(57)【要約】  以下の式の６−置換エストラジオール化合物によって、軸索を再ミエリン化する方法が開示される。2014508807.tif 000033  前記方法は、様々な脱髄疾患の治療に使用できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経細胞を、式： 
【化１】
2014508807.tif 000023
式中、「ａ」環は、以下からなる群から選択され
【化２】
2014508807.tif 000024
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ、スルフェート（ｓｕｌｆａｔｅ）、グルクロニド、−ＯＨ、嵩高い（ｂｕｌｋｙ）基、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、−Ｎ（ＣＨ２）ｎ、ホスフェート（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）基、及びホスフィネート（ｐｈｏｓｐｈｉｎａｔｅ）基からなる群から選択され；
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロゲン、スルフェート、グルクロニド、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ−、−ＮＨＣＮ−、−ＣＨＯ、＝ＣＨＯＣＨ３、−ＣＯＯ塩、−ＯＳＯ２アルキル、−ＮＨ２、及び−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｎからなる群から選択され；
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、ハロゲン、グルクロニド、−ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、−ＮＨＣＮ、−ＣＨＯ、−ＣＯＯ塩、−ＯＳＯ２アルキル、−ＳＨ、−ＳＣＨ３、−ＣＨ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］ＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−Ｎ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＣＮ、−ＳＯ２アルキル、−Ｂ（ＯＨ）２、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝Ｓ）ＣＨ３、及び−ＮＨＮＨ２からなる群から選択され；
Ｙは、Ｈ、＝Ｏ、−ＯＣＯ（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、及び−ＯＨからなる群から選択され；
Ｚは、Ｈ、及びメチルからなる群から選択され；
ｍは、０−２０の整数であり；
ｎは、０−８の整数であり；
【化３】
2014508807.tif 000025
はそれぞれ、独立して３または１７位でケト基を形成することができる、単結合または二重結合のいずれかを表し；並びに
【化４】
2014508807.tif 000026
は、立体化学を問わない任意の形式の結合を表す；
並びに、前記化合物それぞれのエナンチオマー、他の立体化学異性体、水和物、溶媒和物、互変異性体、及び薬学的に許容される塩である、
の６−置換エストラジオール誘導体の有効量に接触させることを含む、神経細胞の軸索の脱髄を防止し、及び／または再ミエリン化を高める方法。
【請求項２】
前記「ａ」環が、
【化５】
2014508807.tif 000027
Ｙは、−ＯＨであり；
Ｚは、メチルであり；
Ｒ１１は、Ｈであり；
Ｒ４は、Ｈ、ハロ、及びＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され；
Ｒ１及びＲ２は、独立してＨ、−ＯＨ、及びハロからなる群から選択され；
Ｒ３は、Ｈ、ハロ、及び−ＯＨからなる群から選択され；
ｍは、１−１２の整数であり；並びに
ｎは、０−４の整数である、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｘが、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、及び−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１５，１６−オクタヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７（１４Ｈ）−オン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１５，１６−オクタヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７（１４Ｈ）−オン；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１７−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１７−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１７−ヒドロキシ−１３−メチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１７−ヒドロキシ−１３−メチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（（メトキシメチル）アミノ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（（メトキシメチル）アミノ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
１−（（（（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３，１７−ジヒドロキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）メチル）アミノ）プロパン−２−オン；
１−（（（（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３，１７−ジヒドロキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）メチル）アミノ）プロパン−２−オン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−メトキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（２−メトキシエチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（４−メトキシブチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシオクチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イルステアリン酸；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６−デカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７（６Ｈ）−ジオン；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６−デカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７（６Ｈ）−ジオン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−１７−オキソ−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル水素スルフェート；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−１７−オキソ−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル水素スルフェート；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１３−メチル−６−（４−プロポキシブチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１３−メチル−６−（５−エトキシペンチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；及び
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（メトキシメチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール
からなる群から化合物が選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記化合物が、
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール、及び
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール
からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
被験体において脱髄性疾患を治療する方法であって、前記方法は以下を含む：
（ｉ）前記被験体へ、式：
【化６】
2014508807.tif 000028
式中、「ａ」環は、以下からなる群から選択され
【化７】
2014508807.tif 000029
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ、スルフェート（ｓｕｌｆａｔｅ）、グルクロニド、−ＯＨ、嵩高い（ｂｕｌｋｙ）基、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、−Ｎ（ＣＨ２）ｎ、ホスフェート（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）基、及びホスフィネート（ｐｈｏｓｐｈｉｎａｔｅ）基からなる群から選択され；
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロゲン、スルフェート、グルクロニド、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ−、−ＮＨＣＮ−、−ＣＨＯ、＝ＣＨＯＣＨ３、−ＣＯＯ塩、−ＯＳＯ２アルキル、−ＮＨ２、及び−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｎからなる群から選択され；
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、ハロゲン、グルクロニド、−ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、−ＮＨＣＮ、−ＣＨＯ、−ＣＯＯ塩、−ＯＳＯ２アルキル、−ＳＨ、−ＳＣＨ３、−ＣＨ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］ＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−Ｎ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＣＮ、−ＳＯ２アルキル、−Ｂ（ＯＨ）２、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝Ｓ）ＣＨ３、及び−ＮＨＮＨ２からなる群から選択され；
Ｙは、Ｈ、＝Ｏ、−ＯＣＯ（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、及び−ＯＨからなる群から選択され；
Ｚは、Ｈ、及びメチルからなる群から選択され；
ｍは、０−２０の整数であり；
ｎは、０−８の整数であり；
【化８】
2014508807.tif 000030
はそれぞれ、独立して３または１７位でケト基を形成することができる、単結合または二重結合のいずれかを表し；並びに
【化９】
2014508807.tif 000031
は、立体化学を問わない任意の形式の結合を表す；
並びに、前記化合物それぞれのエナンチオマー、他の立体化学異性体、水和物、溶媒和物、互変異性体、及び薬学的に許容される塩である、
の６−置換エストラジオール誘導体の有効量を投与し、並びに
（ｉｉ）前記被験体について再ミエリン化を経過観察する。
【請求項７】
前記「ａ」環が、
【化１０】
2014508807.tif 000032
Ｙは、−ＯＨであり；
Ｚは、メチルであり；
Ｒ１１は、Ｈであり；
Ｒ４は、Ｈ、ハロ、及びＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され；
Ｒ１及びＲ２は、独立してＨ、−ＯＨ、及びハロからなる群から選択され；
Ｒ３は、Ｈ、ハロ、及び−ＯＨからなる群から選択され；
ｍは、１−１２の整数であり；並びに
ｎは、０−４の整数である、
請求項６に記載の方法。
【請求項８】
Ｘが、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、及び−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１５，１６−オクタヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７（１４Ｈ）−オン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１５，１６−オクタヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７（１４Ｈ）−オン；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１７−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１７−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１７−ヒドロキシ−１３−メチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１７−ヒドロキシ−１３−メチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（（メトキシメチル）アミノ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（（メトキシメチル）アミノ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
１−（（（（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３，１７−ジヒドロキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）メチル）アミノ）プロパン−２−オン；
１−（（（（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３，１７−ジヒドロキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）メチル）アミノ）プロパン−２−オン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−メトキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（２−メトキシエチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（４−メトキシブチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシオクチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イルステアリン酸；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６−デカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７（６Ｈ）−ジオン；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６−デカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７（６Ｈ）−ジオン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−１７−オキソ−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル水素スルフェート；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−１７−オキソ−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル水素スルフェート；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１３−メチル−６−（４−プロポキシブチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１３−メチル−６−（５−エトキシペンチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；及び
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（メトキシメチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール
からなる群から化合物が選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記化合物が、
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール、及び
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール
からなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記疾患が、多発性硬化症、橋中心髄鞘崩壊症、実験的自己免疫性脳脊髄炎、急性散在性脳脊髄炎、横断性脊髄炎、進行性多巣性白質脳症、アルツハイマー病、亜急性硬化性全脳炎、感染後脳脊髄炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、進行性核上性麻痺、多巣性運動ニューロパチー、ギラン−バレー症候群、進行性多巣性白質脳症、デビック病、バロー同心性硬化症、クラッベ病、副腎白質ジストロフィー（ＡＬＤ）、ペリツェウス−メルツバッハー病、カナバン病、中枢低髄鞘化を伴う小児期運動失調、アレキサンダー病、コケイン症候群、ファンデルナップ症候群、ゼルウィガー症候群、及びレフサム病からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記疾患が、多発性硬化症である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
再ミエリン化を、脱髄性疾患の症状の改善によって経過観察する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記化合物を、抗炎症薬または免疫モジュレーターと組み合わせて投与する、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１１年３月２１日に出願された仮出願シリアル番号６１／４５４，８７３号に基づいて優先権の利益を主張し、それは、その全体が本明細書中に参照されることにより組込まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、６−置換エストラジオール化合物及びそれらの薬学的に許容される塩またはプロドラッグを使い、軸索を再ミエリン化する方法に関する。この方法は、多発性硬化症などの脱髄疾患の治療に有用である。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ミエリンは、ニューロンの軸索を包み、髄鞘として知られている層を形成する電気的な絶縁材料である。ミエリンの主要な意義は、神経インパルスが神経軸索を下って伝搬する速度を増大させることである。細胞膜にわたって電気抵抗を増加させることにより、電流が軸索から離れるのを防ぐのを、ミエリンは手助けしている。
【０００４】
神経脱髄は、神経系におけるミエリンタンパク質の減少によって特徴付けられる状態であり、多発性硬化症などの多くの神経変性自己免疫疾患、実験的自己免疫性脳脊髄炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、進行性多巣性白質脳症、横断性脊髄炎、ギラン−バレー症候群、橋中心髄鞘崩壊症、アルツハイマー病、進行性核上性麻痺、多巣性運動ニューロパチー、及び副腎白質ジストロフィー（ＡＬＤ）のような白質ジストロフィー、アレキサンダー病、カナバン病、クラッベ病、異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）、ペリツェウス−メルツバッハー病、レフサム病、コケイン症候群、ファンデルナップ症候群、並びにゼルウィガー症候群の原因である。
【０００５】
特に、多発性硬化症は最も一般的な脱髄疾患であり、多くの若い成人に障害を引き起こしている。脱髄及び瘢痕化が原因で、多発性硬化症は、脳と脊髄の神経細胞が互いに交信する能力に影響を与える。このようにして、多発性硬化症を患っている人は、感度の喪失やうずきなどの感覚の変化、筋力低下、協調運動障害、及び麻痺を含む、さまざまな神経症状を示すことがある。この病気は一般的に、再発性ステージと慢性進行性フェーズの二つのステージで発症する。
【０００６】
多発性硬化症の現在の治療としては、抗炎症及び免疫調節の手法が挙げられる。しかし、どちらも該病気の再発性ステージにおいて部分的な効果があるのみであり、該病気の二次進行性フェーズにおいては、ほとんど乃至全く効果が無い。最近、エストロゲン受容体βモジュレーターが、そのような神経変性を遅延させることが示されている。Ｃａｒｓｗｅｌｌ，Ｈ．Ｖ．Ｏ．ｅｔ  ａｌ．，ＡＪＰ−ＨｅａｒｔＣｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２００４，ｖｏｌ．２８７，１５０１−０４；Ｃｒａｗｆｏｒｄ，Ｄ．Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ，２０１０，ｖｏｌ．１３３，２９９９−３０１６；Ｄｏｎｚｅｌｌｉ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．，２０１０，ｖｏｌ．１１４，１５８−１６７．。
【０００７】
したがって、脱髄疾患のための効果的な治療に対する要求がある。具体的には、内因性ミエリン化を活性化し、軸索変性を起こさせない化合物が好ましい。
【発明の概要】
【０００８】
発明の分野
上記の観点から、神経細胞を有効量の６−置換エストラジオール誘導体に接触させることを含む、神経細胞の軸索の脱髄を防止し、及び／または再ミエリン化を高める方法を提供することが、本発明の目的である。本発明の一つ以上の態様が、ある目的を達成でき、その上、一つ以上の他の態様が、他のある目的を達成できることを、当業者には理解されるであろう。それぞれの目的は、そのすべての点で、本発明のあらゆる態様に均等に適用されないこともある。このようにして、以下目的は、本発明のいずれか一つの形態について選択的に見ることができる。
【０００９】
したがって、本発明の一態様では、本明細書で開示される方法において使用される６−置換エストラジオール誘導体は、式Ｉの化合物：
【００１０】
【化１】
2014508807.tif 000002
【００１１】
式中、「ａ」環は、以下からなる群から選択され
【００１２】
【化２】
2014508807.tif 000003
【００１３】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は独立して水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ、スルフェート（ｓｕｌｆａｔｅ）、グルクロニド、−ＯＨ、嵩高い（ｂｕｌｋｙ）基、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、−Ｎ（ＣＨ２）ｎ、ホスフェート（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）基、及びホスフィネート（ｐｈｏｓｐｈｉｎａｔｅ）基である；Ｒ１１はＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロゲン、スルフェート、グルクロニド、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ−、−ＮＨＣＮ−、−ＣＨＯ、＝ＣＨＯＣＨ３、−ＣＯＯ塩、−ＯＳＯ２アルキル、−ＮＨ２、及び−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｎからなる群から選択され；ＸはＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、ハロゲン、グルクロニド、−ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、−ＮＨＣＮ、−ＣＨＯ、−ＣＯＯ塩、−ＯＳＯ２アルキル、−ＳＨ、−ＳＣＨ３、−ＣＨ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］ＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−Ｎ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＣＮ、−ＳＯ２アルキル、−Ｂ（ＯＨ）２、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝Ｓ）ＣＨ３、及び−ＮＨＮＨ２からなる群から選択され；Ｙは水素、＝Ｏ、−ＯＣＯ（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、及び−ＯＨから選択され；及びＺはＨまたはメチルであり；このとき、ｍは０−２０の整数であり、ｎは０−８の整数であり、
【００１４】
【化３】
2014508807.tif 000004
【００１５】
は３及び／または１７位でケト基を形成することができる、単結合または二重結合のいずれかを表し；並びに
【００１６】
【化４】
2014508807.tif 000005
【００１７】
は立体化学を問わない任意の形式の結合を表す；並びに、前記それぞれのエナンチオマー、他の立体化学異性体、水和物、溶媒和物、互変異性体、並びに前記化合物の薬学的に許容される塩である。
【００１８】
本発明の別の態様においては、前記方法は、特に、エストロゲン受容体α（ＥＲ−α）及びエストロゲン受容体β（ＥＲ−β）の一方または両方に結合する化合物を提供する。このような方法は、プリカーサー（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）細胞またはプロジェニター（ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ）細胞がミエリンを形成する細胞へ分化するための主要シグナル経路に関与する遺伝子をコードするＲＮＡへの遺伝子転写を、開始し、高め、または増やすこと含むことができる。
【００１９】
本発明の他の目的、特徴、利点及び長所は、この概要及び以後のいくつかの実施形態についての説明から明らかであろうし、様々なステロイド化合物及び関連の治療方法についての知識を有する当業者にとっては容易に明らかとなるであろう。このような目的、特徴、利点及び長所は、添付の実施例、データ、図面、または本明細書に組み込まれる文献の考慮と共に検討すれば、上述から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
図の簡単な説明
【図１】図１は、様々な６−置換エストラジオール誘導体で処置してから９６時間後の、マウス培養系における分化したオリゴデントロサイトプリカーサー細胞（ＯＰＣｓ）の総数を示す。
【図２Ａ】図２は、１０μＭの化合物２１にて処置してから９６時間後の、マウス培養系におけるオリゴデンドロサイトの成熟を示す；ａ）陰性対照（ＤＭＳＯ）にて処置；ｂ）陽性対照（ＭＥＫｉ）にて処置；ｃ）化合物２１にて処置。
【図２Ｂ】図２は、１０μＭの化合物２１にて処置してから９６時間後の、マウス培養系におけるオリゴデンドロサイトの成熟を示す；ａ）陰性対照（ＤＭＳＯ）にて処置；ｂ）陽性対照（ＭＥＫｉ）にて処置；ｃ）化合物２１にて処置。
【図２Ｃ】図２は、１０μＭの化合物２１にて処置してから９６時間後の、マウス培養系におけるオリゴデンドロサイトの成熟を示す；ａ）陰性対照（ＤＭＳＯ）にて処置；ｂ）陽性対照（ＭＥＫｉ）にて処置；ｃ）化合物２１にて処置。
【図３】図３は、様々な６−置換エストラジオール誘導体がＯＰＣｓを成熟オリゴデンドロサイトに分化する能力と、対照薬Ｔ３、ＣＮＴＦ及びＭＥＫｉがＯＰＣｓを成熟オリゴデンドロサイトに分化する能力との比較を示す。
【図４】図４は、化合物８で処置後の、オリゴデンドロサイトの代表的なプロセス伸長を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
発明の詳細な説明
別途に定義しない限り、本明細書で使われる全ての技術的及び科学的用語は、この発明が属する分野の当業者に一般的に理解されているのと同じ意味であり、後述の意味を持つものと理解される。本明細書で参照されるすべての刊行物及び特許は、その全体が参照されて組込まれる。特に断らない限り、特定の化合物への参照は、ラセミ及びこれらの他の混合物を含む、その全ての異性体を含む。特に断らない限り、特定の化合物への参照は、また、イオン性の、塩、溶媒和物（例えば、水和物）、保護された形態、プロドラッグ、及び、例えば本明細書で説明したような、これらの他の立体異性体を含む。
【００２２】
活性化合物に対応する塩、例えば薬学的に許容される塩を調製し、精製し、及び／または取り扱うことが便利または望ましいこともある。薬学的に許容される塩の例としては、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９７７，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  Ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  Ｓａｌｔｓ，」Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，Ｖｏｌ．６６，ｐｐ．１−１９に詳しく述べられており、本明細書においても詳述される。
【００２３】
本明細書において、病気を処置する文脈中で使用される用語「処置」または「治療」は、一般的に哺乳類被験体、ヒトまたは非ヒト動物（例えば、獣医への応用）のいずれか、の処置または治療に関し、例えば病気の進行が阻害されるなど何らかの望ましい治療効果が達成され、さらに、進行速度の低下、進行速度の停止、病気の改善、及び／または病気の治癒を含む。予防策としての処置もまた含まれる。処置は併用処置及び治療を含み、この場合は、例えば、順次または同時に、二つ以上の処置または治療が組み合わされる。処置及び治療の例は、特に制限されるものではないが、化学療法（例えば医薬品、抗体（例えば、免疫療法のようなもの）を含む、活性薬剤の投与）、抗炎症、プロドラッグ（例えば、３または１７位のような適切な位置にリン酸誘導体及びホスフィネートを含む保護基を採用すること、光力学治療に使用される他の化合物、ＧＤＥＰＴ、ＡＤＥＰＴなど）、手術、放射線治療、及び遺伝子治療が挙げられる。好ましい併用処置としては、例えば抗炎症治療または免疫調整治療のような筋肉硬化症に対する既存の治療と、本発明の方法を組み合わせることが挙げられる。
【００２４】
本明細書で使用される「立体化学異性体」という用語は、空間における原子の配向の仕方のみがお互いに異なる異性体を指す。本発明において特に重要な二つの立体異性体は、二つの異性体がお互いに鏡像体であるか否かによって決まる、エナンチオマー及びジアステレオマーである。好ましい実施形態では、特許請求の範囲に記載の式は、単離された、光学分割された、及び「実質的に他の異性体を含まない」化合物からなる。
【００２５】
本明細書で使用される「治療的な有効量」という用語は、活性化合物、または活性化合物を含むマテリアル、組成物若しくは剤形の量に関し、これは合理的な利益／リスク比に見合う、なんらかの望ましい治療効果を生じさせるのに有効である。「有効量」という用語は、検出可能な効果を引き起こすことができる量を、一般的には意味する。
【００２６】
「患者」または「被験体」という用語は哺乳類を含む動物を指し、好ましくはヒトである。
【００２７】
「組織」という用語は、特定の機能を発揮することができる特殊化した細胞を一般的に指す。「組織」という用語は、個々の細胞または複数の若しくは凝集した細胞を指すこともあり、例えば、膜、血液や臓器である。「組織」という用語はまた、異常細胞または複数の異常細胞を含む。典型的な組織として乳房組織が挙げられ、乳腺細胞、内皮及び上皮を含む膜組織、ラミナ、間質組織を含む結合組織、並びに腫瘍を含む。
【００２８】
本発明において、「アルキル」とは、１−２０、及び好ましくは１−１２の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル基を意味する。例としては、特に制限されるものではないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、２−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、及び３−メチルペンチルが挙げられる。各アルキル基は、任意に、例えば、ハロ、シクロアルキル、アリール、アルケニル、またはアルコキシ基などの１個、２個、または３個の置換基で置換されてもよい。
【００２９】
「アリール」は、単環（例えば、フェニル）、多環（例えばビフェニル）、または少なくとも一つが芳香族である複数の縮合環（例えば、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル）を有する、芳香族炭素環基を意味する。アリール基はまた、任意に、例えばハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、またはアルコキシなどによってモノ−、ジ−、又はトリ置換されることもある。
【００３０】
「ヘテロアリール」は、窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を少なくとも１個、最大で４個まで含む、５−、６−、または７−員環の、１または複数の縮合芳香族環系を意味する。例としては、特に制限されるものではないが、フラニル、チエニル、ピリジニル、ピリミジニル、ベンズイミダゾリル及びベンゾオキサゾリルが挙げられる。ヘテロアリール基はまた、任意に、例えばハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、またはアルコキシなどによってモノ−、ジ−、又はトリ置換されることもある。
【００３１】
「シクロアルキル」は、単環（例えば、シクロヘキシル）、多環（例えば、ビシクロヘキシル）、複数の縮合環（例えば）を有する、炭素環式基を意味する。シクロアルキル基は、任意に、１から４個のヘテロ原子を含むことがある。加えて、シクロアルキル基は、一つ以上の二重結合を有していてもよい。シクロアルキル基はまた、任意に、例えばハロ、アルキル、アルケニル、アリール、またはアルコキシなどによってモノ−、ジ−、又はトリ置換されることもある。
【００３２】
「アルコキシ」は、アルキル部分を有するオキシ含有基を意味する。例としては、特に制限されるものではないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ及びｔｅｒｔ−ブトキシが挙げられる。アルコキシ基はまた、例えば、ハロ、アリール、シクロアルキルまたはアルコキシなどによって任意にモノ−、ジ−、又はトリ置換されることもある。
【００３３】
「アルケニル」とは、２−２０、及び好ましくは２−６の炭素原子、並びに一つから三つの二重結合を有する直鎖または分枝鎖の炭化水素基を意味し、例えばエテニル、プロペニル、１−ブト−３−エニル、１−ペント−３−エニル、１−ヘキス−５−エニルが挙げられる。アルケニル基はまた、例えば、ハロ、アリール、シクロアルキル、またはアルコキシなどによって任意にモノ−、ジ−、又はトリ置換されることもある。
【００３４】
「ハロ」または「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素のハロゲン基である。
【００３５】
「グルクロニド」は、グルクロン酸のグルコシド基を意味する。
【００３６】
「スルフェート（ｓｕｌｆａｔｅ）」という用語は、一般式−ＯＳ（Ｏ）２−ＯＲ’、式中、Ｒ’は水素、金属、またはアルキル基、を満たす基を指す。
【００３７】
「ホスフェート（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）」という用語は、一般式−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ’）２、式中、各Ｒ’は独立して水素、金属、またはアルキル基、を満たす基を指す。
【００３８】
「ホスフィネート（ｐｈｏｓｐｈｉｎａｔｅ）」という用語は、一般式−ＯＰ（Ｏ）（Ｒ’）２、式中、各Ｒ’は独立して水素、金属、またはアルキル基、を満たす基を指す。
【００３９】
「嵩高い（ｂｕｌｋｙ）基」は、それが結合している空間について立体障害を生じさせる置換基、例えばｔ−ブチル基、を指す。
【００４０】
本明細書で使用される「アミノアルキル」という用語は、アミノ基がそこに付いたアルキル基、例えば、Ｈ２Ｎ−ＣＨ２−、Ｈ２Ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−、Ｍｅ２ＮＣＨ２−などを指し、このときは、接続点がアルキル鎖の炭素となる；本明細書で使用される「アルキルアミノ」という用語は、窒素原子に接続したアルキル基を持つアミノ基、例えば、ＣＨ３ＮＨ−、ＥｔＮＨ−、ｉＰｒ−ＮＨ−などを指し、このときは、接続点がアミノ基の窒素原子を経由する。連結した基が用いられる全ての他の用語は、類似の規則に従う。
【００４１】
本発明のある実施形態では、式Ｉの６−置換エストラジオール誘導体の有効量に神経細胞を接触させることを含む、神経細胞の軸索の脱髄を防止し、及び／または再ミエリン化を高める／刺激する方法が開示される。好ましくは、内因性ミエリン化（髄鞘の生産）を刺激し、軸索変性を起こさせない化合物が用いられる。非限定的な例においては、例えばシュワン細胞プリカーサーまたはオリゴデンドロサイトプロジェニター細胞（ＯＰＣｓ）のようなプリカーサー細胞から、例えばそれぞれシュワン細胞またはオリゴデンドロサイトのようなグリア細胞への分化によって、ミエリン化は刺激される。
【００４２】
脱髄に応答して、プリカーサー／プロジェニター細胞は本質的な静止状態から再生性表現型への転換を経なければならない。この活性化は再ミエリン化プロセスの最初のステップであり、いくつかの遺伝子、例えば発達中のオリゴデンドロサイトの産出と関係したものがその多くであるが、のアップレギュレーションの主要なステップを含む。オリゴデンドロサイトの分化についての主要シグナル伝達経路において特異的に発現する遺伝子（ｐ＜０．０００１）の非限定的ないくつかの例は、デルタ／ノッチ様ＥＦＧリピート（ＤＮＥＲ）、オリゴデンドロサイト系譜転写因子２（ＯＬＩＧ２）、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）、インターロイキン２３受容体（ＩＬ２３Ｒ）、膜貫通タンパク質１０８（ＴＭＥＭ１０８）、コネキシン（ＡＦ２５１０４７）、インターロイキン２０受容体アルファ（ＩＬ２０ＲＡ）、インターロイキン２８Ａ（ＩＬ２８Ａ）、ホメオボックスタンパク質（ＮＫＸ２．２）、ミエリン転写因子１様タンパク質（ＭＹＴ１）、及びＹ染色体性決定領域−ボックス２（ＳＯＸ２）のようなものが挙げられる。分化のフェーズは、３つの異なるステップを包含する：再ミエリン化される軸索との接触を確立し、ミエリン遺伝子を発現してミエリン膜を生成し、最後に包み込んで鞘を形成するように膜を圧縮する。式Ｉの６−置換エストラジオール誘導体が、ＯＰＣｓの増殖及び分化に関わるシグナル伝達経路のこれらの遺伝子をアップレギュレートし、再ミエリン化が起こる。このようにして、脱髄を防止し、及び／または再ミエリン化を高め／刺激する式Ｉの化合物は、病気の治療に使用することができる。このような方法はまた、再ミエリン化を経過観察することを含むこともある。
【００４３】
従って、式Ｉの化合物によって治療されうる脱髄性疾患は、特に制限されるものではないが、例えば、多発性硬化症（例えば、再発性／寛解型多発性硬化症、二次進行型多発性硬化症、再発進行型多発性硬化症、一次進行型多発性硬化症、及び急性劇症型多発性硬化症）、橋中心髄鞘崩壊症、実験的自己免疫性脳脊髄炎、急性散在性脳脊髄炎、横断性脊髄炎、進行性多巣性白質脳症、アルツハイマー病、亜急性硬化性全脳炎、感染後脳脊髄炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、進行性核上性麻痺、多巣性運動ニューロパチー、ギラン−バレー症候群、進行性多巣性白質脳症、デビック病、バロー同心性硬化症、及び異染性白質ジストロフィーのような白質ジストロフィー、クラッベ病、副腎白質ジストロフィー（ＡＬＤ）、ペリツェウス−メルツバッハー病、カナバン病、中枢低髄鞘化を伴う小児期運動失調、アレキサンダー病、コケイン症候群、ファンデルナップ症候群、ゼルウィガー症候群、並びにレフサム病が挙げられる。脱髄性疾患を有するヒト患者は、一つ以上の脱髄性疾患の症状、特に制限されるものではないが、視覚障害、しびれ、四肢の衰弱、振戦または痙縮、高熱不耐性、言語障害、失禁、めまい、または固有受容覚障害（例えば、バランス、協調、手足の位置感覚）などを持つ。脱髄性疾患の家族歴（例えば、脱髄性疾患の遺伝的素因）がある、または上述の脱髄性障害の軽度若しくは稀な症状を呈するヒト（例えば、ヒト患者）は、本方法が目的とする、脱髄性疾患（例えば、多発性硬化症）を発症するリスクがあると考えられる。ヒトは、例えば脱髄性疾患の症状の一つ以上の改善（再ミエリン化の増進）、例えば本明細書に記載された脱髄性疾患の何かの症状のような、結果について経過観察され得る。
【００４４】
本発明の一実施形態では、前記方法の化合物は、下記式（Ｉａ）に示される一般構造を有する：
【００４５】
【化５】
2014508807.tif 000006
【００４６】
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ及びＹは上記で式（Ｉ）についてしたように定義される。より好ましくは、Ｙは＝Ｏ、及び−ＯＨから選択され；Ｒ４は水素、ハロ、及びＣ１−Ｃ６アルキルから選択され；Ｒ２は水素、−ＯＨ、及びハロから選択され；Ｒ３は水素、ハロ、及び−ＯＨから選択され；並びに、ＸはＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、及び−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；ｍは１−２０の整数であり；ｎは０−８の整数であり；並びに、
【００４７】
【化６】
2014508807.tif 000007
【００４８】
は単結合または二重結合のいずれかを表す。さらにより好ましくは、Ｙは（Ｓ）−ＯＨであり；Ｒ４は水素、またはアルキルから選択され；Ｒ２は水素であり；Ｒ３は水素であり；並びに、ＸはＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、及び−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；ｍは１−１２の整数であり；ｎは０−４の整数であり；並びに、Ｃ−１３メチルは（Ｓ）型立体配置である。
【００４９】
本発明のさらに別の態様は、式（Ｉｂ）の化合物を使用する方法に向けられる：
【００５０】
【化７】
2014508807.tif 000008
【００５１】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＸは上記で式（Ｉ）についてしたように定義される。より好ましくは、Ｒ１は水素、−ＯＨ、及びハロから選択され；Ｒ４は水素、ハロ、及びＣ１−Ｃ６アルキルから選択され；Ｒ２は水素、及びハロから選択され；Ｒ３は水素、ハロ、及び−ＯＨから選択され；並びに、ＸはＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、及び−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；ｍは１−２０の整数であり；並びに、ｎは０−８の整数である。さらにより好ましくは、Ｒ１は水素であり；Ｒ４は水素、またはアルキルから選択され；Ｒ２は水素であり；Ｒ３は水素であり；並びに、ＸはＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、及び−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；ｍは１−１２の整数であり；ｎは０−４の整数であり；並びに、Ｃ−１３メチル及びＣ−１７ヒドロキシルの両方が（Ｓ）型立体配置である。
【００５２】
本発明のさらに別の態様は、式（Ｉｃ）の化合物を使用する方法に向けられる：
【００５３】
【化８】
2014508807.tif 000009
【００５４】
式中、Ｒ１１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＸは上記で式（Ｉ）についてしたように定義される。さらにより好ましくは、Ｒ１１は水素、またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；Ｒ４は水素、ハロ、及びＣ１−Ｃ６アルキルから選択され；Ｒ２は水素、及びハロから選択され；Ｒ３は水素、ハロ、及び−ＯＨから選択され；並びに、ＸはＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、及び−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；ｍは１−２０の整数であり；並びに、ｎは０−８の整数である。さらにより好ましくは、Ｒ１１は水素であり；Ｒ４は水素、またはアルキルから選択され；Ｒ２は水素であり；Ｒ３は水素であり；並びに、ＸはＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、及び−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；ｍは１−１２の整数であり；ｎは０−４の整数であり；並びに、Ｃ−１３メチル及びＣ−１７ヒドロキシルの両方が（Ｓ）型立体配置である。
【００５５】
本発明のさらに別の態様は、式（Ｉｄ）の化合物を使用する方法に向けられる：
【００５６】
【化９】
2014508807.tif 000010
【００５７】
式中、Ｒ１、Ｒ２、及びＸは上記で式（Ｉ）についてしたように定義される。より好ましくは、Ｒ１は水素、−ＯＨ、及びハロから選択され；Ｒ２は水素、及びハロから選択され；並びに、ＸはＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、及び−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；ＸはＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、及び−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；ｍは１−２０の整数であり；ｎは０−８の整数である。さらにより好ましくは、Ｒ１及びＲ２は水素であり；ｍは１−１２の整数であり；ｎは０−４の整数であり；並びに、Ｃ−１３メチル及びＣ−１７ヒドロキシルの両方が（Ｓ）型立体配置である。
【００５８】
本発明のさらに別の態様は、式（Ｉｅ）の化合物を使用する方法に向けられる：
【００５９】
【化１０】
2014508807.tif 000011
【００６０】
式中、ｍ、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は上記で式（Ｉ）についてしたように定義され、Ｚは−Ｏ−、−Ｓ−、及び−ＮＨ−から選択される。より好ましくは、ｍは１−１２であり；ｎは０−４であり；Ｒ１は水素、−ＯＨ、及びハロから選択され；Ｒ４は水素、ハロ、及びＣ１−Ｃ６アルキルから選択され；Ｒ２は水素、及びハロから選択され；Ｒ３は水素、ハロ、及び−ＯＨから選択され；Ｚは−Ｏ−、及び−Ｓ−から選択され；並びに、Ｃ−１３メチル及びＣ−１７ヒドロキシルの両方が（Ｓ）型立体配置である。
【００６１】
本発明のさらに別の態様は、式（Ｉｆ）の化合物を使用する方法に向けられる：
【００６２】
【化１１】
2014508807.tif 000012
【００６３】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＸは上記で式（Ｉ）についてしたように定義される。より好ましくは、Ｒ１は水素、−ＯＨ、及びハロから選択され；Ｒ４は水素、ハロ、及びＣ１−Ｃ６アルキルから選択され；Ｒ２は水素、及びハロから選択され；Ｒ３は水素、ハロ、及び−ＯＨから選択され；並びに、ＸはＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、及び−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；ＸはＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、及び−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；ｍは１−２０の整数であり；並びに、ｎは０−８の整数である。さらにより好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は水素であり；ｍは１−１２の整数であり；並びに、ｎは０−４の整数である。
【００６４】
本発明のさらに別の態様は、式（Ｉｇ）の化合物を使用する方法に向けられる：
【００６５】
【化１２】
2014508807.tif 000013
【００６６】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１１、及びＸは上記で式（Ｉ）についてしたように定義される。より好ましくは、Ｒ１は水素、−ＯＨ、及びハロから選択され；Ｒ４は水素、ハロ、及びＣ１−Ｃ６アルキルから選択され；Ｒ２は水素、及びハロから選択され；Ｒ３は水素、ハロ、及び−ＯＨから選択され；ＸはＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、及び−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；ＸはＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、及び−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；ｍは１−２０の整数であり；
【００６７】
【化１３】
2014508807.tif 000014
【００６８】
は＝Ｏ、または−ＯＨのいずれかであり；並びに、ｎは０−８の整数である。さらにより好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は水素であり；ｍは１−１２の整数であり；ｎは０−４の整数である。
【００６９】
式（Ｉ）及び（Ｉａ）−（Ｉｇ）の化合物の具体例を以下に示す：
【００７０】
【化１４−１】
2014508807.tif 000015
【００７１】
【化１４−２】
2014508807.tif 000016
【００７２】
【化１４−３】
2014508807.tif 000017
【００７３】
本発明の実施形態化合物は、医薬組成物に使用することができる。そのような組成物は、上述したもの、以下に説明され、またはそうでなかったら本明細書から推測されるものから選ばれる一つ以上の化合物、及びこれらの組み合わせを含むことができる。いくつかの実施形態では、そのような組成物は、薬学的に許容されるキャリア成分を含むことができる。限定されないが、そのような組成物は、化合物のラセミ混合物を含むことができる。いくつかの実施形態では、そのような化合物は、Ｓ及びＲのエナンチオマーとして、好ましくはもう一方の異性体が実質的に無い単離された及び精製された形態で存在することができる。
【００７４】
本発明の化合物は、不斉中心を有していることがあり、ラセミ化合物、ラセミ混合物として、または、（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１５，１６−オクタヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７（１４Ｈ）−オン（化合物１）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１５，１６−オクタヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７（１４Ｈ）−オン（化合物２）；（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物３）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物４）；（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１７−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン（化合物５）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１７−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン（化合物６）；（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物７）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物８）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物９）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物１０）；（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物１１）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１７−ヒドロキシ−１３−メチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン（化合物１２）；（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１７−ヒドロキシ−１３−メチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン（化合物１３）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（（メトキシメチル）アミノ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物１４）；（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（（メトキシメチル）アミノ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物１５）；１−（（（（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３，１７−ジヒドロキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）メチル）アミノ）プロパン−２−オン（化合物１６）；１−（（（（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３，１７−ジヒドロキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）メチル）アミノ）プロパン−２−オン（化合物１７）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−メトキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物１８）；（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（２−メトキシｅｔｈｙｌ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物１９）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（４−メトキシブチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物２０）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物２１）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシオクチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物２２）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イルステアリン酸（化合物２３）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６−デカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７（６Ｈ）−ジオン（化合物２４）；（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６−デカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７（６Ｈ）−ジオン（化合物２５）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物２６）；（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物２７）；（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−１７−オキソ−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル水素スルフェート（化合物２８）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−１７−オキソ−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル水素スルフェート（化合物２９）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１３−メチル−６−（４−プロポキシブチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物３０）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１３−メチル−６−（５−エトキシペンチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物３１）；（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物３２）；及び（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（メトキシメチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物３３）（ＣｈｅｍＤｒａｗ  Ｕｌｔｒａ，  Ｖｅｒｓｉｏｎ  １１．０（３）または１２．０によって名づけた）のように単一の精製されたジアステレオマー若しくはエナンチオマーとして生じる。
【００７５】
本発明の方法の前記化合物は、Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．１２／６２７，８７４（参照によって本明細書に組込まれる）に記載されるように調製され、エストラジオールの６−ヒドロキシメチル、６−アルコキシアルキル、６−アルキルチオアルキル、６−アミノメトキシ、６−メチルアミノメトキシ、または６−メトキシアミン誘導体を調製する方法に関する。エストラジオール誘導体を調製する反応スキームを以下、スキーム１−３に示す。このような方法は、エストラジオールのｔ−ブチルジメチルシリル誘導体をＬＩＤＡＫＯＲ／ＴＨＦ／ホルムアルデヒドと反応させて６−ヒドロキシル化した化合物を得て、続けて以下のようなステップを経ることを含む：（ｉ）加水分解してエストラジオールの６−ヒドロキシメチル誘導体を得る；及び／または（ｉｉ）ジメチルスルフェートと処理し、続けて加水分解してエストラジオールの６−メチルオキシメチル誘導体を得る。化合物１は、化合物３をＣ−１７ヒドロキシル位にてさらに酸化することによって得ることができる。化合物３３及び他のジメチル化合物は、Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．１３／２３２，７９８（参照によって本明細書に組込まれる）に従って調製することができる。
【００７６】
代わりのアプローチとして、本発明に係る化合物は、このようなステップを含む方法によっても調製することができる：（ｉ）エストラジオール化合物を保護する、（ｉｉ）保護されたエストラジオール化合物を、ＬＩＤＡＫＯＲ／ブチルリチウム／ジイソプロピルアミン／ｔｅｒｔ−アミラートカリウムによりベンジルの６−位をアシル化する、（ｉｉｉ）水素化アルミニウムリチウムによって６位アルデヒドを還元する、（ｉｖ）前記エストラジオール化合物の保護部位を脱保護する。エストラジオール誘導体を調製する反応スキームを、以下のスキーム２に示す。
【００７７】
本発明に係る化合物は、以下のスキームに表わされるような方法に従うことによって合成できる。
【００７８】
【化１５】
2014508807.tif 000018
【００７９】
【化１６】
2014508807.tif 000019
【００８０】
様々なアルキルオキシアルキル誘導体が、この発明に従えば、アルキル化試薬の選択を含む。そのような誘導体は、この発明を承知している当業者によって理解されるであろうし、本明細書に記載された種類の合成手順を通して入手可能である。従って、限定するもので無いが、様々なＣ１からＣ６アルキル及び置換アルキル試薬が、対応するアルキルオキシアルキル誘導体を調製するために、本明細書に記載のように用いることができる。
【００８１】
本発明の別の態様では、エストラジオールの６−アミノ誘導体を作る方法は、下記の反応スキームに開示される。従って、スキーム１−２に記載の６−メトキシル化エストラジオールが用いられ、そのそれぞれのアミノ誘導体へ変換される。
【００８２】
【化１７】
2014508807.tif 000020
【００８３】
脱髄を防止し、及び／または再ミエリン化を高める方法及び化合物が提供される。本発明のある態様では、細胞内においてミエリン塩基性タンパク質遺伝子及び／またはミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質遺伝子をコードするＲＮＡの遺伝子転写を開始し、高め、または増進する方法が提供され、式（Ｉ）及び（Ｉａ）から（Ｉｆ）までから選択される６−置換エストラジオール誘導体の有効量と細胞を接触させることを含む。そのような遺伝子転写を開始し、高め、または増進することは、これらの遺伝子のうち一つ以上で起こる。
【００８４】
本明細書に記載したように、本発明の化合物の塩は、非毒性の「薬学的に許容される塩」を指す。他の塩は、しかしながら、本発明に関する化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の調製に有用であり得る。本発明の化合物が塩基性基を含む場合、「薬学的に許容される塩」という用語に含まれる塩は、適切な有機または無機の酸と遊離塩基とを反応させることで一般的に調製された、非毒性の塩を指す。代表的な塩は、当該技術分野で知られたこのような塩はどれも含む。本発明の化合物が酸性部分を有する場合、これらの適切な薬学的に許容される塩は、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウムまたはカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウムまたはマグネシウム塩、；及び適切な有機リガンドによって形成される塩、例えば、第四級アンモニウム塩、を含むこともある。
【００８５】
本明細書に記載したように、本発明の化合物は、他の薬剤または哺乳類被験体の養生処置を高める他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本方法の化合物は、他のエストロゲン受容体βモジュレーターと組み合わせて使用することができる。このような組み合わせの個々の成分は、患者またはこのような治療が必要なこのような患者の部位に、治療経過中の異なる時点で別々に、または分割された若しくは単一の組み合わせ形式で同時に投与されることがある。本発明はそれゆえ、同時または交互処置のこのような全ての療養を包含するものと理解されるべきであり、用語「投与」はそれに応じて解釈される。本発明の化合物と、対象とされた脱髄疾患を治療するのに有用な他の薬剤とを組み合わせる範囲は、原則的にエストロゲン機能に関連する疾患を治療するために有用などのような薬学的組成物とのどのような組み合わせも含む、ということが理解されるであろう。
【実施例】
【００８６】
以下の非限定的な例及びデータは、本発明の化合物、組成物及び／または方法に関する様々な態様及び特徴を示し、本明細書に記載の手順を通じて入手可能な６−置換エストラジオール誘導体の合成を含む。先行技術と比較して、驚くべき、予測不可能で、及びそれらに反する結果及びデータを、本発明の化合物及び方法は提供する。本発明の有用性は、いくつかの化合物、これらの部分、及び／または置換基の調製及び使用を通じて示されるが、本発明の範囲に相応の様々な他の化合物、部分、及び／または置換基によっても同等の結果を得ることができることが、当業者に理解されるであろう。
【００８７】
上述したように、本方法の化合物は、Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．１２／６２７，８７４、及びＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．１３／２３２，７９８に開示された手順に従って調製される。上述の合成スキーム及びＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．１２／６２７，８７４にあるものを詳しく実証するため、化合物２１の調製が実施例１で提供される。
【００８８】
実施例１
化合物２１の調製方法
ａ）（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン    −    クロロメチルメチルエーテル（７．０ｍＬ、９２．０ｍｍｏｌ）を、１００ｍｌのＴＨＦ中のβ−エストラジオール（５ｇ、１８．４ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１６．０ｍｌ  ９２ｍｍｏｌ）の溶液へ加える。反応混合物が還流するように加熱し、１８時間攪拌する。ＴＨＦを真空下で除去し、黄色／褐色のオイルを水及びＣＨ２Ｃｌ２に分配する。有機層を分離し、塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空下で蒸発させ、金色のオイルを得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）による精製によって、粘性のある透明なオイル（５．７ｇ、８６％）として表題化合物が得られる。
【００８９】
ｂ）（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−オール    −    アルゴン下で−７８℃に冷却された８０ｍｌの無水ＴＨＦ中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８．８７ｇ、７９．０ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルアミン（１１．２ｍｌ、７９．０ｍｍｏｌ）の溶液へ、ｎ−ブチルリチウム（４９．４ｍｌ、７９．０ｍｍｏｌ、ヘキサン中１．６Ｍ）を滴下して加える。反応混合物を、−７８℃で３０−４５分間攪拌する。４５ｍｌのＴＨＦ中のａ）からの化合物（５．７ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）の溶液を、その後、滴下して加え、反応混合物を−７８℃で３時間攪拌する。ａ）からの化合物を添加している間に、反応は深い赤色へと変わる。ホウ酸トリメチル（１０．６ｍｌ、９４．８ｍｍｏｌ）をその後、ゆっくり加え、混合物を０℃まで温め、２時間攪拌する。過酸化水素（３０％水溶液を２４ｍｌ）をその後に加え、反応混合物を室温まで温め、さらに１時間攪拌する。反応を０℃まで冷却し直し、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（７０ｍｌ）で注意深く抑える。結果として生じる混合物を、ＥｔＯＡｃ（２ｘ）で抽出し、混合有機抽出物を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空下で蒸発させ、金色／褐色のオイルを得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）による精製によって、白い固体（３．５ｇ、５９％）として表題化合物が得られる。
【００９０】
ｃ）（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−オン    −    デス−マーチンペルヨージナン（９．４６ｇ、２２．３ｍｍｏｌ）を、３００ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中のｂ）からの化合物（７．０ｇ、１８．６ｍｍｏｌ）の溶液へ少しずつ（ｐｏｒｔｉｏｎｗｉｓｅ）加える。結果として生じる反応混合物を室温で３時間攪拌する。混合物を水へ注ぎ、層を分離する。水層をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、混合有機抽出物を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空下で蒸発させ、べたつく褐色の固形物を得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）による精製によって、淡黄色の粘性のあるオイル（６．０ｇ、８６％）として表題化合物が得られる。
【００９１】
ｄ）エチル２−（（（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イリデン）アセテート    −    ホスホノ酢酸トリエチル（４．１ｍｌ、２０．８ｍｍｏｌ）を、室温で２５ｍｌのＴＨＦ中の水素化ナトリウム（８３２ｍｇ、２０．８ｍｍｏｌ）の混合物へ加える。約１０分後、１０ｍｌのＴＨＦ中のｃ）からの化合物（３．９ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）の溶液を、滴下して加える。結果として生じる反応混合物が還流するように、シールしたチューブ内で７２時間加熱する。混合物を真空下で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘから４０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘへのグラジエント）により精製すると、透明な粘性のオイル（３．４ｇ、７４％）として表題の化合物を与える。
【００９２】
ｅ）２−（（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イリデン）エタノール    −    ６５ｍｌのＴＨＦ中のｄ）からの化合物（３．１ｇ、６．９７ｍｍｏｌ）の溶液を、水素化アルミニウムリチウム（５．２ｍｌ、１０．４６ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中２Ｍ）を滴下して０℃で処理する。冷却バスを取り除き、反応混合物を室温で１５分間攪拌する。反応を０℃まで冷却し直し、１．３ｍｌの水を注意深く加え、続けて２．６ｍｌの２Ｎ  ＮａＯＨで、次に１．３ｍｌの水で抑える。白い固形分が形成するまで、混合物を激しく攪拌する。混合物を濾過し、濾過物を真空下で濃縮すると、透明なオイル（２．８ｇ、９９％）として表題の化合物を与える。
【００９３】
ｆ）２−（（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）アセトアルデヒド    −    １００ｍｌの酢酸エチル中のｅ）からの化合物（３．０９ｇ、７．６８ｍｍｏｌ）と１０％Ｐｄ／Ｃ（５００ｍｇ）との混合物を４０ｐｓｉのＨ２（ｇ）下において５時間室温で撹拌する。混合物はセライトを通じて濾過し、前記セライトを酢酸エチルで十分に洗浄する。濾過物を真空下で濃縮すると、淡黄色のオイル（３．１ｇ）を与える。前記オイルを１００ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、デス−マーチンペルヨージナン（３．９ｇ、９．２２ｍｍｏｌ）を少しずつ加える。結果として生じる反応混合物を室温で３０分間攪拌する。混合物を水へ注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。混合有機抽出物を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空下で蒸発させ、褐色の固形物を得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）による精製によって、透明なオイル（２．０ｇ、６５％）として表題化合物が得られる。
【００９４】
ｇ）４−（（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）ブト−２−エン−１−オール    −    リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１８．４ｍｌ、１８．４ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１．０Ｍ）を、０℃で６０ｍｌのＴＨＦ中の（２−ヒドロキシエチル）トリフェニルホスホニウムブロミド（３．３７ｇ、８．７０ｍｍｏｌ）の懸濁物へ滴下して加える。１時間後、金褐色溶液を、１０ｍｌのＴＨＦ中のｆ）からの化合物（１．４ｇ、３．４８ｍｍｏｌ）の溶液で滴下して処理する。結果として生じる反応混合物を０℃で４０分間攪拌し、その後、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で抑える。結果として生じる混合物を、ＥｔＯＡｃ（２ｘ）で抽出し、混合有機抽出物を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させて褐色のオイルを得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘから７５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘへのグラジエント）による精製によって、黄色の粘性のオイル（６８０ｍｇ、４５％）として表題の化合物が得られる。
【００９５】
ｈ）４−（（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）ブト−２−エナール    −    デス−マーチンペルヨージナン（４３７ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を、室温でＣＨ２Ｃｌ２中のｇ）からの化合物（３７０ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）の溶液へ加える。結果とし生じる反応混合物を１０分間攪拌し、次に、水へ注ぐ。層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ）で抽出する。混合有機抽出物を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空下で蒸発させ、褐色のオイルを得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２から１０％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２へのグラジエント）による精製によって、淡黄色の粘性のオイル（３５８ｍｇ、８６％）として表題の化合物が得られる。
【００９６】
ｉ）６−（（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）ヘキサ−２，４−ジエン−１−オール    −    リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（４．３ｍｌ、４．２９ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１．０Ｍ）を、０℃で１４ｍｌのＴＨＦ中の（２−ヒドロキシエチル）トリフェニルホスホニウムブロミド（７８６ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ）の懸濁物へ滴下して加える。３０分後、金褐色の溶液を、２ｍｌのＴＨＦ中のｈ）からの化合物（３４５ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）の溶液で滴下して処理する。結果として生じる反応混合物を０℃で２０分間攪拌し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で抑える。結果として生じる混合物をＥｔＯＡｃ（２ｘ）で抽出し、混合有機抽出物を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させて褐色のオイルを得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２から４０％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２へのグラジエント）による精製によって、黄色の粘性のオイル（１４０ｍｇ、３８％）として表題の化合物が得られる。
【００９７】
ｊ）（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（６−メトキシヘキサ−２，４−ジエン−１−イル）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン    −    ｉ）の化合物（１３５ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の溶液を０℃まで冷却し、水素化ナトリウム（１２０ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を少しずつ加える。５−１０分後、ヨードメタン（０．１９ｍｌ、３．０ｍｍｏｌ）を滴下して加え、結果として生じる反応混合物を室温まで温め、４時間攪拌する。ＥｔＯＡｃを加え、水で反応を注意深く抑える。層を分離し、有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させて褐色のオイル状残留物を得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘから２０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘへのグラジエント）による精製によって、透明のオイル（９２ｍｇ、６５％）として表題の化合物が得られる。
【００９８】
ｋ）（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン    −    ５−１０ｍｌの酢酸エチル中のｊ）の化合物（９０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）と１０％Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）との混合物を、Ｈ２（ｇ）のバルーン下において１６時間室温で撹拌する。混合物はセライトを通じて濾過し、前記セライトを酢酸エチルで十分に洗浄する。濾過物を真空下で濃縮すると、透明なオイル（９０ｍｇ、９９％）として表題の化合物を与える。
【００９９】
ｌ）（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物２１）    −    それぞれ１．５ｍｌの６Ｎ  ＨＣｌ及びＴＨＦ中のｋ）からの化合物（９０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）の溶液を５時間室温で撹拌する。反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２ｘ）で抽出する。混合有機抽出物を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させ、透明なオイル状の残留物を得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２から３０％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２へのグラジエント）による精製によって、白い固形の泡状物（３８ｍｇ、５２％）として化合物２１が得られた。
【０１００】
実施例２
化合物３及び４の調製方法
スキーム２に概説したように、エストラジオール誘導体化合物３及び４は、以下のような手順で合成される。保護されたエストラジオール化合物は、トルエンスルホン酸またはカンファースルホン酸を触媒として用い、ＴＨＦ中のジヒドロピランとβ−エストラジオールとの反応によって調製される。当業者が理解できる通り、この反応は平衡反応であり、そのような条件下では完全には進まない。従って、両方のモノ保護エストラジオールが、反応混合物に見出される。このような粗反応混合物は、アセトニトリルとの粉砕ステップを経て、約７０％の収率で望ましいビス−ＴＨＰエストラジオールを結晶化させる。
【０１０１】
スキーム２に示すように、ＬｉＤＡＫＯＲ：ブチルリチウム、ジイソプロピルアミン、及びｔｅｒｔ−アミラートカリウムと呼ばれる強塩基の混合物によってベンジル６−位のアシル化を経て、重要な中間体が得られる。−７０℃のような条件下で、当業者は、ベンジル位のプロトン引き抜きを理解することができる。中間体は、その後、カラムクロマトグラフィーにより精製されて約５０％の収率でシロップとなり、まだ少量の不純物とカラム溶媒を含む。過剰の水素化アルミニウムリチウムによってアルデヒドを還元すると、ラセミのヒドロキシメチルエストラジオール化合物を高収率で得られる。
【０１０２】
化合物３及び４を調製する目的で、メトキシメチル化合物が、水素化ナトリウム及びヨウ化メチルによってヒドロキシメチルエストラジオール化合物をメチル化することで調製される。メトキシメチル化合物は、カラムクロマトグラフィーにより精製され、ガラス状の泡状物を与える。保護基を脱保護すると、ラセミの６−メトキシメチルエストラジオール化合物を与える。エナンチオマーの分離が、キラル分取ＨＰＬＣを用いて行われ、化合物３及び４を与える。化合物４については、＞９５：５  Ｒ：Ｓのキラル純度を実現する。化合物３については、８６：１４  Ｓ：Ｒのキラル純度を実現する。それは、４−及び６−プロトンが診断される、６−位の絶対立体化学を決定するためにＮＭＲを採用する当業者のレベルの十分に範囲内である。
【０１０３】
実施例３
肺、膵臓、及び卵巣腫瘍細胞株における化合物の発現プロファイリング
研究は、三つのヒト腫瘍細胞株：Ａ５４９、Ｐａｎｃ−１、及びＳＫ−ＯＶ−３、を含む。株は、それぞれ２つのフラスコ内でおおよそ４０％コンフルエントまで培養して成長させる。フラスコの一つは、様々な濃度、すなわち１０μＭ、２０μＭ、５０μＭ、１００μＭ、または２００μＭで培地に化合物を添加することによって処置される。もう一方の、模擬処置のフラスコは、薬を可溶化させ運搬するために使用されるビヒクルだけによって処置される。処置済み及び未処置のサンプルのペアから抽出したＲＮＡは、アジレントヒト全ゲノムマイクロアレイ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｗｈｏｌｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ）（Ｇ４１１２Ｆ）のマイクロアレイ分析に供される。各分析は、アレイ上の４１，０００の特異的ｍＲＮＡディテクターの各々について、メッセンジャーＲＮＡの存在量の違いを報告する。各細胞株についての未処置に対する処置済みのサンプルのこの直接比較が、薬処置に起因するｍＲＮＡ存在量の変動の非常に敏感な検出を提供する。各細胞株の比較は自動正規化されるため、高い信頼性を持ってサンプル間で結果が比較できる。
【０１０４】
細胞調製
三つのヒト腫瘍細胞株、Ａ５４９、Ｐａｎｃ−１、及びＳＫ−ＯＶ−３を、それぞれ２つのフラスコ内でおおよそ４０％コンフルエントまで培養して成長させる。フラスコの一つは、１０μＭ、５０μＭ、または１００μＭの濃度で培地に化合物を添加することによって処置される。もう一方の、模擬処置のフラスコは、薬を可溶化させ運搬するために使用されるビヒクルだけによって処置される。全てのフラスコを、さらに２４時間培養し、次に、こすり取って遊離させ、氷冷ＰＢＳ中で洗浄し、次に、遠心分離によって回収する。採取した細胞は、すぐに冷凍し、−８０℃またはより低温で保管する。
【０１０５】
ＲＮＡ精製
Ｔｒｉｚｏｌベースの細胞溶解を使い、冷凍組織サンプルからトータルＲＮＡを調製し、続けて６５℃熱フェノール抽出、ＲＮｅａｓｙクロマトグラフィー精製する。精製ＲＮＡサンプルを、分光光度法で分析する。ＲＮＡ濃度は、２６０ｎｍ（Ａ２６０）の吸光度を測定することで求める。ｐＨ１１のとき、２６０ｎｍで１ユニットの吸光度であれば、ｍｌ当り３５ｕｇのＲＮＡに相当する。
【０１０６】
ＲＮＡ品質評価−Ａ２６０／Ａ２８０吸光度比
２６０ｎｍ及び２８０ｎｍでの測定値の比（Ａ２６０／Ａ２８０）は、タンパク質のようにＵＶを吸収する夾雑物に対する、ＲＮＡの純度の推定を与える。ＲＮＡは、約２．１の理論上のＡ２６０／Ａ２８０比（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７．５）を有する。１．８またはそれより大きいＡ２６０／Ａ２８０比を有する抽出後ＲＮＡは、このアッセイにおいて優れた結果を提供する。
【０１０７】
ＲＮＡ品質評価−キャピラリー電気泳動
キャピラリー電気泳動（Ａｇｉｌｅｎｔ  ＢｉｏＡｎａｌｙｚｅｒ）を使って、無傷の２８Ｓ及び１８ＳリボソームＲＮＡの比を求めることで、前記ＲＮＡは相対的な完全性が評価される。完全に無傷のＲＮＡは、２．２の２８Ｓ／１８Ｓ比を有する。アレイ分析に受け入れられるＲＮＡは全て、１を超える比を有し、２８Ｓ／１８Ｓ比の異なるサンプル間で内部での再現性を総括することで決定される、信頼性のある再現可能なマイクロアレイ結果についての最小の２８Ｓ／１８Ｓ比である。
【０１０８】
プローブ生産、及びチップハイブリダイゼーション
全てのＲＮＡは、アジレント低インプット標識化（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｌｏｗ  Ｉｎｐｕｔ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ）反応への投入量として、１マイクログラムのＲＮＡを使って標識する。
【０１０９】
試験ＲＮＡはＣｙ５（６５０ｎｍエミッタ）で標識し、参照ＲＮＡはＣｙ３（５５０ｎｍエミッタ）ヌクレオチドで標識化する。標識化、ハイブリダイゼーション、及び後続の洗浄は、アジレントＨ１Ａｖ２ヒト発現チップ上で行われる。結果として生じるハイブリダイズ後チップは、アジレントマイクロアレイスキャナーでスキャンされ、各ディテクタースポットについての強度情報が、アジレントフィーチャ抽出ソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ  ｆｅａｔｕｒｅ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使ってスキャン画像から抽出される。
【０１１０】
ハイブリダイゼーションの品質の最有効試験は、これらのチップ上にプリントされた遺伝子のデュプリケート（ｄｕｐｌｉｃａｔｅｓ）の多数から報告された比での分散レベルである。遺伝子プローブのセットは、アレイに渡って無作為の位置にそれぞれ１０回プリントされる。全てのセットに渡るｌｏｇ２比の標準偏差の中央値が、アレイ全体に渡る総合的な標準偏差の推定値として使用される。
【０１１１】
データと解析
全ての三つのハイブリダイゼーションについての主要なデータは、特定の転写パターンを示す遺伝子を同定することができる検索の容易な定式化を可能にするために、ファイルメーカープロ（ＦｉｌｅＭａｋｅｒ  Ｐｒｏ）リレーショナルデータベースに集められる。報告されたデータは、赤（処置済み）と緑（未処置の）バックグラウンドを差し引いたシグナルである。これは、最も修正が少ない形式のデータである。バックグラウンド「表面」は、ヒトＤＮＡに相補的でない多数のプローブに基づいて、スライド全体に渡って推定される。これらは、アレイ表面への標識ｃＲＮＡの非特異的結合と、固定化ＤＮＡオリゴマーへの標識ｃＲＮＡの非特異的結合との、両方の推定値としての役割を果たす。この情報を用いて、各プローブの周囲の局所ノイズが推定され、これは、アレイ上のそれぞれの特異的プローブフィーチャーについてオリゴヌクレオチドが堆積した領域で検出されるシグナルから減算される（ｇＢＧＳｕｂＳｉｇｎａｌ、ｒＢＧＳｕｂＳｉｇｎａｌ）。処置済み細胞のＲＮＡ、及び未処置細胞のＲＮＡからのシグナル比は、直接の比、及びｌｏｇ２比（レシオ（Ｒａｔｉｏ）、Ｌｏｇ２レシオ（Ｌｏｇ２Ｒａｔｉｏ））の両方で報告される。レシオは、各チャネルにおける強度を正規化する反復プロセスによって求められるので、ほとんど同じ転写レベルを有する多数の遺伝子の強度の類似性を最大化するスカラーが見出され、それゆえ１に非常に近い比となる。
【０１１２】
正規化後データについて比が計算された後、様々な対照及びデュプリケートサンプルが、どれぐらい再現可能な結果であるのか、並びにシグナル強度及びノイズに依存してこの再現性がどれぐらい変化するのか、についてのモデルを構築するために解析される。これらのパラメータにより、仮に同じ強度分布を生じる単一プロセスから無作為に赤と緑の強度が導き出された場合に、それぞれの比が生じるであろう尤度の推定値が生成される。この確率は各サンプルについて報告され、処置済み及び未処置シグナル強度間の差（ＰＶａｌＬｏｇＲａｔｉｏ）を比が示す確率の尺度である。この確率は、変動が有る及び変動が無い遺伝子へと結果の閾値を定めるために用いられる。データベースでは、ｐ≦０．００１の閾値が、処置済み及び未処置のサンプル間のｍＲＮＡ存在量が有意に変動したことについての切り分け点（Ｓｉｇ０．００１）として用いられる。この閾値は、各アッセイにおいて調べられる〜４０，０００比が与えられたときに、予想される偽陽性の数を合理的なレベルまで低下させる。未処置サンプルと比較したときに有意な変動を示す領域及び変動の方向は、三つの部分からなるカテゴリー；  １，未処置と比較してアップレギュレートされた、０，未処置と比較して変動無し、及び−１，未処置と比較してダウンレギュレートされた（Ｔｒｉ）、へとアッセイの結果をまとめる。この表現を使用して、ある単一または複数の実験セットにおいて変動した遺伝子を特定する検索を、誰でも簡単に構築する。
【０１１３】
以下の表１に見られる遺伝子発現データは、化合物４及び化合物２１がアップレギュレートする、ＯＰＣｓの増殖及び分化、合成最終的には神経軸索での髄鞘の合成に関与するシグナル伝達経路の遺伝子を示す。表１に示す遺伝子発現値は、ｌｏｇ２値及び三つのヒト腫瘍細胞株（ＳＫＯＶ−３、Ａ５４９及びＰａｎｃ−１）から得られたデータの平均である。遺伝子発現の有意な変化は、ｐ≦０．０００１である。遺伝子ＩＤ（ＧｅｎｅＩＤ）は、Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子データベースのために国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）で開発された規格に準拠する。
【０１１４】
【表１】
2014508807.tif 000021
【０１１５】
実施例４
オリゴデンドロサイト分化アッセイ
ＯＰＣ培養系は、参照によって本明細書に組込まれる、Ｐｅｄｒａｚａ，Ｃ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｉａ  ５６（１２），１３３９−５２（２００８）に記載されているように調製される。Ｅ１４．５Ｃ５７ＢＬ６／Ｊ（ＰＬＰ−ＥＧＦＰを発現する）マウス（Ｍａｌｌｏｎ，Ｂ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２２（３）、８７６−８５（２００２））から脳を取り出し、洗浄し、皮質半球を単離する。組織は、その後、粉砕し、フラスコあたり一つの脳（二つの皮質半球）の密度でＴ−２５ｃｍ２フラスコに播種される。ニューロスフェアは３日に一度継代する。継代２代目からの細胞を、一次スクリーニングのための二つの９６ウェルプレートを調製するために使用される。ＯＰＣ培地中で初期の４８時間インキュベーション後、ビヒクル対照ＤＭＳＯ、並びに１０μＭの毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）及び１μＭの細胞外シグナル制御（ＥＲＫ）キナーゼインヒビター（ＭＥＫｉ）を含む陽性対照化合物と並んで、１０μＭの１７β−エストラジオール、化合物４、及び化合物２１にてＯＰＣｓを処置する。細胞は合計４日間処置し、新鮮な化合物を含む培地へと４８時間に一度交換する。４日間の処置後、細胞を４％パラホルムアルデヒドで固定し、核を可視化するためにヘキスト３３３４２で染色する。アストロサイトを特定するため、細胞を抗ＧＦＡＰ（ＧＦＡＰ＝グリア線維性酸性タンパク質）抗体でも染色する。細胞を３％正常ヤギ血清でブロッキングし、続いて抗ウサギＧＦＡＰ抗体（１：５００）で一晩インキュベーションする。細胞を、１：１０００濃度のヤギ抗ウサギアレクサ６４７蛍光色素二次抗体で標識する。画像は、セロミクスアレイスキャン（Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ  Ａｒｒａｙｓｃａｎ）ＶＴＩによって取得する。ウェル当たり、１０倍の倍率で２０の領域を取得し、ＥＧＦＰ（強化緑色ｇｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔタンパク質；成熟したオリゴデンドロサイト）、及びＧＦＡＰ（アストロサイト）を発現している細胞を、ニューロンのプロファイリングアルゴリズムによって評価する。
【０１１６】
オリゴデンドロサイト成熟の程度は、プロセス形成の程度（図１−４；図１及び３の凡例は下の表２に示される）と共に、ＰＬＰ−ＥＧＦＰレポーターシグナルのレベルによって評価される。プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）は、成熟オリゴデンドロサイトで発現することが知られており、髄鞘の成分であることから、バイオマーカーとして用いられる。図１及び３に示すように、化合物４及び２１は両者とも、効果のある６−置換アナログであり、化合物２１はＤＭＳＯと比較してオリゴデンドロサイトを分化させる活性が３倍以上、陽性対照ＣＮＴＦ（Ｓｔａｎｋｏｆｆ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２２（２１），９２２１−２７（２００２））、及びＭＥＫｉ  Ｙｏｕｎｅｓ−Ｒａｐｏｚｏ，Ｖ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｄｅｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２７（８），７５７−６８（２００９））よりもそれぞれ１．５−２．０倍の活性を有する。ＤＭＳＯ及びＣＮＴＦを含めて試験した他の全ての化合物と比較して、プロセス形成の程度も、化合物２１において最も優れている（図２及び４）。
【０１１７】
【表２】
2014508807.tif 000022
【０１１８】
特許を含めた全ての文献及び参照の開示は、参照によって本明細書に組込まれる。本発明、並びにこれを製造し及び使用する、手段及びプロセスは、今や、適切などの当業者もが同じものを作り及び使用することができるように、このように十分な、明確な、簡明な、且つ正確な用語で開示される。本明細書で言及される全ての参照は、参照によって本明細書に組込まれる。上記の説明は本発明の好ましい実施形態を開示しており、その変更は、本発明の精神または範囲から逸脱することなくその中にされ得ると理解されるべきである。
【図１】
2014508807.tif 000034
【図２Ａ】
2014508807.tif 000035
【図２Ｂ】
2014508807.tif 000036
【図２Ｃ】
2014508807.tif 000037
【図３】
2014508807.tif 000038
【図４】
2014508807.tif 000039