(57)【要約】  本発明は、置換３−（ビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン類、より具体的には治療目的のもの、特に腫瘍疾患の予防および処置のための、その医薬的手段および使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2014524413.tif 000096
［式中、
Ｒ１は、トリフルオロメチルまたはメトキシメチル基を表し、
Ｒ２は、水素またはフッ素を表す］
の化合物またはその塩。
【請求項２】
化合物
・（５ｒ,８ｒ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−８−（メトキシメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
・（５ｒ,８ｒ）−３−（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−８−（メトキシメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
・（５ｒ,８ｒ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−８−（トリフルオロメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン、または、
・（５ｒ,８ｒ）−３−（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−８−（トリフルオロメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン。
【請求項３】
医薬として使用するための、請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
新生物障害の予防および／または治療のための、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌または非小細胞気管支癌の予防および／または治療のための、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
ホルモン受容体陽性乳癌またはアンドロゲン受容体陰性前立腺癌の予防および／または治療のための、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
医薬を製造するための、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項８】
新生物障害の予防および／または治療用の医薬を製造するための、請求項７に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項９】
乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌または非小細胞気管支癌の予防および／または治療用の医薬を製造するための、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
ホルモン受容体陽性乳癌またはアンドロゲン受容体陰性前立腺癌の予防および／または治療用の医薬を製造するための、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
ヒトまたは他の哺乳動物の障害の予防および／または治療のための、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項１２】
新生物障害の予防および／または治療のための、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌または非小細胞気管支癌の予防および／または治療のための、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
ホルモン受容体陽性乳癌またはアンドロゲン受容体陰性前立腺癌の予防および／または治療のための、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
さらなる活性化合物と組み合わされた、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１６】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物を含む医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、置換３−（ビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン類、特に治療目的のもの、特に新生物障害の予防および／または治療のための、本発明の化合物を含む医薬組成物および治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）は、細胞の脂肪酸恒常性において重要な役割を果たす。ＡＣＣは、アセチル−ＣｏＡからマロニル−ＣｏＡへのカルボキシル化をＡＴＰ依存的に触媒する、ビオチンを含有する酵素である（Kim, 1997; Harwood, 2005; Tong, 2005）。２つの半反応、即ちビオチンカルボキシラーゼ（ＢＣ）反応およびカルボキシルトランスフェラーゼ（ＣＴ）反応として進行するこの反応は、脂肪酸生合成の最初の導入段階であり、この経路の速度を決定する段階である。２つの異なる遺伝子にコードされる２種のヒトＡＣＣアイソフォーム、ＡＣＣ１およびＡＣＣ２が知られている（LuTFI ABU-ELHEIGA et al, 1995, Jane WIDMER, et al. 1996）。ＡＣＣ１は、脂質生成の組織（肝臓、脂肪組織）で発現され、細胞質に局在し、マロニル−ＣｏＡのプールを満たし、これは、ＦＡＳＮおよび後続の鎖伸長による長鎖脂肪酸の新規合成のためのＣ２ユニット供与体として働く。ＡＣＣ２は、主に酸化的組織（肝臓、心臓、骨格筋）で発現され（Bianchi et al., 1990; Kim, 1997）、ミトコンドリアに付随し、第２のマロニル−ＣｏＡのプールを調節する。これは、β酸化のために長鎖脂肪酸がミトコンドリアに入ることを助長する酵素であるカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼＩを阻害することにより、脂肪酸の酸化を調節する（Milgraum LZ, et al., 1997, Widmer J. et al., 1996）。両酵素は、非常に高い配列相同性を示し、転写、翻訳および翻訳後メカニズムの組合せにより、同様に調節される。ヒトおよび動物の両方で、ＡＣＣ活性は、クエン酸塩による前向きのアロステリックな活性化、長鎖脂肪酸によるフィードバック阻害、可逆的リン酸化、および／または、遺伝子発現の改変による酵素産生の不活性化または変更などの、数々の食物性、ホルモン性および他の生理学的なメカニズムにより、高度に制御されている。
【０００３】
ＡＣＣ１ノックアウトマウスは、胚性致死である（Swinnen, et al., 2006, Abu-Elheiga, et al. 2005）。ＡＣＣ２ノックアウトマウスは、骨格筋および心筋におけるマロニル−ＣｏＡ濃度の低下、筋肉における脂肪酸の酸化の増加、肝臓脂質レベルの低下、総体脂肪量の減少、骨格筋におけるＵＣＰ３レベルの上昇（高いエネルギー消費を示すものとして）、体重の低下、遊離脂肪酸の血漿濃度の低下、血漿グルコースレベルの低下、組織グリコーゲン量の減少を示し、それらは、食物に誘導される糖尿病および肥満に対して保護される（Abu-Elheiga et al., 2001, 2003; Oh et al., 2005）。
【０００４】
脂肪産生組織における脂肪酸合成および酸化的組織における脂肪酸の酸化に関与することに加え、多くの腫瘍細胞でＡＣＣの上方調節および脂肪生合成の増加が観察された（Swinnen, et al., 2004, Heemers, et al., 2000, Swinnen, et al., 2002,  Rossi, et al., 2003, Milgraum, et al., 1997, Yahagi, et al., 2005）。非常に高い蓋然性で、この表現型は腫瘍の発生および進行に寄与する；しかしながら、関与する調節メカニズムは、依然として解明が待たれている。
【０００５】
ＥＰ０４５４７８２およびＵＳ５７５９８３７は、腫瘍細胞増殖を阻害する脂肪酸合成阻害剤の使用を保護する。環状ケトエノール類は開示されなかった。
植物および／または昆虫のＡＣＣを阻害できる数々の物質が発見された。
【０００６】
ＷＯ９９／４８８６９として公開されたＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＥＰ９９／０１７８７は、欧州特許ＥＰ１０６６２５８Ｂ１に対応し、新規のアリールフェニル置換環状ケトエノール類、複数のそれらの製造方法および殺虫剤および除草剤としてのそれらの使用を記載している。
【０００７】
３−アシルピロリジン−２,４−ジオン類は、医薬的特性を有するものとして既に記述された（S. Suzuki et al. Chem. Pharm. Bull. 15 1120 (1967)）。さらに、Ｎ−フェニルピロリジン−２,４−ジオン類は、R. Schmierer および H. Mildenberger により合成された（Liebigs Ann. Chem. 1985, 1095）。これらの化合物の生物学的活性は、記述されなかった。
【０００８】
ＥＰ−Ａ−０２６２３９９およびＧＢ−Ａ−２２６６８８８は、類似の構造の化合物（３−アリールピロリジン−２,４−ジオン類）を開示するが、それらの除草、殺虫または殺ダニ活性は知られていない。非置換二環式３−アリールピロリジン−２,４−ジオン誘導体（ＥＰ−Ａ−３５５５９９、ＥＰ−Ａ−４１５２１１およびＪＰ−Ａ−１２−０５３６７０）、および、置換単環式３−アリールピロリジン−２,４−ジオン誘導体（ＥＰ−Ａ−３７７８９３およびＥＰ−Ａ−４４２０７７）は、除草、殺虫または殺ダニ活性を有すると知られている。
【０００９】
また知られているのは、多環式３−アリールピロリジン−２,４−ジオン誘導体（ＥＰ−Ａ−４４２０７３）および１Ｈ−アリールピロリジンジオン誘導体である（ＥＰ−Ａ−４５６０６３、ＥＰ−Ａ−５２１３３４、ＥＰ−Ａ−５９６２９８、ＥＰ−Ａ−６１３８８４、ＥＰ−Ａ−６１３８８５、ＷＯ９５／０１９７１、ＷＯ９５／２６９５４、ＷＯ９５／２０５７２、ＥＰ−Ａ−０６６８２６７、ＷＯ９６／２５３９５、ＷＯ９６／３５６６４、ＷＯ９７／０１５３５、ＷＯ９７／０２２４３、ＷＯ９７／３６８６８、ＷＯ９７／４３２７５、ＷＯ９８／０５６３８、ＷＯ９８／０６７２１、ＷＯ９８／２５９２８、ＷＯ９９／２４４３７、ＷＯ９９／４３６４９、ＷＯ９９／４８８６９、ＷＯ９９／５５６７３、ＷＯ０１／１７９７２、ＷＯ０１／２３３５４、ＷＯ０１／７４７７０、ＷＯ０３／０１３２４９、ＷＯ０３／０６２２４４、ＷＯ２００４／００７４４８、ＷＯ２００４／０２４６８８、ＷＯ０４／０６５３６６、ＷＯ０４／０８０９６２、ＷＯ０４／１１１０４２、ＷＯ０５／０４４７９１、ＷＯ０５／０４４７９６、ＷＯ０５／０４８７１０、ＷＯ０５／０４９５６９、ＷＯ０５／０６６１２５、ＷＯ０５／０９２８９７、ＷＯ０６／０００３５５、ＷＯ０６／０２９７９９、ＷＯ０６／０５６２８１、ＷＯ０６／０５６２８２、ＷＯ０６／０８９６３３、ＷＯ０７／０４８５４５、ＤＥＡ１０２００５０５９８９２、ＷＯ０７／０７３８５６、ＷＯ０７／０９６０５８、ＷＯ０７／１２１８６８、ＷＯ０７／１４０８８１、ＷＯ０８／０６７８７３、ＷＯ０８／０６７９１０、ＷＯ０８／０６７９１１、ＷＯ０８／１３８５５１、ＷＯ０９／０１５８０１、ＷＯ０９／０３９９７５、ＷＯ０９／０４９８５１、ＷＯ０９／１１５２６２、ＷＯ１０／０５２１６１、ＷＯ１０／０６３３７８、ＷＯ１０／０６３６７０、ＷＯ１０／０６３３８０、ＷＯ１０／０６６７８０、ＷＯ１０／１０２７５８、ＷＯ２０１０／１３５９１４、ＷＯ２０１１／０６７１３１、ＷＯ２０１１／０６７１３５、ＷＯ２０１１／０６７２０３およびＷＯ２０１１／０６７２４０）。
【００１０】
さらに、ケタール−置換１−Ｈ−アリールピロリジン−２,４−ジオン類がＷＯ９９／１６７４８から、そして、（スピロ）ケタール−置換Ｎ−アルコキシアルコキシ−置換アリールピロリジンジオン類が、ＪＰ−Ａ−１４２０５９８４および Ito M. et. al., Bioscience, Biotechnology and Biochemistry 67, 1230-1238, (2003) から知られている。さらに、ＷＯ０６／０２４４１１は、ケトエノール類を含む除草組成物を開示している。
【００１１】
ＷＯ２００８／０２２７２５は、ウイルス性障害の治療用の４'−ビフェニル−置換テトロン酸誘導体を開示している。
ＷＯ２００５／０８９１１８およびＷＯ２００７／０３９２８６は、一般的に、治療用の窒素含有二環式構造を開示している；しかしながら、５'−ビフェニル−置換環状ケトエノール類は、具体的に言及されていない。
【００１２】
構造的に最も近い先行技術は、アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン環系の８位に、トリフルオロメチル基またはメトキシメチル基の代わりにメチル基を有する化合物により代表され得る。これらの化合物のいくつかは、先行技術の一部を形成し、例えば、ＷＯ１０／０６３３７８に開示されている。
【００１３】
構造的に最も近い先行技術は、また、アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン環系の８位に、メトキシ基の代わりに水素原子を有する化合物により代表され得る。これらの化合物のいくつかは、先行技術の一部を形成し、例えば、ＷＯ０７／０４８５４５（実施例Ｉ−１−ａ−５）に開示されている。
【００１４】
ここで、ＷＯ１０／０６３３７８およびＷＯ０７／０４８５４５は、異なる分野、即ち、除草剤の分野の発明に関するものである。
【００１５】
例外なく、先行技術の最も近い構造は、除草剤、殺虫剤または殺真菌剤の分野で知られている。これらの構造について、それらがヒトＡＣＣを阻害するか否かは、第一に、知られておらず、第二に、予見可能ではない。ましてや、これらの構造について、それらがヒトＡＣＣアイソフォームの１つに対して選択的であるか否かは、知られておらず、予見不可能である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
この先行技術を基礎として、本発明の目的は、ヒトおよび獣医学の障害の治療用の構造を提供することである。
特に、本発明の構造は、新生物障害の予防および治療に適しており、先行技術で知られている構造よりも優れている。
【００１７】
提供されるべきものは、特に、ヒトＡＣＣ１を強く阻害する、障害の治療用の構造である。この目的の構造は、ヒトＡＣＣ２よりも強くヒトＡＣＣ１を阻害する、即ち、ヒトＡＣＣ２に対して選択的である。
【００１８】
好ましくは、障害の治療のために提供される構造は、さらに、下記の特性の１つ、より好ましくはそれ以上、最も好ましくはすべても有するべきである：
【００１９】
・単一の測定法、または好ましくは複数の測定法に従って、それらは、記載されたアッセイにおいて、３００ｎＭ未満、好ましくは２００ｎＭ未満、さらに好ましくは１００ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＡＣＣ１を阻害する。
・単一の測定法、または好ましくは複数の測定法に従って、それらは、記載されたアッセイにおいて、０.５μＭを超える、好ましくは１.５μＭを超える、さらに好ましくは２μＭを超えるＩＣ５０でヒトＡＣＣ２を阻害する。
・単一の測定法、または好ましくは複数の測定法に従って、ヒトＡＣＣ１の阻害についてのＩＣ５０に対するヒトＡＣＣ２の阻害についてのＩＣ５０の比は、少なくとも８倍、好ましくは少なくとも１５倍、さらに好ましくは少なくとも２０倍である。
【００２０】
・単一の測定法、または好ましくは複数の測定法に従って、それらは、記載されたアッセイにおいて、２５０ｎＭ未満、好ましくは１００ｎＭ未満、さらに好ましくは５０ｎＭ未満のＩＣ５０でＭＣＦ７細胞株の腫瘍細胞増殖を阻害する。
【００２１】
・単一の測定法、または好ましくは複数の測定法に従って、それらは、記載されたアッセイにおいて、３未満、好ましくは２.５未満のｌｏｇＰ／Ｄ値を有する。
・単一の測定法、または好ましくは複数の測定法に従って、それらは、記載されたアッセイにおいて、３未満、好ましくは２.５未満、さらに好ましくは２未満のｌｏｇＭＡ値を有する。
・単一の測定法、または好ましくは複数の測定法に従って、それらは、記載されたアッセイにおいて、１μｍｏｌ／Ｌを超えるＨＳＡタンパク質結合定数を有する。
【００２２】
・単一の測定法、または好ましくは複数の測定法に従って、それらは、記載されたアッセイにおいて、ヒト血漿タンパク質への結合に関して、０.１％を超える、好ましくは０.２％を超える遊離フラクションを有する。
・単一の測定法、または好ましくは複数の測定法に従って、それらは、１５倍未満、好ましくは１０倍未満のマウス血漿タンパク質およびヒト血漿タンパク質への結合に関する遊離フラクションの比を有する。
・それらは、様々な種の血漿タンパク質結合に関する遊離フラクションの比を有し、許容される推定ヒト用量を導く。
【００２３】
・それらは、許容される推定ヒト用量を導き、医薬としての投与を可能にする、薬物動態パラメーターを有する。
・それらは、低いクリアランスを有する。
・それらは、高いバイオアベイラビリティーを有する。
・それらは、中等度〜高度の分布容量を有する。
・それらは、許容される推定ヒト用量へ導き、医薬としての投与を可能にする、許容される相対的バイオアベイラビリティーを有する。
・それらは、２週間以内の推定ヒト半減期を有する。
・それらは、ＰＣ３異種移植マウスモデルにおいてインビボ活性を有する。
・それらは、許容される推定ヒト用量を導く血漿濃度で、ＰＣ３異種移植マウスモデルにおいて活性を有する。
・記載された方法により推定されるそれらのヒト日用量は、患者１人当たり、２ｇ未満、好ましくは１ｇ未満である。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
驚くべきことに、この度、式（Ｉ）
【化１】
2014524413.tif 000002
［式中、
Ｒ１は、トリフルオロメチルまたはメトキシメチル基を表し、
Ｒ２は、水素またはフッ素を表す］
の化合物およびそれらの塩が、障害の治療に特に適し、本発明の目的を達成することが見出された。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】腫瘍組織および対応する正常組織におけるＡＣＣ１の発現。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
ここで、殺虫剤または除草剤として知られている構造が、また、これら構造のいずれが、本発明の目的を達成するのか、即ち、ヒトおよび／または動物の障害の治療に使用され得る構造であるのか、予測不可能であった。
【００２７】
また、殺虫剤または除草剤として知られている構造が、また、これら構造のいずれが、ヒトＡＣＣを阻害するのか、また、ヒトアイソフォームの１つに対して選択性を示すのか、予測不可能であった。
【００２８】
驚くべきことに、式（Ｉ）で示される化合物は、殺虫剤、殺真菌剤または除草剤として知られている環状ケトエノールの大集団とは、優れたヒトＡＣＣ１の酵素阻害によって区別される。ここで、本発明の化合物は、ヒトＡＣＣ２に対する高い選択性を有し、特にＡＣＣ１を阻害する。この特性は、予測不可能であったし、本発明の化合物を副作用が少ない治療に適するものにする。望ましくない副作用は、恐らくヒトＡＣＣ２の同時阻害に起因するが、効果は主にヒトＡＣＣ１の阻害に基づく。
【００２９】
ヒトＡＣＣ２に対する選択性は、構造的には、本発明による構造のアザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン環系の８位のトランス−メトキシ基を基礎とすると思われる。先行技術の関連構造においてこのトランス−メトキシ基がすでに実現されていたとしても、これらの構造がヒトＡＣＣを阻害するのか否か、そして、どのような種類の選択性をもって阻害するのか、本発明の時点では未知であった。
【００３０】
本発明は、また、本発明の化合物の生理的に許容し得る塩の使用を包含する。
本発明は、また、本発明の式（Ｉ）の化合物の互変異性体、例えば、
【化２】
2014524413.tif 000003
の使用を包含する。
【００３１】
本発明の化合物の生理的に許容し得る塩には、また、慣用の塩基の塩、例えば、そして好ましくは、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウムおよびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウムおよびマグネシウム塩）、並びにアンモニアまたは１個ないし１６個の炭素原子を有する有機アミン（例えば、そして好ましくは、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、アルギニン、リジン、エチレンジアミンおよびＮ−メチルピペリジン）に由来するアンモニウム塩が含まれる。
【００３２】
本発明は、さらに、本発明の化合物および少なくとも１種またはそれ以上のさらなる活性化合物を含む、特に新生物障害の予防および／または治療用の、医薬を提供する。
【００３３】
本発明の化合物は、全身的および／または局所的に作用し得る。この目的のために、適する方法で、例えば、経口、非経口、肺、鼻腔、舌下、舌、頬側、直腸、皮膚、経皮、結膜、耳経路により、または、インプラントもしくはステントとして、投与され得る。
本発明の化合物は、これらの投与経路に適する投与形で投与され得る。
【００３４】
経口投与に適する投与形は、先行技術に従って機能し、本発明の化合物を急速に、かつ／または、改良された様式で放出し、本発明の化合物を結晶形および／または非晶形および／または溶解形で含有するもの、例えば、錠剤（非被覆または被覆錠剤、例えば、本発明の化合物の放出を制御する胃液耐性または遅延溶解または不溶性被覆を有するもの）、口腔内で急速に崩壊する錠剤またはフィルム剤／オブラート剤、フィルム剤／凍結乾燥剤、カプセル剤（例えば、ハードまたはソフトゼラチンカプセル剤）、糖衣錠、顆粒剤、ペレット剤、散剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール剤または液剤である。
【００３５】
非経口投与は、吸収段階を迂回できるか（例えば、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内）、または、吸収を含む（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内）。非経口投与に適する投与剤形には、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤または滅菌散剤の形態の注射剤および輸液剤が含まれる。
【００３６】
他の投与経路に適する例は、吸入剤（粉末吸入剤、ネブライザーを含む）、鼻用の滴剤、液剤またはスプレー剤；舌、舌下または頬側投与用の錠剤、フィルム剤／オブラート剤またはカプセル剤、坐剤、耳または眼用製剤、膣用カプセル剤、水性懸濁剤（ローション剤、振盪混合物）、親油性懸濁剤、軟膏剤、クリーム剤、経皮治療システム（例えば、パッチ剤）、ミルク、ペースト剤、フォーム剤、散布剤、インプラントまたはステントである。
【００３７】
本発明の化合物は、上記の投与形に変換できる。これは、不活性、非毒性かつ医薬的に適する補助剤と混合することにより、それ自体知られている方法で達成できる。これらの補助剤には、担体（例えば、微結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば、液体ポリエチレングリコール）、乳化剤および分散剤または湿潤剤（例えば、ドデシル硫酸ナトリウム、オレイン酸ポリオキシソルビタン）、結合剤（例えば、ポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えば、アルブミン）、安定剤（例えば、抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸）、着色料（例えば、無機色素、例えば、酸化鉄）および矯味矯臭剤が含まれる。
【００３８】
本発明は、さらに、本発明の化合物を、典型的には１種またはそれ以上の不活性、非毒性かつ医薬的に適する補助剤と共に含む医薬および上記の目的のためのその使用を提供する。
【００３９】
医薬的製剤をもたらす本発明の化合物の製剤化は、医薬製剤において一般的な補助剤を用いて活性化合物を所望の投与形に変換することにより、それ自体知られている方法で実施される。
【００４０】
使用される補助剤は、例えば、担体物質、増量剤、崩壊剤、結合剤、保湿剤、流動促進剤、吸収剤および吸着剤、希釈剤、溶媒、共溶媒、乳化剤、可溶化剤、矯味剤、着色料、保存剤、安定剤、湿潤剤、浸透圧を変えるための塩、またはバッファーであり得る。
【００４１】
Remington's Pharmaceutical Science, 15th ed. Mack Publishing Company, East Pennsylvania (1980) を参照すべきである。
【００４２】
医薬製剤は、
固体形態で、例えば、錠剤、糖衣錠、丸剤、坐剤、カプセル剤、経皮システムとして、または
半固体形態で、例えば、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、坐剤、乳剤として、または
液体形態で、例えば、液剤、チンキ剤、懸濁剤、乳剤として、
存在することができる。
【００４３】
本発明に関して使用される補助剤は、例えば、塩、糖類（単糖、二糖、三糖、オリゴ糖および／または多糖類）、タンパク質、アミノ酸、ペプチド、脂肪、ロウ、油、炭化水素およびそれらの誘導体であり得、当該補助剤は、天然起源のものまたは合成もしくは部分合成のものであり得る。
【００４４】
経口投与に有用な形態は、特に、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、トローチ剤、懸濁剤、乳剤または液剤である。
非経腸投与に有用な形態は、特に、懸濁剤、乳剤および特に液剤である。
【００４５】
本発明は、本発明の化合物に関する。
それらは、ヒトの障害、特に新生物障害の予防および治療に使用され得る。
【００４６】
本発明の化合物は、特に、細胞増殖および／または細胞分割の阻害または軽減、および／またはアポトーシスの誘発のために使用できる。
【００４７】
本発明の化合物は、特に、
・乾癬、
・ケロイドおよび他の皮膚過形成、
・前立腺肥大症（ＢＰＨ）、
・固形腫瘍、および、
・血液腫瘍
などの、過剰増殖性障害の予防および／または治療に適している。
【００４８】
本発明により処置され得る固形腫瘍は、例えば、乳腺、呼吸器、脳、生殖器、消化管、泌尿生殖器、眼、肝臓、皮膚、頭頸部、甲状腺、副甲状腺、骨および結合組織の腫瘍並びにこれらの腫瘍の転移である。
【００４９】
処置され得る血液腫瘍は、例えば、
・多発性骨髄腫、
・リンパ腫、または
・白血病
である。
【００５０】
処置され得る乳腺腫瘍は、例えば、
・ホルモン受容体陽性乳癌、
・ホルモン受容体陰性乳癌、
・Ｈｅｒ−２陽性乳癌、
・ホルモン受容体およびＨｅｒ−２陰性乳癌、
・ＢＲＣＡ関連乳癌、
・炎症性乳癌
である。
【００５１】
処置され得る呼吸器の腫瘍は、例えば、
・非小細胞気管支癌および
・小細胞気管支癌
である。
【００５２】
処置され得る脳の腫瘍は、例えば、
・神経膠腫、
・神経膠芽腫、
・星状細胞腫、
・髄膜腫、および
・髄芽腫
である。
【００５３】
処置され得る男性生殖器の腫瘍は、例えば、
・前立腺癌、
・悪性精巣癌、および
・陰茎癌
である。
【００５４】
処置され得る女性の生殖器の腫瘍は、例えば、
・子宮内膜癌、
・子宮頚癌、
・卵巣癌、
・膣癌、
・外陰癌
である。
【００５５】
処置され得る消化管の腫瘍は、例えば、
・結腸直腸癌、
・肛門癌
・胃癌、
・膵臓癌、
・食道癌、
・胆嚢癌、
・小腸の癌、
・唾液腺癌、
・神経内分泌腫瘍、
・消化管間葉性腫瘍
である。
【００５６】
処置され得る泌尿生殖器の腫瘍は、例えば、
・膀胱癌、
・腎細胞癌、
・腎盂および下部尿路の癌
である。
【００５７】
処置され得る眼の腫瘍は、例えば、
・網膜芽細胞腫、
・眼球内黒色腫
である。
【００５８】
処置され得る肝臓の腫瘍は、例えば、
・肝細胞癌
・胆管細胞癌
である。
【００５９】
処置され得る皮膚の腫瘍は、例えば、
・悪性黒色腫、
・基底細胞腫、
・棘細胞癌、
・カポジ肉腫、
・メルケル細胞癌
である。
【００６０】
処置され得る頭頸部の腫瘍は、例えば、
・喉頭癌、
・咽頭および口腔内の癌
である。
【００６１】
処置され得る肉腫は、例えば、
・軟部組織肉腫、
・骨肉腫
である。
【００６２】
処置され得るリンパ腫は、例えば、
・非ホジキンリンパ腫
・ホジキンリンパ腫、
・皮膚リンパ腫
・中枢神経系のリンパ腫、
・ＡＩＤＳ関連リンパ腫
である。
【００６３】
処置され得る白血病は、例えば、
・急性骨髄性白血病、
・慢性骨髄性白血病、
・急性リンパ性白血病、
・慢性リンパ性白血病、
・ヘアリー細胞性白血病
である。
【００６４】
好都合には、本発明の化合物は、乳癌、特に、ホルモン受容体陰性、ホルモン受容体陽性またはＢＲＣＡ関連乳癌、また、膵臓癌、腎細胞癌、肝細胞癌、悪性黒色腫および他の皮膚腫瘍、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌および前立腺癌の予防および／または治療に使用され得る。
【００６５】
特に好都合には、本発明の化合物は、乳癌、特にホルモン受容体陽性乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌、特にアンドロゲン受容体陰性前立腺癌、または非小細胞気管支癌の予防および／または治療に使用され得る。
【００６６】
これらの障害は、ヒトにおいて十分に特徴解析されているが、他の哺乳動物にも存在する。
【００６７】
本発明は、本発明の式（Ｉａ）で示される化合物、特に、下記の化合物：
・（５ｒ,８ｒ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−８−（メトキシメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
・（５ｒ,８ｒ）−３−（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−８−（メトキシメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
・（５ｒ,８ｒ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−８−（トリフルオロメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
・（５ｒ,８ｒ）−３−（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−８−（トリフルオロメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
を提供する。
【００６８】
本願は、さらに、特に新生物障害の予防および／または治療用医薬として使用するための本発明の化合物を提供する。
【００６９】
本発明は、さらに、乳癌、膵臓癌、腎細胞癌、肝細胞癌、悪性黒色腫および他の皮膚腫瘍、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌または前立腺癌の予防および／または治療のための本発明の化合物を提供する。
【００７０】
本発明は、乳癌、特にホルモン受容体陽性乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌、特にアンドロゲン受容体陰性前立腺癌、または非小細胞気管支癌の予防および／または治療のための本発明の化合物を提供する。
【００７１】
本発明は、さらに、医薬を製造するための本発明の化合物の使用を提供する。
本発明は、さらに、新生物障害の予防および／または治療用医薬を製造するための本発明の化合物の使用を提供する。
【００７２】
本発明は、さらに、乳癌、膵臓癌、腎細胞癌、肝細胞癌、悪性黒色腫および他の皮膚腫瘍、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌または前立腺癌の予防および／または治療用医薬を製造するための本発明の化合物の使用を提供する。
【００７３】
本発明は、さらに、乳癌、特にホルモン受容体陽性乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌、特にアンドロゲン受容体陰性前立腺癌、または非小細胞気管支癌の予防および／または治療用医薬を製造するための本発明の化合物の使用を提供する。
【００７４】
本発明は、さらに、新生物障害の予防および／または治療のための本発明の化合物の使用を提供する。
【００７５】
本発明は、さらに、乳癌、膵臓癌、腎細胞癌、肝細胞癌、悪性黒色腫および他の皮膚腫瘍、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌または前立腺癌の予防および／または治療のための本発明の化合物の使用を提供する。
【００７６】
本発明は、さらに、乳癌、特にホルモン受容体陽性乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌、特にアンドロゲン受容体陰性前立腺癌、または非小細胞気管支癌の予防および／または治療のための本発明の化合物の使用を提供する。
【００７７】
本発明は、さらに、本発明の化合物の１種を含む、乳癌、膵臓癌、腎細胞癌、肝細胞癌、悪性黒色腫および他の皮膚腫瘍、非小細胞気管支癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌または前立腺癌の予防および／または治療のための錠剤の形態の医薬製剤を提供する。
【００７８】
本発明は、さらに、本発明の化合物の１種を含む、乳癌、特にホルモン受容体陽性乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌、特にアンドロゲン受容体陰性前立腺癌、または非小細胞気管支癌の予防および／または治療のための錠剤の形態の医薬製剤を提供する。
【００７９】
本発明は、さらに、増殖過程に関連する障害の処置のための本発明の化合物の使用を提供する。
【００８０】
本発明の化合物は、単独で、または、併用が望まれず、かつ許容されない副作用を誘発しない限り、必要に応じて１種またはそれ以上の他の薬理活性物質と組み合わせて、使用できる。従って、本発明は、さらに、本発明の化合物および１種またはそれ以上のさらなる活性化合物を含む、特に上記の障害の予防および／または治療のための、医薬を提供する。
【００８１】
例えば、本発明の化合物は、癌の処置のための公知の過剰増殖阻害薬物、細胞分裂阻害薬物または細胞障害性薬物と併用され得る。本発明の化合物と、癌処置に一般的に使用される他の物質または放射線療法との併用が特に適する。
【００８２】
適する併用活性化合物の例には、下記のものが含まれる：
アフィニトール、アルデスロイキン、アレンドロン酸、アルファフェロン（alfaferone）、アリトレチノイン、アロプリノール、アロプリム（aloprim）、アロキシ、アルトレタミン、アミノグルテチミド、アミホスチン、アムルビシン、アムサクリン、アナストロゾール、アンズメト（anzmet）、アラネスプ（aranesp）、アルグラビン（arglabin）、三酸化ヒ素、アロマシン、５−アザシチジン、アザチオプリン、ＢＣＧまたはタイスＢＣＧ、ベスタチン、酢酸ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム、ベキサロテン、硫酸ブレオマイシン、ブロキシウリジン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルシトニン、キャンパス、カペシタビン、カルボプラチン、カソデックス、セフェソン（cefesone）、セルモロイキン、セルビジン（cerubidin）、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロン酸、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノキソム（daunoxome）、デカドロン、リン酸デカドロン、デルエストロゲン（delestrogen）、デニロイキンジフチトクス、デポメドロール（depomedrol）、デスロレリン（deslorelin）、デクスラゾキサン、ジエチルスチルベストロール、ジフルカン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドロナビノール、ＤＷ−１６６ＨＣ、エリガード、エリテク（elitek）、エレンス（ellence）、イメンド、エピルビシン、エポエチンアルファ、エポゲン（epogen）、エプタプラチン（eptaplatin）、エルガミソール（ergamisol）、エストラセ（estrace）、エストラジオール、リン酸エストラムスチンナトリウム、エチニルエストラジオール、エチオール（ethyol）、エチドロン酸、エトポホス（etopophos）、エトポシド、ファドロゾール、ファルストン（farstone）、フィルグラスチム、フィナステリド、フリグラスチム（fligrastim）、フロクスウリジン、フルコナゾール、フルダラビン、５−フルオロデオキシウリジン一リン酸、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルオキシメステロン、フルタミド、フォルメスタン、フォステアビン（fosteabine）、ホテムスチン、フルベストラント、ガンマガード、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、グリベック、グリアデル、ゴセレリン、塩酸グラニセトロン、ヒストレリン、ハイカムチン、ハイドロコートン、エリスロ−ヒドロキシノニルアデニン、ヒドロキシウレア、イブリツモマブチウキセタン、イダルビシン、イホスファミド、インターフェロン−アルファ、インターフェロン−アルファ−２、インターフェロン−アルファ−２α、インターフェロン−アルファ−２β、インターフェロン−アルファ−ｎ１、インターフェロン−アルファ−ｎ３、インターフェロン−ベータ、インターフェロン−ガンマ−１α、インターロイキン−２、イントロンＡ、イレッサ、イリノテカン、カイトリル、ラパチニブ、レンチナン硫酸塩、レトロゾール、ロイコボリン、リュープロリド、酢酸リュープロリド、レバミソール、レボフォリン酸（levofolic acid）カルシウム塩、レボスロイド（levothroid）、レボキシル（levoxyl）、ロムスチン、ロニダミン、マリノール、メクロレタミン、メコバラミン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファラン、メネスト、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、メトビックス（metvix）、ミルテ��シン、ミノサイクリン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、モドレナル（modrenal）、マイオセット（myocet）、ネダプラチン、ニューラスタ（neulasta）、ニューメガ（neumega）、ニューポジェン、ニルタミド、ノルバデックス、ＮＳＣ−６３１５７０、ＯＣＴ−４３、オクトレオチド、オンダンセトロン塩酸塩、オラプレド（orapred）、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペジアプレド（pediapred）、ペグアスパルガーゼ、ペガシス、ペントスタチン、ピシバニール、ピロカルピン塩酸塩、ピラルビシン、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、プレドニムスチン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレマリン、プロカルバジン、プロクリット、ラルチトレキセド、ＲＤＥＡ１１９、レビフ、エチドロン酸レニウム−１８６、リツキシマブ、ロフェロン（roferon）−Ａ、ロムルチド、サラジェン、サンドスタチン、サルグラモスチム、セムスチン、シゾフィラン、ソブゾキサン、ソルメドロール、ストレプトゾシン、塩化ストロンチウム−８９、シントロイド（synthroid）、タモキシフェン、タムスロシン、タソネルミン、テストラクトン（tastolactone）、タキソテール、テセロイキン、テモゾロミド、テニポシド、プロピオン酸テストステロン、テストレド（testred）、チオグアニン、チオテパ、サイロトロピン、チルドロン酸、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレオスルファン、トレチノイン、トレキサル（trexall）、トリメチルメラミン、トリメトレキサート、酢酸トリプトレリン、パモ酸トリプトレリン、ＵＦＴ、ウリジン、バルルビシン、ベスナリノン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ビルリジン（virulizin）、ジネカルド（zinecard）、ジノスタチンスチマラマー、ゾフラン；ＡＢＩ−００７、アコルビフェン（acolbifen）、アクティミューン、アフィニタック（affinitak）、アミノプテリン、アルゾキシフェン、アソプリスニル、アタメスタン（atamestane）、アトラセンタン、ＢＡＹ４３−９００６（ソラフェニブ）、アバスチン、ＣＣＩ−７７９、ＣＤＣ−５０１、セレブレックス（celebrex）、セツキシマブ、クリスナトール（crisnatol）、酢酸シプロテロン、デシタビン、ＤＮ−１０１、ドキソルビシン−ＭＴＣ、ｄＳＬＩＭ、デュタステリド、エドテカリン（edotecarin）、エフロールニチン、エキサテカン（exatecan）、フェンレチニド、ヒスタミン二塩酸塩、ヒストレリンヒドロゲルインプラント、ホルミウム−１６６ＤＯＴＭＰ、イバンドロン酸、インターフェロン−ガンマ、イントロン−ＰＥＧ、イクサベピロン、キーホールリンペットヘモシアニン、Ｌ−６５１５８２、ランレオチド、ラソフォキシフェン、ライブラ（libra）、ロナファーニブ、ミプロキシフェン（miproxifene）、ミノドロン酸、ＭＳ−２０９、リポソームＭＴＰ−ＰＥ、ＭＸ−６、ナファレリン、ネモルビシン（nemorubicin）、ネオバスタット（neovastat）、ノラトレキセド（nolatrexed）、オブリメルセン、オンコ−ＴＣＳ、オシデム（osidem）、ポリグルタミン酸パクリタキセル、パミドロン酸二ナトリウム、ＰＮ−４０１、ＱＳ−２１、クアゼパム、Ｒ−１５４９、ラロキシフェン、ランピルナス（ranpirnas）、１３−シス−レチノイン酸、サトラプラチン、セオカルシトール（seocalcitol）、Ｔ−１３８０６７、タルセバ、タキソプレキシン（taxoprexin）、チモシン−アルファ−１、チアゾフリン、ティピファニブ、チラパザミン、ＴＬＫ−２８６、トレミフェン、ｔｒａｎｓＭＩＤ−１０７Ｒ、バルスポダル（valspodar）、バプレオチド（vapreotide）、バタラニブ、ベルテポルフィン、ビンフルニン、Ｚ−１００、ゾレドロン酸およびこれらの組合せ。
【００８３】
好ましい実施態様において、本発明の化合物は、過剰増殖阻害薬物と併用することができ、その例は、以下の非網羅的なリストに挙げられる：
アミノグルテチミド、Ｌ−アスパラギナーゼ、アザチオプリン、５−アザシチジン、ブレオマイシン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、コラスパーゼ（colaspase）、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエチルスチルベストロール、２',２'−ジフルオロデオキシシチジン、ドセタキセル、ドキソルビシン（アドリアマイシン（adriamycine））、エピルビシン、エポチロンおよびその誘導体、エリスロ−ヒドロキシノニルアデニン、エチニルエストラジオール、エトポシド、リン酸フルダラビン、５−フルオロデオキシウリジン、５−フルオロデオキシウリジン一リン酸、５−フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、ヘキサメチルメラミン、ヒドロキシウレア、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、イダルビシン、イホスファミド、インターフェロン、イリノテカン、ロイコボリン、ロムスチン、メクロレタミン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファラン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、パクリタキセル、ペントスタチン、Ｎ−ホスホノアセチル−Ｌ−アスパラギン酸（ＰＡＬＡ）、プリカマイシン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プロカルバジン、ラロキシフェン、セムスチン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テニポシド、プロピオン酸テストステロン、チオグアニン、チオテパ、トポテカン、トリメチルメラミン、ウリジン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン。
【００８４】
非常に有望な方法では、本発明の化合物は、抗体（例えば、アバスチン、リツキサン、アービタックス、ハーセプチン）および組換えタンパク質などの生物学的治療剤と併用することもできる。
【００８５】
本発明の化合物は、血管新生に対する他の治療薬、例えば、アバスチン、アキシチニブ、レゴラフェニブ、レセンチン、ソラフェニブまたはスニチニブと合わせて、有効な効果を得ることもできる。プロテアソームの阻害剤およびｍＴＯＲの阻害剤、およびまた、抗ホルモン薬およびステロイド系代謝酵素阻害剤との併用は、それらの好ましい副作用プロファイルのため、特に好適である。
【００８６】
一般的に、本発明の化合物と他の細胞分裂阻害活性剤または細胞障害活性剤との併用について下記の目的が追求され得る：
・個々の活性化合物での処置と比べて、腫瘍増殖の遅延、そのサイズの縮小、またはその完全な消失における効力の向上；
・単剤療法の場合よりも低用量で使用される化学療法剤の使用の可能性；
・個々の投与と比べて副作用が少ない、より耐容される療法の可能性；
・広範囲の腫瘍の処置の可能性；
・治療に対する高い反応率の達成；
・現行の標準的な療法と比べて長い生存期間。
【００８７】
加えて、本発明の化合物は、放射線療法および／または外科的介入治療と一緒に使用され得る。
【００８８】
１．式（Ｉ）の化合物の合成経路
本発明の式（Ｉ）の化合物は、合成経路Ａおよび／またはＢによって製造できる。
【００８９】
合成経路Ａ
式（ＩＩ）：
【化３】
2014524413.tif 000004
［式中、Ｒ１は、上記の意味を有する］
の臭化アリール誘導体を、式（ＩＩＩ）：
【化４】
2014524413.tif 000005
［式中、
Ｒ２は、上記の意味を有し、
Ａは、−Ｂ（ＯＨ）２、ボロン酸エステル、好ましくはボロン酸ピナコールエステル、または−ＢＦ３−Ｋ＋を表す］
の化合物と、鈴木カップリングで反応させる。
【００９０】
鈴木カップリングは、一般に、不活性溶媒中、触媒の存在下、必要に応じてさらなる反応剤の存在下、好ましくは室温ないし１３０℃の温度範囲で、大気圧下で実施する。この反応は、マイクロ波オーブン中で加熱しながら密閉容器中で実施することもできる。
【００９１】
触媒は、例えば、鈴木反応条件に一般的なパラジウム触媒である；好ましくは、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）、パラジウム／炭素、酢酸パラジウム（ＩＩ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）／トリスシクロヘキシルホスフィン、パラジウム（ＩＩ）アセチルアセトナト／トリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスホニウムテトラフルオロボレート、ジクロロ［１,１'−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム／ジクロロメタン錯体、またはジシクロヘキシル［２',４',６'−トリ（プロパン−２−イル）ビフェニル−２−イル］ホスファンなどの配位子との酢酸パラジウム（ＩＩ）などの触媒である。
【００９２】
さらなる反応剤は、例えば、酢酸カリウムまたは酢酸セシウム、炭酸セシウム、炭酸カリウムまたは炭酸ナトリウム、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、フッ化セシウム、リン酸カリウムまたは水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムであり、好ましくは、炭酸セシウムおよび／または水酸化ナトリウム水溶液などのさらなる反応剤である。
【００９３】
不活性溶媒は、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフランもしくは１,２−ジメトキシエタンなどのエーテル、ベンゼン、キシレンもしくはトルエンなどの炭化水素、またはジメチルホルムアミド、ジメチルアセタミドまたはＮ−メチルピロリドンなどのカルボキシアミド、またはジメチルスルホキシドなどのアルキルスルホキシド、またはこれらの溶媒とメタノールまたはエタノールなどのアルコールおよび／または水との混合物である；好ましくは、１,２−ジメトキシエタンである。
【００９４】
式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＶ）
【化５】
2014524413.tif 000006
［式中、
Ｒ１は、上記の意味を有し、
Ｂは、Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、好ましくは、エチルまたはメチルを表す］
の化合物をディークマン縮合反応条件下で反応させることにより製造できる。
【００９５】
該ディークマン縮合反応は、一般に、不活性溶媒中、塩基の存在下、好ましくは室温ないし１３０℃の温度範囲で、大気圧下にて行われる。
【００９６】
塩基は、例えば、アルカリ金属アルコキシドまたはアルカリ土類金属アルコキシド、例えば、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシドまたはカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、ナトリウムメトキシドまたはナトリウムエトキシドである；好ましくは、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドである。
【００９７】
不活性溶媒は、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフランまたは１,２−ジメトキシエタンなどのエーテル、ベンゼン、キシレンまたはトルエンなどの炭化水素、またはジメチルホルムアミド、ジメチルアセタミドまたはＮ−メチルピロリドンなどのカルボキシアミド、またはジメチルスルホキシドなどのアルキルスルホキシド、またはメタノールまたはエタノールなどのアルコールである；好ましくは、ジメチルホルムアミドである。
【００９８】
式（ＩＶ）の化合物は、式（Ｖ）：
【化６】
2014524413.tif 000007
［式中、Ｒ１およびＢは、上記の意味を有する］
の化合物または式（Ｖ）の化合物の塩を、式（ＶＩ）：
【化７】
2014524413.tif 000008
の化合物と、アミドカップリング条件下で反応させることにより製造できる。
【００９９】
この反応は、一般に、式（ＶＩ）の化合物を、まず、不活性溶媒中で塩化チオニルまたは当業者に知られている同等の反応剤と反応させ、次の工程で、トリエチルアミンまたは炭酸カリウムなどの塩基の存在下で式（Ｖ）の化合物または式（Ｖ）の化合物の塩と反応させることにより、実施する。
【０１００】
別法では、この反応は、不活性溶媒中、脱水剤の存在下で、必要に応じて塩基の存在下で、好ましくは−３０℃ないし５０℃の温度範囲で、大気圧下で実施できる。
【０１０１】
不活性溶媒は、例えば、ジクロロメタンまたはトリクロロメタンなどのハロゲン化炭化水素、ベンゼンまたはトルエンなどの炭化水素、ニトロメタン、テトラヒドロフラン、１,４−ジオキサン、ジメチルホルムアミドまたはアセトニトリルである。これらの溶媒の混合物を使用することもできる。特に好ましくは、アセトニトリル、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフランまたはトルエンである。
【０１０２】
塩基は、例えば、アルカリ金属の炭酸塩、例えば、炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウム、または重炭酸ナトリウムまたは重炭酸カリウム、または有機塩基、例えば、トリアルキルアミン、例えば、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、４−ジメチルアミノピリジンまたはジイソプロピルエチルアミンである。
【０１０３】
適する脱水剤は、例えば、カルボジイミド、例えば、Ｎ,Ｎ'−ジエチル−、Ｎ,Ｎ,'−ジプロピル−、Ｎ,Ｎ'−ジイソプロピル−、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−（３−ジメチルアミノイソプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、Ｎ−シクロヘキシルカルボジイミド−Ｎ'−プロピルオキシメチルポリスチレン（ＰＳ−カルボジイミド）、またはカルボニル化合物、例えば、カルボニルジイミダゾール、または１,２−オキサゾリウム化合物、例えば、２−エチル−５−フェニル−１,２−オキサゾリウム３−スルフェートまたは２−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルイソオキサゾリウムパークロレート、またはアシルアミノ化合物、例えば、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１,２−ジヒドロキノリン、またはプロパンホスホン酸無水物、またはクロロギ酸イソブチル、またはビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホリルクロライド、またはＯ−（ベンソトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、２−（２−オキソ−１−（２Ｈ）−ピリジル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＰＴＵ）またはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、または１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、またはベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、またはベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）、またはＮ−ヒドロキシスクシンイミド、またはこれらと塩基との混合物である。
好ましくは、該縮合反応は、ＰｙＢＯＰまたはＴＢＴＵを用いて、またはＨＯＢｔの存在下でＥＤＣを用いて実施する。
【０１０４】
上記の工程は、下記の合成スキームによって例示される：
【化８】
2014524413.tif 000009
ａ）：１．ＳＯＣｌ２、８０℃、２．トリエチルアミン、ジクロロメタン、室温；
ｂ）：ＫＯｔＢｕ、ＤＭＦ、８０℃；
ｃ）：触媒ジクロロ［１,１'−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム／ジクロロメタン錯体、Ｃｓ２ＣＯ３、１,２−ジメトキシエタン／水、還流。
【０１０５】
合成経路Ｂ
あるいは、本発明の式（Ｉ）の化合物は、式（ＶＩＩ）
【化９】
2014524413.tif 000010
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＢは、上記の意味を有する］
の化合物を、上記の条件下でディークマン縮合反応させることによって製造できる。
【０１０６】
式（ＶＩＩ）の化合物は、Ｒ１およびＢが上記の意味を有する式（Ｖ）の化合物または式（Ｖ）の化合物の塩を、式（ＶＩＩＩ）
【化１０】
2014524413.tif 000011
［式中、Ｒ２は、上記の意味を有する］
の化合物と、上記アミドカップリング条件下で反応させることにより、製造できる。
【０１０７】
式（ＶＩＩＩ）の化合物は、式（ＶＩ）の化合物を、式（ＩＩＩ）［式中、Ｒ２およびＡは、上記の意味を有する］の化合物と、上記の条件下にて鈴木反応で反応させることにより製造できる。
【０１０８】
上記の方法は、下記の合成スキームによって例示される：
【化１１】
2014524413.tif 000012
ａ）：触媒パラジウム（ＩＩ）アセチルアセトナト、触媒トリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスホニウムテトラフルオロボレート、ＮａＯＨ、ＴＨＦ／水；
ｂ）：１．ＳＯＣｌ２、８０℃、２．Ｋ２ＣＯ３、アセトニトリル、室温；
ｃ）：ＫＯｔＢｕ、ＤＭＦ、室温。
【０１０９】
合成経路ＡおよびＢに必要な、Ｒ１およびＢが上記の意味を有する式（Ｖ）の化合物または式（Ｖ）の化合物の塩は、式（ＩＸ）
【化１２】
2014524413.tif 000013
［式中、Ｒ１は上記の意味を有する］
の化合物または式（ＩＸ）の化合物の塩を、例えばＷＯ２００２／０２５３２またはＷＯ２０１０／０６３３７８と同様に、既知方法でエステル化することにより製造できる。
【０１１０】
Ｒ１が上記の意味を有する式（ＩＸ）の化合物または式（ＩＸ）の化合物の塩は、式（Ｘ）
【化１３】
2014524413.tif 000014
［式中、Ｒ１は上記の意味を有する］
の化合物を、例えばＷＯ２００２／０２５３２またはＷＯ２０１０／０６３３７８と同様に、既知方法で開裂することにより製造できる。
【０１１１】
Ｒ１が上記の意味を有する式（Ｘ）の化合物は、式（ＸＩ）
【化１４】
2014524413.tif 000015
［式中、Ｒ１は上記の意味を有する］
の化合物を、例えばＷＯ２００２／０２５３２またはＷＯ２０１０／０６３３７８と同様に、既知方法によりブヘラ・ベルクス反応で反応させることにより製造できる。式（Ｘ）のヒダントインの形成中に、式（Ｘ）のｃｉｓ異性体およびそのｔｒａｎｓ異性体である式（Ｘ−ａ）
【化１５】
2014524413.tif 000016
の異性体混合物が得られる。
【０１１２】
式（Ｘ−ａ）のｔｒａｎｓ異性体は、この合成段階で分離することができる。あるいは、異性体混合物をさらに反応させ、各々のｔｒａｎｓ異性体の中間体を、さらなる合成段階のいずれかで、または、式（Ｉ）の最終生成物から、分離することができる。
【０１１３】
あるいは、ストレッカー合成法を用いて、式（ＸＩ）のケトンからアミノニトリルを製造することができ、これは、公知の方法によって式（ＩＸ）のアミノ酸に加水分解できる。
【０１１４】
Ｒ１が上記の意味を有する式（ＸＩ）の化合物は、式（ＸＩＩ）
【化１６】
2014524413.tif 000017
［式中、Ｒ１は上記の意味を有する］
の化合物を、ケタール開裂（Protective Groups in Organic Synthesis; Theodora W. Greene 参照）に付すことにより製造できる。
【０１１５】
Ｒ１が上記の意味を有する式（ＸＩＩ）の化合物は、式（ＸＩＩＩ）
【化１７】
2014524413.tif 000018
［式中、Ｒ１は上記の意味を有する］
の化合物を、例えばＷＯ２０１０／０６３３７８と同様に、既知方法でメチル化することにより製造できる。
【０１１６】
上記の方法は、下記の合成スキームによって例示される：
【化１８】
2014524413.tif 000019
ａ）：ＮａＨ、ヨウ化メチル、ＴＨＦ、室温；
ｂ）：トルエンスルホン酸一水和物、アセトン／水；
ｃ）：ＮａＣＮ、（ＮＨ４）２ＣＯ３、水／エタノール、６０℃；
ｄ）：ＫＯＨまたはＮａＯＨ、水、還流；
ｅ）：ＳＯＣｌ２、メタノール、４０℃ないし還流。
【０１１７】
Ｒ１がトリフルオロメチル基を表す式（ＸＩＩＩ）の化合物は、式（ＸＩＶ）
【化１９】
2014524413.tif 000020
の化合物を、（トリフルオロメチル）トリメチルシランと反応させることにより製造できる。
【０１１８】
式（ＸＩＩＩ）の化合物を与える式（ＸＩＶ）のケトンと（トリフルオロメチル）トリメチルシランの反応は、一般的に、不活性溶媒中、触媒の存在下、好ましくは−２０℃ないし１００℃の温度範囲で、大気圧下で実施する。触媒は、例えば、アルカリ金属またはアルカリ土類金属炭素塩、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムまたは炭酸セシウムである。所望の反応を触媒するために、アルカリ金属またはアルカリ土類金属フッ化物、例えば、フッ化リチウムおよびフッ化セシウム、並びに、有機塩基のフッ化物塩、例えば、テトラエチルアンモニウムフルオライドまたはテトラブチルアンモニウムフルオライドを用いることも可能である。不活性溶媒は、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフランまたは１,２−ジメトキシエタンなどのエーテル、または、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドまたはＮ−メチルピロリドンなどのカルボキサミド、または、ジメチルスルホキシドなどのアルキルスルホキシドである；好ましいのは、ジメチルホルムアミドである。式（ＸＩＩＩ）のシリル誘導体が最初に得られ、当業者に知られている方法により最終的に切り離される（Protective Groups in Organic Synthesis; Theodora W. Greene 参照）。
【０１１９】
Ｒ１がメトキシメチル基を表す式（ＸＩＩＩ）の化合物は、式（ＸＶ）
【化２０】
2014524413.tif 000021
のエポキシドを、例えば Rodriguez, Benjamin; Torre, Maria C. de la; Perales, Aurea; Malakov, Peter Y.; Papanov, Y.; et al., Tetrahedron, 1994, Volume 50, pages 5451 - 5468 と同様に、既知方法で開くことにより製造できる。
【０１２０】
式（ＸＶ）のエポキシドは、公知であり、式（ＸＩＶ）の化合物から製造できる（Ciaccio, James A.; Drahus, Antoinette L.; Meis, Regina M.; Tingle, Carice T.; Smrtka, Michael; Geneste, Richard, Synthetic Communications, 2003, Volume 33, pages 2135 - 2144）。
【実施例】
【０１２１】
略語および頭字語：
【表１】
2014524413.tif 000022
【０１２２】
ＬＣ−ＭＣ法およびＨＰＬＣの方法：
方法１（ＵＰＬＣ−ＭＣ）：
装置：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ−ＭＣ  ＳＱＤ  ３００１；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １.７  ５０×２.１ｍｍ；移動相Ａ：水＋０.１％ギ酸、移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：０−１.６分  １−９９％Ｂ、１.６−２.０分  ９９％Ｂ；流速０.８ｍＬ／分；温度：６０℃；注入：２μＬ；ＤＡＤスキャン：２１０−４００ｎＭ；ＥＬＳＤ。
【０１２３】
方法２（ＵＰＬＣ−ＭＣ）：
装置：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ−ＭＣ  ＳＱＤ；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １.７  ５０×２.１ｍｍ；移動相Ａ：水＋０.０５％ギ酸、移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.０５％ギ酸；勾配：０−１.６分  １−９９％Ｂ、１.６−２.０分  ９９％；流速０.８ｍＬ／分；温度：６０℃；注入：２μＬ；ＤＡＤスキャン：２１０−４００ｎｍ；ＥＬＳＤ。
【０１２４】
方法３（ＵＰＬＣ−ＭＳ）：
装置：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ−ＭＳ  ＺＱ４０００；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １.７  ５０ｘ２.１ｍｍ；移動相Ａ：水＋０.０５％ギ酸、移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.０５％ギ酸；勾配：０−１.６分  １−９９％Ｂ、１.６−２.０分  ９９％Ｂ；流速０.８ｍｌ／分；温度：６０℃；注入：２μｌ；ＤＡＤスキャン：２１０−４００ｎｍ
【０１２５】
２．比較例および実施例の製造
出発化合物および中間体：
実施例１Ａ
（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）酢酸
【化２１】
2014524413.tif 000023
アルゴン下、（４−クロロ−３−フルオロフェニル）ボロン酸３３.５ｇ（１９２ｍｍｏｌ）を、脱気した１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液４３７ｍｌ（４３７ｍｍｏｌ、脱気した水１６０ｍｌおよび脱気したテトラヒドロフラン１６０ｍｌの混合物中の、（５−ブロモ−２−メチルフェニル）酢酸（ＥＰ１７９１８１６およびＷＯ２００６／２９７９９）４０.０ｇ（１７５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を１０分間撹拌し、トリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスホニウムテトラフルオロボレート５０７ｍｇ（１.７５ｍｍｏｌ）およびパラジウム（ＩＩ）アセチルアセトナト５３２ｍｇ（１.７５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２０時間撹拌した。次いで、トルエンおよび水を添加し、濃塩化水素水溶液でｐＨを１−２に調節し、混合物を１０分間撹拌し、相を分離し、水相をトルエンで２回抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をｎ−ヘキサン／ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルの６／１混合物３００ｍｌ中で３０分間撹拌し、吸引濾過し、ｎ−ヘキサンで洗浄し、減圧下で乾燥させた。これにより、表題化合物３８.０ｇ（理論値の７８％）を得た。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 2.27 (s, 3H), 3.67 (s, 2H), 7.27 (d, 1H), 7.49 - 7.59 (m, 3H), 7.61 - 7.75 (m, 2H), 12.4 (s, 1H).
LC-MS (方法 1): Rt = 1.31 分; MS (ESIneg): m/z = 277 [M-H]-.
【０１２６】
実施例２Ａ
（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチルクロライド
【化２２】
2014524413.tif 000024
（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）酢酸（ＥＰ２０２９５３１Ａ１およびＵＳ２００９／２９８８２８Ａ１）５.００ｇ（１９.１８ｍｍｏｌ）を、塩化チオニル３６.５１ｇ（３０６.８４ｍｍｏｌ）に溶解した。反応混合物を８０℃で４時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。真空下で乾燥させ、表題化合物５.４ｇ（理論値の１００％）を褐色がかった油状物として得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ [ppm] = 2.36 (s, 3H), 4.22 (s, 2H), 7.29 (d, 1H), 7.35 - 7.55 (m, 6H).
【０１２７】
実施例３Ａ
（５−ブロモ−２−メチルフェニル）アセチルクロライド
【化２３】
2014524413.tif 000025
（５−ブロモ−２−メチルフェニル）酢酸（ＥＰ１７９１８１６Ａ１およびＵＳ２００６／２９７９９Ａ１）６.００ｇ（２６.１９ｍｍｏｌ）を、塩化チオニル３１.２０ｇ（２６１.９２ｍｍｏｌ）に溶解した。反応混合物を８０℃で２時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。真空下で乾燥させ、表題化合物６.２９ｇ（理論値の９７％）を褐色がかった油状物として得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ [ppm] = 2.26 (s, 3H), 4.12 (s, 2H), 7.09 (d, 1H), 7.34 (d, 1H), 7.37 (dd, 1H).
【０１２８】
実施例４Ａ
（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチルクロライド
【化２４】
2014524413.tif 000026
（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）酢酸（実施例１Ａ）１０.００ｇ（３５.８８ｍｍｏｌ）を、塩化チオニル２４.３３ｇ（２０４.５１ｍｍｏｌ）に溶解した。反応混合物を８０℃で１時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。真空下で乾燥させ、表題化合物１０.５４ｇ（理論値の９９％）を褐色がかった油状物として得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ [ppm] = 2.36 (s, 3H), 4.22 (s, 2H), 7.26 - 7.39 (m, 4H), 7.41 - 7.49 (m, 2H).
【０１２９】
実施例５Ａ
トリメチル｛［８−（トリフルオロメチル）−１,４−ジオキサスピロ［４.５］デセ−８−イル］オキシ｝シラン
【化２５】
2014524413.tif 000027
１,４−ジオキサスピロ［４.５］デカン−８−オン５.００ｇ（３２.０１ｍｍｏｌ）を、１,２−ジメトキシエタン５０ｍｌに溶解し、炭酸セシウム１４.６０ｇ（４４.８２ｍｍｏｌ）を添加した。３０℃より低い内部温度で、１,２−ジメトキシエタン１００ｍｌに溶解したトリメチル（トリフルオロメチル）シラン３６.４２ｇ（２５６.１１ｍｍｏｌ）を、得られた懸濁液に滴下して添加し、反応混合物を室温で一夜撹拌した。後処理に、水約６００ｍｌを反応に滴下して添加し、標的分子をジクロロメタンで抽出した。有機相を水で繰り返し洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。乾燥させ、表題化合物１０.６ｇ（理論値の１００％）を褐色がかった油状物として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 0.11 (s, 9H), 1.57 - 1.78 (m, 8H), 3.85 (s, 4H).
【０１３０】
実施例６Ａ
１,７,１０−トリオキサジスピロ［２.２.４.２］ドデカン
【化２６】
2014524413.tif 000028
ジクロロメタン７５０ｍｌ中の１,４−シクロヘキサンジオンモノエチレンアセタール３０.０ｇ（１９２ｍｍｏｌ）の溶液を、トリメチルスルホキソニウムアイオダイド５０.７ｇ（２３１ｍｍｏｌ）およびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド２５.９ｇ（２３１ｍｍｏｌ）の均一な混合物に添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。氷水を添加し、相を分離し、水相をジクロロメタンで繰り返し抽出し、合わせた有機相を水で繰り返し洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、表題化合物２８.３ｇ（理論値の８７％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.41 - 1.52 (m, 2H), 1.65 - 1.76 (m, 6H), 2.61 (s, 2H), 3.88 (s, 4H).
【０１３１】
実施例７Ａ
８−（トリフルオロメチル）−１,４−ジオキサスピロ［４.５］デカン−８−オール
【化２７】
2014524413.tif 000029
０℃で、トリメチル｛［８−（トリフルオロメチル）−１,４−ジオキサスピロ［４.５］デセ−８−イル］オキシ｝シラン（実施例５Ａ）１２.２０ｇ（４０.８９ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン中の１モル濃度テトラブチルアンモニウムフルオライド溶液１６４ｍｌに溶解し、混合物を室温で３時間撹拌した。後処理に、水約６００ｍｌを反応に添加し、標的分子をジクロロメタンで抽出した。有機相を繰り返し水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。乾燥させ、表題化合物９.３３ｇ（理論値の１００％）を褐色がかった油状物として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.49 - 1.58 (m, 2H), 1.59 - 1.77 (m, 6H), 3.83 (s, 4H), 5.78 (s, 1H).
【０１３２】
実施例８Ａ
８−（メトキシメチル）−１,４−ジオキサスピロ［４.５］デカン−８−オール
【化２８】
2014524413.tif 000030
２５％濃度ナトリウムメトキシドメタノール溶液７５ｍｌを、メタノール１５０ｍｌ中の実施例６Ａの化合物４.５６ｇ（２６.８ｍｍｏｌ）に添加し、混合物を６０℃で一夜撹拌した。冷却後、反応混合物を濃縮し、残渣を飽和塩化アンモニウム水溶液に取り、酢酸エチルで繰り返し抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、表題化合物３.２３ｇ（理論値の６０％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.37 - 1.47 (m, 4H), 1.50 - 1.63 (m, 2H), 1.68 - 1.80 (m, 2H), 3.10 (s, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.82 (s, 4H), 4.24 (s, 1H).
【０１３３】
実施例９Ａ
８−メトキシ−８−（トリフルオロメチル）−１,４−ジオキサスピロ［４.５］デカン
【化２９】
2014524413.tif 000031
０℃で、８−（トリフルオロメチル）−１,４−ジオキサスピロ［４.５］デカン−８−オール（実施例７Ａ）１６.２３ｇ（７１.７５ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン５８２ｍｌに溶解し、水素化ナトリウム（６０％、パラフィン油中）５.７４ｇ（１４３.５０ｍｍｏｌ）を少しずつ添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。得られた懸濁液にヨードメタン５０.９２ｇ（３５８.７６ｍｍｏｌ）を滴下して添加し、反応混合物を室温で一夜撹拌した。後処理に、混合物を氷水約１ｌに注ぎ、生成物をジクロロメタンで抽出した。有機相を水で繰り返し洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。乾燥させ、表題化合物１７.３４ｇ（理論値の１００％）を褐色がかった油状物として得た。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.50 - 1.75 (m, 6H), 1.85 - 1.98 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.84 (s, 4H).
【０１３４】
実施例１０Ａ
８−メトキシ−８−（メトキシメチル）−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン
【化３０】
2014524413.tif 000032
実施例８Ａの化合物３.４０ｇ（１６.８ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン１７０ｍｌに溶解し、水素化ナトリウム（６０％、パラフィン油中）１.０１ｇ（２５.２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で０.５時間撹拌した。次いで、ヨードメタン３.５８ｇ（２５.２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、ヨードメタン３.５８ｇ（２５.２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。水を添加し、混合物を酢酸エチルで繰り返し抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、表題化合物３.３５ｇ（理論値の９２％）を得た。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.37 - 1.77 (m, 8H), 3.11 (s, 3H), 3.25 (s, 5H), 3.83 (s, 4H).
【０１３５】
実施例１１Ａ
４−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサノン
【化３１】
2014524413.tif 000033
８−メトキシ−８−（トリフルオロメチル）−１,４−ジオキサスピロ［４.５］デカン（実施例９Ａ）１１.８０ｇ（４９.１２ｍｍｏｌ）をアセトン２３６ｍｌおよび水１１８ｍｌに溶解し、４−トルエンスルホン酸一水和物１.５０ｇ（７.８６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を還流で一夜加熱した。次いで、混合物を水１.２ｌに注ぎ、生成物をジエチルエーテルで抽出した。有機相を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。得られた残渣を減圧下で蒸留した（沸点：４０ｍｂａｒで１０６−１１０℃）。これにより、表題化合物６.８６ｇ（理論値の７１％）を黄色がかった油状物として得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ [ppm] = 1.90 - 2.07 (m, 2H), 2.26 - 2.43 (m, 4H), 2.48 - 2.65 (m, 2H), 3.52 (s, 3H).
【０１３６】
実施例１２Ａ
４−メトキシ−４−（メトキシメチル）シクロヘキサノン
【化３２】
2014524413.tif 000034
実施例１０Ａの化合物１３.３ｇ（６１.５ｍｍｏｌ）を、アセトン２００ｍｌおよび水１００ｍｌに溶解し、４−トルエンスルホン酸一水和物１.８７ｇ（９.８４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２日間撹拌した。次いで、アセトンを留去し、水性残渣を重炭酸ナトリウムの添加により中和し、塩化ナトリウム２３.２ｇを添加した。混合物を酢酸エチルで繰り返し抽出し、合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、表題化合物１０.３ｇ（理論値の９７％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.61 - 1.76 (m, 2H), 1.97 - 2.12 (m, 4H), 2.34 - 2.46 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 3.28 (s, 3H), 3.36 (s, 2H).
【０１３７】
実施例１３Ａ
８−メトキシ−８−メチル−１,３−ジアザスピロ［４.５］デカン−２,４−ジオン
【化３３】
2014524413.tif 000035
炭酸アンモニウム６０８ｇ（６.３３ｍｏｌ）およびシアン化ナトリウム６８.２ｇ（１.３９ｍｍｏｌ）を、水２８００ｍｌに溶解した。４−メトキシ−４−メチルシクロヘキサノン（ＷＯ２０１０／０６３３７８に記載されている）１８０ｇ（１.２７ｍｍｏｌ）を室温で滴下して添加し、混合物を６０℃で一夜撹拌した。固体を吸引濾過し、乾燥させた。これにより、表題化合物１６９.６ｇ（理論値の１９％）を、４／１のｔｒａｎｓ／ｃｉｓジアステレオマー混合物として得、これをさらに精製せずに反応させた。
【０１３８】
実施例１４Ａ
８−メトキシ−８−（トリフルオロメチル）−１,３−ジアザスピロ［４.５］デカン−２,４−ジオン
【化３４】
2014524413.tif 000036
４−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサノン（実施例１１Ａ）８.８０ｇ（４４.８６ｍｍｏｌ）、シアン化ナトリウム４.４０ｇ（８９.７２ｍｍｏｌ）および炭酸アンモニウム１７.２４ｇ（１７９.４４ｍｍｏｌ）を、エタノール１０２ｍｌおよび水１０２ｍｌに懸濁した。得られた懸濁液を６０℃で２０時間撹拌した。沈殿した生成物を濾過し、水で洗浄し、減圧下で乾燥させた。これにより、表題化合物１０.０５ｇ（理論値の８４％）を白色粉末として得た。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.38 - 2.20 (m, 8H), 3.31 (s, 3H), 7.87 (s, 0.25H), 8.70 (s, 0.75H), 10.64 (s, 1H).
【０１３９】
実施例１５Ａ
（５ｒ,８ｒ）−８−メトキシ−８−（メトキシメチル）−１,３−ジアザスピロ［４.５］デカン−２,４−ジオン
【化３５】
2014524413.tif 000037
炭酸アンモニウム２８.６ｇ（２９８ｍｍｏｌ）およびシアン化ナトリウム３.２１ｇ（６５.５ｍｍｏｌ）を水１３０ｍｌに溶解した。実施例１２Ａの化合物１０.３ｇ（５９.５ｍｍｏｌ）を、室温で滴下して添加し、混合物を６０℃で一夜撹拌した。固体を吸引濾過し、少量の水で洗浄し、乾燥させた。これにより、表題化合物８.６７ｇ（理論値の６０％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.26 - 1.34 (m, 2H), 1.39 - 1.50 (m, 2H), 1.71 - 1.88 (m, 4H), 3.12 (s, 3H), 3.23 (s, 2H), 3.26 (s, 3H), 8.43 (s, 1H), 10.54 (s, 1H).
【０１４０】
実施例１６Ａ
８−メトキシ−８−（メトキシメチル）−１,３−ジアザスピロ［４.５］デカン−２,４−ジオン
【化３６】
2014524413.tif 000038
炭酸アンモニウム５.７４ｇ（５９.７ｍｍｏｌ）およびシアン化ナトリウム１.４６ｇ（２９.８ｍｍｏｌ）を水３３ｍｌに溶解した。エタノール３３ｍｌ中の実施例１２Ａの化合物の溶液２.５７ｇ（１４.９ｍｍｏｌ）を室温で滴下して添加し、混合物を６０℃で一夜撹拌した。反応混合物をその元の体積の４分の１に濃縮し、ジクロロメタンおよび酢酸エチルで繰り返し抽出し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、表題化合物６７５ｍｇ（理論値の１９％）をジアステレオマー混合物として得、これをさらに精製せずに反応させた。
【０１４１】
実施例１７Ａ
１−アミノ−４−メトキシ−４−メチルシクロヘキサンカルボン酸塩酸塩
【化３７】
2014524413.tif 000039
３０％濃度水酸化カリウム水溶液９７０ｍｌ中の実施例１３Ａの化合物１６９.５ｇを、還流下で２０時間加熱した。冷却後、濃塩化水素水溶液６７０ｍｌの添加により反応混合物をｐＨ２に調節し、沈殿を吸引濾過し、濾液を濃縮した。これにより、粗生成物１１０.７ｇを、ジアステレオマー混合物として得、それは依然として塩を含有し、さらに精製せずに反応させた。
【０１４２】
実施例１８Ａ
１−アミノ−４−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボン酸
【化３８】
2014524413.tif 000040
８−メトキシ−８−（トリフルオロメチル）−１,３−ジアザスピロ［４.５］デカン−２,４−ジオン（実施例１４Ａ）１０.００ｇ（３７.５６ｍｍｏｌ）を、３モル濃度水酸化ナトリウム水溶液１２５ｍｌに懸濁し、還流条件下で３日間撹拌した。その後、濃塩酸を使用してｐＨを６に調節し、沈殿した生成物を濾過し、水で洗浄し、減圧下で乾燥させた。これにより、表題化合物１２.２０ｇ（理論値の１３５％；生成物は無機塩を含有する）を白色粉末として得た。
1H NMR (400 MHz, メタノール-d4): δ [ppm] = 1.64 - 1.79 (m, 3.6H), 1.89 - 2.08 (m, 2.4H), 2.24 - 2.40 (m, 2H), 3.40 (q, 0.5H), 3.42 (q, 2.5H).
【０１４３】
実施例１９Ａ
ｔｒａｎｓ−１−アミノ−４−メトキシ−４−（メトキシメチル）シクロヘキサンカルボン酸塩酸塩
【化３９】
2014524413.tif 000041
３０％濃度水酸化カリウム水溶液５２ｍｌ中の実施例１５Ａの化合物８.６７ｇ（３５.８ｍｍｏｌ）を還流下で３６時間加熱した。冷却後、反応混合物をその元の体積の４分の１に濃縮し、濃塩化水素水溶液の添加によりｐＨ２に調節し、蒸発乾固した。これにより、依然として塩を含有する粗生成物４０.４ｇを得、さらに精製せずに反応させた。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.57 - 1.77 (m, 6H), 1.87 - 2.05 (m, 2H), 3.08 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 3.27 (s, 2H), 8.50 (s, 3H).
【０１４４】
実施例２０Ａ
１−アミノ−４−メトキシ−４−（メトキシメチル）シクロヘキサンカルボン酸塩酸塩
【化４０】
2014524413.tif 000042
３０％濃度水酸化カリウム水溶液４ｍｌ中の実施例１６Ａの化合物６７０ｍｇを、還流下で１８時間加熱した。冷却後、反応混合物をその元の体積の４分の１に濃縮し、濃塩化水素水溶液の添加によりｐＨ２に調節し、濃縮した。これにより、粗生成物４.７０ｇをジアステレオマー混合物として得、それは依然として塩を含有し、さらに精製せずに反応させた。
【０１４５】
実施例２１Ａ
メチルｔｒａｎｓ−１−アミノ−４−メトキシ−４−メチルシクロヘキサンカルボキシレート塩酸塩
【化４１】
2014524413.tif 000043
窒素下、５℃で、塩化チオニル１７２ｍｌ（２.３６ｍｏｌ）を、メタノール２５００ｍｌ中の実施例１７Ａの化合物１１０.５ｇに滴下して添加した。混合物を０℃で３０分間、４０℃で２４時間撹拌した。冷却後、固体を吸引濾過し、濾液を濃縮し、残渣をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル１０００ｍｌおよびアセトニトリル３００ｍｌの混合物中で１０分間撹拌し、固体を吸引濾過した。これにより、表題化合物３７.１ｇ（実施例１３Ａの４−メトキシ−４−メチルシクロヘキサノンからの理論値の１２％）を得、それをさらに精製せずに反応させた。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.08 (s, 3H), 1.60 - 1.79 (m, 6H), 1.94 - 2.11 (m, 2H), 3.07 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 8.68 (s, 3H).
【０１４６】
実施例２２Ａ
メチル１−アミノ−４−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボキシレート
【化４２】
2014524413.tif 000044
１−アミノ−４−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボン酸（実施例１８Ａ）１２.２０ｇ（約３７.５８ｍｍｏｌに相当）をメタノール２１０ｍｌに懸濁し、塩化チオニル１０.４ｍｌ（１４２.８０ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。混合物を還流下で２時間沸騰させ、冷却し、さらに１０.４ｍｌ（１４２.８０ｍｍｏｌ）の塩化チオニルを０℃で添加し、混合物を還流下でさらに２時間沸騰させた。反応を冷却し、さらに１０.４ｍｌ（１４２.８０ｍｍｏｌ）の塩化チオニルを添加し、反応が完了するまで混合物を還流で一夜加熱した。後処理に、メタノール約１００ｍｌを留去し、濃縮物を飽和炭酸ナトリウム水溶液１ｌに注いだ。生成物を酢酸エチルで抽出し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させた。蒸発により濃縮し、表題化合物７.０１ｇ（理論値の７３％）を黄色がかった油状物として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.39 - 2.00 (m, 10H), 3.28 (q, 3H), 3.59 (s, 2.4H), 3.60 (s, 0.6H).
【０１４７】
実施例２３Ａ
メチルｔｒａｎｓ−１−アミノ−４−メトキシ−４−（メトキシメチル）シクロヘキサンカルボキシレート
【化４３】
2014524413.tif 000045
０℃で、塩化チオニル３４.８ｍｌ（４７８ｍｍｏｌ）を、メタノール４００ｍｌ中の実施例１９Ａの化合物４０.４ｇに滴下して添加した。混合物を０℃で０.５時間、４０℃で２４時間撹拌した。冷却後、混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチルに取り、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、水相を酢酸エチルおよびジクロロメタンで繰り返し抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、表題化合物７.１６ｇ（実施例１５Ａからの理論値の８７％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.27 - 1.35 (m, 2H), 1.46 - 1.55 (m, 2H), 1.58 - 1.72 (m, 4H), 1.74 - 1.84 (m, 2H), 3.09 (s, 3H), 3.23 (s, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.60 (s, 3H).
【０１４８】
実施例２４Ａ
メチル１−アミノ−４−メトキシ−４−（メトキシメチル）シクロヘキサンカルボキシレート
【化４４】
2014524413.tif 000046
０℃で、塩化チオニル４.１ｍｌ（５５.６０ｍｍｏｌ）を、メタノール５０ｍｌ中の実施例２０Ａの化合物４.７０ｇに滴下して添加した。混合物を０℃で０.５時間、４０℃で一夜撹拌した。冷却後、混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチルに取り、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、水相を酢酸エチルで繰り返し抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、表題化合物３９２ｍｇ（実施例１６Ａからの理論値の６１％）をジアステレオマー混合物として得、これをさらに精製せずに反応させた。
【０１４９】
実施例２５Ａ
メチルｔｒａｎｓ−１−｛［（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチル］アミノ｝−４−メトキシ−４−メチルシクロヘキサンカルボキシレート
【化４５】
2014524413.tif 000047
（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）酢酸（ＥＰ２０２９５３１Ａ１およびＵＳ２００９／２９８８２８Ａ１）８.０８ｇ（３１.０ｍｍｏｌ）を、塩化チオニル１２.９ｍｌ（４２８ｍｍｏｌ）に溶解した。反応混合物を８０℃で１時間撹拌し、次いで濃縮した。残渣をアセトニトリル７０ｍｌに溶解した。酢酸エチルおよび飽和重炭酸ナトリウム水溶液を、実施例２１Ａの化合物６.００ｇ（２５.２ｍｍｏｌ）に添加した。相を分離し、水相を酢酸エチルで繰り返し抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。アセトニトリル１２０ｍｌおよび炭酸カリウム１２.２ｇ（８８.３ｍｍｏｌ）を残渣に添加した。氷冷しながら、酸塩化物の溶液を滴下して添加し、混合物を室温で２日間撹拌した。次いで、混合物を濃縮し、残渣を水に取り、ジクロロメタンで繰り返し抽出し、合わせた有機相を１Ｎ塩化水素水溶液および飽和重炭酸ナトリウム水溶液で繰り返し洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（移動相：ヘキサン／酢酸エチル勾配）により精製した。これにより、表題化合物７.８７ｇ（理論値の６８％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 0.98 (s, 3H), 1.34 - 1.46 (m, 2H), 1.54 - 1.64 (m, 2H), 1.74 - 1.87 (m, 4H), 2.28 (s, 3H), 3.04 (s, 3H), 3.51 (s, 3H), 3.58 (s, 2H), 7.23 (d, 1H), 7.43 (dd, 1H), 7.47 - 7.53 (m, 2H), 7.55 (d, 1H), 7.61 - 7.68 (m, 2H), 8.23 (s, 1H).
LC-MS (方法 2): Rt = 1.41 分; MS (ESIpos): m/z = 444 [M+H]+.
【０１５０】
実施例２６Ａ
メチルｃｉｓ−１−｛［（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチル］アミノ｝−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボキシレート
【化４６】
2014524413.tif 000048
室温で、メチルｃｉｓ−１−アミノ−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボキシレート塩酸塩（ＥＰ１２２０８４１Ａ２およびＷＯ２００１／２３３５４Ａ３）５.００ｇ（１９.０９ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン４.８３ｇ（４７.７３ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン１１７ｍｇ（０.９５５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン４０ｍｌに溶解した。次いで、ジクロロメタン４０ｍｌ中の（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチルクロライド（実施例２Ａ）５.３３ｇ（１９.０９ｍｍｏｌ）の溶液を、混合物に滴下して添加した。得られた反応混合物を室温で一夜撹拌した。後処理に、混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を５％濃度クエン酸水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥させた後、混合物を蒸発により濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（移動相：ヘキサン／酢酸エチル勾配）により精製した。濃縮し、乾燥させ、表題化合物６.３６ｇ（理論値の７１％）を得た。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.35 - 1.80 (m, 6H), 2.05 - 2.18 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.25 - 2.40 (m, 1H), 3.49 (s, 3H), 3.56 (s, 2H), 7.19 (d, 1H), 7.40 (dd, 1H), 7.42 - 7.52 (m, 3H), 7.56 - 7.65 (m, 2H), 8.34 (s, 1H).
LC-MS (方法 1): Rt = 1.50 分; MS (ESIpos): m/z = 468 [M+H]+.
【０１５１】
実施例２７Ａ
メチル８−｛［（５−ブロモ−２−メチルフェニル）アセチル］アミノ｝−１,４−ジオキサスピロ［４.５］デカン−８−カルボキシレート
【化４７】
2014524413.tif 000049
室温で、メチル８−アミノ−１,４−ジオキサスピロ［４.５］デカン−８−カルボキシレート［T. Satoh et al., Tetrahedron 63 (2007), 4806 - 4813］５.４７ｇ（２５.４１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン３.８６ｇ（３８.１２ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン１５５ｍｇ（１.２７ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン４５ｍｌに溶解した。次いで、ジクロロメタン４５ｍｌ中の（５−ブロモ−２−メチルフェニル）アセチルクロライド（実施例３Ａ）６.２９ｇ（２５.４１ｍｍｏｌ）の溶液を、混合物に滴下して添加した。得られた反応混合物を室温で一夜撹拌した。後処理に、混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥させた後、混合物を蒸発により濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（移動相：ヘキサン／酢酸エチル勾配／１％トリエチルアミン）により精製した。蒸発させ、乾燥させ、表題化合物３.６４ｇ（理論値の３４％）を得、それをさらに特徴解析せずに次の段階に使用した。
【０１５２】
実施例２８Ａ
メチルｔｒａｎｓ−１−｛［（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチル］アミノ｝−４−メトキシ−４−メチルシクロヘキサンカルボキシレート
【化４８】
2014524413.tif 000050
実施例１Ａの化合物２０.９ｇ（７５.０ｍｍｏｌ）を、塩化チオニル３１.２ｍｌ（４２８ｍｍｏｌ）に溶解した。反応混合物を８０℃で１時間撹拌し、次いで濃縮した。残渣をアセトニトリル２００ｍｌに溶解した。酢酸エチルおよび飽和重炭酸ナトリウム水溶液を、実施例２１Ａの化合物１６.０ｇ（６７.３ｍｍｏｌ）に添加した。相を分離し、水相を酢酸エチルで繰り返し抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。アセトニトリル２５０ｍｌおよび炭酸カリウム２８.５ｇ（２０６ｍｍｏｌ）を残渣に添加した。氷冷しながら、酸塩化物の溶液を滴下して添加し、混合物を室温で一夜撹拌した。次いで、混合物を濃縮し、残渣を水に取り、ジクロロメタンで繰り返し抽出し、合わせた有機相を１Ｎ塩化水素水溶液および飽和重炭酸ナトリウム水溶液で繰り返し洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。さらなる精製のために、残渣を再度ジクロロメタンに取り、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で繰り返し洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、表題化合物２３.６ｇ（理論値の７６％）を得、これをさらに精製せずに反応させた。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 0.98 (s, 3H), 1.32 - 1.45 (m, 2H), 1.55 - 1.63 (m, 2H), 1.74 - 1.86 (m, 4H), 2.29 (s, 3H), 3.04 (s, 3H), 3.52 (s, 3H), 3.58 (s, 2H), 7.24 (d, 1H), 7.46 - 7.55 (m, 2H), 7.59 - 7.73 (m, 3H), 8.23 (s, 1H).
LC-MS (方法 2): Rt = 1.46 分; MS (ESIpos): m/z = 462 [M+H]+.
【０１５３】
実施例２９Ａ
メチルｃｉｓ−１−｛［（５−ブロモ−２−メチルフェニル）アセチル］アミノ｝−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボキシレート
【化４９】
2014524413.tif 000051
室温で、メチルｃｉｓ−１−アミノ−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボキシレート塩酸塩（ＥＰ１２２０８４１Ａ２およびＷＯ２００１／２３３５４Ａ３）１０.００ｇ（３８.２２ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン９.６７ｇ（９５.５４ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン２３３ｍｇ（１.９１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン９５ｍｌに溶解した。次いで、ジクロロメタン９５ｍｌ中の（５−ブロモ−２−メチルフェニル）アセチルクロライド（実施例３Ａ）９.４６ｇ（３８.２２ｍｍｏｌ）の溶液を、混合物に滴下して添加した。得られた反応混合物を室温で一夜撹拌した。後処理に、混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム水溶液および５％濃度クエン酸水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥させた後、混合物を蒸発により濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン／メタノール勾配）により精製した。蒸発させ、乾燥させ、表題化合物８.８４ｇ（理論値の５３％）を得、それをさらに特徴解析せずに次の段階に使用した。
【０１５４】
実施例３０Ａ
メチルｃｉｓ−１−｛［（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチル］アミノ｝−４−（メトキシメチル）シクロヘキサンカルボキシレート
【化５０】
2014524413.tif 000052
メチルｃｉｓ−１−アミノ−４−（メトキシメチル）シクロヘキサンカルボキシレート塩酸塩（ＷＯ２００７／０４８５４５に記載されている）２８.３ｇ（１１９ｍｍｏｌ）を、水１００ｍｌに溶解し、重炭酸ナトリウム２０.０ｇ（２３８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を酢酸エチルで繰り返し抽出した。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、メチルｃｉｓ−１−アミノ−４−（メトキシメチル）シクロヘキサンカルボキシレート９.８８ｇを得た。炭酸カリウム７.４６ｇ（５４.０ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル５０ｍｌ中のメチルｃｉｓ−１−アミノ−４−（メトキシメチル）シクロヘキサンカルボキシレート５.９３ｇ（２９.４ｍｍｏｌ）に添加した。氷冷しながら、アセトニトリル５０ｍｌ中の実施例２Ａの化合物６.８５ｇ（２４.５ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して添加し、混合物を室温で１日間撹拌した。次いで、混合物を濃縮し、残渣を水に取り、ジクロロメタンで抽出し、合わせた有機相を１Ｎ塩化水素水溶液および飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、表題化合物１０.５ｇを得、これをさらに精製せずに反応させた。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.05 - 1.25 (m, 2H), 1.44 - 1.65 (m, 5H), 2.01 - 2.12 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 3.04 (d, 2H), 3.17 (s, 3H), 3.51 (s, 3H), 3.58 (s, 2H), 7.23 (d, 1H), 7.43 (dd, 1H), 7.47 - 7.57 (m, 3H), 7.62 - 7.68 (m, 2H), 8.21 (s, 1H).
LC-MS (方法 1): Rt = 1.43 分; MS (ESIpos): m/z = 444 [M+H]+.
【０１５５】
実施例３１Ａ
メチルｃｉｓ−１−｛［（５−ブロモ−２−メチルフェニル）アセチル］アミノ｝−４−（メトキシメチル）シクロヘキサンカルボキシレート
【化５１】
2014524413.tif 000053
メチルｃｉｓ−１−アミノ−４−（メトキシメチル）シクロヘキサンカルボキシレート塩酸塩（ＷＯ２００７／０４８５４５、１４４頁に記載されている）５５.３ｇ（２３２ｍｍｏｌ）を、水２００ｍｌに溶解し、重炭酸ナトリウム３９.０ｇ（４６５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を酢酸エチルで繰り返し抽出した。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、メチルｃｉｓ−１−アミノ−４−（メトキシメチル）シクロヘキサンカルボキシレート１７.２ｇを得た。（５−ブロモ−２−メチルフェニル）酢酸（ＥＰ１７９１８１６およびＷＯ２００６／２９７９９に記載されている）１.９０ｇ（８.３０ｍｍｏｌ）を、塩化チオニル３.５ｍｌ（４７.３ｍｍｏｌ）に溶解した。反応混合物を８０℃で１時間撹拌し、次いで濃縮した。残渣をアセトニトリル１５ｍｌに溶解した。炭酸カリウム２.５２ｇ（１８.２ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル２０ｍｌ中のメチルｃｉｓ−１−アミノ−４−（メトキシメチル）シクロヘキサンカルボキシレート２.００ｇ（９.９４ｍｍｏｌ）に添加した。氷冷しながら、酸塩化物の溶液を滴下して添加し、混合物を室温で２４時間撹拌した。次いで、混合物を濃縮し、残渣を水に取り、ジクロロメタンで抽出し、合わせた有機相を１Ｎ塩化水素水溶液および飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、表題化合物３.１１ｇ（理論値の９１％）を得、さらに精製せずに反応させた。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.07 - 1.29 (m, 2H), 1.47 - 1.66 (m, 5H), 2.01 - 2.12 (m, 2H), 2.20 (s, 3H), 3.13 (d, 2H), 3.22 (s, 3H), 3.51 (s, 2H), 3.54 (s, 3H), 7.10 (d, 1H), 7.30 (dd, 1H), 7.41 (d, 1H), 8.22 (s, 1H).
LC-MS (方法 1): Rt = 1.25 分; MS (ESIpos): m/z = 412 [M+H]+.
【０１５６】
実施例３２Ａ
メチル１−｛［（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチル］アミノ｝−４−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボキシレート
【化５２】
2014524413.tif 000054
メチル１−アミノ−４−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（実施例２２Ａ）３.９４ｇ（１５.４４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン１.５６ｇ（１５.４４ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン５６ｍｌに溶解した。ジクロロメタン５６ｍｌに溶解した（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチルクロライド（実施例２Ａ）３.９２ｇ（１４.０３ｍｍｏｌ）を、この溶液に滴下して添加し、反応混合物を室温で一夜撹拌した。後処理に、混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム水溶液および１％濃度クエン酸水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥させた後、有機相を濃縮し、生成物を乾燥させた。これにより、表題化合物６.８１ｇ（理論値の９７％）を白色粉末として得た。
LC-MS (方法 1): Rt = 1.51 分; MS (ESIpos): m/z = 498 [M+H]+.
【０１５７】
実施例３３Ａ
メチル１−｛［（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチル］アミノ｝−４−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボキシレート
【化５３】
2014524413.tif 000055
メチル１−アミノ−４−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（実施例２２Ａ）２０.５０ｇ（８０.３２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン８.１３ｇ（８０.３２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２８０ｍｌに溶解した。ジクロロメタン２８０ｍｌに溶解した（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチルクロライド（実施例４ＡＡ）２１.７０ｇ（７３.０２ｍｍｏｌ）を、この溶液に滴下して添加し、反応混合物を室温で一夜撹拌した。後処理に、混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム水溶液および１％濃度クエン酸水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥させた後、有機相を濃縮し、生成物を乾燥させた。これにより、表題化合物３７.０５ｇ（理論値の９８％）をベージュ色粉末として得た。
LC-MS (方法 1): Rt = 1.51 分; MS (ESIpos): m/z = 516 [M+H]+.
【０１５８】
実施例３４Ａ
メチルｔｒａｎｓ−１−｛［（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチル］アミノ｝−４−メトキシ−４−（メトキシメチル）シクロヘキサンカルボキシレート
【化５４】
2014524413.tif 000056
実施例１Ａの化合物４.４８ｇ（１６.１ｍｍｏｌ）を、塩化チオニル５.６ｍｌ（７６.４ｍｍｏｌ）に溶解した。反応混合物を８０℃で１時間撹拌し、次いで濃縮した。残渣をアセトニトリル２０ｍｌに溶解した。炭酸カリウム６.４８ｇ（４６.９ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル３０ｍｌ中の実施例２３Ａの化合物３.１０ｇ（１３.４ｍｍｏｌ）に添加した。氷冷しながら、酸塩化物の溶液を滴下して添加し、混合物を室温で一夜撹拌した。次いで、混合物を氷水に添加し、ジクロロメタンで繰り返し抽出し、合わせた有機相を１Ｎ塩化水素水溶液および飽和重炭酸ナトリウム水溶液で繰り返し洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、表題化合物６.５９ｇ（理論値の９６％）を得、さらに精製せずに反応させた。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.32 - 1.49 (m, 2H), 1.54 - 1.66 (m, 2H), 1.70 - 1.91 (m, 4H), 2.29 (s, 3H), 3.09 (s, 3H), 3.14 (s, 2H), 3.20 (s, 3H), 3.52 (s, 3H), 3.57 (s, 2H), 7.24 (d, 1H), 7.46 - 7.56 (m, 2H), 7.58 - 7.74 (m, 3H), 8.27 (s, 1H).
LC-MS (方法 2): Rt = 1.38 分; MS (ESIpos): m/z = 492 [M+H]+.
【０１５９】
実施例３５Ａ
メチル１−｛［（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチル］アミノ｝−４−メトキシ−４−（メトキシメチル）シクロヘキサンカルボキシレート
【化５５】
2014524413.tif 000057
（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）酢酸（ＥＰ２０２９５３１Ａ１およびＵＳ２００９／２９８８２８Ａ１）５７４ｍｇ（２.２０ｍｍｏｌ）を、塩化チオニル０.９ｇ（１２.５ｍｍｏｌ）に溶解した。反応混合物を８０℃で１時間撹拌し、次いで濃縮した。残渣をアセトニトリル５ｍｌに溶解した。炭酸カリウム８１６ｍｇ（５.９０ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル１０ｍｌ中の実施例２４Ａの化合物３９０ｍｇ（１.６９ｍｍｏｌ）に添加した。氷冷しながら、酸塩化物の溶液を滴下して添加し、混合物を室温で一夜撹拌した。次いで、混合物を濃縮し、残渣を氷水に取り、ジクロロメタンで繰り返し抽出し、合わせた有機相を１Ｎ塩化水素水溶液および飽和重炭酸ナトリウム水溶液で繰り返し洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、表題化合物５７０ｍｇをジアステレオマー混合物として得、さらに精製せずに反応させた。
LC-MS (方法 2): Rt = 1.36 分; MS (ESIpos): m/z = 474 [M+H]+.
【０１６０】
実施例３６Ａ
メチル１−｛［（５−ブロモ−２−メチルフェニル）アセチル］アミノ｝−４−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボキシレート
【化５６】
2014524413.tif 000058
メチル１−アミノ−４−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（実施例２２Ａ）３.００ｇ（１１.７５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン１.１９ｇ（１１.７５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン４０ｍｌに溶解した。ジクロロメタン４０ｍｌに溶解した（５−ブロモ−２−メチルフェニル）アセチルクロライド（実施例３Ａ）２.６５ｇ（１０.６９ｍｍｏｌ）を、この溶液に滴下して添加し、反応混合物を室温で一夜撹拌した。後処理に、混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム水溶液および１％濃度クエン酸水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥させ、有機相を濃縮し、生成物を乾燥させた。これにより、表題化合物４.７９ｇ（理論値の８７％）をベージュ色粉末として得た。
LC-MS (方法 1): Rt = 1.33 分; MS (ESIpos): m/z = 468 [M+H]+.
【０１６１】
実施例３７Ａ
（５ｓ,８ｓ）−３−（５−ブロモ−２−メチルフェニル）−４−ヒドロキシ−８−（トリフルオロメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
【化５７】
2014524413.tif 000059
カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド４.５３ｇ（４０.３４ｍｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド１００ｍｌ中のメチルｃｉｓ−１−｛［（５−ブロモ−２−メチルフェニル）アセチル］アミノ｝−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（実施例２９Ａ）８.８０ｇ（２０.１７ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を８０℃で６０分間撹拌した。後処理に、冷たい反応混合物を氷水８００ｍｌに注ぎ、塩酸で酸性化した。粗生成物を濾過し、シリカゲルクロマトグラフィー（移動相：ヘキサン／酢酸エチル勾配）により精製した。乾燥させ、表題化合物５.２３ｇ（理論値の６４％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.40 - 1.50 (m, 2H), 1.58 - 1.72 (m, 2H), 1.77 - 1.86 (m, 2H), 1.86 - 1.96 (m, 2H), 2.07 (s, 3H), 2.12 - 2.28 (m, 1H), 7.14 (d, 1H), 7.19 (d, 1H), 7.33 (dd, 1H), 8.33 (s, 1H), 11.01 (s, 1H).
LC-MS (方法 3): Rt = 1.18 分; MS (ESIpos): m/z = 406 [M+H]+.
【０１６２】
実施例３８Ａ
１１−（５−ブロモ−２−メチルフェニル）−１２−ヒドロキシ−１,４−ジオキサ−９−アザジスピロ［４.２.４.２］テトラデセ−１１−エン−１０−オン
【化５８】
2014524413.tif 000060
カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド１.９２ｇ（１７.０８ｍｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド４３ｍｌ中のメチル８−｛［（５−ブロモ−２−メチルフェニル）アセチル］アミノ｝−１,４−ジオキサスピロ［４.５］デカン−８−カルボキシレート（実施例２７Ａ）３.６４ｇ（８.５４ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を８０℃で３０分間撹拌した。後処理に、冷たい反応混合物を氷水５００ｍｌに注ぎ、塩酸でｐＨ＝４に酸性化した。粗生成物を濾過した。乾燥させ、表題化合物２.４９ｇ（理論値の７４％）を得、さらに特徴解析せずに次の段階で使用した。
【０１６３】
実施例３９Ａ
３−（５−ブロモ−２−メチルフェニル）−４−ヒドロキシ−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２,８−ジオン
【化５９】
2014524413.tif 000061
４−トルエンスルホン酸一水和物１９２ｍｇ（１.０１ｍｍｏｌ）を、アセトン２６ｍｌおよび水１３ｍｌ中の１１−（５−ブロモ−２−メチルフェニル）−１２−ヒドロキシ−１,４−ジオキサ−９−アザジスピロ［４.２.４.２］テトラデセ−１１−エン−１０−オン（実施例３８Ａ）２.４９ｇ（６.３２ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を８０℃で一夜撹拌した。後処理に、冷たい反応混合物を水で希釈し、アセトンをロータリーエバポレーターで除去した。沈殿した粗生成物を酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。乾燥させ、表題化合物１.９７ｇ（理論値の８９％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.68 - 1.78 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 2.21 - 2.34 (m, 4H), 2.64 - 2.78 (m, 2H), 7.15 (d, 1H), 7.23 (d, 1H), 7.35 (dd, 1H), 8.53 (s, 1H), 11.12 (s, 1H).
LC-MS (方法 3): Rt = 0.87 分; MS (ESIpos): m/z = 352 [M+H]+.
【０１６４】
実施例４０Ａ
（５ｒ,８ｒ）−３−（５−ブロモ−２−メチルフェニル）−４,８−ジヒドロキシ−８−（トリフルオロメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
【化６０】
2014524413.tif 000062
炭酸セシウム５２１ｍｇ（１.６０ｍｍｏｌ）および（トリフルオロメチル）トリメチルシラン９７５ｍｇ（６.８５ｍｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド８.３ｍｌ中の３−（５−ブロモ−２−メチルフェニル）−４−ヒドロキシ−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エンｅ−２,８−ジオン（実施例３９Ａ）４００ｍｇ（１.１４ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。その後、混合物を水で希釈し、クエン酸水溶液でｐＨ＝４.５に酸性化し、酢酸エチルで抽出した。有機相を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をテトラヒドロフラン５ｍｌに溶解し、４Ｎ塩酸１ｍｌを添加し、混合物を室温で１時間撹拌し、次いで水で希釈した。粗生成物を酢酸エチルで抽出し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下での濃縮に続き、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（移動相：ヘキサン／酢酸エチル勾配）により精製した。蒸発させ、乾燥させ、表題化合物３６７ｍｇ（理論値の７６％）を得た。
1H NMR (400 MHz, メタノール-d4): δ [ppm] = 1.39 - 1.50 (m, 2H), 1.84 - 1.98 (m, 4H), 2.15 (s, 3H), 2.30 - 2.43 (m, 2H), 7.15 (d, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.34 (dd, 1H).
LC-MS (方法 1): Rt = 0.96 分; MS (ESIpos): m/z = 420 [M+H]+.
【０１６５】
実施例４１Ａ
（５ｓ,８ｓ）−３−（５−ブロモ−２−メチルフェニル）−４−ヒドロキシ−８−（メトキシメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
【化６１】
2014524413.tif 000063
カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド１.６９ｇ（１５.１ｍｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド１１ｍｌ中の実施例３１Ａの化合物３.１１ｇ（７.５４ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を８０℃で１５分間加熱した。冷却後、混合物を濃縮し、残渣を水に取り、１Ｎ塩化水素水溶液を滴下して添加し、混合物を０.５時間撹拌した。沈殿を吸引濾過し、水で洗浄し、乾燥させた。これにより、表題化合物２.８３ｇ（理論値の９６％）を得た。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.22 - 1.44 (m, 4H), 1.46 - 1.63 (m, 1H), 1.65 - 1.75 (m, 2H), 1.80 - 1.85 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 3.15 (d, 2H), 3.23 (s, 3H), 7.17 (d, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.36 (dd, 1H), 8.16 (s, 1H), 10.89 (s, 1H).
LC-MS (方法 1): Rt = 1.05 分; MS (ESIpos): m/z = 380 [M+H]+.
【０１６６】
実施例４２Ａ
３−（５−ブロモ−２−メチルフェニル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−８−（トリフルオロメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
【化６２】
2014524413.tif 000064
カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド２.２６ｇ（２０.１６ｍｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド５０ｍｌ中のメチル１−｛［（５−ブロモ−２−メチルフェニル）アセチル］アミノ｝−４−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（実施例３６Ａ）４.７０ｇ（１０.０８ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を８０℃で６０分間撹拌した。後処理に、冷たい反応混合物を氷水８００ｍｌに注ぎ、塩酸で酸性化した。粗生成物を濾過し、乾燥させた。これにより、表題化合物３.６８ｇ（理論値の８４％）をベージュ色粉末として得た。
1H NMR (400 MHz, メタノール-d4): δ [ppm] = 1.39 - 2.45 (m, 11H), 3.42 - 3.46 (m, 3H), 7.12 - 7.18 (m, 1H), 7.25 - 7.29 (m, 1H), 7.32 - 7.38 (m, 1H).
【０１６７】
比較例：
実施例１−１用
Ｖ.１−ａ（＝ＷＯ１０／０６３３７８の４０頁、表１、第２０行の化合物）
（５ｒ,８ｒ）−３−（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−８−メチル−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
【化６３】
2014524413.tif 000065
窒素下で、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド２.１８ｇ（１９.４ｍｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド７５ｍｌ中の実施例２５Ａの化合物７.８３ｇ（１７.６ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を室温で１５分間撹拌した。次いで、混合物を濃縮し、残渣を氷水に取り、１Ｎ塩化水素水溶液で酸性化し、混合物を３０分間撹拌し、吸引濾過し、沈殿を水で洗浄し、乾燥させた。さらなる精製のために、生成物を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に溶解し、混合物を濾過し、生成物を１Ｎ塩酸での酸性化により沈殿させ、水で洗浄し、濾過し、乾燥させた。これにより、表題化合物４.７８ｇ（理論値の６５％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.09 (s, 3H), 1.12 - 1.20 (m, 2H), 1.60 - 1.71 (m, 2H), 1.71 - 1.80 (m, 2H), 2.04 - 2.14 (m, 2H), 2.18 (s, 3H), 3.10 (s, 3H), 7.30 (d, 1H), 7.34 (d, 1H), 7.46 - 7.52 (m, 3H), 7.62 - 7.68 (m, 2H), 8.15 (s, 1H), 10.79 (s, 1H).
LC-MS (方法 2): Rt = 1.23 分; MS (ESIpos): m/z = 412 [M+H]+.
【０１６８】
Ｖ.１−ｂ
（５ｓ,８ｓ）−３−（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−（トリフルオロメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
【化６４】
2014524413.tif 000066
カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド３.０５ｇ（２７.１８ｍｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド６８ｍｌ中のメチルｃｉｓ−１−｛［（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチル］アミノ｝−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（実施例２６Ａ）６.３６ｇ（１３.５９ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を８０℃で６０分間撹拌した。後処理に、冷たい反応混合物を氷水８００ｍｌに注ぎ、塩酸で酸性化した。粗生成物を濾過し、乾燥させ、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル勾配）により精製した。蒸発させ、表題化合物４.１ｇ（理論値の６９％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.40 - 1.55 (m, 2H), 1.58 - 1.77 (m, 2H), 1.78 - 2.02 (m, 4H), 2.15 (s, 3H), 2.17 - 2.30 (m, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.32 (d, 1H), 7.42 - 7.51 (m, 3H), 7.58 - 7.66 (m, 2H), 8.29 (s, 1H), 10.90 (s, 1H).
LC-MS (方法 1): Rt = 1.32 分; MS (ESIpos): m/z = 436 [M+H]+.
【０１６９】
Ｖ.１−ｃ
（５ｒ,８ｒ）−３−（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４,８−ジヒドロキシ−８−（トリフルオロメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
【化６５】
2014524413.tif 000067
アルゴン下で、ジクロロ［１,１'−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム／ジクロロメタン錯体２４ｍｇ（０.０３０ｍｍｏｌ）を、脱気１,２−ジメトキシエタン１３ｍｌ中の（５ｒ,８ｒ）−３−（５−ブロモ−２−メチルフェニル）−４,８−ジヒドロキシ−８−（トリフルオロメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン（実施例４０Ａ）１２５ｍｇ（０.３０ｍｍｏｌ）に添加した。混合物を室温で５分間撹拌し、（４−クロロフェニル）ボロン酸７０ｍｇ（０.４５ｍｍｏｌ）および脱気した水８１５μｌ中の炭酸セシウム３３９ｍｇ（１.０４ｍｍｏｌ）の溶液を、次いで添加した。反応混合物を、密閉容器中、マイクロ波照射下、１５０℃で１０分間加熱した。冷却後、濃塩化水素水溶液１００μｌを反応に添加し、混合物を減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタンに取り、５％濃度クエン酸水溶液（ｐＨ＝４.０−４.５）および水で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発により濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（移動相：ヘキサン／酢酸エチル勾配）により、そしてＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｃ１８相、移動相：水／アセトニトリル勾配／０.１％ギ酸）により精製し、表題化合物１７.４ｍｇ（理論値の１３％）を得る。
1H NMR (400 MHz, メタノール-d4): δ [ppm] = 1.41 - 1.53 (m, 2H), 1.85 - 2.01 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.33 - 2.46 (m, 2H), 7.32 (d, 1H), 7.35 - 7.42 (m, 3H), 7.46 (dd, 1H), 7.58 ("d", 2H).
LC-MS (方法 1): Rt = 1.19 分; MS (ESIpos): m/z = 452 [M+H]+.
【０１７０】
実施例１−２用
Ｖ.２−ａ（＝ＷＯ１０／０６３３７８の４５頁、表２、第１０行の化合物）
（５ｒ,８ｒ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−８−メチル−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
【化６６】
2014524413.tif 000068
窒素下で、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド６.２２ｇ（５５.４ｍｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド２５０ｍｌ中の実施例２８Ａの化合物２３.５ｇ（５０.４ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を室温で１５分間撹拌した。次いで、混合物を濃縮し、残渣を水に取り、１Ｎ塩化水素水溶液で酸性化した。混合物を３０分間撹拌し、吸引濾過し、沈殿を水で洗浄し、乾燥させた。これにより、表題化合物２１.４ｇ（約９０％純度、理論値の８９％）を得た。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.08 (s, 3H), 1.10 - 1.22 (m, 2H), 1.56 - 1.81 (m, 4H), 1.99 - 2.14 (m, 2H), 2.19 (s, 3H), 3.10 (s, 3H), 7.29 (d, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.46 - 7.56 (m, 2H), 7.60 - 7.72 (m, 2H), 8.05 (s, 1H), 10.86 (s, 1H).
LC-MS (方法 1): Rt = 1.25 分; MS (ESIpos): m/z = 430 [M+H]+.
【０１７１】
Ｖ.２−ｂ
（５ｓ,８ｓ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−（トリフルオロメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
【化６７】
2014524413.tif 000069
アルゴン下で、ジクロロ［１,１'−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム／ジクロロメタン錯体１.０１ｇ（１.２４ｍｍｏｌ）を、脱気した１,２−ジメトキシエタン５００ｍｌ中の実施例３７Ａの化合物５.００ｇ（１２.４ｍｍｏｌ）に添加した。混合物を室温で５分間撹拌し、（４−クロロ−３−フルオロフェニル）ボロン酸３.２４ｇ（１８.５ｍｍｏｌ）および脱気した水３０ｍｌ中の炭酸セシウム１４.１ｇ（４３.３ｍｍｏｌ）の溶液を、次いで添加した。反応混合物を還流下で２時間加熱した。冷却後、濃塩化水素水溶液１０ｍｌを添加し、水相を分離し、硫酸マグネシウムを添加し、混合物をシリカゲルで濾過し、フィルターケーキを酢酸エチルで洗浄し、混合物を濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（移動相：ヘキサン／酢酸エチル勾配）で精製し、酢酸エチルから結晶化し、表題化合物２.４８ｇ（理論値の４４％）を得た。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.45 - 1.57 (m, 2H), 1.62 - 1.79 (m, 2H), 1.81 - 2.05 (m, 4H), 2.19 (s, 3H), 2.20 - 2.33 (m, 1H), 7.32 (d, 1H), 7.41 (d, 1H), 7.49 - 7.58 (m, 2H), 7.64 (t, 1H), 7.70 (dd, 1H), 8.33 (s, 1H), 10.95 (s, 1H).
LC-MS (方法 1): Rt = 1.34 分; MS (ESIpos): m/z = 454 [M+H]+.
【０１７２】
Ｖ.２−ｃ
（５ｒ,８ｒ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４,８−ジヒドロキシ−８−（トリフルオロメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
【化６８】
2014524413.tif 000070
アルゴン下、ジクロロ［１,１'−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム／ジクロロメタン錯体２４ｍｇ（０.０３０ｍｍｏｌ）を、脱気した１,２−ジメトキシエタン１３ｍｌ中の（５ｒ,８ｒ）−３−（５−ブロモ−２−メチルフェニル）−４,８−ジヒドロキシ−８−（トリフルオロメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン（実施例４０Ａ）１２５ｍｇ（０.３０ｍｍｏｌ）に添加した。混合物を室温で５分間撹拌し、（４−クロロ−３−フルオロフェニル）ボロン酸７８ｍｇ（０.４５ｍｍｏｌ）および脱気した水８１５μｌ中の炭酸セシウム３４０ｍｇ（１.０４ｍｍｏｌ）の溶液を、次いで添加した。反応混合物を密閉容器中、マイクロ波照射下、１５０℃で１０分間加熱した。冷却後、濃塩化水素水溶液１００μｌを反応に添加し、混合物を減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタンに取り、水性５％濃度クエン酸（ｐＨ＝４.０−４.５）および水で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発により濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（移動相：ヘキサン／酢酸エチル勾配）により精製し、表題化合物６８ｍｇ（理論値の４９％）を得た。
1H NMR (300 MHz, メタノール-d4): δ [ppm] = 1.41 - 1.56 (m, 2H), 1.85 - 1.99 (m, 4H), 2.25 (s, 3H), 2.32 - 2.48 (m, 2H), 7.10 - 7.25 (m, 1H), 7.34 (d, 1H), 7.40 (dd, 1H), 7.43 - 7.56 (m, 3H).
LC-MS (方法 1): Rt = 1.19 分; MS (ESIpos): m/z = 470 [M+H]+.
【０１７３】
実施例１−３用
Ｖ.３−ａ（＝Ｖ.１−ａ）＝ＷＯ１０／０６３３７８の４０頁、表１、第２０行の化合物
Ｖ.３−ｂ
（５ｓ,８ｓ）−３−（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−（メトキシメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
【化６９】
2014524413.tif 000071
カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド５.２６ｇ（４６.９ｍｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド３５ｍｌ中の実施例３０Ａの化合物１０.４ｇ（２３.４ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を８０℃で１５分間加熱した。冷却後、混合物を濃縮し、残渣を水に取り、溶液を２Ｎ塩化水素水溶液に滴下して添加した。沈殿を吸引濾過し、水で洗浄し、乾燥させた。これにより、表題化合物９.３ｇを得た。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.21 - 1.47 (m, 4H), 1.48 - 1.64 (m, 1H), 1.65 - 1.78 (m, 2H), 1.81 - 1.97 (m, 2H), 2.18 (s, 3H), 3.16 (d, 2H), 3.24 (s, 3H), 7.30 (d, 1H), 7.34 (d, 1H), 7.44 - 7.53 (m, 3H), 7.61 - 7.68 (m, 2H), 8.13 (s, 1H), 10.77 (s, 1H).
LC-MS (方法 3): Rt = 1.25 分; MS (ESIpos): m/z = 412 [M+H]+.
この物質は、異性体混合物として、ＷＯ０７／０４８５４５の実施例Ｉ−１−ａ−５として開示された。
【０１７４】
実施例１−４用
Ｖ.４−ａ（＝Ｖ.２−ａ）＝ＷＯ１０／０６３３７８の４５頁、表２、第１０行の化合物）
Ｖ.４−ｂ
（５ｓ,８ｓ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−（メトキシメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
【化７０】
2014524413.tif 000072
アルゴン下で、（４−クロロ−３−フルオロフェニル）ボロン酸１.１０ｇ（６.３１ｍｍｏｌ）および脱気した水１３ｍｌ中の炭酸セシウム６.００ｇ（１８.４ｍｍｏｌ）の溶液を、脱気した１,２−ジメトキシエタン２１３ｍｌ中の実施例４１Ａの化合物２.００ｇ（５.２６ｍｍｏｌ）およびジクロロ［１,１'−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム／ジクロロメタン錯体２１５ｍｇ（０.２６ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を還流下で２時間加熱した。冷却後、濃塩化水素水溶液２.５ｍｌおよび硫酸ナトリウムを添加し、混合物をシリカゲルおよび硫酸ナトリウムで濾過し、フィルターケーキを酢酸エチルで洗浄し、濾液を濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（移動相：ヘキサン／酢酸エチル勾配）により精製した。次いで、生成物を重炭酸ナトリウム水溶液で撹拌し、濃塩化水素水溶液で酸性化し、吸引濾過し、水で洗浄し、乾燥させた。これにより、表題化合物１.５０ｇ（理論値の６５％）を得た。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.21 - 1.47 (m, 4H), 1.48 - 1.64 (m, 1H), 1.65 - 1.78 (m, 2H), 1.81 - 1.97 (m, 2H), 2.19 (s, 3H), 3.16 (d, 2H), 3.24 (s, 3H), 7.31 (d, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.48 - 7.57 (m, 2H), 7.60 - 7.74 (m, 2H), 8.13 (s, 1H), 10.79 (s, 1H).
LC-MS (方法 1): Rt = 1.26 分; MS (ESIpos): m/z = 430 [M+H]+.
【０１７５】
表Ｖは、出願人が最も近い先行技術であると考える比較例の概要を示す。
表Ｖ
【表２】
2014524413.tif 000073
【０１７６】
【表３】
2014524413.tif 000074
【０１７７】
実施例：
実施例１−１
（５ｒ,８ｒ）−３−（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−８−（トリフルオロメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
【化７１】
2014524413.tif 000075
カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド３.０７ｇ（２７.３１ｍｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド６８ｍｌ中のメチル１−｛［（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチル］アミノ｝−４−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（実施例３２Ａ）６.８０ｇ（１３.６６ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を８０℃で６０分間撹拌した。後処理に、冷たい反応混合物を氷水１５００ｍｌに注ぎ、塩酸で酸性化した。粗生成物を濾過し、乾燥させ、クロマトグラフィー（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＡ  ５μｍ，２５０ｘ３０ｍｍ；ヘキサン／エタノール勾配、０.１％ギ酸の存在下）により予め精製した。蒸発により濃縮し、ジエチルエーテルから結晶化し、表題化合物３.５７ｇ（理論値の５６％）を得た。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.25 - 1.41 (m, 2H), 1.83 - 1.99 (m, 4H), 2.00 - 2.14 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 7.28 (d, 1H), 7.32 (d, 1H), 7.42 - 7.51 (m, 3H), 7.58 - 7.67 (m, 2H), 8.41 (s, 1H), 10.98 (s, 1H).
LC-MS (方法 1): Rt = 1.31 分; MS (ESIpos): m/z = 466 [M+H]+.
【０１７８】
実施例１−２
（５ｒ,８ｒ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−８−（トリフルオロメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
【化７２】
2014524413.tif 000076
アルゴン下、ジクロロ［１,１'−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム／ジクロロメタン錯体６７.７０ｍｇ（０.０８３ｍｍｏｌ）を、脱気した１,２−ジメトキシエタン２８ｍｌ中の３−（５−ブロモ−２−メチルフェニル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−８−（トリフルオロメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン（実施例４２Ａ）３００.００ｍｇ（０.６９ｍｍｏｌ）に添加した。混合物を室温で５分間撹拌し、次いで、（４−クロロ−３−フルオロフェニル）ボロン酸２１６.８３ｍｇ（１.２４ｍｍｏｌ）および脱気した水１ｍｌ中の炭酸セシウム９４５.４０ｍｇ（２.９０ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物をマイクロ波中、１５０℃で４０分間加熱した。冷却後、濃塩化水素水溶液０.４ｍｌを添加し、混合物を濾過し、沈殿をジクロロメタンおよびメタノールで洗浄し、合わせた有機相を減圧下で濃縮した。粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー（移動相：ヘキサン／酢酸エチル勾配）により予め精製した。最終の精製は、ＲＰクロマトグラフィー（移動相：水／ギ酸／アセトニトリル勾配）による。これにより、表題化合物４３ｍｇ（理論値の１３％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.27 - 1.39 (m, 2H), 1.85 - 1.99 (m, 4H), 2.00 - 2.13 (m, 2H), 2.16 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 7.29 (d, 1H), 7.38 (d, 1H), 7.45 - 7.54 (m, 2H), 7.57 - 7.70 (m, 2H), 8.36 (s, 1H), 10.97 (s, 1H).
LC-MS (方法 1): Rt = 1.34 分; MS (ESIpos): m/z = 484 [M+H]+.
【０１７９】
あるいは、目標の構造は、以下の通りに製造できた：
カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド１５.２２ｇ（１３５.６８ｍｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド３５０ｍｌ中のメチル１−｛［（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）アセチル］アミノ｝−４−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（実施例３３Ａ）３５.００ｇ（６７.８４ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。後処理に、冷たい反応混合物を氷水８０００ｍｌに注ぎ、塩酸で酸性化した。粗生成物を濾過し、乾燥させ、シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン／酢酸エチル勾配）で予め精製した。得られた固体をジエチルエーテルから結晶化した。これにより、表題化合物９.３３ｇ（理論値の２８％）を得た。
【０１８０】
実施例１−３
（５ｒ,８ｒ）−３−（４'−クロロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−８−（メトキシメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
【化７３】
2014524413.tif 000077
窒素下、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド１４８ｍｇ（１.３２ｍｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍｌ中の実施例３５Ａの化合物５７０ｍｇ（１.２０ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を室温で１５分間撹拌した。次いで、混合物を濃縮し、残渣を氷水に取り、１Ｎ塩化水素水溶液で酸性化し、混合物を３０分間撹拌し、吸引濾過し、沈殿を水で洗浄し、乾燥させた。２回の分取ＨＰＬＣ［１．カラム：Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ  Ｃ１８、１０μｍ、１２５ｍｍｘ３０ｍｍ；移動相：水／アセトニトリル勾配（０.１％ギ酸を添加）；２．カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＣ、５μｍ、２５０ｍｍｘ２０ｍｍ；移動相：ヘキサン／エタノール＝８０／２０（０.１％ギ酸を添加）；流速：２５ｍｌ／分；温度：ＲＴ］により、ジアステレオマーを分離した。これにより、表題化合物１０５ｍｇ（理論値の２０％）を得た。
1H NMR (300MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.12 - 1.27 (m, 2H), 1.48 - 1.65 (m, 2H), 1.75 - 1.88 (m, 2H), 1.99 - 2.14 (m, 2H), 2.18 (s, 3H), 3.15 (s, 3H), 3.28 (m, 5H), 7.30 (d, 1H), 7.34 (d, 1H), 7.44 - 7.54 (m, 3H), 7.61 - 7.69 (m, 2H), 8.10 (s, 1H), 10.83 (s, 1H).
LC-MS (方法 2): Rt = 1.19 分; MS (ESIpos): m/z = 442 [M+H]+.
【０１８１】
実施例１−４
（５ｒ,８ｒ）−３−（４'−クロロ−３'−フルオロ−４−メチルビフェニル−３−イル）−４−ヒドロキシ−８−メトキシ−８−（メトキシメチル）−１−アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン
【化７４】
2014524413.tif 000078
窒素下で、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド１.６４ｇ（１４.７ｍｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド６０ｍｌ中の実施例３４Ａの化合物６.５５ｇ（１３.３ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を室温で１５分間撹拌した。次いで、反応混合物を氷水に添加し、１Ｎ塩化水素水溶液を、ｐＨが１−２に達するまで滴下して添加し、混合物を３０分間撹拌し、吸引濾過し、フィルターケーキを水で洗浄し、沈殿を乾燥させた。さらなる精製のために、生成物を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に溶解し、１Ｎ塩酸による酸性化により沈殿させ、３０分間撹拌し、水で洗浄し、濾過し、乾燥させた。これにより、表題化合物６.００ｇ（理論値の９８％）を得た。
1H NMR (300MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.12 - 1.26 (m, 2H), 1.50 - 1.65 (m, 2H), 1.76 - 1.89 (m, 2H), 1.98 - 2.15 (m, 2H), 2.19 (s, 3H), 3.15 (s, 3H), 3.28 (s, 5H), 7.31 (d, 1H), 7.39 (d, 1H), 7.49 - 7.57 (m, 2H), 7.64 (t, 1H), 7.69 (dd, 1H), 8.14 (s, 1H), 10.82 (s, 1H).
LC-MS (方法 2): Rt = 1.21 分; MS (ESIpos): m/z = 460 [M+H]+.
【０１８２】
３．アッセイ
３.１  ヒトＡＣＣ酵素アッセイ
下記の２つのアッセイを用いて、ＡＣＣ１およびＡＣＣ２の阻害データを得た。ほとんどの場合で、２つの測定のために共通の試験物質の段階希釈シリーズを調製し、次いで、３８４ウエルの５０ｎｌキャピラリーピペット（Genomics Solutions の HummingbirdTM）を使用して、この希釈シリーズからいくつかの物質プレートのコピーを作製した。次いで、これらを、各場合でＡＣＣ１およびＡＣＣ２のアッセイで使用して、最適な比較のために、２つの酵素阻害測定が同じ物質希釈シリーズのコピーを使用して行われるようにした。
【０１８３】
ヒトＡＣＣ１酵素アッセイ
以下のパラグラフに記載するｈＡＣＣ１アッセイを用いて、本発明の物質のｈＡＣＣ１阻害活性を測定した。
【０１８４】
基本的に、該酵素活性は、Promega の ADP-GloTM検出システムを使用して、酵素反応の副生成物として形成されるアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）を定量化することによって測定される。この試験では、まず、該酵素反応で消費されなかったアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を、アデニレートシクラーゼ（「ADP-Glo 試薬」）を用いてｃＡＭＰに定量的に変換し、次いで、該アデニレートシクラーゼを停止させ（「キナーゼ検出試薬」）、次いで、形成されたＡＤＰをＡＴＰに変換し、これをルシフェラーゼに基づく反応で発光シグナルに変換する。
【０１８５】
使用した酵素は、バキュロウイルス感染昆虫細胞（Ｈｉ５）内で発現され、抗ＦＬＡＧ親和性クロマトグラフィーによって精製された、Ｃ末端ＦＬＡＧ標識組換えヒトＡＣＣ１（アセチル−コエンザイムＡカルボキシラーゼアルファ転写バリアント１）（GenBank受入番号ＮＭ  １９８８３４）、（アミノ酸３９−末端）であった。
【０１８６】
アッセイのために、試験物質のＤＭＳＯ中１００倍濃縮液５０ｎｌをピペットで白色低容量３８４ウエルマイクロタイタープレート（Greiner Bio-One、Frickenhausen、Germany）に添加し、アッセイバッファー［５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ ｐＨ７.５、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  クエン酸カリウム、１２ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、２ｍＭ  ジチオトレイトール（ＤＴＴ）、０.００５％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン（ＤＳＡ）］中のｈＡＣＣ１の溶液２.５μＬを添加し、該混合物を１５分間インキュベートして、酵素反応前に当該物質を酵素へ予め結合させた。次いで、アッセイバッファー中のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ、１００μＭ→アッセイ容量５μＬ中の最終濃度：５０μＭ）およびアセチルＣｏＡ（２０μＭ→アッセイ容量５μＬ中の最終濃度：１０μＭ）の溶液２.５μＬを添加することによって酵素反応を開始し、得られた混合物を、４５分間の反応時間にわたり、２２℃でインキュベートした。ｈＡＣＣ１の濃度を酵素の各々の活性に合わせ、アッセイが線形範囲で行われるように設定した。典型的な濃度は、１.７５ｎｇ／μＬの範囲であった。「ADP-GLO 試薬」２.５μＬの添加（１：１.５倍希釈）によって反応を停止させ、得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートして、未反応ＡＴＰをｃＡＭＰに完全に変換した。次いで、「キナーゼ検出試薬」２.５μＬを添加し（製造者による推奨よりも１.２倍濃縮）、得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートし、次いで、好適な測定装置（Perkin-Elmer の Viewlux もしくは Topcount、または BMG Labtechnologies の Pherastar）を使用して発光を測定した。発光量を、形成されたＡＤＰの量の指標とし、かくして、ｈＡＣＣ１の酵素活性の指標とした。該データを正規化した（阻害剤を用いない酵素反応＝０％阻害、酵素以外の他の全アッセイ成分＝１００％阻害）。通常、試験物質は、２０μＭないし１ｎＭの範囲の１０種類の濃度（２０μＭ、６.７μＭ、２.２μＭ、０.７４μＭ、０.２５μＭ、８２ｎＭ、２７ｎＭ、９.２ｎＭ、３.１ｎＭおよび１ｎＭ；希釈シリーズは、アッセイの前に、１００倍濃縮溶液から１：３の段階希釈によって調製された）で同一のマイクロタイタープレートにて、濃度ごとに２重に試験され、自家製ソフトウエアを使用して４パラメーター適合法を用いてＩＣ５０値を算出した。
【０１８７】
ヒトＡＣＣ２酵素アッセイ
以下のパラグラフに記載するｈＡＣＣ２アッセイを用いて、本発明の物質のｈＡＣＣ２阻害活性を測定した。
【０１８８】
基本的に、該酵素活性は、Promega の ADP-GloTM検出システムを使用して、酵素反応の副生成物として形成されるアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）を定量化することによって測定される。この試験では、まず、該酵素反応で消費されなかったアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を、アデニレートシクラーゼ（「ADP-Glo 試薬」）を用いてｃＡＭＰに定量的に変換し、次いで、該アデニレートシクラーゼを停止させ（「キナーゼ検出試薬」）、次いで、形成されたＡＤＰをＡＴＰに変換し、これをルシフェラーゼに基づく反応で発光シグナルに変換する。
【０１８９】
使用した酵素は、バキュロウイルス感染昆虫細胞（Ｈｉ５）内で発現され、抗ＦＬＡＧ親和性クロマトグラフィーによって精製された、Ｃ末端ＦＬＡＧ標識組換えヒトＡＣＣ２（アセチル−コエンザイムＡカルボキシラーゼ２、GenBank受入番号ＮＰ  ００１０８４）、（アミノ酸２７−末端）であった。
【０１９０】
アッセイのために、試験物質のＤＭＳＯ中１００倍濃縮液５０ｎｌをピペットで白色低容量３８４ウエルマイクロタイタープレート（Greiner Bio-One、Frickenhausen、Germany）に添加し、アッセイバッファー［５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ ｐＨ７.５、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  クエン酸カリウム、１２ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、２ｍＭ  ジチオトレイトール（ＤＴＴ）、０.００５％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン（ＤＳＡ）］中のｈＡＣＣ２の溶液２.５μＬを添加し、該混合物を１５分間インキュベートして、酵素反応前に当該物質を酵素へ予め結合させた。次いで、アッセイバッファー中のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ、１００μＭ→アッセイ容量５μＬ中の最終濃度：５０μＭ）およびアセチルＣｏＡ（２０μＭ→アッセイ容量５μＬ中の最終濃度：１０μＭ）の溶液２.５μＬを添加することによって酵素反応を開始し、得られた混合物を、４５分間の反応時間にわたり、２２℃でインキュベートした。ｈＡＣＣ２の濃度を酵素の各々の活性に合わせ、アッセイが線形範囲で行われるように設定した。典型的な濃度は、２ｎｇ／μＬの範囲であった。「ADP-GLO 試薬」２.５μＬの添加（１：１.５倍希釈）によって反応を停止させ、得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートして、未反応ＡＴＰをｃＡＭＰに完全に変換した。次いで、「キナーゼ検出試薬」２.５μＬを添加し（製造者による推奨よりも１.２倍濃縮）、得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートし、次いで、好適な測定装置（Perkin-Elmer の Viewlux もしくは Topcount、または BMG Labtechnologies の Pherastar）を使用して発光を測定した。発光量を、形成されたＡＤＰの量の指標とし、かくして、ｈＡＣＣ２の酵素活性の指標とした。該データを正規化した（阻害剤を用いない酵素反応＝０％阻害、酵素以外の他の全アッセイ成分＝１００％阻害）。通常、試験物質は、２０μＭないし１ｎＭの範囲の１０種類の濃度（２０μＭ、６.７μＭ、２.２μＭ、０.７４μＭ、０.２５μＭ、８２ｎＭ、２７ｎＭ、９.２ｎＭ、３.１ｎＭおよび１ｎＭ；希釈シリーズは、アッセイの前に、１００倍濃縮溶液から１：３の段階希釈によって調製された）で同一のマイクロタイタープレートにて、濃度ごとに２重に試験され、自家製ソフトウエアを使用して４パラメーター適合法を用いてＩＣ５０値を算出した。
【０１９１】
３.２  細胞アッセイ
本発明に従って、細胞ベースのアッセイで、物質と共に９６時間インキュベートした後、物質が腫瘍細胞の増殖を阻害する能力について、物質を試験した。CellTiter-Glo（登録商標）発光細胞生存率アッセイ（Promega）を使用して、細胞生存率を試験した。９６ウエルマイクロタイタープレートにて増殖培地１００μＬ中（細胞株に応じて）２０００〜５０００細胞／ウエルの密度で細胞を蒔いた。試験細胞株ごとに、別々のプレートに細胞を蒔いて、ｔ＝０時間およびｔ＝９６時間で発光を測定した。３７℃で一夜インキュベートした後、ｔ＝０試料の発光値を測定した。９６時間用のプレートを、増殖培地で希釈した物質で処理した。次いで、該細胞を３７℃で９６時間インキュベートし、ｔ＝９６時間試料の発光値を測定した。データ分析のために、処理試料および未処理試料について、ｔ＝９６時間の値からｔ＝０の値を差し引いた。物質処理試料の値と対照の値との発光の差異のパーセントを使用して、増殖阻害のパーセントを決定した。
【０１９２】
上記の適応症を例示的に代表する下記の細胞株で物質を試験した：
【表４】
2014524413.tif 000079
ATCC: American Type Culture Collection
NCI: National Cancer Institute
DMSZ: Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH
【０１９３】
３.３  腫瘍組織および正常組織内でのＡＣＣ１発現の分析
マイクロアレイを使用して、ＡＣＣ１発現を測定した。この目的で、種々の腫瘍組織および対応する正常組織のＲＮＡを単離した。この方法は、Trizol RNA 抽出試薬（Invitrogen）を使用し、続く精製は、RNeasy ミニキット（Qiagen）を使用した。さらに、DNase I（Qiagen）消化を行って、ゲノムＤＮＡを除去した。品質管理のために、Agilent Bioanalyzer 2100 Platform（Agilent Technologies）で RNA LabChip を用いて、全ＲＮＡを分析し、Peqlab NanoDrop システムを用いてＲＮＡ濃度を測定した。ハイブリダイゼーションのために、Affymetrix のワンサイクル真核生物標的標識アッセイを使用し、次いで、AffymetrixGeneChip 3000 scanner（Affymetrix）でアレイを読み取った。Expressionist Pro 4.0 Refiner（GeneData）ソフトウエアを使用して、評価および品質管理を行った。
【０１９４】
３.４  オクタノール／水分配係数（ｌｏｇＰ／Ｄ）、膜親和性（ｌｏｇＭＡ）およびヒト血清アルブミンへのタンパク質結合（ＫｄＨＳＡ）を測定するためのアッセイ
【０１９５】
オクタノール／水分配係数（ｌｏｇＰ／Ｄ）を測定するためのアッセイ：
分配係数オクタノール／水ＰまたはＤは、膜貫通および透過性を推定するための重要なパラメーターである。それは、オクタノール／水の二相システムにおける物質の平衡濃度の比として定義される。
【数１】
2014524413.tif 000080
Ｐ＝分配（partition）
Ｄ＝分配（distribution）
ｃオクタノール＝オクタノール相中の物質の濃度
ｃ水＝水相中の物質の濃度
それは、通常、１０を底とする対数（ｌｏｇＰまたはｌｏｇＤ）の形態で記述される。
【０１９６】
ｌｏｇＰは、専らその中性形態で存在する物質の分布挙動を説明する。ｌｏｇＤは、特定のｐＨでの物質の分布挙動を説明する；物質の電離定数ｐＫａに応じて、物質の一部はイオン形態で存在し得、一部は中性形態で存在し得る。
【０１９７】
活性化合物のｌｏｇＰ／Ｄを、アイソクラチックＨＰＬＣ法（ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィー）（文献：OECD Guideline for Testing of Chemicals No. 117）を使用して決定した。この方法は、試験物質のＨＰＬＣ保持時間と既知の分配係数を有する参照物質のＨＰＬＣ保持時間との相関関係に基づく。
【０１９８】
試験物質は、ＤＭＳＯ（ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド）中の１０ｍＭ溶液として用いた。この溶液１０μＬを、メタノール／水の７：３混合物で１００μＬとした。
【０１９９】
９種類の参照物質を別々にメタノールに溶解した。表１に濃度を示す。ＨＰＬＣバイアルに各原液を１００μＬずつ添加し、水３００μＬと混合した。
【表５】
2014524413.tif 000081
【０２００】
持続時間を決定するためにホルムアミド溶液を使用した。この目的で、ホルムアミド７ｍｇをメタノール１０ｍＬに溶解した。この原液１００μＬをメタノール５００μＬおよび水２００μＬと混合した。
全ての溶液を流速１.００ｍＬ／分でクロマトグラフィー処理した。
【０２０１】
クロマトグラフィー条件：
【表６】
2014524413.tif 000082
注入プロトコール：
ホルムアミド、参照物質、試験物質１、試験物質２、...、ホルムアミド、参照物質。
【０２０２】
保持時間の評価を、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）にて２００〜４００ｎｍで行った。下流にある質量分析計を使用して、分子量によって、試験物質の同一性をチェックした。
【０２０３】
Waters software Masslynx 4.1 を使用してＨＰＬＣのランを評価した。
ソフトウエア「POW Determination」（独自開発）を使用してｌｏｇＰ／Ｄ値を算出した。
【０２０４】
膜親和性ｌｏｇＭＡおよびヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）へのタンパク質結合の測定アッセイ：
膜親和性およびヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）へのタンパク質結合の測定を、Transil技術（文献：A. Loidl-Stahlhofen, A. Eckert, T. Hartmann, M. Schoettner J Pharm Sci 90, 599-606(2001)）によって行った。Transil（登録商標）（Sovicell（Leipzig、Germany）から購入できる）は、ホスファチジルコリンの二層膜で被覆したガラスビーズ（直径１０〜１２μｍ）（MA-Transil）、またはヒト血清アルブミンと共有接合したガラスビーズ（直径１０〜１２μｍ）（HSA-Transil）である。
【０２０５】
ｌｏｇＭＡおよびＨＳＡへのタンパク質結合定数を測定するために、購入できる TRANSIL Intestinal Absorption & HSA Binding Combined Assay Kit を使用した。これは、Transil が充填された９６ウエルマイクロタイタープレート（９６ウエル−ＭＴＰ）であり、各場合で８種の活性化合物の MA-Transil および HSA-Transil 結合を測定するために使用できる。各活性化合物について、Transil プレートは、１２個のウエルからなる１列を提供する。２個のウエルを参照として使用し、バッファー（ｐＨ７.４）だけを満たす。さらなる５個のウエルは、種々の増大する濃度の MA-Transil を含有し、残り５個のウエルは、種々の増大する濃度の HSA-Transil を含有する。
【０２０６】
活性化合物の Transil への結合を測定するために、ＨＰＬＣ−ＭＣカップリング（ＨＰＬＣ−ＭＣ＝高速液体クロマトグラフィー／質量分析）によって、Transil を含有するウエルの上清を、Transil を含有しない参照溶液に対して定量化した。
【０２０７】
これは、アッセイの個々の工程の実施方法である：
内部の物質貯蔵部から、活性化合物を９６ウエルＭＴＰに送達した。このプレートを母プレートと称する。各ウエルは、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）中の活性化合物の１０ｍｍｏｌ溶液３０μＬを含有した。プレートの最初のウエル（ウエルＡ１）と最後のウエル（ウエルＨ１２）の２個のウエルを、ＤＭＳＯ中のワルファリンの１０ｍｍｏｌ溶液３０μＬで満たした。ワルファリンは、その膜親和性およびＨＳＡへの結合が知られており、測定が正しいか否かをチェックする役割を果たす。母プレートを使用して、バッファー（ｐＨ７.４）およびＤＭＳＯの１：１混合物による１対４０００希釈の娘プレートを調製した。各ウエルの活性化合物濃度は２.５μｍｏｌ／Ｌであり、各ウエルの容積は４００μＬであった。
【０２０８】
Hamilton ピペッティングロボット Microlab STAR を使用して、娘プレートからの９６種の活性化合物を、合計１２枚の Transil プレートに分けた。娘プレートの各ウエルから、２０μｌずつ１２回取り出した。Transil プレートの各ウエルの濃度は、０.２５μｍｏｌ／Ｌであり、１対１０希釈に相当する。ＤＭＳＯ含有量は５％であった。
【０２０９】
充填された Transil プレートを、それぞれ、２分間、再懸濁し、次いで、室温で少なくとも２分間放置し、次いで、毎分６００回で５分間遠心分離処理した。次いで、該ピペッティングロボットを使用して、Transil プレートの各ウエルから２０μＬの上清を取り出し、これらを別のマイクロタイタープレートに移した。ここで、各場合で４枚の Transil プレートの上清を１枚のマイクロタイタープレートにプールし、最終的に、各場合で溶液８０μＬおよび活性化合物濃度６２.５ｎＭ／ウエルの３枚のプールされたマイクロタイタープレートがあるようにした。
【０２１０】
ＨＰＬＣ−ＭＣによる活性化合物の定量化の前に、各活性化合物について、単一注入により娘イオンおよび至適電圧が決定される至適化を行わなければならない。この目的で、ピペッティングロボットにより、別のマイクロタイタープレート中でアセトニトリル／水の８：２混合物による母プレートの１対１０００００００希釈を調製した。
【０２１１】
このマイクロタイタープレートを、AB Sciex のソフトウエア Discovery Quant Optimize を使用して、ＨＰＬＣ−ＭＣにより測定した。３枚のプールしたマイクロタイタープレートを、AB Sciex のソフトウエア Discovery Quant Analyze を使用して、ＨＰＬＣ−ＭＣにより測定した。
【０２１２】
クロマトグラフィー条件：
【表７】
2014524413.tif 000083
【０２１３】
３.５  平衡透析による血漿タンパク質結合の測定
試験物質の血漿タンパク質への結合を、テフロン製Ｈｔ透析装置（９６ウエル）および半透膜（再生セルロース、ＭＷＣＯ  １２−１４Ｋ）を利用して、平衡透析により測定する。これは、血漿側およびバッファー側（５０ｍＭリン酸バッファー）をそれぞれ１５０μＬ分離する。２種類の濃度（通常、３および０.３μＭ）の試験物質を血漿側に添加し、血漿タンパク質に結合させる。試験物質の未結合フラクションは膜を通過し、平衡が確立するまで（３７℃で約６〜８時間後）いずれかの側へ分配される。バッファー側および血漿側の物質の濃度をＬＣ−ＭＣ分析により測定する。このために、バッファーまたは血漿による希釈によって両側を同一マトリックス（１０％血漿）にし、次いで、メタノールで沈殿させる。バッファーおよび血漿濃度の商から遊離（未結合）フラクション（ｆｕ）を算出する。安定性試験および回収率試験を、対照として同時に行う。加えて、バッファー中の物質をバッファーに対して透析して、装置および膜への非特異的結合および平衡の確立をチェックする。インキュベーションの間に、血漿タンパク質の浸透圧が血漿の希釈（体積シフト）を導くので、ブランク血漿試料を計量することにより、この起こり得る誤差を決定し、ｆｕの算出に含める。平衡の確立および血漿安定性は、８０％以上の値を有するべきであり、回収率は、少なくとも３０％であるべきである。＜１％の遊離フラクションを血漿タンパク質結合が高いとみなし、１〜１０％を中程度、＞１０％を低いとみなす。
【０２１４】
３.６  薬物動態学的パラメーター
ラットおよびイヌにおける試験物質の薬物動態学的パラメーターの決定
このために、ＰＥＧ４００および／またはエタノールなどの適合し得る可溶化剤を適合し得る量で使用して、試験物質を静脈内投与用および胃内投与用に溶解した形態で投与した。
【０２１５】
静脈内投与：
試験物質を０.１〜１ｍｇ／ｋｇで投与した。投与は、雄性ラットにおいてボーラス注射として、雌性イヌにおいて輸液（１５分）として行った。ボーラス注射後並びに１５分間の輸液の前および後の種々の時点で、頚静脈（ラット）または伏在静脈（イヌ）からカテーテルによって約１００〜１５０μＬの血液試料を取り出した。該血液試料に抗凝固剤としてリチウム−ヘパリンを添加し、それらを、さらなる処理に必要となるまで、冷蔵庫で貯蔵した。試料を３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した後、上清（血漿）からアリコート１００μｌを取り、冷たいＡＣＮまたはメタノール（無水）４００μＬの添加により沈殿させた。沈殿した試料を２０℃で一夜冷凍し、次いで、再度３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した後、透明な上清１５０μＬを取り出して、濃度を測定した。ＬＣＭＳ／ＭＳ検出器と連結した Agilent 1200 HPLC システムによって、分析を行った。
【０２１６】
ＰＫパラメーターの算出（ＰＫ算出ソフトウエア、例えば、WinNonLin（登録商標）を使用）：ＣＬ血漿：試験物質の全血漿クリアランス（ｌ＊ｋｇ／ｈ）；ＣＬ血液：試験物質の全血液クリアランス（ｌ＊ｋｇ／ｈ）、ここで、
（ＣＬ血液＝ＣＬ血漿＊Ｃｐ／Ｃｂ）；Ｖｓｓ：見かけの定常状態分布容積（ｌ／ｋｇ）；ｔ１／２：特定の間隔内での半減期（ここで：ターミナルｔ１／２、時）；ＡＵＣｎｏｒｍ：体重について正規化した用量で割った、推定されるゼロ時から無限までの血漿濃度時間プロフィールの下の面積（ｋｇ＊ｌ／ｈ）；ＡＵＣ（０−ｔｎ）ｎｏｒｍ：体重について正規化した用量で割った、ゼロ時からの血漿濃度が測定可能な最終時点までの血漿濃度時間プロフィールの下の積分面積（ｋｇ＊ｌ／ｈ）；Ｃｍａｘ：血漿中の試験物質の最大濃度（μｇ／ｌ）；Ｃｍａｘ,ｎｏｒｍ：体重について正規化した用量で割った、血漿中の試験物質の最大濃度（ｋｇ／ｌ）；Ｃｂ／Ｃｐ：血液の血漿濃度分布に対する比率。
【０２１７】
胃内投与：
空腹時の雄性ラットまたは雌性イヌに、試験物質を０.３〜１ｍｇ／ｋｇの用量で、供給管を使用して、ボーラスとして胃内投与した。投与後の様々な時点で、頚静脈（ラット）または伏在静脈（イヌ）からカテーテルによって約１００〜１５０μＬの血液試料を取り出した。該血液試料に抗凝固剤としてリチウム−ヘパリンを添加し、それらを、さらなる処理に必要となるまで冷蔵庫で貯蔵した。該試料を３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した後、上清（血漿）からアリコート１００μｌを取り、冷たいＡＣＮまたはメタノール（無水）４００μＬの添加により沈殿させた。沈殿した試料を−２０℃で一夜冷凍し、次いで、３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した後、透明な上清１５０μＬを取り出して、濃度を測定した。ＬＣＭＳ／ＭＳ検出器と連結した Agilent 1200 HPLC システムによって、分析を行った。
【０２１８】
ＰＫパラメーターの算出（ＰＫ算出ソフトウエア、例えば、WinNonLin（登録商標）を使用）：
ＡＵＣｎｏｒｍ：体重について正規化した用量で割った、推定されるゼロ時から無限までの血漿濃度時間プロフィールの下の面積（ｋｇ＊ｌ／ｈ）；ＡＵＣ（０−ｔｎ）ｎｏｒｍ：体重について正規化した用量で割った、ゼロ時からの血漿濃度が測定可能な最終時点までの血漿濃度時間プロフィールの下の積分面積（ｋｇ＊ｌ／ｈ）；Ｃｍａｘ：血漿中の試験物質の最大濃度（μｇ／ｌ）；Ｃｍａｘ,ｎｏｒｍ：体重について正規化した用量で割った、血漿中の試験物質の最大濃度（ｋｇ／ｌ）；ｔ１／２：特定の間隔内での半減期（ここで：ターミナルｔ１／２、時）；Ｆｏｂｓ％：観察された経口バイオアベイラビリティー、静脈内投与後のＡＵＣ（０−ｔｎ）ｎｏｒｍで割った、胃内投与後のＡＵＣ（０−ｔｎ）ｎｏｒｍ。ｔｍａｘ：試験物質の最大濃度が血漿中で測定される時点。
【０２１９】
試験物質の相対的バイオアベイラビリティーを算出するために、微結晶物質の懸濁液の胃内投与後のＡＵＣ（０−ｔｎ）ｎｏｒｍを、物質溶液の投与後のＡＵＣ（０−ｔｎ）ｎｏｒｍで割る。
【０２２０】
３.７  インビボ活性
異種移植モデル
免疫抑制マウスの異種移植モデルを使用して、生体内での抗腫瘍活性を測定した。
【０２２１】
この目的で、まず、以下のプロトコールを使用して、最大耐用量（ＭＴＤ）を測定した：
３週間にわたって、毎日、雌性ヌードマウス（ＮＭＲＩヌード（ｎｕ／ｎｕ）マウス、Taconic M&B A/S）に所定の用量の試験物質を経口投与し、該マウスを毎日、死亡および体重について観察した。ＭＴＤは、処置期間中の動物の死亡を伴わずに、かつ、初期体重と比べて１０％以上の体重減少を伴わずに、投与され得る最高用量と定義した。
【０２２２】
次いで、試験物質がそれらのＭＴＤで、または、予めこれを測定できない場合には標準的なビヒクルで製剤化され得る最高の用量で、場合によってはそれよりも低い用量で投与された異種移植モデルを使用して、抗腫瘍活性を測定した。主に雄性ヌードマウス（ＮＭＲＩヌード（ｎｕ／ｎｕ）マウス、Taconic M&B A／S）における、ホルモン非依存性ヒトＰＣ−３細胞による前立腺癌モデルを使用した。この目的で、３００万個の腫瘍細胞（培地＋マトリゲル１：１に懸濁した；最終０.１ｍＬ）を各動物の側面に皮下注射した。腫瘍が２０〜３０ｍｍ２の面積に広がった時、該マウスをランダムに治療グループに振り分け、治療を開始した。次いで、試験物質のビヒクルだけを投与されている対照グループまたは処置グループの１つにおいて平均腫瘍サイズが１３０〜１６０ｍｍ２になるまで該治療を続け、腫瘍面積および体重を週２〜３回測定した。この時点で、全てのグループにおいて実験を終了し、できた腫瘍を計量した。
【０２２３】
Ｔ／Ｃ値は、初期成功パラメーターとして、最終腫瘍重量に対する効果を使用して算出した：ビヒクルグループの腫瘍重量で割った処置グループの平均腫瘍重量。
【０２２４】
４．結果
４.１.  酵素アッセイ
表２は、実施例および比較例の酵素アッセイの結果をまとめて示す。選択性の正確な決定のために、２つのアッセイで同一の物質希釈シリーズのコピーを使用して、ＡＣＣ１およびＡＣＣ２の阻害の測定値（各々、ＩＣ５０測定値）を、各場合で一対ごとに比較した。ＡＣＣ１またはＡＣＣ２のいずれかのＩＣ５０測定値が不十分なデータ品質のために評価されなかった場合、両方の測定値を無視し、表には記載しなかった。次いで、ＡＣＣ１の阻害対ＡＣＣ２の阻害の選択性を、個々の測定値で観察される選択性の平均として決定した。
【０２２５】
表２
【表８】
2014524413.tif 000084
【０２２６】
【表９】
2014524413.tif 000085
【０２２７】
これらのデータは、ｔｒａｎｓ−メトキシ基を持たない化合物は、ヒトＡＣＣ２に対する選択性が顕著に乏しいことを示す。アザスピロ［４.５］デセ−３−エン−２−オン環系の８位にｔｒａｎｓ−メトキシ基を有する先行技術のいくつかの関連する構造も、ＡＣＣ１を強く阻害し、ＡＣＣ２に対して選択的である。この先行技術の構造の特性は未知であり、自明ではなく、過度な努力なくして発見できるものではなかった。
【０２２８】
４.２  細胞アッセイ
表３は、実施例および比較例の細胞アッセイの結果をまとめたものである。
【表１０】
2014524413.tif 000086
【０２２９】
４.３  腫瘍組織および正常組織内でのＡＣＣ１発現
マイクロアレイによって腫瘍組織および対応する正常組織内でのＡＣＣ１発現を測定した（図１）。乳癌、結腸直腸癌、気管支癌および膵臓癌において、ＡＣＣ１の発現は正常組織と比べて有意に上方調節された。
【０２３０】
４.４  オクタノール／水分配係数（ｌｏｇＰ／Ｄ）、膜親和性（ｌｏｇＭＡ）およびヒト血清アルブミンへのタンパク質結合（ＫｄＨＳＡ）
表４は、測定したｌｏｇＰ／Ｄ、ｌｏｇＭＡおよびＫd ＨＳＡ値を示す。
ＨＰＬＣピークの評価は、Discovery Quant Analyze を使用して行った。Sovicell によって提供された Excel のワークブックを使用して、結果（ｌｏｇＭＡおよびＨＳＡへの結合定数Ｋｄ）を算出した。
【０２３１】
【表１１】
2014524413.tif 000087
【０２３２】
４.５  平衡透析による血漿タンパク質結合
表５は、平衡透析によって測定された、ヒト、マウスおよびラットの血漿タンパク質への結合を示す。
【０２３３】
【表１２】
2014524413.tif 000088
【０２３４】
４.６  薬物動態学的パラメーター
ラットから得られた薬物動態学的パラメーター。
表６は、ラットから得られた薬物動態学的パラメーターを示す。
【０２３５】
【表１３】
2014524413.tif 000089
【０２３６】
４.７  インビボ効力
マウスの最大耐容量（ＭＴＤ）
雌性ヌードマウス（ＮＭＲＩｎｕ／ｎｕ）に実施例１−１、Ｖ.１−ａ／Ｖ.３−ａ、Ｖ.２−ａ／Ｖ.４−ａおよび１−４を投与した：
【表１４】
2014524413.tif 000090
【０２３７】
処置期間の後、２１日間の観察期間が続いた。この期間に生じた死亡および体重に対する効果を表７にまとめて示す。
【表１５】
2014524413.tif 000091
【０２３８】
従って、１日１回投与で２１日間の処置についてのＭＴＤは、
実施例１−１について、１００ｍｇ／ｋｇよりも高く、
実施例Ｖ.１−ａ／Ｖ.３−ａについて、１００ｍｇ／ｋｇよりも高く、
実施例Ｖ.２−ａ／Ｖ.４−ａについて、８０ｍｇ／ｋｇよりも高く、
実施例１−４について、１００ｍｇ／ｋｇよりも高い。
従って、実施例１−４の１日２回投与による２１日間の処置のＭＴＤは、１００ｍｇ／ｋｇよりも高い。
【０２３９】
マウスのＰＣ３異種移植モデルにおけるインビボ効力
ＰＣ−３前立腺癌異種移植モデルの雄性ヌードマウス（ＮＭＲＩ  ｎｕ／ｎｕ）に、実施例１−１、Ｖ.１−ａ／Ｖ.３−ａ、１−２、Ｖ.２−ａ／Ｖ.４−ａおよび１−４を投与した：
【表１６】
2014524413.tif 000092
【０２４０】
【表１７】
2014524413.tif 000093
【０２４１】
治療効果は、０.５０以下のＴ／Ｃと定義した。優れた耐容性は、マイナス１０％以下の体重の最大変化および試験動物の生存率１００％と定義した。
従って、１日２回８０ｍｇ／ｋｇの投与で、治療効果および優れた耐容性が、実施例１−１について観察された。
従って、１日１回１００ｍｇ／ｋｇの投与で、治療効果および優れた耐容性が、実施例Ｖ.１−ａ／Ｖ.３−ａについて観察され、１日２回１００ｍｇ／ｋｇの投与では、治療効果は観察されたが、優れた耐容性は観察されなかった。
従って、４０ｍｇ／ｋｇおよび８０ｍｇ／ｋｇ（各場合で１日２回投与）で、治療効果および優れた耐容性が、実施例１−２について観察された。
従って、１日１回８０ｍｇ／ｋｇの投与で、治療効果および優れた耐容性が、実施例Ｖ.２−ａ／Ｖ.４−ａについて観察され、一方、１日１回４０ｍｇ／ｋｇの投与で、治療効果は観察されず、１日２回８０ｍｇ／ｋｇの投与で、優れた耐容性は観察されなかった。
従って、１日２回８０ｍｇ／ｋｇの投与で、治療効果および優れた耐容性が、実施例１−４について観察された。
【０２４２】
ヒトの薬物動態学的パラメーターおよびヒトの治療的用量の予測
ラット（単一種スケーリング）で得られたインビボＲＫパラメーターに基づいて、血漿中の遊離フラクション（ｆｕ）の種間差異を考慮して、ヒトの薬物動態学的（ＰＫ）パラメーター（表９）を予測した。マウス（ｎｕ／ｎｕマウス）のＰＣ３腫瘍モデルにおけるインビボ効力について測定した血漿濃度時間プロフィールに基づいて、有効なＡＵＣ（曲線下面積）を測定した。予測されたヒトのクリアランス（ＣＬ）を使用し、１００％バイオアベイラビリティーを仮定し（Ｆ＝１）、動物モデルにおける有効なＡＵＣを使用して、下記の式に従って治療的ヒト用量を測定した：
【数２】
2014524413.tif 000094
【表１８】
2014524413.tif 000095
ther.＝治療的
calc.＝計算された
pred.＝予測された（ｆｕ修正)
【図１】
2014524413.tif 000097
【国際調査報告】
2014524413.tif 000098
2014524413.tif 000099
2014524413.tif 000100
2014524413.tif 000101
2014524413.tif 000102
2014524413.tif 000103