(57)【要約】  本明細書は、微粉化胎盤構成要素からなる組成物およびその医薬組成物を開示する。その組成物は、多くの医療用途を有する。微粉化組成物を作成および使用するための方法もまた、本明細書中に開示される。
2014505111.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
微粉化羊膜、絨毛膜、中間組織層、またはそれらの任意の組み合わせを含む組成物であって、
前記組成物は、微粉化羊膜のみから成るものではない、
組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物であって、
前記組成物は、個々の構成要素として微粉化羊膜、絨毛膜、中間組織層、またはそれらの任意の組み合わせを含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の組成物であって、
前記組成物は、羊膜、絨毛膜、中間組織層、またはそれらの任意の組み合わせを含む微粉化組織移植片を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項４】
請求項１に記載の組成物であって、
前記組成物は、個々の構成要素として微粉化羊膜および中間組織層を含み、
前記中間組織層は、羊膜から取り除かれていることを特徴とする、
組成物。
【請求項５】
請求項４に記載の組成物であって、
前記微粉化羊膜が、２００μｍ未満の粒子サイズを有することを特徴とする、
組成物。
【請求項６】
請求項４に記載の組成物であって、
中間組織層に対する羊膜の重量比が１０：１〜１：１０であることを特徴とする、
組成物。
【請求項７】
請求項４に記載の組成物であって、
中間組織層に対する羊膜の重量比が２：１〜１：１であり、
前記微粉化羊膜および中間組織層が２５μｍ〜２００μｍの粒子サイズを有することを特徴とする、
組成物。
【請求項８】
請求項１に記載の組成物であって、
前記組成物は、少なくとも二層の絨毛膜、少なくとも二層の羊膜、または少なくとも一層の絨毛膜および羊膜を含む微粉化組織移植片を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項９】
請求項１に記載の組成物であって、
前記組成物は、微粉化羊膜／絨毛膜組織移植片を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項１０】
請求項９に記載の組成物であって、
微粉化粒子が４００μｍ未満の粒子サイズを有することを特徴とする、
組成物。
【請求項１１】
請求項９に記載の組成物であって、
微粉化粒子が１５０μｍ〜３５０μｍの粒子サイズを有することを特徴とする、
組成物。
【請求項１２】
請求項９に記載の組成物であって、
羊膜に対する絨毛膜の重量比が１０：１〜１：１０であることを特徴とする、
組成物。
【請求項１３】
請求項９に記載の組成物であって、
羊膜に対する絨毛膜の重量比が４：１〜１：１であり、
微粉化粒子が２５μｍ〜２００μｍの粒子サイズを有することを特徴とする、
組成物。
【請求項１４】
請求項１に記載の組成物であって、
前記組成物はさらに、充填剤を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項１５】
請求項１４に記載の組成物であって、
前記充填剤は、心膜の同種移植片、無細胞真皮の同種移植片、ウォートン・ジェリー、精製された異種移植片１型コラーゲン、バイオセルロースポリマーまたはコポリマー、生体適合性の合成ポリマーまたはコポリマーフィルム、精製された小腸粘膜下組織、膀胱無細胞マトリックス、死体筋膜、またはそれらの任意の組み合わせを含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項１６】
請求項１４に記載の組成物であって、
前記充填剤は、ウォートン・ジェリーを含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項１７】
請求項１に記載の組成物であって、
前記羊膜、羊膜、絨毛膜、中間組織層、またはそれらの任意の組み合わせが架橋していることを特徴とする、
組成物。
【請求項１８】
請求項１に記載の組成物であって、
さらに生物活性剤を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項１９】
請求項１８に記載の組成物であって、
前記生物活性剤は、止血剤、フィブリン糊、同種移植片、または自家材料を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項２０】
請求項１に記載の組成物であって、
前記組成物がさらに、薬学的に許容できる担体を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項２１】
請求項２０に記載の組成物であって、
前記薬学的に許容できる担体は、水、水性ヒアルロン酸、生理食塩水、リンガー液、ブドウ糖液、ハンクス液、バッファー、または非水性ビヒクルを含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項２２】
請求項２１に記載の組成物であって、
前記バッファーは、リン酸バッファー、ビカーボネートバッファー、またはトリスバッファーを含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項２３】
請求項２０に記載の組成物であって、
前記組成物は、注入可能であることを特徴とする、
組成物。
【請求項２４】
請求項２０に記載の組成物であって、
前記組成物は、液体、ゲル、またはペーストであることを特徴とする、
組成物。
【請求項２５】
対象での、しわを治療または予防するための方法であって、
前記方法は、対象での、しわが存在する部位に、または、対象の、しわを形成しやすい領域に、請求項１に記載の組成物を注入するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項２６】
請求項１に記載の組成物の使用であって、
皮膚充填剤としての、
使用。
【請求項２７】
創傷治癒を高めるための方法であって、
前記方法は、創傷部位に、および／または、創傷部位付近に、請求項１に記載の組成物を適用するステップを含む、
方法。
【請求項２８】
対象の関節における炎症を治療または予防するための方法であって、
前記方法は、請求項１に記載の組成物を関節中に注入するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項２９】
対象の関節面での軟骨細胞を修復および／または再生するための方法であって、
前記方法は、請求項１に記載の組成物を関節面に適用するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項３０】
対象の関節面での炎症を治療または予防するための方法であって、
前記方法は、請求項１に記載の組成物を関節面に適用するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項３１】
外科的処置後の脊椎の上または付近の瘢痕形成を予防または減少させるための方法であって、
前記方法は、請求項１に記載の微粉化組成物を、対象の脊髄硬膜または脊椎付近の領域に直接、対象に適用するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項３２】
請求項３１に記載の方法であって、
前記外科的処置は、後処置を含むことを特徴とする、
方法。
【請求項３３】
請求項３２に記載の方法であって、
前記後処置が、椎弓切除術または椎間板切除術であることを特徴とする、
方法。
【請求項３４】
請求項３２に記載の方法であって、
前記後処置が、前方腰椎椎体間固定術（ＡＬＩＦ）および経椎間孔椎体間固定術（ＴＬＩＦ）であることを特徴とする、
方法。
【請求項３５】
請求項３１に記載の方法であって、
前記外科的処置は、前処置を含むことを特徴とする、
方法。
【請求項３６】
対象での、硬膜裂傷を治療するための方法であって、
前記方法は、請求項１に記載の微粉化組成物を、硬膜裂傷に直接適用するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項３７】
対象での、創傷の治癒を促進するための方法であって、
前記方法は、請求項１に記載の微粉化組成物を創傷に適用するステップを含み、
ここで前記創傷は脳硬膜中にあり、
小帯牽引の除去のため、失われた膝蓋骨組織の再生のため、洞腔中のシュナイダー膜または歯科インプラント周囲の軟組織の修復のための、歯周形成外科の（ｐｅｒｉｏｐｌａｓｔｉｃ）処置による創傷であることを特徴とする、
方法。
【請求項３８】
歯科の外科的処置と関連する創傷治癒を促進するための方法であって、
前記方法は、創傷を、請求項１に記載の微粉化組成物と接触させるステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項３９】
請求項３８に記載の方法であって、
微粉化粒子が、進行性歯肉退縮欠損の治療において、または組織再生誘導法において、歯科インプラントとともに用いられることを特徴とする、
方法。
【請求項４０】
整形外科の適用と関連する創傷治癒を促進するための方法であって、
前記方法は、創傷を、請求項１に記載の微粉化組成物と接触させるステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項４１】
請求項４０に記載の方法であって、
微粉化粒子が、骨膜の修復に役立ち、破裂性／損傷性嚢を修復し、または骨修復中の空隙充填材料を固定して、腱修復に用いられることを特徴とする、
方法。
【請求項４２】
耳鼻咽喉科の適用と関連する創傷治癒を促進するための方法であって、
前記方法は、創傷を、請求項１に記載の微粉化組成物と接触させるステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項４３】
請求項１に記載の微粉化組成物を含む三次元構築物であって、
微粉化粒子が、
（１）微粉化粒子を架橋剤で処理するステップと、処理された粒子をモールド中に配置するステップ、または
（２）微粉化粒子を接着剤と混合するステップと、混合物をモールド中に配置するステップ
を含む方法により生産されることを特徴とする、
構築物。
【請求項４４】
請求項４３に記載の構築物であって、
前記微粉化粒子が、微粉化羊膜／絨毛膜組織移植片を含むことを特徴とする、
構築物。
【請求項４５】
請求項４３に記載の構築物であって、
前記微粉化粒子が、微粉化羊膜および中間組織層を含むことを特徴とする、
構築物。
【請求項４６】
請求項４３に記載の構築物であって、
前記接着剤は、フィブリンシーラント、シアノアクリレート、ゼラチンとトロンビンの産物、ポリエチレングリコールポリマー、アルブミン、グルタルアルデヒドの産物、またはそれらの任意の組み合わせを含むことを特徴とする、
構築物。
【請求項４７】
請求項４３に記載の構築物であって、
前記構築物はさらに、１つまたは複数の、構築物に付けられた胎盤組織を含むことを特徴とする、
構築物。
【請求項４８】
請求項４７に記載の構築物であって、
前記胎盤組織が、羊膜、絨毛膜の層、または羊膜および／または絨毛膜の積層を含むことを特徴とする、
構築物。
【請求項４９】
局所組成物であって、
請求項１に記載の微粉化組成物および薬学的に許容できる担体を含む、
組成物。
【請求項５０】
請求項４９に記載の組成物であって、
微粉化粒子が、２０μｍ〜１００μｍの粒子サイズを有することを特徴とする、
組成物。
【請求項５１】
請求項４９に記載の組成物であって、
微粉化粒子が、局所組成物の０．５％〜２０％重量であることを特徴とする、
組成物。
【請求項５２】
請求項４９に記載の組成物であって、
微粉化粒子が、局所組成物の２％〜５％重量であることを特徴とする、
組成物。
【請求項５３】
請求項４９に記載の組成物であって、
前記薬学的に許容できる担体が、界面活性剤、乳化剤、またはそれらの組み合わせを含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項５４】
請求項４９に記載の組成物であって、
前記薬学的に許容できる担体が、ポリアルキレングリコールを含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項５５】
請求項４９に記載の組成物であって、
前記薬学的に許容できる担体が、ポリアルキレングリコールと脂肪族アルコールとの混合物を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項５６】
請求項５５に記載の組成物であって、
前記ポリアルキレングリコールがポリエチレングリコールであり、
前記脂肪族アルコールが、カプリルアルコール（１−オクタノール）、２−エチルヘキサノール、ペラルゴンアルコール（１−ノナノール）、カプリックアルコール（１−デカノール、デシルアルコール）、ウンデシルアルコール（１−ウンデカノール、ウンデカノール、ヘンデカノール）、ラウリルアルコール（ドデカノール、１−ドデカノール）、トリデシルアルコール（１−トリデカノール、トリデカノール、イソトリデカノール）、ミリスチルアルコール（１−テトラデカノール）、ペンタデシルアルコール（１−ペンタデカノール、ペンタデカノール）、セチルアルコール（１−ヘキサデカノール）、パルミトレイルアルコール（シス−９−ヘキサデセン−１−オール）、ヘプタデシルアルコール（１−ｎ−ヘプタデカノール、ヘプタデカノール）、ステアリルアルコール（１−オクタデカノール）、イソステアリルアルコール（１６−メチルヘプタデカン−１−オール）、エライジルアルコール（９Ｅ−オクタデセン−１−オール）、オレイルアルコール（シス−９−オクタデセン−１−オール）、リノレイルアルコール（９Ｚ，１２Ｚ−オクタデカジエン−１−オール）、エライドリノレニルアルコール（９Ｅ，１２Ｅ−オクタデカジエン−１−オール）、リノレニルアルコール（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ−オクタデカトリエン−１−オール）エライドリノレニルアルコール（９Ｅ，１２Ｅ，１５−Ｅ−オクタデカトリエン−１−オール）、リシノレイルアルコール（１２−ヒドロキシ−９−オクタデセン−１−オール）、ノナデシルアルコール（１−ノナデカノール）、アラキジルアルコール（１−エイコサノール）、ヘンエイコシルアルコール（１−ヘンエイコサノール）、ベヘニルアルコール（１−ドコサノール）、エルシルアルコール（シス−１３−ドコセン−１−オール）、リグノセリルアルコール（１−テトラコサノール）、セリルアルコール（１−ヘキサコサノール）、モンタニルアルコール、クロチルアルコール（１−オクタコサノール）、ミリシルアルコール、メリシルアルコール（１−トリアコンタノール）、ゲジルアルコール（１−テトラトリアコンタノール）、セテアリルアルコール、またはそれらの任意の組み合わせを含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項５７】
請求項５５に記載の組成物であって、
前記ポリアルキレングリコールがポリエチレングリコールであり、
前記脂肪族アルコールがセチルアルコールであることを特徴とする、
組成物。
【請求項５８】
対象での、しわを治療するための方法であって、
前記方法は、対象に存在するしわ上に、請求項４９に記載の組成物を適用するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項５９】
対象での、しわを予防するための方法であって、
前記方法は、対象の、しわを形成しやすい皮膚上に、請求項４９に記載の組成物を適用するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項６０】
皮膚層の再上皮形成を高めるための方法であって、
前記方法は、皮膚上に存在する損傷した上皮層に、請求項４９に記載の組成物を適用するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項６１】
対象での、創傷治癒を高めるための方法であって、
前記方法は、創傷中に、または創傷付近に、請求項１に記載の微粉化組成物を注入するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項６２】
請求項６１に記載の方法であって、
前記組成物が、皮下、真皮下、筋肉内、または骨膜界面に、注入されることを特徴とする、
方法。
【請求項６３】
請求項６１に記載の方法であって、
前記創傷が、糖尿病性潰瘍、表皮創傷、トラッキング創傷、または繰り返しの外科的処置に由来する創傷であることを特徴とする、
方法。
【請求項６４】
請求項６１に記載の方法であって、
前記創傷は、脊柱側弯の治療のための切開部位であることを特徴とする、
方法。
【請求項６５】
移植可能な医療デバイスであって、
請求項１に記載の微粉化組成物を含む、
移植可能な医療デバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１１年２月１４日出願の米国仮出願第６１／４４２，３４６号、および２０１１年１０月６日出願の第６１／５４３，９９５号の優先権を主張するものである。これらの出願は、その教示の全てに関してその全体で本明細書中に参照により援用される。
【背景技術】
【０００２】
胎盤組織は、典型的に、選択的帝王切開後に回収される。胎盤は、臍帯と羊膜嚢からなる。羊膜嚢は、一般に羊膜と呼ばれ、２つの主な組織の層である羊膜と絨毛膜とを有する。羊膜組織は羊膜嚢の最内層であり、羊水に直接接する。羊膜嚢は羊水を含み、胎児の環境を保護する。組織学的評価は、羊膜の膜層は単一層の上皮細胞、薄い細網線維（基底膜）、厚い緻密層、および線維芽細胞層からなることを示す。羊膜の線維層（すなわち、基底膜）は、ＩＶ、Ｖ、およびＶＩＩ型コラーゲン、および、フィブロネクチンとラミニンを含む細胞接着の生物活性の因子を含む。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本明細書は、創傷治癒および他の医療用途で胎盤組織の構成要素を使用する、独特の方法を開示する。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
要約
本明細書は、微粉化胎盤の構成要素からなる組成物およびその医薬組成物を開示する。その組成物は、多くの医療用途を有する。微粉化組成物を作成および使用するための方法もまた、本明細書中に開示される。
本発明の効果は、一部分は以下の記載中で説明され、一部分は記載から明白であるか、下記態様の実行により習得され得る。以下に示される効果は、添付の請求項で特に指摘の要素および組み合わせを用いて実現および到達するであろう。前述の一般的な記載および以下の詳細な記載の両者は、単に例示的かつ説明的であり、限定ではないことが理解されるべきである。
【０００５】
援用されて本明細書の一部分を成す添付の図面は、下記の様々な態様を説明する。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】本明細書に記載の微粉化組成物を作成するための方法の概略フローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本項目および方法を開示および記載する前に、下記の態様は、特定の化合物、合成方法、または使用に限定されず、したがってもちろん、変更され得ることが理解されるべきである。また、本明細書で使用される専門用語は、単に特定の態様を説明する目的であり、限定されることを意図しないことが理解されるべきである。
【０００８】
本明細書および以下の請求項において、以下の意味を有すると定義されるべきいくつかの用語に対して、参照が作成される：
本明細書および添付の請求項において用いられる単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに別段の指示をしない限り、複数形の指示対象を含むことを留意しなければならない。したがって、例えば、「生物活性剤（ａ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）」との言及は、２またはそれ以上のそのような生物活性剤（ａｇｅｎｔｓ）の混合物などを含む。
【０００９】
「随意的（ｏｐｔｉｏｎａｌ）」または「場合により（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）」は、続けて記述される事象または状況が生じ得るまたは生じ得ないこと、および、その記載はその事象または状況が生じる事例および生じない事例を含むことを意味する。例えば、語句「場合により清浄化するステップ」は、清浄化するステップが行われ得るか行われ得ないことを意味する。
【００１０】
本明細書において用いられる用語「対象」は、任意の脊椎生物である。
【００１１】
本明細書において用いられる用語「羊膜」は、中間組織層が損傷されていない（ｉｎｔａｃｔ）、または実質的に取り除かれた、羊膜を含む。
【００１２】
タイトルまたはサブタイトルは、読者の便宜のために本明細書中において用いられてよく、本発明の範囲に影響を及ぼす意図ではない。さらに、本明細書中で用いられるいくつかの用語は、以下にさらに具体的に定義される。
【００１３】
Ｉ．微粉化組成物およびそれを作成するための方法
本明細書は、微粉化胎盤の構成要素からなる組成物およびその医薬組成物を開示する。一態様では、組成物は、（ａ）微粉化羊膜、絨毛膜、中間組織層、またはそれらの任意の組み合わせ、および（ｂ）薬学的に許容できる担体を含む。一態様では、組成物は、微粉化羊膜および中間組織層を含む。別の態様では、組成物は、微粉化羊膜および絨毛膜を含む。
【００１４】
図１は、本明細書中に記載の微粉化組成物の調製における使用のために、胎盤材料を摘出し、処理し、そして調製するステップの、概略（１００）と特定の態様を示す。それぞれの個々のステップに関するさらに詳細の説明および議論を続ける。はじめに、選択的帝王切開（ステップ１１０）に続き、胎盤組織が、承諾する患者から採取される。材料は保存されて、適切な処理場、または検査（ｃｈｅｃｋ−ｉｎ）と評価のための施設に、従来の組織保存方法で運ばれる（ステップ１２０）。それから、全体の処理、操作、および組織層の分離が行われる（ステップ１３０）。それから、許容できる組織が除染されて（ステップ１４０）、脱水される（ステップ１４５）。それから、除染脱水後、胎盤の構成要素（例えば、個別に羊膜、中間組織層および／または絨毛膜、または移植片として）が微粉化される（ステップ１５０）。各ステップを以下に詳細に記載する。
【００１５】
最初の組織採取（ステップ１１０）
本明細書に記載の微粉化組成物を生産するために用いられる構成要素は、胎盤に由来する。胎盤の起源は変更することができる。一態様では、胎盤は、ヒトのような哺乳類に由来し、制限されないが、ウシ、ブタなどを含む他の動物をここで用いることができる。ヒトの場合、胎盤の回収は、帝王切開の出産中にそれが採取される病院で行われる。出産間近の母親を指すドナーは、移植が可能な最も安全な組織を提供するために設計された総合的なスクリーニングプロセスを自主的に受ける。スクリーニングプロセスは、好ましくは、ヒト免疫不全ウイルス１型および２型に対する抗体（抗−ＨＩＶ−１および抗−ＨＩＶ−２）、Ｂ型肝炎ウイルス  Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に対する抗体（抗−ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルスに対する抗体（抗−ＨＣＶ）、ヒトＴ−リンパ向性ウイルスＩ型およびＩＩ型に対する抗体（抗−ＨＴＬＶ−Ｉ、抗−ＨＴＬＶ−ＩＩ）、ＣＭＶ、および梅毒に対する抗体、および、ヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ−１）およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）を検査する核酸に関して、従来の血清検査を用いて検査する。上記の検査リストは単に例示的であり、当業者により理解されるように、より多くの、より少ない、または異なる検査が、経時的にまたは移植片の使用目的に基づいて、所望され、または、必要とされてよい。
【００１６】
ドナーの情報およびスクリーニング検査結果の検討に基づいて、ドナーは、許容できるとみなされるか、または許容できないとみなされるかの、いずれかである。加えて、細菌、例えば、クロストリジウムまたは連鎖球菌の存在を判定するために、分娩時（ａｔ  ｔｈｅ  ｔｉｍｅ  ｏｆ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ）に培養が行われる。ドナーの情報、スクリーニング検査、および分娩培養（ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｃｕｌｔｕｒｅ）が全て満たしている場合（すなわち、いかなるリスクも示さず、または許容できるレベルのリスクを示す）、ドナーは医長に承認されて、組織標本は、さらなる処理および評価に当初ふさわしいと指定される。
【００１７】
上記の選定基準に見合うヒト胎盤は、好ましくは、滅菌輸送バッグ中の生理食塩水中に入れられ、そして処理場またはさらなる処理のための実験室への輸送のために、ウェットアイスの容器中に保存される。
【００１８】
スクリーニング検査と分娩培養からの結果の取得が完了する前に胎盤が採取される場合は、そのような組織はラベルされて検疫所に保管される。組織が操作および使用に安全であること示す必要なスクリーニング評価と分娩培養が満たされた後にのみ、胎盤は、さらなる処理に承認され、医長からの最終承認を得る。
【００１９】
材料の検査および評価（ステップ１２０）
処理センターまたは実験室への到着時に、輸送物は開封されて、滅菌輸送バッグ／容器が、なお密封されてかつ冷却されているか、適切なドナー書類が存在するか、そして書類上のドナー番号が、組織を含む滅菌輸送バッグ上の番号と一致するか、確認される。組織を含む滅菌輸送バッグはそれから、さらなる処理の準備が整うまで、冷蔵庫内で保存される。
【００２０】
全体組織の処理（ステップ１３０）
組織をさらに処理する準備が整ったら、胎盤組織をさらに処理するために必要な滅菌用品が制御環境中のステージングエリアに集められて、制御環境の中へ導入するために準備がされる。一態様では、胎盤は室温で処理される。制御環境が製造フードならば、滅菌用品は開封されて従来の滅菌技術を用いてフード内へ置かれる。制御環境がクリーンルームならば、滅菌用品は開封されて滅菌ドレープで覆われたカート上に置かれる。作業表面全体は、従来の滅菌技術を用いて、一枚の滅菌ドレープで覆われており、滅菌用品および処理装置は、同様に従来の滅菌技術を用いて滅菌ドレープ上に置かれる。
【００２１】
処理装置は、従来かつ産業上認可された除染手順により除染されて、それから制御環境内に導入される。装置は、装置が組織標本に近接する可能性を最小限にするために戦略的に制御環境内に置かれ、さもなければ不注意に組織標本で汚染される。
【００２２】
つぎに、胎盤は滅菌輸送バッグから取り出されて、制御環境内の滅菌処理ボウルへと無菌的に移される。滅菌ボウルは、室温または室温付近の高張生理食塩水（例えば、１８％ＮａＣｌ）を含む。胎盤は、血塊を分離するのを助けるため、および、胎盤組織を室温に到達させるために、穏やかに揉まれて、それは、胎盤の構成要素がお互いから（例えば、羊膜および絨毛膜）、分離するのを促進する。周囲温度まで温められた後（例えば、約１０〜３０分後）、胎盤は滅菌処理ボウルから取り出されて、検査のために羊膜の膜層を下向きにして、処理トレイ上に平らに置かれる。
【００２３】
胎盤は、変色、破片または他の汚染、臭気、および損傷の兆候について調べられる。組織サイズも書き留める。この時点で、組織がさらなる処理にふさわしいかどうかについて決定がなされる。
【００２４】
つぎに、羊膜と絨毛膜が、注意深く分離される。一態様では、この処置に用いられる材料および装置は、処理トレイ、１８％生理食塩水、滅菌４×４スポンジ、および２つの滅菌ナルジェンジャー（Ｎａｌｇｅｎｅ  ｊａｒ）を含む。胎盤組織はそれから、羊膜が絨毛膜から分離されることができる領域（典型的には隅）を見つけるために精査される。羊膜は、絨毛膜上の薄い不透明の層として見られる。
【００２５】
線維芽細胞層は、１枚の滅菌ガーゼまたは綿棒で羊膜の両側にやさしく触れることで確認される。線維芽細胞層は、試験材料に張り付く。羊膜は、処理トレイの中に、基底膜層を下にして置かれる。また、先の尖っていない道具、細胞スクレーパー、または滅菌ガーゼを用いて、任意の残りの血液が取り除かれる。このステップは十分注意して行われるべきであり、また、羊膜を引き裂かないようにしなければならない。羊膜の清浄化は、いったん羊膜が外見上滑らかで乳白色になると完了する。
【００２６】
特定の態様では、線維芽細胞層を露出させるために、海綿層とも呼ばれる中間組織層は、羊膜から実質的に取り除かれる。取り除かれる中間組織層の量に関して、用語「実質的に取り除かれる」は、本明細書で、９０％より多い、９５％より多い、または９９％より多い中間組織層を羊膜から取り除くことを定義する。これは、羊膜から中間組織層を剥がすことにより行うことができる。あるいは、中間組織層は、ガーゼまたは他の適切なワイプで中間組織層を拭き取ることで、羊膜から取り除くことができる。結果として生じる羊膜は、続いて、下記の方法を用いて除染することができる。
【００２７】
特定の態様では、羊膜上に存在する上皮層は、羊膜の基底層を露出するために実質的に取り除かれる。取り除かれる上皮の量に関して、用語「実質的に取り除かれる」は、本明細書で、９０％より多い、９５％より多い、または９９％より多い上皮細胞を羊膜から取り除くことを定義する。羊膜層上に残っている上皮細胞の存在または不存在は、当技術分野で知られている技術を用いて評価することができる。例えば、上皮細胞層の除去後、処理ロットからの代表的な組織サンプルが、標準的な顕微鏡の検査スライド上に置かれる。組織サンプルはそれから、エオシンＹ染色を用いて染色されて、下記のように評価される。サンプルはそれからカバーされてスタンドに置かれる。いったん、染色するのに十分な時間が過ぎたら、拡大下で目視観測される。
【００２８】
上皮層は、当技術分野で知られている技術により取り除くことができる。例えば、上皮層は、細胞スクレーパーを用いて、羊膜から削り取ることができる。他の技術は、限定されないが、膜の凍結、細胞スクレーパーを用いた物理的除去、または上皮細胞を非イオン洗剤、陰イオン洗剤、およびヌクレアーゼに曝すことを含む。上皮が除去された組織はそれから、基底膜が傷つけられておらず損傷されていないことを確認するために検査される。このステップは、処理ステップの完了後かつ次のセクションに記載のように組織が脱水される前に行われる。例えば、代表的なサンプル移植片が、顕微鏡を用いた分析のために取り出される。組織サンプルは標準的なスライド上に置かれて、エオシンＹで染色されて、そして、顕微鏡下で観察される。上皮が存在すれば、玉石形の細胞として見られる。
【００２９】
本明細書に記載の方法は、羊膜中の全ての細胞構成要素を除去はしない。この技術は、当技術分野で「脱細胞化」と呼ばれる。脱細胞化は、一般に、上皮細胞および線維芽細胞を含む羊膜に存在する全ての細胞の物理的および／または化学的除去を含む。例えば、上皮細胞の除去は随意的だが、中間組織層が取り除かれるとしても羊膜間質層中に存在する線維芽細胞層は損傷されていない。
【００３０】
化学的除染（ステップ１４０）
上記で単離された羊膜および絨毛膜は、下記の技術を用いて化学的に除染することができる。一態様では、羊膜および絨毛膜は室温で除染される。一態様では、ステップ１３０で（例えば、中間組織層とともに、または伴わずに）生産される羊膜は、次のステップのために滅菌ナルジェンジャー中に置くことができる。一態様では、次の方法は、羊膜を清浄化するために用いることができる。ナルジェンジャーは無菌的に１８％の高張生理食塩水で満たされて密封される（または蓋で封がされる）。ジャーはそれから、ロッカープラットフォーム上に置かれて、３０〜９０分間撹拌されて、羊膜から汚染物質をさらに取り除く。ロッカープラットフォームが臨界的（ｃｒｉｔｉｃａｌ）環境（例えば、製造フード）内でなかった場合は、ナルジェンジャーは制御／滅菌環境へ戻されて開封される。滅菌鉗子を用いて、または無菌的に中身を静かに移して、羊膜は、１８％高張生理食塩水を含むナルジェンジャーからやさしく取り出されて、空のナルジェンジャー中に置かれる。羊膜を有する、この空のナルジェンジャーは、それから、無菌的に、予め混合された抗生物質溶液で満たされる。一態様では、予め混合された抗生物質溶液は、硫酸ストレプトマイシンおよび硫酸ゲンタマイシンのような抗生物質の混合物からなる。ポリミキシンＢ硫酸塩およびバシトラシンのような他の抗生物質、または、現在利用可能または将来利用可能である同様の抗生物質もまた、適切である。加えて、抗生物質溶液は、羊膜の温度を変化させないように、添加時に室温であることが好ましく、さもなければ羊膜を傷つける。羊膜および抗生物質を含む、このジャーまたは容器はそれから、密封され、または密閉されて、ロッカープラットフォーム上に置かれて、好ましくは６０〜９０分間、撹拌される。抗生物質溶液内での羊膜のそのような振動または撹拌は、組織から汚染物質および細菌をさらに取り除く。場合により、羊膜は、洗浄剤で洗浄することができる。一態様では、羊膜は、０．１〜１０％、０．１〜５％、０．１〜１％、または０．５％のＴｒｉｔｏｎ−Ｘ洗浄液で洗浄することができる。
【００３１】
ロッカープラットフォームが臨界的環境（例えば、製造フード）内でなかった場合は、羊膜および抗生物質を含むジャーまたは容器はそれから、臨界的／滅菌環境へ戻されて開封される。滅菌鉗子を用いて、羊膜はジャーまたは容器からやさしく取り出されて、滅菌水または標準の生理食塩水（０．９％生理食塩水）を含む滅菌ボウル中に置かれる。羊膜は、少なくとも１０〜１５分間、滅菌水／標準生理食塩水中に、適所に浸される。羊膜は、組織からの抗生物質溶液および任意の他の汚染物質の除去を促進するために、わずかに撹拌されてよい。少なくとも１０〜１５分後に、羊膜は、脱水およびさらなる処理がされる状態になる。
【００３２】
絨毛膜の場合は、以下の例示的な方法を用いることができる。羊膜から絨毛膜を分離して線維層から凝固血液を除去した後、絨毛膜は１８％生理食塩水中で１５分〜６０分間、すすぎがされる。第一のすすぎのサイクルの間、１８％生理食塩水は、溶液温度がおよそ４８℃であるように、実験用加熱板を用いて滅菌容器中で加熱される。溶液が静かに移され、絨毛膜組織は滅菌容器内に置かれて、静かに移された生理食塩水が容器に注がれる。容器は密封されて、ロッカープレート上に置かれて、１５分〜６０分間撹拌される。１時間の撹拌浴の後に、絨毛膜組織は取り出されて、さらに１５分〜６０分のすすぎのサイクルのために、第二の加熱撹拌浴中に置かれた。場合により、絨毛膜組織は、羊膜の除染のために、上記のように洗浄剤（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ洗浄液）で洗浄することができる。容器は密封されて、１５分〜１２０分間、加熱せずに撹拌される。絨毛膜組織はつぎに、脱イオン水で（２５０ｍｌの脱イオン水×４回）、各すすぎで激しく動かして洗浄される。組織は取り出されて、１×ＰＢＳ  ｗ／ＥＤＴＡ溶液の容器中に置かれる。容器は密封されて、８時間制御された温度下で、１時間撹拌される。絨毛膜組織は取り出されて、滅菌水を用いてすすぎがされる。目視検査は、任意の残っている変色した線維状血液材料を絨毛膜組織から除去するために行われた。絨毛膜組織は、褐色変色の兆候がない乳白色の外観を有するはずである。
【００３３】
脱水（ステップ１４５）
一態様では、羊膜、絨毛膜、中間組織層、またはその任意の組み合わせは、続いて微粉化される組織移植片（すなわち積層）に加工することができる。別の態様では、個々の羊膜、絨毛膜、中間組織層は、独立に脱水されて、続けて単独でまたは構成要素の混合物として微粉化されることができる。一態様では、組織（すなわち、個々の膜または移植片）は、化学的脱水に続く凍結乾燥により脱水される。一態様では、化学的脱水ステップは、組織に存在する残りの水を、実質的に（すなわち、９０％より多く、９５％より多く、または９９％より多く）、または完全に除去する（すなわち、組織を脱水する）ために、羊膜、絨毛膜、および／または中間層を、極性有機溶媒と十分な時間および量で接触させることにより行われる。溶媒はプロトン性または非プロトン性であってよい。本明細書で有用な極性有機溶媒の例は、限定されないが、アルコール類、ケトン類、エーテル類、アルデヒド類、またはそれらの任意の組み合わせを含む。具体的な非限定の例は、ＤＭＳＯ、アセトン、テトラヒドロフラン、エタノール、イソプロパノール、またはそれらの任意の組み合わせを含む。一態様では、胎盤組織は、室温で極性有機溶媒に接触させられる。さらなるステップは必要なく、組織は下記のようにして、直接に凍結乾燥することができる。
【００３４】
化学的脱水後、任意の残りの水と極性有機溶媒を除去するために、組織は凍結乾燥される。一態様では、凍結乾燥の前に、羊膜、絨毛膜、および／または中間層を、適切な乾燥用固定具上に置くことができる。例えば、一片または複数片の羊膜を適切な乾燥用固定具上に置くことができる。つぎに、絨毛膜は、羊膜の上部に置かれる。本態様では、羊膜／絨毛膜組織移植片が生産される。あるいは、一片の羊膜を第一の乾燥用固定具上に置くことができ、一片の絨毛膜を第二の乾燥用固定具上に置くことができる。乾燥用固定具は、好ましくは、胎盤組織を平たい形状で広げて置いて完全に受け入れるのに十分大きいサイズである。一態様では、乾燥用固定具は、デュポンが発明して販売するアセタール樹脂工学プラスチックのブランド名であるテフロンまたはデルリン製であり、そしてそれはまた、ジョージア州マリエッタのＷｅｒｎｅｒ  Ｍａｃｈｉｎｅ，Ｉｎｃ．から市販されている。熱耐性および切断耐性であり湿組織を受け入れるのに適切な形状に形成することが可能な任意の他の適切な材料もまた、乾燥用固定具に用いることができる。
【００３５】
いったん組織が乾燥用固定具上に置かれると、乾燥用固定具は凍結乾燥機内に置かれる。組織を脱水するための凍結乾燥機の使用は、加熱脱水のような他の技術に比べて、より効率的かつ完璧であり得る。一般に、胎盤組織中の氷晶形成は、組織中の細胞外マトリックスを傷つけ得るので避けることが望ましい。凍結乾燥前に胎盤組織を化学的に脱水することで、この問題は回避することができる。
【００３６】
別の態様では、脱水ステップは、組織を温めるステップを含む。一態様では、羊膜、絨毛膜、および／または中間層は適切な乾燥用固定具上に置かれて（個々の小片としてまたは上記の積層としてのいずれかで）、そして、乾燥用固定具は滅菌Ｔｙｖｅｘ（または同様の、通気性があり熱耐性で密封可能な材料）の脱水バッグ中に置かれて、密封される。通気性のある脱水バッグは、組織の乾燥が早すぎるのを防止する。複数の乾燥用固定具が同時に処理される場合は、それぞれの乾燥用固定具は、それ自身のＴｙｖｅｘバッグ中に置かれるか、または、複数の乾燥フレームをそれ上に保持するように設計された適切な取付フレーム中に置かれてそれからフレーム全体がより大きい一つの滅菌Ｔｙｖｅｘ脱水バッグ内に置かれて密封されるかの、いずれかである。
【００３７】
１つまたは複数の乾燥用固定具を含むＴｙｖｅｘ脱水バッグはそれから、およそ３５〜５０℃に予熱された非真空のオーブンまたはインキュベーター内に置かれる。Ｔｙｖｅｘバッグは、３０〜１２０分間、オーブン中にそのままにされる。一態様では、加熱ステップは、組織を過乾燥または燃焼はさせないが組織を十分に乾燥させるために、およそ４５℃の温度で４５分で行うことができる。任意の具体的なオーブンに関する具体的な温度および時間は、高度、オーブンの大きさ、オーブン温度の精度、乾燥用固定具に用いられる材料、同時に乾燥される乾燥用固定具の数、一つまたは複数の、乾燥用固定具のフレームが同時に乾燥されるのかどうか、などを含む他の因子に基づいて計算および調節される必要がある。
【００３８】
微粉化組成物およびその医薬組成物の調製（ステップ１５０）
いったん羊膜、絨毛膜、および／または中間組織層が、個々に、または組織移植片の形状で脱水されたら、脱水された組織（単数または複数）は微粉化される。微粉化組成物は、当技術分野で知られている道具を用いて生産することができる。例えば、Ｒｅｔｓｃｈ  Ｏｓｃｉｌｌａｔｉｎｇ  Ｍｉｌｌ  ＭＭ４００を、本明細書に記載の微粉化組成物を生産するために用いることができる。微粉化組成物中の材料の粒子サイズは、微粉化組成物の適用に応じて変化させることもできる。一態様では、微粉化組成物は、５００μｍ未満、４００μｍ未満、３００μｍ未満、または２５μｍ〜３００μｍ、２５μｍ〜２００μｍ、または２５μｍ〜１５０μｍの粒子を有する。特定の態様では、より大きい直径（例えば１５０μｍ〜３５０μｍ）を有する粒子が望ましい。
【００３９】
一態様では、微粉化は、機械的研削または破砕により行われる。別の態様では、微粉化は低温研削により行われる。この態様では、組織を含む研削ジャーは、研削プロセスの前および間、継続的に、統合冷却システムからの液体窒素で冷却される。したがって、サンプルは砕けやすくなり、揮発性の構成要素は保存される。さらに、羊膜、中間組織層、および／または絨毛膜中のタンパク質の変性は最小限化され、または防止される。一態様では、Ｒｅｔｓｃｈにより製造されるＣｒｙｏＭｉｌｌを、本態様で用いることができる。
【００４０】
本明細書に記載の微粉化構成要素を作成するために用いられる構成要素の選択は、組成物の最終用途に応じて変更することができる。例えば、個々の構成要素としての、羊膜、絨毛膜、中間組織層、またはそれらの任意の組み合わせをお互いに混合して、続いて微粉化することができる。別の態様では、１片または複数片の羊膜、絨毛膜、中間組織層、またはそれらの任意の組み合わせ（すなわち積層）からなる、１片または複数片の組織移植片を、微粉化することができる。さらなる態様では、１片または複数片の羊膜、絨毛膜、中間組織層、または任意の組み合わせからなる１片または複数片の組織移植片を、個々の構成要素として、羊膜、絨毛膜、中間組織層、またはそれらの任意の組み合わせと混合して、続いて微粉化することができる。
【００４１】
本明細書に記載の微粉化組成物を作成するために用いられる異なる構成要素の量は、微粉化組成物の適用に応じて変更することができる。一態様では、微粉化組成物が羊膜（中間組織層を有する、または有さない）と中間組織層とからなる場合、中間組織層に対する羊膜の重量比は、１０：１〜１：１０、９：１〜１：１、８：１〜１：１、７：１〜１：１、６：１〜１：１、５：１〜１：１、４：１〜１：１、３：１〜１：１、２：１〜１：１、または約１：１である。別の態様では、微粉化組成物が羊膜（中間組織層を有する、または有さない）と絨毛膜とからなる場合、羊膜に対する絨毛膜の重量比は、１０：１〜１：１０、９：１〜１：１、８：１〜１：１、７：１〜１：１、６：１〜１：１、５：１〜１：１、４：１〜１：１、３：１〜１：１、２：１〜１：１、または約１：１である。
【００４２】
羊膜、中間組織層、および絨毛膜に加えて、微粉化の前および／または後に、さらなる構成要素を組成物に加えることができる。一態様では、充填剤を加えることができる。充填剤の例は、限定されないが、心膜の同種移植片、無細胞真皮の同種移植片、血管構造（すなわち、臍静脈および臍動脈）から分離されるウォートン・ジェリー（Ｗｈａｒｔｏｎ’ｓ  ｊｅｌｌｙ）および周膜、精製された１型コラーゲン異種移植片、バイオセルロースポリマーまたはコポリマー、生体適合性合成ポリマーまたはコポリマーフィルム、精製された小腸粘膜下組織、膀胱無細胞マトリックス、死体筋膜、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【００４３】
別の態様では、微粉化の前および／または後に、生物活性剤を組成物に加えることができる。生物活性剤の例は、限定されないが、自家血液の採取と分離を用いた産物または期限切れの保存血由来の血小板濃縮物のいずれかの、血小板濃縮物由来の天然起源の増殖因子；骨髄穿刺液；濃縮ヒト胎盤臍帯血幹細胞、濃縮羊水幹細胞またはバイオリアクター中で増殖された幹細胞由来の幹細胞；または抗生物質を含む。生物活性剤とともに微粉化組成物を関心領域に適用する際、生物活性剤は時間をかけてその領域に運ばれる。したがって、本明細書に記載の微粉化粒子は、対象に投与される場合、生物活性剤および他の医薬品のデリバリーデバイスとして有用である。放出プロファイルは、とりわけ、微粉化組成物を作成するために用いられる構成要素の選択および粒子サイズに基づいて変更することができる。
【００４４】
さらなる態様では、羊膜は、中間組織層、絨毛膜、または第二の羊膜組織と架橋することができる。例えば、微粉化の前および／または後に、架橋剤を組成物（例えば、個々の構成要素としての、および／または、組織移植片としての、羊膜、絨毛膜、中間組織層、またはそれらの任意の組み合わせ）に加えることができる。一般に、架橋剤は非毒性および非免疫原性である。羊膜、中間組織層、および／または絨毛膜（またはそれらの組織移植片）が架橋剤で処理される場合、架橋剤は同一または異なってよい。一態様では、羊膜、中間組織層、および絨毛膜は、別々に架橋剤で処理することができ、または選択的に、羊膜、中間組織層、および絨毛膜は、同一の架橋剤で一緒に処理することができる。特定の態様では、羊膜、中間組織層、および絨毛膜は、２またはそれ以上の異なる架橋剤で処理することができる。羊膜、中間組織層、および絨毛膜を処理するための条件は変更することができる。他の態様では、羊膜、中間組織層、および／または絨毛膜は微粉化することができ、そして微粉化組成物は続いて架橋剤で処理することができる。一態様では、架橋剤の濃度は０．１Ｍ〜５Ｍ、０．１Ｍ〜４Ｍ、０．１Ｍ〜３Ｍ、０．１Ｍ〜２Ｍ、または０．１Ｍ〜１Ｍである。
【００４５】
架橋剤は通常、タンパク質と反応して共有結合を生じさせることが可能な、２またはそれ以上の官能基を有する。一態様では、架橋剤はタンパク質上に存在するアミノ基と反応することができる基を有する。そのような官能基の例は、限定されないが、ヒドロキシル基、置換または非置換アミノ基、カルボキシル基、およびアルデヒド基を含む。一態様では、架橋剤は、例えば、グルタルアルデヒドのようなジアルデヒドであってよい。別の態様では、架橋剤は、例えば、（Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド（ＥＤＣ）のようなカルボジイミドであってよい。別の態様では、架橋剤は、酸化デキストラン、ｐ−アジドベンゾイルヒドラジド、Ｎ−［α−マレイミドアセトキシ］スクシンイミドエステル、ｐ−アジドフェニルグリオキサル一水和物、ビス−［β−（４−アジドサリチルアミド）エチル］ジスルフィド、ビス−［スルホスクシンイミジル］スベレート、ジチオビス［スクシンイミジル］プロピオナート、ジスクシンイミジルスベレート、および１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミドハイドロクロライド、二官能性オキシラン（ＯＸＲ）、またはエチレングリコールジグリシジルエーテル（ＥＧＤＥ）であってよい。
【００４６】
一態様では、糖が、羊膜、中間組織層、および絨毛膜に存在するタンパク質と反応して共有結合を形成することができる場合、糖が架橋剤である。例えば、糖はメイラード反応によりタンパク質と反応することができ、それは糖類を還元することによりタンパク質上のアミノ基の非酵素的グリコシル化によって始まり、後に続く共有結合の形成をもたらす。架橋剤として有用な糖類の例は、限定されないが、Ｄ−リボース、グリセロ―ス、アルトロース、タロース、エルセオース、グルコース、リキソース、マンノース、キシロース、グロース、アラビノース、イドース、アロース、ガラクトース、マルトース、ラクトース、スクロース、セロビオース、ゲンチオビオース、メリビオース、ツラノース、トレハロース、イソマルトース、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【００４７】
特定の態様では、微粉化組成物を用いて三次元構築物を形成することができる。例えば、微粉化粒子を上述の架橋剤で処理して、それから特定の寸法を有するモールド中に配置することができる。あるいは、微粉化粒子をモールド中に配置して、続いて架橋剤で処理することができる。一態様では、架橋粒子を手作業で任意の所望の形状に形成することができる。他の態様では、１つまたは複数の接着剤を、モールド中に導入する前に、接着剤と混合することができる。そのような接着剤の例は、限定されないが、フィブリンシーラント、シアノアクリレート、ゼラチンとトロンビンの産物、ポリエチレングリコールポリマー、アルブミン、およびグルタルアルデヒドの産物を含む。理論に束縛されるものではないが、より小さい微粉化粒子からなる三次元構築物は、機械的な負荷に耐え得る、より高密度の産物を生じさせる。あるいは、より大きい微粉化粒子は、より低密度で圧縮特性を有する構築物を生じさせる。この特性は、特に不整形に適合する産物を有することが望ましい非負荷空隙充填において有用であり得る。三次元構築物は、１つまたは複数の本明細書に記載の生物活性剤を含むことができる。
【００４８】
他の態様では、本明細書に記載の微粉化組成物は、医薬組成物を製造するために、生体系または実在物が耐え得る任意の賦形剤で処方することができる。そのような賦形剤の例は、限定されないが、水、水性ヒアルロン酸、生理食塩水、リンガー液、ブドウ糖液、ハンクス溶液、および他の水性生理的平衡食塩水を含む。固定油類のような非水性ビヒクル、オリーブ油およびゴマ油のような植物油類、トリグリセリド類、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、およびオレイン酸エチルのような注射可能な有機エステル類もまた、用いることができる。他の有用な製剤は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランのような粘度増強剤を含む混濁液を含む。また、賦形剤は、等張性および化学的安定性を高める物質のような少量の添加剤を含んでよい。バッファーの例は、リン酸バッファー、ビカーボネートバッファーおよびトリスバッファーを含み、一方で、防腐剤の例は、チメロサール、クレゾール、ホルマリンおよびベンジルアルコールを含む。特定の態様では、投与方法に応じてｐＨを変更することができる。さらに、医薬組成物は、担体、増粘剤、希釈剤、防腐剤、表面活性剤などを本明細書に記載の化合物に加えて含むことができる。
【００４９】
医薬組成物は、当技術分野で知られている技術を用いて調製することができる。一態様では、組成物は、本明細書に記載の微粉化組成物を、薬学的に許容できる化合物および／または担体と混合することにより調製される。用語「混合する」は、化学的反応または物理的相互作用がないように、２つの構成要素を一緒に混ぜ合わせることを定義する。用語「混合する」は、また、化合物と薬学的に許容できる化合物との間の化学的反応または物理的相互作用も含む。
【００５０】
特定の場合での微粉化組成物の実際の好ましい量は、使用される特定の化合物、処方される特定の組成物、利用形態、および治療される特定の部位および対象によって変化することが理解されよう。所定の宿主への用量は、従来の考察を用いて、例えば、適切な従来の薬理学的プロトコルなどを用いて、対象化合物および公知の薬剤の異なった活性の慣例比較によって、決定することができる。医師、および、医薬品化合物の用量を決定する分野の当業者である調合師は、標準的な勧告に従って用量を決定することに問題ないであろう（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，Ｂａｒｎｈａｒｔ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（１９９９））。
【００５１】
本明細書に記載の医薬組成物は、局所的または全身性の治療が所望されるかどうか、および治療されるべき領域に応じて、多くの方法で投与することができる。一態様では、投与は、微粉化組成物が液体またはゲル中に処方される注射によることができる。他の態様では、微粉化組成物は、対象に、内部に適用されるように処方することができる。他の態様では、微粉化組成物は、局所的に（眼に、経膣的に、直腸に、鼻腔内に、経口で、または皮膚に直接的に、を含む）、適用することができる。
【００５２】
一態様では、微粉化組成物は、皮膚に直接的に適用される局所組成物として処方することができる。局所投与のための製剤は、エマルション、クリーム、水溶液、油類、軟膏、ペースト、ゲル、ローション、ミルク、フォーム、懸濁液およびパウダーを含むことができる。一態様では、局所組成物は、１つまたは複数の界面活性剤および／または乳化剤を含むことができる。
【００５３】
存在し得る界面活性剤（または表面活性物質）は、アニオン性、非イオン性、カチオン性および／または両性界面活性剤である。アニオン性界面活性剤の典型的な例は、限定されないが、せっけん、アルキルベンゼンスルホネート、アルカンスルホネート、オレフィンスルホネート、アルキルエーテルスルホネート、グリセロールエーテルスルホネート、．α．−メチルエステルスルホネート、スルホ脂肪酸、アルキルスルファート、脂肪族アルコールエーテルスルファート、グリセロールエーテルスルファート、脂肪酸エーテルスルファート、ヒドロキシ混合エーテルスルファート、モノグリセリド（エーテル）スルファート、脂肪酸アミド（エーテル）スルファート、モノ−およびジアルキルスルホサクシネート、モノ−およびジアルキルスルホサクシナメート、スルホトリグリセリド、アミドせっけん、エーテルカルボン酸およびその塩、脂肪酸イセチオネート、脂肪酸サルコシネート、脂肪酸タウリド、アシルラクチレート、アシルタルトレート、アシルグルタメートおよびアシルアスパルテートなどのＮ−アシルアミノ酸類、アルキルオリゴグルコシドスルファート、タンパク質脂肪酸凝縮物（特に小麦ベースの植物性産物）およびアルキル（エーテル）ホスフェートを含む。非イオン性界面活性剤の例は、限定されないが、脂肪族アルコールポリグリコールエーテル類、アルキルフェノールポリグリコールエーテル類、脂肪酸ポリグリコールエステル類、脂肪酸アミドポリグリコールエーテル類、脂肪族アミンポリグリコールエーテル類、アルコキシル化トリグリセリド類、混合エーテル類または混合ホルマール類、場合により部分的に酸化されたアルキル（アルケニル）オリゴグリコシドまたはグルクロン酸誘導体、脂肪酸Ｎ−アルキルグルカミド、タンパク質加水分解物（特に小麦ベースの植物性産物）、ポリオール脂肪酸エステル類、糖エステル類、ソルビタンエステル類、ポリソルベートおよびアミンオキシドを含む。両性または双性イオン性界面活性剤の例は、限定されないが、アルキルベタイン、アルキルアミドベタイン、アミノプロピオナート、アミノグリシネート、イミダゾリニウム−ベタインおよびスルホベタインを含む。
【００５４】
一態様では、界面活性剤は、脂肪族アルコールポリグリコールエーテルスルファート、モノグリセリドスルファート、モノ−および／またはジアルキルスルホサクシネート、脂肪酸イセチオネート、脂肪酸サルコシネート、脂肪酸タウリド、脂肪酸グルタメート、α−オレフィンスルホネート、エーテルカルボン酸、アルキルオリゴグルコシド、脂肪酸グルカミド、アルキルアミドベタイン、アンホアセタールおよび／またはタンパク質脂肪酸凝縮物であってよい。
【００５５】
双性イオン性界面活性剤の例はベタイン類を含み、例えば、Ｎ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムグリシネート類、例えばココアルキルジメチルアンモニウムグリシネート、Ｎ−アシルアミノプロピル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムグリシネート類、例えばココアシルアミノプロピルジメチルアンモニウムグリシネート、および、２−アルキル−３−カルボキシメチル−３−ヒドロキシエチルイミダゾリン類、（それぞれの場合においてアルキル基またはアシル基に８〜１８炭素原子を有する）、および、ココアシルアミノエチルヒドロキシエチル−カルボキシメチルグリシネートを含む。
【００５６】
一態様では、乳化剤は、以下から選択される非イオン性（ｎｏｎｉｏｎｏｇｅｎｉｃ）界面活性剤であってよい：８〜２２炭素原子を有する直鎖脂肪族アルコール類の上に、１２〜２２炭素原子を有する脂肪酸の上に、アルキル基に８〜１５炭素原子を有するアルキルフェノール類の上に、およびアルキルラジカルに８〜２２炭素原子を有するアルキルアミン類の上に、２〜３０ｍｏｌのエチレンオキシドおよび／または０〜５ｍｏｌのプロピレンオキシドが付加された産物；アルキル（アルケニル）ラジカルに８〜２２炭素原子を有するアルキルおよび／またはアルケニルオリゴグリコシド、およびそれらのエトキシ化アナログ；ヒマシ油および／または水素化ヒマシ油の上に１〜１５ｍｏｌのエチレンオキシドが付加された産物；ヒマシ油および／または水素化ヒマシ油の上に１５〜６０ｍｏｌのエチレンオキシドが付加された産物；１２〜２２炭素原子を有する不飽和直鎖または飽和分岐脂肪酸および／または３〜１８炭素原子を有するヒドロキシカルボン酸と、グリセロールおよび／またはソルビタンとの部分的エステル類、および１〜３０ｍｏｌのエチレンオキシドを有するそれらの付加物；１２〜２２炭素原子を有する飽和および／または不飽和、直鎖または分岐脂肪酸および／または３〜１８炭素原子を有するヒドロキシカルボン酸と、ポリグリセロール（平均自己縮合度２〜８）、トリメチロールプロパン、ペンタエリトリトール、糖アルコール類（例えばソルビトール）、アルキルグルコシド（例えばメチルグルコシド、ブチルグルコシド、ラウリルグルコシド）、およびポリグルコシド（例えばセルロース）との部分的エステル類、および１〜３０ｍｏｌのエチレンオキシドを有するそれらの付加物；ペンタエリトリトール、脂肪酸、クエン酸および脂肪族アルコール類の混合エステル類、および／または、６〜２２炭素原子を有する脂肪酸、メチルグルコースおよびポリオール類、好ましくはグリセロールまたはポリグリセロール、モノ−、ジ−およびトリアルキルホスフェート、およびモノ−、ジ−および／またはトリ−ＰＥＧアルキルホスフェートの混合エステル類およびそれらの塩類；ウールワックスアルコール；ポリシロキサン−ポリアルキル−ポリエーテルコポリマーおよび対応する誘導体；およびポリエチレングリコール−３０ジポリヒドロキシステアレートなどのブロックコポリマー。一態様では、乳化剤は、例えば、ポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールなどのポリアルキレングリコールである。別の態様では、乳化剤は１００Ｄａ〜５，０００Ｄａ、２００Ｄａ〜２，５００Ｄａ、３００Ｄａ〜１，０００Ｄａ、４００Ｄａ〜７５０Ｄａ、５５０Ｄａ〜６５０Ｄａ、または約６００Ｄａの分子量を有するポリエチレングリコールである。
【００５７】
別の態様では、乳化剤はポロキシマーである。一態様では、ポロキシマーは、両側にポリオキシエチレン（例えば、ポリ（エチレンオキシド））の２つの親水性鎖を有し中央がポリオキシプロピレン（例えば、（ポリ（プロピレンオキシド））の疎水性鎖からなる、非イオン性トリブロックコポリマーである。一態様では、ポロキシマーは、以下の化学式を有する。
【化１】
2014505111.tif 000003
【００５８】
ここで、ａは、１０〜１００、２０〜８０、２５〜７０、または２５〜７０、または５０〜７０であり；ｂは、５〜２５０、１０〜２２５、２０〜２００、５０〜２００、１００〜２００、または１５０〜２００である。別の態様では、ポロキシマーは、２，０００〜１５，０００、３，０００〜１４，０００、または４，０００〜１２，０００の分子量を有する。本明細書で有用なポロキシマーは、ＢＡＳＦ製の商品名Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）で売られている。本明細書で有用なポロキシマーの非限定的な例は、限定されないが、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８、Ｐ１０３、Ｐ１０５、Ｐ１２３、Ｆ１２７、およびＬ１２１を含む。
【００５９】
別の態様では、乳化剤は、１つまたは複数の脂肪族アルコールからなる。一態様では、脂肪族アルコールは、直鎖または分岐のＣ６〜Ｃ３５脂肪族アルコールである。脂肪族アルコール類の例は、限定されないが、カプリルアルコール（１−オクタノール）、２−エチルヘキサノール、ペラルゴンアルコール（１−ノナノール）、カプリックアルコール（１−デカノール、デシルアルコール）、ウンデシルアルコール（１−ウンデカノール、ウンデカノール、ヘンデカノール）、ラウリルアルコール（ドデカノール、１−ドデカノール）、トリデシルアルコール（１−トリデカノール、トリデカノール、イソトリデカノール）、ミリスチルアルコール（１−テトラデカノール）、ペンタデシルアルコール（１−ペンタデカノール、ペンタデカノール）、セチルアルコール（１−ヘキサデカノール）、パルミトレイルアルコール（シス−９−ヘキサデセン−１−オール）、ヘプタデシルアルコール（１−ｎ−ヘプタデカノール、ヘプタデカノール）、ステアリルアルコール（１−オクタデカノール）、イソステアリルアルコール（１６−メチルヘプタデカン−１−オール）、エライジルアルコール（９Ｅ−オクタデセン−１−オール）、オレイルアルコール（シス−９−オクタデセン−１−オール）、リノレイルアルコール（９Ｚ，１２Ｚ−オクタデカジエン−１−オール）、エライドリノレイルアルコール（９Ｅ，１２Ｅ−オクタデカジエン−１−オール）、リノレニルアルコール（９Ｚ，１２Ｚ、１５Ｚ−オクタデカトリエン−１−オール）エライドリノレニルアルコール（９Ｅ，１２Ｅ，１５−Ｅ−オクタデカトリエン−１−オール）、リシノレイルアルコール（１２−ヒドロキシ−９−オクタデセン−１−オール）、ノナデシルアルコール（１−ノナデカノール）、アラキジルアルコール（１−エイコサノール）、ヘンエイコシルアルコール（１−ヘンエイコサノール）、ベヘニルアルコール（１−ドコサノール）、エルシルアルコール（シス−１３−ドコセン−１−オール）、リグノセリルアルコール（１−テトラコサノール）、セリルアルコール（１−ヘキサコサノール）、モンタニルアルコール、クロチルアルコール（１−オクタコサノール）、ミリシルアルコール、メリシルアルコール（１−トリアコンタノール）、ゲジルアルコール（１−テトラトリアコンタノール）、またはセテアリルアルコールを含む。
【００６０】
一態様では、局所組成物を生産するために用いられる担体は、ポリエチレンおよび１つまたは複数の脂肪族アルコール類の混合物である。例えば、担体は、５０％〜９９％重量、７５％〜９９％重量、９０％〜９９％重量、または約９５％重量のポリエチレングリコールと、１％〜５０％重量、１％〜２５％重量、１％〜１０％重量、または約５％重量の脂肪族アルコールとからなる。さらなる態様では、担体は、ポリエチレングリコールとセチルアルコールとの混合物である。
【００６１】
また、局所組成物は、そのような組成物に典型的に存在するさらなる構成要素を含んでよい。一態様では、局所組成物は、１つまたは複数の以下の構成要素を含んでよい：脂肪類、ワックス類、真珠光沢ワックス類（ｐｅａｒｌｅｓｃｅｎｔ  ｗａｘｅｓ）、増ちょう剤（ｂｏｄｙｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、増粘剤、過脂肪剤、安定剤、ポリマー類、シリコーン化合物（ｓｉｌｉｃｏｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）、レシチン、リン脂質、生体活性成分、脱臭剤、抗菌剤、制汗剤、膨張剤、防虫剤、ヒドロトロープ（ｈｙｄｒｏｔｒｏｐｅ）、可溶化剤、防腐剤、香油類および染料類。これらの構成要素のそれぞれの例は、これらの構成要素に関して参照により援用される米国特許第８，０６７，０４４号に開示される。
【００６２】
本明細書に記載の微粉化組成物からなる局所組成物は、粒子が担体中に均一に分散するように十分な時間、粒子を担体とともに混合することにより調製することができる。担体が、２またはそれ以上の構成要素からなる場合は、微粉化組成物の添加前に、構成要素をお互いに混合することができる。局所組成物中に存在する微粉化組成物の量は、適用に応じて変更することができる。一態様では、微粉化組成物は、局所組成物の０．５％〜２０％重量、１％〜１０％重量、２％〜５％重量、または約３％重量である。本明細書に記載の局所組成物を作成するための例示的な方法は、実施例に記載される。
【００６３】
ＩＩ．微粉化組成物の適用
本明細書に記載の微粉化組成物は、非常に多くの医療用途がある。一態様では、羊膜および中間組織層からなる微粉化組成物は、皮膚充填剤として使用することができる。皮膚は表皮、真皮、および皮下の三層から構成される。表皮は外層であり、外的環境に対するバリアとして機能する。真皮は、コラーゲンおよびエラスチン線維である構造要素を含む、皮膚の二番目の層である。コラーゲンは皮膚に強度を付与し、一方でエラスチン線維は皮膚に弾性を付与する。表皮と真皮の間は、真皮表皮ジャンクション（ｄｅｒｍａｌ−ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｊｕｎｃｔｉｏｎ）と呼ばれる領域である。それは、乳頭間隆起（ｒｅｔｅ  ｒｉｄｇｅｓ）と呼ばれる指の様な突起を形成して、真皮中の血管に曝される表皮の表面領域を増加させて、組み合わさる。表皮細胞は、その栄養を、真皮中の血管から受け取る。皮膚の最後の層は、脂肪細胞を含む皮下組織である。これらの脂肪細胞は、皮膚をふっくら若々しく見せる。それはまた、身体に保温性を付与する。
【００６４】
人は年を取るにつれて、皮膚は、いずれしわとなる多くの変化を経験する。表皮細胞の数の減少は、皮膚を著しくより薄く見えるようにさせて、皮膚がそれ自身修復するのをより困難にする。真皮層はより薄くなるだけでなく、コラーゲンの生産がより少なくなり、エラスチン線維は消耗して弾性が減少する。皮膚の足場のこれらの変化は、皮膚に、しわ、および、たるみを生じさせる。真皮表皮ジャンクションの乳頭間隆起は押し潰され、皮膚をより弱く、より切れやすくする。押し潰された乳頭間隆起は、真皮と接触する表皮の表面領域を減少させ、表皮が利用できる栄養量の減少をもたらす。また、これは、皮膚の通常の修復プロセスを妨げる。皮下層では、脂肪細胞は年齢とともに小さくなり、より顕著なしわとたるみをもたらす。
【００６５】
羊膜は、ＥＧＦ、ｂＦＧＦ、およびＰＤＧＦのような、創傷治癒および再上皮形成を促進する成長因子を含む。理論に束縛されるものではないが、皮膚の上皮層が破壊された場合の、本発明に記載の微粉化組成物からなる局所組成物の適用は、治癒を促進するために成長因子を損傷部位に直接運ぶことに効果的であり得る。羊膜が水分に結合して膨張できるようにするＩＶ、ＶおよびＶＩＩ型コラーゲンが存在するため、羊膜は優れたＥＣＭである。
【００６６】
同様に、羊膜の中間組織層は糖タンパク質およびプロテオグリカンから主になり、それはまた、中間組織層が水分と結合できるようにする。このように、皮膚または創傷に適用される場合の微粉化粒子は、皮膚中の水分を保持するのに役立ち、それは創傷治癒を促進する。例えば、創傷治癒カスケードにおける細胞遊走は、親水性環境中で促進される。中間層もまた、Ｉ、ＩＩＩ、およびＩＶ型コラーゲンからなる。Ｉ型コラーゲンは、細胞付着のための主要な生物力学的足場および高分子の固定場を提供することにより、皮膚に機械的強度を提供する。ＩＩＩ型コラーゲンは弾性を提供する。したがって、真皮深層に中間組織層組織を加えることにより、弾性および皮膚足場を増加させるだけでなく、より柔らかく感じさせ得る。皮膚に有益な、中間組織層中の別の重要な構成要素は、プロテオグリカンである。上述のように、プロテオグリカンは、中間組織層が水分をそのように大幅に結合するようにさせて、かなり膨張させる。上述のとおり、皮下層中の脂肪細胞は年齢とともに、より小さくなって、より顕著なしわをもたらす。このように、本明細書に記載の微粉化組成物からなる皮膚充填剤を注入することにより、皮膚をより著しくふっくらと若々しく見せることができる。
【００６７】
また、局所組成物の担体の選択は、皮膚中に親水性環境を創造することができ、それは創傷治癒を高める。また、微粒子のサイズと寸法は、皮膚の創傷治癒を高めることができる。例えば、２０μｍ〜１００μｍ、または２５μｍ〜７５μｍの粒子サイズを有する微粒子は、皮膚適用に効果的であり得る。このように、一態様では、本明細書に記載の局所組成物は、対象での、しわ形成を予防または減少させるのに役立つことができる。別の態様では、局所組成物は、レーザーリサーフェイシング（ｌａｓｅｒ−ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）後の皮膚層の再上皮形成を高めることができる。本明細書に記載の局所組成物は、単独で、または、例えば保湿剤、ビタミン（Ａ）クリーム、ビタミン（Ｅ）、組み換えヒアルロン酸、またはヒト、動物、および自然の油類（例えば、ティーツリーオイル（ｔｅｅ  ｔｒｅｅ  ｏｉｌ））などの他の皮膚治療と組み合わせて、用いることができる。
【００６８】
他の態様では、本発明に記載の移植片は、整形外科の適用（すなわち、スポーツ医学）で用いることができる。スポーツ医学は、活発な人およびスポーツ選手において、外傷に起因する関節中または関節周辺の様々な軟組織損傷、または運動の繰り返しによりもたらされる慢性状態の修復および再建を含む。例えば、スポーツ医学は、制限されないが、肩、肘、足、足首、手および手首と関連する、様々な異なる損傷の治療を含む。一態様では、微粉化組成物が液体中に処方される場合、炎症（例えば、テニス肘、手根管（ｃａｒｐｅｌ  ｔｕｎｎｅｌ）など）を緩和するために、関節嚢に注入されてよい。他の態様では、微粉化組成物がゲルまたはペーストとして処方される場合、医学的利益を与えるために、組成物は関節面に適用されてよい。例えば、微粉化組成物は、関節面の炎症または腫れを軽減するのに役立つことができる。他の態様では、微粉化組成物は、軟骨細胞を修復および／または再生するのに役立つことができる。さらなる態様では、本明細書に記載の微粉化組成物は、骨膜の修復での補助；破裂性／損傷性嚢の修復の補助；骨修復中の空隙充填材料の固定の補助；のような他の整形外科の適用において、または対象の四肢に関する適用（例えば、小骨の固定のための抗−癒着バリア、金属めっきまたは金属製品が用いられる場合の抗−癒着バリア、または、破裂性／損傷性嚢の修復の補助）において、用いることができる。
【００６９】
一態様では、本明細書に記載の微粉化組成物は、創傷治癒を高める、または改善するのに有用である。日常ベースで医師を訪れる創傷のタイプはさまざまである。急性の創傷は、外科的処置、外傷および火傷に起因する。慢性の創傷は、他の点では健康な人において、治癒に比べて閉じるのが遅い創傷である。患者を悩ませる慢性の創傷のタイプの例は、糖尿病性足部潰瘍、静脈性下腿潰瘍、圧迫潰瘍、動脈性潰瘍、および感染する手術創傷を含む。
【００７０】
外傷性創傷を治療する時の医師の目標は、最小限の瘢痕および感染で、創傷の領域における自然な機能を患者が保持するようにしながら創傷を治療することである。創傷が感染する場合、手足または生活の喪失を導き得る。ほとんどは、何事もなく医師はこれらの患者を治療する。しかしながら、慢性の創傷を扱う医師は、手足または生活の喪失を導き得る感染リスクを最小限化するために、できるだけ素早く創傷を閉じることを主に心掛ける。慢性の創傷は、治癒カスケードを悪化または遅らせる共存症を有する患者での創傷である。一態様では、本明細書に記載の微粉化組成物は、炎症を軽減して治癒を高めるのを助けるために、必須の創傷治癒因子、細胞外マトリックスタンパク質および炎症性メディエータを運搬して瘢痕組織形成を軽減する、組織再生テンプレートとして機能することができる。
【００７１】
別の態様では、本明細書に記載の微粉化組成物は、創傷治癒を高め、外科的切開の結果としての瘢痕形成を防ぐために用いることができる。一態様では、微粉化組成物は、開いた切開部に適用して、その後に切開部を縫合することができる。例えば、微粉化組成物は、切開部内に組成物をふりかけることにより、または、シリンジ、小さなベローデバイス（ｂｅｌｌｏｗｓ  ｄｅｖｉｃｅ）、または他の関連するデバイスを用いて切開部内に組成物を注入することにより、開いた切開部に直接適用することができる。微粉化組成物は、外科的処置によって大きい切開がされた場合に特に有用である。そのような処置の例は、対象の背中に沿った大きな切開が必要な脊柱側弯の治療を含む。一態様では、上皮層が損傷されていない羊膜／絨毛膜の積層からなる微粉化組成物が、最小限の瘢痕での外科的切開の治癒に有用である。創傷治癒および瘢痕形成予防に関して、本明細書に記載の微粉化組成物は、他の創傷治癒プロダクトと組み合わせて用いることができる。例えば、微粉化組成物の前駆体である、本明細書に記載の任意の組織移植片を、微粉化組成物が適用された後に、創傷に適用することができる。
【００７２】
別の態様では、本明細書に記載の微粉化組成物は、手術後に起こる脊椎および周辺領域への合併症を対処する、または軽減するのに有用である。急性および慢性の脊椎損傷および脊椎痛は、脊柱における外傷および／または退行性変化に起因し得る。退行性の患者に関しては、通常、患者の症状および病状に応じた可能な手術が施される。保存療法が失敗した場合の最初の外科的選択肢は、椎弓切除術またはマイクロ椎間板切除術（ｍｉｃｒｏ−ｄｉｓｃｅｃｔｏｍｙ）である。これらの低侵襲的処置は、痛みの発生または脊柱管狭窄を緩和することを目的とする。疾患が進行する場合、制限されないが、脊椎固定を含む他の手術が必要となり得る。脊椎固定は、前方（腹部を通って前から）、後方（背中から）、または側部（脇を通って）で、様々な方法を通して達成されてよい。それぞれの方法は、利点と欠点がある。目標は典型的に、椎間板を取り除き、板の高さを元に戻して、動きおよびさらなる劣化を制限するために２つの脊椎骨を一緒に固定させることである。外科医および患者の外科的選択肢には、椎間板を人口板で置き換えることもある。脊椎外傷は典型的に、脊椎レベル（ｓｐｉｎｅ  ｌｅｖｅｌｓ）を固定する（ｆｕｓｉｎｇ）ことにより治療され、または、椎骨が破砕している場合は、外科医は椎体切除術（ｃｏｒｐｅｃｔｏｍｙ）をして、影響を受けたレベルにわたって固定することを選択し得る。
【００７３】
一態様では、本明細書に記載の微粉化組成物は、脊椎上または脊椎付近の瘢痕形成を予防または軽減し、および硬膜裂傷をシーリングするのに有用である。手術後の脊椎上または脊椎付近の瘢痕形成は非常に衰弱性（ｄｅｂｉｌｉｔａｔｉｎｇ）であり得て、そして場合により、上記の症状を対処するための手術をその後に必要とする。また、用語「抗−癒着」は、当技術分野において、脊椎上または脊椎付近の瘢痕組織の予防を指すためにも用いられる。他の態様では、本明細書に記載の微粉化組成物は、組成物が周囲の手術部位由来の手術後の外傷から脊髄硬膜を保護する、保護バリアとして用いることができる。例えば、組成物は、椎骨などの、切れたばかりの骨による鋭いエッジによって引き起こされる、脊髄硬膜への損傷を防ぐことができる。他の態様では、微粉化組成物は、前方腰椎椎体間固定術（ａｎｔｅｒｉｏｒ  ｌｕｍｂａｒ  ｉｎｔｅｒｂｏｄｙ  ｆｕｓｉｏｎ）、後方腰椎椎体間固定術（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｌｕｍｂａｒ  ｉｎｔｅｒｂｏｄｙ  ｆｕｓｉｏｎ）、経椎間孔腰椎椎体間固定術（ｔｒａｎｓ−ｌｕｍｂａｒ  ｉｎｔｅｒｂｏｄｙ  ｆｕｓｉｏｎ）、前方頸部椎間板切除術および固定術（ａｎｔｅｒｉｏｒ  ｃｅｒｖｉｃａｌ  ｄｉｓｃｅｃｔｏｍｙ  ａｎｄ  ｆｕｓｉｏｎ）、マイクロ椎間板切除術、脊髄硬膜修復のため、および脳脊髄液漏（ＣＳＦ  ｌｅａｋａｇｅ）を防ぐための硬膜シーラントとして、用いることができる。
【００７４】
外科的処置に応じて、微粉化組成物は、脊髄硬膜、神経根を含む脊椎の周辺領域、またはそれらの組み合わせに、直接適用することができる。椎骨の独特な構造のために、微粉化組成物は、対象における適切な位置に配置し、および、付けることができる。また、微粉化組成物は、影響を受けた領域への露出のために骨髄層が取り除かれている、近位および遠位のバリアカバレッジを与えることができる。
【００７５】
微粉化組成物は、脊椎と関連する様々な外科的処置に起因し得る瘢痕形成を予防または軽減するのに有用である。微粉化組成物は首、背中、または腰における任意の処置後に用いることができる。適用に応じて、羊膜の上皮は実質的に取り除かれてよい。例えば、椎弓切除術または椎間板切除術などの後処置では、羊膜の上皮層は実質的に取り除かれる。上皮細胞層の除去は、羊膜の基底膜層を露出させて、細胞シグナル特性を増大させる。この上方制御の応答は、細胞の遊走および抗−炎症性タンパク質の発現を高めて、線維症を阻害する。脊髄硬膜は、後処置に続き典型的に保護されないままである。
【００７６】
他の態様では、羊膜の上皮細胞層は取り除かれない。例えば、前方腰椎椎体間固定術（ＡＬＩＦ）や経椎間孔椎体間固定術（Ｔｒａｎｓｆｏｒａｍｉｎａｌ  Ｉｎｔｅｒｂｏｄｙ  Ｆｕｓｉｏｎ）（ＴＬＩＦ）のような前処置または改良された前処置では、羊膜の上皮層は取り除かれず、損傷されていない。これらの態様では、微粉化組成物は、腹膜、より大きな血管、および腹部の筋肉組織からの隔離を維持することにより脊椎の手術部位にさらなる保護を与える。微粉化組成物は、癒着および瘢痕に対する、減少した摩擦解剖学的バリア（ｆｒｉｃｔｉｏｎ  ａｎａｔｏｍｉｃａｌ  ｂａｒｒｉｅｒ）としての役割を果たす。例えば、微粉化組成物は、瘢痕組織が大きな血管を脊椎に結合させるのを防ぐことができる。これは、脊椎の手術後での一般的な問題であり、これを対処するための第二の外科的処置が必要である。
【００７７】
他の態様では、液体、ゲル、またはパテとして処方される微粉化組成物は、歯肉炎、歯周炎、粘膜炎、およびインプラント周囲炎（ｐｅｒｉ−ｉｍｐｌａｎｔｉｔｉｓ）に関連する炎症を軽減するための口腔外科、新しい骨、歯周靭帯、およびセメント質を再生するための、歯科インプラント周囲の欠失した骨を再生するための、骨の輪郭削り（ｏｓｓｅｏｕｓ  ｃｏｎｔｏｕｒｉｎｇ）に続く臨床的アタッチメント（ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）の量を増加するための、歯周の骨内欠損（ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ  ｉｎｔｒａ−ｂｏｎｙ  ｄｅｆｅｃｔｓ）の治療、歯肉退縮の治療、サイズおよび厚みを増大させるために、再建手術を介すかまたは直接乳頭を注入するかのいずれかによる歯間乳頭の再生、歯槽垂直および水平骨増大術（ａｌｖｅｏｌａｒ  ｖｅｒｔｉｃａｌ  ａｎｄ  ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ  ｂｏｎｅ  ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎｓ）におけるバリア膜または生体適合性メッシュの上部に適用して、治癒を助けるために最初の閉鎖（ｐｒｉｍａｒｙ  ｃｌｏｓｕｒｅ）後に手術部位上に適用して、歯肉退縮の治療での軟組織移植片の配置前、配置中、または配置後のいずれかに、自家移植片、異種移植片、アロプラスト（ａｌｌｏｐｌａｓｔ）、死体同種移植片または胎盤の同種移植片軟組織移植片の上に適用して、臨床的アタッチメントの量を増加して、歯および歯科インプラントの周辺の歯肉増強、角質化した組織の領域を拡大させて、骨再生誘導法（ｇｕｉｄｅｄ  ｂｏｎｅ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）で覆っている歯肉組織を分厚くさせて、新しい骨、歯周靭帯、およびセメント質を再生するための骨内欠損の治療での、インプラント周辺の欠失した骨を再生するための骨再生誘導法での使用のための、配置前、配置中、または配置後のいずれかに、アロプラスト、異種移植片、およびまたは死体骨移植片と混合して、部位の保持、フェネストレーション（ｆｅｎｅｓｔｒａｔｉｏｎ）および披裂障害（ｄｅｈｉｓｃｅｎｃｅ  ｄｅｆｅｃｔｓ）、一次および二次歯槽堤増大術、洞増大（ｓｉｎｕｓ  ｅｌｅｖａｔｉｏｎｓ）、および歯肉弁穿孔（ｇｉｎｇｉｖａｌ  ｆｌａｐ  ｐｅｒｆｏｒａｔｉｏｎｓ）に用いてよい。象牙質および歯髄組織に関する適用では、歯髄組織の炎症の軽減、歯内の病変の治療、歯髄の再生、そして、歯内治療での閉塞に先立って凹んだ歯髄チャンバー内へ注入される。口腔病変での炎症を軽減するための口腔粘膜組織に関する適用では、口腔病変の治療であり、疾患または外傷性損傷により失われたより多い量の粘膜組織を置換するための、軟組織移植片の配置前、配置中、または配置後のいずれかに、自家移植片、異種移植片、アロプラスト、死体同種移植片または胎盤同種移植片軟組織移植片の上に適用される。
【００７８】
一態様では、微粉化組成物は、末梢神経を修復するために用いることができる。微粉化組成物は、治癒する神経上の瘢痕形成を防ぐために、修復された神経上に置くことができる。また、微粉化組成物は、修復がうまく進行するための保護的な閉鎖環境を提供することができる。他の態様では、微粉化組成物は、神経末端が再接近し得ない保護的環境中に神経が伸びるのを導くための神経再生チューブ中に製造することができる。ここで、末端が他の軟組織に妨害されることなく自由に接することができる場合、神経は一定の距離次第で再度結合することができる。別の態様では、微粉化組成物は、前立腺切除術の処置後に神経束を束ねるために用いることができる。これらの神経は、勃起機能および排泄抑制能力を司る。微粉化組成物は、瘢痕および場合により神経を傷つけることから神経を守るために、神経に適用することができる。
【００７９】
別の態様では、微粉化組成物は、女性の受胎能に関与し得る疾患の治療、生殖器系に起因する痛みまたは生殖器系におけるガンに関する産婦人科（ＯＢ／ＧＹＮ）の外科的処置に用いることができる。これらの処置は、子宮筋腫の除去（筋腫切除術）、卵巣嚢胞の除去、卵管結紮、子宮内膜症の治療、いくつかのガン性または非ガン性腫瘍の除去、および膣スリング（ｖａｇｉｎａｌ  ｓｌｉｎｇｓ）を含む。これらの処置は、経膣の、腹部の、または腹腔鏡の手法により達成されてよい。
【００８０】
微粉化組成物は、外科的処置後の生殖器系における瘢痕組織の量を軽減するためのパッチとして用いることができる。瘢痕組織は、線維組織の別形態であり、そしてまた、受胎能の問題に寄与し得る。卵巣上または卵管中の瘢痕の量を最小限に抑える能力は、手術後の受胎能および痛みさえにも役立ち得る。別の態様では、微粉化組成物は、重症の子宮内膜症の治療後に子宮壁を補強するために、および、患者の妊娠する能力を高めるために、用いることができる。さらなる態様では、微粉化組成物は、卵巣嚢胞の除去後の抗−癒着バリア、または膣壁びらんの修復として用いることができる。
【００８１】
他の態様では、微粉化組成物は心臓適用に用いることができる。狭心症は心筋の虚血（血液の不足、したがって、酸素供給の欠乏）による、一般に冠動脈（心臓の血管）の閉塞または攣縮による、重度の胸部痛である。狭心症の主な原因である冠動脈疾患は、心臓の動脈のアテローム性動脈硬化に起因する。アテローム硬化性の血塊を除去するための様々な開放性の心臓および血管の外科処置は、血管の修復、再建および閉鎖、および外科的欠損を閉鎖させてパッチするための再生組織パッチの補助を必要とする。また、心臓バイパス移植片および心臓欠陥の再建（心臓切開の外科的処置の一環として）は、パッチまたは移植片から、軟組織の弱さに対する支え（ｂｕｔｔｒｅｓｓ）、適切な組織の欠損がある場合は組織置換、および心臓それ自身への癒着を軽減する可能性も与えるという、恩恵を受けることができる。本明細書に記載の微粉化組成物は、頸動脈修復、冠動脈バイパス移植術、先天性心疾患、心臓弁修復、および血管修復（すなわち末梢血管）などの手術および合併症に起因する血管および心臓の欠陥の修復を助けるためのパッチとして、用いることができる。
【００８２】
本明細書に記載の微粉化組成物は、全身の外科処置で用いることができる。例えば、全身の外科的処置は、腹腔に関する処置を含む。これらは、腸、胃、大腸、肝臓、胆嚢、虫垂、胆管および甲状腺を含む。処置は、ヘルニア、ポリープ切除、ガン除去、結腸クローン病および潰瘍性大腸炎の外科的処置を含んでよい。これらの処置は、開腹または腹腔鏡下で行われてよい。他の態様では、微粉化組成物は、吻合の閉鎖、吻合のための抗−癒着バリア、またはヘルニア修復のための抗−癒着バリアを促進するために用いることができる。
【００８３】
他の態様では、微粉化組成物は耳鼻咽喉科（ＥＮＴ）処置で用いることができる。鼓室形成は、鼓膜（ｅａｒｄｒｕｍ）（鼓膜（ｔｙｍｐａｎｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ））および／または中耳の小骨の再建のために行われる。穿孔された鼓膜の治療のための、様々な選択肢が存在する。穿孔が最近の外傷による場合は、耳、鼻および喉の多くの専門家は、自然に治癒するかどうか観察して見ることを選択するだろう。これが生じないか、または、頻回の再度の穿孔が同一エリアに生じる場合は、手術が検討され得る。鼓室形成は、外耳道を通して、または耳の後ろの切開により行うことができる。ここで、外科医は、耳周辺の皮膚の下の組織から移植片を摘出して、そして、鼓膜を再構築するためにそれを用いる。本明細書に記載の微粉化組成物は、患者自身の組織の摘出と関連するさらなる外傷を防ぐために用いることができ、そして手術時間を短縮する。他の態様では、微粉化組成物は、アデノイド切除後の創傷被覆、扁桃摘出後の創傷被覆、またはシュナイダー膜（Ｓｎｉｄｅｒｉａｎ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）の促進修復として用いることができる。
【００８４】
他の態様では、本明細書に記載の微粉化組成物は、形成外科処置で用いることができる。瘢痕形成術（ｓｃａｒ  ｒｅｖｉｓｉｏｎ）は、瘢痕の見た目を改善または軽減するための手術である。それはまた、機能を回復させ、および、損傷、創傷、または以前の手術に起因する皮膚変化（美観を損なうこと）をなおす。瘢痕組織は、損傷または手術後の皮膚治癒として形成する。瘢痕の量は、創傷の大きさ、深さ、および部位；人の年齢；遺伝；および皮膚特性含む皮膚の色（色素沈着）により決定され得る。手術は、瘢痕の切除および欠損の注意深い閉鎖を含む。一態様では、本明細書に記載の微粉化組成物は、瘢痕の治癒および予防；および軟組織の縁の丁寧な近似（ｃａｒｅｆｕｌ  ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｏｆｔ−ｔｉｓｓｕｅ  ｅｄｇｅｓ）が達成不可能であって瘢痕組織が生じ得るケロイドまたはガンの修復（ｒｅｖｉｓｉｏｎ）／除去に役立つパッチとして用いることができる。さらに、微粉化組成物の抗炎症性特性は、その上、治癒を高めることができる。
【００８５】
他の態様では、微粉化組成物は、眼科の適用（例えば、眼表面修復のオン−レイ（ｏｎ−ｌａｙ）移植片）または泌尿器科の適用（例えば、精管復元術の間の精管の閉鎖を促進する、または外傷により生じる精管の閉鎖を促進する）において用いることができる。
【００８６】
一態様では、微粉化組成物は、脳硬膜の修復および置換、小帯牽引の除去、失われた膝蓋骨組織の再生、空洞中のシュナイダー膜、歯科インプラント周辺の軟組織の修復、口腔前庭形成術、および組織再生誘導法において用いることができる。
【００８７】
微粉化組成物を作成するために用いられる構成要素の選択に加えて、粒子のサイズもまた、それらの適用に応じて変更することができる。特定の態様では、より大きな粒子サイズを有する微粉化粒子を、様々な適用に用いることができる。例えば、１５０μｍ〜３５０μｍの粒子サイズを有する微粉化粒子（例えば、微粉化羊膜／絨毛膜の組織移植片）は、瘢痕形成を軽減しまたは予防して軟組織治癒を高めるために望ましい創傷治癒において効果的であり得る。例えば、微粉化粒子は、創傷中に直接的に注入することができる。様々な異なる創傷を、微粉化粒子で治療することができる。一態様では、微粉化粒子は、皮膚創傷を治癒するために用いることができる。微粉化粒子は、対象の皮膚組織中の任意の深さ（例えば、皮膚の下、真皮の下など）に投与することができる。一態様では、微粉化粒子は、治癒糖尿病性潰瘍（例えば、足部潰瘍）の治癒に有用である。他の態様では、皮膚創傷は、トラッキング創傷（すなわち、筋肉組織に及ぶ深い創傷）であり得る。したがって、より大きい微粉化粒子は、深い、大きい創傷のための空隙充填材料として、筋肉内に投与することができる。
【００８８】
また、より大きい表面領域を有する、より大きい粒子は、より小さい粒子と比較して、より多くの流体を吸収することが可能である。理論に束縛されるものではないが、より大きい粒子サイズは、血液または他の生理学的流体によって創傷部位から粒子が移動する可能性を防止または最小限化する。この特性は、創傷治癒をさらに高めることができる。より大きい粒子が流体を吸収する能力は、粒子を止血剤にして、粒子は創傷中の血液および他の生理学的流体との凝固を促進することができる。このように、より大きい粒子は、制限されないが、生理食塩水、血液、増殖因子溶液などを含む、注入に適切な任意の賦形剤と混合および再水和することができる。
【００８９】
上記の利点に加えて、より大きい微粉化粒子が流体を吸収する能力は、それらを様々な物質（例えば、本明細書に記載の任意の生物活性剤）と混合することを可能にして、高い活性を有する医薬組成物を生じさせる。例えば、より大きい粒子をさらなる止血剤と混合して創傷における凝血を高めることができる。他の態様では、より大きい粒子は、患者由来の骨のような自家材料（ａｕｔｏｇｅｎｅｏｕｓ  ｍａｔｅｒｉａｌ）と混合することができる。ここで、微粉化粒子は骨膜界面へ直接投与することができる。他の態様では、より大きい微粉化粒子をフィブリン糊と混合して創傷治癒を高めることができる。微粉化粒子は、フィブリン糊の能力を高めて、フィブリン血塊を形成して組織修復を高めることができる。このように、より大きい粒子は、フィブリン糊と組み合わせて、創傷を閉鎖するために典型的に用いられる縫合の必要性をさらに減らすことができる。
【００９０】
本明細書に記載の微粉化組成物は対象の組織に直接適用することができるが、それらはまた、続けて対象に適用することのできる創傷被覆材（ｗｏｕｎｄ  ｄｒｅｓｓｉｎｇ）に適用することができる。例えば、創傷被覆材は、ガーゼ、絆創膏またはラップ、または対象へ直接適用することのできる微粉化組成物を含むことができる、または付けることができる任意の他の適切な物であり得る。
【００９１】
他の態様では、本明細書に記載の微粉化組成物は、例えば、移植可能な医療デバイスのような医療デバイスに適用することができる。移植可能な医療デバイスは、本明細書に記載の１つまたは複数の微粉化組成物でコーティングして、生組織において用いられる場合に（例えば、優れた創傷治癒および瘢痕の予防）、有益な特性をデバイスに与えることができる。
【００９２】
本明細書に記載の微粉化組成物でコーティングすることのできる適切な移植可能なデバイスの例は、制限されないが、冠動脈ステント、末梢ステント、移植片（例えば、歯科、整形外科、脊髄）、カテーテル、動脈−静脈移植片、バイパス移植片、ペースメーカーおよび除細動器リード（ｄｅｆｉｂｒｉｌｌａｔｏｒ  ｌｅａｄｓ）、吻合クリップ、動脈の閉鎖デバイス、卵円孔開存閉鎖デバイス、および薬物輸送バルーンを含む。移植可能なデバイスは、生体安定性および生体吸収性材料を含む、任意の適切な生体適合性材料で作成することができる。適切な生体適合性金属性材料は、限定されないが、ステンレススチール、タンタル、チタン合金類（ニチノールを含む）、およびコバルト合金類（コバルト−クロム−ニッケルおよびコバルト−クロム−タングステン合金を含む）を含む。適切な非金属製生体適合性材料は、限定されないが、ポリアミド類、フルオロポリマー類、ポリオレフィン類（すなわちポリプロピレン、ポリエチレンなど）、非吸収性ポリエステル類（すなわちポリエチレンテレフタレート）、および生体吸収性脂肪族ポリエステル類（すなわち乳酸、グリコール酸、ラクチド、グリコシド、パラ−ジオキサノン、トリメチレンカーボネート、イプシロン−カプロラクトンなど、およびこれらの組み合わせのホモポリマーおよびコポリマー）を含む。
【００９３】
他の態様では、本明細書に記載の微粉化組成物は、創傷治癒デバイスに適用することができる。例えば、創傷治癒デバイスは、絆創膏、ラップ、ガーゼ、縫合糸、または創傷を治療するために用いられる任意の他のデバイスであり得る。これらの態様では、微粉化組成物は、デバイス上をコーティングおよび／またはデバイス中に浸透させることができる。他の態様では、創傷治癒デバイスは、微粉化組成物が膜または移植片の１つまたは複数の側面上をコーティングする場合の創傷治癒の適用において用いられる膜または移植片であり得る。例えば、微粉化組成物の前駆体である本明細書に記載の任意の組織移植片を、微粉化組成物でコーティングすることができる。
【００９４】
微粉化組成物は、当業者に公知の任意の技術を用いて医療デバイスに、または、医療デバイスへのコーティングの適用のために開発されうるものに、適用することができる。コーティングを医療デバイスに適用するための適切な技術の例は、噴霧、浸漬コーティング、ロールコーティング、スピンコーティング、パウダーコーティング、およびブラシまたはニードルによる直接適用を含む。当業者は、パウダーコーティングにおける多くの異なる技術を十分理解するであろう。微粉化組成物は、移植片デバイスの表面に直接適用することができ、または、それらは下塗りまたは他のコーティング材料の上に適用することができる。
【００９５】
最後に、本明細書に記載の微粉化組成物からなる三次元構築物は、多くの適用を有する。構築物の適用に応じて、構築物は適用のためにテイラーメイドすることができる。例えば、構築物が困難な骨修復または荷重負荷の適用で用いられる予定の場合は、高密度の構築物を、より小さい粒子サイズを有する本明細書に記載の微粉化粒子から作ることができる。あるいは、より柔らかい、または多孔質の構築物が必要である場合は（例えば、嚢胞の除去後の骨欠損の充填）、構築物を、より大きい粒子サイズを有する微粉化粒子から作ることができる。このように、一態様では、本明細書に記載の構築物は、例えば、骨の空隙充填、骨軟骨の修復、および関節面の修復のような整形外科の適用において用いることができる。別の態様では、構築物は、例えば、空隙充填および構造支持の提供のような脊椎の適用において用いることができる。歯科の適用では、構築物は、抜歯後のソケット骨充填剤として用いることができる。別の態様では、構築物は、移植片ブロックとして用いてよく、そして、垂直および水平の歯槽骨増大術（ａｌｖｅｏｌａｒ  ｂｏｎｅ  ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎｓ）において骨のタックまたはスクリューを用いて所定の位置に固定されてよい。
【００９６】
他の態様では、三次元構築物は、本明細書に記載の任意の胎盤組織と組み合わせて用いることができる。例えば、羊膜、絨毛膜の層、または、羊膜および／または絨毛膜の積層のような、１つまたは複数の胎盤組織を、構築物に付けることができる。この態様では、構築物は、創傷または空隙の中へ挿入することができ、絆創膏そっくりに、羊膜、絨毛膜、または積層が創傷の外側にあり構築物を所定の位置に保持する。
【実施例】
【００９７】
以下の実施例は、本明細書に記載されてクレームされた化合物、組成物、および方法がどのように作られて評価されるかについて完全な開示と説明を当業者に提供するために提示され、そして、単なる例示を意図し、発明者らが彼らの発明と見なす範囲を限定することを意図しない。数字（例えば、量、温度など）に関して正確さを保証する努力はしているが、いくつかのエラーおよび偏差は説明されるべきである。別段の指示がない限り、部は重量部であり、温度は℃または大気温度であり、および圧力は大気圧またはそれ付近である。構成要素の濃度、所望の溶媒、溶媒混合物、温度、圧力、および記載の方法により得られる産物の純度および収量を最適化するために用いることのできる他の反応の範囲および条件など、反応条件の多くのバリエーションおよび組み合わせがある。合理的で型通りの実験のみが、そのような方法の条件を最適化するために必要とされる。
【００９８】
微粉化組成物の調製
（実施例１）
微粉化されたヒト羊膜注射剤は、上述のヒト羊膜および帝王切開の出産の間にそれが採取される病院に由来する胎盤組織から得られる中間層組織から構成された。組織の微粉化は、Ｒｅｔｓｃｈ  Ｏｓｃｉｌｌａｔｉｎｇ  Ｍｉｌｌ  ＭＭ４００を用いて行なった。リン酸バッファーを担体として用いた。注射剤の比率は５０ｍｇ／ｍＬであった。濃度比は、０．７０ｍＬのリン酸バッファーで、６０％（２１ｍｇ）羊膜および４０％（１４ｍｇ）中間組織層であった。微粉化組成物は、皮膚充填剤として、２７ゲージのニードルで、真皮深層領域に投与することができる。適切な用量は、上述の組成物の０．５ｃｃ〜１．０ｃｃであった。
【００９９】
（実施例２）
微粉化粒子を生産するためにここで用いられる羊膜／絨毛膜組織移植片は、その全体が参照により援用されるＵＳ２００８／００４６０９５に記載される方法により生産された。組織移植片（４ｃｍ×３ｃｍ）と２つの９．５ｍｍスチール研削ボールが５０ｍＬバイアル中に置かれて、そしてその後にバイアルは密封された。バイアルは低温ブロック（Ｃｒｙｏ−ｂｌｏｃｋ）中に置かれて、そして低温ブロックは低温ラック（Ｃｒｙｏ−ｒａｃｋ）中に置かれた。低温ラックは液体窒素を保持するデュワー（Ｄｅｗａｒ）の中に置かれた。組織サンプルは３０〜６０分以下の間、気相冷却に曝された。低温ラックはデュワーから取り外されて、そして冷却ブロックは低温ラックから取り外された。冷却ブロックはＧｒｉｎｄｅｒ（ＳＰＥＸ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｐｒｅｐ  ＧｅｎｏＧｒｉｎｄｅｒ  ２０１０）中に置かれて、そして１，５００ｒｐｍ、２０分間にセットされた。２０分経過後、組織は微粉化を確かめるために検査される。必要ならば、組織はさらに３０〜６０分間、デュワー中に戻して置き、そして、十分な微粉化を確かにするためにさらに２０分間グラインダーに移すことができる。いったん組織が十分に微粉化されると、一連のＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  ＡＳＴＭのふるい（ｓｉｅｖｅｓ）を用いて分類される。ふるいは、以下の順番で置かれた：３５５μｍ、３００μｍ、２５０μｍ、１５０μｍ、および１２５μｍ。微粉化材料は、５０ｍＬバイアルから３５５μｍのふるいに移された。それぞれのふるいは、微粉化粒子を十分に分離するために、一つ一つ撹拌された。いったん微粉化粒子が、ふるいを用いて効果的に分離されたら、３５５μｍ、３００μｍ、２５０μｍ、１５０μｍ、および１２５μｍの粒子サイズを有する微粉化粒子が、別々のバイアル中に収集された。
【０１００】
微粉化粒子からなる局所組成物の調製
以下の方法は、９５％のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）６００、５％のセチルアルコール、および１０％の水からなる局所ローションを生産する。ＰＥＧ６００はビーカー中に注がれて、そして４５℃に温められた。加温下で撹拌している間、水がビーカーに加えられた。５分間の十分な混合後、加温下でさらに５分間撹拌を続けながらセチルアルコールが加えられた。混合物は、それから、５分間室温で冷却された。
【０１０１】
上記の実施例２で生産された微粉化羊膜／絨毛膜（粒子サイズ２５μｍ〜７５μｍ）は、それから、上記の混合物に加えられて、３％重量のローションが生産された。混合物は、３〜５分間、室温で継続的に撹拌された。ローションはそれから、冷却のために、４℃の冷蔵庫中に１５分間置かれた。最終的なローションは、重たいクリームタイプの密度または粘度を有する。皮膚に直接適用される場合、ローションは、羊膜の微粒子材料の十分な取り込みで、わずかな保湿の光沢を与える。
【０１０２】
様々な改良および変更を、本明細書に記載の化合物、組成物および方法に対して行うことができる。本明細書に記載の化合物、組成物および方法の他の態様は、明細書の検討、および、本明細書に開示された化合物、組成物および方法の実践から明らかであろう。明細書および実施例は例示的であると考えられることが意図される。
【図１】
2014505111.tif 000004
【手続補正書】
【提出日】平成25年10月3日(2013.10.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
微粉化羊膜、絨毛膜、中間組織層、またはそれらの任意の組み合わせを含む、損傷されていない羊膜またはその一部から得られる組成物であって、
前記組成物は、上皮層および線維芽細胞層の全部または一部が取り除かれた微粉化羊膜のみから成るものではない、
組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物であって、
前記組成物は、個々の構成要素として微粉化羊膜、絨毛膜、中間組織層、またはそれらの任意の組み合わせを含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の組成物であって、
前記組成物は、羊膜、絨毛膜、中間組織層、またはそれらの任意の組み合わせを含む微粉化組織移植片を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項４】
請求項１に記載の組成物であって、
前記組成物は、個々の構成要素として微粉化羊膜および中間組織層を含み、
前記中間組織層は、羊膜から取り除かれていることを特徴とする、
組成物。
【請求項５】
請求項４に記載の組成物であって、
前記微粉化羊膜が、２００μｍ未満の粒子サイズを有することを特徴とする、
組成物。
【請求項６】
請求項４に記載の組成物であって、
中間組織層に対する羊膜の重量比が１０：１〜１：１０であることを特徴とする、
組成物。
【請求項７】
請求項４に記載の組成物であって、
中間組織層に対する羊膜の重量比が２：１〜１：１であり、
前記微粉化羊膜および中間組織層が２５μｍ〜２００μｍの粒子サイズを有することを特徴とする、
組成物。
【請求項８】
請求項１に記載の組成物であって、
前記組成物は、少なくとも二層の絨毛膜、少なくとも二層の羊膜、または少なくとも一層の絨毛膜および羊膜を含む微粉化組織移植片を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項９】
請求項１に記載の組成物であって、
前記組成物は、微粉化羊膜／絨毛膜組織移植片を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項１０】
請求項９に記載の組成物であって、
微粉化粒子が４００μｍ未満の粒子サイズを有することを特徴とする、
組成物。
【請求項１１】
請求項９に記載の組成物であって、
微粉化粒子が１５０μｍ〜３５０μｍの粒子サイズを有することを特徴とする、
組成物。
【請求項１２】
請求項９に記載の組成物であって、
羊膜に対する絨毛膜の重量比が１０：１〜１：１０であることを特徴とする、
組成物。
【請求項１３】
請求項９に記載の組成物であって、
羊膜に対する絨毛膜の重量比が４：１〜１：１であり、
微粉化粒子が２５μｍ〜２００μｍの粒子サイズを有することを特徴とする、
組成物。
【請求項１４】
請求項１に記載の組成物であって、
前記羊膜、絨毛膜、中間組織層、またはそれらの任意の組み合わせが架橋していることを特徴とする、
組成物。
【請求項１５】
請求項１に記載の組成物であって、
さらに生物活性剤を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項１６】
請求項１５に記載の組成物であって、
前記生物活性剤は、止血剤、フィブリン糊、同種移植片、または自家材料を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項１７】
請求項１に記載の組成物であって、
前記組成物がさらに、薬学的に許容できる担体を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項１８】
請求項１７に記載の組成物であって、
前記薬学的に許容できる担体は、水、水性ヒアルロン酸、生理食塩水、リンガー液、ブドウ糖液、ハンクス液、バッファー、または非水性ビヒクルを含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項１９】
請求項１８に記載の組成物であって、
前記バッファーは、リン酸バッファー、ビカーボネートバッファー、またはトリスバッファーを含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項２０】
請求項１７に記載の組成物であって、
前記組成物は、注入可能であることを特徴とする、
組成物。
【請求項２１】
請求項１７に記載の組成物であって、
前記組成物は、液体、ゲル、またはペーストであることを特徴とする、
組成物。
【請求項２２】
対象での、しわを治療または予防するための方法であって、
前記方法は、対象での、しわが存在する部位に、または、対象の、しわを形成しやすい領域に、請求項１に記載の組成物を注入するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項２３】
請求項１に記載の組成物の使用であって、
皮膚充填剤としての、
使用。
【請求項２４】
創傷治癒を高めるための方法であって、
前記方法は、創傷部位に、および／または、創傷部位付近に、請求項１に記載の組成物を適用するステップを含む、
方法。
【請求項２５】
対象の関節における炎症を治療または予防するための方法であって、
前記方法は、請求項１に記載の組成物を関節中に注入するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項２６】
対象の関節面での軟骨細胞を修復および／または再生するための方法であって、
前記方法は、請求項１に記載の組成物を関節面に適用するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項２７】
対象の関節面での炎症を治療または予防するための方法であって、
前記方法は、請求項１に記載の組成物を関節面に適用するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項２８】
外科的処置後の脊椎の上または付近の瘢痕形成を予防または減少させるための方法であって、
前記方法は、請求項１に記載の微粉化組成物を、対象の脊髄硬膜または脊椎付近の領域に直接、対象に適用するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項２９】
請求項２８に記載の方法であって、
前記外科的処置は、後処置を含むことを特徴とする、
方法。
【請求項３０】
請求項２９に記載の方法であって、
前記後処置が、椎弓切除術または椎間板切除術であることを特徴とする、
方法。
【請求項３１】
請求項２９に記載の方法であって、
前記後処置が、前方腰椎椎体間固定術（ＡＬＩＦ）および経椎間孔椎体間固定術（ＴＬＩＦ）であることを特徴とする、
方法。
【請求項３２】
請求項２８に記載の方法であって、
前記外科的処置は、前処置を含むことを特徴とする、
方法。
【請求項３３】
対象での、硬膜裂傷を治療するための方法であって、
前記方法は、請求項１に記載の微粉化組成物を、硬膜裂傷に直接適用するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項３４】
対象での、創傷の治癒を促進するための方法であって、
前記方法は、請求項１に記載の微粉化組成物を創傷に適用するステップを含み、
ここで前記創傷は脳硬膜中にあり、
小帯牽引の除去のため、失われた膝蓋骨組織の再生のため、洞腔中のシュナイダー膜または歯科インプラント周囲の軟組織の修復のための、歯周形成外科の（ｐｅｒｉｏｐｌａｓｔｉｃ）処置による創傷であることを特徴とする、
方法。
【請求項３５】
歯科の外科的処置と関連する創傷治癒を促進するための方法であって、
前記方法は、創傷を、請求項１に記載の微粉化組成物と接触させるステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項３６】
請求項３５に記載の方法であって、
微粉化粒子が、進行性歯肉退縮欠損の治療において、または組織再生誘導法において、歯科インプラントとともに用いられることを特徴とする、
方法。
【請求項３７】
整形外科の適用と関連する創傷治癒を促進するための方法であって、
前記方法は、創傷を、請求項１に記載の微粉化組成物と接触させるステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項３８】
請求項３７に記載の方法であって、
微粉化粒子が、骨膜の修復に役立ち、破裂性／損傷性嚢を修復し、または骨修復中の空隙充填材料を固定して、腱修復に用いられることを特徴とする、
方法。
【請求項３９】
耳鼻咽喉科の適用と関連する創傷治癒を促進するための方法であって、
前記方法は、創傷を、請求項１に記載の微粉化組成物と接触させるステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項４０】
請求項１に記載の微粉化組成物を含む三次元構築物であって、
微粉化粒子が、
（１）微粉化粒子を架橋剤で処理するステップと、処理された粒子をモールド中に配置するステップ、または
（２）微粉化粒子を接着剤と混合するステップと、混合物をモールド中に配置するステップ
を含む方法により生産されることを特徴とする、
構築物。
【請求項４１】
請求項４０に記載の構築物であって、
前記微粉化粒子が、微粉化羊膜／絨毛膜組織移植片を含むことを特徴とする、
構築物。
【請求項４２】
請求項４０に記載の構築物であって、
前記微粉化粒子が、微粉化羊膜および中間組織層を含むことを特徴とする、
構築物。
【請求項４３】
請求項４０に記載の構築物であって、
前記接着剤は、フィブリンシーラント、シアノアクリレート、ゼラチンとトロンビンの産物、ポリエチレングリコールポリマー、アルブミン、グルタルアルデヒドの産物、またはそれらの任意の組み合わせを含むことを特徴とする、
構築物。
【請求項４４】
請求項４０に記載の構築物であって、
前記構築物はさらに、１つまたは複数の、構築物に付けられた胎盤組織を含むことを特徴とする、
構築物。
【請求項４５】
請求項４４に記載の構築物であって、
前記胎盤組織が、羊膜、絨毛膜の層、または羊膜および／または絨毛膜の積層を含むことを特徴とする、
構築物。
【請求項４６】
局所組成物であって、
請求項１に記載の微粉化組成物および薬学的に許容できる担体を含む、
組成物。
【請求項４７】
請求項４６に記載の組成物であって、
微粉化粒子が、２０μｍ〜１００μｍの粒子サイズを有することを特徴とする、
組成物。
【請求項４８】
請求項４６に記載の組成物であって、
微粉化粒子が、局所組成物の０．５％〜２０％重量であることを特徴とする、
組成物。
【請求項４９】
請求項４６に記載の組成物であって、
微粉化粒子が、局所組成物の２％〜５％重量であることを特徴とする、
組成物。
【請求項５０】
請求項４６に記載の組成物であって、
前記薬学的に許容できる担体が、界面活性剤、乳化剤、またはそれらの組み合わせを含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項５１】
請求項４６に記載の組成物であって、
前記薬学的に許容できる担体が、ポリアルキレングリコールを含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項５２】
請求項４６に記載の組成物であって、
前記薬学的に許容できる担体が、ポリアルキレングリコールと脂肪族アルコールとの混合物を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項５３】
請求項５２に記載の組成物であって、
前記ポリアルキレングリコールがポリエチレングリコールであり、
前記脂肪族アルコールが、カプリルアルコール（１−オクタノール）、２−エチルヘキサノール、ペラルゴンアルコール（１−ノナノール）、カプリックアルコール（１−デカノール、デシルアルコール）、ウンデシルアルコール（１−ウンデカノール、ウンデカノール、ヘンデカノール）、ラウリルアルコール（ドデカノール、１−ドデカノール）、トリデシルアルコール（１−トリデカノール、トリデカノール、イソトリデカノール）、ミリスチルアルコール（１−テトラデカノール）、ペンタデシルアルコール（１−ペンタデカノール、ペンタデカノール）、セチルアルコール（１−ヘキサデカノール）、パルミトレイルアルコール（シス−９−ヘキサデセン−１−オール）、ヘプタデシルアルコール（１−ｎ−ヘプタデカノール、ヘプタデカノール）、ステアリルアルコール（１−オクタデカノール）、イソステアリルアルコール（１６−メチルヘプタデカン−１−オール）、エライジルアルコール（９Ｅ−オクタデセン−１−オール）、オレイルアルコール（シス−９−オクタデセン−１−オール）、リノレイルアルコール（９Ｚ，１２Ｚ−オクタデカジエン−１−オール）、エライドリノレニルアルコール（９Ｅ，１２Ｅ−オクタデカジエン−１−オール）、リノレニルアルコール（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ−オクタデカトリエン−１−オール）エライドリノレニルアルコール（９Ｅ，１２Ｅ，１５−Ｅ−オクタデカトリエン−１−オール）、リシノレイルアルコール（１２−ヒドロキシ−９−オクタデセン−１−オール）、ノナデシルアルコール（１−ノナデカノール）、アラキジルアルコール（１−エイコサノール）、ヘンエイコシルアルコール（１−ヘンエイコサノール）、ベヘニルアルコール（１−ドコサノール）、エルシルアルコール（シス−１３−ドコセン−１−オール）、リグノセリルアルコール（１−テトラコサノール）、セリルアルコール（１−ヘキサコサノール）、モンタニルアルコール、クロチルアルコール（１−オクタコサノール）、ミリシルアルコール、メリシルアルコール（１−トリアコンタノール）、ゲジルアルコール（１−テトラトリアコンタノール）、セテアリルアルコール、またはそれらの任意の組み合わせを含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項５４】
請求項５２に記載の組成物であって、
前記ポリアルキレングリコールがポリエチレングリコールであり、
前記脂肪族アルコールがセチルアルコールであることを特徴とする、
組成物。
【請求項５５】
対象での、しわを治療するための方法であって、
前記方法は、対象に存在するしわ上に、請求項４６に記載の組成物を適用するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項５６】
対象での、しわを予防するための方法であって、
前記方法は、対象の、しわを形成しやすい皮膚上に、請求項４６に記載の組成物を適用するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項５７】
皮膚層の再上皮形成を高めるための方法であって、
前記方法は、皮膚上に存在する損傷した上皮層に、請求項４６に記載の組成物を適用するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項５８】
対象での、創傷治癒を高めるための方法であって、
前記方法は、創傷中に、または創傷付近に、請求項１に記載の微粉化組成物を注入するステップを含むことを特徴とする、
方法。
【請求項５９】
請求項５８に記載の方法であって、
前記組成物が、皮下、真皮下、筋肉内、または骨膜界面に、注入されることを特徴とする、
方法。
【請求項６０】
請求項５８に記載の方法であって、
前記創傷が、糖尿病性潰瘍、表皮創傷、トラッキング創傷、または繰り返しの外科的処置に由来する創傷であることを特徴とする、
方法。
【請求項６１】
請求項５８に記載の方法であって、
前記創傷は、脊柱側弯の治療のための切開部位であることを特徴とする、
方法。
【請求項６２】
移植可能な医療デバイスであって、
請求項１に記載の微粉化組成物を含む、
移植可能な医療デバイス。
【請求項６３】
請求項１に記載の組成物であって、
前記羊膜が、線維芽細胞層および上皮層を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項６４】
請求項１に記載の組成物であって、
線維芽細胞層を維持しながら、前記羊膜が上皮側でのみ脱細胞化されることを特徴とする、
組成物。
【国際調査報告】
2014505111.tif 000005