(57)【要約】本発明は、Ｂ−クロトおよび／またはＦＧＦ２１様媒介性シグナル伝達を誘発することができる抗原結合タンパク質に関連するかまたはそれに由来する組成物および方法を提供する。実施形態において、抗原結合タンパク質は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発する。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体、このような抗体の結合フラグメントおよび誘導体、ならびにポリペプチドである。他の実施形態は、このような抗原結合タンパク質、それらのフラグメントおよび誘導体、ならびにポリペプチドをコードする核酸、そのようなポリヌクレオチドを含む細胞、そのような抗原結合タンパク質、それらのフラグメントおよび誘導体、ならびにポリペプチドを作製する方法、そして、２型糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ（非アルコール性脂肪性肝炎）、代謝症候群、および関連障害または状態を患う対象の治療または診断方法を含む、このような抗原結合タンパク質、そのフラグメントおよび誘導体、ならびにポリペプチドを使用する方法を提供する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＦＧＦ２１媒介性シグナル伝達を誘発する、単離された抗原結合タンパク質。
【請求項２】
β−クロトと、（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つと、を含む複合体に特異的に結合する、単離された抗原結合タンパク質。
【請求項３】
請求項１に記載の抗原結合タンパク質であって、前記抗原結合タンパク質は、
（ａ）    軽鎖ＣＤＲ３であって、
（ｉ）          表３ＢのＣＤＲＬ３−１〜ＣＤＲＬ３−７５（それぞれ、掲載順に、配列番号９４７〜１０２０）のうちの１つ以上のＣＤＲ３とは、３、２、または１個のアミノ酸付加、置換、欠失、およびそれらの組み合わせが異なる、軽鎖ＣＤＲ３配列、
（ｉｉ）        ＱＱＦＧＳＳＬＴ（配列番号９８８）、
（ｉｉｉ）      ＱＱＳＸ１ＳＸ２Ｘ３ＬＴ（配列番号１４４３）、
（ｉｖ）        ＬＱＸ４Ｘ５ＳＹＰＸ６Ｔ（配列番号１４４７）、
（ｖ）          ＭＱＲＸ７ＥＦＰＸ８Ｔ（配列番号１４５１）、
（ｖｉ）        ＱＸ９ＷＤＳＸ１０Ｘ１１ＶＶ（配列番号１４５７）、
（ｖｉｉ）      ＱＱＹＮＸ１２ＷＰＸ１３Ｔ（配列番号１４６１）、
（ｖｉｉｉ）    ＱＶＷＤＳＳＸ１４ＤＸ１５ＶＸ１６（配列番号１４６６）、
（ｉｘ）        ＱＱＳＳＸ１7 ＩＰＷＴ（配列番号１４６９）、
（ｘ）          ＱＱＴＮＳＦＰＰＷＴ（配列番号１４７０）、
（ｘｉ）        ＧＴＷＤＳＳＬＳＸ１８Ｘ１９Ｖ（配列番号１４７４）、
（ｘｉｉ）      ＱＱＹＤＮＬＰＸ２０Ｔ（配列番号１４７７）、
（ｘｉｉｉ）    ＱＱＹＧＳＳＸ２１ＰＷＴ（配列番号１４８０）、
（ｘｉｖ）      ＱＱＹＧＸ２２ＳＸ２３ＦＴ（配列番号１４８３）、
（ｘｖ）        ＱＱＹＧＳＳＸ２４Ｘ２５Ｘ２６（配列番号１４８８）、
（ｘｖｉ）      ＱＡＷＤＳＳＸ２７ＴＸ２８Ｖ（配列番号１４９２）、
（ｘｖｉｉ）    ＱＡＷＤＳＸ２９ＴＶＸ３０（配列番号１４９６）、
（ｘｖｉｉｉ）  ＱＱＸ３１ＹＳＡＸ３２ＦＴ（配列番号１４９９）、
（ｘｉｘ）      ＱＱＹＮＸ３３ＹＰＲＴ（配列番号１５０２）、
（ｘｘ）        ＨＱＸ３４Ｘ３５ＤＬＰＬＴ（配列番号１５０５）、
（ｘｘｉ）      ＭＱＡＬＱＴＸ３６Ｘ３７Ｔ（配列番号１５０８）、
（ｘｘｉｉ）    ＱＱＦＧＲＳＦＴ（配列番号１５０９）、
（ｘｘｉｉｉ）  ＹＳＴＤＳＳＸ３８ＮＨＶＶ（配列番号１５１２）、
のうちの１つ以上を含む、軽鎖ＣＤＲ３、
（ｂ）              重鎖ＣＤＲ３配列であって、
（ｉ）          表３ＡのＣＤＲＨ３−１〜ＣＤＲＨ３−８１（それぞれ、掲載順に、配列番号７３３〜８１３）のうちの１つ以上のＣＤＲ３とは、８、７、６、５、４、３、２、または１個のアミノ酸付加、置換、欠失、およびそれらの組み合わせが異なる、重鎖ＣＤＲ３、
（ｉｉ）        ＭＴＸ１１０ＰＹＷＹＦＸ１１１Ｌ（配列番号１６６９）、
（ｉｉｉ）      ＤＸ１１２Ｘ１１３Ｘ１１４ＤＦＷＸ１１５ＧＹＰＸ１１６Ｘ１１７Ｘ１１８ＹＹＧＸ１１９ＤＶ（配列番号１６７５）、
（ｉｖ）        ＶＴＧＴＤＡＦＤＦ（配列番号１６７６）、
（ｖ）          ＴＶＴＫＥＤＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号１６７７）、
（ｖｉ）        ＤＳＳＧＳＹＹＶＥＤＹＦＤＹ（配列番号１６７８）、
（ｖｉｉ）      ＤＸ１１９Ｘ１２０ＩＡＶＡＧＸ１２１ＦＤＹ（配列番号１６８１）、
（ｖｉｉｉ）    ＥＹＹＹＧＳＧＳＹＹＰ（配列番号１６８２）、
（ｉｘ）        ＥＬＧＤＹＰＦＦＤＹ（配列番号１６８３）、
（ｘ）          ＥＹＶＡＥＡＧＦＤＹ（配列番号１６８４）、
（ｘｉ）        ＶＡＡＶＹＷＹＦＤＬ（配列番号１６８５）、
（ｘｉｉ）      ＹＮＷＮＹＧＡＦＤＦ（配列番号１６８６）、
（ｘｉｉｉ）    ＲＡＳＲＧＹＲＸ１２２ＧＬＡＦＡＩ（配列番号１６８９）、
（ｘｉｖ）      ＤＧＩＴＭＶＲＧＶＴＨＹＹＧＭＤＶ（配列番号１６９０）、
（ｘｖ）        ＤＨＸ１２３ＳＣＷＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号１６９３）、
（ｘｖｉ）      ＹＸ１２４Ｘ１２５ＷＤＹＹＹＧＸ１２６ＤＶ（配列番号１６９６）、
（ｘｖｉｉ）    ＶＬＨＹＸ１２７ＤＳＸ１２８ＧＹＳＹＹＸ１２９ＤＸ１３０（配列番号１６９９）
のうちの１つ以上を含む、重鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｃ）    前記（ａ）の軽鎖ＣＤＲ３配列および前記（ｂ）の重鎖ＣＤＲ３配列
のうちの１つ以上を含み、
ここで、
Ｘ１は、ＹまたはＦであり、
Ｘ２は、ＴまたはＳであり、
Ｘ３は、ＰまたはＳであり、
Ｘ４は、ＨまたはＲであり、
Ｘ５は、ＮまたはＳであり、
Ｘ６は、ＬまたはＲであり、
Ｘ７は、ＩまたはＬであり、
Ｘ８は、ＩまたはＬであり、
Ｘ９は、ＶまたはＬであり、
Ｘ１０は、ＳまたはＮであり、
Ｘ１１は、Ｔ、Ｐ、またはＳであり、
Ｘ１２は、ＮまたはＴであり、
Ｘ１３は、ＷまたはＬであり、
Ｘ１４は、ＳまたはＣであり、
Ｘ１５は、Ｈ、Ｖ、またはＧであり、
Ｘ１６は、Ｖまたは不在であり、
Ｘ１７は、ＳまたはＴであり、
Ｘ１８は、ＡまたはＶであり、
Ｘ１９は、ＶまたはＭであり、
Ｘ２０は、ＬまたはＦであり、
Ｘ２１は、Ｐまたは不在であり、
Ｘ２２は、ＲまたはＴであり、
Ｘ２３は、ＬまたはＰであり、
Ｘ２４は、Ｐまたは不在であり、
Ｘ２５は、ＲまたはＣであり、
Ｘ２６は、ＳまたはＴであり、
Ｘ２７は、Ｔまたは不在であり、
Ｘ２８は、ＷまたはＡであり、
Ｘ２９は、Ｇ、Ｔ、Ａ、または不在であり、
Ｘ３０は、ＶまたはＩであり、
Ｘ３１は、ＳまたはＴであり、
Ｘ３２は、ＴまたはＰであり、
Ｘ３３は、ＩまたはＴであり、
Ｘ３４は、ＳまたはＹであり、
Ｘ３５は、ＳまたはＤであり、
Ｘ３６は、ＰまたはＬであり、
Ｘ３７は、ＦまたはＩであり、
Ｘ３８は、ＶまたはＧであり、
Ｘ１１０は、ＴまたはＳであり、
Ｘ１１１は、ＤまたはＧであり、
Ｘ１１２は、ＲまたはＱであり、
Ｘ１１３は、Ｙ、Ｄ、またはＮであり、
Ｘ１１４は、ＹまたはＦであり、
Ｘ１１５は、ＳまたはＮであり、
Ｘ１１６は、ＹまたはＦであり、
Ｘ１１７は、ＦまたはＹであり、
Ｘ１１８は、Ｒ、Ｙ、Ｆ、またはＨであり、
Ｘ１１９は、ＬまたはＭであり、
Ｘ１１９は、ＷまたはＬであり、
Ｘ１２０は、ＳまたはＲであり、
Ｘ１２１は、ＴまたはＳであり、
Ｘ１２２は、ＦまたはＹであり、
Ｘ１２３は、ＳまたはＴであり、
Ｘ１２４は、ＳまたはＲであり、
Ｘ１２５は、ＴまたはＤであり、
Ｘ１２６は、ＶまたはＭであり、
Ｘ１２７は、ＳまたはＹであり、
Ｘ１２８は、ＲまたはＳであり、
Ｘ１２９は、ＳまたはＦであり、および
Ｘ１３０は、ＦまたはＹである、
抗原結合タンパク質。
【請求項４】
請求項１に記載の抗原結合タンパク質であって、
（ａ）    軽鎖ＣＤＲ１配列であって、
（ｉ）          表３ＢのＣＤＲＬ１−１〜ＣＤＲＬ１−８１（それぞれ、掲載順に、配列番号８１４〜８９３）のうちの１つ以上のＣＤＲ１配列とは、７、６、５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸付加、置換、欠失、およびそれらの組み合わせが異なる、軽鎖ＣＤＲ１、
（ｉｉ）        ＲＡＳＸ６２ＳＸ６３Ｘ６４Ｘ６５Ｘ６６Ｘ６７Ｘ６８Ａ（配列番号１５９１）、
（ｉｉｉ）      ＲＸ６９ＳＱＸ７０ＩＸ７１Ｘ７２ＹＬＮ（配列番号１６０２）、
（ｉｖ）        ＧＧＮＸ７３ＩＧＳＸ７４Ｘ７５ＶＸ７６（配列番号１６１２）、
（ｖ）          ＲＡＳＱＸ７７ＩＲＮＤＬＸ７８（配列番号１６１６）、
（ｖｉ）        ＲＳＳＱＳＬＸ７９Ｘ８０Ｘ８１ＤＸ８２ＧＸ８３ＴＹＬＤ（配列番号１６２２）、
（ｖｉｉ）      ＳＧＸ８４  Ｘ８５ＬＧＤＫＹＸ８６Ｘ８７（配列番号１６２９）、
（ｖｉｉｉ）    ＱＡＳＱＸ８８ＩＸ８９Ｘ９０Ｘ９１ＬＮ（配列番号１６３５）、
（ｉｘ）        ＲＡＳＱＸ９２ＩＸ９３Ｘ９４ＷＬＸ９５（配列番号１６４０）、
（ｘ）          ＳＧＳＳＳＮＩＧＸ９６ＮＹＶＸ９７（配列番号１６４５）、
（ｘｉ）        ＲＡＳＸ９８ＤＩＳＮＹＬＡ（配列番号１６４８）、
（ｘｉｉ）      ＲＡＳＱＸ９９ＶＸ１００ＳＳＹＸ１０１Ｖ（配列番号１６５２）、
（ｘｉｉｉ）      ＲＳＳＱＳＬＸ１０２ＨＳＮＧＸ１０３ＮＹＬＤ（配列番号１６５６）、
（ｘｉｖ）        ＲＡＳＱＴＸ１０４ＲＮＸ１０５ＹＬＡ（配列番号１６５９）、
（ｘｖ）          ＲＳＳＸ１０６Ｘ１０７ＬＶＹＳＤＧＮＴＹＬＮ（配列番号１６６２）、および
（ｘｖｉ）        ＳＧＤＡＸ１０８ＰＫＫＹＡＸ１０９（配列番号１６６５）
のうちの１つ以上を含む、軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ｂ）    軽鎖ＣＤＲ２配列であって、
（ｉ）            表３ＢのＣＤＲＬ２−１〜ＣＤＲＬ２−５３（それぞれ、掲載順に、配列番号８９４〜９４６）のうちの１つ以上のＣＤＲ２配列とは、３、２、または１個のアミノ酸付加、置換、欠失、およびそれらの組み合わせが異なる、軽鎖ＣＤＲ２、
（ｉｉ）          Ｘ３９ＡＳＳＬＸ４０Ｘ４１（配列番号１５１７）、
（ｉｉｉ）        ＧＸ４２ＳＸ４３ＲＸ４４Ｔ（配列番号１５２５）、
（ｉｖ）          ＧＡＦＳＲＡＸ４５（配列番号１５２８）、
（ｖ）            Ｘ４６ＤＸ４７ＫＲＰＳ（配列番号１５３３）、
（ｖｉ）          ＴＬＳＸ４８ＲＡＳ（配列番号１５３６）、
(ｖｉｉ）          ＡＡＳＮＬＱＸ４９（配列番号１５３９）、
（ｖｉｉｉ）      ＧＸ５０ＳＮＲＡＸ５１（配列番号１５４３）、
（ｉｘ）          Ｘ５２ＡＳＸ５３ＬＱＳ（配列番号１５４８）、
（ｘ）            ＤＮＸ５３ＫＲＰＳ（配列番号１５５１）、
（ｘｉ）          ＤＸ５４ＳＮＬＥＴ（配列番号１５５４）、
（ｘｉｉ）        ＬＸ５５ＳＮＲＡＳ（配列番号１５５７）、
（ｘｉｉｉ）      ＱＸ５６ＮＸ５７ＲＰＳ（配列番号１５６１）、
（ｘｉｖ）        ＲＤＲＮＲＰＳ（配列番号１５６２）、
（ｘｖ）          Ｘ５８ＤＳＮＲＰＳ（配列番号１５６５）、
（ｘｖｉ）        ＤＤＳＤＲＰＳ（配列番号１５６６）、
（ｘｖｉｉ）      ＡＸ５９ＳＳＬＱＳ（配列番号１５６９）、
（ｘｖｉｉｉ）    ＴＸ６０ＳＳＬＱＳ（配列番号１５７２）、および
（ｘｉｘ）        ＫＸ６１ＳＮＷＤＳ（配列番号１５７５）
のうちの１つ以上を含む、軽鎖ＣＤＲ２配列、
（ｃ）    重鎖ＣＤＲ１配列であって、
（ｉ）            表３ＡのＣＤＲＨ１−１〜ＣＤＲＨ１−５３（それぞれ、掲載順に、配列番号６０３〜６５５）のうちの１つ以上のＣＤＲ１配列とは、３、２、または１個のアミノ酸付加、置換、欠失、およびそれらの組み合わせが異なる重鎖ＣＤＲ１、
（ｉｉ）          ＳＧＸ１７０Ｘ１７１ＴＷＸ１７２（配列番号１７７５）、
（ｉｉｉ）        Ｘ１７３ＹＹＷＸ１７４（配列番号１７８１）、
（ｉｖ）          Ｘ１７５Ｘ１７６ＧＭＳ（配列番号１７８６）、
（ｖ）            ＳＹＸ１７７ＭＸ１７８（配列番号１７９０）、
（ｖｉ）          Ｘ１７９ＹＹＸ１８０Ｈ（配列番号１７９６）、
（ｖｉｉ）        ＳＹＧＸ１８１Ｈ（配列番号１７９９）、
（ｖｉｉｉ）      ＮＹＸ１８２ＭＸ１８３（配列番号１８０３）、
（ｉｘ）          Ｘ１８４ＹＷＩＧ（配列番号１８０６）、
（ｘ）            ＧＹＸ１８５ＭＨ（配列番号１８０９）、
（ｘｉ）          ＳＸ１８６ＤＩＸ１８７（配列番号１８１３）、
（ｘｉｉ）        Ｘ１８８ＹＡＭＳ（配列番号１８１６）、
（ｘｉｉｉ）      ＮＡＷＭＳ（配列番号１８１７）、
（ｘｉｖ）        ＳＳＳＹＹＷＧ（配列番号１８１８）、
（ｘｖ）          Ｘ１８９ＹＹＷＮ（配列番号１８２１）、
（ｘｖｉ）        ＳＮＳＡＸ１９０ＷＮ（配列番号１８２４）、および
（ｘｖｉｉ）      Ｘ１９１ＹＤＭＨ（配列番号１８２７）、
のうちの１つ以上を含む、重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｄ）    重鎖ＣＤＲ２配列であって、
（ｉ）            表３ＡのＣＤＲＨ２−１〜ＣＤＲＨ２−７７（それぞれ、掲載順に、配列番号６５６〜７３２）のうちの１つ以上のＣＤＲ２配列とは、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個のアミノ酸付加、置換、欠失、およびそれらの組み合わせが異なる、重鎖ＣＤＲ２、
（ｉｉ）          Ｘ１３１Ｘ１３２Ｘ１３３Ｘ１３４Ｘ１３５ＧＸ１３６Ｘ１３７Ｘ１３８Ｘ１３９ＮＰＳＬＫＳ（配列番号１７１６）、
（ｉｉｉ）        Ｘ１４０ＩＸ１４１Ｘ１４２ＤＧＸ１４３ＮＸ１４４Ｘ１４５Ｘ１４６ＡＤＳＶＫＧ（配列番号１７３２）、
（ｉｖ）          ＷＸ１４７ＮＰＸ１４８ＳＧＸ１４９ＴＸ１５０ＹＡＱＫＦＸ１５１Ｇ（配列番号１７４１）、
（ｖ）            ＥＩＮＨＳＸ１５２Ｘ１５３ＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号１７４４）、
（ｖｉ）          ＩＩＹＰＧＤＳＸ１５４ＴＲＹＳＰＳＦＱＧ（配列番号１７４７）、
（ｖｉｉ）        ＳＩＳＳＳＳＸ１５５ＹＸ１５６ＹＹＸ１５７ＤＳＸ１５８ＫＧ（配列番号１７５１）、
（ｖｉｉｉ）      ＲＩＸ１５９Ｘ１６０ＫＴＤＧＧＴＴＸ１６１ＹＡＡＰＶＫＧ（配列番号１７５５）、
（ｉｘ）          ＧＩＳＧＳＳＡＧＴＹＹＡＤＳＶＧＫ（配列番号１７５６）、
（ｘ）            ＶＩＳＸ１６２ＳＧＧＸ１６３ＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１７５９）、
（ｘｉ）          ＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＶＫＳ（配列番号１７６０）、
（ｘｉｉ）        ＲＩＹＸ１６４ＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＸ１６５Ｘ１６６（配列番号１７６３）、および
（ｘｉｉｉ）      ＷＭＮＰＹＳＧＳＴＧＸ１６７ＡＱＸ１６８ＦＱＸ１６９（配列番号１７６６）、
のうちの１つ以上を含む、重鎖ＣＤＲ２配列、
（ここで、
Ｘ３９は、ＡまたはＳであり、
Ｘ４０は、ＱまたはＫであり、
Ｘ４１は、ＳまたはＦであり、
Ｘ４２は、ＡまたはＴであり、
Ｘ４３は、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｒ、またはＮであり、
Ｘ４４は、ＡまたはＤであり、
Ｘ４５は、ＳまたはＴであり、
Ｘ４６は、Ｑ、Ｒ、またはＥであり、
Ｘ４７は、ＴまたはＳであり、
Ｘ４８は、ＹまたはＦであり、
Ｘ４９は、ＲまたはＳであり、
Ｘ５０は、ＡまたはＳであり、
Ｘ５１は、ＩまたはＴであり、
Ｘ５２は、ＤまたはＧであり、
Ｘ５３は、Ｓ、Ｔ、またはＮであり、
Ｘ５３は、ＮまたはＤであり、
Ｘ５４は、ＡまたはＶであり、
Ｘ５５は、ＧまたはＤであり、
Ｘ５６は、ＤまたはＮであり、
Ｘ５７は、ＫまたはＥであり、
Ｘ５８は、ＳまたはＣであり、
Ｘ５９は、ＳまたはＶであり、
Ｘ６０は、ＡまたはＴであり、
Ｘ６１は、ＶまたはＧであり、
Ｘ６２は、ＰまたはＱであり、
Ｘ６３は、Ｖ、Ｉ、またはＦであり、
Ｘ６４は、Ｓ、Ｒ、または不在であり、
Ｘ６５は、Ｓ、Ｒ、またはＮであり、
Ｘ６６は、Ｄ、Ｓ、ＮまたはＭであり、
Ｘ６７は、Ｉ、Ｙ、Ｈ、Ｑ、Ｎ、またはＳであり、
Ｘ６８は、ＬまたはＶであり、
Ｘ６９は、ＡまたはＴであり、
Ｘ７０は、Ｉ、Ｓ、Ｔ、またはＮであり、
Ｘ７１は、Ｒ、Ｓ、またはＮであり、
Ｘ７２は、Ｒ、Ｓ、Ｎ、またはＩであり、
Ｘ７３は、Ｎ、またはＤであり、
Ｘ７４は、Ｙ、Ｉ、またはＫであり、
Ｘ７５は、Ｎ、Ｓ、Ｔ、またはＡであり、
Ｘ７６は、ＨまたはＱであり、
Ｘ７７は、ＤまたはＧであり、
Ｘ７８は、ＧまたはＡであり、
Ｘ７９は、ＬまたはＦであり、
Ｘ８０は、ＮまたはＤであり、
Ｘ８１は、ＳまたはＮであり、
Ｘ８２は、ＡまたはＤであり、
Ｘ８３は、Ｔ、Ｄ、またはＮであり、
Ｘ８４は、ＮまたはＤであり、
Ｘ８５は、Ｋ、Ｅ、またはＮであり、
Ｘ８６は、ＶまたはＡであり、
Ｘ８７は、ＣまたはＦであり、
Ｘ８８は、ＧまたはＤであり、
Ｘ８９は、Ｓ、Ｋ、Ｎ、またはＴであり、
Ｘ９０は、Ｎ、Ｋ、またはＩであり、
Ｘ９１は、ＹまたはＦであり、
Ｘ９２は、ＤまたはＧであり、
Ｘ９３は、ＤまたはＳであり、
Ｘ９４は、ＲまたはＳであり、
Ｘ９５は、ＶまたはＡであり、
Ｘ９６は、Ｎ、Ｉ、またはＤであり、
Ｘ９７は、ＡまたはＳであり、
Ｘ９８は、ＱまたはＨであり、
Ｘ９９は、ＲまたはＳであり、
Ｘ１００は、ＰまたはＡであり、
Ｘ１０１は、ＩまたはＬであり、
Ｘ１０２は、ＬまたはＱであり、
Ｘ１０３は、ＹまたはＦであり、
Ｘ１０４は、ＶまたはＩであり、
Ｘ１０５は、ＮまたはＳであり、
Ｘ１０６は、ＱまたはＰであり、
Ｘ１０７は、ＲまたはＳであり、
Ｘ１０８は、ＬまたはＶであり、
Ｘ１０９は、ＹまたはＮであり、
Ｘ１３１は、Ｎ、Ｆ、Ｙ、Ｓ、またはＭであり、
Ｘ１３２は、ＩまたはＬであり、
Ｘ１３３は、ＹまたはＦであり、
Ｘ１３４は、Ｙ、Ｈ、またはＤであり、
Ｘ１３５は、ＳまたはＴであり、
Ｘ１３６は、Ｔ、Ｇ、Ｓ、またはＴであり、
Ｘ１３７は、ＴまたはＡであり、
Ｘ１３８は、Ｙ、Ｎ、またはＨであり、
Ｘ１３９は、ＦまたはＹであり、
Ｘ１４０は、Ｌ、Ｇ、Ｉ、またはＶであり、
Ｘ１４１は、ＷまたはＳであり、
Ｘ１４２は、Ｙ、Ｄ、またはＮであり、
Ｘ１４３は、ＳまたはＤであり、
Ｘ１４４は、ＫまたはＮであり、
Ｘ１４５は、Ｙ、Ｎ、Ｄ、またはＨであり、
Ｘ１４６は、ＹまたはＨであり、
Ｘ１４７は、ＩまたはＭであり、
Ｘ１４８は、Ｐ、Ｎ、Ｓ、またはＤであり、
Ｘ１４９は、Ａ、Ｇ、またはＤであり、
Ｘ１５０は、Ｎ、Ｋ、またはＤであり、
Ｘ１５１は、Ｒ、Ｈ、またはＱであり、
Ｘ１５２は、ＥまたはＧであり、
Ｘ１５３は、ＮまたはＴであり、
Ｘ１５４は、ＤまたはＥであり、
Ｘ１５５は、ＴまたはＳであり、
Ｘ１５６は、ＩまたはＥであり、
Ｘ１５７は、ＡまたはＶであり、
Ｘ１５８は、ＶまたはＬであり、
Ｘ１５９は、ＫまたはＩであり、
Ｘ１６０は、ＳまたはＧであり、
Ｘ１６１は、ＤまたはＥであり、
Ｘ１６２は、ＤまたはＧであり、
Ｘ１６３は、ＳまたはＤであり、
Ｘ１６４は、ＩまたはＴであり、
Ｘ１６５は、ＥまたはＫであり、
Ｘ１６６は、ＮまたはＳであり、
Ｘ１６７は、ＹまたはＬであり、
Ｘ１６８は、ＮまたはＲであり、
Ｘ１６９は、ＧまたはＤであり、
Ｘ１７０は、Ｖ、Ｇ、Ｎ、またはＤであり、
Ｘ１７１は、ＹまたはＮであり、
Ｘ１７２は、Ｎ、Ｓ、またはＴであり、
Ｘ１７３は、Ｔ、Ｓ、またはＧであり、
Ｘ１７４は、ＳまたはＴであり、
Ｘ１７５は、Ｓ、Ｔ、またはＦであり、
Ｘ１７６は、ＹまたはＦであり、
Ｘ１７７は、ＡまたはＳであり、
Ｘ１７８は、Ｓ、Ｎ、またはＭであり、
Ｘ１７９は、ＹまたはＧであり、
Ｘ１８０は、Ｉ、Ｌ、Ｋ、またはＴであり、
Ｘ１８１は、ＬまたはＩであり、
Ｘ１８２は、ＧまたはＮであり、
Ｘ１８３は、Ｈ、Ｒ、またはＭであり、
Ｘ１８４は、ＳまたはＧであり、
Ｘ１８５は、ＹまたはＦであり、
Ｘ１８６は、ＹまたはＨであり、
Ｘ１８７は、ＮまたはＤであり、
Ｘ１８８は、ＮまたはＨであり、
Ｘ１８９は、ＤまたはＳであり、
Ｘ１９０は、ＴまたはＡであり、
Ｘ１９１は、ＳまたはＴである）
（ｅ）    前記（ａ）の軽鎖ＣＤＲ１および前記（ｂ）の軽鎖ＣＤＲ２、
（ｆ）    前記（ａ）の軽鎖ＣＤＲ１および前記（ｃ）の重鎖ＣＤＲ１、
（ｇ）    前記（ａ）の軽鎖ＣＤＲ１および前記（ｄ）の重鎖ＣＤＲ２、
（ｈ）    前記（ａ）の軽鎖ＣＤＲ１および前記（ｃ）の重鎖ＣＤＲ１、
（ｉ）    前記（ｃ）の重鎖ＣＤＲ１および前記（ｄ）の重鎖ＣＤＲ２、
（ｊ）    前記（ｂ）の軽鎖ＣＤＲ２および前記（ｄ）の重鎖ＣＤＲ２、
（ｋ）    前記（ａ）の軽鎖ＣＤＲ１、前記（ｂ）の軽鎖ＣＤＲ２、および前記（ｃ）の重鎖ＣＤＲ１、
（ｌ）    前記（ｂ）の軽鎖ＣＤＲ２、前記（ｃ）の重鎖ＣＤＲ１、および前記（ｄ）の重鎖ＣＤＲ２、
（ｍ）    前記（ａ）の軽鎖ＣＤＲ１、前記（ｃ）の重鎖ＣＤＲ１、および前記（ｄ）の重鎖ＣＤＲ２、ならびに
（ｎ）    前記（ａ）の軽鎖ＣＤＲ１、前記（ｂ）の軽鎖ＣＤＲ２、前記（ｃ）の重鎖ＣＤＲ２、および前記（ｄ）の重鎖ＣＤＲ２
のうちの１つ以上を含む、抗原結合タンパク質。
【請求項５】
請求項１に記載の抗原結合タンパク質であって、
（ａ）    軽鎖可変ドメインであって、
（ｉ）    表３ＢのＣＤＲＬ１−１〜ＣＤＲＬ１−８１（それぞれ、掲載順に配列番号８１４〜８９３）から選択される、軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ｉｉ）  表３ＢのＣＤＲＬ２−１〜ＣＤＲＬ２−５３（それぞれ、掲載順に配列番号８９４〜９４６）から選択される、軽鎖ＣＤＲ２配列、
（ｉｉｉ）表３ＢのＣＤＲＬ３−１〜ＣＤＲＬ３−７５（それぞれ、掲載順に配列番号９４７〜１０２０）から選択される、軽鎖ＣＤＲ３配列、
のうちの１つ以上を含む、軽鎖可変ドメイン、
（ｂ）    重鎖可変ドメインであって、
（ｉ）    表３ＡのＣＤＲＨ１−１〜ＣＤＲＨ１−５３（それぞれ、掲載順に配列番号６０３〜６５５）から選択される、重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｉｉ）  表３ＡのＣＤＲＨ２−１〜ＣＤＲＨ２−７７（それぞれ、掲載順に配列番号６５６〜７３２）から選択される、重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｉｉｉ）表３ＡのＣＤＲＨ３−１〜ＣＤＲＨ３−８１（それぞれ、掲載順に配列番号７３３〜８１３）から選択される、重鎖ＣＤＲ３配列、
のうちの１つ以上を含む、重鎖可変ドメイン、ならびに
（ｃ）    （ａ）の軽鎖可変ドメインおよび（ｂ）の重鎖可変ドメインを含む組み合わせ
のうちの１つ以上を含む、抗原結合タンパク質。
【請求項６】
請求項１に記載の抗原結合タンパク質であって、前記抗原結合タンパク質は、
（ａ）    軽鎖可変ドメイン配列であって、
（ｉ）    表２ＡのＶＬ１〜ＶＬ１００（それぞれ、掲載順に配列番号２１７〜３１５）のうちの１つ以上を含む、軽鎖可変ドメインと、少なくとも８０％同一な配列を有する、アミノ酸、
（ｉｉ）  表２ＡのＶＬ１〜ＶＬ１００（それぞれ、掲載順に、配列番号２１７〜３１５）のうちの１つ以上を含む、軽鎖可変ドメイン配列をコードするポリヌクレオチド配列と、少なくとも８０％同一なポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸の配列、
のうちの１つ以上を含む、軽鎖可変ドメイン配列、
（ｂ）    重鎖可変ドメイン配列であって、
（ｉ）    表２ＢのＶＨ１〜ＶＨ９４（それぞれ、掲載順に配列番号３１６〜４０９）のうちの１つ以上を含む、重鎖可変ドメインと、少なくとも８０％同一である、アミノ酸の配列、
（ｉｉ）  表２ＢのＶＨ１〜ＶＨ９４（それぞれ、掲載順に配列番号３１６〜４０９）の重鎖可変ドメイン配列をコードするポリヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸の配列、
のうちの１つ以上を含む、重鎖可変ドメイン配列、ならびに
（ｃ）      （ａ）の軽鎖可変ドメインおよび（ｂ）の重鎖可変ドメインを含む組み合わせ
のうちの１つ以上を含む、抗原結合タンパク質。
【請求項７】
（ａ）    表２ＡのＶＬ１〜ＶＬ１００（それぞれ、掲載順に配列番号２１７〜３１５）のうちの１つ以上を含む、軽鎖可変ドメイン配列、
（ｂ）    表２ＢのＶＨ１〜ＶＨ９４（それぞれ、掲載順に配列番号３１６〜４０９）のうちの１つ以上を含む、重鎖可変ドメイン配列、ならびに
（ｃ）    （ａ）の軽鎖可変ドメインおよび（ｂ）の重鎖可変ドメインを含む組み合わせ
のうちの１つ以上を含む、請求項６に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項８】
請求項７に記載の抗原結合タンパク質であって、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインは、ＶＬ１およびＶＨ１、ＶＬ２およびＶＨ１、ＶＬ３およびＶＨ２もしくはＶＨ３、ＶＬ４およびＶＨ４、ＶＬ５およびＶＨ５、ＶＬ６およびＶＨ６、ＶＬ７およびＶＨ６、ＶＬ８およびＶＨ７もしくはＶＨ８、ＶＬ９およびＶＨ９、ＶＬ１０およびＶＨ９、ＶＬ１１およびＶＨ１０、ＶＬ１２およびＶＨ１１、ＶＬ１３およびＶＨ１２、ＶＬ１３およびＶＨ１４、ＶＬ１４およびＶＨ１３、ＶＬ１５およびＶＨ１４、ＶＬ１６およびＶＨ１５、ＶＬ１７およびＶＨ１６、ＶＬ１８およびＶＨ１７、ＶＬ１９およびＶＨ１８、ＶＬ２０およびＶＨ１９、ＶＬ２１およびＶＨ２０、ＶＬ２２およびＶＨ２１、ＶＬ２３およびＶＨ２２、ＶＬ２４およびＶＨ２３、ＶＬ２５およびＶＨ２４、ＶＬ２６およびＶＨ２５、ＶＬ２７およびＶＨ２６、ＶＬ２８およびＶＨ２７、ＶＬ２９およびＶＨ２８、ＶＬ３０およびＶＨ２９、ＶＬ３１およびＶＨ３０、ＶＬ３２およびＶＨ３１、ＶＬ３３およびＶＨ３２、ＶＬ３４およびＶＨ３３、ＶＬ３５およびＶＨ３４、ＶＬ３６およびＶＨ３５、ＶＬ３７およびＶＨ３６、ＶＬ３８およびＶＨ３７、ＶＬ３９およびＶＨ３８、ＶＬ４０およびＶＨ３９、ＶＬ４１およびＶＨ４０、ＶＬ４２およびＶＨ４１、ＶＬ４３およびＶＨ４２、ＶＬ４４およびＶＨ４３、ＶＬ４５およびＶＨ４４、ＶＬ４６およびＶＨ４５、ＶＬ４７およびＶＨ４６、ＶＬ４８およびＶＨ４７、ＶＬ４９およびＶＨ４８、ＶＬ５０およびＶＨ４９、ＶＬ５１およびＶＨ５０、ＶＬ  ５２およびＶＨ５１、ＶＬ５３およびＶＨ５２、ＶＬ５４およびＶＨ５３、ＶＬ５５およびＶＨ５４、ＶＬ５６およびＶＨ５４、ＶＬ５７およびＶＨ５４、ＶＬ５８およびＶＨ５５、ＶＬ５９およびＶＨ５６、ＶＬ６０およびＶＨ５７、ＶＬ６１およびＶＨ５８、ＶＬ６２およびＶＨ５９、ＶＬ６３およびＶＨ６０、ＶＬ６４およびＶＨ１、ＶＬ６５およびＶＨ６２、ＶＬ６６およびＶＨ６３、ＶＬ６７およびＶＨ６４、ＶＬ６８およびＶＨ６５、ＶＬ６９およびＶＨ６６、ＶＬ７０およびＶＨ６７、ＶＬ７１およびＶＨ６８、ＶＬ７２およびＶＨ６９、ＶＬ７３およびＶＨ７０、ＶＬ７４およびＶＨ７０、ＶＬ７５およびＶＨ７０、ＶＬ７６およびＶＨ７１、ＶＬ７７およびＶＨ７２、ＶＬ７８およびＶＨ７３、ＶＬ７９およびＶＨ７４、ＶＬ８０およびＶＨ７５、ＶＬ８１およびＶＨ７６、ＶＬ８２およびＶＨ７７、ＶＬ８３およびＶＨ７８、ＶＬ８４およびＶＨ７９、ＶＬ８５およびＶＨ８０、ＶＬ８６およびＶＨ８１、ＶＬ８７およびＶＨ８２、ＶＬ８８およびＶＨ８６、ＶＬ８９およびＶＨ８３、ＶＬ９０およびＶＨ８４、ＶＬ９１およびＶＨ８５、ＶＬ９２およびＶＨ８７、ＶＬ９３およびＶＨ８８、ＶＬ９４およびＶＨ８８、ＶＬ９５およびＶＨ８９、ＶＬ９６およびＶＨ９０、ＶＬ９７およびＶＨ９１、ＶＬ９８およびＶＨ９２、ＶＬ９９およびＶＨ９３、ならびにＶＬ１００およびＶＨ９４のうちの１つ以上を含む、抗原結合タンパク質。
【請求項９】
（ａ）    配列番号１２のκ軽鎖定常配列、
（ｂ）    配列番号１３のλ軽鎖定常配列、
（ｃ）    配列番号１１の重鎖定常配列、または
（ｄ）    （ｉ）配列番号１２のκ軽鎖定常配列もしくは
配列番号１３のλ軽鎖定常配列、および
（ｉｉ）配列番号１１の重鎖定常配列
をさらに含む、請求項８に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１０】
請求項１に記載の抗原結合タンパク質であって、前記抗原結合タンパク質は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組み換え抗体、抗原に結合する抗体フラグメント、一本鎖抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ｆａｂ’）２フラグメント、ドメイン抗体、ＩｇＤ抗体、ＩｇＥ抗体、ＩｇＭ抗体、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、ＩｇＧ４抗体、またはヒンジ領域に少なくとも１つの突然変異を有するＩｇＧ４抗体である、抗原結合タンパク質。
【請求項１１】
請求項１に記載の抗原結合タンパク質であって、β−クロトと、（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む、複合体に結合すると、
（ａ）    参照抗体と実質的に同じＫｄで、（ｉ）β−クロト、（ｉｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、ＦＧＦＲ３ｃ、もしくはＦＧＦＲ４、または（ｉｉｉ）β−クロトとＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、ＦＧＦＲ３ｃ、およびＦＧＦＲ４のうちの１つとを含む複合体に結合し、
（ｂ）    ＥＬＫ−ルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて測定される場合、配列番号２の成熟形態を含む、野生型ＦＧＦ２１標準物によって誘発されるシグナル伝達よりも、１０％以上高いＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発し、
（ｃ）    １０ｎＭ以下のＦＧＦ２１様シグナル伝達のＥＣ５０を、
（ｉ）    ＦＧＦＲ１ｃ／β‐クロト媒介性のインビトロでの組み換え細胞に基づくアッセイ、および
（ｉｉ）    インビトロでのヒト脂肪細胞機能アッセイ
のうちの１つを含むアッセイにおいて示し、
（ｄ）    ＦＧＦＲ１ｃに対する１０ｎＭ未満のアゴニスト活性のＥＣ５０を、β−クロトの存在下で、インビトロでの組み換えＦＧＦＲ１ｃ受容体媒介性レポーターアッセイにおいて示し、
（ｅ）    ＦＧＦＲ１ｃに対する１μＭを上回るアゴニスト活性のＥＣ５０を、β−クロトの不在下で、インビトロでの組み換えＦＧＦＲ１ｃ受容体媒介性レポーターアッセイにおいて示し、
（ｆ）    （ｉ）β−クロト、（ｉｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、ＦＧＦＲ３ｃ、もしくはＦＧＦＲ４、または（ｉｉｉ）β−クロトとＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、ＦＧＦＲ３ｃ、およびＦＧＦＲ４のうちの１つとを含む複合体への結合について、参照抗体と競合し、前記参照抗体は、ＶＬ１およびＶＨ１、ＶＬ２およびＶＨ１、ＶＬ３およびＶＨ２もしくはＶＨ３、ＶＬ４およびＶＨ４、ＶＬ５およびＶＨ５、ＶＬ６およびＶＨ６、ＶＬ７およびＶＨ６、ＶＬ８およびＶＨ７もしくはＶＨ８、ＶＬ９およびＶＨ９、ＶＬ１０およびＶＨ９、ＶＬ１１およびＶＨ１０、ＶＬ１２およびＶＨ１１、ＶＬ１３およびＶＨ１２、ＶＬ１３およびＶＨ１４、ＶＬ１４およびＶＨ１３、ＶＬ１５およびＶＨ１４、ＶＬ１６およびＶＨ１５、ＶＬ１７およびＶＨ１６、ＶＬ１８およびＶＨ１７、ＶＬ１９およびＶＨ１８、ＶＬ２０およびＶＨ１９、ＶＬ２１およびＶＨ２０、ＶＬ２２およびＶＨ２１、ＶＬ２３およびＶＨ２２、ＶＬ２４およびＶＨ２３、ＶＬ２５およびＶＨ２４、ＶＬ２６およびＶＨ２５、ＶＬ２７およびＶＨ２６、ＶＬ２８およびＶＨ２７、ＶＬ２９およびＶＨ２８、ＶＬ３０およびＶＨ２９、ＶＬ３１およびＶＨ３０、ＶＬ３２およびＶＨ３１、ＶＬ３３およびＶＨ３２、ＶＬ３４およびＶＨ３３、ＶＬ３５およびＶＨ３４、ＶＬ３６およびＶＨ３５、ＶＬ３７およびＶＨ３６、ＶＬ３８およびＶＨ３７、ＶＬ３９およびＶＨ３８、ＶＬ４０およびＶＨ３９、ＶＬ４１およびＶＨ４０、ＶＬ４２およびＶＨ４１、ＶＬ４３およびＶＨ４２、ＶＬ４４およびＶＨ４３、ＶＬ４５およびＶＨ４４、ＶＬ４６およびＶＨ４５、ＶＬ４７およびＶＨ４６、ＶＬ４８およびＶＨ４７、ＶＬ４９およびＶＨ４８、ＶＬ５０およびＶＨ４９、ＶＬ５１およびＶＨ５０、ＶＬ５２およびＶＨ５１、ＶＬ５３およびＶＨ５２、ＶＬ５４およびＶＨ５３、ＶＬ５５およびＶＨ５４、ＶＬ５６およびＶＨ５４、ＶＬ５７およびＶＨ５４、ＶＬ５８およびＶＨ５５、ＶＬ５９およびＶＨ５６、ＶＬ６０およびＶＨ５７、ＶＬ６１およびＶＨ５８、ＶＬ６２およびＶＨ５９、ＶＬ６３およびＶＨ６０、ＶＬ６４およびＶＨ１、ＶＬ６５およびＶＨ６２、ＶＬ６６およびＶＨ６３、ＶＬ６７およびＶＨ６４、ＶＬ６８およびＶＨ６５、ＶＬ６９およびＶＨ６６、ＶＬ７０およびＶＨ６７、ＶＬ７１およびＶＨ６８、ＶＬ７２およびＶＨ６９、ＶＬ７３およびＶＨ７０、ＶＬ７４およびＶＨ７０、ＶＬ７５およびＶＨ７０、ＶＬ７６およびＶＨ７１、ＶＬ７７およびＶＨ７２、ＶＬ７８およびＶＨ７３、ＶＬ７９およびＶＨ７４、ＶＬ８０およびＶＨ７５、ＶＬ８１およびＶＨ７６、ＶＬ８２およびＶＨ７７、ＶＬ８３およびＶＨ７８、ＶＬ８４およびＶＨ７９、ＶＬ８５およびＶＨ８０、ＶＬ８６およびＶＨ８１、ＶＬ８７およびＶＨ８２、ＶＬ８８およびＶＨ８６、ＶＬ８９およびＶＨ８３、ＶＬ９０およびＶＨ８４、ＶＬ９１およびＶＨ８５、ＶＬ９２およびＶＨ８７、ＶＬ９３およびＶＨ８８、ＶＬ９４およびＶＨ８８、ＶＬ９５およびＶＨ８９、ＶＬ９６およびＶＨ９０、ＶＬ９７およびＶＨ９１、ＶＬ９８およびＶＨ９２、ＶＬ９９およびＶＨ９３、ならびにＶＬ１００およびＶＨ９４からなる群から選択される、軽鎖および重鎖の可変ドメ���ン配列の組み合わせを含み、
（ｇ）    （ａ）〜（ｆ）のうちの２つ以上を行う、
抗原結合タンパク質。
【請求項１２】
β−クロトと、（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む、複合体に結合すると、
（ａ）    動物モデルにおいて血中グルコースを低下させる、
（ｂ）    動物モデルにおいて血清脂質レベルを低下させる、
（ｃ）    動物モデルにおいて、インスリンレベルを低下させる、または
（ｄ）    （ａ）および（ｂ）および（ｃ）のうちの２つ以上を行う、
請求項１１に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１３】
（ａ）    Ｈ１〜Ｈ９４のうちの１つを含む重鎖、
（ｂ）    Ｌ１〜Ｌ１００のうちの１つを含む軽鎖、および
（ｃ）    （ａ）の重鎖と（ｂ）の軽鎖とを含む組み合わせ
のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１４】
請求項１〜１３に記載の１つ以上の抗原結合タンパク質を、それらの薬学的に許容される担体との混合で含む、薬学的組成物。
【請求項１５】
請求項１〜１３に記載の抗原結合タンパク質の前記軽鎖可変ドメインアミノ酸配列、前記重鎖可変ドメインアミノ酸配列、またはその両方のアミノ酸配列をコードする、ポリヌクレオチド配列を含む、単離された核酸。
【請求項１６】
コードされるアミノ酸配列は、
（ａ）    ＶＬ１〜ＶＬ１００、
（ｂ）    ＶＨ１〜ＶＨ９４、および
（ｃ）    （ａ）の１つ以上の配列と（ｂ）の１つ以上の配列とを含む組み合わせ
のうちの１つ以上を含む、請求項１５に記載の単離された核酸。
【請求項１７】
請求項１６に記載の核酸を含む、発現ベクター。
【請求項１８】
請求項１７に記載の核酸を含む、単離細胞。
【請求項１９】
請求項１８に記載の発現ベクターを含む、単離細胞。
【請求項２０】
抗原結合タンパク質を生成する方法であって、請求項１９に記載の宿主細胞を、前記宿主細胞が前記抗原結合タンパク質を発現することを可能にする条件下で、インキュベートすることを含む、方法。
【請求項２１】
状態の予防または治療を、そのような治療を必要とする対象において行う方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項１４に記載の組成物を投与することを含み、前記状態は、血中グルコース、インスリン、または血清脂質のレベルのうちの１つ以上を低下させることによって治療可能である、方法。
【請求項２２】
状態は、２型糖尿病、肥満、脂質異常症、ＮＡＳＨ、心血管疾患、または代謝症候群である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
１つ以上の非天然またはコードされたアミノ酸を含む、請求項１に記載の抗原結合タンパク質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国仮特許出願６１／４９３，９３３号（２０１１年６月６日出願）、同第６１／５０１，１３３号（２０１１年６月２４日）、および同第６１／５３７，９９３号（２０１１年９月２２日出願）の利益を主張する米国特許出願第１３／４８７，０６１号（２０１２年６月１日出願）の優先権を主張し、これらのそれぞれの内容は、その全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを通じてＡＳＣＩＩ形式で提出されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、配列表を含有する。２０１２年５月２２日に作成された前記ＡＳＣＩＩのコピーは、Ａ−１６５０−ＵＳ−ＮＰ＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔという名称であり、サイズは３４０ＫＢである。
【０００３】
発明の分野
本開示は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する、ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発する抗原結合タンパク質を含む、抗原結合タンパク質をコードする核酸分子、ならびに、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する、ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発する抗原結合タンパク質を含む、抗原結合タンパク質を含む、組成物、ならびにこのような核酸、ポリペプチド、または薬学的組成物を使用して、代謝障害を治療するための方法に関する。本抗原結合タンパク質を使用する診断方法もまた、提供する。
【背景技術】
【０００４】
線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ２１）は、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２１、およびＦＧＦ２３を含む線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）のサブファミリーに属する分泌ポリペプチドである（Ｉｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｔｒｅｎｄ  Ｇｅｎｅｔ．２０：５６３−６９）。ＦＧＦ２１は、それがヘパリン非依存性であり、グルコース、脂質、およびエネルギー代謝の制御におけるホルモンとして機能するという点で、非定型ＦＧＦである。
【０００５】
それは、肝臓および膵臓において高度に発現され、主として肝臓で発現される、ＦＧＦファミリーの唯一のメンバーである。ＦＧＦ２１を過剰発現するトランスジェニックマウスは、低成長速度、低血漿グルコースおよびトリグリセリドレベル、ならびに加齢に伴う２型糖尿病、島過形成、および肥満がないといった代謝表現型を示す。齧歯類および霊長類のモデルにおける組み換えＦＧＦ２１タンパク質の薬理学的投与は、血漿グルコースレベルの正常化、トリグリセリドおよびコレステロールレベルの低下、ならびに耐糖能およびインスリン感受性の改善をもたらす。さらに、ＦＧＦ２１は、エネルギー消費、身体活動、および代謝率を増加させることによって、体重および体脂肪を減少させる。実験的研究は、ヒトにおける２型糖尿病、肥満、脂質異常症、および他の代謝状態または障害の治療のための、ＦＧＦ２１の薬理学的投与を支持する。
【０００６】
ＦＧＦ２１は、その受容体の活性化を通じて脂肪細胞へのグルコースの取り込みおよび脂質恒常性を刺激する、肝臓由来の内分泌性ホルモンである。興味深いことに、標準的なＦＧＦ受容体に加えて、ＦＧＦ２１受容体は、必須の補助因子として、膜結合β−クロトも含む。ＦＧＦ２１受容体の活性化は、種々の代謝パラメーターに対して複数の効果をもたらす。
【０００７】
哺乳動物では、ＦＧＦは、ＦＧＦＲ１〜４の４つのＦＧＦ受容体のセットを介して、それらの作用を媒介し、これらは、複数のスプライス変異体、例えば、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、ＦＧＦＲ３ｃ、およびＦＧＦＲ４において発現される。各ＦＧＦ受容体は、リガンドに結合すると活性化され、ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）、ＲＡＦ１、ＡＫＴ１、およびＳＴＡＴを含む下流シグナル伝達経路をもたらす、細胞内チロシンキナーゼドメインを含有する。（Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）ＢｉｏＤｒｕｇｓ２２：３７−４４）。いくつかの報告が、ＦＧＦＲ１〜３の「ｃ」レポータースプライス変異体が、β−クロトに対して特異的な親和性を示し、ＦＧＦ２１に対する内因性受容体として作用し得ることを示唆した（Ｋｕｒｏｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：２６６８７−９５）、Ｏｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０４：７４３２−３７）、Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２１５：１−７）。β−クロトおよびＦＧＦＲ４の両方を大量に発現する肝臓において、ＦＧＦ２１は、ＦＧＦ２１のβ−クロト−ＦＧＦＲ４複合体への強力な結合にもかかわらず、ＭＡＰＫのリン酸化を誘発することはない。３Ｔ３−Ｌ１細胞および白色脂肪組織において、ＦＧＦＲ１は、圧倒的に豊富な受容体であり、したがって、この組織におけるＦＧＦ２１の主な機能性受容体が、β−クロト／ＦＧＦＲ１ｃ複合体である可能性が最も高い。
【０００８】
本開示は、ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発する、モノクローナル抗体等のヒト（またはヒト化）抗原結合タンパク質、例えば、ＦＧＦ２１の機能を模倣するアゴニスト抗体を提供する。そのような抗体は、ＦＧＦ２１様の活性および選択性を有するが、タンパク質安定性、免疫原性の欠如、生産の容易性、および長いインビボ半減期等、抗体に典型的な治療的に望ましい特徴が付加された、分子である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｉｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｔｒｅｎｄ  Ｇｅｎｅｔ．２０：５６３−６９
【非特許文献２】Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）ＢｉｏＤｒｕｇｓ２２：３７−４４
【非特許文献３】Ｋｕｒｏｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：２６６８７−９５
【非特許文献４】Ｏｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０４：７４３２−３７
【非特許文献５】Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２１５：１−７
【発明の概要】
【００１０】
本開示は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する、ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発する抗原結合タンパク質を含む、抗原結合タンパク質、ならびに、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する、ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発する抗原結合タンパク質を含む、抗原結合タンパク質を含む、薬学的組成物を提供する。別の態様において、本明細書に開示される抗原結合タンパク質をコードする前述の単離された核酸分子を含む、発現ベクター、および発現ベクターが形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞もまた、提供する。代表的な重鎖および軽鎖を、表１Ａおよび１Ｂに提供し、代表的な可変領域重鎖および軽鎖の配列を、表２Ａおよび２Ｂに提供し、重鎖および軽鎖の可変領域のコード配列を、表２Ｃおよび２Ｄに提供し、表３Ａおよび３Ｂは、開示される可変重鎖および軽鎖のＣＤＲ領域を提供し、表３Ｃおよび３Ｄは、開示されるＣＤＲのコード配列を提供する。
【００１１】
別の態様において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に、特異的または選択的に結合する、抗原結合タンパク質を調製する方法もまた提供し、この方法は、抗原結合タンパク質を分泌する宿主細胞から抗原結合タンパク質を調製するステップを含む。
【００１２】
他の実施形態は、状態の予防または治療を、このような治療を必要とする対象において行う、本明細書に提供される薬学的組成物の治療有効量を対象に投与することを含む方法を提供し、この状態は、血中グルコース、インスリン、または血清脂質のレベルを低下させることによって治療可能である。実施形態において、状態は、２型糖尿病、肥満、脂質異常症、ＮＡＳＨ（非アルコール性脂肪性肝炎）、心血管疾患、または代謝症候群である。
【００１３】
これらおよび他の態様を、本明細書でさらに詳細に説明する。提供される態様のそれぞれは、本明細書に提供される種々の実施形態を包含し得る。したがって、１つの要素または要素の組み合わせを含む実施形態のそれぞれは、記載される各態様に含まれ得、上述の態様および実施形態の全てのこのような組み合わせは、明示的に考慮されることが予測される。開示される抗原結合タンパク質ならびに関連する方法および組成物の他の特徴、目的、および利点は、以下の発明を実施するための形態において明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１ａ】ヒトＦＧＦＲ１ｃ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ１１３６２、配列番号４）とマウスＦＧＦＲ１ｃ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３４３３６、配列番号１８３２）との間の配列相同性を示すアライメントであり、シグナルペプチド、膜貫通配列、ヘパリン結合領域を含む、種々の特徴をハイライトで示し、コンセンサス配列（配列番号１８３３）が提供される。
【図１ｂ】ヒトＦＧＦＲ１ｃ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ１１３６２、配列番号４）とマウスＦＧＦＲ１ｃ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３４３３６、配列番号１８３２）との間の配列相同性を示すアライメントであり、シグナルペプチド、膜貫通配列、ヘパリン結合領域を含む、種々の特徴をハイライトで示し、コンセンサス配列（配列番号１８３３）が提供される。
【図２ａ】ヒトβ−クロト（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿７８３８６４、配列番号７）とマウスβ−クロト（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿１１２４５７、配列番号１０）との間の配列相同性を示すアライメントであり、膜貫通配列および２つのグリコシル加水分解酵素ドメインを含む、種々の特徴をハイライトで示し、コンセンサス配列（配列番号１８３４）が提供される。
【図２ｂ】ヒトβ−クロト（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿７８３８６４、配列番号７）とマウスβ−クロト（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿１１２４５７、配列番号１０）との間の配列相同性を示すアライメントであり、膜貫通配列および２つのグリコシル加水分解酵素ドメインを含む、種々の特徴をハイライトで示し、コンセンサス配列（配列番号１８３４）が提供される。
【図２ｃ】ヒトβ−クロト（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿７８３８６４、配列番号７）とマウスβ−クロト（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿１１２４５７、配列番号１０）との間の配列相同性を示すアライメントであり、膜貫通配列および２つのグリコシル加水分解酵素ドメインを含む、種々の特徴をハイライトで示し、コンセンサス配列（配列番号１８３４）が提供される。
【図３】ＦＧＦ２１および陽性対照として参照抗体１６Ｈ７．１を用いた本明細書に開示される抗体のルシフェラーゼレポーター活性スクリーニングからの代表的なデータを示すプロットであり（挿入図）、これらのハイブリドーマは、全長ヒトβ−クロトおよび配列番号４のアミノ酸残基＃１４１〜＃８２２ポリペプチドを包含するヒトＦＧＦＲ１ｃのＮ末端切断形態を発現する、２９３Ｔトランスフェクタントの細胞結合受容体での免疫付与によって生成した。プロットのＸ軸およびＹ軸は、同じハイブリドーマ試料セットの２つの独立したアッセイ（ｎ＝１およびｎ＝２）からのＦＧＦ２１活性％であり（灰色の丸）、アッセイの一貫性を示し、いくつかのハイブリドーマ試料がまた、陰性対照として含まれた（黒色丸）。
【図４】本発明に関連して構築されたキメラの概略図を示す。
【図５】抗原結合タンパク質、ならびにヒトＦＧＦ２１の、Ｌ６細胞においてキメラを活性化する能力を示す。
【図６ａ】対応する生殖細胞系Ｖ遺伝子配列と比較した、抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸アライメントを示す。
【図６ｂ】対応する生殖細胞系Ｖ遺伝子配列と比較した、抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸アライメントを示す。
【図６ｃ】対応する生殖細胞系Ｖ遺伝子配列と比較した、抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸アライメントを示す。
【図６ｄ】対応する生殖細胞系Ｖ遺伝子配列と比較した、抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸アライメントを示す。
【図６ｅ】対応する生殖細胞系Ｖ遺伝子配列と比較した、抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸アライメントを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本明細書に使用される節の見出しは、単に編成の目的であり、記載される主題を制限するとみなされるものではない。
【００１６】
本明細書において別途定義されない限り、本出願に関連して使用される科学および技術用語は、当業者によって広く理解される意味を有するものとする。さらに、文脈によって必要とされない限り、単数形は複数形を含むものとし、複数形は単数形を含むものとする。
【００１７】
一般的に、本明細書に記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、ならびにタンパク質および核酸の化学およびハイブリダイゼーションに関連して使用される用語、およびそれらの技術は、当該技術分野で周知であり、広く使用されるものである。本出願の方法および技術は、概して、当該技術分野で周知の従来方法に従って、ならびに、別段に示されない限り、本明細書を通じて引用および記載される、種々の一般的およびより詳細な参考文献に記載のように、行われる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（２００１）および後続版、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９９２）、ならびにＨａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８８）を参照されたく、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。酵素反応および精製技術は、当該技術分野で広く達成されるかまたは本明細書に記載される通りに、製造業者の説明書に従って、行う。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、ならびに医化学および薬化学と関連して使用される用語、ならびにそれらの実験手順および技術は、当該技術分野で周知かつ広く使用されるものである。標準技術を、化学合成、化学分析、医薬品、製剤、および送達、ならびに患者の治療に使用することができる。
【００１８】
本開示は、本明細書に記載の特定の手法、手順、および試薬等に限定されるものではなく、したがって、多様であり得ることを理解されたい。本明細書に使用される用語は、特定の実施形態の説明のみを目的とし、本開示の範囲を制限することを意図するものではない。
【００１９】
操作実施例または別途示される箇所を除き、本明細書に使用される成分の量および反応条件を示す全ての数字は、全ての事例において、それらが、「約」という用語によって修飾されるものとして理解されるべきである。割合に関連して使用される場合の「約」という用語は、±５％、例えば、１％、２％、３％、または４％を意味し得る。
【００２０】
Ｉ．  定義
本明細書に使用される際、「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は、別途明確に示されない限り、「１つ以上」を意味する。
【００２１】
本明細書に使用される際、「抗原結合タンパク質」とは、抗原または標的に結合する部分を含み、任意で、抗原結合部分が、抗原結合部分の抗原への結合を促進する構造を取ることを可能にする、足場またはフレームワーク部分を含む、タンパク質である。抗原結合タンパク質の例には、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、組み換え抗体、一本鎖抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ＩｇＤ抗体、ＩｇＥ抗体、ＩｇＭ抗体、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、またはＩｇＧ４抗体、およびそれらのフラグメントが挙げられる。抗原結合タンパク質は、例えば、ＣＤＲまたはＣＤＲ誘導体がグラフトされた、代替のタンパク質足場または人工の足場を含んでもよい。このような足場には、例えば、抗原結合タンパク質の３次元構造を安定化させるために導入される、突然変異を含む抗体由来の足場、ならびに、例えば、生体適合性ポリマーを含む全面合成足場が含まれるが、これらに限定されない。例えば、Ｋｏｒｎｄｏｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，５３（１）：１２１−１２９、Ｒｏｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：６３９−６５４を参照されたい。さらに、ペプチド抗体模倣体（「ＰＡＭ」）、ならびにフィブロネクチン要素を足場として利用する抗体に基づく足場を、使用することができる。
【００２２】
抗原結合タンパク質は、例えば、天然に存在する免疫グロブリンの構造を有し得る。「免疫グロブリン」は、四量体分子である。天然に存在する免疫グロブリンにおいて、各四量体は、２つの同一なポリペプチド鎖対から構成され、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主として抗原認識を担う、約１００〜１１０以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主としてエフェクター機能を担う、定常領域を定義する。ヒト軽鎖は、κおよびλ軽鎖として分類される。重鎖は、μ、δ、γ、α、またはεとして分類され、それぞれ、抗体のアイソタイプをＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥと定義する。軽鎖および重鎖の中で、可変領域および定常領域は、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって接合され、重鎖がさらに約１０以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。広くは、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ第二版、第７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたく、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。各軽鎖／重鎖対の可変領域は、インタクトな免疫グロブリンが２つの結合部位を有するように抗体結合部位を形成する。
【００２３】
天然に存在する免疫グロブリン鎖は、相補性決定領域またはＣＤＲとも称される、３つの超可変領域によって接合される、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の、同一の一般構造を示す。Ｎ末端からＣ末端へ、軽鎖および重鎖いずれも、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４のドメインを含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，５ｔｈ  Ｅｄ．，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＰＨＳ，ＮＩＨ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２の定義に従って行うことができる。本明細書では、記載のようにＫａｂａｔの命名システムを使用して提示されるが、本明細書に記載のＣＤＲはまた、Ｃｈｏｔｈｉａのもの等、代替的な命名スキームに従って再定義することもできる（Ｃｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ，（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７８−８８３、またはＨｏｎｅｇｇｅｒ＆Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，（２００１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９：６５７−６７０）。
【００２４】
本開示との関連において、抗原結合タンパク質は、解離定数（ＫＤ）が≦１０−８Ｍの場合、その標的抗原に「特異的に結合する」または「選択的に結合する」と言われる。抗体は、ＫＤが≦５×１０−９Ｍの場合「高い親和性」で、ＫＤが≦５×１０−１０Ｍの場合「非常に高い親和性」で、抗原に特異的に結合する。一実施形態において、抗体は、ヒトＦＧＦＲ１ｃおよびヒトβ−クロトの両方を含む複合体を含む、β−クロトおよびＦＧＦＲを含む複合体に、約１０−７Ｍ〜１０−１２ＭのＫＤで結合し、さらに別の実施形態では、抗体は、≦５×１０−９のＫＤで結合するであろう。
【００２５】
「抗体」とは、別途示されない限り、特異的結合について、インタクトな抗体と競合する、インタクトな免疫グロブリンまたはその抗原結合部分を指す。抗原結合部分は、組み換えＤＮＡ技術によって、またはインタクトな抗体の酵素的もしくは化学的開裂によって、生成することができる。抗原結合部分には、とりわけ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むフラグメント、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、およびポリペプチドに特異的抗原結合を与えるのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部分を含有するポリペプチドが挙げられる。
【００２６】
Ｆａｂフラグメントは、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインを有する一価フラグメントであり、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結合される２つのＦａｂフラグメントを有する二価フラグメントであり、Ｆｄフラグメントは、ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有し、Ｆｖフラグメントは、抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインを有し、ｄＡｂフラグメントは、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはＶＨもしくはＶＬドメインの抗原結合フラグメントを有する（米国特許第６，８４６，６３４号、および同第６，６９６，２４５号、ならびに米国出願公開第０５／０２０２５１２号、同第０４／０２０２９９５号、同第０４／００３８２９１号、同第０４／０００９５０７号、同第０３／００３９９５８号、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４−５４６（１９８９））。
【００２７】
一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）は、ＶＬおよびＶＨ領域が、リンカー（例えば、アミノ酸残基の合成配列）を介して接合されて、連続的なタンパク質鎖を形成する抗体であり、このリンカーは、タンパク質鎖がその上に折り畳まれて一価抗原結合部位を形成するのに十分に長い（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３−２６およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９−８３を参照されたい）。ダイアボディは、２つのポリペプチド鎖を含む二価抗体であり、各ポリペプチド鎖は、同じ鎖の２つのドメイン間で対合を可能にするには短すぎ、したがって、各ドメインを別のポリペプチド鎖の相補性ドメインと対合させる、リンカーによって接合される、ＶＨおよびＶＬドメインを含む（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−４８、およびＰｏｌｊａｋ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ２：１１２１−２３を参照されたい）。ダイアボディの２つのポリペプチド鎖が同一の場合、それらの対合からもたらされるダイアボディは、２つの同一な抗原結合部位を有することになる。異なる配列を有するポリペプチド鎖を使用して、２つの異なる抗原結合部位を有するに特異性抗体を作製することができる。同様に、トリアボディおよびテトラボディは、それぞれ、３つおよび４つのポリペプチド鎖を含み、それぞれ、同じかまたは異なり得る、３つおよび４つの抗原結合部位を形成する、抗体である。
【００２８】
所定の抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク領域（ＦＲ）は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，５ｔｈ  Ｅｄ．，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＰＨＳ，ＮＩＨ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２に記載のシステムを使用して、識別することができる。Ｋａｂａｔの命名システムを使用して提示されるが、所望であれば、本明細書に記載のＣＤＲはまた、Ｃｈｏｔｈｉａのもの等、代替の命名スキームに従って再定義することもできる（Ｃｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ，（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７８−８８３、またはＨｏｎｅｇｇｅｒ＆Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，（２００１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９：６５７−６７０を参照されたい）。１つ以上のＣＤＲを、共有的または非結合的に分子に組み込み、抗原結合タンパク質にすることができる。抗原結合タンパク質は、ＣＤＲ（複数可）をより大きなポリペプチド鎖の一部として組み込むことができる、ＣＤＲ（複数可）を別のポリペプチド鎖に共有結合させることができる、またはＣＤＲ（複数可）を非共有的に組み込むことができる。ＣＤＲは、抗原結合タンパク質が、目的とされる特定の抗原に特異的に結合することを可能にする。
【００２９】
抗原結合タンパク質は、１つ以上の結合部位を有し得るが、必ずしもそうである必要はない。１つ以上の結合部位がある場合、結合部位は、互いに同一であってもよく、または異なってもよい。例えば、天然に存在するヒト免疫グロブリンは、典型的に、２つの同一な結合部位を有し、一方で、「二重特異性」または「二機能性」抗体は、２つの異なる結合部位を有する。この二重特異性形態の抗原結合タンパク質（例えば、本明細書に提供される種々の重鎖および軽鎖ＣＤＲを含むもの）は、本開示の態様に含まれる。
【００３０】
「ヒト抗体」という用語には、ヒト免疫グロブリン配列に由来する１つ以上の可変領域および定常領域を有する、全ての抗体が含まれる。一実施形態において、可変ドメインおよび定常ドメインの全てが、ヒト免疫グロブリン配列に由来する（完全ヒト抗体）。これらの抗体は、種々の方法で調製することができ、その例は以下に記載され、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）、ＵＬＴＩＭＡＢ（商標）、ＨＵＭＡＢ−ＭＯＵＳＥ（登録商標）、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）、ＫＹＭＯＵＳＥ、もしくはＡＬＩＶＡＭＡＢ系に由来するマウス等、ヒト重鎖および／もしくは軽鎖をコードする遺伝子に由来する抗体、またはヒト重鎖トランスジェニックマウス、トランスジェニックラットヒト抗体レパートリー、トランスジェニックウサギヒト抗体レパートリー、もしくはウシヒト抗体レパートリー、またはＨＵＴＡＲＧ（商標）技術に由来する抗体を発現するように遺伝子修飾されたマウスの、目的とされる抗原での免疫付与によるものを含む。ファージに基づくアプローチもまた、採用可能である。
【００３１】
ヒト化抗体は、非ヒト種に由来する抗体の配列とは、１つ以上のアミノ酸の置換、欠失、および／または付加が異なる配列を有し、その結果、ヒト化抗体は、ヒト対象に投与されたときに、非ヒト種抗体と比較して、免疫応答を誘発する可能性が低い、および／または重症度がより低い免疫応答を誘発する。一実施形態において、非ヒト種抗体の重鎖および／または軽鎖のフレームワークドメインおよび定常ドメイン内のある特定のアミノ酸を、突然変異させてヒト化抗体を生成する。別の実施形態において、ヒト抗体に由来する定常ドメイン（複数可）を、非ヒト種の可変ドメイン（複数可）に融合する。別の実施形態において、非ヒト抗体の１つ以上のＣＤＲ配列内の１つ以上のアミノ酸残基を、ヒト対象に投与した場合に非ヒト抗体の免疫原性の可能性を低減させるように変化させ、この変化したアミノ酸残基は、抗体のその抗原への免疫特異的結合にとって重要ではないか、またはアミノ酸配列に行われる変更は、ヒト化抗体の抗原への結合が、非ヒト抗体の抗原への結合よりも著しく悪くならないように、保存的変更である。ヒト化抗体の作製方法の例は、米国特許第６，０５４，２９７号、同第５，８８６，１５２号、および同第５，８７７，２９３号に見出すことができる。
【００３２】
「キメラ抗体」という用語は、１つの抗体に由来する１つ以上の領域と、１つ以上の他の抗体に由来する１つ以上の領域と、を含有する抗体を指す。一実施形態において、ＣＤＲの１つ以上は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する、ヒト抗体に由来する。別の実施形態において、ＣＤＲの全てが、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとの複合体に結合する、ヒト抗体に由来する。別の実施形態において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する、１つを上回るヒト抗体に由来するＣＤＲが、キメラ抗体において混在する。例えば、キメラ抗体は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する、第１のヒト抗体の軽鎖に由来するＣＤＲ１、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する、第２のヒト抗体の軽鎖に由来するＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにβ−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する第３の抗体に由来する重鎖に由来するＣＤＲを含み得る。さらに、フレームワーク領域は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する、同じ抗体の１つに由来するか、ヒト抗体等の１つ以上の異なる抗体に由来するか、またはヒト化抗体に由来し得る。キメラ抗体の１つの例において、重鎖および／または軽鎖の一部分は、特定の種に由来するかまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体と、同一であるか、相同であるか、またはそれに由来するが、一方でその鎖（複数可）の残りの部分は、別の種に由来するかまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体（複数可）と、同一であるか、相同であるか、またはそれに由来する。所望される生物学的活性（例えば、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する能力）を示す、このような抗体のフラグメントもまた、含まれる。
【００３３】
「軽鎖」という用語には、全長軽鎖、および結合特異性をもたらすのに十分な可変領域配列を有するそのフラグメントが含まれる。全長軽鎖には、可変領域ドメインＶＬ、および定常領域ドメインＣＬが含まれる。軽鎖の可変領域ドメインは、ポリペプチドのアミノ末端にある。軽鎖には、カッパ（「κ」）鎖およびラムダ（「λ」）鎖が含まれる。
【００３４】
「重鎖」という用語には、全長重鎖、および結合特異性をもたらすのに十分な可変領域配列を有するそのフラグメントが含まれる。全長重鎖には、可変領域ドメインＶＨ、ならびに３つの定常領域ドメインＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３が含まれる。ＶＨドメインは、ポリペプチドのアミノ末端にあり、ＣＨドメインは、ＣＨ３がポリペプチドのカルボキシ末端に最も近い状態で、カルボキシル末端にある。重鎖は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４サブタイプを含む）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２サブタイプを含む）、ＩｇＭ、およびＩｇＥを含む、いずれのアイソタイプのものであってもよい。
【００３５】
抗原結合タンパク質、例えば、抗体または免疫グロブリン鎖（重鎖または軽鎖）の「免疫学的機能性フラグメント」（または単に「フラグメント」）とは、本明細書に使用される際、全長鎖に存在するアミノ酸のうち少なくともいくつかを欠くが、抗原に特異的に結合することができる抗体の部分（その部分がどのようにして得られたか、または合成されたかにかかわらない）を含む、抗原結合タンパク質である。そのようなフラグメントは、それらが標的抗原に特異的に結合し、所定のエピトープへの特異的結合について、インタクトな抗体を含む他の抗原結合タンパク質と競合し得るという点で、生物学的に活性である。一態様において、このようなフラグメントは、全長軽鎖または重鎖に存在する少なくとも１つのＣＤＲを保持することになり、いくつかの実施形態では、単一の重鎖および／もしくは軽鎖、またはその部分を含むことになる。これらの生物学的に活性なフラグメントは、組み換えＤＮＡ技術によって生成することができるか、またはインタクトな抗体を含む、抗原結合タンパク質の酵素的もしくは化学的開裂によって、生成することができる。免疫学的機能性免疫グロブリンフラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体、および一本鎖抗体を含むがこれらに限定されず、ヒト、マウス、ラット、ラクダ、またはウサギを含むがこれらに限定されない、任意の哺乳動物源に由来し得る。本明細書に開示される抗原結合タンパク質の機能性部分、例えば、１つ以上のＣＤＲを、第２のタンパク質または小分子に共有結合させ、二機能治療特性を有するか、または長い血清半減期を有する、体内で特定の標的を対象とする治療剤を作製することができることが、さらに企図される。
【００３６】
「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む、２つの重鎖フラグメントを含む。２つの重鎖フラグメントは、２つ以上のジスルフィド結合またはＣＨ３ドメインの疎水性相互作用によって、結合される。
【００３７】
「Ｆａｂ’フラグメント」は、１つの軽鎖、ならびにＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインを含有する１つの重鎖の一部分、ならびにさらにＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の領域を含み、その結果、鎖間ジスルフィド結合が、２つのＦａｂ’フラグメントの２つの重鎖間に形成され、Ｆ（ａｂ’）２分子を形成することができる。
【００３８】
「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、２つの軽鎖、およびＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の定常領域の一部分を含む２つの重鎖を含有し、その結果、鎖間ジスルフィド結合が、２つの重鎖の間に形成される。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、したがって、２つの重鎖間のジスルフィド結合によって結合される、２つのＦａｂ’フラグメントから構成される。
【００３９】
「Ｆｖ領域」は、重鎖および軽鎖の両方に由来する可変領域を含むが、定常領域を欠いている。
【００４０】
「ドメイン抗体」は、重鎖の可変領域または軽鎖の可変領域のみを含有する、免疫学的機能性免疫グロブリンフラグメントである。いくつかの事例において、２つ以上のＶＨ領域がペプチドリンカーで共有結合され、二価ドメイン抗体がもたらされる。二価ドメイン抗体の２つのＶＨ領域は、同じかまたは異なる抗原を標的とし得る。
【００４１】
「ヘミボディ（ｈｅｍｉｂｏｄｙ）」とは、完全重鎖、完全軽鎖、および完全重鎖のＦｃ領域と対合する第２の重鎖Ｆｃ領域を含む、免疫学的機能性免疫グロブリン構築物である。リンカーを用いて、重鎖Ｆｃ領域と第２の重鎖Ｆｃ領域を接合することができるが、必ずしもそうする必要はない。特定の実施形態において、ヘミボディは、本明細書に開示される抗原結合タンパク質の一価形態である。他の実施形態において、荷電残基対を用いて、１つのＦｃ領域を第２のＦｃ領域と結合させてもよい。
【００４２】
「二価抗原結合タンパク質」または「二価抗体」は、２つの抗原結合部位を含む。いくつかの事例において、２つの結合部位は、同じ抗原特異性を有する。二価抗原結合タンパク質および二価抗体は、本明細書に記載のように、二重特異性であり、本開示の態様を構成する。
【００４３】
「多重特異性抗原結合タンパク質」または「多重特異性抗体」は、１つを上回る抗原またはエピトープを標的とするものであり、本開示の別の態様を構成する。
【００４４】
「二重特異性」、「二特異性」、または「二機能性」抗原結合タンパク質または抗体は、それぞれ、２つの異なる抗原結合部位を有する、ハイブリッドの抗原結合タンパク質または抗体である。二重特異性抗原結合タンパク質および抗体は、多重特異性抗原結合タンパク質または多重特異性抗体の一種であり、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメントの結合を含むがこれらに限定されない、種々の方法によって生成することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ａｎｄ  Ｌａｃｈｍａｎｎ，（１９９０）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３を参照されたい。二重特異性抗原結合タンパク質または抗体の２つの結合部位は、同じタンパク質標的（例えば、β−クロト、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、もしくはＦＧＦＲ３ｃ）か、または異なるタンパク質標的（例えば、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの１つ）上に存在し得る、２つの異なるエピトープに結合することになる。
【００４５】
「ＦＧＦ２１様シグナル伝達」および「ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発する」という用語は、本開示の抗原結合タンパク質に適用する場合、抗原結合タンパク質が、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合することによって誘発されるインビボでの生物学的効果を模倣または調節し、通常はインビボでβ−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体へのＦＧＦ２１の結合からもたらされるであろう生物学的応答を、誘発することを意味する。抗原結合タンパク質、例えば、抗体またはその免疫学的機能性フラグメントの結合および特異性を評価する際、抗体またはフラグメントは、応答が、配列番号２の成熟形態（すなわち、ヒトＦＧＦ２１配列の成熟形態）を含む野生型ＦＧＦ２１標準物の活性の５％以上、好ましくは、１０％以上、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％である場合に、生物学的応答を誘発するとみなされ、以下の特性を有する：（１）実施例４の組み換えＦＧＦ２１受容体媒介性ルシフェラーゼレポーター細胞アッセイ、（２）実施例４の組み換えＦＧＦ２１受容体媒介性細胞アッセイにおけるＥＲＫ−リン酸化、ならびに（３）実施例４に記載のヒト脂肪細胞におけるＥＲＫ−リン酸化において、１００ｎＭ以下、例えば、９０ｎＭ、８０ｎＭ、７０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、もしくは１０ｎＭのＥＣ５０で、ＦＧＦ２１標準物の５％以上の有効レベルを示す。抗原結合タンパク質の「効力」は、以下のアッセイにおいて、１００ｎＭ以下、例えば、９０ｎＭ、８０ｎＭ、７０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、および好ましくは、１０ｎＭ未満の抗原結合タンパク質のＥＣ５０を示すとして、定義される：（１）実施例４の組み換えＦＧＦ２１受容体媒介性ルシフェラーゼレポーター細胞アッセイ、（２）実施例４の組み換えＦＧＦ２１受容体媒介性細胞アッセイにおけるＥＲＫ−リン酸化、（３）実施例４に記載されるヒト脂肪細胞におけるＥＲＫ−リン酸化。
【００４６】
本開示の抗原結合タンパク質の全てが、ＦＧＦ２１媒介性シグナル伝達（例えば、アゴニスト活性を誘発する）を誘発するわけではなく、この特性が全ての状況において望ましいわけでもないことに留意されたい。それにもかかわらず、ＦＧＦ２１媒介性シグナル伝達を誘発しない抗原結合タンパク質は、本開示の態様を構成し、診断試薬または他の用途として有用であり得る。
【００４７】
本明細書に使用される際、「ＦＧＦ２１Ｒ」という用語は、ＦＧＦ２１がインビボで形成することが既知であるかまたはそう思われている、多量体受容体複合体を意味する。種々の実施形態において、ＦＧＦ２１Ｒは、（ｉ）ＦＧＦＲ、例えば、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、ＦＧＦＲ３ｃ、またはＦＧＦＲ４と、（ｉｉ）β−クロトとを含む。
【００４８】
「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、一本鎖および二本鎖両方のヌクレオチドポリマーを含む。ポリヌクレオチドを含むヌクレオチドは、リボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチド、またはいずれかの種類のヌクレオチドの修飾形態であり得る。前記修飾には、ブロモウリジンおよびイノシン誘導体等の塩基修飾、２’３’−ジデオキシリボース等のリボース修飾、ならびにホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｓｅｌｅｎｏａｔｅ）、ホスホロジセレノエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｄｉｓｅｌｅｎｏａｔｅ）、ホスホロアニロチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｎｉｌｏｔｈｉｏａｔｅ）、ホスホロアニラデート（ｐｈｏｓｈｏｒａｎｉｌａｄａｔｅ）、およびホスホロアミダート等のヌクレオチド間結合修飾が挙げられる。
【００４９】
「オリゴヌクレオチド」という用語は、２００以下のヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを意味する。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、長さが１０〜６０塩基である。他の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、長さが１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０〜４０ヌクレオチドである。オリゴヌクレオチドは、例えば、突然変異体遺伝子の構築に使用するために、一本鎖または二本鎖であり得る。オリゴヌクレオチドは、センスまたはアンチセンスのオリゴヌクレオチドであってもよい。オリゴヌクレオチドは、検出アッセイのために、放射標識、蛍光標識、ハプテン、または抗原標識を含む、標識を含み得る。オリゴヌクレオチドは、例えば、ＰＣＲプライマー、クローニングプライマー、またはハイブリダイゼーションプローブとして使用することができる。
【００５０】
「単離された核酸分子」とは、単離ポリヌクレオチドが天然に見られるポリヌクレオチドの全てまたは一部分と関連しないか、または天然には結合しないポリヌクレオチドに結合している、ゲノム、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、もしくは合成起源、またはそれらの何らかの組み合わせのＤＮＡまたはＲＮＡを意味する。本開示の目的に対しては、特定のヌクレオチド配列を「含む核酸分子」は、インタクトな染色体を包含しないことが理解される。指定された核酸配列を「含む」単離された核酸分子は、指定された配列に加えて、最大１０もしくはさらには最大２０の他のタンパク質もしくはその部分に対するコード配列を含み得るか、または引用された核酸配列のコード領域の発現を制御する、操作可能に結合された制御配列を含み得る、および／またはベクター配列を含み得る。
【００５１】
別段の指定がない限り、本明細書に記載のいずれの一本鎖ポリヌクレオチド配列の左手末端も、５’末端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左手方向は、５’方向と称される。新生ＲＮＡ転写物の５’から３’への付加方向は、転写方向と称され、ＲＮＡ転写物と同じ配列を有し、５’から５’末端へのＲＮＡ転写であるＤＮＡ鎖上の配列領域は、「上流配列」と称され、ＲＮＡ転写物と同じ配列を有し、３’から３’末端へのＲＮＡ転写であるＤＮＡ鎖上の配列領域は、「下流配列」と称される。
【００５２】
「制御配列」という用語は、それが連結されるコード配列の発現およびプロセシングに影響を及ぼし得る、ポリヌクレオチド配列を指す。このような制御配列の性質は、宿主生物に依存し得る。特定の実施形態において、原核生物の制御配列は、プロモーター、リボソーム結合部位、および転写終結配列を含み得る。例えば、真核生物の制御配列は、転写因子に対する１つまたは複数の認識部位、転写エンハンサー配列、および転写終結配列を含み得る。「制御配列」には、リーダー配列および／または融合パートナー配列が含まれ得る。
【００５３】
「ベクター」という用語は、タンパク質コード情報を宿主細胞に送るために使用される、任意の分子または実体（例えば、核酸、プラスミド、バクテリオファージ、またはウイルス）を意味する。
【００５４】
「発現ベクター」または「発現構築物」という用語は、宿主細胞の形質転換に好適なベクターを指し、それに操作可能に結合された１つ以上の非相同コード領域の発現を（宿主細胞とともに）指示および／または制御する核酸配列を含有する。発現構築物には、限定されないが、転写、翻訳に影響を及ぼすか、またはそれを制御する配列、およびイントロンが存在する場合には、それに操作可能に結合されるコード領域のＲＮＡスプライシングに影響を及ぼす配列が含まれ得る。
【００５５】
本明細書に使用される際、「操作可能に結合された」とは、この用語が適用される構成要素が、好適な条件下において、それらがそれら特有の機能を実行することを可能にする関係にあることを意味する。例えば、タンパク質コード配列に「操作可能に結合された」ベクター内の制御配列は、タンパク質コード配列の発現が、制御配列の転写活性と適合性のある条件下において達成されるように、そこに連結される。
【００５６】
「宿主細胞」という用語は、核酸配列で形質転換されているか、または形質転換することができ、それによって、目的の遺伝子を発現する細胞を意味する。この用語には、親細胞の子孫が含まれ、目的の遺伝子が存在している限り、この子孫が、元の親細胞と同一の形態学または遺伝子構造であるかどうかにかかわらない。
【００５７】
「形質導入」という用語は、通常はバクテリオファージによる、一方のバクテリアからもう一方への遺伝子の移送を意味する。「形質導入」はまた、複製欠損レトロウイルスによる、真核細胞配列の取得及び移送を指す。
【００５８】
「トランスフェクション」という用語は、細胞による外来性または外因性のＤＮＡの取り込みを意味し、外因性ＤＮＡが細胞膜の中に導入されている場合、細胞は「トランスフェクト」されている。多数のトランスフェクション技術が、当該技術分野で周知であり、本明細書に記載される。例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７３）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ５２：４５６、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）（上記）、Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）Ｇｅｎｅ１３：１９７を参照されたい。このような技術を使用して、１つ以上の外因性ＤＮＡ部分を好適な宿主細胞に導入することができる。
【００５９】
「形質転換」という用語は、細胞の遺伝子特性における変化を指し、細胞は、新しいＤＮＡまたはＲＮＡを含有するように修飾されている場合、形質転換されている。例えば、細胞は、トランスフェクション、形質導入、または他の技術を介して、新しい遺伝物質を導入することにより、その天然の状態から遺伝子的に修飾されている場合、形質転換されている。トランスフェクションまたは形質導入の後に、形質転換ＤＮＡは、細胞の染色体に物理的に統合することによって細胞ものと再結合し得るか、または複製されることなくエピソーム要素として一時的に維持され得るか、またはプラスミドとして独立して複製され得る。細胞は、形質転換ＤＮＡが、細胞分裂により複製される場合、「安定に形質転換」されているとされる。
【００６０】
「ポリペプチド」または「タンパク質」という用語は、本明細書において、アミノ酸残基のポリマーを指して互換的に使用される。この用語はまた、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の類似体または模倣体であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマーにも適用される。この用語はまた、例えば、炭水化物残基の付加によって、糖タンパク質を形成するように修飾されているか、またはリン酸化されている、アミノ酸ポリマーを包含する。ポリペプチドおよびタンパク質は、天然および非組み換え細胞によって生成することができるか、またはポリペプチドおよびタンパク質は、遺伝子操作または組み換え細胞によって生成することができる。ポリペプチドおよびタンパク質は、天然配列の１つ以上のアミノ酸からの欠失、そこへの付加、および／またはその置換を有する分子を含み得る。「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、β−クロトおよびＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、もしくはＦＧＦＲ３ｃ）を含む複合体に特異的または選択的に結合する、抗原結合タンパク質、あるいは、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的または選択的に結合する抗原結合タンパク質の１つ以上のアミノ酸からの欠失、そこへの付加、および／またはその置換を有する配列を包含する。「ポリペプチドフラグメント」という用語は、全長タンパク質と比較した際に、アミノ末端欠失、カルボキシル末端欠失、および／または内部欠失を有する、ポリペプチドを指す。このようなフラグメントはまた、全長タンパク質と比較して、修飾されたアミノ酸を含有し得る。ある特定の実施形態において、フラグメントは、約５〜５００のアミノ酸長である。例えば、フラグメントは、少なくとも５、６、８、１０、１４、２０、５０、７０、１００、１１０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、または４５０のアミノ酸長であってもよい。有用なポリペプチドフラグメントには、結合ドメインを含む、抗体の免疫学的機能性フラグメントが含まれる。β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとの複合体に結合する抗原結合タンパク質の場合、有用なフラグメントには、ＣＤＲ領域、重鎖または軽鎖の可変ドメイン、抗体鎖の一部分、または２つのＣＤＲを含む単なるその可変領域等が含まれるが、これらに限定されない。
【００６１】
参照される「単離されたタンパク質」という用語は、対象のタンパク質が、（１）それが通常一緒にみられる少なくともいくつかの他のタンパク質を含まないこと、（２）同じ源に由来する、例えば、同じ種に由来する他のタンパク質を本質的に含まないこと、（３）異なる種に由来する細胞によって発現されること、（４）それが天然で関連しているポリヌクレオチド、脂質、炭水化物、または他の物質の少なくとも約５０パーセントから分離していること、（５）それが天然には関連していないポリペプチドと操作可能に（共有結合または非共有結合の相互作用によって）関連していること、または（６）天然には発生しないことを意味する。典型的に、「単離されたタンパク質」は、所定の試料の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、または少なくとも約５０％を構成する。ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、または他の合成起源のＲＮＡ、またはそれらの任意の組み合わせにより、このような単離されたタンパク質をコードすることができる。好ましくは、単離されたタンパク質は、実質的に、その治療的、診断的、予防的、研究的、または他の使用を妨げるであろう、その天然の環境に見られるタンパク質またはポリペプチドまたは他の混入物質を含まない。
【００６２】
ポリペプチドの「変異体」（例えば、抗原結合タンパク質、または抗体）には、１つ以上のアミノ酸残基が、別のポリペプチド配列に対して、アミノ酸配列に挿入、そこから欠失、および／またはそこに置換されている、アミノ酸配列が含まれる。変異体には、融合タンパク質が含まれる。
【００６３】
ポリペプチドの「誘導体」とは、挿入、欠失、または置換変異体とは異なる何等かの方法、例えば、別の化学部分への抱合によって、化学的に修飾されているポリペプチド（例えば、抗原結合タンパク質、または抗体）である。
【００６４】
例えば、ポリペプチド、核酸、宿主細胞等の生物学的物質に関連して本明細書全体を通じて使用される「天然に存在する」という用語は、天然に見られる物質を指す。
【００６５】
「抗原結合領域」とは、特定の抗原、例えば、β−クロトおよびａｎβ−クロトならびに（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つ含む複合体に特異的に結合する、タンパク質、またはタンパク質の部分を意味する。例えば、抗原と相互作用し、抗原結合タンパク質に、抗原に対するその特異性および親和性をもたらすアミノ酸残基を含有する、抗原結合タンパク質のその部分は、「抗原結合領域」と称される。抗原結合領域は、典型的に、１つ以上の「相補的結合領域」（「ＣＤＲ」）を含む。ある特定の抗原結合領域には、１つ以上の「フレームワーク」領域もまた含まれる。「ＣＤＲ」は、抗原結合の特異性および親和性に寄与するアミノ酸配列である。「フレームワーク」領域は、ＣＤＲの適正な立体配座の維持を補助し、抗原結合領域と抗原との間の結合を促進することができる。
【００６６】
ある特定の態様において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する、組み換え抗原結合タンパク質を提供する。この文脈において、「組み換えタンパク質」は、組み換え技術を使用して、すなわち、本明細書に記載のように、組み換え核酸の発現を通じて、作製されたタンパク質である。組み換えタンパク質の生成のための方法および技術は、当該技術分野で周知である。
【００６７】
標的上の同じエピトープまたは結合部位について競合する、抗原結合タンパク質（例えば、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する、中和抗原結合タンパク質、中和抗体、アゴニスト抗原結合タンパク質、アゴニスト抗体、および結合タンパク質）に関して使用される際の、「競合する」という用語は、研究中の抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその免疫学的機能性フラグメント）が、共通の抗原（例えば、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、ＦＧＦＲ３ｃ、β−クロト、もしくはそれらのフラグメント、またはβ−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体）への参照分子（例えば、参照リガンド、参照抗原結合タンパク質、参照抗体等）の特異的結合を防止または阻害する、アッセイで判定される抗原結合タンパク質間の競合を意味する。多数の種類の競合的結合アッセイを使用して、試験分子が、結合について、参照分子と競合するかどうかを判定することができる。採用可能なアッセイの例には、固相直接または間接放射免疫測定法（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ９：２４２−２５３を参照されたい）、固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４−３６１９を参照されたい）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，（１９８８）（上記）を参照されたい）、Ｉ−１２５標識を使用する固相直接標識 ＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７−１５）、固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１７６：５４６−５５２）、および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７−８２）が挙げられる。典型的に、このようなアッセイは、非標識試験抗原結合タンパク質または標識参照抗原結合タンパク質のうちのいずれかを有する固体表面または細胞に結合した精製された抗原の使用を伴う。競合的阻害は、試験抗原結合タンパク質の存在下で、固体表面または細胞に結合された標識の量を判定することにより測定される。通常、試験抗原結合タンパク質は、過剰に存在する。競合アッセイにより識別される抗原結合タンパク質（競合する抗原結合タンパク質）には、参照抗原結合タンパク質と同じエピトープに結合する抗原結合タンパク質、および立体障害が生じるのに十分に、参照抗原結合タンパク質によって結合されるエピトープに近位の隣接するエピトープに結合する抗原結合タンパク質が含まれる。競合的結合を判定するための方法に関するさらなる詳細は、本明細書において実施例に提供される。通常、競合する抗原結合タンパク質が過剰に存在する場合、それは、共通の抗原への参照抗原結合タンパク質の特異的結合を、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％阻害することになる。いくつかの実施形態において、結合は、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％以上阻害される。
【００６８】
「抗原」という用語は、抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその免疫学的機能性フラグメントを含む）等の選択的な結合剤によって結合されることができ、その抗原に結合することができる抗体を生成するために、動物において使用することもまたでき得る、分子、または分子の一部分を指す。抗原は、異なる抗原結合タンパク質、例えば、抗体と、相互作用する能力のある１つ以上のエピトープを有し得る。
【００６９】
「エピトープ」という用語は、抗原結合タンパク質が標的分子に結合されるときに、抗原結合タンパク質（例えば、抗体）によって接触される、標的分子のアミノ酸を意味する。この用語には、抗体等の抗原結合タンパク質が標的分子に結合されるときに接触される、標的分子のアミノ酸の全リストのうち任意のサブセットを含が含まれる。エピトープは、連続または非連続であり得る（例えば、（ｉ）一本鎖ポリペプチドにおいて、ポリペプチド配列において互いに連続しないが、標的分子に関しては、抗原結合タンパク質によって結合されるアミノ酸残基、または（ｉｉ）２つ以上の個々の構成要素を含む多量体受容体、例えば、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体の場合、個々の構成要素の１つ以上に存在するが、抗原結合タンパク質によって依然として結合される、アミノ酸残基）。ある特定の実施形態において、エピトープは、それらが、抗原結合タンパク質を生成するために使用される抗原エピトープに類似である３次元構造を含むが、抗原結合タンパク質を生成するために使用されるエピトープに見られるアミノ酸残基を全く含まないか、または数個だけ含むという点で、模倣的であり得る。最も頻繁には、エピトープは、タンパク質上に存在するが、いくつかの事例においては、核酸等の他の種類の分子上に存在し得る。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基等、分子の化学的に活性な表面配置を含み得、特異的な３次元構造特性および／または特異的電荷特性を有し得る。一般的に、特定の標的分子に特異的な抗原結合タンパク質は、タンパク質および／または巨大分子の複合混合物中で、標的分子上のエピトープを選択的に認識することになる。
【００７０】
用語「同一性」は、配列のアライメントおよび比較によって判定される、２つ以上のポリペプチド分子、または２つ以上の核酸分子の配列間の関係を指す。「同一性パーセント」とは、比較される分子におけるアミノ酸またはヌクレオチド間の同一残基の割合を意味し、比較される分子のうち最少のものの寸法に基づいて計算される。これらの計算について、アライメントにおけるギャップ（存在する場合）は、特定の数学モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち、「アルゴリズム」）によって処理する必要がある。アライメントした核酸またはポリペプチドの同一性を計算するために使用可能な方法には、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．），（１９８８）Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．），１９９３，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  Ｉ，（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，  Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．），１９９４，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ：Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，１９８７，Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．），１９９１，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、およびＣａｒｉｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．４８：１０７３．に記載のものが含まれる。
【００７１】
同一性パーセントを計算する際、比較されている配列は、配列間に最大の一致が得られる方法でアライメントされる。同一性パーセントを判定するために使用されるコンピュータプログラムは、ＧＣＧプログラムパッケージであり、これには、ＧＡＰが含まれる（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４），Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１２：３８７；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）。コンピュータアルゴリズムのＧＡＰを使用して、配列同一性パーセントを判定する２つのポリペプチドまたはポリヌクレオチドをアライメントする。配列は、それらのそれぞれのアミノ酸またはヌクレオチドの最適な一致についてアライメントされる（アルゴリズムによって判定される「一致範囲」）。ギャップ開始ペナルティ（平均対角の３倍として計算され、「平均対角」は、使用されている比較マトリックスの対角の平均であり、「対角」とは、特定の比較マトリックスによる各完全なアミノ酸一致に割り当てられるスコアまたは番号である）およびギャップ伸長ペナルティ（通常、ギャップ開始ペナルティの１／１０倍である）、ならびにＰＡＭ２５０またはＢＬＯＳＵＭ６２等の比較マトリックスを、アルゴリズムと併せて使用する。ある特定の実施形態において、標準的な比較マトリックス（例えば、ＰＡＭ２５０の比較マトリックスについては、Ｄａｙｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７８），Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５：３４５−３５２、ＢＬＯＳＵＭ６２の比較マトリックスについては、Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：１０９１５−１０９１９を参照されたい）もまた、このアルゴリズムによって使用される。
【００７２】
ＧＡＰプログラムを使用してポリペプチドまたはヌクレオチド配列の同一性パーセントを判定するのに推奨されるパラメーターは、以下での通りである：
アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３
比較マトリックス：Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２（上記）からのＢＬＯＳＵＭ６２
ギャップペナルティ：１２（終了ギャップはペナルティなしで）
ギャップ長ペナルティ：４
類似性の閾値：０
【００７３】
２つのアミノ酸配列をアライメントするためのある特定のアライメントスキームは、２つの配列の短い領域のみの一致をもたらす可能性があり、この短いアライメント領域は、２つの全長配列の間に有意な関係がないにもかかわらず、非常に高い配列同一性を有し得る。したがって、選択されたアライメント方法（例えば、ＧＡＰプログラム）は、所望される場合、標的ポリペプチドのうち少なくとも５０の連続したアミノ酸に及ぶアライメントをもたらすように調整することができる。
【００７４】
本明細書に使用される際、「実質的に純粋」とは、記載の分子種が、存在している優勢種である、すなわち、モル基準で、それが、同じ混合物中の他の個々の種よりも、豊富であることを意味する。ある特定の実施形態において、実質的に純粋な分子は、対象の種が、存在する全巨大分子種の少なくとも５０％（モル基準で）を構成する、組成物である。他の実施形態において、実質的に純粋な組成物は、その組成物中に存在する全巨大分子種の少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％を構成することになる。他の実施形態において、対象の種は、本質的な均質性まで精製され、混入種は、従来の検出方法では組成物中に検出不可能であり、したがって、組成物は、単一の検出可能な巨大分子種からなる。
【００７５】
「治療する」および「治療すること」という用語は、軽減；回復；症状を縮小すること、または傷害、病状もしくは状態を患者にとってより許容できるものにすること；変性または減退の速度の遅延；変性の最終点の衰弱をより低くすること；患者の身体的または精神的健康を改善することを含む、傷害、病状、または状態の治療または緩和の成功のあらゆる兆候を指す。症状の治療または緩和は、身体的検査、神経精神検査、および／または精神鑑定の結果を含む、客観的または主観的パラメーターに基づくものであり得る。例えば、本明細書に提示されるある特定の方法を採用して、２型糖尿病、肥満、および／または脂質異常症を、予防的もしくは急性治療としてのいずれかで治療する、血漿グルコースレベルを減少させる、循環トリグリセリドレベルを減少させる、循環コレステロールレベルを減少させる、および／または２型糖尿病、肥満、および脂質異常症と関連する症状を緩和することができる。
【００７６】
「有効量」とは、一般的に、症状の重症度および／もしくは頻度を低減させる、症状および／もしくは根本的な原因を排除する、症状および／もしくはそれらの根本的な原因の発生を防ぐ、ならびに／または糖尿病、肥満、および脂質異常症からもたらされるか、もしくはそれらと関連する損傷の改善もしくは治療に十分な量である。いくつかの実施形態において、有効量は、治療有効量または予防有効量である。「治療有効量」は、疾患状態（例えば、糖尿病、肥満、もしくは脂質異常症）または症状、特に、疾患状態と関連する状態または症状を治療するか、あるいは、そうでなければ、疾患状態または疾患と関連する任意の他の望ましくない症状の進行を、どのような方法であれ、予防、妨害、遅延、または逆行させるのに十分な量である。「予防有効量」とは、対象に投与した際に、意図される予防効果、例えば、糖尿病、肥満、または脂質異常症の発症（もしくは再発）の予防または遅延、あるいは糖尿病、肥満、脂質異常症、または関連症状の発症（もしくは再発）の可能性の減少を有するであろう薬学的組成物の量である。完全な治療または予防の効果は、必ずしも１回の投与で生じるわけではなく、複数回の投与後にのみ生じてもよい。したがって、治療または予防有効量は、１回以上の投与で、投与され得る。
【００７７】
「アミノ酸」は、当該技術分野における通常の意味を有する。２０個の天然のアミノ酸およびそれらの略語は、従来の使用法に従う。Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｅ．Ｓ．Ｇｏｌｕｂ  ａｎｄ  Ｄ．Ｒ．Ｇｒｅｅｎ，ｅｄｓ．），Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ：Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，Ｍａｓｓ．（１９９１）を参照されたく、これはあらゆる目的に対して参照により本明細書に組み込まれる。２０個の従来のアミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）、α−，α−二置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸等の非天然もしくは天然に存在しないかまたはコードされたアミノ酸、および他の非従来的アミノ酸もまた、ポリペプチドの好適な構成要素であり得、「アミノ酸」という表現に含まれる。非天然および非天然にコードされたアミノ酸（所望により、本明細書に開示される任意の配列に見られる任意の天然のアミノ酸と置換することができる）の例には、４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、ε−Ｎ−アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、δ−Ｎ−メチルアルギニン、ならびに他の同様のアミノ酸およびイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）が挙げられる。本明細書に使用されるポリペプチドの表記において、標準的な慣用および慣例に従って、左手方向はアミノ末端方向であり、右手方向はカルボキシル末端方向である。抗原結合タンパク質配列に挿入することができるか、または抗原結合配列内の野生型残基と置換することができる、天然に存在しない／コードされたアミノ酸の例の非限定的な例には、β−アミノ酸、ホモアミノ酸、環状アミノ酸、および誘導体化側鎖を有するアミノ酸が挙げられる。例には（Ｌ型またはＤ型、括弧内に略して）、シトルリン（Ｃｉｔ）、ホモシトルリン（ｈＣｉｔ）、Ｎα−メチルシトルリン（ＮＭｅＣｉｔ）、Ｎα−メチルホモシトルリン（Ｎα−ＭｅＨｏＣｉｔ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、Ｎα−メチルオルニチン（Ｎα−ＭｅＯｒｎまたはＮＭｅＯｒｎ）、サルコシン（Ｓａｒ）、ホモリジン（ｈＬｙｓまたはｈＫ）、ホモアルギニン（ｈＡｒｇまたはｈＲ）、ホモグルタミン（ｈＱ）、Ｎα−メチルアルギニン（ＮＭｅＲ）、Ｎα−メチルロイシン（Ｎα−ＭｅＬまたはＮＭｅＬ）、Ｎ−メチルホモリジン（ＮＭｅＨｏＫ）、Ｎα−メチルグルタミン（ＮＭｅＱ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ノルバリン（Ｎｖａ）、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（Ｔｉｃ）、オクタヒドロインドール−２−カルボン酸（Ｏｉｃ）、３−（１−ナフチル）アラニン（１−Ｎａｌ）、３−（２−ナフチル）アラニン（２−Ｎａｌ）、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（Ｔｉｃ）、２−インダニルグリシン（ＩｇＩ）、パラ−ヨードフェニルアラニン（ｐＩ−Ｐｈｅ）、パラ−アミノフェニルアラニン（４ＡｍＰまたは４−Ａｍｉｎｏ−Ｐｈｅ）、４−グアニジノフェニルアラニン（Ｇｕｆ）、グリシルリジン（「Ｋ（Ｎε−ｇｌｙｃｙｌ」または「Ｋ（ｇｌｙｃｙｌ）」または「Ｋ（ｇｌｙ）」と略される）、ニトロフェニルアラニン（ｎｉｔｒｏｐｈｅ���、アミノフェニルアラニン（ａｍｉｎｏｐｈｅまたはＡｍｉｎｏ−Ｐｈｅ）、ベンジルフェニルアラニン（ｂｅｎｚｙｌｐｈｅ）、γ−カルボキシグルタミン酸（γ−ｃａｒｂｏｘｙｇｌｕ）、ヒドロキシプロリン（ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏ）、ｐ−カルボキシル−フェニルアラニン（Ｃｐａ）、α−アミノアジピン酸（Ａａｄ）、Ｎα−メチルバリン（ＮＭｅＶａｌ）、Ｎ−α−メチルロイシン（ＮＭｅＬｅｕ）、Ｎα−メチルノルロイシン（ＮＭｅＮｌｅ）、シクロペンチルグリシン（Ｃｐｇ）、シクロへキシルグリシン（Ｃｈｇ）、アセチルアルギニン（ａｃｅｔｙｌａｒｇ）、α、β−ジアミノプロパン酸（ｄｉａｍｉｎｏｐｒｏｐｉｏｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）（Ｄｐｒ）、α，γ−ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、ジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）、シクロへキシルアラニン（Ｃｈａ）、４−メチル−フェニルアラニン（ＭｅＰｈｅ）、β，β−ジフェニル−アラニン（ＢｉＰｈＡ）、アミノ酪酸（Ａｂｕ）、４−フェニル−フェニルアラニン（またはビフェニルアラニン、４Ｂｉｐ）、α−アミノ−イソ酪酸（Ａｉｂ）、β−アラニン、β−アミノプロピオン酸、ピペリジン酸、アミノカプロン酸、アミノヘプタン酸、アミノピメリン酸、デスモシン、ジアミノピメリン酸、Ｎ−エチルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、ヒドロキシリジン、アロ−ヒドロキシリジン、イソデスモシン、アロ−イソロイシン、Ｎ−メチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、Ｎ−メチルバリン、４−ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、γ−カルボキシグルタミン酸、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、ε−Ｎ−アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、ω−メチルアルギニン、４−アミノ−Ｏ−フタル酸（４ＡＰＡ）、および他の類似のアミノ酸、ならびに具体的に列挙されたもののいずれかの誘導体化形態が含まれる。
【００７８】
ＩＩ．  概要
β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する、抗原結合タンパク質を本明細書に提供する。本明細書に開示される抗原結合タンパク質の独自の特性は、これらのタンパク質のアゴニスト性質、特に、ＦＧＦ２１のインビボ効果を模倣する能力およびＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発する能力である。より注目すべき具体的なことには、本明細書に開示される抗原結合タンパク質のうちのいくつかは、実施例４のＥＬＫ−ルシフェラーゼレポーターアッセイを含む、複数のインビトロ細胞に基づくアッセイにおいて、ＦＧＦ２１様シグナル伝達を、以下の条件下で誘発する：（１）ＦＧＦ２１受容体への結合およびその活性は、β−クロト依存性である、（２）活性は、ＦＧＦＲ／β−クロト複合体に選択的である、（３）ＦＧＦＲ１ｃ／βクロト複合体への結合が、ＦＧＦ２１様シグナル伝達経路を引き起こす、ならびに（４）以下の細胞に基づくアッセイで測定される効力（ＥＣ５０）は、配列番号２の成熟形態を含む野生型ＦＧＦ２１標準物に匹敵する：（１）実施例４の組み換えＦＧＦ２１受容体媒介性ルシフェラーゼレポーター細胞アッセイ、（２）実施例４の組み換えＦＧＦ２１受容体媒介性細胞アッセイにおけるＥＲＫ−リン酸化、および（３）実施例６でさらに詳細に記載されるヒト脂肪細胞におけるＥＲＫ−リン酸化。本開示の抗原結合タンパク質は、したがって、ＦＧＦ２１の自然な生物学的機能と一致する、インビボでの活性を示すことが予想される。この特性は、本開示の抗原結合タンパク質を、２型糖尿病、肥満、脂質異常症、ＮＡＳＨ、心血管疾患、代謝症候群、および広範にはＦＧＦ２１のインビボ効果を模倣または増強することが望ましい任意の疾患または状態等、代謝性疾患の治療のための実現可能な治療薬にする。
【００７９】
本開示のいくつかの実施形態において、提供される抗原結合タンパク質は、１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を中に埋め込む、および／または接合することができる、ポリペプチドを含み得る。このような抗原結合タンパク質において、ＣＤＲは、ＣＤＲ（複数可）を、ＣＤＲ（複数可）の適正な抗原結合特性が達成されるように配置する、「フレームワーク」領域内に埋め込むことができる。一般的に、提供されるこのような抗原結合タンパク質は、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、またはＦＧＦＲ３ｃ）とβ−クロトとの間の相互作用を促進または強化することができ、実質的に、ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発することができる。したがって、本明細書に提供される抗原結合タンパク質は、ＦＧＦ２１のインビボでの役割を模倣し、したがって、「アゴニスト性」であり、２型糖尿病、肥満、脂質異常症、ＮＡＳＨ、心血管疾患、単車症候群、および広範にはＦＧＦ２１のインビボ効果を模倣または増強することが望ましい任意の疾患または状態を含む、ＦＧＦ２１療法により恩恵を受ける広範な状態に、潜在的な治療的有用性を提供する。
【００８０】
本明細書に記載のある特定の抗原結合タンパク質は、抗体であるか、または抗体に由来する。ある特定の実施形態において、本抗原結合タンパク質のポリペプチド構造は、限定されないが、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書で時に「抗体模倣体」と称される）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体融合体（本明細書で時に「抗体抱合体」と称される）、ならびにそれらのヘミボディおよびフラグメントを含む、抗体に基づく。種々の構造は、本明細書において以下にさらに記載される。
【００８１】
本明細書に提供される抗原結合タンパク質は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体、特に、ヒトβ−クロトとヒトＦＧＦＲ（例えば、ヒトＦＧＦＲ１ｃ、ヒトＦＧＦＲ２ｃ、またはヒトＦＧＦＲ３ｃ）とを含む複合体に結合することが実証されている。本明細書に提示される実施形態に記載され、示されるように、ウエスタンブロットの結果に基づいて、既知の市販入手可能な抗β−クロトまたは抗ＦＧＦＲ１ｃ抗体は、変性したβ−クロトまたはＦＧＦＲ１ｃに結合するが、一方で本抗原結合タンパク質（アゴニスト抗体である）は、結合しない。逆に、提供される抗原結合タンパク質は、細胞表面上でＦＧＦＲ１ｃおよびβ−クロトの天然の構造を認識するが、一方で市販の抗体は認識しない。提供される抗原結合タンパク質は、したがって、ＦＧＦ２１の天然のインビボ生物学的活性を模倣する。結果として、本明細書に提供される抗原結合タンパク質は、ＦＧＦ２１様シグナル伝達活性を活性化することができる。具体的には、本開示の抗原結合タンパク質は以下のインビボでの活性のうちの１つ以上を有し得る：ＦＧＦ２１様シグナル伝達経路の誘発、血中グルコースレベルの低下、循環脂質レベルの低下、代謝パラメーターの改善、ならびに、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、またはＦＧＦＲ３ｃ）、β−クロト、およびＦＧＦ２１の三重複合体の形成によってインビボで誘発される、例えば２型糖尿病、肥満、脂質異常症、ＮＡＳＨ、心血管疾患、および代謝症候群等の症状への他の生理学的効果。
【００８２】
本明細書に開示される、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質は、種々の有用性を有する。本抗原結合タンパク質のうちのいくつかは、例えば、特異的結合アッセイ、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体（これらの開示されるタンパク質のヒト形態を含む）の親和性精製、ならびにＦＧＦ２１様シグナル伝達活性の他のアゴニストを識別するためのスクリーニングアッセイにおいて、有用である。
【００８３】
本明細書に開示される、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質は、本明細書に説明される、種々の治療用途において使用可能である。例えば、ある特定の抗原結合タンパク質は、２型糖尿病、肥満、脂質異常症、ＮＡＳＨ、心血管疾患、および代謝症候群の低減、緩和、または治療等、患者におけるＦＧＦ２１様シグナル伝達プロセスと関連する状態の治療に有用である。抗原結合タンパク質の他の用途には、例えば、β−クロト、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、ＦＧＦＲ３ｃ、ＦＧＦＲ４、またはＦＧＦ２１と関連する疾患または状態の診断、およびこれらの分子の存在または不在を判定するスクリーニングアッセイが含まれる。本明細書に記載される抗原結合タンパク質のうちのいくつかは、減少したＦＧＦ２１様シグナル伝達活性と関連する状態、症状、および／または病状の治療に有用であり得る。例となる状態には、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、および脂質異常症が含まれるが、これらに限定されない。
【００８４】
ＦＧＦ２１
本明細書に開示される抗原結合タンパク質は、本明細書に定義されるように、ＦＧＦ２１媒介性シグナル伝達を誘発する。インビボにおいて、ＦＧＦ２１の成熟形態が、この分子の活性形態である。全長ＦＧＦ２１をコードするヌクレオチド配列を提供し、シグナル配列をコードするヌクレオチドを下線で示す。
【００８５】
【化１】
2014518640.tif 000002
【００８６】
全長ＦＧＦ２１のアミノ酸配列を提供し、シグナル配列を構成するアミノ酸を下線で示す。
【００８７】
【化２】
2014518640.tif 000003
【００８８】
ＦＧＦＲ１ｃ
本明細書に開示される抗原結合タンパク質は、β−クロトと結合する場合、ＦＧＦＲ１ｃ、特にヒトＦＧＦＲ１ｃに結合する。ヒトＦＧＦＲ１ｃをコードするヌクレオチド配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０２３１１０）を提供する。
【００８９】
【化３】
2014518640.tif 000004
2014518640.tif 000005
【００９０】
ヒトＦＧＦＲ１ｃのアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０７５５９８）を提供する。
【００９１】
【化４】
2014518640.tif 000006
【００９２】
本明細書に記載の抗原結合タンパク質は、ＦＧＦＲ１ｃの細胞外部分に結合する。ＦＧＦＲ１ｃの細胞外領域の例は、
【００９３】
【化５】
2014518640.tif 000007
である。
【００９４】
本明細書に記載されるように、ＦＧＦＲ１ｃタンパク質は、フラグメントもまた含み得る。本明細書に記載される際、これらの用語は、β−クロトおよびＦＧＦ２１と結合すると、ＦＧＦ２１様シグナル伝達活性を誘発する受容体、特に、別段の指定がない限り、ヒト受容体を意味して互換的に使用される。
【００９５】
ＦＧＦＲ１ｃという用語はまた、ＦＧＦＲ１ｃアミノ酸配列、例えば、Ｎ結合型グリコシル化部位の翻訳後修飾を含む。したがって、抗原結合タンパク質は、それらの位置のうちの１つ以上がグリコシル化されたタンパク質に結合するか、またはそれから生成することができる。
【００９６】
β−クロト
本明細書に開示される抗原結合タンパク質は、β−クロト、特に、ヒトβ−クロトに結合する。ヒトβ−クロトをコードするヌクレオチド配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿１７５７３７）を提供する。
【００９７】
【化６】
2014518640.tif 000008
2014518640.tif 000009
【００９８】
全長ヒトβ−クロトのアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿７８３８６４）を提供する。
【００９９】
【化７】
2014518640.tif 000010
【０１００】
本明細書に記載の抗原結合タンパク質は、β−クロトの細胞外部分に結合する。β−クロトの細胞外領域の例は、
【０１０１】
【化８】
2014518640.tif 000011
である。
【０１０２】
マウス形態のβ−クロト、ならびにそのフラグメントおよび部分配列は、本明細書に提供される分子の研究および／または構築に有用であり得る。マウスβ−クロトをコードするヌクレオチド配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０３１１８０）を提供する。  
【０１０３】
【化９】
2014518640.tif 000012
2014518640.tif 000013
2014518640.tif 000014
【０１０４】
全長マウスβ−クロトのアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿１１２４５７）を提供する。  
【０１０５】
【化１０】
2014518640.tif 000015
【０１０６】
本明細書に記載される際、β−クロトタンパク質はまた、フラグメントも含み得る。本明細書に記載される際、これらの用語は、ＦＧＦＲ１ｃおよびＦＧＦ２１と結合すると、ＦＧＦ２１様シグナル伝達活性を誘発する受容体、特に、別段の指定がない限り、ヒト共受容体を意味して互換的に使用される。
【０１０７】
β−クロトという用語はまた、β−クロトアミノ酸配列、例えば、可能性のあるＮ結合型グリコシル化部位の翻訳後修飾を含む。したがって、抗原結合タンパク質は、その位置のうちの１つ以上がグリコシル化された、タンパク質に結合するか、またはそれから生成することができる。
【０１０８】
β−クロトとＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、またはＦＧＦＲ３ｃ）とを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質
ＦＧＦ２１様シグナル伝達を調節するのに有用な、種々の選択的結合剤を提供する。これらの薬剤は、例えば、抗原結合ドメイン（例えば、一本鎖抗体、ドメイン抗体、ヘミボディ、免疫接着体（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｓｉｏｎ）、および抗原結合領域を有するポリペプチド）を含有し、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体、特に、ヒトβ−クロトとヒトＦＧＦＲ（例えば、ヒトＦＧＦＲ１ｃ、ヒトＦＧＦＲ２ｃ、またはヒトＦＧＦＲ３ｃ）とを含む複合体に特異的に結合する、抗原結合タンパク質を含む。薬剤のうちのいくつかは、例えば、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、またはＦＧＦＲ３ｃ）とβ−クロトおよびＦＧＦＲ２１との結合によって、インビボで生成されるシグナル伝達を模倣することに有用であり、したがって、ＦＧＦＲ２１様シグナル伝達と関連する１つ以上の活性を強化または調節するために使用することができる。
【０１０９】
一般的に、提供される抗原結合タンパク質は、典型的に、本明細書に記載される１つ以上のＣＤＲを含む（例えば、１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲ）。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、クローンによって自然に発現されるが、一方で、他の実施形態においては、抗原結合タンパク質は、（ａ）ポリペプチドフレームワーク構造と、（ｂ）そのポリペプチドフレームワーク構造に挿入および／または接合される１つ以上のＣＤＲとを含むことができる。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、ＣＤＲは、本明細書に記載されるクローンによって発現される重鎖および軽鎖の構成要素を形成し、他の実施形態においては、ＣＤＲは、ＣＤＲが自然には発現されないフレームワーク内に挿入され得る。ポリペプチドフレームワーク構造は、種々の異なる形態をとることができる。例えば、ポリペプチドフレームワーク構造は、天然に存在する抗体、またはそのフラグメントもしくは変異体のフレームワークであるか、またはそれを含んでもよく、あるいは、それは、事実上完全に合成であってもよい。種々の抗原結合タンパク質構造の例を、以下にさらに記載する。
【０１１０】
抗原結合タンパク質が（ａ）ポリペプチドフレームワーク構造と（ｂ）ポリペプチドフレームワーク構造に挿入および／または接合された１つ以上のＣＤＲとを含む、いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質のポリペプチドフレームワーク構造は、それぞれ、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書で時に「抗体模倣体」と称される）、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗体融合体（本明細書で時に「抗体抱合体」と称される）、およびそれぞれの部分またはフラグメントを含むが、これらに限定されない、抗体であるか、または抗体に由来する。いくつかの事例において、抗原結合タンパク質は、抗体の免疫学的フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖ）である。
【０１１１】
本明細書に提供される抗原結合タンパク質のうちのあるものは、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃ（これらのタンパク質のヒト形態を含む）のうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する。一実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号４のアミノ酸配列を含むヒトＦＧＦＲ１ｃおよび配列番号７のアミノ酸配列を含むヒトβ−クロトの両方に特異的に結合し、別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、配列番号４のアミノ酸配列を含むヒトＦＧＦＲ１ｃおよび配列番号７のアミノ酸配列を有するヒトβ−クロトの両方に特異的に結合してＦＧＦＲ２１様シグナル伝達を誘発する。したがって、抗原結合タンパク質は、ＦＧＦＲ２１様シグナルを誘発し得るが、必ずしもそうとは限らない。
【０１１２】
抗原結合タンパク質の構造
本明細書に提供される、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃ（これらのタンパク質のヒト形態を含む）のうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する、抗原結合タンパク質のうちのいくつかは、通常は天然の抗体と関連する構造を有する。これらの抗体の構造単位は、典型的に、１つ以上の四量体であり、そのそれぞれが２つの同一なポリペプチド鎖カプレット（ｃｏｕｐｌｅｔ）から構成されるが、哺乳動物種には、単一の重鎖のみを有する抗体を生成するものもある。典型的な抗体において、各対またはカプレットは、１つの全長「軽」鎖（ある特定の実施形態では、約２５ｋＤａ）、および１つの全長「重」鎖（ある特定の実施形態では、約５０〜７０ｋＤａ）を含む。各個々の免疫グロブリン鎖は、複数の「免疫グロブリンドメイン」から構成され、そのそれぞれが、おおよそ９０〜１１０のアミノ酸からなり、特徴的な折り畳みパターンを示す。これらのドメインは、抗体ポリペプチドを構成する基本単位である。各鎖のアミノ末端部分は、典型的に、抗原認識を担う、可変ドメインを含む。カルボキシ末端部分は、鎖の他方の端部よりも進化的に保存され、「定常領域」または「Ｃ領域」と称される。ヒト軽鎖は、概して、カッパ（「κ」）およびラムダ（「λ」）軽鎖として分類され、これらのそれぞれは、１つの可変ドメインと１つの定常ドメインとを含有する。重鎖は、典型的に、μ、δ、γ、α、またはε鎖として分類され、これらは、それぞれ、抗体のアイソタイプをＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとして定義する。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含むがこれらに限定されない、複数のサブタイプを有する。ＩｇＭサブタイプには、ＩｇＭおよびＩｇＭ２が含まれる。ＩｇＡサブタイプには、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２が含まれる。ヒトの場合、ＩｇＡおよびＩｇＤアイソタイプは、４つの重鎖と４つの軽鎖とを含有し、ＩｇＧおよびＩｇＥアイソタイプは、２つの重鎖と２つの軽鎖とを含有し、ＩｇＭアイソタイプは、５つの重鎖と５つの軽鎖とを含有する。重鎖Ｃ領域は、典型的に、エフェクター機能を担うことができる、１つ以上のドメインを含む。重鎖定常領域ドメインの数は、アイソタイプに依存することになる。ＩｇＧ重鎖は、例えば、それぞれ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３として既知の３つのＣ領域ドメインを含有する。提供される抗体は、これらのアイソタイプおよびサブタイプのうちの任意のものを有し得る。ある特定の実施形態において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する、単離された抗原結合タンパク質は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４サブタイプの抗体である。
【０１１３】
全長軽鎖および重鎖において、可変および定常領域は、典型的に、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって接合され、重鎖はさらに、約１０多いアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２ｎｄ  ｅｄ．，Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．）１９８９，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい（全ての目的について、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。各軽鎖／重鎖対の可変領域が、典型的に、抗原結合部位を形成する。
【０１１４】
β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する、例となるモノクローナル抗体のＩｇＧ２重鎖定常ドメインの１つの例は、アミノ酸配列：
【０１１５】
【化１１】
2014518640.tif 000016
を有する。
【０１１６】
β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する、例となるモノクローナル抗体のκ軽鎖定常ドメインの１つの例は、アミノ酸配列：
【０１１７】
【化１２】
2014518640.tif 000017
を有する。
【０１１８】
β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する、例となるモノクローナル抗体のλ軽鎖定常ドメインの１つの例は、アミノ酸配列：
【０１１９】
【化１３】
2014518640.tif 000018
を有する。
【０１２０】
免疫グロブリン鎖の可変領域は、一般的に、同じ全体構造を示し、大抵は「相補性決定領域」またはＣＤＲとも称される３つの超可変領域によって接合される、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。上述の各重鎖／軽鎖対の２つの鎖のＣＤＲは、典型的に、フレームワーク領域によって整列され、標的タンパク質（例えば、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体）上の特定のエピトープと特異的に結合する構造を形成する。Ｎ末端からＣ末端へ、天然の軽鎖および重鎖の可変領域はいずれも、典型的に、これらの要素が以下の順序に従っている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４。これらのドメインのそれぞれにおいて位置を占めるアミノ酸に番号を割り当てるために、付番方式が考案されている。この付番方式は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，５ｔｈ  Ｅｄ．，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＰＨＳ，ＮＩＨ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２に定義されている。Ｋａｂａｔの命名システムを使用して提示されているが、所望される場合、本明細書に開示されるＣＤＲはまた、Ｃｈｏｔｈｉａのもの等、代替的な命名システムに従って再定義することもできる（Ｃｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ，（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７８−８８３、またはＨｏｎｅｇｇｅｒ＆Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，（２００１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９：６５７−６７０を参照されたい）。
【０１２１】
本明細書に提供される抗原結合タンパク質の種々の重鎖および軽鎖可変領域を、表２に示す。これらの可変領域のそれぞれを、本開示の重鎖および軽鎖定常領域に付加して、それぞれ、完全な抗体の重鎖および軽鎖を形成することができる。さらに、そのようにして生成された重鎖および軽鎖配列のそれぞれを組み合わせて、完全な抗体構造を形成することができる。本明細書に提供される重鎖および軽鎖可変領域はまた、上に列挙された例となる配列とは異なる配列を有する、他の定常ドメインに付加することもできることを理解されたい。
【０１２２】
提供される抗体の全長軽鎖および重鎖のいくつかの具体的な例、およびそれらの対応するアミノ酸配列を、表１Ａおよび１Ｂに要約する。表１Ａは、例となる軽鎖配列を示し、表１Ｂは、例となる重鎖配列を示す。
【０１２３】
【表１Ａ】
2014518640.tif 000019
2014518640.tif 000020
2014518640.tif 000021
2014518640.tif 000022
2014518640.tif 000023
2014518640.tif 000024
2014518640.tif 000025
2014518640.tif 000026
2014518640.tif 000027
2014518640.tif 000028
2014518640.tif 000029
2014518640.tif 000030
2014518640.tif 000031
2014518640.tif 000032
2014518640.tif 000033
2014518640.tif 000034
2014518640.tif 000035
【０１２４】
【表１Ｂ】
2014518640.tif 000036
2014518640.tif 000037
2014518640.tif 000038
2014518640.tif 000039
2014518640.tif 000040
2014518640.tif 000041
2014518640.tif 000042
2014518640.tif 000043
2014518640.tif 000044
2014518640.tif 000045
2014518640.tif 000046
2014518640.tif 000047
2014518640.tif 000048
2014518640.tif 000049
2014518640.tif 000050
2014518640.tif 000051
2014518640.tif 000052
2014518640.tif 000053
2014518640.tif 000054
2014518640.tif 000055
2014518640.tif 000056
2014518640.tif 000057
2014518640.tif 000058
2014518640.tif 000059
2014518640.tif 000060
2014518640.tif 000061
2014518640.tif 000062
2014518640.tif 000063
2014518640.tif 000064
2014518640.tif 000065
2014518640.tif 000066
2014518640.tif 000067
【０１２５】
以下の表１Ｂに列挙された例となる重鎖（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３等）のそれぞれを、以下の表１Ａに示される例となる軽鎖のいずれかと組み合わせて、抗体を形成することができる。このような組み合わせの例には、Ｌ１〜Ｌ１００のいずれかと組み合わせたＨ１、Ｌ１〜Ｌ１００のいずれかと組み合わせたＨ２、Ｌ１〜Ｌ１００のいずれかと組み合わせたＨ３等が挙げられる。いくつかの事例において、抗体は、以下の表１Ａおよび１Ｂに列挙されたものに由来する、少なくとも１つの重鎖と１つの軽鎖とを含み、軽鎖と重鎖の具体的な対合例には、Ｌ１とＨ１、Ｌ２とＨ１、Ｌ３とＨ２もしくはＨ３、Ｌ４とＨ４、Ｌ５とＨ５、Ｌ６とＨ６、Ｌ７とＨ６、Ｌ８とＨ７もしくはＨ８、Ｌ９とＨ９、Ｌ１０とＨ９、Ｌ１１とＨ１０、Ｌ１２とＨ１１、Ｌ１３とＨ１２、Ｌ１３とＨ１４、Ｌ１４とＨ１３、Ｌ１５とＨ１４、Ｌ１６とＨ１５、Ｌ１７とＨ１６、Ｌ１８とＨ１７、Ｌ１９とＨ１８、Ｌ２０とＨ１９、Ｌ２１とＨ２０、Ｌ２２とＨ２１、Ｌ２３とＨ２２、Ｌ２４とＨ２３、Ｌ２５とＨ２４、Ｌ２６とＨ２５、Ｌ２７とＨ２６、Ｌ２８とＨ２７、Ｌ２９とＨ２８、Ｌ３０とＨ２９、Ｌ３１とＨ３０、Ｌ３２とＨ３１、Ｌ３３とＨ３２、Ｌ３４とＨ３３、Ｌ３５とＨ３４、Ｌ３６とＨ３５、Ｌ３７とＨ３６、Ｌ３８とＨ３７、Ｌ３９とＨ３８、Ｌ４０とＨ３９、Ｌ４１とＨ４０、Ｌ４２とＨ４１、Ｌ４３とＨ４２、Ｌ４４とＨ４３、Ｌ４５とＨ４４、Ｌ４６とＨ４５、Ｌ４７とＨ４６、Ｌ４８とＨ４７、Ｌ４９とＨ４８、Ｌ５０とＨ４９、Ｌ５１とＨ５０、Ｌ５２とＨ５１、Ｌ５３とＨ５２、Ｌ５４とＨ５３、Ｌ５５とＨ５４、およびＬ５６とＨ５４、Ｌ５７とＨ５４、Ｌ５８とＨ５５、Ｌ５９とＨ５６、Ｌ６０とＨ５７、Ｌ６１とＨ５８、Ｌ６２とＨ５９、Ｌ６３とＨ６０、Ｌ６４とＨ１、Ｌ６５とＨ６２、Ｌ６６とＨ６３、Ｌ６７とＨ６４、Ｌ６８とＨ６５、Ｌ６９とＨ６６、Ｌ７０とＨ６７、Ｌ７１とＨ６８、Ｌ７２とＨ６９、Ｌ７３とＨ７０、Ｌ７４とＨ７０、およびＬ７５とＨ７０、Ｌ７６とＨ７１、Ｌ７７とＨ７２、Ｌ７８とＨ７３、Ｌ７９とＨ７４、Ｌ８０とＨ７５、Ｌ８１とＨ７６、Ｌ８２とＨ７７、Ｌ８３とＨ７８、Ｌ８４とＨ７９、Ｌ８５とＨ８０、Ｌ８６とＨ８１、Ｌ８７とＨ８２、Ｌ８８とＨ８６、Ｌ８９とＨ８３、Ｌ９０とＨ８４、Ｌ９１とＨ８５、Ｌ９２とＨ８７、Ｌ９３とＨ８８、Ｌ９４とＨ８８、Ｌ９５とＨ８９、Ｌ９６とＨ９０、Ｌ９７とＨ９１、Ｌ９８とＨ９２、Ｌ９９とＨ９３、およびＬ１００とＨ９４が挙げられる。同じクローンに由来する重鎖および軽鎖を含む抗原結合タンパク質に加えて、第１のクローンに由来する重鎖は、第２のクローンに由来する軽鎖と対合してもよい（例えば、第１のクローンに由来する重鎖と第２のクローンに由来する軽鎖の対合、または第１のクローンに由来する重鎖と第２のクローンに由来する軽鎖の対合）。一般的に、このような対合には、９０％以上の相同性を有するＶＬが、天然に存在するクローンの重鎖と対合し得ることが含まれてもよい。
【０１２６】
いくつかの事例において、抗体は、以下の表１Ａおよび１Ｂに列挙される、２つの異なる重鎖および２つの異なる軽鎖を含む。他の事例において、抗体は、２つの同一な軽鎖および２つの同一な重鎖を含む。一例として、抗体または免疫学的機能性フラグメントは、２つのＬ１軽鎖と２つのＨ１重鎖、２つのＬ２軽鎖と２つのＨ１重鎖、２つのＬ３軽鎖と２つのＨ２重鎖もしくは２つのＨ３重鎖、２つのＬ４軽鎖と２つのＨ４重鎖、２つのＬ５軽鎖と２つのＨ５重鎖、２つのＬ６軽鎖と２つのＨ６重鎖、２つのＬ７軽鎖と２つのＨ６重鎖、２つのＬ８軽鎖と２つのＨ７重鎖もしくは２つのＨ８重鎖、２つのＬ９軽鎖と２つのＨ９重鎖、２つのＬ１０軽鎖と２つのＨ９重鎖、２つのＬ１１軽鎖と２つのＨ１０重鎖、２つのＬ１２軽鎖と２つのＨ１１重鎖、２つのＬ１３軽鎖と２つのＨ１２重鎖、２つのＬ１３軽鎖と２つのＨ１４重鎖、２つのＬ１４軽鎖と２つのＨ１３重鎖、２つのＬ１５軽鎖と２つのＨ１４重鎖、２つのＬ１６軽鎖と２つのＨ１５重鎖、２つのＬ１７軽鎖と２つのＨ１６重鎖、２つのＬ１８軽鎖と２つのＨ１７重鎖、２つのＬ１９軽鎖と２つのＨ１８重鎖、２つのＬ２０軽鎖と２つのＨ１９重鎖、２つのＬ２１軽鎖と２つのＨ２０重鎖、２つのＬ２２軽鎖と２つのＨ２１重鎖、２つのＬ２３軽鎖と２つのＨ２２重鎖、２つのＬ２４軽鎖と２つのＨ２３重鎖、２つのＬ２５軽鎖と２つのＨ２４重鎖、２つのＬ２６軽鎖と２つのＨ２５重鎖、２つのＬ２７軽鎖と２つのＨ２６重鎖、２つのＬ２８軽鎖と２つのＨ２７重鎖、２つのＬ２９軽鎖と２つのＨ２８重鎖、２つのＬ３０軽鎖と２つのＨ２９重鎖、２つのＬ３１軽鎖と２つのＨ３０重鎖、２つのＬ３２軽鎖と２つのＨ３１重鎖、２つのＬ３３軽鎖と２つのＨ３２重鎖、２つのＬ３４軽鎖と２つのＨ３３重鎖、２つのＬ３５鎖と２つのＨ３４重鎖、２つのＬ３６鎖と２つのＨ３５重鎖、２つのＬ３７軽鎖と２つのＨ３６重鎖、２つのＬ３８軽鎖と２つのＨ３７重鎖、２つのＬ３９軽鎖と２つのＨ３８重鎖、２つのＬ４０軽鎖と２つのＨ３９重鎖、２つのＬ４１軽鎖と２つのＨ４０重鎖、２つのＬ４２軽鎖と２つのＨ４１重鎖、２つのＬ４３軽鎖と２つのＨ４２重鎖、２つのＬ４４軽鎖と２つのＨ４３重鎖、２つのＬ４５軽鎖と２つのＨ４４重鎖、２つのＬ４６軽鎖と２つのＨ４５重鎖、２つのＬ４７軽鎖と２つのＨ４６重鎖、２つのＬ４８軽鎖と２つのＨ４７重鎖、２つのＬ４９軽鎖と２つのＨ４８重鎖、２つのＬ５０軽鎖と２つのＨ４９重鎖、２つのＬ５１軽鎖と２つのＨ５０重鎖、２つのＬ５２軽鎖と２つのＨ５１重鎖、２つのＬ５３軽鎖と２つのＨ５２重鎖、２つのＬ５４軽鎖と２つのＨ５３重鎖、２つのＬ５５軽鎖と２つのＨ５４重鎖、および２つのＬ５６軽鎖と２つのＨ５４重鎖、２つのＬ５７軽鎖と２つのＨ５４重鎖、２つのＬ５８軽鎖と２つのＨ５５重鎖、２つのＬ５９軽鎖と２つのＨ５６重鎖、２つのＬ６０軽鎖と２つのＨ５７重鎖、２つのＬ６１軽鎖と２つのＨ５８重鎖、２つのＬ６２軽鎖と２つのＨ５９重鎖、２つのＬ６３軽鎖と２つのＨ６０重鎖、２つのＬ６４軽鎖と２つのＨ１重鎖、２つのＬ６５軽鎖と２つのＨ６２重鎖、２つのＬ６６軽鎖と２つのＨ６３重鎖、２つのＬ６７軽鎖と２つのＨ６４重鎖、２つのＬ６８軽鎖と２つのＨ６５重鎖、２つのＬ６９軽鎖と２つのＨ６６重鎖、２つのＬ７０軽鎖と２つのＨ６７重鎖、２つのＬ７１軽鎖と２つのＨ６８重鎖、２つのＬ７２軽鎖と２つのＨ６９重鎖、２つのＬ７３軽鎖と２つのＨ７０重鎖、２つのＬ７４軽鎖と２つのＨ７０重鎖、および２つのＬ７５軽鎖と２つのＨ７０重鎖、２つのＬ７６軽鎖と２つのＨ７１重鎖、２つのＬ７７軽鎖と２つのＨ７２重鎖、２つのＬ７８軽鎖と２つのＨ７３重鎖、２つのＬ７９軽鎖と２つのＨ７４重鎖、２つのＬ８０軽鎖と２つのＨ７５重鎖、２つのＬ８１軽鎖と２つのＨ７６重鎖、２つのＬ８２軽鎖と２つのＨ７７重鎖、２つのＬ８３軽鎖と２つのＨ７８重鎖、２つのＬ８４軽鎖と２つのＨ７９重鎖、２つのＬ８５軽鎖と２つのＨ８０重鎖、２つのＬ８６軽鎖と２つのＨ８１重鎖、２つのＬ８７軽鎖と２つのＨ８２重鎖、２つのＬ８８軽鎖と２つのＨ８６重鎖、２つのＬ８９軽鎖と２つのＨ８３重鎖、２つのＬ９０軽鎖と２つのＨ８４重鎖、２つのＬ９１軽鎖と２つのＨ８５重鎖、２つのＬ９２軽鎖と２つのＨ８７重鎖、２つのＬ９３軽鎖と２つのＨ８８重鎖、２つのＬ９４軽鎖と２つのＨ８８重鎖、２つのＬ９５軽鎖と２つのＨ８９重鎖、２つのＬ９６軽鎖と２つのＨ９０重鎖、２つのＬ９７軽鎖と２つのＨ９１重鎖、２つのＬ９８軽鎖と２つのＨ９２重鎖、２つのＬ９９軽鎖と２つのＨ９３重鎖、および２つのＬ１００軽鎖と２つのＨ９４重鎖、ならびに以下の表１Ａおよび１Ｂに列挙される、軽鎖を含む対と重鎖の対との他の同様の組み合わせを挙げることができる。
【０１２７】
本開示の別の態様において、「ヘミボディ」を提供する。ヘミボディは、（ｉ）インタクトな軽鎖と（ｉｉ）任意でリンカーを介してＦｃ領域（例えば、配列番号１１のＩｇＧ２  Ｆｃ領域）に融合された重鎖とを含む一価抗原結合タンパク質である。リンカーは、（Ｇ４Ｓ）ｘリンカー（配列番号２０７）であり得、式中、「ｘ」は、０ではない整数である（例えば、（Ｇ４Ｓ）２、（Ｇ４Ｓ）３、（Ｇ４Ｓ）４、（Ｇ４Ｓ）５、（Ｇ４Ｓ）６、（Ｇ４Ｓ）７、（Ｇ４Ｓ）８、（Ｇ４Ｓ）９、（Ｇ４Ｓ）１０、それぞれ、配列番号２０８〜２１６）。ヘミボディは、提供される重鎖および軽鎖の構成要素を使用して、構築することができる。
【０１２８】
提供される他の抗原結合タンパク質は、下記の表１Ａおよび１Ｂに示される重鎖と軽鎖の組み合わせによって形成される、抗体の変異体であり、それぞれが、これらの鎖のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する、軽鎖および／または重鎖を含む。いくつかの事例において、このような抗体は、少なくとも１つの重鎖および１つの軽鎖を含み、一方で、他の事例においては、変異体形態は、２つの同一な軽鎖および２つの同一な重鎖を含有する。
【０１２９】
抗原結合タンパク質の可変ドメイン
さらに、表２Ｂに示されるＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５、ＶＨ６、ＶＨ７、ＶＨ８、ＶＨ９、ＶＨ１０、ＶＨ１１、ＶＨ１２、ＶＨ１３、ＶＨ１４、ＶＨ１５、ＶＨ１６、ＶＨ１７、ＶＨ１８、ＶＨ１９、ＶＨ２０、ＶＨ２１、ＶＨ２２、ＶＨ２３、ＶＨ２４、ＶＨ２５、ＶＨ２６、ＶＨ２７、ＶＨ２８、ＶＨ２９、ＶＨ３０、ＶＨ３１、ＶＨ３２、ＶＨ３３、ＶＨ３４、ＶＨ３５、ＶＨ３６、ＶＨ３７、ＶＨ３８、ＶＨ３９、ＶＨ４０、ＶＨ４１、ＶＨ４２、ＶＨ４３、ＶＨ４４、ＶＨ４５、ＶＨ４６、ＶＨ４７、ＶＨ４８、ＶＨ４９、ＶＨ５０、ＶＨ５１、ＶＨ５２、ＶＨ５３、ＶＨ５４、ＶＨ５５、ＶＨ５６、ＶＨ５７、ＶＨ５８、ＶＨ５９、ＶＨ６０、ＶＨ６１、ＶＨ６２、ＶＨ６３、ＶＨ６４、ＶＨ６５、ＶＨ６６、ＶＨ６７、ＶＨ６８、ＶＨ６９、ＶＨ７０、ＶＨ７１、ＶＨ７２、ＶＨ７３、ＶＨ７４、ＶＨ７５、ＶＨ７６、ＶＨ７７、ＶＨ７８、ＶＨ７９、ＶＨ８０、８１、ＶＨ８２、ＶＨ８３、ＶＨ８４、ＶＨ８５、ＶＨ８６、ＶＨ８７、ＶＨ８８、ＶＨ８９、ＶＨ９０、ＶＨ９１、ＶＨ９２、ＶＨ９３、およびＶＨ９４からなる群から選択される抗体重鎖可変領域、ならびに表２Ａに示されるＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、ＶＬ４、ＶＬ５、ＶＬ６、ＶＬ７、ＶＬ８、ＶＬ９、ＶＬ１０、ＶＬ１１、ＶＬ１２、ＶＬ１３、ＶＬ１４、ＶＬ１５、ＶＬ１６、ＶＬ１７、ＶＬ１８、ＶＬ１９、ＶＬ２０、ＶＬ２１、ＶＬ２２、ＶＬ２３、ＶＬ２４、ＶＬ２５、ＶＬ２６、ＶＬ２７、ＶＬ２８、ＶＬ２９、ＶＬ３０、ＶＬ３１、ＶＬ３２、ＶＬ３３、ＶＬ３４、ＶＬ３５、ＶＬ３６、ＶＬ３７、ＶＬ３８、ＶＬ３９、ＶＬ４０、ＶＬ４１、ＶＬ４２、ＶＬ４３、ＶＬ４４、ＶＬ４５、ＶＬ４６、ＶＬ４７、ＶＬ４８、ＶＬ４９、ＶＬ５０、ＶＬ５１、ＶＬ５２、ＶＬ５３、ＶＬ５４、ＶＬ５５、ＶＬ５６、ＶＬ５７、ＶＬ５８、ＶＬ５９、ＶＬ６０、ＶＬ６１、ＶＬ６２、ＶＬ６３、ＶＬ６４、ＶＬ６５、ＶＬ６６、ＶＬ６７、ＶＬ６８、ＶＬ６９、ＶＬ７０、ＶＬ７１、ＶＬ７２、ＶＬ７３、ＶＬ７４、ＶＬ７５、ＶＬ７６、ＶＬ７７、ＶＬ７８、ＶＬ７９、ＶＬ８０、ＶＬ８１、ＶＬ８２、ＶＬ８３、ＶＬ８４、ＶＬ８５、ＶＬ８６、ＶＬ８７、ＶＬ８８、ＶＬ８９、ＶＬ９０、ＶＬ９１、ＶＬ９２、ＶＬ９３、ＶＬ９４、ＶＬ９５、ＶＬ９６、ＶＬ９７、ＶＬ９８、ＶＬ９９、およびＶＬ１００からなる群から選択される抗体軽鎖可変領域を含有する、抗原結合タンパク質、ならびにこれらの軽鎖および重鎖可変領域の免疫学的機能性フラグメント、誘導体、突然変異タンパク質、および変異体もまた、提供される。
【０１３０】
【表２Ａ】
2014518640.tif 000068
2014518640.tif 000069
2014518640.tif 000070
2014518640.tif 000071
2014518640.tif 000072
2014518640.tif 000073
2014518640.tif 000074
2014518640.tif 000075
2014518640.tif 000076
2014518640.tif 000077
【０１３１】
【表２Ｂ】
2014518640.tif 000078
2014518640.tif 000079
2014518640.tif 000080
2014518640.tif 000081
2014518640.tif 000082
2014518640.tif 000083
2014518640.tif 000084
2014518640.tif 000085
2014518640.tif 000086
2014518640.tif 000087
2014518640.tif 000088
【０１３２】
【表２Ｃ】
2014518640.tif 000089
2014518640.tif 000090
2014518640.tif 000091
2014518640.tif 000092
2014518640.tif 000093
2014518640.tif 000094
2014518640.tif 000095
2014518640.tif 000096
2014518640.tif 000097
2014518640.tif 000098
2014518640.tif 000099
2014518640.tif 000100
2014518640.tif 000101
2014518640.tif 000102
2014518640.tif 000103
2014518640.tif 000104
2014518640.tif 000105
2014518640.tif 000106
2014518640.tif 000107
2014518640.tif 000108
2014518640.tif 000109
2014518640.tif 000110
2014518640.tif 000111
【０１３３】
【表２Ｄ】
2014518640.tif 000112
2014518640.tif 000113
2014518640.tif 000114
2014518640.tif 000115
2014518640.tif 000116
2014518640.tif 000117
2014518640.tif 000118
2014518640.tif 000119
2014518640.tif 000120
2014518640.tif 000121
2014518640.tif 000122
2014518640.tif 000123
2014518640.tif 000124
2014518640.tif 000125
2014518640.tif 000126
2014518640.tif 000127
2014518640.tif 000128
2014518640.tif 000129
2014518640.tif 000130
2014518640.tif 000131
2014518640.tif 000132
2014518640.tif 000133
2014518640.tif 000134
2014518640.tif 000135
【０１３４】
表２Ｂに列挙される重鎖可変領域のそれぞれを、表２Ａに示される軽鎖可変領域のいずれかと組み合わせて、抗原結合タンパク質を形成することができる。このような組み合わせの例には、ＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、ＶＬ４、ＶＬ５、ＶＬ６、ＶＬ７、ＶＬ８、ＶＬ９、ＶＬ１０、ＶＬ１１、ＶＬ１２、ＶＬ１３、ＶＬ１４、ＶＬ１５、ＶＬ１６、ＶＬ１７、ＶＬ１８、ＶＬ１９、ＶＬ２０、ＶＬ２１、ＶＬ２２、ＶＬ２３、ＶＬ２４、ＶＬ２５、ＶＬ２６、ＶＬ２７、ＶＬ２８、ＶＬ２９、ＶＬ３０、ＶＬ３１、ＶＬ３２、ＶＬ３３、ＶＬ３４、ＶＬ３５、ＶＬ３６、ＶＬ３７、ＶＬ３８、ＶＬ３９、ＶＬ４０、ＶＬ４１、ＶＬ４２、ＶＬ４３、ＶＬ４４、ＶＬ４５、ＶＬ４６、ＶＬ４７、ＶＬ４８、ＶＬ４９、ＶＬ５０、ＶＬ５１、ＶＬ５２、ＶＬ５３、ＶＬ５４、ＶＬ５５、ＶＬ５６、ＶＬ５７、ＶＬ５８、ＶＬ５９、ＶＬ６０、ＶＬ６１、ＶＬ６２、ＶＬ６３、ＶＬ６４、ＶＬ６５、ＶＬ６６、ＶＬ６７、ＶＬ６８、ＶＬ６９、ＶＬ７０、ＶＬ７１、ＶＬ７２、ＶＬ７３、ＶＬ７４、ＶＬ７５、ＶＬ７６、ＶＬ７７、ＶＬ７８、ＶＬ７９、ＶＬ８０、ＶＬ８１、ＶＬ８２、ＶＬ８３、ＶＬ８４、ＶＬ８５、ＶＬ８６、ＶＬ８７、ＶＬ８８、ＶＬ８９、ＶＬ９０、ＶＬ９１、ＶＬ９２、ＶＬ９３、ＶＬ９４、ＶＬ９５、ＶＬ９６、ＶＬ９７、ＶＬ９８、ＶＬ９９、およびＶＬ１００のいずれかと組み合わせたＶＨ１；ＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、ＶＬ４、ＶＬ５、ＶＬ６、ＶＬ７、ＶＬ８、ＶＬ９、ＶＬ１０、ＶＬ１１、ＶＬ１２、ＶＬ１３、ＶＬ１４、ＶＬ１５、ＶＬ１６、ＶＬ１７、ＶＬ１８、ＶＬ１９、ＶＬ２０、ＶＬ２１、ＶＬ２２、ＶＬ２３、ＶＬ２４、ＶＬ２５、ＶＬ２６、ＶＬ２７、ＶＬ２８、ＶＬ２９、ＶＬ３０、ＶＬ３１、ＶＬ３２、ＶＬ３３、ＶＬ３４、ＶＬ３５、ＶＬ３６、ＶＬ３７、ＶＬ３８、ＶＬ３９、ＶＬ４０、ＶＬ４１、ＶＬ４２、ＶＬ４３、ＶＬ４４、ＶＬ４５、ＶＬ４６、ＶＬ４７、ＶＬ４８、ＶＬ４９、ＶＬ５０、ＶＬ５１、ＶＬ５２、ＶＬ５３、ＶＬ５４、ＶＬ５５、ＶＬ５６、ＶＬ５７、ＶＬ５８、ＶＬ５９、ＶＬ６０、ＶＬ６１、ＶＬ６２、ＶＬ６３、ＶＬ６４、ＶＬ６５、ＶＬ６６、ＶＬ６７、ＶＬ６８、ＶＬ６９、ＶＬ７０、ＶＬ７１、ＶＬ７２、ＶＬ７３、ＶＬ７４、ＶＬ７５、ＶＬ７６、ＶＬ７７、ＶＬ７８、ＶＬ７９、ＶＬ８０、ＶＬ８１、ＶＬ８２、ＶＬ８３、ＶＬ８４、ＶＬ８５、ＶＬ８６、ＶＬ８７、ＶＬ８８、ＶＬ８９、ＶＬ９０、ＶＬ９１、ＶＬ９２、ＶＬ９３、ＶＬ９４、ＶＬ９５、ＶＬ９６、ＶＬ９７、ＶＬ９８、ＶＬ９９、およびＶＬ１００のいずれかと組み合わせたＶＨ２；ＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、ＶＬ４、ＶＬ５、ＶＬ６、ＶＬ７、ＶＬ８、ＶＬ９、ＶＬ１０、ＶＬ１１、ＶＬ１２、ＶＬ１３、ＶＬ１４、ＶＬ１５、ＶＬ１６、ＶＬ１７、ＶＬ１８、ＶＬ１９、ＶＬ２０、ＶＬ２１、ＶＬ２２、ＶＬ２３、ＶＬ２４、ＶＬ２５、ＶＬ２６、ＶＬ２７、ＶＬ２８、ＶＬ２９、ＶＬ３０、ＶＬ３１、ＶＬ３２、ＶＬ３３、ＶＬ３４、ＶＬ３５、ＶＬ３６、ＶＬ３７、ＶＬ３８、ＶＬ３９、ＶＬ４０、ＶＬ４１、ＶＬ４２、ＶＬ４３、ＶＬ４４、ＶＬ４５、ＶＬ４６、ＶＬ４７、ＶＬ４８、ＶＬ４９、ＶＬ５０、ＶＬ５１、ＶＬ５２、ＶＬ５３、ＶＬ５４、ＶＬ５５、ＶＬ５６、ＶＬ５７、ＶＬ５８、ＶＬ５９、ＶＬ６０、ＶＬ６１、ＶＬ６２、ＶＬ６３、ＶＬ６４、ＶＬ６５、ＶＬ６６、ＶＬ６７、ＶＬ６８、ＶＬ６９、ＶＬ７０、ＶＬ７１、ＶＬ７２、ＶＬ７３、ＶＬ７４、ＶＬ７５、ＶＬ７６、ＶＬ７７、ＶＬ７８、ＶＬ７９、ＶＬ８０、ＶＬ８１、ＶＬ８２、ＶＬ８３、ＶＬ８４、ＶＬ８５、ＶＬ８６、ＶＬ８７、ＶＬ８８、ＶＬ８９、ＶＬ９０、ＶＬ９１、ＶＬ９２、ＶＬ９３、ＶＬ９４、ＶＬ９５、ＶＬ９６、ＶＬ９７、ＶＬ９８、ＶＬ９９、およびＶＬ１００のいずれかと組み合わせたＶＨ３等が挙げられる。
【０１３５】
いくつかの事例において、抗原結合タンパク質は、表２Ａおよび２Ｂに列挙されたものに由来する、少なくとも１つの重鎖可変領域、および／または１つの軽鎖可変領域を含む。いくつかの事例において、抗原結合タンパク質は、表２Ｂに列挙されたものに由来する、２つの異なる重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む。このような抗原結合タンパク質の例は、（ａ）１つのＶＨ１と、（ｂ）ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５、ＶＨ６、ＶＨ７、ＶＨ８、ＶＨ９、ＶＨ１０、ＶＨ１１、ＶＨ１２、ＶＨ１３、ＶＨ１４、ＶＨ１５、ＶＨ１６、ＶＨ１７、ＶＨ１８、ＶＨ１９、ＶＨ２０、ＶＨ２１、ＶＨ２２、ＶＨ２３、ＶＨ２４、ＶＨ２５、ＶＨ２６、ＶＨ２７、ＶＨ２８、ＶＨ２９、ＶＨ３０、ＶＨ３１、ＶＨ３２、ＶＨ３３、ＶＨ３４、ＶＨ３５、ＶＨ３６、ＶＨ３７、ＶＨ３８、ＶＨ３９、ＶＨ４０、ＶＨ４１、ＶＨ４２、ＶＨ４３、ＶＨ４４、ＶＨ４５、ＶＨ４６、ＶＨ４７、ＶＨ４８、ＶＨ４９、ＶＨ５０、ＶＨ５１、ＶＨ５２、ＶＨ５３、ＶＨ５４、ＶＨ５５、ＶＨ５６、ＶＨ５７、ＶＨ５８、ＶＨ５９、ＶＨ６０、ＶＨ６１、ＶＨ６２、ＶＨ６３、ＶＨ６４、ＶＨ６５、ＶＨ６６、ＶＨ６７、ＶＨ６８、ＶＨ６９、ＶＨ７０、ＶＨ７１、ＶＨ７２、ＶＨ７３、ＶＨ７４、ＶＨ７５、ＶＨ７６、ＶＨ７７、ＶＨ７８、ＶＨ７９、ＶＨ８０、８１、ＶＨ８２、ＶＨ８３、ＶＨ８４、ＶＨ８５、ＶＨ  ８６、ＶＨ  ８７、ＶＨ８８、ＶＨ８９、ＶＨ９０、ＶＨ９１、ＶＨ９２、ＶＨ９３、およびＶＨ９４のうちの１つと、を含む。別の例は、（ａ）１つのＶＨ２と、（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５、ＶＨ６、ＶＨ７、ＶＨ８、ＶＨ９、ＶＨ１０、ＶＨ１１、ＶＨ１２、ＶＨ１３、ＶＨ１４、ＶＨ１５、ＶＨ１６、ＶＨ１７、ＶＨ１８、ＶＨ１９、ＶＨ２０、ＶＨ２１  ＶＨ２２、ＶＨ２３、ＶＨ２４、ＶＨ２５、ＶＨ２６、ＶＨ２７、ＶＨ２８、ＶＨ２９、ＶＨ３０、ＶＨ３１、ＶＨ３２、ＶＨ３３、ＶＨ３４、ＶＨ３５、ＶＨ３６、ＶＨ３７、ＶＨ３８、ＶＨ３９、ＶＨ４０、ＶＨ４１、ＶＨ４２、ＶＨ４３、ＶＨ４４、ＶＨ４５、ＶＨ４６、ＶＨ４７、ＶＨ４８、ＶＨ４９、ＶＨ５０、ＶＨ５１、ＶＨ５２、ＶＨ５３、ＶＨ５４、ＶＨ５５、ＶＨ５６、ＶＨ５７、ＶＨ５８、ＶＨ５９、ＶＨ６０、ＶＨ６１、ＶＨ６２、ＶＨ６３、ＶＨ６４、ＶＨ６５、ＶＨ６６、ＶＨ６７、ＶＨ６８、ＶＨ６９、ＶＨ７０、ＶＨ７１、ＶＨ７２、ＶＨ７３、ＶＨ７４、ＶＨ７５、ＶＨ７６、ＶＨ７７、ＶＨ７８、ＶＨ７９、ＶＨ８０、８１、ＶＨ８２、ＶＨ８３、ＶＨ８４、ＶＨ８５、ＶＨ８６、ＶＨ  ８７、ＶＨ８８、ＶＨ８９、ＶＨ９０、ＶＨ９１、ＶＨ９２、ＶＨ９３、およびＶＨ９４のうちの１つと、を含む。さらに別の例は、（ａ）１つのＶＨ３と、（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ４、ＶＨ５、ＶＨ６、ＶＨ７、ＶＨ８、ＶＨ９、ＶＨ１０、ＶＨ１１、ＶＨ１２、ＶＨ１３、ＶＨ１４、ＶＨ１５、ＶＨ１６、ＶＨ１７、ＶＨ１８、ＶＨ１９、ＶＨ２０、ＶＨ２１、ＶＨ２２、ＶＨ２３、ＶＨ２４、ＶＨ２５、ＶＨ２６、ＶＨ２７、ＶＨ２８、ＶＨ２９、ＶＨ３０、ＶＨ３１、ＶＨ３２、ＶＨ３３、ＶＨ３４、ＶＨ３５、ＶＨ３６、ＶＨ３７、ＶＨ３８、ＶＨ３９、ＶＨ４０、ＶＨ４１、ＶＨ４２、ＶＨ４３、Ｖ���４４、ＶＨ４５、ＶＨ４６、ＶＨ４７、ＶＨ４８、ＶＨ４９、ＶＨ５０、ＶＨ５１、ＶＨ５２、ＶＨ５３、ＶＨ５４、ＶＨ５５、ＶＨ５６、ＶＨ５７、ＶＨ５８、ＶＨ５９、ＶＨ６０、ＶＨ６１、ＶＨ６２、ＶＨ６３、ＶＨ６４、ＶＨ６５、ＶＨ６６、ＶＨ６７、ＶＨ６８、ＶＨ６９、ＶＨ７０、ＶＨ７１、ＶＨ７２、ＶＨ７３、ＶＨ７４、ＶＨ７５、ＶＨ７６、ＶＨ７７、ＶＨ７８、ＶＨ７９、ＶＨ８０、８１、ＶＨ８２、ＶＨ８３、ＶＨ８４、ＶＨ８５、ＶＨ８６、ＶＨ８７、ＶＨ８８、ＶＨ８９、ＶＨ９０、ＶＨ９１、ＶＨ９２、ＶＨ９３、およびＶＨ９４等のうちの１つと、を含む。このような抗原結合タンパク質のさらに別の例は、（ａ）１つのＶＬ１と、（ｂ）ＶＬ２、ＶＬ３、ＶＬ４、ＶＬ５、ＶＬ６、ＶＬ７、ＶＬ８、ＶＬ９、ＶＬ１０、ＶＬ１１、ＶＬ１２、ＶＬ１３、ＶＬ１４、ＶＬ１５、ＶＬ１６、ＶＬ１７、ＶＬ１８、ＶＬ１９、ＶＬ２０、ＶＬ２１、ＶＬ２２、ＶＬ２３、ＶＬ２４、ＶＬ２５、ＶＬ２６、ＶＬ２７、ＶＬ２８、ＶＬ２９、ＶＬ３０、ＶＬ３１、ＶＬ３２、ＶＬ３３、ＶＬ３４、ＶＬ３５、ＶＬ３６、ＶＬ３７、ＶＬ３８、ＶＬ３９、ＶＬ４０、ＶＬ４１、ＶＬ４２、ＶＬ４３、ＶＬ４４、ＶＬ４５、ＶＬ４６、ＶＬ４７、ＶＬ４８、ＶＬ４９、ＶＬ５０、ＶＬ５１、ＶＬ５２、ＶＬ５３、ＶＬ５４、ＶＬ５５、ＶＬ５６、ＶＬ５７、ＶＬ５８、ＶＬ５９、ＶＬ６０、ＶＬ６１、ＶＬ６２、ＶＬ６３、ＶＬ６４、ＶＬ６５、ＶＬ６６、ＶＬ６７、ＶＬ６８、ＶＬ６９、ＶＬ７０、ＶＬ７１、ＶＬ７２、ＶＬ７３、ＶＬ７４、ＶＬ７５、ＶＬ７６、ＶＬ７７、ＶＬ７８、ＶＬ７９、ＶＬ８０、ＶＬ８１、ＶＬ８２、ＶＬ８３、ＶＬ８４、ＶＬ８５、ＶＬ８６、ＶＬ８７、ＶＬ８８、ＶＬ８９、ＶＬ９０、ＶＬ９１、ＶＬ９２、ＶＬ９３、ＶＬ９４、ＶＬ９５、ＶＬ９６、ＶＬ９７、ＶＬ９８、ＶＬ９９、およびＶＬ１００のうちの１つと、を含む。このような抗原結合タンパク質のさらに別の例は、（ａ）１つのＶＬ２と、（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ３、ＶＬ４、ＶＬ５、ＶＬ６、ＶＬ７、ＶＬ８、ＶＬ９、ＶＬ１０、ＶＬ１１、ＶＬ１２、ＶＬ１３、ＶＬ１４、ＶＬ１５、ＶＬ１６、ＶＬ１７、ＶＬ１８、ＶＬ１９、ＶＬ２０、ＶＬ２１、ＶＬ２２、ＶＬ２３、ＶＬ２４、ＶＬ２５、ＶＬ２６、ＶＬ２７、ＶＬ２８、ＶＬ２９、ＶＬ３０、ＶＬ３１、ＶＬ３２、ＶＬ３３、ＶＬ３４、ＶＬ３５、ＶＬ３６、ＶＬ３７、ＶＬ３８、ＶＬ３９、ＶＬ４０、ＶＬ４１、ＶＬ４２、ＶＬ４３、ＶＬ４４、ＶＬ４５、ＶＬ４６、ＶＬ４７、ＶＬ４８、ＶＬ４９、ＶＬ５０、ＶＬ５１、ＶＬ５２、ＶＬ５３、ＶＬ５４、ＶＬ５５、ＶＬ５６、ＶＬ５７、ＶＬ５８、ＶＬ５９、ＶＬ６０、ＶＬ６１、ＶＬ６２、ＶＬ６３、ＶＬ６４、ＶＬ６５、ＶＬ６６、ＶＬ６７、ＶＬ６８、ＶＬ６９、ＶＬ７０、ＶＬ７１、ＶＬ７２、ＶＬ７３、ＶＬ７４、ＶＬ７５、ＶＬ７６、ＶＬ７７、ＶＬ７８、ＶＬ７９、ＶＬ８０
、ＶＬ８１、ＶＬ８２、ＶＬ８３、ＶＬ８４、ＶＬ８５、ＶＬ８６、ＶＬ８７、ＶＬ８８、ＶＬ８９、ＶＬ９０、ＶＬ９１、ＶＬ９２、ＶＬ９３、ＶＬ９４、ＶＬ９５、ＶＬ９６、ＶＬ９７、ＶＬ９８、ＶＬ９９、およびＶＬ１００のうちの１つと、を含む。このような抗原結合タンパク質のさらなる別の例は、（ａ）１つのＶＬ３と、（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ４、ＶＬ５、ＶＬ６、ＶＬ７、ＶＬ８、ＶＬ９、ＶＬ１０、ＶＬ１１、ＶＬ１２、ＶＬ１３、ＶＬ１４、ＶＬ１５、ＶＬ１６、ＶＬ１７、ＶＬ１８、ＶＬ１９、ＶＬ２０、ＶＬ２１、ＶＬ２２、ＶＬ２３、ＶＬ２４、ＶＬ２５、ＶＬ２６、ＶＬ２７、ＶＬ２８、ＶＬ２９、ＶＬ３０、ＶＬ３１、ＶＬ３２、ＶＬ３３、ＶＬ３４、ＶＬ３５、ＶＬ３６、ＶＬ３７、ＶＬ３８、ＶＬ３９、ＶＬ４０、ＶＬ４１、ＶＬ４２、ＶＬ４３、ＶＬ４４、ＶＬ４５、ＶＬ４６、ＶＬ４７、ＶＬ４８、ＶＬ４９、ＶＬ５０、ＶＬ５１、ＶＬ５２、ＶＬ５３、ＶＬ５４、ＶＬ５５、ＶＬ５６、ＶＬ５７、ＶＬ５８、ＶＬ５９、ＶＬ６０、ＶＬ６１、ＶＬ６２、ＶＬ６３、ＶＬ６４、ＶＬ６５、ＶＬ６６、ＶＬ６７、ＶＬ６８、ＶＬ６９、ＶＬ７０、ＶＬ７１、ＶＬ７２、ＶＬ７３、ＶＬ７４、ＶＬ７５、ＶＬ７６、ＶＬ７７、ＶＬ７８、ＶＬ７９、ＶＬ８０、ＶＬ８１、ＶＬ８２、ＶＬ８３、ＶＬ８４、ＶＬ８５、ＶＬ８６、ＶＬ８７、ＶＬ８８、ＶＬ８９、ＶＬ９０、ＶＬ９１、ＶＬ９２、ＶＬ９３、ＶＬ９４、ＶＬ９５、ＶＬ９６、ＶＬ９７、ＶＬ９８、ＶＬ９９、およびＶＬ１００等のうちの１つと、を含む。
【０１３６】
種々の組み合わせの重鎖可変領域を、種々の組み合わせの軽鎖可変領域のいずれかと組み合わせることができる。
【０１３７】
他の実施形態において、抗原結合タンパク質は、２つの同一な軽鎖可変領域および／または２つの同一な重鎖可変領域を含む。例として、抗原結合タンパク質は、表２Ａおよび２Ｂに列挙される軽鎖可変領域の対と重鎖可変領域の対の組み合わせで、２つの軽鎖可変領域と２つの重鎖可変領域を含む、抗体、またはその免疫学的機能性フラグメントであり得る。
【０１３８】
提供されるいくつかの抗原結合タンパク質は、ＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５、ＶＨ６、ＶＨ７、ＶＨ８、ＶＨ９、ＶＨ１０、ＶＨ１１、ＶＨ１２、ＶＨ１３、ＶＨ１４、ＶＨ１５、ＶＨ１６、ＶＨ１７、ＶＨ１８、ＶＨ１９、ＶＨ２０、ＶＨ２１、ＶＨ２２、ＶＨ２３、ＶＨ２４、ＶＨ２５、ＶＨ２６、ＶＨ２７、ＶＨ２８、ＶＨ２９、ＶＨ３０、ＶＨ３１、ＶＨ３２、ＶＨ３３、ＶＨ３４、ＶＨ３５、ＶＨ３６、ＶＨ３７、ＶＨ３８、ＶＨ３９、ＶＨ４０、ＶＨ４１、ＶＨ４２、ＶＨ４３、ＶＨ４４、ＶＨ４５、ＶＨ４６、ＶＨ４７、ＶＨ４８、ＶＨ４９、ＶＨ５０、ＶＨ５１、ＶＨ５２、ＶＨ５３、ＶＨ５４、ＶＨ５５、ＶＨ５６、ＶＨ５７、ＶＨ５８、ＶＨ５９、ＶＨ６０、ＶＨ６１、ＶＨ６２、ＶＨ６３、ＶＨ６４、ＶＨ６５、ＶＨ６６、ＶＨ６７、ＶＨ６８、ＶＨ６９、ＶＨ７０、ＶＨ７１、ＶＨ７２、ＶＨ７３、ＶＨ７４、ＶＨ７５、ＶＨ７６、ＶＨ７７、ＶＨ７８、ＶＨ７９、ＶＨ８０、８１、ＶＨ８２、ＶＨ８３、ＶＨ８４、ＶＨ８５、ＶＨ８６、ＶＨ８７、ＶＨ８８、ＶＨ８９、ＶＨ９０、ＶＨ９１、ＶＨ９２、ＶＨ９３、およびＶＨ９４から選択される重鎖可変ドメインの配列とは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個のアミノ酸残基のみが異なる、アミノ酸の配列を含む、重鎖可変ドメインを含み、それぞれのこのような配列の違いは、独立して、１つのアミノ酸の欠失、挿入、または置換のいずれかであり、この欠失、挿入、および／または置換は、前述の可変ドメイン配列と比較して１５個以下のアミノ酸の変化をもたらす。いくつかの抗原結合タンパク質における重鎖可変領域は、ＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５、ＶＨ６、ＶＨ７、ＶＨ８、ＶＨ９、ＶＨ１０、ＶＨ１１、ＶＨ１２、ＶＨ１３、ＶＨ１４、ＶＨ１５、ＶＨ１６、ＶＨ１７、ＶＨ１８、ＶＨ１９、ＶＨ２０、ＶＨ２１、ＶＨ２２、ＶＨ２３、ＶＨ２４、ＶＨ２５、ＶＨ２６、ＶＨ２７、ＶＨ２８、ＶＨ２９、ＶＨ３０、ＶＨ３１、ＶＨ３２、ＶＨ３３、ＶＨ３４、ＶＨ３５、ＶＨ３６、ＶＨ３７、ＶＨ３８、ＶＨ３９、ＶＨ４０、ＶＨ４１、ＶＨ４２、ＶＨ４３、ＶＨ４４、ＶＨ４５、ＶＨ４６、ＶＨ４７、ＶＨ４８、ＶＨ４９、ＶＨ５０、ＶＨ５１、ＶＨ５２、ＶＨ５３、ＶＨ５４、ＶＨ５５、ＶＨ５６、ＶＨ５７、ＶＨ５８、ＶＨ５９、ＶＨ６０、ＶＨ６１、ＶＨ６２、ＶＨ６３、ＶＨ６４、ＶＨ６５、ＶＨ６６、ＶＨ６７、ＶＨ６８、ＶＨ６９、ＶＨ７０、ＶＨ７１、ＶＨ７２、ＶＨ７３、ＶＨ７４、ＶＨ７５、ＶＨ７６、ＶＨ７７、ＶＨ７８、ＶＨ７９、ＶＨ８０、８１、ＶＨ８２、ＶＨ８３、ＶＨ８４、ＶＨ８５、ＶＨ８６、ＶＨ  ８７、ＶＨ８８、ＶＨ８９、ＶＨ９０、ＶＨ９１、ＶＨ９２、ＶＨ９３、およびＶＨ９４の重鎖可変領域のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を有する、アミノ酸の配列を含む。
【０１３９】
ある特定の抗原結合タンパク質は、ＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、ＶＬ４、ＶＬ５、ＶＬ６、ＶＬ７、ＶＬ８、ＶＬ９、ＶＬ１０、ＶＬ１１、ＶＬ１２、ＶＬ１３、ＶＬ１４、ＶＬ１５、ＶＬ１６、ＶＬ１７、ＶＬ１８、ＶＬ１９、ＶＬ２０、ＶＬ２１、ＶＬ２２、ＶＬ２３、ＶＬ２４、ＶＬ２５、ＶＬ２６、ＶＬ２７、ＶＬ２８、ＶＬ２９、ＶＬ３０、ＶＬ３１、ＶＬ３２、ＶＬ３３、ＶＬ３４、ＶＬ３５、ＶＬ３６、ＶＬ３７、ＶＬ３８、ＶＬ３９、ＶＬ４０、ＶＬ４１、ＶＬ４２、ＶＬ４３、ＶＬ４４、ＶＬ４５、ＶＬ４６、ＶＬ４７、ＶＬ４８、ＶＬ４９、ＶＬ５０、ＶＬ５１、ＶＬ５２、ＶＬ５３、ＶＬ５４、ＶＬ５５、ＶＬ５６、ＶＬ５７、ＶＬ５８、ＶＬ５９、ＶＬ６０、ＶＬ６１、ＶＬ６２、ＶＬ６３、ＶＬ６４、ＶＬ６５、ＶＬ６６、ＶＬ６７、ＶＬ６８、ＶＬ６９、ＶＬ７０、ＶＬ７１、ＶＬ７２、ＶＬ７３、ＶＬ７４、ＶＬ７５、ＶＬ７６、ＶＬ７７、ＶＬ７８、ＶＬ７９、ＶＬ８０、ＶＬ８１、ＶＬ８２、ＶＬ８３、ＶＬ８４、ＶＬ８５、ＶＬ８６、ＶＬ８７、ＶＬ８８、ＶＬ８９、ＶＬ９０、ＶＬ９１、ＶＬ９２、ＶＬ９３、ＶＬ９４、ＶＬ９５、ＶＬ９６、ＶＬ９７、ＶＬ９８、ＶＬ９９、およびＶＬ１００から選択される軽鎖可変ドメインの配列とは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個のアミノ酸残基のみが異なる、アミノ酸の配列を含む、軽鎖可変ドメインを含み、それぞれのこのような配列の違いは、独立して、１つのアミノ酸の欠失、挿入、または置換のいずれかであり、この欠失、挿入、および／または置換は、前述の可変ドメイン配列と比較して１５個以下のアミノ酸の変化をもたらす。いくつかの抗原結合タンパク質における軽鎖可変領域は、ＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、ＶＬ４、ＶＬ５、ＶＬ６、ＶＬ７、ＶＬ８、ＶＬ９、ＶＬ１０、ＶＬ１１、ＶＬ１２、ＶＬ１３、ＶＬ１４、ＶＬ１５、ＶＬ１６、ＶＬ１７、ＶＬ１８、ＶＬ１９、ＶＬ２０、ＶＬ２１、ＶＬ２２、ＶＬ２３、ＶＬ２４、ＶＬ２５、ＶＬ２６、ＶＬ２７、ＶＬ２８、ＶＬ２９、ＶＬ３０、ＶＬ３１、ＶＬ３２、ＶＬ３３、ＶＬ３４、ＶＬ３５、ＶＬ３６、ＶＬ３７、ＶＬ３８、ＶＬ３９、ＶＬ４０、ＶＬ４１、ＶＬ４２、ＶＬ４３、ＶＬ４４、ＶＬ４５、ＶＬ４６、ＶＬ４７、ＶＬ４８、ＶＬ４９、ＶＬ５０、ＶＬ５１、ＶＬ５２、ＶＬ５３、ＶＬ５４、ＶＬ５５、ＶＬ５６、ＶＬ５７、ＶＬ５８、ＶＬ５９、ＶＬ６０、ＶＬ６１、ＶＬ６２、ＶＬ６３、ＶＬ６４、ＶＬ６５、ＶＬ６６、ＶＬ６７、ＶＬ６８、ＶＬ６９、ＶＬ７０、ＶＬ７１、ＶＬ７２、ＶＬ７３、ＶＬ７４、ＶＬ７５、ＶＬ７６、ＶＬ７７、ＶＬ７８、ＶＬ７９、ＶＬ８０、ＶＬ８１、ＶＬ８２、ＶＬ８３、ＶＬ８４、ＶＬ８５、ＶＬ８６、ＶＬ８７、ＶＬ８８、ＶＬ８９、ＶＬ９０、ＶＬ９１、ＶＬ９２、ＶＬ９３、ＶＬ９４、ＶＬ９５、ＶＬ９６、ＶＬ９７、ＶＬ９８、ＶＬ９９、およびＶＬ１００の軽鎖可変領域のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を有する、アミノ酸の配列を含む。
【０１４０】
さらなる事例において、抗原結合タンパク質は、以下の軽鎖および重鎖可変ドメインの対合を含む：ＶＬ１とＶＨ１、ＶＬ２とＶＨ１、ＶＬ３とＶＨ２もしくはＶＨ３、ＶＬ４とＶＨ４、ＶＬ５とＶＨ５、ＶＬ６とＶＨ６、ＶＬ７とＶＨ６、ＶＬ８とＶＨ７もしくはＶＨ８、ＶＬ９とＶＨ９、ＶＬ１０とＶＨ９、ＶＬ１１とＶＨ１０、ＶＬ１２とＶＨ１１、ＶＬ１３とＶＨ１２、ＶＬ１３とＶＨ１４、ＶＬ１４とＶＨ１３、ＶＬ１５とＶＨ１４、ＶＬ１６とＶＨ１５、ＶＬ１７とＶＨ１６、ＶＬ１８とＶＨ１７、ＶＬ１９とＶＨ１８、ＶＬ２０とＶＨ１９、ＶＬ２１とＶＨ２０、ＶＬ２２とＶＨ２１、ＶＬ２３とＶＨ２２、ＶＬ２４とＶＨ２３、ＶＬ２５とＶＨ２４、ＶＬ２６とＶＨ２５、ＶＬ２７とＶＨ２６、ＶＬ２８とＶＨ２７、ＶＬ２９とＶＨ２８、ＶＬ３０とＶＨ２９、ＶＬ３１とＶＨ３０、ＶＬ３２とＶＨ３１、ＶＬ３３とＶＨ３２、ＶＬ３４とＶＨ３３、ＶＬ３５とＶＨ３４、ＶＬ３６とＶＨ３５、ＶＬ３７とＶＨ３６、ＶＬ３８とＶＨ３７、ＶＬ３９とＶＨ３８、ＶＬ４０とＶＨ３９、ＶＬ４１とＶＨ４０、ＶＬ４２とＶＨ４１、ＶＬ４３とＶＨ４２、ＶＬ４４とＶＨ４３、ＶＬ４５とＶＨ４４、ＶＬ４６とＶＨ４５、ＶＬ４７とＶＨ４６、ＶＬ４８とＶＨ４７、ＶＬ４９とＶＨ４８、ＶＬ５０とＶＨ４９、ＶＬ５１とＶＨ５０、５２とＶＨ５１、ＶＬ５３とＶＨ５２、ＶＬ５４とＶＨ５３、ＶＬ５５と５４、およびＶＬ５６とＶＨ５４、ＶＬ５７とＶＨ５４、ＶＬ５８とＶＨ５５、ＶＬ５９とＶＨ５６、ＶＬ６０とＶＨ５７、ＶＬ６１とＶＨ５８、ＶＬ６２とＶＨ５９、ＶＬ６３とＶＨ６０、ＶＬ６４とＶＨ１、ＶＬ６５とＶＨ６２、ＶＬ６６とＶＨ６３、ＶＬ６７とＶＨ６４、ＶＬ６８とＶＨ６５、ＶＬ６９とＶＨ６６、ＶＬ７０とＶＨ６７、ＶＬ７１とＶＨ６８、ＶＬ７２とＶＨ６９、ＶＬ７３とＶＨ７０、ＶＬ７４とＶＨ７０、およびＶＬ７５とＶＨ７０、ＶＬ７６とＶＨ７１、ＶＬ７７とＶＨ７２、ＶＬ７８とＶＨ７３、ＶＬ７９とＶＨ７４、ＶＬ８０とＶＨ７５、ＶＬ８１とＶＨ７６、ＶＬ８２とＶＨ７７、ＶＬ８３とＶＨ７８、ＶＬ８４とＶＨ７９、ＶＬ８５とＶＨ８０、ＶＬ８６とＶＨ８１、ＶＬ８７とＶＨ８２、ＶＬ８８とＶＨ８６、ＶＬ８９とＶＨ８３、ＶＬ９０とＶＨ８４、ＶＬ９１とＶＨ８５、ＶＬ９２とＶＨ８７、ＶＬ９３とＶＨ８８、ＶＬ９４とＶＨ８８、ＶＬ９５とＶＨ８９、ＶＬ９６とＶＨ９０、ＶＬ９７とＶＨ９１、ＶＬ９８とＶＨ９２、ＶＬ９９とＶＨ９３、およびＶＬ１００とＶＨ９４。
【０１４１】
いくつかの事例において、上述の対合の抗原結合タンパク質は、指定された可変ドメインと７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する、アミノ酸配列を有し得る。
【０１４２】
さらに他の抗原結合タンパク質、例えば、抗体またはその免疫学的機能性フラグメントには、ここで記載した変異体重鎖および変異体軽鎖の変異体形態が含まれる。
【０１４３】
抗原結合タンパク質のＣＤＲ
種々の実施形態において、本明細書に開示される抗原結合タンパク質は、１つ以上のＣＤＲが中にグラフト、挿入、および／または接合された、ポリペプチドを含み得る。抗原結合タンパク質は、１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲを有し得る。抗原結合タンパク質は、したがって、例えば、１つの重鎖ＣＤＲ１（「ＣＤＲＨ１」）、および／または１つの重鎖ＣＤＲ２（「ＣＤＲＨ２」）、および／または１つの重鎖ＣＤＲ３（「ＣＤＲＨ３」）、および／または１つの軽鎖ＣＤＲ１（「ＣＤＲＬ１」）、および／または１つの軽鎖ＣＤＲ２（「ＣＤＲＬ２」）、および／または１つの軽鎖ＣＤＲ３（「ＣＤＲＬ３」）を有し得る。いくつかの抗原結合タンパク質は、ＣＤＲＨ３およびＣＤＲＬ３の両方を含む。特定の重鎖および軽鎖ＣＤＲは、それぞれ、以下の表３Ａおよび３Ｂにおいて特定される。
【０１４４】
所定の抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク領域（ＦＲ）は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，５ｔｈ  Ｅｄ．，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＰＨＳ，ＮＩＨ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２に記載のシステムを使用して、識別することができる。Ｋａｂａｔの命名スキームで提示されるが、所望される場合、本明細書に開示されるＣＤＲはまた、Ｃｈｏｔｈｉａのもの等、代替的な命名スキームに従って再定義することもできる（Ｃｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ，（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７８−８８３、またはＨｏｎｅｇｇｅｒ＆Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，（２００１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９：６５７−６７０を参照されたい）。本明細書に開示されるある特定の抗体は、以下の表３Ａ（ＣＤＲＨ）および表３Ｂ（ＣＤＲＬ）に提示されるＣＤＲのうちの１つ以上のアミノ酸配列と同一であるか、または実質的な配列同一性を有する、１つ以上のアミノ酸配列を含む。
【０１４５】
【表３Ａ】
2014518640.tif 000136
2014518640.tif 000137
2014518640.tif 000138
2014518640.tif 000139
2014518640.tif 000140
2014518640.tif 000141
2014518640.tif 000142
2014518640.tif 000143
2014518640.tif 000144
2014518640.tif 000145
2014518640.tif 000146
【０１４６】
【表３Ｂ】
2014518640.tif 000147
2014518640.tif 000148
2014518640.tif 000149
2014518640.tif 000150
2014518640.tif 000151
2014518640.tif 000152
2014518640.tif 000153
2014518640.tif 000154
2014518640.tif 000155
2014518640.tif 000156
2014518640.tif 000157
【０１４７】
【表３Ｃ】
2014518640.tif 000158
2014518640.tif 000159
2014518640.tif 000160
2014518640.tif 000161
2014518640.tif 000162
2014518640.tif 000163
2014518640.tif 000164
2014518640.tif 000165
2014518640.tif 000166
2014518640.tif 000167
2014518640.tif 000168
2014518640.tif 000169
2014518640.tif 000170
【０１４８】
【表３Ｄ】
2014518640.tif 000171
2014518640.tif 000172
2014518640.tif 000173
2014518640.tif 000174
2014518640.tif 000175
2014518640.tif 000176
2014518640.tif 000177
2014518640.tif 000178
2014518640.tif 000179
2014518640.tif 000180
2014518640.tif 000181
2014518640.tif 000182
2014518640.tif 000183
【０１４９】
天然に存在する抗体内のＣＤＲの構造および特性は、上記で説明されている。簡単に言うと、従来の抗体において、ＣＤＲは、重鎖および軽鎖可変領域において、フレームワーク内に埋め込まれ、そこで、それらは、抗原の結合および認識を担う領域を構築する。可変領域は、少なくとも３つの重鎖または軽鎖のＣＤＲを、例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，５ｔｈ  Ｅｄ．，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＰＨＳ，ＮＩＨ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２、さらに、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３も参照されたい）、フレームワーク領域（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）によってＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４と表記されるフレームワーク領域１〜４、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，（１９８７）（上記）もまた参照されたい）内に、含む。本明細書に提供されるＣＤＲは、しかしながら、従来の抗体構造の抗原結合ドメインを定義するために使用できるだけでなく、本明細書に記載されるように、種々の他のポリペプチド構造に埋め込むこともできる。
【０１５０】
一態様において、提供されるＣＤＲは、（ａ）（ｉ）配列番号６０３〜６５５からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、（ｉｉ）配列番号６５６〜７３２からなる群から選択されるＣＤＲＨ２、（ｉｉｉ）配列番号７３３〜８１３からなる群から選択されるＣＤＲＨ３、ならびに（ｉｖ）５、４、３、２、または１を超えないアミノ酸の１つ以上のアミノ酸置換、欠失、または挿入を含有する、（ｉ）、（ｉｉ）、および（ｉｉｉ）のＣＤＲＨからなる群から選択されるＣＤＲＨ、（Ｂ）（ｉ）配列番号８１４〜８９３からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、（ｉｉ）配列番号８９４〜９４６からなる群から選択されるＣＤＲＬ２、（ｉｉｉ）配列番号９４７〜１０２０からなる群から選択されるＣＤＲＬ３、ならびに（ｉｖ）１、２、３、４、または５を超えないアミノ酸アミノ酸の１つ以上のアミノ酸置換、欠失、または挿入を含有する、（ｉ）、（ｉｉ）、および（ｉｉｉ）のＣＤＲＬ、からなる群から選択される、ＣＤＲＬである。
【０１５１】
別の態様において、抗原結合タンパク質は、以下の表３Ａおよび３Ｂに列挙されるＣＤＲの１、２、３、４、５、または６つの変異体形態を含み、これらは、それぞれが、以下の表３Ａおよび３Ｂに列挙されるＣＤＲ配列と、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する。いくつかの抗原結合タンパク質は、以下の表３Ａおよび３Ｂに列挙されるＣＤＲのうち１、２、３、４、５、または６つを含み、これらは、それぞれが、これらの表に列挙されるＣＤＲとは１、２、３、４、または５個以下のアミノ酸が異なる。
【０１５２】
さらに別の態様において、抗原結合タンパク質は、便宜上、表形式で、関連クローン源を基準に提示される、以下のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３の関連付けを含む。
【０１５３】
【表４】
2014518640.tif 000184
2014518640.tif 000185
2014518640.tif 000186
2014518640.tif 000187
【０１５４】
さらなる態様において、抗原結合タンパク質は、便宜上、表形式で、関連クローン源を基準に提示される、以下のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３の関連付けを含む。
【０１５５】
【表５】
2014518640.tif 000188
2014518640.tif 000189
2014518640.tif 000190
2014518640.tif 000191
【０１５６】
さらなる態様において、抗原結合タンパク質は、便宜上、表形式で、関連クローン源を基準に提示される、以下のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３の関連付けを含む。
【０１５７】
【表６】
2014518640.tif 000192
2014518640.tif 000193
2014518640.tif 000194
2014518640.tif 000195
【０１５８】
コンセンサス配列
【０１５９】
さらに別の態様において、本明細書に開示されるＣＤＲは、関連モノクローナル抗体の群に由来するコンセンサス配列を含む。本明細書に使用される際、「コンセンサス配列」とは、多数の配列間に共通する保存アミノ酸と、所定のアミノ酸配列内で変化する可変アミノ酸とを有するアミノ酸配列を指す。提供されるＣＤＲコンセンサス配列は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のそれぞれに対応するＣＤＲを含む。
【０１６０】
コンセンサス配列を、表３Ａおよび３Ｂに示される本開示の抗原結合タンパク質のＶＨおよびＶＬに対応するＣＤＲの標準分析を使用して判定し、そのうちのいくつかが、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する。コンセンサス配列は、ＶＨまたはＶＬに対応する同じ配列内でＣＤＲが連続する状態を保つことによって、判定することができる。
【０１６１】
【化１４】
2014518640.tif 000196
2014518640.tif 000197
2014518640.tif 000198
2014518640.tif 000199
2014518640.tif 000200
2014518640.tif 000201
2014518640.tif 000202
2014518640.tif 000203
2014518640.tif 000204
2014518640.tif 000205
2014518640.tif 000206
2014518640.tif 000207
2014518640.tif 000208
2014518640.tif 000209
2014518640.tif 000210
2014518640.tif 000211
2014518640.tif 000212
2014518640.tif 000213
2014518640.tif 000214
【０１６２】
いくつかの事例において、抗原結合タンパク質は、上述のコンセンサス配列のうちの１つを有する、少なくとも１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３を含む。いくつかの事例において、抗原結合タンパク質は、上述のコンセンサス配列のうちの１つを有する、少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３を含む。他の事例において、抗原結合タンパク質は、所定のコンセンサス配列に応じて少なくとも２つの重鎖ＣＤＲ、および／または所定のコンセンサス配列に応じて少なくとも２つの軽鎖ＣＤＲを含む。さらに他の事例において、抗原結合タンパク質は、所定のコンセンサス配列に応じて少なくとも３つの重鎖ＣＤＲ、および／または所定のコンセンサス配列に応じて少なくとも３つの軽鎖ＣＤＲを含む。
【０１６３】
例となる抗原結合タンパク質
一態様によると、（ａ）１つ以上の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）であって、（ｉ）配列番号６０３〜６５５からなる群から選択されるＣＤＲＨ１、（ｉｉ）配列番号６５６〜７３２からなる群から選択されるＣＤＲＨ２、（ｉｉｉ）配列番号７３３〜８１３からなる群から選択されるＣＤＲＨ３、ならびに（ｉｖ）１０、９、８、７、６、５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換、欠失、挿入、およびそれらの組み合わせを含む（ｉ）、（ｉｉ）、および（ｉｉｉ）のＣＤＲＨ、のうちの１つ以上を含む、１つ以上の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）、（ｂ）１つ以上の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）であって、（ｉ）配列番号８１４〜８９３からなる群から選択されるＣＤＲＬ１、（ｉｉ）配列番号８９４〜９４６のうちの１つ以上を含むＣＤＲＬ２、（ｉｉｉ）配列番号９４７〜１０２０のうちの１つ以上を含むＣＤＲＬ３、ならびに（ｉｖ）１０、９、８、７、６、５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換、欠失、もしくは挿入、およびそれらの組み合わせを含む（ｉ）、（ｉｉ）、および（ｉｉｉ）のＣＤＲＬ、のうちの１つ以上を含む、１つ以上の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）、または（ｃ）１つ以上の（ａ）の重鎖ＣＤＲＨおよび１つ以上の（ｂ）の軽鎖ＣＤＲＬを含む、単離された抗原結合タンパク質。
【０１６４】
別の実施形態において、ＣＤＲＨは、配列番号６０３〜８１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する、および／またはＣＤＲＬは、配列番号８１４〜１０２０からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する。さらなる実施形態において、ＶＨは、配列番号３１６〜４０９からなる群から選択される、および／またはＶＬは、配列番号２１７〜３１５からなる群から選択される。
【０１６５】
一態様によると、（ａ）１つ以上の可変重鎖（ＶＨ）であって、（ｉ）配列番号３１６〜４０９、ならびに（ｉｉ）１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換、欠失、挿入、およびそれらの組み合わせを含む（ｉ）のＶＨ、のうちの１つ以上を含む、１つ以上の可変重鎖（ＶＨ）、（ｂ）１つ以上の可変軽鎖（ＶＬ）であって、（ｉ）配列番号２１７〜３１５、ならびに（ｉｉ）１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換、欠失、挿入、およびそれらの組み合わせを含む（ｉ）のＶＬからなる群から選択される、１つ以上の可変軽鎖（ＶＬ）、または（ｃ）１つ以上の（ａ）の可変重鎖および１つ以上の（ｂ）の可変軽鎖、を含む、単離された抗原結合タンパク質。
【０１６６】
別の実施形態において、可変重鎖（ＶＨ）は、配列番号３６〜４０９からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する、および／または可変軽鎖（ＶＬ）は、配列番号２１７〜３１５からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する。
【０１６７】
一態様において、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＲＦ２ｃ、およびＦＧＦＲ３ｃに由来する１つ以上のアミノ酸残基を含む、直線状または３次元エピトープに特異的に結合する、抗原結合タンパク質もまた、提供される。
【０１６８】
一態様において、β−クロトに由来する１つ以上のアミノ酸残基を含む、直線状または３次元エピトープに特異的に結合する、抗原結合タンパク質もまた、提供される。
【０１６９】
別の態様において、β−クロトに由来する１つ以上のアミノ酸残基と、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、およびＦＧＦＲ３ｃに由来する１つ以上のアミノ酸残基の両方を含む、直線状または３次元エピトープに特異的に結合する、単離された抗原結合タンパク質もまた、提供される。
【０１７０】
さらに別の実施形態において、本明細書に上述された、単離された抗原結合タンパク質は、本明細書に開示されるＣＤＲＨコンセンサス配列のうちの少なくとも１つを含む第１のアミノ酸配列と、本明細書に開示されるＣＤＲＬコンセンサス配列のうちの少なくとも１つを含む第２のアミノ酸配列と、を含む。
【０１７１】
一態様において、第１のアミノ酸配列は、ＣＤＲＨコンセンサス配列のうち少なくとも２つを含む、および／または第２のアミノ酸配列は、ＣＤＲＬコンセンサス配列のうち少なくとも２つを含む。ある特定の実施形態において、第１および第２のアミノ酸配列は、互いに共有結合される。
【０１７２】
さらなる実施形態において、単離された抗原結合タンパク質の第１のアミノ酸配列は、各クローンについて表５に示されるＣＤＲＨ３、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ１の対合を含む、ならびに／または単離された抗原結合タンパク質の第２のアミノ酸配列は、各クローンについて表４に示されるＣＤＲＬ３、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ１の対合を含む。
【０１７３】
さらなる実施形態において、抗原結合タンパク質は、表３Ａおよび４Ａに示される重鎖配列Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８、Ｈ９、Ｈ１０、Ｈ１１、Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｈ１５、Ｈ１６、Ｈ１７またはＨ１８、Ｈ１９、Ｈ２０、Ｈ２１、Ｈ２２、Ｈ２３、Ｈ２４、Ｈ２５、Ｈ２６、Ｈ２７、Ｈ２８、Ｈ２９、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３４、Ｈ３５、Ｈ３６、Ｈ３７、Ｈ３８、Ｈ３９、Ｈ４０、Ｈ４１、Ｈ４２、Ｈ４３、Ｈ４４、Ｈ４５、Ｈ１４６、Ｈ４６、Ｈ４８、Ｈ４９、Ｈ５０、Ｈ５１、Ｈ５２、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５５、Ｈ５６、Ｈ５７、Ｈ５８、Ｈ５９、Ｈ６０、Ｈ６１、Ｈ６２、Ｈ６３、Ｈ６４、Ｈ６５、Ｈ６６、Ｈ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｈ７０、Ｈ７１、Ｈ７２、Ｈ７３、Ｈ７４、Ｈ７５、Ｈ７６、Ｈ７７、Ｈ７８、Ｈ７９、Ｈ８０、Ｈ８１、Ｈ８２、Ｈ８３、Ｈ８４、Ｈ８５、Ｈ８６、Ｈ８７、Ｈ８８、Ｈ８９、Ｈ９０、Ｈ９１、Ｈ９２、Ｈ９３、およびＨ９４のうち少なくとも２つのＣＤＲＨ配列を含む。
【０１７４】
なおもさらなる実施形態において、抗原結合タンパク質は、表３Ｂおよび４Ｂに示される軽鎖配列Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５、Ｌ６、Ｌ７、Ｌ８、Ｌ９、Ｌ１０、Ｌ１１、Ｌ１２、Ｌ１３、Ｌ１４、Ｌ１５、Ｌ１６、Ｌ１７、Ｌ１８、Ｌ１９、Ｌ２０、Ｌ２１、Ｌ２２、Ｌ２３、Ｌ２４、Ｌ２５、Ｌ２６、Ｌ２７、Ｌ２８、Ｌ２９、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３３、Ｌ３４、Ｌ３５、Ｌ３６、Ｌ３７、Ｌ３８、Ｌ３９、Ｌ４０、Ｌ４１、Ｌ４２、Ｌ４３、Ｌ４４、Ｌ４５、Ｌ４６、Ｌ４７、Ｌ４８、Ｌ４９、Ｌ５０、Ｌ５１、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５４、Ｌ５５、Ｌ５６、Ｌ５７、Ｌ５８、Ｌ５９、Ｌ６０、Ｌ６１、Ｌ６２、Ｌ６３、Ｌ６４、Ｌ６５、Ｌ６６、Ｌ６７、Ｌ６８、Ｌ６９、Ｌ７０、Ｌ７１、Ｌ７２、Ｌ７３、Ｌ７４、Ｌ７５、Ｌ７６、Ｌ７７、Ｌ７８、Ｌ７９、Ｌ８０、Ｌ８１、Ｌ８２、Ｌ８３、Ｌ８４、Ｌ８５、Ｌ８６、Ｌ８７、Ｌ８８、Ｌ８９、Ｌ９０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４、Ｌ９５、Ｌ９６、Ｌ９７、Ｌ９８、Ｌ９９、およびＬ１００のうち少なくとも２つのＣＤＲＬ配列を含む。
【０１７５】
なおもさらなる実施形態において、抗原結合タンパク質は、表３Ａおよび４Ａに示される重鎖配列Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８、Ｈ９、Ｈ１０、Ｈ１１、Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｈ１５、Ｈ１６、Ｈ１７またはＨ１８、Ｈ１９、Ｈ２０、Ｈ２１、Ｈ２２、Ｈ２３、Ｈ２４、Ｈ２５、Ｈ２６、Ｈ２７、Ｈ２８、Ｈ２９、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３４、Ｈ３５、Ｈ３６、Ｈ３７、Ｈ３８、Ｈ３９、Ｈ４０、Ｈ４１、Ｈ４２、Ｈ４３、Ｈ４４、Ｈ４５、Ｈ１４６、Ｈ４６、Ｈ４８、Ｈ４９、Ｈ５０、Ｈ５１、Ｈ５２、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５５、Ｈ５６、Ｈ５７、Ｈ５８、Ｈ５９、Ｈ６０、Ｈ６１、Ｈ６２、Ｈ６３、Ｈ６４、Ｈ６５、Ｈ６６、Ｈ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｈ７０、Ｈ７１、Ｈ７２、Ｈ７３、Ｈ７４、Ｈ７５、Ｈ７６、Ｈ７７、Ｈ７８、Ｈ７９、Ｈ８０、Ｈ８１、Ｈ８２、Ｈ８３、Ｈ８４、Ｈ８５、Ｈ８６、Ｈ８７、Ｈ８８、Ｈ８９、Ｈ９０、Ｈ９１、Ｈ９２、Ｈ９３、およびＨ９４のうち少なくとも２つのＣＤＲＨ配列と、表３Ｂおよび４Ｂに示される軽鎖配列Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５、Ｌ６、Ｌ７、Ｌ８、Ｌ９、Ｌ１０、Ｌ１１、Ｌ１２、Ｌ１３、Ｌ１４、Ｌ１５、Ｌ１６、Ｌ１７、Ｌ１８、Ｌ１９、Ｌ２０、Ｌ２１、Ｌ２２、Ｌ２３、Ｌ２４、Ｌ２５、Ｌ２６、Ｌ２７、Ｌ２８、Ｌ２９、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３３、Ｌ３４、Ｌ３５、Ｌ３６、Ｌ３７、Ｌ３８、Ｌ３９、Ｌ４０、Ｌ４１、Ｌ４２、Ｌ４３、Ｌ４４、Ｌ４５、Ｌ４６、Ｌ４７、Ｌ４８、Ｌ４９、Ｌ５０、Ｌ５１、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５４、Ｌ５５、Ｌ５６、Ｌ５７、Ｌ５８、Ｌ５９、Ｌ６０、Ｌ６１、Ｌ６２、Ｌ６３、Ｌ６４、Ｌ６５、Ｌ６６、Ｌ６７、Ｌ６８、Ｌ６９、Ｌ７０、Ｌ７１、Ｌ７２、Ｌ７３、Ｌ７４、Ｌ７５、Ｌ７６、Ｌ７７、Ｌ７８、Ｌ７９、Ｌ８０、Ｌ８１、Ｌ８２、Ｌ８３、Ｌ８４、Ｌ８５、Ｌ８６、Ｌ８７、Ｌ８８、Ｌ８９、Ｌ９０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４、Ｌ９５、Ｌ９６、Ｌ９７、Ｌ９８、Ｌ９９、およびＬ１００のうち少なくとも２つのＣＤＲＬと、を含む。
【０１７６】
さらに別の実施形態において、抗原結合タンパク質は、表３Ａおよび４Ａに示される重鎖配列Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８、Ｈ９、Ｈ１０、Ｈ１１、Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｈ１５、Ｈ１６、Ｈ１７またはＨ１８、Ｈ１９、Ｈ２０、Ｈ２１、Ｈ２２、Ｈ２３、Ｈ２４、Ｈ２５、Ｈ２６、Ｈ２７、Ｈ２８、Ｈ２９、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３４、Ｈ３５、Ｈ３６、Ｈ３７、Ｈ３８、Ｈ３９、Ｈ４０、Ｈ４１、Ｈ４２、Ｈ４３、Ｈ４４、Ｈ４５、Ｈ１４６、Ｈ４６、Ｈ４８、Ｈ４９、Ｈ５０、Ｈ５１、Ｈ５２、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５５、Ｈ５６、Ｈ５７、Ｈ５８、Ｈ５９、Ｈ６０、Ｈ６１、Ｈ６２、Ｈ６３、Ｈ６４、Ｈ６５、Ｈ６６、Ｈ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｈ７０、Ｈ７１、Ｈ７２、Ｈ７３、Ｈ７４、Ｈ７５、Ｈ７６、Ｈ７７、Ｈ７８、Ｈ７９、Ｈ８０、Ｈ８１、Ｈ８２、Ｈ８３、Ｈ８４、Ｈ８５、Ｈ８６、Ｈ８７、Ｈ８８、Ｈ８９、Ｈ９０、Ｈ９１、Ｈ９２、Ｈ９３、およびＨ９４のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３配列を含む。
【０１７７】
なおも別の実施形態において、抗原結合タンパク質は、表３Ｂおよび４Ｂに示される軽鎖配列Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５、Ｌ６、Ｌ７、Ｌ８、Ｌ９、Ｌ１０、Ｌ１１、Ｌ１２、Ｌ１３、Ｌ１４、Ｌ１５、Ｌ１６、Ｌ１７、Ｌ１８、Ｌ１９、Ｌ２０、Ｌ２１、Ｌ２２、Ｌ２３、Ｌ２４、Ｌ２５、Ｌ２６、Ｌ２７、Ｌ２８、Ｌ２９、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３３、Ｌ３４、Ｌ３５、Ｌ３６、Ｌ３７、Ｌ３８、Ｌ３９、Ｌ４０、Ｌ４１、Ｌ４２、Ｌ４３、Ｌ４４、Ｌ４５、Ｌ４６、Ｌ４７、Ｌ４８、Ｌ４９、Ｌ５０、Ｌ５１、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５４、Ｌ５５、Ｌ５６、Ｌ５７、Ｌ５８、Ｌ５９、Ｌ６０、Ｌ６１、Ｌ６２、Ｌ６３、Ｌ６４、Ｌ６５、Ｌ６６、Ｌ６７、Ｌ６８、Ｌ６９、Ｌ７０、Ｌ７１、Ｌ７２、Ｌ７３、Ｌ７４、Ｌ７５、Ｌ７６、Ｌ７７、Ｌ７８、Ｌ７９、Ｌ８０、Ｌ８１、Ｌ８２、Ｌ８３、Ｌ８４、Ｌ８５、Ｌ８６、Ｌ８７、Ｌ８８、Ｌ８９、Ｌ９０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４、Ｌ９５、Ｌ９６、Ｌ９７、Ｌ９８、Ｌ９９、およびＬ１００のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３配列を含む。
【０１７８】
さらに別の実施形態において、抗原結合タンパク質は、以下のＶＨとＶＬとの対を含む抗原結合タンパク質の全ての６つのＣＤＲを含む：表２Ａおよび２Ｂ、ならびに表４Ａおよび４Ｂに示される、ＶＬ１とＶＨ１、ＶＬ２とＶＨ１、ＶＬ３とＶＨ２またはＶＨ３、ＶＬ４とＶＨ４、ＶＬ５とＶＨ５、ＶＬ６とＶＨ６、ＶＬ７とＶＨ６、ＶＬ８とＶＨ７またはＶＨ８、ＶＬ９とＶＨ９、ＶＬ１０とＶＨ９、ＶＬ１１とＶＨ１０、ＶＬ１２とＶＨ１１、ＶＬ１３とＶＨ１２、ＶＬ１３とＶＨ１４、ＶＬ１４とＶＨ１３、ＶＬ１５とＶＨ１４、ＶＬ１６とＶＨ１５、ＶＬ１７とＶＨ１６、ＶＬ１８とＶＨ１７、ＶＬ１９とＶＨ１８、ＶＬ２０とＶＨ１９、ＶＬ２１とＶＨ２０、ＶＬ２２とＶＨ２１、ＶＬ２３とＶＨ２２、ＶＬ２４とＶＨ２３、ＶＬ２５とＶＨ２４、ＶＬ２６とＶＨ２５、ＶＬ２７とＶＨ２６、ＶＬ２８とＶＨ２７、ＶＬ２９とＶＨ２８、ＶＬ３０とＶＨ２９、ＶＬ３１とＶＨ３０、ＶＬ３２とＶＨ３１、ＶＬ３３とＶＨ３２、ＶＬ３４とＶＨ３３、ＶＬ３５とＶＨ３４、ＶＬ３６とＶＨ３５、ＶＬ３７とＶＨ３６、ＶＬ３８とＶＨ３７、ＶＬ３９とＶＨ３８、ＶＬ４０とＶＨ３９、ＶＬ４１とＶＨ４０、ＶＬ４２とＶＨ４１、ＶＬ４３とＶＨ４２、ＶＬ４４とＶＨ４３、ＶＬ４５とＶＨ４４、ＶＬ４６とＶＨ４５、ＶＬ４７とＶＨ４６、ＶＬ４８とＶＨ４７、ＶＬ４９とＶＨ４８、ＶＬ５０とＶＨ４９、ＶＬ５１とＶＨ５０、ＶＬ５２とＶＨ５１、ＶＬ５３とＶＨ５２、ＶＬ５４とＶＨ５３、ＶＬ５５とＶＨ５４、ＶＬ５６とＶＨ５４、ＶＬ５７とＶＨ５４、ＶＬ５８とＶＨ５５、ＶＬ５９とＶＨ５６、ＶＬ６０とＶＨ５７、ＶＬ６１とＶＨ５８、ＶＬ６２とＶＨ５９、ＶＬ６３とＶＨ６０、ＶＬ６４とＶＨ１、ＶＬ６５とＶＨ６２、ＶＬ６６とＶＨ６３、ＶＬ６７とＶＨ６４、ＶＬ６８とＶＨ６５、ＶＬ６９とＶＨ６６、ＶＬ７０とＶＨ６７、ＶＬ７１とＶＨ６８、ＶＬ７２とＶＨ６９、ＶＬ７３とＶＨ７０、ＶＬ７４とＶＨ７０、ＶＬ７５とＶＨ７０、ＶＬ７６とＶＨ７１、ＶＬ７７とＶＨ７２、ＶＬ７８とＶＨ７３、ＶＬ７９とＶＨ７４、ＶＬ８０とＶＨ７５、ＶＬ８１とＶＨ７６、ＶＬ８２とＶＨ７７、ＶＬ８３とＶＨ７８、ＶＬ８４とＶＨ７９、ＶＬ８５とＶＨ８０、ＶＬ８６とＶＨ８１、ＶＬ８７とＶＨ８２、ＶＬ８８とＶＨ８６、ＶＬ８９とＶＨ８３、ＶＬ９０とＶＨ８４、ＶＬ９１とＶＨ８５、ＶＬ９２とＶＨ８７、ＶＬ９３とＶＨ８８、ＶＬ９４とＶＨ８８、ＶＬ９５とＶＨ８９、ＶＬ９６とＶＨ９０、ＶＬ９７とＶＨ９１、ＶＬ９８とＶＨ９２、ＶＬ９９とＶＨ９３、およびＶＬ１００とＶＨ９４。
【０１７９】
【表７Ａ】
2014518640.tif 000215
2014518640.tif 000216
2014518640.tif 000217
2014518640.tif 000218
2014518640.tif 000219
【０１８０】
【表７Ｂ】
2014518640.tif 000220
2014518640.tif 000221
2014518640.tif 000222
2014518640.tif 000223
2014518640.tif 000224
【０１８１】
一態様において、本明細書に提供される、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する単離された抗原結合タンパク質は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組み換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、多重特異性抗体、またはそれらの抗体フラグメントであり得る。
【０１８２】
別の実施形態において、本明細書に提供される、単離された抗原結合タンパク質の抗体フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディ、または一本鎖抗体分子であり得る。
【０１８３】
さらなる実施形態において、本明細書に提供される、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する単離された抗原結合タンパク質は、ヒト抗体であり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４タイプのものであり得る。
【０１８４】
別の実施形態において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する単離された抗原結合タンパク質は、表１Ａ〜１Ｂに記載される軽鎖または重鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する単離された抗原結合タンパク質は、表２Ａ〜２Ｂに列挙されたもの等の可変軽鎖または可変重鎖ドメインを含む。さらに他の実施形態において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する、単離された抗原結合タンパク質は、以下の表３Ａ〜３Ｂ、４Ａ〜４Ｂに記載される。１、２、もしくは３つのＣＤＲＨ、または１、２、もしくは３つのＣＤＲＬを含む。このような抗原結合タンパク質、および実際に本明細書に開示されるいずれの抗原結合タンパク質も、１つ以上のＰＥＧ分子、例えば、５Ｋ、１０Ｋ、２０Ｋ、４０Ｋ、５０Ｋ、６０Ｋ、８０Ｋ、１００Ｋ、または１００Ｋ超からなる群から選択される分子量を有するＰＥＧ分子で、ペグ化することができる。
【０１８５】
さらに別の態様において、本明細書に提供される、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つを含む複合体に特異的に結合する、いずれの抗原結合タンパク質も、標識基と結合し得、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体の個々のタンパク質構成要素の細胞外部分への結合について、本明細書に提供される単離された抗原結合タンパク質のうちの１つの抗原結合タンパク質と競合し得る。一実施形態において、本明細書に提供される単離された抗原結合タンパク質は、患者に投与されると、血中グルコースレベルを低減させる、トリグリセリドおよびコレステロールのレベルを減少させる、または他の血糖パラメーターおよび心血管危険因子を改善することができる。
【０１８６】
理解されるように、表３Ａ〜３Ｂおよび４Ａ〜４Ｂに提供される１つを上回るＣＤＲを含むいずれの抗原結合タンパク質についても、表示される配列から独立して選択されるＣＤＲのいずれの組み合わせも有用であり得る。したがって、１、２、３、４、５、または６つの独立して選択されるＣＤＲを有する抗原結合タンパク質を、生成することができる。しかしながら、当業者には理解されるように、特定の実施形態では、一般的に、非反復的なＣＤＲの組み合わせが利用され、例えば、抗原結合タンパク質は、一般的に、２つのＣＤＲＨ２領域を用いて作製されない。
【０１８７】
本明細書に提供される、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質のうちのいくつかを、以下にさらに詳細に説明する。
【０１８８】
抗原結合タンパク質および結合エピトープおよび結合ドメイン
抗原結合タンパク質が、複合体β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとの複合体上のエピトープまたはこのような複合体のタンパク質成分の細胞外ドメインに結合すると言われる場合、抗原結合タンパク質が、β−クロトとＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、またはＦＧＦＲ３ｃ）とを含む複合体の特定の部分、またはこのような複合体の細胞外ドメインに特異的に結合することを意味する。いくつかの実施形態において、例えば、抗原結合タンパク質がβ−クロトのみに結合するある特定の事例では、抗原結合タンパク質は、特定の残基（例えば、β−クロトの特定のセグメント）からなるポリペプチドに特異的に結合し得る。他の実施形態において、例えば、抗原結合タンパク質がβ−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとの両方と相互作用するある特定の事例では、抗原結合タンパク質は、抗原結合タンパク質が認識する受容体に応じて、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとの両方の残基、残基配列、または領域に、結合することができる。さらに他の実施形態において、抗原結合タンパク質は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つ、例えば、ＦＧＦＲ１ｃとを含む複合体の残基、配列もしくは残基、または領域に結合することになる。
【０１８９】
前述の実施形態のいずれにおいても、そのような抗原結合タンパク質は、β−クロトまたはβ−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体、あるいは列挙されたタンパク質または複合体の細胞外ドメインの、全ての残基に接触する必要はない。β−クロトまたはβ−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体、または列挙されたタンパク質または複合体の細胞外ドメイン内のひとつひとつのアミノ酸置換または欠失が、必ずしも結合親和性に重大な影響を及ぼすわけでもない。
【０１９０】
抗原結合タンパク質のエピトープ特異性および結合ドメイン（複数可）は、種々の方法によって判定することができる。いくつかの方法は、例えば、抗原の切断部分を使用し得る。他の方法は、アラニンスキャニングまたはアルギニンスキャニング型のアプローチを採用することによって、または種々のドメイン、領域、もしくはアミノ酸が、２つのタンパク質間（例えば、抗原もしくは標的タンパク質のうちの１つ以上のマウスおよびヒト形態）で交換された、キメラタンパク質の生成およびその研究によって、またはプロテアーゼ保護アッセイによって等、１つ以上の特定の残基が突然変異した抗原を利用する。
【０１９１】
競合する抗原結合タンパク質
別の態様において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体への結合について、例示した抗体または機能性フラグメントのうちの１つと競合する、抗原結合タンパク質を提供する。このような抗原結合タンパク質はまた、本明細書に例示された抗原結合タンパク質のうちの１つと同じエピトープ、または重複するエピトープに結合し得る。例示された抗原結合タンパク質と競合するか、またはそれと同じエピトープに結合する、抗原結合タンパク質およびフラグメントは、類似の機能特性を示すことが予想される。例示された抗原結合タンパク質およびフラグメントには、表１、２、３、および４のものを含む、本明細書に提供される重鎖および軽鎖Ｈ１〜Ｈ９４およびＬ１〜Ｌ１００、可変領域ドメインＶＬ１〜ＶＬ１００およびＶＨ１〜ＶＨ９４、ならびにＣＤＲを有するものが含まれる。したがって、具体的な例として、提供される抗原結合タンパク質は、以下のものを含む抗体と競合するものが含まれる：
（ａ）以下の表３Ａおよび３Ｂ、ならびに４Ａおよび４Ｂに列挙された抗原結合タンパク質について列挙される、ＣＤＲのうちの、１、２、３、４、５、または６つ全て、
（ｂ）ＶＬ１〜ＶＬ１００およびＶＨ１〜ＶＨ９４から選択され、以下の表２Ａおよび２Ｂに列挙された抗原結合タンパク質について列挙される、ＶＨおよびＶＬ、または
（ｃ）以下の表１Ａおよび１Ｂに列挙される抗原結合タンパク質に対して指定される、２つの軽鎖および２つの重鎖。
【０１９２】
したがって、一実施形態において、本開示は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体への結合について参照抗体と競合する、抗原結合タンパク質（ヒト抗体を含む）を提供し、参照抗体は、ＶＬ１とＶＨ１、ＶＬ２とＶＨ１、ＶＬ３とＶＨ２またはＶＨ３、ＶＬ４とＶＨ４、ＶＬ５とＶＨ５、ＶＬ６とＶＨ６、ＶＬ７とＶＨ６、ＶＬ８とＶＨ７またはＶＨ８、ＶＬ９とＶＨ９、ＶＬ１０とＶＨ９、ＶＬ１１とＶＨ１０、ＶＬ１２とＶＨ１１、ＶＬ１３とＶＨ１２、ＶＬ１３とＶＨ１４、ＶＬ１４とＶＨ１３、ＶＬ１５とＶＨ１４、ＶＬ１６とＶＨ１５、ＶＬ１７とＶＨ１６、ＶＬ１８とＶＨ１７、ＶＬ１９とＶＨ１８、ＶＬ２０とＶＨ１９、ＶＬ２１とＶＨ２０、ＶＬ２２とＶＨ２１、ＶＬ２３とＶＨ２２、ＶＬ２４とＶＨ２３、ＶＬ２５とＶＨ２４、ＶＬ２６とＶＨ２５、ＶＬ２７とＶＨ２６、ＶＬ２８とＶＨ２７、ＶＬ２９とＶＨ２８、ＶＬ３０とＶＨ２９、ＶＬ３１とＶＨ３０、ＶＬ３２とＶＨ３１、ＶＬ３３とＶＨ３２、ＶＬ３４とＶＨ３３、ＶＬ３５とＶＨ３４、ＶＬ３６とＶＨ３５、ＶＬ３７とＶＨ３６、ＶＬ３８とＶＨ３７、ＶＬ３９とＶＨ３８、ＶＬ４０とＶＨ３９、ＶＬ４１とＶＨ４０、ＶＬ４２とＶＨ４１、ＶＬ４３とＶＨ４２、ＶＬ４４とＶＨ４３、ＶＬ４５とＶＨ４４、ＶＬ４６とＶＨ４５、ＶＬ４７とＶＨ４６、ＶＬ４８とＶＨ４７、ＶＬ４９とＶＨ４８、ＶＬ５０とＶＨ４９、ＶＬ５１とＶＨ５０、５２とＶＨ５１、ＶＬ５３とＶＨ５２、ＶＬ５４とＶＨ５３、ＶＬ５５と５４、およびＶＬ５６とＶＨ５４、ＶＬ５７とＶＨ５４、ＶＬ５８とＶＨ５５、ＶＬ５９とＶＨ５６、ＶＬ６０とＶＨ５７、ＶＬ６１とＶＨ５８、ＶＬ６２とＶＨ５９、ＶＬ６３とＶＨ６０、ＶＬ６４とＶＨ１、ＶＬ６５とＶＨ６２、ＶＬ６６とＶＨ６３、ＶＬ６７とＶＨ６４、ＶＬ６８とＶＨ６５、ＶＬ６９とＶＨ６６、ＶＬ７０とＶＨ６７、ＶＬ７１とＶＨ６８、ＶＬ７２とＶＨ６９、ＶＬ７３とＶＨ７０、ＶＬ７４とＶＨ７０、およびＶＬ７５とＶＨ７０、ＶＬ７６とＶＨ７１、ＶＬ７７とＶＨ７２、ＶＬ７８とＶＨ７３、ＶＬ７９とＶＨ７４、ＶＬ８０とＶＨ７５、ＶＬ８１とＶＨ７６、ＶＬ８２とＶＨ７７、ＶＬ８３とＶＨ７８、ＶＬ８４とＶＨ７９、ＶＬ８５とＶＨ８０、ＶＬ８６とＶＨ８１、ＶＬ８７とＶＨ８２、ＶＬ８８とＶＨ８６、ＶＬ８９とＶＨ８３、ＶＬ９０とＶＨ８４、ＶＬ９１とＶＨ８５、ＶＬ９２とＶＨ８７、ＶＬ９３とＶＨ８８、ＶＬ９４とＶＨ８８、ＶＬ９５とＶＨ８９、ＶＬ９６とＶＨ９０、ＶＬ９７とＶＨ９１、ＶＬ９８とＶＨ９２、ＶＬ９９とＶＨ９３、およびＶＬ１００とＶＨ９４からなる群から選択される、軽鎖および重鎖の可変ドメイン配列の組み合わせを含む。
【０１９３】
別の実施形態において、本開示は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体への結合について参照抗体と競合する、抗原結合タンパク質（ヒト抗体を含む）を提供し、参照抗体は、６３Ｇ８、６４Ａ８、６７Ｂ４、６８Ｄ３、６４Ｅ６、６５Ｅ８、６５Ｆ１１、６７Ｇ７、６３Ｂ６、６４Ｄ４、６５Ｃ３、６８Ｄ５、６３Ｅ６、６６Ｆ７、６４Ｈ５、６５Ｇ４、６７Ｇ１０ｖ１、６７Ｇ１０ｖ２、６６Ｂ４、６６Ｇ２、６８Ｇ５、６３Ｆ５、６６Ｆ６、６５Ｃ１、６４Ａ７、６６Ｄ４、６５Ｂ１、６７Ａ４、６５Ｂ４、６３Ａ１０、６５Ｈ１１、６４Ｃ８、６５Ｅ３、６５Ｄ４、６５Ｄ１、６７Ｇ８、６５Ｂ７、６４Ａ６、６５Ｆ９、６７Ｆ５、６４Ｂ１０、６８Ｃ８、６７Ａ５、６７Ｃ１０、６４Ｈ６、６３Ｆ９、６７Ｆ６、４８Ｈ１１、５２Ａ８、５２Ｆ８、４９Ｈ１２、５４Ａ１、５５Ｇ９、４９Ｃ８、５２Ｈ１、６０Ｇ５．２、４９Ｇ３、５９Ａ１０、４８Ｆ８、５３Ｂ９、５６Ｂ４、５７Ｅ７、５７Ｆ１１、５９Ｃ９、５８Ａ５、５７Ａ４、５７Ｆ９、５１Ｇ２、５６Ａ７、５６Ｅ４、５４Ｈ１０、５５Ｄ１、４８Ｈ３、５３Ｃ１１、５９Ｇ１０．３、５１Ｃ１０．１、５９Ｄ１０ｖ１、５９Ｄ１０ｖ２、６０Ｆ９、４８Ｂ４、５２Ｄ６、６１Ｇ５、５９Ｇ１０．２、５１Ａ８、５３Ｈ５．２、５３Ｆ６、５６Ｃ１１、４９Ａ１０、４８Ｄ４、４９Ｇ２、５０Ｃ１２、５５Ｇ１１、５２Ｃ１、５５Ｅ９、６０Ｄ７、５１Ｃ１０．２、５５Ｄ３、５７Ｂ１２、５２Ｃ５、６０Ｇ５．１、５５Ｅ４、４９Ｂ１１、５０Ｈ１０、５３Ｃ１、５６Ｇ１、４８Ｆ３、４８Ｃ９、４９Ａ１２、５１Ｅ２、５１Ｅ５、５３Ｈ５．３、５６Ｇ３．３、５５Ｂ１０、５２Ｂ８、５５Ｇ５、５２Ｈ２、５６Ｇ３．２、６Ｅ７、５７Ｄ９、６１Ｈ５、４８Ｇ４、５０Ｇ１、５８Ｃ２、５０Ｄ４、５０Ｇ５ｖ１、５０Ｇ５ｖ２、５１Ｃ１、５３Ｃ３．２、５４Ｈ１０．３、５５Ａ７、５５Ｅ６、６１Ｅ１、５３Ｃ３．１、４９Ｈ４、および５１Ｅ２である。
【０１９４】
さらなる実施形態において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に、参照抗体と実質的に同じＫｄで結合する、インビトロでのＥＬＫ−ルシフェラーゼアッセイにおいてＦＧＦ２１様シグナル伝達を参照抗体と同程度に生じさせる、血中グルコースを低下させる、血清脂質レベルを低下させる、および／またはβ−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体への結合について前記参照抗体と競合する、ヒト抗体等の単離された抗原結合タンパク質を提供し、参照抗体は、６３Ｇ８、６４Ａ８、６７Ｂ４、６８Ｄ３、６４Ｅ６、６５Ｅ８、６５Ｆ１１、６７Ｇ７、６３Ｂ６、６４Ｄ４、６５Ｃ３、６８Ｄ５、６３Ｅ６、６６Ｆ７、６４Ｈ５、６５Ｇ４、６７Ｇ１０ｖ１、６７Ｇ１０ｖ２、６６Ｂ４、６６Ｇ２、６８Ｇ５、６３Ｆ５、６６Ｆ６、６５Ｃ１、６４Ａ７、６６Ｄ４、６５Ｂ１、６７Ａ４、６５Ｂ４、６３Ａ１０、６５Ｈ１１、６４Ｃ８、６５Ｅ３、６５Ｄ４、６５Ｄ１、６７Ｇ８、６５Ｂ７、６４Ａ６、６５Ｆ９、６７Ｆ５、６４Ｂ１０、６８Ｃ８、６７Ａ５、６７Ｃ１０、６４Ｈ６、６３Ｆ９、６７Ｆ６、４８Ｈ１１、５２Ａ８、５２Ｆ８、４９Ｈ１２、５４Ａ１、５５Ｇ９、４９Ｃ８、５２Ｈ１、６０Ｇ５．２、４９Ｇ３、５９Ａ１０、４８Ｆ８、５３Ｂ９、５６Ｂ４、５７Ｅ７、５７Ｆ１１、５９Ｃ９、５８Ａ５、５７Ａ４、５７Ｆ９、５１Ｇ２、５６Ａ７、５６Ｅ４、５４Ｈ１０、５５Ｄ１、４８Ｈ３、５３Ｃ１１、５９Ｇ１０．３、５１Ｃ１０．１、５９Ｄ１０ｖ１、５９Ｄ１０ｖ２、６０Ｆ９、４８Ｂ４、５２Ｄ６、６１Ｇ５、５９Ｇ１０．２、５１Ａ８、５３Ｈ５．２、５３Ｆ６、５６Ｃ１１、４９Ａ１０、４８Ｄ４、４９Ｇ２、５０Ｃ１２、５５Ｇ１１、５２Ｃ１、５５Ｅ９、６０Ｄ７、５１Ｃ１０．２、５５Ｄ３、５７Ｂ１２、５２Ｃ５、６０Ｇ５．１、５５Ｅ４、４９Ｂ１１、５０Ｈ１０、５３Ｃ１、５６Ｇ１、４８Ｆ３、４８Ｃ９、４９Ａ１２、５１Ｅ２、５１Ｅ５、５３Ｈ５．３、５６Ｇ３．３、５５Ｂ１０、５２Ｂ８、５５Ｇ５、５２Ｈ２、５６Ｇ３．２、６Ｅ７、５７Ｄ９、６１Ｈ５、４８Ｇ４、５０Ｇ１、５８Ｃ２、５０Ｄ４、５０Ｇ５ｖ１、５０Ｇ５ｖ２、５１Ｃ１、５３Ｃ３．２、５４Ｈ１０．３、５５Ａ７、５５Ｅ６、６１Ｅ１、５３Ｃ３．１、４９Ｈ４、および５１Ｅ２からなる群から選択される。
【０１９５】
抗体と競合する能力は、本明細書に記載のもの等、任意の好適なアッセイを使用して判定することができ、抗原結合タンパク質６３Ｇ８、６４Ａ８、６７Ｂ４、６８Ｄ３、６４Ｅ６、６５Ｅ８、６５Ｆ１１、６７Ｇ７、６３Ｂ６、６４Ｄ４、６５Ｃ３、６８Ｄ５、６３Ｅ６、６６Ｆ７、６４Ｈ５、６５Ｇ４、６７Ｇ１０ｖ１、６７Ｇ１０ｖ２、６６Ｂ４、６６Ｇ２、６８Ｇ５、６３Ｆ５、６６Ｆ６、６５Ｃ１、６４Ａ７、６６Ｄ４、６５Ｂ１、６７Ａ４、６５Ｂ４、６３Ａ１０、６５Ｈ１１、６４Ｃ８、６５Ｅ３、６５Ｄ４、６５Ｄ１、６７Ｇ８、６５Ｂ７、６４Ａ６、６５Ｆ９、６７Ｆ５、６４Ｂ１０、６８Ｃ８、６７Ａ５、６７Ｃ１０、６４Ｈ６、６３Ｆ９、６７Ｆ６、４８Ｈ１１、５２Ａ８、５２Ｆ８、４９Ｈ１２、５４Ａ１、５５Ｇ９、４９Ｃ８、５２Ｈ１、６０Ｇ５．２、４９Ｇ３、５９Ａ１０、４８Ｆ８、５３Ｂ９、５６Ｂ４、５７Ｅ７、５７Ｆ１１、５９Ｃ９、５８Ａ５、５７Ａ４、５７Ｆ９、５１Ｇ２、５６Ａ７、５６Ｅ４、５４Ｈ１０、５５Ｄ１、４８Ｈ３、５３Ｃ１１、５９Ｇ１０．３、５１Ｃ１０．１、５９Ｄ１０ｖ１、５９Ｄ１０ｖ２、６０Ｆ９、４８Ｂ４、５２Ｄ６、６１Ｇ５、５９Ｇ１０．２、５１Ａ８、５３Ｈ５．２、５３Ｆ６、５６Ｃ１１、４９Ａ１０、４８Ｄ４、４９Ｇ２、５０Ｃ１２、５５Ｇ１１、５２Ｃ１、５５Ｅ９、６０Ｄ７、５１Ｃ１０．２、５５Ｄ３、５７Ｂ１２、５２Ｃ５、６０Ｇ５．１、５５Ｅ４、４９Ｂ１１、５０Ｈ１０、５３Ｃ１、５６Ｇ１、４８Ｆ３、４８Ｃ９、４９Ａ１２、５１Ｅ２、５１Ｅ５、５３Ｈ５．３、５６Ｇ３．３、５５Ｂ１０、５２Ｂ８、５５Ｇ５、５２Ｈ２、５６Ｇ３．２、６Ｅ７、５７Ｄ９、６１Ｈ５、４８Ｇ４、５０Ｇ１、５８Ｃ２、５０Ｄ４、５０Ｇ５ｖ１、５０Ｇ５ｖ２、５１Ｃ１、５３Ｃ３．２、５４Ｈ１０．３、５５Ａ７、５５Ｅ６、６１Ｅ１、５３Ｃ３．１、４９Ｈ４、および５１Ｅ２を、参照抗体として使用することができる。
【０１９６】
モノクローナル抗体
提供される抗原結合タンパク質は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合し、ＦＧＦ２１様シグナル伝達を様々な程度で誘発する、モノクローナル抗体を含む。モノクローナル抗体は、当該技術分野で既知の任意の技術を使用して、例えば、免疫付与スケジュールの終了後にトランスジェニック動物から摘出した脾臓細胞を不死化することによって、生成することができる。脾臓細胞は、当該技術分野で既知の任意の技術を使用して、例えば、それらを骨髄腫細胞と融合してハイブリドーマを生成することによって、不死化することができる。ハイブリドーマを生成する融合手順に使用するための骨髄腫細胞は、好ましくは、非抗体産生であり、高い融合効率と、所望される融合細胞（ハイブリドーマ）のみの成長を支持するある特定の選択培地において、それらが成長することができないようにする酵素欠損と、を有する。マウス融合に使用するために好適な細胞系の例には、Ｓｐ−２０、Ｐ３−Ｘ６３／Ａｇ８、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８．６５３、ＮＳ１／１．Ａｇ４  １、Ｓｐ２１０−Ａｇ１４、ＦＯ、ＮＳＯ／Ｕ、ＭＰＣ−１１、ＭＰＣ１１−Ｘ４５−ＧＴＧ１．７、およびＳ１９４／５ＸＸＯ  Ｂｕｌが挙げられ、ラット融合に使用される細胞系の例には、Ｒ２１０．ＲＣＹ３、Ｙ３−Ａｇ１．２．３、ＩＲ９８３Ｆ、および４Ｂ２１０が挙げられる。細胞融合に有用な他の細胞系は、Ｕ−２６６、ＧＭ１５００−ＧＲＧ２、ＬＩＣＲ−ＬＯＮ−ＨＭｙ２、およびＵＣ７２９−６である。
【０１９７】
いくつかの事例において、ハイブリドーマ細胞系は、動物（例えば、ヒト免疫グロブリン配列を有するトランスジェニック動物）を、（１）ＣＨＯ細胞に、配列番号４のヒト全長ＦＧＦＲ１ｃポリペプチドをコードするｃＤＮＡおよび配列番号７のヒトβ−クロトポリペプチドをコードするｃＤＮＡを、凍結前に細胞をＦＧＦ２１とともにインキュベートしてからトランスフェクトすることによって得られた（実施例２に示される）、全長ヒトＦＧＦＲ１ｃおよびβ−クロトを細胞表面に発現するＣＨＯトランスフェクタントの細胞結合受容体、または（２）全長ヒトβ−クロトと配列番号４のアミノ酸残基＃１４１〜＃８２２のポリペプチドを包含するヒトＦＧＦＲ１ｃのＮ末端切断形態とを発現する２９３Ｔトランスフェクタントの細胞結合受容体（実施例２に示される）を含む、免疫原で免疫付与し、免疫付与した動物から脾臓細胞を摘出し、摘出した脾臓細胞を骨髄腫細胞系に融合し、それによって、ハイブリドーマ細胞を生成し、ハイブリドーマ細胞からハイブリドーマ細胞系を確立し、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含み、ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発することができる複合体に結合する抗体を生成する、ハイブリドーマ細胞系を識別する（例えば、実施例４に記載のように）ことによって生成される。このようなハイブリドーマ細胞系、およびそれらによって生成されるモノクローナル抗体が、本開示の態様を構成する。
【０１９８】
ハイブリドーマ細胞系によって分泌されたモノクローナル抗体は、当該技術分野で既知の任意の技術によって精製することができる。ハイブリドーマまたはｍＡｂを、さらにスクリーニングして、ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発する能力等、特定の特性を有するｍＡｂを識別することができる。このようなスクリーニングの例を、本明細書に提供する。
【０１９９】
キメラおよびヒト化抗体
前述の配列に基づくキメラおよびヒト化抗体は、容易に生成することができる。一例は、キメラ抗体であり、これは、共有結合されて機能性免疫グロブリン軽鎖もしくは重鎖、またはその免疫学的機能性部分を生成する、異なる抗体に由来するタンパク質セグメントから構成される、抗体である。一般的に、重鎖および／または軽鎖の一部分は、特定の種に由来するか、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一もしくは相同であるが、鎖（複数可）の残りの部分は、別の種に由来するか、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と、同一もしくは相同である。キメラ抗体に関する方法については、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号およびＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８１：６８５１−６８５５を参照されたく、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。ＣＤＲのグラフトは、例えば、米国特許第６，１８０，３７０号、同第５，６９３，７６２号、同第５，６９３，７６１号、同第５，５８５，０８９号、および同第５，５３０，１０１に記載される。
【０２００】
一般的に、キメラ抗体を作製する目的は、意図される患者／レシピエントの種に由来するアミノ酸の数が最大化されたキメラを作製することである。一例は、「ＣＤＲグラフト」抗体であり、この抗体は、特定の種に由来するかまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むが、抗体鎖（複数可）の残りの部分は、別の種に由来するか、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一もしくは相同である。ヒトでの使用については、齧歯類抗体由来の可変領域または選択されたＣＤＲを、しばしば、ヒト抗体にグラフトし、ヒト抗体の天然の可変領域またはＣＤＲを置き換える。
【０２０１】
キメラ抗体の１つの有用な種類は、「ヒト化」抗体である。一般的に、ヒト化抗体は、非ヒト動物で最初に産生されたモノクローナル抗体から生成される。典型的には抗体の非抗原認識部分に由来する、このモノクローナル抗体のある特定のアミノ酸残基を、対応するアイソタイプのヒト抗体の対応する残基に相同となるように、修飾する。ヒト化は、例えば、齧歯類の可変領域の少なくとも一部分をヒト抗体の対応する領域と置換することによる、種々の方法を使用して、行うことができる（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６２号、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２−５２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３−２７、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４−１５３６を参照されたい）。
【０２０２】
一態様において、本明細書に提供される抗体の軽鎖および重鎖可変領域のＣＤＲ（例えば、表３〜４および２１〜２３）を、同じかまたは異なる系統発生種に由来する抗体由来のフレームワーク領域（ＦＲ）にグラフトする。例えば、重鎖および軽鎖可変領域ＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５、ＶＨ６、ＶＨ７、ＶＨ８、ＶＨ９、ＶＨ１０、ＶＨ１１、ＶＨ１２、ＶＨ１３、ＶＨ１４、ＶＨ１５、ＶＨ１６、ＶＨ１７、ＶＨ１８、ＶＨ１９、ＶＨ２０、ＶＨ２１、ＶＨ２２、ＶＨ２３、ＶＨ２４、ＶＨ２５、ＶＨ２６、ＶＨ２７、ＶＨ２８、ＶＨ２９、ＶＨ３０、ＶＨ３１、ＶＨ３２、ＶＨ３３、ＶＨ３４、ＶＨ３５、ＶＨ３６、ＶＨ３７、ＶＨ３８、ＶＨ３９、ＶＨ４０、ＶＨ４１、ＶＨ４２、ＶＨ４３、ＶＨ４４、ＶＨ４５、ＶＨ４６、ＶＨ４７、ＶＨ４８、ＶＨ４９、ＶＨ５０、ＶＨ５１、ＶＨ５２、ＶＨ５３、ＶＨ５４、ＶＨ５５、ＶＨ５６、ＶＨ５７、ＶＨ５８、ＶＨ５９、ＶＨ６０、ＶＨ６１、ＶＨ６２、ＶＨ６３、ＶＨ６４、ＶＨ６５、ＶＨ６６、ＶＨ６７、ＶＨ６８、ＶＨ６９、ＶＨ７０、ＶＨ７１、ＶＨ７２、ＶＨ７３、ＶＨ７４、ＶＨ７５、ＶＨ７６、ＶＨ７７、ＶＨ７８、ＶＨ７９、ＶＨ８０、８１、ＶＨ８２、ＶＨ８３、ＶＨ８４、ＶＨ８５、ＶＨ８６、ＶＨ８７、ＶＨ８８、ＶＨ８９、ＶＨ９０、ＶＨ９１、ＶＨ９２、ＶＨ９３、およびＶＨ９４、ならびに／またはＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、ＶＬ４、ＶＬ５、ＶＬ６、ＶＬ７、ＶＬ８、ＶＬ９、ＶＬ１０、ＶＬ１１、ＶＬ１２、ＶＬ１３、ＶＬ１４、ＶＬ１５、ＶＬ１６、ＶＬ１７、ＶＬ１８、ＶＬ１９、ＶＬ２０、ＶＬ２１、ＶＬ２２、ＶＬ２３、ＶＬ２４、ＶＬ２５、ＶＬ２６、ＶＬ２７、ＶＬ２８、ＶＬ２９、ＶＬ３０、ＶＬ３１、ＶＬ３２、ＶＬ３３、ＶＬ３４、ＶＬ３５、ＶＬ３６、ＶＬ３７、ＶＬ３８、ＶＬ３９、ＶＬ４０、ＶＬ４１、ＶＬ４２、ＶＬ４３、ＶＬ４４、ＶＬ４５、ＶＬ４６、ＶＬ４７、ＶＬ４８、ＶＬ４９、ＶＬ５０、ＶＬ５１、ＶＬ５２、ＶＬ５３、ＶＬ５４、ＶＬ５５、ＶＬ５６、ＶＬ５７、ＶＬ５８、ＶＬ５９、ＶＬ６０、ＶＬ６１、ＶＬ６２、ＶＬ６３、ＶＬ６４、ＶＬ６５、ＶＬ６６、ＶＬ６７、ＶＬ６８、ＶＬ６９、ＶＬ７０、ＶＬ７１、ＶＬ７２、ＶＬ７３、ＶＬ７４、ＶＬ７５、ＶＬ７６、ＶＬ７７、ＶＬ７８、ＶＬ７９、ＶＬ８０、ＶＬ８１、ＶＬ８２、ＶＬ８３、ＶＬ８４、ＶＬ８５、ＶＬ８６、ＶＬ８７、ＶＬ８８、ＶＬ８９、ＶＬ９０、ＶＬ９１、ＶＬ９２、ＶＬ９３、ＶＬ９４、ＶＬ９５、ＶＬ９６、ＶＬ９７、ＶＬ９８、ＶＬ９９、およびＶＬ１００のＣＤＲを、コンセンサスヒトＦＲにグラフトすることができる。コンセンサスヒトＦＲを作製するために、複数のヒト重鎖または軽鎖アミノ酸配列に由来するＦＲを、アライメントして、コンセンサスアミノ酸配列を識別することができる。他の実施形態において、本明細書に開示される重鎖または軽鎖のＦＲは、異なる重鎖または軽鎖に由来するＦＲと置き換えられる。一態様において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質（例えば、抗体）の重鎖および軽鎖のＦＲ内の希アミノ酸は、置き換え���れないが、残りのＦＲアミノ酸は、置き換えられる。「希アミノ酸」とは、ある位置に存在する特定のアミノ酸であり、この特定のアミノ酸は、通常、ＦＲには見られない。あるいは、１つの重鎖または軽鎖からグラフトされた可変領域は、本明細書に開示される、その特定の重鎖または軽鎖の定常領域とは異なる定常領域とともに使用することができる。他の実施形態において、グラフトされた可変領域は、一本鎖Ｆｖ抗体部分である。
【０２０３】
ある特定の実施形態において、ヒト以外の種に由来する定常領域を、ヒト可変領域（複数可）とともに使用して、ハイブリッド抗体を生成することができる。
【０２０４】
完全ヒト抗体
完全ヒト抗体を、本開示によって提供する。ヒトを抗原に暴露することなく、所定の抗原に特異的な完全ヒト抗体を作製するための方法が、利用可能である（「完全ヒト抗体」）。完全ヒト抗体の生成を実践するために提供される１つの特定の手段は、マウス体液性免疫系の「ヒト化」である。内因性Ｉｇ遺伝子が不活性化されているマウスへのヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座の導入は、任意の望ましい抗原での免疫付与が可能な動物であるマウスにおいて、完全ヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を生成する１つの手段である。完全ヒト抗体を使用することで、しばしば、マウスｍＡｂまたはマウス由来ｍＡｂを治療薬としてヒトに投与することによって引き起こされ得る免疫原性およびアレルギー性の応答を最小化することができる。
【０２０５】
完全ヒト抗体は、内因性免疫グロブリン産生の不在下において、ヒト抗体のレパートリーを生成することが可能なトランスジェニック動物（典型的にはマウス）を免疫付与することによって、生成することができる。この目的のための抗原は、典型的に、６個以上の連続したアミノ酸を有し、任意で、ハプテン等の担体に抱合される。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：２５５１−２５５５、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ３６２：２５５−２５８、およびＢｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３を参照されたい。このような方法の１つの例において、トランスジェニック動物は、マウス免疫グロブリン重鎖および軽鎖をそこでコードする内因性マウス免疫グロブリン遺伝子座を無能力化し、マウスゲノムに、ヒト重鎖および軽鎖タンパク質をコードする遺伝子座を含有するヒトゲノムＤＮＡの大型フラグメントを挿入することによって、生成される。全てではないがヒト免疫グロブリン遺伝子座の要素を有する、部分修飾された動物を、次いで、異種交配して、所望される全ての免疫系修飾を有する動物を得る。免疫原が投与されると、これらのトランスジェニック動物は、その免疫原に免疫特異的であるが、マウスではなくヒトのアミノ酸配列（可変領域を含む）を有する、抗体を生成する。このような方法のさらなる詳細については、例えば、ＷＯ９６／３３７３５号およびＷＯ９４／０２６０２号を参照されたい。ヒト抗体を作製するためのトランスジェニックマウスに関するさらなる方法は、米国特許第５，５４５，８０７号、同第６，７１３，６１０号、同第６，６７３，９８６号、同第６，１６２，９６３号、同第５，５４５，８０７号、同第６，３００，１２９号、同第６，２５５，４５８号、同第５，８７７，３９７号、同第５，８７４，２９９号、および同第５，５４５，８０６号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９１／１０７４１号、同第ＷＯ９０／０４０３６号、ならびにＥＰ５４６０７３号およびＥＰ５４６０７３号に記載されている。
【０２０６】
ある特定の実施形態によると、本発明の抗体は、ヒト抗体産生ゲノムの大部分が挿入されているが、内因性マウス抗体の産生を欠乏させた、トランスジェニックマウスの利用を通じて調製することができる。このようなマウスは、その結果、ヒト免疫グロブリン分子および抗体を生成する能力があり、マウス免疫グロブリン分子および抗体の産生を欠いている。この結果を達成するために利用される技術は、本願において、本明細書に開示される特許、出願、および参考文献に開示される。ある特定の実施形態において、ＰＣＴ公開出願第ＷＯ９８／２４８９３号またはＭｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１５：１４６−１５６に開示されるもの等の方法を採用することができ、これらは、あらゆる目的に対して参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０７】
一般的に、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）  ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ１ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的な完全ヒトモノクローナル抗体は、以下のように生成することができる。ヒト免疫グロブリン遺伝子を含有するトランスジェニックマウスを、目的の抗原、例えば、本明細書に記載のもので免疫付与し、抗体を発現するマウス由来のリンパ性細胞（Ｂ細胞等）を得る。このような回収された細胞を、骨髄性細胞系と融合して、不死ハイブリドーマ細胞系を調製し、このようなハイブリドーマ細胞系をスクリーニングおよび選択して、目的の抗原に特異的な抗体を生成するハイブリドーマ細胞系を特定する。ある特定の実施形態において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ１ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的な抗体を生成する、ハイブリドーマ細胞系の生成を、提供する。
【０２０８】
ある特定の実施形態において、完全ヒト抗体は、ヒト脾細胞（ＢまたはＴ細胞）を、インビトロで抗原に暴露し、次いで、暴露した細胞を、免疫不全マウス、例えば、ＳＣＩＤまたはｎｏｄ／ＳＣＩＤにおいて、再構成することによって、生成することができる。例えば、Ｂｒａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：２０５１−２０５８（１９９８）、Ｃａｒｂａｌｌｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，６：１０３−１０６（２０００）を参照されたい。ある特定のこのようなアプローチにおいて、ヒト胎児組織のＳＣＩＤマウスへの移植（ＳＣＩＤ−ｈｕ）は、長期の造血およびヒトＴ細胞の発達をもたらす。例えば、ＭｃＣｕｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４１：１５３２−１６３９（１９８８）、Ｉｆｖｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８：２４３−２４８（１９９６）を参照されたい。ある特定の事例において、このようなキメラマウスにおける体液性免疫応答は、その動物におけるヒトＴ細胞の共発達に依存する。例えば、Ｍａｒｔｅｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８３：１２７１−１７９（１９９４）を参照されたい。ある特定のアプローチにおいて、ヒト末梢血リンパ球を、ＳＣＩＤマウスに移植する。例えば、Ｍｏｓｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３５：２５６−２５９（１９８８）を参照されたい。ある特定のこのような実施形態において、このような移植細胞を、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ  Ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ  Ａ（ＳＥＡ）等のプライミング剤、または抗ヒトＣＤ４０モノクローナル抗体のいずれかで処理すると、高レベルのＢ細胞生成が検出される。例えば、Ｍａｒｔｅｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８４：２２４−２３０（１９９５）、Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，８６：１９４６−１９５３（１９９５）を参照されたい。
【０２０９】
したがって、ある特定の実施形態において、完全ヒト抗体は、宿主細胞での組み換えＤＮＡの発現、またはハイブリドーマ細胞での発現によって、生成することができる。他の実施形態において、抗体は、本明細書に記載のファージ提示技術を使用して、生成することができる。
【０２１０】
本明細書に記載の抗体を、本明細書に記載のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）技術の利用を通じて調製した。このようなマウスは、その結果、ヒト免疫グロブリン分子および抗体を生成する能力があり、マウス免疫グロブリン分子および抗体の産生を欠いている。これを達成するために利用される技術は、本明細書において、背景技術の部分に開示される、特許、出願、および参考文献に開示されている。しかしながら、具体的には、マウスおよびそれに由来する抗体のトランスジェニック生成の好ましい実施形態は、１９９６年１２月３日に出願された米国特許出願第０８／７５９，６２０号、ならびに１９９８年６月１１日に公開された国際特許出願第ＷＯ９８／２４８９３号、および２０００年１２月２１日に公開された同第ＷＯ００／７６３１０号に開示され、これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１５：１４６−１５６（１９９７）もまた参照されたく、この開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１１】
このような技術の使用を通じて、種々の抗原に対する完全ヒトモノクローナル抗体が、生成されている。本質的には、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）系のマウスに、目的の抗原（例えば、本明細書に提供される抗原）で免疫付与し、リンパ性細胞（Ｂ細胞等）を、過剰に免疫付与したマウスから回収し、回収したリンパ球を、骨髄性細胞系と融合して、不死ハイブリドーマ細胞系を調製する。これらのハイブリドーマ細胞系を、スクリーニングおよび選択して、目的の抗原に特異的な抗体を生成したハイブリドーマ細胞系を識別する。β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ１ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的な抗体を生成する、複数のハイブリドーマ細胞系の生成のための方法を、本明細書に提供する。さらに、このような抗体の重鎖および軽鎖のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を含む、このような細胞系によって生成される抗体の特徴付けを、本明細書に提供する。
【０２１２】
ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）株のマウスの生成は、１９９０年１月１２日に出願された米国特許出願第０７／４６６，００８号、１９９０年１１月８日に出願された同第０７／６１０，５１５号、１９９２年７月２４日に出願された同第０７／９１９，２９７号、１９９２年７月３０日に出願された同第０７／９２２，６４９号、１９９３年３月１５日に出願された同第０８／０３１，８０１号、１９９３年８月２７日に出願された同第０８／１１２，８４８号、１９９４年４月２８日に出願された同第０８／２３４，１４５号、１９９５年１月２０日に出願された同第０８／３７６，２７９号、１９９５年４月２７日に出願された同第０８／４３０，９３８号、１９９５年６月５日に出願された同第０８／４６４，５８４号、１９９５年６月５日に出願された同第０８／４６４，５８２号、１９９５年６月５日に出願された同第０８／４６３，１９１号、１９９５年６月５日に出願された同第０８／４６２，８３７号、１９９５年６月５日に出願された同第０８／４８６，８５３号、１９９５年６月５日に出願された同第０８／４８６，８５７号、１９９５年６月５日に出願された同第０８／４８６，８５９号、１９９５年６月５日に出願された同第０８／４６２，５１３号、１９９６年１０月２日に出願された同第０８／７２４，７５２号、１９９６年１２月３日に出願された同第０８／７５９，６２０号、２００１年１１月３０日に出願された米国公開第２００３／００９３８２０号、ならびに米国特許第６，１６２，９６３号、同第６，１５０，５８４号、同第６，１１４，５９８号、同第６，０７５，１８１号、および同第５，９３９，５９８号、ならびに日本特許第３  ０６８  １８０  Ｂ２号、同第３  ０６８  ５０６  Ｂ２号、および同第３  ０６８  ５０７  Ｂ２号に、さらに記載および詳述される。１９９６年６月１２に付与公開された欧州特許第ＥＰ  ０  ４６３  １５１  Ｂ１号、１９９４年２月３日に公開された国際特許出願第ＷＯ９４／０２６０２号、１９９６年１０月３１日に公開された国際特許出願第ＷＯ９６／３４０９６号、１９９８年６月１１日に公開された同第ＷＯ９８／２４８９３号、２０００年１２月２１日に公開された同第ＷＯ００／７６３１０号もまた、参照されたい。上に列挙された特許、出願、および参考文献のそれぞれの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２１３】
ハイブリドーマ技術を使用して、所望の特異性を有する抗原特異的ヒトｍＡｂを、本明細書に記載のもの等、トランスジェニックマウスから生成し、選択することができる。このような抗体は、好適なベクターおよび宿主細胞を使用してクローニングおよび発現することができるか、またはこの抗体を、培養ハイブリドーマ細胞から摘出することができる。
【０２１４】
完全ヒト抗体はまた、ファージ提示ライブラリに由来し得る（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１およびＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１に記載される）。ファージ提示技術は、糸状バクテリオファージの表面上における抗体レパートリーの提示、および続く好適な抗原へのそれらの結合によるファージの選択を通じて、免疫選択を模倣する。１つのこのような技術は、ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／１０４９４号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載され、これは、このようなアプローチを使用した、ＭＰＬ−およびｍｓｋ−受容体に対する高親和性および機能性のアゴニスト抗体の単離について記載している。
【０２１５】
二重特異性または二機能性抗原結合タンパク質
上述の１つ以上のＣＤＲまたは１つ以上の可変領域を含む、二重特異性および二機能性抗体もまた、提供される。いくつかの事例における二重特異性または二機能性抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖対および２つの異なる結合部位を有する、人工的なハイブリッド抗体であり得る。二重特異性抗体は、限定されないが、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメントの結合を含む、種々の方法によって生成することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ＆Ｌａｃｈｍａｎｎ，（１９９０）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３を参照されたい。本開示の抗原結合タンパク質が、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する場合、その結合は、実施例４〜６に記載のＦＧＦ２１様機能性およびシグナル伝達アッセイによって測定される、ＦＧＦ２１様活性の活性化をもたらし得、このような抗原結合タンパク質が抗体である場合、それは、アゴニスト抗体と称される。
【０２１６】
種々の他の形態
本開示に提供される、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質のいくつかには、本明細書に開示される抗原結合タンパク質（例えば、表１〜４および６〜２３に列挙される配列を有するもの）の変異体形態が含まれる。
【０２１７】
種々の実施形態において、本明細書に開示される抗原結合タンパク質は、１つ以上の天然に存在しない／コードされたアミノ酸を含み得る。例えば、抗原結合タンパク質のいくつかは、表１〜２３に列挙される、重鎖もしくは軽鎖、可変領域、またはＣＤＲのうちの１つ以上に、１つ以上の天然に存在しない／コードされたアミノ酸置換を有する。天然に存在しない／コードされたアミノ酸（所望であれば、本明細書に開示される任意の配列に見出される任意の天然に存在するアミノ酸と置換することができる）の例には、４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、ε−Ｎ−アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、δ−Ｎ−メチルアルギニン、ならびに他の同様のアミノ酸およびイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）が挙げられる。本明細書に使用されるポリペプチドの表記において、標準的な用法および慣例に従い、左手方向はアミノ末端方向であり、右手方向はカルボキシル末端方向である。抗原結合タンパク質配列に挿入することができるか、または抗原結合配列内の野生型残基と置換することができる、天然に存在しない／コードされたアミノ酸の例の非限定的な例には、β−アミノ酸、ホモアミノ酸、環状アミノ酸、および誘導体化側鎖を有するアミノ酸が挙げられる。例には（Ｌ型またはＤ型、括弧内は略称）、シトルリン（Ｃｉｔ）、ホモシトルリン（ｈＣｉｔ）、Ｎα−メチルシトルリン（ＮＭｅＣｉｔ）、Ｎα−メチルホモシトルリン（Ｎα−ＭｅＨｏＣｉｔ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、Ｎα−メチルオルニチン（Ｎα−ＭｅＯｒｎまたはＮＭｅＯｒｎ）、サルコシン（Ｓａｒ）、ホモリジン（ｈＬｙｓまたはｈＫ）、ホモアルギニン（ｈＡｒｇまたはｈＲ）、ホモグルタミン（ｈＱ）、Ｎα−メチルアルギニン（ＮＭｅＲ）、Ｎα−メチルロイシン（Ｎα−ＭｅＬまたはＮＭｅＬ）、Ｎ−メチルホモリジン（ＮＭｅＨｏＫ）、Ｎα−メチルグルタミン（ＮＭｅＱ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ノルバリン（Ｎｖａ）、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（Ｔｉｃ）、オクタヒドロインドール−２−カルボン酸（Ｏｉｃ）、３−（１−ナフチル）アラニン（１−Ｎａｌ）、３−（２−ナフチル）アラニン（２−Ｎａｌ）、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（Ｔｉｃ）、２−インダニルグリシン（ＩｇＩ）、パラ−ヨードフェニルアラニン（ｐＩ−Ｐｈｅ）、パラ−アミノフェニルアラニン（４ＡｍＰまたは４−アミノ−Ｐｈｅ）、４−グアニジノフェニルアラニン（Ｇｕｆ）、グリシルリジン（「Ｋ（Ｎε−ｇｌｙｃｙｌ」または「Ｋ（ｇｌｙｃｙｌ）」または「Ｋ（ｇｌｙ）」と略される）、ニトロフェニルアラニン（ｎｉｔｒｏｐｈｅ）、アミノフェニルアラニン（ａｍｉｎｏｐｈｅまたはＡｍｉｎｏ−Ｐｈｅ）、ベンジルフェニルアラニン（ｂｅｎｚｙｌｐｈｅ）、γ−カルボキシグルタミン酸（γ−ｃａｒｂｏｘｙｇｌｕ）、ヒドロキシプロリン（ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏ）、ｐ−カルボキシル−フェニルアラニン（Ｃｐａ）、α−アミノアジピン酸（Ａａｄ）、Ｎα−メチルバリン（ＮＭｅＶａｌ）、Ｎ−α−メチルロイシン（ＮＭｅＬｅｕ��、Ｎα−メチルノルロイシン（ＮＭｅＮｌｅ）、シクロペンチルグリシン（Ｃｐｇ）、シクロへキシルグリシン（Ｃｈｇ）、アセチルアルギニン（ａｃｅｔｙｌａｒｇ）、α，β−ジアミノプロパン酸（ｄｉａｍｉｎｏｐｒｏｐｉｏｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）（Ｄｐｒ）、α，γ−ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、ジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）、シクロへキシルアラニン（Ｃｈａ）、４−メチル−フェニルアラニン（ＭｅＰｈｅ）、β，β−ジフェニル−アラニン（ＢｉＰｈＡ）、アミノ酪酸（Ａｂｕ）、４−フェニル−フェニルアラニン（またはビフェニルアラニン、４Ｂｉｐ）、α−アミノ−イソ酪酸（Ａｉｂ）、β−アラニン、β−アミノプロピオン酸、ピペリジン酸、アミノカプロン酸、アミノヘプタン酸、アミノピメリン酸、デスモシン、ジアミノピメリン酸、Ｎ−エチルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、ヒドロキシリジン、アロ−ヒドロキシリジン、イソデスモシン、アロ−イソロイシン、Ｎ−メチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、Ｎ−メチルバリン、４−ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、γ−カルボキシグルタミン酸、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、ε−Ｎ−アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、ω−メチルアルギニン、４−アミノ−Ｏ−フタル酸（４ＡＰＡ）、および他の類似のアミノ酸、ならびに具体的に列挙されたもののいずれかの誘導体化形態が含まれる。
【０２１８】
さらに、抗原結合タンパク質は、表１〜４および６〜２３に列挙される重鎖もしくは軽鎖、可変領域、またはＣＤＲの１つ以上に、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有し得る。天然に存在するアミノ酸は、共通の側鎖特性に基づいて、クラスに分類することができる。
１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ
２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ
３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ
４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ
５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ
６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０２１９】
保存的アミノ酸置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーと、同じクラスの別のメンバーとの交換を伴い得る。保存的アミノ酸置換は、典型的には生物系における合成ではなく、化学的ペプチド合成によって組み込まれる、天然に存在しない／コードされたアミノ酸残基を包含し得る。以下の表８を参照されたい。これらには、ペプチド模倣物およびアミノ酸部分の他の逆転または反転形態が含まれる。
【０２２０】
非保存的置換は、上述のクラスのうちの１つのメンバーと、別のクラスからのメンバーの交換を伴い得る。このような置換残基を、非ヒト抗体と相同である抗体の領域、または分子の非相同領域に導入することができる。
【０２２１】
このような変化を加える場合、ある特定の実施形態によると、アミノ酸の疎水性親水性指標を考慮することができる。タンパク質の疎水性親水性プロファイルは、各アミノ酸に数値（「疎水性親水性指標」）を割り当て、次いで、ペプチド鎖に沿ってこれらの値を繰り返し平均化することによって、計算される。各アミノ酸には、その疎水性および荷電特性に基づいて、疎水性親水性指標が割り当てられている。それらは、イソロイシン（＋４．５）、バリン（＋４．２）、ロイシン（＋３．８）、フェニルアラニン（＋２．８）、システイン／シスチン（＋２．５）、メチオニン（＋１．９）、アラニン（＋１．８）、グリシン（−０．４）、スレオニン（−０．７）、セリン（−０．８）、トリプトファン（−０．９）、チロシン（−１．３）、プロリン（−１．６）、ヒスチジン（−３．２）、グルタミン酸塩（−３．５）、グルタミン（−３．５）、アスパラギン酸塩（−３．５）、アスパラギン（−３．５）、リジン（−３．９）、およびアルギニン（−４．５）である。
【０２２２】
タンパク質に相互作用性生物学的機能を与えることにおける、疎水性親水性プロファイルの重要性は、当該技術分野で理解されている（例えば、Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３１を参照されたい）。ある特定のアミノ酸は、類似の疎水性親水性指標またはスコアを有する他のアミノ酸と置換しても、類似の生物学的活性を保持することが可能であることが既知である。疎水性親水性指標に基づいて変化を加える際、ある特定の実施形態では、疎水性親水性指標が±２以内であるアミノ酸の置換が含まれる。いくつかの態様では、±１以内のものが含まれ、他の態様では、±０．５以内のものが含まれる。
【０２２３】
同様のアミノ酸の置換は、特に、それによって作製される生物学的機能タンパク質またはペプチドが、本発明の場合のように、免疫学的実施形態での使用を目的とする場合、親水性を基準として効果的行うことができることもまた、当該技術分野で理解されている。ある特定の実施形態において、その隣接するアミノ酸の親水性によって左右されるタンパク質の最大局所平均親水性は、その免疫原性および抗原結合または免疫原性、すなわち、タンパク質の生物学的特性と、相関する。
【０２２４】
以下の親水性値が、これらのアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）、リジン（＋３．０）、アスパラギン酸塩（＋３．０±１）、グルタミン酸塩（＋３．０±１）、セリン（＋０．３）、アスパラギン（＋０．２）、グルタミン（＋０．２）、グリシン（０）、スレオニン（−０．４）、プロリン（−０．５±１）、アラニン（−０．５）、ヒスチジン（−０．５）、システイン（−１．０）、メチオニン（−１．３）、バリン（−１．５）、ロイシン（−１．８）、イソロイシン（−１．８）、チロシン（−２．３）、フェニルアラニン（−２．５）、およびトリプトファン（−３．４）。類似の親水性値に基づいて変化を加える場合、ある特定の実施形態では、親水性値が±２以内のアミノ酸置換が含まれ、他の特定の実施形態では、±１以内のものが含まれ、さらに他の実施形態では、±０．５以内のものが含まれる。いくつかの事例において、親水性に基づいて、一次アミノ酸配列からエピトープを識別することもできる。これらの領域はまた、「エピトープコア領域」と称される。
【０２２５】
例となる保存的アミノ酸置換を、表８に記載する。
【０２２６】
【表８】
2014518640.tif 000225
【０２２７】
当業者であれば、周知の技術を、本明細書に提供される情報とともに使用して、本明細書に記載のポリペプチドの好適な変異体を判定することができるであろう。当業者は、活性に重要ではないと思われる領域を標的とすることにより、活性を破壊することなく変更を行うこと可能な分子の好適な領域を特定することができる。また、当業者であれば、類似のポリペプチド間で保存される、分子の残基および部分を特定することができるであろう。さらなる実施形態において、生物学的活性または構造に重要であり得る範囲でさえも、生物学的活性を破壊することなく、またはポリペプチド構造に悪影響を与えることなく、保存的アミノ酸置換の対象となり得る。
【０２２８】
さらに、当業者は、活性または構造に重要である、類似のポリペプチド内の残基を特定する、構造−機能研究を検討することができる。このような比較を考慮して、類似のタンパク質において、活性または構造に重要なアミノ酸残基に対応するタンパク質内のアミノ酸残基の重要性を、予測することができる。当業者は、このような予測された重要なアミノ酸残基に対して、化学的に類似のアミノ酸置換を選択することができる。
【０２２９】
当業者はまた、類似のポリペプチドにおいて、３次元構造およびその構造に関連するアミノ酸配列を、分析することができる。このような情報を考慮して、当業者は、抗体のアミノ酸残基のアライメントを、その３次元構造に関して、予測することができる。当業者は、タンパク質の表面上に存在することが予測されるアミノ酸残基に対しては、このような残基が他の分子との重要な相互作用に関与し得ることから、根本的な変更を加えないことを選択することができる。さらに、当業者は、各所望されるアミノ酸残基に単一のアミノ酸置換を含有する、試験変異体を生成することができる。これらの変異体は、次いで、ＦＧＦ２１様シグナル伝達について、アッセイを使用してスクリーニングすることができ（本明細書に提供される実施例に記載のものを含む）、したがって、どのアミノ酸が変更可能であり、どれが変更できないかに関する情報を得ることができる。換言すると、このような日常的実験から収集された情報に基づいて、当業者は、単独または他の突然変異と組み合わせてのさらなる置換を避けるべきであるアミノ酸位を、容易に判定することができる。
【０２３０】
多数の科学的出版物が、二次構造の予測に取り組んでいる。Ｍｏｕｌｔ，（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．７：４２２−４２７、Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３：２２２−２４５、Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７４）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１３：２１１−２２２、Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７８）Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．Ｒｅｌａｔ．Ａｒｅａｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４７：４５−１４８、Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７９）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４７：２５１−２７６、およびＣｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７９）Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．２６：３６７−３８４を参照されたい。７：４２２−４２７、Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７４）Ｂｉｏｃｈｅｍ。さらに、二次構造の予測を補助するために、コンピュータプログラムが現在利用可能である。二次構造を予測するための１つの方法は、相同性モデリングに基づく。例えば、３０％を上回る配列同一性、または４０％を上回る類似性を有する２つのポリペプチドまたはタンパク質は、類似の構造トポロジーを有し得る。タンパク質構造データベース（ＰＤＢ）の発展は、ポリペプチドまたはタンパク質の構造内の可能な折り畳み数を含む、二次構造の予測可能性の強化をもたらしている。Ｈｏｌｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．２７：２４４−２４７を参照されたい。所定のポリペプチドまたはタンパク質における折り畳み数は限られていること、および重大な数の構造が解明された時点で、構造の予測は、劇的に正確になるであろうことが示唆されている（Ｂｒｅｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．７：３６９−３７６）。
【０２３１】
二次構造を予測するさらなる方法には、「スレッディング（ｔｈｒｅａｄｉｎｇ）」（Ｊｏｎｅｓ，（１９９７）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．７：３７７−３８７、Ｓｉｐｐｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ４：１５−１９）、「プロファイル分析」（Ｂｏｗｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ２５３：１６４−１７０、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．１８３：１４６−１５９、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：４３５５−４３５８）、および「進化的結合（ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｌｉｎｋａｇｅ）」（Ｈｏｌｍ，（１９９９）（上記）、およびＢｒｅｎｎｅｒ，（１９９７）（上記）を参照されたい）が含まれる。
【０２３２】
いくつかの実施形態において、アミノ酸置換は、（１）タンパク質分解する傾向を低減させるもの、（２）酸化する傾向を低減させるもの、（３）タンパク質複合体の形成に対する親和性を変化させるもの、（４）リガンドもしくは抗原の結合親和性を変化させるもの、および／または（４）このようなポリペプチドに他の物理化学的もしくは機能的特性を与えるかもしくはそれを修正するものが行われる。例えば、単一または複数のアミノ酸置換（いくつかの実施形態において、保存的アミノ酸置換）は、天然に存在する配列に行うことができる。置換は、分子間接触を形成するドメイン（複数可）の外側に位置する抗体の部分に行うことができる。このような実施形態において、実質的に親配列の構造的特徴を変化させない保存的アミノ酸置換を使用することができる（例えば、親または天然の抗原結合タンパク質を特徴付ける二次構造を分断させない、１つ以上の置換アミノ酸）。当該技術分野で認識されているポリペプチドの二次および三次構造の例は、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９２，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，１９８４，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｂｒａｎｄｅｎ  ａｎｄ  Ｔｏｏｚｅ，ｅｄｓ．），２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９９，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｐｅｔｓｋｏ＆Ｒｉｎｇｅ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，２００４，Ｎｅｗ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｒｅｓｓ  Ｌｔｄ、およびＴｈｏｒｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ３５４：１０５に記載され、これらは、それぞれ、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２３３】
さらなる好適な抗体変異体には、親または天然のアミノ酸配列中の１つ以上のシステイン残基が、欠失しているか、または別のアミノ酸（例えば、セリン）と置換されている、システイン変異体が挙げられる。システイン変異体は、とりわけ、抗体を生物学的に活性な立体配座に再び折り畳む必要がある場合に、有用である。システイン変異体は、天然の抗体よりも少ないシステイン残基を有し得、典型的に、不対システインからもたらされる相互作用を最小化するために偶数である。
【０２３４】
開示される重鎖および軽鎖、可変領域ドメイン、ならびにＣＤＲを使用して、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合することが可能であり、ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発し得る、抗原結合領域を含有するポリペプチドを調製することができる。例えば、表３〜４、および２１〜２３に列挙されるＣＤＲのうちの１つ以上を、分子（例えば、ポリペプチド）に共有的または非共有的に組み込んで、免疫接着体を作製することができる。免疫接着体は、より大きなポリペプチド鎖の一部としてＣＤＲ（複数可）を組み込むことができるか、ＣＤＲ（複数可）を別のポリペプチド鎖に共有結合させることができるか、またはＣＤＲ（複数可）を非共有的に組み込むことができる。ＣＤＲ（複数可）は、免疫接着体が、目的の特定の抗原（例えば、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体、またはそれらのエピトープ）に特異的に結合することを可能にする。
【０２３５】
開示される重鎖および軽鎖、可変領域ドメイン、ならびにＣＤＲを使用して、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合することができ、ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発し得る、抗原結合領域を含有するポリペプチドを調製することができる。例えば、表３〜４および２１〜２３に列挙されるＣＤＲのうちの１つ以上を、Ｆｃフラグメントと対合した抗原結合タンパク質の重鎖、軽鎖を含む、「半」抗体に構造的に類似の分子（例えば、ポリペプチド）に組み込むことができ、その結果、抗原結合領域は一価（Ｆａｂフラグメントのように）であるが、二量体Ｆｃ部分を有するようになる。
【０２３６】
本明細書に記載される可変領域ドメインおよびＣＤＲに基づいた、模倣体（例えば、「ペプチド模倣体」または「ペプチド模倣物」）もまた、提供される。これらの類似体は、ペプチド、非ペプチド、またはペプチド領域と非ペプチド領域の組み合わせであり得る。Ｆａｕｃｈｅｒｅ，（１９８６）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．１５：２９、Ｖｅｂｅｒ  ａｎｄ  Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ，（１９８５）ＴＩＮＳ  ｐ．３９２、およびＥｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９、これらは、あらゆる目的について、参照により本明細書に組み込まれる。治療的に有用なペプチドと構造的に類似するペプチド模倣体を使用して、類似の治療的または予防的効果を得ることができる。このような化合物は、しばしば、コンピュータによる分子モデリングを活用して開発される。一般的に、ペプチド模倣物は、所望される生物学的活性、ここでは、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する能力等、を呈する抗体と構造的に類似であるが、１つ以上のペプチド結合が、当該技術分野で周知の方法により、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ−ＣＨ−（シスおよびトランス）、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、および−ＣＨ２ＳＯ−から選択される結合によって任意に置換されているタンパク質である。ある特定の実施形態において、コンセンサス配列の１つ以上のアミノ酸の、同じ種類のＤ−アミノ酸との系統的置換（例えば、Ｌ−リジンの代わりにＤ−リジン）を使用して、より安定なタンパク質を生成することができる。さらに、コンセンサス配列または実質的に同一のコンセンサス配列変異を含む、拘束性ペプチドは、当該技術分野で既知の方法（Ｒｉｚｏ  ａｎｄ  Ｇｉｅｒａｓｃｈ，（１９９２）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７、参照により本明細書に組み込まれる）によって、例えば、ペプチドを環化させる分子内ジスルフィド架橋を形成する能力のある内部システイン残基を付加することによって、生成することができる。
【０２３７】
本明細書に記載される、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質の誘導体もまた、提供される。誘導体化された抗原結合タンパク質は、抗体またはフラグメントに、特定の使用における増加した半減期等の所望される特性を与える、任意の分子または物質を含み得る。誘導体化された抗原結合タンパク質は、例えば、検出可能（または標識）部分（例えば、放射性分子、比色分析分子、抗原性分子、もしくは酵素的分子、検出可能ビーズ（磁気もしくは電着（例えば、ゴールド）ビーズ）、または別の分子に結合する分子（例えば、ビオチンもしくはストレプトアビジン）、治療的または診断的部分（例えば、放射性部分、細胞毒性部分、もしくは薬学的活性部分）、あるいは特定の用途（例えば、ヒト対象等の対象への投与、または他のインビボもしくはインビトロ用途）に対する抗原結合タンパク質の適合性を増加させる分子を含み得る。抗原結合タンパク質を誘導体化するために使用可能な分子の例には、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。抗原結合タンパク質のアルブミン結合型およびペグ化誘導体は、当該技術分野で周知の技術を使用して調製することができる。ある特定の抗原結合タンパク質には、本明細書に記載される、ペグ化一本鎖ポリペプチドが含まれる。一実施形態において、抗原結合タンパク質は、トランスサイレチン（「ＴＴＲ」）またはＴＴＲ変異体に、抱合されるかまたはそうでなければ結合する。ＴＴＲまたはＴＴＲ変異体は、例えば、デキストラン、ポリ（ｎ−ビニルピロリドン）、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌａｔｅｄ  ｐｏｌｙｏｌ）、およびポリビニルアルコールからなる群から選択される、化学物質で、化学修飾され得る。
【０２３８】
他の誘導体には、ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発する抗原結合タンパク質のＮ末端またはＣ末端に融合された非相同ポリペプチドを含む組み換え融合タンパク質の発現等による、本明細書に開示される、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質と、他のタンパク質またはポリペプチドとの共有または凝集抱合体が含まれる。例えば、抱合ペプチドは、非相同シグナル（もしくはリーダー）ポリペプチド、例えば、酵母α因子リーダー、またはエピトープタグ等のペプチドであり得る。本開示の抗原結合タンパク質を含有する融合タンパク質は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合し、ＦＧＦ２１様シグナリングを誘発し得る抗原結合タンパク質の精製または識別を促進するように付加されるペプチド（例えば、ポリ−Ｈｉｓタグ）を含み得る。β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質はまた、Ｈｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ６：１２０４、および米国特許第５，０１１，９１２号に記載のように、ＦＬＡＧペプチドに結合し得る。ＦＬＡＧペプチドは、高度に抗原性であり、特異的モノクローナル抗体（ｍＡｂ）によって可逆的に結合されるエピトープを提供し、発現された組み換えタンパク質の迅速なアッセイおよび容易な精製を可能にする。ＦＬＡＧペプチドが所定のポリペプチドに融合される、融合タンパク質の調製に有用な試薬は、市販入手可能である（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。
【０２３９】
β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する、１つ以上の抗原結合タンパク質を含む、多量体は、本開示の別の態様を構成する。多量体は、共有的に結合したかまたは非共有的に結合した、二量体、三量体、またはそれ以上の多量体の形態をとることができる。β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合し、ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発し得る、２つ以上の抗原結合タンパク質を含む多量体は、治療薬としての使用、診断薬としての使用、および他の使用も同様に企図され、このような多量体の一例は、ホモ二量体である。他の例となる多量体には、ヘテロ二量体、ホモ三量体、ヘテロ三量体、ホモ四量体、ヘテロ四量体等が挙げられる。
【０２４０】
一実施形態は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質に融合されたペプチド部分間の共有または非共有の相互作用を介して結合される、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する複数の抗原結合タンパク質を含む、多量体を対象とする。このようなペプチドは、ペプチドリンカー（スペーサー）、または多量体化を促進する特性を有するペプチドであり得る。ロイシンジッパー、および抗体に由来するある特定のポリペプチドは、本明細書にさらに詳細に記載されるように、そこに付加された抗原結合タンパク質の多量体化を促進し得るペプチドである。
【０２４１】
特定の実施形態において、多量体は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する、２〜４つの抗原結合タンパク質を含む。多量体の抗原結合タンパク質部分は、上述の形態のうちの任意のもの、例えば、変異体またはフラグメントであり得る。好ましくは、多量体は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する能力を有する抗原結合タンパク質を含む。
【０２４２】
一実施形態において、オリゴマーが、免疫グロブリンに由来するポリペプチドを使用して調製される。抗体由来のポリペプチドの種々の部分（Ｆｃドメインを含む）に融合された、ある特定の非相同ポリペプチドを含む融合タンパク質の調製は、例えば、Ａｓｈｋｅｎａｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：１０５３５、Ｂｙｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ３４４：６７７、およびＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌ．４，ｐａｇｅｓ１０．１９．１−１０．１９．１１によって説明されている。
【０２４３】
一実施形態は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質を抗体のＦｃ領域に融合することによって作製された、２つの融合タンパク質を含む、二量体を含む。二量体は、例えば、融合タンパク質をコードする遺伝子融合体を、適切な発現ベクターに挿入し、組み換え発現ベクターで形質転換した宿主細胞に遺伝子融合体を発現させ、発現した融合タンパク質を抗体分子に非常に類似するように構築させることによって作製することができ、その後、鎖間ジスルフィド結合がＦｃ部分間に形成されて、二量体がもたらされる。
【０２４４】
本明細書に使用される「Ｆｃポリペプチド」という用語には、抗体のＦｃ領域に由来するポリペプチドの、天然および突然変異タンパク質の形態が含まれる。二量体化を促進するヒンジ領域を含有するこのようなポリペプチドの切断形態もまた、含まれる。Ｆｃ部分を含む融合タンパク質（およびそこから形成されたオリゴマー）は、プロテインＡまたはプロテインＧカラムでの親和性クロマトグラフィーによる容易な精製という利点を提供する。
【０２４５】
ＰＣＴ出願ＷＯ９３／１０１５１号ならびに米国特許第５，４２６，０４８号および同第５，２６２，５２２号にに記載される、１つの好適なＦｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１抗体のＦｃ領域のＮ末端ヒンジ領域から天然のＣ末端までに及ぶ、一本鎖ポリペプチドである。別の有用なＦｃポリペプチドは、米国特許第５，４５７，０３５号およびＢａｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）ＥＭＢＯ  Ｊ．１３：３９９２−４００１に記載される、Ｆｃ突然変異タンパク質である。この突然変異タンパク質のアミノ酸配列は、アミノ酸１９がＬｅｕからＡｌａに変更されており、アミノ酸２０がＬｅｕからＧｌｕに変更されており、アミノ酸２２がＧｌｙからＡｌａに変更されている以外は、ＷＯ９３／１０１５１号に提示される天然のＦｃ配列のものと同一である。突然変異タンパク質は、Ｆｃ受容体に対して、減少した親和性を示す。
【０２４６】
他の実施形態において、本明細書に記載されるもの等、抗原結合タンパク質の重鎖および／または軽鎖の可変部分は、抗体の重鎖および／または軽鎖の可変部分と置換することができる。
【０２４７】
あるいは、オリゴマーは、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つととを含む複合体に特異的に結合する複数の抗原結合タンパク質を、ペプチドリンカー（スペーサーペプチド）ありまたはなしで含む、融合タンパク質である。好適なペプチドリンカーには、米国特許第４，７５１，１８０号および同第４，９３５，２３３号に記載のものがある。
【０２４８】
β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合するその抗原結合タンパク質を含むオリゴマー誘導体を調製するための別の方法は、ロイシンジッパーの使用を伴う。ロイシンジッパードメインは、それらが存在するタンパク質のオリゴマー化を促進する、ペプチドである。ロイシンジッパーは、もともとは、複数のＤＮＡ結合タンパク質で特定されたものであり（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４０：１７５９−６４）、それ以来、種々の異なるタンパク質で発見されている既知のロイシンジッパーには、天然に存在するペプチドおよび二量体化または三量体化するそれらの誘導体がある。可溶性オリゴマータンパク質の生成に好適なロイシンジッパードメインの例は、ＰＣＴ出願ＷＯ９４／１０３０８号に記載され、肺表面活性タンパク質Ｄ（ＳＰＤ）に由来するロイシンジッパーは、Ｈｏｐｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ３４４：１９１に記載され、参照により本明細書に組み込まれる。そこに融合された非相同タンパク質の安定な三量体化を可能にする、修飾されたロイシンジッパーの使用は、Ｆａｎｓｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２６７−２７８に記載されている。１つのアプローチでは、β−クロトとＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、またはＦＧＦＲ３ｃ）とを含む複合体に特異的に結合する、抗原結合タンパク質フラグメントまたは誘導体を含む組み換え融合タンパク質が、ロイシンジッパーペプチドに融合され、好適な宿主細胞で発現され、形成された可溶性オリゴマー抗原結合タンパク質フラグメントまたは誘導体が、培養上清から回収される。
【０２４９】
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、１ｐＭ、１０ｐＭ、１００ｐＭ、１ｎＭ、２ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、２５ｎＭ、または５０ｎＭ未満のＫＤ（平衡結合親和性）を有する。
【０２５０】
別の態様において、本開示は、（例えば、ヒト対象に投与した場合に）インビトロまたはインビボで少なくとも１日の半減期を有する抗原結合タンパク質を提供する。一実施形態において、抗原結合タンパク質は、少なくとも３日の半減期を有する。別の実施形態において、抗体またはその部分は、４日以上の半減期を有する。別の実施形態において、抗体またはその部分は、８日以上の半減期を有する。別の実施形態において、抗体またはその部分は、１０日以上の半減期を有する。別の実施形態において、抗体またはその部分は、１１日以上の半減期を有する。別の実施形態において、抗体またはその部分は、１５日以上の半減期を有する。別の実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、それが、非誘導体化抗体または非修飾抗体と比較して、より長い半減期を有するように、誘導体化または修飾される。別の実施形態において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質は、参照により組み込まれる２０００年２月２４日に公開されたＷＯ００／０９５６０号に記載のもの等、血清半減期を増加させる点突然変異を有する。
【０２５１】
グリコシル化
β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質は、天然種に見られるものとは異なるかまたは改変された、グリコシル化パターンを有し得る。当該技術分野で既知のように、グリコシル化パターンは、タンパク質の配列（例えば、以下に説明される、特定のグリコシル化アミノ酸残基の存在もしくは不在）、またはタンパク質が生成される宿主細胞もしくは生物の両方に依存し得る。特定の発現系を、以下に説明する。
【０２５２】
ポリペプチドのグリコシル化は、典型的に、Ｎ結合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の付加を指す。Ｘが、プロリン以外の任意のアミノ酸であるトリペプチド配列、アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−スレオニンは、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的付加に対する認識配列である。したがって、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在が、可能性のあるグリコシル化部位を作製する。Ｏ結合型グリコシル化は、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはスレオニンへの、糖類であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの付加を指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンもまた使用可能である。
【０２５３】
抗原結合タンパク質へのグリコシル化部位の付加は、（Ｎ結合型グリコシル化部位については）アミノ酸配列を、それが上述のトリペプチド配列のうちの１つ以上を含有するように改変することによって、便宜的に達成される。改変はまた、（Ｏ結合型グリコシル化部位については）出発配列への１つ以上のセリンまたはスレオニン残基の付加、またはそれらによる置換によって、行うことができる容易にするためには、抗原結合タンパク質アミノ酸配列は、ＤＮＡレベルでの変更を通じて、特に、標的ポリペプチドをコードするＤＮＡを事前に選択された塩基で突然変異させることによって、所望されるアミノ酸に翻訳されるコドンが生成されるように、改変することができる。
【０２５４】
抗原結合タンパク質上の炭水化物部分の数を増加させる別の手段は、グリコシドとタンパク質との化学的または酵素的結合によるものである。これらの手順は、それらが、ＮおよびＯ結合型グリコシル化のグリコシル化能力を有する宿主細胞でのタンパク質の生成を必要としないという点で、有利である。使用される結合モードに応じて、糖類（複数可）は、（ａ）アルギニンおよびヒスチジン、（ｂ）遊離カルボキシル基、（ｃ）システインのもの等の遊離スルフヒドリル基、（ｄ）セリン、スレオニン、もしくはヒドロキシプロリンのもの等の遊離ヒドロキシル基、（ｅ）フェニルアラニン、チロシン、もしくはトリプトファンのもの等の芳香族残基、または（ｆ）グルタミンのアミド基に付加することができる。これらの方法は、ＷＯ８７／０５３３０号およびＡｐｌｉｎ＆Ｗｒｉｓｔｏｎ，（１９８１）ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０：２５９−３０６に記載される。
【０２５５】
開始抗原結合タンパク質上に存在する炭水化物部分の除去は、化学的または酵素的に達成することができる。化学的脱グリコシル化は、トリフルオロメタンスルホン酸の化合物または同等の化合物へのタンパク質の暴露を要する。この処理は、ポリペプチドをインタクトなまま残しながら、結合糖（Ｎ−アセチルグルコサミンまたはＮ−アセチルガラクトサミン）を除く、ほとんどまたは全ての糖類の開裂をもたらす。化学的脱グリコシル化は、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２５９：５２−５７およびＥｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１８：１３１−３７によって説明されている。ポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的開裂は、Ｔｈｏｔａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１３８：３５０−５９に記載のように、種々のエンドおよびエキソグリコシダーゼの使用によって、達成することができる。潜在的グリコシル化部位のグリコシル化は、Ｄｕｓｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：３１０５−０９に記載のように、ツニカマイシン化合物の使用によって防ぐことができる。ツニカマイシンは、タンパク質−Ｎ−グリコシド結合の形成を阻止する。
【０２５６】
したがって、本開示の態様は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質のグリコシル化変異体を含み、グリコシル化部位（複数可）の数および／または種類は、親ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して、改変されている。ある特定の実施形態において、抗体タンパク質変異体は、天然の抗体よりも多いかまたは少ない数のＮ結合型グリコシル化部位を含む。Ｎ結合型グリコシル化部位は、配列Ａｓｎ−Ｘ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒを特徴とし、式中、Ｘとして表記されるアミノ酸残基は、プロリン以外の任意のアミノ酸残基であり得る。この配列を作製するためのアミノ酸残基の置換は、Ｎ結合型炭水化物鎖の付加が可能な新しい部位を提供する。あるいは、この配列を除去または改変する置換は、天然のポリペプチドに存在するＮ結合型炭水化物鎖の付加を防ぐことになる。例えば、グリコシル化は、Ａｓｎの欠失によって、またはＡｓｎを異なるアミノ酸と置換することによって、低減させることができる。他の実施形態において、１つ以上の新しいＮ結合型部位が作製される。抗体は、典型的に、Ｆｃ領域内にＮ結合型グリコシル化部位を有する。
【０２５７】
標識およびエフェクター基
いくつかの実施形態において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質は、１つ以上の標識を含む。「標識基」または「標識」という用語は、任意の検出可能な標識を意味する。好適な標識基の例には、以下のものが含まれるが、これらに限定されない：放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光基（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素基（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光基、ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）。いくつかの実施形態において、標識基は、種々の長さのスペーサーアームを介して抗原結合タンパク質に結合して、潜在的な立体障害を低減させる。タンパク質を標識化するための種々の方法は、当該技術分野で既知であり、適すると思われるように使用可能である。
【０２５８】
「エフェクター基」という用語は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質に結合され、細胞毒性剤として機能する、任意の基を意味する。好適なエフェクター基の例は、放射同位体または放射性核種である（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）。他の好適な基には、毒素、治療基、または化学療法基が含まれる。好適な基の例には、カリケアマイシン、アウリスタチン、ゲルダナマイシン、およびカンタンシン（ｃａｎｔａｎｓｉｎｅ）が挙げられる。いくつかの実施形態において、エフェクター基は、種々の長さのスペーサーアームを介して抗原結合タンパク質に結合して、可能性のある立体障害を低減させる。
【０２５９】
一般的に、標識は、それらが検出されることになるアッセイに応じて、多様なクラスに分類される：ａ）放射性同位体または重同位体であり得る同位体標識、ｂ）磁気標識（例えば、磁気粒子）、ｃ）レドックス活性部分、ｄ）光学染料、酵素基（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリ性ホスファターゼ）、ｅ）ビオチニル化基、およびｆ）に次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ等）。いくつかの実施形態において、標識基は、種々の長さのスペーサーアームを介して抗原結合タンパク質に結合して、潜在的な立体障害を低減させる。タンパク質を標識化するための種々の方法は、当該技術分野で既知である。
【０２６０】
特定の標識には、発色団、蛍光体、およびフルオロフォアを含むが、これらに限定されない光学染料が挙げられ、後者は、多くの事例では特異的である。フルオロフォアは、「小分子」蛍光物質またはタンパク質性蛍光物質のいずれかであり得る。
【０２６１】
「蛍光標識」とは、その固有の蛍光特性を介して検出可能な任意の分子を意味する。好適な蛍光標識には、フルオレセイン、ローダミン、テトラメチルローダミン、エオシン、エリトロシン、クマリン、メチルクマリン、ピレン、Ｍａｌａｃｉｔｅ  ｇｒｅｅｎ、スチルベン、Ｌｕｃｉｆｅｒ  Ｙｅｌｌｏｗ、Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｌｕｅ、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、ＩＡＥＤＡＮＳ、ＥＤＡＮＳ、ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ、ＬＣ  Ｒｅｄ６４０、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、ＬＣ  Ｒｅｄ７０５、Ｏｒｅｇｏｎ  ｇｒｅｅｎ、Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ染料（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ３５０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４３０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５４６、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５６８、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５９４、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６３３、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６６０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６８０）、Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｌｕｅ、Ｃａｓｃａｄｅ  Ｙｅｌｌｏｗ、およびＲ−フィコエリトリン（ＰＥ）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）、ＦＩＴＣ、ローダミン、およびＴｅｘａｓ  Ｒｅｄ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）が挙げられるがこれらに限定されない。フルオロフォアを含む好適な光学染料は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１１ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｓｐｅｎｃｅ（ｅｄｓ）を含む、Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｐ．ＨａｕｇｌａｎｄによるＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋおよび後続版に記載され、参照により明確に本明細書に組み込まれる。
【０２６２】
好適なタンパク質性蛍光標識にはまた、ウミシイタケ、ウミエラ（Ｐｔｉｌｏｓａｒｃｕｓ）、またはオワンクラゲ（Ａｅｑｕｏｒｅａ）種のＧＦＰ（Ｃｈａｌｆｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ２６３：８０２−８０５）を含む、緑色蛍光タンパク質、ｅＧＦＰ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｓ．，Ｉｎｃ．、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｕ５５７６２）、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ，Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ、Ｓｔａｕｂｅｒ，（１９９８）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ２４：４６２−７１、Ｈｅｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ６：１７８−８２）、強化黄色蛍光タンパク質（ＥＹＦＰ，Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｓ．，Ｉｎｃ．）、ルシフェラーゼ（Ｉｃｈｉｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：５４０８−１７）、β−ガラクトシダーゼ（Ｎｏｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：２６０３−０７）、およびＲｅｎｉｌｌａ（ＷＯ９２／１５６７３号、ＷＯ９５／０７４６３号、ＷＯ９８／１４６０５号、ＷＯ９８／２６２７７号、ＷＯ９９／４９０１９号、米国特許第５２９２６５８号、同第５４１８１５５号、同第５６８３８８８号、同第５７４１６６８号、同第５７７７０７９号、同第５８０４３８７号、同第５８７４３０４号、同第５８７６９９５号、および５９２５５５８号）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２６３】
抗原結合タンパク質の調製
提供される非ヒト抗体は、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ロバ、または非ヒト霊長類（サル（例えば、カニクイザルもしくはアカゲザル）または類人猿（例えば、チンパンジー）等）などの任意の抗体産生動物に由来し得る。非ヒト抗体は、例えば、インビトロの細胞培養および細胞培養に基づく用途で使用することができるか、あるいは、抗体に対する免疫応答が、生じないかもしくはわずかである、予防可能である、問題ではない、または所望される、任意の他の用途で使用することができる。ある特定の実施形態において、抗体は、ＦＧＦ２１とともにインキュベートした後に、全長ヒトＦＧＦＲ１ｃおよびβ−クロトを細胞表面に発現するＣＨＯトランスフェクタント由来の細胞結合受容体で；または全長ヒトβ−クロトおよび配列番号４のポリペプチドのアミノ酸残基１４１〜８２２を包含するヒトＦＧＦＲ１ｃのＮ末端切断型を発現する２９３Ｔトランスフェクタントの細胞結合受容体で；または全長β−クロト、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、もしくはＦＧＦＲ３ｃで；またはβ−クロト、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、もしくはＦＧＦＲ３ｃの細胞外ドメインで；またはβ−クロト、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、およびＦＧＦＲ３ｃのうちの２つで；またはＦＧＦＲ１ｃ、β−クロト、もしくはＦＧＦＲ１ｃとβ−クロトの両方を発現する、全細胞で；またはＦＧＦＲ１ｃ、β−クロト、もしくはＦＧＦＲ１ｃとβ−クロトの両方を発現する細胞から調製された膜で；または融合タンパク質、例えば、Ｆｃに融合されたＦＧＦＲ１ｃ、β−クロト、もしくはＦＧＦＲ１ｃとβ−クロト（もしくはそれらの細胞外ドメイン）を含むＦｃ融合体で、免疫付与することによって、ならびに当該技術分野で既知の他の方法、例えば、本明細書に提示される実施例に記載のものによって、調製することができる。あるいは、ある特定の非ヒト抗体は、本明細書に提供されるある特定の抗体が結合するエピトープの一部を形成する、β−クロト、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、またはＦＧＦＲ３ｃのうちの１つ以上のセグメントであるアミノ酸で、免疫付与することによって、産生することができる。抗体は、ポリクローナル、モノクローナルであり得るか、または組み換えＤＮＡを発現させることによって、宿主細胞において合成することができる。
【０２６４】
完全ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含有するトランスジェニック動物を免疫付与することによって、またはヒト抗体のレパートリーを発現しているファージ提示ライブラリを選択することによって、上述のように調製することができる。
【０２６５】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、従来のモノクローナル抗体手法、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５−９７の標準的な体細胞ハイブリダイゼーション技術を含む、種々の技術によって生成することができる。あるいは、モノクローナル抗体を生成するための他の技術、例えば、Ｂリンパ球のウイルスまたは発癌性の形質転換を、採用してもよい。ハイブリドーマを調製するための１つの好適な動物系は、マウス系であり、これは、非常によく確立された手順である。融合のために免疫付与した脾細胞を単離するための免疫付与手順および技術は、当該技術分野で既知である。このような手順については、免疫付与したマウスに由来するＢ細胞を、マウス骨髄腫細胞系等、好適な不死化融合パートナーと融合させる。所望であれば、それ以外にもラットまたは他の動物を、マウスの代わりに免疫付与してもよく、このような動物に由来するＢ細胞を、マウス骨髄腫細胞系と融合させて、ハイブリドーマを形成することができる。あるいは、マウス以外の他の源に由来する骨髄腫細胞系を使用してもよい。ハイブリドーマを作製するための融合手順もまた、周知である。ＳＬＡＭ技術もまた、抗体の生成に採用することができる。
【０２６６】
提供される一本鎖抗体は、重鎖および軽鎖の可変ドメイン（Ｆｖ領域）フラグメントを、アミノ酸架橋（短いペプチドリンカー）を介して結合させ、単一のポリペプチド鎖をもたらすことによって、形成することができる。このような一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）は、２つの可変ドメインポリペプチド（ＶＬおよびＶＨ）をコードするＤＮＡの間に、ペプチドリンカーをコードするＤＮＡを融合することによって、調製することができる。結果として得られるポリペプチドは、２つの可変ドメイン間の可動リンカーの長さに応じて、折り重なって抗原結合モノマーを形成し得るか、またはそれらは、多量体（例えば、二量体、三量体、または四量体）を形成し得る（Ｋｏｒｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：４２３、Ｋｏｒｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｂｉｏｍｏｌ．Ｅｎｇ．１８：９５−１０８）。異なるＶＬおよびＶＨを含むポリペプチドを組み合わせることによって、異なるエピトープに結合する多量体ｓｃＦｖを形成することができる（Ｋｒｉａｎｇｋｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｂｉｏｍｏｌ．Ｅｎｇ．１８：３１−４０）。一本鎖抗体の生成のために開発された技術には、米国特許第４，９４６，７７８号、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３−２６、Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：５８７９−８３、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ３３４：５４４−４６、ｄｅ  Ｇｒａａｆ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．１７８：３７９−３８７に記載のものが含まれる。本明細書に提供される抗体に由来する一本鎖抗体には、表２に示される重鎖および軽鎖可変領域の可変ドメインの組み合わせ、または表３〜４および６〜２３に示されるＣＤＲを含む軽鎖および重鎖可変ドメインの組み合わせを含む、ｓｃＦｖが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２６７】
１つのサブクラスのものである、本明細書に提供される抗体は、サブクラススイッチ法を使用して、異なるサブクラスに由来する抗体に変化させることができる。したがって、例えば、ＩｇＧ抗体を、ＩｇＭ抗体から誘導することができ、その逆もまた同様である。このような技術は、所定の抗体（親抗体）の抗原結合特性を有するが、さらに、親抗体のものとは異なる抗体アイソタイプまたはサブクラスと関連する生物学的特性も示す、新しい抗体の調製を可能にする。組み換えＤＮＡ技術を採用してもよい。特定の抗体ポリペプチドをコードするクローン化ＤＮＡ、例えば、所望のアイソタイプの抗体の定常ドメインをコードするＤＮＡを、このような手順で用いることができる。例えば、Ｌａｎｔｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８：３０３−１６を参照されたい。
【０２６８】
したがって、提供される抗体には、例えば、所望のアイソタイプ（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ、およびＩｇＤ）を有する、上述の可変ドメインの組み合わせを含むもの、ならびにそのＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２フラグメントが含まれる。さらに、ＩｇＧ４が所望される場合、点突然変異（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＢｌｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ６：４０７−１５に記載のように、ヒンジ領域にＣＰＳＣＰからＣＰＰＣＰ（それぞれ、掲載順に配列番号１８２８および１８２９）への突然変異）を導入して、ＩｇＧ４抗体に非相同性をもたらし得る、Ｈ鎖内ジスルフィド結合を形成する傾向を緩和することが望ましい場合がある。
【０２６９】
さらに、異なる特性を有する抗体（すなわち、それらが結合する抗原に対する親和性が多様である）を誘導するための技術もまた、既知である。鎖シャッフリング（ｃｈａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）と称される１つのこのような技術は、糸状バクテリオファージの表面上に免疫グロブリン可変ドメイン遺伝子レパートリーを提示することを伴い、これは、しばしば、ファージ提示法と称される。鎖シャッフリングは、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０：７７９−８３に記載のように、ハプテン２−フェニルオキサゾール−５−オンに対する高親和性抗体を調製するために使用されている。
【０２７０】
表２に記載の重鎖および軽鎖可変領域、または表３Ａおよび３Ｂ、４Ａおよび４Ｂ、ならびに表６〜２３に記載のＣＤＲに、保存的修飾（およびコード核酸への対応する修飾）を行って、機能的および生化学的特徴を有する抗原結合タンパク質を生成することができる。このような修飾を達成するための方法を、本明細書に記載する。
【０２７１】
β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質は、種々の方法で、さらに修飾することができる。例えば、それらが治療目的で使用される場合、それらをポリエチレングリコールと抱合させて（ペグ化）、血清半減期を延長させるか、またはタンパク質送達を強化することができる。ＰＥＧは、抗原結合タンパク質に直接結合させてもよく、または、グリコシド結合等、リンカーを介して結合させてもよい。
【０２７２】
あるいは、本主題の抗体またはそのフラグメントのＶ領域を、異なる抗体分子のＦｃ領域と融合させてもよい。この目的で使用されるＦｃ領域は、それが補体に結合せず、したがって、融合タンパク質が治療剤として使用されたときに、患者において細胞溶解を誘発する可能性を低減させるように、修飾することができる。さらに、本主題の抗体またはその機能性フラグメントは、ヒト血清アルブミンと抱合させて、抗体またはそのフラグメントの血清半減期を強化することができる。抗原結合タンパク質またはそのフラグメントの別の有用な融合パートナーは、トランスチレチン（ＴＴＲ）である。ＴＴＲは、四量体を形成する能力があり、したがって、抗体−ＴＴＲ融合タンパク質は、その結合アビディティを増加させることが可能な多価抗体を形成することができる。
【０２７３】
あるいは、本明細書に記載の抗原結合タンパク質の機能的および／または生化学的特徴における実質的な修飾は、（ａ）例えば、シートもしくはヘリカル構造のような、置換領域における分子骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしく疎水性、または（ｃ）側鎖のかさ高さ、を維持することに対するそれらの効果が有意に異なる、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列に置換を行うことによって、達成することができる。「「保存的アミノ酸置換」は、天然のアミノ酸残基を、その位置でアミノ酸残基の極性または電荷に影響をほとんど有さないかまたは全く有さない非天然の残基と、置換することを伴い得る。上記の表８を参照されたい。さらに、ポリペプチド内のいずれの天然の残基も、アラニンスキャニング突然変異生成について前述したように、アラニンと置換することが可能である。
【０２７４】
本主題の抗体のアミノ酸置換（保存的または非保存的かにかかわらず）は、当業者によって、日常的な技術を適用することにより実現することができる。アミノ酸置換を使用して、本明細書に提供される抗体の重要な残基を特定するか、あるいはβ−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に対するこれらの抗体の親和性の増加もしくは減少、または本明細書に記載の他の抗原結合タンパク質の結合親和性の修正を行うことができる。
【０２７５】
抗原結合タンパク質の発現方法
上述の少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む、プラスミド、発現ベクター、転写、または発現カセットの形態にある、発現系および構築物もまた、このような発現系または構築物を含む宿主細胞と同様に、本明細書に提供される。
【０２７６】
本明細書に提供される抗原結合タンパク質は、多数の従来技術のうちの任意のものによって、調製することができる。例えば、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質は、当該技術分野で既知の任意の技術を使用して、組み換え発現系によって生成することができる。例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ：Ａ  Ｎｅｗ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｅｓ，（Ｋｅｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ（１９８０）および後続版、ならびにＨａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅ，（１９８８）（上記）を参照されたい。
【０２７７】
抗原結合タンパク質は、ハイブリドーマ細胞系（例えば、特に、抗体はハイブリドーマに発現することができる）またはハイブリドーマ以外の細胞系において、発現することができる。抗体をコードする発現構築物を使用して、哺乳動物、昆虫、または微生物の宿主細胞を形質転換することができる。形質転換は、宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための任意の既知の方法を使用して、行うことができ、例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，９１２，０４０号、同第４，７４０，４６１号、および同第４，９５９，４５５号によって例証されるように、ポリヌクレオチドをウイルスまたはバクテリオファージに封入し、当該技術分野で既知のトランスフェクション手順によって宿主細胞に構築物を形質導入することが含まれる。使用される最適な形質転換手順は、形質転換される宿主細胞の種類に依存することになる。非相同ポリヌクレオチドを哺乳動物細胞に導入するための方法は、当該技術分野で周知であり、これには、デキストラン媒介性トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレン媒介性トランスフェクション、原形質融合、ポリヌクレオチド（複数可）のリポソームへの封入、核酸と正電荷を有する脂質との混合、および核へのＤＮＡの直接的な微量注入が含まれるが、これらに限定されない。
【０２７８】
組み換え発現構築物は、典型的に、以下のうちの１つ以上を含むポリペプチドをコードする核酸分子を含む：本明細書に提供される１つ以上のＣＤＲ、軽鎖定常領域、軽鎖可変領域、重鎖定常領域（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、および／もしくはＣＨ３）、ならびに／または抗原結合タンパク質の別の足場部分。これらの核酸配列は、標準的な連結技術を使用して、適切な発現ベクターに挿入される。一実施形態において、重鎖または軽鎖定常領域は、抗β−クロト／ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、またはＦＧＦＲ３ｃ）複合体特異的重鎖または軽鎖可変領域のＣ末端側に付加され、発現ベクターに連結される。ベクターは、典型的に、採用される特定の宿主細胞において機能するように選択される（すなわち、ベクターは、宿主細胞機構と適合性であり、遺伝子の増幅および／または発現を可能にする）。いくつかの実施形態において、ジヒドロ葉酸還元酵素等のタンパク質レポーターを使用したタンパク質−フラグメント相補性アッセイを採用するベクターを使用する（例えば、米国特許第６，２７０，９６４号を参照されたく、これは、参照により本明細書に組み込まれる）。好適な発現ベクターは、例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓまたはＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入することができる。抗体およびフラグメントのクローニングおよび発現に有用な他のベクターには、Ｂｉａｎｃｈｉ  ａｎｄ  ＭｃＧｒｅｗ，（２００３）Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．８４：４３９−４４に記載のものが含まれ、これは、参照により本明細書に組み込まれる。さらなる好適な発現ベクターは、例えば、“Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，”Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．，ｖｏｌ．１８５，（Ｇｏｅｄｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．），（１９９０），Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓに記載される。
【０２７９】
典型的に、宿主細胞のいずれかにおいて使用される発現ベクターは、プラスミド維持および外因性ヌクレオチド配列のクローニングおよび発現のための配列を含有することになる。ある特定の実施形態においては集合的に「フランキング配列」と称される、このような配列は、典型的に、以下のヌクレオチド配列のうちの１つ以上を含むことになる：プロモーター、１つ以上のエンハンサー配列、複製起点、転写終結配列、スプライス供与部位およびスプライス受容部位を含む全イントロン配列、ポリペプチド分泌のリーダー配列をコードする配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化配列、発現されるポリペプチドをコードする核酸を挿入するためのポリリンカー領域、ならびに選択可能なマーカー要素。
【０２８０】
任意で、発現ベクターは、「タグ」コード化配列、すなわち、抗原結合タンパク質をコードする配列の５’または３’末端に位置するオリゴヌクレオチドを含有し得、オリゴヌクレオチド配列は、ポリＨｉｓ（ヘキサＨｉｓ、ＨＨＨＨＨＨ（配列番号１８３０）等）、またはＦＬＡＧ、ＨＡ（へマグルチニンインフルエンザウイルス）、もしくはｍｙｃ等、市販の抗体が存在する別の「タグ」をコードする。このタグは、典型的に、ポリペプチドが発現すると、ポリペプチドに融合され、宿主細胞からの抗原結合タンパク質の親和性精製または検出のための手段として機能し得る。親和性精製は、例えば、タグに対抗する抗体を親和性マトリックスとして使用する、カラムクロマトグラフィーによって達成することができる。任意で、タグは、その後、ある特定のペプチダーゼを開裂に使用するなど、種々の手段によって、精製された抗原結合タンパク質から除去することができる。
【０２８１】
フランキング配列は、相同（すなわち、宿主細胞と同じ種および／もしくは株に由来する）、非相同（すなわち、宿主細胞の種もしくは株以外の種に由来する）、ハイブリッド（すなわち、１つを上回る源に由来するフランキング配列の組み合わせ）、合成、または天然であり得る。したがって、フランキング配列源は、任意の原核生物もしくは真核生物、任意の脊椎動物もしくは無脊椎動物、または任意の植物であり得るが、フランキング配列が、宿主細胞機構において機能性であるか、またはそれによって活性化され得ることを条件とする。
ベクターにおいて有用なフランキング配列は、当該技術分野で周知の複数の方法のうちの任意のものによって、得ることができる。典型的に、本明細書において有用なフランキング配列は、マッピングおよび／または制限エンドンクレアーゼ消化によって既に特定されており、したがって、適切な制限エンドヌクレアーゼを使用して、適正な組織源から単離することができる。いくつかの事例では、フランキング配列の全ヌクレオチド配列が既知であり得る。ここで、フランキング配列は、核酸合成またはクローニングについて本明細書に記載の方法を使用して、合成することができる。
【０２８２】
フランキング配列の全てまたは一部分のみが既知であるかにかかわらず、これは、ポリペラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して、ならびに／または、同じまたは別の種に由来するオリゴヌクレオチドおよび／もしくはフランキング配列フラグメント等の好適なプローブでゲノムライブラリをスクリーニングすることによって、得ることができる。フランキング配列が不明の場合、フランキング配列を含むＤＮＡのフラグメントは、例えば、コード配列または別の遺伝子（複数可）でさえも含み得る、より大きなＤＮＡ断片から単離することができる。単離は、適正なＤＮＡフラグメントを生成するための制限エンドヌクレアーゼ消化、およびそれに続くアガロースゲル精製、カラムクロマトグラフィー、または当業者に既知の他の方法を使用した単離によって、達成することができる。この目的を達成するために好適な酵素の選択は、当業者には容易に明らかであろう。
【０２８３】
複製起点は、典型的に、市販で購入した原核生物の発現ベクターの一部であり、この起点は、宿主細胞におけるベクターの増幅を補助する。選択したベクターが、複製部位の起点を含まない場合、それを既知の配列に基づいて化学的に合成し、ベクターに連結させることができる。例えば、プラスミドｐＢＲ３２２（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｊ０１７４９、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）に由来する複製起点は、ほとんどのグラム陰性菌に好適であり、種々のウイルス起点（例えば、ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ｖｅｓｉｃｕｌａｒ  ｓｔｏｍａｔｉｔｕｓ  ｖｉｒｕｓ）（ＶＳＶ）、またはＨＰＶもしくはＢＰＶ等のパピローマウイルス）は、哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに有用である。一般的に、複製起点要素は、しばしば、哺乳動物の発現ベクターに必要とされない（例えば、ＳＶ４０起点は、しばしば、それがウイルスの初期プロモーターを含むという理由でのみ、使用される）。
【０２８４】
転写終結配列は、典型的に、ポリペプチドコード領域末端の３’側に位置し、転写を終結させるように機能する。通常、原核生物細胞における転写終結配列は、Ｇ−Ｃリッチフラグメントであり、ポリ−Ｔ配列が続く。この配列は、ライブラリから容易にクローニングされるかまたはベクターの一部として市販で購入されるが、本明細書に記載のもの等の核酸合成のための方法を使用して、容易に合成することもできる。
【０２８５】
選択可能なマーカー遺伝子は、選択的培養培地で成長する宿主細胞の生存および成長に必要なタンパク質をコードする。典型的な選択マーカー遺伝子は、（ａ）抗生物質もしくは他の毒素、例えば、原核生物の宿主細胞については、アンピシリン、テトラサイクリン、もしくはカナマイシンに対して、耐性を与える、（ｂ）細胞の栄養要求欠乏を補完する、または（ｃ）複合培地もしくは定義された培地から得ることができない重要な栄養を補給する、タンパク質をコードする。特定の選択的マーカーは、カナマイシン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、およびテトラサイクリン耐性遺伝子である。有利なことに、ネオマイシン耐性遺伝子もまた、原核生物および真核生物の両方の宿主細胞において、選択に使用することができる。
【０２８６】
他の選択可能な遺伝子を使用して、発現されるであろう遺伝子を増幅することができる。増幅は、成長または細胞の生存に重要なタンパク質の生成に必要とされる遺伝子が、組み換え細胞の歴代の染色体内で連続して反復される、プロセスである。哺乳動物細胞に好適な選択可能マーカーの例には、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）およびプロモーターを有さないチミジンキナーゼ遺伝子が挙げられる。哺乳動物細胞の形質転換体は、この形質転換体のみがベクターに存在する選択可能遺伝子によって生存するように特異的に適応される、選択圧下に置かれる。選択圧は、媒体中の選択薬剤の濃度が、継続して増加する条件下で、形質転換した細胞を培養することによって、印加され、それによって、選択可能遺伝子、ならびにβ−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する抗原結合タンパク質等、別の遺伝子をコードするＤＮＡの両方の増幅をもたらす。結果として、増加した量のポリペプチド、例えば抗原結合タンパク質が、増幅されたＤＮＡから合成される。
【０２８７】
リボソーム結合部位が、通常、ｍＲＮＡの翻訳開始に必要であり、シャインダルガーノ配列（原核生物）またはコザック配列（真核生物）によって特徴付けられる。この要素は、典型的に、プロモーターに対しては３’、発現されるポリペプチドのコード配列に対しては５’に位置する。
【０２８８】
グリコシル化が真核生物の宿主細胞発現系において所望される場合等、いくつかの事例において、種々のプレまたはプロ配列を操作して、グリコシル化または収率を改善することができる。例えば、特定のシグナルペプチドのペプチダーゼ開裂部位を改変するか、またはプロ配列を付加することができ、これもまた、グリコシル化に影響を与え得る。最終的なタンパク質生成物は、その１位（成熟タンパク質の第１のアミノ酸に対して）に、発現から生じる１つ以上の追加のアミノ酸を有し得、これは、完全に除去されなかったものであり得る。例えば、最終的なタンパク質生成物は、アミノ末端に付加された、ペプチダーゼ開裂部位に見られる１つまたは２つのアミノ酸残基を有し得る。あるいは、いくつかの酵素開裂部位の使用は、酵素が成熟ポリペプチド内のこのような領域を切断する場合、所望されるポリペプチドのわずかに切断された形態をもたらし得る。
【０２８９】
発現およびクローニングは、典型的に、宿主生物によって認識され、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質をコードする分子に操作可能に結合される、プロモーターを含むことになる。プロモーターは、構造遺伝子の転写を制御する、構造遺伝子（一般的に、約１００〜１０００ｂｐ）の開始コドンに対して上流（すなわち、５’）に位置付けられる、非転写配列である。プロモーターは、従来的に、２つのクラスのうちの１つの分類される：誘導的プロモーターおよび構成的プロモーター。誘導的プロモーターは、栄養の存在もしくは不在または温度の変化等、培養条件の何らかの変更に応答して、それらの制御下でＤＮＡから増加したレベルの転写を開始する。一方で、構成的プロモーターは、それらが操作可能に結合される遺伝子を、均一に転写する、すなわち、遺伝子発現に対する制御をほとんど有さないかまたは全く有さない。種々の潜在的な宿主細胞によって認識される、非常に多数のプロモーターが周知である。好適なプロモーターは、制限酵素の消化によって、もとのＤＮＡからプロモーターを除去し、所望されるプロモーター配列をベクターに挿入することによって、抗原結合タンパク質を含む重鎖または軽鎖をコードするＤＮＡに操作可能に結合される。
【０２９０】
酵母宿主を用いる用途に好適なプロモーターもまた、等が技術分野で周知である。酵母エンハンサーは、酵母プロモーターとともに、有利に使用される。哺乳動物の宿主細胞での使用に好適なプロモーターは、周知であり、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２等）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、およびシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）等のウイルスのゲノムから得られたものを含むが、これらに限定されない。他の好適な哺乳動物プロモーターには、非相同哺乳動物プロモーター、例えば、熱ショックプロモーターおよびアクチンプロモーターが挙げられる。
【０２９１】
対象となり得る、さらなるプロモーターには、ＳＶ４０初期プロモーター（Ｂｅｎｏｉｓｔ＆Ｃｈａｍｂｏｎ，（１９８１）Ｎａｔｕｒｅ２９０：３０４−３１０）、ＣＭＶプロモーター（Ｔｈｏｒｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１：６５９−６６３）、ラウス肉腫ウイルスの３’長末端反復に含まれるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８０）Ｃｅｌｌ２２：７８７−９７）、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：１４４４−４５）、メタロチオニン遺伝子に由来するプロモーターおよび制御配列（Ｐｒｉｎｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８２）Ｎａｔｕｒｅ２９６：３９−４２）、ならびにβ−ラクタマーゼプロモーター等の原核生物プロモーター（Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７５：３７２７−３１）、またはｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８０：２１−２５）が挙げられるが、これらに限定されない。以下の動物転写制御領域もまた対象であり、これらは、組織特異性を示し、トランスジェニック動物において利用されている：膵腺房細胞において活性なエラスターゼＩ遺伝子制御領域（Ｓｗｉｆｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｃｅｌｌ３８：６３９−４６、Ｏｒｎｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５０：３９９−４０９、ＭａｃＤｏｎａｌｄ，（１９８７）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ７：４２５−５１５）、膵臓β細胞において活性なインスリン遺伝子制御領域（Ｈａｎａｈａｎ，（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ３１５：１１５−２２）、リンパ系細胞において活性な免疫グロブリン遺伝子制御領域（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｃｅｌｌ３８：６４７−５８、Ａｄａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ３１８：５３３−３８、Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．７：１４３６−４４）、精巣細胞、乳腺細胞、リンパ系細胞、および肥満細胞において活性なマウス乳癌ウイルス制御領域（Ｌｅｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｃｅｌｌ４５：４８５−９５）、肝臓において活性なアルブミン遺伝子制御領域（Ｐｉｎｋｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌ．１：２６８−７６）、肝臓において活性なα−フェトプロテイン遺伝子制御領域（Ｋｒｕｍｌａｕｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：１６３９−４８、Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ２５３：５３−５８）、肝臓において活性なα１−抗トリプシン遺伝子制御領域（Ｋｅｌｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌ．１：１６１−７１）、骨髄性細胞において活性なβ−グロビン遺伝子制御領域（Ｍｏｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ３１５：３３８−４０、Ｋｏｌｌｉａｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｃｅｌｌ４６：８９−９４）、脳内の乏突起膠細胞において活性なミエリン塩基性タンパク質遺伝子制御領域（Ｒｅａｄｈｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｃｅｌｌ４８：７０３−１２）、骨格筋において活性なミオシン軽鎖−２遺伝子制御領域（Ｓａｎｉ，（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ３１４：２８３−８６）、ならびに視床下部において活性な性腺刺激性放出ホルモン遺伝子制御領域（Ｍａｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３４：１３７２−７８）。
【０２９２】
エンハンサー配列をベクターに挿入して、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質を含む、軽鎖または重鎖をコードするＤＮＡの転写を、より高度な真核生物、例えば、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合するヒト抗原結合タンパク質によって、増加させることができる。エンハンサーは、プロモーター上で転写を増加させるように機能する、通常は長さが約１０〜３００ｂｐの、ＤＮＡのシス作用エレメントである。エンハンサーは、配向および位置が比較的独立しており、転写単位に対して５’および３’の両方の位置に見出されている。哺乳動物遺伝子から利用可能ないくつかのエンハンサー配列が、既知である（例えば、グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテイン、およびインスリン）。しかしながら、典型的には、ウイルス由来のエンハンサーを使用する。当該技術分野で既知のＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、ポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーが、真核生物プロモーター活性化のための例となるエンハンサー要素である。エンハンサーは、ベクター内で、コード配列に対して５’または３’のいずれかに位置し得るが、それは、典型的に、プロモーターの５’に位置付けられる。適切な天然または非相同シグナル配列（リーダー配列またはシグナルペプチド）をコードする配列を、発現ベクターに組み込んで、抗体の細胞外分泌を促進することができる。シグナルペプチドまたはリーダーの選択は、抗体が生成される宿主細胞の種類に依存し、非相同シグナル配列は、天然のシグナル配列を置き換えることができる。哺乳動物の宿主細胞において機能性であるシグナルペプチドの例には、以下のものが含まれる：米国特許第４，９６５，１９５号に記載されるインターロイキン−７（ＩＬ−７）のシグナル配列、Ｃｏｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ３１２：７６８−７１に記載されるインターロイキン−２受容体のシグナル配列、欧州特許第０３６７  ５６６号に記載されるインターロイキン−４受容体シグナルペプチド、米国特許第４，９６８，６０７号に記載されるＩ型インターロイキン−１受容体シグナルペプチド、欧州特許第０  ４６０  ８４６号に記載されるＩＩ型インターロイキン−１受容体シグナルペプチド。
【０２９３】
発現ベクターは、市販入手可能なベクター等、開始ベクターから構築することができる。このようなベクターは、所望のフランキング配列の全てを含有し得るが、必ずしもそうとは限らない。フランキング配列のうちの１つ以上がベクターに未だ存在していない場合、それらを個々に得て、ベクターに結合させることができる。フランキング配列のそれぞれを得るために使用される方法は、当業者に周知である。
【０２９４】
ベクターを構築し、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質を含む、軽鎖、重鎖、または軽鎖および重鎖をコードする核酸分子が、ベクターの適正な部位に挿入された後に、完成したベクターを、増幅および／ポリペプチド発現のために、好適な宿主細胞に挿入することができる。抗原結合タンパク質の発現ベクターの、選択された宿主細胞への形質転換は、トランスフェクション、感染、リン酸カルシウム共沈殿、電気穿孔法、微量注入、リポフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介性トランスフェクション、または他の既知の技術を含む、周知の方法によって、達成することができる。選択される方法は、部分的に、使用される宿主細胞の種類に応じることになる。これらの方法および他の好適な方法は、当業者に周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）（上記）に記載されている。
【０２９５】
宿主細胞は、適切な条件下で培養された場合、抗原結合タンパク質を合成し、それを、続いて、培養培地（宿主細胞が培地にそれを分泌する場合）から、または直接それを生成する宿主細胞（分泌されない場合）から、採取することができる。適切な宿主細胞の選択は、所望の発現レベル、活性に望ましいかまたは必要であるポリペプチド修飾（グリコシル化もしくははリン酸化等）、および生物学的に活性な分子への折り畳みの容易さ等、種々の因子に依存することになる。
【０２９６】
発現のための宿主として利用可能な哺乳動物細胞系は、当該技術分野で周知であり、限定されないが、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な不死化細胞系が含まれ、ＨｅＬａ細胞、ヒト胎児腎臓２９３細胞（ＨＥＫ２９３細胞）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）、および多数の他の細胞系が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、細胞系は、どの細胞系が、高い発現レベルを有し、望ましい結合特性（例えば、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つと）とを含む複合体に結合する能力）を有する抗原結合タンパク質を構造的に生成するかを判定することを通じて、選択することができる。別の実施形態において、それ自体の抗体を作製することはないが、非相同抗体を作製および分泌する能力を有する、Ｂ細胞系統に由来する細胞系を、選択することができる。ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発する能力もまた、選択基準を形成し得る。
【０２９７】
診断および治療目的での抗原結合タンパク質の使用
本明細書に開示される抗原結合タンパク質は、生物学的試料における、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体の検出、ならびに、β−クロトならびに（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つのうちの１つ以上を生成する細胞または組織の特定に有用である。例えば、本明細書に開示される抗原結合タンパク質を、診断アッセイ、例えば、結合アッセイで使用して、組織または細胞に発現される、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体の検出および／または定量化を行うことができる。
【０２９８】
β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質はまた、２型糖尿病、肥満、脂質異常症、ＮＡＳＨ、心血管疾患、および代謝症候群等、ＦＧＦ２１様シグナル伝達に関連する疾患の治療を、それを必要とする患者において行うことに使用することができる。抗原結合タンパク質と、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体と、を含むシグナル伝達複合体を形成することによって、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体と結合して、インビボでシグナル伝達を開始する、ＦＧＦ２１の天然のインビボ活性が、模倣および／または強化され、治療効果へとつながる。
【０２９９】
適応症
ヒトＦＧＦ２１と関連する疾患または状態には、患者におけるその発症が、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体の形成によってインビボで開始される、ＦＧＦ２１様シグナル伝達の欠如またはその誘発の治療的不足に少なくとも部分的に影響を受ける、いずれの疾患または状態も含まれる。疾患または状態の重症度はまた、ＦＧＦ２１様シグナル伝達の誘発によって、減少させることができる。本明細書に提供される抗原結合タンパク質で治療可能な疾患および状態の例には、２型糖尿病、肥満、脂質異常症、ＮＡＳＨ、心血管疾患、および代謝症候群が挙げられる。
【０３００】
本明細書に記載の抗原結合タンパク質を使用して、２型糖尿病、肥満、脂質異常症、ＮＡＳＨ、心血管疾患、および代謝症候群を治療することができるか、あるいは、これらを、例えば、毎日、毎週、隔週、毎月、隔月、半年に１回等で施される予防的治療として採用し、症状の頻度および／または重症度、例えば、血漿グルコースレベルの上昇、トリグリセリドレベルの上昇、および／またはコレステロールレベルの上昇を、予防または低減し、それによって、改善された血糖および心血管の危険因子プロファイルを提供することができる。
【０３０１】
診断方法
本明細書に記載の抗原結合タンパク質は、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、ＦＧＦＲ３ｃ、β−クロト、ＦＧＦ２１、および／またはそれらの組み合わせを含む複合体と関連する疾患および／または状態を、検出、診断、または監視する、診断目的で使用することができる。当業者に既知の古典的免疫組織学的方法を使用して、試料中のβ−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体の存在を検出するための方法もまた、提供される（例えば、Ｔｉｊｓｓｅｎ，（１９８５）“Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ａｎｄ  Ｔｈｅｏｒｙ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ”  ｉｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１５（Ｂｕｒｄｏｎ＆ｖａｎ  Ｋｎｉｐｐｅｎｂｅｒｇ，ｅｄｓ．），Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ）、Ｚｏｌａ，（１９８７）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ｐｐ．１４７−５８（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、Ｊａｌｋａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６−８５、Ｊａｌｋａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７−９６）。β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体の検出は、インビボまたはインビトロで行うことができる。
【０３０２】
本明細書に提供される診断用途には、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体の発現／形成、ならびに／またはβ−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体への結合を検出するために、抗原結合タンパク質を使用することが含まれる。β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体の存在の検出に有用な方法の例には、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）および放射免疫測定法（ＲＩＡ）等の免疫測定法が含まれる。
【０３０３】
診断用途については、抗原結合タンパク質を、典型的に、検出可能な標識基で標識化する。好適な標識基には、以下のものが含まれるが、これらに限定されない：放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光基（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素基（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光基、ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）。いくつかの実施形態において、標識基は、種々の長さのスペーサーアームを介して抗原結合タンパク質に結合して、可能性のある立体障害を低減させる。タンパク質を標識化するための種々の方法が、当該技術分野で既知であり、使用することができる。
【０３０４】
別の態様において、抗原結合タンパク質を使用して、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体を発現する細胞（１つまたは複数）を特定することができる。特定の実施形態において、抗原結合タンパク質を、標識基で標識化し、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体への標識化した抗原結合タンパク質の結合が、検出される。さらなる特定の実施形態において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体への抗原結合タンパク質の結合は、インビボで検出される。さらなる特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、当該技術分野で既知の技術を使用して、単離および測定される。例えば、Ｈａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅ，（１９８８）（上記）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｄ），Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９９３  ｅｄ．ならびに付録および／または改訂版）を参照されたい。
【０３０５】
別の態様は、本明細書に記載のように、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体への結合について、提供される抗原結合タンパク質と競合する、試験分子の存在を検出することを提供する。このようなアッセイの例は、試験分子の存在下または不在下で、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含むある量の複合体を含有する溶液中における、遊離抗原結合タンパク質の量を検出することを伴い得る。遊離抗原結合タンパク質（すなわち、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合していない抗原結合タンパク質）の増加は、試験分子が、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体への結合について、抗原結合タンパク質と競合することができることを示す。一実施形態において、抗原結合タンパク質を、標識基で標識化する。あるいは、試験分子を標識化し、遊離している試験分子の量を、抗原結合タンパク質の存在下および不在下で監視する。
【０３０６】
治療の方法：製剤および投与経路
本開示の抗原結合タンパク質を使用する方法もまた提供される。いくつかの方法において、抗原結合タンパク質を、患者に提供し、それが、ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発する。
【０３０７】
１つまたは複数の抗原結合タンパク質の治療有効量、ならびに薬学的に許容される希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、保存剤、および／またはアジュバントを含む、薬学的組成物もまた提供される。さらに、このような薬学的組成物を投与することによって、患者を治療する方法が含まれる。「患者」という用語は、ヒト患者を含む。
【０３０８】
許容される製剤材料は、採用される投与量および濃度で、レシピエントに対して非毒性である。特定の実施形態において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合するヒト抗原結合タンパク質の治療有効量を含む、薬学的組成物を提供する。
【０３０９】
ある特定の実施形態において、許容される製剤材料は、好ましくは、採用される投与量および濃度で、レシピエントに対して非毒性である。ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、例えば、組成物のｐＨ、モル浸透圧濃度、粘度、透明度、色、等張性、臭気、無菌性、安定性、溶解もしくは放出の速度、吸収、または浸透を、修正、維持、または保持するためのある特定の製剤材料を含有し得る。このような実施形態において、好適な製剤材料には、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、リジン等）；抗菌剤；酸化防止剤（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、もしくは亜硫酸水素ナトリウム等）；緩衝剤（ホウ酸塩、重炭酸塩、トリス−ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩、もしくは他の有機酸等）；増量剤（マンニトールもしくはグリシン）；キレート剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等）；錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、β−シクロデキストリン、もしくヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン等）；充填剤；単糖類；二糖類；および他の炭水化物（グルコース、マンノース、もしくはデキストリン等）；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン等）；着色、香味、および希釈剤；乳化剤；親水性ポリマー（ポリビニルピロリドン等）；低分子量ポリペプチド；塩形成対イオン（ナトリウム等）；保存剤（塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、もしくは過酸化水素等）；溶媒（グリセリン、プロピレングリコール、もしくはポリエチレングリコール等）；糖アルコール（マンニトールもしくはソルビトール等）；懸濁化剤；界面活性剤または湿潤剤（プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート、例えばポリソルベート２０、ポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサパル（ｔｙｌｏｘａｐａｌ）等）；安定性強化剤（スクロースもしくはソルビトール等）；等張性強化剤（アルカリ金属ハロゲン化物、好ましくは塩化ナトリウムもしくは塩化カリウム等、マンニトール、ソルビトール等）；送達ビヒクル；希釈剤；賦形剤、ならびに／または薬学的アジュバントが含まれるが、これらに限定されない。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．），１９９０，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、および後続版を参照されたい。
【０３１０】
ある特定の実施形態において、最適な薬学的組成物は、例えば、意図される投与の経路、送達の形式、および所望される投与量に応じて、当業者によって決定されることになる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（上記）を参照されたい。ある特定の実施形態において、このような組成物は、開示される抗原結合タンパク質の物理的状態、安定性、インビボでの放出速度、およびインビボでのクリアランス速度に影響を及ぼし得る。ある特定の実施形態において、薬学的組成物中の主要なビヒクルまたは担体は、性質が水溶性または非水溶性のいずれかであり得る。例えば、好適なビヒクルまたは担体は、注射用水、生理食塩水、または人工脳骨髄液であり得、非経口投与用の組成物に一般的な他の材料が補充される場合もある。中性緩衝生理食塩水、または血清アルブミンと混合した生理食塩水は、さらなる例示的ビヒクルである。特定の実施形態において、薬学的組成物は、約ｐＨ７．０〜８．５のトリス緩衝液、または約ｐＨ４．０〜５．５の酢酸緩衝液を含み、これは、さらに、ソルビトールまたはその好適な代替物を含み得る。ある特定の実施形態において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質を含む組成物は、所望される程度の純度を有する選択された組成物を、任意の製剤化剤（好適な製剤化剤の例については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（上記）を参照されたい）と混合することによって、凍結乾燥した固形物または水溶液の形態で、保存用に調製することができる。さらに、ある特定の実施形態において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する抗原結合タンパク質は、スクロース等の適切な賦形剤を使用して、凍結乾燥剤として製剤化してもよい。
【０３１１】
薬学的組成物は、非経口送達のために選択することができる。あるいは、本組成物は、吸入、または経口等の消化管を通じた送達のために、選択することができる。このような薬学的に許容される組成物の調製は、当業者の技術の範囲内である。
【０３１２】
製剤の構成成分は、好ましくは、投与部位に許容される濃度で存在する。ある特定の実施形態において、緩衝剤を使用して、生理的ｐＨまたはわずかに低いｐＨ、典型的には約５〜８のｐＨ範囲内に、組成物を維持する。
【０３１３】
非経口投与が企図される場合、治療的組成物は、所望される抗原結合タンパク質を薬学的に許容されるビヒクル中に含む、発熱物質不含の非経口で許容される水溶液の形態で提供することができる。非経口注射に特に好適なビヒクルは、抗原結合タンパク質が、滅菌の等張溶液として製剤化されて適正に保存された、滅菌蒸留水である。ある特定の実施形態において、調製は、所望される分子を、生成物の制御放出または持続放出を提供することができ、蓄積注射を介して送達することができる、注射可能なマイクロスフェア、生体浸食性粒子、ポリマー化合物（ポリ乳酸もしくはポリグリコール酸等）、ビーズ、またはリポソーム等の薬剤と製剤化することを伴い得る。ある特定の実施形態において、ヒアルロン酸もまた使用可能であり、これは、循環血液中での持続期間を促進する効果を有し得る。ある特定の実施形態において、埋め込み可能な送達装置を使用して、所望される抗原結合タンパク質を導入することができる。
【０３１４】
ある特定の薬学的組成物は、吸入用に製剤化される。いくつかの実施形態において、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に結合する抗原結合タンパク質は、乾燥した吸入可能粉末として製剤化される。特定の実施形態において、抗原結合タンパク質の吸入溶液はまた、エアロゾル送達のために、噴射剤とともに製剤化されてもよい。ある特定の実施形態において、溶液は、噴霧することができる。肺内の投与および製剤方法は、したがって、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ９４／００１８７５号にさらに記載され、これは、参照により組み込まれ、化学修飾されたタンパク質の肺内送達について記載している。いくつかの剤形は、経口投与可能である。この形式で投与される、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質は、錠剤およびカプセル等の固形投薬形態の構成に習慣的に使用されている担体ありまたはなしで、製剤化することができる。ある特定の実施形態において、カプセルを、バイオアベイラビリティが最大化され、全身循環前の分解が最小化される、胃腸管内の時点で製剤の活性部分を放出するように設計することができる。追加の薬剤を、抗原結合タンパク質の吸収を促進するために含んでもよい。希釈剤、香味剤、低融点ワックス、植物油、滑沢剤、懸濁化剤、懸濁化剤、錠剤崩壊剤、および結合剤もまた、採用可能である。
【０３１５】
いくつかの薬学的組成物は、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する１つまたは複数のヒト抗原結合タンパク質の有効量を、錠剤の製造に好適な非毒性賦形剤との混合物中に含む。滅菌水または別の適切なビヒクル中に錠剤を溶解することによって、溶液を、単位用量形態に調製することができる。好適な賦形剤には、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムもしくは重炭酸ナトリウム、ラクトース、またはリン酸カルシウム等の不活性希釈剤、あるいは、デンプンン、ゼラチン、またはアカシア等の結合剤、あるいは、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、または滑石等の滑沢剤が含まれるが、これらに限定されない。
【０３１６】
β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質を持続または制御送達剤形に含んだ製剤が含まれる、さらなる薬学的組成物は、当業者には明白であろう。リポソーム担体、生体浸食性微粒子もしくは多孔質ビーズ、および蓄積注射等、種々の他の持続または制御放出送達手段を配合するための技術もまた、当業者に既知である。例えば、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ９３／００８２９号を参照されたく、これは、参照により組み込まれ、薬学的組成物の送達のための多孔質ポリマー微粒子の制御放出について記載している。持続放出性調製物は、フィルムを例とする成形物品、またはマイクロカプセルの形態である半透過性ポリマーマトリックスを含み得る。持続放出マトリックスには、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号および欧州特許出願公開第０５８４８１号に記載され、これらのそれぞれは、参照により組み込まれる）、Ｌ−グルタミン酸およびγエチル−Ｌ−グルタミン酸塩のコポリマー（Ｓｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２：５４７−５５６）、ポリ（２−ヒドロキシエチル−インエタクリレート）（ｐｏｌｙ  （２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ−ｉｎｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ））（Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．  Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７、およびＬａｎｇｅｒ，（１９８２）Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５）、エチレン酢酸ビニル（Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）（上記））、またはＤ（−）−３−ヒドロキシ酪酸（欧州特許出願公開第ＥＰ１３３９８８号）が含まれ得る。持続放出性組成物にはまた、当該技術分野で既知の複数の方法のいずれかによって調製することができる、リポソームが含まれ得る。例えば、参照により組み込まれる、Ｅｐｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２：３６８８−３６９２、欧州特許出願公開第ＥＰ０３６６７６号、同第ＥＰ０８８０４６号、および同第ＥＰ１４３９４９号を参照されたい。
【０３１７】
インビボ投与に使用される薬学的組成物は、典型的に、滅菌調製物として提供される。滅菌は、滅菌濾過膜を通じた濾過によって達成することができる。組成物が凍結乾燥される場合、この方法を使用した滅菌は、凍結乾燥および再構成の前または後のいずれかに行うことができる。非経口投与のための組成物は、凍結乾燥形態または溶液中に保管することができる。非経口組成物は、一般的に、滅菌のアクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射用針で刺し通すことが可能な栓を有する静脈注射溶液バッグまたはバイアルに入れられる。
【０３１８】
ある特定の実施形態において、本明細書に開示される組み換え抗原結合タンパク質を発現する細胞は、送達のために封入される（Ｔａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ（２００２）４３：３２９２−３２９８およびＳｉｅｖｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＵＳＡ（２００６）１０３：３８９６−３９０１を参照されたい）。
【０３１９】
ある特定の製剤において、抗原結合タンパク質は、１０ｍｇ／ｍｌ〜１５０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。いくつかの製剤は、緩衝剤、スクロース、およびポリソルベートを含有する。製剤の一例は、５０〜１００ｍｇ／ｍｌの抗原結合タンパク質、５〜２０ｍＭの酢酸ナトリウム、５〜１０％ｗ／ｖのスクロース、および０．００２〜０．００８％ｗ／ｖのポリソルベートを含有するものである。ある特定の製剤は、例えば、１〜１００ｍｇ／ｍｌの抗原結合タンパク質、９〜１１ｍＭの酢酸ナトリウム、８〜１０％ｗ／ｖのスクロース、および０．００５〜０．００６％ｗ／ｖのポリソルベートを含有する。ある特定のこのような製剤のｐＨは、４．５〜６の範囲内である。他の製剤は、５．０〜５．５のｐＨを有し得る。
【０３２０】
薬学的組成物が製剤化されると、それを、溶液、懸濁液、ゲル、エマルジョン、固体、結晶として、または乾燥もしくは凍結乾燥させた粉末として、滅菌バイアル中で保管することができる。このような製剤は、すぐに使用可能な形態、または投与前に再構成される形態（例えば、凍結乾燥）のいずれかで保管することができる。単回用量の投与単位を生成するためのキットもまた、提供される。ある特定のキットは、乾燥したタンパク質を有する第１の容器と、水性製剤を有する第２の容器とを含む。ある特定の実施形態において、単一および複数のチャンバを有する事前充填したシリンジ（例えば、液体シリンジおよび分散シリンジ（ｌｙｏｓｙｒｉｎｇｅ））を含むキットを、提供する。採用される抗原結合タンパク質を含有する薬学的組成物の治療有効量は、例えば、治療内容及び目的に依存することになる。当業者であれば、治療に適切な投与量レベルが、部分的に、送達される分子、抗原結合タンパク質が使用される適応症、投与の経路、ならびに患者の寸法（体重、体表もしくは器官の寸法）および／または状態（年齢および一般健康状態）に応じて、多様であることを理解するであろう。ある特定の実施形態において、臨床医は、最適な治療効果を得るように、投与量の滴定および投与経路の変更を行うことができる。
【０３２１】
典型的な投与量は、上述の因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜最大約３０ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上の範囲に及び得る。特定の実施形態において、投与量は、１０μｇ／ｋｇ〜最大約３５ｍｇ／ｋｇ、任意で０．１ｍｇ／ｋｇ〜最大約３５ｍｇ／ｋｇ、あるいは０．３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲に及び得る。いくつかの適用において、投与量は、０．５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇであり、別の適用では、投与量は、２１〜１００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの事例において、抗原結合タンパク質は、０．３〜２０ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの治療レジメンにおける投与スケジュールは、０．３ｍｇ／ｋｇ週１回〜２０ｍｇ／ｋｇ週１回である。
【０３２２】
投与頻度は、使用される製剤における特定の抗原結合タンパク質の薬物動態パラメーターに依存することになる。典型的に、臨床医は、所望の効果を達成する投与量に達するまで、組成物を投与する。組成物は、したがって、単回用量として、または継時的に２回以上の用量（同量の所望の分子を含有し得るが、必ずしもそうでない場合もある）として、または埋め込み装置もしくはカテーテルを介した連続的注入として、投与することができる。適切な投与量は、適切な用量応答データの使用を通じて確認することができる。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、長期間にわたって患者に投与してもよい。抗原結合タンパク質の慢性的な投与は、非完全ヒト抗体または非ヒト種において生成された非ヒト抗体、例えば、非ヒト動物においてヒト抗原に対して産生された抗体を例とする完全にヒトのものではない抗原結合タンパク質と、広く関連性のある有害な免疫またはアレルギー応答を最小化させる。
【０３２３】
薬学的組成物の投与経路は、既知の方法に従い、例えば、経口、静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、門脈内、または病巣内経路による注射を通じてのもの、持続放出システムまたは埋め込み装置によるものである。ある特定の実施形態において、本組成物は、ボーラス注入によって、連続的注入によって、または埋め込み装置によって、投与することができる。
【０３２４】
本組成物はまた、所望の分子が吸収または封入されている膜、スポンジ、または別の適切な物質の埋め込みを介して、局所的に投与することができる。ある特定の実施形態において、埋め込み装置を使用する場合、その装置は、任意の好適な組織または器官に埋め込むことができ、所望の分子の送達は、拡散、徐放性ボーラス、または連続的投与を介して行うことができる。
【０３２５】
抗原結合タンパク質の薬学的組成物を、エキソビボで使用することが望ましい場合もある。このような事例において、患者から摘出された細胞、組織、または器官を、抗原結合タンパク質の薬学的組成物に暴露し、その後で、細胞、組織、および／または器官を、患者に移植して戻す。
【０３２６】
具体的には、β−クロトと（ｉ）ＦＧＦＲ１ｃ、（ｉｉ）ＦＧＦＲ２ｃ、および（ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３ｃのうちの少なくとも１つとを含む複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質は、本明細書に記載のものおよび当該技術分野で既知のもの等の方法を使用して、ポリペプチドを発現および分泌するように遺伝子操作が行われたある特定の細胞を移植することによって、送達することができる。ある特定の実施形態において、このような細胞は、動物またはヒトの細胞であってもよく、自己、非相同、または異種であり得る。ある特定の実施形態において、細胞を不死化することができる。他の実施形態において、免疫学的応答の可能性を減少させるために、細胞をカプセル封入して、周辺組織の浸潤を回避することができる。さらなる実施形態において、カプセル封入の材料は、典型的に、タンパク質生成物（複数可）の放出を可能にするが、患者の免疫系または周辺組織からの他の有害因子による細胞の破壊を阻止する、生体適合性の半透過性のポリマー封入物または膜である。
【０３２７】
併用療法
別の態様において、本開示は、本明細書に記載の完全ヒト治療抗体等、本開示の治療的抗原結合タンパク質を、１つ以上の他の治療とともに用いて、対象の糖尿病を治療する方法を提供する。一実施形態において、そのような併用療法は、相加または相乗効果を達成する。抗原結合タンパク質は、現在利用可能な２型糖尿病または肥満の治療薬のうちの１つ以上と組み合わせて、投与することができる。これらの糖尿病治療薬には、ビグアニド（メタホルミン（ｍｅｔａｆｏｒｍｉｎ））、およびスルホニル尿素（グリブリド、グリピジド等）が含まれる。グルコース恒常性を維持することを目的としたさらなる治療薬には、ＰＰＡＲγアゴニスト（ピオグリタゾン、ロシグリタゾン）、グリニド（メグリチニド、レパグリニド、ナテグリニド）、ＤＰＰ−４阻害剤（Ｊａｎｕｖｉａ（登録商標）およびＯｎｇｌｙｚａ（登録商標））、ならびにαグルコシダーゼ阻害剤（アカルボース、ボグリボース）が挙げられる。
【０３２８】
糖尿病のためのさらなる併用治療薬には、インスリンおよびインクレチン模倣体（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標）、Ｅｘｅｎａｔｉｄｅ（登録商標））等の注射可能治療薬、Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標）（リラグルチド）等の他のＧＬＰ−１（グルカゴン様ペプチド）類似体、他のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト、およびＳｙｍｌｉｎ（登録商標）（プラムリンチド）が含まれる。
【０３２９】
体重の減少を目的とした、さらなる併用治療薬には、Ｍｅｒｉｄｉａ（登録商標）およびＸｅｎｉｃａｌ（登録商標）が含まれる。
【実施例】
【０３３０】
以下の実施例は、行われた実験および得られた結果を含み、単に例示の目的で提供されるものであり、制限するものとして解釈されるものではない。
【０３３１】
実施例１
抗原として使用するためのＦＧＦＲ１ｃおよびβ−クロトを過剰発現する細胞の調製
全長ヒトＦＧＦＲ１ｃポリペプチド（配列番号４、図１Ａ〜１Ｂ）をコードする核酸配列と、全長ヒトβ−クロトポリペプチド（配列番号７、図２Ａ〜２Ｃ）をコードする別の核酸配列を、好適な哺乳動物細胞発現ベクターにサブクローニングした（例えば、ｐｃＤＮＡ３．１  Ｚｅｏ、ｐｃＤＮＡ３．１  Ｈｙｇ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、またはｐＤＳＲα２４。ｐＤＳＲα２４ベクターは、目的の遺伝子を発現するためのＳＶ４０初期プロモーター／エンハンサー、およびＡＭ１／Ｄ  ＣＨＯ（ＤＧ４４の誘導体、ＣＨＯ  ＤＨＦＲ（−））等のＣＨＯ  ＤＨＦＲ（−）宿主細胞における選択のためのマウスＤＨＦＲ発現カセットを含有する。
【０３３２】
ＡＭ−１／Ｄ  ＣＨＯ細胞に、標準的な哺乳動物細胞発現ベクター、例えば、ｐｃＤＮＡ３．１  ｐｕｒｏおよびｐｃＤＮＡ３．１  Ｈｙｇにおいて、ｈｕＦＧＦＲ１ｃおよびｈｕβ−クロトの線状化ＤＮＡを、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ  ＣＡ）を用いてトランスフェクトした。トランスフェクトした細胞を、トランスフェクションの２日後にトリプシン処理し、対応する選択薬物、すなわち、ピューロマイシンおよびハイグロマイシンを含有する培地に播種した。２週間後、結果として得られたトランスフェクトしたコロニーを、トリプシン処理し、プールした。プールからの単細胞コロニーを単離し、ＦＡＣＳにおいてｈｕＦＧＦＲ１ｃおよびｈｕβクロトに対する抗体でスクリーニングし、２つの受容体成分が高レベルで均衡して発現したため、クローン１６を選択した。
【０３３３】
クローン１６に由来する２×１０ｅ９個の新しい細胞を、ローラーボトルから、より少量でＰＢＳ中に採取し、１０μｇ／ｍｌの組み換えＦＧＦ２１（Ａｍｇｅｎ，Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ  ＣＡ）とともに、４Ｃで１時間インキュベートして、細胞表面受容体を有する複合体を形成した。細胞を、低温ＰＢＳで２回洗浄し、遠心分離によってペレット状にし、免疫付与のために個別のバイアル中に２×１０ｅ８個の細胞で凍結させた。
【０３３４】
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に、ｈｕＦＧＦＲ１ｃの切断型を発現するＤＮＡ（シグナルペプチドＶＨ２１は、欠失によりＤ１ドメインおよび酸性ボックス（ａｃｉｄｉｃ  ｂｏｘ）（ＡＢ）の両方が除去された、残りのＦＧＦＲ１ｃのアミノ酸残基＃１４１〜＃８２２（配列番号４中）に結合させた）、およびｐｃＤＮＡ３．１シリーズまたはｐＴＴ５（ＣＭＶプロモーターおよびＥＢＶ  ｏｒｉを有する、Ｄｕｒｏｃｈｅｒ，ＮＲＣＣよって開発された発現ベクター）に基づく一過性発現のためのベクターにおいて全長ｈｕβ−クロトを発現するＤＮＡを、トランスフェクトした。ＦＧＦＲ１ｃにおけるＤ１−ＡＢの除去は、この自己阻害性ドメインによって隠れている可能性のある、ＦＧＦＲ１ｃ（例えば、Ｄ２およびＤ３ドメイン内）上のエピトープを暴露するように設計した（Ｍｏｈａｍｍａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，１６，１０７−１３７、Ｇｕｐｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４０８：４９１−５０２を参照されたい）。
【０３３５】
トランスフェクトした２９３Ｔ細胞における、β‐クロトおよび切断型ＦＧＦＲ１ｃの発現を、ＦＡＣＳにおいて、それぞれの特異的抗体によって検証し、細胞を、トランスフェクションの３日後に採取し、免疫付与のために細胞ペレットとしてアリコートに凍結させた。
【０３３６】
ＦＧＦＲ１ｃおよびβ‐クロトを個々にかまたは一緒に発現する安定なＣＨＯまたは一過性トランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞もまた生成し、免疫付与後にＦＡＣＳによってマウス血清を滴定するため、およびＦＭＡＴによってハイブリドーマ上清を結合スクリーニングするために使用した（実施例３を参照されたい）。
【０３３７】
実施例２
モノクローナル抗体の調製
免疫付与を、以下のものを含む、ＦＧＦ２１受容体抗原の１つ以上の好適な形態を使用して、実行した：（１）配列番号４（図１ａ〜ｂもまた参照されたい）のヒト全長ＦＧＦＲ１ｃポリペプチドをコードするｃＤＮＡ、および配列番号７（図２ａ〜ｃもまた参照されたい）のヒトβ−クロトポリペプチドをコードするｃＤＮＡを、細胞間で均衡ののとれた比率で、ＣＨＯ細胞にトランスフェクトし、凍結させる前のＦＧＦ２１とともにインキュベートすることによって得られた、細胞表面で全長ヒトＦＧＦＲ１ｃおよびβ−クロトを発現する、ＣＨＯトランスフェクタントの細胞結合受容体、（２）全長ヒトβ−クロト、および配列番号４のアミノ酸残基１４１〜８２２ポリペプチドを包含するヒトＦＧＦＲ１ｃのＮ末端切断形態（ＦＧＦＲ１ｃのＤ１ドメインが欠失している）を発現する、２９３Ｔトランスフェクタントの細胞結合受容体。
【０３３８】
好適な量の免疫原（すなわち、３〜４×１０６細胞／マウスの上記の安定にトランスフェクトしたＣＨＯ細胞または一過性トランスフェクトした２９３Ｔ細胞を、参照によってそれらの開示が本明細書に組み込まれる、１９９６年１２月３日に出願された米国特許出願第０８／７５９，６２０号、ならびに国際特許出願第ＷＯ９８／２４８９３号および同第ＷＯ００／７６３１０号に開示される方法による、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）での初期免疫付与に使用した。初期免疫付与の後、続いて、追加免疫の免疫原（１．７×１０６のＦＧＦ２１Ｒトランスフェクト細胞／マウス）を、スケジュールに従って、マウスにおいて好適な抗ＦＧＦ２１Ｒ力価を誘発するのに必要な期間、投与した。力価を、好適な方法、例えば、酵素免疫測定法、蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）、または他の方法（酵素免疫測定法とＦＡＣＳの組み合わせを含む）によって、判定した。
【０３３９】
好適な力価を示す動物を特定し、リンパ球を、流入領域リンパ節から採取し、必要であれば、コホートごとにプールした。リンパ球を、好適な培地（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡから入手したダルベッコ変法イーグル培地、ＤＭＥＭ）中で粉砕することによってリンパ組織から解離させ、組織から細胞を放出させて、ＤＭＥＭ中に懸濁させた。Ｂ細胞を、標準的な方法を使用して選択および／または増殖し、当該技術分野で既知の技術を使用して、好適な融合パートナー、例えば、非分泌性骨髄腫Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ＣＲＬ  １５８０、Ｋｅａｒｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ，（１９７９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２３：１５４８−１５５０）と、融合させた。
【０３４０】
１つの好適な融合方法においては、リンパ球を、融合パートナー細胞と、１：４の比率で混合した。細胞混合物を、４００×ｇで４分間の遠心分離によって、緩やかにペレット状にし、上清を傾瀉し、細胞混合物を、（例えば、１ｍｌのピペットを使用することによって）穏やかに混合した。融合を、ＰＥＧ／ＤＭＳＯ（ポリエチレングリコール／ジメチルスルホキシド、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ  ＭＯから入手、リンパ球１００万個につき１ｍｌ）で誘発した。ＰＥＧ／ＤＭＳＯを、穏やかに撹拌しながら１分間にわたりゆっくりと添加し、続いて１分間混合した。ＩＤＭＥＭ（グルタミンなしのＤＭＥＭ、Ｂ細胞１００万個につき２ｍｌ）を、次いで、穏やかに撹拌しながら２分間にわたって添加し、続いて、３分間にわたって追加のＩＤＭＥＭ（Ｂ細胞１００万個につき８ｍｌ）を添加した。
【０３４１】
融合細胞を、ペレット状にし（４００×ｇで６分間）、Ｂ細胞１００万個につき２０ｍｌの選択培地（例えば、アザセリンおよびヒポキサンチン［ＨＡ］、ならびに必要に応じて他の追加物質を含有するＤＭＥＭ）中に、再懸濁した。細胞を、３７℃で２０〜３０分間インキュベートし、次いで、２００ｍｌの選択培地中に再懸濁し、９６ウェルプレートに播種する前にＴ１７５フラスコ中で３〜４日間培養した。
【０３４２】
細胞を、結果として得られたコロニーのクローン性を最大化させるように、標準的な技術を使用して、９６ウェルプレートに分配した。代替的な方法もまた採用し、融合細胞を、出発物質からの単一クローン性を確保するために３８４ウェルプレートに直接クローン的に播種した。数日間の培養後、上清を回収し、以下の実施例で詳述される、ヒトＦＧＦ２１受容体への結合、特異性、および／または種間反応性の確認を含む、スクリーニングアッセイに供した。陽性細胞を、さらに選択し、標準的なクローニングおよびサブクローニング技術を施した。クローン系をインビトロで増殖させ、分泌されたヒト抗体を、分析用に得た。
【０３４３】
この方法で、マウスを、ＦＧＦ２１と混合した全長ＦＧＦ２１Ｒ細胞を発現する細胞、または切断型ＦＧＦＲ１ｃおよび全長β−クロトを発現する細胞で、おおよそ１〜３か月半の期間にわたって、１１〜１７回の範囲の免疫付与によって、免疫付与した。ＦＧＦ２１Ｒ特異的抗体を分泌するいくつかの細胞系が得られ、これらの抗体に、さらに特徴付けを行った。それらの配列を、本明細書および配列表に提示し、これらの抗体を使用した種々の試験の結果を提供する。
【０３４４】
実施例３
ＦＭＡＴによる結合抗体の選択
１４日間の培養後、ハイブリドーマの上清を、Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ  Ｍｉｃｒｏｖｏｌｕｍｅ  Ａｓｓａｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＦＭＡＴ）により、ヒトＦＧＦ２１ＲをトランスフェクトしたＣＨＯ  ＡＭ１／Ｄ／ｈｕＦＧＦ２１Ｒ細胞系または組み換えＨＥＫ２９３細胞のいずれかに対してスクリーニングし、ＣＨＯまたはＨＥＫ２９３の親細胞に対して対抗スクリーニングすることによって、ＦＧＦＲ２１Ｒ特異的モノクローナル抗体について、スクリーニングした。簡単に言うと、Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中の細胞を、５０μＬ／ウェルの体積で、安定トランスフェクタントについては４，０００細胞／ウェルの密度で、親細胞については１６，０００細胞／ウェルの密度で、３８４ウェルＦＭＡＴプレートに播種し、細胞を、３７℃で一晩インキュベートした。次いで、１０μＬ／ウェルの上清を添加し、プレートを、おおよそ１時間、４℃でインキュベートし、その後、１０μＬ／ウェルの抗ヒトＩｇＧ−Ｃｙ５二次抗体を、２．８μｇ／ｍｌの濃度で添加した（最終濃度４００ｎｇ／ｍｌ）。次いで、プレートを、４℃で１時間インキュベートし、ＦＭＡＴ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、蛍光を読み取った。
【０３４５】
ＦＭＡＴ法により、合計で１，５００を上回るハイブリドーマ上清が、ＦＧＦ２１受容体発現細胞に結合するが、親細胞には結合しないと特定された。これらの上清を、次いで、以下に記載のＦＧＦ２１機能性アッセイにおいて試験した。
【０３４６】
実施例４
ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発する抗体の選択
好適なＦＧＦ２１レポーターアッセイを使用して、野生型ＦＧＦ２１活性（例えば、ＦＧＦ２１様シグナル伝達を誘発する能力）を模倣する機能性抗体を特定するための実験を行った。本開示のＦＧＦ２１レポーターアッセイは、ＭＡＰＫ経路の読み出しを介してＦＧＦＲシグナル伝達の活性化を測定する。β‐クロトは、ＦＧＦ２１シグナル伝達の共受容体であり、その細胞質ドメインが非常に短いため、固有のシグナル伝達能力を有さないと考えられているが、これは、ＦＧＦ２１がＦＧＦＲを通じてシグナル伝達を誘発するために必要とされる。
【０３４７】
実施例４．１
ＥＬＫ−ルシフェラーゼレポーターアッセイ
ＥＬＫ−ルシフェラーゼアッセイを、組み換えヒト２９３Ｔ腎臓細胞またはＣＨＯ細胞系を使用して行った。具体的には、宿主細胞を、β−クロトおよびルシフェラーゼレポーター構築物を過剰発現するように遺伝子操作した。レポーター構築物は、Ｇａｌ４結合部位の５つの連続するコピーを含むプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーターである、ＧＡＬ４−ＥＬＫ１および５ｘＵＡＳ−Ｌｕｃをコードする配列を含有する。これらの組み換えレポーター細胞系におけるＦＧＦ２１受容体複合体の活性化は、細胞内シグナル伝達を誘発し、これが、次にＥＲＫおよびＥＬＫリン酸化をもたらす。ルシフェラーゼ活性は、リン酸化ＥＬＫのレベルによって制御され、ＦＧＦ２１活性を間接的に監視および定量化するために使用される。
【０３４８】
１つの例では、ＣＨＯ細胞を、製造業者のプロトコルに従って、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００トランスフェクション試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、β‐クロト、ＦＧＦＲ１ｃを発現する受容体構築物、ならびにレポータープラスミドである５×Ｇａｌ４−ルシフェラーゼ（ルシフェラーゼの上流に５×Ｇａｌ４結合部位を有する最小ＴＫプロモーター）およびＧａｌ４−ＥＬＫ１で、順にトランスフェクトした。Ｇａｌ４−ＥＬＫ１は、Ｇａｌ４結合部位に結合し、ＥＲＫによってリン酸化されると転写を活性化する。ルシフェラーゼ転写、およびこの状況におけるそれによる対応する酵素活性は、リン酸化ＥＬＫ１のレベルによって制御され、ＦＧＦ２１活性の間接的な監視および定量化に使用される。
【０３４９】
一桁のｎＭ範囲でＥＣ５０を示す天然のＦＧＦ２１を用いた１０〜２０倍の最適なアッセイウィンドウに基づいて、クローン１６を、ＦＧＦ２１ルシフェラーゼレポーター細胞系として選択した。
【０３５０】
アッセイについては、ＥＬＫ−ルシフェラーゼレポーター細胞を、９６ウェルアッセイプレートに播種し、一晩血清飢餓させた。ＦＧＦ２１または試験試料を、３７℃で６時間添加した。プレートを、次いで、室温まで冷却し、細胞溶解物中のルシフェラーゼ活性を、Ｂｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で測定した。
【０３５１】
実施例４．２
ＥＲＫ−リン酸化アッセイ
代替の宿主細胞系、具体的にはＬ６（ラット筋芽細胞系）を、成長させて、ＦＧＦ２１様シグナル伝達活性を有する抗体を特定するために適用した。ラットＬ６細胞系は、最小限のレベルの内因性ＦＧＦ受容体を発現することが知られているため、活性アッセイに望ましい宿主細胞系である。Ｌ６細胞は、βクロト発現ベクターをトランスフェクトした場合ですら、ＦＧＦ２１に応答せず、したがって、より鮮明なバックグラウンドを提供する。（Ｋｕｒｏｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２，２６６８７−２６６９５）。
【０３５２】
複数の健康な非糖尿病ドナーの皮下脂肪組織から単離したヒト初代前脂肪細胞を、Ｚｅｎ−Ｂｉｏ，Ｉｎｃから購入した。前脂肪細胞を、２４ウェルプレートに播種し、１８日間、成熟脂肪細胞に分化させた。３時間の飢餓期間後、脂肪細胞を、異なる濃度の試験分子で１０分間処理した。処理に続いて、培地を吸引し、細胞を、液体窒素で瞬間凍結させた。細胞溶解物を調製し、ＥＲＫリン酸化を、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  ＤｉｓｃｏｖｅｒｙからのＰｈｏｓｐｈｏ−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４；Ｔｈｒ１８５／Ｔｙｒ１８７）／Ｔｏｔａｌ  ＥＲＫ１／２  Ａｓｓａｙ  Ｗｈｏｌｅ  Ｃｅｌｌ  Ｌｙｓａｔｅ  Ｋｉｔを使用して、測定した。
【０３５３】
Ｌ６細胞を、１０％ウシ胎児血清およびペニシリン／ストレプトマイシンを補充したダルベッコ変法イーグル培地で維持した。細胞に、製造業者のプロトコルに従って、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００トランスフェクション試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、β−クロトおよび個々のＦＧＦＲを発現するプラスミドをトランスフェクトした。
【０３５４】
Ｌ６細胞におけるＦＧＦシグナル伝達の分析を、文献に記載のように行った（Ｋｕｒｏｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２，２６６８７−２６６９５）。細胞培養物を、ＦＧＦ２１または試験分子による処理の１０分後に回収し、液体窒素中で瞬間凍結させ、溶解緩衝液中で均質化し、ＥＲＫリン酸化を、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ」からのＰｈｏｓｐｈｏ−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４；Ｔｈｒ１８５／Ｔｙｒ１８７）／Ｔｏｔａｌ  ＥＲＫ１／２  Ａｓｓａｙ  Ｗｈｏｌｅ  Ｃｅｌｌ  Ｌｙｓａｔｅ  Ｋｉｔを使用して測定した。
【０３５５】
さらに、サイトカイン受容体に頻繁に用いられる因子依存性マウスＢａＦ３細胞に基づく増殖アッセイもまた、展開および適用することができる。
【０３５６】
ＣＨＯ細胞（クローン１６）に基づくヒトＦＧＦ２１  ＥＬＫ−ルシフェラーゼレポーターアッセイで試験したハイブリドーマ上清の中で、陽性対照として２０ｎＭ  ＦＧＦ２１と比較した場合、１４０を上回るものが陽性と特定された（ＦＧＦ２１活性の＞２０％）（図３および４）。抗体を、これらの陽性のハイブリドーマ培養物の条件培地から精製し、ＣＨＯ細胞に基づくＥＬＫ−ルシフェラーゼレポーターアッセイで再試験して、代表的な抗体の強度を用量応答性アッセイにおいて評価し、ＥＣ５０を判定することができる。活性および強度は、Ｌ６細胞に基づくＥＲＫ１／２−リン酸化アッセイで確認することができる。ＥＣ５０は、ＣＨＯ安定細胞系クローン１６でのＥＬＫ−ルシフェラーゼアッセイと一致することが予測される。
【０３５７】
実施例５
ＦＧＦ２１様シグナル伝達の誘発がβクロト複合体に特異的であることを判定する
ＦＧＦ２１は、β‐クロトと対合すると、ＦＧＦＲ１ｃ、２ｃ、３ｃ、および４を含む複数の受容体複合体を通じてシグナル伝達を行うことが報告されている。ＦＧＦ２１アゴニスト抗体の選択性は、実施例４．２に記載のように、それぞれのＦＧＦＲおよびβ‐クロトを発現するベクターをトランスフェクトしたラット筋芽細胞Ｌ６において判定することができる。
【０３５８】
観察された選択性は、これらの抗体の作用が、β−クロト依存性であるが、依然としてシグナル伝達複合体のＦＧＦＲ要素もまた関与するに違いないということを強く示唆した。結果を以下の表６に記載する。
【０３５９】
【表９】
2014518640.tif 000226
【０３６０】
実施例５．１
結合特異性はβ−クロトにのみ依存性である
ハイブリドーマ上清中のレポーターアッセイ陽性抗体の結合特異性を、全長ＦＧＦＲ１ｃ単独、β‐クロト単独、またはＦＧＦＲ１ｃおよびβ‐クロトを共に発現するように、一過性トランスフェクトした２９３Ｔ細胞を使用して、ＦＡＣＳによって判定した。β−クロト単独に結合したものは９８％を上回ったが（１４３ハイブリドーマ中１４１）、ＦＧＦＲ１ｃ単独に結合したものはなかった。
【０３６１】
実施例６
初代ヒト脂肪細胞での活性
ＦＧＦ２１は、培養脂肪細胞においてグルコースの取り込みおよび脂肪分解を刺激し、脂肪細胞は、組み換えレポーター細胞系よりも生理学的に適切であると考えられる。
【０３６２】
抗体パネルを、実施例４．２に記載のように、ヒト脂肪細胞アッセイにおいてＥｒｋ−リン酸化活性について試験し、それらのＥＣ５０についてＦＧＦ２１と比較した。結果を以下の表１０に記載する。
【０３６３】
【表１０】
2014518640.tif 000227
【０３６４】
実施例７
競合結合およびエピトープビニング
ＦＧＦ２１受容体上での抗体の結合部位の類似性を比較するために、一連の競合結合実験を行い、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定することができる。１つの例において、代表的なアゴニストＦＧＦ２１受容体抗体（および任意の対照）を、センサーチップ表面に固定することができる。次いで、可溶性ヒトＦＧＦＲ１ｃ／β‐クロトＥＣＤ−Ｆｃ複合体またはβ‐クロトを、固定化した抗体表面に捕捉することができる。最後に、試験ＦＧＦ２１受容体抗体のうちのいくつかを、捕捉した可溶性ヒトＦＧＦ２１受容体またはβ−クロトに、個別に注入することができる。注入した抗体が、固定化した抗体によって認識されたものとは異なる結合部位を認識する場合、第２の結合イベントが観察されることになる。抗体が、非常によく似た結合部位を認識する場合、それ以上の結合が観察されることはない。
【０３６５】
代替として、または追加として、Ｂｉａｃｏｒｅ分析を、センサーチップ上に固定化したビオチニル化ＦＧＦ２１を用いて行ってもよい。１０ｎＭの可溶性β‐クロトを、次いで、単独でか、または個々の試験抗体１００ｎＭと混合して、チップ上に移す。結果を以下の表１１に記載する。
【０３６６】
【表１１】
2014518640.tif 000228
【０３６７】
実施例８
天然または変性の構造の認識
開示される抗原結合タンパク質が変性および天然の構造を認識する能力について調査した。手順および結果は、以下の通りであった。
【０３６８】
実施例８．１
ＦＧＦ２１受容体アゴニスト抗体は変性構造を認識しない
ＦＧＦ２１受容体（ＦＧＦＲ１ｃおよびβ−クロト）を安定して発現するＣＨＯ細胞またはＣＨＯ親細胞に由来する細胞溶解物を、β−メルカプトエタノールを含まない試料緩衝液で希釈した（非還元条件）。４〜２０％のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で、隣接するレーンが分子量マーカーレーンで分離された各レーンに、２０μｌの細胞溶解物を充填した。電気泳動後、ゲルを０．２μニトロセルロースフィルターにブロットした。ブロットを、５％脱脂乳（ブロッキング緩衝液）を加えたトリス緩衝生理食塩水／Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ（ＴＢＳＴ）で３０分間処理した。ブロットを、続いて、分子量マーカーレーンに沿って切り取った。この条片を、ＴＢＳＴ／５％乳中、市販のヤギ抗マウスβクロトまたはマウス抗ｈｕＦＧＦＲ１（Ｒ＆Ｄ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）でプローブした。ブロットを、室温で１時間、抗体とともにインキュベートし、続いて、ＴＢＳＴ＋１％乳で３回洗浄した。ブロットを、次いで、抗ヒトまたは抗ヤギＩｇＧ−ＨＲＰ二次抗体で２０分間プローブした。ブロットに、ＴＢＳＴでの１５分間の洗浄を３回行い、続いて、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｓｕｐｅｒｓｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｄｕｒａ現像試薬で処理し（１分間）、Ｋｏｄａｋ  Ｂｉｏｍａｘ  Ｘ線フィルムに暴露した。
【０３６９】
市販の抗β‐クロトおよび抗ＦＧＦＲ１抗体は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて対応する受容体タンパク質を検出し、それらが、変性した受容体タンパク質に結合することを示す。
【０３７０】
実施例８．２
ＦＧＦ２１受容体アゴニスト抗体は天然の受容体構造に結合する
ＦＡＣＳ結合アッセイを、いくつかの市販入手可能なＦＧＦＲ１ｃおよびβ−クロト抗体、ならびに本開示のＦＧＦ２１受容体アゴニスト抗体のいくつかを用いて行った。実験は、以下のように行った。
【０３７１】
ＦＧＦ２１受容体を安定して発現するＣＨＯ細胞を、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓのマウス抗ｈｕＦＧＦＲ１、ヤギ抗ｍｕβ‐クロト（１００μｌ  ＰＢＳ／０．５％ＢＳＡ中、１×１０６細胞あたり１μｇ）で処理した。細胞を、４℃で抗体とともにインキュベートし、続いて、ＰＢＳ／ＢＳＡで２回洗浄した。次いで、細胞を、４℃でＦＩＴＣ標識二次抗体で処理し、続いて２回洗浄した。細胞を１ｍｌのＰＢＳ／ＢＳＡ中に再懸濁し、抗体結合を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（商標）装置を使用して分析した。
【０３７２】
試験した市販の抗β‐クロトまたは抗ＦＧＦＲ１抗体のいずれも、ＦＡＣＳによって判定すると、細胞表面ＦＧＦ２１受容体に結合しなかった。この観察結果は、受容体成分に対する市販の抗体は、変性または非天然の構造に結合するが、一方で、本明細書に開示されるアゴニスト抗体の全てが、初期スクリーニングであったＦＡＣＳまたはＦＭＡＴによって示されるように、細胞表面の受容体に結合することを、さらに確認した。
【０３７３】
実施例９
アルギニンスキャニング
上述のように、ｂ−クロトとＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、およびＦＧＦＲ３ｃのうちの１つとを含む複合体に結合する抗原結合タンパク質を作製し、特徴付けを行うことができる。これらの種々の抗原結合タンパク質が結合したヒトＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロト上の中和決定基を判定するために、ヒトＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロトの選択されたアミノ酸残基にアルギニン置換を有する多数の突然変異ＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロトタンパク質を、構築することができる。アルギニンスキャニングは、抗体または他のタンパク質が、別のタンパク質に結合することを評価する、当該技術分野で認識されている方法であり、例えば、Ｎａｎｅｖｉｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７０：３７，２１６１９−２５およびＺｕｐｎｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８１：２９，２０４６４−７３を参照されたい。一般的には、アルギニン側鎖は、正の電荷を有し、他のアミノ酸と比較すると比較的かさ高く、このため、突然変異が導入された抗原の領域への抗体の結合を乱すことができる。アルギニンスキャニングは、残基が中和決定基および／またはエピトープの一部であるかどうかを判定する方法である。
【０３７４】
ヒトＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロト細胞外ドメイン全体に分布する種々のアミノ酸を、アルギニンへの突然変異に選択することができる。荷電または極性アミノ酸に偏った選択を行い、表面上に存在する残基の可能性を最大化し、誤って折り畳まれたタンパク質をもたらす突然変異の可能性を減少させることができる。当該技術分野で既知の標準的な技術を使用して、突然変異した残基を有するセンスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドを、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  Ｑｕｉｃｋｃｈａｎｇｅ（登録商標）ＩＩプロトコルキット（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ／Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，ＣＡ）によって提供される基準に基づいて、設計することができる。野生型（ＷＴ）ＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロト配列の突然変異生成を、Ｑｕｉｃｋｃｈａｎｇｅ（登録商標）ＩＩキット（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を使用して行うことができる。キメラ構築物を、細胞外ドメインのカルボキシ末端でＦＬＡＧ−ヒスチジンタグ（６つのヒスチジン（配列番号１８３０））をコードするように遺伝子操作し、ポリ−Ｈｉｓタグを介して精製を促進することができる。
【０３７５】
Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘワークステーションおよびソフトウェア（ＢｉｏＲａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を使用した多重分析を行って、例となるヒトＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロトｍＡｂのアルギニン変異体への結合を、野生型ＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロトタンパク質と比較して分析することによって、ヒトＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロト上の中和決定基を判定することができる。任意のビーズコード番号のペンタＨｉｓコーティングされたビーズ（「ペンタ−Ｈｉｓ」は配列番号１８３１として開示）（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を使用して、ヒスチジンタグタンパク質を捕捉することができる。ビーズコードは、ＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロトアルギニン突然変異体および野生型ヒトＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロトの多重化を可能にすることができる。
【０３７６】
ビーズを調製するために、一過性発現培地からの野生型ＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロト、ならびにＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロトアルギニン突然変異体の上清１００ｕｌを、４℃で一晩、または室温で２時間、激しく振動させながら、ペンタ−Ｈｉｓコーティングビーズ（「ペンタ−Ｈｉｓ」は配列番号１８３１として開示）に結合させる。ビーズを、次いで、製造業者のプロトコルに従って洗浄し、ビーズセットをプールし、それぞれ、２または３通りのアッセイ点のために、９６ウェルフィルタープレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ，製品＃ＭＳＢＶＮ１２５０）の２つまたは３つのカラムに等分する。４倍希釈の抗ＦＧＦＲ１ｃおよび／または抗β−クロト抗体１００μｌを、ウェルに追加し、室温で１時間インキュベートし、洗浄する。１：１００希釈のＰＥ抱合抗ヒトＩｇＧＦｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ．，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）１００μｌを、各ウェルに添加し、室温で１時間インキュベートし、洗浄する。ビーズを、１％ＢＳＡ中に再懸濁し、３分間振動させ、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘワークステーション上で読み取る。ＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロトアルギニン突然変異体タンパク質への抗体結合を、抗体  同じプールからのヒトＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロト野生型への抗体結合と比較する。おおよそ５対数スケールにわたる抗体の滴定を行ってもよい。ＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロトアルギニン突然変異体タンパク質の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、野生型ヒトＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロトの最大シグナルのパーセントとしてグラフにすることができる。全ての抗体からのシグナル伝達が、カットオフ値、例えば、野生型ＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロトの３０％よりも低い、突然変異体は、一過性培地での発現不足のためにビーズ上のタンパク質が低すぎるか、または誤って折り畳まれた可能性があるかのいずれかであると見なすことができ、分析から除外することができる。ＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロトｍＡｂのＥＣ５０を、カットオフ値、例えば、３倍以上（例えば、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）によって測定される）増加させる突然変異（すなわち、アルギニン置換）は、ＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロトｍＡｂの結合に悪影響を及ぼしたと見なすことができる。これらの方法を通じて、種々のＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロト抗体の中和決定基およびエピトープを解明する。
【０３７７】
実施例１０
プロテアーゼ保護分析
ヒトＦＧＦ２１受容体、例えば、ＦＧＦＲ１ｃ、β−クロト、またはＦＧＦＲ１ｃとβ−クロトとの複合体に結合する抗原結合タンパク質によって結合されたヒトＦＧＦ２１受容体の領域は、ヒトＦＧＦ２１受容体を、特異的プロテアーゼ、例えば、ＡｓｐＮ、Ｌｙｓ−Ｃ、キモトリプシン、またはトリプシンで、ペプチドにフラグメント化することによって、特定することができる。結果として得られたヒトＦＧＦ２１受容体ペプチド（すなわち、ＦＧＦＲ１ｃおよびβ−クロト部分に由来する、ジスルフィド含有および非ジスルフィド含有両方のペプチドフラグメント）の配列を、次に判定することができる。１つの例において、ヒトＦＧＦ２１受容体、例えば、本明細書に記載される、ＦＧＦＲ１ｃ  ＥＣＤ−Ｆｃおよびβ−クロトＥＣＤ−Ｆｃヘテロ二量体を含む複合体の可溶性形態を、０．１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．５）中１．０ｍｇ／ｍｌの可溶性ＦＧＦ２１受容体約１００μｇを、２μｇのＡｓｐＮとともに、３７℃で２０時間インキュベートすることによって、ＡｓｐＮ（アミノ末端で、アスパラギン酸またはいくつかのグルタミン酸残基の後を開裂させる）で消化することができる。
【０３７８】
次いで、ＡｓｐＮ消化物のペプチドプロファイルを、ＨＰＬＣクロマトグラフィーで生成することができ、類似する量の抗体での対照の消化は、ＡｓｐＮエンドプロテアーゼに対して本質的に耐性を有することが予測される。続いて、プロテアーゼ保護アッセイを実行し、抗原結合タンパク質の存在下におけるヒトＦＧＦ２１受容体のタンパク質分解消化を判定することができる。このアッセイの一般的な原理は、抗原結合タンパク質のＦＧＦ２１受容体への結合が、ある特定の特異的プロテアーゼ開裂部位の保護をもたらし得るというものであり、この情報を使用して、抗原結合タンパク質が結合するＦＧＦ２１受容体の領域または部分を判定することができる。
【０３７９】
簡単に言うと、ペプチド消化物を、ＨＰＬＣペプチドマッピングに供することができ、個々のピークを収集し、ペプチドを特定して、オンラインエレクトロスプレーイオン化ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ−ＬＣ−ＭＳ）分析および／またはＮ末端シークエンシングによってマッピングする。これらの研究のためのＨＰＬＣ分析は、オフラインでの分析については狭口径逆相Ｃ１８カラム（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、ＬＣ−ＭＳについてはキャピラリー逆相Ｃ１８カラム（Ｔｈｅ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｇｒｏｕｐ）を使用して、行うことができる。ＨＰＬＣペプチドマッピングは、０．０５％トリフルオロ酢酸（移動相Ａ）から０．０５％トリフルオロ酢酸中９０％アセトニトリルへの直線勾配を用いて行うことができる。カラムは、オフラインまたはオンラインのＬＣ−ＭＳ分析については狭口径ＨＰＬＣに、オンラインＬＣ−ＭＳ分析についてはキャピラリーＨＰＬＣに望ましい流速で、展開することができる。
【０３８０】
配列分析を、オンラインＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって、およびＨＰＬＣから回収したペプチドピークに対するエドマンシークエンシングによって行うことができる。ペプチド消化物のオンラインＥＳＩ  ＬＣ−ＭＳ分析を行って、ＨＰＬＣによって分離されたペプチドの正確な質量および配列を判定することができる。プロテアーゼ消化から得られたペプチドピークに存在する、選択されたペプチドの同一性を、判定することができる。
【０３８１】
実施例１１
キメラ受容体の構築
これらの種々の抗原結合タンパク質が結合する、活性化決定基を判定するさらなる方法は、以下の通りである。ヒトおよびマウス種間の特異的キメラＦＧＦＲ１ｃおよび／またはβ−クロトタンパク質を構築し、一過性または安定な２９３またはＣＨＯ細胞（本明細書に記載の）において発現させ、試験することができる。例えば、天然のヒトＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、ＦＧＦＲ３ｃ、またはＦＧＦＲ４受容体を含む、キメラＦＧＦ２１受容体を構築することができる。例として、ＦＧＦＲ１ｃ  を、ヒトβ−クロト上の選択された領域または配列が、対応するマウス特異的残基で系統的に置き換えられているキメラヒト／マウスβ−クロトと対合させることができる（例えば、図２Ａ〜２Ｃを参照されたい）。同様に、天然のヒトβ−クロトを、キメラヒト／マウスＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、ＦＧＦＲ３ｃ、またはＦＧＦＲ４と対合させることができる。この場合、ヒトＦＧＦＲ１ｃ上の選択された領域または配列が、対応するマウス特異的残基によって系統的に置き換えられている（例えば、図１Ａ〜１Ｂのアライメントを参照されたい）。抗原結合タンパク質の結合および／または活性に関与する重要な配列は、キメラＦＧＦ２１受容体に基づく前述の実施例４、５、６、および７に記載の結合アッセイおよび活性測定を通じて導出することができる。
【０３８２】
実施例１１．１特異的キメラの構築
ヒト−マウスβ−クロトキメラを、上述の方法を使用して構築した。構築したキメラの概略を、図４に示す。要約すると、生成されたキメラは、（Ｎ末端からＣ末端へ）ヒトβ−クロト配列がマウスβ配列に融合され、それがヒトβ−クロト配列に融合された、融合体を含んでいた。ヒトβ−クロト（配列番号８）を、フレームワーク領域として使用し、そこにマウスβ−クロト（全長配列を配列番号４６８に示す）の領域を挿入した。挿入したマウスβ−クロトの領域は、以下の通りであった。
【０３８３】
【化１５】
2014518640.tif 000229
2014518640.tif 000230
2014518640.tif 000231
【０３８４】
マウスΒ−クロト配列を使用して生成したキメラは、以下のものを含んでいた。
【０３８５】
【表１２】
2014518640.tif 000232
2014518640.tif 000233
【０３８６】
生成されたキメラは、以下のアミノ酸配列を含んだ。
【０３８７】
【化１６】
2014518640.tif 000234
2014518640.tif 000235
2014518640.tif 000236
2014518640.tif 000237
2014518640.tif 000238
2014518640.tif 000239
2014518640.tif 000240
2014518640.tif 000241
2014518640.tif 000242
【０３８８】
本明細書に提供される種々の抗原結合タンパク質、ならびにヒトＦＧＦ２１を、Ｌ６細胞においてキメラを活性化する能力について試験した。図５は、各試験した分子で観察された結果を示す。
【０３８９】
これらのデータは、ヒトＦＧＦ２１が全てのヒト／マウスβ−クロトキメラと組み合わせたＦＧＦＲ１cを活性化することができたが（「＋」記号は、受容体に対する活性を示す）マウス配列のヒトβ−クロトへの置換が、１６Ｈ７、３７Ｄ３、および３９Ｆ７の活性に影響を与えたことを示す（図５を参照されたい）。これらの結果は、β−クロト配列１〜８１、３０２〜５２２、および８４９〜１０４４が、アゴニスト抗原結合タンパク質の活性に重要であり、それらの機能に重要なエピトープを表し得ることを示唆する。
【０３９０】
さらに、種々の抗原結合タンパク質はまた、ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞の表面上に発現する種々のヒト／マウスβ−クロトキメラへの結合について、フローサイトメトリーによって試験した。トランスフェクションおよびフローサイトメトリーを、実施例１２に記載のように行った。全長マウスβ−クロトに交差結合する能力を有さない抗体は、キメラによって抗体の結合部位領域が分断される場合、ヒト／マウスβ−クロトキメラに結合することができないことが、理解されるであろう。この方法では、キメラパネル上の各抗体の結合プロファイルが、抗体のエピトープ情報を明らかにする。データを、以下の表１０に示す。抗β−クロト抗体２Ｇ１０（ヒトおよびマウスβ−クロトの両方に結合する）を、各ヒト／マウスキメラの発現の陽性対照として使用した。この陽性対照を使用して、キメラ７および８の発現レベルが、強固なデータを提供するためには十分に高くないことが判定され、したがって、これらは分析から除外した。１つの抗体２６Ｈ１１は、全長マウスβ−クロトに結合することがわかり、したがって、この分析ではエピトープを割り当てることができなかった。マウスβ−クロトに交差結合しなかった他の抗体は、エピトープ集団にグループ化することができた。第１の集団には、抗体１６Ｈ７、４６Ｄ１１、および４９Ｇ３．３が含まれ、これらの抗体は、キメラ＃３およびキメラ＃１２には結合せず、エピトープが１〜８１領域を含むことを示した。さらに、この抗体群はまた、キメラ１、５、６、および１４への結合が観察されず、これは、エピトープが、２９４〜５０６領域もまた含むことを示した。これらのことを合わせると、このデータは、これらの抗体が非直線型のエピトープの複合体を有することを示唆する。
【０３９１】
第２の集団には、抗体６５Ｃ３．１のみが含まれた。この抗体は、キメラ＃２、＃１１、および＃１４への結合が欠けており、８４９〜９３６の領域のエピトープを示した。第３の集団は、抗体４９Ｈ１２．１、５４Ａ１．１、４９Ｃ８．１、５１Ａ８．１、６３Ａ１０．１、６４Ｂ１０．１、６８Ｃ８．１、および３９Ｆ７を含み、キメラ＃１、＃５、および＃６への結合が欠けており、それらのエピトープが、３０２〜４１６の領域にあることを示した。第４の集団には、抗体６７Ｃ１０．１、５１Ｅ５．１、５２Ａ８．１、６６Ｇ２、１６７Ｆ５．１が含まれ、これらはキメラ＃２、＃８、＃９、＃１０、＃１１、および＃１４上での結合を欠いており、これらの抗体のエピトープが領域５０６〜１０４５内にあることを示した。表内の「＋」または「−」の記号は、キメラおよび／またはそれぞれのβ−クロトの相同分子種、または疑似細胞（陰性対照）への、それぞれの抗体の結合（「＋」）または結合が欠けていること（「−」）を示す。
【０３９２】
【表１３】
2014518640.tif 000243
【０３９３】
実施例１２
ＦＧＦ２１受容体アゴニスト抗体の結合選択性
ＦＧＦ２１受容体アゴニスト抗体のパネルを、ヒトＦＧＦＲ１／ヒトβクロトを一過性共トランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞、ヒトＦＧＦＲ１ｃを一過性トランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞、およびβ−クロトを一過性トランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞への結合について、フローサイトメトリーを使用してアッセイした。さらに、結合はまた、ＦＧＦＲ１ｃおよびβ−クロトのカニクイザル相同分子種を一過性トランスフェクトしたＨＥＫ−２９３Ｔにおいても試験した。細胞は、５００μｌのＯｐｔｉＭＥＭ（商標）培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標））中で１０μｇプラスミドＤＮＡを調製し、これを５００μｌのＯｐｔｉＭＥＭ（商標）培地中で１０μｌの２９３ｆｅｃｔｉｎ（商標）と混合し、次いで、この溶液を室温で５分間インキュベートすることによって、トランスフェクトした。この溶液を、次いで、１０ｍｌの培地中、１０００万のＨＥＫ２９３Ｔ細胞に滴下添加した。トランスフェクションの２４時間後、細胞を洗浄し、５０，０００細胞を、各一次抗体で染色し、５０μｌの未精製ハイブリドーマ上清を、１：２に希釈して、細胞染色に使用した。４℃で１時間インキュベートした後、細胞を洗浄し、抗ヒトＦｃ特異的二次抗体を追加した。染色した細胞を、次いで、フローサイトメーターで分析した。試験したハイブリドーマ上清パネルの全てが、ヒトβ−クロト／ヒトＦＧＦＲ１ｃを共トランスフェクトした細胞、ならびにヒトβ−クロトを単独でトランスフェクトした細胞に、特異的に結合した。データを以下の表１１に示す。ＦＧＦＲ１ｃを単独でトランスフェクトした細胞では、いずれの抗体についても染色は検出されなかった。６４Ｂ１０．１および６８Ｃ８．１を除く全ての抗体が、カニクイザルβ−クロト／カニクイザルＦＧＦＲ１ｃを共トランスフェクトした細胞に特異的に検出された。
【０３９４】
【表１４】
2014518640.tif 000244
【０３９５】
実施例１３
ホットスポット／共分散突然変異体
合計１７個の抗体を、可能性のあるホットスポットおよび共分散の妨害について分析した。設計した変異体（以下に示す）は、異性化、脱アミド化、酸化、共分散妨害等を低減および／または回避することができるアミノ酸置換の概要を示す。以下のデータにおいて、「０２  ４９Ｃ８．１＿ＶＫ：［Ｆ２１Ｉ］」は、２１位にＦ（Ｐｈｅ）からＩ（イソロイシン）への突然変異を有する、親抗体４９Ｃ８．１の変異体を指す。構造に基づく番号付けスキームは、指定するアミノ酸位に従うことに留意されたい。これらの単一点突然変異は、最終的な所望される分子に到達するために、任意のコンビナトリアル形式で組み合わせることができることを理解されたい。データを、以下の表１５および表１６に示す。
【０３９６】
【表１５】
2014518640.tif 000245
2014518640.tif 000246
2014518640.tif 000247
2014518640.tif 000248
2014518640.tif 000249
【０３９７】
【表１６】
2014518640.tif 000250
2014518640.tif 000251
2014518640.tif 000252
2014518640.tif 000253
2014518640.tif 000254
2014518640.tif 000255
2014518640.tif 000256
2014518640.tif 000257
2014518640.tif 000258
2014518640.tif 000259
2014518640.tif 000260
2014518640.tif 000261
2014518640.tif 000262
2014518640.tif 000263
2014518640.tif 000264
2014518640.tif 000265
2014518640.tif 000266
2014518640.tif 000267
2014518640.tif 000268
2014518640.tif 000269
2014518640.tif 000270
2014518640.tif 000271
2014518640.tif 000272
2014518640.tif 000273
2014518640.tif 000274
2014518640.tif 000275
2014518640.tif 000276
2014518640.tif 000277
2014518640.tif 000278
2014518640.tif 000279
2014518640.tif 000280
2014518640.tif 000281
2014518640.tif 000282
2014518640.tif 000283
【０３９８】
実施例１４
免疫原性の予測
タンパク質に対する免疫応答は、主要な組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩＩ結合部位における抗原の処理および提示によって、強化される。この相互作用は、タンパク質を認識する抗体の突然変異にＴ細胞の補助に必要である。ＭＨＣクラスＩＩ分子の結合部位は特徴付けされているため、タンパク質が、一連の共通ヒト遺伝子座に結合することができる、特定の配列を有するかどうかを予測することができる。コンピュータアルゴリズムが、参考文献およびＭＨＣクラスＩＩ結晶構造に基づいて、直線状の９個のアミノ酸ペプチド配列が、免疫寛容を破壊する能力を有するかどうかを判定するために作製されている。ＴＥＰＩＴＯＰＥ（商標）というプログラムを使用して、ＦＧＦ２１の点突然変異が、ヒトの大半において抗原特異性Ｔ細胞を増加させるとが予測されるかどうかを判定した。直線状タンパク質配列に基づくと、試験した突然変異はいずれも、免疫原性を強化することが予測されない。結果を以下の表１７Ａおよび表１７Ｂに示す。
【０３９９】
【表１７Ａ】
2014518640.tif 000284
【０４００】
【表１７Ｂ】
2014518640.tif 000285
【０４０１】
本明細書に引用される各参考文献は、それが教示する全てに関して、および全ての目的について、参照によりその全体が組み込まれる。
【０４０２】
本開示は、本開示の個々の態様の例示であることが意図される本明細書に記載される特定の実施形態による範囲に限定されるものではなく、機能的に同等の方法および構成要素が、本開示の態様を構成する。実際に、本明細書に示され、記載されるものに加えて、本開示の種々の修正は、前述の発明を実施するための形態および添付の図面から、当業者には明らかとなろう。このような修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。
【図１ａ】
2014518640.tif 000286
【図１ｂ】
2014518640.tif 000287
【図２ａ】
2014518640.tif 000288
【図２ｂ】
2014518640.tif 000289
【図２ｃ】
2014518640.tif 000290
【図３】
2014518640.tif 000291
【図４】
2014518640.tif 000292
【図５】
2014518640.tif 000293
【図６ａ】
2014518640.tif 000294
【図６ｂ】
2014518640.tif 000295
【図６ｃ】
2014518640.tif 000296
【図６ｄ】
2014518640.tif 000297
【図６ｅ】
2014518640.tif 000298
【配列表】
2014518640000001.app
【国際調査報告】
2014518640.tif 000299
2014518640.tif 000300
2014518640.tif 000301
2014518640.tif 000302
2014518640.tif 000303
2014518640.tif 000304