(57)【要約】  陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングのための新規放射性トレーサーが記載される。神経内分泌腫瘍の陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングのための新規放射性トレーサーが記載される。具体的には本発明は、新規な［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール−［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体、特に胃腸膵臓神経内分泌腫瘍の細胞表面に見出されるソマトスタチン受容体を標的化するものを記載する。本発明はまた、新規放射性トレーサーの中間体、前駆体、医薬組成物、製造方法及び使用方法も記載する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式（ＩＩＩ）の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体。
Ｒ1−ＬＩＮＫＥＲ−Ｒ2    （ＩＩＩ）
（式中、
Ｒ1は次式の基であり、
【化１】
2014515729.tif 000044
Ｒ2は次式の構造を有し、
【化２】
2014515729.tif 000045
ＬＩＮＫＥＲは式−（Ａ）m−（式中、各Ａは独立に−ＣＲr、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ2ＣＯ2−、−ＣＯ2ＣＲ2−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ2ＮＲ−、−ＮＲＳＯ2−、−ＣＲ2ＯＣＲ2−、−ＣＲ2ＳＣＲ2−、−ＣＲ2ＮＲＣＲ2−、Ｃ4-8シクロヘテロアルキレン基、Ｃ4-8シクロアルキレン基、Ｃ5-12アリーレン基又はＣ3-12ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位であり、各Ｒは独立にＨ、Ｃ1-20アルキル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、Ｃ1-4アルコキシＣ1-20アルキル及びヒドロキシＣ1-20アルキルから選択され、ｍは１〜２０の値を有する整数である。）のリンカー基である。）
【請求項２】
下記の化合物からなる群から選択される２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体。
次の式（１ｂ）のＦＥＴ−Ｇ−ＰＥＧ−ＴＯＣＡ、
【化３】
2014515729.tif 000046
次の式（２ｂ）のＦＥＴＥ−ＰＥＧ−ＴＯＣＡ、
【化４】
2014515729.tif 000047
次式のＦＥＴ−Ｇ−ＴＯＣＡ（３ｂ）、
【化５】
2014515729.tif 000048
次式のＦＥＴＥ−ＴＯＣＡ（４ｂ）、
【化６】
2014515729.tif 000049
及び
次式のＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡ（５ｂ）。
【化７】
2014515729.tif 000050
（上記化合物の各々に関し、
Ｒ1は次式の基であり、
【化８】
2014515729.tif 000051
Ｒ2は次式の構造を有する。）
【化９】
2014515729.tif 000052
【請求項３】
Ｒ2が次式の構造を有する、請求項１又は請求項２記載の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体。
【化１０】
2014515729.tif 000053
【請求項４】
次式のＦＥＴ−βＡＧ−［Ｗ−ｃ−（ＣＴＦＴＹＣ）Ｋ］（７ｂ）である２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体。
【化１１】
2014515729.tif 000054
（式中、
Ｒ1は次式の基であり、
【化１２】
2014515729.tif 000055
Ｒ3は次式の構造を有する。）
【化１３】
2014515729.tif 000056
【請求項５】
Ｒ3が次式の構造を有する、請求項４記載の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体。
【化１４】
2014515729.tif 000057
【請求項６】
請求項１乃至請求項５に記載の化合物の１種以上及び薬学的に許容されるキャリヤー、賦形剤又は生体適合性キャリヤーを含んでなる医薬組成物。
【請求項７】
次の式（ＩＶ）のアルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体。
Ｒ1−ＬＩＮＫＥＲ−Ｒ2    （ＩＶ）
（式中、
Ｒ1は次式の基であり、
【化１５】
2014515729.tif 000058
Ｒ2は次式の構造を有し、
【化１６】
2014515729.tif 000059
ＬＩＮＫＥＲは式−（Ａ）m−（式中、各Ａは独立に−ＣＲr、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ2ＣＯ2−、−ＣＯ2ＣＲ2−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ2ＮＲ−、−ＮＲＳＯ2−、−ＣＲ2ＯＣＲ2−、−ＣＲ2ＳＣＲ2−、−ＣＲ2ＮＲＣＲ2−、Ｃ4-8シクロヘテロアルキレン基、Ｃ4-8シクロアルキレン基、Ｃ5-12アリーレン基又はＣ3-12ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位であり、各Ｒは独立にＨ、Ｃ1-20アルキル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、Ｃ1-4アルコキシＣ1-20アルキル及びヒドロキシＣ1-20アルキルから選択され、ｍは１〜２０の値を有する整数である。）のリンカー基である。）
【請求項８】
下記の化合物からなる群から選択されるアルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体。
次の式（１ａ）のＧ−ＰＥＧ−ＴＯＣＡ、
【化１７】
2014515729.tif 000060
次の式（２ａ）のＥ−ＰＥＧ−ＴＯＣＡ、
【化１８】
2014515729.tif 000061
次式のＧ−ＴＯＣＡ（３ａ）、
【化１９】
2014515729.tif 000062
次式のＥ−ＴＯＣＡ（４ａ）、
【化２０】
2014515729.tif 000063
及び
次式のβＡＧ−ＴＯＣＡ（５ａ）。
【化２１】
2014515729.tif 000064
（上記化合物の各々に関し、
Ｒ1は次式の基であり、
【化２２】
2014515729.tif 000065
Ｒ2は次式の構造を有する。）
【化２３】
2014515729.tif 000066
【請求項９】
Ｒ2が次式の構造を有する、請求項７又は請求項８記載のアルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体。
【化２４】
2014515729.tif 000067
【請求項１０】
次式のβＡＧ−［Ｗ−ｃ−（ＣＴＦＴＹＣ）Ｋ］（６ａ）であるアルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体。
【化２５】
2014515729.tif 000068
（式中、
Ｒ1は次式の基であり、
【化２６】
2014515729.tif 000069
Ｒ3は次式の構造を有する。）
【化２７】
2014515729.tif 000070
【請求項１１】
Ｒ3が次式の構造を有する、請求項１０記載のアルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体。
【化２８】
2014515729.tif 000071
【請求項１２】
アルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を銅触媒クリック化学条件下で２−［18Ｆ］フルオロエチルアジドと反応させて対応する２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を生成する段階を含んでなる製造方法。
【請求項１３】
前記アルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体が請求項１記載の化合物であり、前記対応する２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体が請求項１記載の化合物である、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
請求項１記載の化合物を被験体に投与する段階、及び前記被験体において前記化合物を検出する段階を含んでなるイメージング方法。
【請求項１５】
被験体においてソマトスタチン受容体の増加したレベル又は高いレベルを示す病態又は腫瘍をインビボで検出する方法であって、
（ｉ）請求項１記載の化合物又はその医薬組成物を前記被験体に投与する段階、
（ｉｉ）前記化合物又はその医薬組成物を前記被験体内に見出されるソマトスタチン受容体に結合させる段階、
（ｉｉｉ）前記化合物又はその医薬組成物中の放射性同位体から放出される信号を検出する段階、
（ｉｖ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階、並びに任意には
（ｖ）前記被験体における前記病態の分布及び程度を決定する段階
を含んでなる方法。
【請求項１６】
被験体における神経内分泌腫瘍をインビボで検出する方法であって、
（ｉ）請求項１記載の化合物又はその医薬組成物を前記被験体に投与する段階、
（ｉｉ）前記化合物又はその医薬組成物を前記被験体における神経内分泌腫瘍の表面に見出されるソマトスタチン受容体に結合させる段階、
（ｉｉｉ）前記化合物又はその医薬組成物中の放射性同位体から放出される信号を検出する段階、
（ｉｖ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階、並びに任意には
（ｖ）前記被験体における前記神経内分泌腫瘍の分布及び程度を決定する段階
を含んでなる方法。
【請求項１７】
被験体における肺腫瘍をインビボで検出する方法であって、
（ｉ）請求項１記載の化合物又はその医薬組成物を前記被験体に投与する段階、
（ｉｉ）前記化合物又はその医薬組成物を前記被験体における肺腫瘍の表面に見出されるソマトスタチン受容体に結合させる段階、
（ｉｉｉ）前記化合物又はその医薬組成物中の放射性同位体から放出される信号を検出する段階、
（ｉｖ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階、並びに任意には
（ｖ）前記被験体における前記肺腫瘍の分布及び程度を決定する段階
を含んでなる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージング、詳しくは胃腸膵臓神経内分泌腫瘍を含む神経内分泌腫瘍のイメージングのための新規放射性トレーサーを記載する。具体的には本発明は、新規な［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール−［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を記載する。本発明の放射性トレーサーは、胃腸膵臓神経内分泌腫瘍の細胞表面に見出されるソマトスタチン受容体を標的化し得る。本発明はまた、新規放射性トレーサーの中間体、前駆体、医薬組成物、製造方法及び使用方法も記載する。
【背景技術】
【０００２】
ＰＥＴは、腫瘍学及び神経学において疾患の早期検出のためにますます重要となりつつある。特に放射性標識ペプチドは、疾患の検出、治療のモニタリング及びペプチド受容体放射線療法（ＰＲＲＴ）のために一層頻繁に研究されている（Ｃｈｅｎ，Ｘ．Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ２００４，３１，（８），１０８１−１０８９；Ｌｅｉ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ６，（１），３３−４１）。
【０００３】
ペプチド［Ｔｙｒ3］オクトレオテート（ＴＯＣＡ）（図１）は、以前には、イメージング目的（Ｎｉｋｏｌｏｐｏｕｌｏｕ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００６，１２，１２４−１３１；Ｌｉ，Ｗ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００２，１３，７２１−７２８；Ｒｅｕｂｉ，Ｊ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ２０００，２７，（３），２７３−２８２）及び神経内分泌腫瘍のＰＲＲＴ（Ｔｅｕｎｉｓｓｅｎ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ２００９，３６，（１１），１７５８−１７６６）のために各種の放射性同位体で標識されていた。［Ｔｙｒ3］オクトレオテートは、ソマトスタチンより長い生物学的半減期（１．５〜２時間）を有しながら受容体特異性を保持するソマトスタチン類似体である（Ｗｅｉｎｅｒ，Ｒ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００１，３１，（４），２９６−３１１）。５つのサブタイプ（ｓｓｔｒ−１〜５）が存在するソマトスタチン受容体は神経内分泌腫瘍の表面で過剰発現されることが判明している（Ｒｕｆｉｎｉ，Ｖ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００６，３６，（３），２２８−２４７）。この過剰発現は、放射性標識されたオクトレオテート類似体による腫瘍の選択的標的化を可能にする。ソマトスタチンを模倣するための最初に発見された８アミノ酸配列ペプチドはオクトレオチドであった。環状オクタペプチドはソマトスタチン受容体への結合のために重要な部位を含み、最初は急性及び慢性膵炎のような疼痛状態の治療のためにアヘンアンタゴニストとして使用された（Ｍａｕｒｅｒ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  １９８２，７９，４８１５−４８１７）ことが判明した（Ｕｈｌ，Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １９９９，６０，２３−３１）。オクトレオチドと［Ｔｙｒ3］オクトレオテートとを比較すると、後者はソマトスタチン受容体に対してより高い親和性を有することが証明されており（Ｒｅｕｂｉ，Ｊ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ２０００，２７，（３），２７３−２８２；Ｗｉｌｄ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ２００３，３０，（１０），１３３８−１３４７）、Ｃ末端においてチロシンをフェニルアラニンで置換しかつトレオニンをトレオニノールで置換することは親和性を高めるように思われる。それにもかかわらず、［111Ｉｎ］−ＤＴＰＡ−オクトレオチド（Ｏｃｔｒｅｏｓｃａｎ（商標））はなおも臨床において選択されるペプチドであり、１９９４年にはソマトスタチン受容体陽���神経内分泌腫瘍に対するイメージング剤としてＦＤＡにより認可された（Ｒｕｆｉｎｉ，Ｖ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００６，３６，（３），２２８−２４７）。
【０００４】
ペプチド又は他の巨大分子を標識する場合、塩基性及び低反応性のような18Ｆの制約を克服するため一般に使用される方策は、補欠分子族（即ち、小さい放射性標識有機分子であって、次いで目的の主要ファーマコフォアにカップリングし得るもの）を使用することである（Ｏｋａｒｖｉ，Ｓ．Ｍ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００１，２８，（７），９２９−３８）。これまで使用されてきたアプローチはいずれも、所要段階数、総合反応時間、単離収率及び単離方法の点で様々に異なっている。オクトレオチドは、以前には18Ｆ修飾有機補欠分子族で標識されていた。Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌａｂｅｌｌｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ＆  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  １９９９，４２，Ｓ７２０−Ｓ７２１）によって使用された初期の方策は、オクトレオチドのＮ末端を［18Ｆ］フルオロ安息香酸（［18Ｆ］ＦＢＡ）の活性化エステルで直接に標識するものであった。続く体内分布試験では、［18Ｆ］フルオロベンゾイル−オクトレオチド類似体は親油性が高すぎ、肝臓への顕著な取込みを示すことが証明された。オクトレオチドはまた、Ｎ末端において２−［18Ｆ］フルオロプロピオン酸４−ニトロフェニルエステルで直接に標識されたが、これ自体を合成するために３つの化学修飾段階を必要とする（Ｇｕｈｌｋｅ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｓｏｔｏｐｅｓ  １９９４，４５，（６），７１５−７２７）。この化学における主な欠点は、コンジュゲーション中にオクトレオチドのリシン側鎖をＢｏｃ保護する必要があり、最終段階でそれの除去が要求されることである（Ｇｕｈｌｋｅ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １９９４，２１，（６），８１９−８２５）。
【０００５】
Ｓｃｈｏｔｔｅｌｉｕｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００４，１０，（１１），３５９３−３６０６）は、以前の類似体に比べて向上した腫瘍取込み及び良好な薬物動態を有する18Ｆ標識オクトレオテートを開発することを望んだ。著者らは、親油性を低下させ、結果として肝排出を減少させて逆に腎排出を助けるため、オクトレオテートを炭水化物基で修飾することを選択した。グルコース修飾オクトレオテート（Ｇｌｕｃ−Ｌｙｓ−ＴＯＣＡ）を開発し、ペプチドのリシンを２−［18Ｆ］フルオロプロピオン酸４−ニトロフェニルエステルで標識した。Ｍｅｉｓｅｔｓｃｈｌａｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００６，４７，５６６−５７３）により、最終生成物Ｇｌｕｃ−Ｌｙｓ（［18Ｆ］ＦＰ）−ＴＯＣＡが患者において評価され、神経内分泌腫瘍の検出時に［111Ｉｎ］−ＤＴＰＡ−オクトレオチドより優れていることが判明した。しかし、［111Ｉｎ］−ＤＴＰＡ−オクトレオチドは腫瘍取込みの向上を示したものの、非常に長い合成時間（３時間）及び低い収率（２０〜３０％）のためにそれは日常的な臨床用途のために実用可能な選択肢でない（Ｍｅｉｓｅｔｓｃｈｌaｇｅｒ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００６，４７，５６６−５７３）。Ｓｃｈｏｔｔｅｌｉｕｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００４，１０，（１１），３５９３−３６０６）はまた、２種の他の炭水化物類似体（Ｃｅｌ−Ｓ−Ｄｐｒ−［Ｔｙｒ3］オクトレオテート及びＧｌｕｃ−Ｓ−Ｄｐｒ［Ｔｙｒ3］オクトレオテート）を［18Ｆ］フルオロベンズアルデヒドで標識してオキシム誘導体化放射性トレーサーを得た。Ｃｅｌ−Ｓ−Ｄｐｒ（［18Ｆ］ＦＢＯＡ）−［Ｔｙｒ3］オクトレオテートは、Ｇｌｕｃ−Ｌｙｓ（［18Ｆ］ＦＰ）−ＴＯＣＡに比べて腫瘍取込みの向上を示すと共に、向上した収率（６５〜８５％）を有しながら短い合成時間（５０分）を有していた。Ｇｌｕｃ−Ｓ−Ｄｐｒ［Ｔｙｒ3］オクトレオテートを［18Ｆ］フルオロプロピオネート（［18Ｆ］ＦＰ）及び［18Ｆ］フルオロベンズアルデヒド（［18Ｆ］ＦＢＯＡ）で標識した。Ｇｌｕｃ−Ｓ−Ｄｐｒ（［18Ｆ］ＦＰ）−［Ｔｙｒ3］オクトレオテート標識類似体はＧｌｕｃ−Ｌｙｓ（［18Ｆ］ＦＰ）−ＴＯＣＡと同様な腫瘍取込みを示したが、高い腫瘍／器官比（血液、肝臓及び筋肉）も有していた。Ｇｌｕｃ−Ｓ−Ｄｐｒ（［18Ｆ］ＦＢＯＡ）−［Ｔｙｒ3］オクトレオテートはＣｅｌ−Ｓ−Ｄｐｒ（［18Ｆ］ＦＢＯＡ）−［Ｔｙｒ3］オクトレオテートと同等な腫瘍取込みを示したが、高い腫瘍／筋肉比を有していた。
【０００６】
最も最近に公表された18Ｆ標識オクトレオチド類似体は、［18Ｆ］フッ化アルミニウム−１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸オクトレオチド（［18Ｆ］ＡｌＦ−ＮＯＴＡ−オクトレオチド）であった（Ｌａｖｅｒｍａｎ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ５１，（３），４５４−４６１）。［18Ｆ］フッ化アルミニウム標識方法を使用することの利点は、フッ素−１８共沸乾燥段階が必要とされないことであり、これは総反応時間がより短いことを意味する。ＨＰＬＣによれば、生成物は２種の異性体として観察され、［18Ｆ］ＡｌＦがＮＯＴＡキレート中に組み込まれたものは約５０％に等しく、残部は非キレート化［18Ｆ］ＡｌＦであると述べられていた。著者らは、２種の異性体がＨＰＬＣによって分離できたとコメントしていた。再分析したところ、２種の異性体への再平衡化が見られた。これら２種の異性体の立体配座はこれまで確立されていない。
【０００７】
ペプチドのフッ素−１８標識においては、以前はクリック化学が利用されていた（Ｌｉ，Ｚ．Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００７，（１８），１９８７−１９９４；Ｒａｍｅｎｄａ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ２００９，４８，７５２１−７５２３；Ｈａｕｓｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，２００８，５９０１；Ｍａｍａｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｉｎｉ−Ｒｅｖ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００９，６，２１）。反応は効率が良いので、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）用の短寿命同位体（18Ｆの半減期１０９．７分）による放射性標識トレーサー及びリガンドの合成にそれを適用することができる（Ｇｌａｓｅｒ，Ｍ．，ａｎｄ  Ａｒｓｔａｄ，Ｅ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００７，１８，（３），９８９−９９３；Ｇｌａｓｅｒ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌａｂｅｌｌｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ＆  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ２００９，５２，（９−１０），４０７−４１４）。
【０００８】
Ｍａｒｉｋ  ａｎｄ  Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅ（Ｍａｒｉｋ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００６，（４７），６６８１−６６８４）は、末端アルキンをフッ素−１８で標識すると共に、アジド部分を各種のペプチドに付加するアプローチを採用した。最初、ＣｕＳＯ4／アスコルビン酸Ｎａを触媒系として使用したが、標識ペプチドは１０％の収率でしか単離されなかった。ＣｕＳＯ4をＣｕＩで置き換えると共にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を添加した場合に改善が認められた。Ｓｉｒｉｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００７，４８，３９５３−３９５７）は、ＣｕＩを使用すると微量の１，５−置換トリアゾール副生物が生じることを見出した。著者らは４種のメシレート前駆体、２種のアセチレン及び２種のアジドを合成し、ｔＢｕＯＨを溶媒として使用しながらこれらの全てを［18Ｆ］ＴＢＡＦで標識した（Ｋｉｍ，Ｄ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ２００６，１２８，１６３９４−１６３９７）。
【０００９】
しかし当技術分野では、以前の標識類似体に比べて向上した腫瘍取込み及び薬物動態パラメーターを有する放射性標識オクトレオテートに対するニーズがなおも存在している。また、かかる放射性標識オクトレオテート類似体を製造するための効率的かつ効果的な方法に対するニーズも存在している。本発明は、以下に記載するように、これらのニーズに応えるものである。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、トリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を提供する。
【００１１】
本発明は、２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を提供する。本発明の化合物は、高い特異的結合と。高コントラストＰＥＴイメージングのための迅速な標的局在化及び迅速な薬物動態とを併せ持っている。
【００１２】
本発明は、本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体の製造方法を提供する。
【００１３】
本発明は、本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を用いるイメージング方法を提供する。
【００１４】
本発明は、アルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体及びその製造方法を提供する。
【００１５】
本発明は、本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体の１種以上を、薬学的に許容されるキャリヤー、賦形剤又は生体適合性キャリヤーと共に含んでなる医薬組成物を提供する。
【００１６】
本発明はさらに、インビトロ又はインビボでソマトスタチン受容体を検出する方法であって、本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体又はその医薬組成物を投与する段階を含んでなる方法を提供する。
【００１７】
本発明はさらに、２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体又はその医薬組成物を用いてインビトロ又はインビボでソマトスタチン受容体を検出する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、ペプチド［Ｔｙｒ3］オクトレオテート（ＴＯＣＡ）、５種のアルキン（１ａ〜５ａ）−及びトリアゾール（１ｂ〜５ｂ）−オクトレオテート類似体、並びにスクランブルド陰性対照アルキン（６ａ）及びトリアゾール（６ｂ）を示している。
【図１Ａ】図１Ａは５ｂを合成するための反応混合物の半分取ＨＰＬＣトレースを表し、生成した副生物１１及び１２を示している。半分取ＨＰＬＣでは、Ｌｕｎａ  Ｃ１８，１００×１０ｍｍ，５μ、勾配２５〜５０％ＭｅＣＮ／Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡを使用した。上段トレースは、放射能チャネル（保持時間１６．０５分）である。下段トレースはＵＶチャネル（λ２５４ｎｍ）であって、２種の副生物１２（保持時間１４．２７分）及び１１（保持時間１７．０６分）を示している。
【図２】図２は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）カラム（５０×４．６ｍｍ，３μｍ；流量１ｍＬ／分）を１５分で５〜８０％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡの勾配と共に用いて実施したＦＥＴ−Ｇ−ＰＥＧ−ＴＯＣＡ（１ｂ）のＨＰＬＣ分析を示している。
【図３】図３は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）カラム（５０×４．６ｍｍ，３μｍ；流量１ｍＬ／分）を１５分で５〜８０％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡの勾配と共に用いて実施したＦＥＴＥ−ＰＥＧ−ＴＯＣＡ（２ｂ）のＨＰＬＣ分析を示している。
【図４】図４は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）カラム（５０×４．６ｍｍ，３μｍ；流量１ｍＬ／分）を１５分で５〜８０％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡの勾配と共に用いて実施したＦＥＴ−Ｇ−ＴＯＣＡ（３ｂ）のＨＰＬＣ分析を示している。
【図５】図５は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）カラム（５０×４．６ｍｍ，３μｍ；流量１ｍＬ／分）を１５分で５〜８０％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡの勾配と共に用いて実施したＦＥＴＥ−ＴＯＣＡ（４ｂ）のＨＰＬＣ分析を示している。
【図６】図６は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）カラム（５０×４．６ｍｍ，３μｍ；流量１ｍＬ／分）を１５分で５〜８０％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡの勾配と共に用いて実施したＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡ（５ｂ）のＨＰＬＣ分析を示している。
【図７】図７は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）カラム（５０×４．６ｍｍ，３μｍ；流量１ｍＬ／分）を１５分で５〜８０％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡの勾配と共に用いて実施したＦＥＴ−βＡＧ−［Ｗ−ｃ−（ＣＴＦＴＹＣ）Ｋ］（６ｂ）のＨＰＬＣ分析を示している。
【図８】図８は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）カラム（５０×４．６ｍｍ，３μｍ；流量１ｍＬ／分）を１５分で５〜８０％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡの勾配と共に用いて実施した、［19Ｆ］−標準でスパイクしたＦＥＴ−Ｇ−ＰＥＧ−ＴＯＣＡ（１ｂ）のＨＰＬＣ分析を示している。
【図９】図９は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）カラム（５０×４．６ｍｍ，３μｍ；流量１ｍＬ／分）を１５分で５〜８０％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡの勾配と共に用いて実施した、［19Ｆ］−標準でスパイクしたＦＥＴＥ−ＰＥＧ−ＴＯＣＡ（２ｂ）のＨＰＬＣ分析を示している。
【図１０】図１０は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）カラム（５０×４．６ｍｍ，３μｍ；流量１ｍＬ／分）を１５分で５〜８０％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡの勾配と共に用いて実施した、［19Ｆ］−標準でスパイクしたＦＥＴ−Ｇ−ＴＯＣＡ（３ｂ）のＨＰＬＣ分析を示している。
【図１１】図１１は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）カラム（５０×４．６ｍｍ，３μｍ；流量１ｍＬ／分）を１５分で５〜８０％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡの勾配と共に用いて実施した、［19Ｆ］−標準でスパイクしたＦＥＴＥ−ＴＯＣＡ（４ｂ）のＨＰＬＣ分析を示している。この分析は、１ヶ月を超えて水溶液状態で貯蔵したために経時的分解の徴候を示すように思われ、したがって２つのピークを含んでいる。初期生成時には、［19Ｆ］ＦＥＴＥ−ＴＯＣＡはただ１つのピークとして認められた。
【図１２】図１２は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）カラム（５０×４．６ｍｍ，３μｍ；流量１ｍＬ／分）を１５分で５〜８０％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡの勾配と共に用いて実施した、［19Ｆ］−標準でスパイクしたＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡ（５ｂ）のＨＰＬＣ分析を示している。
【図１３】図１３は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）カラム（５０×４．６ｍｍ，３μｍ；流量１ｍＬ／分）を１５分で５〜８０％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡの勾配と共に用いて実施した、［19Ｆ］−標準でスパイクしたＦＥＴ−βＡＧ−［Ｗ−ｃ−（ＣＴＦＴＹＣ）Ｋ］（６ｂ）のＨＰＬＣ分析を示している。
【図１４】図１４は、カルシウムフラックスフルオロメトリックイメージングプレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）アッセイ（実施例を参照されたい）を用いて測定した、ソマトスタチン受容体サブタイプｓｓｔｒ−２、３及び４に対する様々な［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール−［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体の親和性プロファイルを示している。カルシウム色素をプレロードしたｓｓｔｒ−２、３又は４発現細胞において、［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール−［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体によるカルシウムフラックスの活性化を様々な濃度で評価し、このアッセイを二重反復試験で実施した。蛍光出力を測定し、データを％最大蛍光信号として表した。各種のアゴニストリガンドに関する半最大受容体活性をまとめて示す。ＮＤ＝活性欠如のために測定せず。
【図１５】図１５は、［18Ｆ］−ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡの放射性ＨＰＬＣクロマトグラフィーを示している。（Ａ）は８．４７分の検体保持時間を示す参照標準であり、（Ｂ）はマウスへの放射性トレーサー注射から３０分後に得られた典型的な血漿抽出物であって、安定な放射性トレーサーを表している。
【図１６】図１６は、ＡＲ４２Ｊ腫瘍担持マウスの腫瘍、腎臓及び膀胱における（Ａ）［18Ｆ］−ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡ及び（Ｂ）スクランブルドペプチドＦＥＴ−βＡＧ−［Ｗ−ｃ−（ＣＴＦＴＹＣ）Ｋ］の局在を示すＰＥＴ−ＣＴ画像である。横断面及び矢状断面の静止画像（３０〜６０分融合画像、０．５ｍｍスライス画像）が示されている。
【図１７】図１７は、ＡＲ４２Ｊ腫瘍、腎臓、肝臓、筋肉及び尿における［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール−［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体の組織薬物動態を比較する時間活性曲線を示している。各放射性トレーサーを腫瘍担持マウスに静脈内注射した後、動的ＰＥＴ／ＣＴイメージングを６０分間行った。明確化のため、肝臓曲線は拡大（ズーム）されている。組織の放射性トレーサー取込み値は、組織の％注射量／ｍＬとして表されている。値は平均±ＳＥＭ（ｎ＝３〜５）を表し、値は平均±ＳＥＭ（ｎ＝３〜５）を表し、明確化のために上方及び下方のバーが使用されている。符号は、（□）ＦＥＴ−Ｇ−ＰＥＧ−ＴＯＣＡ、（○）ＦＥＴＥ−ＰＥＧ−ＴＯＣＡ、（●）ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡ、（■）ＦＥＴ−Ｇ−ＴＯＣＡ及び（▲）ＦＥＴＥ−ＴＯＣＡである。
【図１８】図１８は、ＡＲ４２Ｊ異種移植モデルにおけるＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡ局在化の特異性を示している。［18Ｆ］−ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡの動態及び過剰の非放射性非標識オクトレオチドによる受容体結合部位の飽和効果が示されている。［18Ｆ］−ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡの静脈内注射の１０分前にオクトレオチド（１０ｍｇ／ｋｇ、静脈内）を注射することでブロッキング試験を実施した。動的イメージングを６０分間行った。組織の放射性トレーサー取込み値は、組織の％注射量／ｍＬとして表されている。グラフはまた、同じマウスモデルにおけるスクランブルドペプチドＦＥＴ−βＡＧ−［Ｗ−ｃ−（ＣＴＦＴＹＣ）Ｋ］の薬物動態も示している。値は平均±ＳＥＭ（ｎ＝３〜５）を表し、明確化のために上方及び下方のバーが使用されている。符号は、（●）オクトレオチドナイーブマウスにおけるＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡ、（▲）１０ｍｇ／ｋｇの非標識オクトレオチドを予め投与したマウスにおけるＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡ、及び（■）オクトレオチドナイーブマウスにおけるＦＥＴ−βＡＧ−［Ｗ−ｃ−（ＣＴＦＴＹＣ）Ｋ］である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明は、次の式（Ｉ）のトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を提供する。
Ｒ1−ＬＩＮＫＥＲ−Ｒ2    （Ｉ）
式中、
Ｒ1は次式の基であり、
【００２０】
【化１】
2014515729.tif 000002
（式中、Ｙは１以上の放射性同位体を含むレポーター部分である。）
Ｒ2は次式の構造を有し、
【００２１】
【化２】
2014515729.tif 000003
ＬＩＮＫＥＲは、国際公開第２００８／１３９２０７号に記載されているようなリンカー基であるか、或いは式−（Ａ）m−（式中、各Ａは独立に−ＣＲr、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ2ＣＯ2−、−ＣＯ2ＣＲ2−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ2ＮＲ−、−ＮＲＳＯ2−、−ＣＲ2ＯＣＲ2−、−ＣＲ2ＳＣＲ2−、−ＣＲ2ＮＲＣＲ2−、Ｃ4-8シクロヘテロアルキレン基、Ｃ4-8シクロアルキレン基、Ｃ5-12アリーレン基又はＣ3-12ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位であり、各Ｒは独立にＨ、Ｃ1-20アルキル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、Ｃ1-4アルコキシＣ1-20アルキル及びヒドロキシＣ1-20アルキルから選択され、ｍは１〜２０の値を有する整数である。）の合成リンカー基である。
【００２２】
本発明に従えば、レポーター部分Ｙの放射性同位体は、当技術分野で知られている任意のＰＥＴ放射性同位体（例えば、18Ｆ、17Ｂｒ、76Ｂｒ、124Ｉ、11Ｃ、82Ｒｂ、68Ｇａ、64Ｃｕ及び62Ｃｕ、好ましくは11Ｃ又は18Ｆ、最も好ましくは18Ｆ）であり得る。一実施形態では、放射性同位体は当技術分野で知られている任意のＳＰＥＣＴ放射性同位体（例えば、123Ｉ、124Ｉ、131Ｉ）であり得る。放射性同位体は、レポーター部分Ｙ中に直接組み込んでもよいし（例えば、−ＣＨ2ＣＨ218Ｆ又は−ＣＨ2ＣＨ211ＣＨ2Ｆ）、或いは当技術分野で知られている方法によってキレート化剤中に組み込んでもよい（例えば、国際公開第２００６／０６７３７６号を参照されたい）。
【００２３】
本発明は、次の式（ＩＩ）の２−フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を提供する。
Ｒ1−ＬＩＮＫＥＲ−Ｒ2    （ＩＩ）
式中、
Ｒ1は次式の基であり、
【００２４】
【化３】
2014515729.tif 000004
（式中、Ｘは上記に記載したような放射性同位体である。）
ＬＩＮＫＥＲ及びＲ2の各々は、式（Ｉ）に関して記載した通りである。
【００２５】
本発明は、次の式（ＩＩＩ）の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を提供する。
Ｒ1−ＬＩＮＫＥＲ−Ｒ2    （ＩＩＩ）
式中、
Ｒ1は次式の基であり、
【００２６】
【化４】
2014515729.tif 000005
Ｒ2は次式の構造を有し、
【００２７】
【化５】
2014515729.tif 000006
ＬＩＮＫＥＲは、国際公開第２００８／１３９２０７号に記載されているようなリンカー基であるか、或いは式−（Ａ）m−（式中、各Ａは独立に−ＣＲr、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ2ＣＯ2−、−ＣＯ2ＣＲ2−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ2ＮＲ−、−ＮＲＳＯ2−、−ＣＲ2ＯＣＲ2−、−ＣＲ2ＳＣＲ2−、−ＣＲ2ＮＲＣＲ2−、Ｃ4-8シクロヘテロアルキレン基、Ｃ4-8シクロアルキレン基、Ｃ5-12アリーレン基又はＣ3-12ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位であり、各Ｒは独立にＨ、Ｃ1-20アルキル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、Ｃ1-4アルコキシＣ1-20アルキル及びヒドロキシＣ1-20アルキルから選択され、ｍは１〜２０の値を有する整数である。）の合成リンカー基である。
【００２８】
本発明は、それぞれ上記に記載したような式（Ｉ）、（ＩＩ）及び／又は（ＩＩＩ）のトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を提供し、式中のＲ1及びＲ2の各々はそれぞれ式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）に関して記載した通りであり、ＬＩＮＫＥＲはは−（ポリエチレングリコール）n−或いは次式の基である。
【００２９】
【化６】
2014515729.tif 000007
式中、ｎは１〜２０の整数であり、好ましくはｎは１〜１０の整数であり、さらに好ましくはｎは１〜６の整数である。
【００３０】
本発明の一実施形態では、それぞれ上記に記載したような式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）のＲ2化合物は次式の構造を有する。
【００３１】
【化７】
2014515729.tif 000008
本発明は、２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体である次の式（１ｂ）のＦＥＴ−Ｇ−ＰＥＧ−ＴＯＣＡを提供する。
【００３２】
【化８】
2014515729.tif 000009
式中、
Ｒ1は次式の基であり、
【００３３】
【化９】
2014515729.tif 000010
Ｒ2は次式の構造を有し、
【００３４】
【化１０】
2014515729.tif 000011
好ましくはＲ2は次式の構造を有する。
【００３５】
【化１１】
2014515729.tif 000012
本発明は、２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体である次の式（２ｂ）のＦＥＴＥ−ＰＥＧ−ＴＯＣＡを提供する。
【００３６】
【化１２】
2014515729.tif 000013
式中、Ｒ1及びＲ2の各々は式（１ｂ）の化合物に関して上記に記載した通りである。
【００３７】
本発明は、２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体である次式のＦＥＴ−Ｇ−ＴＯＣＡ（３ｂ）を提供する。
【００３８】
【化１３】
2014515729.tif 000014
式中、Ｒ1及びＲ2の各々は式（１ｂ）の化合物に関して上記に記載した通りである。
【００３９】
本発明は、２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体である次式のＦＥＴＥ−ＴＯＣＡ（４ｂ）を提供する。
【００４０】
【化１４】
2014515729.tif 000015
式中、Ｒ1及びＲ2の各々は式（１ｂ）の化合物に関して上記に記載した通りである。
【００４１】
本発明は、２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体である次式のＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡ（５ｂ）を提供する。
【００４２】
【化１５】
2014515729.tif 000016
式中、Ｒ1及びＲ2の各々は式（１ｂ）の化合物に関して上記に記載した通りである。
【００４３】
本発明は、２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体である次式のＦＥＴ−βＡＧ−［Ｗ−ｃ−（ＣＴＦＴＹＣ）Ｋ］（７ｂ）を提供する。
【００４４】
【化１６】
2014515729.tif 000017
式中、Ｒ1は式（１ｂ）の化合物に関して上記に記載した通りであり、Ｒ3は次式の構造を有し、
【００４５】
【化１７】
2014515729.tif 000018
好ましくはＲ3は次式の構造を有する。
【００４６】
【化１８】
2014515729.tif 000019
医薬組成物又は放射性医薬組成物
本発明は、本明細書中に記載したような本発明のトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体又は２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体の１種以上を、薬学的に許容されるキャリヤー、賦形剤又は生体適合性キャリヤーと共に含んでなる医薬組成物を提供する。
【００４７】
本発明は、本明細書中に記載したような本発明のトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体又は２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体の１種以上を、哺乳動物への投与に適した薬学的に許容されるキャリヤー、賦形剤又は生体適合性キャリヤーと共に含んでなる医薬組成物を提供する。
【００４８】
当業者には理解される通り、薬学的に許容されるキャリヤー、賦形剤又は生体適合性キャリヤーは、当技術分野で知られる任意の薬学的に許容されるキャリヤー、賦形剤又は生体適合性キャリヤーであり得る。
【００４９】
「生体適合性キャリヤー、賦形剤又は生体適合性キャリヤー」は、医薬組成物が生理学的に認容され得るようにして（例えば、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにして）本発明のトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体又は２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を懸濁又は溶解し得る任意の流体（特に液体）であり得る。生体適合性キャリヤーは、好適には、無菌のパイロジェンフリー注射用水、（有利には注射用の最終生成物が等張性又は非低張性になるように平衡させ得る）食塩水のような水溶液、或いは１種以上の張度調整物質（例えば、血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。生体適合性キャリヤーはまた、エタノールのような生体適合性有機溶媒を含んでいてもよい。かかる有機溶媒は、親油性の高い化合物又は配合物を可溶化するために有用である。好ましくは、生体適合性キャリヤーはパイロジェンフリー注射用水、等張食塩水又はエタノール水溶液である。静脈内注射用の生体適合性キャリヤーのｐＨは、好適には４．０〜１０．５の範囲内にある。
【００５０】
本発明の医薬組成物は非経口的に（即ち、注射によって）投与でき、最も好ましくは水溶液である。かかる組成物は、緩衝剤、薬学的に許容される可溶化剤（例えば、シクロデキストリン或いはＰｌｕｒｏｎｉｃ、Ｔｗｅｅｎ又はリン脂質のような界面活性剤）、薬学的に許容される安定剤又は酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、ゲンチシン酸又はｐ−アミノ安息香酸）のような追加成分を任意に含み得る。本発明の医薬組成物の製造方法はさらに、放射性標識化合物を含む医薬組成物を得るために必要な段階（例えば、有機溶媒の除去、生体適合性緩衝剤及び任意の追加成分の添加）を含むことができる。非経口投与のためには、本発明の医薬組成物が無菌性かつ非発熱原性であることを保証するための段階を採用することも必要である。かかる段階は当業者には公知である。
【００５１】
中間体
本発明は、次の式（ＩＶ）のアルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を提供する。
Ｒ1−ＬＩＮＫＥＲ−Ｒ2    （ＩＶ）
式中、
Ｒ1は次式の基であり、
【００５２】
【化１９】
2014515729.tif 000020
Ｒ2は次式の構造を有し、
【００５３】
【化２０】
2014515729.tif 000021
ＬＩＮＫＥＲは、国際公開第２００８／１３９２０７号に記載されているようなリンカー基であるか、或いは式−（Ａ）m−（式中、各Ａは独立に−ＣＲr、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ2ＣＯ2−、−ＣＯ2ＣＲ2−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ2ＮＲ−、−ＮＲＳＯ2−、−ＣＲ2ＯＣＲ2−、−ＣＲ2ＳＣＲ2−、−ＣＲ2ＮＲＣＲ2−、Ｃ4-8シクロヘテロアルキレン基、Ｃ4-8シクロアルキレン基、Ｃ5-12アリーレン基又はＣ3-12ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位であり、各Ｒは独立にＨ、Ｃ1-20アルキル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、Ｃ1-4アルコキシＣ1-20アルキル及びヒドロキシＣ1-20アルキルから選択され、ｍは１〜２０の値を有する整数である。）の合成リンカー基である。
【００５４】
本発明は、上記に記載したような式（ＩＶ）のアルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を提供し、式中のＲ1及びＲ2の各々は式（ＩＶ）に関して記載した通りであり、ＬＩＮＫＥＲはは−（ポリエチレングリコール）n−或いは次式の基である。
【００５５】
【化２１】
2014515729.tif 000022
式中、ｎは１〜２０の整数であり、好ましくはｎは１〜１０の整数であり、さらに好ましくはｎは１〜６の整数である。
【００５６】
本発明の一実施形態では、上記に記載したような式（ＩＶ）のＲ2化合物は次式の構造を有する。
【００５７】
【化２２】
2014515729.tif 000023
本発明は、アルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体である次の式（１ａ）のＧ−ＰＥＧ−ＴＯＣＡを提供する。
【００５８】
【化２３】
2014515729.tif 000024
式中、
Ｒ1は次式の基であり、
【００５９】
【化２４】
2014515729.tif 000025
Ｒ2は次式の構造を有し、
【００６０】
【化２５】
2014515729.tif 000026
好ましくはＲ2は次式の構造を有する。
【００６１】
【化２６】
2014515729.tif 000027
本発明は、アルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体である次の式（２ａ）のＥ−ＰＥＧ−ＴＯＣＡを提供する。
【００６２】
【化２７】
2014515729.tif 000028
式中、Ｒ1及びＲ2の各々は式（１ａ）の化合物に関して上記に記載した通りである。
【００６３】
本発明は、アルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体である次式のＧ−ＴＯＣＡ（３ａ）を提供する。
【００６４】
【化２８】
2014515729.tif 000029
式中、Ｒ1及びＲ2の各々は式（１ａ）の化合物に関して上記に記載した通りである。
【００６５】
本発明は、アルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体である次式のＥ−ＴＯＣＡ（４ａ）を提供する。
【００６６】
【化２９】
2014515729.tif 000030
式中、Ｒ1及びＲ2の各々は式（１ａ）の化合物に関して上記に記載した通りである。
【００６７】
本発明は、アルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体である次式のβＡＧ−ＴＯＣＡ（５ａ）を提供する。
【００６８】
【化３０】
2014515729.tif 000031
式中、Ｒ1及びＲ2の各々は式（１ａ）の化合物に関して上記に記載した通りである。
【００６９】
本発明は、アルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体である次式のβＡＧ−［Ｗ−ｃ−（ＣＴＦＴＹＣ）Ｋ］（６ａ）を提供する。
【００７０】
【化３１】
2014515729.tif 000032
式中、Ｒ1は式（１ａ）の化合物に関して上記に記載した通りであり、Ｒ3は次式の構造を有する。
【００７１】
【化３２】
2014515729.tif 000033
合成
本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体及び本発明のアルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体は、当技術分野で知られる方法（国際公開第２０１０／０２６３８８号（その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす））及び下記に例示される方法によって製造できる。
【００７２】
本明細書中に記載したようなＰＥＴ放射性同位体（即ち、任意の陽電子放出放射性同位体）は、トリアゾール部分の形成前又は当技術分野で知られる任意の手段（例えば、国際公開第２０１０／０２６３８８号）によるトリアゾール部分の形成後において、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物及び２−フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体中に導入することができる。ＳＰＥＣＴ放射性同位体は、同様にして、本明細書中にそれぞれ記載したような式（Ｉ）又は（ＩＩ）の分子中に導入することができる。
【００７３】
本発明に従えば、本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体の製造方法は、アルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を銅触媒クリック化学条件下で２−［18Ｆ］フルオロエチルアジドと反応させることで、本明細書中にそれぞれ記載したような対応する２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を生成する段階を含んでいる。
【００７４】
本発明の一実施形態では、２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体の合成は自動化される。［18Ｆ］放射性トレーサーは、自動放射合成装置の使用により、自動化方式で簡便に製造できる。かかる装置には、Ｔｒａｃｅｒｌａｂ（商標）及びＦＡＳＴｌａｂ（商標）（共にＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｔｄ製）をはじめとするいくつかの市販例が存在している。かかる装置は通常、放射化学を実施するための（しばしば使い捨ての）「カセット」を含んでいて、これは放射合成を実施するため装置に取り付けられる。カセットは、普通、流体通路、反応器、及び試薬バイアルを受け入れるためのポート並びに放射合成後の清掃段階で使用される任意の固相抽出カートリッジを含んでいる。
【００７５】
したがって本発明は、別の態様では、本明細書中に記載したようなＰＥＴ放射性トレーサーの自動化合成のためのカセットであって、
（ｉ）本明細書中に記載したようなアルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を含む容器、
（ｉｉ）容器（ｉｉｉ）のアルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体とクリック化学反応を行い得るアジド（例えば、ＭｅＣＮ、ＤＭＳＯ又はＤＭＦ中のトリルエチルアジド溶液）を含む容器、及び
（ｉｉｉ）前記容器（ｉｉ）の内容物を１８Ｆの適当な供給源に添加する手段
を含んでなるカセットを提供する。
【００７６】
本発明に従えば、本発明のカセットはさらに、下記の要素の１以上をを任意に含み得る。
（ｉｖ）ＱＭＡカートリッジ、
（ｖ）Ｋ２２２、ＭｅＣＮ、水及び塩基（例えば、ＴＢＡＨＣＯ3、Ｋ2ＣＯ3、Ｃｓ2ＣＯ3）からなる、捕捉されたフッ素−１８を遊離させるためのＱＭＡ溶離剤、
（ｖｉ）銅触媒（例えば、銅（Ｉ）触媒、硫酸銅水溶液）を含む容器、
（ｖｉｉ）アスコルビン酸Ｎａ（好ましくはｐＨ５．０の酢酸ナトリウム緩衝液中のもの）を含む容器、
（ｖｉｉｉ）銅（Ｉ）安定化リガンド（例えば、ＢＰＤＳ）を含む容器、
（ｉｘ）ＨＰＬＣシステムに導く管路、及び
（ｘ）過剰の18Ｆを除去するためのイオン交換カートリッジ。
【実施例】
【００７７】
試薬及び溶媒は、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．Ｌｔｄ（ギリンガム、英国）及びＶＷＲ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｔｄ（英国）から購入し、それ以上精製せずに使用した。ＢＰＤＳ（９）は、Ｐｆａｌｔｚ  ＆  Ｂａｕｅｒ  Ｉｎｃ（ウォーターベリー、米国）から購入した。［18Ｆ］−ＡｌＦ−ＮＯＴＡは、Ｌａｖｅｒｍａｎ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ，２０１０；５１：４５４−４６１に従って合成した。［68Ｇａ］−ＤＯＴＡＴＡＴＥは、Ｃｏｖｉｄｉｅｎ（ＵＫ）Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ  Ｌｔｄ（ゴスポート、英国）から購入した。
【００７８】
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦは、Ｔｈｅ  Ｌｏｎｄｏｎ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  ＰｈａｒｍａｃｙにおいてＦｉｎｎｉｇａｎ  Ｌａｓｅｒｍａｔ  ２０００計測器上で測定した。分析ＨＰＬＣは、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｇｏｌｄ計測器をＫａｒａｔ３２ソフトウェア及びＬａｕｒａソフトウェアと共に用いて実施した。放射性ＨＰＬＣシステムは、γ線検出器（Ｂｉｏｓｃａｎ  Ｆｌｏｗ−ｃｏｕｎｔ）を備えたＢｅｃｋｍａｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｇｏｌｄ計測器であった。分析ＨＰＬＣのためには、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）カラム（５０×４．６ｍｍ，３μｍ；流量：１ｍＬ／分）を使用した。ペプチドの最終精製のためには、半分取カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８，１００×１０ｍｍ，５μｍ，１１０Ａ；流量：３ｍＬ／分）を使用した。分析ＨＰＬＣのためには次の移動相系を使用した：溶媒Ａ，水／ＴＦＡ（０．１％）；溶媒Ｂ，アセトニトリル／ＴＦＡ（０．１％）；１５分で５〜８０％溶媒ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡの直線勾配。非放射性化合物は、分取ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００，カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２），７５×３０ｍｍ，５μｍ，流量：１５ｍＬ／分）を用いて精製した。ｌｏｇ  Ｄ計算用の試料を分離するためには、ＭＳＥ  Ｍｉｃｒｏ  Ｃｅｎｔａｕｒ遠心装置を使用し、Ｗａｌｌａｃ  １２８２  Ｃｏｍｐｕｇａｍｍａ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌガンマカウンターを用いてガンマカウントを実施し、ＥｄｅｎＴｅｒｍ  ｖ１．２ソフトウェアを用いて結果を記録した。［18Ｆ］フッ化物イオンは、濃縮［18Ｏ］Ｈ2Ｏターゲットの１６．４ＭｅＶプロトン照射による18Ｏ（ｐ，ｎ）18Ｆ核反応を使用しながらサイクロトロン（ＰＥＴ  Ｔｒａｃｅ、ＧＥ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）によって製造した。
【００７９】
略語
ＡＣＮ：        アセトニトリル
ＤＣＭ：        ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ：    ジイソプロピルエチルアミン
Ｆｍｏｃ：      ９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＢＴＵ：      Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチ
ルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＢｔ：      １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＮＭＰ：        １−メチル−２−ピロリジノン
ＰｙＢＯＰ：    （ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウム
ヘキサフルオロホスフェート
ＳＡＳＲＩＮ：  超酸感受性樹脂
ＴＦＡ          トリフルオロ酢酸
ＴＩＳ：        トリイソプロピルシラン
例１：［19Ｆ］フルオロエチルトリアゾールペプチド標準の合成のための一般的方法
（ａ）銅粉末（２０ｍｇ、−４０メッシュ）を仕込んだホイートンバイアルに、アルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体（アルキン−ペプチド）（５ｍｇ）のＤＭＦ／Ｈ2Ｏ（１：１  ｖ／ｖ（６０μＬ））溶液をを添加した。これに、［18Ｆ］フルオロエチルアジド（１．５ｅｑ、ＤＭＦ中０．３５４Ｍ）（Ｇｌａｓｅｒ，Ｍ．，ａｎｄ  Ａｒｓｔａｄ，Ｅ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００７，１８，（３），９８９−９９３）を添加した。反応物を室温で３０分間撹拌し続け、次いで０．１ｍＬの２０％ＭｅＣＮ／Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡで脱活した後、Ａｇｉｌｅｎｔ分取ＨＰＬＣを用いた精製のために注入した。全ての類似体は、３０分で２０〜８０％ＭｅＣＮ／Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡの勾配を用いて単離した。質量分析の結果を下記表１に要約して示す。
【００８０】
【表１】
2014515729.tif 000034
（ｂ）ＤＭＦのみ。［19Ｆ］標準である［19Ｆ］１ｂ〜６ｂはまた、銅粉末及び溶媒としてのＤＭＦを用いて合成した。化合物［19Ｆ］１ｂ及び［19Ｆ］３ｂに関しては、唯一の溶媒としてＤＭＦを使用すると進行が遅かった（＞３時間）。水（ＤＭＦ：Ｈ2Ｏ（３：２））の添加は反応速度を高め、１５分以内に反応が完了した。
【００８１】
例２ａ：２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体の合成のための一般的方法
下記スキーム１に示すように、本発明の放射性標識［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体は、試薬２−［18Ｆ］フルオロエチルアジドを使用しながら銅触媒アジド−アルキン環付加反応（ＣｕＡＡＣ）によってアルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を標識して、１，４−置換トリアゾールを形成することで製造できる（即ち、本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体）。試験した各アルキン類似体に関しては、ＣｕＡＡＣ反応中に予想外の反応性変動が認められた。
【００８２】
【化３３】
2014515729.tif 000035
例２ｂ：アルキンの製造
５種のアルキン官能化オクトレオテート類似体（図１）は、下記に記載するβＡＢ−ＴＯＣＡ（５ａ）の合成と同様にして合成された。スクランブルドペプチド（６ｂ）は、ソマトスタチン受容体に対して特異性を示さない陰性対照として設計された。オクトレオテートとアルキン官能基との間のリンカーは、ペプチドを補完しかつ合成を容易にするように選択された。２種の類似体は、ポリエチレングリコール基を含むように設計された（（１ａ）及び（２ａ））。オクトレオテートアルキン（１ａ〜５ａ）及びスクランブルド類似体（６ａ）は、［18Ｆ］フルオロエチルアジド（８）を用いて標識された（スキーム１）。
【例２ｂ．１】
【００８３】
例２ｂ.１：βＡＢ−ＴＯＣＡ（５ａ）の合成
２ｂ.１.１：プロピノイル−β−Ａｌａ−ＯＨの合成
【００８４】
【化３４】
2014515729.tif 000036
Ｈ−β−Ａｌａ−ＯＭｅ  ＨＣｌ塩（３．００ｍｍｏｌ、４１９ｍｇ）、ＰｙＢＯＰ（３．００ｍｍｏｌ、１．５６ｇ）及びＤＩＰＥＡ（９．００ｍｍｏｌ、１．５３ｍＬ）をＮＭＰ（５ｍＬ）に溶解した溶液に、プロピオン酸（３．００ｍｍｏｌ、１８４μＬ）を添加した。反応混合物を３０分間振盪し、次いで水／０．１％ＴＦＡで希釈し、精製のために分取ＨＰＬＣカラム上に装填してプロピノイル−β−Ａｌａ−ＯＨを得た。
【００８５】
プロピノイル−β−Ａｌａ−ＯＨをＡＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ（２００ｍＬ）に溶解し、この溶液を０．１Ｍ  ＮａＯＨでｐＨ１１に調整した。溶液を１時間撹拌し、次いで真空中で減容した。生成物精製のため、残留物（５０ｍＬ）を分取ＨＰＬＣカラム上に注入した。
【００８６】
精製及び特性決定
分取ＨＰＬＣ（勾配：６０分で０％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）によって精製することで、２６０ｍｇ（３ｍｍｏｌの出発原料に基づいて６１％）の純粋なプロピノイル−β−Ａｌａ−ＯＨを得た。
【００８７】
精製物質を分析ＬＣ−ＭＳによって分析した（勾配：５分で０〜１５％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、ｔR：０．２９分、実測ｍ／ｚ：１４２．３、予測ＭＨ+：１４２．０）。
【００８８】
２ｂ.１.２：固体担体上でのＨ−Ｇｌｙ−［Ｔｙｒ3］オクトレオテートのアセンブリ
標準的なペプチド合成法を用いて、ペプチド樹脂Ｈ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ポリマーをアセンブルした。０．２５ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＳＡＳＲＩＮ樹脂から出発するＦｍｏｃ化学を用いて、商業的に入手可能なＣＥＭ  Ｌｉｂｅｒｔｙマイクロ波ペプチド合成装置上でペプチジル樹脂Ｈ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ポリマーをアセンブルした。各カップリング段階（８０℃で５分）では、インサイチュ活性化のために０．９ｍｍｏｌ  ＨＢＴＵ／０．９ｍｍｏｌ  ＨＯＢｔ／２．０ｍｍｏｌ  ＤＩＰＥＡを使用しながら１．０ｍｍｏｌのアミノ酸を適用した。Ｆｍｏｃは、樹脂をＮＭＰ中の２０％ピペリジン溶液で処理することで除去した。
【００８９】
２ｂ.１.３：プロピノイル−β−Ａｌａ−Ｇｌｙ−［Ｔｙｒ3］オクトレオテート（す即ち、βＡＢ−ＴＯＣＡ（５ａ））の合成
【００９０】
【化３５】
2014515729.tif 000037
プロピノイル−β−Ａｌａ−ＯＨ（０．５０ｍｍｏｌ、７１ｍｇ、上記２ｂ.１.１に記載）及びＰｙＢＯＰ（０．５００ｍｍｏｌ、２６０ｍｇ）をＮＭＰ（５ｍＬ）に溶解し、オクトレオテート樹脂（０．２５ｍｍｏｌ、上記２ｂ.１.２に記載）に添加した。ＤＩＰＥＡ（２．００ｍｍｏｌ、３４０μＬ）を添加し、混合物を９０分間振盪した。試薬を濾過によって除去し、樹脂をＮＭＰ、ＤＣＭ及びジエチルエーテルで洗浄し、乾燥した。
【００９１】
２．５％のＴＩＳ及び２．５％の水を含むＴＦＡ（１００ｍＬ）中で、側鎖保護基の同時除去及び樹脂からのペプチドの切断を９０分間実施した。樹脂を濾過によって除去し、ＴＦＡで洗浄し、合わせた濾液を真空中で蒸発させた。残留物にジエチルエーテルを添加し、生じた沈殿をジエチルエーテルで洗浄し、乾燥した。乾燥した沈殿を５０％ＡＣＮ／水に溶解し、残留するＴｒｐ保護基を除去するために一晩放置した。次いで溶液を凍結乾燥することで、２９４ｍｇ（９６％）の祖プロピノイル−β−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＯＨを得た。
【００９２】
ＡＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ（３００ｍＬ）に溶解した祖プロピノイル−β−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＯＨ（２９４ｍｇ）に、ＡＣＮ（０．７５ｍＬ）に溶解した２，２'−ジチオジピリジン（０．２７ｍｍｏｌ、５９ｍｇ）を３等分して添加し、溶液を３０分間振盪した。生成物精製のため、反応混合物を分取ＨＰＬＣカラム上に装填した。
【００９３】
精製及び特性決定
分取ＨＰＬＣ（勾配：６０分で２０〜４０％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）によって精製することで、１４０ｍｇ（４８％）の純粋なプロピノイル−β−Ａｌａ−Ｇｌｙ−［Ｔｙｒ3］オクトレオテートを得た。
【００９４】
精製物質を分析ＬＣ−ＭＳによって分析した（勾配：５分で２０〜３０％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、ｔR：２．４９分、実測ｍ／ｚ：１２２９．５、予測ＭＨ+：１２２９．５）。
【００９５】
放射化学
例３：２−［18Ｆ］フルオロエチルアジド（８）の製造
８を合成するために使用した方法は、Ｇｌａｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｇｌａｓｅｒ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００７，１８，（３），９８９−９９３；Ｄｅｍｋｏ，Ｚ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ−Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ２００２，４１，（１２），２１１３−２１１６）によって使用されたものを僅かに変更したものであった。［18Ｆ］フッ化物イオン乾燥段階においてＫ2ＣＯ3の代わりにＫＨＣＯ3を使用することは、温和な塩基の使用による前駆体７の安全性のため、蒸留による精製後により一貫した単離収率を与えた。
【００９６】
Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ  ２２２（５ｍｇ、１３．３μｍｏｌ）、炭酸水素カリウム（１００μＬ水中の１．４ｍｇ、１６．７μｍｏｌ）及びアセトニトリル（０．５ｍＬ）の混合物に、水（０．１〜１ｍＬ）中の［18Ｆ-］フッ化物イオン（５〜１５ｍＣｉ）を添加した。窒素流（１００ｍＬ／分）下において１００℃で加熱することで溶媒を除去した。その後、アセトニトリル（０．５ｍＬ）を添加し、蒸留を続けた。この操作をさらに２回繰り返した。室温に冷却した後、無水アセトニトリル（０．２ｍＬ）中のアジドエチル−４−トルエンスルホン酸（７）（Ｇｌａｓｅｒ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００７，１８，（３），９８９−９９３；Ｄｅｍｋｏ，Ｚ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ−Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ２００２，４１，（１２），２１１３−２１１６）の溶液を添加した。反応混合物を８０℃で１５分間撹拌した。［18Ｆ］８を１３０℃で、アセトニトリル（３０μＬ）を含むトラッピングバイアル中に蒸留した（Ａｒｓｔａｄ，Ｅ．，国際公開第２００８／０１５３９１号）。化合物［18Ｆ］８は、５０〜５５％（崩壊補正）の放射化学収率で収集された。
【００９７】
続いてインビボ試験で使用する試料をクリック化学によって製造するための２−［18Ｆ］フルオロエチルアジドの生成は、Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ  Ｉｍａｎｅｔ社で組み立てた遠隔制御装置上で実施した。このシステムは、出発放射能として約２００〜３００ｍＣｉの［18Ｆ］フッ化物イオンを使用することを可能にする。このシステムを用いた単離［18Ｆ］フルオロエチルアジドの放射化学収率（崩壊補正）は、１９〜２６％の範囲内にある。しかし、２−［18Ｆ］フルオロエチルアジドの生成は、当技術分野で知られる他の手段（Ｇｌａｓｅｒ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００７，１８，（３），９８９−９９３；Ｄｅｍｋｏ，Ｚ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ−Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ２００２，４１，（１２），２１１３−２１１６；国際公開第２００８／０１５３９１号）によっても達成できる。
【００９８】
例４：一般的な標識方法
アルキン１ａ、２ａ及び４ａに関しては、水（２５μＬ）中の硫酸銅（ＩＩ）五水和物（４ｅｑ）の溶液に、２５μＬの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０、２５０ｍＭ）中のＬ−アスコルビン酸ナトリウム（４．４ｅｑ）をＮ2下で添加し、次いで２５μＬ中のＢＰＤＳ（９）（５ｅｑ）を添加した。アルキン３ａ及び５ａに関しては、ＣｕＳＯ4（２ｅｑ）、アスコルビン酸Ｎａ（２．２ｅｑ）及びＢＰＤＳ（９）（４ｅｑ）を使用した。
【００９９】
ＭｅＣＮ（１００μＬ）中の［18Ｆ］８溶液、次いでＤＭＦ（３０μＬ）中のアルキン（２ｍｇ）を添加し、室温で反応を実施した（最適反応時間に関しては表２を参照されたい）。次いで、反応物をＨ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ（１００μＬ）で希釈し、表２に示す勾配を用いた逆相分取ＨＰＬＣによって精製した。次いで、ＨＰＬＣ画分をＨ2Ｏ（１５〜１９ｍＬ）で希釈し、ｔＣ１８  ｌｉｇｈｔ  ＳＰＥカートリッジ上に装填した。生成物をエタノールで１００μＬずつの画分に溶出し、＞９８％のＲＣＰを有する１０％エタノール／ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．０）の溶液に調製した。
【０１００】
【表２】
2014515729.tif 000038
例５：オクタノール／リン酸緩衝液分配係数（Ｌｏｇ  Ｄ）の測定
振盪フラスコ法を用いてオクタノール／ＰＢＳ分配係数を測定した。両溶媒を一緒に５分間振盪することで互いに予備飽和させた。５００μＬのオクタノール及びＰＢＳの溶液に、２０μＬのＥｔＯＨ中放射性標識リガンドを添加した（ｎ＝３）。溶液混合物をロータミキサー内で５分間振盪した。平衡化の後、良好な分離を達成するために混合物を（１３０００ｒｐｍで１０分間）遠心した。各層からの試料（２５μＬ）を採取し、γカウンターで測定し、次式に従ってＬｏｇ  Ｄを算出した。
【０１０１】
Ｌｏｇ  Ｄ＝ｌｏｇ（オクタノール層中のｃｐｍ／水性層中のｃｐｍ）
Ｌｏｇ  Ｄ値は、18Ｆ標識トリアゾールを用いて測定した。予想された通り、類似体１ｂ及び２ｂに関するＬｏｇ  Ｄ値はＰＥＧ化のために最低であり、最高のＬｏｇ  Ｄ値を有する類似体は４ｂであった（表３）。［19Ｆ］１ｂ〜６ｂに関する受容体親和性は、標識放射性トレーサーとして［111Ｉｎ］−ＯｃｔｒｅｏＳｃａｎを使用するＡＲ４２Ｊ腫瘍細胞での競合結合アッセイによって測定した。半最大阻害濃度（ＩＣ50）値を算出し、置換曲線の結果を要約して示す（表３）。参照ペプチドとして、オクトレオチドに関するＩＣ50値を測定したところ、１４．７±７．７ｎＭであることが判明した。オクトレオテート類似体に関するＩＣ50値はオクトレオチドと同等又はそれより低いことが判明し、これはソマトスタチン受容体に対する高い結合親和性を表している。全てが該受容体に対してナノモル濃度範囲内の高い結合親和性を示している。フルオロエチルトリアゾール部分の導入は［19Ｆ］２ｂ、３ｂ、４ｂ及び５ｂに関する親和性を低下させたが。有意ではなく、値はなおもオクトレオチドより低いか又はそれと同等であった。この試験では、化合物［19Ｆ］５ｂは１．６±０．２ｎＭのＩＣ50値を有する最高の親和性を示した。６個の連続したエチレングリコール基の追加によるペプチドのＰＥＧ化は、［19Ｆ］１ｂ及び［19Ｆ］２ｂの総合親和性に顕著な影響を及ぼすようには思われず、それぞれ２．９±１．３ｎＭ及び１３．２±７．８ｎＭのＩＣ50値を与えた。それに比べて、スクランブルドアミノ酸配列を含む［19Ｆ］６ｂは低い親和性を示し、＞１０ｍＭのＩＣ50値を与えた。この結果は、本発明の類似体がソマトスタチン受容体に対して特異的に結合していることを示した。
【０１０２】
【表３】
2014515729.tif 000039
例６：インビトロでの受容体結合測定
［19Ｆ］フルオロエチルトリアゾール−［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体（19Ｆ−１ｂ〜６ｂ）及びアルキン−オクトレオテート類似体（１ａ〜６ａ）の結合親和性を測定するため、Ｈｏｆｌａｎｄ及び共同研究者ら（Ｈｏｆｌａｎｄ，Ｌ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １９９５，１３６，（９），３６９８−７０６）によって以前に報告された方法のの変法を用いてインビトロアッセイを行った。ＡＲ４２Ｊ細胞（５×１０4個）を２４ウェルプレートに播種し、ＰＢＳで２回洗浄し、増加する濃度（０，０．０１、０．１、１、１．０、１０、１００、１０００及び１００００ｎＭ）の分析すべき化合物と共に室温で１０分間インキュベートしたが、これはこれらの実験条件下で結合が起こるのに十分な時間であった（Ｓｃｅｍａｍａ，Ｊ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｕｔ  １９８７，２８  Ｓｕｐｐｌ，２３３−６）。次いで、プレートを［111Ｉｎ］−ＯｃｔｒｅｏＳｃａｎ（Ｃｏｖｉｄｉｅｎ社（ゴスポート、英国）、５００００ｃｐｍ／ウェル）と共にさらに３０分間インキュベートした。ウェル当たり０．２５ｍＬの最終容量のインキュベーション緩衝液を使用した。インキュベーション緩衝液は、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５．０ｍＭ  ＭｇＳＯ4・６Ｈ2Ｏ、１．０ｍＭバシトラシン及び１％ＢＳＡからなり、最終ｐＨは７．４に調整した。インキュベーションの終了後、プレートを氷冷インキュベーション緩衝液で３回洗浄し、０．２Ｎ  ＮａＯＨ溶液で可溶化した。次いで、各ウェルの内容物を計数管に移し、ガンマカウンター（Ｂｉｏｓｏｆｔ社、ファーガソン、米国ミズーリ州）を用いて試料をカウントした。各濃度について四重反復試験を実施し、実験を３回繰り返した。結果は対照（標識［111Ｉｎ］−ＯｃｔｒｅｏＳｃａｎのみで処理した最初の４つのウェル）に対する百分率として表される。ＩＣ50値は、Ｗｉｎｄｏｗｓ用ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ｖｅｒｓｉｏｎ  ４．００）（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ）を用いて当てはめたＳ字状置換曲線から算出した。
【０１０３】
例７：触媒としての銅線の使用
代わりの触媒銅（Ｉ）源としての銅線の使用を検討した。ＣｕＳＯ４／アスコルビン酸Ｎａ法を用いた場合に他の類似体に比べて向上した反応性を有することから、実験は３ａを用いて実施した。銅線とアルキンとを予め混合してから加熱した後に８を添加すれば、反応は５分以内に完了することが判明した（表４、項目２）。２種の成分を予め混合しないと、クリック反応は完了するまでにより長い時間を要した（表４、項目１）。他のｐＨ緩衝液系（表４、項目４、５及び６）も適用したが、いずれも酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０、２５０ｍＭ）（表４、項目１）より劣ることが判明した。銅線を用いた反応物にＣｕＳＯ4及びＢＰＤＳ（９）を添加したが、このアプローチの背後にある根拠は、添加したＣｕＳＯ4が利用可能なＣｕ（ＩＩ）の濃度を高めることでコンプロポーショネーション反応を向上させるであろうというものであった（Ｇｏｐｉｎ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００６，１７，１４３２−１４４０；Ｂｏｎｎｅｔ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００６，１７，１６１８−１６２３）。前述したリガンド（９）は、Ｃｕ（ＩＩ）化学種を安定化するために添加した。この方策はうまく働き、室温での収率の向上を示した（表４、項目７）。これがタンデム効果であるか否かを確認するため、両方の追加試薬を別々に試験するための反応を実施した（表４、項目７及び８）。両試薬は速度にある程度の影響を及ぼすが、一緒に使用すれば反応速度に一層大きい影響を与えるように思われる。代替リガンドとしてＭｏｎｏＰｈｏｓ（商標）（Ｃａｍｐｂｅｌｌ−Ｖｅｒｄｕｙｎ，Ｌ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ２００９，（１６），２１３９−２１４１）を試験したが、反応については効率が低いことが判明した（表４、項目１０）。
【０１０４】
【表４】
2014515729.tif 000040
結果
アルキン結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体Ｇ−ＴＯＣＡ（３ａ）及びβＡＧ−ＴＯＣＡ（５ａ）は、クリック反応において高い反応性を有し、温和な条件及び短い合成時間（２０℃で５分）で２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体ＦＥＴ−Ｇ−ＴＯＣＡ（３ｂ）及びＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡ（５ｂ）への完全な転化を示すことが確認された。合成の容易性ばかりでなく、インビトロでの膵臓腫瘍ＡＲ４２Ｊ細胞への結合は、ＦＥＴ−Ｇ−ＴＯＣＡ（３ｂ）及びＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡ（５ｂ）の両方がそれぞれ４．０±１．４ｎＭ及び１．６±０．２ｎＭのＩＣ50というソマトスタチン受容体に対する高い親和性を有することを示した。
【０１０５】
アルキン−ペプチド１ａ〜５ａに関して認められたクリック反応速度の変動は、ペプチド部分には変化がないので、リンカーの違いに帰因させることができる。末端アルキン中心に隣接する基の電子的性質は、反応速度を増大させたり低下させたりしないと考えられる（Ｈｅｉｎ，Ｊ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２０１０，（３９），１３０２−１３１５）。これとは逆に、アミド部分で直接に置換された末端アルキン（１ａ、３ａ、５ａ、６ａ（図１））は、エチル結合アミドで直接に置換されたもの（２ａ及び４ａ（図１））に比べて向上した反応性を有することがこのたび見出された。同様な結果は、１，３−ヒュスゲン（Ｈｕｉｓｇｅｎ）環付加反応の研究中にＬｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００４，４５，３１４３−３１４６）によって見出され、別にＣｕＡＡＣの速度に対するアジド部分周囲の電子求引基及び立体障害の効果を研究したＧｏｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒａｐｉｄ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ２００８，２９，１１６７−１１７１）によっても見出された。アルキンの電子的性質と共に考慮に入れるべき別の要因は、アルキン−ペプチドのサイズである。運動論的には、アルキン−ペプチドが大きいほど反応速度が遅くなると予想され、これはＰＥＧ化類似体（１ａ、２ａ）の場合に正しいことが判明した。１ａは３ａ及び５ａより遅く反応することがわかる（表５、条件Ｂ）。電子的には、これらは同様であり、全てが直接に結合したアミドで置換された末端アルキンであるが、１ａは６個の連続したエチレングリコール基を含んでいる。ＰＥＧ鎖がバルキーな水雲によって包囲され、これがアルキンの官能性を立体的に妨害する可能性がある（Ｓｈｉｆｆｍａｎ，Ｍ．Ｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ２００３，２，１７−２３）。アルキン２ａ及び４ａは同じ点に関して比較可能であり（ＰＥＧ化対非ＰＥＧ化）、２ａはＣｕＡＡＣに際してより遅い反応速度を示すことが認められた。クリック反応に際して１ａ及び２ａを用いて見出された遅い反応速度及び変動のため、試薬の濃度を増加させることが必要であった。再現性及び反応速度の点で改善が見られた（条件Ｄ、表５）。類似体１ｂ〜６ｂを単離することで、９０〜１２０分後に（出発フッ化物イオン放射能に基づいて）３〜７％の非崩壊補正収率を得た。高い反応温度を用いると反応速度は増大して反応時間が減少したが、これは顕著な副生物生成をもたらし、精製を一層困難にした（表５、条件Ｃ）。
【０１０６】
類似体１ａ〜６ａを用いたクリック反応に際して見出された一般的傾向として、ＨＰＬＣモニタリング時に２種の安定な副生物が見られた。２種の副生物１１及び１２（スキーム２、図１Ａ）は、５ａ（図１）を用いた反応媒質から単離された。これらを分離し、回収し、衝突誘起解離質量分析法（ＣＩＤ−ＭＳ）によって分析した。極性がより高い化合物１２は、ＣＩＤ−ＭＳ分析に際してアルキン前駆体（５ａ）であると解明された。このような事実が判明したものの、反応混合物を５ａと混合してクロマトグラフィーで評価した場合、副生物１２はＨＰＬＣトレース上で共溶出しなかった。２−［18Ｆ］フルオロエチルアジド（８）の不完全な組込みを示す反応は、１２の存在下でもそれ以上は顕著に進行しないことが判明し、これはＣｕＡＡＣ反応におけるこの化学種の不十分な反応性を示唆している。副生物１１を分析したところ、１−ビニルトリアゾール（スキーム２）に一致することが判明した。
【０１０７】
【化３６】
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恐らく、１１は、初期標識段階における脱離機構からの副生物であると疑われるアジドエテン（１０）とのクリック反応によって生成されたものである。Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｓｏｔｏｐｅｓ  ２０１０，６８，３２９−３３３）は、４−トシルオキシ−１−ブチンを用いて同様な出来事を報告した。彼らは、脱離によってビニルアセチレンが生成し、次いでそれがクリック反応においてアジドと反応し得ることを認めた。副生物１１に関する主な問題点は、精製時に放射性標識生成物と同様な保持時間を有するため、できるだけ高い収率並びに高い比放射能を得るのが難しいことである。
【０１０８】
ＣｕＳＯ4／アスコルビン酸Ｎａを用いて実施された実験は、一般にｐＨ６．０の酢酸ナトリウム緩衝液（ＡＢ）を用いて行った。３ａを用いた実験を蒸留水中で実施した場合、放射性標識生成物への転化は遅く、緩衝系を用いた場合の＞９８％の転化率に比べて５分で７８％の転化率を示した。
【０１０９】
８の蒸留が回避されるワンポット反応を実施した。２ａ及び３ａを用いて反応を試みたが、恐らくは競合する副反応のため、いずれも遅い反応速度を示した。反応速度に影響を与え得る別の変量は、２−［18Ｆ］フルオロエチルアジドの容量である。２ａ及び５０μｌの２−［18Ｆ］フルオロエチルアジド（８）と共に条件Ｂ（表５）を用いて実施された反応は、３０分後に３ｂへの８４％の転化率を与えた。同じ条件下で１４００μｌの８を使用した場合、いかなる反応も認められなかった（表５）。
【０１１０】
Ｃｕ（Ｉ）安定化リガンド（Ｇｉｌｌ，Ｈ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００９，５２，５８１６−５８２５）であるＢＰＤＳリガンド（９）を用いると、クリック反応の速度が大幅に増大することが見出された。いかなるリガンドも使用せずに反応を評価した。９なしで４ａを用いて実施された反応（表５、条件Ａ）は所望生成物への１４％の転化率を示したが、９を添加すると（条件Ｂ）４７％の転化率を与えた。同じ試薬濃度を使用しながら反応物を８０℃に加熱すると、５分後に４ｂへの＞９８％の転化率が得られた（表５、条件Ｃ）。この温度における生成物への転化率は優れていたものの、副生物の増加が認められ、その一部は４ｂと共溶出した。
【０１１１】
【表５】
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要するに、５種の新規なアルキン官能化オクトレオテート類似体をクリック反応で２−［18Ｆ］フルオロエチルアジドと反応させた。最も反応性の高いアルキンはＧ−ＴＯＣＡ（３ａ）及びβＡＧ−ＴＯＣＡ（５ａ）であり、最適化条件を使用すれば室温で５分後に標識トリアゾールＦＥＴ−Ｇ−ＴＯＣＡ（３ｂ）及びＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡ（５ｂ）への完全な転化を示した。クリック反応の効率ばかりでなく、両類似体はソマトスタチン受容体に対する高い結合親和性も示した。
【０１１２】
例８：インビトロ結合アッセイ
対照の低親和性受容体サブタイプとしてのｓｓｔｒ−３及びｓｓｔｒ−４と比較した、ソマトスタチン受容体サブタイプｓｓｔｒ−２に対する本発明の２−［19Ｆ］フルオロエチルトリアゾール−［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体の親和性を、フルオロメトリックイメージングプレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）を用いて決定した。本アッセイは、カルシウム色素をプレロードしたｓｓｔｒ−２、３又は４発現Ｃｈｅｍ−１細胞（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社、セントチャールズ、米国ミズーリ州）において、カルシウムフラックスの［19Ｆ］フルオロエチルトリアゾール−［Ｔｙｒ3］オクトレオテート誘起活性化を測定することを含んでいる。簡単に述べれば、特異的ｓｓｔｒサブタイプを発現するＣｈｅｍ−１細胞を５００００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種し、５％ＣＯ2インキュベーター内で２４時間インキュベートした。細胞をＦｌｕｏ−８−Ｎｏ−Ｗａｓｈで洗浄し、５％ＣＯ2インキュベーター内においてＧＰＣＲＰｒｏｆｉｌｅｒ（商標）アッセイ緩衝液（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）中のＣａ2+色素を３０℃で９０分間ロードした。本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール−［Ｔｙｒ3］オクトレオテート又はソマトスタチン（Ｓｉｇｍａ社、陽性対照）を様々な濃度で添加した後、蛍光測定を行った。本アッセイはアゴニストモードにおいて二重反復試験で実施した。アゴニスト活性を有していたので、アンタゴニスト活性は評価しなかった。蛍光出力を測定し、データを基線補正後に％最大蛍光信号として表した。各種のリガンドに関する半最大受容体活性を、Ｗｉｎｄｏｗｓ用ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ４．００）（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ社、サンディエゴ、米国カリフォルニア州）を用いたＳ字状用量応答曲線当てはめによって推定した。
【０１１３】
例９：動物及び腫瘍モデル
６〜８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃ  ｎｕ／ｎｕ無胸腺マウスを、Ｈａｒｌａｎ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ  Ｌｔｄ（ビセスター、英国）から入手した。高ｓｓｔｒ−２膵臓腫瘍細胞株ＡＲ４２Ｊ（Ｔａｙｌｏｒ  Ｊ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９４；１５：１２２９−１２３６）及び低ｓｓｔｒ−２ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ１１６（ＬＧＣ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ社、ミドルセックス、英国）をそれぞれ、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清、２ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｌ−グルカミン、１００単位／ｍＬペニシリン及び１００ｇ／ｍＬストレプトマイシンを含むＦ１２Ｋ及びＲＰＭ１６４０増殖培地中で培養し、５％ＣＯ2インキュベーター内において３７℃で増殖させた。１×１０6細胞を含む１００μｌのＰＢＳの皮下注射によって腫瘍を確立した。全ての動物実験は、動物の手術（科学操作）に関する英国ホームオフィスガイダンス法１９８６に従い、かつ癌研究における動物の福利に関して英国国立癌研究所委員会が制定した指針（Ｗｏｒｋｍａｎ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１０；１０２：１５５５−１５７７）の範囲内で、許可された研究者達によって実行された。カリパスを用いて腫瘍の寸法を連続的に測定し、式：体積＝（π／６）×ａ×ｂ×ｃ（式中、ａ、ｂ及びｃは腫瘍の３つの直交軸を表す。）によって腫瘍体積を算出した。マウスは腫瘍が約２００ｍｍ3に達した時点で使用した。
【０１１４】
例１０：ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡのインビボ血漿安定性
ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡ（約３．７ＭＢｑ）を尾静脈から非腫瘍担持ＢＡＬＢ／ｃ  ｎｕ／ｎｕマウスに注射した。注射から３０分後に全身イソフルオラン麻酔下で血液を採取し、血漿試料を調製し、直ちに氷上で凍結した。分析のためには、使用の直前に試料を融解し、４℃で保存した。血漿（約０．２ｍＬ）を氷冷メタノール（１．５ｍＬ）の添加によって清澄化し、次いで混合物を遠心した（３分、２００００×ｇ、４℃）。上澄みを、回転蒸発器（Ｈｅｉｄｏｌｐｈ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＧＭＢＨ  ＆  Ｃｏ、シュヴァバッハ、ドイツ）を３５℃の浴温度で用いて蒸発乾固した。残留物をＨＰＬＣ移動相（１．２ｍＬ）中に再懸濁し、清澄化し（０．２μｍフィルター）、１ｍＬ試料ループを通して試料（１ｍＬ）をＨＰＬＣ上に注入した。試料を、γ−ＲＡＭ  Ｍｏｄｅｌ  ３γ線検出器（ＩＮ／ＵＳ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．、米国フロリダ州）及びＬａｕｒａ  ３ソフトウェア（Ｌａｂｌｏｇｉｃ社、シェフィールド、英国）及びＵＶ（２５４ｎｍ）を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズＨＰＬＣシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ストックポート、英国）上での放射性ＨＰＬＣによって分析した。Ｗａｔｅｒｓ  μＢｏｎｄａｐａｋ  Ｃ18逆相カラム（３００ｍｍ×７．８ｍｍ）固定相を、６７％水（０．１％ＴＦＡ）／３３％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）からなる移動相を３ｍＬ／分でイソクラティックに送入することで溶出した。
【０１１５】
例１１：ＰＥＴイメージング試験
専用の小動物ＰＥＴスキャナー（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｉｎｖｅｏｎ  ＰＥＴ  ｍｏｄｕｌｅ、Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｉｎｃ、英国）上で動的ＰＥＴイメージングスキャンを実施した（Ｗｏｒｋｍａｎ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１０；１０２：１５５５−１５７７；Ｌｅｙｔｏｎ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００６；６６：７６２１−７６２９）。簡単に述べれば、全身麻酔（イソフルオラン）下で尾静脈にカニューレを挿入した。動物をスキャナー内のサーモスタット制御環境中に置き、試験期間を通じて心拍数をモニターした。マウスに３．０〜３．７ＭＢｑの様々な放射性標識化合物を注射し、動的ＰＥＴ−ＣＴスキャンを６０分間にわたってリストモードフォーマットで取得した。ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡの場合には、ブロッキング試験も行った。それによれば、１０ｍｇ／ｋｇの非標識オクトレオチド（Ｓｉｇｍａ社）をマウスに静脈内注射してから１０分後に放射性トレーサー注射及びイメージングを開始した。このオクトレオチド用量は、放射性トレーサー注射液中の非標識ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡの等価用量の約１００倍であった。全ての場合における取得データを、画像再構成のため、０．５ｍｍシノグラムビン及び１９の時間枠（０．５×０．５×０．５ｍｍボクセル、４×１５秒、４×６０秒及び１１×３００秒）内にソートした。得られた画像データセットを、Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｉｎｖｅｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｗｏｒｋｐｌａｃｅソフトウェアを用いて可視化及び定量化した。５つの隣接した腫瘍、肝臓、腎臓、筋肉及び尿／膀胱領域（それぞれ厚さ０．５ｍｍ）上に三次元の検査対象領域（３Ｄ  ＲＯＩ）を手作業で定義した。データを１９の時点の各々において組織に関して平均することで、時間放射能曲線（ＴＡＣ）を得た。各組織に関する放射性トレーサー取込みを注射量に対して基準化し、組織１ｍＬ当たりのパーセント注射放射能（％ＩＤ／ｍＬ）として表した。
【０１１６】
例１２：組織放射能の直接カウンティング
６０分のＰＥＴスキャン後、全身イソフルオラン麻酔下で心臓穿刺によって放血した後にマウスから腫瘍組織の一部を採取した。全ての試料を秤量し、崩壊補正を適用するＣｏｂｒａ  ＩＩオートガンマカウンター（以前はＰａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｍｅｒｉｄｅｎ  ＣＴ  ＵＳＡ）を用いてその放射能を直接に測定した。結果は１グラム当たりの注射量の百分率（％ＩＤ／ｇ）として表した。
【０１１７】
例１３：統計
ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ，ｖｅｒｓｉｏｎ  ４．００（ＧｒａｐｈＰａｄ社、サンディエゴ、米国カリフォルニア州）を用いて統計分析を実施した。ノンパラメトリックＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定を用いて群間の比較を行った。≦０．０５の両側Ｐ値は有意と見なした。
【０１１８】
結果
放射性トレーサー。全ての放射性トレーサーは、＞９８％の放射化学純度をもって成功裡に製造された。総合成時間は約１．５時間であった。放射性トレーサーの親油性（Ｌｏｇ  Ｄ）は、当技術分野で知られる方法（Ｂａｒｔｈｅｌ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．２００４；９０：２２３２−２２４２）を用いて測定し、測定されたＬｏｇ  Ｄを表６に示す。動物は異なる日にスキャンされたので、各放射性トレーサーに関する平均比放射能も示す（表６）。
【０１１９】
【表６】
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インビトロでのｓｓｔｒサブタイプ特異性。全ての［19Ｆ］フルオロエチルトリアゾール−［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体はｓｓｔｒ−２に対してアゴニスト活性を示し（図１４）、スクランブルドペプチド（ＦＥＴ−βＡＧ−［Ｗ−ｃ−（ＣＴＦＴＹＣ）Ｋ］）は予想通りに低い親和性を有していた。リガンドの親和性（ＩＣ50）は、（５．６ｎＭのソマトスタチンに対して）４〜１９ｎＭの範囲内にあり、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−ＴＯＣＡ類似体はｓｓｔｒ−２に対して最低の親和性を示した。類似体は顕著なアゴニスト活性を有していたので、アンタゴニスト活性は評価しなかった。いずれの化合物も、ｓｓｔｒ−３に対しては検出可能な活性を示さなかった。スクランブルドペプチドを除き、全ての［19Ｆ］フルオロエチルトリアゾール−［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体はｓｓｔｒ−４に対しては検出可能な活性を示したが、親和性は非常に低かった（≧５．４ｍＭ）。インビトロ試験は、トリアゾール類似体がｓｓｔｒ−２に対して選択的な親和性を有し、このＧタンパク質結合受容体に関するカルシウムフラックスアッセイにおける半最大アゴニスト活性（ＩＣ50）が低い親和性を有するスクランブルドペプチドに比べて４〜１９ｎＭの範囲内にあることを明らかにした。
【０１２０】
ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡはインビボで安定である。ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡのインビボ安全性を調べた。投与溶液及び３０分マウス血漿の典型的な放射性クロマトグラムを図１５に示す。ＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡの代謝産物は見られず、インタクトな母体トレーサーのみが見出された。
【０１２１】
ｓｓｔｒ受容体に対する高い結合親和性と非標識組織からの迅速な洗浄除去との総合効果により、ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡに関して図１６に示されるように、インビボで高コントラストのＰＥＴ画像が生成された。インビボ動的ＰＥＴ画像データから導かれるＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡの腫瘍時間−放射能曲線（図１７）が上昇することは、ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡの高い選択的結合を反映していた。放射性トレーサーはマウスにおいて代謝的に安定であり、低い骨取込みを有していて、これは顕著な脱フッ素化が起こらないことを表している。
【０１２２】
［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール−［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体の薬物動態及びインビボ腫瘍局在化。ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡの高い親和性及び体内安定性を仮定すれば、腫瘍における放射性トレーサーの良好な局在が観察されることは保証されていた。図１６Ａは、ｓｓｔｒ−２を発現するＡＲ４２Ｊ腫瘍担持マウスの典型的な横断面及び矢状断面のＰＥＴ画像スライスを示しており、ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡが高い信号−バックグラウンドコントラストを有しながら腫瘍、腎臓及び膀胱／尿に局在することを実証している。それとは対照的に、スクランブルドペプチドＦＥＴ−βＡＧ−［Ｗ−ｃ−（ＣＴＦＴＹＣ）Ｋ］を注射した場合にマウスの腫瘍及び腎臓には、いかなる放射性トレーサーの局在も見られなかった（図１６Ｂ）。この場合には、主として脳、尿、肝臓及び腸におけるトレーサーの局在が見られた（データは示さず）。腫瘍、腎臓、肝臓、筋肉及び膀胱／尿における［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール−［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体の比較薬物動態を図１７に示す。ＡＲ４２Ｊ腫瘍における放射性トレーサー取込みは、６０分の走査期間全体にわたる急速な上昇によって特徴づけられた。ＦＥＴ−Ｇ−ＴＯＣＡが最高の腫瘍取込みを有し、次いでＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡが［18Ｆ］−ＡｌＦ−ＮＯＴＡ−ＯＣより高いか又は同等の取込みを有していた。これらのトレーサーは、腫瘍取込みに関しては、臨床用放射性トレーサー［68Ｇａ］−ＤＯＴＡＴＡＴＥより優れていた（表６）。ＦＥＴ−Ｇ−ＰＥＧ−ＴＯＣＡ及びＦＥＴＥ−ＰＥＧ−ＴＯＣＡの構造中に組み込まれたＰＥＧリンカーは、腫瘍取込みを低下させた（図１７、表６）。肝臓における非特異的取込みは一般に低く（＜７％ＩＤ／ｍＬ）、ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡは最低の肝臓取込みを示し、ＦＥＴ−Ｇ−ＴＯＣＡ及びＦＥＴＥ−ＰＥＧ−ＴＯＣＡは最高の肝臓取込みを示した。ＰＥＧ−ＴＯＣＡ類似体は、その最低の親油性に合致して最高の尿クリアランスを有していた。しかし、やはりｓｓｔｒを発現する腎臓における放射性トレーサーの動態プロファイルは腫瘍におけるものとは異なっていて、取込みの大きさは２種の放射性トレーサーＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡ及びＦＥＴ−Ｇ−ＴＯＣＡに関して最高であり、［18Ｆ］−ＡｌＦ−ＮＯＴＡ−オクトレオチドは比較的低い腎臓取込みを有していた。平均筋肉取込みは、全ての放射性トレーサーに関して＜３％ＩＤ／ｍＬであった。骨における放射性トレーサー取込みは全ての類似体に関して低く、脱フッ素化がほとんど／全く起こらないことを表していた。我々はねイメージング試験における放射性トレーサーの取込みを直接組織カウンティングと比較した。プロファイルは一般的に一致していたが、大きさは直接カウンティングの方が高く、部分体積平均化に一致していた。組織の一部のみの直接放射能測定（ガンマカウンティング）は、イメージングの場合における腫瘍全体のサンプリングに比べて、系統的な差を生み出した可能性もある。
【０１２３】
ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡの取込みは特異的である。放射性トレーサーの高い腫瘍取込みを仮定して、我々は次に、ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡをプロトタイプの［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール−［Ｔｙｒ3］オクトレオテートとして使用しながらインビボで取込みの特異性を評価した。我々は放射性トレーサーの取込みが特異的であることを実証した。ｉ）ｓｓｔｒ−２に対する低い親油性に合致して、放射性標識スクランブルドペプチド（ＦＥＴ−βＡＧ−［Ｗ−ｃ−（ＣＴＦＴＹＣ）Ｋ］）はインビボでＡＲ４２Ｊモデルにおける検出可能な腫瘍取込みを示さなかった（図１８）。ＦＥＴ−βＡＧ−［Ｗ−ｃ−（ＣＴＦＴＹＣ）Ｋ］の取込みはまた、高ｓｓｔｒ発現性の正常組織（腎臓）においても低く、肝臓においてはＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡに比べて高かった。ｉｉ）放射性トレーサーの腫瘍取込みが受容体を媒介したものであることを示すため、
マウスに過剰の非標識オクトレオチド（１００倍モル当量）を予め注射してｓｓｔｒ結合部位を飽和させることでブロッキング試験を行った。これは、ＡＲ４２Ｊ異種移植片においてＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡの（直接カウンティングによれば）２倍低い取込みをもたらした（図１８、表６）。非標識オクトレオチドによるブロッキング後には、腎臓（初期時点のみ）、筋肉及び（僅かながら）肝臓の放射能濃度は増加し、尿の放射能は減少した（図１８）。ｉｉｉ）ＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡの取込みの特異性に関する追加の証拠は、低ｓｓｔｒ発現性のＨＣＴ１１６異種移植片における取込みがＡＲ４２Ｊ異種移植片に比べて低いことによって与えられた（表６）。
【０１２４】
興味深いことには、ＦＥＴ−Ｇ−ＴＯＣＡ及びＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡ化合物に関する腫瘍取込みは、これまでに報告された最高の部類に位置し、臨床的に使用されている［68Ｇａ］−ＤＯＴＡ−ＴＡＴＥのものより高かった（表６）。同様に、２種の［19Ｆ］フルオロエチルトリアゾール−［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体の腫瘍取込みは、同じ腫瘍モデルにおいてＦｒｏｉｄｅｖａｕｘ  ｅｔ  ａｌ．（Ｆｒｏｉｄｅｖａｕｘ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．２０００；１４１：３３０４−３３１２）により報告された［111Ｉｎ］−ＤＴＰＡ−オクトレオチドの値（３．０３±０．２６％ＩＤ／ｇ）より顕著に高かった。これらのトレーサーはまた、［18Ｆ］−ＡｌＦ−ＮＯＴＡ−ＯＣに比べて同等以上の取込みを示した。ＦＥＴ−Ｇ−ＴＯＣＡ及びＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡの高い腫瘍取込みとは対照的に、２種のＰＥＧ化類似体は低い腫瘍（及び腎臓）取込みを示した。ペプチドのＰＥＧ化はしばしば半減期を増加させ、一般に身体からの総合クリアランスを減少させることを考えると（Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ｆ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ．２００５；１０：１４５１−１４５８）、これは意外な所見であった。この所見は、一つには、ＰＥＧ化の性質の１つが分子の水溶性を高めることであるという事実によって説明できる（Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ｆ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，ＢｉｏＤｒｕｇｓ．２００８；２２：３１５−３２９）。これは、親水性の低い非ＰＥＧ化類似体に比べて循環からより迅速なクリアランスが起こることによって裏付けられ、また高い尿クリアランスによって裏づけられる（図１７Ｆ）。ＰＥＧ−ＴＯＣＡ類似体の低い取込みはまた、そのインビトロ親和性が低いことによっても説明できよう（図１４）。
【０１２５】
受容体発現が欠如している肝臓及び筋肉のような組織（Ｒｅｙｎａｅｒｔ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｕｔ．２００４；５３：１１８０−１１８９）は、放射性トレーサーの低い取込みを示すものと予測された。ＰＥＧ−ＴＯＣＡ類似体は、より低い非標的組織取込みを示した。この系列においてＰＥＧ化から生じる高い親水性は、非標的組織からのより迅速な排出をもたらすように思われる。ＰＥＴ試験からの時間経過にわれば、この効果を定量化することができる。興味深いことには、ＰＥＧ化類似体に比べて中間の親水性を有するＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡ（表６）は、肝臓及び筋肉を含む非標的組織において同様な低い取込みを示した。これは、最高の腫瘍取込みを有するＦＥＴ−Ｇ−ＴＯＣＡでは理解されなかったＦＥＴ−βＡＧ−ＴＯＣＡのプラスとなる属性である。
【０１２６】
イメージング
本発明のトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体又は２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体は、ソマトスタチン受容体の増加したレベル又は高いレベルを示す病態又は腫瘍に対する放射性トレーサー又はイメージング剤として使用できる。
【０１２７】
一実施形態では、本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体は、ソマトスタチン受容体の増加したレベル又は高いレベルを示す病態又は腫瘍に対するＰＥＴ放射性トレーサーとして使用できる。一実施形態では、本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体は、増加したレベルのソマトスタチン受容体を発現することが知られている神経内分泌腫瘍のインビボ検出のために有用なＰＥＴ放射性トレーサーとして使用できる。一実施形態では、本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体は、高いレベルのソマトスタチン受容体を発現する肺腫瘍の検出のために有用なＰＥＴ放射性トレーサーとして使用できる。
【０１２８】
したがって一態様では、本発明は、ソマトスタチン受容体の増加したレベルを示す病態又は腫瘍の分布及び／又は程度を決定するためのＰＥＴイメージング方法であって、
ｉ）本明細書中に記載したような本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を前記被験体に投与する段階、
ｉｉ）本発明の前記２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を前記被験体内のソマトスタチン受容体に結合させる段階、
ｉｉｉ）本発明の前記２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体中に含まれる18Ｆから放出される信号を検出する段階、並びに
ｉｖ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階
を含んでなる方法を提供する。本方法はさらに、前記被験体における病態の分布及び程度を決定する段階であって、病態の前記分布及び程度が前記信号と直接に相関している段階を任意に含んでいる。
【０１２９】
別の態様では、本発明は、被験体における１つ又は複数の神経学的腫瘍の分布及び／又は程度を決定するためのＰＥＴイメージング方法であって、
ｉ）本明細書中に記載したような本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を前記被験体に投与する段階、
ｉｉ）本発明の前記２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を前記被験体における前記神経内分泌腫瘍の表面にあるソマトスタチン受容体に結合させる段階、
ｉｉｉ）本発明の前記２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体中に含まれる18Ｆから放出される信号を検出する段階、並びに
ｉｖ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階
を含んでなる方法を提供する。本方法はさらに、前記被験体における神経内分泌腫瘍の分布及び程度を決定する段階であって、神経内分泌腫瘍の前記分布及び程度が前記信号と直接に相関している段階を任意に含んでいる。
【０１３０】
別の態様では、本発明は、被験体における１つ又は複数の肺腫瘍の分布及び／又は程度を決定するためのＰＥＴイメージング方法であって、
ｉ）本明細書中に記載したような本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を前記被験体に投与する段階、
ｉｉ）本発明の前記２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を前記被験体における肺腫瘍の表面にあるソマトスタチン受容体に結合させる段階、
ｉｉｉ）本発明の前記２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体中に含まれる18Ｆから放出される信号を検出する段階、並びに
ｉｖ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階
を含んでなる方法を提供する。本方法はさらに、前記被験体における肺腫瘍の分布及び程度を決定する段階であって、肺腫瘍の前記分布及び程度が前記信号と直接に相関している段階を任意に含んでいる。
【０１３１】
本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を前記被験体を「投与する」段階は、好ましくは非経口的に実施され、最も好ましくは静脈内に実施される。静脈内経路は、本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を被験体の身体全域に送達するための最も効率的な方法である。静脈内投与は、被験体に対して実質的な物理的介入も実質的な健康リスクももたらさない。本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体は、好ましくは、本明細書中に定義されているような本発明の放射性医薬組成物として投与される。投与段階は、本発明のＰＥＴイメージング方法の完全な定義のためには必要でない。したがって本発明のＰＥＴイメージング方法は、本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体を予め投与した被験体に関して実施される、上述の段階（ｉｉ）〜（ｖ）を含むものとして理解することもできる。
【０１３２】
投与段階後かつ検出段階前に、本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体をソマトスタチン受容体に結合させる。例えば、被験体がインタクトな哺乳動物である場合、本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体は哺乳動物の身体を通って動的に移動し、体内の様々な組織に接触する。ひとたび本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体がソマトスタチン受容体に接触すれば、特異的な相互作用が起こる結果、ソマトスタチン受容体をもった組織からの本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体がソマトスタチン受容体のクリアランスは、ソマトスタチン受容体をもたない組織又はソマトスタチン受容体の少ない組織よりも長い時間がかかる。一定の時点に達すれば、ソマトスタチン受容体をもった組織に結合したＰＥＴ放射性トレーサーとソマトスタチン受容体をもたない組織又はソマトスタチン受容体の少ない組織に結合したものとの比の結果として、ソマトスタチン受容体に特異的に結合した本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体の検出が可能となる。
【０１３３】
本発明の方法の「検出」段階は、本発明の２−［18Ｆ］フルオロエチルトリアゾール結合［Ｔｙｒ3］オクトレオテート類似体に含まれる18Ｆから放出される信号を、前記信号に対して感受性を有する検出器（例えば、ＰＥＴカメラ）の使用によって検出することを含んでいる。この検出段階はまた、信号データの取得として理解することもできる。
【０１３４】
本発明の方法の「生成」段階は、取得された信号データに再構築アルゴリズムを適用してデータセットを得るコンピューターによって実施される。次いで、このデータセットを操作することで、18Ｆから放出される信号の位置及び／又は量を示す画像が生成される。放出される信号はソマトスタチン受容体の発現と直接に相関する結果、生成された画像を評価することで「決定」段階を行うことができる。
【０１３５】
本発明の「被験体」は、任意のヒト又は動物被験体であり得る。好ましくは、本発明の被験体は哺乳動物である。最も好ましくは、前記被験体はインタクトな哺乳動物生体である。特に好ましい実施形態では、本発明の被験体はヒトである。本発明のインビボイメージング方法は、健常な被験体において、或いはソマトスタチン受容体の異常発現に関連する病的状態を有することが知られ又は疑われる被験体においてソマトスタチン受容体を試験するために使用できる。
【０１３６】
別の態様では、本発明のＰＥＴイメージング方法は前記被験体に関する治療計画の進行中に繰り返して実施することができ、前記計画は神経内分泌腫瘍と戦うための薬物の投与を含んでいる。例えば、本発明のＰＥＴイメージング方法は、神経内分泌腫瘍と戦うための薬物による治療前、治療中及び治療後に実施できる。このようにすれば、前記治療の効果を経時的にモニターすることができる。ＰＥＴは、優れた感度及び分解能を有する結果、病変部における比較的小さい変化でも経時的に観察できるのでこの用途に特によく適しており、これは治療モニタリングにとって特別の利点である。
【０１３７】
上記に論議及び／又は引用された全ての特許、雑誌論文、刊行物及び他の文書の内容は、援用によって本明細書中に組み込まれる。
【図１】
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【図１Ａ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【国際調査報告】
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