(57)【要約】  ジモルホリノピリミジン類は、過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するのに有用である。ジモルホリノピリミジン類は過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するので、それらはＰＴＥＮ過誤腫性腫瘍症候群を処置するのにも有用である。本発明により提供される治療処置および予防処置は、その必要がある患者に過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するのに有効な量のジモルホリノピリミジン誘導体である化合物を投与することにより実施される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害する方法であって、その必要がある患者に過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するのに有効な量で、以下の式
【化１】
2014505107.tif 000026
［式中、Ｒ２は水素またはハロゲンであり；Ｒ３は水素、シアノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、またはトリフルオロメチルであり；Ｒ４は水素またはハロゲンであり；Ｒ６は水素、メチル、またはエチルであり；ＷはＣＲｗまたはＮであり、ここでＲｗは水素、シアノ、ハロゲン、メチル、トリフルオロメチル、またはスルホンアミドである］の化合物またはその医薬的に許容できる塩を投与することを含む方法。
【請求項２】
ＷがＣＨである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒ２が水素であり；Ｒ３が水素またはトリフルオロメチルであり；Ｒ４が水素であり；かつＲ６が水素である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ＷがＣＨである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
Ｒ３がトリフルオロメチルである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
式（Ｉ）の化合物が４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミンまたはその医薬的に許容できる塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するのに有効な式（Ｉ）の化合物または塩の量が、０．００１から１０００ｍｇ／ｋｇまでの範囲の投与量である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するのに有効な式（Ｉ）の化合物または塩の量が、１．０から１０００ｍｇ／ｋｇまでの範囲の投与量である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
ＰＴＥＮ過誤腫性腫瘍症候群を処置する方法であって、その必要がある患者に過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するのに有効な量で、以下の式
【化２】
2014505107.tif 000027
［式中、Ｒ２は水素またはハロゲンであり；Ｒ３は水素、シアノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、またはトリフルオロメチルであり；Ｒ４は水素またはハロゲンであり；Ｒ６は水素、メチル、またはエチルであり；ＷはＣＲｗまたはＮであり、ここでＲｗは水素、シアノ、ハロゲン、メチル、トリフルオロメチル、またはスルホンアミドである］の化合物またはその医薬的に許容できる塩を投与することを含む方法。
【請求項１０】
ＷがＣＨである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
Ｒ２が水素であり；Ｒ３が水素またはトリフルオロメチルであり；Ｒ４が水素であり；かつＲ６が水素である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ＷがＣＨである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
Ｒ３がトリフルオロメチルである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
式（Ｉ）の化合物が４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミンまたはその医薬的に許容できる塩である、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するのに有効な式（Ｉ）の化合物または塩の量が、０．００１から１０００ｍｇ／ｋｇまでの範囲の投与量である、請求項９に記載の方法。
【請求項１６】
過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するのに有効な式（Ｉ）の化合物または塩の量が、１．０から３０ｍｇ／ｋｇまでの範囲の投与量である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
ＰＴＥＮ過誤腫性腫瘍症候群が、カウデン症候群、レルミット−デュクロス病、バナヤン−ライリー−ルバルカバ症候群、およびプロテウス症候群からなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１８】
ＰＴＥＮ過誤腫性腫瘍症候群がカウデン症候群である、請求項９に記載の方法。
【請求項１９】
ＰＴＥＮ過誤腫性腫瘍症候群が、カウデン症候群、レルミット−デュクロス病、バナヤン−ライリー−ルバルカバ症候群、およびプロテウス症候群からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
ＰＴＥＮ過誤腫性腫瘍症候群がカウデン症候群である、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
ＰＴＥＮ過誤腫性腫瘍症候群の処置に使用するための、以下の式
【化３】
2014505107.tif 000028
［式中、Ｒ２は水素またはハロゲンであり；Ｒ３は水素、シアノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、またはトリフルオロメチルであり；Ｒ４は水素またはハロゲンであり；Ｒ６は水素、メチル、またはエチルであり；ＷはＣＲｗまたはＮであり、ここでＲｗは水素、シアノ、ハロゲン、メチル、トリフルオロメチル、またはスルホンアミドである］による化合物またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項２２】
ＷがＣＨである、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ２が水素であり；Ｒ３が水素またはトリフルオロメチルであり；Ｒ４が水素であり；かつＲ６が水素である、請求項２１または２２に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ３がトリフルオロメチルである、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２５】
式（Ｉ）の化合物が４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミンまたはその医薬的に許容できる塩である、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２６】
過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するのに有効な式（Ｉ）の化合物または塩の量が、０．００１から１０００ｍｇ／ｋｇまでの範囲の投与量である、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２７】
過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するのに有効な式（Ｉ）の化合物または塩の量が、１．０から３０ｍｇ／ｋｇまでの範囲の投与量である、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２８】
ＰＴＥＮ過誤腫性腫瘍症候群が、カウデン症候群、レルミット−デュクロス病、バナヤン−ライリー−ルバルカバ症候群、およびプロテウス症候群からなる群から選択される、請求項２１〜２７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２９】
ＰＴＥＮ過誤腫性腫瘍症候群がカウデン症候群である、請求項２８に記載の化合物。
【請求項３０】
ＰＴＥＮ過誤腫性腫瘍症候群を処置する医薬の調製のための、式
【化４】
2014505107.tif 000029
［式中、Ｒ２は水素またはハロゲンであり；Ｒ３は水素、シアノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、またはトリフルオロメチルであり；Ｒ４は水素またはハロゲンであり；Ｒ６は水素、メチル、またはエチルであり；ＷはＣＲｗまたはＮであり、ここでＲｗは水素、シアノ、ハロゲン、メチル、トリフルオロメチル、またはスルホンアミドである］による化合物またはその医薬的に許容できる塩の使用。
【請求項３１】
ＷがＣＨである、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
Ｒ２が水素であり；Ｒ３が水素またはトリフルオロメチルであり；Ｒ４が水素であり；かつＲ６が水素である、請求項３０または３１に記載の使用。
【請求項３３】
Ｒ３がトリフルオロメチルである、請求項３０〜３２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３４】
式（Ｉ）の化合物が４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミンまたはその医薬的に許容できる塩である、請求項３０に記載の使用。
【請求項３５】
過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するのに有効な式（Ｉ）の化合物または塩の量が、０．００１から１０００ｍｇ／ｋｇまでの範囲の投与量である、請求項３０〜３４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３６】
過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するのに有効な式（Ｉ）の化合物または塩の量が、１．０から３０ｍｇ／ｋｇまでの範囲の投与量である、請求項３０〜３４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３７】
ＰＴＥＮ過誤腫性腫瘍症候群が、カウデン症候群、レルミット−デュクロス病、バナヤン−ライリー−ルバルカバ症候群、およびプロテウス症候群からなる群から選択される、請求項３０〜３６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３８】
ＰＴＥＮ過誤腫性腫瘍症候群がカウデン症候群である、請求項３７に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
[0001]  本出願は、35 U.S.C. §119(e)のもとで、Provisional U.S. Patent Application Serial No. 61/441,896, 2011年2月11日出願に基づく優先権を主張し、これを全体として本明細書に援用する。
【０００２】
政府支援による研究または開発
[0002]  本明細書に記載する本発明は、少なくとも一部が、米国国立予防衛生研究所（ＮＩＨ）および国立癌研究所（ＮＣＩ）により与えられた連絡番号Ｒ０１  ＣＡ１３４５０２により支援された。米国政府は本発明において一定の権利を保有することができる。
【背景技術】
【０００３】
[0003]  ＰＴＥＮ過誤腫性腫瘍症候群(PTEN hamartoma tumor syndrome)（ＰＨＴＳ）は、腫瘍サプレッサー遺伝子ＰＴＥＮ(ホスファターゼ・テンシン・ホモログ、第10染色体欠失（deleted on chromosome 10）)における生殖細胞系列変異に関連する稀な異なる障害の集まりである。これらの症候群は、事実上いかなる臓器においても細胞が過剰成長して良性過誤腫を生じることを特徴とする。ＰＴＥＮは、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路を負に調節する二重ホスファターゼタンパク質をコードする。変異、欠失またはメチル化による体細胞のＰＴＥＮ機能喪失が、脳、胸部、前立腺、結腸、肺、および子宮内膜の癌を含む種々の散発性ヒト癌において記載されており、したがって癌研究者らにより研究されている。Blumenthal, G.M. and Dennis, P.A., Eur. J. Hum. Gen. 16, 1289-1300 (2008)。
【０００４】
[0004]  過誤腫は組織学的に別個のサブタイプの良性腫瘍類であり、それらにおいて細胞は正常な分化を維持するが、構造に関して無秩序になる。カウデン症候群(Cowden syndrome)（ＣＳ）は原型症候群であり、粘膜皮膚病変、良性過誤腫、大頭症、ならびに乳癌、甲状腺癌および子宮内膜癌に対する素因の増大を特徴とする。ＣＳの変異型であるレルミット−デュクロス(Lhermitte-Duclos)（ＬＤ）は小脳の発育不全型神経節細胞腫を特徴とし、これは水頭症、運動失調症、および発作に至る可能性がある。ＰＴＥＮ遺伝子が発見され、ＣＳはＰＴＥＮの生殖細胞系列変異により起きるという事実が見出された後、ＣＳは表面的には無関係な他の臨床症候群に対して対立遺伝子性であることが明らかになった。発育遅延、大頭症、脂肪腫、血管腫、および雄性における陰茎色素斑(speckled penis)を特徴とするバナヤン−ライリー−ルバルカバ症候群(Bannayan-Riley-Ruvalcaba syndrome)（ＢＲＲＳ）は、約６０％の症例においてＰＴＥＮ変異と関連する。プロテウス症候群(Proteus syndrome)も生殖細胞系列ＰＴＥＮ変異と関連づけられているが、これは議論の余地がある。ＰＨＴＳ患者の臨床管理は、歴史的に遺伝子カウンセリングおよびスクリーニングに注目してきた。ＰＨＴＳ患者、特にＣＳ患者は、罹患しやすい悪性疾患について早期かつ頻繁な監視を受けるべきである。ＰＨＴＳ患者に対する医療は現在は無い。
【０００５】
[0005]  ＰＴＥＮ遺伝子（ＭＭＡＣ１またはＴＥＰ１としても知られる）は９つのエキソンに及び、染色体１０ｑ２２−２３上に位置する。この遺伝子は４０３アミノ酸のタンパク質をコードし、これは脂質およびタンパク質を脱リン酸する二重特異性ホスファターゼとして作用する。ＰＴＥＮは、ＰＩ３Ｋの３０−ホスホイノシチド産物類を脱リン酸することによりそれのリピドホスファターゼ活性を発揮して、ホスファチジルイノシトール（３，４，５）三リン酸をホスファチジルイノシトール（４，５）二リン酸に変換し、またホスファチジルイノシトール（３，４）二リン酸をホスファチジルイノシトール（４）リン酸に変換する。３０−ホスホイノシチド類の減少は、ＰＩ３Ｋの下流のキナーゼ類、たとえばホスホイノシチド依存性キナーゼ１、ＡｋｔおよびｍＴＯＲの活性を低下させ、それの腫瘍抑制活性に関与する。Ａｋｔ経路の負の調節のため、ＰＴＥＮはＡｋｔの下流の他の基質、たとえばｐ２７、ｐ２１、ＧＳＫ−３、Ｂａｄ、ＡＳＫ−１、ならびにフォークヘッド転写因子ファミリーのメンバー（たとえば、ＡＦＸ、ＦＫＨＲ、ＦＫＨＲＬ１）のリン酸化を間接的に低下させる。したがって、ＰＴＥＮ活性の喪失または低下は、鍵となる多数の細胞タンパク質のリン酸化を増大させ、これが次いで細胞周期進行、代謝、移動、アポトーシス、転写、および翻訳などのプロセスに影響を及ぼす可能性がある。
【０００６】
[0006]  G.M. BlumenthalおよびP.A. Dennisは、ＰＨＴＳの処置には、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路の阻害薬、ラパマイシン、高特異性ｍＴＯＲ阻害薬、ＦＫＢＰ１２を結合する薬剤、プロテオソーム阻害薬（ボルテゾミブを含む）、およびＰＩＮＫ１アゴニストを含めた多種多様なタイプの療法を使用できるという仮説を立てている。しかし、BlumenthalおよびDennisはＰＨＴＳに対する具体的な療法を何ら教示しておらず、有効な療法薬の開発には著しい障壁の可能性があるであろうと指摘している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Blumenthal, G.M. and Dennis, P.A., Eur. J. Hum. Gen. 16, 1289-1300 (2008)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
[0007]  本発明の目的は、過誤腫性腫瘍細胞の成長（growth）または増殖(proliferation)を阻害する療法薬を提供することである。本発明の他の目的は、ＰＴＥＮ過誤腫性腫瘍症候群を処置（treat）することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
発明の概要
[0008]  本出願は、過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害する方法であって、その必要がある患者に過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するのに有効な量で、式
【００１０】
【化１】
2014505107.tif 000002
【００１１】
［式中、Ｒ２は水素またはハロゲンであり；Ｒ３は水素、シアノ、ニトロ、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、またはトリフルオロメチルであり；Ｒ４は水素またはハロゲンであり；Ｒ６は水素、メチル、またはエチルであり；ＷはＣＲｗまたはＮであり、ここでＲｗは水素、シアノ、ハロゲン、メチル、トリフルオロメチル、またはスルホンアミドである］の化合物またはその医薬的に許容できる塩を投与することを含む方法に関する。
【００１２】
[0009]  本発明はまた、ＰＴＥＮ過誤腫性腫瘍症候群を処置する方法であって、その必要がある患者に過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するのに有効な量で、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容できる塩を投与することを含む方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１ａ】[0010]  図１ａは、ＰＩ３Ｋのｐ１１０−アルファおよびｐ１１０−ベータイソ型の除去によりＰＨＴＳのマウスモデルにおいてＰＨＴＳの発現が遮断されたことを示す一連の写真である。（ｉ）Ｋ１４−ｃｒｅ  Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆ（ｎ＝２８）、（ｉｉ）Ｋ１４−ｃｒｅ  Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆ；  ｐ１１０ａ  ｆ／ｆ（ｎ＝１６）、（ｉｉｉ）Ｋ１４−ｃｒｅ  Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆ；  ｐ１１０ｂ  ｆ／ｆ（ｎ＝１１）、および（ｉｖ）ｋ１４−ｃｒｅ−Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆ；  ｐ１１０ａ  ｆ／ｆ；  ｐ１１０ｂ  ｆ／ｆ（ｎ＝１５）マウス。一方のイソ型のみの除去は部分的なＰＨＴＳ阻害を示すにすぎない。
【図１ｂ】[0011]  図１ｂは、（ｉ）Ｋ１４−ｃｒｅ  Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆ（ｎ＝  ２８）、（ｉｉ）Ｋ１４−ｃｒｅ  Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆ；  ｐ１１０ａ  ｆ／ｆ（ｎ＝１６）、（ｉｉｉ）Ｋ１４−ｃｒｅ  Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆ；  ｐ１１０ｂ  ｆ／ｆ（ｎ＝１１）、および（ｉｖ）ｋ１４−ｃｒｅ−Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆ；  ｐ１１０ａ  ｆ／ｆ；  ｐ１１０ｂ  ｆ／ｆ（ｎ＝１５）マウスにおけるＰＨＴＳ発症のカプラン−マイヤー(Kaplan-Meier)プロットである。ＰＨＴＳ発症の中央値：
【００１４】
【表１】
2014505107.tif 000003
【図２ａ】[0012]  図２ａは、４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミン（化合物Ａ）で処置したマウスはＰＨＴＳ症状を示さないままであること（ｉｉ）；一方、ビヒクルのみで処置したマウスは特徴的なＰＨＴＳ病変をそれらの顔および足に発現したこと（ｉ）を証明する一連の写真である。
【図２ｂ】[0013]  図２ｂは、上記の４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミン（化合物Ａ）で維持した（ｉｉ）、またはビヒクルのみで処置した（ｉ）、Ｋ１４−ｃｒｅ−Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆマウス（ｎ＝１２）における無ＰＨＴＳ生存のカプラン−マイヤー曲線を表わす。
【図３】[0014]  図３は、１日１回、４５ｍｇ／ｍｌの４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミン（化合物Ａ）で処置した２匹のＫ１４−ｃｒｅ−Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆマウスの頭部および前左足を示す一連の写真を表わす。図３は、完全発現ＰＨＴＳを伴うマウスにおける薬物処置の経時的な効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
[0015]  本発明は、式（Ｉ）に示す特定群の置換２，６−ジモルホリノピリミジン類が過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するのに有用であるという知見に関連する。式（Ｉ）の２，６−ジモルホリノピリミジン類は過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するので、それらはＰＴＥＮ過誤腫性腫瘍症候群を処置するのにも有用である。本発明により提供される治療処置および予防処置（therapeutic and prophylactic treatments）は、その必要がある患者に過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するのに有効な量のジモルホリノピリミジン誘導体である化合物を投与することにより実施される。
【００１６】
[0016]  用語“ハロゲン”は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を表わす。
【００１７】
[0017]  本明細書中で用いるように、用語“阻害する”、“阻害すること”、または“過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害する”は、過誤腫性腫瘍細胞の成長を遅延、中断、停滞または停止させることを表わし、必ずしも過誤腫性腫瘍細胞の成長の完全な排除を示すわけではない。用語“阻害する”および“阻害すること”などは２状態間の量的な差を意味し、それら２状態間の少なくとも統計的に有意な差を表わす。たとえば、“過誤腫性腫瘍細胞の成長を阻害するのに有効な量”は、細胞の成長速度が非処理細胞から少なくとも統計的に有意なほど差があることを意味する。そのような用語は、本明細書中でたとえば細胞増殖の速度に適用される。
【００１８】
[0018]  本発明の状況における“処置すること”、“処置する”、または“処置”は、傷害もしくは疾患に関連する症状の軽減、または症状のそれ以上の進行もしくは悪化の停止を意味する。たとえば、本発明の状況において、有効な処置は過誤腫性腫瘍に関連する症状の軽減またはＰＨＴＳなどの疾患の進行の停止を含むことができる。特定の状況で、処置は過誤腫性腫瘍またはＰＨＴＳを発現するリスクをもつ無症候性患者の同定を含むこともできる。
【００１９】
[0019]  “過誤腫”または“過誤腫性腫瘍”は、細胞が正常な分化を維持するけれども構造に関して無秩序になる、組織学的に別個のサブタイプの良性腫瘍類を表わす。
【００２０】
[0020]  “ＰＴＥＮ過誤腫性腫瘍症候群”または“ＰＨＴＳ”は、異常な成長を特徴とし、生殖細胞系列ＰＴＥＮ変異に関連する変動性の臨床症状発現を伴う、ある範囲の症候群を表わす。カウデン症候群（ＣＳ）、レルミット−デュクロス症候群（ＬＤ）、バナヤン−ライリー−ルバルカバ症候群、およびプロテウス症候群はすべて、ＰＨＴＳの例である。
【００２１】
[0021]  本明細書中で用いるように、用語“医薬的に許容できる塩類”は、本発明のピリミジン化合物の無毒性の酸塩またはアルカリ土類金属塩を表わす。これらの塩類は、ピリミジン化合物の最終的な単離および精製中にその場で、あるいは別個に塩基官能基または酸官能基をそれぞれ適切な無機の酸または塩基と反応させることにより調製できる。代表的な塩類には下記のものが含まれるが、それらに限定されない：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびウンデカン酸塩。塩基性窒素含有基を下記の試薬などで四級化することもできる：ハロゲン化アルキル、たとえば塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、プロピル、およびブチル；硫酸ジアルキル、たとえば硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミル、長鎖ハロゲン化物、たとえば塩化、臭化およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチル、およびステアリル、ハロゲン化アラルキル、たとえば臭化ベンジルおよびフェネチルなど。水または油に溶解性または分散性の生成物がこれにより得られる。
【００２２】
[0022]  医薬的に許容できる酸付加塩を形成するために使用できる酸の例には、無機酸、たとえば塩酸、ヒドロホウ酸（hydroboric acid）、硝酸、硫酸およびリン酸、ならびに有機酸、たとえばギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマル酸、酒石酸、シュウ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、ならびに酸性アミノ酸、たとえばアスパラギン酸およびグルタミン酸が含まれる。
【００２３】
[0023]  塩基付加塩は、ピリミジン化合物の最終的な単離および精製中にその場で、あるいは別個にカルボン酸部分を適切な塩基、たとえば医薬的に許容できる金属カチオンの水酸化物、炭酸塩もしくは炭酸水素塩と、またはアンモニア、または有機第一級、第二級もしくは第三級アミンと反応させることにより調製できる。医薬的に許容できる塩類は下記のものを含むが、それらに限定されない：アルカリ金属およびアルカリ土類金属に基づくカチオン、たとえばナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウムの塩など、ならびに無毒性のアンモニウム、第四級アンモニウム、およびアミンのカチオン：これにはアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどが含まれるが、これらに限定されない。塩基付加塩を形成するために有用な他の代表的な有機アミンには、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ピリジン、ピコリン、トリエタノールアミンなど、ならびに塩基性アミノ酸、たとえばアルギニン、リジンおよびオルニチンが含まれる。
【００２４】
[0024]  式（Ｉ）の化合物は単独で、または医薬的に許容できるキャリヤーもしくは賦形剤と共に組成物として使用できる。本発明の医薬組成物は、１種類以上の医薬的に許容できるキャリヤーと共に配合した療法有効量の式（Ｉ）の化合物を含む。本明細書中で用いるように、用語“医薬的に許容できるキャリヤー”は、無毒性の不活性な固体、半固体または液体状のいずれかのタイプの増量剤、希釈剤、封入材または配合助剤を意味する。医薬的に許容できるキャリヤーとして使用できる材料の若干例は、下記のものである：糖、たとえば乳糖、グルコースおよびショ糖；デンプン、たとえばトウモロコシデンプンおよびバレイショデンプン；セルロースおよびそれの誘導体、たとえばカルボキシメチルセルロース、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤、たとえばカカオ脂および坐剤ろう；油、たとえばラッカセイ油、綿実油；サフラワー油；ゴマ油；オリーブ油；トウモロコシ油およびダイズ油；グリコール類；たとえばプロピレングリコール；エステル類、たとえばオレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；寒天；緩衝剤、たとえば水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；アルギン酸；発熱物質を含まない水；等張塩類溶液；リンガー液；エチルアルコール、およびリン酸緩衝液、ならびに他の無毒性の適合する滑沢剤、たとえばラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム；また、着色剤、放出剤(releasing agent)、コーティング剤、甘味剤、矯味矯臭剤および香料、保存剤および抗酸化剤が配合業者の判断に従って組成物中に存在してもよい。他の適切な医薬的に許容できる賦形剤は“Remington's Pharmaceutical Sciences”, Mack Pub. Co., New Jersey, 1991に記載されており、これを本明細書に援用する。
【００２５】
[0025]  式（Ｉ）の化合物は、ヒトおよび他の動物に、経口、非経口、舌下、エアゾール化もしくは吸入用のスプレーにより、直腸、槽内、膣内、腹腔内、口腔内、または局所に、目的に従って一般的な無毒性の医薬的に許容できるキャリヤー、佐剤およびビヒクルを含有する投与単位配合物中において投与することができる。局所投与は、経皮投与、たとえば経皮パッチまたはイオン電気泳動デバイスの使用を伴うこともできる。本明細書中で用いる非経口という用語には、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内への注射または注入法が含まれる。
【００２６】
[0026]  配合方法は当技術分野で周知であり、たとえばRemington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 19th Edition (1995)に示されている。本発明に使用するための医薬組成物は、発熱物質を含まない無菌の液剤もしくは懸濁液剤、コーティングしたカプセル剤、坐剤、凍結乾燥粉末、経皮パッチの形態、または当技術分野で知られている他の形態であってもよい。
【００２７】
[0027]  注射用製剤、たとえば無菌の注射用水性または油性懸濁液剤は、既知の技術に従って、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて配合できる。無菌の注射用製剤は、無毒性の非経口用として許容できる希釈剤または溶剤中における無菌の注射用液剤、懸濁液剤または乳剤、たとえば１，３−プロパンジオールまたは１，３−ブタンジオール中の液剤であってもよい。使用可能な許容できるビヒクルおよび溶剤には、水、リンガー液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および等張の塩化ナトリウム溶液が含まれる。さらに、無菌の固定油が一般に溶剤または懸濁媒体として用いられる。この目的には、合成のモノ−またはジ−グリセリドを含めたいかなる銘柄の固定油も使用できる。さらに、脂肪酸、たとえばオレイン酸を注射剤の調製に使用できる。注射用配合物は、たとえば細菌保持フィルターによる濾過により、あるいは無菌固体組成物の形の殺菌剤（使用前に水または他の無菌注射用媒体に溶解または分散しておくことができる）を含有させることにより、殺菌できる。
【００２８】
[0028]  薬物の効果を持続させるためには、皮下または筋肉内注射からの薬物の吸収を遅くすることがしばしば望ましい。これは、水溶性に乏しい結晶質または非晶質材料の懸濁液の使用により達成できる。その際、薬物の吸収速度はそれの溶解速度に依存し、溶解速度は結晶サイズおよび結晶形態に依存する可能性がある。あるいは、非経口投与薬物形態からの遅延吸収は、薬物を油性ビヒクルに溶解または懸濁することにより達成できる。注射用デポー剤形は、生分解性ポリマー、たとえばホリラクチド−ポリグリコリド中における薬物のマイクロカプセル封入マトリックスを形成することにより作成できる。薬物とポリマーの比率および使用する特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出速度を制御できる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）およびポリ（アンヒドリド）が含まれる。デポー型注射用配合物は、薬物を身体組織と適合性であるリポソームまたはマイクロエマルジョン中に捕獲することによっても調製できる。
【００２９】
[0029]  直腸または膣に投与するための組成物は、好ましくは坐剤であり、それらは本発明の化合物を、周囲温度では固体であるが体温では液体であるので直腸または膣腔内では融解して有効化合物を放出する適切な非刺激性の賦形剤またはキャリヤー、たとえばカカオ脂、ポリエチレングリコールまたは坐剤ろうと混合することにより調製できる。
【００３０】
[0030]  経口投与用の固体剤形には、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒剤が含まれる。そのような固体剤形においては、有効化合物を少なくとも１種類の不活性な医薬的に許容できる賦形剤またはキャリヤー、たとえばクエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム、および／または下記のものと混合する：ａ）増量剤(fillerまたはextender)、たとえばデンプン、乳糖、ショ糖、グルコース、マンニトール、およびケイ酸、ｂ）結合剤、たとえばカルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖、およびアラビアゴム、ｃ）保湿剤、たとえばグリセロール、ｄ）崩壊剤、たとえば寒天、炭酸カルシウム、バレイショまたはタピオカのデンプン、アルギン酸、ある種のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム、ｅ）溶解遅延剤、たとえばパラフィン、ｆ）吸収促進剤、たとえば第四級アンモニウム化合物、ｇ）湿潤剤、たとえばアセチルアルコールおよびグリセロールモノステアレート、ｈ）吸収剤、たとえばカオリンおよびベントナイトクレー、ならびにｉ）滑沢剤、たとえばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ならびにその混合物。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、剤形は緩衝剤をも含む場合がある。
【００３１】
[0031]  類似のタイプの固体組成物を、乳糖(lactoseまたはmilk sugar)および高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を用いて軟および硬−充填ゼラチンカプセル剤中の充填物としても使用できる。
【００３２】
[0032]  固体剤形の錠剤、糖衣剤、カプセル剤、丸剤、および顆粒剤は、コーティングおよび外皮、たとえば医薬配合技術分野で周知の腸溶コーティングおよび他のコーティングを備えた形で調製できる。それらは場合により不透明化剤を含有することができ、また有効成分（単数または複数）を専らまたは優先的に腸管の特定部分において、場合により遅延様式で放出する組成物であってもよい。使用できる包埋組成物の例には、高分子物質およびろうが含まれる。
【００３３】
[0033]  有効化合物は、前記の賦形剤を１種類以上含むマイクロカプセル封入形態であってもよい。固体剤形の錠剤、糖衣剤、カプセル剤、丸剤、および顆粒剤は、コーティングおよび外皮、たとえば医薬配合技術分野で周知の腸溶コーティング、放出制御コーティングおよび他のコーティングを備えた形で調製できる。そのような固体剤形においては、有効化合物を少なくとも１種類の不活性希釈剤、たとえばショ糖、乳糖またはデンプンと混合することができる。そのような固体剤形は、普通に行なわれるように、不活性希釈剤以外の追加物質、たとえば錠剤製造用滑沢剤および他の錠剤製造用助剤、たとえばステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セルロースをも含むことができる。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、剤形は緩衝剤をも含む場合がある。それらは場合により不透明化剤を含有することができ、また有効成分（単数または複数）を専らまたは優先的に腸管の特定部分において、場合により遅延様式で放出する組成物であってもよい。使用できる包埋組成物の例には、高分子物質およびろうが含まれる。
【００３４】
[0034]  経口投与用の液体剤形には、医薬的に許容できる乳剤、マイクロエマルジョン、液剤、懸濁液剤、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれる。液体剤形は、有効化合物のほかに、当技術分野で一般に用いられる不活性希釈剤、たとえば水または他の溶剤、可溶化剤および乳化剤、たとえばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、ＥｔＯＡｃ、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにその混合物を含有することができる。経口組成物は、希釈剤のほかに、佐剤、たとえば湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、矯味矯臭剤、および香料をも含有することができる。
【００３５】
[0035]  本発明化合物の局所または経皮投与のための剤形には、軟膏剤、パスタ剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、散剤、液剤、スプレー剤、吸入剤またはパッチ剤が含まれる。有効成分を無菌条件下で、医薬的に許容できるキャリヤー、および要求に従っていずれか必要な保存剤または緩衝剤と混和する。眼用配合物、点耳剤なども本発明の範囲に含まれるものとする。
【００３６】
[0036]  軟膏剤、パスタ剤、クリーム剤およびゲル剤は、本発明の有効化合物のほかに、賦形剤、たとえば動物性および植物性の脂肪、油、ろう、パラフィン、デンプン、トラガント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルクならびに酸化亜鉛、またはその混合物を含有することができる。
【００３７】
[0037]  本発明の組成物は、液体エアゾール剤または吸入用乾燥粉末として送達するために配合することもできる。液体エアゾール配合物は、主に終末細気管支および呼吸細気管支へ送達できる粒径に噴霧されてもよい。
【００３８】
[0038]  本発明のエアゾール化した配合物は、エアゾール形成器具、たとえばジェット式、振動多孔板型または超音波ネブライザー、好ましくは主に１〜５μｍの質量中間平均直径をもつエアゾール粒子を形成できるように選択されたものを用いて送達できる。さらに、配合物は、好ましくは平衡モル浸透圧イオン濃度およびクロリド濃度、ならびに有効量の本発明化合物を感染部位へ送達できる最小エアゾール化可能体積をもつ。さらに、エアゾール化した配合物は、好ましくは気道の機能に負の傷害を与えず、かつ望ましくない副作用を引き起こさない。
【００３９】
[0039]  本発明のエアゾール配合物の投与に適したエアゾール形成器具には、たとえば本発明の配合物を主に１〜５μｍのサイズ範囲のエアゾール粒子に噴霧できる、ジェット式、振動多孔板型、超音波ネブライザー、および動力式乾燥粉末インヘラーが含まれる。本明細書において主にとは、生成した全エアゾール粒子の少なくとも７０％、ただし好ましくは９０％より多くが、１〜５μｍの範囲にあることを意味する。ジェット式ネブライザーは空気圧により作動して、液剤をエアゾール液滴に分断する。振動多孔板型ネブライザーは、急速に振動する多孔板により発生する音波真空を利用して多孔板から溶剤滴を押し出すことにより作動する。超音波ネブライザーは、液体を剪断して小エアゾール滴にする圧電結晶により作動する。下記を含めた多様な適切な器具を入手できる：たとえば、ＡＥＲＯＮＥＢおよびＡＥＲＯＤＯＳＥ振動多孔板型ネブライザー（ＡｅｒｏＧｅｎ，Ｉｎｃ．，カリフォルニア州サニーベール）、ＳＩＤＥＳＴＲＥＡＭネブライザー（ＭｅｄｉｃＡｉｄ  Ｌｔｄ．，英国ウェストサセックス）、ＰＡＲＩ  ＬＣおよびＰＡＲＩ  ＬＣ  ＳＴＡＲジェット式ネブライザー（Ｐａｒｉ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ，Ｉｎｃ．，バージニア州リッチモンド）、ならびにＡＥＲＯＳＯＮＩＣ（ＤｅＶｉｌｂｉｓｓ  Ｍｅｄｉｚｉｎｉｓｃｈｅ  Ｐｒｏｄｕｋｔｅ  （Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ）  ＧｍｂＨ，ドイツ、ハイデン）およびＵＬＴＲＡＡＩＲＥ（Ｏｍｒｏｎ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｉｎｃ．，イリノイ州バーノンヒルズ）超音波ネブライザー。
【００４０】
[0040]  本発明の化合物は局所用の散剤およびスプレー剤として使用するために配合することもでき、これらは本発明の化合物のほかに、賦形剤、たとえば乳糖、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウムおよびポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物を含有することができる。スプレー剤はさらに、慣用される噴射剤、たとえばクロロフルオロカーボン類を含有することができる。
【００４１】
[0041]  経皮パッチは、化合物を身体へ制御送達するという追加の利点をもつ。そのような剤形は、化合物を適切な媒体に溶解または分散することにより調製できる。皮膚を通る化合物のフラックスを高めるために、吸収増強剤も使用できる。その速度は、速度制御膜を付与することにより、あるいは化合物をマトリックスまたはゲルに分散させることにより制御できる。本発明の化合物は、リポソームの形態で投与することもできる。当技術分野で知られているように、リポソームは一般にリン脂質または他の脂質物質から得られる。リポソームは、水性媒体に分散させた単層または多層の水和液晶により形成される。リポソームを形成できる無毒性の生理的に許容できる代謝性脂質をいずれも使用できる。リポソーム形態の本発明組成物は、本発明化合物のほかに、安定剤、保存剤、賦形剤などを含有することができる。好ましい脂質は、天然および合成の両方のリン脂質およびホスファチジルコリン（レシチン）である。リポソームを形成する方法は当技術分野で知られている。たとえば、Prescott (ed.), “Methods in Cell Biology”, Volume XIV, Academic Press, New York, 1976, p. 33以下を参照。
【００４２】
[0042]  本発明化合物の有効量には、一般に過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を探知可能なほど阻害するのに十分な、あるいはＰＨＴＳの症状の阻害または軽減を探知することによる、いずれかの量が含まれる。キャリヤー材料と混和して単一剤形を製造できる有効成分の量は、処置される宿主および特定の投与様式に応じて異なるであろう。しかし、いずれかの特定の患者に対する具体的な投与レベルが、用いる具体的な化合物の活性、年齢、体重、全般的な健康状態、性別、食事、投与の時間、投与の経路、排出速度、薬物の組合わせ、および療法を受けている特定の疾患の重症度を含めた多様な要因に依存することは理解されるであろう。ある状況に対する療法有効量はルーティン実験によって容易に決定でき、普通の医師の技術および判断の範囲内にある。
【００４３】
[0043]  本発明の処置方法によれば、ある量の式（Ｉ）の化合物を目的結果の達成に必要な量および時間で患者に投与することにより、ヒトまたは下等動物などの患者において過誤腫性腫瘍の成長が抑制または阻止される。式（Ｉ）の化合物の“過誤腫性腫瘍細胞の成長または増殖を阻害するのに有効な量”は、過誤腫性腫瘍の成長をいずれかの医療処置に適用できる妥当な損益比で処置するのに十分な化合物量を表わす。しかし、本発明の化合物および組成物の全一日量が担当医によって健全な医学的判断の範囲で決定されることは理解されるであろう。いずれか特定の患者に対する具体的な療法有効量レベルは、下記を含めた多様な要因に依存するであろう：処置される障害およびその障害の重症度；用いる具体的化合物の活性；用いる具体的な組成物；患者の年齢、体重、全般的な健康状態、性別、および食事；用いる具体的化合物の投与時間、投与経路、および排出速度；処置の期間；用いる具体的な化合物と組み合わせてまたは同時に使用する薬物；ならびに医学分野で周知の同様な要因。
【００４４】
[0044]  本発明の目的に対して、療法有効量は一般に宿主に１回量または分割量で投与する全一日量であり、たとえば１日に０．００１から１０００ｍｇ／ｋｇ体重まで、より好ましくは１．０から３０ｍｇ／ｋｇ体重までの量であってもよい。投与単位組成物は、一日量を構成するそのような量の約数を含有することができる。一般に、本発明による処置計画は、そのような処置を必要とする患者に１日当たり約１０ｍｇから約２０００ｍｇまでの本発明化合物（単数または複数）を１回量または分割量で投与することを含む。
【００４５】
[0045]  別態様の式（Ｉ）の化合物を以下に示す：
１）Ｒ２が下記のものである化合物：
ａ．水素；
ｂ．水素もしくはフッ素；または
ｃ．水素、フッ素もしくは塩素；
２）Ｒ３が下記のものである化合物：
ａ．トリフルオロメチル；
ｂ．水素もしくはトリフルオロメチル；
ｃ．水素、ハロゲンもしくはトリフルオロメチル；
３）Ｒ４が下記のものである化合物：
ａ．水素；または
ｂ．水素、フッ素もしくは塩素；
４）Ｒ６が水素である化合物；
５）Ｗが下記のものである化合物：
ａ．ＣＨ；または
ｂ．Ｎ。
【００４６】
[0046]  式（Ｉ）の化合物の上記の態様（１）〜（５）のうち１以上を要件とすることにより他の態様の式（Ｉ）の化合物を選択できると理解される。たとえば、さらに他の態様は、下記の組合わせにより得ることができる：(1)(a)および(2)(a)；(1)(a)および(2)(b)；(1)(b)および(2)(a)；(1)(b)および(2)(b)；(1)(c)および(2)(a)；(1)(c)および(2b)；(1)(c)および(2)(c)；(1)(b)および(2)(c)；(1)(a)および(2)(c)；(1)(a)、(2)(a)、および(3)(a)；(1)(b)、(2)(a)、および(3)(a)；(1)(a)、(2)(b)、および(3)(a)；(1)(a)、(2)(a)、および(3)(b)；(1)(b)、(2)(b)、および(3)(a)；(1)(a)、(2)(b)、および(3)(b)；(1)(a)、(2)(a)、(3)(a)、および(4)；(1)(b)、(2)(a)、(3)(a)、および(4)；(1)(a)、(2)(a)、(3)(b)、および(4)；(1)(b)、(2)(b)、(3)(a)、および(4)；(1)(b)、(2)(a)、(3)(b)、および(4)；(1)(b)、(2)(b)、(3)(b)、および(4)；(1)(c)、(2)(a)、(3)(a)、および(4)；(1)(c)、(2)(b)、(3)(a)、および(4)；(1)(c)、(2)(b)、(3)(b)、および(4)；(1)(c)、(2)(c)、(3)(a)、および(4)；(1)(c)、(2)(c)、(3)(b)、および(4)；(1)(a)、(2)(a)、(3)(a)、(4)、および(5)(a)；(1)(b)、(2)(a)、(3)(a)、(4)、および(5)(a)；(1)(a)、(2)(b)、(3)(a)、(4)、および(5)(a)；(1)(a)、(2)(a)、(3)(b)、(4)、および(5)(a)；(1)(b)、(2)(b)、(3)(a)、(4)、および(5)(a)；(1)(b)、(2)(b)、(3)(a)、(4)、および(5)(a)；(1)(c)、(2)(a)、(3)(a)、(4)、および(5)(a)；(1)(a)、(2)(c)、(3)(a)、(4)、および(5)(a)；(1)(c)、(2)(c)、(3)(b)、(4)、および(5)(a)；(1)(a)、(2)(a)、(3)(a)、(4)、および(5)(b)；(1)(b)、(2)(a)、(3)(a)、(4)、および(5)(b)；(1)(a)、(2)(b)、(3)(a)、(4)、および(5)(b)；(1)(a)、(2)(a)、(3)(b)、(4)、および(5)(b)；(1)(c)、(2)(a)、(3)(a)、(4)、および(5)(b)；(1)(c)、(2)(a)、(3)(a)、(4)、および(5)(b)；(1)(c)、(2)(b)、(3)(a)、(4)、および(5)(b)；(1)(b)、(2)(c)、(3)(a)、(4)、および(5)(b)；(1)(b)、(2)(b)、(3)(b)、(4)、および(5)(b)；(1)(c)、(2)(c)、(3)(b)、(4)、および(5)(b)；(1)(a)および(4)；(1)(b)および(4)；(2)(a)および(4)；(3)(a)および(4)；(2)(a)、(3)(a)、および(4)；(1)(a)および(5)(a)；(1)(b)、(4)および(5)；など。
【００４７】
[0047]  本発明は、下記の例を参照することによってより容易に理解されるであろう；これらは説明のために提示され、本発明を限定するためのものではない。
【００４８】
[0048]  式（Ｉ）の化合物は、U.S. Patent Application Publication No. US 2010/0249126 A1, 2010年9月30日公開に記載された方法を用いて合成された；これを完全に述べたと同様に本明細書に援用する。後記のスキームおよび実施例に述べるように特定の例も本明細書に開示する。
【００４９】
[0049]  化合物および／または中間体は、２６９５  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｍｏｄｕｌｅを備えたＷａｔｅｒｓ  Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍクロマトグラフィーシステム（マサチュセッツ州ミルフォード）を用いる高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により特性分析された。分析カラムは、Ａｌｌｔｅｃｈ（イリノイ州ディーアフィールド）からのＡｌｌｔｉｍａ  Ｃ−１８逆相、４．６×５０ｍｍ、流速２．５ｍＬ／分であった。一般に５％アセトニトリル／９５％水から出発して１００％アセトニトリルまで４０分の期間をかけて漸増する勾配溶離を用いた。すべての溶媒が０．１％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含有していた。化合物を２２０または２５４ｎｍでの紫外線（ＵＶ）吸収により検出した。ＨＰＬＣ溶媒は、Ｂｕｒｄｉｃｋ  ａｎｄ  Ｊａｃｋｓｏｎ（ミシガン州マスキーガン）、またはＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（ペンシルベニア州ピッツバーグ）からのものであった。場合により、ガラスまたはプラスチック裏打ちしたシリカゲルプレート、たとえばＢａｋｅｒ−Ｆｌｅｘ  Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ  １Ｂ２−Ｆフレキシブルシートを用いる薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により、純度を評価した。ＴＬＣ結果は、紫外線下で目視により、あるいは周知のヨウ素蒸気および他の多様な染色法の採用により、容易に検出された。
【００５０】
[0050]  質量分析は、２種類のＬＣＭＳ計測器のうちの１つで実施された：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｌｌｉａｎｃｅ  ＨＴ  ＨＰＬＣおよびＭｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ質量分析計；カラム：Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢＣ１８、２．１×５０ｍｍ；溶媒系：水中５−９５％（または３５−９５％、または６５−９５％または９５−９５％）アセトニトリル、０．０５％のＴＦＡを含有；流速０．８ｍＬ／分；分子量範囲２００〜１５００；コーン電圧(cone Voltage)２０Ｖ；カラム温度４０℃）、またはＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  Ｓｙｓｔｅｍ（シリーズ１１００  ＨＰＬＣ；カラム：Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢＣ１８、２．１×５０ｍｍ；溶媒系：水中１−９５％アセトニトリル、０．０５％のＴＦＡを含有；流速０．８ｍＬ／分；分子量範囲１５０〜８５０；コーン電圧５０Ｖ；カラム温度３０℃）。すべての質量を、プロトン化した親イオンの質量として報告した。
【００５１】
[0051]  ＧＣＭＳ分析は、Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ計測器（Ｍａｓｓ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ  ５９７３を備えたＨＰ６８９０シリーズのガスクロマトグラフ；インジェクター容量：１μＬ；初期カラム温度：５０℃；最終カラム温度：２５０℃；勾配時間：２０分；ガス流速：１ｍＬ／分；カラム：５％フェニルメチルシロキサン，モデルＮｏ．ＨＰ  １９０９１５−４４３，寸法：３０．０ｍ×２５ｍ×０．２５ｍ）で実施される。
【００５２】
[0052]  核磁気共鳴（ＮＭＲ）分析は、若干の化合物についてはＶａｒｉａｎ  ３００ＭＨｚ  ＮＭＲ（カリフォルニア州パロアルト）で実施された。スペクトル基準はＴＭＳ、または溶媒の既知の化学シフトのいずれかであった。若干の化合物試料は、試料溶解度を増大させるために高められた温度（たとえば７５℃）で試験された。
【００５３】
[0053]  若干の本発明化合物の純度を元素分析（Ｄｅｓｅｒｔ  Ａｎａｌｙｔｉｃｓ，アリゾナ州タクソン）により評価する。
【００５４】
[0054]  融点をＬａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｍｅｌ−Ｔｅｍｐ装置（マサチュセッツ州ホリストン）で測定する。
【００５５】
[0055]  分取用分離は、Ｆｌａｓｈ  ４０クロマトグラフィーシステムおよびＫＰ−Ｓｉｌ、６０Ａ（Ｂｉｏｔａｇｅ，バージニア州シャーロッツビル）により、あるいはシリカゲル（２３０〜４００メッシュ）充填材を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーにより、あるいはＷａｔｅｒｓ  ２７６７  Ｓａｍｐｌｅ  Ｍａｎａｇｅｒ、Ｃ−１８逆相カラム、３０×５０ｍｍ、流速７５ｍＬ／分を用いるＨＰＬＣにより実施された。Ｆｌａｓｈ  ４０  Ｂｉｏｔａｇｅシステムおよびフラッシュカラムクロマトグラフィーに用いた一般的溶媒は、ジクロロメタン、メタノール、酢酸エチル、ヘキサン、アセトン、アンモニア水（または水酸化アンモニウム）、およびトリエチルアミンであった。逆相ＨＰＬＣに用いた一般的溶媒は、変動濃度のアセトニトリルおよび水（０．１％トリフルオロ酢酸を含む）であった。
【００５６】
[0056]  本発明による有機化合物が互変異性の現象を示す可能性があることを理解すべきである。本明細書中の化学構造は可能性のある互変異性形態のうちの１つを示すことができるにすぎないので、本発明は記述された構造の互変異性形態をいずれも包含することを理解すべきである。
【００５７】
[0057]  本発明は、説明のために本明細書に述べる態様に限定されるのではなく、前記の開示の範囲に含まれる本発明の形態すべてを包含すると理解される。
【００５８】
[0058]  略号
[0059]  ＡＣＮ    アセトニトリル
[0060]  ＢＩＮＡＰ    ２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル
[0061]  ＤＩＥＡ    ジイソプロピルエチルアミン
[0062]  ＤＭＥ    １，２−ジメトキシエタン
[0063]  ＤＭＦ    Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
[0064]  ＤＰＰＦ    １，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン
[0065]  ＥｔＯＡｃ    酢酸エチル
[0066]  ＥｔＯＨ    エタノール
[0067]  ＭＣＰＢＡ    メタ−クロロペルオキシ安息香酸
[0068]  ＮＢＳ    Ｎ−ブロモスクシンイミド
[0069]  ＮＭＰ    Ｎ−メチル−２−ピロリドン
[0070]  ＲＴ    室温
[0071]  ＴＨＦ    テトラヒドロフラン
[0072]  式（Ｉ）の化合物を合成するための一般法
[0073]  式（Ｉ）の化合物を製造する方法を提供する。この方法は下記を含む：４−ハロ−２，６−ジモルホリノピリミジンと反応性ボロン酸エステル置換基を含む置換ピリジニルまたはピリミジニル基とを、パラジウム触媒の存在下で反応させる。１態様において、反応性ボロン酸エステル置換基を含む置換ピリジニルまたはピリミジニル基は、ボロン酸エステルに対してパラ位にある−ＮＨ２基をもつ。他の態様において、反応性ボロン酸エステル置換基を含む置換ピリジニルまたはピリミジニル基は、ボロン酸エステルに対してパラ位にある−ＮＨ２基、およびボロン酸エステルに対してオルト位にあるもうひとつの非水素置換基をもつ。特定の態様において、非水素置換基は−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＨ２、ハロゲン、ヒドロキシルまたはニトロである。
【００５９】
[0074]  他の態様において、ピリジニルボロン酸は４−（トリフルオロメチル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−２−アミンである。他の態様において、パラジウム触媒はＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２  ジクロロメタン付加物である。
【００６０】
[0075]  他の態様において、４−クロロ−２，６−ジモルホリノピリミジン基は、４，６−ジクロロ−２−モルホリノピリミジンをモルホリンと反応させることにより製造される。他の態様において、４，６−ジクロロ−２−モルホリノピリミジン基は、２−モルホリノピリミジン−４，６−ジオールをＰＯＣｌ３と反応させることにより製造される。他の態様において、２−モルホリノピリミジン−４，６−ジオールは、モルホリン−４−カルボキサミジンとマロン酸ジエチルを、塩基、たとえばナトリウムエトキシドの存在下で反応させることにより製造される。
【００６１】
[0076]  他の態様において、反応性ボロン酸エステル置換基を含む置換ピリジニルまたはピリミジニル基は、ブロモ置換基を含む置換ピリジニルまたはピリミジニル基を、ジボロン酸エステル、たとえば４，４，５，５−テトラメチル−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，３，２−ジオキサボロランと反応させることにより製造される。他の態様において、ブロモ置換基を含む置換ピリジニルまたはピリミジニル基は、置換ピリジニルまたはピリミジニル基をＮ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）と反応させることにより製造される。
【００６２】
[0077]  本発明の他の態様は、モルホリンと２，４，６−トリクロロピリミジンを適切な溶媒中で反応させることを含む、４−クロロ−２，６−ジモルホリノピリミジンの製造方法を提供する。より具体的な態様において、溶媒は極性非プロトン溶媒である。よりさらに具体的には、溶媒はＴＨＦである。より具体的な他の態様において、４−クロロ−２，６−ジモルホリノピリミジンを少なくとも１０分、または少なくとも２０分、または３０分の期間をかけて、モルホリンを含む溶液に添加する。あるいは、モルホリンを、４−クロロ−２，６−ジモルホリノピリミジンを含む溶液に添加する。よりさらに具体的には、溶液を２０℃未満、または１０℃未満、または５℃未満、または０℃未満に冷却する。より具体的には、４−クロロ−２，６−ジモルホリノピリミジンの添加の途中または後に、溶液を２０℃より高く、または２５℃より高く、または３０℃より高くまで昇温させる。他の態様において、モルホリンと４−クロロ−２，６−ジモルホリノピリミジンを混和した後に、水溶液の添加により溶液を冷却する。より具体的には、モルホリンと４−クロロ−２，６−ジモルホリノピリミジンを混和して少なくとも１０時間後、または少なくとも２０時間後、または少なくとも３０時間後、または少なくとも４０時間後、または少なくとも５０時間後、または約６４時間後に、水溶液の添加により溶液を冷却する。より具体的には、冷却後に溶液をカラムクロマトグラフィーにより精製する。よりさらに具体的には、カラムはシリカゲルである。他の態様において、４−クロロ−２，６−ジモルホリノピリミジンを２−アミノピリジニルまたは２−アミノピリミジニル部分と反応させて、式（Ｉ）の化合物を形成する。
【実施例】
【００６３】
[0078]  方法１
[0079]  ５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリミジン−２−イルアミンの合成
【００６４】
【化２】
2014505107.tif 000004
【００６５】
[0080]  乾燥した５００ｍＬフラスコに、２−アミノ−５−ブロモピリミジン（１０ｇ，５７．５ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（１６．９ｇ，１７２ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２  イル）−１，３，２−ジオキサボロラン（１６．１ｇ，６３．０ｍｍｏｌ）およびジオキサン（３００ｍＬ）を添加した。アルゴンをこの溶液に１５分間吹き込み、この時点でジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）  ジクロロメタン付加物（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２  ＣＨ２Ｃｌ２）（２．３４ｇ，２．８７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１１５℃の油浴中で４時間、アルゴン下で還流した。室温に冷却した後、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を添加し、生成したスラリーを音波処理し、濾過した。追加のＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を用いて固体を洗浄した。有機抽出液を合わせてＨ２Ｏ（２×３００ｍＬ）、ＮａＣｌ（ｓａｔ．）（３００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、５ｃｍのシリカゲルパッドにより濾過した。追加のＥｔＯＡｃを用いて生成物をフラッシした。溶媒を濃縮した後、粗生成物を１：３  ジクロロメタンおよびヘキサン混合物（４０ｍＬ）で処理し、濾過し、ヘキサンで洗浄して、淡黄色固体（８．５ｇ，７５％）を得た。LCMS (m/z): 140 (ボロン酸のMH+, LCに際して生成物加水分解から誘導されたもの). 1H NMR (CDCl3): δ 8.58 (s, 2H), 5.74 (s, 2H), 1.32 (s, 12H)。
【００６６】
[0081]  方法２
[0082]  ２−アミノメチル−５−ブロモピリミジンの合成
【００６７】
【化３】
2014505107.tif 000005
【００６８】
[0083]  メチルアミン（メタノール中２．０Ｍ，４０ｍＬ，８０ｍｍｏｌ）を、密閉可能な反応器内で５−ブロモ−２−クロロピリミジン（５．６ｇ，２９．０ｍｍｏｌ）に添加した。数分間排気させた後、反応器を密閉し、安全シールドの背後に置き、１１５℃の油浴内で４８時間加熱した。冷却した時点で揮発性成分を真空中で除去した。この物質をＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）に溶解し、１Ｍ  ＮａＯＨ（４０ｍＬ）で洗浄した。水層をさらにＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせてＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、灰白色固体（５．１ｇ，９３％）を得た。LCMS (m/z): 188.0/190.0 (MH+)。
【００６９】
[0084]  メチル［５−（４，４，５，５−テトラメチル（１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル））ピリミジン−２−イル］アミンの合成
【００７０】
【化４】
2014505107.tif 000006
【００７１】
[0085]  乾燥した５００ｍＬフラスコに、２−メチルアミノ−５−ブロモピリミジン（９．５ｇ，５０．５ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（１５．１ｇ，１５４．４ｍｍｏｌ）、４，４，５，５，−テトラメチル−２−（４，４，５，５，−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，３，２−ジオキサボロラン（１４．１ｇ，５５．５ｍｍｏｌ）およびジオキサン（２８０ｍＬ）を添加した。アルゴンをこの溶液に１５分間吹き込み、この時点で１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）クロリド  ジクロロメタン付加物（２．０５ｇ，２．５１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１５℃の油浴内で４時間、アルゴン下で還流した。室温に冷却した後、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を添加し、生成したスラリーを音波処理し、濾過した。追加のＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を用いて固体を洗浄した。有機層を合わせてＨ２Ｏ（２×３００ｍＬ）、ＮａＣｌ（ｓａｔ．），（３００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去した。ＳｉＯ２クロマトグラフィー（５０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン類）による精製により、灰白色固体（７．６６ｇ，６４％）を得た。LCMS (m/z): 154 (ボロン酸のMH+, LCに際してその場での生成物加水分解から誘導されたもの). 1H NMR (CDCl3): δ 8.58 (s, 2H), 5.56 (s, 1H), 3.02 (d, 3H), 1.32 (s, 12H)。
【００７２】
[0086]  方法３
[0087]  ５−ブロモ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジルアミンの合成
【００７３】
【化５】
2014505107.tif 000007
【００７４】
[0088]  ２−アミノ−４−トリフルオロメチルピリジン（１０．０ｇ，６２．１ｍｍｏｌ）のクロロホルム（２００ｍＬ）中における溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１２．０ｇ，６７．４ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を暗所で２時間撹拌し、この時点でそれをＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）および１Ｎ  ＮａＯＨ（２００ｍＬ）に添加した。混合した時点で層を分離し、有機層をＮａＣｌ（ｓａｔ．）（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＳｉＯ２クロマトグラフィー（０−５％  ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２）により精製して、１２．０ｇ（８０％）の５−ブロモ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジルアミンを得た。LCMS (m/z): 241/243 (MH+). 1H NMR (CDCl3): δ 8.28(s, 1H), 6.77(s, 1H), 4.78(bs, 2H)。
【００７５】
[0089]  ５−（４，４，５，５−テトラメチル（１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル））−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジルアミンの合成
【００７６】
【化６】
2014505107.tif 000008
【００７７】
[0090]  乾燥した５００ｍＬフラスコに、５−ブロモ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジルアミン（１１．８ｇ，４９．０ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（１４．４ｇ，１４６．９ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，３，２−ジオキサボロラン（１３．６ｇ，５３．９ｍｍｏｌ）およびジオキサン（３００ｍＬ）を添加した。アルゴンをこの溶液に１５分間吹き込み、この時点で１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）クロリド  ジクロロメタン付加物（２．０ｇ，２．４５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１１５℃の油浴中で８時間、アルゴン下で還流した。室温に冷却した後、ジオキサンを真空中で除去した。ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を添加し、生成したスラリーを音波処理し、濾過した。追加のＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を用いて固体を洗浄した。有機抽出液を合わせて濃縮し、粗製物質をＳｉＯ２クロマトグラフィー（３０−４０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン類）により部分精製した。溶媒を除去した時点でヘキサン類（７５ｍＬ）を添加した；音波処理した後、生成した固体を濾過し、高真空で３日間乾燥させると２．４ｇの灰白色固体が得られた。１Ｈ  ＮＭＲによれば、この物質はボロン酸エステルと２−アミノ−４−トリフルオロメチルピリジン副生物の５：１混合物であった。この物質をそのまま後続の鈴木反応に用いた。LCMS (m/z): 207 (ボロン酸のMH+, LCに際してその場での生成物加水分解から誘導されたもの). 1H NMR (CDCl3): δ 8.50 (s, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.80 (bs, 2H), 1.34 (s, 12H)。
【００７８】
[0091]  方法４
[0092]  ５−ブロモ−４−（トリフルオロメチル）ピリミジン−２−アミンの合成
【００７９】
【化７】
2014505107.tif 000009
【００８０】
[0093]  ２−アミノ−４−トリフルオロメチルピリミジン（８．０ｇ，４９．１ｍｍｏｌ）のクロロホルム（３００ｍＬ）中における溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（８．９ｇ，５０ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を暗所で１６時間撹拌し、この時点で追加のＮ−ブロモスクシンイミド（４．０ｇ，２２．５ｍｍｏｌ）を添加した。さらに４時間撹拌した後、溶液をＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）および１Ｎ  ＮａＯＨ（２００ｍＬ）に添加した。混合した時点で層を分離し、有機層をＮａＣｌ（ｓａｔ．）（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、１０．９ｇ（８２％）の５−ブロモ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリミジルアミンを得た。LCMS (m/z): 242/244 (MH+). 1H NMR (CDCl3): δ 8.52 (s, 1H), 5.38 (bs, 2H)。
【００８１】
[0094]  ５−（４，４，５，５−テトラメチル（１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル））−４−（トリフルオロメチル）ピリミジン−２−イルアミンの合成
【００８２】
【化８】
2014505107.tif 000010
【００８３】
[0095]  乾燥した５００ｍＬフラスコに、５−ブロモ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリミジルアミン（１０．１ｇ，４１．７ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（１２．３ｇ，１２５．２ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，３，２−ジオキサボロラン（１１．６ｇ，４５．９ｍｍｏｌ）およびジオキサン（１５０ｍＬ）を添加した。アルゴンをこの溶液に１５分間吹き込み、この時点で１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）クロリド（１．７ｇ，２．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１１５℃の油浴中で６時間、アルゴン下で還流した。室温に冷却した後、ジオキサンを真空中で除去した。ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を添加し、生成したスラリーを音波処理し、濾過した。追加のＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を用いて固体を洗浄した。有機抽出液を合わせて濃縮し、粗製物質をＳｉＯ２クロマトグラフィー（３０−４０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン類）により精製すると４．４０ｇの白色固体が得られた。１Ｈ  ＮＭＲによれば、この物質はボロン酸エステルと２−アミノ−４−トリフルオロメチルピリミジン副生物の１：１混合物であった。この物質をそのまま後続の鈴木反応に用いた。LCMS (m/z): 208 (ボロン酸のMH+, LCに際してその場での生成物加水分解から誘導されたもの). 1H NMR (CDCl3): δ 8.72 (s, 1H), 5.50 (bs, 2H), 1.34 (s, 12H)。
【００８４】
[0096]  方法５
[0097]  ５−ブロモ−４−クロロ−２−ピリジルアミンの合成
【００８５】
【化９】
2014505107.tif 000011
【００８６】
[0098]  ４−クロロ−２−ピリジルアミン（６．０ｇ，４６．７ｍｍｏｌ）のクロロホルム（１８０ｍＬ）中における溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（８．３ｇ，４６．７ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を暗所で２時間撹拌し、この時点でそれをＣＨ２Ｃｌ２（８００ｍＬ）および１Ｎ  ＮａＯＨ（１００ｍＬ）に添加した。混合した時点で層を分離し、有機層をＮａＣｌ（ｓａｔ．）（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＳｉＯ２クロマトグラフィー（２５−３５％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン類）により精製して、３．６３ｇ（３８％）の５−ブロモ−４−クロロ−２−ピリジルアミンを得た。LCMS (m/z): 206.9/208.9 (MH+). 1H NMR (CDCl3): δ 8.18 (s, 1H), 6.62 (s, 1H), 4.52 (bs, 2H)。
【００８７】
[0099]  ４−クロロ−５−（４，４，５，５−テトラメチル（１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル））−２−ピリジルアミンの合成
【００８８】
【化１０】
2014505107.tif 000012
【００８９】
[00100]  乾燥した５００ｍＬフラスコに、５−ブロモ−４−クロロ  ２−ピリジルアミン（７．３ｇ，３５．８ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（１０．３ｇ，１０５ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，３，２−ジオキサボロラン（１０．１ｇ，３９．８ｍｍｏｌ）およびジオキサン（１５０ｍＬ）を添加した。アルゴンをこの溶液に１５分間吹き込み、この時点で１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）クロリド  ジクロロメタン付加物（０．８５ｇ，１．０４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１１５℃の油浴内で６時間、アルゴン下で還流した。室温に冷却した後、ジオキサンを真空中で除去した。次いでＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を添加し、生成したスラリーを音波処理し、濾過した。追加のＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を用いて固体を洗浄した。有機抽出液を合わせて濃縮し、粗製物質をＳｉＯ２クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃを溶離剤として）により精製した。溶媒を除去した時点で、３：１  ヘキサン類／ＣＨ２Ｃｌ２を添加した（１００ｍＬ）。音波処理した後、生成した固体を濾過し、真空中で濃縮すると２．８ｇの白色固体が得られた。１Ｈ  ＮＭＲによれば、この物質はボロン酸エステルと２−アミノ−４−クロロピリジン副生物の１０：１混合物であった。この物質をそのまま後続の鈴木反応に用いた。LCMS (m/z): 173 (ボロン酸のMH+, LCに際してその場での生成物加水分解から誘導されたもの). 1H NMR (CDCl3): δ 8.36 (s, 1H), 6.46 (s, 1H), 4.70 (bs, 2H), 1.38 (s, 12H)。
【００９０】
[00101]  方法６
[00102]  ５−ブロモピリミジン−２，４−ジアミンの合成
【００９１】
【化１１】
2014505107.tif 000013
【００９２】
[00103]  ２，４−ジアミノピリミジン（１．０ｇ，９．１ｍｍｏｌ）のクロロホルム（３０ｍＬ）中における溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１．６２ｇ，９．０８ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を暗所で１２時間撹拌し、この時点でそれをＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍＬ）および１Ｎ  ＮａＯＨ（５０ｍＬ）に添加した。生成した固体を濾過し、水ですすぎ、真空中で濃縮して、１．４ｇ（７４％）の５−ブロモピリミジン−２，４−ジアミンを得た。LCMS (m/z): 189/191 (MH+). 1H NMR (DMSOd6): δ 7.78 (s, 1H), 6.58 (bs, 2H), 6.08 (bs, 2H)。
【００９３】
[00104]  ５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリミジン−２，４−ジアミンの合成
【００９４】
【化１２】
2014505107.tif 000014
【００９５】
[00105]  乾燥した１Ｌフラスコに、５−ブロモピリミジン−２，４−ジアミン（３０．０ｇ，１５８．７ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（４５．８ｇ，４６６．７ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，３，２−ジオキサボロラン（５１．２ｇ，２０２．２ｍｍｏｌ）およびジオキサン（５００ｍＬ）を添加した。アルゴンをこの溶液に１５分間吹き込み、この時点で１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）クロリド（２．５ｇ，３．１１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１１５℃の油浴内で１６時間、アルゴン下で還流した。室温に冷却した後、固体無機物質を濾過し、ＥｔＯＡｃ（１Ｌ）ですすいだ。有機濾液を真空中で濃縮し、生成した固体にジクロロメタン（１Ｌ）を添加した。音波処理した後、固体を濾過した。この固体は脱ブロムされた２，４−ジアミノピリミジンであった。目的とするボロン酸エステルを含有する濾液を真空中で濃縮した。この残留物にジエチルエーテル（１００ｍＬ）を添加した。音波処理した後、溶液を濾過し、追加のジエチルエーテル（５０ｍＬ）ですすぎ、得られた固体を高真空下で乾燥させると目的とする２，４−ジアミノピリミジル−５−ボロン酸エステル（１０．１３ｇ，２７％）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲによれば、この物質は２，４−ジアミノピリミジル−５−ボロン酸エステルと２，４−ジアミノピリミジン副生物の４：１混合物であった。この物質をそのまま後続の鈴木反応に用いた。LCMS (m/z): 155 (ボロン酸のMH+, LCに際してその場での生成物加水分解から誘導されたもの). 1H NMR (CDCl3+CD3OD): δ 8.16 (s, 1H), 1.34 (s, 12H)。
【００９６】
[00106]  方法７
[00107]  ５−ブロモ−６−フルオロ−２−ピリジルアミンの合成
【００９７】
【化１３】
2014505107.tif 000015
【００９８】
[00108]  ６−フルオロ−２−ピリジルアミン（１．０ｇ，８．９３ｍｍｏｌ）のクロロホルム（５５ｍＬ）中における溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１．５９ｇ，８．９３ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を暗所で１５時間撹拌し、この時点でそれをＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）および１Ｎ  ＮａＯＨ（５０ｍＬ）に添加した。混合した時点で層を分離し、有機層をＮａＣｌ（ｓａｔ．）（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＳｉＯ２クロマトグラフィー（２５％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン類）により精製して、５−ブロモ−６−フルオロ−２−ピリジルアミン（３８６ｍｇ，２２％）を得た。LCMS (m/z): 190.9/192.9 (MH+); 1H NMR (CDCl3): δ 7.59 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 6.25 (dd, J = 8.1, 1.2 Hz, 1H), 4.58 (bs, 1H)。
【００９９】
[00109]  ６−フルオロ−５−（４，４，５，５−テトラメチル（１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル））−２−ピリジルアミンの合成
【０１００】
【化１４】
2014505107.tif 000016
【０１０１】
[00110]  乾燥した５０ｍＬフラスコに、５−ブロモ−６−フルオロ−２−ピリジルアミン（３７０ｍｇ，１．９３ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（５６９ｍｇ，５．８ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，３，２−ジオキサボロラン（５３８ｍｇ，２．１２ｍｍｏｌ）およびジオキサン（１５ｍＬ）を添加した。アルゴンをこの溶液に１５分間吹き込み、この時点で１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）クロリド  ジクロロメタン付加物（７９ｍｇ，０．０９ｍｍｏｌ）。反応物を１１５℃の油浴内で４時間、アルゴン下で還流した。揮発性成分を真空中で除去した後、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）を添加し、この溶液をＨ２Ｏ（３×４０ｍＬ）、ＮａＣｌ（ｓａｔ．）（３００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。ＳｉＯ２クロマトグラフィー（３０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン類）による精製により、ボロン酸エステル（１６１ｍｇ，３５％）を得た。LCMS (m/z): 157 (ボロン酸のMH+, LCに際してその場での生成物加水分解から誘導されたもの). 1H NMR (CDCl3): δ 7.86 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 6.29 (dd, J = 8.1, 2.7 Hz, 1H), 4.70 (bs, 1H), 1.32 (s, 12H)。
【０１０２】
[00111]  方法８
[00112]  ５−ブロモ−４−フルオロピリジン−２−アミンの合成
【０１０３】
【化１５】
2014505107.tif 000017
【０１０４】
[00113]  Ｎ−ブロモスクシンイミド（１２６ｍｇ，０．７１ｍｍｏｌ）を、４−フルオロピリジン−２−アミンＴＦＡ塩（１６２ｍｇ，０．７２ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（４ｍＬ）中における溶液に、アルミニウム箔で包んだフラスコ内で暗いフード内において添加した。反応溶液を室温、暗所で２時間撹拌した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物をシリカゲルカラム上、ＥｔＯＡｃで溶離して精製して、５−ブロモ−４−フルオロピリジン−２−アミンを象牙色固体（９２ｍｇ，６７％）として得た。LC/MS (m/z): 190.9/192.9 (MH+), Rt 1.02分。
【０１０５】
[00114]  ４−フルオロ−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−２−アミンの合成
【０１０６】
【化１６】
2014505107.tif 000018
【０１０７】
[00115]  密閉可能なパイレックス（Pyrex）（登録商標）加圧容器内で、５−ブロモ−４−フルオロピリジン−２−アミン（２５ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，３，２−ジオキサボロラン（４０ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（５１ｍｇ，０．５２ｍｍｏｌ）およびジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）−ジクロロメタン付加物（１６ｍｇ，０．０１９ｍｍｏｌ）の混合物を、ジオキサン（１．７ｍＬ）にアルゴン下で懸濁した。加圧容器を密閉し、反応混合物を１１０℃で２時間撹拌した。ＬＣＭＳにより確認して反応が完了した後、反応混合物を室温に冷却し、この４−フルオロ−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−２−アミンをさらに精製せずに後続反応に用いた；定量的収量（０．１３ｍｍｏｌ）と推定。LC/MS (m/z): 157.0 (ボロン酸のMH+, LCに際して生成物加水分解により形成されたもの), Rt 0.34分。
【０１０８】
[00116]  方法９
[00117]  ２−アミノ−５−ブロモ−イソニコチノニトリルの合成
【０１０９】
【化１７】
2014505107.tif 000019
【０１１０】
[00118]  アルミニウム箔で覆ったフラスコ内で暗いフードにおいて、２−アミノ−イソニコチノニトリルＴＦＡ塩（１２５ｍｇ，０．５４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（３．５ｍＬ）に溶解した。固体Ｎ−ブロモスクシンイミド（８９．２ｍｇ，０．５０１ｍｍｏｌ）を、撹拌したこの溶液に室温で一度に添加した。反応溶液を室温、暗所で９０分間撹拌した。溶媒を蒸発させた後、粗製物質をさらにシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、２−アミノ−５−ブロモ−イソニコチノニトリル（５３ｍｇ，４９％）を得た。LC/MS (m/z): 197.9 (MH+), Rt 2.92分。
【０１１１】
[00119]  ２−アミノ−５−ボロン酸エステル−イソニコチノニトリルの合成
【０１１２】
【化１８】
2014505107.tif 000020
【０１１３】
[00120]  ガラス製の加圧容器内で、２−アミノ−５−ブロモ−イソニコチノニトリル（２５ｍｇ，０．１２６ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，３，２−ジオキサボロラン（３８ｍｇ，０．１５１ｍｍｏｌ）および酢酸カリウム（４９ｍｇ，０．５０４ｍｍｏｌ）の混合物をジオキサン（１．８ｍＬ）に懸濁した。混合物をアルゴンで１〜２分間パージした後、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）  ジクロロメタン付加物（１６ｍｇ，０．０１９ｍｍｏｌ）を一度に添加した。反応器を密閉し、撹拌しながら１２０℃で２時間加熱した。粗製反応溶液を室温に冷却し、さらに精製せずに後続反応に用いた；定量的収率のボロン酸エステル（０．１２６ｍｍｏｌ）と推定。LC/MS (m/z): 164.0 (ボロン酸のMH+, LCに際して生成物加水分解により形成されたもの), Rt 0.37分。
【０１１４】
[00121]  方法１０
[00122]  ５−フルオロ−２−モルホリノピリミジン−４，６−ジオールの合成
【０１１５】
【化１９】
2014505107.tif 000021
【０１１６】
[00123]  水素化ナトリウム（油中６０％，３．９ｇ，９６．５ｍｍｏｌ）を丸底フラスコ内においてアルゴン下にヘキサン類で洗浄し、氷水浴で冷却した。ＥｔＯＨ（１００ｍＬ）を徐々に添加した。生成した混合物を室温に温め、３０分間撹拌した。この塩基溶液に、２−フルオロマロン酸ジエチル（５．７ｇ，３２．２ｍｍｏｌ）、続いてモルホリノホルムアミジン臭化水素酸塩（６．８ｇ，３２．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をアルゴン下で撹拌しながら９０〜９５℃に加熱した。１２時間後、反応物を室温に冷却し、ＥｔＯＨを真空中で除去した。生成した白色固体を水（２５ｍＬ）に溶解し、濃ＨＣｌでｐＨ＝３〜４に酸性化した。生成した白色沈殿をブーフナーフィルター上に採集し、水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、フィルター上で風乾し、真空乾燥して、５−フルオロ−２−モルホリノピリミジン−４，６−ジオール（０．８７ｇ，１２％）を得た。LC/MS (m/z): 216.0 (MH+), Rt 0.63分。
【０１１７】
[00124]  ４−（４，６−ジクロロ−５−フルオロピリミジン−２−イル）モルホリンの合成
【０１１８】
【化２０】
2014505107.tif 000022
【０１１９】
[00125]  ５−フルオロ−２−モルホリノピリミジン−４，６−ジオール（０．８７ｇ，４．０ｍｍｏｌ）およびＰＯＣｌ３（１０ｍＬ）の混合物を、１２０℃で１６時間加熱し、次いで室温に冷却した。過剰のＰＯＣｌ３を減圧下で除去すると半固体が得られ、これをさらに真空乾燥させた。１２時間の真空乾燥後、固体をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）中に希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（６０ｍＬ）で洗浄した。洗浄中に固体が生成し、これを水層と共に廃棄した。有機層を再び飽和ＮａＨＣＯ３（２×３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させると粗生成物が得られた。この生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより、２５％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離して精製して、４−（４，６−ジクロロ−５−フルオロピリミジン−２−イル）モルホリン（４１８ｍｇ，４２％）を得た。LC/MS (m/z): 251.9 (MH+), Rt 3.22分。
【０１２０】
[00126]  方法１１
【０１２１】
【化２１】
2014505107.tif 000023
【０１２２】
[00127]  モルホリン（１００ｇ；１．１５ｍｏｌ；５．３当量）のＴＨＦ（４５０ｍＬ）中における溶液を、氷浴で冷却した。２，４，６−トリクロロピリミジン（３９．９ｇ；２１７ｍｍｏｌ；１．０当量）のＴＨＦ（１００ｍＬ）中における溶液を、３０分間かけて添加した。２，４，６−トリクロロピリミジンを添加すると大量の白色沈殿が生成し、反応混合物が急速に増粘した。混合物を周囲温度に温め、６４時間、機械的に撹拌した（２，４，６−トリクロロピリミジンの添加後に反応混合物を還流温度に加熱すると、反応は６０分で完了する。ａとｂの比率は変化しなかった）。次いで混合物を濾過し、フィルターケーキを追加のＴＨＦ（２×１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を回転蒸発器で濃縮した。水（６００ｍＬ）を添加し、生成したスラリーを３０分間撹拌した。固体を濾過により単離し、追加の水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、真空下で一夜乾燥させた。収量ａ＋ｂ：６１．３ｇ（９９％）。ｈｐｌｃ面積パーセントによれば、生成物は８７％のａであった；残りはｂである。
【０１２３】
[00128]  ３１ｇの粗製固体を２００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、フリットガラスろうと内で６００ｇの乾燥シリカに付与した。シリカを１：１  ヘキサン：ＥｔＯＡｃで溶離し、３００ｍＬの画分を採集した。ＴＬＣ分析は、ａが画分１〜７中に、４，６−ジモルホリノ−２−クロロピリミジンが画分６〜１０中に存在することを示す。画分１〜５をプールし、濃縮して、白色固体を得た。収量：２８．２ｇ（ｈｐｌｃ面積パーセントによれば、生成物は９８％のａであった）。
【０１２４】
[00129]  例１
[00130]  ４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミンの製造
【０１２５】
【化２２】
2014505107.tif 000024
【０１２６】
[00131]  ２−モルホリノ−４，６−ジクロロピリミジン（方法２２の場合と同様にに製造，２．０ｇ，８．５４ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（１４ｍＬ）中におけるスラリーに、トリエチルアミン（１．４３ｍＬ，１０．２５ｍｍｏｌ）を添加した。この不均一混合物を１５分間撹拌し、次いでモルホリン（０．７５ｍＬ，８．５４ｍｍｏｌ）で処理した。８５℃でアルゴン下に２時間還流した時点で溶液を冷却し、次いでＥｔＯＡｃ（１６０ｍＬ）に添加した。有機溶液を２５ｍＬのＮａＨＣＯ３（ｓａｔ．）（２×）、水（２×）およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質を２００ｍＬのＥｔＯＡｃに溶解し、ＳｉＯ２パッドにより濾過し、さらにＥｔＯＡｃで溶離して、２．２ｇ（９３％）の２，４−ジモルホリノ−６−クロロピリミジンを灰白色固体として得た。LCMS (m/z): 285.0 (MH+), 1H NMR (CDCl3): δ 5.86 (s, 1H), 3.71-3.76(m, 12H), 3.52-3.56(m, 4H)。
【０１２７】
[00132]  ４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミン
【０１２８】
【化２３】
2014505107.tif 000025
【０１２９】
[00133]  アルゴンガスを、２，４−ジモルホリノ−６−クロロピリミジン（４．１ｇ，１４．３ｍｍｏｌ）および４−（トリフルオロメチル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−２−アミン（１６．５ｇ，５７．３ｍｍｏｌ）の１，２−ジメトキシエタンおよび２Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３（３：１）中における不均一混合物に、２０分間吹き込んだ。１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）クロリド（２９２ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を収容した高圧ガラス容器を密閉した。次いで反応混合物を９０℃で１５時間加熱し、冷却し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で希釈した。有機溶液を３００ｍＬの水：Ｎａ２ＣＯ３（ｓａｔ．）：ＮＨ４ＯＨ（ｃｏｎｃ．）＝５：４：１混合物、次いでＮＨ４Ｃｌ（ｓａｔ．）、およびブライン（２×）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＳｉＯ２クロマトグラフィー（５０−９０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン類，０．１％のＴＥＡを含有）により精製して、５．６２ｇ（９５％）の４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミンを灰白色固体として得た。LCMS (m/z): 411.3 (MH+); 1H NMR (CDCl3): δ 8.27 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 5.97 (s, 1H), 4.77 (bs, 2H), 3.59-3.80(m, 12H), 3.58-3.61(m, 4H)。
【０１３０】
[00134]  例２
[00135]  ４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミンの試験配合物
[00136]  ４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミン粉末を１体積のＮＭＰ（１−メチル−２−ピロリドン）に溶解した。溶解した（必要ならば温水中で）後、９体積のＰＥＧ３００を添加した。最終比率はＮＭＰ  １０％／ＰＥＧ３００  ９０％である。
【０１３１】
[00137]  例３
[00138]  Ｐｔｅｎ過誤腫性腫瘍症候群またはＰＨＴＳの発現におけるｐ１１０ａおよび／またはｐ１１０ｂの役割
[00139]  Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆマウス(Lesche, R., et al., Cre/loxP-mediated inactivation of the murine Pten tumor suppressor gene. Genesis, 2002. 32(2): 148-9)をＫ１４−ｃｒｅマウス(Jonkers, J., et al., Synergistic tumor suppressor activity of BRCA2 and p53 in a conditional mouse model for breast cancer. Nat Genet, 2001. 29(4): 418-25)と交配して、Ｋ１４−Ｃｒｅ  Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆマウスを作製した；その際、ｌｏｘＰで挟まれた(floxed)Ｐｔｅｎ対立遺伝子がＫ１４駆動Ｃｒｅリコンビナーゼによって特異的にケラチノサイト中に欠失する。これらのマウスをさらにｐ１１０ａ  ｆ／ｆマウス(Zhao, J.J., et al., The p110alpha isoform of PI3K is essential for proper growth factor signaling and oncogenic transformation. Proc Natl Acad Sci U S A, 2006. 103(44): 16296-300)およびｐ１１０ｂ  ｆ／ｆマウス(Jia, S., et al., Essential roles of PI(3)K-p110beta in cell growth, metabolism and tumorigenesis. Nature, 2008)と交配して、Ｋ１４−ｃｒｅ  Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆ、Ｋ１４−ｃｒｅ  Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆ；  ｐ１１０ａ  ｆ／ｆ、Ｋ１４−ｃｒｅ  Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆ；  ｐ１１０ｂ  ｆ／ｆ、およびＫ１４−ｃｒｅ−Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆ  ；ｐ１１０ａ  ｆ／ｆ；  ｐ１１０ｂ  ｆ／ｆマウスを作製した。ケラチノサイト特異的なＰｔｅｎ欠失により、Ｋ１４−ｃｒｅ  Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆマウスにＰＨＴＳの多発性皮膚過誤腫に類似した多発性皮膚病変が生じる。図１のパネル（ａ）は、１２週齢で示された関連遺伝子型のマウスの頭部および前足を示す。すべてのマウスがＦＶＢバックグラウンドをもつ。さらにｐ１１０ａまたはｐ１１０ｂのいずれかの除去はこれらの病変の発症を遅らせ、病変の重症度を軽減し、両ｐ１１０イソ型の除去は（ａ）パネルの写真に目視証明されるように、症状の出現を遮断する。
【０１３２】
[00140]  図１、パネル（ｂ）は、Ｋ１４−ｃｒｅ  Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆ（ｎ＝２８）、Ｋ１４−ｃｒｅ  Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆ；  ｐ１１０ａ  ｆ／ｆ（ｎ＝１６）、Ｋ１４−ｃｒｅ  Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆ；  ｐ１１０ｂ  ｆ／ｆ（ｎ＝１１）、およびｋ１４−ｃｒｅ−Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆ  ；ｐ１１０ａ  ｆ／ｆ；  ｐ１１０ｂ  ｆ／ｆ（ｎ＝１５）マウスにおけるＰＨＴＳ発症のカプラン−マイヤー(Kaplan-Meier)プロットである。Ｋ１４−ｃｒｅ  Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆマウス（赤線）についてのＰＨＴＳ発症の中央値は６２日である。ｐ１１０ａ（緑線）またはｐ１１０ｂ（青線）のいずれかの欠失は、症状の発症を約６０日遅らせるが、これらの遺伝子型のすべてのマウスが症状を約２１０〜２２５日までに提示する。顕著に対照的に、Ｋ１４−ｃｒｅ−Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆ；  ｐ１１０ａ  ｆ／ｆ；  ｐ１１０ｂ  ｆ／ｆマウスのすべてが少なくとも３００日間はＰＨＴＳ症状を示さなかった。
【０１３３】
[00141]  例４
[00142]  Ｋ１４−ｃｒｅ−Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆマウスにおいて式（Ｉ）の化合物の早期投与はＰＨＴＳ症状の発現を阻止する
[00143]  Ｋ１４−ｃｒｅ−Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆマウスを、３週齢から開始して１日１回、２５ｍｇ／ｋｇの４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミンの経口胃管投与で処置し、ＰＨＴＳ症状の発現をモニターした。図２、パネル（ａ）は、４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミンで処置したマウスはＰＨＴＳ症状を示さないままであり、一方、ビヒクルのみで処置したマウスは特徴的なＰＨＴＳ病変をそれらの顔および足に発現したことを証明する。図２、パネル（ｂ）は、上記のように４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミンで維持した、またはビヒクルのみで処置したＫ１４−ｃｒｅ−Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆマウス（ｎ＝１２）における無ＰＨＴＳ生存のカプラン−マイヤー曲線である。
【０１３４】
[00144]  例５
[00145]  式（Ｉ）の化合物の投与はＫ１４−ｃｒｅ−Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆマウスにおけるＰＨＴＳ症状を軽減する
[00146]  完全発現したＰＨＴＳを伴うＫ１４−ｃｒｅ−Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆマウス（１２〜１４週齢）を１日１回、４５ｍｇ／ｋｇの４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミンで経口胃管投与により処置した。図３の写真は、図３の説明文に記載するように、１日１回、４５ｍｇ／ｋｇの４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミンで処置した２匹のＫ１４−ｃｒｅ−Ｐｔｅｎ  ｆ／ｆマウスの頭部および前左足を示す。４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミンを４週間投与し、マウスを処置前、２および４週目に撮影した。４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミンの投与は、これらのマウスにおいてＰＨＴＳ症状を劇的に軽減した。大部分のＰＨＴＳ症状が、４週間の４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミン処置の終了時には実質的または完全に軽減した。
【０１３５】
[00147]  結果
[00148]  これらの所見は、ＰＨＴＳの動物モデルにおいてｐ１１０またはｐ１１０のいずれかのイソ型のＰＩ３Ｋの欠失はＰＨＴＳの発症および重症度を有意に軽減したが、両イソ型の除去はＰＨＴＳの発現を完全に阻止したことを示す。これらの所見はさらに、若いマウスにおける４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミンの投与もＰＨＴＳの出現を完全に遮断したことを証明する。より印象的には、進行した皮膚病変を伴うマウスにおける４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミンの投与がＰＨＳＴの表現型を完全に反転させた。
【図１ａ】
2014505107.tif 000030
【図１ｂ】
2014505107.tif 000031
【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図３】
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【国際調査報告】
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