が監視される。反応後、生成物とシリカゲルは１対１５の比率で、シリカゲルカラムクロマトグラフィにより処理され、移動相は１対４の比率のエチルアセテートおよび石油エーテルから構成された。１．８ｇの黄色顆粒化合物が得られた（７．１４ｍｍｏｌ、収率３５．７％、融点１７９〜１８１℃）。
【実施例４】
【００９２】
２−（４−（４−メトキシフェニル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（４−フェニル−チアゾール−２−イル）アセトアミド（ＴＪ−Ｍ２０１００５と呼ぶ）の調製
【００９３】
０．５ｇ（２．１ｍｍｏｌ）の４−フェニル−チアゾール−２−（２−クロロ）−アセトアミドおよび０．４８ｇ（２．１ｍｍｏｌ）の１−（４−メトキシフェニル）ピペラジン塩酸塩が２０ｍｌのＤＭＦに溶解させられ、０．２９ｇ（２．１ｍｍｏｌ）の炭酸カリウムおよび触媒量のヨウ化カリウムが加えられた。混合物は約５時間、反応を行うために８０℃に加熱され、その間、反応はＴＬＣモニタにより監視された。反応後、反応溶液には飽和塩水が反応を行うために加えられ、次に、数回ジクロロメチレンにより抽出された。ジクロロメチレン溶液は結合され、飽和塩水により洗浄され、且つ乾燥させられた。凝縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィが行われ、エチルアセテートおよび石油エーテルを１対１０の比率で含む移動相を用いて取り込まれ、凝縮後、収率が７０％、融点が１８６〜１８９℃である０．６ｇ（１．５ｍｍｏｌ）のカーキ黄色固体が凝縮後に得られた。ＵＶ（ＣＨ３ＯＨ）Ａｍａｘ／ｎｍ２６８．１，２３１．０；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：２．８３（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ），３．２２（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ）３．３５（ｓ,２Ｈ）,３．８０（ｓ,３Ｈ）,６．８７（ｄ,Ｊ＝９．２Ｈｚ,２Ｈ）,６．９５（ｄ,Ｊ＝９．２Ｈｚ）,７．１８（ｓ,１Ｈ）,７．２７（ｓ,ＣＤＣｌ３）,７．３４（ｄ,Ｊ＝８．０Ｈｚ,１Ｈ）,７．４２（ｔ,Ｊ＝８．０Ｈｚ,２Ｈ）,７．８５（ｄ,Ｊ＝８．０Ｈｚ,２Ｈ）；13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）５０．８５,５３．７５,５５．５８,６１．１０,１０７．８７,１１４．５５,１１８．６６,１２６．０９,１２８．０７,１２８．７６,１３４．３４,１４０．５４,１４７．３５,１５０．１３,１５７．０２,１６８．３８.
【実施例５】
【００９４】
２−（４−（４−メトキシフェニル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（４−フェニル−チアゾール−２−イル）ブチルアミド（ＴＪ−Ｍ２０１０１８と呼ぶ）の調製
【００９５】
０．６ｇ（２．１ｍｍｏｌ）の４−フェニル−チアゾール−２−（２−ブロモ）−ブチルアミドおよび０．４８ｇ（２．１ｍｍｏｌ）の１−（４−メトキシフェニル）ピペラジン塩酸塩が２０ｍｌのＤＭＦに溶解させられた。０．２９ｇ（２．１ｍｍｏｌ）の炭酸カリウムおよび触媒量のヨウ化カリウムが加えられた、反応条件は実施例４と同じであった。０．７ｇ（１．５ｍｍｏｌ）の黄色結晶が得られ、その収率は７３％であり、融点は１８９〜１９２℃であった。ＵＶ（ＣＨ３ＯＨ）Ａｍａｘ/ｎｍ２６２．０,２３３．４；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：２．６８ （ｍ,２Ｈ）,２．８３−３．３１（ｔ,Ｊ＝５．４Ｈｚ,４Ｈ）,２．８７（ｍ,４Ｈ）,３．２２（ｔ,Ｊ＝８．４Ｈｚ,４Ｈ）,３．５５（ｓ,２Ｈ）,３．８０（ｓ,３Ｈ）,６．９２（ｄ,Ｊ＝９．２Ｈｚ,２Ｈ）,６．９１（ｄ,Ｊ＝５．４Ｈｚ）,７．１５（ｓ,１Ｈ）,７．３４（ｄ,Ｊ＝８．０Ｈｚ,１Ｈ）,７．４２（ｔ,Ｊ＝８．０Ｈｚ,２Ｈ）,７．８５（ｄ,Ｊ＝８．０Ｈｚ,２Ｈ）；13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）,２８．４５,３１．２６,５０．８５,５２．７０,５５．５９,６１．１０,１０７．２９,１１４．５５,１１８．６０,１２７.９２,１２８．９７,１２８．７６,１３４．３４,１４６．３４,１４９．３５,１５５．１８,１５７．４２,１６８．３８,２０６．９８。
【実施例６】
【００９６】
２−（４−（ｐ−トリル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（４−フェニル−チアゾール−２−イル）−アセトアミド（ＴＪ−Ｍ２０１００２と呼ぶ）の調製
【００９７】
調製方法は実施例５と同じであり、生成物の収率は８２％であり、融点は１７６〜１７８℃であった。ＵＶ（ＣＨ３ＯＨ）Ａｍａｘ/ｎｍ２６８．１,２３５．１；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）２．３０（ｓ,３Ｈ）,２．８１（ｔ,Ｊ＝６．４Ｈｚ,４Ｈ）,３．２６（ｔ,Ｊ＝６．４Ｈｚ,４Ｈ）,３．３４（ｓ,２Ｈ）６．８８（ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ）,７．１１（ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ）７．１８（ｓ,１Ｈ）７．２７（ｓ,ＣＤＣｌ３）６．８７３−７．８６８（ｍ,５Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）２０．４５,４９．８５,５３．７２,６１．１５,１０７．８６,１１６．７５,１２６．０９,１２７．９２,１２８．６０,１２８．７６,１２９．７５,１３４．３５,１４８．７８,１５０．１４,１５７．０２,１６８．４３。
【実施例７】
【００９８】
３−（４−ベンジル−ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（４−フェニル−チアゾール−２−イル）−プロピンアミド（ＴＪ−Ｍ２０１０１５と呼ぶ）の調製
【００９９】
０．５ｇ（２．２ｍｍｏｌ）の４−フェニル−チアゾール−２−アクリルアミド、０．２４ｇ（２．２ｍｍｏｌ）のベンジルピペラジンが３０ｍＬのエタノールに溶解させられ、０．２２ｇ（２．２ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンが加えられて混合物が形成された。混合物は６０℃の温度で加熱されつつ、撹拌されて反応を行い、反応はＴＬＣにより監視された（エチルアセテート：石油エーテル：トリエチルアミンは１対４対１  ｄ）。反応後、多量のエタノールが減圧により除去された。移動相（エチルアセテート：石油エーテル／トリエチルアミンが１対８／１‰）を含むシリカゲルカラムクロマトグラフィが浄化のために行われた。０．５ｇ（１．２ｍｍｏｌ）の淡黄色顆粒化合物が得られた。その収率は５６．０％であり、融点は１９７〜２０１℃であった。ＵＶ（ＣＨ３ＯＨ）Ａｍａｘ/ｎｍ２６０．０,２２５．０；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）２．６２（ｔ,Ｊ＝６．０Ｈｚ,２Ｈ）,２．７０（ｓ,８Ｈ）,２．７９（ｔ,Ｊ＝６．０Ｈｚ,２Ｈ）,３．６３（ｓ,２Ｈ）,７．１５（ｓ,１Ｈ）,７．２７（ｓ,ＣＤＣｌ３）,７．２９−７．３７（ｍ,６Ｈ）,７．４５（ｔ,６．４Ｈｚ,２Ｈ）,７．９０（ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ）；13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：．３０．９３,３１．１７,５２．２１,５２．９８,６２．９２,１０７．２８,１２５．９８,１２７．２６,１２７．８２,１２８．３３,１２９．２３,１３４．６１,１４９．８２,１５７．４８,１７０．１０,２０６．９７。
【実施例８】
【０１００】
３−（４−（４−メトキシフェニル）ピペラジン−１−イル−Ｎ−（４−フェニル−チアゾール−２−イル）−プロピンアミド（ＴＪ−Ｍ２０１０２１と呼ぶ）の調製
【０１０１】
調製方法は実施例６と同じであった。カラムクロマトグラフィの移動相は、エチルアセテート、石油エーテルおよびトリエチルアミンを１対４対１‰の比率で含むものであった。０．５ｇ（１．２ｍｍｏｌ）の白色フレーク状結晶が得られた。その収率は５３．９％であり、融点は２０２〜２０４℃であった。ＵＶ（ＣＨ３ＯＨ）Ａｍａｘ/ｎｍ２６１．０,２３３．２；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）２．６８（ｍ,４Ｈ）,２．８３−２．８７（ｍ,６Ｈ）,３．３１（ｔ,Ｊ＝４．８Ｈｚ,２Ｈ）,３．８１（ｓ,３Ｈ）,６．９１（ｄ,Ｊ＝５．２Ｈｚ,２Ｈ）,６．９８（ｄ,Ｊ＝５．２Ｈｚ,２Ｈ）,７．１４（ｓ,１Ｈ）,７．２７（ｓ,ＣＤＣｌ３）７．７３（ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ）,７．３８（ｔ,Ｊ＝７．６Ｈｚ,２Ｈ）,７．８５（ｄ,Ｊ＝５．２Ｈｚ,２Ｈ）；13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）.３１．２６,５０．８０,５２．５１,５３．０６,５５．５９,１０７.２８,１１４．５２,１１８．６２,１２７．８１,１２８．６２,１３４．４５,１４５．３２,１４９．８６,１５４．１７,１５７．４１,１６９．９９,２０６．９８.
【実施例９】
【０１０２】
３−（Ｎ，Ｎ−ピリジルメチル−エチルアミン）−Ｎ−（４−フェニル−チアゾール−５−メチル−２−イル）−プロピンアミド（ＴＪ−Ｍ２０１０４１と呼ぶ）の調製
【０１０３】
０．５ｇ（２．０ｍｍｏｌ）の４−フェニル−５−メチル−チアゾール−２−アクリルアミドおよび０．２２ｇ（２．０ｍｍｏｌ）の２−（アミノメチル）ピリジンが３０ｍＬの無水エタノールに溶解させられた。０．２１ｇ（２．０ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンが加えられた。混合物は５０〜１００℃の温度で撹拌され反応が行われた。反応はＴＬＣにより監視された（エチルアセテート：石油エーテル：トリエチルアミンが１対３対１  ｄ）。反応後、溶媒が取り除かれた。１５ｍｌのＤＭＦおよび０．２４ｇ（２．２ｍｍｏｌ）のブロモエタンおよび適当量の炭酸カリウムが加えられて、反応が５０〜１００℃の間の温度で行われた、反応はＴＬＣにより監視された（エチルアセテート対石油エーテル対トリエチルアミンが４対１対１  ｄ）。反応後、移動相（エチルアセテート対石油エーテル対トリエチルアミンが８対１対１‰）を含むシリカゲルカラムクロマトグラフィが浄化のために行われた。０．４１ｇ（１．０ｍｍｏｌ）の白色顆粒化合物が得られた。その収率は５０％であり、融点は１８５〜１８７℃であった。ＵＶ （ＣＨ３ＯＨ） Ａｍａｘ/ｎｍ２６９．９,２３０．０,１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）．１．２２（ｔ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,３Ｈ）,２．６４（ｔ,Ｊ＝６．４Ｈｚ,２Ｈ）,２．７６（ｑ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ）,２．８９（ｔ,Ｊ＝６．４Ｈｚ,２Ｈ）,３．２５（ｓ,３Ｈ）,３．７８（ｓ,２Ｈ）,７．２７（ｓ, ＣＤＣｌ３）,７．５８（ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ）,７．４５（ｔ, Ｊ＝７．８Ｈｚ,２Ｈ）,７．３５（ｔ,Ｊ＝７．８Ｈｚ,２Ｈ）,７．３４（ｍ,２Ｈ）,７．９７（ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,２Ｈ）,13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）．１０．３６,３１．６９,４５．８７,４８．１１,５８．０５,６０．８２,１０７．１３,１２５．９９,１２７．６９,１２７．７７,１２８．６３,１２８．６８,１２９．４８,１３４．７５,１４９．８７,１５７．３０,１７０．１１。
【実施例１０】
【０１０４】
Ｎ−２−イソニコチノイル−４−フェニル−チアゾール−２−アミン（ＴＪ−Ｍ２０１０５０と呼ぶ）の調製
【０１０５】
１ｇ（５．６ｍｍｏｌ）の４−フェニル−２−アミノチアゾール（Ｉ）、１．０２ｇ（８．４ｍｍｏｌ）のイソニコチン酸、０．６８ｇ（５．６ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰ，１．７３ｇ（５．６ｍｍｏｌ）のＤＣＣが１５ｍｌのアセトンに加えられて混合物が形成された。混合物は平行合成装置内で２４時間、２５℃の温度で振られ、白色の固体が得られた。白色固体はアセトン（３×３ｍｌ）により洗浄された。アセトン溶液は結合されて、結合溶液が生成された。アセトンが減圧により結合溶液から取り除かれ、薄黄色固体が得られた。薄黄色固体は洗浄され、希釈水により中和され、吸引ろ過されて、淡黄色粉体が得られた。淡黄色粉体は７５％のエタノールにより再結晶化され、生成物は真空内で乾燥させられ、０．９ｇの淡黄色針状結晶が得られた。その収率は６０％であり、溶融点は２１３〜２１６℃であった。ＵＶ（ＭｅＯＨ,λｍａｘ/ｎｍ）：２２８.；ＩＲ（ＫＢｒσ/ｃｍ−１）：３４００（ｗ,νＮ−Ｈ）,３０２８（ｗ,νＡｒ−Ｈ）,１６０２（ｍ,νＣ＝Ｏ）,１５４２（ｓ,チアゾール環ν−Ｃ＝Ｎ）,７０４（ｍ,δＢｅｎｚ環ベンド）；1Ｈ−ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ,δ/ｐｐｍ）：７．２５（ｄｄ，１Ｈ,アリル−Ｈ）,７．２９（ｄｄ，２Ｈ,アリル−Ｈ）,７．４５（ｄ，２Ｈ,アリル−Ｈ）,７．５８（ｓ，１Ｈ,チアゾール−Ｈ）,７．６７（ｄ，２Ｈ,ピリジン−Ｈ）,８．６４（ｄ，２Ｈ,ピリジン−Ｈ）,１１．４９（ｓ，１Ｈ,ＮＨ）。
【実施例１１】
【０１０６】
Ｎ−２−ニコチノイル−４，５，６，７−テトラハイドロ−ベンゾ[ｄ]チアゾール−２−アミン（ＴＪ−Ｍ２０１０５７と呼ぶ）の調製
【０１０７】
反応プロセスおよび処理は実施例１０と同じであった。淡黄色粉体が得られた。収率は３４％であり、融点は１８９〜１９２℃であった。ＵＶ （ＭｅＯＨ,λｍａｘ/ｎｍ）：２１２．４；ＩＲ（ＫＢｒσ/ｃｍ−１）：３４２１（ｓ,νＮ−Ｈ）,２９３０（ｍ,ピリジン環ν−ＨＣ＝）,１６４１（ｓ,νＣ＝Ｏ）,１５４２（ｓ,チアゾール環ν−Ｃ＝Ｎ）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ,δ/ｐｐｍ）：１.６３（ｍ，４Ｈ,ＣＨ２）,２．５８（ｍ，４Ｈ,ＣＨ２）,７．３８（ｓ，１Ｈ,ピリジン−Ｈ）,８．２４（ｓ，１Ｈ,ピリジン−Ｈ）,８．６８（ｓ，１Ｈ,ピリジン−Ｈ）,８．７７（ｓ，１Ｈ,ピリジン−Ｈ）,９．１９（ｓ，１Ｈ,−ＮＨ−）。
【実施例１２】
【０１０８】
（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチレン）−４−（２，４−ジエトキシ−フェニル）−チアゾール−２−アミン（ＴＪ−Ｍ２０１０６１と呼ぶ）の調製
【０１０９】
１．６ｇ（０．００６ｍｏｌ）の４−（２，４−ジエトキシ−フェニル）−２−アミノチアゾール（ｃ）および０．９ｇ（０．００６ｍｏｌ）のインドール−３−カルボキシアルデヒドは２０ｍｌの無水エタノールで溶解させられて溶液が形成された。３滴のヘキサヒドロピリジンが触媒として溶液に加えられた。溶液は６５Ｗの出力のマイクロ波放射の存在下で１分間撹拌されて反応が行われ、次にマイクロ波の出力が１３０Ｗに制御され、溶液の反応が１時間継続されて、黄色の混濁液が得られた。黄色の混濁液は吸引ろ過された。ろ過ケーキが水で２〜３回洗浄され、真空内で乾燥させられて、２．２ｇの黄色粉体が得られた。その収率は９３．８％であり、融点は２１８〜２２０℃であった。ＩＲ（ＫＢｒ）/ｃｍ−１３２２４,３１１３,１５２３．７２,１４８６．６４.1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）１．３４（ｔ,Ｊ＝６．６Ｈｚ,３Ｈ）,１．４８（ｔ,Ｊ＝６．６Ｈｚ,３Ｈ）,４．０１（ｑ,Ｊ＝６．６Ｈｚ,２Ｈ）,４．１０（ｑ,Ｊ＝６．６Ｈｚ,２Ｈ）,６．４７（ｄ,Ｊ＝２．４Ｈｚ,１Ｈ）,６．４８（ｄｄ,Ｊ＝７．２ＨｚおよびＪ＝２．４Ｈｚ,１Ｈ）,７．１６−７．２１（ｍ,２Ｈ）,７．５８（ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ）,７．６８（ｄ, ＝３．６ Ｈｚ １Ｈ）,７．８５（ｄ, J＝７．２Ｈｚ,１Ｈ）,８．１５（ｄ,Ｊ＝７．２Ｈｚ,１Ｈ）,８．３８（ｄ,Ｊ＝３．６Ｈｚ,１Ｈ）,９．１０（ｓ,１Ｈ）,１１．６４（ｓ,１Ｈ）.13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６)１７１．２７,１６４．７０,１５８．３１,１５６．２０,１４７．６４,１３６．５２,１３４．１４,１２９．７３,１２３．８４,１２２．３７,１２１．１３,１２０．６２,１１５．１７,１１３．６７,１１０．９６,１０４．２１,９８．４０,６２．７４,６２．２７,１３．７７,１３．６９.ＭＳ（ＥＳＩ正イオン）ｍ/ｚ：３９２．２（Ｍ ＋ １）。
【実施例１３】
【０１１０】
（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチレン）−４−（ナフタレン−１−イル）チアゾール−２−アミン（ＴＪ−Ｍ２０１０６４と呼ぶ）の調製
【０１１１】
０．７ｇ（０．００３ｍｏｌ）の４−（ナフタレン−１−イル）−２−アミノチアゾールおよび０．４ｇ（０．００３ｍｏｌ）のインドール−３−カルボキシアルデヒドが混合され、２５ｍｌの無水エタノールに溶解されて溶液が形成された。３滴のヘキサヒドロピリジンが触媒として溶液に加えられた。溶液は６５Ｗの出力のマイクロ波放射の存在下で、１分間撹拌されて反応させられた後、マイクロ波の出力が１３０Ｗに制御されて、溶液は継続して１．３時間反応させられ、黄色の混濁液が得られた。黄色混濁液は吸引ろ過された。ろ過ケーキは水で２〜３回洗浄され、真空中で乾燥させられて、１．０ｇの黄色粉体が得られた。その収率は９４．４％であり、融点は２３９〜２４１℃であった。ＩＲ（ＫＢｒ,σ/ｃｍ−１）：３１０２．９４（ｓ,チアゾール環νＨＣ＝）,３０５６．７１（ｗ,フェニル環ν＝Ｃ−Ｈ）,１５９８．２４（ｓ,νＣ＝Ｃ）,１５２０．６１（ｍ,シッフ塩基νＣ＝Ｎ）,１４９７．６４（ｍ,チアゾールνＣ＝Ｎ）,７７８．０５,７４０．３３（δナフチル環ベンド）,７４０．３３（δフェニル環ベンド）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ,３００ＭＨｚ,δ/ｐｐｍ）：１２．１３（ｓ，１Ｈ,ＮＨ）,９．２１（ｓ,１Ｈ,ＣＨ＝Ｎ）,８．３３−８．３７（ｍ,２Ｈ,ナフチル−Ｈ）,８．２７（ｓ,１Ｈ,インジル−Ｈ）,７．９５−７．９８（ｍ,２Ｈ,ナフチル−Ｈ）,７．７３,７．７２（ｄ,１Ｈ,インジル−Ｈ）,７．６４（ｓ,１Ｈ,チアゾール−Ｈ）,７．５４−７．５７（ｍ,２Ｈ,ナフチル−Ｈ）,７．５４,７．５３（ｄ,１Ｈ,インジル−Ｈ）,７．５１,７．５０（ｄ,１Ｈ,ナフチル−Ｈ）,７．２２−７．２７（ｍ, ２Ｈ,インジル−Ｈ）；13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ,３００ＭＨｚ,δ/ｐｐｍ）：１７４．５３（Ｃ１０）,１５９．５７（Ｃ９）,１５２．７４（Ｃ１１）,１３８．２８（Ｃ１３）,１３８．１６（Ｃ８）,１３４．１６（Ｃ１７）,１３３．６０（Ｃ２２）,１３１．３９（Ｃ１）,１２９．２１（Ｃ１６）,１２８．９６（Ｃ１８）,１２７．９６（Ｃ２１）,１２７．１２（Ｃ１９）,１２６．６６（Ｃ２０）,１２６．５２（Ｃ１５）,１２６．１５（Ｃ３）,１２５．２６（Ｃ１４）,１２４．１８（Ｃ５）,１２２．６５（Ｃ６）,１２２．５２（Ｃ４）,１１５．６３（Ｃ７）,１１４．９５（Ｃ１２）,１１３．１３（Ｃ２）。
【実施例１４】
【０１１２】
ＴＪ−Ｍ２０１０タイプ２−アミノチアゾール誘導体のアセチルコリンエステラーゼへの阻害
【０１１３】
幾つかのＴＪ−Ｍ２０１０タイプ２−アミノチアゾール誘導体のアセチルコリンエステラーゼの阻害効果が、エルマン法を用いて検証された。アセチルコリンエステラーゼはＳＤラットに由来する。１６０から１８０グラムの体重の２匹のＳＤラットが提供された。海馬が低温状態のラットの脳から回収された。２ｍｌの溶解緩衝剤を用いて、溶解および均質化が行われた。得られた混合物は３０００ｒ／ｍｉｎの回転速度で１５分間遠心分離機にかけられ、上清が得られ、−２０℃の温度で保存された。ＢＣＡ法により測定すると、ホモジネートタンパク質の容積は１１．３８３ｍｇ／ｍＬ（吸収度Ａ＝０．４２８）、標準溶液１０ｍｇ／ｍＬ（吸収度Ａ＝０．３７６）であった。ＴＪ−Ｍ２０１０１８（１）、ＴＪ−Ｍ２０１００５（２）、ＴＪ−Ｍ２０１０４１（３）、ＴＪ−Ｍ２０１０２１（４）、ＴＪ−Ｍ２０１０６４（５）、ＴＪ−Ｍ２０１０５７（６）が検査された。１％のＤＭＳＯ酵素溶液がブランクコントロールとして利用され、タクリンが陽性対照として利用された。結果を図１に示す。
【０１１４】
結果から、ＴＪ−Ｍ２０１０タイプ２−アミノチアゾール誘導体は、ＡｃｈＥに一定の阻害効果があり、その阻害効果はタクリンと比較可能なものであった。
【実施例１５】
【０１１５】
本発明で提供されるアミノチアゾール誘導体のＰＡＲＰ−１への阻害
【０１１６】
ユニバーサル発色法キット（Ｒ＆Ｄカタログナンバー４６７７−０９６−Ｋ）を利用した。原理は以下のとおりである。９６ウェルプレートの底部はヒストンで被覆した。ヒストンはＰＡＲＰ−１触媒反応の基質であった。各ウェルについて、ＰＡＲＰ−１酵素、ビオチンで標識したＮＡＤ＋、活性化因子ニックＤＮＡ、および様々な阻害剤が加えられた。ＰＡＲＰ−１は活性化因子ニックＤＮＡにより活性された。活性されたＰＡＲＰ−１は、ＰＡＲに触媒作用を及ぼしヒストンと結合し、ＰＡＲＰ−１−ＰＡＲ−ヒストン化合物を形成し底部に固定された。タンパク質複合体は発色ＨＲＰ（西洋ワサビペルオキシダーゼ）と結合された。適当な反応時間の後、反応溶液は廃棄された。洗浄後、基質ＴＡＣＳが加えられた。基質ＴＡＣＳはＨＲＰにより触媒作用が及ぼされた。マイクロプレートリーダを利用して、６３０ｎｍでの測定値が測定された。反応は０．２Ｎの塩酸により完了させられ、測定値は４５０ｎｍで集められた。
【０１１７】
２Ｍから１０ｍＭの間の濃度内で、一般的なＰＡＲＰ−１阻害剤３−ＡＢはＰＡＲＰ−１に阻害効果をもたらしたので、陽性対照として使用された。ＴＪ−Ｍ２０１０１８（１）、ＴＪ−Ｍ２０１００５（２）、ＴＪ−Ｍ２０１０４１（３）、ＴＪ−Ｍ２０１０２１（４）、ＴＪ−Ｍ２０１０６４（５）、ＴＪ−Ｍ２０１０５７（６）、ＴＪ−Ｍ２０１０６１（７）が検査された。結果を図２に示す。ＴＪ−Ｍ２０１０１８（１）、ＴＪ−Ｍ２０１００５（２）、ＴＪ−Ｍ２０１０４１（３）およびＴＪ−Ｍ２０１０６１（７）は、濃度が１Ｍである時に、５０％を超えるＰＡＲＰ−１への阻害率を呈した。
【実施例１６】
【０１１８】
過酸化水素により誘導される神経細胞アポトーシスに対する本発明で提供されるアミノチアゾール誘導体の保護
【０１１９】
人体からのドーパミン作動性神経芽細胞腫腫瘍細胞ＳＨ−ＳＹ５Ｙを実験細胞として使用した。１０００μＭ／Ｌの濃度のＨ２Ｏ２を使用してＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞が１２時間処理された。細胞生存は約５０％であり、過酸化水素破壊モデルが判定された。ＭＴＴ法を使用して、ＴＪ−Ｍ２０１０１８（１）、ＴＪ−Ｍ２０１００５（２）、ＴＪ−Ｍ２０１０２１（４）、ＴＪ−Ｍ２０１０６４（５）の過酸化水素により破壊された細胞の保護が実験された。結果を図３に示す。
【０１２０】
ＴＪ−Ｍ２０１０２１（４）は、１μＭの濃度の過酸化水素に対してＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を一定保護した。細胞生存は３０％であった。
【０１２１】
実施例１０
塩化コバルト誘導低酸素障害から生じる神経細胞アポトーシスに対する本発明で提供される２−アミノチアゾール誘導体の使用
【０１２２】
人体からのドーパミン作動性神経芽細胞腫腫瘍細胞ＳＨ−ＳＹ５Ｙを実験細胞として使用した。６００μＭ／Ｌの濃度の塩化コバルトを使用してＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞が２４時間処理された。細胞生存は約５５％であり、塩化コバルト破壊モデルが判定された、ＭＴＴ法を使用して、様々な濃度のＴＪ−Ｍ２０１０１８（１）、ＴＪ−Ｍ２０１００５（２）、ＴＪ−Ｍ２０１０４１（３）、ＴＪ−Ｍ２０１０２１（４）、ＴＪ−Ｍ２０１０６４（５）ＴＪ−Ｍ２０１０５７（６）の塩化コバルトにより破壊された細胞への保護が検査された。結果を図４に示す。
【０１２３】
結果から、アミノチアゾール誘導体は、塩化コバルトにより生じる低酸素障害に対して、細胞を良好に保護した。顕微鏡で観察すると、破壊後の細胞（図５）は端縁が不明確であり、細胞数が減少した。図６に示すように、ＴＪ−Ｍ２０１０２１（４）を加えた試料では、多くの細胞が存在し、またはっきりとした端縁を備えた。細胞の成長は良好であった。
【０１２４】
実施例１１
自己免疫疾患の治療における本発明で提供される２−アミノチアゾール誘導体の使用
【０１２５】
インビトロ実験−フローサイトメトリからの結果によれば、ＭｙＤ８８は、自己免疫疾患の治療のために、ＤＣ細胞の成熟を阻害することができた。
【０１２６】
インビトロ実験は以下の工程を含むものであった。
【０１２７】
１．ＴＪ−Ｍ２０１０２１（実施例８）と名付けられたアミノチアゾール誘導体が、ＢＡＬＢ／ｃマウスの骨髄細胞に塗布された。骨髄細胞膜が破壊された。次に骨髄細胞はＲＰＭＩ１６４０培地（ＧＭ−ＣＳＦが１０ｎｇ／ｍｌとＩＬ−４が１０ｎｇ／ｍｌ加えられた）で培養され、骨髄細胞の濃度は２×１０  ６ＭＬに調節された。
【０１２８】
２．４８時間の培養後、懸濁細胞が取り除かれた。６日間の培養後、懸濁細胞および半接着細胞が回収された。
【０１２９】
３．ＤＣ細胞に５０ｍＭのＴＪ−Ｍ２０１０２１が加えられて１時間培養された。次に培地に壊死心筋上清、ＬＰＳ（２００ｎｇ／ｍｌ）、ポリＩ：Ｃ（２０ｍｇ／ｍｌ）、およびＣｐＧ（１０ｍｇ／ｍｌ）が加えられ、１２時間培養された。
【０１３０】
４．フロー抗体ＦＩＴＣ標識抗ＣＤ８０，ＣＤ８６が、検査のために加えられた。ＴＪ−Ｍ２０１０２１は、ＴＬＲ刺激（ＬＰＳ，ＣｐＧ）により生じるＲＡＷ２６４．７細胞での共刺激分子ＣＤ８０の増加を阻害した。従って、ＴＪ−Ｍ２０１０２１はＴＬＲ信号伝達経路を効果的に遮断することにより、図７および図８に示すように、細胞の免疫反応を阻害した。
【０１３１】
Ｒａｗ２６４．７：４８ウェルプレート、細胞数９＊１０５／ウェル。各ウェルには１ｍｌの培養系が加えられた。異なる濃度のＴＪ−Ｍ２０１０２１が加えられ、細胞は２時間前培養された。次にＣＰＧが加えられた。最終濃度は４０ｕｇ／ｍｌであった。細胞は、ＣＯ２が充満する３７℃の温度の培養器内で、１２時間培養された。フロー抗体ＦＩＴＣ標識抗ＣＤ８０およびＣＤ８６が検査のために加えられた。
【０１３２】
ＤＣ：４８ウェルプレート、細胞数１＊１０６／ウェル。各ウェルには１ｍｌの培養系が加えられた。異なる濃度のＴＪ−Ｍ２０１０２１が加えられ、細胞は２時間前培養された。次にＬＰＳが加えられた。最終濃度は１ｕｇ／ｍｌであった。細胞は、３７℃の温度の培養器内で１２時間培養された。フロー抗体ＦＩＴＣ標識抗ＣＤ８０およびＣＤ８６が検査のために加えられた。
【０１３３】
従って、本発明で提供されるアミノチアゾール誘導体は、図９および図１０に示すように、一定範囲の濃度に関連して、ＤＣおよびマクロファージ表面へのＣＤ８０の発現を阻害した。
【０１３４】
上記の検査結果によれば、ＭｙＤ８８はＣＤ８０の発現を減少させることができ、ＤＣ細胞の成熟を阻害した。ＤＣ細胞の成熟は、自己免疫性心筋症、実験的自己免疫ブドウ膜炎症、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、エリテマトーデスに至る重症段階の一つであることが判明している。従って、ＭｙＤ８８は、この種の疾患を治療することができた。
【０１３５】
インビボ実験−本発明で提供されるＭｙＤ８８−／−およびアミノチアゾール誘導体のＩ型糖尿病モデル設定への影響
【０１３６】
インビボ実験は以下の工程を含むものであった。
【０１３７】
１．実験グループ：ＭｙＤ８８ＫＯ  ＮＯＤマウス、ＭｙＤ８８ＫＯ／＋ＮＯＤマウス、ＮＯＤマウスＴＪ−Ｍ２０１００２（実施例６を参照）投与。
【０１３８】
２．投与グループ：０．５％のＣＭＣに溶解した１５０ｍｇ／ｋｇ／ｄのＴＪ−Ｍ２０１０が０〜３日目、５日目、７日目、９日目、１１日目、１３日目、１５日目に腹腔内注射される一日前に、抗原が注射された。
【０１３９】
３．各グループにはマイコバクテリア抗原が注射され、その濃度が連続監視された。
【０１４０】
４．各グループには３０週に亘りクリアグレードで供給された。その後、尾の静脈血が空ではない腹部から回収され、血糖が２度連続して検査された。糖尿病モデルの標準は、両方の血糖≧２２ｍｍｏｌ／Ｌであった。
【０１４１】
Ｉ型糖尿病の発症曲線グラフを図１１に示す。結果として、ＭｙＤ８８ＫＯヘテロ接合グループについて、Ｉ型糖尿病の発生は、時間の経過とともに増加した。ＭｙＤ８８ＫＯホモ接合グループでは、Ｉ型糖尿病は発生しなかった。アミノチアゾール誘導体グループのＩ型糖尿病の発生は、ＭｙＤ８８ＫＯホモ接合グループと同等であった。従って、ＭｙＤ８８経路は、Ｉ型糖尿病と密接に関連した。ＭｙＤ８８経路を遮断することは、糖尿病の発生を減少させることであるから、小分子ＭｙＤ８８阻害剤ＴＪ−Ｍ２０１０は、Ｉ型糖尿病の治療に効果的であった。
【０１４２】
本発明の特定の実施形態を図示および説明したが、当該技術分野に属する者には当然のことながら、本発明のより広い態様から逸脱することなく、変更および変形がなされてよく、従って、添付の請求の範囲の目的は、本発明の真の主旨および範囲に含まれるこれらの変更および変形全てを網羅することである。
【図１】
2014506897.tif 000048
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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