(57)【要約】本発明は、可溶性セレン組成物、ならびにその生成、分離、および精製方法に関する。具体的には、本発明は、（例えば、セレン富化酵母からのセレノ糖タンパク質の抽出を介した）水溶性セレノ糖タンパク質の調製方法、水溶性セレノ糖タンパク質とセレン欠乏組成物との混合によるセレン欠乏組成物の補給方法、水溶性セレノ糖タンパク質を含む組成物、およびそれらの投与方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
可溶性セレノ糖タンパク質（ｓｅｌｅｎｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）を含む組成物であって、前記可溶性セレノ糖タンパク質がセレン富化酵母からの前記可溶性セレノ糖タンパク質の酸抽出を介して得られる、組成物。
【請求項２】
前記可溶性セレノ糖タンパク質が、前記セレン富化酵母を酸性条件に暴露した後に、前記可溶性セレノ糖タンパク質のｐＨ依存的沈殿を介して得られる、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
酸性条件下で可溶性のセレン富化酵母の抽出物を含む液相から前記可溶性セレノ糖タンパク質の一部が沈殿するレベルまで前記ｐＨを上昇させることと、前記沈殿したセレノ糖タンパク質を回収することとを、ｐＨ依存的沈殿が含む、請求項２記載の組成物。
【請求項４】
前記ｐＨレベルを４．０まで上昇させる、請求項３記載の組成物。
【請求項５】
前記ｐＨレベルを６．０まで上昇させる、請求項３記載の組成物。
【請求項６】
以下を含む方法により前記可溶性セレノ糖タンパク質が作出される、請求項１記載の組成物：
ａ）セレン富化酵母を提供することと、
ｂ）前記セレン富化酵母を酸性条件に暴露し、続いて遠心分離して、
ｉ）酸不溶性物質を含むペレットと、
ｉｉ）前記酸性条件下で可溶性のセレン富化酵母の抽出物を含む液相と、
を作成することと、
ｃ）前記液相のｐＨを上昇させることによって、前記酸性条件下で可溶性のセレン富化酵母の抽出物を含む前記液相からセレノ糖タンパク質を沈殿させることと、
ｄ）前記液相から前記沈殿されたセレノ糖タンパク質を分離すること。
【請求項７】
可溶性セレノ糖タンパク質および担体を含む、組成物。
【請求項８】
前記担体が、ポリマーソーム、遅延放出重合体、ナノカプセル、および分子刷り込み重合体からなる群から選択される、請求項７記載の組成物。
【請求項９】
前記担体が遅延放出重合体である、請求項７記載の組成物。
【請求項１０】
前記担体が、セレノ糖タンパク質を封入するために使用されるポリマーソームである、請求項７記載の組成物。
【請求項１１】
前記ポリマーソームがポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）ブロック共重合体を含む、請求項１０記載の組成物。
【請求項１２】
前記ポリマーソームがポリ（ε‐カプロラクトン）（ＰＣＬ）ジブロック共重合体を含む、請求項１０記載の組成物。
【請求項１３】
前記ポリマーソームがポリ（エチレンオキシド）‐ブロック‐ポリ（ε‐カプロラクトン）（ＰＥＯ‐ｂ‐ＰＣＬ）系のジブロック共重合体を含む、請求項１０記載の組成物。
【請求項１４】
前記ポリマーソームが、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコリド）、ポリ（乳酸‐コグリコール酸）、またはポリ（３‐ヒドロキシブチレート）とＰＥＯとのカップリングに由来する、請求項１０記載の組成物。
【請求項１５】
セレノ糖タンパク質を封入するポリマーソームの平均直径が５０〜３００ｎｍである、請求項１０記載の組成物。
【請求項１６】
以下を含む、可溶性セレノ糖タンパク質を調製するための方法：
ａ）セレン富化酵母を提供することと、
ｂ）前記セレン富化酵母を酸性条件に暴露し、続いて遠心分離して、
ｉ）酸不溶性物質を含むペレットと、
ｉｉ）前記酸性条件下で可溶性のセレン富化酵母の抽出物を含む液相と、
を作成することと、
ｃ）前記液相のｐＨレベルを上昇させることによって、前記酸性条件下で可溶性のセレン富化酵母の抽出物を含む前記液相からセレノ糖タンパク質を沈殿させることと、
ｄ）前記液相から前記沈殿されたセレノ糖タンパク質を分離すること。
【請求項１７】
前記酸性条件が酸性緩衝液または酸の添加を用いて得られる、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
前記酸が塩酸である、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記セレン富化酵母を酸性条件に暴露することが、前記セレン富化酵母を１．５のｐＨレベルに暴露することを含む、請求項１６記載の方法。
【請求項２０】
前記セレン富化酵母が１〜２４時間酸性条件に暴露される、請求項１６記載の方法。
【請求項２１】
前記セレン富化酵母が約８時間酸性条件に暴露される、請求項１６記載の方法。
【請求項２２】
前記セレン富化酵母を酸性条件に暴露することが室温より高い温度で起こる、請求項１６記載の方法。
【請求項２３】
前記温度が５０℃〜１００℃である、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
前記温度が８０℃である、請求項２２記載の方法。
【請求項２５】
セレノ糖タンパク質がさまざまなｐＨ条件で前記液相から沈殿され、可溶性セレノ糖タンパク質の複数のｐＨ依存的画分が作成される、請求項１６記載の方法。
【請求項２６】
可溶性セレノ糖タンパク質の前記複数のｐＨ依存的画分が、１．８５、３．０、４．０、および６．０のｐＨ値で作成される、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
前記液相から前記沈殿されたセレノ糖タンパク質を分離することが、前記沈殿されたセレノ糖タンパク質のペレットを形成するための遠心分離、続いて前記沈殿されたセレノ糖タンパク質からの前記液相の除去を含む、請求項１６記載の方法。
【請求項２８】
前記セレン富化酵母が、２％以下の無機セレンを含む、乾燥した生育不能のセレン富化酵母である、請求項１６記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１０年３月１８日出願の米国仮特許出願第６１／３１５，２６５号に対する優先権を主張する、２０１１年３月１８日出願の米国特許出願第１３／０５１，６４６号の一部継続であり、そしてそれに対する優先権を主張し、当該出願はそれぞれ、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は、可溶性セレン組成物、ならびにその生成、分離、および精製方法に関する。具体的には、本発明は（例えば、セレン富化酵母からのセレノ糖タンパク質（ｓｅｌｅｎｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）の抽出による）水溶性セレノ糖タンパク質の調製方法、水溶性セレノ糖タンパク質とセレン欠乏組成物との混合によるセレン欠乏組成物の補給方法、水溶性セレノ糖タンパク質を含む組成物、ならびにその投与方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
セレンはヒトの適切な生理機能に重要な微量元素である。セレンは、さまざまな含有量のセレンを有し得る食物を通して摂取される。
【０００４】
セレンは生理代謝、成長、性と生殖に関する健康、および免疫の維持において重要な役割を果たすことが知られている。セレンは例えば、１‐セレノメチオニン、セレノシステイン、およびセレノシスチンの如きアミノ酸を含む、異なる有機分子に組み込まれる。したがって、セレンはタンパク質の構成部分であり得る。そしてそれらの多くは体にとって構造的に重要なものである。さらに、セレンはヒトにおいて代謝、生殖、癌の予防、および免疫防御に影響するいくつかの酵素において重要な成分である（例えば、Ｒａｙｍａｎ，Ｍ，Ｌａｎｃｅｔ  ３５６：２３３−２４１（２０００）（非特許文献１）を参照のこと）。
【０００５】
複数の研究が低レベルのセレンの摂取からもたらされる健康上の有益性の可能性を明らかにすることを試みてきた。例えば、低濃度の無機形態のセレンはいくつかの健康上の有益性を有する可能性を示した（例えば、Ｆｕｒｎｓｉｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ  ｏｆ  Ｏｂｅｓｉｔｙ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓ．，１９，４５８‐４６３（１９９５）（非特許文献２）を参照のこと）。しかしながら、高投与量レベルでは、有益な効果は逆転され、そして危険な毒性が顕著になる。
【０００６】
ここ２０年間にわたる研究は、セレンは、栄養要求量より５〜１０倍だけ高い用量で動物に提供されるとき、癌の発生の減少において有効であることを示唆した（例えば、Ｅｌ‐Ｂａｙｏｕｍｙ，Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｓｅｌｅｎｉｕｍ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，１‐１５，１９９１）（非特許文献３）を参照のこと）。動物モデル系におけるセレンでの化学予防研究は、この元素は、全てではないかもしれないが、ほとんどの器官系について有効であり、そして発癌効果に対して保護性であることを示した（例えば、Ｅｌ‐Ｂａｙｏｕｍｙ，Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｓｅｌｅｎｉｕｍ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，１‐１５，１９９１（非特許文献３）を参照のこと）。疫学研究および補給試験もまた肝臓、結腸、前立腺、および肺の発癌の低下におけるその有効性を支持した（例えば、Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｌ  Ｔｒａｃｅ  Ｅｌｅｍ  Ｒｅｓ，５６：  １１７‐１２４（１９９７）（非特許文献４）、Ｃｌａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｍ  Ｍｅｄ  Ａｓｓｏｃ，  ２７６：１９５７‐１９６３（１９９６）（非特許文献５）、Ｙｏｓｈｉｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ，９０：  １２１９‐１２２４，（１９９８）（非特許文献６）、Ｂｒｏｏｋｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｕｒｏｌ，１６６：２０３４‐２０３８，（２００１）（非特許文献７）を参照のこと）。他の研究は癌のセレンによる減少について有益な効果を示さなかった（例えば、Ｇａｒｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ  Ｎｕｔｒ．，１２，４００‐１１  （１９９３）（非特許文献８）、Ｇｈａｄｉｒｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔ  Ｐｒｅｖ，２４：  ３０５‐１３（２０００）（非特許文献９）を参照のこと）。
【０００７】
複数の形態のセレンが調べられている。これらは亜セレン酸ナトリウムの如き無機セレン、およびセレン酵母を含む有機源を含む。無機および有機セレンの毒性には顕著な相違があり、無機化合物は通常吸収され、そしてあまり有効に利用されない、そしてまたセレンの有機源より毒性である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｒａｙｍａｎ，Ｍ，Ｌａｎｃｅｔ  ３５６：２３３−２４１（２０００）
【非特許文献２】Ｆｕｒｎｓｉｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ  ｏｆ  Ｏｂｅｓｉｔｙ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓ．，１９，４５８‐４６３（１９９５）
【非特許文献３】Ｅｌ‐Ｂａｙｏｕｍｙ，Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｓｅｌｅｎｉｕｍ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，１‐１５，１９９１）
【非特許文献４】Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｌ  Ｔｒａｃｅ  Ｅｌｅｍ  Ｒｅｓ，５６：  １１７‐１２４（１９９７）
【非特許文献５】Ｃｌａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｍ  Ｍｅｄ  Ａｓｓｏｃ，  ２７６：１９５７‐１９６３（１９９６）
【非特許文献６】Ｙｏｓｈｉｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ，９０：  １２１９‐１２２４，（１９９８）
【非特許文献７】Ｂｒｏｏｋｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｕｒｏｌ，１６６：２０３４‐２０３８，（２００１）
【非特許文献８】Ｇａｒｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ  Ｎｕｔｒ．，１２，４００‐１１  （１９９３）
【非特許文献９】Ｇｈａｄｉｒｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔ  Ｐｒｅｖ，２４：  ３０５‐１３（２０００）
【発明の概要】
【０００９】
本発明は、可溶性セレン組成物、ならびにその生成、分離、および精製方法に関する。具体的には、本発明は、（例えば、セレン富化酵母からのセレノ糖タンパク質の抽出による）水溶性セレノ糖タンパク質の調製方法、水溶性セレノ糖タンパク質とセレン欠乏組成物との混合によるセレン欠乏組成物の補給方法、水溶性セレノ糖タンパク質を含む組成物、およびその投与方法を提供する。
【００１０】
したがって、いくつかの実施形態において、本発明は、可溶性セレノ糖タンパク質の調製方法であって、セレン富化酵母を提供することと、セレン富化酵母を酸性条件に暴露し、続いて遠心分離して、ｉ）酸不溶性物質を含むペレットと、ｉｉ）酸性条件下で可溶性のセレン富化酵母の抽出物を含む液相と、を作成することと、その液相のｐＨを上昇させることにより酸性条件下で可溶性のセレン富化酵母の抽出物を含む液相からセレノ糖タンパク質を沈殿させることと、（ｄ）その液相から沈殿されたセレノ糖タンパク質を分離することと、を含む、調製方法を提供する。いくつかの実施形態において、セレン富化酵母を酸性条件に暴露することは室温より高い温度で起こる（例えば、約２０〜２５℃超）。本発明はセレン富化酵母が酸性条件に暴露される室温より高い温度に限定されない。実際、非限定的に、約３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９０、９５、９７、９９℃、またはそれ以上を含む、さまざまな温度が使用され得る。同様に、本発明はセレン富化酵母が暴露される酸性条件に限定されない。いくつかの実施形態において、セレン富化酵母は、ｐＨが約６．５、約６、約５．５、約５、約４．５、約４、約３．５、約３、約２．５、約２、約１．５、約１、またはそれ以下である条件に暴露される。好ましい実施形態において、セレン富化酵母を酸性条件に暴露することはセレン富化酵母のｐＨ１．５への暴露を含む。いくつかの実施形態において、セレン富化酵母の酸性条件への暴露はある特定の期間起こる。本発明はセレン富化酵母が酸性条件に暴露される期間に限定されない。いくつかの実施形態において、セレン富化酵母は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４時間、またはそれ以上の時間、酸性条件に暴露される。いくつかの実施形態において、セレン富化酵母は１〜２４時間の間、酸性条件に暴露される。いくつかの実施形態において、セレン富化酵母は５〜１０時間の間、酸性条件に暴露される。好ましい実施形態において、セレン富化酵母は約８時間、酸性条件に暴露される。いくつかの実施形態において、酸性条件は酸性緩衝液および／または酸の添加を利用して作出され、および／または維持される。本発明は利用される酸の種類に限定されない。実際、どんな酸も使用され得る。いくつかの実施形態において、その酸は塩酸であるが、どんな酸も使用され得る。いくつかの実施形態において、セレノ糖タンパク質は液相のｐＨを上昇させることにより酸性条件下で可溶性のセレン富化酵母の抽出物を含む液相から沈殿される。いくつかの実施形態において、沈殿されたセレノ糖タンパク質は、沈殿されたセレノ糖タンパク質のペレットを作成するための遠心分離およびその沈殿されたセレノ糖タンパク質からのその液相の除去により液相から分離される。本発明は、その抽出物のｐＨがその液相からセレノ糖タンパク質を沈殿させるために上昇させられる量または程度に限定されない。いくつかの実施形態において、その液相のｐＨを１．８５まで上昇させる。いくつかの実施形態において、その液相のｐＨを３．０まで上昇させる。いくつかの実施形態において、その液相のｐＨを４．０まで上昇させる。いくつかの実施形態において、その液相のｐＨを６．０まで上昇させる。いくつかの実施形態において、セレノ糖タンパク質はさまざまなｐＨ条件で沈殿され、そして液相から分離され、可溶性セレノ糖タンパク質の複数のｐＨ依存的画分を形成する。例えば、いくつかの実施形態において、酸性条件下で可溶性のセレン富化酵母の抽出物を含む単一の液相は第１のｐＨ（例えば、ｐＨ１．８５）で沈殿される可溶性セレノ糖タンパク質の第１の画分、第２のｐＨ（例えば、ｐＨ３．０）で沈殿される可溶性セレノ糖タンパク質の第２の画分、第３のｐＨ（例えば、ｐＨ４．０）で沈殿される可溶性セレノ糖タンパク質の第３の画分、および第４のｐＨ（例えば、ｐＨ６．０）で沈殿される可溶性セレノ糖タンパク質の第４の画分を作成するために使用される。いくつかの実施形態において、液相のｐＨを上昇させることにより液相からセレノ糖タンパク質を沈殿させることはその液相の複数の、連続したｐＨ依存的沈殿反応を含む。いくつかの実施形態において、可溶性セレノ糖タンパク質を含む組成物はセレノ糖タンパク質の単一のｐＨ依存的画分のみを含む（例えば、ｐＨ４．０で沈殿される、酸性条件下で可溶性のセレン富化酵母の抽出物を含む液相からの可溶性セレノ糖タンパク質）。いくつかの実施形態において、可溶性セレノ糖タンパク質を含む組成物はセレノ糖タンパク質の２つ以上のｐＨ依存的画分を含む（例えば、２つ以上の異なるｐＨ値で沈殿される、酸性条件下で可溶性のセレン富化酵母の抽出物を含む液相からの可溶性セレノ糖タンパク質）。いくつかの実施形態において、セレン富化酵母は２％以下の無機セレンしか含まない乾燥された生育不能のセレン富化酵母である。
【００１１】
本発明は本発明に従って調製される可溶性セレノ糖タンパク質を含む組成物をもまた提供する。例えば、いくつかの実施形態において、本発明は本発明に係る可溶性セレノ糖タンパク質を含むセレン欠乏組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明に係る可溶性セレノ糖タンパク質はセレン欠乏組成物に添加され、および／またはそれと混合される。本発明は本発明に係る可溶性セレノ糖タンパク質が添加されるまたは混合されるセレン欠乏組成物または材料の種類に限定されず、そのような組成物または材料は、非限定的に、食物サプリメント、薬物、医薬、食料品、動物食餌、および他の種類の材料を含む。いくつかの実施形態において、セレノ糖タンパク質を添加するまたは混合する（例えば、ブレンドする）ことはセレノ糖タンパク質および１つ以上の他の種類のセレンをその組成物にブレンドすることを含む。いくつかの実施形態において、本発明に係る可溶性セレノ糖タンパク質は（例えば、セレンの総量を増加させるおよび／または補給するために）セレンを含む組成物に添加され、および／またはそれと混合される。
【００１２】
本発明は可溶性セレノ糖タンパク質および担体を含む組成物をもまた提供する。いくつかの実施形態において、そのセレノ糖タンパク質はセレノ糖タンパク質の特定のｐＨ依存的画分である。本発明は利用される担体の種類に限定されない。実際、非限定的に、デンドリマー、ポリマーソーム、ナノ粒子、遅延放出重合体、ナノカプセル、および／または分子刷り込み重合体を含む、さまざまな担体が使用され得る。１つの好ましい実施形態において、その担体は遅延放出重合体である。別の好ましい実施形態において、その担体は分子刷り込み重合体である。さらに別の好ましい実施形態において、その担体はセレノ糖タンパク質を封入するために使用されるポリマーソームである。本発明は使用されるポリマーソームの種類に限定されない。実際、本分野において既知のどんなポリマーソームも利用され得る。いくつかの実施形態において、そのポリマーソームはポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）ブロック共重合体を含む。しかしながら、本発明はあまり限定されない。例えば、ポリ（エチルエチレン）（ＰＥＥ）、ポリ（ブタジエン）（ＰＢまたはＰＢＤ）、ポリ（スチレン）（ＰＳ）、およびポリ（イソプレン）（ＰＩ）を含む、どんな既知のブロック共重合体も利用され得る。いくつかの実施形態において、その重合体はポリ（ε‐カプロラクトン）（ＰＣＬ）ジブロック共重合体を含む。いくつかの実施形態において、そのポリマーソームはポリ（エチレンオキシド）‐ブロック‐ポリ（ε‐カプロラクトン）（ＰＥＯ‐ｂ‐ＰＣＬ）系のジブロック共重合体を含む。いくつかの実施形態において、そのポリマーソームはトリブロック、テトラブロック、ペンタブロック、または少なくとも６ブロック共重合体であるブロック共重合体を含む。いくつかの実施形態において、そのポリマーソームはポリ（乳酸）、ポリ（グリコリド）、ポリ（乳酸‐コグリコール酸）、および／またはまたはポリ（３‐ヒドロキシブチレート）とＰＥＯとのカップリングに由来する。本発明はセレノ糖タンパク質を封入したポリマーソームのサイズに限定されない。非限定的に、直径約５０〜３００ｎｍであるセレノ糖タンパク質を封入したポリマーソームを含む、さまざまなサイズが本発明に係る組成物および方法において使用されるが、より大きな（例えば、約３５０ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、またはそれ以上の）およびより小さな（例えば、約４０ｎｍ、３０ｎｍ、２０ｎｍ、またはそれ以下の）セレノ糖タンパク質を封入したポリマーソームが使用され得る。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明の実施形態の酸抽出および続く沈殿によるＳＥＬ‐ＰＬＥＸからの可溶性セレノ糖タンパク質（ＳＧＰ）の連続調製を示す。
【図２】本発明の実施形態のセレノ糖タンパク質のｐＨ依存的沈殿のプロセスを示す。
【図３】基本対照に比較したニワトリ胸骨格の筋肉における遺伝子発現レベルに対する、実施例３の表３および４中に示される異なるセレン補給処置の効果を示す熱マップを示す。
【図４】胸筋においてプロファイル化された遺伝子発現に対するＳＧＰ画分ｐＨ４．０およびＳＥＬ‐ＰＬＥＸの異なる効果を示すベン図を示す。
【図５】亜セレン酸ナトリウム（ＳＳ）、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ（ＳＰ）、およびセレノ糖タンパク質（ＳＧＰ）画分ｐＨ４．０により共通して調節されることが同定された例示的な遺伝子を示す。
【図６】ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ（ＳＰ）およびセレノ糖タンパク質（ＳＧＰ）画分ｐＨ４．０により共通して調製されるが、亜セレン酸ナトリウム（ＳＳ）によっては調節されないことが同定された例示的な遺伝子を示す。
【図７】セレノ糖タンパク質（ＳＧＰ）画分ｐＨ４．０により独自に調節されるが、亜セレン酸ナトリウム（ＳＳ）またはＳＥＬ‐ＰＬＥＸ（ＳＰ）によっては調節されないことが同定された例示的な遺伝子を示す。
【図８】セレノ糖タンパク質（ＳＧＰ）画分ｐＨ４．０により独自に調節されるが、亜セレン酸ナトリウム（ＳＳ）またはＳＥＬ‐ＰＬＥＸ（ＳＰ）によっては調節されないことが同定された例示的な遺伝子を示す。
【図９】セレノ糖タンパク質（ＳＧＰ）画分ｐＨ４．０により独自に調節されるが、亜セレン酸ナトリウム（ＳＳ）またはＳＥＬ‐ＰＬＥＸ（ＳＰ）によっては調節されないことが同定された例示的な遺伝子を示す。
【図１０】セレノ糖タンパク質（ＳＧＰ）画分ｐＨ４．０により独自に調節されるが、亜セレン酸ナトリウム（ＳＳ）またはＳＥＬ‐ＰＬＥＸ（ＳＰ）によっては調節されないことが同定された例示的な遺伝子を示す。
【図１１】基本対照に比較した肝臓組織における遺伝子発現レベルに対する実施例３の表３および４中に示される異なるセレン補給処置の効果を示す熱マップを示す。
【図１２】２週間にわたるｐＨ５．１およびｐＨ７．４でのナノカプセルからのＳＧＰの放出を示す。
【図１３】ｐＨ７．４でのセレノ糖タンパク質を封入したポリマーソームの低温トンネリング電子顕微鏡（Ｃｒｙｏｇｅｎｉｃ  Ｔｕｎｎｅｌｉｎｇ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）（低温ＴＥＭ（ｃｒｙｏ‐ＴＥＭ））画像を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
定義
本発明の理解を促進するために、いくつかの用語および句が以下に定義される。
【００１５】
本明細書中で使用されるとき、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」の全ては共有「ペプチド結合」により連結されるアミノ酸の一次配列を言う。一般的に、ペプチドはいくつかのアミノ酸、典型的には２〜５０アミノ酸からなり、そしてタンパク質より短い。用語「ポリペプチド」はペプチドおよびタンパク質を包含する。
【００１６】
用語「糖タンパク質（単数または複数）」または「糖ペプチド（単数または複数）」はポリペプチド鎖に共有結合された１つ以上の炭水化物残基を含むタンパク質またはペプチドを言う。用語「セレノタンパク質（単数または複数）」または「セレノペプチド（単数または複数）」は１つ以上のセレン原子を含むタンパク質またはペプチドを言う。典型的に、セレン原子はセレノシステインおよびセレノメチオニンを含むセレン含有アミノ酸内でタンパク質に組み込まれる。
【００１７】
用語「セレノ糖タンパク質（単数または複数）」、「セレノ糖ペプチド（単数または複数）」、または「ＳＧＰ（単数または複数）」は１つ以上のセレン原子を組み込む糖タンパク質または糖ペプチドを言う。典型的に、「セレノ糖タンパク質」は１つ以上のセレン含有アミノ酸を含む。「セレノ糖タンパク質」は任意の数の異なる形態のいくつかの炭水化物を含み得る。
【００１８】
用語「サンプル」および「標本」はそれらの最も広い意味で使用され、そしてどんな源から得られたサンプルまたは標本をも包含する。本明細書中で使用されるとき、用語「サンプル」は（ヒトを含む）動物から得られた生物学的サンプルを言うために使用され、そして液体、固体、および組織を包含する。本発明のいくつかの実施形態において、生物学的サンプルは脳脊髄液（ＣＳＦ）、漿液、尿および唾液、血液、ならびに血漿、血清等の如き血液産物を含む。しかしながら、これらの例は本発明で使用されるサンプルの種類を限定するものとして解釈されるべきでない。
【００１９】
本明細書中で使用されるとき、用語「酵母」および「酵母細胞」は細胞壁、細胞膜、および細胞内構成要素を有する、真菌界に分類される真核微生物を言う。酵母は特定の分類上のまたは系統上のグループを形成しない。現在は、約１，５００種が知られており、全ての酵母種の１％のみが示されていると見積もられている。用語「酵母」はしばしば出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）の同義語として取られるが、酵母の系統上の多様性は子嚢菌門および担子菌門の両方におけるそれらのクラス分けにより示される。用語「酵母」は醸造酵母、蒸留酵母、およびパン酵母を包含する。出芽酵母（「真の酵母」）はサッカロミセス目に分類される。酵母のほとんどの種は出芽により無性生殖的に再生するが、いくつかは二分裂により再生する。酵母は単細胞であるが、いくつかの種は仮性菌糸または偽菌糸として知られる連結された出芽細胞の糸の形成を通して多細胞になる。酵母の大きさは種により大きく変化し、典型的に直径３〜４μｍであり得るが、いくつかの酵母は４０μｍ超に達し得る。
【００２０】
本明細書中で使用されるとき、用語「セレン富化酵母」および「セレン化酵母」は、無機セレン塩を含む培地中で培養されるどんな酵母（例えば、出芽酵母）をも言う。本発明は使用されるセレン塩により限定されない。実際、非限定的に、亜セレン酸ナトリウムまたはセレン酸ナトリウムを含む、さまざまなセレン塩が本発明において有用であることが企図される。（例えば、細胞または酵母と関連していない）遊離セレノメチオニンもまた、酵母がこの形態のセレンを組み込むため、セレン富化酵母のセレン源として使用され得る。培養中、セレンと硫黄の間の化学的類似性のために、酵母は、細胞内の通常は硫黄含有有機化合物であるところに硫黄の代わりにセレンを組み込む。そのような酵母調製物中のセレン含有化合物はポリペプチド／タンパク質に組み込まれるセレノメチオニンである。そのような調製物中にセレノメチオニンの形態で存在する細胞セレンの総量はさまざまであろうが、１０〜１００％、２０〜６０％、５０〜７５％、および６０〜７５％であり得る。セレン化酵母調製物中の有機セレンの残余は主にセレノメチオニン生合成経路中の中間体からなる。これらは、非限定的に、セレノシステイン、セレノシスタチオニン、セレノホモシステイン、およびセレノ‐アデノシルセレノメチオニンを含む。完成した生成物中の残留無機セレン塩の量は一般的に非常に低い（例えば、２％未満）。
【００２１】
本明細書中で使用されるとき、用語「ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ」は、酵母の成長速度に対するセレン塩の有害な効果を最小限にし、そして細胞有機材料への無機セレンの最適な組み込みを許容する様式で、甘蔗廃糖蜜およびセレン塩の増加性の量を提供するフェドバッチ発酵中で培養された、乾燥した生育不能のセレン富化酵母（例えば、受託番号ＣＮＣＭ  Ｉ‐３０６０の出芽酵母、Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌｅ  Ｄｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ  Ｄｅ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ（ＣＮＣＭ），Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｐａｓｔｅｕｒ，Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）を言う。残留無機セレンは（例えば、厳しい洗浄プロセスを用いて）除去され、そして２％の総セレン含有量を超えない。
【００２２】
本明細書中で使用されるとき、用語「有機セレン」はセレン原子が直接炭素原子に結合した有機化合物を言う。
【００２３】
本明細書中で使用されるとき、用語「無機セレン」は一般的に、セレンが−２、＋４、および＋６酸化状態であるどんなセレン塩（例えば、亜セレン酸ナトリウム、セレン酸ナトリウム）をも言う。
【００２４】
本明細書中で使用されるとき、用語「受容者」、「対象」、および「患者」は研究され、分析され、試験され、診断され、または処置される、非限定的に、ヒトおよび動物（例えば、霊長類、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、家禽、魚、甲殻類等）を含む、どんな動物をも言う。本明細書中で使用されるとき、用語「受容者」、「対象」、および「患者」は、別段の定めなき限り、相互変換可能に使用される。
【００２５】
本明細書中で使用されるとき、用語「ｗ／ｗ」（「重量／重量」）は重量ベースでの組成物中のある物質の量を言う。例えば、０．０２％  ｗ／ｗ食物飼料サプリメントを含む動物飼料はその食物飼料サプリメントの質量がその動物飼料の総質量の０．０２％であることを意味する（例えば、９９９，８００ｇの動物飼料中の２００ｇの食物飼料サプリメント組成物）。
【００２６】
本明細書中で使用されるとき、用語「精製される」または「精製する」はサンプルからの成分の除去を言う。例えば、酵母細胞壁は非酵母細胞壁成分（例えば、細胞膜および／または酵母細胞内成分）の除去により精製される。それらは酵母細胞壁以外の汚染物質または他の剤の除去によってもまた精製される。非酵母細胞壁成分および／または非酵母細胞壁汚染物質の除去はサンプル中の酵母細胞壁またはその成分の割合における増加をもたらす。
【００２７】
本明細書中で使用されるとき、用語「有効な量」は有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な（例えば、本発明に係るセレノ糖タンパク質を含む）組成物の量を言う。有効な量は１回以上の投与、適用、または投与量で投与されることができ、そして特定の処方または投与経路に限定されるとは意図されない。
【００２８】
本明細書中で使用されるとき、用語「バイオアベイラビリティ」は生物に利用可能であるまたは体循環に達する分子または成分の画分を言う。分子または成分が静脈内に投与されるとき、そのバイオアベイラビリティは非常に高い。しかしながら、分子または成分が（経口の如き）他の経路を介して投与されるとき、そのバイオアベイラビリティは（不完全な吸収および初回通過代謝のために）減少する。栄養関係で、バイオアベイラビリティは栄養素の吸収および利用速度を言う。例えば、異なる形態の同じ栄養素は異なるバイオアベイラビリティを有し得る。
【００２９】
本明細書中で使用されるとき、用語「飼料」、「食糧」、「動物飼料」、および「飼料原料」は動物により消費され、そして動物の食餌のエネルギーおよび／または栄養素に寄与する材料（単数または複数）を言う。例は非限定的に、完全混合飼料（Ｔｏｔａｌ  Ｍｉｘｅｄ  Ｒａｔｉｏｎ（ＴＭＲ））、かいば（単数または複数）、ペレット（単数または複数）、濃縮物（単数または複数）、プレミックス（単数または複数）、連産品（単数または複数）、穀物（単数または複数）、蒸留穀物（単数または複数）、糖蜜、繊維（単数または複数）、飼料（単数または複数）、牧草（単数または複数）、干し草、穀粒（単数または複数）、葉、あら粉、溶解物（単数または複数）、およびサプリメント（単数または複数）を含む。
【００３０】
本明細書中で使用されるとき、用語「食物サプリメント」、「食事サプリメント」、「食事サプリメント組成物」等は、例えば、動物飼料への添加として、ヒトまたは動物食事の一部分として使用される食事サプリメントまたは栄養サプリメントとして調合された食物製品を言う。
【００３１】
本明細書中で使用されるとき、用語「投与」および「投与する」は薬物、プロドラッグ、もしくは他の剤、または治療的処置（例えば、本発明に係る組成物）を対象（例えば、対象またはインビボ、インビトロ、もしくはエックスビボ細胞、組織、および器官）に与える行為を言う。ヒトの体への例示的な投与経路は目（眼の）、口（経口）、皮膚（局所または経皮）、鼻（鼻の）、肺（吸入）、口腔粘膜（頬）、耳、直腸、膣を通したもの、注入（例えば、静脈内、皮下、腫瘍内、腹腔内等）によるもの等であり得る。
【００３２】
本明細書中で使用されるとき、用語「共投与」および「共投与する」は少なくとも２つの剤（単数または複数）（例えば、本発明に係るセレノ糖タンパク質および１つ以上の他の剤、例えば、抗生物質、治療的（例えば、薬物または医薬）、または他の生物学的に活性な化合物を含む組成物）または治療の、対象への投与を言う。いくつかの実施形態において、２つ以上の剤または治療の共投与は同時である。他の実施形態において、第１の剤／治療は第２の剤／治療より前に投与される。当業者は、使用されるさまざまな剤または治療の処方および／または投与経路は変化し得ることを理解する。共投与のための適切な投与量は当業者により容易に決定され得る。いくつかの実施形態において、剤または治療が共投与されるとき、それぞれの剤または治療はそれらの単独投与に適切な投与量より低い投与量で投与される。したがって、共投与は剤または治療の共投与が有害である可能性がある（例えば、毒性の）剤（単数または複数）の必要な投与量を低下する実施形態において、および／または２つ以上の剤の共投与により、その他の剤の共投与を介してその剤のうちの１つの有益な効果に対して対象が敏感になるとき、特に所望される。
【００３３】
本明細書中で使用されるとき、用語「処置」または文法上の均等物は疾患（例えば、神経変性疾患）の症状の改善および／または逆転を包含する。本発明に係るスクリーニング方法において使用されるとき疾患に関連する任意のパラメータにおける改善を引き起こす化合物はしたがって治療用化合物として同定され得る。用語「処置」は治療的処置および予防的または防御手段の両方を言う。例えば、本発明に係る組成物および方法での処置から利益を受け得る者は既に疾患および／または障害（例えば、神経変性疾患、糖尿病、または認識機能の欠損もしくは喪失）を有する者ならびに（例えば、本発明に係る予防処置を用いて）疾患および／または障害が予防される者を含む。
【００３４】
本明細書中で使用されるとき、用語「疾患の危険性のある」は特定の疾患にかかりやすい対象（例えば、ヒト）を言う。このかかりやすさは遺伝的（例えば、遺伝的障害の如き、疾患にかかる特定の遺伝的傾向）または他の因子（例えば、年齢、体重、環境条件、環境中に存在する有害化合物への暴露等）のためであり得る。したがって、本発明は特定の危険性に限定されるとは意図されず、本発明は特定の疾患に限定されるとも意図されない。
【００３５】
本明細書中で使用されるとき、用語「疾患を患う」は特定の疾患にかかっている対象（例えば、ヒト）を言う。本発明は特定の兆候または症状、あるいは疾患に限定されるとは意図されない。したがって、本発明は、対象が特定の疾患に関連する少なくともいくつかの兆候（例えば、兆候および症状）を示す（例えば、無症状の兆候から本格的な疾患まで）どんな種類の疾患にかかっている対象をも包含することが意図される。
【００３６】
本明細書中で使用されるとき、用語「疾患」および「病理学的状態」は、通常の機能の動作を妨害するまたは改変する、生きている動物のまたはそのいずれかの器官もしくは組織の通常の状態の欠陥に関連し、そして（照射、栄養失調、工業災害、または天候の如き）環境因子に、（ぜん虫、細菌、またはウイルスの如き）特定の感染性の剤に、（さまざまな遺伝的異常の如き）生物の遺伝的欠陥に、またはこれらのおよび他の因子の組み合わせに応答し得る状態、兆候、および／または症状を示すために相互変換可能に使用される。
【００３７】
用語「化合物」は体機能の疾患、病気、病、または障害を治療するまたは予防するために使用され得る化学物質、医薬、薬物等を言う。化合物は既知のおよび可能性のある治療用化合物の両方を含む。化合物は本発明に係るスクリーニング方法を用いたスクリーニングにより治療的であると決定され得る。「既知の治療用化合物」はそのような処置において有効であることが（例えば、動物試験またはヒトへの投与での事前の経験を通して）示されている治療用化合物を言う。別の言葉で言えば、既知の治療用化合物は疾患（例えば、癌、神経変性疾患等）の治療において有効な化合物に限定されない。
【００３８】
本明細書中で使用されるとき、用語「キット」は試薬および他の材料の組み合わせについて使用される。キットは栄養剤および薬物の如き試薬ならびに投与手段を含み得ることが企図される。用語「キット」は試薬および／または他の材料の特定の組み合わせに限定されるとは意図されない。
【００３９】
本明細書中で使用されるとき、用語「毒性」は、対象、細胞、または組織に対して、毒性物の投与前の同じ細胞または組織に比較して有害なまたは害を及ぼす効果を言う。
【００４０】
本明細書中で使用されるとき、用語「医薬組成物」は活性剤（例えば、セレノ糖タンパク質を含む組成物）と、その組成物をインビトロ、インビボ、またはエックスビボでの診断的、予防的、および／または治療的使用に特に好適にする不活性または活性な担体との組み合わせを言う。
【００４１】
本明細書中で使用されるとき、用語「医薬として許容される」または「薬理学的に許容される」は、対象に投与されたとき、悪い反応、例えば、毒性、アレルギー性、または免疫学的反応を実質的に生成しない組成物を言う。
【００４２】
本明細書中で使用されるとき、用語「局所的に」は皮膚表面ならびに粘膜細胞および組織（例えば、肺胞、頬、舌、咀嚼、または鼻粘膜、ならびに中空器官または体腔を覆う他の組織および細胞）への本発明に係る組成物の適用を言う。
【００４３】
本明細書中で使用されるとき、用語「医薬として許容される担体」は非限定的に、リン酸緩衝生理食塩溶液、水、エマルジョン（例えば、油／水または水／油エマルジョンの如き）、およびさまざまな種類の湿潤剤、どんなおよび全ての溶媒、分散媒体、コーティング、ラウリル硫酸ナトリウム、等張および吸収遅延剤、崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはグリコール酸ナトリウムデンプン）等を含む、どんな標準の医薬担体をも言う。組成物は安定化剤および保存剤をも含み得る。担体、安定化剤、および補助剤の例は、例えば、Ｍａｒｔｉｎ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９７５）中に示され、これは参照により本明細書に援用される。いくつかの実施形態において、食糧（例えば、食物材料および／または処置）は（例えば、本発明に係るセレノ糖タンパク質組成物の）担体としてはたらく。
【００４４】
本明細書中で使用されるとき、用語「医薬として許容される塩」は標的対象（例えば、哺乳類対象、および／またはインビボもしくはエックスビボ、細胞、組織、もしくは器官）において生理学的に耐性である本発明に係る化合物の（例えば、酸または塩基との反応により得られる）どんな塩をも言う。本発明に係る化合物の「塩」は無機もしくは有機酸および塩基に由来し得る。酸の例は非限定的に、塩酸、臭化水素酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン‐ｐ‐スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、蟻酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン‐２‐スルホン酸、ベンゼンスルホン酸等を含む。シュウ酸の如き他の酸は、それ自体医薬として許容されないが、本発明に係る化合物およびそれらの医薬として許容される酸添加塩の取得における中間体として有用な塩の調製において使用され得る。塩基の例は非限定的に、水酸化アルカリ金属（例えば、ナトリウム）、水酸化アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）、アンモニア、およびＷがＣ１‐４アルキルである式ＮＷ４＋の化合物等を含む。塩の例は非限定的に、酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスパラギン酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、重硫酸、酪酸、クエン酸、ショウノウ酸、ショウノウスルホン酸、シクロペンタンプロピオン酸、ジグルコン酸、ドデシル硫酸、エタンスルホン酸、フマル酸、フルコヘプタン酸、グリセロリン酸、ヘミ硫酸、ヘプタン酸、ヘキサン酸、塩化物、臭化物、ヨウ化物、２‐ヒドロキシエタンスルホン酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、２‐ナフタレンスルホン酸、ニコチン酸、シュウ酸、パルモ酸、ペクチン酸、フェニルプロピオン酸、ピクリン酸、ピバル酸、プロピオン酸、コハク酸、酒石酸、チオシアン酸、トシル酸、ウンデカン酸等を含む。塩の他の例はＮａ＋、ＮＨ４＋、およびＮＷ４＋（ＷがＣ１‐４アルキル基である）等の如き好適な陽イオンと混合された本発明に係る化合物の陰イオンを含む。治療的使用のために、本発明に係る化合物の塩は医薬として許容されることが企図される。しかしながら、医薬として許容不可能である酸および塩基の塩もまた、例えば、医薬として許容可能な化合物の調製または精製において使用され得る。治療的使用のために、本発明に係る化合物の塩は医薬として許容されることが企図される。しかしながら、医薬として許容不可能である酸および塩基の塩もまた、例えば、医薬として許容可能な化合物の調製または精製において使用され得る。
【００４５】
本明細書中で使用されるとき、用語「乾燥」はスプレイ乾燥、凍結乾燥、空気乾燥、真空乾燥、または物質中の液体を減少させるもしくは除去するどんな他の種類のプロセスをも言う。
【００４６】
本明細書中で使用されるとき、用語「スプレイ乾燥」は物質中の液体を減少させるまたは除去するためにその液体を蒸発させるための熱い気体を用いてその液体を含む物質を乾燥させる通常使用される方法を言う。別の言葉で言えば、その物質は加熱された乾燥空気の通風中へのスプレイまたは噴霧の方法により乾燥される。
【００４７】
本明細書中で使用されるとき、用語「凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ‐ｄｒｙｉｎｇ）」および用語「凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ）」ならびに用語「低温乾燥」は昇華による凍結状態の物質からの溶媒の除去を言う。これは乾燥させたい物質をその共晶点未満まで凍結させ、そしてその後昇華の潜熱を提供することにより達成される。真空および熱入力の正確な制御により、生成物のメルトバックを伴わない凍結状態からの乾燥をすることができる。実質的な適用において、そのプロセスは減圧条件下で加速され、および正確に制御される。
【００４８】
本明細書中で使用されるとき、用語「乾燥遊離流動粉末」は遊離流動乾燥粉末、例えば、大きな塊の妨害を伴わずに、容器、袋、器等から注がれ得る粉末を言う。
【００４９】
本明細書中で使用されるとき、用語「研削」は衝撃、せん断、または摩擦により粒子サイズを減少させることを言う。
【００５０】
本明細書中で使用されるとき、用語「洗浄」は不純物の（例えば、あらゆる種類の溶質（例えば、蒸留水、緩衝液、または溶媒）または混合物を用いた）除去または清浄を言う、あるいは調製物（例えば、酵母細胞壁）の可溶性の所望されない成分はサンプルから非酵母細胞壁成分を除去するために洗浄され得る。
【００５１】
本明細書で使用されるとき、用語「ポリマーソーム」は（例えば、材料を封入するために利用され得る）水溶液中の合成重合体から組み立てられる小胞を言う。ポリマーソームは両親媒性合成ブロック共重合体を用いて作成され、小胞膜を形成し得る。そしてポリマーソームは５０ｎｍ〜５μｍ、またはそれ以上の範囲の半径を有する。ほとんどのポリマーソームはそれらの核内に水溶液を含み、そして薬物、酵素、他のタンパク質およびペプチド、ならびにＤＮＡおよびＲＮＡ断片の如き、感受性分子を封入するおよび保護するために有用である。ポリマーソーム膜は封入された物質を、生物系において見られるものの如き、外部の物質から隔離する物理的障壁を提供する。本発明の実施形態において使用されるポリマーソームの例、およびそれらの合成は例えば、米国特許第７，８６７，５１２号、第７，６８２，６０３号、および第６，８３５，３９４号中に見られることができ、これらはそれぞれ、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【００５２】
本明細書中で使用されるとき、用語「廃棄物」は所望されないまたは無用の物質を言う。
【００５３】
本明細書中で使用されるとき、用語「廃棄水」は人為的起源の影響により質が悪くなった水である。
【００５４】
発明の詳細な説明
Ｉ．導入
セレンは体のグルタチオン（ＧＳＨ）ならびにその主要なＳｅ含有抗酸化酵素、グルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰＸ）、およびチオレドキシン還元酵素と相互作用することにより全ての生存組織において抗酸化防御機構の局面の調節に関連する微量元素である（例えば、Ｇｏｅｈｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｉｍ．  Ｓｃｉ．５９，７２５‐７３２（１９８４）、Ｇｅｒｌｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｉｍ．Ｓｃｉ．７０，３９３４‐３９４０（１９９２）を参照のこと。これらは参照によりそれらの全体が本明細書に援用される）。グルタチオンおよびＧＰＸは脂質酸化を開始するおよび伝播させることができる遊離ラジカル攻撃を消去することにより膜リン脂質の不飽和結合の完全性を保護する能力を有する（例えば、Ｍｅｉｓｔｅｒ  ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５２，７１１‐７６０（１９８３）、Ｄｅｌｅｖｅ  ａｎｄ  Ｋａｐｌｏｗｉｔｚ，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒ．５２，２８７‐３０５（１９９１）、Ｐａｌｍｅｒ  ａｎｄ  Ｐａｕｌｓｏｎ，Ｎｕｔｒ．Ｒｅｖ．５５，３５３‐３６１（１９９７）を参照のこと。これらは参照によりそれらの全体が本明細書に援用される）。
【００５５】
セレンはいくつかの疫学研究において癌の危険性を減少させることにもまた関連していた（例えば、Ｓａｌｏｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１２０：  ３４２‐３４９（１９８４）、Ｗｉｌｌｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  ２：１３０‐１３４（１９８３）、Ｖｉｒｔａｍｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ６０：１４５‐１４８（１９８７）を参照のこと。これらは参照によりそれらの全体が本明細書に援用される）。天然および合成起源のさまざまなセレン化合物は広い範囲の投与量で動物研究において腫瘍発展を阻害することが示されている（例えば、Ｉｐ，．Ｊ．Ｎｕｔｒ．１２８：１８４５‐１８５４（１９９８）を参照のこと。これは参照によりその全体が本明細書に援用される）。ほとんどの動物研究は癌の化学的予防において薬理学的用量のセレン（２ｍｇ／ｋｇ超）を使用しているが（例えば、Ｉｐ，．Ｊ．Ｎｕｔｒ．１２８：１８４５‐１８５４（１９９８）を参照のこと）、セレン欠乏は乳癌発癌（例えば、Ｉｐ  ａｎｄ  Ｄａｎｉｅｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４５：６１‐６５（１９８５）を参照のこと。これは参照によりその全体が本明細書に援用される）およびＵＶＢ‐誘発皮膚発癌（例えば、Ｐｅｎｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，１０２：７５９‐７６１（１９９４）を参照のこと。これは参照によりその全体が本明細書に援用される）を高めることもまた示されている。
【００５６】
酵母細胞壁タンパク質は化学結合により細胞壁多糖に連結され、そして酵母細胞壁タンパク質を溶液中に放出するために、これらの結合は壊される必要がある。酵母細胞壁からのタンパク質抽出のための標準的技法はアルカリ加水分解（ｐＨ１１．５、８０℃）を用いてその結合を壊し、その後水中で不溶性であるグルカン多糖からタンパク質を分離するために遠心分離することである。
【００５７】
本発明の実施形態の開発中に行われた実験は、アルカリ加水分解の標準的技法を用いてセレノ糖タンパク質を抽出することを試みて行われた。アルカリ加水分解を用いて酵母細胞壁からセレノ糖タンパク質を抽出するためのこれらの試みは失敗した。アルカリ加水分解を用いた酵母細胞壁からのセレノ糖タンパク質抽出の失敗はセレノ糖タンパク質の破壊のためであったことが後に分かった。セレノ糖タンパク質を抽出するための後の試みは改変されたアルカリ加水分解手順（ｐＨ１１．５、６０℃）を用いて行われた。これらの試みもまた酵母細胞壁からセレノ糖タンパク質を抽出することができなかった。典型的なアルカリ性酵母タンパク質抽出法は酵母からセレノ糖タンパク質を抽出する試みにおいては、うまくいかなかった。したがって、酸抽出（ｐＨ５、８０℃）を用いてセレノ糖タンパク質を抽出することを試みた、追加の実験が本発明の実施形態の開発中に行われた。本明細書中に示されるように、酸抽出法は成功であった。セレノ糖タンパク質は破壊されず、そして抽出は可能であった。
【００５８】
したがって、いくつかの実施形態において、本発明は（例えば、酸抽出法（例えば、ｐＨ依存的セレノ糖タンパク質画分）を用いて得られた）セレノ糖タンパク質（ＳＧＰ）、セレノ糖タンパク質（ＳＧＰ）組成物を得る新規方法、封入されたセレノ糖タンパク質（ＳＧＰ）を含む組成物、および（対象（例えば、ヒト、動物等）へ例えば、インビボ有益性（例えば、遺伝子発現プロファイルにおける変化）を提供するための）それらの使用方法を提供する。具体的には、本発明の実施形態の開発中に行われた実験は、本発明に係る（例えば、（例えば、本発明に係る方法により単離された）ＳＧＰを含む）組成物および方法が対象に生物学的に利用可能なセレンを提供するために（例えば、それにより対象内の組織および／または筋肉のセレン含有量を増加させて（例えば、それにより対象の健康の安定化および／または増大を引き起こして））使用され得ることを示す。いくつかの実施形態において、本発明はＳＧＰ、封入された（例えば、ポリマーソームに封入された）ＳＧＰを含む組成物を得る方法および細胞機能を変える（例えば、それにより対象の（例えば非限定的に、筋骨格系、神経学系、神経系、内分泌系、代謝系、および／または免疫系を含む）体系に有益な効果を提供する）ためにそれらを使用する方法を提供する。本発明は疾患（例えば、癌成長および／または転移）の治療または予防のためのＳＧＰ単独または１つ以上の他の活性剤との組み合わせのＳＧＰの使用方法をもまた提供する。本発明は動物（例えば、家畜）の健康を高めるためにＳＧＰを用いる方法をもまた提供する。いくつかの実施形態において、本発明に係る組成物は健康および／または食品（例えば、食肉、乳製品、卵等）の栄養価を補給する、改善する、および／または高めるために利用される。いくつかの実施形態において、本発明は（例えば、一般的な健康のための、免疫系をブーストするための、神経変性疾患のための、認識機能を高めるための、癌、腫瘍成長、および／または転移の治療または予防のため等の）ＳＧＰを含む組成物および治療的、栄養補給的、および／または予防的処置としてのその使用方法、ならびにその作出、生成、精製、単離、抽出、および／または特徴付け方法を提供する。本発明は動物に飼料を与えるおよび／または動物飼料を補給するための、ＳＧＰおよびＳＧＰの使用方法をもまた提供する。
【００５９】
本発明は可溶性セレン組成物（例えば、ＳＧＰ）ならびにその使用、生成、および精製方法をもまた提供する。例えば、いくつかの実施形態において、本発明は可溶性ＳＧＰ（例えば、ｐＨ依存的ＳＧＰ画分の作成（例えば、分離および特徴付け）を示す実施例１〜２を参照のこと）および組成物ならびにそれらの投与方法（例えば、実施例３〜４を参照のこと）を提供する。いくつかの実施形態において、本発明はさまざまな経路（例えば、経口、局所、静脈内等）を通して対象に投与される、溶解形態のセレン（例えば、有機セレン（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸまたは他のセレン富化酵母のｐＨ依存的ＳＧＰ画分））を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は低繊維可溶性セレン（例えば、有機セレン）組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は可溶性有機セレン送達系（例えば、セレノ糖タンパク質を封入したポリマーソーム、ナノカプセル、重合体等）のための組成物および方法を提供する。
【００６０】
セレン（例えば、無機セレン（例えば、亜セレン酸ナトリウム（Ｎａ２ＳｅＯ３）））を含む培地中で生育された酵母（例えば、出芽酵母）はセレン（例えば、無機セレン）を代謝し、そして硫黄の代わりにシステインおよびメチオニンにセレンを組み込み、セレノアミノ酸（ＳｅＣｙｓおよびＳｅＭｅｔ）を含むタンパク質を生成する（Ｄｅｍｉｒｃｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．４７，２４９６‐２５００（１９９９）．、Ｄｅｍｉｒｃｉ  ＆  Ｐｏｍｅｔｔｏ．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．４７，２４９１‐２４９５（１９９９）、Ｏｕｅｒｄａｎｅ  ＆  Ｍｅｓｔｅｒ．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．５６，１１７９２‐１１７９９，（２００８）、これらはそれぞれ、参照によりその全体が本明細書に援用される）。ＡＬＬＴＥＣＨ，Ｉｎｃ．（Ｎｉｃｈｏｌｓｖｉｌｌｅ，ＫＹ，ＵＳＡ）は「有機セレン」を含む、飼料および食物栄養サプリメントとしてＳＥＬ‐ＰＬＥＸの名称で市販されるスプレイ乾燥セレン富化酵母を生産する（例えば、Ｋｏｒｈｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｓ．１８，６５‐６８，（１９８６）を参照のこと。これは参照によりその全体が本明細書に援用される）。ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ中の最小セレン濃度は１５００ｐｐｍであり、そしてタンパク質はその排他的な担体である（例えば、Ｓｕｒａｉ．Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ  ２００２，２３４‐２３６（２００２）、Ｋｅｌｌｙ  ＆  Ｐｏｗｅｒ．Ｊ．Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉ．７８，２３７‐２４２（１９９５）、ＭｃＳｈｅｅｈｙ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎａｌｙｓｔ  １３０，３５‐３７（２００５）を参照のこと。これらは参照によりそれらの全体が本明細書に援用される）。酵母中には２つのタンパク質プール、つまり、酵母細胞内に存在するタンパク質および酵母細胞壁マンナンに関連するタンパク質がある（例えば、Ｓｅｄｍａｋ．米国特許出願公開第２００６／０２６３４１５号を参照のこと。当該出願は参照によりその全体が本明細書に援用される）。市販のＳＥＬ‐ＰＬＥＸの約１７．０重量％は水溶性であり、そしてこの物質はＳＥＬ‐ＰＬＥＸ中に存在するセレン全量の６．５％未満しか含まない。ＳＥＬ‐ＰＬＥＸおよび亜セレン酸ナトリウムがセレン源として使用されたニワトリ飼育研究は、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸによるニワトリ胸筋へのより優れたセレン移行を示した。さまざまな生物活性がＳＥＬ‐ＰＬＥＸの経口投与について発見された（例えば、Ｒａｙｍａｎ．Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ  ３５６，２３３‐２４１（２０００）、ＭｃＫｅｎｚｉｅ  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９，３４２‐３４５（１９９８）、Ｔａｐｉｅｒｏ．Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ＆  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  ５７，１３４‐１４４（２００３）、Ｃｏｍｂｓ  ＆  Ｇｒｅｙ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．７９，１７９‐１９２（１９９８）、Ｃｌａｒｋ  ｅｔ．ａｌ．Ｊ．  Ａｍ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．２７６，１９５７‐１９６３（１９９６）を参照のこと。これらは参照によりそれらの全体が本明細書に援用される）。
【００６１】
いくつかの実施形態において、本発明はセレン（例えば、無機セレン（例えば、亜セレン酸ナトリウム））を含む培地中で生育された酵母（例えば、出芽酵母）からの可溶性セレノ糖タンパク質（ＳＧＰ）の分離、ならびに物理的および化学的特徴付け、ならびに本発明に係るＳＧＰで補給されたまたはそうでなければそれを含む食物（例えば、飼料）を対象に与えることによる、組織（例えば、ヒト、動物、ニワトリ等）への「有機セレン」送達におけるそれらの活発な関与を提供する（例えば、実施例１〜４を参照のこと）。本発明は活性、可溶性セレン成分（例えば、セレン富化酵母（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ）のｐＨ依存的ＳＧＰ画分）の組織標的化、静脈内、経口、および／または経皮送達を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は「有機セレン」送達系（例えば、ナノカプセル、重合体球、およびＳＧＰを封入したポリマーソーム）の遅延放出形を提供する（例えば、実施例５〜９を参照のこと）。いくつかの実施形態において、本発明はＳＧＰを封入したポリマーソームを含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明はポリ（エチレンオキシド）‐ブロック‐ポリ（ε‐カプロラクトン）（ＰＥＯ‐ｂ‐ＰＣＬ）系のポリマーソーム内にＳＧＰを封入することによりＳＧＰの増強された送達および改善された生体分布を提供する。
【００６２】
酵母細胞の細胞内成分から細胞壁を抽出することによるさまざまな酵母細胞成分の分離が示されている（例えば、Ｏｔｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６６，６７‐７１（１９９６）を参照のこと。これは参照によりその全体が本明細書に援用される）。これらの分離技術はスプレイ乾燥セレン酵母の抽出には適用されていない。酵母からの糖タンパク質の抽出における本分野において使用される通常のアルカリ条件（ｐＨ９．０〜１４．０）（例えば、Ｒｏｂｅｒｇｅ  ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．５１，４１９１‐４１９７（２００３）を参照のこと。これは参照によりその全体が本明細書に援用される）は、ＳｅＨまたはＳｅＭｅ置換基がセレノシスチンまたはセレノメチオニンアミノ酸から消去されたため、失敗であった。別の言葉で言えば、セレノタンパク質を含む酵母の抽出に適用されたとき、所望の置換基は分解され、そしてその結果、元のＳＧＰ中に存在したセレンはアルカリ条件下での抽出の試行中に失われた（例えば、実施例８の表１２を参照のこと）。
【００６３】
したがって、いくつかの実施形態において、本発明は（例えば、本明細書中に示されるセレノ糖タンパク質のｐＨ依存的画分を含む）セレノ糖タンパク質組成物およびその利用方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は（例えば、セレン富化酵母からの）セレノ糖タンパク質の生成、精製、単離、抽出、分離、沈殿、および／または特徴付け方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は（例えば、ＳＧＰ（例えば、医薬、栄養補給食品、サプリメント、食品等）を含む）食物サプリメント組成物を含む、可溶性セレン組成物（例えば、ＳＧＰ（例えば、ｐＨ依存的ＳＧＰ画分））の対象への送達のための組成物および方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明はセレン（例えば、ＳＧＰ（例えば、ポリマーソーム、ナノカプセル、ナノ粒子、重合体等））の高度な送達（例えば、方向付けられた送達、時間放出送達等）のための組成物および方法を提供する。本発明に係る組成物および方法は非限定的に、食物（例えば、飼料とブレンドするまたはそうでなければ動物に与える）、予防、治療、および研究適用を含む、さまざまな適用において使用される。したがって、いくつかの実施形態において、本発明は（例えば、ＳＧＰ（例えば、可溶性ＳＧＰ（例えば、可溶性有機セレン））を含む）動物飼料組成物、その組成物の製造方法、および動物にその組成物を提供することを含む動物への（例えば、ＳＧＰ（例えば、可溶性ＳＧＰ（例えば、可溶性有機セレン））を含む）栄養素の提供方法を提供する。
【００６４】
ＩＩ．抽出、分離、精製、および使用
本発明のいくつかの実施形態において、可溶性セレンはセレノ糖タンパク質（ＳＧＰ）の形態で得られる。いくつかの実施形態において、ＳＧＰは一般的なセレノタンパク質源（例えば、セレン富化酵母（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ））から抽出される。いくつかの実施形態において、ＳＧＰの抽出および／または精製は１つ以上のｐＨ依存的抽出／沈殿ステップを含む（例えば、実施例１および２中に示されるように）。いくつかの実施形態において、ＳＧＰの抽出および／または精製は１つ以上のｐＨ依存的画分化ステップを含む。いくつかの実施形態において、本発明は（例えば、ＳＧＰの変性および／または破壊なしに）ＳＧＰを可溶化するためのセレン富化酵母（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ）の酸抽出を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は（例えば、実施例１〜２中に示されるような）酸抽出からのＳＧＰのｐＨ依存的沈殿が高含有量のセレノ糖タンパク質、低含有量の消化不能繊維、および高濃度のセレン（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ中に存在する濃度より高いセレン濃度）を作成することを提供する。したがって、いくつかの実施形態において、本発明は（例えば、ｗｔ／ｗｔ％、ｐｐｍ等で）ＳＧＰのセレン含有量が、ＳＧＰが抽出された材料のセレン含有量より高い、セレン富化酵母から抽出されたＳＧＰを提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、セレン富化酵母（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ）親源からのセレンのバイオアベイラビリティに比較して、対象に投与されたときと同じまたは非常に類似のレベルのバイオアベイラビリティを示す、セレン富化酵母（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ）のｐＨ依存的ＳＧＰ画分（例えば、ｐＨ４．０またはｐＨ６．０画分）の形態のセレンを提供する（例えば、実施例３、表５を参照のこと）。
【００６５】
いくつかの実施形態において、ＳＧＰは一般的なセレノタンパク質源（例えば、セレン富化酵母細胞（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ））から抽出される。いくつかの実施形態において、セレノタンパク質源中のセレノタンパク質の一部はＳＧＰ（例えば、０．１％、０．２％、０．５％、１．０％、２．０％、５．０％、１０％、２０％、５０％、またはそれ以上のＳＧＰ）を含む。いくつかの実施形態において、セレノタンパク質源はＳｅ含有培地（Ｓｅ富化培地）の存在下で生育された細胞（例えば、酵母細胞）を含む。いくつかの実施形態において、Ｓｅ含有細胞（例えば、酵母細胞）はセレノタンパク質を抽出、単離、および／または精製するためにプロセスされ、セレノタンパク質源またはセレノタンパク質富化組成物（例えば、ＳＧＰ富化組成物）をもたらす。いくつかの実施形態において、セレノタンパク質およびＳＧＰを含むサンプルはＳＧＰについて富化されている。
【００６６】
いくつかの実施形態において、セレノタンパク質源またはセレノタンパク質富化組成物（例えば、セレン富化酵母源（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ））は１つ以上のステップにかけられ、単離された、精製された、分離された、および／または抽出されたＳＧＰを生成する。いくつかの実施形態において、セレノタンパク質源は（例えば、液体担体（例えば、水、緩衝液、生理食塩水等）中で）混合され、タンパク質スラリー、混合物、溶解物、および／または溶液を生成する。いくつかの実施形態において、セレノタンパク質源（例えば、セレン富化酵母源（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ））は（例えば、凍結温度超、室温超、３０℃、４０℃、５０℃、６０℃、７０℃、８０℃、９０℃、またはそれ以上の）高温で混合される。いくつかの実施形態において、セレノタンパク質源（例えば、セレン富化酵母源（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ））は低ｐＨ（例えば、酸性条件（例えば、約０．５、約１．０、約１．５、約２．０、約３．０、約４．０、約４．５、約５．０、約５．５、約６．０、または約６．５のｐＨ））で混合される。いくつかの実施形態において、セレノタンパク質源（例えば、セレン富化酵母源（例えばＳＥＬ‐ＰＬＥＸ））は穏やかに混合され、速く混合され、徹底的に混合され、激しく混合され等する。いくつかの実施形態において、セレノタンパク質源（例えば、セレン富化酵母源（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ））は低ｐＨ（例えば、酸性条件（例えば、約０．５、約１．０、約１．５、約２．０、約３．０、約４．０、約４．５、約５．０、約５．５、約６．０、または約６．５のｐＨ））および高温（例えば、凍結温度超、室温超、３０℃、４０℃、５０℃、６０℃、７０℃、８０℃、９０℃、またはそれ以上）で混合される。いくつかの実施形態において、その混合物のｐＨは酸または塩基の添加を通して維持される。
【００６７】
いくつかの実施形態において、セレノタンパク質含有混合物は液体／可溶相および固体／不溶相を分離するために遠心分離される。いくつかの実施形態において、その相を分離するために十分な遠心分離スピードが選択される。いくつかの実施形態において、その液相は可溶性ＳＧＰを含む。いくつかの実施形態において、その液相のｐＨはＳＧＰの一部を沈殿するために調節される（例えば、上昇させられる）。いくつかの実施形態において、液体画分のｐＨは、元のｐＨで可溶性であったが高ｐＨでは可溶性でないＳＧＰを沈殿するために、わずかに〜中程度まで上昇させられる（例えば、約０．１、０．２、０．５、１．０、２．０上昇させられたｐＨ）。いくつかの実施形態において、その液体画分のｐＨは、元のｐＨで可溶性であったＳＧＰの大部分を沈殿させるために、顕著に上昇させられる（例えば、約１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０上昇させられたｐＨ）。いくつかの実施形態において、セレノ糖タンパク質は沈殿され、そしてさまざまなｐＨ条件で液相から分離され、可溶性セレノ糖タンパク質の複数のｐＨ依存的画分を生成する。例えば、いくつかの実施形態において、酸性条件下で可溶性のセレン富化酵母の抽出物を含む単一の液相は、第１のｐＨ（例えば、ｐＨ１．８５）で沈殿される可溶性セレノ糖タンパク質の第１の画分、第２のｐＨ（例えば、ｐＨ３．０）で沈殿される可溶性セレノ糖タンパク質の第２の画分、第３のｐＨ（例えば、ｐＨ４．０）で沈殿される可溶性セレノ糖タンパク質の第３の画分、および第４のｐＨ（例えば、ｐＨ６．０）で沈殿される可溶性セレノ糖タンパク質の第４の画分を作成するために使用される。いくつかの実施形態において、液相のｐＨを上昇させることによる液相からのセレノ糖タンパク質の沈殿はその液相の複数の、連続したｐＨ依存的沈殿反応を含む。
【００６８】
いくつかの実施形態において、沈殿されたＳＧＰは（例えば、分離した液体および固体相を生成するのに十分なスピードでの）遠心分離によりｐＨ調節液体画分から分離される。いくつかの実施形態において、その液相から分離されたＳＧＰは固体ＳＧＰ画分を作成するために凍結乾燥される。いくつかの実施形態において、ＳＧＰ画分を単離するためにその液相のｐＨを上昇させるおよび遠心分離するプロセスは異なる溶解性（例えば、ｐＨ１．５未満で可溶性、ｐＨ２未満で可溶性、ｐＨ３未満で可溶性、ｐＨ４未満で可溶性、ｐＨ５未満で可溶性、ｐＨ６未満で可溶性等）のＳＧＰ画分を生成するために繰り返される。いくつかの実施形態において、単一のｐＨ調節および遠心分離ステップは所望の溶解性（例えば、ｐＨ１．５未満で可溶性、ｐＨ２未満で可溶性、ｐＨ３未満で可溶性、ｐＨ４未満で可溶性、ｐＨ５未満で可溶性、ｐＨ６未満で可溶性等）のＳＧＰを含む１つの画分を生成するために行われる。いくつかの実施形態において、最後のＳＧＰ画分の除去後に残る液相はセレノタンパク質またはＳＧＰのさらなる生成において使用される細胞の成長培地の成分として利用性がある。いくつかの実施形態において、可溶性セレノ糖タンパク質を含む組成物はセレノ糖タンパク質の単一の、ｐＨ依存的画分のみ（例えば、ｐＨ４．０で沈殿される酸性条件下で可溶性のセレン富化酵母の抽出物を含む液相からの可溶性セレノ糖タンパク質）を含む。いくつかの実施形態において、可溶性セレノ糖タンパク質を含む組成物はセレノ糖タンパク質の２つ以上のｐＨ依存的画分（例えば、２つ以上の異なるｐＨ値で沈殿される酸性条件下で可溶性のセレン富化酵母の抽出物を含む液相からの可溶性セレノ糖タンパク質）を含む。
【００６９】
好ましい実施形態において、セレノタンパク質源（例えば、セレン富化酵母（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ））からのＳＧＰ抽出およびＳＧＰの混合物のｐＨ依存的画分化のプロセス（例えば、図２および３を参照のこと）は２つの段階を含む（例えば、実施例１〜２、図１および２を参照のこと）。第１の段階において、０．３Ｎ  ＨＣｌ（ｐＨ１．５）中のセレン富化酵母の懸濁物は攪拌され、そして８０℃で８時間加熱される。その混合物のｐＨは抽出の最初の１時間の間に濃縮ＨＣｌを添加することによりｐＨ１．５で維持される。８時間後、その混合物は遠心分離され、そしてその液相が分離される。その溶液のｐＨは２．０Ｎ  ＮａＯＨの添加により１．８５に調節され、そしてこのｐＨで限られた溶解性を有するＳＧＰはその溶液から沈殿し、そして第２の遠心分離によりその液体（ｐＨ１．８５）から分離され、そしてその後、凍結乾燥され、ｐＨ１．８５の固体ＳＧＰ画分を生じる。いくつかの実施形態において、その液体（ｐＨ１．８５）は第１の遠心分離からの固体（ｐＨ１．５）と混合され、これはその混合物のｐＨの、ｐＨ１．６への変化をもたらす。ｐＨ１．６で可溶性のＳＧＰの大部分はそのプロセスのこの段階で生じた廃棄流の体積を増加させることなく、液相に移される。そのプロセスのこの段階からの主要な副産物は第２の遠心分離からの固体である。廃棄固体流は抽出にかかるセレン富化酵母の約５６．５重量％を構成し、そして３８．９１％のタンパク質および２４７７ｐｐｍのセレンを含む、価値のあるセレン酵母細胞壁材料を含む。いくつかの実施形態において、これらの固体は動物飼料における環境親和性の栄養サプリメントとして（例えば、単独でまたは他の材料（例えば、セレン富化酵母）との組み合わせで）利用される。第２の段階において（例えば、図３を参照のこと）、第２の遠心分離（図２を参照のこと）からの液相（ｐＨ１．６）はミキサーに移され、そしてそのｐＨは２．０Ｎ  ＮａＯＨの添加によりｐＨ３．０に調節され、そしてこのｐＨで限られた溶解性を有するＳＧＰはその溶液から沈殿し、そして第３の遠心分離によりその液体（ｐＨ３．０）から分離され、そして最後に凍結乾燥され、ｐＨ３．０の固体ＳＧＰ画分を生じる（例えば、実施例１〜２ならびに図２および３を参照のこと）。第３の遠心分離からの液相（ｐＨ３．０）はミキサーに移され、そしてそのｐＨは２．０Ｎ  ＮａＯＨの添加によりｐＨ４．０に調節され、そしてこのｐＨで限られた溶解性を有するＳＧＰはその溶液から沈殿し、そして第４の遠心分離によりその液体（ｐＨ４．０）から分離され、そして最後に凍結乾燥され、ｐＨ４．０の固体ＳＧＰ画分を生じる。第４の遠心分離からの液相（ｐＨ４．０）はミキサーに移され、そしてそのｐＨは２．０Ｎ  ＮａＯＨの添加によりｐＨ６．０に調節され、そしてこのｐＨで限られた溶解性を有するＳＧＰはその溶液から沈殿し、そして第５の遠心分離によりその液体（ｐＨ６．０）から分離され、そしてその後凍結乾燥され、ｐＨ６．０の固体ＳＧＰ画分を生じる。そのプロセスの第２の段階で生じた廃棄流のみが（抽出において使用されるセレン富化酵母の重量と比較して）１３．４重量％の固体を含む廃棄水流であり、そのうち、��ンパク質画分は約１３．３重量％、塩化ナトリウムは３．６重量％を構成し、そしてグルコースおよびマンノースモノ‐およびオリゴ糖は８０重量％超を構成する。このｐＨ６．０および２４２ｐｐｍのセレン濃度の「廃棄水」流はリサイクルされる、またはそうでなければ、新規バッチのセレン酵母の調製に再使用される（例えば、成長培地中で利用される）。
【００７０】
いくつかの実施形態において、ｐＨ４．０で沈殿されるＳＧＰはセレン富化酵母（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ）に比較して（例えば、筋肉組織への）優れたセレン送達、およびセレンの無機形態（例えば、亜セレン酸ナトリウム）と比較してはるかに優れた送達を示す（例えば、実施例３を参照のこと）。さらに、ｐＨ依存的セレノ糖タンパク質画分（例えば、ｐＨ６．０）はセレン富化酵母（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ）とは組成が異なり、そして同様の量のセレン送達を許容するが、一方でもっと少ない出発物質（例えば、セレン富化酵母）しか必要としない。
【００７１】
いくつかの実施形態において、ＳＧＰ抽出手順は上記の手順の４以下のｐＨ調節および遠心分離ステップを含む（例えば、１回のｐＨ調節および遠心分離ステップ、２回のｐＨ調節および遠心分離ステップ、３回のｐＨ調節および遠心分離ステップ、４回のｐＨ調節および遠心分離ステップ）。
【００７２】
ＩＩＩ．動物飼料
動物飼料は飼い慣らされた家畜（例えば、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ウマ、家禽、バッファロー、アルパカ、ラマ、ロバ、ラバ、ウサギ、ニワトリ、ガチョウ、シチメンチョウ、またはブタ）を飼うために使用されるどんな飼料をも言う。動物飼料はしばしば干し草、わら、サイレージ、加圧およびペレット化飼料、油および混合食糧、ならびにまた発芽穀類および豆類を含む。世界の動物飼料産業は２００６年に６億３５００万トンの飼料を消費し、約２％の年間増加率であった。ヒトの食物ではなく飼料を栽培するための農地の使用は議論の的となり得、トウモロコシ（メーズ）の如きいくつかの種類の飼料はヒトの食物ともなり得るが、一方で牧草の如き他のものはそうではない。動物にエネルギー源を提供することに加えて、動物飼料は体に利用される栄養素（例えば、セレン）をもまた提供する。
【００７３】
いくつかの実施形態において、本発明は従来の動物飼料に比較して、全体のコストを減少させる、飼料変換を増加させる、およびそれを受容する家畜由来の動物製品（例えば、肉、卵、乳製品等）の質を維持するおよび／または改善する栄養組成物（例えば、セレン（例えば、標準の飼料組成物より高い濃度のセレン（例えば、可溶性セレン））を含む動物飼料組成物の生成を許容する可溶性セレン組成物（例えば、ＳＧＰ））を提供する。
【００７４】
例えば、いくつかの実施形態において、本発明は動物飼料と混合されおよび／またはそれに組み込まれ、そして動物に投与され（例えば、与えられ）、（例えば、他の形態の栄養補給的セレン（例えば、セレン富化酵母（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ））を伴う動物飼料食物に比較して）動物において成長能力に対する同等以上の効果を提供する、ＳＧＰを含む食物サプリメント組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明に係る食物サプリメント組成物はその組成物を受容する対象（例えば、ヒトまたは動物）中の（例えば、血液および／または血清中に存在する）循環セレンの量を増加させる。いくつかの実施形態において、他のセレン調合物（例えば、亜セレン酸ナトリウムまたはセレン富化酵母（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ））におけるより高い割合の投与されたセレンが、本発明に係る可溶性セレン組成物（例えば、ＳＧＰ）において生物利用可能である。したがって、いくつかの実施形態において、本発明は、対象が利用可能（例えば、生物利用可能）となるセレンが、他の形態のセレン（例えば、セレン富化酵母）に比較してより高い割合および／または率で含まれるセレノ糖タンパク質を含む組成物を提供し、このことは本発明に係るセレノ糖タンパク質を含む組成物は（例えば、同様のバイオアベイラビリティ量を得るために）より少ない量しか必要とされないことを意味する。いくつかの実施形態において、（例えば、本発明に係るＳＧＰを含む）本発明に係る食物サプリメント組成物はその組成物を受容する対象（例えば、ヒトまたは動物）における（例えば、筋肉または他の組織に存在する）セレンの量を増加させる。いくつかの実施形態において、ＳＧＰおよび／または可溶性セレン投与は血清、脂肪組織、筋肉組織等にとって増加したセレンバイオアベイラビリティをもたらす。
【００７５】
いくつかの実施形態において、本発明は動物に本発明に係る食物サプリメント組成物を含む食物を提供することを含む、動物がその動物に与えられた食物中の栄養素を利用する効率の増加方法を提供し、ここで、そのサプリメント組成物は食物中に存在する栄養素をプロセスするおよび利用する動物の能力を高める。いくつかの実施形態において、本発明に係る食物サプリメント組成物はその組成物を受容する対象中の循環抗酸化物（例えば、血液および／または血清中に存在するセレン）の量を増加させる。いくつかの実施形態において、本発明に係る食物サプリメント組成物はその組成物を受容する対象中の抗酸化物（例えば、脂肪組織、筋肉等中に存在するセレン）の量を増加させる。
【００７６】
ＩＶ．医薬、栄養補給食品、およびサプリメント
栄養的セレンレベルはＦＤＡにより確立されている（２１  Ｃ．Ｆ．Ｒ．１０１．９（ｃ）（８）（ｉｖ），Ｊａｎｕａｒｙ  １９９４を参照のこと）。ヒトおよび動物は限定された量の無機および有機形態のセレンであれば安全に代謝することができ、そして非メチル化セレンをモノ‐またはジ‐あるいはトリメチル化誘導体に変換することができ、そのうちモノメチル化誘導体は最も毒性である（例えば、Ｂｅｄｗａｌ，Ｒ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ，４１（２）：１５０‐１５９（Ａｕｇｕｓｔ  １９９３）を参照のこと）。ＦＤＡは授乳中の女性について７０μｇの１日のセレン推奨摂取量（ＲＤＩ）および非授乳成人について５５μｇのＲＤＩを採用している。１日当たり６００μｇのセレン投与量は安全であることが報告されている（例えば、Ｆｅｒｒｉｓ  Ｇ．Ｍ．Ｌｌｏｙｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｐ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２６：８３‐８８（１９８９）を参照のこと）。およそこの投与量で、酵素グルタチオン還元酵素の通常の活性は肝臓および赤血球中でセレノグルタチオンをセレン化水素に安全に変換し、そして最終的に排泄する。したがって、そのような低投与量では、体は遊離金属形で存在するセレンを安全に代謝し、そして排泄することができる。しかしながら、多くの微量元素（例えば、セレン）と同様に、より高い投与量レベルまたは濃度では、有益な効果は逆転され、そして危険な毒性が現れる（例えば、Ｆｕｒｎｓｉｎｎ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔ′ｌ  Ｊ．ｏｆ  Ｏｂｅｓｉｔｙ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓ．，１９（７）：４５８−４６３（１９９５）を参照のこと）。
【００７７】
比較的低濃度で投与されたときセレンは有益な健康効果を提供するが、高い濃度ではセレンは劇的な毒性を示すので、健康上の有益性の可能性は失われ、そして毒性が主な関心事となるため、天然形のセレン投与は科学的および医学的トレードオフに関連する。
【００７８】
上記に示されるように、本発明は対象に有益な効果を提供する、ある特定の形態のセレン（例えば、ＳＧＰ、水溶性セレン）を提供する。有機形態のセレン（例えば、セレノメチオニンおよびセレン富化酵母）はあまり毒性ではなく、そして無機形態より良く吸収され得るという証拠が示されている（例えば、Ｍａｈａｎ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  １５ｔｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ，ＵＫ，ｐｐ．５２３‐５３５（１９９９）を参照のこと）。それでもなお、いくつかの実施形態において、複数の形態のセレンは（例えば、対象に有益な健康効果を提供するために）互いとの組み合わせで使用される。セレンの天然源は非限定的に、セレン富化（例えば、セレン化）酵母を含む。使用される酵母株は限定されない。
【００７９】
本発明のある特定の好ましい実施形態において、（例えば、実施例１〜２中に示されるような、セレン富化酵母（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ）由来の）ＳＧＰは本発明に係る調合物および組成物について選択されるセレン形態である。いくつかの実施形態において、水溶性セレンおよび／またはＳＧＰを含む組成物は他の形態のセレンに比較してより生物学的に利用可能な形態のセレンを提供する。しかしながら、水溶性セレンの誘導体および修飾物および／またはＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ、または他の形態のセレン富化酵母、セレノメチオニン、セレノシステイン、亜セレン酸化合物、セレン酸化合物、またはそれらの誘導体、塩、もしくは修飾物を含む、他の形態のセレンもまた本発明において使用され得る。したがって、いくつかの好ましい実施形態において、これらの形態のセレンのそれぞれは調合物の成分として使用され得る。あるいは、上記に示される形態のセレンのそれぞれはセレン‐薬物誘導体を形成するよう薬物または医薬に（例えば、化学的にまたは物理的に）結合され得る。さらに、組成物および調合物は１つの形態のセレンに限定されない。実際、組成物または調合物は複数の形態のセレン（例えば、ＳＧＰおよびＳＥＬ‐ＰＬＥＸ、またはＳｏｄ‐ｓｅｌおよび水溶性セレン）を含み得る。
【００８０】
本発明のさまざまな実施形態において使用される他の形態のセレンは米国特許第６，９１１，５５０号、第６，１９７，２９５号、第５，２２１，５４５、６号および第６，５７６，２３３号、ならびに米国特許出願第２００１００４３９２５号、第２００５００６９５９４号、第２００５００８９５３０号、および第２００８０１０７７５５号中に示され、これらはそれらの全体が参照により本明細書に援用される。
【００８１】
したがって、本発明は単独のまたは安定化化合物、他の治療用剤（単数または複数）、栄養素（単数または複数）、および／または鉱物の如き、少なくとも１つの他の剤との組み合わせの、１つ以上の形態のセレン（例えば、ＳＧＰ、可溶性セレン（例えば、水溶性セレン）等）を含む医薬、栄養補給、および／またはサプリメント組成物（例えば、食品および／または食物組成物または処置）を提供し、そして非限定的に、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、水等を含む滅菌、生物適合性担体中で投与され得る。
【００８２】
本発明に係る方法は疾患（例えば、神経変性疾患、癌等）の（例えば、予防的なまたは治療的な）処置または生理学的状態の改変において使用される。セレン（例えば、可溶性セレン（例えば、水溶性セレン）、ＳＧＰ）は生理食塩水の如き、医薬として許容される担体中で対象（例えば、患者）に静脈内投与され得る。化合物の細胞内送達のための標準の方法（例えば、リポソームによる送達）が使用され得る。そのような方法は当業者に周知である。本発明に係る調合物は静脈内、皮下、筋内、および腹腔内の如き非経口投与に有用である。いくつかの実施形態において、組成物（例えば、ＳＧＰおよび／またはそれを含む医薬調合物）は経口で投与される。
【００８３】
医薬分野において周知であるように、どんな対象にとっての投与量も、患者の大きさ、体の表面領域、年齢、投与される特定の化合物、性別、投与時間および経路、一般的な健康、および同時投与される他の薬物との相互作用を含む、多くの因子に依存し得る。
【００８４】
したがって、いくつかの実施形態において、セレン（例えば、可溶性セレン（例えば、水溶性セレン）、ＳＧＰ等）を含む組成物および／または調合物は単独でまたは他の形態のセレン、薬物、小分子との組み合わせで、あるいはそれが賦形剤（単数または複数）もしくは他の医薬として許容される担体と混合される医薬組成物で、対象に投与される。いくつかの実施形態において、その医薬として許容される担体は医薬として不活性である。他の実施形態において、セレン（例えば、可溶性セレン（例えば、水溶性セレン）、ＳＧＰ等）を含む組成物は疾患または状態を患う個々の対象に単独で投与される。本発明の他の実施形態において、セレン（例えば、可溶性セレン（例えば、水溶性セレン）、ＳＧＰ等）を含む組成物は全体的な健康または体系の健康の促進のために個々の対象に単独で投与される。単独のまたは１つ以上の他の形態のセレンとの組み合わせのセレン（例えば、可溶性セレン（例えば、水溶性セレン）、ＳＧＰ等）を含む組成物は日々の消費のために、栄養飲料または食物（例えば、ＥＮＳＵＲＥ、ＰＯＷＥＲＢＡＲ等）、マルチビタミン、栄養製品、食物製品等に添加され得る。
【００８５】
処置により変えられると考えられる標的（例えば、加齢に関連する遺伝子発現、および／または癌および／または腫瘍成長もしくは転移に関連する遺伝子発現の調節）により、これらの医薬、サプリメント、および／または栄養補給組成物は体系的にまたは局所的に処方され、および投与される。処方および投与技術は「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ，Ｅａｓｔｏｎ  Ｐａ．）の最新版中に見られ得る。好適な経路は例えば、経口または経粘膜投与、および筋内、皮下、脊髄内、クモ膜下腔内、脳室内、静脈内、腹腔内、または鼻内投与を含む、非経口送達を含み得る。
【００８６】
注入のために、セレン含有組成物（例えば、可溶性セレン（例えば、水溶性セレン）、ＳＧＰ等）は水溶液中、好ましくはハンクス溶液、リンガー溶液、または生理学的緩衝生理食塩水の如き生理学的に適合性の緩衝液中に調合される。組織または細胞投与のために、浸透させたい特定の障壁に適切な浸透剤がその調合物中で使用される。そのような浸透剤は一般的に本分野において既知である。
【００８７】
他の実施形態において、セレン含有組成物（例えば、可溶性セレン（例えば、水溶性セレン）、ＳＧＰ等）は経口投与のために好適な投与形態で本分野において周知の医薬として許容される担体を用いて調合される。そのような担体はセレン含有組成物（例えば、可溶性セレン（例えば、水溶性セレン）、ＳＧＰ等）が処置される対象による経口または経鼻摂取のための、錠剤、ピル、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁物等として調合されることを可能にする。
【００８８】
本発明における使用のために好適な医薬組成物は、活性成分（例えば、セレン含有組成物（例えば、可溶性セレン（例えば、水溶性セレン）、ＳＧＰ等））が意図される目的を達成するために有効な量で含まれる、組成物を含む。例えば、医薬剤の有効な量は特定の遺伝子（例えば、ＫＴＬＧ、ＧＲＢ２、ＤＮＡＪ３、ＴＧＦＢ１、ＭＡＰＫ８、Ｃ１Ｒ、ＵＢＥ４Ａ、ＳＭＰＸ、ＵＳＰ２２、および／またはＰＴＰ４Ａ１）の発現を変える量であり得る。有効な量の決定は十分に当業者の能力の範囲内である。
【００８９】
本発明は（癌／腫瘍進行および／または転移を妨げるまたは遅延させる）癌の予防および／または治療処置における使用のためのｐＨ依存的ＳＧＰおよびそれを含む組成物をもまた提供する。例えば、好ましい実施形態において、セレン富化酵母（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ）のｐＨ依存的ＳＧＰ画分は癌の成長および／または転移に関連する遺伝子の発現を（例えば、所望の様式で）調節するために対象に投与される。本明細書中に示されるように、ある特定の可溶性のＳＧＰ画分は可溶性のＳＧＰ画分が由来する親材料（例えば、セレン富化酵母（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ））が有しない生物特性（例えば、遺伝子発現を調節する能力）を有することが特定されている（例えば、実施例４および図７〜１１を参照のこと）。好ましい実施形態において、セレン富化酵母（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ）のｐＨ依存的ＳＧＰ画分はｐＨ４．０依存的画分であるが、他の画分（例えば、ｐＨ３．０、ｐＨ６．０等）もまた本発明に係る組成物および方法において使用される。
【００９０】
活性成分に加えて、これらのセレン含有（例えば、可溶性セレン（例えば、水溶性セレン）、ＳＧＰ等）医薬組成物は医薬として使用され得る調製物へのその活性化合物の加工を促進する賦形剤および補助剤を含む、好適な医薬として許容される担体を含み得る。経口投与のために調合される調製物は錠剤、糖衣錠、カプセル、または溶液の形態であり得る。
【００９１】
本発明に係る医薬組成物は（例えば、従来の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠作成、湿式粉砕、乳化、カプセル化、封入、または凍結乾燥プロセスの手段により）既知の様式で製造され得る。
【００９２】
非経口投与のための医薬調合物は水溶形態の活性化合物の水溶液を含む。さらに、活性化合物の懸濁物は適切な油性注入懸濁物として調製され得る。好適な親油性溶媒または媒体はゴマ油の如き脂肪性油またはオレイン酸エチルもしくはトリグリセリドの如き合成脂肪酸エステル、あるいはリポソームを含む。水性注入懸濁物はカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランの如き、その懸濁物の粘性を増加させる物質を含み得る。場合により、その懸濁物は高濃度溶液の調製を許容するためにその化合物の可溶性を増加させる好適な安定化剤または剤をもまた含み得る。
【００９３】
経口使用のための医薬調製物は活性化合物を固体賦形剤と混合すること、場合により生ずる混合物を挽くこと、および所望の場合、錠剤または糖衣錠の核を得るために好適な補助剤の添加後に顆粒の混合物をプロセスすることにより得られ得る。好適な賦形剤はラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖、トウモロコシ、小麦、コメ、ジャガイモ等からのデンプン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはカルボキシメチルセルロースナトリウムの如きセルロース、およびアラビアおよびトラガカントを含むゴム、ならびにゼラチンおよびコラーゲンの如きタンパク質の如き、炭水化物またはタンパク質充填剤である。所望の場合、架橋ポリビニルピロリドン、アガー、アルギン酸、またはアルギン酸ナトリウムの如きそれらの塩の如き、崩壊または可溶化剤が添加され得る。
【００９４】
糖衣錠核はアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、および好適な有機溶媒または溶媒混合物をもまた含み得る、濃縮糖溶液の如き好適なコーティングで提供される。染料または色素は製品識別のためにまたは活性化合物の量（すなわち、投与量）を特徴付けるために錠剤または糖衣錠コーティングに添加され得る。
【００９５】
経口で使用され得る医薬調製物はゼラチンからなる押込みばめカプセルならびにゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールの如きコーティングからなるやわらかい密閉されたカプセルを含む。押込みばめカプセルはラクトースまたはデンプンの如き充填剤または結合剤、タルクまたはステアリン酸マグネシウムの如き潤滑剤、および場合により、安定化剤と混合された活性成分を含み得る。やわらかいカプセル中では、活性化合物は安定化剤を伴ってまたは伴わずに、脂肪油、液体パラフィン、または液体ポリエチレングリコールの如き好適な液体中に溶解されまたは懸濁され得る。
【００９６】
医薬として許容される担体中に調合された本発明に係る化合物を含む組成物は調製され、適切な容器中に入れられ、そして示される状態の処置のために標識化され得る。セレンを含む組成物または調合物について、その標識上に示される状態は疾患または状態（例えば、癌、神経変性疾患、および／または認識機能）の予防的または治療的処置に関連する状態の処置を含み得る。
【００９７】
医薬組成物は塩として提供されることができ、そして非限定的に、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸等を含む、多くの酸を伴って形成され得る。塩は対応する遊離塩基形である水性または他のプロトン溶媒中でより可溶性である傾向がある。他の場合、好ましい調製物は使用前に緩衝液と混合される、４．５〜５．５のｐＨ範囲の１ｍＭ〜５０ｍＭヒスチジン、０．１％〜２％スクロース、２％〜７％マンニトール中の凍結乾燥粉末であり得る。
【００９８】
本発明に係る方法において使用されるどの化合物についても、治療的に有効な用量は細胞培養分析からはじめに見積もられ得る。その後、好ましくは、投与量が所望の循環濃度範囲を達成するよう動物モデル（特にマウスモデル）において処方され得る。
【００９９】
治療的に有効な用量は（例えば、遺伝子発現を変えることを通して）疾患状況または状態の症状を改善するまたは予防するその量を言う。そのような化合物の毒性および治療的有効性は例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効な用量）を決定するために、細胞培養物または実験動物において標準の医薬手順により決定され得る。毒性および治療的効果間の用量割合は治療指標であり、そしてそれはＬＤ５０／ＥＤ５０率と表現され得る。大きな治療指標を示す化合物は好ましい。これらの細胞培養分析および追加の動物研究から得られたデータはヒトの使用のための投与量範囲の処方において使用され得る。そのような化合物の投与量は好ましくは、ほとんどまたは全く毒性を伴わないＥＤ５０を含む循環濃度範囲内にある。投与量は使用される投与形態、対象の感受性、および投与経路により、この範囲内で変化する。
【０１００】
正確な投与量は処置される対象の観点から対象によりまたは医師により選択され得る。投与量および投与は活性部分の十分なレベルを提供するようまたは所望の効果（例えば、対象における遺伝子発現の変化）を維持するよう調節される。考慮に入れられ得る追加の因子は疾患状況の重症度、年齢、体重、および患者の性別、食事、投与時間および頻度、薬物の組み合わせ（単数または複数）、反応感受性、および治療に対する耐性／応答を含む。長期活性医薬組成物は特定の調合物の半減期およびクリアランス速度により、３〜４日毎、毎週もしくは２週間毎に１回、または１カ月毎に１回投与され得る。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、セレン（例えば、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ等）は１日当たり２５〜６００μｇの毎日の用量で投与される（例えば、可溶性セレン、水溶性セレン、および／またはＳＧＰは各日に対象に２５〜６００μｇのセレンを提供するような方法で対象に投与される）。好ましい実施形態において、セレンは１日当たり５０〜２００μｇの毎日の用量で投与される。他の好ましい実施形態において、セレンは１日当たり１００〜２００μｇの毎日の用量で投与される。２５〜６００μｇ外の用量が使用され得る。いくつかの実施形態において、単一の用量のセレン（例えば、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ等）は毎日１回投与される。他の実施形態において、２、３、４、またはそれ以上の用量は各日に投与され得る（例えば、朝１回および夜１回、または４〜６時間毎に１回）。例えば、いくつかの実施形態において、セレン（例えば、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ等）は３つの別々の、３つ超の別々の、２つの別々の、または２つ未満の別々の用量で対象に投与される。いくつかの好ましい実施形態において、毎日の用量は時間放出カプセル中で投与される。いくつかの好ましい実施形態において、毎日の用量は２５〜７５μｇのセレン（例えば、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ等）である。他の好ましい実施形態において、毎日の用量は２００μｇのセレン（例えば、有機セレン、セレン化酵母、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ等）である。
【０１０２】
本発明に係る医薬組成物は局所的または体系的処置が所望されるかどうかにより、および処置される領域によりいくつかの方法で投与され得る。投与は（目、ならびに膣および直腸送達を含む粘膜を含む）局所、肺（例えば、噴霧器によるものを含む粉末またはエーロゾルの吸入またはガス注入による、気管内、鼻内、表皮、および経皮）、経口、または非経口であり得る。非経口投与は静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、もしくは筋内注入もしくは点滴、または頭蓋内、例えば、クモ膜下腔内もしくは脳室内投与を含む。セレンを含む組成物および調合物は経口投与に特に有用であると考えられる。
【０１０３】
局所投与のためのセレン含有（例えば、ＳＧＰ含有）医薬、栄養補給、および／またはサプリメント組成物および調合物は経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、坐剤、スプレイ、液体、および粉末を含み得る。水性、粉末、または油性ベースの従来の医薬担体、増粘剤等は必要でありまたは所望され得る。
【０１０４】
経口投与のための組成物および調合物は粉末もしくは顆粒、水もしくは非水性媒体中の懸濁物もしくは溶液、カプセル、サシェ、または錠剤を含む。増粘剤、香味剤、希釈剤、乳化剤、分散補助剤、または結合剤が所望され得る。
【０１０５】
非経口、クモ膜下腔内、または脳室内投与のための組成物および調合物は非限定的に、浸透エンハンサー、担体化合物、および他の医薬として許容される担体もしくは賦形剤の如き、緩衝液、希釈剤、および他の好適な添加物をもまた含み得る滅菌水溶液を含み得る。
【０１０６】
したがって、いくつかの実施形態において、本発明に係る医薬、栄養補給、および／またはサプリメント組成物は非限定的に、溶液、エマルジョン、およびリポソーム含有調合物を含む。これらの組成物は非限定的に、事前に形成された液体、自己乳化固体、および自己乳化半固体を含むさまざまな成分から作出され得る。
【０１０７】
単位投与形態中に便利に提示され得る本発明に係る医薬、栄養補給、および／またはサプリメント調合物は製薬業界において周知の従来の技術に従って調製され得る。そのような技術は活性成分を医薬担体（単数または複数）または賦形剤（単数または複数）と関係させるステップを含む。一般的に、調合物は活性成分を液体担体もしくは細かく分けられた固体担体またはそれら両方と均一におよび親密に関係させ、そしてその後、必要な場合、製品を形作ることにより調製される。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、本発明に係るセレン含有（例えば、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ）組成物は非限定的に、錠剤、カプセル、液体シロップ、ソフトゲル、坐剤、および浣腸剤の如き多くの可能な投与形態のいずれかに調合され得る。本発明に係る組成物は時間放出ナノ粒子（例えば、ナノカプセル）、小胞、リポソーム、重合体（例えば、分子刷り込み重合体（ＭＩＰ）、生分解性遅延放出重合体、ポリカチオン性重合体等としてもまた調合され得る。本発明に係る組成物は水性、非水性、または混合媒体中の懸濁物としてもまた調合され得る。水性懸濁物は例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、および／またはデキストランを含む、その懸濁物の粘性を増加させる物質をさらに含み得る。懸濁物は安定化剤をもまた含み得る。本発明の１つの実施形態において、医薬、および／またはサプリメント組成物は泡として調合されおよび使用され得る。泡は非限定的に、エマルジョン、マイクロエマルジョン、クリーム、ゼリー、およびリポソームの如き調合物を含む。性質は基本的に同じであるが、これらの調合物は最終製品の成分および一貫性において変化する。
【０１０９】
本発明に係るセレン含有（例えば、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ等）組成物は医薬組成物中に従来見られる他の補助成分をさらに含み得る。したがって、例えば、その組成物は例えば、かゆみ止め、収れん薬、局所麻酔薬、もしくは抗炎症剤の如き、追加の適合性の医薬として活性な物質を含み得る、あるいは、色素、香味剤、保存剤、抗酸化剤、乳白剤、増粘剤、および安定化剤の如き、本発明に係る組成物のさまざまな投与形態を物理的に調合することにおいて有用な追加の物質を含み得る。しかしながら、そのような物質は、添加されたとき、本発明に係る組成物の成分の生物学的活性を過度に妨害するべきでない。その調合物は滅菌され、そして所望の場合、その調合物の核酸（単数または複数）と有害な相互作用をしない補助剤、例えば、潤滑剤、保存剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響する塩、緩衝剤、着色剤、香味および／または芳香物質等と混合され得る。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、本発明は（ａ）１つ以上の形態のセレン（例えば、ＳＧＰ（例えば、ｐＨ依存的ＳＧＰ画分）、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ）および（ｂ）１つ以上の他の剤（例えば、栄養素、鉱物、治療薬等）を含む、医薬、栄養補給、および／またはサプリメント組成物を提供する。
【０１１１】
本発明は本明細書中に示されるセレン（例えば、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ等）を含む化合物と１つ以上の追加の活性剤（例えば、治療薬（例えば、癌治療薬、アルツハイマー治療薬）、抗酸化剤等）との共投与に関連する方法をもまた含む。実際、本発明に係るセレン（例えば、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ（例えば、ｐＨ依存的ＳＧＰ画分）等）を含む組成物と、予防または治療医薬組成物、栄養補給剤、および／またはサプリメントとを共投与することにより治療および／または医薬、栄養補給、および／またはサプリメント組成物をより良くするための方法を提供することは本発明のさらなる態様である。共投与手順において、その剤は同時にまたは連続して投与され得る。１つの実施形態において、本明細書中に示される化合物は他の活性剤（単数または複数）の前に投与される。その調合物および投与様式は上記に示されるいずれのものでもあり得る。さらに、２つ以上の共投与剤はそれぞれ異なる様式または異なる処方を用いて投与され得る。いくつかの実施形態において、本発明に係る組成物は癌の処置と共に共投与される。
【０１１２】
したがって、いくつかの実施形態において、１つ以上の形態のセレン（例えば、ＳＧＰ（例えば、ｐＨ依存的ＳＧＰ画分）、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ）を含む組成物は癌患者において腫瘍細胞増殖および血管新生を阻害するためにおよび／または腫瘍細胞死を誘発するために体系的にまたは局所的に投与される。例えば、いくつかの実施形態において、セレン富化酵母（例えば、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ）のｐＨ依存的ＳＧＰ画分（ｐＨ４．０）を含む組成物は、対象において癌／腫瘍成長および／または転移に関連する１つ以上の遺伝子の発現が有益な様式で調節される（例えば、アップレギュレートされるまたはダウンレギュレートされる）ような条件下で対象に投与される（例えば、実施例４を参照のこと）。その組成物は静脈内に、クモ膜下腔内に、腹腔内に、および経口で投与され得る。さらに、それらは単独でまたは抗増殖薬との組み合わせで投与され得る。
【０１１３】
組み合わせが企図される場合、本発明は特定の組み合わせの性質により限定されるとは意図されない。本発明は単純な混合物および化学的ハイブリッドとしての組み合わせを企図する。後者の例は１つ以上の形態のセレンを含む組成物が標的化担体にまたは活性医薬に共有結合されているものである。共有結合は多くの市販の入手可能な架橋化合物のいずれか１つにより達成され得る。
【０１１４】
本発明は特定の治療用調製物の性質に限定されるとは意図されない。例えば、そのような組成物は生理学的に耐性な液体、ゲルまたは固体担体、希釈剤、補助剤、および賦形剤と共に提供され得る。
【０１１５】
これらの治療用調製物は他の治療用剤と同様の様式で、家畜または牧場動物での如き獣医学的使用、およびヒトにおける臨床的使用のために哺乳類に投与され得る。一般的に、治療的有効性に必要な投与量は使用の種類および投与様式ならびに個々の受容者の特定の必要性にしたがって変化するであろう。
【０１１６】
そのような組成物は典型的に液体溶液もしくは懸濁物として、または固体形態で調製される。癌のための経口調合物は通常、例えば、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等のような結合剤、充填剤、担体、保存剤、安定化剤、乳化剤、緩衝液、および賦形剤の如き、通常使用される添加物を含むであろう。これらの組成物は溶液、懸濁物、錠剤、ピル、カプセル、放出維持調合物、または粉末の形態を取り、そして典型的に１％〜９５％の活性成分、好ましくは２％〜７０％を含む。
【０１１７】
その組成物はまた液体溶液または懸濁物としての注射剤としてもまた調製される。注入前の液体中の溶液または液体中の懸濁物のために好適な固体形態もまた調製され得る。
【０１１８】
本発明に係る組成物はしばしば生理学的に耐性でおよび適合性である希釈剤または賦形剤と混合される。好適な希釈剤および賦形剤は例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール等、およびそれらの組み合わせである。さらに、所望の場合、その組成物は湿潤または乳化剤、安定化またはｐＨ緩衝剤の如き、少量の補助物質を含み得る。
【０１１９】
広範囲の治療用剤が本発明で使用される。例えば、１つ以上の形態の本発明に係るセレンを含む組成物と共に共投与され得るどんな治療用剤も本発明における使用のために好適である。
【０１２０】
本発明に係るいくつかの実施形態は１つ以上の形態のセレンおよび少なくとも１つの抗癌剤（例えば、化学療法薬、および／または放射線治療の如き従来の抗癌剤）を含む有効な量の組成物の対象への投与を提供する。
【０１２１】
本発明での使用のために好適な抗癌剤の機構は非限定的に、アポトーシスを誘導する剤、核酸損傷を誘発する／引き起こす剤、核酸合成を阻害する剤、微小管形成に影響する剤、およびタンパク質合成または安定性に影響する剤を含む。
【０１２２】
本発明に係る組成物および方法における使用のために好適な抗癌剤のクラスは非限定的に、１）微小管阻害剤（例えば、ビンクリスチン（Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）、ビンブラスチン（Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、およびビンデシン（Ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）等）、微小管安定化剤（例えば、パクリタキセル（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）（タキソール（Ｔａｘｏｌ））、およびドセタキセル（Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）等）を含むアルカロイド、およびエピポドフィロトキシン（例えば、エトポシド（Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）（ＶＰ−１６）、およびテニポシド（Ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）（ＶＭ−２６）等））の如きトポイソメラーゼ阻害剤およびトポイソメラーゼＩを標的にする剤（例えば、カンプトテシン（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）およびイシリノテカン（Ｉｓｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）（ＣＰＴ−１１）等）を含む、クロマチン機能阻害剤、２）ナイトロジェンマスタード（例えば、メクロレタミン（Ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、クロラムブシル（Ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、シクロフォスファミド（Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、イフォスファミド（Ｉｆｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、およびブスルファン（Ｂｕｓｕｌｆａｎ）（ミレラン（Ｍｙｌｅｒａｎ））等）、ニトロソウレア（例えば、カルムスチン（Ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン（Ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）、およびセムスチン（Ｓｅｍｕｓｔｉｎｅ）等）、および他のアルキル化剤（例えば、ダカルバジン（Ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）、ヒドロキシメチルメラミン（Ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｍｅｌａｍｉｎｅ）、チオテパ（Ｔｈｉｏｔｅｐａ）、およびミトシシン（Ｍｉｔｏｃｙｃｉｎ）等）を含む、共有ＤＮＡ結合剤（アルキル化剤）、３）核酸阻害剤（例えば、ダクチノマイシン（Ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）（アクチノマイシンＤ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ  Ｄ））等）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）（ダウノマイシン（Ｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ）、およびセルビジン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ））、ドキソルビシン（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）（アドリアマイシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ））、およびイダルビシン（Ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）（イダマイシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ））等）、アントラセンジオン（例えば、ミトキサントロン（Ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）の如きアントラサイクリン類似体等）、ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）（ブレノキサン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ））等、およびプリカマイシン（ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ）（ミトラマイシン（Ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ））等を含む、非共有ＤＮＡ結合剤（抗腫瘍抗生物質）、４）抗葉酸剤（例えば、メトトレキセート（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、フォレックス（Ｆｏｌｅｘ）、およびメキセート（Ｍｅｘａｔｅ）等）、プリン抗代謝薬（例えば、６‐メルカプトプリン（６‐ＭＰ、プリネトール（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ））、６‐チオグアニン（６‐ＴＧ）、アザチオプリン（Ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）、アシクロビル（Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ）、ガンシクロビル（Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）、クロロデオキシアデノシン、２‐クロロデオキシアデノシン（ＣｄＡ）、および２′‐デオキシコフォルマイシン（Ｄｅｏｘｙ���ｏｆｏｒｍｙｃｉｎ）（ペントスタチン（Ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ））等）、ピリミジンアンタゴニスト（例えば、フルオロピリミジン（例えば、５‐フルオロウラシル（アドルシル（Ａｄｒｕｃｉｌ））、５‐フルオロデオキシウリジン（ＦｄＵｒｄ）（フロクスウリジン（Ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ））等）、およびシトシンアラビノシド（例えば、シトサール（Ｃｙｔｏｓａｒ）（ａｒａ‐Ｃ）およびフルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）等）を含む、抗代謝薬、５）Ｌ‐アスパラギナーゼ、およびヒドロキシ尿素等を含む、酵素、６）抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン（Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）等）の如き糖質コルチコイド、非ステロイド系抗アンドロゲン（例えば、フルタミド（Ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）等）、およびアロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）（アリミデックス（Ａｒｉｍｉｄｅｘ））等）を含む、ホルモン、７）プラチナ化合物（例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン等）、８）抗癌薬、毒素、および／または放射性核種等と結合されたモノクローナル抗体、９）生物応答調節剤（例えば、インターフェロン（例えば、ＩＦＮ‐α等）およびインターロイキン（例えば、ＩＬ‐２等）等）、１０）養子免疫治療、１１）造血成長因子、１２）腫瘍細胞分化を誘発する剤（例えば、全トランス型レチノイン酸等）、１３）遺伝子治療技術、１４）アンチセンス治療技術、１５）腫瘍ワクチン、１６）腫瘍転移に向けられた治療（例えば、バチミスタット（Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ）等）、および１７）血管新生の他の阻害剤を含む。
【０１２３】
好ましい実施形態において、本発明は本発明に係る１つ以上の形態のセレンおよびアポトーシスを誘発するおよび／または癌細胞増殖を予防する少なくとも１つの従来の抗癌剤を含む有効な量の組成物の、対象への投与を提供する。いくつかの好ましい実施形態において、その対象は転移により特徴付けられる疾患を有する。また他の好ましい実施形態において、本発明は１つ以上の形態のセレンおよびタキサン（例えば、ドセタキセル）を含む有効な量の組成物の、Ｂｃｌ‐２ファミリータンパク質（単数または複数）（例えば、Ｂｃｌ‐２および／またはＢｃｌ‐ＸＬ）の過剰発現により特徴付けられる疾患を有する対象への投与を提供する。
【０１２４】
タキサン（例えば、ドセタキセル）は有効なクラスの抗癌化学療法剤である（例えば、Ｋ．Ｄ．  Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｇ．Ｗ．Ｓｌｅｄｇｅ，Ｊｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１７：１２１‐１３６（１９９９）を参照のこと）。本発明は特定の機構に限定されるとは意図されないが、タキサン仲介細胞死は細胞内微小管安定化および続くアポトーシス経路の誘発を通して進むと考えられている（例えば、Ｓ．Ｈａｌｄａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５７：２２９‐２３３（１９９７）を参照のこと）。いくつかの他の実施形態において、シスプラチンおよびタキソールは本発明に係る１つ以上の形態のセレンを含む組成物との使用のために特に企図される。いくつかの実施形態において、癌治療関係においてルーチンで使用されるどんな医薬も本発明において使用される。１つ以上の形態のセレンを含む開示される組成物との投与に好適な従来の抗癌剤は非限定的に、アドリアマイシン、５‐フルオロウラシル、エトポシド、カンプトテシン、メトトレキセート、アクチノマイシン‐Ｄ、マイトマイシンＣ、またはより好ましくは、シスプラチンを含む。本発明のいくつかの実施形態において、治療処置は直接的に核酸（例えば、ＤＮＡ）を架橋し、相乗作用を引き起こすＤＮＡ損傷を促進する１つ以上の剤、本発明に係る抗腫瘍剤をさらに含む。例えば、シスプラチンの如き剤、および他のＤＮＡアルキル化剤が使用され得る。ＤＮＡを損傷する剤はＤＮＡ複製、有糸分裂、および染色体分離を妨害する化合物をもまた含む。そのような化学療法化合物は非限定的に、ドキソルビシンとしても知られるアドリアマイシン、エトポシド、ベラパミル（ｖｅｒａｐａｍｉｌ）、ポドフィロトキシン等を含む。これらの化合物は新生物の治療のために臨床施設において広く使用され、そしてアドリアマイシンについてはボーラス注入を通して静脈内に２１日間隔で２５〜７５Ｍ／２、エトポシドについては静脈内に３５〜５０Ｍｇ／Ｍ２または経口で静脈内投与量の２倍の範囲の用量で投与される。
【０１２５】
核酸前駆体およびサブユニットの合成および忠実度を妨害する剤もまたＤＮＡ損傷を引き起こし、そして本発明における化学療法剤として使用される。いくつかの核酸前駆体が開発されている。広範な試験を受け、そして容易に入手可能である剤は特に有用である。そのように、５‐フルオロウラシル（５‐ＦＵ）の如き剤は新生物性組織により優先的に使用され、そのためこの剤は新生物性細胞に対する標的化に特に有用となる。送達される用量は３〜１５ｍｇ／ｋｇ／日に及び得るが、疾患段階、その細胞の治療のしやすさ、その剤に対する抵抗性の程度等を含む、さまざまな因子に従って他の用量はかなり変化し得る。
【０１２６】
好ましい実施形態において、本発明において使用される抗癌剤（例えば、本明細書中で議論される抗血管新生因子）は１つ以上の形態のセレンを含む組成物との共投与に適している、またはそうでなければ、それらが抗癌効果の忠実度の損失なしに対象、組織、または細胞に送達され得るように１つ以上の形態のセレンを含む組成物と関連するものである。プラチナ複合体、ベラパミル、ポドフィロトキシン、カルボプラチン、プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）、メクロレタミン、シクロフォスファミド、カンプトテシン、イフォスファミド、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、アドリアマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、タキソール、トランスプラチナ、５‐フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、およびメトトレキセート、および他の同様の抗癌剤の如き、癌治療用剤のより詳細な記述については、当業者は非限定的に、ｔｈｅ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ′ｓ  Ｄｅｓｋ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｔｏ  Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ′ｓ  "Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ"ｎｉｎｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄｓ．Ｈａｒｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６を含む、いくつかの教示的なマニュアルを参照する。
【０１２７】
Ｖ．抗酸化剤
本発明のいくつかの実施形態において、抗酸化剤は本発明に係る組成物または調合物と共投与される。本発明は利用される抗酸化剤の種類に限定されない。実際、非限定的に、アルキル化ジフェニルアミン、Ｎ‐アルキル化フェニレンジアミン、フェニル‐アルファ‐ナフチルアミン、アルキル化フェニル‐アルファ‐ナフチルアミン、ジメチルキノリン、トリメチルジヒドロキノリン、およびそれらに由来のオリゴマー組成物、ヒンダードフェノール、アルキル化ヒドロキノン、ヒドロキシル化チオジフェニルエーテル、アルキリデンビスフェノール、チオプロピオネート、金属性ジチオカルバメート、１，３，４‐ジメルカプトチアジアゾール、および誘導体、油溶性銅化合物等、Ｎａｕｇａｌｕｂｅ．ＲＴＭ．４３８、Ｎａｕｇａｌｕｂｅ４３８Ｌ、Ｎａｕｇａｌｕｂｅ６４０、Ｎａｕｇａｌｕｂｅ６３５、Ｎａｕｇａｌｕｂｅ６８０、Ｎａｕｇａｌｕｂｅ  ＡＭＳ、Ｎａｕｇａｌｕｂｅ  ＡＰＡＮ、Ｎａｕｇａｒｄ  ＰＡＮＡ、Ｎａｕｇａｌｕｂｅ  ＴＭＱ、Ｎａｕｇａｌｕｂｅ５３１、Ｎａｕｇａｌｕｂｅ４３１、Ｎａｕｇａｒｄ  ＢＨＴ、Ｎａｕｇａｌｕｂｅ４０３、およびＮａｕｇａｌｕｂｅ４２０、アスコルビン酸、アルファ‐トコフェロールを含むトコフェロール、スルフヒドリル化合物およびそれらの誘導体（例えば、メタ重亜硫酸ナトリウムおよびＮ‐アセチル‐システイン）の如き水溶性抗酸化剤、リポ酸およびジヒドロリポ酸、レスベラトロール（ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ）、ラクトフェリン、アスコルビン酸誘導体（例えば、パルミチン酸アスコルビルおよびアスコルビルポリペプチド）、ブチル化ヒドロキシトルエン、レチノイド（例えば、レチノールおよびパルミチン酸レチニル）、トコトリエノール、ユビキノン、フラボノイドおよびイソフラボノイドならびにそれらの誘導体を含む抽出物（例えば、ゲニステイン（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）およびジアドゼイン（ｄｉａｄｚｅｉｎ））、レスベラトロールを含む抽出物等、ブドウ種子、緑茶、マツ樹皮、プロポリス、（Ｃｉｂａ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．により製造された）Ｉｒｇａｎｏｘ１０１０、１０３５、１０７６、  １２２２、アンチジーンＰ、３Ｃ、ＦＲ、（Ｓｕｍｉｔｏｍｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．により製造された）Ｓｕｍｉｌｉｚｅｒ  ＧＡ‐８０、ベータ‐カロテン、リコピン、ビタミンＣ、Ｅ、およびＡ、ならびに他の物質を含む、さまざまな抗酸化剤が本発明において有用であることが企図される。
【０１２８】
機構の理解は本発明の実施に必ずしも必要ではなく、そして本発明は特定の活性機構に限定されないが、いくつかの実施形態において、セレノ含有組成物（例えば、可溶性セレン、ＳＧＰ）を対象に投与することはその対象における遺伝子発現プロファイル（例えば、ＴＧＦＢ１、ＭＡＰＫ８、Ｃ１Ｒ、ＵＢＥ４Ａ、ＳＭＰＸ、ＵＳＰ２２、およびＰＴＰ４Ａ１）を変える。いくつかの実施形態において、セレン含有組成物（例えば、可溶性セレン、ＳＧＰ）を対象に投与することは対象の（例えば、脳組織（例えば、新皮質）、筋肉組織、脂肪組織等における）ＤＮＡ損傷のレベルを減少させる。
【０１２９】
いくつかの実施形態において、本発明は細胞にセレン含有組成物（例えば、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）を投与することを含む、細胞のＨ２Ｏ２細胞毒性に対する感受性を減少させる方法を提供する。
【０１３０】
本発明は対象にセレン（例えば、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）を含む組成物（例えば、栄養サプリメント）を投与することを含む、対象において（例えば、酸化ストレスを受けている対象において）過酸化ラジカルを減少させる方法をさらに提供する。さらに、いくつかの実施形態において、本発明はセレン（例えば、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）を含むある特定の組成物を受容する対象が酸化ストレスを処理する高い能力を有することを提供する。機構の理解は本発明を実施するために必ずしも必要ではなく、そして本発明は特定の活性機構に限定されないが、いくつかの実施形態において、セレン（例えば、セレン（例えば、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）を含む食物サプリメント）を含む組成物を受容する対象は、選択形態のセレン（例えば、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）による対象における過酸化ラジカルのレベルを変える（例えば、減少させる）能力のために、酸化ストレスに対処する高い能力を有する。
【０１３１】
本発明に係る組成物および方法は非限定的に、研究および臨床診断を含む、さまざまな状況において使用されるであろうことが企図される。
【０１３２】
ＶＩ．担体
いくつかの実施形態において、本発明は非限定的に、ナノ粒子（例えば、ナノカプセル）、小胞、リポソーム、重合体（例えば、分子刷り込み重合体（ＭＩＰ）、遅延放出重合体、ポリカチオン性重合体）、および／またはポリマーソームを含む、１つ以上の担体によるセレン（例えば、セレノ糖タンパク質）の送達を提供する。いくつかの実施形態において、セレン担体は対象（例えば、ヒトまたは動物）におけるセレン含有化合物（例えば、水溶性セレン、ＳＧＰ）の投与、標的化、および／または時間放出を提供する。いくつかの実施形態において、担体（例えば、遅延放出重合体、ナノカプセル、ＭＩＰ、ポリマーソーム等）は対象へのセレン含有化合物（例えば、有機セレン、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）の送達を高める。いくつかの実施形態において、担体（例えば、遅延放出重合体、ナノカプセル、ＭＩＰ、ポリマーソーム等）は対象に対するセレン含有化合物（例えば、有機セレン、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）のバイオアベイラビリティを増加させる。
【０１３３】
本発明は利用される担体の種類に限定されない。実際、非限定的に、デンドリマー、ポリマーソーム、ナノ粒子、遅延放出重合体、ナノカプセル、分子刷り込み重合体、および／または他の種類の担体（例えば、本明細書中に示される担体のどれでも）を含む、さまざまな担体が使用され得る。１つの好ましい実施形態において、その担体は遅延放出重合体である。別の好ましい実施形態において、その担体は分子刷り込み重合体である。また別の好ましい実施形態において、その担体はセレノ糖タンパク質を封入するために使用されるポリマーソームである。本発明は使用されるポリマーソームの種類に限定されない。実際、本分野において既知のどんなポリマーソームも利用され得る。いくつかの実施形態において、そのポリマーソームはポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）ブロック共重合体を含む。しかしながら、本発明はそのように限定されない。例えば、ポリ（エチルエチレン）（ＰＥＥ）、ポリ（ブタジエン）（ＰＢまたはＰＢＤ）、ポリ（スチレン）（ＰＳ）、およびポリ（イソプレン）（ＰＩ）を含む、既知のブロック共重合体が利用され得る。いくつかの実施形態において、その重合体はポリ（ε‐カプロラクトン）（ＰＣＬ）ジブロック共重合体を含む。いくつかの実施形態において、そのポリマーソームはポリ（エチレンオキシド）‐ブロック‐ポリ（ε‐カプロラクトン）（ＰＥＯ‐ｂ‐ＰＣＬ）系のジブロック共重合体を含む。いくつかの実施形態において、そのポリマーソームはトリブロック、テトラブロック、ペンタブロック、または少なくとも６つのブロック共重合体であるブロック共重合体を含む。いくつかの実施形態において、そのポリマーソームはポリ（乳酸）、ポリ（グリコリド）、ポリ（乳酸‐コグリコール酸）、および／または、またはポリ（３‐ヒドロキシブチレート）と、ＰＥＯとのカップリングに由来する。本発明はセレノ糖タンパク質封入ポリマーソームの大きさに限定されない。非限定的に、直径約５０〜３００ｎｍであるセレノ糖タンパク質封入ポリマーソームを含む、さまざまな大きさが本発明に係る組成物および方法において使用されるが、より大きな（例えば、約３５０ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、またはそれ以上）およびより小さな（例えば、約４０ｎｍ、３０ｎｍ、２０ｎｍ、またはそれ以下）のセレノ糖タンパク質封入ポリマーソームが使用され得る。
【０１３４】
いくつかの実施形態において、本発明は他の形態のセレン（例えば、セレン富化酵母、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ、または無機セレン単一用量カプセルもしくはピル）に比較して、有機セレン（例えば、分子刷り込み重合体（ＭＩＰ）、遅延放出重合体等）の定常的なおよび安全な供給を提供するＳＧＰ放出制御ナノカプセルおよびＭＩＰ球を含む。いくつかの実施形態において、水溶性、可溶性、および／またはＳＧＰは本明細書中の高度な送達方法（例えば、ナノ粒子（例えば、ナノカプセル）、小胞、重合体（例えば、分子刷り込み重合体（ＭＩＰ）、遅延放出重合体等）、および／またはポリマーソーム）を通してセレンの有効な封入および送達のために利用される。いくつかの実施形態において、本明細書中の高度な送達方法は封入されたセレン（例えば、ＳＧＰまたは可溶性セレン）のバイオアベイラビリティを高める。いくつかの実施形態において、本明細書中の高度な送達方法は溶液、対象、血清等へのセレンの遅延放出（例えば、１２時間、２４時間、２日間、１週間、２週間、３週間、１０週間等）を提供する。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、本発明は本発明に係るセレン含有組成物（例えば、有機セレン、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ等）のための担体としての遅延放出重合体を提供する。ポリ（乳酸‐共‐グリコール酸）（ＰＬＧＡ）の如き遅延放出重合体、またはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）の如きポリカチオン性重合体が担体として利用され得る。いくつかの実施形態において、遅延放出重合体はセレン含有組成物（例えば、有機セレン、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）の制御された送達を提供する。いくつかの実施形態において、制御された送達は、重合体（例えば、ＰＥＩ）が、天然であるかまたは合成であるかに関わらず、そのセレン含有組成物（例えば、有機セレン、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）が事前に設計された様式でその材料から放出されるような様式で、セレン含有組成物（例えば、有機セレン、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）および場合により他の活性または不活性剤と賢明に混合されるとき起こる。セレン含有組成物（例えば、有機セレン、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）の放出は長期間にわたり一定であり得る、それは長期間にわたり周期的であり得る、またはそれは環境もしくは他の外部事件により誘発され得る。いくつかの実施形態において、送達の制御はより有効な治療を提供する。いくつかの実施形態において、送達の制御は過少量投与および過剰量投与の可能性を消去する。送達制御系を用いる他の利点は所望の範囲内のセレンレベルの維持、投与の必要性の減少、および対象のコンプライアンスの増加を含み得る。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、本発明は本発明に係るセレン含有組成物（例えば、有機セレン、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）のための担体としてポリマーソームを提供する。いくつかの実施形態において、ポリマーソームは小胞膜を形成するために両親媒性合成ブロック共重合体を用いて作成され、そして約５０ｎｍ〜約１０μｍ、またはそれ以上の半径を有する（例えば、Ｄｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂ（２００２），１０６（１１），２８４８‐２８５４を参照のこと。これは参照によりその全体が本明細書に援用される）。いくつかの実施形態において、ポリマーソームはそれらの核内に水溶液を含み、そしてセレン含有組成物（例えば、有機セレン、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）および場合により１つ以上の薬物、酵素、他のタンパク質およびペプチド、ならびにＤＮＡおよびＲＮＡ断片の如き、分子を封入するおよび保護するために有用である。いくつかの実施形態において、そのポリマーソーム膜は封入された物質を生物系中に見られる物の如き外部物質から分離する物理的障壁を提供する。いくつかの実施形態において、ポリマーソームはそれらの核内の内容物（例えば、セレン含有組成物（例えば、有機セレン、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等））の時間決め放出を許容する。いくつかの実施形態において、ポリマーソームを構築するための合成重合体の使用は、設計者が膜の特徴を操ることおよびしたがって、浸透性、放出速度、安定性、および他の特性を制御することを可能にする。
【０１３７】
１つの実施形態において、本発明に係るセレン含有（例えば、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ）組成物はポリ（エチレンオキシド）‐ブロック‐ポリ（ε‐カプロラクトン）（ＰＥＯ‐ｂ‐ＰＣＬ）系のポリマーソーム内に封入され得る。機構の理解は本発明の実施に必ずしも必要ではなく、そして本発明は特定の活性機構に限定されないが、いくつかの実施形態において、ＰＥＯは生ずる担体にインビトロ化学的および機械的安定性の改善、インビボバイオアベイラビリティの増大、および血液循環半減期の延長を提供する。周知の埋め込み可能な生物材料であるＰＣＬはポリマーソーム膜を形成し、そして生ずる生成物のそのエステル結合の加水分解による完全なおよび安全なインビボ分解を促進する。
【０１３８】
別の実施形態において、本発明に係るセレン含有組成物（例えば、セレノ糖タンパク質）はポリ（乳酸）、ポリ（グリコリド）、ポリ（乳酸‐コグリコール酸）、またはポリ（３‐ヒドロキシブチレート）と、ＰＥＯとのカップリングに由来する他の生分解性ブロック重合体の配合または純粋な誘導体から合成されたポリマーソーム中に封入され得る。
【０１３９】
いくつかの実施形態において、本発明は本発明に係るセレン含有組成物（例えば、有機セレン、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）のための担体としてナノカプセル（Ｃｏｕｖｒｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｔｈｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．２００２；１９（２）：９９‐１３４を参照のこと。これは参照によりその全体が本明細書に援用される）を提供する（例えば、米国特許第７，４９８，０４５号を参照のこと。これは参照によりその全体が本明細書に援用される）。いくつかの実施形態において、ナノカプセルはそのナノカプセルの生分解に際してセレン含有組成物（例えば、有機セレン、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）の放出の制御を提供する。いくつかの実施形態において、ナノカプセルは約２〜約１００時間（例えば、約２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、９６時間等）の生分解半減期を有する。いくつかの実施形態において、本発明に係る生分解性ナノカプセルは対象への投与に際しての対象のインビボ循環へのセレン含有組成物（例えば、有機セレン、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）および場合により巨大分子を含むさまざまな他の封入された治療用剤の放出の制御に適応できる。本発明に係るナノカプセル組成物は治療的に有効な濃度のセレン含有組成物（例えば、有機セレン、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ等）を封入し、そして受容者のインビボ循環にそれらを送達することにさらに適応される。いくつかの実施形態において、セレン含有組成物（例えば、有機セレン、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）を封入するナノカプセルは例えば、ポリ乳酸重合体およびポリエチレングリコールの共重合体を含む膜である。いくつかの実施形態において、ナノカプセルは単量体の界面上の重合化または事前に形成された重合体の界面上のナノ沈着により形成される。
【０１４０】
いくつかの実施形態において、本発明は本発明に係るセレン含有組成物（例えば、有機セレン、可溶性セレン、水溶性セレン、ＳＧＰ、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ等）の担体として分子刷り込み重合体を提供する（Ｍｏｓｂａｃｈ．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．７，ｐｐ．９２‐９６，１９９４．、Ｗｕｌｆｆ．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１１，ｐｐ．８５‐８７，１９９３．、Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ（Ｎｇｏ．Ｔ．Ｔ．ｅｄ．），ｐｐ．３８３‐３９４、米国特許第５，９５９，０５０号を参照のこと。これらは参照によりそれらの全体が本明細書に援用される）。
【実施例】
【０１４１】
実験
以下の実施例は本発明のいくつかの好ましい実施形態および態様を示し、そしてさらに例示するために提供され、そしてそれらの範囲の限定として解釈されるとは意図されない。
【実施例１】
【０１４２】
Ａ．酸抽出および続く沈殿によるＳＥＬ‐ＰＬＥＸからの可溶性セレノ糖タンパク質の連続調製
機械的スターラー、サーモメーター、および電気毛布を装備した４Ｌの３つ口反応器（抽出器番号１、図１を参照のこと）を、３Ｌの脱イオン水および５０ｍｌの０．３Ｎ  ＨＣｌで満たした。その反応器を５０℃超まで加熱し、そして６００ｇの１６００ｐｐｍのＳＥＬ‐ＰＬＥＸを攪拌しながら一部ずつ添加した。約１時間後、その温度は８０℃に達し、そしてその混合物のｐＨは２．２３であった。そのｐＨを１３．５ｍＬの０．３Ｎ  ＨＣｌの添加により１．５まで減少させた。反応容器の加熱および攪拌を７時間維持した。その混合物のｐＨをおよそ１時間毎にチェックし、ｐＨレベルが１．５のままであることを確認した。酸性反応後混合物（ｐＨ１．５）を４つの１Ｌ遠心分離ジャーに分配し、そして４０００ＲＣＦで８℃で２０分間遠心分離した（遠心分離番号１、図１を参照のこと）。上清（ｐＨ１．５）および固体ペレットを回収した。上清を氷浴（４℃）中の３Ｌの３つ口反応器（ミキサー番号１、図１を参照のこと）に添加し、そして２Ｎ  ＮａＯＨを含む滴下漏斗、機械的スターラー、およびｐＨ電極を装備した。２Ｎ  ＮａＯＨをその混合物のｐＨが１．８５に達するまで、攪拌しながら溶液に１滴ずつ添加した。ＮａＯＨの添加中、白色沈殿物が形成された。攪拌を３０分間続け、そしてその混合物を再び遠心分離して（遠心分離番号２、図１を参照のこと）、上清およびセレノ糖タンパク質ペレットを形成させた。セレノ糖タンパク質ペレットを回収し、そして凍結乾燥させ（凍結乾燥器番号１、図１を参照のこと）、１．６３５ｇの白色沈殿物を得た。ｐＨ１．８５の上清およびｐＨ１．５で形成されたペレットを反応容器（ミキサー番号２、図１を参照のこと）に添加し、そして氷水浴（４℃）中に置いた。その混合物を３０分間攪拌し、そしてその後遠心分離し（遠心分離番号３、図１および図２を参照のこと）、ｐＨ１．６での湿潤残留固体および上清を形成させ、それらは続くｐＨ依存的沈殿によりＳＧＰ（例えば、以下に示されるようなｐＨ３．０、ｐＨ４．０、およびｐＨ６．０ＳＧＰ画分）を作成するために後に使用された。
【０１４３】
Ｂ．セレノ糖タンパク質のｐＨ依存的沈殿
ｐＨ１．６の上清を反応器（ミキサー番号３、図２を参照のこと）中に入れ、そして２Ｎ  ＮａＯＨをその混合物のｐＨが３．０に達するまで攪拌しながらその溶液に添加した。攪拌をさらなる３０分間続け、そしてその混合物を遠心分離し（遠心分離番号４、図２を参照のこと）、上清およびセレノ糖タンパク質ペレットを形成させた。ｐＨ３．０でのセレノ糖タンパク質ペレット（ＳＧＰ  ｐＨ３．０）を回収し、そして凍結乾燥させ（凍結乾燥器番号２、図２を参照のこと）、薄灰色沈殿物を得た。ｐＨ３．０の上清を反応器（ミキサー番号４、図２を参照のこと）中に入れ、そして２Ｎ  ＮａＯＨをその溶液のｐＨが４．０まで上昇するまでその溶液に添加した。攪拌をさらなる３０分間続け、そしてその混合物を遠心分離し（遠心分離番号５、図２を参照のこと）、上清およびセレノ糖タンパク質ペレットを形成させた。ｐＨ４．０でのセレノ糖タンパク質ペレット（ＳＧＰ  ｐＨ４．０）を回収し、そして凍結乾燥させ（凍結乾燥器番号３、図２を参照のこと）、薄灰色沈殿物を得た。ｐＨ４．０の上清を反応器（ミキサー番号５、図２を参照のこと）中に入れ、そして２Ｎ  ＮａＯＨをその溶液のｐＨが６．０まで上昇するまでその溶液に添加した。攪拌をさらなる３０分間続け、そしてその混合物を遠心分離し（遠心分離番号６、図２を参照のこと）、上清およびセレノ糖タンパク質ペレットを形成させた。ｐＨ６．０のセレノ糖タンパク質ペレット（ＳＧＰ  ｐＨ６．０）を回収し、そして凍結乾燥させ（凍結乾燥器番号４、図２を参照のこと）、薄灰色沈殿物を得た。続いて形成されていた沈殿物を遠心分離により回収した。最後の遠心分離からのｐＨ６．０の廃棄水流は（例えば、酵母成長培地または他の栄養物の調製において利用され得る）いくらかのセレノ‐ペプチド、マンノース、およびグルコースオリゴ糖を含有していた。そのプロセスは毒性廃棄物を生成せず、環境親和性である。
【実施例２】
【０１４４】
可溶性ＳＧＰ分離および特徴付け
ＳＥＬ‐ＰＬＥＸの酸抽出により形成されたｐＨ１．５の固体残留物を含むペレットを、そのプロセス中で使用される水の体積を減少させるために、およびそのペレット中に閉じ込められたほとんどのＳＧＰを溶解するために、第２抽出（実施例１を参照のこと）からのｐＨ１．８５の上清で洗浄した。ｐＨ１．６での第３の遠心分離後の固体残留物は顕著な量のセレンを含み、そして新規バッチのセレン酵母と配合され、その後スプレイ乾燥され得、これにより抽出に使用した材料を完全に利用する。
【０１４５】
ＳＥＬ‐ＰＬＥＸからの３回の連続抽出後に各ＳＧＰ画分のセレン総量、％タンパク質濃度、および重量を平均化した（表１を参照のこと）。抽出されたＳＧＰ画分はＳＥＬ‐ＰＬＥＸの２．０〜２．５重量％、および抽出前ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ中に存在したセレン総量の４．３〜５．７５％を構成した。ＳＧＰ画分のｐＨおよびタンパク質重量の間には正の相関があり、総セレン濃度については逆のことが言える（表１を参照のこと）。ＳＧＰ画分についての平均タンパク質重量は約６５〜９０重量％に及び、そして同じセットの画分についてのセレン濃度は約２９００ｐｐｍ〜４９００ｐｐｍの範囲に及んだ。ＳＧＰ画分は４〜３７重量％の炭水化物成分を含有していた。
【０１４６】
（表１）６００ｇのＳＥＬ‐ＰＬＥＸの３回の連続抽出からの平均の結果
2014514277.tif 000002
【０１４７】
ＳＥＬ‐ＰＬＥＸの酸抽出により形成されたｐＨ１．５でのＳＧＰ画分のゲル電気泳動から、高分子量タンパク質または大きな炭水化物成分を有するタンパク質に対応するバンドはなかったことが明らかになった。低分子量画分が優性である類似の大きさの分布をキャピラリー電気泳動を用いて検出し、そして５．１ｋＤａ〜１２．２ｋＤａの低分子量タンパク質がその混合物の９０％超を構成した。
【０１４８】
ＢＩＯ‐ＲＡＤ  Ｐ１０ゲル（６時間までの保持時間）上でのおよびＢＩＯ‐ＲＡＤ  Ｐ３０ゲル（１時間未満の保持時間）上でのｐＨ３．０、４．０、および６．０の３つのＳＧＰ画分のサイズ排除クロマトグラフィーは保持時間５〜１０分での早いピーク、および保持時間３５〜６０分での広い、遅いピークをもたらした。早いピークは６４．７４〜７５．２４％の顕著により多いタンパク質、および２９７２〜４２５２ｐｐｍの顕著により高いセレン濃度を含有していた。遅いピーク中のタンパク質含有量は３１．６６〜５４．９５％ともっと低く、そしてセレン濃度は１１９３〜１８５８ｐｐｍと顕著により低かった。この種類のクロマトグラフィーは粗い画分から高含有量のＳｅを伴うＳＧＰを生じることができ、そしてこれらの混合物中の炭水化物成分の低い均一性を示した。
【０１４９】
ＳＥＬ‐ＰＬＥＸのトリプシン消化からのさまざまなペプチドの０．１Ｍ  ＡｃＯＮＨ４（ｐＨ７．５）を用いたＳＵＰＥＲＤＥＸペプチド１０／３００ＧＬ樹脂（ＡＭＥＲＳＨＡＭ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、画分化範囲７．０〜１００ｋＤａ）上でのサイズ排除クロマトグラフィーはＳＧＰサンプルについて同様のセットのピーク（１０〜１００ｋＤａおよび１００ｋＤａ超）、およびＳＥＬ‐ＰＬＥＸサンプルについて完全に異なる溶離パターンを生成した。２０分未満の溶離時間での「早い」ピークのみがセレンを含有していた。セレン含有溶離物を回収し、凍結乾燥させ、そしてＳＥＣ  ＩＣＰ  ＭＳ、ＭＡＬＤＩ  ＴＯＦ  ＭＳおよびナノＥＳＩ  ＭＳ／ＭＳ技術を用いて分析した。その結果は相補的であり、そしてセレン含有ペプチドの検出、同定、およびシークエンシングを許容した。検出されたタンパク質の同定はＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース検索により得られた（表２を参照のこと）。
【０１５０】
（表２）ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ抽出物のトリプシン消化からの同定されたセレノ‐ペプチドおよびセレノタンパク質
2014514277.tif 000003
【０１５１】
この方法の最も驚くべき性質は、ｐＨ依存的沈殿からの異なるＳＧＰ画分のクロマトグラフィー分離（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー）により得られたさまざまな画分のタンパク質組成は適用された電気泳動法（ゲル電気泳動およびキャピラリー電気泳動）に従って、同じであったまたは非常に似ていたことであった。本明細書中に示されるように、セレン富化酵母からのセレノ糖タンパク質の抽出は低ｐＨ（例えば、１．５）で成功であった。機構の理解は本発明を実施するために必ずしも必要ではなく、そして本発明は特定の活性機構に限定されないが、いくつかの実施形態において、ＳＧＰ抽出に使用される酸性条件下でタンパク質コアは顕著に加水分解されず、そして大部分は元の形態のまま残る。いくつかの実施形態において、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸのｐＨ依存的セレノ糖タンパク質画分（例えば、ＳＧＰ  ｐＨ３．０、ＳＧＰ  ｐＨ４．０、ＳＧＰ  ｐＨ６．０）は作成され、そして（例えば、（例えば、経口経路を介して）対象に有機セレンを送達するために）対象に（例えば、それ単独でまたは別の剤との組み合わせで）投与される。
【実施例３】
【０１５２】
バイオアベイラビリティ比較
ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ酸抽出物からのＳＧＰのｐＨ依存的沈殿からのセレンのバイオアベイラビリティを比較するために、ひよこを７つの異なる食餌処置（表３および４を参照のこと）で１８日間飼い、ニワトリ胸筋中のセレン含有量を計測した。
【０１５３】
（表３）基本食の組成および栄養明細
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【０１５４】
（表４）食餌処置
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【０１５５】
表５中に示されるように、ＳＧＰ画分ｐＨ４．０またはｐＨ６．０で補給された食餌を取ったニワトリは、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ（ＳＰ）補給食餌を取ったニワトリと比較して、胸筋組織中にほとんど同じ量のセレン沈着を蓄積した。対照に比較して、ＳＰ食餌を取ったニワトリおよびＳＧＰ画分ｐＨ４．０またはｐＨ６．０補給食餌を取ったニワトリ中の組織のＳｅレベルは亜セレン酸ナトリウムで補給された食餌を受けたニワトリの２倍超であった。したがって、本発明は、いくつかの実施形態において、ＳＰおよびＳＰ由来ＳＧＰ画分（例えば、ｐＨ４．０およびｐＨ６．０）は対象に投与されたとき、生物利用可能であることを提供する（例えば、いくつかの実施形態において、ＳＰ、ＳＧＰ  ｐＨ４．０またはＳＧＰ  ｐＨ６．０は（例えば、対象の組織へのセレンの送達により明示されるように）対象に投与されたとき無機セレン（例えば、亜セレン酸ナトリウム）より（例えば、２倍以上）生物利用可能である）。
【０１５６】
（表５）筋肉Ｓｅ濃度に対する食餌Ｓｅ源の効果
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＊異なる文字を伴う値はその結果が統計的に有意である（Ｐ＜０．０５）ことを示す。
【実施例４】
【０１５７】
Ａ．ブロイラーの胸筋における遺伝子発現プロファイルに対する異なる食餌セレン源の効果
実施例３中で言及されるニワトリからの胸筋組織を以下の食餌処置により誘発される遺伝子発現プロファイルにおける類似性および相違性を評価するために使用した。処置１‐基本（対照）、処置２‐対照＋０．３ｐｐｍ亜セレン酸ナトリウム（ＳＳ）、処置３‐対照＋０．３ｐｐｍ  ＳＥＬ‐ＰＬＥＸ、処置６‐ｐＨ４．０のＳＥＬ‐ＰＬＥＸ（ＳＰ）から抽出された０．３ｐｐｍ  ＳＧＰ画分。ＳＧＰ画分ｐＨ４．０はＳＰで得られた値と比較して胸組織におけるほとんど同レベルのセレン沈積をもたらしたので、ＳＧＰ画分ｐＨ４．０を分析した（表５を参照のこと）。そのように、ＳＧＰ画分ｐＨ４．０を受容する動物はＳＰを取る動物中で観察されるのと同様のインビボ効果（例えば、遺伝子発現変化）を経験するかどうか、または顕著な、計測可能な相違が存在するかどうかを決定するために、本発明の実施形態の開発中に実験を行った。
【０１５８】
動物および組織サンプリング
１８日齢で、（上記および表３および４中に示される）各処置群からの５羽のニワトリをランダムに選択し、そしてアルゴン窒息により安楽死させ、続いて頸椎脱臼させた。胸筋組織のサンプル（１グラム）を迅速に除去し、そして液体窒素中に瞬間凍結した。サンプルを分析されるまで−８０℃で貯蔵した。
【０１５９】
マイクロアレイ分析
トータルＲＮＡをＴＲＩＺＯＬ試薬（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を用いて製造業者のプロトコールに従って凍結組織から単離し、そしてＲＮＥＡＳＹキット（ＱＩＡＧＥＮ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を用いて精製した。トータルＲＮＡを２６０ｎｍでの吸収により定量し、そして無傷であることをアガロースゲル電気泳動および２８Ｓおよび１８Ｓバンドの臭化エチジウム染色により確認した。
【０１６０】
マイクロアレイプロファイリングを、ＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ（Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ、ＣＡ）遺伝子チップニワトリゲノムアレイを用いて製造業者の提案するプロトコールに従って行った。
【０１６１】
データをプロセスし、そして各プローブセットをＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ  ＭＡＳ５．０発現サマリーアルゴリズムを用いてシグナル対ノイズ強度の割合に基づいてＰ（存在する）、Ｍ（境界）、またはＡ（存在しない）として標識した。
【０１６２】
バイオインフォマティクス分析
ＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇ  ＧＸ１０．０（Ｓｉｌｉｃｏｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、Ｒｅｄｗｏｏｄ、ＣＡ）を、マイクロアレイデータを特徴付け、そして正規化するために、そして統計的および遺伝子発現パターン分析を行うために使用した。
【０１６３】
誤った発見の可能性を最小限にするために、（ＭＡＳ５．０アルゴリズムにより「存在しない」として標識される）低シグナル強度のプローブセットをさらなる分析から排除した。フィルターにかけた遺伝子発現プロファイルをその後、群間で異なって発現されたプローブセットを同定するために１方向ＡＮＯＶＡに、続いて対照に比較してセレン処置により顕著に変えられた遺伝子を決定するために事後検定にかけた。対照と異なる（Ｐ≦０．０５）および対応するシグナル強度倍変化（ＦＣ）≧１．２を有する遺伝子のみが変えられたとみなされた。
【０１６４】
胸筋組織における遺伝子発現プロファイルに対する食餌処置の効果を視覚的に示すために、異なって発現された（ＡＮＯＶＡ、Ｐ＜０．０５）と同定された６９３個の遺伝子をアレイおよび遺伝子の両方に基づいて無監督の階層的クラスタリングにかけた。上記に詳細に示されるように、ＳＧＰ画分ｐＨ４．０はＳＰに直接由来し、そしてＳＰまたはＳＧＰ画分ｐＨ４．０を受容した食餌処置群はニワトリ胸筋組織においてほとんど同レベルのセレン沈積（バイオアベイラビリティ）を示した（上記表５を参照のこと）。したがって、両方のセレン処置群（ＳＰおよびＳＧＰ画分ｐＨ４．０）は同一のまたは非常に類似の遺伝子発現変化を示したであろうことが予想された。しかしながら、および非常に驚くべきことに、遺伝子発現プロファイルに対する明らかな食餌効果が２つの処置群間で観察された（図３を参照のこと）。特に、劇的な相違はＳＧＰ画分ｐＨ４．０処置群に比較したＳＰ処置群の遺伝子発現プロファイルで観察され、分析された遺伝子の大多数がこの２つの処置群について異なって応答した。ＳＰ処置対ＳＧＰ画分ｐＨ４．０処置によりもたらされた、この遺伝子発現プロファイルにおける大きな変化は全く予想外であり、そして微量元素生物学についての従来なかった見識を提供する。
【０１６５】
例えば、６９３個の異なって調節された遺伝子（Ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ）をアレイおよび遺伝子両方に基づいた無監督の階層的クラスタリングにかけた。図３中に示される熱マップにおいて、正規化遺伝子発現プロファイルは各遺伝子の平均値に比較した発現変化を反映する色で示される。白色、黒色、または灰色はそれぞれ、発現強度のレベルにおける減少、増加、または変化なしを示す。この熱マップの上部の系統樹は処置間の発現プロファイルにおける類似性の程度を反映し、一方で左側の系統樹は全ての処置にわたる、個々の遺伝子の発現パターンにおける相違を示す。図３中に示される系統樹の長さはクラスター葉間の相違のレベルに対応する（短い系統樹はより高レベルの類似性を示す）。
【０１６６】
胸筋における遺伝子発現プロファイルに対するＳＧＰ画分ｐＨ４．０およびＳＰの異なる効果を、図４中に示されるベン図において示されるように、ＳＧＰ画分ｐＨ４．０（ｐＨ４）、ＳＰ、および亜セレン酸ナトリウム（ＳＳ）により顕著に変えられた（Ｐ＜０．０５、ＦＣ＞１．２）遺伝子の数を比較することによりさらに分析した。ＳＰ、ｐＨ４、およびＳＳにより、それぞれ、１９８個、１７３個、および２８３個の遺伝子が顕著に変えられた。全ての３つのＳｅ処置群により共通して調節された遺伝子は２１個のみであり、そしてＳＰおよびＳＧＰ画分ｐＨ４．０の両方により共通して調節された遺伝子は４６個であった。ＳＰまたはＳＧＰ画分ｐＨ４．０により独自に変えられた遺伝子は、それぞれ、１５２個および１２７個であった。
【０１６７】
例えば、さまざまなセレン処置の結果としてニワトリ胸筋組織において異なってまたは共通して調節されることが同定された、いくつかの遺伝子が図５〜７中に示される。
【０１６８】
ベータ誘発形質転換成長因子（ＴＧＦＢＩ  ６８ｋＤａ）は細胞マトリックス相互作用、細胞接着、遊走、および分化に関連すると考えられている。この遺伝子の突然変異はいくつかの形態の角膜変性症に関連している。マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ８（ＭＡＰＫ８、ＪＮＫ１としても知られる）はＭＡＰキナーゼファミリーの一員である。ＭＡＰキナーゼは複数の生化学シグナルの統合点としてはたらき、そして増殖、分化、転写調節、および発達の如き、広くさまざまな細胞プロセスに関連する。ＭＡＰＫ８はインスリン伝達経路を通して細胞酸化ストレス応答、免疫応答、ならびに炭水化物およびタンパク質代謝においてもまた重要な役割を果たす。ＭＡＰＫ８の過剰な活性化はインスリン受容体基質１（ＩＲＳ１）のリン酸化を通してインスリン抵抗性を誘発し得ることが知られる。
【０１６９】
図５はＳＳ、ＳＰ、およびＳＧＰ画分ｐＨ４．０により共通して調節された遺伝子の例（例えば、ＴＧＦＢＩおよびＭＡＰＫ８）を提供する。図６はＳＰおよびＳＧＰ画分ｐＨ４．０により共通して調節されたが、ＳＳによっては調節されなかった遺伝子の例（例えば、補体成分１Ｒ（Ｃ１Ｒ）、およびユビキチン化因子Ｅ４Ａ（ＵＢＥ４Ａ））を提供する。補体成分１Ｒ（Ｃ１Ｒ）は先天的な免疫系の補体カスケードおよび病原体除去に関連するタンパク質である。ユビキチンでのタンパク質修飾は異常なまたは短命のタンパク質が分解されるよう標的化されるための重要な細胞機構である。ＵＢＥ４ＡはＥ４ユビキチン化因子として示されるＵ‐ボックス型ユビキチンリガーゼをコードする。ＵＢＥ４Ａは成長および／または分化を含む、ユビキチン化以外の異なる生化学プロセスにおいて役割を有すると考えられている。
【０１７０】
図７はＳＧＰ画分ｐＨ４．０により独自に調節された遺伝子の例（例えば、Ｘ結合小筋タンパク質（ＳＭＰＸ）およびユビキチン特異的ペプチダーゼ（ＵＳＰ２２））を提供する。Ｘ結合小筋タンパク質（ＳＭＰＸ）は横紋筋において特異的に発現される小タンパク質であり、そして筋肉収縮において重要な役割を果たす。ユビキチン特異的ペプチダーゼ２２（ＵＳＰ２２）はユビキチン依存的タンパク質異化プロセスに関連する遺伝子である。ＵＳＰ２２は腫瘍成長の正の調節剤であることが示されている。ＵＳＰ２２の発現の増加は癌進行に関連する。ＵＳＰ２２の発現を減少させるまたはノックダウンさせる能力は腫瘍成長および／または癌進行の阻害を提供し得る。例えば、ＵＳＰ２２の発現を減少させることはＭｄｍ２およびサイクリンＥの発現をダウンレギュレートし、ｐ５３およびｐ２１の発現のアップレギュレートをもたらし、細胞周期停止およびヒト膀胱腫瘍細胞増殖の阻害を引き起こし得る。
【０１７１】
筋肉組織におけるｐＨ４．０画分により誘発された独特の遺伝子発現パターンのさらなる調査は（例えば、腫瘍進行および／または転移を妨げるまたは遅延させるための）この画分中のこの化学形態のセレンの治療的使用の可能性について追加の証拠をもたらす。
【０１７２】
例えば、ＫＩＴＬＧ（ｃ‐ＫＩＴリガンド）遺伝子は子宮内の生殖細胞および神経細胞発達、ならびに造血ではたらく多面的因子であるチロシンキナーゼ受容体のリガンドをコードする。これらのプロセスは細胞遊走における役割を反映すると考えられている。近年、睾丸癌の危険性の増加に関連すると考えられているＫＩＴＬＧ遺伝子の変形が発見された（Ｋａｎｅｔｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。さらに、ＫＩＴ発癌遺伝子の遺伝子産物である、ＫＩＴＬＧの同種の受容体の過剰発現は色素嫌性腎臓細胞癌腫において実証されており、そしてＫＩＴＬＧおよびＫＩＴ両方の発現はＮＩＨ３Ｔ３線維芽細胞の変形および小細胞肺癌の腫瘍形成に関連することが知られる（Ｙａｍａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。
【０１７３】
驚くべきことに、ｐＨ４．０画分を投与された対象からの筋肉組織はＫＩＴＬＧ遺伝子を顕著にダウンレギュレートしたが、その発現レベルはｐＨ４．０画分の親材料であるＳＰを含む、他のセレン処置により影響を受けなかったことが観察された（例えば、図８を参照のこと）。
【０１７４】
転移はほとんどのヒト癌における主要な死亡原因であり、そして第１の腫瘍からの細胞が細胞外マトリックスを通して遊走し、新規に形成された血管を通る循環に入り（腫瘍血管新生）、そして離れた部位に播種し（溢出）、そこで増殖が再び始まる、複数のステップのプロセスである。
【０１７５】
成長因子受容体‐結合タンパク質２（Ｇｒｂ２）は細胞内シグナル伝達において鍵となる分子である。それは細胞周期進行およびアクチンに関連する運動性、ならびにその結果、上皮形態形成、血管新生、および脈管形成の如き、より複雑なプロセスに重要である。これらの重要な機能から、Ｇｒｂ２は局所侵入および転移を通した固体腫瘍の広がりを妨げるために設計された策の治療標的となる。実際に、Ｇｒｂ２を妨害するまたは拮抗する方法は、有効な抗転移策であり得ると思われるので、その方法の発見に最近多くの努力がはらわれている（Ｇｉｕｂｅｌｌｉｎｏ，Ｂｕｒｋｅ  ａｎｄ  Ｂｏｔｔａｒｏ，２００８）。
【０１７６】
図９中に示されるように、Ｇｒｂ２は対照ならびに亜セレン酸ナトリウムおよびｐＨ４．０の親セレン材料であるＳｅｌ‐Ｐｌｅｘを含む、他のセレン処置に対して、ｐＨ４．０処置動物において顕著にダウンレギュレートされた。
【０１７７】
ｐＨ４．０画分の抗発癌活性の可能性は重要な癌関連遺伝子のダウンレギュレーションに限定されない。例えば、乳癌細胞中のＤＮＡＪＡ３の発現の減少はインターロイキン８のレベルを増加させることによりそれらの遊走を高めることが観察されている（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。このおよび他の結果は、癌細胞においてＴｉｄ１（ＤＮＡＪＡ３）のレベルをブーストすることはそれらの運動性および転移能力を負に調節することを強く示唆する。
【０１７８】
ＤＮＡＪＡ３はｐＨ４．０セレンに応答して実験における筋肉組織において強くアップレギュレートされた（図１０）が、他のセレン源を受容した動物からの筋肉組織においては対照条件に比較して、応答しないままであった。
【０１７９】
Ｂ．ブロイラーの肝臓遺伝子発現プロファイルに対する異なるセレン処置の効果
ＳＰおよびＳＧＰ画分ｐＨ４．０の予想されない異なる遺伝子発現効果をさらに特徴付けるために、および発現の調節は他の組織に拡大されたかどうかを決定するために、遺伝子発現研究を上記実施例４（ａ）に示されるように行った。胸筋組織の代わりに、実施例３中で言及されるのと同じニワトリから肝臓組織を回収し、そして分析した。ＳＳ、ＳＰ、およびＳＧＰ画分ｐＨ４．０補給処置群に加えて、追加の処置群（ＳＧＰ画分ｐＨ１．８５（ｐＨ１．８５）、ＳＧＰ画分ｐＨ３．０（ｐＨ３）、およびＳＧＰ画分ｐＨ６．０（ｐＨ６））からのニワトリの肝臓遺伝子発現プロファイルもまた特徴付け、そして対照処置群と比較した。
【０１８０】
実施例４（Ａ）中で言及されるのと同じ実験プロトコールに続いて、各処置群の対象からの肝臓遺伝子発現プロファイルの分析は異なる食餌処置により顕著に変えられた（Ｐ＜０．０１、ＡＮＯＶＡ）１５２０個の遺伝子を同定した。これらの遺伝子の無監督の階層的クラスタリング分析は図１１中に示され、そして異なるセレン源での処置は遺伝子発現を調節する能力における大きな変化を誘発するということの追加の証拠を提供する。図１１の熱マップは各遺伝子の平均値に比較した発現変化を反映する色の、正規化遺伝子発現プロファイルを示す。白色、黒色、または灰色はそれぞれ、発現強度のレベルにおける減少、増加、または変化なしを示す。この熱マップの上部の系統樹は処置間の発現プロファイルにおける類似性の程度を反映し、一方で左側の系統樹は全ての処置にわたる、個々の遺伝子の発現パターンにおける相違を示す。図中に示される系統樹の長さはクラスター葉間の相違のレベルに対応する（短い系統樹はより高レベルの類似性を示す）。
【０１８１】
ＳＰおよびＳＧＰ画分ｐＨ４．０間、ならびにＳＧＰ画分ｐＨ３．０およびＳＧＰ画分ｐＨ６．０間の相違は劇的であり、数個の遺伝子のみが各セレン源での処置により共通して調節された。一般的に、遺伝子発現に対するＳＧＰ画分ｐＨ１．８５での処置の効果はＳＰおよび他のＳＧＰ処置群の間に入る（図１１を参照のこと）。したがって、いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＬ‐ＰＬＥＸでの処置（例えば、それを含む食餌および／またはその投与）対ＳＥＬ‐ＰＬＥＸから抽出されたＳＧＰ画分での処置（例えば、それを含む食餌および／またはその投与）は、異なるセレン源がセレンバイオアベイラビリティの点で同様の効果を示すにもかかわらず、異なる生物活性をもたらすということを提供する。
【実施例５】
【０１８２】
セレノ糖タンパク質のポリマーソーム封入
ｐＨ４．０および６．０で沈殿されたＳＧＰ（例えば、実施例１および２を参照のこと）の１：１混合物をポリマーソーム中に封入した。この混合物のセレン濃度は３，０５４ｐｐｍであり、そして７９．９６重量％タンパク質を含んだ。
【０１８３】
セレノ糖タンパク質封入ポリマーソームを作成するために、その混合物をｐＨ５．１、６．２、および７．４の水性緩衝液中に溶解し、そしてその懸濁物を振騰プラットフォーム上で一晩混合した。溶解しなかったＳＧＰを遠心分離により除去した。ポリマーソームを作成するために、ＰＥＯ（２ｋ）‐ｂ‐ＰＣＬ（１２ｋ）系のジブロック共重合体を有機溶媒（例えば、塩化メチレン、テトラヒドロフラン、またはジメチルスルフォキシド）中に溶解し、有機溶液中の１ｍＭ  ＰＥＯ‐ｂ‐ＰＣＬ重合体を得た。その溶液をその後ざらざらしたＴＥＦＬＯＮ小片（約１′′×１′′×１／１６′′の厚み）上に載せ、そしてざらざらの面を上に向けて、ガラスバイアルの底に置いた。その溶媒を環境温度で２４〜４８時間真空下で蒸発させ、１〜１０ｍｇの重さの共重合体の乾燥フィルムを得た。
【０１８４】
これらのフィルムをその後１：１の割合のｐＨ４．０およびｐＨ６．０のセレノ糖タンパク質を含む２〜３ｍｌの水溶液で水和し、そしてその後浴槽超音波発生装置中で２０〜１００Ｈｚで１〜２時間超音波処理した。超音波処理が完了した後、バイアルを直ちに１〜２分間ボルテックスし、ＰＥＯ‐ｂ‐ＰＣＬ系の重合体小胞の水性核中にセレノ糖タンパク質を封入するポリマーソームを形成させた。そのポリマーソームをその後、ＬＩＰＯＳＯＦＡＳＴ押し出し機を用いて所望の孔サイズのポリカーボネート膜を通して迅速に押し出し、所望の平均直径、この場合５０〜３００ｎｍのポリマーソームを得た。押し出されたポリマーソームをその後、ｐＨ７．４の等張緩衝液に対する２４時間の溶液交換のために透析カセット中に注入し、全ての封入されなかったセレノ糖タンパク質を除去した。
【０１８５】
ｐＨ７．４のセレノ糖タンパク質を封入したポリマーソームのサンプルを１０ｍｇ／ｍｌの出発セレノ糖タンパク質濃度で調製し、そして等張ＰＢＳ緩衝液に対して透析した。このサンプルを２１，０００×倍率および５２，０００×倍率の低温ＴＥＭにより画像化し、ポリマーソーム内へのセレノ糖タンパク質封入の成功を視覚的に確認した（図１３を参照のこと）。低温ＴＥＭは、それらの天然水和状態で、それにより所望されないコンフォメーション変化を妨げる、低温での標本の画像化を許容する。一般的に、およそ１００ｎｍの、またはわずかにそれより小さい大きさの均一な球形のポリマーソームが画像化サンプル中で観察された。いくつかの場合、非晶性物質のおよそ球形の集合体がポリマーソームに加えて観察された。これらの集合体はポリマーソーム核から放出されたセレノ糖タンパク質からなり得る。そしてそれらはサンプルが画像化されるまでに、ポリマーソームの内側と外側のｐＨの相違のためにさらに沈殿する。
【０１８６】
ｐＨ５．１、６．２、および７．４のセレノ糖タンパク質封入ポリマーソームをセレン濃度を計測することによりさらに特徴付けた（表６を参照のこと）。１ｍｌの各セレノ糖タンパク質封入ポリマーソームサンプルを凍結乾燥させ、白色粉末沈殿物を形成させ、その重さを後に計測し、そして２００×倍率拡大下で点検した。セレノ糖タンパク質封入ポリマーソームの全量を、濃縮酸（過塩素酸、硝酸、および塩酸）を用いて１００℃〜１７５℃の温度で溶解した。その溶液を脱イオン（ＤＩ）水を用いて５０ｍｌまで希釈し、そしてＭＩＬＬＥＮＩＵＭ  ＥＸＣＡＬＩＢＵＲ装置および方法を用いて分析した。
【０１８７】
（表６）封入の結果
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【実施例６】
【０１８８】
ナノカプセルからのセレノ糖タンパク質の放出
１０ｍｇ／ｍｌのＳＧＰ懸濁物で調製され、そしてそれぞれ、ｐＨ７．４および５．１の緩衝液に対して透析された、上記表６からのナノカプセル調合物番号１および３からのセレノ糖タンパク質（ＳＧＰ）の放出を３７０Ｃで１４日間にわたりモニターした。セレノ糖タンパク質封入ナノカプセルからのセレノ糖タンパク質の放出をモニターするために、透析された懸濁物を膜遠心分離により濃縮した（３００ｋＤの分子量カットオフを伴う遠心分離管を使用した）。濃縮懸濁物を等張緩衝液（ｐＨ５．１または７．４）中に等分し、そして３７℃で維持し、各時点についてＮ＝２のサンプルをとった。ナノカプセルからのセレノ糖タンパク質の％放出を評価するために、サンプルを各時点での無傷のナノカプセルを分離するために遠心分離した。ナノカプセルがセレノ糖タンパク質サンプルから有効に分離されたことを確認するために、動力学光散乱計測を分離された小胞（残余物）およびフリーの溶液（ろ過物）について行い、粒子サイズを計測した。フリーの溶液のＵＶ吸収を２８０ｎｍで計測し、そしてセレノ糖タンパク質の％放出を（Ａサンプル−Ａ開始）／（Ａ最終−Ａ開始）として算出した。「Ａ開始」は０日目の吸収であり、そして「Ａ最終」はサンプルが可溶化され、完全な放出を引き起こした研究の終わりの吸収である（図１２を参照のこと）。１４日間にわたり、ｐＨ５．１のＳＧＰの約７０％が定常状態でナノカプセルから放出され、一方で約５０％がｐＨ７．４で放出された。より低いｐＨでのＳＧＰの放出開始速度はナノカプセル膜の酸触媒加水分解のためであり、続いてナノカプセル膜を介したセレノ糖タンパク質の定常的な拡散が起こると考えられる。これらの放出プロファイルはＰＥＯ‐ｂ‐ＰＣＬ系のポリマーソーム内に封入された癌治療薬であるドキソルビシンのものと顕著に類似している（例えば、Ｇｈｏｒｏｇｈｃｈｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２００６，３９（５），１６７３‐１６７５を参照のこと）。これらのデータから、比較的高い負荷濃度でさえもセレノ糖タンパク質の封入は否定的に放出パターンに影響することはないことが確認される。
【実施例７】
【０１８９】
セレノ糖タンパク質（ＳＧＰ）遅延放出重合体の調製
ポリマーＡの合成。ｐＨ４．０および６．０で沈殿された（実施例５を参照のこと）ＳＧＰの１：１混合物をＳＧＰ遅延放出重合体の調製において使用した。１５０ｍｇのＳＧＰを２ｍｌのメタクリル酸および１ｍｌのＤＩ水中に溶解した。溶解を加速するためにいくらか加熱した。０．５ｍｌの溶液のサンプルを１０ｍｇのＡＩＢＮを含む５ｍｌのバイアル中に入れ、１分間ボルテックスし、そしてその管の空気を真空下で除去し、そして窒素に置き換えた。その管の内容物を、その管を７０℃まで加熱した研究室オーブン内に２時間入れることにより重合化させた。その管を壊し、そして重合体を薄い切片に切り、そして高真空下で乾燥させた。
【０１９０】
重合体Ｂの合成。０．０６４ｍｌのメタクリル酸、０．０９１ｍｌの２‐ヒドロキシエチル‐メタクリレート、１．４２７ｍｌのエチレングリコールジメタクリレート、および１０ｍｇのＡＩＢＮの混合物を５ｍｌのバイアル中に入れ、そして磁気攪拌棒で攪拌し、続いて１．５ｍｌの酢酸および０．７５ｍｌのＤＩ水の混合物中に溶解された７５ｍｇのＳＧＰを添加した。そのバイアル中の空気を窒素で置き換え、そしてそのバイアルを密閉し、そして７０℃の油浴中に４時間入れた。そのバイアルを壊し、そして重合体モノリスを磁器乳鉢中で押し砕き、粉末にした。揮発性物質を高真空下でその重合体から除去した。
【０１９１】
ＳＧＰ時間放出。同じＳＧＰ遅延放出プロトコールを各重合体（ＡおよびＢ）に適用した。３３３．７±０．１ｍｇの重合体を５ｍｌのクエン酸緩衝液（ｐＨ５．０）を含む１５ｍｌ遠心分離管中に入れ、そしてその管を穏やかに４時間振騰した。その管をその後遠心分離し、そして上清を回収し、一方、重合体ペレットを８ｍｌ体積のＤＩ水で２回洗浄し、そして凍結乾燥させた。約２１ｍｇをＳｅ分析のために凍結乾燥サンプルから取った。ＳＧＰ抽出をさらに２回繰り返した。サンプル重量を記録した。全てのサンプルはこれらの処置中に重量が減った（表８および９を参照のこと）。
【０１９２】
（表８）
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【０１９３】
（表９）
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【０１９４】
放出されたＳＧＰの濃度を見積もるために、上清の２８０ｎｍでのＵＶ吸収を計測し、そして同じ緩衝液中に調製されたＳＧＰ校正曲線と比較した（表１０を参照のこと）。
【０１９５】
（表１０）
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【０１９６】
（ＥＸＣＡＬＩＢＵＲ法および装置を用いた）原子吸収スペクトロスコピーを遅延放出重合体中の残留Ｓｅ濃度を計測するために適用した（表１１を参照のこと）。
【０１９７】
（表１１）
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【０１９８】
残留のペレット中のＳｅ濃度の計測に従って、３６．０８％のＳＧＰが３回の４時間（全部で１２時間）の洗浄後に重合体Ａから放出された。同じ処置中に、３０．１１％のＳＧＰが重合体Ｂから放出された。
【実施例８】
【０１９９】
細胞内酵母タンパク質のアルカリ抽出
２００．０ｇのＳＥＬ‐ＰＬＥＸを１ＬのｐＨ１１．５の０．１Ｍ水酸化ナトリウムと混合し、そして６０℃で８時間加熱した。その混合物をその後１４，０００×ｇ／１０分間／１０℃で遠心分離し、上清およびペレットを形成させた。そのペレットを４００ｍｌのＤＩ水で２回洗浄し、そして凍結乾燥させ、そしてそれは５４．５ｇの重量であった（表１２を参照のこと）。ｐＨ１１．５の上清および使用された洗浄液を共に混合した。そのｐＨを、濃塩酸を用いた中和により６．６まで減少させた。沈殿物のわずかな形跡および透明な上清が中和中に形成された。その沈殿物を遠心分離により分離し、そして上清をＡＭＩＣＯＮ  １０ｋＤａ超ろ過装置を用いて濃縮した。その濃縮物を１００ｍｌのＤＩ水で２回洗浄し、そして凍結乾燥させ、６４．０ｇの茶色固体を得た。残ったろ過物を混合し（総体積２ｌ）、およびセレン濃度について分析した。分離された沈殿物をセレンおよび窒素／タンパク質について分析した（表１２を参照のこと）。
【０２００】
（表１２）アルカリ抽出
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【０２０１】
ろ過物分析は１０ｋＤａ膜を通した超ろ過により回復されなかった４０．７％の質量損失および４８．７％のセレン損失を示した。セレン含有ペプチドからのＭｅＳｅ‐１およびＨＳｅ‐１ならびにこれらの官能基の酸化形態のβ‐求核／熱消去はＳＧＰの元の化学構造の分解およびろ過物への質量およびセレンの損失をもたらした。本分野において通常実施される生成プロセスはろ過物中の大量および高濃度セレンを作成し、それらは有害なまたは有毒な（例えば、環境に有害な）効果を有し得る廃棄流をもたらす。対照的に、本発明に係る方法は（例えば、大スケールの商業的プロセスにおける）セレン富化酵母からのＳＧＰの酸抽出およびｐＨ依存的画分化を提供する。さまざまな温度条件下で、アルカリ加水分解を用いた伝統的な／従来の技術は酵母細胞からのセレノ糖タンパク質の抽出においてうまくいかなかったことが分かった。本明細書中に示されるように、酸抽出を用いた酵母細胞からのＳＧＰ抽出は成功であることが発見された。
【０２０２】
引用文献
以下の引用文献は、それらが本明細書中に完全に示されるかのように、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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