(57)【要約】本発明は、少なくとも１の活性成分及び、ポリアミノ酸の直鎖の骨格を有し、かつ２，０００以下の重合度を有する、反対の極性の少なくとも２のポリ電解質から形成されるナノ粒子において：該２つのポリ電解質の少なくとも１は疎水性側鎖基を有し；該２つのポリ電解質の少なくとも１はポリアルキレングリコール側鎖基を有し；該ナノ粒子は、１０〜１００ｎｍの範囲の平均直径を有し、かつポリアルキレングリコール：総ポリマーの質量比ＷＰＡＧが０．０５以上であるようなの量のポリアルキレングリコール基を含むことを特徴とする、上記ナノ粒子に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１の活性成分及び、ポリアミノ酸の直鎖の骨格を有し、かつ２，０００以下の重合度を有する、反対の極性の少なくとも２の高分子電解質から形成されるナノ粒子において：
該２つの高分子電解質の少なくとも１は疎水性側鎖基を有し；
該２つの高分子電解質の少なくとも１はポリアルキレングリコール側鎖基を有し；
該ナノ粒子は、１０〜１００ｎｍの範囲の平均直径を有し、かつポリアルキレングリコール：総ポリマーの質量比ＷＰＡＧが０．０５以上であるような量のポリアルキレングリコール基を含むことを特徴とする、上記ナノ粒子。
【請求項２】
第一の高分子電解質の溶液を反対の極性の第二の高分子電解質の溶液と混合することにより得られ、該第一及び第二の高分子電解質は、ポリアルキレングリコール：総ポリマーの質量比ＷＰＡＧが０．０５以上であるところのものであることを特徴とする、請求項１に記載のナノ粒子。
【請求項３】
使用される該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質が有する、カチオン性基の数：アニオン性基の数のモル比Ｚが、０．１〜２、より特に０．４〜１．５の間に含まれることを特徴とする、請求項１又は２に記載のナノ粒子。
【請求項４】
ポリアルキレングリコール：総ポリマーの質量比ＷＰＡＧが０．０５〜０．７５、特に０．０５〜０．６、特に０．０５〜０．５、好ましくは０．０５〜０．３の範囲であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項５】
ナノ粒子のサイズが１０〜７０ｎｍ、好ましくは１０〜５０ｎｍの範囲であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項６】
疎水性側鎖基を有する上記高分子電解質が、５〜８の範囲のｐＨを有する水性媒体、特に水、に分散されるときに、自発的にナノ粒子を形成することができることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項７】
該アニオン性高分子電解質が、下記式（Ｉ）のもの又はその薬学的に許容される塩であることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項に記載のナノ粒子、
2014515003.tif 000025
ここで、
Ｒａは、水素原子、直鎖のＣ２〜Ｃ１０アシル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アシル基、ピログルタメート基又は以下で定義される疎水性基Ｇを表し；
Ｒｂは−ＮＨＲ５基又は、窒素により結合されかつそのカルボキシルは任意的に−ＮＨＲ５アルキルアミノ基又は−ＯＲ６アルコキシにより置換されていてもよいところの末端アミノ酸残基を表わし、ここで
Ｒ５は水素原子、直鎖のＣ１〜Ｃ１０アルキル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アルキル基、又はベンジル基を表し；
Ｒ６は、水素原子、直鎖のＣ１〜Ｃ１０アルキル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アルキル基、ベンジル基、又は基Ｇを表し；
Ｇは、オクチルオキシ−、ドデシルオキシ−、テトラデシルオキシ−、ヘキサデシルオキシ−、オクタデシルオキシ−、９−オクタデセニルオキシ−、トコフェリル−、及びコレステリル−から選択された疎水性基を表し；
ＰＡＧは、ポリアルキレングリコール、好ましくは１８００〜６０００ｇ／モルの範囲のモル質量を有するもの、特にポリエチレングリコール、特に２０００〜６０００ｇ／モルの範囲のモル質量のもの、を表わし、
ｓ１は中性ｐＨにおいてアニオン性である、非グラフト化グルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｐ１は、疎水性の基Ｇを有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｑ１は、ポリアルキレングリコール基を有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｐ１及びｑ１は任意的にゼロであってもよく、
重合度ＤＰ１＝（ｓ１＋ｐ１＋ｑ１）は２，０００以下、特に７００未満、より特に４０〜４５０、特に４０〜２５０、特に４０〜１５０であり、
上記一般式（Ｉ）のモノマーの鎖形成は、ランダム、モノブロック又はマルチブロックタイプであることができる。
【請求項８】
上記アニオン性高分子電解質が、以下の式（Ｉ´）のもの又はその薬学的に許容される塩であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載のナノ粒子、
2014515003.tif 000026
ここで、
Ｇ´は、オクチル−、ドデシル−、テトラデシル−、ヘキサデシル−、オクタデシル−、９−オクタデセニル−から選択される疎水性基を表し；
ｓ１＝（ｓ１´＋ｓ１´´）は、中性ｐＨにおいてアニオン性である非グラフト化アスパルテートモノマーの平均数に該当し、
ｐ１＝（ｐ１´＋ｐ１´´）は、疎水性基Ｇ´を有するアスパルテートモノマーの平均数に該当し、任意的にゼロであってもよく、
重合度ＤＰ１＝（ｓ１＋ｐ１）は２，０００以下、特に７００未満、より特に２０〜４５０、特に２０〜２５０、特に２０〜１５０であり；
上記一般式（Ｉ´）のモノマーの鎖形成は、ランダム、モノブロック又はマルチブロックタイプであることができる。
【請求項９】
上記カチオン性高分子電解質が、以下の式（ＩＩ）のもの又はその薬学的に許容される塩であることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項に記載のナノ粒子、
2014515003.tif 000027
ここで、
Ｒａは、水素原子、直鎖のＣ２〜Ｃ１０アシル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アシル基、ピログルタメート基又は以下で定義される疎水性基Ｇを表し；
Ｒｂは−ＮＨＲ５基又は、窒素により結合されかつそのカルボキシルは−ＮＨＲ５アルキルアミノ基又は−ＯＲ６アルコキシにより任意的に置換されていてもよいところの末端アミノ酸残基を表し、ここで
Ｒ５は水素原子、直鎖のＣ１〜Ｃ１０アルキル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アルキル基、又はベンジル基を表し；
Ｒ６は、水素原子、直鎖のＣ１〜Ｃ１０アルキル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アルキル基、ベンジル基、又は基Ｇを表し；
Ｇは、オクチルオキシ−、ドデシルオキシ−、テトラデシルオキシ−、ヘキサデシルオキシ−、オクタデシルオキシ−、９−オクタデセニルオキシ−、トコフェリル−、及びコレステリル−から選択された疎水性基を表し；
ＰＡＧは、ポリアルキレングリコール、好ましくは１８００〜６０００ｇ／モルの範囲のモル質量を有するもの、特にポリエチレングリコール、特に２０００〜６０００ｇ／モルの範囲のモル質量のもの、を表わし、
Ｒ２は、カチオン性基、特に、アミン官能基により結合されたアルギニンアミドを表し、
Ｒ３は、アミン官能基により結合されたヒドロキシエチルアミノ、アミン官能基により結合されたジヒドロキシプロピルアミノから選択された中性基を表し；
ｓ２は中性ｐＨにおいてアニオン性である、非グラフト化グルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｐ２は、疎水性基Ｇを有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｑ２は、ポリアルキレングリコール基を有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｒ２は、カチオン性基Ｒ２を有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｔ２は、中性基Ｒ３を有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｓ２、ｐ２、ｑ２及びｔ２は任意的にゼロであってもよく、かつ
重合度ＤＰ２＝（ｓ２＋ｐ２＋ｑ２＋ｒ２＋ｔ２）は２，０００以下、特に７００未満、より特に４０〜４５０、特に４０〜２５０、特に４０〜１５０であり、
上記一般式（ＩＩ）のモノマーの鎖形成は、ランダム、モノブロック又はマルチブロックタイプであることができる。
【請求項１０】
上記カチオン性高分子電解質が、以下の式（ＩＩ´）のもの又はその薬学的に許容される塩であることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項に記載のナノ粒子、
2014515003.tif 000028
ここで、
Ｘ−は、対アニオン、特に塩素イオン、酢酸イオン又はアンモニウムイオンを表わし、
ＰＡＧは、ポリアルキレングリコール、好ましくは１８００〜６０００ｇ／モルの範囲のモル質量を有するもの、特にポリエチレングリコール、特に２０００〜６０００ｇ／モルの範囲のモル質量のもの、を表わし、
ｑ２は、ポリアルキレングリコール基を有するリシンモノマーの平均数に該当し、
ｒ２は中性ｐＨにおいてカチオン性である、非グラフト化リシンモノマーの平均数に該当し、
ｑ２は任意的にゼロであってもよく、そして
重合度ＤＰ２＝（ｑ２＋ｒ２）は２，０００以下、特に７００未満、より特に４０〜４５０、特に４０〜２５０、特に４０〜１５０の範囲であり、
上記一般式（ＩＩ´）のモノマーの鎖形成は、ランダム、モノブロック又はマルチブロックタイプであることができる。
【請求項１１】
該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質が、
該アニオン性高分子電解質における疎水性基のモル割合ｘＰ１は２〜２２％、特に４〜１２％の範囲であり；
該アニオン性高分子電解質におけるポリアルキレングリコール基のモル割合ＸＰＡＧ１はゼロであり；
該カチオン性高分子電解質における疎水性基のモル割合ｘｐ２はゼロであり；かつ
該カチオン性高分子電解質におけるポリアルキレングリコール基のモル割合ＸＰＡＧ２は２〜１０％、特に２〜６％の範囲である
ところのものであることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項１２】
該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質が、
モル割合ｘｐ１は２〜２２％、特に４〜１２％の範囲であり；
モル割合ｘＰＡＧ１は２〜１０％、特に２〜６％の範囲であり；
モル割合ｘｐ２はゼロであり；かつ
モル割合ｘＰＡＧ２はゼロである
ところのものであることを特徴とする、請求項１〜７、９及び１０のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項１３】
該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質が、
モル割合ｘｐ１は２〜２２％、特に４〜１２％の範囲であり；
モル割合ｘＰＡＧ１は２〜１０％、特に２〜６％の範囲であり；
モル割合ｘｐ２は５〜２０％、特に５〜１０％の範囲であり；かつ
モル割合ｘＰＡＧ２はゼロである
ところのものであることを特徴とする、請求項１〜７及び９のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項１４】
該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質が、
モル割合ｘｐ１は２〜２２％、特に４〜１２％の範囲であり；
モル割合ｘＰＡＧ１はゼロであり；
モル割合ｘｐ２は５〜２０％、特に５〜１０％の範囲であり；かつ
モル割合ｘＰＡＧ２は２〜１０％、特に２〜６％の範囲である
ところのものであることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項１５】
該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質が、
モル割合ｘｐ１は２〜２２％、特に４〜１２％の範囲であり；
モル割合ｘＰＡＧ１は２〜１０％、特に２〜６％の範囲であり；
モル割合ｘｐ２は５〜２０％、特に５〜１０％の範囲であり；かつ
モル割合ｘＰＡＧ２は２〜１０％、特に２〜６％の範囲である
ところのものであることを特徴とする、請求項１〜７及び９のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項１６】
上記活性成分が、治療的、化粧料的又は予防的な利益又はイメージングの利益のある分子であることを特徴とする、請求項１〜１５のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項１７】
少なくとも、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のナノ粒子を含むことを特徴とする組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載のナノ粒子を製造する方法において、
（１）疎水性側鎖基を有する、電荷を帯びた状態の第一の高分子電解質のナノ粒子を含む水性溶液を用意すること、該ナノ粒子は活性成分と非共有結合的に結合されている；
（２）上記ナノ粒子を形成するように、上記溶液（１）を、該第一の高分子電解質の極性と反対の極性の少なくとも１の第二の高分子電解質と一緒にすること、
からなる段階を少なくとも含み、
該第一及び第二の高分子電解質の少なくとも１はポリアルキレングリコール側鎖基を有し、上記ポリアルキレングリコール基の量は、ポリアルキレングリコール：総ポリマーの質量比ＷＰＡＧが、０．０５以上であるような量であり、
該第一及び第二の高分子電解質は、ポリアミノ酸の直鎖の骨格を有し、かつ２，０００以下の重合度を有することを特徴とする、上記製造方法。
【請求項１９】
上記第一の高分子電解質及び第二の高分子電解質が、請求項３、４、及び６〜１５のいずれか１項に記載されたものであることを特徴とする、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
該水性溶液（１）が、活性成分を該第一の高分子電解質の水性コロイド溶液、特に５〜８の範囲のｐＨ値を有するもの、に添加することにより得られ、上記活性成分は上記第一の高分子電解質のナノ粒子と非共有結合的に結合することを特徴とする、請求項１８又は１９に記載の方法。
【請求項２１】
段階（２）が、
該第二の高分子電解質の水性溶液、特に５〜８の範囲のｐＨ、有利には段階（１）の該水性溶液のｐＨ値と同じｐＨ値を有するもの、を用意すること；及び
該第二の高分子電解質の上記水性溶液を段階（１）の上記水性溶液と混合すること
を少なくとも含むことを特徴とする、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、反対の極性を有する少なくとも２つの特定の高分子電解質及び少なくとも１の活性成分により形成されている新規なナノ粒子及び該ナノ粒子を含む配合物に関する。
【０００２】
活性成分の配合物は、ある数の許容基準に適合し、かつ小さな直径を有する針、例えば２７−から３１−ゲージの針、を通しての容易な注入を許すために低い粘度を有するが、活性成分の十分な濃度を有していなければならない。
【背景技術】
【０００３】
この分野において、出願人の会社は、国際公開第２００８／１３５５６１号パンフレットに示されているように、活性成分を含むミクロ粒子により構成された、低い粘度を有する安定な懸濁物を開発することに成功した。これらのミクロ粒子は、延長された期間に亘って該活性成分を放出することができ、より特に反対の極性の２つの高分子電解質ポリマー（ＰＥ１）及び（ＰＥ２）であってそれらのうち少なくとも１は疎水性基を有している該２つの高分子電解質ポリマーの特定の条件下での混合物から形成される。この混合物は１〜１００μｍに含まれるサイズのミクロ粒子をもたらす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかし、ミクロ粒子の配合物は、静脈投与には適切ではなく、皮下ルートによる投与の場合には、過敏症（ｉｎｔｏｌｅｒａｎｃｅ）の問題を有し得る。
【０００５】
結果的に、非経口的、特に静脈又は皮下の、ルートによる活性成分の投与の観点から、ずっと小さいサイズ、特にナノメートルスケールのサイズの粒子の懸濁物を有することが好ましい。
【０００６】
さらに、活性成分の皮下投与は注入される投与量の体積が制限される、例えば１ｍＬ以下、ことを要求し、従って、活性成分の配合物が十分に濃縮されていることを要求する。この制約は、治療のための投与量が一般的に高い、ペプチド又はある種の小さな分子の場合特に制限的である。
【０００７】
さらに、活性成分の粒子の濃縮された懸濁物を薄い懸濁物から得ることは、制限的であり、患者に投与されることのできる投与量をもたらすために濃縮の１以上のステージの適用を特に要求する。
【０００８】
従って、十分に濃縮されており、それにかかわらず、低い粘度を有し、非経口、特に静脈の、ルートによる投与に特に適切である活性成分のナノ粒子の安定な配合物に対する需要がまだある。
【０００９】
本発明は、上記の要求の全てを満足することのできる、新規なナノ粒子、及び後者を含む新規な組成物を提案することを特に目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
すべての期待と反対に、本発明者らは、特定の高分子電解質の混合物から、適切な場合には活性成分を含むナノ粒子の濃縮された流動性配合物を得ることが可能であることを見出した。
【００１１】
より正確には、その特徴の第一に従うと、本発明は、少なくとも１の活性成分及び反対の極性を有し、ポリアミノ酸の直鎖の骨格を有し、かつ２，０００以下の重合度を有する少なくとも２の高分子電解質から形成されるナノ粒子において：
−  該２つの高分子電解質の少なくとも１は疎水性側鎖基を有し；
−  該２つの高分子電解質の少なくとも１はポリアルキレングリコール側鎖基を有し；
該ナノ粒子は、１０〜１００ｎｍの範囲の平均直径を有し、かつポリアルキレングリコール：総ポリマーの質量比ＷＰＡＧが０．０５以上、特に０．０５〜０．７５、特に０．０５〜０．６、特に０．０５〜０．５、好ましくは０．０５〜０．３に含まれるような量のポリアルキレングリコール基を含む
上記ナノ粒子に関する。
【００１２】
特に、ポリアルキレングリコール：総ポリマーの質量比ＷＰＡＧは、０．１〜０．７５、特に０．１５〜０．６、特に０．１５〜０．５、好ましくは０．１５〜０．３の範囲である。
【００１３】
有利には、本発明に従って考慮される高分子電解質は、生体適合性である。それらは、完全に耐性があり、素早く即ち数日〜数週間のタイムスケールで分解する。
別なその特徴に従うと、本発明は、上記で定義された少なくともナノ粒子を含む組成物、特に医薬品に関する。
【００１４】
特に、本発明に従うナノ粒子は、タンパク質及びペプチド活性成分のビヒクルとして、及び／又は低分子量の活性成分を溶解させるために特に有利であることが分かった。
【００１５】
その上、本発明に従うナノ粒子は延長された期間に亘って、活性成分を有利に放出することができる。
【００１６】
本発明の粒子のナノメートルのサイズは静脈又は皮下ルートによる活性剤の配合物の投与に特に適切である。即ち、本発明は癌の治療のために使用される活性成分の非経口投与に関して特に有利であることが分かった。
【００１７】
高分子電解質の種々の配合物は、既に記載されている。
【００１８】
即ち、Ｋａｂａｎｏｖらによる“Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ”、１９９６年、第２９巻、第６７９７頁〜６８０２頁は、反対の極性の２つの高分子電解質、より詳細にはアニオン性高分子電解質としてのジブロックポリ（メタクリル酸ナトリウム）−ｂ−ＰＥＯ及びカチオン性高分子電解質としてのポリ（Ｎ−エチル−４−ビニルピリジニウムブロマイド）、の錯体形成により形成されたナノ粒子を記載している。しかし、このタイプの非生分解性高分子電解質の非経口投与を想定することは困難であり得る。
【００１９】
文献、Ｌｅｅ  Ｙ．及びカタオカ  Ｋ．“Ｓｏｆｔ  Ｍａｔｔｅｒ”、２００９年、第５巻、第３８１０〜１７頁及びオサダ  Ｋ．ら、 “Ｊ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ”、２００９年、第６号、Ｓ３２５〜Ｓ３３９においてカタオカらは、活性成分、より特に抗ガン活性成分、例えばドクソルビチン、の非経口投与のためのポリイオン性ミセル特にポリ（エチレングリコール）−ポリアミノ酸ブロックコポリマーにより形成されるポリイオン性ミセルを記載している。
【００２０】
Ｓｏｎａｊｅらによる“Ｂｉｏｍｅｔｅｒｉａｌｓ”、２０１０年、第３１巻、第３３８４〜３３９４頁は、インスリンを結合する、ｐ−ガンマグルタミン酸を有するキトサンの錯体化により得られる高分子電解質錯体を記載している。
【００２１】
しかし、本発明者が知る限り、本発明の上記の特定の要件と適合する２つの高分子電解質を結合しているナノ粒子は全く提案されていない。
【００２２】
別のその特徴に従うと、本発明は、１０〜１００ｎｍの範囲の平均直径を有するナノ粒子の製造方法において、
（１）疎水性側鎖基を有する、電荷を帯びた状態の第一の高分子電解質のナノ粒子を含む水性溶液を用意すること、該ナノ粒子は活性成分と非共有結合的に結合される；
（２）上記ナノ粒子を形成するように、該溶液（１）を、該第一の高分子電解質の極性と反対の極性の少なくとも１の第二の高分子電解質と一緒にすること、
からなる段階を少なくとも含み、
該第一の高分子電解質及び第二の高分子電解質の少なくとも１はポリアルキレングリコール側鎖基を有し、該ポリアルキレングリコールタイプの基の量は、ポリアルキレングリコール：全ポリマーの質量比ＷＰＡＧが、０．０５以上であるような量であり、
該第一の高分子電解質及び第二の高分子電解質はポリアミノ酸の直鎖の骨格を有し、２，０００以下の重合度を有する
前記製造方法に関する。
【００２３】
特に、水性溶液（１）は、活性成分を該第一の高分子電解質の水性コロイド状溶液に添加することにより得られ、該活性成分は該第一の高分子電解質と非共有結合的に結合する。
【００２４】
本発明に従う活性成分のナノ粒子の配合物は、いくつかの点において特に有利であることも分かった。
【００２５】
第一に、本発明に従うナノ粒子の懸濁物は有利には優れた安定性を有する。さらに、該懸濁物の物理化学的性質を、特に粘度、粒子サイズ、コロイド又は化学的安定性の点において損なうことなく、高濃度において混合を行うことができる。すなわち、本発明に従って、流動性があり、かつ十分に濃縮されたナノ粒子の安定な懸濁物を得ることが可能である。特に、本発明に従って得られる懸濁物は、濃縮の次なるステージの適用を要求しない。従って、本発明は、特に静脈ルートによる投与のために「使用する用意ができている」流動性懸濁物を配合することを可能にする。言い換えると、上記の方法の終わりに得られる形での患者への投与に適切であることができる。
【００２６】
その上、本発明に従うナノ粒子の懸濁物は、得られた性質に影響を与えることなく、凍結乾燥及び水性相における再構成に容易に役立つ。
【００２７】
さらに、本発明に従うナノ粒子の懸濁物は、上記のように製造された２つの液状懸濁物を単純に混合することにより、投与のときにその場で形成されることができる。即ち、ナノ粒子のこれらの懸濁物は簡単に貯蔵されることができ、産業スケールでの制限された製造コストが想定されることを許す。
【００２８】
最後に、該活性成分は過剰な温度、かなりの剪断、界面活性剤又は有機溶媒を必要としない水性法において使用され、このことは活性成分の可能性のある分解を避けることを有利に可能にする。そのような特徴は、ある種の活性成分、上記の条件に付されたとき潜在的に分解される可能性がある、例えばペプチド及びタンパク質、に関して特に有利であるようである。
【００２９】
活性成分
活性成分に関しては、それは、治療的、化粧料的又は予防的な利益又はイメージングの利益のある分子であることができる。
【００３０】
それは、タンパク質、グリコタンパク質、１以上のポリアルキレングリコール鎖［好ましくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）］に共有結合的に結合されたタンパク質、ペプチド、多糖類、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、合成の医薬品物質、及びそれらの混合物を含む群から好ましくは選択される。
【００３１】
より好ましくは、該活性成分は、エリスロポイエチン類、ヘモグロビンラフィマー、それらの類縁体又は誘導体；オキシトシン、バソプレッシン、副腎皮質刺激性ホルモン、成長因子、血液因子類、ヘモグロビン、チトクローム類、アルブミン類プロラクチン、ルリベリン（黄体組織を作るホルモン放出ホルモン即ちＬＨＲＨ）、又はその類縁体、例えばロイプロリド、ゴセレリン、トリプトレリン、ブセレリン、ナファレリン；ＬＨＲＨ拮抗剤類、ＬＨＲＨコンペティター類、ヒト、ブタ、又はウシの成長ホルモン類（ＧＨ）、成長ホルモン放出ホルモン、インシュリン、ソマトスタチン、グルカゴン、インターロイキン類、又はこれらの混合物、インターフェロン類、例えばインターフェロンアルファ、アルファ−２ｂ、ベータ、ベータ−１ａ、又はガンマ；ガストリン、テトラガストリン、ペンタガストリン、ウロガストロン、セクレチン、カルシトニン、エンケファリン類、エンドモルフィン類、アンジオテンシン類、チロトロピン放出因子（ＴＲＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、成長因子類、例えばベクラペルミン、トラフェルミン、アンセスチム、ケラチン生成細胞成長因子、顆粒白血球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒白血球−マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、マクロファージ−コロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、ヘパリナーゼ、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、ｈＡＮＰ、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−Ｉ）その類縁体類及びそのアゴニスト類、特にエクセナチド、ＶＥＧ−Ｆ、組換Ｂ型肝炎アンチゲン（ｒＨＢｓＡｇ）、レニン、サイトカイニン類、シクロスポリン類及びその合成類縁体、酵素類、サイトカイニン類、抗体類、アンチゲン類、およびワクチン類の薬学的に活性な変性物及び破片、抗体、例えばリツキシマブ、インフリキシマブ、トラスツズマブ、アダリムマブ、オマリズマブ、トシツモマブ、エファリツマブ及びセツキシマブを含むサブグループから選択される。
【００３２】
他の活性成分は、多糖類（例えばヘパリン）及びオリゴ若しくはポリヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｉＲＮＡ、抗生物質及び生細胞、リスペリドン、ズクロペンチキソール、フルフェナジン、ペルフェナジン、フルペンチクソール、ハロペリドール、フルスピリレン、クエチアピン、クロザピン、アミスルプリド、スルピリド、ジプラシドン等である。
【００３３】
より特に該活性成分は成長ホルモン、インスリン、カルシトニン、フルベストラント及びサイトカイニンから選択される。
【００３４】
高分子電解質
上記のように、本発明に従うナノ粒子は、反対の極性の少なくとも２の高分子電解質を含む。言い換えると本発明に従うナノ粒子は、少なくとも１のアニオン性高分子電解質及び少なくとも１のカチオン性高分子電解質を含む。
【００３５】
「高分子電解質」により、本発明の意味内において水、特に５〜８の範囲のｐＨにおける水、においてイオン化して、ポリマー上に電荷を作り出すことのできる基を有するポリマーが意味される。即ち、極性溶媒、例えば水における溶液において、高分子電解質は解離して、その骨格上に電荷が、及び溶液中に対イオンが現れるようにする。
【００３６】
例えば、高分子電解質のカルボン酸とアミン官能基は、溶液のｐＨに依存してそれぞれ−ＣＯＯＨ又は−ＣＯＯ−及びＮＨ２又はＮＨ３＋の形の下でおり、中性は溶液中に存在する対カチオン及び対アニオンにより保証される。
【００３７】
高分子電解質が酸基を含む場合、該化合物は塩の形であり得る。塩の選択は当業者の能力の範囲内である。例えば、対カチオンは、特に一価の金属カチオン、好ましくはナトリウム又はカリウムイオンであることができる。高分子電解質がアミン基を含む場合、対アニオンは、特に塩化物、アセテート、又はアンモニウムイオンであることができる。
【００３８】
本発明に従う高分子電解質は、一組の同じ又は異なる高分子電解質基を含むことができる。
【００３９】
別に特定されない限り、高分子電解質は、本説明の残りを通して、本発明に従うナノ粒子の形成をもたらすアニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質の混合物のｐＨ値において現れると記載される。「カチオン性」又は「アニオン性」のような基の記載は、例えば、該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質の混合物のこのｐＨ値においてこの基が持つ電荷に照らして、考慮される。同様に、高分子電解質の極性はこのｐＨ値においてこの電解質が持つ総電荷に照らして定義される。
【００４０】
特に、本発明に従うナノ粒子の形成をもたらす該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質の混合物のｐＨ値は５〜８、好ましくは６〜７．５の範囲である。
【００４１】
より特に、「アニオン性高分子電解質」により２つの高分子電解質の混合物のｐＨ値において負の総電荷を有する高分子電解質が意味される。
同様に、「カチオン性高分子電解質」により２つの高分子電解質の混合物のｐＨ値において正の総電荷を有する高分子電解質が意味される。
【００４２】
高分子電解質の「総電荷」により、この電解質が持つ正及び負の電荷のすべての代数的合計が意味される。
【００４３】
ポリアミノ酸の直鎖の骨格
上記のように、本発明に従って考慮される高分子電解質は、ポリアミノ酸の直鎖の骨格を有する、即ちアミノ酸残基を含む。
【００４４】
有利には、本発明に従う高分子電解質は生分解性である。
【００４５】
本発明の意味内において、用語「ポリアミノ酸」は、天然のポリアミノ酸及び合成のポリアミノ酸の両方を包含する。
【００４６】
ポリアミノ酸は直鎖のポリマー、有利にはペプチド結合により結合されたアルファアミノ酸からなる。
【００４７】
ブロック又はランダムコポリマー、マルチ鎖ポリマー、及びアミノ酸の特定の配列を含むポリマーを形成するたくさんの合成技術がある（ポリマーの科学と工学の百科事典、第１２巻、第７８６頁；ジョンワイリー＆サンズを参照のこと）。
【００４８】
当業者は、その知識のおかげで、これらの技術を実施して、本発明に適するポリマーを得ることができる。特に、国際公開第９６／２９９９１号パンフレット、国際公開第０３／１０４３０３号パンフレット、国際公開第２００６／０７９６１４号パンフレット、国際公開第２００８／１３５５６３号パンフレット、及びＫａｎｇら（Ｌａｎｇｍｕｉｒ、２００１年、第１７巻、第７５０１〜７５０６頁）の教示も参照されたい。
【００４９】
好ましい実施態様の変形に従うと、該ポリアミノ酸鎖はアルファ−Ｌ−グルタメート又はアルファ−Ｌ−グルタミン酸のホモポリマーにより構成されている。
【００５０】
別の実施態様の変形に従うと、該ポリアミノ酸鎖はアルファ−Ｌ−アスパルテート又はアルファ−Ｌ−アスパラギン酸のホモポリマーにより構成されている。
【００５１】
別の実施態様の変形に従うと、該ポリアミノ酸鎖は、アルファ−Ｌ−アスパルテート／アルファ−Ｌグルタメート、アルファ−Ｌ−アスパラギン酸／アルファ−Ｌ−グルタミン酸、アルファ／ベータ−Ｌ−アスパルテート又はアルファ／ベータ−Ｌ−アスパラギン酸のコポリマーにより構成されている。
【００５２】
別の実施態様の変形に従うと、該ポリアミノ酸鎖はポリ−Ｌ−リシンのホモポリマーにより構成されている。
【００５３】
そのようなポリアミノ酸は、特に、国際公開第０３／１０４３０３号パンフレット、国際公開第２００６／０７９６１４号パンフレット、及び国際公開第２００８／１３５５６３号パンフレットに記載されており、これらの内容は参照することにより取り込まれる。これらのポリアミノ酸は、国際公開第００／３０６１８号パンフレットに記載されているタイプのものでもあることができる。
【００５４】
これらのポリマーは、当業者に公知の方法により得られることができる。
【００５５】
本発明に従って使用されることのできるある数のポリマー、可変の質量を有する例えば、ポリ（アルファ−Ｌ−グルタミン酸）、ポリ（アルファ−Ｄ−グルタミン酸）、ポリ（アルファ−Ｄ，Ｌ−グルタメート）、ポリ（ガンマ−Ｌ−グルタミン酸）及びポリ（Ｌ−リシン）タイプが市販入手可能である。
【００５６】
ポリ（Ｌ−グルタミン酸）は、フランス国特許出願公開第２８０１２２６号に記載のルートの従って合成されることもまたできる。
【００５７】
特に有利な実施態様に従うと、本発明に従って考慮されるアニオン性高分子電解質は、以下の式（Ｉ）のもの又はその薬学的に許容される塩の一つである。
【化１】
2014515003.tif 000002
【００５８】
ここで、
−  Ｒａは、水素原子、直鎖のＣ２〜Ｃ１０アシル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アシル基、ピログルタメート基又は以下で定義される疎水性基Ｇを表し；
−  Ｒｂは−ＮＨＲ５基又は、窒素により結合されかつそのカルボキシルは任意的に−ＮＨＲ５アルキルアミノ基又は−ＯＲ６アルコキシにより置換されていてもよいところの末端アミノ酸残基を表わし、ここで
・Ｒ５は水素原子、直鎖のＣ１〜Ｃ１０アルキル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アルキル基、又はベンジル基を表し；
・Ｒ６は、水素原子、直鎖のＣ１〜Ｃ１０アルキル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アルキル基、ベンジル基、又は基Ｇを表し、
−  Ｇは、オクチルオキシ−、ドデシルオキシ−、テトラデシルオキシ−、ヘキサデシルオキシ−、オクタデシルオキシ−、９−オクタデセニルオキシ−、トコフェリル−、及びコレステリル−から選択された疎水性基、好ましくはアルファ−トコフェリル−を表し；
−  ＰＡＧは、ポリアルキレングリコール、好ましくは１８００〜６０００ｇ／モルの範囲のモル質量を有するもの、特にポリエチレングリコール、特に２０００〜６０００ｇ／モルの範囲のモル質量のもの、を表わし、
・ｓ１は中性ｐＨにおいてアニオン性である、非グラフト化グルタメートモノマーの平均数に該当し、
・ｐ１は、疎水性の基Ｇを有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
・ｑ１は、ポリアルキレングリコール基を有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｐ１及びｑ１は任意的にゼロであってもよく、
−  重合度ＤＰ１＝（ｓ１＋ｐ１＋ｑ１）は２，０００以下、特に７００未満、より特に４０〜４５０、特に４０〜２５０、特に４０〜１５０の範囲であり、
−  該一般式（Ｉ）のモノマーの鎖形成は、ランダム、モノブロック又はマルチブロックタイプであることができる。
【００５９】
本発明の特に好ましい実施態様に従うと、式（Ｉ）の該アニオン性高分子電解質は、ｘｐ１＝ｐ１／（ｓ１＋ｐ１＋ｑ１）が２〜２２％、特に４〜１２％、さらにより特に４〜６％の範囲であるように、疎水性基を有するモノマーのモル割合ｘｐ１を有する。
【００６０】
第二の実施態様に従うと、本発明に従って考慮される該アニオン性高分子電解質は、以下の式（Ｉ´）のもの又はその薬学的に許容される塩の一つである。
【化２】
2014515003.tif 000003
【００６１】
ここで、
−  Ｇ´は、オクチル−、ドデシル−、テトラデシル−、ヘキサデシル−、オクタデシル−、９−オクタデセニル−から選択される疎水性基を表し；
・ｓ１＝（ｓ１´＋ｓ１´´）は、中性ｐＨにおいてアニオン性である非グラフト化アスパルテートモノマーの平均数に該当し、
・ｐ１＝（ｐ１´＋ｐ１´´）は、疎水性基Ｇ´を有するアスパルテートモノマーの平均数に該当し、任意的にゼロであってもよく、
−  重合度ＤＰ１＝（ｓ１＋ｐ１）は２，０００以下、特に７００未満、より特に２０〜４５０、特に２０〜２５０、特に２０〜１５０の範囲であり、
−  該一般式（Ｉ´）のモノマーの鎖形成は、ランダム、モノブロック又はマルチブロックタイプであることができる。
【００６２】
本発明の第二の特に好ましい実施態様に従うと、式（Ｉ´）の該アニオン性高分子電解質は、ｘｐ１＝ｐ１／（ｓ１＋ｐ１）が２〜２２％、特に４〜１２％の範囲であるように、疎水性基を有するモノマーのモル割合ｘｐ１を有する。
【００６３】
特に有利な実施態様に従うと、本発明に従う該カチオン性高分子電解質は、以下の式（ＩＩ）のもの又はその薬学的に許容される塩の一つである。
【化３】
2014515003.tif 000004
【００６４】
ここで、
−  Ｒａは、水素原子、直鎖のＣ２〜Ｃ１０アシル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アシル基、ピログルタメート基又は以下で定義される疎水性基Ｇを表し；
−  Ｒｂは−ＮＨＲ５基又は、窒素により結合されかつそのカルボキシルは−ＮＨＲ５アルキルアミノ基又は−ＯＲ６アルコキシにより任意的に置換されていてもよいところの末端アミノ酸残基を表し、ここで
・Ｒ５は水素原子、直鎖のＣ１〜Ｃ１０アルキル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アルキル基、又はベンジル基を表し；
・Ｒ６は、水素原子、直鎖のＣ１〜Ｃ１０アルキル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アルキル基、ベンジル基、又は基Ｇを表し；
−  Ｇは、オクチルオキシ−、ドデシルオキシ−、テトラデシルオキシ−、ヘキサデシルオキシ−、オクタデシルオキシ−、９−オクタデセニルオキシ−、トコフェリル−、及びコレステリル−から選択された疎水性基、好ましくはアルファ−トコフェリル−を表し；
−  ＰＡＧは、ポリアルキレングリコール、好ましくは１８００〜６０００ｇ／モルの範囲のモル質量を有するもの、特にポリエチレングリコール、特に２０００〜６０００ｇ／モルの範囲のモル質量のもの、を表わし、
−  Ｒ２は、カチオン性基、特に、アミン官能基により結合されたアルギニンアミドを表し、
−  Ｒ３は、アミン官能基により結合されたヒドロキシエチルアミノ、アミン官能基により結合されたジヒドロキシプロピルアミノから選択された中性基を表し；
・ｓ２は中性ｐＨにおいてアニオン性である、非グラフト化グルタメートモノマーの平均数に該当し、
・ｐ２は、疎水性基Ｇを有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
・ｑ２は、ポリアルキレングリコール基を有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
・ｒ２は、カチオン性基Ｒ２を有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
・ｔ２は、中性基Ｒ３を有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｓ２、ｐ２、ｑ２及びｔ２は任意的にゼロであってもよく、かつ
−  重合度ＤＰ２＝（ｓ２＋ｐ２＋ｑ２＋ｒ２＋ｔ２）は２，０００以下、特に７００未満、より特に４０〜４５０、特に４０〜２５０、特に４０〜１５０の範囲であり、
−  該一般式（ＩＩ）のモノマーの鎖形成は、ランダム、モノブロック又はマルチブロックタイプであることができる。
【００６５】
もちろん、式（ＩＩ）に該当するカチオン性高分子電解質は高分子電解質の総電荷（ｒ２−ｓ２）が正であるようなものである。
【００６６】
本発明の特に好ましい実施態様に従うと、式（ＩＩ）のカチオン性高分子電解質は、ｘｐ２＝ｐ２／（ｓ２＋ｐ２＋ｑ２＋ｒ２＋ｔ２）が２〜２２％、特に４〜１２％、さらにより特に４〜６％の範囲であるように、疎水性基を有するモノマーのモル割合ｘｐ２を有する。
【００６７】
第二の特定の実施態様に従うと、本発明に従って考慮されるカチオン性高分子電解質は、以下の式（ＩＩ´）のもの又はその薬学的に許容される塩の一つである。
【化４】
2014515003.tif 000005
【００６８】
ここで、
−  Ｘ−は、対アニオン、特に塩素イオン、酢酸イオン又はアンモニウムイオンを表わし、
−  ＰＡＧは、ポリアルキレングリコール、好ましくは１８００〜６０００ｇ／モルの範囲のモル質量を有するもの、特にポリエチレングリコール、特に２０００〜６０００ｇ／モルの範囲のモル質量のもの、を表わし、
・ｑ２は、ポリアルキレングリコール基を有するリシンモノマーの平均数に該当し、
・ｒ２は中性ｐＨにおいてカチオン性である、非グラフト化リシンモノマーの平均数に該当し、
ｑ２は任意的にゼロであってもよく、そして
−  重合度ＤＰ２＝（ｑ２＋ｒ２）は２，０００以下、特に７００未満、より特に４０〜４５０、特に４０〜２５０、特に４０〜１５０の範囲であり、
−  該一般式（ＩＩ´）のモノマーの鎖形成は、ランダム、モノブロック又はマルチブロックタイプであることができる。
【００６９】
高分子電解質の平均分子量及び重合度並びに各単位に相当するモル割合の測定
【００７０】
本発明の意味において、ポリマーの平均分子量は、サイズ排除クロマトグラフィーデバイスに接続された静的光散乱検出器により測定される。保持された該平均分子量はピークの分子量（Ｍｐ）である。
【００７１】
グラフト化されたポリ（グルタミン酸）の場合、該分析は以下の条件において行われる。
【００７２】
水性溶液中のグラフト化されたポリ（グルタミン酸）の試料は、０．１Ｎの塩酸を添加することにより沈殿され、凍結乾燥され、その後Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）に溶解され、分析される。
【００７３】
平均ピーク分子量は、３つの連続するポリスチレン−コ−ジビニルベンゼンクロマトグラフィーのカラム：５μｍ／１０００００Å、５μｍ／１００００Å、及び５μｍ／１０００Å、を含む、Ｎ−メチルピロリドン中のサイズ排除クロマトグラフィーに接続された１８角（ＭＡＬＬＳ）静的光散乱検出器により測定される。
【００７４】
該高分子電解質を構成する（グラフト化されている又はされていない）モノマー単位ＡＡｉのそれぞれに対応するモル割合ｘｉは、適切な溶媒中でプロトンＮＭＲにより測定される。当業者は高分子電解質のための適切な溶媒を選択して、分析しかつ分析条件を決めることができる。
【００７５】
式（Ｉ）に対応するグラフト化されたポリ（グルタミン酸）の場合、ポリマー試料は凍結乾燥され、重水素化トリフルオロ酢酸に溶解され、その後プロトン１Ｈプローブを備えられた３００ＭＨｚＮＭＲ分光計により分析される。
【００７６】
特に、疎水性基中の平均モルグラフト化率に相当する、疎水性基でグラフト化されたモノマーにおけるモル割合ｘｐ、ポリアルキレングリコールでグラフト化されたモノマー単位におけるモル割合ｘＰＡＧ、アニオン性モノマー単位におけるモル割合ｘａ及びカチオン性モノマー単位におけるモル割合ｘｃがこのようにして測定される。
【００７７】
平均重合度ＤＰは、上記のようにサイズ排除クロマトグラフィーにより測定されたポリマー鎖の平均分子量を高分子電解質のモノマー単位の平均分子量ＭＡＡｍにより除することにより計算される：ＤＰ＝Ｍｐ／ＭＡＡｍ。
【００７８】
ある単位のこの平均分子量は、高分子電解質を構成する単位の分子量の平均であり、それぞれはこの単位のモル割合により加重されている。即ち、それぞれ、分子量ＭＡＡｉ及びモル割合ｘｉの、ｎ個の異なるモノマー単位ＡＡｉを有する高分子電解質の場合、平均重量ＭＡＡｍは以下の式により与えられる。
【数１】
2014515003.tif 000006
【００７９】
もちろん、上記の式（Ｉ）、（Ｉ´）、（ＩＩ）、及び（ＩＩ´）に対応する本発明に従うナノ粒子の該アニオン性高分子電解質及び該カチオン性高分子電解質は、
−  該２つの高分子電解質のうちの少なくとも１が疎水性側鎖基Ｇ又はＧ´を有し；
−  該２つの高分子電解質のうちの少なくとも１がポリアルキレングリコール側鎖基ＰＡＧ、特にポリエチレングリコールＰＥＧ、を有し；
該アニオン性高分子電解質及び／又はカチオン性高分子電解質によって保持される該ポリアルキレングリコール基の量は、ポリアルキレングリコール：総ポリマーの質量比ＷＰＡＧが０．０５以上、特に０．０５〜０．７５、特に０．０５〜０．６、特に０．０５〜０．５、好ましくは０．０５〜０．３の間に含まれるような量である。好ましくはＷＰＡＧは０．１〜０．７５、好ましくは０．１５〜０．６、好ましくは０．１５〜０．５、好ましくは０．１５〜０．３の間に含まれる。
【００８０】
該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質を混合した後の質量比ＷＰＡＧは以下の式から計算されることができる。
【数２】
2014515003.tif 000007
【００８１】
ここで、
−  ＸＰＡＧ１及びＸＰＡＧ２は、それぞれアニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質により保持されたポリアルキレングリコール基を有するモノマーのモル割合を表わし、
−  ＭＰＡＧ１及びＭＰＡＧ２は、それぞれアニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質により保持されたポリアルキレングラフトのモル質量を表わし、
−  ｍ１及びｍ２は、アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質を混合する前の溶液の質量をそれぞれ表し、（混合する前の）ポリマーのそれぞれの質量濃度はＣ１及びＣ２である；
−  ＤＰ１及びＤＰ２は、それぞれ該アニオン性高分子電解質及び該カチオン性高分子電解質の重合度を表し；
−  Ｍ１及びＭ２は、それぞれ、該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質のモル質量を表す。
【００８２】
第一の実施態様に従うと、該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質は、
・  該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質の重合度が４０〜２５０、好ましくは、４０〜１１０に含まれ；
・  該２つの高分子電解質のうちの一つだけが、ランダムに分布された疎水性側鎖基を有し；
・  該２つの高分子電解質のうちの一つだけが、ポリアルキレングリコールタイプ、特に２０００〜６０００ｇ／モルのモル質量のランダムに分布されたポリエチレングリコール基、の側鎖基を有し；
・  ｔ２はゼロであり、即ち、該カチオン性高分子電解質は中性の基を有しておらず；
・  該２つの高分子電解質の混合物におけるカチオン性基の数：アニオン性基の数のモル比Ｚは０．１〜２．２、好ましくは０．１〜２、好ましくは０．４〜１．５の間に含まれる
ようなものである。
【００８３】
第二の実施態様に従うと、該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質は、
・  該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質の重合度が４０〜２５０、好ましくは、４０〜１１０に含まれ；
・  該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質は両方ともランダムに分布された疎水性側鎖基を有し；
・  該２つの高分子電解質のうちの一つだけが、ポリアルキレングリコールタイプ、特に２０００〜６０００ｇ／モルのモル質量のランダムに分布されたポリエチレングリコール基の側鎖基を有し；
・  ｔ２はゼロであり、即ち、該カチオン性高分子電解質は中性の基を有しておらず；
・  該２つの高分子電解質の混合物におけるカチオン性基の数：アニオン性基の数のモル比Ｚは０．１〜２．２、好ましくは０．１〜２、好ましくは０．４〜１．５の間に含まれる
ようなものである。
【００８４】
第三の実施態様に従うと、該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質は、
・  該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質の重合度が４０〜２５０、好ましくは、４０〜１１０に含まれ；
・  該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質は両方ともポリアルキレングリコールの側鎖基、特に２０００〜６０００ｇ／モルのモル質量のポリエチレングリコール基、を有し；
・  ｔ２はゼロであり、即ち、該カチオン性高分子電解質は中性の基を有しておらず；
・  該２つの高分子電解質の混合物におけるカチオン性基の数：アニオン性基の数のモル比Ｚは０．１〜２．２、好ましくは０．１〜２、好ましくは０．４〜１．５の間に含まれる
ようなものである。
【００８５】
本発明に従うアニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質の特に好ましい組み合わせの例は以下の変形に記載されている。
【００８６】
本発明の第一の好ましい実施態様の変形に従うと、該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質は、
・  該アニオン性高分子電解質における疎水性基のモル割合ｘＰ１が２〜２２％、特に４〜１２％の範囲であり、
・  該アニオン性高分子電解質におけるポリアルキレングリコール基のモル割合ＸＰＡＧ１はゼロであり；
・  該カチオン性高分子電解質における疎水性基のモル割合ｘｐ２はゼロであり、かつ
・  該カチオン性高分子電解質におけるポリアルキレングリコール基のモル割合ＸＰＡＧ２は２〜１０％、特に２〜６％の範囲である
ようなものである。
【００８７】
第二の好ましい実施態様の変形に従うと、該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質は、
・  モル割合ｘｐ１が２〜２２％、特に４〜１２％の範囲であり、
・  モル割合ｘＰＡＧ１は２〜１０％、特に２〜６％であり；
・  モル割合ｘｐ２はゼロであり、かつ
・  モル割合ｘＰＡＧ２はゼロである
ようなものである。
【００８８】
第三の好ましい実施態様の変形に従うと、該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質は、
・  モル割合ｘｐ１が２〜２２％、特に４〜１２％の範囲であり、かつ
・  モル割合ｘＰＡＧ１は２〜１０％、特に２〜６％であり；
・  モル割合ｘｐ２は５〜２０％、特に５〜１０％であり、かつ
・  モル割合ｘＰＡＧ２はゼロである
ようなものである。
【００８９】
第四の好ましい実施態様の変形に従うと、該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質は、
・  モル割合ｘｐ１が２〜２２％、特に４〜１２％の範囲であり；
・  モル割合ｘＰＡＧ１はゼロであり；
・  モル割合ｘｐ２は５〜２０％、特に５〜１０％の範囲であり；かつ
・  モル割合ｘＰＡＧ２は２〜１０％、特に２〜６％の範囲である
ようなものである。
【００９０】
第五の好ましい実施態様の変形に従うと、該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質は、
・  モル割合ｘｐ１が２〜２２％、特に４〜１２％の範囲であり；
・  モル割合ｘＰＡＧ１は２〜１０％、特に２〜６％の範囲であり；
・  モル割合ｘｐ２は５〜２０％、特に５〜１０％の範囲であり；かつ
・  モル割合ｘＰＡＧ２は２〜１０％、特に２〜６％の範囲である
ようなものである。
【００９１】
ナノ粒子
前記のように、本発明に従って形成されるナノ粒子は、１０〜１００ｎｍの範囲の平均直径を有している。
好ましくは、該ナノ粒子のサイズは１０〜７０ｎｍ、特に１０〜５０ｎｍの範囲であることができる。
該ナノ粒子のサイズは準弾性光散乱により測定されることができる。
【００９２】
準弾性光散乱により粒子サイズを測定するための試験
粒子サイズは、当業者に周知である測定方法に従って、例えば、ＡＬＶ  ＣＧＳ−３タイプを使用して、得られた体積平均流体力学直径により特徴づけられる。
【００９３】
一般的に、測定は０．１５ＭのＮａＣｌ媒体中において１ｍｇ／ｇの濃度において製造され２４時間撹拌されたポリマーの溶液を用いて行われる。次に、これらの溶液は、０．８〜０．２μｍ上でろ過され、動的光散乱法により分析される。
【００９４】
波長６３２．８ｎｍの、垂直方向に偏光されたＨｅ−Ｎｅレーザービームで操作するＡＬＶ  ＣＧＳ−３タイプのデバイスを使用するとき、散乱角は１４０°であり、信号収集時間は１０分である。測定は溶液の２つの試料について３回繰り返される。結果は６回の平均である。
【００９５】
ナノ粒子の調製
本発明に従うナノ粒子は、第一の高分子電解質の溶液を反対の極性の第二の高分子電解質の溶液と混合することにより得られることができ、ここで該第一の高分子電解質及び第二の高分子電解質は、ポリアルキレングリコール：総ポリマーの質量比ＷＰＡＧが０．０５以上であるようなものである。
【００９６】
本発明に従うナノ粒子は、特に
（１）疎水性側鎖基を有する、電荷を帯びた状態の第一の高分子電解質のナノ粒子を含む水性溶液を用意すること；該ナノ粒子は、活性成分と非共有結合的に結合される；
（２）該溶液（１）を、該第一の高分子電解質の極性と反対の極性の少なくとも１の第二の高分子電解質と一緒にすること、
からなる段階を少なくとも含む方法に従って製造されることができ、
ただし、該第一の高分子電解質及び第二の高分子電解質の少なくとも１はポリアルキレングリコール側鎖基を有し、該ポリアルキレングリコール基の量は、ポリアルキレングリコール：総ポリマーの質量比ＷＰＡＧが０．０５以上、特に０．０５〜０．７５、特に０．０５〜０．６、特に０．０５〜０．５、特に０．０５〜０．３の間に含まれるようなものであり；
該第一の高分子電解質及び第二の高分子電解質はポリアミノ酸の直鎖の骨格を有し、２，０００以下、好ましくは７００未満、特に４０〜４５０の範囲、特に４０〜２５０の範囲、特に４０〜１５０の範囲の重合度を有する。
【００９７】
特定の実施態様に従うと、ＷＰＡＧは、０．１〜０．７５、０．１５〜０．６、好ましくは．１５〜０．５、好ましくは０．１５〜０．３に含まれる。
【００９８】
特に、該第一の高分子電解質及び第二の高分子電解質は上記で定義された通りである。
【００９９】
特定の実施態様に従うと、水性溶液（１）は、活性成分を第一の高分子電解質の水性コロイド状溶液に添加することにより得られ、該活性成分は該第一の高分子電解質のナノ粒子と非共有的に結合する。
【０１００】
特に、水性溶液（１）は５〜８の範囲のｐＨ値、より特に約７のｐＨ値を有する。
【０１０１】
特定の実施態様に従うと、段階（２）は、
−  特に５〜８の範囲のｐＨ、有利には水性溶液（１）のｐＨ値と同じｐＨ値を有する第二の高分子電解質の水性溶液を用意すること；及び
−  該第二の高分子電解質の該水性溶液を該水性溶液（１）と混合すること
を少なくとも含む。
【０１０２】
特に好ましい実施態様に従うと、該第一の高分子電解質は、疎水性側鎖基を有し、５〜８の範囲のｐＨを有する水性媒体、特に水、に分散されるときに、自発的にナノ粒子を形成することができる。
【０１０３】
理論に拘束されることを望まないが、疎水性の領域を形成する疎水性基の超分子の組み合わせがナノ粒子の形成をもたらすことを示唆することができる。即ち、各ナノ粒子は、これらの疎水性領域の周囲で多かれ少なかれ濃縮された１以上の高分子電解質鎖により構成されている。
【０１０４】
好ましくは、疎水性側鎖基を有する第一の高分子電解質により形成されるナノ粒子は、１０〜１００ｎｍ、特に１０〜７０ｎｍ、より特に１０〜５０ｎｍの範囲の平均直径を有する。
【０１０５】
１以上の活性成分と高分子電解質の間の関係を記載するために使用される用語「結合」又は「結合された」は、該活性成分が該高分子電解質と非共有結合的物理的相互作用、特に疎水性相互作用、及び／又は静電的相互作用及び／又は水素結合及び／又は該高分子電解質による立体的カプセル化により結合されていることを意味する。
【０１０６】
別の特定の実施態様に従うと、第二の高分子電解質もまた疎水性の側鎖基を有し、５〜８の範囲のｐＨを有する水性媒体、特に水に分散されたときに、ナノ粒子を自発的に形成することができる。
【０１０７】
本発明に従う２つの高分子電解質の混合物におけるカチオン性基の数：アニオン性基の数のモル比（Ｚと表示される）は０．１〜２．２、好ましくは、０．１〜２、より特に０．４〜１．５の間に含まれる。
【０１０８】
比Ｚは、該ナノ粒子の総電荷を反映し、特にゼロに近いことができ、そのことはある種の用途においてはとくに興味深い。
【０１０９】
本発明の特に有利な実施態様に従うと、モル比Ｚは０．９〜１．１の間に含まれ、中性に近いナノ粒子を例示する。
【０１１０】
モル比Ｚは、本発明の方法に従うナノ粒子の製造の間に導入される高分子電解質の量と性質とに関して、以下の式により定義されることができる。
【０１１１】
【数３】
2014515003.tif 000008
【０１１２】
ここで
−  ｍ１及びｍ２は、アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質を混合する前の溶液の質量をそれぞれ表し、（混合する前の）ポリマーのそれぞれの質量濃度はＣ１及びＣ２である；
−  ＤＰ１及びＤＰ２は、該アニオン性高分子電解質及び該カチオン性高分子電解質の重合度をそれぞれ表し；
−  Ｍ１及びＭ２は、該アニオン性高分子電解質及び該カチオン性高分子電解質のモル質量をそれぞれ表し；
−  ｘｃ２は、該カチオン性高分子電解質において、カチオン性基を有するモノマーのモル割合を表し；
−  ｘａ１及びｘａ２は、該アニオン性高分子電解質及び該カチオン性高分子電解質のアニオン性基を有するモノマーのモル割合をそれぞれ表す。
【０１１３】
該ナノ粒子は、アニオン性、カチオン性又は中性であることができる。本発明の意味内において、「アニオン性ナノ粒子」により、中性のｐＨにおいてはその総電荷が負であるナノ粒子が、そして「カチオン性ナノ粒子」により、中性のｐＨにおいてその総電荷が正であるナノ粒子が意味される。
【０１１４】
さらに、本発明の別の特徴に従うと、本発明に従うナノ粒子は、静脈投与の後の循環時間を改良することを可能にする低い総電荷を有利に有する。
【０１１５】
総電荷は、当業者に公知の任意の方法、例えば、中性のｐＨにおけるゼータポテンシャルの測定により測定される。
【０１１６】
好ましくは、本発明に従うナノ粒子は、−２０ｍＶ〜＋２０ｍＶ、好ましくは−１５ｍＶ〜＋１５ｍＶ、好ましくは−１０ｍＶ〜＋１０ｍＶの範囲の中性ｐＨにおけるゼータポテンシャルを有する。
【０１１７】
好ましくは、段階（１）及び（２）において製造された溶液は、１〜５０ｍｇ／ｇ、好ましくは５〜５０ｍｇ／ｇ、特に７〜２５ｍｇ／ｇに含まれる高分子電解質の総濃度を有する。
【０１１８】
有利には、上記の製造方法の段階（２）の終わりに得られるナノ粒子の懸濁物は、ナノ粒子の十分な濃度を有し、さらなる濃縮の段階なしにそのまま使用されることができる。
【０１１９】
有利に、本発明の方法に従って得られたナノ粒子の懸濁物は、非経口ルート、特に静脈ルートによる投与に適切である。
【０１２０】
好ましくは、該懸濁物は、２０℃、１０秒−１の剪断において測定されて、１〜５００、好ましくは２〜２００ｍＰａ．ｓ．の範囲の粘度を有する。
【０１２１】
粘度は、標準的な装置、例えばコーン及びプレートタイプの形状（４ｃｍ及び角度２°）を有する、強制された応力レオメーター（Ｇｅｍｉｎｉ，Ｂｏｈｌｉｎ）を使用して、製造業者の説明書に従って２０℃において測定されることができる。
【０１２２】
別の実施態様の変形に従うと、上記の製造方法の段階（２）の終わりに得られるナノ粒子の懸濁物は、特に接線方向又は正面の超ろ過、遠心分離、蒸発又は凍結乾燥による濃縮の１以上の段階に付される。
【０１２３】
別の実施態様の変形に従うと、次に、本発明の方法は、乾燥粉末の形で粒子を得るために、得られた粒子の懸濁物を脱水する段階（例えば凍結乾燥又は霧状化）を含むことができる。
【０１２４】
有利に、本発明に従うナノ粒子は凍結乾燥された形において安定である。その上、それらは凍結乾燥後に再分散させるのが容易である。即ち、本発明に従うナノ粒子の懸濁物は、得られるナノ粒子の性質に影響を及ぼすことなく、凍結乾燥されて、次に、水性溶液において再構成されることができる。
【０１２５】
本発明は、本発明に従う組成物から製造される新規な医薬品、植物検疫、食品、化粧料又はダイエット食品にもまた関する。
【０１２６】
即ち、本発明に従う組成物は、粉末、溶液、懸濁物、錠剤又はゼラチンカプセルの形であることができる。
【０１２７】
本発明の組成物は、特に医薬品の製造のために意図されていることができる。
【０１２８】
経口ルート又は非経口ルート、特に非経口ルート、より特に皮下ルートによる投与のためを意図されていることができる。
【０１２９】
本発明は、説明のために与えられた以下の実施例により、よりよく説明される。
【実施例】
【０１３０】
実施例１
アニオン性高分子電解質ＰＡ１：５％のビタミンＥ及び４％のポリエチレングリコールでグラフトされており、約１００の重合度を有する、ポリグルタメートの合成
ＤＰ１００のポリ（グルタミン酸）１０ｇ及び０．１９ｇのジメチルアミノピリジンが８０℃において１６０ｍＬのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解される。該混合物は８０℃において終夜撹拌され、１５℃に冷却され、その後６．５ｍＬのＤＭＦ中における溶液中の１．６７ｇのα−トコフェロール、０．２８５ｇのジメチルアミノピリジン、３２ｍＬのＤＭＦ中における溶液中の質量５０００Ｄａのポリエチレングリコール（ＰＥＧ：メトキシＰＥＧ（ＣＨ２）３ＮＨ２）１６．２ｇ及び１．８ｍＬのジイソプロピルカルボジイミドが逐次的に添加される。該反応混合物は、１５℃において２４時間撹拌され、次に、水塊中で１Ｎのソーダで中和される。得られた溶液は透析ろ過（ｄｉａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）により精製され、濃縮される。
【０１３１】
ＴＦＡ−ｄ中、プロトンＮＭＲにより測定されたα−トコフェロール及びポリエチレングリコールによるグラフト率はそれぞれ５．３％及び３．８％である。
【０１３２】
下記の表１は、アニオン性高分子電解質ＰＡ１の特徴を記載する（表記ｐ１、ｑ１及びｓ１は詳細な説明の式（Ｉ）をさし、表記ｘｐ１、ｘａ１、ＸＰＡＧ１、ＤＰ１は発明の詳細において定義されたものである）。
【０１３３】
【表１】
2014515003.tif 000009
【０１３４】
実施例２
カチオン性高分子電解質ＰＣ１：５％のビタミンＥ及び８０％のアルギニンでグラフトされており、約１００の重合度を有するポリグルタメートの合成
このポリマーの合成は、特に本出願人の国際公開第２００８／１３５５６３号パンフレットに記載されている。
【０１３５】
下記の表２は、該カチオン性高分子電解質ＰＣ１の特徴を記載する（表記ｐ２、ｑ２、ｒ２、ｓ２及びｔ２は詳細な説明の式（ＩＩ）を指し、表記ＤＰ２、Ｍ２、ｘｐ２、ｘａ２、ｘｃ２、ｘＰＡＧ２及びＭＰＡＧ２は発明の詳細において上記で定義されたものである）。
【０１３６】
【表２】
2014515003.tif 000010
【０１３７】
実施例３
Ｚの種々の値のための２つの高分子電解質ＰＡ１及びＰＣ１に基づく粒子の製造
高分子電解質錯体の製造のためのプロトコルは以下の通りである：
【０１３８】
アニオン性高分子電解質ＰＡ１がＮａＣｌの１０ｍＭ溶液において希釈されて、穏やかな撹拌下において維持しながら、質量濃度Ｃ１を有する、質量ｍ１の溶液を得る。まだ撹拌を維持しながら、ＮａＣｌの１０ｍＭ溶液において予め質量濃度Ｃ２に希釈された、カチオン性高分子電解質ＰＣ１の量ｍ２の溶液がこの溶液に注がれる。
【０１３９】
得られる混合物における高分子電解質の総質量濃度Ｃは式Ｃ＝（ｍ１・Ｃ１＋ｍ２・Ｃ２）／（ｍ１＋ｍ２）により与えられる。
【０１４０】
得られるナノ粒子の直径は上記の準弾性光散乱法により測定される。
【０１４１】
総ゼータ電荷は、中性ｐＨにおけるゼータポテンシャルの測定により測定される。
【０１４２】
比Ｚ（カチオン性基／アニオン性基のモル比）及びＷＰＡＧ（ポリアルキレングリコール／総ポリマーの質量比）の値、混合物における高分子電解質の総質量濃度Ｃ、２つの高分子電解質ＰＡ１及びＰＣ１の溶液の種々の混合物について形成されたナノ粒子のゼータポテンシャルは、下記表３に示される。
【０１４３】
【表３】
2014515003.tif 000011
【０１４４】
結果は、本発明に従うアニオン性ＰＡ１及びカチオン性ＰＣ１高分子電解質の混合物から本発明に従う５０ｎｍ以下のサイズのナノ粒子を得ることが可能であることを示す。
【０１４５】
実施例４（比較）
ポリアルキレングリコールによりグラフトされていないアニオン性高分子電解質ＰＡ２（５％のビタミンＥでグラフトされ、約１００の重合度を有し、ポリエチレングリコールのグラフトを有しないポリグルタメート）と実施例２からのカチオン性高分子電解質ＰＣ１との混合物に基づく配合物。
【０１４６】
このポリマーの合成は、特に本出願人の国際公開第０３／１０４３０３号パンフレットに記載されている。
【０１４７】
下記の表４は、非ＰＥＧ化されているアニオン性高分子電解質ＰＡ２の特徴を記載する（表記ｐ１、ｑ１、及びｓ１は詳細な説明の式（Ｉ）を指し、表記ＤＰ１、Ｍ１、ｘｐ１、ｘａ１、ｘＰＡＧ１及びＭＰＡＧ１は発明の詳細において上記で定義されたものである）。
【０１４８】
【表４】
2014515003.tif 000012
【０１４９】
実施例３におけるのと同じ様に、ＮａＣｌの１０ｍＭの溶液において濃度Ｃ１における、量ｍ１のアニオン性高分子電解質ＰＡ２の溶液及び実施例２において記載された、ＮａＣｌの１０ｍＭ溶液において予め質量濃度Ｃ２に希釈された量ｍ２のカチオン性高分子電解質ＰＣ１の溶液が用意される。実施例３におけるのと同じように、カチオン性ポリマーＰＣ１がアニオン性ポリマーＰＡ２に添加される。
【０１５０】
【表５】
2014515003.tif 000013
【０１５１】
結果は、ポリアルキレングリコールを有しない（ｗＰＡＧ＝０）高分子電解質を混合した後に得られたナノ粒子は、１００ｎｍより大きく、本発明に従わないことを明らかに示す。
【０１５２】
実施例５
本発明に従う式（Ｉ）、（Ｉ´）、（ＩＩ）及び（ＩＩ´）に対応する他のアニオン性高分子電解質及び他のカチオン性高分子電解質の合成
アニオン性高分子電解質ＰＡ３〜ＰＡ６の合成：
・  ＰＡ３及びＰＡ６は、ビタミンＥグラフト及びポリエチレングリコール基を有するポリグルタメートである。それらの合成は実施例１において提案されたＰＡ１の合成に似ている。
【０１５３】
・  ＰＡ４、ＰＡ５、及びＰＡ８は、ビタミンＥグラフトを有するがポリエチレングリコール基を有しないポリグルタメート類である。そのようなポリマーの合成は、本出願人の国際公開第０３／１０４３０３号パンフレットに特に記載されている。
【０１５４】
・  ＰＡ７は、オクタデシルアミングラフトを有するポリアスパルテートである。このポリマーの合成は以下の通りである：
ステップ１：ポリサクシンイミドがＬ−アスパラギン酸を使用して「ポリマー」１９９７年、第３８巻、第１８号、第４７３３〜４７３６頁に記載されたプロトコルに類似するプロトコルに従って製造される。
【０１５５】
ステップ２：「ラングミュアー」２００１年、第１７巻、第７５０１頁に記載のプロトコルに類似するプロトコルに従って、ステアリルアミンでのアミノ分解次に残っているポリサクシンイミド基の加水分解。
【０１５６】
下記の表６は、製造されたアニオン性高分子電解質の特徴をまとめる。
【０１５７】
【表６】
2014515003.tif 000014
【０１５８】
カチオン性高分子電解質、ＰＣ２〜ＰＣ８の合成：
・  ＰＣ２は、ビタミンＥのグラフトを有するが、ポリエチレングリコール基は含まず、中性基を含まないポリグルタメートである。その合成は、実施例２において提案されたＰＣ１の合成に類似しており、本出願人の国際公開第２００８／１３５５６３号パンフレットに特に記載されている。
【０１５９】
・  ＰＣ６は、ビタミンＥグラフトを有し、ポリエチレングリコール基を有さず、ヒドロキシエチルアミノ−中性基を有するポリグルタメートである。その合成は、ＰＣ２の合成に類似しており、更にエタノールアミンのグラフト化の段階を含む。このグラフト化の段階は、本出願人の国際公開第２００６／０７９６１４号パンフレットに記載されている。
【０１６０】
・  ＰＣ７は、ビタミンＥグラフト及びポリエチレングリコール基を有するが中性基を有しないポリグルタメートである。このポリマーの合成は以下の通りである：
段階１：５％のビタミンＥ及び４％のポリエチレングリコールでグラフトされたポリグルタメートは実施例１のプロトコルに従って合成される。
段階２：段階１からの生成物がｐＨ＝３に酸性化され、次に凍結乾燥される。この凍結乾燥物１０ｇが１２５ｍＬのＮＭＰに８０℃において溶解される。得られる溶液は０℃に冷却されて、３．１５ｍＬのイソブチルクロロホルメート、次に２．７ｍＬのＮ−メチルモルホリンが逐次的に添加される。該混合物は０℃において１５分間撹拌される；乳状の懸濁物が形成するのが観察される。平行して、８．３６ｇのアルギニンアミド二塩酸塩が１５０ｍＬのＮＭＰに懸濁され、４．７３ｍＬのトリエチルアミンが添加される。得られる懸濁物は数分間２０℃において撹拌され、次に０℃まで冷却される。活性化されたポリマーの乳状懸濁物は、次にこのアルギニンアミド懸濁物に添加され、反応混合物は２時間０℃において次に２０℃において終夜撹拌される。２．４ｍＬの１ＮＨＣｌ溶液、次に２．５ｍＬの水の添加の後、反応混合物は１．２Ｌの水に一滴ずつ注がれる。得られた溶液は透析ろ過により精製され、濃縮される。
【０１６１】
Ｄ２ＯにおけるプロトンＮＭＲにより測定されたグラフトされたアルギニンアミドのパーセンテージは、８４％である。
【０１６２】
・  ＰＣ３及びＰＣ４は、ビタミンＥグラフトを有さず、ポリエチレングリコール基及びヒドロキシエチルアミノ中性基を有するポリグルタメートである。ＰＣ４の合成は以下の通りである：
ＤＰ１００のポリ（グルタミン酸）１０ｇが２００ｍＬのＮＭＰに８０℃において溶解される。得られた溶液は、０℃まで冷却され、そして１０．５ｍＬのイソブチルクロロホルメート、次に９ｍＬのＮ−メチルモルホリンが逐次的に添加される。混合物は１５分間、０℃において撹拌される。平行して、４．７５ｇのアルギニンアミド二塩酸塩が９４ｍＬのＮＭＰにおいて懸濁され、２．３ｍＬのトリエチルアミンが添加される。得られた懸濁物は、数分間２０℃において撹拌され、次に０℃まで冷却される。次に、末端アミンにより官能基化された質量２０００ｇ／モルのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（ＭＥＰＡ−２０Ｈ、ＮＯＦにより販売されている）、５．４６ｇの１０９ｍＬのＮＭＰにおける溶液、次にアルギニンアミド／トリエチルアミン懸濁物、そして３．２７ｇのエタノールアミン（ＥＡ）が活性化されたポリマーの乳状懸濁物に逐次的に添加される。反応混合物は０℃において終夜撹拌される。０．９３ｇのＥＡの添加の後、該反応混合物は、５時間２０℃において撹拌される。０．７７ｍＬの３５％ＨＣｌの溶液を、次に５０ｍＬの水を添加した後、反応混合物は５００ｍＬの水に一滴ずつ注がれ、１ＮのソーダでｐＨが７〜７．５に調節される。得られた溶液は透析ろ過により精製され、濃縮される。Ｄ２ＯにおけるプロトンＮＭＲにより測定されたグラフトされたＥＡ及びアルギニンアミドを有するＰＥＧ２，０００のパーセンテージは、それぞれ３．７０及び２５％である。
【０１６３】
ＰＣ３の合成は、適合された量の反応物と３０００ｇ／モルのポリエチレングルコールを使用するＰＣ４の合成と似ている。
【０１６４】
・ＰＣ５は、ビタミンＥグラフトはないが、ポリエチレングリコール基を有し、中性基を有しないポリグルタメートである。その合成は上で提案されたＰＣ３及びＰＣ４の合成とエタノールアミンのグラフト化を除いて似ている。エタノールアミンのグラフト化はＰＣ５の合成の場合、行われない。
【０１６５】
・ＰＣ８はビタミンＥグラフト及びポリエチレングリコール基はないがジヒドロキシプロピルアミノ−中性基は有するポリグルタメートである。このポリマーの合成は以下の通りである：
ＤＰ１００のポリ（グルタミン酸）（６２．８ｇ）が１２９３ｇのＮＭＰに８０℃において溶解される。得られた溶液は０℃まで冷却され、６９．６８ｇのイソブチルクロロホルメートが、次に５１．６ｇのＮ−メチルモルホリンが逐次的に添加される。混合物は１５分間、０℃において撹拌される。平行して、２６．３７ｇのアルギニンアミド二塩酸塩が５０１．９８ｇのＮＭＰにおいて懸濁され、３３．２ｇのアミノプロパンジオール（ＡＰＤ）、次に１０．７９ｇのトリエチルアミンが添加される。得られた懸濁物は、数分間２０℃において撹拌され、次に０℃まで冷却され、次に活性化されたポリマーの乳状懸濁物に添加される。反応混合物は０℃において６時間、撹拌される。次に７．９ｇのＡＰＤが添加され、次に該反応混合物は、０℃において終夜撹拌される。３５％ＨＣｌの溶液５２ｇを添加した後、反応混合物は５．４Ｌの水に一滴ずつ注がれ、ｐＨが７〜７．５に調節される。得られた溶液は透析ろ過により精製され、濃縮される。Ｄ２ＯにおけるプロトンＮＭＲにより測定されたグラフトされたＡＰＤ及びアルギニンアミドのパーセンテージは、それぞれ７２及び１８％である。
【０１６６】
・ＰＣ９はビタミンＥグラフトを有しないが、ポリエチレングリコール基及びポリエチレングリコール基及びポリエチレングリコール基を有し、中性基を有しないポリリシンである。このポリマーの合成は以下の通りである：
１．５ｇのポリ−Ｌ−リシンが１０ｍＬの１０ｍＭＨｅｐｅｓバッファー（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）に溶解され、ｐＨは０．１Ｎのソーダで８．１に調節される。
次に、０．６２８ｇのα−スクシンイミジルオキシグルタリル−ω−メトキシ、ポリオキシエチレン（Ｓｕｎｂｒｉｇｈｔ  ＭＥ−０５０ＧＳ）が添加され、ｐＨが再び８．１に調節される。反応混合物は環境温度において終夜撹拌される。
【０１６７】
反応混合物は透析ろ過により精製され、濃縮される。
【０１６８】
下記の表７は製造されたカチオン性ポリマーの特徴を示す。
【０１６９】
【表７】
2014515003.tif 000015
【０１７０】
実施例６
実施例５において製造されたアニオン性高分子電解質ＰＡ及びカチオン性高分子電解質ＰＣの混合物から得られる配合物
該アニオン性高分子電解質ＰＡは、濃度Ｃ１を有する溶液を得るために、ＮａＣｌの１０ｍＭ溶液において希釈される。
【０１７１】
該カチオン性高分子電解質ＰＣは、濃度Ｃ２を有する溶液を得るために、ＮａＣｌの１０ｍＭ溶液において希釈される。
【０１７２】
次に、該方法は、目標とされる最終混合物が過剰のアニオン電荷又は過剰のカチオン電荷を有するかによって添加の順序が異なる：
−  過剰のアニオン電荷を有する混合物が求められる場合（表８における試験ｅ３．１〜ｅ３．９）、質量ｍ１の、濃度Ｃ１におけるアニオン性高分子電解質ＰＡが穏やかな撹拌下、ビーカーに入れられ、次に質量ｍ２の、濃度Ｃ２におけるカチオン性高分子電解質ＰＣが添加される。
−  過剰のカチオン電荷を有する混合物が求められる場合（表８における試験ｅ３．１０）、質量ｍ２の、濃度Ｃ２におけるカチオン性高分子電解質ＰＣが穏やかな撹拌下、ビーカーに入れられ、次に質量ｍ１の、濃度Ｃ１におけるアニオン性高分子電解質ＰＡが添加される。
【０１７３】
下記の表８は、該混合物において使用された質量及び濃度並びにこれらの混合物の特徴をまとめる。
【０１７４】
【表８】
2014515003.tif 000016
【０１７５】
結果は、本発明に従うアニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質の混合物から５０ｎｍより小さいナノ粒子を得ることが可能であることを示す。
【０１７６】
実施例７
活性成分として組換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）を取り込んだ本発明の配合物
ｒｈＧＨは、まず、アニオン性高分子電解質ＰＡと混合され、このようにして得られたＰＡ／ｒｈＧＨ錯体は次にカチオン性高分子電解質と混合される。より正確には：
該アニオン性高分子電解質ＰＡはホスフェートバッファーにおいて２０ｍＭまで希釈され、４．３ｍｇ／ｇのｒｈＧＨ（Ｂｉｏｓｉｄｕｓ  Ｐ１６１）を含む溶液と混合されて、濃度Ｃ１のアニオン性高分子電解質ＰＡ及び濃度Ｃｐ１のｒｈＧＨタンパク質を有するＰＡ／ｒｈＧＨ混合物を得る。該混合物は、穏やかな撹拌下、１２時間環境温度において放置される。
【０１７７】
質量ｍ１のこのＰＡ／ｒｈＧＨ混合物が濃度Ｃ２における質量ｍ２のカチオン性高分子電解質に添加される。最終混合物は総ポリマー濃度Ｃ（実施例３において計算されている）及びタンパク質濃度Ｃｐ＝ｍ１Ｃｐ１／（ｍ１＋ｍ２）を有する。
【０１７８】
高分子電解質と結合されていない活性成分の濃度は、立体排除クロマトグラフィー（カラムＧ４，０００＋Ｇ２，０００  ＳＷＸＬ−１０分の１に希釈されたＰＢＳバッファー−フロー０．５ｍＬ／分）により最終混合物を分析することにより決定される。全ての場合において、結合されていないｒｈＧＨの溶出時間に対応するピークは、検出されない：従って、結合されていないｒｈＧＨのフラクションは＜１％である。
【０１７９】
下記の表９は、該混合物において使用された質量及び濃度並びにこの混合物の特徴を示す。
【０１８０】
【表９】
2014515003.tif 000017
【０１８１】
結果は、ｒｈＧＨタンパク質及び本発明に従う高分子電解質を取り込んだ、本発明に従う配合物は、５０ｎｍより小さいナノ粒子からなることを示す。
【０１８２】
実施例８
活性成分として組換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）を取り込み、２つの方法：超ろ過及び凍結乾燥により濃縮された本発明に従う配合物
実施例７の試験ｅ４．２（高分子電解質ＰＡ６及びＰＣ２を用いる場合）において記載された配合物のフラクションはベンチトップ凍結乾燥機（ＣＨＲＩＳＴ  Ａｌｐｈａ  ２−４  ＬＰ  ｐｌｕｓ）を使用して２４時間凍結乾燥される。次に、凍結乾燥された粉末は、水に分散されて、前の試験ｅ４．２における溶液より約２０倍濃縮された溶液を得る。均一なコロイド状溶液が５分未満内に得られる。
【０１８３】
配合物の別のフラクションは１０ｋＤａのカットオフを有する膜上での正面の超ろ過により約１０倍濃縮される。
【０１８４】
濃縮の前及び後の該溶液の特徴は下記の表１０に示される。
【０１８５】
【表１０】
2014515003.tif 000018
【０１８６】
結果は、本発明に従う配合物は粒子のサイズを変えずに容易に濃縮されることができることを示す。
【０１８７】
実施例９
サケのカルシトニン（ｓＣＴ）を活性成分として取り込んだ本発明に従う配合物
ｓＣＴはまず、アニオン性高分子電解質ＰＡと混合され、次に、このようにして得られたＰＡ／ｃＳＴ錯体はカチオン性高分子電解質ＰＣと混合される。より正確には：
該アニオン性高分子電解質ＰＡはホスフェートバッファの１０ｍＭ溶液において希釈され、１０ｍｇ／ｇのｓＣＴを含む溶液と混合されて（ポリペプチドラボラトリーズ  ＡＢ）、濃度Ｃ１のアニオン性高分子電解質ＰＡ及び濃度Ｃｐ１のタンパク質ｓＣＴを有するＰＡ／ｓＣＴ混合物を得る。該混合物は環境温度において１時間、磁気棒で撹拌される。
【０１８８】
次に、該方法は、目標とされる最終混合物が過剰のアニオン電荷又は過剰のカチオン電荷を有するかによって添加の順序が異なる：
−  過剰のアニオン電荷を有する混合物が求められる場合（下に与えられる表における試験ｅ５．１及びｅ５．２）、質量ｍ１の、前記混合物ＰＡ／ｓＣＴが穏やかな撹拌下、ビーカーに入れられ、次に質量ｍ２の、前もって濃度Ｃ２に希釈されたカチオン性高分子電解質ＰＣが該混合物に添加され；
−  過剰のカチオン電荷を有する混合物が求められる場合（下に与えられる表における試験ｅ５．３）、質量ｍ２の、前もって濃度Ｃ２に希釈されたカチオン性高分子電解質ＰＣが穏やかな撹拌下、ビーカーに入れられ、次に質量ｍ１の、前記混合物ＰＡ／ｓＣＴが該混合物に添加される。
【０１８９】
該最終混合物は、総ポリマー濃度Ｃ及びタンパク質濃度Ｃｐを有する。
【０１９０】
高分子電解質と結合されていない活性成分の濃度は、３０ｋＤａのカットオフを有する超フィルター上での超遠心分離による分離及びＨＰＬＣによるろ液の分析後に決定される。全ての場合において、それは厳密に５％未満である。
【０１９１】
この実施例にために使用されたアニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質の特徴は実施例５に記載されている。
【０１９２】
【表１１】
2014515003.tif 000019
【０１９３】
結果は、サケカルシトニン及び本発明に従う高分子電解質を取り込んだ、本発明に従う配合物は５０ｎｍより小さいナノ粒子からなることを示す。
【０１９４】
実施例１０
サケのカルシトニン（ｓＣＴ）を活性成分として取り込んだ本発明に従う配合物
ｓＣＴはまず、アニオン性高分子電解質ＰＡと混合され、次に、このようにして得られたＰＡ／ｃＳＴ錯体はカチオン性高分子電解質ＰＣと混合される。より正確には：
【０１９５】
該アニオン性高分子電解質ＰＡはＮａＣｌの１０ｍＭ溶液において希釈され、１０ｍｇ／ｇのｓＣＴを含む溶液（ポリペプチドラボラトリーズ  ＡＢ）と混合されて、濃度Ｃ１のアニオン性高分子電解質ＰＡ及び濃度Ｃｐ１のタンパク質ｓＣＴを有するＰＡ／ｓＣＴ混合物を得る。該混合物は環境温度において３０分間、穏やかに撹拌される。
【０１９６】
質量ｍ１の、前記のＰＡ／ｓＣＴ混合物が穏やかな撹拌下においてビーカーに入れられ、次に、前もって濃度Ｃ２に希釈された、質量ｍ２のカチオン性高分子電解質ＰＣが該混合物に添加される。
【０１９７】
最終混合物は、総ポリマー濃度Ｃ及びタンパク質濃度Ｃｐを有する。
【０１９８】
この実施例のために使用された該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質は、それぞれ、実施例５に記載されたＰＡ４及びＰＣ７である。
【０１９９】
【表１２】
2014515003.tif 000020
【０２００】
実施例１１
組換えヒトインスリン（ＩＮＳ）を活性成分として取り込んだ本発明に従う配合物
まずインスリンはアニオン性高分子電解質ＰＡと混合されて、次に、このようにして得られたＰＡ／ＩＮＳ錯体がカチオン性高分子電解質ＰＣと混合される。より正確には：
【０２０１】
ＩＮＳ（Ｂｉｏｃｏｎ）のストック溶液は以下のように製造される：
【０２０２】
０．３６ｇのＩＮＳが９ｇの蒸留水に溶解され、該溶液は２０分間、２５０ｒｐｍにおいて磁気棒で撹拌される。該溶液は塩酸の０．１Ｎ溶液２．６６ｇを添加することにより酸性化され、次に５００ｒｐｍにおいて１５分間、撹拌される。次に水酸化ナトリウムの０．１Ｎ溶液、３．９８ｇが５００ｒｐｍにおいて撹拌しながら添加され、次に１５分後に、３．９０ｇの蒸留水が添加されて、（インスリン粉末に存在する水のパーセンテージを考慮にいれて）１７．５４ｍｇ／ｇのＩＮＳの最終濃度を得る。
【０２０３】
該アニオン性高分子電解質ＰＡは塩化ナトリウムの１０ｍＭ溶液において希釈され、１７．５４ｍｇ／ｇのＩＮＳ（Ｂｉｏｃｏｎ）を含むインスリンストック溶液と混合されて、濃度Ｃ１のアニオン性高分子電解質ＰＡ及び濃度Ｃｐのタンパク質ＩＮＳを有するＰＡ／ｓＣＴ混合物を得る。該混合物は２０時間、環境温度において穏やかに撹拌される。
【０２０４】
ＮａＣｌの１０ｍＭ溶液で前もって濃度Ｃ２に希釈された、質量のｍ２のカチオン性高分子電解質が、撹拌下、ビーカーにおける質量ｍ１のこのＰＡ／ＩＮＳに添加される。最終混合物は、（前のように計算された）総ポリマー濃度Ｃ及び（前のように計算された）タンパク質の濃度Ｃｐを有する。
【０２０５】
高分子電解質と結合されていない活性成分の濃度は、５０ｋＤａのカットオフを有する超フィルター上での超遠心分離による分離及びＨＰＬＣによるろ液の分析の後に決定される。これらの条件下での結合されていない活性成分の濃度は約８％である。この実施例にために使用されたアニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質はそれぞれ、実施例５に記載されているＰＡ４及びＰＣ７である。
【０２０６】
【表１３】
2014515003.tif 000021
【０２０７】
結果は、組換えヒトインスリン及び本発明に従う高分子電解質を取り込んだ、本発明に従う配合物は５０ｎｍより小さいナノ粒子からなることを示す。
【０２０８】
実施例１２
エクセナチドを活性成分として取り込んだ本発明に従う配合物
まずエクセナチドはアニオン性高分子電解質ＰＡと混合されて、次に、このようにして得られたＰＡ／エクセナチド錯体がカチオン性高分子電解質ＰＣと混合される。より正確には：
【０２０９】
該アニオン性高分子電解質ＰＡは塩化ナトリウムの１０ｍＭ溶液において希釈され、１０ｍｇ／ｇのエクセナチドを含む溶液（Ａｓｓｉａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  ＬＴＤ）と混合されて、濃度Ｃ１のアニオン性高分子電解質ＰＡ及び濃度Ｃｐ１のエクセナチドを有するＰＡ／エクセナチド混合物を得る。該混合物は環境温度において３０分間、穏やかな撹拌下に維持される。
【０２１０】
ＮａＣｌの１０ｍＭ溶液において濃度Ｃ２に前もって希釈された、質量のｍ２のカチオン性高分子電解質ＰＣが次に、穏やかな撹拌下、ビーカーにおいて維持された質量ｍ１の前記の混合物ＰＡ／エクセナチドに添加される。
【０２１１】
最終混合物は、前のように計算された、総ポリマー濃度Ｃ及びタンパク質の濃度Ｃｐを有する。
【０２１２】
【表１４】
2014515003.tif 000022
【０２１３】
実施例１３
活性成分としてフルベストラントを取り込んだ本発明に従う配合物
まずフルベストランはアニオン性高分子電解質ＰＡと混合されて、次に、このようにして得られたＰＡ／フルベストラント錯体がカチオン性高分子電解質ＰＣと混合される。
【０２１４】
より正確には、該アニオン性高分子電解質ＰＡはＮａＣｌの１０ｍＭ溶液において希釈され、粉末の形のフルベストラント（ＳｃｉｍｏＰｈａｒｍ  台湾）と混合されて、濃度Ｃ１のアニオン性高分子電解質ＰＡ及び濃度Ｃｐのフルベストラントを有するＰＡ／フルベストラント混合物を得る。該混合物は３０℃において２４時間、穏やかな撹拌下に維持される。
【０２１５】
ＮａＣｌの１０ｍＭ溶液において濃度Ｃ２に前もって希釈された、質量のｍ２のカチオン性高分子電解質ＰＣが、穏やかな撹拌下において維持された、質量ｍ１の前記のＰＡ／フルベストラント混合物に添加される。
【０２１６】
最終混合物は、前のように計算された総ポリマー濃度Ｃ及び活性成分の濃度Ｃｐを有する。
【０２１７】
この実施例のために使用されたアニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質の特徴は実施例５に記載されている。
【０２１８】
【表１５】
2014515003.tif 000023
【０２１９】
実施例１４
本発明に従う配合物の粘度の測定
実施例３の試験ｅ１．７に記載された（高分子電解質ＰＡ１及びＰＣ１を使用する）配合物のフラクションがベンチトップ凍結乾燥機（ＣＨＲＩＳＴ  Ａｌｐｈａ  ２−４  ＬＰ  ｐｌｕｓ）を使用して凍結乾燥される。次に該凍結乾燥された粉末は水に分散されて、試験ｅ１．７における溶液より約１０倍濃縮された溶液を得る。５分未満内において、均一なコロイド状溶液が得られる。
【０２２０】
該粘度は、コーン及びプレートタイプの形状（４ｃｍ及び角度２°）を有する、強制された応力レオメーター（Ｇｅｍｉｎｉ，Ｂｏｈｌｉｎ）を使用して、１０秒−１のせん断速度、２０℃において測定される。
【０２２１】
【表１６】
2014515003.tif 000024
【０２２２】
結果は、本発明に従う配合物は、非経口ルート、特に皮下ルートによる注入のために十分に流動的であることを示す。
【手続補正書】
【提出日】平成25年9月19日(2013.9.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１の活性成分及び、ポリアミノ酸の直鎖の骨格を有し、かつ２，０００以下の重合度を有する、反対の極性の少なくとも２の高分子電解質から形成されるナノ粒子において：
該２つの高分子電解質の少なくとも１は疎水性側鎖基を有し；
該２つの高分子電解質の少なくとも１はポリアルキレングリコール側鎖基を有し；
該ナノ粒子は、１０〜１００ｎｍの範囲の平均直径を有し、かつポリアルキレングリコール：総ポリマーの質量比ＷＰＡＧが０．０５以上であるような量のポリアルキレングリコール基を含むことを特徴とする、上記ナノ粒子。
【請求項２】
第一の高分子電解質の溶液を反対の極性の第二の高分子電解質の溶液と混合することにより得られ、該第一及び第二の高分子電解質は、ポリアルキレングリコール：総ポリマーの質量比ＷＰＡＧが０．０５以上であるところのものであることを特徴とする、請求項１に記載のナノ粒子。
【請求項３】
使用される該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質が有する、カチオン性基の数：アニオン性基の数のモル比Ｚが、０．１〜２の間に含まれることを特徴とする、請求項１又は２に記載のナノ粒子。
【請求項４】
使用される該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質が有する、カチオン性基の数：アニオン性基の数のモル比Ｚが、０．４〜１．５の間に含まれることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか1項に記載のナノ粒子。
【請求項５】
ポリアルキレングリコール：総ポリマーの質量比ＷＰＡＧが０．０５〜０．７５の範囲であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項６】
ナノ粒子のサイズが１０〜７０ｎｍの範囲であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項７】
疎水性側鎖基を有する上記高分子電解質が、５〜８の範囲のｐＨを有する水性媒体に分散されるときに、自発的にナノ粒子を形成することができることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項８】
該アニオン性高分子電解質が、下記式（Ｉ）のもの又はその薬学的に許容される塩であることを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載のナノ粒子、
2014515003.tif 000029
ここで、
Ｒａは、水素原子、直鎖のＣ２〜Ｃ１０アシル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アシル基、ピログルタメート基又は以下で定義される疎水性基Ｇを表し；
Ｒｂは−ＮＨＲ５基又は、窒素により結合されかつそのカルボキシルは任意的に−ＮＨＲ５アルキルアミノ基又は−ＯＲ６アルコキシにより置換されていてもよいところの末端アミノ酸残基を表わし、ここで
Ｒ５は水素原子、直鎖のＣ１〜Ｃ１０アルキル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アルキル基、又はベンジル基を表し；
Ｒ６は、水素原子、直鎖のＣ１〜Ｃ１０アルキル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アルキル基、ベンジル基、又は基Ｇを表し；
Ｇは、オクチルオキシ−、ドデシルオキシ−、テトラデシルオキシ−、ヘキサデシルオキシ−、オクタデシルオキシ−、９−オクタデセニルオキシ−、トコフェリル−、及びコレステリル−から選択された疎水性基を表し；
ＰＡＧは、ポリアルキレングリコールを表わし、
ｓ１は中性ｐＨにおいてアニオン性である、非グラフト化グルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｐ１は、疎水性の基Ｇを有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｑ１は、ポリアルキレングリコール基を有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｐ１及びｑ１は任意的にゼロであってもよく、
重合度ＤＰ１＝（ｓ１＋ｐ１＋ｑ１）は２，０００以下であり、
上記一般式（Ｉ）のモノマーの鎖形成は、ランダム、モノブロック又はマルチブロックタイプであることができる。
【請求項９】
上記アニオン性高分子電解質が、以下の式（Ｉ´）のもの又はその薬学的に許容される塩であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載のナノ粒子、
2014515003.tif 000030
ここで、
Ｇ´は、オクチル−、ドデシル−、テトラデシル−、ヘキサデシル−、オクタデシル−、９−オクタデセニル−から選択される疎水性基を表し；
ｓ１＝（ｓ１´＋ｓ１´´）は、中性ｐＨにおいてアニオン性である非グラフト化アスパルテートモノマーの平均数に該当し、
ｐ１＝（ｐ１´＋ｐ１´´）は、疎水性基Ｇ´を有するアスパルテートモノマーの平均数に該当し、任意的にゼロであってもよく、
重合度ＤＰ１＝（ｓ１＋ｐ１）は２，０００以下であり；
上記一般式（Ｉ´）のモノマーの鎖形成は、ランダム、モノブロック又はマルチブロックタイプであることができる。
【請求項１０】
上記カチオン性高分子電解質が、以下の式（ＩＩ）のもの又はその薬学的に許容される塩であることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載のナノ粒子、
2014515003.tif 000031
ここで、
Ｒａは、水素原子、直鎖のＣ２〜Ｃ１０アシル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アシル基、ピログルタメート基又は以下で定義される疎水性基Ｇを表し；
Ｒｂは−ＮＨＲ５基又は、窒素により結合されかつそのカルボキシルは−ＮＨＲ５アルキルアミノ基又は−ＯＲ６アルコキシにより任意的に置換されていてもよいところの末端アミノ酸残基を表し、ここで
Ｒ５は水素原子、直鎖のＣ１〜Ｃ１０アルキル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アルキル基、又はベンジル基を表し；
Ｒ６は、水素原子、直鎖のＣ１〜Ｃ１０アルキル基、分岐状のＣ３〜Ｃ１０アルキル基、ベンジル基、又は基Ｇを表し；
Ｇは、オクチルオキシ−、ドデシルオキシ−、テトラデシルオキシ−、ヘキサデシルオキシ−、オクタデシルオキシ−、９−オクタデセニルオキシ−、トコフェリル−、及びコレステリル−から選択された疎水性基を表し；
ＰＡＧは、ポリアルキレングリコールを表わし、
Ｒ２は、カチオン性基を表し、
Ｒ３は、アミン官能基により結合されたヒドロキシエチルアミノ、アミン官能基により結合されたジヒドロキシプロピルアミノから選択された中性基を表し；
ｓ２は中性ｐＨにおいてアニオン性である、非グラフト化グルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｐ２は、疎水性基Ｇを有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｑ２は、ポリアルキレングリコール基を有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｒ２は、カチオン性基Ｒ２を有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｔ２は、中性基Ｒ３を有するグルタメートモノマーの平均数に該当し、
ｓ２、ｐ２、ｑ２及びｔ２は任意的にゼロであってもよく、かつ
重合度ＤＰ２＝（ｓ２＋ｐ２＋ｑ２＋ｒ２＋ｔ２）は２，０００以下であり、
上記一般式（ＩＩ）のモノマーの鎖形成は、ランダム、モノブロック又はマルチブロックタイプであることができる。
【請求項１１】
上記カチオン性高分子電解質が、以下の式（ＩＩ´）のもの又はその薬学的に許容される塩であることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載のナノ粒子、
2014515003.tif 000032
ここで、
Ｘ−は、対アニオンを表わし、
ＰＡＧは、ポリアルキレングリコールを表わし、
ｑ２は、ポリアルキレングリコール基を有するリシンモノマーの平均数に該当し、
ｒ２は中性ｐＨにおいてカチオン性である、非グラフト化リシンモノマーの平均数に該当し、
ｑ２は任意的にゼロであってもよく、そして
重合度ＤＰ２＝（ｑ２＋ｒ２）は２，０００以下であり、
上記一般式（ＩＩ´）のモノマーの鎖形成は、ランダム、モノブロック又はマルチブロックタイプであることができる。
【請求項１２】
該アニオン性高分子電解質及びカチオン性高分子電解質が、
該アニオン性高分子電解質における疎水性基のモル割合ｘＰ１は２〜２２％の範囲であり；
該アニオン性高分子電解質におけるポリアルキレングリコール基のモル割合ＸＰＡＧ１はゼロであり；
該カチオン性高分子電解質における疎水性基のモル割合ｘｐ２はゼロであり；かつ
該カチオン性高分子電解質におけるポリアルキレングリコール基のモル割合ＸＰＡＧ２は２〜１０％の範囲であるところのものであること、又は
モル割合ｘｐ１は２〜２２％の範囲であり；
モル割合ｘＰＡＧ１は２〜１０％の範囲であり；
モル割合ｘｐ２はゼロであり；かつ
モル割合ｘＰＡＧ２はゼロである
ところのものであること、又は
モル割合ｘｐ１は２〜２２％の範囲であり；
モル割合ｘＰＡＧ１は２〜１０％の範囲であり；
モル割合ｘｐ２は５〜２０％の範囲であり；かつ
モル割合ｘＰＡＧ２はゼロである
ところのものであること、又は
モル割合ｘｐ１は２〜２２％の範囲であり；
モル割合ｘＰＡＧ１はゼロであり；
モル割合ｘｐ２は５〜２０％の範囲であり；かつ
モル割合ｘＰＡＧ２は２〜１０％の範囲である
ところのものであること、又は
モル割合ｘｐ１は２〜２２％の範囲であり；
モル割合ｘＰＡＧ１は２〜１０％の範囲であり；
モル割合ｘｐ２は５〜２０％の範囲であり；かつ
モル割合ｘＰＡＧ２は２〜１０％の範囲である
ところのものであることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項１３】
少なくとも、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のナノ粒子を含むことを特徴とする組成物。
【請求項１４】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載のナノ粒子を製造する方法において、
（１）疎水性側鎖基を有する、電荷を帯びた状態の第一の高分子電解質のナノ粒子を含む水性溶液を用意すること、該ナノ粒子は活性成分と非共有結合的に結合されている；
（２）上記ナノ粒子を形成するように、上記溶液（１）を、該第一の高分子電解質の極性と反対の極性の少なくとも１の第二の高分子電解質と一緒にすること、
からなる段階を少なくとも含み、
該第一及び第二の高分子電解質の少なくとも１はポリアルキレングリコール側鎖基を有し、上記ポリアルキレングリコール基の量は、ポリアルキレングリコール：総ポリマーの質量比ＷＰＡＧが、０．０５以上であるような量であり、
該第一及び第二の高分子電解質は、ポリアミノ酸の直鎖の骨格を有し、かつ２，０００以下の重合度を有することを特徴とする、上記製造方法。
【国際調査報告】
2014515003.tif 000033
2014515003.tif 000034
2014515003.tif 000035
2014515003.tif 000036
2014515003.tif 000037
2014515003.tif 000038