(57)【要約】  グルコース代謝拮抗物質、ＢＨＡ、及び／又はＢＨＴを含む組成物が提供される。組成物は、コンパニオンアニマル用であり得る。組成物は、栄養のバランスのとれたペットフード組成物であり得る。
2014517686.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルコース代謝拮抗物質及びＢＨＡを含む、ペットフード組成物。
【請求項２】
前記グルコース代謝拮抗物質がマンノヘプツロースを含む、請求項１に記載のペットフード組成物。
【請求項３】
前記ＢＨＡが、組成物１ｋｇ当たり約２ｍｇ〜約１４０ｍｇ、又は組成物１ｋｇ当たり約６ｍｇ〜約８０ｍｇ、組成物１ｋｇ当たり約１０ｍｇ〜約６０ｍｇで存在する、請求項１〜２のいずれか一項に記載のペットフード組成物。
【請求項４】
前記グルコース代謝拮抗物質が、前記組成物の約５重量％未満で該組成物中に存在する、請求項１〜３のいずれか一項に記載のペットフード組成物。
【請求項５】
前記組成物が、湿潤（wet）組成物、半湿潤（semi-moist）組成物、乾燥（dry）組成物、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載のペットフード組成物。
【請求項６】
前記組成物が栄養のバランスのとれたペットフード組成物であり、前記グルコース代謝拮抗成分がマンノヘプツロースを含み、前記ＢＨＡが前記組成物１キログラム当たり約２ｍｇ〜約１４０ｍｇで存在する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
グルコース代謝拮抗物質及びＢＨＴを含む、ペットフード組成物。
【請求項８】
前記グルコース代謝拮抗物質がマンノヘプツロースを含む、請求項７に記載のペットフード組成物。
【請求項９】
前記ＢＨＴが、組成物１キログラム当たり約２ｍｇ〜約１４０ｍｇ、又は組成物１キログラム当たり約６ｍｇ〜約８０ｍｇ、又は組成物１キログラム当たり約１０ｍｇ〜約６０ｍｇで存在する、請求項７又は９に記載のペットフード組成物。
【請求項１０】
前記グルコース代謝拮抗物質が、組成物の約５重量％未満で組成物中に存在する、請求項７、８、又は９に記載のペットフード組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、湿潤組成物、半湿潤組成物、乾燥組成物、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項７、８、９、又は１０に記載のペットフード組成物。
【請求項１２】
前記組成物が、栄養のバランスのとれたペットフード組成物であり、前記グルコース代謝拮抗成分がマンノヘプツロースを含み、前記ＢＨＴが組成物１キログラム当たり約２ｍｇ〜約１４０ｍｇで存在する、請求項７、８、９、１０、又は１１に記載の組成物。
【請求項１３】
グルコース代謝拮抗物質並びにＢＨＡ及びＢＨＴを含むペットフード組成物。
【請求項１４】
前記グルコース代謝拮抗物質がマンノヘプツロースを含む、請求項１３に記載のペットフード組成物。
【請求項１５】
前記ＢＨＡ及びＢＨＴが、混合されて、前記組成物１キログラム当たり約２ｍｇ〜約１４０ｍｇで存在し、前記グルコース代謝拮抗物質が、前記組成物の約５重量％未満で該組成物中に存在し、該組成物が、栄養のバランスのとれたペットフード組成物である、請求項１３又は１４に記載のペットフード組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の実施形態は、グルコース代謝拮抗物質、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、及び／又はブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）を含む組成物に関する。より詳しくは、限定はされないが、本発明の実施形態は、グルコース代謝拮抗物質、ＢＨＡ、及び／又はＢＨＴを含むコンパニオンアニマル用の組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
多くの老化及び老化関連疾患に関連するある種の望ましくない細胞プロセスは、絶食によりカロリー摂取を制限させることで遅らせられるという知見が、実験動物において、生物学的理論によって正確に予見されている。
【０００３】
詳細には、カロリー制限は、寿命を確実に延ばし、腫瘍の発生及び進行を遅らせ、多くの系において生理的老化を遅らせることが示されている。実際、７０年以上にわたる研究により、カロリー制限は動物の寿命を確実に延ばす栄養学的介入であることが示されている。これについては以下を参照されたい。Ｗｅｉｎｄｒｕｃｈ及びＷａｌｆｏｒｄ、「Ｔｈｅ  Ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ」、Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＩＬ：Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｃ．Ｔｈｏｍａｓ（１９８８）；Ｙｕ、「Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｂｙ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ」、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ：ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（１９９４）；及びＦｉｓｈｂｅｉｎ、「Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９１）。寿命及び腫瘍発生に対するカロリー制限のこのような効果については、ＭｃＫａｙによる初期の研究以来、数多くの報告がある。これについては以下を参照されたい。ＭｃＫａｙ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｒｅｔａｒｄｅｄ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｕｐｏｎ  ｔｈｅ  Ｌｅｎｇｔｈ  ｏｆ  Ｌｉｆｅｓｐａｎ  ａｎｄ  Ｕｐｏｎ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  Ｂｏｄｙ  Ｓｉｚｅ，」Ｊ．Ｎｕｔｒ．，Ｖｏｌ．１０，ｐｐ．６３〜７９（１９３５）。実際、過去２０年間にわたり、老年学においてカロリー制限に対する関心が再び高まったことにより、このような食事療法が多くの系で生理的老化を遅らせるということが広く受け容れられるようになった。これについては以下を参照されたい。Ｗｅｉｎｄｒｕｃｈ及びＷａｌｆｏｒｄ，「Ｔｈｅ  Ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ，」Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＩＬ：Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｃ．Ｔｈｏｍａｓ（１９８８）；Ｙｕ，「Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｂｙ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ，」Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ：ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（１９９４）；Ｆｉｓｈｂｅｉｎ，「Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ，」Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９１）及びＭａｓｏｒｏ，Ｅ．Ｊ．「Ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｃａｌｏｒｉｃ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｇｅｉｎｇ，」Ｍｅｃｈ．Ａｇｉｎｇ  Ｄｅｖ．，Ｖｏｌ．１２６，ｐｐ  ９１３〜９２２（２００５）。
【０００４】
空腹時の血糖値及びインスリン濃度の低下、並びにインスリン感受性の改善が、カロリー制限のバイオマーカーとして速やかに測定される。カロリー制限を行ったげっ歯類では、空腹時の血糖値及びインスリン濃度はより低く、グルコースチャレンジ中のピーク血糖値及びインスリン濃度は、カロリー制限を行ったものでは低下している。これについては以下を参照されたい。Ｋａｌａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｄｉｅｔ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ  ｏｎ  Ｇｌｕｃｏｓｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ  ａｎｄ  Ａｇｉｎｇ  Ｒａｔｓ，」Ｍｅｃｈ．Ａｇｉｎｇ  Ｄｅｖ．，Ｖｏｌ．４６，ｐｐ．８９〜１０４（１９８８）。高インスリン血症は、心臓疾患及び糖尿病などの、いくつかのこうした疾患プロセスに関係する危険因子であることが知られている（Ｂａｌｋａｕ及びＥｓｃｈｗｅｇｅ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｏｂｅｓ．Ｍｅｔａｂ．１（Ｓｕｐｐｌ．１）：Ｓ２３〜３１，１９９９）。インスリン濃度及び体温の低下は、この代謝プロファイル異常についての最も信頼度の高い指標のうちの２つである（Ｍａｓｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．４７：Ｂ２０２〜Ｂ２０８，１９９２）；Ｋｏｉｚｕｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｔｒ．１１７：３６１〜３６７，１９８７；Ｌａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９３：４１５４〜４１６４，１９９６）。
【０００５】
２−デオキシ−Ｄ−グルコースなどのグルコース代謝拮抗物質は、グルコースに関連する化合物である。しかしながら、グルコースとは構造が異なることから、こうした化合物は炭水化物代謝の一部を阻止又は阻害し、したがってカロリー制限効果と同様の効果をもたらし得る（Ｒｅｚｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｔｒ．１０６：１４３〜１５７，１９７２）。これらの代謝拮抗物質は、体重の低下、血漿インスリン濃度の低下、体温の低下、腫瘍の発生及び増殖の阻害、並びに血液循環中の糖質コルチコイドホルモン濃度の上昇などの多くの生理作用を示す。（総説として以下を参照されたい。（Ｒｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９２８：３０５〜３１５，２００１））。これらの生理作用は、炭水化物代謝の阻害により生じる。
【０００６】
ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）及びブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）は、それぞれ多くの抗酸化特性を付与する共役芳香環を含有する親油性の有機化合物であり、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）は、事実上ビタミンＥの合成類似化合物であるとみなすことができる。ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）は、実際には、２種の有機化合物異性体、２−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシアニソールと３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシアニソールの混合物である。ＢＨＴ及びＢＨＡは、どちらも自然発生はしない。ＢＨＴは、ｐ−クレゾール（４−メチルフェノール）とイソブチレン（２−メチルプロペン）とを反応させるか、あるいは２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノールをヒドロキシメチル化又はアミノメチル化した後に水素化分解して調製し、ＢＨＡは、４−メトキシフェノール及びイソブチレンから調製する。
【０００７】
ＢＨＴ及びＢＨＡは、どちらも、その抗酸化作用のために、食品、薬品、化粧品及びその関連製品に防腐剤として使用される。上述のように、共役芳香環は、フリーラジカルを安定化及び捕捉するため、不飽和有機物質の自動酸化を予防又は抑制することができる。生物学的エンドポイントが同じであることを踏まえると、ＢＨＴ及びＢＨＡは、どちらも、同様に機能し（酸化防止剤）、かつ相乗的に機能し得る（ＢＨＡはインスリン濃度の増加をもたらす膜損傷を防ぎ、ＢＨＴはインスリンの作用を減じる膜損傷を防ぐ）。したがって、ＢＨＡ及びＢＨＴは、以下で教示される用途において、互換性があり、独立するものであり、又は組み合わせることができるとみなされるであろう。したがって、これらの「一次的な」効果は、酸素フリーラジカルの消去であり、この酸化保護による「二次的な」効果として、その後、生物学的エンドポイントが得られるものと考えられる。
【０００８】
理論によって制限されることはないが、ＢＨＴ及び／又はＢＨＡがグルコース代謝拮抗カロリー制限模倣配合物及び組成物に含まれる場合、多くの潜在的な相乗効果及び相乗利益がもたらされ得ると考えられる。例えば、ＢＨＴ及びＢＨＡは、双方ともに相乗的にグルコース代謝拮抗物質と作用し、インスリン感受性、インスリンシグナル伝達、血中インスリン濃度、並びに筋量及び筋肉の機能性の維持における効果を増強する。更には、低用量のＢＨＡ及びＢＨＴが癌を防御し、発癌を阻害し得ることが報告されている。これについては以下を参照されたい。Ｂｏｔｔｅｒｗｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｉｎｔａｋｅ  ｏｆ  Ｂｕｔｙｌａｔｅｄ  Ｈｙｄｒｏｘｙａｎｉｓｏｌｅ  ａｎｄ  Ｂｕｔｙｌａｔｅｄ  Ｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅ  ａｎｄ  Ｓｔｏｍａｃｈ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｉｓｋ：Ｒｅｓｕｌｔｓ  ｆｒｏｍ  Ａｎａｌｙｓｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ  Ｃｏｈｏｒｔ  Ｓｔｕｄｙ，」Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，３８（２０００）５９９〜６０５。したがって、グルコース代謝拮抗物質は、異なる抗解糖機序を介して機能するとされることから、かかる組み合わせによって、期待される利益をもたらすのに必要とされる酸化防止剤化合物及びグルコース代謝拮抗物質の各用量を削減することが可能である。多様な、用量、安全性及び有効性試験に基づくと、ＢＨＴ及び／又はＢＨＡを最小量で有効に機能させることができるということは、望ましい成果であり得る。グルコース代謝拮抗物質は、壊れにくくかつ総合的なカロリー制限模倣剤であると考えられ、その有効性及び／又は費用対効果を向上させることも可能である。グルコース代謝拮抗物質を、同様の利益がもたらされるものの異なる代謝機序を介して機能する、ＢＨＴ及び／又はＢＨＡなどの増強剤と結合させることで、有効性の向上が達成され得ると考えられる。したがって、ＢＨＴ及び／又はＢＨＡは、カロリー制限模倣剤の系において、グルコース代謝拮抗物質と組み合わせることができる代表的な増強剤であり、代謝作用を、並びにグルコース代謝拮抗物質に関係する全身の健康効果を、「大まかに」及び／又は「微妙に」調整することができる。
【０００９】
その他に、カロリー制限の表現型に関する主な特徴としては、インスリン感受性の上昇が挙げられる。多くの場合、感受性の上昇に伴いインスリンの血漿濃度は減少し、抗糖尿病機序としての役割も果たす。更には、インスリンシグナル経路（又は下等動物モデルにおけるそのホモログ）は、寿命と密接に関係し、機能及び生命力を維持して寿命を延長する多くの介入に反応するように見える。マンノヘプツロースは、ネズミ、イヌ、及び他の種において、血漿インスリン濃度の低下及び／又はインスリン感受性の増加の双方が見られるカロリー制限模倣剤化合物の１つである。
【００１０】
実行可能な相補的な方法においては、Ｍｏｕｓｔａｆａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５年）は、１日当たり１４０ｍｇ／体重（ｋｇ）の用量でＢＨＴを１８ヶ月間与えられたラットでは、インスリン感受性が上昇し、老化による、脂肪細胞におけるインスリン刺激性グルコース輸送の減少が部分的に改善されることを示した。この有益な効果は、フリーラジカルによって引き起こされる酸化的損傷から細胞膜脂質を防御する能力によるものであろう。フリーラジカルによる損傷は、老化過程に関連する多くの機能低下に周知の素因である。マンノヘプツロースは、酸化的損傷に対してなんらかの間接的な保護をもたらすと考えられるものの（国際特許第２００８０９３３０２Ａ２号参照）、主要な有益な効果はインスリン感受性に対するものであり、この効果は、ヘキソキナーゼ及び解糖を阻害し全体的な解糖流量を減少させることにともない生じるものと考えられる。興味深いことに、Ｒａｄｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０年）は、マウスの肺抽出物中のヘキソキナーゼ又は他の解糖酵素に対してはＢＨＴの影響はないことを以前から示している。したがって、総合すれば、上述の所見は、ＢＨＴが、グルコース代謝拮抗物質と相乗的に機能して、異なるが相補的な分子機序を駆動させることで、老化に伴うインスリン感受性の低下から哺乳類の身体が保護され得ることを示唆する。
【００１１】
また、アロキサンは、糖尿病を誘発させるためにインビボ及びインビトロの双方の環境において幅広く使用されている。アロキサンに誘発される糖尿病反応は、通常の老化において一般的に観察される血中インスリンレベルの上昇と若干類似している。アロキサンは、おそらくはフリーラジカルを生成してインスリン分泌を増加させることで、膵臓ベータ細胞に悪影響を及ぼす。Ｍａｅｃｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９年）は、培養したインスリン分泌細胞を使用して、ＢＨＡはアロキサンによる悪影響を予防することを報告した。血漿インスリン濃度の低下に関係するマンノヘプツロースの有益な効果に最も関連するのは、インスリン分泌物時にアロキサン誘発が増加するのを防ぐＢＨＡの能力である。これに対し、ＢＨＴはインスリン感受性の低下を防ぐことが明白であり、ＢＨＡの利益は、その能力によって、細胞膜をフリーラジカルによる損傷から保護できることであることは明白である。ＢＨＴは、インスリン濃度の上昇に対する保護をもたらし得る。したがって、ＢＨＡは、グルコース代謝拮抗物質と相乗効果を示し、異なるものの相補的である機序を通してインスリン濃度の上昇を防ぐことができる。
【００１２】
要約すると、グルコース代謝拮抗物質、ＢＨＴ、及びＢＨＡは、同様の利益を提供するが、異なる分子過程及び機序により機能する。これらの化合物の作用方式は異なることから、マンノヘプツロース、ＢＨＴ、及び／又はＢＨＡは、組み合わせることによって哺乳類の身体内で相乗効果を示し、有効性及び効力が更に向上し得ることが示唆される。したがって、グルコース代謝拮抗物質をもとにしたカロリー制限模倣配合物にＢＨＴ及び／又はＢＨＡを加えることで、インスリン感受性が増加し、老化に伴うインスリン感受性の低下及び／又は血中インスリン濃度の上昇が良好に予防されることが予想され、有益な効果を得るのに必要とされるマンノヘプツロースの濃度を減少させることができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】国際特許第２００８０９３３０２Ａ２号
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｗｅｉｎｄｒｕｃｈ及びＷａｌｆｏｒｄ、「Ｔｈｅ  Ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ」、Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＩＬ：Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｃ．Ｔｈｏｍａｓ（１９８８）；Ｙｕ、「Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｂｙ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ」、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ：ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（１９９４）；及びＦｉｓｈｂｅｉｎ、「Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９１）。
【非特許文献２】ＭｃＫａｙ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｒｅｔａｒｄｅｄ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｕｐｏｎ  ｔｈｅ  Ｌｅｎｇｔｈ  ｏｆ  Ｌｉｆｅｓｐａｎ  ａｎｄ  Ｕｐｏｎ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  Ｂｏｄｙ  Ｓｉｚｅ，」Ｊ．Ｎｕｔｒ．，Ｖｏｌ．１０，ｐｐ．６３〜７９（１９３５）
【非特許文献３】Ｗｅｉｎｄｒｕｃｈ及びＷａｌｆｏｒｄ，「Ｔｈｅ  Ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ，」Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＩＬ：Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｃ．Ｔｈｏｍａｓ（１９８８）；Ｙｕ，「Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｂｙ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ，」Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ：ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（１９９４）；Ｆｉｓｈｂｅｉｎ，「Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ，」Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９１）及びＭａｓｏｒｏ，Ｅ．Ｊ．「Ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｃａｌｏｒｉｃ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｇｅｉｎｇ，」Ｍｅｃｈ．Ａｇｉｎｇ  Ｄｅｖ．，Ｖｏｌ．１２６，ｐｐ  ９１３〜９２２（２００５）。
【非特許文献４】Ｋａｌａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｄｉｅｔ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ  ｏｎ  Ｇｌｕｃｏｓｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ  ａｎｄ  Ａｇｉｎｇ  Ｒａｔｓ，」Ｍｅｃｈ．Ａｇｉｎｇ  Ｄｅｖ．，Ｖｏｌ．４６，ｐｐ．８９〜１０４（１９８８）
【非特許文献５】Ｂａｌｋａｕ及びＥｓｃｈｗｅｇｅ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｏｂｅｓ．Ｍｅｔａｂ．１（Ｓｕｐｐｌ．１）：Ｓ２３〜３１，１９９９
【非特許文献６】Ｍａｓｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．４７：Ｂ２０２〜Ｂ２０８，１９９２）
【非特許文献７】Ｋｏｉｚｕｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｔｒ．１１７：３６１〜３６７，１９８７
【非特許文献８】Ｌａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９３：４１５４〜４１６４，１９９６
【非特許文献９】Ｒｅｚｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｔｒ．１０６：１４３〜１５７，１９７２
【非特許文献１０】Ｒｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９２８：３０５〜３１５，２００１
【非特許文献１１】Ｂｏｔｔｅｒｗｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｉｎｔａｋｅ  ｏｆ  Ｂｕｔｙｌａｔｅｄ  Ｈｙｄｒｏｘｙａｎｉｓｏｌｅ  ａｎｄ  Ｂｕｔｙｌａｔｅｄ  Ｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅ  ａｎｄ  Ｓｔｏｍａｃｈ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｉｓｋ：Ｒｅｓｕｌｔｓ  ｆｒｏｍ  Ａｎａｌｙｓｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ  Ｃｏｈｏｒｔ  Ｓｔｕｄｙ，」Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，３８（２０００）５９９〜６０５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
したがって、特にコンパニオンアニマルにおいて、ＢＨＡ及び／又はＢＨＴとグルコース代謝拮抗物質とを組み合わせた栄養摂取法を提供することは有益である。したがって、本発明の実施形態は、かかる組成物に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
一実施形態は、グルコース代謝拮抗物質及びＢＨＡを含む、ペットフード組成物に関する。グルコース代謝拮抗物質には、マンノヘプツロースが含まれ得る。ＢＨＡは、組成物１キログラム当たり約２ｍｇ〜約１４０ｍｇ、又は組成物１キログラム当たり約６ｍｇ〜約８０ｍｇ、又は組成物１キログラム当たり約１０ｍｇ〜約６０ｍｇで存在させ得る。グルコース代謝拮抗物質は、組成物の約５重量％未満で組成物中に存在させ得る。ペットフード組成物は、湿潤（wet）組成物、半湿潤（semi-moist）組成物、乾燥（dry）組成物、及びこれらの組み合わせであり得る。組成物は、栄養のバランスのとれたペットフード組成物であり得る。
【００１７】
他の実施形態は、グルコース代謝拮抗物質及びＢＨＴを含むペットフード組成物に関する。グルコース代謝拮抗物質には、マンノヘプツロースが含まれ得る。ＢＨＴは、組成物１キログラム当たり約２ｍｇ〜約１４０ｍｇ、又は組成物１キログラム当たり約６ｍｇ〜約８０ｍｇ、又は組成物１キログラム当たり約１０ｍｇ〜約６０ｍｇで存在させ得る。グルコース代謝拮抗物質は、組成物の約５重量％未満で組成物中に存在させ得る。組成物は、湿潤組成物、半湿潤組成物、乾燥組成物、及びこれらの組み合わせであり得る。組成物は、栄養のバランスのとれたペットフード組成物であり得る。
【００１８】
他の実施形態は、グルコース代謝拮抗物質並びにＢＨＡ及びＢＨＴを含むペットフード組成物に関する。グルコース代謝拮抗物質には、マンノヘプツロースが含まれ得る。ＢＨＡ及びＢＨＴは、組成物１キログラム当たり約２ｍｇ〜約１４０ｍｇで組み合わせて存在させ得る。グルコース代謝拮抗物質は、組成物の約５重量％未満で組成物中に存在させ得る。組成物は、湿潤組成物、半湿潤組成物、乾燥組成物、及びこれらの組み合わせであり得る。組成物は、栄養のバランスのとれたペットフード組成物であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】グルコース代謝拮抗法をもとに積分し、生成した電流波形。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
定義
本明細書において使用するとき、「ｔｈｅ」、「ａ」及び「ａｎ」などの冠詞は、特許請求の範囲又は明細書において使用される場合、特許請求又は記載されているものの個数が１つ以上であることを意味するものとして理解される。
【００２１】
本明細書において使用するとき、「含む（include）」、「含む（includes）」、及び「含んでいる（including）」は、非限定的であることを意味する。
【００２２】
本明細書において使用するとき、用語「複数」は、１よりも多いことを意味する。
【００２３】
本明細書において使用するとき、用語「動物」又は「ペット」は、これらに限定されるものではないが、飼いイヌ（イヌ科動物）、ネコ（ネコ科動物）、ウマ、ウシ、フェレット、ウサギ、ブタ、ラット、マウス、ジャービル、ハムスター、及びウマなどを含む家畜を意味する。特に、飼いイヌ及び飼いネコはペットに関する特定例であり、本明細書において「コンパニオンアニマル」と称される。本開示を通して、動物、ペット、又はコンパニオンアニマルという用語を使用する際、特に明記しない限り、動物、ペット、又はコンパニオンアニマルは、病気でない状態であることを理解すべきである。
【００２４】
本明細書で使用するとき、用語「動物飼料」、「動物飼料組成物」、「動物飼料キブル」、「ペットフード」又は「ペットフード組成物」はいずれも、ペットによって摂取されることを目的とした組成物を意味する。ペットフードとしては、これらに限定されるものではないが、毎日の摂取に適した栄養のバランスのとれた組成物、並びに栄養的にバランスがとれていてもいなくともよい栄養補助食品及び／又はペットスナックを挙げることができる。
【００２５】
本明細書で使用するとき、用語「栄養のバランスのとれた」は、ペットフードなどの組成物が、追加で必要とされる水を除き、生命を維持するうえで必要とされる既知の栄養素を、ペット栄養分野における、米国食品医薬品局動物薬センター、米国飼料検査官協会などの（ただしこれらに限定されない）行政機関を含む広く認識された当局の推奨に基づく適切な量及び割合で有することを意味する。
【００２６】
本発明の全ての経口用量は、特に示されない限りは、コンパニオンアニマルの体重１ｋｇ当たりで計算される。
【００２７】
本明細書の全体を通じて与えられる全ての最大の数値限定は、それよりも小さい全ての数値限定を、そうしたより小さい数値限定があたかも本明細書に明確に記載されているものと同様にして包含するものと理解すべきである。本明細書の全体を通じて与えられる全ての最小数値限定は、それよりも大きい全ての数値限定を、あたかもそれらの大きい数値限定が本明細書に明確に記載されているものと同様にして含むものである。本明細書の全体を通じて与えられる全ての数値範囲は、そのようなより広い数値範囲内に含まれるそれよりも狭い全ての数値範囲を、あたかもそれらのより狭い数値範囲が全て本明細書に明確に記載されているものと同様にして含むものである。
【００２８】
品目の全リスト、例えば、成分のリストは、マーカッシュ群として解釈されることを意図しており、またそのように解釈されるべきである。したがって、全てのリストは、．．．リストの品目．．．「からなる群から選択される」品目、「並びにこれらの組み合わせ及び混合物」として読んで解釈することができる。
【００２９】
本明細書では、本発明の実施形態において使用される各種材料などの各成分についてはその商品名で参照している。本明細書において特定の商品名の材料により限定されることは、本発明者らの意図するところではない。本明細書の説明文中において、商品名によって参照される材料と同等の材料（例えば、異なる名称又は参照符合で異なる供給源から得られるもの）に置き換えて使用することもできる。
【００３０】
本明細書におけるプロセス、方法、組成物、及び装置は、本明細書に述べられる特徴又は実施形態の任意のものを含むか、これらから基本的になるか、又はこれらからなり得る。
【００３１】
本開示の各種実施形態の説明では、各種実施形態又は個々の特徴について開示する。当業者には明らかなように、このような実施形態及び特徴の全ての組み合わせが可能であり、本開示の好ましい実施法となり得るものである。本発明の様々な実施形態及び個々の特徴について例示及び説明したが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、他の様々な変更及び改変を行うことが可能である。また、明らかなことであるが、上記の開示において教示された実施形態及び特徴の全ての組み合わせが可能であり、本発明の好ましい実施となり得るものである。
【００３２】
本発明の実施形態
本発明の実施形態は、ＢＨＡ及び／又はＢＨＴ、及び２−デオキシ−Ｄ−グルコース、５−チオ−Ｄ−グルコース、３−Ｏ−メチルグルコース、１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、２，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトール、マンノヘプツロース、並びにこれらの混合物及び組み合わせからなる群から選択されるグルコース代謝拮抗成分を含む組成物に関するものである。理論によって限定されることは意図するところではないが、これらの成分は、グルコース代謝拮抗物質として受け入れられているものである。別の実施形態では、各成分は、アボカドなどの植物体、又はアルファルファ、イチジク、及びサクラソウなどの、その他の、マンノヘプツロースの豊富な資源の１つの成分として、記載される組成物中に存在させ得る。
【００３３】
グルコース代謝拮抗物質
本明細書において開示されるグルコース代謝拮抗成分としては、２−デオキシ−Ｄ−グルコース、５−チオ−Ｄ−グルコース、３−Ｏ−メチルグルコース、１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、２，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、及び２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトールなどのアンヒドロ糖類、マンノヘプツロース、並びにこれらの混合物及び組み合わせが含まれる。マンノヘプツロースは、具体的なグルコース代謝拮抗物質の１つである。一実施形態では、マンノヘプツロースは、アボカド、アボカド抽出物、アボカド粉末、アボカド濃縮物、又はマンノヘプツロースの豊富なその他の資源などの、植物体の１つの成分として、記載される組成物中に存在させ得る。マンノヘプツロースの豊富な供給源の非限定的な例としては、アルファルファ、イチジク、及びサクラソウが挙げられる。植物体には、果実、種子（若しくは核）、枝、葉、若しくは関連する植物の他の任意の部分、又はそれらの組み合わせが含まれ得る。
【００３４】
アボカド（一般的にワニナシ、アグアカテ、又はパルタとも呼ばれる）は、関連する糖類及び他の炭水化物と同様、マンノヘプツロースを極めて豊富に含む資源を含む。アボカドは、亜熱帯性常緑樹の果実であり、カリフォルニア州、フロリダ州、ハワイ州、グアテマラ共和国、メキシコ、西インド諸島、南アフリカ共和国、及びアジアの各地域で最もよく生育する。
【００３５】
アボカドの種としては、例えばパーシー・アメリカーナ（Persea Americana）及びパーシー・ヌビゲナ（Persea nubigena）が挙げられ、これらの例示的な種に含まれる全ての栽培品種が含まれる。栽培品種としては、「アナハイム（Anaheim）」、「ベーコン（Bacon）」、「クリームハート（Creamhart）」、「デューク（Duke）」、「フエルテ（Fuerte）」、「ガンター（Ganter）」、「グウェン（Gwen）」、「ハス（Hass）」、「ジム（Jim）」、「ルラ（Lula）」、「リヨン（Lyon）」、「メキシコーラ・グランデ（Mexicola Grande）」、「マリエッタ・グリーン（Murrieta Green）」、「ネイバル（Nabal）」、「ピンカートン（Pinkerton）」、「クィーン（Queen）」、「プエブラ（Puebla）」、「リード（Reed）」、「リンコン（Rincon）」、「ライアン（Ryan）」、「スピンクス（Spinks）」、「トパ・トパ（Topa Topa）」、「ウィトセル（Whitsell）」、「ビュルツ（Wurtz）」及び「ズッターノ（Zutano）」が挙げられる。本明細書での使用にはアボカドの果実が特に好ましく、果実は核を含んでいてもよく、あるいは核を取り除くか又は少なくとも部分的に取り除くかしてもよい。パーシー・アメリカーナ（Persea Americana）由来の果実以外に、アナハイム（Anaheim）、クリームハート（Creamhart）、フエルテ（Fuerte）、ハス（Hass）、ルラ（Lula）、リヨン（Lyon）、マリエッタ・グリーン（Murrieta Green）、ネイバル（Nabal）、クィーン（Queen）、プエブラ（Puebla）、リード（Reed）、ライアン（Ryan）及びスピンクス（Spinks）などのより大きな果実（例えば、果実が熟したときに約０．３４ｋｇ（１２オンス）以上）を実らせる栽培品種から得られる果実が本明細書での使用には特に好ましい。
【００３６】
アルファルファ、イチジク又はサクラソウ由来の植物体も、比較的高濃度のマンノヘプツロースを提供することが報告されている。アルファルファはまた、メディカゴ・サティバ（Medicago sativa）とも呼ばれる。イチジクすなわちフィカス・カリカ（Ficus carica）（例えば、フサナリイチジク（Cluster fig）又はエジプトイチジク（Sycamore fig）が挙げられる）以外に、サクラソウすなわちプリムラ・オフィシナリス（Primula officinalis）を使用することもできる。
【００３７】
２−デオキシ−Ｄ−グルコース、５−チオ−Ｄ−グルコース、３−Ｏ−メチルグルコース、１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、２，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトール、マンノヘプツロース、並びにこれらの混合物及び組み合わせからなる群から選択される成分の特定の濃度が、本明細書での使用には有用であり得ることが見出されている。詳細には、比較的低濃度、及び比較的高用量のこうした成分は有用ではあるものの、所望の目的には不充分な効果しか得られない可能性がある。用量は使用されるグルコース代謝拮抗成分によって決まり、グルコース代謝拮抗物質が投与されるコンパニオンアニマルの体格及び状態に応じて異なる。いくつかの実施形態では、約０．０００１又は約０．００１ｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇの範囲の用量が有効であり得る。本明細書で使用されるとき、用量について単位ｍｇ／ｋｇを使用する場合、「ｍｇ」は、マンノヘプツロースなどの成分の濃度を示し、「ｋｇ」はイヌ又はネコなどのコンパニオンアニマルの体重のキログラムを示す。２−デオキシ−Ｄ−グルコースを大型の動物で使用する場合には、より少量での投与が適当である場合もある。特に５−チオ−Ｄ−グルコース又は２，５−無水−Ｄ−マンニトールなどの化合物のより多量での投与も容易に許容される。一実施形態では、コンパニオンアニマルに毎日投与される成分の用量は、「ｍｇ」が成分の濃度を示し、「ｋｇ」がコンパニオンアニマルの体重のキログラムを示すものとして、約０．１、０．５、１、２、又は５ｍｇ／ｋｇ〜約１５、２０、５０、１００、１５０、又は２００ｍｇ／ｋｇ、及びこれらの範囲の全ての組み合わせであってよい。一実施形態では、コンパニオンアニマルに毎日投与される成分の用量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、又は約２ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇであってよい。一実施形態では、コンパニオンアニマルに毎日投与される成分の用量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、又は約２ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、又は約２ｍｇ／ｋｇであってよい。特定の実施形態では、これらの量は、いずれも組成物の約５重量％未満、又は約２重量％未満、又は約０．０００１重量％〜約０．５重量％、又は約０．１重量％〜約１０重量％、又は約０．１重量％〜約５重量％の成分を含む組成物に相当し得る。これらの間の全ての範囲も考えられる。成分の濃度は、例えば組成物の形態（例えば、乾燥組成物、半湿潤組成物、湿潤組成物、若しくは栄養補助食品、又はこれらの他の任意の形態若しくは混合物のいずれであるか）などの異なる因子に基づいて、当業者が決定することができる。当業者であれば、好ましい用量を使用し、特定の組成物中の成分の最適濃度を決定することが可能である。
【００３８】
同様に、コンパニオンアニマルに毎日投与される成分の全体用量も与えることができる。こうした一日用量は、約０．１ｍｇ／日〜約１０００ｍｇ／日であってよい。こうした一日用量は、組成物を摂取するコンパニオンアニマルの大きさによって変化し得る。例えば、一実施形態では、大きなコンパニオンアニマルは小さなコンパニオアニマルよりも多く消費し得る。このことは、コンパニオンアニマルの体重当たりの用量に関して本明細書に開示される用量と一致していることは言うまでもない。したがって、一実施形態では、コンパニオンアニマルが大きくなるほど、多くの組成物を投与することができる。
【００３９】
したがって、一実施形態では、こうした一日用量は、本明細書に開示されるように、コンパニオンアニマルの体重毎に毎日投与される用量に相当し得る。具体的には、一日用量は、いくつかの実施形態では、コンパニオンアニマルの体格及び上述の一日用量に応じて、約０．１ｍｇ／日〜約１０００ｍｇ／日の範囲、又は更にはそれ以上であり得る。他の実施形態では、日用量は、約１ｍｇ／日〜約５００ｍｇ／日、又は約１ｍｇ／日〜約２００ｍｇ／日、又は約１ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日、又は約５ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日、又は約５ｍｇ／日〜約８０ｍｇ／日、又は約１０ｍｇ／日〜約５０ｍｇ／日、又は約４０ｍｇ／日であってよい。これらの間の全ての範囲も考えられる。
【００４０】
同様に、本明細書の組成物において植物体の抽出物又は粉末が用いられる場合には、抽出物又は粉末の濃度は、こうした抽出物又は粉末中の有効成分の濃度によって決まり得る。本明細書では、いずれも抽出物又は粉末の、約０．５重量％〜約９９重量％のグルコース代謝拮抗成分、又は約０．５重量％〜約７５重量％のグルコース代謝拮抗成分、又は約０．５重量％〜約５０重量％のグルコース代謝拮抗成分、又は約０．５重量％〜約２５重量％のグルコース代謝拮抗成分を含む抽出物及び／又は粉末が見出されている。グルコース代謝拮抗成分が、抽出物及び／又は粉末の約０．５、１、２、５、又は１０重量％〜約１５、２５、５０又は７５重量％であり得る抽出物及び／又は粉末が見出されている。
【００４１】
ＢＨＡ及びＢＨＴ
記載されているように、本発明の実施形態の組成物は、ＢＨＡ及び／又はＢＨＴを含み得る。ＢＨＡ及びＢＨＴは、酸化的損傷を予防するために、脂肪及び脂肪分の多い食品に添加することができる合成酸化防止剤である。これらは合成により生成されるのであって、天然に発生しないため、本発明の組成物は、合成ＢＨＡ及び／又はＢＨＴを含む実施形態に関する。
【００４２】
一実施形態では、本発明の組成物中にはＢＨＡのみ（ＢＨＴを除く）が含まれる。他の実施形態では、本発明の組成物中にはＢＨＡ及びＢＨＴの双方が含まれる。
【００４３】
ＢＨＡ及び／又はＢＨＴは、任意数の資源に由来させて組成物中に存在させることができる。一実施形態では、ＢＨＡ及び／又はＢＨＴは、組成物の調製中に脂肪を介して添加することで含まれ得る。ＢＨＡ及び／又はＢＨＴは、典型的には、酸化を防ぐか減少させるために食品添加物として脂肪分に使用され得る。他の実施形態では、ＢＨＡ及び／又はＢＨＴは、他のキャリアを添加することで本明細書の組成物に添加され得る。
【００４４】
組成物は、ＢＨＡ及び／又はＢＨＴの量を変化させて含むことができる。これらの各々については、以下で扱う。
【００４５】
一実施形態では、ＢＨＡは、食事量に応じ本明細書の組成物に含まれ得る。したがって、一実施形態では、組成物中のＢＨＡの総量は、約２〜約１４０ｍｇ／飼料（ｋｇ）であり得る。他の実施形態では、ＢＨＡの総量は、約３〜約１２０ｍｇ／飼料（ｋｇ）、又は約４〜約１００ｍｇ／飼料（ｋｇ）、又は約５〜約９０ｍｇ／飼料（ｋｇ）、又は約６〜約８０ｍｇ／飼料（ｋｇ）で存在させ得る。他の実施形態では、ＢＨＡの総量は、約１０〜約３０ｍｇ／飼料（ｋｇ）で存在させ得る。
【００４６】
ＢＨＡは、動物に１日当たりに投与される量だけ本明細書の組成物に含まれ得る。したがって、動物に１日当たりに投与されるＢＨＡの総量は、一実施形態では、約０．１２〜約２１０ｍｇ／日であり得る。他の実施形態では、動物に１日当たりに投与されるＢＨＡの総量は、約０．１３〜約２００ｍｇ／日、又は約０．１４〜約１８０ｍｇ／日、又は約０．１５〜約１６０ｍｇ／日、又は約０．１６〜約１４０ｍｇ／日、又は約０．２〜約１２０ｍｇ／日であり得る。一実施形態では、動物に１日当たりに投与されるＢＨＡの総量は、約１〜約２０ｍｇ／日であり得る。
【００４７】
ＢＨＡは、動物の体重に対し１日当たりに投与される量だけ本明細書の組成物に含まれ得る。したがって、一実施形態では、動物の体重に対し１日当たりに投与されるＢＨＡの総量は、約０．０４〜約３．６ｍｇ／日／体重（ｋｇ）であり得る。一実施形態では、動物の体重に対し１日当たりに投与されるＢＨＡの総量は、約０．０６〜３ｍｇ／日／体重（ｋｇ）、又は約０．０８〜約２．５ｍｇ／日／体重（ｋｇ）、又は約０．０８〜約２．２５ｍｇ／日／体重（ｋｇ）、又は約０．１〜約２ｍｇ／日／体重（ｋｇ）であり得る。一実施形態では、動物の体重に対し１日当たりに投与されるＢＨＡの総量は、約０．１〜約０．６ｍｇ／日／体重（ｋｇ）であり得る。
【００４８】
一実施形態では、ＢＨＴは、食事量に応じ本明細書の組成物に含まれ得る。したがって、一実施形態では、組成物中のＢＨＴの総量は、約２〜約１４０ｍｇ／飼料（ｋｇ）であり得る。他の実施形態では、ＢＨＴの総量は、約３〜約１２０ｍｇ／飼料（ｋｇ）、又は約４〜約１００ｍｇ／飼料（ｋｇ）、又は約５〜約９０ｍｇ／飼料（ｋｇ）、又は約６〜約８０ｍｇ／飼料（ｋｇ）で存在させ得る。一実施形態では、ＢＨＴの総量は、約１０〜約３０ｍｇ／飼料（ｋｇ）で存在させ得る。
【００４９】
ＢＨＴは、動物に１日当たりに投与される量だけ本明細書の組成物に含まれ得る。したがって、動物に１日当たりに投与されるＢＨＴの総量は、一実施形態では、約０．１２〜約２１０ｍｇ／日であり得る。他の実施形態では、動物に１日当たりに投与されるＢＨＴの総量は、約０．１３〜約２００ｍｇ／日、又は約０．１４〜約１８０ｍｇ／日、又は約０．１５〜約１６０ｍｇ／日、又は約０．１６〜約１４０ｍｇ／日、又は約０．２〜約１２０ｍｇ／日であり得る。一実施形態では、動物に１日当たりに投与されるＢＨＴの総量は、約１〜約２０ｍｇ／日であり得る。
【００５０】
ＢＨＴは、動物の体重に対し１日当たりに投与される量で本明細書の組成物に含まれ得る。したがって、一実施形態では、動物の体重に対し１日当たりに投与されるＢＨＴの総量は、約０．０４〜約３．６ｍｇ／日／体重（ｋｇ）であり得る。一実施形態では、動物の体重に対し１日当たりに投与されるＢＨＴの総量は、約０．０６〜３ｍｇ／日／体重（ｋｇ）、又は約０．０８〜約２．５ｍｇ／日／体重（ｋｇ）、又は約０．０８〜約２．２５ｍｇ／日／体重（ｋｇ）、又は約０．１〜約２ｍｇ／日／体重（ｋｇ）であり得る。一実施形態では、動物の体重に対し１日当たりに投与されるＢＨＴの総量は、約０．１〜約０．６ｍｇ／日／体重（ｋｇ）であり得る。
【００５１】
記載されているように、一実施形態では、本発明の組成物中にＢＨＡのみ（ＢＨＴを除く）を存在させ得る。つまり、本発明の組成物中にＢＨＡは存在するが、ＢＨＴは存在しなくてもよい。他の実施形態では、本発明の組成物中にはＢＨＡ及びＢＨＴの双方が含まれる。
【００５２】
記載されているように、一実施形態では、本発明の組成物中にＢＨＴのみ（ＢＨＡを除く）を存在させ得る。つまり、本発明の組成物中にＢＨＴは存在するが、ＢＨＡは存在しなくてもよい。他の実施形態では、本発明の組成物中にはＢＨＡ及びＢＨＴの双方が含まれる。
【００５３】
食事の量によって、本明細書の組成物中に、任意の組み合わせのＢＨＡ及びＢＨＴが含まれ得る。したがって、組成物中のＢＨＡ及びＢＨＴの総量は、約２〜約１４０ｍｇ／飼料（ｋｇ）であり得る。他の実施形態では、ＢＨＡ及びＢＨＴの総量は、約３〜約１２０ｍｇ／飼料（ｋｇ）、又は約４〜約１００ｍｇ／飼料（ｋｇ）、又は約５〜約９０ｍｇ／飼料（ｋｇ）、又は約６〜約８０ｍｇ／飼料（ｋｇ）で存在させ得る。一実施形態では、ＢＨＡ及びＢＨＴの総量は、約１０〜約３０ｍｇ／飼料（ｋｇ）で存在させ得る。
【００５４】
ＢＨＡ及びＢＨＴの任意の組み合わせは、動物の体重に対し１日当たりに投与される量で本明細書の組成物に含まれ得る。したがって、一実施形態では、動物に１日当たりに投与されるＢＨＡ及びＢＨＴの総量は、約０．１２〜約２１０ｍｇ／日であり得る。他の実施形態では、動物に１日当たりに投与されるＢＨＡ及びＢＨＴの総量は、約０．１３〜約２００ｍｇ／日、又は約０．１４〜約１８０ｍｇ／日、又は約０．１５〜約１６０ｍｇ／日、又は約０．１６〜約１４０ｍｇ／日、又は約０．２〜約１２０ｍｇ／日であり得る。一実施形態では、動物に１日当たりに投与されるＢＨＡ及びＢＨＴの総量は、約１〜約２０ｍｇ／日であり得る。
【００５５】
ＢＨＡ及びＢＨＴの任意の組み合わせは、動物の体重に対し１日当たりに投与される量で本明細書の組成物に含まれ得る。したがって、一実施形態では、動物の体重に対し１日当たりに投与されるＢＨＡ及びＢＨＴの総量は、約０．０４〜約３．６ｍｇ／日／体重（ｋｇ）であり得る。一実施形態では、動物の体重に対し１日当たりに投与されるＢＨＡ及びＢＨＴの総量は、約０．０６〜３ｍｇ／日／体重（ｋｇ）、又は約０．０８〜約２．５ｍｇ／日／体重（ｋｇ）、又は約０．０８〜約２．２５ｍｇ／日／体重（ｋｇ）、又は約０．１〜約２ｍｇ／日／体重（ｋｇ）であり得る。一実施形態では、動物の体重に対し１日当たりに投与されるＢＨＡ及びＢＨＴの総量は、約０．１〜約０．６ｍｇ／日／体重（ｋｇ）であり得る。
【００５６】
一実施形態では、ＢＨＡとＢＨＴとの比率は、約１：１であり得る。他の実施形態では、０：１又は１：０などの任意の比率が使用され得る。
【００５７】
組成物
したがって、本発明の実施形態は、本明細書に記載されるように、コンパニオンアニマルに摂取されることを目的とし、グルコース代謝拮抗物質並びにＢＨＡ及び／又はＢＨＴを含む組成物に関する。組成物は、必要とされる栄養素を供給することを目的とした食品ばかりでなく、ペット用スナック（例えばビスケット）又は他の保健機能食品も含む。必要に応じて、本明細書の組成物は、乾燥組成物（例えばキブル）、半湿潤組成物、湿潤組成物、又はこれらの任意の混合物であってよい。これに代えるか又はこれに加えて、組成物は、グレービー、飲み水、ヨーグルト、粉末、懸濁液、チュー、ペット用スナック（例えばビスケット）又は他の任意の投与形態などの栄養補助食品である。
【００５８】
更に、一実施形態では、組成物は、ペットフードキブルのように栄養のバランスのとれたものであってよい。別の実施形態では、組成物は、栄養補助食品、ペット用スナック、又はペット用の他の投与形態のものなどの栄養的にバランスのとれていないものである。栄養のバランスのとれたペットフード及び栄養補助食品、並びにそれらの製造プロセスは、当該技術分野において周知である。
【００５９】
本明細書で使用される組成物は、必要に応じて１つ以上の更なる成分を含み得る。他の成分は本明細書で使用される組成物に含有させるのに効果的なものではあるが、本発明の目的では任意である。一実施形態では、組成物は、乾燥物基準で、組成物の約１０重量％〜約９０重量％の粗タンパク質、あるいは約２０重量％〜約５０重量％の粗タンパク質、あるいは約２０重量％〜約４０重量％の粗タンパク質、あるいは組成物の約２０重量％〜約３５重量％の粗タンパク質を含み得る。粗タンパク質材料には、大豆、穀物（トウモロコシ、小麦など）、綿の実、及びピーナツなどの植物性タンパク質、又はカゼイン、アルブミン、及び肉タンパク質などの動物性タンパク質が含まれ得る。本明細書で有用な肉タンパク質の非限定的な例としては、牛肉、豚肉、羊肉、鶏肉、魚、及びこれらの混合物からなる群から選択されるタンパク質源が挙げられる。
【００６０】
更に、組成物は、乾燥物基準で、組成物の約５重量％〜約４０重量％の脂肪、又は約１０重量％〜約３５重量％の脂肪を含み得る。
【００６１】
本発明の組成物に関する各実施形態は、炭水化物源を更に含み得る。一実施形態では、組成物は、組成物の約３５重量％〜約５０重量％までの炭水化物源を含み得る。他の実施形態では、組成物は、組成物の約３５重量％〜約４５重量％、又は組成物の約４０重量％〜５０重量％の炭水化物源を含み得る。例示的な炭水化物源としては、米、トウモロコシ、ミロ、ソルガム、大麦及び小麦などの穀類又は穀草類がある。
【００６２】
組成物は、これらに限定されるものではないが、乾燥ホエイ及び他の乳製品副産物、ビートパルプ、セルロース、繊維、魚油、亜麻、ビタミン類、ミネラル類、香味料、酸化防止剤、並びにタウリンなどの他の材料も含み得る。
【００６３】
組成物は、他の任意成分を更に含んでもよい。任意成分としては、プロバイオティック成分（ビフィズス菌及び／又は乳酸菌）及びプレバイオティック（フラクトオリゴ糖類）成分が挙げられる。含まれ得るプロバイオティック成分及びプレバイオティック成分の例並びに量については、例えば米国特許出願公開第２００５／０１５８２９４号に開示されている。含まれ得る他の任意成分としては、オメガ６及びオメガ３脂肪酸、カルニチン、ヘキサメタリン酸塩、グルコサミン、コンドロイチン硫酸、βカロチン、ビタミンＥ、及びルテインなどのカロチノイド、並びに下記表１に示されるような成分がある。
【実施例】
【００６４】
以下の実施例は、本発明の実施形態を例示するために与えられるものであって、本発明の範囲をいかなる意味においても限定することを目的とするものではない。
【００６５】
マンノヘプツロースを含有するアボカド粉末の調製
新鮮なアボカド（ルラ（Lula）種）をフレッシュキング社（Fresh King Incorporated）（フロリダ州、ホームステッド）より入手した。アボカドを手作業で割り、種を取り出して捨てた。残った皮及び果肉を、Ｈｏｂａｒｔ業務用食品加工装置（製品番号１１−１０４１０２３５）で１２と１／４のシーブを使用してすりつぶした。次いで、すりつぶしたアボカドをＥｄｗａｒｄｓ凍結乾燥機（Ｓｕｐｅｒ  Ｍｏｄｕｌｙｏモデル、英国、サセックス州、クローリー）に移した。凍結乾燥機は、最初の２４時間は−２０℃に、次の２４時間は−５℃に、最後の７２時間は５℃に設定した。この粉末を凍結乾燥機から取り出し、Ｓｔｒａｕｂグラインディングミル（モデル４Ｅ、ペンシルベニア州、フィラデルフィア）を使用して粉末にすりつぶした。このアボカド粉末を分析したところ、粉末の約１０．３５重量％のマンノヘプツロースを含有していた。アボカド中のマンノヘプツロースの量は、特定の品種及び熟度の状態によって異なる点は注意を要する。
【００６６】
アボカド抽出物の調製
高濃度のマンノヘプツロースを含むアボカド抽出物を、必要に応じて行われる以下のプロセスに従って調製し、本発明の各実施形態の組成物中に使用する。
【００６７】
丸ごとのアボカド果実（約９００ｋｇ）を用意する。果実を割って種の一部又は全部を取り出し、種を除いた約２２５ｋｇの半分のアボカドを得る。この生のアボカドを粉砕機に入れ、少し攪拌してから水（約３０００ｋｇ）及びＣＥＬＬＵＢＲＩＸ（ノボザイムズＡ／Ｓ社（Novozymes A/S）より市販されるもの）（約１Ｌ）を更に加える。混合物を約６６℃まで加熱しながら更に攪拌する。充填が完了したら、更にＣＥＬＬＵＢＲＩＸ（約１リットル）を加え、全ての混合物をｐＨ約５．５に調整して約１２時間攪拌しながら保持する。温度を更に約８０℃に上昇させて、少なくとも約２時間維持する。次いで、得られた消化された植物混合物を８０℃で濾過して、炭水化物抽出物を濾液として得る。次いで、この炭水化物抽出物を簡単な再循環システム中で８０℃にて真空下で蒸発させて、約１０％〜約２０％の固形分及び約５．５のｐＨを有する炭水化物抽出物を得る。次いで、抽出物をリフラクタンスウインドードライヤー（refractance window dryer）を使用して更に濃縮して、約１００ｋｇの抽出物を結晶又は粉末として得る（アボカドの全果実の開始重量に対して炭水化物抽出物の収率は約１１％。これを分析したところ、マンノヘプツロースの収率は、アボカドの全果実の開始重量に対して約０．２５％〜約４．５％であった）。アボカド中のマンノヘプツロースの量は、果実の特定の品種及び熟度の状態によって異なる点は注意を要する。この抽出物を、本発明の各実施形態の組成物中に使用することができる。
【００６８】
キブル
表１は、以下の成分をおおよその量で含み、押出しを含む当該技術分野において標準的なプロセスを使用して調製し得る、イヌ及び／又はネコに毎日の餌として与え得る２種類のキブル組成物を示す。
【００６９】
【表１】
2014517686.tif 000003
＊アボカドを、マンノヘプツロースの含量が高い他の植物体に置き換えることができる。同様にマンノヘプツロース源を加えることによって、組成物中の同様の量の穀類資源が置き換えられる。
＊＊ビタミン類及びミネラル類としては以下が含まれ得る。すなわち、ビタミンＥ、β−カロチン、ビタミンＡ、アスコルビン酸、パントテン酸カルシウム、ビオチン、ビタミンＢ１２、ビタミンＢ１、ナイアシン、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＤ３、ビタミンＤ２、葉酸、塩化コリン、イノシトール、炭酸カルシウム、リン酸二カルシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、酸化亜鉛、硫酸マンガン、硫酸銅、酸化マンガン、硫酸第一鉄、ヨウ化カリウム、炭酸コバルト。
＊＊＊微量成分としては以下が含まれ得る。すなわち、魚油、亜麻仁、亜麻粉、セルロース、香味料、酸化防止剤、タウリン、酵母、カルニチン、コンドロイチン硫酸、グルコサミン、ルテイン、ローズマリーエキス。
【００７０】
投与
８０頭（ｎ＝８０）のラブラドールレトリバーを年齢、性別、及び同腹子についてランダム化し、以下に開示するように、Ｅｕｋａｎｕｂａ（登録商標）Ｓｅｎｉｏｒ  Ｌａｒｇｅ  Ｂｒｅｅｄと同様の完全かつ栄養のバランスのとれたコントロール食、又はマンノヘプツロース並びにＢＨＡ及びＢＨＴを含む以外はコントロール食と同じである実験食を与えた。イヌを２つの試験群に割り付けた。
【００７１】
試験１：総数３９頭の高齢のラブラドールレトリバーに、０〜約２ｍｇ／イヌの体重（ｋｇ）の濃度のマンノヘプツロース、並びに０ｍｇ／飼料（ｋｇ）のＢＨＡ又は約１２ｍｇ／飼料（ｋｇ）のＢＨＴを提供する栄養のバランスのとれた組成物を与えた。４年間の試験の開始時のイヌ（１２頭の去勢した雄、２７頭の避妊した雌）の平均年齢は６．７歳であり、コホート中の最も若いイヌと最も高齢のイヌの年齢はそれぞれ５．１〜８．２歳の範囲である。栄養のバランスのとれた組成物として、マンノヘプツロース（０ｍｇ／ｋｇ）、ＢＨＡ及びＢＨＴ（０ｍｇ／飼料（ｋｇ））、アボカド抽出物、アボカド粉末、又はアボカド濃縮物を含有しない対照組成物を与えた。試験組成物は、栄養のバランスのとれた対照組成物に、２ｍｇ／イヌの体重（ｋｇ）のマンノヘプツロース及び約１２ｍｇ／飼料（ｋｇ）のＢＨＡ及びＢＨＴが与えられるように、アボカド抽出物、アボカド粉末、又はアボカド濃縮物が配合された組成物であってよい。高齢のイヌには、毎日、７：３０及び１４：３０に一日量を半分ずつ与えた。体重及び身体組成スコア（ＢＣＳ）が２〜４のスコア範囲内に維持するようにイヌに与えた。食物の調整をする場合には、３ヶ月ごとに行うべきである。全てのイヌは、夜間には断食させ、朝食は免疫測定のための全ての採血をするまで与えない。水は制限なく与えた。
【００７２】
試験２：総数４１頭の若いラブラドールレトリバーに、０〜約２ｍｇ／イヌの体重（ｋｇ）の濃度のマンノヘプツロース、並びに０ｍｇ／飼料（ｋｇ）のＢＨＡ又は約２４ｍｇ／飼料（ｋｇ）のＢＨＴを提供する栄養のバランスのとれた組成物を与えた。３６ヶ月の給餌実験の開始時のイヌ（１２頭の去勢した雄、２９頭の避妊した雌）の平均年齢は４．０歳であり、コホート中の最も若いイヌと最も高齢のイヌの年齢はそれぞれ２．０〜６．１歳の範囲である。栄養のバランスのとれた組成物（Ｅｕｋａｎｕｂａ（登録商標）Ｓｅｎｉｏｒ  Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  Ｆｏｒｍｕｌａ）として、マンノヘプツロース（０ｍｇ／ｋｇ）、ＢＨＡ及びＢＨＴ（０ｍｇ／飼料（ｋｇ））、アボカド抽出物、アボカド粉末、又はアボカド濃縮物を含有しない対照組成物を与えた。試験組成物は、栄養のバランスのとれた対照組成物に、２ｍｇ／イヌの体重（ｋｇ）のマンノヘプツロース及び約２４ｍｇ／飼料（ｋｇ）のＢＨＡが与えられるように、アボカド抽出物、アボカド粉末、又はアボカド濃縮物を配合した組成物であってよい。若いイヌには、毎日、７：３０及び１４：３０に一日量を半分ずつ与えた。体重及び身体組成スコア（ＢＣＳ）が２〜４のスコア範囲内に維持するようにイヌに給餌した。食物の調整をする場合には、３ヶ月ごとに行うべきである。しかしながら、全てのイヌは、夜間には断食させ、朝食は免疫測定のための全ての採血をするまで与えない。水は制限なく与えた。
【００７３】
方法
マンノヘプツロースなどのグルコース代謝拮抗物質は、以下のようなペットフード又は栄養補助食品において測定する。
【００７４】
手順（脱イオン水のみを使用）：
約０．１ｇ（飼料／成分）を秤量し、１５ｍＬのプラスチック遠心管に入れる。
その遠心管に１０ｍＬの水を加え、５分間攪拌する。
最大速度（２４４０ｇ）で５分間遠心分離する。
上澄の一部を０．２μｍのナイロン遠心分離膜に分取し、最大速度（１４０００ｇ）で５分間回転させる。試料を注入する準備をする。
１Ｌの水に１０ｍｇの炭水化物を各々溶解させ、１０μｇ／ｍＬの炭水化物標準を調製する。
９００μＬの水に、１００μＬの１０μｇ／ｍＬ溶液を溶解させ、１μｇ／ｍＬの標準炭水化物を調製する。
９９０μＬの水に、１０μＬの１０μｇ／ｍＬ溶液を溶解させ、０．１μｇ／ｍＬの標準炭水化物を調製する。
ＩＣ条件：溶離剤クリーンアップ：Ｉｏｎｐａｃ  ＡＴＣ−３（Ｄｉｏｎｅｘ  Ｐ／Ｎ  ０５９６６１），Ｂｏｒａｔｅｔｒａｐ（Ｄｉｏｎｅｘ  Ｐ／Ｎ  ０４７０７８）。カラム：ＣａｒｂｏＰａｃ  ＰＡ２０（Ｄｉｏｎｅｘ  Ｐ／Ｎ  ０６０１４２），２ｍｍアミノトラッププレカラム（Ｄｉｏｎｅｘ  Ｐ／Ｎ  ０４６１２２）。カラム温度：３０℃
【００７５】
【表２】
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注：カラムを使用する前に、１ＭのＮａＯＨを３０〜６０分流し、９５％の水：５％の０．２ＭのＮａＯＨを流して再生する必要がある場合がある。Ｄｉｏｎｅｘにより推奨される手順に従って、溶離液を調製する。
【００７６】
オートサンプラー
注入用量：１０μフルループ
【００７７】
【表３】
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注：ピーク領域を使用して、全てのピークを定量する。積分された電流波形の一例を図で示す。
【００７８】
参照
１．Ｓｈａｗ，Ｐ．Ｅ．；Ｗｉｌｓｏｎ，Ｃ．Ｗ．；Ｋｎｉｇｈｔ，Ｒ．Ｊ．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．１９８０，２８，３７９〜３８２。
２．Ｄｉｏｎｅｘ  ＣａｒｂｏＰａｃ２０  Ｄｏｃｕｍｅｎｔ  Ｎｏ．０３１８４４−０１。
【００７９】
ＢＨＡ及び／又はＢＨＴ
ＡＯＡＣ承認方法９５４．０２に記載されるように、酸加水分解を使用して粗脂肪を抽出し、ＡＯＡＣ承認方法９８３．１５：油中、脂肪中、及びバターオイル中のフェノール系酸化防止剤によって、以下のように、ＢＨＡ及び／又はＢＨＴを測定する。
【００８０】
約２ｇの、正確に秤量し、粉末化して、十分に混合した試験画分をＭｏｊｏｎｎｉｅｒ脂肪抽出管に量り入れ、２ｍＬのアルコールを添加して、酸を添加した際の固化を防ぎ、全ての粒子を湿潤させるために攪拌する。１０ｍＬのＨＣｌ（２５＋１１）を添加し、十分に混合し、管を７０〜８０℃の水浴中に３０〜４０分セットし、頻繁に攪拌する。室温まで冷却し、液面がＭｏｊｏｎｎｉｅｒ管のくびれた部分に到達するまでアルコ−ルを添加する。
【００８１】
２５ｍＬのエーテルを加え、アルコールで十分に洗浄したガラス、ネオプレン、又は良質のゴムストッパで栓をして、１分間激しく攪拌する。溶媒をこぼさないように、注意深く減圧する。ストッパの背部にこびりついた溶媒及び脂肪を、数ｍＬの再蒸留した石油エーテル（沸点＜６０℃）で洗浄し、抽出管に入れる。
【００８２】
２５ｍＬの再蒸留した石油エーテルを添加し、栓をして１分間激しく攪拌する。液体上部がほぼ透明になるまで立てておくか、６００ｒｐｍで２０分間遠心分離する。漏斗の脚部に綿球がしっかりと充填されたフィルターを通して、できるだけ多くのエーテル−脂肪溶液を注ぎ入れ、数種のガラスビーズを含む１５０ｍＬのビーカーにエーテルを自由に流す。管の注ぎ部を数ｍＬの石油エーテルですすぐ。管に残った液体には、各回１５ｍＬだけエーテルを用い、エーテルの添加後１分間攪拌し再抽出を２回行う。上述したのと同じビーカーに、フィルターを通して透明なエーテル溶液を注ぎ入れ、管の注ぎ部、栓、漏斗、及び漏斗の脚部の縁を数ｍＬの２種のエーテルの混合物（１＋１）で洗浄する。
【００８３】
穏やかな空気流又はＮ２流のもと、蒸気浴でゆっくりと蒸発させる。溶媒を蒸発させた後、１５分間蒸気浴で加熱し続け、次に、室温まで冷却する。
【００８４】
乾燥した脂肪残留物を４つの１０ｍＬ画分のエチルエーテルに再溶解した。エチルエーテルは、１００℃で３０分間前乾燥させデシケータ中で室温まで冷却し直接量りとったガラスビーズをいくらか入れた１００ｍＬビーカーに、小さな綿球を通してろ過した。エーテルを１０ｍＬずつ５回使用して、綿球及び漏斗をすすいだ。蒸気浴でエーテルを蒸発させ、１００℃で９０分間乾燥し、デシケータ中で室温まで冷却して、迅速に秤量する。試薬を使用してブランク試験を行ってこの秤量を修正する。
【００８５】
続いて、上述で抽出された脂肪を以下のＢＨＡ／ＢＨＴ分析に使用する。
Ａ．１回の飼料中のＢＨＡ及び／又はＢＨＴ含有量は、以下のように、ＡＯＡＣ承認方法９８３．１５：油中、脂肪中、及びバターオイル中のフェノール系酸化防止剤によって測定する。
【００８６】
Ｂ．装置：
ａ．勾配溶出液体クロマトグラフィー
ピーク高さを電子的に測定する１０ｍＶレコーダー又は積算器、１０μＬループインジェクションバルプ、及び２８０ｎｍにおける吸光度を測定する検出器を使用。
【００８７】
典型的な作動条件：検出器感度、０．０５ＡＵＦＳ；温度、周囲温度；流速、２．０ｍ／分。
【００８８】
ｂ．ＬＣカラム
Ｃ１８結合球状シリカ充填物、又は同等物を充填。必要であれば、ガードカラムを使用する。
【００８９】
ｃ．ガラス製品
全てのガラス製品はＣＨＣＬ３、アセトン、及びメタノールですすぎ、続いてＮ２で風乾させる。
【００９０】
Ｃ．試薬
ａ．溶媒
アセトニトリル、２−プロパノール、及びヘキサン。ガラス蒸留（Distilled-in-glass）等級。
【００９１】
ｂ．移動相
（１）５％酢酸（Ｈ２Ｏ中）−ＬＣ等級。（２）アセトニトリル−メタノール（１＋１、ｖ／ｖ）−ＬＣ等級。
【００９２】
（１）中３０％の（２）から、１００％の（２）までの直線濃度勾配で、最後の酸化防止剤（ＤＧ）が溶出するまで１０分以上かけてクロマトグラフィーを実施する。試験溶液のみのものについては、１００％の（２）で４ｍＬ／分まで流速を上げて６分以上又は非極性脂質が溶出するまで実施する。試験溶液及び標準溶液については、２ｍＬ／分で、（１）中３０％（ｖ／ｖ）の（２）まで１分以上かけて戻し、ベースライン及び圧力を安定させる（約６分）。いかなる酸化防止剤にも干渉するピークが存在しないことを確認するために、ブランク溶媒勾配（注入なし）でクロマトグラフィーを行う。溶出溶媒（１）から生じるピークを除去又は減少させるため、インレットフィルターを、予めすすいだ固体相Ｃ１８抽出カートリッジに代え、インラインフィルターを使用する。小さな干渉ピークが除去できない場合、標準溶液又は試験溶液のピーク高さ又は勾配干渉を減算する。
【００９３】
ｃ．酸化防止剤：
ＢＨＡ（２−及び３−ＢＨＡ混合物）、ＢＨＴ
【００９４】
ｄ．標準溶液：
２−プロパノール−アセトニトリル（１＋１、ｖ／ｖ）で調製する。（１）標準原液−１ｍｇ／ｍＬ。各酸化防止剤を正確に約５０ｍｇ（０．１ｍｇ単位で）秤量し、５０ｍＬの１つのメスフラスコに移す。溶解させ、規定の容積まで希釈し、混合する。（２）使用標準液−０．０１ｍｇ／ｍＬ。ピペットで１ｍＬの標準原液を１００ｍＬのメスフラスコに分取し、規定の容積まで希釈し、混合した。
【００９５】
ｅ．抽出溶媒
（１）標準ヘキサン
２分間の攪拌後に２層が残るようになるまでアセトニトリルを添加し、約３００ｍＬのヘキサンを分液漏斗中で飽和させる。下層のアセトニトリルを廃棄する。
【００９６】
（２）飽和アセトニトリル
２分間の攪拌後に２層が残るようになるまでヘキサンを添加し、約３００ｍＬのアセトニトリルを分液漏斗中で飽和させる。上層のヘキサン層を除去して廃棄する。
【００９７】
Ｄ．測定：
ａ．抽出。
５０ｍＬビーカーに、０．０１ｇ単位で、正確に約５．５ｇの液体油若しくはバターオイル又は約３．０ｇのラード若しくはショートニング（６０℃の水浴又は炉を使用してまとめて液体化し、回転させ、攪拌して均質化する）を正確に秤量する。２０ｍＬ（ラード又はショートニングにおいては２２．５ｍＬ）の飽和ヘキサンを入れた１２５ｍＬの分液漏斗にできる限りの試験画分をデカントする。試験画分の秤量を測定するために、ビーカーを再秤量する。試験画分とヘキサンを混合するために回転させ、飽和アセトニトリルを５０ｍＬずつ用い３回抽出する。乳化したら、蛇口からの熱湯下で分液漏斗を５〜１０分保持する。２５０ｍＬの分液漏斗に抽出物を回収し、混和した抽出物を２５０ｍＬ又は５００ｍＬの丸底フラスコにゆっくりと流してヘキサン−油液滴が除去されるのを助ける。（注：この時点で、１５０ｍＬのアセトニトリル抽出部を一晩保管し、冷凍してもよい）。
【００９８】
４０℃の水浴でフラッシュエバポレータを使用して、１０分以内で３〜４ｍＬまで蒸発させる。使い捨てピペットを使用して、ガラス栓をした１０ｍＬのメスシリンダーにアセトニトリル−油液滴混合物を移す。少量の不飽和アセトニトリルでフラスコをすすぐ。すすぎ液がフラスコ底部にたまっている場合には、すすぎ液は、５ｍＬ分回収されるまで、ピペットでシリンダーに移す。先端部を通過させてピペットをすすぎ、少量の２−プロパノールでフラスコをすすぎ続け、１０ｍＬ回収されるまですすぎ液をシリンダーに移す。シリンダーの内容物を混合する。
【００９９】
ｂ．クロマトグラフィー
ループインジェクションバルブを使用して、１０μＬの試験抽出物を注入し、試験抽出物用の溶媒勾配プログラムで溶出する、Ｃ（ｂ）。３〜４回又はそれ以上の試験注入毎の前後に、標準ピーク高さ間に５％＞の差が見られた場合、１０μＬの酸化防止剤作用標準溶液（１０μＬ／ｍＬ）を注入し、標準物質を溶媒勾配プログラムで溶出する、Ｃ（ｂ）。測定限界を超えているか、標準の３倍を超えているピークの分析については、試験抽出物を２−プロパノール−アセトニトリル（１＋１）で定量的に希釈し、再注入する。標準物質の保持時間と比較して、ピークを同定する。
【０１００】
試薬ブランク試験については、２５ｍＬ飽和ヘキサンを使用して、続いて、（ａ）「飽和アセトニトリルを５０ｍＬずつ用い３回抽出すること」によって抽出する。１０μＬの試薬ブランク抽出物を注入し、分析用の溶媒勾配プログラムで溶出する。試薬ブランクは、酸化防止剤測定を干渉するいかなるピークも有していてはならない。
【０１０１】
電子的に決定したピーク高さを使用するか、ベースラインに従う指針として、ブランク勾配クロマトグラムを使用して０．１ｍｍまでピーク高さを測定する。酸化防止剤のピーク高さ及び酸化防止剤標準物質のピーク高さ平均を測定する（試験注入前後に複数回注入し、勾配ブランクについて補正する）。
【０１０２】
Ｅ．計算：
以下のように、酸化防止剤の濃度を計算する：
酸化防止剤、μｇ／ｇ＝（Ｒｘ／Ｒｓ）×（Ｃｓ／Ｗｘ）×Ｄ
式中、Ｒｘ及びＲｓは、それぞれ、試験画分及び標準物質のピーク高さであり、Ｃｓは、標準物質の濃度（μｇ／ｍＬ）であり、Ｗｘは、１０ｍＬの非希釈試験画分中の重量（ｇ／ｍＬ）であり、Ｄは溶液が希釈されている場合の希釈係数である。
【０１０３】
本明細書に開示した寸法及び値は、記載された正確な数値に厳密に限定されるものと理解されるべきではない。むしろ、特に断らない限り、そのような寸法のそれぞれは、記載された値及びその値の周辺の機能的に同等の範囲の両方を意味するものとする。例えば、「４０ミリメートル」として開示される寸法は、「約４０ミリメートル」を意味するものである。
【０１０４】
相互参照されるか又は関連する全ての特許又は特許出願を含む、本願に引用される全ての文書を、特に除外すること又は限定することを明言しない限りにおいて、その全容にわたって本願に援用するものである。いずれの文献の引用も、こうした文献が本願で開示又は特許請求される全ての発明に対する先行技術であることを容認するものではなく、また、こうした文献が、単独で、あるいは他の全ての参照文献とのあらゆる組み合わせにおいて、こうした発明のいずれかを参照、教示、示唆又は開示していることを容認するものでもない。更に、本文書において、用語の任意の意味又は定義の範囲が、参考として組み込まれた文書中の同様の用語の任意の意味又は定義と矛盾する場合には、本文書中で用語に割り当てられる意味又は定義に準拠するものとする。
【０１０５】
本発明の特定の実施形態を説明及び記述してきたが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく他の様々な変更及び修正を行えることが当業者には明白であろう。したがって、本発明の範囲内にあるそのような全ての変更及び修正を添付の特許請求の範囲で扱うものとする。
【図１】
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【国際調査報告】
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2014517686.tif 000008
2014517686.tif 000009