(57)【要約】  本発明は、膀胱及び胃腸障害；炎症性疾患；心血管疾患；腎症；緑内障；痙性；癌；骨粗鬆症；代謝障害；肥満；嗜癖、依存、乱用、再発関連障害；精神障害及び神経障害；神経変性障害；自己免疫性肝炎及び脳炎；疼痛；生殖障害及び皮膚炎症性疾患及び線維性疾患からなる群より選択される病的状態又は障害の処置において使用するためのＣＢ１受容体のアンタゴニストに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
膀胱及び胃腸障害；炎症性疾患；心血管疾患；腎症；緑内障；痙性；癌；骨粗鬆症；代謝障害；肥満；嗜癖、依存、乱用及び再発関連障害；精神障害及び神経障害；神経変性障害；自己免疫性肝炎及び脳炎；疼痛；生殖障害及び皮膚炎症性疾患及び線維性疾患からなる群より選択される病的状態又は障害の処置において使用するための、式（Ａ）：
【化２１】
2014515361.tif 000047
（式中：
−−−は、結合が単結合又は２重結合であることを示し、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が、
−Ｈ、
−ハロゲン、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｂｎ−Ｏ−
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、
＝Ｏ、
−ＮＲ５Ｒ６（式中、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、Ｂｎ、又はＰｈである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｒ７（式中、Ｒ７は、アルキルである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｃ２Ｈ４−ＣＯＯＨ、又は
−Ｎ３
で置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、
−Ｈ、
−ＯＨ、
ハロゲン、
Ｃ１−８アルキル、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｃ２−６アルケニル、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、又は
Ｂｎ−Ｏ−
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ３は、Ｃ２０が、
−Ｈ、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルキル、
Ｂｎ、
−ＮＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、又はＢｎである）、
＝ＣＲ１０Ｒ１１（式中、Ｒ１０及びＲ１１は、それぞれ独立して、Ｈ、又はＣ１−７アルキルである）、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ４は、Ｃ１６が、
−Ｈ、
−ＯＨ、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
但し、
Ｃ１６とＣ１７の間の結合が２重結合であるとき、Ｒ２は存在せず、Ｃ１７とＣ２０の間の結合は単結合であり、
Ｃ１７とＣ２０の間の結合が２重結合であるとき、Ｃ２０は、−Ｈ又は−ＯＨで置換され、Ｒ２は存在せず、
Ｃ４とＣ５の間の結合が２重結合であるとき、Ｃ５とＣ６の間の結合は、逆に単結合である）
の化合物、又はその医薬的な塩。
【請求項２】
膀胱及び胃腸障害；炎症性疾患；心血管疾患；腎症；緑内障；痙性；癌；骨粗鬆症；代謝障害；肥満；嗜癖、依存、乱用及び再発関連障害；精神障害及び神経障害；神経変性障害；自己免疫性肝炎及び脳炎；疼痛；及び生殖障害からなる群より選択される病的状態又は障害の処置において使用するための、式（Ｉ）：
【化２２】
2014515361.tif 000048
（式中：
−−−が、結合が単結合又は２重結合であることを示し、
−−−Ｒ１が、Ｃ３が
−Ｈ、
−ハロゲン、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｂｎ−Ｏ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、
＝Ｏ、
−ＮＲ５Ｒ６（式中、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、Ｂｎ、又はＰｈである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｒ７（式中、Ｒ７は、アルキルである）、又は
−Ｏ−ＣＯ−Ｃ２Ｈ４−ＣＯＯＨ
で置換されていることを示し、
−Ｒ２が、Ｃ１７が、
−Ｈ、
−ＯＨ、
ハロゲン、
Ｃ１−８アルキル、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｃ２−６アルケニル、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、又は
Ｂｎ−Ｏ−
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ３が、Ｃ２０が、
−Ｈ、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルキル、
Ｂｎ、
−ＮＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８及びＲ９が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、又はＢｎである）、
＝ＣＲ１０Ｒ１１（式中、Ｒ１０及びＲ１１は、それぞれ独立して、Ｈ、又はＣ１−７アルキルである）、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ４が、Ｃ１６が
−Ｈ、
−ＯＨ、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
但し、
Ｃ１６とＣ１７の間の結合が２重結合であるとき、Ｒ２が存在せず、Ｃ１７とＣ２０の間の結合が単結合であり、
Ｃ１７とＣ２０の間の結合が２重結合であるとき、Ｃ２０は、−Ｈ又は−ＯＨで置換され、Ｒ２は存在しない）
の化合物、又はその医薬的な塩である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
化合物が、プレグネノロン又はその医薬的な塩である、請求項１又は２記載の化合物。
【請求項４】
−−−Ｒ１が、Ｃ３が、
−Ｈ、−ハロゲン、−ＯＨ、Ｃ２−８アルコキシ、Ｂｎ−Ｏ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、
＝Ｏ、
−ＮＲ５Ｒ６（式中、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、Ｂｎ、又はＰｈである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｒ７（式中、Ｒ７は、アルキルである）、又は
−Ｏ−ＣＯ−Ｃ２Ｈ４−ＣＯＯＨ（式中、−Ｒ２、−−−Ｒ３、−−−Ｒ４は、請求項２で定義された通りである）
で置換されていることを示す、請求項１又は２記載の化合物。
【請求項５】
対象への投与後、活性なプレグネノロン下流誘導体に実質的に変換されない、請求項１、２、又は４のいずれか１項記載の化合物。
【請求項６】
Ｃ１６とＣ１７の間の結合、及びＣ１７とＣ２０の間の結合が単結合である、請求項１、２、４、又は５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７】
式（Ｂ）
【化２３】
2014515361.tif 000049
（式中、
−−−Ｒ１が、Ｃ３が、−ＯＨ又は＝Ｏで置換されていることを示し、
−Ｒ２が、Ｃ１７が、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−８アルキル、ハロゲン、又はＢｎで置換されていることを示し、
−−−Ｒ３が、Ｃ２０が、−ＯＨ、又は＝Ｏで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４が、Ｃ１６が、−Ｈで置換されていることを示す）
を有する、請求項６記載の化合物。
【請求項８】
式（Ｃ）：
【化２４】
2014515361.tif 000050
（式中、
−−−Ｒ１が、Ｃ３が、＝Ｏ、又は−ＯＨで置換されていることを示し、
−Ｒ２が、Ｃ１７が、−Ｈで置換されていることを示し、
−−−Ｒ３が、Ｃ２０が、＝Ｏで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４が、Ｃ１６が、−Ｈで置換されていることを示す）
を有する、請求項６記載の化合物。
【請求項９】
−−−Ｒ１が、Ｃ３が、
−Ｈ、−ハロゲン、Ｃ１−８アルコキシ、Ｂｎ−Ｏ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、
＝Ｏ、
−ＮＲ５Ｒ６（式中、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、Ｂｎ、又はＰｈである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｒ７（式中、Ｒ７は、アルキルである）、又は
−Ｏ−ＣＯ−Ｃ２Ｈ４−ＣＯＯＨ
で置換されていることを示し、
−Ｒ２が、Ｃ１７が、−Ｈで置換されていることを示し、
−−−Ｒ３が、Ｃ２０が、＝Ｏで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４が、Ｃ１６が、−Ｈで置換されていることを示す、
請求項６記載の化合物。
【請求項１０】
式（Ｄ）：
【化２５】
2014515361.tif 000051
（式中、
−−−Ｒ１が、Ｃ３が、
ハロゲン、Ｂｎ−Ｏ、又は−Ｎ３
で置換されていることを示し、
−Ｒ２が、Ｃ１７が、−Ｈで置換されていることを示し、
−−−Ｒ３が、Ｃ２０が、＝Ｏで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４が、Ｃ１６が、−Ｈで置換されていることを示す）
を有する、請求項６記載の化合物。
【請求項１１】
Ｃ１６とＣ１７の間の結合、及びＣ１７とＣ２０の間の結合が単結合であり、
−−−Ｒ３が、Ｃ２０が、＝Ｏで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４が、Ｃ１６が、−Ｈで置換されていることを示し、
−−−Ｒ１が、Ｃ３が、−Ｆで置換されていることを示し、
−Ｒ２が、Ｃ１７が、−Ｈ、又は−ＣＨ３で置換されていることを示すか、又は
−−−Ｒ１が、Ｃ３が、−ＯＨで置換されていることを示し、
−Ｒ２が、Ｃ１７が、−ＣＨ３で置換されていることを示す、
請求項１、２、４、又は５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１２】
式（Ｄ）：
【化２６】
2014515361.tif 000052
（式中、
−−−Ｒ１が、Ｃ３が、Ｃ１−８アルコキシ、ハロゲン又はＢｎ−Ｏ−、又はＮ３で置換されていることを示し、
−Ｒ２が、Ｃ１７が、Ｂｎ、−ＣＨ３、又はＣ２−６アルケニルで置換されていることを示し、
−−−Ｒ３が、Ｃ２０が、＝Ｏで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４が、Ｃ１６が、−Ｈで置換されていることを示す）
を有する、請求項６記載の化合物。
【請求項１３】
−−−Ｒ１が、Ｃ３が−ＯＨで置換されていることを示し、
−Ｒ２が、Ｃ１７が、
−ＯＨ、ハロゲン、Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、Ｃ２−６アルケニル；
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−；
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−；又は
Ｂｎ−Ｏ−
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ３が、Ｃ２０が、＝Ｏで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４が、Ｃ１６が−Ｈで置換されていることを示す、
請求項６記載の化合物。
【請求項１４】
式（Ｄ）：
【化２７】
2014515361.tif 000053
（式中、
−Ｒ２が、Ｃ１７が、Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、又はＢｎ−で置換されていることを示す）
を有する、請求項１３記載の化合物。
【請求項１５】
−−−Ｒ１が、Ｃ３が、−ＯＨで置換されていることを示し、
−Ｒ２が、Ｃ１７が、−Ｈで置換されていることを示し、
−−−Ｒ３が、Ｃ２０が、
−Ｈ、−ＯＨ及びＣ１−８アルキル、Ｂｎ、
−ＮＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、又はＢｎである）、
＝ＣＲ１０Ｒ１１（式中、Ｒ１０及びＲ１１は、それぞれ独立して、Ｈ、又はＣ１−７アルキルである）、又は
＝Ｏで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４が、Ｃ１６が−Ｈで置換されていることを示す）
を有する、請求項６記載の化合物。
【請求項１６】
式（Ｄ）：
【化２８】
2014515361.tif 000054
（式中
−−−Ｒ３が、Ｃ２０が、−Ｈ、−ＯＨ、又は−ＮＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、Ｈ、又はＣ１−８アルキルである）で置換されているを示す）
を有する、請求項１５記載の化合物。
【請求項１７】
−−−Ｒ１が、Ｃ３が、−ＯＨで置換されていることを示し、
−Ｒ２が、Ｃ１７が、−Ｈで置換されていることを示し、
−−−Ｒ３が、Ｃ２０が、−ＯＨ、又は−Ｈで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４が、Ｃ１６が、−ＯＨ、又は＝Ｏで置換されていることを示す、
請求項６記載の化合物。
【請求項１８】
Ｃ１６とＣ１７の間の結合が、２重結合であり、Ｃ１７とＣ２０の間の結合が単結合であり、
−−−Ｒ１が、Ｃ３が、−Ｈ、−ＯＨ、又は＝Ｏで置換されていることを示し、
−−−Ｒ３が、Ｃ２０が、−Ｈ、−ＯＨ、又は＝Ｏで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４が、Ｃ１６が、−Ｈで置換されていることを示す、
請求項１、２、４、又は５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１９】
Ｃ３とＲ１の間の結合、及びＣ３とＣ４の間の結合が単結合であるとき、Ｒ１がβ位にある、請求項１、２、又は４〜１８のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２０】
胃腸障害の処置において使用するための、請求項１〜１９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２１】
肥満又は代謝障害の処置において使用するための、請求項１〜１９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２２】
嗜癖、依存、乱用及び再発関連障害の処置において使用するための、請求項１〜１９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２３】
大麻嗜癖、依存、乱用、中毒、及び再発関連障害の処置において使用するための、請求項２２記載の化合物。
【請求項２４】
神経変性障害及び精神障害の処置において使用するための、請求項１〜１９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２５】
皮膚炎症性疾患及び線維性疾患の処置において使用するための、請求項１〜１９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２６】
式（ＩＩ）
【化２９】
2014515361.tif 000055
（式中、
−−−は、結合が単結合又は２重結合であることを示し、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が−ＯＨで置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、
Ｃ３−８アルキル、
Ｃ２−８アルコキシ、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、又は
Ｂｎ−Ｏ−
で置換されていることを示す）、又は
（式中、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｂｎ−Ｏ、又は
ハロゲンで置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、
Ｃ１−８アルキル、
Ｃ２−６アルケニル、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、又はＢｎ−Ｏ−で置換されていることを示す）
の化合物、又はその医薬的な塩。
【請求項２７】
化合物が、３β−フルオロ−１７α−メチルプレグネノロン、１７α−ベンジル−３β−フルオロプレグネノロン、１７α−ベンジル−３β−ベンジルオキシプレグネノロン、３β−ベンジルオキシ−１７α−メチルプレグネノロン、１７α−ベンジルプレグネノロン、３β−メトキシ−１７α−メチルプレグネノロン、１７α−アリル−３β−メトキシプレグネノロン、又は１７α−ベンジル−３β−メトキシプレグネノロンである、請求項２６記載の化合物。
【請求項２８】
請求項２６又は２７記載の化合物、又はその医薬的な塩、及び医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項２９】
処置方法において使用するための、請求項２６〜２８のいずれか１項記載の化合物。
【請求項３０】
膀胱及び胃腸障害；炎症性疾患；心血管疾患；腎症；緑内障；痙性；癌；骨粗鬆症；代謝障害；肥満；嗜癖、依存、乱用及び再発関連障害；精神障害及び神経障害；神経変性障害；自己免疫性肝炎；脳炎；疼痛；及び生殖障害及び皮膚炎症性疾患及び線維性疾患からなる群より選択される病的状態又は障害の処置において使用するための、請求項２６〜２９のいずれか１項記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野：
本発明は、膀胱及び胃腸障害；炎症性疾患；心血管疾患；腎症；緑内障；痙性；癌；骨粗鬆症；代謝障害；肥満；嗜癖、依存、乱用、再発及び関連障害；精神障害及び神経障害；神経変性障害；自己免疫性肝炎及び脳炎；疼痛；生殖障害及び皮膚炎症性疾患及び線維性疾患からなる群より選択される病的状態又は障害の処置において使用するための化合物に関する。
【０００２】
発明の背景：
ＣＢ１受容体は、身体の主要なＧ共役型７回膜貫通型受容体（ＧＣＰＲ）の１つである。これは、脳の主なＧＣＰＲであり、また脂肪組織、肝臓、膵臓、筋肉、腎臓、膀胱、及び骨を非限定的に含む、ほとんどの体組織によっても発現されている。
【０００３】
ＣＢ１は、アナンダミド及び２−アラキドニルグリセロール（２−ＡＧ）を非限定的に含む、エンドカンナビノイドと命名される内因性リガンドにより活性化される。
【０００４】
内因性リガンドによる活性化を通じて、ＣＢ１は、多数の生理機能及び病理学的状態の制御に関与している。ＣＢ１受容体の活性化が関与する機能の非包括的リストは、エネルギー代謝；炎症及び免疫；線維症、骨恒常性；種々の器官、行動における脂質貯蔵及び蓄積；乱用薬物の自己投与、記憶、ストレス関連順応、正の強化因子により仲介される行動；胃腸運動能及び他の内蔵収縮器官の運動能；細胞増殖及び分化；疼痛制御；生殖及び妊孕性を含む（Marsicano et al., J Endocrinol Invest.,2006;29(3 Suppl):27-46 Review ; Pagotto U et al., Int J Obes. 2006, Suppl 1:S39-43 Review ; Pagotto U et al., Endocr Rev., 2006 (1):73-100. Review ; Bifulco M, et al. Mol Pharmacol. 2007, 71(6):1445-56 Review）。
【０００５】
この広範な生理的役割のため、ＣＢ１受容体の過剰活性化は、多数の病状、疾患、及び病態生理学的過程に関与している。ＣＢ１受容体の活性化が関与する疾患及び疾患関連過程の例の非包括的リストは、膀胱及び胃腸障害；炎症性疾患；心血管疾患；腎症；緑内障；痙性；癌；骨粗鬆症；代謝障害；肥満；嗜癖、依存、乱用、及び再発関連障害；精神障害及び神経障害；神経変性障害；自己免疫性肝炎及び脳炎；疼痛；生殖障害及び皮膚炎症性疾患及び線維性疾患を含む（Di Marzo et al., Nat. Rev., Drug Discov., 2004, 3 : 771-784）。
【０００６】
ＣＢ１受容体はΔ９テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）の主な標的であり、この活性成分は大麻から得られる乱用薬物に含有される。ＴＨＣがその耽溺効果ならびに行動的及び生理的かく乱効果を奏するのは、ＣＢ１活性化を介してである。加えて、ＣＢ１受容体はまた、ニコチン、オピオイド、精神覚醒薬、及びアルコールを非限定的に含む、全ての他の既知の乱用薬物の効果の仲介に関与する。ＣＢ１受容体はまた、食物、性交渉の相手、又は賭博を非限定的に含む、嗜癖を誘導することができる非薬物性強化刺激の欲求性質の仲介に関与する。乱用薬物、及び嗜癖を誘導することができる他の強化刺激についてのＣＢ１の一般的効果は、ＣＢ１受容体の活性化がドーパミン作動性伝達の活性に及ぼす興奮性コントロールにより、説明される。従って、ドーパミン作動性伝達の活性化は、乱用薬物及び非薬物性の正の強化因子の欲求特性及び依存傾向の仲介に関与する。このため、ＣＢ１活性の遮断は、嗜癖、薬物乱用、薬物依存、及び再発の処置方法として提案されてきた（Scherma M et al., CNS Neurol Disord Drug Targets. 2008 ;7(5):468-81. Review ; Wiskerke J et al., Addict Biol. 2008;13(2):225-38. Review ; Moreira FA, et al., Addict Biol. 2008;13(2):196-212.. Review ; Lopez-Moreno JA et al, Addict. Biol. 2008;13(2):160-87. Review ; Janero DR et al., Curr Psychiatry Rep., 2007; 9(5):365-73. Review ; Laviolette SR et al., Cell Mol Life Sci., 2006;63(14):1597-613. Review ; Maldonado R, et al. Trends Neurosci., 2006; 29(4):225-32. Review ; ColomboG et al., Pharmacol Biochem Behav., 2005; 81(2):369-80. Review ; Gardner EL. Pharmacol Biochem Behav., 2005; 81(2):263-84. Review）。
【０００７】
ＣＢ１受容体の阻害は、体重を減らし、心血管代謝のリスクパラメーターの改善を増すことが示されている。従って、ＣＢ１受容体アンタゴニストは、過体重を予防的に防ぎ、食物摂取の制御において助けとなり、ダイエット補助薬として助けとなり、肥満を処置し、しばしば肥満と関連する代謝障害、例えば、糖尿病及び脂質異常症を改善することが示された（Bermudez-Silva FJ et al., 2010 ; Lee HK et al. 2009; Xie S et al., 2007）。
【０００８】
中心的なＣＢ１受容体シグナル伝達は、モノアミン作動性神経伝達と機能的に結び付けられる。これが、ＣＢ１アンタゴニストを、任意の中心的モノアミン作動系における妨害によりもたらされる精神病、情動及び認知障害の処置の候補となす。さらに、ＣＢ１アゴニストは、記憶の機能障害を導く。それ故、ＣＢ１アンタゴニストは、記憶の強化に良好な候補剤である（Reibaud M et al., Eur. J. Pharmacol, 1999; 379 (l):Rl-2, and Terranova JP et al, Psychopharmacology., 1996;126(2): 165-72を参照）。ＣＢ１活性化はまた、上昇した脳のエンドカンナビノイドと関連するパーキンソン病の様な運動における機能障害及び運動障害も導き得る。それ故、ＣＢ１アンタゴニズムは、パーキンソン病の優れた候補処置であろう（Di Marzo V et al, FASEB J., 2000; 14(10): 1432-8を参照）。それ故、ＣＢ１アンタゴニストは、種々の精神医学的及び神経学的疾患の処置の候補である。
【０００９】
ＣＢ１受容体はまた、Pryce G等（Br J Pharmacol, 2007, 150 (4): 519-525.）及びBaker D等（FASEB J., 2001, 15: 300-302）により開示される痙性に関与する。
【００１０】
Chien FY等は、ＷＩＮ５５２１２−２である、ＣＢ（１）受容体でのカンナビノイドアゴニストが、正常及び緑内障モンキーアイの両方で眼圧を減少させることを示した。
【００１１】
ＣＢ１受容体は、いくつかの末梢組織、例えば、胃腸管中の神経終末において発現し、主に、進行中の収縮性伝達物質放出を阻害することにより、胃腸の運動性を下げる。従って、ＣＢ１受容体のアンタゴニストは、低下した腸の運動性からなる病理学的状態、例えば、腹膜炎、手術、又は他の有害状況により引き起こされる麻痺性イレウスにおける使用を見出すことができた（Mascolo N et al, FASEB J., 2002 Dec; 16(14): 1973-5）。
【００１２】
又、胃腸疾患について、ＣＢ１受容体はまた、肝臓疾患、特に、脂肪肝、脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、及び肝硬変に関与することも示されている。ＣＢ１活性化は、２重のメカニズムにより、これらの疾患において役割を果たす：１．肝臓での脂肪の蓄積を促進すること；２．炎症性因子、例えば、ＴＮＦαの放出を促進すること。ＣＢ１阻害剤は、これらの病状において、脂肪蓄積及びＴＨＦα放出の両方を減少させるので有益である。３．この場合は、例えば、１．Mallat A and Lotersztajn S. Diabetes and Metabolis 34(2008) 680-684; ２．Tam J et al., HEPATOLOGY 2011;53:346-355; ３．Soren V. Siegmund SV and Schwabe RF Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 294: G357-G362, 2008; ４．DeLeve DL et al., The American Journal of Pathology, 173, No. 4, 2008; ５．Roche M et al., Immunology, 2008 125, 263-271; ６．Murumalla R et al., Journal of Inflammation 2011, 8:33; ７．Croci T, et al., British Journal of Pharmacology (2003) 140, 115-122を参照。
【００１３】
ＣＢ１受容体はまた、骨を神経支配するノルアドレナリン作動性末端において発現している。ＣＢ１活性化は、ノルアドレナリン放出を阻害して、次には、閉経期に関連する骨粗鬆症を非限定的に含む、骨量を減少させる破骨細胞の活性を増大させることができる。この理由のため、ＣＢ１アンタゴニストはまた、骨粗鬆症の処置として提案されきた（Idris AI Curr Neuropharmacol. 2010 8(3):243-53）。
【００１４】
ＣＢ１受容体はまた、血小板及びマクロファージ由来エンドカンナビノイドの降圧効果を仲介する血管内皮細胞において役割を果たす。ＣＢ１アンタゴニストは、エンドトキシンにより誘導される低血圧又は硬化低血圧（両方とも、上昇したレベルのエンドカンナビノイドにより特徴付けられる）の阻害において有用な剤であろう（Batkai S et al, Nat Med., 2001 Jul;7(7): 827-32を参照）。ＣＢ１はまた、血管新生を刺激し、結果として、ＣＢ１受容体の遮断は、例えば、腫瘍成長においてみられるような、血管新生の増加が病態生理学的役割を果たす疾患の処置のために、提案されてきた。
【００１５】
ＣＢ１受容体はまた、心筋症、例えば、硬化心筋症、ならびに抗悪性腫瘍薬誘発性の心筋症、収縮不全、梗塞、及びアテローム性動脈硬化症を含む心血管系の病状にも関与する。ＣＢ１受容体は、血圧、炎症、脂質蓄積、血管新生、及び心収縮性のコントロールに関与する複数のメカニズムでこれらの疾患において役割を果たす。例えば、１．Batkai S et al., Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2007, 293: H1689-H1695; ２．Seyed Ali Gaskari SA et al., British Journal of Pharmacology (2005) 146, 315-323; ３．Batkai S and Pacher P.  Pharmacol Res. 2009, 60: 99-106； ４．Nissen SE et al., JAMA. 2008;299(13):1547-1560； ５．Mukhopadhyay P et al., J Am Coll Cardiol. 2007, 50: 528-536を参照。
【００１６】
ＣＢ１受容体はまた、炎症性疾患、特に、皮膚炎症、ＵＶにより誘導される皮膚炎症及び癌、皮膚線維症、ならびに創傷治癒を非限定的に含む皮膚疾患に関与することも示された。このような関係において、ＣＢ１受容体の阻害又は抑制は、これら全ての病理学的状態について有益であることが示された。例えば、１．Marquart S et al., ARTHRITIS & RHEUMATISM, 2010, 62:3467-3476; ２．Zheng D et al., Cancer Res. 2008 May 15; 68(10): 3992-3998を参照。
【００１７】
さらに、エンドカンナビノイドシグナル伝達は、対応する健常な組織と比較していくつかのヒト悪性腫瘍、並びに高度の侵襲性を伴うヒト癌細胞において見出される（Sarnataro D et al., 2006 ; Gazzerro P et al., 2010 ; Santoro A, et al. 2009）。
【００１８】
エンドカンナビノイドシグナル伝達はまた、受精、着床前胚、及び精子形成において必要とされ、それ故、ヒトにおける不妊及びリプロダクティブ・ヘルスの改善に関連する標的である。
【００１９】
この理由のため、ＣＢ１受容体の阻害は、これら全ての病理学的状態及び関連疾患の治療として提案されてきた。
【００２０】
内因性リガンドが結合して受容体を活性化する部位である、オルソステリック結合部位の阻害を介したＣＢ１の活性の遮断を目的とする方法が、開発され、臨床試験のため提起されてきた。これらの化合物の１つであるリモナバンは、ブランド名アコンプリアで市場にある。アコンプリアは試験され、代謝障害、糖尿病及び異常脂質血症、肥満の処置について有益な効果、及びまた、ニコチン嗜癖についての１つの研究において、有益な効果を明らかにした。
【００２１】
不運なことに、利用可能なオルソステリックアンタゴニスト、例えば、リモナバンはまた、ＣＢ１受容体のインバースアゴニストとして作用する（すなわち、それらは、ＣＢ１の活性化ばかりでなく、内因性リガンド不存下での受容体の基本的な活性も阻害する）。このインバースアゴニスト作用及び受容体活性の完全阻害のため、オルソステリックＣＢ１アンタゴニストの投与に基づく利用可能な方法はまた、一連の重篤な副作用を有する。これらの副作用のため、アコンプリアの商業化は、一時的に停止され、ＣＢ１のオルソステリック部位を阻害する他の方法の開発がストップした。
【００２２】
ＣＢ１受容体のオルソステリックアンタゴニストが良好な治療有効性を示した病状の多くには、新規の効率的な治療法の必要が依然としてある。結果として、オルソステリック結合に干渉することなく、ＣＢ１受容体を阻害することを可能にすることができ、オルソステリックアンタゴニストより少ない副作用を有する方法を開発する必要がある。
【００２３】
故に、オルソステリック結合を緩和することなく、又は副作用を誘導することなく、ＣＢ１受容体の阻害を可能にするリガンドの開発の必要が依然として存在する。
【００２４】
発明の概要：
本発明は、膀胱及び胃腸障害；炎症性疾患；心血管疾患；腎症；緑内障；痙性；癌；骨粗鬆症；代謝障害；肥満；嗜癖、依存、乱用、及び再発関連障害；精神障害及び神経障害；神経変性障害；自己免疫性肝炎及び脳炎；疼痛；生殖障害、及び皮膚炎症性疾患及び線維性疾患からなる群より選択される病的状態又は障害の処置において使用するための、式（Ａ）
【化１】
2014515361.tif 000002
（式中：
−−−は、結合が単結合又は２重結合であることを示し、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が、
−Ｈ、
−ハロゲン、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｂｎ−Ｏ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、
＝Ｏ、
−ＮＲ５Ｒ６（式中、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、Ｂｎ、又はＰｈである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｒ７（式中、Ｒ７は、アルキルである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｃ２Ｈ４−ＣＯＯＨ、又は
−Ｎ３
で置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、
−Ｈ、
−ＯＨ、
ハロゲン、
Ｃ１−８アルキル、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｃ２−６アルケニル、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、又は
Ｂｎ−Ｏ−
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ３は、Ｃ２０が、
−Ｈ、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルキル、
Ｂｎ、
−ＮＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、又はＢｎである）、
＝ＣＲ１０Ｒ１１（式中、Ｒ１０及びＲ１１は、それぞれ独立して、Ｈ、又はＣ１−７アルキルである）、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ４は、Ｃ１６が、
−Ｈ、
−ＯＨ、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
但し、
Ｃ１６とＣ１７の間の結合が２重結合であるとき、Ｒ２は存在せず、Ｃ１７とＣ２０の間の結合は単結合であり、
Ｃ１７とＣ２０の間の結合が２重結合であるとき、Ｃ２０は、−Ｈ又は−ＯＨで置換され、Ｒ２は存在せず、
Ｃ４とＣ５の間の結合が２重結合であるとき、Ｃ５とＣ６の間の結合は反対に単結合である）
の化合物、又はその医薬的な塩に関する。
【００２５】
本発明はまた、式（ＩＩ）
【化２】
2014515361.tif 000003
（式中：
−−−は、結合が単結合又は２重結合であることを示し、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が、−ＯＨで置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、
Ｃ３−８アルキル、
Ｃ２−８アルコキシ、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、又は
Ｂｎ−Ｏ−
で置換されていることを示す）、又は
（式中、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｂｎ−Ｏ、又は
ハロゲン
で置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、
Ｃ１−８アルキル、
Ｃ２−６アルケニル、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、又は
Ｂｎ−Ｏ−
で置換されていることを示す）
の化合物、又はその医薬的な塩に関する。
【００２６】
発明の詳細な説明
定義
「アゴニスト」は、別の化合物又は受容体部位の活性を増強させる化合物に言及する。
【００２７】
用語「アンタゴニスト」及び「阻害剤」は、受容体部位での別の化合物の活性を弱めるか又は妨げる化合物に言及し、より一般的には、受容体の活性化及び／又は活性を弱めるか又は妨げる化合物に言及する。
【００２８】
「処置又は処置すること」は、治療的処置及び予防又は防止手段（ここで、対象は、標的の病的状態又は障害を妨げるか又は遅延させることである）の両方に言及する。処置を必要とするものは、障害を既に有するもの、並びに障害を有する傾向のあるもの、又は障害が妨げられるべきものを含む。故に、本明細書において処置されるべき対象は、障害を有すると診断され得るか、又は障害に罹りやすいか若しくは感受性があり得る。
【００２９】
本明細書において用いられる用語「対象」は、哺乳動物、例えば、げっ歯類、ネコ、イヌ、及び霊長類を示す。好ましくは、本発明による対象は、ヒトである。
【００３０】
「治療上有効量」は、（例えば）対象に対して治療又は予防上の利益を授けることが必要である、活性剤の最小量に向けられている。例えば、哺乳動物に対する「治療上有効量」は、障害に関連する病的症状、疾患の進行、又は生理的状態の改善、又は障害に屈服することに対する抵抗を誘導するか、改善するか、又はそうでなければ引き起こす量である。
【００３１】
本明細書において用いられる用語「癌」は、無制御の細胞成長又は死により典型的に特徴付けられる対象の生理的状態に言及するか、又は述べる。癌の例は、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病又はリンパ性悪性疾患を非限定的に含む。かかる癌のより具体的な例は、扁平細胞癌（例えば、扁平上皮細胞癌）、小細胞性肺癌、非小細胞性肺癌、肺の腺癌及び肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸癌を含む胃部の癌又は胃癌、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頸部癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、大腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌腫、腎臓癌又は腎癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝臓癌、肛門癌、陰茎癌、並びに頭部及び頸部癌を含む。
【００３２】
本明細書において用いられる用語「嗜癖及び依存」は、薬理化合物、食物、性交渉の相手、賭博、危険な行動を非限定的に含む、強化刺激に対する行動変化に言及する。この行動変化は、次の特徴：１．個人が上述の刺激の消費、摂取、又は上述の刺激との接触を抑えられず、結果として、より多量の刺激を消費して、長期間これらの行動をやめることを当初目的とした試みが不成功に終わったこと；２．対象の主な活動となり、そして他の活動を無視することと関連し得る上述の刺激を得るか、消費するか、摂取するか、又は上述の刺激と接触する強力な動機；３．強化刺激の消費の停止又は強化刺激の不存下での、身体的又は心理的不快感の出現の１つ又は全てにより特徴付けられる。
【００３３】
本明細書において用いられる用語「乱用」は、個々の生物の健全性が、薬理化合物、食物、性交渉の相手、賭博を非限定的に含む、強化刺激の消費、摂取、又は強化刺激との接触の結果として、永久的又は一時的に損なわれた生理的状態に言及する。これらの損傷は、心血管系の合併症、呼吸障害、肝臓疾患、感染症、外傷を非限定的に含む。身体的な健全性のこれらの損傷は、上述の嗜癖及び依存を特徴とする行動の兆候と関連し得るか、又は関連し得ない。
【００３４】
本明細書において用いられる用語「再発」は、薬理化合物、食物、性交渉の相手、賭博を非限定的に含む強化刺激の消費、摂取、又は強化刺激との接触を抑えた継続的な期間の後、嗜癖、依存、又は乱用の復元に言及する。
【００３５】
本明細書において用いられる用語「代謝障害」は、エネルギー力学、又はより一般的には生物の構造的もしくは機能的健全性を保証するのに必要である要素として身体により使用される化学物質の正常レベルが変化している生理的状態に言及する。これらの化学物質は、糖質、脂質、アミノ酸、及び電解物を非限定的に含む。一般的に代謝障害から生じる病状は、糖尿病及び脂質異常症を非限定的に含む。代謝障害はまた、胃腸疾患及び心血管疾患、例えば、アテローム性動脈硬化症、ＮＡＳＨ、及び肝硬変を促進し得る。代謝障害は、肥満に関連し得るか、又は特発性性質であり得る。
【００３６】
「疼痛」は、特殊神経終末の刺激から生じる、不快感、苦悩、又は激しい苦痛のおおよそ局在性の感覚を意味する。電撃痛、幻想痛、刺痛、急性疼痛、炎症性疼痛、神経障害性疼痛、複合性局所疼痛、神経痛、神経障害等を非限定的に含む、多くの種類の疼痛が存在する（Dorland's Illustrated Medical Dictionary, 28th Edition, W. B. Saunders Company, Philadelphia, Pa.）。疼痛処置のゴールは、処置対象により認知される疼痛の重症度の程度を低減することである。
【００３７】
皮膚炎症性疾患及び皮膚線維性疾患は、皮膚の変化、皮膚癌及び／又は創傷治癒過程の中断を生じる、特発性又はＵＶを含む外部物質により誘導される皮膚の病状に言及する。
【００３８】
骨粗鬆症、神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病、統合失調症、気分障害、膀胱及び胃腸障害；炎症性疾患；心血管疾患；アテローム性動脈硬化症、脂肪肝、ＮＡＳＨ、及び肝硬変；腎症；緑内障；痙性；自己免疫性肝炎及び脳炎；生殖障害を非限定的に含む、本明細書において用いられる病状の他の指定は、医薬の任意のマニュアルにおいて定義されるそれらの医療の開始範囲内で用いられる。
【００３９】
表現「Ｃｉは、Ｘで置換されている」は、化学式のｉ位の炭素が、原子、例えば、Ｈもしくはハロゲン、又は官能基でありうる置換基Ｘを有することを意味する。
【００４０】
「アルキル」は、もっぱら炭素及び水素原子からなる一価の直鎖又は分岐飽和炭化水素部分を意味する。Ｃ１−８アルキルは、１〜８個の炭素原子を有する直鎖又は分岐アルキルを意味する。
【００４１】
「アルコキシ」は、式−ＯＲ（式中、Ｒは、本明細書で定義されるアルキル部分である）の部分を意味する。
【００４２】
用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素原子に言及する。
【００４３】
「アミノ」は、式−ＮＲＲ'（式中、Ｒ及びＲ'は、それぞれ独立して、水素、又は本明細書で定義されるアルキルである）の部分を意味する。
【００４４】
略語Ｂｎは、ベンジル基に言及する。
【００４５】
略語Ｐｈは、フェニル基に言及する。
【００４６】
分子面上の置換基は、実線
【化３】
2014515361.tif 000004
として示され、βとして記載され；面の下のものは、破線
【化４】
2014515361.tif 000005
により示され、αとして記載される。
【００４７】
「場合により」は、その後記載される現象又は事情が、必要であるが、生じなくてもよいこと、及び記載が、現象又は事情が生じる場合、及びそれが生じない場合を含むことを意味する。
【００４８】
ＣＢ１受容体の阻害
本発明は、膀胱及び胃腸障害；炎症性疾患；心血管疾患；腎症；緑内障；痙性；癌；骨粗鬆症；代謝障害；肥満；嗜癖、依存、乱用及び再発関連障害；精神障害及び神経障害；神経変性障害；自己免疫性肝炎及び脳炎；疼痛；生殖障害及び皮膚炎症性疾患及び線維性疾患からなる群より選択される病的状態又は障害の処置において使用するための、式（Ａ）：
【化５】
2014515361.tif 000006
（式中：
−−−は、結合が単結合又は２重結合であることを示し、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が
−Ｈ、
−ハロゲン、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｂｎ−Ｏ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、
＝Ｏ、
−ＮＲ５Ｒ６（式中、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、Ｂｎ、又はＰｈである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｒ７（式中、Ｒ７は、アルキルである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｃ２Ｈ４−ＣＯＯＨ、又は
−Ｎ３
で置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、
−Ｈ、
−ＯＨ、
ハロゲン、
Ｃ１−８アルキル、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｃ２−６アルケニル、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、又は
Ｂｎ−Ｏ−
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ３は、Ｃ２０が、
−Ｈ、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルキル、
Ｂｎ、
−ＮＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、又はＢｎである）、
＝ＣＲ１０Ｒ１１（式中、Ｒ１０及びＲ１１は、それぞれ独立して、Ｈ又はＣ１−７アルキルである）、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ４は、Ｃ１６が、
−Ｈ、
−ＯＨ、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
但し、
Ｃ１６とＣ１７の間の結合が２重結合であるとき、Ｒ２は存在せず、Ｃ１７とＣ２０の間の結合は単結合であり、
Ｃ１７とＣ２０の間の結合が２重結合であるとき、Ｃ２０は、−Ｈ又は−ＯＨで置換され、Ｒ２は存在せず、
Ｃ４とＣ５の間の結合が２重結合であるとき、Ｃ５とＣ６の間の結合は逆に単結合である）
の化合物、又はその医薬的な塩に関する。
【００４９】
実に、本発明者等は、プレグネノロン及びその誘導体のいくつかは、ＣＢ１受容体の阻害剤であり、オルソステリック結合を修飾することなく、天然又は合成アゴニスト、又は内因性リガンドにより誘導されるＣＢ１受容体の活性化を遮断することができることを示した。
【００５０】
それ故、本発明の化合物は、ＣＢ１受容体の他のアンタゴニスト、例えば、リモナバンと同様に作用し、ＣＢ１受容体のアンタゴニストが必要とされる病状の処置において用いられ得る。
【００５１】
さらに、この阻害は、内因性メカニズムである。次に、それは、内因性又は外因性アゴニストに対する受容体の応答を調節し、アゴニストの受容体への結合を遮断しないより生理的な方法で、受容体の活性を修飾する。このより生理的なメカニズムのため、阻害剤、例えば、プレグネノロン及びその誘導体は、オルソステリックアンタゴニストより少ない副作用を提示しやすい。
【００５２】
ＣＢ１受容体のアンタゴニストで処置され得る膀胱及び胃腸障害の例は、肝線維症；脂肪肝；非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝硬変；アルコール性脂肪肝；内毒血症により合併した肝性虚血性再灌流傷害；急性膵炎；過活動及び有痛性膀胱障害、及び収縮性内蔵器官の運動性変化を非限定的に含む。
【００５３】
ＣＢ１受容体のアンタゴニストで処置され得る炎症性疾患の例は、肥満と関連する炎症及び関節炎；慢性免疫性炎症性疾患、及び潰瘍を非限定的に含む。
【００５４】
ＣＢ１受容体のアンタゴニストで処置され得る心血管疾患の例は、心筋症、例えば、硬化心筋症、抗悪性腫瘍薬により誘導される心筋症、内皮機能障害、及び鬱血性心不全と関連する血管機能障害の発症に関与する細胞死；高血圧；冠動脈疾患；アテローム性動脈硬化症；心筋梗塞；脂質の蓄積から生じる疾患、例えば、アテローム性動脈硬化症、増大した血管新生により誘導される病状、及び血管新生に関与する疾患を非限定的に含む。
【００５５】
ＣＢ１受容体のアンタゴニストで処置され得る代謝障害の例は、異常脂質血症、糖尿病、及び糖尿病合併症を非限定的に含む。
【００５６】
ＣＢ１受容体のアンタゴニストで処置され得る嗜癖、依存、乱用、及び再発関連障害の例は、薬物依存；薬物乱用；薬物依存、乱用、及び嗜癖の再発；大麻及び派生製品の使用；大麻及び派生製品の乱用；大麻及び派生製品の毒性；大麻及び派生製品により誘導される精神病を非限定的に含む。
【００５７】
ＣＢ１受容体のアンタゴニストで処置され得る神経変性障害の例は、パーキンソン病及びアルツハイマー病を非限定的に含む。
【００５８】
ＣＢ１受容体のアンタゴニストで処置され得る精神障害及び神経障害の例は、統合失調症；気分障害；Ｌ−ＤＯＰＡにより誘導されるジスキネジア；記憶障害を非限定的に含む。
【００５９】
ＣＢ１受容体のアンタゴニストで処置され得る生殖障害の例は、不妊及び反復流産を非限定的に含む。
【００６０】
ＣＢ１受容体のアンタゴニストで処置され得る皮膚炎症性疾患及び線維性疾患の例は、皮膚炎症、ＵＶにより誘導される皮膚炎症及び癌、皮膚線維症、及び創傷治癒を非限定的に含む。
【００６１】
本発明は、処置を必要とする対象における、膀胱及び胃腸障害；炎症性疾患；心血管疾患；腎症；緑内障；痙性；癌；骨粗鬆症；代謝障害；肥満；嗜癖、依存、乱用及び再発関連障害；精神障害及び神経障害；神経変性障害；自己免疫性肝炎及び脳炎；疼痛；生殖障害及び皮膚炎症性疾患及び線維性疾患からなる群より選択される病的状態又は障害の処置方法であって、該対象に、有効量の式（Ａ）：
【化６】
2014515361.tif 000007
（式中：
−−−は、結合が単結合又は２重結合であることを示し、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が
−Ｈ、
−ハロゲン、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｂｎ−Ｏ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、
＝Ｏ、
−ＮＲ５Ｒ６（式中、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、Ｂｎ、又はＰｈである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｒ７（式中、Ｒ７は、アルキルである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｃ２Ｈ４−ＣＯＯＨ、又は
−Ｎ３
で置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、
−Ｈ、
−ＯＨ、
ハロゲン、
Ｃ１−８アルキル、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｃ２−６アルケニル、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、又は
Ｂｎ−Ｏ−
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ３は、Ｃ２０が、
−Ｈ、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルキル、
Ｂｎ、
−ＮＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、又はＢｎである）、
＝ＣＲ１０Ｒ１１（式中、Ｒ１０及びＲ１１は、それぞれ独立して、Ｈ又はＣ１−７アルキルである）、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ４は、Ｃ１６が、
−Ｈ、
−ＯＨ、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
但し、
Ｃ１６とＣ１７の間の結合が２重結合であるとき、Ｒ２は存在せず、Ｃ１７とＣ２０の間の結合は単結合であり、
Ｃ１７とＣ２０の間の結合が２重結合であるとき、Ｃ２０は、−Ｈ又は−ＯＨで置換され、Ｒ２は存在せず、
Ｃ４とＣ５の間の結合が２重結合であるとき、Ｃ５とＣ６の間の結合は逆に単結合である）
の化合物、その医薬的な塩を投与することを含む方法に関する。
【００６２】
本発明は、膀胱及び胃腸障害；炎症性疾患；心血管疾患；腎症；緑内障；痙性；癌；骨粗鬆症；代謝障害；肥満；嗜癖、依存、乱用及び再発関連障害；精神障害及び神経障害；神経変性障害；自己免疫性肝炎及び脳炎；疼痛；生殖障害及び皮膚炎症性疾患及び線維性疾患からなる群より選択される病的状態又は障害の処置用医薬の製造のための、式（Ａ）：
【化７】
2014515361.tif 000008
（式中：
−−−は、結合が単結合又は２重結合であることを示し、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が、
−Ｈ、
−ハロゲン、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｂｎ−Ｏ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、
＝Ｏ、
−ＮＲ５Ｒ６（式中、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、Ｂｎ、又はＰｈである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｒ７（式中、Ｒ７は、アルキルである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｃ２Ｈ４−ＣＯＯＨ、又は
−Ｎ３
で置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、
−Ｈ、
−ＯＨ、
ハロゲン、
Ｃ１−８アルキル、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｃ２−６アルケニル、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、又は
Ｂｎ−Ｏ−
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ３は、Ｃ２０が、
−Ｈ、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルキル、
Ｂｎ、
−ＮＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、又はＢｎである）、
＝ＣＲ１０Ｒ１１（式中、Ｒ１０及びＲ１１は、それぞれ独立して、Ｈ、又はＣ１−７アルキルである）、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ４は、Ｃ１６が、
−Ｈ、
−ＯＨ、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
但し、
Ｃ１６とＣ１７の間の結合が２重結合であるとき、Ｒ２は存在せず、Ｃ１７とＣ２０の間の結合は、単結合であり、
Ｃ１７とＣ２０の間の結合が２重結合であるとき、Ｃ２０は、−Ｈ又は−ＯＨで置換され、Ｒ２は存在せず、
Ｃ４とＣ５の間の結合が２重結合であるとき、Ｃ５とＣ６の間の結合は逆に単結合である）
の化合物、又はその医薬的な塩の使用に関する。
【００６３】
本発明はまた、膀胱及び胃腸障害；炎症性疾患；心血管疾患；腎症；緑内障；痙性；癌；骨粗鬆症；代謝障害；肥満；嗜癖、依存、乱用及び再発関連障害；精神障害及び神経障害；神経変性障害；自己免疫性肝炎及び脳炎；疼痛；及び生殖障害及び皮膚炎症性疾患及び線維性疾患からなる群より選択される病的状態又は障害の処置において使用するための、本発明の式（Ｉ）：
【化８】
2014515361.tif 000009
（式中：
−−−は、結合が単結合又は２重結合であることを示し、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が、
−Ｈ、
−ハロゲン、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｂｎ−Ｏ−
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、
＝Ｏ、
−ＮＲ５Ｒ６（式中、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、Ｂｎ、又はＰｈである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｒ７（式中、Ｒ７は、アルキルである）、又は
−Ｏ−ＣＯ−Ｃ２Ｈ４−ＣＯＯＨ
で置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、
−Ｈ、
−ＯＨ、
ハロゲン、
Ｃ１−８アルキル、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｃ２−６アルケニル、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、又は
Ｂｎ−Ｏ−
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ３は、Ｃ２０が
−Ｈ、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルキル、
Ｂｎ、
−ＮＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、又はＢｎである）、
＝ＣＲ１０Ｒ１１（式中、Ｒ１０及びＲ１１は、それぞれ独立して、Ｈ、又はＣ１−７アルキルである）、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ４は、Ｃ１６が、
−Ｈ、
−ＯＨ、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
但し、
Ｃ１６とＣ１７の間の結合が２重結合であるとき、Ｒ２は、存在せず、Ｃ１７とＣ２０の間の結合は、単結合であり、
Ｃ１７とＣ２０の間の結合が２重結合であるとき、Ｃ２０は、−Ｈ又は−ＯＨで置換され、Ｒ２は存在しない）
の化合物、又はその医薬的な塩に関する。
【００６４】
本発明はまた、本発明の化合物、又はその医薬的な塩、及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【００６５】
「医薬的」又は「医薬的に許容される」は、必要に応じて、哺乳動物、特に、ヒトに投与されるとき、有害なアレルギー反応又は他の不都合な反応を生じない分子実体及び組成物に言及する。医薬的に許容される担体は、任意の種類の無毒性の固体、半固体、又は液体の充填剤、希釈剤、被覆材料、又は剤形補助物に言及する。
【００６６】
医薬的に許容される担体は、任意の種類の無毒性の固体、半固体、又は液体の充填剤、希釈剤、結合剤、崩壊剤、溶解剤、安定化剤、塩形成剤、滑沢剤、及び被覆材料、又は剤形補助物に非限定的に言及する。
【００６７】
医薬組成物の形態、投与経路、投薬量、及び処方計画は、当然、処置されるべき病状、病気の重症度、患者の年齢、体重、及び性別等に依存する。
【００６８】
本発明の医薬組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、気管内、経皮、局所、皮下、腹腔内、鼻腔内、経腸、舌下、膣内及び直腸を非限定的に含む、任意の投与経路用に製剤化され得る。
【００６９】
好ましくは、本発明によると、活性成分は、経口経路により投与され、単位投薬量形態、例えば、固体投薬形態として提示される。この単位投薬形態は、成人又は小児への生成物投与を助けるために、錠剤、被覆錠剤、丸薬、粉剤、又は顆粒剤、サシェ、又は硬ゲルカプセル剤のいずれかであり得る。
【００７０】
経口投与のため、任意の従来の投薬形態において、組成物は、結合剤（例えば、プレゼラチン化メイズスターチ、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、グアールガムの様なガム誘導体、カラギーナン、アルギン酸又はその塩）；充填剤（例えば、ラクトース、蔗糖、微結晶セルロース、リン酸水素カルシウム、二リン酸カルシウム、マンニトール、ソルビトール又はキシリトールの様なポリオール、フルクトース、デキストリン、マルトデキストリン等）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、フマル酸ナトリウムステライル、タルク、又はシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモでんぷん又はグリコール酸ナトリウムスターチ、クロスポビドン、クロスカルメロース等）、塩形成剤（例えば、ｎ−メチルグルカミン、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム又は塩酸等）、又は湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）を非限定的に含む、医薬的に許容される賦形剤を用いて古典的技術により調製される。錠剤又は硬ゲルカプセル剤は、当該技術分野において知られた方法により被覆されうる。例えば、錠剤又は硬ゲルカプセル剤は、大腸に到達するまで、活性成分を保護する腸内又は遅延放出コーティングを有することができる。
【００７１】
別の可能性は、長期間（最大２４時間）運ばれ、１日当たりの投与数を制限するために、活性成分を持続放出させるか、又は制御放出させることである。錠剤又は硬ゲルカプセル剤は、活性成分の制御放出を確かにするポリマーで被覆されうるか、又は錠剤の場合、それらは、マトリックス錠剤であり得、該錠剤は、活性成分の制御放出を確かにする組成物成分中に存在する（かかる成分は、非限定的に、一般的に、親水性ポリマー（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、キサンタンガム、キトサン、ポリエチレンオキシド等）、不水溶性及び疎水性ポリマー（例えば、エチルセルロース、ポリ（酢酸ビニル）、酢酸セルロース等）、脂肪酸（例えば、硬化植物油、パルミトステアリン酸グリセリル等）、アルコール（例えば、セチルアルコール、ステアリルアルコール等）、ワックス（例えば、蜜ろう、カルナバ・ワックス等）である。プレグネノロンの特定の場合、持続放出剤形はまた、プレグネノロンの下流活性代謝物の産生を減少させる機能を供するであろう。
【００７２】
錠剤形態の固体組成物が調製されるとき、錠剤は、直接圧縮、湿式造粒過程又は乾式造粒過程のいずれかにより、製造され得る。使用される製造過程がいずれであれ、活性成分は、第一に、上述のビヒクル全部又は一部と混合され、次に、潤滑され、その後、錠剤に圧縮される。
【００７３】
別の実施態様において、本発明は、活性成分の口腔送達に有用であり得；組成物は、従来の方法で製剤化される錠剤又はトローチ剤の形態を取ることができる。使用される成分は、成分間の割合が変わったのみで、従来の錠剤と同じである。
【００７４】
好ましくは、活性成分は、局所活性のためのみに送達されることができ；錠剤は、粘膜付着性錠剤として提示される。
【００７５】
他方、有効成分は、口腔内で直接送達されることができるが、全身性吸収のため、水が利用できないとき、投薬形態は、水等なしで投与されるという利点を提示する、経口用崩壊錠剤である。
【００７６】
別の実施態様において、本発明は、経口投与用液体製剤としても提示されうる。それらは、例えば、液剤、シロップ剤、又は懸濁剤の形態をとることができるか、又は使用前に水又は他の適切なビヒクルと構成させるための乾燥製品として提示され得る。これらの医薬製剤は、アンプル剤としての単位投薬形態、又は一般的にバイアルに充填された複数回用量形態のいずれかであり得る。かかる液体製剤は、懸濁化剤（例えば、ソルビトール又はマンニトールシロップ、蔗糖シロップ、ナトリウムカルボキシメチルセルロース又はヒドロキシプロピルセルロースのようなセルロース誘導体、グアールガム、キサンタンガム又はアカシアガム等のようなガム誘導体、又は硬化食用油脂）；乳化剤（例えば、レシチン、ポリソルベート、ポリオキシエチル化ヒマシ油、ソルビタンエステル、又はポロクサマー等）；水性及び非水性ビークル（例えば、水、モノプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール、ゴマ油、綿実油、大豆油、ヒマシ油、アーモンドオイル、油性エステル、エチルアルコール、又は分留植物油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等）；及び保存剤（例えば、一般的に、メチル又はプロピル−ｐ−ヒドロキシ安息香酸及びそれらの塩、ソルビン酸及びその塩、安息香酸及びその塩）を非限定的に含む、医薬的に許容される添加剤を用いて、従来技術により調製されうる。製剤はまた、必要に応じて、緩衝塩、安定化剤、酸化防止剤、香味剤、着色剤、甘味剤を含有することができる。
【００７７】
本発明に適切な別の投与経路は、非経口経路である。活性成分は、静脈内経路、筋肉内経路、又は皮下経路用の適切な注射可能な製品として提示されるであろう（医薬組成物は、注射され得る剤形用の医薬的に許容されるビークルを含有しうる）。これらの組成物は、液剤又は乳剤（例えば、希薄な乳剤、マイクロエマルジョン、又はナノエマルジョン等）として提示されることができ、無菌でありうる。かかる組成物は、等張であるために、生理食塩水成分（リン酸モノナトリウム又はリン酸ジナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム又は塩化マグネシウム等、又はかかる塩の混合物）を含有することができる。ある種の場合、活性成分が、液剤として直接提示されるのに十分に安定でないとき、活性成分は、場合によっては、注射に適した無菌非水溶液、無菌水又は生理食塩水溶液の添加で患者への投与に適した注射可能な液剤の構成を可能にする、凍結乾燥組成物又は粉末形態のいずれかとして乾燥状態で提供される。
【００７８】
最終製品は、一般的に、バイアル又はアンプル剤形態に充填されて提示される。
【００７９】
投与のために使用される用量は、様々なパラメーターに応じて、特に、用いられる投与方法、関連する病状、又は処置の所望の持続に応じて、適応させることができる。
【００８０】
全身の薬物レベルを維持するために、及び頻繁な注射を避けるために、デポー型非経口剤形が用いられ得る。これらの医薬剤形は、一般的に非限定的に、注射後、インサイツでゲル又はコロイド又は半固体デポーを形成する微小粒子、移植片、又は液体の形態である。かかるデポー型製剤は、生体適合及び生分解性ポリマー（例えば、ポリ（ε−カプロラクトン）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（グリコール酸）、ポリ［（乳酸）−ｃｏ−（グリコール酸）等］）、ポリ（乳酸）等）、非生分解性ポリマー（例えば、エチレン酢酸ビニルコポリマー、ポリウレタン、ポリエステル（アミド）、塩化ポリビニル等）、水性及び非水性ビヒクル（例えば、水、ゴマ油、綿実油、大豆油、ヒマシ油、アーモンドオイル、油性エステル、エチルアルコール又は分留植物油、プロピレングリコール、ＤＭＳＯ、ＴＨＦ、２−ピロリドン、Ｎ−メチルピロリジノン、Ｎ−ビニルピロリジノン等）を非限定的に含む、医薬的に許容される添加剤を用いて、従来技術により調製され得る。プレグネノロンの特定の場合、デポー型製剤はまた、プレグネノロンの活性下流代謝物の産生を減少させる機能を供する。
【００８１】
医薬組成物を調製するために、有効量の本発明の化合物が、医薬的に許容される担体又は水性媒体中に溶解されるか、又は分散されうる。
【００８２】
注射可能な使用に適した液体医薬形態は、無菌水溶剤又は分散剤；又は無菌油性成分、例えば、ゴマ油、ピーナッツ油、綿実油等、中鎖トリグリセリド、トリアセチン油、無菌プロピレングリコール、無菌ポリエチレングリコール、無菌グリセロール、又は無菌ポリオール溶液を含む非水性剤形を非限定的に含む。
【００８３】
遊離塩基としての活性化合物又は医薬的に許容される塩の溶液は、適切な溶媒中、必要なら、一般的に、界面活性剤、例えば、非限定的に、ポリソルベート誘導体、ポリエトキシル化ヒマシ油（例えば、cremophor RH40等）、ＰＥＧ１５ヒドロキシステアレート（solutol HS15）、ポロクサマー（lutrol F68等）のような可溶化剤と、安定剤、例えば、ＥＤＴＡ及びその塩と、緩衝剤と、又は酸化防止剤（アスコルビン酸及びその塩、酢酸トコフェロール、又はメタ重亜硫酸ナトリウム）と混合して、調製され得る。該製剤は、微生物の成長を防ぐために保存剤を含有し得る。
【００８４】
安定性の理由のため、剤形は、粉剤形態として提示されることができ、該粉剤は、無菌であり、水性溶媒又は非水性溶媒により用時に溶解される。該製剤は、一般的に、無菌の注射可能な液剤又は分散剤の用時投与用である。
【００８５】
全ての場合において、形態は、無菌であり、使用、製造、及び保存条件下で安定でなければならず、微生物、例えば、細菌及び真菌の汚染活動に対して守られなければならない。
【００８６】
本発明の化合物
一般式：
本発明の化合物は、式：
【化９】
2014515361.tif 000010
（式中：
−−−は、結合が単結合又は２重結合であることを示し、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が、
−Ｈ、
−ハロゲン、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｂｎ−Ｏ−
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、
＝Ｏ、
−ＮＲ５Ｒ６（式中、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、Ｂｎ、又はＰｈである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｒ７（式中、Ｒ７は、アルキルである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｃ２Ｈ４−ＣＯＯＨ、又は
−Ｎ３
で置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、
−Ｈ、
−ＯＨ、
ハロゲン、
Ｃ１−８アルキル、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｃ２−６アルケニル、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、又は
Ｂｎ−Ｏ−
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ３は、Ｃ２０が、
−Ｈ、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルキル、
Ｂｎ、
−ＮＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、又はＢｎである）、
＝ＣＲ１０Ｒ１１（式中、Ｒ１０及びＲ１１は、それぞれ独立して、Ｈ、又はＣ１−７アルキルである）、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ４は、Ｃ１６が、
−Ｈ、
−ＯＨ、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
但し、
Ｃ１６とＣ１７の間の結合が２重結合であるとき、Ｒ２は存在せず、Ｃ１７とＣ２０の間の結合は単結合であり、
Ｃ１７とＣ２０の間の結合が２重結合であるとき、Ｃ２０は、−Ｈ又は−ＯＨで置換され、Ｒ２は存在せず、
Ｃ４とＣ５の間の結合が２重結合であるとき、Ｃ５とＣ６の間の結合は、逆に単結合である）
を有する。
【００８７】
１つの実施態様において、本発明の化合物は、式（Ｉ）：
【化１０】
2014515361.tif 000011
（式中：
−−−は、結合が単結合又は２重結合であることを示し、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が
−Ｈ、
−ハロゲン、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｂｎ−Ｏ−
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、
＝Ｏ、
−ＮＲ５Ｒ６（式中、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、Ｂｎ、又はＰｈである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｒ７（式中、Ｒ７は、アルキルである）、又は
−Ｏ−ＣＯ−Ｃ２Ｈ４−ＣＯＯＨ
で置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、
−Ｈ、
−ＯＨ、
ハロゲン、
Ｃ１−８アルキル、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｃ２−６アルケニル、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、又は
Ｂｎ−Ｏ−
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ３は、Ｃ２０が、
−Ｈ、
−ＯＨ、
Ｃ１−８アルキル、
Ｂｎ、
−ＮＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、又はＢｎである）、
＝ＣＲ１０Ｒ１１（式中、Ｒ１０及びＲ１１は、それぞれ独立して、Ｈ、又はＣ１−７アルキルである）、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
−−−Ｒ４は、Ｃ１６が、
−Ｈ、
−ＯＨ、又は
＝Ｏ
で置換されていることを示し、
但し、
Ｃ１６とＣ１７の間の結合が２重結合であるとき、Ｒ２は、存在せず、Ｃ１７とＣ２０の間の結合は、単結合であり、
Ｃ１７とＣ２０の間の結合が２重結合であるとき、Ｃ２０は、−Ｈ、又は−ＯＨで置換され、Ｒ２は存在しない）
を有する。
【００８８】
プレグネノロン：
具体的な実施態様において、本発明の化合物は、プレグネノロン、又はその医薬的な塩である。
【００８９】
プレグネノロンは、周知のステロイド（ＣＡＳ番号１４５−１３−１）である。それは、脳及び他の器官でのステロイド合成の第１工程である。
【００９０】
上述の通り、本発明者等は、プレグネノロン、及びその医薬的な塩、例えば、酢酸プレグネノロン又はヘミコハク酸プレグネノロンが、ＣＢ１受容体の阻害剤であり、次に、ＣＢ１受容体のアンタゴニストが必要とされる病理学的障害及び疾患の処置において用いられ得ることを示した。
【００９１】
好ましい実施態様において、プレグネノロンは、対象中のプレグネノロンの血漿濃度が、１００ng/mlを超えないような投薬量で対象に投与される。好ましくは、プレグネノロンは、持続放出剤形により投与される。
【００９２】
実に、プレグネノロンが有効用量(約１００ng/ml又は１００ng/g組織)の範囲内にあることを可能にする低用量で投与されるとき、下流活性代謝物中のプレグネノロンの変換は減少する。従って、本発明者等は、下流活性代謝物の増加を誘導しない低濃度で投与されるプレグネノロンが、ＣＢ１受容体の活性化の効果を阻害できることを示した。このことは、プレグネノロンが、観察された治療効果が起因する下流活性代謝物を増加するために、高用量で投与されている従前の文献と比較して、重要な相違及びイノベーションである。低用量でのプレグネノロンの投与は、プロゲステロン活性、アンドロゲン活性、エストロゲン活性、グルココルチコイド活性、又は神経調節特性（アロプレグナノロン、テストステロン、ＤＨＥＡを非限定的に含む、プレグネノロンに由来する他の脳ステロイドの場合のようなもの）を付与するプレグネノロンの下流活性ステロイド誘導体の増加に起因する不要かつ非所望の効果なしに、ＣＢ１依存性病状に作用するので、有利である。
【００９３】
代謝を伴わないか、又は若干の代謝を伴う化合物
或は、本発明の化合物は、対象への投与後、活性なプレグネノロン下流誘導体へ実質的に変換されない。
【００９４】
プレグネノロンは、一般的に、下流活性ステロイドの不活性な前駆体と考えられている。プレグネノロン硫酸塩、アロプレグナノロン、ＤＨＥＡ、ＤＨＥＡ硫酸塩を非限定的に含む、活性プレグネノロン下流誘導体は、種々の行動機能の制御に関与している。
【００９５】
しかしながら、本発明者等は、ＣＢ１受容体の阻害が、プレグネノロン特異的であり、活性な下流プレグネノロン誘導体と関係しないことを示した。
【００９６】
プレグネノロン代謝物へ変換されないか、又は実質的に変換されないプレグネノロンの誘導体の使用が、プレグネロンの前駆体であり、プロゲステロン活性、アンドロゲン活性、エストロゲン活性、グルココルチコイド活性、又は神経調節特性（アロプレグナノロン、テストステロン、ＤＨＥＡを非限定的に含む、プレグネノロンに由来する他の脳ステロイドの場合のようなもの）を付与する代謝物と関連し得る副作用を回避する。
【００９７】
活性なプレグネノロン下流誘導体に変換される又はされない本発明の化合物の能力は、この化合物を投与すること、例えば、５０mg/kgでラットに投与し、３０分後にラットを屠殺し、ラットの側坐核におけるアロプレグナノロン及びエピアロプレグナノロンの濃度をＧＣ／ＭＳにより測定し、これらの濃度を、ビヒクル又はプレグネノロンのみを注射したラット中のアロプレグナノロン及びエピアロプレグナノロンと比較することにより、評価されうる。
【００９８】
或は、化合物は、培養下でプレグネノロンを代謝する酵素を発現する任意の細胞株に投与され、次に、細胞内又は細胞培地中のアロプレグナノロン及びエピアロプレグナノロンの含有量をＧＣ／ＭＳにより測定し、これらの濃度をビヒクル又はプレグネノロンのみを受け取った細胞培地中のアロプレグナノロン及びエピアロプレグナノロンと比較することができる。
【００９９】
１つの実施態様において、本発明の化合物は、式Ｉ
（式中、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が、
−Ｈ、−ハロゲン、−ＯＨ、Ｃ２−８アルコキシ、Ｂｎ−Ｏ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、
＝Ｏ、
−ＮＲ５Ｒ６（式中、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、Ｂｎ、又はＰｈである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｒ７（式中、Ｒ７は、アルキルである）、又は
−Ｏ−ＣＯ−Ｃ２Ｈ４−ＣＯＯＨで置換されていることを示し、
−Ｒ２、−−−Ｒ３、−−−Ｒ４は、既に定義された通りである）
の化合物である。
【０１００】
本発明者等は、広範囲のプレグネノロンの誘導体を試験して、それらがＣＢ１に対する阻害活性を維持することから、対象への投与後、活性なプレグネノロン下流誘導体に実質的に変換されない、プレグネノロンの誘導体を見出した。
【０１０１】
誘導体のいくつかの群が見出された。
【０１０２】
Ｃ１６とＣ１７の間の結合、及びＣ１７とＣ２０の間の結合は、単結合である
１つの実施態様において、Ｃ１６とＣ１７の間の結合、及びＣ１７とＣ２０の間の結合は、単結合である。
【０１０３】
Ｃ４とＣ５の間の結合は、２重結合である
１つの実施態様において、Ｃ３とＣ４の間の結合、及びＣ５とＣ６の間の結合は、単結合であり、Ｃ４とＣ５の間の結合は、２重結合である。
【０１０４】
この実施態様において、本発明の化合物は、式Ｂ：
【化１１】
2014515361.tif 000012
（式中：
−−−Ｒ１は、Ｃ３が、−ＯＨ、又は＝Ｏで置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−８アルキル、ハロゲン、又はＢｎで置換されていることを示し、
−−−Ｒ３は、Ｃ２０が、−ＯＨ、又は＝Ｏで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４は、Ｃ１６が、−Ｈで置換されていることを示す）
を有する。
【０１０５】
実に、本発明者等は、Ｃ４とＣ５の間の２重結合を有し、上で開示された通りＲ１、Ｒ２、及び／又はＲ３で置換されているプレグネノロンの誘導体が、プレグネノロンの下流誘導体に変換されないことを見出した。
【０１０６】
好ましくは、化合物は、４−プレグネン−１７α，２０α−ジオール−３−オン、４−プレグネン−３β，２０α−ジオール、４−プレグネン−２０α−オール−３−オン、１７α−メチルプロゲステロン、及び１７α−ベンジルプロゲステロンからなる群より選択される。
【０１０７】
Ｃ５とＣ６の間の結合、及びＣ４とＣ５の間の結合は、単結合である
１つの実施態様において、Ｃ３とＣ４の間、Ｃ５とＣ６の間、及びＣ４とＣ５の間の結合は、単結合である。
【０１０８】
この実施態様において、本発明の化合物は、式（Ｃ）
【化１２】
2014515361.tif 000013
（式中：
−−−Ｒ１は、Ｃ３が、＝Ｏ、又は−ＯＨで置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、−Ｈで置換されていることを示し、
−−−Ｒ３は、Ｃ２０が、＝Ｏで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４は、Ｃ１６が、−Ｈで置換されていることを示す）
を有する。
【０１０９】
好ましくは、該化合物は、５β−プレグナン−３，２０−ジオン、又は５β−プレグナン−３β−オール−２０−オンである。
【０１１０】
Ｃ５とＣ６の間の結合は、２重結合である
１つの実施態様において、Ｃ３とＣ４の間の結合、及びＣ４とＣ５の間の結合は、単結合であり、Ｃ５とＣ６の間の結合は、２重結合である。
【０１１１】
この実施態様において、本発明の化合物は、式（Ｄ）：
【化１３】
2014515361.tif 000014
を有する。
【０１１２】
この実施態様において、本発明の化合物は、好ましくは、Ｃ３、Ｃ１７、及び／又はＣ２０で修飾されたプレグネノロンである。
【０１１３】
Ｃ３での修飾：
１つの実施態様において、化合物は、Ｃ３で修飾されたプレグネノロンである。
【０１１４】
この実施態様において、化合物は、式（Ｄ）を有し、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が、
−Ｈ、−ハロゲン、Ｃ１−８アルコキシ、Ｂｎ−Ｏ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、
＝Ｏ、
−ＮＲ５Ｒ６（式中、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、Ｂｎ、又はＰｈである）、
−Ｏ−ＣＯ−Ｒ７（式中、Ｒ７は、アルキルである）、又は
−Ｏ−ＣＯ−Ｃ２Ｈ４−ＣＯＯＨ
で置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、−Ｈで置換されていることを示し、
−−−Ｒ３は、Ｃ２０が、＝Ｏで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４は、Ｃ１６が、−Ｈが置換されていることを示す。
【０１１５】
或は、この実施態様において、化合物は、式（Ｄ）を有し、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が、
ハロゲン、Ｂｎ−Ｏ、又は−Ｎ３で置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、−Ｈで置換されていることを示し、
−−−Ｒ３は、Ｃ２０が、＝Ｏで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４は、Ｃ１６が、−Ｈで置換されていることを示す。
【０１１６】
好ましくは、この実施態様の化合物は、３β−ベンジルオキシプレグネノロン、３−アジドプレグネノロン、及び３β−フルオロプレグネノロンからなる群より選択される。
【０１１７】
Ｃ３及びＣ１７での修飾：
１つの実施態様において、本発明の化合物は、Ｃ３及びＣ１７で修飾されたプレグネノロンである。
【０１１８】
この実施態様において、化合物は、式（Ｄ）を有し、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が、Ｃ１−８アルコキシ、ハロゲン、Ｂｎ−Ｏ−、又はＮ３で置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、Ｂｎ、−ＣＨ３、又はＣ２−６アルケニルで置換されていることを示し、
−−−Ｒ３は、Ｃ２０が、＝Ｏで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４は、Ｃ１６が、−Ｈで置換されていることを示す。
【０１１９】
好ましくは、この実施態様の化合物は、３β−フルオロ−１７α−メチルプレグネノロン、１７α−ベンジル−３β−フルオロプレグネノロン、１７α−ベンジル−３β−ベンジルオキシプレグネノロン、及び３β−ベンジルオキシ−１７α−メチルプレグネノロンからなる群より選択される。
【０１２０】
Ｃ１７での修飾：
１つの実施態様において、化合物は、Ｃ１７のみで修飾されたプレグネノロンである。
【０１２１】
この実施態様において、化合物は、式（Ｄ）を有し、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が、−ＯＨで置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、
−ＯＨ、ハロゲン、Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、Ｃ２−６アルケニル、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、又は
Ｂｎ−Ｏ−
で置換されていることを示し、
−−Ｒ３は、Ｃ２０が、＝Ｏで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４は、Ｃ１６が、−Ｈで置換されていることを示す。
【０１２２】
好ましくは、−Ｒ２は、Ｃ１７が、Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、又はＢｎ−で置換されていることを示す。
【０１２３】
より好ましくは、該化合物は、１７α−メチルプレグネノロン、１７α−ベンジルプレグネノロン、１７−メトキシプレグネノロン、及び１７α−エチルプレグネノロンからなる群より選択される。
【０１２４】
Ｃ３及び／又はＣ１７での修飾
本発明はまた、式（ＩＩ）
【化１４】
2014515361.tif 000015
（式中、
−−−は、結合が単結合又は２重結合であることを示し、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が、−ＯＨで置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、
Ｃ３−８アルキル、
Ｃ２−８アルコキシ、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、又は
Ｂｎ−Ｏ−
で置換されていることを示す）又は
（式中、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｂｎ−Ｏ、又は
ハロゲン
で置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、
Ｃ１−８アルキル、
Ｃ２−６アルケニル、
Ｃ１−８アルコキシ、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＢｎ−、
Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシル、又はハロゲンで場合により置換されているＰｈ−、又は
Ｂｎ−Ｏ−
で置換されていることを示す）
の化合物、又はその医薬的な塩に関する。
【０１２５】
好ましくは、式ＩＩの化合物は、３β−フルオロ−１７α−メチルプレグネノロン、１７α−ベンジル−３β−フルオロプレグネノロン、１７α−ベンジル−３β−ベンジルオキシプレグネノロン、３β−ベンジルオキシ−１７α−メチルプレグネノロン、１７α−ベンジルプレグネノロン、３β−メトキシ−１７α−メチルプレグネノロン、１７α−アリル−３β−メトキシプレグネノロン、及び１７α−ベンジル−３β−メトキシプレグネノロンからなる群より選択される。
【０１２６】
本発明はまた、式ＩＩの化合物、又はその医薬的な塩、及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【０１２７】
Ｃ２０での修飾：
１つの実施態様において、化合物は、Ｃ２０で修飾されたプレグネノロンである。
【０１２８】
この実施態様において、化合物は、式Ｄ
（式中：
−−−Ｒ１は、Ｃ３が−ＯＨで置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、−Ｈで置換されていることを示し、
−−−Ｒ３は、Ｃ２０が、
−Ｈ、−ＯＨ、及びＣ１−８アルキル、Ｂｎ、
−ＮＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、又はＢｎである）、
＝ＣＲ１０Ｒ１１（式中、Ｒ１０及びＲ１１は、それぞれ独立して、Ｈ、又はＣ１−７アルキルである）、又は
＝Ｏで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４は、Ｃ１６が、−Ｈで置換されていることを示す）
を有する。
【０１２９】
好ましくは、−−−Ｒ３は、Ｃ２０が、−Ｈ、−ＯＨ、又は−ＮＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、Ｈ、又はＣ１−８アルキルである）で置換されていることを示す。
【０１３０】
より好ましくは、該化合物は、５−プレグネン−３β，２０α−ジオール、２０−デオキシプレグネノロン、及び２０−メチルアミノ−５−プレグネン−３β−オールからなる群より選択される。
【０１３１】
Ｃ２０及びＣ１６での修飾：
１つの実施態様において、化合物は、Ｃ２０及び／又はＣ１６で修飾されたプレグネノロンである。
【０１３２】
この実施態様において、化合物は、式Ｄ
（式中、
−−−Ｒ１は、Ｃ３が、−ＯＨで置換されていることを示し、
−Ｒ２は、Ｃ１７が、−Ｈで置換されていることを示し、
−−−Ｒ３は、Ｃ２０が、−ＯＨ、又は−Ｈで置換されていることを示し、
−−−Ｒ４は、Ｃ１６が、−ＯＨ、又は＝Ｏで置換されていることを示す）
を有する。
【０１３３】
Ｃ１６とＣ１７との間の結合は、２重結合であり、Ｃ１７とＣ２０の間の結合は、単結合である
別の実施態様において、Ｃ１６とＣ１７の間の結合は、２重結合であり、Ｃ１７とＣ２０の間の結合は、単結合であり、−−−Ｒ１は、Ｃ３が、−Ｈ、−ＯＨ、又は＝Ｏで置換されていることを示し、−−−Ｒ３は、Ｃ２０が、−Ｈ、−ＯＨ、又は＝Ｏで置換されていることを示し、−−−Ｒ４は、Ｃ１６が、−Ｈで置換されていることを示す。
【０１３４】
この実施態様は、以下の式Ｅ
【化１５】
2014515361.tif 000016
において開示される。
【０１３５】
好ましくは、該化合物は、５，１６プレグナジエン−２０−オンである。
【０１３６】
Ｒ１は、β位にある：
最も好ましい実施態様において、Ｃ３とＲ１、及びＣ３とＣ４のあいだの結合が単結合であるとき、Ｒ１はβ位にある。
【０１３７】
実に、本発明者等は、Ｒ１をα位に有する誘導体とは対照的に、Ｒ１をβ位に有する誘導体が、ＧＡＢＡ及びグルタマート受容体について効果を有さず、これらの受容体の修飾により誘導される副作用、例えば、鎮静作用、記憶機能障害、運動性動揺のようなもの（これらに限定されない）を回避することを示した。さらに、Ｃ３をβ位に有する誘導体は、ＣＢ１受容体の阻害活性を保持する。
【０１３８】
病的状態又は障害の処置：
本発明はまた、処置方法において使用するための、上で定義された本発明の化合物、又はその医薬的な塩に関する。
【０１３９】
１つの実施態様において、上で定義された式ＩＩの化合物、又はその医薬的な塩は、処置方法において使用するためのものである。
【０１４０】
本発明はまた、医薬の製造のための、上で定義された本発明の化合物、又はその医薬的な塩に関する。
【０１４１】
１つの実施態様において、上で定義された式ＩＩの化合物、又はその医薬的な塩は、医薬の製造のためのものである。
【０１４２】
本発明はまた、必要とする対象における病的状態又は障害の処置方法であって、該対象に、有効量の上で定義された本発明の化合物、又はその医薬的な塩を投与することを含む方法に関する。
【０１４３】
本発明はまた、膀胱及び胃腸障害；炎症性疾患；心血管疾患；腎症；緑内障；痙性；癌；骨粗鬆症；代謝障害；肥満；嗜癖、依存、乱用及び再発関連障害；精神障害及び神経障害；神経変性障害；自己免疫性肝炎及び脳炎；疼痛；生殖障害；及び皮膚炎症性疾患及び線維性疾患からなる群より選択される病的状態又は障害の処置において使用するための、上で定義された本発明の化合物、又はその医薬的な塩に関する。
【０１４４】
本発明は、必要とする対象における、膀胱及び胃腸障害；炎症性疾患；心血管疾患；腎症；緑内障；痙性；癌；骨粗鬆症；代謝障害；肥満；嗜癖、依存、乱用及び再発関連障害；精神障害及び神経障害；神経変性障害；自己免疫性肝炎及び脳炎；疼痛；生殖障害；皮膚炎症性疾患及び線維性疾患からなる群より選択される病的状態又は障害の処置方法であって、該対象に有効量の上で定義された本発明の化合物、又はその医薬的な塩を投与することを含む方法に関する。
【０１４５】
本発明は、膀胱及び胃腸障害；炎症性疾患；心血管疾患；腎症；緑内障；痙性；癌；骨粗鬆症；代謝障害；肥満；嗜癖、依存、乱用及び再発関連障害；精神障害及び神経障害；神経変性障害；自己免疫性肝炎及び脳炎；疼痛；皮膚炎症性疾患及び線維性疾患からなる群より選択される病的状態又は障害の処置用医薬の製造のための、上で定義された本発明の化合物の使用に関する。
【０１４６】
胃腸疾患：
好ましい実施態様において、本発明の化合物は、胃腸疾患の処置において使用するためのものである。
【０１４７】
好ましい実施態様において、本発明の化合物の使用は、胃腸疾患の処置用医薬の製造のためのものである。
【０１４８】
好ましい実施態様において、方法は、必要とする対象における胃腸疾患の処置方法であって、該対象に、有効量の化合物を投与することを含む。
【０１４９】
好ましくは、本発明の化合物は、肝臓疾患、特に、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、及び肝硬変の処置において使用するためのものである。
【０１５０】
実に、本発明者等は、プレグネノロン及びその誘導体が、肥満モデルにおいて脂質蓄積、及びＴＮＦαの産生を阻害することを示した。
【０１５１】
肥満又は代謝障害：
好ましい実施態様において、本発明の化合物は、肥満又は代謝障害の処置において使用するためのものである。
【０１５２】
好ましい実施態様において、本発明の化合物の使用は、肥満又は代謝障害の処置用医薬の製造のためのものである。
【０１５３】
好ましい実施態様において、方法は、必要とする対象における肥満又は代謝障害の処置方法であって、該対象に、有効量の化合物を投与することを含む。
【０１５４】
好ましくは、本発明の化合物は、糖尿病及び脂質異常症の処置において使用するためのものである。
【０１５５】
実に、本発明者等は、プレグネノロン及びその誘導体が、肥満モデルにおいて急性食物摂取、脂肪蓄積、及びＴＮＦαの産生を阻害することを示した。
【０１５６】
嗜好、依存、乱用及び再発関連障害：
別の好ましい実施態様において、本発明の化合物は、嗜癖、依存、乱用及び再発関連障害の処置において使用するためのものである。
【０１５７】
好ましい実施態様において、本発明の化合物の使用は、嗜癖、依存、乱用及び再発関連障害の処置用医薬の製造のためのものである。
【０１５８】
別の好ましい実施態様において、方法は、必要とする対象における嗜癖、依存、乱用及び再発関連障害の処置方法であり、該対象に有効量の化合物を投与することを含む。
【０１５９】
好ましくは、本発明の化合物は、大麻嗜癖、依存、乱用、中毒、及び再発関連障害の処置において使用するためのものである。
【０１６０】
実に、本発明者等は、特に、プレグネノロン及びその誘導体が、ＴＨＣによるＣＢ１受容体の活性化により誘導されるエンドカンナビノイドの四徴；ＴＨＣにより誘導される食物摂取；ＴＨＣにより誘導される記憶機能障害；ＴＨＣにより誘導されるシナプス伝達の変化；ＣＢ１アゴニストの自己投与を阻害することを示した。
【０１６１】
好ましくは、本発明の化合物は、アルコール嗜癖、依存、乱用及び再発関連障害の処置において使用するためのものである。
【０１６２】
神経変性及び精神障害：
別の好ましい実施態様において、本発明の化合物は、神経変性及び精神障害の処置において使用するためのものである。
【０１６３】
別の好ましい実施態様において、本発明の化合物の使用は、神経変性及び精神障害の処置用医薬の製造のためのものである。
【０１６４】
別の好ましい実施態様において、方法は、必要とする対象における神経変性及び精神障害の処置方法であり、該対象に、有効量の化合物を投与することを含む。
【０１６５】
好ましくは、本発明の化合物は、パーキンソン病及び統合失調症の処置において使用するためのものである。
【０１６６】
従って、本発明者等は、プレグネノロンが、ＴＨＣ又はコカインのいずれかにより増大されるドーパミン作動系の活性、及び興奮性シナプス伝達についてのＣＢ１活性化の効果を調整できることを示した。
【０１６７】
皮膚炎症疾患及び線維性疾患：
別の好ましい実施態様において、本発明の化合物は、皮膚炎症性疾患及び線維性疾患の処置において使用するためのものである。
【０１６８】
別の好ましい実施態様において、本発明の化合物の使用は、皮膚炎症性疾患及び線維性疾患の処置用医薬の製造のためのものである。
【０１６９】
別の好ましい実施態様において、方法は、皮膚炎症性疾患及び線維性疾患の処置方法である。従って、本発明者等は、本発明の化合物が、ＴＮＦαの産生を阻害することを示した。
【０１７０】
好ましくは、本発明の化合物は、皮膚炎症、ＵＶにより誘導される皮膚炎症及び癌、皮膚線維症及び創傷治癒の処置において使用するためのものである。
【０１７１】
循環器疾患：
別の好ましい実施態様において、本発明の化合物は、循環器疾患の処置において使用するためのものである。
【０１７２】
別の好ましい実施態様において、本発明の化合物の使用は、循環器疾患の処置用医薬の製造のためのものである。
【０１７３】
別の好ましい実施態様において、方法は、循環器疾患の処置方法である。
【０１７４】
従って、本発明者等は、本発明の化合物が、脂質の蓄積を低減し、ＴＮＦαの産生を阻害することを示した。
【０１７５】
好ましくは、本発明の化合物は、心筋症の処置において使用するためのものである。
【０１７６】
より好ましくは、本発明の化合物は、硬化心筋症、及び抗悪性腫瘍薬により誘導される心筋症、収縮不全、梗塞、及びアテローム性動脈硬化症からなる群より選択される心筋症の処置において使用するためのものである。
【０１７７】
本発明は、以下の図及び実施例によりさらに説明される。しかしながら、これらの実施例及び図は、決して、本発明の範囲を制限するものとして解釈されるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【０１７８】
【図１】図１は、Ｗｉｓｔａｒラットにおいて、以下を表すダイアグラムを示す：（Ａ）側坐核におけるプレグネノロン（ＰＲＥＧ）、アロプレグナノロン（ＡＬＬＯ）、エピアロプレグナノロン（ＥＰＩ）、テストステロン（Ｔ）、及びジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）の基底レベル。（Ｂ）側坐核におけるプレグネノロン濃度の高くかつ長期の増加を誘導する、ＴＨＣ注射（３mg/kg、ｉｐ）の効果。側坐核におけるプレグネノロンのずっと少ない増加を誘導する、他の乱用薬物：コカイン（２０mg/kg、ｉｐ）、モルヒネ（２mg/kg、ｉｐ）、ニコチン（０．４mg/kg、ｉｐ）、及びエタノール（１g/kg、ｉｐ）の効果。プレグネノロンについて観察されるものよりずっと低い、プレグネノロン由来の下流ステロイド：アロプレグナノロン（Ｃ）、エピアロプレグナノロン（Ｄ）、テストステロン（Ｅ）、及びＤＨＴ（Ｆ）についてのＴＨＣ及び他の乱用薬物の効果。矢印は、全ての薬物の注射時間を示す。データを、平均±ＳＥＭ（１群当たりｎ＝６〜８）として表す。
【図２】図２は、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおけるＴＨＣにより誘導される行動の四徴についてのプレグネノロンの負の制御を表すダイヤグラムを示す。ＴＨＣ用量依存性（ビヒクル群）は、（Ａ）自発運動活性［Ｆ（３，５９）＝１７．７、Ｐ＜０．００１］、及び（Ｂ）体温（対照と比較されたデルタＴ）［Ｆ（３，５９）＝３９．９、Ｐ＜０．００１］を減少させ、（Ｃ）カタレプシー（移動を開始する潜時）［Ｆ（３，５９）＝４７．５、Ｐ＜０．００１］及び（Ｄ）鎮痛（ホットプレート試験における侵害刺激反応を開始する潜時）［Ｆ（３，５９）＝５．１５、Ｐ＜０．０１］を増加させた。プレグネノロンの合成を遮断するＰ４５０ｓｃｃ阻害剤であるアミノグルテチミド（ＡＭＧ、５０mg/kg、ｉｐ）は、全てのＴＨＣの行動効果：（Ａ）自発運動の抑制［Ｆ（３，９８）＝１３．８、Ｐ＜０．００１］、（Ｂ）低体温［Ｆ（３，９８）＝４．７、Ｐ＜０．０１］、（Ｃ）カタレプシー［Ｆ（３，９８）＝２．１，Ｐ＜０．０５］、及び（Ｄ）鎮痛［Ｆ（３，９８）＝２．２、Ｐ＜０．０５］を増大させた。プレグネノロン（ＰＲＥＧ、６mg/kg、ｓｃ）は、ＴＨＣ（１０mg/kg、ｉｐ）の効果を減少させ、（Ｅ）自発運動、（Ｆ）体温、（Ｇ）カタレプシー、及び（Ｈ）鎮痛についてＡＭＧ（５０mg/kg、ｉｐ）の効果を完全にレスキューした。プレグネノロンは、ＴＨＣを受けていない動物において効果を有さなかった。データを、平均±ＳＥＭ（１群当たりｎ＝６〜１２）として表す。ビヒクル処置マウスと比較して、＊＝Ｐ＜０．０５；＊＊＝Ｐ＜０．０１；＊＊＊＝Ｐ＜０．００１。
【図３】図３は、ＣＢ１により仲介される食物摂取のプレグネノロンによる阻害を表すダイヤグラムを示す。（Ａ）自由に餌を与えたＷｉｓｔａｒラットにおけるＴＨＣ（０．５mg/kg、ｉｐ）により誘導される食物摂取の増加は、プレグネノロン注射［Ｆ（３，９４）＝３．６５；Ｐ＜０．０２］により、用量に依存して阻害された。（Ｂ）２４時間食物欠乏Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおけるＴＨＣ（１mg/kg、ｉｐ）により誘導される食物摂取の増加は、プレグネノロン（２mg/kg、ｓｃ）により抑制された。（Ｃ）プレグネノロンは、２４時間食物欠乏Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおいて、食物摂取を用量に依存して減少させた。（Ｄ）２４時間食物欠乏Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおいて、プレグネノロン（ＰＲＥＧ  ６mg/kg）により誘導される食物摂取の減少は、ＣＢ１ＲアンタゴニストであるＳＲ１４１７１６Ａ（０．０５mg/kg、ｉｐ）での事前処置により、逆転された。データを、平均±ＳＥＭ（１群当たりｎ＝６〜１２）として表す。ビヒクル処置マウスと比較して、＊＝Ｐ＜０．０５；＊＊＝Ｐ＜０．０１；＊＊＊＝Ｐ＜０．００１。
【図４】図４は、脳におけるプレグネノロン由来下流活性ステロイドについて、プレグネノロン注射の効果を表すダイヤグラムを示す。（Ａ）プレグネノロン投与（ｓ．ｃ．）は、２４時間食物欠乏Ｃ５７Ｂｌ／６マウスの前頭皮質及び視床下部［それぞれ、Ｆ（３，１９）＝２０，Ｐ＜０００１；Ｆ（３，１９）＝２３、Ｐ＜０．００１］において、プレグネノロンレベルを用量に依存して増加させた。プレグネノロンは、（Ｂ）アロプレグナノロン、（Ｃ）エピアロプレグナノロンの濃度を変更しなかった。データを、平均±ＳＥＭ（１群当たりｎ＝７〜８）として表す。ビヒクル処置動物（ＰＲＥＧ  ０mg/kg）と比較して、＊＝Ｐ＜０．０５、＊＊＊＝Ｐ＜０．００１。
【図５】図５は、ＣＤ１マウスにおいて、ＣＢ１アゴニストであるＷＩＮ５５，５１２−２の自己投与のプレグネノロンによる阻害を表すダイヤグラムを示す。（Ａ）ＷＩＮ５５，５１２−２の自己投与（０，０１２５mg/kg/注射）の取得中、鼻を突く回数は、不活性な穴より、活性な穴において有意に多かった［Ｆ（１，１８）＝３８．３、Ｐ＜０．００１］。（Ｂ）取得後、プレグネノロンの注射（２又は４mg/kg、ｓｃ）は、活性な穴における応答数を減少させた。（Ｃ）プレグネノロンはまた、累進比率スケジュールのブレークポイントの減少により測定されるように、ＷＩＮ５５，５１２−２の動機付けを減少させた。データを、平均±ＳＥＭ（１群当たりｎ＝５〜８）として表す。ビヒクル処置動物（ＰＲＥＧ  ０mg/kg）と比較して、＊＊＝Ｐ＜０．０５、＊＊＊＝Ｐ＜０．００１。
【図６】図６は、記憶について、ＴＨＣの副作用のプレグネノロンによる阻害を表すダイヤグラムを示す。物体認知試験において判別指標により示される通り、ＴＨＣ（１０mg/kg、ｉｐ）は、有意な記憶喪失を誘導し、そしてそれは、プレグネノロン（ＰＲＥＧ、６mg/kg、ｓｃ）により、消滅された［Ｆ（３，２３）＝２４．６、Ｐ＜０．００１］。データを、平均±ＳＥＭ（１群当たりｎ＝６〜７）として表す。ビヒクル処置マウスと比較して、＊＊＊＝Ｐ＜０．００１。
【図７】図７は、ＴＨＣにより誘導されるドーパミン作動性活性の増加のプレグネノロンによる阻害を表すダイヤグラムを示す。ラットにおけるプレグネノロン注射（ＰＲＥＧ、２mg/kg、ｓｃ）は、（Ａ）腹部被蓋野（ＶＴＡ）ドーパミン作動性ニューロンの発火率［Ｆ（４，３２）＝７．１４、ｐ＜０．００１］、及び（Ｂ）側坐核におけるドーパミン流出の増加［Ｆ（１０，８０）＝１０．８０、ｐ＜０．００１］において、Δ９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）により誘導される増加を減少させた。ＴＨＣの累積用量（０．１５〜１．２mg/kg）を、時間０で、４分かけてｉ．ｖ．投与した（１投薬当たり１分記録）。
【図８】図８は、ラットにおけるコカインプレグネノロン注射（ＰＲＥＧ、２mg/kg、ｓｃ）により誘導されるドーパミン作動性活性の緩和のプレグネノロンによる阻害が、（Ａ）ドーパミン作動性ニューロンの破壊活性におけるコカインにより誘導される減少、及び側坐核におけるドーパミン流出の増加を消滅させることを表すダイヤグラムを示す。コカインの累積用量（０．０１２５〜０．８mg/kg）を、時間０で、４分かけてｉ．ｖ．投与した（１投薬当たり１分記録）。ビヒクル処置ラットと比較して、＊＝Ｐ＜０．０５、＊＊＝Ｐ＜０．０１、＊＊＊＝Ｐ＜０．００１。
【図９】図９は、体重及び食物摂取について、プレグネノロン投与の効果を表すダイヤグラムを示す。（Ａ）暗期の始まる前に、１日に１回皮下注射したプレグネノロン５mg/kg（ＰＲＥＧ５）は、高脂肪食餌を与えた動物において、体重の有意な減少を徐々に誘導した［Ｆ（１，２９）＝３．１３；ｐ＜０．００１］。（Ｂ）しかしながら、プレグネノロンは、食物摂取を緩和しなかった。
【図１０】図１０は、肥満マウスにおける、脂肪蓄積及び除脂肪量について、プレグネノロンの効果を表すダイヤグラムを示す。暗サイクルの始まる前に、１日に１回皮下注射したプレグネノロンは、脂肪量の増加を依存的にブロックし（Ａ，Ｃ）、高脂肪食餌を与えている間観察される除脂肪量の減少を鈍らせた（Ｂ，Ｄ）。脂肪量及び除脂肪量を、磁気共鳴を用いて、マウスにおいて算出した。プレグネノロン投与開始前に、ＰＲＥ＝値を得た。プレグネノロン又はビークルでの処置の３０日後に、ＰＯＳＴ＝値を得た。＊＝Ｐ＜０．０５、＊＊＝Ｐ＜０．０１。
【図１１】図１１は、ＬＰＳにより誘導されるＴＮＦαの増加のプレグネノロンによる阻害を表すダイヤグラムを示す。プレグネノロン（６mg/kg皮下）又はビークル溶液の注射の３０分後に、細菌毒素ＬＰＳを腹腔内注射した。プレグネノロンは、ＬＰＳの注射により誘導されるＴＮＦαの増加を半減させた。＊＝Ｐ＜０．５
【図１２】図１２は、ラットの側坐核における興奮性シナプス電流のＴＨＣにより誘導される阻害のプレグネノロンによる阻害を表すダイヤグラムを示す。局所軸索（アクソン）を電気的に刺激することにより誘導される興奮性シナプス後電流（ＥＰＳＣ）を、成体ラットから得られた脳切片中の主なニューロンである側坐核におけるパッチクランプを用いて、記録した。（Ａ）ＴＨＣ（２０mM）のバス適用は、対照切片におけるシナプス伝達を確実に阻害した（阻害の３４．３±３．７％、Ｎ＝８）。切片を１００nMプレグネノロンで予め処理したとき、ＴＨＣの効果は有意に弱められた（阻害の１５．１±１．８％、Ｎ＝９）。（Ｂ）シナプス電流トレースを、代表的実験から、ベースラインとＴＨＣ暴露の４０分後で平均化した。＊＊＊Ｔ検定：ｔ＝４．８２０、ｄｆ＝１５、ｐ＝０．０００２。
【図１３】図１３は、マウス側坐核における興奮性シナプス伝達のＴＨＣにより誘導される阻害のプレグネノロンによる阻害を表すダイヤグラムを示す。（Ａ）局所軸索を電気的に刺激することにより誘導されるフィールド興奮性シナプス後電位（ｆＥＰＳＰ）を、成体マウスから得られた側坐核脳切片において記録した。ＴＨＣのバス適用は、対照切片において、シナプス伝達の用量に依存した阻害を誘導した（Ｎ＝５〜９）。切片を１００nMプレグネノロンで予め処理したとき、ＴＨＣの効果は減少された（Ｎ＝５〜６）。（Ｂ）代表的なｆＥＰＳＰ平均トレースを、ベースラインの最中とＴＨＣ暴露の４０分後に記録した。２方法ＡＮＯＶＡ：プレグネノロン効果ｐ＜０．００２；ＴＨＣ効果ｐ＜０．０００３。
【図１４】図１４は、プレグネノロンがＣＢ１受容体の活性化の阻害剤であり、そして、それがＣＢ１のアゴニストのオルソステリック結合を修飾しないことを表すダイヤグラムを示す。プレグネノロン（１０−１２〜１０−４Ｍ）は、ＣＨＯ細胞により発現されるヒトＣＢ１受容体へのＣＢ１アゴニスト［３Ｈ］ＣＰ５５，９４０の特異的結合を修飾しなかった。データを、平均±ＳＥＭとして表す（濃度当たりｎ＝２〜３）。
【図１５】図１５は、不安様行動について、プレグネノロンの効果の欠如を表すダイヤグラムを示す。高架式十字迷路のオープンアームへのエントリー数及びそこで過ごした時間の％により、不安様行動を測定した。プレグネノロンは、その最大行動効果に対応する１〜６mg/kgの効果的行動用量より十分に多い用量（１０mg/kg）でさえ、不安様行動を誘導しなかった。ＣＢ１受容体のオルソステリックアンタゴニストであるリモナバンは、１０mg/kgで、オープンアームへのエントリー数及びそこで過ごした時間の減少により示される不安の増加を誘導した。Ｐ１、Ｐ６、Ｐ１０＝プレグネノロン１、６、１０mg/kg。Ｒｉｍｏ１０＝リモナバン１０mg/kg。Ｖ＝ビヒクル。＊＝Ｐ＜０．０５；＊＊＊＝Ｐ＜０．００１。
【図１６】図１６は、ＧＡＢＡ−Ａ受容体により仲介される電流についてプレグネノロンの効果の欠如を示すダイヤグラムを表す。成体マウスＮＡｃ  ＰＮから記録したｍＩＰＳＣは、−８０mVに電圧を固定した。対照（Ｎ＝１６）及びプレグネノロン（１００nM：Ｎ＝１５；１μM：Ｎ＝１１）又はアロプレグナノロン（１００nM：Ｎ＝１８；１μM  Ｎ＝１１）で予め処理した切片由来のｍＩＰＳＣの振幅（ＡＮＯＶＡ  ｆ＝５．３９、ｄｆ＝４，６６、ｐ＜０．００１）、及び減衰期間（ＡＮＯＶＡ  ｆ＝２４．７、ｄｆ＝４，６６、ｐ＜０．０００１）の概要。ｈｏｃ試験後：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。Ｂ．ｍＩＰＳＣ記録の代表的トレース。Ｃ．ピークに対して正規化された平均ｍＩＰＳＣトレース。１μMアロプレグナノロンのみが、ｍＩＰＳＣ減衰期に実質的に影響したことに注意。ｃｏｎｔ＝対照；ｐｒｅｇ＝プレグネノロン；ａｌｌｏ＝アロプレグナノロン。
【図１７】図１７は、プレグネノロンが、ＡＭＰＡＲ又も、ＮＭＤＡＲにより介在される電流も修飾しないことを示すダイヤグラムを表す。（Ａ）成体マウス側坐核の主なニューロンから記録したｍＥＰＳＣは、−８０mVで電圧を固定し、ａ）対照（Ｎ＝１６）、及びプレグネノロン（１００ｎＭ）で予め処理した（Ｎ＝１５）切片から記録されたｍＥＰＳＣは、同様の振幅（Ｔ検定：ｔ＝１．１６、ｄｆ＝２９、ｐ＝０．２５）及び減衰期間（Ｔ検定：ｔ＝１．２８、ｄｆ＝２９、ｐ＝０．２１）を示した。ｂ）平均ｍＥＰＳＣトレースは、カイネティクスがプレグネノロンにより影響されないことを示すピークに対して正規化された。ｃ）ｍＥＰＳＣ記録の代表的トレース。Ｂ．全細胞電流は、２５μM  ＮＭＤＡ、１分間のバス適用により誘導されるＮＡｃ  ＰＮにおいて記録された。ａ）ＮＭＤＡＲ−誘導電流は、対照（Ｎ＝１７）と１００nMプレグネノロン（Ｎ＝１２）及び１μM（Ｎ＝７）（ＡＮＯＶＡ：ｆ＝０．０９、ｄｆ＝２，３３、ｐ＝０．９１）で予め処理した切片間で同等であった。ｂ）−３０ｍＶで電圧を固定したＮＡｃ  ＰＮの保持電流について、ＮＭＤＡの効果を示す代表的実験。ｃｏｎｔ＝対照；ｐｒｅｇ＝プレグネノロン。
【図１８】図１８は、側坐核ステロイド含有について、プレグネノロン及び、Ｃ３及びＣ１７合成誘導体３−フルオロプレグネノロン（ＣＰ１）、１７−メチルプレグネノロン（ＣＰ２）、及び３−フルオロ−１７−メチルプレグネノロン（ＣＰ３）の高用量（５０mg/kg、ｓｃ）注射の効果を表すダイヤグラムを示す。プレグネノロンは、Ｗｉｓｔａｒラットの側坐核において、アロプレグナノロン（Ａ）、及びエピアロプレグナノロン（Ｂ）レベルを増加させたが、３−フルオロプレグネノロン、１７−メチルプレグネノロン、又は３−フルオロ−１７−メチルプレグネノロンは増加させなかった。データを、平均±ＳＥＭ（１群当たりｎ＝５〜７）として表す。
【図１９】図１９は、Ｃ３及びＣ１７合成誘導体３−フルオロプレグネノロン（ＣＰ１）、１７−メチルプレグネノロン（ＣＰ２）、及び３−フルオロ−１７−メチルプレグネノロン（ＣＰ３）が、食物摂取を減少させることを示すダイヤグラムを表す。（Ａ）自由に食餌を与えたＷｉｓｔａｒラットにおいて、ＴＨＣ（０．５mg/kg、ｓｃ）により誘導される食物摂取の増加は、１７−メチルプレグネノロン（８mg/kg、ｓｃ）により有意に減少され、統計的に有意でない減少傾向も、３−フルオロプレグネノロン及び３−フルオロ−１７−メチルプレグネノロンの後に観察された。（Ｂ）プレグネノロン［（Ｆ４，２８）＝５，５；Ｐ＜０．０１］、３−フルオロプレグネノロン［（Ｆ３，２０）＝３；Ｐ＜０．０５］、１７−メチルプレグネノロン［（Ｆ３，２０）＝５．３；Ｐ＜０．０１］、及び３−フルオロ−１７−メチルプレグネノロン［（Ｆ３，２０）＝４；Ｐ＜０．０２］は、２４時間食物欠乏Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおいて、食物摂取を用量に依存して減少させた。（Ｃ）プレグネノロン、３−フルオロプレグネノロン、１７−メチルプレグネノロン、及び３−フルオロ−１７−メチルプレグネノロン（２mg/kg、ｓｃ）は、２４時間食物欠乏Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおいて、ＴＨＣにより誘導される過食症を減少させた。（Ｄ）２４時間食物欠乏Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおいて、ＴＨＣにより誘導される過食症について、プレグネノロン及び１７−メチルプレグネノロンの全用量応答効果。両化合物について、第１の有効用量は１mg/kgであった。データを、平均±ＳＥＭ（１群当たりｎ＝６〜８）として表す。ビヒクル処置マウスと比較して、＊＝Ｐ＜０．０５、＊＊＝Ｐ＜０．０１；＊＊＊＝Ｐ＜０．００１。ＴＨＣ処置マウスと比較して、＃＃＝Ｐ＜０．０１；＃＃＃＝Ｐ＜０．００１。
【図２０】図２０は、プレグネノロン及び下流代謝物アロプレグナノロンのレベルについて、Ａｌｚｅｔミニポンプを用いたプレグネノロンの定常状態投与の効果を表すダイヤグラムを示す。プレグネノロンの皮下注射は、短い時間（＜１時間）持続するプレグネノロンレベルの増加を誘導し（Ａ）、又、少なくとも１時間に渡り、アロプレグナノロンレベルを増加させた（Ｄ）。Ａｌｚｅｔミニポンプを介したプレグネノロンの投与（Ｂ、Ｃ）は、プレグネノロンの血漿レベルを用量依存的に増加させたが、アロプレグナノロンの血漿レベルを増加させなかった（Ｅ、Ｆ）。
【０１７９】
実施例
プレグネノロンの誘導体の合成例：
プレグネノロンは、周知であり、市販されており、その誘導体の合成のために前駆体として用いることができる。
【０１８０】
アルキルで置換されているＣ１７を有するプレグネノロンの誘導体の合成例：
以下に示す通り、Ｃ１７位にてアルキルで置換された化合物を合成するために、第１工程において、対応する酢酸エノールを形成する。次に、それをグリニャール試薬で処理して、エノラートを生成し、続いて、求電子試薬で捕捉した。求電子試薬は、優先的に、ヨード−又はブロモ−アルキル、−アリル、−ベンジル又は−アリールであった。
【化１６】
2014515361.tif 000017
【０１８１】
−ＯＲで置換されているＣ１７を有するプレグネノロンの誘導体の合成例
以下の図は、アルコールを用いて銅により仲介される官能化による、アルコキシ−、ベンジルオキシ−、及びアリールオキシプレグネノロンで置換されたＣ１７の取得方法を示す。
【化１７】
2014515361.tif 000018
【０１８２】
ハロゲンで置換されているＣ３及びＲで置換されているＣ１７を有するプレグネノロンの誘導体の合成例：
以下に示す通り、Ｃ３のアルコール官能基をフッ素原子で置換するために、Ｒで置換されているＣ１７を有するプレグネノロンの誘導体を、ＤＡＳＴで処理する。
【化１８】
2014515361.tif 000019
【０１８３】
アルコキシで置換されているＣ３を有するプレグネノロンの誘導体の合成例：
以下に示す通り、Ｃ３位でのエーテル官能基の形成は、第１工程において、アルコールを脱離基として対応するトシレートに転換することを必要とする。次に、Ｃ３−アルコキシプレグネノロンの形成に至るために、それを適切なアルコールで処理する。
【化１９】
2014515361.tif 000020
【０１８４】
＝Ｏで置換されているＣ３及びＲで置換されているＣ１７を有するプレグネノロンの誘導体の合成例：
以下に示す通り、＝Ｏで置換されているＣ３及びＲで置換されているＣ１７を有するプレグネノロンの誘導体を得るために、Ｃ１７置換プレグネノロンを酸化剤で処理して、アルコール官能基を対応するケトンへ酸化し、続いて、２重結合の自発的な異性化により、修飾プロゲステロンを与える。
【化２０】
2014515361.tif 000021
【０１８５】
ＣＢ１受容体の阻害におけるプレグネノロン及びその誘導体の役割例
材料及び方法：
動物
動物を、温度（２２℃）及び湿度（６０％）にコントロールされた動物施設において、一定の明暗サイクル（点灯、８：００〜２０：００）下で、個々に飼育した。食物摂取実験、及びＷＩＮ５５，２１２−２の自己投与の実験期間中を除き、食物及び水は、実験を通じて自由に利用可能であった。到着後、実験前２週間、動物を定期的に調べた。ラットにおける食物摂取実験、及び暗期中に行ったＣＤ１マウスにおけるＷＩＮ５５，２１２−２自己投与期間の試験を除き、大抵の実験を明期中に行った。全ての実験を、European Unionの勧告（８６／６０９／ＥＥＣ）を厳密に順守して行った。
【０１８６】
成体オスＷｉｓｔａｒラット（３〜４月齢）、Ｃ５７Ｂｌ／６Ｎマウス（２〜３月齢）Ｃ５７Ｂｌ／６ｊマウス（２〜３月齢）、及びＣＤ１マウス（実験開始時の体重２５〜３０ｇ）を、Charles River Laboratories（France）から購入した。ＣＢ１欠損（ＣＢ１−／−）及びＤ１−ＣＢ１変異（Ｄ１−ＣＢ１−／−）マウスを、Marsicano et al., Nature. 2002 418:530-4;Monory et al., PLoS Biol. 2007 5(10):e269に記載されるように、我々の実験室において作成した。
【０１８７】
薬
Δ９−テトラヒドロカンビノール（ＴＨＣ、Sigma-Aldrich、France）を、１００％エタノール中の３０mg/ml(w/v)溶液として購入した。注射前、この溶液を、Ｔｗｅｅｎ８０（１滴／３ml）、及び生理食塩水（２．５％）で１：４０希釈したジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で溶解した。ビヒクル溶液は、全ての成分（１滴／Ｔｗｅｅｎ８０  ３ml、ＤＭＳＯ（２．５％）、及び終濃度１．８％のエタノール得るため生理食塩水で希釈したエタノール）を含有していた。コカインＨＣｌ（Cooperation Pharmaceutique Francaise、France）、硫酸モルヒネ（Francopia、France）、酒石酸水素ニコチン（Sigma-Aldrich、France）、及びＵＳＰアルコール（９５％、Sigma-Aldrich、France）を、生理食塩水に溶解した。ＨＵ２１０、ＪＷＨ１３３、及びＡＭ２５１を、Tocris、UKから、ＷＩＮ５５，２１２−２、Ｅ．Ｃｏｌｉ０１１１：Ｂ４由来のアミノグルテチミド（ＡＭＧ）プレグネノロン（５−プレグネン−３β−オール−２０−オン）リポポリサッカライド（ＬＰＳ）をSigma-Aldrich（France）から、リモナバン（ＳＲ１４１７１６Ａ）を、Cayman Chemical（Interchim、Montlucon、France）から購入した。
【０１８８】
合成化合物である３−フルオロプレグネノロン；１７−メチルプレグネノロン、及び３−フルオロ−１７−メチルプレグネノロンを、AtlanChimPharma（France）により合成した。薬物溶液を、Ｔｗｅｅｎ８０（１滴／３ml）、及びＤＭＳＯ（２．５％）又はＮＭＰ（２．５％）に溶解し、生理食塩水溶液にて希釈した。ＴＨＣ、コカイン、モルヒネ、ニコチン、エタノール、ＨＵ２１０、ＪＷＨ１３３、ＡＭ２５１、ＷＩＮ５５，２１２−２、ＡＭＧ、及びＳＲ１４１７１６Ａを腹腔内注射（ｉｐ）し、プレグネノロン又はプレグネノロン誘導体を、皮下注射（ｓｃ）した。注射容量は、ラットについて、１ml/kg体重、マウスについて１０ml/kg体重であった。
【０１８９】
ＳＡ実験において、ＷＩＮ５５，２１２−２（Sigma Chemical Co.、Madrid、Spain）を、Ｔｗｅｅｎ８０  １滴に溶解し、生理食塩水溶液において希釈した。塩酸ケタミン（１００mg/kg）（Imalgene 1000；Rhone Merieux、Lyon、France）と塩酸キシラジン（２０mg/kg）（Sigma、Madrid、Spain）を混合し、エタノール（５％）及び蒸留水（９５％）に溶解した。この麻酔薬混合物を、カテーテル移植に先立ち、２０ml/kg体重の注射容量で腹腔内注射した。チオペンタールナトリウム（５mg/ml）（Braun Medical S.A、Barcelona、Spain）を、蒸留水に溶解し、静脈内カテーテルを通した０．１mlの注入により、デリバリーした。インビトロヒトＣＢ１受容体機能アッセイのため、プレグネノロン、及びＣＰ５５９４０を、終濃度１００mMまでＤＭＳＯ中に溶解し、−２０℃で保存した。
【０１９０】
神経ステロイド定量化
血液及び脳試料採取
動物を断頭により屠殺し、胴体血液をＥＤＴＡでコートしたチューブに集め、２０００×ｇで１０分間遠心し、上清を−２０℃で保存した。脳を速やかに採取し、脳領域を氷上に解剖し、試料を迅速に氷にて凍結し、−８０℃で保存した。
【０１９１】
ＧＣ／ＭＳによるステロイドレベルの測定
プレグネノロン（５−プレグネン−３β−オール−２０−オン）、アロプレグナノロン（３α−ヒドロキシ−５α−プレグナン−２０−オン）、エピアロプレグナノロン（３β−ヒドロキシ−５α−プレグナン−オール−２０−オン）、テストステロン、及び５αジヒドロテストステロンの血漿、脳、及び培地レベルを、既に記載された抽出、精製、及び定量プロトコール（George O, et al., Biol Psychiatry. 2010 68: 956-63、Vallee M, et al., Anal Biochem. 2000, 287:153-66）に従い、ＧＣ／ＭＳにより決定した。
【０１９２】
ＴＨＣ行動の４分子
体温
直腸プローブ（ＲＥＴ３プローブ、Physitemp instruments、USA）を用いて、意識のあるマウスにおいて、体温を測定し、thermalert monitoring thermometer（TH-5、Physitemp instruments、USA）によりモニタリングした。
【０１９３】
自発運動活性
自発運動を、自動開放フィールドシステム（箱の大きさ１００×１００×３０cm、照明１０lux、ビデオ追跡システム：Viewpoint、Lyon、France）又コンピューターによりモニターされるフォトセルビーム（Imetronic、France）を取り付けたＰｌｅｘｉｇｌａｓケージ（長さ１９cm×幅１１cm×高さ１４cm）により測定した。動物を１５分間個々に試験した。動物が箱内で移動した累積水平距離を記録した。
【０１９４】
カタレプシー
棒カタレプシー試験により、カタレプシーを測定した。台表面から３．５cmで水平に固定した直径１cmの棒上に、マウスの前足を置いた。落ちるまでの時間を記録した。
【０１９５】
鎮痛
ホットプレート鎮痛メーター（ＢＩＯ−ＨＣ１．００、Bioseb、France）を用いて、鎮痛を測定した。プレートを５２℃±０．１℃まで加熱し、マウスが、不快感（本明細書で逃避潜時として定義される、足をなめるか又はたじろぐ、又はプレート上でのジャンプ）の最初の兆候を示すまでの時間を記録した。６０秒のカットオフ時間をセットし、組織損傷を防いだ。
【０１９６】
物体認識課題
２本のアームのＬ迷路（各アームの大きさ：長さ３０cm×幅４．５cm）において、薄暗い条件（５０〜６０lux）下で、物体認識を測定した。慣れ、トレーニング、及び試験セッションに対応する、連続して３日間、毎日９分間のセッションについて、動物を個々に試験した。１日目（慣れのセッション）、マウスに物体のないＬ迷路を探索させた。２日目（トレーニングセッション）、２個の同一物体を、迷路の各アームの端に提示した。物体のあるアームについて優先性は現れない（データを示していない）が、物体及びアームを、各マウス／条件について無作為化した。３日目（試験セッション）、なじみのある物体の１つを、新たな物体と置き換え、２つの物体（新規及びなじみ）それぞれを探索する総時間を計算した。各アームで費やす時間、及び物体（なじみ又は新規）を探索する時間を記録した。物体の探索を、２cm未満の距離で鼻を物体に向けることとして定義した。試験セッション中、判別指標を、２つの物体を探索する総時間により割った、新規又はなじみの物体のいずれかを探索する時間の差として計算した。判別指標が高ければ高いほど、なじみの物体について、より優れた記憶力を反映していると考える（Puighermanal et al., 2009）。
【０１９７】
食物摂取測定
動物のホームケージにおける食物の消費を測定することにより、食物摂取を評価した。各動物について、標準的実験用固形飼料（U.A.R.、France）５０〜１００ｇを、清潔なホームケージ内に置いた。残った食物の量を１時間後に計量し、消費された食物の量を計算した。
【０１９８】
WIN55,212−2自己投与
動物に自己注入WIN55,212−2(WIN)を学習させた静脈内自己投与実験を、マウスオペラントチャンバー(Model ENV−307A−CT, Medical Associates, Georgia, VT, USA)にて、既に記載の手順(Mendizabal V, et al., Neuropsychopharmacology. 2006, 31:1957−66)を用いて、行った。
【０１９９】
インビボ微小透析と電気生理学の結びつけ
一般的手法。手術及び灌流手順を行って、同時の電気生理的モニタリングと微小透析モニタリングを可能にした。簡単に言うと、ラットを、イソフルレン／空気の２％混合物を用いて麻酔し、カテーテルを、静脈内薬物投与のために大腿静脈内に挿入した。その後、ガス麻酔（手術中２％イソフルレン、電気生理学及び微小透析実験中１．５％イソフルレン）を一定に運ぶためのノーズマスクを備えた定位枠（David Kopf Instruments、Phymep、Paris、France）内に動物を置き、それらの直腸温度をモニターし、加温パッド（CMA 150、Carnegie Medecin、Phymep）により３７±１℃に維持した。微小透析プローブ（CMA/11、2mm長、240μm外径、Cuprophan；Carnegie Medicin、Phymep）、及び記録電極（ガラスマイクロピペットTW150F-4、2〜3μm外径、WPI-Europe、Aston Stevenage、UK）を、それぞれ、シェル細分化［座標，ブレグマに対してmm内：前後方向（ＡＰ）＝＋１．７、側部（Ｌ）＝１、腹部（Ｖ）−８］に対応する右側坐核の中間腹部部分、及び右腹部被蓋野（ＶＴＡ）（座標、ブレグマに対してｍｍ内：ＡＰ＝−５．４〜５．８、Ｌ＝０．４〜０．８、Ｖ＝−７．０〜８．５）内に、Paxinos and Watson地図に従い埋め込んだ。２mM硫酸ナトリウムバッファーでｐＨ７．４に調節した、１５４．１mM  Ｃｌ−、１４７mM  Ｎａ＋、２．７mM  Ｋ＋、１mM  Ｍｇ２＋、及び１．２mM  Ｃａ２＋を含有する人工脳脊髄液（ａＣＳＦ）を用いて、微小灌流ポンプ（CMA111、Carnegie Medicin、Phymep）により、一定速度２μL/分でプローブを灌流した。次に、灌流を２時間維持し、灌流液中のドーパミン（ＤＡ）レベルを安定化させた。
【０２００】
プローブ灌流開始の２時間（安定化期間）後に、ＤＡニューロン発火の１単位記録、及びＤＡ細胞外レベルのモニターを開始した。透析液（３０μL）を、１５分毎に氷上に回収し、直ちに分析して、ＤＡ細胞外レベルの基底値（ベースライン）を決定し、ＤＡ含有が１０％未満で変動する３つの連続試料により定義した（９）。薬物処置（ＴＨＣ又はコカイン）投与の３０分前に、電気生理的記録のためのＤＡニューロンの研究を行った。ＤＡニューロン発火頻度を３〜５分間記録して、ＤＡニューロンの平均頻度放出の１０％未満の変動により定義される発火基底値を得た。灌流液中のＤＡニューロン発火及びＤＡ細胞外レベルの安定な基底値を得たら、薬理学的処置を行った。
【０２０１】
ＤＡニューロンの記録。０．５Ｍ酢酸ナトリウム（インピーダンス、２〜５ＭΩ）に溶解した１％Ｆａｓｔ  Ｇｒｅｅｎで充填したガラスマイクロピペットを用いて、ＶＴＡに位置するニューロンの１単位活性を細胞外で記録した。シグナルをフィルター処理（帯域通過、０．４〜１ｋＨｚ）し、高インピーダンス増幅器（Dagan2400A、Dagan Corporation、USA）により増幅し、個々のスパイクをウィンドウ弁別器（WD-2、Dagan Corporation、USA）により単離し、アナログ−デジタルストレージスコープ（HM507、Hameg、Frankfurt、Germany）上に表示した。次に、実験を、ＣＥＤ  １４０１インタフェース（Cambridge Electronic Design、Cambridge、UK）に接続したコンピューターにより、Ｓｐｉｋｅ２ソフトウエア（Cambridge Electronic Design、Cambridge、UK）を用いて、オンラインで試料採取した。既に公開された基準（１２〜１４）に従い、ＶＴＡ  ＤＡニューロンを同定した。発火頻度を、スパイク／秒の数として定義した。
【０２０２】
ＤＡアッセイ。ＤＡを定量化するために、逆相Equisil BDSカラム（C18；2×250mm、粒子サイズ5μm；Cluzeau Info Labo、Ste Foy la Grande France）、及び＋４５０mV対Ａｇ／ＡｇＣｌにセットしたガラス状炭素電極を伴った電流測定検出器（Antec Leyden DECADE II、Alpha-mos、Toulouse、France）を備えたＨＰＬＣ装置に、透析液を注入した。移動相の組成は、１０％メタノールプラスのオルトリン酸でｐＨ４．８に調節した７０mM  ＮａＨ２ＰＯ４、０．１mM  Ｎａ２ＥＤＴＡ、及び０．１mM  オクチルスルホン酸であった。ＤＡについての感度は、シグナル／ノイズ比３：１を伴う０．３pg／２０μLであった。
【０２０３】
組織学。各実験の最後に、電極を介して、直接連続電流（−２０μA、１５分間）を通して、Ｆａｓｔ  Ｇｒｅｅｎダイを押し出し、記録部位の同定を可能にした。その後、脳を取り出し、ＮａＣｌ（０．９％）／パラホルムアルデヒド溶液（１０％）において固定した。Neutral Redで染色した連続冠状切片（６０μm）上の顕微鏡検査により、ＶＴＡ中の電極の位置、及び側坐核中の微小透析プローブの位置を決定した。
【０２０４】
食餌により誘発される肥満、及び脂肪蓄積の評価
２月齢オスＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスは、６０％高脂肪食餌（ＨＦＤ；カタログ番号Ｄ１２４９２、Research Diets、New Brunswick、NJ）を８週間自由に与えられ、その後、プレグネノロン又はビヒクルのいずれかで処置された。薬理学的処置の開始前の体重、脂肪量、及び絶食時グルコースレベルを一致させることにより、３つの処置群の動物の均一分配を保証した。
【０２０５】
身体の組成分析。マウスをＨＦＤ上に置く前、並びにプレグネノロン又はビヒクルでの慢性的処置の直前及び終わりに、EchoMRI分析計（EchoMedical Systems、Houston、TX）を用いて、脂肪量及び除脂肪量をインビボで評価した。
【０２０６】
血漿遊離脂肪酸の測定。４週間の処置の終わりに、ＤＩＯマウス由来の胴体血液を集め、製造元の指示（Abcam、カタログ番号６５３４１）に従い、比色反応キットにより、血漿遊離脂肪酸（ＦＦＡ）を測定した。
【０２０７】
血漿ＴＮＦαの測定。胴体血液を集め、３０００rpmで１５分間、４℃で遠心した。ＴＮＦαの測定を行うまで、血漿を−８０℃で保存した。製造元の指示（Fisher Scientific、カタログ番号Ｅ６４７３Ｃ）に従い、ＥＬＩＳＡキットを用いて、血漿ＴＮＦαレベルを評価した。
【０２０８】
脳切片上の電気生理学
切片調製。動物をイソフルランで深く麻酔し、スクロース−ベースの生理的溶液を用いて、４℃（２３mM  ＮａＨＣＯ３、７０mM  コリンＣｌ、７５mM  スクロース、２５mM  グルコース、２．５mM  ＫＣｌ、１．２５mM  ＮａＨ２ＰＯ４、７mM  ＭｇＣｌ２、及び０．５mM  ＣａＣｌ２）で経心的に灌流させた。脳を取り出し、前頭面において、ビブラトーム（Campden Instruments、Loughborough、UK）を用いて、切片化した（２５０〜３００μm）。切片化過程の間、脳をスクロースベース溶液中で維持した。切断後直ちに、切片を２３mM  ＮａＨＣＯ３、１２０mM  ＮａＣｌ、１１mM  グルコース、２．５mM  ＫＣｌ、１．２mM  ＮａＨ２ＰＯ４、２．４mM  ＭｇＣｌ２、１．２mM  ＣａＣｌ２を含有する低カルシウム人工脳脊髄液（低Ｃａ２＋ＡＣＳＦ）において、３２℃で、４０分間、保存した。次に、記録まで、低Ｃａ２＋ＡＣＳＦにおいて、室温で、切片を保存した。
【０２０９】
電気生理学。Axopatch-1D増幅器（Molecular Devices、Sunnyvale、CA）を用いて、記録を行った。データを１〜２kHzでフィルターし、１０kHzで、Digidata 1332Aインターフェース（Molecular Devices）上にデジタル化し、Clampex9を用いて、ＰＣ上に集め、Clampfit 10（Molecular Devices）を用いて分析した。
【０２１０】
全細胞パッチクランプ記録を、ＮＡｃコア主ニューロン（ＰＮｓ）から実施し行った。微分干渉赤外ビデオ顕微鏡（Leica DM LFSS microscope、Leica Microsystems、Germany；Camera Till Photonics、Germany）を用いて、細胞を同定した。
【０２１１】
ＡＭＰＡＲ及びＮＭＤＡＲ−仲介電流を記録するため、ガラスパッチクランプ電極（抵抗性４〜６MOhms）を、セシウムベースの溶液（１２５mM  グルコン酸、１２５mM  ＣｓＯＨ、１０mM  ＨＥＰＥＳ、１０mM  ＮａＣｌ、０．３mM  ＥＧＴＡ、０．０５mM  スペルミン、１０mM  ＴＥＡ−Ｃｌ、２mM  ＭｇＣｌ２、０．３mM  ＣａＣｌ２、４mM  Ｎａ２ＡＴＰ、０．３mM  ＮａＧＴＰ、０．２mM  ｃＡＭＰ）で充填した。阻害電流を記録するため、８０mM  グルコン酸、８０mM  ＣｓＯＨ、３０mM  ＣｓＣｌ、２０mM  ＮａＣｌを除き、同様の溶液を用いた。塩化物濃度が高くなればなるほど、過分極電位で記録したときより強力な推進力を好む。抵抗性を評価する実験を通じて、（Ｒａ）を、２−mV過分極パルスで評価した。Ｒａは補償されず、実験中、Ｒａが＞２５MΩ、又は＞２０％変化したなら、細胞を拒絶した。細胞に侵入する前に、増幅器の参照電位をゼロに調節した。
【０２１２】
ｆＥＰＳＰｓのため、細胞外ガラス記録及び刺激電極をＡＣＳＦで満たした。シナプス電位を、１０秒毎に２０Hzで運ばれる、２種の電気的刺激（０．１〜０．２５mA、２００μsec  持続）により誘起した。記録電極から背内側方向に＞１５０μmの距離に、刺激電極を置いた。
【０２１３】
データ取得及び分析。ＡＭＰＡＲ−仲介シナプス電流：ＧＡＢＡ−Ａ受容体を、５０μMピクロトキシンを灌流培地に加えることにより、ブロックした。過分極電位で記録することにより、ＮＭＤＡＲの関与を除外した。誘起シナプス電流及びｍＥＰＳＣのため、細胞は、それぞれ、−７０mV、及び−８０mVで固定した電圧であった。０．５μM  ＴＴＸの存在下でｍＥＰＳＣを記録した。
【０２１４】
ＮＭＤＡＲ−仲介電流：ＮＭＤＡＲを、電圧依存性マグネシウムブロックから解放するために、ＮＭＤＡにより誘導される保持電流の変化を、−３０mVで電圧固定した細胞において測定した。ＡＭＰＡＲ及びＧＡＢＡ−Ａ受容体を、それぞれ、２０μM  ＤＮＱＸ及び５０μMピクロトキシンでブロックした。
【０２１５】
ＧＡＢＡ−Ａ受容体−仲介電流：ｍＩＰＳＣを、ＡＭＰＡＲ及びＮＭＤＡＲアンタゴニスト（それぞれ、２０μM  ＤＮＱＸ及び５０μM  ＡＰ−５）の存在下で記録した。
【０２１６】
ｍＥＰＳＣ−ｍＩＰＳＣ分析：典型的には、慣らした後、細胞を２０分間平衡状態にし、続く１０分間のｍＥＰＳＣ−ｍＩＰＳＣの記録を分析に用いた。いくつかの典型的現象を平均化することから得たテンプレートを用いて、ｍＥＰＳＣ−ｍＩＰＳＣを検出した（Clampfit 10、Molecular Devices）。テンプレートを、データトレースに沿って、一度にワンポイントスライドした。それぞれの位置で、テンプレートを場合により測定し、データに合わせるために補正した。ベースラインノイズの２．５ＳＤと同等の、７pA及び１０pAのより小さい振幅閾値を、それぞれｍＥＰＳＣ及びｍＩＰＳＣに適用した。各細胞について、ｍＥＰＳＣ−ｍＩＰＳＣのカイネティクスを、平均的現象から、Ｃｌａｍｐｆｉｔ１０を用いて測定した。減衰期間を推定するために、２つの指数関数的曲線を、以下の方程式：ｙ（ｔ）＝Ａ１・ｅ（−ｔ／τ１）＋Ａ２・ｅ（−ｔ／τ２）（式中、Ａは振幅であり、ｔは時間であり、τは減衰期間定数である）により与えられる電流の減衰期の５〜９５％にフィットさせた。次に、加重τを計算した。
【０２１７】
インビトロヒトＣＢ１受容体アッセイ
プレグネノロンのオルソステリック結合についての結合アッセイを、ヒトＣＢ１受容体発現するチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）を用いて評価した。
【０２１８】
プレグネノロンのＣＢ１結合を、ＣＨＯ細胞において発現されるヒトＣＢ１カンナビノイド受容体のアゴニスト部位についての対するプレグネノロンの親和性により評価し、ＣＢ１アゴニスト［３Ｈ］ＣＰ５５９４０の放射性リガンド結合アッセイにて決定した。実験を、CEREP Franceにより、この供給者の標準的手順を用いて、行った。
【０２１９】
高架式十字迷路
高架式十字迷路を、中央の台（１０×１０cm）、及びそこから互いに９０°の角度で伸びた４本のアーム木（４５×１０cm）により作成した。クローズドアームと呼ばれる２つの反対アームは、５０cmの高さの周囲壁を有していた。オープンアームと呼ばれる他の２つのアームは、壁を有さない。部屋の床から６６cmで迷路をつるし、明るく照らした（１２０lux）。試験は、中央の台に動物を置くこと、エントリー数、及び５分間記録した迷路の各コンパートメントで過ごした時間からなっていた。エントリー数、及びオープアームで過ごした時間は、不安様行動の指標と考えられ、一方、エントリーの総数は、自発運動活性の指標である。
【０２２０】
インビトロでの代謝の研究
成体チャイニーズハムスター卵巣細胞の生検から初期化された親ＣＨＯ細胞株由来のサブクローンとして得られたＣＨＯ−Ｋ１細胞株（#CCL-61、ATCC-LGC、USA）を用いた。ＣＨＯ−Ｋ１細胞を、２４ウェルプレート（#353047、BD Biosciences、USA）上に、適切な濃度（２５×１０４細胞/ウェル）に、９０％  DMEM-Glutamax；（#31966-21、Life technologies、USA）及び１０％  Fetal Bovine Serum（#10270-106、Life technologies、USA）により構成されるフレッシュな、抗生物質フリーの培地中に播種した。
【０２２１】
プレグネノロンの定常状態投与
ポンプ速度０．１５μl/時間（model 2006）を有するマイクロ浸透圧ポンプ（Alzet Osmotis Pumps、Charles River、France）を、１２５又は２５０mg/mlの濃度（それぞれ、１日用量１２又は２４mg/kg体重に対応する）で、ＰＥＧ３００（８５％）、及びエタノール（１５％）に溶解したプレグネノロンで満たし、軽く麻酔した後に、皮下に埋め込んだ。全てのポンプを、埋め込む前、生理食塩水中、３７℃で、６０時間浸すことにより、用意した。
【０２２２】
統計的分析
分散の二元配置又は一元配置分析（ＡＮＯＶＡ）、Newman-Keuls、スチューデントＴ検定を用いて、統計分析を行った。全ての結果を、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍとして表した。GraphPad Prism（GraphPad Software Inc.、La Jolla、CA、USA）、又はStatistica 5.0（著作権）（StatSoft Inc、Tulsa、OK、USA）を用いて、統計的試験を行った。
【０２２３】
結果：
Ｉ．ＣＢ１活性化は、プレグネノロン合成及び濃度を増加させる
実施例１：ＴＨＣは、他の乱用薬物より、脳のプレグネノロン濃度を増加させる
この実施例において、本発明者等は、オスＷｉｓｔａｒラットにおいて、プレグネノロンの産生について主な乱用薬物の注射の効果を分析した。全組織において、ステロイド合成の第１工程は、下流活性分子の不活性な前駆体として多いに考えられてきたプレグネノロンの産生である。例えば、脳において、プレグネノロンから出発して、２つの並行する酵素カスケードが、一方で、アロプレグナノロン及びその立体異性体、エピアロプレグナノロンを、他方で、テストステロン及びその代謝物ＤＨＴを産生させる。微かな構造の違いを区別することが可能な唯一の技術であるＧＣ−ＭＳを用いて、これらの脳ステロイドを定量した。ほとんどの無条件の行動効果のためのＥＤ５０に対応する用量：精神刺激薬であるコカイン（２０mg/kg）、オピオイドモルヒネ（２mg/kg）、ニコチン（０，４mg/kg）、アルコール（１g/kg）、及び大麻、Δ９テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）（３mg/kg）の活性原理で、主要な種類の乱用薬物を、皮下注射又は腹腔内注射した。いくつかの上行脳構造、腹側中脳、視床下部、線条複合体、及び前頭皮質において、注射の１５、３０、及び１２０分後に、ニューロステロイドの濃度を分析した。
【０２２４】
全ての脳構造研究（前頭皮質、線条体、側坐核、腹側中脳）において、非常に類似する結果を得た。腹側線条体（側坐核）についての実施例において示す通り、ステロイドの基底レベル（図１Ａ）は、プレグネノロン及びテストステロンについて約１ng/g組織から、エピアロプレグナノロンについて０．２ng/gの範囲にあった。ＤＨＴ及びアロプレグナノロンは、中間体レベル約０．４ng/gを有した。全ての乱用薬物が、注射の１５〜３０分後に、プレグネノロンの脳濃度を増加させた（図１Ｂ）。著しいことに、ＴＨＣにより誘導されるプレグネノロンの増加は、他の乱用薬物により誘導されるものより数倍高かった：すなわち、他の乱用薬物について約２００％の増加に比べ、ＴＨＣについて約１５００％の増加であった。
【０２２５】
実施例２：ＴＨＣは、用量に依存した様式で、ラットの脳におけるプレグネノロン濃度を増加させる
この実施例において、本発明者等は、上述の実施例において示す通り、注射の３０分後に観察される薬物効果のピックで測定したプレグネノロンの体濃度について、異なる濃度のＴＨＣ（０．３、０．９、１．５、３、６、及び９mg/kg）又はビヒクルのオスＷｉｓｔａｒラットへの投与の効果をさらに特徴付けた。これらの実験は、脳で観察されるプレグネノロンの増加が、約３mg/kgのＥＤ５０を伴い、用量依存性であることを示した。実施例は、血漿及びいくつかの脳構造：前頭皮質（ＦＣＸ）；側坐核（ＡＣＣ）；線条体（ＳＴＲ）；視床下部（ＨＹＰ）において観察されるデータを提供した。ＴＨＣ投与後、プレグネノロンは、比較可能な様式で、全ての研究した脳構造において増加した。プレグネノロンはまた、血漿において増加したが、この増加は、脳で観察されるものより数倍低かった。
【０２２６】
実施例３：ＴＨＣは、用量に依存した様式で、マウスの脳におけるプレグネノロン濃度を増加させる
この実施例において、本発明者等は、マウスにおけるＴＨＣの効果を研究することにより、プレグネノロンの濃度について、ＴＨＣ投与の効果をさらに特徴付けた。注射の３０分後、薬物効果のピックにて、プレグネノロンを測定した。これらの実験は、マウスにおいても、ＴＨＣがプレグネノロンの用量依存的増加を誘導することを示した。実施例は、いくつかの脳構造：前頭皮質（ＦＣＸ）；側坐核（ＡＣＣ）；線条体（ＳＴＲ）から得られたデータを提供した。ＴＨＣは、全てのこれらの脳構造においてプレグネノロン濃度の同様の増加を誘導した。
【０２２７】
実施例４：ＣＢ１受容体のアゴニストは、ＴＨＣにより誘導されるものと同様のプレグネノロン濃度の増加を誘導する
脳におけるＴＨＣの効果は、Ｇタンパク質共役型７回膜貫通型受容体（ＧＣＰＲ）のファミリーにより、そして主に、ＣＢ１及びＣＢ２受容体により仲介される。ＴＨＣは、ＣＢ１受容体の活性化を介して、プレグネノロン合成を増加させた。従って、合成混合物であるＣＢ１／ＣＢ２アゴニストＷｉｎ５５，２１２、及びＣＢ２受容体よりＣＢ１についてより高い親和性を有するアゴニスト（ＨＵ２１０）の両方の独立した群のラット（１群当たりｎ＝６〜１２）への注射は、プレグネノロンの有意な増加を誘導した。対照的に、ＣＢ１受容体よりＣＢ２についてより高い親和性を有するアゴニスト（ＪＷＨ，１３３）は、プレグネノロン濃度についてずっと低く、有意でない効果を有する。
【０２２８】
実施例５：プレグネノロンにおいてのＴＨＣにより誘導される増加は、ＣＢ１受容体のアンタゴニストにより抑制される
ＣＢ１活性についてのＴＨＣ効果の依存は、ＴＨＣの投与（３mg/kg、ｉ．ｐ）により、Ｗｉｓｔａｒラットの側坐核において誘導されるプレグネノロン濃度の増加が、ＴＨＣ注射の３０分前に注射したＣＢ１選択性アンタゴニストの投与（ＡＭ２５１、８mg/kg、ｉ．ｐ．）によりブロックされるという知見により、さらに示された（１群当たりｎ＝６）。
【０２２９】
実施例６：プレグネノロンにおけるＴＨＣにより誘導される増加は、ＣＢ１受容体を欠く変異動物において抑制される
この実施例において、本発明者等は、ＴＨＣにより誘導されるプレグネノロン増加のＣＢ１受容体への依存をさらに分析した。この目的のため、本発明者等は、ＣＢ１受容体の発現が構造的に欠損している変異マウス（１群当たりｎ＝６〜８）における、プレグネノロンについてＴＨＣの効果を研究した。実施例は、側坐核において得られたデータを示している。ＴＨＣにより誘導されるプレグネノロンの増加は、ＣＢ１受容体が全種類の細胞において欠損しているか又はドーパミン作動性Ｄ１受容体を発現する神経集団において選択的に欠損している変異動物において、完全に抑制された。この変異体において、ＣＢ１受容体は、側坐核中の大抵のＧＡＢＡニューロンにおいて欠損している。最近の実験は、脳において、ＴＨＣが、ニューロンにより発現されるＣＢ１受容体に作用することにより、プレグネノロンを増加させることを示す。
【０２３０】
考察：
上記実施例において提示したデータは、本明細書で開示の知見：「哺乳動物におけるＣＢ１受容体の活性化は、プレグネノロンの合成を誘導し、身体中のこのステロイド濃度を増加させる」の支持に集中している。
【０２３１】
次に、上記実施例において提示したデータは、身体中のプレグネノロン濃度を増加させる一般化方法の提供に集中する。
【０２３２】
実施例において提示した、集中する証拠は、以下の通り要約されうる：
第１に、プレグネノロンは、ＣＢ１受容体の３つの異なるアゴニスト：ＴＨＣ、ＨＵ２１０、及びＷｉｎ５５，２１２の投与により、用量に依存して増加する。対照的に、プレグネノロンは、ＣＢ１受容体についてより、ＣＢ２について、より高い親和性を有するアゴニストにより、有意に増加しなかった。ＣＢ１アゴニストにより誘導されるプレグネノロン濃度の増加を、２つの異なる種（マウス、及びラット）において確認し、脳及び血漿の両方で見出した。
【０２３３】
第２に、ＴＨＣにより誘導されるプレグネノロンの増加は、ＣＢ１アンタゴニストの投与により抑制され、ＣＢ１受容体を欠く変異動物において無効にされた。
【０２３４】
ＩＩ．プレグネノロンは、ＣＢ１受容体について、ネガティブフィードバックを及ぼし、ＣＢ１受容体活性化の効果を阻害する
実施例７：プレグネノロンのＴＨＣにより誘導される増加は、ＣＢ１受容体の活性化についてネガティブフィードバックを提供する
これらの実施例において、本発明者等は、ＣＢ１受容体のＴＨＣ活性により誘導されるプレグネノロンの増加の可能性のある機能的役割を分析した。本発明者等は、プレグネノロンが、ＣＢ１受容体の刺激により仲介される効果についてネガティブフィードバックを及ぼすことを見出した。
【０２３５】
ＣＢ１受容体の活性化は、カンナビノイドの四徴と呼ばれる４つの効果（１．低自発運動、２．低体温、３．カタレプシー（運動を開始する能力の障害）、及び４．鎮痛を含む）により、通常同定される。従って、ＴＨＣ（３、１０、１５mg/kg）のＣ５７Ｂｌ／６Ｎへの注射（１群当たりｎ＝７〜８）は、用量に依存して、ｉ）オープン・フィールドにおける自発運動活性の減少；ｉｉ）体温の低下；ｉｉｉ）運動を開始する潜時の増加（増加したカタレプシー）；及びｉｖ）侵害受容閾値の増加を誘導した（図２Ａ〜Ｄ）。
【０２３６】
四徴を観察するＴＨＣの用量（３〜１５mg/kg  ＴＨＣ）は、プレグネノロン濃度の強い増加を誘導するので、本発明者等は、ＴＨＣの３０分前に注射し、行動をＴＨＣ注射の３０分後に経時的に測定して、プレグネノロン合成アミノグルテチミド（ＡＭＧ、５０mg/kg、ｉｐ）の阻害剤の効果を分析した。ＡＭＧは、ＴＨＣの全行動効果を強力に増加させ（図２Ａ〜Ｄ）、この増強は、プレグネノロンの外因性注射（６mg/kg）により完璧に覆され（図２Ｅ〜Ｈ）、ＡＭＧ投与の観察される効果のプレグネノロンへの依存を示した。これらのデータは、ＣＢ１受容体の活性化により誘導されるプレグネノロンの分泌が、例えば、ＣＢ１の活性化から生じる効果を、ネガティブフィードバックループで阻害する機能を供することを示している。
【０２３７】
実施例８：プレグネノロンは、ＴＨＣによるＣＢ１受容体の活性化により誘導されるエンドカンナビノイドの四徴を阻害する
これらの実施例において、本発明者等は、プレグネノロンの外因性投与がまた、ＴＨＣにより誘導されるカンナビノイドの四徴を阻害することができるかどうかを分析した。
【０２３８】
ＴＨＣ前、かつＡＭＧの不存在下でのプレグネノロン投与（６mg/kg）は、ＴＨＣにより誘導されるカンナビノイドの四徴の全行動：自発運動活性、体温、カタレプシー、及び疼痛閾値を減少させた（図２Ｅ〜Ｈ）。しかしながら、ＴＨＣ不存在下でのプレグネノロン自体の投与は、自発運動活性、体温、カタレプシー、及び疼痛閾値についての効果を有しない（図２Ｅ〜Ｈ）。
【０２３９】
実施例９：プレグネノロンは、ＴＨＣに誘導される食物摂取の増加を阻害する
ＣＢ１受容体の活性から生じる効果を阻害するプレグネノロンの能力の更なる例を提供するために、次に、本発明者等は、プレグネノロン（ＴＨＣの３０分前に注射した）がまた、ＴＨＣに誘導される食物摂取の増加を阻害するかできるかどうかを研究した。
【０２４０】
ＴＨＣは、十分に飽食させたラット（０．５mg/kg、１群当たりｎ＝７〜８）、及び２４時間食物欠乏マウス（１群当たりｎ＝７〜８、１mg/kg）において、食物摂取を増加させることを示した。十分に飽食させたラット（図３Ａ）において、プレグネノロンは、２mg/kgでの統計的に有意な効果を伴って、ＴＨＣにより誘導される食物摂取を用量に依存して減少させた。この用量はまた、マウスにおいて、ＴＨＣの注射により誘導される食物摂取の増加を抑制した（図３Ｂ）。この用量で、プレグネノロンは、基底食物摂取を有意に緩和しなかった（図３Ａ、Ｂ）。
【０２４１】
実施例１０：プレグネノロンは、食物欠乏により誘発される食物摂取の増加を阻害する
内因性エンドカンナビノイドによるＣＢ１活性は、生理的食物摂取（すなわち、外因性ＣＢ１アンタゴニスト、例えば、ＴＨＣにより刺激されない食物摂取）の制御に関与していた。次に、本発明者等は、プレグネノロン投与が、ＴＨＣを受け取らなかった、食物欠乏動物において、食物摂取を緩和することができるかどうかを、更に評価した。本発明者等は、プレグネノロンが、食物欠乏マウスにおいて、食物摂取を依存的に減少させ（図３Ｃ）、しかしながら、第１の統計的に有意な用量（６mg/kg）が、ＴＨＣにより誘導される食物摂取をブロックすることができるもの（２mg/kg）より高いことを見出した。
【０２４２】
実施例１１：プレグネノロンは、ＣＢ１依存性メカニズムを通じた食物欠乏により誘導される食物摂取の増加を阻害する
多くの生理的システムは、食物摂取を制御する。この理由のため、この実施例において、本発明者等は、ＴＨＣで処置していない食物欠乏動物におけるプレグネノロンにより誘発される食物摂取の減少が、ＣＢ１受容体に依存するかどうかを確かめた。本発明者等は、食物欠乏動物においてプレグネノロンにより誘導される食物摂取の減少について、ＣＢ１アンタゴニストＳＲ１４１７１６Ａ（０．０５mg/kg、ｉｐ）での事前処置の効果を研究した。本発明者等は、食物欠乏動物における食物摂取について、プレグネノロンにより誘発される阻害は、ＣＢ１受容体に依存することを見出した。従って、プレグネノロン投与前３０分間食物を制限したマウスへ投与されたＣＢ１アンタゴニストＳＲ１４１７１６Ａは、プレグネノロン投与により誘発される食物摂取の減少を抑制した（図３Ｄ）。
【０２４３】
実施例１２：プレグネノロンは、ＣＢ１アゴニストの自己投与を阻害する
嗜癖を誘導するＴＨＣの能力に関連するＣＢ１活性のポジティブ増強効果に対するプレグネノロン投与の効果を分析するために、本発明者等は、既に記載されたプロトコール（Soria et al., 2006；Mendizabal et al., 2006）に従い行われる静脈内自己投与モデルを用いた。静脈内自己投与は、嗜癖の最善の行動モデルと考えられる。このモデルにおいて、動物は、薬物の静脈内注射を得るために、操作的な応答（本発明者の場合、穴に鼻を突く）を生じることを習得した。マウスは、容易にＣＢ１アゴニストＷＩＮ５５，２１２を自己投与し（１回注射当たり１２．５μg/kg）、応答が予定された結果を招かない（不活性）不活性な装置と比較して、応答が、この化合物の注入の引き金をひく（活性）装置について明確な好みを示す（図５Ａ）。２又は４mg/kgプレグネノロンのラテン方格法（すなわち、自己投与セッション前）での投与は、ＷＩＮ５５，２１２の自己投与を大いに減少させた。加えて、プレグネノロン投与はまた、累進比率（ＰＲ）スケジュールにおいて、ブレークポイントの減少により示されるような、自己投与ＷＩＮ５５，２１２の動機付けも減少させた（図５Ｃ）。このスケジュールにおいて、動物は、１つの薬物注入を受けるために、増加数の応答（比）を生じることが必要とされ、ブレークポイントは、完了した最終比であり、薬物について動機付けの信頼できる処置と考えられる。ＰＲセッションについて、注射をもたらす応答の条件は、以下の連続：１−２−３−５−１２−１８−２７−４０−６０−９０−１３５−２００−３００−４５０−６７５−１０００に従い拡大した。
【０２４４】
実施例１３：プレグネノロンは、ＴＨＣ投与により誘導される記憶喪失を阻害する
この実施例において、本発明者等は、ＣＢ１活性化の効果を阻害するプレグネノロンの能力をさらに分析した。ＣＢ１活性の補足的効果は、記憶機能障害の誘導である。この効果は、大麻使用の副作用の１つ：最近の記憶の喪失により特徴付けられる認知機能障害と関連する。トレーニングの１０分後に注射したＴＨＣ（１０mg/kg）によるＣＢ１受容体活性化は、マウスにおける物体認知課題の記憶力を強く損なう（図６）。
【０２４５】
トレーニング後直ちに注射したプレグネノロンでの事前処置（６mg/kg）は、１０mg/kgＴＨＣの記憶喪失作用を強く鈍らせた。しかしながら、プレグネノロン（６mg/kg）は、ＴＨＣの不存下で投与したとき、記憶力の変化を全く誘導しなかった（図６）。
【０２４６】
実施例１４：プレグネノロンは、ＴＨＣ投与により誘導されるドーパミン作動性活性の増加を阻害する
この実施例において、本発明者等は、ＣＢ１活性化の効果を阻害するプレグネノロン能力を更に分析した。大麻は、順に、動機付けから行動までのシフトを制御する脳領域である側坐核における神経伝達物質であるドーパミンの放出を増加させるＣＢ１受容体を活性化することにより、その常習特性を働かせると考えられる。ＴＨＣにより引き起こされるドーパミン作動性活性の増加についてプレグネノロンの効果（図７）を、２つのパラメーター：１．側坐核におけるドーパミン作動性終末のレベルでのドーパミンの放出；及び２．腹側被蓋野（ＶＴＡ）における細胞体レベルでのドーパミン作動性ニューロンの電気的活性を並行して記録して研究した。プレグネノロン（２mg/kg皮下注射、ＴＨＣの３０分前）は、ドーパミン放出、ＴＨＣにより誘導されるドーパミン作動性ニューロンの活性における増加を強く鈍らせた。ＴＨＣ又はコカインを、指数関数的に増加する累積的用量（０．１５〜１．２mg/kg）で静脈内投与した。それぞれの投薬後、連続投与の１分前にＤＡニューロン発火を記録した（図７）。
【０２４７】
実施例１５：プレグネノロンは、コカイン投与により誘導される、ドーパミン作動性活性の増加を阻害する
この実施例において、本発明者等は、ドーパミン作動系の活性化を阻害するプレグネノロンの能力を更に分析した。上記実施例において、プレグネノロンは、ＴＨＣにより誘導されるドーパミン作動系の運動亢進と拮抗することができた。本実施例（図８）において、プレグネノロン（２mg/kg皮下投与、コカインの３０分前）が、精神刺激薬、例えば、コカインにより誘導されるドーパミン作動系の活性の増加と拮抗することもできることが示される。コカインを、指数関数的に増加する累積的用量（０．０１２５〜０．８mg/kg）で静脈内投与した。それぞれの投薬後、ＤＡニューロン発火を続く投与の１分前に記録した。精神刺激薬により誘導されるドーパミン作動性活性の増加が、精神病の実験モデルの１つであると考えられているので、この結果は、統合失調症に関連する。従って、精神刺激薬により誘導されるドーパミンの増大は、これらの薬物の使用後に、ヒトにおいて生じ得る急性精神病の発症の原因となる。
【０２４８】
実施例１６：プレグネノロンは、高脂肪食餌を受けた動物における体重増加及び脂肪蓄積を阻害する
この実施例において、本発明者等は、肥満の状況におけるＣＢ１活性の効果を阻害するプレグネノロンの能力を分析した。代謝障害についてのプレグネノロンの効果を、食餌により誘発される肥満のモデル（ＤＩＯ）を用いて、マウスにおいて、研究した。この手順において、動物を、肥満を徐々に誘導する高脂肪食餌（脂肪６０％）にて維持する。これらの動物において、過体重及び過剰な脂肪蓄積を既に誘導したこの食餌について、８週間後に、プレグネノロンでの処置を、３０日間（１日１回２mg/kg又は５mg/kg、ｎ＝８）開始した。プレグネノロンは、処置の１５日後から現れ（図９Ａ）、食物摂取を修飾しない（図９Ｂ）遅延効果を伴った体重を減少させた。
【０２４９】
結果として、体重についてのプレグネノロン効果は、一次代謝効果に起因せず、食物摂取についての行動効果に起因しないと思われる。これを、プレグネノロン処置下で、動物の脂肪量及び除脂肪量について、異なる効果が存在することを明らかにした磁気共鳴で行った身体組成の分析により、確かめた（図１０）。高脂肪食餌中の対照動物において、脂肪量の割合は徐々に増加し、一方で除脂肪量は減少した。動物を、最高用量のプレグネノロン（５mg/kg）で処理したとき、脂肪量の増加を抑制し、一方で、除脂肪量の減少を鈍らせた。
【０２５０】
ＤＩＯモデルにおけるプレグネノロンの食物摂取についての効果の欠如は、プレグネノロンが食物摂取を減少させる絶食／リフィーディングモデルを用いて観察されるものと反対であると思われる（図３）。このことは、餌を与える条件（ＤＩＯモデルにおける高脂肪食餌対絶食／リフィーディングモデルにおける標準的な固形飼料）、又は絶食動物において、食物への再暴露の最初の１時間の間に誘導される突発摂食についてのプレグネノロンの潜在的特異性効果に起因し得る。この理由のため、絶食／リフィーディングモデルにおいて、食物摂取を、１時間、古典的に評価し、一方、ＤＩＯモデルにおいて、食物摂取を２４時間に渡り評価する。続く実験において、プレグネノロンの効果を、２４時間に渡り、絶食／リフィーディングモデルにおいても研究した。観察した結果は、リフィーディングの最初の１時間中のプレグネノロンの効果を確認したが、有意な効果は２４時間に渡って見られなかった。これらのデータは、エンドカンナビノイド系及びＣＢ１受容体を強く活性化する絶食により誘導される突発摂食についてのプレグネノロンの特異的効果を示す。２４時間食物摂取についてのプレグネノロンの効果のこの欠如は、食物摂取を２４時間に渡り大いに減少させることが既に示された参照ＣＢ１オルソステリック受容体アンタゴニストのリモナバンの既知の作用と非常に異なる。同様に、高脂肪食餌中、リモナバンは、処置の最初の１週間、食物摂取を減少させることを示し、一方、プレグネノロンは示さなかった（図９Ａ）。
【０２５１】
実施例１７：プレグネノロンは、ＬＰＳにより誘導されるＴＮＦ−αの増加を阻害する
この実施例において、本発明者等は、炎症及び線維症の状況において、ＣＢ１活性の効果を阻害するプレグネノロンの能力を更に分析した。ＣＢ１受容体の活性は、オルソステリックアンタゴニスト（例えば、リモナバン）によるこの受容体の阻害が、炎症誘発性刺激により誘導されるＴＮＦ−α、例えば、ＬＰＳの増加を減少させる事実にもかかわらず、示す通り炎症及び線維過程に関与する。ＴＮＦ−αは、線維症の促進により関与する炎症性刺激への細胞応答の１つである。ＬＰＳ投与の３０分前のプレグネノロンのマウスへの投与（６mg/kg、皮下）は、ＬＰＳ投与の９０分後に測定されるＴＮＦ−αの増加を半減させた（図１１）。
【０２５２】
実施例１８：プレグネノロンは、シナプス伝達についてのＣＢ１活性の効果を阻害する
この実施例において、本発明者等は、シナプス伝達の状況において、ＣＢ１活性の効果を阻害するプレグネノロンの能力を更に分析した。ＣＢ１受容体の活性化は、神経伝達物質の放出を阻害することにより、シナプス伝達を抑制することが、広く記載されている。このことは、脳の多くの領域において、興奮性及び阻害性シナプスの両方で観察されている。本発明者等は、プレグネノロンが、側坐核（ＮＡｃ）において、興奮性シナプス伝達を阻害するＴＨＣの能力を変えるかどうかを評価した。成体ＮＡｃにおいて、全細胞パッチクランプ記録を行い、ＡＭＰＡＲ−仲介ＥＰＳＣを、局所軸索の電気的刺激により誘導した。ＴＨＣのバス灌流は、対照切片（阻害の３４．３±３．７％）において、ＥＰＳＣ振幅を確かに減少させた。切片を１００nMプレグネノロン（阻害の１５．１±１．８％，ｐ＜０．００１）で予め処置したとき、ＴＨＣの効果が有意に減弱した（図１２）。
【０２５３】
広範囲のＴＨＣ濃度についてプレグネノロンの効果を試験するために、本発明者等は、ＮＡｃ切片におけるｆＥＰＳＰを記録した。数時間の安定なｆＥＰＳＰ測定を達成する可能性に起因し、この技術は、理想的に研究されて、用量応答性曲線を実行し、ＣＢ１受容体機能に対処するために既に用いられた（Robbe et al., 2001；Mato et al., 2004）。従って、局所軸索を電気的に刺激することにより、ＡＭＰＡＲにより仲介される誘起ｆＥＰＳＰを記録した。切片をコントロールするためのＴＨＣのバス灌流は、ｆＥＰＳＰを用量に依存した方法（１０μM：２３．９±６．０％；２０μM：３５．３±４．７％；４０μM：４８．６±３．６％）で阻害した。結果として、ＴＨＣは、１００nMプレグネノロンと予めインキュベーションした切片におけるシナプス伝達のより少ない阻害を誘導した（１０μM：１１．１±３．２％；２０μM：２２．７±２．７％；４０μM：３４．６±３．１％；２方向ＡＮＯＶＡ神経ステロイドファクターｐ＝０．００１）（図１３）。
【０２５４】
全体として、これらのデータは、神経ステロイドプレグネノロンが、興奮性シナプス伝達のＣＢ１受容体依存性調節を活性化するＴＨＣの能力を損なうことを示す。
【０２５５】
考察：
上記実施例で提示されるデータは、「ＣＢ１の活性化により、身体内で誘導されるプレグネノロン濃度の増加が、ＣＢ１受容体の活性について、内因性ネガティブフィードバックを提供する。このネガティブフィードバックは、内因的に産生されるか、又は外因的に投与されるプレグネノロンが、ＣＢ１活性化の効果と拮抗するという事実により、実現される」という、本明細書において開示される発見に集中する。
【０２５６】
次に、上記実施例において提示されるデータは、プレグネノロンの投与により、ＣＢ１受容体の活性化の効果を阻害する一般的方法の提供に集中する。
【０２５７】
これらの集中する証拠は、以下の通り要約される：
第１に、ＣＢ１活性化により誘導されるプレグネノロンの内因性増加が、ＣＢ１活性化の効果を減少させる機能を供する内因性ネガティブフィードバックを提供したので、ＣＢ１により仲介される効果に対するプレグネノロンの阻害作用は、生理的に関連するものであった。従って、ＣＢ１活性により誘導されるプレグネノロンの産生がブロックされると、ＴＨＣの行動効果は増加した。
【０２５８】
第２に、プレグネノロンの外因的投与は、ＣＢ１受容体の活性化により誘導される多数の効果：１．低自発運動；２．カタレプシー；３．低体温；４．鎮痛；５．絶食−リフィーディングモデルにおける食物摂取；７．ＴＨＣにより誘導される食物摂取；６．ＣＢ１アゴニストの静脈内自己投与；７．ＴＨＣにより誘導される記憶喪失；８．ＴＨＣ又はコカインによるドーパミン作動系の活性化；９．肥満モデルにおける脂肪蓄積及び体重増加；９．ＴＮＦ−αの産生；１０．ＴＨＣにより誘導されるシナプス伝達の阻害、を阻害することができた。
【０２５９】
第３に、ＣＢ１により仲介される効果に対するプレグネノロンの阻害作用を、２つの異なる種：ラット及びマウスにおいて見出した。
【０２６０】
本発明者等により本明細書において示されるこれらの多数のパラメーターについての収束効果は、ＣＢ１受容体の活性化の効果を増加させて減少させない、完全に反対に予測される他の既知のステロイドの効果についての以前の知見に基づいて、固有かつ予測できないものである。例えば、多くのステロイド、例えば、プレグナノロン、アロプレグナノロン、及びそれらの誘導体は、ＧＡＢＡ受容体の活性化を促進することが記載されている。次に、ＧＡＢＡ受容体の活性化を増強する化合物がＴＨＣによるＣＢ１活性化の効果を増加させることが示されたので、これらのステロイドはＣＢ１活性化の効果を増加させるべきである（Bellocchio L et al.,  Nature Neurosci  2010, 13:281-3; Pertwee RG and Wickens AP. Neuropharmacology. 1991, 30:237-44 ; Pertwee RG, et al., Neuropharmacology. 1988 27:1265-70）。同様に、現在の知見に基づいて、又、プロゲステロン及びプロゲステロン化合物、他の性ステロイド、及びグルココルチコイドは、ＣＢ１活性化の効果を増加させると予測される（Anaraki DK et al., Europ. J. Pharmacol, 2008, 586, 186-196; Rdriguez de Fonseca F, et al., Life Sci. 1993, 54: 159-170 ; Becker JB, Rudick CN. Pharmacol Biochem Behav. 1999 , 64:53-7; Piazza PV and Le Moal M Brain Res Rev 1997, 25:359-72）。
【０２６１】
ＩＩＩ．プレグネノロンは、ＣＢ１のオルソステリックアンタゴニスト及び他の向神経活性ステロイドより少ない副作用及びより少ない非特異的作用を有する、ＣＢ１受容体の阻害剤である
実施例１９：プレグネノロンは、ＣＢ１受容体へのオルソステリック結合を修飾しない
上記実施例は、ＣＢ１活性化の研究された全ての効果を阻害することができることを示している。これらの知見に基づき、この実施例において、本発明者等は、プレグネノロンとＣＢ１受容体との間の可能性のある相互作用を研究した。本発明者等は、プレグネノロンが、ＣＢ１のオルソステリックアンタゴニストとして作用することができるかどうかを分析した。このことは、プレグネノロンがＣＨＯ細胞の血漿膜上に存在するＣＢ１受容体へのＣＢ１アゴニスト［３Ｈ］ＣＰ５５，９４０のオルソステリック結合を置き換えないので、事実とは異なる（図１４）。プレグネノロンは、オルソステリックアンタゴニストとして作用しないが、本発明者等により生み出された予備的証拠は、それがアロステリック阻害剤として作用し得ることを示す。
【０２６２】
実施例２０：プレグネノロンは、不安様行動を誘導しない
ＣＢ１のオルソステリックアンタゴニストの主要な副作用の１つは、行動の副作用、特に、抗うつ状態の誘導である。これらの効果は、第１のＣＢ１オルソステリックアンタゴニストリモナバンの販売承認を抑制する規制当局により、十分に重大であると判断された。プレグネノロンの異なる安全性プロファイルを立証するために、その効果を、不安の動物モデルである高架式十字迷路を用いて、ＣＢ１オルソステリックアンタゴニスト／インバースアゴニストリモナバン（両方の薬物を皮下投与）の１つと比較した。不安の増加が、ヒトにおけるこの化合物の主な不所望の副作用だったので、この試験を選択した。マウスに、プレグネノロン（１、６、１０mg/kg）、リモナバン（１０mg/kg）、又はビヒクル（１群当たり少なくともｎ＝７）のいずれかを皮下注射し、３０分後、十字迷路の中央の台に置き、オープンアーム及びクローズドアーム内で過ごした時間及びそこへのエントリー数を５分間記録する。この研究（図１５）は、十字迷路のオープンアームへのエントリー数及びそこで過ごした時間の減少により示されるように、リモナバンの不安惹起効果を確認した。対照的に、プレグネノロンは、不安の増加を誘導しなかった（図１５）。
【０２６３】
実施例２１：プレグネノロンは、ＧＡＢＡ−Ａ受容体の活性を修飾しない
この実施例において、本発明者等は、他の神経伝達物質受容体、特に、ＧＡＢＡ−Ａ受容体について、プレグネノロン効果の特異性を試験した。従って、他の活性ステロイド、例えば、アロプレグナノロン及びプレグナノロンは、ＧＡＢＡ受容体の活性化を促進する重要な行動効果を有する。
【０２６４】
シナプス後ＧＡＢＡの官能基上のプレグネノロンの効果を評価するために、本発明者等は、ｍＩＰＳＣを記録し、群間のその振幅及び減衰期間を比較した。本発明者等は、ｍＩＰＳＣ振幅及び減衰期間が、対照（振幅：１７．９±０．８ｐＡ；減衰期間：１１．１±０．３ms）とプレグネノロンで予め処置された切片（それぞれ、１００nM及び１μM、；振幅：１７．３±０．４ｐＡ、１５．９±０．４ｐＡ；減衰期間：１０．２±０．４ms、１０．８±０．５ms）間で類似することを観察した。プレグネノロンの効果の欠如とは対照的に、ＧＡＢＡ−Ａ受容体のモジュレーターであることが知られている神経ステロイドアロプレグナノロンは、ｍＩＰＳＣ特性（それぞれ、１００nM及び１μM；振幅：１５．９±０．５pA、２０．２±１．２pA、ｐ＜０．００１；減衰期間：１３．６±０．７ms、２２．７±２．３ms、ｐ＜０．０００１）を有意に修飾した（図１６）。
【０２６５】
結論として、このデータは、ＧＡＢＡ−Ａにより介在されるシナプス電流が、神経ステロイドであるプレグネノロンにより仲介されないことを示唆する。次に、このデータは、既に示されているように（米国特許第５，２３２，９１７号）、プレグネノロンのＣ３β位がＧＡＢＡ受容体上での効果を抑制することを確認している。本発明者等は、ここで、Ｃ３β位が、代わりに、ＣＢ１受容体の活性化を阻害する性質を与えることを発見する。
【０２６６】
実施例２２：プレグネノロンはグルタミン酸受容体の活性を修飾しない
この実施例において、本発明者等は、他の神経伝達物質受容体、特に、ＮＭＤＡ及びＡＭＰＡ受容体について、プレグネノロン効果の特異性を試験した。従って、他の活性ステロイド、例えば、ＤＨＥＡ及びＤＨＥＡ硫酸塩は、グルタマート受容体の活性化を修飾することにより、行動効果を誘導すると想定した。
【０２６７】
ＡＭＰＡ受容体電流についてプレグネノロンの効果を評価するために、本発明者等は、ｍＥＰＳＣに依存しない作用の可能性を記録することにした。この場合において、シナプス電流は神経伝達物質の確率量子的放出から生じ、また神経ステロイドがシナプス小胞の内容を変えないと仮定すると、記録したｍＥＰＳＣの振幅及びカイネティクスはシナプス後受容体の機能に依存する。
【０２６８】
本発明者等は、プレグネノロンが、成体ＮＡｃにおいて、ＡＭＰＡＲ機能を修飾しないことを見出した（図１７Ａ）。従って、対照及びプレグネノロン（１００nM）で処理した切片由来のＡＭＰＡＲ−仲介ｍＥＰＳＣは、同様の振幅（対照：１４．４±０．８pA、プレグネノロン：１５．７±０．７pA、ｐ＝０．２５）、及び減衰期間（対照：４．７６±０．０８ms、プレグネノロン：４．６２±０．０６ms、ｐ＝０．２１）を示した。
【０２６９】
ＮＭＤＡ受容体により仲介される電流を定量するために、本発明者等は異なる方策を用いた。遅いカイネティクス及び電位依存のため、ＮＭＤＡＲ−仲介ｍＥＰＳＣの単離は、ＡＭＰＡＲ−仲介電流についてのものと同じ程度に信頼できるものではない。従って、本発明者等は、外因的に適用したＮＭＤＡ応答における、全細胞電流を記録することにした。−３０ｍＶに電位固定したＮＡｃ  ＰＮにおいて、２５μM  ＮＭＤＡの１分間のバス灌流は、対照切片（１１５±１５．５pA）及びプレグネノロンで予め処理した切片（１００nM：１０７±９．６pA；１μM：１０８．９±１２．５pA；ｐ＝０．９１）において、同様の大きさの内向電流を誘導した（図１７Ｂ）。
【０２７０】
全体として、これらの実験は、プレグネノロンが、げっ歯類の成体ＮＡｃにおいて、主なシナプス後イオンチャンネル型グルタマート作動性受容体の機能に影響しないことを示した。これらのデータはまた、エタノン（メチルケトン）を有するステロイド環の１７位におけるケトンの置換が、ＮＭＤＡ及びＡＭＰＡ受容体についての活性を抑制し、ＣＢ１受容体の活性化を阻害する性質を与えることを示した。
【０２７１】
考察：
上記実施例において提示するデータは、本明細書において開示の発見：「プレグネノロンは、オルソステリックアンタゴニスト及び他の向神経活性ステロイドとは異なり、プレグネノロンがＣＢ１のオルソステリックアンタゴニスト及び他の向神経活性ステロイドより少ない非特異的及びより少ない非所望の効果を有することを示す薬理学的プロファイルを有するヒトＣＢ１受容体の阻害剤として作用する」を示すことに集中する。
【０２７２】
次に、上記実施例において提示するデータは、プレグネノロンの投与により、ＣＢ１受容体の活性化の阻害を誘導する一般的な方法の提供に向けられる。結果として、上記実施例において提示するデータは、ＣＢ１受容体の活性化に関連する全病状、及び／又はプレグネノロンの投与によるＣＢ１受容体の阻害から利益を受けることができる病状を、ＣＢ１のオルソステリックアンタゴニスト及び他の活性ステロイド（ＤＨＥＡ、アロプレグナノロン、及びプレグナノロンを非限定的に含む）の可能性のある副作用を伴うことなく、処置するか又は軽減する一般的な方法の提供に向けられる。
【０２７３】
これらの集中する証拠は、以下の通り要約されうる：
第１に、プレグネノロンは、オルソステリックアゴニストの結合を緩和せず、一方、ＣＢ１受容体の活性化から生じる効果を阻害する。このプロファイルは、アロステリックな阻害剤の１つに対応し得る。
【０２７４】
第２に、オルソステリックアンタゴニストとは異なり、プレグネノロンは、脂肪蓄積を減少させるものの、不安を誘導せず（実施例２０）、肥満モデルにおいて食物摂取を減少させもしない（実施例１８）。食物摂取の緩和を欠くプレグネノロンの純粋な代謝作用はまた、プレグネノロンについてのより少ない副作用を予測する。体重及び代謝についてのＣＢ１のオルソステリックアンタゴニスト、例えば、リモナバンの効果についての研究は、これらの化合物が、２重の作用（食物摂取の減少から生じる体重の減少（効果の約５０％）による第１の作用及び直接的な代謝効果からの第２の作用）を伴って代謝に作用することを示した。ＣＢ１のオルソステリック受容体アンタゴニストの副作用、特に、うつ病の増加は、食物摂取について行動効果を含むようである。従って、肥満集団において、食物摂取を減少させる全ての触診、薬理学的、外科的、又は行動処置がまた、対象の最大５％において、重篤な行動障害、特に、鬱病を誘導することは周知である。
【０２７５】
最後に、他の向神経活性ステロイドとは異なって、プレグネノロンは、ＧＡＢＡ及びグルタマート受容体についての効果を欠く。このことは、プレグネノロンが、鎮静ならびに記憶力及び運動行動の機能障害を誘導する、覚醒状態の重要な緩和を誘導し得る、これらのステロイドのいくつかの副作用を有しないと予測するのに重要である。
【０２７６】
ＩＶ．プレグネノロンに由来する他の活性ステロイドにおける変形が制限されているプレグネノロン誘導体は、ＣＢ１受容体活性化の効果の阻害剤として作用する
実施例２３：下流活性ステロイドにおける変形が制限されているプレグネノロンの誘導体は、インビボでアロプレグナノロン及びエピ−アロプレグナノロンを生じない
一般式Ａに記載の化合物の例として、本発明者等は、本明細書において、以下により得た３つの化合物を試験した：
１．フッ素原子によるＣ３のＯＨ基の置換、これは３−フルオロプレグネノロン（ＣＰ１）と呼ばれる化合物を生じた。
２．メチル基でのＣ１７の４級化、これは１７−メチルプレグネノロン（ＣＰ２）と呼ばれる化合物を生じた。
３．フッ素原子によるＣ３のＯＨ基の置換、及びメチル基でのＣ１７の４級化、これは３−フルオロ−１７−メチルプレグネノロン（ＣＰ３）と呼ばれる化合物を生じた。
【０２７７】
Ｗｉｓｔａｒラットに高用量（５０mg/kg、１群当たりｎ＝６〜７）で注射した修飾プレグネノロン誘導体（化合物：ＣＰ１、ＣＰ２、ＣＰ３）のいずれもがアロプレグナノロン及びエピアロプレグナノロンの産生を誘導せず（図１８）、一方で、アロプレグナノロン及びエピアロプレグナノロンが、プレグネノロンの注射（５０mg/kg）後、増加した（図１８）。アロプレグナノロン及びエピアロプレグナノロンの濃度を、注射の３０分後、ＧＣ／ＭＳにより個々の動物の側坐核において測定した。
【０２７８】
実施例２４：下流活性ステロイドにおける変形が、インビトロで制限されているプレグネノロンの誘導体
この実施例において、本発明者等は、ＣＨＯ細胞細胞におけるインビトロ試験を用いて、プレグネノロン誘導体の代謝をさらに分析した。卵巣に由来するこれらの細胞は、プレグネノロンを下流ステロイドに代謝するのに必要な全ての酵素を有する。特に、これらの細胞への４８時間のプレグネノロン（１μM）の投与は、アロプレグナノロン、エピアロプレグナノロンにおいて有意な増加を生じ、培地中のＴＨＤＯＣのよりずっと少ない増加を生じた（表１Ａ）。合計５５種の化合物とプレグネノロンを試験し、これらの化合物のうち、２５種のみが、下流活性ステロイドへの代謝がないか、その代謝を有意に減少させた（表１Ｂ〜Ｄ、表２Ａ、Ｂ）。残りの化合物は、１又はいくつかのプレグネノロンの下流ステロイド、例えば、アロプレグナノロン、エピアロプレグナノロン、ＴＨＤＯＣ、テストステロン、及びＤＨＥＡに多かれ少なかれ代謝された。
【０２７９】
【表１】
2014515361.tif 000022
【０２８０】
【表２】
2014515361.tif 000023
【０２８１】
【表３】
2014515361.tif 000024
【０２８２】
【表４】
2014515361.tif 000025
【０２８３】
表１．ＣＨＯ細胞における減少した代謝物を伴うプレグネノロン誘導体。結果を、プレグネノロンで処理したＣＨＯ細胞からの変化の百分率として（表２Ａ）、又はpg/ml（０＝検出限度未満の濃度）として表す。ＡＬＬＯ＝アロプレグナノロン、ＥＰＩＡＬＬＯ＝エピアロプレグナノロン、ＰＲＥＧ＝プレグネノロン、ＴＥＳＴＯ＝テストステロン。
【０２８４】
【表５】
2014515361.tif 000026
【０２８５】
【表６】
2014515361.tif 000027
【０２８６】
表２．ＣＨＯ細胞における減少した代謝物を伴うプレグネノロン誘導体。結果を、プレグネノロンで処理したＣＨＯ細胞からの変化の百分率として（表２Ａ）、又はpg/ml（０＝検出限度未満の濃度）として表す。ＡＬＬＯ＝アロプレグナノロン、ＥＰＩＡＬＬＯ＝エピアロプレグナノロン、ＰＲＥＧ＝プレグネノロン、ＴＥＳＴＯ＝テストステロン。
【０２８７】
表３において示され得る通り、ステロイド代謝についての現在の知見は、プレグネノロンの修飾が、代謝を顕著に減少させるかさせないかを完全に予測することを可能にしない。例えば、Ｃ２０におけるα−ヒドロキシル基は、代謝を減少させ、一方、Ｃ２０におけるβ−ヒドロキシル基は減少させなかった。同様に、Ｃ５においてβ−水素を有する化合物は、減少させた代謝を有し、一方、Ｃ５α化合物は強力に代謝された。又、Ｃ３及びＣ１７における選択的基、又はいくつかの特異的組み合わせは、代謝をブロックした。
【０２８８】
【表７】
2014515361.tif 000028
【０２８９】
【表８】
2014515361.tif 000029
【０２９０】
【表９】
2014515361.tif 000030
【０２９１】
【表１０】
2014515361.tif 000031
【０２９２】
【表１１】
2014515361.tif 000032
【０２９３】
【表１２】
2014515361.tif 000033
【０２９４】
表３．下流活性ステロイドへの有意な代謝を減少させるか、又は維持するプレグネノロン誘導体の比較
【０２９５】
実施例２５：下流活性ステロイドにおける変形が制限されるプレグネノロン誘導体は、ＣＢ１受容体活性化の効果を阻害する
一般式Ａに記載の化合物の例として、本発明者等は、ラット又はマウスにおける、ＴＨＣでの刺激後及び／又は食物欠乏後の化合物３−フルオロプレグネノロン、１７−メチルプレグネノロン、３−フルオロ−１７−メチルプレグネノロンの食物摂取についての効果を、本明細書に示す実施例において試験した。化合物３−フルオロプレグネノロン、１７−メチルプレグネノロン、３−フルオロ−１７−メチルプレグネノロンは、食物摂取についてのＣＢ１活性化の効果を阻害することができた。化合物１７−メチルプレグネノロンは、ＣＢ１受容体活性化の効果の阻害において、プレグネノロン及び３−フルオロプレグネノロン及び３−フルオロ−１７−メチルプレグネノロンより効果的であると思われた（図１９）。化合物１７−メチルプレグネノロンは、ラットにおいて、ＴＨＣにより誘導される食物摂取の増加を有意に減少させることができ、一方、食物摂取を減少させる傾向のみを、他の２種の化合物について観察した（図１９Ａ）。食物制限マウスにおいて、全ての化合物は、食物摂取を減少させた。しかしながら、統計的に有意な効果を、最小用量（４mg/kg）で、化合物１７−メチルプレグネノロンについて得たが、一方、６mg/kgがプレグネノロン及び３−フルオロプレグネノロン及び３−フルオロ−１７−メチルプレグネノロンで統計的有意差に至るのに必要であった（図１９Ｂ）。最後に、マウスにおいてＴＨＣに誘導される食物摂取の増加は、マウスにおいて、２mg/kgで全ての化合物により減少された（図１９Ｃ）。食物摂取におけるＴＨＣにより誘導される増加についての用量応答機能は、プレグネノロンと１７−メチルプレグネノロンの両方が、１mg/kgでこの行動を阻害し、一方、用量０．５mg/kgは有効でないことを示した。
【０２９６】
下流活性ステロイドの代謝が減少されている他のプレグネノロン誘導体（表４）を、阻害能力について試験した：１．ＣＢ１受容体の活性化を評価するための信頼に足る方法と認められている、ＴＨＣにより誘導されるカンナビノイドの四徴の効果（体温及び自発運動活性における減少（ＴＨＣ１０mg/kg、化合物６mg/kg、ＴＨＣの１５〜３０分前）；２．ＣＢ１活性化の典型的効果である、ＴＨＣに誘導される食物摂取の増加（ＴＨＣ０．５〜１mg/kg、化合物２〜４mg/kg、ＴＨＣの３０分前）；３．ＬＰＳにより誘導されるＴＮＦαにおける増加、ＣＢ１アンタゴニストの典型である別の効果（化合物６mg/kg、ＬＰＳの１５分前）。それぞれの化合物及びそれぞれの試験について、独立群の動物を用いた（１種の化合物／１試験当たり少なくともｎ＝６）。
【０２９７】
【表１３】
2014515361.tif 000034
【０２９８】
【表１４】
2014515361.tif 000035
【０２９９】
【表１５】
2014515361.tif 000036
【０３００】
【表１６】
2014515361.tif 000037
【０３０１】
【表１７】
2014515361.tif 000038
【０３０２】
表４．減少した代謝を有するプレグネノロン誘導体によるＣＢ１活性化の阻害。プレグネノロン誘導体（２〜６mg/kg）で処置したマウス（１群当たり少なくともｎ＝６）を、ビークルで処置した適切な対照と比較した。１０mg/kgＴＨＣの投与後、身体温度及び自発運動活性の変化を、０．５〜１mg/kgＴＨＣの注射後、食物摂取を、及びＬＰＳの全身注射後、ＴＮＦαを調べた。ｎｔ＝試験していないこと。スチューデントt検定を用いて、統計処理した。
【０３０３】
Ｃ３位においてβ−ヒドロキシル基を維持した化合物について、Ｃ１７におけるメチル又はベンジル又はメトキシル基での置換は、良好なレベルのＣＢ１活性の拮抗作用を維持したプレグネノロン誘導体を生成した（表４Ａ）。また、Ｃ２０位がα−ヒドロキシル基で置換されているとき、及び／又はＣ５−Ｃ６の２重結合がＣ５−Ｃ４位置にシフトしたとき又はＣ５においてβ−水素で置換されたとき、良好なレベルの活性化を観察した（表４Ａ）。対照的に、Ｃ１７位におけるエチル基、Ｃ２０位におけるケトンの抑制又はメチルアミノ基での置換は、ＣＢ１活性の拮抗作用を大いに減少させた（表４Ｂ）。Ｃ３位におけるアルコール官能基の抑制又はフルオロもしくはアジドもしくはベンジルオキシル基での置換は、ＣＢ１活性の良好な代謝を伴った化合物を生成した（表４Ｃ）。対照的に、Ｃ３におけるメトキシル基でのアルコールの置換は、ＣＢ１活性の顕著な減少を誘導した（表４Ｄ）。Ｃ３のアルコールがケトンで置換されているとき、ＣＢ１活性の拮抗作用における一般的減少も起こった（表４Ｅ）。しかしながら、Ｃ３にケトンを有する化合物の減少した活性は、Ｃ５、Ｃ２０、及びＣ１７位における修飾により、改善され得た。Ｃ２０及びＣ１７位のα−ヒドロキシル基、又はＣ５位におけるＣ５−Ｃ６の２重結合のβ−水素での置換は、ケトン化合物であるＣＢ１アンタゴニストを改善した（表４Ｅ）。
【０３０４】
考察：
これらの収束データは、以下の通り要約することができる：
第１に、一般式Ａは、プレグネノロンによりもたらされる活性ステロイドにおける変形が制限されている、プレグネノロンの誘導体を得ることを可能にする。下流活性ステロイドへの代謝を減少させるか、またはその代謝をさせないプレグネノロンの化学的修飾の能力を、従前の知見又は当該技術分野の専門家により予測されえないので、この式は最初である。
【０３０５】
第２に、一般式Ｉ及び／又はＩＩは、異なるシステムモデル：１．マウスとラットの両方においてＴＨＣにより誘導される食物摂取；２．マウスにおいて、食物制限により誘導される食物摂取；３．ＴＨＣにより誘導されるカンナビノイドの四徴に属する行動；４．ＬＰＳにより誘導されるＴＮＦαの増加において、ＣＢ１活性の効果を阻害することができるプレグネノロンの誘導体の産生を可能にする。
【０３０６】
Ｖ．ＣＢ１受容体活性化の効果の阻害は、プレグネノロン特異的であり、下流代謝物を含まない
実施例２６：ＴＨＣは、プレグネノロン由来の下流活性ステロイドのものより、オスｗｉｓｔａｒラットの脳において、プレグネノロン濃度を増加させた
この実施例において、本発明者等は、ＴＨＣ（３mg/kg  ｓｃ）のオスＷｉｓｔａｒラットへの投与が、時間をかけて、プレグネノロン由来ステロイドのいくつか、特に、アロプレグナノロン及びエピアロプレグナノロンの有意な増加を誘導したことを示す。しかしながら、ＴＨＣのプレグネノロンについての効果は、プレグネノロンに由来する下流ステロイド上で観察される任意の効果より数桁高かった（図１Ｃ〜Ｆ）。
【０３０７】
ＴＨＣを、種々の用量でオスＷｉｓｔａｒラットに投与したとき、本発明者等は、ＴＨＣは、プレグネノロン下流由来ステロイド、アロプレグナノロン、及びエピアロプレガナノロンの濃度を増加させたが、一方、テストステロン及びＤＨＴの有意な増加はなかったことを見出した。しかしながら、最大用量のＴＨＣの後でさえ、他のステロイドの濃度の増加は、プレグネノロンについて観察されるものよりずっと小さかった。
【０３０８】
実施例２７：ＴＨＣは、マウスにおいてプレグネノロン由来下流活性ステロイドを増加させない
ＴＨＣを、種々の用量でオスのマウスに投与したとき、プレグネノロン濃度の強力な用量依存性増加を観察した。しかしながら、マウスにおいて、プレグネノロン由来の下流活性ステロイドのアロプレグナノロン及びエピアロプレガナノロン、テストステロン、及びＤＨＴは、脳において有意に増加しなかった。
【０３０９】
実施例２８：食物摂取を阻害するプレグネノロンの用量は、脳においてプレグネノロン由来の下流活性ステロイドの濃度を増加させなかった
この実施例において、本発明者等は、マウスにおいてＣＢ１活性の効果を阻害することができるプレグネノロンの用量（２〜８mg/kg）の効果を研究した。２〜８mg/kgのプレグネノロン注射は、プレグネノロンの脳レベルを増加させ；しかしながら、それらは、マウスの脳における下流代謝物、例えば、エピアロプレグナノロン及びアロプレグナノロンの濃度を修飾しなかった（図４）。
【０３１０】
考察
これらの集中するデータを、以下の通り要約することができる：
第１に、ラットにおけるＴＨＣ投与によるＣＢ１活性化は、プレグネノロンより、アロプレグナノロン及びエピアロプレグナノロンにおいてずっと小さな増加を誘導する。マウスにおいて、ＴＨＣ投与は、アロプレグナノロン及びエピアロプレグナノロンを有意に増加させなかった。結果として、プレグネノロン濃度の内因性増加により働く、ＣＢ１の活性化のネガティブフィードバック（これは、マウスにおいて調べられた）は、プレグネノロンに由来する下流活性ステロイドの続く増加に起因し得ない。
【０３１１】
第２に、ＣＢ１活性化の効果のプレグネノロンによる阻害を、マウスにおいて観察した用量の範囲（２〜８mg/kg）におけるプレグネノロンの外因性投与は、脳においてアロプレグナノロン又はエピアロプレグナノロンのどちらも増加させなかった（図２）。結果として、プレグネノロン投与後に観察されるＣＢ１活性の阻害は、プレグネノロンに由来する下流活性ステロイドのその後の増加に起因し得ない。
【０３１２】
最後に、プレグナノロン及びアロプレグナノロン及び他の下流活性ステロイドに変形されない式Ｉ及び／又はＩＩに従い得られるプレグネノロンの誘導体は、依然として、ＣＢ１活性化の効果を阻害することができる。結果として、プレグネノロン投与後に観察されるＣＢ１受容体の阻害及び／又はＣＢ１効果の阻害は、プレグネノロン由来の下流活性ステロイドに起因し得ない。
【０３１３】
ＶＩ．下流向神経活性代謝物の誘導及び増加のない、プレグネノロンの投与方法
実施例２４．下流活性ステロイドにおいて代謝を減少させることを可能にする持続放出剤形をシミュレートする方法でのプレグネノロンの投与
ここで、本発明者等は、ＣＢ１活性化を阻害することができるが、下流向神経活性ステロイドを増加させない用量でのプレグネノロンの投与方法を例証した。
【０３１４】
プレグネノロンを、皮下（６mg/kg）、又はプレグネノロンの持続放出製剤をシミュレートするＡｌｚｅｔマイクロ浸透圧ポンプ（Alzet Osmotis Pumps、Charles River、France、model 2006）により投与したとき、プレグネノロン血漿レベルについて、プレグネノロン投与の効果を比較した（１群当たりｎ＝５）。従って、皮下に埋め込んだこれらのミニポンプは、プレグネノロンの一定の放出をもたらす。２種のプレグネノロン濃度を、０．６mg/kg/時間及び１mg/kg/時間（皮下に投与した用量より、１０倍及び６倍少ない）として用いた。マウスにおける６mg/kgでのプレグネノロンの皮下投与は、脳においてアロプレグネノロンの濃度を増加させないが（図４）、下流活性ステロイドの有意な増加を血漿において観察した（図２０）。６mg/kgで皮下投与したプレグネノロンは、プレグネノロンの血漿レベルを増加させたが（約１００ng/ml）、アロプレグナノロンの増加を誘導した。皮下に投与したプレグネノロンの半減期は、非常に短く（３０分）、アロプレグナノロンの増加を１時間に渡り維持した（図２０）。それどころか、Ａｌｚｅｔミニポンプを介して、０．６mg/kg/時間でプレグネノロンを一定に投与したとき、プレグネノロンは、皮下注射後に観察される最大増加範囲内で増加したが、アロプレグナノロンを増加させなかった（図２０）。また、プレグネノロンレベルは、２週に渡り効果的な治療用量の範囲内のままであった。プレグネノロン血漿濃度を６mg/kg投与後に観察したものの２倍に増加させた１mg/kg／時間でプレグネノロンを投与したときでさえ、アロプレグナノロンは増加しなかった（図２０）。
【０３１５】
考察
プレグネノロンは、精神疾患、ある種の炎症及び代謝障害、ある種の嗜好、特に、ニコチン嗜癖、及びアルコールの処置方法として、従前の資料において記載されている。しかしながら、全てのこの方法において、プレグネノロンの投与の治療的効果が起因する、下流向神経活性ステロイドを増加させるための明確な目標を伴って、プレグネノロンを高濃度で用いた。本明細書において、本発明者等は、プレグネノロン自体は、下流向神経活性ステロイドの関与なしに、従前の資料において用いられたものよりずっと少ない用量で、ＣＢ１受容体の活性化に関与する病状を処置するのに有用であり得ることを示す。この状況において、プレグネノロンは、非常に短い半減期（約３０分）を有するので、持続放出剤形は、治療範囲内にプレグネノロンレベルを維持するために、有用であり得る。Ａｌｚｅｔミニポンプを用いてかかる剤形をシュミレーションすることにより、本発明者等は、低い１時間当たりの濃度でのプレグネノロンの定常投与は、２つの目的：１．ＣＢ１活性化の全効果をブロックすることができる範囲内である、プレグネノロンの安定濃度（約１００ng/ml）を誘導すること；及び２．下流活性ステロイド、例えば、アロプレグナノロンの増加を減少させること、に至ることを可能にすることを示す。次に、これらの結果は、プレグネノロンの持続放出剤形の使用を通じて、ＣＢ１が関与する疾患を処置するため、プレグネノロン自体の薬理学的効果の利点を有し、下流ステロイドの非所望の効果を減少させ、低用量で、プレグネノロンを投与する方法を提供する。
【０３１６】
参考文献
本出願を通じて、種々の参考文献が、本発明が関連する当該技術分野の状況を記載している。これらの参考文献の開示は、引用により本開示に取り込まれる。
【０３１７】
【表１８】
2014515361.tif 000039
2014515361.tif 000040
2014515361.tif 000041
2014515361.tif 000042
2014515361.tif 000043
2014515361.tif 000044
2014515361.tif 000045
2014515361.tif 000046
【図１】
2014515361.tif 000056
【図２】
2014515361.tif 000057
【図３】
2014515361.tif 000058
【図４】
2014515361.tif 000059
【図５】
2014515361.tif 000060
【図６】
2014515361.tif 000061
【図７】
2014515361.tif 000062
【図８】
2014515361.tif 000063
【図９】
2014515361.tif 000064
【図１０】
2014515361.tif 000065
【図１１】
2014515361.tif 000066
【図１２】
2014515361.tif 000067
【図１３】
2014515361.tif 000068
【図１４】
2014515361.tif 000069
【図１５】
2014515361.tif 000070
【図１６】
2014515361.tif 000071
【図１７】
2014515361.tif 000072
【図１８】
2014515361.tif 000073
【図１９】
2014515361.tif 000074
【図２０】
2014515361.tif 000075
【国際調査報告】
2014515361.tif 000076
2014515361.tif 000077
2014515361.tif 000078
2014515361.tif 000079
2014515361.tif 000080
2014515361.tif 000081