(57)【要約】  本発明は、有効量のプロアントシアニジンと、薬学的に許容し得る担体または塩とを含有し、プロアントシアニジンのモノマーユニットは下記化学式を有し、肝臓がん増殖を遅延し、肝機能、肝線維症、肝硬変および肝炎を改善して、かつ障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物を提供する。2014508785.tif 000023  式中、Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、またはＲ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨであり、かつＲ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖である。【選択図】なし
2014508785.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量のプロアントシアニジンと
薬学的に許容し得る担体または塩とを含有し、
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは下記化学式を有することを特徴とするＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【化１】
2014508785.tif 000016
［式中、
Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、または
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨであり、
かつＲ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖である。］
【請求項２】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットが互いにＣ４−Ｃ８結合、Ｃ４−Ｃ６結合、またはＣ２−Ｃ７結合を介して結合している請求項１に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【請求項３】
前記プロアントシアニジンの重合度が２〜３０である請求項１に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【請求項４】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４においてＲまたはＳの光学異性体を含む請求項１に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【請求項５】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラボノイド化合物を含む請求項１に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【請求項６】
前記フラボノイド化合物がカテキン、エピカテキン、エピアフゼレキン、ガロカテキン、ガロエピカテキン、エピガロカテキン、ガレート、フラボノール、フラバンジオール、ロイコシアニジンまたはプロシアニジンを含む請求項５に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【請求項７】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラバン−３−オールを含む請求項１に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【請求項８】
前記プロアントシアニジンが植物からの抽出物である請求項１に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【請求項９】
前記植物が、ツツジ科、バラ科、マツ科、ブドウ科またはイラクサ科に属する植物を含む請求項８に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【請求項１０】
前記イラクサ科に属する植物がナンバンカラムシを含む請求項９に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【請求項１１】
有効量のプロアントシアニジンと
薬学的に許容し得る担体または塩とを含有し、
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは下記化学式を有することを特徴とする肝機能改善用医薬組成物。
【化２】
2014508785.tif 000017
［式中、
Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、または
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨであり、
かつＲ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖である。］
【請求項１２】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットが互いにＣ４−Ｃ８結合、Ｃ４−Ｃ６結合、またはＣ２−Ｃ７結合を介して結合している請求項１１に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【請求項１３】
前記プロアントシアニジンの重合度が２〜３０である請求項１１に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【請求項１４】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４においてＲまたはＳの光学異性体を含む請求項１１に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【請求項１５】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラボノイド化合物を含む請求項１１に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【請求項１６】
前記フラボノイド化合物がカテキン、エピカテキン、エピアフゼレキン、ガロカテキン、ガロエピカテキン、エピガロカテキン、ガレート、フラボノール、フラバンジオール、ロイコシアニジンまたはプロシアニジンを含む請求項１５に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【請求項１７】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラバン−３−オールを含む請求項１１に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【請求項１８】
前記プロアントシアニジンが植物からの抽出物である請求項１１に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【請求項１９】
前記植物が、ツツジ科、バラ科、マツ科、ブドウ科またはイラクサ科に属する植物を含む請求項１８に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【請求項２０】
前記イラクサ科に属する植物がナンバンカラムシを含む請求項１９に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【請求項２１】
有効量のプロアントシアニジンと
薬学的に許容し得る担体または塩とを含有し、
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは下記化学式を有することを特徴とする肝線維症改善用医薬組成物。
【化３】
2014508785.tif 000018
［式中、
Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、または
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨであり、
かつＲ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖である。］
【請求項２２】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットが互いにＣ４−Ｃ８結合、Ｃ４−Ｃ６結合、またはＣ２−Ｃ７結合を介して結合している請求項２１に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【請求項２３】
前記プロアントシアニジンの重合度が２〜３０である請求項２１に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【請求項２４】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４においてＲまたはＳの光学異性体を含む請求項２１に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【請求項２５】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラボノイド化合物を含む請求項２１に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【請求項２６】
前記フラボノイド化合物がカテキン、エピカテキン、エピアフゼレキン、ガロカテキン、ガロエピカテキン、エピガロカテキン、ガレート、フラボノール、フラバンジオール、ロイコシアニジンまたはプロシアニジンを含む請求項２５に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【請求項２７】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラバン−３−オールを含む請求項２１に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【請求項２８】
前記プロアントシアニジンが植物からの抽出物である請求項２１に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【請求項２９】
前記植物が、ツツジ科、バラ科、マツ科、ブドウ科またはイラクサ科に属する植物を含む請求項２８に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【請求項３０】
前記イラクサ科に属する植物がナンバンカラムシを含む請求項２９に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【請求項３１】
有効量のプロアントシアニジンと
薬学的に許容し得る担体または塩とを含有し、
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは下記化学式を有することを特徴とする肝硬変改善用医薬組成物。
【化４】
2014508785.tif 000019
［式中、
Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、または
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨであり、
かつＲ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖である。］
【請求項３２】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットが互いにＣ４−Ｃ８結合、Ｃ４−Ｃ６結合、またはＣ２−Ｃ７結合を介して結合している請求項３１に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【請求項３３】
前記プロアントシアニジンの重合度が２〜３０である請求項３１に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【請求項３４】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４においてＲまたはＳの光学異性体を含む請求項３１に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【請求項３５】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラボノイド化合物を含む請求項３１に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【請求項３６】
前記フラボノイド化合物がカテキン、エピカテキン、エピアフゼレキン、ガロカテキン、ガロエピカテキン、エピガロカテキン、ガレート、フラボノール、フラバンジオール、ロイコシアニジンまたはプロシアニジンを含む請求項３５に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【請求項３７】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラバン−３−オールを含む請求項３１に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【請求項３８】
前記プロアントシアニジンが植物からの抽出物である請求項３１に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【請求項３９】
前記植物が、ツツジ科、バラ科、マツ科、ブドウ科またはイラクサ科に属する植物を含む請求項３８に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【請求項４０】
前記イラクサ科に属する植物がナンバンカラムシを含む請求項３９に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【請求項４１】
有効量のプロアントシアニジンと
薬学的に許容し得る担体または塩とを含有し、
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは下記化学式を有することを特徴とする肝炎改善用医薬組成物。
【化５】
2014508785.tif 000020
［式中、
Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、または
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨであり、
かつＲ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖である。］
【請求項４２】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットが互いにＣ４−Ｃ８結合、Ｃ４−Ｃ６結合、またはＣ２−Ｃ７結合を介して結合している請求項４１に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【請求項４３】
前記プロアントシアニジンの重合度が２〜３０である請求項４１に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【請求項４４】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４においてＲまたはＳの光学異性体を含む請求項４１に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【請求項４５】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラボノイド化合物を含む請求項４１に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【請求項４６】
前記フラボノイド化合物がカテキン、エピカテキン、エピアフゼレキン、ガロカテキン、ガロエピカテキン、エピガロカテキン、ガレート、フラボノール、フラバンジオール、ロイコシアニジンまたはプロシアニジンを含む請求項４５に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【請求項４７】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラバン−３−オールを含む請求項４１に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【請求項４８】
前記プロアントシアニジンが植物からの抽出物である請求項４１に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【請求項４９】
前記植物が、ツツジ科、バラ科、マツ科、ブドウ科またはイラクサ科に属する植物を含む請求項４８に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【請求項５０】
前記イラクサ科に属する植物がナンバンカラムシを含む請求項４９に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【請求項５１】
有効量のプロアントシアニジンと
薬学的に許容し得る担体または塩とを含有し、
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは下記化学式を有することを特徴とする障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【化６】
2014508785.tif 000021
［式中、
Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、または
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨであり、
かつＲ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖である。］
【請求項５２】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットが互いにＣ４−Ｃ８結合、Ｃ４−Ｃ６結合、またはＣ２−Ｃ７結合を介して結合している請求項５１に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【請求項５３】
前記プロアントシアニジンの重合度が２〜３０である請求項５１に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【請求項５４】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４においてＲまたはＳの光学異性体を含む請求項５１に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【請求項５５】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラボノイド化合物を含む請求項５１に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【請求項５６】
前記フラボノイド化合物がカテキン、エピカテキン、エピアフゼレキン、ガロカテキン、ガロエピカテキン、エピガロカテキン、ガレート、フラボノール、フラバンジオール、ロイコシアニジンまたはプロシアニジンを含む請求項５５に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【請求項５７】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラバン−３−オールを含む請求項５１に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【請求項５８】
前記プロアントシアニジンが植物からの抽出物である請求項５１に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【請求項５９】
前記植物が、ツツジ科、バラ科、マツ科、ブドウ科またはイラクサ科に属する植物を含む請求項５８に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【請求項６０】
前記イラクサ科に属する植物がナンバンカラムシを含む請求項５９に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【請求項６１】
有効量のプロアントシアニジンと
薬学的に許容し得る担体または塩とを含有し、
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは下記化学式を有することを特徴とする肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【化７】
2014508785.tif 000022
［式中、
Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、または
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨであり、
かつＲ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖である。］
【請求項６２】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットが互いにＣ４−Ｃ８結合、Ｃ４−Ｃ６結合、またはＣ２−Ｃ７結合を介して結合している請求項６１に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【請求項６３】
前記プロアントシアニジンの重合度が２〜３０である請求項６１に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【請求項６４】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４においてＲまたはＳの光学異性体を含む請求項６１に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【請求項６５】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラボノイド化合物を含む請求項６１に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【請求項６６】
前記フラボノイド化合物がカテキン、エピカテキン、エピアフゼレキン、ガロカテキン、ガロエピカテキン、エピガロカテキン、ガレート、フラボノール、フラバンジオール、ロイコシアニジンまたはプロシアニジンを含む請求項６５に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【請求項６７】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラバン−３−オールを含む請求項６１に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【請求項６８】
前記プロアントシアニジンが植物からの抽出物である請求項６１に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【請求項６９】
前記植物が、ツツジ科、バラ科、マツ科、ブドウ科またはイラクサ科に属する植物を含む請求項６８に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【請求項７０】
前記イラクサ科に属する植物がナンバンカラムシを含む請求項６９に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【請求項７１】
肝細胞がんの進行を遅延させるか、肝機能、肝線維症、肝硬変および肝炎を改善させるか、障害を受けた肝臓の再生を促進させるか、および／または肝線維症を回復に向かわせる請求項１〜７０のいずれかに記載の医薬組成物の使用方法。
【請求項７２】
肝細胞がんの進行を遅延させるか、肝機能、肝線維症、肝硬変および肝炎を改善させるか、障害を受けた肝臓の再生を促進させるか、および／または肝線維症を回復に向かわせる請求項１〜７０のいずれかに記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬組成物に関し、特に肝臓がんの進行を遅延し、肝機能、肝線維症、肝硬変および肝炎を改善して、並びに障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
肝細胞がん（ＨＣＣ、肝臓がん）は世界の男性の死因の第５位であり、女性の死因の８位である。ＨＣＣは、初期段階においてほとんど検出できない。それゆえ治療の最良のタイミングの遅れがいつも生じる。臨床的には、肝切除術または肝移植はＨＣＣ治療のための最良の方法である。しかしながら、ほとんどのＨＣＣ患者が末期に診断されるので、患者の１５％だけが肝切除術によって治療することができるが、その治癒率は５％未満である。更に、肝動脈化学塞栓療法（ＴＡＣＥ）、高周波アブレーション（ＲＦＡ）および放射線療法を含む他の治療方法を行うことができるが、その再発率は８０％を超える。臨床症状を伴った患者がＨＣＣと診断された場合、ＨＣＣの死亡率は高いだけでなく、その予後が非常に悪いことを考慮すれば、その平均生存期間はたったの６月程度である。現在、ＨＣＣの一般的な化学療法薬（例えばフルオロウラシル、ピラルビシン、オキサリプラチン、シスプラチンなど）の有効性は限られている。マルチキナーゼ抑制剤として新しいターゲット療法剤であるネクサバール（登録商標）（ソラフェニブ）は進行期のＨＣＣまたは初期のＨＣＣ用療法剤として承認されている。ネクサバールは、ＨＣＣの生存率を改善する。２００８年における、がん治療の世界的マーケティングは５３１億ドル（ネイチャー  レビュー  イン  キャンサー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ））であり、肝臓がん治療のマーケティングは２５億ドルである。それゆえＨＣＣ治療用新薬の開発は臨床での要求を満たしていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の一実施態様は、有効量のプロアントシアニジンと薬学的に許容し得る担体または塩とを含有し、前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは下記化学式を有し、特にＨＣＣの進行を遅延させるか、肝機能、肝線維症、肝硬変および肝炎を改善させるか、障害を受けた肝臓の再生を促進させるか、および／または肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物を提供することにある。
【０００４】
【化１】
2014508785.tif 000003
【０００５】
式中、Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、またはＲ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨであり、かつＲ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明では、実験的試験の後に（１）慢性Ｂ型肝炎ウィルスまたはＣ型肝炎ウィルスの感染によって引き起こされる肝臓がんを含む様々な肝臓病治療に適応可能な医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）を見出した。この医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）は、ＨＣＣ患者の肝機能を改善し、ＨＣＣの進行を低下させ、ＨＣＣ患者の手術可能率および手術成功率を増加させて、手術後の再発率を低下させ、生存率を増加させて、ＨＣＣ患者の生存期間を延長し、更にＨＣＣ患者の生活の質を改善することができる他の様々な治療方法として単独で、またはアジュバントとして使用することができる。（２）上記医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）は単独でまたは他の臨床治療薬と組み合わせて使用することができ、これにより肝線維症患者を治療することができる。（３）上記医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）は単独で、または他の臨床治療薬と組み合わせて使用することができ、これにより肝硬変とＨＣＣを防ぐために肝機能を改善するだけでなく脂肪肝患者を治療することができる。
【０００７】
即ち、本発明は以下の項目のように記載される。
【０００８】
１．有効量のプロアントシアニジンを含むＨＣＣの進行を遅延するための医薬組成物：プロアントシアニジンのモノマーユニットは下記の化学式を有する。
【０００９】
【化２】
2014508785.tif 000004
【００１０】
式中、Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、またはＲ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨであり、かつＲ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖；かつ薬学的に許容し得る担体または塩を含む。
【００１１】
２．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットが互いにＣ４−Ｃ８結合、Ｃ４−Ｃ６結合、またはＣ２−Ｃ７結合を介して結合している項目１に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【００１２】
３．前記プロアントシアニジンの重合度が２〜３０である項目１に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【００１３】
４．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４においてＲまたはＳの光学異性体を含む項目１に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【００１４】
５．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラボノイド化合物を含む項目１に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【００１５】
６．前記フラボノイド化合物がカテキン、エピカテキン、エピアフゼレキン、ガロカテキン、ガロエピカテキン、エピガロカテキン、ガレート、フラボノール、フラバンジオール、ロイコシアニジンまたはプロシアニジンを含む項目５に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【００１６】
７．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラバン−３−オールを含む項目１に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【００１７】
８．前記プロアントシアニジンが植物からの抽出物である項目１に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【００１８】
９．前記植物が、ツツジ科、バラ科、マツ科、ブドウ科またはイラクサ科に属する植物を含む項目８に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【００１９】
１０．前記イラクサ科に属する植物がナンバンカラムシを含む項目９に記載のＨＣＣの進行を遅延する医薬組成物。
【００２０】
１１．有効量のプロアントシアニジンを含有し、プロアントシアニジンのモノマーユニットは下記化学式を有する肝機能改善用医薬組成物。
【００２１】
【化３】
2014508785.tif 000005
【００２２】
式中、Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、またはＲ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨであり、かつＲ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖；かつ薬学的に許容し得る担体または塩を含む。
【００２３】
１２．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットが互いにＣ４−Ｃ８結合、Ｃ４−Ｃ６結合、またはＣ２−Ｃ７結合を介して結合している項目１１に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【００２４】
１３．前記プロアントシアニジンの重合度が２〜３０である項目１１に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【００２５】
１４．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４においてＲまたはＳの光学異性体を含む項目１１に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【００２６】
１５．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラボノイド化合物を含む項目１１に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【００２７】
１６．前記フラボノイド化合物がカテキン、エピカテキン、エピアフゼレキン、ガロカテキン、ガロエピカテキン、エピガロカテキン、ガレート、フラボノール、フラバンジオール、ロイコシアニジンまたはプロシアニジンを含む項目１５に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【００２８】
１７．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラバン−３−オールを含む項目１１に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【００２９】
１８．前記プロアントシアニジンが植物からの抽出物である項目１１に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【００３０】
１９．前記植物が、ツツジ科、バラ科、マツ科、ブドウ科またはイラクサ科に属する植物を含む項目１８に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【００３１】
２０．前記イラクサ科に属する植物がナンバンカラムシを含む項目１９に記載の肝機能改善用医薬組成物。
【００３２】
２１．有効量のプロアントシアニジンを含有し、プロアントシアニジンのモノマーユニットは下記化学式を有する肝線維症改善用医薬組成物。
【００３３】
【化４】
2014508785.tif 000006
【００３４】
式中、Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、またはＲ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨであり、かつＲ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖；かつ薬学的に許容し得る担体または塩を含む。
【００３５】
２２．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットが互いにＣ４−Ｃ８結合、Ｃ４−Ｃ６結合、またはＣ２−Ｃ７結合を介して結合している項目２１に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【００３６】
２３．前記プロアントシアニジンの重合度が２〜３０である項目２１に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【００３７】
２４．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４においてＲまたはＳの光学異性体を含む項目２１に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【００３８】
２５．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラボノイド化合物を含む項目２１に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【００３９】
２６．前記フラボノイド化合物がカテキン、エピカテキン、エピアフゼレキン、ガロカテキン、ガロエピカテキン、エピガロカテキン、ガレート、フラボノール、フラバンジオール、ロイコシアニジンまたはプロシアニジンを含む項目２５に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【００４０】
２７．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラバン−３−オールを含む項目２１に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【００４１】
２８．前記プロアントシアニジンが植物からの抽出物である項目２１に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【００４２】
２９．前記植物が、ツツジ科、バラ科、マツ科、ブドウ科またはイラクサ科に属する植物を含む項目２８に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【００４３】
３０．前記イラクサ科に属する植物がナンバンカラムシを含む項目２９に記載の肝線維症改善用医薬組成物。
【００４４】
３１．有効量のプロアントシアニジンを含有し、プロアントシアニジンのモノマーユニットは下記化学式を有する肝硬変改善用医薬組成物。
【００４５】
【化５】
2014508785.tif 000007
【００４６】
式中、Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、またはＲ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨであり、かつＲ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖；かつ薬学的に許容し得る担体または塩を含む。
【００４７】
３２．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットが互いにＣ４−Ｃ８結合、Ｃ４−Ｃ６結合、またはＣ２−Ｃ７結合を介して結合している項目３１に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【００４８】
３３．前記プロアントシアニジンの重合度が２〜３０である項目３１に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【００４９】
３４．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４においてＲまたはＳの光学異性体を含む項目３１に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【００５０】
３５．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラボノイド化合物を含む項目３１に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【００５１】
３６．前記フラボノイド化合物がカテキン、エピカテキン、エピアフゼレキン、ガロカテキン、ガロエピカテキン、エピガロカテキン、ガレート、フラボノール、フラバンジオール、ロイコシアニジンまたはプロシアニジンを含む項目３５に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【００５２】
３７．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラバン−３−オールを含む項目３１に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【００５３】
３８．前記プロアントシアニジンが植物からの抽出物である項目３１に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【００５４】
３９．前記植物が、ツツジ科、バラ科、マツ科、ブドウ科またはイラクサ科に属する植物を含む項目３８に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【００５５】
４０．前記イラクサ科に属する植物がナンバンカラムシを含む項目３９に記載の肝硬変改善用医薬組成物。
【００５６】
４１．有効量のプロアントシアニジンを含有し、プロアントシアニジンのモノマーユニットは下記化学式を有する肝炎改善用医薬組成物。
【００５７】
【化６】
2014508785.tif 000008
【００５８】
式中、Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、またはＲ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨであり、かつＲ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖；かつ薬学的に許容し得る担体または塩を含む。
【００５９】
４２．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットが互いにＣ４−Ｃ８結合、Ｃ４−Ｃ６結合、またはＣ２−Ｃ７結合を介して結合している項目４１に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【００６０】
４３．前記プロアントシアニジンの重合度が２〜３０である項目４１に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【００６１】
４４．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４においてＲまたはＳの光学異性体を含む項目４１に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【００６２】
４５．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラボノイド化合物を含む項目４１に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【００６３】
４６．前記フラボノイド化合物がカテキン、エピカテキン、エピアフゼレキン、ガロカテキン、ガロエピカテキン、エピガロカテキン、ガレート、フラボノール、フラバンジオール、ロイコシアニジンまたはプロシアニジンを含む項目４５に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【００６４】
４７．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラバン−３−オールを含む項目４１に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【００６５】
４８．前記プロアントシアニジンが植物からの抽出物である項目４１に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【００６６】
４９．前記植物が、ツツジ科、バラ科、マツ科、ブドウ科またはイラクサ科に属する植物を含む項目４８に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【００６７】
５０．前記イラクサ科に属する植物がナンバンカラムシを含む項目４９に記載の肝炎改善用医薬組成物。
【００６８】
５１．有効量のプロアントシアニジンを含有し、プロアントシアニジンのモノマーユニットは下記化学式を有する障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【００６９】
【化７】
2014508785.tif 000009
【００７０】
式中、Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、またはＲ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨであり、かつＲ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖；かつ薬学的に許容し得る担体または塩を含む。
【００７１】
５２．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットが互いにＣ４−Ｃ８結合、Ｃ４−Ｃ６結合、またはＣ２−Ｃ７結合を介して結合している項目５１に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【００７２】
５３．前記プロアントシアニジンの重合度が２〜３０である項目５１に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【００７３】
５４．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４においてＲまたはＳの光学異性体を含む項目５１に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【００７４】
５５．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラボノイド化合物を含む項目５１に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【００７５】
５６．前記フラボノイド化合物がカテキン、エピカテキン、エピアフゼレキン、ガロカテキン、ガロエピカテキン、エピガロカテキン、ガレート、フラボノール、フラバンジオール、ロイコシアニジンまたはプロシアニジンを含む項目５５に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【００７６】
５７．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラバン−３−オールを含む項目５１に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【００７７】
５８．前記プロアントシアニジンが植物からの抽出物である項目５１に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【００７８】
５９．前記植物が、ツツジ科、バラ科、マツ科、ブドウ科またはイラクサ科に属する植物を含む項目５８に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【００７９】
６０．前記イラクサ科に属する植物がナンバンカラムシを含む項目５９に記載の障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物。
【００８０】
６１．有効量のプロアントシアニジンを含有し、プロアントシアニジンのモノマーユニットは下記化学式を有する肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【００８１】
【化８】
2014508785.tif 000010
【００８２】
式中、Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、またはＲ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨであり、かつＲ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖；かつ薬学的に許容し得る担体または塩を含む。
【００８３】
６２．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットが互いにＣ４−Ｃ８結合、Ｃ４−Ｃ６結合、またはＣ２−Ｃ７結合を介して結合している項目６１に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【００８４】
６３．前記プロアントシアニジンの重合度が２〜３０である項目６１に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【００８５】
６４．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４においてＲまたはＳの光学異性体を含む項目６１に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【００８６】
６５．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラボノイド化合物を含む項目６１に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【００８７】
６６．前記フラボノイド化合物がカテキン、エピカテキン、エピアフゼレキン、ガロカテキン、ガロエピカテキン、エピガロカテキン、ガレート、フラボノール、フラバンジオール、ロイコシアニジンまたはプロシアニジンを含む項目６５に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【００８８】
６７．前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラバン−３−オールを含む項目６１に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【００８９】
６８．前記プロアントシアニジンが植物からの抽出物である項目６１に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【００９０】
６９．前記植物が、ツツジ科、バラ科、マツ科、ブドウ科またはイラクサ科に属する植物を含む項目６８に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【００９１】
７０．前記イラクサ科に属する植物がナンバンカラムシを含む項目６９に記載の肝線維症を回復に向かわせる医薬組成物。
【００９２】
７１．肝細胞がんの進行を遅延させるか、肝機能、肝線維症、肝硬変および肝炎を改善させるか、障害を受けた肝臓の再生を促進させるか、および／または肝線維症を回復に向かわせる項目１〜７０のいずれかに記載の医薬組成物の使用方法。
【００９３】
７２．肝細胞がんの進行を遅延させるか、肝機能、肝線維症、肝硬変および肝炎を改善させるか、障害を受けた肝臓の再生を促進させるか、および／または肝線維症を回復に向かわせる項目１〜７０のいずれかに記載の医薬組成物。
【図面の簡単な説明】
【００９４】
【図１】図１ａ〜ｆは、３−フラバノール、３，４−フラバノール、カテキンおよびエピカテキンを示す。
【図２】図２ａ〜ｅは、プロアントシアニジンナンバンカラムシの９５％エタノール抽出物を再精製した後におけるプロアントシアニジンの熱分解ガスクロマトグラフィマススペクトルを示す。
【図３】図３は、ナンバンカラムシの９５％エタノール抽出物を再精製した後におけるプロアントシアニジンの赤外吸収スペクトルを示す。
【図４】図４ａおよびｂは、ナンバンカラムシの９５％エタノール抽出物を再精製した後におけるプロアントシアニジンの高速液体クロマトグラフィー（＋／−）マススペクトルを示す。
【図５】図５ａ〜ｃは、ナンバンカラムシの９５％エタノール抽出物を再精製した後におけるプロアントシアニジンの13Ｃ−ＮＭＲと1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図６】図６ａおよびｂは、13Ｃ−ＮＭＲと1Ｈ−ＮＭＲのスペクトル検出によるＣ４−Ｃ８結合およびＣ４−Ｃ６結合を示し、本発明では精製プロアントシアニジンポリマーのモノマーユニットは、主として互いにＣ４−Ｃ８結合により結合している。
【図７】図７ａ〜ｃは、ナンバンカラムシの９５％エタノール抽出物を再精製した後におけるプロアントシアニジンのマトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）マススペクトルを示す。
【図８】図８は、本発明において、ＨＣＣ誘発Ｂ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウスの生存率に対する医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）の効果を示す。
【図９】図９は、本発明において、肝臓重量／体重の比率で推定される、ＨＣＣ誘発Ｂ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウスのＨＣＣに対する医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）の効果を示す。
【図１０】図１０は、本発明において、肝機能指標−ＡＬＴで推定される、ＨＣＣ誘発Ｂ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウスの肝機能に対する医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）の効果を示す。
【図１１】図１１は、本発明において、肝機能指標−ＡＳＴで推定される、ＨＣＣ誘発Ｂ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウスの肝機能に対する医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）の効果を示す。
【図１２】図１２は、本発明において、ヒドロキシプロリン含有量で推定される、化学物質ＤＥＮによって誘発された肝線維症ラットに対する医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）の効果を示す。
【図１３】図１３は、本発明において、α−ＳＭＡ陽性領域で推定される、化学物質ＤＥＮによって誘発された肝線維症ラットに対する医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）の効果を示す。
【図１４】図１４は、本発明において、ヒドロキシプロリン含有量で推定される、化学物質ＤＥＮによって誘発された肝線維症ラットに対する医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）の効果を示す。
【図１５】図１５は、本発明において、化学物質ＤＥＮによって誘発される肝線維症／肝臓がんラットの生存率に対する医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）の効果を示す。
【図１６】図１６は、本発明において、化学物質ＤＥＮによって誘発される肝線維症／肝臓がんラットの生存率に対する医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）の効果を示す。
【図１７】図１７は、本発明において、肝体積の再生率により推定される、化学物質ＤＥＮによって誘発される肝線維症ラットの生存率に対する医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００９５】
添付図面を参照しながら以下の詳細な説明および実施例を読むことにより、本発明をより十分に理解できる。
【００９６】
以下の詳細な説明には、開示した実施形態を十分に理解できるように多数の具体的な詳細が記載されている。明らかであるだろうが、一または二以上の実施態様はこれらの具体的な詳細になくても実施することができる。他の例では、図面を単純化するために周知の構造および装置を概略的に示す。
【００９７】
本発明では、ＨＣＣの進行を遅延し、肝機能、肝線維症、肝硬変および肝炎を改善して、かつ障害を受けた肝臓の再生を促進する目的を達成するために、医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）の有効成分としてプロアントシアニジンを採用する。
【００９８】
本発明では、ＨＣＣの進行を遅延し、肝機能、肝線維症、肝硬変および肝炎を改善して、かつ障害を受けた肝臓の再生を促進する効果を有するプロアントシアニジンは植物からの抽出物であっても良い。一実施態様では、使用する植物はツツジ科、バラ科、マツ科、ブドウ科またはイラクサ科に属する植物を含んでいても良く、好ましくは、イラクサ科のナンバンカラムシである。植物の抽出部分は根、茎、葉および／または果物を含んでいても良い。
【００９９】
本発明では、植物は一般的に知られている抽出方法を使用することができる。一実施態様では、植物の乾燥根、茎、葉および／または果実をスライスするかまたはすりおろす。次に、植物を抽出溶液で抽出する。一実施態様では、ナンバンカラムシの根および／または茎を抽出のために選択する。
【０１００】
抽出溶液は、水または水と混ぜた溶液および水とは異なる極性の溶媒から選択しても良い。水とは異なる極性の溶媒はアルコール、アセトン、メタノール、または酢酸エチルを含んでいても良い。溶媒は、単独で使用しても良いし、相互に混ぜるかまたは水と混ぜても良い。抽出溶液と植物の比率は特に限定されない。一実施態様では、抽出溶液と植物の比率は１：１０（Ｗ／Ｗ）である。
【０１０１】
抽出の間、抽出温度は様々な抽出溶液の選択に応じて少し変えても良い。一実施態様では、植物を室温で抽出溶液に浸漬しても良い。別の実施態様では、抽出溶液を還流温度（６０〜１００℃）まで加熱しても良い。抽出時間は抽出温度によるが、約２時間から７日間である。更に抽出操作中に、例えば塩化ナトリウム、希無機酸（例えば希塩酸）または有機酸（例えばビタミンＣまたは酒石酸）を、抽出溶液のｐＨ値を調節のために必要に応じて抽出溶液に添加しても良い。
【０１０２】
次に、有効成分であるプロアントシアニジン含む抽出液を集めて乾燥させるか、または必要に応じて抽出液に対して部分的精製または完全な精製を行っても良い。一実施態様では、部分的精製の方法として、乾燥させた抽出物を９５％アルコールおよび／またはメタノール水溶液に再溶解する。次に部分的な不純物を取り除くために、様々な極性の溶媒を使用し、得られた溶液を抽出する。例えば脂質および非極性物質を取り除くために非極性溶液（例えばｎ−ヘキサン）を使用し、次に小さなフェノール化合物を取り除くために、トリクロロメタンおよび／または酢酸エチルを使用する。次に部分的に精製されたプロアントシアニジンを得るために、溶媒で抽出された液相を集めて乾燥させる。
【０１０３】
完全な精製方法は以下の手順を含んでいても良い。部分的に精製された抽出物をアルコールまたはメタノール水溶液に溶解し、モレキュラーシーブカラムに注入する。次に、プロアントシアニジンを精製および分離するために様々な溶液および／または混合溶液を使用し、溶出を行う。一実施態様では、様々な溶液の溶出順序は、９５％アルコール、９５％アルコール／メタノール（１：１、ｖ／ｖ）、および５０％メタノールおよび５０％アセトン水溶液である。各溶離液を通して溶出した溶液を分画して集める。次に、溶出した溶液中の精製プロアントシアニジンを液体クロマトグラフィー（２８０ｎｍ）を用いて検出する。様々な分子量分布のプロアントシアニジン溶液を、様々な溶離液を通して溶出した溶液を収集することにより得ても良い。次に、溶出した溶液を４０℃以下で濃縮し、精製プロアントシアニジンを得るために冷凍乾燥しても良い。一実施態様では、溶出に用いるモレキュラーシーブカラムはセファデックスＬＨ−２０カラム（ドイツのアマシャム株式会社より購入）である。
【０１０４】
本発明では、精製プロアントシアニジンのモノマーユニットは以下の化学式を有する。
【０１０５】
【化９】
2014508785.tif 000011
【０１０６】
一実施態様では、Ｒ1がＯＣＨ3のときＲ2はＯＨでＲ3はＨである。別の実施態様では、Ｒ1がＯＨのときＲ2はＨでＲ3はＨである。別の実施態様では、Ｒ1がＯＨのときＲ2はＯＨでＲ3はＨである。他の実施態様では、Ｒ1がＯＨのときＲ2はＯＨでＲ3はＯＨである。この化学式では、Ｒ４は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖である。
【０１０７】
プロアントシアニジンのモノマーユニットは、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４においてＲまたはＳの光学異性体を含んでいても良い。
【０１０８】
プロアントシアニジンのモノマーユニットの構造はフラボノイド化合物を含んでいても良く、例えば、カテキン、エピカテキン、エピアフゼレキン、ガロカテキン、ガロエピカテキン、エピガロカテキン、ガレート、フラボノール、フラバンジオール、ロイコシアニジンまたはプロシアニジンである。一実施態様では、プロアントシアニジンのモノマーユニットはフラバン−３−オールまたはフラバン誘導体を含んでいても良い。
【０１０９】
本発明では、プロアントシアニジンの重合度は２〜３０であり、好ましくは３〜２０である。プロアントシアニジンのモノマーユニットが互いにＣ４−Ｃ８結合、Ｃ４−Ｃ６結合、またはＣ２−Ｃ７結合していても良い。プロアントシアニジンの平均分子量は６００〜１０，０００である。
【０１１０】
一実施態様では、精製プロアントシアニジンは重合度１のプロアントシアニジンを含んでいても良い。別の実施態様では、精製プロアントシアニジンは様々な重合度のプロアントシアニジン混合物を含んでいても良い。
【０１１１】
本発明では、抽出したプロアントシアニジンを、肝臓がん増殖を遅延し、肝機能、肝線維症、肝硬変および肝炎を改善し、並びに障害を受けた肝臓の再生を促進する医薬組成物中に調整しても良く、医薬組成物はプロアントシアニジンと薬学的に許容し得る担体または塩を含んでいても良い。
【０１１２】
薬学的に許容し得る担体は、特に限定されないが、溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤、抗真菌剤等、張吸収遅延剤または医薬品薬剤を含んでいても良い。様々な投与方法として周知の方法を用い、様々な適切な剤形の中に医薬組成物を調整しても良い。
【０１１３】
薬学的に許容し得る塩は、特に限定されないが、無機塩または有機塩を含んでいても良い。無機塩類は、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩またはアミン塩類のようなアルカリ金属塩；マグネシウム塩またはカルシウム塩のようなアルカリ土類金属塩類；または亜鉛塩、アルミニウム塩類またはジルコニウム塩のような２価か４価のカチオン塩；を含んでいても良い。有機塩は、アルギニン塩類、リジン塩、ヒスチジン塩類またはグルタミン塩類のような、ジシクロヘキシルアミン塩類、メチル−ｄ−グルカミン塩類またはアミノ酸塩類を含んでいでも良い。
【０１１４】
本発明において、医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）の投与方法は経口、非経口、吸入スプレー経由または埋め込みリザーバー経由の投与を含んでいてもよい。非経口の方法は皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内または病巣内への注射または還流法を含んでいても良い。
【０１１５】
経口の剤形は、特に限定されないが、錠剤、カプセル、乳剤、水性懸濁剤、分散剤または液剤を含んでいても良い。
【０１１６】
本発明では、実験的試験の後に（１）慢性Ｂ型肝炎ウィルスまたはＣ型肝炎ウィルスの感染によって引き起こされる肝臓がんを含む様々な肝臓病治療に適応可能な医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）を見出した。この医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）は、ＨＣＣ患者の肝機能を改善、ＨＣＣの進行を低下させ、ＨＣＣ患者の手術可能率および手術成功率を増加させて、手術後の再発率を低下させ、生存率を増加させて、ＨＣＣ患者の生存期間を延長し、更にＨＣＣ患者の生活の質を改善することができる他の様々な治療方法として単独でまたはアジュバントとして使用することができる。（２）上記医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）は単独でまたは他の臨床治療薬と組み合わせて使用することができ、これにより肝線維症患者を治療することができる。（３）上記医薬組成物（ＢＥＬ−Ｘ）は単独でまたは他の臨床治療薬と組み合わせて使用することができ、これにより肝硬変とＨＣＣを防ぐために肝機能を改善するだけでなく脂肪肝患者を治療することができる。
【実施例】
【０１１７】
実施例１
プロアントシアニジンポリマーのモノマーユニットの構造決定
熱分解ガスクロマトグラフィー質量分析法（ＰＧＣ／ＭＳ）によってプロアントシアニジンのモノマーユニットの構造を検出した。本検出方法では、固体の精製プロアントシアニジン（本発明者が精製した試料）を熱分解ガスクロマトグラフィーの中へ直接注入し、徐々に分解温度（５０℃〜５００℃）まで温めるか、または即座に単一温度の操作モードで温める。プロアントシアニジンポリマーのモノマーユニット構造は、質量分析法の検出により得られるスペクトルによって決定した。プロアントシアニジンポリマーのマススペクトルおよび構造解析を図２ａおよび図２ｂ〜図２ｅに示す。図２ｂ〜図２ｅの左部分は、図２ａのピークによって表されるｍ／ｚ値と化学構造を示し、図２ｂ〜図２ｅの右部分は、左部分のピークのモノマーユニット解析結果を示す。決定されたプロアントシアニジンポリマーのモノマーユニット構造の化学式は、以下の通りである。
【０１１８】
【化１０】
2014508785.tif 000012
【０１１９】
式中、Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、またはＲ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨである。
【０１２０】
測定した熱分解質量分析では、グリコシドシグナルのピークを示した。それゆえ、Ｒ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖と推定される。
【０１２１】
赤外吸収スペクトル解析
精製されたプロアントシアニジンの試料および塩化カリウムを混合し、錠剤にして送信赤外光によって検出した。この結果を図３に示す。その中で、強い吸収ピークは３４１２．３８ｎｍ、１６１０．５７ｎｍ、１５２１．４０ｎｍ、１４４１．１４ｎｍ、１２８４．８６および１１００．８８ｎｍである。
【０１２２】
高速液体クロマトグラフィー質量分析法のスペクトル分析
精製されたプロアントシアニジンの試料を高速液体クロマトグラフィー質量分析法（エレクトロスプレイ（＋／−）質量分析法  ＨＰＬＣ／ＥＳＩ＋、ＨＰＬＣ／ＥＳＩ−）（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｑｕａｔｔｒｏ／Ｗａｔｅｒｓ  ２６９０）で分析した。モノマーユニットおよび重合度が１〜６のポリマー並びに１６４グリコシド（例えば、モノマーユニットの分子量とグリコシドの分子量１６４）を検出した。精製されたプロアントシアニジンの高速液体クロマトグラフィー質量分析法（＋／−）による質量分析結果を図４ａおよび図４ｂに示す。
【０１２３】
13Ｃ−ＮＭＲと1Ｈ−ＮＭＲのスペクトル分析
精製プロアントシアニジン試料を13Ｃ−ＮＭＲおよび1Ｈ−ＮＭＲにより分析した。13Ｃ−ＮＭＲの分析結果を図５ａ〜図５ｃに示す。１４２〜１４５．７ｐｐｍに２重項−２重項のピークが現れているのに加えて他のピークは存在しない。この結果は、モノマーユニットがデルフィニジン（例えばそのＢ環に３つのＯＨ基を有する）を除くアントシアニジンを有することを示す。この解析結果は、ＥＧＡ／ＭＳの結果と同様であった。図５ｂ中、Ｒ1＝ＨまたはＯＨ、Ｒ2＝ＨまたはＯＨまたはＯＣＨ3である。
【０１２４】
本発明において、13Ｃ−ＮＭＲと1Ｈ−ＮＭＲのスペクトル解析の結果、精製されたプロアントシアニジンポリマーのモノマーユニットは互いに主にＣ４−Ｃ８結合を介して結合している。Ｃ４−Ｃ８結合とＣ４−Ｃ６結合を図６ａと図６ｂにそれぞれ示す。
【０１２５】
マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）質量分析法のスペクトル分析
部分的に精製されたプロアントシアニジンの分子量分布をマトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）質量分析法により分析した。この結果を図７ａ〜図７ｃに示す。この分析結果は部分的に精製されたプロアントシアニジンの分子量分布が５００〜５，０００であることを示す。分子量分布の分析結果では、ポリマーの重合度は２〜１８であると推定される。
【０１２６】
実施例２
（１）プロアントシアニジン含有抽出物の調製
ナンバンカラムシ薬用材料の根に繋がる茎と根を水で洗浄し、自然環境の中で乾燥させた。乾燥させた薬用材料を約５ｍｍの厚さにスライスし、４℃で保管した。保管したナンバンカラムシ薬用材料をすり棒ですり潰し、２０メッシュのふるいに通した。得られた粉末を９５％エタノール（１０倍重量）（１：１０、ｗ／ｗ）中に分散し、２時間加熱還流した（２回行った）。室温に冷却した後、抽出溶液を集めた。この抽出溶液を遠心分離機によって遠心分離し、ろ過した。ろ過溶液は４０℃以下の温度で減圧濃縮機によって濃縮し、凍結乾燥機によって乾燥しプロアントシアニジン含有抽出物を得た。
【０１２７】
実施例３
（２）プロアントシアニジン含有抽出物の調製
乾燥させて４℃で保管した実施例２の薬用材料を、すり棒ですり潰し、２０メッシュのふるいを通した。得られた粉末を、逆浸透水（１０倍重量）（１：１０、ｗ／ｗ）中で分散させ、２時間加熱還流した（２回行った）。室温に冷却した後、抽出物溶液を集めた。５０％〜９５％エタノールを抽出溶液に加えて冷却し、沈殿させた。上澄みは遠心分離機によって遠心分離し、濾過した。ろ過溶液を４０℃以下の温度で減圧濃縮機によって濃縮し、凍結乾燥機によって乾燥させてプロアントシアニジン含有抽出物を得た。
【０１２８】
実施例４
（１）プロアントシアニジン含有抽出物の精製
実施例２または３のプロアントシアニジン含有抽出物をｎ−ヘキサン（１：１０、ｗ／ｖ）に加え、６時間加熱還流（ソックスレー抽出器を使用）し、抽出物中の脂質を取り除いた。得られた固体を７０％メタノール溶液および／または０．３％ビタミンＣ水溶液に溶解し、４０℃以下の温度で減圧濃縮機により濃縮し、溶媒を取り除いた。濃縮物をトリクロロメタンに加え（トリクロロメタン：濃縮物＝１：１、ｖ／ｖ）、オシレーターを用いて３０分間振動させた（抽出を複数回行った）。酢酸エチルを液相に加え（酢酸エチル：液相＝１：１、ｖ／ｖ）、３０分間振動させた（抽出を複数回行った）。次にこの液相を４０℃以下の温度で減圧濃縮機を用いて濃縮した後、凍結乾燥機により乾燥させ部分的に精製されたプロアントシアニジンを得た。
【０１２９】
実施例５
（２）プロアントシアニジン含有抽出物の精製
実施例２または３のプロアントシアニジン含有抽出物を水／エタノール（１：１０、ｗ／ｖ）に溶解した。次に、ｎ−ヘキサンを加え（１：１０、ｖ／ｖ）、抽出物中の脂質を取り除くために３０分間オシレーターを用いて振動させた（抽出を複数回行った）。酢酸エチルを液相に加え（酢酸エチル：液相＝１：１、ｖ／ｖ）、３０分間振動させた（抽出を複数回行った）。この液相をｎ−ブタノールに加え（１：１０、ｖ／ｖ）、オシレーターを用いて３０分間振動させた（抽出を複数回行った）。液相を４０℃以下の温度で減圧濃縮機によって濃縮し、凍結乾燥機を用いて乾燥させ、部分的に精製されたプロアントシアニジンを得た。
【０１３０】
実施例６
（３）プロアントシアニジン含有抽出物の精製
実施例４で得た部分的に精製されたプロアントシアニジンをモレキュラーシーブカラムクロマトグラフィー（ゲル透過クロマトグラフィーカラム、セファデックスＬＨ−２０、４ｃｍ直径×４５ｃｍ長さ）を用いて再精製した。先ず不純物を取り除くために、様々な極性の溶液を用いて、溶出を行った。次に、部分的に精製されたプロアントシアニジン２．５ｇを０．５ｍＬ  ９５％エタノールに溶解した。溶解した試料をモレキュラーシーブカラムに注入し、引き続き一連の溶媒（溶離液）を用いて溶出した。様々な溶媒（溶離液）を通して溶出した溶出液を集めた。溶離液は順に３００ｍＬ  ９５％エタノール、３００ｍＬ  ９５％エタノール／メタノール（１／１、ｖ／ｖ）、３００ｍＬメタノール、３００ｍＬの５０％メタノール水溶液と３００ｍＬの５０％アセトン水溶液である。３００ｍＬの９５％エタノール溶離液を通して溶出した溶出液を除いて、他の溶出した溶出液は減圧濃縮機により４０℃以下の温度で濃縮した後、凍結乾燥機で乾燥して、部分的に精製されたまたは完全精製されたプロアントシアニジンを得た。乾燥物は−２０℃で保管した。
【０１３１】
実施例７
肝臓がん誘発Ｂ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウスの生存率に対する薬物（ＢＥＬ−Ｘ）の効果
実験動物：実験に用いた動物の親の出所（ｐａｒｅｎｔａｌ  ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅ）はＢＢＲＣ1２００６に公開された雄のＢ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ−ＨＢｘ（Ａ０１１２系））である。
【０１３２】
実験のグルーピングおよび実験デザイン：マウスを、非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）の１つの対照群；非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−２０Ｍ）の１つの薬物対照群；遺伝子導入マウス（Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）の１つの対照群；および遺伝子導入マウス（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理）の３つの薬物試験群；を含む６群に分け、ＢＥＬ−Ｘ（本発明の医薬組成物）をそれぞれ９〜２０月齢（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−２０Ｍ）、１２〜２０月齢（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  １２−２０Ｍ）および１５〜２０月齢（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  １５−２０Ｍ）のマウスに１日１回経口投与した。非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）の対照群、および遺伝子導入マウス（Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）の対照群では、９〜２０月齢のマウスに飲用水を１日１回経口投与した。非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−２０Ｍ）の薬物対照群では、９〜２０月齢のマウスにＢＥＬ−Ｘ薬物を１日１回経口投与した。ＢＥＬ−Ｘ薬物の量は１，０００ｍｇ／ｋｇ／日である。
【０１３３】
結論：
１．図８に示す通り、２０月齢で雄の肝臓がん誘発Ｂ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウスの１００％に肝臓がんが生じ、生存率はおよそ６４％（Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）であった。様々な月齢のＢＥＬ−Ｘ薬物投与マウスの生存率は、それぞれ７０％（９−２０月齢、Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−２０Ｍ）、１００％（１２−２０月齢、Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ  処理  １２−２０Ｍ）および５８％（１５−２０月齢、Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  １５−２０Ｍ）であった。
【０１３４】
２．カイ二乗統計量分析によれば、ＢＥＬ−Ｘ薬物投与した雄の１２〜２０月齢のＢ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウスの生存率は、驚くべきことに２０月齢で１００％であった。
【０１３５】
３．初期段階においてＢＥＬ−Ｘ薬物を雄のＢ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウスに投与することにより生存率を改善することができる。
【０１３６】
実施例８
Ｂ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウスにおけるＨＣＣの遅延に対するＢＥＬ−Ｘ薬物の効果
実験動物：実験に用いた動物の親の出所はＢＢＲＣ1２００６に公開された雄のＢ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ−ＨＢｘ（Ａ０１１２系））である。
【０１３７】
実験のグルーピングおよび実験デザイン：マウスを、非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）の１つの対照群；非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−２０Ｍ）の１つの薬物対照群；遺伝子導入マウス（Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）の１つの対照群；および遺伝子導入マウス（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理）の３つの薬物試験群；を含む６群に分け、ＢＥＬ−Ｘ（本発明の医薬組成物）をそれぞれ９〜２０月齢（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−２０Ｍ）、１２〜２０月齢（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  １２−２０Ｍ）および１５〜２０月齢（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  １５−２０Ｍ）のマウスに１日１回経口投与した。非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）の対照群、および遺伝子導入マウス（Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）の対照群では、９〜２０月齢のマウスに飲用水を１日１回経口投与した。非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）の対照群、および遺伝子導入マウス（Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）の１つの対照群では、９〜２０月齢のマウスに飲用水を１日１回経口投与した。非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−２０Ｍ）の薬物対照群では、９〜２０月齢のマウスにＢＥＬ−Ｘ薬物を１日１回経口投与した。ＢＥＬ−Ｘ薬物の量は１，０００ｍｇ／ｋｇ／日である。
【０１３８】
肝臓重量と体重の比率の決定：肝臓（肝臓がんを含む）のサンプリングのために実験動物を屠殺し、解剖した。測定した肝臓重量をマウスの体重で除して、肝臓重量と体重の比率を得た。
【０１３９】
結論：
１．図９に示す通り、通常の非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  模擬）の肝臓重量と体重の比率は約５％であった。雄のＢ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウス（Ｔｇ  模擬）の肝臓重量と体重の比率は、２０月齢で肝臓がんが発生したため約１３％まで増加した。ＡＮＯＶＡ統計分析では、遺伝子組み換えマウスと通常の非遺伝子組み換えマウスの肝臓重量と体重の比率の差は有意であった。
【０１４０】
２．通常の非遺伝子導入マウスにＢＥＬ−Ｘを１年間投与（９−２０月齢、Ｎｏｎ−Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−２０Ｍ）した後では、肝臓重量と体重の比率は薬物非投与群と同様に５％であった。この結果より、この薬物は通常の動物に対しては何の影響も無いことを示す。
【０１４１】
３．様々な月齢の雄のＢ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウスにＢＥＬ−Ｘ薬物を投与した結果、肝臓重量と体重の比率は３つの群で約８％まで低下した。薬物投与群の雄の９〜２０月齢（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−２０Ｍ）のマウス、および１２〜２０月齢（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  １２−２０Ｍ）のマウス、および薬物非投与群（Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）との肝臓重量と体重の比率差は統計的に有意であった。
【０１４２】
実施例９
（１）ＨＣＣ誘発Ｂ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウスの肝機能に対する薬物（ＢＥＬ−Ｘ）の影響
【０１４３】
実験動物：実験に用いた動物の親の出所（ｐａｒｅｎｔａｌ  ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅ）はＢＢＲＣ1２００６に公開された雄のＢ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ−ＨＢｘ（Ａ０１１２系））である。
【０１４４】
実験のグルーピングおよび実験デザイン：マウスを、非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  模擬  ９−１８Ｍ）の１つの対照群；非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−１８Ｍ）の１つの薬物対照群；遺伝子導入マウス（Ｔｇ  模擬  ９−１８Ｍ）の１つの対照群；および遺伝子導入マウス（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理）の３つの薬物試験群；を含む６群に分け、ＢＥＬ−Ｘ（本発明の医薬組成物）をそれぞれ９〜１８月齢（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−１８Ｍ）、１２〜１８月齢（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  １２−１８Ｍ）および１５〜１８月齢（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  １５−１８Ｍ）のマウスに１日１回経口投与した。非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  模擬  ９−１８Ｍ）の対照群、および遺伝子導入マウス（Ｔｇ  模擬  ９−１８Ｍ）の対照群では、９〜１８月齢のマウスに飲用水を１日１回経口投与した。非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−１８Ｍ）の薬物対照群では、９〜１８月齢のマウスにＢＥＬ−Ｘ薬物を１日１回経口投与した。ＢＥＬ−Ｘ薬物の量は１，０００ｍｇ／ｋｇ／日である。
【０１４５】
肝機能ＩＣＧの検出：マウスにインドシアニン・グリーン（ＩＣＧ）を静脈注射した。１０分後に血中の残存ＩＣＧの濃度（ｍｇ／ｄＬ）を検出し、肝機能の指標とした。１２〜１８月齢のマウスで、この実験をそれぞれ２回行った。
【０１４６】
結論：
１．表１に示す通り、１８月齢（Ｎｏｎ−Ｔｇ  模擬  ９−１８Ｍ）の正常な非遺伝子導入マウスのＩＣＧ代謝値は、２．２５±０．８９ｍｇ／ｄＬであった。この結果と、１８月齢（Ｎｏｎ−Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−１８Ｍ）のＢＥＬ−Ｘ投与群との間に有意差はなかった。
【０１４７】
２．１８月齢での雄のＢ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウス（Ｔｇ  模擬  ９−１８Ｍ）のＩＣＧ代謝は肝臓がん発生のため低下し、値は４．４６±１．１７ｍｇ／ｄＬまで上昇した。ノンパラメトリック統計分析では、遺伝子導入マウスと正常な非遺伝子導入マウスのＩＣＧ代謝に有意差があった。
【０１４８】
３．各月齢の３群の雄のＢ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウスにＢＥＬ−Ｘ薬物を投与した結果、３群のＩＣＧ代謝値は非薬物投与群（Ｔｇ  模擬  ９−１８Ｍ）より下回った。９月齢からのＢＥＬ−Ｘ薬投与群（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−１８Ｍ）と非薬物投与群（Ｔｇ  模擬  ９−１８Ｍ）のＩＣＧ代謝値には統計的な有意差があった。この結果は、ＢＥＬ−ＸはＨＣＣ動物の肝機能を改善できることを示す。
【０１４９】
【表１】
2014508785.tif 000013
【０１５０】
実施例１０
（２）ＨＣＣ誘発Ｂ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウスの肝機能に対する薬物（ＢＥＬ−Ｘ）の効果
【０１５１】
実験動物：実験に用いた動物の親の出所（ｐａｒｅｎｔａｌ  ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅ）はＢＢＲＣ1２００６に公開された雄のＢ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ−ＨＢｘ（Ａ０１１２系））である。
【０１５２】
実験のグルーピングおよび実験デザイン：マウスを、非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）の１つの対照群；非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−２０Ｍ）の１つの薬物対照群；遺伝子導入マウス（Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）の１つの対照群；および遺伝子導入マウス（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理）の３つの薬物試験群；を含む６群に分け、ＢＥＬ−Ｘ（本発明の医薬組成物）をそれぞれ９〜２０月齢（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−２０Ｍ）、１２〜２０月齢（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  １２−２０Ｍ）および１５〜２０月齢（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  １５−２０Ｍ）のマウスに１日１回経口投与した。非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）の対照群、および遺伝子導入マウス（Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）の対照群では、９〜２０月齢のマウスに飲用水を１日１回経口投与した。非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−２０Ｍ）の薬物対照群では、９〜２０月齢のマウスにＢＥＬ−Ｘ薬物を１日１回経口投与した。ＢＥＬ−Ｘ薬物の量は１，０００ｍｇ／ｋｇ／日である。
【０１５３】
肝機能の検出−アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）：全てのマウスは月に一度定期的に採血（顎または心臓から）を行った。全血は室温で３０分以上エッペンドルフの中で静置した。血液凝固の後、血液試料を１，８００ｘｇで１０分間遠心分離した。遠心分離後、血清をエッペンドルフチューブに移し、実験日まで−２０℃で保管した。血清中のＡＬＴおよびＡＳＴの値は、液体血清生化学分析装置（日立社製  ７０８０）によって決定した。肝臓障害と雄のＢ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウスの月齢との間には相関関係があるため、各群の９〜２０月齢のマウスについて測定した肝機能指標（ＡＬＴとＡＳＴ）を、９月齢から、包括的に３月毎分析した。
【０１５４】
結論：
１．図１０および図１１に示す通り、正常な非遺伝子導入マウス（Ｎｏｎ−Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）とＢ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウス（Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）における、ＡＬＴとＡＳＴの相違は１２月齢から生じた。ＢＥＬ−Ｘ（Ｎｏｎ−Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−２０Ｍ）を投与した正常な非遺伝子導入マウス群と非投与群（Ｎｏｎ−Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）との間の肝機能指標に有意差はなかった。
【０１５５】
２．様々な月齢のＢ型肝炎ウィルスＸ遺伝子導入マウスにＢＥＬ−Ｘ薬物を投与した結果、３つの群のＡＬＴとＡＳＴは非薬物投与群（Ｔｇ  模擬  ９−１８Ｍ）よりも低くなった。薬物投与群の９〜２０月齢（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  ９−２０Ｍ）、１２〜２０月齢（Ｔｇ  ＢＥＬ−Ｘ処理  １２−２０Ｍ）および非薬物投与群（Ｔｇ  模擬  ９−２０Ｍ）間のＡＬＴとＡＳＴの統計的な有意差はなかった。この結果は、ＢＥＬ−ＸがＨＣＣ動物の肝機能を有効に改善できることを示す。
【０１５６】
実施例１１
（１）化学物質ＤＥＮによって引き起こされるラットの肝線維症に対する薬物（ＢＥＬ−Ｘ）の効果
実験のグルーピングおよび実験デザイン：肝線維症と肝臓がんを誘発するために、８週齢のウィスター系ラットにジエチルニトロソアミン（ＤＥＮ）（１００ｐｐｍ、水中添加）を６週間（Ｄ６群）および９週間（Ｄ９群）投与した。他の２群では、ラットにＤＥＮとＢＥＬ−Ｘ薬物（１０００ｍｇ／ｋｇ体重）（餌に加え、６週間（Ｄ６Ｈ６群）と９週間（Ｄ９Ｈ９群）の間毎日給餌）を同時に与えた。ラットの肝臓がんの程度を様々な時点で分析した。対照群は全過程において、いずれの薬も投与しなかった。各実験群はラット１０匹からなる。病理学的切片と染色の後、ヒドロキシプロリンの生化学分析によるアシストにより、肝線維症／肝臓がんの程度を判断した。肝臓のヒドロキシプロリン含有量の上昇を肝線維症の指標として用いた。ヒドロキシプロリン含有量を決定するために、各群のラットの肝臓を、様々な時点で集めた。次に、肝臓を薄片にし、α−ＳＭＡ免疫染色分析を行った。α平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）含有量の上昇も肝線維症の別の指標として用いた。９週目には、各群のマウスの肝臓を集め、α−ＳＭＡ免疫染色を行った。肝細胞を、顕微鏡を使用して観察し、標識物を含む細胞の合計を計算した。
【０１５７】
結論：
１．図１２に示す通り、ＤＥＮを連続して９週間投与した群（Ｄ９群）では、肝臓のヒドロキシプロリン含有量が有意に増加した。この結果は、ＤＥＮが肝線維症を誘発したことを示す。しかし、ＢＥＬ−Ｘを連続して給餌した実験群（Ｄ９Ｈ９群）では、ヒドロキシプロリン含有量が有意に減少した。この結果は、ＢＥＬ−Ｘが化学物質ＤＥＮによって誘発される肝線維症を予防したことを示す。
【０１５８】
２．図１３に示す通り、ＤＥＮを連続して９週間投与した群（Ｄ９群）では、肝臓内のα平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）含有量は有意に増加した。この結果は、ＤＥＮが肝線維症を誘発したことを示す。しかし、ＢＥＬ−Ｘを連続して投与した実験群（Ｄ９Ｈ９群）では、α平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）含有量が有意に低下した。この結果は、ＢＥＬ−Ｘが化学物質ＤＥＮによって引き起こされる肝線維症を予防したことを示す。
【０１５９】
３．α平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）含有量は、６週間投与した実験群（Ｄ６Ｈ６群）では有意に減少した。この結果は、ＢＥＬ−Ｘは化学物質ＤＥＮの誘発による初期段階の肝線維症を予防したことを示す。
【０１６０】
実施例１２
（２）化学物質ＤＥＮによって誘発されるラットの肝線維症に対する薬物（ＢＥＬ−Ｘ）の効果
実験のグルーピングおよび実験デザイン：肝線維症と肝臓がんを誘発するためにジエチルニトロソアミン（ＤＥＮ）（１００ｐｐｍ、水中添加）を８週齢のウィスター系ラットに投与した。他の３群では、ラットにＤＥＮとＢＥＬ−Ｘ薬物（１０００ｍｇ／ｋｇ体重）を同時に投与した。３〜６週（ＤＥＮ−ＢＥＬ−Ｘ  ３−６）、６〜９週（ＤＥＮ−ＢＥＬ−Ｘ  ６−９）および９〜１２週（ＤＥＮ−ＢＥＬ−Ｘ  ９−１２）の３つの異なる群それぞれにＢＥＬ−Ｘを投与した。ラットの肝臓がんの程度を適切な時点で分析した。対照群（ＤＥＮ）では、ＤＥＮ投与の全過程において薬物を投与しなかった。各実験群は、ラット１０匹からなる。肝線維症／肝臓がんの程度は、ヒドロキシプロリンの生化学分析によるアシストにより、視覚的方法により判断した。肝臓のヒドロキシプロリン含有量の上昇を肝線維症の指標として用いた。ヒドロキシプロリン含有量を決定するために各群のラットの肝臓を、１２週目に集めた。
【０１６１】
結論：
１．図１４に示す通り、ＤＥＮを連続して９週間投与した非処理群（ＤＥＮ）では、肝臓内のヒドロキシプロリン含有量は有意に増加した。この結果は、ＤＥＮが肝線維症を誘発したことを示す。これに対して、ＢＥＬ−Ｘ群（ＤＥＮ−ＢＥＬ−Ｘ  ３−６とＤＥＮ−ＢＥＬ−Ｘ  ６−９）への投与初期段階ではヒドロキシプロリン含有量が有意に減少した。この結果は、ＢＥＬ−Ｘが化学物質ＤＥＮによって誘発される肝線維症を回復させたことを示す。
【０１６２】
実施例１３
化学物質ＤＥＮによって誘発される肝線維症のラットの生存率に対する薬物（ＢＥＬ−Ｘ）の効果
実験のグルーピングおよび実験デザイン：８週齢ウィスター系ラットにジエチルニトロソアミン（ＤＥＮ）（５０ｐｐｍ、水中添加）を１０．５週間投与し、肝線維症と肝臓がん（Ｂ群）を誘発した。ＤＥＮとＢＥＬ−Ｘ薬物（１０００ｍｇ／ｋｇ体重）（餌に加え、それぞれ０〜１０．５週（Ｃ群）、３〜１０．５週（Ｄ群）、および６〜１０．５週（Ｅ群）の間毎日給餌）を同時に与えた。ＤＥＮの投与を止めて３週間後にＢＥＬ−Ｘを給餌した（Ｆ群）。ラットの肝臓がんの程度を適切な時点で分析した。対照群（Ａ群）では、全過程において薬を投与しなかった。実験の間、死亡した動物を記録した。ノンパラメトリック統計により各群の生存率を分析した。
【０１６３】
結論：
１．図１５に示すように、各群の１３．５週目（９４日目）の生存率を分析した結果、ＤＥＮのみ投与したＢ群において、生存率はわずか４０％程度であった。これに対して、様々な時期にＢＥＬ−Ｘを投与したものの生存率は８０％を超えていた。この結果は、ＢＥＬ−Ｘが肝線維症と肝臓がんを発症したラットの生存率を効果的に改善したことを示す。
【０１６４】
２．図１６に示す通り、ＤＥＮ（Ｆ群）によって肝臓がんを誘発した後、ＢＥＬ−Ｘ薬物を３週間投与したラットの１５週目（１０４日目）の生存率を分析した結果、ラットの生存率は、ＢＥＬ−Ｘ投与の期間（７４〜９４日目）において１００％であった。更にＢＥＬ−Ｘ薬物の投与の中止後５日間（９５〜９９日目）の死亡はみられなかった。１５週目（１０４日目）の生存率は６２％であり、ＤＥＮのみを投与したＢ群の１３．５週目（９４日目）の生存率４０％より高かった。この結果は、ＢＥＬ−Ｘが、肝硬変と肝臓がんを有するラットの生存時間を効果的に延長でき、同時に生存率も改善できることを示す。
【０１６５】
実施例１４
（１）ＤＥＮ障害を受けた肝臓について肝切除後の再生に対する薬物（ＢＥＬ−Ｘ）の効果
実験のグルーピングおよび実験デザイン：８週齢ウィスター系ラットにジエチルニトロソアミン（ＤＥＮ）（１００ｐｐｍ、水中添加）を９週間投与し、肝線維症と肝臓がん（非薬物投与群）を誘発させた。処理ラットには６〜９週間、ＢＥＬ−Ｘ薬物を同時に給餌した（高用量ＢＥＬ−Ｘ群（１０００ｍｇ／ｋｇ体重）と低用量ＢＥＬ−Ｘ群（２５０ｍｇ／ｋｇ体重）に分類される）。薬物の投与完了後、９週目に肝葉の５０％を切除した。２日後に、肝臓試料を集めて薄片化し、ＨＥ染色を行った。次に肝再生の根拠として、肝細胞の有糸分裂を顕微鏡で観察した。肝細胞の有糸分裂を以下のようにして計算した。各ラットから少なくとも３つの薄片を得た。各薄片は１０の領域を含む。有糸分裂細胞の数を４００Ｘ拡大顕微鏡で数えた。最後に、各群のラットの有糸分裂細胞の数の平均値を得た。
【０１６６】
結論：
１．表２に示す通り、化学物質ＤＥＮによって肝線維症と肝臓がんを誘発した後、肝切除を行った結果、非薬物投与群のラットの肝臓の有糸分裂数（７．６±４．６）は、高用量または低用量のＢＥＬ−Ｘ薬物を３週間同時に投与したラットの肝臓の有糸分裂数（１２±５．５または１３．０±５．６）よりはるかに低かった。この結果は、化学物質ＤＥＮの障害を受けた肝臓の肝再生を効果的に改善できることを示す。
【０１６７】
【表２】
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【０１６８】
実施例１５
（２）ＤＥＮ障害を受けた肝臓について、肝切除後の再生に対する薬物（ＢＥＬ−Ｘ）の効果
実験のグルーピングおよび実験デザイン：肝線維症と肝硬変（ＤＥＮ群）を誘発するために、ジエチルニトロソアミン（ＤＥＮ）（１００ｐｐｍ、水中添加）を８週齢ウィスター系ラットに９週間投与した。処理ラットにはＢＥＬ−Ｘ薬物（１０００ｍｇ／ｋｇ体重）を６〜９週の間（ＢＥＬ−Ｘ群）同時に投与した。対照群はＤＥＮとＢＥＬ−Ｘの非投与ラットである。薬物の投与完了後、核磁気共鳴画像法試験を行ない、９週目に肝葉の３０％を切除した。ＤＥＮとＢＥＬ−Ｘの非投与対照群で、同じ手術を行った。２週後に、第２回目の核磁気共鳴画像法試験を行い、ラットを屠殺した。実験の間、死亡した動物を記録した。手術後、各群のラットの摂餌時間および摂取量を観察した。各群のラットの生存率を計算した。
【０１６９】
結論：
１．図１７に示す通り、肝体積の再生率を判断した。対照群では、正常肝臓を有するラットの合計肝再生体積は、切除体積の９２±１１％であった。ＤＥＮ群（肝硬変群）では、ラットの合計肝再生体積は切除体積の３２±７％であった。ＢＥＬ−Ｘ群（処理群）では、ラットの合計肝再生体積は切除体積の７９±６％であった。ＢＥＬ−Ｘ群（処理群）の肝再生の程度は、ＤＥＮ群（肝硬変群）より有意に増加した。これに対して、対照群のものとは統計的差異はなかった。
【０１７０】
２．以下の表３に示すとおり、肝硬変ラットの肝切除後の摂餌時間（２７時間）は対照群の摂餌時間（１１時間）より有意に長かった。しかし、ＢＥＬ−Ｘ群では、肝切除後の摂餌時間（１６時間）は、ＤＥＮ群（肝硬変群）よりも有意に短かった。更に、ＤＥＮ群（肝硬変群）の摂餌量（４２％）は対照群の摂餌量（９１％）より低かった。ＢＥＬ−Ｘ群の摂餌量（８３％）は、ＤＥＮ群（肝硬変群）の摂餌量より有意に高く、対照群と類似している。この結果は、ＢＥＬ−Ｘ薬物は肝切除後のラットの肝硬変に対して良好な効果を及ぼしており、摂餌量が増加して摂餌時間を低下させることを示す。
【０１７１】
３．更に、肝硬変ラットの生存率は５５％であった。しかし、ＢＥＬ−Ｘを肝硬変ラットに投与すると、対照群と同様に生存率が１００％に達した。この結果は、ＢＥＬ−Ｘ薬物が生存率を確実に増加させることを示す。
【０１７２】
【表３】
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【０１７３】
当業者には明らかであるように、本発明の実施態様には様々な改変と修正を行うことができる。明細書およびと実施例は例示として考慮されるに過ぎず、真の発明の範囲は、以下の特許請求の範囲およびその均等な物で示される記載の範囲であることを意図している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図６】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図５】
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【図７】
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【手続補正書】
【提出日】平成25年11月20日(2013.11.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量のプロアントシアニジンと
薬学的に許容し得る担体または塩とを含有し、
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは下記化学式を有して、
ＨＣＣの進行を遅延させるか、肝機能、肝線維症、肝硬変および肝炎を改善させるか、障害を受けた肝臓の再生を促進させるか、および／または肝線維症を回復に向かわせることを特徴とする医薬組成物。
【化１】
2014508785.tif 000041
［式中、
Ｒ1がＯＣＨ3のとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであり、
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＨでＲ3はＨであるか、
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＨであるか、または
Ｒ1がＯＨのとき、Ｒ2はＯＨでＲ3はＯＨであり、
かつＲ4は３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖または３−（β）−Ｏ−糖である。］
【請求項２】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットが互いにＣ４−Ｃ８結合、Ｃ４−Ｃ６結合、またはＣ２−Ｃ７結合を介して結合している請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記プロアントシアニジンの重合度が２〜３０である請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットは、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４においてＲまたはＳの光学異性体を含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラボノイド化合物を含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記フラボノイド化合物がカテキン、エピカテキン、エピアフゼレキン、ガロカテキン、ガロエピカテキン、エピガロカテキン、ガレート、フラボノール、フラバンジオール、ロイコシアニジンまたはプロシアニジンを含む請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記プロアントシアニジンのモノマーユニットがフラバン−３−オールを含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記プロアントシアニジンが植物からの抽出物である請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記植物が、ツツジ科、バラ科、マツ科、ブドウ科またはイラクサ科に属する植物を含む請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記イラクサ科に属する植物がナンバンカラムシを含む請求項９に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
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