(57)【要約】  本発明は、TNF-αに特異的に結合する抗原結合タンパク質を提供する。たとえば、アダリムマブのような抗TNF抗体の新規変異体は、アダリムマブと比べて、FcRn受容体との結合の増加、または半減期の増加を示す。抗原結合タンパク質を含有する組成物、ならびに障害および疾患の治療におけるそうした組成物の使用も提供する。【選択図】図６
2014524748.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
TNF-αに特異的に結合する抗原結合タンパク質であって：
(i) CDRH1（配列番号27）、CDRH2（配列番号28）、CDRH3（配列番号29）、CDRL1（配列番号30）、CDRL2（配列番号31）、およびCDRL3（配列番号32）；またはCDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、もしくはCDRL3と比較して1、2、3、もしくは4アミノ酸の置換、挿入、もしくは欠失を含有する、それらのCDR変異体；ならびに
(ii) ヒトIgG1定常ドメインと比べて1つもしくは複数のアミノ酸置換を含有する、ヒトIgG1定常ドメインの胎児性Fc受容体（FcRn）結合部分；
を含んでなり、
該抗原結合タンパク質は、配列番号2の軽鎖配列および配列番号12の重鎖配列を含有するIgGと比べて、pH 6におけるFcRn結合親和性の増加、および/または半減期の増加を示す、
前記抗原結合タンパク質。
【請求項２】
TNF-αに特異的に結合する抗原結合タンパク質であって：
(i) CDRH1（配列番号27）、CDRH2（配列番号28）、CDRH3（配列番号29）、CDRL1（配列番号30）、CDRL2（配列番号31）、およびCDRL3（配列番号32）；またはCDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、もしくはCDRL3と比較して1、2、3、もしくは4アミノ酸の置換、挿入、もしくは欠失を含有する、それらのCDR変異体；ならびに
(ii) ヒトIgG1定常ドメインと比べて1つもしくは複数のアミノ酸置換を含有する、ヒトIgG1定常ドメインの胎児性Fc受容体（FcRn）結合部分；
を含んでなるものであり、
該抗原結合タンパク質は、配列番号2の軽鎖配列および配列番号12の重鎖配列を含有するIgGと比べて半減期が増加しており、該抗原結合タンパク質は、4週間に1回を超えない頻度で投与することで、2週間に1回ごとに投与される配列番号2の軽鎖配列および配列番号12の重鎖配列を含有するIgGの同一投与量で達成されるのと同等の平均定常状態トラフ濃度を達成することができるものである、
前記抗原結合タンパク質。
【請求項３】
TNF-αに特異的に結合する抗原結合タンパク質であって：
(i) CDRH1（配列番号27）、CDRH2（配列番号28）、CDRH3（配列番号29）、CDRL1（配列番号30）、CDRL2（配列番号31）、およびCDRL3（配列番号32）；またはCDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、もしくはCDRL3と比較して1、2、3、もしくは4アミノ酸の置換、挿入、もしくは欠失を含有する、それらのCDR変異体；ならびに
(ii) ヒトIgG1定常ドメインと比べて1つもしくは複数のアミノ酸置換を含有する、ヒトIgG1定常ドメインの胎児性Fc受容体（FcRn）結合部分；
を含んでなり、
該抗原結合タンパク質は、チップ上に抗原結合タンパク質を固定化しておくアレイシステムである、ProteOn XPR36タンパク質相互作用アレイシステムによって25℃で評価され、pH 6において、上記のような改変のない同じCDRを有する抗TNF抗原結合タンパク質よりも、FcRnに対して4倍を上回る大きな親和性を有する、
前記抗原結合タンパク質。
【請求項４】
配列番号2の軽鎖配列および配列番号12の重鎖配列を含んでなるIgGの変異体である、抗原結合タンパク質であって、
該抗原結合タンパク質変異体は、抗原結合タンパク質変異体の半減期をIgGと比べて長くするために、IgG定常ドメインの胎児性Fc受容体（FcRn）結合部分の中に、1つもしくは複数の置換を含んでおり、この変異体を4週間から8週間の間隔で40 mgの1回量で患者に投与すると、患者集団の平均定常状態トラフ抗体濃度は、投与間隔の間に5μg/mlより低くならず、好ましくは6μg/mlより低くならない、
前記抗原結合タンパク質。
【請求項５】
ヒトIgG1定常ドメインに対して、KabatのEUインデックスにしたがって番号付けされた250、252、254、256、257、259、308、428、または434位のうち1箇所または複数箇所でアミノ酸置換を含有する、請求項１〜４のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質。
【請求項６】
ヒトIgG1定常ドメインが、アミノ酸置換を導入する前に配列番号13の配列を有する、請求項１〜５のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質。
【請求項７】
抗原結合タンパク質を患者に４週間ごとに１回を超えることなく投与して、２週間に１回ごとに投与される配列番号２の軽鎖および配列番号12の重鎖を含有するIgGの同一投与量で達成されるのと同等の平均定常状態トラフ濃度を達成することができる、疾患治療用の薬剤として使用するための、請求項１〜６のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質。
【請求項８】
４週間から８週間の間隔をおいて、約35から約45 mgまでの1回量で、抗原結合タンパク質が投与される、疾患を治療するための、請求項１〜７のいずれか1つに記載の抗原結合タンパク質。
【請求項９】
抗原結合タンパク質が、４週間ごとに1回を超えることなく、40 mgの1回量で患者に皮下投与される、請求項８に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１０】
抗原結合タンパク質が、わずかに８週間ごとに1回、40 mgの1回量で患者に皮下投与される、請求項８または９に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１１】
抗原結合タンパク質の半減期が、天然のIgGと比べて２倍、３倍、４倍、または５倍長くなっている、請求項１〜１０のいずれか1つに記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１２】
４週間ごとに１回を超えないの抗原結合タンパク質の投与が、患者において、約４μg/mlから約７μg/mlの間の、患者集団の平均定常状態トラフ濃度を達成する、請求項１〜１１のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１３】
平均定常状態トラフ濃度が約５μg/mlから約６μg/mlの間である、請求項１２に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１４】
抗原結合タンパク質のクリアランスが、約２ml/hrから約４ml/hrである、請求項１〜１３のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１５】
１つもしくは複数のアミノ酸置換が、KabatのEUインデックスによる番号でアミノ酸残基252、254、および256にあり、残基252での置換はTyr、Phe、Trp、またはThrによる置換である；残基254での置換はThrによる置換である；ならびに残基256での置換はSer、Arg、Glu、Asp、またはThrによる置換である、請求項１〜１４のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１６】
残基252での置換が、MetのTyrによる置換である；残基254での置換はSerのThrによる置換であり、残基256での置換はThrのGluによる置換である、請求項１５に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１７】
配列番号７に示す定常ドメインを含有する、請求項１〜１６のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１８】
１つもしくは複数のアミノ酸置換が、KabatのEUインデックスによる番号でアミノ酸残基250および428にあり、残基250での置換はGluまたはGlnによる置換である；残基428での置換はLeuまたはPheによる置換である、請求項１〜１４のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１９】
残基250での置換がThrのGluによる置換であり、残基428での置換がMetのLeuによる置換である、請求項１８に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項２０】
配列番号１６に示す定常ドメインを含有する、請求項１９に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項２１】
１つもしくは複数のアミノ酸置換が、KabatのEUインデックスによる番号でアミノ酸残基428および434にあり、残基428でのアミノ酸置換はMetのLeuによる置換であり、残基434でのアミノ酸置換はAsnのSerによる置換である、請求項１〜１４のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質。
【請求項２２】
配列番号１０に示す定常ドメインを含有する、請求項２１に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項２３】
抗原結合タンパク質が抗体である、請求項１〜２２のいずれか1つに記載の抗原結合タンパク質。
【請求項２４】
抗原結合タンパク質がメトトレキサートとともに投与するためのものであって、好ましくは、該抗原結合タンパク質が関節リウマチの治療のために投与されるものである、請求項１〜２３のいずれか1つに記載の抗原結合タンパク質。
【請求項２５】
配列番号６および/または配列番号３の可変ドメイン、またはその変異体を含有する、請求項１〜２４のいずれか1つに記載の抗原結合タンパク質であって、この変異体が１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸の置換、挿入、もしくは欠失を含有するか、または配列番号６もしくは配列番号３の全長にわたって少なくとも９０％の同一性を共有している、前記抗原結合タンパク質。
【請求項２６】
配列番号５、９、または１５に示すな重鎖配列を含有し、場合によっては配列番号２に示す軽鎖配列とともにこれを含有してもよい、請求項１〜２４のいずれか1つに記載の抗原結合タンパク質。
【請求項２７】
配列番号７８または８０に示す重鎖可変ドメイン配列を含有する、請求項１〜２４のいずれか1つに記載の抗原結合タンパク質。
【請求項２８】
配列番号１４５または配列番号１４６に示す重鎖配列を含有する、請求項１〜２４のいずれか1つに記載の抗原結合タンパク質。
【請求項２９】
請求項１〜２８のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質を投与することを含む、疾患を有する患者を治療する方法。
【請求項３０】
疾患を有する患者を治療する方法であって、その方法が、請求項１〜２８のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質を、４から８週間の間隔をおいて約３５から約４５mgの１回量で、患者に皮下投与することを含む、前記方法。
【請求項３１】
疾患が、関節リウマチ、多関節型若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、または乾癬である、請求項７〜１０のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質、または請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３２】
関節リウマチ、多関節型若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、または乾癬を治療するための薬剤の製造に用いるための、請求項１〜２８のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質の使用。
【請求項３３】
請求項１〜２８のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含有する核酸。
【請求項３４】
請求項３３に記載の核酸を含有する宿主細胞。
【請求項３５】
請求項１〜２８のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質を含むキットであって、場合によっては、抗原結合タンパク質とメトトレキサートの同時投与のためにメトトレキサートを含んでいてもよい、前記キット。
【請求項３６】
TNF-α抗原結合タンパク質、および酢酸バッファーを含有する、液体製剤。
【請求項３７】
製剤がポリオールを含有しない、請求項３６に記載の製剤。
【請求項３８】
バッファーが、界面活性剤；キレート剤；塩；およびアミノ酸のうち１つもしくは複数、それらの組み合わせ、またはそれらのすべてを追加して含有する、請求項３６または３７に記載の製剤。
【請求項３９】
TNF-α抗原結合タンパク質が２０から３００mg/mlの濃度で存在する、請求項３６〜３８のいずれか１つに記載の製剤。
【請求項４０】
請求項３６〜３９のいずれか１つに記載の製剤であって、その製剤が、
(a) 10〜100 mM酢酸ナトリウム三水和物；および/または
(b) 25〜100 mM塩化ナトリウム；および/または
(c) 0.5〜5% アルギニン遊離塩基；および/または
(d) 0.02〜0.2 mM EDTA；および/または
(e) 0.01〜0.1 % ポリソルベート80、
を含有し、pH 5.0から7.0に調整されている、前記製剤。
【請求項４１】
(a) 酢酸ナトリウム三水和物は約50mMの濃度である；および/または
(b) 塩化ナトリウムは約51mMの濃度である；および/または
(c) アルギニン遊離塩基は約1%の濃度である；および/または
(d) EDTAは約0.05 mMの濃度である；および/または
(e) ポリソルベート80は約0.02%の濃度である、
請求項４０に記載の製剤。
【請求項４２】
製剤がpH 5.5に調整されている、請求項３６〜４１のいずれか１つに記載の製剤。
【請求項４３】
TNF-α抗原結合タンパク質が50 mg/mlの濃度で存在する、請求項３６〜４２のいずれか1つに記載の製剤。
【請求項４４】
製剤の単量体含量が、室温（約25℃）にて約1週間後に、少なくとも95％、または少なくとも96％、または少なくとも97％、または少なくとも98％、または少なくとも99％である、請求項３６〜４３のいずれか1つに記載の製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は抗TNF抗体の新規変異体に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗体は、少なくとも２つの重鎖および２つの軽鎖を含んでなるヘテロ多量体の糖タンパク質である。IgMを除いて、インタクトな抗体は通常、2つの同じ軽（L）鎖および2つの同じ重（H）鎖からなる、およそ150Kdaのヘテロ四量体糖タンパク質である。それぞれの重鎖は、一方の末端に可変ドメイン（VH）を有し、それに続いていくつかの定常領域を有する。それぞれの軽鎖は、可変ドメイン（VL）を有し、その反対側に定常領域を有する；軽鎖の定常領域は重鎖の第1の定常領域とつながっており、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインとつながっている。それら重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、ヒト抗体は、5つの異なるクラス、IgA、IgD、IgE、IgG、およびIgMに振り分けることができる。IgGおよびIgAはさらに、サブクラス、IgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4；ならびにIgA1およびIgA2に細分化することができる。抗体の可変ドメインは、抗体に結合特異性をもたらし、特別な可変性を示す特定の領域は相補性決定領域（CDR）と呼ばれる。可変領域の比較的保存された部分は、フレームワーク領域（FR）と呼ばれる。インタクトな重鎖および軽鎖の可変ドメインにはそれぞれ、3つのCDRで結び付けられた4つのFRが含まれる。定常領域は抗体の抗原との結合に直接は関わらないが、抗体依存性細胞傷害（ADCC）、Fcγ受容体との結合による貪食、胎児性Fc受容体（FcRn）による半減期/クリアランス速度、および補体カスケードのC1q成分を介した補体依存性細胞傷害などの、さまざまなエフェクター機能を示す。IgG抗体の構造の特徴は、2つの抗原結合部位が存在し、その2つがともに同一エピトープに特異的であることである。したがって、それらは単一特異性である。
【０００３】
成体哺乳類において、胎児性Fc受容体としても知られるFcRnは、IgGアイソタイプの抗体と結合して分解から救う保護的受容体として機能することによって、血清中の抗体レベルを維持するのに重要な役割を果たしている。IgG分子は、内皮細胞によって取り込まれ、FcRnと結合すると、血液循環中に出てリサイクルされる。これとは対照的に、FcRnと結合しないIgG分子は、細胞に入ってリソソーム経路の対象となり、そこで分解される。
【０００４】
胎児性FcRn受容体は、抗体クリアランス、および組織を横断するトランスサイトーシスの双方に関与すると考えられている（Junghans R.P (1997) Immunol.Res 16. 29-57、およびGhetie et al (2000) Annu.Rev.Immunol. 18, 739-766を参照されたい）。
【０００５】
WO 9734631は、血中半減期が増加し、Fcヒンジ領域に少なくとも1つのアミノ酸置換を有する、変異IgG分子を含有する組成物を明らかにする。CH2ドメインの番号252、254、256、309、311、もしくは315、またはCH3ドメインの433もしくは434から選択されるアミノ酸のうち1つもしくは複数の位置でのアミノ酸置換を開示している。
【０００６】
WO 00/42072は、FcRn結合親和性が変化した変異型Fc領域を含有するポリペプチドを開示するが、このポリペプチドはFc領域のアミノ酸238、252、253、254、255、256、265、272、286、288、303、305、307、309、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、386、388、400、413、415、424、433、434、435、436、439、および447のうちいずれか１つもしくは複数の位置でのアミノ酸改変を含んでいる。
【０００７】
WO 02/060919は、251、253、255、285-290、308-314、385-389、および428-435位のうち1つもしくは複数の位置でのアミノ酸改変を含んでいるIgG定常ドメインを含有する、改変IgGを開示する。
【０００８】
WO 2004035752は、クラスIgGの改変抗体を開示しているが、そのアミノ酸残基250、314、および428からなる一群から選択される、重鎖定常領域の少なくとも1つのアミノ酸残基は、未改変のクラスIgG抗体中に存在するアミノ酸とは異なる。
【０００９】
Shieldsら（2001, J Biol Chem ; 276:6591-604）は、アラニンスキャニング変異誘発を用いて、ヒトIgG1抗体のFc領域内の残基を変更した後、ヒトFcRnとの結合を評価した。アラニンに変更されたときにFcRnとの結合を効果的に抑止する位置としては、I253、S254、H435、およびY436がある。他に、それほど明白ではないが結合の低下を示したのは、次のような位置である：E233-G236、R255、K288、L309、S415、およびH433。いくつかのアミノ酸位置は、アラニンに変更するとFcRn結合の向上を示した。
【００１０】
Dall'Acquaら（2002, J Immunol.;169:5171-80）は、マウスFcRnに対するヒトIgG1ヒンジ-Fcフラグメントファージディスプレイのランダム変異誘発およびスクリーニングを報告した。かれらは、251、252、254-256、308、309、311、312、314、385-387、389、428、433、434、および436位でのランダム変異誘発を明らかにした。
【００１１】
WO2006130834は、252、254、256、433、434、および436位のうち1箇所もしくは複数箇所でのアミノ酸改変を有するIgG定常ドメインを含有するIgGを含む、改変IgGを開示している。
【００１２】
したがって、IgG抗体のFcドメインの改変は、治療用抗体の血中半減期を長くする手段として検討されてきた。しかしながら、そうした数多くの改変は、種々の抗体において、多様で時に相反する結果を伴うことが示唆された。
【００１３】
治療として抗原結合タンパク質を投与するには、処方された頻度で注射する必要があり、それは、そのタンパク質のクリアランスおよび半減期特性に関係している。
【００１４】
アダリムマブは、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、およびクローン病の治療に使用される、TNF-αに対するモノクローナル抗体である。これは、ヒト細胞発現系を用いた組換えDNA技術によって製造される。それは330アミノ酸からなり、約148キロダルトンの分子量を有する。米国特許第6090382号を参照されたい。0.5 mg/kg（約40 mg）の投与量で、アダリムマブのクリアランスは11から15 ml/時間とされ、分布容積（Vss）は5から6リットルであって、平均消失相半減期はおよそ2週間であった（製品特性の概要はwww.medicines.org.ukから入手できる）。これらの半減期およびクリアランス特性は、アダリムマブが現在、2週間に1回投与される必要があることを意味する。病気に応じて、一部の患者では、たとえば乾癬患者のように、初回負荷量を投与することが必要なこともある。この投与量は、維持量とは異なっていてもよい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】WO 9734631
【特許文献２】WO 00/42072
【特許文献３】WO 02/060919
【特許文献４】WO 2004035752
【特許文献５】WO2006130834
【特許文献６】米国特許第6090382号
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Junghans R.P (1997) Immunol.Res 16. 29-57
【非特許文献２】Ghetie et al (2000) Annu.Rev.Immunol. 18, 739-766
【非特許文献３】Shieldsら（2001, J Biol Chem ; 276:6591-604
【非特許文献４】Dall'Acquaら（2002, J Immunol.;169:5171-80
【発明の概要】
【００１７】
ある態様において、本発明は、TNF-αに特異的に結合する抗原結合タンパク質に関するが、このタンパク質はCDRH1（配列番号27）、CDRH2（配列番号28）、CDRH3（配列番号29）、CDRL1（配列番号30）、CDRL2（配列番号31）、およびCDRL3（配列番号32）、またはそれらの変異体、ならびにヒトIgG1定常ドメインと比べて1つもしくは複数のアミノ酸置換を含有するヒトIgG1定常ドメインの胎児性Fc受容体（FcRn）結合部分を含んでなるものであって、前記変異体は、CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、もしくはCDRL3と比べて1、2、3、もしくは4アミノ酸の置換、挿入、もしくは欠失を含有することができる：この抗原結合タンパク質は、配列番号2の軽鎖配列および配列番号12の重鎖配列を含有するIgGと比べて、pH 6におけるFcRn結合親和性の増加、および/または半減期の増加を示す。
【００１８】
本明細書を通じて、「ヒトIgG1定常ドメイン」という用語は、当業者に公知のあらゆるアロタイプおよびその変異体を包含する。
【００１９】
ある態様において、本発明は、TNF-αに特異的に結合する抗原結合タンパク質に関するが、このタンパク質はCDRH1（配列番号27）、CDRH2（配列番号28）、CDRH3（配列番号29）、CDRL1（配列番号30）、CDRL2（配列番号31）、およびCDRL3（配列番号32）、またはそれらの変異体、ならびにヒトIgG1定常ドメインと比べて1つもしくは複数のアミノ酸置換を含有するヒトIgG1定常ドメインの胎児性Fc受容体（FcRn）結合部分を含んでなるものであって、前記変異体は、CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、もしくはCDRL3と比べて1、2、3、もしくは4アミノ酸の置換、挿入、もしくは欠失を含有することができる：この抗原結合タンパク質は、配列番号2の軽鎖配列および配列番号12の重鎖配列を有するIgGと比べて半減期が長くなっており、この抗原結合タンパク質は、わずかに4週間に1回投与するだけで、2週間に1回投与される配列番号2の軽鎖配列および配列番号12の重鎖配列を含有するIgGの同一投与量で達成されるのと同等の平均定常状態トラフ濃度を達成することができる。
【００２０】
ある態様において、本発明は、TNF-αに特異的に結合する抗原結合タンパク質に関するが、このタンパク質はCDRH1（配列番号27）、CDRH2（配列番号28）、CDRH3（配列番号29）、CDRL1（配列番号30）、CDRL2（配列番号31）、およびCDRL3（配列番号32）、またはそれらの変異体、ならびにヒトIgG1定常ドメインと比べて1つもしくは複数のアミノ酸置換を含有するヒトIgG1定常ドメインのFcRn結合部分を含んでなるものであって、前記変異体は、CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、もしくはCDRL3と比べて1、2、3、もしくは4アミノ酸の置換、挿入、もしくは欠失を含有することができる：この抗原結合タンパク質は、チップ上に抗原結合タンパク質を固定化しておくアレイシステムである、ProteOn XPR36タンパク質相互作用アレイシステムによって25℃で評価され、pH 6において、このような改変のない同じCDRを有する抗TNF抗原結合タンパク質よりも、2倍（フォールド）、または3倍（フォールド）、または4倍（フォールド）、または5倍（フォールド）、または6倍（フォールド）、または8倍（フォールド）以上大きな、FcRnに対する親和性を有する。
【００２１】
ある態様において、本発明は、配列番号2の軽鎖配列および配列番号12の重鎖配列を含んでなるIgGの変異体である、抗原結合タンパク質に関するが、この抗原結合タンパク質変異体は、1つもしくは複数の置換をIgG定常ドメインの胎児性Fc受容体（FcRn）結合部分の中に含有し、そうした置換のないIgGと比べて抗原結合タンパク質変異体の半減期が長くなっており、この変異体を4週間から8週間の間隔で40 mgの1回量で患者に投与すると、患者集団の平均定常状態トラフ濃度は、投与間隔の間に4μg/mlを下回らず、または5μg/mlより低くならない。好ましくは、患者集団の平均血清トラフ抗体濃度は、投与間隔の間、6μg/mlより低くならない。変異体が8週間間隔で40 mgの1回量で患者に投与される場合、患者集団の平均血清トラフ抗体濃度は、投与間隔の間に5μg/mlを下回らないことが好ましい。変異体が8週間間隔で40 mgの1回量で患者に投与される場合、患者集団の平均血清トラフ抗体濃度は、最大限の有効性を提供しながら、投与間隔の間4μg/mlを下回らないことが好ましい。変異体が8週間間隔で40 mgの1回量で患者に投与される場合、患者集団の平均血清トラフ抗体濃度は、最大限の有効性を提供しながら、投与間隔の間3μg/mlを下回らないことが好ましい。
【００２２】
ある態様において、本発明は、疾病を治療するための、本明細書に記載の抗体結合タンパク質に関するものであって、この抗原結合タンパク質は、わずかに4週間毎に1回患者に投与するだけで、配列番号2の軽鎖配列および配列番号12の重鎖配列を含んでなるIgGの同量を2週間に1回投与するのと同等の平均定常状態トラフ濃度を達成することができる。
【００２３】
ある態様において、本発明は、疾患を有する患者を治療する方法に関するが、その方法は、本発明の抗原結合タンパク質を投与することを含む。
【００２４】
ある態様において、本発明は、本発明の抗原結合タンパク質、またはその一部、たとえば重鎖もしくは軽鎖をコードする核酸配列に関する。ある態様において、本発明は、本発明の抗原結合タンパク質、またはその一部、たとえば重鎖もしくは軽鎖をコードする発現ベクターに関する。
【００２５】
ある態様において、本発明は、本発明の抗原結合タンパク質をコードする核酸配列を含有する、宿主細胞に関する。ある態様において、本発明は、乾癬または関節リウマチの治療に使用するための、本発明の抗原結合タンパク質に関する。
【００２６】
ある態様において、本発明は、本発明の抗原結合タンパク質を含んでなるキットであって、場合によって、本発明の抗原結合タンパク質とメトトレキサートを同時にデリバリーするためにメトトレキサートを含んでいることもある、前記キットに関する。
【００２７】
ある態様において、本発明は、すでにメトトレキサートで治療中の個体において関節リウマチを治療するための、本明細書に記載の抗原結合タンパク質、ならびに関節リウマチの治療のためにメトトレキサートと併用する抗原結合タンパク質に関するが、この併用は、同時に、実質的に同時に、または順次、投与される。
【００２８】
ある態様において、本発明は、すでにメトトレキサートで治療中の個体において乾癬を治療するための、本明細書に記載の抗原結合タンパク質、ならびに乾癬の治療のためにメトトレキサートと併用する抗原結合タンパク質に関するが、この併用は、同時に、実質的に同時に、または順次、投与される。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】抗TNFα抗体のヒトTNFαとの結合
【図２】加速ストレス要因試験後の抗TNFα抗体のヒトTNFαとの結合活性の分析
【図３】25%ヒト血清中2週間インキュベーション後の抗TNFα抗体のヒトTNFαとの結合
【図４】凍結融解後の抗TNFα抗体のヒトTNFαとの結合
【図５】FcγRIIIa受容体に対する抗TNFα抗体の分析 (a)ヒトFcγRIIIa（バリン158変異体）との結合 (b)ヒトFcγRIIIA（フェニルアラニン158変異体）との結合
【図６】点滴静注（1時間）後の雌カニクイザルにおけるBPC2604、および雄カニクイザルにおけるパスコリズマブ（pascolizumab）の平均投与量標準化血漿濃度。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
発明の詳細な説明
本発明は、TNFαに特異的に結合する新規抗原結合タンパク質に関する。より詳細には、本発明は、アダリムマブと比べて、FcRn受容体への結合の増加、および/または半減期の増加を示す、アダリムマブのような抗TNFα抗体の新規変異体に関する。アダリムマブは、配列番号2の軽鎖配列、および配列番号12の重鎖配列を含んでなる、IgGモノクローナル抗体である。
【００３１】
本発明者らは、本明細書に記載のようなアダリムマブに対する特異的な改変が、以下の実施例に示すようにFcRn結合の著しい改善を示すことを見いだした。アダリムマブの親和性成熟変異体も、抗TNFα結合および/または中和活性の改善を示す。
【００３２】
本発明の新規抗原結合タンパク質は、FcRn受容体への結合の増加、および/または半減期の増加、および/または平均滞留時間の増加、および/またはクリアランスの減少を示す。FcRnとの結合はin vivoで血清保持を長くする結果をもたらすと考えられる。in vivoでFcタンパク質の保持を増加させるために、約pH 6で結合親和性の増加が見られる。したがって、ある態様において、本発明は、FcRnとの結合を最適化した抗原結合タンパク質を提供する。
【００３３】
ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質の半減期は、配列番号2の軽鎖配列および配列番号12の重鎖配列を含んでなるIgGと比べて、2倍から6倍に増加し、たとえば2倍、3倍、4倍、5倍、または6倍に増加する。好ましくは、本発明の抗原結合タンパク質の半減期は、配列番号2の軽鎖配列および配列番号12の重鎖配列を含んでなるIgGと比べて、3倍、または4倍以上に増加する。たとえば、IgGが、10日、または10日から20日までの半減期を有するアダリムマブであるならば、ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、約40日から80日の半減期を示す。たとえば、配列番号5、または配列番号9、または配列番号15、または配列番号18、または配列番号21、または配列番号24、または配列番号163、または配列番号165、または配列番号167、または配列番号169から選択される重鎖配列を含んでなる抗原結合タンパク質。
【００３４】
ある実施形態において、患者にわずかに4週間毎に1回だけ投与される本発明の抗原結合タンパク質は、約2μg/mlから約7μg/mlの間の平均定常状態トラフ濃度を達成する。好ましくは、平均定常状態トラフ濃度は、約4μg/mlから約7μg/mlの間であり、より好ましくは約5μg/mlから約6μg/mlの間である。
【００３５】
ある実施形態において、患者にわずかに28日毎に1回だけ投与される本発明の抗原結合タンパク質は、約2μg/mlから約7μg/mlの間の平均定常状態トラフ濃度を達成する。好ましくは、平均定常状態トラフ濃度は、約4μg/mlから約7μg/mlの間であり、より好ましくは約5μg/mlから約6μg/mlの間である。
【００３６】
本発明のある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、4、5、6、7、または8週間に1回投与され、アダリムマブが同一投与量で2週間に1回投与されるときに達成するのと同等の平均定常状態トラフ濃度を達成することができる。
【００３７】
本発明のあらゆる態様の好ましい実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は7もしくは8週間に1回投与することができる。
【００３８】
本発明のある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、25-80日毎に1回投与することができるが、たとえば40-60日に1回、またはたとえば28、35、42、49、もしくは56日に1回投与され、同一投与量で14日に1回投与されたときアダリムマブによって達成されるのと同等の平均定常状態トラフ濃度を達成することができる。
【００３９】
本発明のある実施形態において、抗原結合タンパク質は49日から60日に1回、たとえば56日毎に投与することができる。
【００４０】
本発明のあらゆる態様の実施形態において、抗原結合タンパク質は、その抗体がチップ上に固定化されている、25℃でのProteOn XPR36タンパク質相互作用アレイシステムによる評価で、pH 6でのヒトFcRnへの親和性が2倍、または4倍、または6倍、または8倍以上大きい。好ましくは、抗原結合タンパク質は、約100から500 Kd（nM）までのヒトFcRnに対する親和性を有し、たとえば、約130から約360 Kd（nM）、または約140から約250 Kd（nM）、または約140から約210 Kd（nM）の間である。
【００４１】
ある実施形態において、抗原結合タンパク質のクリアランスは、約2から約10 ml/時間、好ましくは約2から約5 ml/時間、または2から4 ml/時間、または2から3 ml/時間、たとえば、約2、約2.5、3、4、または5 ml/時間である。ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、アダリムマブの1/2、1/3、1/4、または1/5の低いクリアランス速度を示す。ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質のクリアランスは、約40 mgのヒト投与量で、上記の範囲であるか、またはアダリムマブの1/2、1/3、1/4、または1/5に低くなっている。
【００４２】
ある態様において、本発明の抗原結合タンパク質は、アダリムマブ（配列番号2の軽鎖配列および配列番号12の重鎖配列を含んでなるIgG）の変異体であって、この変異体は、変異体の半減期がアダリムマブと比べて長くなるように、1つもしくは複数の置換を、IgG定常ドメインのFcRn結合部分の中に含んでおり、その変異体が、4週間から8週間の間隔、好ましくは8週間の間隔で40 mgの1回量で患者に投与されると、患者集団の平均定常状態トラフ抗体濃度は、5μg/mlを下回らない。ある実施形態において、患者集団の平均定常状態トラフ抗体濃度は、投与間隔の間、6μg/mlを下回らない。
【００４３】
他の実施形態において、抗原結合タンパク質は、少なくとも1つのアミノ酸改変を、前記抗原結合タンパク質のFc領域内に含んでおり、前記改変は、アダリムマブ配列中の同一位置と比較して、Fc領域の250、252、254、256、257、259、308、428、または434位のうち1箇所、または複数箇所にあるが、Fc領域のアミノ酸ナンバリングはKabatのEUインデックスの番号である。
【００４４】
野生型ヒトIgG1は、308-314位にアミノ酸残基Val-Leu-His-Gln-Asp-Trp-Leuを有し、251-256位にアミノ酸残基Leu-Met-Ile-Ser-Arg-Thr、428-436位にアミノ酸残基Met-His-Glu-Ala-Leu-His-Asn-His-Tyr、さらに385-389位にアミノ酸残基Gly-Gln-Pro-Glu-Asnを有する。残基番号はIgG2-4については異なる可能性がある。
【００４５】
ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号13の配列を含んでなるヒトIgG1定常ドメインに対して1つもしくは複数のアミノ酸置換を含有する。
【００４６】
ある実施形態において、ヒトIgG1重鎖定常ドメインのFcRn結合部分の1つもしくは複数のアミノ酸置換は、KabatのEUインデックスにしたがってナンバリングされたアミノ酸残基252、254、および256にあり、残基252でのアミノ酸置換は、MetのTyr、Phe、Trp、またはThrによる置換である；残基254でのアミノ酸置換は、SerのThrによる置換である；さらに残基256でのアミノ酸置換はThrのSer、Arg、Glu、Asp、またはThrによる置換である。好ましくは、残基252でのアミノ酸置換は、Tyrによる置換である；残基254でのアミノ酸置換は、Thrによる置換であり、残基256での置換はGluによる置換である。好ましくは、IgG1定常ドメインは、配列番号7に示すとおりである。
【００４７】
ある実施形態において、ヒトIgG1定常ドメインのFcRn結合部分の1つもしくは複数のアミノ酸置換は、KabatのEUインデックスにしたがってナンバリングされたアミノ酸残基250および428の位置にあり、残基250でのアミノ酸置換は、ThrのGluもしくはGlnによる置換である；残基428でのアミノ酸置換は、MetのLeuもしくはPheによる置換である。好ましくは、残基250でのアミノ酸置換はGluによる置換であり、残基428でのアミノ酸置換はLeuによる置換である。好ましくは、IgG1定常ドメインは配列番号16に示すとおりである。
【００４８】
ある実施形態において、ヒトIgG1定常ドメインのFcRn結合部分の1つもしくは複数のアミノ酸置換は、KabatのEUインデックスにしたがってナンバリングされたアミノ酸残基428および/または434の位置にある。好ましくは、残基428でのアミノ酸置換は、MetのLeuによる置換であり、残基434でのアミノ酸置換は、AsnのSerによる置換である。好ましくは、IgG1定常ドメインは配列番号10に示すとおりである。
【００４９】
ある実施形態において、ヒトIgG1定常ドメインのFcRn結合部分の1つもしくは複数のアミノ酸置換は、KabatのEUインデックスにしたがってナンバリングされたアミノ酸残基259または308の位置にある。好ましくは、残基259での置換は、ValのIleによる置換であり、残基308でのアミノ酸置換は、ValのPheによる置換である。好ましくは、IgG1定常ドメインは配列番号19または配列番号22に示すとおりである。
【００５０】
ある実施形態において、ヒトIgG1重鎖定常ドメインのFcRn結合部分の1つもしくは複数のアミノ酸置換は、配列番号25に示すように、KabatのEUインデックスにしたがってナンバリングされたアミノ酸残基257および434の位置にある。
【００５１】
ある実施形態において、ヒトIgG1重鎖定常ドメインのFcRn結合部分の1つもしくは複数のアミノ酸置換は、KabatのEUインデックスにしたがってナンバリングされたアミノ酸残基433および434の位置にあり、たとえばその残基はH433KおよびN434Fである。好ましくは、IgG1定常ドメインは配列番号165または配列番号167に示すとおりである。
【００５２】
ある実施形態において、抗原結合タンパク質は、表Aに記載のIgG1定常ドメイン改変のいずれかを含んでいる。
【００５３】
ある実施形態において、抗原結合タンパク質は抗体である。
【００５４】
ある実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号6および/または配列番号3の可変ドメイン、またはそれらの変異体を含んでいるが、この変異体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、もしくは10個のアミノ酸置換、挿入、または欠失を含有し、ならびに/または、配列番号6もしくは配列番号3の全長にわたって、少なくとも90%の同一性を共有するものである。
【００５５】
ある実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号5、9、もしくは15に示す重鎖配列を含んでいるが、配列番号2に示す軽鎖配列とともに含んでいてもよい。
【００５６】
ある実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号78または80に示す可変重鎖ドメイン配列を含む。
【００５７】
ある実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号145または配列番号146に示す重鎖配列を含んでいるが、配列番号148、150、もしくは152に示す軽鎖変異体とともに含んでいてもよい。
【００５８】
ある実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号18もしくは21に示す重鎖配列を含んでいるが、配列番号2に示す軽鎖配列とともに含んでいてもよい。
【００５９】
ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、表Aに示す可変ドメインのいずれかを含んでいる。ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、表Aに示すcb1-3-VH、cb2-44-VH、cb1-39-VH、cb1-31-VH、cb2-11-VH、cb2-40-VH、cb2-35-VH、cb2-28-VH、cb2-38-VH、cb2-20-VH、cb1-8-VL、またはcb1-43-VLの配列を有する可変重鎖ドメインを含んでいる。
【００６０】
ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、表Aに示すcb1-45-VL、cb1-4-VL、cb1-41-VL、cb1-37-VL、cb1-39-VL、cb1-33-VL、cb1-35-VL、cb1-31-VL、cb1-29-VL、cb1-22-VL、cb1-23-VL、cb1-12-VL、cb1-10-VL、cb2-1-VL、cb2-11-VL、cb2-40-VL、cb2-35-VL、cb2-28-VL、cb2-20-VL、cb1-3-VL、cb2-6-VL、またはcb2-44-VLの配列を有する可変軽鎖ドメインを含んでいる。
【００６１】
たとえば、本発明の抗原結合タンパク質は、表Aに示すcb1-3VH、cb2-44VH、またはcb2-6VLの配列を有する可変ドメインを含んでいる。
【００６２】
ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、表Aに記載の可変ドメインのいずれかを含んでいる。ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号170または配列番号174または配列番号178から選択される配列を有する、可変重鎖ドメインを含んでいる。
【００６３】
ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号171または配列番号175または配列番号179から選択される配列を有する、可変軽鎖ドメインを含んでいる。
【００６４】
他の実施形態において、抗原結合タンパク質は、表Aに記載のIgG1定常ドメイン改変のいずれかを含んでいる。
【００６５】
上記のすべての可変ドメインまたは重鎖配列または軽鎖配列の変異体であって、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個のアミノ酸の置換、挿入、もしくは欠失を有し、ならびに/または、上記配列のいずれかの全長にわたって少なくとも90%の同一性を共有する前記変異体もまた、本発明の範囲に含まれる。
【００６６】
ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、CDRH3（配列番号29）の変異体を含んでいるが、この変異体は、配列番号29と比較して1、2、3、または4個のアミノ酸置換を有するものである。ある実施形態において、変異型CDRH3は、配列番号40から49のいずれか1つに示す配列を有することができる。
【００６７】
ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、CDRH1（配列番号27）の変異体を含んでいるが、この変異体は、配列番号27と比較して1または2個のアミノ酸置換を有するものである。ある実施形態において、変異型CDRH1は、配列番号33から38のいずれか1つに示す配列を有することができる。
【００６８】
ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、CDRL1（配列番号30）の変異体を含んでいるが、この変異体は、配列番号30と比較して1、2または3個のアミノ酸置換を有するものである。ある実施形態において、変異型CDRL1は、配列番号50から61のいずれか1つに示す配列を有することができる。
【００６９】
ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、CDRL2（配列番号31）の変異体を含んでいるが、この変異体は、配列番号31と比較して1、2または3個のアミノ酸置換を有するものである。ある実施形態において、変異型CDRL2は、配列番号62から72のいずれか1つに示す配列を有することができる。
【００７０】
ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、CDRL3（配列番号32）の変異体を含んでいるが、この変異体は、配列番号32と比較して1、2または3個のアミノ酸置換を有するものである。ある実施形態において、変異型CDRL3は、配列番号73から76のいずれか1つに示す配列を有することができる。
【００７１】
ある実施形態において、本発明は、TNFαに特異的に結合する抗原結合タンパク質であって、CDRH1（配列番号27）、CDRH2（配列番号28）、CDRH3（配列番号29）、CDRL1（配列番号30）、CDRL2（配列番号31）、およびCDRL3（配列番号32）から選択される1つもしくは複数もしくはすべてのCDRを含んでなる、前記抗原結合タンパク質に関する；これらのCDRはいずれも、CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、またはCDRL3と比べて1、2、3、もしくは4個のアミノ酸の置換、挿入、または欠失を含有する、変異型CDRであってもよい。ある態様において、本発明の抗原結合タンパク質は、CDRH1、CDRH3、CDRL1、CDRL2、およびCDRL3を含んでおり、これらのCDRはいずれも、CDRH1、CDRH3、CDRL1、CDRL2、またはCDRL3と比べて1、2、3、もしくは4個のアミノ酸の置換、挿入、もしくは欠失を含有する、変異型CDRとすることができる。ある態様において、本発明の抗原結合タンパク質は、CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、およびCDRL3を含んでおり、これらのCDRはいずれも、CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、またはCDRL3と比べて1、2、3、もしくは4個のアミノ酸の置換、挿入、もしくは欠失を含有する、変異型CDRとすることができる。
【００７２】
ある態様において、本発明は、疾患を有するヒト患者を治療する方法に関するが、その方法は、本発明の抗原結合タンパク質を投与することを含む。
【００７３】
本発明はまた、ヒトの疾患を治療するための本明細書に記載の抗原結合タンパク質に関する。
【００７４】
本発明は、本明細書に記載の抗原結合タンパク質を疾患治療用の薬剤の製造に使用すること、ならびに疾患の治療に使用される本明細書に記載の抗原結合タンパク質に関する。
【００７５】
ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質で治療される疾患は、関節リウマチ、多関節型若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、脊椎関節症、クローン病、または乾癬である。
【００７６】
ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、メトトレキサートとともに投与することができる。メトトレキサートは、抗原結合タンパク質の前、後、もしくはそれと同時に、または実質的に同時に投与することができる。好ましい実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、関節リウマチ患者に、メトトレキサートとともに投与することができる。ある実施形態において、メトトレキサートは、本発明の抗原結合タンパク質の投与を受けている患者に、抗原結合タンパク質の免疫原性の影響を減じるために投与される。ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、すでにメトトレキサートの投与を受けている患者に投与される。メトトレキサートは、抗原結合タンパク質の免疫反応を低下させる別の許容される化合物、たとえばコルチコステロイドで置き換えることもできる。
【００７７】
ある態様において、本発明は、疾患を有する患者を治療する方法に関するが、その方法は、本発明の抗原結合タンパク質を投与することを含んでいる。ある実施形態において、その方法は、抗原結合タンパク質を患者に、20、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、または80 mgの１回投与量で、わずかに4週間に1回、好ましくは5、6、7、または8週間に1回、そしてもっとも好ましくは8週間に1回、投与することを含む。好ましくは投与量は40から80 mgまでであり、たとえば40 mgである。
【００７８】
本発明はまた、本明細書に記載の抗原結合構築物のいずれかの重鎖を含めて、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列、および本明細書に記載の抗原結合構築物のいずれかの軽鎖をコードするポリヌクレオチドを提供する。こうしたポリヌクレオチドは、同等のポリペプチド配列に対応するコード配列を表すが、当然のことながら、このようなポリヌクレオチド配列は、開始コドン、適当なシグナル配列、および終止コドンとともに発現ベクターに入れてクローニングすることができる。ポリヌクレオチドはDNAまたはRNAとすることができる。
【００７９】
本発明はまた、本明細書に記載の抗原結合構築物のいずれかの重鎖および/または軽鎖をコードする、1つもしくは複数のポリヌクレオチドを含有する宿主細胞、たとえば組換え細胞、形質転換細胞、またはトランスフェクト細胞を提供する。
【００８０】
本発明はさらに、本明細書に記載の抗原結合構築物および製薬上許容される添加剤を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００８１】
本発明はさらに、本明細書に記載のあらゆる抗原結合構築物を製造するための方法を提供するが、その方法は第1および第2のベクターを含有する宿主細胞を、無血清/合成/動物由来成分なしの培地で培養するステップを含んでおり、前記第1のベクターは、本明細書に記載の抗原結合構築物のいずれかの重鎖をコードするポリヌクレオチドを含有し、前記第2のベクターは本明細書に記載の抗原結合構築物のいずれかの軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含んでいる。あるいはまた、本発明は、本明細書に記載の抗原結合構築物のいずれかの、重鎖をコードするポリヌクレオチドを含有するベクターを含む宿主細胞を、やはり無血清/合成/動物由来成分なしの培地中で培養することを含んでいてもよい。
【００８２】
別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の改変にしたがってFcを改変することによって、抗体の半減期を長くする方法を含む。
【００８３】
もう1つの実施形態において、本発明は、FcRn結合が強化された本明細書に記載の抗原結合タンパク質であって、加えて、別のエフェクター機能特性を変更する1つもしくは複数の追加的な置換、欠失もしくは挿入を有する、前記抗原結合タンパク質を含む。
【００８４】
望ましい方法によって発現されたら、そこで適当なアッセイを使用して、本発明の抗原結合タンパク質のin vitro活性を調べる。現在、抗原結合構築物のその標的に対する結合を定性的および定量的に評価するために、従来のELISAおよびBiacoreアッセイ法が用いられる。加えて、通常のクリアランスメカニズムがあるにもかかわらず体内で抗原結合タンパク質が持続する性質を評価するために実施される、その後のヒト臨床試験の前に、中和効力を検証するために、他のin vitroアッセイを使用することもできる。
【００８５】
治療の用量および期間は、ヒト血液循環中での本発明の分子の相対的持続時間と関係があり、当業者はそれを、本明細書で与えられる情報に基づいて、治療される症状および患者の全身健康状態に応じて、調整することができる。最大の治療効果を達成するために、長期間（たとえば4から6ヶ月）にわたって、繰り返し（たとえば、4週間、5週間、6週間、7週間もしくは8週間毎に1回）投与する必要があると予想される。
【００８６】
本発明の治療薬の投与方法は、薬剤を受容者に投与する任意の適当な経路とすることができる。本発明の抗原結合タンパク質および医薬組成物は、非経口投与、すなわち、皮下（s.c.）、くも膜下腔内、腹腔内、筋肉内（i.m.）、静脈内（i.v.）、または鼻腔内投与に特に有用である。ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質および医薬組成物は、皮下注オートインジェクターペン、または皮下注プレフィルドシリンジによって投与される。
【００８７】
本発明の抗原結合タンパク質は、製薬上許容される基剤中に活性成分として有効量の本発明の抗原結合タンパク質を含有する医薬組成物として、調製することができる。本発明の予防薬としては、すぐに注射できる形態の、好ましくは生理的pHに緩衝化された、抗原結合構築物を含有する水性懸濁液もしくは溶液が好ましい。非経口投与のための組成物には、一般に、製薬上許容される基剤、好ましくは水性基剤中に溶解した、本発明の抗原結合構築物の溶液、またはその混合物が含まれる。さまざまな水性基剤、たとえば、0.9%生理食塩水、0.3%グリシンなどを用いることができる。これらの溶液は、無菌で、通常、微粒子状物質を含まないようにすることができる。これらの溶液は、従来の周知の滅菌技術（たとえば、濾過）で滅菌することができる。組成物は、生理的条件に近づけるために必要とされる、製薬上許容される補助物質、たとえばpHを調整し緩衝化する物質などを含有することができる。このような医薬組成物中の、本発明の抗原結合タンパク質の濃度は、広範囲にわたって、すなわち約0.5重量%未満、通常少なくとも約1重量%から、15もしくは20重量%もの量までさまざまであってよく、選ばれた個別の投与法に応じて、主として液体の容量、粘性などに基づいて選択されることになる。
【００８８】
アダリムマブは、高濃度で製剤することが難しいと報告されている。WO2004016286は、クエン酸-リン酸バッファー、ならびにポリオールおよび界面活性剤などの他の成分を含有するアダリムマブ製剤を記載する。PDA Conferenceにて2005年10月25日に発表された口頭発表 “Humira（登録商標） - from Development to Commercial Scale Production” は、(i) クエン酸-リン酸バッファー；(ii) 酢酸-リン酸バッファー；および(iii) リン酸バッファーを含有する製剤を報告している。テストした酢酸-リン酸バッファーは、アダリムマブに対して最悪の安定化作用を示した。Curtis et al. (2008) Current Medical Research and Opinion, Volume 27, p71-78は、関節リウマチ患者で、アダリムマブ注射による注射部位の灼熱感および刺激感の発生を報告している。灼熱感および刺激感は、部分的には、クエン酸バッファーを基本とする製剤に起因していた（Basic and Clinical Pharmacology & Toxicology, Volume 98, p218-221, 2006; およびJournal of Pharmaceutical Sciences, Volume 97, p3051-3066, 2008）。しかしながら、WO20100129469は、クエン酸-リン酸バッファー、ならびにポリオールなどの他の成分を依然として含有し、塩化ナトリウムは含有しない、アダリムマブ高濃度製剤を記載している。もっと最近のWO2012065072は、バッファーなしで界面活性剤およびポリオールを含有するアダリムマブ製剤を記載するが、それによって注射へのクエン酸バッファーの影響を避けられる可能性がある。
【００８９】
ある実施形態において、TNFα抗原結合タンパク質および酢酸バッファーを含有する液体製剤が与えられる。他の実施形態において、TNFα結合タンパク質は、配列番号27もしくは配列番号33-38から選択されるCDRH1、および/または配列番号28のCDRH2、および/または配列番号29もしくは配列番号40-49から選択されるCDRH3、および/または配列番号30もしくは配列番号50-61から選択されるCDRL1、および/または配列番号31もしくは配列番号62-72から選択されるCDRL2、および/または配列番号32もしくは配列番号73-76のCDRL3を含んでなる。たとえば、TNFα抗原結合タンパク質は、配列番号27のCDRH1、および配列番号28のCDRH2、および配列番号29のCDRH3、および配列番号30のCDRL1、および配列番号31のCDRL2、および配列番号32のCDRL3、またはそれらの変異体を含んでなる。
【００９０】
TNFα抗原結合タンパク質はアダリムマブであってもよい。TNFα抗原結合タンパク質はBPC1494であってもよい。TNFα抗原結合タンパク質はBPC1496であってもよい。
【００９１】
本明細書に記載のTNFα抗原結合タンパク質は酢酸バッファー中で製剤される。その製剤は液剤とすることができる。製剤はさらに、界面活性剤；キレート剤；塩；およびアミノ酸のうち1つもしくは複数、それらの組み合わせ、またはそれらのすべてを含んでいてもよい。TNFα抗原結合タンパク質は、たとえば50 mg/mlの高濃度で製剤される。ある実施形態において、製剤はポリオールを含まない。別の態様において、製剤は他のバッファー成分、たとえばクエン酸を含まない。したがって、本明細書に記載の製剤は、TNFα抗原結合タンパク質、具体的には表Aに記載のTNFα抗原結合タンパク質を、安定した製剤中で高濃度にて提供する問題を解決し、クエン酸を基本とするバッファーの灼熱感および刺激感の影響を回避する。
【００９２】
ある実施形態において、酢酸バッファー製剤は界面活性剤およびキレート剤をさらに含有する。別の実施形態において、酢酸バッファー製剤は界面活性剤および塩をさらに含有する。もう１つの実施形態において、酢酸バッファーは界面活性剤およびアミノ酸をさらに含有する。別の実施形態において、酢酸バッファー製剤はキレート剤および塩をさらに含有する。もう１つの実施形態において、酢酸バッファー製剤はキレート剤およびアミノ酸をさらに含有する。別の実施形態において、酢酸バッファーは塩およびアミノ酸をさらに含有する。
【００９３】
ある実施形態において、酢酸バッファー製剤は、界面活性剤、キレート剤、および塩をさらに含有する。別の実施形態において、酢酸バッファー製剤は、界面活性剤、キレート剤、およびアミノ酸をさらに含有する。別の実施形態において、酢酸バッファー製剤は、界面活性剤、塩、およびアミノ酸をさらに含有する。別の実施形態において、酢酸バッファー製剤は、キレート剤、塩、およびアミノ酸をさらに含有する。
【００９４】
ある実施形態において、バッファーは、酢酸ナトリウム三水和物である。これは、10から100 mM酢酸ナトリウム三水和物（1.361から13.61mg/ml）の濃度とすることができる。酢酸ナトリウム三水和物は、20から80 mM、30から70 mM、40から60 mM、または約40 mM、約45 mM、約50 mM、約55 mM、もしくは約60 mMの量で存在してもよい。ある実施形態において、酢酸ナトリウム三水和物は約50 mM（6.80mg/ml）の濃度である。
【００９５】
酢酸バッファーは単独のバッファーであってもよい。言い換えれば、製剤は別のバッファー成分、リン酸もしくはクエン酸バッファーなどを含んでいなくてもよい。クエン酸バッファーはいくつかの理由から製剤にとって有害となる可能性がある：(i) 3つの解離定数の値が近すぎて3つのプロトン受容体の状態を区別することができないため、良好なバッファーとはいえない；(ii) クエン酸は金属キレート剤として機能しうるので、金属イオンバランスに影響を及ぼす可能性がある：(iii) クエン酸はクエン酸回路の代謝産物であり、細胞代謝に影響を及ぼす可能性がある。
【００９６】
適当な界面活性剤（surfactant）（界面活性剤（detergent）としても知られる）には、たとえば、ポリソルベート（たとえばポリソルベート20または80）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（Brij 35.RTM.など）、ポロキサマー（たとえば、ポロキサマー188、ポロキサマー407）、Tween 20、Tween 80、Cremophor A25、Sympatens ALM/230、およびMirjが挙げられる。ある実施形態において、界面活性剤はポリソルベート80である。製剤は、0.01から0.1%（0.1から1 mg/ml）濃度のポリソルベート80を含有することができる。ポリソルベート80は、0.01から0.05%、もしくは0.01から0.03%；または約0.015%、約0.02%、もしくは約0.025%の量で存在してもよい。ある実施形態において、ポリソルベート80は約0.02% w/v（0.2 mg/ml）の濃度である。たとえば0.1%を越える高濃度のポリソルベート80は製剤にとって有害となる可能性があるが、それはこの界面活性剤が、保存中に酸化レベルを上昇させ、したがって保存可能期間を短縮させる可能性のある、高レベルの酸化性物質を含有するかもしれないからである。
【００９７】
適当なキレート剤として、EDTAおよび金属錯体（たとえば、Znタンパク質錯体）を挙げることができる。ある実施形態において、キレート剤はEDTAである。製剤は、0.02から0.2 mM濃度のEDTA（0.00748から0.0748mg/ml）を含有することができる。EDTAは、0.02から0.15 mM、0.02から0.1 mM、0.03から0.08 mM、もしくは0.04から0.06 mM；または約0.03 mM、約0.04 mM、約0.05 mM、もしくは約0.06 mMの量で存在してもよい。ある実施形態において、EDTAは約0.05 mM（0.018 mg/ml）の濃度で存在する。
【００９８】
適当な塩には、塩を形成する任意の対イオン、たとえばナトリウムを含めることができる。たとえば、塩化ナトリウムを使用することができるが、ナトリウム塩の対イオンとして塩素の代わりに酢酸アニオンを用いてもよい。ある実施形態において、塩は塩化ナトリウムである。製剤は、25から100 mM濃度の塩化ナトリウム（1.461から5.84mg/ml)を含有することができる。塩化ナトリウムは、35から90 mM、45から80 mM、25から70 mM、もしくは45から60mM；または45mM、46mM、47mM、48mM、49mM、50mM、51mM、52mM、53mM、54mM、55mMの量で存在してもよい。ある実施形態において、塩化ナトリウムは約51mM (2.98mg/ml)の濃度で存在する。
【００９９】
適当なアミノ酸にはアルギニンを含めることができる。製剤は、0.5から5%濃度のアルギニン遊離塩基（5から50 mg/ml）を含有することができる。他の実施形態において、アルギニン遊離塩基は、0.5から4.0%、0.5から3.5%、0.5から3.0%、0.5から2.5%；または約0.5%、約0.75%、約1%、約1.5%、約2%、もしくは約3%の量で存在することができる。ある実施形態において、アルギニンは約1%（10 mg/ml）の濃度で存在する。
【０１００】
ポリオールは複数のヒドロキシ基を有する物質であり、これには糖類（還元糖および非還元糖）、糖アルコール、および糖酸が含まれる。ポリオールの例としては、フルクトース、マンノース、マルトース、ラクトース、アラビノース、キシロース、リボース、ラムノース、ガラクトース、グルコース、スクロース、トレハロース、ソルボース、メレジトース、ラフィノース、マンニトール、キシリトール、エリトリトール、トレイトール、ソルビトール、グリセロール、L-グルコン酸およびその金属塩がある。ある実施形態において、本発明の製剤はポリオールを含まない。
【０１０１】
ある実施形態において、酢酸バッファー製剤は、ポリソルベート80、EDTA、塩化ナトリウム、およびアルギニン遊離塩基のうち1つもしくは複数、それらの組み合わせ、またはそれらのすべてをさらに含有する。
【０１０２】
製剤のpHは、pH 5.0 から7.0に調整することができる。ある実施形態において、製剤を約pH 5.5に調整するために酢酸が存在する（約100 mM酢酸）。他の実施形態において、pHはpH5.0、5.5、6.0、6.5、または7.0に調整することができる。本発明のさらに他の実施形態では、NaOHもしくはHClを用いてpHを5.0、5.5、6.0、6.5、または7.0に調整する。
【０１０３】
本明細書に記載のTNFα抗原結合タンパク質は、20から300 mg/mlの濃度範囲で製剤することができる。たとえば、抗原結合タンパク質は、20-200 mg/mlもしくは50-100 mg/ml；または約40 mg/mlもしくは約45 mg/mlもしくは約50 mg/mlもしくは約55 mg/mlもしくは約60 mg/mlもしくは約70 mg/mlもしくは約80 mg/mlもしくは約90 mg/mlもしくは約100mg/mlの濃度で存在する。ある実施形態において、TNFα抗原結合タンパク質は約50 mg/mlの濃度で存在する。
【０１０４】
TNFα抗原結合タンパク質はアダリムマブとすることができる。TNFα抗原結合タンパク質はPBC1494とすることができる。TNFα抗原結合タンパク質はBPC1496とすることができる。
【０１０５】
ある実施形態において、製剤は、少なくとも1年、少なくとも18ヶ月、または少なくとも2年間、安定である。たとえば、製剤は約5℃の温度で、少なくとも1年、少なくとも18ヶ月、または少なくとも2年間、安定である。別の実施形態において、製剤は室温（約25℃）で安定である。たとえば製剤は、約25℃の温度で、少なくとも14週間、少なくとも2週間、少なくとも1週間、少なくとも6日、少なくとも5日、少なくとも4日、少なくとも3日、少なくとも2日、または少なくとも1日の間、安定である。別の実施形態において、製剤は約40℃の温度で安定である。たとえば、製剤は約40℃の温度で、少なくとも9週間、または少なくとも4週間安定である。
【０１０６】
下記の実施例25および26に示すように、製剤は室温（約25℃）で安定である。したがって、推奨時間を越えて室温で放置される可能性のある注射用充填済みデバイス内で、凝集物または低分子量断片生成のリスクはほとんどない。凝集物は免疫原性である可能性があり（The AAPS Journal 2006; 8 (3) Article 59 Themed Issue: Proceedings of the 2005 AAPS Biotec Open Forum on Aggregation of Protein Therapeutics, Guest Editor - Steve Shire, Effects of Protein Aggregates: An Immunologic Perspectiveを参照されたい）低分子量断片は、既存の自己抗体を誘発する可能性がある（J Immunol 2008; 181:3183-3192; Human Anti-IgG1 Hinge Autoantibodies Reconstitute the Effector Functions of Proteolytically Inactivated IgGs1を参照されたい）。
【０１０７】
液体製剤中のTNFα抗原結合タンパク質の安定性は、目視観察による外観、タンパク質濃度（A280nm）、サイズ排除クロマトグラフィー（SEC）、キャピラリー等電点電気泳動のうちいずれか1つによって、もしくはそれらを組み合わせて、ならびに機能的結合アッセイ（ELISA）によって、評価することができる。たとえば、単量体、凝集物、もしくは断片、もしくはそれらの組み合わせのパーセンテージによって、安定性を判定することができる。ある実施形態において、安定な液体製剤は、製剤中に凝集物として存在するTNFα抗原結合タンパク質が約10%未満、または約5%未満の製剤である。製剤は、少なくとも95%、または少なくとも96%、または少なくとも97%、または少なくとも98%、または少なくとも99%の単量体含量を有することができる。製剤は、室温（約25℃）にて約2週間後に、少なくとも95%、または少なくとも96%、または少なくとも97%、または少なくとも98%、または少なくとも99%の単量体含量を有することができる。製剤は、室温（約25℃）にて約1週間後に、少なくとも95%、または少なくとも96%、または少なくとも97%、または少なくとも98%、または少なくとも99%の単量体含量を有することができる。製剤は、室温（約25℃）にて約1日後に、少なくとも95%、または少なくとも96%、または少なくとも97%、または少なくとも98%、または少なくとも99%の単量体含量を有することができる。
【０１０８】
したがって、本発明の注射用医薬組成物は、1 ml滅菌緩衝用水、および約1 mgから約100 mgまで、たとえば約30 mgから約100 mgまで、またはより好ましくは、約35 mgから約80mgまで、たとえば40、50、80、もしくは90 mgの本発明の抗原結合構築物を含有するように調製することができる。非経口投与可能な組成物を調製するための実際上の方法は、当業者によく知られているか、明白なものであって、たとえば下記に、より詳細に記載されている：Remington's Pharmaceutical Science, 15th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania. For the preparation of intravenously administrable antigen binding construct formulations of the invention see Lasmar U and Parkins D “The formulation of Biopharmaceutical products”, Pharma. Sci.Tech.today, page 129-137, Vol.3 (3rd April 2000), Wang, W "Instability, stabilisation and formulation of liquid protein pharmaceuticals", Int. J. Pharm 185 (1999) 129-188, Stability of Protein Pharmaceuticals Part A and B ed Ahern T.J., Manning M.C., New York, NY: Plenum Press (1992), Akers,M.J. "Excipient-Drug interactions in Parenteral Formulations", J.Pharm Sci 91 (2002) 2283-2300, Imamura, K et al "Effects of types of sugar on stabilization of Protein in the dried state", J Pha
rm Sci 92 (2003) 266-274,Izutsu, Kkojima, S. "Excipient crystalinity and its protein-structure-stabilizing effect during freeze-drying”, J Pharm. Pharmacol, 54 (2002) 1033-1039, Johnson, R, “Mannitol-sucrose mixtures-versatile formulations for protein lyophilization”, J. Pharm. Sci, 91 (2002) 914-922。
【０１０９】
好ましくは、本発明の抗原結合タンパク質は、約40 mgの投与量で提供もしくは投与される。好ましくは、抗原結合タンパク質は、皮下投与に適しており、皮下投与される。他の投薬もしくは投与経路も、本明細書に記載のように、使用できる。
【０１１０】
ある実施形態において、本発明のいかなる態様の抗原結合タンパク質も、配列番号2の軽鎖配列および配列番号12の重鎖配列を含有するIgGと比較して、増加した平均滞留時間を示す。
【０１１１】
改変IgG、およびIgG構築物ドメインもしくはそのFcRn結合部分を含有する分子の結合能力は、さまざまなin vitroアッセイによって特徴付けることができる。WardによるPCT公報WO 97/34631は、さまざまな方法を詳細に発表している。たとえば、改変IgGもしくはその断片がFcRnと結合する能力を、野生型IgGの能力と比較するために、改変IgGもしくはその断片、および野生型IgGを放射性同位体で標識化し、in vitroでFcRn発現細胞と反応させることができる。次に細胞結合画分の放射能をカウントして比較する。このアッセイに用いられるFcRn発現細胞は、内皮細胞株、たとえばB10.DBA/2マウス肺由来のマウス肺毛細管内皮細胞（B10, D2.PCE）、およびSV40により形質転換したC3H/HeJマウス由来内皮細胞（SVEC）（Kim et al., J Immunol., 40: 457-465,1994）などとすることができる。しかしながら、十分な数のFcRnを発現する他のタイプの細胞、たとえば、選ばれた種の組換えFcRnを発現する哺乳類細胞なども使用することができる。あるいはまた、改変IgGの結合画分の放射能、または未改変IgGのその放射能をカウントした後、結合した分子を界面活性剤で抽出することが可能であって、細胞単位数当たりのパーセント放出を算出して比較することができる。
【０１１２】
本発明の抗原結合タンパク質のFcRnに対する親和性は、既述のように、たとえばBIAcore 2000 (BIAcore Inc.)を用いて、表面プラズモン共鳴（SPR）測定法によって測定することができる（Popov et al., Mol. Immunol., 33: 493-502,1996; Karlsson et al., J Immunol. Methods, 145: 229-240,1991、この2つはいずれもその全体を参考として組み入れる）。この方法では、FcRn分子をBIAcoreセンサーチップ（たとえばPharmacia製CM5チップ）に結合し、固定化されたFcRnへの改変IgGの結合を一定流速で測定して、BIA evaluation 2.1ソフトウェアを用いてセンサーグラムが得られるが、それに基づいて改変IgG、定常ドメイン、もしくはそれらの断片のFcRnに対するon-rateおよびoff-rateを算出することができる。本発明の抗原結合タンパク質および未改変IgGのFcRnに対する相対的親和性は、単純な競合結合アッセイによっても測定することができる。さらに、改変IgGもしくはその断片、および野生型IgGのFcRnに対する親和性は、飽和試験およびScatchard解析によっても測定することができる。
【０１１３】
細胞を介した改変IgGもしくはその断片の移動は、in vitro移動アッセイによって、放射性同位体で標識したIgGもしくはその断片およびFcRn発現細胞を用いて、細胞単層の片側の放射能を反対側と比較して、測定することができる。あるいはまた、こうした移動は、in vivoで、10から14日齢の授乳期マウスに放射性同位体で標識した改変IgGを与え、定期的に血液サンプル中の放射能をカウントすることによって測定することができるが、これは腸を通って血液循環（または他の任意の標的組織、たとえば肺）に至るIgGの移動を示すものである。腸管を通過するIgG移動の容量依存的阻害を調べるために、放射能標識および非標識IgGの一定割合の混合物をマウスに与え、血漿の放射能を定期的に測定することができる（Kim et al., Eur. R Immunol., 24: 2429-2434,1994）。
【０１１４】
抗原結合タンパク質の半減期は、Kimらが記載する方法（Eur. J. of Immuno. 24: 542,1994）にしたがって薬物動態試験によって測定することができるが、この文献は参考としてその全体を本明細書に含めるものとする。この方法によれば、放射能標識抗原結合タンパク質をマウスに静脈注射し、その血漿中濃度を定期的に時間の関数として、たとえば注射の3分後から72時間後まで測定する。こうして得られたクリアランス曲線は二相性となるはずである。改変IgGもしくはその断片のin vivo半減期を決定するために、β相でのクリアランス速度を算出し、未改変IgGと比較する。
【０１１５】
本発明の抗原結合タンパク質は、免疫特異的に抗原と結合する能力についてアッセイすることができる。このようなアッセイは、溶液中（たとえば、Houghten, BiolTechniques, 13: 412-421,1992）、ビーズ上（Lam, Nature, 354: 82-84,1991）、チップ上（Fodor, Nature, 364: 555-556,1993）、細菌表面（米国特許第5,223,409号）、芽胞表面（米国特許第5,571,698; 5,403,484; および5,223,409号）、プラスミド上（Cull et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 1865-1869,1992）、またはファージ上（Scott and Smith, Science, 249: 386-390,1990; Devlin, Science, 249: 404-406,1990; Cwirla et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87: 6378-6382, 1990; およびFelici, J : Mol. Biol., 222: 301-310, 1991）で実施することができる（これらの参考文献はそれぞれ、参考としてその全体を本明細書に含めるものとする）。抗原もしくはその断片に免疫特異的に結合したと特定された抗体は、次に、その抗原に対するそれら抗体の特異的親和性についてアッセイすることができる。
【０１１６】
本発明の抗原結合タンパク質は、抗原に対する免疫特異的結合、および他の抗原との交差反応性について、当技術分野で公知の任意の方法でアッセイすることができる。免疫特異的結合および交差反応性を分析するために使用することができるイムノアッセイには、ほんの数例を挙げれば、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ELISA（酵素免疫測定法）、「サンドウィッチ」免疫測定法、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル内拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射定量測定法、蛍光免疫測定法、Protein Aイムノアッセイなどの技術を用いた、競合および非競合アッセイ系があるが、これらに限定されない。このようなアッセイは日常的なものであり、当業者によく知られている（たとえば、Ausubel et al, eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, John Wiley & Sons, Inc., New Yorkを参照されたいが、これは、その全体を参考として本明細書に含めるものとする）。
【０１１７】
好ましい実施形態において、BIAcore動態解析を用いて、抗原に対する抗体結合のon rateおよびoff rateを測定する。BIAcore動態解析には、表面に抗体を固定化したチップからの抗原の結合解離を解析することが含まれる。
【０１１８】
抗原結合タンパク質：本明細書で使用される「抗原結合タンパク質」という用語は、抗体、抗体フラグメント、および他のタンパク質構築物への言及を含んでおり、これらはTNFαと結合する能力を有する。
【０１１９】
抗体：「抗体」という用語は、本明細書では、もっとも広い意味で使用され、免疫グロブリン様ドメインを有する分子への言及を含んでいるが、それにはモノクローナル抗体、組換え抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、およびヘテロ結合抗体が含まれる。
【０１２０】
ヒトIgG1重鎖定常ドメイン：は、対立遺伝子変異を含めて、天然に存在するIgG1重鎖定常ドメインのヒトアミノ酸配列を表す。
【０１２１】
「半減期（t1/2）」は、抗原結合ポリペプチドの濃度が最初の値の半分に達するのに要する時間を表す。タンパク質の血清中半減期は、Kimら（Eur. J. of Immuno. 24: 542, 1994）により記載の方法にしたがって、薬物動態試験で測定することができる。この方法によれば、放射能標識タンパク質をマウスに静脈注射し、その血漿中濃度を定期的に時間の関数として、たとえば注射の約3分後から約72時間後まで測定する。分子の薬物動態解析および半減期の決定のための他の方法は当業者によく知られている。詳細は、Kenneth, A et al: Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists and in Peters et al, Pharmacokinetic analysis: A Practical Approach (1996)に見いだすことができる。“Pharmacokinetics”, M Gibaldi & D Perron, Marcel Dekker刊、改訂第2版(1982)にも言及しておくが、これはtαおよびtβ半減期、ならびに曲線下面積（AUC）などの薬物動態パラメーターを記載しており、さらに、 “Clinical Pharmacokinetics: Concepts and Applications”, RowlandおよびTozer、第3版(1995)にも言及しておく。
【０１２２】
「クリアランス（CL）」は単位時間あたり不可逆的にタンパク質除去される血漿体積を表す。クリアランスは投与量/AUC（AUC：曲線下面積、すなわち血漿中薬物濃度-時間曲線下の面積）として計算される。またクリアランスは、薬物消失速度を薬物の血漿中濃度で割ることによっても算出することができる（消失速度 = CL×濃度）。
【０１２３】
「平均滞留時間（MRT）」は、抗原結合ポリペプチドが不可逆的に除去される前に体内に滞留する平均時間である。MRT = AUMC/AUCとして算出。
【０１２４】
「定常状態濃度」（Css）は、持続的な薬物投与の結果として、薬物消失速度が薬物投与速度と等しくなったときに到達する濃度である。Cssはピーク濃度とトラフ濃度の間で変動し、μg/mlの単位で測定される。「平均定常状態トラフ濃度」は、ある時点での患者集団全体のトラフ濃度の平均を意味する。
【０１２５】
「同等の平均定常状態トラフ濃度」とは、表示された値と同じであるか、またはその値の約10%から30%までの範囲内である、平均定常状態トラフ濃度を意味する。本発明の抗原結合ポリペプチドについて同等の平均定常状態トラフ濃度は、配列番号2の軽鎖配列および配列番号12の重鎖配列を含んでなるIgGで達成された平均定常状態トラフ濃度の0.8から1.25倍であるような平均定常状態トラフ濃度であるとみなすことができる。
【０１２６】
半減期およびAUCは、時間に対する、薬物（たとえば本発明の抗原結合ポリペプチド）の血清中濃度の曲線から算定することができる。半減期はコンパートメント解析もしくはノンコンパートメント解析によって求めることができる。たとえば、曲線をモデル化するために、WINNONLIN（登録商標）解析パッケージ（Pharsight Corp., Mountain View, CA94040, USAより入手できる）を使用することができる。ある実施形態において、「半減期」は終末相半減期を指す。
【０１２７】
特異的に結合する：抗原結合タンパク質に関して本明細書の全体を通じて使用される「特異的に結合する」という用語は、抗原結合タンパク質がTNFαと結合するが、他の無関係なタンパク質との結合はないか、または有意でないことを意味する。しかしながら、その用語は、抗原結合タンパク質が、密接に関連した分子と交差反応する可能性もあるという事実を排除しない。本明細書に記載の抗原結合タンパク質は、密接に関連した分子と結合するより、少なくとも2倍、少なくとも5倍、少なくとも10倍、少なくとも50倍、少なくとも100倍、または少なくとも1000倍大きな親和性で、TNFαと結合することができる。
【０１２８】
CDR：「CDR」は、抗原結合タンパク質のアミノ酸配列の相補性決定領域として定義される。これらは、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の超可変領域である。免疫グロブリンの可変部分には3つの重鎖および3つの軽鎖CDR（またはCDR領域）がある。したがって、本明細書で使用されるCDRは、3つすべての重鎖CDR、3つすべての軽鎖CDR、重鎖および軽鎖CDRのすべて、または少なくとも2つのCDRを意味する。
【０１２９】
本明細書を通じて、可変ドメイン配列および全長抗体配列のアミノ酸残基は、Kabatナンバリング法にしたがって番号が付けられている。同様に、実施例で使用される「CDR」、「CDRL1」、「CDRL2」、「CDRL3」、「CDRH1」、「CDRH2」、「CDRH3」という用語は、Kabatナンバリング法に従う。これ以上の情報については、Kabatら、Sequences of Proteins of Immunological Interest、第4版、米国保健福祉省（U.S. Department of Health and Human Services）、国立衛生研究所（National Institutes of Health）（1987）を参照されたい。
【０１３０】
変異体の%同一性：「同一な」または「配列同一性」という用語は、2つの核酸もしくは2つのアミノ酸配列を最適に並べて、適当な挿入もしくは欠失で比較したときの、それら2つの間の同一性の程度を示す。本明細書に記載の変異体は、アミノ酸レベルで、天然型CDRもしくは可変ドメイン配列に対して90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99%の同一性を有する可能性がある。
【０１３１】
当然のことながら、本明細書に記載の特定の実施形態は、例証として示されるのであって、本発明を制限するものとして示されるのではない。本発明の主要な特徴は、本発明の範囲から逸脱することなく、さまざまな実施形態で用いることができる。当業者は、日常的な実験だけで、本明細書に記載の具体的な手順と同等な多数のものを認識し、または確認することができる。このような同等なものは、本発明の範囲内に含まれるとみなされ、請求の範囲でカバーされる。本明細書で言及されるあらゆる出版物および特許出願は、本発明が属する技術分野の当業者の水準を示している。すべての出版物および特許出願は、個々の出版物もしくは特許出願が具体的かつ個別に、参考として組み入れられると示された場合と同じように、参考として本明細書に組み入れられる。特許請求の範囲および/または明細書において"comprising"（含んでなる）という用語と併せて使用される場合の"a"および"an"という単語の使用は、"one"（1つ）を意味することもあるが、"one or more"（1つもしくは複数）、"at least one"（少なくとも1つ）、および"one or more than one"（1つもしくは2つ以上）の意味とも合致する。特許請求の範囲における"or"（または（もしくは））という用語の使用は、明細書が別の可能性のみ、および"and/or"を意味する定義を支持していても、明らかに別の可能性のみを指すと示されない限り、またはその別の可能性が互いに排他的でない限り、"and/or"（および/または）を意味するために使用される。本出願書類の全体を通じて、「約」という用語は、ある値が、その値を決定するために用いられた機器、方法に固有の誤差変動、または研究対象の間に存在する差異を含むことを示すために使用される。
【０１３２】
本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、"comprising"（含んでなる）（ならびにcomprisingの任意の語形、たとえば"comprise"および"comprises"）、"having"（有する）（ならびにhavingの任意の語形、たとえば"have"および"has"）、"including"（含む）（ならびにincludingの任意の語形、たとえば"includes"および"include"）、または"containing"（含有する）（ならびにcontainingの任意の語形、たとえば"contains"および"contain"）は包括的であって、すなわち制限がなく、追加の未記載の要素もしくは方法ステップを除外しない。ある態様において、このような制限のない表現は、たとえば"consisting essentially of"（基本的に〜からなる）、または"consisting of"（〜からなる）といった制限的、すなわち排他的な記述もその範囲内に含んでいる。
【０１３３】
本明細書で使用される「またはそれらの組み合わせ」という表現は、その表現に先行する列挙された事項のあらゆる順列および組み合わせを指す。たとえば、「A、B、C、またはそれらの組み合わせ」は、A、B、C、AB、AC、BC、またはABCのうち少なくとも1つを含むものとするが、特定の状況で順序が重要である場合には、BA、CA、CB、CBA、BCA、ACB、BAC、またはCABも含まれるものとする。この例を続けていくと、1つもしくは複数の事項の繰り返し、たとえばBB、AAA、AB、BBC、AAABCCCC、CBBAAA、CABABBなどを含む組み合わせが明示的に含まれる。当業者には当然のことながら、典型的には、状況からそうでないことが明白でない限り、いかなる組み合わせにおいても事項の数について制限はない。
【０１３４】
本明細書に記載され請求される組成物および/または方法はすべて、本明細書に照らして過度の実験なしに作製し、実行することができる。本発明の組成物および方法は、好ましい実施形態について記載してきたが、本発明の概念、意図、および範囲から逸脱することなく、本明細書に記載の組成物および/または方法、ならびに方法のステップまたはそのステップの順序に、変形物を適用できることは、当業者にとって明白である。このような当業者に明白な類似の代用形および変更はすべて、添付の特許請求の範囲で規定される、本発明の意図、範囲、および概念に含まれるとみなされる。
【０１３５】
本明細書に引用されたすべての文書は、許容される最大限まで、参考として組み入れられる。
【０１３６】
本明細書の任意の要素は、出願の文脈からそうでないことが明白でない限り、明らかに、本明細書の他の任意の要素と組み合わせて考えられている。
【０１３７】
本発明は以下の実施例を参考にしてさらに説明されるが、実施例は本発明について限定しない。
【０１３８】
（実施例）
【実施例１】
【０１３９】
抗体発現ベクターのクローニング
抗TNFα抗体の重鎖可変（VH）および軽鎖可変（VL）ドメインをコードするDNA発現構築物は、新たに、あらかじめ調製され、哺乳類発現ベクターに入れてクローニングするための制限酵素部位を含んでいた。重鎖および軽鎖可変ドメイン配列はいずれも、哺乳類細胞での発現用に配列最適化された（方法論については、WO2009024567およびKotsopoulouら、J Biotechnol (2010) 146: 186-193を参照されたい）。重鎖および軽鎖可変領域配列を記載する報告は、米国特許US6090382に見いだすことができる。本研究で使用する構築物を作製するために、PCRを用いて重鎖可変ドメイン（VH）配列を増幅した。PCRプライマーは、ヒトγ1定常領域を含有するpTT哺乳類発現ベクターに入れてクローニングするために、シグナル配列を含有するVHドメインを構築するように、HindIIIおよびSpeI制限部位を含有した。同様にVL配列は、ヒトκ定常領域を含有するpTT哺乳類発現ベクターへのクローニングを容易にするように、HindIIIおよびBsiWI制限部位を含有するプライマーを用いたPCRによって増幅された。重鎖発現プラスミドはコードSJC322を与えられ、軽鎖発現プラスミドはプラスミドコードSJC321を与えられた。
【０１４０】
CDR領域に改変を有する、抗TNFα抗体の別の重鎖および軽鎖可変領域をコードするDNA発現構築物（Rajpalら、PNAS (2005) 102(24): 8466-8471ページに記載のような）は、オーバーラップオリゴヌクレオチドの構築、および上記と同様の分子生物学の技術によって、新たに調製された。その結果得られた、変異体cb1-3、cb2-6、およびcb2-44の重鎖および軽鎖をコードするプラスミドを表1に記載する。
【実施例２】
【０１４１】
Fc領域の操作
フォワードおよびリバースプライマーを用いて、パスコリズマブ（抗IL-4抗体）の重鎖をコードするプラスミドのヒトγ1定常領域内に、QuikChangeプロトコール（Promega）によって変異（M252Y/S254T/T256EおよびT250Q/M428L）を導入した。
【０１４２】
上記の実施例1に記載のように、抗TNFα抗体のVHドメインをコードするPCR断片は、あらかじめ構築されたコドン最適化ベクターを鋳型として用いて作製された。得られた断片は、HindIIIおよびSpeIを用いて、前項に記載の改変ヒトγ1定常領域を含有するpTT発現ベクターに挿入されてクローン化された。M252Y/S254T/T256E変異を有する抗TNFα抗体の重鎖をコードするプラスミドをSJC324と名付けた。T250Q/M428L変異を有する重鎖をコードするプラスミドはSJC323と命名した。
【０１４３】
フォワードおよびリバースプライマーを用いて、抗TNFα重鎖発現プラスミドSJC322のヒトγ1定常領域内に、QuikChangeプロトコール（Promega）によって変異を導入した。プラスミドSJC326は、ヒトγ1定常領域内にM428L/N434S変異を有する抗TNFα重鎖をコードする。プラスミドSJC328は、ヒトγ1定常領域内にV308F変異を有する抗TNFα重鎖をコードする。
【実施例３】
【０１４４】
pTT5エピソームベクターによるHEK2936E細胞での抗体の発現
上記の重鎖および軽鎖をコードする発現プラスミドをHEK 293 6E細胞に、一過性に同時トランスフェクトした。1 ml HiTrap Protein Aカラム（GE Healthcare）を用いたアフィニティクロマトグラフィーによって、発現された抗体を上清から生成した。表1は作製された抗体のリストを示す。
【０１４５】
一部の抗体は、異なる発現ベクターのセットを用いてCHO細胞でも発現された。分子生物学、発現、および精製に関する説明については実施例13、14、および15を参照されたい。
【表１】
2014524748.tif 000003
【実施例４】
【０１４６】
直接結合ELISAにおける腫瘍壊死因子αに対する抗体の結合
結合ELISAは、Protein Aにより精製された発現抗体の、組換え腫瘍壊死因子α（TNFα）との結合を調べるために行った。ELISAプレートを組換えヒトTNFα、0.1μg/mlでコーティングし、ブロッキング溶液（4% BSA）でブロックした。さまざまに希釈した精製抗体を添加し（0.05% Tween 20含有トリス緩衝食塩水、pH8.0に溶解した4% BSAで希釈）、そのプレートを室温で1時間インキュベートしてから脱イオン水で洗浄した。結合は、ブロッキング溶液に溶解したペルオキシダーゼ標識抗ヒトκ軽鎖抗体（Sigma A7164）の添加により検出した。プレートを室温で1時間インキュベートした後、脱イオン水で洗浄した。OPD基質（Sigma P9187）を添加してプレートを呈色させ、2M HClの添加により発色の進行を止めた。プレートリーダーによって490 nmで吸光度を測定し、平均吸光度を濃度に対してプロットした。結果を図1に示すが、それによって、すべての抗体が類似したプロファイルを示すことが確認される。
【実施例５】
【０１４７】
L929 in vitro中和アッセイによる抗体の分析
このアッセイは、TNFαを中和して細胞死を抑制する、抗体の中和能力を調べるために用いられた。簡単に述べると、L929細胞を、100μl RPMI 1640（w/oフェノールレッド）中で10,000/ウェルとして96ウェル平底プレートにシードし、37℃にて5% CO2で一晩インキュベートした。細胞は、1.25μg/mlアクチノマイシンDを用いて1時間感作した。中和研究のために、0.001 - 60μg/ml（0.0067 - 400 nM）抗TNFα mAbを室温にて1時間、約2ng/ml（約0.05nM）TNFαとともに1:1の割合でプレインキュベートした。対照群には、抗体の代わりにRPMIを使用した。アクチノマイシンDとともに1時間プレインキュベートした後、20μlの抗体-抗原複合体をウェルごとに加えた。ネガティブコントロールとしては10μl培地のみをウェルに加えた。プレートを37℃にて5% CO2で18時間インキュベートした。この処理時間の後、細胞生存率を、Cell Titer-Glo Luminescent Assayキットで、メーカーの説明書にしたがって測定した（Promega, Madison USA）。L929アッセイについて、未知の細胞生存率パーセンテージは、未処理群（100%とみなされる）のパーセンテージとして表され、IC50はGraphpad Prismによって算定された。抗体のIC50の相違は、One-way ANOVA（一元配置分散分析法）（Newman-Keuls post hoc test）によって評価され、0.05未満のP値で有意とみなされた。データは二連で測定されたn=4の実験の平均±SEMとして表される。各抗体についてIC50値を求め、以下の表2に示す。結果は、テストした抗体すべての能力が同等であることを示す。
【表２】
2014524748.tif 000004
【０１４８】
表3は、実験から導かれたIC50値を示す。この結果によれば、改良された抗TNFα抗体（BPC1499、BPC1500、BPC1501）はこのアッセイではBPC1492およびアダリムマブより高い能力を示す。
【表３】
2014524748.tif 000005
【実施例６】
【０１４９】
in vitro IL-6放出に及ぼす抗体の影響
抗体の中和能力は、TNFαの関与する全血液細胞からのIL-6放出の阻害に関するそれらの影響を測定することによって、判定することができる。簡単に述べると、全血130μlを各ウェルに添加し、プレートを37℃にて5% CO2加湿インキュベーター内で1時間インキュベートした。中和検討のために、0.01 - 30μg/ml（0.067 - 200 nM）TNFαmAbを、10 ng/ml（約0.4 nM）TNFαとともに1:1の比率で1時間4℃にてプレインキュベートした。対照群には、抗体の代わりにRPMIを使用した。この前処理の後、20μlの抗原-抗体複合体またはRPMI（ネガティブコントロール）をウェルごとに添加し、プレートを37℃にて5% CO2で24時間インキュベートした。100μl PBS（w/o MgCl2またはCaCl2）を各ウェルに加え、500 rpmで10分間プレートシェーカーに載せた。次にプレートを2000 rpmで5分間遠心した。120μl上清を注意深く取り出し、新しい96ウェル丸底プレートに移し、MSDに基づくアッセイキット（Meso Scale Diagnostics, Maryland USA）を用いてIL-6放出を測定した。全血アッセイのために、MSD SECTOR（登録商標）Imager 2400を用いてMSDシグナルを各サンプルについて読み取り、PRISM 4.00ソフトウェア (GraphPad. San Diego, USA)の標準データ解析パッケージを用いて細胞からのIL-6放出を数量化した。各抗体によるIL-6阻害のパーセンテージを、TNFα単独処理群のパーセンテージとして表した。このようにして、用量反応曲線が各抗体について得られ、IC50値が決定された。IC50値の対数を用いて、抗体の能力の相違がOne-way ANOVA（一元配置分散分析法）(Newman−Keuls post hoc test)によって算定され、各ドナー（n=3）について0.05未満のP値で有意とみなされた。データは二連で測定された3ドナーの平均±SEMとして表される。
【０１５０】
下記の表4はこれらのデータから導き出されたIC50値を示す。こうした結果は、調べた抗体間で能力に有意な差がないことを示唆する。
【表４】
2014524748.tif 000006
【０１５１】
IC50値を表5に示す。この結果によれば、改良された抗TNFα抗体（BPC1499、BPC1500、BPC1501）はこのアッセイでは能力の増加を示す。
【表５】
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【実施例７】
【０１５２】
加速ストレス要因試験
試験に先立って、テストすべき抗体を分光光度計でOD280nmにおいて定量し、PBS（pH7.4）中1.1 mg/mlに希釈した。一定分量を取り、10%v/vの500mM酢酸はトリウムを加えて、pH5.5 で終濃度1mg/mlとなるようにして、サンプルの沈殿を検査した。残りのPBS中サンプルは、10% PBS v/vを加えて、pH7.4で終濃度1mg/mlとし、このサンプルの一定分量を取って、ベースラインの凝集レベル（サイズ排除クロマトグラフィーでモニターした）を提供した。次に、サンプルを37℃にて2週間インキュベーター内でインキュベートし、その後サンプルをOD280nmにおいて分光光度計で再定量し、（サイズ排除クロマトグラフィーによって）凝集について評価した。直接結合ELISAで、サンプルのヒトTNFα結合について調べた。結果を図２に示すが、調べたすべての抗体の結合活性が加速ストレス要因試験後に同等であることが確認される。
【実施例８】
【０１５３】
25%ヒト血清中での安定性試験
試験に先立って、テストすべき抗体を分光光度計でOD280nmにおいて定量し、PBS（pH7.4）中1.25 mg/mlに希釈した。一定分量をとり、25%v/vヒト血清を添加して、終濃度1mg/mlとなるようにした。残りのPBS中サンプルは、25% PBS v/vを加えて、終濃度1mg/mlとし、このサンプルの一定分量を取って、ベースラインレベルを提供した。次に、サンプルを37℃にて2週間インキュベーター内でインキュベートし、その後、直接結合ELISAで、サンプルのヒトTNFα結合について調べた。結果を図3に示すが、調べたすべての抗体の結合活性が25%血清中2週間のインキュベーション後に同等であることが確認される。
【実施例９】
【０１５４】
凍結融解後のヒトTNFαとの結合の分析
抗体サンプルは、50mM酢酸および150mM NaCl含有バッファー(pH6.0)中1mg/mlに希釈し、ドライアイス中で瞬間凍結した後4℃にて一晩融解した。抗体のヒトTNFαとの結合は、瞬間凍結されなかった抗体と比較して調べた。凍結融解後の結合活性を評価するために、ELISAプレートを組換えヒトTNFα、1μg/mlでコーティングし、ブロッキング溶液（Tris緩衝食塩水中4% BSA）でブロックした。さまざまな濃度のものをコーティングしたプレートに加え、室温で1時間インキュベートした後、脱イオン水で洗浄した。ブロッキング溶液中のペルオキシダーゼ標識抗ヒトκ軽鎖抗体（Sigma A7164）の添加により、結合を検出した。プレートを1時間室温にてインキュベートした後、脱イオン水で洗浄した。OPD基質（Sigma P9187）を添加してプレートを呈色させ、2M HClの添加により発色の進行を止めた。プレートリーダーによって490 nmで吸光度を測定し、平均吸光度を濃度に対してプロットした。結果を図4に示すが、それによって、テストしたすべての抗体の結合活性が凍結融解後に同等であることが確認される。
【実施例１０】
【０１５５】
抗TNFα抗体のFcγRIIIaとの結合の分析
ELISAプレートを組換えヒトFcγRIIIa（V158およびF158変異体）、1μg/mlでコーティングし、ブロッキング溶液（Tris緩衝食塩水中4% BSA）でブロックした。さまざまな濃度のものをコーティングしたプレートに加え、室温で1時間インキュベートした後、脱イオン水で洗浄した。ブロッキング溶液中のペルオキシダーゼ標識抗ヒトκ軽鎖抗体（Sigma A7164）の添加により、結合を検出した。プレートを1時間室温にてインキュベートした後、脱イオン水で洗浄した。OPD基質（Sigma P9187）を添加してプレートを呈色させ、2M HClの添加により発色の進行を止めた。プレートリーダーによって490 nmで吸光度を測定し、平均吸光度を濃度に対してプロットした。結果を図5aおよび5bに示すが、それによって、BPC1494のFcγRIIIa（V158およびF158変異体）と結合する能力がBPC1492およびBPC1496と比べて低下していることが確認される。
【実施例１１】
【０１５６】
ProteOn解析：FcRn結合
一級アミンカップリングによって、GLCバイオセンサーチップ上に同じようなレベルでテスト用の抗体を固定化した。組換えヒトおよびカニクイザルFcRnを、アナライトとして2048nM、512nM、128nM、32nM、および8nMで使用し、バッファーのみのインジェクション（すなわち0nM）を結合曲線の二重の基準に使用した。FcRnインジェクション後の抗体表面の再生はpH9.0のHBS-Nを使用し、アッセイは、ProteOn XPR36 Protein Interaction Array Systemで25℃にて行われ、適当なバッファーで希釈されたFcRnを用いてHBS-N pH7.4およびHBS-N pH6.0中で行われた。親和性は、ProteOn解析ソフトウェアの中の平衡モデルを用いて計算したが、pH6.0での結合については“Global R-max”を使用し、pH7.4での親和性計算のためにはpH6.0での結合からのR-maxを使用した。結合曲線はpH7.4では飽和に達しなかったので、得られた値は真の親和性である可能性は低いが、構築物をランク付けするために使用することができる。結果を表6に示すが、それによって、BPC1494およびBPC1496は、pH6.0で、BPC1492と比べて改善された、ヒトおよびカニクイザルFcRnに対する親和性を有することが確認される。
【表６】
2014524748.tif 000008
【実施例１２】
【０１５７】
ヒトFcRnトランスジェニックマウスにおけるPKの検討
単回投与薬物動態試験において、BPC1494およびBPC1492は、2つの異なる系統のFcRnヒト化マウス、およびFcRnを欠損した1系統に、1 mg/kgで静脈内（IV）投与された（Petkova ら、Int. Immunol (2010) 18(12): 1759-1769）。必要に応じて、有効なGyrolab蛍光イムノアッセイを用いて、血漿サンプルをBPC1494またはBPC1492について分析した。
【０１５８】
その方法は、捕捉抗原としてビオチン標識ヒトTNFαを使用し、検出抗体としてAlexa標識抗ヒトIgG（Fc特異的）抗体を使用した。アッセイバッファーで1:10に希釈したマウス血漿の一定分量を用いて、定量下限（LLQ）は100 ng/mlであり、定量上限（HLQ）は100,000 ng/mlであった。最低基準より低い血漿中濃度は、定量不可能とみなされた。3つの異なる濃度で調製され、試験サンプルとともに保存されたQCサンプルは、別に作成された検量線と対照して、各バッチのサンプルとともに分析された。分析が受け入れられるために、各濃度で少なくとも1つのQCは、設定濃度から20%を越えて逸脱してはならない。この試験から得られたQCの結果は、これらの容認基準に合致した。
【０１５９】
PK分析は、WinNonLin、バージョン6.1を用いて、ノンコンパートメント薬物動態解析によって行った。すべての計算は、設定の採血時間を用いた。BPC1494およびBPC1492への全身暴露は、投与開始から最終測定可能時点までの（AUC0-t）血漿中濃度-時間曲線下の面積（AUC）を、線形対数台形法を用いて計算することによって、算定された。そのほかのPKパラメーターは、サンプル標識の相違のため、データから導くことができなかった。
【表７】
2014524748.tif 000009
【０１６０】
系統1 = mFcRn-/- hFcRn (32) Tg/Tg
系統2 = mFcRn-/- hFcRn (276) Tg/Tg Rag1-/-
系統3 = mFcRn -/-/Rag1-/-
すべてのグループについて類似したCmax 濃度が得られた。ヒトFcRnノックインマウス系統BPC1494はいずれも、BPC1492より高い暴露（AUC0-t）を示したが、この相違は顕著ではなかった（1.3倍）。ヒトおよびマウスFcRnがいずれも存在しない場合、BPC1492はBPC1494より高い暴露を示した。
【実施例１３】
【０１６１】
抗体発現ベクターのpEFベクターへのクローニング
一部の例では、重鎖および軽鎖の発現カセットをコードするDNAを、HindIIIおよびEcoRIを用いて、実施例3に記載のベクターから切り出し、pEFベクターに挿入してクローン化したが、この場合、発現は、標準的な分子生物学の技法によって、hEF1aプロモーターから生じる（ベクターの説明については、Kotsopoulouら、J. Biotechnol (2010) 146: 186-193を参照されたい）。
【表８】
2014524748.tif 000010
【実施例１４】
【０１６２】
pEF発現ベクターを用いたCHO細胞における抗体発現
重鎖および軽鎖をコードする発現プラスミドを、同時トランスフェクトしてCHO DG44細胞に入れ、抗体製造規模で発現させた。BPC1492を作製するために、プラスミドSJC329およびSJC330を使用した。BPC1494の発現のために、プラスミドSJC329およびSJC331が使用された。BPC1496には、プラスミドSJC329およびSJC332が使用された。
【０１６３】
簡単に述べると、30μg DNA（15μg重鎖および15μg軽鎖）を、NotI制限酵素によって一晩、線状化した。その結果得られた制限DNAを次に、エタノール沈殿させて、TEバッファー中に再溶解した。培養から6 x 106 CHO DG44細胞を得て、10 ml PBSで洗浄した。その後、細胞ペレットを、300μl Amaxa溶液V中に再懸濁した。次いで前記細胞懸濁液100μlを3つのAmaxaキュベットのそれぞれに添加したが、このキュベットには線状化DNA 3μgも入っていた。キュベットをAmaxa Nucleofector II装置に挿入し、プリセットプログラムU-023でエレクトロポレーションを行った。エレクトロポレーションを行った細胞の3つのキュベットの内容物（300μl）を、10 mlの加温したMR14培地（ヌクレオシドおよびBSAを含む）に加え、T75フラスコ内で48時間インキュベートした。この時間の後に、培地を、ヌクレオシドを含有しないMR14（BSAのみを含有するMR14）に交換した。3-4日ごとに、培養上清を除去して、新鮮な選択培地で置き換えた。細胞が回復したら、培地を2X MR14に置き換えて、IgG発現を比濁法により確認した。2L振盪フラスコに1LのIgG発現細胞を0.6 x 106/mlで播種し、7日間増殖させた。遠心分離によって細胞を上清から分離し、その上清をタンパク質精製のために使用した。
【０１６４】
AKTA Xpressシステムで2段階の自動工程によって、1リットル細胞培養物上清を精製した。抗体を5 ml MabSelect SuReカラムに捕捉した後、洗浄してから溶出した。次に、溶出された抗体を、440 ml Superdex 200ゲル濾過カラムにロードし、96ウェルブロックに2 ml画分を採取した。精製された抗体の画分をプールして、0.2μmフィルターで濾過した後、Amiconスピンコンセントレーターを用いて約5 mg/mlに濃縮した。最終材料を再度0.2μmフィルターで濾過した後、投与用の滅菌チューブに分注した。最終材料は、凝集を測定するための分析用SEC、エンドトキシンアッセイ、正確な質量測定のためのLC-MS（グリコシル化を測定するためにPNGaseFおよび未処理材料を含めた）、SDS PAGE電気泳動、配列確認のためのPMF、および濃度測定のためのA280に供された。
【実施例１５】
【０１６５】
pEF発現ベクターを用いたCHO細胞における抗体発現のための別法
DHFR欠損CHO DG44細胞は、コロンビア大学（Columbia University）のChasin博士から入手した。その後、この細胞を合成培地に適応させた。この適応宿主細胞はDG44-cと称され、GlutamaxおよびHTサプリメントを添加した市販の合成培地で培養される。
【０１６６】
ポリクローナルプールの作製：プロトコールについてさらに詳細な情報は、WO2009024567 およびKotsopoulouら、J. Biotechnol (2010) 164(4): 186-193を参照されたい。簡単に述べると、重鎖および軽鎖、ならびにDHFR、ならびにneoRをそれぞれをコードしたプラスミドを用いて、DG44-c細胞を、エレクトロポレーションによりトランスフェクトした（Amaxa Nucleofectorシステムを使用）。トランスフェクション後48時間の時点で、G418の（400μg/mlの終濃度での）添加、およびしHTの除去によって、選択を開始した。生存率および細胞数が十分に増加したら（この場合はトランスフェクション後2ヶ月で）、メトトレキサート（MTX）を添加して終濃度5nMとした。細胞をスケールアップして、生産曲線はMTX添加の9-16日後に開始した。この生産曲線のために、細胞を、0.6-0.8x106 細胞/mlで合成培地に播種し、6、9もしくは10、12もしくは13、および/または16日目にフィードした。生存率が約50%まで下がったら上清を集め、4000gにて30分間の遠心後Sartobran Capsuleで濾過することによって細胞を除去した。
【０１６７】
抗体は、室温にて、2段階クロマトグラフ法によって精製した：50ml MabSelectSureカラム（GE Healthcare）の後、1.5L Superdex 200 pg SEC（GE Healthcare）を用いたサイズ排除クロマトグラフィー（SEC）によって、最初の捕捉を行った。培養上清をあらかじめ平衡化されたMabSelectSureカラムに、9cm/hの流速でロードした。平衡化バッファー（50mm Tris pH 8.0、2M NaCl）でベースラインまで洗浄した後、電気伝導度が安定するまで、低塩濃度バッファー（50mM NaCl Tris pH 8.0、150mM NaCl）でカラムを洗浄した。その後カラムを溶出バッファー（25mMクエン酸塩pH 2.5）で溶出した。ピークのタンパク質溶出に対応する画分をただちに1/10容1.0M Tris pH 8.0で中和した後、プールして、0.2μmボトルトップフィルターで濾過した。回収したサンプルを、SECバッファー（50mM 酢酸ナトリウム、150mM NaCl）であらかじめ平衡化されたSECカラムに、21cm/hでロードした。主要な（単量体）タンパク質ピークを含む画分をプールし、濾過滅菌した。
【０１６８】
この方法で調製された抗体を、下記実施例にまとめられた分析的同等性試験に使用した。
【実施例１６】
【０１６９】
ストレスを加えられたサンプルおよび対照サンプルの同等性分析
タンパク質の凝集レベルを測定するためにサイズ排除クロマトグラフィーを実施した。最適化された方法は、100 mMリン酸ナトリウム、400 mM NaCl、pH 6.8で平衡化されたTOSOH TSK G3000SWXLカラムへのサンプルのインジェクションを含むものであった。280nmおよび214nmの両者で吸光度を測定した。逆相HPLCは、疎水性に基づいてタンパク質とそのアイソフォームを分離する。タンパク質はPLRP-S 1000A 8μmカラムにインジェクションされ、50%ギ酸および95%アセトニトリルによって生じる濃度勾配を用いて溶出された。吸光度を280nmで測定した。分子の純度は、全ピーク面積に対する主要ピーク面積のパーセンテージとして報告される。mAbの異なるアイソフォームは、キャピラリー等電点電気泳動（cIEF）を用いて、pI値に基づいて分離された。IEF分離は、10cm、UV280透過性カートリッジキャピラリーで行った。最適化された方法には、圧力注入によってキャピラリーにロードされる、5% pH 3-10 両性電解質、10mM NaOH、当該タンパク質、および内部pIマーカー（7.05および9.5）を含有する溶液が必要であった。
【０１７０】
抗体（アダリムマブ、BPC1494、BPC1496）の比活性は、MSDを用いて測定した。簡単に述べると、96ウェルプレートを、ウェル当たり50μlの、PBSで1μg/mlに希釈したTNFαでコーティングした。プレートは、ベンチトップで室温にて振盪せずに2時間、インキュベートした。コーティング溶液を除去し、プレートを、ウェル当たり50μlの、0.05% Polysorbate 20含有PBS中1% BSAでブロックした。そのプレートを1時間24℃にて400 rpmで振盪しながらインキュベートした後、洗浄バッファーで4回洗浄した。抗体を0.05% Polysorbate 20含有PBS中0.1% BSAで希釈し、30μlの各サンプルをプレートに添加した。プレートを1時間24℃にて400 rpmで振盪しながらインキュベートした。次に、プレートを洗浄バッファーで4回洗浄した。抗ヒトIgG Sulfo-Tagをアッセイバッファーで1/5000に希釈した。30μlをプレートの各ウェルに添加した後、24℃にて1.5時間、400 rpmで振盪しながらインキュベートした。その後プレートを洗浄バッファーで4回洗浄した。4x MSD Read Buffer濃縮物を脱イオン水で1xに希釈した。次に100μlをプレートのウェルごとに添加した。プレートはその後、MSD Sector Imager装置を用いて読み取った。アッセイから得られたシグナルから、分子の比活性を計算した。
【０１７１】
脱アミド化分析
脱アミド化は、アスパラギンおよびグルタミン残基に起こりうる、よく知られた翻訳後修飾であるが、アスパラギン残基でもっともよくみられ、特にグリシン残基に隣接する場合である。これらの残基がどれほど感受性であるかを調べ、力価に及ぼす脱アミド化の影響を判定するために、アダリムマブ、BPC1494、およびBPC1496をストレス試験に供した。ストレスは、脱アミド化を引き起こすことがすでに判明している条件である、1% 炭酸水素アンモニウム、pH9.0中で48時間のインキュベーションによって行われた。ストレスサンプルは、対照（PBS中）と並行してインキュベートし、この対照ならびにストレスなしの標準と比較し、c-IEF、SEC、および結合ELISAを用いて分析した。EDTA存在下および非存在下で、強制的な脱アミド化も全サンプルに対して実施した。強制的な脱アミド化条件が脱アミド化に加えて断片化を引き起こすことはすでに判明している。EDTAは断片化を防ぎ、および/または最小限にする。
【０１７２】
酸化分析
さまざまな残基の酸化が、タンパク質の処理および保存の間中、生じうる；しかしながら、もっともよく酸化される残基はメチオニンであって、それが評価の焦点であった。5mMおよび50 mM H2O2中30分間のインキュベーションによってストレス条件にさらすことにより、これらの残基の酸化感受性を調べ、RP-HPLC、SEC、およびELISAによって評価した。
【０１７３】
結果の概要
BPC1494およびBPC1496はいずれも、ストレスサンプルおよび対照サンプルの両方についての同等性分析で示されるように、アダリムマブと比べて非常に好ましい挙動を示す。調べたすべての抗体に関して、使用したあらゆる分析法で示されるように、強制的な酸化条件下で有意な分解は観察されなかった。c-IEFで測定される有意な脱アミド化は、テストしたすべての抗体について予想通りpH 9.0で観察された。それに加えて、テストしたすべての抗体について、EDTAを含有しないサンプル中pH 9.0において、SECで示されるように、有意な断片化が見られたが、これも予想通りである。アダリムマブと比較するとBPC1494のpI値に低下が認められる（約0.2）。これは、BPC1494の重鎖配列中に追加のグルタミン酸残基が存在し、そのために酸性が強まることに起因する。強制的な脱アミド化および酸化は、結合に最小限の影響しか及ぼさず、これはBPC1494、BPC1496、およびアダリムマブについて観察された。
【実施例１７】
【０１７４】
ELISAによる改良型抗体の結合の分析
抗体BPC1499、1500、および1501の結合活性を、実施例4に記載のようにELISAによって評価した。2つの異なる抗原コーティング濃度（0.1および1.0μg/ml）を用いて、BPC1492と比較すると、抗体は、その結合プロファイルになんら相違を示さなかった。テストした条件下で、ELISAは異なる結合活性が報告されている抗体を区別しないと思われる。同じ抗体を、より高感度のアッセイと考えられる、実施例18、5、および6に記載の方法を用いて評価した。これらのアッセイで、抗体BPC1499、1500、および1501は、BPC1492と比べて結合親和性の向上および力価の改善を示す。
【実施例１８】
【０１７５】
捕捉表面によるTNFα結合のBiacore解析
Protein Aおよび抗ヒトIgG（GE Healthcare BR-1008-39）をCM3バイオセンサーチップの別々のフローセルに結合させた。これらの表面は、結合解析の目的で抗体を捕捉するために使用された。組換えヒトおよびカニクイザルTNFαをアナライトとして64nM, 21.33nM, 7.11nM, 2.37nM, 0.79nMで使用し、バッファーのみ（すなわち0nM）のインジェクションは結合曲線の二重の基準に使用した。捕捉表面の再生は、100mMリン酸および3M MgCl2を用いて行った。ランニングバッファーとしてHBS-EPを用いて37℃にてBiacore T100機器で実施した。構築物BPC1494およびBPC1496は、Protein Aおよび抗ヒトIgG表面との結合の低下を示し、このため、これらの表面はそれらの分子について速度論をもたらすには不適当となった。
【表９】
2014524748.tif 000011
【実施例１９】
【０１７６】
ProteOn Reverse Assay結合解析
ビオチン標識TNFαをビオチン標識BSAと1：49の割合で混合し、最終総タンパク質濃度が20μg/mlとなるようにした（すなわち、0.4μgビオチン標識TNFαおよび19.6μgビオチン標識BSA）。この混合物をNLCバイオセンサーチップ（シングルフローセル）（Biorad 176-5021）上に捕捉させた。安定したシグナルが達成されるまで、チップ表面を10mMグリシンpH3.0で調整した。テストすべき抗体を256nM、64nM、16nM、4nM、および1nM、ならびに0nMでアナライトとして使用した。結合曲線は、ビオチン標識BSAのみでコーティングされたフローセルに対して基準化された。再生は10mMグリシンpH3.0を用いて行われた。データは、ProteOn解析ソフトウェアに付属の1:1モデルに当てはめられた。
【表１０】
2014524748.tif 000012
【０１７７】
このデータは、実行された2つの実験の1セットである（別の1セットは示さず）。データのKD順位は、2つのデータセットの両者に対応している。
【実施例２０】
【０１７８】
ヒトTNFαと結合する別の抗体の構築
（Rajpalら、PNAS (2005) 102(24): 8466-8471ページに記載のような）CDR領域内に変異を有する追加の重鎖可変領域をコードするDNA発現構築物を、オーバーラップしたオリゴヌクレオチドの構築、ならびに実施例1に記載の方法と同様の分子生物学の技法によって新規に調製した。これらの変異型抗体の重鎖可変ドメインをコードするDNA配列の例は、配列番号81、83、85、87、89、91、93、および95で与えられる。（Rajpalら、PNAS (2005) 102(24): 8466-8471ページに記載のような）CDR領域内に変異を有する追加の軽鎖可変ドメイン領域をコードするDNA発現構築物を、オーバーラップしたオリゴヌクレオチドの構築、ならびに実施例1に記載の方法と同様の分子生物学の技法によって新規に調製した。これらの変異型抗体の軽鎖可変ドメインをコードするDNA配列の例は、配列番号97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、および137で与えられる。構築したら、重鎖および軽鎖をコードする発現プラスミドを、HEK 293 6E細胞内に一過性に同時トランスフェクトした。発現された抗体を上清から精製し、実施例6に記載の方法と同様の方法を用いて活性について評価した。
【実施例２１】
【０１７９】
BPC2604（パスコリズマブ-YTE）のための発現ベクターの構築
パスコリズマブの重鎖をコードする、pTTベースのDNA発現構築物が、次の変化M252Y/S254T/T256E (EUインデックス番号)を含有するように、Quikchangeプロトコール（Promega）を用いて操作した。
【実施例２２】
【０１８０】
PascoおよびPasco-YTEベクターの発現/精製
BPC2604の重鎖および軽鎖をコードする発現プラスミドを、HEK 293 6E細胞内に一過性に同時トランスフェクトした。発現された抗体を、AKTAxpressにおいて5ml MabSelectSureカラムおよびSuperdex 200カラムを用いたアフィニティクロマトグラフィーおよびSECによって実施される2段階精製を用いて、バルク上清から精製した。
【実施例２３】
【０１８１】
FcRn結合に関するPascoおよびPasco-YTEのBIAcore解析
抗体を一級アミンカップリングでGLMチップ上に固定化した（20μg/ml酢酸塩pH4.5）。ヒト、カニクイザル、ラット、およびマウスFcRn受容体は、2048、512、128、32、および8nMで使用した。0nMは二重に対照するために使用された。アッセイは、HBS-EP pH7.4およびHBS-EP pH6.0中で行われた（FcRn受容体はそれぞれのpH用の適当なランニングバッファーで希釈された）。表面はFcRn結合のために200mM Tris pH9.0で再生された。データは平衡モデルに適合し、R-maxは任意の構築物について得られる最高のRmaxに設定された。結果を下記の表11に示すが、YTE改変パスコリズマブ（BPC2604）はパスコリズマブと比べて、pH6.0で、改善されたFcRnとの結合を示すことが確認される。
【表１１】
2014524748.tif 000013
【実施例２４】
【０１８２】
PascoおよびPasco-YTEに関するPKの検討
図6は、1 mg/kgの目標投与量で単回静脈内（1時間点滴）投与後の、雌カニクイザルにおけるパスコリズマブ-YTE（BPC2604）の、ならびに雄カニクイザルにおけるパスコリズマブの、投与量補正した平均血漿中濃度を示す。BPC2604およびパスコリズマブのデータは、別々の研究でもたらされた。パスコリズマブおよびBPC2604の血漿中抗体濃度は、キャプチャー試薬としてIL-4を使用し、検出試薬として抗ヒトIgG（Fc特異的）-HRPコンジュゲートを使用して、ケミルミネッセンスELISAによって評価した。アッセイの有効な範囲は50-5000 ng/mlであった。結果を図6に示す。どちらの化合物も、同様のCmaxを有したが、BPC2604は、血漿クリアランスが3倍低く、その結果AUCの3倍の増加、ならびに半減期（T1/2）の2倍の増加をもたらした。
【実施例２５】
【０１８３】
5mg/mlにおける製剤の検討
2つの製剤中でのアダリムマブおよびTNFα変異体BPC1494の安定性を比較した。製剤"A"（クエン酸-リン酸バッファー）は、市販のアダリムマブ製剤であって、pH 5.2で、6.16 mg/ml 塩化ナトリウム + 0.30 mg/ml クエン酸一ナトリウム + 1.30 mg/mL クエン酸一水和物 + 12 mg/ml マンニトール + 0.86mg/mL リン酸二水素ナトリウム二水和物 + 1.53mg/mL リン酸水素ナトリウム二水和物 + 1.0 mg/ml PS80からなるものである。
【０１８４】
製剤"B"（酢酸バッファー）は、6.81mg/mL (50mM) 酢酸ナトリウム三水和物 + 10mg/mL (1% w/v) アルギニン + 0.0186mg/mL (0.05mM) EDTA + 2.98mg/mL (51mM) 塩化ナトリウム + 0.2mg/mL (0.02% w/v) Polysorbate 80からなり、HClまたはNaOHを用いてpH 5.5に調製される。
【０１８５】
この検討で使用されるTNFα変異体BPC1494の材料は、チャイニーズハムスター卵巣（CHO DG44）細胞株で作製され、MabSelect SuReの後にSuperdexカラム 200pgを含む2段階のプロセスで精製された。Abbott Laboratories製のアダリムマブ（製品コードNDC 0074-3799-02、ロット番号 91073LX40）を使用した。
【０１８６】
アダリムマブを、10KDa Slide - A - Lyzerカセット（製品番号66830、ロット番号LJ150514；Thermo Scientific (Rockford, IL ;USA)製）を用いて5℃にて一晩透析することによって、製剤"B"に製剤し直した。この実験は、他の3つの製剤に対して異なる時点で実施された。製剤"A"および"B"のアダリムマブはいずれも、対応する製剤バッファーで5mg/mlに希釈した。TNFα変異体BPC1494も製剤AおよびB中で約5mg/mlに調剤された。全4サンプルを、清潔な層流条件下でMillexGV 0.22μmフィルターで濾過した後、ラベル付きの滅菌済みガラスバイアルに移し、5℃、25℃、および40℃にて、最長で14週間インキュベートした。選択された時点でサンプルを採取し、SEC-HPLC（表12）、cIEF（表13）を用いて分析した。下記のような他のアッセイも行って、抗体の安定性を評価した。
【０１８７】
目視観察による外観
明所でサンプルの透明性を検査した。それぞれの製剤中の2つの抗体はいずれも、5℃、25℃、および40℃で14週間保存後、依然として変化はなかった（無色透明な溶液）。
【０１８８】
タンパク質濃度（A280nm）測定
NanoDrop（ナノドロップ）分光計を用いてタンパク質濃度を測定したが、これはタンパク質の安定性を示す。アダリムマブの吸光係数は1.46であり、TNFα変異体BPC1494の吸光係数は1.48であった。5℃、25℃、および40℃にて14週間保存後の結果に有意な差異はなかった。
【０１８９】
pH
異なる保存条件で保存した全サンプルについてpHを測定し、有意なpH変化が生じたかどうかを判定した。5℃、25℃、および40℃にて14週間保存後に、結果はすべてアッセイ変動の範囲内であった。
【０１９０】
サイズ排除クロマトグラフィー（SEC）
この方法は、溶液中の可溶性タンパク質分子を、分子量ではなくサイズに基づいて分離する。理論的には、小さい分子は固定相のあらゆる小孔に入り込むので、ゆっくり溶出されることになる。得られたクロマトグラムから、凝集物、単量体、および低分子量（MW）断片の面積パーセンテージを決定することができる。凝集物および/または低分子量分子種の存在はタンパク質の分解を示している。安定性の増加は、全凝集物（TA）および全低分子量断片（TLMWF）のパーセンテージが低いことに加えて、単量体分子種（Mono）のパーセンテージが高いことに対応する。
【０１９１】
SEC-HPLCデータ（表12）は、TNFα変異体BPC1494が、25℃および40℃にて14週間の保存後に、製剤Aより製剤"B"中で相対的に安定であったことを示す。さらに、TNFα変異体BPC1494は、製剤A中のアダリムマブよりも相対的に安定であるか、または少なくともそれと同程度に安定であった。製剤B中のアダリムマブの結果は、すべて、5% TAおよび/またはTLMWF以内である。したがって、製剤BはTNFα変異体BPC1494およびアダリムマブのいずれについても製剤Aより有利である。
【０１９２】
たとえば、表12は、25℃にて8週間保存後に、製剤A中のTNFα変異体BPC1494が2.3% TLMWFを有するのに対して、製剤Bは1.5%しか生じなかったことを示す。さらに、製剤B中のTNFα変異体BPC1494は、製剤A中のアダリムマブ（1.8% TLMWF）よりも相対的に安定であった。同様に、25℃にて14週間の時点で、TNFα変異体BPC1494について、製剤"B"中では2.3% TLMWFであったのに対して、製剤"A"中では3.15% TLMWFが観察された。その上、"B"中のTNFα変異体BPC1494は、製剤A中のアダリムマブ（3.4% TLMWF）よりも相対的に安定であった。TLMWFについて同様の傾向が、40℃にて4週間のインキュベーションで、どちらの分子にも観察された（‘A’中のアダリムマブ：3.6%；"A"中のTNFα変異体BPC1494：4.1%；"B"中のTNFα変異体BPC1494：2.6%）。
【０１９３】
また、全凝集物（TA）の結果は、25℃にて14週間で、TNFα変異体BPC1494が、"A"中（0.5%）よりも”B"中で（0.3%）相対的に安定であったこと；ならびに製剤A中のアダリムマブ（0.4%）より相対的に安定であったことを示す。
【０１９４】
キャピラリー等電点電気泳動（c-IEF）
この方法は、分子の電荷プロファイルを決定するために使用される。幅広いpI範囲は、産物の電荷不均一性が高いことを反映しており、それに加えて幅広いpI範囲は、分解を示す可能性がある。典型的にはピークの数は、分解の増加に伴って増加するものである。表12のc-IEFデータは、表13のSECの知見を裏付ける。
【０１９５】
主要アイソフォームの面積％（%AMI）は、25℃にて8週間および14週間の時点で、製剤A中のアダリムマブと製剤B中のTNF-α変異体BPC1494との間で同等であった（それぞれ56.0-57.7および53.2）。上記の時点および温度で、製剤Bは、TNF-α変異体BPC1494について、"A"よりわずかに優位性を示す。
【０１９６】
同様に、アダリムマブは、製剤Aよりも製剤B中の方が相対的に安定である（第4週のデータを参照されたい）。たとえば、電荷の不均一性が増加する変化（すなわち、ピーク数の増加）は、製剤Bよりも、製剤A中で40℃にて4週間までインキュベートしたアダリムマブで観察された（それぞれ6ピークおよび8ピーク）。TNF-α変異体BPC1494はすべての時点および温度で、5ピークという、より安定した電荷の不均一性を示した。
【０１９７】
機能的結合アッセイ
2つの製剤中のアダリムマブおよびTNF-α変異体BPC1494の結合活性を、Biacoreで評価した。5℃、25℃、および40℃で14週間の保存期間にわたって、サンプルは、アッセイのばらつきの範囲内で、同じような結合％を示した。
【０１９８】
したがって、製剤Bは、タンパク質の安定性を損なうことなく、市販のアダリムマブ製剤(A)に伴う痛みを取り除く可能性があり、臨床の場で製剤Aに代わる製剤として機能を果たしうると結論付けることができる。
【０１９９】
重要なことは、このデータが、酢酸製剤(B)がクエン酸-リン酸製剤(A)と比べてTNF-α変異体BPC1494の安定性を改善することを示すのみならず、酢酸製剤がアダリムマブを安定化する際にクエン酸-リン酸製剤と同等か、それより優れていることも示していることである。
【表１２】
2014524748.tif 000014
【表１３】
2014524748.tif 000015
【０２００】
2014524748.tif 000016
【０２０１】
NT = 検査せず；pI R：Piレンジ；pMI：主要アイソフォームのpI；%AMI：主要アイソフォームの面積；NoP：ピーク数
【実施例２６】
【０２０２】
50mg/mlにおける製剤の検討
前の実施例25に示すように、製剤B中5mg/mlのアダリムマブおよびTNF-α変異体BPC1494は、製剤Aに代わるものとして機能を果たすことができる。この実施例は、50mg/mlにおいて、製剤Bに対して市販の製剤A中のアダリムマブの安定性を比較し、ならびに他のTNF-α変異体の安定性を比較することに焦点を当てる。
【０２０３】
TNF-α変異体BPC1494の2サンプルを分析したが、1つはCHO DG44細胞で発現され、1つはCHOK1細胞で発現されたものである。もう1つのTNF-α変異体BPC1496は、CHO DG44細胞株で作製された。3つサンプルはすべて、発現させてからMabSelect SuReを用いて精製した。実施例25とは異なり、Superdexカラムステップは行わなかった。実施例25と同様に、アダリムマブ（製品コードN 00515-01、ロット番号02136XH12）はAbbott Laboratories製。
【０２０４】
アダリムマブは、上記実施例25のように、製剤A（購入）およびB（バッファー交換による）中で製剤され、TNF-α変異体（BPC1494および1496）は、製剤B中で製剤されたが、いずれも約50mg/mlとした（全部で5サンプル）。サンプルは、清潔な層流条件下でMillexGV 0.22μmフィルターで濾過した後、ラベル付きの滅菌済みガラスバイアルに移し、5℃、および40℃にて、最長で9週間インキュベートした。選択された時点でサンプルを採取し、SEC-HPLC（表14）、cIEF（表15）を用いて分析した。下記のような他のアッセイも行った。
【０２０５】
目視観察による外観
明所でサンプルの透明性を観察した。2つの製剤中の2つの抗体はいずれも、5℃、および40℃にて9週間保存後、依然として変化はなかった（無色透明な溶液）。
【０２０６】
タンパク質濃度（A280nm）測定
NanoDrop（ナノドロップ）分光計を用いてタンパク質濃度を測定したが、これはタンパク質の安定性を示す。5℃および40℃にて9週間保存後の結果に有意な差異はなかった。
【０２０７】
サイズ排除クロマトグラフィー（SEC）
SEC-HPLCデータ（表13）によれば、アダリムマブは、40℃にて9週間の保存後に、製剤A中よりも製剤B中のほうが相対的に安定であった。また、TNFα変異体（BPC1494および1496）は製剤B中で、製剤B中のアダリムマブと相対的に同等に安定であるか、またはそれより安定であった。製剤A中の変異体とB中の変異体との間で比較は行わなかった。
【０２０８】
ここで留意すべきは、TNF-α変異体の最初のTAレベルがアダリムマブより相対的に高かったことである。したがって、40℃で最初から9週までの変化を比較するために、結果の表は、右側に％変化の列を含んでいる。たとえば、表13は、9週間保存後に、製剤B中の全低分子量断片（TLMWF）のパーセンテージ変化が、製剤A中での6.08%に対して3.82-4.96%の間であったことを示している。同様に、製剤A中の単量体パーセンテージ変化は、アダリムマブについて製剤Bより大きかった（それぞれ7.54および4.52%）。製剤B中のTNF-α変異体はすべて、相対的に製剤A中のアダリムマブと少なくとも同等に安定であるか、またはそれより安定であった（9週での％変化）。全サンプルについて4週での結果は、5% TAおよび/または市販製品のためのTLMWF許容量の範囲内に含まれる。したがって、製剤Bは、2つのTNF-α変異体およびアダリムマブについて50mg/mlで、製剤Aより優位性を有する。
【０２０９】
具体的には、TNF-α変異体BPC1496は、40℃にて9週間で、3.86という低いTLMWFを示した。
【０２１０】
キャピラリー等電点電気泳動（c-IEF）
c-IEFデータ（表15）は表14の知見を裏付ける。
【０２１１】
製剤Bは、製剤Aと比べて、アダリムマブについて9週の時点で%AMIの％変化の減少を示す（それぞれ23.53および27.57）。
【０２１２】
製剤B中のTNF-α変異体は、電荷不均一性（すなわちピーク数の増加）に関してアダリムマブ（製剤A中およびB中のいずれも）より安定である。たとえば、9週の時点で、5℃および40℃にてそれぞれ、各変異体について5個および6個のピークが存在するが、アダリムマブについては6個および9個のピークが存在する。
【０２１３】
具体的には、TNF-α変異体BPC1496およびアダリムマブはいずれも製剤B中で、それぞれ25.83および23.53という低い、9週での%AMIの％変化を示した。TNF-α変異体BPC1496 （CHO DG44）に関する38.13という相対的に高い、9週での%AMIの％変化は、75.03という相対的に高い最初の%AMIに起因する可能性がある。
【０２１４】
機能的結合アッセイ（ELISA）
2つの製剤中のアダリムマブおよびTNF-α変異体の結合活性を、Biacoreで評価した。5℃および40℃で9週間の保存期間にわたって、サンプルは、アッセイのばらつきの範囲内で、同じ結合％を示した。
【０２１５】
したがって、製剤Bは、50mg/mlの調剤濃度で、抗体の安定性を損なうことなく、臨床の場で製剤Aに代わる製剤として機能を果たしうると結論付けることができる。
【表１４】
2014524748.tif 000017
【表１５】
2014524748.tif 000018
NT = 検査せず；pI R：Piレンジ；pMI：主要アイソフォームのpI；%AMI：主要アイソフォームの面積；NoP：ピーク数。
【実施例２７】
【０２１６】
雄カニクイザルに皮下投与した後の血漿中BPC1494濃度
反復投与薬物動態試験において、BPC1494は、4週間にわたって週1回、または2週に1回、30もしくは100 mg/kgで雄カニクイザルに皮下投与された。第2群（n = 3）については、動物は第1日に2 x 30 mg/kgの投与（約1時間おいて）を受けた後、第8、15、および22日に30 mg/kgの単回投与を受けた。第3群（n = 3）については、動物は第1日に2 x 30 mg/kgの投与（約1時間おいて）を受けた後、第15日に30 mg/kgの単回投与を受けた。第4群については、動物は第1日に2 x 100 mg/kgの投与（約1時間おいて）を受けた後、第15日に30 mg/kgの単回投与を受けた。血漿サンプルは試験の投与期間および回復期間を通して間隔を置いて採取した。
【０２１７】
サンプル希釈に基づく限定分析法に続いてイムノアッセイ分析を用いて、血漿サンプルをBPC1494について分析した。血漿サンプルはBPC1494またはBPC1492について分析した。その方法は、10μg/mlのビオチン標識組換えヒトTNF-αを捕捉抗原として使用し、1:100希釈のAlexaFluor 647標識抗ヒトIgG（Fc特異的）抗体を検出抗体（G18-145）として使用した。BPC1494の定量下限（LLQ）は、100倍希釈のサル血漿50μlを用いて1μg/mlであり、定量上限（HLQ）は100μg/mlであった。データを取得して数値化するためにこの試験で使用されたコンピューターシステムは、Gyrolab Workstation Version 5.2.0、Gyrolab Companion version 1.0、およびSMS2000 version 2.3を含んでいた。PK解析は、WinNonlin Enterprise Pheonix version 6.1を用いて、ノンコンパートメント薬物動態解析によって実施された。
【０２１８】
薬物動態データは、表16に与えられるが、パラメーターは、30 mg/kg/週の投与群(2)については、第4週に受けた最後の投与から投与後840時間の時点(t)まで決定され、30および100 mg/kg/隔週の投与群（3および4）については、第3週に受けた最後の投与から投与後1008時間の時点(t)まで決定された。
【表１６】
2014524748.tif 000019
【０２１９】
a)  第2群の動物は4週間、毎週30 mg/kgの投与を受けた。
【０２２０】
b)  薬物動態パラメーターは、30 mg/kg/週については、第4週に受けた最後の投与から投与後840時間の時点(t)まで決定され、30および100 mg/kg/隔週については、第3週に受けた最後の投与から投与後1008時間の時点(t)まで決定された。
【０２２１】
c)   Cl_FおよびVz_Fは、複数回投与後の消失相であって定常状態が未だ達成されないため、推定値である。パラメーター推定値は、i) AUCO-168もしくは336の使用、ii) 半減期に基づく第1週から得られたデータの外挿、ならびにiii)規定のサンプリングの終わりまでの総投与量をAUCO-infとともに使用、から算出された。
【０２２２】
d)  動物274および277は、抗薬物抗体反応を示しやすいという科学的判断に基づいて、薬物動態に関する平均の算出から除外した。かっこ内に示す平均は、これらの動物を含めたものである。
【実施例２８】
【０２２３】
Protein Lに捕捉された抗TNF-α mAb対するFcRnのSPR結合解析
この検討は、無標識の反応速度/親和性測定のために設計された、表面プラズモンに基づく機器である、ProteOnTM XPR36 (BioRadTM) バイオセンサー機器を用いて行った。Protein Lは一級アミンカップリングによってGLMチップ（BioRad、カタログ番号: 176-5012）上に固定化された。その後、この表面を用いてヒト化抗体を捕捉し、次にヒトおよびカニクイザルFcRn（いずれも自社製材料）をアナライトとして、2048nM、512nM、128n、32nM、および8nMで使用し、バッファー単独（すなわち0 nM）のインジェクションを用いて結合曲線を二重に標準化した。Protein L表面の再生は、グリシン-HCl pH1.5を用いて行った。アッセイは25℃で実行し、ヒトもしくはカニクイザルFcRnを適当なバッファーで希釈してHBS-EP pH7.4およびHBS-EP pH6.0中で実行した。親和性は、ProteOn解析ソフトウェアに付属の平衡モデルを用いて計算したが、pH6.0での結合には“Global R-max”を使用し、pH7.4での親和性の計算にはpH6.0での結合から得られたR-maxを使用した。結合曲線はpH7.4では飽和に達しなかったので、得られた値は真の親和性である可能性は低いが、テストした抗体の結合を順位付けするために使用した。
【０２２４】
異なるバッチのBPC1492、BPC1494、およびBPC1496の、ヒトFcRnに対する結合親和性を、Protein Lによって捕捉された抗体を用いて比較した。表17は、このフォーマットを用いた一連の実験から得られた結果を示す。データから、BPC1494およびBPC1496は、組換えヒトFcRnに対する親和性が、pH6.0とpH7.4のいずれにおいてもBPC1492と比べて向上していることが確認される。FcRnに対するBPC1494の結合親和性をBPC1492と比較した向上の倍率は、捕捉に関するProtein L活性が変化したために、実験ごとに異なる。しかしながら、表17に示す実験において、pH6.0における結合親和性の向上倍率は、3.5倍から16.3倍までである。中性pHではFcRnに対するヒトIgGの結合親和性が弱かったため、pH7.4における結合親和性の向上倍率を求めることはできなかった。
【０２２５】
カニクイザルFcRnに対する、異なるバッチのBPC1492、BPC1494、およびBPC1496の結合親和性も、Protein Lにより捕捉された抗体を用いて比較した。表18は、このフォーマットによる実験から得られた結果を示す。データから、BPC1494は、組換えカニクイザルFcRnに対する親和性が、pH6.0とpH7.4のいずれにおいてもBPC1492と比べて向上していることが確認される。カニクイザルFcRnに対するBPC1494の結合親和性（41.8-46.8nM）をBPC1492（394-398nM）と比較した向上の倍率は、pH6で約9倍である。FcRnに対するBPC1492の結合親和性が弱かったため、pH7.4における結合親和性の向上倍率を求めることはできなかった。
【表１７】
2014524748.tif 000020
【０２２６】
** - データ点は報告されてはいるが、その値は慎重に取り扱うべきであって、それは、これらのデータが本実験中に同じ分子の他のバッチについて得られたデータと一致しないからである。
【０２２７】
NAB = 分析可能な結合なし
ND = 本実験ではテストせず
## = 高親和性結合 - 機器の感度を超えている
【表１８】
2014524748.tif 000021
【０２２８】
[表Ａ]
2014524748.tif 000022
【０２２９】
2014524748.tif 000023
【０２３０】
2014524748.tif 000024
【０２３１】
配列表
配列番号1  抗TNF抗体軽鎖のポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCGGGCCAGCCAGGGCATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCACCCTGCAGAGCGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACAACAGAGCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTCAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAAGTGCAGTGGAAAGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAAGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
配列番号2  抗TNF抗体軽鎖のタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号3  抗TNF抗体可変ドメイン（VL）のタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号4  抗TNF抗体重鎖＋M252Y/S254T/T256E改変のポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGACTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGTCCTACCTGAGCACCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGTACATCACCAGAGAGCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号5  抗TNF抗体重鎖＋M252Y/S254T/T256E改変のタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号6  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン（VH）のタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS
配列番号7  IgG1定常ドメイン＋M252Y/S254T/T256E改変のタンパク質配列
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号8  抗TNF抗体重鎖＋M428L/N434S改変のポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGACTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGTCCTACCTGAGCACCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGCTGCACGAGGCCCTGCACAGCCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号9  抗TNF抗体重鎖＋M428L/N434S改変のタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
配列番号10  IgG1定常ドメイン＋M428L/N434S改変のタンパク質配列
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
配列番号11  抗TNF抗体重鎖（野生型IgG1）のポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGACTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGTCCTACCTGAGCACCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号12  抗TNF抗体重鎖（野生型IgG1）のタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号13  IgG1定常ドメイン(野生型）のタンパク質配列
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号14  抗TNF抗体重鎖＋T250Q/M428L改変のポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGACTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGTCCTACCTGAGCACCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACcaaCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGtTGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号15  抗TNF抗体重鎖＋T250Q/M428L改変のタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDQLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号16  IgG1定常ドメイン＋T250Q/M428L改変のタンパク質配列
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDQLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号17  抗TNF抗体重鎖＋V308F改変のポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGACTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGTCCTACCTGAGCACCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCtTcCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号18  抗TNF抗体重鎖＋V308F改変のタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTFLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号19  IgG1定常ドメイン＋V308F改変のタンパク質配列
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTFLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号20  抗TNF抗体重鎖＋V259I改変のポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGACTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGTCCTACCTGAGCACCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGATCACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号21  抗TNF抗体重鎖＋V259I改変のタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEITCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号22  IgG1定常ドメイン＋V259I改変のタンパク質配列
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEITCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号23  抗TNF抗体重鎖＋P257LおよびN434Y変異体のポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGACTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGTCCTACCTGAGCACCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCTGGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACTATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号24  抗TNF抗体重鎖＋P257LおよびN434Y改変のタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTLEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHYHYTQKSLSLSPGK
配列番号25  IgG1定常ドメイン＋P257LおよびN434Y改変のタンパク質配列
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTLEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHYHYTQKSLSLSPGK
配列番号26  シグナルペプチド配列
MGWSCIILFLVATATGVHS
配列番号27  抗TNF抗体CDRH1
DYAMH
配列番号28  抗TNF抗体CDRH2
AITWNSGHIDYADSVEG
配列番号29  抗TNF抗体CDRH3
VSYLSTASSLDY
配列番号30  抗TNF抗体CDRL1
RASQGIRNYLA
配列番号31  抗TNF抗体CDRL2
AASTLQS
配列番号32  抗TNF抗体CDRL3
QRYNRAPYT
配列番号33  抗TNF抗体CDRH1変異体
QYAMH
配列番号34  抗TNF抗体CDRH1変異体
HYALH
配列番号35  抗TNF抗体CDRH1変異体
HYAMH
配列番号36  抗TNF抗体CDRH1変異体
QHALH
配列番号37  抗TNF抗体CDRH1変異体
QHAMH
配列番号38  抗TNF抗体CDRH1変異体
DHALH
配列番号39  シムジア（Cimzia）（セルトリズマブ）LC (VL + Ck)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVGTNVAWYQQKPGKAPKALIYSASFLYSGVPYRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNIYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号40  抗TNF抗体CDRH3変異体
VHYLSTASQLHH
配列番号41  抗TNF抗体CDRH3変異体
VQYLSTASSLQS
配列番号42  抗TNF抗体CDRH3変異体
VKYLSTASSLHY
配列番号43  抗TNF抗体CDRH3変異体
VKYLSTASNLES
配列番号44  抗TNF抗体CDRH3変異体
VHYLSTASSLDY
配列番号45  抗TNF抗体CDRH3変異体
VSYLSTASSLQS
配列番号46  抗TNF抗体CDRH3変異体
VRYLSTASNLQH
配列番号47  抗TNF抗体CDRH3変異体
VQYLSTASQLHS
配列番号48  抗TNF抗体CDRH3変異体
VRYLSTASQLDY
配列番号49  抗TNF抗体CDRH3変異体
VRYLSTASSLDY
配列番号50  抗TNF抗体CDRL1変異体
HASKKIRNYLA
配列番号51  抗TNF抗体CDRL1変異体
HASRKLRNYLA
配列番号52  抗TNF抗体CDRL1変異体
HASRRLRNYLA
配列番号53  抗TNF抗体CDRL1変異体
HASKRIRNYLA
配列番号54  抗TNF抗体CDRL1変異体
HASRKIRNYLA
配列番号55  抗TNF抗体CDRL1変異体
HASRRIRNYLA
配列番号56  抗TNF抗体CDRL1変異体
HASREIRNYLA
配列番号57  抗TNF抗体CDRL1変異体
HASQGIRNYLA
配列番号58  抗TNF抗体CDRL1変異体
HASQKIRNYLA
配列番号59  抗TNF抗体CDRL1変異体
RASRGLRNYLA
配列番号60  抗TNF抗体CDRL1変異体
HASQRIRNYLA
配列番号61  抗TNF抗体CDRL1変異体
RASRRIRNYLA
配列番号62  抗TNF抗体CDRL2変異体
AASSLLR
配列番号63  抗TNF抗体CDRL2変異体
AASSLLK
配列番号64  抗TNF抗体CDRL2変異体
AASSLLP
配列番号65  抗TNF抗体CDRL2変異体
AASSLQP
配列番号66  抗TNF抗体CDRL2変異体
AASSLLH
配列番号67  抗TNF抗体CDRL2変異体
AASSFLP
配列番号68  抗TNF抗体CDRL2変異体
AASSLLQ
配列番号69  抗TNF抗体CDRL2変異体
AASSLQQ
配列番号70  抗TNF抗体CDRL2変異体
AASTLLK
配列番号71  抗TNF抗体CDRL2変異体
AASSLQN
配列番号72  抗TNF抗体CDRL2変異体
AASSLQK
配列番号73  抗TNF抗体CDRL3変異体
QRYDRPPYT
配列番号74  抗TNF抗体CDRL3変異体
QRYDKPPYT
配列番号75  抗TNF抗体CDRL3変異体
QRYNRPPYT
配列番号76  抗TNF抗体CDRL3変異体
QRYNKPPYT
配列番号77  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb1-3-VH (aka cb2-6-VH) のポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACCAGTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGTCCTACCTGAGCACCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号78  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb1-3-VH (aka cb2-6-VH) のタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDQYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS
配列番号79  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb2-44-VHのポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGACCACGCCCTGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGAGGTACCTGAGCACCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号80  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb2-44-VHのタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDHALHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVRYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS
配列番号81  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb1-39-VHのポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACCACTACGCCCTGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGTCCTACCTGAGCACCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号82  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb1-39-VHのタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDHYALHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS
配列番号83  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb1-31-VHのポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGACTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGCACTACCTGAGCACCGCCAGCCAACTGCACCACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号84  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb1-31-VHのタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVHYLSTASQLHHWGQGTLVTVSS
配列番号85  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb2-11-VHのポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACCACTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGCAGTACCTGAGCACCGCCAGCAGCCTGCAGAGCTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号86  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb2-11-VHのタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDHYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVQYLSTASSLQSWGQGTLVTVSS
配列番号87  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb2-40-VHのポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACCAGTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGAAGTACCTGAGCACCGCCAGCAGCCTGCACTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号88  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb2-40-VHのタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDQYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVKYLSTASSLHYWGQGTLVTVSS
配列番号89  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb2-35-VHのポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACCAGCACGCCCTGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGCACTACCTGAGCACCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号90  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb2-35-VHのタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDQHALHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVHYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS
配列番号91  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb2-28-VHのポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACCAGTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGCACTACCTGAGCACCGCCAGCCAGCTGCACCACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号92  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb2-28-VHのタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDQYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVHYLSTASQLHHWGQGTLVTVSS
配列番号93  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb2-38-VHのポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACCAGCACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGTCCTACCTGAGCACCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号94  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb2-38-VHのタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDQHAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS
配列番号95  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb2-20-VHのポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACCAGTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGAAGTACCTGAGCACCGCCAGCAACCTGGAGAGCTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号96  抗TNF抗体重鎖可変ドメイン変異体cb2-20-VHのタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDQYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVKYLSTASNLESWGQGTLVTVSS
配列番号97  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-8-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAAGAAGATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGAGGGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号98  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-8-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASKKIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号99  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-43-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAAGCTGAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGAAGGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号100  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-43-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRKLRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLKGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号101  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-45-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAGGCTGAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGCCCGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号102  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-45-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRRLRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLPGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号103  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-4-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAAGCTGAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGAGGGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号104  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-4-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRKLRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号105  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-41-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAAGAGGATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGAAGGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAAGCCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号106  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-41-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASKRIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLKGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDKPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号107  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-37-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAAGCTGAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGAGGGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACAACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号108  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-37-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRKLRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号109  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-39-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAAGATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCAGCCCGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号110  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-39-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRKIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQPGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号111  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-33-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAGGATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGCACGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号112  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-33-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRRIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLHGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号113  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-35-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAGGCTGAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCAGCCCGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号114  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-35-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRRLRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQPGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号115  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-31-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAGGCTGAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGAAGGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACAACAAGCCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号116  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-31-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRRLRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLKGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNKPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号117  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-29-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAAGATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCTTCCTGCCCGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号118  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-29-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRKIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSFLPGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号119  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-22-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAAGAAGATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCAGCCCGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号120  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-22-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASKKIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQPGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号121  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-23-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAGGATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGCAGGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号122  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-23-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRRIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLQGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号123  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-12-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAAGCTGAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCAGCAGGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号124  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-12-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRKLRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQQGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号125  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-10-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAAGCTGAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGCCCGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号126  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-10-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRKLRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLPGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号127  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb2-1-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGGAGATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGCCCGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号128  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb2-1-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASREIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLPGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号129  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb2-11-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCCAGGGCATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCACCCTGCTGAAGGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号130  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb2-11-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLLKGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号131  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb2-40-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCCAGAAGATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCAGCAGGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号132  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb2-40-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQKIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQQGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号133  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb2-35-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAGGCTGAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGCACGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号134  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb2-35-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRRLRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLHGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号135  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb2-28-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAGGCTGAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGAAGGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号136  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb2-28-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRRLRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLKGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号137  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb2-20-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAAGAGGATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGAGGGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACAACAAGCCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号138  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb2-20-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASKRIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNKPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号139  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-3-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAAGATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGAGGGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAAGCCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号140  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb1-3-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRKIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDKPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号141  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb2-6-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAAGAGGATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGAAGGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACAACAAGCCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号142  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb2-6-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASKRIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLKGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNKPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号143  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb2-44-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAAGATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGCCCGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACG
配列番号144  抗TNF抗体軽鎖可変ドメイン変異体cb2-44-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRKIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLPGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRT
配列番号145  抗TNF抗体重鎖変異体cb1-3-VH＋M252Y/S254T/T256E改変のタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDQYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号146  抗TNF抗体重鎖変異体cb2-44-VH＋M252Y/S254T/T256E改変のタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDHALHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVRYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号147  抗TNF抗体軽鎖変異体cb1-3-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAAGATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGAGGGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAAGCCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
配列番号148  抗TNF抗体軽鎖変異体cb1-3-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRKIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDKPPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号149  抗TNF抗体軽鎖変異体cb2-6-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAAGAGGATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGAAGGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACAACAAGCCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
配列番号150  抗TNF抗体軽鎖変異体cb2-6-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASKRIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLKGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNKPPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号151  抗TNF抗体軽鎖変異体cb2-44-VLのポリヌクレオチド配列
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATAGAGTGACCATCACCTGCCACGCCAGCAGGAAGATCAGAAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAGCCTGCTGCCCGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACGTGGCCACCTACTACTGCCAGCGGTACGACAGACCCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
配列番号152  抗TNF抗体軽鎖変異体cb2-44-VLのタンパク質配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASRKIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLLPGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYDRPPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号153  抗TNF抗体重鎖変異体cb1-3-VHのポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACCAGTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGTCCTACCTGAGCACCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号154  抗TNF抗体重鎖変異体cb1-3-VHのタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDQYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号155  抗TNF抗体重鎖変異体cb2-44-VHのポリヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCCGGCAGAAGCCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGACCACGCCCTGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGCCATCACCTGGAATAGCGGCCACATCGACTACGCCGACAGCGTGGAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAAGGTGAGGTACCTGAGCACCGCCAGCAGCCTGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号156  抗TNF抗体重鎖変異体cb2-44-VHのタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDHALHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVRYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号157  M252Y/S254T/T256E改変を含むパスコリズマブ重鎖のポリヌクレオチド配列
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTGACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGGCAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGGTACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTGGTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGGGAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGtacATCacCAGAgagCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号158  M252Y/S254T/T256E改変を含むパスコリズマブ重鎖のタンパク質配列
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号159  パスコリズマブ軽鎖のポリヌクレオチド配列
GACATCGTGCTGACCCAGAGCCCCTCTTCCCTGAGCGCAAGCGTGGGCGATAGGGTGACCATCACCTGCAAGGCCAGCCAGAGCGTGGACTACGACGGCGACAGCTACATGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAACTGCTGATCTACGCCGCCAGCAACCTCGAGTCAGGCATTCCCAGCAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCTTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACATCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAACGAGGACCCTCCCACCTTCGGACAGGGCACCAAGGTCGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
配列番号160  パスコリズマブ軽鎖のタンパク質配列
DIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLESGIPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQSNEDPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号161  パスコリズマブ重鎖のタンパク質配列
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号162  別の抗TNF抗体重鎖＋M428L/N434S改変のタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
配列番号163  別のIgG1定常ドメイン＋M428L/N434S改変のタンパク質配列
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
配列番号164  抗TNF抗体重鎖＋H433K/N434F改変のタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALKFHYTQKSLSLSPGK
配列番号165  IgG1定常ドメイン＋H433K/N434F改変のタンパク質配列
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALKFHYTQKSLSLSPGK
配列番号166  別の抗TNF抗体重鎖＋H433K/N434F改変のタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALKFHYTQKSLSLSPGK
配列番号167  別のIgG1定常ドメイン＋H433K/N434F改変のタンパク質配列
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALKFHYTQKSLSLSPGK
配列番号168  別の抗TNF抗体重鎖＋M428L/N434S改変のタンパク質配列
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
配列番号169  別のIgG1/2定常ドメイン＋M428L/N434S改変のタンパク質配列
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
配列番号170  ゴリムマブ_VH
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFIFSSYAMHWVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
配列番号171  ゴリムマブ_VL
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKVDIKRT
配列番号172  ゴリムマブ_HC
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFIFSSYAMHWVRQAPGNGLEWVAFMSYDGSNKKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGIAAGGNYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号173  ゴリムマブ_LC
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号174  レミケード（Remicade）_VH
EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRFTISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQGTTLTVSS
配列番号175  レミケード（Remicade）_VL
DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRFSGSGSGTDFTLSINTVESEDIADYYCQQSHSWPFTFGSGTNLEVKRT
配列番号176  レミケード（Remicade）_HC
EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFIFSNHWMNWVRQSPEKGLEWVAEIRSKSINSATHYAESVKGRFTISRDDSKSAVYLQMTDLRTEDTGVYYCSRNYYGSTYDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号177  レミケード（Remicade）_LC
DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQFVGSSIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESMSGIPSRFSGSGSGTDFTLSINTVESEDIADYYCQQSHSWPFTFGSGTNLEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号178  シムジア（Cimzia）（セルトリズマブ）VH
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYVFTDYGMNWVRQAPGKGLEWMGWINTYIGEPIYADSVKGRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARGYRSYAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号179  シムジア（Cimzia）（セルトリズマブ）VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVGTNVAWYQQKPGKAPKALIYSASFLYSGVPYRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNIYPLTFGQGTKVEIKRT
配列番号180  シムジア（Cimzia）（セルトリズマブ）HC (VH+CH1)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYVFTDYGMNWVRQAPGKGLEWMGWINTYIGEPIYADSVKGRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARGYRSYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCAA
【図１】
2014524748.tif 000025
【図２】
2014524748.tif 000026
【図３】
2014524748.tif 000027
【図４】
2014524748.tif 000028
【図５】
2014524748.tif 000029
【図６】
2014524748.tif 000030
【配列表】
2014524748000001.app
【国際調査報告】
2014524748.tif 000031
2014524748.tif 000032
2014524748.tif 000033
2014524748.tif 000034
2014524748.tif 000035
2014524748.tif 000036
2014524748.tif 000037
2014524748.tif 000038