(57)【要約】  本発明は、防除が望まれる場所に有効量の２，４−ＤＢおよび有効量のグルホシネートの混合物を施用することによる、オーキシン除草剤抵抗性ワタ作物を含む圃場において望ましくない植生を防除する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
オーキシンおよびグルホシネート除草剤抵抗性ワタ作物を含む圃場において望ましくない植生を防除する方法であって、防除が望まれる場所に対して、有効量の２，４−ＤＢおよび有効量のグルホシネートの混合物を施用することを含む方法。
【請求項２】
前記オーキシン除草剤抵抗性ワタ作物がオーキシンおよびグルホシネート除草剤抵抗性ワタ作物であり、前記除草剤抵抗性ワタ作物への損傷が酸当量の２，４−Ｄおよびグルホシネートの混合物の施用と比べて低減される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記除草剤抵抗性ワタ作物への損傷が、酸当量の２，４−Ｄおよびグルホシネートの混合物の施用と比べて、施用後６時間で低減される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記除草剤抵抗性ワタ作物への損傷が、酸当量の２，４−Ｄおよびグルホシネートの混合物の施用と比べて、施用後２４時間で低減される、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記オーキシン除草剤抵抗性ワタ作物が、アリールオキシアルカノエートオーキシン除草剤抵抗性ワタ作物である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記除草剤抵抗性ワタ作物への損傷が、２，４−Ｄおよびグルホシネートの混合物の同量の施用と比べて、施用後１２日までのいずれの時点においても低減される、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記アリールオキシアルカノエート除草剤抵抗性ワタ作物が遺伝子組み換えワタ作物である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記遺伝子組み換えアリールオキシアルカノエート除草剤抵抗性ワタ作物が、少なくとも１のさらなる除草剤耐性遺伝子をさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記アリールオキシアルカノエート除草剤抵抗性ワタ作物が、ＡＡＤ−１（アリールオキシアルカノエートジオキシゲナーゼ）をコードする遺伝子を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記アリールオキシアルカノエート除草剤抵抗性ワタ作物がＡＡＤ−１２（アリールオキシアルカノエートジオキシゲナーゼ）をコードする遺伝子を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
前記有効量の２，４−ＤＢが少なくとも２８０グラム酸当量／ヘクタールであり、前記有効量のグルホシネートが少なくとも３００ｇ ａｅ／ｈａである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記有効量の２，４−ＤＢが約２８０グラム酸当量／ヘクタールから約２，２４０グラム酸当量／ヘクタールであり、前記有効量のグルホシネートが約３００ｇ ａｅ／ｈａから約１，０００ｇ ａｅ／ｈａである、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記２，４−ＤＢおよびグルホシネートの混合物が前記オーキシン除草剤抵抗性ワタ作物に出芽後施用される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記２，４−ＤＢおよびグルホシネートの混合物が、出芽後の前記オーキシン除草剤抵抗性ワタ作物に対して、前記オーキシン除草剤抵抗性ワタ作物の栄養成長期の期間中に、施用される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記望ましくない植生がグリホサート抵抗性の雑草を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
さらなる除草剤を防除が望まれる場所に施用することを含む、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権の主張
本出願は、２０１１年４月２７日に出願された「ワタ植物の圃場において雑草を防除する方法」についての米国仮特許出願第６１／４７９，５３３号の出願日の利益を主張するものである。
【０００２】
本発明は、防除が望まれる場所に有効量の２，４−ＤＢおよびグルホシネートの混合物を施用することを含む、オーキシンおよびグルホシネート除草剤に抵抗性のワタ作物を含む圃場において望ましくない植生を防除する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
オーキシンおよびグルホシネート除草剤に抵抗性であるワタ作物の圃場において望まれない植生を防除するためにオーキシン型およびグルホシネート除草剤の混合物を用いることは、作物にその発育を遅らせる可能性がある一過性の損傷を引き起こし得る。視認できる一過性損傷としては、葉の垂下、葉巻および葉柄湾曲の組み合わせを挙げることができ、これらは合わせて上偏生長と呼ばれる。施用後１０から１４日で視認できる他の一過性損傷としては、葉のストラッピング（strapping）、奇形および葉の上偏生長が挙げられる。かかる一過性の初期損傷は、ワタ作物が成熟するまでの時間の望ましくない延長をもたらし得るものであって、栽培者に追加の費用を負わせ、おそらく全体的な作物収量を低減させる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、オーキシンおよびグルホシネート除草剤に抵抗性の作物を含む圃場において望ましくない植生を防除するためにオーキシン型除草剤およびグルホシネートの混合物を施用することに起因する作物損傷に関連した課題であって、初期の除草剤損傷に起因する早晩性遅延などである課題に取り組み、これを解決するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の目的は、防除が望まれる場所に有効量の２，４−ＤＢおよびグルホシネートを施用することを含む、オーキシンおよびグルホシネート除草剤に抵抗性のワタ作物を含む圃場において望ましくない植生を防除する方法である。
【０００６】
本発明の別の目的は、酸当量の２，４−Ｄおよびグルホシネートの混合物の施用と比べて、除草剤抵抗性ワタ作物への損傷が低減される方法である。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本発明のさらなる目的および利点は以下の詳細な記載から当業者に容易に明らかになるものであるが、本発明の実施形態は単に本発明を行うにあたって考えられる最良の形態を説明するために記載される。当然のことながら、本発明は他のおよび異なる実施形態が可能であり、そのいくつかの詳細は様々な明白な点において、全て本発明から逸脱することなく改変が可能である。したがって、記載は本来説明的とみなされるべきで、制限的とみなされるべきではない。
【０００８】
本発明は、以降、より完全に記載される。実際に、これらの発明は多くの異なる形態で実施され得るものであり、本明細書において述べられる実施形態に限定されると解釈すべきではない。むしろ、これらの実施形態は、本開示が適用可能な法的要件を充足するように提供される。同様の数字は全体を通して同様の要素をいう。
【０００９】
本明細書において述べられる本発明の多くの改変および他の実施形態は、これらの発明が関係する分野の当業者にとって、先の記載中に存在する教示の利益を持って思い浮かぶものである。それゆえ、本発明は開示される特定の実施形態に限定されるものではないこと、ならびに改変および他の実施形態は添付の特許請求の範囲の中に含まれるよう意図されることが理解されるものである。特定の用語が本明細書において使用されるが、これらは一般的で記述的な意味のみで用いられ、限定の目的のためではない。
【００１０】
本発明は、防除が望まれる場所に有効量の２，４−ＤＢおよびグルホシネートを施用することを含む、オーキシンおよびグルホシネート除草剤抵抗性ワタ作物を含む圃場において望ましくない植生を防除する方法に向けられる。
【００１１】
本明細書において用いられるように、および特に指示がない限り、用語「除草剤」とは、望ましくない、望まれない植物、例えば有害なまたは煩わしい雑草、広葉植物、草およびスゲなどであるがこれらに限定されない植物を妨害するか、またはそうでなければ死滅させる分子または分子の組み合わせをいい、作物保護のためにこのように用いられ得る。句「有効量」は、観察可能である所望の、望まれない植物成長を低減させる効果であって、望ましくない、望まれない植物の植物壊死、植物死、成長阻害、再生阻害、増殖の阻害、および除去、破壊、またはそうでなければ発生および活性を減少させる効果などを生み出すのに必要な除草剤の量を意味する。望ましくない、望まれない植物としては、除草剤耐性の雑草、例えばグリホサート耐性の雑草などが挙げられる。
【００１２】
「オーキシン除草剤」としては、アリールオキシアルカノエート化学構造を持つ除草剤、例えばフェノキシアセテートオーキシン（例として２，４−ＤおよびＭＣＰＡ）、フェノキシブタノエートオーキシン（例として２，４−ＤＢおよびＭＣＰＢ）およびピリジルオキシアセテートオーキシン（例としてフルロキシプリ（fluroxypry）およびトリクロピル）などが挙げられる。
【００１３】
多数のオーキシン型除草剤抵抗性遺伝子が本発明の植物と共に使用され得る。ワタ作物は、酵素アリールオキシアルカノエートジオキシゲナーゼ（ＡＡＤ）をコードする抵抗性遺伝子（ＡＡＤと命名されたもの）のファミリーのうちのいずれかを含有するように形質転換することができ、その結果オーキシン除草剤をインプランタ（in planta）で不活性化する。かかる除草剤抵抗性は、ＡＡＤ−１（スフィンゴビウム・ハービシドボランス（Sphingobium herbicidovorans）起源）、ＡＡＤ−１２（デルフチア・アシドボランス（Delftia acidovorans）起源）、およびＰＣＴ公報国際公開第２００５／１０７４３７号、ＰＣＴ公報国際公開第２００７／０５３４８２号およびＰＣＴ公報米国特許出願公開第２０１０／０２５１４３２号明細書中で開示されるＡＡＤ−１３遺伝子により授けられ得る。
【００１４】
グルホシネートは、オーキシン型除草剤と異なる作用様式を有する別の除草剤である。グルホシネートへの抵抗性はＰＡＴ遺伝子で形質転換された植物に与えられるが、この遺伝子はストレプトマイセス・ビリドクロモゲネス（Streptomyces viridochromogenes）を起源として単離され、米国特許第５２７３８９４号明細書中で最初に開示されたものである。
【００１５】
グルホシネートとオーキシン型除草剤、例えば２，４−ＤＢなどとの混合物は、好都合な方法により雑草防除が望まれる場所に施用される。「場所」は、土壌、種子および苗、同様に定着した植生を含むことが意図される。除草活性は、２，４−ＤＢおよびグルホシネートの混合物によって、あらゆる成長段階にあるまたは植え付け前もしくは出芽前である植物または植物の場所に直接的に施用される場合に発揮される。観察される効果は、防除対象の植物種、植物の成長段階、希釈および噴霧液滴サイズの施用パラメーター、固形成分の粒子サイズ、使用時の環境条件、使用される特定の化合物、使用される特定の補助剤および担体、土壌のタイプなど、同様に施用される化学物質の量に依存する。これらなどの因子は、当分野で公知のように、意図される除草作用を促進するよう調整することができる。一般に、最大の雑草防除を達成するには、２，４−ＤＢおよびグルホシネートの混合物を出芽前に比較的未熟な望ましくない植生に施用するのが好ましい。
【００１６】
ワタ（ワタ属種（Gossypium spp.））は、世界で最も重要な織物繊維作物であり、世界で最も重要な油料種子作物の１つである。ワタ植物は、ヒトの食糧、家畜飼料および工業原材料の供給源を提供する。綿実は調理油用に圧搾され、残った綿実粕は動物飼料用に用いられる。綿の工業的使用としては、ろうそくの芯、撚り糸、紙および数多くの織物製品が挙げられる。
【００１７】
ワタ属は非常に大きく、現在５０の種がある。ワタ属の２つの四倍体種は、リントと呼ばれる紡糸可能な種子繊維を持つ。これらの２つの種は、Ｇ．ヒルスタム（G.hirsutum）（アメリカリクチメンと呼ばれる）およびＧ．バルバデンス（G.barbadense）（ピマワタと呼ばれる）である。
【００１８】
ワタは完全花を有する双子葉植物であり、すなわち、ワタは雄性花粉生産器官および別々の雌性花粉受容器官を同一の花上に持つ。栽培されたワタの花は、３枚の三角形の苞葉に囲まれており、一般にスクエア（square）として公知であるものを形成する。花は、５枚の花弁を有する開花冠、雄ずいの集団を有して花柱を囲む管を形成するずい柱（staminal column）を含有する。複合雌ずいは、葯の上方に突き出た柱頭を持つ３から５枚の心皮からなる。子房は３から５個の子房室を持つ▲さく▼果または丸莢へと発達する。７から９個の種子が各房または子房室内に置かれる。開花の前の日、ねじれた花冠がスクエアから出現する。開花の日に花冠が開いて花粉脱粒が起こる。花冠は開花の翌日に赤くなり、その後、植物から落ちる。受粉は、葯が開いて花粉が柱頭上に脱粒するのに伴って、または昆虫により花粉が柱頭上に置かれるのに伴って起こる。
【００１９】
「植物」は、全植物体、植物器官（例として葉、幹、根など）、種子、植物細胞、栄養繁殖体、胚およびそれらの後代を意図する。植物細胞は分化したものであるか、または未分化のものであることができる（例としてカルス、懸濁培養細胞、プロトプラスト、葉細胞、根細胞、師部細胞および花粉）。
【００２０】
「遺伝子組み換え植物」または「形質転換植物」または「安定形質転換」植物、細胞もしくは組織とは、外因性の核酸配列またはＤＮＡ断片を植物細胞内に取り込んだまたは組み込んだ植物をいう。「安定形質転換」は、植物内に導入されたヌクレオチド構築物が植物のゲノム内に組み込まれて、その後代に遺伝する能力があることを意図する。
【００２１】
除草活性がある化合物４−（２，４−ジクロロフェノキシ）酪酸すなわち２，４−ＤＢおよびグルホシネートは、例えば、Tomlin, Clive(editor) (2009) 「The Pesticide Manual」, Fifteenth Edition, British Crop Protection Council(BCPC), pages 306-308および587-589中に記載されている。
【００２２】
本発明の除草剤混合物を調製するのに有用である好適な農薬補助剤および担体は、当業者に周知である。用いることができる液体担体としては、水、トルエン、キシレン、石油ナフサ、作物油、アセトン、メチルエチルケトン、シクロヘキサノン、トリクロロエチレン、パークロロエチレン、エチルアセテート、アミルアセテート、ブチルアセテート、プロピレングリコールモノメチルエーテルおよびジエチレングリコールモノメチルエーテル、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アミルアルコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリンなどが挙げられる。水は一般に濃縮物の希釈用に選択される担体である。用いることができる固体担体としては、タルク、パイロフィライト粘土、シリカ、アタパルガス粘土（attapulgus clay）、カオリン粘土、キーゼルグール、白亜、ケイソウ土、石灰、カルシウムカーボネート、ベントナイト粘土、フラー土、綿実外皮、小麦粉、大豆粉、軽石、木粉、クルミ殻粉、リグニンなどが挙げられる。
【００２３】
通常、１またはそれ以上の界面活性剤を本発明の組成物中に組み入れるのが望ましい。かかる界面活性剤は、好都合には、固体および液体組成物の両方において、特に施用前に担体で希釈されるように設計されたものにおいて使用される。界面活性剤はアニオン性、カチオン性または非イオン性の性質であることができ、乳化剤、湿潤剤、懸濁剤として、または他の目的のために使用することができる。典型的な界面活性剤としては、アルキルサルフェートの塩、例えばジエタノールアンモニウムラウリルサルフェートなど；アルカリアリールスルホネート塩、例えばカルシウムドデシルベンゼンスルホネートなど；アルキルフェノール−アルキレンオキサイド付加生成物、例えばノニルフェノール−Ｃ１８エトキシレートなど；アルコール−アルキレンオキサイド付加生成物、例えばトリデシルアルコール−Ｃ１６エトキシレートなど；石けん、例えばナトリウムステアレートなど；アルキルナフタレンスルホネート塩、例えばナトリウムジブチルナフタレンスルホネートなど；スルホサクシネートのジアルキルエステルの塩、例えばナトリウムジ（２−エチルヘキシル）−スルホサクシネートなど；ソルビトールエステル、例えばソルビトールオレエートなど；第四級アミン、例えばラウリルトリメチルアンモニウムクロライドなど；脂肪酸のポリエチレングリコールエステル、例えばポリエチレングリコールステアレートなど；エチレンオキサイドおよびプロピレンオキサイドのブロックコポリマー；ならびにモノおよびジアルキルホスフェートエステルの塩が挙げられる。
【００２４】
農薬組成物中で一般に用いられる他の補助剤としては、相溶化剤、消泡剤、金属イオン封鎖剤、中和剤および緩衝剤、防錆剤、染料、付臭剤、展着剤、浸透助剤、固着剤、分散剤、増粘剤、凝固点降下剤、抗菌剤などが挙げられる。組成物はまた、他の適合性成分、例えば他の除草剤、植物成長調節剤、殺真菌剤、殺虫剤などをも含有し得るものであり、液体肥料または固体粒状肥料担体、例えばアンモニウムナイトレート、尿素などと共に製剤化することができる。
【００２５】
本発明の除草剤組成物中の有効成分の濃度は、一般に、約０．００１から約９８重量パーセントである。約０．０１から約９０重量パーセントの濃度がしばしば使用される。濃縮物として使用されるように設計された組成物中では、有効成分は一般に約５から約９８重量パーセント、好ましくは約１０から約９０重量パーセントの濃度で存在する。かかる組成物は、典型的に、使用前に不活性担体、例えば水などで希釈される。通常雑草または雑草の場所に施用される希釈された組成物は、一般に、約０．０００１から約１重量パーセントの有効成分を含有し、好ましくは約０．００１から約０．０５重量パーセントを含有する。
【００２６】
本発明の方法において、２，４−ＤＢおよびグルホシネート除草剤混合物の施用は、作物の播種前、出芽前および出芽後において等しく行うことができる。出芽前および／または早期の出芽後施用が好ましい。「出芽前」は、作物植物が地面から出芽する前の期間中の除草剤の施用と定義される。「出芽後」は、作物植物の葉群が除草剤に接触する、作物植物が地面から出芽した後の期間中の除草剤の施用と定義される。好ましくは、２，４−ＤＢおよびグルホシネート混合物は、ワタ作物の出芽後および栄養成長期の間にワタ作物に施用される。
【００２７】
本発明のオーキシンおよびグルホシネート化合物の除草剤混合物は、より幅広い種類の望ましくない植生を防除するため、１またはそれ以上の他の除草剤と合わせて施用することができる。他の除草剤と合わせて用いられる場合、本明細書で記載される混合物は、他の除草剤と共に製剤化し、他の除草剤とタンク混合し、または他の除草剤と共に順次施用することができる。本発明の混合物と合わせて使用することができる除草剤のいくつかとしては、グリホサート、パラコート、ＡＬＳ阻害剤（例としてスルホニルウレア、イミダゾリノン、トリアゾロピリミジンスルホンアニリドなど）、ＨＰＰＤ阻害剤（例としてメソトリオン、イソキサフルトールなど）、ＰＰＯ阻害剤（例としてピラフルフェン、ホメサフェンなど）、ジカンバ、ブロモキシニル、アリールオキシアルカノエート、アリールオキシフェノキシプロピオネート（一般に「ホップ」除草剤と呼ばれる、例えばキザロホップなど）、オーキシンなどが挙げられ、これらのうちのいくつかは、作物にこれらの除草剤への選択性を賦与する遺伝子工学を必要とすることもある。
【００２８】
本混合物は、従来の粉砕または空中散粉機、噴霧機および散粒機の使用により、灌漑用水の添加により、および当業者に公知である他の従来の手段により、雑草またはそれらの場所に施用することができる。
【００２９】
本発明の１つの態様において、有効量の２，４−ＤＢおよびグルホシネートを施用することにより引き起こされる除草剤抵抗性ワタ作物への損傷は、有効量の２，４−Ｄおよびグルホシネートの施用と比べて低減される。除草剤からの損傷の低減は、好都合には作物に対するストレスを低減させ、それによっておそらく作物が成熟するまでの時間を低減させ、さらには栽培者に費用を節約させて、全体的な作物収量を増加させる。
【００３０】
何らかの理論に拘束されることを意図するものではないが、２，４−ＤＢはインプランタでベータ酸化を受けるまでは強力な除草剤ではないと仮定される。この付加的な代謝工程および／または他の因子は、２，４−Ｄと比べて２，４−ＤＢの施用に耐えるというＡＡＤ形質転換植物の能力の向上をもたらす。この概念は全てのＡＡＤ形質転換作物に適用できるが、２，４−Ｄへの抵抗性がより低い、ワタなどのＡＡＤ形質転換作物に施用する場合にとりわけ有用である。
【００３１】
「損傷」は、当業者により視覚的に評価される上偏生長である（葉垂下、葉巻、葉柄湾曲を持つ）葉群のパーセンテージを意味する。２，４−Ｄおよびグルホシネート混合物と比べて低減した２，４−ＤＢおよびグルホシネート混合物からの損傷は、これら除草剤の施用後数分以内で観察可能であり、その後の長時間にわたって、例えば施用後２時間から施用後３０日など、施用後３時間から施用後１９日など、さらに施用後６時間から施用後２４時間などにわたって観察可能であり続ける。
【００３２】
主題の発明はまた、より幅広くより強力な雑草防除に適合した除草剤抵抗性植物および除草剤抵抗性管理の選択肢を提供するように１またはそれ以上のさらなる除草剤抵抗性遺伝子を含む遺伝子組み換えオーキシン除草剤抵抗性ワタ作物に施用可能であり、この除草剤抵抗性遺伝子はグリホサート、ＡＬＳ−（イミダゾリノン、スルホニルウレア）、第二のアリールオキシアルカノエート−、ＨＰＰＤ−、ＰＰＯ−およびグルホシネート−抵抗性の遺伝子などが挙げられるがこれらに限定されるものではない。
【００３３】
出芽後施用の場合、約０．１から約２，２４０グラム酸当量／ヘクタール（ｇ ａｅ／ｈａ）の施用量が一般に使用され、好ましくは１から約１，１２０ｇ ａｅ／ｈａである。出芽前施用の場合、約１から約２，２４０ｇ ａｅ／ｈａの施用量が一般に使用される。指定される施用量が多いほど、一般に、幅広い範囲の望ましくない植生について非選択的防除が得られる。施用量が少ないほど、典型的に選択的防除が得られ、ワタ作物の場所において使用することができる。本発明の実施形態において、出芽後作業のための好ましい２，４−ＤＢ施用量は、少なくとも２８０ｇ ａｅ／ｈａ、好ましくは約２８０ｇ ａｅ／ｈａから約２，２４０ｇ ａｅ／ｈａである。出芽後作業のための好ましいグルホシネート施用量は少なくとも３００ｇ ａｅ／ｈａ、好ましくは約３００ｇ ａｅ／ｈａから約１，０００ｇ ａｅ／ｈａである。
【００３４】
先の記載において、多数の特定の詳細、例えば特定の材料、構造、化学物質、プロセスなどが、本発明のより良い理解を提供するために述べられている。しかしながら、本発明は、具体的に述べられた詳細に頼ることなく実行することができる。他の例において、周知の処理構造は、不必要に本発明を不明瞭にしないために詳細に記載されていない。
【００３５】
本発明の好ましい実施形態だけでなく、その多用途性についてのいくつかの例もまた、本開示において示され、記載される。本発明は様々な他の組み合わせおよび環境において使用が可能であり、本明細書において表現される発明概念の範囲内での変更または改変が可能であると理解されるものである。
【実施例】
【００３６】
以下の実施例は、本発明のある好ましい実施形態を実証するために挙げられる。これらの実施例は特許請求の範囲への限定として解釈されるべきではない。以下の実施例において開示される技術はその実行のための好ましい様式を説明するために用いられる特定のアプローチを表すということが、当業者により認識されるべきである。しかしながら、当業者は、本開示に照らして、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく同様または類似の結果をなお得ながらも、これらの特定の実施形態において多くの変更を行うことができることを認識すべきである。
【００３７】
ワタ植物は、アリールオキシアルカノエートジオキシゲナーゼ（ＡＡＤ）タンパク質をコードするＡＡＤ−１またはＡＡＤ−１２遺伝子で形質転換した。ワタ植物は、ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ（ＰＡＴ）タンパク質をコードするＰＡＴ遺伝子で形質転換した。その結果として、ＡＡＤおよびＰＡＴ遺伝子の両方で形質転換されたワタ植物は、オーキシンおよびグルホシネート除草剤の両方に抵抗性を持つ。
【００３８】
かかる形質転換植物を、グルホシネート除草剤と混合された場合のオーキシン除草剤、具体的には２，４−ＤＢおよび２，４−Ｄへの抵抗性を実証するために以下の実施例において用いる。ＡＡＤ−１、ＡＡＤ−１２またはＰＡＴはまた、植物形質転換の間および育種圃場における選択マーカーとしても用いられ得る。植物における除草剤抵抗性のためのＡＡＤ−１遺伝子自体は、国際公開第２００５／１０７４３７号中で最初に開示された（米国特許出願公開第２００９−００９３３６６号明細書も参照のこと）。植物における除草剤抵抗性のためのＡＡＤ−１２遺伝子自体は、国際公開第２００７／０５３４８２号中で最初に開示された（米国特許出願公開第２００５７３１０４４号明細書も参照のこと）。植物における除草剤抵抗性のためのＰＡＴ遺伝子自体は、米国特許出願公開第５２７３８９４号明細書中で最初に開示された。
【００３９】
実施例１
グルホシネートと混合された２，４−ＤＢおよび２，４−Ｄは、ＡＡＤ−１およびＰＡＴで形質転換されたワタにおいて類似の雑草防除を提供する
グルホシネートと混合された２，４−ＤＢおよびグルホシネートと混合された２，４−Ｄの、ＡＡＤ−１およびＰＡＴ遺伝子で形質転換されたワタにおいて雑草を防除する効力を比較する実験は、Ｇｒｅｅｎｖｉｌｌｅ，ＭＳ（３箇所）；Ｃｈｕｌａ，ＧＡ；Ｍａｃｏｎ Ｃｏｕｎｔｙ，ＧＡ；Ａｔｔａｐｕｌｇｕｓ，ＧＡ；Ｍｅｍｐｈｉｓ，ＴＮ；Ｎｅｗｐｏｒｔ，ＡＲ；およびＦｒｅｓｎｏ，ＣＡの近くに位置する９箇所の圃場現場で行った。実験デザインは、ランダム化完備ブロック中に処理区画を有する１つの現場あたり４反復であった。各区画には、高さ６．１メートルの２畝のワタ植物があった。高さ５から１５ｃｍの雑草およびワタ植物を単回施用処理の標的とした。除草剤処理は、全４回の処理について、５４２ｇ ａｅ／ｈａのＩｇｎｉｔｅ ２８０（グルホシネート）を伴う各々２つの異なる濃度（８４０ｇ ａｅ／ｈａおよび１１２０ｇ ａｅ／ｈａ）で混合されたＢｕｔｙｒａｃ ２００（２，４−ＤＢ）およびＷｅｅｄａｒ ６４（２，４−Ｄ）から構成された。雑草種を週に１回、除草剤施用後の３週間、死滅したまたは重篤な除草剤関連損傷を示した植物のパーセンテージについて視覚的に評価した（０％は活性がないことを表し、１００％は全ての標的植物の死滅を表す）。
【００４０】
ほぼ全ての標的種について、および各測定週について、より多い施用量である１１２０ｇ ａｅ／ｈａの２，４−ＤＢまたは２，４−Ｄを使用すると、より高いレベルの防除が得られた。それゆえ、効力に基づくと、この除草剤耐性ワタにおいて雑草を防除するには、グルホシネートと混合された場合の２，４−ＤＢおよび２，４−Ｄについて、８４０ｇ ａｅ／ｈａより１１２０ｇ ａｅ／ｈａの施用量が好ましい。１１２０ｇ ａｅ／ｈａでは、防除は、グリホサートに抵抗性であるヒユ属（Amaranthus）の植物（ＡＭＡＰＡ ｇｌｙ−ｒｅｓ）を除いて雑草植物の＞９０％を施用後３週間の間、死滅または重篤に損傷させた。施用後第３週の終りまで、ＡＭＡＰＡ ｇｌｙ−ｒｅｓ植物の防除は、２，４−ＤＢ＋グルホシネートを使用して７９％であり、２，４−Ｄ＋グルホシネートを使用して７５％であった。この除草剤耐性ワタの区画における、グルホシネートと混合された２，４−ＤＢまたは２，４−Ｄの施用後１週間での雑草防除の結果を、表１中に示す。
【００４１】
【表１】
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【００４２】
実施例２
ＡＡＤ−１およびＰＡＴで形質転換されたワタ植物は、グルホシネートと混合された場合の２，４−Ｄと比べた２，４−ＤＢへの抵抗性が顕著に向上する
ＡＡＤ−１およびＰＡＴ遺伝子で形質転換されたワタ植物を、グルホシネートと混合された２，４−ＤＢおよび２，４−Ｄ除草剤化合物への抵抗性について、１つの温室実験において評価した。除草剤Ｂｕｔｏｘｏｎｅ（登録商標）（２，４−ＤＢ）およびＷｅｅｄａｒ ６４（２，４−Ｄ）をＩｇｎｉｔｅ ２８０（グルホシネート）と混合し、４つの処理においてワタ植物に施用した（表２）。実験デザインは、１つの処理ごとに１つの植物の４反復であった。植物をポット内で成長させ、処理はランダム化しなかった。噴霧時の植物は３から４葉期であった。噴霧されたワタ植物を、除草剤関連損傷を示す葉群のパーセンテージについて、施用後０、１、２、４および１２日で視覚的に評価した。
【００４３】
グルホシネートを伴う２，４−ＤＢまたは２，４−Ｄの噴霧後にワタ植物上で観察された平均損傷の結果を、表２中に示す。観察された植物への損傷は、より多い施用量で有意差がなかった施用後２日および４日を除いて、グルホシネートと混合された２，４−ＤＢについて、グルホシネートと混合された同じ施用量の２，４−Ｄと比較して、施用後１２日に至るまで統計的に有意に少なかった。
【００４４】
【表２】
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【００４５】
実施例３
ＡＡＤ−１２およびＰＡＴで形質転換されたワタ植物は、グルホシネートと混合された場合の２，４−Ｄと比べた２，４−ＤＢへの抵抗性が適度に向上する
ＡＡＤ−１２およびＰＡＴ遺伝子で形質転換されたワタ植物を、グルホシネートと混合された２，４−ＤＢおよび２，４−Ｄ除草剤化合物への抵抗性について、１つの温室実験において評価した。除草剤Ｂｕｔｏｘｏｎｅ（登録商標）（２，４−ＤＢ）およびＷｅｅｄａｒ ６４（２，４−Ｄ）をＩｇｎｉｔｅ ２８０（グルホシネート）と混合し、４つの処理においてワタ植物に施用した（表３）。実験デザインは、１つの処理ごとに１つの植物の４反復であった。植物をポット内で成長させ、処理はランダム化しなかった。噴霧時の植物は３から４葉期であった。噴霧されたワタ植物を、除草剤関連損傷を示す葉群のパーセンテージについて、施用後０、１、２、４および１２日で視覚的に評価した。
【００４６】
グルホシネートを伴う２，４−ＤＢまたは２，４−Ｄの噴霧後にワタ植物上で観察された平均損傷の結果を、表３中に示す。全体的に、観察された防除パーセンテージは処理間で統計的に有意な差がなかった。除草剤混合物間において同じ濃縮率で比較すると、除草剤間のただ１つの差は、施用後１日において、グルホシネートと混合されたより低い施用量の２，４−ＤＢがグルホシネートと混合されたより低い施用量の２，４−Ｄより有意に少ないワタ植物への損傷をもたらしたことであった。
【００４７】
【表３】
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【国際調査報告】
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