(57)【要約】  本発明は、対象における神経変性障害（例えば、筋萎縮性側索硬化症および多発性硬化症）を診断する方法、神経変性障害を発症させるリスクがある対象の識別方法、神経変性障害を有する対象における疾患の進行速度の予測方法、神経変性障害を治療するための対象の選択方法、臨床試験に参加させるための対象の選択方法、および神経変性障害治療の有効性の決定方法を提供する。これらの方法は、対象からの単球（例えばＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球）中の、または髄液（ＣＳＦ）中の１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーを決定すること、および１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベル、および／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを、参照レベル（複数可）と比較することを含む。また、神経変性障害の治療方法であって、対象に、対象の単球（例えばＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球）中の、またはＣＳＦ中の１つまたは複数のマイクロＲＮＡまたは１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルまたは活性を減少または増加させる少なくとも１種の作用物質を投与することを含む、治療方法も提供される
2014534810.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療に使用するための、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５中に存在する連続配列、例えばヌクレオチド少なくとも５個の連続配列、に相補的な配列を含む抑制性核酸。
【請求項２】
対象における筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療方法であって、ＡＬＳを有する対象に、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａのいずれか１つ中に存在する連続配列、例えばヌクレオチド少なくとも５個の連続配列、に相補的な配列を含む少なくとも１つのアンタゴミアを投与することを含む、方法。
【請求項３】
対象における筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療方法であって、ＡＬＳを有する対象に、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５中に存在する連続配列、例えばヌクレオチド少なくとも５個の連続配列、に相補的な配列を含む少なくとも１種の抑制性核酸を投与することを含む、方法。
【請求項４】
少なくとも１種の抑制性核酸が、アンタゴミアである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
アンタゴミアが、配列番号２６２の配列を有する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
少なくとも１種の抑制性核酸が、アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
少なくとも１種の抑制性核酸が、リボザイムである、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
少なくとも１種の抑制性核酸が、対象の髄液に注射される、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
注射が、頭蓋内注射である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
注射が、髄腔内注射である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも１種の抑制性核酸が、１種または複数のカチオン性ポリマーおよび／またはカチオン脂質と複合体化されている、請求項３に記載の方法。
【請求項１２】
対象における筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の診断方法であって、該方法は、
対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８０、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａからなる群から選択される１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；および
対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の１つまたは複数のマイクロＲＮＡ（複数可）のレベルを、１つまたは複数のマイクロＲＮＡ（複数可）の参照レベルと比較すること
を含み、
参照レベルと比較して、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈａｓ−ｍｉＲ−１９ａのうち１つまたは複数のレベルが増加していること、および／またはｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８０のうち１つまたは複数のレベルが減少していることが、ＡＬＳを対象が有することの指標である、方法。
【請求項１３】
対象における筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の診断方法であって、該方法は、
対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを決定すること；および
対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較すること
を含み、
対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルが参照レベルと比較して増加していることが、ＡＬＳを対象が有することの指標である、方法。
【請求項１４】
対象における家族性筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の診断方法であって、該方法は、
対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルと、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルとを決定すること；および
対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂの参照レベルと比較すること、さらに、対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較すること
を含み、
対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルが、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂの参照レベルと比較して増加していること、さらに、対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルが、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較して減少しているかまたは有意な変化がないことが、家族性ＡＬＳを対象が有することの指標である、方法。
【請求項１５】
対象における孤発性筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の診断方法であって、該方法は、
対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐからなる群から選択される２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；および
対象のＣＳＦ中の前記２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルを、前記２つ以上のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較すること
を含み、
対象のＣＳＦ中の前記２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルが参照レベルと比較して増加していることが、孤発性ＡＬＳを対象が有することの指標である、方法。
【請求項１６】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を発症させるリスクがある対象の識別方法であって、該方法は：
対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８０、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａからなる群から選択される１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；および
対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを、前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較すること
を含み、
参照レベルと比較して、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａのうち１つまたは複数のレベルが増加していること、および／またはｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５８０のうち１つまたは複数のレベルが減少していることが、ＡＬＳを発症させる高いリスクを対象が有することの指標である、方法。
【請求項１７】
対象において筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を発症させるリスクがある対象の識別方法であって、該方法は、
対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを決定すること；および
対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較すること
を含み、
対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルが参照レベルと比較して増加していることが、ＡＬＳを発症させる高いリスクを対象が有することの指標である、方法。
【請求項１８】
家族性筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を発症させるリスクがある対象の識別方法であって、該方法は、
対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルと、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルとを決定すること；および
対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂの参照レベルと比較すること、さらに、対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較すること
を含み、
対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルが、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂの参照レベルと比較して増加していることおよび対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルが、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較して減少しているかまたは有意な変化がないことが、家族性ＡＬＳを発症させる高いリスクを対象が有することの指標である、方法。
【請求項１９】
孤発性筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を発症させるリスクがある対象の識別方法であって、該方法は、
対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐからなる群から選択される２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；および
対象のＣＳＦ中の前記２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルを、前記２つ以上のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較すること
を含み、
対象のＣＳＦ中の前記２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルが参照レベルと比較して増加していることが、孤発性ＡＬＳを発症させる高いリスクを対象が有することの指標である、方法。
【請求項２０】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を有する対象における疾患の進行速度の予測方法であって、該方法は、
対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８０、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａからなる群から選択される１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；および
対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを、前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較すること
を含み、
参照レベルと比較して、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａのうち１つまたは複数のレベルが増加していること、および／またはｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５８０のうち１つまたは複数のレベルが減少していることが、疾患の進行速度の増加を対象が有すると予想されることの指標である、方法。
【請求項２１】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を有する対象における疾患の進行速度の予測方法であって、該方法は、
対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを決定すること；および
対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較すること
を含み、
対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルが参照レベルと比較して増加していることが、疾患の進行速度の増加を対象が有すると予想されることの指標である、方法。
【請求項２２】
疾患の進行速度の増加は、ＡＬＳの１つまたは複数の症状が発症する速度の増加、ＡＬＳの１つまたは複数の症状の悪化の増進、ＡＬＳの１つまたは複数の症状の頻度の増加、ＡＬＳの１つまたは複数の症状の持続時間の増加、または対象の寿命の減少である、請求項２０または請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療するための対象の選択方法であって、
対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８０、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａからなる群から選択される１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；
対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを、前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較すること；および
ＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａのうち１つまたは複数のレベルが参照レベルと比較して増加しているおよび／またはｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５８０のうち１つまたは複数のレベルが参照レベルと比較して減少している対象を孤発性ＡＬＳを治療するために選択すること
を含む、方法。
【請求項２４】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療するための対象の選択方法であって、
対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを決定すること；および
対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較すること；および
ＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルが参照レベルと比較して増加している対象をＡＬＳを治療するために選択すること
を含む、方法。
【請求項２５】
家族性筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療するための対象の選択方法であって、
対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルと、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルとを決定すること；および
対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂの参照レベルと比較すること、さらに、対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較すること；および
ＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルが、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂの参照レベルと比較して増加しているおよびＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルが、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較して減少しているかまたは有意な変化がない対象を家族性ＡＬＳを治療するために選択すること
を含む、方法。
【請求項２６】
孤発性筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療するための対象の選択方法であって、
対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐからなる群から選択される２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；
対象のＣＳＦ中の前記２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルを、前記２つ以上のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較すること；および
ＣＳＦ中の２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルが参照レベルと比較して増加している対象を孤発性ＡＬＳを治療するために選択すること
を含む、方法。
【請求項２７】
選択された対象はさらに、ＡＬＳ治療が施される、請求項２３〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
臨床試験に参加させるための対象の選択方法であって、
対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８０、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａからなる群から選択される１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；
対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを、前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較すること；および
参照レベルと比較して、ＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａのうち１つまたは複数のレベルが増加しているおよび／またはｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５８０のうち１つまたは複数のレベルが減少している対象を、臨床試験に参加させるために選択すること
を含む、方法。
【請求項２９】
臨床試験に参加させるための対象の選択方法であって、
対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐからなる群から選択される１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；
対象のＣＳＦ中の前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを、前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較すること；および
ＣＳＦ中の１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルが参照レベルと比較して増加している対象を、臨床試験に参加させるために選択すること
を含む、方法。
【請求項３０】
対象における筋萎縮性側索硬化症治療の有効性の決定方法であって、該方法は、
第１の時点で、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８０、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａからなる群から選択される１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；
少なくとも１回の治療用量を投与した後の第２の時点で、対象からのＣＤ１４＋／ＣＤ１６−単球中の前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；および
第１の時点における前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを、第２の時点における前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルと比較すること
を含み、
第１の時点におけるレベル（複数可）と比較して、第２の時点におけるｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａのうち１つまたは複数のレベルが減少していること、および／またはｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５８０のうち１つまたは複数のレベルが増加していることが、対象において治療が有効であったことの指標である、方法。
【請求項３１】
対象における筋萎縮性側索硬化症治療の有効性（ＡＬＳ）の決定方法であって、該方法は、
第１の時点で、対象の髄液中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを決定すること；
少なくとも１回の治療用量を投与した後の第２の時点で、対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを決定すること；および
第１の時点におけるｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを、第２の時点におけるｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルと比較すること
を含み、
第１の時点におけるレベル（複数可）と比較した、第２の時点におけるｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルの減少が、対象において治療が有効であったことの指標である、方法。
【請求項３２】
参照レベルが、閾値レベルである、請求項１２〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
参照レベルが、対照の対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中で見出されるレベルである、請求項１２、１６、２０、２３、２８、および３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
参照レベルが、対照の対象のＣＳＦ中で見出されるレベルである、請求項１３〜１５、１７〜１９、２１、２４〜２６、２９、および３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
対象からＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球を含む生体サンプルを得ることをさらに含む、請求項１２、１６、２０、２３、２８、および３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
生体サンプルからＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球を精製することをさらに含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
対象からＣＳＦを含むサンプルを得ることをさらに含む、請求項１３〜１５、１７〜１９、２１、２４〜２６、２９、および３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
マイクロＲＮＡまたは１つまたは複数のマイクロＲＮＡが、前駆マイクロＲＮＡである、請求項１２〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
マイクロＲＮＡまたは１つまたは複数のマイクロＲＮＡが、成熟マイクロＲＮＡである、請求項１２〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる２０１１年１０月１１日付けで出願された米国特許仮出願第６１／５４５，９６８号、および２０１２年２月２１日付けで出願された米国特許仮出願第６１／６０１，２０５号の優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、多数の神経変性障害（例えば筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）および多発性硬化症）との関連が示されてきた。例えば炎症性反応の増加は、ヒトＡＬＳ患者および動物のＡＬＳモデルの両方で観察されている（McGreerら、Muscle Nerve 26：459〜470、2002；Beersら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.105：15558〜15563、2008；Banerjeeら、PLoS ONE 3：e2740、2008；Chiuら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 105：17913〜17918、2008；Chiuら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.106：20960〜20965、2009；Beersら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.103：16021〜16026、2006；Henkelら、Ann. Neurol.55：221〜235、2004；Meissnerら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.107：13046〜13050、2010）。マウスの家族性ＡＬＳモデルでは、中枢神経系でミクログリアと星状細胞の両方が活性化されていること（Alexianuら、Neurology 57：1282〜1289、2001；Hallら、Glia 23：249〜256、1998）、およびマウスのＡＬＳモデルでは、神経変性疾患が進行する間にナチュラルキラー細胞および末梢Ｔ細胞は脊髄に浸潤すること（Chiuら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.105：17913〜17918、2008）が報告されている。
【０００３】
末梢神経系において、末梢性運動神経軸索の変性は、ＡＬＳ患者および動物のＡＬＳモデルにおける初期の有意な病理学的特徴であり、それに先立ちマクロファージの動員および活性化が起こる（Chiuら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.106：20960〜20965、2009）。マウスにおける特異的な単球サブセット（Ｌｙ６ＣＨｉ）は、マウス多発性硬化症モデルにおける組織の損傷および疾患の病因に関与し（Kingら、Blood 113：3190〜3197、2009）、これらの単球は、ＣＣＬ２により炎症組織に動員される（Kimら、Immunity 34:769〜780、2011;Gettsら、J.Exp.Med.205：2319〜2337、2008）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、特異的なマイクロＲＮＡおよび炎症性マーカー遺伝子が、神経変性疾患を有する対象からの髄液（ＣＳＦ）中ならびにＣＤ１４＋ＣＤ１６−中およびＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中で、健康な対象からのＣＳＦ中ならびにＣＤ１４＋ＣＤ１６−中およびＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中でのこれらのマイクロＲＮＡおよびこれらの炎症性マーカー遺伝子の発現レベルと比較して、増加または減少しているという発見に少なくとも部分的に基づく。表１〜２１に、神経変性疾患を有する対象におけるＣＳＦ中、ならびに／またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−中および／もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中で増加または減少すると同定された特異的なマイクロＲＮＡおよび炎症性マーカー遺伝子を列挙する。表２０および２１に、本明細書で説明される炎症性マーカーを列挙する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本明細書において、対象における神経変性障害（例えば筋萎縮性側索硬化症または多発性硬化症）の診断方法であって、対象からの単球（例えばＣＤ１４＋ＣＤ１６−およびＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球）中またはＣＳＦ中の表１〜２１のいずれか１つまたは複数に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを決定すること、および１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを、１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベル（例えば、閾値レベル、あるいは健康な対象からのＣＳＦ中またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中に存在するレベル）と比較することを含む、診断方法が提供される。これらの方法において、１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルの参照レベルに対する増加または減少が、神経変性障害を対象が有することの指標である。
【０００６】
また、神経変性障害（例えば筋萎縮性側索硬化症または多発性硬化症）を発症させるリスクがある対象の識別方法であって、対象からの単球（例えばＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球（例えば末梢血または血液由来単球）またはＣＳＦ中の、表１〜２１のいずれか１つまたは複数に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを決定すること、および１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを、１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベル（例えば、閾値レベル、あるいは健康な対象からのＣＳＦ中またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球（例えば末梢血または血液由来単球）中に存在するレベル）と比較することを含む、識別方法も提供される。これらの方法において、１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルの参照レベルと比した増加または減少が、（例えば、参照レベルと比較して１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルの増加または減少を示さない人と比べて）神経変性障害を発症させる高いまたは低いリスクを対象が有することの指標である。
【０００７】
また、神経変性障害（例えば筋萎縮性側索硬化症または多発性硬化症）を有する対象における疾患の進行速度の予測方法であって、対象からの単球（例えばＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球（例えば末梢血または血液由来単球）中またはＣＳＦ中の、表１〜２１のいずれか１つまたは複数に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを決定すること、および１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを、１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベル（例えば、閾値レベル、あるいは健康な対象からのＣＳＦ中またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球（例えば末梢血または血液由来単球）中に存在するレベル）と比較することを含む、予測方法も提供される。これらの方法において、１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルの参照レベルに対する増加または減少が、（例えば、参照レベルと比較して１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルの増加または減少を示さない人と比べて）速いまたは遅い疾患の進行速度を対象が有するであろうと予想されることの指標である。
【０００８】
また、神経変性障害（例えば筋萎縮性側索硬化症または多発性硬化症）を治療するための対象の選択方法であって、対象からの単球（例えばＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球（例えば末梢血または血液由来単球）中またはＣＳＦ中の、表１〜２１のいずれか１つまたは複数に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを決定すること；１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを、１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベル（例えば、閾値レベル、あるいは健康な対象からのＣＳＦ中またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球（例えば末梢血または血液由来単球）中に存在するレベル）と比較すること；および神経変性障害を治療するために、１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルが参照レベルと比べて増加または減少している対象を選択することを含む、選択方法も提供される。
【０００９】
また、対象における神経変性障害（例えば筋萎縮性側索硬化症または多発性硬化症）の治療の有効性の決定方法であって、第１の時点で、対象からの単球（例えばＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球（例えば末梢血または血液由来単球））中またはＣＳＦ中の、表１〜２１のいずれか１つまたは複数に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを決定すること；少なくとも１回の治療用量を投与した後の第２の時点で、対象からの単球（例えばＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球（例えば末梢血または血液由来単球）中またはＣＳＦ中の１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを決定すること；および第１の時点における１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを、第２の時点における１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルと比較することを含む、決定方法も提供される。これらの方法において、第２の時点における健康な対象のレベルへの回復または接近（例えば、第２の時点における１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルが、本明細書において説明される第１の時点におけるレベルと比較して減少または増加すること）が、治療が対象において有効であったこと（例えば、治療が、同じ神経変性障害を有し同じ治療を受けた対象と比べて有効であったが、第２の時点で健康な対象のレベルへの回復または接近（例えば、１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルが、本明細書において説明される参照値と比較して増加または減少すること）を示さないか、あるいは本明細書において説明される参照値と比較して、１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルの顕著な増加または減少を示さないこと）の指標である。
【００１０】
また、臨床試験に参加させるための対象の選択方法も提供される。これらの方法は、対象からの単球（例えばＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球（例えば末梢血または血液由来単球）中またはＣＳＦ中の、表１〜２１のいずれか１つまたは複数に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを決定すること；１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを、１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベル（例えば、閾値レベル、あるいは健康な対象からのＣＳＦ中またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球（例えば末梢血または血液由来単球）中に存在するレベル）と比較すること；および１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルが参照レベルと比較して増加または減少している対象を、臨床試験に参加させるために選択することを含む。
【００１１】
また、対象における神経変性障害（例えば筋萎縮性側索硬化症または多発性硬化症）の治療方法であって、対象に、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡ、または表２１に列挙した炎症性マーカーのいずれかの発現または活性を低下させる少なくとも１種の作用物質（例えば抑制性核酸、例えばアンタゴミア（antagomir））を投与することを含む、治療方法も提供される。また、対象における神経変性障害（例えば筋萎縮性側索硬化症または多発性硬化症）の治療方法であって、対象に、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、または１９に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または表２０に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの発現または活性を高める少なくとも１種の作用物質（例えばセンス（タンパク質をコードする）核酸を含む核酸）を投与することを含む、治療方法も提供される。
【００１２】
また、対象における神経変性障害（例えばＡＬＳ、例えば孤発性ＡＬＳもしくは家族性ＡＬＳ、または多発性硬化症）の治療方法であって、神経変性障害（例えばＡＬＳ、例えば孤発性ＡＬＳもしくは家族性ＡＬＳ、または多発性硬化症）を有する対象に、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５中に存在する連続配列（例えばｈｓａ−ｍｉＲ−１５５の前駆体または成熟型中に存在する連続配列）に相補的な配列を含む少なくとも１種の抑制性核酸（例えばｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アンタゴミア、および／またはリボザイム）を投与することを含む、治療方法も提供される。
【００１３】
また、対象における筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療に使用するための、連続配列に相補的な、例えば、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、またはｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａ中に存在する少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個のヌクレオチドの連続配列に相補的な配列を含む抑制性核酸も提供される。好ましくは上記配列は、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５中に存在する少なくとも７または８個のヌクレオチドの連続配列に相補的である。
【００１４】
本明細書において、対象における筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の診断方法であって、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５８０からなる群から選択される１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；および対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の１つまたは複数のマイクロＲＮＡ（複数可）のレベルを、１つまたは複数のマイクロＲＮＡ（複数可）の参照レベルと比較することを含み、参照レベルと比較して、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルが増加していること、および／またはｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５８０のうち１つまたは複数のレベルが減少していることが、ＡＬＳを対象が有することの指標である、方法が提供される。
【００１５】
また、対象における筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の診断方法であって、対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを決定すること；および対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較することを含み、対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルが参照レベルと比較して増加していることが、ＡＬＳを対象が有することの指標である、診断方法も提供される。
【００１６】
また、対象における家族性筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の診断方法であって、対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルと、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルとを決定すること；および対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂの参照レベルと比較すること、さらに、対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較することを含み、対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルが、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂの参照レベルと比較して増加していること、さらに、対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルが、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較して減少しているかまたは有意な変化がないことが、家族性ＡＬＳを対象が有することの指標である、診断方法も提供される。
【００１７】
また、対象における孤発性筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の診断方法であって、対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐからなる群から選択される２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；および対象のＣＳＦ中の前記２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルを、前記２つ以上のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較することを含み、対象のＣＳＦ中の前記２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルが参照レベルと比較して増加していることが、孤発性ＡＬＳを対象が有することの指標である、診断方法も提供される。
【００１８】
また、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を発症させるリスクがある対象の識別方法であって、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５８０からなる群から選択される１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；および対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを、前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較することを含み、参照レベルと比較して、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルが増加していること、および／またはｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５８０のうち１つまたは複数のレベルが減少していることが、ＡＬＳを発症させる高いリスクを対象が有することの指標である、識別方法も提供される。
【００１９】
また、対象における筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を発症させるリスクがある対象の識別方法であって、対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを決定すること；および対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較することを含み、対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルが参照レベルと比較して増加していることが、ＡＬＳを発症させる高いリスクを対象が有することの指標である、識別方法も提供される。
【００２０】
また、家族性筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を発症させるリスクがある対象の識別方法であって、対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルと、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルとを決定すること；および対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂの参照レベルと比較すること、さらに、対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較することを含み、対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルが、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂの参照レベルと比較して増加していること、さらに、対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルが、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較して減少しているかまたは有意な変化がないことが、家族性ＡＬＳを発症させる高いリスクを対象が有することの指標である、識別方法も提供される。
【００２１】
また、孤発性筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を発症させるリスクがある対象の識別方法であって、対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐからなる群から選択される２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；および対象のＣＳＦ中の前記２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルを、前記２つ以上のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較することを含み、対象のＣＳＦ中の前記２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルが参照レベルと比較して増加していることが、孤発性ＡＬＳを発症させる高いリスクを対象が有することの指標である、識別方法も提供される。
【００２２】
また、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を有する対象における疾患の進行速度の予測方法であって、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８０、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ１９ａからなる群から選択される１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；および対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを、前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較することを含み、参照レベルと比較して、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｍｉＲ−１９ａのうち１つまたは複数のレベルが増加していること、および／またはｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５８０のうち１つまたは複数のレベルが減少していることが、疾患の進行速度の増加を対象が有するであろうと予想されることの指標である、予測方法も提供される。
【００２３】
また、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を有する対象における疾患の進行速度の予測方法であって、対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを決定すること；および対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較することを含み、対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルが参照レベルと比較して増加していることが、疾患の進行速度の増加を対象が有するであろうと予想されることの指標である、予測方法も提供される。いくつかの実施形態において、疾患の進行速度の増加は、ＡＬＳの１つまたは複数の症状が発症する速度の増加、ＡＬＳの１つまたは複数の症状の悪化の増進、ＡＬＳの１つまたは複数の症状の頻度の増加、ＡＬＳの１つまたは複数の症状の持続時間の増加、または対象の寿命の減少である。
【００２４】
また、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療するための対象の選択方法であって、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８０、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａからなる群から選択される１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを、前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較すること；およびＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａのうち１つまたは複数のレベルが参照レベルと比較して増加している、および／またはｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５８０のうち１つまたは複数のレベルが参照レベルと比較して減少している対象をＡＬＳを治療するために選択することを含む、選択方法も提供される。
【００２５】
また、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療するための対象の選択方法であって、対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを決定すること；および対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較すること；およびＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルが参照レベルと比較して増加している対象をＡＬＳを治療するために選択することを含む、選択方法も提供される。
【００２６】
また、家族性筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療するための対象の選択方法であって、対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルと、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルとを決定すること；および対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂの参照レベルと比較すること、さらに、対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較すること；およびＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルが、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂの参照レベルと比較して増加しているおよびＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルが、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較して減少しているかまたは有意な変化がない対象を家族性ＡＬＳを治療するために選択することを含む、選択方法も提供される。
【００２７】
また、孤発性筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療するための対象の選択方法であって、対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐからなる群から選択される２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；対象のＣＳＦ中の前記２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルを、前記２つ以上のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較すること；およびＣＳＦ中の２つ以上のマイクロＲＮＡのレベルが参照レベルと比較して増加している対象を孤発性ＡＬＳを治療するために選択することを含む、選択方法も提供される。
【００２８】
本明細書において説明される方法のいくつかの実施形態において、選択された対象はさらに、ＡＬＳ治療が施される。
【００２９】
また、臨床試験に参加させるための対象の選択方法であって、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８０、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａからなる群から選択される１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを、前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較すること；およびＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａのうち１つまたは複数のレベルが参照レベルと比較して増加している、および／またはｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５８０のうち１つまたは複数のレベルが参照レベルと比較して減少している対象を、臨床試験に参加させるために選択することを含む、選択方法も提供される。
【００３０】
また、臨床試験に参加させるための対象の選択方法であって、対象の髄液（ＣＳＦ）中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐからなる群から選択される１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；対象のＣＳＦ中の前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを、前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較すること；およびＣＳＦ中の１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルが参照レベルと比較して増加している対象を、臨床試験に参加させるために選択することを含む、選択方法も提供される。
【００３１】
また、対象における筋萎縮性側索硬化症治療の有効性の決定方法であって、第１の時点で、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８０、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａからなる群から選択される１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；少なくとも１回の治療用量を投与した後の第２の時点で、対象からのＣＤ１４＋／ＣＤ１６−単球中の前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを決定すること；および第１の時点における前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを、第２の時点における前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルと比較することを含み、第１の時点におけるレベル（複数可）と比較して、第２の時点におけるｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａのうち１つまたは複数のレベルが減少していること、および／またはｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５８０のうち１つまたは複数のレベルが増加していることが、対象において治療が有効であったことの指標である、決定方法も提供される。
【００３２】
また、対象における筋萎縮性側索硬化症治療（ＡＬＳ）の有効性の決定方法であって、第１の時点で、対象の髄液中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを決定すること；少なくとも１回の治療用量を投与した後の第２の時点で、対象のＣＳＦ中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを決定すること；および第１の時点におけるｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルを、第２の時点におけるｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルと比較することを含み、第１の時点におけるレベル（複数可）と比較して、第２の時点におけるｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数のレベルが減少していることが、対象において治療が有効であったことの指標である、決定方法も提供される。
【００３３】
本明細書において説明される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、参照レベルは、閾値レベルである。いくつかの実施形態において、参照レベルは、対照の対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球（例えば末梢血または血液由来単球）中で見出されるレベルである。いくつかの実施形態において、参照レベルは、対照の対象のＣＳＦ中で見出されるレベルである。
【００３４】
本明細書において説明される方法のいくつかの実施形態はさらに、対象からＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球を含む生体サンプル（例えば、血液、血漿、血清、または髄液を含むサンプル）を得ることを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、生体サンプルからＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球を精製することをさらに含む。
【００３５】
本明細書において説明される方法のいくつかの実施形態はさらに、対象からＣＳＦを含むサンプルを得ることを含む。
【００３６】
本明細書において説明される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、マイクロＲＮＡまたは１つまたは複数のマイクロＲＮＡは、前駆マイクロＲＮＡである。本明細書において説明される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、マイクロＲＮＡまたは１つまたは複数のマイクロＲＮＡは、成熟マイクロＲＮＡである。
【００３７】
また、対象における筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療方法であって、ＡＬＳを有する対象に、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０  ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈａｓ−ｍｉＲ−１９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａのいずれか１つ中に存在する連続配列（例えば、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個のヌクレオチド、好ましくは少なくとも７または８個のヌクレオチドの連続配列）に相補的な配列を含む少なくとも１つのアンタゴミアを投与することを含む、方法も提供される。
【００３８】
また、対象における筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療方法であって、ＡＬＳを有する対象に、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５中に存在する連続配列に相補的な配列を含む少なくとも１種の抑制性核酸を投与することを含む、方法も提供される。いくつかの実施形態において、少なくとも１種の抑制性核酸は、アンタゴミアである（例えば、配列番号２６２の配列を含む、または有するアンタゴミアである）。いくつかの実施形態において、少なくとも１種の抑制性核酸は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、少なくとも１種の抑制性核酸は、リボザイムである。いくつかの実施形態において、少なくとも１種の抑制性抑制性核酸は、対象の髄液に注射される（例えば頭蓋内注射または髄腔内注射）。いくつかの実施形態において、少なくとも１種の抑制性核酸は、１種または複数のカチオン性ポリマーおよび／またはカチオン脂質と複合体を形成する。いくつかの実施形態において、抑制性核酸は、レンチウイルスベクターを用いて送達される。
【００３９】
また、対象の筋萎縮性側索硬化症を治療するための医薬品製造において、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａのいずれか１つ中に存在する連続配列に相補的な配列を含む少なくとも１つのアンタゴミアを使用する方法も提供される。また、本明細書において、対象の筋萎縮性側索硬化症を治療するのに使用するための、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ｂ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１９ａのいずれか１つ中に存在する連続配列に相補的な配列を含むアンタゴミアも提供される。
【００４０】
また、対象の筋萎縮性側索硬化症を治療するための医薬品製造において、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５中に存在する連続配列に相補的な配列を含む少なくとも１種の抑制性核酸（例えばアンタゴミア）を使用する方法も提供される。また、本明細書において、対象の筋萎縮性側索硬化症を治療するのに使用するための、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５中に存在する連続配列に相補的な配列を含む抑制性核酸（例えばアンタゴミア）も提供される。
【００４１】
「ＲＮＡ」は、本明細書で用いられる場合、少なくとも１つまたは複数のリボヌクレオチド残基を含む分子を指す。「リボヌクレオチド」とは、ベータ−Ｄ−リボフラノース部分の２’位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドである。ＲＮＡという用語は、本明細書で用いられる場合、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、単離されたＲＮＡ、例えば一部精製したＲＮＡ、実質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換えによって生産されたＲＮＡを含み、加えて１つまたは複数のヌクレオチドの付加、欠失、置換、および／または変更により天然に存在するＲＮＡとは異なる変性ＲＮＡも含む。またＲＮＡ分子のヌクレオチドは、標準的ではないヌクレオチド、例えば天然に存在しないヌクレオチド、または化学合成されたヌクレオチド、またはデオキシヌクレオチドを含んでいてもよい。
【００４２】
「成熟マイクロＲＮＡ」（成熟ｍｉＲＮＡ）は、典型的には、遺伝子発現を調節する、約２１〜２３個のヌクレオチドの長さの一本鎖ＲＮＡ分子を指す。ｍｉＲＮＡは、そのＤＮＡからｍｉＲＮＡが転写される遺伝子によってコードされているが、ｍｉＲＮＡはタンパク質に翻訳されない；その代わりに一次転写物（ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ）はそれぞれ短いステム−ループ構造（前駆マイクロＲＮＡ）にプロセシングされ、その後、機能的な成熟ｍｉＲＮＡへのさらなるプロセシングを受ける。成熟ｍｉＲＮＡ分子は、部分的に１つまたは複数のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子に相補的であり、それらの主要な機能は、遺伝子発現を下方調節することである。本明細書全体で用いられているように、用語「マイクロＲＮＡ」または「ｍｉＲＮＡ」は、成熟マイクロＲＮＡおよび前駆マイクロＲＮＡの両方を含む。
【００４３】
用語「炎症性マーカー」は、本明細書で用いられる場合、表２０および２１に列挙したタンパク質またはｍＲＮＡのいずれかを指す。表２０および２１に列挙したタンパク質およびｍＲＮＡは、炎症における役割との関連が示されている。炎症性マーカーのレベルまたは活性を検出する方法が当技術分野で公知である。本明細書では、追加の炎症性マーカーのレベルまたは活性を検出する方法が説明される。
【００４４】
用語「参照レベル」は、表１〜１９に列挙したマイクロＲＮＡのうち１種、または表２０および２１に列挙した炎症性マーカーのうち１種の対照レベルを意味する。参照レベルは、特異的なマイクロＲＮＡまたは炎症性マーカーの閾値レベルを示す可能性がある。また参照レベルは、健康な対象（例えば、２つ以上の神経変性障害の症状を示していない対象、神経変性障害と診断されていない対象、および／または神経変性疾患の家族歴がない対象）からの髄液中または単球（例えばＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球（例えば末梢血または血液由来単球））中に存在する特定のマイクロＲＮＡまたは炎症性マーカーのレベルであってもよい。
【００４５】
用語「増加」は、参照レベルまたは同じ対象でそれより前もしくは後の時点で測定されたレベルと比較して、観察可能な、検出可能な、または有意なレベルの増加を意味する。
【００４６】
用語「減少」は、参照レベルまたは同じ対象でそれより前もしくは後の時点で測定されたレベルと比較して、観察可能な、検出可能な、または有意なレベルの減少を意味する。
【００４７】
用語「神経変性障害」は、ニューロンの機能および構造の進行性喪失、ならびにニューロンの死を特徴とする神経障害を意味する。神経変性障害の非限定的な例としては、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、脳卒中、脳腫瘍、心臓虚血、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、網膜色素変性症（ＲＰ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、例えば家族性ＡＬＳおよび孤発性ＡＬＳ）、および多発性硬化症（ＭＳ）が挙げられる。本明細書では、神経変性障害の診断方法が説明される。追加の神経変性障害の診断方法は、当技術分野で公知である。
【００４８】
用語「抑制性ＲＮＡ」は、標的核酸のレベルまたは活性（例えばＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の活性）の減少を仲介する標的核酸（例えば、標的マイクロＲＮＡまたは標的炎症性マーカー、例えば、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、もしくは１８に列挙したマイクロＲＮＡのいずれか、または表２１に列挙した炎症性マーカーのいずれか）に相補的な配列を含む核酸分子を意味する。抑制性ＲＮＡの非限定的な例としては、干渉ＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、リボザイム、アンタゴミア、およびアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられる。本明細書では、抑制性ＲＮＡの作製方法が説明される。追加の抑制性ＲＮＡの作製方法は、当技術分野で公知である。
【００４９】
「干渉ＲＮＡ」は、本明細書で用いられる場合、直接的または間接的（すなわち変換の際に）のいずれかによって、ＲＮＡ干渉を仲介することにより遺伝子発現を阻害または下方調節することができるあらゆる二本鎖または一本鎖のＲＮＡ配列を指す。干渉ＲＮＡとしては、これらに限定されないが、低分子干渉ＲＮＡ（「ｓｉＲＮＡ」）および低分子ヘアピンＲＮＡ（「ｓｈＲＮＡ」）が挙げられる。「ＲＮＡ干渉」は、配列親和性（sequence-compatible）メッセンジャーＲＮＡ転写物の選択的な分解を指す。
【００５０】
「ｓｈＲＮＡ」（低分子ヘアピンＲＮＡ）は、本明細書で用いられる場合、アンチセンス領域、ループ部分、およびセンス領域を含むＲＮＡ分子を指し、この場合のセンス領域は、アンチセンス領域と塩基対を形成して二重のステムを形成する相補的ヌクレオチドを有する。転写後プロセシングがなされた後、低分子ヘアピンＲＮＡは、ＲＮアーゼＩＩＩファミリーのメンバーである酵素ダイサーが仲介する切断現象によって低分子干渉ＲＮＡに変換される。
【００５１】
「低分子干渉ＲＮＡ」または「ｓｉＲＮＡ」は、本明細書で用いられる場合、ＲＮＡ干渉を配列特異的な方式で仲介することにより遺伝子発現を阻害または下方調節することができるあらゆる小さいＲＮＡ分子を指す。この小さいＲＮＡの長さは、例えば約１８〜２１個のヌクレオチドであってもよい。
【００５２】
「アンタゴミア」は、本明細書で用いられる場合、特異的なマイクロＲＮＡ標的への相補性を有する小さい合成ＲＮＡを指し、任意選択で、切断を阻害するような切断部位における誤対合または１つまたは複数の塩基修飾のいずれかを有していてもよい。
【００５３】
成句「転写後プロセシング」は、本明細書で用いられる場合、転写後に起こるｍＲＮＡプロセシングを指し、このようなプロセシングは、例えば酵素ダイサーおよび／またはドローシャによって仲介される。
【００５４】
成句「疾患を発症させるリスク」は、対照の対象または集団（例えば健康な対象または集団）と比較して対象が将来的に神経変性障害を発症させる相対的な確率を意味する。本明細書において、対象が将来的に神経変性疾患を発症させるリスクの決定方法であって、表１〜１９に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または表２０〜２１に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを決定することを含む、方法が提供される。
【００５５】
成句「疾患の進行速度」は、対象における神経変性障害の症状の発症率、対象における神経変性障害の症状が強度を増す（悪化する）速度、対象における１つまたは複数の神経変性障害の症状の頻度、対象における１つまたは複数の神経変性障害の症状の持続時間、または対象の寿命のうち１つまたは複数を意味する。例えば、疾患の進行速度の増加は、対象における神経変性障害の症状の発症率の増加、対象における１つまたは複数の神経変性障害の症状の頻度の増加、対象における１つまたは複数の神経変性障害の症状の持続時間の増加、または対象の寿命の減少のうち１つまたは複数を含んでいてもよい。本明細書では、神経変性障害を有する対象における疾患の進行速度の予測方法が説明される。
【００５６】
用語「精製する」は、物質をその天然の環境から部分的に単離することを意味する（例えば不純にする生体分子または細胞の部分的な除去）。例えば単球（例えばＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球）は、末梢血液サンプル中に存在する他の細胞型から（例えば蛍光補助セルソーティングを用いて）精製することができる。
【００５７】
用語「治療する」は、症状の数を減少させること、あるいは対象における疾患（例えば神経変性疾患）の１つまたは複数の症状の重症度、持続時間、または頻度を減少させることを含む。また治療するという用語は、対象において神経変性障害を発症させるリスクを減少させること、対象において神経変性障害の症状の発症を遅らせること、または神経変性障害を有する対象の寿命を長くすることも含む可能性がある。
【００５８】
用語「カチオン性ポリマー」は、核酸をナノ粒子に縮合させることができる生理学的なｐＨ（例えばおよそｐＨ６．５〜８．０）で正電荷を有する高分子材料を意味する。カチオン性ポリマーの非限定的な例としては、ポリ−L−リシンおよびポリ（エチレンイミン）が挙げられる。カチオン性ポリマーの追加の例は、当技術分野で公知である。
【００５９】
用語「カチオン脂質」は、核酸との複合体を形成することができる生理学的なｐＨ（例えばおよそｐＨ６．５〜８．０）で少なくとも１つの正電荷を有する脂質を意味する。カチオン脂質の非限定的な例としては、１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウムプロポン（propone）（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ−メチル−４−（ジオレイル）メチルピリジニウム、および３β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロールが挙げられる。カチオン脂質の追加の例は、当技術分野で公知であり、市販されている（例えば、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２０００；Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）。
【００６０】
他の定義はこの開示全体にわたり文章中に記載される。特に他の定義がない限り、本明細書において用いられる全ての専門用語や科学用語は、本発明が属する分野の当業者により一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書では、本発明で使用する方法および材料が説明されるが、当技術分野で公知の他の適切な方法および材料も使用することができる。材料、方法、および例は単なる説明のためであり、限定を目的としない。本明細書で述べられた全ての公報、特許出願、特許、配列、データベースエントリー、および他の参考文献は、それら全体が参照により開示に組み込まれる。矛盾が生じる場合、定義を含めて本明細書に従うものとする。
【００６１】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および図から、さらに特許請求の範囲から明らかであろうと予想される。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１Ａ】症状を示す前（６０日目）の時点（前症状）、症状の発症時（発症時）、および疾患末期（末期）における、非トランスジェニック同腹子からのＣＤ３９＋ミクログリアにおけるマイクロＲＮＡ発現と比較した、ＳＯＤＧ９３ＡマウスのＣＤ３９＋ミクログリアにおける有意に調節異常のマイクロＲＮＡのボルケーノプロットである。ｘ軸は、発現の変化（ｄｄＣＴ値に基づくｌｏｇ２倍率変化）を表し、ｙ軸は、その変化の統計的有意性を対数オッズで示す。
【図１Ｂ】全ての疾患段階にわたる非トランスジェニック同腹子からのＣＤ３９＋ミクログリアにおけるマイクロＲＮＡの発現と比較した、ＳＯＤＧ９３ＡマウスのＣＤ３９＋ミクログリアにおける有意に調節異常のマイクロＲＮＡのベン図である。数値は、各疾患段階における有意に調節異常のマイクロＲＮＡを表す。
【図１Ｃ】非トランスジェニック同腹子からのＣＤ３９＋ミクログリアにおけるマイクロＲＮＡの発現と比較した、ＳＯＤＧ９３ＡマウスのＣＤ３９＋ミクログリアにおける有意に調節異常のマイクロＲＮＡの要約である。これらのデータをシングルプレックスＴａｑＭａｎ  ＰＣＲで検証した。
【図２Ａ】症状を示す前（６０日目）の時点（前症状）、症状の発症時（発症時）、および疾患の末期（末期）における、非トランスジェニック同腹子からのＬｙ６ＣＨｉ単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較した、ＳＯＤＧ９３ＡマウスのＬｙ６ＣＨｉ単球における有意に調節異常のマイクロＲＮＡのボルケーノプロットである。ｘ軸は、発現の変化（ｄｄＣＴ値に基づくｌｏｇ２倍率変化）を表し、ｙ軸は、その変化の統計的有意性を対数オッズで示す。
【図２Ｂ】全ての疾患段階にわたる（症状を示す前、症状の発症、および疾患の末期）、非トランスジェニック同腹子からのＬｙ６ＣＨｉ単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較した、ＳＯＤＧ９３ＡマウスのＬｙ６ＣＨｉ単球における有意に調節異常のマイクロＲＮＡのベン図である。数値は、各疾患段階における有意に調節異常のマイクロＲＮＡを表す。
【図２Ｃ】非トランスジェニック同腹子からのＬｙ６ＣＨｉ単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較した、ＳＯＤＧ９３ＡマウスのＬｙ６ＣＨｉ単球における有意に調節異常のマイクロＲＮＡの要約である。これらのデータをシングルプレックスＴａｑＭａｎ  ＰＣＲで検証した。
【図３Ａ】症状を示す前（６０日目）の時点、症状の発症時（発症時）、および疾患の末期（末期）における、非トランスジェニック同腹子からのＬｙ６ＣＬｏｗ単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較した、ＳＯＤＧ９３ＡマウスのＬｙ６ＣＬｏｗ単球における有意に調節異常のマイクロＲＮＡのボルケーノプロットである。ｘ軸は、発現の変化（ｄｄＣＴ値に基づくｌｏｇ２倍率変化）を表し、ｙ軸は、その変化の統計的有意性を対数オッズで示す。
【図３Ｂ】全ての疾患段階にわたる、非トランスジェニック同腹子からのＬｙ６ＣＬｏｗ単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較した、ＳＯＤＧ９３ＡマウスのＬｙ６ＣＬｏｗ単球における有意に調節異常のマイクロＲＮＡのベン図である。数値は、各疾患段階における有意に調節異常のマイクロＲＮＡを表す。
【図３Ｃ】非トランスジェニック同腹子からのＬｙ６ＣＬｏｗ単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較した、ＳＯＤＧ９３ＡマウスのＬｙ６ＣＬｏｗ単球における有意に調節異常のマイクロＲＮＡの要約である。これらのデータをシングルプレックスＴａｑＭａｎ  ＰＣＲで検証した。
【図４】ＳＯＤ１マウスにおける全ての疾患段階にわたる（非トランスジェニック同腹子対照と比較した）Ｌｙ６ＣＨｉ単球における３２種の調節異常のマイクロＲＮＡのＩｎｇｅｎｕｉｔｙパスウェイアナリシスの結果を示すグラフおよび表である。このグラフは、骨疾患、筋疾患、および筋障害性疾患で観察されたパターンを示す。
【図５】健康な対照（８人）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較した、孤発性ＡＬＳ（８人）および再発寛解型多発性硬化症（８人）における６６４種のマイクロＲＮＡに関する血液由来ＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球のｎＣｏｕｎｔｅｒ発現プロファイリングを示すヒートマップである。ヒートマップは、ダネットの事後検定（Ｐ＜０．０１）を用いた分散分析（ＡＮＯＶＡ）の結果を示す。ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中で（健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のこれらのマイクロＲＮＡの発現と比較して）上方調節または下方調節されたマイクロＲＮＡが示される。ヒートマップの各列は、個々の遺伝子を表し、各行は個体を表す。
【図６】孤発性ＡＬＳ（８人）および再発寛解型多発性硬化症（８人）における６６４種のマイクロＲＮＡに関する、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球（８人）におけるこれらのマイクロＲＮＡの発現と比較した血液由来ＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球のｎＣｏｕｎｔｅｒ発現プロファイリングを示すヒートマップである。ヒートマップは、ダネットの事後検定（Ｐ＜０．０１）を用いたＡＮＯＶＡの結果を示す。ＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中で（健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較して）上方調節または下方調節されたマイクロＲＮＡが示される。ヒートマップの各列は、個々の遺伝子を表し、各行は個体を表す。
【図７Ａ】健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較した、ＡＬＳおよびＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における独特な、または類似の調節異常の（上方調節または下方調節された）マイクロＲＮＡのベン図である。
【図７Ｂ】健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較した、ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における有意に調節異常のマイクロＲＮＡを示すボルケーノプロットである。
【図７Ｃ】健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較した、ＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における有意に調節異常のマイクロＲＮＡを示すボルケーノプロットである。
【図８】健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較した、ＡＬＳおよびＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における有意に調節異常のマイクロＲＮＡの要約である。バーは、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較した、ＡＬＳおよびＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の調節異常のマイクロＲＮＡの相対的な発現を示す。
【図９】健康な対象（８人）およびＡＬＳを有する対象（対象１１人）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の６種の異なるマイクロＲＮＡの発現を示す一連の６つのグラフである（リアルタイムＰＣＲによって決定された）。両側マン−ホイットニーｔ検定を用いて、Ｐ値を計算した（＊、Ｐ＜０．０５；＊＊、Ｐ＜０．０１；＊＊＊、Ｐ＜０．００１）。
【図１０Ａ】８人の異なるＡＬＳ患者の臨床的なスコア付け（努力性肺活量（ＦＶＣ）スコアおよび機能評価尺度（ＦＲＳ））を示す２つのグラフである。図１０Ｃに、これらの８人の患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のマイクロＲＮＡ発現と、健康な対照およびＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のマイクロＲＮＡ発現との比較を示す。
【図１０Ｂ】図１０Ａおよび１０Ｃで説明されている８人の異なるＡＬＳ患者のリストである。
【図１０Ｃ】孤発性ＡＬＳ対象（８人）、健康な対象、およびＭＳを有する対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における２０種の上方調節されたマイクロＲＮＡの発現を示す２０のグラフである（リアルタイムＰＣＲを用いて決定された）。両側マン−ホイットニーｔ検定を用いて、Ｐ値を計算した。
【図１１】健康な対照（ｎ＝８）、およびＭＳを有する対象（ｎ＝８）と比較した、孤発性ＡＬＳの対象（ｎ＝１１）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における４種の上方調節されたマイクロＲＮＡの発現のリアルタイムＰＣＲ分析を示す４つのグラフである。示されたデータは、一元配置ＡＮＯＶＡとダネットの多重比較検定を用いて作製された（＊＊＊、ｐ＜０．００１）。
【図１２Ａ】８人の異なるＡＬＳ患者の臨床的なスコア付け（努力性肺活量（ＦＶＣ）スコアおよび機能評価尺度（ＦＲＳ））を示す２つのグラフである。図１０Ｃに、これらの８人の患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のマイクロＲＮＡ発現と、健康な対照およびＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のマイクロＲＮＡ発現との比較を示す。
【図１２Ｂ】図１２Ａおよび１２Ｃで説明されている８人の異なるＡＬＳ患者のリストである。
【図１２Ｃ】健康な対象、および再発寛解型ＭＳ（ＭＳ−ＲＲ）を有する対象と比較した、孤発性ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における２０種の下方調節されたマイクロＲＮＡの発現を示す２０のグラフである（リアルタイムＰＣＲを用いて決定された）。両側マン−ホイットニーｔ検定を用いて、Ｐ値を計算した（＊、Ｐ＜０．０５；＊＊、Ｐ＜０．０１；＊＊＊、Ｐ＜０．００１）。
【図１３】健康な対象、対象（各群で８人）と比較した、孤発性ＡＬＳおよびＭＳ−ＲＲからのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における８種の上方調節されたマイクロＲＮＡの発現を示す８つのグラフである（リアルタイムＰＣＲを用いて決定された）。示されたデータは、一元配置ＡＮＯＶＡとダネットの多重比較検定を用いて作製された（＊＊、Ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１）。
【図１４】健康な対象およびＡＬＳを有する対象（８人）と比較した、ＭＳ−ＲＲ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における５種の上方調節されたマイクロＲＮＡの発現を示す５つの異なるグラフである（リアルタイムＰＣＲを用いて決定された）。両側マン−ホイットニーｔ検定を用いて、Ｐ値を計算した（＊、Ｐ＜０．０５；＊＊、Ｐ＜０．０１；＊＊＊、Ｐ＜０．００１）。
【図１５】健康な対象、および孤発性ＡＬＳを有する対象と比較した、ＭＳ−ＲＲ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における５種の下方調節されたマイクロＲＮＡの発現を示す５つのグラフである（リアルタイムＰＣＲによって決定した）。両側マン−ホイットニーｔ検定を用いて、Ｐ値を計算した（＊、Ｐ＜０．０５）。
【図１６】健康な対象、家族性ＡＬＳを有する対象（ｎ＝５）、および孤発性ＡＬＳを有する対象（ｎ＝１０）からの髄液（ＣＳＦ）において６種の上方調節されたマイクロＲＮＡの発現を示す６つのグラフである。データは、ＡＮＯＶＡをボンフェローニの多重比較検定と共に用いて解析された。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；および＊＊＊、ｐ＜０．００１。
【図１７】健康な対照（ｎ＝１０）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるこれらの炎症性マーカー遺伝子のレベルと比較した、ＡＬＳ対象（ｎ＝８）およびＭＳ対象（ｎ＝１１）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における１７９種の炎症関連遺伝子（「炎症性マーカー遺伝子」）のｎＣｏｕｎｔｅｒ発現プロファイルを示すヒートマップである。データ解析は、ＡＮＯＶＡとダネットの事後検定とを共に用いて行われた（ｐ＜０．０１）。ヒートマップの各列は、個々の遺伝子を表し、各行は、個々の対象を表す。
【図１８Ａ】健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における炎症性マーカー遺伝子のレベルと比較した、ＡＬＳ対象（左のグラフ）およびＭＳ対象（右のグラフ）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における有意に調節異常の炎症性マーカー遺伝子を示す２つのボルケーノプロットである。
【図１８Ｂ】健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における炎症性マーカー遺伝子のレベルと比較した、ＡＬＳおよびＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における有意に調節異常の炎症性マーカー遺伝子の要約である。バーは、ＡＬＳおよびＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における調節異常の炎症性マーカー遺伝子の、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるこれらの遺伝子の発現と比較した相対的な発現を示す。
【図１９】健康な対照（ｎ＝８）およびＡＬＳ対象（ｎ＝１１）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球における８人の異なるマイクロＲＮＡの発現を示す８つのグラフである（リアルタイムＰＣＲを用いて決定された）。データは、両側マン−ホイットニーｔ検定を用いて解析された（＊、Ｐ＜０．０５）。
【図２０Ａ】ＡＬＳ対象（ｎ＝８）およびＭＳ対象（ｎ＝８）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球におけるマイクロＲＮＡの、健康な対照（ｎ＝８）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球におけるこれらのマイクロＲＮＡの発現と比較したｎＣｏｕｎｔｅｒ発現プロファイルを示すヒートマップである。データ解析は、ＡＮＯＶＡとダネットの事後検定とを共に用いて行われた（ｐ＜０．０１）。ヒートマップの各列は、個々の遺伝子を表し、各行は、個々の対象を表す。健康な対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球と比較して、ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球において上方調節または下方調節されたマイクロＲＮＡが示される。
【図２０Ｂ】健康な対照（ｎ＝８）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較した、ＡＬＳ対象（ｎ＝８）およびＭＳ対象（ｎ＝８）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球におけるマイクロＲＮＡのｎＣｏｕｎｔｅｒ発現プロファイルを示すヒートマップである。データ解析は、ＡＮＯＶＡとダネットの事後検定とを共に用いて行われた（ｐ＜０．０１）。ヒートマップの各列は、個々の遺伝子を表し、各行は、個々の対象を表す。健康な対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球におけるマイクロＲＮＡの発現と比較して、ＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球において上方調節または下方調節されたマイクロＲＮＡが示される。
【図２０Ｃ】健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球マイクロＲＮＡの発現と比較した、ＡＬＳおよびＭＳ対象のＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球における有意に調節異常のマイクロＲＮＡの要約である。バーは、健康な対照のＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較した、ＡＬＳおよびＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球における調節異常のマイクロＲＮＡの相対的な発現を示す。
【図２１Ａ−１】症状を示す前（６０日目）、発症時（体重減少で定義される）、および疾患の末期における、非トランスジェニック（Ｔｇ）同腹子の同じ細胞と比較した、ＳＯＤ１Ｇ９３ＡマウスからのＬｙ６ＣＨｉ脾臓由来単球サブセットにおける１７９種の炎症性マーカー遺伝子のｎＣｏｕｎｔｅｒ発現プロファイルである。転写レベルが少なくとも２倍変化した遺伝子を示すダネットの事後検定の結果と共にＡＮＯＶＡのヒートマップを示す（Ｐ＜０．０１）。ヒートマップの各列は、個々の遺伝子を表し、各行は、個々の群を生物学的な３つの組で示す（各時点につき、マウス４〜５匹を含むプールの群ごとにｎ＝３のアレイを用いた）。各疾患段階における非トランスジェニックの重複をまとめて、遺伝子を階層的にクラスタリングした。遺伝子発現レベルを６種のハウスキーピング遺伝子（ＣＬＴＣ、ＧＡＰＤＨ、ＧＵＳＢ、ＨＰＲＴ１、ＰＧＫ１、およびＴＵＢＢ５）の相乗平均に対して正規化した。
【図２１Ａ−２】図２１Ａ−１の続き。
【図２１Ｂ】症状を示す前（６０日目）、発症時（体重減少で定義される）、および疾患の末期における、非トランスジェニック（Ｔｇ）同腹子の同じ細胞と比較してＳＯＤ１Ｇ９３ＡマウスからのＬｙ６ＣＨｉ脾臓由来単球サブセットで有意に下方調節された炎症性マーカー遺伝子を示すｎＣｏｕｎｔｅｒ発現プロファイルのデータである。
【図２１Ｃ】ＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスにおいて疾患発症の１カ月前にＬｙ６ＣＨｉ脾臓由来単球で活性化された主要な生物学的ネットワークのリストである。
【図２１Ｄ】ＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスからの脊髄由来ＣＤ３９＋ミクログリア中で、非トランスジェニック同腹子からの同じ細胞と比較して上方調節された遺伝子のｎＣｏｕｎｔｅｒ発現プロファイルのデータを示す。
【図２１Ｅ−１】ＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスからの脊髄由来ＣＤ３９＋ミクログリア中で、非トランスジェニック同腹子からの同じ細胞と比較して下方調節された遺伝子のｎＣｏｕｎｔｅｒ発現プロファイルのデータを示す。
【図２１Ｅ−２】図２１Ｅ−１の続き。
【図２１Ｆ】疾患発症時の、ＳＯＤ１マウスの脊髄からのＣＤ３９＋ミクログリアにおいて活性化された主要な生物学的経路のリストである。
【図２１Ｇ】発症時のＳＯＤ１マウスの脊髄からのＣＤ３９＋ミクログリア中で、同じＳＯＤ１マウスの脳から単離したＣＤ３９＋ミクログリアと比較して有意に上方調節された遺伝子の比較解析である。
【図２２Ａ】健康な対照（ｎ＝１０）と比較した、孤発性ＡＬＳ（ｎ＝１１）およびＭＳ（ｎ＝８）対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−血液単球における１８４種の炎症関連遺伝子のｎＣｏｕｎｔｅｒ発現プロファイルである。
【図２２Ｂ】健康な対照と比較した、孤発性ＡＬＳおよびＭＳ対象における有意に調節異常の遺伝子の発現における倍数の差を示すグラフである。遺伝子発現レベルを、６種の内部基準のハウスキーピング遺伝子（ＣＬＴＣ、ＧＡＰＤＨ、ＧＵＳＢ、ＰＧＫ１、およびＴＵＢＢ５）の相乗平均に対して正規化した。
【図２２Ｃ】孤発性ＡＬＳ対象およびＭＳ対象で同定された調節異常の遺伝子の主成分分析（ＰＣＡ）分析を遺伝子の空間分布と共に示すグラフである。
【図２３Ａ】健康な対照（１０人）と比較した、孤発性ＡＬＳ（１０人）および家族性ＳＯＤ１ＡＬＳ（４人）における５１１種の免疫関連遺伝子および１８４種の炎症関連遺伝子に関する、血液でソートしたＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球のｎＣｏｕｎｔｅｒ発現プロファイルである。プロファイル（ヒートマップ）は、有意に調節異常の遺伝子を示す教師なし階層的クラスタリング（ピアソン相関）である（ノンパラメトリックなクラスカル−ワリス検定；有意性は、ベンジャミン−ホッホバーグ法によって決定した偽発見率（ＦＤＲ）に基づく；選択されたＦＤＲの限界：０．０５；Ｐ＜０．０１）。ヒートマップの各列は、個々の遺伝子を表し、各行は個々の対象を表す。
【図２３Ｂ】健康な対照と比較した、孤発性ＡＬＣおよび家族性ＡＬＳ対象からの血液でソートしたＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球の有意に調節異常の遺伝子の倍数の差を示すグラフである。遺伝子発現レベルを、１５種の内部基準のハウスキーピング遺伝子（ＡＢＣＦ１、ＡＬＡＳ１、ＥＥＦ１Ｇ、Ｇ６ＰＤ、ＧＡＰＤＨ、ＧＵＳＢ、ＨＰＲＴ１、ＯＡＺ１、ＰＯＬＲ１Ｂ、ＰＯＬＲ２Ａ、ＰＰＩＡ、ＲＰＬ１９、ＤＳＨＡ、ＴＢＰ、およびＴＵＢＢ）の相乗平均に対して正規化した。
【図２３Ｃ】健康な対照と比較した、孤発性ＡＬＳおよび家族性ＡＬＳ対象からの血液でソートしたＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球において同定された調節異常の遺伝子のＰＣＡ分析を遺伝子の空間分布と共に示すグラフである。
【図２４】健康な対照からの血液でソートしたＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球と比較して、家族性および／または孤発性ＡＬＳ対象からの血液でソートしたＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球において最も有意に調節異常であった８種の遺伝子のリアルタイムＰＣＲによる検証を示す一連の８つのグラフである。健康な対照に対する孤発性ＡＬＳおよび家族性ＡＬＳの相対的な発現は、比較Ｃｔ（２−ΔΔＣｔ）法を用いて計算した。遺伝子発現レベルを、３種のハウスキーピング遺伝子（ＧＡＰＤＨ、ＴＵＢＢ、およびＧＲＢ２）の相乗平均に対して正規化した。ポリメラーゼ連鎖反応を対象ごとに二連で行った。このグラフは、ＡＬＳ対象における有意に調節異常の遺伝子の一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）およびダネットの多重比較検定を表す。
【図２５】ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−血液単球において同定された有意に調節異常のｍｉＲＮＡおよびｍＲＮＡを基準とした、ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−血液単球における上位１０種のｍｉＲＮＡ−ｍＲＮＡの相互作用を示すＩｎｇｅｎｕｉｔｙターゲットフィルターアナリシスのグラフである。
【図２６−１】ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−血液単球から集められたデータに行われたマイクロＲＮＡ−ｍＲＮＡターゲットアナリシスの結果を示す表である（ＩＰＡ；Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ）。結果から、２７種のｍＲＮＡを標的とする３２種のｍｉＲＮＡが示される。
【図２６−２】図２６−１の続き。
【図２７−１】ＡＬＳの血液でソートしたＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるマイクロＲＮＡ−ｍＲＮＡの相互作用を示すグラフである。このグラフは、ＡＬＳ対象からの血液でソートしたＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球において有意に調節異常のｍｉＲＮＡおよび免疫関連遺伝子に関する結果を示す。２７種のｍＲＮＡを標的化する合計３２種のｍｉＲＮＡが示される。
【図２７−２】図２７−１の続き。
【図２８Ａ】４１種の調節されない高度に発現されたｍｉＲＮＡ、およびＳＯＤ１マウスの脾臓由来Ｌｙｓ６ＣＨｉ単球で観察された４７種の調節異常の遺伝子（図２８Ａ）、および６４種の調節されない高度に発現されたｍｉＲＮＡ、およびＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−末梢血液単球で観察された５９種の調節異常の遺伝子（図２８Ｂ）において観察された推定のｍｉＲＮＡ−ｍＲＮＡ対と比較して、１０００種の無作為の調節されないｍｉＲＮＡ−ｍＲＮＡ対間の可能性のある無作為の相互作用の分布を示す２つのグラフである（ターゲットスキャン（Ｔａｒｇｅｔｓｃａｎ）４．１）。
【図２８Ｂ】４１種の調節されない高度に発現されたｍｉＲＮＡ、およびＳＯＤ１マウスの脾臓由来Ｌｙｓ６ＣＨｉ単球で観察された４７種の調節異常の遺伝子（図２８Ａ）、および６４種の調節されない高度に発現されたｍｉＲＮＡ、およびＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−末梢血液単球で観察された５９種の調節異常の遺伝子（図２８Ｂ）において観察された推定のｍｉＲＮＡ−ｍＲＮＡ対と比較して、１０００種の無作為の調節されないｍｉＲＮＡ−ｍＲＮＡ対間の可能性のある無作為の相互作用の分布を示す２つのグラフである（ターゲットスキャン（Ｔａｒｇｅｔｓｃａｎ）４．１）。
【図２９−１】ＡＬＳ対象からの血液でソートしたＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で調節異常の上位２０種の転写因子および標的遺伝子を示す表（ＧｅｎｅＧｏパスウェイアナリシスを用いて決定された）、およびＡＬＳ対象の血液でソートしたＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における特異性タンパク質−１（ＳＰ１）転写因子およびその標的遺伝子を示すグラフである。
【図２９−２】図２９−１の続き。
【図３０】ＳＯＤ１／ｍｉＲ−１５５−／−およびＳＯＤ１／ｍｉＲ−１５５＋／−マウス両方のカプラン−マイヤー生存率分析のグラフである。ＳＯＤ１／ｍｉＲ−１５５−／−対ＳＯＤ１／ｍｉＲ−１５５＋／−マウスの群間のマンテル−コックスのＦ検定による比較である（Ｐ＜０．０００１）。
【図３１】疾患の神経系の発症（２の神経学的重症度スコア）に関するイベント発生時間分析のグラフである。ＳＯＤ１／ｍｉＲ−１５５＋／−マウスと比較したところ、ＳＯＤ１／ｍｉＲ−１５５−／−マウスでの疾患発症は有意に遅かった（Ｐ＜０．０００１）。
【図３２】ＳＯＤ１／ｍｉＲ−１５５−／−およびＳＯＤ１／ｍｉＲ−１５５＋／−マウスのロータロッド性能を日齢の関数として示したグラフである。＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；要因ＡＮＯＶＡおよびフィッシャーのＬＳＤ事後検定によってなされた。
【図３３】ＳＯＤ１／ｍｉＲ−１５５−／−およびＳＯＤ１／ｍｉＲ−１５５＋／−マウスの体重の減少のグラフである。統計的分析は、両側ＡＮＯＶＡ、ボンフェローニの事後検定を用いて行われた。＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図３４】ＳＯＤ１／ｍｉＲ−１５５−／−およびＳＯＤ１／ｍｉＲ−１５５＋／−マウスに関する疾患初期の持続時間（発症から体重が５％減少するまで）（左のグラフ）および疾患後期の持続時間（体重の５％減少から末期まで）を示す一連の２つのグラフである。
【図３５Ａ】野生型、ＳＯＤ１／ｍｉＲ１５５＋／＋、ＳＯＤ１／ｍｉＲ１５５−／＋、およびＳＯＤ１／ｍｉＲ１５５−／−マウスにおける、４Ｄ４で染色された脊髄由来単核細胞（常在性ミクログリア）およびＣＤ１１ｂで染色された脊髄由来単核細胞（骨髄細胞）の蛍光活性化細胞分類法（ＦＡＣＳ）の解析データを示す。
【図３５Ｂ】野生型、ＳＯＤ１／ｍｉＲ１５５＋／＋、ＳＯＤ１／ｍｉＲ１５５−／＋、およびＳＯＤ１／ｍｉＲ１５５−／−マウスにおける、脊髄あたりのミクログリア（４Ｄ４陽性）および単球細胞（ＣＤ１１ｂ陽性）細胞の絶対数を示す。
【図３６−１】ＷＴ、ＳＯＤ１／ｍｉＲ１５５−／＋、およびＳＯＤ１／ｍｉＲ１５５−／−マウスにおける、脊髄ミクログリアおよびＬｙ６ＣＨｉ脾臓由来単球における炎症関連遺伝子の発現を示す一連の４つのヒートマップである。（ａ）で示されるヒートマップは、末期の動物によるものである。（この場合、ＳＯＤ１／ｍｉＲ１５５−／−マウスはそれでもなお生存可能であり、研究終了時には繁殖するが、ＳＯＤ１／ｍｉＲ−／＋マウスは症状を発症させた（末期）ことに留意する）。全てのマウスは、バックグラウンドがＣ５７／ＢＩ６−ＳＯＤ１の雄である。（ｂ）で示されるヒートマップは、ＳＯＤ１マウスにおいて有意にｍｉＲ１５５の影響を受けた遺伝子を示す。
【図３６−２】図３６−１の続き。
【図３７】野生型、ＳＯＤ１／ｍｉＲ１５５−／＋、ＳＯＤ１／ｍｉＲ１５５−／−マウスからのＬｙ６ＣＨｉ脾臓由来単球サブセットにおける数匹のマウスのマイクロＲＮＡの発現を示すｎＣｏｕｎｔｅｒ発現プロファイルのデータである。
【図３８−１】健康な対照（８人）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較した、孤発性ＡＬＳ（８人）および再発寛解型多発性硬化症（８人）におけるマイクロＲＮＡに関する血液由来ＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球のｎＣｏｕｎｔｅｒ発現プロファイリングを示すヒートマップおよび棒グラフである。ヒートマップは、ダネットの事後検定を用いた分散分析（ＡＮＯＶＡ）の結果を示す（Ｐ＜０．０１）。ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中で（健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のこれらのマイクロＲＮＡの発現と比較して）上方調節または下方調節されたマイクロＲＮＡが示される。ヒートマップの各列は、個々の遺伝子を表し、各行は個体を表す。
【図３８−２】図３８−１の続き。
【発明を実施するための形態】
【００６３】
本発明は、少なくとも部分的に、特異的なマイクロＲＮＡおよび炎症性マーカーが、神経変性疾患を有する患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球および／またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球（例えば末梢血または血液由来単球）において調節異常であり、さらに、神経変性障害（例えばＡＬＳ（例えば孤発性ＡＬＳおよび家族性ＡＬＳ）ならびにＭＳ）を有する患者の髄液中に、特異的なマイクロＲＮＡが健康な個体と比較して増加または減少したレベルで存在するという発見に基づく。本発明はまた、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５は、マウスのＡＬＳモデルでの疾患発症において有意な役割を果たすという発見にも基づく。この発見を考慮して、本明細書において、神経変性障害の診断方法、神経変性障害を発症させるリスク（例えば高いリスクまたは低いリスク）がある対象の識別方法、神経変性障害を有する対象における疾患の進行速度の予測方法、神経変性障害を治療するための対象の選択方法、神経障害を有する対象のための治療の選択方法、神経変性障害治療の有効性の決定方法、および臨床試験に参加させるための対象の選択方法が提供される。これらの方法は、表１〜１９のうち１つまたは複数に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、または１０種の）マイクロＲＮＡおよび／または表２０〜２１に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを測定することを含む。
【００６４】
また、神経変性障害（例えばＡＬＳまたはＭＳ）の治療方法であって、対象に、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡ（例えばｈｓａ−ｍｉＲ−１５５）のレベルまたは活性を減少させる、および／または表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、または１９に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルまたは活性を増加させる作用物質（例えば核酸）を投与することを含む、方法も提供される。また、神経障害（例えばＡＬＳまたはＭＳ）の治療方法であって、対象に、表２１に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの発現（例えばタンパク質またはｍＲＮＡ）および／または活性を減少させる作用物質（例えば核酸）、および／または表２０に列挙した遺伝子のうち１つまたは複数の発現（例えばタンパク質またはｍＲＮＡ）および／または活性を増加させる物質（例えば核酸）を投与することを含む、方法も提供される。
【００６５】
また、表１〜１９に列挙したマイクロＲＮＡのいずれか１つ中に存在する配列、または表２０および２１に列挙した遺伝子のいずれか（例えばプライマーまたはプローブ）をコードするｍＲＮＡ中に存在する配列に相補的な配列を含む核酸も提供される。また、標的マイクロＲＮＡまたは標的ｍＲＮＡ（例えば抑制性ＲＮＡ、例えば本明細書において説明される抑制性核酸のいずれか）の発現または活性を減少させる、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙したマイクロＲＮＡ（標的マイクロＲＮＡ）のいずれか１つ中に存在する配列、または表２１に列挙した遺伝子のいずれかによってコードされたｍＲＮＡ（標的ｍＲＮＡ）中に存在する配列に相補的な配列を含む核酸も提供される。また、標的マイクロＲＮＡまたは標的ｍＲＮＡの発現または活性を増加させる、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙したマイクロＲＮＡ（標的マイクロＲＮＡ）のいずれか１つの配列、または表２０に列挙した遺伝子のいずれかによってコードされたｍＲＮＡ（標的ｍＲＮＡ）中に存在する配列を含む核酸を含む組成物も提供される。また、表２０および表２１に列挙したタンパク質のいずれか１つに特異的に結合する少なくとも１種の抗体を含む組成物も包含される。また、表２０および表２１に列挙した少なくとも１種のタンパク質を含む組成物も包含される。また、上記の核酸、タンパク質、または抗体のうち１つまたは複数を（あらゆる組合せで）含むキットも提供される。
【００６６】
神経変性障害
神経変性障害とは、ニューロンの構造および機能の進行性喪失と神経細胞死を特徴とする神経疾患のクラスである。いくつかの神経変性障害において炎症が関与することが示されている。様々な種類の神経変性障害では、運動および感覚ニューロンの進行性喪失と、外部の物体に対する感覚情報を参照する知能が影響を受ける。神経変性障害の非限定的な例としては、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、例えば家族性ＡＬＳおよび孤発性ＡＬＳ）、および多発性硬化症（ＭＳ）が挙げられる。
【００６７】
医療専門家は、対象における１つまたは複数の神経変性障害の症状を評価することによって、神経変性障害を有すると対象を診断する可能性がある。対象における非限定的な神経変性障害の症状としては、足の前部とつま先を持ち上げることの困難さ；腕、脚、足、または足首の衰弱；手の衰弱または不器用；言語不明瞭；嚥下困難；筋痙攣；腕、肩、および舌の単収縮；咀嚼困難；呼吸困難；筋麻痺；部分的または完全な失明；複視；体の一部の刺痛または疼痛；頭の動きに伴い生じる電気ショックのような感覚；震え；歩行不安定；疲労；眩暈；記憶喪失；見当識障害；空間関係の誤認；読取りまたは筆記の困難；集中および思考の困難；判断および決定をなすことの困難；普通の作業の計画および実行の困難；うつ病；不安；社会的引きこもり；気分変動；興奮性；攻撃性；睡眠習慣の変化；徘徊；認知症；自動運動の損失；姿勢およびバランスを保てないこと；筋肉の硬直；運動緩慢；遅いまたは異常な目の動き；不随意の痙動または身もだえするような動き（舞踏病）；不随意の持続的な筋肉の攣縮（ジストニア）；柔軟性の損失；衝動を制御できないこと；および食欲の変化が挙げられる。また医療専門家は、部分的に対象の神経変性障害の家族歴に関する診断を根拠とすることもある。医療専門家は、医療施設（例えば診療所または病院）への対象の説明に基づき神経変性障害を有すると対象を診断することもある。場合によっては、医療専門家は、神経変性障害を有すると対象を診断する可能性があり、その間、対象を介護施設に入院させる。典型的には、医師は、１つまたは複数の症状が示された後に、対象の神経変性障害を診断する。
【００６８】
本明細書において、対象（例えば１つまたは複数の神経変性障害の症状を示す対象、または神経変性障害の症状を示さない対象（例えば診断未確定の、および／または無症状の対象）における、追加の神経変性障害の診断方法が提供される。また、本明細書において、対象における神経変性障害の予後予測方法および治療方法（例えば、対象における神経変性障害の症状（例えば運動失調）の発症率または進行を低減させる方法）も提供される。
【００６９】
マーカー
本明細書において説明される１つまたは複数のマーカーのあらゆる組合せは、本明細書において説明される方法のどれにおいても使用することができ、例えば、対象における神経変性障害の診断方法、神経変性障害を発症させるリスク（例えば高いまたは低いリスク）がある対象の識別方法、神経変性障害を有する対象における疾患の進行速度の予測方法、神経変性障害を治療するための対象の選択方法、神経変性障害を有する対象における治療の有効性の決定方法、または臨床試験に参加させるための対象の選択方法で使用することができる。
【００７０】
表１に、健康な対照（健康な対照のＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球、またはＣＳＦ）と比較して、神経変性障害を有する対象における単球（ＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球）またはＣＳＦで増加したマイクロＲＮＡマーカーを列挙する。
【００７１】
【表１】
2014534810.tif 000003
2014534810.tif 000004
2014534810.tif 000005
2014534810.tif 000006
2014534810.tif 000007
【００７２】
表２に、健康な対照（健康な対照のＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球）と比較して、神経変性障害を有する対象におけるＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球で減少したマイクロＲＮＡマーカーを列挙する。
【００７３】
【表２】
2014534810.tif 000008
2014534810.tif 000009
2014534810.tif 000010
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【００７４】
表３に、健康な対照（健康な対照のＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球、またはＣＳＦ）と比較して、ＡＬＳを有する対象の単球（ＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球）またはＣＳＦで増加したマイクロＲＮＡマーカーを列挙する。
【００７５】
【表３】
2014534810.tif 000012
【００７６】
表４に、健康な対照（健康な対照のＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球）と比較して、ＡＬＳを有する対象の単球（ＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球）で減少したマイクロＲＮＡマーカーを列挙する。
【００７７】
【表４】
2014534810.tif 000013
【００７８】
表５に、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球と比較して、ＡＬＳ患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で増加したマイクロＲＮＡマーカーを列挙する。
【００７９】
【表５】
2014534810.tif 000014
【００８０】
表６に、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球と比較して、ＡＬＳ患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で減少したマイクロＲＮＡを列挙する。
【００８１】
【表６】
2014534810.tif 000015
【００８２】
表７に、ＭＳ対象および健康な対照の両方からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球と比較して、ＡＬＳ患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で独特に増加したマイクロＲＮＡマーカーを列挙する。
【００８３】
【表７】
2014534810.tif 000016
【００８４】
表８に、ＭＳ対象および健康な対照の両方からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球と比較して、ＡＬＳ患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で独特に減少したマイクロＲＮＡマーカーを列挙する。
【００８５】
【表８】
2014534810.tif 000017
【００８６】
表９に、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球と比較して、ＡＬＳ患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球で増加したマイクロＲＮＡマーカーを列挙する。
【００８７】
【表９】
2014534810.tif 000018
【００８８】
表１０に、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球と比較して、ＡＬＳ患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球で減少したマイクロＲＮＡマーカーを列挙する。
【００８９】
【表１０】
2014534810.tif 000019
【００９０】
表１１に、健康な対照からのＣＳＦと比較して、孤発性ＡＬＳまたは家族性ＡＬＳを有する対象からのＣＳＦで独特に増加したマイクロＲＮＡマーカーを列挙する。
【００９１】
【表１１】
2014534810.tif 000020
【００９２】
表１２に、健康な対照（健康な対照のＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋）と比較して、ＭＳを有する対象の単球（ＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球）で増加したマイクロＲＮＡマーカーを列挙する。
【００９３】
【表１２】
2014534810.tif 000021
【００９４】
表１３に、健康な対照（健康な対照のＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球）と比較して、ＭＳを有する対象の単球（ＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球）で減少したマイクロＲＮＡマーカーを列挙する。
【００９５】
【表１３】
2014534810.tif 000022
【００９６】
表１４に、ＭＳ患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球と比較して、ＭＳ患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で増加したマイクロＲＮＡマーカーを列挙する。
【００９７】
【表１４】
2014534810.tif 000023
【００９８】
表１５に、健康な患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球と比較して、ＭＳ患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で減少したマイクロＲＮＡマーカーを列挙する。
【００９９】
【表１５】
2014534810.tif 000024
【０１００】
表１６に、ＡＬＳ対象および健康な対照の両方からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球と比較して、ＭＳ患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で独特に増加したマイクロＲＮＡマーカーを列挙する。
【０１０１】
【表１６】
2014534810.tif 000025
【０１０２】
表１７に、ＡＬＳ対象および健康な対照の両方からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球と比較して、ＭＳ患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で独特に減少したマイクロＲＮＡマーカーを列挙する。
【０１０３】
【表１７】
2014534810.tif 000026
【０１０４】
表１８に、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球と比較して、ＭＳ患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球で増加したマイクロＲＮＡマーカーを示す。
【０１０５】
【表１８】
2014534810.tif 000027
【０１０６】
表１９に、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球と比較して、ＭＳ患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球で減少したマイクロＲＮＡマーカーを列挙する。
【０１０７】
【表１９】
2014534810.tif 000028
【０１０８】
表２０に、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球と比較して、神経変性障害を有する患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で減少した炎症性マーカーを列挙する。
【０１０９】
【表２０】
2014534810.tif 000029
2014534810.tif 000030
2014534810.tif 000031
【０１１０】
表２１に、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球と比較して、神経変性障害を有する患者からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で独特に増加した炎症性マーカーを列挙する。
【０１１１】
【表２１】
2014534810.tif 000032
2014534810.tif 000033
2014534810.tif 000034
【０１１２】
診断方法
本明細書において、神経変性障害の診断方法が提供される。これらの方法は、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球（例えば末梢血または血液由来単球）中の、表１〜１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０〜２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５または６種の）炎症性マーカーのレベルを決定すること、および１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを、１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較することを含む。１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルが参照レベル（複数可）と比較して増加または減少していることが、以下で詳細に概説されるように、対象が神経変性疾患を有することの指標である。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、対象からのＣＳＦまたはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球（例えば末梢血または血液由来単球）中の表１に列挙した１つまたは複数または複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５または６種の）マイクロＲＮＡのレベルが、表１に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較して増加している場合、および／または対象からのＣＳＦまたはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球（例えば末梢血または血液由来単球）中の表２に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５または６種の）マイクロＲＮＡのレベルが、表２に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較して減少している場合、対象を神経変性障害を有すると診断することができる。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の表３および１２に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５または６種の）マイクロＲＮＡのレベルが、表３および１２に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５または６種の）マイクロＲＮＡの参照レベルと比較して増加している場合、および／または対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の表４および１３に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルが、表４および１３に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較して減少している場合、対象を神経変性障害を有すると診断することができる。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の、表５および表１４に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２１に記載の１つまたは複数の炎症性マーカー（例えば、少なくとも２、３、４、５または６）のレベルが、表５および表１４に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベル、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して増加している場合；および／または対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の、表６および表１５に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０に記載の１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表６および表１５に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルおよび／または表２０に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して減少している場合、対象を神経変性障害を有すると診断することができる。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の、表５および７に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表５および７に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルおよび／または表２１に記載の１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して増加している場合；および／または対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の、表６および８に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表６および８に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルおよび／または表２０に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して減少している場合、対象を筋萎縮性側索硬化症を有すると診断することができる。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の表９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５または６種の）マイクロＲＮＡのレベルが、表９に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較して増加している場合、および／または対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の表１０に列挙した１つまたは複数の（例えば１、２、または３種の）マイクロＲＮＡのレベルが、表１０に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較して減少している場合、対象を筋萎縮性側索硬化症を有すると診断することができる。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５または６種）のレベルが、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐの参照レベルと比較して、対象の髄液中で増加している場合、対象を筋萎縮性側索硬化症を有すると診断することができる。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、対象からの髄液中のｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂのレベルが、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂの参照レベルと比較して増加しており、対象からの髄液中のｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数（例えば１、２、３、４、または５種）のレベルが、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐのうち１つまたは複数の参照レベルと比較して減少しているかまた有意な変化がない場合、対象を家族性ＡＬＳを有すると診断することができる。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、対象からの髄液中のｈｓａ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐから選択される２つ以上の（例えば２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベルが、１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較して増加している場合、対象を孤発性ＡＬＳを有すると診断することができる。いくつかの実施形態において、対象からの髄液中のｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐから選択される１つまたは複数の（例えば２、３、４または５種の）マイクロＲＮＡのレベルが、１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較して増加している場合、対象を孤発性ＡＬＳを有すると診断することができる。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の、表１４および表１６に記載の１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２１に記載の１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表１４および表１６に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルおよび／または表２１に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して増加している場合；および／または対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中の、表１５および表１７に記載の１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０に記載の１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表１５および表１７に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルおよび／または表２０に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して減少している場合、対象を多発性硬化症を有すると診断することができる。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の表１８に記載の１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベルが、表１８に記載の１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較して増加している場合、および／または対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の表１９に記載の１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベルが、表１９に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルと比較して減少している場合、対象を多発性硬化症を有すると診断することができる。
【０１２３】
表１〜１９に記載の１つまたは複数のマイクロＲＮＡ（成熟および前駆マイクロＲＮＡの両方）のレベルは、当技術分野で公知の分子生物学的な方法を用いて決定することができる。例えば、本明細書で説明されているようなマイクロＲＮＡのいずれかのレベルは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）と適切なプライマーの使用を含む技術、例えば定量リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）を用いて測定することができる。本明細書で説明されているような成熟および前駆マイクロＲＮＡそれぞれのプライマーは、当技術分野で公知の方法を用いて設計することができる。同様に、表２０および２１に記載の炎症性マーカーのいずれかをコードするｍＲＮＡのレベルは、ＰＣＲと適切なプライマーの使用を含む技術を用いて決定することができる。例えば、プライマーは、標的マイクロＲＮＡまたは標的炎症性マーカーのｍＲＮＡ中に存在する配列に相補的な少なくとも７個の（例えば、少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の）連続したヌクレオチドを含んでいてもよい。プライマーは、本明細書において説明される１つまたは複数の修飾（例えば、主鎖における１つまたは複数の修飾、核酸塩基（複数可）における１つまたは複数の修飾、および糖（複数可）における１つまたは複数の修飾）を含んでいてもよい。プライマーはまた、標識（例えば、放射線同位体またはフルオロフォア）を含んでいてもよい。プライマーはまた、（本明細書において説明されているような）プライマーの安定性を改善するために、二次的な分子または作用物質にコンジュゲートしていてもよい。
【０１２４】
表２０および２１に列挙した炎症性マーカー遺伝子によってコードされたタンパク質のレベルは、表２０および２１に列挙したタンパク質のうち１種に特異的に結合する抗体を利用する当技術分野で公知の多数の技術（例えば免疫ブロッティング）を用いて検出することができる。
【０１２５】
本明細書において説明される方法のいずれかはさらに、対象サンプル（例えば髄液または末梢血液を含む生体サンプル）を得ること、または回収することを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、本方法（例えば本明細書において説明される方法のいずれか）はさらに、単球（例えば、対象からの生体サンプルからＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球、またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球）を精製することを含む。ＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球を精製する方法は、当技術分野で公知の様々な方法を用いて行うことができ、例えば蛍光補助セルソーティング（ＦＡＣＳ）などの抗体ベースの方法を用いて行うことができる。
【０１２６】
本明細書において説明される方法のいずれかは、医療施設（例えば病院、診療所、または介護施設）に訪れた患者に行うことができる。対象は、１つまたは複数の神経変性障害の症状（例えば、本明細書において説明される神経変性障害の症状のいずれか）を示していてもよい。対象はまた、症状を示していなくてもよいし（無症状の対象）、あるいは神経変性障害の症状を１つだけ示していてもよい。対象は、神経変性障害（例えば家族性ＡＬＳ）の家族歴を有していてもよい。
【０１２７】
本明細書において説明される診断方法は、あらゆる医療専門家（例えば、医師、検査技師、看護師、医師助手、および看護師助手）によって行うことができる。本明細書において説明される診断方法は、あらゆる追加の当技術分野で公知の診断試験法（例えば、対象における１つまたは複数の神経変性障害の症状の観察または評価）と組み合わせて用いてもよい。
【０１２８】
治療のための対象の選択方法
また、神経変性障害の治療のための対象の選択方法も提供される。これらの方法は、表１〜１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベル、および／または対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の表２０および２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルを決定すること；対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを、前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較すること；および神経変性障害を治療するために、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベル、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して増加している；および／または対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルおよび／または表２０に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して減少している対象を選択することを含む。
【０１２９】
対象は、治療のために、上記の診断方法を説明する章で説明されているように、表１〜１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０および２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーの相対的な発現に基づき選択されてもよい。例えば、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベル、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルの（参照レベルと比較した）増加は、対象を神経変性障害を有すると診断するのに用いられるのと同様に、神経変性障害を治療するために対象を選択するのにも用いられる可能性がある。同様に、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベル、および／または表２０に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルの（参照レベルと比較した）減少は、対象を神経変性障害を有すると診断するのに用いられるのと同様に、神経変性障害を治療するために対象を選択するのにも用いられる可能性がある。
【０１３０】
表１〜１９に記載の１つまたは複数のマイクロＲＮＡ（成熟および前駆マイクロＲＮＡの両方）のレベルは、当技術分野で公知の分子生物学的な方法を用いて決定することができる。例えば、本明細書で説明されているようなマイクロＲＮＡのいずれかのレベルは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）と適切なプライマーの使用を含む技術、例えば定量リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）を用いて測定することができる。本明細書で説明されているような成熟および前駆マイクロＲＮＡそれぞれのプライマーは、当技術分野で公知の方法を用いて設計することができる。同様に、表２０および２１に記載の炎症性マーカーのいずれかをコードするｍＲＮＡのレベルは、ＰＣＲと適切なプライマーの使用を含む技術を用いて決定することができる。例えば、プライマーは、標的マイクロＲＮＡまたは標的炎症性マーカーのｍＲＮＡ中に存在する配列に相補的な少なくとも７個の（例えば、少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の）連続したヌクレオチドを含んでいてもよい。プライマーは、本明細書において説明される１つまたは複数の修飾（例えば、主鎖における１つまたは複数の修飾、核酸塩基（複数可）における１つまたは複数の修飾、および糖（複数可）における１つまたは複数の修飾）を含んでいてもよい。プライマーはまた、標識（例えば、放射線同位体またはフルオロフォア）を含んでいてもよい。プライマーはまた、（本明細書において説明されているような）プライマーの安定性を改善するために、二次的な分子または作用物質にコンジュゲートしていてもよい。本方法は、あらゆる医療専門家（例えば、医師、看護師、医師助手、検査技師、または看護師助手）によって行うことができる。
【０１３１】
対象は、神経変性障害（例えば、本明細書において説明される神経変性障害の症状のいずれか）の１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、または４つの）症状を示していてもよい。対象はまた、症状を示していなくてもよいし、あるいは神経変性障害の症状を１つだけ示していてもよい。対象は、神経変性障害（例えば家族性ＡＬＳ）の家族歴を有していてもよい。対象は、これまでに神経変性障害を有すると診断されていてもよい。
【０１３２】
対象に投与することができる神経変性障害の治療としては、リルゾール、コルチコステロイド、ベータ−インターフェロン、グラティラマー（glatiramer）、フィンゴリモド、ナタリズマブ、ミトキサントロン、筋弛緩剤、およびアマンタジンが挙げられる。追加の神経変性障害の治療としては、理学療法および血漿交換療法が挙げられる。
【０１３３】
神経変性障害を発症させるリスクがある対象の識別方法
また、神経変性障害を発症させるリスクがある対象の識別方法も提供される。これらの方法は、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１〜１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０および２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルを決定すること；対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルを、前記１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較することを含む。対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベル、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して増加している場合；および／または対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルおよび／または表２０に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して減少している場合、対象は、神経障害を発症させる高いリスクを有すると識別される。
【０１３４】
いくつかの実施形態において、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベル、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して減少しているかまたは有意な変化がない場合；および／または対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルおよび／または表２０に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して増加しているかまたは有意な変化がない場合、対象は、神経障害を発症させる低いリスクを有すると識別される。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、上記の診断方法を説明する章で説明されているように、参照値と比較した、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１〜１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０および２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーの相対的な発現に基づき、対象を神経変性障害を発症させる高いまたは低いリスクを有すると識別することができる。例えば、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、および１８に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベル、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルの（参照レベルと比較した）増加は、対象を神経変性障害を有すると診断するのに用いられるのと同様に、神経変性障害を発症させる高いリスクがある対象を識別するのに用いられる可能性がある。同様に、髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベルまたは表２０に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルの（参照レベルと比較した）減少は、対象を神経変性障害を有すると診断するのに用いられるのと同様に、神経変性障害を発症させる高いリスクがある対象を識別するのに用いられる可能性がある。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、（上記の診断方法を説明する章で詳述されたように）１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルの減少または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルの減少が神経変性疾患の診断の指標である場合、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、または１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベル、および／または表２０に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルの（参照レベルと比較した）増加は、対象の神経変性障害を発症させるリスクが低いことの指標である。いくつかの実施形態において、（上記の診断方法を説明する章で詳述されたように）１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルの増加または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルの増加が神経変性障害の診断の指標である場合、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、および１８に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベル、または表２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルの（参照レベルと比較した）減少は、対象の神経変性障害を発症させるリスクが低いことの指標である。
【０１３７】
本明細書において説明される方法のいずれかにおいて、高いまたは低いリスクとは、表１〜１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベルの増加または減少がない対象、および／または表２０および２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルの増加または減少がない対象（例えば、本明細書において説明される方法のいずれかを用いて神経変性障害を有すると診断されていない対象）との比較によるものである。
【０１３８】
表１〜１９に記載のマイクロＲＮＡのいずれかのレベルまたは表２０および２１に列挙した炎症性マーカーのいずれかのレベルは、標準的な分子生物学的な方法（例えば、本明細書において説明されるＰＣＲベースの方法および抗体ベースの方法）を用いて得てもよい。本方法は、あらゆる医療専門家（例えば、医師、看護師、医師助手、検査技師、または看護師助手）によって行うことができる。
【０１３９】
対象は、１つまたは複数の神経変性障害の症状（例えば本明細書において説明される神経変性障害の症状のいずれか）を示していてもよい。対象はまた、症状を示していなくてもよいし、あるいは神経変性障害の症状を１つだけ示していてもよい。対象は、神経変性障害（例えば家族性ＡＬＳ）の家族歴を有していてもよい。
【０１４０】
神経変性疾患を発症させる高いリスクを有すると識別された対象には、神経変性障害治療を施してもよいし、あるいは新しいまたはその代わりの神経変性障害治療を施してもよい。また神経変性障害を発症させる高いリスクを有すると識別された対象は、より積極的な治療的処置（例えば、診療所または病院を訪れる頻度を多くすること）を受けてもよい。
【０１４１】
疾患の進行速度の予測方法
また、神経変性障害を有する対象における疾患の進行速度の予測方法も提供される。これらの方法は、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１〜１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０および２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルを決定すること；１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを、１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較することを含む。対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベル、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して増加している；および／または対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルおよび／または表２０に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して減少している場合、対象は、疾患の進行速度の増加を有すると予測される。
【０１４２】
いくつかの実施形態において、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベル、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して減少しているかまたは有意な変化がない；および／または対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルおよび／または表２０に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して増加しているかまたは有意な変化がない場合、対象は、比較的遅いかまたは平均の疾患の進行速度を有すると予測される。
【０１４３】
いくつかの実施形態において、上記の診断方法を説明する章で説明されているように、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１〜１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０および２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーの、参照値と比較した相対的な発現に基づき、対象は、速いまたは遅い疾患の進行速度を有すると予測することができる。例えば、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、および１８に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベル、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルの（参照レベルと比較した）増加は、対象を神経変性障害を有すると診断するのに用いられるのと同様に、疾患の進行速度の増加を予測するのにも用いられる可能性がある。同様に、髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベル、および／または表２０に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルの（参照レベルと比較した）減少は、対象を神経変性障害を有すると診断するのに用いられるのと同様に、疾患の進行速度の増加を予測するのにも用いられる可能性がある。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、（上記の診断方法を説明する章で詳述されたように）１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルの減少および／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルの減少が神経変性疾患の診断の指標である場合、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベル、および／または表２０に記載の１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルの（参照レベルと比較した）増加は、減少したまたは平均の疾患の進行速度を予測するのに用いられる可能性がある。いくつかの実施形態において、（上記の診断方法を説明する章で詳述されたように）１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルの増加、および／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルの増加が神経変性障害の診断の指標である場合、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベル、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルの（参照レベルと比較した）減少は、減少したまたは平均の疾患の進行速度を予測するのに用いられる可能性がある。
【０１４５】
いくつかの実施形態において、疾患の進行速度とは、神経変性障害の１つまたは複数の（例えば１、２、３、または４つの）症状（例えば運動失調）の発症率、神経変性障害の症状の強度を増す（悪化する）速度、１つまたは複数の神経変性障害の症状の頻度、１つまたは複数の神経変性障害の症状の持続時間、または対象の寿命である。例えば、疾患の進行速度の増加は、１つまたは複数の（新しい）神経変性障害の症状の発症率の増加、１つまたは複数の神経変性障害の症状の強度を増す（悪化する）速度の増加、１つまたは複数の神経変性障害の症状の持続時間の増加、および対象の寿命の減少のうち１つまたは複数によって証明することができる。
【０１４６】
本明細書において説明される方法を用いて決定された疾患の進行速度は、対象のＣＳＦ中またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−またはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１〜１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベルの増加または減少がない、および／または表２０および２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルの増加または減少がない対象における疾患の進行速度と比較してもよい。いくつかの実施形態において、疾患の進行速度は、同じ神経変性疾患を有すると診断された全ての対象における平均の疾患の進行速度と比較してもよい。
【０１４７】
表１〜１９に記載のマイクロＲＮＡのいずれかのレベルまたは表２０および２１に列挙した炎症性マーカーのいずれかのレベルは、標準的な分子生物学的な方法（例えば、本明細書において説明されるＰＣＲベースの方法および抗体ベースの方法）を用いて得てもよい。本方法は、あらゆる医療専門家（例えば、医師、看護師、医師助手、検査技師、または看護師助手）によって行うことができる。
【０１４８】
対象は、１つまたは複数の（例えば１、２、３、または４）神経変性障害の症状（例えば本明細書において説明される神経変性障害の症状のいずれか）を示していてもよい。対象はまた、症状を示していなくてもよいし、あるいは神経変性障害の症状を１つだけ示していてもよい。対象は、神経変性障害（例えば家族性ＡＬＳ）の家族歴を有していてもよい。いくつかの実施形態において、対象は、すでに神経変性障害を有すると診断されていてもよい。
【０１４９】
これらの方法のいくつかの実施形態はさらに、疾患の進行速度の増加を有すると予測された対象に治療を施すことを含む。いくつかの実施形態において、疾患の進行速度の増加を有すると予測された対象には、より積極的な治療（例えば診療所を訪れる頻度を多くすること）が施される。
【０１５０】
臨床試験に参加させるための対象の選択方法
また、臨床試験に参加させるための対象の選択方法も提供される。これらの方法は、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１〜１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０および２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルを決定すること；１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルを、１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較すること、および対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、１つまたは複数のマイクロＲＮＡおよび／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルが参照レベルと比較して増加または減少している対象を、臨床試験に参加させるために選択すること（以下で詳細に説明されるように）を含む。いくつかの実施形態において、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベル、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して増加している；および／または対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルおよび／または表２０に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して減少している場合、臨床試験に参加させるために対象を選択する。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベル、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して減少しているかまたは有意な変化がない；および／または対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルが、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数のマイクロＲＮＡの参照レベルおよび／または表２０に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカーの参照レベルと比較して増加しているかまたは有意な変化がない場合、臨床試験に参加させるために対象を選択する。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、上記の診断方法を説明する章で説明されているように、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１〜１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡ、および／または表２０および２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーの、参照値と比較した相対的な発現に基づき、臨床試験に参加させるために対象を選択することができる。例えば、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、および１８に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベル、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルの（参照レベルと比較した）増加は、対象を神経変性障害を有すると診断するのに用いられるのと同様に、臨床試験に参加させるために対象を選択するのにも用いられる可能性がある。同様に、髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、または１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベル、および／または表２０に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルの（参照レベルと比較した）減少は、対象を神経変性障害を有すると診断するのに用いられるのと同様に、臨床試験に参加させるために対象を選択するのにも用いられる可能性がある。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、（上記の診断方法を説明する章で詳述されたように）１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルの減少および／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルの減少が神経変性疾患の診断の指標である場合、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベル、および／または表２０に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルにおいて（参照レベルと比較して）増加しているかまたは有意な変化がないことを、臨床試験に参加させるために対象を（例えば対照の対象として）選択するのに用いることができる。いくつかの実施形態において、（上記の診断方法を説明する章で詳述されたように）１つまたは複数のマイクロＲＮＡのレベルの増加、および／または１つまたは複数の炎症性マーカーのレベルの増加が神経変性障害の診断の指標である場合、対象からの髄液またはＣＤ１４＋ＣＤ１６−もしくはＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球中の、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベル、および／または表２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーのレベルにおいて（参照レベルと比較して）減少または有意な変化がないことを、臨床試験に参加させるために対象を選択するのに用いることができる。
【０１５４】
表１〜１９に記載のマイクロＲＮＡのいずれかのレベルまたは表２０および２１に列挙した炎症性マーカーのいずれかのレベルは、標準的な分子生物学的な方法（例えば、本明細書において説明されるＰＣＲベースの方法および抗体ベースの方法）を用いて得てもよい。本方法は、あらゆる医療専門家（例えば、医師、看護師、医師助手、検査技師、または看護師助手）によって行うことができる。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、対象は、１つまたは複数の神経変性障害の症状（例えば本明細書において説明される神経変性障害の症状のいずれか）を示していてもよい。いくつかの実施形態において、対象はまた、症状を示していなくてもよいし、あるいは神経変性障害の症状を１つだけ示していてもよい。いくつかの実施形態において、対象は、神経変性障害（例えば家族性ＡＬＳ）の家族歴を有していてもよい。いくつかの実施形態において、対象は、すでに神経変性障害を有すると診断されていてもよい。
【０１５６】
治療方法
また、神経変性障害の治療方法であって、対象に、少なくとも１種の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）作用物質（例えば核酸）、すなわち表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）マイクロＲＮＡのレベルまたは活性を減少させる作用物質（例えば抑制性核酸、例えばアンタゴミア）、および／または表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、または１９に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種）のマイクロＲＮＡのレベルまたは活性を増加させる作用物質（例えばセンス核酸）を投与することを含む、上記治療方法も提供される。また、神経変性障害（例えばＡＬＳまたはＭＳ）の治療方法であって、対象に、少なくとも１種の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）作用物質（例えば核酸）、すなわち表２１に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）炎症性マーカーの発現（例えばタンパク質またはｍＲＮＡ）または活性を減少させる作用物質（例えば抑制性核酸または抗体）、および／または表２０に列挙した１つまたは複数の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）遺伝子の発現（例えばタンパク質またはｍＲＮＡ）および／または活性を増加させる作用物質（例えばセンス核酸）を投与することを含む、上記治療方法も提供される。いくつかの実施形態において、対象はまず、本明細書において説明される診断方法のいずれか、または本明細書において説明される神経変性障害を発症させるリスクがある対象の予測方法のいずれかを用いた治療のために識別または選択される。
【０１５７】
いくつかの実施形態において、対象に、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５中に存在する連続配列（例えば、成熟または前駆ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５中に存在する連続配列）に相補的な配列を含む少なくとも１種の抑制性核酸が投与される。非限定的な実施形態において、抑制性核酸は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、またはアンタゴミアであってもよい。いくつかの実施形態において、少なくとも１種の抑制性核酸は、対象の髄液に注射される。いくつかの実施形態において、注射は、頭蓋内注射または髄腔内注射である。いくつかの実施形態において、少なくとも１種の抑制性核酸は、１種または複数のカチオン性ポリマーおよび／またはカチオン脂質（例えば、本明細書において説明されるかまたは当技術分野で公知のカチオン性ポリマーのいずれか）と複合体を形成する。特異的な標的ｍｉＲＮＡ（例えばｈｓａ−ｍｉＲ−１５５）の発現および／または活性を減少させるアンタゴミアは、当技術分野で公知の方法を用いて設計することができる（例えば、Krutzfeldら、Nature 438：685〜689、2005を参照）。本明細書では、アンタゴミアおよび他のタイプの抑制性核酸を設計し作製する追加の例示的な方法が説明される。
【０１５８】
いくつかの実施形態において、ｍｉＲ−１５５レベルを減少させる抑制性核酸は、アンタゴミア−１５５ＬＮＡ配列＋ＴＣ＋ＡＣ＋Ａ＋Ａ＋ＴＴＡ＋Ｇ＋Ｃ＋ＡＴ＋Ｔ＋Ａ（配列番号２６２）（式中、＋は、ＬＮＡ部分の存在を示す）である。標的マイクロＲＮＡ分子に対するアンタゴミアを設計する方法は、Obadら、Nature Genetics 43：371〜378、2011で説明されている。ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５のレベルまたは発現を減少させる追加の抑制性核酸は、Wormら、Nucleic Acids Res.37:5784〜5792,2009、およびMurugaiyanら、J.Immunol.187:2213〜2221、2011で説明されている。
【０１５９】
対象に、作用物質（例えば１つまたは複数の抑制性核酸）を、少なくとも１回（例えば、少なくとも２、３、４、または５回）の用量で投与することができる。作用物質（例えば１つまたは複数の抑制性核酸）は、少なくとも１日１回（例えば１日２回、１日３回、および１日４回）、少なくとも週１回（例えば週２回、週３回、週４回）、および／または少なくとも月１回で対象に投与することができる。対象は、長期間で（例えば、少なくとも１カ月、２カ月、６カ月、１年、２年、３年、４年、または５年で）治療することができる（例えば作用物質を定期的に投与することができる）。本明細書で詳細に説明されるように、対象に投与される作用物質の投与量は、多数の生理学的な因子を考慮して医師により決定することができ、このような因子としては、これらに限定されないが、対象の性別、対象の体重、対象の年齢、および他の医療条件の存在が挙げられる。作用物質は、経口、静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、頭蓋内で、または髄液への注射によって対象に投与することができる。同様に、作用物質は、固体（例えば経口投与の場合）として、または生理学的に許容できる液体キャリアー（例えば生理食塩水）として（例えば静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、脳脊髄（髄腔内）、または頭蓋内投与の場合）配合されてもよい。いくつかの実施形態において、作用物質（例えば１つまたは複数の抑制性核酸）は、注射によって投与してもよいし、または所定時間にわたる注入により投与してもよい。
【０１６０】
以下で神経変性障害を治療するために対象に投与される作用物質を説明するが、これらは、あらゆる組合せで（例えば、作用物質または以下で説明されるクラスの作用物質のうち少なくとも１、２、３、４、または５種のあらゆる組合せで）用いることができる。
【０１６１】
抑制性核酸
本明細書において説明される治療方法において有用な抑制性作用物質としては、表１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６、または１８に列挙したマイクロＲＮＡ（例えば、成熟マイクロＲＮＡまたは前駆マイクロＲＮＡ）のいずれかの発現または活性を減少させる抑制性核酸分子（例えばｈｓａ−ｍｉＲ−１５５）、または表２１に列挙した炎症性マーカーをコードするｍＲＮＡのいずれかの発現または活性を減少させる抑制性核酸分子（標的ｍＲＮＡ）が挙げられる。
【０１６２】
本発明の方法および組成物において有用な抑制性核酸としては、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、外部ガイド配列（ＥＧＳ）オリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ化合物、一本鎖または二本鎖ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）化合物、例えばｓｉＲＮＡ化合物、修飾された塩基／ロックト核酸（ＬＮＡ）、アンタゴミア、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、および他のオリゴマー化合物、または標的核酸の少なくとも一部にハイブリダイズしてその機能を調節するオリゴヌクレオチド模倣体が挙げられる。いくつかの実施形態において、抑制性核酸としては、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、キメラアンチセンスオリゴヌクレオチド、修飾された結合を有するアンチセンスオリゴヌクレオチド、干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）；マイクロ、干渉ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）；低分子一過性ＲＮＡ（ｓｔＲＮＡ）；または低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）；低分子ＲＮＡによって誘導された遺伝子の活性化（ＲＮＡａ）；低分子活性化ＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）、またはそれらの組合せが挙げられる。例えばＷＯ２０１０／０４０１１２を参照されたい。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、抑制性核酸は、１０〜５０、１３〜５０、または１３〜３０個のヌクレオチドの長さである。当技術分野で通常の技術を有するものであれば当然のことながら、このようなものとしては、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０個のヌクレオチドの長さ、またはそれらのいずれかの範囲のヌクレオチドの長さのアンチセンス部分を有するオリゴヌクレオチドが挙げられる。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１５個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態において、本発明のアンチセンスまたはオリゴヌクレオチド化合物は、１２個または１３〜３０個のヌクレオチドの長さである。当技術分野で通常の技術を有するものであれば当然のことながら、このようなものとしては、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のヌクレオチドの長さ、またはそれらのいずれかの範囲のヌクレオチドの長さのアンチセンス部分を有する抑制性核酸が挙げられる。
【０１６４】
いくつかの実施形態において、抑制性核酸は、それぞれ少なくとも１つのヌクレオチドで構成される２つ以上の化学的に別個の領域を含むキメラオリゴヌクレオチドである。これらのオリゴヌクレオチドは、典型的には、１つまたは複数の有益な特性（例えば、高いヌクレアーゼ耐性、細胞への取り込みの多さ、高い標的への結合親和性）を付与する修飾されたヌクレオチドの少なくとも１つの領域と、ＲＮＡ：ＤＮＡまたはＲＮＡ：ＲＮＡハイブリッドを切断することができる酵素の基質である領域とを含む。本発明のキメラ抑制性核酸は、上述のような２つ以上のオリゴヌクレオチド、修飾されたオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、および／またはオリゴヌクレオチド模倣体の複合的な構造として形成されていてもよい。このような化合物はまた、当技術分野ではハイブリッドまたはギャップマーともいう。このようなハイブリッド構造の製造を教示している代表的な米国特許は、これらに限定されないが、米国特許第５，０１３，８３０号；同第５，１４９，７９７号；同第５，２２０，００７号；同第５，２５６，７７５号；同第５，３６６，８７８号；同第５，４０３，７１１号；同第５，４９１，１３３号；同第５，５６５，３５０号；同第５，６２３，０６５号；同第５，６５２，３５５号；同第５，６５２，３５６号；および同第５，７００，９２２号を含み、これらはそれぞれ参照により本発明に組み込みこまれる。
【０１６５】
いくつかの実施形態において、抑制性核酸は、糖の２’位で修飾された少なくとも１つのヌクレオチドを含み、最も好ましくは２’−Ｏ−アルキル、２’−Ｏ−アルキル−Ｏ−アルキルまたは２’−フルオロ−修飾ヌクレオチドを含む。他の好ましい実施形態において、ＲＮＡ修飾としては、ピリミジンのリボースにおける２’−フルオロ、２’−アミノ、および２’Ｏ−メチル修飾、脱塩基性残基、またはＲＮＡの３’末端における逆向きの塩基が挙げられる。このような修飾は、慣例的操作でオリゴヌクレオチドに取り込まれ、これらのオリゴヌクレオチドは、所定の標的に対する２’−デオキシオリゴヌクレオチドよりも高いＴｍ（すなわち、それよりも高い標的との結合親和性）を有することが示されている。
【０１６６】
多数のヌクレオチドおよびヌクレオシドの修飾は、それらが取り込まれているオリゴヌクレオチドに、ヌクレアーゼ消化に対して天然型のオリゴデオキシヌクレオチドよりも高い耐性を付与する（すなわち修飾されたオリゴは、修飾されていないオリゴヌクレオチドよりも長い時間無傷のままである）ことが示されている。修飾されたオリゴヌクレオチドの具体的な例としては、修飾された主鎖、例えばホスホロチオエート、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、短鎖アルキルまたはシクロアルキル糖間結合、または短鎖ヘテロ原子または複素環式の糖間結合を含むものが挙げられる。最も好ましくは、ホスホロチオエート主鎖を有するオリゴヌクレオチドおよびヘテロ原子主鎖を有するオリゴヌクレオチドであり、特定には、ＣＨ２−ＮＨ−Ｏ−ＣＨ２、ＣＨ、〜Ｎ（ＣＨ３）〜Ｏ〜ＣＨ２（メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩ主鎖として知られている］、ＣＨ２−−Ｏ−−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２、ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２、およびＯ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ２主鎖、ここで天然型のホスホジエステル主鎖は、Ｏ−Ｐ−−Ｏ−ＣＨのように表される）；アミド主鎖（De Mesmaekerら、Ace.Chem.Res.28：366〜374、1995を参照）；モルホリノ主鎖構造（米国特許第５，０３４，５０６号を参照）；ペプチド核酸（ＰＮＡ）主鎖（この場合、オリゴヌクレオチドのホスホジエステル主鎖は、ヌクレオチドが直接的または間接的にポリアミド主鎖のアザ窒素原子に結合したポリアミド主鎖で置き換えられる、Nielsenら、Science 254：1497、1991を参照）である。リン含有結合としては、これらに限定されないが、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、３’アルキレンホスホネートおよびキラルホスホネートを含むメチルおよび他のアルキルのホスホネート、ホスフィネート、３’−アミノホスホルアミデートおよびアミノアルキルホスホルアミデートを含むホスホルアミデート、チオノホスホルアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、および正常な３’−５’結合を有するボラノホスフェート、２’−５’結合したこれらの類似体、加えて、隣接するヌクレオシド単位対が３’−５’と５’−３’または２’−５’と５’−２’で連結している逆向きの極性を有するものが挙げられる。米国特許第３，６８７，８０８号；同第４，４６９，８６３号；同第４，４７６，３０１号；同第５，０２３，２４３号；同第５，１７７，１９６号；同第５，１８８，８９７号；同第５，２６４，４２３号；同第５，２７６，０１９号；同第５，２７８，３０２号；同第５，２８６，７１７号；同第５，３２１，１３１号；同第５，３９９，６７６号；同第５，４０５，９３９号；同第５，４５３，４９６号；同第５，４５５，２３３号；同第５，４６６，６７７号；同第５，４７６，９２５号；同第５，５１９，１２６号；同第５，５３６，８２１号；同第５，５４１，３０６号；同第５，５５０，１１１号；同第５，５６３，２５３号；同第５，５７１，７９９号；同第５，５８７，３６１号；および同第５，６２５，０５０号を参照されたい（これらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１６７】
モルホリノベースのオリゴマー化合物は、Braaschら、Biochemistry 41（14）：4503〜4510、2002；Genesis、30巻、3版、2001；Heasman、J.、Dev.Biol.、243：209〜214、2002；Naseviciusら、Nat.Genet.26:216〜220、2000；Lacerraら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.97：9591〜9596、2000；および米国特許第５，０３４，５０６号で説明されている。シクロヘキセニル核酸のオリゴヌクレオチド模倣体は、Wangら、J.Am.Chem.Soc.122、8595〜8602、2000で説明されている。
【０１６８】
リン原子非含有の修飾されたオリゴヌクレオチド主鎖は、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルのヌクレオシド間結合、混成のヘテロ原子とアルキルもしくはシクロアルキルとのヌクレオシド間結合、あるいは１つまたは複数の短鎖ヘテロ原子もしくは複素環式のヌクレオシド間結合によって形成される主鎖を有する。このような主鎖は、モルホリノ結合（部分的にヌクレオシドの糖の部分から形成された）を有するもの；シロキサン主鎖；スルフィド、スルホキシド、およびスルホン主鎖；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル主鎖；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル主鎖；アルケン含有主鎖；スルファメート主鎖；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ主鎖；スルホネートおよびスルホンアミド主鎖；アミド主鎖；および混成のＮ、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ２構成部分を有する他のものを含む。米国特許第５，０３４，５０６号；同第５，１６６，３１５号；同第５，１８５，４４４号；同第５，２１４，１３４号；同第５，２１６，１４１号；同第５，２３５，０３３号；同第５，２６４，５６２号；同第５，２６４，５６４号；同第５，４０５，９３８号；同第５，４３４，２５７号；同第５，４６６，６７７号；同第５，４７０，９６７号；同第５，４８９，６７７号；同第５，５４１，３０７号；同第５，５６１，２２５号；同第５，５９６，０８６号；同第５，６０２，２４０号；同第５，６１０，２８９号；同第５，６０２，２４０号；同第５，６０８，０４６号；同第５，６１０，２８９号；同第５，６１８，７０４号；同第５，６２３，０７０号；同第５，６６３，３１２号；同第５，６３３，３６０号；同第５，６７７，４３７号；および同第５，６７７，４３９号を参照されたい（これらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１６９】
また１つまたは複数の置換された糖部分が含まれていてもよく、例えば、２’位において以下に示すもののうち１つ：ＯＨ、ＳＨ、ＳＣＨ３、Ｆ、ＯＣＮ、ＯＣＨ３ＯＣＨ３、ＯＣＨ３Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２またはＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ３（式中ｎは、１〜約１０である）；Ｃｉ〜Ｃ１０低級アルキル、アルコキシアルコキシ、置換低級アルキル、アルカリルまたはアラルキル；Ｃｌ；Ｂｒ；ＣＮ；ＣＦ３；ＯＣＦ３；Ｏ−、Ｓ−、またはＮ−アルキル；Ｏ−、Ｓ−、またはＮ−アルケニル；ＳＯＣＨ３；ＳＯ２ＣＨ３；ＯＮＯ２；ＮＯ２；Ｎ３；ＮＨ２；ヘテロシクロアルキル；ヘテロシクロアルカリル；アミノアルキルアミノ；ポリアルキルアミノ；置換シリル；ＲＮＡ切断基；レポーター基；インターカレーター；オリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改善する基；またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改善する基、および他の類似の特性を有する置換基が含まれていてもよい。好ましい修飾としては、２’−メトキシエトキシ［２’−０−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、また２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）としても知られている］（Martinら、HeIv.Chim.Acta 78：486、1995）が挙げられる。他の好ましい修飾としては、２’−メトキシ（２’−０−ＣＨ３）、２’−プロポキシ（２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、および２’−フルオロ（２’−Ｆ）が挙げられる。また類似の修飾が、オリゴヌクレオチドの他の位置、特定には３’末端ヌクレオチドの糖の３’位および５’末端ヌクレオチドの５’位になされていてもよい。またオリゴヌクレオチドは、ペントフラノシル基の代わりにシクロブチルなどの糖模倣体を有していてもよい。
【０１７０】
また抑制性核酸は、それに加えて、またはその代わりに、核酸塩基（当技術分野では単に「塩基」ということが多い）の修飾または置換を含んでいてもよい。「修飾されていない」または「天然の」核酸塩基は、本明細書で用いられる場合、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、およびウラシル（Ｕ）を含む。修飾された核酸塩基は、天然の核酸では希にまたは一時的にしか見られない核酸塩基、例えばヒポキサンチン、６−メチルアデニン、５−Ｍｅピリミジン、特定には５−メチルシトシン（また５−メチル−２’デオキシシトシンとも称し、当技術分野では５−Ｍｅ−Ｃということが多い）、５−ヒドロキシメチルシトシン（ＨＭＣ）、グリコシルＨＭＣ、およびゲントビオシル（gentobiosyl）ＨＭＣ、加えて合成核酸塩基、例えば２−アミノアデニン、２−（メチルアミノ）アデニン、２−（イミダゾリルアルキル）アデニン、２−（アミノアルキルアミノ）アデニン、または他のヘテロ置換されたアルキルアデニン、２−チオウラシル、２−チオチミン、５−ブロモウラシル、５−ヒドロキシメチルウラシル、８−アザグアニン、７−デアザグアニン、Ｎ６（６−アミノヘキシル）アデニン、および２，６−ジアミノプリンを含む。Kornberg,A.、DNA Replication、W.H.Freeman&Co.、San Francisco、1980、75〜77ページ；およびGebeyehuら、Nucl.Acids Res.15：4513、1987を参照されたい。また当技術分野で公知の「ユニバーサル」塩基、例えばイノシンが含まれていてもよい。５−Ｍｅ−Ｃ置換は、核酸二本鎖の安定性を０．６〜１．２＜０＞Ｃに高めることが示されており（Sanghvi,Y.S.、Crooke,S.T.、およびLebleu,B.編、Antisense Research and Applications、CRC Press、Boca Raton、1993、276〜278ページ）、目下好ましい塩基置換である。
【０１７１】
所定のオリゴヌクレオチドの全ての位置を均一に修飾させることが必ずしも必要ではなく、実際には、単一のオリゴヌクレオチドに上述の修飾のうち１つより多くが取り込まれていてもよく、あるいはオリゴヌクレオチド内の単一のヌクレオシド中にさえ取り込まれていればよい。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、糖とヌクレオシド間結合との両方、すなわちヌクレオチド単位の主鎖は、新規の基で置き換えられる。塩基単位は、適切な核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために維持される。このようなオリゴマー化合物の１種の、優れたハイブリダイゼーション特性を有することが示されているオリゴヌクレオチド模倣体は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と称される。ＰＮＡ化合物において、オリゴヌクレオチドの糖主鎖は、アミド含有主鎖、例えばアミノエチルグリシン主鎖で置き換えられる。核酸塩基は保持され、主鎖のアミド部分のアザ窒素原子に直接的または間接的に結合する。ＰＮＡ化合物の調製を教示している代表的な米国特許は、これらに限定されないが、米国特許第５，５３９，０８２号；同第５，７１４，３３１号；および同第５，７１９，２６２号を含み、これはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる。さらなるＰＮＡ化合物の教示は、Nielsenら、Science 254：1497〜1500、1991で見ることができる。
【０１７３】
抑制性核酸はまた、１つまたは複数の核酸塩基（当技術分野では単に「塩基」ということが多い）の修飾または置換を含んでいてもよい。「修飾されていない」または「天然の」核酸塩基は、本明細書で用いられる場合、プリン塩基のアデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基のチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、およびウラシル（Ｕ）を含む。修飾された核酸塩基は、他の合成および天然核酸塩基、例えば５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチル、ならびに他のアデニンおよびグアニンのアルキル誘導体、２−プロピル、ならびに他のアデニンおよびグアニンのアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン、および２−チオシトシン、５−ハロウラシルおよびシトシン、５−プロピニルウラシルおよびシトシン、６−アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシル、ならびに他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ、特定には５−ブロモ、５−トリフルオロメチル、ならびに他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、７−デアザグアニンおよび７−デアザアデニン、ならびに３−デアザグアニンおよび３−デアザアデニンを含む。
【０１７４】
さらに、核酸塩基は、米国特許第３，６８７，８０８号で開示されたもの、「The Concise Encyclopedia of Polymer Science And Engineering」、858〜859ページ、Kroschwitz,J.I.編、John Wiley&Sons、1990で開示されたもの、Englischら、Angewandle Chemie、国際版、1991、30、613ページによって開示されたもの、およびSanghvi,Y.S.、15章、Antisense Research and Applications、289〜302ページ、それぞれCrooke,S.T.およびLebleu,B.、CRC Press、1993によって開示されたものを含む。これらの核酸塩基のうちある種のものは、本発明のオリゴマー化合物の結合親和性を高めるのに特に有用である。これらの核酸塩基としては、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、ならびに２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル、および５−プロピニルシトシンを含むＮ−２、Ｎ−６、および０−６置換プリン類が挙げられる。５−メチルシトシン置換は、核酸二重鎖の安定性を０．６〜１．２＜０＞Ｃに高めることが示されており（Sanghvi,Y.S.、Crooke,S.T.およびLebleu,B.編、「Antisense Research and Applications」、CRC Press、Boca Raton、1993、276〜278ページ）、目下好ましい塩基置換であり、２’−Ｏ−メトキシエチル糖の修飾と組み合わされる場合によりいっそう好ましい。修飾された核酸塩基は、米国特許第３，６８７，８０８号ならびに同第４，８４５，２０５号；同第５，１３０，３０２号；同第５，１３４，０６６号；同第５，１７５，２７３号；同第５，３６７，０６６号；同第５，４３２，２７２号；同第５，４５７，１８７号；同第５，４５９，２５５号；同第５，４８４，９０８号；同第５，５０２，１７７号；同第５，５２５，７１１号；同第５，５５２，５４０号；同第５，５８７，４６９号；同第５，５９６，０９１号；同第５，６１４，６１７号；同第５，７５０，６９２号、および同第５，６８１，９４１号に記載されている（これらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、抑制性核酸は、オリゴヌクレオチドの活性、細胞分布、または細胞による取り込みを強化する１つまたは複数の部分または結合体と化学的に連結している。このような部分は、これらに限定されないが、脂質部分、例えばコレステロール部分（Letsingerら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86：6553〜6556、1989）、コール酸（Manoharanら、Bioorg.Med.Chem.Lett.4：1053〜1060、1994）、チオエーテル、例えばヘキシル−Ｓ−トリチルチオール（Manoharanら、Ann.N.Y.Acad.Sci.660：306〜309, 1992;Manoharanら、Bioorg.Med.Chem. Lett.3：2765〜2770、1993）、チオコレステロール（Oberhauserら、Nucl.Acids Res.20、533〜538、1992）、脂肪鎖、例えばドデカンジオールまたはウンデシル残基（Kabanovら、FEBS Lett.259：327〜330、1990;Svinarchukら、Biochimie 75：49〜54、1993）、リン脂質、例えばジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロールまたはトリエチルアンモニウム１，２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−ホスホネート（Manoharanら、Tetrahedron Lett.36：3651〜3654、1995;Sheaら、Nucl.Acids Res.18：3777〜3783、1990）、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖（Mancharanら、Nucleosides&Nucleotides 14：969〜973、1995）、またはアダマンタン酢酸（Manoharanら、Tetrahedron Lett. 36：3651〜3654、1995）、パルミチル部分（Mishraら、Biochim.Biophys.Acta 1264：229〜237、1995）、またはオクタデシルアミン、あるいはヘキシルアミノ−カルボニル−ｔオキシコレステロール部分（Crookeら、J. Pharmacol. Exp. Ther. 277：923〜937、1996）を含む。また、米国特許第４，８２８，９７９号；同第４，９４８，８８２号；同第５，２１８，１０５号；同第５，５２５，４６５号；同第５，５４１，３１３号；同第５，５４５，７３０号；同第５，５５２，５３８号；同第５，５７８，７１７号、同第５，５８０，７３１号；同第５，５８０，７３１号；同第５，５９１，５８４号；同第５，１０９，１２４号；同第５，１１８，８０２号；同第５，１３８，０４５号；同第５，４１４，０７７号；同第５，４８６，６０３号；同第５，５１２，４３９号；同第５，５７８，７１８号；同第５，６０８，０４６号；同第４，５８７，０４４号；同第４，６０５，７３５号；同第４，６６７，０２５号；同第４，７６２，７７９号；同第４，７８９，７３７号；同第４，８２４，９４１号；同第４，８３５，２６３号；同第４，８７６，３３５号；同第４，９０４，５８２号；同第４，９５８，０１３号；同第５，０８２，８３０号；同第５，１１２，９６３号；同第５，２１４，１３６号；同第５，０８２，８３０号；同第５，１１２，９６３号；同第５，２１４，１３６号；同第５，２４５，０２２号；同第５，２５４，４６９号；同第５，２５８，５０６号；同第５，２６２，５３６号；同第５，２７２，２５０号；同第５，２９２，８７３号；同第５，３１７，０９８号；同第５，３７１，２４１、５，３９１，７２３号；同第５，４１６，２０３号、同第５，４５１，４６３号；同第５，５１０，４７５号；同第５，５１２，６６７号；同第５，５１４，７８５号；同第５，５６５，５５２号；同第５，５６７，８１０号；同第５，５７４，１４２号；同第５，５８５，４８１号；同第５，５８７，３７１号；同第５，５９５，７２６号；同第５，５９７，６９６号；同第５，５９９，９２３号；同第５，５９９，��２８号および同第５，６８８，９４１号も参照されたい（これらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１７６】
これらの部分または結合体は、１級または２級ヒドロキシル基などの官能基に共有結合した結合基を含んでいてもよい。本発明の結合基としては、インターカレーター、レポーター分子、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、ポリエーテル、オリゴマーの薬力学的特性を強化する基、およびオリゴマーの薬物動態学的特性を強化する基が挙げられる。典型的な結合基としては、コレステロール、脂質、リン脂質、ビオチン、フェナジン、フォレート、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、および色素が挙げられる。薬力学的特性を強化する基としては、本発明に関して、取り込みを改善する、分解への耐性を強化する、および／または標的核酸との配列特異的なハイブリダイゼーションを強化する基が挙げられる。薬物動態学的特性を強化する基としては、本発明に関して、本発明の化合物の取り込み、分布、代謝、または排出を改善する基が挙げられる。代表的な結合基は、１９９２年１０月２３日付けで出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９１９６号、および米国特許第６，２８７，８６０号に開示されており、これらは参照により本明細書に組み込まれる。結合部分としては、これらに限定されないが、脂質部分、例えばコレステロール部分、コール酸、チオエーテル、例えばヘキシル−５−トリチルチオール、チオコレステロール、脂肪鎖、例えばドデカンジオールまたはウンデシル残基、リン脂質、例えばジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロールまたはトリエチルアンモニウム１，２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−ホスホネート、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖、またはアダマンタン酢酸、パルミチル部分、あるいはオクタデシルアミンまたはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分が挙げられる。例えば、米国特許第４，８２８，９７９号；同第４，９４８，８８２号；同第５，２１８，１０５号；同第５，５２５，４６５号；同第５，５４１，３１３号；同第５，５４５，７３０号；同第５，５５２，５３８号；同第５，５７８，７１７号、同第５，５８０，７３１号；同第５，５８０，７３１号；同第５，５９１，５８４号；同第５，１０９，１２４号；同第５，１１８，８０２号；同第５，１３８，０４５号；同第５，４１４，０７７号；同第５，４８６，６０３号；同第５，５１２，４３９号；同第５，５７８，７１８号；同第５，６０８，０４６号；同第４，５８７，０４４号；同第４，６０５，７３５号；同第４，６６７，０２５号；同第４，７６２，７７９号；同第４，７８９，７３７号；同第４，８２４，９４１号；同第４，８３５，２６３号；同第４，８７６，３３５号；同第４，９０４，５８２号；同第４，９５８，０１３号；同第５，０８２，８３０号；同第５，１１２，９６３号；同第５，２１４，１３６号；同第５，０８２，８３０号；同第５，１１２，９６３号；同第５，２１４，１３６号；同第５，２４５，０２２号；同第５，２５４，４６９号；同第５，２５８，５０６号；同第５，２６２，５３６号；同第５，２７２，２５０号；同第５，２９２，８７３号；同第５，３１７，０９８号；同第５，３７１，２４１号、同第５，３９１，７２３号；同第５，４１６，２０３号、同第５，４５１，４６３号；同第５，５１０，４７５号；同第５，５１２，６６７号；同第５，５１４，７８５号；同第５，５６５，５５２号；同第５，５６７，８１０号；同第５，５７４，１４２号；同第５，５８５，４８１号；同第５，５８７，３７１号；同第５，５９５，７２６号；同第５，５９７，６９６号；同第５，５９９，９２３号；同第５，５９９，９２８号および同第５，６８８，９４１号を参照されたい（これらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１７７】
本発明の方法において有用な抑制性核酸は、標的ｍｉＲＮＡに対して十分な相補性を有しており、すなわちこのような抑制性核酸は、十分良好に十分高い特異性でハイブリダイズして、所望の効果をもたらすことができる。「相補的」とは、天然に存在するまたは天然に存在しない塩基またはそれらの類似体を含む２つの配列間で水素結合を介して対形成する能力を指す。例えば、抑制性核酸の１つの位置における塩基が、ｍｉＲＮＡのそれに対応する位置における塩基と水素結合することができる場合、それらの塩基は、その位置において互いに相補的であるとみなされる。いくつかの実施形態において、１００％の相補性は必要ではない。いくつかの実施形態において、１００％の相補性が必要である。慣例的な方法を用いて、十分に高い特異性で標的配列に結合する抑制性核酸を設計することができる。
【０１７８】
特定の例示的な標的セグメントの特異的配列が本明細書に記載されるが、当業者であれば、これらは、本発明の範囲内の特定の実施形態を図解し説明するのに役立つことを理解しているであろう。この開示を考慮すれば、当技術分野で通常の技術を有するものにより追加の標的セグメントを容易に確認することができる。同様に、シード配列内に、またはシード配列に直接隣接して、連続したヌクレオチド少なくとも５個の伸張部を含む５、６、７、８、９、１０個以上のヌクレオチドの長さの標的セグメントが、標的化に適切であるとみなされる。いくつかの実施形態において、標的セグメントは、シード配列のうち１つの５’末端からの連続したヌクレオチドを少なくとも５個含む配列を含んでいてもよい（残りのヌクレオチドは、シード配列の５’末端のすぐ上流から始まり、抑制性核酸が約５〜約３０個のヌクレオチドを含むようになるまで続く、同じＲＮＡの連続した伸張部である）。いくつかの実施形態において、標的セグメントは、シード配列のうち１つの３’末端からの連続したヌクレオチドを少なくとも５個含むＲＮＡ配列によって表される（残りのヌクレオチドは、標的セグメントの３’末端のすぐ下流から始まり、抑制性核酸が約５〜約３０個のヌクレオチドを含むようになるまで続く、同じｍｉＲＮＡの連続した伸張部である）。本明細書で示される配列が関与する分野の当業者であれば、余計な実験を行うことなく、標的化するのに好ましいさらなる領域を同定することが可能であろう。いくつかの実施形態において、抑制性核酸は、標的（例えば標的ｍｉＲＮＡ、例えば成熟もしくは前駆ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、または標的ｍＲＮＡ）中に存在する少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個の連続したヌクレオチドに相補的な配列を含む。
【０１７９】
１つまたは複数の標的領域、セグメントまたは部位が同定されれば、標的に十分に相補的な、すなわち十分に高い特異性で十分良好にハイブリダイズする（すなわち実質的に他の非標的ＲＮＡに結合しない）抑制性核酸化合物が選択され、所望の効果をもたらすことができる。
【０１８０】
本発明に関して、ハイブリダイゼーションは、水素結合を意味し、この水素結合は、相補的ヌクレオシドまたはヌクレオチド塩基間のワトソン−クリック、フーグスティーンまたは逆フーグスティーン型水素結合であってもよい。例えば、アデニンとチミンは、水素結合の形成を介して対をなす相補的核酸塩基である。相補的とは、本明細書で用いられる場合、２個のヌクレオチド間で正確に対を形成する能力を指す。例えば、オリゴヌクレオチドの特定の位置におけるヌクレオチドが、ｍｉＲＮＡ分子またはｍＲＮＡ分子の同じ位置におけるヌクレオチドと水素結合が可能な場合、抑制性核酸およびｍｉＲＮＡもしくはｍＲＮＡは、その位置で互いに相補的であるとみなされる。抑制性核酸とｍｉＲＮＡまたはｍＲＮＡとは、それぞれの分子において十分な数の対応する位置が互いに水素結合可能なヌクレオチドで占められている場合、互いに相補的である。従って、「特異的にハイブリダイゼーション可能な」および「相補的」は、抑制性核酸とｍｉＲＮＡ標的との間で安定で特異的な結合が生じるのに十分な相補性または正確な対形成の程度を示すのに用いられる用語である。例えば、抑制性核酸の１つの位置における塩基が、ｍｉＲＮＡまたはｍＲＮＡのそれに対応する位置における塩基と水素結合が可能な場合、それらの塩基は、その位置において互いに相補的であるとみなされる。１００％の相補性は必要ではない。
【０１８１】
当技術分野では当然のことながら、相補的核酸配列は、特異的にハイブリダイズ可能にするためにその標的核酸の配列に１００％相補的でなくてもよいことが理解される。本発明の方法のための相補的核酸配列は、特異的な結合が望ましい条件下で、例えばｉｎ  ｖｉｖｏでのアッセイまたは治療的処置の場合での生理学的条件下で、加えてｉｎ  ｖｉｔｒｏでのアッセイの場合ではアッセイが適切なストリンジェンシーの条件下で行われる条件下で、上記配列と標的ｍｉＲＮＡまたはｍＲＮＡ分子との結合が標的ｍｉＲＮＡまたはｍＲＮＡの正常な機能に干渉して、発現または活性の損失を引き起こし、かつ上記配列と非標的ＲＮＡ配列との非特異的な結合を回避するのに十分な程度の相補性がある場合、特異的にハイブリダイズ可能である。例えば、ストリンジェントな塩濃度は、通常は約７５０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、好ましくは約５００ｍＭ未満のＮａＣｌおよび５０ｍＭのクエン酸三ナトリウム、より好ましくは約２５０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび２５ｍＭのクエン酸三ナトリウムであろうと予想される。低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーションは、例えばホルムアミドなどの有機溶媒の非存在下で達成することができ、高いストリンジェンシーのハイブリダイゼーションは、少なくとも約３５％ホルムアミド、より好ましくは少なくとも約５０％ホルムアミドの存在下で達成することができる。ストリンジェントな温度条件は、通常は少なくとも約３０℃の温度、より好ましくは少なくとも約３７℃の温度、最も好ましくは少なくとも約４２℃の温度を含むであろうと予想される。ハイブリダイゼーション時間、例えばドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）などの洗浄剤の濃度、およびキャリアーＤＮＡを含むか含まないかなどの様々な追加のパラメーターは、当業者周知である。様々なレベルのストリンジェンシーは、これらの様々な条件を必要に応じて組み合わせることによって達成される。好ましい実施形態において、ハイブリダイゼーションは、３０℃で、７５０ｍＭのＮａＣｌ、７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および１％ＳＤＳで起こるであろうと予想される。より好ましい実施形態において、ハイブリダイゼーションは、３７℃で、５００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％ＳＤＳ、３５％ホルムアミド、および１００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）で起こるであろうと予想される。最も好ましい実施形態において、ハイブリダイゼーションは、４２℃で、２５０ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、および２００μｇ／ｍｌのｓｓＤＮＡで起こるであろうと予想される。これらの条件の有用なバリエーションは、当業者にとっては容易に理解されるであろうと予想される。
【０１８２】
ほとんどの適用に関して、ハイブリダイゼーション後に行われる洗浄工程もストリンジェンシーの点で異なるであろうと予想される。洗浄のストリンジェンシー条件は、塩濃度と温度で定義することができる。上述したように、洗浄のストリンジェンシーは、塩濃度を減少させるか、または温度を上げることにより高めることができる。例えば、洗浄工程のストリンジェントな塩濃度は、好ましくは約３０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび３ｍＭのクエン酸三ナトリウム、最も好ましくは約１５ｍＭ未満のＮａＣｌおよび１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウムであろうと予想される。洗浄工程のストリンジェントな温度条件は、通常は少なくとも約２５℃の温度、より好ましくは少なくとも約４２℃の温度、さらにより好ましくは少なくとも約６８℃の温度を含むであろうと予想される。好ましい実施形態において、洗浄工程は、２５℃で、３０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％ＳＤＳで起こるであろうと予想される。より好ましい実施形態において、洗浄工程は、４２℃で、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％ＳＤＳで起こるであろうと予想される。より好ましい実施形態において、洗浄工程は、６８℃で、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％ＳＤＳで起こるであろうと予想される。これらの条件の追加のバリエーションは、当業者にとっては容易に理解であろうと予想される。ハイブリダイゼーション技術は、当業者によく知られており、例えば、BentonおよびDavis（Science 196:180、1977）；GrunsteinおよびHogness（Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.72：3961、1975）；Ausubelら（Current Protocols in Molecular Biology、Wiley Interscience、New York、2001）；BergerおよびKimmel（Guide to Molecular Cloning Techniques、1987、Academic Press、New York）；およびSambrookら、Molecular Cloning:A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Laboratory Press、New Yorkに記載されている。
【０１８３】
一般的に、本明細書において説明される方法で有用な抑制性核酸は、標的核酸内の標的領域に対して少なくとも８０％の配列相補性を有し、例えばｍｉＲＮＡ内の標的領域に対して９０％、９５％、または１００％の配列相補性を有する。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドの２０個の核酸塩基のうち１８個が相補的であり、それゆえに標的領域に特異的にハイブリダイズするであろうと予想されるアンチセンス化合物は、９０パーセントの相補性を示すであろうと予想される。標的核酸のある領域に対する抑制性核酸の相補性のパーセントは、慣例的操作でベーシックローカルアライメントサーチツール（basic local alignment search tools）（ＢＬＡＳＴプログラム）（Altschulら、J.Mol.Biol.215：403〜410、1990；ZhangおよびMadden、Genome Res.7：649〜656、1997）を用いて決定することができる。ｍｉＲＮＡまたはｍＲＮＡにハイブリダイズする本発明のアンチセンスおよび他の化合物は、慣例的な実験により同定される。一般的に、抑制性核酸は、それらの標的に対する特異性を保持していなければならず、すなわち、対象の標的以外の転写物に直接結合してはならないか、あるいは対象の標的以外の転写物の発現レベルに直接的に有意な影響を与えてはならない。
【０１８４】
抑制性核酸に関するさらなる開示については、ＵＳ２０１０／０３１７７１８（アンチセンスオリゴ）；ＵＳ２０１０／０２４９０５２（二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ））；ＵＳ２００９／０１８１９１４、およびＵＳ２０１０／０２３４４５１（ＬＮＡ）；ＵＳ２００７／０１９１２９４（ｓｉＲＮＡ類似体）；ＵＳ２００８／０２４９０３９（修飾されたｓｉＲＮＡ）；ならびにＷＯ２０１０／１２９７４６およびＷＯ２０１０／０４０１１２（抑制性核酸）を参照されたい。
【０１８５】
アンチセンス
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、典型的には、標的に結合して、転写、翻訳、またはスプライシングレベルで発現を中断させることによって、ＤＮＡまたはＲＮＡ標的の発現をブロックするように設計される。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的マイクロＲＮＡまたは標的炎症性マーカーのｍＲＮＡにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするように設計された相補的な核酸配列である。従って、標的に十分に相補的な、すなわち十分に高い特異性で十分良好にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドが選択され、所望の効果をもたらすことができる。
【０１８６】
修飾された塩基／ロックト核酸（ＬＮＡ）
いくつかの実施形態において、本明細書において説明される方法で用いられる抑制性核酸は、１つまたは複数の修飾された結合または塩基を含む。修飾された塩基としては、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ペプチド核酸、またはロックト核酸（ＬＮＡ）分子が挙げられる。好ましくは、修飾されたヌクレオチドは、［アルファ］−Ｌ−ＬＮＡなどのロックト核酸分子である。ＬＮＡは、リボース環が２’−酸素と４’−炭素との間のメチレン架橋によって「ロック」されたリボ核酸類似体、すなわち、少なくとも１つのＬＮＡ単量体、すなわち１つの２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレン−β−Ｄ−リボフラノシルヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを含む。ＬＮＡ塩基は、標準的なワトソン−クリック塩基対を形成するが、ロックされた配置は、塩基対形成反応の速度と安定性を高める（Jepsenら、Oligonucleotides 14：130〜146、2004）。またＬＮＡは、ＲＮＡとの塩基対に対して、ＤＮＡと比べて高い親和性も有する。これらの特性のために、ＬＮＡは、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）および比較ゲノムハイブリダイゼーションのためのプローブとして、ｍｉＲＮＡのためのノックダウンツールとして、さらに標的ｍＲＮＡまたは他のＲＮＡ、例えば本明細書において説明されているようなｍｉＲＮＡおよびｍＲＮＡに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドとして特に有用である。
【０１８７】
ＬＮＡ分子としては、各鎖において１０〜３０、例えば１２〜２４、例えば１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のヌクレオチドを含む分子であって、一方の鎖が、ｍｉＲＮＡまたはｍＲＮＡ中の標的領域に実質的に同一な、例えば少なくとも８０％（またはそれより高い割合で、例えば８５％、９０％、９５％、または１００％）同一な、例えば３、２、１、または０個のミスマッチヌクレオチド（複数可）を有する分子が挙げられる。ＬＮＡ分子は、当技術分野で公知の方法を用いて化学合成することができる。
【０１８８】
ＬＮＡ分子は、当技術分野で公知のあらゆる方法を用いて設計することができ、多数のアルゴリズムが公知であり、（例えばインターネットで、例えばexiqon.comで）市販されている。例えば、Youら、Nuc.Acids.Res.34：e60、2006；McTigueら、Biochemistry 43：5388〜405、2004；およびLevinら、Nucl.Acids.Res.34：e142、2006を参照されたい。例えば、アンチセンスオリゴの設計に用いられる方法と類似した「ジーンウォーク（gene walk）」法を用いて、ＬＮＡの阻害活性を最適化することができる。例えば、標的ｍｉＲＮＡまたはｍＲＮＡの所定長さに及ぶ１０〜３０個のヌクレオチドの一続きのオリゴヌクレオチドを調製して、それに続いて活性に関して試験することができる。任意選択で、ギャップ、例えば５〜１０個またはそれより多くのヌクレオチドをＬＮＡ間に残して、合成および試験されるオリゴヌクレオチドの数を減らすことができる。ＧＣ含量は、好ましくは約３０〜６０％である。ＬＮＡ設計に関する一般的なガイドラインは当技術分野で公知である。例えば、ＬＮＡ配列は他のＬＮＡ配列と非常にきつく結合するであろうと予想されるため、ＬＮＡ内で有意な相補性を回避することが好ましい。可能であれば、連続した３つ以上のＧまたはＣの並び、または４つより多くのＬＮＡ残基は回避されるべきである（例えば、極めて短い（例えば約９〜１０ｎｔの）オリゴヌクレオチドの場合はこのようなことは不可能な可能性がある）。いくつかの実施形態において、ＬＮＡは、キシロ−ＬＮＡである。
【０１８９】
いくつかの実施形態において、ＬＮＡ分子は、ｍｉＲＮＡの特異的な領域を標的化するように設計することができる。例えば、特異的な機能的領域を標的化することができ、このような機能的領域としては、例えばシード配列を含む領域などがある。その代わりに、またはそれに加えて、高度に保存された領域を標的化してもよく、このような領域としては、例えば、霊長類（例えばヒト）およびげっ歯類（例えばマウス）などの異種由来の配列を並べて高度な同一性を有する領域を探すことにより同定された領域がある。同一性のパーセントは、ベーシックローカルアライメントサーチツール（ＢＬＡＳＴプログラム）（Altschulら、J.Mol.Biol.215：403〜410、1990；ZhangおよびMadden、Genome Res.7：649〜656、1997）を用いて、例えばデフォルトパラメーターを用いて慣例的操作で決定することができる。
【０１９０】
ＬＮＡに関する追加の情報については、米国特許第６，２６８，４９０号；同第６，７３４，２９１号；同第６，７７０，７４８号；同第６，７９４，４９９号；同第７，０３４，１３３号；同第７，０５３，２０７号；同第７，０６０，８０９号；同第７，０８４，１２５号；および同第７，５７２，５８２号；および付与前の米国公開公報第２０１０／０２６７０１８号；同第２０１０／０２６１１７５号；および同第２０１０／００３５９６８号；Koshkinら、Tetrahedron 54：3607〜3630、1998；Obikaら、Tetrahedron Lett.39：5401〜5404、1998；Jepsenら、Oligonucleotides 14：130〜146、2004；Kauppinenら、Drug Disc.Today 2（3）：287〜290、2005；およびPontingら、Cell 136（4）：629〜641、2009、およびそこで引用された文献を参照されたい。
【０１９１】
また、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＵＳＳＮ６１／４１２，８６２も参照されたい。
【０１９２】
アンタゴミア
いくつかの実施形態において、アンチセンスは、アンタゴミアである。アンタゴミアは、マイクロＲＮＡ（例えば標的ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５）を標的化する化学修飾されたアンチセンスオリゴヌクレオチドである。例えば、本明細書において説明される方法で使用するためのアンタゴミアは、約１２〜２５個のヌクレオチド、好ましくは約１５〜２３個のヌクレオチドのｍｉＲＮＡ標的配列にハイブリダイズするのに十分な相補性を有するヌクレオチド配列を含んでいてもよい。
【０１９３】
一般的に、アンタゴミアは、例えば３’末端にコレステロール部分を含む。いくつかの実施形態において、アンタゴミアは、ＲＮアーゼからの防御、ならびに強化された組織および細胞による取り込みなどの薬理学的特性のための様々な修飾を有する。例えば、上記でアンチセンスオリゴについて考察された修飾に加えて、アンタゴミアは、糖の完全なまたは部分的な２’−Ｏ−メチル化および／またはホスホロチオエート主鎖のうち１つまたは複数を有していてもよい。ホスホロチオエート修飾は、ＲＮアーゼ活性に対する防御をもたらし、その親油性は、組織への取り込みの強化に寄与する。いくつかの実施形態において、アンタゴミアは、６つのホスホロチオエートの主鎖の修飾を含んでいてもよく、この場合、２つのホスホロチオエートは５’末端に配置され、４つは３’末端に配置される。例えば、Krutzfeldtら、Nature 438：685〜689、2005;Czech、N.Engl.J.Med. 354：1194〜1195、2006;Robertsonら、Silence 1：10、2010;MarquezおよびMcCaffrey、Human Gene Ther.19（1）：27〜38、2008; van Rooijら、Circ.Res.103（9）：919〜928、2008;およびLiuら、Int.J.Mol.Sci.9：978〜999、2008を参照されたい。
【０１９４】
また本発明の方法において有用なアンタゴミアは、それらの長さに関して修飾されていてもよいし、あるいは別の方法でアンタゴミアを構成するヌクレオチド数に関して修飾されていてもよい。一般的に、アンタゴミアは、最適な機能のために約２０〜２１個のヌクレオチドの長さであり、このサイズはほとんどの成熟マイクロＲＮＡのサイズに適合する。アンタゴミアは、それらの標的に対する特異性を保持していなければならず、すなわち、対象の標的以外の転写物に直接結合してはならないか、あるいは対象の標的以外の転写物の発現レベルに直接的に有意な影響を与えてはならない。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、抑制性核酸は、ロックされており、コレステロール部分を含む（例えばロックトアンタゴミア）。
【０１９６】
ｓｉＲＮＡ
いくつかの実施形態において、標的ｍｉＲＮＡまたは標的ｍＲＮＡに相補的な核酸配列は、干渉ＲＮＡであってもよく、このような干渉ＲＮＡとしては、これらに限定されないが、低分子干渉ＲＮＡ（「ｓｉＲＮＡ」）または低分子ヘアピンＲＮＡ（「ｓｈＲＮＡ」）が挙げられる。干渉ＲＮＡを構築する方法は当技術分野で周知である。例えば、干渉ＲＮＡは、２つの別個のオリゴヌクレオチドから組み立ててもよく、この場合、一方の鎖はセンス鎖であり、他方はアンチセンス鎖であり、アンチセンスおよびセンス鎖は、自己相補的である（すなわち、それぞれの鎖が、他方の鎖のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含む；例えば、アンチセンス鎖およびセンス鎖が二重鎖または二本鎖構造を形成する場合が挙げられる）。アンチセンス鎖は、標的核酸分子のヌクレオチド配列またはその一部に相補的なヌクレオチド配列（すなわち望ましくない遺伝子）を含み、センス鎖は、標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を含む。あるいは、干渉ＲＮＡは、単一種のオリゴヌクレオチドから組み立てられ、この場合、自己相補的なセンスおよびアンチセンス領域は、核酸ベースまたは非核酸ベースのリンカー（複数可）によって連結される。干渉ＲＮＡは、自己相補的なセンスおよびアンチセンス領域を有する二重鎖、非対称二重鎖、ヘアピンまたは非対称ヘアピン二次構造を有するポリヌクレオチドであってもよく、この場合、アンチセンス領域は、別の標的核酸分子のヌクレオチド配列またはその一部に相補的なヌクレオチド配列を含み、センス領域は、標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を有する。干渉は、自己相補的なセンスおよびアンチセンス領域を含む２つ以上のループ構造およびステムを有する環状の一本鎖ポリヌクレオチドであってもよく、この場合、アンチセンス領域は、標的核酸分子のヌクレオチド配列またはその一部に相補的なヌクレオチド配列を含み、センス領域は、標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を有し、この場合、環状ポリヌクレオチドをｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏのいずれかでプロセシングして、ＲＮＡ干渉を仲介することができる活性なｓｉＲＮＡ分子を作製してもよい。
【０１９７】
いくつかの実施形態において、干渉ＲＮＡのコード領域は、センス領域、アンチセンス領域、およびループ領域を有する自己相補的なＲＮＡ分子をコードする。このようなＲＮＡ分子は、所望通りに発現される場合、「ヘアピン」構造を形成し、本明細書では「ｓｈＲＮＡ」と称される。ループ領域は、一般的に、約２〜約１０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態において、ループ領域は、約６〜約９個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態において、センス領域およびアンチセンス領域は、約１５〜約２０個のヌクレオチドの長さである。転写後プロセシングがなされた後、低分子ヘアピンＲＮＡは、ＲＮアーゼＩＩＩファミリーのメンバーである酵素ダイサーが仲介する切断現象によってｓｉＲＮＡに変換される。続いてｓｉＲＮＡは、それと相同性を共有する遺伝子の発現を阻害することができる。詳細については、Brummelkampら、Science 296：550〜553、2002；Leeら、Nature Biotechnol.、20、500〜505、2002；Miyagishi and Taira、Nature Biotechnol.20：497〜500、2002；Paddisonら、Genes&Dev. 16：948〜958、2002；Paul、Nature Biotechnol.20、505〜508、2002；Sui、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.、99（6）：5515〜5520、2002；Yuら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99：6047〜6052、2002を参照されたい。
【０１９８】
ｓｉＲＮＡによってガイドされる標的ＲＮＡの切断反応は、高度な配列特異性を有する。一般的に、標的核酸の一部（すなわち、標的ｍｉＲＮＡまたはｍＲＮＡのシード配列を含む標的領域）と同一なヌクレオチド配列を含むｓｉＲＮＡが阻害に関して好ましい。しかしながら、本発明を実施するにあたりｓｉＲＮＡと標的遺伝子との１００％の配列同一性は必要ではない。従って、本発明は、遺伝学的突然変異、系統多型、または進化的分岐に起因するであろう予想される配列のバリエーションを許容することができるという利点を有する。例えば、標的配列と比較して挿入、欠失、および単一点突然変異を含むｓｉＲＮＡ配列も、阻害に関して有効であることが見出されている。あるいは、ヌクレオチド類似体の置換または挿入を含むｓｉＲＮＡ配列が、阻害に関して有効である可能性がある。一般的に、ｓｉＲＮＡは、その標的に対する特異性を保持していなければならず、すなわち、対象の標的以外の転写物に直接結合してはならないか、あるいは対象の標的以外の転写物の発現レベルに直接的に有意な影響を与えてはならない。
【０１９９】
リボザイム
またトランス切断する酵素的な核酸分子も用いることができ、このような核酸分子は、ヒト疾患用の治療剤として見込みがあることが示されている（UsmanおよびMcSwiggen、Ann.Rep.Med.Chem.30：285〜294、1995；ChristoffersenおよびMarr、J.Med.Chem.38：2023〜2037、1995）。酵素的な核酸分子は、細胞ＲＮＡのバックグラウンド中の特異的なｍｉＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的を切断するように設計されていてもよい。このような切断現象により、ｍｉＲＮＡまたはｍＲＮＡは機能しなくなる。
【０２００】
一般的に、ＲＮＡ切断活性を有する酵素的な核酸は、まず標的ＲＮＡに結合することによって作用する。このような結合は、標的ＲＮＡを切断するように作用する分子の酵素的部分の近傍に保持される酵素的な核酸の標的結合部分を介して起こる。従って、酵素的な核酸はまず標的ＲＮＡを認識して、その次に相補的塩基対形成によりそれと結合し、正しい部位に結合したら、酵素的に作用して標的ＲＮＡを切断する。このような標的ＲＮＡの戦略的な切断は、その活性を破壊するであろうと予想される。酵素的な核酸が結合してそのＲＮＡ標的が切断された後、酵素的な核酸はそのＲＮＡから解離して他の標的を探索し、さらに新しい標的に繰り返して結合して切断することができる。
【０２０１】
数種のアプローチ、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏでの選択（進化）法（Orgel、Proc.R.Soc.London、B 205：435、1979）が、ホスホジエステル結合およびアミド結合の切断およびライゲーションなどの様々な反応を触媒することができる新しい核酸触媒を得るために用いられてきた（Joyce、Gene、82、83〜87、1989；Beaudryら、Science 257、635〜641、1992；Joyce、Scientific American 267、90〜97、1992；Breakerら、TIBTECH 12：268、1994；Bartelら、Science 261：1411〜1418、1993；Szostak、TIBS 17、89〜93、1993；Kumarら、FASEB J.、9：1183、1995；Breaker、Curr.Op.Biotech.、1：442、1996）。触媒活性に最適なリボザイムの開発は、遺伝子発現を調節する目的でＲＮＡ切断リボザイムを用いるあらゆる戦略に大いに貢献するであろうと予想される。ハンマーヘッド型リボザイムは、例えば、飽和（１０ｒｎＭ）濃度のＭｇ２＋補因子の存在下で約１分−１の触媒反応速度（ｋｃａｔ）で機能する。人工「ＲＮＡリガーゼ」リボザイムは、約１００分−１の速度で対応する自己修飾反応を触媒することが示されている。加えて、ＤＮＡで構成される基質結合アームを有する特定の修飾されたハンマーヘッド型リボザイムは、１００分−１に近い複合的な回転率でＲＮＡ切断を触媒することが知られている。
【０２０２】
センス核酸
本明細書において説明される治療方法において有用な作用物質としては、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙したマイクロＲＮＡ（例えば成熟マイクロＲＮＡまたは前駆マイクロＲＮＡ）のいずれかの発現または活性を増加させる、または表２１に列挙した炎症性マーカーをコードするｍＲＮＡのいずれかの発現または活性を増加させるセンス核酸分子が挙げられる。センス核酸は、表２、４、６、８、１０、１３、１５、１７、および１９に列挙したマイクロＲＮＡ（例えば成熟マイクロＲＮＡまたは前駆マイクロＲＮＡ）のいずれか１つの配列、または表２１に列挙したｍＲＮＡのいずれか１つの配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一な配列を含んでいてもよい。センス核酸は、これらに限定されないが、本明細書において説明される修飾（例えば主鎖の修飾、核酸塩基の修飾、糖の修飾、または１つまたは複数のコンジュゲートした分子）のいずれかのうち１つまたは複数を含んでいてもよい。センス核酸の作製および投与方法は、当技術分野で公知である。本明細書では、追加のセンス核酸の作製および使用方法が説明される。
【０２０３】
抑制性核酸およびセンス核酸の作製および使用
本明細書において説明される方法を実施するのに用いられる核酸配列は、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ベクター、ウイルスまたはそれらのハイブリッドのいずれかにかかわらず、様々な源から単離し、遺伝操作し、増幅し、および／または組換えによって発現／生成することができる。組換え核酸配列は、個々に単離してもよいし、またはクローニングして所望の活性について試験してもよい。あらゆる組換え発現系を用いることができ、このような発現系としては、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ、細菌、真菌性、哺乳動物、酵母、昆虫、または植物細胞の発現系などが挙げられる。
【０２０４】
本発明の核酸配列（例えば本明細書において説明される抑制性核酸またはセンス核酸のいずれか）は、送達用ベクターに挿入されて、ベクター内の転写単位から発現させてもよい。組換えベクターは、ＤＮＡプラスミドまたはウイルスベクターであってもよい。ベクターコンストラクトの作製は、当技術分野で周知のあらゆる適切な遺伝子操作技術を用いて達成することができ、このような技術としては、これらに限定されないが、例えばSambrookら、Molecular Cloning：A Laboratory Manual.（1989））、Coffinら、（Retroviruses.（1997））および「RNA Viruses：A Practical Approach」（Alan J.Cann編、Oxford University Press（2000））に記載されているような、標準的なＰＣＲ技術、オリゴヌクレオチド合成、制限エンドヌクレアーゼ消化、ライゲーション、形質転換、プラスミド精製、およびＤＮＡ配列決定が挙げられる。
【０２０５】
当業者には当然のことながら、本発明の核酸を細胞に移すために様々な適切なベクターが利用可能である。核酸を送達するのに適したベクターの選択、選択された発現ベクターを細胞に挿入する条件の最適化は当業者の技術範囲内であり、余計な実験を必要としない。ウイルスベクターは、パッケージング細胞中で組換えウイルスを生産するための配列を有するヌクレオチド配列を含む。本発明の核酸を発現するウイルスベクターは、これらに限定されないが、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ポックスウイルス、またはアルファウイルスなどのウイルス主鎖をベースとして構築してもよい。本発明の核酸を発現することができる組換えベクター（例えばウイルスベクター）は、本明細書において説明されているようにして送達して、標的細胞（例えば安定な形質転換体）で維持してもよい。例えば、このような組換えベクター（例えば、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５に相補的なアンチセンスオリゴマーの発現を起こす組換えベクター）は、対象の髄液に（例えば注射または注入）投与することができる（例えば、頭蓋内注射、脳実質内注射、脳室内注射、および髄腔内注射、例えばBergenら、Pharmaceutical Res. 25：983〜998、2007を参照）。また本明細書において説明される核酸のいずれかを発現させるのに使用できる多数の例示的な組換えウイルスベクターもBergenら（上記）によって説明されている。組換えウイルスベクターの追加の例は、当技術分野で公知である。
【０２０６】
本明細書において提供される核酸（例えば抑制性核酸）はさらに、対象に投与（例えば、対象の髄液に注射または注入）する前に、カチオン性ポリマー（例えば、ポリ−L−リシンおよびポリ（エチレンイミン）、カチオン脂質（例えば、１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウムプロポン（propone）（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ−メチル−４−（ジオレイル）メチルピリジニウム、および３β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール）、および／またはナノ粒子（例えば、カチオン性ポリブチルシアノアクリレートナノ粒子、シリカナノ粒子、またはポリエチレングリコールベースのナノ粒子）のうち１種または複数種と複合体を形成してもよい。核酸の治療的送達のためのカチオン性ポリマー、カチオン脂質、およびナノ粒子の追加の例は、当技術分野で公知である。また核酸の治療的送達は、ポリエチレンイミン／ＤＮＡ複合体の髄腔内注射のあとに達成されることが示されている（Wangら、Mol. Ther.12：314〜320、2005）。本明細書において説明される核酸の送達方法は、限定されない。追加の対象への核酸の治療的送達方法は、当技術分野で公知である。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、抑制性核酸（例えば、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５を標的化する１つまたは複数の抑制性核酸）は、全身投与してもよいし（例えば静脈内、動脈内、筋肉内、皮下、または腹腔内）、またはクモ膜下に投与してもよい（例えば硬膜外投与）。いくつかの実施形態において、抑制性核酸は、１つまたは複数のカチオン脂質と組み合わせて（例えばそれらと複合体化して）投与される。１つまたは複数の抑制性核酸（例えば本明細書において説明される抑制性核酸のいずれか）を投与するのに用いることができるカチオン脂質の非限定的な例としては、リポフェクトアミン、ＷＯ９７／０４５０６９、および米国特許出願公開第２０１２／００２１０４４号、同第２０１２／００１５８６５号、同第２０１１／０３０５７６９号、同第２０１１／０２６２５２７号、同第２０１１／０２２９５８１号、同第２０１０／０３０５１９８号、同第２０１０／０２０３１１２号、および同第２０１０／０１０４６２９号（これはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているカチオン脂質分子が挙げられる。本発明を実施するのに用いられる核酸配列は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで周知の化学合成技術により合成することもでき、例えば、Adams、J.Am.Chem.Soc.105：661、1983；Belousov、Nucleic Acids Res.25：3440〜3444、1997；Frenkel、Free Radic.Biol.Med.19：373〜380、1995；Blommers、Biochemistry 33：7886〜7896、1994；Narang、Meth.Enzymol.68：90、1994；Brown、Meth.Enzymol.68：109、1979；Beaucage、Tetra.Lett.22：1859、1981；および米国特許第４，４５８，０６６号に記載されているようにして合成することもできる。
【０２０８】
本発明の核酸配列は、例えばヌクレオチド修飾などの修飾を取り入れることにより、核酸分解に対して安定化されていてもよい。例えば、本発明の核酸配列は、少なくともヌクレオチド配列の５’または３’末端における第１、第２、または第３のインターヌクレオチド結合にホスホロチオエートを含む。別の例として、核酸配列は、２’位で修飾されたヌクレオチド、例えば２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、または２’−Ｏ−−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−−ＮＭＡ）を含んでいてもよい。別の例として、核酸配列は、少なくとも１つの２’−Ｏ−メチル−修飾ヌクレオチドを含んでいてもよく、いくつかの実施形態において、全てのヌクレオチドが、２’−Ｏ−メチル修飾を含む。いくつかの実施形態において、核酸は、「ロック」されており、すなわち、リボース環が２’−Ｏ原子と４’−Ｃ原子とを連結するメチレン架橋によって「ロック」された核酸類似体を含む（例えば、Kaupinnenら、Drug Disc.Today 2（3）：287〜290、2005；Koshkinら、J.Am.Chem.Soc.、120（50）：13252〜13253、1998を参照）。追加の修飾については、ＵＳ２０１０／０００４３２０、ＵＳ２００９／０２９８９１６、およびＵＳ２００９／０１４３３２６を参照されたい（これらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる）。
【０２０９】
本発明を実施するのに用いられる核酸の取り扱い技術、例えばサブクローニング、標識付けプローブ（例えば、クレノーポリメラーゼ、ニックトランスレーション、増幅を用いたランダムプライマーによる標識付け）、配列決定、ハイブリダイゼーションなどは、科学文献および特許文献でよく説明されており、例えば、Sambrookら、Molecular Cloning；A Laboratory Manual 3版.（2001）；Current Protocols in Molecular Biology、Ausubelら編（John Wiley&Sons,Inc.、New York 2010）；Kriegler,Gene Transfer and Expression：A Laboratory Manual（1990）；Laboratory Techniques In Biochemistry And Molecular Biology：Hybridization With Nucleic Acid Probes,PartI.Theory and Nucleic Acid Preparation、Tijssen編.Elsevier、N.Y.（1993）を参照されたい。
【０２１０】
抗体および組換えタンパク質
また表２１に列挙した炎症性マーカー遺伝子のいずれかによってコードされたタンパク質に特異的に結合する１つまたは複数の抗体を対象に投与することによっても、神経変性疾患を治療することができる。表２１に列挙したタンパク質に特異的に結合する抗体は、市販のものでもよいし、あるいは当技術分野で公知の標準的な方法を用いて作製してもよい。例えば、表２１に列挙したタンパク質に特異的に結合するポリクローナル抗体は、哺乳動物を精製タンパク質で免疫化し、哺乳動物から精製タンパク質に特異的に結合する抗体を単離することによって作製することができる。用いられる抗体は、モノクローナル抗体であってもよいし、またはポリクローナル抗体であってもよい。投与される抗体は、免疫グロブリンＧであってもよいし、または免疫グロブリンＭであってもよい。投与される抗体は、キメラ（例えばヒト化抗体）であってもよいし、またはヒト抗体であってもよい。用いられる抗体はまた、抗体フラグメント（例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、および単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント）であってもよい。
【０２１１】
また表２０に列挙した１つまたは複数の炎症性マーカータンパク質は、神経変性障害の治療のために対象に投与することもできる。分子生物学および細胞培養技術を用いて組換えタンパク質を生産する数種の方法が当技術分野で公知である。例えば、表２０に列挙したｍＲＮＡ配列によってコードされた炎症性マーカータンパク質は、（タンパク質発現プラスミドまたはウイルスベクターを用いて）トランスフェクションされた細胞による炎症性の発現を可能にする細菌、酵母、または哺乳動物細胞にトランスフェクションすることもできる。当技術分野で公知の方法を用いて、トランスフェクションされた細胞または培養培地を回収して、組換え炎症性マーカータンパク質を精製してもよい。対象に投与される炎症性マーカータンパク質は、表２０に列挙したアミノ酸配列のいずれかに少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含んでいてもよい。対象に投与される炎症性マーカータンパク質はさらに、修飾（例えば、ポリエチレングリコールもしくはＨＩＶのｔａｔタンパク質、または炎症性マーカータンパク質の細胞透過性を高める他のあらゆる部分）を含んでいてもよい。
【０２１２】
医薬組成物
本明細書において説明される方法は、本明細書において説明される抑制性核酸（例えば、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５を標的化する１つまたは複数の抑制性核酸）、センス核酸、炎症性マーカータンパク質、または抗体のうちいずれか１つまたは複数（例えば２、３、４、または５種）を含む医薬組成物および製剤の投与を含んでいてもよい。
【０２１３】
いくつかの実施形態において、本組成物は、医薬的に許容されるキャリアーと共に配合される。医薬組成物および製剤は、非経口投与、局所投与、経口投与してもよいし、あるいは例えばエアロゾルまたは経皮で局所投与してもよい。医薬組成物は、あらゆる方法で配合することができ、状態または疾患および疾病の程度、各患者の一般健康状態、その結果の好ましい投与方法などに応じて様々な単位剤形で投与することができる。医薬の配合および投与技術に関する詳細は、科学文献および特許文献でよく説明されており、例えば、Remington：The Science and Practice of Pharmacy、21版、2005を参照されたい。
【０２１４】
抑制性核酸は、単独で投与してもよいし、または医薬製剤（組成物）の成分として投与してもよい。本化合物は、ヒトまたは獣医学に使用するのに便利なあらゆる方法で、投与用に配合することができる。また湿潤剤、乳化剤、および潤滑剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム、加えて着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および着香剤、保存剤、ならびに抗酸化剤も組成物中に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、１つまたは複数のカチオン脂質、カチオン性ポリマー、またはナノ粒子が、１つまたは複数の抑制性核酸を含む組成物（例えば、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５を標的化する１つまたは複数の抑制性核酸を含む組成物）中に含まれていてもよい。
【０２１５】
本発明の組成物の製剤は、皮内、吸入法、経口／経鼻、局所、非経口、直腸、および／または膣内投与に適した製剤を含む。このような製剤は、都合のよい形態としては単位剤形で提供することができ、当技術分野で周知のあらゆる薬学的方法で調製することができる。単一剤形を生産するのにキャリアー材料と組み合わせることができる活性成分（例えば本発明の核酸配列）の量は、治療を受ける宿主、例えば皮内または吸入法などの具体的な投与様式に応じて様々であろうと予想される。単一剤形を生産するのにキャリアー材料と組み合わせることができる活性成分の量は、一般的には治療効果をもたらす化合物の量であろうと予想される。
【０２１６】
本発明の医薬製剤は、医薬製造分野で公知のあらゆる方法に従って調製することができる。このような薬物は、甘味剤、矯味矯臭剤、着色剤、および保存剤を含んでいてもよい。製剤は、製造に適した非毒性の医薬的に許容される賦形剤と混合されていてもよい。製剤は、１つまたは複数の希釈剤、乳化剤、保存剤、緩衝剤、賦形剤などを含んでもよく、さらに、液体、粉末、エマルジョン、凍結乾燥粉末、スプレー、クリーム、ローション、放出制御製剤、錠剤、丸剤、ゲルのような形態、パッチ上、インプラント中などで提供されてもよい。
【０２１７】
経口投与用の医薬製剤は、当技術分野で周知の医薬的に許容されるキャリアーを用いて適切で都合のよい投与量で配合することができる。このようなキャリアーにより、患者による摂取に適した錠剤、丸剤、粉末、糖衣錠、カプセル、液体、ロゼンジ、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液等として医薬を単位剤形で配合できるようになる。経口で使用するための医薬調製物を固体賦形剤として配合し、任意選択で得られた混合物を磨り潰し、必要に応じて適切な追加の化合物を添加した後に顆粒の混合物を加工することにより、錠剤または糖衣錠コアを得てもよい。適切な固体賦形剤は、炭水化物またはタンパク質の充填剤であり、このようなものとしては、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールなどの糖類；トウモロコシ、コムギ、コメ、ジャガイモ、または他の植物由来のデンプン；例えばメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、またはナトリウムカルボキシ−メチルセルロースなどのセルロース；ならびにアラビアゴムおよびトラガカントゴムなどのゴム；ならびに例えばゼラチンおよびコラーゲンなどのタンパク質が挙げられる。例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸、またはそれらの塩、例えばアルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤または可溶化剤が添加されていてもよい。プッシュフィット式カプセルは、ラクトースまたはデンプンなどの充填剤または結合剤、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、および任意選択で安定剤と混合された活性物質を含んでいてもよい。ソフトカプセルの場合、活性物質は、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの適切な液体に、安定剤と共に、または安定剤なしで溶解または懸濁させてもよい。
【０２１８】
水性懸濁液は、活性物質（例えば本明細書において説明される抑制性核酸またはセンス核酸）を、例えば水溶液の皮内注射のための水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合した状態で含んでいてもよい。このような賦形剤としては、懸濁化剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム、およびアラビアゴム、および分散剤または湿潤剤、例えば天然に存在するホスファチド（例えばレシチン）、酸化アルキレンと脂肪酸（例えばステアリン酸ポリオキシエチレン）との縮合生成物、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコール（例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール）との縮合生成物、エチレンオキシドと、脂肪酸およびヘキシトール（例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート）から誘導された部分エステルとの縮合生成物、またはエチレンオキシドと、脂肪酸およびヘキシトール無水物（例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）から誘導された部分エステルとの縮合生成物が挙げられる。水性懸濁液はまた、１つまたは複数の保存剤、例えばエチルまたはｎ−ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル、１つまたは複数の着色剤、１つまたは複数の香味剤、および１つまたは複数の甘味剤、例えばスクロース、アスパルテーム、またはサッカリンを含んでいてもよい。製剤の浸透圧モル濃度を調節することができる。
【０２１９】
いくつかの実施形態において、本発明の核酸配列を投与するためにオイルベースの医薬が用いられる。オイルベースの懸濁液は、落花生油、オリーブ油、ゴマ油、もしくはヤシ油などの植物油、または流動パラフィンなどの鉱油；またはこれらの混合物中に活性物質を懸濁することによって配合されてもよい。例えば、生物学的利用率を高め、経口投与される疎水性医薬化合物の個体間および個体内での変動を減少させるために、エッセンシャルオイルまたはエッセンシャルオイル成分を用いることが説明されている米国特許第５，７１６，９２８号を参照されたい（また米国特許第５，８５８，４０１号も参照）。油懸濁液は、蜜蝋、固形パラフィン、またはセチルアルコールなどの増粘剤を含んでいてもよい。口当たりのよい経口用調製物を提供するために、グリセロール、ソルビトール、またはスクロースなどの甘味剤が添加されていてもよい。これらの製剤は、アスコルビン酸などの抗酸化剤の添加により保存することができる。注射用油性ビヒクルの例としては、Minto、J.Pharmacol.Exp. Ther.281：93〜102、1997を参照されたい。
【０２２０】
また医薬製剤は、水中油型エマルジョンの形態であってもよい。油相は、上述された植物油もしくは鉱油、またはこれらの混合物であってもよい。適切な乳化剤としては、天然に存在するゴム、例えばアラビアゴムおよびトラガカントゴム、天然に存在するホスファチド、例えばダイズレシチン、脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導されたエステルまたは部分エステル、例えばソルビタンモノオレエート、ならびにこれらの部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートが挙げられる。またエマルジョンは、例えばシロップやエリキシルの配合の場合、甘味剤や香味剤を含んでいてもよい。このような製剤はさらに、粘滑薬、保存剤、または着色剤を含んでいてもよい。その代わりの実施形態において、これらの本発明の注射用水中油型エマルジョンは、パラフィン油、モノオレイン酸ソルビタン、エトキシ化モノオレイン酸ソルビタン、および／またはエトキシ化トリオレイン酸ソルビタンを含む。
【０２２１】
医薬化合物はまた、例えば坐剤、通気法、粉末、およびエアロゾル製剤（例えばステロイド吸入剤、例えば、Rohatagi,J.Clin.Pharmacol.35：1187〜1193、1995；Tjwa,Ann.Allergy Asthma Immunol.75：107〜111、1995を参照）として、鼻腔内、眼球内、および膣内経路で投与されてもよい。坐剤の製剤は、薬物を、常温では固体であるが体温では液体の適切な非刺激性の賦形剤と混合することによって調製することができ、それゆえに体内で溶融して薬物を放出するであろうと予想される。このような材料は、カカオバターやポリエチレングリコールである。
【０２２２】
いくつかの実施形態において、アプリケータースティック、溶液、懸濁液、エマルジョン、ゲル、クリーム、軟膏、ペースト、ゼリー、塗料、粉末、およびエアロゾルとして配合される医薬化合物は、局部経路により経皮送達することもできる。
【０２２３】
いくつかの実施形態において、医薬化合物はまた、体内で遅延放出させるためのマイクロスフェアとして送達することもできる。例えば、マイクロスフェアは、皮下で徐放される薬物の皮内注射により投与してもよいし（Rao,J.Biomater Sci.Polym.7版：623〜645、1995を参照）；生分解性の注射用ゲル製剤として投与してもよいし（例えば、Gao, Pharm.Res.12：857〜863、1995を参照）；または経口投与用マイクロスフェアとして投与してもよい（例えば、Eyles,J.Pharm.Pharmacol.49：669〜674、1997を参照）。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、医薬化合物は、静脈内（ＩＶ）投与もしくは体腔内、臓器の内腔への投与、または頭蓋への投与（例えば頭蓋内注射または注入）もしくは対象の髄液への投与などによって非経口投与されてもよい。これらの製剤は、医薬的に許容されるキャリアーに溶解させた活性物質溶液を含んでいてもよい。使用可能な、許容できるビヒクルおよび溶媒は、水およびリンゲル液、等張の食塩水である。加えて、溶媒または懸濁媒として滅菌した不揮発性油を使用することもできる。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドなどのあらゆる刺激の少ない不揮発性油を使用することができる。加えて、オレイン酸などの脂肪酸も同様に注射液調製物に使用することができる。これらの溶液は滅菌されており、通常は望ましくない物質を含まない。これらの製剤は、従来の周知の滅菌技術により滅菌することができる。このような製剤は、必要に応じて、生理学的条件に近づけるための医薬的に許容される補助剤を含んでいてもよく、このような補助剤としては、例えばｐＨ調節剤および緩衝剤、毒性を調節する作用物質、例えば酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどが挙げられる。これらの製剤中の活性物質濃度は、広範囲に様々であってよく、主として流体の体積、粘度、体重などに基づき、選択された特定の投与様式および患者の要求に従って選択されるであろうと予想される。ＩＶ投与の場合、製剤は、滅菌された注射用水性または油性懸濁液などの滅菌注射用調製物であってもよい。この懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤と懸濁化剤とを用いて配合することができる。また滅菌注射用調製物は、１，３−ブタンジオール溶液などの非毒性の非経口で許容できる希釈剤または溶媒中の懸濁液であってもよい。投与は、ボーラスまたは持続注入（例えば、特定の期間にわたり実質的に中断しないで血管に導入されること）によってなされてもよい。
【０２２５】
いくつかの実施形態において、医薬化合物および製剤は、凍結乾燥することができる。抑制性核酸またはセンス核酸を含む安定な凍結乾燥製剤は、本発明の医薬と、充填剤、例えばマンニトール、トレハロース、ラフィノース、およびスクロース、またはそれらの混合物とを含む溶液を凍結乾燥することによって作製することができる。安定な凍結乾燥製剤の調製方法は、約２．５ｍｇ／ｍＬのタンパク質、約１５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約１９ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ、および５．５より高いが６．５より低いｐＨを有するクエン酸ナトリウム緩衝液の溶液を凍結乾燥することを含んでいてもよい。例えばＵＳ２００４／００２８６７０を参照されたい。
【０２２６】
組成物および製剤は、リポソームの使用によって送達することができる。リポソームを用いれば、特にリポソーム表面が標的細胞に特異的なリガンドを有するか、あるいは別の方法で選択的に特定の臓器に向けられている場合、ｉｎ  ｖｉｖｏで集中的に標的細胞に活性物質を送達することができる。例えば、米国特許第６，０６３，４００号；同第６，００７，８３９号；Al-Muhammed,J.Microencapsul.13：293〜306、1996；Chonn,Curr.Opin.Biotechnol.6：698〜708、1995；Ostro,Am.J.Hosp.Pharm.46：1576〜1587、1989を参照されたい。
【０２２７】
本発明の製剤は、予防的および／または治療的処置のために投与することができる。いくつかの実施形態において、治療用途の場合、組成物は、本明細書において説明される障害のリスクがあるかまたはそのような障害を有する対象に、障害またはその合併症の臨床徴候を治癒する、緩和する、または部分的に抑えるのに十分な量で投与される。これは、治療有効量と呼ばれることもある。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の医薬組成物は、症状の数を減らす、または対象における１つまたは複数の神経変性障害の症状の重症度、持続時間、もしくは頻度を減少させるのに十分な量で投与される。
【０２２８】
これを達成するのに十分な医薬組成物の量は、治療上有効な用量である。この使用にとって有効な処方計画および量、すなわち投与計画は、疾患または状態の段階、疾患の重症度または状態、患者の健康状態の全身状態、患者の身体状態、年齢などの様々な因子によって決まるであろうと予想される。患者にあった計画を計算する際、投与様式も考慮に入れる。
【０２２９】
また計画は、当技術分野で周知の薬物動態学的パラメーター、すなわち活性物質の吸収速度、生物学的利用率、代謝、クリアランスなども考慮に入れる（例えば、Hidalgo-Aragones、J.Steroid Biochem.Mol.Biol.58：611〜617、1996；Groning、Pharmazie 51：337〜341、1996；Fotherby、Contraception 54：59〜69、1996； Johnson、J.Pharm.Sci.84：1144〜1146、1995；Rohatagi、Pharmazie 50：610〜613、1995；Brophy、Eur.J.Clin.Pharmacol.24：103〜108、1983；Remington：The Science and Practice of Pharmacy、21版、2005を参照）。最先端技術により、臨床医は、それぞれ個々の患者、活性物質、および治療される疾患または状態にあった計画を決定することが可能になる。医薬として用いられる類似の組成物のために提供されたガイドラインを指針として用いることにより、計画、すなわち本発明の方法の実施の際に投与される用量のスケジュールと投与量のレベルが、正しく適切であることを決定することができる。
【０２３０】
単回または複数回の製剤の投与は、例えば患者が必要とし許容されるような投与量および頻度などに応じてなされてもよい。製剤は、効果的に状態、疾患、または症状を治療、予防または改善するのに十分な量の活性物質を提供すべきである。
【０２３１】
その代わりの実施形態において、経口投与用の医薬製剤の１日の量は、約１〜１００ｍｇ／キログラム体重／日またはそれより多い量である。経口投与とは異なり、血流、体腔または臓器の内腔には、それよりも少ない投与量が用いられる可能性がある。局所もしくは経口投与、あるいは粉末、スプレー、または吸入法での投与では、それよりも実質的に高い投与量が用いられる可能性がある。非経口投与または非経口ではない投与が可能な製剤を調製する実際の方法は、当業者にはよく知られており明白であると予想され、Remington：The Science and Practice of Pharmacy、21版、2005のような出版物でより詳細に説明されている。
【０２３２】
様々な研究で、相補的核酸配列を用いた哺乳動物投与の成功が報告されている。例えば、Esau C.ら、Cell Metabolism、3（2）：87〜98、2006では、４週間で週２回、１２．５〜７５ｍｇ／ｋｇの範囲の腹膜内用の用量のｍｉＲ−１２２アンチセンスオリゴヌクレオチドを正常なマウスに投与することが報告されている。治療の終了時、マウスは、体重の損失または食物摂取の減少がなく、健康で正常に見えた。全ての用量で血漿トランスアミナーゼレベルは正常な範囲内（ＡＳＴ３／４が４５、ＡＬＴ３／４が３５）であったが、用量７５ｍｇ／ｋｇのｍｉＲ−１２２  ＡＳＯだけは、極めて軽度のＡＬＴおよびＡＳＴレベルの増加を示した。著者らは、５０ｍｇ／ｋｇが有効な非毒性の用量と結論付けた。Krutzfeldt J.,ら、Nature 438、685〜689、2005による別の研究では、総用量８０、１６０または２４０ｍｇ／ｋｇ体重のアンタゴミアをマウスに注射することにより、ｍｉＲ−１２２を無効にした。最大用量でｍｉＲ−１２２シグナルが完全に消失した。さらに別の研究では、霊長類にロックト核酸（「ＬＮＡ」）を適用してｍｉＲ−１２２の無効化に成功した。Elmenら、Nature 452、896〜899、2008では、霊長類において、１０ｍｇ／ｋｇの１ＬＮＡ−抗ｍｉＲを３回投与することによりｍｉＲ−１２２の効率的な無効化が達成され、それにより総血漿コレステロールの長期にわたる可逆的な減少が起こり、研究動物においてＬＮＡ関連の毒性または組織病理学的変化に関する証拠はまったく示されなかったことが報告されている。
【０２３３】
いくつかの実施形態において、本明細書において説明される方法は、他の薬物または医薬の共投与を含んでいてもよく、例えば、本明細書において説明される神経変性障害の治療のいずれかを共に施してもよい。
【０２３４】
キット
また、本明細書において、本明細書において説明されるプローブ、抑制性核酸、センス核酸、炎症性マーカータンパク質、または抗体のいずれかのうち１つまたは複数（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、または２０種）を（あらゆる組合せで）含むキットも提供される。いくつかの実施形態において、キットは、本明細書において説明される方法のいずれかを行うための説明書を含んでいてもよい。
【０２３５】
いくつかの実施形態において、キットは、表１〜１９に列挙したマイクロＲＮＡ（例えば成熟マイクロＲＮＡまたは前駆マイクロＲＮＡ）のいずれかに存在する配列を増幅するための、または表２０および２１に列挙したｍＲＮＡのいずれかに存在する配列を増幅するための、少なくとも２種のプライマー（例えば、少なくとも４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３６、３８、または４０種）を含んでいてもよい。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、キットは、表１〜１１のいずれか１つに列挙したマイクロＲＮＡのうち１つまたは複数（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９のプライマー対）（例えば、表１および２；表３および４；表５および６；表７および８；表９および１０；および表１１からのマイクロＲＮＡのうち１つまたは複数（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９））に存在する配列を増幅する、および／または表２０および／または表２１に列挙したｍＲＮＡのうち１つまたは複数（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、または９５）に存在する配列を増幅する２つ以上のプライマーセット（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９のプライマー対）を含む（例えばＡＬＳ診断キット）。
【０２３７】
いくつかの実施形態において、キットは、表１〜１１のいずれか１つに列挙したマイクロＲＮＡのうち１つまたは複数（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９のプライマー対）（例えば、表１および２；表３および４；表５および６；表７および８；表９および１０；および表１１からのマイクロＲＮＡのうち１つまたは複数（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９））に存在する配列を増幅する、ならびに／または表２０および／もしくは表２１に列挙したｍＲＮＡのうち１つまたは複数（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、または９５）に存在する配列を増幅する２つ以上のプライマーセット（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９のプライマー対）を含む（例えばＡＬＳ診断キット）。
【０２３８】
いくつかの実施形態において、キットは、表１、２、および１２〜１９のいずれか１つに列挙したマイクロＲＮＡのうち１つまたは複数（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９）（例えば、表１および２；表１２および１３；表１４および１５；表１６および１７；および表１８および１９からの３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９のマイクロＲＮＡ）に集合的にハイブリダイズすることができる、および／または表２０および／または表２１に列挙したｍＲＮＡのうち１つまたは複数（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、または９５）に集合的にハイブリダイズすることができる２つ以上のアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９のプライマー対）を含む（例えばＭＳ診断キット）。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、キットは、表１、２、および１２〜１９のいずれか１つに列挙したマイクロＲＮＡのうち１つまたは複数（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９）（例えば、表１および２；表１２および１３；表１４および１５；表１６および１７；および表１８および１９からの３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９のマイクロＲＮＡ）に集合的にハイブリダイズすることができる、および／または表２０および／または表２１に列挙したｍＲＮＡのうち１つまたは複数（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、または９５）に集合的にハイブリダイズすることができる２つ以上のアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９のアンチセンスオリゴヌクレオチド）を含む（例えばＭＳ診断キット）。
【０２４０】
いくつかの実施形態において、キットは、表１〜１９に列挙したマイクロＲＮＡ（例えば成熟マイクロＲＮＡまたは前駆マイクロＲＮＡ）のいずれかに存在する配列または表２０および２１に列挙したｍＲＮＡのいずれかの内の配列とハイブリダイズするための、少なくとも２種のアンチセンス分子（例えば、少なくとも４、６、８、１０、１２、１４、１６、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、または４０種）を含んでいてもよい。
【０２４１】
いくつかの実施形態において、キットは、少なくとも１種の抑制性核酸、および／または少なくとも１種のセンス核酸（例えば本明細書において説明される抑制性核酸またはセンス核酸のいずれか）を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、キットは、髄腔内もしくは頭蓋内注射または注入用に配合された少なくとも１種の抑制性核酸（例えば、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５を標的化する少なくとも１種の抑制性核酸）を含む。
【０２４２】
いくつかの実施形態において、キットは、表２０または表２１に列挙した炎症性マーカー遺伝子のいずれかによってコードされたタンパク質のいずれか１つに特異的に結合する少なくとも１種の（例えば、少なくとも２、３、４、５、または６種の）抗体（例えば本明細書において説明される様々な抗体または抗体フラグメントのいずれか）を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、抗体は、標識することができる（例えば、フルオロフォア、放射線同位体、酵素、ビオチン、またはアビジンで標識することができる）。
【０２４３】
いくつかの実施形態において、キットはさらに、少なくとも１種の追加の治療剤（例えば、ＫＮＳ７６０７０４、ＳＢ５０９、セフトリアキソン、ミノサイクリン、リルテック、およびリルゾールのうち１つまたは複数）を含む。いくつかの実施形態において、キットはさらに、神経変性疾患（例えば孤発性ＡＬＳ、および／または家族性ＡＬＳ、またはＭＳ）を有するかまたは神経変性疾患（例えば孤発性ＡＬＳ、および／または家族性ＡＬＳ、またはＭＳ）を有すると診断された対象に少なくとも１種の作用物質（例えば、１つまたは複数の抑制性核酸）を投与するための説明書を含む。
【０２４４】
以下の実施例において本発明をさらに説明するが、これは特許請求の範囲に記載される発明の範囲を限定するものではない。
【実施例１】
【０２４５】
マウスのＡＬＳモデル（ＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウス）のＬｙ６ＣＨｉ単球、Ｌｙ６ＣＬｏｗ単球、およびＣＤ３９＋ミクログリアにおけるマイクロＲＮＡの脱制御
Ｌｙｓ６ＣＨｉ／ＣＣＲ２＋単球は、動物ＭＳモデルなどの様々な状態における組織の損傷と疾患の病因に関与する（Kingら、Blood 113：3190〜3197、2009）。症状を示す前の段階（６０日）、症状の発症時、および疾患の末期における、ＣＤ３９＋ミクログリア（図１Ａ〜１Ｃ）、Ｌｙ６ＣＨｉ単球（図２Ａ〜２Ｃ）、およびＬｙ６ＣＬｏｗ単球（図３Ａ〜３Ｃ）の、加えてマウスＳＯＤ１Ｇ９３ＡのＡＬＳモデルのマイクロＲＮＡ発現プロファイルを、非トランスジェニック同腹子の同じ細胞における発現と比較する実験を行った。
【０２４６】
これらのデータを、げっ歯類用ＴａｑＭａｎローデンシティアレイ（Low Density Arrays）（ＴａｑＭａｎマイクロＲＮＡアッセイ、これは、３６４種のマウスのマイクロＲＮＡアッセイを含む（各群でｎ＝２のアレイ；群あたりマウス５〜６匹を含むプール）を用いて集めた。マイクロアレイデータを分位数（Ｒソフトウェア）を用いて正規化し、サンプル間の変動を取り除いた。マイクロＲＮＡの発現レベルを、全てのサンプルにわたりＵ６  ｍｉＲＮＡ（内部対照）に対するｄＣＴと相乗平均を用いて正規化した。正規化工程後、群間の分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて、ＳＯＤ１マウスにおいて全ての疾患段階にわたり有意に変化したマイクロＲＮＡを定義した（≦０．１の偽発見率を使用）。
【０２４７】
全ての疾患段階におけるＳＯＤ１マウスの脾臓由来Ｌｙ６ＣＨｉおよびＬｙ６ＣＬｏｗ単球のマイクロＲＮＡのプロファイリングから、Ｌｙ６ＣＨｉ脾臓由来単球では３２種の有意に調節異常のマイクロＲＮＡが示され、Ｌｙ６ＣＬｏｗ脾臓由来単球では２３種の調節異常のマイクロＲＮＡが示された。臨床的な発症の１カ月前と疾患の進行中に、単球サブセットにおける全ての調節異常のマイクロＲＮＡを観察した。これらのマイクロＲＮＡの大半がＬｙｓ６ＣＨｉ単球とＬｙ６ＣＬｏｗ単球とでオーバーラップしなかったが、これは、これらの異なる単球サブセットは、疾患の進行中に異なる機能を有することを示唆するものである。ＳＯＤ１マウスでの疾患の進行中に、脾臓のＬｙ６ＣＨｉ単球において、炎症関連のマイクロＲＮＡ、例えばｌｅｔ−７ａ、ｍｉＲ−２７ａ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−４５１、およびｍｉＲ−１５５は有意に上方調節された（図２）。ＳＯＤ１マウスにおけるＬｙ６ＣＨｉ単球のマイクロＲＮＡプロファイルのＩｎｇｅｎｕｉｔｙパスウェイアナリシスから、原発性筋障害で観察されたマイクロＲＮＡ発現のパターンが同定された（図４）。
【０２４８】
ＳＯＤ１マウスにおけるＣＤ３９＋ミクログリアのマイクロＲＮＡ発現プロファイリングからのデータから、非トランスジェニック同腹子の同じ細胞と比較して、２４種のマイクロＲＮＡが上方調節され、２種のマイクロＲＮＡが下方調節されたことが示される。これらのマイクロＲＮＡは、６種のマイクロＲＮＡ（ｌｅｔ−７ａ、ｍｉＲ−２７ａ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１４６ａ、およびｍｉＲ−１５５）を除いて、Ｌｙ６ＣＨｉ単球で調節異常のマイクロＲＮＡとは異なっていた。これらのデータは、ＣＤ３９によって同定された常在性ミクログリアと浸潤性Ｌｙ６Ｃ単球とで差があることを実証し、ＳＯＤ１マウスにおけるミクログリアの独特なマイクロＲＮＡパターンを同定する。
【実施例２】
【０２４９】
ＡＬＳおよびＭＳを有する対象のＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中で調節異常のマイクロＲＮＡ
マウス単球で観察された独特なマイクロＲＮＡプロファイルを考慮して、ＡＬＳ対象およびＭＳ対象からのヒト血液由来ＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球（Ｌｙ６ＣＨｉ類似体）でマイクロＲＮＡ発現プロファイリングを行った。この実験は、孤発性ＡＬＳを有する対象（ｎ＝８）、再発寛解型ＭＳを有する対象（ｎ＝８）、および健康な対照（ｎ＝８）からの血液由来ＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における６６４種のマイクロＲＮＡのｎＣｏｕｎｔｅｒ発現プロファイリングである。マイクロＲＮＡ発現レベルを、５種のハウスキーピング遺伝子（ＡＣＴＢ、Ｂ２Ｍ、ＧＡＰＤＨ、ＲＰＬ１９、およびＲＰＬＰ０）の相乗平均に対して正規化した。ＡＬＳまたはＭＳ対象からの単球中のマイクロＲＮＡ発現と、健康な対照における発現とを比較するヒートマップを、ダネットの事後検定を用いたＡＮＯＶＡにより作製した（ｐ＜０．０１）（それぞれ図５、６、および３３）。図７Ａは、ＡＬＳおよびＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で独特に上方調節されたマイクロＲＮＡの数、加えてＡＬＳおよびＭＳ対象の両方からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で上方調節されたマイクロＲＮＡの数を示す。また図７Ａは、ＡＬＳおよびＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で独特に下方調節されたマイクロＲＮＡの数、加えてＡＬＳおよびＭＳ対象の両方からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で下方調節されたマイクロＲＮＡの数も示す。図７Ｂは、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較して、ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中で有意に脱制御されたマイクロＲＮＡを示すボルケーノプロットである。図７Ｃは、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較して、ＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中で有意に脱制御されたマイクロＲＮＡを示すボルケーノプロットである。図８は、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較して、ＡＬＳおよびＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で脱制御されたマイクロＲＮＡの要約を示す。
【０２５０】
ＡＬＳおよびＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における特異的なマイクロＲＮＡの調節異常（健康な対照と比較して）を、リアルタイムＰＣＲを用いて確認した。例えば、リアルタイムＰＣＲを用いて、ＡＬＳ対象（ｎ＝１１）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９０、ｈｓａ−ｍｉＲ−５００、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐの、健康な対照（ｎ＝８）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるこれらのマイクロＲＮＡの発現と比較した上方調節を確認した（両側マン−ホイットニーｔ検定）（図９）。追加のリアルタイムＰＣＲ実験を行って、ＡＬＳ対象（ｎ＝８；これらの対象の臨床的なスコア付けは、図１０Ａおよび１０Ｂに示される）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるマイクロＲＮＡの、ＭＳ対象および健康な対照の両方からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるこれらのマイクロＲＮＡの発現と比較して独特な上方調節を確認した（図１０Ｃ）。図１０Ｃに記載のデータから、２０種の異なるマイクロＲＮＡ：ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７４ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１０３が、ＭＳ対象および健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるこれらのマイクロＲＮＡの発現と比較して、ＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で独特に上方調節されることが示される。また、第２の一連のリアルタイムＰＣＲ実験（図１１）で、ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるｈｓａ−ｍｉＲ−２７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐの、ＭＳ対象および健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるこれらのマイクロＲＮＡの発現と比較して独特な上方調節も確認された（マイクロＲＮＡ発現は、Ｕ６  ｍｉＲＮＡを用いたｄＣＴに対して正規化された）。追加のリアルタイムＰＣＲ実験を行って、ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球におけるｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０４、ｈｓａ−ｍｉＲ−１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５３、ｈｓａ−ｍｉＲ−６０３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９２、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６５５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｆ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３００、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０２ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２１、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５８０の、ＭＳ対象および健康な対照の両方からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球におけるこれらのマイクロＲＮＡの発現と比較して独特な下方調節を���認した（図１２）。
【０２５１】
さらなる一連のリアルタイムＰＣＲ実験を行い、ＡＬＳおよびＭＳ対象の両方からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるｈｓａ−ｍｉＲ−２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−９３、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０ａ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４３２−３ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１２６０の、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるこれらのマイクロＲＮＡの発現と比較した上方調節を検証した（図１３）。追加の一連のリアルタイムＰＣＲ実験を行い、ＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるｈｓａ−ｍｉＲ−３２０ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６４、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２３−５ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａの、健康な対照と比較した上方調節を検証した（図１４）。またこれらのデータから、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６４は、ＡＬＳ対象および健康な対照の両方からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるこのマイクロＲＮＡの発現と比較して、ＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で独特に上方調節されることが確認されたことも示される（図１４）。
【０２５２】
加えて、ＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６２−３ｐ、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ｂの、ＡＬＳ対象および健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるこれらのマイクロＲＮＡの発現と比較して独特な下方調節を、リアルタイムＰＣＲを用いて確認した（図１５）。
【実施例３】
【０２５３】
孤発性ＡＬＳおよび家族性ＡＬＳを有する対象からの髄液における異常なマイクロＲＮＡレベル
またマイクロＲＮＡ発現プロファイリングは、孤発性ＡＬＳおよび家族性ＡＬＳを有する対象からの髄液（ＣＳＦ）を用いることによっても行われた。孤発性ＡＬＳ（ｎ＝１０）および家族性ＡＬＳ（ｎ＝５）対象両方からのＣＳＦ中のマイクロＲＮＡのレベルを、健康な対照（ｎ＝１０）のＣＳＦ中のマイクロＲＮＡのレベルと比較した。得られたデータから、孤発性ＡＬＳおよび家族性ＡＬＳの両方を有する対象のＣＳＦ中で、ｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂが、健康な対照のＣＳＦ中のこのマイクロＲＮＡのレベルと比較して増加していること、さらに孤発性ＡＬＳを有する対象からのＣＳＦ中で、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５０、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２８、およびｈｓａ−ｍｉＲ−５３２−３ｐが、健康な対照または家族性ＡＬＳを有する対象からのＣＳＦ中のこれらのマイクロＲＮＡのレベルと比較して独特に上方調節されること（図１６）が示される。
【実施例４】
【０２５４】
炎症関連遺伝子は、ＡＬＳおよびＭＳを有する対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球でも調節異常である
１７９種の炎症関連遺伝子（「炎症性マーカー遺伝子」）の発現プロファイリング解析を、ＡＬＳ対象（ｎ＝８）、ＭＳ対象（ｎ＝１１）、および健康な対照（ｎ＝１０）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球を用いて行った。ＡＬＳまたはＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における異なる炎症性マーカー遺伝子の発現の、健康な対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるこれらの遺伝子の発現と比較した変化を示すヒートマップを図１７に示す）。ＡＬＳおよびＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で調節異常の炎症性マーカー遺伝子の、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるこれらの遺伝子の発現と比較したボルケーノプロットを図１８Ａ（それぞれ左のグラフおよび右のグラフ）に示す。ＡＬＳおよびＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるこれらの遺伝子の発現と比較して上方調節または下方調節された炎症性マーカー遺伝子のリストを図１８Ｂに示す。
【実施例５】
【０２５５】
ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球でも調節異常なマイクロＲＮＡ
さらにＡＬＳ対象（ｎ＝１１）および健康な対照（ｎ＝８）の両方からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球を用いてもマイクロＲＮＡの発現プロファイリングを行った（図１９）。これらのデータから、ｈｓａ−ｍｉＲ−７０８が、健康な対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるこのマイクロＲＮＡの発現と比較してＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球で増加していることが示される。
【０２５６】
ｎＣｏｕｎｔｅｒ発現プロファイリングを行って、健康な対象からの（ｎ＝８）ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球におけるマイクロＲＮＡ発現と比較して、ＡＬＳ（ｎ＝８）およびＭＳ対象（ｎ＝８）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球で調節異常の追加のマイクロＲＮＡを同定した。これらの実験におけるデータを、５種の異なるハウスキーピング遺伝子（ＡＣＴＢ、Ｂ２Ｍ、ＧＡＰＤＨ、ＲＰＬ１９、およびＲＰＬ１０）の相乗平均に対して正規化した。これらの実験では、６６４種のマイクロＲＮＡの発現を解析した（図２０Ａ〜Ｃ）。ＡＬＳ対象およびＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球におけるマイクロＲＮＡの、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球におけるこれらのマイクロＲＮＡの発現と比較した相対的な発現のヒートマップを、それぞれ図２１Ａおよび図２０Ｂに示す。図２０Ｃに、ＡＬＳおよびＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球において、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球におけるこれらのマイクロＲＮＡの発現と比較して有意に脱制御されたマイクロＲＮＡの要約を示す。
【実施例６】
【０２５７】
ＳＯＤ１Ｇ９３ＡマウスからのＬｙ６ＣＨｉ単球およびＣＤ３９＋ミクログリアで発現された炎症促進性マーカー
臨床疾患発症の１カ月前と疾患の進行中に、ＳＯＤ１マウスの脾臓から単離したＬｙ６ＣＨｉ単球の遺伝子発現プロファイルである。両方の時点で炎症促進性の遺伝子を発現させた（図２１Ａ）。ｎＣｏｕｎｔｅｒによって測定された１７９種の炎症性マーカー遺伝子のうち、９７種が（非トランスジェニック同腹子からのＬｙ６ＣＨｉ単球と比較して）発現が変化したことが検出され：４０種が、ＳＯＤ１マウスからのＬｙ６ＣＨｉ単球において、少なくとも１つの疾患段階で（非トランスジェニック同腹子と比較して）遺伝子が上方調節されたことが検出された。ＳＯＤ１マウスのＬｙ６ＣＨｉ単球において、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ１受容体などの７種の遺伝子が、非トランスジェニック同腹子からのＬｙ６ＣＨｉ単球と比較して下方調節された（図２１Ｂ）。生物学的ネットワーク解析から、ＣＲＥＢ１、ＮＦ−ｋＢ、ＰＵ．１、およびＰＰＡＲγを含む本発明の解析で最も有意に影響を受けた経路は炎症性反応に関連することが実証される（図２１Ｃ）。これらの経路は、単球の活性化と分化の両方において重要な役割を果たすことが示されている。遺伝子発現プロファイリングから、ＳＯＤ１マウスの末梢免疫区画には活性化された炎症促進性Ｌｙ６ＣＨｉ単球の集団があることが実証される。
【０２５８】
ＳＯＤ１マウスの脊髄および脳から単離したＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ３９＋ミクログリアの発現プロファイリングを異なる疾患段階で行った。１７９種の炎症性マーカー遺伝子のうち１２０種が検出され、２０種の遺伝子が、ＳＯＤ１マウスからのＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ３９＋ミクログリアにおいて（非トランスジェニック同腹子からのＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ３９＋ミクログリアと比較して）上方調節され（図２１Ｄ）、３８種の遺伝子が、ＳＯＤ１マウスからのＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ３９＋ミクログリアにおいて（非トランスジェニック同腹子からのＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ３９＋ミクログリアと比較して）下方調節された（図２１Ｅ）。ＳＯＤ１マウスからのＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ３９＋ミクログリアミクログリアは、非トランスジェニック同腹子の同じ細胞と比較して、走化性に関する遺伝子（例えばＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＸＣＲ４、およびＣＸＣＲ１０）を有意に発現した。興味深いことに、下方調節された遺伝子のなかでも特に、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ１受容体が下方調節された。生物学的ネットワーク解析から炎症経路の活性化が実証され、最も顕著なのは走化性であった（図２１Ｆ）。これらの遺伝子の発現は症状の発症よりも前に起こり、脊髄では観察されたが、脳では観察されなかった（図２１Ｇ）。
【実施例７】
【０２５９】
ＡＬＳ対象のＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で発現された炎症促進性マーカー
ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における免疫関連遺伝子発現を実施例６で説明されているようにして解析した。数種の炎症関連遺伝子が、健康な対照と比較して、ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で上方調節された。ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球とＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球とでは免疫関連遺伝子発現にある程度の差があったが、ＡＬＳ対象およびＭＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における免疫関連遺伝子発現パターンは類似していた（図２２Ａ〜Ｃ）。
【０２６０】
さらなる一連の実験で、ＡＬＳ（孤発性および家族性ＡＬＳ）を有する対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球における５１１種の免疫関連遺伝子の発現を解析した。これらの実験は、定量的ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ  ｎＣｏｕｎｔｅｒ技術を用いて行われた。これらの実験から集められたデータと実施例６に記載されたデータを、ＧｅｎｅＧｏおよびＩｎｇｅｎｕｉｔｙ（登録商標）パスウェイアナリシスを用いてさらに解析した。
【０２６１】
健康な対照に対して、ＳＯＤ１マウス脊髄ＣＤ３９＋ミクログリアおよび脾臓由来Ｌｙ６ＣＨｉ単球で、さらに孤発性ＡＬＳ対象の血液由来ＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で差次的に上方調節された遺伝子を、ＧｅｎｅＧｏ  Ｍｅｔａｃｏｒｅパスウェイアナリシス（ＧｅｎｅＧＯ、Ｓｔ．Ｊｏｓｅｐｈ、ＭＩ）を用いて解析した。この方法は、所定のオントロジーにおいて過剰に存在する転写物を同定する。偽発見率（ＦＤＲ）フィルターをｑ値計算を用いて予備的なＰ値に適用した。エンリッチメント後、所定のオントロジー内の全てのタームについてＰ値を計算し、それぞれのタームを別個の仮説として試験した。得られたｑ値は、校正済みのＰ値を表し、加えて所定のオントロジーにおける総タームの説明と特定のタームの順位を表す。同定された有意に調節異常の遺伝子をさらに解析して、ＳＯＤ１マウスおよびヒトＡＬＳにおける生物学的経過／疾患の経過と関与する経路／ネットワークを同定した。脊髄からのＣＤ３９＋ミクログリアにおける５８種の調節異常の遺伝子とＳＯＤ１マウスからのＬｙ６ＣＨｉ脾臓由来単球における４７種の調節異常の遺伝子の全データセットをＭｅｔａＣｏｒｅにインポートして、ＧｅｎｅＧｏプロセス、ＧｅｎｅＧｏ疾患経過、正規の経路マップ、およびネットワークを用いた機能的なオントロジーの解析を構築した。マップ、ネットワーク、およびプロセスのためのＭｅｔａＣｏｒｅ全体にわたる統計的有意性の計算は、超幾何分布に基づき計算されたＰ値に基づきなされた。Ｐ値は、偶然生じる特定のマッピングの確率のことであり、マップ／ネットワーク／プロセスに存在する全ての遺伝子、特定のマップ／ネットワーク／プロセスにおける遺伝子、および実験における遺伝子のセット中の遺伝子数を表す。０．０１のＰ値をカットオフに用いた。アップロードされたデータセットの異なるカテゴリーに関する関連性の程度はＰ値で定義され、ここでＰ値が低ければ低いほどより優先順位が高いことを示す。実験データをインプットしてネットワークを構築した。ネットワーク構築アルゴリズムによって作製された小さいサブネットワークをランク付けするのに使用された３種の異なるスコアリング関数は、ｚスコア、ｇスコア、およびｐ値であった。ｚスコアは、実験からの遺伝子での飽和度に関してサブネットワークを（解析されたネットワーク内に）ランク付けする。高いｚスコアは、そのネットワークが、実験で同定された調節異常の遺伝子で高度に飽和していることを意味する。言い換えれば、特定のネットワークにおいて比較的多数の遺伝子／分析物の数が水性サンプル中に存在することを意味する。各ネットワークは、ネットワークを構築するのに用いられた正規の経路で構成される。ネットワークが高いｇスコアを有する場合、ネットワークは、（ｚスコアからの）発現された遺伝子で飽和しており、多くの正規の経路を含む。この解析は、偽発見率を推測することにより複数回の試験で制御した。測定された６６４種のマイクロＲＮＡのうち、５６種が確実に検出され、２０種が少なくとも１つの疾患群で差次的に発現された。
【０２６２】
ターゲットスキャン１４．１を用いて、ｍｉＲＮＡ−ｍＲＮＡ相互作用の統計的有意性を調査した。ターゲットスキャン１４．１を用いて、８６２０４４種の保存されたｍｉＲＮＡ結合部位を、保存の尺度であるゼロ以外のコンテクストスコアを用いて予測した。ＳＯＤ１マウスのデータセットにおいて：Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ（登録商標）パスウェイアナリシス（ＩＰＡ）を用いたｍｉＲＮＡ標的フィルタリング解析により、１０７９７種のｍＲＮＡを標的化すると予測される３４種のｍｉＲＮＡファミリーが得られた。これらのデータをフィルタリングして、細胞性免疫応答、体液性免疫応答、およびサイトカインシグナル伝達に関与するシグナル伝達経路を表すＩＰＡ正規経路カテゴリーに関与する遺伝子のみが含まれるようにした。その結果、免疫応答シグナル伝達に関与する可能性がある９７１種のｍＲＮＡを標的化する３４種のマイクロＲＮＡをフィルタリングにより得た。ｍＲＮＡ発現研究をＮａｎｏｓｔｒｉｎｇのプラットフォームを用いてまとめ、解析した。９７１種のフィルタリングして得られた標的は、ｍｉＲＮＡ−ｍＲＮＡ調節の逆の性質を考慮して、ＳＯＤ１マウスで調節異常の４７種の免疫関連遺伝子を含む。それにより、２７種のｍｉＲＮＡファミリーと３３種のｍＲＮＡとを表す最終的な８７対のｍｉＲＮＡ−ｍＲＮＡ相互作用が示された。ＡＬＳ対象研究のｍｉＲＮＡ発現において、５６種のｍｉＲＮＡがＡＬＳ対象で有意に調節異常であることが見出された。予測された８６２０４４の部位をフィルタリングしてこれら５６種のｍｉＲＮＡの標的を含むものだけにすることで、予測された部位の数を減らす（３４１１８の部位に減少させる）。免疫学的なパネルのナノストリングアレイで、ｍＲＮＡ標的へのデータを、１．４より高い倍率変化で調節されることが見出された遺伝子に制限することにより、部位の数をさらに減らした。最終的なデータから、ｍＲＮＡとｍｉＲＮＡとが逆に調節される６８種の独特なｍｉＲＮＡ−ｍＲＮＡ相互作用対が示される。５６種の調節異常のｍｉＲＮＡによって形成されたこれらの６８種のｍｉＲＮＡ−ｍＲＮＡ相互作用の統計的有意性をさらに以下のようにして評価した：１）上記研究からの５６種の無作為に選択された調節されないｍｉＲＮＡを含む１０００種の無作為なネットワークを使用して、結合のために３’−ＵＴＲモチーフを含むｍＲＮＡを見出し、２）ｍｉＲＮＡ−ｍＲＮＡ対をさらにフィルタリングし、ＡＬＳ対象で調節異常の５９種のｍＲＮＡのみが含まれるようにした。平均４４．８８の相互作用が観察された（ＳＤ＝９．９９）。発現研究で決定された真の相互作用は６８であり、これは、有意なＰ値に相当する（＜１．１×１０−１５）。ＳＯＤ１マウスにおける調節されたｍｉＲＮＡ−ｍＲＮＡ対に関する類似の解析から、平均１５．２６（ＳＤ＝４．０３）の相互作用分布が示され、それに対して実験的に決定された真のｍｉＲＮＡ−ｍＲＮＡ相互作用は、４１であり、有意なＰ値は＜５．７×１０−９であった。
【０２６３】
データから、ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球は、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球と比較して独特な免疫関連遺伝子の発現を有することが示される。加えて、家族性ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球と比較して、孤発性ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で、いくつかの免疫関連遺伝子が差次的に発現される（図２３Ａ〜Ｃ）。これら結果は、ＡＬＳ患者および健康な対照の独立したコホートで、シングルプレックスｑＰＣＲを用いて検証された（ＣＣＬ２、ＡＨＲ、ＰＴＡＦＲ、ＮＦ−κＢ、ＴＲＡＦ３、ＦＣＥＲ１Ａ、ＣＸＣＲ４、およびＳＯＣＳ１の発現の変化が検証された）（図２４）。これらのデータから、ＣＣＬ２、ＡＨＲ、ＰＴＡＦＲ、ＮＦ−κＢ、およびＴＲＡＦ３は、ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球と比較して上方調節されること、さらにＣＸＣＲ４およびＳＯＣＳ１は、ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で、健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球と比較して下方調節されることが確認される。
【０２６４】
ＩｎｇｅｎｕｉｔｙマイクロＲＮＡ−ｍＲＮＡターゲットフィルターアナリシスはさらに、ＳＯＤ１マウスからのＬｙ６ＣＨｉ細胞における上位１０種のマイクロＲＮＡ−ｍｉＲＮＡ相互作用は、ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球で最も有意に調節異常であることが見出された遺伝子と関連を有することも明らかにした（図２５）。
【０２６５】
ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるｍｉＲＮＡおよびｍＲＮＡ発現プロファイルの両方のさらなる評価から、ＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるｍｉＲＮＡおよび遺伝子発現に関する異常は、炎症関連および免疫関連遺伝子に関連がある（図２６および図２７）ことが示される。これらのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球におけるｍｉＲＮＡ−ｍＲＮＡ相互作用を解析したところ、ＳＯＤ１マウスおよびＡＬＳ対象の両方において、この相互作用は、ターゲットスキャン４．１予測解析により統計学的に有意であることが示された（図２８）。さらに、ＧｅｎｅＧｏパスウェイアナリシスにより、９種の炎症関連のネットワークが同定された（図２９）。これらの炎症ネットワークは、（本明細書において説明される研究で）ＳＯＤ１マウスＬｙ６ＣＨｉ単球において調節異常であることが観察されたものと同一であった。
【実施例８】
【０２６６】
ＳＯＤ１Ｇ９３ＡモデルにおけるｍｉＲ−１５５の治療的役割
ｍｉＲ−１５５の有意な上方調節は、臨床的な発症の前に、脾臓由来Ｌｙ６ＣＨｉ単球および脊髄由来ミクログリアで起こり、このような上方調節はＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスにおける疾患の進行の全ての段階で増加した（上記データを参照）。追加の実験を行って、ｍｉＲ−１５５は、ＡＬＳの発症／病因において役割を果たすかどうかを決定した。これらの実験では、ＳＯＤ１マウス（ＡＬＳモデル）をさらに遺伝子操作して、ｍｉＲ−１５５の発現をノックダウンまたはノックアウトした。
【０２６７】
動物および行動に関する解析
Ｂ６／ＳＪＬ−ＳＯＤ１Ｇ９３ＡＴｇおよびＳＯＤ１−野生型（ＷＴ）をＰｒｉｚｅ４Ｌｉｆｅから入手するか、またはＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。ＡＬＳマウスを、３０日目と６０日目（症状を示す前）、９０〜１００日目（初期の症状）、および１２０〜１４０日目（後期の症状／末期）の時点で解析した。症状の発症を体重曲線のピークと目視観察での筋衰弱の徴候によって定義した。末期疾患を、症候の進行と動物の取り扱いのガイドラインによって決定した（従って、１３５の時点とは±５日異なる）。疾患の進行を、Ｐｒｉｚｅ４ＬｉｆｅとＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙによって提供された確立された方法に従って文書化した。８０日目から毎日モニターし、３〜４日毎に体重を測定することによって症候の解析を行った。症候の発症を、動物の体重が低下し始める日齢と定義した。各マウスの両方の後肢の神経学的スコアを５０日齢から毎日評価した。神経学的スコアでは、ＡＬＳ治療開発研究所（ＡＬＳ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（ＡＬＳＴＤＩ）により開発された０〜４のスケールが用いられた。各スコアレベルを割り当てるのに使用された基準は以下の通りである：０＝マウスを尻尾で吊り下げて、マウスをこの位置で２秒ホールドし、さらに２〜３回吊り下げた場合、後肢が正中線から外側に向かって十分伸長すること；２＝尻尾で吊り下げる最中に、正中線から外側に肢を伸ばせないか部分的に伸ばせないこと（衰弱）または後肢が震えること；２＝歩行中におけるつま先の巻き込みと少なくとも１本の肢の引き摺り；３＝硬直または関節が最小限しか動かないこと、前方への動きに足が利用されないこと；および４＝マウスが、どちらの側からも３０秒間起き上がれないか、安楽死。
【０２６８】
ＳＯＤ１Ｇ９３Ａ／ｍｉＲ−１５５−／−の作製
雄ＳＯＤ１Ｇ９３Ａ［Ｂ６．Ｃｇ−Ｔｇ（ＳＯＤ１Ｇ９３Ａ）１Ｇｕｒ／Ｊ］マウスを非Ｔｇ  Ｃ５７Ｂｌ／６ｍｉＲ１５５−／−雌と共に飼育した。非トランスジェニックｍｉＲ１５５−／−をＦ１−ＳＯＤ１Ｇ９３Ａ／ｍｉＲ１５５−／＋に戻し交配して、ｍｉＲ１５５が欠失したＦ２−ＳＯＤ１Ｇ９３Ａ／ｍｉＲ１５５−／−を生産した。マウスを、神経行動学的な試験（ロータロッド性能および神経学的スコア）で臨床的に評価し、続いてｍｉＲ−１５５の発現レベルが異なるＳＯＤ１マウスの３つの実験群の生存率を評価した：１）ＳＯＤ１Ｇ９３Ａ／ｍｉＲ１５５＋／＋；２）ＳＯＤ１Ｇ９３Ａ／ｍｉＲ１５５−／＋；および３）ＳＯＤ１Ｇ９３Ａ／ｍｉＲ１５５−／−。
【０２６９】
ＳＯＤ１マウスにおけるｍｉＲ−１５５の標的化
ｍｉＲＮＡとそれらの標的との直接的な相互作用を証明するために、可能性のあるｍｉＲＮＡ結合部位を有する３’ＵＴＲを有しているルシフェラーゼレポーターを利用する。ｍｉＲＮＡ結合部位の部位特異的変異誘発により、ルシフェラーゼレポーターのｍｉＲＮＡ調節への応答性が無効になり、これが、直接的な標的化の証明になるであろうと予想される。
【０２７０】
フローサイトメトリー
Cardonaら（Nat.Protoc.1：1947〜1951、2006）で説明されているようにして、マウス脊髄から単核細胞を直接単離したが、本発明者らは、ディスパーゼは数種の表面分子を切断して表面での表面分子検出を低減させる可能性があることを見出したため、ディスパーゼを用いなかった。マウスを氷冷したリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で経心臓的に潅流し、脊髄と脳を別々に解剖した。単一の細胞懸濁液を調製し、３７％／７０％の不連続なパーコール勾配（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で遠心分離し、境界面から単核細胞を単離し、全細胞数を決定した。細胞を抗ＣＤ１６／ＣＤ３２（Ｆｃ  Ｂｌｏｃｋ  ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で予めブロッキングし、抗Ｌｙ６Ｃ−ＦＩＴＣ、ＣＤ１１ｂ−ＰＥ−Ｃｙ（商標）７、および４Ｄ４−ＡＰＣ（独特なミクログリア抗体）の組合せで氷上で３０分染色した。７ＡＡＤ−ＰｅｒＣＰを用いて、初期のアポトーシスを起こした細胞と死細胞を検出するかまたは除去した（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）。全ての染色に適切な抗体ＩｇＧアイソタイプ対照（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用した。蛍光活性化細胞分類法（ＦＡＣＳ）解析をＬＳＲ装置（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で行い、その後ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）でデータを解析した。
【０２７１】
定量的ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ  ｎＣｏｕｎｔｅｒによるｍｉＲＮＡ／遺伝子発現解析
Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ  ｎＣｏｕｎｔｅｒ技術を用いて、最大８００種の炎症関連遺伝子の発現を研究した。また炎症および免疫応答中に差次的に発現された遺伝子からなる１７９種の炎症関連転写物のマルチプレックス標的プロファイリングも上述のようにして行った。
【０２７２】
得られたデータから、ＳＯＤ１Ｇ９３Ａ／ｍｉＲ１５５−／−動物の疾患発症と生存率について、ＳＯＤ１Ｇ９３Ａ動物と比較して有意な遅延がみられたことが示される。（表２２および２３、ならびに図３０〜３４）。マウスの体重を８０日目から始めて３〜４日毎に評価し、マウスの臨床神経学的スコアを毎日評価し、ロータロッド性能を週３回評価した。データから、遺伝学的にｍｉＲ−１５５を欠失させることにより、生存が５１日延長し（Ｐ＜０．０００１；図３０）、２の神経学的スコアに到達するまでの時間が４９日延長し（Ｐ＜０．０００１；図３１）、ロータロッド性能が強化され（図３２）、体重減少が少なくなり（図３３）、初期（Ｐ＝０．０００３）および後期（Ｐ＝０．０００４）の疾患発症が遅くなったことが示される（図３４）。
【０２７３】
【表２２】
2014534810.tif 000035
【０２７４】
【表２３】
2014534810.tif 000036
【０２７５】
またＳＯＤ１Ｇ９３Ａ／ｍｉＲ１５５−／−動物は、ＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスと比較して、脊髄におけるミクログリアの保護に関連する末梢単球動員の有意な減少（図３５）、さらにＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスと比較して、脊髄ミクログリアおよびＬｙ６ＣＨｉ単球における
炎症関連遺伝子発現の有意な減少も示す（図３６）。脾臓Ｔ細胞では炎症関連遺伝子はほとんど影響を受けなかったが、抗炎症性遺伝子（ＩＬ４およびＩＬ１０）の発現が非トランスジェニックマウスのレベルに戻ったことから、ｍｉＲ−１５５は、主としてＳＯＤ１Ｇ９３ＡマウスのＬｙ６ＣＨｉ単球においてＭ１関連シグネチャーの活性化に影響を与える可能性があることが示唆される。
【０２７６】
これらのデータから、ｍｉＲ−１５５は、ＡＬＳ発症（病因）において有意な役割を果たすこと、さらに神経変性障害を有する対象（例えばＡＬＳ、例えば家族性ＡＬＳ、および／または孤発性ＡＬＳ）の治療は、神経変性障害（例えばＡＬＳ、例えば、家族性ＡＬＳ、および／または孤発性ＡＬＳ）を有する対象に、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５を標的化する少なくとも１つの抑制性核酸（例えば、前駆または成熟ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５）を投与することによって達成できることが示される。本明細書では、神経変性障害を有する対象に投与することができる例示的なｈｓａ−ｍｉＲ−１５５を標的化する抑制性核酸（例えば前駆または成熟ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５）が説明される。
【実施例９】
【０２７７】
ＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスの治療に関するｍｉＲ−１５５アンタゴミアの有効性
家族性ＡＬＳのＳＯＤ１Ｇ９３Ａモデルに第１の一連の実験を行って、ｍｉＲ−１５５を標的化するアンタゴミアが、脊髄由来ミクログリアおよび脾臓由来Ｌｙ６ＣＨｉ単球においてｍｉＲＮＡ発現、および／または炎症性遺伝子発現を変化させるかどうかを決定した。これらの実験では、以下の５つの実験群が研究された。
【０２７８】
群Ｉ。対照、スクランブル化したｍｉＲ−１５５（腹膜内注射、注射１回あたり２ｍｇ、３日に１回）（ｎ＝３）。対照、スクランブル化したｍｉＲ−１５５：＋ＴＣ＋ＡＡ＋Ｃ＋Ａ＋ＴＴＡ＋Ｇ＋Ａ＋ＣＴ＋Ｔ＋Ａ（配列番号２６３）（「＋」は、ＬＮＡ部分の存在を示す）。
【０２７９】
群ＩＩ。アンタゴミアｍｉＲ−１５５、低い用量（静脈注射、注射１回あたり０．２ｍｇ、３日に１回）（ｎ＝３）。アンタゴミアｍｉＲ−１５５：＋ＴＣ＋ＡＣ＋Ａ＋Ａ＋ＴＴＡ＋Ｇ＋Ｃ＋ＡＴ＋Ｔ＋Ａ（配列番号２６２）（「＋」は、ＬＮＡ部分の存在を示す）。
【０２８０】
群ＩＩＩ。アンタゴミアｍｉＲ−１５５、高い用量（静脈注射、注射１回あたり２ｍｇ、３日に１回）（ｎ＝３）。
【０２８１】
群ＩＶ。アンタゴミアｍｉＲ−１５５、低い用量（腹膜内注射、注射１回あたり０．２ｍｇ、３日に１回）（ｎ＝３）。
【０２８２】
群Ｖ。アンタゴミアｍｉＲ−１５５、高い用量（腹膜内注射、注射１回あたり２ｍｇ、３日に１回）（ｎ＝３）。
【０２８３】
Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇによる炎症性遺伝子およびｍｉＲＮＡ発現の解析を、脊髄由来ミクログリアおよび脾臓由来Ｌｙ６ＣＨｉ単球で上述のようにして行った。
【０２８４】
３日に１回、低い用量（注射１回あたり０．２ｍｇ／ｋｇ体重）および高い用量（注射１回あたり２ｍｇ／ｋｇ体重）を（腹腔内または静脈内）投与されたＳＯＤ１マウスのミクログリアおよび脾臓由来Ｌｙ６Ｃ単球からのデータの比較から、低い用量は、脾臓由来Ｌｙ６ＣＨｉ単球のＭ１表現型に影響を与えないことが示される（未処理ＳＯＤ１マウスと比較して、これらのマウスでは同じｍｉＲＮＡおよび炎症性遺伝子発現が観察されている）。しかしながら、（腹腔内または静脈内のいずれかで投与された）高い用量は、炎症関連遺伝子について定量的ｎＣｏｕｎｔｅｒ技術で測定したところ、炎症促進性サイトカインの発現を阻害した。これらのデータから、脊髄由来ミクログリアはアンタゴミアｍｉＲ−１５５の全身的治療による影響を受けなかったことも示される。
【０２８５】
第２の一連の実験を行って、ＳＯＤ１マウスの行動および生存に対するアンタゴミアｍｉＲ−１５５の効果を決定する。これらの実験では、ＳＯＤ１マウスには、スクランブル化したｍｉＲ−１５５（ｎ＝１０）またはアンタゴミアｍｉＲ−１５５のいずれかが、注射１回あたり２ｍｇ／ｋｇ体重で、３日に１回、腹膜内注射で投与される（ｎ＝１０）。この処置は、疾患の発症時（体重減少および神経学的スコアで定義される）に開始される。実験の最後まで、または末期までマウスを連続して処置する。例えばロータロッド性能によってマウスの行動を判定し、さらにマウスの体重および生存をモニターする。
【０２８６】
ＳＯＤ１マウスの中枢神経系におけるｍｉＲ−１５５が、レンチウイルスが仲介するｍｉＲ−１５５の阻害を用いて標的化され得るのかどうかを調査するために、第３の一連の実験を設計する。これらの実験では、アンタゴミアｍｉＲ１５５は、レンチウイルス感染により送達される。ｍｉＲ−１５５阻害のために、突然変異体ｍｉＲ−１５５またはその特異的な阻害剤をコードする配列をレンチウイルスベクター（Ｇｅｎｅｃｏｐｏｅｉａ）にクローニングする。このウイルスは、使用者用マニュアルに従って標的細胞を感染させることにより生産される。脳を定位固定してＣＳＦまたは側脳室に注射することによって、およそ２×１０７個の形質転換単位の組換えレンチウイルスがＳＯＤ１マウスに送達される。治療群は、以下の通りである。
【０２８７】
群Ｉ。対照レンチウイルスのスクランブル化したｍｉＲ−１５５（ＧＦＰタグを有する）を、高い用量で投与されたマウス（ｎ＝１０）。（対照であり、配列番号２６３に記載のスクランブル化したアンタゴミア配列を参照）。
【０２８８】
群ＩＩ。アンタゴミアのレンチウイルスｍｉＲ−１５５（ＧＦＰタグを有する）を、高い用量で投与されたマウス（ｎ＝１０）。（配列番号２６２に記載のアンタゴミアｍｉＲ−１５５配列を参照）。
【０２８９】
マウスの行動は、例えばロータロッド性能、およびマウスの体重および生存をモニターすることに従った。また自然免疫系のＮａｎｏｓｔｒｉｎｇ  ｍｉＲＮＡおよび免疫関連遺伝子プロファイリングとＴ細胞の炎症関連遺伝子プロファイリングもこれらのマウスから得られた細胞（例えば末梢Ｌｙｓ６ＣＨｉ細胞）で行われる。
【０２９０】
またｎＣｏｕｎｔｅｒ発現解析も行い、野生型、ＳＯＤ１／ｍｉＲ１５５−／＋、ＳＯＤ１／ｍｉＲ１５５−／−マウスからのＬｙ６ＣＨｉ脾臓由来単球サブセットにおける数種のマイクロＲＮＡの発現を決定した。データから、数種のマイクロＲＮＡが、野生型マウスでは、ＳＯＤ１／ｍｉＲ１５５−／＋マウスとは異なって発現され、さらにＳＯＤ１／ｍｉＲ１５５−／＋マウスとＳＯＤ１／ｍｉＲ１５５−／−マウスとでも異なって発現されたことが示される（図３７）。
【０２９１】
また、健康な対照（８人）からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のマイクロＲＮＡの発現と比較した、孤発性ＡＬＳ（８人のヒト対象）および再発寛解型多発性硬化症（８人のヒト対象）からのマイクロＲＮＡに関する血液由来ＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球のｎＣｏｕｎｔｅｒ発現プロファイリングも行われた。図３８に記載の得られたヒートマップは、ダネットの事後検定を用いた分散分析（ＡＮＯＶＡ）の結果を示す（Ｐ＜０．０１）。ＡＬＳ対象からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中で（健康な対照からのＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球中のこれらのマイクロＲＮＡの発現と比較して）上方調節または下方調節されたマイクロＲＮＡが示される。
【０２９２】
他の実施形態
本発明をその詳細な説明と共に説明したが、当然のことながら前述の記載は説明のためであり、本発明の範囲を限定せず、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって定義されることが理解されよう。他の態様、利点、および変形形態も以下の特許請求の範囲である。
【図１Ａ】
2014534810.tif 000037
【図１Ｂ】
2014534810.tif 000038
【図１Ｃ】
2014534810.tif 000039
【図２Ａ】
2014534810.tif 000040
【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
2014534810.tif 000042
【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
2014534810.tif 000050
【図７Ｃ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１９】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２１Ａ−１】
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【図２１Ａ−２】
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【図２１Ｂ】
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【図２１Ｃ】
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【図２１Ｄ】
2014534810.tif 000076
【図２１Ｅ−１】
2014534810.tif 000077
【図２１Ｅ−２】
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【図２１Ｆ】
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【図２１Ｇ】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２２Ｃ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６−１】
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【図２６−２】
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【図２７−１】
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【図２７−２】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２９−１】
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【図２９−２】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５Ａ】
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【図３５Ｂ】
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【図３６−１】
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【図３６−２】
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【図３７】
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【図３８−１】
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【図３８−２】
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【配列表】
2014534810000001.app
【国際調査報告】
2014534810.tif 000109
2014534810.tif 000110
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