(57)【要約】本発明は、クロムおよびインスリン、および／またはクロム−インスリン錯体を含む組成物に関する。その製造方法並びに低血糖症および低血糖症関連疾患の予防および治療のための使用に関する。本発明の組成物は、非経口、鼻腔内、および経口を含むあらゆる方法で投与され得る。本発明の組成物は、血清グルコースレベルを安定化させ、クロムおよびインスリンを別々に投与する場合に比べて相乗的な効果を有する。【選択図】図２２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
クロムとインスリンを含む組成物であって、ここで、クロムとインスリンの量がインスリン単独よりも高い効果を対象に提供するように一緒に選択される組成物。
【請求項２】
前記組成物が、クロム−インスリン錯体を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が、対象への注射用に調合される、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記のクロムとインスリンの量が、対象の体重を安定化するのに有効である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記のクロムとインスリンの量が、２型糖尿病の対象の体重増加を予防するのに有効である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記のクロムとインスリンの量が、１型糖尿病の対象の体重減少を予防するのに有効である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記クロム−インスリン錯体が、５ｋＤａ〜５０ｋＤａの分子量を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記クロム−インスリン錯体が、約３３ｋＤａの分子量を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記クロムの量が、約５マイクログラム〜約２，０００マイクログラムである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記インスリンの量が、約１単位〜約５００単位である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
インスリンに対するクロムの前記比率が、インスリン単位に対するクロムの約０．００１マイクログラム〜インスリン単位に対するクロムの約２０マイクログラムである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記クロムが、ピコリン酸クロム、トリピコリン酸クロム、ニコチン酸クロム、ポリニコチン酸クロム、塩化クロム、ヒスチジン酸クロム、トリヒスチジン酸クロム、およびクロム酵母からなるクロム錯体群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記クロムが、インスリン溶液に溶解されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記クロムが、インスリン溶液に懸濁されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
栄養学的に許容される担体をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
クロム−インスリン錯体を含む組成物であって、ここに、前記クロム−インスリン錯体が、インスリン単独より大きな効果を対象に提供する組成物。
【請求項１７】
前記クロム−インスリン錯体が、水性溶液中に存在する、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
インスリンの投与を必要とする対象にインスリンを投与する改善された方法であって、前記改善が、インスリンとクロムを含む組成物を提供し、そして、当該組成物を対象に投与することを含む、方法。
【請求項１９】
前記組成物が、インスリンとクロムの相乗的に有効な量を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記組成物が、クロム−インスリン錯体を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記対象が、グルコース代謝に関連する疾患または障害を有している、請求項１８に記載の改善された方法。
【請求項２２】
クロムとインスリンを配合し、それによって注射用組成物とすることを含む、クロムとインスリンの注射用組成物の製造方法。
【請求項２３】
前記クロムが、溶液中に懸濁されている、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記クロムが、溶液中に溶解されている、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記注射用組成物が、懸濁液である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記注射用組成物が、溶液である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
インスリンに対するクロムの比率が、インスリン単位当たりクロムの０．００１マイクログラム〜インスリン単位当たりクロムの１００マイクログラムである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
血清グルコースレベルを安定化させることを必要とする対象の血清グルコースレベルを安定化させる方法であって、
インスリンを必要とする対象を識別する工程、および、
クロムとインスリンを含む組成物を対象に投与する工程
を含む方法。
【請求項２９】
前記のクロムとインスリンの組成物が、注射によって投与される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記のクロムとインスリンの組成物が、鼻腔内に投与される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記対象が糖尿病である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
血清グルコースレベルを安定化させることを必要とする対象の血清グルコースレベルを安定化させるための改善された方法であって、
インスリンとクロムを配合して注射用組成物を生成する工程；および
その組成物を対象に投与する工程
を含む方法。
【請求項３３】
前記クロムの量が、約５マイクログラム〜約１，０００マイクログラムである、請求項３２に記載の改善された方法。
【請求項３４】
前記インスリンの量が、約１単位〜約５０単位である、請求項３２に記載の改善された方法。
【請求項３５】
前記対象が、グルコース代謝に関連する疾患または障害を有している、請求項３２に記載の改善された方法。
【請求項３６】
インスリンで糖尿病を治療する必要のある対象の糖尿病を治療する改善された方法であって、当該改善がインスリンとクロムを含む組成物を対象に投与することを含む方法。
【請求項３７】
インスリンとクロムを含む前記組成物が、注射による投与のために調合される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
インスリンとクロムを含む前記組成物が、鼻腔内投与のために調合される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記組成物が、クロム−インスリン錯体を含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
前記対象が、１型糖尿病である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４１】
前記対象が、２型糖尿病である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４２】
前記対象が、アルツハイマー病、認知症、軽度認知障害（ＭＣＩ）、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、ハンチントン病、てんかん、およびパーキンソン病を患っている、請求項３６に記載の方法。
【請求項４３】
糖尿病の治療のためのインスリン治療の必要な対象を識別すること；および
インスリンとクロムを含む組成物を当該対象に投与すること；
を含む、糖尿病の対象の糖尿病誘発性体重減少を予防する方法。
【請求項４４】
前記組成物が、クロム−インスリン錯体を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
糖尿病の治療のためのインスリン治療の必要な対象を識別すること；および
インスリンとクロムを含む組成物を当該対象に投与すること；
を含む、糖尿病の対象の糖尿病誘発性体重増加を予防する方法。
【請求項４６】
インスリンを必要とする対象での対象を識別すること；および
クロム−インスリン錯体を含む組成物を当該対象に投与すること；
を含む、インスリン誘発性低血糖を予防または減少させる方法。
【請求項４７】
対象の脳におけるクロムレベル、インスリンレベル、またはその両方を増加させる方法であって、クロム−インスリン錯体を含む組成物を前記対象に投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１１年３月１日に出願された、「ＭＥＴＨＯＤＳ  ＡＮＤ  ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳ  ＦＯＲ  ＴＨＥ  ＴＲＥＡＴＭＥＮＴ  ＡＮＤ  ＰＲＥＶＥＮＴＩＯＮ  ＯＦ  ＨＹＰＯＧＬＹＣＥＭＩＡ  ＡＮＤ  ＲＥＬＡＴＥＤ  ＤＩＳＯＲＤＥＲＳ」と題する米国仮特許出願第６１／４４８，１３４号の優先権を主張するものであり、この米国出願の全体の内容は参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本明細書で開示される実施形態は、低血糖および例えば、インスリン投与から生じる低血糖に関連する症状の治療および予防のための組成物、ならびに当該組成物を製造および使用する方法に関する。また、インスリンを投与し、糖尿病を治療する改善された方法が提供される。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
グルコース代謝関連の疾患と障害
多くの疾患および障害は−病因学的にあるいはそうでなければ−障害があるか、変更されたか、もしくは異常なグルコース代謝に関連している。こうした疾患および障害としては、限定されるものではないが、糖尿病（高血糖症）；低血糖症；心血管代謝性症候群；アルツハイマー病；ハンチントン病；てんかん；虚血；パーキンソン病；健忘症；認知症；軽度認知障害（ＭＣＩ）；注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）；筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）；および外傷性脳損傷が挙げられる。
【０００４】
低血糖症
低血糖症は、文字通り「低血糖」を意味する用語である。低血糖症は、約６０ｍｇ／ｄＬ以下の血糖値の状態を含むが、この血糖値に限定されるものではない。例えば、糖尿病等による高血糖を有する人が、インスリン注射または抗糖尿病剤の投与により血糖値の低下を受ける場合、あるいは健康な個体が飢餓や激しい運動により血糖値の急激な低下を受ける場合、低血糖に似た病状が、約１００ｍｇ／ｄＬの血糖値においてさえ現れることがある。低血糖症はしばしば、糖尿病治療の副作用（例えば、インスリンの投与）として生じる。しかし、低血糖症は、他の薬や病気、ホルモンや酵素の欠乏症、または腫瘍から生じることもある。さらに、低血糖は、大量の炭水化物を摂取する長期の習慣；アルコールの過剰摂取；そして、栄養不足の状態での長時間の極端な運動の継続に起因することがある。しかし、糖尿病治療または他の薬剤によって誘導される低血糖は、低血糖症の他の原因と比較して、特に危険であり、高い確率で厳しい症状をもたらす。
【０００５】
低血糖症関連障害および低血糖症関連合併症は、インスリンによって誘発される脳組織の損傷等などの、低血糖の結果として生じる症状や合併症を指す。低血糖症関連疾患と低血糖関連症状は、血液中のグルコースレベルの低下が、脳内のグルコースレベルの減少を伴い、それにより、倦怠感、一般的な不快感、狼狽、倦怠感、苛立ち、震え、頭痛、脱力感、冷や汗と動悸を引き起こし、さらにまた、深刻な場合には、死亡にもつながる可能性がある意識障害や昏睡を引き起こす。
【０００６】
真性糖尿病
糖尿病は、少なくとも１０００万人のアメリカ人に影響を与えることが知られており、数百万を超える人が無意識のうちにその病気に罹患している可能性がある。糖尿病は、アメリカ合衆国における死因の６番目の主要な原因であり、１９９７年には、１９３，０００人を超える人の死亡を占めている。糖尿病は、膵臓がグルコースレベルを制御することが可能なレベルでインスリンを放出しない疾患状態である。糖尿病は、２つのタイプに分類される。最初のタイプは、インスリン依存性であり、通常は若い人に現れる糖尿病（１型）である。膵臓の膵島細胞が、主に自己免疫破壊によりインスリンの生産を停止する。１型糖尿病のための標準的治療は、インスリンの投与である。１型糖尿病患者は、全糖尿病患者の少数派（糖尿病患者全体の最大１０％）である。糖尿病の第２のタイプ（２型）は、インスリン抵抗性および不十分なインスリン分泌の組み合わせによって引き起こされるインスリン非依存性糖尿病である。これは、西洋世界における糖尿病の最も一般的なタイプである。これらの患者のうち、アメリカ合衆国を含む世界各国の成人人口の８％近くは、２型糖尿病に罹患しており、約３０％は、二次的な膵臓の機能低下により生存期間中にいくつかの時点でインスリンを使う必要があるであろう。
【０００７】
米国糖尿病協会（ＡＤＡ）、世界保健機構（ＷＨＯ）、日本糖尿病学会（ＪＤＳ）は、最近、臨床および疫学研究の成果を考慮して、糖尿病の新しい診断基準を発表した。これらの基準の下では、次の血糖値のいずれかが観察されると、人は糖尿病患者として分類される：空腹時血糖値≧１２６ｍｇ／ｄＬ；随時血糖値≧２００ｍｇ／ｄＬ；または７５グラムの経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）後２時間の血糖値≧２００ｍｇ／ｄＬ（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ２０：  １１８３  （１９９７）；  Ｄｉａｂｅｔ  Ｍｅｄ  １５：  ５３９  （１９９８）；およびＤｉａｂｅｔｅｓ  ４２：３８５（１９９９））。
【０００８】
１型糖尿病患者と多くの２型糖尿病患者は、彼らの膵臓は、グルコース代謝をサポートするために必要である十分なインスリンを産生することができないので、１日に複数回のインスリン投与により彼らの血糖濃度を管理しなければならない。適切なインスリン投与量を投与する目的は、血液１リットル当たり約１グラム、または１００ｍｇ／ｄＬである生理的基準に近い血糖値を維持することである。十分ではないインスリンが投与される場合には、血糖値は、高血糖値となり、健康への有害な合併症をもたらす。逆に、あまりにもインスリンが投与される場合は、グルコースレベルが正常値よりも有意に下がり、低血糖と呼ばれる重篤な急性の病状をもたらす。糖尿病患者が、彼のまたは彼女の緊急の必要量を知ることは難問であり、糖尿病患者が１００ｍｇ／ｄＬの望ましい正常血糖値の目標から２倍または３倍離れた数値となることは珍しくない。十分に管理されないと、対象の血糖は、１時間未満で、高血糖から低血糖へ、またはその逆へ交替し得る。低血糖症は、放置すれば、発作、脳障害、昏睡、または死亡につながる場合がある。従って、インスリンで血中グルコースレベルを管理する改善された方法が必要である。
【０００９】
脳グルコース代謝／輸送体ならびに関連疾患および障害
グルコース恒常性は、エネルギー生成、神経細胞の維持、神経細胞新生、神経伝達物質の調節、細胞の生存、およびシナプス可塑性のために重要である。グルコースは、哺乳類の脳のための主要エネルギー源であり、認知機能における重要な役割がある。
【００１０】
血液から脳へのグルコースの送達は、血液脳関門の内皮細胞ならびに神経細胞および神経膠の原形質膜を通過して、グルコースを輸送する必要があり、それは、促進性のグルコース輸送タンパク質によって媒介される。促進性のグルコース輸送は、密接に関連するグルコース輸送体（ＧＬＵＴ）ファミリーの１つまたは複数のメンバーによって媒介される。ＧＬＵＴファミリーのメンバーのうち１３が、これまでに記述されてきた。組織特異的グルコース輸送体は、脳のグルコース濃度を維持するために、臓器間のグルコースを割り当てる。脳グルコース代謝で機能する２つの主要グルコース輸送体アイソフォームは、ＧＬＵＴ−１とＧＬＵＴ−３である。ＧＬＵＴ−１は、血液脳関門、脈絡叢、上衣、および神経膠の主要輸送体であり、ＧＬＵＴ−３は、神経グルコース輸送体である。ＧＬＵＴ−４は、一方では、筋肉および脂肪細胞の膜を通過してグルコースを運ぶ。
【００１１】
グルコース取り込み調節因子のインスリンは、膵臓から分泌される。インスリンは、筋肉と脂肪にグルコースを割り当てる。視床下部−下垂体−副腎（ＨＰＡ）系、交感神経系（ＳＮＳ）、および血管内皮増殖因子は、脳にグルコースを割り当てる。脳から、および筋肉と脂肪の両方からのフィードバック経路は、グルコース配分と外因性のグルコース供給の調節に関与している。さらに、インスリンは、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過して神経細胞および神経膠細胞に到達し、グルコース代謝に関して領域特異的な効果を発揮することができる。増加したグルコースの摂取は、血液から脳へのグルコースの正味の輸送の増加を引き起こす。インスリン誘発性低血糖は、脳のＧＬＵＴ−１とＧＬＵＴ−３の濃度を増加させることが示されている。（Ｕｅｈａｒａら  （１９９７）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２７２：Ｅ７１６−Ｅ７１９）。このように、インスリンは輸送機構に作用することなく、間接的に輸送に影響を与える。インスリン作用の一部は、血液中のアミノ酸バランスの変化を介して脳外組織中で起こる可能性が提案されている。（Ｒｅａｇａｎら  （１９９９）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２７６：Ｅ８７９−Ｅ８８６）。
【００１２】
ＧＬＵＴ−１は、血液脳関門を通過するグルコースの輸送を容易にする。ＧＬＵＴ−１の発現レベルは、インスリンに非依存性である。むしろ、ＧＬＵＴ−１は、下垂体の対向制御ホルモンである血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）のような血管機能の強力な制御因子に依存する。ＨＰＡ系のオーバードライブは、メタボリック症候群として周知の臨床的側面である、中心性肥満、高血糖、脂質異常症、および高血圧などの代謝異常を引き起こす。骨格筋におけるＧＬＵＴ−１の過剰発現は、基礎グルコース取り込みの増加により乳酸とグリコーゲンの著しい増加を伴い、増加したグルコース流量は、インスリンと他の刺激による活性化に対するＧＬＵＴ−４の抵抗（例えば低酸素と収縮活動）をもたらす。（Ｋａｔｓｕｍａｔａら  （１９９９）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１１：１４０５−１３）。
【００１３】
神経細胞特異的グルコース輸送体ＧＬＵＴ−３は、中枢神経系の神経細胞へのグルコースの送達のみに関与している。ＧＬＵＴ−３のｍＲＮＡは、海馬の錐体神経、歯状回の顆粒神経細胞、および皮質を含む、脳で広く発現している。
【００１４】
脳特異的キナーゼ１および２（ＢＲＳＫ１／２）は、ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）関連のキナーゼであって、哺乳類の前脳において高発現される。ＡＭＰＫの活性化は、排他的でないとはいえ、骨格筋で見られるインスリン依存性グルコース輸送体ＧＬＵＴ−４の補充の細胞膜への誘導において重要な役割を果たしている。骨格筋における細胞膜へのＧＬＵＴ−４の転座を刺激するＡＭＰＫの能力は、インスリンとＡＭＰＫが一緒の効果は相加的であるため、インスリンによって刺激されるものとは異なるメカニズムを介して生じる。ＧＬＵＴ−４の調節におけるその役割に加えて、ＡＭＰＫがＧＬＵＴ−１を介してグルコース輸送を制御することをデータは示唆している。
【００１５】
脳内の変化したグルコース代謝は、限定されるものではないが、アルツハイマー病、ハンチントン病、てんかん、虚血、健忘症、および外傷性脳損傷を含む種々の疾患状態と関連する。グルコース輸送体の発現は、変化したグルコース代謝に関連すると考えられている。慢性的な高血糖は、脳のｍＲＮＡと蛋白質レベルの両方でＧＬＵＴ−１およびＧＬＵＴ−３の発現を下方制御するが、これは、微小血管の密度の減少によるものではない（Ｈｏｕら（２００７）Ｃｈｉｎ  Ｍｅｄ  Ｊ（Ｅｎｇｌ）．１２０（１９）：１７０４−１７０９）。ＧＬＵＴ−１とＧＬＵＴ−３の発現の下方制御は、細胞の損傷につながる可能性がある、過剰なグルコースが細胞に入るのを防ぐための身体の適応反応であるかもしれない。研究では、慢性的なストレスは、認知障害を伴う海馬で、分子形態学的な、超微細構造の変化を生成することを示唆している。さらに、インスリン抵抗性、認知症、認知障害、およびアルツハイマー病では、高インスリン血症を生じる、インスリンに対する感受性の低下がある。インスリンの毒性レベルは、神経機能と生存に負の影響を与え、末梢インスリン濃度の上昇は、脳脊髄液（ＣＳＦ）の濃度を急性的に増加させる。末梢性高インスリン血症は、アミロイドベータペプチド（Ａｂｅｔａ）の異常な除去と増大されたｃｄｋ５およびＧＳＫ３ベータ活性の結果としてのタウ過リン酸化の増加と相関する。これは、神経変性表現型および認知機能の低下を誘発する細胞のカスケードにつながる。
【００１６】
アルツハイマー病では、グルコース代謝が低下し、最も影響を受けた領域として前頭葉と海馬における脳微小血管でのＧＬＵＴ−１タンパク質の減少した量と関連付けられる。（Ｋａｌａｒｉａら（１９８９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５３：１０８３−１０８８）。同様に、ＧＬＵＴ−３レベルは、アルツハイマー病患者の脳で減少することが報告されている。（Ｓｉｍｐｓｏｎら（１９９４）Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．３５：５４６−５５１）。
【００１７】
軽度認知障害（ＭＣＩ）と呼ばれる症状が、前駆症状のアルツハイマー病を表しており、早期に診断された場合、薬物介入の最善の機会を示すことを研究は示唆している。ＭＣＩの診断のために使用される臨床基準は、Ｐｅｔｅｒｓｅｎらの基準（Ａｒｃｈ  Ｎｅｕｒｏｌ（１９９９）５６：３０３−３０８）であり、以下のものを含む：情報提供者によって確認される記憶の病訴；年齢や教育に対する客観的な記憶障害；正常な一般的認知機能；問題ない日常生活の活動；そして、対象は認知症の基準を満たしていない。
【００１８】
ハンチントン病は、神経変性疾患である。この病気の初期段階は、人格、認知、または身体的な能力における微妙な変化によって特徴付けられる。最も特徴的な初期の身体的な症状は、ぎくしゃくした、でたらめな、かつ制御不能な動きで特徴付けられる舞踏病である。舞踏病は、多くの場合、最初は一般的な落ち着きのなさ、小さな、意図せずに始められたあるいは未完成の動作、協調運動失調、または遅延型衝動性眼球運動として示される。疾患が進行するにつれて、硬直、反復的動作、または異常姿勢などの徴候が現われる。これらの症状は、当該疾患の発症の段階とみなされ、徐々に支配的な身体症状となる。若年性ハンチントン病は、一般的に速く進行し、仮にあったとしても舞踏病が一時的に示され、硬直が主な症状であるという点で、これらの症状とは異なる。また、発作が若年性ハンチントン病の一般的な症状である。ハンチントン病では、ＧＬＵＴ−１、ＧＬＵＴ−３のレベルは、脳の尾状部分で減少している。（Ｇａｍｂｅｒｉｎｏら（１９９４）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．６３：１３９２−１３９７）。尾状でのグルコース代謝の低下は、ハンチントン病のリスクがある症候性と臨床的に無症候性の両方の対象で報告されている。（Ｍａｚｚｉｏｔｔａら（１９８７）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊ．Ｍｅｄ．３１６：３５７−３６２）。
【００１９】
グルコース輸送は、また、少なくとも一部は血液脳関門内皮におけるＧＬＵＴ−１の発現低下に起因する、ヒトてんかん脳で減少もしている。（Ｃｏｒｎｆｏｒｄら（１９９８）Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．４３：８０１−８０８；Ｃｏｒｎｆｏｒｄら（１９９８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．５４：８４２−８５１）。
【００２０】
特発性てんかんは、より大きな集団よりも、１型糖尿病の集団でより大きな発生率を有する。（Ｈａｎｎｏｎｅｎら（２００３）Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ＆  Ｃｈｉｌｄ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ４５：４：２６２−２６８）。その結果から推定される意義は、いくつかの方法で解釈することができた。糖尿病は、部分的に特発性全般てんかんの原因となったか、あるいは、２つの症状は、発症が異なる年齢を有していた。高血糖、軽度の高浸透圧、および低ナトリウム血症を含む代謝異常は、限局性脳障害の分野で持続性部分てんかんの進行に関与する。後頭部発作と半盲は、高血糖が原因で発生することがあり、特殊なＭＲＩとＶＥＰの所見を伴うことがある。虚血前高血糖に起因する発作および遅延型神経損傷の発生率の増加は、グルコースレベルよりもむしろコルチコステロンレベルに対応し、その脳虚血性損傷を予測する上でグルコースよりもコルチコステロンが、より大きな予後的価値を有することを示唆する。
【００２１】
ＧＬＵＴ−１不全症候群は、主に脳に影響を及ぼす疾患である。罹患した個体は、一般的に生後の数ヶ月で始まる発作を有する。ＧＬＵＴ−１不全症候群の乳児は、出生時に通常の頭のサイズを有するが、脳と頭蓋骨の成長がしばしば遅く、重篤な場合には、異常に小さい頭のサイズ（小頭症）となる。ＧＬＵＴ−１不全症候群の対象は、多くの場合、発育遅延や知的障害を呈する。ＧＬＵＴ−１不全症候群はまた、筋肉の異常な緊張（痙縮）、協調運動の困難性（運動失調）、言語困難（構音障害）により引き起こされる硬直などの他の神経学的な難題も伴う。一部のヒトは、特に食事の前に、精神錯乱、エネルギーの欠如（無気力）、頭痛、筋肉のけいれん（間代性筋けいれん）、または不随意不規則眼球運動の症状の発現を経験する。
【００２２】
脳のグルコース代謝と輸送関連疾患および障害に関連する他のマーカーとしては、Ｎｒｆ２（核因子赤血球２関連因子２）、ＧＦＡＰ（グリア線維性酸性タンパク質）、およびＨＮＥ（４−ヒドロキシノネナール）が挙げられる。
【００２３】
Ｎｒｆ２（核因子赤血球２関連因子２）は、複数の細胞保護タンパク質の調節因子である。Ｎｒｆ２は、細胞の酸化還元恒常性を維持し、酸化による損傷から細胞を保護する転写プログラムを積極的に調節する転写因子である。（Ｒａｎｇａｓａｍｙら（２００４）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １１４：１２４８）。Ｎｒｆ２は、それらの遺伝子プロモーターで見つかった抗酸化応答配列（ＡＲＥ）に特異的に結合することによりその標的遺伝子の転写を活性化する。Ｎｒｆ２のレベルの減少は、高脂肪食に関連し、酸化ストレスおよび認知障害につながることが示されている。（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（２０１０）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１１４：１５８１−１５８９）。
【００２４】
ＧＦＡＰ（グリア線維性酸性タンパク質）は、神経損傷のマーカーである。ＧＦＡＰは、殆ど星状細胞でもっぱら見出される中間径繊維タンパク質であり、これは、成人において、ＧＦＡＰ発現レベルを制御する。星状細胞は、神経伝達物質の処理、細胞外イオン濃度の制御、神経成長の方向と量の調整、血液脳関門の維持、および免疫反応への関与などの様々な構造的および代謝的機能を実行する、神経膠細胞の主要なタイプである。星状細胞は、このような高齢化などの事象の過程で、休止状態から突起のある反応状態に変形するにつれて、ＧＦＡＰ発現は、上方制御される。ＧＦＡＰレベルは、アルツハイマー病を患っている患者の脳組織と脳脊髄液中で増加することが示されており、反応性星状細胞は、アルツハイマー病の神経病理学に関与している可能性が示唆されている。（Ｗａｌｌｉｎら（１９９６）Ｄｅｍｅｎｔｉａ  ７：２６７）。アルツハイマー病に罹患した脳では、シナプスの喪失が、ＧＦＡＰ陽性星状細胞の数の増加に関係している。また、シナプスのこの喪失は、反応性星状細胞神経膠症の程度に関連していると思われる。（Ｂｒｕｎら（１９９５）Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ４：１７１）。ＧＦＡＰは、神経膠症から生じる、その後の神経再生を妨げる可能性があるグリア性瘢痕の主要成分である。
【００２５】
ＨＮＥ（４−ヒドロキシノネナール）は、アルツハイマー病やパーキンソン病と関連のある酸化的ストレスのマーカーである。ＨＮＥレベルの増加は、アルツハイマー疾患の脳で検出されている（Ｍａｒｋｅｓｂｅｒｙら（１９９９）Ｂｒａｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ  ９（１）：１３３−４６；Ｓａｙｒｅら（１９９７）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  ６８（５）：２０９２−２０９７）。ＨＮＥは、膜脂質のポリ不飽和脂肪酸の酸化過程で生成されるα，β−不飽和アルデヒドである。それは、膜過酸化の主要産物の一つであり、酸化的ストレス下で観察される細胞毒性効果に主に関与すると考えられている。ＨＮＥは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、およびタンパク質合成の阻害、特定の酵素活性の干渉、ならびに熱ショックタンパク質の誘導などのいろいろな副作用を示す。（Ｙｏｒｉｔａｋａら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：２６９６−２７０１）。
【００２６】
パーキンソン病は、脳の中央部に細胞の小さな領域（黒質と呼ばれる）に影響し、女性よりも男性でわずかに、より頻繁に発生する進行性の疾患である。また、振盪麻痺や振戦麻痺と呼ばれ、主に５０才〜６９才の年齢の人々を攻撃する中枢神経系の障害である。およそ１，０００人のうち１人は、この病気と接する。パーキンソン病の１つの既知の原因は、脳内でメッセージを送信するための化学的な必要物である通常ドーパミンを産生する細胞の変性および死である。これは、ドーパミンの欠乏、そして結果的に、おそらくパーキンソン病の症状を引き起こす。一般的な症状は、震え、筋肉のこわばり（または硬直）、動きの遅さ（動作緩慢）、バランスの喪失（姿勢機能障害）を含む。てんかん、脳卒中や認知症とともに、パーキンソン病は、最も一般的な神経学的症状の１つである。患者によっていくらかの違いはあるが、この疾患の普通の病歴は、疾病の発症から身体障害まで１０〜１５年の進行割合となる。パーキンソン病はそれ自体が、さらには、その疾患によって引き起こされる障害が、多くの場合、誤嚥、肺炎、および尿路感染症などの致命的な感染症を引き起こす。
【００２７】
パーキンソン病は、通常、３つの異なるグループに分類される。通常、パーキンソン病と呼ばれる振戦麻痺は、その症例の約７５％が患っている、パーキンソン症候群の最も一般的な形態であり、その起源や原因は不明である。パーキンソン症候群の第２の形態は、一酸化炭素、マンガンおよびＭＰＴＰ（メチル−フェニルテトラヒドロピリジン）と呼ばれる化合物を含む薬物や毒素によって引き起こされる。パーキンソン症候群の第３の形態は、ドーパミン産生脳細胞に損傷を与える複数の小さな脳卒中に起因する可能性がある血管性パーキンソン症候群と呼ばれる。
【００２８】
ＡＤＨＤは、比較的一般的な症候群（疫学研究では、一般的な人口のうち、ＡＤＨＤの有病率が、２〜１０％であることが示唆されている）を臨床的に意味する。ＡＤＨＤは、小児期に始まり、一般的に成人期までに緩解する（Ｓｚａｔｍａｒｉ（１９８２）Ｃｈｉｌｄ  Ａｄｏｌｅｓｃ．Ｐｓｙｃｈｉａｔ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．１：３６１−３７１）。ＡＤＨＤは、臨床的には、不注意（例えば、細心の注意を払うことができないこと、注意を持続することが困難であること、作業や活動を組織化することが困難であり、余分な刺激に簡単に気を取られること）、多動性（例えば、座ったままでいることが困難であること、不適切な状況での過度な運動活動をすること、「モーターにより駆動されている」かのように行動すること）、および衝動性（例えば、順番を待つことが困難であること、質問が完了する前に回答し、そして多くの場合、継続中の会話の中断または邪魔などをすること）によって特徴づけられる（米国精神医学会、精神障害の診断と統計マニュアル（ＤＳＭ−ＩＶ）、１９９４）。
【００２９】
クロム
クロムは、栄養学的に必須の微量元素である。食べ物中のクロムの重要性は、Ｓｃｈｗａｒｚによって１９５９年に確立された。（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，“Ｐｒｅｓｅｎｔ  Ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ  ｉｎ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，”ｐａｇｅ  ５７１，ｆｉｆｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８４，ｔｈｅ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）。クロムはすべての既知のインスリン依存性の系における最適なインスリン活性に必須である（Ｂｏｙｌｅら（１９７７）Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｍｅｄ．Ｊ．７０：１４４９−１４５３）。クロムの枯渇は、グルコース、脂質およびタンパク質の代謝の乱れ、ならびに短い寿命に特徴づけられる。不十分な食べ物のクロムは、成人発症型糖尿病と心血管疾患の両方に関連している。
【００３０】
正常な個体へのクロムの栄養補助食品は、高密度リポタンパク質コレステロール、インスリンおよびインスリン結合を含む耐糖能、血清脂質濃度の改善をもたらすことが報告されている。（Ａｎｄｅｒｓｏｎ  （１９８６）Ｃｌｉｎ．Ｐｓｙｃｈｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４：３１−４１）。３価の形態の補助食品のクロム、例えば、塩化クロムは、成人発症型（２型）糖尿病および心血管疾患に関連する危険因子の改善に関連する。米国特許第５，９２９，０６６号、同第６，３２９，３６１号、および同第６，８０９，１１５号（これらの特許は参照によりその全体がそれぞれ本明細書に取り込まれる）に記載されているように、クロムの補給は、高血糖を減らすだけでなく、体重減少を促進することが示されている。臨床研究では、Ａｎｄｅｒｓｏｎら（Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  （１９８７）３６（４）：３５１−３５５，１９８７）は、クロムの補給が、低血糖症状を緩和し、低血糖範囲の血清グルコースレベルを上昇させることを示した。別の研究では、１型糖尿病の太りすぎの子供へのクロムの補給は、いずれの低血糖の症例にも至らなかった（２００７年５月）。さらに別の研究では、１型糖尿病の成人へのクロムの補給は、いずれの低血糖の症例にも至らず、インスリン投与量を５０％減少させることができた（Ｒａｖｉｎａら（１９９５）Ｊ．Ｔｒａｃｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄ．１２：７１−８３）。
【００３１】
体の主要なエネルギー源は、グルコースと脂肪酸類である。クロムの減少は、生物学的に効果のないインスリンおよびグルコース代謝傷害をもたらす。これらの条件下では、体はそのエネルギー要件を満たすために脂質代謝に主に依存し、過剰量のアセチル−ＣｏＡとケトン体を産生する。アセチル−ＣｏＡの一部は、高コレステロール血症をもたらす増加したコレステロール生合成に転用することができる。真性糖尿病は、大部分、糖尿、高コレステロール血症、そして、しばしばケトアシドーシスによって特徴づけられる。真性糖尿病患者で見られる促進されたアテローム性動脈硬化のプロセスは、高コレステロール血症を伴う。（Ｂｏｙｌｅら（１９７７）Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｍｅｄ．Ｊ．７０：１４４９−１４５３）。
【００３２】
クロムはインスリンの補因子として機能する。これは、インスリン受容体に結合し、その機能の多くを、おそらくすべてを増強する。（Ｂｏｙｌｅら（１９７７）Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｍｅｄ．Ｊ．７０：１４４９−１４５３）。これらの機能は、限定されるものではないが、炭水化物および脂質代謝の調節を含む。（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，  “Ｐｒｅｓｅｎｔ  Ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ  ｉｎ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，”ｐａｇｅ  ５７１，ｆｉｆｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ  （１９８４，ｔｈｅ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ））。無機クロム化合物自体の個体への導入は、特に有益ではない。クロムは、有機錯体に内在的に変換されなければならないか、または生物学的に活性な分子として摂取される必要がある。しかし、摂取された無機クロムのわずか約０．５％が体内に吸収される。（１日あたりの推奨許容量、第９改訂版、全米科学アカデミー、１６０頁、１９８０年）。ほとんどの有機クロム化合物のわずか１〜２％が、体内に吸収される。
【００３３】
米国特許第４，３１５，９２７号および米国再発行特許第３３，９８８号は、クロムを含む選択された必須の金属が、ピコリン酸の体外で合成された配位錯体として哺乳動物に投与されるとき、それらは他の金属と競合することなく吸収に直接利用できることを開示している。そこには、選択的に人間の食べ物に不可欠な金属を補うための、そして、腸細胞によるこれらの金属の吸収を促進するための組成物および方法が記述されている。これらの錯体は、安全であり、安価であり、生体適合性であり、そして、製造が容易である。ピコリン酸（ピリジン−２−カルボン酸）の体外で合成された必須金属配位錯体は、以下の構造式を有する：
【化１】
2014506932.tif 000003
（式中、Ｍは金属陽イオンを表し、ｎはカチオンの価数に等しい。例えば、ＭがＣｒであり、ｎ＝３の場合には、その他の化合物はトリピコリン酸クロムである。開示されているその他のピコリン酸クロムは、モノピコリン酸クロムおよびジピコリン酸クロムを含む。
【００３４】
クロムの米国推奨一日摂取量（ＲＤＩ）は、１２０μｇである。参照により全体の内容が明示的に本明細書に組み込まれる米国特許第５，０８７，６２３号は、５０〜５００μｇの範囲の投与量で成人発症型糖尿病の治療のためのトリピコリン酸クロムの投与を記述している。参照により全体の内容が本明細書に明示的に組み込まれる米国特許第６，３２９，３６１号は、２型糖尿病のヒトにおいて、高血糖を減少させ、そして、血清グルコースのレベルを安定化するためのトリピコリン酸クロムの高投与量の使用（１日当たり１，０００〜１０，０００μｇのクロムの投与）を開示している。参照により全体の内容が本明細書に明示的に組み込まれる米国特許第５，７８９，４０１号および同第５，９２９，０６６号は、トリピコリン酸クロム−ビオチン組成物および２型糖尿病のヒトにおいて血糖値を下げる際のその使用を開示している。
【００３５】
参照により全体の内容が本明細書に明示的に組み込まれる米国特許第５，０８７，６２３号、同第５，０８７，６２４号、および同第５，１７５，１５６号は、食べ物のクロムを補うために、高血糖を減少させて血清グルコースを安定化させるために、除脂肪体重を増加させて、体脂肪を減少させるために、そして望ましくない高血清ＬＤＬ−コレステロール値の低下および血清高密度脂質（ＨＤＬ）コレステロール値の上昇を含む血清脂質レベルを調節するためのトリピコリン酸クロムの使用を開示している。参照により全体の内容が本明細書に明示的に組み込まれる米国特許第４，９５４，４９２号および同第５，１９４，６１５号は、食べ物のクロムを補充し、血清脂質レベルを低下させるために使用もされる関連錯体のニコチン酸クロムを記述している。ピコリン酸とニコチン酸は、以下の構造を有する位置異性体である：
【化２】
2014506932.tif 000004
【００３６】
ニコチン酸とピコリン酸は、１価、２価および３価の金属イオンと配位錯体を形成し、腸細胞を通過して血流へそれらを輸送することによって、これらの金属の吸収を促進する。ＣｒＣｌ３の経口投与後のラットにおけるクロムの吸収は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）であるアスピリンやインドメタシンによって促進された。（Ｄａｖｉｓら（１９９５）Ｊ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｒｅｓ．１５：２０２−２１０；Ｋａｍａｔｈら（１９９７）Ｊ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  １２７：４７８−４８２）。これらの薬剤は、アラキドン酸を種々のプロスタグランジン類に変換する酵素シクロオキシゲナーゼを阻害し、その結果、腸の粘液形成を阻害し、クロムの吸収を促進する腸内ｐＨを低下させる。
【００３７】
低血糖と低血糖に関連する症状の効果的な治療のための恒常的な必要性が残されている。そのような必要性は、インスリンのより安全かつ最適な投与についてである。本明細書に開示された本実施形態は、安全で安価な、違法薬物のない治療剤およびそれを使用する方法を提供することによって、この必要性に対処している。
【発明の概要】
【００３８】
本明細書に開示された実施形態は、治療効果と利点を改善した新規なクロム−インスリン錯体の驚くべき発見に部分的に基づいている。したがって、本明細書に記載された実施形態に従って、インスリンおよび／またはクロムの改善された送達のための組成物、およびその使用が提供される。
【００３９】
いくつかの実施形態は、クロム−インスリン錯体を含む組成物に関する。いくつかの実施形態では、クロム−インスリン錯体は、インスリンに対するクロムの化学量論比、例えば、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０を含む。いくつかの実施形態では、クロムおよびインスリンは、クロム−インスリン錯体中に、非化学量論的な量で、例えば、インスリン１分子当たり、またはインスリンの６量体当たり、クロム（例えば、クロム錯体）の１〜１０分子が存在している。いくつかの実施形態では、本錯体は、約３０〜４０ｋＤａ、例えば、３０ｋＤａ、３１ｋＤａ、３２ｋＤａ、３３ｋＤａ、３４ｋＤａ、３５ｋＤａ、３６ｋＤａ、３７ｋＤａ、３８ｋＤａ、３９ｋＤａ、４０ｋＤａ、またはそれ以上の分子量を有する。
【００４０】
クロム−インスリン錯体を含む改善された組成物は、それを必要とする個体、例えば、糖尿病や低血糖などのグルコース代謝障害または病状を有する個体へのインスリンの送達のために有用である。いくつかの実施形態では、クロム−インスリン錯体を含む組成物は、錯体化されていないインスリン、または他のインスリン錯体と比べて、血流への改善された吸収を示す。いくつかの実施形態では、クロム−インスリン錯体を含む組成物は、錯体化されていないインスリン、または他のインスリン錯体と比べて、血清グルコースレベルのより急速な低下を示す。いくつかの実施形態では、クロム−インスリン錯体を含む組成物は、Ｉ型糖尿病に伴う体重減を減少させる。いくつかの実施形態では、クロム−インスリン錯体を含む組成物は、２型糖尿病に伴う体重増加を減少させる。
【００４１】
したがって、本明細書に開示されるいくつかの実施形態は、クロム−インスリン錯体を含む組成物に関する。いくつかの実施形態では、組成物中のクロムとインスリンの量は、クロムおよびまたはインスリンの治療有効量を提供するために一緒に選択される。いくつかの実施形態では、クロムおよびインスリンの相乗的有効量は、相加効果を超える効果を達成するために提供される。いくつかの実施形態では、クロムとインスリンの組成物は、インスリン単独よりも、あるいは亜鉛−インスリンなどの他のインスリン錯体に比べて、それを必要とする患者に、より大きな治療効果を提供するために使用することができる。
【００４２】
いくつかの態様において、組成物中のクロムの相乗的有効量は、約５〜２，０００マイクログラムとすることができる。いくつかの態様において、インスリンの相乗的有効量は、約１単位〜５００単位である。いくつかの態様において、組成物は、インスリン単位当たりクロムの約０．００１マイクログラムからインスリン単位当たりクロムの２０マイクログラムの、インスリンに対するクロムの比率を有する。いくつかの態様において、クロムは、ピコリン酸クロム、トリピコリン酸クロム、ニコチン酸クロム、ポリニコチン酸クロム、塩化クロム、ヒスチジン酸クロム、トリヒスチジン酸クロム、およびクロム酵母からなるクロム錯体群から選択される。好ましくは、クロムは、ヒスチジン酸クロムを含む。いくつかの態様において、組成物は、増加したインスリン受容体の結合を提供する。クロムは、インスリンの溶液に溶解させることができるし、あるいはクロムは、インスリンの溶液中に懸濁させることができる。
【００４３】
本明細書に開示された実施形態によれば、それを必要とする対象にインスリンを投与する改善された方法が提供され、当該方法は、インスリンとクロムを配合して組成物を生成し、対象にその組成物の最適投与量を投与することを含む。インスリンとクロムの量は、相乗的に有効な量とすることができる。組成物は、クロム−インスリン錯体を含むことができる。いくつかの実施形態では、対象は、グルコース代謝に関連する疾患または障害を有している。いくつかの態様において、疾患または障害は、以下からなる群から選択される：糖尿病、アルツハイマー病、認知症、軽度認知障害（ＭＣＩ）、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、ハンチントン病、てんかん、およびパーキンソン病。いくつかの実施形態では、クロム−インスリン錯体を含む組成物の最適投与量は、対象への組成物の投与前に対象への投与について決定される。
【００４４】
いくつかの実施形態では、クロムとインスリンを配合して注射用組成物とすることを含む、クロムとインスリンの注射可能な組成物の製造方法が提供される。クロムは、溶液中に懸濁することができるか、あるいはクロムは、溶液中に溶解することができる。クロムとインスリンの注射用組成物は、クロム−インスリン錯体を含むことができる。注射用組成物は、懸濁液または溶液とすることができる。いくつかの態様において、インスリンに対するクロムの比率は、インスリンの単位当たり、クロム０．００１マイクログラムからインスリンの単位当たり、クロム１００マイクログラムである。いくつかの実施形態では、組成物は鼻腔内に投与される。
【００４５】
いくつかの実施形態では、それを必要とする対象における血清グルコースレベルを安定化するための方法が提供され、それは、インスリンを必要としている対象を識別し、クロムとインスリンを含む組成物を前記対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、クロムとインスリンの組成物は、クロム−インスリン錯体を含む。いくつかの態様では、クロムとインスリンの組成物は、非経口的に投与される。他の態様では、クロムとインスリンの組成物は、経口投与される。いくつかの態様では、クロムとインスリンの組成物は、経肺投与される。いくつかの態様では、クロムとインスリンの組成物は、経鼻的に投与される。いくつかの実施形態では、対象は、糖尿病を患っている。いくつかの実施形態では、対象は、過体重である。いくつかの実施形態では、対象は、糖尿病誘発性の体重減少があると確認される。
【００４６】
いくつかの実施形態では、インスリンを必要とする対象における血清グルコースレベルを安定化させるためのクロムとインスリンを含む組成物の使用が提供される。いくつかの実施形態では、クロムとインスリンの組成物は、クロム−インスリン錯体を含む。いくつかの態様においては、クロムとインスリンの組成物は、注射による投与用に調合される。他の態様においては、クロムとインスリンの組成物は、経口投与または経鼻投与のために調合される。いくつかの実施形態では、対象は、糖尿病に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、過体重である。いくつかの実施形態では、対象は、糖尿病誘発性の体重減少があると確認される。
【００４７】
したがって、いくつかの実施形態では、インスリン療法を受けている糖尿病患者における、インスリン投与に伴う体重減を減らすための、または体重を安定化させるための方法が本明細書で提供される。また、インスリン療法を受けている糖尿病患者における、インスリン投与に伴う体重減を低減させるための、または体重を安定化させるための、クロムとインスリンを含む組成物が提供される。いくつかの実施形態では、クロムとインスリンの組成物は、クロム−インスリン錯体を含む。いくつかの態様では、クロムとインスリンの組成物は、注射による投与用に調合される。
【００４８】
いくつかの実施形態では、それを必要とする対象の血清グルコースレベルを安定化させるための改善された方法が提供され、ここに、その改善は、クロム−インスリン錯体を含む組成物の形態で対象にインスリンを投与することを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、相乗的に有効量のクロムとインスリンを含む。組成物は、非経口的に、経口的に、経肺的に、または経皮的に投与することができる。いくつかの態様では、クロムの相乗的有効量は、約３００〜１，０００マイクログラムである。いくつかの態様において、インスリンの相乗的有効量は、約５単位〜５０単位である。いくつかの実施形態では、対象は、グルコース代謝に関連する疾患または障害を有している。
【００４９】
いくつかの実施形態では、インスリンを必要とする対象でのインスリンによる糖尿病、例えば、１型または２型糖尿病を治療する改善された方法は、インスリンとクロムを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、クロム−インスリン錯体を含む。いくつかの実施形態では、インスリンとクロムを含む組成物は、非経口的に投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、経鼻的に投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、経肺投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、経皮的に投与される。いくつかの実施形態は、糖尿病、例えば、１型または２型糖尿病を治療するために、クロムとインスリンを含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、注射による投与用に調合される。いくつかの実施形態では、組成物は、クロム−インスリン錯体を含む。
【００５０】
いくつかの実施形態では、糖尿病の対象のインスリン誘導性の体重減少を予防する方法は、糖尿病の治療のためのインスリン療法の必要な対象を識別し、インスリンとクロムを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの態様において、インスリンとクロムを含む組成物は、非経口的に投与される。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】実施例１に記載の、インスリン注射０．５時間後の対照群（インスリンなし）と処置群の血清グルコースレベルを示す棒グラフである。１つの処置群は、インスリン（「Ｈｙｐｏ」または「Ｈ」）のみが投与された。別の処置群は、インスリンとピコリン酸クロム（「Ｈ＋ＣｒＰｉｃ」）が投与された。最後の群は、インスリンとヒスチジン酸クロム（「Ｈ＋ＣｒＨｉｓ」）が投与された。
【図２】実施例１に記載したように、対照群（無処置）と処置群（Ｈ、Ｈ＋ＣｒＰｉｃ、およびＨ＋ＣｒＨｉｓ）に対する処置後の脳内クロムレベルを示す棒グラフである。
【図３】実施例１に記載したように、対照群（無処置）と処置群（Ｈ、Ｈ＋ＣｒＰｉｃ、およびＨ＋ＣｒＨｉｓ）に対する処置後のＧＬＵＴ−１輸送体レベルを示す棒グラフである。
【図４】実施例１に記載したように、対照群（無処置）と処置群（Ｈ、Ｈ＋ＣｒＰｉｃ、およびＨ＋ＣｒＨｉｓ）に対する処置後のＧＬＵＴ−３輸送体レベルを示す棒グラフである。
【図５】実施例１に記載したように、対照群（無処置）と処置群（Ｈ、Ｈ＋ＣｒＰｉｃ、およびＨ＋ＣｒＨｉｓ）に対する処置後の海馬Ｎｒｆ２（核因子赤血球２関連因子２）レベルを示す棒グラフである。
【図６】実施例１に記載したように、対照群（無処置）と処置群（Ｈ、Ｈ＋ＣｒＰｉｃ、およびＨ＋ＣｒＨｉｓ）に対する処置後の海馬ＧＦＡＰ（グリア線維性酸性タンパク質）レベルとＨＮＥ（４−ヒドロキシノネナール）レベルを示す棒グラフである。
【図７】実施例３に記載したように、１型糖尿病誘発ラットのグルコースレベルに対するインスリン−キレート型の効果を示す棒グラフと折れ線グラフである。対照群（無処置）に加えて、５つの処置群には、以下のものをそれぞれ投与した：ストレプトゾシン（ＳＴＺ）；ストレプトゾシンおよび酸化亜鉛（ＳＴＲ＋Ｚｎ）；ストレプトゾシンおよびヒスチジン酸クロム（ＳＴＺ＋ＣｒＨｉｓ）；ストレプトゾシン、酸化亜鉛、およびインスリン（ＳＴＲ＋ＺｎＩｎｓ）；ならびにストレプトゾシン、ヒスチジン酸クロム、およびインスリン（ＳＴＲ＋ＣｒＩｎｓ）。
【図８】実施例３に記載したように、対照群（無処置）と処置群（ＳＴＲ、ＳＴＲ＋Ｚｎ、ＳＴＲ＋Ｃｒ、ＳＴＲ＋ＺｎＩｎｓ、およびＳＴＲ＋ＣｒＩｎｓ）に対する処置後の腎臓ＯＣＴ−１（有機カチオン輸送体１）のレベルを示す棒グラフである。
【図９】実施例３に記載したように、対照群（無処置）と処置群（ＳＴＲ、ＳＴＲ＋Ｚｎ、ＳＴＲ＋Ｃｒ、ＳＴＲ＋ＺｎＩｎｓ、およびＳＴＲ＋ＣｒＩｎｓ）に対する処置後の腎臓ＯＣＴ−２（有機カチオン輸送体１）のレベルを示す棒グラフである。
【図１０】実施例３に記載したように、対照群と処置群（ＳＴＲ、ＳＴＲ＋Ｚｎ、ＳＴＲ＋Ｃｒ、ＳＴＲ＋ＺｎＩｎｓ、およびＳＴＲ＋ＣｒＩｎｓ）に対する処置後の腎臓ＮＦＫ（核因子カッパＢ）のレベルを示す棒グラフである。
【図１１】実施例３に記載したように、対照群と処置群（ＳＴＲ、ＳＴＲ＋Ｚｎ、ＳＴＲ＋Ｃｒ、ＳＴＲ＋ＺｎＩｎｓ、およびＳＴＲ＋ＣｒＩｎｓ）に対する処置後の腎臓ＭＲＰ２（多剤耐性タンパク質２）のレベルを示す棒グラフである。
【図１２】実施例３に記載したように、対照群と処置群（ＳＴＲ、ＳＴＲ＋Ｚｎ、ＳＴＲ＋Ｃｒ、ＳＴＲ＋ＺｎＩｎｓ、およびＳＴＲ＋ＣｒＩｎｓ）に対する処置後の脳のＮＦＫレベルを示す棒グラフである。
【図１３】実施例３に記載したように、対照群と処置群（ＳＴＲ、ＳＴＲ＋Ｚｎ、ＳＴＲ＋Ｃｒ、ＳＴＲ＋ＺｎＩｎｓ、およびＳＴＲ＋ＣｒＩｎｓ）に対する処置後の脳のインスリンレベルを示す棒グラフである。
【図１４】サイジングカラムを通して溶出サされたヒスチジン酸クロムの経時的な紫外線吸光度（ｍＡＵ）を示すグラフである。
【図１５】サイジングカラムを通して溶出されたインスリンの経時的な紫外線吸光度（ｍＡＵ）を示すグラフである。
【図１６】サイジングカラムを通して溶出されたクロム−インスリン組成物からの上清液の経時的な紫外線吸光度（ｍＡＵ）を示すグラフである。
【図１７】サイジングカラムを通して溶出されたクロム−インスリン組成物からの上清液の５２Ｃｒを標的とする誘導結合プラズマ質量分析（「ＩＣＰＭＳ」）装置からのカウントの経時的出力を示すグラフである。
【図１８】クロム−インスリン錯体の存在を示すサイジングカラムを通して溶出されたクロム−インスリン組成物からの再溶解析出物の経時的な紫外線吸光度（ｍＡＵ）を示すグラフである。
【図１９】クロム−インスリン錯体の存在を示すサイジングカラムを通して溶出されたクロム−インスリン組成物からの再溶解析出物の５２Ｃｒを標的とするＩＣＰＭＳ装置からの出力からの経時的カウントを示すグラフである。
【図２０】クロム−インスリン錯体の存在を示すサイジングカラムを通して溶出されたクロム−インスリン組成物からの再溶解析出物の５３Ｃｒを標的とするＩＣＰＭＳ装置からの出力からの経時的カウントを示すグラフである。
【図２１】標準インスリン（Ｒ−Ｉｎ）、クロム−インスリン（Ｃｒ−Ｉｎ）、または亜鉛−インスリン（Ｚｎｃ−Ｉｎ）のいずれかで処置したマウスに対する経時的な血清インスリンレベルを示す折れ線グラフである。
【図２２】標準インスリン（Ｒ−Ｉｎ）、クロム−インスリン（Ｃｒ−Ｉｎ）、または亜鉛−インスリン（Ｚｎｃ−Ｉｎ）のいずれかで処置したマウスに対する経時的な血清グルコースレベルを示す折れ線グラフである。
【図２３】生理食塩水（対照）、標準インスリン（Ｉｎｓｕｌｉｎ）、クロム−インスリン（Ｃｒ−Ｉｎ）、または亜鉛−インスリン（Ｚｎｃ−Ｉｎ）のいずれかで処置した糖尿病マウスに対する経時的な血清インスリンレベルを示す折れ線グラフである。
【図２４】標準インスリン（Ｉｎｓｕｌｉｎ）、クロム−インスリン（Ｃｒ−Ｉｎ）、または亜鉛−インスリン（Ｚｎｃ−Ｉｎ）のいずれかで処置した糖尿病マウスに対する経時的な血清グルコースレベルを示す折れ線グラフである。
【図２５】実施例５に記載したように、対照群と処置群（対照、１型、＋ＺｎＩｎｓ、＋ＣｒＩｎｓ）に対する処置後の血清グルコースレベルを示す棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
本明細書に開示された実施形態は、低血糖症の予防における、そして脳損傷などの低血糖関連症状の予防または寛解における、クロムの予想外の保護効果についての出願人による発見、ならびにそれを必要とする人々にインスリン療法を施す改善された方法の出願人による発見に部分的に基づいている。
【００５３】
クロム
本明細書で使用されるように、用語「クロム」は、塩化クロム、クロム酵母、同様にクロム錯体を指す。本明細書に開示された実施形態で有用ないくつかのクロム錯体は、限定されるものではないが、以下のものを含む：ヒスチジン酸クロム；トリヒスチジン酸クロム；ポリヒスチジン酸クロム；ジニコシステイン酸クロム；クロミウムジニコチネートトリプトファン；クロミウムジニコチネートチロシン；クロミウムジニコチネートヒドロキシシトレート；クロミウムジニコチネートシンナメート；クロミウムジニコチネートガレート；クロミウムジニコチネート５−ヒドロキシトリプトファン；クロミウムジニコチネートアスパルテート；クロミウムジニコチネートグルタメート；クロミウムジニコチネートアルギネート；クロミウムトリス（トリプトファン）；ニコチン酸クロム；ポリニコチン酸クロム；ピコリン酸クロム；モノピコリン酸クロム；ジピコリン酸クロム；トリピコリン酸クロム；クロミウムトリフェニルアラニン；クロミウムトリス（チロシン）；クロミウムトリス（ヒドロキシシトレート）；クロミウムトリス（５−ヒドロキシトリプトファン）；クロミウムトリス（シンナメート）；クロミウムトリス（ガレート）。本明細書に開示されたクロム錯体は、３つの異なるカルボン酸配位子を有するクロムである。ニコチン酸、グルタミン酸、システイン酸、アスパラギン酸、アルギニン酸、チロシン、トリプトファンからの配位子を変えることによって、少なくとも３０の可能なクロム錯体を製造することができる。
【００５４】
様々なケースでは、１つまたは複数の配位子は、そのカルボン酸官能基を介して、同様にパイ電子−ｄ軌道の相互作用によりクロムと結合する能力を有している。配位子とクロムの間のこの二次相互作用は、クロムの生物学的利用能と吸収を高めることができる。
【００５５】
いくつかの実施形態では、クロムは、３価クロムと、少なくとも１個で３個以下のチロシンまたはトリプトファン配位子との錯体の形態とすることができる。特定の実施形態では、クロムは、クロムミウム（ＩＩＩ）トリス（トリプトファン）およびクロムミウム（ＩＩＩ）トリス（チロシン）などのクロム錯体の形態とすることができる。
【００５６】
いくつかの実施形態では、クロム錯体は、３価のクロムと植物から抽出された１種以上の化合物との錯体とすることができる。そこからこれらの化合物を抽出することができる植物の非限定的な例としては、ガルシニア属、グロフォニア・シンプリシフォリア（Ｇｒｏｆｆｏｎｉａ  ｓｉｍｐｌｉｃｉｆｏｌｉａ）、シナモン樹皮、没食子、ウルシ、マンサク、茶葉、およびオーク樹皮などの植物が挙げられる。例えば、いくつかの実施形態では、クロムは、ヒドロキシクエン酸クロム、ヒドロキシトリプトファンクロム、ケイ皮酸クロム、および没食子酸クロムの形態で提供することができる。
【００５７】
好ましくは、クロムは、ピコリン酸クロムとヒスチジン酸クロムの組み合わせ、あるいはニコチン酸クロムとヒスチジン酸クロムの組み合わせとして提供される。いくつかの好ましい実施形態では、クロムはヒスチジン酸クロムとして提供される。
【００５８】
クロム錯体は、腸管細胞によるクロムの吸収の助けとなるが、いくつかの実施形態では、錯体を形成していないキレート剤が、有利に組成物中に含まれて、他の摂取されたクロムならびに他の金属（限定されるものではないが、銅、鉄、マグネシウム、マンガン、および亜鉛）の吸収を容易にする。好適なキレート剤としては、ヒスチジン、任意の必須アミノＤまたはＬアミノ酸類、トリアミノ酸の処方（限定されるものではないが、トリフェニルアラニン、トリヒスチジン、トリアルギニン、ピコリン酸、ニコチン酸、またはピコリン酸とニコチン酸の両方を含む）が挙げられる。
【００５９】
ヒスチジン、ピコリン酸、ニコチン酸などのキレート剤は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社（セントルイス、ミズーリ州）（ピコリン酸；カタログ番号Ｐ５５０３；ニコチン酸；カタログ番号ＰＮ４１２６）を含む多くの市販供給源から入手可能である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示された実施形態におけるキレート剤に対するクロム錯体の比率は、約１０：１〜約１：１０（ｗ／ｗ）、より好ましくは、約５：１〜約１：５（ｗ／ｗ）、例えば、５：１、５：２、５：３、５：４、１：１；１：２、１：３、１：４、１：５、あるいは、その間の任意の数値とすることができる。あるいはまた、錯体を形成していないキレート剤に対するクロム錯体のモル比は、好ましくは１：１であり、約５：１〜約１：１０、例えば、５：１、５：２、５：３、５：４、１：１；１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、あるいは、その間の任意の数値とすることができる。ＤまたはＬアミノ酸およびまたはトリアミノ酸または１種以上のアミノ酸とのクロム錯体のトリ体またはモノ体およびジ体とのキレート剤は、限定されるものではないが、クロミウムトリフェニラニン、クロミウムトリヒスチジン、クロミウムポリフェニラニン、クロミウムポリヒスチジン、クロミウムポリニコチネート、クロミウムポリジフェニラナニン、クロミウムジピコリン酸、クロミウムジヒスチジンなどを含む。
【００６０】
いくつかの実施形態は、組成物および治療有効量のクロムを含む、あるいはからなる組成物を用いて、対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態は、組成物および治療有効量のインスリンを含む、治療有効量のインスリンから本質的になる、あるいは治療有効量のインスリンからなる組成物を用いて、対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態は、組成物および治療有効量のクロムと治療有効量のインスリンを含む、治療有効量のクロムと治療有効量のインスリンから本質的になる、あるいは治療有効量のクロムと治療有効量のインスリンからなる組成物を用いて、対象を治療する方法を提供する。例えば、いくつかの実施形態は、組成物および治療有効量のクロム−インスリン錯体を含む、クロム−インスリン錯体から本質的になる、あるいはクロム−インスリン錯体からなる組成物を用いて、対象を治療する方法を提供する。色々な治療方法を以下に説明する。
【００６１】
本明細書で使用される「治療有効量」とは、その意味の範囲内において、所望の治療効果を提供するために本明細書に開示される実施形態で使用するための、配合活性成分またはそれを含む組成物の非毒性で十分な量が挙げられる。本明細書に開示される必要な活性成分の正確な量は、処置される種、対象の年齢および一般的な症状、処置される症状の重症度、投与される特定の薬剤、対象の体重、および投与方法などの要因に依存して対象毎に変わるであろう。したがって、正確な「有効量」を特定することはできない。しかし、どんな所定の症例に対しても、適切な「有効量」は、通常の方法を用いるだけで当業者によって決定することが可能である。
【００６２】
一例として、本明細書に開示されるクロムの「治療有効量」は、例えば、０．００１μｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１．５μｇ／ｋｇ、２．０μｇ／ｋｇ、２．５μｇ／ｋｇ、３．０μｇ／ｋｇ、３．５μｇ／ｋｇ、４．０μｇ／ｋｇ、４．５μｇ／ｋｇ、５．０μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１５μｇ／ｋｇ、２０μｇ／ｋｇ、２５μｇ／ｋｇ、３０μｇ／ｋｇ、３５μｇ／ｋｇ、４０μｇ／ｋｇ、４５μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ、５５μｇ／ｋｇ、６０μｇ／ｋｇ、６５μｇ／ｋｇ、７０μｇ／ｋｇ、７５μｇ／ｋｇ、８０μｇ／ｋｇ、８５μｇ／ｋｇ、９０μｇ／ｋｇ、９５μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、１５０μｇ／ｋｇ、２００μｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇ、３００μｇ／ｋｇ、３５０μｇ／ｋｇ、４００μｇ／ｋｇ、４５０μｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ、５５０μｇ／ｋｇ、６００μｇ／ｋｇ、６５０μｇ／ｋｇ、７００μｇ／ｋｇ、７５０μｇ／ｋｇ、８０μｇ／ｋｇ、０、８５０μｇ／ｋｇ、９００μｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ．ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、５５ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、６５ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、７５ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、８５ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、９５ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、３５０ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、４５０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、５５０ｍｇ／ｋｇ、６００ｍｇ／ｋｇ、６５０ｍｇ／ｋｇ、７００ｍｇ／ｋｇ、７５０ｍｇ／ｋｇ、８００ｍｇ／ｋｇ、８５０ｍｇ／ｋｇ、９００ｍｇ／ｋｇ、９５０ｍｇ／ｋｇ、ｌｇ／ｋｇ、５ｇ／ｋｇ、１０ｇ／ｋｇ、もしくはそれ以上であるか、またはクロムのその間の任意の量であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物中のクロムの投与量は、好ましくは１日当たり、約０．００１μｇ〜約１００ｇであり得る。例えば、クロムの量は、０．００１μｇ、０．０１μｇ、０．１μｇ、０．２μｇ、０．３μｇ、０．４μｇ、０．５μｇ、０．６μｇ、０．７μｇ、０．８μｇ、０．９μｇ、１μｇ、２μｇ、３μｇ、４μｇ、５μｇ、６μｇ、７μｇ、８μｇ、９μｇ、１０μｇ、１５μｇ、２０μｇ、２５μｇ、３０μｇ、３５μｇ、４０μｇ、４５μｇ、５０μｇ、５５μｇ、６０μｇ、６５μｇ、７０μｇ、７５μｇ、８０μｇ、８５μｇ、９０μｇ、９５μｇ、１００μｇ、１２５μｇ、１５０μｇ、１７５μｇ、２００μｇ、２２５μｇ、２５０μｇ、２７５μｇ、３００μｇ、３２５μｇ、３５０μｇ、３７５μｇ、４００μｇ、４２５μｇ、４５０μｇ、４７５μｇ、５００μｇ、５２５μｇ、５７５μｇ、６００μｇ、６２５μｇ、６５０μｇ、６７５μｇ、７００μｇ、７２５μｇ、７５０μｇ、７７５μｇ、８００μｇ、８２５μｇ、８５０μｇ、８７５μｇ、９００μｇ、９２５μｇ、９５０μｇ、９７５μｇ、１０００μｇ、１．２５ｇ、１．５ｇ、１．７５ｇ、２．０ｇ、２．２５ｇ、２．５ｇ、２．７５ｇ、３．０ｇ、３．２５ｇ、３．５ｇ、３．５ｇ、３．７５ｇ、４．０ｇ、４．２５ｇ、４．５ｇ、４．７５ｇ、５．０ｇ、５．２５ｇ、５．５ｇ、５．７５ｇ、６．０ｇ、６．２５ｇ、６．５ｇ、６．７５ｇ、７．０ｇ、７．２５ｇ、７．５ｇ、７．７５ｇ、８．０ｇ、８．２５ｇ、８．５ｇ、８．７５ｇ、９．０ｇ、８．２５ｇ、９．５ｇ、９．７５ｇ、１０ｇ、２０ｇ、３０ｇ、４０ｇ、５０ｇ、６０ｇ、７０ｇ、８０ｇ、９０ｇ、ｌ００ｇ、もしくはそれ以上、またはクロムのその間の任意の量であり得る。上記の例示的な治療上有効な量は、いくつかの実施形態では、時間単位で、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３時間毎に、または任意の間隔で、あるいは日を基準として、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、６日毎、毎週、８日毎、９日毎、１０日毎、２週間毎、毎月、またはより多くのまたはより少ない頻度で、所望の治療効果を達成するために必要に応じて、投与することができる。
【００６３】
いくつかの実施形態では、クロムの治療有効量は、上昇した血糖値を減少させる量であるが、また、低血糖症から保護する（例えば、正常値に下がるまで、高いグルコースレベルを低下させるが、クロムは正常値以下にさらに下げる増強は何らしない）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えば、クロム−インスリン錯体を含む組成物は、１日当たり１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、またはそれ以上を、例えば、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１年間、もしくはそれ以上の期間などの期間、または前述の値の間の任意の期間、投与することができる。
【００６４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、例えば、クロムとインスリンを含む組成物、例えば、クロム−インスリン錯体は、それ自体、または併用療法のように他の活性成分、または適切な担体もしくは１種または複数の賦形剤と混合される医薬組成物で対象に投与することができる。本願化合物の調合および投与のための技術は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９０」に見ることができる。
【００６５】
インスリン
本明細書中で使用されるように、「インスリン」は、さまざまな供給源からのインスリンを指す。天然に存在するインスリンと構造的に類似の生物活性等価物（短時間作用を含むインスリン類似体および長期作用を有するインスリン類似体）を用いることができる。本明細書に開示される実施形態において有用なインスリンは、哺乳動物の異なる種から単離することができる。例えば、いくつかの実施形態では、ウシまたはブタの膵臓から抽出した動物のインスリン製剤を使用することができる。いくつかの実施形態では、インスリン類似体、誘導体およびそれらの生物学的等価物も使用することができる。天然供給源から単離されたインスリンに加えて、本明細書に開示される実施形態は、ペプチド合成などのタンパク質化学技術を用いて化学的に合成されるインスリンを使用できる。いくつかの実施形態では、インスリンの類似体も好適である。
【００６６】
本明細書に開示される実施形態で使用されるインスリンは、天然供給源から単離することにより、またはペプチド合成を用いて化学的にそれを合成することにより、または細菌もしくは真核細胞における組換えインスリンを産生するために、分子生物学の技法を使用することによって得ることができる。インスリンの物理的形状は、結晶および／または非晶質固体の形態を含むことができる。加えて、溶解したインスリンを用いてもよい。インスリンの合成形態は、米国特許第４，４２１，６８５号、同第５，４７４，９７８号、および同第５，５３４，４８８号に記載されており、それらの各々の開示は、参照によりその全体が本明細書に明示的に取り込まれる。
【００６７】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される組成物は、治療有効量のインスリンと治療有効量のクロムとの組み合わせを含む、組み合わせから本質的になる、または、組み合わせからなる。上述したように、クロムおよび／またはインスリンの正確な量は、処置される種、対象の年齢および一般的な症状、処置される症状の重症度、投与される特定の薬剤、対象の体重、および投与方法などの要因に依存して対象毎に変わるであろう。したがって、正確な「治療有効量」を特定することはできない。しかし、どんな所定の症例に対しても、適切な「治療有効量」は、通常の方法を用いるだけで当業者によって決定することができる。本明細書に開示される実施形態において有用なインスリンの典型的な剤形と治療有効量は、例えば、米国特許第７，４２９，５６４号および同第７，１１２，５６１号、米国特許出願公開番号２０１０／０２６２４３４などに記載されており、それらの各々は、参照によりその全体が本明細書に明示的に取り込まれる。
【００６８】
一例として、本明細書に開示されるインスリンの「治療有効量」は、例えば、インスリンの０．０１単位、インスリンの０．１単位、インスリンの１単位、インスリンの１．５単位、インスリンの２単位、インスリンの３単位、インスリンの４単位、インスリンの５単位、インスリンの６単位、インスリンの７単位、インスリンの８単位、インスリンの９単位、インスリンの１０単位、インスリンの１１単位、インスリンの１２単位、インスリンの１３単位、インスリンの１４単位、インスリンの１５単位、インスリンの１６単位、インスリンの１７単位、インスリンの１８単位、インスリンの１９単位、インスリンの２０単位、インスリンの２１単位、インスリンの２２単位、インスリンの２３単位、インスリンの２４単位、インスリンの２５単位、インスリンの２６単位、インスリンの２７単位、インスリンの２８単位、インスリンの２９単位、インスリンの３０単位、インスリンの３５単位、インスリンの４０単位、インスリンの４５単位、インスリンの５０単位、インスリンの６０単位、インスリンの７０単位、インスリンの８０単位、インスリンの９０単位、インスリンの１００単位、インスリンの１５０単位、インスリンの２００単位、インスリンの２５０単位、インスリンの３００単位、インスリンの４００単位、インスリンの５００単位、インスリンの１０００単位、インスリンの２０００単位、もしくはそれ以上、もしくはそれ以下、またはその間の任意の量であり得る。
【００６９】
従来のインスリンの投与は、非経口的（例えば、筋肉内、皮下、腹腔内等）に達成されるが、しかし、本明細書に開示される実施形態において有用である利用可能な多数の他の投与方法がある。米国特許第５，８５８，９６８号（その全体の内容は、参照により本明細書に明示的に取り込まれる）は、経口的な、経腸的な（胃への直接インキュベーション）、またはエアロゾルでの、すなわち、経肺的なインスリンの投与を記述している。米国特許第７，２９１，５９１号（その全体の内容は、参照により本明細書に明示的に取り込まれる）は、経皮的なインスリンの投与を記述している。米国特許第４，１６４，５７３号（その全体の内容は、参照により本明細書に明示的に取り込まれる）は、経直腸的なインスリンの投与を記述している。米国特許第５，０５３，３８９号（その全体の内容は、参照により本明細書に明示的に取り込まれる）は、インスリン投与の様々な非経口的でない手段を記述しており、眼科的投与を含む（デンマーク特許第１３５，２６８号を引用し、その全体の内容は、参照により本明細書に明示的に取り込まれる）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、例えば噴霧器等を介して経鼻投与用に調合することができる。
【００７０】
インスリンの非経口投与
米国特許出願公開番号２０１０／０２６２４３４には、その全体の内容が参照により本明細書に明示的に取り込まれるものであるが、所定の患者のために注射されるインスリンの適切な投与量を決定するための方法が記載されている。適切なインスリン投与量の投与を困難にする多くの要因がある。第１に、注射されたインスリンは、血糖に瞬時には影響を与えない。速効型インスリン製剤でさえ、生物学的効果を有するには時間がかかる。このように、従来の投薬は、グルコース濃度を下げるために補充の注射を適用することができる前に、何時間もの高血糖をもたらすことがある。過剰投与は、低血糖をもたらすことがあり、それは、急性無能力または昏睡の危険性を提示する。
【００７１】
第２に、様々な食事療法は、インスリン投与量の同時調整が必要である。一部の食品に存在する炭水化物は、急速にグルコースに変換される。食事の炭水化物成分Ｉｃから体がグルコースを利用するために必要な単位Ｕで測定される正確なインスリン投与量は、炭水化物の摂取Ｃａｒｂｓに比例する：
ＩＣ＝Ｃａｒｂｓ／ＣＩＲ
ここで、インスリン感度係数に対する炭水化物ＣＩＲは、各患者に固有であり、患者の状態に応じて変わり得る。
【００７２】
第３に、血糖値ＢＧが、患者の目標血糖値ＢＧＴの近くでないとき、食事を始める前またはすべての注射されたインスリンが利用された後の時点で、ずれを補正するために、調整（ずれの方向に応じてのインスリンや食品の形態での）を施すべきである。高血糖のずれのためのインスリンの調整量ＩＢは、患者の個々のインスリン感度係数ＩＳＦに依存する。
ＩＢ＝（ＢＧ−ＢＧｒ）／ＩＳＦ
ＩＢは、ＢＧが目標よりも高い場合に、正であり、ＢＧが目標よりも低い場合、負である。正の場合、インスリンの投与量ＩＢは、彼らの目標血糖値の近くに患者を戻さなければならない。ＩＢが負の場合、現在の血糖値（ＢＧ）は、目標より下であり、調整は食物摂取を含む必要があるであろう。
【００７３】
第４に、ＩＢが負の場合は、調整を行うために食物を摂取することができる。理想的には、食物の量は、低いＢＧを修正するだけで十分である。食物摂取感度係数は、食物摂取を導くために使用することができる。食物の炭水化物含有量を食物摂取の基準とすることは、現在好ましい方法である。与えられた血糖値の負のずれＢＧ−ＢＧＴを補正するための推奨される炭水化物の摂取量Ｃａｒｂｓは、次のとおりである：
Ｃａｒｂｓ＝−ＣＩＲ／ＩＳＦ＊（ＢＧ−ＢＧＴ）
−ＣＩＲ／ＩＳＦは、また、Ｉ／ＣＧＲとしても知られており、人がそのＣＩＲおよびＩＳＦの推定値を有する場合には算出することができる。
【００７４】
第５に、患者の感度係数は、彼らの状態の関数とすることができる。したがって、運動、ストレス、病気などは、患者がインスリンをどのように利用するかを変える変数の元となることができる。より長い期間にわたって、患者の体重と進行状態は、感度係数に影響を与えることができる。
【００７５】
ＩＳＦ（インスリン感度係数）は、それによって個々の患者の血中グルコース濃度が、急激なインスリン摂取のそれぞれの単位に対して減少する量である。ＩＳＦは、一般に３０〜５０ミリグラム／ｄＬ／Ｕの範囲である。
【００７６】
インスリンの経口投与
インスリンの経口投与は、参照により本明細書に明示的にその全体が取り込まれる米国特許第７，４２９，５６４号に記載されている。インスリンの経口投与は、経口投与に特異的なさまざまな要因に加えて、インスリンの非経口投与に影響を及ぼす同様の要因を考慮する必要があり、例えば、特定の送達薬剤の化学構造、インスリンと送達薬剤との相互作用の性質および程度、単位投与量の種類；消化管での送達薬剤の濃度、およびインスリンに対する送達薬剤の比率を含む。経口投与のための単位投与量の種類は、限定されるものではないが、固体、液体、錠剤、カプセル、懸濁液、または他の許容される剤型である。医薬組成物（例えば、クロムとインスリンを含む組成物、例えば、クロム−インスリン錯体を含む組成物）の送達手段は、限定されるものではないが、例えば、カプセル、圧縮錠剤、丸剤、液剤、ゲル、容易に再構成するための凍結乾燥粉末、対象に投与するのに適した懸濁液、または他の手段である。
【００７７】
一般的に、インスリンは消化管から吸収されない。しかし、経口投与された場合、消化管粘膜を通してインスリンを生物学的に利用、吸収可能とするいくつかの送達薬剤がある。一例として、許容される送達薬剤は、以下の式の化合物またはその薬学的に有効な塩を含むことができる：
【化３】
2014506932.tif 000005
（式中、Ｘは水素またはハロゲンであり；そして、Ｒは、置換もしくは非置換のＣ１−Ｃ３アルキレン、置換もしくは非置換のＣ１−Ｃ３アルケニレン、置換もしくは非置換のＣ１−Ｃ３アルキル（アリーレン）、または置換もしくは非置換のＣ１−Ｃ３アリール（アルキレン）である）。許容される送達薬剤は、また、限定されるものではないが、Ｘが水素またはハロゲンであり；そして、Ｒが置換もしくは非置換のＣ１−Ｃ１２アルキレン、または置換もしくは非置換のＣ１−Ｃ１２アルケニレンである上記の式の化合物またはその薬学的に有効な塩を含む。許容される送達薬剤は、また、限定されるものではないが、Ｘが塩素であり、ＲがＣ３アルキレンである上記の式の化合物またはその薬学的に有効な塩を含む。許容されるインスリン送達薬剤は、また、下記式の化合物またはその薬学的に有効な塩を含むこともできる：
【化４】
2014506932.tif 000006
（式中、Ｘは、１つ以上の、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、またはＣ１−Ｃ３アルコキシであり、そして、Ｒは、置換もしくは非置換のＣ１−Ｃ３アルキレン、または置換もしくは非置換のＣ１−Ｃ３アルケニレンである）。許容される送達薬剤は、また、化合物４−［（４−クロロ、２−ヒドロキシベンゾイル）アミノ］ブタン酸（あるいはＮ−（４−クロロサリチロイル）−４−アミノブチラートとして、または短縮した名前の「４−ＣＮＡＢ」として知られている）、ならびにそのモノナトリウム塩を含む。
【００７８】
いくつかの実施形態では、送達薬剤は、カルボン酸またはその塩の形態とすることができる。適切な塩としては、限定されるものではないが、有機および無機の塩、例えばナトリウム、カリウム、リチウムなどのアルカリ金属塩；マグネシウム、カルシウムまたはバリウムなどのアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩；リジンまたはアルギニンなどの塩基性アミノ酸の塩；ジメチルアミンまたはピリジンなどの有機アミン類の塩を含む。好ましくは、塩はナトリウム塩である。塩は、モノナトリウム塩およびジナトリウム塩などの１価の塩または多価の塩であってもよい。塩はまた、エタノール溶媒和物および水和物を含む溶媒和物であってもよい。
【００７９】
インスリンの経口投与に用いることができる他の適切な送達薬剤は、米国特許第５，６５０，３８６号、第５，７７３，６４７号、第５，７７６，８８８号、第５，８０４，６８８号、第５，８６６，５３６号、第５，８７６，７１０号、第５，８７９，６８１号、第５，９３９，３８１号、第５，９５５，５０３号、第５，９６５，１２１号、第５，９８９，５３９号、第５，９９０，１６６号、第６，００１，３４７号、第６，０５１，５６１号、第６，０６０，５１３号、第６，０９０，９５８号、第６，１００，２９８号、第５，７６６，６３３号、第５，６４３，９５７号、第５，８６３，９４４号、第６，０７１，５１０号および第６，３５８，５０４号に記載されたものを含み、これらの各特許は、参照によりその全体が本明細書に明示的に取り込まれる。追加の適切な送達薬剤は、国際公開番号ＷＯ０１／３４１１４、国際公開番号ＷＯ０１／３４１１４、国際公開番号ＷＯ０１／２１０７３、国際公開番号ＷＯ０１／４１９８５、国際公開番号ＷＯ０１／３２１３０、国際公開番号ＷＯ０１／３２５９６、国際公開番号ＷＯ０１／４４１９９、国際公開番号ＷＯ０１／５１４５４、国際公開番号ＷＯ０１／２５７０４、国際公開番号ＷＯ０１／２５６７９、国際公開番号ＷＯ００／５０３８６、国際公開番号ＷＯ０２／０２５０９、国際公開番号ＷＯ００／４７１８８、国際公開番号ＷＯ００／０７９７９、国際公開番号ＷＯ００／０６５３４、国際公開番号ＷＯ９８／２５５８９、国際公開番号ＷＯ０２／１９９６９、国際公開番号ＷＯ００／５９８６３、国際公開番号ＷＯ９５／２８８３８、国際公開番号ＷＯ０２／２０４６６、国際公開番号ＷＯ０２／１９９６９、国際公開番号ＷＯ０２／０６９９３７、および国際公開番号ＷＯ０２／０７０４３８に記載されており、これらの各特許は、参照によりその全体が本明細書に明示的に取り込まれる。
【００８０】
経口投与のためのインスリン投与量は、通常、非経口投与のためのものより多い。経口投与されるインスリンの好ましい量は、対象毎に変わり、治療される種、対象の年齢および一般的症状、併存疾患、治療を受ける状態の重症度、投与されるインスリンの種類、対象の体重、使用される送達薬剤などの要因を考慮して、当業者によって決定することができる。
【００８１】
インスリン投与の他の方法
参照によりその全体が本明細書に明示的に取り込まれる米国特許第７，１１２，５６１号は、皮膚および様々な体腔の膜（例えば、眼、鼻、口腔、頬側、肛門、直腸、膣、血液脳関門の膜、および類似した膜）を通過する、注射以外のインスリン送達のための組成物および方法を記述している。皮膚膜および体腔膜を貫通するインスリン投与は、皮膚膜および／または体腔膜を介しての投与に特異的である他の要因に加えて、限定されるものではないが、特定の送達薬剤の化学構造；インスリンと送達薬剤との相互作用の性質および程度；単位投与量の性質；送達薬剤の濃度；およびインスリンに対する送達薬剤の比率を含む、インスリンの非経口投与に影響を及ぼす同じ要因を検討する必要がある。経口投与のための単位投与量の種類は、限定されるものではないが、固体、液剤、錠剤、カプセル剤、または懸濁液である。医薬組成物の送達手段は、限定されるものではないが、例えば、カプセル、圧縮錠剤、丸剤、液剤、凍結乾燥品、ローション、泡、エアゾール、クリーム、ゲル、または再構成の容易な粉末もしくは対象への投与に適した懸濁液である。
【００８２】
皮膚膜や体腔の膜を通して投与するための送達薬剤は、膜を通してインスリンの送達を容易にするために、浸透促進剤を含むことができる。許容される浸透促進剤は、以下の構造を有する化合物を含むことができる：
【化５】
2014506932.tif 000007
［式中、ＸおよびＹは、酸素、硫黄または以下の構造：
【化６】
2014506932.tif 000008
のイミノ基、もしくは＝Ｎ−Ｒである。但し、Ｙがイミノ基であるとき、Ｘはイミノ基であり、Ｙが硫黄であるとき、Ｘは硫黄またはイミノ基であり、Ａは以下の構造：
【化７】
2014506932.tif 000009
を有する基であり、ここに、ＸおよびＹは、上に定義した通りであり、ｍおよびｎは、１〜２０の値を有する整数であり、ｍ＋ｎの合計は、２５以下であり、ｐは０または１の値を有する整数であり、ｑは０または１の値を有する整数であり、ｒは０または１の値を有する整数であり、そして、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６の各々は、独立して水素または直鎖状または分岐状であってもよい１〜６個の炭素原子を有するアルキル基である（但し、Ｒ〜Ｒ６の１つだけがアルキル基であり得るが、ｐ、ｑおよびｒが０の値を有し、かつＹが酸素であるとき、ｍ＋ｎは、少なくとも１１である；さらにＸがアミノ基であり、ｑが１であり、Ｙが酸素であり、かつｐおよびｒが０のとき、ｍ＋ｎは少なくとも１１である）］。好ましくは、上で定義した浸透促進剤は、治療有効量のインスリンおよび液体担体と組成物中で配合されて、この組成物は酸性ｐＨを有する。一般に、組成物のｐＨは少なくとも２であり、４．５以下である。好ましくは、ｐＨは４以下である。より好ましくは、ｐＨは２．５〜３．８の範囲である。さらにより好ましくは、ｐＨは約３である。
【００８３】
他の適切な浸透促進剤は、米国特許第５，０２３，２５２号、および同第５，７３１，３０３号に記述されており、これらの特許は、参照によりその全体が明示的に本明細書に取り込まれる。
【００８４】
上記は、好ましい浸透促進剤であるが、この教示は、また、他の浸透促進剤に適用もできることを当業者は認識するであろう。本明細書に開示される実施形態において有用な他の浸透促進剤の非限定的な例としては、様々な薬局方大綱にある米国食品医薬品局が認定した食品安全表示（ＧＲＡＳ）の単純な長鎖エステル類が挙げられる。これらは、長さが最大中鎖を含む単純な脂肪族の不飽和または飽和エステル類（ただし、好ましくは、完全に飽和したもの）を含むことができる。このようなエステル類の非限定的な例としては、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、パルミチン酸オクチルなどが挙げられる。促進剤は、医薬組成物での使用に適しているタイプのものである。当業者はまた、粘膜と不適合である、または粘膜を刺激するそれらの物質は避けるべきであることを理解するであろう。
【００８５】
前記促進剤は、インスリンの浸透を増強するのに有効な濃度で、膜を介して送達される組成物中に存在することができる。使用する促進剤の量を決定する際に、様々な考察が考慮されるべきである。そのような考慮事項には、例えば、達成される流量（膜を通過する割合）、および製剤中の成分の安定性と相容性が挙げられる。促進剤は、一般に、約０．０１重量％〜約２５重量％組成物の量で、より一般的には、約０．１重量％〜約１５重量％組成物の量で、そして、好ましい態様では、約０．５重量％〜約１５重量％組成物の量で使用される。
【００８６】
液体担体は、本明細書に開示される実施形態の組成物に適したビヒクルとして役立つのに有効な濃度で組成物中に存在する。一般に、担体は組成物の約４０重量％〜約９８重量％の量で使用することができ、好ましい実施形態では、組成物の約５０重量％〜約９８重量％の量で使用することができる。
【００８７】
一般に、インスリンを含む組成物は、冷蔵庫で保存することができる。しかし、冷凍は浸透促進剤の結晶化をもたらすことがある。このような結晶化を阻害または防止するために、好ましい実施形態では、組成物は、浸透促進剤の結晶化を阻害する１つ以上の結晶化阻害剤を含む。結晶化は、進行させると、エマルジョンを不安定にし、貯蔵寿命に悪影響を及ぼす。好ましい結晶化阻害剤は、関与する化合物が結晶化する温度を下げることによって機能する。このような結晶化阻害剤としては、例えば、天然油、油性物質、ワックス類、エステル類、および炭化水素類が挙げられる。天然油または油性物質の例としては、ビタミンＥ酢酸エステル、パルミチン酸オクチル、ゴマ油、大豆油、ベニバナ油、アボカド油、パーム油、および綿実油を含む。適切な結晶化阻害剤の選択は、本明細書の教示から当業者の範囲内であるとみなされる。好ましい結晶化阻害剤は、浸透促進剤が結晶化する温度を低下させることによって機能する。
【００８８】
関与する化合物の結晶化温度を約２５℃より下に下げることができる阻害剤は、非常に好ましく、関与する化合物の結晶化温度を約５℃より下に下げることができる阻害剤は、特に好ましい。オキサシクロヘキサデカン−２−オンの結晶化を阻害するのに使用するための特に好ましい結晶化阻害剤の例としては、ヘキサデカン、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸オクチル、綿実油、ベニバナ油、およびビタミンＥ酢酸エステルを含み、それらの各々は、医薬製剤に用いることができる。
【００８９】
結晶化阻害剤は、浸透促進剤の結晶化を阻害するのに有効な濃度で組成物中に存在する。一般に、結晶化阻害剤は、約０．００１重量％〜約５重量％の組成物の量で、より一般的には、約０．０１重量％〜約２重量％の組成物の量で存在する。１つの実施形態では、結晶化阻害剤は、組成物の約０．１〜約１重量％の量で存在する。結晶化阻害剤は、促進剤が約０℃より上の結晶化温度を有する場合に好ましく使用されるものである。特に、例えば、促進剤がペンタデカラクトンおよび／またはシクロヘキサデカノンの場合、これらは室温より上で結晶化するので、結晶化阻害剤が好ましく使用される。
【００９０】
クロムとインスリンを含む組成物
亜鉛イオンはインスリン溶液に対して安定化効果を発揮することが報告されている。参照によりその全体が明示的に本明細書に取り込まれる米国特許第４，４７６，１１８号を参照されたい。例えば、インスリンの６量体当たり２〜５個の亜鉛イオンを含むことは、インスリンの析出を防ぐことができる。米国特許第４，４７６，１１８号に記載のＺｎ−インスリン錯体と対照的に、クロム−インスリン錯体は、有利な吸収と治療効果を提供する。
【００９１】
いくつかの実施形態では、クロムは、インスリンとの組み合わせ、例えば、単回注射剤形または単回経口剤形などの単回投与剤形で提供される。いくつかの実施形態では、クロムは、マルチユニット剤形でインスリンと共に提供される。いくつかの実施形態では、クロムは、インスリン溶液に溶解されて提供される。他の実施形態では、クロムは、インスリン溶液に懸濁されて提供される。したがって、クロムとインスリンを含む、クロムとインスリンから本質的になる、あるいはクロムとインスリンからなる組成物が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、組成物はクロム−インスリン錯体を含む。
【００９２】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される組成物は、例えば、単一剤形内でのインスリンとクロムとの組合せを含み、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、経口、舌下、鼻腔内、脳内、膣内、経皮、経直腸、眼内、または局所送達のために調合される。いくつかの実施形態では、クロムは、マルチユニット剤形でインスリンと共に提供される。いくつかの実施形態では、クロムは、インスリン溶液の懸濁液で提供される。鼻腔内送達は、噴霧器を用いて達成することができる。投与の好ましい様式は、医師の裁量に委ねられ、病状の部位に部分的に依存する。クロム、インスリン、およびまたはクロム−インスリン錯体の有効量は、投与経路に応じて変えることができる。ほとんどの場合、投与は、血流中に本明細書に開示した実施形態の化合物の放出をもたらすであろう。従って、クロムとインスリンを含む、クロムとインスリンから本質的になる、あるいはクロムとインスリンからなる組成物は、例えば、クロム−インスリン錯体の形態で、本明細書に提供される。
【００９３】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は、治療有効量のインスリンと治療的有効量のクロムとの組み合わせを含む、治療有効量のインスリンと治療的有効量のクロムとの組み合わせから本質的になる、または治療有効量のインスリンと治療的有効量のクロムとの組み合わせからなる。いくつかの実施形態では、これらの組成物は、クロム−インスリン錯体を含む、クロム−インスリン錯体から本質的になる、またはクロム−インスリン錯体からなる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は、相乗的有効量のインスリンと相乗的有効量のクロムとの組み合わせを含む、相乗的有効量のインスリンと相乗的有効量のクロムとの組み合わせから本質的になる、または相乗的有効量のインスリンと相乗的有効量のクロムとの組み合わせからなる。いくつかの実施形態では、組成物は、それ自体、クロム−インスリン錯体を含むことができる、クロム−インスリン錯体から本質的になることができる、またはクロム−インスリン錯体からなることができる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は、インスリン溶液に溶解されているクロムを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、それ自体、クロム−インスリン錯体を含むことができる、クロム−インスリン錯体から本質的になることができる、またはクロム−インスリン錯体からなることができる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は、インスリンの溶液中に懸濁されているクロムを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、それ自体、クロム−インスリン錯体を含むことができる、クロム−インスリン錯体から本質的になることができる、またはクロム−インスリン錯体からなることができる。
【００９４】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物としては、治療有効量のクロムと治療有効量のインスリンの組み合わせを含む注射用溶液が挙げられる。いくつかの実施形態では、クロムとインスリンの組み合わせは、限定されるものではないが、インスリンの吸収および全体的な吸収率の増加、インスリン溶解速度の減少、受容体結合の増加、および治療特性を含む、糖尿病の治療のための利点をもたらす。いくつかの実施形態では、クロムとインスリンの組み合わせは、インスリン単独よりも速い速度で血清グルコースレベルを低下させる。
【００９５】
クロム−インスリン錯体
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される、クロムとインスリンの組成物は、クロム−インスリン錯体を含む、クロム−インスリン錯体から本質的になる、またはクロム−インスリン錯体からなる。いくつかの実施形態では、クロム−インスリン錯体は、クロム：インスリンの化学量論比、例えば、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１または１０：１を含む。いくつかの実施形態では、クロムとインスリンは、非化学量論的な量、例えば、インスリン６量体当たり、クロム（例えば、クロム錯体）の１〜１０分子の量で、クロム−インスリン錯体中に存在する。いくつかの実施形態では、錯体は約３０〜４０ｋＤａ、例えば、３０ｋＤａ、３１ｋＤａ、３２ｋＤａ、３３ｋＤａ、３４ｋＤａ、３５ｋＤａ、３６ｋＤａ、３７ｋＤａ、３８ｋＤａ、３９ｋＤａ、４０ｋＤａ、またはそれより多い分子量を有する。
【００９６】
いくつかの実施形態では、クロム−インスリン錯体は、クロムおよびインスリンの治療有効量を提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、クロム−インスリン錯体の単離および／または精製された量を含む、クロム−インスリン錯体の単離および／または精製された量から本質的になる、またはクロム−インスリン錯体の単離および／または精製された量からなる。クロム−インスリン錯体の単離および／または精製された量は、クロムおよび／またはインスリンの治療有効量を提供するための量で提供することができる。いくつかの実施形態では、クロム−インスリン錯体は、単離および／または精製されないで、むしろクロムとインスリンの混合物内に存在する。
【００９７】
いくつかの実施形態では、クロムおよび／またはインスリンは、栄養学的に許容される担体または薬学的に許容される担体と共に提供される。本明細書で使用されるように、語句「栄養学的に許容される担体」、「栄養学的に許容される賦形剤」、「薬学的に許容される担体」または「薬学的に許容される賦形剤」は、本明細書に開示される実施形態の化合物を哺乳類に投与するのに適した栄養学的にまたは薬学的に許容される物質、組成物またはビヒクルを指す。担体は、１つの臓器または身体の一部から他の臓器または身体の一部に対象薬剤を運搬または輸送することに関与している、液体もしくは固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒または封入材料を含むことができる。担体は、製剤の他の成分と相容性であるという意味で「許容される」ことができ、患者にとって有害ではない。栄養学的または薬学的に許容される担体として役立ち得る物質のいくつかの例としては、限定されるものではないが、ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖類；トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなどのデンプン類；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロースなどのセルロースならびにその誘導体；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；カカオバターおよび坐剤ワックスなどの賦形剤；ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、およびダイズ油などの油類；プロピレングリコールなどのグリコール類；グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなどのポリオール類；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル類；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；アルギン酸；発熱物質を含まない水；等張食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；リン酸緩衝液；および医薬製剤に用いられる他の非毒性の適合性物質が挙げられる。いくつかの実施形態では、栄養学的にまたは薬学的に許容される担体は、静脈内投与に適することができる。いくつかの実施形態では、栄養学的にまたは薬学的に許容される担体は、局所注射に適することができる
【００９８】
用語「医薬組成物」は、「治療剤」と互換的に使用され、哺乳類、例えば、ヒトへの投与に適した製剤を含む。本明細書に開示される実施形態の化合物は、医薬品として哺乳類、例えば、ヒトに投与される場合、それ自体、あるいは、例えば、栄養学的または薬学的に許容される担体と組み合わせた活性成分の０．１〜９９．５％（より好ましくは０．５〜９０％）を含む医薬組成物として投与されることができる。本明細書に開示される実施形態のマルチプルユニット剤形に配合される治療剤の量は、所望の治療効果を達成する適量である。開示された治療薬の投与量は当該技術分野においてよく確立されており、ルーチンの実験を介して任意の特定の適応症のために最適化することができる。
【００９９】
別の態様において、実施形態は、本明細書に開示される組成物で対象を治療する方法に関する。本明細書で用いられる用語「対象」、「患者」または「個体」は、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトを指す。「哺乳類」は、哺乳動物として分類される任意の動物を指し、ヒト、家畜や農場の動物、動物園の動物、スポーツ用動物、または愛玩動物（例えば、ウマ、ヒツジ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど）を含む。好ましくは、哺乳類はヒトである。
【０１００】
クロムとインスリンを含む相乗的に有効な組成物
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は、相加的な効果よりも大きな効果を提供するために一緒に選択されるクロムおよびインスリンの相乗的有効量を含む。相加的な効果よりも大きいこの効果は、インスリン受容体結合の増加を含むことができるが、これに限定されるものではない。本明細書で使用する「相乗的有効量」は、組成物中に存在する別の成分の相乗効果を引き出すのに必要な組成物の一成分の量を指す。本明細書で使用する「相乗効果」は、いずれかの成分を単独で投与した場合に予想されるものよりも著しく大きい結果を指す。本明細書で開示される活性成分の必要とされる、正確な相乗的有効量は、処置される種、対象の年齢および一般的な症状、合併症、処置される症状の重症度、投与される特定の薬剤、対象の体重、および投与方法などの要因に依存して対象毎に変わるであろう。したがって、正確な「相乗的な量」を特定することはできない。しかし、どんな所定の症例に対しても、適切な「相乗的有効量」は、ルーチンの方法を用いて当業者によって決定することが可能である。
【０１０１】
一例として、例えば、本明細書で開示されるクロム錯体の形態で存在するクロムの「相乗的有効量」は、例えば、０．００１μｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１．５μｇ／ｋｇ、２．０μｇ／ｋｇ、２．５μｇ／ｋｇ、３．０μｇ／ｋｇ、３．５μｇ／ｋｇ、４．０μｇ／ｋｇ、４．５μｇ／ｋｇ、５．０μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１５μｇ／ｋｇ、２０μｇ／ｋｇ、２５μｇ／ｋｇ、３０μｇ／ｋｇ、３５μｇ／ｋｇ、４０μｇ／ｋｇ、４５μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ、５５μｇ／ｋｇ、６０μｇ／ｋｇ、６５μｇ／ｋｇ、７０μｇ／ｋｇ、７５μｇ／ｋｇ、８０μｇ／ｋｇ、８５μｇ／ｋｇ、９０μｇ／ｋｇ、９５μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、１５０μｇ／ｋｇ、２００μｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇ、３００μｇ／ｋｇ、３５０μｇ／ｋｇ、４００μｇ／ｋｇ、４５０μｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ、５５０μｇ／ｋｇ、６００μｇ／ｋｇ、６５０μｇ／ｋｇ、７００μｇ／ｋｇ、７５０μｇ／ｋｇ、８０μｇ／ｋｇ、０、８５０μｇ／ｋｇ、９００μｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ．ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、５５ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、６５ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、７５ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、８５ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、９５ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、３５０ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、４５０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、５５０ｍｇ／ｋｇ、６００ｍｇ／ｋｇ、６５０ｍｇ／ｋｇ、７００ｍｇ／ｋｇ、７５０ｍｇ／ｋｇ、８００ｍｇ／ｋｇ、８５０ｍｇ／ｋｇ、９００ｍｇ／ｋｇ、９５０ｍｇ／ｋｇ、ｌｇ／ｋｇ、５ｇ／ｋｇ、１０ｇ／ｋｇ、またはそれ以上であるか、またはクロムのその間の任意の量であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物中のクロムの相乗的有効量は、好ましくは１日あたり、約０．００１μｇ〜約１ｇであり得る。例えば、クロム錯体中に存在するクロムの量は、０．００１μｇ、０．０１μｇ、０．１μｇ、０．２μｇ、０．３μｇ、０．４μｇ、０．５μｇ、０．６μｇ、０．７μｇ、０．８μｇ、０．９μｇ、１μｇ、２μｇ、３μｇ、４μｇ、５μｇ、６μｇ、７μｇ、８μｇ、９μｇ、１０μｇ、１５μｇ、２０μｇ、２５μｇ、３０μｇ、３５μｇ、４０μｇ、４５μｇ、５０μｇ、５５μｇ、６０μｇ、６５μｇ、７０μｇ、７５μｇ、８０μｇ、８５μｇ、９０μｇ、９５μｇ、１００μｇ、１２５μｇ、１５０μｇ、１７５μｇ、２００μｇ、２２５μｇ、２５０μｇ、２７５μｇ、３００μｇ、３２５μｇ、３５０μｇ、３７５μｇ、４００μｇ、４２５μｇ、４５０μｇ、４７５μｇ、５００μｇ、５２５μｇ、５７５μｇ、６００μｇ、６２５μｇ、６５０μｇ、６７５μｇ、７００μｇ、７２５μｇ、７５０μｇ、７７５μｇ、８００μｇ、８２５μｇ、８５０μｇ、８７５μｇ、９００μｇ、��２５μｇ、９５０μｇ、９７５μｇ、１０００μｇ、１．２５ｍｇ、１．５ｍｇ、１．７５ｍｇ、２．０ｍｇ、２．２５ｍｇ、２．５ｍｇ、２．７５ｍｇ、３．０ｍｇ、３．２５ｍｇ、３．５ｍｇ、３．５ｍｇ、３．７５ｍｇ、４．０ｍｇ、４．２５ｍｇ、４．５ｍｇ、４．７５ｍｇ、５．０ｍｇ、５．２５ｍｇ、５．５ｍｇ、５．７５ｍｇ、６．０ｍｇ、６．２５ｍｇ、６．５ｍｇ、６．７５ｍｇ、７．０ｍｇ、７．２５ｍｇ、７．５ｍｇ、７．７５ｍｇ、８．０ｍｇ、８．２５ｍｇ、８．５ｍｇ、８．７５ｍｇ、９．０ｍｇ、８．２５ｍｇ、９．５ｍｇ、９．７５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、１ｇ、もしくはそれ以上であるか、または前述の値の任意の２つの間の任意の範囲または量であり得る。
【０１０２】
同様に、一例として、本明細書で開示されるインスリンの「相乗的有効量」は、例えば、インスリンの０．０１単位、インスリンの０．１単位、インスリンの１単位、インスリンの１．５単位、インスリンの２単位、インスリンの３単位、インスリンの４単位、インスリンの５単位、インスリンの６単位、インスリンの７単位、インスリンの８単位、インスリンの９単位、インスリンの１０単位、インスリンの１１単位、インスリンの１２単位、インスリンの１３単位、インスリンの１４単位、インスリンの１５単位、インスリンの１６単位、インスリンの１７単位、インスリンの１８単位、インスリンの１９単位、インスリンの２０単位、インスリンの２１単位、インスリンの２２単位、インスリンの２３単位、インスリンの２４単位、インスリンの２５単位、インスリンの２６単位、インスリンの２７単位、インスリンの２８単位、インスリンの２９単位、インスリンの３０単位、インスリンの３５単位、インスリンの４０単位、インスリンの４５単位、インスリンの５０単位、インスリンの６０単位、インスリンの７０単位、インスリンの８０単位、インスリンの９０単位、インスリンの１００単位、インスリンの１５０単位、インスリンの２００単位、インスリンの２５０単位、インスリンの３００単位、インスリンの４００単位、インスリンの５００単位、インスリンの１０００単位、インスリンの２０００単位、もしくはそれ以上、またはその間の任意の量であり得る。
【０１０３】
他の実施形態では、対象に最大の相乗効果をもたらす、インスリンに対するクロムの比率の範囲がある。本明細書に開示される活性成分の必要とされる正確な比率は、処置される種、対象の年齢および一般的な症状、合併症、処置される症状の重症度、投与される特定の薬剤、対象の体重、および投与方法などの要因に依存して対象毎に変わるであろう。したがって、正確な比率および比率の範囲を特定することはできない。しかし、どんな所定の症例に対しても、適切な比率および比率の範囲は、ルーチンの方法のみを用いて当業者によって決定することが可能である。
【０１０４】
一例として、本明細書に開示されるインスリンに対するクロムの比率は、例えば、０．０００１μｇのクロム／単位インスリン、０．０００１μｇのクロム／単位インスリン、０．００１μｇのクロム／単位インスリン、０．００２μｇのクロム／単位インスリン、０．００３μｇのクロム／単位インスリン、０．００４μｇのクロム／単位インスリン、０．００５μｇのクロム／単位インスリン、０．００６μｇのクロム／単位インスリン、０．００７μｇのクロム／単位インスリン、０．００８μｇのクロム／単位インスリン、０．００μｇのクロム／単位インスリン、０．０１μｇのクロム／単位インスリン、０．０２μｇのクロム／単位インスリン、０．０３μｇのクロム／単位インスリン、０．０４μｇのクロム／単位インスリン、０．０５μｇのクロム／単位インスリン、０．０６μｇのクロム／単位インスリン、０．０７μｇのクロム／単位インスリン、０．０８μｇのクロム／単位インスリン、０．０９μｇのクロム／単位インスリン、０．１０μｇのクロム／単位インスリン、０．１１μｇのクロム／単位インスリン、０．１２μｇのクロム／単位インスリン、０．１３μｇのクロム／単位インスリン、０．１４μｇのクロム／単位インスリン、０．１５μｇのクロム／単位インスリン、０．１６μｇのクロム／単位インスリン、０．１７μｇのクロム／単位インスリン、０．１８μｇのクロム／単位インスリン、０．１９μｇのクロム／単位インスリン、０．２μｇのクロム／単位インスリン、０．３μｇのクロム／単位インスリン、０．４μｇのクロム／単位インスリン、０．５μｇのクロム／単位インスリン、０．６μｇのクロム／単位インスリン、０．７μｇのクロム／単位インスリン、０．８μｇのクロム／単位インスリン、０．９μｇのクロム／単位インスリン、１μｇのクロム／単位インスリン、２μｇのクロム／単位インスリン、３μｇのクロム／単位インスリン、４μｇのクロム／単位インスリン、５μｇのクロム／単位インスリン、１０μｇのクロム／単位インスリン、２０μｇのクロム／単位インスリン、５０μｇのクロム／単位インスリン、１００μｇのクロム／単位インスリン、２００μｇのクロム／単位インスリン、５００μｇのクロム／単位インスリン、もしくはそれ以上、またはその間の任意の量であり得る。一例として、本明細書に開示されるインスリンに対するクロムの比率の範囲は、例えば、０．００１−２０μｇのクロム／単位インスリン、０．００１−０．０１μｇのクロム／単位インスリン、０．０１−０．１μｇのクロム／単位インスリン、０．１−１μｇのクロム／単位インスリン、１−２μｇのクロム／単位インスリン、２−３μｇのクロム／単位インスリン、３−４μｇのクロム／単位インスリン、４−５μｇのクロム／単位インスリン、５−１０μｇのクロム／単位インスリン、１０−２０μｇのクロム／単位インスリン、もしくはそれ以上、またはその間の任意の量であり得る。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、インスリンを必要とする対象にインスリンを投与する改善された方法が提供される。この改善された方法は、相乗的有効量のインスリンとクロムとを配合して組成物を生成させること；対象に対する組成物の最適投与量を決定すること；そして、この組成物の最適投与量を対象に投与することを含む。組成物の最適投与量は、対象に組成物を投与した後、所望の効果を達成する最小値にインスリンの投与量を調整することによって決定することができる。例えば、糖尿病の治療では、望ましい効果は、高血糖でも低血糖でもないレベルに血清グルコースを安定化させることである。したがって、糖尿病を治療するための組成物の最適投与量は、高血糖や低血糖でもないレベルに血清グルコースをもたらす最小投与量である。クロムの血清グルコース安定化効果を考えると、インスリンとクロムの相乗的有効量を含む組成物の最適投与量は、おそらくインスリンのみが投与された最適であろうよりも少ないインスリンを含む。
【０１０６】
インスリンとクロムを含むキット
別の態様では、実施形態は、注射器、インスリンの溶液、およびクロムを含むインスリン注射用キットに関するものである。いくつかの実施形態では、キットは、クロム−インスリン錯体を含む。このキットは、エンドユーザーが投与前にクロムとインスリンを配合することができる。これにより、エンドユーザーは、クロムとインスリンの投与量、ならびに注射前に組成物中のインスリンに対するクロムの比率を変化させることができる。いくつかの実施形態では、キットに含まれる注射器は、米国特許第４，４２４，０５７号（その開示は、参照によりその全体が本明細書に明示的に取り込まれる）に開示されている注射器などの注射器自体の中にインスリンとクロムを配合するように構成されている。
【０１０７】
クロムとインスリンを含む組成物の製造方法
別の実施形態では、本明細書に開示されるクロムとインスリンの注射可能な組成物を製造するための方法は、クロムとインスリンを配合し、それによって注射用組成物に到達する。いくつかの実施形態では、クロム成分は、限定されるものではないが、溶液中に懸濁されたクロム（例えば、クロム錯体）；溶液中に溶解されたクロム（例えば、クロム錯体）；または、粉末のクロム（例えば、クロム錯体の形態で）；あるいはインスリンの溶液と配合し得る任意の形態を取る。いくつかの実施形態では、注射可能な組成物は、懸濁液；溶液；またはクロムとインスリン溶液との任意の他の組成物の形態を取るが、これらに限定されるものではない。
【０１０８】
インスリンを必要としている過体重の対象の治療方法
別の実施形態では、血清グルコース濃度を安定化させる必要のある過体重の対象での血清グルコース濃度を安定化させる方法が提供され、それは、（ａ）インスリンを必要としている過体重の対象を識別すること、そして、（ｂ）クロムとインスリンを含む組成物（例えば、クロム−インスリン錯体を含む組成物の形態で）を対象に投与すること、の工程を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、非経口的に、経鼻的に、経口的に、または経肺的に投与されてもよい。いくつかの実施形態では、過体重の対象は、糖尿病、しばしば２型糖尿病に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は１型糖尿病に罹患している。換言すれば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物および／または錯体は、血清グルコースレベルを安定化させる必要のある対象の血清グルコースレベルを安定化させるために使用することができる。
【０１０９】
過体重は、糖尿病を発症する主要な危険因子の１つである。糖尿病の過体重の人は、圧倒的に２型糖尿病を患っている。しかし、糖尿病の治療、例えば、インスリンによる治療は、代謝率が低下し、脂肪とグルコースの貯蔵を増加させた結果として、多くの場合、体重の増加をもたらす。これは、人の糖尿病が、治療によって引き起こされる体重増加の結果、悪化し、さらなる治療が必要となり、さらに体重増加をもたらすというサイクルにつながる可能性がある。クロムとインスリンを組み合わせることにより、インスリン治療に伴う体重増加は、クロム補給の体重減量効果によって軽減することができる。クロムは、低血糖レベルを超える血清グルコースレベルを安定させるのに対し、一方、インスリン単独では、過剰なグルコース取り込みを引き起こす可能性があり、時には低血糖をもたらす。インスリンに配合されたクロムは、インスリン単独に比べて少ないグルコース取り込みをもたらす可能性があるため、より少ないグルコースが貯蔵され、より少ない体重増加の結果となり得る。同様に、クロムは、グルコース代謝を正常化するために働くため、インスリンとクロムの投与は、低体重の対象の体重を増加させる作用をする可能性がある。
【０１１０】
他の実施形態では、糖尿病治療によって誘発される体重増加を予防する方法が提供され、この方法は、インスリンとクロムを含む組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、インスリンとクロムを含む組成物は、非経口的に投与される。
【０１１１】
血清グルコースレベルを安定化するための改善された方法
別の実施形態では、血清グルコースレベルの安定化を必要とする対象で、血清グルコースレベルを安定化するための改善された方法が提供される。改善は、相乗的に有効量のインスリンとクロムを配合して組成物を生成すること、そして、この組成物を対象に投与すること、の工程を含む。いくつかの実施形態では、改善された方法は、例えば、非経口的に、経鼻的に、経口的に、経肺的に、または経皮的に施される。いくつかの実施形態では、改善は治療有効量のクロム−インスリン錯体を含む組成物を提供し、組成物を対象に投与することを含む。このようにして、本明細書に記載される組成物は、他の既知の組成物と比較して、血清グルコースレベルを安定化するための改善された方法を提供するために使用することができる。
【０１１２】
血清インスリンレベルを上げるための改善された方法
他の実施形態では、血清インスリンレベルを上昇させるための改善された方法が提供される。改善は、相乗的に有効量のインスリンとクロムを配合して組成物を生成すること、そして、この組成物を対象に投与すること、の工程を含む。いくつかの実施形態では、改善された方法は、例えば、非経口的に、経鼻的に、経口的に、経肺的に、または経皮的に投与される。いくつかの実施形態では、改善は治療有効量のクロム−インスリン錯体を含む組成物を提供し、この組成物を対象に投与することを含む。すなわち、本明細書に記載される組成物は、他の既知の組成物および／またはインスリン単独と比較して、血清インスリンレベルを上昇させるための改善された方法を提供するために使用することができる。
【０１１３】
体重を安定化するための改善された方法
別の実施形態では、対象の体重を安定化するための改善された方法が提供される。１型糖尿病の個体において、インスリン療法は、体重減少をもたらし得る。下記実施例６に示されるように、本明細書で提供される組成物は、１型糖尿病の対象におけるインスリン療法に伴う体重減を減少させることが示されている。２型糖尿病の人は、しばしば体重増加を経験する。本明細書で提供される組成物は、２型糖尿病に関連する体重増加を有利に減少させる。換言すれば、本明細書で提供される組成物は、糖尿病の個体の体重を安定化するのに有益である。改善は、相乗的に有効量のインスリンとクロムを配合して組成物を生成すること、そして、この組成物をそれを必要とする対象に投与すること、の工程を含む。いくつかの実施形態では、改善された方法は、例えば、非経口的に、経鼻的に、経口的に、経肺的に、または経皮的に投与される。いくつかの実施形態では、改善は治療有効量のクロム−インスリン錯体を含む組成物を提供し、この組成物を対象に投与することを含む。このようにして、本明細書に記載される組成物は、他の既知の組成物および／またはインスリン単独と比較して、血清インスリンレベルを上昇させるための改善された方法を提供するために使用することができる。
【０１１４】
他のグルコース代謝に関連する疾患および障害の治療のための組成物および方法
別の態様では、いくつかの実施形態は、低血糖症以外のグルコース代謝関連疾患および障害の治療のための組成物、ならびにその使用方法に関する。他のグルコース代謝関連疾患の治療のための組成物は、クロムおよびインスリンとの組み合わせのクロムを含む本明細書に記載される同じ組成物である。グルコース代謝に関連する疾患および障害には、これらに限定されるものではないが、アルツハイマー病、認知症、軽度の認知障害、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、てんかん、糖尿病、低血糖症、ならびにその他の任意のグルコース代謝に関連する疾患および障害が挙げられる。したがって、本明細書に開示される組成物および／または錯体は、アルツハイマー病、認知症、軽度の認知障害、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、てんかん、糖尿病、低血糖症などのグルコース代謝関連疾患を治療するために使用することが可能である。
【実施例】
【０１１５】
実施例１  −  クロムは、インスリン誘発性低血糖ラットの脳傷害の重症度の軽減をする。
インスリン誘発性低血糖症を予防するクロムの潜在的保護効果を評価するために、インスリンを動物に投与して低血糖を誘発させ、低血糖脳傷害のマーカーを、クロムを投与した動物およびクロムを投与しなかった動物において比較した。
【０１１６】
簡単に述べると、低血糖がＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（雄、８週齢）でインスリン１５単位／ｋｇ体重の腹腔内注射によって誘発された。ラットをそれぞれ１５匹の４群に分けた：（１）インスリン投与を受けない対照群（「Ｃｏｎｔｒｏｌ」）；（２）クロムを投与しなかった群（「Ｈｙｐｏ」）；（３）ピコリン酸クロムを１１０μｇ／ｋｇ／日、投与した群（ＣｒＰｉｃ）；およびヒスチジン酸クロムを１１０μｇ／ｋｇ／日、投与した群（ＣｒＨｉｓ）。投与の１週間後、脳を犠牲にしたラットから摘出し、低血糖傷害マーカー：ＧＬＵＴ−１、ＧＬＵＴ−３、Ｎｒｆ２、ＧＦＡＰ、およびＨＮＥに対して分析した。データを表１と図１〜６に示す。
【０１１７】
図１に示すように、クロムの前処置は、インスリン注射後の血清グルコースレベルを上げたり下げたりしなかった。これらのデータは、クロムが血清グルコースレベルの正常化に、すなわち、インスリン投与により影響されるものとして、有用であることを示している。
【０１１８】
図２に示すように、非クロム処置した動物において、インスリン誘発性の低血糖が脳内クロムの組織レベルを大幅に低下させた。対照的に、クロム処置は、脳内クロムレベルを上昇させた。
【０１１９】
図３に示すように、低血糖は、脳内ＧＬＵＴ−１輸送体レベルを著しく上昇させた。低血糖誘発性ＧＬＵＴ−１の増加は、クロム処置を受けた動物において減少した。これらのデータは、細胞の傷害につながる可能性のある、過剰グルコースの細胞内への侵入がないようにするために、ＧＬＵＴ−１レベルを調節することによって、クロムが保護的役割を果たし得ることを示唆している。
【０１２０】
図４に示すように、低血糖は、脳内ＧＬＵＴ−３輸送体レベルを著しく上昇させた。低血糖誘発性ＧＬＵＴ−３の増加は、クロム処置を受けた動物において減少した。これらのデータは、細胞の傷害につながる可能性のある、過剰グルコースの細胞内への侵入がないようにするために、ＧＬＵＴ−３レベルを調節することによって、クロムが保護的役割を果たし得ることを示唆している。
【０１２１】
図５に示すように、低血糖は、脳内Ｎｒｆ２の組織レベル（細胞保護タンパク質）を著しく低下させた。低血糖誘発性Ｎｒｆ２の減少は、クロム処置により減少した。減少Ｎｒｆ２のレベルが認知障害に関与していたので、これらのデータは、認知機能障害を含む低血糖症関連症状および障害に対する保護におけるクロムの有用性を証明する。
【０１２２】
図６に示すように、低血糖は、脳内ＧＦＡＰとＨＮＥ組織レベル（神経傷害と酸化的傷害のマーカー）を著しく上昇させた。ＧＦＡＰとＨＮＥレベルは、クロム処置によって低下した。これらのデータは、神経傷害を含む低血糖関連症状に対する保護におけるクロムの有用性を証明している。
【表１】
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【０１２３】
上記のデータは、クロム前処置が、低血糖症に起因するよくない副作用を大幅に軽減できることを示す。
【０１２４】
実施例２  −  クロムとインスリンは、クロム−インスリン錯体を形成することができる。
インスリン分子との錯体を形成するためのクロムの可能性を評価するために、以下のことを実施した。
【０１２５】
１００μｌのインスリン（１０ｍｇ／ｍｌ）を２００μｌのヒスチジン酸クロム（「Ｃｒ−Ｈｉｓ」）（２６ｍｇ／ｍｌ）と室温（２０℃）で混合し、白色の沈殿物を形成した。沈殿物を遠心分離によって回収し、脱イオン水で１回洗浄した。それから、沈殿物を２５ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）に再溶解した。次に、最初の上清液と再溶解沈殿物をサイズ排除カラム（例えば、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｂｉｏ社から入手可能な、１００〜１００，０００Ｄａの再分割範囲を有する、３μＭ、１００Åのカラム；大きな分子が最初に溶出する）に通し、紫外−可視分光法および誘導結合プラズマ質量分析法（ＩＣＰＭＳ）を用いて分析した。
【０１２６】
Ｃｒ−Ｈｉｓとインスリンのコントロール（すなわち、Ｃｒ−Ｈｉｓとインスリン混合物中と同じ濃度）をカラムに流した。図１４は、ヒスチジン酸クロム単独の紫外線２８０ｎｍのプロットを示し、一方、図１５は、インスリン単独の紫外線２１４ｎｍのプロットを示す。
【０１２７】
図１６は、上清の紫外線２８０ｎｍのプロットを示し、図１７は、５２Ｃｒを標的とするＩＣＰＭＳプロットを示す。従って、Ｃｒ−Ｈｉｓのコントロールと比較して、上清の分析は、多くのＣｒ−Ｈｉｓが上清に残っていることを示した。
【０１２８】
図１８は、再溶解析出物に対する紫外線２１４ｎｍのプロットを示す。図示したように、約１０分でのピークが検出された。図１９は、５２Ｃｒを標的とするＩＣＰＭＳプロットを示す。図２０は、再溶解析出物に対する５３Ｃｒを標的とするＩＣＰＭＳプロットを示す。また、１０分付近のピークは、クロムの存在を示した。１０分頃のこの溶出液の分子量は、約３６ｋＤａと推定された。これらのデータは、クロムがインスリンと錯体を形成することを強く示唆している。
【０１２９】
実施例３  −  クロム−インスリン組成物は、正常マウスにおいて、インスリンまたは亜鉛−インスリン組成物よりも、より大きな程度に血清インスリンレベルを上げ、血清グルコースレベルを下げる。
正常マウスにおける血清インスリンレベルおよび血清グルコースレベルに対するクロム−インスリン組成物の効果を評価するために、以下のことを実施した。
【０１３０】
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（試験群当たり５匹のマウス）は、３つの異なる形態：インスリン単独、亜鉛−インスリン、およびクロム−インスリンを用いて、０．５Ｕ／ｋｇ体重のインスリンを腹腔内注射した。
【０１３１】
血清インスリンレベルを経時的に測定した。血清インスリンレベルは、Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｃｈｅｍ社（Ｄｏｗｎｅｒｓ  Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ）からのラットインスリン酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）キットにより決定した。
【０１３２】
図２１は、その結果を示す。図２１に示すように、クロム−インスリン組成物の形態で提供されるインスリンの同量は、インスリン単独および亜鉛−インスリン組成物として提供されるインスリンの同量とは異なる、有益な薬物動態プロファイルを有していた。注目すべきは、早い時点では、クロム−インスリン注射は、他の組成物よりも血清インスリンをより高く上昇させたことを示している。血清インスリンレベルは、早い時点でクロム−インスリンに対して、より高いままであった。このように、データは、本明細書で提供される組成物は、インスリンの改善された吸収を提供することを示している。
【０１３３】
改善された吸収データが、改善された治療効果と相関しているかどうかを決定するために、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ血中グルコース監視システム（ＴｈｅｒａＳｅｎｓｅ，Ｐｈｏｅｎｉｘ，ＡＺ）を用いて、血清グルコースレベルが経時的に測定された。そのデータは、図２２に示される。クロム−インスリン組成物として提供されるインスリンは、インスリン単独、または亜鉛−インスリン組成物として提供されるインスリンの同量よりも、より大きな程度に血清グルコースレベルを下げたことを示している。クロムを含む組成物が提供されたときに、これらのデータは、インスリンの改善された治療効果を証明している。
【０１３４】
実施例４  −  クロム−インスリン組成物は、糖尿病マウスにおいて、インスリン単独よりも速く、そして亜鉛−インスリン組成物よりも速く、血清インスリンレベルを上げ、そして血清グルコースレベルを下げる。
糖尿病マウスにおける血清インスリンレベルおよび血清グルコースレベルに対するクロム−インスリン組成物の効果を評価するために、以下のことを実施した。
【０１３５】
ＫＫＡｙマウス（試験群当たり５匹のマウス）は、３つの異なる形態：インスリン単独、亜鉛−インスリン、およびクロム−インスリンで、０．５Ｕ／ｋｇ体重のインスリンを腹腔内注射した。血清インスリンレベルを経時的に測定した。
【０１３６】
血清インスリンレベルを経時的に測定した。血清インスリンレベルは、Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｃｈｅｍ社（Ｄｏｗｎｅｒｓ  Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ）からのラットインスリン酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）キットにより測定した。
【０１３７】
図２３は、その結果を示す。図２３に示すように、クロム−インスリンは、インスリン単独および亜鉛−インスリンの両方と比べて、異なる有益な薬物動態プロファイルを有していた。注目すべきは、早い時点では、クロム−インスリン注射は、他の組成物よりも血清インスリンをより高く上昇させたことを示している。血清インスリンレベルは、早い時点でクロム−インスリン組成物の形態でインスリンの投与を受けた動物では、より高いままであった。クロム−インスリン組成物として提供されるとき、これらのデータは、インスリンの吸収における観察された増加を確認している。
【０１３８】
図２４は、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ血中グルコース監視システム（ＴｈｅｒａＳｅｎｓｅ，Ｐｈｏｅｎｉｘ，ＡＺ）を用いて決定された、経時的に測定された血清グルコースレベルを示す。図２４に示すように、クロム−インスリン注射は、インスリン単独よりも下に血清グルコースレベルを下げた。
【０１３９】
実施例５  −  クロム−インスリン組成物は、亜鉛−インスリン組成物よりも、より大きな程度にグルコースレベルを下げる。
糖尿病ラットモデルにおける、亜鉛−インスリン組成物と比較した、クロム−インスリン組成物の効果を評価するために、以下のことを実施した。
【０１４０】
それぞれ７匹のＷｉｓｔａｒラットを含む４つの実験群は、次のように形成された：
１）対照：生理食塩水での注射；
２）１型：ストレプトゾトシン（「ＳＴＺ」）の６５ｍｇ／ｋｇ腹腔内注射（１型糖尿病モデルに対して）；
３）＋ＺｎＩｎｓ：体重１００ｇ当たり、ＳＴＺの６５ｍｇ／ｋｇ腹腔内注射、およびＺｎＯの６．２３ｍｃｇ注射、およびインスリンの３国際単位（ＩＵ）注射；
４）＋ＣｒＩｎｓ：体重１００ｇ当たり、ＳＴＺの６５ｍｇ／ｋｇ腹腔内注射、およびＣｒ−Ｈｉｓの４７．７ｍｃｇ注射、およびインスリンの３国際単位（ＩＵ）注射。
【０１４１】
血清グルコースレベルは、処置後１時間にグルコースオキシダーゼ・ペルオキシダーゼ法（ＧＯＤ／ＰＯＤキット）を用いて計算した。図２５は、グラフ形式でその結果を示している。図２５に示すように、＋ＣｒＩｎｓは、＋ＺｎＩｎｓ群よりも低い血清グルコースレベルを有していた。これらのデータは、インスリン単独、あるいは亜鉛とインスリンを含む組成物と比べて、クロム−インスリン組成物として提供される場合に、血清グルコースレベルを低下させるという点でインスリンが予想外の良好な治療効果を示すことを確認している。
【０１４２】
実施例６  −  クロム−インスリン組成物は、糖尿病ラットにおいて、亜鉛−インスリン組成物よりも大いに正常体重を維持する。
糖尿病ラットモデルにおいて、亜鉛−インスリン組成物と比較して、クロム−インスリン組成物の効果を評価するために、以下のことを実施した。
【０１４３】
それぞれ７匹のＷｉｓｔａｒラットを含む４つの実験群は、次のように形成された：
１）対照：生理食塩水での注射；
２）１型：ＳＴＺの４０ｍｇ／ｋｇ腹腔内注射；
３）＋ＺｎＩｎｓ：ＳＴＺの４０ｍｇ／ｋｇ腹腔内注射とＺｎ−インスリン０．５ＩＵの注射；
４）＋ＣｒＩｎｓ：ＳＴＺの４０ｍｇ／ｋｇ腹腔内注射と０．８ＩＵの注射。
【０１４４】
ラットは８週間毎日、注射した。ラットの初期平均体重と最終平均体重を以下の表２に示す。
１型糖尿病誘発性ラットの体重に対するインスリン−キレート型の効果（１群当たり７匹）
【表２】
2014506932.tif 000011
【０１４５】
上記データは、クロム−インスリン組成物として提供されるインスリンによる治療が、低血糖症に起因する体重減などの良くない副作用を著しく緩和することができることを証明している。クロム−インスリン錯体の有益な効果は、亜鉛とインスリンを含む組成物で観察されたものよりも有意に大きかった。
【０１４６】
実施例７  −  糖尿病の治療において相乗効果を有するクロムとインスリンを含む組成物
同様の体重、年齢、インスリン感受性、およびその他の特性を有する第１、第２、第３、および第４の対象は、糖尿病を患っているとして識別される。それぞれの対象は、１２６ｍｇ／ｄＬを超える空腹時血清グルコースレベルなどの糖尿病に伴う１つ以上の症状を提示する。
【０１４７】
第１の対象は、非経口的に対照の生理食塩液を投与される。
【０１４８】
第２の対象は、２５〜２，０００μｇのクロムの投与量Ｘが非経口的に投与される。
【０１４９】
第３の対象は、１単位〜５００単位のインスリンの投与量Ｙが非経口的に投与される。
【０１５０】
第４の対象は、２５〜２，０００μｇのクロムの投与量Ｘと１単位〜５００単位のインスリンの投与量Ｙを含む組成物が非経口的に投与される。
【０１５１】
対象の空腹時血清グルコースレベルは、クロムの投与の前と後で測定される。クロムの投与後に、第１の対象は、血清グルコースレベルの不変が観察される。第２の対象は、低下した血清グルコースレベルを有することが観察される。第３の対象は、第３の対象のそれよりも低い、低下したグルコースレベルを有することが観察され、そして、低血糖になっている。第４の対象は、第１および第２の対象のそれよりも低い、低下した血清グルコースレベルを有するが、第３の対象のそれよりも高い血清グルコースレベルを有し、かつ低血糖でないことが観察される。
【０１５２】
実施例８
クロムとインスリンを含む非経口投与用組成物の有効性を評価するために、糖尿病性動物にクロムとインスリンを含む組成物を非経口的投与し、代謝機能の指標、糖尿病プロファイル、および低血糖脳傷害マーカーを、クロム投与をして、またはクロム投与をしないで動物において比較した。また、クロムの投与を亜鉛の投与と比較した。
【０１５３】
４２匹のＷｉｓｔａｒラットを６つの実験群の１つに割り当てた：１）陽性対照：生理食塩水を注射したラット、２）１型糖尿病群：ベータ細胞を損傷するためにストレプトゾトシン（ＳＴＺ、６５ｍｇ／ｋｇを腹腔内）投与したラット（３５匹）。糖尿病ラット（サブグループ当たり７匹）はその後、ａ）なし、ｂ）Ｚｎの単独（６．２３μｇのＺｎＯ）、ｃ）Ｃｒの単独（４７．７μｇのヒスチジン酸クロム）、ｄ）Ｚｎ−インスリン（６．２３μｇのＺｎＯ＋３ＩＵのＩｎｓ／１００ｇ体重）、またはｅ）Ｃｒ−インスリン（４７．７μｇのヒスチジン酸クロム＋３ＩＵのＩｎｓ／１００ｇ体重）で、毎日２６日間、投与された。体重は、実験の開始時と終了時に測定した。
【０１５４】
血液サンプルは、血液生化学検査のために−２日目（開始）、０日目（誘導）、４日目、６日目、１２日目、および２６日目に採取した。実験の終了時に、ラットは脳組織ＧＬＵＴ（１および３）のために犠牲にした。データは平均比較のためにＬＳＤオプションを使用して一元配置分散分析により分析した。実験開始時の体重は、グループ間で差はなかった。対照ラットと比較して、しかし、実験終了時糖尿病ラットは、対照ラットに比べて体重の減少があった。Ｚｎ−ＩｎｓおよびＣｒ−Ｉｎｓで処置された糖尿病ラットでは、未処置の糖尿病ラットよりも体重減が少なかった。糖尿病の誘導は、血清インスリン、総タンパク質、およびＣＫ（クレアチニンキナーゼ）のレベルの減少、ならびに血清グルコース、尿素、クレアチニン、およびＫレベルの増加、同様に、ＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）、ＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）、ＡＬＰ（アルカリホスファターゼ）、およびＬＤＨ（乳酸脱水素酵素）の活性の増加を伴った。
【０１５５】
代謝プロファイルを回復するＣｒＩｎｓの有効性は、ＺｎＩｎｓと同等であるか、またはＺｎＩｎｓよりも優れていた。実験中、ＣｒＩｎｓの注射は、ＺｎＩｎｓを注射するよりも、上昇した血清グルコースレベルを低下させるのにより効果的であった。脳のＧＬＵＴ発現は、糖尿病誘導によって弱められた。ＣｒＩｎｓ治療は、脳のＧＬＵＴ発現を緩和するという点で他の治療の選択肢よりも優れていた。結論として、ＣｒＩｎｓは、おそらく増強インスリン作用および内在グルコースから生じる、Ｃｒおよび外因性インスリンの２重の効果により高血糖を抑制するのにＺｎＩｎｓより優れていると思われる。
【０１５６】
研究結果は、表２〜７および図７〜１３に示される。
【表３】
2014506932.tif 000012
【０１５７】
表２に示すように、ＺｎＩｎｓを含む他のすべての処置群と比較して、ＣｒＩｎｓは、体重の最も少ない減少をもたらした。これらのデータは、ＣｒＩｎｓが糖尿病の治療にＺｎＩｎｓよりも優れていることを示唆している。
【表４】
2014506932.tif 000013
【表５】
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【０１５８】
表４に示すように、ＺｎＩｎｓを含む他のすべての処置群に比べて、ＣｒＩｎｓは、血清インスリン、ＣＫ、総蛋白質、アルブミン、血清グルコース、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＬＰ、ＬＤＨ、尿素、クレアチニン、および尿酸のレベルを対照レベルに戻す際に最も効果的であった。
【表６】
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【０１５９】
表５に示すように、ＺｎＩｎｓを含む他のすべての処置群と比較して、ＣｒＩｎｓは、ＧＬＵＴ−１およびＧＬＵＴ−３の発現の最高レベルをもたらした。これらのデータは、ＣｒＩｎｓが高血糖を抑制し、糖尿病を治療するのにＺｎＩｎｓよりも優れていることを示唆している。
【表７】
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【０１６０】
表６に示すように、ＺｎＩｎｓを含む他のすべての処置群と比較して、ＣｒＩｎｓは、血清クロムレベル、脳のクロムレベル、脳のセロトニンレベル、脳のトリプトファンレベルの最高レベルをもたらした。これらのデータは、ＣｒＩｎｓが高血糖を抑制し、糖尿病を治療するのにＺｎＩｎｓよりも優れていることを示唆している。
【表８】
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【０１６１】
表７および図７に示すように、ＣｒＩｎｓ合剤の投与は、望ましい正常血糖レベルである約１００ｍｇ／ｄｌの、投与後血清グルコースレベルをもたらした。ＺｎＩｎｓ合剤に対する投与後の血清グルコースレベルは、約１２０〜１５０ｍｇ／ｄｌと相違した。これらのデータは、ＣｒＩｎｓが高血糖を抑制し、糖尿病を治療するのにＺｎＩｎｓよりも優れていることを示唆している。
【０１６２】
表７ならびに図８および９に示すように、ＣｒＩｎｓ合剤は、対照レベルと比べて、腎臓ＯＣＴ−１およびＯＣＴ−２（有機カチオン輸送体）の最大の割合をもたらした。ＯＣＴは、モノアミン神経伝達物質、アグマチン、およびプロスタグランジン類などを含む、多くの生理的に重要な内因性陽イオンの腎臓恒常性にとって重要である。ＯＣＴは、また、毒素、生体異物、および一般的に使用される薬（例えば、メトホルミンおよびβ−ブロッカー）を含む広範囲の外因性基質の腎クリアランスのためにも必要である。（Ｔｈｏｍａｓら（２００４）ＪＰＥＴ  ３１１：４５６−４６６）。これらのデータは、ＣｒＩｎｓが例えばメトホルミンを含むいくつかの糖尿病治療薬の有効性を高めることができることを示唆している。
【０１６３】
また、表７および図１０に示すように、ＣｒＩｎｓ合剤は、対照レベルと比べて、腎臓ＮＦＫ（核因子カッパＢ）の最低割合をもたらした。ＮＦＫは、急性炎症の発生において重要であると考えられる炎症誘発性分子の広いアレイの最大転写に必要とされるタンパク質転写因子である。（Ｃｈｒｉｓｔｍａｎら（２０００）Ｂｒａｉｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  １０：１５３−１６２）。長期的な酸化ストレスにより誘導されるＮＦＫの活性化は、神経損傷およびそれに伴う細胞死の促進に関与することが示されている。（Ａｒａｇａｎｏら（２００２）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １４３（９）：３２５０−３２５８）。
【０１６４】
表７および図１１に示すように、ＣｒＩｎｓ合剤は、対照レベルと比べて、腎臓ＭＲＰ２（多剤耐性関連タンパク質２）の最も低い割合をもたらした。ＭＲＰ２は、有機アニオン輸送システムにおいて機能するＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）輸送体である。（Ｓｅｋｉｎｅら（２００６）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２９０：Ｆ２５１−Ｆ２６１）。
【０１６５】
表７および図１２に示すように、ＣｒＩｎｓ合剤は、対照レベルと比べて、脳ＮＦＫの最低割合をもたらした。
【０１６６】
表７および図１３に示すように、ＣｒＩｎｓ合剤は、対照レベルと比べて、脳インスリンレベルの最高割合をもたらした。これらのデータは、ＣｒＩｎｓが高血糖を抑制し、糖尿病を治療するのにＺｎＩｎｓよりも優れていることを示唆している。
【０１６７】
実施例９
対象は、初期段階のアルツハイマー病にかかっているとして識別される。対象は、日常生活を混乱させる記憶の変化；課題を計画したり、解決する際の異議；おなじみのタスクを完了することの困難性；時間や場所の混乱；視覚的なイメージと空間的関係を理解することが厄介；話したり、書いたりする際の単語使用の新たな問題；物を置き忘れたり、後戻りする能力の喪失；低下した、または誤った判断；仕事や社会的活動からの離脱；そして気分や人格の変化；を含む１つ以上を提示する。
【０１６８】
対象は、５０μｇ〜５０００μｇのクロムと１単位〜５００単位のインスリンとを含む組成物を投与される。この組成物は非経口的に投与される。１つ以上の症状によって評価される対象の状態は、経時的に悪化しないか、または改善する。
【０１６９】
実施例１０
対象は、時計描画テスト、時間と小銭勘定テスト、匂い嗅ぎテスト、またはその種の他のものなどのルーチンの認知症スクリーニング試験でアルツハイマー病に罹患しているとして識別され、および／またはＰＥＴスキャンにより証明されるアルツハイマー病の症状を示す。
【０１７０】
対象は、５０μｇ〜５０００μｇのクロムと１単位〜５００単位のインスリンを含む組成物を投与される。この組成物は非経口的に投与される。当該疾患の１つ以上の症状によって評価される対象の状態は、５日間にわたって悪化しないか、または改善する。
【０１７１】
実施例１１
対象は、従来の方法によってパーキンソン病にかかっていると識別される。対象は、震え、筋肉のこわばり（または硬直）、動きの遅さ（運動緩慢）、およびバランスの喪失（姿勢不全）を含む１つ以上の症状を呈する。
【０１７２】
対象は、５０μｇ〜５０００μｇのクロムと１単位〜５００単位のインスリンとを含む組成物を投与される。この組成物は非経口的に投与される。当該疾患の１つ以上の症状によって評価される対象の状態は、経時的に悪化しないか、または改善する。
【０１７３】
実施例１２
対象は、軽度認知障害にかかっていると識別される。対象は、情報提供者によって確認される記憶の病訴；年齢や教育による客観的な記憶障害；正常な一般的認知機能；問題ない日常生活の活動；の１つ以上を呈し、そして、対象は認知症の基準を満たしていない。
【０１７４】
対象は、５０μｇ〜５０００μｇのクロムと１単位〜５００単位のインスリンとを含む組成物を投与される。この組成物は非経口的に投与される。当該疾患の１つ以上の症状によって評価される対象の状態は、経時的に悪化しないか、または改善する。
【０１７５】
実施例１３
対象は、不注意（例えば、細心の注意を払うことができないこと、注意を持続することが困難であること、作業や活動を組織化することが困難であり、余分な刺激に簡単に気を取られること）、多動性（例えば、座ったままでいることが困難であること、不適切な状況での過度な運動活動をすること、「モーターにより駆動されている」かのように行動すること）、および衝動性（例えば、順番を待つことが困難であること、質問が完了する前に回答し、そして多くの場合、継続中の会話の中断または邪魔などをすること）を含むＡＤＨＤの症状を呈する。
【０１７６】
対象は、５０μｇ〜５０００μｇのクロムと１単位〜５００単位のインスリンとを含む組成物を投与される。この組成物は非経口的に投与される。当該疾患の１つ以上の症状によって評価される対象の状態は、経時的に悪化しないか、または改善する。
【０１７７】
上記の説明は、本発明の特定の実施形態を詳述する。なお、上記の記述が明細書中にどんなに詳述されても、本発明は多くの方法で実施することができることが理解されるであろう。また、上述されたように、本発明の特定の特徴または態様を記述するときに、特定の用語の使用は、その用語が関連している本発明の特徴または態様の任意の特定の特徴を含むことに限定されるように本明細書に再定義されていることを意味するものと解釈されるべきではないことに留意すべきである。したがって、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲およびその均等物に従って解釈されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
2014506932.tif 000037
【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【手続補正書】
【提出日】平成25年12月10日(2013.12.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本質的にクロム−インスリン錯体からなる組成物であって、該クロム−インスリン錯体はクロムおよびインスリンを含み、該インスリンに対する該クロムの割合が、インスリン１分子当たり、またはインスリンの６量体当たり、クロムの１〜１０分子で存在する、組成物。
【請求項２】
前記組成物が、患者への注射用に調合される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記クロム−インスリン錯体が、５ｋＤａ〜５０ｋＤａの分子量を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記クロム−インスリン錯体が、約３３ｋＤａの分子量を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物が、５マイクログラム〜２，０００マイクログラムのクロムを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物が、１単位〜５００単位のインスリンを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記クロム−インスリン錯体が、溶液中に懸濁されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
栄養学的に許容される担体をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記クロム−インスリン錯体が、水性溶液中に存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
インスリンを必要とする対象にインスリンを投与するための薬剤を製造するための、前述の請求項のいずれか１項に記載の組成物の使用であって、
請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物を提供すること、および
当該組成物を対象に投与すること、を含む使用。
【請求項１１】
前記対象が、グルコース代謝に関連する疾患または障害を有している、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記対象が、１型糖尿病、２型糖尿病、血清グルコースレベルの不安定性、アルツハイマー病、認知症、軽度認知障害（ＭＣＩ）、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、ハンチントン病、てんかん、パーキンソン病、糖尿病誘発性の体重増加もしくは体重減少、および糖尿病誘発性低血糖からなる群から選択される疾患または症状を患っている、請求項１０または１１に記載の使用。
【請求項１３】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の注射用組成物を製造する方法であって、前記方法は、
クロム錯体とインスリンを配合すること；
沈殿物を分離すること；
沈殿物を緩衝液に溶解すること；
請求項１〜９のいずれか１項に記載のクロム−インスリン錯体を緩衝液から分離すること；および
クロム−インスリン錯体を注射剤として調合すること；
を含む方法。
【請求項１４】
対象の脳におけるクロムレベル、インスリンレベル、または両方を増加させるための薬剤の製造のための請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物の使用であって、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む使用。
【請求項１５】
前記組成物が、注射投与または鼻腔内投与のために調合される、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【国際調査報告】
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