(57)【要約】本開示は、レシピエント哺乳動物における同種移植片器官の生存を長期化するために有用な方法を提供する。上記方法は、抗ＣＤ２００抗体もしくは上記抗体のＣＤ２００結合フラグメントの投与を包含する。本開示はまた、バイオマーカー、抗ＣＤ２００抗体が哺乳動物において所望の免疫調節効果を生じたことを示すバイオマーカーのうちの１種以上の変化を提供する。また、少なくとも１つの抗ＣＤ２００抗体を含み、本明細書に記載される方法において有用である薬学的組成物、キットおよび溶液を特徴とする。
2014505706.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
腎臓同種移植片の生存を長期化するための方法であって、該方法は、腎臓同種移植片の生存の長期化を必要とするレシピエント哺乳動物に、該レシピエント哺乳動物における該腎臓同種移植片の生存を長期化するために有効な量および頻度において、単一薬剤として抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２】
前記抗ＣＤ２００抗体が、前記レシピエント哺乳動物への前記腎臓同種移植片の移植後、該レシピエント哺乳動物に、少なくとも７日間にわたって投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗ＣＤ２００抗体が、前記レシピエント哺乳動物への前記腎臓同種移植片の移植後、最大７日間までにわたって少なくとも１日１回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記抗ＣＤ２００抗体が、前記腎臓移植片の移植後、前記哺乳動物に、最大１４日間までにわたって少なくとも１日１回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記抗ＣＤ２００抗体の有効量が、前記レシピエント哺乳動物において少なくとも７日間にわたって維持される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記抗ＣＤ２００抗体の有効量が、前記レシピエント哺乳動物において少なくとも１４日間にわたって維持される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抗ＣＤ２００抗体の単一用量が、前記抗ＣＤ２００抗体の有効量を前記哺乳動物において少なくとも７日間にわたって維持するために十分である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記抗ＣＤ２００抗体の単一用量が、前記抗ＣＤ２００抗体に有効量を前記哺乳動物において少なくとも１４日間にわたって維持するために十分である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記抗ＣＤ２００抗体が、前記レシピエント哺乳動物への前記腎臓同種移植片の移植前および移植後に、該レシピエント哺乳動物に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗ＣＤ２００抗体が、前記レシピエント哺乳動物への前記腎臓同種移植片の移植の少なくとも１週間前に、該レシピエント哺乳動物に投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗ＣＤ２００抗体の少なくとも２用量が、前記レシピエント哺乳動物への前記腎臓同種移植片の移植前に、該レシピエント哺乳動物に投与される、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記腎臓同種移植片が得られたドナー哺乳動物から取り出す前に、抗ＣＤ２００抗体を該ドナー哺乳動物に投与する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記腎臓同種移植片が、前記レシピエント哺乳動物に対して完全にＭＨＣ不適合である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記レシピエント哺乳動物が、前記腎臓同種移植片に予備感作される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記腎臓同種移植片が、前記レシピエント哺乳動物に対してＡＢＯ不適合である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗ＣＤ２００抗体が、前記レシピエント哺乳動物に静脈内投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗ＣＤ２００抗体が、前記レシピエント哺乳動物に皮下投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗ＣＤ２００抗体の投与が、少なくとも１００日間にわたって腎臓同種移植片の生存を生じる、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗ＣＤ２００抗体の投与が、少なくとも６ヶ月間にわたって腎臓同種移植片の生存を生じる、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗ＣＤ２００抗体の投与が、少なくとも１年間にわたって腎臓同種移植片の生存を生じる、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
レシピエント哺乳動物における同種移植片器官の生存を長期化するための方法であって、該方法は、同種移植片器官の生存の長期化を必要とする同種移植片器官のレシピエント哺乳動物に：（ａ）１種以上の免疫抑制剤；および（ｂ）抗ＣＤ２００抗体を投与し、それによって、該レシピエント哺乳動物における該移植片の生存を長期化する工程を包含し、ここで該抗ＣＤ２００抗体の投与は、該１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種での処置の、該抗ＣＤ２００抗体の非存在下での該少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続期間に対してより短い継続期間を可能にする、方法。
【請求項２２】
前記レシピエント哺乳動物への前記抗ＣＤ２００抗体の投与が、少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続期間を少なくとも２０％短くする、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記レシピエント哺乳動物への前記抗ＣＤ２００抗体の投与が、少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続期間を少なくとも５０％短くする、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
レシピエント哺乳動物における同種移植片器官の生存を長期化するための方法であって、該方法は、同種移植片器官の生存の長期化を必要とする同種移植片器官のレシピエント哺乳動物に：（ａ）１種以上の免疫抑制剤；および（ｂ）抗ＣＤ２００抗体を投与し、それによって、該哺乳動物における該移植片の生存を長期化する工程を包含し、ここで該抗ＣＤ２００抗体は、該レシピエント哺乳動物に皮下投与されるか、または該レシピエント哺乳動物に静脈内投与される、方法。
【請求項２５】
前記抗ＣＤ２００抗体の投与が、前記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種での処置の、該抗ＣＤ２００抗体の非存在下での該少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続時間に対してより短い継続時間を可能にする、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗ＣＤ２００抗体が、前記レシピエント哺乳動物に皮下投与される、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗ＣＤ２００抗体が、前記レシピエント哺乳動物に静脈内投与される、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記同種移植片器官が得られたドナー哺乳動物から取り出す前に、該ドナー哺乳動物に抗ＣＤ２００抗体を投与する工程をさらに包含する、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記同種移植片器官が、前記レシピエント哺乳動物に関して完全にＭＨＣ不適合である、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記レシピエント哺乳動物が、前記同種移植片器官に予備感作される、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記同種移植片器官が、前記レシピエント哺乳動物に対してＡＢＯ不適合である、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種が、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、非ステロイド系抗炎症薬、ラパマイシン、およびＦＫ−５０６からなる群より選択される、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
２種以上の免疫抑制剤が、前記レシピエント哺乳動物に投与される、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記２種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも２種が、シクロスポリンＡとシクロホスファミドである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
同種移植片器官をレシピエント哺乳動物に移植するための方法であって、該方法は、
（ａ）同種移植片器官をレシピエント哺乳動物に移植する前に、抗ＣＤ２００抗体を該レシピエント哺乳動物に投与する工程；
（ｂ）該同種移植片器官を該レシピエント哺乳動物に移植する工程；および
（ｃ）該同種移植片器官の移植後に、抗ＣＤ２００抗体を該レシピエント哺乳動物に投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項３６】
前記抗ＣＤ２００抗体が、前記レシピエント哺乳動物に皮下投与されるかもしくは静脈内投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記抗ＣＤ２００抗体が、単一薬剤治療として投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記同種移植片器官が得られたドナー哺乳動物から取り出す前に、抗ＣＤ２００抗体を該ドナー哺乳動物を投与する工程をさらに包含する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記同種移植片器官が、前記レシピエント哺乳動物に関して完全にＭＨＣ不適合である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】
前記レシピエント哺乳動物が、前記同種移植片器官に予備感作される、請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
前記同種移植片器官が、前記レシピエント哺乳動物に関してＡＢＯ不適合である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４２】
前記レシピエント哺乳動物に１種以上の免疫抑制剤を投与する工程をさらに包含する、請求項３５に記載の方法。
【請求項４３】
前記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種が、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、非ステロイド系抗炎症薬、ラパマイシン、およびＦＫ−５０６からなる群より選択される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
２種以上の免疫抑制剤が、前記レシピエント哺乳動物に投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項４５】
前記２種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも２種が、シクロスポリンＡとシクロホスファミドである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記同種移植片器官の拒絶を予防するために、前記抗ＣＤ２００抗体の投与が、前記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種での処置の、該抗ＣＤ２００抗体の非存在下での該少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続期間に対してより短い継続期間を可能にするか、または該抗ＣＤ２００抗体の投与は、該１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種の、該抗ＣＤ２００抗体の非存在下での該少なくとも１種の免疫抑制剤の用量に対してより低い用量を可能にする、請求項４２〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
前記同種移植片器官が、腎臓、肺、心臓、膵臓、脈管組織、肝臓もしくはその１つ以上の肝葉、皮膚、眼、胃腸組織、神経組織、筋組織、骨もしくは軟骨、骨髄、結合組織、赤血球、島細胞、角膜、および眼の水晶体からなる群より選択される、請求項２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
前記同種移植片器官が、心臓もしくは腎臓である、請求項２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
前記抗ＣＤ２００抗体が、前記レシピエント哺乳動物に１日１回投与される、請求項２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
前記抗ＣＤ２００抗体が、前記レシピエント哺乳動物に２日ごとに１回投与される、請求項２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
前記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種が、前記レシピエント哺乳動物に長期的に投与される、請求項２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記抗ＣＤ２００抗体が、前記同種移植片器官の移植後、少なくとも７日間にわたって投与される、請求項２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
前記抗ＣＤ２００抗体が、前記同種移植片器官の移植後、少なくとも１４日間にわたって投与される、請求項２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
前記抗ＣＤ２００抗体の有効量が、前記レシピエント哺乳動物において少なくとも７日間にわたって投与される、請求項２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
前記抗ＣＤ２００抗体の有効量が、前記レシピエント哺乳動物において少なくとも１４日間にわたって維持される、請求項２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
前記抗ＣＤ２００抗体の単一用量が、該抗ＣＤ２００抗体の有効量を、前記哺乳動物において少なくとも７日間にわたって維持するのに十分である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
前記抗ＣＤ２００抗体の単一用量が、該抗ＣＤ２００抗体の有効量を、前記哺乳動物において少なくとも１４日間にわたって維持するのに十分である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
前記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤ２００とＣＤ２００レセプターとの間の相互作用を阻害する、請求項１〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
前記抗ＣＤ２００抗体が、重鎖定常領域の非改変形態と比較して、低下したエフェクター機能を有するその対応する改変重鎖定常領域を含む、請求項１〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
前記抗ＣＤ２００抗体が、完全抗体である、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６１】
前記抗ＣＤ２００抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、齧歯類抗体、脱免疫化抗体、もしくは霊長類化抗体である、請求項１〜６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
前記抗ＣＤ２００抗体が、完全抗ＣＤ２００抗体のＣＤ２００結合フラグメントである、請求項１〜５９または６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＣＤ２００結合フラグメントが、一本鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｖ、Ｆｄ、ミニボディー、ダイアボディー、および単一ドメイン抗体からなる群より選択される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記抗ＣＤ２００抗体が、サマリズマブである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６５】
レシピエント哺乳動物における同種移植片器官の生存を長期化するための方法であって、該方法は、同種移植片器官を有するレシピエント哺乳動物に：（ａ）抗ＣＤ２００抗体および（ｂ）１種以上の免疫抑制剤を投与する工程を包含し、ここで該抗体および該１種以上の免疫抑制剤は、該レシピエント哺乳動物において、所望の免疫調節効果の発生を生成および維持し、従って、該レシピエント哺乳動物における該同種移植片器官の生存を長期化するために十分な量および頻度において投与される、方法。
【請求項６６】
レシピエント哺乳動物における同種移植片の生存を長期化するための方法であって、該方法は、
（ｉ）抗ＣＤ２００抗体および（ｉｉ）１種以上の免疫抑制剤の、同種移植片器官を有するレシピエント哺乳動物において所望の免疫調節効果を生成するために有効な相対的用量を決定する工程；ならびに
該レシピエント哺乳動物に、該相対的用量の該抗ＣＤ２００抗体および該１種以上の免疫抑制剤を、該レシピエント哺乳動物において、該所望の免疫調節効果を維持するために十分な頻度で投与する工程
を包含する、方法。
【請求項６７】
前記所望の免疫調節効果は、以下：
（ｉ）ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＣＤ４０の発現における、前記抗ＣＤ２００抗体および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物において同じ組織学的タイプの細胞によるＣＤ４０の発現レベルに対する低下；
（ｉｉ）ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＭＨＣクラスＩＩの発現における、前記抗ＣＤ２００抗体および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプの細胞によるＭＨＣクラスＩＩの発現レベルに対する低下；
（ｉｉｉ）ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＣＤ８０の発現における、前記抗ＣＤ２００抗体および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプの細胞によるＣＤ８０の発現レベルに対する低下；
（ｉｖ）ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＩＬ−１２の発現における、前記抗ＣＤ２００抗体および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプの細胞によるＩＬ−１２の発現レベルに対する増大；
（ｖ）調節性Ｔ細胞の濃度における、前記抗ＣＤ２００抗体および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプの調節性Ｔ細胞の濃度に対する増大；
（ｖｉ）Ｇｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における、前記抗ＣＤ２００抗体および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＧｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞の濃度に対する増大；
（ｖｉｉ）Ｆ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における、前記抗ＣＤ２００抗体および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＦ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞の濃度に対する低下；
（ｖｉｉｉ）ＣＤ３＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の濃度における、前記抗ＣＤ２００抗体および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＣＤ３＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の濃度に対する低下；
（ｉｘ）ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度における、前記抗ＣＤ２００抗体および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度に対する低下；
（ｘ）ＣＤ１９＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における、前記抗ＣＤ２００抗体および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＣＤ１９＋ＣＤ４５＋Ｔ細胞の濃度に対する低下；ならびに
（ｘｉ）複数の免疫細胞によるＳＨＩＰ発現における、前記抗ＣＤ２００抗体および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の同じ組織学的タイプの免疫細胞におけるＳＨＩＰの発現レベルに対する低下、
からなる群より選択される、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記調節性Ｔ細胞が、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋細胞である、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＣＤ４０の発現における少なくとも３０％の低下は、所望の免疫調節効果が前記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＭＨＣクラスＩＩの発現における少なくとも４０％の低下は、所望の免疫調節効果が前記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】
ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−樹状細胞によるＣＤ８０の発現における少なくとも７０％の低下は、所望の免疫調節効果が前記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、請求項６７に記載の方法。
【請求項７２】
ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＩＬ−１２の発現における少なくとも６０％の増大は、所望の免疫調節効果が前記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、請求項６７に記載の方法。
【請求項７３】
Ｇｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における少なくとも３００％の増大は、所望の免疫調節効果が前記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、請求項６７に記載の方法。
【請求項７４】
調節性Ｔ細胞の濃度における少なくとも３００％の増大は、所望の免疫調節効果が前記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、請求項６７に記載の方法。
【請求項７５】
Ｆ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における少なくとも８０％の増大は、所望の免疫調節効果が前記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、請求項６７に記載の方法。
【請求項７６】
ＣＤ３＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の濃度における少なくとも５０％の低下は、所望の免疫調節効果が前記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、請求項６７に記載の方法。
【請求項７７】
ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度における少なくとも２０％の低下は、所望の免疫調節効果が前記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、請求項６７に記載の方法。
【請求項７８】
ＣＤ１９＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における少なくとも５０％の低下は、所望の免疫調節効果が前記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、請求項６７に記載の方法。
【請求項７９】
少なくとも１つの所望の免疫調節効果の発生は、前記抗ＣＤ２００抗体での治療が治療上有効であることを示す、請求項６７に記載の方法。
【請求項８０】
少なくとも３つの所望の免疫調節効果の発生は、前記抗ＣＤ２００抗体での治療が治療上有効であることを示す、請求項６７に記載の方法。
【請求項８１】
前記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種が、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、非ステロイド系抗炎症薬、ラパマイシン、およびＦＫ−５０６からなる群より選択される、請求項６７に記載の方法。
【請求項８２】
前記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種が、シクロスポリンＡである、請求項６７に記載の方法。
【請求項８３】
少なくとも１０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＣＤ２００抗体を含む、水性溶液。
【請求項８４】
前記溶液中の前記抗ＣＤ２００抗体の濃度は、少なくとも５０ｍｇ／ｍＬである、請求項８３に記載の水性溶液。
【請求項８５】
前記溶液中の前記抗ＣＤ２００抗体の濃度は、少なくとも１００ｍｇ／ｍＬである、請求項８３に記載の水性溶液。
【請求項８６】
前記溶液中の前記抗ＣＤ２００抗体の濃度は、１０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ（両端含む）の間である、請求項８３に記載の水性溶液。
【請求項８７】
（ｉ）請求項８３〜８６のいずれか１項に記載の水性溶液；および（ｉｉ）該溶液を哺乳動物へ送達するための手段、を含む、キット。
【請求項８８】
前記手段は、前記哺乳動物への前記溶液の皮下送達もしくは筋肉内送達に適している、請求項８７に記載のキット。
【請求項８９】
前記手段は、シリンジもしくはペン型注射器である、請求項８７または８８に記載のキット。
【請求項９０】
レシピエント哺乳動物における同種移植片の生存を長期化することにおける使用のための１種以上の免疫抑制剤をさらに含む、請求項８７〜８９のいずれか１項に記載のキット。
【請求項９１】
前記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種が、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、非ステロイド系抗炎症薬、ラパマイシン、およびＦＫ−５０６からなる群より選択される、請求項９０に記載のキット。
【請求項９２】
前記キットは、シクロスポリンＡおよびシクロホスファミドのうちの一方もしくは両方を含む、請求項９０または９１のいずれかに記載のキット。
【請求項９３】
前記キットは、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、ラパマイシン、もしくはＦＫ−５０６を含む、請求項９０または９１に記載のキット。
【請求項９４】
１つ以上の容器を含むキットであって、ここで各容器は、少なくとも１０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＣＤ２００抗体を含む滅菌用液を含み、各容器は、該抗ＣＤ２００抗体の少なくとも１つの薬学的単位投与形態を含む、キット。
【請求項９５】
各容器は、０．０５ｍｇ〜１０ｍｇの間の前記抗ＣＤ２００抗体を含む、請求項９４に記載のキット。
【請求項９６】
前記キットは、約１ｍｇ〜１００ｍｇの間の前記抗ＣＤ２００抗体を含む、請求項９４または９５に記載のキット。
【請求項９７】
各容器は、容積０．１ｍＬ〜１ｍＬ（両端含む）を有する、請求項９４〜９６のいずれか１項に記載のキット。
【請求項９８】
少なくとも１つの容器は、哺乳動物への皮下注射に、または哺乳動物への筋肉内注射に適した水性溶液を含む、請求項９４〜９７のいずれか１項に記載のキット。
【請求項９９】
前記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤ２００とＣＤ２００レセプターとの間の相互作用を阻害する、請求項９４〜９８のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１００】
前記抗ＣＤ２００抗体が、重鎖定常領域の非改変形態と比較して、低下したエフェクター機能を有するその対応する改変重鎖定常領域を含む、請求項９４〜９９のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１０１】
前記抗ＣＤ２００抗体が、完全抗体である、請求項９４〜１００のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１０２】
前記抗ＣＤ２００抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、齧歯類抗体、脱免疫化抗体、もしくは霊長類化抗体である、請求項９４〜１０１のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１０３】
前記抗ＣＤ２００抗体が、完全抗ＣＤ２００抗体のＣＤ２００結合フラグメントである、請求項９４〜１００または１０２のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１０４】
前記ＣＤ２００結合フラグメントが、一本鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｖ、Ｆｄ、ミニボディー、ダイアボディー、および単一ドメイン抗体からなる群より選択される、請求項１０３に記載のキット。
【請求項１０５】
前記抗ＣＤ２００抗体が、サマリズマブである、請求項１０１に記載のキット。
【請求項１０６】
少なくとも１０ｍｇ／ｍＬの濃度において抗ＣＤ２００抗体を含む滅菌用液を含む、充填済みシリンジ。
【請求項１０７】
前記溶液は、皮下投与のために処方されている、請求項１０６に記載の充填済みシリンジ。
【請求項１０８】
前記溶液は、筋肉内投与のために処方されている、請求項１０６に記載の充填済みシリンジ。
【請求項１０９】
前記シリンジは、前記溶液中に前記抗ＣＤ２００抗体の少なくとも１つの薬学的単位投与形態を含む、請求項１０６に記載の充填済みシリンジ。
【請求項１１０】
前記シリンジは、約１ｍｇ〜１００ｍｇの間の前記抗ＣＤ２００抗体を含む、請求項１０６〜１０９のいずれか１項に記載の充填済みシリンジ。
【請求項１１１】
前記薬学的単位投与形態は、１ｍＬ以下の容積を有する、請求項１０６〜１１０のいずれか１項に記載の充填済みシリンジ。
【請求項１１２】
前記薬学的単位投与形態は、０．５ｍＬ以下の容積を有する、請求項１０６〜１１１のいずれか１項に記載の充填済みシリンジ。
【請求項１１３】
前記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤ２００とＣＤ２００レセプターとの間の相互作用を阻害する、請求項１０６〜１１２のいずれか１項に記載の充填済みシリンジ。
【請求項１１４】
前記抗ＣＤ２００抗体が、重鎖定常領域の非改変形態と比較して、低下したエフェクター機能を有するその対応する改変重鎖定常領域を含む、請求項１０６〜１１３のいずれか１項に記載の充填済みシリンジ。
【請求項１１５】
前記抗ＣＤ２００抗体が、完全抗体である、請求項１０６〜１１４のいずれか１項に記載の充填済みシリンジ。
【請求項１１６】
前記抗ＣＤ２００抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、齧歯類抗体、脱免疫化抗体、もしくは霊長類化抗体である、請求項１０６〜１１５のいずれか１項に記載の充填済みシリンジ。
【請求項１１７】
前記抗ＣＤ２００抗体が、完全抗ＣＤ２００抗体のＣＤ２００結合フラグメントである、請求項１０６〜１１４または１１６のいずれか１項に記載の充填済みシリンジ。
【請求項１１８】
前記ＣＤ２００結合フラグメントが、一本鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｖ、Ｆｄ、ミニボディー、ダイアボディー、および単一ドメイン抗体からなる群より選択される、請求項１１７に記載の充填済みシリンジ。
【請求項１１９】
前記抗ＣＤ２００抗体が、サマリズマブである、請求項１１５に記載の充填済みシリンジ。
【請求項１２０】
前記レシピエント哺乳動物が、ヒトであり、前記同種移植片は、ヒト同種移植片である、請求項１〜８２のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
この出願は、２０１１年２月３日に出願された米国出願第６１／４３９，２７７号（この全体の内容は、参考として本明細書に援用される）に対する優先権を主張する。
【０００２】
（技術分野）
本発明の分野は、医療、免疫学、分子生物学、およびタンパク質化学である。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
細胞、組織および器官の移植は、非常に一般的になってきており、しばしば、生命を救う手順である。器官移植は、慢性器官不全を有する大部分の患者にとって好ましい処置である。しかし、拒絶を阻害する処置は大いに改善されたものの、拒絶は、器官移植の成功に対する１つの最も大きな障害のままである。拒絶は、急性拒絶のみならず、慢性拒絶もまた含む。移植された腎臓の１年生存率は、死亡したドナー由来の腎臓では平均８８．３％であり、生存ドナーから受けた腎臓では平均９４．４％である。
【０００４】
対応する移植された腎臓の５年生存率は、６３．３％および７６．５％である［ＯＰＴＮ／ＳＲＴＲ  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  （２００２）  Ｃｈａｐｔｅｒ  １  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｇｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ  （ＳＲＴＲ）  ｉｎ  ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  Ｏｒｇａｎ  Ｐｒｏｃｕｒｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｎｅｔｗｏｒｋ  （ＯＰＴＮ）．］。１年生存率は、死亡したドナーおよび生存ドナーに由来する肝臓については、それぞれ、８０．２％および７６．５％である。対応する肝移植片の５年生存率は、６３．５％および７３．０％である（ＯＰＴＮ／ＳＲＴＲ  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ，  ２００２）。免疫抑制薬（例えば、シクロスポリンＡ、およびより近年では、タクロリムス）の使用は、特に急性拒絶を予防することによって、器官移植の成功率を劇的に改善した。しかし、上の数字が示すように、短期間および特に長期間の両方の成功率を改善する必要は未だにある。例えば、腎臓移植片および肝臓移植片について上記の数字から認められるように、これら移植器官の５年不全率（ｆｉｖｅ  ｙｅａｒ  ｆａｉｌｕｒｅ  ｒａｔｅ）は、２５〜３５％程度である。
【０００５】
２００１年単独では、２３，０００名より多くの患者が器官移植を受け、そのうち、約１９，０００名が、腎臓もしくは肝臓であった（ＯＰＴＮ／ＳＲＴＲ  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ，  ２００２）。移植片のみのこの１年については、現在の技術では、これら移植した腎臓および肝臓のうちの約５，０００〜６，０００は、５年以内に不全になると予測され得る。これらの数字は、他の移植器官または移植組織もしくは細胞（例えば、骨髄）を全く含まない。
【０００６】
移植片には多くのタイプがある。これらは、非特許文献１（Ｗ．Ｂ．  Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に記載されている。ある個体からその同一の個体に移植される移植片は、自己移植片もしくは自家移植片といわれる。遺伝的に同一もしくは同系の２個体間で移植される移植片は、同族移植片といわれる。同種の遺伝的に異なる２個体間で移植される移植片は、同種異系移植片もしくは同種移植片といわれる。異なる種の個体間で移植される移植片は、異種発生性移植片（ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ  ｇｒａｆｔ）もしくは異種移植片といわれる。同種移植片に関して外来であると認識される分子は、同種抗原といわれ、異種移植片に関するものは、異種抗原といわれる。同種抗原もしくは異種抗原と反応するリンパ球もしくは抗体は、それぞれ、同種反応性もしくは異種反応性であると記載される。
【０００７】
現在では、４０，０００を超える腎臓、心臓、肺、肝臓および膵臓の移植が、毎年米国において行われている（非特許文献１）。他の考えられる移植としては、脈管組織、眼、角膜、水晶体、皮膚、骨髄、筋肉、結合組織、胃腸組織、神経組織、骨、幹細胞、島、軟骨、肝細胞、および造血細胞が挙げられるが、これらに限定されない。不運なことに、ドナーが存在するより、移植候補者の方が数は多い。前述の必要とされる移植片の数および既存の治療の制限に鑑みれば、同種移植片の生存を長期化するための新たな、治療上有効な方法が必要とされることは明らかである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ａｂｂａｓら、Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０００）、第４版、３６３〜３８３頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（要旨）
本開示は、哺乳動物における免疫応答を調節するために有用な組成物および方法に関する。説明において詳述されかつ実用的な実施例において例示されるように、本発明者らは、抗ＣＤ２００抗体が、レシピエント哺乳動物において腎臓同種移植片の生存を実質的に長期化させるために単一薬剤治療（このような治療は、本明細書において「単独療法」ともいわれる）として治療上有効であるということを発見した。移植レシピエントへのこの発見の利益は、数多い。例えば、単独療法としての抗ＣＤ２００抗体の使用は、腎臓の同種移植片レシピエントのクオリティーオブライフを改善し得る。なぜなら、同種移植片拒絶は、１種以上の免疫抑制剤（そのうちの多く（単独でもしくは組み合わせのいずれかにおいて）は、重篤な副作用（例えば、脱毛、骨髄消耗（ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ）、胃腸の不調、掻痒症、血小板減少症、貧血、腎毒性、膵炎、および感染症）を生じ得る）で一般に処置されるからである。狭い治療用量範囲内ですら、免疫抑制剤（例えば、カルシニューリンインヒビター（例えば、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）およびＦＫ−５０６））は、例えば、極めて腎毒性であり得る。Ｃａｌｎｅら、（１９７８）  Ｌａｎｃｅｔ  ２：１３２３−１３２７およびＧａｓｔｏｎ  （２００９）  Ｃｌｉｎ  Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  ４（１２）：２０２９−２０３４。ＣｓＡもしくはＦＫ−５０６の治療量以下の投与量での処置は、腎毒性の顕著に低いリスクを生じるが、移植片生存に関して治療的利益における顕著な低下を伴う。例えば、ＳｅｒｏｎおよびＭｏｒｅｓｏ（２００４）  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ  ３６：２５７Ｓを参照のこと。カルシニューリン治療に付随する制限および副作用を考慮すると、例えば、これらインヒビターの必要条件（用量レベルにおいてだろうと、処置の長さにおいてだろうと）を減少させ得ると同時に、移植片生存を長期化することに関して、治療効力の高いレベルを維持し得る新たな化合物を同定することは、明らかに非常に価値がある。本開示は、抗ＣＤ２００抗体がこのような化合物であることを示す。
【００１０】
１種以上のさらなる免疫抑制剤の非存在下で抗ＣＤ２００抗体を使用して、腎臓同種移植片生存を長期化する能力は、腎臓同種移植片レシピエントに、免疫抑制剤治療（例えば、組み合わせ治療）と関連した消耗性の副作用の多くを伴わずに、同じかもしくはさらにより大きな治療効果を提供する。さらに、上記１種以上のさらなる免疫抑制剤は、しばしば、上記患者に長期的に、またはおそらく無期限に、移植片生存を維持するために、投与されなければならない。本開示から明らかであり、実用的な実施例において例示されるように、抗ＣＤ２００抗体単独療法は、いくつかの実施形態において、移植後７〜１４日間にわたって投与され得、さらなる免疫抑制療法を必要としない場合ですら、上記移植片の長期間の生存をさらになお達成し得る。
【００１１】
抗ＣＤ２００抗体単独療法の効力にも関わらず、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体はまた、治療プラットフォームとして有用である。すなわち、移植患者に柔軟な、代替の治療選択肢を提供する。例えば、本発明者らは、同種移植片を有する哺乳動物への抗ＣＤ２００抗体の治療的投与が、上記哺乳動物に投与されている１種以上のさらなる免疫抑制剤の早期の中止（および／もしくは低下した用量）を可能にし得、治療効力をさらになお維持し得るということを発見した。実用的な実施例において記載されるように、同種移植片器官を有する哺乳動物への抗ＣＤ２００抗体の投与は、同時のカルシニューリンインヒビター治療の早期の中止およびより低い投与量のうちの一方もしくは両方を可能にし、上記同種移植片の生存を長期化するにおいて治療効力をさらになお維持する。別の例において、ミコフェノレートを含まないかもしくはこれが低下した治療選択肢もまた、本明細書において提供される。
【００１２】
本発明者らはまた、哺乳動物への抗ＣＤ２００抗体の皮下投与、またはより局所のもしくはデポー送達が、上記抗体の全身送達と同程度に有効に、同種移植片器官の生存を長期化し得ることを発見した。実用的な実施例において例示されるように、単独療法としての抗ＣＤ２００抗体の皮下投与は、上記抗体の静脈内送達と同様に、レシピエント哺乳動物における腎臓同種移植片の生存を実質的に長期化し得る。上記例はまた、抗ＣＤ２００抗体の皮下投与が、１種以上のさらなる免疫抑制剤との組み合わせにおいて、同種移植片器官（例えば、心臓）の生存を長期化し得る実験の結果を提供する。多くの利益は、抗ＣＤ２００抗体の皮下送達もしくはデポー送達に付随する。例えば、頻繁なおよび／もしくは長期的な投与を要する治療適用のために、皮下送達もしくはデポー送達は、全体で上記治療剤のより少ない回数の投与を可能にし得る（上記治療剤のより高い濃度が各間隔において投入（ｄｅｐｏｓｉｔ）され、上記化合物を上記哺乳動物にゆっくりと放出する）。第２に、抗ＣＤ２００抗体の皮下（もしくはデポー）送達は、全身送達形態とともに、より多くの患者に、上記治療剤がどのようにおよびいつ投与されるかに関する選択を提供する。例えば、いくつかの実施形態において、患者が、抗ＣＤ２００抗体を自己投与することは、可能であり得る（例えば、このような医薬のために通院するか、または在宅看護師（ｉｎ−ｈｏｍｅ  ｎｕｒｓｅ）の訪問の調整をする（これらはともに、コストがかかりかつ不便であり得る）必要性を回避する）。従って、増大した患者選択肢は、同種移植片を有する患者にとって容易な自己投与選択肢を提供することによって、増大した患者コンプライアンスを最終的には明らかにする。
【００１３】
この目的のために、本開示は、上記抗体の皮下投与が有益である適用において使用するための、抗ＣＤ２００抗体を含む水性溶液、およびその溶液を含む治療キットを提供する。上記溶液は、上記抗ＣＤ２００抗体を少なくとも１０ｍｇ／ｍＬの濃度において含み得る。
【００１４】
よって、一局面において、本開示は、腎臓同種移植片の生存を長期化させるための方法を特徴とする。上記方法は、それを必要とするレシピエント哺乳動物に、抗ＣＤ２００抗体を単一薬剤（単独療法）として上記レシピエント哺乳動物において腎臓同種移植片の生存を長期化するために有効な量で投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記方法はまた、上記腎臓同種移植片を上記レシピエント哺乳動物に移植する工程を包含し得る。いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ドナー哺乳動物（上記ドナー哺乳動物から、上記腎臓同種移植片が得られた）から取り出す前に、抗ＣＤ２００抗体を上記ドナー哺乳動物に投与する工程をさらに包含し得る。
【００１５】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物に、上記レシピエント哺乳動物への上記腎臓同種移植片の移植後、少なくとも７日間（例えば、少なくとも８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、２５日間、２６日間、２７日間、２８日間、２９日間、３０日間、３１日間）にわたって投与される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物への上記腎臓同種移植片の移植後、最大７日間まで（例えば、最大８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、２５日間、２６日間、２７日間、２８日間、２９日間、３０日間、３１日間、３２日間、３３日間、３４日間、３５日間、３６日間、３７日間、３８日間、３９日間、４０日間、４１日間、４２日間、４３日間、４４日間、４５日間、４６日間、４７日間、４８日間、４９日間、もしくは５０日間まで）にわたって、少なくとも１日１回投与される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物への上記腎臓同種移植片の投与後、少なくとも７日間にわたって、しかし３０日間未満（例えば、２９日間未満、２８日間、２７日間、２６日間、２５日間、２４日間、２３日間、２２日間、２１日間、２０日間、１９日間、１８日間、１７日間、１６日間、１５日間、１４日間、１３日間、１２日間、１１日間、１０日間、９日間、もしくは８日間）にわたって、少なくとも１日１回投与される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物への同種移植片の移植後、少なくとも２日間（例えば、少なくとも２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、もしくは１４日間）にわたって有効なままであるのに十分大きい用量で投与され得る（上記抗体は、有効用量を維持するために必要である限り頻繁に投与される（例えば、単一用量は、１４日間にわたって有効なままであるように十分大きいものであり得、この場合においては、単一用量のみが、上記抗体の有効量が１４日間のみにわたって必要とされれば、１４日ごとに１回もしくは１回だけ必要とされる）。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体の有効量は、少なくとも７日間（例えば、少なくとも８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、２５日間、２６日間、２７日間、もしくは２８日間以上）にわたって、上記レシピエント哺乳動物において維持される。上記のように、上記抗ＣＤ２００抗体の単一用量が、上記哺乳動物において、上記抗ＣＤ２００抗体の有効量を少なくとも７日間（例えば、少なくとも８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、２５日間、２６日間、２７日間、もしくは２８日間以上）にわたって維持するために十分であり得ることは理解される。
【００１６】
使用される特定の投与スケジュール（例えば、量、頻度、および／もしくは間隔）が、患者間で変動し得るが、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、それを必要とする哺乳動物（例えば、患者）にこのようなレジメンの下で、上記レシピエント哺乳動物への上記腎臓同種移植片の移植後、上記哺乳動物において上記抗体の有効量を少なくとも７日間（例えば、少なくとも８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、２５日間、２６日間、２７日間、２８日間、２９日間、３０日間、３１日間）にわたって維持するように投与され得る。
【００１７】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物への上記腎臓同種移植片の移植前および移植後、上記レシピエント哺乳動物に投与される。例えば、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物への上記腎臓同種移植片の移植前の少なくとも１週間にわたって上記レシピエント哺乳動物に投与され得る。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体の少なくとも２用量（例えば、少なくとも３用量、４用量、５用量、６用量、７用量、８用量、９用量、もしくはさらに１０以上の用量）が、上記レシピエント哺乳動物への上記腎臓同種移植片の移植前に、上記レシピエント哺乳動物に投与される。
【００１８】
いくつかの実施形態において、上記腎臓同種移植片は、上記レシピエント哺乳動物に関して完全にＭＨＣ不適合である。いくつかの実施形態において、上記レシピエント哺乳動物は、上記腎臓同種移植片に対して予備感作（ｐｒｅｓｅｎｓｉｔｉｚｅ）される。いくつかの実施形態において、上記腎臓同種移植片は、上記レシピエント哺乳動物に関して、ＡＢＯ不適合である。
【００１９】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物に静脈内投与される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物に皮下投与される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物に筋肉内投与される。
【００２０】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、少なくとも１００日間にわたって腎臓同種移植片生存を生じる。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、少なくとも６ヶ月間（例えば、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１２ヶ月間、１６ヶ月間、１８ヶ月間、２０ヶ月間、もしくは２４ヶ月間以上）の腎臓同種移植片生存を生じる。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、長期間の腎臓同種移植片生存を生じる。
【００２１】
いくつかの実施形態において、上記レシピエント哺乳動物および上記腎臓同種移植片ドナーは、ヒトである。
【００２２】
別の局面において、本開示は、レシピエント哺乳動物において同種移植片器官の生存を長期化するための方法を特徴とし、上記方法は、それを必要とする同種移植片器官レシピエントに：（ａ）１種以上の免疫抑制剤；および（ｂ）抗ＣＤ２００抗体を投与し、それによって、上記患者において上記移植片の生存を長期化する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種での処置の、上記抗ＣＤ２００抗体の非存在下での上記少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続期間と比較してより短い継続期間を可能にする。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種の、上記抗ＣＤ２００抗体の非存在下での上記少なくとも１種の免疫抑制剤の用量レベルもしくは量と比較して低下した用量レベルもしくは量の要件を可能にする。
【００２３】
いくつかの実施形態において、上記免疫抑制剤のうちの少なくとも１種は、ＩＬ−２インヒビターであり得る。例えば、いくつかの実施形態において、上記免疫抑制剤のうちの少なくとも１種は、ｍＴＯＲインヒビター（例えば、ラパマイシン）である。いくつかの実施形態において、上記免疫抑制剤のうちの少なくとも１種は、カルシニューリンインヒビター（例えば、シクロスポリンＡもしくはＦＫ−５０６）である。
【００２４】
いくつかの実施形態において、上記レシピエント哺乳動物への上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続期間を少なくとも２０％短くする。いくつかの実施形態において、上記レシピエント哺乳動物への上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続期間を少なくとも５０％短くする。
【００２５】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される方法は、ミコフェノレート治療（例えば、ＭＭＦ治療）に感受性の患者にとっての代替治療ストラテジーを提供する。このような実施形態において、本明細書は、上記患者に、抗ＣＤ２００抗体およびカルシニューリンインヒビター（例えば、シクロスポリンＡもしくはタクロリムス）を投与する工程を包含する、ミコフェノレートを含まない選択肢を提供する（例えば、ここで上記インヒビターは、上記抗ＣＤ２００抗体治療の非存在下で上記患者を処置するために必要とされる上記カルシニューリンインヒビターのその対応する量もしくは頻度より少ない量および／もしくは頻度において投与される）。
【００２６】
いくつかの実施形態において、例えば、患者が、カルシニューリンインヒビターに対して感受性がある場合、本明細書に記載される方法は、抗ＣＤ２００抗体がミコフェノレート含有化合物（例えば、ＭＭＦ）と関連して上記患者に投与される、カルシニューリンインヒビターを含まない代替選択肢を患者に提供する。上記ミコフェノレート化合物は、上記抗ＣＤ２００抗体治療の非存在下で上記患者を処置するために必要とされる上記化合物の量もしくは頻度より少ない量および／もしくは頻度において上記患者に投与され得る。
【００２７】
別の局面において、本開示は、レシピエント哺乳動物における同種移植片の生存を長期化するための方法を特徴とし、上記方法は、上記哺乳動物（例えば、ヒト）に：（ａ）本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体および（ｂ）ミコフェノレート含有化合物（例えば、ＭＭＦ）を長期的に投与し、それによって、上記哺乳動物における上記同種移植片の生存を長期化する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体および／もしくはミコフェノレート含有化合物は、少なくとも７日間にわたって長期的に投与される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体もしくはミコフェノレート含有化合物は、少なくとも１４日間にわたって長期的に投与される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体の長期的投与は、上記哺乳動物において有効な量を維持するために必要とされる上記ミコフェノレート含有化合物の投与の、上記抗体の非存在下で有効量を維持するために必要とされる上記化合物の量および／もしくは頻度と比較して低下した量および／もしくは頻度を可能にする。
【００２８】
別の局面において、本開示は、レシピエント哺乳動物における同種移植片の生存を長期化するための方法を特徴とし、上記方法は、上記哺乳動物（例えば、ヒト）に：（ａ）本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体および（ｂ）ＩＬ−２インヒビター（例えば、カルシニューリンインヒビター（例えば、シクロスポリンＡ））を長期的に投与し、それによって、上記哺乳動物における上記同種移植片の生存を長期化する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体および／もしくはＩＬ−２インヒビターは、少なくとも７日間にわたって長期的に投与される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体もしくはＩＬ−２インヒビターは、少なくとも１４日間にわたって長期的に投与される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体の長期的投与は、上記哺乳動物における有効量の維持に必要とされる上記ＩＬ−２インヒビターの投与の、上記抗体の非存在下で有効量を維持するために必要とされる上記インヒビターの量および／もしくは頻度と比較して低下した量および／もしくは頻度を可能にする。
【００２９】
別の局面において、本開示は、レシピエント哺乳動物における同種移植片の生存を長期化するための方法を特徴とし、ここで上記方法は、上記同種移植片の移植の後（および必要に応じて、移植前および／もしくは移植中）に、上記レシピエント哺乳動物に：（ａ）抗ＣＤ２００抗体および（ｂ）１種以上のさらなる免疫抑制剤を投与する工程を包含し、ここで上記１種以上のさらなる免疫抑制剤は、ミコフェノレート化合物（例えば、ＭＭＦ）およびＩＬ−２インヒビター（例えば、カルシニューリンインヒビター（例えば、シクロスポリンＡ））を含み、上記さらなる免疫抑制剤のうちの１種以上は、上記抗ＣＤ２００抗体の非存在下での等価な治療効力に必要とされる用量もしくは頻度よりも低い用量および／もしくは少ない頻度において投与される。等価な治療効力は、例えば、付随する抗ＣＤ２００抗体治療の非存在下で上記１種以上のさらなる免疫抑制剤を投与された患者集団において観察される標準的もしくは歴史的な（ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ）効力であり得る。
【００３０】
抗ＣＤ２００抗体および１種以上の免疫抑制剤を含む、本明細書において記載される組み合わせ治療において、「１種以上の免疫抑制剤」は、用語「１種以上のさらなる免疫抑制剤」と交換可能に使用され得ることは理解される。
【００３１】
さらに別の局面において、本開示は、レシピエント哺乳動物における同種移植片器官の生存を長期化するための方法を特徴とし、上記方法は、それを必要とする同種移植片器官のレシピエント哺乳動物に：（ａ）１種以上の免疫抑制剤；および（ｂ）抗ＣＤ２００抗体を投与し、それによって、上記哺乳動物における上記移植片の生存を長期化する工程を包含し、ここで上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物に皮下投与されるか、または上記レシピエント哺乳動物に静脈内投与される。
【００３２】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種での処置の、上記抗ＣＤ２００抗体の非存在下での上記少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続期間に対してより短い継続期間を可能にする。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種の、上記抗ＣＤ２００抗体の非存在下での上記少なくとも１種の免疫抑制剤の用量レベルもしくは量に対して低下した用量レベルもしくは量の要件を可能にする。
【００３３】
本明細書中に記載される方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物に皮下投与される。本明細書に記載される方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物に静脈内投与される。
【００３４】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態において、上記方法は、上記ドナー哺乳動物（このドナー哺乳動物から、同種移植片器官が得られる）から取り出す前に、抗ＣＤ２００抗体を上記ドナー哺乳動物に投与する工程をさらに包含し得る。
【００３５】
いくつかの実施形態において、上記同種移植片は、上記レシピエント哺乳動物に対して完全にＭＨＣ不適合である。いくつかの実施形態において、上記レシピエント哺乳動物は、上記同種移植片に対して予備感作される。いくつかの実施形態において、上記同種移植片は、上記レシピエント哺乳動物に対してＡＢＯ不適合である。
【００３６】
いくつかの実施形態において、上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種は、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、非ステロイド系抗炎症薬、およびＩＬ−２インヒビター（例えば、ｍＴＯＲインヒビター（例えば、ラパマイシン）もしくはカルシニューリンインヒビター（例えば、ＦＫ−５０６もしくはシクロスポリンＡ））からなる群より選択される。
【００３７】
いくつかの実施形態において、２種以上の免疫抑制剤が、上記レシピエント哺乳動物に投与される。いくつかの実施形態において、上記２種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも２種は、シクロスポリンＡとシクロホスファミド、ＦＫ−５０６とシクロホスファミド、またはカルシニューリンインヒビター（シクロスポリンＡもしくはＦＫ−５０６）とミコフェノレート化合物（例えば、ミコフェノール酸モフェチルもしくはミコフェノール酸ナトリウム）である。
【００３８】
さらに別の局面において、本開示は、同種移植片器官をレシピエント哺乳動物に移植するための方法を特徴とする。上記方法は、（ａ）同種移植片器官をレシピエント哺乳動物に移植する前に、抗ＣＤ２００抗体を上記レシピエント哺乳動物に投与する工程；（ｂ）上記同種移植片器官を上記レシピエント哺乳動物に移植する工程；および（ｃ）上記同種移植片器官の移植後に、抗ＣＤ２００抗体を上記レシピエント哺乳動物に投与する工程を包含する。
【００３９】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物に皮下投与もしくは静脈内投与される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、単一薬剤治療（単独療法）として投与される。
【００４０】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ドナー哺乳動物（このドナー哺乳動物から、同種移植片器官が得られる）から取り出す前に、抗ＣＤ２００抗体を上記ドナー哺乳動物に投与する工程を包含し得る。
【００４１】
いくつかの実施形態において、上記同種移植片は、上記レシピエント哺乳動物に対して完全にＭＨＣ不適合である。いくつかの実施形態において、上記レシピエント哺乳動物は、上記同種移植片に対して予備感作される。いくつかの実施形態において、上記同種移植片は、上記レシピエント哺乳動物に対してＡＢＯ不適合である。
【００４２】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記レシピエント哺乳動物に、１種以上の免疫抑制剤（例えば、本明細書に記載される免疫抑制剤のうちのいずれか）を投与する工程を包含し得る。例えば、上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種は、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、非ステロイド系抗炎症薬、およびＩＬ−２インヒビター（例えば、ｍＴＯＲインヒビター（例えば、ラパマイシン）もしくはカルシニューリンインヒビター（例えば、ＦＫ−５０６もしくはシクロスポリンＡ））からなる群より選択される。
【００４３】
いくつかの実施形態において、２種以上の免疫抑制剤は、上記レシピエント哺乳動物に投与される。いくつかの実施形態において、上記２種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも２種は、シクロスポリンＡとシクロホスファミド、ＦＫ−５０６とシクロホスファミド、またはカルシニューリンインヒビター（シクロスポリンＡもしくはＦＫ−５０６）とミコフェノレート化合物（例えば、ミコフェノール酸モフェチルもしくはミコフェノール酸ナトリウム）である。
【００４４】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種での処置の、上記抗ＣＤ２００抗体の非存在下での上記少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続期間に対してより短い継続期間を可能にする。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種の、上記抗ＣＤ２００抗体の非存在下での上記少なくとも１種の免疫抑制剤の用量レベルもしくは量に対して低下した用量レベルもしくは量の要件を可能にする。
【００４５】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態において、上記同種移植片器官は、腎臓、肺、心臓、膵臓、脈管組織、肝臓もしくはその１つ以上の肝葉、皮膚、眼、胃腸組織、神経組織、筋組織、骨もしくは軟骨、骨髄、結合組織、赤血球、島細胞、角膜、および眼の水晶体からなる群より選択される。上記同種移植片器官は、いくつかの実施形態において、心臓もしくは腎臓である。
【００４６】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物への上記同種移植片の移植後、少なくとも７日間（例えば、少なくとも８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、２５日間、２６日間、２７日間、２８日間、２９日間、３０日間、３１日間）にわたって、上記レシピエント哺乳動物に投与される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物への上記同種移植片の移植後、最大７日間（例えば、最大８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、２５日間、２６日間、２７日間、２８日間、２９日間、３０日間、３１日間、３２日間、３３日間、３４日間、３５日間、３６日間、３７日間、３８日間、３９日間、４０日間、４１日間、４２日間、４３日間、４４日間、４５日間、４６日間、４７日間、４８日間、４９日間、もしくは５０日間）までにわたって、少なくとも１日１回投与される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物への上記同種移植片の移植後、少なくとも７日間であるが、３０日間未満（例えば、２９日間、２８日間、２７日間、２６日間、２５日間、２４日間、２３日間、２２日間、２１日間、２０日間、１９日間、１８日間、１７日間、１６日間、１５日間、１４日間、１３日間、１２日間、１１日間、１０日間、９日間、もしくは８日間未満）にわたって、少なくとも１日１回投与される。本明細書に記載される方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体は、２日ごとに１回、上記レシピエント哺乳動物に投与される。本明細書に記載される方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態において、上記抗体は、少なくとも１週間に１回投与され得る。本明細書に記載される方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態において、上記抗体は、少なくとも２週間に１回（例えば、少なくとも１２日ごと、１３日ごと、１４日ごと、１５日ごと、もしくは１６日ごとに１回）投与され得る。
【００４７】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態において、上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種は、上記レシピエント哺乳動物に長期的に投与される。
【００４８】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ＣＤ２００とＣＤ２００レセプターとの間の相互作用を阻害する。
【００４９】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、重鎖定常領域の非改変形態と比較して、低下したエフェクター機能を有するその対応する改変重鎖定常領域を含む。
【００５０】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、完全抗体である。本明細書に記載される方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、齧歯類抗体、脱免疫化抗体、もしくは霊長類化抗体（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）である。
【００５１】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、完全抗ＣＤ２００抗体のＣＤ２００結合フラグメントである。上記ＣＤ２００結合フラグメントは、一本鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｖ、Ｆｄ、ミニボディー、ダイアボディー、および単一ドメイン抗体からなる群より選択されるものであり得る。本明細書に記載される方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、サマリズマブ（ｓａｍａｌｉｚｕｍａｂ）である。
【００５２】
本明細書に記載される方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態において、上記レシピエント哺乳動物は、ヒトであり、上記同種移植片器官は、ヒトから得られる。
【００５３】
さらに別の局面において、本開示は、レシピエント哺乳動物における同種移植片器官の生存を長期化させるための方法を特徴とし、上記方法は、同種移植片器官を有するレシピエント哺乳動物に、抗ＣＤ２００抗体を、上記レシピエント哺乳動物において所望の免疫調節効果の発生を生成および維持し、従って、上記レシピエント哺乳動物における上記同種移植片器官の生存を長期化させるのに十分な量および頻度において投与する工程を包含する。
【００５４】
別の局面において、本開示は、レシピエント哺乳動物における同種移植片の生存を長期化するための方法を特徴とし、上記方法は、（ｉ）同種移植片器官を有するレシピエント哺乳動物において所望の免疫調節効果を生成するのに有効な抗ＣＤ２００抗体の相対的用量を決定する工程；上記レシピエント哺乳動物に、上記抗ＣＤ２００抗体の相対的用量を、上記レシピエント哺乳動物において上記所望の免疫調節効果を維持するのに十分な頻度で投与する工程を包含する。
【００５５】
さらに別の局面において、本開示は、レシピエント哺乳動物における同種移植片器官の生存を長期化するための方法を特徴とし、上記方法は、同種移植片器官を有するレシピエント哺乳動物に：（ａ）抗ＣＤ２００抗体および（ｂ）１種以上の免疫抑制剤を投与する工程を包含し、ここで上記抗体および１種以上の免疫抑制剤は、上記レシピエント哺乳動物において所望の免疫調節効果の発生を生成および維持し、従って、上記レシピエント哺乳動物における上記同種移植片器官の生存を長期化するのに十分な量および頻度において投与される。
【００５６】
別の局面において、本開示は、レシピエント哺乳動物における同種移植片の生存を長期化するための方法を特徴とし、上記方法は、同種移植片器官を有するレシピエント哺乳動物において所望の免疫調節効果を生成するのに有効な、（ｉ）抗ＣＤ２００抗体および（ｉｉ）１種以上の免疫抑制剤の相対的用量を決定する工程；ならびに上記レシピエント哺乳動物に、上記抗ＣＤ２００抗体および１種以上の免疫抑制剤の上記相対的用量を、上記レシピエント哺乳動物において、上記所望の免疫調節効果を維持するのに十分な頻度で投与する工程を包含する。
【００５７】
実用的な実施例において詳述されるように、本発明者らは、レシピエント哺乳動物に移植するための抗ＣＤ２００抗体の投与が、上記哺乳動物における脾細胞によるＳＨＩＰ（ＳＨ２含有イノシトール５’−ホスファターゼ）の発現を低下させることを発見した。ＳＨＩＰは、ＰＩ３−キナーゼに刺激の際に、造血細胞の増殖、生存、活性化を抑制する細胞内ホスファターゼである。Ｌｉｏｕｂｉｎら、（１９９６）  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １４：５６８２−５６９１およびＬｉｕら、（１９９７）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２：８９８３−８９８８。
【００５８】
ＳＨＩＰ欠損マウスは、報告に拠れば、増大した数の単球およびマクロファージ、増強した生存、増殖および分化を有するそれらの造血性前駆体を示す。さらに、ＳＨＩＰ欠損マウスはまた、ＭＨＣ不適合骨髄を激しく拒絶できず、同種骨髄移植後の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の発症に対して耐性である。Ｗａｎｇら、（２００２）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９５：２０９４−２０９７。さらに、ＳＨＩＰ欠損マウスのＴ細胞は、Ｔｒｅｇへと発生する増強した能力を有する。Ｋｅｒｒ  （２００８）  Ｃｕｒｒ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ  ３（２）：９９−１０６。
【００５９】
本開示は、いかなる特定の理論にも作用機構にも束縛されないが、本発明者らは、同種移植片レシピエント哺乳動物に投与される抗ＣＤ２００抗体の治療効果が、少なくとも一部は、ＳＨＩＰ依存性機構に由来すると考える。すなわち、同種移植片を有する哺乳動物への抗ＣＤ２００抗体の投与は、免疫細胞によるＳＨＩＰ発現を低下させ、このことは、次に、とりわけ、単球およびマクロファージ、損なわれた抗原特異的Ｔ細胞増殖、増強されたＴｒｅｇ発生、およびより顕著なＴｈ１サイトカイン表現型を生じる。よって、いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体は、１種以上のさらなる免疫抑制剤ありもしくはなしで、上記哺乳動物から得られた生物学的サンプルにおいて免疫細胞による低下したＳＨＩＰ発現を維持するために十分な量および頻度において、同種移植片レシピエントに投与され得る。すなわち、上記所望の免疫調節効果は、上記哺乳動物から得られた生物学的サンプル（例えば、血液サンプルもしくは脾臓組織サンプル）中の複数の免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、顆粒球、単球、および／もしくはマクロファージ）による低下したＳＨＩＰ発現であり得る。上記機構（繰り返すと、本開示の範囲を限定しないが）は、ＣＤ２００をなぜ阻害するかに関する知見を提供し、免疫抑制タンパク質は、レシピエント哺乳動物における同種移植片の生存を長期化するために有用である。
【００６０】
いくつかの実施形態において、上記所望の免疫調節効果は、以下からなる群より選択される：（ｉ）ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＣＤ４０の発現における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプの細胞によるＣＤ４０の発現レベルに対する低下；（ｉｉ）ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＭＨＣクラスＩＩの発現における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプの細胞によるＭＨＣクラスＩＩの発現レベルに対する低下；（ｉｉｉ）ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＣＤ８０の発現における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプの細胞によるＣＤ８０の発現レベルに対する低下；（ｉｖ）ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＩＬ−１２の発現における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプの細胞によるＩＬ−１２の発現レベルに対する増大；（ｖ）調節性Ｔ細胞の濃度における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプの調節性Ｔ細胞の濃度に対する増大；（ｖｉ）Ｇｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＧｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞の濃度に対する増大；（ｖｉｉ）Ｆ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＦ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞の濃度に対する低下；（ｖｉｉｉ）ＣＤ３＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の濃度における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＣＤ３＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の濃度に対する低下；（ｉｘ）ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度に対する低下；（ｘ）ＣＤ３＋ＣＤ２００Ｒ＋細胞の濃度における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＣＤ３＋ＣＤ２００Ｒ＋細胞の濃度に対する増大；（ｘｉ）ＣＤ１９＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＣＤ１９＋ＣＤ４５＋Ｔ細胞の濃度に対する低下；ならびに（ｘｉｉ）上記レシピエント哺乳動物から得られた生物学的サンプル中の複数の免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および／もしくはマクロファージ）によるＳＨＩＰの発現における低下。いくつかの実施形態において、上記調節性Ｔ細胞は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋細胞である。いくつかの実施形態において、上記ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞は、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）である。いくつかの実施形態において、本明細書で考察される特定の細胞集団の濃度は、全脾細胞集団に対する上記細胞集団の濃度である。いくつかの実施形態において、上記バイオマーカーのうちの少なくとも２種の変化は、所望の免疫調節効果が、上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す。いくつかの実施形態において、上記バイオマーカーのうちの少なくとも３種（例えば、少なくとも４種、少なくとも５種、少なくとも６種、少なくとも７種、少なくとも８種、もしくは全て）における変化は、免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す。
【００６１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＣＤ４０の発現における少なくとも１０％（例えば、少なくとも１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、もしくは７５％以上）の低下は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す。
【００６２】
いくつかの実施形態において、ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＭＨＣクラスＩＩの発現における少なくとも１０％（例えば、少なくとも１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、もしくは７５％以上）の低下は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す。
【００６３】
いくつかの実施形態において、ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−樹状細胞によるＣＤ８０の発現における少なくとも５０％（例えば、少なくとも５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、もしくは９０％以上）の低下は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す。
【００６４】
いくつかの実施形態において、ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＩＬ−１２の発現における少なくとも５０％（例えば、少なくとも５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、もしくは９０％以上）の増大は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す。
【００６５】
いくつかの実施形態において、Ｇｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における少なくとも５０％（例えば、少なくとも７５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２２５％、２５０％、２７５％、３００％、３２５％、３５０％、３７５％、もしくは４００％以上）の増大は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す。
【００６６】
いくつかの実施形態において、調節性Ｔ細胞の濃度における少なくとも少なくとも５０％（例えば、少なくとも７５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２２５％、２５０％、２７５％、３００％、３２５％、３５０％、３７５％、もしくは４００％以上）の増大は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す。
【００６７】
いくつかの実施形態において、Ｆ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における少なくとも５０％（例えば、少なくとも５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、もしくは９０％以上）の低下は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す。
【００６８】
いくつかの実施形態において、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の濃度における少なくとも５０％（例えば、少なくとも５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、もしくは９０％以上）の低下は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す。
【００６９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度における少なくとも１０％（例えば、少なくとも１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、もしくは７５％以上）の低下は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す。
【００７０】
いくつかの実施形態において、ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の濃度における少なくとも５％（例えば、少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、もしくは７５％以上）の増大は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す。
【００７１】
いくつかの実施形態において、ＣＤ３＋ＣＤ２００Ｒ＋細胞の濃度における少なくとも５％（例えば、少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、もしくは７５％以上）の増大は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す。
【００７２】
いくつかの実施形態において、ＣＤ１９＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における少なくとも５０％（例えば、少なくとも５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、もしくは９０％以上）の低下は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す。
【００７３】
いくつかの実施形態において、複数の免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および／もしくはマクロファージ）によるＳＨＩＰ発現における少なくとも２０％（例えば、少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、もしくは７５％）の低下は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す。
【００７４】
いくつかの実施形態において、上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種は、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、非ステロイド系抗炎症薬、ラパマイシン、およびＦＫ−５０６からなる群より選択される。例えば、上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種は、シクロスポリンＡである。
【００７５】
さらに別の局面において、本開示は、少なくとも、または約１０ｍｇ／ｍＬ（例えば、１１ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１３ｍｇ／ｍＬ、１４ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１６ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、１９ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、５５ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、６５ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、８５ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬ、９５ｍｇ／ｍＬ、もしくは１００ｍｇ／ｍＬ以上）に等しい濃度において抗ＣＤ２００抗体を含む水性溶液を提供する。
【００７６】
別の局面において、本開示は、（ｉ）本明細書に記載される上記抗ＣＤ２００抗体含有水性溶液のうちのいずれか；および（ｉｉ）上記溶液を哺乳動物に送達するための手段を含むキットを提供する。
【００７７】
いくつかの実施形態において、上記手段は、上記哺乳動物への上記溶液の皮下送達もしくは筋肉内送達に適している。いくつかの実施形態において、上記手段は、シリンジもしくはペン型注射器である。
【００７８】
いくつかの実施形態において、上記キットは、哺乳動物における同種移植片器官の生存を長期化することにおける使用のための１種以上の免疫抑制剤をさらに含み得る。上記薬剤は、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、非ステロイド系抗炎症薬、ラパマイシン、およびＦＫ−５０６からなる群より選択され得る。いくつかの実施形態において、上記キットは、カルシニューリンインヒビター（例えば、シクロスポリンＡもしくはＦＫ−５０６）およびシクロホスファミドのうちの一方もしくは両方を含む。いくつかの実施形態において、上記キットは、カルシニューリンインヒビター（例えば、シクロスポリンＡもしくはＦＫ−５０６）およびミコフェノレート化合物のうちの一方もしくは両方を含む。いくつかの実施形態において、上記キットは、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、ラパマイシン、もしくはＦＫ−５０６を含む。
【００７９】
さらに別の局面において、本開示は、１つ以上の容器（ここで各容器は、少なくとも１０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＣＤ２００抗体を含む無菌用液を含み、各容器は、上記抗ＣＤ２００抗体の少なくとも１の薬学的単位投与形態を含む）を含むキットを特徴とする。いくつかの実施形態において、各容器は、０．０５ｍｇ〜１０ｍｇの間の上記抗ＣＤ２００抗体を含む。いくつかの実施形態において、上記キットは、約１ｍｇ〜１００ｍｇの間の上記抗ＣＤ２００抗体を含む。いくつかの実施形態において、各容器は、０．１ｍＬ〜１ｍＬ（両端含む）の容積を有する。
【００８０】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つの容器は、哺乳動物への皮下注射に、または哺乳動物への筋肉内注射に適した水性溶液を含む。
【００８１】
本明細書に記載されるキットのうちのいずれかのいくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ＣＤ２００とＣＤ２００レセプターとの間の相互作用を阻害する。上記抗ＣＤ２００抗体は、重鎖定常領域の非改変形態と比較して、低下したエフェクター機能を有するその対応する改変重鎖定常領域を含む。上記抗ＣＤ２００抗体は、完全抗体であり得る。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、齧歯類抗体、脱免疫化抗体、もしくは霊長類化抗体である。
【００８２】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、完全抗ＣＤ２００抗体のＣＤ２００結合フラグメントである。例えば、上記ＣＤ２００結合フラグメントは、一本鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｖ、Ｆｄ、ミニボディー、ダイアボディー、および単一ドメイン抗体からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、サマリズマブである。
【００８３】
別の局面において、本開示は、少なくとも１０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＣＤ２００抗体を含む無菌溶液を含む充填済みシリンジを特徴とする。いくつかの実施形態において、上記溶液は、皮下投与のために処方される。いくつかの実施形態において、上記溶液は、筋肉内投与のために処方される。
【００８４】
いくつかの実施形態において、上記シリンジは、上記溶液中に上記抗ＣＤ２００抗体の少なくとも１の薬学的単位投与形態を含む。いくつかの実施形態において、上記シリンジは、約１ｍｇ〜１００ｍｇの間の上記抗ＣＤ２００抗体を含む。いくつかの実施形態において、上記薬学的単位投与形態は、容積１ｍＬ以下（例えば、０．５ｍＬ以下）を有する。
【００８５】
本明細書に記載される充填済みシリンジのうちのいずれかのいくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ＣＤ２００とＣＤ２００レセプターとの間の相互作用を阻害する。上記抗ＣＤ２００抗体は、重鎖定常領域に非改変形態と比較して、低下したエフェクター機能を有するその対応する改変重鎖定常領域を含み得る。上記抗ＣＤ２００抗体は、完全抗体であり得る。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、齧歯類抗体、脱免疫化抗体、もしくは霊長類化抗体である。
【００８６】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、完全抗ＣＤ２００抗体のＣＤ２００結合フラグメントである。例えば、上記ＣＤ２００結合フラグメントは、一本鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｖ、Ｆｄ、ミニボディー、ダイアボディー、および単一ドメイン抗体からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、サマリズマブである。
【００８７】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、交換可能に使用され、長さもしくは翻訳後修飾に拘わらず、アミノ酸の任意のペプチド結合した鎖を意味する。本明細書に記載されるＣＤ２００タンパク質は、野生型タンパク質を含むかもしくは野生型タンパク質であってもよく、５０個以下（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１２個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個もしくは５０個以下）の保存的アミノ酸置換を有する改変体であり得る。保存的置換は、代表的には、以下の群内の置換を含む：グリシンおよびアラニン；バリン、イソロイシン、およびロイシン；アスパラギン酸およびグルタミン酸；アスパラギン、グルタミン、セリンおよびスレオニン；リジン、ヒスチジンおよびアルギニン；ならびにフェニルアラニンおよびチロシン。
【００８８】
本明細書に記載されるＣＤ２００タンパク質はまた、上記タンパク質の「抗原性ペプチドフラグメント」を含み、これらは、全長ＣＤ２００タンパク質より短いが、上記全長タンパク質が哺乳動物において抗原性応答を誘導する能力のうちの少なくとも１０％（例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、もしくは１００％以上）を保持する（以下の「抗体を生成するための方法」を参照のこと）。ＣＤ２００タンパク質の抗原性ペプチドフラグメントは、上記タンパク質の末端欠失改変体および内部欠失改変体を含む。欠失改変体は、（２個以上のアミノ酸の）１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、もしくは２０個の、アミノ酸セグメントもしくは連続しない単一のアミノ酸を欠き得る。抗原性ペプチドフラグメントは、長さが少なくとも６個（例えば、少なくとも７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１１０個、１２０個、１３０個、１４０個、１５０個、１６０個、１７０個、１８０個、１９０個、もしくは２００個以上）のアミノ酸残基（例えば、配列番号１〜３のうちのいずれか１つにおける少なくとも６個の連続するアミノ酸残基）であり得る。いくつかの実施形態において、ヒトＣＤ２００タンパク質の抗原性ペプチドフラグメントは、長さが２２５個未満（例えば、２００個、１９０個、１８０個、１７０個、１６０個、１５０個、１４０個、１３０個、１２０個、１１０個、１００個、９５個、９０個、８５個、８０個、７５個、６０個、５０個、４９個、４８個、４７個、４６個、４５個、４４個、４３個、４２個、４１個、４０個、３９個、３８個、３７個、３６個、３５個、３４個、３３個、３２個、３１個、３０個、２９個、２８個、２７個、２６個、２５個、２４個、２３個、２２個、２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、もしくは７個未満）のアミノ酸残基（例えば、配列番号１〜３のうちのいずれかにおける２２５個未満の連続するアミノ酸残基）である。いくつかの実施形態において、全長ＣＤ２００タンパク質の抗原性ペプチドフラグメントは、長さが少なくとも６個のアミノ酸残基であるが、２２５個未満のアミノ酸残基である。
【００８９】
いくつかの実施形態において、上記ヒトＣＤ２００タンパク質は、配列番号１もしくは配列番号２（以下を参照のこと）に示されるアミノ酸配列を有する上記ヒトＣＤ２００タンパク質に対して７０（例えば、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００）％同一であるか、またはそれ以上のアミノ酸配列を有し得る。
【００９０】
パーセント（％）アミノ酸配列同一性は、参照配列および候補配列をアラインし、必要であればギャップを導入して、最大％配列同一性を達成した後の、参照配列中のアミノ酸に同一である候補配列中のアミノ酸のパーセンテージとして定義される。％配列同一性を決定する目的のアラインメントは、当該分野の技術の範囲内にある種々の方法で、例えば、公に入手可能なコンピューターソフトウェア（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ−２もしくはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア）を使用して、達成され得る。アラインメントを測定するための適切なパラメーター（比較されている配列の全長にわたり最大アラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む）は、公知の方法によって決定され得る。
【００９１】
例示的なヒトＣＤ２００タンパク質およびこれらの抗原性ペプチドフラグメントのアミノ酸配列は、当該分野で公知であり、以下に記載される。
【００９２】
本明細書で使用される場合、抗ＣＤ２００抗体は、完全抗体および上記完全抗体のＣＤ２００結合フラグメントの両方を含む。完全抗体は、異なる抗体アイソタイプ（ＩｇＭ抗体、ＩｇＧ抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＤ抗体、およびＩｇＥ抗体を含む）を含む。用語「抗体」とは、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ化抗体もしくはキメラ抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、脱免疫化ヒト抗体、および完全ヒト抗体を含む。上記抗体は、種々の種のうちのいずれか（例えば、哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、サル、ヒヒ、もしくはチンパンジー）、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、アレチネズミ、ハムスター、ラット、およびマウス）のうちのいずれかにおいて作製され得るかもしくはこれらのうちのいずれかに由来し得る。上記抗体は、精製されていてもよいし、組換え抗体であってもよい。
【００９３】
本明細書で使用される場合、用語「抗体フラグメント」、「抗原結合フラグメント」、もしくは類似の用語は、抗原（例えば、ヒトＣＤ２００もしくは本明細書において定義されるとおりのそのフラグメント）に結合する能力を保持する抗体のフラグメント（例えば、一本鎖抗体、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）、Ｆｄフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、もしくはＦ（ａｂ’）２フラグメント）に言及する。ｓｃＦｖフラグメントは、上記ｓｃＦｖが由来する上記抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域の両方を含む単一のポリペプチド鎖である。さらに、イントラボディー、ミニボディー、トリアボディー、およびダイアボディーはまた、抗体の定義に含まれ、本明細書に記載される方法における使用に適合している。例えば、Ｔｏｄｏｒｏｖｓｋａら、（２００１）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８（１）：４７−６６；ＨｕｄｓｏｎおよびＫｏｒｔｔ  （１９９９）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１（１）：１７７−１８９；Ｐｏｌｊａｋ  （１９９４）  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２（１２）：１１２１−１１２３；ＲｏｎｄｏｎおよびＭａｒａｓｃｏ  （１９９７）  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ５１：２５７−２８３（これらのうちの各々の開示は、それらの全体が本明細書に参考として援用される）を参照のこと。二重特異的抗体（ＤＶＤ−Ｉｇ抗体を含む；以下を参照のこと）はまた、用語「抗体」によって包含される。二重特異的抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体、好ましくは、ヒト抗体もしくはヒト化抗体である。
【００９４】
抗体のＣＤ２００結合フラグメントはまた、例えば、単一ドメイン抗体（例えば、ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ）単一ドメイン抗体）を含む。例えば、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓら、（２００１）  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｃｉ  ２６：２３０−２３５；Ｎｕｔｔａｌｌら、（２０００）  Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  １：２５３−２６３  ；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら、（１９９９）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ  ２３１：２５−３８；ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ  ９４／０４６７８およびＷＯ  ９４／２５５９１；ならびに米国特許第６，００５，０７９号（これらのうちの全ては、それらの全体が本明細書に参考として援用される）を参照のこと。いくつかの実施形態において、本開示は、単一ドメイン抗体を形成するような改変を有する２個のＶＨドメインを含む単一ドメイン抗体を提供する。
【００９５】
本明細書で使用される場合、用語「長期的に」（例えば、化合物を長期的に投与するために）、もしくは類似の用語は、少なくとも７日間（例えば、少なくとも８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間）にわたって、上記被験体において上記薬剤の有効量を維持するために十分な量および頻度において、薬剤（例えば、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体および／もしくは免疫抑制剤）が被験体（例えば、移植患者）に投与される、投与法に言及する。いくつかの実施形態において、薬剤は、少なくとも１ヶ月（例えば、少なくとも２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、もしくは６ヶ月）にわたって被験体に長期的に投与され得る。いくつかの実施形態において、薬剤は、１年以上にわたって被験体に長期的に投与され得る。
【００９６】
別段定義されなければ、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾する場合には、定義を含め、本明細書が支配する。好ましい方法および材料は、以下に記載されるが、本明細書に記載されるものに類似もしくは等価な方法および材料はまた、本開示の方法および組成物の実施もしくは試験において使用され得る。本明細書で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、それらの全体が本明細書に参考として援用される。
【００９７】
本開示の他の特徴および利点（例えば、レシピエント哺乳動物における同種移植片器官の生存を長期化するための方法）は、以下の説明、実施例および特許請求の範囲から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】図１〜１２は、心臓同種移植片を有するマウスにおける種々の免疫細胞集団の特徴付けを示す棒グラフである。各グラフにおいて、上記主題の細胞を、移植片を有するマウスの５つの異なる群のうちの各々から得た。個々の群を、以下のとおりに処置した：（群１）ＣＤ２００に結合しないコントロール抗体；（群２）抗ＣＤ２００抗体；（群３）シクロスポリンＡ；（群４）上記コントロール抗体とシクロスポリンＡの組み合わせ；および（群５）上記抗ＣＤ２００抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせ。（各群についての上記処置レジメンのさらなる詳細は、以下の実施例５に提供される）。図１〜４のＹ軸は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の単位であり、これは、細胞１個あたりをベースにした所定の抗原（例えば、ＣＤ４０（図１）、ＭＨＣクラスＩＩ（図２）、ＣＤ８０（図３）、およびＩＬ−１２（図４））の相対的発現レベルの尺度である。図５〜１２のＹ軸は、単離された脾細胞の集団中の所定の細胞タイプのパーセンテージ単位である。図１は、上記群のうちの各々のマウスから得られたＣＤ１１ｃ＋（ＣＤ４９ｂ−でゲーティング）樹状細胞によるＣＤ４０発現のレベルを示す。
【図２】図１〜１２は、心臓同種移植片を有するマウスにおける種々の免疫細胞集団の特徴付けを示す棒グラフである。各グラフにおいて、上記主題の細胞を、移植片を有するマウスの５つの異なる群のうちの各々から得た。個々の群を、以下のとおりに処置した：（群１）ＣＤ２００に結合しないコントロール抗体；（群２）抗ＣＤ２００抗体；（群３）シクロスポリンＡ；（群４）上記コントロール抗体とシクロスポリンＡの組み合わせ；および（群５）上記抗ＣＤ２００抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせ。（各群についての上記処置レジメンのさらなる詳細は、以下の実施例５に提供される）。図１〜４のＹ軸は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の単位であり、これは、細胞１個あたりをベースにした所定の抗原（例えば、ＣＤ４０（図１）、ＭＨＣクラスＩＩ（図２）、ＣＤ８０（図３）、およびＩＬ−１２（図４））の相対的発現レベルの尺度である。図５〜１２のＹ軸は、単離された脾細胞の集団中の所定の細胞タイプのパーセンテージ単位である。図２は、上記群のうちの各々のマウスから得られたＣＤ１１ｃ＋（ＣＤ４９ｂ−でゲーティング）樹状細胞によるＭＨＣクラスＩＩ発現のレベルを示す。
【図３】図１〜１２は、心臓同種移植片を有するマウスにおける種々の免疫細胞集団の特徴付けを示す棒グラフである。各グラフにおいて、上記主題の細胞を、移植片を有するマウスの５つの異なる群のうちの各々から得た。個々の群を、以下のとおりに処置した：（群１）ＣＤ２００に結合しないコントロール抗体；（群２）抗ＣＤ２００抗体；（群３）シクロスポリンＡ；（群４）上記コントロール抗体とシクロスポリンＡの組み合わせ；および（群５）上記抗ＣＤ２００抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせ。（各群についての上記処置レジメンのさらなる詳細は、以下の実施例５に提供される）。図１〜４のＹ軸は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の単位であり、これは、細胞１個あたりをベースにした所定の抗原（例えば、ＣＤ４０（図１）、ＭＨＣクラスＩＩ（図２）、ＣＤ８０（図３）、およびＩＬ−１２（図４））の相対的発現レベルの尺度である。図５〜１２のＹ軸は、単離された脾細胞の集団中の所定の細胞タイプのパーセンテージ単位である。図３は、上記群のうちの各々のマウスから得られたＣＤ１１ｃ＋（ＣＤ４９ｂ−でゲーティング）樹状細胞によるＣＤ８０発現のレベルを示す。
【図４】図１〜１２は、心臓同種移植片を有するマウスにおける種々の免疫細胞集団の特徴付けを示す棒グラフである。各グラフにおいて、上記主題の細胞を、移植片を有するマウスの５つの異なる群のうちの各々から得た。個々の群を、以下のとおりに処置した：（群１）ＣＤ２００に結合しないコントロール抗体；（群２）抗ＣＤ２００抗体；（群３）シクロスポリンＡ；（群４）上記コントロール抗体とシクロスポリンＡの組み合わせ；および（群５）上記抗ＣＤ２００抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせ。（各群についての上記処置レジメンのさらなる詳細は、以下の実施例５に提供される）。図１〜４のＹ軸は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の単位であり、これは、細胞１個あたりをベースにした所定の抗原（例えば、ＣＤ４０（図１）、ＭＨＣクラスＩＩ（図２）、ＣＤ８０（図３）、およびＩＬ−１２（図４））の相対的発現レベルの尺度である。図５〜１２のＹ軸は、単離された脾細胞の集団中の所定の細胞タイプのパーセンテージ単位である。図４は、上記群のうちの各々のマウスから得られたＣＤ１１ｃ＋（ＣＤ４９ｂ−でゲーティング）樹状細胞による細胞内ＩＬ−１２発現のレベルを示す。
【図５】図１〜１２は、心臓同種移植片を有するマウスにおける種々の免疫細胞集団の特徴付けを示す棒グラフである。各グラフにおいて、上記主題の細胞を、移植片を有するマウスの５つの異なる群のうちの各々から得た。個々の群を、以下のとおりに処置した：（群１）ＣＤ２００に結合しないコントロール抗体；（群２）抗ＣＤ２００抗体；（群３）シクロスポリンＡ；（群４）上記コントロール抗体とシクロスポリンＡの組み合わせ；および（群５）上記抗ＣＤ２００抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせ。（各群についての上記処置レジメンのさらなる詳細は、以下の実施例５に提供される）。図１〜４のＹ軸は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の単位であり、これは、細胞１個あたりをベースにした所定の抗原（例えば、ＣＤ４０（図１）、ＭＨＣクラスＩＩ（図２）、ＣＤ８０（図３）、およびＩＬ−１２（図４））の相対的発現レベルの尺度である。図５〜１２のＹ軸は、単離された脾細胞の集団中の所定の細胞タイプのパーセンテージ単位である。図５は、上記群のうちの各々のマウスから得られた単離された脾細胞集団全体に対するＴ調節性ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋細胞のパーセンテージを示す。
【図６】図１〜１２は、心臓同種移植片を有するマウスにおける種々の免疫細胞集団の特徴付けを示す棒グラフである。各グラフにおいて、上記主題の細胞を、移植片を有するマウスの５つの異なる群のうちの各々から得た。個々の群を、以下のとおりに処置した：（群１）ＣＤ２００に結合しないコントロール抗体；（群２）抗ＣＤ２００抗体；（群３）シクロスポリンＡ；（群４）上記コントロール抗体とシクロスポリンＡの組み合わせ；および（群５）上記抗ＣＤ２００抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせ。（各群についての上記処置レジメンのさらなる詳細は、以下の実施例５に提供される）。図１〜４のＹ軸は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の単位であり、これは、細胞１個あたりをベースにした所定の抗原（例えば、ＣＤ４０（図１）、ＭＨＣクラスＩＩ（図２）、ＣＤ８０（図３）、およびＩＬ−１２（図４））の相対的発現レベルの尺度である。図５〜１２のＹ軸は、単離された脾細胞の集団中の所定の細胞タイプのパーセンテージ単位である。図６は、上記群のうちの各々のマウスから得られた単離された脾細胞集団全体に対するＧｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージを示す。
【図７】図１〜１２は、心臓同種移植片を有するマウスにおける種々の免疫細胞集団の特徴付けを示す棒グラフである。各グラフにおいて、上記主題の細胞を、移植片を有するマウスの５つの異なる群のうちの各々から得た。個々の群を、以下のとおりに処置した：（群１）ＣＤ２００に結合しないコントロール抗体；（群２）抗ＣＤ２００抗体；（群３）シクロスポリンＡ；（群４）上記コントロール抗体とシクロスポリンＡの組み合わせ；および（群５）上記抗ＣＤ２００抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせ。（各群についての上記処置レジメンのさらなる詳細は、以下の実施例５に提供される）。図１〜４のＹ軸は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の単位であり、これは、細胞１個あたりをベースにした所定の抗原（例えば、ＣＤ４０（図１）、ＭＨＣクラスＩＩ（図２）、ＣＤ８０（図３）、およびＩＬ−１２（図４））の相対的発現レベルの尺度である。図５〜１２のＹ軸は、単離された脾細胞の集団中の所定の細胞タイプのパーセンテージ単位である。図７は、上記群のうちの各々のマウスから得られた単離された脾細胞集団全体に対するＦ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージを示す。
【図８】図１〜１２は、心臓同種移植片を有するマウスにおける種々の免疫細胞集団の特徴付けを示す棒グラフである。各グラフにおいて、上記主題の細胞を、移植片を有するマウスの５つの異なる群のうちの各々から得た。個々の群を、以下のとおりに処置した：（群１）ＣＤ２００に結合しないコントロール抗体；（群２）抗ＣＤ２００抗体；（群３）シクロスポリンＡ；（群４）上記コントロール抗体とシクロスポリンＡの組み合わせ；および（群５）上記抗ＣＤ２００抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせ。（各群についての上記処置レジメンのさらなる詳細は、以下の実施例５に提供される）。図１〜４のＹ軸は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の単位であり、これは、細胞１個あたりをベースにした所定の抗原（例えば、ＣＤ４０（図１）、ＭＨＣクラスＩＩ（図２）、ＣＤ８０（図３）、およびＩＬ−１２（図４））の相対的発現レベルの尺度である。図５〜１２のＹ軸は、単離された脾細胞の集団中の所定の細胞タイプのパーセンテージ単位である。図８は、上記群のうちの各々のマウスから得られた単離された脾細胞集団全体に対するＣＤ３＋ＣＤ２５＋細胞のパーセンテージを示す。
【図９】図１〜１２は、心臓同種移植片を有するマウスにおける種々の免疫細胞集団の特徴付けを示す棒グラフである。各グラフにおいて、上記主題の細胞を、移植片を有するマウスの５つの異なる群のうちの各々から得た。個々の群を、以下のとおりに処置した：（群１）ＣＤ２００に結合しないコントロール抗体；（群２）抗ＣＤ２００抗体；（群３）シクロスポリンＡ；（群４）上記コントロール抗体とシクロスポリンＡの組み合わせ；および（群５）上記抗ＣＤ２００抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせ。（各群についての上記処置レジメンのさらなる詳細は、以下の実施例５に提供される）。図１〜４のＹ軸は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の単位であり、これは、細胞１個あたりをベースにした所定の抗原（例えば、ＣＤ４０（図１）、ＭＨＣクラスＩＩ（図２）、ＣＤ８０（図３）、およびＩＬ−１２（図４））の相対的発現レベルの尺度である。図５〜１２のＹ軸は、単離された脾細胞の集団中の所定の細胞タイプのパーセンテージ単位である。図９は、上記群のうちの各々のマウスから得られた単離された脾細胞集団全体に対するＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞のパーセンテージを示す。
【図１０】図１〜１２は、心臓同種移植片を有するマウスにおける種々の免疫細胞集団の特徴付けを示す棒グラフである。各グラフにおいて、上記主題の細胞を、移植片を有するマウスの５つの異なる群のうちの各々から得た。個々の群を、以下のとおりに処置した：（群１）ＣＤ２００に結合しないコントロール抗体；（群２）抗ＣＤ２００抗体；（群３）シクロスポリンＡ；（群４）上記コントロール抗体とシクロスポリンＡの組み合わせ；および（群５）上記抗ＣＤ２００抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせ。（各群についての上記処置レジメンのさらなる詳細は、以下の実施例５に提供される）。図１〜４のＹ軸は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の単位であり、これは、細胞１個あたりをベースにした所定の抗原（例えば、ＣＤ４０（図１）、ＭＨＣクラスＩＩ（図２）、ＣＤ８０（図３）、およびＩＬ−１２（図４））の相対的発現レベルの尺度である。図５〜１２のＹ軸は、単離された脾細胞の集団中の所定の細胞タイプのパーセンテージ単位である。図１０は、上記群のうちの各々のマウスから得られた単離された脾細胞集団全体に対するＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞のパーセンテージを示す。
【図１１】図１〜１２は、心臓同種移植片を有するマウスにおける種々の免疫細胞集団の特徴付けを示す棒グラフである。各グラフにおいて、上記主題の細胞を、移植片を有するマウスの５つの異なる群のうちの各々から得た。個々の群を、以下のとおりに処置した：（群１）ＣＤ２００に結合しないコントロール抗体；（群２）抗ＣＤ２００抗体；（群３）シクロスポリンＡ；（群４）上記コントロール抗体とシクロスポリンＡの組み合わせ；および（群５）上記抗ＣＤ２００抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせ。（各群についての上記処置レジメンのさらなる詳細は、以下の実施例５に提供される）。図１〜４のＹ軸は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の単位であり、これは、細胞１個あたりをベースにした所定の抗原（例えば、ＣＤ４０（図１）、ＭＨＣクラスＩＩ（図２）、ＣＤ８０（図３）、およびＩＬ−１２（図４））の相対的発現レベルの尺度である。図５〜１２のＹ軸は、単離された脾細胞の集団中の所定の細胞タイプのパーセンテージ単位である。図１１は、上記群のうちの各々のマウスから得られた単離された脾細胞集団全体に対するＣＤ３＋ＣＤ２００Ｒ＋細胞のパーセンテージを示す。
【図１２】図１〜１２は、心臓同種移植片を有するマウスにおける種々の免疫細胞集団の特徴付けを示す棒グラフである。各グラフにおいて、上記主題の細胞を、移植片を有するマウスの５つの異なる群のうちの各々から得た。個々の群を、以下のとおりに処置した：（群１）ＣＤ２００に結合しないコントロール抗体；（群２）抗ＣＤ２００抗体；（群３）シクロスポリンＡ；（群４）上記コントロール抗体とシクロスポリンＡの組み合わせ；および（群５）上記抗ＣＤ２００抗体とシクロスポリンＡとの組み合わせ。（各群についての上記処置レジメンのさらなる詳細は、以下の実施例５に提供される）。図１〜４のＹ軸は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の単位であり、これは、細胞１個あたりをベースにした所定の抗原（例えば、ＣＤ４０（図１）、ＭＨＣクラスＩＩ（図２）、ＣＤ８０（図３）、およびＩＬ−１２（図４））の相対的発現レベルの尺度である。図５〜１２のＹ軸は、単離された脾細胞の集団中の所定の細胞タイプのパーセンテージ単位である。図１２は、上記群のうちの各々のマウスから得られた単離された脾細胞集団全体に対するＣＤ１９＋ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージを示す。
【図１３−１】図１３Ａ〜１３Ｄは、免疫染色した脾細胞の一連の写真を示す。これら写真は、上記脾細胞によるＳＨＩＰ（ＳＨ２含有イノシトール−５’−ホスファターゼ）発現のレベルを示す。各写真に示される脾細胞を、５００万個の同種（Ｂ６マウス）脾細胞（腹腔内に投与）で免疫化したＢＡＬＢ／ｃマウスから単離した。上記免疫化したマウスに、抗ＣＤ２００抗体（エフェクター機能を有する）［図１３Ａ］もしくはコントロール抗体（エフェクター機能を有する）［図１３Ｂ］をさらに投与した。処置後に脾臓を採取し、固定し、免疫組織化学に供した（以下を参照のこと）。図１３Ｃは、上記同種脾細胞で免疫化しなかったマウスの脾細胞によるＳＨＩＰ発現を示す。図１３Ｄは、一次抗ＳＨＩＰ抗体で染色しなかった免疫化マウスに由来する脾細胞を示す。上記に示される各実験群には、３匹のマウスを含めた。各群の代表的写真が提供される。
【図１３−２】図１３Ａ〜１３Ｄは、免疫染色した脾細胞の一連の写真を示す。これら写真は、上記脾細胞によるＳＨＩＰ（ＳＨ２含有イノシトール−５’−ホスファターゼ）発現のレベルを示す。各写真に示される脾細胞を、５００万個の同種（Ｂ６マウス）脾細胞（腹腔内に投与）で免疫化したＢＡＬＢ／ｃマウスから単離した。上記免疫化したマウスに、抗ＣＤ２００抗体（エフェクター機能を有する）［図１３Ａ］もしくはコントロール抗体（エフェクター機能を有する）［図１３Ｂ］をさらに投与した。処置後に脾臓を採取し、固定し、免疫組織化学に供した（以下を参照のこと）。図１３Ｃは、上記同種脾細胞で免疫化しなかったマウスの脾細胞によるＳＨＩＰ発現を示す。図１３Ｄは、一次抗ＳＨＩＰ抗体で染色しなかった免疫化マウスに由来する脾細胞を示す。上記に示される各実験群には、３匹のマウスを含めた。各群の代表的写真が提供される。
【図１４】図１４は、上記のように、５００万個のＢ６脾細胞で免疫化したＢＡＬＢ／ｃマウスから得られた脾細胞による平均の相対的ＳＨＩＰ発現を示す棒グラフである。上記免疫化マウスに、抗ＣＤ２００抗体（エフェクター機能を有する）［抗体３；実施例３を参照のこと］もしくはコントロール抗体（エフェクター機能を有する）［抗体４；実施例３を参照のこと］をさらに投与した。マウスの１群「偽」には、免疫化も抗体処置も与えなかった。上記に示される各実験群には、３匹のマウスを含めた。処置後に、上記マウスの脾臓を採取し、固定し、免疫組織化学に供した。脾細胞切片からの平均の相対的発現を、デンシトメトリーを使用して定量し、総ピクセル単位で報告する（×Ｅ＋７）。
【図１５】図１５は、上記のように５００万個のＢ６脾細胞で免疫化したＦｃγＲ２ｂ欠損ＢＡＬＢ／ｃマウスから得られた脾細胞による平均の相対的ＳＨＩＰ発現を示す棒グラフである。上記免疫化マウスに、抗ＣＤ２００抗体（エフェクター機能を有する）［抗体３；実施例３を参照のこと］もしくはコントロール抗体（エフェクター機能を有する）［抗体４；実施例３を参照のこと］をさらに投与した。マウスの１群「偽」には、免疫化も抗体処置も与えなかった。上記に示される各実験群には、３匹のマウスを含めた。処置後に、上記マウスの脾臓を採取し、固定し、免疫組織化学に供した。脾細胞切片からの平均の相対的発現を、デンシトメトリーを使用して定量し、総ピクセル単位で報告する。（×Ｅ＋７）。
【発明を実施するための形態】
【００９９】
（詳細な説明）
本開示は、抗ＣＤ２００抗体（上記抗体のＣＤ２００結合フラグメントを含む）、薬学的組成物、およびキット（これらのうちの各々は、哺乳動物において免疫応答を調節するために有用である）を提供する。この節において詳述されるように、上記抗体（または組成物もしくはキット）は、レシピエント哺乳動物（例えば、ヒト）において移植片の生存を長期化するための方法において、単独でもしくは組み合わせにおいて使用され得る。限定されるとは決して解釈されないが、上記抗体、キット、および組み合わせが使用され得る適切な適用は、この節において示され、以下の実施例において例示される。
【０１００】
（抗ＣＤ２００抗体）
本開示は、ヒトＣＤ２００ポリペプチドに結合する抗体（ときおり、上記抗体は、本明細書において「抗ＣＤ２００抗体」といわれる）を特徴とする。また、上記抗体の抗原結合（ＣＤ２００結合）フラグメントを特徴とする。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、ヒトＣＤ２００タンパク質内の細胞外エピトープに結合する。例えば、上記抗ＣＤ２００抗体は、ヒトＣＤ２００タンパク質における細胞外エピトープに結合し得、このタンパク質は、以下のアミノ酸配列：
【０１０１】
【化１】
2014505706.tif 000003
（配列番号１；  ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００５９３５．２）を有する。配列番号１は、全長の前駆ヒトＣＤ２００アイソフォームＡタンパク質のアミノ酸配列を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、ヒトＣＤ２００タンパク質中のエピトープに結合し、このタンパク質は、以下のアミノ酸配列：
【０１０２】
【化２】
2014505706.tif 000004
（配列番号２；  ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１００４１９６．２）を有する。配列番号２は、全長ＣＤ２００アイソフォームＢタンパク質のアミノ酸配列を示す。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ヒトＣＤ２００タンパク質に存在するエピトープに結合し、このタンパク質は、以下のアミノ酸配列：
【０１０３】
【化３】
2014505706.tif 000005
（配列番号３；Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号  ＣＡＡ２８９４３．１；ＭｃＣａｕｇｈａｎら（１９８７）  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２５：３２９−３３５の図３）を有する。配列番号３は、全長ヒトＣＤ２００タンパク質の例示的配列である。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、例えば、（ｉ）配列番号１に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１〜２３３；（ｉｉ）配列番号２に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１〜２５８；または（ｉｉｉ）配列番号３に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１〜２２９の中にあるかもしくはこれらと重複するエピトープにおいてＣＤ２００タンパク質の細胞外部分に結合し得る。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、リーダー配列を欠いている上記ヒトＣＤ２００タンパク質内の細胞外エピトープに結合する。例えば、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、配列番号１（これは、上記アミノ末端リーダー配列を除いたヒトＣＤ２００アイソフォームＡの成熟形態の細胞外部分に対応する）に示されるアミノ酸配列のアミノ酸３１〜２３３の中にあるかもしくはこれと重複するエピトープにおいてＣＤ２００タンパク質に結合し得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、配列番号２（これは、上記アミノ末端リーダー配列を除いたヒトＣＤ２００アイソフォームＢの成熟形態の細胞外部分に対応する）に示されるアミノ酸配列のアミノ酸５６〜２５８の中にあるかもしくはこれと重複するエピトープにおいてＣＤ２００タンパク質に結合し得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、配列番号３（これは、上記アミノ末端リーダー配列を除いたヒトＣＤ２００の成熟形態の細胞外部分に対応する）に示されるアミノ酸配列のアミノ酸２７〜２２９の中にあるかもしくはこれと重複するエピトープにおいてＣＤ２００タンパク質に結合し得る。
【０１０６】
「エピトープ」とは、抗体によって結合されるタンパク質（例えば、ヒトＣＤ２００タンパク質）の部位をいう。「重複エピトープ」は、少なくとも１個（例えば、２個、３個、４個、５個、もしくは６個）の共通するアミノ酸残基を含む。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ヒトＣＤ２００タンパク質（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する上記ヒトＣＤ２００タンパク質、または上記ＣＤ２００タンパク質の成熟形態の細胞外ドメイン）に特異的に結合する。用語「特異的結合」もしくは「特異的に結合する」とは、生理学的条件下で比較的安定な複合体（例えば、抗ＣＤ２００抗体とＣＤ２００タンパク質との間の複合体）を形成する２つの分子に言及する。代表的には、結合は、会合定数（Ｋａ）が１０６Ｍ−１より高い場合に特異的とみなされる。従って、抗ＣＤ２００抗体は、ＣＤ２００タンパク質に少なくとも１０６（もしくはこれより高い）（例えば、少なくとも１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３、１０１４、もしくは１０１５以上、もしくはこれらより高い）Ｍ−１のＫａで特異的に結合し得る。ヒトＣＤ２００タンパク質に特異的に結合する抗体の例は、以下に記載される：例えば、米国特許第７，４０８，０４１号；同第７，４２７，６６５号；同第７，４３５，４１２号；および同第７，５９８，３５３号（これらの各々の開示は、それらの全体が本明細書に参考として援用される）。
【０１０８】
いくつかの例示的な抗ＣＤ２００抗体のアミノ酸配列は、例えば、米国特許第７，４０８，０４１号に記載される。例えば、上記抗ＣＤ２００抗体は、米国特許第７，４０８，０４１の図２３に示されるＦａｂ抗体（ｄ１Ｂ１０、ｄ１Ａ５、ｄ１Ｂ５、ｃ２ａＢ７、ｃ１Ａ１０、もしくはｃ２ａＡ１０）のうちの１つの重鎖および軽鎖の可変領域のアミノ酸配列を含み得る。図２３に示される配列は、それらの全体が本明細書に参考として援用される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、米国特許第７，４０８，０４１号の図２３に示されるＦａｂ抗体のうちの１つの重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲの対になったセットを含む。例えば、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、上記ｄ１Ｂ１０  Ｆａｂ抗体に由来するＣＤＲの対になったセットを含む：以下の配列：ＧＦＴＦＳＧＦＡＭＳ（配列番号４）を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）；以下の配列：ＳＩＳＳＧＧＴＴＹＹＬＤＳＶＫＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）；以下の配列：ＧＮＹＹＳＧＴＳＹＤＹ（配列番号６）を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）；以下の配列：ＲＡＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号７）を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）；以下の配列：ＲＡＳＮＬＥＳ（配列番号８）を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）；および以下の配列：ＱＱＳＮＥＤＰＲＴ（配列番号９）を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）。
【０１０９】
別の例において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、上記ｄ１Ａ５  Ｆａｂ抗体に由来するＣＤＲの対になったセットを含み得る：（ｉ）以下の配列：ＧＦＮＩＫＤＹＹＭＨ（配列番号１０）を含むＨＣＤＲ１；以下の配列：ＷＩＤＰＥＮＧＤＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号１１）を含むＨＣＤＲ２；以下の配列：ＫＮＹＹＶＳＮＹＮＦＦＤＶ（配列番号１２）を含むＨＣＤＲ３；以下の配列：ＳＡＳＳＳＶＲＹＭＹ（配列番号１３）を含むＬＣＤＲ１；以下の配列：ＤＴＳＫＬＡＳ（配列番号１４）を含むＬＣＤＲ２；および以下の配列：ＦＱＧＳＧＹＰＬＴ（配列番号１５）を含むＬＣＤＲ３。
【０１１０】
別の例において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、上記ｄ１Ｂ５  Ｆａｂ抗体に由来するＣＤＲの対になったセットを含み得る：以下のアミノ酸配列：ＧＦＮＩＫＤＹＹＩＨ（配列番号１６）を含むＨＣＤＲ１；以下のアミノ酸配列：ＷＩＤＰＥＩＧＡＴＫＹＶＰＫＦＱＧ（配列番号１７）を含むＨＣＤＲ２；以下のアミノ酸配列：ＬＹＧＮＹＤＲＹＹＡＭＤＹ（配列番号１８）を含むＨＣＤＲ３；以下のアミノ酸配列：ＫＡＳＱＮＶＲＴＡＶＡ（配列番号１９）を含むＬＣＤＲ１；以下のアミノ酸配列：ＬＡＳＮＲＨＴ（配列番号２０）を含むＬＣＤＲ２；および以下のアミノ酸配列：ＬＱＨＷＮＹＰＬＴ（配列番号２１）を含むＬＣＤＲ３。
【０１１１】
別の例において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、上記ｃ２ａＢ７  Ｆａｂ抗体に由来するＣＤＲの対になったセットを含み得る：アミノ酸配列：ＧＹＳＦＴＤＹＩＩＬ（配列番号２２）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＨＩＤＰＹＹＧＳＳＮＹＮＬＫＦＫＧ（配列番号２３）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＳＫＲＤＹＦＤＹ（配列番号２４）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳ（配列番号２５）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＲＡＮＲＬＶＤ（配列番号２６）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（配列番号２７）を含むＬＣＤＲ３。サマリズマブは、米国特許第７，４０８，０４１号の図２３にもともと示された上記ｃ２ａＢ７  Ｆａｂ抗体の前述の対になったＣＤＲのセットを含む。
【０１１２】
なお別の例において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、上記ｃ１Ａ１０  Ｆａｂ抗体に由来するＣＤＲの対になったセットを含み得る：アミノ酸配列：ＧＹＴＦＴＥＹＴＭＨ（配列番号２８）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＧＶＮＰＮＮＧＧＡＬＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号２９）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＲＳＮＹＲＹＤＤＡＭＤＹ（配列番号３０）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＫＳＳＱＳＬＬＤＩＤＥＫＴＹＬＮ（配列番号３１）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号３２）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＷＱＧＴＨＦＰＱＴ（配列番号３３）を含むＬＣＤＲ３。
【０１１３】
そしてなお別の例において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、上記ｃ２ａＡ１０  Ｆａｂ抗体に由来するＣＤＲの対になったセットを含み得る：アミノ酸配列：ＡＦＮＩＫＤＨＹＭＨ（配列番号３４）を含むＨＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＷＩＤＰＥＳＧＤＴＥＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号３５）を含むＨＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＦＮＧＹＱＡＬＤＱ（配列番号３６）を含むＨＣＤＲ３；アミノ酸配列：ＴＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＨ（配列番号３７）を含むＬＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号３８）を含むＬＣＤＲ２；およびアミノ酸配列：ＲＱＹＨＲＳＰＰＩＦＴ（配列番号３９）を含むＬＣＤＲ３。
【０１１４】
抗ＣＤ２００抗体のＣＤＲのさらなる例示的なセットは、例えば、米国特許第７，４２７，６６５号に記載される。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、サマリズマブ（Ａｌｅｘｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｃｈｅｓｈｉｒｅ，  ＣＴ）である。
【０１１５】
抗体がタンパク質抗原に結合するか否か、そして／またはタンパク質抗原に対する抗体の親和性を決定するための方法は、当該分野で公知である。例えば、タンパク質抗原に対する抗体の結合は、種々の技術（例えば、ウェスタンブロット、ドットブロット、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅシステム；Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）、もしくは酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）が挙げられるが、これらに限定されない）を使用して検出および／もしくは定量され得る。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）  「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｂｅｎｎｙ  Ｋ．Ｃ．Ｌｏ（２００４）  「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（ＩＳＢＮ：１５８８２９０９２１）；Ｂｏｒｒｅｂａｅｋ（１９９２）  「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ」，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ＮＹ；Ｂｏｒｒｅｂａｅｋ（１９９５）  「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，Ｏｘｆｏｒｄ；Ｊｏｈｎｅら（１９９３）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ  １６０：１９１−１９８；Ｊｏｎｓｓｏｎら（１９９３）Ａｎｎ  Ｂｉｏｌ  Ｃｌｉｎ  ５１：１９−２６；およびＪｏｎｓｓｏｎら（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７を参照のこと。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ヒトＣＤ２００タンパク質の中にあるかもしくはこれと重複するエピトープに結合する別の抗体の結合を交差ブロック（ｃｒｏｓｓｂｌｏｃｋ）する。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ヒトＣＤ２００タンパク質のペプチドフラグメントの中にあるかもしくはこれと重複するエピトープに結合する抗体の結合を交差ブロックし得る。上記ペプチドフラグメントは、例えば、配列番号１〜３のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を有するヒトＣＤ２００タンパク質のフラグメントであり得る。本明細書に記載される場合、用語「交差ブロック抗体」とは、上記抗体の非存在下での上記エピトープへの上記抗ＣＤ２００抗体の結合の量と比較して、ＣＤ２００タンパク質上のエピトープへの抗ＣＤ２００抗体の結合の量を低下させる抗体をいう。第１の抗体が、エピトープへの第２の抗体の結合を交差ブロックするか否かを決定するために適した方法は、当該分野で公知である。
【０１１７】
特定の抗体（例えば、抗ＣＤ２００抗体）が結合する上記エピトープを同定するための方法はまた、当該分野で公知である。例えば、抗ＣＤ２００抗体の結合エピトープは、ＣＤ２００タンパク質のいくつかの（例えば、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、もしくは３０個以上の）重複するペプチドフラグメント（例えば、例えば、配列番号１〜３のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を有するタンパク質のいくつかの重複するフラグメント）に対する上記抗体の結合を測定することによって同定され得る。次いで、種々の重複するペプチドの各々は、固体支持体（例えば、マルチウェルアッセイプレートの別個のウェル）上の特有のアドレスに結合される。次に、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記抗ＣＤ２００抗体を、上記抗体がそのエピトープに結合するのを可能にする時間量および条件下で、上記アッセイプレートにおける上記ペプチドの各々に接触させることによって、問い合わせされる。結合しない抗ＣＤ２００抗体は、上記ウェルの各々を洗浄することによって除去される。次に、上記抗ＣＤ２００抗体に結合する、検出可能に標識された二次抗体を、上記プレートのウェルに存在する場合、上記ウェルの各々に接触させ、結合しない二次抗体は、洗浄工程によって除去される。ウェルにおける上記検出可能に標識された二次抗体によって生成される検出可能なシグナルの存在もしくは量は、上記抗ＣＤ２００抗体が、上記ウェルと関連した特定のペプチドフラグメントに結合するという指標である。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（前出），Ｂｅｎｎｙ  Ｋ．Ｃ．Ｌｏ（前出）、および米国特許出願公開第２００６０１５３８３６号（その開示は、その全体が本明細書に参考として援用される）を参照のこと。抗体が結合する特定のエピトープはまた、ＢＩＡｃｏｒｅクロマトグラフィー技術を使用して同定され得る（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＢＩＡｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，「Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ」，Ｓｅｃｔｉｏｎ  ６．３．２，（Ｍａｙ  １９９４）；およびＪｏｈｎｅら（１９９３）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １６０：１９１−８を参照のこと）。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体、もしくはそのＣＤ２００結合フラグメントは、細胞の表面に発現されるヒトＣＤ２００ポリペプチドに結合する。抗体が、細胞の表面に発現されるタンパク質に結合するか否かを決定するための方法は、当該分野で公知であり、例えば、Ｐｅｔｅｒｍａｎｎら（２００７）  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １１７（１２）：３９２２−３９２９；Ｒｉｊｋｅｒｓら（２００８）
Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４５（４）：１１２６−３５；およびＫｒｅｔｚ−Ｒｏｍｍｅｌ（２００７）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７８（９）：５５９５−５６０５に記載される。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体もしくはそのＣＤ２００結合フラグメントは、ＣＤ２００タンパク質とＣＤ２００レセプターとの間の相互作用を阻害する。薬剤（例えば、抗ＣＤ２００抗体）が、ＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの間の相互作用を阻害するか否かを決定するための方法は、当該分野で公知であり、例えば、ＨａｔｈｅｒｌｙおよびＢａｒｃｌａｙ（２００４）  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３４（６）：１６８８−１６９４に記載される。いくつかの実施形態において、上記抗体は、上記抗体の非存在下でのＣＤ２００とそのレセプターとの間の相互作用のレベルと比較して、ＣＤ２００とそのレセプターとに間の相互作用を少なくとも２０％（例えば、少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくはさらに１００％）阻害する。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体もしくはそのＣＤ２００結合フラグメントは、インビトロおよび／もしくはインビボでの破骨細胞の形成を阻害する。抗体が破骨細胞の形成を阻害するか否かを決定するために適した方法は、当該分野で公知であり、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ  ０８／０８９０２２およびＣｕｉら（２００７）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０４（３６）：１４４３６−１４４４１に記載される。例えば、マウス骨髄細胞は、抗ＣＤ２００抗体の存在下もしくは非存在下で、例えば、ＲＡＮＫＬおよびＭ−ＣＳＦの存在下で培養され得る。上記抗体の非存在下で形成される破骨細胞のパーセンテージと比較した、上記抗体の存在下での上記骨髄細胞から形成される破骨細胞のパーセンテージの低下は、上記抗体がインビトロでの破骨細胞形成を阻害することを示す。
【０１２１】
ＣＤ２００は、正常細胞（例えば、内皮細胞）で発現されるので、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）もしくは補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を媒介しないか、もしくは媒介する能力が低下するように改変された定常領域を有する改変抗ＣＤ２００抗体（もしくはそのＣＤ２００結合フラグメント）を投与することは、いくつかの実施形態において有利であり得る。ＣＤ２００発現はまた、いくらかの活性化された正常細胞（例えば、活性化Ｔ細胞）上でアップレギュレートされ、このような細胞をエフェクター機能を有する抗ＣＤ２００抗体による死滅に弱くする。エフェクター機能が減殺されているかエフェクター機能を欠いている抗ＣＤ２００抗体を使用して、ＡＤＣＣもしくはＣＤＣによるこれら細胞の死滅を回避することは、有利であり得る。抗ＣＤ２００抗体のエフェクター機能は、エフェクター機能を有する免疫グロブリン定常領域（例えば、ＩｇＧ１定常ドメイン）を、エフェクター機能を有さない定常領域（例えば、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４融合定常領域）で置換することによって排除され得る。抗体重鎖定常領域のエフェクター機能を低減または排除するためのさらなる方法は、以下に記載される。
【０１２２】
（抗体を生成するための方法）
本開示に従う抗体、もしくはその抗原結合フラグメントを生成するために適した方法は、当該分野で公知であり（例えば、米国特許第７，４０８，０４１号およびＰＣＴ出願公開番号ＷＯ  ０９／０１４７４５を参照のこと）、本明細書に記載される。例えば、モノクローナル抗ＣＤ２００抗体は、ＣＤ２００発現細胞、ＣＤ２００ポリペプチド、もしくはＣＤ２００ポリペプチドの抗原性フラグメントを免疫原として使用して生成され得、従って、抗体生成細胞および次に、モノクローナル抗体が単離され得る動物において免疫応答が惹起され得る。このような抗体の配列が決定され得、上記抗体もしくはその改変体は、組み換え技術によって生成され得る。組み換え技術は、上記モノクローナル抗体ならびにヒトＣＤ２００に結合し得るポリペプチドの配列に基づいて、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト化抗体、ヒト化抗体および完全ヒト抗体を生成するために使用され得る。
【０１２３】
さらに、組換えライブラリーから得られる抗体（「ファージ抗体」）は、ベイト（ｂａｉｔ）として、標的特異性に基づいて上記抗体もしくはポリペプチドを単離するために、ＣＤ２００発現細胞、もしくはそれから得られるポリペプチドを使用して選択され得る。非ヒトおよびキメラ抗ＣＤ２００抗体の生成および単離は、十分に当業者の技術範囲内である。
【０１２４】
組換えＤＮＡ技術は、非ヒト細胞において生成される抗体の１つ以上の特徴を改変するために使用され得る。従って、キメラ抗体は、診断適用もしくは治療適用においてその免疫原性を低下させるために構築され得る。さらに、免疫原性は、ＣＤＲグラフト化、および必要に応じて、フレームワーク改変によって、上記抗体をヒト化することによって最小限にされ得る。米国特許第５，２２５，５３９号および同第７，３９３，６４８号（これらの各々の内容は、本明細書に参考として援用される）を参照のこと。
【０１２５】
抗体は、動物血清から得られ得るか、またはモノクローナル抗体もしくはそのフラグメントの場合には、細胞培養物において生成され得る。組換えＤＮＡ技術は、確立された手順（細菌細胞培養物もしくは好ましくは、哺乳動物細胞培養物における手順が挙げられる）に従って上記抗体を生成するために使用され得る。上記選択された細胞培養システムは、好ましくは、上記抗体生成物を分泌する。
【０１２６】
別の実施形態において、本明細書で開示される抗体の生成のためのプロセスは、宿主（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉもしくは哺乳動物細胞）を培養する工程を包含し、上記宿主は、ハイブリッドベクターで形質転換されている。上記ベクターは、１個以上の発現カセットを含み、上記発現カセットは、上記抗体タンパク質をコードする第２のＤＮＡ配列に適切なリーディングフレームで連結されたシグナルペプチドをコードする第１のＤＮＡ配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む。次いで、上記抗体タンパク質は、集められ、単離される。必要に応じて、上記発現カセットは、抗体タンパク質（各々個々に、適切なリーディングフレームでシグナルペプチドに作動可能に連結される）をコードするポリシストロン性（例えば、二シストロン性）ＤＮＡ配列に作動可能に連結されたプロモーターを含み得る。
【０１２７】
インビトロでのハイブリドーマ細胞もしくは哺乳動物宿主細胞の増殖は、適切な培養培地中で行われ、上記培養培地は、哺乳動物血清（例えば、ウシ胎仔血清）、もしくは微量元素および増殖持続補助物質（例えば、フィーダー細胞（例えば、正常マウス腹腔滲出細胞）、脾細胞、骨髄マクロファージ、２−アミノエタノール、インスリン、トランスフェリン、低密度リポタンパク質、オレイン酸など）が必要に応じて補充された習慣的な標準培養培地（例えば、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）もしくはＲＰＭＩ  １６４０培地）を含む。細菌細胞もしくは酵母細胞である宿主細胞の増殖は、同様に、当該分野で公知の適切な培養培地中で行われる。例えば、細菌に関して、適切な培養培地としては、ＬＥ培地、ＮＺＣＹＭ培地、ＮＺＹＭ培地、ＮＺＭ培地、Ｔｅｒｒｉｆｉｃ  Ｂｒｏｔｈ培地、ＳＯＢ培地、ＳＯＣ培地、２ｘＹＴ培地、もしくはＭ９最小培地が挙げられる。酵母に関しては、適切な培養培地としては、ＹＰＤ培地、ＹＥＰＤ培地、最小培地、もしくは完全ミネラルドロップアウト培地（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｍｉｎｉｍａｌ  Ｄｒｏｐｏｕｔ  Ｍｅｄｉｕｍ）が挙げられる。
【０１２８】
インビトロ生成は、比較的純粋な抗体調製物を提供し、スケールアップ生成を可能にして、大量の所望の抗体を与える。細菌細胞、酵母、植物、もしくは哺乳動物細胞培養の技術は、当該分野で公知であり、均質な懸濁培養（例えば、エアリフトリアクター中もしくは連続撹拌リアクター中で）、および固定化されたもしくは閉じ込められた細胞培養（例えば、中空繊維、マイクロカプセル中、アガロースマイクロビーズもしくはセラミックカートリッジ上で）が挙げられる。
【０１２９】
大量の所望の抗体はまた、インビボで哺乳動物細胞を増殖させることによって得られ得る。この目的のために、上記所望の抗体を生成するハイブリドーマ細胞が、組織適合性哺乳動物の中に注射されて、抗体生成腫瘍の増殖を引き起こす。必要に応じて、上記動物は、注射前に、炭化水素（特に、ミネラルオイル（例えば、プリスタン（テトラメチル−ペンタデカン）））で刺激される。１〜３週間後、上記抗体は、それら哺乳動物の体液から単離される。例えば、適切なメラノーマ細胞と、Ｂａｌｂ／ｃマウスに由来する抗体生成脾細胞との融合によって得られるハイブリドーマ細胞または上記所望の抗体を生成するハイブリドーマ細胞株Ｓｐ２／０に由来するトランスフェクトされた細胞は、必要に応じて、プリスタンで予め処理したＢａｌｂ／ｃマウスの腹腔内に注射される。１〜２週間後に、腹水を上記動物から採取する。
【０１３０】
前述のおよび他の技術は、例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，（１９７５）  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７；米国特許第４，３７６，１１０号；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（１９８８）  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ（これらの開示はすべて、本明細書に参考として援用される）おいて考察されている。組換え抗体分子の調製のための技術は、上記参考文献に記載され、そして例えば：ＷＯ９７／０８３２０；米国特許第５，４２７，９０８号；米国特許第５，５０８，７１７号；Ｓｍｉｔｈ（１９８５）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２５：１３１５−１３１７；ＰａｒｍｌｅｙおよびＳｍｉｔｈ（１９８８）  Ｇｅｎｅ  ７３：３０５−３１８；Ｄｅ  Ｌａ  Ｃｒｕｚら（１９８８）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６３：４３１８−４３２２；米国特許第５，４０３，４８４号；米国特許第５，２２３，４０９号；ＷＯ８８／０６６３０；ＷＯ９２／１５６７９；米国特許第５，７８０，２７９号；米国特許第５，５７１，６９８号；米国特許第６，０４０，１３６号；Ｄａｖｉｓら（１９９９）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．１８（４）：４２１−５；Ｔａｙｌｏｒら（１９９２）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２０：６２８７−６２９５；およびＴｏｍｉｚｕｋａら（２０００）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７（２）：７２２−７２７（これらの各々の内容は、それらの全体が本明細書に参考として援用される）においても記載される。
【０１３１】
上記細胞培養上清は、ＣＤ２００発現細胞の免疫蛍光染色によって、イムノブロッティングによって、酵素イムノアッセイ（例えば、サンドイッチアッセイもしくはドットアッセイ、またはラジオイムノアッセイ）によって、優先的に上記所望の抗体についてスクリーニングされる。
【０１３２】
上記抗体の単離のために、上記培養上清もしくは腹水中の免疫グロブリンは、例えば、硫酸アンモニウムでの沈殿、吸湿性物質（例えば、ポリエチレングリコール）に対する透析、選択膜を介する濾過などによって、濃縮され得る。必要な場合および／もしくは所望される場合、上記抗体は、習慣的なクロマトグラフィー法（例えば、ゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィー、ＤＥＡＥ−セルロースに対するクロマトグラフィーおよび／もしくは（イムノ−）アフィニティークロマトグラフィー（例えば、ＣＤ２００発現細胞株に由来する１種以上の表面ポリペプチド、またはプロテインＡもしくはプロテイン−Ｇでのアフィニティークロマトグラフィー））によって精製される。
【０１３３】
別の実施形態は、適切な哺乳動物におけるＣＤ２００タンパク質に対して指向される抗体を分泌する細菌細胞株の調製のためのプロセスを提供する。例えば、ウサギは、ＣＤ２００発現組織もしくは細胞またはＣＤ２００ポリペプチドもしくはそのフラグメントに由来するプールされたサンプルで免疫化される。上記免疫化されたウサギから生成されるファージディスプレイライブラリーが構築され、当該分野で周知の方法（例えば、本明細書に参考として援用される種々の文献中で開示される方法）に従って所望の抗体についてパニング（ｐａｎ）される。
【０１３４】
上記モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞がまた、開示される。上記好ましいハイブリドーマ細胞は、一般に、安定であり、所望の特異性の本明細書に記載されるモノクローナル抗体を分泌し、インビトロでの融解および増殖によって極低温で凍結した培養物から増殖させられ得るか、もしくはインビボで腹水として増殖させられ得る。
【０１３５】
別の実施形態において、ＣＤ２００タンパク質に対するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞株の調製のためのプロセスが提供される。そのプロセスにおいて、適切な哺乳動物（例えば、Ｂａｌｂ／ｃマウス）は、ＣＤ２００の１種以上のポリペプチドもしくは抗原性フラグメントで、またはＣＤ２００発現細胞に由来する１種以上のポリペプチドもしくは抗原性フラグメント、上記ＣＤ２００発現細胞自体、もしくは記載されるように精製ポリペプチドを含む抗原性キャリアで免疫化される。上記免疫化された哺乳動物の抗体生成細胞は、培養において短時間増殖させられるか、または適切な骨髄腫細胞株の細胞と融合される。上記融合において得られたハイブリッド細胞は、クローニングされ、望ましい抗体を分泌する細胞クローンが選択される。例えば、ヒトＣＤ２００を発現する慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞株で免疫化したＢａｌｂ／ｃマウスの脾細胞は、骨髄腫細胞株ＰＡＩもしくは骨髄腫細胞株Ｓｐ２／０−Ａｇ  １４の細胞と融合される。次いで、得られたハイブリッド細胞は、望ましい抗体の分泌についてスクリーニングされ、陽性のハイブリドーマ細胞がクローニングされる。
【０１３６】
ハイブリドーマ細胞株を調製するための方法は、ヒトＣＤ２００タンパク質を含む免疫原性組成物（またはその免疫原性フラグメント）を数回（例えば、４〜６回）数ヶ月にわたって（例えば、２〜４ヶ月の間）皮下注射および／もしくは腹腔内注射することによってＢａｌｂ／ｃマウスを免疫化する工程を包含する。上記免疫化したマウス由来の脾細胞は、最後の注射の２〜４日後に採取され、融合促進剤（好ましくは、ポリエチレングリコール）の存在下で、骨髄腫細胞株ＰＡＩの細胞と融合される。好ましくは、上記骨髄腫細胞は、分子量約４０００の約３０％〜約５０％  ポリエチレングリコールを含む溶液中に、上記免疫化したマウスに由来する３〜２０倍過剰の脾細胞と融合される。融合後、上記細胞を前述で記載されるように、通常の骨髄腫細胞が所望のハイブリドーマ細胞よりも多く増殖させないようにするために、周期的な間隔で、選択培地（例えば、ＨＡＴ培地）を補充した適切な培養培地中で増殖される。
【０１３７】
上記抗体およびそのフラグメントは、「キメラ」であり得る。キメラ抗体およびその抗原結合フラグメントは、２種以上の異なる種（例えば、マウスおよびヒト）に由来する部分を含む。キメラ抗体は、ヒト定常ドメイン遺伝子セグメントの中にスプライシングされた所望の特異性のマウス可変領域とともに生成され得る（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号）。この様式において、非ヒト抗体は、これをヒト臨床適用（例えば、ヒト被験体における免疫関連障害を処置もしくは予防するための方法）により適切にするように改変され得る。
【０１３８】
本開示のモノクローナル抗体は、上記非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態を含む。ヒト化もしくはＣＤＲグラフト化ｍＡｂは、ヒトのための治療剤として特に有用である。なぜなら、それらは、マウス抗体ほど迅速には循環から浄化されず、代表的には、有害な免疫反応を誘起しないからである。ヒト化抗体を調製する方法は、一般には、当該分野で周知である。例えば、ヒト化は、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者らの方法に従って、齧歯類ＣＤＲもしくはＣＤＲ配列を、ヒト抗体の対応する配列の代わりに使用することによって本質的に行われ得る（例えば、Ｊｏｎｅｓら（１９８６）  Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；およびＶｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６を参照のこと）。また、例えば、Ｓｔａｅｌｅｎｓら（２００６）  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４３：１２４３−１２５７を参照のこと。いくつかの実施形態において、非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、ヒト抗体（レシピエント抗体）であり、ここで、上記レシピエント抗体の超可変（ＣＤＲ）領域残基が、所望の特異性、親和性、および結合能を有する非ヒト種（ドナー抗体）（例えば、マウス、ラット、ウサギ、もしくは非ヒト霊長類）に由来する超可変領域残基で置換されている。いくつかの例において、上記ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域残基はまた、対応する非ヒト残基によって置換される（いわゆる、「復帰変異」）。さらに、ファージディスプレイライブラリーは、上記抗体配列内の選択された位置においてアミノ酸を変動させるために使用され得る。ヒト化抗体の特性はまた、上記ヒトフレームワークの選択によって影響を受ける。さらに、ヒト化抗体およびキメラ抗体は、抗体特性（例えば、親和性もしくはエフェクター機能）をさらに改善するために、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見いだされない残基を含むように改変され得る。
【０１３９】
完全ヒト抗体はまた、本開示において提供される。用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域（存在する場合）を有する抗体を含む。ヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含み得る（例えば、インビトロでのランダム変異誘発もしくは部位特異的変異誘発によって導入される変異もしくはインビボでの体性変異）。しかし、用語「ヒト抗体」は、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列にグラフト化された抗体（すなわち、ヒト化抗体）を含まない。完全ヒト抗体もしくはヒト抗体は、ヒト抗体遺伝子（可変（Ｖ）、多様性（Ｄ）、結合（Ｊ）、および定常（Ｃ）エキソン）を有するトランスジェニックマウスまたはヒト細胞に由来し得る。例えば、いまや、免疫の際に、内因性免疫グロブリン生成の非存在下でヒト抗体の完全レパートリーを生成し得るトランスジェニック動物（例えば、マウス）を生成することは可能である。（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら（１９９３）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０：２５５１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら（１９９３）  Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−２５８；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら（１９９３）  Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ７：３３；およびＤｕｃｈｏｓａｌら（１９９２）  Ｎａｔｕｒｅ  ３５５：２５８を参照のこと。）トランスジェニックマウス系統は、再配列されていないヒト免疫グロブリン遺伝子に由来する遺伝子配列を含むように操作され得る。上記ヒト配列は、ヒト抗体の重鎖および軽鎖両方をコードし得、マウスにおいて正確に機能し、再配列を受けて、ヒトにおけるものと類似の広い抗体レパートリーを提供し得る。上記トランスジェニックマウスは、上記標的タンパク質（例えば、ＣＤ２００タンパク質、そのフラグメント、またはＣＤ２００タンパク質を発現する細胞）で免疫化されて、特異的抗体の多様なアレイおよびそれらのコードＲＮＡを作製し得る。このような抗体の上記抗体鎖成分をコードする核酸は、次いで、上記動物からディスプレイベクターへとクローニングされ得る。代表的には、重鎖および軽鎖の配列をコードする別個の核酸集団は、クローニングされ、上記別個の集団は、次いで、ベクターへの挿入の際に組換えられ得、その結果、上記ベクターの任意の所定のコピーは、重鎖および軽鎖のランダム組換えを受容する。上記ベクターは、抗体鎖を発現するように設計され、その結果、それらは、組み立てられ得、上記ベクターを含むディスプレイパッケージ（ｄｉｓｐｌａｙ  ｐａｃｋａｇｅ）の外側表面にディスプレイされ得る。例えば、抗体鎖は、上記ファージの外側表面のファージコートタンパク質との融合タンパク質として発現され得る。その後、ディスプレイパッケージは、標的へ結合する抗体のディスプレイについてスクリーニングされ得る。
【０１４０】
さらに、ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーに由来し得る（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９１）  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２７：３８１；Ｍａｒｋｓら（１９９１）  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２２：５８１−５９７；およびＶａｕｇｈａｎら（１９９６）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  １４：３０９（１９９６））。合成ファージライブラリーが作製され得、これは、合成ヒト抗体Ｖ領域のランダム化組み合わせを使用する。抗原に対する選択によって、完全ヒト抗体が作製され得、これは、上記Ｖ領域が本質的にヒトのものに非常に類似している。例えば、米国特許第６，７９４，１３２号、同第６，６８０，２０９号、および同第４，６３４，６６６号、ならびにＯｓｔｂｅｒｇら（１９８３）  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ２：３６１−３６７（これらの各々の内容は、それらの全体が本明細書に参考として援用される）を参照のこと。
【０１４１】
ヒト抗体の生成に関しては、Ｍｅｎｄｅｚら（１９９８）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６、ならびにＧｒｅｅｎおよびＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ（１９９８）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８８：４８３−４９５（それらの開示は、それらの全体が本明細書に参考として援用される）もまた参照のこと。ヒト抗体は、米国特許第５，９３９，５９８号；同第６，６７３，９８６号；同第６，１１４，５９８号；同第６，０７５，１８１号；同第６，１６２，９６３号；同第６，１５０，５８４号；同第６，７１３，６１０号；および同第６，６５７，１０３号、ならびに米国特許出願公開第２００３０２２９９０５  Ａ１号、同第２００４００１０８１０  Ａ１号、同第ＵＳ  ２００４００９３６２２  Ａ１号、同第２００６００４０３６３  Ａ１号、同第２００５００５４０５５  Ａ１号、同第２００５００７６３９５  Ａ１号、同第２００５０２８７６３０  Ａ１号においてさらに考察されかつ詳述される。国際公開番号ＷＯ  ９４／０２６０２、ＷＯ  ９６／３４０９６、およびＷＯ  ９８／２４８９３、ならびに欧州特許第ＥＰ  ０  ４６３  １５１  Ｂ１号もまた参照のこと。上記で引用される特許、出願、および参考文献の各々の開示は、それらの全体が本明細書に参考として援用される。
【０１４２】
代替のアプローチにおいて、他のもの（ＧｅｎＰｈａｒｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．を含む）は、「ミニ遺伝子座」アプローチを利用した。上記ミニ遺伝子座アプローチにおいて、外因性Ｉｇ遺伝子座は、上記Ｉｇ遺伝子座から構成要素（ｐｉｅｃｅ）（個々の遺伝子）を含めることを介して模倣される。従って、１個以上のＶＨ遺伝子、１個以上のＤＨ遺伝子、１個以上のＪＨ遺伝子、ミュー定常領域、および第２の定常領域（好ましくは、ガンマ定常領域）は、動物への挿入のために構築物へと形成される。このアプローチは、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，６２５，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６６１，０１６号；同第５，７７０，４２９号；同第５，７８９，６５０号；同第５，８１４，３１８号；同第５，５９１，６６９号；同第５，６１２，２０５号；同第５，７２１，３６７号；同第５，７８９，２１５号；同第５，６４３，７６３号；同第５，５６９，８２５号；同第５，８７７，３９７号；同第６，３００，１２９号；同第５，８７４，２９９号；同第６，２５５，４５８号；および同第７，０４１，８７１号（これらの開示は、それら全体が本明細書に参考として援用される）において記載される。欧州特許第０  ５４６  ０７３  Ｂ１号、国際特許公開番号ＷＯ  ９２／０３９１８、ＷＯ  ９２／２２６４５、ＷＯ  ９２／２２６４７、ＷＯ  ９２／２２６７０、ＷＯ  ９３／１２２２７、ＷＯ  ９４／００５６９、ＷＯ  ９４／２５５８５、ＷＯ  ９６／１４４３６、ＷＯ  ９７／１３８５２、およびＷＯ  ９８／２４８８４（これらの各々の開示は、それら全体が本明細書に参考として援用される）もまた参照のこと。Ｔａｙｌｏｒら（１９９２）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２０：６２８７；Ｃｈｅｎら（１９９３）  Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ５：６４７；Ｔｕａｉｌｌｏｎら（１９９３）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０：３７２０−４；Ｃｈｏｉら（１９９３）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４：１１７；Ｌｏｎｂｅｒｇら（１９９４）  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９；Ｔａｙｌｏｒら（１９９４）  Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ６：５７９−５９１；Ｔｕａｉｌｌｏｎら（１９９５）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５４：６４５３−６５；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら（１９９６）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １４：８４５；およびＴｕａｉｌｌｏｎら（２０００）  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０：２９９８−３００５（これらの各々の開示は、それら全体が本明細書に参考として援用される）をさらに参照のこと。
【０１４３】
特定の実施形態において、脱免疫化抗ＣＤ２００抗体もしくはその抗原結合フラグメントが提供される。脱免疫化抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、所定の種（例えば、ヒト）に対して上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントを非免疫原性にするかもしくは免疫原性を低くするように改変された抗体である。脱免疫化は、当業者に公知の種々の技術のうちのいずれかを利用して、上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントを改変することによって達成され得る（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ０４／１０８１５８およびＷＯ  ００／３４３１７を参照のこと）。例えば、抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントのアミノ酸配列内の潜在的なＴ細胞エピトープおよび／もしくはＢ細胞エピトープを同定し、上記潜在的なＴ細胞エピトープおよび／もしくはＢ細胞エピトープのうちの１個以上を、例えば、組み換え技術を使用して、上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントから除去することによって、脱免疫化され得る。次いで、上記改変された抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、必要に応じて、生成され得、試験されて、１個以上の所望の生物学的活性（例えば、結合親和性）を保持するが、免疫原性が低下した抗体もしくはその抗原結合フラグメントを同定する。潜在的なＴ細胞エピトープおよび／もしくはＢ細胞エピトープを同定するための方法は、当該分野で公知の技術（例えば、コンピューター化方法（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ０２／０６９２３２を参照のこと）、インビトロもしくはインシリコ技術、および生物学的アッセイもしくは物理的方法（例えば、ＭＨＣ分子へのペプチドの結合の決定、上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントを受容するための上記種に由来する上記Ｔ細胞レセプターへのペプチド：ＭＨＣ複合体の結合の決定、上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントを受容するための上記種のＭＨＣ分子を有するトランスジェニック動物を使用する上記タンパク質もしくはそのペプチド部分の試験、または上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントを受容するための上記種に由来する免疫系細胞で再構成したトランスジェニック動物での試験など）を使用して行われ得る。種々の実施形態において、本明細書に記載される脱免疫化抗ＣＤ２００抗体としては、脱免疫化抗原結合フラグメント、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、モノクローナル抗体、マウス抗体、操作された抗体（例えば、キメラ抗体、一本鎖抗体、ＣＤＲグラフト化抗体、ヒト化抗体、および人工的に選択された抗体）、合成抗体および半合成抗体が挙げられる。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体の重鎖可変ドメインおよび／もしくは軽鎖可変ドメインをコードする挿入物を含む組換えＤＮＡ、またはＣＤ２００タンパク質発現細胞株が生成される。用語ＤＮＡは、コード一本鎖ＤＮＡ、上記コードＤＮＡおよびこれに相補的なＤＮＡからなる二本鎖ＤＮＡ、またはこれらの相補的な（一本鎖）ＤＮＡ自体を含む。
【０１４５】
さらに、抗ＣＤ２００抗体の重鎖可変ドメインおよび／もしくは軽鎖可変ドメインをコードするＤＮＡは、重鎖可変ドメインおよび／もしくは軽鎖可変ドメイン、またはこれらの変異体をコードする忠実なＤＮＡ配列を含むように、酵素的にもしくは化学的に合成され得る。上記忠実なＤＮＡの変異体は、１もしくはそれより多いアミノ酸が欠失されるか、挿入されるか、もしくは１もしくはそれより多い他のアミノ酸と交換された、上述の抗体の重鎖可変ドメインおよび／もしくは軽鎖可変ドメインをコードするＤＮＡである。好ましくは、上記改変は、ヒト化および発現最適化の適用において上記抗体の重鎖可変ドメインのＣＤＲおよび／もしくは軽鎖可変ドメインのＣＤＲの外にある。用語である変異体ＤＮＡはまた、１もしくはそれより多いヌクレオチドが、同じアミノ酸をコードする新たなコドンを有する他のヌクレオチドによって置換されるサイレント変異体を包含する。用語である変異体配列はまた、縮重配列を含む。縮重配列は、非制限数のヌクレオチドが、元々コードされるアミノ酸配列の変更を生じることなしに他のヌクレオチドによって置換されるという点で上記遺伝子コードの意味の範囲内で縮重である。このような縮重配列は、上記重鎖マウス可変ドメインおよび／もしくは軽鎖マウス可変ドメインの最適な発現を得るために、それらの異なる制限部位および／もしくは特定の宿主（特に、Ｅ．ｃｏｌｉ）によって好まれる特定のコドンの頻度に起因して有用であり得る。
【０１４６】
用語である変異体は、当該分野で公知の方法に従って、上記忠実なＤＮＡのインビトロ変異誘発によって得られるＤＮＡ変異体を含むことが意図される。
【０１４７】
完全な四量体免疫グロブリン分子の組み立ておよびキメラ抗体の発現に関しては、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインをコードする上記組換えＤＮＡ挿入物は、重鎖および軽鎖の定常ドメインをコードする対応するＤＮＡと融合され、次いで、例えば、ハイブリッドベクターの中へ組み込んだ後に、適切な宿主細胞の中に移される。
【０１４８】
ヒト定常ドメインＩｇＧ（例えば、γ１、γ２、γ３もしくはγ４、特定の実施形態においては、γ１もしくはγ４）に融合された、抗ＣＤ２００抗体発現細胞株の重鎖マウス可変ドメインをコードする挿入物を含む組換えＤＮＡが、使用され得る。ヒト定常ドメインκもしくはλ（好ましくは、κ）に融合された抗体の軽鎖マウス可変ドメインをコードする挿入物を含む組換えＤＮＡもまた、提供される。
【０１４９】
別の実施形態は、上記重鎖可変ドメインおよび上記軽鎖可変ドメインが、スペーサー基（必要に応じて、上記宿主細胞における上記抗体のプロセシングを促進するシグナル配列および／または上記抗体の精製を促進するペプチドをコードするＤＮＡ配列および／または切断部位および／またはペプチドスペーサーおよび／もしくは因子を含む）によって連結された組換えポリペプチドをコードする組換えＤＮＡに関する。
【０１５０】
よって、本開示のモノクローナル抗体もしくは抗原結合フラグメントは、他の因子（例えば、治療剤もしくは検出可能な標識）に結合体化されていない裸の抗体もしくは抗原結合フラグメントであり得る。あるいは、上記モノクローナル抗体もしくは抗原結合フラグメントは、因子（例えば、細胞傷害性薬剤、低分子、ホルモン、酵素、増殖因子、サイトカイン、リボザイム、ペプチド摸倣物、化学物質、プロドラッグ、コード配列を含む核酸分子（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、遺伝子標的化構築物など）もしくは検出可能な標識（例えば、ＮＭＲもしくはＸ線造影剤、蛍光分子など）に結合体化され得る。特定の実施形態において、抗ＣＤ２００抗体もしくは抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ、一本鎖（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２）は、上記抗体もしくは抗原結合フラグメントの半減期を増大させる分子に連結される（上記を参照のこと）。
【０１５１】
いくつかの考えられるベクター系は、哺乳動物細胞での、クローニングされた重鎖および軽鎖の遺伝子の発現のために利用可能である。１つのクラスのベクターは、所望の遺伝子配列の宿主細胞ゲノムへの組み込みに依拠する。安定に組み込まれたＤＮＡを有する細胞は、薬物耐性遺伝子（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ  ｇｐｔ（ＭｕｌｌｉｇａｎおよびＢｅｒｇ（１９８１）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，７８：２０７２〜２０７６）もしくはＴｎ５  ｎｅｏ（ＳｏｕｔｈｅｒｎおよびＢｅｒｇ（１９８２）Ｊ  Ｍｏｌ  Ａｐｐｌ  Ｇｅｎｅｔ  １：３２７〜３４１）を同時に導入することによって選択され得る。上記選択マーカー遺伝子は、発現されるべきＤＮＡ遺伝子配列に連結され得るか、または同時トランスフェクションによって同じ細胞に導入され得るかのいずれかである（Ｗｉｇｌｅｒら（１９７９）  Ｃｅｌｌ  １６：７７７〜７８５）。第２のクラスのベクターは、染色体外プラスミドに自律的に複製する能力を付与するＤＮＡエレメントを利用する。これらベクターは、動物ウイルス（例えば、ウシパピローマウイルス（Ｓａｒｖｅｒら（１９８２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，７９：７１４７〜７１５１）、ポリオーマウイルス（Ｄｅａｎｓら（１９８４）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８１：１２９２〜１２９６）、もしくはＳＶ４０ウイルス（ＬｕｓｋｙおよびＢｏｔｃｈａｎ（１９８１）  Ｎａｔｕｒｅ  ２９３：７９〜８１））に由来し得る。
【０１５２】
免疫グロブリンｃＤＮＡは、抗体タンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡを表す配列のみから構成されるので、上記遺伝子の転写および上記ＲＮＡのプロセシングを調節するさらなる遺伝子発現エレメントは、免疫グロブリンｍＲＮＡの合成に必要とされる。これらエレメントは、スプライシングシグナル、転写プロモーター（誘導性プロモーターが挙げられる）、エンハンサー、および終止シグナルを含み得る。このようなエレメントを組み込むｃＤＮＡ発現ベクターは、ＯｋａｙａｍａおよびＢｅｒｇ（１９８３）  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ３：２８０〜２８９；Ｃｅｐｋｏら（１９８４）  Ｃｅｌｌ  ３７：１０５３〜１０６２；およびＫａｕｆｍａｎ（１９８５）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８２：６８９〜６９３によって記載されるものを含む。
【０１５３】
本開示から明らかなように、上記抗ＣＤ２００抗体は、治療（例えば、免疫関連障害を処置するための治療（組み合わせ治療を含む））において使用され得る。
【０１５４】
本開示の治療実施形態において、二重特異的抗体が企図される。二重特異的抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体、好ましくは、ヒトもしくはヒト化抗体である。この場合、上記結合特異性のうちの１つは、細胞（例えば、免疫細胞）上のヒトＣＤ２００抗原に対するものであり、他方は、任意の他の抗原に対するものである。
【０１５５】
二重特異的抗体を作製するための方法は、当業者の範囲内である。伝統的には、二重特異的抗体の組換え生成は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の同時発現に基づき、ここで、上記２つの重鎖は、異なる特異性を有する（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ（１９８３）  Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７−５３９）。所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原結合部位）は、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合され得る。上記融合は、好ましくは、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン（ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域のうちの少なくとも一部を含む）とのものである。上記免疫グロブリン重鎖融合物、および所望であれば、上記免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別個の発現ベクターに挿入され、適切な宿主生物に同時トランスフェクトされる。二重特異的抗体を生成するための例示的な現在公知の方法のさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら（１９８６）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  １２１：２１０〜２２８；ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９６／２７０１１；Ｂｒｅｎｎａｎら（１９８５）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１〜８３；Ｓｈａｌａｂｙら  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ（１９９２）  １７５：２１７−２２５；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら（１９９２）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８（５）：１５４７−１５５３；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｇｒｕｂｅｒら（１９９４）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５２：５３６８〜５４７４；およびＴｕｔｔら（１９９１）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４７：６０〜６９を参照のこと。二重特異的抗体はまた、架橋された抗体もしくは異種結合体（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）抗体を含む。異種結合体抗体は、任意の都合のよい架橋法を使用して作製され得る。適切な架橋剤は、当該分野で周知であり、多くの架橋技術とともに、米国特許第４，６７６，９８０号に開示される。
【０１５６】
二重特異的抗体フラグメントを作製し、組換え細胞培養物から直接単離するための種々の技術はまた、記載されてきた。例えば、二重特異的抗体は、ロイシンジッパーを使用して生成された。例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら（１９９２）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８（５）：１５４７−１５５３を参照のこと。Ｆｏｓタンパク質およびＪｕｎタンパク質に由来するロイシンジッパーペプチドは、遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結され得る。上記抗体ホモダイマーは、モノマーを形成するためのヒンジ領域において還元され得、次いで、上記抗体ヘテロダイマーを形成するために再酸化され得る。この方法はまた、抗体ホモダイマーの生成のために利用され得る。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８によって記載される上記「ダイアボディー」技術は、二重特異的抗体フラグメントを作製するための代替機構を提供した。上記フラグメントは、リンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含み、ここで、上記リンカーは、あまりに短くて、同じ鎖上の上記２つのドメインの間で対形成をさせない。よって、１つのフラグメントの上記ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、別のフラグメントの相補的なＶＬドメインおよびＶＨドメインと対形成させられ、それによって、２つの抗原結合部位を形成する。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）ダイマーの使用による二重特異的抗体フラグメントを作製するための別のストラテジーがまた、報告された。例えば、Ｇｒｕｂｅｒら（１９９４）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５２：５３６８〜５３７４を参照のこと。あるいは、上記抗体は、例えば、Ｚａｐａｔａら（１９９５）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  ８（１０）：１０５７−１０６２に記載されるように「直線状抗体」であり得る。簡潔には、これら抗体は、抗原結合領域の対を形成するタンデムＦｄセグメントの対（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む。直線状抗体は、二重特異的もしくは単一特異的（ｍｏｎｏｓｐｅｃｉｆｉｃ）であり得る。
【０１５７】
本開示はまた、二重特異的抗体（例えば、Ｗｕら（２００７）  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２５（１１）：１２９０−１２９７に記載される四価二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ）分子）の改変体形態を包含する。上記ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、２つの異なる親抗体に由来する２つの異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、組換えＤＮＡ技術によって、タンデムで直接、もしくは短いリンカーを介して連結され、続いて、上記軽鎖定常ドメインが連結されるように設計される。２つの親抗体に由来するＤＶＤ−Ｉｇ分子を生成するための方法は、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ０８／０２４１８８およびＷＯ  ０７／０２４７１５（これらの各々の開示は、それら全体が本明細書に参考として援用される）にさらに記載される。
【０１５８】
（エフェクター機能）
免疫系の細胞との抗体および抗体−抗原複合体の相互作用は、種々の応答に影響を及ぼす（本明細書においてエフェクター機能といわれる）。例示的エフェクター機能としては、Ｆｃレセプター結合、ファゴサイトーシス、細胞表面レセプター（例えば、Ｂ細胞レセプター；ＢＣＲ）のダウンレギュレーションなどが挙げられる。他のエフェクター機能としては、ＡＤＣＣ（これによって、抗体がナチュラル・キラー（ＮＫ）細胞もしくはマクロファージ上のＦｃレセプターを結合する（細胞死をもたらす）、およびＣＤＣ（これは、補体カスケードの活性化を介して誘導される細胞死である）（Ｄａｅｒｏｎ  （１９９７）  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５：２０３−２３４；ＷａｒｄおよびＧｈｅｔｉｅ  （１９９５）  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２：７７−９４；およびＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ  （１９９１）  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９：４５７−４９２において総説される）が挙げられる。このようなエフェクター機能は、一般に、上記Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と合わせられることを必要とし、本明細書中で開示されるように、種々のアッセイを使用して評価され得る。
【０１５９】
いくつかの抗体エフェクター機能（ＡＤＣＣが挙げられる）は、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）（これは、抗体のＦｃ領域に結合する）によって媒介される。ＡＤＣＣにおいて、ＮＫ細胞もしくはマクロファージは、上記抗体複合体のＦｃ領域に結合し、その標的細胞の溶解を促進する。ＮＫ細胞上のＦｃＲの架橋は、パーフォリン／グランザイム媒介性細胞傷害性を誘発するのに対して、マクロファージにおいては、この架橋は、メディエーター（例えば、一酸化窒素（ＮＯ）、ＴＮＦ−α、および反応性酸素種）の放出を促進する。ＣＤ２００陽性標的細胞に関しては、抗ＣＤ２００抗体は、上記標的細胞に結合し、上記Ｆｃ領域は、エフェクター機能を上記標的細胞へと指向する。特定のＦｃＲに対する抗体の親和性、よって、上記抗体によって媒介されるエフェクター活性は、上記Ｆｃおよび／もしくは上記抗体の定常領域のアミノ酸配列および／もしくは翻訳後修飾を変化させることによって、調節され得る。
【０１６０】
ＦｃＲは、免疫グロブリンアイソタイプに対するそれらの特異性によって定義される；ＩｇＧ抗体に関するＦｃレセプターは、ＦｃγＲといわれ、ＩｇＥに関しては、ＦｃεＲといわれ、ＩｇＡに関しては、ＦｃαＲといわれるなど。ＦｃγＲの３つのサブクラスが同定された：ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）。各ＦｃγＲサブクラスは、２種もしくは３種の遺伝子によってコードされるので、選択的ＲＮＡスプライシングは、複数の転写物をもたらすので、ＦｃγＲアイソフォームにおいて広い多様性が存在する。上記ＦｃγＲＩサブクラス（ＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＢおよびＦｃγＲＩＣ）をコードする３種の遺伝子は、染色体１の長腕の領域１ｑ２１．１にクラスター化され；ＦｃγＲＩＩアイソフォーム（ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢおよびＦｃγＲＩＩＣ）をコードする遺伝子、ならびにＦｃγＲＩＩＩ（ＦｃγＲＩＩＩＡおよびＦｃγＲＩＩＩＢ）をコードする２種の遺伝子は、領域１ｑ２２において全てクラスター化される。これら異なるＦｃＲサブタイプは、異なる細胞タイプで発現される（ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ  （１９９１）  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９：４５７−４９２において総説される）。例えば、ヒトにおいて、ＦｃγＲＩＩＩＢは、好中球でのみ見いだされるのに対して、ＦｃγＲＩＩＩＡは、マクロファージ、単球、ナチュラル・キラー（ＮＫ）細胞、およびＴ細胞の亜集団で見いだされる。顕著なことには、ＦｃγＲＩＩＩＡは、ＮＫ細胞（ＡＤＣＣに関与する細胞タイプのうちの１つ）に存在する唯一のＦｃＲである。
【０１６１】
ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩは、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）レセプターであり；ＦｃγＲＩは、その細胞外ドメインにおいて３個のＩｇＳＦドメインを有する一方で、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩは、細胞外ドメインにおいてわずか２個のＩｇＳＦドメインのみを有する。Ｆｃレセプターの別のタイプは、新生児型Ｆｃレセプター（ＦｃＲｎ）である。ＦｃＲｎは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）に構造上類似しており、β２−ミクログロブリンに非共有的に結合したα鎖からなる。
【０１６２】
ＦｃγＲに対するヒト抗体およびマウス抗体の結合部位は、残基２３３〜２３９（Ｋａｂａｔら、（１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  ５ｔｈ  Ｅｄ．  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍａｒｙｌａｎｄにおけるとおりの、ＥＵインデックス番号付け）からなる、いわゆる「下部ヒンジ領域（ｌｏｗｅｒ  ｈｉｎｇｅ  ｒｅｇｉｏｎ）」に以前にマッピングされた。Ｗｏｏｆら、（１９８６）  Ｍｏｌｅｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３：３１９−３３０；Ｄｕｎｃａｎら、（１９８８）  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：５６３；ＣａｎｆｉｅｌｄおよびＭｏｒｒｉｓｏｎ  （１９９１）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７３：１４８３−１４９１；Ｃｈａｐｐｅｌら、（１９９１）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８：９０３６−９０４０。残基２３３〜２３９のうち、Ｐ２３８およびＳ２３９は、おそらく結合に関与するとして引用された。
【０１６３】
ＦｃγＲへの結合におそらく関与する、他の以前に引用された領域は、ヒトＦｃγＲＩに関してＧ３１６−Ｋ３３８（ヒトＩｇＧ）（配列比較のみによる；置換変異体は評価しなかった）（Ｗｏｏｆら、（１９８６）  Ｍｏｌｅｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３：３１９−３３０）；ヒトＦｃγＲＩＩＩ（ペプチドに基づく）に関してＫ２７４〜Ｒ３０１（ヒトＩｇＧ１）（Ｓａｒｍａｙら、（１９８４）  Ｍｏｌｅｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２１：４３−５１）；ヒトＦｃγＲＩＩＩ（ペプチドに基づく）に関してＹ４０７−Ｒ４１６（ヒトＩｇＧ）（Ｇｅｒｇｅｌｙら、（１９８４）  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ  １２：７３９−７４３  （１９８４））；ならびにマウスＦｃγＲＩＩに関してＮ２９７およびＥ３１８（マウスＩｇＧ２ｂ）（Ｌｕｎｄら、（１９９２）  Ｍｏｌｅｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２９：５３−５９）である。
【０１６４】
ヒトエフェクター細胞は、１種以上のＦｃＲを発現し、エフェクター機能を発揮する白血球である。特定の実施形態において、上記細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を発揮する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、ナチュラル・キラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞および好中球が挙げられる。エフェクター細胞は、その天然供給源から、例えば、血液もしくはＰＢＭＣから単離され得る。
【０１６５】
ＣＤＣにおいて、上記抗体−抗原複合体は、補体に結合し、補体カスケードの活性化および膜侵襲複合体の生成を生じる。古典的補体経路の活性化は、同族抗原に結合している（適切なサブクラスの）抗体への補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）の結合によって開始され；従って、補体カスケードの活性化は、Ｃ１ｑタンパク質への上記免疫グロブリンの結合親和性によって一部調節される。Ｃ１ｑおよび２つのセリンプロテアーゼであるＣ１ｒおよびＣ１ｓは、複合体Ｃ１（ＣＤＣ経路の第１成分）を形成する。Ｃ１ｑは、分子量約４６０，０００を有し、６つのコラーゲン性の「柄（ｓｔａｌｋ）」が６つの球状ヘッド領域につながっている構造を有する６価分子である。ＢｕｒｔｏｎおよびＷｏｏｆ  （１９９２）  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ５１：１−８４。補体カスケードを活性化するために、Ｃ１ｑが、抗原性標的に結合したＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ３のうちの少なくとも２つの分子（ただしＩｇＭではただ１つの分子）に結合することが必要である（ＷａｒｄおよびＧｈｅｔｉｅ  （１９９５）  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２：７７−９４）。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイ（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、（１９９６）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３に記載されるとおり）が、行われ得る。
【０１６６】
上記ＩｇＧ分子の種々の残基が、Ｃ１ｑ（ＣＨ２ドメインのＧｌｕ３１８、Ｌｙｓ３２０およびＬｙｓ３２２残基、おなじβ鎖の近位にあるターン上に位置したアミノ酸残基３３１、下部ヒンジ領域に位置したＬｙｓ２３５およびＧｌｙ２３７残基、ならびにＣＨ２ドメインのＮ末端領域に位置した残基２３１〜２３８を含む）への結合に関与することが提唱された。例えば、Ｘｕら、（１９９３）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５０：１５２Ａ；ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９４／２９３５１；Ｔａｏら、（１９９３）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７８：６６１−６６７；Ｂｒｅｋｋｅら、（１９９４）  Ｅｕｒ  Ｊ  ｌｍｍｕｎｏｌ  ２４：２５４２−２５４７；Ｂｕｒｔｏｎら、（１９８０）  Ｎａｔｕｒｅ  ２８８：３３８−３４４；ならびに米国特許第５，６４８，２６０号および同第５，６２４，８２１号を参照のことのこと。ＩｇＧがＣ１ｑに結合し、補体カスケードを活性化する能力がまた、２つのＣＨ２ドメインの間に位置した炭水化物部分（これは、通常、Ａｓｎ２９７に固定される）の存在、非存在もしくは改変に依存することが、さらに提唱された。例えば、ＷａｒｄおよびＧｈｅｔｉｅ  （１９９５）  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２：７７−９４を参照のこと。特定の実施形態において、これらの残基のうちの１個以上は、改変されても、置換されても、除去されてもよく、または１個以上のアミノ酸残基は、本明細書において提供される抗ＣＤ２００抗体のＣＤＣ活性を増強もしくは低下させるように、挿入されてもよい。
【０１６７】
（エフェクター機能を低下もしくは排除するための方法）
上記標的特異的抗体の定常領域が関わるエフェクター機能は、上記定常領域もしくはＦｃ領域の特性を変化させることによって調節され得る。変化したエフェクター機能としては、例えば、以下の活性のうちの１つ以上における調節が挙げられる：ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、アポトーシス、１個以上のＦｃレセプターへの結合、および炎症促進性応答。調節とは、第２の抗体の活性と比較して、本発明の抗体によって示されるエフェクター機能活性の増大、減少、もしくは排除をいう。特定の実施形態において、上記第２の抗体は、改変されていない天然に存在するエフェクター機能を有する抗体である。特定の実施形態において、調節は、活性が破壊もしくは完全に存在しない状況を含む。さらに、いくつかの場合において、非改変抗体は、本明細書で開示されるｃｈＣ２ａＢ７−ｈＧ１抗体もしくはｈＢ７Ｖ３Ｖ２−ｈＧ１抗体の活性に類似もしくは等価なエフェクター機能活性を示し得る。
【０１６８】
変化したＦｃＲ結合親和性および／もしくはＡＤＣＣ活性および／もしくは変化したＣＤＣ活性を有する改変定常領域は、天然のもしくは親のポリペプチドと、または天然の配列もしくは定常領域を含むポリペプチドと比較して、増強したかもしくは減少したかのいずれかのＦｃＲ結合活性および／もしくはＡＤＣＣ活性および／もしくはＣＤＣ活性を有するポリペプチドである。ＦｃＲへの増大した結合を示すポリペプチド改変体は、上記親ポリペプチドより大きな親和性で少なくとも１つのＦｃＲを結合する。ＦｃＲへの低下した結合を示すポリペプチド改変体は、親ポリペプチドより低下した親和性で少なくとも１つのＦｃＲを結合する。ＦｃＲへの低下した結合を示すこのような改変体は、ＦｃＲへの結合をほとんど有さなくてもよいし、認め得るほどの結合を全く有さなくてもよい（ＦｃＲへの、天然配列の免疫グロブリン定常領域もしくはＦｃ領域の結合のレベルと比較して、上記ＦｃＲへの結合の例えば、０〜５０％（例えば、５０％未満、４９％、４８％、４７％、４６％、４５％、４４％、４３％、４２％、４１％、４０％、３９％、３８％、３７％、３６％、３５％、３４％、３３％、３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、もしくは１％））。同様に、変化したＡＤＣＣ活性および／もしくはＣＤＣ活性を示す改変抗ＣＤ２００抗体は、上記天然もしくは親のポリペプチドと比較して、増大したかもしくは低下したかのいずれかのＡＤＣＣ活性および／もしくはＣＤＣ活性を示し得る。例えば、いくつかの実施形態において、改変定常領域を含む上記抗ＣＤ２００抗体は、上記定常領域の天然形態のＡＤＣＣ活性および／もしくはＣＤＣ活性のうちの約０〜５０％（例えば、５０％未満、４９％、４８％、４７％、４６％、４５％、４４％、４３％、４２％、４１％、４０％、３９％、３８％、３７％、３６％、３５％、３４％、３３％、３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、もしくは１％）を示し得る。低下したＡＤＣＣおよび／もしくはＣＤＣを示す改変定常領域を含む抗ＣＤ２００抗体は、本明細書で例示されるように、低下したＡＤＣＣ活性および／もしくはＣＤＣ活性を示してもよいし、これら活性を全く示さなくてもよい。
【０１６９】
天然配列のＦｃ領域もしくは定常領域は、天然において見いだされるＦｃ領域もしくは定常鎖領域のアミノ酸配列に同一のアミノ酸配列を含む。改変もしくは変化したＦｃ領域もしくは定常領域は、例えば、少なくとも１個のアミノ酸改変、挿入、もしくは欠失によって天然配列の重鎖領域のものとは異なるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、上記改変もしくは変化した定常領域は、天然配列の定常領域ともしくは親ポリペプチドの定常領域と比較して、少なくとも１個のアミノ酸置換、挿入、および／もしくは欠失を、例えば、天然配列の定常領域においてもしくは親ポリペプチドの定常領域において例えば、約１〜約１００個のアミノ酸置換、挿入、および／もしくは欠失を有する。いくつかの実施形態において、本明細書の改変もしくは変化した定常領域は、天然配列の定常領域および／もしくは親ポリペプチドの定常領域と少なくとも約７０％の相同性（類似性）もしくは同一性を、およびいくつかの場合においては、少なくとも約７５％、および他の場合においては、上記と少なくとも約８０％の相同性もしくは同一性、および他の実施形態においては、上記と少なくとも約８５％、９０％もしくは９５％の相同性もしくは同一性を有する。上記改変もしくは変化した定常領域はまた、１個以上のアミノ酸欠失もしくは挿入を含み得る。さらに、上記改変定常領域は、変化した翻訳後修飾（例えば、変化したグリコシル化パターンが挙げられる）を生じる１個以上のアミノ酸置換、欠失もしくは挿入を含み得る。
【０１７０】
変化したエフェクター機能を有するかもしくはエフェクター機能を有しない抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、改変定常領域、Ｆｃ領域、もしくは重鎖領域を有する抗体を操作もしくは生成することによって生成され得る；組換えＤＮＡ技術ならびに／もしくは細胞培養および発現条件は、変化した機能および／もしくは活性を有する抗体を生成するために使用され得る。例えば、組換えＤＮＡ技術は、エフェクター機能を含む抗体機能に影響を及ぼす領域（例えば、Ｆｃ領域もしくは定常領域）において、１個以上のアミノ酸置換、欠失、もしくは挿入を操作するために使用され得る。あるいは、翻訳後修飾（例えば、グリコシル化パターン）の変化は、上記抗体が生成される細胞培養および発現条件を操作することによって、達成され得る。１個以上の置換、付加、もしくは欠失を抗体のＦｃ領域に導入するために適した方法は、当該分野で周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（１９８９）  “Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，”  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ  （１９８８），前出；  Ｂｏｒｒｅｂａｅｋ  （１９９２），前出；Ｊｏｈｎｅら、（１９９３），前出；ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ０６／５３３０１；および米国特許第７，７０４，４９７号に記載される標準のＤＮＡ変異誘発技術が挙げられる。
【０１７１】
よって、本開示の特定の局面および方法は、１個以上のアミノ酸置換、挿入、および／もしくは欠失を含む、変化したエフェクター機能を有する抗ＣＤ２００抗体に関する。いくつかの実施形態において、このような改変抗ＣＤ２００抗体は、低下したエフェクター機能を示すか、またはエフェクター機能を全く示さない。いくつかの実施形態において、改変抗体は、ハイブリッド定常領域もしくはその部分（例えば、Ｇ２／Ｇ４ハイブリッド定常領域（例えば、Ｂｕｒｔｏｎら、（１９９２）  Ａｄｖ  Ｉｍｍｕｎ  ５１：１−１８；Ｃａｎｆｉｅｌｄら、（１９９１）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７３：１４８３−１４９１；およびＭｕｅｌｌｅｒら、（１９９７）  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３４（６）：４４１−４５２を参照のこと）を含む。例えば（およびＫａｂａｔ番号付けに従って）、上記ＩｇＧ１およびＩｇＧ４定常領域は、Ｇ２４９Ｇ２５０残基を含むのに対して、上記ＩｇＧ２定常領域は、残基２４９を含まないが、Ｇ２５０を含む。Ｇ２／Ｇ４ハイブリッド定常領域において、上記２４９−２５０領域が上記Ｇ２配列に由来する場合、上記定常領域は、２４９位のグリシン残基を導入して、Ｇ２４９／Ｇ２５０を有するＧ２／Ｇ４融合物を生成するようにさらに改変され得る。
【０１７２】
上記に記載されるようにＧ２／Ｇ４構築物を使用することに加えて、低下したエフェクター機能を有する抗ＣＤ２００抗体は、上記抗体の特定の領域のアミノ酸配列において他のタイプの変化を導入することによって生成され得る。このようなアミノ酸配列変化としては、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９４／２８０２７およびＷＯ  ９８／４７５３１；ならびにＸｕら、（２０００）  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００：１６−２６に記載されるＡｌａ−Ａｌａ変異が挙げられるが、これらに限定されない。従って、いくつかの実施形態において、定常領域内に変異（上記Ａｌａ−Ａｌａ変異を含む）を有する抗ＣＤ２００抗体は、エフェクター機能を低下もしくは破壊するために使用され得る。これら実施形態によれば、抗ＣＤ２００抗体の定常領域は、２３４位のアラニンに対する変異もしくは２３５位のアラニンに対する変異を含む。さらに、上記定常領域は、二重変異を含み得る：２３４位のアラニンに対する変異および２３５位のアラニンに対する第２の変異。一実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ＩｇＧ４フレームワークを含み、ここで上記Ａｌａ−Ａｌａ変異は、２３４位においてフェニルアラニンからアラニンへの変異および／もしくは２３５位においてロイシンからアラニンへの変異を説明する。別の実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、ＩｇＧ１フレームワークを含み、ここで上記Ａｌａ−Ａｌａ変異は、２３４位においてロイシンからアラニンへの変異および／もしくは２３５位においてロイシンからアラニンへの変異を説明する。抗ＣＤ２００抗体は、代わりにもしくはさらに、他の変異（ＣＨ２ドメインにおける点変異Ｋ３２２Ａを含む（Ｈｅｚａｒｅｈら、（２００１）  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７５：１２１６１−８））を有していてもよい。上記定常領域において上記変異を有する抗体は、さらに、ブロッキング抗体もしくは非ブロッキング抗体であり得る。
【０１７３】
重鎖定常領域に導入される場合、低下したエフェクター機能を生じるさらなる置換は、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓら、（２００１）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（９）：６５９１−６６０４に記載される。Ｓｈｉｅｌｄｓら（その開示は、その全体において本明細書中に参考として援用される）の特に、表１（「ヒトＦｃＲｎおよびＦｃγＲへのヒトＩｇＧ１改変体の結合）を参照のこと。抗ＩｇＥ抗体のライブラリー（上記ライブラリーの各抗体は、上記重鎖定常領域において１個以上の置換だけ異なる）を、Ｆｃレセプターのパネル（ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、およびＦｃγＲＩＩＩＡが挙げられる）への結合についてスクリーニングすることによって、上記著者らは、特異的Ｆｃ−Ｆｃレセプター相互作用を調節する多くの置換を同定した。例えば、ＣＨ２ドメインがＤ２６５Ａ置換を含む（重鎖アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔら（前出）に従う）改変ＩｇＧ２ａ重鎖定常領域は、上記改変定常領域とＩｇＧ  ＦｃレセプターであるＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩ、ＦｃγＲＩ、およびＦｃγＲＩＶとの間の相互作用の完全な喪失を生じる。Ｓｈｉｅｌｄｓら、（２００１）、６５９５頁、表１。Ｂａｕｄｉｎｏら、（２００８）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８１：６６６４−６６６９  （前出）もまた参照のこと。
【０１７４】
ヒンジ領域内の変化はまた、エフェクター機能に影響を及ぼす。例えば、上記ヒンジ領域の欠失は、Ｆｃレセプターに対する親和性を低下させ得、補体活性化を低下させ得る（Ｋｌｅｉｎら、（１９８１）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８：  ５２４−５２８）。従って、本開示はまた、上記ヒンジ領域における変化を有する抗体に関する。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体は、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を増強もしくは阻害するかのいずれかのために改変され得る。調節されたＣＤＣ活性は、上記抗体のＦｃ領域において１個以上のアミノ酸置換、挿入もしくは欠失を導入することによって達成され得る。例えば、米国特許第６，１９４，５５１号を参照のこと。代わりにもしくはさらに、システイン残基が上記Ｆｃ領域に導入され得、それによって、この領域における鎖間ジスルフィド結合形成を可能にする。このようにして生成されるホモダイマー抗体は、改善されたかもしくは低下した内部移行能力および／または増大もしくは低下した補体媒介性細胞殺傷を有し得る。例えば、Ｃａｒｏｎら、（１９９２）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７６：１１９１−１１９５およびＳｈｏｐｅｓ  （１９９２）  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８：２９１８−２９２２；ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９９／５１６４２およびＷＯ  ９４／２９３５１；ＤｕｎｃａｎおよびＷｉｎｔｅｒ  （１９８８）  Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０；ならびに米国特許第５，６４８，２６０号および同第５，６２４，８２１号を参照のこと。増強された抗腫瘍活性を有するホモダイマー抗体はまた、Ｗｏｌｆｆら、（１９９３）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：２５６０−２５６５に記載されるように、ヘテロ二官能性架橋剤を使用して調製され得る。あるいは、抗体が操作され得（これは、二重のＦｃ領域を有する）、それによって、増強された補体溶解およびＡＤＣＣ能力を有し得る。例えば、Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、（１９８９）  Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ３：２１９−２３０を参照のこと。
【０１７６】
抗体のエフェクター機能を調節する別の潜在的手段としては、グリコシル化の変化（これは、例えば、Ｒａｊｕ  （２００３）  ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  １（４）：４４−５３にまとめられている）が挙げられる。ＷｒｉｇｈｔおよびＭｏｒｒｉｓｏｎによれば、ヒトＩｇＧオリゴサッカリドの微小不均一性は、生物学的機能（例えば、ＣＤＣおよびＡＤＣＣ、種々のＦｃレセプターへの結合、ならびにＣ１ｑタンパク質への結合）に影響を及ぼし得る。（１９９７）  ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２。抗体のグリコシル化パターンは、細胞を生成する条件および細胞培養条件に依存して異なり得る（Ｒａｊｕ，前出）。このような差異は、エフェクター機能および薬物動態の両方における変化をもたらし得る。例えば、Ｉｓｒａｅｌら、（１９９６）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８９（４）：５７３−５７８；Ｎｅｗｋｉｒｋら、（１９９６）  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０６（２）：２５９−２６４を参照のこと。エフェクター機能における差異は、上記ＩｇＧが上記エフェクター細胞上の上記Ｆｃγレセプター（ＦｃγＲ）に結合する能力に関連し得る。Ｓｈｉｅｌｄｓらは、ＩｇＧと、ＦｃγＲへの改善された結合を有する、アミノ酸配列における改変体とが、ヒトエフェクター細胞を使用して、最大１００％まで増強されたＡＤＣＣを示し得ることを示した。（２００１）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（９）：６５９１−６６０４。これら改変体は、上記結合界面において見いだされなかったアミノ酸変化を含むが、上記糖成分の性質およびその構造パターンの両方がまた、観察される差異に寄与し得る。さらに、ＩｇＧのオリゴサッカリド成分におけるフコースの存在もしくは非存在は、結合およびＡＤＣＣを改善し得る。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓら、（２００２）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７（３０）：２６７３３−２６７４０を参照のこと。Ａｓｎ２９７に結合したフコシル化炭水化物が欠如したＩｇＧは、上記ＦｃγＲＩレセプターへの通常のレセプター結合を示した。対照的に、上記ＦｃγＲＩＩＩＡレセプターへの結合は、５０倍改善され、増強されたＡＤＣＣが、特に、より低い抗体濃度において、付随した。
【０１７７】
Ｓｈｉｎｋａｗａらは、ラットハイブリドーマにおいて生成された上記ヒトＩＬ−５レセプターに対する抗体が、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）において生成された抗体と比較した場合、５０％を超えて高いＡＤＣＣを示すことを実証した（Ｓｈｉｎｋａｗａら、（２００３）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８（５）：３４６６−７３）。モノサッカリド組成およびオリゴサッカリドプロフィールは、上記ラットハイブリドーマ生成ＩｇＧが、ＣＨＯ生成タンパク質より低い含有量のフコースを有することを示した。上記著者らは、ＩｇＧ１のフコシル化の欠如が、ＡＤＣＣ活性の増強において重要な役割を有すると結論づけた。
【０１７８】
異なるアプローチが、Ｕｍａｎａら（彼らは、ｃｈＣＥ７（キメラＩｇＧ１抗神経芽腫抗体のグリコシル化パターンを変化させた）によってとられた。（（１９９９）  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １７（２）：１７６−１８０）。テトラサイクリンを使用して、彼らは、ＡＤＣＣ活性に関与したオリゴサッカリドを二分する（ｂｉｓｅｃｔ）グリコシルトランスフェラーゼ酵素（ＧｎＴＩＩＩ）の活性を調節した。親抗体のＡＤＣＣ活性は、バックグラウンドレベルをかろうじて上回った。異なるテトラサイクリンレベルにおいて生成した上記ｃｈＣＥ７のＡＤＣＣ活性の測定は、最大のｃｈＣＥ７インビトロＡＤＣＣ活性についてのＧｎＴＩＩＩ発現の最適範囲を示した。この活性は、定常領域に会合した、二分された複合型オリゴサッカリドのレベルと相関した。新たに至適化された改変体は、実質的なＡＤＣＣ活性を示した。同様に、ＷｒｉｇｈｔおよびＭｏｒｒｉｓｏｎは、グリコシル化欠損ＣＨＯ細胞株において抗体を生成し、この細胞株において生成した抗体が、補体媒介性細胞溶解の能力がないことを示した。（１９９４）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８０：１０８７−１０９６。従って、エフェクター機能に影響を及ぼす公知の変化は、グリコシル化パターンの改変もしくはグリコシル化残基の数の変化を含むので、本開示は、グリコシル化がエフェクター機能（ＡＤＣＣおよびＣＤＣを含む）を増強させるかもしくは低下させるかのいずれかであるように変化しているＣＤ２００抗体に関する。変化したグリコシル化は、グリコシル化残基の数の減少もしくは増加、ならびにグリコシル化残基のパターンもしくは位置の変化を含む。
【０１７９】
抗体のエフェクター機能を変化させるためのなお他のアプローチが存在する。例えば、抗体生成細胞は、高度変異誘発性（ｈｙｐｅｒｍｕｔａｇｅｎｉｃ）であり得、それによって、抗体分子全体を通じて無作為に変化したポリペプチドの残基を有する抗体を生成し得る。例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ０５／０１１７３５を参照のこと。高度変異誘発性宿主細胞は、ＤＮＡミスマッチ修復が欠損している細胞を含む。このようにして生成される抗体は、抗原性が低下し得るか、そして／または有益な薬物動態特性を有し得る。さらに、このような抗体は、増強もしくは低下したエフェクター機能のような特性について選択され得る。
【０１８０】
エフェクター機能が、抗体の結合親和性に従って変動し得ることは、さらに理解される。例えば、高親和性を有する抗体は、比較的低い親和性を有する抗体と比較して、補体系を活性化することにおいてより効率的であり得る（Ｍａｒｚｏｃｃｈｉ−Ｍａｃｈａｄｏら、（１９９９）  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２８：８９−１０１）。よって、抗体は、その抗原に対する結合親和性が低下するように変化させられ得る（例えば、１個以上のアミノ酸残基の置換、付加、もしくは欠失のような方法によって上記抗体の可変領域を変化させることによる）。低下した結合親和性を有する抗ＣＤ２００抗体は、低下したエフェクター機能（例えば、低下したＡＤＣＣおよび／もしくはＣＤＣを含む）を示し得る。
【０１８１】
（抗体結合体）
本明細書に記載の抗体は、例えば、発現の前またはそれらの発現もしくは精製の後に改変され得る。上記改変は、共有結合的もしくは非共有結合的な改変であり得る。このような改変は、例えば、上記ポリペプチドの標的とされたアミノ酸残基と、選択された側鎖もしくは末端残基と反応し得る有機性誘導体化剤とを反応させることによって、上記抗体に導入され得る。改変に適切な部位は、種々の基準（例えば、上記抗体の構造分析もしくはアミノ酸配列分析を含む）のうちのいずれかを使用して選択され得る。
【０１８２】
いくつかの実施形態において、上記抗体は、異種部分に結合体化され得る。上記異種部分は、例えば、異種ポリペプチド、治療剤（例えば、毒素もしくは薬物）、または検出可能な標識（例えば、放射性標識、酵素標識、蛍光標識、もしくは発光標識が挙げられるが、これらに限定されない）であり得る。適切な異種ポリペプチドとしては、上記抗体の精製に使用するために、例えば、抗原性タグ（例えば、ＦＬＡＧ、ポリヒスチジン、ヘマグルチニン（ＨＡ）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、もしくはマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ））が挙げられる。異種ポリペプチドはまた、診断マーカーもしくは検出可能なマーカーとして有用なポリペプチド（例えば、ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、もしくはクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ））が挙げられる。上記異種部分がポリペプチドである場合、この部分は、融合タンパク質として本明細書に記載の抗体に組み込まれ得る。
【０１８３】
適切な放射性標識としては、例えば、３２Ｐ、３３Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、および３Ｈが挙げられる。適切な蛍光標識としては、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ＤｙＬｉｇｈｔ  ４８８、フィコエリスリン（ＰＥ）、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）、ＰｅｒＣＰ、ＰＥ−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  ７００、Ｃｙ５、アロフィコシアニン、およびＣｙ７が挙げられるが、これらに限定されない。発光標識としては、例えば、種々の発光ランタニド（例えば、ユーロピウムもしくはテルビウム）キレートのうちのいずれかが挙げられる。例えば、適切なユーロピウムキレートとしては、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）もしくはテトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）のユーロピウムキレートが挙げられる。酵素標識としては、例えば、アルカリホスファターゼ、ＣＡＴ、ルシフェラーゼ、および西洋ワサビペルオキシダーゼが挙げられる。
【０１８４】
２つのタンパク質（例えば、抗体および異種部分）は、公知の化学的架橋剤のうちのいずれかを使用して架橋され得る。このような架橋剤の例としては、「ヒンダード（ｈｉｎｄｅｒｅｄ）」ジスルフィド結合を含む連結を介して２個のアミノ酸残基を連結するものである。これら連結において、架橋ユニットの中のジスルフィド結合は、例えば、還元型グルタチオンもしくは酵素ジスルフィドレダクターゼの作用による還元から保護される（上記ジスルフィド結合のいずれかの側上の基を妨げることによって）。１つの適切な試薬である４−スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α（２−ピリジルジチオ）トルエン（ＳＭＰＴ）は、上記タンパク質のうちの一方の上の末端リジンおよび他方のタンパク質の末端システインを利用して、２個のタンパク質の間でこのような連結を形成する。各タンパク質の上の異なるカップリング部分によって架橋するヘテロ二官能性試薬はまた、使用され得る。他の有用な架橋剤としては、２個のアミノ基（例えば、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド）、２個のスルフヒドリル基（例えば、１，４−ビス−マレイミドブタン）、アミノ基とスルフヒドリル基（例えば、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、アミノ基とカルボキシル基（例えば、４−［ｐ−アジドサリチルアミド］ブチルアミン）、およびアミノ基とアルギニンの側鎖に存在するグアニジウム基（例えば、ｐ−アジドフェニルグリオキサール一水和物）を連結する試薬が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、放射性標識は、上記抗体のアミノ酸骨格に直接結合体化され得る。あるいは、上記放射性標識は、遊離アミノ基に結合して、関連タンパク質のメタ−ヨードフェニル（ｍＩＰ）誘導体（例えば、Ｒｏｇｅｒｓら（１９９７）  Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  ３８：１２２１−１２２９を参照のこと）もしくは次に上記タンパク質の骨格に結合するキレート（例えば、ＤＯＴＡもしくはＤＴＰＡに）を形成するより大きな分子の一部（例えば、メタ−［１２５Ｉ］ヨードフェニル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドにおける１２５Ｉ（［１２５Ｉ］ｍＩＰＮＨＳ））として含まれ得る。上記放射性標識もしくはこれらを含むより大きな分子／キレートを、本明細書に記載される抗体に結合体化するための方法は、当該分野で公知である。このような方法は、上記タンパク質を、上記放射性標識もしくはキレートを上記タンパク質に結合するのを促進させる条件（例えば、ｐＨ、塩濃度、および／もしくは温度）下で上記放射性標識とインキュベートする工程を包含する（例えば、米国特許第６，００１，３２９号を参照のこと）。
【０１８６】
蛍光標識（ときおり「フルオロフォア」といわれる）をタンパク質（例えば、抗ＣＤ２００抗体）に結合体化するための方法は、タンパク質化学の分野で公知である。例えば、フルオロフォアは、上記フルオロフォアに結合されるスクシンイミジル（ＮＨＳ）エステル部分もしくはテトラフルオロフェニル（ＴＦＰ）エステル部分を使用して、タンパク質の遊離アミノ基（例えば、リジンの）もしくはスルフヒドリル基（例えば、システイン）に結合体化され得る。いくつかの実施形態において、上記フルオロフォアは、ヘテロ二官能性架橋剤部分（例えば、スルホ−ＳＭＣＣ）に結合体化され得る。適切な結合体化法は、抗体タンパク質を、上記フルオロフォアと、上記タンパク質への上記フルオロフォアの結合を促進する条件下でインキュベートする工程を包含する。例えば、ＷｅｌｃｈおよびＲｅｄｖａｎｌｙ（２００３）  「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（ＩＳＢＮ  ０４７１４９５６０３）を参照のこと。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、上記抗体は、例えば、循環中（例えば、血中、血清中、もしくは組織中）での上記抗体の安定化および／もしくは保持を改善する部分で改変され得る。例えば、抗ＣＤ２００抗体は、例えば、Ｌｅｅら（１９９９）  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  １０（６）：９７３−８；Ｋｉｎｓｔｌｅｒら（２００２）  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｉｅｓ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ５４：４７７−４８５；およびＲｏｂｅｒｔｓら（２００２）  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ５４：４５９−４７６に記載されるように、ＰＥＧ化され得る。上記安定化部分は、上記抗体の安定性もしくは保持を、少なくとも１．５倍（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、もしくは５０倍以上）、改善し得る。
【０１８８】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体は、グリコシル化され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体は、上記抗体もしくはフラグメントが、還元されるかもしくはグリコシル化されないように、酵素処理もしくは化学的処理に供され得るかもしくは細胞から生成され得る。還元されたグリコシル化を有する抗体を生成するための方法は、当該分野で公知であり、例えば、米国特許第６，９３３，３６８号；Ｗｒｉｇｈｔら（１９９１）  ＥＭＢＯ  Ｊ  １０（１０）：２７１７−２７２３；およびＣｏら（１９９３）  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３０：１３６１に記載される。
【０１８９】
（薬学的組成物および処方物）
抗ＣＤ２００抗体を含む組成物は、例えば、同種移植片器官の生存を長期化させるためにレシピエント哺乳動物に投与するための、薬学的組成物として処方され得る。上記薬学的組成物は、一般に、薬学的に受容可能なキャリアを含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」とは、生理学的に適合性である任意および全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などをいい、これらを含む。上記組成物は、薬学的に受容可能な塩（例えば、酸付加塩もしくは塩基付加塩）を含み得る。例えば、Ｂｅｒｇｅら、（１９７７）  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ６６：１−１９を参照のこと。
【０１９０】
上記組成物は、標準的方法に従って処方され得る。薬学的処方物は、十分に確立された技術であり、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ  （２０００）  “Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，”  ２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  （ＩＳＢＮ：  ０６８３３０６４７２）；Ａｎｓｅｌら、（１９９９）  “Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，”  ７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  （ＩＳＢＮ：  ０６８３３０５７２７）；およびＫｉｂｂｅ  （２０００）  “Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，”  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  （ＩＳＢＮ：  ０９１７３３０９６Ｘ）においてさらに記載されている。いくつかの実施形態において、組成物は、例えば、適した濃度において、および２〜８℃での貯蔵に適切な緩衝化溶液として、処方され得る。いくつかの実施形態において、組成物は、０℃未満の温度（例えば、−２０℃もしくは−８０℃）での貯蔵のために処方され得る。
【０１９１】
上記薬学的組成物は、種々の形態にあり得る。これら形態としては、例えば、液体、半固体および個体の投与形態が挙げられる（例えば、液体溶液（例えば、注射用および注入用の溶液）、分散物もしくは懸濁物、錠剤、丸剤、散剤、リポソームおよび坐剤）。好ましい形態は、一部、意図された投与様式および治療適用に依存する。例えば、全身送達もしくは局所送達が意図された抗ＣＤ２００抗体を含む組成物は、注射用もしくは注入用の溶液の形態にあり得る。よって、上記組成物は、非経口様式（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、もしくは筋肉内の注射）による投与のために処方され得る。「非経口投与」、「非経口投与される」、および他の文法的に等価な語句は、本明細書で使用される場合、経腸的投与および局所投与以外の、通常は、注射による投与様式をいい、静脈内、鼻内、眼内、肺、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、肺内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、大脳内、頭蓋内、頸動脈内および胸骨内の注射および注入が挙げられるが、これらに限定されない（以下を参照のこと）。
【０１９２】
上記組成物は、高濃度での安定した貯蔵に適切な、溶液、マイクロエマルジョン、分散物、リポソーム、もしくは他の規則正しい構造として処方され得る。滅菌注射用溶液は、本明細書に記載される抗体を、必要な場合、上記に列挙される成分のうちの１種もしくは組み合わせとともに適切な溶媒中で必要な量において組み込むことによって調製され得、続いて、濾過滅菌され得る。一般に、分散物は、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体を、基本的な分散媒および上記に列挙されるものに由来する必要とされる他の成分を含む滅菌ビヒクルへと組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌散剤の場合において、調製法は、真空乾燥および凍結乾燥を含み、上記方法から、本明細書に記載される抗体と予め滅菌濾過された溶液に由来する任意のさらなる所望の成分との散剤が得られる。溶液の適切な流動性が、例えば、レシチンのようなコーティングの使用によって、分散物の場合には必要とされる粒度の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。注射用組成物の長期の吸収は、吸収を遅らせる試薬（例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチン）を上記組成物中に含めることによってもたらされ得る。
【０１９３】
特定の実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、インプラントおよび微小被包された送達システムを含め、上記化合物を迅速な放出から保護するキャリアとともに調製され得る（例えば、制御放出処方物）。生分解性で生体適合性のポリマーが使用され得る（例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸）。このような処方物の調製のための多くの方法は、当該分野で公知である。例えば、Ｊ．Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  （１９７８）  「Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．を参照のこと。
【０１９４】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体は、例えば、循環における（例えば、血液、血清、もしくは他の組織における）その安定化および／もしくは保持を改善する部分で、改変され得る。上記安定化部分は、上記抗体の安定性、もしくは保持を、少なくとも１．５倍（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、もしくは５０倍以上）改善し得る。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体は、単位投与形態において存在し、上記単位投与形態は、自己投与に特に適切であり得る。本開示の処方された生成物は、容器（代表的には、例えば、バイアル、カートリッジ、充填済みシリンジもしくは使い捨てペン）内に含まれ得る。投与装置（ｄｏｓｅｒ）（例えば、米国特許第６，３０２，８５５号に記載される投与デバイス）はまた、例えば、本開示の注射システムとともに使用され得る。
【０１９６】
本開示の注射システムは、米国特許第５，３０８，３４１号に記載されるとおりの送達ペン（ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｐｅｎ）を使用し得る。ペン型デバイス（最も一般的には、糖尿病を有する患者へのインスリンの自己送達のために使用される）は、当該分野で周知である。このようなデバイスは、少なくとも１つの注射ニードル（例えば、約５〜８ｍｍの長さの３１ゲージニードル）を含み得、代表的には、治療溶液の１以上の治療単位用量で予め充填され、上記溶液を可能な限りほとんど疼痛を伴わずに、被験体に迅速に送達するために有用である。
【０１９７】
１つの医薬送達ペンは、バイアルホルダー（この中に、インスリンもしくは他の医薬のバイアルが収納され得る）を含む。上記バイアルホルダーは、近位端および遠位端を有する概して管状の構造である。上記バイアルホルダーの遠位端は、両頭ニードル（ｄｏｕｂｌｅ−ｅｎｄｅｄ  ｎｅｅｄｌｅ）カニューレと係合するための取り付け手段を含む。上記近位端はまた、ドライバおよび用量設定装置を含むペン本体と係合するための取り付け手段を含む。先行技術のバイアルホルダーとともに使用するための、バイアルを含む使い捨ての医薬（例えば、抗ＣＤ２００抗体）は、貫通可能なエラストマー隔壁（両頭ニードルカニューレのうちの一方の端で穿孔され得る）を有する遠位端を含む。このバイアルの近位端は、上記バイアルの円筒型の壁と液密でかみ合う状態でスライド可能に配置されたストッパーを含む。この医薬送達ペンは、上記医薬のバイアルを上記バイアルホルダーへ挿入することによって使用される。次いで、ペン本体は、上記バイアルホルダーの近位端に繋がれる。上記ペン本体は、上記ペンによって送達されるべき医薬の用量を指定するための用量設定装置、および上記バイアルのストッパーを上記選択された用量に対応する距離にわたって遠位方向に動かすための駆動装置を含む。上記ペンのユーザーは、両頭ニードルカニューレの近位点が上記バイアルの隔壁を穿通するように、上記バイアルホルダーの遠位端に上記ニードルカニューレを取り付ける。次いで、上記患者は、用量を選択し、上記ペンを操作して、上記ストッパーを上記選択された用量を送達するように遠位方向に動かす。上記用量選択装置は、上記選択された用量を注射すると、ゼロに戻る。次いで、上記患者は、上記ニードルカニューレを取り外して廃棄し、次の必要とされる医薬投与のために、便利な場所に上記先行技術の医薬送達ペンをしまっておく。上記バイアル中の医薬は、数回のこのような医薬の投与の後に空になる。次いで、上記患者は、上記バイアルホルダーを上記ペン本体から外す。次いで、上記空のバイアルは、外されて廃棄され得る。新たなバイアルが上記バイアルホルダーに挿入され得、上記バイアルホルダーおよびペン本体は、上記で説明されるように、再度組み立てられ、使用され得る。よって、医薬送達ペンは、一般に、正確な投与および使用しやすさのための駆動機構を有する。
【０１９８】
回転可能なノブのような投薬機構は、上記ユーザーが医薬の予めパッケージされたバイアルから上記ペンによって注射される医薬の量を正確に調節することを可能にする。医薬の上記用量を注射するために、上記ユーザーは、上記ニードルを皮膚の下に挿入し、上記ノブを押し込めるだけ奥に１回押し込む。上記ペンは、完全に機械式のデバイスであってもよいし、上記ユーザーに挿入される医薬の投与量を正確に設定および／または示すために電子回路と組み合わされてもよい。米国特許第６，１９２，８９１号を参照のこと。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、上記ペン型デバイスのニードルは、使い捨てであり、上記キットは、１つ以上の使い捨ての交換用のニードルを含む。現在特徴付けられている抗体溶液のいずれか１つの送達に適したペン型デバイスはまた、例えば、米国特許第６，２７７，０９９号；同第６，２００，２９６号；および同第６，１４６，３６１号（これらのうちの各々の開示は、それらの全体において本明細書に参考として援用される）に記載されている。マイクロニードルベースのペン型デバイスは、例えば、米国特許第７，５５６，６１５号（この開示は、その全体において本明細書に参考として援用される）において記載される。Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｌｔｄによって製造されたＰｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｐｅｎ  Ｉｎｊｅｃｔｏｒ  （ＰＰＩ）デバイス、ＭｏｌｌｙＴＭもまた参照のこと。
【０２００】
本開示はまた、医薬の長期的および／もしくは自己投与に適した、制御放出処方物もしくは長期放出処方物をもたらす。上記種々の処方物は、ボーラスとしての静脈投与によって、もしくは一定の期間にわたる連続注入によって、上記医薬（例えば、本開示の抗体および少なくとも１種の免疫抑制剤）での処置が必要な患者（例えば、同種移植片のレシピエント）に投与され得る。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体は、徐放性（ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ）投与、長期放出投与、時限（ｔｉｍｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ）投与、制御放出投与、もしくは連続放出投与のために処方される。いくつかの実施形態において、デポー処方物は、上記抗体をそれを必要とする被験体に投与するために使用される。この方法において、上記抗体は、数時間もしくは数日の期間にわたって活性薬剤の緩やかな放出を提供する１種以上のキャリアとともに処方される。このような処方物は、しばしば、身体に徐々に分散して、上記活性薬剤を放出する分解マトリクスに基づく。
【０２０２】
抗ＣＤ２００抗体のデポー注射に適した１つの処方物は、ポリマーデポーシステムに依拠する。上記ポリマーは、生分解性ポリマー（例えば、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）および／もしくはポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ））であり得、溶媒、開始剤と混合したプレポリマー、被包されたポリマー粒子もしくはポリマーマイクロスフェア中の溶液の形態にあり得る。上記ポリマーもしくはポリマー粒子は、上記活性薬剤を捕捉し、徐々に分解して、ゆっくりと拡散することによっておよび／もしくは上記マトリクスが吸収されるにつれて上記薬剤を放出する。このようなシステムの例としては、米国特許第４，９３８，７６３号；同第５，４８０，６５６号；および同第６，１１３，９４３号に記載されるものが挙げられ、最大数ヶ月までの期間にわたって活性薬剤の送達を生じ得る。
【０２０３】
別のデポーシステムは、米国特許第５，８０７，５７３号に記載され、このシステムは、脂質ベース（ジアシルグリセロール、リン脂質および必要に応じて、水、グリセロール、エチレングリコールもしくはプロピレングリコール）である。適切なデポー処方物はまた、例えば、米国特許出願公開番号２００６０１６５８００（短い継続期間にわたって被験体に有益な薬剤を全身送達および局所送達するための注射用デポーゲル組成物を記載する）；Ｂａｒｉら、（２０１０）  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｒｅｖ  Ｒｅｓ  ３（１）：１−１０（哺乳動物への治療タンパク質の非経口的送達に適した長期放出処方物を記載する）；および米国特許出願公開番号２００９００１０９２８（これは、デポー抗体処方物（例えば、５０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ（ＨＣｌでｐＨ６．０に調節）からなる水性緩衝液中に処方された、５ｍｇ／ｍＬのモノクローナル抗体を含む組成物を含む）を記載する）において記載されている。
【０２０４】
抗ＣＤ２００抗体組成物は、投与の容易さおよび投与量の均一性のために投与単位形態において調製され得る。「投与単位形態」とは、本明細書において使用される場合、処置されるべき被験体のための単位投与量として適した物理的に別個の単位をいう；各単位は、選択された薬学的キャリアと会合した状態で所望の治療効果を生じるように計算された所定の量の活性化合物を含む。
【０２０５】
本開示は、ＣＤ２００に結合する抗体（例えば、サマリズマブ）を含む水性溶液を提供する。いくつかの実施形態において、上記溶液は、抗ＣＤ２００抗体の高濃度溶液であり得る。このような溶液は、ときおり、「高濃度抗体溶液」と本明細書でいわれる。本明細書で使用される場合、水性溶液中の抗ＣＤ２００抗体の「高濃度」は、少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ以上（例えば、少なくとも１１ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１３ｍｇ／ｍＬ、１４ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１６ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、１９ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２１ｍｇ／ｍＬ、２２ｍｇ／ｍＬ、２３ｍｇ／ｍＬ、２４ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、５５ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、６５ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、８５ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬ、９５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１０５ｍｇ／ｍＬ、１１０ｍｇ／ｍＬ、１１５ｍｇ／ｍＬ、１２０ｍｇ／ｍＬ、１２５ｍｇ／ｍＬ、１３０ｍｇ／ｍＬ、１３５ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、１４５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１５５ｍｇ／ｍＬ、１６０ｍｇ／ｍＬ、１６５ｍｇ／ｍＬ、１７０ｍｇ／ｍＬ、１７５ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１８５ｍｇ／ｍＬ、１９０ｍｇ／ｍＬ、１９５ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２０５ｍｇ／ｍＬ、２１０ｍｇ／ｍＬ、２１５ｍｇ／ｍＬ、２２０ｍｇ／ｍＬ、２２５ｍｇ／ｍＬ、２３０ｍｇ／ｍＬ、２３５ｍｇ／ｍＬ、２４０ｍｇ／ｍＬ、２４５ｍｇ／ｍＬ、もしくは２５０ｍｇ／ｍＬ以上）である上記抗体の濃度である。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、２００ｍｇ／ｍＬより高い（例えば、２００ｍｇ／ｍＬ、２０５ｍｇ／ｍＬ、２１０ｍｇ／ｍＬ、２１５ｍｇ／ｍＬ、２２０ｍｇ／ｍＬ、２２５ｍｇ／ｍＬ、２３０ｍｇ／ｍＬ、２３５ｍｇ／ｍＬ、２４０ｍｇ／ｍＬ、２４５ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬ、２５５ｍｇ／ｍＬ、２６０ｍｇ／ｍＬ、２６５ｍｇ／ｍＬ、２７０ｍｇ／ｍＬ、２７５ｍｇ／ｍＬ、２８０ｍｇ／ｍＬ、２８５ｍｇ／ｍＬ、もしくは２９０ｍｇ／ｍＬより高い）濃度において上記溶液中に存在する。いくつかの実施形態において、上記抗体は、例えば、１０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、１１０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、１２０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、１３０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、１１０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、１２０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、１１０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、１２０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、１３０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、１６０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、１７０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、１９０ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ〜２５０ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬより高い（例えば、少なくとも２０１ｍｇ／ｍＬ）〜２５０ｍｇ／ｍＬ、または２００ｍｇ／ｍＬより高い（例えば、２０１ｍｇ／ｍＬ以上）〜３００ｍｇ／ｍＬの濃度において上記溶液中に存在する。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体は、単独療法として使用するためのものであり、そのように処方される。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体は、１種以上のさらなる活性薬剤とともに、もしくはこれらとともに使用するために処方され得る。例えば、上記１種以上のさらなる活性薬剤は、哺乳動物における同種移植片器官の生存を長期化するために有用であり得る。このような薬剤としては、例えば、モノクローナル抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）、シクロスポリンＡ、もしくはタクロリムス（ＦＫ  ５０６）が挙げられる。さらに、グルココルチコイドおよび／もしくはアザチオプリン（もしくは他のプリンアナログ）は、移植前に宿主に投与され得る。移植拒絶を予防もしくは阻害することを補助するために使用される薬物としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＡＴＧもしくはＡＬＧ、ＯＫＴ３、ダクリズマブ、バシリキシマブ、コルチコステロイド、１５−デオキシスペルグアリン、ＬＦ１５−０１９５、シクロスポリン、タクロリムス、プリンアナログ（例えば、アザチオプリン）、メトトレキサート、ミコフェノレート化合物（例えば、ミコフェノール酸モフェチルもしくはミコフェノール酸ナトリウム）、６−メルカプトプリン、ブレディニン、ブレキナル、レフルノミド、シクロホスファミド、シロリムス、抗ＣＤ４モノクローナル抗体、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、リツキサン、抗ＣＤ１５４モノクローナル抗体、抗ＬＦＡｌモノクローナル抗体、抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体、抗ＣＤ２モノクローナル抗体、および抗ＣＤ４５抗体。
【０２０７】
移植片拒絶を遅らせるために（すなわち、移植片生存を長期化するために）利用される多くの薬物は、種々の方法において機能する。シクロスポリンＡは、移植片拒絶を阻害するために最も広く使用されている免疫抑制薬のうちの１つである。それは、インターロイキン−２すなわちＩＬ−２のインヒビターである（それは、インターロイキン−２のｍＲＮＡ転写を妨げる）。より直接的には、シクロスポリンは、Ｔ細胞レセプター刺激に際して通常起こるカルシニューリン活性化を阻害する。カルシニューリンは、ＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞の核因子）を脱リン酸化し、それによって、ＮＦＡＴが核に入り、インターロイキン−２プロモーターに結合することを可能にする。このプロセスをブロックすることによって、シクロスポリンＡは、上記ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化、および別に存在する事象の生じたカスケードを阻害する。タクロリムスは、カルシニューリン阻害を介してインターロイキン−２の生成を阻害することによって作用する別の免疫抑制剤である。ラパマイシン（シロリムス）、ＳＤＺ  ＲＡＤ、およびインターロイキン−２レセプターブロッカーは、インターロイキン−２の作用を阻害する薬物であり、従って、上記の事象のカスケードを妨げる。プリンもしくはピリミジン生合成のインヒビターはまた、移植片拒絶を阻害するために使用される。これらインヒビターは、ＤＮＡ合成を妨げ、それによって、Ｔ細胞増殖を含む細胞分裂を阻害する。その結果は、新たなＴ細胞の形成を妨げることによる、Ｔ細胞活性の阻害である。プリン合成のインヒビターとしては、以下が挙げられる：アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）、ミコフェノール酸ナトリウム（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、およびミゾリビン（ブレディニン）。ピリミジン合成のインヒビターとしては、ブレキナルナトリウムおよびレフルノミドが挙げられる。
【０２０８】
シクロホスファミドは、プリン合成およびピリミジン合成の両方のインヒビターである。Ｔ細胞活性化を阻害するためのなお別の方法は、Ｔ細胞に対する抗体でレシピエントを処置することである。ＯＫＴ３は、Ｔ細胞レセプターの一部であるＣＤ３に対するマウスモノクローナル抗体である。この抗体は，最初に、Ｔ細胞レセプターを介してＴ細胞を活性化し、次いで、上記活性化Ｔ細胞のアポトーシスを誘導する。
【０２０９】
同種移植片拒絶を遅らせるための多くの他の薬物および方法は、当業者に公知であり、使用されている。１つのアプローチは、Ｔ細胞を、例えば、照射によって枯渇させることである。Ｔ細胞の枯渇は、しばしば、骨髄移植において、特に、主要なＨＬＡの部分的不適合が存在する場合に使用されてきた。上記ＣＤ４０リガンド−ＣＤ４０相互作用のインヒビター（ブロッカー）および／または上記ＣＤ２８−Ｂ７相互作用のブロッカーの、レシピエントへの投与も、使用されてきた（米国特許第６，２８０，９５７号）。ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ  ０１／３７８６０は、Ｔｈ１免疫応答を阻害するために、抗ＣＤ３抗体およびＩＬ−５の投与を開示する。ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ  ００／２７４２１は、腫瘍壊死因子αアンタゴニストを投与することによって、角膜移植片拒絶の予防もしくは処置のための方法を教示する。Ｇｌｏｔｚら、（２００２）  Ａｍ  Ｊ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ２：７５８−７６０は、静脈内免疫グロブリンの投与（ＩＶＩｇ）が、抗ＨＬＡ抗体の力価における顕著なかつ持続した減少を誘導し得、それによって、ＨＬＡ不適合器官の生存を可能にすることを示す。類似のプロトコルは、血漿交換（Ｘａｕｂｅら、（１９８４）  Ｌａｎｃｅｔ  １：８２４−８２８）もしくは免疫抑制剤と合わせた免疫吸着技術（Ｈｉｅｓｓｅら、（１９９２）  Ｎｅｐｈｒｏｌ  Ｄｉａｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ７：９４４−９５１）もしくはこれら方法の組み合わせ（Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙら，  ２０００  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ７０：８８７−８９５）を含んだ。Ｃｈａｎｇｅｌｉａｎら（２００３）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０２：８７５−８７８は、免疫抑制がＪａｎｕｓキナーゼ３（ＪＡＫ３）（これは、共通するγ鎖（γｃ）を使用するサイトカインレセプター（インターロイキン−２、−４、−７、−９、−１５、−２１）の適切なシグナル伝達に必須の酵素である）の経口インヒビターによって引き起こされるモデル（その結果は、Ｔ細胞活性化の阻害である）を開示する。
【０２１０】
ＩＣＡＭ−１に対するアンチセンス核酸は、単独で、または心臓同種移植片移植の研究において白血球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）に対して特異的なモノクローナル抗体と組み合わせて使用されてきた（Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ，前出）。同様に、抗ＩＣＡＭ−１抗体は、心臓同種移植片を処置するために抗ＬＦＡ−１抗体と組み合わせて使用されてきた（Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ，前出）。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ラット心臓もしくは腎臓同種移植片モデルにおいてシクロスポリンと共にさらに使用され、上記移植片の生存を長期化する相乗効果を生じた（Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ，前出）。慢性移植片拒絶は、ＴＧＦ−βのアンタゴニスト（これは、分化、増殖、およびアポトーシスに関与するサイトカインである）を投与することによって処置された（米国特許出願公開番号２００３／０１８０３０１）。
【０２１１】
上記抗ＣＤ２００抗体は、第２の活性薬剤と組み合わせて使用されるべき場合、または２種以上の異なる抗ＣＤ２００抗体が使用されるべき場合、上記薬剤は、別個にもしくは一緒に処方され得る。例えば、それぞれの薬学的組成物が、例えば、投与直前に混合され得、一緒に投与され得るか、または例えば、同時にもしくは異なるときに、別個に投与され得る（以下を参照のこと）。
【０２１２】
上記のように、組成物は、上記組成物が治療上有効量の抗ＣＤ２００抗体を含むように処方され得るか、または上記組成物は、治療量以下の量の上記抗体および治療量以下の量の１種以上のさらなる活性薬剤を含み、その結果、上記成分が全体として、哺乳動物における同種移植片の生存を長期化するために治療上有効であるように、処方され得る。いくつかの実施形態において、組成物は、２種以上の抗ＣＤ２００抗体（各々、治療量以下にある）を含み、その結果、上記抗体が組み合わせにおいて、移植片生存を長期化するために治療上有効である濃度にあるように、処方され得る。抗ＣＤ２００抗体の治療上有効な用量を決定するための方法は、当該分野で公知であり、本明細書に記載される。
【０２１３】
（生物学的サンプルおよびサンプル収集）
本明細書に記載される方法において使用するための適切な生物学的サンプルは、任意の生物学的流体、細胞集団、もしくは組織またはその画分を含み、これらは、１個以上の白血球集団を含む。生物学的サンプルは、例えば、被験体（例えば、ヒトのような哺乳動物）から得られる標本であり得るか、またはこのような被験体に由来し得る。例えば、サンプルは、生検によって得られる組織切片、または組織培養物中に配置されるかもしくは組織培養に適合させられる細胞であり得る。生物学的サンプルはまた、生物学的流体（例えば、尿、全血もしくはその画分（例えば、血漿）、唾液、精液、痰、脳脊髄液、涙液、もしくは粘液）であり得る。生物学的サンプルは、所望であれば、特定の細胞タイプを含む画分へとさらに分画され得る。例えば、全血サンプルは、血清へと、もしくは特定の血球タイプ（例えば、赤血球もしくは白血球（白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）））を含む画分へと分画され得る。所望であれば、生物学的サンプルは、被験体由来の異なる生物学的サンプルの組み合わせ（例えば、組織および流体サンプルの組み合わせ）であり得る。一部の実施形態において、生物学的サンプルは、脾臓組織または脾性免疫細胞集団を含む。
【０２１４】
上記生物学的サンプルは、被験体（例えば、同種移植器官（例えば、同種移植の腎臓または心臓）を有するレシピエント哺乳動物）から得られ得る。上記生物学的サンプルを得るための任意の適切な方法が使用され得るが、例示的な方法は、例えば、瀉血、スワブ（例えば、口内スワブ）、洗浄液、もしくは細いニードルの吸引による生検手順が挙げられる。細いニードルで吸引しやすい組織の非限定的な例としては、リンパ節、肺、甲状腺、乳房および肝臓が挙げられる。生物学的サンプルはまた、骨髄から得られ得る。サンプルはまた、例えば、顕微解剖（例えば、レーザーキャプチャーマイクロダイセクション法（ｌａｓｅｒ  ｃａｐｔｕｒｅ  ｍｉｃｒｏｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ）（ＬＣＭ）もしくはレーザーマイクロダイセクション法（ｌａｓｅｒ  ｍｉｃｒｏｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ（ＬＭＤ））、膀胱洗浄、スミア（ＰＡＰスミア）もしくは乳管洗浄細胞診（ｄｕｃｔａｌ  ｌａｖａｇｅ）によって集められ得る。
【０２１５】
上記生物学的サンプル中の細胞の活性もしくは完全性を保つ、サンプルを得るおよび／もしくは貯蔵するための方法は、当業者に周知である。例えば、生物学的サンプルは、１種以上のさらなる薬剤（例えば、適切な緩衝剤および／もしくはインヒビター（プロテアーゼインヒビターを含む））とさらに接触させられ得、上記薬剤は、上記細胞を保存するか、上記細胞における変化（例えば、容量オスモル濃度もしくはｐＨにおける変化）を最小限にするか、または上記細胞の細胞表面タンパク質（例えば、ＧＰＩ結合タンパク質）もしくは表面上のＧＰＩ部分を保存するか、それらの変性を最小限にすることが意図される。このようなインヒビターとしては、例えば、キレート化剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングリコール四酢酸（ＥＧＴＡ））、プロテアーゼインヒビター（例えば、フェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）、アプロチニン、およびロイペプチン）が挙げられる。適切な緩衝剤および全細胞を貯蔵するかもしくは別の方法で操作するための条件は、例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ  ＰｒｅｓｓのＰｏｌｌａｒｄおよびＷａｌｋｅｒ（１９９７），「Ｂａｓｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」，第７５巻；Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｓｅｒｉｅｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ＰｒｅｓｓのＭａｓｔｅｒｓ（２０００）  「Ａｎｉｍａｌ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ」，第２３２巻；およびＭｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  Ｈｕｍａｎａ  ＰｒｅｓｓのＪｏｎｅｓ（１９９６）  「Ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」，第２巻に記載される。
【０２１６】
サンプルはまた、干渉物質の存在を排除するかもしくは最小限にするように加工処理され得る。例えば、生物学的サンプルは、目的でない１種以上の材料（例えば、細胞）を除去するように分画もしくは精製され得る。生物学的サンプルを分画もしくは精製するための方法としては、フローサイトメトリー、蛍光活性化セルソーティング、および沈殿が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１７】
（バイオマーカーおよび適用）
本発明者らは、いくつかのバイオマーカーを同定し、本明細書において提供した。そのうちの１種以上における変化は、同種移植片器官を有するレシピエント哺乳動物に投与される抗ＣＤ２００抗体による、所望の免疫調節効果の生成と一致する。すなわち、上記同定されたバイオマーカーのうちの１種以上における変化は、レシピエント哺乳動物において長期化した同種移植片生存と相関する。上記バイオマーカーは、この節において以下に記載され、実用的な実施例において例示される。
【０２１８】
「所望の免疫調節効果」、「抗ＣＤ２００抗体関連免疫調節効果」および文法的に類似の用語は、本明細書で使用される場合、上記哺乳動物に投与される抗ＣＤ２００抗体の生物学的活性に帰し得る、哺乳動物における測定可能な所望の免疫学的効果をいう。例えば、本発明者らは、哺乳動物への抗ＣＤ２００抗体の（例えば、少なくとも１種の免疫抑制剤との組み合わせにおいて）投与後に、調節性Ｔ細胞の濃度が増大するのに対して、ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度が同種移植片を有するレシピエント哺乳動物において減少することを観察した。抗ＣＤ２００抗体の投与の際に、ＣＤ１１ｃ＋（ＣＤ４９ｂ−）細胞（例えば、ＣＤ１１ｃ＋（ＣＤ４９ｂ−）抗原提示細胞）によるＣＤ４０、ＭＨＣクラスＩＩ、およびＣＤ８０の発現レベルが減少するのに対して、ＩＬ−１２の細胞内発現レベルはこのサブセットにおいて増大することもまた、観察した。いくつかの免疫細胞集団（例えば、Ｆ４／８０＋ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋、ＣＤ３＋ＣＤ２００Ｒ＋、およびＣＤ１９＋ＣＤ４５＋細胞）の濃度のさらなる変化は、抗ＣＤ２００抗体で処置した同種移植片レシピエント哺乳動物においても観察された。いかなる特定の理論にも作用機構にも拘束されないが、本発明者らは、抗ＣＤ２００抗体（および必要に応じて１種以上の免疫抑制剤）で処置した哺乳動物を、これらバイオマーカーのうちの１種以上における変化（例えば、増大もしくは減少）についてモニターすることが、とりわけ、上記抗ＣＤ２００抗体が、上記抗体が投与される上記哺乳動物において生物学的効果を生じ得るか否かを決定するために有用であると考える。さらに、上記バイオマーカーのうちの１種以上の変化をモニターすることはまた、上記哺乳動物における免疫調節効果によって、上記疾患において臨床的に意義のある効果を達成するために十分（すなわち、レシピエント哺乳動物における同種移植片の生存を長期化するために十分）である抗ＣＤ２００抗体（例えば、サマリズマブ）の用量、すなわち、閾値用量（もしくは投与スケジュール）を同定するために有用である。
【０２１９】
従って、本開示によれば、抗ＣＤ２００抗体（例えば、低下したエフェクター機能を有するかもしくはエフェクター機能を全く有しない改変抗ＣＤ２００抗体）が、哺乳動物（例えば、ヒト）において所望の免疫調節効果（例えば、抗ＣＤ２００抗体関連免疫調節効果）を生じたか否かを決定するために、実施者は、抗ＣＤ２００抗体を投与した哺乳動物に由来する生物学的サンプル中の例えば、調節性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋細胞）の濃度を測定し得る。コントロールサンプル中の上記細胞の濃度と比較して、上記サンプル中の同じ組織学的タイプの細胞の濃度の増大は、上記抗ＣＤ２００抗体が上記哺乳動物において所望の免疫調節効果を生じたことを示す。いくつかの実施形態において、上記実施者は、上記生物学的サンプル中の上記調節性Ｔ細胞の濃度を直接測定する必要はない。例えば、（ｉ）上記抗体を投与した同種移植片レシピエント哺乳動物に由来する生物学的サンプル中の調節性Ｔ細胞の濃度および（ｉｉ）コントロール細胞濃度についての情報を提供された実施者（例えば、医療専門家または診断科学者もしくは診断技術者）は、上記抗体が、上記ヒトにおいて所望の免疫調節効果を生成したか否かを、情報を使用して（例えば、上記生物学的サンプル中の調節性Ｔ細胞の濃度と、上記コントロールサンプル中のこのような細胞の濃度とを比較して）決定し得、ここで上記調節性Ｔ細胞のコントロール濃度と比較して、上記生物学的サンプル中の上記調節性Ｔ細胞の濃度における増大は、上記抗ＣＤ２００抗体が上記ヒトにおいて所望の免疫調節効果を生じたことを示す。
【０２２０】
同様に、所望の免疫調節効果が、上記哺乳動物において起こったか否かを決定するための方法は、例えば、抗ＣＤ２００抗体で（および必要に応じて、少なくとも１種の免疫抑制剤で）処置した同種移植片レシピエント哺乳動物から得た生物学的サンプル中のＧｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞の濃度（ここでＧｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞のコントロール濃度と比較して上記Ｇｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞の濃度の増大は、上記抗ＣＤ２００抗体が、上記レシピエント哺乳動物において所望の免疫調節効果を生じたことを示す）を決定する工程を包含し得る。
【０２２１】
所望の免疫調節効果が上記哺乳動物において起こったか否かを決定するための方法は、例えば、抗ＣＤ２００抗体で（および必要に応じて、少なくとも１種の免疫抑制剤）で処置した同種移植片レシピエント哺乳動物から得た生物学的サンプル中のＦ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞の濃度（ここでＦ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞のコントロール濃度と比較して、上記Ｆ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における低下は、上記抗ＣＤ２００抗体が上記レシピエント哺乳動物において所望の免疫調節効果を生じたことを示す）を決定する工程を包含し得る。
【０２２２】
所望の免疫調節効果が上記哺乳動物で起こったか否かを決定するための方法は、例えば、抗ＣＤ２００抗体で（および必要に応じて、少なくとも１種の免疫抑制剤で）処置した同種移植片レシピエント哺乳動物から得られた生物学的サンプル中のＣＤ３＋ＣＤ２５＋細胞の濃度を決定する工程を包含し得、ここでＣＤ３＋ＣＤ２５＋細胞のコントロール濃度と比較して、上記ＣＤ３＋ＣＤ２５＋細胞の濃度の減少は、上記抗ＣＤ２００抗体が上記レシピエント哺乳動物において所望の免疫調節効果を生じたことを示す。
【０２２３】
所望の免疫調節効果が上記哺乳動物において起こったか否かを決定するための方法は、例えば、抗ＣＤ２００抗体で（および必要に応じて、少なくとも１種の免疫抑制剤で）処置した同種移植片レシピエント哺乳動物から得られた生物学的サンプル中のＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞もしくはＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞の濃度を決定する工程を包含し得、ここでこれら細胞集団のうちの一方もしくは両方の濃度の、上記細胞のコントロール濃度と比較した減少は、上記抗ＣＤ２００抗体が上記レシピエント哺乳動物において所望の免疫調節効果を生じたことを示す。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体（例えば、低下したエフェクター機能を有するかもしくはエフェクター機能を有しない改変抗ＣＤ２００抗体）がレシピエント哺乳動物において所望の免疫調節効果を生じたか否か（およびそれによって、上記哺乳動物が、とりわけ、その免疫調節活性を介して、上記哺乳動物の処置に影響を及ぼすために十分な上記抗体の用量を投与されたか）を決定するために、実施者は、抗ＣＤ２００抗体を投与した哺乳動物に由来する生物学的サンプル中のＣＤ３＋ＣＤ２００Ｒ＋細胞の濃度を測定し得る。上記生物学的サンプル中のＣＤ３＋ＣＤ２００Ｒ＋細胞の濃度における、コントロールサンプル中の同じ組織学的タイプの細胞の濃度と比較した増大は、上記抗ＣＤ２００抗体が上記哺乳動物において所望の免疫調節効果を生じたことを示す。いかなる特定の理論にも作用機構にも拘束されないが、本発明者らは、ＣＤ３＋ＣＤ２００Ｒ＋細胞の濃度における増大が、潜在的に、上記抗ＣＤ２００抗体に対するこれら細胞による代償的応答であると考える。従って、ＣＤ３＋ＣＤ２００Ｒ＋細胞の濃度は、上記抗ＣＤ２００抗体が投与される上記哺乳動物における抗ＣＤ２００抗体の免疫調節効果をモニター（検出する）ための間接的なバイオマーカーとして働く。
【０２２５】
所望の免疫調節効果がレシピエント哺乳動物において起こったか否かを決定するための方法が、本明細書で開示されるバイオマーカー細胞集団のうちの２つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、もしくは９つ）の分析を伴い得ることは理解される。
【０２２６】
特定の細胞集団（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞）の濃度を測定するための方法は、当該分野で周知であり、他の方法の中でも、フローサイトメトリーを含む。例えば、Ｃｈｅｎら、（２００９）  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４６（１０）：１９５１−１９６３を参照のこと。いくつかの実施形態において、実施者は、処置後患者（抗ＣＤ２００抗体が既に投与された患者）から得られた生物学的サンプルを、細胞の特定のサブセットの細胞の濃度について問い合わせ得る（ｉｎｔｅｒｒｏｇａｔｅ）。例えば、実施者は、処置後患者に由来する生物学的サンプル中に存在するＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の濃度および／もしくは活性化ＣＤ３＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度を決定し得る。これら２つの場合の各々において、所定のサブセットの細胞の濃度における、同じ組織学的タイプの細胞のコントロール濃度と比較した減少は、上記抗ＣＤ２００抗体が上記ヒトにおいて所望の免疫調節効果を生じたことを示す。
【０２２７】
上記のように、抗ＣＤ２００抗体（例えば、低下したエフェクター機能を有するかもしくはエフェクター機能を有しない改変抗ＣＤ２００抗体）がヒトにおいて所望の免疫調節効果を生じたか否かを決定することは、上記抗ＣＤ２００抗体の投与後の患者から得られた生物学的サンプル中の特定のサブタイプの細胞の濃度（処置後のＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞濃度）と、コントロールサンプル中の同じ組織学的タイプの細胞の濃度とを比較することによって、行われ得る。いくつかの実施形態において、コントロールサンプルは、上記患者に上記抗ＣＤ２００抗体を投与する前に、上記患者から得られる。いくつかの実施形態において、上記コントロールサンプルは、例えば、抗ＣＤ２００抗体を投与したことがない１名以上（例えば、２名、３名、４名、５名、６名、７名、８名、９名、１０名、１５名、２０名、２５名、３０名、３５名、もしくは４０名以上）の健康な個体から得られたサンプルの収集物であり得る（もしくは上記収集物に基づき得る）（例えば、同じ組織学的タイプの細胞のコントロール濃度は、抗ＣＤ２００抗体を投与したことがない患者から得られた１つ以上のコントロールサンプル中の上記細胞の濃度の平均であり得る）。いくつかの実施形態において、上記コントロールサンプルは、例えば、１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、もしくは４０以上の）同種移植片レシピエント哺乳動物から得られたサンプルの収集物であり得るかもしくは上記収集物に基づき得るが、上記レシピエント哺乳動物は、抗ＣＤ２００抗体を投与されたことがない。例えば、抗ＣＤ２００抗体が、上記抗体を投与したヒトにおいて所望の免疫調節効果を生じたか否かを決定するために、実施者は、抗ＣＤ２００抗体を投与したことがないか、または少なくとも上記ヒトから得た生物学的サンプル中の抗ＣＤ２００抗体の検出可能なレベルを有しないヒトに存在する同じ組織学的タイプの細胞の処置後濃度と、代表的な濃度もしくは平均濃度とを比較し得る。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体（例えば、低下したエフェクター機能を有するかもしくはエフェクター機能を有しない改変抗ＣＤ２００抗体）がヒトにおいて所望の免疫調節効果を生じたか否かを決定することは、上記処置後細胞濃度が、ヒトにおいて抗ＣＤ２００抗体による所望の免疫調節効果の発生の指標となる所定の範囲内に入るか否かを問うことによって行われ得る。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体がヒトにおいて所望の免疫調節効果を生じたか否かを決定することは、細胞の所定の組織学的タイプに関する上記処置後細胞濃度が、所定のカットオフ値より上かもしくは下に入るか否かを問うことを包含し得る。カットオフ値は、代表的には、所定の組織学的タイプの細胞の濃度であり、それより上もしくは下は、特定の表現型、すなわち、抗ＣＤ２００抗体によって生じたヒトにおける所望の免疫調節効果の発生の指標とみなされる。
【０２２９】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体（例えば、低下したエフェクター機能を有するかもしくはエフェクター機能を有しない改変抗ＣＤ２００抗体）が上記ヒトにおいて所望の免疫調節効果を生じたか否か（およびそれによって、上記ヒトがとりわけ、その免疫調節活性を介して上記患者の処置に影響を及ぼすために十分な抗体の用量を投与したか）を決定するために、実施者は、抗ＣＤ２００抗体を投与した同種移植片レシピエント哺乳動物に由来する生物学的サンプル中の抗原提示細胞（例えば、ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞）による、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＭＨＣクラスＩＩ、および／もしくは細胞内ＩＬ−１２の発現を定量し得る。上記生物学的サンプル中のＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞による、ＣＤ４０、ＣＤ８０、もしくはＭＨＣクラスＩＩの発現レベルにおける、コントロールサンプル中の同じ組織学的タイプの細胞によるその対応する発現レベルと比較した低下は、上記抗ＣＤ２００抗体が上記レシピエント哺乳動物において所望の免疫調節効果を生じたことを示す。対照的に、上記生物学的サンプル中のＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＩＬ−１２の細胞内発現レベルにおける、コントロールサンプル中の同じ組織学的タイプの細胞によるその対応する発現レベルと比較した増大は、上記抗ＣＤ２００抗体が上記ヒトにおいて所望の免疫調節効果を生じたことを示す。
【０２３０】
上記のように、実施者は、血液サンプル中の細胞による所定の抗原の発現レベルを直接的に測定する必要はない。例えば、（ｉ）上記抗体を投与した上記レシピエント哺乳動物に由来する生物学的サンプル中のＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＣＤ４０の発現レベル、および（ｉｉ）コントロールサンプル中の同じ組織学的タイプの細胞によるＣＤ４０の発現レベルについての情報を提供された実施者は、上記抗体が、上記レシピエント哺乳動物において所望の免疫調節効果を生じたか否かを、情報を使用して、例えば、上記生物学的サンプル中のＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＣＤ４０の発現レベルと、上記コントロールサンプル中のこのような細胞によるＣＤ４０の発現レベルとを比較して決定し得、ここで上記生物学的サンプル中の上記ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＣＤ４０発現のレベルにおける、上記コントロールサンプル中の同じ組織学的タイプの細胞によるＣＤ４０の発現レベルと比較した低下は、上記抗ＣＤ２００抗体が所望の免疫調節効果を上記ヒトにおいて生じたことを示す。
【０２３１】
いくつかの実施形態において、実施者は、所望の免疫調節効果が上記ヒトにおいて生じたか否かの尺度として、上記レシピエント哺乳動物から得られた生物学的サンプル中の免疫細胞によるＳＨＩＰ発現のレベルを検出および／もしくは定量し得る。いくつかの実施形態において、上記生物学的サンプルは、血液サンプルである。いくつかの実施形態において、上記生物学的サンプルは、脾臓生検に由来する細胞を含むか、もしくは上記脾臓生検に由来する細胞である。
【０２３２】
いくつかの実施形態において、複数の免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、前述のうちのいずれかのサブセット、または前述のうちの１つ以上を含む集団）によるＳＨＩＰ発現における、少なくとも１０％（例えば、少なくとも１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、もしくは７５％以上）の低下は、上記抗ＣＤ２００抗体が上記ヒトにおいて所望の免疫調節効果を生じたことを示す。
【０２３３】
細胞（例えば、脾細胞もしくは白血球（例えば、Ｔ細胞））によるＳＨＩＰ、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＭＨＣクラスＩＩ、および／もしくはＩＬ−１２の発現レベルを定量するための適した方法は、当該分野で公知であり、本明細書に記載される。例えば、このような方法としては、ウェスタンブロッティング、ドットブロッティング、およびフローサイトメトリー（これらは、タンパク質の発現を定量するために有用である）、またはｍＲＮＡの発現を定量するための逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）およびノーザンブロッティング分析が挙げられる。例えば、Ｗａｌｋｅｒら、（２００９）  Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ  ２１５（１）：５−１９；Ｒｉｊｋｅｒｓら、（２００８）  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４５（４）：１１２６−１１３５；およびＶｏｅｈｒｉｎｇｅｒら、（２００４）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７９（５２）：５４１１７−５４１２３を参照のこと。一般には、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（１９８９）  “Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，”  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．およびＡｕｓｕｂｅｌら、（１９９２）  “Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，”  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓを参照のこと。免疫細胞によるＳＨＩＰの発現レベルを検出および／もしくは定量するために適した方法は、実用的な実施例においてさらに例示される。
【０２３４】
上記のように、いくつかの実施形態において、上記コントロールサンプルは、上記哺乳動物に上記抗ＣＤ２００抗体を投与する前の、上記被験体レシピエント哺乳動物から得られた生物学的サンプルである。いくつかの実施形態において、上記コントロール発現レベルは、例えば、抗ＣＤ２００抗体を投与したことがない１名以上の（例えば、２名、３名、４名、５名、６名、７名、８名、９名、１０名、１５名、２０名、２５名、３０名、３５名、もしくは４０名以上の）健康な個体から得られた同じ組織学的タイプの細胞による所定の抗原の発現の平均発現レベルに基づき得る。上記コントロール発現レベルは、例えば、同種移植された器官を有するが、抗ＣＤ２００抗体を投与されたことがない１以上の（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、もしくは４０以上の）レシピエント哺乳動物から得られた同じ組織学的タイプの細胞による所定の抗原の平均発現レベルに基づき得る。
【０２３５】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体（例えば、減少したエフェクター機能を有するかもしくはエフェクター機能を有しない改変抗ＣＤ２００抗体）がヒトにおいて所望の免疫調節効果を生じたか否かを決定することは、抗原の処置後発現レベルが、ヒトにおいて抗ＣＤ２００抗体による免疫調節効果の発生の指標となる所定の範囲内に入るか否かを問うことによって、行われ得る。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体がヒトにおいて所望の免疫調節効果を生じたか否かを決定することは、白血球の所定の組織学的タイプによる所定の抗原の処置後発現レベルが、所定のカットオフ値より上もしくは下に入るか否かを問うことを包含し得る。この場合、上記カットオフ値は、代表的には、ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞による発現（例えば、ｍＲＮＡもしくはタンパク質発現）のレベルであり、これより上もしくは下は、特定の表現型、すなわち、抗ＣＤ２００抗体によって生じたヒトにおける所望の免疫調節効果の発生の指標とみなされる。
【０２３６】
上記のバイオマーカーベースの方法のうちのいずれも、抗ＣＤ２００抗体を、レシピエント哺乳動物に、上記レシピエント哺乳動物において所望の免疫調節効果を生成および／もしくは維持する量および頻度において投与し、それによって、上記哺乳動物における上記同種移植片の生存を長期化する工程を包含し得る。
【０２３７】
（処置方法）
本開示はまた、レシピエント哺乳動物における同種移植片器官の生存を長期化するための方法を特徴とする。いくつかの実施形態において、上記方法は、それを必要とするレシピエント哺乳動物に、抗ＣＤ２００抗体を単一薬剤として、上記レシピエント哺乳動物における腎臓同種移植片の生存を長期化するために有効な量において投与する工程を包含し得る。いくつかの実施形態において、上記方法は、それを必要とするレシピエント哺乳動物に、抗ＣＤ２００抗体を、１種以上の免疫抑制剤と組み合わせて投与し、それによって、同種移植片の生存を長期化する工程を包含し得る。
【０２３８】
上記組成物は、被験体（例えば、ヒト被験体）に、一部は投与経路に依存する種々の方法を使用して投与され得る。上記経路は、例えば、静脈内注射もしくは注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、腹腔内注射（ＩＰ）、もしくは筋肉内注射（ＩＭ）であり得る。特定のインヒビター（例えば、低分子）は、被験体に経口投与され得る。
【０２３９】
投与は、例えば、局所注入、注射によって、もしくはインプラントによって達成され得る。上記インプラントは、多孔性の、非多孔性の、もしくはゼラチン状の物質（膜（例えば、シリコンゴム膜（ｓｉａｌａｓｔｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ））、もしくは線維を含む）のものであり得る。上記インプラントは、上記被験体への上記組成物の徐放もしくは周期的な放出のために構成され得る。（例えば、米国特許出願公開番号２００８０２４１２２３；米国特許第５，５０１，８５６号；同第４，８６３，４５７号；および同第３，７１０，７９５号；ＥＰ４８８４０１；およびＥＰ  ４３０５３９（これらの各々の開示は、それらの全体において本明細書に参考として援用される）を参照のこと）。上記組成物は、例えば、拡散性の、腐食性の、もしくは対流性のシステム（例えば、浸透圧ポンプ、生分解性インプラント、電気核酸（ｅｌｅｃｔｒｏｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）システム、電気浸透システム、蒸気圧ポンプ、電解（ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｉｃ）ポンプ、起沸性ポンプ、圧電性ポンプ、腐食ベースのシステム、もしくは電気化学的システムに基づく移植可能なデバイスによって、上記被験体に送達され得る。
【０２４０】
本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体の適した用量（この用量は、レシピエント哺乳動物における同種移植片の生存を長期化し得る）は、種々の要因（例えば、処置されるべき被験体の年齢、性別、および体重、ならびに使用される特定の抗体が挙げられる）に依存し得る。例えば、抗ＣＤ２００抗体の異なる用量は、腎臓同種移植片を有するレシピエント哺乳動物を処置するために必要とされる抗体の用量と比較して、心臓同種移植片を有する同じ被験体を処置するために必要とされ得る。他の要因としては、例えば、上記被験体に同時にもしくは以前に影響を及ぼしている他の医学的障害、上記被験体の全般的な健康状態、上記被験体の遺伝的素因、食事、投与時間、排出速度、薬物組み合わせ、および上記被験体に投与される任意の他のさらなる治療剤が挙げられ得る。任意の特定の被験体のための特定の投与量および処置レジメンが、処置する医療従事者（例えば、医師もしくは看護師）の判断に依存することはまた、理解されるべきである。
【０２４１】
本明細書に記載される抗体は、固定用量として、または１キログラムあたりのミリグラム（ｍｇ／ｋｇ）用量単位で、投与され得る。いくつかの実施形態において、上記用量はまた、抗体の生成、または上記組成物中の活性抗体のうちの１種以上に対する他の宿主免疫応答を低下もしくは回避するために、選択され得る。限定されることは決して意図しないが、抗体の例示的投与量としては、例えば、１〜１００μｇ／ｋｇ、０．５〜５０μｇ／ｋｇ、０．１〜１００μｇ／ｋｇ、０．５〜２５μｇ／ｋｇ、１〜２０μｇ／ｋｇ、および１〜１０μｇ／ｋｇ、１〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．５〜２５ｍｇ／ｋｇ、１〜２０ｍｇ／ｋｇ、および１〜１０ｍｇ／ｋｇが挙げられる。本明細書に記載される抗体の例示的投与量としては、０．１μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１．０μｇ／ｋｇ、２．０μｇ／ｋｇ、４μｇ／ｋｇ、および８μｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、および８ｍｇ／ｋｇが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４２】
薬学的組成物は、本明細書に記載される抗体の治療上有効な量を含み得る。このような有効量は、一部は、上記投与される抗体の効果、もしくは上記抗体と１種以上のさらなる活性薬剤（１種より多くの薬剤が使用される場合）との組み合わせ効果に基づいて、当業者によって容易に決定され得る。本明細書に記載される抗体の治療上有効な量はまた、上記個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに抗体（および１種以上のさらなる活性薬剤）が上記個体において所望の応答（例えば、少なくとも１つの状態パラメーターの改善、例えば、同種移植片拒絶の少なくとも１つの症状の改善）を誘発する能力のような要因に従って変動し得る。治療上有効な量はまた、上記組成物の任意の毒性もしくは有害な効果より、上記治療上有益な効果が勝るものである。
【０２４３】
本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体の適切なヒト用量は、例えば、第Ｉ相用量上昇研究においてさらに評価され得る。例えば、ｖａｎ  Ｇｕｒｐら、（２００８）  Ａｍ  Ｊ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ８（８）：１７１１−１７１８；Ｈａｎｏｕｓｋａら、（２００７）  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １３（２，  ｐａｒｔ  １）：５２３−５３１；およびＨｅｔｈｅｒｉｎｇｔｏｎら、（２００６）  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ５０（１０）：  ３４９９−３５００を参照のこと。
【０２４４】
用語「治療上有効な量」もしくは「治療上有効な用量」、または本明細書で使用される類似の用語は、所望の生物学的応答もしくは医学的応答を誘発する薬剤の量を意味することが意図される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物は、治療上有効な量の抗ＣＤ２００抗体を含む。いくつかの実施形態において、上記組成物は、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか、および１種以上の（例えば、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、もしくは１１種以上の）さらなる治療剤を含み、その結果、上記組成物は、全体として、治療上有効である。例えば、組成物は、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体および免疫抑制剤を含み得、ここで上記抗体および薬剤は、各々、組み合わされた場合に、レシピエント哺乳動物における同種移植片の生存を長期化するために治療上有効である濃度にある。
【０２４５】
このような組成物の毒性および治療効力は、細胞培養物もしくは実験動物（例えば、同種移植片拒絶の動物モデル）における公知の薬学的手順によって決定され得る。これら手順は、例えば、ＬＤ５０（集団のうちの５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ５０（集団のうちの５０％に対して治療上有効である用量）を決定するために使用され得る。毒性効果と治療効果との間の用量比は、治療指数であり、上記用量比は、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表され得る。高い治療指数を示す抗ＣＤ２００抗体が好ましい。毒性副作用を示す組成物は、使用され得るが、このような化合物を罹患組織の部位へ標的化する送達システムの設計に、および正常な細胞への潜在的な損傷を最小限にし、よって、副作用を低下させるために、注意が払われるべきである。
【０２４６】
上記細胞培養物アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトにおける使用のために、投与量範囲を処方するにあたって使用され得る。このような抗体の投与量は、一般に、ほとんどもしくは全く毒性がない、ＥＤ５０を含む上記抗ＣＤ２００抗体の循環濃度の範囲内にある。上記投与量は、使用される投与形態および利用される投与経路に依存して、この範囲内で変動し得る。用量は、細胞培養物において決定される場合の上記ＩＣ５０（すなわち、症状の最大半値阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するために、動物モデルにおいて処方され得る。このような情報は、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定するために使用され得る。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーもしくはＥＬＩＳＡによって測定され得る。
【０２４７】
「被験体」とは、本明細書で使用される場合、任意の哺乳動物であり得る。例えば、被験体は、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、サル、ヒヒ、もしくはチンパンジー）、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、アレチネズミ、ハムスター、ラット、もしくはマウスであり得る。いくつかの実施形態において、上記被験体は、幼児（例えば、ヒトの幼児）である。いくつかの実施形態において、上記被験体は、雌性である。
【０２４８】
本明細書で使用される場合、「予防を必要とする」、「処置を必要とする」、もしくは「それを必要とする」被験体とは、適切な医療従事者（例えば、ヒトの場合においては医師、看護師、もしくはナース・プラクティショナー；非ヒト哺乳動物の場合には、獣医師）の判断によって、所定の処置（例えば、抗ＣＤ２００抗体を含む組成物での処置）から合理的に利益を得る被験体をいう。
【０２４９】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物への同種移植片の移植後、少なくとも７日間（例えば、少なくとも８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、もしくは１４日間）にわたって上記レシピエント哺乳動物に投与され得る。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物に、少なくとも１日に１回投与され得る。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、連続注入によって、例えば、ポンプによって投与され得る。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記レシピエント哺乳動物への同種移植片の移植後、少なくとも２日間（例えば、少なくとも２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、もしくは１４日間）にわたって有効なままであるのに十分大きな用量において投与され得、上記抗体は、有効用量を維持するために必要な頻度で投与される（例えば、単一用量は、１４日間にわたって有効なままであるのに十分大きいと思われる（この事象では、単一用量が、１４日間ごとに１回必要とされるのみであるか、または上記抗体の有効量が１４日間のみ必要とされる場合には、１回のみ）。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体は、上記同種移植片器官の移植前に、上記レシピエント哺乳動物へと投与され得る。例えば、抗ＣＤ２００抗体は、上記同種移植片器官の移植の前に、例えば、少なくとも１日１回もしくは１週間に１回、レシピエント哺乳動物に投与され得る。
【０２５０】
いくつかの実施形態において、上記哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態において、上記同種移植片は、ＭＨＣ不適合である。いくつかの実施形態において、上記ＭＨＣ不適合同種移植片は、ＨＬＡ不適合同種移植片である。いくつかの実施形態において、上記レシピエント哺乳動物は、上記同種移植片器官に対してＡＢＯ不適合である。
【０２５１】
上記ドナー同種移植片器官は、例えば、腎臓、肺、心臓、膵臓、脈管組織、肝臓、皮膚、眼、手、指、胃腸組織、神経組織、筋組織（例えば、平滑筋もしくは骨格筋組織）、骨もしくは軟骨、骨髄（例えば、造血細胞）、結合組織、または赤血球であり得る。いくつかの実施形態において、上記ドナー移植片器官は、完全な器官の一部（例えば、肝臓のうちの１以上の葉、膵臓に由来する島細胞、または眼の角膜もしくは水晶体）であり得る。
【０２５２】
いくつかの実施形態において、上記方法は、それを必要とするレシピエント哺乳動物に、抗ＣＤ２００抗体を、１種以上の（例えば、１種、２種、３種、４種、もしくは５種以上の）免疫抑制剤と組み合わせて投与して、それによって、同種移植片の生存を長期化する工程を包含し得る。上記方法において使用するために適切な免疫抑制剤は、本明細書において記載され、当該分野で公知である。
【０２５３】
いくつかの実施形態において、免疫調節処置方法（例えば、血漿交換法、脾臓摘出術、もしくは免疫吸着）は、上記抗ＣＤ２００抗体治療と組み合わせて使用され得る。
【０２５４】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種での処置の、上記抗ＣＤ２００抗体の非存在下での少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続期間に対してより短い継続期間を可能にする。例えば、上記レシピエント哺乳動物への上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続時間を、少なくとも約２０％（例えば、少なくとも約２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％以上）減少させ得る。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、少なくとも１種の免疫抑制剤の、レシピエント哺乳動物における同種移植片の生存を長期化するために必要とされる上記抗ＣＤ２００抗体の非存在下での上記薬剤の量に対して減少した量を可能にする。例えば、上記レシピエント哺乳動物への上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、レシピエント哺乳動物における上記同種移植片器官の増大した生存に影響を及ぼすために必要な、少なくとも１種の免疫抑制剤の量を、約２０％（例えば、少なくとも約２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％以上）減少させ得る。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、同種移植片器官の生存を長期化するために必要とされる上記抗ＣＤ２００抗体の非存在下に対して、少なくとも１種の免疫抑制剤の処置のより短い継続期間および減少した量を可能にする。
【０２５５】
本明細書で使用される場合、増大した生存は、抗ＣＤ２００抗体での処置（およびいくつかの実施形態において、上記抗体と１種以上の免疫抑制剤との組み合わせ治療）の非存在下での同種移植片器官生存と比較して、関連する同種移植片器官の生存において、例えば、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、もしくは２００％を超える）増大を含む。いくつかの実施形態において、単独療法（もしくは１種以上の免疫抑制剤との組み合わせにおいて）としての抗ＣＤ２００抗体の投与は、処置の非存在下でのレシピエント哺乳動物における器官同種移植片生存と比較して、レシピエント哺乳動物における関連する同種移植片の生存を、少なくとも約１．５倍（例えば、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、もしくは１０倍以上）増大し得る。生存時間は、例えば、日数単位で、週数単位で、月数単位で、もしくは年数単位で測定され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される方法のうちのいずれかに従う抗ＣＤ２００抗体の投与は、レシピエント哺乳動物における同種移植片器官の生存を、少なくとも６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月、もしくは３６ヶ月だけ長期化し得る。
【０２５６】
いくつかの実施形態において、腎臓同種移植片を有するレシピエント哺乳動物への、単独療法としての抗ＣＤ２００抗体の投与は、上記同種移植片器官の長期の生存をもたらし得る。同種移植片の長期の生存は、上記同種移植片器官の移植後、例えば、少なくとも約５年、少なくとも約７．５年、少なくとも約１０年、もしくは少なくとも約１５年以上であり得る。
【０２５７】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される方法は、上記抗ＣＤ２００抗体を投与した後、上記哺乳動物を上記同種移植片の状態における変化についてモニターする工程を包含し得る。同種移植片生存における改善について哺乳動物をモニターすることは、本明細書で定義されるとおり、移植片拒絶パラメーターにおける変化（例えば、上記疾患の１つ以上の症状における改善）について上記被験体を評価することを意味する。いくつかの実施形態において、上記評価は、投与後、少なくとも１時間、例えば、少なくとも２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間、もしくは４８時間、または少なくとも１日、２日、４日、１０日、１３日、２０日以上、または少なくとも１週間、２週間、４週間、１０週間、１３週間、２０週間以上、行われる。上記ヒトは、以下の期間のうちの１つ以上において評価され得る：処置開始前；処置の間；もしくは処置の１つ以上の要素が投与された後。評価は、さらなる処置の必要性を評価すること、例えば、投与量、投与頻度、もしくは処置の継続期間が変更されるべきか否かを評価することを包含し得る。上記評価はまた、選択された治療モダリティーを追加もしくは中止する必要性を評価すること（例えば、本明細書に記載される障害のための処置のうちのいずれかを追加もしくは中止すること）を包含し得る。
【０２５８】
いくつかの実施形態において、治療的処置の進行および／もしくは有効性をモニターする工程は、処置の前後にＣＤ２００発現のレベルをモニターする工程を包含する。例えば、ＣＤ２００の処置前レベルが確認され得、上記治療の少なくとも１回の施与の後に、ＣＤ２００のレベルが再び決定され得る。ＣＤ２００レベルの低下は、有効な処置の指標となり得る（以下を参照のこと）。ＣＤ２００レベルの測定値は、上記治療の量もしくは投与頻度を増大させるためのガイドとして、実施者によって使用され得る。ＣＤ２００レベルが直接モニターされ得るか、または代わりに、ＣＤ２００と相関する任意のマーカーがモニターされ得ることは、当然のことながら理解されるべきである。
【０２５９】
いくつかの実施形態において、例えば、腎臓同種移植片を伴う実施形態において、上記方法は、抗ＣＤ２００抗体での処置の前、処置の間、および／もしくは処置の後に、腎機能をモニターする工程を包含し得る。腎機能をモニターするための適切な方法は、当該分野で公知であり、例えば、上記レシピエント哺乳動物においてヘモグロビン、血清クレアチニン、タンパク尿、血中グルコース、および血清脂質をモニターする工程を包含する。例えば、Ｍａｒｃｅｎら、（２０１０）  ＮＤＴ  Ｐｌｕｓ  ３（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ２）：ｉｉ２−ｉｉ８；Ｆｉｅｂｉｇｅｒら、（２００４）  Ｈｅａｌｔｈ  Ｑｕａｌ  Ｌｉｆｅ  Ｏｕｔｃｏｍｅｓ  ２：２；およびＴｉｎｔｉら、（２０１０）  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ  ４２（１）：４０４７−４０４８を参照のこと。他の同種移植片器官（例えば、心臓、肺、肝臓、もしくは皮膚）の機能をモニターするために適した方法はまた、医療分野において周知である。
【０２６０】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２００抗体がレシピエント哺乳動物において所望の免疫調節効果を生じたことを決定した後に、医療従事者は、免疫調節効果の発生を維持して、それによって、上記同種移植片の生存を長期化するために十分な量および頻度において、上記抗ＣＤ２００抗体を上記哺乳動物に投与するように選択し得る。ヒトへと抗ＣＤ２００抗体を治療的に投与するための方法は、当該分野で周知であり、例えば、米国特許第７，４０８，０４１号に記載される。
【０２６１】
本明細書に記載される１種以上のバイオマーカーにおける変化を持続させるために十分な量および頻度において、抗ＣＤ２００抗体をレシピエント哺乳動物に投与することは、有益であると考えられる。所定の細胞集団の発現、発現の変化もしくは濃度の変化を検出するための方法は、当該分野で周知であり（例えば、ウェスタンブロット、免疫組織化学、およびフローサイトメトリー技術）、本明細書に記載される。例えば、ヒトへの抗ＣＤ２００抗体の投与後に、ＣＤ１１ｃ＋（ＣＤ４９ｂ−）細胞によるＣＤ４０発現のレベルは、レシピエント哺乳動物から得られた生物学的サンプル中に存在する細胞のフローサイトメトリー分析によって決定され得る。処置後のＣＤ１１ｃ＋（ＣＤ４９ｂ−）細胞によるＣＤ４０発現レベルは、コントロール発現レベルおよび／もしくは上記抗体での処置前の同じ組織学的タイプの細胞のＣＤ４０発現のレベルと比較され得、ここで上記細胞によるＣＤ４０発現のレベルの低下は、上記細胞によるＣＤ４０発現を低下させるために十分な量および頻度において、上記抗ＣＤ２００抗体を上記レシピエント哺乳動物に投与したことを示す。
【０２６２】
反復プロセスを介して、医療従事者は、上記哺乳動物において免疫調節効果の発生を維持するために必要とされる、各用量の投与の適切な用量および頻度を決定し得る。例えば、医療従事者は、レシピエント哺乳動物に、少なくとも２回（例えば、少なくとも３回、４回、５回、６回、７回、もしくは８回以上）、抗ＣＤ２００抗体を、上記ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−抗原提示細胞によるＣＤ４０の発現のレベルを低下させる（または少なくとも低下させると予測される）量において投与し得る。上記少なくとも２用量は、少なくとも１日（例えば、少なくとも２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、もしくはさらに１４日）の時間間隔が空けられるべきである。目的の免疫細胞集団を含む生物学的サンプル（例えば、血液サンプルもしくは組織サンプル（例えば、脾臓組織サンプル））は、上記哺乳動物から、種々の時間において（例えば、第１の抗ＣＤ２００抗体投与の前に、第１の用量と少なくとも１回のさらなる用量との間に、および第２の用量後の少なくとも１回の生物学的サンプル収集のときに）得られる。いくつかの実施形態において、生物学的サンプルは、用量間に少なくとも２回および／もしくは第１の用量が上記レシピエント哺乳動物へ投与された後に少なくとも１回、集められ得る。得られた各生物学的サンプルにおける主題の細胞は、次いで、特定の抗原（例えば、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＭＨＣクラスＩＩ、もしくはＩＬ−１２）の発現について問い合わされるか、またはそれらの濃度を決定するために、最終的には、上記抗ＣＤ２００抗体の量および／もしくは投与頻度が、上記レシピエント哺乳動物において免疫調節効果を維持するために十分であるか否かを決定するために、定量される。
【０２６３】
（キット）
本開示はまた、とりわけ、本明細書に記載される抗ＣＤ２００抗体のうちの１種以上を含む治療用キットを特徴とする。上記抗体は、溶液中に、または例えば、乾燥形態（例えば、凍結乾燥形態もしくはフリーズドライ形態）にあり得る。１種以上の抗ＣＤ２００抗体の乾燥形態を含むキットはまた、例えば、上記抗体を可溶化するために有用な１種以上の溶液（例えば、薬学的に受容可能な緩衝液、キャリア、賦形剤など）を含み得る。上記治療用キットは、例えば、１種以上の抗ＣＤ２００抗体を、それを必要とする患者（例えば、炎症性障害に罹患したか、これを有すると疑われるか、またはこれを発症するリスクがある哺乳動物）に送達するための適切な手段を含み得る。いくつかの実施形態において、上記キットは、同種移植された器官を有する哺乳動物への、または上記同種移植片器官が得られた上記ドナー哺乳動物への、上記抗体の送達のための適切な手段を含む。いくつかの実施形態において、上記手段は、哺乳動物への上記溶液の侵襲的な（例えば、血管内（例えば、静脈内）、皮下、もしくは筋肉内）送達に適している。いくつかの実施形態において、上記手段は、上記被験体への上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントの皮下送達に適している。例えば、上記手段は、シリンジもしくは浸透圧ポンプであり得る。いくつかの実施形態において、上記キットは、哺乳動物に投与されるべき抗ＣＤ２００抗体溶液が充填済みの手段を含む。例えば、治療用キットは、本明細書に記載される水性溶液が充填済みのシリンジ（例えば、上記溶液を含むペン型デバイス）を含み得るか、または上記キットは、ポンプ（例えば、浸透圧ポンプ）および上記ポンプと共に使用するために構成された１つ以上の使い捨てカセット（上記カセットには、本明細書に記載される水性溶液が充填済みである）を含み得る。いくつかの実施形態において、高濃度溶液を送達するための手段は、薬物送達のためのペン型デバイスである。
【０２６４】
いくつかの実施形態において、例えば、抗ＣＤ２００抗体が１種以上の免疫抑制剤と組み合わせて哺乳動物に投与されるべきである実施形態において、上記キットは、１種以上のさらなる免疫抑制剤（例えば、本明細書に記載されるいずれかのもの）を含み得る。例えば、治療用キットは、以下を含み得るが、これらに限定されない：アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、非ステロイド系抗炎症薬、ｍＴＯＲインヒビター（例えば、ラパマイシン）、および／もしくはＦＫ−５０６。いくつかの実施形態において、上記キットは、１種以上のＩＬ−２インヒビター（例えば、本明細書に記載されるもののうちのいずれか）を含み得る。
【０２６５】
以下の実施例は、本発明を例示し、限定するとは解釈されない。
【実施例】
【０２６６】
（実施例１．腎臓同種移植片生存を長期化するための単一薬剤治療）
同種移植片拒絶は、一般に、１種以上の免疫抑制剤（例えば、カルシニューリンインヒビター）で処置され、そのうちの多くは、単独でもしくは組み合わせのいずれかで、重篤で有害な薬物相互作用および副作用（脱毛、骨髄消耗、胃腸の不調、掻痒症、血小板減少症、貧血、腎毒性、膵炎、および感染症が挙げられるが、これらに限定されない）を生じ得る。さらに、患者における移植片生存を維持するために、上記１種以上の免疫抑制剤を長期的に、ときには、上記患者の生涯にわたって投与し続けることは、しばしば必要である。従って、現在の免疫抑制治療に代わる選択肢として、レシピエント哺乳動物における移植片の生存を、より少ない有害作用で長期化し得る新たな化合物を同定することは、非常に価値がある。
【０２６７】
本研究は、完全にＭＨＣ不適合の生命維持腎臓移植マウスモデル（ｌｉｆｅ−ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ  ｒｅｎａｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ）を使用して、腎臓同種移植片拒絶の予防、遅延、もしくは重篤度の低下のための単独療法として、抗ＣＤ２００抗体の評価を含んだ。本発明のマウスモノクローナル抗ＣＤ２００抗体は、マウスＣＤ２００に結合し、マウスＣＤ２００とそのＣＤ２００レセプターとの間の相互作用を阻害する。この抗体の可変領域のアミノ酸配列は、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ  ０９／０１４７４５（特に、例えば、図１０、ＯＸ９０ｍＧ２ａ）（その開示は、その全体において本明細書に参考として援用される）に示される。このマウス抗ＣＤ２００抗体は、エフェクターなしである（ＣＨ２ドメインがＤ２６５Ａ置換（Ｋａｂａｔら、（前出）に従う重鎖アミノ酸番号付け）を含む改変ＩｇＧ２ａ重鎖定常領域を含む）。上記置換は、上記改変定常領域と、ＩｇＧ  ＦｃレセプターであるＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩ、ＦｃγＲＩ、およびＦｃγＲＩＶとの間の相互作用の完全な喪失を生じる。例えば、Ｂａｕｄｉｎｏら、（２００８）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８１：６６６４−６６６９  （前出）を参照のこと。さらに、上記抗体のＦｃγＲＩ結合部位を、２３６位のロイシンをグルタミン酸残基で置換することによって非機能的にした。上記Ｃ１ｑ結合部位を、グルタミン酸３１９、リジン３２１およびリジン３２３を、アラニン残基で置換することによって非機能的にした（Ｓｔｅｕｒｅｒら、（１９９５）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５５：１１６５）。さらに、重鎖の２９８位のアスパラギンをグルタミンに変更して、保存されたＮ結合型グリコシル化部位を除去した。本開示によれば、上記マウス抗ＣＤ２００抗体は、重鎖定常領域の非改変形態に対して低下したエフェクター機能を有する、改変重鎖定常領域を含む抗体である。この節において記載される実験で使用されるコントロール抗体は、ＣＤ２００に結合しないマウスモノクローナル抗体である。上記コントロール抗体は、上記抗ＣＤ２００抗体のように、ＣＨ２ドメインがＤ２６５Ａ置換を含み、それによって、上記コントロール抗体を「エフェクターなし」にする改変ＩｇＧ２ａ重鎖定常領域を含む。
【０２６８】
この節で記載される研究において、ＢＡＬＢ／ｃマウスは、腎臓同種移植片レシピエントであり、Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、上記腎臓同種移植片のドナーであった。上記マウスは約１０週齢であり、手術時に、体重約２２〜２３ｇであった。左腎移植をこの研究において行った。上記レシピエントにおける両側の腎臓摘出後、採取したＣ５７ＢＬ／６ドナー移植片を、上記ドナー腎動脈と上記レシピエント腹大動脈との間の端側吻合で血管再生した。上記ドナー腎静脈およびレシピエント下大静脈もまた、繋げた。その後、尿管端端吻合を行った。死をもたらす移植片拒絶は、拒絶のエンドポイントの指標であったが、長期生存移植片を有するマウスを、術後（ＰＯＤ）１００日目に安楽死させた。１日の間に行われ得る個々の手術の回数に対する時間的制約を考慮すれば、手術（マウスの実験群内であったとしても）は、数日間にわたって互いにずらされた。しかし、全ての手術を、一貫性を確実にするために同じ顕微外科医（ｍｉｃｒｏｓｕｒｇｅｏｎ）が行った。
【０２６９】
上記研究には、８匹のマウスからなる６群を含み、各マウスは、生命維持腎臓同種移植片を有した。上記群を、以下の用量スケジュールの下で処置し、投与を移植時に開始した：（１）移植片を有するマウスに、７５μｇの上記抗ＣＤ２００抗体を、１４日間にわたって各日に静脈内投与した；（２）移植片を有するマウスに、７５μｇのエフェクターなしコントロール抗体（これは、ＣＤ２００に結合しないが、Ｄ２６５Ａ置換を含む前述の変異を含む）を１４日間にわたって各日に静脈内投与した；（３）移植片を有するマウスに、上記抗ＣＤ２００抗体を１４日間にわたって各日に皮下投与した；（４）移植片を有するマウスに、７５μｇの上記エフェクターなしコントロール抗体を１４日間にわたって各日に皮下投与した；（５）移植片を有するマウスに、７５μｇの上記抗ＣＤ２００抗体を、７日間にわたって各日に静脈内投与した；および（６）移植片を有するマウスに、７５μｇの上記コントロール抗体を、７日間にわたって各日に静脈内投与した。
【０２７０】
上記実験の結果を、実験群ごとに、表１に示す。
【０２７１】
【表１】
2014505706.tif 000006
表１に示されるように、上記コントロール抗体で処置した３つの群の各々からの移植片を有するマウスは、移植後４０日未満で移植片拒絶の結果として死亡した（群６、群４、および群２のマウスについて、それぞれ、３４．１±４．６、３９．１±５．３、および３７．６±４．４）。対照的に、群１、群３および群５からの全てのマウスは、研究終了時点まで（＞１００日）生存した。
【０２７２】
この実験の結果から、単一薬剤治療として投与した抗ＣＤ２００抗体は、マウスにおける腎臓同種移植片生存を長期化することが示される。上記結果はまた、制限された継続期間にわたる（例えば、７日〜１４日の間にわたって毎日）単一薬剤としての抗ＣＤ２００抗体の投与が、１４日を超えて長期的に投与するまたは上記同種移植片器官が上記レシピエントに存在する継続期間にわたって投与するよりも、上記同種移植片器官を上記宿主における生存のために条件付けするのに有効であることを示す。
【０２７３】
（実施例２．予備感作したレシピエントにおける腎臓同種移植片生存を長期化するための単一薬剤治療）
一連の実験（実施例１に記載されるものに類似）を、単一薬剤としての上記の治療用抗ＣＤ２００抗体が、予備感作させたレシピエント哺乳動物における腎臓同種移植片生存を長期化する能力を評価するために行った。これら実験において、上記予備感作を、上記レシピエント哺乳動物へのドナー脾細胞の事前免疫化によって誘導した。
【０２７４】
これら実験のために、ＢＡＬＢ／ｃレシピエントマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６マウスドナーから腎臓移植する１４日前に、５×１０６の同じドナーの脾細胞をレシピエントマウスに腹腔内注射することによって、予備感作した（ＰｒｕｉｔｔおよびＢｏｌｌｉｎｇｅｒの方法  （１９９１）  Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｒｅｓ  ５０（４）：３５０−３５５を使用）。このモデルを、ヒトにおいて、特に、促進された体液性拒絶反応に関連して、予備感作した移植を摸倣するように設計する。一般に、予備感作は、より早期の同種移植片を受けた結果として起こり得るのみならず、複数回の輸血を受けたことによっても、または妊娠した女性においても引き起こされ得る。このような予備感作法の他に、ＡＢＯ不適合を伴う同種移植片は、迅速に攻撃されかつ拒絶される。なぜなら、このような攻撃を予防する工程が講じられなければ、上記ＡＢＯ抗原に対する予め形成された抗体が原因となるからである。
【０２７５】
上記研究は、５〜７匹のマウスからなる４群を含み、各々のマウスは、生命維持腎臓同種移植片を有した。上記群を、表２における以下の投与スケジュールの下で処置し、投与は、移植時に開始した。
【０２７６】
【表２】
2014505706.tif 000007
この進行中の実験の中間結果を、表３に提供する。
【０２７７】
【表３】
2014505706.tif 000008
表３に提供される最初の結果によって実証されるように、群２（予備感作した、上記コントロール抗体で処置した移植片を有するマウス）における評価の下でのマウスのうちの全５匹が、１５日より長くは生存しなかった。対照的に、観察下の群１の移植片を有するマウスの平均移植片生存は、４０．６±１．４日であった。同様に、群３および群４のマウスの移植片について観察された平均移植片生存時間は、それぞれ、７１．８±２．４日および５４．３±４．８日であった。これら結果から、単一薬剤としての抗ＣＤ２００抗体での予備感作した腎臓同種移植片を有するマウスの処置は、上記マウスにおける腎臓同種移植片の生存を長期化させ得ることが示される。上記結果はまた、腎臓同種移植片を有するレシピエント哺乳動物への抗ＣＤ２００抗体の皮下送達が、治療上価値ある投与経路であることを強調する。
【０２７８】
（実施例３．ＩｇＧ２ａ  抗ＣＤ２００抗体およびエフェクターなし抗ＣＤ２００抗体の治療的等価性）
同種移植片の生存を長期化することにおいて、エフェクター機能を有する抗ＣＤ２００抗体（この場合には、ＩｇＧ２ａ抗体）と比較したエフェクターなし抗ＣＤ２００抗体の治療効力を評価するために、実験を行った。
【０２７９】
この節で記載される研究は、Ｃ５７ＢＬ／６からＢＡＬＢ／ｃ完全ＭＨＣ不適合マウスへの心臓移植モデルにおける移植片生存を試験した。各実験群には、４〜６匹の動物を含めた。上記実験群のうちのいくつかを、抗体で処置した。抗体１は、マウスＣＤ２００に結合し、かつマウスＣＤ２００とそのＣＤ２００レセプターとの間の相互作用を阻害するマウスモノクローナル抗ＣＤ２００抗体である。抗体１（実施例１に記載される抗ＣＤ２００抗体）は、エフェクターなしである。抗体２（実施例１に記載されるコントロール抗体）は、ＣＤ２００に結合しない、マウスモノクローナル抗体である。抗体２はまた、ＣＨ２ドメインがＤ２６５Ａ置換を含み、それによって、上記コントロール抗体を「エフェクターなし」にする改変ＩｇＧ２ａ重鎖定常領域を含む。抗体３は、抗体１と可変領域を共有するマウスモノクローナル抗体である。抗体３は、重鎖ＩｇＧ２ａ定常領域の非改変形態を含み、従って、エフェクター機能を有する。抗体４は、抗体２と可変領域を共有する、コントロールマウスモノクローナル抗体である。抗体４はまた、上記ＩｇＧ２ａ重鎖定常領域の非改変形態を含み、従って、エフェクター機能を有する。
【０２８０】
各群のマウスを、以下のとおりに処置し、投与を、移植時に開始した：
群１：  移植片を有するマウスは、未処置であった；
群２：  移植片を有するマウスに、シクロスポリンＡを用量１５ｍｇ／ｋｇにおいて上記研究の各日に皮下投与した；
群３：移植片を有するマウスに、シクロスポリンＡを用量５ｍｇ／ｋｇにおいて上記研究の各日に皮下投与した；
群４：抗体３を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて１４日間にわたって１日１回静脈内投与し、同時に、上記マウスに、シクロスポリンＡも用量１５ｍｇ／ｋｇにおいて上記研究の各日に皮下投与した；
群５：抗体４を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて１４日間にわたって１日１回静脈内投与し、同時に、上記マウスに、シクロスポリンＡも、用量１５ｍｇ／ｋｇにおいて上記研究の各日に皮下投与した；
群６：抗体１を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて１４日間にわたって１日１回静脈内投与し、同時に、上記マウスに、シクロスポリンＡも、用量１５ｍｇ／ｋｇにおいて上記研究の各日に皮下投与した；
群７：抗体１を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて１４日間にわたって１日１回静脈内投与し、同時に、上記マウスに、シクロスポリンＡも、用量５ｍｇ／ｋｇにおいて上記研究の各日に皮下投与した；ならびに
群８：抗体２を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて１４日間にわたって１日１回静脈内投与し、同時に、上記マウスに、シクロスポリンＡも、用量１５ｍｇ／ｋｇにおいて上記研究の各日に皮下投与した。
【０２８１】
この実験の結果を、表４に示す。
【０２８２】
【表４】
2014505706.tif 000009
表３に示されるように、群４のマウス（抗体１と１５ｍｇ／ｍＬ／日  ＣｓＡの組み合わせ治療で処置されたマウス）の移植片および群５のマウス（抗体３と１５ｍｇ／ｍＬ／日  ＣｓＡの組み合わせ治療で処置されたマウス）の移植片は、移植後１００日間での屠殺時にレシピエントマウスにおいて生存し続けた。対照的に、未処置レシピエントマウスにおける同種移植片は、平均生存時間８．５日を有した。ＣｓＡ単独（１５ｍｇ／ｍＬ／日において）で処置したレシピエントマウスの移植片は、平均して、約１５日目までしか生存しなかった。いずれかのコントロール抗体（抗体２もしくは抗体４）の投与は、１５ｍｇ／ｋｇ／日のＣｓＡと組み合わせても、同種移植片心臓の生存を約１６日目まで維持したに過ぎなかった。
【０２８３】
レシピエントマウスにおいて顕著に延長された生存を有することに加えて、群４および群６のマウスにおける心臓移植片は、拍動の定性的評価によって、十分機能していた。すなわち、上記移植片の全てが、強く拍動していたか、または拍動の強度に僅かな減少の徴候しか示さなかった。
【０２８４】
この実験の結果から、抗ＣＤ２００抗体の治療的投与は、上記抗体がエフェクター機能を有するか、欠如しているかに拘わらず、同種移植片の生存を長期化し得ることが示される。上記結果はまた、静脈内投与が、哺乳動物における同種移植片拒絶の処置において、抗ＣＤ２００抗体にとっての治療上有効な送達経路であることを示す。
【０２８５】
（実施例４．抗ＣＤ２００抗体の投与は、免疫抑制治療の早期の中止を可能にする）
狭い治療的用量範囲であっても、カルシニューリンインヒビター（例えば、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）およびＦＫ−５０６）は、極めて腎毒性であり得る。Ｃａｌｎｅら、（１９７８）  Ｌａｎｃｅｔ  ２：１３２３−１３２７およびＧａｓｔｏｎ  （２００９）  Ｃｌｉｎ  Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  ４（１２）：２０２９−２０３４。治療量以下のレベルのＣｓＡもしくはＦＫ−５０６での処置は、腎毒性の有意に低いリスクを生じるが、移植片生存に関する治療利益は有意に低下する。例えば、ＳｅｒｏｎおよびＭｏｒｅｓｏ  （２００４）  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ  ３６：２５７Ｓを参照のこと。カルシニューリン治療に付随する制限および副作用を考慮すると、移植片生存を長期化させることに関して高レベルの治療効力を維持すると同時に、これらインヒビターの要件を（用量レベルにおいてであろうと、処置の長さにおいてであろうと）低下させ得る新たな化合物を同定することは、明らかに価値のあることである。
【０２８６】
１．
抗ＣＤ２００抗体の使用によって、ＣｓＡが、同種移植片の生存を長期化するためにレシピエント哺乳動物に投与されなければならない時間の長さが減少し得るか否かを評価するために、実験を行った。実施例３に記載されるように、これら研究は、Ｃ５７ＢＬ／６からＢＡＬＢ／ｃ完全ＭＨＣ不適合マウスへの心臓移植モデルにおける移植片生存を試験した。各実験群には、５匹の動物を含めた。５つの実験群を、以下のとおりに処置し、投与を、移植時に開始した：
群１：抗体１（実施例３から）を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて１４日間にわたって１日１回皮下投与し、その後、同じ用量において上記研究の残りにわたって１週間に２回皮下投与した；同時に、上記マウスに、ＣｓＡも、用量１５ｍｇ／ｋｇにおいて４２日間にわたって皮下投与した；
群２：抗体１を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて７日間にわたって１日１回皮下投与し、その後、同じ用量において上記研究の残りにわたって１週間に２回皮下投与した；同時に、上記マウスに、ＣｓＡも、用量１５ｍｇ／ｋｇにおいて２８日間にわたって皮下投与し、その後、用量５ｍｇ／ｋｇにおいて１日１回皮下投与した；
群３：抗体２（実施例３から）を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて１４日間にわたって１日１回皮下投与し、その後、同じ用量において上記研究の残りにわたって１週間に２回皮下投与した；同時に、上記マウスに、ＣｓＡも、用量１５ｍｇ／ｋｇにおいて４２日間にわたって皮下投与した；
群４：抗体１を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて１４日間にわたって１日１回皮下投与し、その後、同じ用量において上記研究の残りにわたって１週間に２回皮下投与した；同時に、上記マウスに、ＣｓＡも、用量１５ｍｇ／ｋｇにおいて２８日間にわたって皮下投与し、その後、用量５ｍｇ／ｋｇにおいて１日１回皮下投与した；
群５：抗体１を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて１４日間にわたって１日１回皮下投与し、その後、同じ用量において上記研究の残りにわたって１週間に２回皮下投与した；同時に、上記マウスに、ＣｓＡも、用量１５ｍｇ／ｋｇにおいて最初の１４日間にわたって皮下投与した。
【０２８７】
この実験の結果を、表５に示す。
【０２８８】
【表５】
2014505706.tif 000010
表５に示されるように、抗体２、上記コントロール抗体、およびＣｓＡで処置した群３のマウスの心臓同種移植片は、約１７日間という平均生存時間を示した。対照的に、群１のマウス（これらマウスは、上記抗ＣＤ２００抗体（抗体１）で処置した）の上記同種移植片は、移植後１００日での屠殺時にも成長し続けていた。研究全体にわたって１５ｍｇ／ｋｇ／日のＣｓＡと組み合わせて、抗体１で処置されたマウスの移植片はまた、屠殺時（１００日）まで成長していた。これは、ＣｓＡ単独で処置した心臓同種移植片の歴史的平均生存が１５．５日であるのとは対照的であった（実施例３、表４を参照のこと）。
【０２８９】
群１のマウス（これらマウスは、ＣｓＡで４２日間にわたって処置されたのみである）の心臓同種移植片はまた、屠殺時に成長し続けていた。同様に、群２のマウス（これら処置群は、２９日目に１５ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇへとＣｓＡの用量の低下を伴った）の移植片はまた、屠殺時に生存可能なままであった。さらに、群５のマウス（これらは、ＣｓＡで１４日間にわたってのみ処置した）の移植片は、約３５．８日という平均生存時間を示した（生存時間は、１５ｍｇ／ｋｇ／日での長期的なＣｓＡ処置の２倍程度長く（実施例３，表４，群２）、５ｍｇ／ｋｇ／日での長期的なＣｓＡ処置の３倍程度長い（実施例３，表４，群３））。
【０２９０】
まとめると、これら結果から、抗ＣＤ２００抗体の投与は、ＣｓＡのより高い用量もしくはより高い投与頻度において認められる移植片生存の利益を保持しながら、投与されるＣｓＡの量および／もしくはＣｓＡがレシピエント哺乳動物に投与される時間の長さを減少させるために有効であることが示される。すなわち、上記結果は、抗ＣＤ２００抗体が、移植片生存を長期化させることに関して、高レベルの治療効力を維持しながら、カルシニューリンインヒビター（例えば、ＣｓＡ）の必須の治療的用量を低下させるために有用であることを示す。
【０２９１】
２．
抗ＣＤ２００抗体の使用が、レシピエント哺乳動物における同種移植片の生存を長期化するために必要であるミコフェノール酸モフェチルの継続期間もしくは量を減少させ得るか否かを評価するために、同様に実験を行った。第１に、マウスにおける同種移植片生存を長期化するために必要とされるミコフェノール酸モフェチルの用量および継続期間を決定するために、予備実験を行った。実施例３に記載されるように、これら研究は、Ｃ５７ＢＬ／６からＢＡＬＢ／ｃ完全ＭＨＣ不適合マウスへの心臓移植モデルにおける移植片生存を試験した。各実験群には、５匹の動物を含めた。３つの実験群を、以下のとおりに処置した：
群１−ＰＥ（予備実験）：心臓同種移植片を有するマウスに、ミコフェノール酸モフェチルを、用量１２０ｍｇ／ｋｇにおいて、移植時に開始して、上記研究の各日に経口投与した；
群２−ＰＥ：心臓同種移植片を有するマウスに、ミコフェノール酸モフェチルを、用量８０ｍｇ／ｋｇにおいて、移植時に開始して、上記研究の各日に経口投与した；ならびに
群３−ＰＥ：心臓同種移植片を有するマウスに、ＦＫ−５０６を、用量１６ｍｇ／ｋｇにおいて、移植時に開始して、上記研究の各日に経口投与した。
【０２９２】
この実験の結果を、以下の表６Ａに提供する。
【０２９３】
【表６Ａ】
2014505706.tif 000011
表６Ａに示されるように、ＦＫ−５０６レジメン（群３ＰＥ）で処置したマウスにおける心臓同種移植片の平均生存時間は、約２５．２日であった。ミコフェノール酸モフェチルの高用量（１２０ｍｇ／ｋｇ；群１ＰＥ）で処置したマウスにおける心臓同種移植片の平均生存時間は、約２２．２日であったのに対して、ミコフェノール酸モフェチルの中間用量（８０ｍｇ／ｋｇ；群２ＰＥ）で処置したマウスは、それらの心臓同種移植片を約２０．２日にわたって維持した。
【０２９４】
抗ＣＤ２００抗体の治療的投与が、心臓同種移植片を長期化するために必要とされる免疫抑制剤の継続期間および／もしくは量を減少するために有効であったか否かを決定するために、以下の実験を、上記Ｃ５７ＢＬ／６からＢＡＬＢ／ｃ完全ＭＨＣ不適合マウスへの心臓移植モデルを使用して、行った。各実験群には、５匹の動物を含めた。５つの実験群を、以下のとおりに処置し、処置は、移植時に開始した：
群１：抗体１（実施例３から）を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて、１４日間にわたって１日１回皮下投与した；同時に、上記マウスに、ミコフェノール酸モフェチルも、８０ｍｇ／ｋｇ／日において、研究全体にわたって経口投与した；
群２：抗体２（実施例３から）を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて、１４日間にわたって１日１回皮下投与した；同時に、上記マウスに、ミコフェノール酸モフェチルも、８０ｍｇ／ｋｇ／日において、研究全体にわたって経口投与した；
群３：抗体１（実施例３から）を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて、１４日間にわたって１日１回皮下投与した；同時に、上記マウスに、（ａ）シクロスポリンＡを、用量１５ｍｇ／ｋｇ／日において２８日間にわたって皮下投与し、（ｂ）ミコフェノール酸モフェチルを、用量８０ｍｇ／ｋｇ／日において研究全体にわたって経口投与した；ならびに
群４：抗体２（実施例３から）を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて、１４日間にわたって１日１回皮下投与した；同時に、上記マウスに、（ａ）シクロスポリンＡを、用量１５ｍｇ／ｋｇ／日において２８日間にわたって皮下投与し、（ｂ）ミコフェノール酸モフェチルを、用量８０ｍｇ／ｋｇ／日において研究全体にわたって経口投与した。
【０２９５】
この実験の結果を、表６Ｂに示す。
【０２９６】
【表６Ｂ】
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ミコフェノール酸モフェチルに関して、上記抗体２、上記コントロール抗体、および８０ｍｇ／ｋｇ／日のＭＭＦで処置した群１のマウスの心臓同種移植片は、約２１日という平均生存時間を示した（これは、ＭＭＦのみで処置した心臓移植片の生存時間に類似である（約２０．２日；上記の群２ＰＥの結果を参照のこと））。対照的に、抗ＣＤ２００抗体（抗体１）およびＭＭＦで処置したマウスの心臓同種移植片は、３倍より長く生存した（約６３．４日）。抗ＣＤ２００抗体で処置したマウスにおける上記増大した同種移植片生存時間はまた、高用量（１２０ｍｇ／ｋｇ）のＭＭＦで処置したマウスよりほぼ３倍長かった（表６Ａ，群１ＰＥを参照のこと）。これら結果から、抗ＣＤ２００抗体の治療的投与は、レシピエント哺乳動物における同種移植片の生存時間を大いに増大させると同時に、ＭＭＦの量を減少させるために有効であることが示される。
【０２９７】
（実施例５．抗ＣＤ２００抗体治療の効力のバイオマーカーとしての細胞集団）
拒絶の早期検出は、移植レシピエントのケアにおける医療および研究の主要な焦点である。器官の機能不全が始まる前に同種移植片器官拒絶を検出することは、例えば、１種以上の免疫抑制治療を使用して、この状態の首尾良い処置の機会を提供し得る。化合物が治療上効果的であるか否か、および／または効果的であり続けるか否かを、上記同種移植片器官の機能の不可逆性の喪失を回避するために可能な限り早く決定することは、同様に重要である。早期の決定は、医療従事者に、現在の医薬の用量もしくは頻度を変更する、そして／または上記患者へ新たな治療を処方するための時間および選択肢を提供し得、このことは、移植片拒絶を予防することにおいてより多くの治療的成功を提供し得る。
【０２９８】
心臓同種移植片器官を有し、抗ＣＤ２００抗体で処置したレシピエントマウスにおいて、特定の免疫細胞集団の特徴を研究するために、実験を行った。抗ＣＤ２００抗体の、少なくとも１種の免疫抑制剤と組み合わせでの投与は、心臓同種移植片の生存を長期化し得る（上記を参照のこと）ので、上記実験は、上記レシピエント哺乳動物において移植促進（ｐｒｏ−ｇｒａｆｔ）生存免疫調節効果を示す細胞集団を特徴付けようとした。いかなる特定の理論にも作用機構にも拘束されないが、長期化した移植片生存を示す動物におけるこのような細胞集団の変化は、抗ＣＤ２００抗体で処置した他のレシピエント哺乳動物における治療効力もしくは治療効力の見込みを決定するために有用なツールであり得ると考えられた
以下の細胞集団を調査した：
（１）ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−樹状細胞（これは、ＣＤ１１ｃ／ＣＤ４９ｂ−ビーズガイドによる細胞ソーティングを使用して選択した樹状細胞である）；
（２）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋細胞（これは、調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞である）。Ｔｒｅｇ細胞は、自己および外来抗原に対する有害な免疫学的反応を抑制する能力を有するＴ細胞のサブセットである；
（３）Ｇｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞は、骨髄系細胞であり、骨髄由来サプレッサ細胞もしくは（ＭＤＳＣ）といわれる［Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈら、（２００７）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６７（１）：４２５−４２６］。これらは、マクロファージ、顆粒球、未成熟樹状細胞、および早期骨髄前駆体を含む不均一な細胞集団である；
（４）Ｆ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞（単離された脾細胞集団内のマクロファージ集団）；
（５）ＣＤ３＋ＣＤ２５＋細胞（これらは、リンパ球亜集団である）；
（６）ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞（これらは、細胞傷害性Ｔ細胞である）；
（７）ＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞（これらは、いわゆるヘルパーＴ細胞である）；
（８）ＣＤ３＋ＣＤ２００Ｒ＋細胞（これらは、ＣＤ２００Ｒ陽性Ｔ細胞集団である）；ならびに
（９）ＣＤ１９＋ＣＤ４５＋細胞（これらは、ｐｒｏ−Ｂから成熟Ｂ細胞（発生の間）および濾胞性樹状細胞の混合集団を表す）。
【０２９９】
さらに、ＣＤ４０、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ８０、およびＩＬ−１２発現を、ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−樹状細胞集団に対して評価した。
【０３００】
上記の実施例３および実施例４に記載されるように、本研究は、心臓同種移植片レシピエントマウス（上記Ｃ５７ＢＬ／６からＢＡＬＢ／ｃ完全ＭＨＣ不適合マウスへの心臓移植モデル）を処置することを伴う。各実験群には、３匹の動物を含めた。
【０３０１】
マウスの群を、以下のとおりに処置し（上記の実施例４（１）もまた参照のこと）、処置は、移植時に開始した：
群１：抗体２（コントロール抗体，実施例３）を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて、１４日間にわたって１日１回静脈内投与した；
群２：抗体１（エフェクター機能を欠く抗ＣＤ２００抗体，実施例３）を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて、１４日間にわたって１日１回静脈内投与した；
群３：移植片を有するマウスに、ＣｓＡを、用量１５ｍｇ／ｋｇにおいて、１４日間にわたって上記研究の各日に皮下投与した；
群４：抗体２（実施例３）を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて、１４日間にわたって１日１回静脈内投与し、同時に、上記マウスに、ＣｓＡも、用量１５ｍｇ／ｋｇにおいて、１４日間にわたって上記研究の各日に皮下投与した；ならびに
群５：抗体１（実施例３）を、各移植片を有するマウスに、用量１００μｇにおいて、１４日間にわたって１日１回静脈内投与し、同時に、上記マウスに、ＣｓＡも、用量１５ｍｇ／ｋｇにおいて、１４日間にわたって上記研究の各日に皮下投与した。
【０３０２】
１４日目に、マウスを屠殺した。上記マウスから脾臓を採取し、フローサイトメトリー法を使用する分析のために、細胞を単離した。上記方法は、検出可能に標識したモノクローナル抗体のパネル（その各々は、所定の抗原に対して特異的であり、かつ異なるフルオロフォアを有する）の使用を採用した。各群の３匹のマウスの各々に由来する細胞集団を、独立して評価した。上記細胞集団の特徴付けの結果を、以下に示す。
【０３０３】
（ＣＤ１１＋ＣＤ４９ｂ−樹状細胞によるＣＤ４０発現）
フローサイトメトリーを使用して、各マウス（Ｎ１、Ｎ２、およびＮ３）から得られたＣＤ１１＋ＣＤ４９ｂ−細胞（樹状細胞）によるＣＤ４０発現のレベルを評価した。ＣＤ４０は、樹状細胞で見いだされる共刺激分子（例えば、そのＣＤ４０リガンドによる結合（ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）によって樹状細胞活性化を生じる）である。いかなる特定の理論にも作用機構にも拘束されないが、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞）によるＣＤ４０のレベルにおける低下、従って、ＡＰＣ活性化における低下は、おそらく、レシピエント哺乳動物における抗移植片免疫応答を阻害するかもしくは低下させる。
【０３０４】
この分析の結果（図１および表７Ａに示される）は、ＣＤ４０発現／細胞の相対的レベルの尺度である平均蛍光強度（ＭＦＩ）の単位で提供される。上記３匹の動物に由来する細胞による発現の平均レベルを、表中に提供し、実験群内の標準偏差もまた提供する。Ｔ検定もまた、上記結果が統計的に有意であるか否かを決定するためにこのデータセットに対して行った。
【０３０５】
【表７Ａ】
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図１および表７Ａに示されるように、心臓同種移植片を有するマウスへの抗体２（上記コントロール抗体）単独の投与は、ＣＤ４０の平均ＭＦＩ  １２．０６７を生じた。対照的に、このようなマウスへの抗体１（エフェクター機能を欠く抗ＣＤ２００抗体）とＣｓＡとの投与は、ＣＤ１１＋（ＣＤ４９ｂでゲーティングした）細胞によるＣＤ４０発現における統計的に有意な減少を生じた。発現におけるこの減少は、抗体１＋ＣｓＡ処置マウスにおける移植片生存の長期化と相関した（実施例１を参照のこと）。しかし、ＣＤ４０発現における減少は、抗体１単独、ＣｓＡ単独、もしくは抗体２とＣｓＡとの組み合わせで処置した動物から得られたこのタイプの細胞において観察されなかった。これら結果から、ＣＤ４０発現における低下は、抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとで処置した心臓同種移植片を有する哺乳動物における増大した同種移植片生存と関連することが示される。
【０３０６】
（ＣＤ１１＋ＣＤ４９ｂ−樹状細胞によるＭＨＣクラスＩＩ発現）
フローサイトメトリーを使用して、各マウス（Ｎ１、Ｎ２、およびＮ３）から得られたＣＤ１１＋ＣＤ４９ｂ−樹状細胞によるＭＨＣクラスＩＩ発現のレベルを評価した。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、種々のＡＰＣで見いだされ、免疫細胞の抗原認識および抗原特異的活性化に関与する。いかなる特定の理論にも作用機構にも拘束されないが、ＡＰＣ（例えば、樹状細胞）によるＭＨＣクラスＩＩのレベルにおける低下、従って、ＡＰＣ活性化における低下は、おそらく、レシピエント哺乳動物における抗移植片免疫応答を阻害するかもしくは低下させる。
【０３０７】
この分析の結果（図２および表７Ｂに示される）は、ＭＨＣクラスＩＩ発現／細胞の相対的レベルの尺度としてＭＦＩ単位で提供される。上記３匹の動物に由来する細胞による発現の平均レベルを、表中に提供し、実験群内の標準偏差もまた提供する。Ｔ検定もまた、上記結果が統計的に有意であるか否かを決定するためにこのデータセットに対して行った。
【０３０８】
【表７Ｂ】
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図２および表７Ｂに示されるように、心臓同種移植片を有するマウスへの抗体２（上記コントロール抗体）単独の投与は、ＭＨＣクラスＩＩの平均ＭＦＩ  ２９７を生じた。対照的に、抗ＣＤ２００抗体（抗体１）の投与は、同じ組織学的タイプの細胞によるＭＨＣクラスＩＩ発現における統計的に有意な低下を生じる（平均ＭＦＩ  １１６．３３）。同様に、上記抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの投与は、この細胞タイプにおけるＭＨＣクラスＩＩ発現における統計的に有意な低下を生じた。しかし、ＭＨＣクラスＩＩ発現における低下は、ＣｓＡ単独で処置したマウスにおいても、ＣｓＡおよび上記コントロール抗体（抗体２）で処置したマウスにおいても観察されなかった。これら結果から、ＭＨＣクラスＩＩ発現における低下は、抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとで処置した心臓同種移植片を有する哺乳動物における増大した同種移植片生存と関連することが示される。
【０３０９】
（ＣＤ１１＋ＣＤ４９ｂ−樹状細胞によるＣＤ８０発現）
フローサイトメトリーを使用して、各マウス（Ｎ１、Ｎ２、およびＮ３）から得られたＣＤ１１＋ＣＤ４９ｂ−樹状細胞によるＣＤ８０発現のレベルを評価した。ＣＤ８０（Ｂ７−１ともいわれる）は、種々のＡＰＣによって発現され、Ｔ細胞の活性化および生存に必要な共刺激シグナルを提供する。いかなる特定の理論にも作用機構にも拘束されないが、ＡＰＣ（例えば、樹状細胞）によるＣＤ８０のレベルにおける低下、従って、Ｔ細胞活性化における低下は、おそらく、レシピエント哺乳動物における抗移植片免疫応答を阻害するかもしくは低下させる。
【０３１０】
この分析の結果を、図３および表７Ｃに提供し、ＣＤ８０発現／細胞の相対的レベルの尺度（ＭＦＩ）として報告する。上記３匹の動物に由来する細胞による発現の平均レベルを、表中に提供し、実験群内の標準偏差もまた提供する。Ｔ検定もまた、上記結果が統計的に有意であるか否かを決定するためにこのデータセットに対して行った。
【０３１１】
【表７Ｃ】
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図３および表７Ｃに示されるように、心臓同種移植片を有するマウスへの抗体２（上記コントロール抗体）単独の投与は、ＣＤ８０の平均ＭＦＩ  約１１２を生じた。対照的に、抗ＣＤ２００抗体（抗体１）もしくはＣｓＡの投与は、同じ組織学的タイプの細胞によるＣＤ８０発現において統計的に有意な低下を生じた（それぞれ、平均ＭＦＩ  ５０．８、および抗体１とＣｓＡに関しては４７．６）。同様に、上記抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの投与は、この細胞タイプにおけるＣＤ８０発現において統計的に有意な低下を生じた。しかし、ＣＤ８０発現における低下は、ＣｓＡおよび上記コントロール抗体（抗体２）で処置したマウスにおいて観察されなかった。これら結果から、ＣＤ１１＋ＣＤ４９ｂ−樹状細胞によるＣＤ８０発現における低下は、抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとで処置した心臓同種移植片を有する哺乳動物における増大した同種移植片生存と関連することが示される。
【０３１２】
（ＣＤ１１＋ＣＤ４９ｂ−樹状細胞によるＩＬ−１２発現）
フローサイトメトリーを使用して、各マウス（Ｎ１、Ｎ２、およびＮ３）から得られたＣＤ１１＋ＣＤ４９ｂ−細胞（樹状細胞）によるＩＬ−１２発現のレベルを評価した。この分析の結果を、図４および表７Ｄに提供し、ＩＬ−１２発現／細胞の相対的レベルの尺度（ＭＦＩ）として報告する。上記３匹の動物に由来する細胞による発現の平均レベルを、表中に提供し、実験群内の標準偏差もまた提供する。Ｔ検定もまた、上記結果が統計的に有意であるか否かを決定するためにこのデータセットに対して行った。
【０３１３】
【表７Ｄ】
2014505706.tif 000016
図４および表７Ｄに示されるように、心臓同種移植片を有するマウスへの抗体２（上記コントロール抗体）単独の投与は、ＩＬ−１２の平均ＭＦＩ  約５．２４を生じた。対照的に、抗ＣＤ２００抗体（抗体１）の、もしくは抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの投与は、同じ組織学的タイプの細胞によるＩＬ−１２発現において統計的に有意な増大を生じる。同様に、上記抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの投与は、この細胞タイプにおけるＩＬ−１２発現において統計的に有意な増大を生じた。しかし、ＩＬ−１２発現における増大は、ＣｓＡ単独で処置したマウスでも、ＣｓＡと上記コントロール抗体（抗体２）とで処置したマウスでも、観察されなかった。これら結果から、ＣＤ１１＋ＣＤ４９ｂ−樹状細胞によるＩＬ−１２発現における増大は、抗ＣＤ２００抗体で、もしくは抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの組み合わせで処置した心臓同種移植片を有する哺乳動物における増大した同種移植片生存と関連することが示される。
【０３１４】
（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋細胞）
フローサイトメトリーを使用して、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋細胞のパーセンテージを、各マウス（Ｎ１、Ｎ２、およびＮ３）から得られた脾細胞の全集団内で、評価した。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋細胞は、調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞（自己および外来抗原に対する有害な免疫学的反応を抑制する能力を有するＴ細胞のサブセット）である。いかなる特定の理論にも作用機構にも拘束されないが、このような細胞の濃度における増大は、おそらく、レシピエント哺乳動物における抗移植片免疫応答を阻害するかもしくは低下させる。
【０３１５】
この分析の結果を、図５および表７Ｅに提供し、上記マウスの脾臓から単離されたＣＤ３＋Ｔ細胞の集団内のＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋細胞のパーセンテージの尺度として報告する。上記３匹の動物の各々に由来するこれら細胞の平均パーセンテージを、表中に提供し、各実験群内の標準偏差もまた提供する。Ｔ検定もまた、上記結果が統計的に有意であるか否かを決定するためにこのデータセットに対して行った。
【０３１６】
【表７Ｅ】
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図５および表７Ｅに示されるように、心臓同種移植片を有するマウスへの抗体２（上記コントロール抗体）単独の投与は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋細胞の平均パーセンテージ  約５．２７％を生じた。対照的に、抗ＣＤ２００抗体（抗体１）の投与は、同じ組織学的タイプの細胞のパーセンテージにおいて統計的に有意な増大（１３．６％）を生じる。同様に、上記抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの投与は、この細胞タイプのパーセンテージにおいて統計的に有意な増大（２２．７％）を生じた。しかし、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋細胞のパーセンテージにおける増大はまた、ＣｓＡと上記コントロール抗体（抗体２）とで処置したマウスにおいて観察されたが、ＣｓＡ単独で処置されたマウスにおいては観察されなかった。これら結果から、Ｔｒｅｇのパーセンテージにおける増大は、抗ＣＤ２００抗体で、もしくは抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの組み合わせで処置した心臓同種移植片を有する哺乳動物における増大した同種移植片生存と関連することが示される。
【０３１７】
（Ｇｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞）
フローサイトメトリーを使用して、Ｇｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージを、各マウス（Ｎ１、Ｎ２、およびＮ３）から得られた脾細胞の全集団内で、評価した。Ｇｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞は、骨髄系細胞であり、骨髄由来サプレッサ細胞もしくは（ＭＤＳＣｓ）といわれ［Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈら、（２００７）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６７（１）：４２５−４２６］、これらは、マクロファージ、顆粒球、未成熟樹状細胞、および早期骨髄前駆体を含む不均一な細胞集団である。いかなる特定の理論にも作用機構にも拘束されないが、このようなサプレッサ細胞の濃度における増大は、おそらく、レシピエント哺乳動物における抗移植片免疫応答を阻害するかもしくは低下させる。
【０３１８】
この分析の結果を、図６および表７Ｆに提供し、上記マウスの脾臓から単離されたリンパ球の集団内のＧｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージの尺度として報告する。上記３匹の動物の各々に由来するこれら細胞の平均パーセンテージを、表中に提供し、各実験群内の標準偏差もまた提供する。Ｔ検定もまた、上記結果が統計的に有意であるか否かを決定するためにこのデータセットに対して行った。
【０３１９】
【表７Ｆ】
2014505706.tif 000018
図６および表７Ｆに示されるように、心臓同種移植片を有するマウスへの抗体２（上記コントロール抗体）単独の投与は、Ｇｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞の平均パーセンテージ  約８．８１％を生じた。対照的に、抗ＣＤ２００抗体（抗体１）の投与は、同じ組織学的タイプの細胞のパーセンテージにおいて統計的に有意な増大（１５．８％）を生じる。同様に、上記抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの投与は、この細胞タイプのパーセンテージにおいて統計的に有意な増大（３５．３６％）を生じた。しかし、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋細胞のパーセンテージにおける増大はまた、ＣｓＡと上記コントロール抗体（抗体２）とで処置したマウスにおいて観察されたが、ＣｓＡ単独で処置したマウスにおいては観察されなかった。これら結果から、Ｇｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋骨髄系サプレッサ細胞のパーセンテージにおける増大は、抗ＣＤ２００抗体で、または抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの組み合わせで処置された心臓同種移植片を有する哺乳動物における増大した同種移植片生存と関連することが示される。
【０３２０】
（Ｆ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞）
フローサイトメトリーを使用して、Ｆ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージを、各マウス（Ｎ１、Ｎ２、およびＮ３）から得られた脾細胞の全集団内で、評価した。Ｆ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞は、免疫エフェクター細胞であり、これらは、マクロファージ、顆粒球、未成熟樹状細胞、および早期骨髄前駆体を含む不均一な細胞集団である。いかなる特定の理論にも作用機構にも拘束されないが、このような細胞の濃度における減少は、おそらく、レシピエント哺乳動物における抗移植片免疫応答を阻害するかもしくは低下させる。
【０３２１】
この分析の結果を、図７および表７Ｇに提供し、上記マウスの脾臓から単離されたリンパ球の集団内のＦ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージの尺度として報告する。上記３匹の動物の各々に由来するこれら細胞の平均パーセンテージを、表中に提供し、各実験群内の標準偏差もまた提供する。Ｔ検定もまた、上記結果が統計的に有意であるか否かを決定するためにこのデータセットに対して行った。
【０３２２】
【表７Ｇ】
2014505706.tif 000019
図７および表７Ｇに示されるように、心臓同種移植片を有するマウスへの抗体２（上記コントロール抗体）単独の投与は、Ｆ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞の平均パーセンテージ  約１３．０７％を生じた。対照的に、抗ＣＤ２００抗体（抗体１）の投与は、同じ組織学的タイプの細胞のパーセンテージにおいて統計的に有意な増加（２４．０６％）を生じた。上記抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの投与は、この細胞タイプのパーセンテージにおいて統計的に有意な減少（２．６９％）を生じた。しかし、Ｆ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージにおける低下はまた、ＣｓＡと上記コントロール抗体（抗体２）とで処置したマウスにおいて、およびＣｓＡ単独で処置したマウスにおいても観察された。これら結果から、Ｆ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージにおける低下は、抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの組み合わせで処置した心臓同種移植片を有する哺乳動物における増大した同種移植片生存と関連することが示される。
【０３２３】
（ＣＤ３＋ＣＤ２５＋細胞）
フローサイトメトリーを使用して、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋細胞のパーセンテージを、各マウス（Ｎ１、Ｎ２、およびＮ３）から得られた脾細胞の全集団内で、評価した。ＣＤ３＋ＣＤ２５＋細胞は、活性化Ｔ細胞サブセットである。いかなる特定の理論にも作用機構にも拘束されないが、このような細胞の濃度における低下は、おそらく、レシピエント哺乳動物における抗移植片免疫応答を阻害するかもしくは低下させる。
【０３２４】
この分析の結果を、図８および表７Ｈに提供し、上記マウスの脾臓から単離されたリンパ球の集団内のＣＤ３＋ＣＤ２５＋細胞のパーセンテージの尺度として報告する。上記３匹の動物の各々に由来するこれら細胞の平均パーセンテージを、表中に提供し、各実験群内の標準偏差もまた提供する。Ｔ検定もまた、上記結果が統計的に有意であるか否かを決定するためにこのデータセットに対して行った。
【０３２５】
【表７Ｈ】
2014505706.tif 000020
図８および表７Ｈに示されるように、心臓同種移植片を有するマウスへの抗体２（上記コントロール抗体）単独の投与は、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋細胞平均パーセンテージ  約２８．４７％を生じた。対照的に、抗ＣＤ２００抗体（抗体１）の投与は、同じ組織学的タイプの細胞のパーセンテージにおいて統計的に有意な低下（１５．８３％）を生じる。上記抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの投与は、この細胞タイプのパーセンテージにおいて統計的に有意な低下（１２％）を生じた。しかし、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋細胞のパーセンテージにおける低下はまた、ＣｓＡと上記コントロール抗体（抗体２）とで処置したマウスにおいて、およびＣｓＡ単独で処置したマウスにおいて、観察された。これら結果から、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋細胞のパーセンテージにおける低下は、抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの組み合わせで処置した心臓同種移植片を有する哺乳動物における増大した同種移植片生存と関連することが示される。
【０３２６】
（ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞）
フローサイトメトリーを使用して、ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞のパーセンテージを、各マウス（Ｎ１、Ｎ２、およびＮ３）から得られた脾細胞の全集団内で、評価した。ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。いかなる特定の理論にも作用機構にも拘束されないが、このような細胞の濃度における低下は、おそらく、レシピエント哺乳動物における抗移植片免疫応答を阻害するかもしくは低下させる。
【０３２７】
この分析の結果を、図９および表７Ｉに提供し、上記マウスの脾臓から単離されたリンパ球の集団内のＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞のパーセンテージの尺度として報告する。上記３匹の動物の各々に由来するこれら細胞の平均パーセンテージを、表中に提供し、各実験群内の標準偏差もまた提供する。Ｔ検定もまた、上記結果が統計的に有意であるか否かを決定するためにこのデータセットに対して行った。
【０３２８】
【表７Ｉ】
2014505706.tif 000021
図９および表７Ｉに示されるように、心臓同種移植片を有するマウスへの抗体２（上記コントロール抗体）単独の投与は、ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞の平均パーセンテージ  約２３．１７％を生じた。対照的に、抗ＣＤ２００抗体（抗体１）の投与は、同じ組織学的タイプの細胞のパーセンテージにおいて統計的に有意な低下（１８．６％）を生じた。上記抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの投与は、この細胞タイプのパーセンテージにおいて統計的に有意な低下（１５．４％）を生じた。これら結果から、ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞のパーセンテージにおける低下が、抗ＣＤ２００抗体で、または抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの組み合わせで処置した心臓同種移植片を有する哺乳動物における増大した同種移植片生存と関連することが示される。
【０３２９】
（ＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞）
フローサイトメトリーを使用して、ＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞のパーセンテージを、各マウス（Ｎ１、Ｎ２、およびＮ３）から得られた脾細胞の全集団内で、評価した。ＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞は、ヘルパーＴ細胞である。いかなる特定の理論にも作用機構にも拘束されないが、このような細胞の濃度における低下は、おそらく、レシピエント哺乳動物における抗移植片免疫応答を阻害するかもしくは低下させる。
【０３３０】
この分析の結果は、図１０および表７Ｊに提供し、上記マウスの脾臓から単離されたリンパ球の集団内のＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞のパーセンテージの尺度として報告する。上記３匹の動物の各々に由来するこれら細胞の平均パーセンテージを、表中に提供し、各実験群内の標準偏差もまた提供する。Ｔ検定もまた、上記結果が統計的に有意であるか否かを決定するためにこのデータセットに対して行った。
【０３３１】
【表７Ｊ】
2014505706.tif 000022
図１０および表７Ｊに示されるように、心臓同種移植片を有するマウスへの抗体２（上記コントロール抗体）単独の投与は、ＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞の平均パーセンテージ  約５７．５％を生じた。上記抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの投与は、この細胞タイプのパーセンテージにおける低下（４９．２％）を生じた。上記抗ＣＤ２００抗体単独の投与は、上記Ｔ細胞のパーセンテージにおける僅かな増大を生じた。
【０３３２】
（ＣＤ３＋ＣＤ２００Ｒ＋細胞）
フローサイトメトリーを使用して、ＣＤ３＋ＣＤ２００Ｒ＋細胞のパーセンテージを、各マウス（Ｎ１、Ｎ２、およびＮ３）から単離された脾細胞の全集団内で、評価した。ＣＤ３＋ＣＤ２００Ｒ＋細胞は、Ｔ細胞のＣＤ２００Ｒ＋サブセットである。この分析の結果を、図１１および表７Ｋに示し、上記マウスの脾臓から単離されたリンパ球の集団内のＣＤ３＋ＣＤ２００Ｒ＋細胞のパーセンテージの尺度として報告する。上記３匹の動物の各々に由来するこれら細胞の平均パーセンテージを、表中に提供し、各実験群内の標準偏差もまた提供する。Ｔ検定もまた、上記結果が統計的に有意であるか否かを決定するためにこのデータセットに対して行った。
【０３３３】
【表７Ｋ】
2014505706.tif 000023
図１１および表７Ｋに示されるように、心臓同種移植片を有するマウスへの抗体２（上記コントロール抗体）単独の投与は、ＣＤ３＋ＣＤ２００Ｒ＋細胞の平均パーセンテージ  約１７．８％を生じた。対照的に、抗ＣＤ２００抗体（抗体１）の投与は、同じ組織学的タイプの細胞のパーセンテージにおいて増大（２４．８％）を生じた。上記抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの投与は、この細胞タイプのパーセンテージにおいて僅かな増大（１９．８７％）を生じた。
【０３３４】
（ＣＤ１９＋ＣＤ４５＋細胞）
フローサイトメトリーを使用して、ＣＤ１９＋ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージを、各マウス（Ｎ１、Ｎ２、およびＮ３）から得られた脾細胞の全集団内で、評価した。ＣＤ１９＋ＣＤ４５＋細胞は、Ｂ細胞のＣＤ４５＋サブセットである。この分析の結果を、図１２および表７Ｌに提供し、上記マウスの脾臓から単離されたリンパ球の集団内のＣＤ１９＋ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージの尺度として報告する。上記３匹の動物の各々に由来するこれら細胞の平均パーセンテージを、表中に提供し、各実験群内の標準偏差もまた提供する。Ｔ検定もまた、上記結果が統計的に有意であるか否かを決定するためにこのデータセットに対して行った。
【０３３５】
【表７Ｌ】
2014505706.tif 000024
図１２および表７Ｌに示されるように、心臓同種移植片を有するマウスへの抗体２（上記コントロール抗体）単独の投与は、ＣＤ１９＋ＣＤ４５＋細胞の平均パーセンテージ  約２８．４６６７％を生じた。対照的に、抗ＣＤ２００抗体（抗体１）の投与は、同じ組織学的タイプの細胞のパーセンテージにおいて統計的に有意な低下（１５．８３３３％）を生じた。上記抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの投与は、この細胞タイプのパーセンテージにおいて統計的に有意な増大（１２％）を生じた。これら結果から、ＣＤ１９＋ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージにおける低下は、抗ＣＤ２００抗体で、または抗ＣＤ２００抗体とＣｓＡとの組み合わせで処置した心臓同種移植片を有する哺乳動物における増大した同種移植片生存と関連することが示される。
【０３３６】
（実施例６．同種移植片生存を長期化させるための組み合わせ治療の効力）
実施例４に記載されるように、レシピエント哺乳動物における同種移植片の生存を長期化するために必要とされる免疫抑制剤（例えば、カルシニューリンインヒビター（例えば、ＦＫ−５０６もしくはＣｓＡ））での処置の継続期間もしくは上記免疫抑制剤の用量レベルは、上記レシピエント哺乳動物への抗ＣＤ２００抗体の投与によって減少し得る。カルシニューリンインヒビターおよびミコフェノレート化合物と組み合わせて使用される抗ＣＤ２００抗体の治療効果を決定するために、実験を行った。
【０３３７】
実施例３に記載されるように、これら研究は、Ｃ５７ＢＬ／６からＢＡＬＢ／ｃ完全ＭＨＣ不適合マウスへの心臓移植モデルにおいて移植片生存を試験した。各実験群には、５匹の動物を含めた。５つの実験群を、以下のとおりに処置した：
群１：移植片を有するマウスに、ＦＫ−５０６を、用量１６ｍｇ／ｋｇ／日において、上記研究の継続期間にわたって経口投与した；
群２：移植片を有するマウスに、抗ＣＤ２００抗体（抗体１，実施例３）を、用量１００μｇにおいて、１４日間にわたって各日に皮下投与し、同時に、ミコフェノール酸モフェチルを、用量８０ｍｇ／ｋｇ／日において皮下投与した；
群３：移植片を有するマウスに、ＣＤ２００に結合しないコントロール抗体（抗体２，実施例３）を、用量１００μｇにおいて、１４日間にわたって各日に皮下投与し、同時に、ミコフェノール酸モフェチルを、用量８０ｍｇ／ｋｇ／日において皮下投与した；
群４：移植片を有するマウスに、抗ＣＤ２００抗体（抗体１，実施例３）を、用量１００μｇにおいて、１４日間にわたって各日に皮下投与し、同時に、（ａ）ミコフェノール酸モフェチルを、用量８０ｍｇ／ｋｇ／日において経口投与し、かつ（ｂ）ＦＫ−５０６を、用量１６ｍｇ／ｋｇ／日において２８日間にわたって経口投与した；ならびに
群５：移植片を有するマウスに、上記コントロール抗体（抗体２，実施例３）を、用量１００μｇにおいて、１４日間にわたって各日に皮下投与し、同時に、（ａ）ミコフェノール酸モフェチルを、用量８０ｍｇ／ｋｇ／日において経口投与し、かつ（ｂ）ＦＫ−５０６を、用量１６ｍｇ／ｋｇ／日において２８日間にわたって経口投与した。
【０３３８】
この実験の結果は、表８に示される。
【０３３９】
【表８】
2014505706.tif 000025
表８に示されるように、上記研究の継続期間（心臓移植片の機能不全まで）にわたるカルシニューリンインヒビターであるＦＫ−５０６の高用量の投与は、平均移植片生存  約２５．２日を生じたに過ぎなかった（群１）。抗ＣＤ２００抗体とミコフェノール酸モフェチルとの共投与は、移植片生存  約６３．４日（群２）を生じた。しかし、抗ＣＤ２００抗体、ミコフェノール酸モフェチル、およびＦＫ−５０６の３成分治療は、無期限の移植片生存を生じた（この実験においては、１００日での屠殺まで）。対照的には、ミコフェノール酸モフェチル、ＦＫ−５０６、および上記コントロール抗体の３成分治療は、移植片生存  約３９．２日（群５）を生じた。群４のレシピエント哺乳動物における増大した器官生存は、群２および群５のマウスにおける移植片の生存と比較して、統計的に有意であった。群２のマウスの移植片の平均生存は、群１および群３のマウスの同種移植片の生存と比較して、統計的に有意であった。顕著なことには、上記抗ＣＤ２００抗体の投与は、ＦＫ−５０６に伴って必要とされる処置の継続期間の（上記研究全体にわたって毎日からちょうど２８日間への）短縮を可能にする。これら結果から、抗ＣＤ２００抗体は、移植片生存を長期化するために必要とされるカルシニューリンインヒビターでの処置の継続期間を短縮するために有用であることが示される（実施例４（２）もまた参照のこと）。上記結果はまた、抗ＣＤ２００抗体と、ミコフェノレート化合物（もしくは類似の機能特性を有する化合物）と、カルシニューリンインヒビターとの特定の治療組み合わせが、レシピエント哺乳動物における同種移植片器官の生存を長期化するために有用であることを示す。
【０３４０】
ｍＴＯＲインヒビターであるラパマイシンと組み合わせて使用される抗ＣＤ２００抗体の治療効果を決定するために、実験を行った。
【０３４１】
実施例３に記載されるように、これら研究は、Ｃ５７ＢＬ／６からＢＡＬＢ／ｃ完全ＭＨＣ不適合マウスへの心臓移植モデルにおいて移植片生存を試験した。各実験群には、５匹の動物を含めた。３つの実験群を、以下のとおりに処置し、処置は、移植時に開始した：
群１：移植片を有するマウスに、ラパマイシンを、用量２ｍｇ／ｋｇ／日において１４日間にわたって経口投与した；
群２：移植片を有するマウスに、抗ＣＤ２００抗体（抗体１，実施例３）を、用量１００μｇにおいて、１４日間にわたって各日に皮下投与し、同時に、ラパマイシンを、用量２ｍｇ／ｋｇ／日において１４日間にわたって経口投与した；ならびに
群３：移植片を有するマウスに、コントロール抗体（抗体２，実施例３）を、用量１００μｇにおいて、１４日間にわたって各日に皮下投与し、同時に、ラパマイシンを、用量２ｍｇ／ｋｇ／日において１４日間にわたって経口投与した。
【０３４２】
この実験の結果を、表９に示す。
【０３４３】
【表９】
2014505706.tif 000026
表９に示されるように、ラパマイシンを、単独で、またはＣＤ２００に結合しないコントロール抗体と組み合わせての投与は、レシピエント動物における平均移植片生存、それぞれ、約４２．６日および３６．２日を生じた。対照的に、ラパマイシンと抗ＣＤ２００抗体（群２）との共投与は、無期限の同種移植片生存（これは、群１および群３のマウスの移植片の平均生存に対して統計的に有意であった）を生じた。これら結果から、抗ＣＤ２００抗体とｍＴＯＲインヒビター（例えば、ラパマイシン）との特定の組み合わせは、レシピエント哺乳動物における同種移植片器官の生存を長期化するために有用であることが示される。
【０３４４】
（実施例７．脾細胞によるＳＨＩＰ発現に対する抗ＣＤ２００抗体の効果）
免疫化マウスにおける脾細胞によるＳＨＩＰ発現に対する抗ＣＤ２００抗体処置の効果を評価するために、実験を行った。免疫応答を誘導するために、ＢＡＬＢ／ｃマウスを、Ｂ６マウスから単離した５００万の脾細胞（赤血球を枯渇させた）で免疫化した。免疫化の直後に、上記マウスに、抗体３（上記の実施例３）もしくは抗体４（上記の実施例３）を、用量５ｍｇ／ｋｇ／日において腹腔内投与した。上記マウスを、１４日目に屠殺した。
【０３４５】
上記マウスの脾臓を取り出し、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で一晩４℃において固定した。次いで、上記脾臓を、リン酸緩衝化食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）で洗浄し、次いで、３０％スクロース溶液中に浸漬した。上記脾臓を、低温保護包埋培地（ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｅｍｂｅｄｄｉｎｇ  ｍｅｄｉｕｍ）（至適切断温度（ＯＣＴ）化合物）中に包埋した。上記脾臓の５〜１０μｍ切片を、ミクロトーム−クリオスタットを使用して切り出し、風乾するためにスライド上に置いた。次いで、上記切片を、１５分間にわたって過酸化水素で処理し、続いて、ＰＢＳで３回洗浄した。
【０３４６】
次いで、上記切片を、３０分間にわたって室温で、ブロッキング溶液（３％ウシ血清アルブミン、３％正常ウサギ血清、および０．３％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００ＴＭをＰＢＳ中に含む）とともにインキュベートした。インキュベーションの後、上記切片を、上記ブロッキング溶液中１：１００においてヤギポリクローナル抗ＳＨＩＰ１抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｍ−１４）とともに、４℃で一晩インキュベートした。一晩インキュベートした後、上記切片をＰＢＳで３回洗浄した。次に、上記スライドを、ビオチン化ウサギ抗ヤギ抗体（Ｖｅｃｔｏｒｓｔａｉｎ  ＡＢＣキット  ＰＫ−１００５）（ブロッキング溶液中１：１０００）とともに、１時間にわたって室温でインキュベートし、次いで、ＰＢＳで３回洗浄した。
【０３４７】
アビジン−ペルオキシダーゼ複合体（ブロッキング溶液中１：２００）を、上記切片に１時間にわたって室温で接触させ、次いで、上記切片を再びＰＢＳで３回洗浄した。ＳＨＩＰタンパク質の存在もしくは量を、上記切片とペルオキシダーゼ基質ＤＡＢとを約５〜１０分間にわたって接触させることによって可視化した。
【０３４８】
図１３Ｂに示されるように、同種細胞免疫化は、非免疫化マウスに由来する脾細胞によるＳＨＩＰ発現（図１３Ｃを参照のこと）と比較して、上記ＢＡＬＢ／ｃ脾細胞によるＳＨＩＰ発現を誘導した（図１３Ｂを参照のこと）。しかし、抗体３の投与は、ＳＨＩＰの発現を実質的に低下させた（図１３Ａを参照のこと）。上記に示した各実験群には、３匹のマウスを含めた。各群の代表的写真を提供する。
【０３４９】
ＳＨＩＰ１タンパク質は、ＳＨ２依存性様式において複合体形成したＦｃγＲ２ｂに結合することが示された。例えば、Ｍｕｒａｉｌｌｅら、（２０００）  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ７２（１）：７−１５を参照のこと。ＦｃγＲ２ｂ（これは、脾臓の免疫細胞で発現される）はまた、上記実験において使用される抗体３に存在するＩｇＧ２ａアイソタイプＦｃ領域と複合体形成し得る。従って、本発明者らは、脾細胞におけるＳＨＩＰ発現レベルに対する任意の効果が、ＣＤ２００拮抗作用に起因するのではなく、上記マウスに投与される抗体のＦｃ領域に起因し得ると考えられる、と推論した。言い換えると、本発明者らは、抗ＣＤ２００抗体の観察された治療効果は、標的媒介性（すなわち、ＣＤ２００−ＳＨＩＰ経路を介する）であったかもしくはＦｃ媒介性（ＦｃγＲ２ｂ−ＳＨＩＰ経路を介する）であったかを決定しようとした。従って、免疫化マウスに由来する脾細胞によるＳＨＩＰ発現の抗体依存性低下が、上記抗体のエフェクター機能を必要としたか否かを決定するために、別の実験を行った。野生型ＢＡＬＢ／ｃマウス、ならびにＦｃγＲ２ｂ欠損ＢＡＬＢ／ｃマウスを、５００万のＢ６同種脾細胞で免疫化し、続いて、１００μｇの抗体３もしくは抗体４を投与した。マウスの１群「偽」には、免疫化も抗体処置も受けさせなかった。上記で示した各実験群には、３匹のマウスを含めた。
【０３５０】
図１４および図１５に示されるように、抗体３の投与は、抗体４の投与と比較して、上記脾細胞がＦｃγＲ２ｂを発現したか否かに拘わらず、免疫化マウスにおいてＳＨＩＰ発現を有意に低下した。これら結果から、抗ＣＤ２００抗体投与後のＳＨＩＰ発現における低下は、上記抗体Ｆｃ領域とＦｃレセプターγＲ２ｂとの相互作用よりむしろ、ＣＤ２００拮抗作用に起因することが示される。繰り返すと、本開示は、いかなる理論にも作用機構にも拘束されないが、上記結果はまた、哺乳動物におけるアンタゴニスト抗ＣＤ２００抗体治療の移植片生存長期化効果が、少なくとも一部は、ＳＨＩＰ発現の調節に由来するという見解を裏付ける。
【０３５１】
本開示は、その具体的実施形態を参照しながら記載されてきたが、種々の変更が行われ得、等価物が本開示の真の趣旨および範囲から逸脱することなく置き換わり得ることは、当業者によって理解されるべきである。さらに、多くの改変が、特定の状況、物質、組成物、プロセス、プロセスの工程を、本開示の目的、趣旨および範囲に適合させるために行われ得る。全てのこのような改変は、本開示の範囲内にあると解釈される。
【図１３Ａ】
2014505706.tif 000027
【図１３Ｂ】
2014505706.tif 000028
【図１３Ｃ】
2014505706.tif 000029
【図１３Ｄ】
2014505706.tif 000030
【図１】
2014505706.tif 000031
【図２】
2014505706.tif 000032
【図３】
2014505706.tif 000033
【図４】
2014505706.tif 000034
【図５】
2014505706.tif 000035
【図６】
2014505706.tif 000036
【図７】
2014505706.tif 000037
【図８】
2014505706.tif 000038
【図９】
2014505706.tif 000039
【図１０】
2014505706.tif 000040
【図１１】
2014505706.tif 000041
【図１２】
2014505706.tif 000042
【図１４】
2014505706.tif 000043
【図１５】
2014505706.tif 000044
【手続補正書】
【提出日】平成25年10月2日(2013.10.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
レシピエント哺乳動物において腎臓同種移植片の生存を長期化するのに使用するための、抗ＣＤ２００抗体を含む組成物であって、該抗ＣＤ２００抗体は、該レシピエント哺乳動物における該腎臓同種移植片の生存を長期化するために有効な量および頻度での単一薬剤として存在する、組成物。
【請求項２】
前記組成物が、
（ｉ）前記レシピエント哺乳動物への前記腎臓同種移植片の移植後、少なくとも７日間にわたって；
（ｉｉ）前記レシピエント哺乳動物への前記腎臓同種移植片の移植後、最大７日間までにわたって少なくとも１日１回；または
（ｉｉｉ）前記腎臓移植片の移植後、最大１４日間までにわたって少なくとも１日１回
該レシピエント哺乳動物に投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が、前記レシピエント哺乳動物への前記腎臓同種移植片の移植前および移植後に、該レシピエント哺乳動物に投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記腎臓同種移植片が、（ａ）前記レシピエント哺乳動物に対して完全にＭＨＣ不適合であるか、または（ｂ）前記レシピエント哺乳動物に対してＡＢＯ不適合である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記レシピエント哺乳動物が、前記腎臓同種移植片に予備感作される、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物が、（ａ）前記レシピエント哺乳動物に皮下投与されるか、または（ｂ）前記レシピエント哺乳動物に静脈内投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
レシピエント哺乳動物において腎臓同種移植片の生存を長期化するのに使用するための、抗ＣＤ２００抗体を含む組成物であって、該組成物は、該腎臓同種移植片が得られるドナー哺乳動物から該腎臓同種移植片を取り出す前に、該ドナー哺乳動物に投与される、組成物。
【請求項８】
レシピエント哺乳動物において腎臓同種移植片の生存を長期化するのに使用するための、抗ＣＤ２００抗体を含む組成物であって、該組成物は、該レシピエント哺乳動物に１種以上の免疫抑制剤と組み合わせて投与され、かつ該組成物は、該レシピエント哺乳動物に皮下投与されるか、または該レシピエント哺乳動物に静脈内投与される、組成物。
【請求項９】
レシピエント哺乳動物において同種移植片の生存を長期化するのに使用するための、抗ＣＤ２００抗体を含む組成物であって、同種移植片器官をレシピエント哺乳動物に移植する前に、該組成物は、該レシピエント哺乳動物に投与され、かつ該同種移植片器官の移植後に、該組成物は、該レシピエント哺乳動物に投与される、組成物。
【請求項１０】
レシピエント哺乳動物において同種移植片器官の生存を長期化するのに使用するための、抗ＣＤ２００抗体を含む組成物であって、該組成物は、１種以上の免疫抑制剤と組み合わせて該レシピエント哺乳動物に投与され、かつ該組成物および該１種以上の免疫抑制剤は、該レシピエント哺乳動物において、所望の免疫調節効果の発生を生成および維持し、従って、該レシピエント哺乳動物における該同種移植片器官の生存を長期化するために十分な量および頻度において投与される、組成物。
【請求項１１】
前記所望の免疫調節効果は、以下：
（ｉ）ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＣＤ４０の発現における、前記組成物および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物において同じ組織学的タイプの細胞によるＣＤ４０の発現レベルに対する低下；
（ｉｉ）ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＭＨＣクラスＩＩの発現における、前記組成物および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプの細胞によるＭＨＣクラスＩＩの発現レベルに対する低下；
（ｉｉｉ）ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＣＤ８０の発現における、前記組成物および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプの細胞によるＣＤ８０の発現レベルに対する低下；
（ｉｖ）ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＩＬ−１２の発現における、前記組成物および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプの細胞によるＩＬ−１２の発現レベルに対する増大；
（ｖ）調節性Ｔ細胞の濃度における、前記組成物および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプの調節性Ｔ細胞の濃度に対する増大；
（ｖｉ）Ｇｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における、前記組成物および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＧｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞の濃度に対する増大；
（ｖｉｉ）Ｆ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における、前記組成物および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＦ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞の濃度に対する低下；
（ｖｉｉｉ）ＣＤ３＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の濃度における、前記組成物および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＣＤ３＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の濃度に対する低下；
（ｉｘ）ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度における、前記組成物および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度に対する低下；
（ｘ）ＣＤ１９＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における、前記組成物および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の前記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＣＤ１９＋ＣＤ４５＋Ｔ細胞の濃度に対する低下；ならびに
（ｘｉ）複数の免疫細胞によるＳＨＩＰ発現における、前記組成物および前記１種以上の免疫抑制剤の投与前の同じ組織学的タイプの免疫細胞におけるＳＨＩＰの発現レベルに対する低下、
からなる群より選択される、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
レシピエント哺乳動物において同種移植片の生存を長期化するのに使用するための、抗ＣＤ２００抗体を含む組成物であって、該組成物は、１種以上の免疫抑制剤と組み合わせて該レシピエント哺乳動物に投与され、かつ該組成物の投与は、該１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種での処置の、該組成物の非存在下での該少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続期間に対してより短い継続期間を可能にする、組成物。
【請求項１３】
前記抗ＣＤ２００抗体が、重鎖定常領域の非改変形態と比較して、低下したエフェクター機能を有するその対応する改変重鎖定常領域を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記抗ＣＤ２００抗体が、完全抗体またはそのＣＤ２００結合フラグメントである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ＣＤ２００結合フラグメントが、一本鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｖ、Ｆｄ、ミニボディー、ダイアボディー、および単一ドメイン抗体からなる群より選択される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記抗ＣＤ２００抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、齧歯類抗体、脱免疫化抗体、もしくは霊長類化抗体である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記抗ＣＤ２００抗体が、サマリズマブである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記レシピエント哺乳動物が、ヒトであり、前記同種移植片は、ヒト同種移植片である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１９】
少なくとも１０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＣＤ２００抗体を含む、滅菌水性溶液。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９７】
本開示の他の特徴および利点（例えば、レシピエント哺乳動物における同種移植片器官の生存を長期化するための方法）は、以下の説明、実施例および特許請求の範囲から明らかである。
したがって、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
腎臓同種移植片の生存を長期化するための方法であって、該方法は、腎臓同種移植片の生存の長期化を必要とするレシピエント哺乳動物に、該レシピエント哺乳動物における該腎臓同種移植片の生存を長期化するために有効な量および頻度において、単一薬剤として抗ＣＤ２００抗体を投与する工程を包含する、方法。
（項目２）
上記抗ＣＤ２００抗体が、上記レシピエント哺乳動物への上記腎臓同種移植片の移植後、該レシピエント哺乳動物に、少なくとも７日間にわたって投与される、項目１に記載の方法。
（項目３）
上記抗ＣＤ２００抗体が、上記レシピエント哺乳動物への上記腎臓同種移植片の移植後、最大７日間までにわたって少なくとも１日１回投与される、項目１に記載の方法。
（項目４）
上記抗ＣＤ２００抗体が、上記腎臓移植片の移植後、上記哺乳動物に、最大１４日間までにわたって少なくとも１日１回投与される、項目１に記載の方法。
（項目５）
上記抗ＣＤ２００抗体の有効量が、上記レシピエント哺乳動物において少なくとも７日間にわたって維持される、項目１に記載の方法。
（項目６）
上記抗ＣＤ２００抗体の有効量が、上記レシピエント哺乳動物において少なくとも１４日間にわたって維持される、項目１に記載の方法。
（項目７）
上記抗ＣＤ２００抗体の単一用量が、上記抗ＣＤ２００抗体の有効量を上記哺乳動物において少なくとも７日間にわたって維持するために十分である、項目５に記載の方法。
（項目８）
上記抗ＣＤ２００抗体の単一用量が、上記抗ＣＤ２００抗体に有効量を上記哺乳動物において少なくとも１４日間にわたって維持するために十分である、項目６に記載の方法。
（項目９）
上記抗ＣＤ２００抗体が、上記レシピエント哺乳動物への上記腎臓同種移植片の移植前および移植後に、該レシピエント哺乳動物に投与される、項目１に記載の方法。
（項目１０）
上記抗ＣＤ２００抗体が、上記レシピエント哺乳動物への上記腎臓同種移植片の移植の少なくとも１週間前に、該レシピエント哺乳動物に投与される、項目９に記載の方法。
（項目１１）
上記抗ＣＤ２００抗体の少なくとも２用量が、上記レシピエント哺乳動物への上記腎臓同種移植片の移植前に、該レシピエント哺乳動物に投与される、項目９または１０に記載の方法。
（項目１２）
上記腎臓同種移植片が得られたドナー哺乳動物から取り出す前に、抗ＣＤ２００抗体を該ドナー哺乳動物に投与する工程をさらに包含する、項目１に記載の方法。
（項目１３）
上記腎臓同種移植片が、上記レシピエント哺乳動物に対して完全にＭＨＣ不適合である、項目１に記載の方法。
（項目１４）
上記レシピエント哺乳動物が、上記腎臓同種移植片に予備感作される、項目１に記載の方法。
（項目１５）
上記腎臓同種移植片が、上記レシピエント哺乳動物に対してＡＢＯ不適合である、項目１に記載の方法。
（項目１６）
上記抗ＣＤ２００抗体が、上記レシピエント哺乳動物に静脈内投与される、項目１に記載の方法。
（項目１７）
上記抗ＣＤ２００抗体が、上記レシピエント哺乳動物に皮下投与される、項目１に記載の方法。
（項目１８）
上記抗ＣＤ２００抗体の投与が、少なくとも１００日間にわたって腎臓同種移植片の生存を生じる、項目１に記載の方法。
（項目１９）
上記抗ＣＤ２００抗体の投与が、少なくとも６ヶ月間にわたって腎臓同種移植片の生存を生じる、項目１に記載の方法。
（項目２０）
上記抗ＣＤ２００抗体の投与が、少なくとも１年間にわたって腎臓同種移植片の生存を生じる、項目１に記載の方法。
（項目２１）
レシピエント哺乳動物における同種移植片器官の生存を長期化するための方法であって、該方法は、同種移植片器官の生存の長期化を必要とする同種移植片器官のレシピエント哺乳動物に：（ａ）１種以上の免疫抑制剤；および（ｂ）抗ＣＤ２００抗体を投与し、それによって、該レシピエント哺乳動物における該移植片の生存を長期化する工程を包含し、ここで該抗ＣＤ２００抗体の投与は、該１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種での処置の、該抗ＣＤ２００抗体の非存在下での該少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続期間に対してより短い継続期間を可能にする、方法。
（項目２２）
上記レシピエント哺乳動物への上記抗ＣＤ２００抗体の投与が、少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続期間を少なくとも２０％短くする、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
上記レシピエント哺乳動物への上記抗ＣＤ２００抗体の投与が、少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続期間を少なくとも５０％短くする、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
レシピエント哺乳動物における同種移植片器官の生存を長期化するための方法であって、該方法は、同種移植片器官の生存の長期化を必要とする同種移植片器官のレシピエント哺乳動物に：（ａ）１種以上の免疫抑制剤；および（ｂ）抗ＣＤ２００抗体を投与し、それによって、該哺乳動物における該移植片の生存を長期化する工程を包含し、ここで該抗ＣＤ２００抗体は、該レシピエント哺乳動物に皮下投与されるか、または該レシピエント哺乳動物に静脈内投与される、方法。
（項目２５）
上記抗ＣＤ２００抗体の投与が、上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種での処置の、該抗ＣＤ２００抗体の非存在下での該少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続時間に対してより短い継続時間を可能にする、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
上記抗ＣＤ２００抗体が、上記レシピエント哺乳動物に皮下投与される、項目２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２７）
上記抗ＣＤ２００抗体が、上記レシピエント哺乳動物に静脈内投与される、項目２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２８）
上記同種移植片器官が得られたドナー哺乳動物から取り出す前に、該ドナー哺乳動物に抗ＣＤ２００抗体を投与する工程をさらに包含する、項目２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２９）
上記同種移植片器官が、上記レシピエント哺乳動物に関して完全にＭＨＣ不適合である、項目２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目３０）
上記レシピエント哺乳動物が、上記同種移植片器官に予備感作される、項目２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目３１）
上記同種移植片器官が、上記レシピエント哺乳動物に対してＡＢＯ不適合である、項目２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種が、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、非ステロイド系抗炎症薬、ラパマイシン、およびＦＫ−５０６からなる群より選択される、項目２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目３３）
２種以上の免疫抑制剤が、上記レシピエント哺乳動物に投与される、項目２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目３４）
上記２種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも２種が、シクロスポリンＡとシクロホスファミドである、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
同種移植片器官をレシピエント哺乳動物に移植するための方法であって、該方法は、
（ａ）同種移植片器官をレシピエント哺乳動物に移植する前に、抗ＣＤ２００抗体を該レシピエント哺乳動物に投与する工程；
（ｂ）該同種移植片器官を該レシピエント哺乳動物に移植する工程；および
（ｃ）該同種移植片器官の移植後に、抗ＣＤ２００抗体を該レシピエント哺乳動物に投与する工程、
を包含する、方法。
（項目３６）
上記抗ＣＤ２００抗体が、上記レシピエント哺乳動物に皮下投与されるかもしくは静脈内投与される、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
上記抗ＣＤ２００抗体が、単一薬剤治療として投与される、項目３５に記載の方法。
（項目３８）
上記同種移植片器官が得られたドナー哺乳動物から取り出す前に、抗ＣＤ２００抗体を該ドナー哺乳動物を投与する工程をさらに包含する、項目３５に記載の方法。
（項目３９）
上記同種移植片器官が、上記レシピエント哺乳動物に関して完全にＭＨＣ不適合である、項目３５に記載の方法。
（項目４０）
上記レシピエント哺乳動物が、上記同種移植片器官に予備感作される、項目３５に記載の方法。
（項目４１）
上記同種移植片器官が、上記レシピエント哺乳動物に関してＡＢＯ不適合である、項目３５に記載の方法。
（項目４２）
上記レシピエント哺乳動物に１種以上の免疫抑制剤を投与する工程をさらに包含する、項目３５に記載の方法。
（項目４３）
上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種が、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、非ステロイド系抗炎症薬、ラパマイシン、およびＦＫ−５０６からなる群より選択される、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
２種以上の免疫抑制剤が、上記レシピエント哺乳動物に投与される、項目３５に記載の方法。
（項目４５）
上記２種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも２種が、シクロスポリンＡとシクロホスファミドである、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
上記同種移植片器官の拒絶を予防するために、上記抗ＣＤ２００抗体の投与が、上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種での処置の、該抗ＣＤ２００抗体の非存在下での該少なくとも１種の免疫抑制剤での処置の継続期間に対してより短い継続期間を可能にするか、または該抗ＣＤ２００抗体の投与は、該１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種の、該抗ＣＤ２００抗体の非存在下での該少なくとも１種の免疫抑制剤の用量に対してより低い用量を可能にする、項目４２〜４５のいずれか１項に記載の方法。
（項目４７）
上記同種移植片器官が、腎臓、肺、心臓、膵臓、脈管組織、肝臓もしくはその１つ以上の肝葉、皮膚、眼、胃腸組織、神経組織、筋組織、骨もしくは軟骨、骨髄、結合組織、赤血球、島細胞、角膜、および眼の水晶体からなる群より選択される、項目２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
（項目４８）
上記同種移植片器官が、心臓もしくは腎臓である、項目２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
（項目４９）
上記抗ＣＤ２００抗体が、上記レシピエント哺乳動物に１日１回投与される、項目２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
（項目５０）
上記抗ＣＤ２００抗体が、上記レシピエント哺乳動物に２日ごとに１回投与される、項目２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
（項目５１）
上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種が、上記レシピエント哺乳動物に長期的に投与される、項目２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
（項目５２）
上記抗ＣＤ２００抗体が、上記同種移植片器官の移植後、少なくとも７日間にわたって投与される、項目２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
（項目５３）
上記抗ＣＤ２００抗体が、上記同種移植片器官の移植後、少なくとも１４日間にわたって投与される、項目２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
（項目５４）
上記抗ＣＤ２００抗体の有効量が、上記レシピエント哺乳動物において少なくとも７日間にわたって投与される、項目２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
（項目５５）
上記抗ＣＤ２００抗体の有効量が、上記レシピエント哺乳動物において少なくとも１４日間にわたって維持される、項目２１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
（項目５６）
上記抗ＣＤ２００抗体の単一用量が、該抗ＣＤ２００抗体の有効量を、上記哺乳動物において少なくとも７日間にわたって維持するのに十分である、項目５４に記載の方法。
（項目５７）
上記抗ＣＤ２００抗体の単一用量が、該抗ＣＤ２００抗体の有効量を、上記哺乳動物において少なくとも１４日間にわたって維持するのに十分である、項目５５に記載の方法。
（項目５８）
上記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤ２００とＣＤ２００レセプターとの間の相互作用を阻害する、項目１〜５７のいずれか１項に記載の方法。
（項目５９）
上記抗ＣＤ２００抗体が、重鎖定常領域の非改変形態と比較して、低下したエフェクター機能を有するその対応する改変重鎖定常領域を含む、項目１〜５８のいずれか１項に記載の方法。
（項目６０）
上記抗ＣＤ２００抗体が、完全抗体である、項目１〜５９のいずれか１項に記載の方法。
（項目６１）
上記抗ＣＤ２００抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、齧歯類抗体、脱免疫化抗体、もしくは霊長類化抗体である、項目１〜６０のいずれか１項に記載の方法。
（項目６２）
上記抗ＣＤ２００抗体が、完全抗ＣＤ２００抗体のＣＤ２００結合フラグメントである、項目１〜５９または６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目６３）
上記ＣＤ２００結合フラグメントが、一本鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｖ、Ｆｄ、ミニボディー、ダイアボディー、および単一ドメイン抗体からなる群より選択される、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
上記抗ＣＤ２００抗体が、サマリズマブである、項目６０に記載の方法。
（項目６５）
レシピエント哺乳動物における同種移植片器官の生存を長期化するための方法であって、該方法は、同種移植片器官を有するレシピエント哺乳動物に：（ａ）抗ＣＤ２００抗体および（ｂ）１種以上の免疫抑制剤を投与する工程を包含し、ここで該抗体および該１種以上の免疫抑制剤は、該レシピエント哺乳動物において、所望の免疫調節効果の発生を生成および維持し、従って、該レシピエント哺乳動物における該同種移植片器官の生存を長期化するために十分な量および頻度において投与される、方法。
（項目６６）
レシピエント哺乳動物における同種移植片の生存を長期化するための方法であって、該方法は、
（ｉ）抗ＣＤ２００抗体および（ｉｉ）１種以上の免疫抑制剤の、同種移植片器官を有するレシピエント哺乳動物において所望の免疫調節効果を生成するために有効な相対的用量を決定する工程；ならびに
該レシピエント哺乳動物に、該相対的用量の該抗ＣＤ２００抗体および該１種以上の免疫抑制剤を、該レシピエント哺乳動物において、該所望の免疫調節効果を維持するために十分な頻度で投与する工程
を包含する、方法。
（項目６７）
上記所望の免疫調節効果は、以下：
（ｉ）ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＣＤ４０の発現における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物において同じ組織学的タイプの細胞によるＣＤ４０の発現レベルに対する低下；
（ｉｉ）ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＭＨＣクラスＩＩの発現における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプの細胞によるＭＨＣクラスＩＩの発現レベルに対する低下；
（ｉｉｉ）ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＣＤ８０の発現における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプの細胞によるＣＤ８０の発現レベルに対する低下；
（ｉｖ）ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＩＬ−１２の発現における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプの細胞によるＩＬ−１２の発現レベルに対する増大；
（ｖ）調節性Ｔ細胞の濃度における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプの調節性Ｔ細胞の濃度に対する増大；
（ｖｉ）Ｇｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＧｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞の濃度に対する増大；
（ｖｉｉ）Ｆ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＦ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞の濃度に対する低下；
（ｖｉｉｉ）ＣＤ３＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の濃度における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＣＤ３＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の濃度に対する低下；
（ｉｘ）ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度に対する低下；
（ｘ）ＣＤ１９＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の上記レシピエント哺乳動物における同じ組織学的タイプのＣＤ１９＋ＣＤ４５＋Ｔ細胞の濃度に対する低下；ならびに
（ｘｉ）複数の免疫細胞によるＳＨＩＰ発現における、上記抗ＣＤ２００抗体および上記１種以上の免疫抑制剤の投与前の同じ組織学的タイプの免疫細胞におけるＳＨＩＰの発現レベルに対する低下、
からなる群より選択される、項目６５または６６に記載の方法。
（項目６８）
上記調節性Ｔ細胞が、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋細胞である、項目６７に記載の方法。
（項目６９）
ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＣＤ４０の発現における少なくとも３０％の低下は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、項目６７に記載の方法。
（項目７０）
ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＭＨＣクラスＩＩの発現における少なくとも４０％の低下は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、項目６７に記載の方法。
（項目７１）
ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−樹状細胞によるＣＤ８０の発現における少なくとも７０％の低下は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、項目６７に記載の方法。
（項目７２）
ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ４９ｂ−細胞によるＩＬ−１２の発現における少なくとも６０％の増大は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、項目６７に記載の方法。
（項目７３）
Ｇｒ−１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における少なくとも３００％の増大は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、項目６７に記載の方法。
（項目７４）
調節性Ｔ細胞の濃度における少なくとも３００％の増大は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、項目６７に記載の方法。
（項目７５）
Ｆ４／８０＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における少なくとも８０％の増大は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、項目６７に記載の方法。
（項目７６）
ＣＤ３＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の濃度における少なくとも５０％の低下は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、項目６７に記載の方法。
（項目７７）
ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度における少なくとも２０％の低下は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、項目６７に記載の方法。
（項目７８）
ＣＤ１９＋ＣＤ４５＋細胞の濃度における少なくとも５０％の低下は、所望の免疫調節効果が上記レシピエント哺乳動物において起こったことを示す、項目６７に記載の方法。
（項目７９）
少なくとも１つの所望の免疫調節効果の発生は、上記抗ＣＤ２００抗体での治療が治療上有効であることを示す、項目６７に記載の方法。
（項目８０）
少なくとも３つの所望の免疫調節効果の発生は、上記抗ＣＤ２００抗体での治療が治療上有効であることを示す、項目６７に記載の方法。
（項目８１）
上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種が、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、非ステロイド系抗炎症薬、ラパマイシン、およびＦＫ−５０６からなる群より選択される、項目６７に記載の方法。
（項目８２）
上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種が、シクロスポリンＡである、項目６７に記載の方法。
（項目８３）
少なくとも１０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＣＤ２００抗体を含む、水性溶液。
（項目８４）
上記溶液中の上記抗ＣＤ２００抗体の濃度は、少なくとも５０ｍｇ／ｍＬである、項目８３に記載の水性溶液。
（項目８５）
上記溶液中の上記抗ＣＤ２００抗体の濃度は、少なくとも１００ｍｇ／ｍＬである、項目８３に記載の水性溶液。
（項目８６）
上記溶液中の上記抗ＣＤ２００抗体の濃度は、１０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ（両端含む）の間である、項目８３に記載の水性溶液。
（項目８７）
（ｉ）項目８３〜８６のいずれか１項に記載の水性溶液；および（ｉｉ）該溶液を哺乳動物へ送達するための手段、を含む、キット。
（項目８８）
上記手段は、上記哺乳動物への上記溶液の皮下送達もしくは筋肉内送達に適している、項目８７に記載のキット。
（項目８９）
上記手段は、シリンジもしくはペン型注射器である、項目８７または８８に記載のキット。
（項目９０）
レシピエント哺乳動物における同種移植片の生存を長期化することにおける使用のための１種以上の免疫抑制剤をさらに含む、項目８７〜８９のいずれか１項に記載のキット。
（項目９１）
上記１種以上の免疫抑制剤のうちの少なくとも１種が、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、非ステロイド系抗炎症薬、ラパマイシン、およびＦＫ−５０６からなる群より選択される、項目９０に記載のキット。
（項目９２）
上記キットは、シクロスポリンＡおよびシクロホスファミドのうちの一方もしくは両方を含む、項目９０または９１のいずれかに記載のキット。
（項目９３）
上記キットは、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、ラパマイシン、もしくはＦＫ−５０６を含む、項目９０または９１に記載のキット。
（項目９４）
１つ以上の容器を含むキットであって、ここで各容器は、少なくとも１０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＣＤ２００抗体を含む滅菌用液を含み、各容器は、該抗ＣＤ２００抗体の少なくとも１つの薬学的単位投与形態を含む、キット。
（項目９５）
各容器は、０．０５ｍｇ〜１０ｍｇの間の上記抗ＣＤ２００抗体を含む、項目９４に記載のキット。
（項目９６）
上記キットは、約１ｍｇ〜１００ｍｇの間の上記抗ＣＤ２００抗体を含む、項目９４または９５に記載のキット。
（項目９７）
各容器は、容積０．１ｍＬ〜１ｍＬ（両端含む）を有する、項目９４〜９６のいずれか１項に記載のキット。
（項目９８）
少なくとも１つの容器は、哺乳動物への皮下注射に、または哺乳動物への筋肉内注射に適した水性溶液を含む、項目９４〜９７のいずれか１項に記載のキット。
（項目９９）
上記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤ２００とＣＤ２００レセプターとの間の相互作用を阻害する、項目９４〜９８のいずれか１項に記載のキット。
（項目１００）
上記抗ＣＤ２００抗体が、重鎖定常領域の非改変形態と比較して、低下したエフェクター機能を有するその対応する改変重鎖定常領域を含む、項目９４〜９９のいずれか１項に記載のキット。
（項目１０１）
上記抗ＣＤ２００抗体が、完全抗体である、項目９４〜１００のいずれか１項に記載のキット。
（項目１０２）
上記抗ＣＤ２００抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、齧歯類抗体、脱免疫化抗体、もしくは霊長類化抗体である、項目９４〜１０１のいずれか１項に記載のキット。
（項目１０３）
上記抗ＣＤ２００抗体が、完全抗ＣＤ２００抗体のＣＤ２００結合フラグメントである、項目９４〜１００または１０２のいずれか１項に記載のキット。
（項目１０４）
上記ＣＤ２００結合フラグメントが、一本鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｖ、Ｆｄ、ミニボディー、ダイアボディー、および単一ドメイン抗体からなる群より選択される、項目１０３に記載のキット。
（項目１０５）
上記抗ＣＤ２００抗体が、サマリズマブである、項目１０１に記載のキット。
（項目１０６）
少なくとも１０ｍｇ／ｍＬの濃度において抗ＣＤ２００抗体を含む滅菌用液を含む、充填済みシリンジ。
（項目１０７）
上記溶液は、皮下投与のために処方されている、項目１０６に記載の充填済みシリンジ。
（項目１０８）
上記溶液は、筋肉内投与のために処方されている、項目１０６に記載の充填済みシリンジ。
（項目１０９）
上記シリンジは、上記溶液中に上記抗ＣＤ２００抗体の少なくとも１つの薬学的単位投与形態を含む、項目１０６に記載の充填済みシリンジ。
（項目１１０）
上記シリンジは、約１ｍｇ〜１００ｍｇの間の上記抗ＣＤ２００抗体を含む、項目１０６〜１０９のいずれか１項に記載の充填済みシリンジ。
（項目１１１）
上記薬学的単位投与形態は、１ｍＬ以下の容積を有する、項目１０６〜１１０のいずれか１項に記載の充填済みシリンジ。
（項目１１２）
上記薬学的単位投与形態は、０．５ｍＬ以下の容積を有する、項目１０６〜１１１のいずれか１項に記載の充填済みシリンジ。
（項目１１３）
上記抗ＣＤ２００抗体が、ＣＤ２００とＣＤ２００レセプターとの間の相互作用を阻害する、項目１０６〜１１２のいずれか１項に記載の充填済みシリンジ。
（項目１１４）
上記抗ＣＤ２００抗体が、重鎖定常領域の非改変形態と比較して、低下したエフェクター機能を有するその対応する改変重鎖定常領域を含む、項目１０６〜１１３のいずれか１項に記載の充填済みシリンジ。
（項目１１５）
上記抗ＣＤ２００抗体が、完全抗体である、項目１０６〜１１４のいずれか１項に記載の充填済みシリンジ。
（項目１１６）
上記抗ＣＤ２００抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、齧歯類抗体、脱免疫化抗体、もしくは霊長類化抗体である、項目１０６〜１１５のいずれか１項に記載の充填済みシリンジ。
（項目１１７）
上記抗ＣＤ２００抗体が、完全抗ＣＤ２００抗体のＣＤ２００結合フラグメントである、項目１０６〜１１４または１１６のいずれか１項に記載の充填済みシリンジ。
（項目１１８）
上記ＣＤ２００結合フラグメントが、一本鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｖ、Ｆｄ、ミニボディー、ダイアボディー、および単一ドメイン抗体からなる群より選択される、項目１１７に記載の充填済みシリンジ。
（項目１１９）
上記抗ＣＤ２００抗体が、サマリズマブである、項目１１５に記載の充填済みシリンジ。
（項目１２０）
上記レシピエント哺乳動物が、ヒトであり、上記同種移植片は、ヒト同種移植片である、項目１〜８２のいずれか１項に記載の方法。
【手続補正書】
【提出日】平成25年10月17日(2013.10.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2014505706000001.app
【国際調査報告】
2014505706.tif 000045
2014505706.tif 000046