(57)【要約】本発明は、紫外線Ｃ（ＵＶＣ）光露光への露光に最適化された細胞培養培地および関連した方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞培養培地であって、
ａ．ＵＶＣ光に露光される基本培地と、
ｂ．ＵＶＣ露光後、前記基本培地に添加されるＵＶ感受性培地成分を含む添加剤パッケージと、を含む、細胞培養培地。
【請求項２】
前記基本培地が、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含まない、請求項１に記載の細胞培養培地。
【請求項３】
前記添加剤パッケージが、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含む、請求項１に記載の細胞培養培地。
【請求項４】
前記基本培地が、粉末または液体形態であり、前記添加剤パッケージが、粉末または液体形態である、請求項１〜３のいずれかに記載の細胞培養培地。
【請求項５】
前記培地が、哺乳動物細胞の培養に適している、請求項１に記載の細胞培養培地。
【請求項６】
前記培地が、昆虫細胞の培養に適している、請求項１に記載の細胞培養培地。
【請求項７】
ＵＶＣに露光された細胞培養培地製剤を作製するための方法であって、
ａ．基本培地をＵＶＣ光に露光するステップと、
ｂ．ＵＶ感受性成分を含む添加剤パッケージを前記ＵＶＣに露光された基本培地に添加するステップと、を含む、方法。
【請求項８】
前記基本培地が、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含まない、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記添加剤パッケージが、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＵＶＣ光が、約２５４ｎｍの波長である、請求項７〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記基本培地が、約２５〜約３５０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記基本培地が、約１２５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記基本培地が、約１７５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記基本培地をＵＶＣ光に露光する前記ステップが、前記基本培地中のいずれかの非エンベロープウイルスの核酸を損傷するのに十分である、請求項７に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＵＶＣ光が、薄膜ＵＶＣ反応器を用いて送達される、請求項７に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＵＶＣ光が、螺旋ＵＶＣ反応器を用いて送達される、請求項７に記載の方法。
【請求項１７】
タンパク質を生成するための方法であって、
ａ．基本培地をＵＶＣ光に露光するステップと、
ｂ．ＵＶ感受性培地成分を含む添加剤パッケージを前記ＵＶＣに露光された基本培地に添加するステップと、
ｃ．所望のタンパク質が生成されるように前記ＵＶＣで処理された培地中で細胞を培養するステップと、を含む、方法。
【請求項１８】
前記基本培地が、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含まない、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記パッケージが、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＵＶＣ光が、約２５４ｎｍの波長である、請求項１７〜１９のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記培地が、約２５〜約３５０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記基本培地が、約１２５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記基本培地が、約１７５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記基本培地をＵＶＣ光に露光する前記ステップが、前記基本培地中のいずれかの非エンベロープウイルスの核酸を損傷するのに十分である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
前記細胞がＣＨＯ細胞である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
前記タンパク質が、組換えヒトエリスロポエチンである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＵＶＣ光が、薄膜ＵＶＣ反応器を用いて送達される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＵＶＣ光が、螺旋ＵＶＣ反応器を用いて送達される、請求項１７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１１年２月２３日に出願された米国仮出願第６１／４４５，９８８号の利益を主張し、これは参照によって本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、紫外線Ｃ（ＵＶＣ）光露光への露光に最適化された細胞培養培地およびそれに関連した方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
薬学的製品の製造に用いられる細胞培養培地の滅菌は、バイオバーデンを防ぐために、高品質の薬学的製品を生成するプロセスの一部として重要なステップである。これは、一般的に、滅菌等級濾過（０．２または０．１ミクロンの絶対定格濾過）により達成される。細胞培地および上清のマイコプラズマ属およびウイルスの汚染もまた、世界中の生物薬剤の製薬業者に大きな課題をもたらす。大きなもしくは小さなエンベロープもしくは非エンベロープ（または「裸」）ＤＮＡまたはＲＮＡウイルス粒子を不活性化し、および／または該ウイルス粒子を溶液から除去するために、幾つかの方法が用いられている。これらのアプローチの例には、濾過（ナノ、ウイルス、または０．１ミクロン）、クロマトグラフィー、バッチ熱処理、流水式高温短時間（ＨＴＳＴ）、ガンマ線照射、低ｐＨおよび化学的不活性化（溶媒、洗浄剤）、ならびにバッチまたは流水式紫外線光Ｃ（ＵＶＣ）が含まれる。ＨＴＳＴは、ウイルスの制御において実績のある方法であるが、血清等のタンパク質成分を含有する細胞培養培地へ悪影響を与える。さらに、ウイルス粒子を不活性化するための化学的処理が、しばしばこれらの化学物質の毒性性質が、薬剤製造におけるそれらの使用を制限しはするが、用いられている。さらに、ＨＴＳＴは、工場設備において専用かつ統合された基礎設備を必要とし、これは薬学的および治療的薬剤の製造を企図する場合に考慮すべき事項であり得る。
【０００４】
上記技術に加えて、細胞上清からこれらのタンパク質を精製する前に大きなタンパク質調製物を処理するためにＵＶＣ技術が用いられている。例えば、米国特許出願公開第２０１００２０３６１０Ａ１号を参照のこと。ＵＶＣ技術は、望ましくない生物のＤＮＡ／ＲＮＡを攪乱するために、紫外線波長範囲のスペクトルにおける光の特性に依存する。ＵＶＣ線量であると見なされるＵＶＣ処理の強度は、光束の強度および液体がＵＶＣ光源に露光される時間によって決定される。提供されるＵＶＣ線量は、所望の生物の有効な不活性化に十分である必要があるが、線量が高すぎて、標的タンパク質の生成および品質を含むロバストなプロセスに必要とされる溶液の成分を攪乱するべきではない。培地のＵＶＣ処理はウイルス不活性化に有効な手段であるが、本発明者は、増殖する前にＵＶＣ光に露光された培地で増殖した細胞が、ＵＶＣ光に露光されていない培地と比較して減少したタンパク質力価を生成することを見出した。
【０００５】
それ故に、薬剤製造で用いる、ＵＶＣを処理することができる細胞培養培地、およびＵＶＣにより細胞培養培地を処理するための方法が当該技術分野において必要である。そのような方法は、貴重な細胞系をウイルス汚染から防ぎ、汚染された使用不可能な培地の結果として失われる経費を節約し、そのような細胞系によるタンパク質生成の効率を高めるのに特に有用であり得る。したがって、そのような方法の開発は、生物薬剤の製造において広い用途を有し得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１０／０２０３６１０号明細書
【発明の概要】
【０００７】
（ａ）ＵＶＣ光に露光される基本培地と、（ｂ）ＵＶＣ露光後、該基本培地に添加されるＵＶ感受性培地成分を含む添加剤パッケージと、を含む、細胞培養培地が本明細書に提供される。一実施形態では、基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含まない。別の実施形態では、添加剤パッケージは、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含む。更なる実施形態では、基本培地は、粉末または液体形態であり、添加剤パッケージは、粉末または液体形態である。なお別の実施形態では、培地は、哺乳動物細胞の培養に適しているが、一方、さらに別の実施形態では、培地は、昆虫細胞の培養に適している。
【０００８】
また、ＵＶＣに露光された細胞培養培地製剤を作製するための方法も、本明細書に提供され、該方法は、（ａ）基本培地をＵＶＣ光に露光するステップと、（ｂ）ＵＶ感受性成分を含む添加剤パッケージを該ＵＶＣに露光された基本培地に添加するステップと、を含む。一実施形態では、基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含まない。更なる実施形態では、添加剤パッケージは、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含む。別の実施形態では、ＵＶＣ光は、約２５４ｎｍの波長である。更なる実施形態では、基本培地は、約２５〜約３５０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される。なお別の実施形態では、基本培地は、約１２５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光され、一方、更なる実施形態では、基本培地は、約１７５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される。さらに別の実施形態では、基本培地をＵＶＣ光に露光する該ステップは、基本培地中のいずれかの非エンベロープウイルスの核酸を損傷するのに十分である。別の実施形態では、ＵＶＣ光は、薄膜ＵＶＣ反応器を用いて送達され、一方、更なる実施形態では、ＵＶＣ光は、螺旋ＵＶＣ反応器を用いて送達される。
【０００９】
また、タンパク質を生成するための方法が、本明細書に提供され、該方法は、（ａ）基本培地をＵＶＣ光に露光するステップと、（ｂ）ＵＶ感受性培地成分を含む添加剤パッケージを該ＵＶＣに露光された基本培地に添加するステップと、（ｃ）所望のタンパク質が生成されるように該ＵＶＣで処理された培地中で細胞を培養するステップと、を含む。一実施形態では、基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含まない。更なる実施形態では、添加剤パッケージは、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含む。別の実施形態では、ＵＶＣ光は、約２５４ｎｍの波長である。更なる実施形態では、基本培地は、約２５〜約３５０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される。なお別の実施形態では、基本培地は、約１２５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光され、一方、更なる実施形態では、基本培地は、約１７５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される。さらに別の実施形態では、基本培地をＵＶＣ光に露光するステップは、基本培地中のいずれかの非エンベロープウイルスの核酸を損傷するのに十分である。別の実施形態では、ＵＶＣ光は、薄膜ＵＶＣ反応器を用いて送達され、一方、更なる実施形態では、ＵＶＣ光は、螺旋ＵＶＣ反応器を用いて送達される。一実施形態では、細胞は、ＣＨＯ細胞である。更なる実施形態では、タンパク質は、組換えヒトエリスロポエチンである。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、実施例１からのＨＰＬＣ力価の結果を記載する。処理されていない対照培地および様々なＵＶＣで処理された培地群の結果を示す。Ｙ軸は、組換えヒトエリスロポエチン（ｍｇ／Ｌ）を示し、Ｘ軸は、３つの異なる収穫サイクルを示し、全収率も示す。
【図２】図２は、実施例１からのブラッドフォードアッセイの結果を記載する。処理されていない対照培地および様々なＵＶＣで処理された培地群の結果を示す。Ｙ軸は、組換えタンパク質（ｍｇ／Ｌ）を示し、Ｘ軸は、３つの異なる収穫サイクルを示し、全収率も示す。
【図３】図３は、実施例２からのＨＰＬＣ力価の結果を記載する。処理されていない対照培地および様々なＵＶＣで処理された培地群の結果を示す。Ｙ軸は、組換えヒトエリスロポエチン（ｍｇ／Ｌ）を示し、Ｘ軸は、３つの異なる収穫サイクルを示す。
【図４】図４は、実施例２からのブラッドフォードアッセイの結果を記載する。処理されていない対照培地および様々なＵＶＣで処理された培地群の結果を示す。Ｙ軸は、組換えタンパク質（ｍｇ／Ｌ）を示し、Ｘ軸は、３つの異なる収穫サイクルを示す。
【図５】図５は、実施例３からのＨＰＬＣ力価の結果を記載する。処理されていない対照培地および様々なＵＶＣで処理された培地群の結果を示す。Ｙ軸は、組換えヒトエリスロポエチン（ｍｇ／ＲＢ）を示し、Ｘ軸は、３つの異なる収穫サイクル、および収穫サイクルの合計を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本明細書で使用される項の見出しは、構成目的のためのみであり、そこに記載される主題を限定するように解釈されるべきではない。本出願において言及されるすべての参照は、参照によって本明細書に明確に組み込まれる。本明細書に特に規定されない限り、本発明に関連して使用される科学および技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈により特に必要とされない限り、単数形の用語は、複数形を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。
【００１２】
本発明は、ＵＶＣで処理することができる細胞培養培地の当該技術分野における必要性に取り組む。本発明の新規製剤および方法を開発する場合に、幾つかの障害を克服しなければならなかった。元の培地から開始して、ＵＶ感受性成分を元の培地から除去することによって、安定した新しい基本培地の製剤化を試みた。しかしながら、全く予想しなかったが、ＵＶ感受性成分を元の培地から除去することにより、ＵＶ感受性成分を含まない新しい基本培地と、ＵＶ感受性成分を含む添加剤パッケージとの両方において、ある特定の不安定かつ溶解性の問題をもたらすことが見出された。
【００１３】
別々の混合物の挙動を予測できないことは、混合物内の多くの構成物質の中およびその間の化学的相互作用に由来する。より具体的には、添加剤パッケージを用いた溶解性の問題は、自己緩衝系におけるプロトンの相互作用に由来すると考えられている。さらに、新しい基本培地および添加剤パッケージを用いる不安定性の問題はまた、ＵＶＣ放射線への露光によって生成され得る、活性酸素種等を通じて他の相互作用に由来し得る。
【００１４】
予想外に、添加剤パッケージが安定していなかったことを見出した。添加剤パッケージは、元来、元の基本培地から除去された場合に、可溶性でも、熱的に安定していなかった。元の培地と同様の安定性を回復するために、滴定剤を添加することによって、混合物のｐＨを調節して、可溶性で安定にすることが必要であった。
【００１５】
更に予想外の順守が、ＵＶで処理した場合にＵＶ感受性成分を含まない新しい基本培地における相互作用に関与し、基本培地の主な成分への損傷をもたらした。添加剤パッケージ内の成分が、通常、元の培地中の反応種を反応停止させ、それによって、ＵＶからそれを防ぐため、この損傷は、予測可能でない。可能性のある反応停止剤が添加剤パッケージ内に入れられるため、新しい基本培地内に存在しない可能性のある反応停止剤の非限定例には、ピリドキサルおよびピリドキサルが含まれる。更なる反応停止剤の不在により損傷され得る新しい基本培地内に残留する反応停止剤の非限定例には、ピルビン酸塩が含まれる。更なる反応停止剤の不在により損傷され得る新しい基本培地内に残留する主な成分の非限定例には、ウシ胎仔血清タンパク質が含まれる。
【００１６】
しかしながら、驚いたことには、添加剤パッケージは、複合混合物（例えば、元の基本培地）のようなある特定の態様において自己安定化される。添加剤パッケージの天然ｐＨは、約６．７であり、これは基本培地とほぼ同一である。
【００１７】
更なる予想外の効果は、ＵＶＣ反応器の種類および関連した線量分布に関与する。幾つかのプロセスのＵＶＣ反応器、例えば、層流および薄膜反応器は、広範な線量分布をもたらし、一般的には、高線量テールを有する。新しい培地は、この広範な分布（および露光過度）を受けるが、驚くべきことに、力価改善によって証明されるように著しく損傷しない。先行研究は、薄膜反応器と比較して、蜜な線量分布を生じる螺旋ＵＶＣ反応器を使用した。これらの研究は、ＵＶＣ処理が、力価（産物濃度）の減少をもたらすことを示した。元の培地が薄膜ＵＶＣで処理された場合、結果は、全プロセスの失敗、すなわち、ローラーボトルへの細胞付着の完全な欠如および細胞増殖の欠如であった。
【００１８】
したがって、一態様では、本発明は、ＵＶＣ露光に適している細胞培養培地を提供し、該培地は、基本培地と、ＵＶＣ露光後、基本培地に添加されるＵＶ感受性培地成分を含む添加剤パッケージと、を含む。更なる態様では、本発明は、ＵＶＣに露光された細胞培養培地製剤を作製するための方法を更に提供し、該方法は、基本培地を製剤化するステップと、基本培地をＵＶＣ光に露光するステップと、ＵＶ感受性成分を含む添加剤パッケージをＵＶＣに露光された基本培地に添加するステップと、を含む。別の態様では、本発明は、タンパク質を生成するための方法を更に提供し、該方法は、基本培地をＵＶＣ光に露光するステップと、ＵＶ感受性培地成分を含む添加剤パッケージをＵＶＣに露光された基本培地に添加するステップと、所望のタンパク質が生成されるようにＵＶＣで処理された培地中で細胞を培養するステップと、を含む。
【００１９】
ＵＶ感受性培地成分
以下の本明細書でさらに論じられるように、細胞培養培地は、インビトロ設定における細胞増殖を支持する多くの異なる成分を含む。ある特定の培地成分は、ＵＶＣ光に感受性があり、ＵＶＣ光に露光される場合に分解されることが見出されている。これは、同様に、細胞培養物からのタンパク質生成の低下をもたらす。細胞培養培地のＵＶＣ処理で観察されるタンパク質産物力価へのこの有害な影響を克服するために、ＵＶＣ露光に適している新しい基本培地が必要とされる。したがって、本発明の目的は、ＵＶ感受性成分を含まない基本培地と、ＵＶ感受性成分を含む添加剤パッケージとを提供することである。本明細書で使用されるとき、「基本培地」とは、ある特定のＵＶ感受性成分を含まない、液体、粉末、または他の形態の細胞培養培地を指す。本明細書で使用されるとき、「添加剤パッケージ」とは、基本培地がＵＶＣ光に露光された後に、基本培地に添加されるべき、液体、粉末、または他の形態のＵＶ感受性成分（複数可）を指す。
【００２０】
一実施形態では、基本培地は、粉末形態であり、添加剤パッケージは、粉末形態である。別の実施形態では、基本培地は、粉末形態であり、添加剤パッケージは、液体形態である。なお別の実施形態では、基本培地は、液体形態であり、添加剤パッケージは、粉末形態である。別の実施形態では、基本培地は、液体形態であり、添加剤パッケージは、液体形態である。
【００２１】
一実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２（シアノコバラミン）からなる群から選択される少なくとも１個の成分を含まない液体培地である。別の実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも２個の成分を含まない液体培地である。一実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも３個の成分を含まない液体培地である。更なる実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも４個の成分を含まない液体培地である。なお更なる実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも５個の成分を含まない液体培地である。また更なる実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも６個の成分を含まない液体培地である。一実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも７個の成分を含まない液体培地である。なお別の実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも８個の成分を含まない液体培地である。更なる実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも９個の成分を含まない液体培地である。また更なる実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１０個の成分を含まない液体培地である。なお別の実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１１個の成分を含まない液体培地である。一実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１２個の成分を含まない液体培地である。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２を含まない液体培地である。
【００２２】
一実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個の成分を含まない粉末培地である。別の実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも２個の成分を含まない粉末培地である。なお別の実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも３個の成分を含まない粉末培地である。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも４個の成分を含まない粉末培地である。更なる実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも５個の成分を含まない粉末培地である。なお更なる実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも６個の成分を含まない粉末培地である。また更なる実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも７個の成分を含まない粉末培地である。なお別の実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも８個の成分を含まない粉末培地である。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも９個の成分を含まない粉末培地である。別の実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１０個の成分を含まない粉末培地である。更なる実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１１個の成分を含まない粉末培地である。なお更なる実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１２個の成分を含まない粉末培地である。また更なる実施形態では、ＵＶＣ露光に適している基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２を含まない粉末培地である。
【００２３】
一実施形態では、添加剤パッケージは、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個の成分を含む液体である。別の実施形態では、添加剤パッケージは、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも２個の成分を含む液体である。さらに別の実施形態では、添加剤パッケージは、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも３個の成分を含む液体である。なお別の実施形態では、添加剤パッケージは、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも４個の成分を含む液体である。また更なる実施形態では、添加剤パッケージは、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも５個の成分を含む液体である。更なる実施形態では、添加剤パッケージは、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも６個の成分を含む液体である。また更なる実施形態では、添加剤パッケージは、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも７個の成分を含む液体である。一実施形態では、添加剤パッケージは、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも８個の成分を含む液体である。別の実施形態では、添加剤パッケージは、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも９個の成分を含む液体である。なお別の実施形態では、添加剤パッケージは、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１０個の成分を含む液体である。さらに別の実施形態では、添加剤パッケージは、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１１個の成分を含む液体である。なお更なる実施形態では、添加剤パッケージは、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１２個の成分を含む液体である。別の実施形態では、添加剤パッケージは、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２を含む液体である。
【００２４】
一実施形態では、添加剤パッケージは、粉末であり、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個の成分を含む。さらに別の実施形態では、添加剤パッケージは、粉末であり、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも２個の成分を含む。一実施形態では、添加剤パッケージは、粉末であり、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも３個の成分を含む。また更なる実施形態では、添加剤パッケージは、粉末であり、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも４個の成分を含む。なお別の実施形態では、添加剤パッケージは、粉末であり、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも５個の成分を含む。さらに別の実施形態では、添加剤パッケージは、粉末であり、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも６個の成分を含む。なお別の実施形態では、添加剤パッケージは、粉末であり、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも７個の成分を含む。更なる実施形態では、添加剤パッケージは、粉末であり、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも８個の成分を含む。なお別の実施形態では、添加剤パッケージは、粉末であり、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも９個の成分を含む。また更なる実施形態では、添加剤パッケージは、粉末であり、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１０個の成分を含む。なお別の実施形態では、添加剤パッケージは、粉末であり、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１１個の成分を含む。さらに別の実施形態では、添加剤パッケージは、粉末であり、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１２個の成分を含む。別の実施形態では、添加剤パッケージは、粉末であり、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２を含む。
【００２５】
更なる実施形態では、本発明は、ＵＶＣ露光に適している基本培地と、添加剤パッケージと、を含むキットに関する。
【００２６】
一実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個の成分を更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加する。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも２個の成分を更に含み、これらをＵＶＣに露光された基本培地に添加する。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも４個の成分を更に含み、これらをＵＶＣに露光された基本培地に添加する。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも５個の成分を更に含み、これらをＵＶＣに露光された基本培地に添加する。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも６個の成分を更に含み、これらをＵＶＣに露光された基本培地に添加する。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも７個の成分を更に含み、これらをＵＶＣに露光された基本培地に添加する。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも８個の成分を更に含み、これらをＵＶＣに露光された基本培地に添加する。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも９個の成分を更に含み、これらをＵＶＣに露光された基本培地に添加する。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１０個の成分を更に含み、これらをＵＶＣに露光された基本培地に添加する。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１１個の成分を更に含み、これらをＵＶＣに露光された基本培地に添加する。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１２個の成分を更に含み、これらをＵＶＣに露光された基本培地に添加する。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２を更に含み、これらをＵＶＣに露光された基本培地に添加する。
【００２７】
ＵＶ感受性成分の濃度の以下の説明において、特定の濃度および濃度の範囲は、１倍培地の最終濃度である。当業者は、２倍培地溶液（すなわち、所定の濃度および範囲の２倍）、３倍培地溶液（すなわち、所定の濃度の３倍）等の必要な濃度を容易に想定し得る。
【００２８】
一実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、葉酸を更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．１〜約１０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、葉酸を更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．５〜約５．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、葉酸を更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１．０〜約３．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、葉酸を更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２．０〜約３．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、葉酸を更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。更なる実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、葉酸を更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２．５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、葉酸を更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約３．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。
【００２９】
一実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ヒスチジンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１．０〜約１００．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ヒスチジンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１０．０〜約９０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ヒスチジンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１０．０〜約８０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ヒスチジンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１０．０〜約７０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ヒスチジンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１５．０〜約５５．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ヒスチジンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２０．０〜約５０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ヒスチジンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２５．０〜約４０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ヒスチジンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２５．０〜約３５．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ヒスチジンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約３０．０〜約３５．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ヒスチジンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約３０．０〜約３３．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ヒスチジンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約３１．０〜約３２．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ヒスチジンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約３１．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ヒスチジンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約３２．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ヒスチジンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約３１．５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。
【００３０】
一実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、フェニルアラニンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１．０〜約１００．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、フェニルアラニンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１０．０〜約９０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、フェニルアラニンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１０．０〜約８０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、フェニルアラニンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１０．０〜約７０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、フェニルアラニンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１５．０〜約５５．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、フェニルアラニンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２０．０〜約５０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、フェニルアラニンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２５．０〜約４０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、フェニルアラニンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約３０．０〜約４０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、フェニルアラニンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約３２．０〜約３８．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、フェニルアラニンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約３４．０〜約３６．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、フェニルアラニンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約３５．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、フェニルアラニンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約３６．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、フェニルアラニンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約３５．５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。
【００３１】
一実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、トリプトファンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．１〜約５０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、トリプトファンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１．０〜約２０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、トリプトファンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約５．０〜約１５．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、トリプトファンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約８．０〜約１２．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、トリプトファンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約８．０〜約１０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、トリプトファンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約８．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、トリプトファンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約８．５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、トリプトファンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約９．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、トリプトファンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約９．５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。
【００３２】
一実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チロシンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１．０〜約１００．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チロシンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１０．０〜約９０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チロシンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２０．０〜約８０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チロシンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約３０．０〜約７０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チロシンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約４０．０〜約６０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チロシンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約５０．０〜約６０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チロシンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約５３．０〜約５７．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チロシンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約５４．０〜約５６．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チロシンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約５５．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チロシンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約５５．５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チロシンを更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約６０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。
【００３３】
一実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸を更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．０１〜約１０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸を更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．０５〜約５．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸を更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．０８〜約０．１２ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸を更に含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．１００〜約０．１１０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸を含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．１０１〜約０．１０７ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸を含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．１０２〜約０．１０４ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸を含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．１０２ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸を含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．１０３ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リポ酸を含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．１０４ｍｇ／Ｌの濃度を得る。
【００３４】
一実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ナイアシンアミドを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．１〜約１０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ナイアシンアミドを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．５〜約５．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ナイアシンアミドを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１．０〜約３．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ナイアシンアミドを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１．５〜約２．５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ナイアシンアミドを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１．５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ナイアシンアミドを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ナイアシンアミドを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２．５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。
【００３５】
一実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ピリドキサルを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．１〜約１０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ピリドキサルを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．５〜約５．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ピリドキサルを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１．０〜約３．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ピリドキサルを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１．５〜約２．５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ピリドキサルを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１．５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ピリドキサルを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ピリドキサルを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２．５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。
【００３６】
一実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ピリドキシンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．０００１〜約１ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ピリドキシンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．００１〜約０．１ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ピリドキシンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．０１０〜約０．０５０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ピリドキシンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．０２０〜約０．０４０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ピリドキシンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．０２５〜約０．０３５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ピリドキシンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．０３０〜約０．０３５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ピリドキシンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．０３０〜約０．０３２ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ピリドキシンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．０３０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ピリドキシンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．０３１ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ピリドキシンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．０３２ｍｇ／Ｌの濃度を得る。
【００３７】
一実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リボフラビンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．０１〜約１０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リボフラビンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．０５〜約５．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リボフラビンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．１〜約１．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リボフラビンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．１〜約０．５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リボフラビンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．１〜約０．３ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リボフラビンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．１５〜約０．２５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リボフラビンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．２０〜約０．２３ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リボフラビンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．２１〜約０．２２ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リボフラビンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．２１０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リボフラビンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．２１３ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リボフラビンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．２１６ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、リボフラビンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．２１９ｍｇ／Ｌの濃度を得る。
【００３８】
一実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チアミンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．１〜約１０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チアミンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．５〜約５．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チアミンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１．０〜約３．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チアミンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約１．５〜約２．５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チアミンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２．０〜約２．３ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チアミンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２．１〜約２．２ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チアミンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チアミンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２．１ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、チアミンを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約２．２ｍｇ／Ｌの濃度を得る。
【００３９】
一実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、メトトレキサートを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．００００００１〜約０．００１ｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、メトトレキサートを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．０００００１〜約０．０００１ｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、メトトレキサートを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．００００１〜約０．０００１ｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、メトトレキサートを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．００００１〜約０．００００５ｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、メトトレキサートを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．００００２〜約０．００００４ｇ／Ｌの濃度を得る。
【００４０】
別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、メトトレキサートを含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．００００３ｇ／Ｌの濃度を得る。
【００４１】
一実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ビタミンＢ１２を含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．０１〜約１０．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ビタミンＢ１２を含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．０５〜約５．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ビタミンＢ１２を含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．１〜約１．０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ビタミンＢ１２を含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．３〜約０．８ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ビタミンＢ１２を含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．５〜約０．７５ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ビタミンＢ１２を含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．６〜約０．７ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ビタミンＢ１２を含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．６５〜約０．７０ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ビタミンＢ１２を含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．６７〜約０．６９ｍｇ／Ｌの濃度を得る。なお別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ビタミンＢ１２を含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．６７ｍｇ／Ｌの濃度を得る。さらに別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ビタミンＢ１２を含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．６８ｍｇ／Ｌの濃度を得る。別の実施形態では、ＵＶＣ光に露光された基本培地は、ビタミンＢ１２を含み、これをＵＶＣに露光された基本培地に添加して、約０．６９ｍｇ／Ｌの濃度を得る。
【００４２】
細胞、タンパク質、および細胞培養
一般に、細胞培養培地は、「基本培地」として本明細書で相互交換可能に称される、基本溶液または「基礎培地」を含有し、これに所望の成分のすべてが添加される。本発明の文脈において、「基本培地」は、ある特定のＵＶ感受性成分を含まない細胞培養培地を指す。以下に記載される基本培地は、概して、ＵＶ感受性成分を含むが、任意に、ある特定のＵＶ感受性成分を含まないように製剤化され得ることが理解されよう。例えば、ＲＰＭＩ１６４０が、本明細書で基本培地として開示される場合、それが、他の場合では一般に、ＲＰＭＩ１６４０中に見出されるある特定のＵＶ感受性成分を、任意に含まない場合があることが理解されよう。
【００４３】
一般に、「細胞を培養する培地」（「培養培地」、「細胞培養培地」、または「組織培養培地」とも称される）は、細胞、例えば、動物または哺乳動物細胞が増殖し、概して、以下の少なくとも１個以上の成分を提供する栄養溶液を指すことが当業者によって理解され、知られている用語である：エネルギー源（通常、グルコース等の炭水化物の形態で）；すべての必須アミノ酸、および概して、２０種の塩基性アミノ酸＋システイン；ビタミンおよび／もしくは一般的には低濃度で必要とされる他の有機化合物；脂質もしくは遊離脂肪酸、例えばリノール酸；ならびに、微量元素、例えば、一般的に、非常に低濃度で、通常、ミクロモル範囲で必要とされる無機化合物または天然元素。細胞培養培地はまた、様々な任意の成分、例えば、ホルモンおよび他の成長因子、例えば、インスリン、トランスフェリン、上皮成長因子、血清等；塩、例えばカルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩、ならびに緩衝液、例えばＨＥＰＥＳ；ヌクレオシドおよび塩基、例えばアデノシン、チミジン、ヒポキサンチン；ならびにタンパク質および組織加水分解物、例えば加水分解動物タンパク質（動物副産物、精製ゼラチン、または植物材料から得ることができるペプトンまたはペプトン混合物）；抗生物質、例えばゲンタマイシン；ならびに細胞保護剤、例えばＰｌｕｒｏｎｉｃポリオール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８）を含むように添加することもできる。ある特定の実施形態では、細胞培養培地は、無血清であり、動物起源の産物または成分を含まない。
【００４４】
当業者により理解されるように、動物または哺乳動物細胞は、培養される特定の細胞に適しており、過度な実験を行うことなく当業者によって決定され得る培地中で培養される。市販の培地を利用することができ、Ｉｓｃｏｖｅ改変ダルベッコ培地、ＲＰＭＩ１６４０、最小必須培地α（ＭＥＭ-α）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、ＤＭＥ／Ｆ１２、αＭＥＭ、基礎培地イーグル＋イーグルの緩衝生理食塩溶液、ＤＭＥＭ高グルコース（グルタミン含有）、ＤＭＥＭ高グルコース（グルタミン不含）、ＤＭＥＭ低グルコース（グルタミン不含）、ＤＭＥＭ：Ｆ１２  １：１（グルタミン含有）、ＧＭＥＭ（グラスゴーＭＥＭ）、ＧＭＥＭ（グルタミン含有）、グレース完全昆虫培地、グレース昆虫培地（ＦＢＳ不含）、ハムＦ−１０（グルタミン含有）、ハムＦ−１２（グルタミン含有）、ＩＭＤＭ（ＨＥＰＥおよびグルタミン含有）、ＩＭＤＭ（ＨＥＰＥＳ含有するが、グルタミン不含）、ＩＰ４１昆虫培地、１５（Ｌｅｉｂｏｖｉｔｚ）（２Ｘ）（グルタミンまたはフェノールレッド不含）、１５（Ｌｅｉｂｏｖｉｔｚ）（グルタミン不含）、マッコイ５Ａ改変培地、培地１９９、ＭＥＭイーグル（グルタミンまたはフェノールレッド（２Ｘ）不含）、ＭＥＭイーグル−イーグルの緩衝生理食塩溶液（グルタミン含有）、ＭＥＭイーグル−イーグルの緩衝生理食塩溶液（グルタミン不含）、ＭＥＭイーグル−ハンクス緩衝生理食塩溶液（グルタミン不含）、ＮＣＴＣ−１０９（グルタミン含有）、ＲｉｃｈｔｅｒのＣＭ培地（グルタミン含有）、ＲＰＭＩ１６４０（ＨＥＰＥＳ、グルタミン、および／もしくはペニシリン−ストレプトマイシン含有）、ＲＰＭＩ１６４０（グルタミン含有）、ＲＰＭＩ１６４０（グルタミン不含）、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒの昆虫培地、あるいは当業者に知られている任意の他の培地が挙げられるが、これらに限定されず、これらは特定細胞種について製剤化される。必要または所望に応じて、および当業者によって知られており、日常的な技術を用いて実施されるように、前述の例示的な培地に、適切な濃度または量の任意の成分を含む、追加成分または構成要素を添加することができる。
【００４５】
さらに、本発明の方法に適している細胞培養条件は、細胞のバッチ、供給バッチ、または連続培養に一般的に使用され、知られているものであり、ｐＨ、溶解酸素（Ｏ２）および二酸化炭素（ＣＯ２）、撹拌および湿度、ならびに温度に注意を払う。
【００４６】
本発明の組成物は、様々な細胞を培養するために使用することができる。一実施形態では、この培地を用いて、植物および／または動物細胞等の真核細胞を培養する。これらの細胞は、哺乳動物細胞、魚細胞、昆虫細胞、両生類細胞、または鳥類細胞であり得る。この培地を用いて、ＭＫ２．７細胞、ＰＥＲ−Ｃ６細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ細胞およびＳｐ２／０細胞、５Ｌ８ハイブリドーマ細胞、Ｄａｕｄｉ細胞、ＥＬ４細胞、ＨｅＬａ細胞、ＨＬ−６０細胞、Ｋ５６２細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、ＴＨＰ−１細胞、Ｓｐ２／０細胞、一次上皮細胞（例えば、ケラチン生成、頸部上皮細胞、気管支上皮細胞、気管上皮細胞、腎臓上皮細胞、および網膜上皮細胞）、樹立した細胞株およびそれらの菌株（例えば、２９３胚腎臓細胞、ＢＨＫ細胞、ＨｅＬａ頸部上皮細胞、およびＰＥＲ−Ｃ６網膜細胞、ＭＤＢＫ（ＮＢＬ−１）細胞、９１１細胞、ＣＲＦＫ細胞、ＭＤＣＫ細胞、ＢｅＷｏ細胞、Ｃｈａｎｇ細胞、Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２細胞、ＨｅＬａ２２９細胞、ＨｅＬａ  Ｓ３細胞、Ｈｅｐ−２細胞、ＫＢ細胞、ＬＳ１８０細胞、ＬＳ１７４Ｔ細胞、ＮＣＩ−Ｈ−５４８細胞、ＲＰＭＩ２６５０細胞、ＳＷ−１３細胞、Ｔ２４細胞、ＷＩ−２８  ＶＡ１３、２ＲＡ細胞、ＷＩＳＨ細胞、ＢＳ−Ｃ−Ｉ細胞、ＬＬＣ−ＭＫ２細胞、クローンＭ−３細胞、１−１０細胞、ＲＡＧ細胞、ＴＣＭＫ−１細胞、Ｙ−１細胞、ＬＬＣ−ＰＫ１細胞、ＰＫ（１５）細胞、ＧＨ１細胞、ＧＨ３細胞、Ｌ２細胞、ＬＬＣ−ＲＣ２５６細胞、ＭＨ１Ｃ１細胞、ＸＣ細胞、ＭＤＯＫ細胞、ＶＳＷ細胞、およびＴＨ−Ｉ、Ｂ１細胞、またはそれらの誘導体）、任意の組織もしくは器官（例えば、限定されないが、心臓、肝臓、腎臓、結腸、腸、食道、胃、神経組織（脳、脊髄）、肺、血管組織（動脈、静脈、毛細血管）、リンパ系組織（リンパ腺、アデノイド、扁桃、骨髄、および血管）、膵臓由来の線維芽細胞、ならびに線維芽細胞株および線維芽様細胞株（例えば、ＴＲＧ−２細胞、ＩＭＲ−３３細胞、Ｄｏｎ細胞、ＧＨＫ−２１細胞、シトルリン血症細胞、Ｄｅｍｐｓｅｙ細胞、Ｄｅｔｒｏｉｔ５５１細胞、Ｄｅｔｒｏｉｔ５１０細胞、Ｄｅｔｒｏｉｔ５２５細胞、Ｄｅｔｒｏｉｔ５２９細胞、Ｄｅｔｒｏｉｔ５３２細胞、Ｄｅｔｒｏｉｔ５３９細胞、Ｄｅｔｒｏｉｔ５４８細胞、Ｄｅｔｒｏｉｔ５７３細胞、ＨＥＬ２９９細胞、ＩＭＲ−９０細胞、ＭＲＣ−５細胞、ＷＩ−３８細胞、ＷＩ−２６細胞、ＭｉＣｌ１細胞、ＣＶ−１細胞、ＣＯＳ−１細胞、ＣＯＳ−３細胞、ＣＯＳ−７細胞、Ｖｅｒｏ細胞、ＤＢＳ−ＦｒｈＬ−２細胞、ＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞、Ｆ９細胞、ＳＶ−Ｔ２細胞、Ｍ−ＭＳＶ−ＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞、Ｋ−ＢＡＬＢ細胞、ＢＬＯ−１１細胞、ＮＯＲ−１０細胞、Ｃ３Ｈ／ＩＯＴＩ／２細胞、ＨＳＤＭ１Ｃ３細胞、ＫＬＮ２０５細胞、ＭｃＣｏｙ細胞、マウスＬ細胞、２０７１系統（マウスＬ）細胞、Ｌ−Ｍ系統（マウスＬ）細胞、Ｌ−ＭＴＫ（マウスＬ）細胞、ＮＣＴＣクローン２４７２および２５５５、ＳＣＣ−ＰＳＡ１細胞、Ｓｗｉｓｓ／３Ｔ３細胞、Ｉｎｄｉａｎ  ｍｕｎｔａｃ細胞、ＳＩＲＣ細胞、ＣＩＩ細胞、ならびにＪｅｎｓｅｎ細胞、またはそれらの誘導体）、あるいは当業者に知られている任意の他の細胞型が挙げられるが、これらに限定されない、細胞を培養することができる。
【００４７】
本明細書に開示される培地を用いて、懸濁液中の細胞または付着細胞を培養することができる。本発明の組成物は、細胞の、付着、単層、または懸濁培養、トランスフェクション、および栽培のいずれか、ならびに単層または懸濁培養における細胞中のタンパク質または抗体の発現に適している。
【００４８】
本発明の培地によって支持される細胞は、マウスまたはハムスターまたはヒト等の任意の動物に由来し得る。本発明の培地中で培養された細胞は、正常細胞または異常細胞（すなわち、形質転換細胞、樹立細胞、または罹患組織サンプル由来の細胞）であり得る。
【００４９】
動物細胞、哺乳動物細胞、培養細胞、動物または哺乳動物宿主細胞、宿主細胞、組換え細胞、組換え宿主細胞等は、本発明のプロセスに従って培養することができる細胞に対するすべての用語である。そのような細胞は、一般的に、哺乳動物から得られるまたはそれに由来する細胞株であり、適切な栄養および／または成長因子を含む培地中の単層培養または懸濁培養のいずれかに入れる場合に増殖および生存することができる。特定の細胞培養の成長および維持に必要な成長因子および栄養は、例えば、Ｂａｒｎｅｓ  ａｎｄ  Ｓａｔｏ、（１９８０，Ｃｅｌｌ，２２：６４９）、Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ，Ｅｄ．Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９８４、および米国特許第５，７２１，１２１号に記載されるように、関連技術分野において当業者により容易に実験的に決定することができる。
【００５０】
多くの細胞種を本発明の方法に従って培養することができる。細胞は、一般的に、培養培地中に大量の特定のタンパク質、より具体的には、所望の糖タンパク質を発現および分泌することができるか、または発現および分泌するために分子的に操作することができる動物または哺乳動物細胞である。宿主細胞によって生成される糖タンパク質は、宿主細胞に内因性または同種であり得る。あるいは、糖タンパク質は、宿主細胞に異種、すなわち、外来性、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）宿主細胞によって生成および分泌されるヒト糖タンパク質である。さらに、哺乳動物糖タンパク質、すなわち、本来、哺乳動物生物から得られるか、またはそれに由来するものが本発明の方法によって得られ、細胞によって培養培地内に分泌され得る。
【００５１】
本発明の方法によって好都合に生成することができる哺乳動物糖タンパク質の非限定例には、融合またはキメラタンパク質を含む、サイトカイン、サイトカイン受容体、成長因子（例えば、ＥＧＦ、ＨＥＲ−２、ＦＧＦ−α、ＦＧＦ−β、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、ＰＤＧＦ、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、ＮＧＦ、ＮＧＦ−β）、成長因子受容体が含まれる。他の非限定例には、成長ホルモン（例えば、ヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン）；インスリン（例えば、インスリンＡ鎖およびインスリンＢ鎖）、プロインスリン；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；ダーベポエチン、コロニー刺激因子（例えば、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ）；インターロイキン（例えば、ＩＬ−１〜ＩＬ−１２）；血管上皮成長因子（ＶＥＧＦ）およびその受容体（ＶＥＧＦ−Ｒ）；インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−α、β、もしくはγ）；腫瘍壊死因子（例えば、ＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−β）およびそれらの受容体、ＴＮＦＲ−１およびＴＮＦＲ−２；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；トロンビン；脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）；凝固因子（例えば、因子ＶＩＩＩ、因子ＩＸ、フォンウィルブランド因子等）；抗凝固因子；組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、例えば、ウロキナーゼまたはヒト尿または組織型ＴＰＡ；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）；黄体形成ホルモン（ＬＨ）；カルシトニン；ＣＤタンパク質（例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ１９等）；ＣＴＬＡタンパク質（例えば、ＣＴＬＡ４）；Ｔ細胞およびＢ細胞受容体タンパク質；骨形成タンパク質（ＢＮＰ、例えば、ＢＭＰ−１、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−３等）；神経栄養因子、例えば、骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）；ニューロトロフィン、例えば、３−６；レニン；リウマチ因子；ＲＡＮＴＥＳ；アルブミン；レラキシン；マクロファージ阻害タンパク質（例えば、ＭＩＰ−１、ＭＩＰ−２）；ウイルスタンパク質または抗原；表面膜タンパク質；イオンチャネルタンパク質；酵素；調節タンパク質；抗体；免疫調節タンパク質、（例えば、ＨＬＡ、ＭＨＣ、Ｂ７ファミリー）；ホーミング受容体；輸送タンパク質；スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）；Ｇ−タンパク質結合受容体タンパク質（ＧＰＣＲ）；神経調節タンパク質；アルツハイマー病関連タンパク質およびペプチド、（例えばＡ−ベータ）、および当該技術分野で知られている他のものが含まれる。融合タンパク質およびポリペプチド、キメラタンパク質およびポリペプチド、ならびに前述のタンパク質およびポリペプチドのうちのいずれかの断片もしくは部分、または突然変異体、変異体、または類似体もまた、本発明の方法によって生成することができる好適なタンパク質、ポリペプチド、およびペプチドに含まれる。
【００５２】
次の単離および／または精製のためにタンパク質を保持、発現、および生成するのに適した動物または哺乳動物宿主細胞の非限定例には、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、例えば、ＣＨＯ−Ｋ１（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−６１）、ＤＧ４４（Ｃｈａｓｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｓｏｍ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌｅｃ．Ｇｅｎｅｔ．，１２：５５５−５５６、Ｋｏｌｋｅｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３６：１０９０１−１０９０９、および第ＷＯ０１／９２３３７  Ａ２号）、ジヒドロ葉酸還元酵素陰性ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ／−ＤＨＦＲ，Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６）、およびｄｐ１２．ＣＨＯ細胞（米国特許第５，７２１，１２１号）；ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎ＣＶ１細胞（ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ−７，ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６５１）；ヒト胚腎細胞（例えば、２９３細胞、または懸濁培養中での増殖のためにサブクローンした２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９７７，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，３６：５９）；新生仔ハムスター腎細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１０）；サル腎細胞（ＣＶ１、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−７０）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７；ＶＥＲＯ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−８１）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４，Ｍａｔｈｅｒ，１９８０，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．，２３：２４３−２５１）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２）；イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−３４）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−７５）；ヒト肝臓細胞（ＨＥＰ−Ｇ２、ＨＢ８０６５）；マウス乳腺腫瘍細胞（ＭＭＴ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−５１）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１４４２）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ，１９８２，Ａｎｎａｌｓ  ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，３８３：４４−６８）；ＭＣＲ５細胞；ＦＳ４細胞が含まれる。
【００５３】
本発明の方法およびプロセスを用いて培養するのに適している細胞は、培養プロセスにおいて発現および生成するためのタンパク質をコードするコード配列またはその部分を保持する、導入（例えば、形質転換、トランスフェクション、感染、または注入による）、発現ベクター（構築物）、プラスミド等を含むことができる。そのような発現ベクターは、挿入されるコード配列の転写および翻訳のための必要な要素を含む。当業者によく知られ、実施されている方法を用いて、生成されたタンパク質およびポリペプチドをコードする配列、ならびに適切な転写および翻訳制御要素を含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、およびインビボ遺伝子組換えが含まれる。そのような技術は、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．、およびＦ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙに記載されており、これらのすべては、いかなる目的のために、本明細書に組み込まれる。
【００５４】
懸濁液中または単層培養物中の哺乳動物細胞の培養に加えて、本培地および方法は、哺乳動物細胞からウイルスを生成するための方法に使用され得る。本発明の本態様に従ってそのような方法は、（ａ）ウイルスに感染する哺乳動物細胞を得ることと、（ｂ）ウイルスによる細胞の感染を促進するのに適している条件下で、細胞をウイルスと接触させることと、（ｃ）細胞によるウイルスの生成を促進するのに適している条件下で、本発明の培養培地中で細胞を培養することと、を含む。本発明に従って、細胞は、本発明の培養培地中で、細胞の培養前、培養中、または培養後のいずれかでウイルスと接触し得、哺乳動物細胞をウイルスに感染させるための最適方法は、当該技術分野で公知であり、当業者にはよく知られている。本発明の培地中の懸濁液中で培養されたウイルス感染した哺乳動物細胞は、本発明の培地中の懸濁液中で培養されない細胞よりも高いウイルス力価（例えば、２倍、３倍、５倍、１０倍、２０倍、２５倍、５０倍、１００倍、２５０倍、５００倍、または１０００倍高い力価）を生成することが期待され得る。これらの方法を用いて、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、インフルエンザウイルス、およびワクチン製造のための他のウイルス等が挙げられるが、これらに限定されない、様々な哺乳動物ウイルスおよびウイルスベクターを生成することができる。本培地中で感染した細胞を培養した後、ウイルス、ウイルスベクター、ウイルス粒子、またはそれらの成分（タンパク質および／または核酸（ＤＮＡおよび／もしくはＲＮＡ））を含む使用された培養培地は、ワクチン生産、細胞トランスフェクションまたは遺伝子治療に用いるウイルスベクターの生産、動物または細胞培養の感染、ウイルスタンパク質および／または核酸の研究等を含む、様々な目的のために使用することができる。あるいは、ウイルス、ウイルスベクター、ウイルス粒子、またはそれらの成分は、任意に、当業者によく知られているであろうタンパク質および／または核酸の単離に関する技術に従って使用された培養培地から単離することができる。
【００５５】
細胞培養の種類
限定されるものではないが理解のために、当業者は、タンパク質生成のための細胞培養および培養実行には３つの一般的種類、すなわち、連続培養、バッチ培養、および供給バッチ培養を含むことができることが理解されよう。連続培養において、例えば、新鮮な培養培地の補充（すなわち供給培地）が培養期間中細胞に提供され、一方、古い培養培地は毎日除去され、産物が、例えば毎日または連続的に収穫される。連続培養において、供給培地を毎日加えることができ、また連続的に、すなわち点滴または注入で加えることができる。連続培養では、細胞は生存したままであり、環境および培養条件が維持されるかぎり、この細胞は所望の長さで培養中にとどまることができる。
【００５６】
バッチ培養において、細胞は最初に、培地中で培養され、この培地は除去も、交換も、添加もされない。すなわち、培養実行中またはその終了前に、細胞に新しい培地は「供給（ｆｅｄ）」されない。所望の産物は、培養行程の終了時に収穫される。
【００５７】
供給バッチ培養では、培養実行時間は、その実行中に新しい培地を毎日１回以上（または連続的に）添加することにより増加させる。すなわち、培養期間中、細胞に新しい培地（「供給培地」）が供給される。供給バッチ培養は、上記の様々な供給計画および時間、例えば、毎日、１日おき、２日おき等、１日に１回より多く、または１日に１回未満等を含むことができる。さらに、供給バッチ培養に、供給培地を連続的に供給することができる。次いで、所望の産物は、培養／生産実行の終了時に収穫される。
【００５８】
本発明によれば、動物または哺乳動物細胞培養のために従来使用される培養容器および／または培養装置を用いて、大規模または小規模のタンパク質の生産のための条件下で、細胞培養を実行することができ、糖タンパク質を細胞によって生産することができる。当業者によって理解されるように、組織培養皿、Ｔフラスコ、およびスピナーフラスコは、一般に、実験室規模で使用される。より大規模（例えば、５００Ｌ、１０００Ｌ、２０００Ｌ、５０００Ｌ、１００００Ｌ等）に培養するために、発酵槽型タンク培養装置、エアーリフト型培養装置、流動層型バイオリアクター、中空糸型バイオリアクター、ローラーボトル培養、撹拌タンクバイオリアクターシステム、充填槽型培養装置、または当業者に知られている任意の他の適切な装置が挙げられるが、これらに限定されない、手順を使用することができる。ローラーボトルまたは撹拌タンクバイオリアクターシステムとともにマイクロキャリアを用いても用いなくてもよい。該システムは、バッチ、連続、または供給バッチ様式で操作することができる。さらに、培養装置またはシステムは、フィルター、重力、遠心力等を用いる細胞分離器を装備してもしていなくてもよい。
【００５９】
一実施形態では、細胞培養基本培地を、ＵＶＣ光に露光し、次いで、必要になるまで保存し、この時点で、添加剤パッケージを、細胞培養中で使用する前に、ＵＶＣに露光された基本培地に添加する。別の実施形態では、細胞培養基本培地は、保存に間に合うように中断することなく、段階的プロセスの一部として添加剤パッケージをＵＶＣに露光された基本培地に添加する、自動プロセスの一部として処理される。当業者は、基本培地をＵＶＣ露光し、続いて、ある時点で、添加剤パッケージを添加する必要なステップを用いる、このＵＶＣ露光プロセスが生じ得る方法をいくらでも容易に想定するであろう。
【００６０】
ＵＶ光
「紫外線光」という用語は、Ｘ線領域（１００ｎｍ）から可視領域（４００ｎｍ）に及ぶ、光の電磁スペクトルの部分を指す。特に、紫外線光は、一般に、４つの部分に分けられる。（１）１００〜２００ｎｍの波長を有する真空紫外線光、（２）２００〜２８０ｎｍの波長を有する紫外線Ｃ（ＵＶＣ）、（３）２８０〜３１５ｎｍの波長を有する紫外線Ｂ（ＵＶＢ）、および（４）３１５〜４００ｎｍの波長を有する紫外線Ａ（ＵＶＡ）。一実施形態では、細胞培養培地を培養装置（例えばバイオリアクター）内に導入する前に、細胞培養基本培地は、ＵＶＣ光に露光される。
【００６１】
本発明の一実施形態では、細胞培養培地をバイオリアクター内に導入する前に、細胞培養培地は、２００ｎｍ〜２８０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。別の実施形態では、細胞培養培地は、２００ｎｍ〜２７５ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。更なる実施形態では、細胞培養培地は、２００ｎｍ〜２７０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。なお別の実施形態では、細胞培養培地は、２００ｎｍ〜２６５ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。また更なる実施形態では、細胞培養培地は、２００ｎｍ〜２６０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。別の実施形態では、細胞培養培地は、２００ｎｍ〜２５５ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。更なる実施形態では、細胞培養培地は、２００ｎｍ〜２５０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。なお別の実施形態では、細胞培養培地は、２００ｎｍ〜２４５ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。さらに別の実施形態では、細胞培養培地は、２００ｎｍ〜２４０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。更なる実施形態では、細胞培養培地は、２００ｎｍ〜２３５ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。一実施形態では、細胞培養培地は、２００ｎｍ〜２３０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。別の実施形態では、細胞培養培地は、２００ｎｍ〜２２５ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。なお別の実施形態では、細胞培養培地は、２００ｎｍ〜２２０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。さらに別の実施形態では、細胞培養培地は、２００ｎｍ〜２１５ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。なお別の実施形態では、細胞培養培地は、２００ｎｍ〜２１０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。更なる実施形態では、細胞培養培地は、２００ｎｍ〜２０５ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。なお更なる実施形態では、細胞培養培地は、２０５ｎｍ〜２８０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。また更なる実施形態では、細胞培養培地は、２１０ｎｍ〜２８０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。なお更なる実施形態では、細胞培養培地は、２１５ｎｍ〜２８０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。また更なる実施形態では、細胞培養培地は、２２０ｎｍ〜２８０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。別の実施形態では、細胞培養培地は、２２５ｎｍ〜２８０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。更なる実施形態では、細胞培養培地は、２３０ｎｍ〜２８０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。さらに別の実施形態では、細胞培養培地は、２３５ｎｍ〜２８０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。別の実施形態では、細胞培養培地は、２４０ｎｍ〜２８０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。なお更なる実施形態では、細胞培養培地は、２４５ｎｍ〜２８０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。別の実施形態では、細胞培養培地は、２５０ｎｍ〜２８０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。更なる実施形態では、細胞培養培地は、２５５ｎｍ〜２８０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。また更なる実施形態では、細胞培養培地は、２６０ｎｍ〜２８０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。一実施形態では、細胞培養培地は、２６５ｎｍ〜２８０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。なお別の実施形態では、細胞培養培地は、２７０ｎｍ〜２８０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。さらに別の実施形態では、細胞培養培地は、２７５ｎｍ〜２８０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。なお別の実施形態では、細胞培養培地は、２０５ｎｍ〜２７５ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。別の実施形態では、細胞培養培地は、２１０ｎｍ〜２７０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。また更なる実施形態では、細胞培養培地は、２１５ｎｍ〜２６５ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。別の実施形態では、細胞培養培地は、２２０ｎｍ〜２６０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。さらに別の実施形態では、細胞培養培地は、２２５ｎｍ〜２５５ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。なお別の実施形態では、細胞培養培地は、２３０ｎｍ〜２５０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。更なる実施形態では、細胞培養培地は、２３５ｎｍ〜２４５ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。なお別の実施形態では、細胞培養培地は、２４５ｎｍ〜２６５ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。別の実施形態では、細胞培養培地は、２４８ｎｍ〜２６０ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。なお更なる実施形態では、細胞培養培地は、２４９ｎｍ〜２５９ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。更なる実施形態では、細胞培養培地は、２５０ｎｍ〜２５８ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。また更なる実施形態では、細胞培養培地は、２５１ｎｍ〜２５７ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。なお別の実施形態では、細胞培養培地は、２５２ｎｍ〜２５６ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。別の実施形態では、細胞培養培地は、２５３ｎｍ〜２５５ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。
【００６２】
本発明の別の実施形態では、細胞培養培地をバイオリアクター内に導入する前に、細胞培養培地は、２５４ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。本発明の他の実施形態では、細胞培養培地は、２５４ｎｍ＋／−１ｎｍの波長、または２５４ｎｍ＋／−２ｎｍの波長、または２５４ｎｍ＋／−３ｎｍの波長、または２５４ｎｍ＋／−４ｎｍの波長、または２５４ｎｍ＋／−５ｎｍの波長、または２５４ｎｍ＋／−６ｎｍの波長、または２５４ｎｍ＋／−７ｎｍの波長、または２５４ｎｍ＋／−８ｎｍの波長、または２５４ｎｍ＋／−９ｎｍの波長、または２５４ｎｍ＋／−１０ｎｍの波長、または２５４ｎｍ＋／−１５ｎｍの波長、または２５４ｎｍ＋／−２０ｎｍの波長、または２５４ｎｍ＋／−２５ｎｍの波長を有するＵＶＣ光に露光される。
【００６３】
本明細書で使用される、「エネルギー」という用語は、処理される細胞培養培地が露光されるミリジュール／ｃｍ２またはジュール／メートル２単位の紫外線放射線量を指す。本発明の一実施形態では、細胞培養培地をバイオリアクター内に導入する前に、細胞培養培地は、２５〜３５０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、より好ましくは、６０〜２５０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、最も好ましくは、１００〜１５０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される。別の実施形態では、細胞培養培地をバイオリアクター内に導入する前に、細胞培養培地は、１２５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される。本発明の他の実施形態では、細胞培養培地は、１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−２ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−３ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−４ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−２０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−２５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−３０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−４０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−５０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−６０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−７０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−８０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−９０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１００ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１１０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１２０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される。本発明のなお他の実施形態では、細胞培養培地は、１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−２ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−３ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−４ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−２０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−２５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−３０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−４０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−５０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−６０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−７０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−８０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−９０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１００ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１１０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１２０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１３０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１４０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１５０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１６０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、または１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１７０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される。
【００６４】
エネルギー密度の具体例が提供されているが、本明細書に開示される方法において使用され得るＵＶＣ源が、標的エネルギー密度の前後の一連のエネルギー密度を送達することが留意され、この一連のエネルギー密度は「線量分布」としても称される。エネルギー密度分布の１つの特徴は、「高線量テール」を有する、エネルギー密度の広がりの非対称性である。Ｐ１０、Ｐ５０、Ｐ９０、および平均の確率測度を用いて、この分布を抽象化することができる。Ｐ＃値は、流動体（例えば培地）の＃％が処理される線量値を示す。したがって、６０ｍＪ／ｃｍ２のＰ１０値は、流動体の１０％が６０ｍＪ／ｃｍ２未満のエネルギー密度を受けたことを意味する。このアプローチは、本明細書に記載される螺旋ＵＶＣ反応器等のＵＶＣ露光装置に適している。
【００６５】
開示される方法の別の実施形態では、層流ＵＶＣ露光装置（例えば、薄膜ＵＶＣ反応器）を使用して、ＵＶＣ光を送達することができる。層流または薄膜ＵＶＣ露光装置を使用するとき、この分布は、Ｐ１０＝１／２＊平均、Ｐ９０＝２＊平均で近似され得る。したがって、層流または薄膜ＵＶＣ露光装置が、本明細書に記載される条件下で使用された場合、この分布は、Ｐ１０〜６０、平均＝１２５ｍＪ／ｃｍ２、およびＰ９０〜２５０ｍＪ／ｃｍ２であり得る。
【００６６】
上の考察と一致して、ＵＶＣ光の標的エネルギー密度が本開示に提供されるとき、標的エネルギー密度が、上に提供される線量分布規定によって説明される一連の被爆量を具体化することは暗黙であることに留意する。より具体的には、一実施形態では、標的ＵＶＣエネルギー密度は、エネルギー密度のＰ１０〜Ｐ６０分布内のすべてのエネルギー密度を含み、別の実施形態では、標的ＵＶＣエネルギー密度は、エネルギー密度のＰ６５分布内のすべてのエネルギー密度を含み、別の実施形態では、標的ＵＶＣエネルギー密度は、エネルギー密度のＰ７０分布内のすべてのエネルギー密度を含み、別の実施形態では、標的ＵＶＣエネルギー密度は、線量のＰ７５分布内のすべてのエネルギー密度を含み、別の実施形態では、標的ＵＶＣエネルギー密度は、エネルギー密度のＰ８０分布内のすべてのエネルギー密度を含み、別の実施形態では、標的ＵＶＣ線量は、エネルギー密度のＰ８５分布内のすべてのエネルギー密度を含み、別の実施形態では、標的ＵＶＣエネルギー密度は、エネルギー密度のＰ９０分布内のすべてのエネルギー密度を含み、別の実施形態では、標的ＵＶＣエネルギー密度は、エネルギー密度のＰ９５分布内のすべてのエネルギー密度を含む。
【００６７】
本開示の文脈において、ＵＶＣエネルギー密度は、提供されたスカラー範囲（例えば、１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−２ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−３ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−４ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−２０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−２５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−３０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−４０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−５０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−６０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−７０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−８０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−９０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１００ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１１０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１２５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１２０ｍＪ／ｃｍ２、または本発明のなお他の実施形態では、１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−２ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−３ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−４ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−２０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−２５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−３０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−４０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−５０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−６０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−７０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−８０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−９０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１００ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１１０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１２０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１３０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１４０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１５０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１６０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度、もしくは１７５ｍＪ／ｃｍ２＋／−１７０ｍＪ／ｃｍ２）を用いて記載され得るか、または、記載される線量分布関数（例えば、標的エネルギー密度のＰ１０〜６０、Ｐ６５、Ｐ７０、Ｐ７５、Ｐ８０、Ｐ８５、Ｐ９０、およびＰ９５の範囲内のエネルギー密度）を用いて記載され得ることが理解されよう。
【００６８】
ＵＶＣ露光装置
本発明の細胞培養培地および方法は、細胞培養基本培地をＵＶＣに露光するために、いかなる装置（ｄｅｖｉｃｅ）、システム、装置（ａｐｐａｒａｔｕｓ）、または方法と共に使用することができる。装置の非限定例は、米国特許第７，６５１，６６０号、米国特許第６，７７３，６０８号、米国特許第６，５９６，２３０号、米国特許第５，７２５，７５７号、米国特許第５，７０７，５９４号、および米国出願公開第２００４０２４５１６４Ａ１号に見出され得る。一実施形態では、本発明の細胞培養培地および方法は、螺旋ＵＶ反応器と共に使用される。別の実施形態では、本発明の細胞培養培地および方法は、層流（または薄膜）ＵＶ反応器と共に使用される。
他の培地処理
【００６９】
本明細書に提供される細胞培養培地および方法は、細胞培養前に培地を滅菌または消毒するために、ＵＶＣ露光以外の処理方法または装置と共に使用することができる。一実施形態では、ＨＴＳＴは、本発明の培地および方法と組み合わせて使用される（例えば、米国特許第７，４２０，１８３号を参照）。別の実施形態では、ｐＨの調節（例えば、４を下回るまで）は、本発明の培地および方法と組み合わせて使用される。
【００７０】
一実施形態では、細胞培養培地を、ＵＶＣ光に露光された後に、濾過ステップに付す。本明細書で使用されるとき、「滅菌濾過」および「滅菌フィルター」という用語は、標準的な生物学的滅菌フィルターの使用により細胞培養培地からマイクロプラズマおよび他の潜在的汚染物を除去することを指す。本発明の一実施形態では、細胞培養培地をバイオリアクター内に導入する前に、最大２００ｎｍのサイズの細孔を有する滅菌フィルターに細胞培養培地を通過させる。
【００７１】
別の実施形態では、細胞培養培地は、ＵＶＣ光に露光される前または露光された後に、デプスフィルター（ｄｅｐｔｈ  ｆｉｌｔｅｒ）を通す。「デプスフィルター」という用語は、それぞれの層が、異なるサイズおよび密度の微粒子物質の濾過を担う、複数の濾過層を有するフィルターを指す。このタイプの濾過プロセスは、サイズ排除に類似している。軽い物質は、濾過床の最上部で単離される。下層になるほど、培地は次第に、より細かく、そしてより高密度になる。より大きな懸濁粒子はより上部の層で除去され、一方、より小さな粒子はより下部の層により除去される。
【００７２】
別の実施形態では、細胞培養培地は、溶媒、洗浄剤、ソラレン、またはβ−プロピオラクトン等のウイルスを不活性化する化学物質で処理される。
【００７３】
更なる実施形態
一実施形態では、本開示は、培地を、ＵＶＣ光の影響を受けやすいことが知られている、または受けやすいと考えられる、過剰量の培地成分、例えば、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２（シアノコバラミン）で補充し、ＵＶＣ光による処置時のそれらの部分的破壊を補うことによって、ウイルスを不活性化する培地を提供する方法を提供する。
【００７４】
本明細書に記載されるように、様々な一般的な培地成分は、ＵＶＣ光への露光後、分解されるか、または生物学的に不活性になる。この分解を補うために、ＵＶＣ媒介の分解に影響を受けやすい培地成分を、ＵＶＣ光への露光後に適切な量のこれらの化合物を提供する余剰量で、培地処方物に添加することができる。換言すれば、ＵＶＣ露光によって不活性化される所与の培地成分量が、培地が必要量の成分を有することができるように、不活性化される成分量を添加することによって補充され得る。一実施形態では、成分は、ＵＶＣ露光前、培地への補助剤として添加することができ、一方、別の実施形態では、成分は、ＵＶＣ露光後、培地への補助剤として添加することができる。
【００７５】
特定の例では、ＵＶＣ光によって不活性化されることが知られている、または不活性化されると考えられる培地成分が特定される。次いで、初期量の培地中の成分が特定される。別々に、所望のＵＶＣ線量に基づいて、分解される成分量から経験的決定がなされる。あるいは、指針として成分の既知の特性（例えば、吸光度、濃度、ＵＶＣ線量等）を用いて、計算によって、この決定がなされる。次いで、分解されることが予測される成分量を、滅菌添加剤（例えば、適切な濃度で成分を含む滅菌溶液）中で培地に添加する。続いて、補充した培地が、ＵＶＣ光に露光される。
【００７６】
別の特定の例では、ＵＶＣ光によって不活性化されることが知られている、または不活性化されると考えられる培地成分が特定される。次いで、初期量の培地中の成分が特定される。別々に、所望のＵＶＣ線量に基づいて、分解される成分量から経験的決定がなされる。あるいは、指針として成分の既知の特性（例えば、吸光度、濃度、ＵＶＣ線量等）を用いて、計算によって、この決定がなされる。次いで、補充された培地が、ＵＶＣ光に露光される。次いで、分解されることが予測される成分量を、滅菌添加剤（例えば、適切な濃度の成分を含む滅菌溶液）中で培地に添加する。
【００７７】
本発明が説明されたが、以下の実施例は、説明する目的のために提供されるものであって、限定するためのものではない。
【実施例】
【００７８】
すべての実施例の材料および方法
組換えヒトエリスロポエチンは、ＵＶ感受性成分のリポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、およびビタミンＢ１２、ならびにメトトレキサートを含むＤＭＥＭ／Ｆ１２基本培地中で培養されたＣＨＯ細胞株から生成された。
【００７９】
これらの実験のためにＵＶＣで処理された対照培地を、滅菌等級フィルターに通過させた。細胞をバイアルから解凍し、拡大した体積のローラーボトル中でスケールアップを図り、プロセスの生産段階のために一連のバイオリアクターに接種した。
【００８０】
これらの実験は、収穫１、８日間、収穫２、７日間、収穫３、７日間の間隔の３つの収穫を通して行われた。このプロセスのローラーボトルのスケールアップ部分は、３７．０℃の設定点で実行された。このプロセスのローラーボトルの接種および生産部分は、３６．０℃の設定点で実行された。
【００８１】
ＵＶＣ処理は、螺旋流ＵＶＣ反応器（２５４ｎｍで）を用いて、６０Ｗ／ｍ２の照射強度で、時速５〜２０リットル（ＬＰＨ）の流速で完了した。培地は、所望の条件に対して正確なＵＶＣ吸収量で処理された。
【００８２】
実施例１
【００８３】
【表１】
2014506482.tif 000002
【００８４】
幾つかの他の条件を加えて、特定のプロセスの必要性を評価し、ＵＶＣで処理した培地へのプロセスのロバスト性を試験した。製造設備は、濃縮状態でスケールアップ培地および富化生産培地を調製し、供給タンクへの移動中、インライン濾過を行う。培地は、ＷＦＩ洗浄機を用い、インラインフィルターを通して、最終的にそれの１倍の体積にする。濃縮し、１倍のＵＶＣで処理した培地の様々な組み合わせを、この実験では試験した。
【００８５】
結果
スケールアッププロセスのいかなる段階でも、細胞増殖または集団倍加に関しては、ＵＶＣで処理した条件と対照との差はなかった。ＵＶＣ条件の代謝データは、生産のすべての収穫を通じて対照と同様であった。収穫３での細胞付着は、ＵＶＣ条件のすべてに関して、対照と同様であった。２．５倍のＵＶＣの１２５ｍＪ／ｃｍ２条件は、他の条件と比較してわずかに付着の減少を示したが、これは、大規模な生産において観察される場合、問題を示さないことが予測される。
【００８６】
すべてのＵＶＣで処理した培地条件は、力価減少を示した。１７５ｍＪ／ｃｍ２条件は、収穫を通じて一貫して低い力価を示した。処理され、濃縮された培地が、収穫３で力価においてより大きな効果を有するように思われるが、更なる研究がこれを確認するには必要である。
【００８７】
対照およびＵＶＣで処理した２．５倍濃縮したスケールアップ培地の複写のみが、ウイルス解凍から処理された。他のＵＶＣ条件は、接種での処理を開始し、生産まで継続した。この時点での開始は、ウイルス解凍からの処理を示す。産物力価データを図１および２に要約する。
【００８８】
実施例２
【００８９】
【表２】
2014506482.tif 000003
【００９０】
２．５倍に濃縮したＵＶＣで処理した培地を用いてプロセスのスケールアップ部分を繰り返し、接種中およびプロセスの生産部分でより低いＵＶＣ被爆量を評価するために、この実験が実行された。前述の実験は、産物力価がＵＶＣ被爆量と相関があるため、７５ｍＪ／ｃｍ２および５０ｍＪ／ｃｍ２のより低い被爆量が試験されたことを示唆した。
【００９１】
結果
すべてのＵＶＣで処理した条件に関して産物の変化および産物のそれぞれの収穫における代謝データを対照と比較した。産物力価は、２つのＵＶＣ処理による用量依存的な減少を示した。産物力価データを図３および４に要約する。
【００９２】
実施例３
様々な細胞培養培地の処理条件は、このエポエチンアルファ培地処理実験において研究された。研究された培地処理技術は、高温短時間（ＨＴＳＴ）、紫外線光Ｃ（ＵＶＣ）、およびウイルス濾過（ＶＦ）を含んだ。ローラーボトル（ＲＢ）接種から開始し、生産まで、これらの処理を適用した。それぞれの条件が、収穫され、精製された。すべての新しいＵＶＣ処理条件は、現行培地のＵＶＣ処理で観察された力価の減少を改善した（条件２）。すべての処理条件はまた、対照条件と比較した場合の変化で同様の細胞増殖および生存能力を示した（条件１および１０）。対照と比較して低いＳＥ−ＨＰＬＣのモノマー率のような幾つかの製品品質の差が観察された。
【００９３】
培地処理条件
表３は、生産中に使用される様々な溶液に適用される培地処理条件を示す。表の処理欄下の結合したセルは、処理技術を製剤化した両方の成分に一緒に適用することを示し、表の処理欄下にある別々のセルは、処理技術をそれぞれの成分に別々に適用することを示す。
【００９４】
【表３】
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【００９５】
条件６〜９は、ＵＶＣで処理し、続いて、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２を含む添加剤パッケージを添加した新しい基本培地を用いる。
【００９６】
１２５ｍＪ／ｃｍ２のそれぞれの条件に関する標的平均ＵＶＣ線量は、正確に得られなかった。これは、元の平均線量モデルにおける蛍光強度の変動によるためであった。その後、より正確な線量分布モデルが、開発され、平均およびパーセンテージ（１０、５０、および９０）線量を報告するために利用されている。螺旋ＵＶＣ反応器ユニットによって送達された平均線量は、標的よりも低かった。現行の培地（条件２）の過少線量はなお、力価の減少をもたらし、これは、限りなく低い５０〜７５ｍＪ／ｃｍ２の線量に対する力価の影響を示したことが先行研究と一致している。
【００９７】
生産性の結果を図５に提供する。処理条件３、４、および６〜９は、処理限界内で同様の生産性を有し、それ故に、ＵＶＣ処理の現行の培地（条件２）で観察された力価の減少を改善し、これは収穫２および３に関しては、すべての他の条件よりも約１５〜２０％低く、先行研究と一致した。新しい培地の対照、条件５の結果は、既存の培地対照１および１０と一致した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【手続補正書】
【提出日】平成25年10月4日(2013.10.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞培養培地であって、
ａ．ＵＶＣ光に露光される基本培地と、
ｂ．ＵＶＣ露光後、前記基本培地に添加されるＵＶ感受性培地成分を含む添加剤パッケージと、
を含む、細胞培養培地。
【請求項２】
前記基本培地が、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含まない、請求項１に記載の細胞培養培地。
【請求項３】
前記添加剤パッケージが、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含む、請求項１に記載の細胞培養培地。
【請求項４】
前記基本培地が、粉末または液体形態であり、前記添加剤パッケージが、粉末または液体形態である、請求項１〜３のいずれかに記載の細胞培養培地。
【請求項５】
前記培地が、哺乳動物細胞の培養に適している、請求項１に記載の細胞培養培地。
【請求項６】
前記培地が、昆虫細胞の培養に適している、請求項１に記載の細胞培養培地。
【請求項７】
ＵＶＣに露光された細胞培養培地製剤を作製するための方法であって、
ａ．基本培地をＵＶＣ光に露光するステップと、
ｂ．ＵＶ感受性成分を含む添加剤パッケージを前記ＵＶＣに露光された基本培地に添加するステップと、
を含む、方法。
【請求項８】
前記基本培地が、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含まない、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記添加剤パッケージが、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＵＶＣ光が、２５４ｎｍの波長である、請求項７〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記基本培地が、２５〜３５０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記基本培地が、１２５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記基本培地が、１７５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記基本培地をＵＶＣ光に露光する前記ステップが、前記基本培地中のいずれかの非エンベロープウイルスの核酸を損傷するのに十分である、請求項７に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＵＶＣ光が、薄膜ＵＶＣ反応器を用いて送達される、請求項７に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＵＶＣ光が、螺旋ＵＶＣ反応器を用いて送達される、請求項７に記載の方法。
【請求項１７】
タンパク質を生成するための方法であって、
ａ．基本培地をＵＶＣ光に露光するステップと、
ｂ．ＵＶ感受性培地成分を含む添加剤パッケージを前記ＵＶＣに露光された基本培地に添加するステップと、
ｃ．所望のタンパク質が生成されるように前記ＵＶＣで処理された培地中で細胞を培養するステップと、
を含む、方法。
【請求項１８】
前記基本培地が、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含まない、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記パッケージが、リポ酸、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、葉酸、ナイアシンアミド、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、メトトレキサート、およびビタミンＢ１２からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、または１３個の成分を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＵＶＣ光が、２５４ｎｍの波長である、請求項１７〜１９のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記培地が、２５〜３５０ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記基本培地が、１２５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記基本培地が、１７５ｍＪ／ｃｍ２のエネルギー密度のＵＶＣ光に露光される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記基本培地をＵＶＣ光に露光する前記ステップが、前記基本培地中のいずれかの非エンベロープウイルスの核酸を損傷するのに十分である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
前記細胞がＣＨＯ細胞である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
前記タンパク質が、組換えヒトエリスロポエチンである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＵＶＣ光が、薄膜ＵＶＣ反応器を用いて送達される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＵＶＣ光が、螺旋ＵＶＣ反応器を用いて送達される、請求項１７に記載の方法。
【国際調査報告】
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