(57)【要約】不応性または抵抗性の血液癌を含む血液癌を処置するための方法および組成物を開示する。2014500259.tif 000005
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液癌を処置するための医薬の製造のための、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩である化合物の使用。
【請求項２】
前記血液癌がリンパ腫である、請求項1記載の使用。
【請求項３】
前記リンパ腫がB細胞リンパ腫である、請求項2記載の使用。
【請求項４】
前記リンパ腫が、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫またはマントル細胞リンパ腫である、請求項3記載の使用。
【請求項５】
前記血液癌が不応性血液癌である、請求項1〜4のいずれか一項記載の使用。
【請求項６】
前記血液癌が、ドキソルビシン、シタラビンおよびフルダラビンからなる群より選択される1つまたは複数の薬物を含む処置に対して不応性の白血病である、請求項5記載の使用。
【請求項７】
前記血液癌が、ドキソルビシンもしくはメルファランまたはその両方を含むレジメン、あるいはCHOPレジメンまたはRCHOPレジメンに対して不応性のリンパ腫である、請求項5記載の使用。
【請求項８】
前記化合物がトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムである、請求項1〜4、6および7のいずれか一項記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連米国出願の相互参照
本願は、2010年11月17日に出願された米国特許仮出願第61/414,892号からの恩典および優先権を主張し、その内容全体を参照により本明細書に組み入れる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、全体として、癌を処置するための薬学的組成物および方法、特に血液癌を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
血液悪性腫瘍または血液癌は、骨髄またはリンパ組織から発生し、血液の機能に影響する多様な癌のグループである。毎年、米国において診断される新たな癌症例のほぼ10%を、白血病、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫ならびに骨髄腫の新たな症例が占めている。抗体およびキナーゼ阻害剤（例えば、イマチニブ、すなわちBCR-ABL阻害剤）を用いる標的化療法が開発されているが、血液癌の管理は依然として化学療法および放射線療法に大きく依存している。それらは典型的には強い副作用を示し、効果も小さい。血液癌の処置においては、異なる作用メカニズムを有する新規クラスの薬物が必要とされている。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、様々な血液癌を処置する方法を提供する。1つの局面において、本発明は、血液癌（例えば、白血病またはリンパ腫）を処置する、その発症を予防するまたは遅らせる方法であって、血液癌を有する患者に、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩（例えば、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムまたはトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]カリウム）の治療有効量または予防有効量を投与する工程を含む方法を提供する。
【０００５】
別の局面にしたがい、不応性血液癌（例えば、白血病またはリンパ腫）を処置する、その発症を予防するまたは遅らせる方法であって、ドキソルビシン、シタラビン（Ara-C）、フルダラビン、メルファラン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、アドリアマイシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンから選択される1つまたは複数の薬物に対して不応性の患者に、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩（例えば、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムまたはトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]カリウム）の治療有効量または予防有効量を投与する工程を含む方法が、提供される。
【０００６】
本発明の方法において使用するための医薬の製造のためのトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩の使用も提供される。
【０００７】
本発明の上記およびその他の利点および特徴ならびにそれと同じことを達成する手段は、以下の発明の詳細な説明を、好ましい例示的な態様を示す付属の実施例と合わせて検討することでより容易に明らかにされるであろう。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムによるMV4-11細胞の細胞生存率および増殖阻害を示すグラフであり、増殖が用量依存的な様式で最大100%（曝露時間24時間）阻害されている。Y軸：%対照、X軸：濃度（μM）。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
発明の詳細な説明
本発明は、少なくとも一部、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムという化合物が、白血病細胞およびリンパ腫細胞において、かつ他の化学療法剤に対して抵抗性の白血病およびリンパ腫細胞においてさえ、アポトーシスを引き起こす際に特に低い有効IC50値を示す、という発見に基づいている。したがって、本発明の第1の局面にしたがい、血液癌（例えば、白血病またはリンパ腫）を処置するための方法が提供される。この方法は、処置を必要とする血液癌患者を、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩（例えば、アルカリ金属塩、例えばトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムまたはトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]カリウムまたはトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]インダゾリウム）の治療有効量で処置する工程を含む。すなわち、本発明は、血液癌（例えば、白血病またはリンパ腫）を有すると同定または診断された患者においてそのような血液癌を処置するための医薬の製造のための、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩の有効量の使用に関する。好ましい態様においては、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムが使用される。
【００１０】
1つの態様において、本発明にしたがって処置される血液癌は、骨髄起源の、すなわち骨髄細胞由来の血液癌である。特定の態様において、本発明の方法は、骨髄性白血病を処置するために使用される。いくつかの特定の態様において、本発明の方法は、急性骨髄性白血病（AML）または急性単芽球性／単球性白血病（AMOL）を処置するために使用される。いくつかの特定の態様において、本発明の方法は、慢性顆粒球性白血病（CGL）、慢性骨髄性白血病（CML）、骨髄異形成症候群（MDS）または骨髄増殖性疾患（MPD）を処置するために使用される。
【００１１】
別の態様において、本発明にしたがって処置される血液癌は、リンパ球起源、すなわち免疫系のリンパ細胞由来の血液癌であるリンパ腫である。いくつかの態様において、リンパ腫は、ホジキンリンパ腫である。いくつかの態様において、リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫である。いくつかの態様において、リンパ腫は、B細胞リンパ腫である。特定の態様において、リンパ腫は、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫である。別の特定の態様において、リンパ腫は、濾胞性リンパ腫である。別の特定の態様において、リンパ腫は、マントル細胞リンパ腫である。
【００１２】
本発明のこの局面の様々な態様において、処置方法は、任意で、患者が血液癌を有することを診断または同定する工程も含む。同定された患者は、その後、治療有効量の本発明の化合物、例えばトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムで処置されるかまたはそれを投与される。全血算、血液塗抹標本、リンパ節生検、骨髄生検、細胞遺伝学分析（例えば、AML、CMLの場合）または免疫表現型検査（例えば、リンパ腫、CLLの場合）を含む当技術分野で公知の任意の従来的な診断方法によって、様々な血液癌を診断することができる。
【００１３】
加えて、驚くべきことに、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムという化合物は、ドキソルビシン、シタラビン（Ara-C）およびフルダラビンに対して抵抗性の白血病細胞ならびにメルファラン、ドキソルビシンおよびCHOP（シクロホスファミド、アドリアマイシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）療法に対して抵抗性のリンパ腫細胞において等しく効果的であることも発見された。したがって、本発明の別の局面は、白血病を処置する方法であって、過去にドキソルビシン、シタラビン（Ara-C）およびフルダラビンから選択される1つまたは複数の薬物を含む処置レジメンで処置された白血病認定患者を、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩（例えば、アルカリ金属塩、例えば、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムおよびトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]カリウムまたはトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]インダゾリウム）の治療有効量で処置する工程を含む方法を提供する。いくつかの態様において、患者は、ドキソルビシン、シタラビン（Ara-C）およびフルダラビンからなる群より選択される1つまたは複数の薬物を含む処置に対して不応性の白血病を有する。患者は、そのような処置レジメンに対して応答しなかったか、またはその処置レジメン後に癌が再発したもしくはぶり返したかのいずれかである。すなわち、本発明はまた、ドキソルビシン、シタラビン（Ara-C）およびフルダラビンから選択される1つまたは複数の薬物に対して不応性の不応性血液癌（例えば、AMLまたはAMOL）を処置するための医薬の製造のためのトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩（例えば、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウム）の使用に関する。1つの態様において、不応性血液癌は、不応性AMLである。別の態様において、不応性血液癌は、不応性AMOLである。さらに別の態様において、不応性血液癌は、不応性慢性骨髄性白血病（CML）である。別の態様において、不応性血液癌は、不応性慢性顆粒球性白血病（CGL）である。別の態様において、不応性血液癌は、不応性骨髄異形成症候群（MDS）である。さらに別の態様において、不応性血液癌は、不応性または骨髄増殖性疾患（MPD）である。
【００１４】
本発明はまた、リンパ腫を処置する方法であって、過去にメルファラン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、アドリアマイシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンから選択される1つまたは複数の薬物を含むレジメンで処置されたリンパ腫を、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩（例えば、アルカリ金属塩、例えば、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムおよびトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]カリウムまたはトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]インダゾリウム）の治療有効量で処置する工程を含む方法を提供する。いくつかの態様において、リンパ腫は、過去にCHOP（シクロホスファミド、アドリアマイシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）療法またはRCHOP（リツキシマブ、シクロホスファミド、アドリアマイシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）レジメンで処置されたものである。
【００１５】
いくつかの態様において、患者は、メルファラン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、アドリアマイシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンからなる群より選択される1つまたは複数の薬物を含む処置に対して不応性のリンパ腫を有する。患者は、そのような処置レジメンに対して応答しなかったか、またはその処置レジメン後に癌が再発したもしくはぶり返したかのいずれかである。すなわち、本発明はまた、メルファラン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、アドリアマイシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンから選択される1つまたは複数の薬物に対して不応性の不応性リンパ腫を処置するための医薬の製造のためのトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩（例えば、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウム）の使用に関する。1つの態様において、不応性リンパ腫は、不応性非ホジキンリンパ腫である。別の態様において、不応性リンパ腫は、不応性ホジキンリンパ腫である。特定の態様において、不応性リンパ腫は、不応性B細胞リンパ腫である。特定の態様において、不応性リンパ腫は、不応性びまん性大細胞型B細胞リンパ腫である。特定の態様において、不応性リンパ腫は、不応性濾胞性リンパ腫である。別の特定の態様において、不応性リンパ腫は、不応性マントル細胞リンパ腫である。
【００１６】
特定の態様において、本発明はまた、リンパ腫を処置する方法であって、過去にメルファランもしくはドキソルビシンまたはその両方を含むレジメン、あるいはCHOPレジメンまたはRCHOPレジメンで処置された不応性びまん性大細胞型B細胞リンパ腫を、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩（例えば、アルカリ金属塩、例えば、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムおよびトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]カリウムまたはトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]インダゾリウム）の治療有効量で処置する工程を含む方法を提供する。
【００１７】
本明細書で使用される場合、「不応性」という用語は、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩を含まない抗新生物処置に対して好ましい応答をしないか、またはその代わりに、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩を含まない抗新生物処置に対して好ましい応答をした後に再発するもしくはぶり返すかのいずれかの癌を指す。
【００１８】
したがって、いくつかの態様において、本発明の方法では、過去にドキソルビシンを含むレジメンで処置された血液癌患者に対して、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩が投与される。特定の態様において、患者は、不応性AMLまたはAMOL、すなわち、ドキソルビシンを含む処置に対する抵抗性を示すまたはドキソルビシンを含む処置後に再発した、AMLまたはAMOLを有する。他の態様において、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩は、過去にシタラビン（Ara-C）を含むレジメンで処置された血液癌患者に対して投与される。特定の態様において、患者は、不応性AMLまたはAMOL、すなわち、シタラビン（Ara-C）を含む処置に対する抵抗性を示すまたはシタラビン（Ara-C）を含む処置後に再発した、AMLまたはAMOLを有する。さらに他の態様において、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩は、過去にフルダラビンを含むレジメンで処置された血液癌患者に対して投与される。特定の態様において、患者は、不応性AMLまたはAMOL、すなわち、フルダラビンを含む処置に対する抵抗性を示すまたはフルダラビンを含む処置後に再発した、AMLまたはAMOLを有する。
【００１９】
したがって、いくつかの態様において、本発明の方法では、過去にメルファランもしくはドキソルビシンまたはその両方を含むレジメンで、あるいはCHOPまたはRCHOPレジメンで処置されたリンパ腫（非ホジキンリンパ腫またはホジキンリンパ腫）患者に対して、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩が投与される。特定の態様において、患者は、その処置レジメンに対して抵抗性を示すまたはその処置レジメン後に再発した不応性非ホジキンリンパ腫またはホジキンリンパ腫を有する。特定の態様において、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩は、過去にメルファランもしくはドキソルビシンまたはその両方を含むレジメンで、あるいはCHOPまたはRCHOPレジメンで処置された（特に、それらのレジメンに対して抵抗性のまたはそれらのレジメン後に再発した）B細胞リンパ腫（例えば、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫またはマントル細胞リンパ腫）を有する患者に投与される。
【００２０】
不応性血液癌を検出するために、初期処置を受けている患者は、血液癌の抵抗性、非応答性またはぶり返しの兆候について注意深く観察され得る。これは、その初期処置に対する患者の癌の応答を観察することによって達成することができる。初期処置に対する癌の応答、応答欠如または再発は、当技術分野で実施されている任意の適切な方法によって決定することができる。例えば、これは、腫瘍のサイズおよび数の評価によって達成することができる。腫瘍サイズあるいは腫瘍数の増大は、その腫瘍が化学療法に応答していないことまたは再発が起こったことを示す。この決定は、Therasse et al, J. Natl. Cancer Inst. 92:205-216 (2000)に詳細に記載される「RECIST」基準にしたがって行うことができる。
【００２１】
本発明のさらに別の局面にしたがい、血液癌の発症を予防するもしくは遅らせるまたは血液癌（白血病、非ホジキンリンパ腫（B細胞リンパ腫、例えばびまん性大細胞型B細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫またはマントル細胞リンパ腫）のぶり返しを予防するもしくは遅らせるための方法であって、その予防または遅延を必要とする患者を、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩（例えば、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウム）の予防有効量で処置する工程を含む方法が提供される。血液癌のぶり返しを予防するまたは遅らせる目的では、処置されたおよび寛解状態にあるまたは安定もしくは非進行状態にある血液癌患者が、血液癌のぶり返しまたは再発を効果的に予防するかまたは遅らせるため、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩（例えば、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウム）で処置され得る。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「・・・を・・・で処置する」という句またはその言い換えは、化合物を患者に投与すること、または患者の体内で化合物を形成させることを意味する。
【００２３】
本発明の方法にしたがい、血液癌は、単剤として単独で、あるいは1つまたは複数の他の抗癌剤と組み合わせて、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩の治療有効量で処置され得る。薬学的に許容される塩の例には、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウムまたはカリウム塩）、アンモニウム塩、インダゾリウム塩等が含まれる。
【００２４】
トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩は、静脈内注射または経口投与または任意のその他の適切な手段によって、総体重に基づき患者の体重1 kgあたり0.1 mg〜1000 mgの量で投与することができる。活性成分は、既定の時間間隔で、例えば1日3回、投与され得る。上記の用量範囲は例示にすぎず本発明の範囲の限定を意図したものではないことを理解されたい。当業者に明らかなように、活性化合物の治療有効量は、使用される化合物の活性、患者体内での活性化合物の安定性、軽減させたい状態の重篤度、処置される患者の総体重、投与経路、身体による活性化合物の吸収、分配および排出の容易性、処置される患者の年齢および感受性等を含むがこれらに限定されない要因により変化し得る。投与量は、様々な要因が時間と共に変化するのに合わせて調整することができる。
【００２５】
本発明にしたがい、血液癌の処置に有用な医薬の製造のためのトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩（例えば、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウム）の使用が提供される。医薬は、例えば、経口用形態または注射可能形態、例えば、静脈内、皮内または筋内投与に適した形態、であり得る。注射可能形態は、一般に当技術分野で公知であり、例えば緩衝溶液または懸濁物である。
【００２６】
本発明の別の局面にしたがい、容器内に、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩（例えば、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウム）の単位剤形および、任意で、本発明にしたがう方法、例えば血液癌を処置する、血液癌の発症を予防するもしくは遅らせるまたは血液癌のぶり返しを予防するもしくは遅らせるまたは不応性血液癌を処置する方法において薬学的キットを使用するための説明書を含む該キットが提供される。当業者に明らかなように、単位剤形中の治療化合物の量は、本発明の方法において患者に対して使用される用量によって決定される。該キットにおいて、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]の薬学的に許容される塩（例えば、トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウム）は、例えば1 mgの量の、錠剤形態であり得る。
【実施例】
【００２７】
実施例1
ヒト白血病細胞におけるトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムの活性
ヒト白血病細胞株MV4-11細胞［混合型B骨髄単球性白血病、リンパ芽球形態］を、総量90μL/ウェルとなるよう96ウェルマイクロカルチャープレート（Costar白色、平底#3917）にプレーティングした。37℃、5% CO2および95%空気の加湿インキュベーター中で24時間インキュベーションした後、10μLの10×連続希釈トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウム含有成長培地を各ウェルに添加した。CO2インキュベーター中で計96時間培養した後、プレーティングされた細胞およびCell Titer-Glo (Promega #G7571)試薬を室温にし、30分間平衡化させた。100μLのCell Titer-Glo（登録商標）試薬を各ウェルに添加した。このプレートを2分間振盪し、次いで10分間平衡化させた後に、発光をTecan GENiosマイクロプレートリーダーで読み取った。未処置対照ウェルに対する細胞成長のパーセント阻害を算出した。すべての試験を、濃度レベルごとに2通り実施した。試験作用物質のIC50値は、Prism 3.03を用いて、以下の4パラメータロジスティック式を用いるデータの曲線あてはめにより概算した：
2014500259.tif 000003
式中、Topは、最大の%対照吸光度であり、Bottomは最高作用物質濃度における最小の%対照吸光度であり、Yは%対照吸光度であり、Xは作用物質濃度であり、IC50は対照細胞との比較で細胞成長を50%阻害する作用物質濃度であり、かつnは曲線の勾配である。化合物トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムは、MV4-11に対して8.53μMのIC50を示した。MV4-11細胞がAra-C、フルダラビン（fluradabine）およびドキソルビシンに対して抵抗性であることは公知である。Colado et al., Haematologica., 93(1):57-66 (2008); Scatena et al., Cancer Chemother. Pharmacol., 66(5):881-8 (2010)を参照のこと。
【００２８】
実施例2
ヒトリンパ腫細胞におけるトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムの活性
ヒトリンパ腫腫瘍細胞株におけるトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムの抗増殖活性を測定するため、DoHH2（濾胞性リンパ腫）、Granta 519（マントル細胞リンパ腫）およびWSU-DLCL2（びまん性大細胞型B細胞リンパ腫）細胞株において抗増殖アッセイを実施した。DoHH2 ヒトEBV陰性B細胞リンパ腫細胞は、5,000細胞／ウェルとなるよう播種し、20% FBSおよび2mM L-グルタミンを含有するRPMI1640培地中で成長させた。Granta 519ヒトマントル細胞リンパ腫細胞は、10,000細胞／ウェルとなるよう播種し、10% FBSおよび2mM L-グルタミンを含有するDMEM培地中で成長させた。WSU-DLCL2ヒトB細胞リンパ腫細胞は、5,000細胞／ウェルとなるよう播種し、10% FBSおよび2mM L-グルタミンを含有するRPMI1640培地中で成長させた。具体的に、これらのヒト腫瘍細胞を適切な密度で96ウェルマイクロカルチャープレートにプレーティングし、総成長時間を96時間とした。37℃、5% CO2および95%空気の加湿インキュベーター中で24時間インキュベーションした後、連続希釈試験作用物質含有成長培地を各ウェルに添加した。CO2インキュベーター中で計96時間培養した後、Cell Titer-Glo (Promega #G7571)を製造元の指示にしたがい用いてプレートを処理した。発光は、Tecan GENiosマイクロプレートリーダーを用いて検出した。未処置対照ウェルに対する細胞成長のパーセント阻害を算出した。すべての試験を、濃度レベルごとに2通り実施した。試験作用物質のIC50値は、Prism 3.03を用いて、以下の4パラメータロジスティック式を用いるデータの曲線あてはめにより概算した：
2014500259.tif 000004
式中、Topは、最大の%対照吸光度であり、Bottomは最高作用物質濃度における最小の%対照吸光度であり、Yは%対照吸光度であり、Xは作用物質濃度であり、IC50は対照細胞との比較で細胞成長を50%阻害する作用物質濃度であり、かつnは曲線の勾配である。化合物トランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムは、DoHH2において7.18μM、Granta 519において63.56μM、およびWSU-DLCL2において25μMのIC50を示した。WSU-DLCL2細胞は、メルファランおよびドキソルビシンに対して抵抗性であり、かつCHOP（シクロホスファミド、アドリアマイシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）療法に対しても抵抗性である。Aref et al., Int. J. Radiation Oncology Biol. Phys., 45(4): 999-1003 (1999); Levi et al., Cancer Chemother. Pharmacol., Published on line August 31, 2010を参照のこと。したがってトランス-[テトラクロロビス（1H-インダゾール）ルテニウム酸(III)]ナトリウムは、そのような薬物に対して抵抗性の癌細胞において有効であり得る。
【００２９】
本明細書中で言及されているすべての刊行物および特許出願は、本発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者のレベルを示すものである。すべての刊行物および特許出願は、各々個々の刊行物または特許出願が具体的かつ個別に参照により組み入れられることが示されている場合と同程度に、参照により本明細書に組み入れられる。その刊行物および特許出願に言及されたこと自体が、必然的に、それらが本願に対する先行技術であることの承認となる、ということではない。
【００３０】
上記の発明は、理解を確実にする目的で事例および実施例によってある程度詳細に説明されているが、添付の特許請求の範囲内で一定の変更および修正がなされ得ることは明らかであろう。
【図１】
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【国際調査報告】
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2014500259.tif 000008