(57)【要約】本発明は、特別なキナーゼ阻害プロファイルを有し、且つ治療薬として、特に抗腫瘍薬として有用な、ベンゾ［ｅ］ピリド−インドールの新しいクラス、アミノ−置換−アルキルオキシ−ベンゾ［ｅ］ピリド［４，３−ｂ］インドール誘導体に関する。
2014515384.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）：
【化３４】
2014515384.tif 000046
［式中、
ベンゾ環Ａは、２、３又は４位でＲ１により一置換されており；
Ｒ１は、基−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ５）アルキル−ＮＲａＲｂであり、ここで、（Ｃ２−Ｃ５）アルキルは、直鎖状又は分岐鎖状アルキルであり、Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、水素、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル（場合により、ヒドロキシル、−ＮＲＲ’、−ＯＰＯ（ＯＲ）（ＯＲ’）、及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒからなる群より選択される基で置換されている）、及び（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキルからなる群より選択されるか；又は、ＮＲａＲｂは、一緒になって、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピロール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、及びチオモルホリンからなる群より選択される複素環（該複素環は、場合により、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル又はヒドロキシル基により置換されている）を形成してもよく；
Ｒ２は、水素及び（Ｃ１−Ｃ３）アルキル（場合により、基ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルオキシ又は−ＮＲＲ’により置換されている）からなる群より選択され；
Ｒ３及びＲ４は、各々独立に、水素、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル及びアリールからなる群より選択されるか；あるいは、Ｒ３及びＲ４は、一緒になって、下記式：
・−（ＣＨ２）ｎ−（式中、ｎは、３、４又は５である）；又は
・−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−（場合により、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルオキシで置換されている）
の二価基を形成してもよく；
Ｒ５（式（Ｉ）にのみ存在）は、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシであり；
Ｒ６（式（ＩＩ）にのみ存在）は、水素及び（Ｃ１−Ｃ３）アルキル（場合により、ヒドロキシル、−ＮＲＲ’、−ＯＰＯ（ＯＲ）（ＯＲ’）、及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒからなる群より選択される基で置換されている）からなる群より選択され；
Ｘ（式（ＩＩ）にのみ存在）は、Ｏ又はＳであり；
ここで、Ｒ及びＲ’は、同一又は異なり、水素及び（Ｃ１−Ｃ４）アルキルからなる群より選択される］を有する化合物、又はその異性体形態、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物が、下記の特徴：
［−  Ｒ１は、基−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ４）アルキル−ＮＲａＲｂであり、ここで、（Ｃ２−Ｃ４）アルキルは、直鎖状又は分岐鎖状アルキルであり、Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、水素及び（Ｃ１−Ｃ３）アルキルからなる群より選択されるか；又は、ＮＲａＲｂは、一緒になって、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピロール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン及びチオモルホリンからなる群より選択される複素環を形成してもよく；及び／又は
−  Ｒ２は、水素、メチル、エチル、及び−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ［（Ｃ１−Ｃ２）アルキル］２（式中、ｎは、２又は３である）からなる群より選択され；及び／又は
−  Ｒ３及びＲ４は、各々独立に、水素、メチル、エチル及びフェニルからなる群より選択されるか、あるいは、一緒になって、式−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−の二価基を形成してもよく；及び／又は
−  式（Ｉ）において、Ｒ５は、（Ｃ１−Ｃ２）アルコキシであり；及び／又は
−  式（ＩＩ）において、Ｘは、酸素であり；及び／又は
−  式（ＩＩ）において、Ｒ６は、水素、メチル、エチル、−ＣＨ２−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ［（Ｃ１−Ｃ２）アルキル］２（式中、ｎは、２又は３である）、−（ＣＨ２）−ＯＰＯ［Ｏ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル］２及び−（ＣＨ２）−ＯＣ（＝Ｏ）−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルからなる群より選択される］の一つ又は幾つかを有する、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物が、下記の特徴：
［−  Ｒ１は、基−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲａＲｂ（式中、ｎは、２又は３である）、又は基−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨＣＨ３）−ＣＨ２−ＮＲａＲｂであり、ここで、Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、水素及び（Ｃ１−Ｃ２）アルキルからなる群より選択されるか；又は、ＮＲａＲｂは、一緒になって、ピペリジン及びモルホリンより選択される複素環を形成してもよく；及び／又は
−  Ｒ２は、水素であり；及び／又は
−  Ｒ３は、水素、メチル及びエチルからなる群より選択され、そしてＲ４は、水素であり；及び／又は
−  式（Ｉ）において、Ｒ５は、メトキシであり；及び／又は
−  式（ＩＩ）において、Ｘは、酸素であり；及び／又は
−  式（ＩＩ）において、Ｒ６は、水素である］の一つ又は幾つかを有する、請求項１又は２記載の化合物。
【請求項４】
−  Ｒ１が、基−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲａＲｂ（式中、ｎは、２又は３である）、又は基−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨＣＨ３）−ＣＨ２−ＮＲａＲｂであり、ここで、Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、水素及び（Ｃ１−Ｃ２）アルキルからなる群より選択されるか；又は、ＮＲａＲｂは、一緒になって、ピペリジン及びモルホリンより選択される複素環を形成してもよく；
−  Ｒ２が、水素であり；
−  Ｒ３が、メチル及びエチルからなる群より選択され、そしてＲ４が、水素であり；及び、下記のいずれか：
−  式（Ｉ）において、Ｒ５が、メトキシであるか；又は
−  式（ＩＩ）において、Ｘが、酸素であり、そしてＲ６が、水素である、
請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物。
【請求項５】
式の化合物が、下記の特徴：
［−  Ｒ１は、基−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲａＲｂ（式中、ｎは、２又は３である）、又は基−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨＣＨ３）−ＣＨ２−ＮＲａＲｂであり、ここで、Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、水素及び（Ｃ１−Ｃ２）アルキルからなる群より選択されるか；又は、ＮＲａＲｂは、一緒になって、ピペリジン及びモルホリンからなる群より選択される複素環を形成してもよく；
−  Ｒ２は、水素であり；
−  Ｒ３は、メチル及びエチルからなる群より選択され、そしてＲ４は、水素であり；及び
−  Ｘは、酸素であり、そしてＲ６は、水素である］を有する、請求項１〜４のいずれか一項記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（ＣＨ３）２又は−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２（式中、ｎは、２又は３である）である、請求項１〜５のいずれか一項記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が、−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ３）２である、請求項１〜６のいずれか一項記載の化合物。
【請求項８】
化合物が、式（ＩＩ）［式中、Ｒ１は、−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ３）２（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６は、水素であり、Ｘは、酸素であり、そしてＲ３は、メチルである］を有する、請求項１〜６のいずれか一項記載の化合物。
【請求項９】
化合物が、式（ＩＩ）［式中、Ｒ１は、−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ３）２（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６は、水素であり、Ｘは、酸素であり、そしてＲ３は、エチルである］を有する、請求項１〜６のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１０】
化合物が、式（ＩＩ）［式中、Ｒ１は、２−（モルホリン−４−イル）エトキシ（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６は、水素であり、Ｘは、酸素であり、そしてＲ３は、メチルである］を有する、請求項１〜６のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１１】
化合物が、式（ＩＩ）［式中、Ｒ１は、２−（モルホリン−４−イル）エトキシ（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６は、水素であり、Ｘは、酸素であり、そしてＲ３は、エチルである］を有する、請求項１〜６のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１２】
化合物が、式（ＩＩ）［式中、Ｒ１は、２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６は、水素であり、Ｘは、酸素であり、そしてＲ３は、メチルである］を有する、請求項１〜６のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１３】
化合物が、式（ＩＩ）［式中、Ｒ１は、２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６は、水素であり、Ｘは、酸素であり、そしてＲ３は、エチルである］を有する、請求項１〜６のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１４】
化合物が、下記：
１１−メトキシ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール；
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（Ｃ１４）；
３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（Ｃ０７）；
３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
ＤＬ  ３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−２−メチルプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ−１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１１Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（Ｃ４８）
からなる群より選択され、及びその薬学的に許容し得る塩、好ましくはそのマレイン酸塩である、請求項１〜５のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１５】
化合物が、下記：
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（Ｃ１４）；
３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（Ｃ０７）；
３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１１Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（Ｃ４８）；
３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン
からなる群より選択され、及びその薬学的に許容し得る塩、好ましくはそのマレイン酸塩である、請求項１〜５のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項記載の化合物及び薬学的に許容し得る担体を含む、医薬組成物。
【請求項１７】
さらなる抗腫瘍薬、好ましくはトポイソメラーゼＩ又はＩＩ阻害剤、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡアルキル化剤及び代謝拮抗剤からなる群より選択される、好ましくはＤＮＡ損傷抗腫瘍剤をさらに含む、請求項１６記載の医薬組成物。
【請求項１８】
薬剤としての請求項１〜１５のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１９】
癌、炎症、疼痛又は寄生虫感染症を処置するための使用のための、請求項１８記載の化合物。
【請求項２０】
放射線療法、温熱療法及び／又は抗腫瘍化学療法と組み合わせて、好ましくはＤＮＡ損傷抗腫瘍剤を用いる、より好ましくはトポイソメラーゼＩ又はＩＩ阻害剤、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡアルキル化剤、及び代謝拮抗剤からなる群より選択されるＤＮＡ損傷抗腫瘍剤を用いる化学療法と組み合わせて、癌を処置するための使用のための、請求項１９記載の化合物。
【請求項２１】
特に癌の処置における、同時使用、別個使用又は連続使用のための複合調製物としての、（ａ）請求項１〜１６のいずれか一項記載の化合物；ならびに（ｂ）さらなる抗腫瘍薬、好ましくはＤＮＡ損傷抗腫瘍剤、より好ましくはトポイソメラーゼＩ又はＩＩ阻害剤、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡアルキル化剤、及び代謝拮抗剤からなる群より選択される抗腫瘍剤を含む、キット。
【請求項２２】
式（Ｉ）：
【化３５】
2014515384.tif 000047
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、請求項１〜６のいずれか一項に定義されたとおりである］で示される化合物の調製方法であって、
ａ）  試薬Ｙ−（Ｃ２−Ｃ５）アルキル−ＮＲａＲｂを、下記（１）：
【化３６】
2014515384.tif 000048
［式中、Ｙは、ハロ又はヒドロキシであり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、本開示中に定義されたとおりである］で示される化合物と反応させること；
そして
ｂ）  工程ａ）で得た化合物を、アルカリ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシドと反応させること、それにより、式（Ｉ）で示される化合物を得ることを含む、方法。
【請求項２３】
式（ＩＩ）：
【化３７】
2014515384.tif 000049
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６及びＸは、請求項１〜７のいずれか一項に定義されたとおりである］で示される化合物の調製方法であって、
ａ）  試薬Ｙ−（Ｃ２−Ｃ５）アルキル−ＮＲａＲｂを、下記（１）：
【化３８】
2014515384.tif 000050
［式中、Ｙは、ハロ又はヒドロキシであり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ６は、本開示中に定義されたとおりである］で示される化合物と反応させること；
そして
ｂ）  工程ａ）で得た化合物を、カルボン酸無水物、又はカルボン酸中のアルカリカルボキシラートのいずれかと反応させること、それにより、式（ＩＩ）で示される化合物を得ることを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医学分野、特に腫瘍学の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
白血病においてイマチニブ（imatinib）を用いて有望な結果を得たので、キナーゼ阻害剤は、癌治療における現実的な希望を表している。特に、オーロラキナーゼは、有糸分裂の進行に重要な役割を果たすセリン／トレオニン・タンパク質キナーゼのファミリーである。オーロラＡは、最初は中心体（centrosome）に関与し、そして最後は微小管に関与することが見出されており、一方、オーロラＢは、染色体パッセンジャータンパク質である。オーロラＡは、中心体の複製、有糸分裂への移行、双極紡錘体の形成及び有糸分裂チェックポイントのために必要である。オーロラＢは、有糸分裂の間、典型的なパッセンジャータンパク質挙動を示す。最初、キナーゼは、セントロメアに関与し、そして有糸分裂の進行に伴って、キナーゼは、中心紡錘体及び中央体（midbody）に再局在する。オーロラＢは、染色体凝縮、動原体機能、紡錘体チェックポイントの活性化及び細胞質分裂の完了にとって不可欠である。
【０００３】
オーロラＡ及びＢは、原発性大腸癌及び乳癌を含む、多くの癌において過剰発現される。さらに、ヒトオーロラＡ遺伝子は、乳癌における予後不良に関与する、２０ｑ１３アンプリコンに局在している。オーロラＡを過剰発現するマウスＮＩＨ−３Ｔ３細胞の異種移植片はヌードマウスにおいて腫瘍を発生させ、このことは、オーロラＡが発癌遺伝子として振る舞うことを示唆している。同様の条件下、オーロラＢの過剰発現は、転移を誘発し得る。
【０００４】
ベンゾ［ｅ］ピリド−インドールは、興味深い有糸分裂キナーゼ阻害剤であるとして同定されている（Hoang et al, 2009）。これらの化合物は、最小限の毒性でオーロラキナーゼを阻害することが見出された。またそれらの化合物、特に化合物Ｃ１及びＣ２は、異なる癌腫に由来する異なる細胞株の増殖を阻害することも示された。
【０００５】
徹底した研究にもかかわらず、依然として癌治療において２つの主要な問題が残っている：既に使用している薬剤に対する腫瘍耐性の誘導、及び処置の毒性と処置の効率とのバランス。したがって、毒性及び耐性誘導がより少ない新規な処置が依然として必要とされている。
【発明の概要】
【０００６】
本発明において、本発明者らは、ベンゾ［ｅ］ピリド−インドールの新しいクラス、アミノ−置換−アルキルオキシ−ベンゾ［ｅ］ピリド［４，３−ｂ］インドール誘導体を同定した。この新しいクラスの化合物は、特に抗増殖薬として、治療利益を提供する。
【０００７】
本発明は、式（Ｉ）又は（ＩＩ）：
【化１】
2014515384.tif 000003
［式中、
ベンゾ環Ａは、２、３又は４位でＲ１により一置換されており；
Ｒ１は、基−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ５）アルキル−ＮＲａＲｂであり、ここで、（Ｃ２−Ｃ５）アルキルは、直鎖状又は分岐鎖状アルキルであり、Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、水素、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル（場合により、ヒドロキシル、−ＮＲＲ’、−ＯＰＯ（ＯＲ）（ＯＲ’）、及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒからなる群より選択される基で置換されている）、及び（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキルからなる群より選択されるか；又は、ＮＲａＲｂは、一緒になって、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピロール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、及びチオモルホリンからなる群より選択される複素環（該複素環は、場合により、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル又はヒドロキシル基により置換されている）を形成してもよく；
Ｒ２は、水素及び（Ｃ１−Ｃ３）アルキル（場合により、基ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルオキシ又は−ＮＲＲ’により置換されている）からなる群より選択され；
Ｒ３及びＲ４は、各々独立に、水素、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル及びアリールからなる群より選択されるか；あるいは、Ｒ３及びＲ４は、一緒になって、下記式：
・−（ＣＨ２）ｎ−（式中、ｎは、３、４又は５である）；又は
・−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−（場合により、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルオキシで置換されている）
の二価基を形成してもよく；
Ｒ５（式（Ｉ）にのみ存在）は、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシであり；
Ｒ６（式（ＩＩ）にのみ存在）は、水素及び（Ｃ１−Ｃ３）アルキル（場合により、ヒドロキシル、−ＮＲＲ’、−ＯＰＯ（ＯＲ）（ＯＲ’）、及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒからなる群より選択される基で置換されている）からなる群より選択され；
Ｘ（式（ＩＩ）にのみ存在）は、Ｏ又はＳであり；
ここで、Ｒ及びＲ’は、同一又は異なり、水素及び（Ｃ１−Ｃ４）アルキルからなる群より選択される］を有する化合物、又はその異性体形態、又はその薬学的に許容し得る塩、又はその誘導体に関する。
【０００８】
好ましくは、式（Ｉ）又は（ＩＩ）で示される化合物、より好ましくは、式（ＩＩ）で示される化合物は、下記の特徴の１つ又は幾つかを有する：
−  Ｒ１は、基−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ４）アルキル−ＮＲａＲｂであり、ここで、（Ｃ２−Ｃ４）アルキルは、直鎖状又は分岐鎖状アルキルであり、Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、水素及び（Ｃ１−Ｃ３）アルキルからなる群より選択されるか；又は、ＮＲａＲｂは、一緒になって、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピロール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリノ及びチオモルホリンからなる群より選択される複素環を形成してもよく；及び／又は
−  Ｒ２は、水素、メチル、エチル、及び−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ［（Ｃ１−Ｃ２）アルキル］２（式中、ｎは、２又は３である）からなる群より選択され；及び／又は
−  Ｒ３及びＲ４は、各々独立に、水素、メチル、エチル及びフェニルからなる群より選択されるか、あるいは、一緒になって、式−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−の二価基を形成してもよく；及び／又は
−  式（Ｉ）において、Ｒ５は、（Ｃ１−Ｃ２）アルコキシであり；及び／又は
−  式（ＩＩ）において、Ｘは、酸素であり；及び／又は
−  式（ＩＩ）において、Ｒ６は、水素、メチル、エチル、−ＣＨ２−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ［（Ｃ１−Ｃ２）アルキル］２（式中、ｎは、２又は３である）、−（ＣＨ２）−ＯＰＯ［Ｏ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル］２及び−（ＣＨ２）−ＯＣ（＝Ｏ）−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルからなる群より選択される。
【０００９】
より好ましくは、式（Ｉ）又は（ＩＩ）で示される化合物、さらにより好ましくは、式（ＩＩ）で示される化合物は、下記の特徴の１つ又は幾つかを有する：
−  Ｒ１は、基−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲａＲｂ（式中、ｎは、２又は３である）、又は基−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨＣＨ３）−ＣＨ２−ＮＲａＲｂであり、ここで、Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、水素及び（Ｃ１−Ｃ２）アルキルからなる群より選択されるか；又は、ＮＲａＲｂは、一緒になって、ピペリジン及びモルホリンからなる群より選択される複素環を形成してもよく；及び／又は
−  Ｒ２は、水素であり；及び／又は
−  Ｒ３は、水素、メチル及びエチルからなる群より選択され、そしてＲ４は、水素であり；及び／又は
−  式（Ｉ）において、Ｒ５は、メトキシであり；及び／又は
−  式（ＩＩ）において、Ｘは、酸素であり；及び／又は
−  式（ＩＩ）において、Ｒ６は、水素である。
【００１０】
さらにより好ましくは、式（Ｉ）又は（ＩＩ）で示される化合物、なおより好ましくは、式（ＩＩ）で示される化合物は、下記の特徴を有する：
−  Ｒ１は、基−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲａＲｂ（式中、ｎは、２又は３である）、又は基−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨＣＨ３）−ＣＨ２−ＮＲａＲｂであり、ここで、Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、水素及び（Ｃ１−Ｃ２）アルキルからなる群より選択されるか；又は、ＮＲａＲｂは、一緒になって、ピペリジン及びモルホリンからなる群より選択される複素環を形成してもよく；
−  Ｒ２は、水素であり；
−  Ｒ３は、メチル及びエチルからなる群より選択され、そしてＲ４は、水素であり；及び、下記のいずれか：
−  式（Ｉ）において、Ｒ５は、メトキシであるか；又は
−  式（ＩＩ）において、Ｘは、酸素であり、そしてＲ６は、水素である。
【００１１】
特に好ましい実施態様において、式（ＩＩ）で示される化合物は、下記の特徴を有する：
−  Ｒ１は、基−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲａＲｂ（式中、ｎは、２又は３である）、又は基−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨＣＨ３）−ＣＨ２−ＮＲａＲｂであり、ここで、Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、水素及び（Ｃ１−Ｃ２）アルキルからなる群より選択されるか；又は、ＮＲａＲｂは、一緒になって、ピペリジン及びモルホリノからなる群より選択される複素環を形成してもよく；
−  Ｒ２は、水素であり；
−  Ｒ３は、メチル及びエチルからなる群より選択され、そしてＲ４は、水素であり；及び
−  Ｘは、酸素であり、そしてＲ６は、水素である。
【００１２】
上記で定義された式（Ｉ）又は（ＩＩ）で示される化合物の特別な実施態様において、Ｒ１は、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（ＣＨ３）２又は−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２（式中、ｎは、２又は３である）である。好ましくは、Ｒ１は、−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ３）２である。より好ましくは、化合物は、Ｘが酸素であり、そしてＲ６が水素である、式（ＩＩ）の化合物である。
【００１３】
第１の非常に特別な実施態様において、化合物は、Ｒ１が−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ３）２（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６が水素であり、Ｘが酸素であり、そしてＲ３がメチルである、式（ＩＩ）を有する。第２の非常に特別な実施態様において、化合物は、Ｒ１が−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ３）２（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６が水素であり、Ｘが酸素であり、そしてＲ３がエチルである、式（ＩＩ）を有する。第３の非常に特別な実施態様において、化合物は、Ｒ１が２−（モルホリン−４−イル）エトキシ（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６が水素であり、Ｘが酸素であり、そしてＲ３がメチルである、式（ＩＩ）を有する。第４の非常に特別な実施態様において、化合物は、Ｒ１が２−（モルホリン−４−イル）エトキシ（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６が水素であり、Ｘが酸素であり、そしてＲ３がエチルである、式（ＩＩ）を有する。第５の非常に特別な実施態様において、化合物は、Ｒ１が２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６が水素であり、Ｘが酸素であり、そしてＲ３がメチルである、式（ＩＩ）を有する。第６の非常に特別な実施態様において、化合物は、Ｒ１が２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６が水素であり、Ｘが酸素であり、そしてＲ３がエチルである、式（ＩＩ）を有する。
【００１４】
非常に特別な態様において、化合物は、下記：
１１−メトキシ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール；
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（Ｃ１４）；
３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（Ｃ０７）；
３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
ＤＬ  ３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−２−メチルプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ−１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（Ｃ７１０）；
３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１１Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（Ｃ４８）
からなる群より選択され、及びその薬学的に許容し得る塩、好ましくはそのマレイン酸塩である。
【００１５】
より好ましくは、化合物は、下記：
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（Ｃ１４）；
３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（Ｃ０７）；
３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１１Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（Ｃ４８）；
３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（Ｃ７１０）；
３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン
からなる群より選択され、及びその薬学的に許容し得る塩、好ましくはそのマレイン酸塩である。
【００１６】
本発明はまた、本発明の化合物及び薬学的に許容し得る担体を含む、医薬組成物にも関する。場合により、医薬組成物はさらに、さらなる抗腫瘍薬を含み得る。好ましくは、さらなる抗腫瘍薬は、好ましくは、トポイソメラーゼＩ又はＩＩ阻害剤、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡアルキル化剤、及び代謝拮抗剤からなる群より、好ましくはトポイソメラーゼＩ及び／又はＩＩ阻害剤及びＤＮＡ架橋剤からなる群より選択される、ＤＮＡ損傷抗腫瘍剤である。
【００１７】
本発明はさらに、薬剤としての本発明の化合物に関する。特に、本発明は、癌、炎症、疼痛又は寄生虫感染症を処置するための使用のための、好ましくは癌を処置するための使用のための、本発明の化合物に関する。場合により、本化合物は、放射線療法、温熱療法及び／又は抗腫瘍化学療法と組み合わせて、好ましくはＤＮＡ損傷抗腫瘍剤を用いる、より好ましくはトポイソメラーゼＩ又はＩＩ阻害剤、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡアルキル化剤、及び代謝拮抗剤からなる群より、好ましくはトポイソメラーゼＩ及び／又はＩＩ阻害剤及びＤＮＡ架橋剤からなる群より選択されるＤＮＡ損傷抗腫瘍剤を用いる化学療法と組み合わせて、癌を処置するための使用のためである。あるいは、本発明は、抗寄生虫薬としての本発明の化合物に関する。加えて、本発明は、炎症又は疼痛を治療する又は予防するための使用のための本発明の化合物に関する。
【００１８】
加えて、本発明は、特に癌の処置における、同時使用、別個使用又は連続使用のための複合調製物としての、（ａ）本発明の化合物；ならびに（ｂ）さらなる抗腫瘍薬、好ましくはＤＮＡ損傷抗腫瘍剤、より好ましくはトポイソメラーゼＩ又はＩＩ阻害剤、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡアルキル化剤、及び代謝拮抗剤からなる群より、好ましくはトポイソメラーゼＩ及び／又はＩＩ阻害剤及びＤＮＡ架橋剤からなる群より選択される抗腫瘍剤を含む、キット又は製品に関する。
【００１９】
本発明は、式（Ｉ）：
【化２】
2014515384.tif 000004
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、本開示中に定義されたとおりである］で示される化合物の調製方法であって、
ａ）  試薬Ｙ−（Ｃ２−Ｃ５）アルキル−ＮＲａＲｂを、下記（１）：
【化３】
2014515384.tif 000005
［式中、Ｙは、ハロ又はヒドロキシであり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、本開示中に定義されたとおりである］で示される化合物と反応させること；
そして
ｂ）  工程ａ）で得た化合物を、アルカリ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシドと反応させること、それにより、式（Ｉ）で示される化合物を得ることを含む方法に関する。
【００２０】
本発明はまた、式（ＩＩ）：
【化４】
2014515384.tif 000006
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６及びＸは、本開示中に定義されたとおりである］で示される化合物の調製方法であって、
ａ）  試薬Ｙ−（Ｃ２−Ｃ５）アルキル−ＮＲａＲｂを、下記（１）：
【化５】
2014515384.tif 000007
［式中、Ｙは、ハロ又はヒドロキシであり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ６は、本開示中に定義されたとおりである］で示される化合物と反応させること；
そして
ｂ）  工程ａ）で得た化合物を、カルボン酸無水物、又はカルボン酸中のアルカリカルボキシラートのいずれかと反応させること、それにより、式（ＩＩ）で示される化合物を得ることを含む方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１Ａ】化合物Ｃ１４のキナーゼプロファイリング。Ｃ１４の阻害能力を、１２１種類のキナーゼに対して、インビトロで１μMの濃度にて試験した。各キナーゼを縦棒で示して、キナーゼ活性をＣ１４の存在下で示す。わずかに１８種類のキナーゼだけが、Ｃ１４の存在下で３０％未満の活性を有している。
【図１Ｂ】化合物Ｃ１４のキナーゼプロファイリング。主要なＣ１４標的（７０％以上阻害されたキナーゼ）とＣＨ２１標的との比較。主要なＣＨ２１標的（５０％以上阻害されたキナーゼ）は、星で示される。各キナーゼの活性の割合は、柱状グラフで表される（ＣＨ２１は灰色、及びＣ１４は白色）。
【図２】数種類の標的に対するＣ１４、Ｃ１及びＣＨ２１の効率の比較。アッセイを、組換えキナーゼに対してインビトロで行った。各キナーゼに対する活性を、ＣＨ２１は灰色、Ｃ１４は白色、及びＣ１は灰色グラデーションの柱状グラフで表す。これらのキナーゼのいずれも、ＣＨ２１によって有意に影響されなかった。ＲＳＫ１、ＲＳＫ２の両方、Ｓｒｃ及びオーロラＡは、Ｃ１４によって影響されていないが、それらは、Ｃ１によって大きく阻害されている。したがって、Ｃ１及びＣ１４は、オーロラキナーゼファミリーに及ぼす影響が異なる。
【図３】Ｕ２ＯＳ細胞におけるオーロラＢの阻害。ヒストンＨ３リン酸化（ヒストンＨ３−Ｐ）の強度により、オーロラＢの活性が明らかになる。アクチンを量の標準として使用する。細胞を、Ｃ１又はＣ２又はＣＨ２１又はＣ１４又はＤＭＳＯ（Ｃ：対照）のいずれかの存在下で、一晩インキュベートした。すべての化合物を、１μMで試験した。タンパク質をウエスタンブロット法により検出した。
【図４】ベンゾ［ｅ］ピリドインドールによるオーロラＢの阻害。細胞を種々の分子と共にインキュベートし、そしてオーロラＢの阻害をウエスタンブロット法（ＷＢ）及び免疫蛍光実験により予測する。Ｓｅｒ １０においてリン酸化したヒストンＨ３をオーロラＢキナーゼ活性のマーカーとして、及びアクチンを内部標準として使用する。各ＷＢ信号を、化合物の非存在下、対照と比較する。ＷＢによって推定した効率を、［＋＋＋：非常に効率的な阻害］〜［−：阻害無し］で示す。ヒストンＨ３による有糸分裂細胞の免疫蛍光標識は、オーロラＢキナーゼ活性を例証する。しかし免疫蛍光は、ＷＢよりも感度が低い。活性分子を四角枠で囲い、線の太さは阻害の効率を示す。
【図５】静止Ｈ３５８細胞を、血清の非存在下で、化合物と共に９６時間インキュベートした。Ｃ１４の３種類の異なる濃度を使用し、生細胞を、ＭＴＴ（Promega）を用いて推定した。対照には、ＤＭＳＯのみを添加した。
【図６】ＦＡＣＳによる細胞周期の分析。Ｃ１４処理対Ｃ１処理及び対照（Ｔｅ）の影響を、ヨウ化プロピジウム標識に従ってＦＡＣＳによって分析した。Ｃ１及びＣ１４を、０．５μMの濃度で添加し、そして処理を３０時間又は４８時間のいずれかの間続けた。ヒストグラムの上部に、矢印によって細胞周期の様々なフェーズの可視化を可能にし、そして対応するデータを表４に報告する。
【図７Ａ】安定的にオーロラＢ−ＧＦＰを発現するＨｅＬａ細胞の時間経過。ＤＭＳＯ（ＣＯ：対照）又はＣ１（０．５μM）又はＣ１４（０．５μM）のいずれかで処理した細胞を、ZEISS共焦点顕微鏡で継続的に画像化した。ＧＦＰにより、オーロラＢキナーゼの存在及び局在が明らかになった。有糸分裂細胞は、蛍光発色が見られ、ＧＦＰはセントロメアに集中した。対照条件下では、セントロメアは分裂中期に整列し、そして分裂後期が進行すると、蛍光は紡錘体に集中し、そして最後に中央体（Ａ、ＣＯ）に集中する。細胞の形状を、白い点線で可視化している。Ｃ１の存在下では、セントロメアが整列しているのは１つも見られなかった（図７Ａ、Ｃ１）。Ｃ１４の存在下では、セントロメアは正常に整列し、且つ蛍光発光は中央域に集中したが、細胞は分裂に失敗した（白色の点線により示される細胞の形状及び各蛍光フォト下の画像を参照のこと）。
【図７Ｂ】安定的にオーロラＢ−ＧＦＰを発現するＨｅＬａ細胞の時間経過。上記のように処理した細胞の核（図７Ａ）をヘキスト（Hoechst）で標識した。２個の接触核を生じさせる脱凝縮済みの核における連結クロマチンの存在（Ｃ１４ａ）に注意すること。処理をそれぞれの画像上に示す（Ｃ０：対照）。
【図７Ｃ】安定的にオーロラＢ−ＧＦＰを発現するＨｅＬａ細胞の時間経過。有糸分裂中のＣ１及びＣ１４の作用の可視化。Ｃ１及びＣ１４はいずれも進行中の有糸分裂を阻止したが、しかしＣ１は紡錘体チェックポイントを変更し、一方、Ｃ１４は細胞分離を損なう。
【図８】チューブリン−ＧＦＰを発現するＨＥＫ細胞の時間経過。安定的にチューブリンＧＦＰを発現する有糸分裂ＨＥＫ細胞を連続的に画像化し、そして対照又は処理細胞（Ｃ１４及びＣ１、０．５μM）のいずれかの代表を示す。経過時間を、各写真の上に示す。Ｃ１４は紡錘体構築を阻止したが、一方、Ｃ１はその複製を誘発した。
【図９】球状体増殖に対する化合物の効率の比較。Ｈ３５８細胞を３次元で培養した。１日目に、化合物を０．６μMの濃度で添加した。球状体の増殖を毎日測定し、そして増殖率（Ｖｄ−Ｖｏ／Ｖｏ）として表した；ｄは日を、ｏは開始日を表す。球状体の体積の進化は、時間（日数）の関数で表される。Ｃ１の存在下で増殖した球状体は三角形で示され、一方、四角形はＣ１４で処理された球状体を示し；対照の球状体は、菱形で描いている。
【図１０Ａ】Ｓｅｒ １０におけるヒストンＨ３リン酸化に対する様々な分子の効率の免疫蛍光アッセイ。phospho-Ser10-Histone H3抗体を用いる免疫蛍光法。陽性phospho-Ser10-Histone H3の割合を示すか、又は代表的な有糸分裂を示すかのいずれかである。（＋＋＋）は、強力な阻害を示し且つ陽性の有糸分裂は検出されなかったが、一方、（−）は、対照との差は認められなかった。免疫蛍光アッセイは、特定のリン酸化抗体を用いて実行し、有糸分裂Ｕ２ＯＳ細胞をHoechstで染色したそのＤＮＡ含有量によって評価する。右側には、代表的な細胞又はＨ３−Ｓ１０−Ｐ標識有糸分裂の割合を示す。
【図１０Ｂ】Ｓｅｒ １０におけるヒストンＨ３リン酸化に対する様々な分子の効率の免疫蛍光アッセイ。ヒストンＨ３リン酸化の免疫ブロット法分析。Ｕ２ＯＳ細胞を、ＤＭＳＯ（Ｃｏ）又は化合物（１μM）のいずれかの存在下、ノコダゾール（Nocodazole）（５０nM）と共に一晩インキュベートした。次に、細胞を回収し、溶解した。溶解した細胞試料と同一の量を、ＳＤＳ含有１８％アクリルアミドゲル上で泳動させた。移動後、リン酸化したヒストンＨ３（Ｈ３−Ｓ１０−Ｐ）に対する抗体を用いて、ブロットを可視化した。ロードされたタンパク質の量及び有糸分裂細胞の量の両方をそれぞれ推定するために、α−チューブリン及びオーロラＢに対する抗体を用いて、同じ膜をまた可視化した。
【図１０Ｃ】Ｓｅｒ １０におけるヒストンＨ３リン酸化に対する様々な分子の効率の免疫蛍光アッセイ。ヒストンＨ３リン酸化の免疫ブロット法分析。Ｕ２ＯＳ細胞を、ＤＭＳＯ（Ｃｏ）、又は３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）化合物（Ｃ０７及びＣ０５、１μM）、又は３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）化合物（Ｃ７１０及びＣ７０９、１μM）のいずれかの存在下、ノコダゾール（５０nM）と共に一晩インキュベートした。次に細胞を回収し、溶解した。溶解した細胞試料と同一の量を、ＳＤＳ含有１８％アクリルアミドゲル上で泳動させた。移動後、リン酸化したヒストンＨ３（Ｈ３−Ｓ１０−Ｐ）に対する抗体を用いて、ブロットを可視化した。有糸分裂細胞の量を推定するために、オーロラＢに対する抗体を用いて、同じ膜をまた可視化した。
【図１０Ｄ】Ｓｅｒ １０におけるヒストンＨ３リン酸化に対する様々な分子の効率の免疫蛍光アッセイ。ヒストンＨ３リン酸化の免疫ブロット法分析。Ｕ２ＯＳ細胞を、ＤＭＳＯ（Ｃｏ）又は３−（２−メトキシエトキシ）化合物（Ｃ７０８及びＣ７１１、１μM）のいずれかの存在下、ノコダゾール（５０nM）と共に一晩インキュベートした。次に細胞を回収し、溶解した。溶解した細胞試料と同一の量を、ＳＤＳ含有１８％アクリルアミドゲル上で泳動させた。移動後、リン酸化したヒストンＨ３（Ｈ３−Ｓ１０−Ｐ）に対する抗体を用いて、ブロットを可視化した。有糸分裂細胞の量を推定するために、オーロラＢに対する抗体を用いて、同じ膜をまた可視化した。
【図１１Ａ】相当するマレイン酸塩の検証。オーロラＢキナーゼ阻害剤に相当するマレイン酸塩を合成した。Ｃ１４Ｍ、Ｃ４８Ｍ及びＣ０７Ｍと称される分子を表す。
【図１１Ｂ】相当するマレイン酸塩の検証。ヒストンＨ３リン酸化の免疫ブロット法分析。Ｕ２ＯＳ細胞及びＨｅＬａ細胞を、ＤＭＳＯ（Ｃｏ）又は化合物（１μM）のいずれかの存在下、ノコダゾール（５０nM）と共に一晩インキュベートした。次に細胞を回収し、溶解した。溶解した細胞試料と同一の量を、ＳＤＳ含有１８％アクリルアミドゲル上で泳動させた。移動後、リン酸化したヒストンＨ３（Ｈ３−Ｓ１０−Ｐ）に対する抗体を用いて、ブロットを可視化した。有糸分裂細胞の量を推定するために、オーロラＢに対する抗体を用いて、同じ膜をまた可視化した。
【図１１Ｃ】相当するマレイン酸塩の検証。ヒストンＨ３リン酸化の免疫ブロット法分析。Ｕ２ＯＳ細胞及びＨｅＬａ細胞を、ＤＭＳＯ（Ｃｏ）又は化合物（１μM）のいずれかの存在下、ノコダゾール（５０nM）と共に一晩インキュベートした。次に細胞を回収し、溶解した。溶解した細胞試料と同一の量を、ＳＤＳ含有１８％アクリルアミドゲル上で泳動させた。移動後、リン酸化したヒストンＨ３（Ｈ３−Ｓ１０−Ｐ）に対する抗体を用いて、ブロットを可視化した。有糸分裂細胞の量を推定するために、オーロラＢに対する抗体を用いて、同じ膜をまた可視化した。
【図１２】Ｃ１４Ｍ処理時のＬＡＴＳ１の定量化。ＨｅＬａ細胞を、Ｃ２１（ＣＨ２１とも呼ばれる）及びＣ１４ＭによりＯＮ処理し、対照（Ｃ０）と比較した。全細胞抽出物を、抗ＬＡＴＳ１モノクローナル抗体を用いてＷＢにより分析し、ローディングをチューブリン信号により定量化した。処理時のＬＡＴＳ１の大幅な増加に注目されたし。
【００２２】
発明の詳細な記載
本発明者らは、ベンゾ［ｅ］ピリド−インドールの新しいクラス、アミノ−置換−アルキルオキシ−ベンゾ［ｅ］ピリド［４，３−ｂ］インドール誘導体を同定した。この新しいクラスの化合物は、特に広範な抗増殖性活性を有する抗増殖薬として、治療利益を提供する。それらは、基アミノアルコキシのベンゾ環Ａ上及び基オキソ又はアルコキシの１１位における存在によって、構造的に特徴付けられる。実際、これらの特徴は、オーロラＡと比較して、化合物にオーロラＢ阻害特異性を提供する。ＭＥＬＫをターゲティングとするおかげで、それらはまた、癌幹細胞ターゲティング（例えば、神経芽細胞腫、結腸直腸癌、肺癌及び乳癌）のために提唱され得る。加えて、チェックポイントキナーゼＣｈｋ−１及びＣｈｋ−２を阻害するそれらの能力により、それらをＤＮＡ傷害剤と組み合わせて使用することの利点を支持する。実際、ＤＮＡが損傷を受けたまま有糸分裂に入る細胞は、細胞死に対して非常に感受性が高いので、これらの化合物によるオーロラＢ及びｃｈｋ２キナーゼのダブル・ターゲティングが、協調的に作用して癌細胞を消滅させる。加えて、本発明の化合物は、Ｇｃｋを阻害して抗腫瘍効果及び抗炎症効果を可能にし；そして本発明の化合物は、癌遺伝子であり且つ慢性的炎症疼痛において役割を担うＴｒｋＡを阻害する。本発明の化合物は、調節解除されたＭｙｃを発現する腫瘍細胞における主要シグナル伝達キナーゼである、ＡＲＫ５／Ｎｕａｋ１を標的にする（Liu et al, 2012, Nature 483, 608-612）。本発明の化合物は、水に可溶性であるというさらなる利点を提供する。
【００２３】
特に、本発明の化合物は、化合物Ｃ１及びＣ２（Hoang et al, 2009）とは異なるキナーゼ阻害プロファイルを有し、それらとは異なる生物学的活性をもたらす。Ｃ１及びＣ２化合物は、オーロラＡ及びＢの両方を阻害するが、本発明の新しいクラスは、実に、驚くべきことに、オーロラＡと比較して、オーロラＢのより特異的な阻害プロファイルを提供する。この特異性により、Ｃ１よりも遅い段階で細胞周期の阻害へと導く。特に、Ｃ１４のオーロラＢ阻害活性は、化合物Ｃ１よりも高い。そこで、本発明者らは、驚くべきことに、ベンゾ環Ａに対するアミノ−アルキルでの構造的修飾の機能的インパクトを同定した。加えて、化合物Ｃ１及びＣ２（Hoang et al, 2009）と比較して、本発明の化合物は、より高い抗増殖性効率を有している。
【００２４】
したがって、本発明は、式（Ｉ）又は（ＩＩ）：
【化６】
2014515384.tif 000008
［式中、
ベンゾ環Ａは、２、３又は４位でＲ１により一置換されており；
Ｒ１は、基−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ５）アルキル−ＮＲａＲｂであり、ここで、（Ｃ２−Ｃ５）アルキルは、直鎖状又は分岐鎖状アルキルであり、Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、水素、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル（場合により、ヒドロキシル、−ＮＲＲ’、−ＯＰＯ（ＯＲ）（ＯＲ’）、及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒからなる群より選択される基で置換されている）、及び（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキルからなる群より選択されるか；又は、ＮＲａＲｂは、一緒になって、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピロール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、及びチオモルホリンからなる群より選択される複素環（該複素環は、場合により、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル又はヒドロキシル基により置換されている）を形成してもよく；
Ｒ２は、水素及び（Ｃ１−Ｃ３）アルキル（場合により、基ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルオキシ又は−ＮＲＲ’により置換されている）からなる群より選択され；
Ｒ３及びＲ４は、各々独立に、水素、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル及びアリールからなる群より選択されるか；あるいは、Ｒ３及びＲ４は、一緒になって、下記式：
・−（ＣＨ２）ｎ−（式中、ｎは、３、４又は５である）；又は
・−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−（場合により、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルオキシで置換されている）
の二価基を形成してもよく；
Ｒ５（式（Ｉ）にのみ存在）は、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシであり；
Ｒ６（式（ＩＩ）にのみ存在）は、水素及び（Ｃ１−Ｃ３）アルキル（場合により、ヒドロキシル、−ＮＲＲ’、−ＯＰＯ（ＯＲ）（ＯＲ’）、及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒからなる群より選択される基で置換されている）からなる群より選択され；
Ｘ（式（ＩＩ）にのみ存在）は、Ｏ又はＳであり；
ここで、Ｒ及びＲ’は、同一又は異なり、水素及び（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから、好ましくは水素及び（Ｃ１−Ｃ２）アルキルからなる群より選択される］を有する化合物、又はその異性体形態、又はその薬学的に許容し得る塩、又はその誘導体に関する。
【００２５】
本発明の文脈において、用語「（Ｃ１−Ｃ２）アルキル」とは、より詳細にはメチル又はエチルを意味し、用語「（Ｃ１−Ｃ３）アルキル」とは、より詳細にはメチル、エチル、プロピル、又はイソプロピルを意味し、そして「（Ｃ１−Ｃ４）アルキル」とは、より詳細にはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、又はtert−ブチルを意味し、用語「（Ｃ２−Ｃ５）アルキル」とは、より詳細にはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert−ブチル又はプロピルを意味する。
【００２６】
「アルコキシ」基は、−Ｏ−（エーテル）結合により分子に結合しているアルキル基（本明細書の上記で定義した）に相当する。（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシは、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、及びイソプロピルオキシを含む。（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシは、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、イソプロピルオキシ、ブチルオキシ、イソブチルオキシ、及びtert−ブチルオキシを含む。
【００２７】
「アリール」又は「Ａｒ」基は、６〜１２個の炭素原子を有する、単環式又は二環式芳香族炭化水素であり、場合により置換されている。アリールは、フェニル、ビフェニル又はナフチルであり得る。好ましい実施態様において、アリールは、フェニルである。
【００２８】
用語「誘導体」とは、その水和物、エステル、エーテル、コンジュゲート、又はプロドラッグを包含することを意味する。例えば、上記で定義した基−ＯＰＯ（ＯＲ）（ＯＲ’）を有する化合物は、プロドラッグであり、且つ増大した溶解性を有する。
【００２９】
（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルを含む。
【００３０】
「ハロゲノ」又は「ハロ」基は、好ましくはＣｌ（塩化物）、Ｂｒ（臭化物）、Ｉ（ヨウ化物）及びＦ（フッ化物）からなる群より選択される。
【００３１】
薬学的に許容し得る塩は、無機酸及び有機酸の塩を含む。適切な無機酸の代表的な例には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リン酸等が挙げられる。適切な有機酸の代表的な例には、ギ酸、酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、安息香酸、ケイ皮酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、メタンスルホン酸等が挙げられる。薬学的に許容し得る無機酸付加塩又は有機酸付加塩のさらなる例には、J. Pharm. Sci. 1977, 66, 2, 及びHandbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use edited by P. Heinrich Stahl and Camille G. Wermuth 2002に列記されている薬学的に許容し得る塩が挙げられる。好ましい実施態様において、塩は、マレイン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、及びメタンスルホン酸塩からなる群より選択される。特定の実施態様において、塩は、マレイン酸塩である。
【００３２】
好ましい実施態様において、Ｒ１は、基−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲａＲｂ（式中、ｎは、２又は３である）又は基−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨＣＨ３）−ＣＨ２−ＮＲａＲｂであり、ここで、Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、水素及び（Ｃ１−Ｃ２）アルキルからなる群より選択されるか；又は、ＮＲａＲｂは、一緒になって、ピペリジン及びモルホリノからなる群より選択される複素環を形成してもよい。より好ましくは、Ｒ１は、基−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲａＲｂ（式中、ｎは、２又は３である）又は基−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨＣＨ３）−ＣＨ２−ＮＲａＲｂであり、ここで、Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、水素及び（Ｃ１−Ｃ２）アルキルからなる群より選択されるか；又は、ＮＲａＲｂは、一緒になって、ピペリジン及びモルホリノからなる群より選択される複素環を形成してもよい。好ましくは、Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、メチル及びエチルからなる群より選択される。上記で定義した式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物の特別な実施態様において、Ｒ１は、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（ＣＨ３）２又は−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２（式中、ｎは、２又は３である）である。好ましくは、Ｒ１は、−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ３）２である。最も好ましい実施態様において、Ｒ１は、−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ３）２である。２番目に最も好ましい実施態様において、Ｒ１は、２−（モルホリン−４−イル）エトキシである。３番目に最も好ましい実施態様において、Ｒ１は、２−（ピペリジン−１−イル）エトキシである。より好ましくは、Ｒ１は、ベンゾ環Ａの３位にある。
【００３３】
好ましい実施態様において、Ｒ２は、水素及び（Ｃ１−Ｃ３）アルキルからなる群より選択され、より好ましくは水素である。
【００３４】
好ましい実施態様において、Ｒ３及びＲ４は、各々独立に，水素、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル及びアリールからなる群より選択される。より好ましくは、Ｒ３は、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル及びアリールからなる群より選択され、そしてＲ４は、水素及び（Ｃ１−Ｃ３）アルキルからなる群より選択される。さらにより好ましくは、Ｒ３は、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、そしてＲ４は、水素である。
【００３５】
好ましい実施態様では、式（Ｉ）において、Ｒ５は、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシであり、より好ましくはメトキシ又はエトキシであり、さらにより好ましくはメトキシである。
【００３６】
好ましい実施態様では、式（ＩＩ）において、Ｒ６は、水素及び（Ｃ１−Ｃ３）アルキルからなる群より選択され、より好ましくは水素である。加えて、Ｘは、好ましくは酸素である。
【００３７】
好ましくは、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物は、より好ましくは、式（ＩＩ）の化合物は、下記の特徴の一つ又は幾つかを有し得る：
−  Ｒ２は、水素であり；及び／又は
−  Ｒ３は、水素、メチル及びエチルからなる群より選択され、そしてＲ４は、水素であり；及び／又は
−  式（Ｉ）において、Ｒ５は、メトキシであり；及び／又は
−  式（ＩＩ）において、Ｘは、酸素であり；及び／又は、Ｒ６は、水素である。
【００３８】
さらにより好ましくは、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物は、なおより好ましくは、式（ＩＩ）の化合物は、下記の特徴の一つ又は幾つかを有し得る：
−  Ｒ２は、水素であり；及び／又は
−  Ｒ３は、メチル及びエチルからなる群より選択され；及び／又は
−  Ｒ４は、水素であり；及び／又は
下記のいずれか
−  式（Ｉ）において、Ｒ５は、メトキシであるか；又は
−  式（ＩＩ）において、Ｘは、酸素であり、そしてＲ６は水素である。
【００３９】
なおより好ましくは、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物は、さらになおより好ましくは、式（ＩＩ）の化合物は、下記の特徴を有し得る：
−  Ｒ２は、水素であり；
−  Ｒ３は、メチル及びエチルからなる群より選択され、そしてＲ４は、水素であり；及び
下記のいずれか
−  式（Ｉ）において、Ｒ５は、メトキシであるか；又は
−  式（ＩＩ）において、Ｘは、酸素であり、そしてＲ６は水素である。
【００４０】
特に好ましい実施態様において、式（ＩＩ）の化合物は、下記の特徴を有する：
−  Ｒ１は、基−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲａＲｂ（式中、ｎは、２又は３である）又は基−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨＣＨ３）−ＣＨ２−ＮＲａＲｂであり、ここで、Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、水素及び（Ｃ１−Ｃ２）アルキルからなる群より選択されるか；又は、ＮＲａＲｂは、一緒になって、ピペリジン及びモルホリンからなる群より選択される複素環を形成してもよく；
−  Ｒ２は、水素であり；
−  Ｒ３は、メチル及びエチルからなる群より選択され、そしてＲ４は、水素であり；及び
−  Ｘは、酸素であり、そしてＲ６は、水素である。
【００４１】
第１の特別な実施態様において、化合物は、Ｒ１が、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（ＣＨ３）２（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、ｎが２又は３であり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６が水素であり、Ｘが酸素であり、そしてＲ３がメチル又はエチルである、式（ＩＩ）を有する。より詳細には、ｎは、２である。第１の実施態様において、Ｒ３は、メチルである。第２の実施態様において、Ｒ３は、エチルである。
【００４２】
第２の非常に特別な実施態様において、化合物は、Ｒ１が−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（ＣＨ３）２（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、ｎが２又は３であり、Ｒ２が水素であり、Ｒ５がメトキシであり、そしてＲ３がメチル又はエチルである、式（Ｉ）を有する。より詳細には、ｎは、２である。第１の実施態様において、Ｒ３は、メチルである。第２の実施態様において、Ｒ３は、エチルである。
【００４３】
第３の非常に特別な実施態様において、化合物は、Ｒ１が−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、ｎが２又は３であり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６が水素であり、Ｘが酸素であり、そしてＲ３がメチル又はエチルである、式（ＩＩ）を有する。より詳細には、ｎは、２である。第１の実施態様において、Ｒ３は、メチルである。第２の実施態様において、Ｒ３は、エチルである。
【００４４】
第４の非常に特別な実施態様において、化合物は、Ｒ１が−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、ｎが２又は３であり、Ｒ２が、水素であり、Ｒ５がメトキシであり、そしてＲ３がメチル又はエチルである、式（Ｉ）を有する。より詳細には、ｎは、２である。第１の実施態様において、Ｒ３は、メチルである。第２の実施態様において、Ｒ３は、エチルである。
【００４５】
第５の非常に特別な実施態様において、化合物は、Ｒ１が−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−モルホリノ（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、ｎが２又は３であり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６が水素であり、Ｘが酸素であり、そしてＲ３がメチル又はエチルである、式（ＩＩ）を有する。より詳細には、ｎは、２である。第１の実施態様において、Ｒ３は、メチルである。第２の実施態様において、Ｒ３は、エチルである。
【００４６】
第６の非常に特別な実施態様において、化合物は、Ｒ１が−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−モルホリノ（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、ｎが２又は３であり、Ｒ２が水素であり、Ｒ５がメトキシであり、そしてＲ３がメチル又はエチルである、式（Ｉ）を有する。より詳細には、ｎは、２である。第１の実施態様において、Ｒ３は、メチルである。第２の実施態様において、Ｒ３は、エチルである。
【００４７】
第７の非常に特別な実施態様において、化合物は、Ｒ１が−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨＣＨ３）−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）２（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６が水素であり、Ｘが酸素であり、そしてＲ３がメチル又はエチルである、式（ＩＩ）を有する。第１の実施態様において、Ｒ３は、メチルである。第２の実施態様において、Ｒ３は、エチルである。
【００４８】
第８の特別な実施態様において、化合物は、Ｒ１が−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨＣＨ３）−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）２（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、Ｒ２が水素であり、Ｒ５がメトキシであり、そしてＲ３がメチル又はエチルである、式（Ｉ）を有する。第１の実施態様において、Ｒ３は、メチルである。第２の実施態様において、Ｒ３は、エチルである。
【００４９】
第９の非常に特別な実施態様において、化合物は、Ｒ１が−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ピペリジン−１−イル（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、ｎが２又は３であり、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６が水素であり、Ｘが酸素であり、そしてＲ３がメチル又はエチルである、式（ＩＩ）を有する。より詳細には、ｎは、２である。第１の実施態様において、Ｒ３は、メチルである。第２の実施態様において、Ｒ３は、エチルである。
【００５０】
さらなる特別な実施態様において、化合物は、Ｒ１が−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ピペリジン−１−イル（好ましくは、ベンゾ環Ａの３位に）であり、ｎが２又は３であり、Ｒ２が水素であり、Ｒ５がメトキシであり、そしてＲ３がメチル又はエチルである、式（Ｉ）を有する。より詳細には、ｎは、２である。第１の実施態様において、Ｒ３は、メチルである。第２の実施態様において、Ｒ３は、エチルである。
【００５１】
本発明の好ましい実施態様において、化合物は、式（ＩＩ）の化合物である。
【００５２】
場合により、本発明の化合物は、下記：
１１−メトキシ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール；
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
ＤＬ ３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−２−メチルプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ−１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１１Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン
からなる群より選択され得、及びその薬学的に許容し得る塩であり得る。
【００５３】
より好ましくは、本発明の化合物は、下記：
１１−メトキシ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール；
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１１Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン
からなる群より選択され、及びその薬学的に許容し得る塩である。
【００５４】
別の好ましい実施態様において、本発明の化合物は、下記：
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１１Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）−８−エチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン
からなる群より選択され、及びその薬学的に許容し得る塩である。
【００５５】
より好ましい好ましい実施態様において、本発明の化合物は、下記：
３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）−８−エチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン
からなる群より選択され、及びその薬学的に許容し得る塩である。
【００５６】
より特異的な実施態様において、本発明の化合物は、下記：
３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）−８−エチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン；
３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン
からなる群より選択され、及びその薬学的に許容し得る塩である。
【００５７】
本発明は、下記に関する：
−  特に癌、炎症、疼痛又は寄生虫感染症の処置における使用のための、ａ）開示した実施態様のいずれか一つを含む上記で開示した式（Ｉ）又は（ＩＩ）を有する任意の化合物、及び薬学的に許容し得る担体を含む、医薬組成物；及び／又は
−  薬剤、特に抗腫瘍薬、抗炎症薬、抗疼痛薬、又は抗寄生虫薬として、開示した実施態様のいずれか一つを含む上記で開示した式（Ｉ）又は（ＩＩ）を有する、任意の化合物；及び／又は
−  特に癌の処置における使用のための、ａ）開示した実施態様のいずれか一つを含む上記で開示した式（Ｉ）又は（ＩＩ）を有する任意の化合物、ｂ）さらなる抗腫瘍剤、好ましくはＤＮＡ損傷抗腫瘍剤、及び薬学的に許容し得る担体を含む、医薬組成物；及び／又は
−  特に癌の処置における、同時使用、別個使用又は連続使用のための複合調製物としての、（ａ）開示した実施態様のいずれか一つを含む上記で開示した式（Ｉ）又は（ＩＩ）の任意の化合物、及び（ｂ）さらなる抗腫瘍剤、好ましくはＤＮＡ損傷抗腫瘍剤を含有する、製品又はキット；及び／又は
−  特に癌の処置における、同時使用、別個使用又は連続使用のための、（ａ）開示した実施態様のいずれか一つを含む上記で開示した式（Ｉ）又は（ＩＩ）の任意の化合物、及び（ｂ）さらなる抗腫瘍剤、好ましくはＤＮＡ損傷抗腫瘍剤を含む、複合調製物；及び／又は
−  放射線療法及び／又は温熱療法と組み合わせた癌の処置における使用のための、開示した実施態様のいずれか一つを含む上記で開示した式（Ｉ）又は（ＩＩ）を有する任意の化合物を含む、医薬組成物；及び／又は
−  癌、炎症、疼痛又は寄生虫感染症、好ましくは癌の処置用の医薬の製造のための、開示した実施態様のいずれか一つを含む上記で開示した式（Ｉ）又は（ＩＩ）を有する任意の化合物を含む、医薬組成物の使用；及び／又は
−  放射線療法、温熱療法及び／又はさらなる抗腫瘍剤、好ましくはＤＮＡ損傷抗腫瘍剤と組み合わせた、癌の処置用の医薬の製造のための開示した実施態様のいずれか一つを含む上記で開示した式（Ｉ）又は（ＩＩ）を有する任意の化合物を含む、医薬組成物の使用；及び／又は
−  癌の処置用の医薬の製造のための、ａ）開示した実施態様のいずれか一つを含む上記で開示した式（Ｉ）又は（ＩＩ）を有する任意の化合物、及びｂ）さらなる抗腫瘍剤、好ましくはＤＮＡ損傷抗腫瘍剤、及び薬学的に許容し得る担体を含む、医薬組成物の使用；及び／又は
−  それを必要としている対象における癌を処置するための方法であって、有効量の、開示した実施態様のいずれか一つを含む上記で開示した式（Ｉ）又は（ＩＩ）を有する任意の化合物、及び薬学的に許容し得る担体を含む医薬組成物を投与することを含む、方法；及び／又は
−  それを必要としている対象における癌を処置するための方法であって、有効量の、開示した実施態様のいずれか一つを含む上記で開示した式（Ｉ）又は（ＩＩ）を有する任意の化合物、ｂ）さらなる抗腫瘍剤、好ましくはＤＮＡ損傷抗腫瘍剤、及び薬学的に許容し得る担体を含む医薬組成物を投与することを含む、方法；及び／又は
−  それを必要としている対象における癌を処置するための方法であって、有効量の、開示した実施態様のいずれか一つを含む上記で開示した式（Ｉ）又は（ＩＩ）を有する任意の化合物を含む医薬組成物を、及び有効量の、さらなる抗腫瘍剤、好ましくはＤＮＡ損傷抗腫瘍剤を含む医薬組成物を投与することを含む、方法；及び／又は
−  それを必要としている対象における癌を処置するための方法であって、放射線療法又は温熱療法と組み合わせて、有効量の、ａ）開示した実施態様のいずれか一つを含む上記で開示した式（Ｉ）又は（ＩＩ）を有する任意の化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法；及び／又は
−  それを必要としている対象における炎症、疼痛又は寄生虫感染症を処置するための方法であって、有効量の、開示した実施態様のいずれか一つを含む上記で開示した式（Ｉ）又は（ＩＩ）を有する任意の化合物及び薬学的に許容し得る担体を含む医薬組成物を投与することを含む、方法。
【００５８】
本明細書のすべての範囲内で「癌の処置」などについて本発明の医薬組成物に言及されるときはいつでも、下記を意味する：ａ）癌を処置するための方法であって、かかる処置を必要としている対象に本発明の医薬組成物を投与することを含む、方法；ｂ）癌の処置のための本発明の医薬組成物の使用；ｃ）癌の処置用の医薬の製造のための本発明の医薬組成物の使用；ｄ）癌の処置のために適切な、開示した実施態様のいずれか一つを含む上記で開示した式（Ｉ）又は（ＩＩ）を有する任意の化合物の投与量、及びさらなる抗腫瘍剤、好ましくはＤＮＡ損傷抗腫瘍剤の投与量を含む、医薬組成物；及び／又はｅ）癌を処置するための本発明の医薬組成物。
【００５９】
疼痛には、急性疼痛、慢性疼痛、神経障害性疼痛、筋肉痛、骨痛、術後疼痛、片頭痛、癌−関連疼痛、腰痛、関節痛、糖尿病−関連疼痛、又はＡＩＤＳ関連疼痛が挙げられる。特に好ましい実施態様において、疼痛は、癌−関連疼痛、特に骨転移性癌である。
【００６０】
「炎症」又は「炎症性障害又は疾患」とは、過剰なもしくは制御不能の炎症、又は発赤、腫脹、熱感、疼痛等のような炎症の任意の局面によって特徴付けられる又は起因する、任意の障害、状態、又は疾患を指す。特に、それは、慢性又は急性炎症を指してもよい。炎症性疾患には、過敏性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、アレルギー、例えばアレルギー性鼻炎／副鼻腔炎、皮膚アレルギー、例えば、じん麻疹（urticaria/hives）、血管性浮腫、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、薬物アレルギー、虫アレルギー、及び希少種アレルギー障害（例えば、肥満細胞症喘息（mastocytosisasthma））、喘息、関節炎（例えば、変形性関節症、関節リウマチ、及び脊椎関節症）、胃腸炎症、神経炎症障害、及び自己免疫障害が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６１】
「寄生虫感染症」とは、原虫（原虫感染症を引き起こす）、蠕虫類（蠕虫症）、及び外寄生生物類に起因する疾患を指すことを意図する。
【００６２】
用語「薬学的に許容し得る担体」とは、活性成分の生物学的活性の有効性を妨げず、且つそれが投与される宿主に対して毒性でない、任意の担体（例えば、支持体、補助物質、溶媒、等）を包含することを意味する。例えば、非経口投与の場合、活性化合物は、生理食塩水、デキストロース溶液、血清アルブミン及びリンゲル液のような溶剤中に注射用単位剤形で製剤化し得る。
【００６３】
医薬組成物は、薬学的適合性溶媒中の溶液として、又は適切な薬学的溶媒もしくは溶剤中のエマルション、懸濁液もしくは分散液として、又は当技術分野において公知の方法で固体溶剤を含む丸剤、錠剤もしくはカプセル剤として、製剤化することができる。経口投与に適切な本発明の製剤は、それぞれが所定量の活性成分を含有する個別単位（カプセル剤、サシェ剤、錠剤又はトローチ剤として）の剤形；粉末もしくは顆粒の剤形；水性液体もしくは非水性液体の液剤もしくは懸濁剤の剤形；又は水中油型エマルションもしくは油中水型エマルションの剤形であり得る。直腸投与用の製剤は、活性成分及びカカオバターのような担体を組み込んだ坐剤の剤形で、又は浣腸の剤形であり得る。非経口投与に適切な製剤は、好ましくはレシピエントの血液と等張である、活性成分の滅菌油性又は水性調製物を都合よく含む。かかる各製剤は、他の薬学的適合性且つ非毒性である他の補助剤（例えば、安定化剤、抗酸化剤、結合剤、色素、乳化剤又は香味物質）も含有することができる。本発明の製剤は、したがって薬学的に許容し得る担体及び場合により他の治療成分と共に、活性成分を含む。担体は、製剤の他の成分と適合性であるという意味で「許容され得」なければならず、そしてそのレシピエントに有害であってはならない。医薬組成物は、有利には、適切な滅菌溶液の注射もしくは静脈内注入により、又は消化管による経口投与で適用される。これらの化学療法剤の大部分の安全且つ効果的な投与方法は、当業者に公知である。加えて、それらの投与は、標準的な文献に記載されている。
【００６４】
放射線治療は、腫瘍細胞に対する、γ線、Ｘ線、及び／又はラジオアイソトープの指向送達が挙げられるが、これらに限定されない。他の放射線治療には、マイクロ波及びＵＶ照射が挙げられる。放射線治療への他の取り組みも本発明において考慮される。放射線治療は、本発明の化合物の投与前に又は投与と同時に適用し得る。化合物の投与が放射線治療の後である場合、化合物は、例えば放射線治療の１、２、３、４、５、６、１２、１８又は２４時間後に投与し得る。
【００６５】
温熱療法は、体組織を高温に曝して癌細胞に損傷を与え消滅させるか、又は放射線及び特定の抗癌薬の効果に対して癌細胞をより感受性にする医療処置である。熱を送達し得ることによる当業者に周知の多くの技術が存在する。最も一般的なうちの幾つかは、集束超音波（ＦＵＳ又はＨＩＦＵ）、赤外線サウナ、マイクロ波加熱、誘導加熱、磁気温熱療法、温めた液体の注入の使用、又は、例えば高温の部屋に座っていることもしくは高温のブランケットに患者を包むことによる熱の直接適用が挙げられる。
【００６６】
ＤＮＡ損傷抗腫瘍剤は、トポイソメラーゼＩ及び／又はＩＩ阻害剤、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡアルキル化剤、及び代謝拮抗剤からなる群より選択され得る。好ましい実施態様において、ＤＮＡ損傷抗腫瘍剤は、トポイソメラーゼＩ及び／又はＩＩ阻害剤、及びＤＮＡ架橋剤からなる群より選択される。
【００６７】
トポイソメラーゼＩ及び／又はＩＩ阻害剤には、エトポシド（etoposide）、トポテカン（topotecan）、カンプトテシン（camptothecin）、イリノテカン（irinotecan）、アムサクリン（amsacrine）、イントプリシン（intoplicin）、アントラサイクリン系薬剤（anthracyclines）［例えば、ドキソルビシン（doxorubicin）、エピルビシン（epirubicin）、ダウノルビシン（daunorubicin）、イダルビシン（idarubicin）及びミトキサントロン（mitoxantrone）］が挙げられるが、これらに限定されない。トポイソメラーゼＩ及びＩＩの阻害剤には、イントプリシンが挙げられるが、これに限定されない。
【００６８】
ＤＮＡ架橋剤には、シスプラチン（cisplatin）、カルボプラチン（carboplatin）及びオキサリプラチン（oxaliplatin）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施態様において、ＤＮＡ架橋剤は、シスプラチンである。
【００６９】
代謝拮抗剤は、核酸合成に関与する酵素を遮断するか、又はＤＮＡに組み込まれ、これが、誤った遺伝コードを生じさせ、そしてアポトーシスを引き起こす。それらの非包括的な例には、非限定的に、葉酸、アンタゴニスト、ピリミジン類似物、プリン類似物及びアデノシンデアミナーゼ阻害剤、そしてより特別にはメトトレキサート（Methotrexate）、フロクスウリジン（Floxuridine）、シタラビン（Cytarabine）、６−メルカプトプリン（6-Mercaptopurine）、６−チオグアニン（6-Thioguanine）、フルダラビンホスフェート（Fludarabine phosphate）、ペントスタチン（Pentostatine）、５−フルオロウラシル（5-fluorouracil）、ゲムシタビン（gemcitabine）及びカペシタビン（capecitabine）が挙げられる。
【００７０】
ＤＮＡ損傷抗腫瘍剤は、非限定的に、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、ニトロソウレア、金属塩及びトリアゼンを含むアルキル化剤であることができる。それらの非包括的な例には、ウラシルマスタード（Uracil mustard）、クロロメチン（Chlormethine）、シクロホスファミド（Cyclophosphamide）（ＣＹＴＯＸＡＮ（Ｒ））、イホスファミド（Ifosfamide）、メルファラン（Melphalan）、クロラムブシル（Chlorambucil）、ピポブロマン（Pipobroman）、トリエチレンメラミン（Triethylenemelamine）、トリエチレンチオホスホルアミン（Triethylenethiophosphoramine）、ブスルファン（Busulfan）、カルムスチン（Carmustine）、ロムスチン（Lomustine）、シスプラチン（cisplatin）、カルボプラチン（carboplatin）、オキサリプラチン（oxaliplatin）、チオテパ（thiotepa）、ストレプトゾシン（Streptozocin）、ダカルバジン（Dacarbazine）及びテモゾロミド（Temozolomide）が挙げられる。
【００７１】
本明細書において使用される用語「キット」、「製品」又は「複合調製物」とは、上記で定義した組み合わせパートナー（ａ）と（ｂ）とが、独立して投与されることができるか、又は、組み合わせパートナー（ａ）と（ｂ）の別個の量を有する異なる一定の組み合わせの使用により、すなわち同時又は異なる時点で投与されることができるという意味で、特に「パーツのキット」を定義する。次いで、パーツのキットのパーツは、例えば、同時に又は時間をずらして、すなわち、異なる時点で及びパーツのキットの任意のパーツと等しい又は異なる時間間隔で、投与することができる。複合調製物において投与される、組み合わせパートナー（ｂ）に対する組み合わせパートナー（ａ）の総量の比は、変化させることができる。組み合わせパートナー（ａ）と（ｂ）は、同じ経路又は異なる経路で投与することができる。好ましい実施態様において、パートナー（ｂ）は、パートナー（ａ）の前に又はパートナー（ａ）と同時に投与される。投与が連続的な場合、第１パートナーは、例えば、第２パートナーの１、２、３、４、５、６、１２、１８又は２４時間前に投与し得る。
【００７２】
本発明の文脈内において、処置という用語は、治療的、対症的及び予防的処置を意味する。
【００７３】
本発明の医薬組成物、キット、製品及び複合調製物は、癌の進行の早期又は末期を含む既存の癌又は腫瘍を有するヒトにおいて使用することができる。本発明の医薬組成物、キット、製品及び複合調製物は、癌を有する患者を必ずしも治癒するのではなく、疾患の進行を遅延させるか、もしくは遅らせるか、又はさらなる進行を防止し、それにより患者の病状を改善する。特に、本発明の医薬組成物、キット、製品及び複合調製物は、腫瘍の発生を減少させるか、腫瘍量を減少させるか、哺乳類宿主における腫瘍退縮を生成させるか、ならびに／又は、転移の発生及び癌の再発を防止する。癌の処置において、本発明の医薬組成物は、治療有効量で投与される。
【００７４】
「有効量」とは、ヒトを含む哺乳動物における処置した疾患の有害な効力を防止、除去、又は軽減する本発明の医薬組成物の量を意味する。投与量は、患者、病理、投与方法等に従って、当業者によって適合させ得ると理解される。例えば、本発明の化合物は、０．０１〜５００mg／kg体重／日の用量で使用し得る。特別な実施態様において、本発明による医薬組成物は、本発明の化合物を０．０１mg〜５００mg／kg（体重）含む。投与量は、患者、病理、投与方法等に従って、当業者によって適合させ得ると理解される。
【００７５】
処置は、局所、経皮、経口、直腸、舌下、鼻腔内又は非経口であり得る。医薬組成物、キット、製品又は複合調製物は、好ましくは、注射によって、又は静脈内注入又は適切な滅菌溶液によって、又は消化管を介して液剤又は固体用量の剤形で投与される。
【００７６】
用語「癌」、「癌性」又は「悪性」とは、無秩序な細胞増殖により典型的に特徴付けられる哺乳動物の生理的状態を指すか、又は説明する。癌の例には、例えば、白血病、リンパ腫、芽細胞腫、細胞腫及び肉腫が挙げられる。かかる癌のより特別な例には、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ芽球性白血病（Ｐｈ＋ ＡＬＬ）、扁平上皮細胞癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、胃腸癌、腎癌（renal cancer）、卵巣癌、肝癌、直腸結腸癌、子宮内膜癌、腎癌（kidney cancer）、前立腺癌、甲状腺癌、神経芽細胞腫、骨肉腫、膵癌、多形性神経膠芽腫、子宮頸癌、胃癌（stomach cancer）、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、食道癌、結腸癌、及び頭頚部癌、胃癌（gastric cancer）、胚細胞性腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病、肥満細胞症、及び肥満細胞症に関連する任意の症状が挙げられる。
【００７７】
「白血病」は、造血器官の進行性悪性疾患を指し、一般的には、血液及び骨髄中の白血球及びそれらの前駆体の歪んだ増殖及び発達によって特徴付けられる。白血病は、一般的には、（１）疾患の継続期間及び特徴−急性又は慢性；（２）関与する細胞の種類；骨髄（骨髄性）、リンパ（リンパ性）又は単球；ならびに（３）血中の異常細胞数の増加又は非増加−白血病性又は非白血病性（亜白血性白血病）に基づいて、臨床的に分類される。白血病には、例えば、急性非リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性顆粒球性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性前骨髄球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、非白血性白血病、白血性白血病、好塩基球性白血病、芽細胞性白血病、ウシ白血病、慢性骨髄球性白血病、皮膚白血病、胎児性白血病、好酸球性白血病、グロス白血病、有毛細胞白血病、血芽球性白血病（hemoblastic leukemia）、血球母細胞性白血病（hemocytoblastic leukemia）、組織球性白血病、幹細胞性白血病、急性単球性白血病、白血球減少性白血病、リンパ管白血病（lymphatic leukemia）、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、リンパ性白血病（lymphogenous leukemia）、リンパ性白血病（lymphoid leukemia）、リンパ肉腫細胞性白血病、肥満細胞性白血病、巨核球性白血病、小骨髄芽球性白血病、単球性白血病、骨髄芽球性白血病、骨髄球性白血病、骨髄性顆粒球性白血病、骨髄性単球性白血病、ネーゲリ（Naegeli）白血病、形質細胞白血病、形質細胞性白血病、前骨髄球性白血病、リーダー（Rieder）細胞性白血病、シリング（Schilling）白血病、幹細胞性白血病、亜白血性白血病、及び未分化細胞性白血病が挙げられる。特定の態様では、本発明は、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、及び／又はフィラデルフィア染色体陽性急性リンパ芽球性白血病（Ｐｈ＋ ＡＬＬ）の処置を提供する。
【００７８】
下記を含む様々な癌も本発明の範囲に包含されるが、これらに限定されない：膀胱（加速性及び転移性膀胱癌を含む）、乳房、結腸（結腸直腸癌を含む）、腎臓、肝臓、肺（小細胞及び非小細胞の肺癌及び肺腺癌）、卵巣、前立腺、精巣、尿路、リンパ系、直腸、喉頭、膵臓（外分泌膵臓癌を含む）、食道、胃、胆嚢、頚部、甲状腺及び皮膚（扁平上皮細胞癌を含む）の癌を含む癌；リンパ系の造血器腫瘍（白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、有毛細胞リンパ腫、組織球性リンパ腫及びバーケット（Burketts）リンパ腫を含む）；骨髄系の造血器腫瘍（急性及び慢性骨髄性白血病、骨髄異形性症候群、骨髄性白血病及び前骨髄球性白血病を含む）；中枢及び末梢神経系の腫瘍（星細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫及びシュワン腫を含む）；間葉系起源の腫瘍（線維肉腫、横紋筋肉腫、及び骨肉腫を含む）；他の腫瘍（メラノーマ、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、精上皮腫、甲状腺濾胞癌及び奇形癌腫を含む）；メラノーマ、病期III又はIVの切除不能な悪性メラノーマ、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、胃腸癌、腎癌（renal cancer）、卵巣癌、肝癌、直腸結腸癌、子宮内膜癌、腎癌（kidney cancer）、前立腺癌、甲状腺癌、神経芽細胞腫、膵癌、多形性神経膠芽腫、子宮頸癌、胃癌（stomach cancer）、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、及び頭頚部癌、網膜芽腫、胃癌（gastric cancer）、胚細胞性腫瘍、骨肉腫、骨腫瘍、骨の成人悪性線維性組織球腫；骨の小児悪性線維性組織球腫、肉腫、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、新生物、形質細胞新生物；骨髄異形成症候群；神経芽細胞腫；精巣性胚細胞腫瘍、眼内メラノーマ、骨髄異形成症候群；骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、滑膜肉腫。さらに他の癌に加えて、障害には、ヒトにおける色素性じんま疹、びまん性皮膚肥満細胞症、孤立性肥満細胞腫、及びイヌの肥満細胞腫、ならびに水疱性の、紅皮症の肥満細胞症及び毛細血管拡張症の肥満細胞症のような幾つかの稀なサブタイプ、骨髄増殖性症候群もしくは骨髄異形成症候群、又は急性白血病、肥満細胞症と関連した骨髄増殖性障害、及び肥満細胞白血病のような関連する血液学的障害を有する肥満細胞症が挙げられる。以下のものを含む他の癌も障害の範囲に含まれるが、これらに限定されない：膀胱、尿路上皮癌、乳房、結腸、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、胃、子宮頚部、甲状腺、精巣（特に、精巣精上皮腫）及び皮膚（扁平上皮細胞癌を含む）の癌を含む癌；胃腸間質腫瘍（「ＧＩＳＴ」）；白血病、急性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞性リンパ腫、Ｔ細胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、有毛細胞リンパ腫及びバーケットリンパ腫を含むリンパ球系の造血性腫瘍；急性及び慢性骨髄性白血病ならびに前骨髄球性白血病を含む骨髄系の造血性腫瘍；線維肉腫及び横紋筋肉腫を含む間葉起源の腫瘍；メラノーマ、精上皮腫、奇形癌、神経芽細胞腫及び神経膠腫を含む他の腫瘍；星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫及びシュワン細胞腫を含む中枢神経系及び末梢神経系の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫、及び骨肉腫を含む間葉起源の腫瘍；ならびにメラノーマ、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、精上皮腫、甲状腺濾胞癌、奇形癌、化学療法不応性非精上皮腫胚細胞性腫瘍、及びカポジ肉腫及びそれらのあらゆる転移を含む他の腫瘍。特に、癌は、肝細胞癌、食道癌、乳癌、肺癌、神経芽細胞腫、卵巣癌、結腸直腸癌及び骨肉腫からなる群より選択され得る。場合により、癌は、肺癌、卵巣癌又は骨肉腫であり得る。
【００７９】
本発明の好ましい実施態様において、癌は、固形腫瘍である。用語「固形腫瘍」とは、特に、乳癌、卵巣癌、大腸及び一般的にはＧＩ（胃腸）管の癌、頸癌、神経芽細胞腫、肺癌、特に小細胞肺癌及び非小細胞肺癌、頭頸部癌、結腸直腸癌、膀胱癌、骨肉腫、前立腺癌又はカポジ肉腫を意味する。本組み合わせは、固形腫瘍の増殖だけでなく、液性腫瘍も阻害する。さらに、腫瘍体積の減少を得ることができる。本明細書で開示される化合物はまた、腫瘍の転移拡散及び微小転移の増殖又は発生を予防するのに適している。
【００８０】
最後に、本発明は、上記で開示した式（Ｉ）及び（ＩＩ）で示される化合物の調製方法に関する。
【００８１】
したがって、本発明は、開示した実施態様のいずれか一つを含む、式（Ｉ）：
【化７】
2014515384.tif 000009
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、上記で定義したとおりである］で示される化合物の調製方法であって、
ａ）  試薬Ｙ−（Ｃ２−Ｃ５）アルキル−ＮＲａＲｂ［式中、Ｙは、ハロ又はヒドロキシである］を、開示した実施態様のいずれか一つを含む、下記（１）：
【化８】
2014515384.tif 000010
［式中、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、上記で定義したとおりである］で示される化合物と反応させること；
そして
ｂ）  工程ａ）で得た化合物を、アルカリ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシドと反応させること、それにより、式（Ｉ）で示される化合物を得ることを含む方法に関する。
【００８２】
特別な実施態様において、アルカリ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシドは、ナトリウム（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシドである。
【００８３】
工程ａ）及び工程ｂ）の反応は、適切な条件の下で実施される。
【００８４】
特に工程ａ）について、条件は、例えば以下である：ｉ）ウィリアムソン（Williamson）縮合について、試薬としてハロゲノ−（Ｃ２−Ｃ５）アルキル−ＮＲａＲｂを使用すること：反応は、相間移動条件（ＢｕＯＨ−水）下、且つ塩基として水酸化アルカリの存在下において実現し、及びii）光延反応について、試薬としてＨＯ−（Ｃ２−Ｃ５）アルキル−ＮＲａＲｂ及びジアルキルアゾジカルボキシラートを使用すること：縮合は、標準的な条件下で実現した。
【００８５】
好ましくは、ハロゲノ−（Ｃ２−Ｃ５）アルキル−ＮＲａＲｂは、クロロ−（Ｃ２−Ｃ５）アルキル−ＮＲａＲｂであり、そしてジアルキルアゾジカルボキシラートは、ジイソプロピルアゾジカルボキシラートである。
【００８６】
特に工程ｂ）について、条件は、例えば以下である：クロロ誘導体のアルコキシル化は、アルカリアルコキシドの存在下、密閉管中、高温で加熱することにより実現した。
【００８７】
好ましくは、アルカリアルコキシドは、ナトリウムメトキシドである。
【００８８】
本発明はまた、開示した実施態様のいずれか一つを含む、式（ＩＩ）：
【化９】
2014515384.tif 000011
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６及びＸは、上記で定義したとおりである］で示される化合物の調製方法であって、
ａ）  試薬Ｙ−（Ｃ２−Ｃ５）アルキル−ＮＲａＲｂ［式中、Ｙは、ハロ又はヒドロキシである］を、下記（１）：
【化１０】
2014515384.tif 000012
［式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ６は、上記で定義したとおりである］で示される化合物と反応させること；
そして
ｂ）  工程ａ）で得た化合物を、ｉ）カルボン酸無水物又はii）カルボン酸中のアルカリカルボキシラートのいずれかと反応させること、それにより、式（ＩＩ）で示される化合物を得ることを含む方法に関する。
【００８９】
工程ａ）及び工程ｂ）の反応は、適切な条件の下で実施される。
【００９０】
特に工程ａ）について、条件は、例えば以下である：ｉ）ウィリアムソン（Williamson）縮合について、試薬としてハロゲノ−（Ｃ２−Ｃ５）アルキル−ＮＲａＲｂを使用すること：反応は、相間移動条件（ＢｕＯＨ−水）下、且つ塩基として水酸化アルカリの存在下において実現し、及びii）光延反応について、試薬としてＨＯ−（Ｃ２−Ｃ５）アルキル−ＮＲａＲｂ及びジアルキルアゾジカルボキシラートを使用すること：縮合は、標準的な条件下で実現した。
【００９１】
好ましくは、ハロゲノ−（Ｃ２−Ｃ５）アルキル−ＮＲａＲｂは、クロロ−（Ｃ２−Ｃ５）アルキル−ＮＲａＲｂであり、そしてジアルキルアゾジカルボキシラートは、ジイソプロピルアゾジカルボキシラートである。
【００９２】
特に工程ｂ）について、条件は、例えば以下である：ラクタム化合物へのクロロ誘導体の転換は、カルボン酸無水物中、密閉管中、高温で加熱することによるか、又はアルカリカルボキシラートの存在下、カルボン酸中で加熱することにより、実現した。
【００９３】
好ましくは、カルボン酸無水物は無水酢酸であり、カルボン酸は酢酸であり、そしてアルカリカルボキシラートは、酢酸ナトリウムである。
【００９４】
代替的に、式（ＩＩ）の化合物はまた、式（Ｉ）の化合物の調製方法の工程ａ）で得た中間体生成物から、式（Ｉ）の化合物の調製方法の工程ａ）で得た中間体生成物を加熱することにより調製し得る。特に、条件は、例えば以下である：アルコキシ誘導体の脱アルキル化を、酢酸中の水素酸水溶液を加熱することにより実現した。
【００９５】
好ましくは、水素酸は、塩酸である。
【００９６】
本発明のさらなる態様及び利点を以下の実験セクションに開示するが、これは例示的なものであって、本発明の範囲を限定しないとみなされるべきである。多数の参考文献が、本明細書において引用される；これらの各引用文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００９７】
実施例
【化１１】
2014515384.tif 000013
１：ウィリアムソン又は光延条件； ２：アルカリアルコキシド； ３：カルボン酸無水物又はカルボン酸中のアルカリカルボキシラート； ４：カルボン酸中の水素酸
【００９８】
１１−クロロ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール（２又はＣ２０）
【化１２】
2014515384.tif 000014
方法１：  １１−クロロ−３−ヒドロキシ−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール（４００mg、１．４mmol）（Bioconjugate Chem. (2003), 14, 120-135に従って調製した）、ｎ−ブタノール（４０mL）及び水（２４mL）の混合物を、３０分間撹拌し、次に水（５mL）中のＮａＯＨ（３００mg）の溶液を加えた。１５分間の撹拌の後、２−クロロ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン塩酸塩（２４０mg、１．７mmol）を加え、混合物を１時間加熱還流した。反応混合物を冷却し、有機層を分離した。水層をＡｃＯＥｔにより抽出し、有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（中性アルミナ、ジクロロメタン中のエタノール（０〜２％）の勾配）により精製して、目的化合物をベージュ色の固体（２２０mg、４４％）として得た。 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ(ppm): 9.76 (d, 1H), 8.79 (br s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.39 (dd, 1H), 7.35 (d, 1H), 4.24 (t, 2H), 2.83 (t, 2H), 2.56 (s, 3H), 2.40 (s, 6H). 微量分析, C20H20ClN3O.0.7 H2Oの計算値: C, 65.64; H, 5.85; N, 11.48, 実測値: C, 65.29; H, 5.49; N, 11.31.
【００９９】
方法２：  Ｎ２雰囲気下、ジイソプロピルアゾジカルボキシラート（２８０mg、１．４mmol）を、乾燥ＴＨＦ（１０mL）中のトリフェニルホスフィン（４３０mg、１．４mmol）の溶液に加えた。この混合物を、乾燥ＴＨＦ（２０mL）中の１１−クロロ−３−ヒドロキシ−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール（２００mg、０．７mmol）（Bioconjugate Chem. (2003), 14, 120-135に従って調製した）及び２−（ジメチルアミノ）エタノール（７５mg、０．８mmol）の溶液に加えた。最終混合物を室温で２４時間撹拌した。溶媒を蒸発させた。粗残留物を上記のようにカラムクロマトグラフィーにより精製して、目的化合物を得たが、これは方法１で得たものと同一であった。
【０１００】
１１−メトキシ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール（３又はＣ１２）
【化１３】
2014515384.tif 000015
２５mL容量の密閉した管中、メタノール溶液（１２mL）中の１１−クロロ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール（８０mg、０．２２mmol）と３０％ナトリウムメトキシドとの混合物を、油浴中、１３０℃で４８時間加熱した。反応混合物を冷却し、水（３０mL）に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（中性アルミナ、ＣＨ２Ｃｌ２中のＡｃＯＥｔ（０〜２０％）の勾配）により精製して、メトキシ化合物の遊離塩基（７５mg、９４％）を得た。 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ (ppm): 9.64 (d, 1H), 8.82 (br s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.58 (d, 1H), 7.35 (dd, 1H), 7.30 (d, 1H), 4.27-4.22 (m, 5H), 2.83 (t, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.39 (s, 6H).
【０１０１】
マレイン酸塩の生成：  高温のアセトン（５mL）中のこの遊離塩基（３５mg）の溶液を、高温のアセトン（２mL）中のマレイン酸（３３mg）の溶液に注いだ。沈殿物を濾過により回収し、アセトンで洗浄し、減圧下にてデシケーター中で乾燥させて、マレイン酸塩（４０mg）を得た。 微量分析, C21H23N3O2.2C4H4O4.H2Oの計算値: C, 58.10; H, 5.50; N, 7.01; 実測値: C, 57.96; H, 5.44; N, 7.12. MS 350.2 [M+1].
【０１０２】
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（４又はＣ１４）
【化１４】
2014515384.tif 000016
方法１：  １１−メトキシ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール（４０mg、０．１１mmol）、Ｎ ＨＣｌ（５mL）及びＡｃＯＨ（２mL）の混合物を、１８時間加熱還流した。揮発物を減圧下で蒸発させ、続いてトルエンと同時蒸発させた。水（１０mL）を加え、２８％水酸化アンモニウム（２mL）の添加により、溶媒を塩基性にした。水層をＡｃＯＥｔで抽出し、有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（中性アルミナ、ジクロロメタン中のエタノール（０〜１０％）の勾配）により精製して：（ｉ）回収した出発物質（２２mg）及び（ii）目的化合物をベージュ色の固体（１２mg、６９％）として得た。 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ (ppm): 10.28, (d, 1H), 8.89 (br s, 1H), 8.60 (br s, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.37 (dd, 1H), 7.29 (d, 1H), 7.02 (s, 1H), 4.24 (t, 2H), 2.84 (t, 2H), 2.40 (s, 6H), 2.35 (s, 3H). MS 336.3 [M+1].
【０１０３】
方法２：  ２５mL容量の密閉した管中、１１−クロロ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール（２３０mg、０．６５mmol）と無水酢酸（２０mL）との混合物を、油浴中、１５０℃で２０時間加熱した。揮発物を減圧下で蒸発させ、続いてトルエンと同時蒸発させた。トルエン（６mL）を加え、沈殿物を濾過により回収し、トルエンで洗浄した。得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィー（中性アルミナ、ＣＨ２Ｃｌ２中のエタノール（０〜１０％）の勾配）により精製して、目的化合物（１６０mg、７３％）を得たが、これは方法１で得たものと同一であった。
【０１０４】
方法３：  １１−クロロ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール（２９０mg、０．８２mmol）、酢酸ナトリウム（１７２mg、２．１mmol）及びＡｃＯＨ（１６mL）の混合物を、１８時間加熱還流した。揮発物を減圧下で蒸発させ、続いてトルエンと同時蒸発させた。水（１００mL）を加え、２N 水酸化ナトリウムの添加により、溶媒を塩基性にした。水層をＡｃＯＥｔ及びＥｔＯＨで抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、目的化合物（２７４mg、１００％）を得たが、これは方法１で得たものと同一であった。微量分析, C20H21N3O2.1.8 H2Oの計算値: C, 65.32; H, 6.69; N, 11.43; 実測値: C, 65.36; H, 6.28; N, 11.17.
【０１０５】
マレイン酸塩の生成：  沸騰している無水エタノール（１０mL）中のこの遊離塩基（１２０mg）の溶液を、高温の無水エタノール（２mL）中のマレイン酸（５０mg）の溶液に注いだ。得られた均質な溶液を減圧下で蒸発させ、残留物をアセトンでトリチュレートして、固体を得て、これを濾過により回収し、アセトンで洗浄し、デシケーター中で乾燥させて、マレイン酸塩（１６０mg）を得た。微量分析, C20H21N3O2.C4H4O4.0.5 H2Oの計算値: C, 62.61; H, 5.65; N, 9.31; 実測値: C, 62.51; H, 5.80; N, 9.42. 
【０１０６】
１１−クロロ−３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール
【化１５】
2014515384.tif 000017
１１−クロロ−３−ヒドロキシ−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール（３００mg、１．１mmol）（Bioconjugate Chem. (2003), 14, 120-135に従って調製した）、ｎ−ブタノール（３０mL）及び水（１８mL）の混合物を、３０分間撹拌し、次に水（３mL）中のＮａＯＨ（２００mg）の溶液を加えた。１５分間の撹拌の後、（ＣＨ３）２Ｎ（ＣＨ２）３Ｃｌ、ＨＣｌ（２００mg、１．３mmol）を加え、混合物を１時間加熱還流した。反応混合物を冷却し、有機層を分離した。水層をＡｃＯＥｔにより抽出し、有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（中性アルミナ、ジクロロメタン中のエタノール（０〜２％）の勾配）により精製して、目的化合物１１−クロロ−３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールをベージュ色の固体（１９０mg、４８％）として得た。微量分析, C21H22ClN3O.0.5 H2Oの計算値: C, 66.92; H, 6.15; N, 11.15, 実測値: C, 66.73; H, 5.92; N, 11.27.
【０１０７】
３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン
【化１６】
2014515384.tif 000018
化合物３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オンの合成について先に記載された方法２を適用し、１１−クロロ−３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールから出発し、上記のように調製して標記化合物を得た。
【０１０８】
１１−クロロ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール
【化１７】
2014515384.tif 000019
化合物１１−クロロ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールの合成について先に記載されたプロトコルを適用し、１１−クロロ−３−ヒドロキシ−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールから出発し、２−クロロ−Ｎ，Ｎ−ジエチルエタンアミン塩酸塩を２−クロロ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン塩酸塩の代わりに使用して、標記化合物を得た。
【０１０９】
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン
【化１８】
2014515384.tif 000020
化合物３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オンの合成について先に記載された方法２を適用し、１１−クロロ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールから出発し、上記のように調製して、標記化合物を得た。
【０１１０】
１１−クロロ−３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール
【化１９】
2014515384.tif 000021
化合物１１−クロロ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルオキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールの合成について先に記載されたプロトコルを適用し、１１−クロロ−３−ヒドロキシ−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールから出発し、４−（２−クロロエチル）モルホリン塩酸塩を２−クロロ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン塩酸塩の代わりに使用して、標記化合物を得た。 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12.94 (br s, 1H), 9.62 (d, 1H), 8.06 (d, 1H), 7.99 (d 1H), 7.80 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.35 (dd, 1H), 4.25 (t, 2H), 3.64-3.58 (m, 4H), 2.78 (t, 2H), 2.56 (s, 3H), 2.54-2.49 (m. DMSO 信号により重複). 微量分析, C22H20ClN3O2.0.5 H2Oの計算値: C, 65.34; H, 5.69; N, 10.39, 実測値: C,65.75; H,5.73; N,10.37. MS 394.1 & 396.1 [M-1].
【０１１１】
３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（ＣＨ１７０７又はＣ０７）
【化２０】
2014515384.tif 000022
化合物３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オンの合成について先に記載された方法２又は３を適用し、１１−クロロ−３−（２−（モルホリン−４−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールから出発し、上記のように調製して、標記化合物を得た。 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12.03 (br s, 1H), 10.94 & 10.92 (2 s, 1H), 10.26 (d, 1H), 7.75-7.64 (m, 2H), 7.42 (d, 1H), 7.18 (dd, 1H), 7.07 (d, 1H), 4.21 (t, 2H), 3.66-3.56 (m, 4H), 2.77 (t, 2H), 2.57-2.46 (m. DMSO 信号により重複). 微量分析, C22H23N3O3.1.2 H2Oの計算値: C, 66.23; H, 6.37; N, 10.54, 実測値: C, 66.28; H, 6.55; N, 10.10. MS 400.1 [M+Na].
【０１１２】
マレイン酸塩の生成：  沸騰している無水エタノール（１０mL）中のこの遊離塩基（１５０mg）の溶液を、高温の無水エタノール（４mL）中のマレイン酸（５５mg）の溶液に注いだ。得られた均質な溶液を減圧下で蒸発させ、残留物をアセトンでトリチュレートして、固体を得て、これを濾過により回収し、アセトンで洗浄し、デシケーター中で乾燥させて、マレイン酸塩（１６０mg）を得た。微量分析, C22H23N3O3.C4H4O4.0.4 H2Oの計算値: C, 62.37; H, 5.56; N, 8.40; 実測値: C, 62.66; H, 6.00; N, 7.95.
【０１１３】
ＤＬ １１−クロロ−３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−２−メチルプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール
【化２１】
2014515384.tif 000023
化合物１１−クロロ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルオキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールの合成について先に記載されたプロトコルを適用し、１１−クロロ−３−ヒドロキシ−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールから出発し、ＤＬ ３−クロロ−２−メチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−１−アミン塩酸塩を２−クロロ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン塩酸塩の代わりに使用して、標記化合物を得た。
【０１１４】
ＤＬ ３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−２−メチルプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ−１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン
【化２２】
2014515384.tif 000024
化合物３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オンの合成について先に記載された方法２を適用し、ＤＬ １１−クロロ−３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−２−メチルプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールから出発し、上記のように調製して、標記化合物を得た。
【０１１５】
１１−クロロ−３−（３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール
【化２３】
2014515384.tif 000025
化合物１１−クロロ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルオキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールの合成について先に記載されたプロトコルを適用し、１１−クロロ−３−ヒドロキシ−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールから出発し、１−（３−クロロプロピル）ピペリジン塩酸塩を２−クロロ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン塩酸塩の代わりに使用して、標記化合物を得た。
【０１１６】
３−（３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン
【化２４】
2014515384.tif 000026
化合物３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オンの合成について先に記載された方法２を適用し、１１−クロロ−３−（３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールから出発し、上記のように調製して、標記化合物を得た。
【０１１７】
１１−クロロ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−エチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール
【化２５】
2014515384.tif 000027
工程１：  ５０mL容量の密閉管中、１１−クロロ−８−エチル−３−メトキシ−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール（６００mg、１．９mmol）（Anti-Cancer Drug Design (1992), 7, 235-251に従って調製した）、ベンジルトリエチル塩化アンモニウム（２．８０ｇ、１２mmol）及び３７％塩酸（４５mL）の混合物を、油浴中、１４０℃で２４時間加熱した。次に反応混合物を減圧下で蒸発させ、次に水（１０mL）を加えた。２８％水酸化アンモニウム（２mL）の添加により、溶媒を塩基性にし、得られた固体を濾過により回収し、次に水で洗浄し、真空デシケーターを使用して乾燥させた。中間体１１−クロロ−８−エチル−３−ヒドロキシ−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール４５０mg（収率７８％）を褐色の粉末として得た。微量分析, C17H13ClN2O 0.25 H2Oの計算値: C, 67.78; H, 4.52; N, 9.30; 実測値: C, 67.90; H, 4.62; N, 9.56. MS:  296.1/298.1 (M+H).
【０１１８】
工程２：  化合物１１−クロロ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルオキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールの合成について先に記載されたプロトコルを適用し、１１−クロロ−３−ヒドロキシ−８−エチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールから出発し、２−クロロ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン塩酸塩を使用して、標記化合物を得た。 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ (ppm): 9.76 (d, 1H), 8.73 (br s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.43-7.34 (m, 2H), 4.25 (t, 2H), 2.97 (q, 2H), 2.84 (t, 2H), 2.40 (s, 6H), 1.46 (t, 3H). MS: 368.2 & 370.2 (M+H).
【０１１９】
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−エチル−７Ｈ，１１Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（Ｃ４８）
【化２６】
2014515384.tif 000028
化合物３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オンの合成について先に記載された方法２又は３を適用し、１１−クロロ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−エチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールから出発し、上記のように調製して、標記化合物を得た。 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12.02 (s, 1H), 10.98 & 10.96 (2 s, 1H), 10.27 (d, 1H), 7.74-7.67 (m, 2H), 7.40 (d, 1H), 7.18 (dd, 1H), 7.05 (d, 1H), 4.17 (t, 2H), 2.77-2.67 (m, 4H), 2.26 (s, 6H), 1.27 (t, 2H). 微量分析, C21H23N3O2.H2Oの計算値: C, 68.66; H, 6.81; N, 11.44, 実測値: C, 68.96; H, 6.78; N, 11.36. MS 350.1 [M+H].
【０１２０】
マレイン酸塩の生成：  沸騰している無水エタノール（１２mL）中のこの遊離塩基（１２０mg）の溶液を、高温の無水エタノール（２mL）中のマレイン酸（６２mg）の溶液に注いだ。得られた均質な溶液を減圧下で蒸発させ、残留物をアセトンでトリチュレートして、固体を得て、これを濾過により回収し、アセトンで洗浄し、デシケーター中で乾燥させて、マレイン酸塩（１４７mg）を得た。微量分析, C21H23N3O2.C4H4O4.0.25 H2Oの計算値:: C, 63.89; H, 5.85; N, 8.94; 実測値: C, 63.41; H, 6.28; N, 8.76.
【０１２１】
１１−クロロ−３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール（ＣＨ１７０９又はＣ７０９）
【化２７】
2014515384.tif 000029
化合物１１−クロロ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルオキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールの合成について先に記載されたプロトコルを適用し、１１−クロロ−３−ヒドロキシ−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールから出発し、Ｎ−（２−クロロエチル）ピペリジン塩酸塩を２−クロロ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン塩酸塩の代わりに使用して、標記化合物を得た。 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12.48 (br s, 1H), 9.61 (d, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.99 (d 1H), 7.79 (d, 1H), 7.58 (d, 1H), 7.34 (dd, 1H), 4.22 (t, 2H), 2.74 (t, 2H), 2.56 (s, 3H), 2.51-2.45 (m. DMSO信号により重複), 1.56-1.47 (m, 4H), 1.45-1.30 (m, 2H). 微量分析, C23H24ClN3O2の計算値: C, 70.13; H, 6.14; N, 10.67, 実測値: C, 69.63; H, 6.38; N, 10.44. MS 394.1 & 396.1 [M+1]. 
【０１２２】
３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（ＣＨ１７１０又はＣ７１０）
【化２８】
2014515384.tif 000030
化合物３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オンの合成について先に記載された方法２又は３を適用し、１１−クロロ−３−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールから出発して、上記のように調製して、標記化合物を得た。 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12.03 (br s, 1H), 10.94 & 10.92 (2 br s, 1H), 10.26 (d, 1H), 7.73-7.63 (m, 2H), 7.41 (d, 1H), 7.17 (dd, 1H), 7.08 (d, 1H), 4.18 (t, 2H), 2.73 (t, 2H), 2.56-2.43 (m, DMSO信号により重複), 2.29 (s, 3H), 1.57-1.48 (m, 4H), 1.44-1.35 (m, 2H). 微量分析, C23H25N3O2.H2Oの計算値: C, 70.22; H, 6.87; N, 10.68, 実測値: C, 70.16; H, 6.92; N, 10.42. MS 376.2 [M+1].
【０１２３】
マレイン酸塩の生成：  沸騰している無水エタノール（１４mL）中のこの遊離塩基（１６０mg）の溶液を、高温の無水エタノール（４mL）中のマレイン酸（６０mg）の溶液に注いだ。得られた均質な溶液を減圧下で蒸発させ、残留物をアセトンでトリチュレートして、固体を濾過により回収し、アセトンで洗浄し、デシケーター中で乾燥させて、マレイン酸塩（１８０mg）を得た。微量分析, C23H25N3O2.C4H4O4.0.5 H2Oの計算値: C, 64.80; H, 6.00; 実測値: C, 64.41; H, 6.37.
【０１２４】
３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルオキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール（Ｃ２１又はＣＨ２１）
【化２９】
2014515384.tif 000031
パラジウム担持炭素（１０％、１５０mg）を、無水エタノール（３０mL）中の１１−クロロ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルオキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール（３００mg、０．８４mmol）の溶液に加えた。大気圧で、水素を導入し、混合物を１８時間撹拌した。次に触媒を濾別し、高温のエタノールで洗浄し、溶媒を減圧下で除去した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（中性アルミナ、ジクロロメタン中のエタノール（０〜２％）の勾配）により精製して、目的化合物３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルオキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールをベージュ色の固体（１９０mg、７１％）として得た。 1H NMR ( 300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12.39 (s, 1H), 9.73 (s, 1H), 8.77 (d, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.99 (d, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.47 (dd, 1H), 4.48 (t, 2H), 2.79 (s, 6H), 2.65 (s, 3H), 2.53 (m, 2H). 微量分析, C20H21N3O.0.25 H2Oの計算値: C, 74.18; H, 6.64; N, 12.98, 実測値: C, 74.21; H, 6.67; N, 12.71. 
【０１２５】
３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール（Ｃ２３）
【化３０】
2014515384.tif 000032
パラジウム担持炭素（１０％、７０mg）を、無水エタノール（２０mL）中の１１−クロロ−３−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール（１３０mg、０．３５mmol）の溶液に加えた。大気圧で、水素を導入し、混合物を１８時間撹拌した。次に触媒を濾別し、高温のエタノールで洗浄し、溶媒を減圧下で除去した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（中性アルミナ、ジクロロメタン中のエタノール（０〜２％の勾配））により精製して、目的化合物をベージュ色の固体（８４mg、７１％）として得た。 1H NMR ( 300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12.07 (s, 1H), 9.64 (s, 1H), 8.70 (d, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.39 (dd, 1H), 4.20 (t, 2H), 2.62 (s, 3H), 2.47 (t, 2H), 2.22 (s, 6H), 1.98 (m, 2H). 微量分析, C21H23N3O.0.25 H2Oの計算値: C, 74.64; H, 7.01; N, 12.43, 実測値: C, 74.77; H, 6.99; N, 12.45.
【０１２６】
１１−クロロ−３−（２−メトキシエトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール（ＣＨ１７０８）
【化３１】
2014515384.tif 000033
化合物１１−クロロ−３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルオキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールの合成について先に記載されたプロトコルを適用し、１１−クロロ−３−ヒドロキシ−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールから出発し、１−クロロ−２−メトキシエタンを２−クロロ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン塩酸塩の代わりに使用して、標記化合物を得た。この場合、混合物を７０℃で４時間加熱したことに注意されたい。1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ (ppm): 9.78 (d, 1H), 8.70 (br s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.41 (dd, 1H), 7.36 (d, 1H), 4.30 (t, 2H), 3.86 (t, 2H), 3.51 (s, 3H), 2.57 (s, 3H). MS 341.0 & 343.0 [M+1].
【０１２７】
３−（２−メトキシエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン（ＣＨ１７１１）
【化３２】
2014515384.tif 000034
化合物３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オンの合成について先に記載された方法３を適用し、１１−クロロ−３−（２−メトキシエトキシ）−８−メチル−７Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドールから出発して、上記のように調製して、標記化合物を得た。 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12.09 (s, 1H), 11.01 & 10.99 (2 s, 1H), 10.33 (d, 1H), 7.80-7.70 (m, 2H), 7.46 (d, 1H), 7.26 (dd, 1H), 7.15 (d, 1H), 4.28 (t, 2H), 3.80 (t, 2H), 3.41 (s, 3H), 3.35 (s, 3H). MS 323.2 [M+1].
【０１２８】
アミノ−置換−アルキルオキシ−ベンゾ［ｅ］ピリド［４，３−ｂ］インドール・ファミリーの効果の特徴：
Ｃ１４、すなわち３−（２−ジメチルアミノエチルオキシ）−８−メチル−７Ｈ，１０Ｈ−ベンゾ（ｅ）ピリド（４，３−ｂ）インドール−１１−オン
【０１２９】
１）  抗増殖活性
【０１３０】
【表１】
2014515384.tif 000035
【０１３１】
Ｃ１４は、様々な細胞株に対する抗増殖活性を示す（生存率：ＨｅＬａ細胞においてＩＣ５０値 １１０nM及びＨ３５８細胞において４７０nM）（表１参照）。これらの結果は、幾つかの構造的特徴を共有している他の二つのベンゾピリドインドール（Ｃ１及びＣＨ２１）で得た活性と同等ではない。Ｃ１は、ＨＬ６０の増殖を効果的に阻害するが、一方Ｃ１４及びＣＨ２１は、不良な阻害剤である。ＣＨ２１は、Ｕ３７３細胞の増殖を阻止するが、一方、Ｃ１４及びＣ１は、効果的でない。したがって、これらの分子は、異なる特異性を有し得る。
【０１３２】
ＨｅＬａ細胞を用いる抗増殖アッセイを好ましい化合物で実施し、そしてＣ１及びＣ２と比較した。３つの独立した実験の平均値が示されている。Ｃ１及びＣ２を用いて得られたＩＣ５０は、先にHoang et al, 2009に報告され、比較のために示している。該分子の全てが１１位にオキソ基を有していることを踏まえて、各分子の側鎖を以下にまとめる。ＩＣ５０は、すなわち５０％の死を誘導した濃度を表している。
【０１３３】
【表２】
2014515384.tif 000036
【０１３４】
ジメチルアミノエトキシ基は、抗増殖効率を劇的に向上させる（すなわち、Ｃ２とＣ１４、Ｃ１とＣ４８を比較）。しかし、同様の効果がモルホリン−４−イルエトキシ基で観察された。
【０１３５】
２）  化合物Ｃ１４のキナーゼプロファイリング
Ｃ１４の特異性を、カイノームの代表的な１２１種のキナーゼに対して、インビトロで試験した。１μMの濃度にて二連で実行したアッセイは、ＭＲＣ（Dundee, UK）によって行われた、結果を図１に示す。主な標的を、図１Ｂにハイライト表示する。
【０１３６】
【表３】
2014515384.tif 000037
【０１３７】
また、ＣＨ２１によって標的とされるキナーゼ（Ｎｕａｋ１、ＴｒｋＡ、Ｔａｋ１及びＧｃｋ）に加えて、Ｃ１４は、有糸分裂キナーゼ（オーロラＢ及びＭＥＬＫ）だけでなく、チェックポイントキナーゼ１及び２も阻害する。オーロラＡは、Ｃ１４によって僅かに部分的に阻害される（阻害の７６％、１μMで）。実際、Ｃ１４は、Ｃ１と少しの特異性を共有するが、全てではない。例えば、Ｃ１４は、オーロラＡの不良な阻害剤であるが、一方、Ｃ１は、オーロラＡ及びＢを同じように標的とする（Hoang et al, 2009）。Ｃ１及びＣ１４の両分子による有糸分裂の異なる障害を予測し得る。様々な利用可能な阻害剤の特異性を、表３及び図２で比較する。
【０１３８】
【表４】
2014515384.tif 000038
【０１３９】
加えて、Ｃ１、Ｃ２及びＣ１４の１μMの濃度で、組換えキナーゼのオーロラキナーゼＡ及びＢならびにチェックポイントキナーゼ１及び２の残存活性の割合を測定した。結果を以下の表に示す。
【０１４０】
【表５】
2014515384.tif 000039
【０１４１】
これらのデータを考慮すると、Ｃ１とＣ２と比較して、Ｃ１４のみが、オーロラＡと対比してオーロラＢに特異性を示すことが明らかとなった。したがって、ジメチルアミノエトキシ基は、驚くべきことに、化合物の特異性を改質する。
【０１４２】
３）  Ｃ１４は、細胞中のオーロラキナーゼを標的とする
オーロラＢの主要な基質は、ヒストンＨ３である。オーロラＢは、有糸分裂の間、Ｓｅｒ １０においてヒストンＨ３をリン酸化する。上記の化合物によって処理したＵ２ＯＳ有糸分裂抽出物を、ウエスタンブロット法によって分析した。図３に示すように、Ｃ１及びＣ１４は、細胞中、効率的にオーロラＢを阻害するが、一方、ＣＨ２１は全く効果がなくそしてＣ２は軽度の阻害活性を有する。
【０１４３】
４）  構造／機能研究
細胞を、様々な分子と共にインキュベートし、そしてオーロラＢの阻害を、ウエスタンブロット法及び免疫蛍光実験によって推定する。Ｓｅｒ １０においてリン酸化されたヒストンＨ３をオーロラＢキナーゼ活性のマーカーとして、及びアクチンを内部標準として使用する。結果を図４及び図１０及び表３に示す。
【０１４４】
化合物Ｃ１〜Ｃ５は、下記のように、Hoang et al, 2009の図１に開示されている：
【０１４５】
【表６】
2014515384.tif 000040
【０１４６】
化合物Ｃ１１は、以下の構造を有し、そしてそれはJ. Med. Chem. (1990), 33, 1519-1528に記載された：
【０１４７】
【化３３】
2014515384.tif 000041
【０１４８】
【表７】
2014515384.tif 000042
【０１４９】
Ｃ２とＣ１４との比較は、ベンゾ環Ａの３位の大きな鎖がオーロラＢキナーゼの阻害及び選択性を高度に増大させることが明らかになった。８位のエチル（式（Ｉ）又は（ＩＩ）中のＲ３）は、より良いターゲティングのために有用であり得る。オキソ基が水素になる場合（Ｃ１４と、ＣＨ２１とも称されるＣ２１とを比較）、又はオキソ基がクロリドになる場合（Ｃ４０とＣ４８、又はＣ０５とＣ０７、又はＣ７０９とＣ７１０とを比較）、活性が弱くなるので、１１位（式（Ｉ）中のＲ５）も、オーロラＢキナーゼ阻害に不可欠である。
【０１５０】
Ｃ１４Ｍ、Ｃ４８Ｍ及びＣ０７Ｍと呼ばれる、オーロラＢキナーゼ阻害剤のそれぞれＣ１４、Ｃ４８及びＣ０７に相当するマレイン酸塩を、合成し且つ試験した（図１１）。オーロラＢキナーゼ阻害は、マレイン酸塩に対して維持される。
【０１５１】
５）  静止期細胞に対するＣ１４の影響
Ｈ３５８細胞を２日間、血清中に取り、次いで血清非存在下のまま、化合物と共に９６時間インキュベートした。周期過程中の５０％以上の細胞の死を誘発した濃度（０．５μM）で、細胞の９０％が、処理後９６時間依然として生存している（図５）。このように、Ｃ１４は、静止期細胞に対して有害ではない。
【０１５２】
６）細胞周期の進行に対するＣ１４の影響
ＨｅＬａ細胞を、Ｃ１（０．５μM）又はＣ１４（０．５μM）又はＤＭＳＯ（Ｔｅ）のいずれかの存在下で、インキュベートし、異なるフェーズにおける細胞の再分裂をＦＡＣＳにより分析する。分析は、処理の３０時間目及び４８時間目に実施し、ヒストグラムを図６に報告し、そしてデータを表５に示す。
【０１５３】
【表８】
2014515384.tif 000043
【０１５４】
Ｃ１４は、効率的に進行中の細胞周期を阻止する（３０時間目に僅か７％及び４８時間目に僅か５％が、Ｇ０／Ｇ１期及びＳ期に見られる）。Ｃ１４の存在下、Ｃ１４の添加の僅か３０時間後に、大規模なアポトーシスと多倍数化（polyploidisation）が顕著である。同じ条件下、Ｃ１は、１つの細胞世代後のみに細胞周期に影響を与え、処理の僅か４８時間後に、倍数化（polyploidy）へと導く。したがって、Ｃ１４は、効率的にＨｅＬａ細胞の増殖を防止し、細胞死を誘導する。さらに、細胞は、Ｃ１の存在下、依然として周期進行中である（処理４８時間後の細胞の４８％）。これらの結果は、ＨｅＬａ細胞において両方の化合物について観察されたＩＣ５０と完全に一致する。これらのデータにより、Ｃ１４とＣ１がＨｅＬａ細胞シグナル伝達に異なるやり方で影響を与えることを確認した。
【０１５５】
７）  オーロラＢ−ＧＦＰを発現するＨｅＬａ細胞の時間経過
オーロラＢ−ＧＦＰを発現するＨｅＬａ細胞を、Ｃ１４（０．５μM）又はＣ１（０．５μM）又はＤＭＳＯ（対照；Ｃｏ）のいずれかで処理した。有糸分裂細胞を、制御された条件（３７℃、５％ＣＯ２）下で連続的に画像化した。オーロラＢ−ＧＦＰの局在化が示され、経過時間が３つの条件下で示された（図７Ａ）。対照細胞は、正常に分裂した；次にセントロメア上に現れたオーロラＢ（図７Ａ、ＣＯ；Ｔｏ及び１０分）は、微小管上に移行（図７Ａ、ＣＯ；４５分）し、そして最終的に中心体に集中した（図７Ａ、ＣＯ；１時間）。かかる条件下、娘細胞は、２個の十分に分裂した核を示した（図７Ｂ、ＣＯ）。Ｃ１（０．５μM）の存在下で、オーロラＢは、セントロメアに集中するが、染色体は中期プレート（metaphasic plate）の上に整列できず（図７Ａ、Ｃ１；１時間）、そして最後に染色体は正しく整列しなかった（図７Ａ、Ｃ１；１時間１０分）。これらの細胞は、分裂後期なしで有糸分裂から脱出し、微小核を生じた（図７Ｂ、Ｃ１）。Ｃ１４の存在（０．５μM）下で、染色体は正常に整列（図７Ｂ、Ｃ１４；Ｔｏ）し、オーロラＢ−ＧＦＰが、中間帯に蓄積しているのが見られた（図７Ｂ、Ｃ１４；１８分、４０分及び２時間）。最後に、これらの細胞は分裂せずに再び広がった（図７Ｂ、Ｃ１４；４時間）。実際、（図７Ｃ、Ｃ１４ａ）に見られるように、２つの核が結合され（矢印参照）、そして個別化することはできない（図７Ｃ、Ｃ１４ｂ）。
【０１５６】
換言するならば、Ｃ１及びＣ１４は共に、有糸分裂を阻害した；Ｃ１は、進行中の分裂後期を阻止し、一方、Ｃ１４は細胞質分裂に影響した。
【０１５７】
８）チューブリン−ＧＦＰを発現するＨｅｋ細胞の時間経過
チューブリンＧＦＰを安定的に発現する有糸分裂ＨＥＫ細胞を連続的に画像化し、対照又は処理細胞（Ｃ１４及びＣ１、０．５μM）のいずれかの代表を示した（図８）。経過時間を、各写真の上に示す。対照及びＣ１の存在下において、有糸分裂紡錘体は構築されている（それぞれ２４分及びＴｏ）が、一方、Ｃ１４の存在下で２つの極は少しの微小管で接続されているだけである（９７分及び１３０分）。最後に、Ｃ１４の存在下、細胞は、有糸分裂から脱出し、細胞質微小管が観察される（１５９分及び２１２分）。紡錘体の複製がＣ１の処理時に発生することに注意すること（１０６分）。
【０１５８】
９）  球状体に対するＣ１４の効果
構築された細胞に対するＣ１４の効果を理解するために、本発明者らは、Ｈ３５８球状体の増殖（図９）について追跡調査した。構築された３次元球状体を、Ｃ１４（０．５μM）又はＣ１（０．５μM）又はＤＭＳＯ（対照）のいずれかで処理した。Ｃ１４は、３Ｄ−Ｈ３５８細胞増殖に有意に影響を及ぼし、その効果は、少なくとも５日間継続した。最後に、１０日目に、Ｃ１４処理した球状体は、Ｃ１で処理した対応する球状体よりも小さいことが見出された。このようにＣ１４は、細胞が組織構築を模倣している場合でさえ、細胞増殖を阻止するのに効果的であることが見出された。
【０１５９】
１０）  細胞中、Ｃ１４は、ＡＭＰＫ−関連キナーゼ５（Ｎｕａｋ１）を標的にする。
プロファイリングにより、ＡＭＰＫ−関連キナーゼ５（Ｎｕａｋ１）は、パネル中で最も影響を受けたキナーゼであることが明らかになった。Ｎｕａｋ１を阻害する３−アミノ−エトキシ化合物の効率をインビトロで測定した。
【０１６０】
【表９】
2014515384.tif 000044
【０１６１】
したがって、細胞中でＮｕａｋ１を阻害する可能性を大抗原腫瘍抑制因子（Large Antigen Tumour Suppressor）ＬＡＴＳ１の安定化により評価した。予想どおり、Ｎｕａｋ１の阻害は、図１２に報告されているように、ＬＡＴＳ１タンパク質の大幅な増加を誘導した。
【０１６２】
１１）  結論
Ｃ１４は、新規で、可溶性の抗増殖化合物である。Ｃ１４は、オーロラＢのような有糸分裂キナーゼ、ならびにＮｕａｋ１及びＭＥＬＫのようなＡＭＰＫ関連キナーゼを標的にする、狭い範囲のキナーゼ阻害剤である。Ｃ１４は、細胞質分裂を阻害するので、それゆえ特にＭＥＬＫを発現する癌幹細胞において進行中の有糸分裂を阻止し得る（Nakano et al, 2008）。ＭＥＬＫをターゲティングとするおかげで、Ｃ１４はまた、（神経芽細胞腫、結腸直腸癌、肺癌及び乳癌、・・・）をターゲティングとする癌幹細胞のために提案され得る。ｍｙｃ腫瘍の増殖が、Ｃ１４の主要な標的であるＡＭＰＫ関連キナーゼ５（Ｎｕａｋ１）に依存することが報告されているので、Ｃ１４は、調節解除されたｍｙｃ腫瘍に対して大きな関心を持ち得る（Liu et al, 2012）。
【０１６３】
Ｃ１４は、Ｇｃｋ、ＭＡＰ４Ｋ（Ippeita et al., 2001）及びＴｒｋ酵素（Thiele et al., 2009）を標的とし、そしてＣ１４は、炎症過程と疼痛の感覚において、ＭＡＰカスケードシグナル伝達に幾分の阻害可能性を有し得る（Jian et al., 2009; Watson et al. 2008）。Ｇｃｋ阻害剤は、抗癌及び抗炎症治療的介入のために興味深い（Ippeita et al., 2001; Jian et al., 2007）。Ｔｒｋ又はトロポミオシン（Tropomysin）関連キナーゼは、癌遺伝子として説明され、慢性炎症性疼痛における役割を果たしている（Harel et al., 2010; Thiele et al., 2009）。Ｔｒｋはニューロトロフィン（neurotrophin）の受容体である；ニューロトロフィンとは、様々なヒト疾患に関連する疼痛おいて、原因として大きく関与している分泌された成長因子のファミリーである。癌に関しては、Ｔｒｋ受容体は、肝臓癌又は食道癌のような耐性腫瘍に関与している。興味深いアプリケーションは、（Albanese et al, 2010）に記載されている。実際に、Ｔｒｋ阻害剤は、例えば、骨転移性浸潤によって誘導される疼痛を減少させる一方で、細胞増殖を阻止するために使用され得ることが提案されている。
【０１６４】
Ｃ１４は、静止細胞に対する深刻な毒性無しに、興味深い細胞増殖阻害を示した。Ｃ１４は、前述したベンゾ［ｅ］ピリドインドールＣ１よりも効率的であり、且つキナーゼ阻害の異なるパターン、特にオーロラＢ選択性を示す。さらに、Ｃ１及びＣ１４は、異なるやり方で有糸分裂を阻止する；Ｃ１は分裂後期への分裂中期の移行をブロックするが、一方、Ｃ１４は、細胞質分裂を阻止する。注意することは、Ｃ１４は、Ｃｈｋ１（このキナーゼは、有糸分裂の完了だけでなく、ＤＮＡ修復に関与している）も標的とする（Peddibhotla et al., 2009）。チェックポイントキナーゼをターゲティングとすることは、ＤＮＡ傷害剤と組み合わせて使用する利点を示唆する。
【０１６５】
これらの特徴は、Ｃ１４を標的複合薬理学（targeted polypharmacology）のために有用な新規の抗増殖化合物として提案することを可能にした（Apsel et al, 2008）。多重特異性キナーゼ阻害剤の主要な利点は、特有な薬物の効率を増大させ、それによって副作用を減少させることである（Harrison, 2010）。
【０１６６】
最後に、様々な生物（菌類、植物、ブルセイトリパノソーマ（Trypanosoma brucei）、・・・）におけるオーロラ様相同体の同定を考慮すると、オーロラ阻害剤のより広範な用途を検討してもよい（Jetton et al., 2009）。これらの分子は、抗寄生虫化合物として提案されてもよい。
【０１６７】
Ｃ１４に加えて、関心対象の他の化合物が同定されている。関心対象の化合物は、常に、１１位にオキソ基、３位にジメチルアミノエトキシ基又は２−（モルホリン−４−イル）エトキシ基又は２−（ピペリジニル）エトキシ基、及び８位にメチル又はエチルを有する。これらの化合物は、増大した抗増殖活性を有し、オーロラＡよりもオーロラＢに対して特異性を示し、且つＣｈｋ−１及びＣｈｋ−２の阻害剤である。特に、化合物Ｃ１４、Ｃ４８、Ｃ０７及びＣ７１０、及びそれらのマレイン酸塩は、有望である。
【０１６８】
１０）  材料及び方法
細胞培養及び細胞生存率試験：  Ｈ３５８、Ｈ３２２（肺癌細胞）、Ｕ３７３（神経膠芽腫）及びＨｅＬａ細胞（卵巣癌）を、ＤＭＥＭ（１．５ｇ／Ｌのグルコース）中で増殖させ、一方、ＨＬ６０（ヒト骨髄細胞株）細胞を、ＲＰＭＩ １６４０中で増殖させた。Ｕ２ＯＳ（ヒト骨肉腫細胞株）細胞はマッコイ（McCoy）培地５Ａ中で、及び肝細胞（ＳＫ ＨＥＰ１）はＤＭＥＭ（４ｇ／Ｌのグルコース）（Gibco-Invitrogen）中で培養した。培地（Gibco-Invitrogen）に、１０％加熱不活性化ウシ胎仔血清（Gibco-Invitrogen）、Ｌ−グルタミン（２mM）、ペニシリン（１００UI／mL）及びストレプトマイシン（１００μg／mL）を補填した。
【０１６９】
細胞増殖アッセイを、９６ウェル培養プレート中で行った。アッセイは三連で実施した。細胞生存率は、製造業者により規定された条件下で、CellTiter 96Queous One Solution Reagent（Promega）を培養ウェルへ直接添加することによる、化合物の種々の濃度を用いた処理の７２時間目に推定した。
【０１７０】
血清の除去により細胞を静止状態にした。血清除去の２日後、血清は依然として取り除かれた状態で、細胞を様々な濃度の化合物と共に９６時間インキュベートした。生存率は、上記のように決定される。
【０１７１】
ウエスタンブロット法：  細胞を、化合物で処理し、採取し、９M 尿素に溶解させ、次いでLaemmli試料緩衝液を補充した。細胞抽出物をＳＤＳ−ＰＡＧＥに供し、ニトロセルロースフィルター（GE Healthcare）に移した。少なくとも１時間、ＰＢＳ中の５％脱脂乳でブロッキングした後、膜を一次抗体と共にインキュベートした。下記の抗体を使用した：phospho-Histone H3 Ser10（１：２０００、Upstate Biotechnology）、抗ＬＡＳＴ１（Cell signalling）、抗オーロラＢ（Epitomics）及び抗α−チューブリン（Sigma）。抗−ウサギ西洋わさびペルオキシダーゼ（１：５０００、GE Healthcare）を二次抗体として使用した。バンドをＥＣＬ技法（Amersham Bioscience）によって可視化した。
【０１７２】
細胞周期分析：  細胞を化合物の存在下又は非存在下のいずれかでインキュベートした。細胞周期プロファイルの決定のために、細胞を、氷冷７０％エタノールにより１時間固定し、次いで、ヨウ化プロピジウム溶液（０．２mg／mLのＲＮＡｓｅの存在下での５０μg／mLのＰＩ）と共に３７℃で１５分間インキュベートした。ＤＮＡ含量を、CellQuest Proソフトウェアを備えたＦＡＣＳフローサイトメーターを用いて測定した（Becton Dickinson, San Diego, CA）。
【０１７３】
免疫蛍光法：  細胞をガラス製カバーガラス上に播種し、化合物（１μM）で一晩処理した。処理後、細胞を４％ホルムアルデヒドで３７℃にて１５分間固定し、次いでＰＢＳ中のTriton X-100で５分間透過処理した。ＢＳＡ ０．０５mg／mLで３０分間ブロッキングした後、一次抗体（抗Phospho-Histone H3 Ser10（１／２０００、Upstate））を添加した。３０分間のインキュベーションの後、未結合の抗体をＰＢＳ（０．２％Tween-20）で洗浄することにより除去し、そして特異的染色を、Hylite Fluor（商標）５４６−又は６４７−又は４８８−結合型二次抗体（Anaspec)で可視化した。ＤＮＡを、０．１mM Hoechst 33342（Sigma）で可視化した。画像を、６３倍油浸対物レンズ付きZEISS 510共焦点レーザー走査顕微鏡を用いて収集した。０．５ミクロンのスライスが表示される。
【０１７４】
経時的実験：  安定的にオーロラＢ−ＧＦＰを発現するＨｅＬａ細胞を、培養条件（３７℃及び５％ＣＯ２）下、連続的に画像化した。細胞を、Ｃ１４（０．５μM）又はＣ１（０．５μM）又はＤＭＳＯ（対照条件）のいずれかの存在下でインキュベートした。画像を、４０倍水浸対物レンズ付きZEISS 510共焦点レーザー走査顕微鏡を用いて収集した。０．５ミクロンのスライスが表示される。
【０１７５】
インビトロでのキナーゼプロファイリング：  プロファイリングは、１２１種類のキナーゼのセットに対して二連で、ＭＲＣ（Dundee University）にて実施した。パネルは、キナーゼの主要な様々なクラスの代表である。化合物を、１μMの濃度で使用した。Reaction biology Corp (USA)によって、ＩＣ５０をインビトロにて組換えキナーゼに対して決定した
【０１７６】
多細胞腫瘍球状体（ＭＴＳ）モデル：  本発明者らは、同様の直径を有するＨ３５８球状体を生成するため、ハンギングドロップ法を適用した。１４００個の細胞を、培養培地を含有する寒天コーティングされた２４−ペトリ皿の蓋の上に懸濁した。４８時間後、球状体を、培養培地に移した。球状体の体積を、薬物処理の前（０日目）及び薬物処理中（Ｎ日目）に測定した。Ｈ３５８球状体を、０．６μMの濃度の化合物で処理した。対照Ｈ３５８球状体は、薬物処理なしで同じ条件で増殖させた。各球状体の大きさは、倒立顕微鏡を用いて２つの直径（ｄ１及びｄ２）を測定することによって決定した。体積を、式：Ｖ＝４／３πｒ３［式中、ｒ＝１／２√ｄ１×ｄ２］によって計算した。球状体増殖は、体積の変化を測定することによって計算し、初期体積Ｖ０と比較した。増殖率は、（Ｖｄ−Ｖｏ）／Ｖｏとして定義した。データは、異なる球状体の少なくとも３回の測定の平均である。
【０１７７】
参考文献：
【表１０】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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