(57)【要約】  ヒト対象の視覚パフォーマンスの改善のための経口消費用の栄養補助食品又は食品添加物として使用するための、メソ−ゼアキサンチンを含有する組成物を開示する。
2014524914.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト対象の視覚パフォーマンスを改善するための経口消費用の栄養補助食品又は食品添加物として使用するための、ＭＺを含有する組成物。
【請求項２】
更にルテイン又はゼアキサンチンを含有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ルテイン及びゼアキサンチンを含有する、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
単位剤形にある、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
各用量が少なくとも０．１ｍｇのＭＺを含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
各用量が少なくとも１００ｍｇのＭＺを含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
更に１種又は複数種のビタミン及び／又はミネラルを含有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
ＭＺとルテインとゼアキサンチンとの比が、約１０：１０：２である、請求項３に記載の組成物。
【請求項９】
更に野菜油及び／若しくは魚油、並びに／又はω３脂肪酸を含有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
更に以下の任意の１つ又は複数：ｐＨ調整剤；固化防止剤；抗酸化剤；着色料；色保持剤；乳化剤；香料；風味増強剤；保存剤；安定剤；甘味剤；増粘剤を含有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
ＭＺを含む餌を給飼された雌鳥から得られた卵の形態にある、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記対象の視覚パフォーマンスが、以下の１つ又は複数：コントラスト感度；視力；及びグレア障害において改善される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、３Ｃｄｍ−２を超える照明レベルを有する明所視条件内での対象の前記視覚パフォーマンスを改善するためである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。 
【請求項１４】
前記組成物が、正常レベルの黄斑色素を有する対象の前記視覚パフォーマンスを改善するためである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、加齢黄斑変性を有しない対象の前記視覚パフォーマンスを改善するためである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記対象が、非定型「中心凹み」黄斑色素分布を有する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
改善を必要とするヒト対象の視覚パフォーマンスの改善方法であって、前記方法が、有効量の請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項１８】
前記対象が、前記組成物を少なくとも週１に回消費する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記対象が、前記組成物を少なくとも週に３回消費する、請求項１７又は１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記対象が、前記組成物を毎日消費する、請求項１７〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記対象が、前記組成物を、少なくとも８週間に亘って所望の頻度で消費する、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記対象が、前記組成物を、少なくとも３ヶ月間に亘って消費する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記対象が、前記組成物を、少なくとも６ヶ月間に亘って消費する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記方法の実行が、コントラスト感度、最高補正視力、及びグレア障害のうちの１つ又は複数の改善をもたらす、請求項１７〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記方法の実行が、明所視条件内での前記対象の視覚パフォーマンスの改善をもたらす、請求項１７〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記方法の実行が、正常レベルの黄斑色素を有する対象の視覚パフォーマンスの改善をもたらす、請求項１７〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記方法の実行が、加齢黄斑変性を有しない対象の視覚パフォーマンスの改善をもたらす、請求項１７〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記方法の実行が、非定型「中心凹み」黄斑色素分布を有する対象の視覚パフォーマンスの改善をもたらす、請求項１７〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
ヒト消費用の組成物の製造方法であって、前記組成物が、視覚パフォーマンスを改善する目的のためにヒト対象によって消費され、前記方法が、有効量のＭＺを許容可能な食物希釈剤、賦形剤又は担体と混合するステップを含む、方法。
【請求項３０】
更に前記組成物を、好ましくは単位剤形で、十分な用量、頻度及び継続期間での前記組成物の消費のための指示書と共にパッケージ内に包装して、視覚パフォーマンスの改善を達成するステップを含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ヒト対象における視覚パフォーマンスを改善する医薬品の製造における、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項３２】
実質的に前述されているような、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト対象における視覚パフォーマンスを改善するための組成物、及びこの組成物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
黄斑として既知の中心網膜は、色及び微細な視覚の役割を担っている。２種の食物カロテノイド、ルテイン（Ｌ）及びゼアキサンチン（Ｚ）、並びに一般に非食物カロテノイド、メソ−ゼアキサンチン（ＭＺ）から構成される色素は、黄斑に蓄積し、この蓄積された色素は黄斑色素（ＭＰ）として既知である。ＭＰは、青色光フィルター及び強力な抗酸化剤であり、従って現在西洋諸国で視力障害登録（ｂｌｉｎｄ  ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ）の最も一般的な原因である加齢黄斑変性（ＡＭＤ）から保護すると考えられている。様々な科学者達が、黄斑色素が視覚パフォーマンス（ＶＰ）を向上させ得ることを提唱しているが、そのような仮説を支持する、説得力のある実験的証拠のいずれも存在しないように思われる。
【０００３】
ＭＺ含有組成物は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）の処置に有用であるとして開示されており、例えば米国特許第６，３２９，４３２号明細書を参照されたい。Ｌ、Ｚ及びＭＺの各々を含有する栄養補助剤は既知であり、ＡＭＤなどの眼疾患を処置及び／又は予防する目的を意図して販売されている。そのような栄養補助剤の一例は、商標ＭａｃｕＳｈｉｅｌｄ（登録商標）の下で販売され、３種のＭＰカロテノイドＬ、Ｚ及びＭＺを、用量当たり各々１０ｍｇ、２ｍｇ及び１０ｍｇの量で含んでいる。
【０００４】
国際公開第０３／０６３８４８号パンフレットは、暗闇条件下での対象の視覚パフォーマンスを改善するための組成物の製造用のルテイン、ゼアキサンチン、メソゼアキサンチンまたはこれらの混合物などの化合物の使用を開示している。しかしながら、この文献は、主張する使用を支持する実験的証拠又は実験データのいずれも含まない点で、幾分普通ではない。従って当業者は、この開示に関して多少懐疑的であり、勿論この文献から、成功に対するいずれの期待も引き出し得ないであろう。
【０００５】
欧州特許第１９２０７１１号明細書は、事実上、対象の眼内に存在する黄斑色素（ルテイン、ゼアキサンチン又はメソゼアキサンチンなど）の量を測定又は決定（即ち、黄斑色素光学密度、ＭＰＯＤを測定）することを含む、視覚パフォーマンスを評価する方法を開示している。ＭＰＯＤのレベルが低い場合、この文献は、視覚パフォーマンスの改善に繋がると主張されているルテイン及び／又はゼアキサンチンを含有する組成物を投与することを示唆している。しかしながら、この文献は、黄斑色素のレベルの改善が視覚パフォーマンスの改善を生じ得ることを示す、いずれの実際の実験データも開示していない。従って当業者は、再度、この開示を幾分かの慎重さをもって扱い、この文献から成功に対するいずれの期待も引き出し得ないであろう。 
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、ルテイン単独を含む栄養補助食品の消費が、網膜の中心部分内に異常に低い濃度のＭＰを有する対象のＭＰ上に殆ど効果を有しないことを見出した。対照的に、ＭＺ単独を含む栄養補助食品の消費は、網膜の中心部分内のＭＰレベルを実質的に正常に戻すことができるが、中心部分の外部のＭＰレベル上に殆ど効果を有しない。比較的大量のＭＺを含み、またＺ及びＬも含む栄養補助剤の組み合わせ消費により、網膜の中心領域内のＭＰレベルが正常化するだけでなく、網膜の中心領域の外部のＭＰレベルも増大され得る。
【０００７】
本目的上、網膜の「中心領域」とは、光干渉断層法（ＯＣＴ）及び／又は眼底撮影法により測定して、０．２５°以下の偏心度を有する、網膜の中心部分を意味する。 
【０００８】
第一の態様において、本発明は、ヒト対象の視覚パフォーマンスを改善する、経口消費用の栄養補助食品、食品添加物などとして使用される、ＭＺを含有する組成物を提供する。好ましい実施形態において、対象は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を有しない対象である。
【０００９】
本明細書の目的上、対象は、ＡＲＥＤＳ（年齢関連の眼疾患試験）１１−ステップ黄斑障害類別システム（Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ９８，１１２８−１１３４）で１〜３のスコアを有する場合、ＡＭＤを有しないと見なされる。
【００１０】
第二の態様において、本発明は、改善を必要とするヒト対象の視覚パフォーマンスを改善する方法を提供し、この方法は、ＭＺを含有する有効量の組成物を、対象に投与するステップを含む。下記に説明するように、組成物は、ルテイン及び／又はゼアキサンチンも含有することが好ましい。組成物は、一般に、栄養補助食品又は食品添加物として、経口的に投与されることが好ましい。好ましい実施形態では、本方法は、ＡＭＤを有しない対象上で行われる。
【００１１】
特定の対象のための有効量の組成物は、本明細書に提供する指導に鑑みて、発明要件ではない日常的な試行錯誤によって容易に決定することができる。最初に低い用量を付与し、視覚パフォーマンスの改善が検出されるまで投与量を増大させてもよい。対象の視覚パフォーマンスは、下記に詳細に述べるように、多数の都合のよい方法のいずれかで試験することができる。
【００１２】
本目的おいて、ＭＺは、図１に示す構造を有する化合物（トランス、３Ｒ，３’Ｓメソ）−ゼアキサンチンを指すものと理解される。用語「ＭＺ」には、ＭＺのエステル、例えば酢酸エステル、ラウリン酸エステル、ミリスチン酸エステル、パルミチン酸エステル、リノール酸エステル、リノレン酸エステル、及びアラキドン酸エステル、並びにω３脂肪酸とのエステルも含まれる。
【００１３】
ヒト対象は、網膜医による試験後、以下の特徴：軟性ドルーゼン、黄斑の高い及び／若しくは低い色素変化（初期ＡＭＤ）、又は地図状萎縮若しくは脈絡膜血管新生（進行ＡＭＤ）のいずれかを含む、ＡＭＤに通常関連する徴候が存在しない場合、ＡＭＤを経験していないと見なされる。
【００１４】
組成物は、ＭＺを少なくとも０．００１％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗまでの濃度で含有することが好ましい。一実施形態において、ＭＺの好ましい濃度は、３〜１０％ｗ／ｗの範囲内であってもよい。しかしながら、当業者は、本発明の組成物中のＭＺの正確な濃度は重要ではないことを認識するであろう：対象の視覚パフォーマンス上の有益な効果は、より低い濃度のＭＺを含有するより大きい用量の組成物、又はその逆を消費することにより得ることができる。正常なヒト成人対象に消費されるべき、典型的な効果的なＭＺの平均一日用量は、一般に、０．１ｍｇ〜１００ｍｇ／日の範囲内、より都合よくは１〜５０ｍｇ／日の範囲内、好ましくは５〜２５ｍｇ／日の範囲内である。
【００１５】
組成物は、都合よくは、例えば錠剤、カプセル剤などの単位剤形にあってもよい。組成物は、当業者に既知の種類のホイルブリスター内に包装されるのが都合よいが、必ずしもそうではない。一日に１つ又は２つの用量が摂取され、それに従って用量中のＭＺの量が調整されることが望ましい。
【００１６】
本発明の組成物は、ＭＺのみではく、ルテイン及び／又はゼアキサンチンも含有することが望ましい。組成物は、集合的に黄斑カロテノイドと称され得るＭＺ、ルテイン及びゼアキサンチンを含有することが最も好ましい。ＭＺは、ルテイン又はゼアキサンチンよりも高い濃度又は同一の濃度で組成物中に存在するのが都合よいが、必ずしもそうではないでこともある。組成物中のＭＺ又はルテインのいずれかの百分率は、１０％〜９０％（配合物中に存在する黄斑カロテノイド色素の）の範囲であってもよい。ゼアキサンチンの百分率は一般に、５〜４５％（配合物中の黄斑カロテノイド色素の）の範囲であってもよい。特に好ましい組成物は、ＭＺ：ルテイン：ゼアキサンチンの比が１０：１０：２（即ち４５％、４５％、１０％）である。
【００１７】
３種の黄斑カロテノイドは、単一の配合物中にて組み合わされ、又は好ましくはそのようなものとして製造され得る。本発明の組成物は、錠剤、カプセル剤、ゲル、液剤、散剤などを含む、ヒト対象による経口消費に好適な任意の配合物であってもよい。黄斑カロテノイドは、例えば配合物中に包含される前にマイクロカプセルとして顆粒化されてもよい。組成物は、都合よくは従来の希釈剤、特にヒマワリ、ベニバナ、トウモロコシ油及び菜種油などの植物油、当業者に周知である賦形剤、増量剤などを含有し得る。そのような物質には、ステアリン酸カルシウム及び／若しくはマグネシウム、澱粉又は化工澱粉が挙げられる。
【００１８】
組成物中には、以下の非排他的なリストの任意の１つ又は複数を含む他の従来の配合剤が存在してもよい：ｐＨ調整剤；固化防止剤（例えばアルミノケイ酸ナトリウム、炭酸カルシウム又はマグネシウム、ケイ酸カルシウム、フェロシアン化ナトリウム又はカリウム）、抗酸化剤（例えばビタミンＥ、ビタミンＣ、ポリフェノール）、着色料（例えばＦＤ＆Ｃ  Ｂｌｕｅ  Ｎｏ．１、Ｂｌｕｅ  Ｎｏ．２、Ｇｒｅｅｎ  Ｎｏ．３、Ｒｅｄ  Ｎｏ．４０、Ｒｅｄ  Ｎｏ．３、Ｙｅｌｌｏｗ  Ｎｏ．５及びＹｅｌｌｏｗ  Ｎｏ．６などの人工着色料；並びにカラメル、アナトー、コチニール、ベタニン、ウコン、サフラン、パプリカなどの天然着色料）；色保持剤；乳化剤；香料；風味増強剤；保存剤；安定剤；甘味剤及び増粘剤。
【００１９】
ＭＺを含有する上述した組成物は、必須ビタミン及びミネラルを含む製剤；例えば人が必要とするビタミン及びミネラルの全ＲＤＡｓを含む一日一つの（ｏｎｅ  ａ  ｄａｙ）錠剤／カプセル剤に添加され；若しくはビタミン及びミネラルで強化された食品に添加され；又はω３脂肪酸と共に添加されてもよい。
【００２０】
ＭＺを含む黄斑カロテノイドを雌鳥に給飼してもよく、この雌鳥からの卵は、ヒト消費用の卓越したＭＺ源を提供することができる。
【００２１】
視覚パフォーマンス
視覚パフォーマンスは状況、状態又はパラメータであり、異常又は疾病ではない。それ故、根底にある網膜疾病又は黄斑疾病のいずれも存在しない正常な対象に値の範囲が存在する。しかしながら、他のヒト状態の全てと同様、ＶＰの改善は、有益かつ望ましいと考えられる。
【００２２】
当業者に既知の多数の異なる「視覚パフォーマンス」の尺度が存在する。
本目的において、「視覚パフォーマンス」の改善とは、対象において以下のうちの１つ又は複数の検出可能な改善を生み出すことを意味する：コントラスト感度；視力、好ましくは最高補正視力；グレア障害；不快グレア；眼の迷光；光ストレス回復；及びＳ錐体感度。本発明の組成物の消費により引き起こされる、視覚パフォーマンスの改善は、コントラスト感度、最高補正視力、又はグレア障害のうちの１つ又は複数の改善を含むことが好ましい。
【００２３】
好ましくは、視覚パフォーマンスのパラメータの組成物の消費、より好ましくは前述した視覚パフォーマンスパラメータのうちの、２つ以上、最も好ましくは３つ以上の改善。
【００２４】
上記に列挙した視覚パフォーマンスの様々なパラメータは、下記により詳細に記載される。
【００２５】
（ｉ）コントラスト感度機能
コントラストとは、物体（又は像内におけるその表現）を他の物体及び背景から区別可能にする視覚的特性の違いである。実際の世界の視覚において、コントラストは、同じ視野内の物体と他の物体との色及び明るさにおける相違から決定される。コントラスト感度は、コントラストの変化に対する対象の感度の尺度であり；標的をその背景から区別されるものとして正確に検出するのに、どのくらいのコントラストが必要かの尺度である。   
【００２６】
標的のサイズ（空間周波数）及び背景の輝度を変更することにより、コントラスト感度機能を試験することが可能である。コントラスト感度機能は、視力の最も重要な決定因子がコントラスト、サイズ及び輝度である現実世界の視力を高く反映する。コントラスト感度機能は、正弦波格子テスト（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ａｃｕｉｔｙ  Ｃｏｎｔｒａｓｔ  Ｔｅｓｔ）（ＦＡＣＴ）を用いて評価することができ、この試験は、Ｌｏｕｇｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓ．５０，１２４９−１２５６）に開示されているように、様々な空間周波数設定においてコントラスト感度を試験するように設計されている。文字コントラスト感度は、市販の「Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｃｈａｒｔ」を使用して測定することができる。
【００２７】
（ｉｉ）視力
視力は、視覚パフォーマンスを評価する単純かつ直感的な方法である。視力は、眼鏡の必要性に直接関連するため、視覚の有用な尺度である（即ち、個人が遠視又は近視の場合、眼鏡レンズの紹介により、一般に視力の予測可能な改善が引き起こされる）。また、視力は眼疾患により損なわれる傾向があり、従って異常な視力は、異常性が発生している徴候であり得る。
【００２８】
その広範な使用及び人気にも係わらず、視力は視覚評価の最良の技術ではなく、これは（ａ）視力が、明るく点灯された高コントラストの試験環境とは異なる条件下で高く関連する傾向を有さず、また（ｂ）視力が、スペクトルの高い空間周波数（即ち、小さい文字サイズ）末端におけるパフォーマンスのみを評価するためである。
【００２９】
一般に、最高補正視力（「ＢＣＶＡ」）は、対象の視覚が補正レンズによって可能な限り高いレベルに補正された後に、高コントラスト（１００％に近い、即ち、白色背景上の黒色文字）文字チャートを使用して評価される。対象の任務は、この対象が認識できる、可能な限り小さい文字サイズを判読することである。視覚パフォーマンスは、標準的表記法（例えばＳｎｅｌｌｅｎ表記法；２０／２０又は６／６視力は、正常なヒト視力として認められる）を使用して定量化される。ＢＣＶＡの改善は、一般に、視力における利益を暗示する。
【００３０】
（ｉｉｉ）グレア障害
グレア障害は、網膜像コントラストの損失を一般に原因とする視覚パフォーマンスの悪化を記述するのに使用される用語である。グレア障害は、多くの場合、例えば表面光反射、又は自動車のヘッドランプなどの明るい光源により生じ、一般に眼内の前方光散乱の増加の結果である。新しいバイキセノン高強度ディスチャージ（「ＨＩＤ」）ヘッドランプは、より多くの「青色」光を含み、より古いヘッド光源と比較して、更なるグレア障害の原因であると度々考えられている。
【００３１】
このことは、黄斑色素の光濾過特性により、黄斑色素研究に特に重要である。黄斑色素は、短波長（青色）光フィルターとして機能する。眼内前方光散乱は短波長（青色）光が支配的であるため、黄斑色素の受容体前及び中心位置は、視覚パフォーマンスをグレアに関して最適化することを促進する。
【００３２】
グレア障害は、Ｌｏｕｇｈｍａｎ  ｅｔ．ａｌ．，２０１０  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓ．５０，１２４９−１２５６に開示されている正弦波格子テスト（ＦＡＣＴ）を用いて評価することができる。
【００３３】
（ｉｖ）不快グレア
不快グレアは、明るい光源から目を背ける本能的な願望、又は課題を見ることの困難さをもたらす。不快グレアは、例えば明るい日光下での雪原上など、全体的な照明が明るすぎる場合に経験する感覚を指す。
【００３４】
黄斑色素は、（ａ）この色素が、最も多くのエネルギーを含む青色成分を濾過し；従ってより少量の光及びより低いエネルギーが光受容器に到達してパフォーマンスに影響を与えるために、また（ｂ）黄斑色素は二色性特性も有し、これはこの色素が平面偏光を濾過する能力を有することを意味するため、不快グレアの効果を減少させる能力を有する。平面偏光は、表面（例えば雪で覆われた地表、水など）から眼内に反射された光である。平面偏光は一方向性であるため、エネルギーが集中され、従って増大された効果を視覚上に有する。このことが、スキーヤー、釣り人などがそのような不快グレアを低減するために偏光サングラスを着用する理由である。
【００３５】
不快グレアは、Ｗｅｎｚｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００６  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓ．４６，４６１５−４６２２に開示されている不快度評価スケールを使用して評価される。
【００３６】
（ｖ）眼の迷光
眼の迷光は、実験環境内で長年試験された後の、診療の比較的新しいパラメータである。眼の迷光は、眼媒質により散乱された入射光の一部に関係し、網膜上での正常な像形成に参加しない。代わりに、この光は、網膜像全体に亘って、多かれ少なかれ均質の靄を形成する。数個の病態が網膜迷光を相当増大させることが既知であり、それによりコントラスト感度の損失、減能グレア、及び光ぼけなどの症状がもたらされる場合がある。このことは患者の日常生活における視覚の質、例えば夜間の運転中、及び光源に対して人を認識すること、の視覚の質を低下させるが、眼科試験中に測定して、視力上に非常に僅かな効果を有するのみである。
【００３７】
黄斑色素は、支配的な短波長散乱成分を吸収するため、眼の迷光の量を有意に低減する能力を有し、従って特にグレアの環境下での視覚パフォーマンスを更に改善する。
【００３８】
眼の迷光は、ｖａｎ  Ｂｒｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １１８，９４５−９５３に開示されているＯｃｕｌｕｓ  Ｃ−Ｑｕａｎｔを使用して評価される。
【００３９】
（ｖｉ）光ストレス回復
光ストレス回復試験は、強力な光源に対する適用後に、視覚機能を回復する時間によって視覚パフォーマンスを評価する方法である。この試験は、視覚色素のかなりの部分を漂白するのに十分明るい光源に黄斑を暴露することを含む。正常な網膜機能及び感度への回復は、視覚色素の再生に依存する。試験は基本的に、黄斑機能の間接的評価を提供する。
【００４０】
光ストレス回復は、Ｌｏｕｇｈｍａｎ  ｅｔ．ａｌ．，２０１０  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓ．５０，１２４９  −１２５６に開示されているハンフリー視野計（Ｈｕｍｐｈｅｒｅｙ  Ｐｅｒｉｍｅｔｅｒ）を使用して黄斑自動化光ストレス試験により評価される。
【００４１】
（ｖｉｉ）Ｓ錐体感度
Ｓ錐体は、「青色」感受性錐体であり、即ちそれらのピーク感度は短波長に対するものである。一般に、光受容器に突き当たる青色光の量を黄斑色素が最小限にするため、高いレベルの黄斑色素を有する人は、低いＳ錐体感度を示すことが予想される。Ｓ錐体感度試験を光ストレス試験と組み合わせることにより、グレアにより最も影響を受けるこれらの錐体の実際の感度に対する、黄斑色素の直接的効果の情報を提供することができる。
【００４２】
Ｓ錐体感度は、（Ｄａｖｉｓｏｎ  ｅｔ．ａｌ．，Ｏｐｔｏｍ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２０１１  ｖｏｌ．８８）に記載されているＨｕｍｐｈｒｅｙ  Ｐｅｒｉｍｅｔｅｒ上の短波長自動化視野測定プログラム（ＳＷＡＰ）を使用して評価される。
【００４３】
（ｖｉｉｉ）アンケートによるＶＰの評価
視覚パフォーマンスの改善を試験する別の方法は、対象自身による対象の視覚パフォーマンスの評価を点数化するアンケートの使用である。従って、本発明の好ましい実施形態において、視覚パフォーマンスの検出可能な改善は、組成物消費の開始前に完了した対照評価アンケートと比較した、組成物を数週間又は数ヶ月間の好適な期間消費した後の、対象の評価アンケートにおけるスコアの増大により決定される。
【００４４】
好適なアンケートは、Ｃｈａｒａｌａｍｐｉｄｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２０１１（５月９日、印刷前の電子出版物）に開示されており、このアンケートには、自覚的な視覚パフォーマンス改善を評価するように設計された３０部の未検証の「健常者の視覚機能（Ｖｉｓｕａｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｎｏｒｍａｌｓ）」アンケート（ＶＦＮｑ３０）が記載されている。この設計は、部分的に、以前検証された視覚活性アンケート（Ｓｌｏａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｔｈｅ  Ｖｉｓｕａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ：Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  ａｎ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ａｓｓｅｓｓｉｎｇ  ｐｒｏｂｌｅｍｓ  ｉｎ  ｅｖｅｒｙｄａｙ  ｖｉｓｕａｌ  ｔａｓｋｓ．Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｄｉｇｅｓｔ，Ｎｏｎ−ｉｎｖａｓｉｖｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｔｏｐｉｃａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １９９２）に基づいていたが、正常な、若い、健康な集団サンプルに適するように適合された。このアンケートにより、対象は、３つの別個の測定基準を用いて対象の視覚パフォーマンスを定量化することができる：対象が特定の日常生活状況での対象の視覚パフォーマンスを評価することを要求される状況分析（ＳＡ）；対象が該対象の知覚した視覚パフォーマンスを、対象の同僚／家族／友人の知覚した視覚パフォーマンスと比較することを要求される比較分析（ＣＡ）；対象が該対象の知覚した視覚の質の全体的な見積もりを提供することを要求される対象満足度スコア（ＳＳＳ）。上記の３つの測定基準の各々を計算して、対象の視覚の５つの異なる機能的局面に関するパフォーマンススコア：視力／空間視覚：グレア障害；光／闇適応；日常の視覚的任務；及び色彩弁別を与える。
【００４５】
ＶＰの改善を達成する時間
本発明の組成物の消費直後に、対象の視覚パフォーマンスに任意の測定可能な、識別可能な、又は検出可能な改善が生じることは明らかに期待されない。視覚パフォーマンスの測定可能な改善を生み出すのに必要な栄養素補充の期間は、栄養素補充を開始する前の、対象の黄斑カロテノイドの平均一日用量サイズ、対象の全身の健康などを含む、数個の因子に依存する。一般に、１つ又は複数の視覚パフォーマンスパラメータを測定して対象の任意の改善を試験する前に、本発明の組成物を用いた栄養素補充を少なくとも８週間、より好ましくは少なくとも３又は６ヶ月必要とすることが予想される。
【００４６】
対象は、本発明の活性組成物を、少なくとも週１回、より通常には少なくとも週３回、好ましくは毎日消費する必要があり得る。
【００４７】
以下、本発明を例示的な実施形態により、及び付随する図面を参照して、更に記載する。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】ルテイン、ゼアキサンチン及びＭＺに関する構造式の概略図である。
【図２】正常な対象及びＡＭＤ対象の混合のグループにおける中心黄斑色素ＯＤ（任意単位）に対する補正視力のグラフである。
【図３】様々な黄斑カロテノイド組成物を消費した対象に関する、時間に対する黄斑色素ＯＤ（０．２５°偏心度での）のグラフである。
【図４】「中心凹み」（即ち、黄斑の中心内のより低いレベルの黄斑色素）を有する非定型ＭＰＯＤプロファイルを有することが見出された特定の対象に関する、様々な偏心度での黄斑色素ＯＤ測定値を示すグラフである。
【図５】３つの異なる黄斑カロテノイド配合物の１つを受容した対象に関する、時間に対するＭＰＯＤ（０．２５°偏心度での）のグラフである。
【図６】３つの異なる黄斑カロテノイド配合物の１つを受容した対象に関する、時間に対するＭＰＯＤ（０．５０°偏心度での）のグラフである。
【図７】３つの異なる黄斑カロテノイド配合物のうちの１つによる８週間の栄養素補充の前後の、グループ１に関する網膜偏心度（実施例２参照）に対する平均ＭＰＯＤのグラフである。
【図８】３つの異なる黄斑カロテノイド配合物のうちの１つによる８週間の栄養素補充の前後の、グループ２に関する網膜偏心度（実施例２参照）に対する平均ＭＰＯＤのグラフである。
【図９】３つの異なる黄斑カロテノイド配合物のうちの１つによる８週間の栄養素補充の前後の、グループ３に関する網膜偏心度（実施例２参照）に対する平均ＭＰＯＤのグラフである。
【図１０】１０ｍｇのＬ、１０ｍｇのＭＺ及び１０ｍｇのＺの一日用量による３ヶ月の補給の前（円記号）又は後（四角記号）の、網膜偏心度（８人の対象の平均；実施例５参照）に対するＭＰＯＤのグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
好ましい実施形態
本発明の一実施形態において、組成物は、黄斑の中心部分内の黄斑色素量が欠乏している対象により消費される。説明のために、本発明者らは、ＡＭＤ（本明細書に定義した）を経験していない可能性があるが、Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒ（商標）を使用した、カスタマイズされた異色交照測光法（ｃＨＦＰ）を用いることにより決定して、黄斑の中心内の黄斑色素のレベルが統計的に有意に低い割合の集団が一般に存在することを見出した。これらの対象は、「中心凹み（ｃｅｎｔｒａｌ  ｄｉｐ）」と称される非定型黄斑色素分布を有するとして説明される。この技術を用いて、ＭＰは、ＨＦＰによって心理物理学的に測定される。ＨＦＰは、ＭＰが青色光を吸収する事実に基づくものである。対象は、試験領域内の標的を観察するように求められ、該領域は、青色（４６０ｎｍ）及び緑色（５５０ｎｍ）の間で逆相矩形波において交互に入れ替わり、即ち点滅する。対象はゼロ点滅（ｎｕｌｌ  ｆｌｉｃｋｅｒ）を達成するように、換言すれば、標的が不動となるまで、青色光の輝度を調整する必要がある。中心窩にてゼロ点滅を達成するのに要する青色光の量の比を傍中心窩（ＭＰが０と推定される）にて要するその比と比較し、その対数は光学密度として既知である。Ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒを使用して、ＭＰは、黄斑全域において５つの地点；０．２５°、０．５°、１°、１．７５°及び７°にて測定することができる。ＨＦＰの原理は、各標的に関して同一のままである。中心窩外部の網膜偏心度、即ち０．５°、１°、１．７５°及び７°の場合、凝視点は、点滅ディスクから所望の角距離に配置される。各地点にて３つの測定値をとり、平均を計算する。ＨＦＰ設定における誤差を最小限にするために、各対象に関する、臨界点滅周波数（ＣＦＦ）としても既知の点滅速度を最適化するよう注意する。ＣＦＦは、対象が５５０ｎｍにて０．５°標的における点滅をもはや知覚できない周波数である。ＣＦＦは、融合から点滅（又は点滅から融合）への変化を報告するまで、点滅周波数が漸進的に減少（又は増加）する極限法により決定された。非定型黄斑色素分布（「中心凹み」）を有する対象は、０．２５°偏心度でのＭＰＯＤ以上の、０．５°偏心度でのＭＰＯＤを有する。
【００５０】
別の実施形態では、組成物は、統計的に正常な黄斑色素のレベルを有する対象により消費される。
【００５１】
第三の態様において、本発明は、視覚パフォーマンスを改善する目的でヒト対象により消費される組成物である、ヒト消費用の組成物の製造方法を提供し、この方法は、有効量のＭＺを、許容可能な食物希釈剤、賦形剤又は担体と混合するステップを含む。本方法は更に、ルテイン及び／又はゼアキサンチンを希釈剤、賦形剤又は担体に加える（又はその逆）ことを含み得る。本方法を実行することにより、望ましくは、上述した好ましい特徴を有する組成物の製造がもたらされる。本方法は更に、視覚パフォーマンスの改善を達成するために、組成物を該組成物の消費に関する指示書と共にパッケージ内に包装するステップを含んでもよい。都合よくは、組成物は、例えば複数の錠剤、カプセル剤又は丸剤として単位剤形にて包装されてもよく、この単位剤形は、緩く（例えばタブ型容器内に）包装されてもよく、又は、個別に（例えばブリスター内に）包装されてもよい。
【００５２】
特定の一実施形態において、本発明は、ヒト対象の視覚パフォーマンスを改善する方法を提供し、この方法は：
ａ）ＭＺを含む餌を、雌鳥又はアヒルなどの産卵鳥に供給して、ＭＺを含む卵を鳥に産ませるステップと、
ｂ）前記卵を収集し、この卵又はその少なくとも卵黄部分を、食用形態で対象に供給するステップと、を含む。
【００５３】
対象による調理のために、全卵が生で提供され得る。代替的に、卵を加工して、その少なくとも卵黄部分を対象に提供してもよく、卵のＭＺ内容物は、卵黄内に集中されている。加工は例えば、卵の殻取り、調理及び乾燥を含んでもよい。
【００５４】
一般に、本発明の組成物は、少なくとも週に１回、好ましくは少なくとも週に２回、より好ましくは少なくとも週に３回、最も好ましくは少なくとも毎日消費される。いくつかの実施形態では、組成物は、一日１回よりも多く消費され得る（例えば、朝１回及び夕方１回）。当業者は、消費の頻度が、配合物中に存在する黄斑色素カロテノイド、特にメソ−ゼアキサンチン（ｚｅａｘａｎｔｉｏｎ）の濃度を考慮して調整され得ることを認識する。本発明の方法は、それに従って調整され得る。
【００５５】
本発明の組成物を十分な期間（一般に少なくとも８週間、好ましくは少なくとも３ヶ月間、より好ましくは少なくとも６ヶ月間に亘り、最も好ましくは１２ヶ月間以上）に亘り消費し、又は本発明の方法を実行することにより、一般に、対象における黄斑色素のレベルの増大がもたらされる。
【００５６】
組成物の消費により達成される、対象における黄斑色素カロテノイドのレベルの増大の量は、例えば組成物の消費の開始前の対象の眼内に存在する黄斑色素カロテノイドのレベルに依存し得る。上述したように、本発明者らは、異常に低い黄斑色素のレベル、及び、黄斑内のカロテノイド色素の異常な分布を有する集団の割合（約１０％など）がアイルランド内に存在することを見出しており、他の集団にも同様の対象が存在することが予想される。そのような人々は、本発明の組成物の長期間（即ち、６ヶ月間以上）の消費の後に、黄斑色素のレベルが実質的に増大すると期待され得る。
【００５７】
しかしながら、有意に、また驚くべきことに、本発明者らは、視覚パフォーマンスの少なくともいくつかのパラメータ（例えば、文字コントラスト感度；グレア障害）が、対応する黄斑色素レベルの増大を必要とすることなく、本発明の組成物の消費により改善し得ることも見出した。
【００５８】
詳細には、本発明の組成物／方法は、微光以外の条件下での対象の視覚パフォーマンスの検出可能な改善を生み出すことができる。例えば、本発明の組成物／方法は、１Ｃｄｍ−２を超える照明の条件；より特には、明所視条件（例えば３Ｃｄｍ−２以上の照明レベル）内での対象の視覚パフォーマンスの改善を生み出すことができる。
【００５９】
より特には、本発明の組成物／方法は、以下の視覚パフォーマンスパラメータのうちの１つ又は複数の改善を生み出すことができる：視力、特に最高補正視力（ＢＣＶＡ）；コントラスト感度（ＣＳ）；及びグレア障害（ＧＤ）。これらの視覚パフォーマンスパラメータを測定する好適な方法は、当業者に既知であり、本明細書にて詳細に記載される。一般に、本発明の方法／組成物は、本発明の組成物の消費／本方法の実行の前に測定した、同じパラメータに対して、少なくとも５％、好ましくは少なくとも８％、より好ましくは少なくとも１０％の改善を生み出す。
【００６０】
疑いを避けるために、好ましい、有利な、都合のよい、望ましい、典型的な、などとして本明細書に記載した本発明の任意の特徴は、文脈が別様に示さない限り、単独で、又は、他のそれらの特徴の任意の１つ又は複数との任意の組み合わせで、本発明の任意の実施形態に存在し得ることを本明細書に明確に主張する。加えて、本発明の一態様との関連で記載された特徴は、文脈が別様に示さない限り、本発明の他の態様にも等しく適用される。
【００６１】
本明細書に言及した全ての刊行物及び引用の内容は、参照により本明細書に特に組み込まれる。
【実施例】
【００６２】
実施例１：
３種の異なる黄斑カロテノイド配合物を補給した後の黄斑応答の比較
対象及び動員
この試験は、アイルランドのＩｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｈｉｔｆｉｅｌｄ  Ｃｌｉｎｉｃ，Ｗａｔｅｒｆｏｒｄ，Ｒｅｐｕｂｌｉｃにて実施された。７１人の対象が地域研究倫理委員会により認可されたこの試験への参加を志願した。対象は３２〜８４歳であり、良好な全身の健康を有していた。志願者を２つのグループ：ＡＭＤグループ及び正常グループに分けた。３４人の対象は、少なくとも一方の眼に初期段階のＡＭＤを確認し（ＡＭＤグループ；ドルーゼの存在及び／又は黄斑における色素変化のいずれかによりカテゴリー化及び識別）、３７人の対象は、眼の病態を有さなかった（正常グループ）。重要なことには、ＡＭＤグループに関しては、カロテノイド栄養補助剤を目下摂取していなかった初期ＡＭＤの患者を識別するのに相当の努力を要した。
【００６３】
試験設計及び配合物
Ｌ＝ルテイン  ＭＺ＝メソゼアキサンチン  Ｚ＝ゼアキサンチン
この試験は、以下のような、３つの異なる黄斑カロテノイド配合物を経口補給する単盲検無作為化比較臨床試験である：
グループ１：高Ｌグループ
（ｎ＝２４［正常グループ＝１２及びＡＭＤグループ＝１２］；
Ｌ＝２０ｍｇ／日、Ｚ＝２ｍｇ／日）；
グループ２：混合カロテノイドグループ
（ｎ＝２４［正常グループ＝１３及びＡＭＤグループ＝１１］；
ＭＺ＝１０ｍｇ／日、Ｌ＝１０ｍｇ／日、Ｚ＝２ｍｇ／日）；
グループ３：高ＭＺグループ
（ｎ＝２３［正常グループ＝１２及びＡＭＤグループ＝１１］；
ＭＺ＝１８ｍｇ／日、Ｌ＝２ｍｇ／日Ｌ）。
【００６４】
全対象は、食事と共に１日当たり１個のカプセル剤（油ベース）を８週間摂取するよう指示された。各試験訪問にて錠剤を計数することによりコンプライアンスを評価した。
【００６５】
黄斑色素光学密度（ＭＰＯＤ）の測定
カスタマイズされた異色交照測光法（ｃＨＦＰ）を用いて、Ｗｏｏｔｅｎ  ＆  Ｈａｍｍｏｎｄ（２００５  Ｏｐｔｏｍｅｔｒｙ  ＆  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ８２，３７８−３８６）及びＫｉｒｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０  Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．５１，６７２２−６７２８に記載された装置を少々変更したｃＨＦＰ機器であるＭａｃｕｌａｒ  Ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒ（商標）を使用して、ＭＰの空間プロファイルを測定した。
【００６６】
対象は、ベースライン、２週間、４週間、６週間及び８週間にて評価された（各々、ＶＩ、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４、及びＶ５）。ＭＰＯＤは、以下の偏心度：０．２５°、０．５°、１°、１．７５°、３°において測定されたが、黄斑に対応する、網膜の中心部である０．２５°での結果のみ本明細書に報告する。
【００６７】
統計解析  統計ソフトウェアパッケージＰＡＳＷ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  １７．０（ＳＰＳＳ  Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ，ＵＳＡ）及びＲを解析に使用し、Ｓｉｇｍａ  Ｐｌｏｔ  ８．０（Ｓｙｓｔａｔ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ，ＵＳＡ）をグラフ提示に使用した。研究された全定量的変数は、典型的な正規分布を有した。本発明者らは、５％レベルの有意性を用いた。
【００６８】
結果
ＭＰＯＤ及び視力
図２に示すように、ベースラインにおいて中心ＭＰＯＤ（０．２５°での）と補正視力との間に、正の及び統計的に有意な関係が存在し（ｒ＝０．３０３、ｐ＝０．００８）、図２は、３つのカロテノイド配合物のうちの１つを補給する前の、２つのグループの個々の対象に関するデータ点を示す、ＭＰＯＤ（任意単位）に対する補正視力のグラフである。この知見は、中心ＭＰが視覚パフォーマンスに有意に及び正に関係することを示唆する。
【００６９】
経時的なＭＰＯＤの増大
０．２５°の偏心度では、ベースラインＭＰＯＤは各グループで以下のように異なっていた；グループ１：０．４２±０．２０、グループ２：０．４４±０．１８、グループ３：０．４９±０．２１。全グループの平均は、０．４５±０．２０であった。比較を簡素化するために、全グループを平均値から開始するように引き寄せる。試験は、図３に示すように、経時的なＭＰＯＤの増大を示した。図３は、０．２５°偏心度でのＭＰＯＤ（任意単位）の時間に対するグラフである（時点１〜５は、各々０、２、４、６及び８週間に対応する）。図３から明かなように、中心ＭＰＯＤの最大の増大は、グループ２配合物（ＭＺ＝１０ｍｇ／日、Ｌ＝１０ｍｇ／日、Ｚ＝２ｍｇ／日）により達成され、これは、グループ１及び３との統計的に有意な差異であった。グループ１とグループ３との間に統計的な差異は存在しなかった。
【００７０】
結論
驚くべきことに、黄斑色素に対する最大の効果は、ＭＺ  １０ｍｇ、Ｌ  １０ｍｇ、Ｚ  ２ｍｇを含有する混合カロテノイドグループ（グループ２）に見られた一方、他の２つのグループによる結果は、非常に類似していた。ＭＺとＬとの間に相乗効果が存在するように思われる。高ＭＺグループ（グループ３）がＭＰを増大させることが可能であったことは、ＭＺが他のカロテノイドのいずれの寄与も有することなくＭＰＯＤを実質的に上昇させ得るが、Ｌと組み合わせたＭＺと比較して低い効果を有したことを示す。
【００７１】
黄斑色素空間プロファイルに「中心凹み」を有する対象における黄斑カロテノイド補給
黄斑として既知の中心網膜は、色及び微細な視覚の役割を担っている（Ｈｉｒｓｈ  ＆  Ｃｕｒｃｉｏ  １９８９；Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓ．２９，１０９５−１１０１）。２つの食物カロテノイド、ルテイン（Ｌ）及びゼアキサンチン（Ｚ）、並びに一般に非食物カロテノイドＭＺ（ＭＺ）（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５  Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．４６，６９２−７０２）から構成される色素は、黄斑に蓄積し、これらの色素は黄斑色素（ＭＰ）として既知である。ＭＰは、青色光フィルターであり（Ｓｎｏｄｄｅｒｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４  Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２５，６６０−６７３）、強力な抗酸化剤（Ｋｈａｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．．１９９７  Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍ．＆  Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．３８，１８０２−１８１１）であり、従って現在西洋諸国で視力障害登録の最も通常の原因である加齢黄斑変性（ＡＭＤ）（Ｋｌａｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８  Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１１６，６５３−６５８）から保護すると考えられる。
【００７２】
ＭＺ及びＺは、中心窩領域内で優勢なカロテノイドである一方、Ｌは、傍中心窩領域内で優勢なカロテノイドである（Ｓｎｏｄｄｅｒｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１  Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．３２，２６８−２７９）。ＭＺの濃度は中心部で最大であり、ＭＺ：Ｚの比は、中心網膜内（中心窩の３ｍｍ以内）で０．８２であり、周辺網膜内（中心窩から１１〜２１ｍｍ）で０．２５である（Ｂｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６４，２１１−２１８）。網膜ＭＺは、主に網膜Ｌの異性化により生成されるため、中心黄斑内でＬがより低い相対レベルを有し、ＭＺがより高い相対レベルを有し、また周辺黄斑内ではその逆となり、ＭＺが総ＭＰの約１／３を占めることも説明するであろう。
【００７３】
ＭＰの濃度は、個人間で非常に異なっている（Ｈａｍｍｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ａ−Ｏｐｔｉｃｓ  Ｉｍａｇｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｖｉｓｉｏｎ，１４，１１８７−１１９６）。非定型ＭＰ空間プロファイル（即ち、「中心凹み」）は、いくつかの個人ＭＰプロファイルに存在する。より重要なことには、カスタマイズされた異色交照測光法（ｃＨＦＰ、ＭＰを測定する検証された技術）を用いて測定された際、これらの「中心凹み」は、ＭＰ空間プロファイルの現実の及び再現性のある特徴であることが確認された。ＭＰの空間プロファイルのそのような変形（例えば「中心凹み」の存在）の重要性は、もし存在したとしても、未だに知られていないが、この色素の推定上の保護役割に関連している可能性がある。例えば、黄斑の中心部の低いＭＰＯＤ（即ち、「中心凹み」の存在）は、ＡＭＤが発生する危険性の増大に関連し得る。
【００７４】
正常なアイルランド人集団の１２％（４８４人の対象からなるサンプルデータベースからの５８人の対象）が、ＭＰＯＤ空間プロファイルにおいて再現性のある「中心凹み」を有し、またＭＰ空間プロファイルにおけるそのような凹みは、より高齢の対象及び喫煙者（ＡＭＤの確立された危険因子のうちの２つ）で一般的であることが示されている。
【００７５】
実施例２  ＭＰプロファイルに「中心凹み」を有する対象に対する、黄斑カロテノイドを含有する配合物の補給
この実施例に記載する試験は、「中心凹み試験」における上述したデータベースからの志願者対象により行われ（ｎ＝５８）、この対象は、ＭＰ空間プロファイルにて「中心凹み」を有すると識別及び確認され（即ち、０．５度の偏心度でのＭＰＯＤ≧０．２５度の偏心度でのＭＰＯＤであった、図４参照）、３つの異なる黄斑カロテノイド配合物のうちの１つを用いた８週間の補給治験に参加するよう招待された（下記参照）。
【００７６】
方法
対象及び試験設計：
ＭＰ空間プロファイルに「中心凹み」を有する５８人の対象（原本ＭＰデータベースから識別；ｎ＝４８４）を、試験に参加するよう招待した。試験に戻ることに同意した４０人の対象のうち、３１人が、尚「中心凹み」を有すると確認され（即ち、０．５度の偏心度でのＭＰＯＤ≧０．２５度での偏心度のＭＰＯＤあった）、従って８週間の補給治験に登録した。
【００７７】
全対象がインフォームドコンセント文書に署名し、この実験的測定はヘルシンキ宣言に適合していた。この試験は、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ，Ｗａｔｅｒｆｏｒｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗａｔｅｒｆｏｒｄ，Ｉｒｅｌａｎｄにより審査及び認可された。この試験に参加するための試験対象患者基準は、以下の通りであった：０．５度の偏心度でのＭＰＯＤ≧０．２５度の偏心度でのＭＰＯＤ（即ち、ＭＰ空間プロファイルにおける「中心凹み」の証拠）；眼の病態が存在しない；試験眼の視力が２０／６０以上；現在Ｌ及び／又はＺ及び／又はＭＺ栄養補助食品を摂取していない。
【００７８】
対象を以下のように２つのグループのうちの１つに無作為に割り当てた；
グループ１：高Ｌグループ（ｎ＝１１）、Ｌ＝２０ｍｇ／日、Ｚ＝２ｍｇ／日；
グループ２：混合カロテノイドグループ（ｎ＝１０）、ＭＺ＝１０ｍｇ／日、Ｌ＝１０ｍｇ／日、Ｚ＝２ｍｇ／日。
【００７９】
グループ３  高ＭＺグループ（ｎ＝１０）、１８ｍｇ／日  ＭＺ、２ｍｇ／日  Ｌ）。
全対象は、食事と共に１日１つのカプセル剤を８週間摂取するよう指示された。その空間プロファイルを含むＭＰＯＤ、即ち０．２５°、０．５°、１°、１．７５°、３°での空間プロファイルを含むＭＰＯＤを、ベースライン、４週間及び８週間にて測定した。
【００８０】
黄斑色素光学密度の測定
実施例１に記載したＭａｃｕｌａｒ  Ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒ（商標）を使用して、ｃＨＦＰを用いてＭＰの空間プロファイルを測定した。ＭＰの空間プロファイルを測定するために、以下のサイズの標的直径；３０分、１°、２°、３．５°、１°及び２°を使用して得た以下の度の網膜偏心度にて測定を行った：０．２５°、０．５°、１°、１．７５°、３°及び７°（基準点）。
【００８１】
統計解析
統計ソフトウェアパッケージ  ＰＡＳＷ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  １７．０（ＳＰＳＳ  Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ，ＵＳＡ）を解析に使用し、Ｓｉｇｍａ  Ｐｌｏｔ  ８．０（Ｓｙｓｔａｔ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ，ＵＳＡ）をグラフ提示に使用した。研究された全定量的変数は、典型的な正規分布を有した。平均±ＳＤをテキスト及び表に提示する。ベースラインにおける３つの異なる研究グループの統計的比較は、適宜、独立サンプルｔ検定及びカイ二乗解析を用いて行った。本発明者らは、本発明者らの解析全体に５％レベルの有意性を用いた。
【００８２】
結果
８週間の補給期間に亘るＭＰＯＤの変化
本発明者らは、ある期間（即ち、試験期間［ベースライン、４週間及び８週間］）に亘って測定した全網膜偏心度（即ち、０．２５°、０．５°、１．０°、１．７５°、及び３°での）に関して、１組の対象者間因子：処置（グループ１、グループ２、グループ３）及び年齢を共変数として使用して、一般線形モデル手法を用いてＭＰＯＤの反復測定分散分析を行った。図５及び６は、各々０．２５及び０．５°偏心度での測定に関する治験過程中のＭＰＯＤの変化を示す。表１は、個々の各グループ及び網膜偏心度の各度に関する反復測定分散分析結果を表す。この表から明かなように、０．２５°及び０．５°でのＭＰＯＤの増大は、グループ２（即ち、混合カロテノイドグループ）において統計的に有意であった。同様に、０．２５°でのＭＰＯＤの有意な増大がグループ３（即ち、高ＭＺグループ）に見られた。注目すべきは、試験に関するボンフェローニ補正の後、グループ２の０．２５°でのＭＰＯＤの増大のみが有意なままであった。
【００８３】
グループ１〜３の各々に関するＭＰＯＤの空間プロファイルの変化を、各々図７〜９に示す。
【００８４】
結論
ＭＺを含有する２つの配合物のみが、「中心凹み」を補正しかつＭＰを増大させることが可能であった。驚くべきことに、また予想に反して、Ｌを含有するがＭＺを含有しない配合物は、任意の偏心度においてＭＰＯＤに効果を有さなかった。
【００８５】
混合カロテノイド（グループ２）を含有する配合物は、０．２５及び０．５偏心度の両方においてＭＰを有意に増大させたため、優れた効果を有した。これは３つのカロテノイドを有する栄養補助剤を受容した、ベースラインにおいて中心凹みを有しない対象からの結果（実施例１参照）と一致し、即ち、最大の応答は、ＭＺ、Ｌ及びＺの各々を含有する栄養補助剤を使用して観察された。
【００８６】
【表１】
2014524914.tif 000003
【００８７】
値は、平均±標準偏差を表す；ｎ＝３１；ＭＰＯＤ＝黄斑色素光学密度；０．２５°＝０．２５°網膜偏心度にて測定したＭＰＯＤ；０．５°＝０．５°網膜偏心度にて測定したＭＰＯＤ；１．０°＝１．０°網膜偏心度にて測定したＭＰＯＤ；１．７５°＝１．７５°網膜偏心度にて測定したＭＰＯＤ；３°＝３．０°網膜偏心度にて測定したＭＰＯＤ；グループ１：高Ｌグループ；グループ２：組み合わせカロテノイドグループ；グループ３：高ＭＺグループ；ｐ値は、３回の試験訪問に関する反復測定分散分析を表し（対象内効果）、球面性の欠乏に関して、適宜グリーンハウス・ガイザー補正を行った。
【００８８】
実施例３  ３つの異なる黄斑カロテノイド配合物の補給後の、初期段階ＡＭＤを有する対象における視覚パフォーマンスの比較。
【００８９】
対象及び動員
この試験は、その多数が初期ＡＭＤを有する７２人の対象を用いて行った。詳細に関しては、実施例１を参照されたい。
【００９０】
試験設計及び配合物
対象を３つのグループ（２０〜２７人の対象からなる）に分け、以下の補給を与えた：
グループ１：Ｌ＝２０；Ｚ＝２ｍｇ／日
グループ２：Ｌ＝１０；ＭＺ＝１０；Ｚ＝２ｍｇ／日
グループ３：ＭＺ＝１７〜１８；Ｌ＝２〜３；Ｚ＝２ｍｇ／日
０．３ｍｌの植物油に溶解したこれらの配合物を、軟ゲルカプセル剤中にて投与した。 前述した技術を用いて、ベースライン、並びに補給から３及び６ヶ月後の視覚パフォーマンスを測定した。対応ｔ検定を用いて統計解析を行った。有意な値は、Ｐ＜０．０５と考慮された。少なくとも１つのグループが統計的に有意であった場合のみ、結果を与える。
【００９１】
結果：
処置から３ヶ月後に、検出された統計的に有意なＶＰの改善が存在しなかったため、６又は１２ヶ月に関する結果のみをここに提示する（以下）： １．グループ間のベースライン比較：
【００９２】
【表２】
2014524914.tif 000004
【００９３】
これらのグループは、ベースラインにおいてＭＰ及び視覚（最高補正視力、「ＢＣＶＡ」により評価）に関して統計的に同等であった。ベースラインにおいて、グループ３と他の２つのグループとの間に年齢に関する有意な相違が存在した。グループ１及びグループ２は、年齢に関して統計的に類似していた。
【００９４】
２．最高補正視力（ＢＣＶＡ）
中心ＭＰＯＤ（０．２５）とＢＣＶＡとの間に正の及び統計的に有意な関係のベースライン相関が存在し（補給の前に）、重要なことには、これはＡＭＤ集団内にあった（ｒ−＝０．３６８、ｐ＝０．００２）。３及び６ヶ月後、いずれのグループのＢＣＶＡにも統計的に有意な変化は存在しなかった。
【００９５】
コンピュータ生成ＬｏｆＭＡＲ試験チャート（Ｔｅｓｔ  ｃｈａｒｔ  ２０００  Ｐｒｏ；Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を用いて、Ｓｌｏａｎ  ＥＴＤＲＳ文字セットを使用して４ｍの視認距離におけるＢＣＶＡを測定した。ソフトウェア偽無作為化機能により容易にされた文字及び線変化による３つの測定値の平均としてＢＣＶＡを決定した。２０／２０（６／６）視力に１００の値を割り当てた文字−点数化視力評価を使用して、最高補正視力を記録した。最高補正視力は、この値に対して点数化され、正確に識別された各文字は１の名目値を与えられた。従って例えば、２０／２０＋１（６／６＋１）のＢＣＶＡは、スコア１０１に一致し、２０／２０−１（６／６−１）のＢＣＶＡは、スコア９９に一致する。
【００９６】
３．ＭＰＯＤ応答
下記の表３は、ベースライン、黄斑カロテノイドの補給から６ヶ月後及び１２ヶ月後に測定した、各グループ及び各偏心度に関するＭＰデータを表す。
【００９７】
１２ヶ月におけるＭＰＯＤの統計的に有意な増大は、ＭＺ含有栄養補助剤を受容したグループ２及び３のみに観察された。
【００９８】
【表３】
2014524914.tif 000005
【００９９】
４．文字コントラスト感度（Ｔｈｏｍｓｏｎチャート）
表４Ａは、ベースライン、及び黄斑カロテノイドの補給から６ヶ月後における文字コントラスト感度データを表す。測定は、１．２、２．４、６．０及び９．６ｃｐｄにて行った。１．２、２．４及び９．６ｃｐｄにてグループ２（１０ｍｇ  ＭＺ；１０ｍｇ  Ｌ；２ｍｇ  Ｚ）のみに統計的に有意な改善が存在し、他の２つのグループには、統計的に有意な改善は全く存在しなかった。このことは、グループ２における非常に優れた効果を示す。
【０１００】
【表４Ａ】
2014524914.tif 000006
【０１０１】
表４Ｂは、５つの空間周波数（１．２〜１５．１５ｃｐｄ）の各々に関する、ベースライン及び１２ヶ月後における文字コントラスト感度（ＣＳ）を示す。
【０１０２】
【表４Ｂ】
2014524914.tif 000007
【０１０３】
１２ヶ月において、結果は、大きい物体（１．２及び２．４ｃｐｄ）では全グループで文字コントラスト感度が増大した点で、６ヶ月後と同様であったが、より小さい物体（６．０〜１５．５ｃｐｄ）ではグループ２のみ増大した。
【０１０４】
表４Ｃは、ＭＰＯＤ（０．２５°偏心度での）にて観察された変化と、１．２ｃｐｄの文字ＣＳにて観察された変化との間の関係を報告する。注目すべきは、任意の空間周波数において、ＭＰの変化と文字ＣＳの変化の間で、統計的に有意な関係は存在しなかった。
【０１０５】
【表４Ｃ】
2014524914.tif 000008
【０１０６】
カラー眼底写真
Ｚｅｉｓｓ  ＶｉｓｕＣａｍ（商標）（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  Ｍｅｄｉｔｅｃ  ＡＧ，Ｊｅｎａ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して各試験訪問にてカラー眼底写真を撮影し、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡのＯｃｕｌａｒ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅａｄｉｎｇ  Ｃｅｎｔｅｒにて立体視的に類別した。写真は、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌｏｐａｔｈｙ  Ｇｒａｄｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍの変更形態を使用して類別した。初期ＡＭＤは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎの類別者と協働した現場の眼科医により確認した、少なくとも一方の眼内のドルーゼの存在及び／又は色素変化として定義された。各眼底写真を病変別に評価して、最大のドルーゼサイズ、タイプ、面積、及び網膜色素異常性を決定した。知見全体を１１−ステップのＡＭＤ重症度スケール上で報告した。重症度スケールにおける２つ以上のステップの変化を、臨床的に有意であると定義した。類別した写真は、ベースライン及び１２ヶ月の訪問の間獲得した。
【０１０７】
ベースラインにおいて、ＡＭＤ等級に関してグループ間で有意な相違は存在しなかった（ｐ＝０．６７９）［表４Ｄ］。
【０１０８】
【表４Ｄ】
2014524914.tif 000009
【０１０９】
３つのグループの各々に関するベースラインと１２ヶ月との間のＡＭＤ等級の変化を、表４Ｅにまとめる。負方向の変化（即ち、−１、−２）は、ＡＭＤ重症度スケールにおける進行を示す一方、正の整数は、ＡＭＤ重症度スケールにおける後退（改善）を示す。ベースラインとの１２ヶ月との間において、ＡＭＤ重症度の変化に関して、処置グループの間で統計的に有意な相違は存在しなかった（ｐ＝０．２２３、ピアソンのカイ二乗試験）。
【０１１０】
【表４Ｅ】
2014524914.tif 000010
【０１１１】
注目すべきは、表４Ｅは、ベースラインと１２ヶ月との間で、対象の８６％がＡＭＤの状態に臨床的に有意な変化を有さず、７％が悪化を有し、７％が改善を有したことを示す（注記：２つ以上の等級の変化は、臨床的に有意であるとして容認される）。
【０１１２】
考察
最も興味深い結果は、文字コントラスト感度に関するものであった。この試験は日光中でのみ行われ、異なるサイズの文字を試験する。６ヶ月及び１２ヶ月における結果は同様であった。ＭＰの増大と、黄斑カロテノイドの神経生理学的効果を示すこのパラメータの増大との間に相関は存在しなかった。
【０１１３】
ベースラインからのＡＭＤ等級の有意な変化は存在しなかった。それ故、コントラスト感度の変化は、ＡＭＤ病態上の効果に関係しなかった。
【０１１４】
５．夜間のコントラスト感度（ＦＡＣＴ装置上で評価）
下記の表５は、ベースライン及び黄斑カロテノイドの補給から６ヶ月後の、夜間に評価したｌｏｇコントラスト感度データを表す。測定は、１．５、３．０、６．０、１２及び１８ｃｐｍにて行った。このＶＰ測定における統計的に有意な改善は、１．５、３．０、ｃｐｄでのグループ２と１．５ｃｐｄでのグループ１のみに存在し、グループ２は優れた効果を示した。
【０１１５】
【表５】
2014524914.tif 000011
【０１１６】
６．日中のコントラスト感度（ＦＡＣＴ装置上で評価）
下記の表６は、ベースライン及び黄斑カロテノイドの補給から６ヶ月後の、日中に評価したｌｏｇコントラスト感度データを表す。測定は、１．５、３．０．６．０、１２及び１８ｃｐｍにて行った。このＶＰ測定における統計的に有意な改善は、１．５、３．０、及び１８ｃｐｄでのグループ２と１．５ｃｐｄでのグループ１に存在し、グループ２は優れた効果を示した。
【０１１７】
【表６】
2014524914.tif 000012
【０１１８】
７．グレアの存在下での夜間のコントラスト感度（ＦＡＣＴ装置上で評価）
下記の表７は、グレアの存在下での、ベースライン及び黄斑カロテノイドの補給から６ヶ月後の、夜間のＬｏｇコントラスト感度データを表す。測定は、１．５、３．０、６．０、１２及び１８ｃｐｄにて行った。このＶＰにおける統計的に有意な改善は、１８ｃｐｄでのグループ２のみに存在した。
【０１１９】
【表７】
2014524914.tif 000013
【０１２０】
８．グレアの存在下での日中のコントラスト感度（ＦＡＣＴ装置上で評価）
下記の表８は、グレアの存在下での、ベースライン及び黄斑カロテノイドの補給から６ヶ月後の、日中のＬｏｇコントラスト感度データを表す。測定は、１．５、３．０、６．０、１２及び１８ｃｐｄにて行った。このＶＰ測定における統計的に有意な改善は、１．５、３．０、６．０及び１８ｃｐｄでのグループ２と、１．５、３．０及び６．０ｃｐｄでのグループ１と、６ｃｐｄでのグループ３に存在し、グループ２は優れた効果を示した。
【０１２１】
【表８】
2014524914.tif 000014
【０１２２】
９．ベースラインと１２ヶ月との間のコントラスト感度及びグレア障害
薄明視及び明所視条件下での、ベースライン及び１２ヶ月におけるコントラスト感度（ＣＳ）及びグレア障害（ＧＤ）に関するデータを表９〜１２に表す。
【０１２３】
【表９】
2014524914.tif 000015
【０１２４】
【表１０】
2014524914.tif 000016
【０１２５】
【表１１】
2014524914.tif 000017
【０１２６】
【表１２】
2014524914.tif 000018
【０１２７】
考察
１２ヶ月における結果は、結果が変動し、解釈が困難である点で、６ヶ月における結果と同様であった。薄明視（夜間）条件下で、コントラスト感度はグループ１及び２において大きい物体（１．５及び３．０ｃｐｄ）のみで増大した。グレア障害に関しては、グループ１は変化しなかった一方、グループ２及び３は大きい物体で幾分変化を示した。
【０１２８】
明所視（日光）条件下では、グループ１及び３のみで大きい物体でコントラスト感度が増大した。グレア障害は、全グループが大きい物体のみで増大した。
【０１２９】
１０．視覚パフォーマンスのパラメータの変化及びＭＰＯＤの変化
表１３は、観察されたＭＰＯＤ（０．２５°偏心度での）の変化と、観察された視覚パフォーマンスのパラメータ、即ちＣＤＶＡ、１．５ｃｐｄでの薄明視及び明所視コントラスト感度、並びに薄明視及び明所視グレア障害の測定値の変化との間の関係を報告する。注目すべきは、グループのいずれにも、ＭＰの変化と、視覚パフォーマンスの変化との間に統計的に有意な関係は存在しなかった（グループ１のみに、ＭＰＯＤの増大と、１．５ｃｐｄでの明所視ＣＳとの間に負の関係が存在したことを除いて）。
【０１３０】
【表１３】
2014524914.tif 000019
【０１３１】
考察
視覚パフォーマンスの増大と、黄斑カロテノイドの神経生理学的効果を示す黄斑色素の増大との間に相関は存在しなかった。
【０１３２】
他の結論：ＶＰの変化は、６ヶ月以上後にのみ統計的に有意であった
コントラスト感度において本明細書に報告した方法は、様々な空間周波数でのものであった。低い空間周波数（例えば１．２ｃｐｄ）は非常に大きい物体（例えば、自動車、家）を示す一方、高い空間周波数（例えば１８ｃｐｄ）は、小さい物体（例えば、レストランのメニュー）を示す。データにより以下の結論が導かれた；
１．最も重要な効果は、ＶＰの最も重要な尺度であるコントラスト感度に関してであり、このコントラスト感度は、患者がどのように患者自身の視覚を実際に知覚しているかを反映している。
【０１３３】
２．多数の空間周波数に亘って統計的有意性に達し、このことは、検出された改善は、通常の及び実生活の視覚を示唆するものであることを意味する。
【０１３４】
３．グループ２治療介入（即ち、１０ｍｇ  ＭＺ；１０ｍｇ  Ｌ；２ｍｇ  Ｚ）に関して、ＶＰにて優れた改善が存在した。
【０１３５】
実施例４：正常対象のＶＰに対する２つの黄斑カロテノイド及びプラセボ配合物の効果  対象及び動員
この試験は、ＡＭＤを有しない３６人の正常な対象に対して行われた。動員の詳細は、実施例１に提供されている。動員された３６人の対象のうち３２人が治験を完了し、治療介入グループの各々から１人の離脱者、及びプラセボグループであるグループ３から２人の離脱者を有した。更なる全分析は、完全データセットを有する対象に限定された（グループ１、ｎ＝１１；グループ２、ｎ＝１１；グループ３、ｎ＝１０）。
【０１３６】
試験設計及び配合物
正常な対象を（当初）１２人の対象からなる３つのグループに分け、以下の栄養補助剤を与えた：
グループ１：Ｌ  ２０；Ｚ  ２ｍｇ／日
グループ２：ＭＺ  １０；Ｌ  １０；Ｚ  ２ｍｇ／日
グループ３：プラセボ  ０ｍｇ／日
カロテノイド配合物は０．３ｍｌの植物油中に存在し、軟ゲルカプセル剤中にて投与された。
視覚パフォーマンスをベースライン、３ヶ月及び６ヶ月にて、下記に詳細に記載するように評価した。
【０１３７】
統計解析
統計ソフトウェアパッケージＰＡＳＷ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  １８．０（ＳＰＳＳ  Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ，ＵＳＡ）を解析に使用した。研究された全定量的変数は、典型的な正規分布を有した。平均±ＳＤをテキスト及び表に表す。ベースラインにおける３つの補給グループの統計的比較は、一方向分散分析を用いて行った一方、対サンプルｔ検定及び反復測定分散分析（一般線形モデル手法を用いて）は、適宜、各補給グループの視覚パフォーマンス及びＭＰＯＤ測定値の、試験訪問に亘った変化に関する解析に使用した。関連する場合、球面性の侵害に関するグリーンハウス・ガイザー補正を使用した。解析全体において、５％レベルの有意性を使用した。
【０１３８】
結果
１．ベースライン解析
下記の表１４に、選択されたパラメータに関して示すように、無作為化の後、分散の一方向解析は、個体群統計、黄斑色素、視覚パフォーマンスパラメータ、又は他のパラメータに関して、ベースラインにおけるグループ間での有意な相違を明らかにしなかった。   
【０１３９】
【表１４】
2014524914.tif 000020
【０１４０】
２．３及び６ヶ月におけるＭＰＯＤ応答
ＭＰＯＤ測定
異色交照測光法（ＨＦＰ）の技術を用いるＭａｃｕｌａｒ  Ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒ（商標）を使用して、７°の参照位置に関連した０．２５°、０．５°、１°、１．７５°及び３°の網膜偏心度に亘ってＭＰＯＤの空間プロファイルを生成した。この技術の説明ビデオを対象に見せ、試験開始前に練習セッションを付与した。個々の臨界フリッカー融合（ＣＦＦ）周波数測定値の決定後、ＭＰ測定を最適化するカスタマイズ工程において、ＨＦＰフリッカー周波数を最適化した（Ｓｔｒｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ  ｒｅｓ．２００８，８７，４４５−４５３）。ＭＰＯＤ測定値は、各網膜偏心度での６つの読み取り値（対象がゼロ点滅を報告した放射輝度値として計算）の平均からなり、ゼロ点滅応答の標準偏差が０．１を下回る場合のみ信頼でき及び許容可能であると見なした。
【０１４１】
【表１５】
2014524914.tif 000021
【０１４２】
ここで、測定した全偏心度でのＭＰの最大の増大は、グループ２、１０ｍｇ  ＭＺ；１０ｍｇ  Ｌ；２ｍｇ  Ｚを含有する栄養補助剤に見られることが理解され得る。
【０１４３】
視覚パフォーマンス評価
視力（ＶＡ）は、ベースラインにおいて、コンピュータ生成ｌｏｇＭＡＲ試験チャート（Ｔｅｓｔ  Ｃｈａｒｔ  ２０００  Ｐｒｏ；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｈａｔｆｉｅｌｄ，ＵＫ）を使用し、Ｓｌｏａｎ  ＥＴＤＲＳ文字セットを使用して、視認距離４ｍにおいて測定した。ＶＡは、単一文字点数化視力評価を用いて測定し、ソフトウェア文字無作為化機構により容易にされた３回の測定の平均として記録した。より高い視力を有する眼を試験眼として選択した；しかしながら、両方の眼が同じ補正視力を有した場合、右眼を試験眼として選択した。
【０１４４】
コントラスト感度は、正弦波格子テスト（Ｏｐｔｅｃ６５００  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｔｅｓｔｅｒ；Ｓｔｅｒｅｏ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｃｏ．Ｉｎｃ，Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）を用いて測定し、この試験は、１．５、３、６、１２及び１８サイクル／度（ｃｐｄ）の空間周波数におけるＧａｂｏｒパッチとして提示される正弦波格子を組み込んで、コントラスト感度機能を生成する。試験は、薄明視（３カンデラ／平方メートル［ｃｄ／ｍ２］）及び明所視（８５ｃｄ／ｍ２）条件下で行った。（説明のために、３カンデラ／平方メートルは、薄明視条件の上限を表すと見なされる：より高い照明のレベルはいずれも、明所視条件を構成すると見なされる）。Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｃｈａｒｔを使用して、又は５つの異なる空間周波数におけるｌｏｇ  ＭＡＲ形態のＥＤＴＲＳ（Ｅａｒｌｙ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ  Ｓｔｕｄｙ）文字を使用して、コントラスト感度試験を行った（Ｌｏｒｅｎｔｅ  −  Ｖｅｌａｚｑｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１  Ｏｐｔｏｍ．Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．８８（１０）：１２４５−１２５１参照）。グレア障害は、同じ試験及び試験条件を用いたが、内蔵周方向ＬＥＤグレア源（薄明視では４２ルクス、明所視グレア試験では８４ルクス）の存在下で評価した。ＬＥＤグレア源は、日光をシミュレートする６５００°Ｋの色温度と、４５３ｎｍ（ピークＭＰスペクトル吸収に近い）に単一の大きいピークを有するスペクトル放出プロファイルとを与えた。これらの試験は、他の箇所に、より詳細に記載されている（Ｌｏｕｇｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｖｉｓ  Ｒｅｓ．２０１０；５０：１２４９−１２５６；Ｎｏｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｖｉｓ  Ｒｅｓ．２０１１；５１  ：４５９−６９）。対象の任務、及び試験の性質は、試験開始前に詳細に説明され、対象の実行は、試験中、熟練した試験官により密接に監視され、必要であれば再度指示された。Ｎｅｕｒｏｐｔｉｃｓ  ＶＩＰ（商標）−２００瞳孔計（Ｎｅｕｒｏｐｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ  ９２６１２，ＵＳＡ）を使用して、使用した背景薄明視及び明所視条件に関して瞳孔径を測定し、また両方のグレア源の存在下で測定した。
【０１４５】
短波長感受性（ＳＷＳ）視覚系の光ストレス回復時間（ＰＲＴ）は、中心窩増分光閾値を評価するＨｕｍｐｈｒｅｙ視野分析計（Ｍｏｄｅｌ  ７４５ｉ  Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  Ｍｅｄｉｔｅｃ  Ｉｎｃ．Ｄｕｂｌｉｎ，ＣＡ，ＵＳＡ）を適応させる黄斑自動化光ストレス（ＭＡＰ）試験により評価した（Ｄｈａｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，．Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２００７；１４３（４），５９６−６００）。ＳＷＳ錐体を隔離するために、中及び長波長感受性錐体を、１００ｃｄ／ｍ２、５７０ｎｍの漂白背景に対する３分間の持続暴露により脱感作した。光ストレスの前後、２００ミリ秒提示されたＧｏｌｄｍａｎｎ  Ｖ、４４０ｎｍ刺激を使用してＳＷＳ系の感度を試験した。３分間の適応及び練習セッション（その間、対象の実行を信頼性及び理解に関して評価した）の後、対象は４つの周方向光刺激の間を中心として凝視し、また提供された応答ボタンを使用してその位置での「青色」刺激の検出に応答するよう指示された。中心窩感度を、デシベル（ｄＢ）で記録された３つの連続測定値の平均として決定した。各ｄＢは、０．１  ｌｏｇ単位の感度変動を表す。ベースラインでの中心窩感度計算の後、短波長が支配的な光ストレス刺激に対象を暴露することにより、一時的な中心窩「青色」後画像（ａｆｔｅｒ−ｉｍａｇ）を形成して、凝視部（ｆｉｘａｔｉｏｎ）をマスクし、中心窩感度を低下させ、前記短波長優勢光ストレス刺激は、ローパスガラス二色性フィルターを通して１ｍにて視認される３００−Ｗランプに対して５秒間暴露することからなっていた。光ストレスの直後、中心窩感度の連続的な、かつ時限サイクルの測定を行い、記録した。ベースラインからの中心窩感度の低下を、ＳＷＳ系感度の回復特性と共に記録した。瞳孔径を、背景光条件に関して、及び光ストレス光源の存在下、再度記録した。
【０１４６】
眼の迷光は、視覚に対する光散乱の効果を定量化するように設計された機器であるＯｃｕｌｕｓ  Ｃ−Ｑｕａｎｔ（ＯＣＵＬＵＳ  Ｏｐｔｉｋｇｅｒａｔｅ  ＧｍｂＨ，Ｗｅｔｚｌａｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して測定した。器具アイピースを介して、中心の、二つの部分からなる１４°試験範囲を視認した。対象は、適切な応答ボタンを使用して応答して、最も強く点滅する右又は左試験半範囲の位置を示すよう指示された。対象は、規定された練習セッションを許可され、その間、信頼できる任務の理解を熟練試験官により評価された。試験結果は、測定した迷光値の標準偏差（ｅｓｄ）が≦０．０８、信頼度係数（Ｑ）が≧１の場合のみ許容可能であると見なされた。絶対迷光値を対数形態［ｌｏｇ（ｓ）］で記録した。
【０１４７】
グレア障害及び光ストレス試験手順中、視覚的不快感を評価した。対象はグレア及び光ストレス光源の提示の直後に、対象の不快感を１〜１０の範囲のスケール上で評価するよう求められ、「１」は「眼部不快感なし」を示し、「５」は「中程度の眼部不快感」を示し、「１０」は「耐え難い眼部不快感」を示した。このようなスケールは、以前に、原型の黄斑色素／グレア試験で効果的に使用されている（Ｓｔｒｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，．Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．２０１１；５２（１０）：７４０６−１５）。他の箇所で使用され、詳細に記載されている視覚活性アンケートの改変版を使用したアンケートにより、視覚的経験も評価した（Ｌｏｕｇｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｖｉｓ  Ｒｅｓ．２０１０；５０：１２４９−１２５６；Ｓｌｏａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｖｉｓｕａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒ：Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  ａｎ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ａｓｓｅｓｓｉｎｇ  ｐｒｏｂｌｅｍｓ  ｉｎ  ｅｖｅｒｙｄａｙ  ｖｉｓｕａｌ  ｔａｓｋｓ．Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｄｉｇｅｓｔ，Ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｔｏｐｉｃａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，Ｊａｎｕａｒｙ，１９９２）。Ｓｅｄｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．により定義された標準化虹彩分類スキームを使用して、虹彩色も類別した（Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  １９９０（３１），８：１５９２−１５９８）。
【０１４８】
３．ＢＣＶＡは、３ヶ月において、いずれの治療介入グループでも有意な効果を示さなかった。６ヶ月において、対応ｔ検定解析により、グループ２に関して、ベースラインと比較したＢＣＶＡの統計的に有意な改善が明かとなった（ｐ＝０．００８）。反復測定分散分析は、グループ２に関して、３つの試験訪問に亘る有意な変化を確認した（ｐ＝０．０３４）。
【０１４９】
４．コントラスト感度
薄明視及び明所視コントラスト感度は、３ヶ月及び特に６ヶ月において、空間周波数の範囲に亘って、ベースライン値から改善した。３ヶ月において、グループ２では、薄明視条件に関して１．５ｃｐｄ（ｐ＝０．００８）において、及び、明所視条件に関して３ｃｐｄ（ｐ＝０．０２４）及び１２ｃｐｄ（ｐ＝０．０２５）において、統計的に有意な改善が注目された。６ヶ月において、グループ２では、実質的により広い空間周波数の組に亘って、最も顕著には薄明視条件下で、ＣＳにおいて統計的に有意な改善が注目された。６ＣＰＤでの薄明視ＣＳは、６ヶ月において、グループ１に関して有意に改善した（ｐ＜０．０５）。反復測定分散分析により、全試験訪問に亘って、薄明視及び明所視条件下で試験した５つの空間周波数のうちの少なくとも３つに関して、コントラスト感度の改善が統計的に有意であることを確認した。コントラスト感度結果の詳細な概要を、表１６に提供する。
【０１５０】
【表１６】
2014524914.tif 000022
【０１５１】
５．グレア障害
薄明視及び明所視グレア障害は、３ヶ月及び６ヶ月において、一連の空間周波数に亘ってベースラインから改善した。３ヶ月において、グループ２では、薄明視条件に関して１２ｃｐｄ（ｐ＝０．０４８）において、明所視条件に関して１．５ｃｐｄ（ｐ＝０．０２３）及び３ｃｐｄ（ｐ＝０．０３３）において統計的に有意な改善が注目された。
【０１５２】
６ヶ月において、グループ２では、実質的により広い空間周波数の組に亘って、統計的に有意な改善が注目された。全試験訪問に亘る反復測定分散分析により、グループ１及び３では薄明視又は明所視グレア障害において、任意の空間周波数にて統計的に有意な変化がないことが明かとなった。薄明視及び明所視条件下の両方でのグループ２に関するグレア障害における、試験した全空間周波数（１８ｃｐｄ以外）に関する統計的に有意な改善は、反復測定分散分析に対して強固（ｒｏｂｕｓｔ）であった。グレア障害結果の詳細な概要を、表１７に提供する。
【０１５３】
【表１７】
2014524914.tif 000023
【０１５４】
６．光ストレス回復時間
光ストレス回復時間は、試験期間中、グループのいずれにおいても有意に改善しなかった（ｐ＞０．０５  全部に関して）。しかしながら、対応ｔ検定解析は、グループ２に関するＰＲＴの改善（ＰＲＴ  ベースラインと比較して、６ヶ月にて平均で３７秒［又は２１％］短い）が近づいたことを明かにしたが、統計的有意性には達しなかった（ｔ＝２．０６７、ｐ＝０．０６９）。
【０１５５】
眼の迷光の測定値は、いずれのグループに関しても有意に変化しなかった（ｐ＞０．０５  全部に関して）。アンケート及び不快度評価により決定した視覚的経験及び眼部不快感は、いずれのグループに関しても、試験期間中、有意に変化しなかった。
【０１５６】
７．ＭＰの変化と、視覚パフォーマンスパラメータの変化との比較
ベースラインと６ヶ月との間で、黄斑色素の変化と、視覚パフォーマンスパラメータの変化との間の比較を行った。黄斑色素の変化と、視覚パフォーマンス変数のいずれとの間にも、統計的に有意な関係は存在しなかった（ｐ＞０．０５  全部に関して）。表１８は、１．５ｃｐｄにおける明所視（日中）及び薄明視（夜間）コントラスト感度の結果を与える。
【０１５７】
【表１８】
2014524914.tif 000024
【０１５８】
驚くべきことに、これらのデータは、観察された視覚パフォーマンスパラメータの増大が、黄斑色素の増大とは無関係であったことを示す。
【０１５９】
考察
ＭＰＯＤに関しては、３ヶ月又は６ヶ月において、ＭＺを含まない製剤を栄養補助された対象、又はプラセボを与えられた対象に、任意の偏心度において有意な変化は存在しなかった。対照的に、３つの全黄斑カロテノイドを栄養補助された対象は、３ヶ月及び６ヶ月に試験した５つの偏心度のうちの４つにおいて、ＭＰＯＤの有意な増大を有した。
【０１６０】
本試験は、眼疾患を有しない健康な対象の間での、視覚パフォーマンスに対するＭＰ増大の新規な及び重要な効果を示す。広い範囲の試験モダリティー及び条件に亘って、ＭＰＯＤの有意な上昇を呈した対象の間で視覚パフォーマンスが有意に改善された。詳細には、コントラスト感度及びグレア障害の改善（事実上、全空間周波数に亘り、かつ日中及び夜間条件下での）、及び視力の改善は、３つの全黄斑カロテノイドを栄養補助された対象において示されたが、そのような初見は、プラセボ対象又はＬ及びＺを栄養補助された（が、ＭＺは栄養補助されない）対象では見られなかった。
【０１６１】
データは、グレア障害試験プロトコルがＭＰの既知のスペクトル吸収に一致する短波長ピークの放出プロファイルを呈するＬＥＤグレア源を含んでいたため、ＭＰがその光濾過効果を介して視覚パフォーマンスに影響を与え得るという見解を支持する。しかしながら、視力及びコントラスト感度で観察された改善は、光学的説明単独との一貫性が比較的低い。しかしながら、使用した刺激は比較的少量の短波長成分を含む。従って、ＭＰ増大は、色収差及び光散乱の有害な効果の低下による光学像の向上をもたらし、それによって、そのようなスペクトル的に広帯域の刺激に関しても、視力及びコントラスト感度を改善することが可能である。細胞内化合物である黄斑カロテノイドは神経生物学的役割を果たすことにより、最適な神経生理学的パフォーマンスに寄与し、及び／又は該パフォーマンスを促進し、ひいては視覚機能を促進することも可能である（空間視覚の限界は、組み合わされた光学及び神経の効率限界の影響を表す）。この見解は、視覚パフォーマンスの増大と、黄斑色素の増大との間に相関が存在しないという観察により支持され、ＭＰカロテノイドは神経生理学的機構によって視覚パフォーマンス上に効果を与え得ることを示唆する。
【０１６２】
結論として、本発明者らは、３種の全黄斑カロテノイドを補給した後のＭＰＯＤの急速かつ持続的な上昇を示し、これはプラセボ対照比較対象、又は、ＭＺを含まない製剤を栄養補助された対象には観察されなかった。更に、３種の全黄斑カロテノイドを用いた補給は、コントラスト感度及びグレア障害（明所視及び暗所視条件下での）において、及び補正距離視力において有意な改善をもたらした一方、そのような変化は、プラセボ対照、又は、ＭＺを含まない製剤を栄養補助された対象には見られなかった。これらの知見は、視覚重要度の最適化が重要である活動に従事している（特に明るい条件下で活動している場合）人々にとって潜在的に重要な示唆であり、更なる試験の根拠となる。
【０１６３】
実施例５
黄斑色素の非定型分布（中心凹み）を有する対象における視覚パフォーマンス上のＭＺ含有栄養補助剤の効果 対象及び投与量
実施例２に記載した、黄斑色素空間プロファイルにおいて予め識別した中心凹みを有する８人の対象を、この試験に動員した。８人の全対象が、１０ｍｇ  Ｌ、１０ｍｇ  ＭＺ、及び１０ｍｇ  Ｚを含む栄養補助剤を毎日３ヶ月間消費した。
【０１６４】
方法
ベースラインにおいて、及びＭＺ補給から３ヶ月後に、黄斑色素光学密度（ＭＰＯＤ）を実施例１の通りに測定した。実施例３の４節に記載した方法を用いて、同様に文字コントラスト感度（Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｃｈａｒｔ）を測定した。
【０１６５】
結果
１．ＭＰＯＤ結果：表１９及び図１０から明かなように、ＭＰの空間プロファイルは、１０ｍｇ  Ｌ、１０ｍｇ  ＭＺ、及び１０ｍｇ  Ｚを３ヶ月補給した後、正常化した。全対象は、この治療介入に応答した。０．５°を除いて全偏心度に統計的に有意な増大が見られた。
【０１６６】
【表１９】
2014524914.tif 000025
【０１６７】
２．コントラスト感度：表２０から明かなように、１０ｍｇ  Ｌ、１０ｍｇ  ＭＺ、及び１０ｍｇ  Ｚを３ヶ月補給した後、コントラスト感度の改善があった。   
【０１６８】
【表２０】
2014524914.tif 000026
【０１６９】
実施例６；
一実施形態において、本発明の組成物は、ＭＺ、Ｌ、及び任意選択でＺで強化されたミネラル及びビタミン含有栄養補助食品の形態をとる。この栄養補助剤は、以下の活性成分の組成物と共に錠剤として処方される：−
ＭＺ  ５ｍｇ
Ｌ  ５ｍｇ
Ｚ  １ｍｇ
ビタミンＡ  ８００マイクログラム
チアミン  １．１ｍｇ
リボフラビン  １．４ｍｇ
ビタミンＢ６  ２．０ｍｇ
ビタミンＢ１２  ２．５マイクログラム
葉酸  ４００マイクログラム
ナイアシン  ２０ｍｇ
パントテン酸  ６ｍｇ
ビオチン  ５０マイクログラム
ビタミンＣ  ８０ｍｇ
ビタミンＤ  ２０マイクログラム
ビタミンＥ  １２ｍｇ
カルシウム  １２０ｍｇ
マグネシウム  ６０ｍｇ
鉄  １４ｍｇ
亜鉛  １０ｍｇ
銅  １ｍｇ
ヨウ素  １５０マイクログラム
マンガン  ３ｍｇ
クロム  ４０マイクログラム
セレン  ５５マイクログラム
モリブデン  ５０マイクログラム
以下の成分は、ミネラル及びビタミン源として使用することができる。 ミネラル：炭酸カルシウム、水酸化マグネシウム、フマル酸第一鉄、酸化亜鉛、硫酸銅、ヨウ化カリウム、硫酸マンガン、塩化第二クロム、セレン酸ナトリウム、モリブデン酸ナトリウム ビタミン：
酢酸レチニル、モノ硝酸チアミン、リボフラビン、ピリドキシン塩酸塩、シアノコバロミン（ｃｏｂａｌｏｍｉｎ）、葉酸、ナイアシン、Ｄ−パントテン酸カルシウン（Ｃａｌｃｉｕｎ）、Ｄ−ビオチン、アスコルビン酸ナトリウム＃、コレカルシフェロール、Ｄ−α−トコフェロール酢酸塩
錠剤は、都合よくは更に以下の充填剤の１つ又は複数を含んでもよい：マルトデキストリン、微細セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、シェラック、滑石、アカシアガム、グリセロール、二酸化チタン、ポリフルクトース   １日当たり１つの錠剤（例えば５００ｍｇ）を摂取する必要がある。
【０１７０】
実施例７：ヒト消費用の卵黄中へのＭＺの提供
数人の研究者は、卵黄からのＬ及びＺの摂取が、カプセル剤の２〜４倍効率的であることを示した（Ｈａｎｄｌｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９  Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．７０，２４７−２５１；Ｇｏｏｄｒｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，２００６  Ｊ．Ｎｕｔｒ．１３６，２５１９−２５２４；Ｊｏｈｎｓｏｎ  ２００４，Ｊ．Ｎｕｔｒ．１３４，１８８７−１８９３）。
【０１７１】
この試験の目的は、Ｌ、ＭＺ及びＺの混合物を雌鳥に給飼して、卵黄中のＭＺの総量を決定することであった。加えて、実験の終わりに収集した２４個の卵は、１人の対象により１個の卵／日にて消費され、血中のＭＺ組成を決定した。
【０１７２】
方法
およそ１８週齢の８匹のＢｏｖａｎ  Ｇｏｌｄｌｉｎｅの雌鳥を得た。
【０１７３】
雌鳥が１日に少なくとも全部で８個の卵を産んだときに、この雌鳥を隔離し、市販の飼料のみ給飼した。１週間後、混合カロテノイドを含有するプレミックスを飼料に加えた際に実験を開始した。プレミックスは、餌１ｋｇ当たり２５０ｍｇのＭＺを提供し、Ｌ  ５０、ＭＺ  ３０、Ｚ  ２０の割合を有した。
【０１７４】
ベースライン、３週間及び６週間にて収集した全卵から調製した混合物中の卵黄カロテノイドを測定した。
【０１７５】
卵黄縣濁液の調製
卵黄を個々に秤量し、リン酸緩衝生理食塩水と混合し、最大５０ｍｌとした。２ｍｌの各縣濁液を、３つのバッチの各々に関して別々に、別個の万能管（ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ｔｕｂｅ）内で混合し、−４０℃で保管した。
【０１７６】
カロテノイド抽出
（ｉ）卵黄縣濁液
卵黄縣濁液（０．１ｍｌ）をガラス抽出管内で０．１５ｍｌの水性ＫＯＨ（２５ｇ／１００ｍｌ水）、０．１５ｍｌの絶対エチルアルコール及び０．１ｍｌのエキネノン（内部基準、０．４ｍｇ／５００ｍｌエチルアルコール）と混合し、４５Ｃで４５分間インキュベートした。
【０１７７】
次いで、溶液を冷却し、１．５ｍｌのヘキサン（ＢＨＴ  ５００ｍｇ／ｌを含有する）と勢いよく混合し、遠心分離にかけてヘキサンと水性層とを分離した。１ｍｌの上部ヘキサン層を蒸発管に移動し、残留物を１．５ｍｌのヘキサンで再抽出した。遠心分離後、１．５ｍｌの上部層を除去し、抽出物を組み合わせ、窒素下にて４０Ｃで乾燥するまで蒸発させた。移動相（下記のＵｌｔｒａｃａｒｂ  ＨＰＬＣ参照）を用いて残留物を最大０．１５ｍｌとし、０．１ｍｌをＨＬＰＣ分析のためにＵｌｔｒａ  Ｃａｒｂ  Ｃｏｌｕｍｎ上に注入した。
【０１７８】
（ｉｉ）血漿
ヒト対象からの血液（１０ｍｌ）をベースライン、１日当たり１個の卵の消費から１２日及び２４日にてリチウムヘパリンチューブ内に収集し、遠心分離にかけて血漿を提供し、−４０Ｃで保管した。血漿、０．２５ｍｌを０．２ｍｌのドデシル硫酸ナトリウム、０．４ｍｌの酢酸エチル（内部基準）と混合した。ＢＨＴ含有ヘキサン（１．０ｍｌ）を加え、混合物を４分間勢いよく抽出し、１０分間遠心分離にかけ、０．７ｍｌの上部ヘキサン層を除去し、乾燥するまで蒸発させた。
【０１７９】
移動相（下記のＨＰＬＣ手順参照）を用いて残留物を最大０．１ｍｌとし、０．０５ｍｌをカラム上に注入した。
【０１８０】
Ｌ、ＭＺ、Ｚを測定するための液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）   ２つのカラム手順を用いてＭＺの分離及び定量化を達成した。
【０１８１】
Ｕｌｔｒａｃａｒｂ手順：上述したように調製した抽出物を、アセトニトリル：メタノール（８５：１５、０．１％トリエチルアミン含有）を含む移動相中に再構成した。同じ溶媒混合物を１．５ｍｌ／分で使用して、抽出物を３マイクロｍ  Ｕｌｔｒａｃａｒｂ  ＯＤＳカラム（２５０ｘ４．６ｍｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，ＵＫ）を使用した均一濃度クロマトグラフにかけ、フォトダイオードアレイ検出器（モデル２９９６、Ｗａｔｅｒｓ  Ｌｔｄ）を使用して検出して、４５０ｎｍでＬ及びＺ＋ＭＺを定量化した。ＭＺ＋Ｚの出現と一致した溶離液を廃棄ラインから収集し、窒素下で乾燥するまで蒸発させた。
【０１８２】
キラルクロマトグラフィー：次いで、Ｚ＋ＭＺ抽出物を０．１ｍｌのヘキサン：イソプロパノール（９０：１０）中で再構成し、３０分間に亘る線形勾配において９０％ヘキサン及び１０％イソプロピルアルコールから開始して９５％ヘキサンに増大する勾配溶出を用いた０．８ｍｌ／分の溶出による、１０マイクロｍ  Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤカラム（２５０ｘ４．６ｍｍ；Ｃｈｉｒａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｅｕｒｏｐｅ，６７４０４  Ｉｌｌｋｉｒｃｈ  Ｃｅｄｅｘ，Ｆｒａｎｃｅ）上のクロマトグラフに５０ｕＬをかけて、ＭＺ及びＺ異性体の割合を決定した。
【０１８３】
結果
卵黄中のＭＺ
ベースライン、並びに３週間及び６週間の終わりの卵黄の平均（ＳＤ）重量は、各々、１２．２９（０．３５）、１４．２３（０．８７）及び１５．７３（０．７２）ｇであった。卵黄のＭＺ含有量を表２１に示す。ベースラインではＬ及びＺのみが存在した；
２５０ｐｐｍのカロテノイド混合物を３週間給飼することにより、卵黄１つ当たり２．７８ｍｇのＭＺを含有する卵黄が生成され、Ｌはおよそ７６％、Ｚは１３％、ＭＺは１１％であった。６週間目の更なる増大はなかった。
【０１８４】
血漿
１日当たり１個の卵を消費した１人のヒト対象からの血漿中のＭＺ含有量を、表２２に示す。
【０１８５】
ベースラインの総ＭＺ濃度は０．８１マイクロモル／リットルであり、そのうちＬは５３％であり、Ｚは４７％であり、ＭＺは０％であった。Ｌの濃度は、１２日目に殆ど３倍となったが、続いて２４日目にベースライン値の２倍のみに低下した。
【０１８６】
１２及び２４日目のＭＺ＋Ｚの増大は、各々３０％及び２３％であり、これはＭＺの増大のみに起因した。
【０１８７】
結論
カロテノイドの混合物を３及び６週間鶏に給飼したことにより、卵黄中の及び１日１個の卵を消費する対象の血漿中のＬ＋ＭＺ＋Ｚが増大した。
【０１８８】
卵黄１個当たりのＭＺ含有量は、およそ０．８ｍｇから２．８ｍｇへ上昇した。卵黄からのＬ及びＺ吸収は向上されていることが既知であるため、Ｌ、Ｚ及びＭＺの混合物を給飼された鶏からの２個又は３個の卵は十分なＭＺを提供して、対象の視覚パフォーマンスを改善し得るが、これは試験されなかった。
【０１８９】
【表２１】
2014524914.tif 000027
【０１９０】
【表２２】
2014524914.tif 000028
【０１９１】
実施例８；食物配合物及びＶＰへのＭＺの添加
５ｍｇのＭＺ、５ｍｇのＬ及び１ｍｇのＺを、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｏｄｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ｓｔａｆｆｏｒｄ  Ｈｏｕｓｅ，Ｂｒａｋｅｙ  Ｒｏａｄ，Ｃｏｒｂｙ  ＮＮ１７  ５ＬＵ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍから得られる、「Ｔｈｅ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｄｉｅｔ」製品を各々およそ５０ｇ含む４つの薬袋の内容物と混合することにより、乾燥粉末配合物栄養補助食品の組成物を調製し得る（Ｔｈｅ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｄｉｅｔは、登録商標である）。
【０１９２】
実施例９；魚油、ＭＺ及びＶＰ
網膜は高い濃度のω３脂肪酸を含み、ω３脂肪酸は、特に魚油、例えばサケ、ニシン、サバ、アンチョビ、イワシからの；またオキアミ及びグリーンリップドマッスル（ｇｒｅｅｎ−ｌｉｐｐｅｄ  ｍｕｓｃｌｅ）からの油中に豊富である。ω３脂肪酸はエイコサペンタン酸Ｃ２２．６ｎ−３（ＥＰＡ）及びドコサヘキサン酸Ｃ２２．６ｎ−３（ＤＨＡ）として見出され、組み合わせて魚体油の約３０％を構成する。ＥＰＡ＋ＤＨＡの許容可能な一日マクロ栄養素用量（ＡＭＮＤ）は、男性で約１．６ｇ／日、女性で１．１ｇ／日、即ち各々約５ｇ及び３．５ｇの魚油である。
【０１９３】
網膜内の高い濃度のω３脂肪酸の存在は、ω３脂肪酸が視覚に重要な役割を果たし得ることを示唆する。それ故、ＭＺを含む黄斑カロテノイド（ＭＣ）とω３脂肪酸との組み合わせは、網膜に有益であり、視覚パフォーマンスを改善するであろう。混合物はカプセル剤中に、又は薬袋中のエマルションとして存在し得る。後者はより少量の用量を薬袋中に付与し得る利点を有する一方、ＡＭＮＤに関しては、数個の大きいカプセル剤（これは多数の高齢の人々が嚥下の困難さを見出す）が必要である。エマルションは２５〜６０％の魚油を含んで０．５〜２．０ｇのω３脂肪酸及び十分なＭＣを提供し、１日に０．５ｍｇ〜５０ｍｇのＭＣの一日用量を与えることができる。
【０１９４】
７８ｍｌのオキアミ油中のメソゼアキサンチン（ｍｅｓｏｚｅａｚａｎｔｈｉｎ）１０ｇ、ルテイン１０ｇ及びゼアキサンチン２ｇからなる活性黄斑カロテノイド（ＭＣ）の市販の製剤を、９００ｍｌのサケ油と混合し、各々１ｇの油配合物を含有する軟ゲルカプセル剤とする。５個のカプセル剤の一日用量は、１．５ｇのω３脂肪酸及び２２ｍｇ用量の黄斑カロテノイドを提供して視覚パフォーマンスを改善するであろう。
【０１９５】
代替的な実施形態は、以下のように処方され得る：
成分
上記のようなＭＣ、オキアミ及びサケ油の混合物  ５５％
水  ３５％
スクラロース（Ｓｐｌｅｎｄａ（商標））  ４％
粉乳  ５％
ソルビン酸カリウム  ０．１％
α  トコフェロール  ０．１％
香料（例えば、柑橘類）  ０．８％
標準的な技術を用いてエマルションを不活性雰囲気下で作製した後、気密薬袋内に包装し、該薬袋は各々５グラムのエマルションを含む。一日用量は、２薬袋／日であり、６ｇのω３脂肪酸及び２２ｍｇのＭＣを含む。
【図１】
2014524914.tif 000029
【図２】
2014524914.tif 000030
【図３】
2014524914.tif 000031
【図４】
2014524914.tif 000032
【図５】
2014524914.tif 000033
【図６】
2014524914.tif 000034
【図７】
2014524914.tif 000035
【図８】
2014524914.tif 000036
【図９】
2014524914.tif 000037
【図１０】
2014524914.tif 000038
【国際調査報告】
2014524914.tif 000039
2014524914.tif 000040
2014524914.tif 000041
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