(57)【要約】  本発明は、オレオシン（現在定義されているように、カレオシン、ステロレオシンおよびポリオレオシンも包含する）と、リン脂質などの界面活性剤と、４つ以上の二重結合を有する多価不飽和脂肪酸などの脂肪酸を含む油とを含む人工オイルボディに関する。また本発明は、前記人工オイルボディの調製方法にも関する。これらのＡＯＢは、様々な種類の製品で使用される生物活性分子などのその他の分子をさらに含むことができ、酸化防止剤を添加せずに酸化安定性の水中油エマルションを製造するために特に有用である。本発明はさらに、植物抽出物からオレオシンを部分的に精製するための方法も包含する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
オレオシンと、界面活性剤と、４つ以上の二重結合を有する多価不飽和脂肪酸を含む油とを含むことを特徴とする人工オイルボディ。
【請求項２】
請求項１に記載のオイルボディにおいて、前記界面活性剤がリン脂質であることを特徴とするオイルボディ。
【請求項３】
請求項１または２に記載のオイルボディにおいて、前記多価不飽和脂肪酸の少なくとも５％が４つ以上の二重結合を有することを特徴とするオイルボディ。
【請求項４】
オレオシンと、界面活性剤と、脂肪酸を含む油とを含む人工オイルボディにおいて、前記界面活性剤の少なくとも一部がリン脂質でないことを特徴とする人工オイルボディ。
【請求項５】
請求項１乃至４の何れか１項に記載のオイルボディにおいて、前記オレオシンが油糧種子オレオシンであることを特徴とするオイルボディ。
【請求項６】
請求項１乃至５の何れか１項に記載のオイルボディにおいて、前記油が海産油および／または魚油であることを特徴とするオイルボディ。
【請求項７】
請求項１乃至６の何れか１項に記載のオイルボディにおいて、前記脂肪酸の少なくとも５０％がグリセリドの形態であることを特徴とするオイルボディ。
【請求項８】
請求項１乃至７の何れか１項に記載のオイルボディにおいて、前記人工オイルボディの乾燥重量の少なくとも８０％が油であることを特徴とするオイルボディ。
【請求項９】
請求項１乃至８の何れか１項に記載のオイルボディにおいて、１つまたは複数のその他の分子をさらに含むことを特徴とするオイルボディ。
【請求項１０】
請求項９に記載のオイルボディにおいて、前記その他の分子が生物活性分子であることを特徴とするオイルボディ。
【請求項１１】
請求項１乃至１０の何れか１項に記載のオイルボディにおいて、約０．１〜約１００μｍの間のサイズを有することを特徴とするオイルボディ。
【請求項１２】
請求項１乃至１１の何れか１項に記載の１つまたは複数の人工オイルボディと、キャリアとを含むことを特徴とする組成物。
【請求項１３】
脂肪酸から恩恵を受け得る状態の治療または予防方法において、前記状態を有する被験者に、請求項１乃至１１の何れか１項に記載の１つもしくは複数の人工オイルボディおよび／または請求項１２に記載の組成物を投与するステップを含むことを特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項１乃至１１の何れか１項に記載の１つもしくは複数の人工オイルボディおよび／または請求項１２に記載の組成物の使用において、脂肪酸から恩恵を受け得る状態の治療または予防のための薬剤を製造するためであることを特徴とする、使用。
【請求項１５】
請求項１乃至１１の何れか１項に記載の１つもしくは複数の人工オイルボディおよび／または請求項１２に記載の組成物の使用において、脂肪酸から恩恵を受け得る状態の治療または予防のための薬剤としてであることを特徴とする、使用。
【請求項１６】
請求項１３に記載の方法または請求項１４もしくは１５の使用において、前記脂肪酸が４つ以上の二重結合を有する多価不飽和脂肪酸であることを特徴とする方法。
【請求項１７】
請求項１乃至１１の何れか１項に記載の１つもしくは複数の人工オイルボディおよび／または請求項１２に記載の組成物を含むことを特徴とする製品。
【請求項１８】
請求項１７に記載の製品において、食品もしくは飼料製品、飲料製品、パーソナルケア製品、医薬品または工業製品であることを特徴とする製品。
【請求項１９】
請求項１７または１８に記載の製品において、水中油エマルションであるか、あるいは水中油エマルションを含むことを特徴とする製品。
【請求項２０】
請求項１乃至１１の何れか１項に記載の１つもしくは複数の人工オイルボディ、および／または請求項１２に記載の組成物の使用において、製品を調製するためであることを特徴とする、使用。
【請求項２１】
飼料、食品または飲料の調製方法において、請求項１乃至１１の何れか１項に記載の１つもしくは複数の人工オイルボディおよび／または請求項１２に記載の組成物と、１つまたは複数のその他の食用成分とを混合するステップを含むことを特徴とする方法。
【請求項２２】
人工オイルボディの製造方法において、
ｉ）オレオシンと、界面活性剤と、４つ以上の二重結合を有する多価不飽和脂肪酸を含む油とを入手するステップと、
ｉｉ）前記オレオシン、前記界面活性剤および前記油を混合して、前記人工オイルボディを製造するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２３】
人工オイルボディの製造方法において、
ｉ）オレオシンと、界面活性剤と、脂肪酸を含む油とを入手するステップであって、前記界面活性剤の少なくとも一部がリン脂質ではないステップと、
ｉｉ）前記オレオシン、前記界面活性剤および前記油を混合して、前記人工オイルボディを製造するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２４】
請求項２２または２３に記載の方法において、
ｉｉｉ）人工オイルボディを選択するステップ
をさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項２２乃至２４の何れか１項に記載の方法において、前記ステップｉ）が、
ａ）オレオシンを含む植物の抽出物を入手するステップと、
ｂ）前記抽出物からタンパク質を少なくとも部分的に精製するステップであって、前記タンパク質がオレオシンを含むステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２６】
請求項２５に記載の方法において、前記ステップｂ）が、
１）前記抽出物のｐＨを少なくとも約１１．５のｐＨに調整するステップと、
２）１）を分離して固相および液相を生じさせ、前記液相を選択するステップと、
３）前記液相のｐＨを低下させ、前記タンパク質を沈殿させるステップと、
４）３）を分離して固相および液相を生じさせ、前記固相を選択するステップと、
５）前記固相をキャリア中に分散させるステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２７】
植物抽出物からオレオシンを部分的に精製する方法において、
１）前記抽出物のｐＨを少なくとも約１１．５のｐＨに調整するステップと、
２）１）を分離して固相および液相を生じさせ、前記液相を選択するステップと、
３）前記液相のｐＨを低下させ、タンパク質を沈殿させるステップと、
４）３）を分離して固相および液相を生じさせ、前記固相を選択するステップと、
５）前記固相をキャリア中に分散させるステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２８】
請求項２６または２７に記載の方法において、前記ステップ３）が、前記液相のｐＨを約７未満に低下させるステップを含むことを特徴とする方法。
【請求項２９】
請求項２２乃至２８の何れか１項に記載の方法において、有機溶媒を使用しないことを特徴とする方法。
【請求項３０】
請求項２５乃至２９の何れか１項に記載の方法において、前記植物が油糧種子であることを特徴とする方法。
【請求項３１】
請求項２５乃至３０の何れか１項に記載の方法において、前記抽出物が、油の抽出後に生じるミールであることを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂肪酸を含む人工オイルボディと、前記人工オイルボディの調製方法とに関する。人工オイルボディは様々な種類の製品において使用することができ、特に、酸化防止剤の非存在下で酸化安定性の水中油エマルションを製造するために有用である。
【背景技術】
【０００２】
脂肪は高い熱含有量を有し、ヒトの食事エネルギーの摂取に大きく貢献する。飽和脂肪およびトランス脂肪などの特定のタイプの脂肪は、心血管疾患を含む様々な病状に関与している。しかしながら、脂肪はヒトの健康および栄養において肯定的な役割も果たし、国際的な食事ガイドラインは、食事エネルギーの特定の割合は、「善玉脂肪」である限りは脂肪に由来することができるとしている。「善玉脂肪」は単価不飽和および多価不飽和油であり、食品中の飽和脂肪をより健康的な不飽和油で置き換えることへの関心が高まっている。さらにここ何年にもわたって、多価不飽和油の特定のグループ、すなわち長鎖オメガ−３油は、これらに起因している、心血管疾患に対する防御を含む多数の健康上の利益のために、大きな注目を集めている。オメガ−３油の健康上の利益のリストの増大を受けて、食品産業では世界的にオメガ−３油で強化された食品を製造する努力が成されている。
【０００３】
高度不飽和油を含有するオメガ−３強化食品および同様の健康食品の拡大に対する主な障害の１つは、貯蔵中にこれらの油が酸化変質を極めて受けやすいことである。酸化は、その一部が非常に望ましくない風味特性を有し得る製品を生じ、それにより、製品の嗜好性および貯蔵期間が低下される。従って、これらの油を酸化から適切に保護することが重要である。食品中の高度不飽和油の酸化を調節するための戦略として、マイクロカプセル化および酸化防止剤の添加が成功しているが、これらの技術は、コスト、自然性、および一般的な適用性に関していくつかの欠点を有する。
【０００４】
植物および油糧種子中の油は、これらが存在している植物種に関係なく構造が類似しているオイルボディ（ＯＢ）と呼ばれる分離した沈着物の形態で産出する。天然のＯＢの顕著な特徴は、細胞内部および単離された調製物の両方におけるその非常に優れた物理的安定性である。両方の状況において、ＯＢは個々の実体として存在し、長期の貯蔵（乾燥によりインビボで、そして浮遊遠心分離後のインビトロで）の後でも、互いに押し付けられたときに凝集または融合しない（ＴｚｅｎおよびＨｕａｎｇ，１９９２）。ＯＢの非常に優れた物理的安定性は、オイルボディ表面に生じるオレオシンと呼ばれる独特の両親媒性タンパク質に起因している（Ｈｕａｎｇ，１９９４）。オイルボディの表面全体は、圧縮されたＯＢが成熟種子の細胞内で決して融合または凝集しないように、オレオシンにより被覆されていることが示唆されている（ＴｚｅｎおよびＨｕａｎｇ，１９９２）。オレオシンの含量は全オイルボディの１〜４％の範囲であり、最大量は、ＯＢが最小である種、例えば、菜種／キャノーラにおいて生じる（Ｈｕａｎｇ，１９９２、Ｔｚｅｎ，１９９３）。
【０００５】
良好な物理的安定性に加えて、油糧種子内のＯＢは、酸化に対する自然の防御を有する。最近の研究では、この酸化安定性はオイルボディ単離物の水性分散体まで拡張されることが示されている。Ｆｉｓｋおよび共同研究者ら（２００８）は、ヒマワリ種子から抽出され、連続水相中に分散された未処理のＯＢが、ヒマワリ油および乳化剤から調製した等価のエマルションよりも酸化に耐性があることを示した。最近になって、高度不飽和ステアリドン酸を含有するシャゼンムラサキ（ｅｃｈｉｕｍ）オイルボディ単離物について同様の結果が得られた（Ｇｒａｙら，２０１０）。乳化剤としてＴｗｅｅｎ４０を用いて調製された等価の水中キャノーラ油エマルションと比較して、未処理のキャノーラＯＢの水性分散体の優れた酸化安定性が報告されている（ＳｈｅｎおよびＷｉｊｅｓｕｎｄｅｒａ，２００９）。
【０００６】
ＯＢをその構成成分から再構築するための試みは限られている。ＭｕｒｐｈｙおよびＣｕｍｍｉｎｓ（１９８９）は、菜種油から抽出されたＴＡＧまたは精製トリオレインを菜種オイルボディ膜材料と共にインキュベーションすると、天然のオイルボディと同様の寸法を有する安定した油滴の出現が得られることを報告した。後に、ＴｚｅｎおよびＨｕａｎｇ（１９９２）は、トリオレインおよびトリリノレインのＴＡＧ混合物（１：２モル）と、小麦、米、菜種、大豆またはホホバから単離されたジオレオイルホスファチジルコリンおよびオレオシンとを混ぜ合わせることによって、物理的に安定な人工（再構成）オイルボディ（ＡＯＢ）を調製することに成功した。しかしながら、このような人工ＯＢの酸化安定性は調査されていないと思われる。
【０００７】
酸化防止剤の添加の使用に依存せずに脂肪酸を酸化から保護するための手段が必要とされている。
【発明の概要】
【０００８】
４つ以上の二重結合を有する多価不飽和脂肪酸を高レベルで含有する油、例えばω３脂肪酸が豊富な海産油（ｍａｒｉｎｅ  ｏｉｌ）などは、油糧種子などの植物において産生される油とは化学的に異なる。しかしながら、本発明者らは、意外なことに、市販のキャノーラミールなどの植物ミールから抽出されるオレオシンを使用して、ω３脂肪酸が豊富な海産油および／または魚油などの高度の多価不飽和油を有する人工オイルボディを構築できることを見出した。また本発明者らは、意外なことに、酸化安定性に悪影響を与えることなく、オイルボディのリン脂質成分が様々な種類の界面活性剤で置換され得ることも見出した。
【０００９】
従って、第１の態様では、本発明は、オレオシンと、界面活性剤と、３つ以上の二重結合、より好ましくは４つ以上の二重結合を有する多価不飽和脂肪酸を含む油とを含む人工オイルボディを提供する。
【００１０】
実施形態では、界面活性剤はリン脂質である。
【００１１】
実施形態では、多価不飽和脂肪酸の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％または少なくとも２５％が４つ以上の二重結合を有する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、オレオシンと、界面活性剤と、脂肪酸を含む油とを含む人工オイルボディを提供し、ここで、界面活性剤の少なくとも一部はリン脂質ではない。
【００１３】
オレオシンは任意の供給源から入手することができるが、好ましい実施形態では、オレオシンは油糧種子オレオシンである。
【００１４】
また油も供給源から入手することができる。好ましい実施形態では、油は海産油および／または魚油である。
【００１５】
さらなる実施形態では、脂肪酸の少なくとも５０％、少なくとも７５％、または少なくとも９０％はグリセリドの形態である。
【００１６】
実施形態では、人工オイルボディの乾燥重量の少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％は油である。
【００１７】
本発明のオイルボディは１つまたは複数の他の分子のためのキャリアとして使用することができ、従って、１つまたは複数の他の分子をさらに含み得る。このような他の分子の例としては、プロバイオティクス、防腐剤、治療薬、診断薬、送達剤または食品着色剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１８】
オイルボディのサイズは、オレオシンに対する油の相対濃度の操作によって変えることができ、オレオシンの相対量がより少ないと、より大きいサイズが促進される。実施形態では、オイルボディは、約０．１〜約１００μｍの間、または少なくとも約０．５〜約５０μｍの間、または少なくとも約０．５〜約１０μｍの間、または少なくとも約０．５〜約２μｍの間のサイズを有する。
【００１９】
またさらなる態様では、本発明は、本発明の１つまたは複数の人工オイルボディと、キャリアとを含む組成物を提供する。実施形態では、キャリアは脱イオン水である。
【００２０】
実施形態では、組成物は水中油エマルションである。特に、本発明の水中油エマルションは、オレオシンの非存在下で乳化剤としてＴｗｅｅｎ４０などを用いて製造された脂肪酸を含む水中油エマルションよりも、酸化に対して耐性である。
【００２１】
本発明者らは、本発明の人工オイルボディが概して酸化に対して耐性があることを見出した。従って、実施形態では、人工オイルボディおよび／または組成物は合成酸化防止剤を含まない。さらに、好ましい実施形態では、本発明の人工オイルボディは酸化安定性である。
【００２２】
実施形態では、人工オイルボディは、オレオシンと、界面活性剤と、４つ以上の二重結合を有する多価不飽和脂肪酸などの脂肪酸を含む油とからなる。
【００２３】
治療薬の送達において有用であるだけでなく、本発明の人工オイルボディは、オイルボディの脂肪酸、特に多価不飽和脂肪酸のよく知られている恩恵によって疾患を治療または予防するために使用することができる。従って、さらなる態様では、本発明は、脂肪酸から恩恵を受け得る状態の治療または予防方法を提供し、本方法は、上記状態を有する被験者に、本発明の１つもしくは複数のオイルボディおよび／または本発明の組成物を投与することを含む。
【００２４】
また、脂肪酸から恩恵を受け得る状態を治療または予防するための薬剤を製造するための、本発明の１つもしくは複数のオイルボディおよび／または本発明の組成物の使用も提供される。
【００２５】
さらに、脂肪酸から恩恵を受け得る状態の治療または予防のための薬剤としての、本発明の１つもしくは複数のオイルボディおよび／または本発明の組成物の使用が提供される。
【００２６】
上記方法および使用の実施形態では、状態は、４つ以上の二重結合を有する多価不飽和脂肪酸から恩恵を受け得る。
【００２７】
オイルボディは、様々な種類の製品において使用することができる。従って、別の態様では、本発明は、本発明の１つもしくは複数の人工オイルボディおよび／または組成物を含む製品を提供する。このような製品の例としては、食品もしくは飼料製品、飲料製品、パーソナルケア製品、医薬品または工業製品が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２８】
好ましい実施形態では、製品は水中油エマルションであるか、あるいは水中油エマルションを含む。
【００２９】
また、本発明の１つもしくは複数の人工オイルボディおよび／または本発明の組成物の、製品の調製のための使用も提供される。
【００３０】
さらなる態様では、本発明は、飼料、食品または飲料の調製方法を提供し、本方法は、本発明の１つもしくは複数の人工オイルボディおよび／または本発明の組成物と、１つまたは複数の他の食用成分とを混合することを含む。
【００３１】
さらなる態様では、本発明は、人工オイルボディの製造方法を提供し、本方法は、
ｉ）オレオシンと、界面活性剤と、４つ以上の二重結合を有する多価不飽和脂肪酸を含む油とを入手するステップと、
ｉｉ）オレオシン、界面活性剤および油を混合して、人工オイルボディを製造するステップと、
を含む。
【００３２】
別の態様では、本発明は、人工オイルボディの製造方法を提供し、本方法は、
ｉ）オレオシンと、界面活性剤と、脂肪酸を含む油とを入手するステップであって、界面活性剤の少なくとも一部がリン脂質ではないステップと、
ｉｉ）オレオシン、界面活性剤および油を混合して、人工オイルボディを製造するステップと、
を含む。
【００３３】
実施形態では、界面活性剤は油中に混合および溶解された後、オレソイン（ｏｌｅｓｏｉｎ）中に混合される。
【００３４】
さらなる実施形態では、本方法はさらに、
ｉｉｉ）人工オイルボディを選択するステップ
を含む。
【００３５】
本発明者らは、意外にも、本発明の人工オイルボディで使用するためのオレオシンの入手方法も同定した。本発明者らは、特に、比較的少量のオレオシン（例えば、全タンパク質の約１０％）を有する高度に不均一なタンパク質の集団を含むタンパク質抽出物を使用することができ、油、界面活性剤およびオレオシンの自然の親和性が人工オイルボディの形成において非常に効率的であると思われることを見出した。これは、徹底的な精製手順を実行する必要性が回避され、比較的安価なオレオシンの供給源が提供されるので特に有利である。従って、さらなる実施形態では、ステップｉ）は、
ａ）オレオシンを含む植物の抽出物を入手するステップと、
ｂ）抽出物からタンパク質を少なくとも部分的に精製するステップであって、タンパク質がオレオシンを含むステップと、
を含む。
【００３６】
好ましくは、ステップｂ）は、
１）抽出物のｐＨを少なくとも約１１．５のｐＨに調整するステップと、
２）１）を分離して固相および液相を生じさせ、液相を選択するステップと、
３）液相のｐＨを低下させ、タンパク質を沈殿させるステップと、
４）３）を分離して固相および液相を生じさせ、固相を選択するステップと、
５）固相をキャリア中に分散させるステップと、
を含む。
【００３７】
また本発明は、本発明の方法によって製造される人工オイルボディも提供する。
【００３８】
さらなる態様では、本発明は、植物抽出物からオレオシンを部分的に精製する方法を提供し、本方法は、
１）抽出物のｐＨを少なくとも約１１．５のｐＨに調整するステップと、
２）１）を分離して固相および液相を生じさせ、液相を選択するステップと、
３）液相のｐＨを低下させ、タンパク質を沈殿させるステップと、
４）３）を分離して固相および液相を生じさせ、固相を選択するステップと、
５）固相をキャリア中に分散させるステップと、
を含む。
【００３９】
実施形態では、ステップ３）は、液相のｐＨを約７未満、約ｐＨ４〜約７、または約５．５〜約７のｐＨまで低下させるステップを含む。
【００４０】
好ましくは、上記２つの態様の方法は有機溶媒を使用しない。
【００４１】
抽出物は、植物ミールなどの任意の植物に由来することができる。しかしながら、好ましい実施形態では、植物は油糧種子である。
【００４２】
また本発明者らは、油糧種子の種子などの植物材料からの油の抽出によって生じるミールが、オレオシンの供給源として使用可能であることも見出した。特許請求される本発明の追加の恩恵として、オレオシンの部分精製の後、残りの植物抽出物は動物飼料として使用することができる。従って、好ましい実施形態では、抽出物は、油の抽出後に生じるミールである。
【００４３】
また本発明は、本発明の方法によって生じる少なくとも部分的に精製されたオレオシンも提供する。
【００４４】
本明細書中の任意の実施形態は、他に特に記載されない限り、必要な変更を加えて任意の他の実施形態に適用すると解釈されるものとする。
【００４５】
本発明は、例示の目的だけが意図される本明細書に記載される特定の実施形態によって範囲が限定されてはならない。機能的に等価な製品、組成物および方法は、本明細書に記載されるように、本発明の範囲内に明らかに含まれる。
【００４６】
本明細書全体を通して、特に他に記載されない限り、あるいは文脈上別のことが求められていない限り、単一のステップ、物質の組成、ステップの群または物質の組成の群への言及は、１つおよび複数（すなわち、１つ以上）のこれらのステップ、物質の組成、ステップの群または物質の組成の群を包含すると解釈されるものとする。
【００４７】
本発明は、以下の非限定的な実施例によって、かつ添付図面を参照して以下に記載される。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】図１は、キャノーラミールからオレオシンを抽出するための手順を示す。
【図２】図２は、キャノーラミールからのオレオシン抽出物の電気泳動分析を示す。
【図３】図３は、キャノーラミールからのオレオシン回収率に対する抽出媒体のｐＨの効果を示す。
【図４】図４は、異なるｐＨ値で抽出されたオレオシンの電気泳動分析を示す。レーン２および３はｐＨ１０．５であり、レーン４および５はｐＨ１１．０であり、レーン６および７はｐＨ１１．５であり、レーン８および９はｐＨ１２．０である。
【図５】図５Ａおよび図５Ｂは、加速自己酸化（６０℃）を受けたＴｗｅｅｎ４０およびオレソイン（ｏｌｅｓｏｉｎ）エマルションについてのＤ［３，２｝およびｄ（０．５）の粒径（μｍ）の変化を示す。デュプリケート測定からの平均データである。
【図６】図６は、人工マグロオイルボディの表面タンパク質の電気泳動分析を示す。レーン：Ｍはマーカーであり、Ｒａｗ  ｐＨ１２はキャノーラミールからのｐＨ１２可溶性粗タンパク質抽出物であり、ＣＰ１は、キャノーラ油で作られた人工キャノーラオイルボディから抽出されたタンパク質、および再可溶化されたｐＨ６．５沈殿キャノーラミールタンパク質であり、ＣＰ１＋ＰＬｓは、キャノーラ油で作られた人工キャノーラオイルボディから抽出されたタンパク質、再可溶化されたｐＨ６．５沈殿キャノーラミールタンパク質、およびリン脂質である。
【図７】図７Ａおよび図７Ｂは、Ｔｗｅｅｎ４０およびオレオシン抽出物をそれぞれ用いて調製されたマグロ油エマルションの加速酸化中のトランス，トランス，２，４，ヘプタジエナールの発生を示す。デュプリケート測定からの平均データである。図７Ａは６０℃における酸化であり、図７Ｂは４０℃における酸化である。
【図８】図８Ａおよび図８Ｂは、６０℃における貯蔵中、Ｔｗｅｅｎ４０およびオレオシン抽出物（それぞれ）を用いて作られたマグロ油エマルションにおけるＥＰＡおよびＤＨＡの消耗を示す。デュプリケート測定からの平均データである。図８Ａは６０℃における酸化であり、図８Ｂは４０℃における酸化である。
【図９】図９は、４０℃で加速酸化を受けたマグロ油人工オイルボディエマルションおよび等価のＴｗｅｅｎ４０エマルションから抽出された油の過酸化物価（ＰＶ）を示す。
【図１０】図１０は、オレオシン、Ｉｓｏｌｅｘｘおよびカゼインナトリウムによってそれぞれ安定化されたマグロ油エマルションの加速貯蔵（４０℃、空気）中のトランス，トランス，２，４−ヘプタジエナールの発生を示す。
【図１１】図１１は、二次的な界面活性剤としてそれぞれモノアシルグリセロール（ＭＡＧ）、Ｔｗｅｅｎ４０（Ｔｗｅｅｎ）、およびステアロイルラクチル酸ナトリウム（ＳＳＬ）を併用し、オレオシンを用いて調製されたマグロ油エマルションの加速貯蔵（４０℃、空気）中のトランス，トランス，２，４−ヘプタジエナールの発生を示す。
【００４９】
配列表への鍵
配列番号１：ブラシカ・ナプス（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ）オレオシン（ＣＡＡ５７５４５．１）
配列番号２：ブラシカ・ナプス（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ）オレオシンＳ１−１（ＡＣＧ６９５０４．１）
配列番号３：ブラシカ・ナプス（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ）オレオシンＳ２−１（ＡＣＧ６９５０３．１）
配列番号４：ブラシカ・ナプス（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ）オレオシンＳ３−１（ＡＣＧ６９５１３．１）
配列番号５：ブラシカ・ナプス（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ）オレオシンＳ４−１（ＡＣＧ６９５０７．１）
配列番号６：ブラシカ・ナプス（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ）オレオシンＳ５−１（ＡＣＧ６９５１１．１）
配列番号７：アラキス・ヒポゲア（Ａｒａｃｈｉｓ  ｈｙｐｏｇａｅａ）オレオシン１（ＡＡＺ２０２７６．１）
配列番号８：アラキス・ヒポゲア（Ａｒａｃｈｉｓ  ｈｙｐｏｇａｅａ）オレオシン２（ＡＡＵ２１５００．１）
配列番号９：アラキス・ヒポゲア（Ａｒａｃｈｉｓ  ｈｙｐｏｇａｅａ）オレオシン３（ＡＡＵ２１５０１．１）
配列番号１０：アラキス・ヒポゲア（Ａｒａｃｈｉｓ  ｈｙｐｏｇａｅａ）オレオシン５（ＡＢＣ９６７６３．１）
配列番号１１：リシナス・コムニス（Ｒｉｃｉｎｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ）オレオシン１（ＥＥＦ４０９４８．１）
配列番号１２：リシナス・コムニス（Ｒｉｃｉｎｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ）オレオシン２（ＥＥＦ５１６１６．１）
配列番号１３：グリシン・マックス（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ）オレオシンアイソフォームａ（Ｐ２９５３０．２）
配列番号１４：グリシン・マックス（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ）オレオシンアイソフォームｂ（Ｐ２９５３１．１）
配列番号１５：リナム・ウシタティシマム（Ｌｉｎｕｍ  ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ）オレオシン低分子量アイソフォーム（ＡＢＢ０１６２２．１）
配列番号１６：リナム・ウシタティシマム（Ｌｉｎｕｍ  ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ）オレオシン高分子量アイソフォーム（ＡＢＢ０１６２４．１）
配列番号１７：ヘリアンサス・アンヌス（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ａｎｎｕｕｓ）オレオシン（ＣＡＡ４４２２４．１）
配列番号１８：ゼア・マイス（Ｚｅａ  ｍａｙｓ）オレオシン（ＮＰ＿００１１０５３３８．１）
配列番号１９：ブラシカ・ナプス（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ）ステロレオシン（ＡＢＭ３０１７８．１）
配列番号２０：ブラシカ・ナプス（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ）ステロレオシンＳＬＯ１−１（ＡＣＧ６９５２２．１）
配列番号２１：ブラシカ・ナプス（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ）ステロレオシンＳＬＯ２−１（ＡＣＧ６９５２５．１）
配列番号２２：セサマム・インディカム（Ｓｅｓａｍｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍ）ステロレオシン（ＡＡＬ１３３１５．１）
配列番号２３：ゼア・マイス（Ｚｅａ  ｍａｙｓ）ステロレオシン（ＮＰ＿００１１５２６１４．１）
配列番号２４：ブラシカ・ナプス（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ）カレオシンＣＬＯ−１（ＡＣＧ６９５２９．１）
配列番号２５：ブラシカ・ナプス（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ）カレオシンＣＬＯ−３（ＡＣＧ６９５２７．１）
配列番号２６：セサマム・インディカム（Ｓｅｓａｍｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍ）カレオシン（ＡＡＦ１３７４３．１）
配列番号２７：ゼア・マイス（Ｚｅａ  ｍａｙｓ）カレオシン（ＮＰ＿００１１５１９０６．１）
【発明を実施するための形態】
【００５０】
一般的な技術および定義
特に他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、当業者（例えば、脂質化学、分子遺伝学的、化学、および生化学の分野）によって一般に理解されるものと同じ意味を有すると解釈されるものとする。
【００５１】
他に記載されない限り、本発明で用いられる組換えタンパク質、細胞培養、および免疫学的技術は標準的な手順であり、当業者によく知られている。このような技術は、Ｊ．  Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９８４）、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｕｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９）、Ｔ．Ａ．Ｂｒｏｗｎ（編），Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １  ａｎｄ  ２，  ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９１）、Ｄ．Ｍ．Ｇｌｏｖｅｒ  ａｎｄ  Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ（編），ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−４，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９５  ａｎｄ  １９９６）、ならびにＦ．Ｍ．  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（編），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までの全ての改訂を含む）などの出典において文献全体にわたって記載および説明されている。
【００５２】
「および／または」、例えば「Ｘおよび／またはＹ」という用語は、「ＸおよびＹ」または「ＸまたはＹ」のいずれかを意味すると理解され、両方の意味またはいずれかの意味に対する明確な支持を提供すると解釈されるものとする。
【００５３】
本明細書で使用される場合、約という用語は、反対のことが記載されない限り、指定された値の＋／−２０％、より好ましくは＋／−１０％、さらにより好ましくは＋／−５％を指す。
【００５４】
本明細書全体にわたって、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変化形は、記載される要素、整数もしくはステップ、または要素、整数もしくはステップの群の包含を意味するが、任意の他の要素、整数もしくはステップ、または要素、整数もしくはステップの群の排除を意味しないことが理解されるであろう。
【００５５】
油および脂肪酸
本明細書で使用される場合、「脂肪酸」という用語は、飽和または不飽和のいずれかである少なくとも８個の炭素原子の長さの長い脂肪族尾部を有するカルボン酸を指す。通常、脂肪酸は、少なくとも１２個の炭素の長さの炭素−炭素結合鎖を有する。天然に存在するほとんどの脂肪酸は、その生合成が２つの炭素原子を有するアセテートを必要とするので、偶数の炭素原子を有する。脂肪酸は、遊離状態（非エステル化）、またはＴＡＧ、ＤＡＧ、ＭＡＧ、アシル−ＣｏＡ（チオ−エステル）結合の一部などのエステル化形態、または他の共有結合形態であり得る。エステル化形態で共有結合される場合、脂肪酸は、本明細書では「アシル」基と呼ばれる。飽和脂肪酸は、鎖に沿って二重結合または他の官能基を含有しない。「飽和」という用語は水素を指し、全ての炭素（カルボン酸［−ＣＯＯＨ］基を除いて）が可能な限り多くの水素を含有する。言い換えると、オメガ（ω）末端は３個の水素を含有し（ＣＨ３−）、鎖内の各炭素は２個の水素を含有する（−ＣＨ２−）。不飽和脂肪酸は、鎖に沿って１つまたは複数のアルケン官能基が存在することを除いて、飽和脂肪酸と同様の形態を有し、各アルケンは、鎖の単結合「−ＣＨ２−ＣＨ２−」部分を二重結合「−ＣＨ＝ＣＨ−」部分（すなわち、別の炭素に二重結合された炭素）で置換する。二重結合の両側に結合する鎖内の隣の２つの炭素原子はシスまたはトランス配置で生じ得る。二重結合に加えて、脂肪酸のアシル鎖は、三重結合、メチルもしくはエチル基などのアシル側鎖、ヒドロキシル基、または当該技術分野で知られているその他の修飾を有し得る。本発明の人工オイルボディは、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファ−リノレン酸、またはこれらの２つ以上の組み合わせなど（これらに限定されない）の脂肪酸を含むことができる。
【００５６】
本明細書で使用される場合、「多価不飽和脂肪酸」または「ＰＵＦＡ」という用語は、その炭素鎖内の少なくとも１８個の炭素原子と、少なくとも３つ、より好ましくは少なくとも４つのアルケン基（炭素−炭素二重結合）とを含む脂肪酸を指す。本発明の１つの態様は、４つ以上の二重結合を有する多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）を含む人工オイルボディに関する。このようなＰＵＦＡの例としては、ステアリドン酸（ＳＤＡ、１８：４Δ６，９，１２，１５、ω３）、アラキドン酸（ＡＲＡ、２０：４Δ５，８，１１，１４、ω６）、エイコサテトラエン酸（ＥＴＡ、２０：４Δ８，１１，１４，１７、ω３）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ、２０：５Δ５，８，１１，１４，１７、ω３）、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ、２２：５Δ７，１０，１３，１６，１９、ω３）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、２２：６Δ４，７，１０，１３，１６，１９、ω３）、およびこれらの２つ以上の混合物が挙げられるが、これらに限定されない。人工オイルボディはさらに、例えば、２つ以下の二重結合、三重結合、側鎖（メチル基、ヒドロキシル基および／またはエポキシド基など）を有する上記のものなどの他の脂肪酸を含むことができる。
【００５７】
脂肪酸は、遊離状態（非エステル化）、またはトリグリセリド、ジアシルグリセリド、モノアシルグリセリド、アシル−ＣｏＡ結合の一部などのエステル化形態、または他の結合形態、あるいはこれらの２つ以上の混合物であり得る。脂肪酸は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトールまたはジホスファチジルグリセロール形態などのリン脂質としてエステル化されていてもよい。
【００５８】
「グリセリド」という用語は、本明細書で使用される場合、トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド、ホスホグリセリドおよびこれらの組み合わせからなる群から選択される脂質を包含する。より好ましくは、グリセリドは、トリグリセリドおよびジグリセリドからなる群から選択される。最も好ましくは、グリセリドはトリグリセリド油である。
【００５９】
「トリアシルグリセロール」または（ＴＡＧ）は、グリセロールが３つの脂肪酸でエステル化されたグリセリドである。ＴＡＧ合成のＫｅｎｎｅｄｙ経路では、前駆体ｓｎ−グリセロール−３−リン酸は、ｓｎ−１の位置でグリセロール−３−リン酸アシルトランスフェラーゼにより触媒される反応において、脂肪酸補酵素Ａエステルによってエステル化されてリゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）を形成し、これは次に、ｓｎ−２の位置でアシルグリセロリン酸アシルトランスフェラーゼによってアシル化されてホスファチジン酸を形成する。リン酸基は酵素ホスファチジン酸ホスホヒドロラーゼによって除去され、得られる１，２―ジアシル−ｓｎ−グリセロールはアシル化されてトリアシル−ｓｎ−グリセロールを形成する。
【００６０】
一実施形態では、油のグリセリド（好ましくは、ＴＡＧ）含量は、脂肪酸の本質的に全て（例えば、少なくとも７５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％）を構成する。
【００６１】
脂肪酸を含む油は、微生物（酵母を含む）、甲殻類（ｃｒｕｓｔｅｃｅａｎ）、魚類、動物および植物を含む様々な種類の供給源から入手することができる。生物は遺伝子改変されていても、そうでなくてもよい。
【００６２】
実施形態では、種子油は人工オイルボディ中に存在する。本明細書で使用される場合、「種子油」という用語は、少なくとも６０％（ｗ／ｗ）の脂質を含む植物の種子／穀物から得られた組成物、あるいは種子油が種子／穀物中にまだ存在している場合には、種子／穀物から得ることが可能な組成物を指す。すなわち、種子油は、種子／穀物中に存在する種子油またはその一部と、種子／穀物から抽出された種子油とを含む。種子油は、好ましくは、抽出された種子油である。種子油は、通常、室温で液体である。好ましくは、種子油中の全脂肪酸（ＴＦＡ）含量は、大部分（５０％超）は、少なくとも１６個の炭素の長さである脂肪酸を含む。より好ましくは、種子油中の全脂肪酸の少なくとも５０％はＣ１８脂肪酸、例えばオレイン酸である。脂肪酸は、通常、例えば、ＴＡＧ、ＤＡＧ、アシル−ＣｏＡまたはリン脂質などのエステル化形態である。脂肪酸は、遊離脂肪酸および／またはエステル化形態であり得る。実施形態では、人工オイルボディ中の種子油は、１つまたは複数の他の脂質（リン脂質を除く）、核酸、ポリペプチド（オレオシンを除く）、または種子もしくは粗抽出物中で関連される他の汚染分子から分離された「実質的に精製された」または「精製された」油である。実質的に精製された種子油は、少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７５％、そしてより好ましくは少なくとも９０％が、種子または抽出物中で関連される他の成分を含まないことが好ましい。種子油はさらに、ステロールおよびフェノール類など（これらに限定されない）の非脂肪酸分子を含み得る。実施形態では、種子油は、キャノーラ油（ブラシカ・ナプス（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ）、ブラシカ・ラパ（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｒａｐａ）亜種）、カラシ油（ブラシカ・ユンセア（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｊｕｎｃｅａ））、他のブラシカ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）油（例えば、ブラシカ・ナポブラシカ（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｏｂｒａｓｓｉｃａ）、ブラシカ・カメリナ（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｃａｍｅｌｉｎａ））、ヒマワリ油（ヘリアンサス・アンヌス（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ａｎｎｕｓ））、アマニ油（リナム・ウシタティシマム（Ｌｉｎｕｍ  ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ））、大豆油（グリシン・マックス（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ））、ベニバナ油（カルタムス・チンクトリウス（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ  ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ））、コーン油（ゼア・マイス（Ｚｅａ  ｍａｙｓ））、タバコ油（ニコチアナ・タバカム（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ｔａｂａｃｕｍ））、ピーナッツ油（アラキス・ヒポゲア（Ａｒａｃｈｉｓ  ｈｙｐｏｇａｅａ））、ヤシ油（エラエイス・ギネエンシス（Ｅｌａｅｉｓ  ｇｕｉｎｅｅｎｓｉｓ））、綿実油（ゴシッピウム・ヒルスツム（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ  ｈｉｒｓｕｔｕｍ））、ココナッツ油（ココス・ヌシフェラ（Ｃｏｃｏｓ  ｎｕｃｉｆｅｒａ））、アボカド油（ペルセア・アメリカナ（Ｐｅｒｓｅａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ））、オリーブ油（オレア・ユーロパエア（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａｅａ））、カシュー油（アナカルディウム・オクシデンタレ（Ａｎａｃａｒｄｉｕｍ  ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｅ））、マカダミア油（マカダミア・インテルグリフォリア（Ｍａｃａｄａｍｉａ  ｉ���ｔｅｒｇｒｉｆｏｌｉａ））、アーモンド油（プルヌス・アミグダルス（Ｐｒｕｎｕｓ  ａｍｙｇｄａｌｕｓ））、オート麦種子油（アベナ・サティバ（Ａｖｅｎａ  ｓａｔｉｖａ））、米油（オリザ・サティバ（Ｏｒｙｚａ  ｓａｔｉｖａ）またはオリザ・グラベリマ（Ｏｒｙｚａ  ｇｌａｂｅｒｒｉｍａ））、またはアラビドプシス（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）種子油（アラビドプシス・タリアナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ））である。種子油は、当該技術分野で知られている任意の方法によって、種子／穀物から抽出することができる。これは、一般的に種子の最初の破砕に関連してジエチルエーテル、石油エーテル、クロロホルム／メタノールまたはブタノール混合物などの非極性溶媒による抽出を通常必要とする。穀物中のデンプンに関連する脂質は、水−飽和ブタノールにより抽出され得る。種子油は、多糖類を除去するために当該技術分野で知られている方法によって「脱ガム化（ｄｅ−ｇｕｍｍｅｄ）」されてもよいし、あるいは、汚染物質を除去するか、または純度、安定性、もしくは色を改善するために他の方法で処理されてもよい。遊離脂肪酸を放出するために種子油中のＴＡＧおよび他のエステルは加水分解されてもよいし、あるいは当該技術分野において知られているように、種子油は水素化、化学的に処理または酵素的に処理されてもよい。
【００６３】
本明細書で使用される場合、「海産油」は、海水中に生息する生物、特に海洋微細藻類、魚類または甲殻類から得られる油である。従って、本発明で使用するための油は、海産油および海水魚に由来する魚油油の両方であり得る。
【００６４】
４つ以上の二重結合を有する多価不飽和脂肪酸を含む油は、海洋微生物、甲殻類、魚類、または４つ以上の二重結合を有する多価不飽和脂肪酸を生物が合成できるようにする外因性ポリヌクレオチドを含む遺伝子導入生物（例えば、遺伝子導入植物または酵母など）から抽出される油などの任意の供給源から入手され得る。ＰＵＦＡが入手され得る海洋微生物の例としては、アンフィジニウム（Ａｍｐｈｉｄｉｎｉｕｍ）種、アンフォル（Ａｍｐｈｏｒ）種、アステリオネラ（Ａｓｔｅｒｉｏｎｅｌｌａ）種、ビダルフィア（Ｂｉｄｄｕｌｐｈｉａ）種、セラチウム（Ｃｅｒａｔｉｕｍ）種、キートセロス（Ｃｈａｅｔｏｃｅｒｏｓ）種、クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ）種、クロオモナス（Ｃｈｒｏｏｍｏｎａｓ）種、コクロジニウム（Ｃｏｃｈｌｏｄｉｎｉｕｍ）種、クリスファエラ（Ｃｒｉｓｐｈａｅｒａ）種、クリプテコジニウム（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ）種、クリプトモナス（Ｃｒｙｐｔｏｍｏｎａｓ）種、シクロテラ（Ｃｙｃｌｏｔｅｌｌａ）種、シリンドロテカ（Ｃｙｌｉｎｄｒｏｔｈｅｃａ）種、デゥニエラ（Ｄｕｎｉｅｌｌａ）種、エミリアニア（Ｅｍｉｌｉａｎｉａ）種、フラギラリア（Ｆｒａｇｉｌａｒｉａ）種、グレノジニウム（Ｇｌｅｎｏｄｉｎｉｕｍ）種、ゴニオラックス（Ｇｏｎｙａｕｌａｘ）種、ギロジニウム（Ｇｙｒｏｄｉｎｉｕｍ）種、ヘマトコッカス・プルビアリス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｌｕｖｉａｌｉｓ）種、ヘテロマスティクス（Ｈｅｔｅｒｏｍａｓｔｉｘ）種、イソクリシス（Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ）種、ラウデリア（Ｌａｕｄｅｒｉａ）種、モノクリシス（Ｍｏｎｏｃｈｒｙｓｉｓ）種、モノダス（Ｍｏｎｏｄｕｓ）種、モリテラ（Ｍｏｒｉｔｅｌｌａ）種、モルチエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）、ナノクロリス（Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｉｓ）種、ナノクロロピス（Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｉｓ）種、ナビキュラ（Ｎａｖｉｃｕｌａ）種、ニッチア（Ｎｉｔｚｓｃｈｉａ）種、オドンテラ（Ｏｄｏｎｔｅｌｌａ）種、オリストディスカス（Ｏｌｉｓｔｈｏｄｉｓｃｕｓ）種、パブロバ（Ｐａｖｌｏｖａ）種、ペリジニウム（Ｐｅｒｉｄｉｎｉｕｍ）種、フェオダクチラム（Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ）種、ポルフィリディウム（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ）種、プロロセントラム（Ｐｒｏｒｏｃｅｎｔｒｕｍ）種、シュードペディネラ（Ｐｓｅｕｄｏｐｅｄｉｎｅｌｌａ）種、ロデラ（Ｒｈｏｄｅｌｌａ）種、ロドドマス（Ｒｈｏｄｏｄｏｍａｓ）種、シゾキトリウム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）種、スケレントネマ（Ｓｋｅｌｅｎｔｏｎｅｍａ）種、スタウロネイス（Ｓｔａｕｒｏｎｅｉｓ）種、テトラセルミス（Ｔｅｔｒａｓｅｌｍｉｓ）種、タラシオシラ（Ｔｈａｌａｓｓｉｏｓｉｒａ）種、スラウトキトリウム（Ｔｈｒａｕｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）種、またはウルケニア（Ｕｌｋｅｎｉａ）種が挙げられるが、これらに限定されない。本発明のために有用な魚油の例としては、マグロ油、カツオ油、シーバス油、オヒョウ油、フウライカジキ油、バラクーダ油、タラ油、メンヘーデン油、サーディン油、ピルチャード油、アンチョビ油、カラフトシシャモ油、タイセイヨウダラ油、タイセイヨウニシン油、タイセイヨウサバ油、タイセ���ヨウメンヘーデン油、サケ類油、サメ油、イカ油、タコ油、オキアミ油、アザラシ（ｓｅａｌ）油、クジラ油など（これらの混合物および組み合わせを含む）が挙げられるが、これらに限定されない。４つ以上の二重結合を有する多価不飽和脂肪酸を産生する遺伝子導入生物の例は、例えば、国際公開第２００５／１０３２５３号パンフレット、国際公開第２００７／１０６９０５号パンフレット、国際公開第２０１０／０２３２０２号パンフレット、国際公開第２０１０／０５７２４６号パンフレット、および国際公開第２０１２／００００２６号パンフレットに記載される。
【００６５】
上記のように、当該技術分野において日常的に実施される技術を使用して、細胞、植物、種子などによって産生される油を抽出および加工することができる。例えば、油の抽出は、脱ガム（または酸処理）、中和（またはアルカリ処理）、水洗、漂白、ろ過、脱臭、研磨および／または冷却（または脱ろう）を含み得る。好ましくは、精製は、酸処理および／またはアルカリ処理（脱ガムおよび中和）を含む。あるいは、精製方法は、漂白および／または脱臭を含み得る。しかしながら、好ましくは、精製は漂白および／または脱臭を必要とし、最適には、さらに酸およびアルカリ処理を含むであろう。
【００６６】
オレオシン
オレオシンは、種子の貯蔵組織のオイルボディの膜中に存在する疎水性タンパク質である（例えば、Ｈｕａｎｇ，１９９６、Ｌｉｎら，２００５、Ｃａｐｕａｎｏら，２００７、Ｌｕｉら，２００９、ＳｈｉｍａｄａおよびＨａｒａ−Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，２０１０を参照）。オレオシンは低ＭＷ（１５〜２６，０００）を有し、油糧種子に豊富に含まれる。各種子種の中には、通常、異なるＭＷを有する２つ以上のオレオシンが存在する。各オレオシン分子は、比較的親水性のＮ末端ドメイン（例えば、約４８のアミノ酸残基）と、脂肪族アミノ酸（例えば、アラニン、グリシン、ロイシン、イソロイシンおよびバリンなど）が特に豊富な中央の全体として疎水性のドメイン（例えば、約７０〜８０のアミノ酸残基）と、Ｃ末端またはその近くの両親媒性α−らせんドメイン（例えば、約３３のアミノ酸残基）とを含有する。一般に、中央の一続きの疎水性残基が脂質コアに挿入され、両親媒性Ｎ末端および／または両親媒性Ｃ末端はオイルボディの表面に位置し、正に帯電した残基は界面活性単層に埋め込まれ、負に帯電した残基は外側に露出される。
【００６７】
本明細書で使用される場合、「オレオシン」という用語は、カルシウムに結合しているカレオシン、ステロールに結合しているステロレオシン、およびポリオレオシンを包含する（Ｓｃｏｔｔら，２０１０）。しかしながら、一般に、本発明の人工オイルボディのオレオシンの大部分（全部でなくても）は、カレオシンおよび／またはステロレオシンではないであろう。さらに、「オレオシン」という用語は、本明細書で使用される場合、同じオレオシンタンパク質の均一な集団、またはより一般的には、異なるオレオシンタンパク質の不均一な集団のいずれかを指す。
【００６８】
相当な数のオレオシンタンパク質配列、およびそれをコードするヌクレオチド配列が多数の異なる植物種から知られている。例としては、アラビドプシス（Ａｒａｂｉｄｐｏｓｉｓ）、キャノーラ、コーン、米、ピーナッツ、トウゴマ（ｃａｓｔｏｒ）、大豆、亜麻、ブドウ、キャベツ、綿、ヒマワリ、ソルガムおよび大麦からのオレオシンが挙げられるが、これらに限定されない。これらのオレオシンいくつかの例は配列表において提供される。従って、一実施形態では、オレオシンは、
ａ）配列番号１〜２７のいずれか１つにおいて提供されるアミノ酸配列と、
ｂ）配列番号１〜２７のいずれか１つまたは複数に対して少なくとも５０％同一である、より好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９６％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列と、
ｃ）ａ）またはｂ）の生物学的に活性な断片と
から選択される配列を含む。
【００６９】
さらなる実施形態では、オレオシンは、
ａ）配列番号１〜１８のいずれか１つにおいて提供されるアミノ酸配列と、
ｂ）配列番号１〜１８のいずれか１つまたは複数に対して少なくとも５０％同一である、より好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９６％、より好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列と、
ｃ）ａ）またはｂ）の生物学的に活性な断片と
から選択される配列を含む。
【００７０】
タンパク質の同一性％は、ギャップクリエーションペナルティー＝５、およびギャップエクステンションペナルティー＝０．３を用いて、ＧＡＰ（ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ，１９７０）分析（ＧＣＧプログラム）によって決定される。クエリー配列は少なくとも５０のアミノ酸の長さであり、ＧＡＰ分析は、少なくとも５０のアミノ酸の領域にわたって２つの配列をアラインさせる。より好ましくは、クエリー配列は少なくとも１００のアミノ酸の長さであり、ＧＡＰ分析は、少なくとも１００のアミノ酸の領域にわたって２つの配列をアラインさせる。さらにより好ましくは、クエリー配列は少なくとも２５０のアミノ酸の長さであり、ＧＡＰ分析は、少なくとも２５０のアミノ酸の領域にわたって２つの配列をアラインさせる。さらにより好ましくは、ＧＡＰ分析は、その全長にわたって２つの配列をアラインさせる。
【００７１】
本明細書で使用される場合、「生物学的に活性な」断片は、本発明の人工オイルボディを調製するために使用することができるオレオシンの一部である。生物学的に活性な断片は、規定の活性を保持する限りは任意のサイズであり得る。
【００７２】
好ましい実施形態では、オレオシンは、キャノーラ（ブラシカ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）種）、大豆（グリシン・マックス（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ））、ヒマワリ（ヘリアンサス・アンヌス（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ａｎｎｕｕｓ））、アブラヤシ（エラエイス・ギネイス（Ｅｌａｅｉｓ  ｇｕｉｎｅｅｉｓ））、綿実（ゴシッピウム（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ）種）、ラッカセイ（アラキス・ヒポゲア（Ａｒａｃｈｉｓ  ｈｙｐｏｇａｅａ））、ココナッツ（コクス・ヌシフェラ（Ｃｏｃｕｓ  ｎｕｃｉｆｅｒａ））、トウゴマ（リシナス・コムニス（Ｒｉｃｉｎｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ））、ベニバナ（カルタムス・チンクトリウス（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ  ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ））、カラシ（ブラシカ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）種およびシナピス・アルバ（Ｓｉｎａｐｉｓ  ａｌｂａ））、コリアンダー（コリアンドラム・サティバム（Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ））、カボチャ（ククルビタ・マキシマ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ  ｍａｘｉｍａ））、アマニ／亜麻（リナム・ウシタティシマム（Ｌｉｎｕｍ  ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ））、ブラジルナッツ（ベルトレティア・エクセルサ（Ｂｅｒｔｈｏｌｌｅｔｉａ  ｅｘｃｅｌｓａ））、ホホバ（シモンドシア・キネンシス（Ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ））またはトウモロコシ（ゼア・マイス（Ｚｅａ  ｍａｙｓ））など（これらに限定されない）の油糧種子から入手される。
【００７３】
オレオシンは、天然、合成または組換えの供給源から入手され得る。有利には、オレオシンは、植物抽出物、特に油の抽出後の油糧種子のミールなどの天然源から入手することができる。図１は、キャノーラミールなどの植物ミールからオレオシンを抽出するために使用される手順の一例を示す。キャノーラミールタンパク質の約５０％は、ｐＨ６．０〜７．０で沈殿すると報告されている（Ｍａｎａｍｐｅｒｉら，２０１０）。キャノーラミールは、通常、主に種子の細胞タンパク質に由来する４０％までのタンパク質を含有する。機械的な圧搾の後に溶媒抽出を行う商業的な油抽出プロセスによってキャノーラオイルボディ構造が破壊され、それにより、比較的より豊富な細胞タンパク質の混合物にオレオシンが放出される。キャノーラオレオシンの等電点は６．５なので、６．０〜７．０のｐＨ範囲で沈殿したタンパク質は、細胞タンパク質に加えてオレオシンを含有する。
【００７４】
オレオシンは、オレオシン産生のレベルの増強をもたらすオレオシンをコードする外因性遺伝子を有する植物か、または外因性遺伝子を含むが天然にはオレオシンを産生しない組換え生物（例えば、組換え酵母）のいずれかの組換え源から入手することもできる。オレオシンを産生する、および／またはオレオシンのレベルが増強された組換え生物の製造は十分に当業者の能力の範囲内である（例えば、Ｒｏｕｘら，２００４、Ａｂｅｎｅｓら，１９９７、Ｂｈａｔｌａら，２０１０を参照）。
【００７５】
天然に存在するオレオシンのアミノ酸配列の突然変異体は、オレオシンをコードする核酸に適切なヌクレオチド変化を導入することによって、あるいは所望のタンパク質のインビトロ合成によって調製することができる。このような突然変異体には、例えば、アミノ酸配列内の残基の欠失、挿入または置換が含まれる。最終構築物に到達するために欠失、挿入および置換の組み合わせを行うことができるが、ただし、最終タンパク質産物は所望の特性を有するものとする。天然に存在するオレオシンの機能性突然変異体の製造および同定も十分に当業者の能力の範囲内である。
【００７６】
また本発明の範囲内には、例えば、ビオチン化、ベンジル化、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解性の切断、抗体分子または他の細胞リガンドへの結合などによって、合成中または合成後に差次的に修飾されたタンパク質も含まれる。
【００７７】
オレソイン（ｏｌｅｓｏｉｎ）は、当該技術分野において既知の技術を用いて、あるいは本発明の方法を用いて調製することができる。一実施形態では、オレソイン（ｏｌｅｓｏｉｎ）は、
１）抽出物のｐＨを少なくとも約１１．５のｐＨに調整するステップと、
２）１）を分離して固相および液相を生じさせ、液相を選択するステップと、
３）液相のｐＨを低下させ、タンパク質を沈殿させるステップと、
４）３）を分離して固相および液相を生じさせ、固相を選択するステップと、
５）固相をキャリア中に分散させるステップと、
によって、粗抽出物として調製される。
【００７８】
代替の実施形態では、ろ過方法を用いて、オレオシンを植物材料から少なくとも部分的に精製する。
【００７９】
界面活性剤
本発明の人工オイルボディは１つまたは複数の界面活性剤を含む。
【００８０】
界面活性剤は、非イオン性もしくはアニオン性界面活性剤またはこれらの２つ以上の組み合わせであり得る。より詳細には、界面活性剤は、アニオン性、カチオン性、両性イオン性またはこれらの２つ以上の組み合わせであり得る。例えば、界面活性剤は、リン脂質、モノグリセリド、ペルフルオロオクタノアート（ＰＦＯＡまたはＰＦＯ）、ペルフルオロオクタンスルホナート（ＰＦＯＳ）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ラウリル硫酸ナトリウム、および他のアルキル硫酸塩、ラウレス硫酸ナトリウム（ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）としても知られている）、アルキルベンゼンスルホン酸塩、セッケン、または脂肪酸塩、臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、および他のアルキルトリメチルアンモニウム塩、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、ポリエトキシル化タローアミン（ＰＯＥＡ）、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）、塩化ベンゼトニウム（ＢＺＴ）、ドデシルベタイン、コカミドプロピルベタイン、ココアンフォグリシナート（Ｃｏｃｏ  ａｍｐｈｏ  ｇｌｙｃｉｎａｔｅ）、アルキルポリ（エチレンオキシド）、アルキルフェノールポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレンオキシド）およびポリ（プロピレンオキシド）のコポリマー（商業的にポロキサマーまたはポロキサミンと呼ばれる）、アルキルポリグルコシド（オクチルグルコシドを含む）、デシルマルトシド、脂肪アルコール、セチルアルコール（ＣＡ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、オレイルアルコール、コカミドＭＥＡ、コカミドＤＥＡ、ポリソルバート、例えば、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｅｎ４０、Ｔｗｅｅｎ８０など、ならびにドデシルジメチルアミンオキシドからなる群から選択され得るが、これらに限定されない。
【００８１】
一実施形態では、界面活性剤はリン脂質である。しかしながら、脂肪酸が少なくとも４つの二重結合を有する多価不飽和脂肪酸でない場合、好ましい実施形態は、人工オイルボディがリン脂質を含まないか、あるいはリン脂質が少なくとも１つの他の界面活性剤と共に存在するものである（例えば、少なくとも１つの他の界面活性剤は、人工オイルボディ中の全界面活性剤の少なくとも５％、または少なくとも２５％、または少なくとも５０％、または少なくとも７５％、または少なくとも９０％を構成する）。
【００８２】
リン脂質は脂質の種類であり、これらは脂質二重層を形成することができるので、全ての細胞膜の主要成分である。ほとんどのリン脂質は、ジグリセリドと、リン酸基と、コリンなどの単純な有機分子とを含有する。この規則の１つの例外はスフィンゴミエリンであり、これは、グリセロールの代わりにスフィンゴシンから誘導される。
【００８３】
本発明のために有用なリン脂質の例としては、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、レシチン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトールおよびこれらの２つ以上の混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８４】
本発明のオイルボディの製造のためのリン脂質は、種々の供給源、例えば種子、より一般的には油糧種子に由来し得る。これらには、レシチンおよびリゾレシチンが含まれる。レシチンは、例えば、大豆（大豆レシチン）またはヒマワリ（ヒマワリレシチン）から入手され得る。さらに、脂肪酸組成が修飾されたリン脂質を使用することができる。このようなリン脂質は、例えば、酵素修飾大豆リン脂質であり得る。酵素修飾リン脂質は、例えば、ホスホリパーゼＡ２（Ｎｏｖｏ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，Ｂａｇｓｖａｅｒｄ，Ｄｅｎｍａｒｋ）による処理によって大豆リン脂質（ＳＬＰ、Ｔｒｕｅ  Ｌｅｃｉｔｈｉｎ，Ｍｉｅ，Ｊａｐａｎ）から調製され得る。さらに、脂肪酸組成が修飾されたリン脂質は、脂肪酸組成が修飾されたリン脂質を産生するように遺伝子改変された植物または植物種子から入手することができる。脂肪酸組成が修飾されたリン脂質の一例は、脂肪酸組成が修飾されたレシチンである。当該技術分野においてよく知られているその他の方法も、リン脂質の脂肪酸組成を修飾するために使用され得る。
【００８５】
オイルボディの脂質コアを包囲する界面活性層は通常単層である。
【００８６】
人工オイルボディの形成を可能にする任意の濃度の界面活性剤を用いることができる。
【００８７】
人工オイルボディ
本明細書で使用される場合、「人工オイルボディ」という用語は、界面活性層により包囲された油を、界面活性層に埋め込まれたオレオシンと共に含む、通常約０．１〜約１００μｍの間のサイズの構造を指す。本発明のオイルボディが天然に存在するという証拠はないので、これらは人工と呼ばれる。それでもなお、本発明の「人工オイルボディ」は、「オイルボディ」とも呼ぶこともできる。
【００８８】
通常、本発明の人工オイルボディは、約９０％〜約９８．５％のグリセリドと、約０．２％〜約５％の界面活性剤と、約０．５％〜約５％のタンパク質とを含む。例えば、本発明の典型的な人工オイルボディは、約９７．５／１．０／１．５の油／界面活性剤／オレオシン比を含む。本明細書で示されるように、オレオシンの濃度を低下させると、オイルボディのサイズの増大が得られる。
【００８９】
実施形態では、脂肪酸の少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも３０％は４つ以上の二重結合を有する多価不飽和脂肪酸である。例えば、Ｎｕｍｅｇａにより製造されるＨｉ−ＤＨＡマグロ油は、約３７％のＰＵＦＡを有するが、Ｍａｒｔｅｋにより製造される藻類油ＤＨＡＳＣＯは、約６１％のＰＵＦＡを有する。
【００９０】
別の実施形態では、脂肪酸の少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも２０％はＤＨＡである。例えば、Ｎｕｍｅｇａにより製造されるＨｉ−ＤＮＡマグロ油は約２６％のＤＨＡを有するが、Ｍａｒｔｅｋにより製造される藻類油ＤＨＡＳＣＯは約４０％のＤＨＡを有する。
【００９１】
オイルボディは、８００ｒｐｍで３０分間操作される自動撹拌機を用いて油、界面活性剤およびオレオシンを水（例えば）と混合することでプレエマルションを調製することによって得ることができる。有利には、オレオシンは、本発明の方法を用いて得られる植物からのタンパク質抽出物として提供され得る。実施形態では、オレオシンは、本発明の方法において使用する前、例えば凍結乾燥によって製造される粉末として貯蔵される。
【００９２】
本発明の人工オイルボディは酸化安定性である。例えば、オイルボディが４０℃で１５日間貯蔵される場合、人工オイルボディ中の脂肪酸（ＥＰＡおよびＤＨＡの全濃度など）の４０％未満、より好ましくは３０％未満、より好ましくは２０％未満、さらにより好ましくは１５％未満が消耗される。別の例では、４０℃で１５日間の貯蔵の後、オイルボディは、６μｇ／ｍｌ未満、より好ましくは５μｇ／ｍｌ未満、さらにより好ましくは４μｇ／ｍｌ未満のトランス，トランス―２，４−ヘプタジエナールを含む。さらに別の例では、４０℃で５日後に、９０ｍｅｑ／ｋｇ油未満、より好ましくは５０ｍｅｑ／ｋｇ油未満、より好ましくは２５ｍｅｑ／ｋｇ油未満のヒドロペルオキシドが生成される。
【００９３】
人工オイルボディを含む製品およびその使用
オイルボディは、様々な種類の製品において使用することができる。このような製品の例としては、食品もしくは飼料製品、飲料製品、パーソナルケア製品、医薬品または工業製品を挙げることができるが、これらに限定されない。これらの製品の製造方法は当該技術分野においてよく知られている。
【００９４】
好ましい一実施形態では、主題の発明は、動物および／またはヒトにより摂取され得る製品に関する。これらの組成物は摂取され得るので、これらは食品グレード品質でなければならない。しかしながら、オイルボディが適用される特定の製品および特定の形態はあまり重要ではなく、必要に応じてでよい。食品、飼料または飲料製品の例としては、乳成分を含まない代用品、乳成分を含まないチーズ、乳成分を含まないヨーグルト、マーガリン、マヨネーズ、ビネグレット、アイシング、クリーム、スープ、アイスクリーム（例えば、安定剤として）、サラダドレッシング、マスタード、キャンディ、ベシャメルソース、チューインガム、プディング、焼き製品、香辛料、ジュース（例えば、天然の混濁剤（ｃｌｏｕｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）として）、粉ミルク、フレーバーキャリア、テクスチャリング剤、魚餌、ペットフードおよび家畜飼料が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９５】
パーソナルケア製品の例としては、セッケン、化粧品、スキンクリーム、フェイシャルクリーム、歯磨き粉、口紅、香水、メイクアップ、ファンデーション、ブラッシャー、マスカラ、アイシャドウ、日焼け止めローションおよびヘアケア製品が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９６】
医薬品の例としては、治療薬、診断薬および送達剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９７】
治療薬または診断薬は、宿主に送達することが望まれる分子であり得る。一実施形態では、活性成分は、治療的または診断的価値があるタンパク質またはペプチドであり得る。このようなペプチドには、抗原（ワクチン製剤用）、抗体または抗体関連分子、サイトカイン、血液凝固因子および成長ホルモンが含まれる。
【００９８】
工業製品の例としては、ペンキ、コーティング、潤滑剤、フィルム、ゲル、掘削流体、ペーパーサイジング（ｐａｐｅｒ  ｓｉｚｉｎｇ）、ラテックス、建築または道路建設材料、インク、染料、ワックス、光沢剤および農薬製剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９９】
本発明の人工オイルボディは、本発明のオイルボディ中の脂肪酸のよく知られている恩恵により疾患を治療または予防するために使用することができる。従って、さらなる態様では、本発明は、脂肪酸から恩恵を受け得る状態、特に、４つ以上の二重結合を有する多価不飽和脂肪酸から恩恵を受ける状態を治療または予防する方法を提供し、本方法は、上記の状態を有する被験者に、本発明の１つもしくは複数のオイルボディおよび／または本発明の組成物を投与することを含む。このような状態の例としては、心不整脈、血管形成、炎症、喘息、乾癬、骨粗鬆症、腎臓結石、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、クローン病、統合失調症、癌、胎児アルコール症候群、注意欠陥多動性障害、嚢胞性線維症、フェニルケトン尿症、単極性うつ病、攻撃的な敵意、副腎白質ジストロフィー、冠動脈心疾患、高血圧症、糖尿病、肥満、アルツハイマー病、慢性閉塞性肺疾患、潰瘍性大腸炎、血管形成術後の再狭窄、湿疹、高血圧、血小板凝集、胃腸出血、子宮内膜症、月経前症候群、筋痛性脳脊髄炎、ウィルス感染後の慢性疲労または眼疾患が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１００】
実施形態では、オイルボディまたは組成物は経口投与によって提供される。通常、オイルボディは、投与事象当たり少なくとも１０ｍｇの脂肪酸（例えば、オメガ−３ＰＵＦＡなど）を送達するために十分な量で投与される。より好ましくは、投与事象当たり少なくとも３０ｍｇ、さらにより好ましくは少なくとも５０ｍｇ、そして最も好ましくは１００ｍｇの脂肪酸（例えば、オメガ−３ＰＵＦＡなど）が送達される。
【０１０１】
本発明が哺乳類などの動物を治療するために適切に使用され得ることは理解されるであろう。最も好ましくは、本発明はヒトを治療するために使用される。
【０１０２】
好ましい実施形態では、製品は水中油エマルションであるか、あるいは水中油エマルションを含む。本発明のこのようなエマルションは物理的および酸化的に安定性であり、静置させても融合しない。
【０１０３】
オイルボディは、当該技術分野において知られている技術を用いてエマルション内に配合され得る。好ましくは、少なくとも１つの追加的な成分がオイルボディ調製物に添加される。追加的な成分は、溶液、懸濁液、ゲルまたは固体として添加することができ、追加的な成分の量は配合物により異なるであろう。追加的な成分は、配合されるとオイルボディと結合して溶液中に懸濁されたままになるか、あるいはオイルボディが分散された懸濁液を形成し得る。成分はオイルボディを包囲する界面活性層に浸透してもよい。オイルボディに浸透し得る成分には、油、ワックスおよび着色剤Ｎｉｌｅ  Ｒｅｄが含まれる。好ましい実施形態では、追加的な成分は液相である。さらに好ましい実施形態では、液相は水である。
【０１０４】
水は直接添加されてもよいし、あるいは、別の成分と結合された水分によって添加されてもよい。成分の混合の際に安定したエマルションが形成される限り、水の最終的な量は重要ではない。一般に、組成物は、少なくとも１％の水、そして最大９９％の水を含有するであろう。適切なエマルションを提供するためには通常混合が必要とされ、熱または圧力を加えることが必要なこともある。
【０１０５】
別の好ましい実施形態では、追加的な成分は油またはワックスである。油またはワックスはオイルボディ内で区分化され、このようにして脂質可溶性ビタミンなどの脂質可溶性成分はオイルボディに送達され得る。油またはワックスが追加の成分を含む場合、オイルボディは親油性相中に懸濁されたままであるか、あるいはダブルエマルションが形成され得る。
【０１０６】
最終組成物は固体または液体形態でよく、あるいは任意の他の所望の粘度を有していてもよい。エマルションは、セルロースおよび誘導体、Ｃａｒｂｏｐｏｌおよび誘導体、イナゴマメ、カレギーナン（ｃａｒｒｅｇｅｅｎａｎ）および誘導体、キサンタンガム、スクレランガム（ｓｃｌｅｒａｎｅ  ｇｕｍ）、長鎖アルカノールアミド、ならびにベントンおよび誘導体などの、通常２重量％未満の濃度で存在するゲル化剤を用いて粘度を高めることができる。
【０１０７】
エマルションはさらに、選択された材料を湿潤、発泡、浸透、乳化、可溶化および／または分散させるために界面活性剤を含んでいてもよい。例えば、ココナッツモノグリセリドスルホン酸ナトリウムなどのアニオン性界面活性剤、塩化ラウリルトリメチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウムおよび臭化トリメチルアンモニウムなどのカチオン性界面活性剤、プルロニック、およびアルキルフェノールのポリエチレンオキシド縮合物を含む非イオン性界面活性剤、ならびに脂肪族第４級アンモニウム、ホスモミウム（ｐｈｏｓｍｏｍｉｕｍ）およびスルホニウム化合物の誘導体などの両性イオン性界面活性剤は全て必要に応じて添加することができる。
【０１０８】
酒石酸、ＥＤＴＡ、クエン酸、アルカリ金属のクエン酸塩、ピロリン酸塩またはアニオン性高分子ポリカルボキシラートなどの、金属イオンと結合することができるキレート剤も、必要に応じてエマルション配合物中に含まれ得る。
【０１０９】
一般に、エマルション配合物は、細菌、真菌、マイコプラズマ、ウィルスなどによる汚染、または酸化反応などの望ましくない化学反応が防止されるように処理されるであろう。好ましい実施形態では、これは、防腐剤（例えば、メタ重亜硫酸ナトリウムまたは他の化学添加剤）の添加によって、あるいは照射によって、例えば、コバルト−６０もしくはセシウム−１３７照射などのイオン化放射または紫外線照射によって達成される。
【０１１０】
さらに、活性剤が添加されてもよい。例えば、化粧品組成物は、本発明のエマルション配合物を用いて安定な懸濁液として配合することができ、スキンクリーム中にビタミンおよび保湿剤が含まれていてもよい。活性成分が主題の発明のエマルション中に含まれ得る特に有利な方法の一つは、国際公開第９６／２１０２９号パンフレットに詳述されるようなオレオシン遺伝子融合物の構築によるものである。これらの融合タンパク質は、オレオシンをコードする遺伝子と、対象のペプチドまたはタンパク質をコードする遺伝子とを遺伝的に連結することによって作られる。例えば油糧種子植物において、融合遺伝子の発現は融合タンパク質の合成をもたらし、これは次に、本発明の人工オイルボディを生成するために使用される。原則として、所望されるタンパク質またはペプチドはどれもこの技術を用いて生成することができ、例えば、極地魚類不凍ペプチドまたは治療用タンパク質がオレオシン融合物として生成され得る。
【０１１１】
皮膜形成特性を有するエマルションも配合され得る。このようなエマルションは、表面に塗布されて乾燥されると、コーティングを形成する。オイルボディ皮膜の被覆が適用されるエマルションの一例は魚餌であり、オイルボディ（例えば、微細藻類油から生成される）は魚餌に適用されて、食餌の価値を高めることができる。皮膜形成エマルションは、医薬品または揮発性物質（香料など）の送達などの、活性成分の制御放出が望ましい本発明の実施形態において特に有用である。乾燥の間に生じるエマルションの皮膜からの活性剤の放出時間は、いくつかある因子の中でも特に、皮膜の厚さに依存する。より厚いコーティングが塗布されると、より長い乾燥時間により、活性剤の放出がより遅くなるであろう。意図される異なる配合物では、薬剤の放出は、皮膜が乾燥したときにだけ起こる。
【０１１２】
エマルションの組成ならびに活性成分のタイプおよび濃度などのその他の因子も放出の特性を決定する。例えば、エタノールなどの共溶媒は、配合物中に含有されて放出時間に影響を与え得る。活性成分の放出は、エマルション中に封入された風味剤（ｆｌａｖｏｒａｎｔ）が消費の間に放出される食品用途においても望ましい。風味剤の放出は、エマルションの正確な配合に依存して、突然の激しい感覚を引き起こすこともあるし、あるいは風味およびエッセンスのより微妙なブレンドを引き起こすこともある。
【０１１３】
エマルション配合物はスプレーおよびエアロゾルにおいて使用することもできる。これらのスプレーにはアルコールおよび香料などの揮発性物質が含まれ得る。このタイプのエマルションは、ポテトチップスおよび乾燥スープなどの乾燥食品調製物の表面にスプレーされてもよい。エマルションは風味剤を含み、防腐価値を付加してもよいし、あるいは食品の適切な水分レベルの保持を助けてもよい。
【０１１４】
本発明のエマルション配合物の安定性は、酸エマルションの配合において利用され得る。例えば、エマルション配合物は、必要に応じてオイルボディ調製物の他に植物油、マスタード、ビネガーおよび卵黄を含むマヨネーズ様食品の調製において使用され得る。サラダドレッシングなどの注ぐことが可能なエマルションは、ビネガーの相対量を高めることによって、そして／あるいは水を添加することによって調製することができる。
【０１１５】
明白な悪影響なしに加熱され得る用途の一例は、ベシャメルソースなどの塩味スープまたはチョコレートソースなどの甘いソースの調製である。これらの用途では、オイルボディ調製物は、フライ代用品として使用される。ベシャメルソースを調製するために、１部の加熱したオイルボディ調製物に１部（ｗ／ｗ）の小麦粉が添加され、濃厚な懸濁液が形成されるまで攪拌される。所望の粘度を有するソースが得られるまで、中温でミルクが徐々に添加される。
【０１１６】
エマルション配合物はバター代用品としても使用され得る。この用途では、所望の粘度が得られるまで、例えば１０％未満の少量の水がオイルボディ調製物に添加される。必要に応じて天然バター風味および増粘剤が添加されてもよい。バター代用品は、スイートコーンやパンの上、ケーキミックスまたはパン製造において使用され得る。風味に寄与し、そして防腐剤として作用する塩は通常、約２．５％（ｗｔ／ｖｏｌ）のレベルまで添加され得る。着色剤、例えば、アナトー種子の抽出物またはカロテンは、必要に応じて、色を濃くするために使用され得る。この用途の利点は、オイルボディベースのバターが水素化脂肪酸を含まないことであり、水素化脂肪酸は、望ましい粘稠度を達成するためにマーガリンなどの配合において使用されるが、心血管疾患にも関連する。
【０１１７】
ショートニングは、発泡体から注入可能なショートニングまで、種々の程度の堅さに調製され得る。この用途では、エマルション配合物中に空気が混ぜ込まれ、エマルション配合物は、連続相の空気中に分散されると考えることができる。ショートニングは、クリーム状および綿毛状にすることが所望される混合物に適用され得る。これらの混合物には、アイシング、合成クリーム、アイスクリームおよびケーキバターが含まれる。
【０１１８】
模造の果実ジュースは、人工または天然風味料および栄養物から調製され得る。このような模造ジュースは正しい外観を有さず、透明であるために薄いまたは希釈されているように見える。少量、例えば０．１〜１％（ｖ／ｖ）のオイルボディ調製物またはそのエマルションを添加することによって、混濁が生じて、ジュースに濃厚な外観を与え得る。従って、本発明のオイルボディ調製物は混濁剤として使用され得る。ジュースを含む別の用途では、オイルボディ調製物またはそのエマルションは、トマトジュースなどの沈殿可能な固形分を有するジュースに添加され得る。
【０１１９】
少量、例えば０．１〜１％（ｖ／ｖ）のオイルボディ調製物を添加すると、ジュース中の固形分の沈降速度を低減し、濃厚な外観の保持を助けることができる。
【０１２０】
本発明のオイルボディ調製物の局所適用も想定される。この実施形態では、エマルションは皮膚科学的に許容可能なエマルションとして配合され、例えば、顔および／または身体の皮膚（爪および唇を含む）を保湿するために使用されてもよいし、あるいは皮膚の老化、ざ瘡、色素沈着、脱毛と闘う、または除毛を促進する、または創傷治癒および／または皮膚組織の再構築を容易にする特性を有することもできる。オイルボディ調製物は、好ましくは最終組成物の１〜９９重量％に相当する。
【０１２１】
本発明の化粧品組成物は、植物、動物、ミネラルもしくは合成油もしくはワックス、またはこれらの混合物などの追加的な炭化水素化合物を含むことができる。これらは、パラフィン、ペトロラタム、ペルヒドロスクアレン、アララ（ａｒａｒａ）油、アーモンド油、カルフィラム（ｃａｌｐｈｙｌｌｕｍ）油、アボカド油、ゴマ油、ヒマシ油、ホホバ油、オリーブ油、またはシリアル胚芽油を含む。
【０１２２】
ラノール酸（ｌａｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、オレイン酸、ラウリン酸、ステアリン酸、ミリスチン酸のエステルなどのエステルが含有されていてもよい。また、アルコール、例えば、オレオイルアルコール、リノレイルアルコールまたはリノレニルアルコール、イソステアリルアルコールまたはオクチルドデカノール、アルコールまたは多価アルコールを含むことも可能である。
【０１２３】
含有され得るさらなる炭化水素は、オクタノアート、デカノアート、リシノレアート、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリドまたはＣ１０〜Ｃ２２脂肪酸トリグリセリドである。これらの薬剤の添加は、ダブルエマルションの形成をもたらし得る。
【０１２４】
また、水素化ヒマシ油、ヤシ油もしくはココナッツ油、または水素化獣脂などの２５℃で固体である水素化油と、モノ、ジ、トリまたはスクログリセリドと、ラノリンと、２５℃で固体である脂肪酸も、本発明の化粧品配合物中に含まれ得る。含有され得るワックスには、蜜ろうなどの動物ワックスと、カルナバワックス、カンデリラ（ｃａｎｄｅｌｉｌｌａ）ワックス、オーリカリー（ｏｕｒｉｃｕｒｒｙ）ワックス、ジャパンワックスまたはコルク繊維もしくはサトウキビからのワックスなどの植物ワックスと、ミネラルワックス、例えば、パラフィンワックス、亜炭ワックス、微結晶ワックスまたはオゾケライトと、合成ワックスとが含まれる。
【０１２５】
顔料が含有されていてもよく、白色でも着色されていてもよく、無機でも有機でもよく、そして／あるいは真珠光沢性（ｐａｅｒｌｅｓｃｅｎｔ）でもよい。これらの顔料は、二酸化チタン、酸化亜鉛、二酸化ジルコニウム、黒色、黄色、赤色および茶色の酸化鉄、二酸化セリウム、酸化クロム、フェリックブルー（ｆｅｒｒｉｃ  ｂｌｕｅ）、カーボンブラック、バリウム、ストロンチウム、カルシウムおよびアルミニウムレーキ、ならびに酸化チタンまたは酸化ビスマスで被覆されたマイカを含む。
【０１２６】
ビタミン（例えば、ビタミンＡまたはＣ）およびアルファヒドロキシ酸（クエン酸、グリコール酸、乳酸および酒石酸など）などの、スキンクリームにおいて通常使用される活性成分が化粧品および／または皮膚科学的組成物中に含まれていてもよい。例えば、米国特許第５，６０２，１８３号明細書では、ビタミンＣまたはアスコルビン酸は結合組織の成長を促進し、特に皮膚においては、煙および紫外線放射などの外部からの攻撃に対して皮膚を強化することが教示されている。スキンクリームおよび化粧品中に含有され得る保湿剤は、例えば、鉱油および尿素である。天然に存在するトコフェロールおよびポリフェノール、またはブチル化ヒドロキシトルエンおよびヒドロキシアニソールなどの酸化防止剤も添加され得る。メトキシケイ皮酸オクチル（Ｐａｒｓｏｌ  ＭＣＸ）、３−ベンゾフェノン（Ｕｖｉｎｕｌ  Ｍ４０）およびブチルメトキシジベンゾイルメタン（Ｐａｒｓｏｌ  １７８９）などの日焼け止めを用いて、日焼け用ローションを調製することができる。化粧品組成物を配合するために使用され得る薬学的活性成分には、例えば、抗生物質、殺真菌剤および抗炎症剤が含まれる。
【０１２７】
最終的な化粧品は、遊離した、注入された、または圧縮された粉末（ファンデーション、ブラッシャーまたはアイシャドウ）、比較的脂っぽい製品（口紅、マスカラなど）、あるいは身体または顔用の油またはローションの形態であり得る。
【０１２８】
またオイルボディ調製物は、歯磨き粉中で経口的に許容可能なキャリアとしての機能を果たすように使用されてもよく、歯磨き粉は、さらに、シリカ、界面活性剤、キレート剤、フッ化物、増粘剤、甘味料、風味剤（例えば、ペパーミント油）、酵素および殺生物剤をさらに含み得る。
【０１２９】
配合され得る工業製品の一例はペンキであり、この場合、シリコーン系化合物、アクリル化合物、ポリエステル、アルキド（ａｋｙｄ）、フッ素、エポキシ、ポリウレタンに基づく樹脂などの主要な樹脂を、本発明のオイルボディ調製物によって部分的または完全に置き換えることができる。顔料、染料、ガラスフレーク、およびアルミニウムフレーク、顔料分散剤、増粘剤、レベリング剤、硬化触媒、硬化剤（ジオイソシアナート（ｄｉｏｉｓｏｃｙａｎａｔｅ）など）、硬化触媒、ゲル化抑制剤、紫外線吸収剤、フリーラジカルクエンチング剤などのさらなる添加剤は、必要に応じてペンキ組成物中に配合され得る。
【０１３０】
またオイルボディ調製物は、潤滑剤を配合するためのものであってもよい。例えば、オイルボディ調製物は、動物油、植物油、石油潤滑油、合成潤滑油、または潤滑グリース（リチウムグリース、尿素グリースおよびカルシウムグリースなど）などの潤滑油を部分的または完全に置き換えるために使用され得る。潤滑剤配合物において使用されるその他の組成物は、酸化防止剤、洗剤分散剤、油性向上剤（ｏｉｌｎｅｓｓ  ａｇｅｎｔ）、摩擦調整剤、粘度指数改善剤、流動点降下剤、固体潤滑材料、さび止め剤および消泡剤を含む。
【０１３１】
ワックスも本発明のオイルボディ調製物を用いて調製され得る。これらには、自動車に対して安定した疎水性皮膜仕上げを提供するものおよび他の保護コーティングなどのリンスワックス型が含まれる。ワックスの調製において使用されるその他の組成物は、界面活性剤、混合パラフィン系および芳香族系／ナフテン系油などの鉱油、香水、殺生物剤、着色剤を含み、これらは必要に応じて適合性の量で添加され得る。
【実施例】
【０１３２】
実施例１−材料および方法
材料
キャノーラ（ブラシカ・ナプス（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ））種子、油、およびミールは、Ｃａｒｇｉｌｌ  Ａｕｓｔｒａｌｉａにより贈与された。ミールは、機械的な圧搾の後に溶媒抽出を行う通常の工業プロセスによりキャノーラ油を抽出した後の残渣であった。到着したら、種子をふるいにかけてわらおよび他の種子でない材料を除去し、必要とされるまで４℃で貯蔵した。種子は、ＬＥＣＯ（登録商標）ＦＰ−２０００分析により決定されるように、３８．０％の油（Ｃａｒｇｉｌｌ，Ｌｔｄ提供の情報）および２５．２％のタンパク質を含有した。キャノーラ油は、精製、漂白および脱臭グレードを有し、ＴＢＨＱ（２００ｐｐｍ）酸化防止剤が添加されていた。脱ろうマグロ油（ＨＴ３０３−４）は、ＬＹＳＩ  ＨＦ（Ｒｅｙｋｊａｖｉｋ，Ｉｃｅｌａｎｄ）から入手した。
【０１３３】
オイルキャノーラボディの抽出
最終のヘキサン洗浄を省略したことを除いて、Ｔｚｅｎ（１９９３）に記載される方法に従って、天然オイルボディをキャノーラ種子から抽出した。簡単に言うと、種子をリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）中に一晩浸漬し、キッチンブレンダー（Ｓｕｎｂｅａｍ  Ｍｕｌｔｉｂｌｅｎｄｅｒ、６５０Ｗ）を用いて、粉砕媒体（１０ｇ乾燥種子／５０ｍｌ）により４０秒間均質化した。粉砕媒体は、０．６Ｍのスクロースおよび１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）を含有した。３層のチーズクロスを通してホモジネートをろ過した。ろ液を遠心管に入れ、等量の浮遊媒体（０．６Ｍの代わりに０．４Ｍのスクロースを含有する粉砕媒体）を上部に層状にし、スインギングバケットローター（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｊ６−ＨＣ）において、５，０００ｇ、１０℃で６０分間、管を遠心分離した。
【０１３４】
上部で捕集されたオイルボディを、０．１％のＴｗｅｅｎ−２０、０．２Ｍのスクロース、および５ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）を含有する、その２倍体積の洗剤洗浄溶液中に再懸濁させた。再懸濁液を遠心管の底部に入れ、１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）を１：１の比率で上部に層状にし、管を遠心分離した。上部のオイルボディを捕集し、その２倍体積のイオン溶離緩衝液（２ＭのＮａＣｌをさらに含有する粉砕媒体）中に再懸濁させた。懸濁液を遠心管の底部に入れ、浮遊媒体（２ＭのＮａＣｌおよび０．６Ｍの代わりに０．２５Ｍのスクロースを含有する粉砕媒体）を上部に層状にし（１：１比）、管を遠心分離した。上部のオイルボディを捕集し、その体積の９Ｍの尿素中に再懸濁させた。再懸濁液を室温で１０分間激しく振とうさせてから、遠心管の底部に入れ、１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）を上部に層状にし（１：１比）、管を遠心分離した。上部のオイルボディを捕集し、その体積の粉砕媒体中に再懸濁させた。再懸濁液を遠心管の底部に入れ、浮遊媒体を上部に層状にし（比１：１）、管を遠心分離した。上部のオイルボディを捕集し、粉砕媒体により再懸濁させ、約１００ｍｇ／ｍｌの濃度を得た。
【０１３５】
キャノーラオイルボディからのオレオシンの単離
１４％（ｗ／ｗ）の水分含量まで乾燥させた精製キャノーラＯＢからオレオシンを抽出した。オイルボディ調製物を脱イオン水およびエタノール（６０％エタノール）の溶液中に再分散させ、１時間攪拌し、ロータリーエバポレーター（ＢＵＥＣＨＩ  Ｒｏｔａｖａｐｏｒ  Ｒ−１２４）を用いてエタノールを除去した。次に、２０℃のスインギングバケットローター（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｊ６−ＨＣ）において、５，０００ｇで３０分間、エマルションを遠心分離した。水および微量のエタノールを含有する上部層を除去し、タンパク質を１００ｇ／Ｌの濃度で脱イオン水中に再分散させた。この水性タンパク質分散体を必要とされるまで−１８℃で貯蔵した。
【０１３６】
タンパク質の特徴付け
キャノーラオイルボディ（ＣＯＢ）から単離したタンパク質を、電気泳動法によりその分子量に従って特徴付けた。電気泳動法は、ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）ゲル４−１２％ＢＴ１．０ゲル（ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、供給業者の推奨に従って実施した。簡単に言うと、タンパク質サンプルの濃度を１ｍｇ／ｍｌに調整し、２５μｌをエッペンドルフ管に入れた。次に、１０μｌのＮｕＰＡＧＥ（登録商標）ＬＤＳサンプル緩衝液（４Ｘ）および５μｌのＮｕＰＡＧＥ（登録商標）還元剤（１０ｘ）をそれぞれ添加し、管を室温において１４，０００ｒｐｍで３秒間遠心分離した（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ  ５４１５Ｃ）後、７０℃で１０分間加熱した。その濃度を調整しないことを除いて同じ方法でマーカー（Ｍａｒｋ  １２（商標）Ｕｎｓｔａｉｎｅｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ）を調製した。最後に、ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）Ｒｕｎｎｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒおよび酸化防止剤を含有する電気泳動セル（Ｎｏｖｅｘ  Ｍｉｎｉ−Ｃｅｌｌ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）内に配置済みのゲルに、１０μｌ量のマーカーおよびサンプルの両方を添加した。２００ボルトおよび４００ミリアンペアに設定した発生器（ＢＩＯＲＡＤ  Ｐｏｗｅｒ  Ｐａｃ  ３００）にセルを３５分間接続した。
【０１３７】
電気泳動法が完了したら、ゲルを脱イオン水中で３回洗浄し、４２ｒｐｍでゆっくり攪拌しながら２時間、ＳｉｍｐｌｙＢｌｕｅ（商標）ＳａｆｅＳｔａｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と共にプラスチック容器に入れた（ＲＡＴＥＫ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ＭｉｘｅｒモデルＯＭ６）。その後、ゲルを脱イオン水でもう２回洗浄し、タンパク質に結合していない染料を除去するために脱イオン水中に２時間入れ、Ｇ：ＢＯＸ（ＳＹＮＧＥＮＥ）およびＧｅｎｅＳｎａｐ  ７．０７ソフトウェア（ＳＹＮＧＥＮＥ）で撮影した。
【０１３８】
キャノーラミールからのオレオシンの抽出
Ｇｈｏｄｓｖａｌｉら（２００５）の手順の修正版に従って、キャノーラミールからオレオシンを抽出した。簡単に言うと、キャノーラミール（１．０ｋｇ）を脱イオン水（１０．０Ｌ）中に浸漬し、水酸化ナトリウム水（５％、ｗ／ｗ）によりｐＨを１２．０に調整し、Ｕｌｔｒａｔｕｒａｘミキサーを用いて１０分間混合した。１０分間静置した後、内容物をさらに１０分間混合した。得られたスラリーを、スインギングバケットローターにおいて２０℃で３０分間、４，０００ｇで遠心分離した（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｊ６−  ＨＣ）。タンパク質の沈殿が生じたときに、粗タンパク質を含有する上澄みのｐＨをｐＨ６．５（オレオシンの等電点）に調整した。攪拌をさらに３０分間継続した後、４，０００ｇで遠心分離して、上澄みおよび沈殿物を回収した。Ｕｌｔｒａｔｕｒａｘを用いて沈殿物をｐＨ６．５の水で洗浄し、４，０００ｇで３０分間再度遠心分離した。洗浄した沈殿物をペーストとして回収し、必要とされるまで−１８℃において湿潤形態で貯蔵した。
【０１３９】
人工オイルボディの構築
最初の実験では、キャノーラミールから様々に得られたオレオシン抽出物を用いて、キャノーラ油およびマグロ油をそれぞれ含有する人工オイルボディ分散体を、いずれもリン脂質の存在下および非存在下で調製した。最初に、８００ｒｐｍで３０分間操作される自動撹拌器（ＨｅｉｄｏｌｐｈからのＲＺＲ  ２０５１  Ｃｏｎｔｒｏｌ）を用いて、油およびタンパク質を含有する水を混合することによって、プレエマルションを調製した。リン脂質を含有させる場合には、乳化の前に油中に溶解した。使用した成分の重量比は、天然キャノーラＯＢ中の重量比と類似していた。従って、プレエマルションは、０．５〜２μｍの間の粒径を達成するために１．５％のタンパク質、１％のリン脂質（必要であれば）、および１０％の油を含有し、油滴は、タンパク質およびリン脂質により十分に被覆された。プレエマルションを５００バールで３回均質化した（ＲＡＴＥＫ  Ｐｉｌｏｔ  Ｌａｂ  Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ）。
【０１４０】
その後の実験で、界面活性剤と、キャノーラミールから様々に得られたオレオシン抽出物とを用いて、キャノーラ油およびマグロ油をそれぞれ含有する人工オイルボディ分散体を調製した。リン脂質または他の界面活性剤を含有させる場合には、乳化の前に油と混合した。最初に、Ｕｌｔｒａｔｕｒａｘ混合を受けさせながら４０％の水酸化ナトリウム水を液滴で添加することによって、オレオシン抽出物のｐＨを約８．０に調整した。油（１０ｇ）、オレオシン抽出物（１．５ｇ）、界面活性剤（様々）および脱イオン水（８７．５ｇ）をガラスビーカーに入れ、水浴（６０℃）中で温めた後、酸化を最小限にするために窒素で覆って、Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎミキサーを用いて２分間混合した。混合物を窒素下において１０００バールで２回均質化した（ＥｍｕｌｓｉＦｌｅｘ  Ｃ５）。使用した成分の重量比は、天然キャノーラＯＢ中の重量比と類似していた。従って、プレエマルションは、１．５％のタンパク質、１％の界面活性剤（必要であれば）、および１０％の油を含有した。
【０１４１】
キャノーラミールからのオレオシン抽出物は、エマルション調製の前に以下のように「後処理」した。貯蔵した抽出物を解凍させ、ｐＨが８．０に達するまで水酸化ナトリウムを液滴で添加しながら、Ｕｌｔｒａｔｕｒａｘミキサー４０％（ｗ／Ｗ）を用いて混合した。
【０１４２】
Ｔｗｅｅｎ４０乳化剤を用いた対照エマルションの調製
Ｔｗｅｅｎ４０（６％、ｗ／ｗ）を乳化剤として用いて、キャノーラおよびマグロ油により１０％（ｗ／ｗ）のｏ／ｗエマルションを調製した。乳化は上記のように実施した。
【０１４３】
人工オイルボディの物理的な特徴付け
ＡＯＢの物理的安定性を、それぞれ４℃、周囲温度（約２０℃）、４５℃および６０℃において１２日間にわたってそれぞれ研究した。Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｓｍａｌｌ  Ｖｏｌｕｍｅ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ＵｎｉｔをＨｙｄｒｏ  ２０００ｇモジュールと組み合わせて用いて、ＭＡＳＴＥＲＳＩＺＥＲ  ２０００（Ｍａｌｖｅｒｎ）によりエマルションの粒径を測定した（粒子ＲＩ：１，４５６／吸収：０，００１／分散剤ＲＩ：１，３３０水）。Ｃｏｌｏｒ  Ｖｉｅｗ  ＩＩＩｕカメラに連結した光学顕微鏡Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＢＨ−２により光学顕微鏡写真を獲得し、ＡｎａｌｙＳＩＳ  ｇｅｔＩＴ  ５．０ソフトウェアを用いて処理した。ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）で処理することにより粒子の凝集を調べた。これは、室温でマグネチックスターラーを用いて、３体積のエマルションと、１体積のＳＤＳの１０％（ｗ／ｗ）溶液とを１０分間混合した後、再分析することによって実施した。
【０１４４】
オイルボディから調製された水中油エマルションの酸化安定性
ＥＰＡ／ＤＨＡの消耗と、加速酸化条件下で貯蔵中に生じるトランス，トランス−２，４−ヘプタジエナールの量とから、ＡＯＢ分散体の酸化安定性を評価した。後者の目的のために、エマルションのサンプル（２ｇ）をヘッドスペースバイアル（１０ｍｌ）に入れ、シリコーンの内張りをしたアルミニウムキャップで密封し、暗オーブン内で１５日間にわたって４０℃または６０℃で加熱した。サンプルを毎日取り出し、以下のように固相マイクロ抽出およびガスクロマトグラフィ−質量分析によって２，４−ヘプタジエナールについて直ちに分析した。
【０１４５】
ＡＯＢエマルションの加速酸化中に発生する酸化揮発性化合物は、ＤＶＢ／ＣＡＲ／ＰＤＭＳ繊維（５０／３０μｍ、Ｓｕｐｅｌｃｏ，Ｓｙｄｎｅｙ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を用いて、ヘッドスペースの固相マイクロ抽出（ＳＰＭＥ）により決定した。繊維をサンプルヘッドスペースに挿入し、バイアルを６０℃で１５分間インキュベートしてから取り出し、ＧＣインジェクター（スプリットレスモードで操作）に移し、７分間保持して、抽出された揮発性化合物をＧＣカラム内に脱着させた。連続する事象の全体は、Ｃｏｍｂｉ  ＰＡＬ  Ａｕｔｏ  Ｉｎｊｅｃｔｏｒ（ＣＴＣ  Ａｎａｌｙｔｉｃｓ，Ｚｗｉｎｇｅｎ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて実施した。ＧＣ−ＭＳは、ＶＯＣ溶融シリカキャピラリーカラム（６０ｍｍ、０．３２ｍｍ内径、０．１８ｍｍ膜厚、Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ，ＶＩＣ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を取り付けたＡｇｉｌｅｎｔ  Ｍｏｄｅｌ  ６８９０  ＧＣおよびＭｏｄｅｌ  ５９７３  ＭＳＤ（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を用いて実施した。ＧＣオーブンを４０℃から２２０℃まで２２℃・分−１の速度で上昇するようにプログラムし、その温度でさらに１４分間保持した。２．０ｍｌ・分−１の一定速度でキャリアガスとしてヘリウムを使用した。最初にインジェクターをスプリットレスモードで操作し、次に、サンプル注入の２分後に、スプリットモード（１：２０）に切り替えた。インジェクターおよびＭＳ検出器の温度は、いずれも２３０℃に保持した。ＭＳをスキャンモードで操作した（２９〜３５０ａｍｕ）。Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェアを用いてデータ分分析を実施し、標準物質と、スペクトルライブラリーへの参照とにより化合物を同定した（Ｗｉｌｅｙ  ２７５）。種々のレベルの揮発性化合物２，４−ヘプタジエナール（トランス，トランス）標準物質を添加したその対応する新しいエマルションから確立された較正曲線を用いることにより、エマルション中の揮発性化合物を定量した。
【０１４６】
キャピラリーガスクロマトグラフィを用いる脂肪酸分析によって、貯蔵中のＡＬＡ（キャノーラ）ＥＰＡおよびＤＨＡ（マグロ）の消耗を測定した。この目的のために、イソプロパノール／ヘキサンを用いて貯蔵エマルションから脂質を抽出し、事前に水酸化カリウム触媒エステル交換によりメチルエステルに転換した。ＢＰＸ−７０キャピラリーカラムにおいてエステルを分析し、フレームイオン化検出器により検出した。
【０１４７】
実施例２−キャノーラミールからのオレオシンの抽出
図２は、アルカリ抽出（ｐＨ１２）の後、ｐＨ６．５で沈殿させ、水洗することによってキャノーラミールから単離したタンパク質の電気泳動結果を示す。オレオシンの分子量は、１８〜２０ｋＤａの範囲であると報告されており、上記の単離物は、オレオシンの存在を確認するこの分子量範囲において多量のタンパク質を含有した。３．０〜１２．０の範囲の異なるｐＨ値におけるタンパク質の沈殿と、その次の電気泳動法とにより、最大のオレオシン回収はｐＨ６．５で得られることが示された。他の研究者らによるこれまでの研究は、エタノールまたはクロロホルムおよびメタノールの混合物の処理により不安定化した後に、予備抽出したオイルボディからオレオシンを単離することに焦点が合わせられていた。本発明者らの知る限り、水抽出によりオレオシンを油糧種子またはミールから単離する試みはこれまで成されていない。これは、オレオシンがｐＨに関係なく水に不溶性であると考えられるからであろう（Ｂｅｉｓｓｏｎら，２００１）。見かけ上の不水溶性は、乾燥時にオレオシンが凝集する傾向の結果であると思われ、一旦これが生じたら、オレオシンを水中に溶解または分散させるのは困難である。
【０１４８】
最初の実験の後、キャノーラミールからのオレオシンの抽出の最適化を行った。最高のオレオシン収率はｐＨ１２．０において得られ、ｐＨが低下されるにつれて著しくより低い回収率が得られた（図３）。またｐＨ１２．０では、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより示されるように、最も純粋なオレオシン抽出物も提供された（図４）。ｐＨ値が低いほど、約１２および５ｋＤａの２つのより低分子量成分の抽出量を増大させる傾向があった。
【０１４９】
実施例３−人工オイルボディの粒径
酸化速度に対する粒径のあらゆる効果を排除するために、２つのエマルション（Ｔｗｅｅｎ４０およびオレオシン）の粒径をできる限り一致させた（図５）。また、加速酸化研究のための貯蔵中に分離が生じず、粒径が比較的一定なままであることを保証することも重要であった。オレオシンで作られたＡＯＢの液滴サイズもＴｗｅｅｎ４０エマルションのＡＯＢの液滴サイズも、６０℃で１２日間にわたる貯蔵の間、不変のままであった。高温での貯蔵中の液滴サイズの均一性は、ヘッドスペース分析に基づいた加速酸化研究を可能にした。
【０１５０】
明らかに、ｐＨ１２可溶性抽出物は、主として細胞タンパク質で構成されていた。沈殿した画分も比較的大量の非オレオシンタンパク質を含有していたであろう。しかしながら、興味深いことに、ｐＨ１２可溶性抽出物またはｐＨ１２で再溶解させたｐＨ６．５沈殿タンパク質のいずれかを用いてＡＯＢを調製したときには、オイルボディ表面を形成するためにオレオシンの自然選択があると思われた（図６）。これは、ＡＯＢの調製の前にオレオシン含量を高めるために、沈殿したタンパク質のさらなる精製を必要しないという利点を有するであろう。
【０１５１】
実施例４−酸化安定性
再溶解ｐＨ６．５沈殿タンパク質を用いてＰＬの非存在下および存在下の両方で調製したキャノーラおよびマグロ油ＡＯＢの水性分散体の酸化安定性を、対応する油およびＴｗｅｅｎ４０乳化剤を用いて調製した等価のエマルションと比較した。この目的のために、エマルションを高温（６０℃）で貯蔵し、３つの異なる方法、すなわち、一次酸化生成物（ヒドロペルオキシド）と、二次酸化生成物（トランス，トランス−２，４−ヘプタジエナール）と、不飽和脂肪酸（キャノーラについてはリノレン酸、そしてマグロ油についてはＤＨＡ）の消耗とによって、酸化レベルを測定した。ＡＯＢエマルションのヒドロペルオキシドレベルは、試験した貯蔵期間全体を通して、対応するＴｗｅｅｎ４０エマルションのレベルよりも著しく低く、ＡＯＢエマルションのより大きい酸化安定性が示された（データは示さず）。
【０１５２】
オレオシン抽出物で作られたマグロ油エマルション中の２，４−ヘプタジエナールの濃度は、Ｔｗｅｅｎ４０で作られたものよりも著しく低く、オレオシンエマルションのより大きい酸化安定性が示された（図７）。これにより、キャノーラオレオシンの酸化防止効果はキャノーラ油に限定されず、マグロ油などの魚油にも拡張されることが示された。これを支持する追加的な証拠は脂肪酸データによって提供された。キャノーラミールから抽出されたオレソイン（ｏｌｅｓｏｉｎ）を用いて作られたマグロ油エマルションのＥＰＡおよびＤＨＡ含量は、Ｔｗｅｅｎ４０エマルションよりもよりもゆっくり減少し（図８）、６０℃で５日後に、Ｔｗｅｅｎ４０エマルションの場合の７０％未満と比較して、９０％よりも多いＤＨＡが残存していた。
【０１５３】
図９は、オレオシン安定化エマルションおよびＴｗｅｅｎ４０安定化エマルションの加速酸化（４０℃、空気に暴露）中のヒドロペルオキシドの発生速度（ＰＶで表される）を示す。加速酸化にさらされると、Ｔｗｅｅｎ４０安定化エマルションのＰＶは明らかな誘導期間なしに急増し、１０日後には、１２０ｍｅｑ／ｋｇ油の値に到達し、この点を超えるとＰＶは徐々に下降するが、これは、ヒドロペルオキシドの形成速度がアルデヒドおよびケトンなどの二次酸化生成物へのその分解速度を下回るためであると説明することができる。オレオシン安定化エマルションのＰＶ値は、加速の３０日後でもＴｗｅｅｎ４０安定化エマルションのＰＶ最大値（１２０ｍｅｑ／ｋｇ）に到達せず、この時点で実験を終了した。結果は、Ｔｗｅｅｎ４０安定化エマルションよりも優れたオレオシ安定化エマルションの酸化安定性を実証する。
【０１５４】
マグロ油およびオレオシンから製造した人工オイルボディ（ＡＯＢ）は水中に容易に分散し、水中マグロ油エマルションを形成した。４℃で１週間貯蔵したとき、使用した二次的な界面活性剤（リン脂質、モノグリセリドまたはステアロイルラクチル酸ナトリウム、ＳＳＬ）に関係なくエマルションは分離しなかった。対照的に、リン脂質を用いておよびリン脂質を用いずにマグロ油およびＩｓｏｌｅｘｘ（キャノーラタンパク質単離物）から製造したエマルションは不安定であり、調製から数時間のうちに分離した。４０℃において、カゼインナトリウムエマルションが最も安定であり、１週間後に分離は示されなかった。リン脂質またはＳＳＬを含有するオレオシン安定化エマルションは、４０℃で１週間後に事実上分離されなかった。
【０１５５】
実施例５−他のタンパク質成分に関するオレオシンの乳化および酸化防止効力
乳化剤として広く使用されるカゼインナトリウムと、カナダで製造され、食品グレードの乳化剤として奨励されているキャノーラタンパク質単離物である「Ｉｓｏｌｅｘｘ」とを用いて比較を行った。物理的安定性および酸化安定性について以下の配合物を試験した。
１．マグロ油＋オレオシン＋リン脂質
２．マグロ油＋Ｉｓｏｌｅｘｘ（ＢｉｏＥｘｘ，Ｃａｎａｄａにより市販されるキャノーラベースのタンパク質乳化剤）
３．マグロ油＋Ｉｓｏｌｅｘｘ＋リン脂質
４．マグロ油＋カゼインナトリウム
【０１５６】
加速酸化条件（４０℃で貯蔵、空気に暴露）を使用し、トランス，トランス，２，４−ヘプタジエナールをマグロ油オメガ−３脂肪酸の酸化的分解のマーカーとして用いて酸化安定性を比較した。図１０は、貯蔵中のエマルション内のトランス，トランス，２，４−ヘプタジエナールの発生を示す。オレオシン（＋リン脂質）エマルションを除く全てのエマルションは、１８日以内に最大酸化に到達した。カゼインナトリウムおよびＩｓｏｌｅｘｘエマルションは９〜１０日以内に３．０ｐｐｍのヘプタジエナール濃度に到達したが、オレソシン（ｏｌｅｓｏｓｉｎ）エマルションは、２４日後まで同じ酸化レベルに到達せず、カゼインナトリウムおよびＩｓｏｌｅｘｘと比較して優れたオレオシンの酸化防止特性が実証された。
【０１５７】
実施例６−人工オイルボディの安定性における二次的な界面活性剤の役割
これまでの研究に基づいて、オレオシンに加えたリン脂質の存在は、貯蔵の際に融合しないエマルションを製造するために必要であった。本発明者らは、リン脂質がＴｗｅｅｎ４０、モノグリセリドおよびＳＳＬで置換されたエマルションを以下のように調製することによって、人工エマルションの安定性に対するリン脂質の不可欠性を調べた。リン脂質、Ｔｗｅｅｎ４０、ＭＡＧおよびＳＳＬは、同じレベル（油の重量により１％ｗ／ｗ）で使用した。
ａ．  マグロ油＋オレオシンおよびリン脂質
ｂ．  マグロ油＋オレオシンおよびＴｗｅｅｎ４０
ｃ．  マグロ油＋オレオシンおよびモノグリセリド
ｄ．  マグロ油＋オレオシンおよびステアロイルラクチル酸ナトリウム（ＳＳＬ）
【０１５８】
加速酸化条件（４０℃で貯蔵、空気に暴露）を使用し、トランス，トランス，２，４−ヘプタジエナールをマグロ油オメガ−３脂肪酸の酸化的分解のマーカーとして用いて酸化安定性を比較した。図１１は、貯蔵中のエマルション内のトランス，トランス，２，４−ヘプタジエナールの発生を示す。異なるエマルションの間でヘプタジエナールの発生速度に有意な差異はなく、Ｔｗｅｅｎ４０、モノグリセリドまたはＳＳＬによるリン脂質の置換がオレオシンベースの人工オイルボディの酸化安定性に悪影響を与えないことが示された。
【０１５９】
広義に説明される本発明の趣旨または範囲から逸脱することなく特定の実施形態で示される本発明に対して多数の変形および／または修正が成され得ることは、当業者により認識されるであろう。従って、本発明の実施形態は全ての点で例示的であり、限定的ではないと考えられるべきである。
【０１６０】
本出願は２０１１年２月７日に出願されたオーストラリア特許第ＡＵ２０１１９００３８３号明細書からの優先権を主張し、その内容全体が参照によって本明細書中に援用される。
【０１６１】
本明細書において議論および／または参照される全ての刊行物は、その全体が本明細書中に援用される。
【０１６２】
本明細書中に包含されている文献、行為、材料、デバイス、物品などについての議論はいずれも本発明の背景を提供するためだけのものである。これらの事項のいずれかまたは全てが、本出願の各請求項の優先日より前に存在したことから、従来技術の土台の一部を形成する、あるいは本発明に関連する分野における通常の一般知識であるということを認めていると解釈されてはならない。
【０１６３】
参考文献
Ａｂｅｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ  （１９９７）  Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  １７：１−１７．
Ｂｅｉｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ  （２００１）  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ３９：  ６２３−６３０．
Ｂｈａｔｌａ  ｅｔ  ａｌ  （２０１０）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ａｄｖ．  ２８：  ２９３−３００．
Ｃａｐｕａｎｏ  ｅｔ  ａｌ  （２００７）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ａｄｖ．  ２５：  ２０３−２０６．
Ｆｉｓｋ  ｅｔ  ａｌ  （２００８）  Ｅｕｒｏ．  Ｊ．  Ｌｉｐｉｄ  Ｓｃｉ．  ａｎｄ  Ｔｅｃｈ．  １１０：  ９６２−６８．
Ｇｈｏｄｓｖａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｆｏｏｄ  Ｒｅｓ．  Ｉｎｔ．  ３８：２２３−２３１．
Ｇｒａｙ  ｅｔ  ａｌ  （２０１０）  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｌｉｐｉｄ  Ｓｃｉ．  Ｔｅｃｈｎｏｌ．  １１２：７４１−７４９．
Ｈｕａｎｇ  （１９９２）  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ４３：１７７−２００．
Ｈｕａｎｇ  （１９９４）  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．  ４：４９３−４９８．
Ｈｕａｎｇ  （１９９６）  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  １１０：  １０５５−１０６１．
Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ  （２００５）  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ４３：  ７７０−７７６．
Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ  （２００９）  Ｊ．  Ａｇｒｉｃ．  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．  ５７：  ２３０８−２３１３．
Ｍａｎａｍｐｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ  （２０１０）  Ｊ．  Ａｍ．  Ｏｉｌ  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  ８７：９０９−９１５．
Ｍｕｒｐｈｙ  ａｎｄ  Ｃｕｍｍｉｎｓ  （１９８９）  Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８：２０６３−２０６９．
Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ  （１９７０）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ４８：４４３−４５３．
Ｒｏｕｘ  ｅｔ  ａｌ  （２００４）  Ｊ．  Ａｇｒｉｃ．  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．  ５２：  ５２４５−５２４９．
Ｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｐｌａｎｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｊ．  ８：９１２−９２７．
Ｓｈｅｎ  ａｎｄ  Ｗｉｊｅｓｕｎｄｅｒａ  （２００９）  Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｎｏｌａ  Ｏｉｌ  Ｂｏｄｉｅｓ，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｏｉｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｓ’  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，  Ｍａｙ  ２００９．  Ｏｒｌａｎｄｏ，  ＵＳＡ．
Ｓｈｉｍａｄａ  ａｎｄ  Ｈａｒａ−Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  （２０１０）  Ｂｉｏｌ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．  ３３：  ３６０−３６３．
Ｔｚｅｎ  ａｎｄ  Ｈｕａｎｇ  （１９９２）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  １１７：３２７−３３５．
Ｔｚｅｎ  ｅｔ  ａｌ  （１９９３）  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  １０１：  ２６７−２７６．
【図１】
2014505697.tif 000002
【図２】
2014505697.tif 000003
【図３】
2014505697.tif 000004
【図４】
2014505697.tif 000005
【図５】
2014505697.tif 000006
【図６】
2014505697.tif 000007
【図７】
2014505697.tif 000008
【図８】
2014505697.tif 000009
【図９】
2014505697.tif 000010
【図１０】
2014505697.tif 000011
【図１１】
2014505697.tif 000012
【配列表】
2014505697000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成25年10月9日(2013.10.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
オレオシンと、界面活性剤と、４つ以上の二重結合を有する多価不飽和脂肪酸を含む油とを含むことを特徴とする人工オイルボディ。
【請求項２】
請求項１に記載のオイルボディにおいて、前記界面活性剤がリン脂質であることを特徴とするオイルボディ。
【請求項３】
請求項１または２に記載のオイルボディにおいて、前記多価不飽和脂肪酸の少なくとも５％が４つ以上の二重結合を有することを特徴とするオイルボディ。
【請求項４】
オレオシンと、界面活性剤と、脂肪酸を含む油とを含む人工オイルボディにおいて、前記界面活性剤の少なくとも一部がリン脂質でないことを特徴とする人工オイルボディ。
【請求項５】
請求項１乃至４の何れか１項に記載のオイルボディにおいて、前記オレオシンが油糧種子オレオシンであることを特徴とするオイルボディ。
【請求項６】
請求項１乃至５の何れか１項に記載のオイルボディにおいて、前記油が海産油および／または魚油であることを特徴とするオイルボディ。
【請求項７】
請求項１乃至６の何れか１項に記載のオイルボディにおいて、前記脂肪酸の少なくとも５０％がグリセリドの形態であることを特徴とするオイルボディ。
【請求項８】
請求項１乃至７の何れか１項に記載のオイルボディにおいて、１つまたは複数のその他の分子をさらに含むことを特徴とするオイルボディ。
【請求項９】
請求項８に記載のオイルボディにおいて、前記その他の分子が生物活性分子であることを特徴とするオイルボディ。
【請求項１０】
請求項１乃至９の何れか１項に記載のオイルボディにおいて、約０．１〜約１００μｍの間のサイズを有することを特徴とするオイルボディ。
【請求項１１】
請求項１乃至１０の何れか１項に記載の１つまたは複数の人工オイルボディと、キャリアとを含むことを特徴とする組成物。
【請求項１２】
請求項１乃至１０の何れか１項に記載の１つもしくは複数の人工オイルボディおよび／または請求項１１に記載の組成物の使用において、脂肪酸から恩恵を受け得る状態の治療または予防のための薬剤を製造するためであることを特徴とする、使用。
【請求項１３】
人工オイルボディの製造方法において、
ｉ）オレオシンと、界面活性剤と、４つ以上の二重結合を有する多価不飽和脂肪酸を含む油とを入手するステップと、
ｉｉ）前記オレオシン、前記界面活性剤および前記油を混合して、前記人工オイルボディを製造するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１４】
植物抽出物からオレオシンを部分的に精製する方法において、
１）前記抽出物のｐＨを少なくとも約１１．５のｐＨに調整するステップと、
２）１）を分離して固相および液相を生じさせ、前記液相を選択するステップと、
３）前記液相のｐＨを低下させ、タンパク質を沈殿させるステップと、
４）３）を分離して固相および液相を生じさせ、前記固相を選択するステップと、
５）前記固相をキャリア中に分散させるステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法において、前記ステップ３）が、前記液相のｐＨを約７未満に低下させるステップを含むことを特徴とする方法。
【請求項１６】
請求項１４または１５に記載の方法において、有機溶媒を使用しないことを特徴とする方法。
【請求項１７】
請求項１４乃至１６の何れか１項に記載の方法において、前記植物が油糧種子であることを特徴とする方法。
【請求項１８】
請求項１４乃至１７の何れか１項に記載の方法において、前記抽出物が、油の抽出後に生じるミールであることを特徴とする方法。
【国際調査報告】
2014505697.tif 000013
2014505697.tif 000014
2014505697.tif 000015
2014505697.tif 000016
2014505697.tif 000017