(57)【要約】  本発明は、子葉菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の真菌からの殺虫性脂質及び脂質画分と、このような脂質及び脂質画分を含む組成物、及び、その調製方法を提供する。脂質及び脂質画分、あるいは、前記脂質を含む組成物を、場合により、１種以上の殺虫剤又は昆虫病原性真菌を含む昆虫病原性剤とともに使用する、植物病原性昆虫などの昆虫の生物学的防除方法も提供される。【選択図】図９
2014508803.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の真菌から単離された、精製された又は実質的に純粋な、１種以上の殺虫性脂質又は脂質画分。
【請求項２】
前記脂質又は脂質画分が、１種以上の非酸性脂質又は非酸性脂質画分である、又は、該非酸性脂質又は非酸性脂質画分を含む、又は、該非酸性脂質又は非酸性脂質画分からなる、請求項１記載の殺虫性脂質又は脂質画分。
【請求項３】
酸性脂質を実質的に含まない、請求項１又は２のいずれかに記載の脂質画分。
【請求項４】
遊離脂肪酸を実質的に含まない、請求項１〜３のいずれか１項記載の脂質画分。
【請求項５】
以下、
ａ．本明細書の図４中に示され、又は例２に記載される、画分１、画分５又は画分６、
ｂ．本明細書の図７中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分４又は画分５、
ｃ．本明細書の図８中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４、画分５又は画分９、
ｄ．本明細書の図８中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４、画分５又は画分９、
ｅ．本明細書の図１０中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４ｂ、画分５ａ、画分５ｂ又は画分６、
のいずれか１つ以上であるか又はそれらの特定的特徴を有する、請求項１〜４のいずれか１項記載の脂質画分。
【請求項６】
画分２、画分３、画分４ｂ、画分５ａ、画分５ｂ又は画分６の特定的特徴が、図１２ａ〜１２ｆのいずれか１つに示されるＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析  （ＭＳ）プロファイルである、請求項１〜５のいずれか１項記載の脂質画分。
【請求項７】
本明細書の図１０中に示され、又は例２に記載される画分３であるか又はその特定的特徴を有する、請求項１〜６のいずれか１項記載の脂質画分。
【請求項８】
前記特定的特徴が、図１３に示すＮＭＲスペクトルである、請求項７記載の脂質画分。
【請求項９】
以下、
ａ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ８６のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｂ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  １４７のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｃ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４４５のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｄ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６５６のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｅ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４５４のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｆ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｇ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ３９３のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｈ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｉ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９３のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｊ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９５のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｋ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７１７のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｌ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ５３１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｍ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ８６．０２の質量を有する脂質、又は、
ｎ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  １４６．９７の質量を有する脂質、又は、
ｏ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４４４．８２の質量を有する脂質、又は、
ｐ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６５５．９４の質量を有する脂質、又は、
ｑ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４５４．１９の質量を有する脂質、又は、
ｒ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５０．６６の質量を有する脂質、又は、
ｓ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ３９３．３９の質量を有する脂質、又は、
ｔ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５０．６７の質量を有する脂質、又は、
ｕ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９２．６９の質量を有する脂質、又は、
ｖ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９４．７２の質量を有する脂質、又は、
ｗ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７１６．７１の質量を有する脂質、又は、
ｘ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ５３１．３４の質量を有する脂質、
のいずれか１つである、請求項１〜８のいずれか１項記載の脂質。
【請求項１０】
以下、
ａ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ８６のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｂ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  １４７のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｃ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４４５のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｄ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６５６のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｅ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４５４のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｆ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｇ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ３９３のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｈ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｉ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９３のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｊ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９５のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｋ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７１７のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｌ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ５３１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｍ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ８６．０２の質量を有する脂質、又は、
ｎ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  １４６．９７の質量を有する脂質、又は、
ｏ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４４４．８２の質量を有する脂質、又は、
ｐ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６５５．９４の質量を有する脂質、又は、
ｑ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４５４．１９の質量を有する脂質、又は、
ｒ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５０．６６の質量を有する脂質、又は、
ｓ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ３９３．３９の質量を有する脂質、又は、
ｔ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５０．６７の質量を有する脂質、又は、
ｕ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９２．６９の質量を有する脂質、又は、
ｖ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９４．７２の質量を有する脂質、又は、
ｗ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７１６．７１の質量を有する脂質、又は、
ｘ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ５３１．３４の質量を有する脂質、
の１つ以上を含む又はからなる、請求項１〜８のいずれか１項記載の脂質画分。
【請求項１１】
前記子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の真菌が、豪州全国計測協会（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）（ＮＭＩＡ）に登録番号Ｎｏ．  Ｖ０８／０２５８５５で寄託された、２００８年９月２３日寄託のビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株ＡＭ２又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｆ４８０又はその特定的特徴を有する株、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）単離物１３２８を含む１種以上のトリコデルマ種又はその特定的特徴を有する株、及び、１種以上のメタルヒジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）種を含む群から選ばれる、請求項１〜１０のいずれか１項記載の脂質又は脂質画分。
【請求項１２】
子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の真菌からの１種以上の殺虫性脂質又は１種以上の殺虫性脂質画分を少なくとも１種のキャリアとともに含む組成物。
【請求項１３】
子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の真菌からの１種以上の殺虫性脂質又は１種以上の殺虫性脂質画分を少なくとも１種のキャリアとともに添加した、組成物。
【請求項１４】
子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の真菌の培養物からの、培養物、細胞抽出物、細胞懸濁液、細胞ホモジネート、細胞溶解物、細胞上清、細胞ろ液、細胞ペレット、又は成長培地である、又は、それらを含む、請求項１２又は１３記載の組成物。
【請求項１５】
子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の真菌から得ることができる胞子をさらに含む、請求項１２〜１４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１６】
豪州全国計測協会（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）（ＮＭＩＡ）に登録番号Ｎｏ．  Ｖ０８／０２５８５５で寄託された、２００８年９月２３日寄託のビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３又はその特定的特徴を有する株、又は、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株ＡＭ２又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｆ４８０又はその特定的特徴を有する株、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）単離物１３２８を含む１種以上のトリコデルマ種又はその特定的特徴を有する株、及び、１種以上のメタルヒジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）種を含む群から選ばれる真菌から得ることができる胞子を含む、請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】
ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３から得ることができる胞子を含む、請求項１６記載の組成物。
【請求項１８】
豪州全国計測協会（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）（ＮＭＩＡ）に登録番号Ｎｏ．  Ｖ０８／０２５８５５で寄託された、２００８年９月２３日寄託のビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株ＡＭ２又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｆ４８０又はその特定的特徴を有する株、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）単離物１３２８を含む１種以上のトリコデルマ種又はその特定的特徴を有する株、及び、１種以上のメタルヒジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）種を含む群から選ばれる真菌からの１種以上の脂質又は脂質画分を含む、請求項１２〜１７のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９】
ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３からの１種以上の脂質又は脂質画分を含む、請求項１８記載の組成物。
【請求項２０】
以下、
ａ．本明細書の図４中に示され、又は例２に記載される、画分１、画分５又は画分６、
ｂ．本明細書の図７中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分４又は画分５、
ｃ．本明細書の図８中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４、画分５又は画分９、
ｄ．本明細書の図８中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４、画分５又は画分９、
ｅ．本明細書の図１０中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４ｂ、画分５ａ、画分５ｂ又は画分６、
のいずれか１つ以上であるか又はそれらの特定的特徴を有する１つ以上の脂質画分を含む、請求項１２〜１９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２１】
非酸脂質が濃縮されている、請求項１２〜２０のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２２】
以下、
ａ．本明細書の図４中に示され、又は例２に記載される、画分１、画分５又は画分６、
ｂ．本明細書の図７中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分４又は画分５、
ｃ．本明細書の図８中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４、画分５又は画分９、
ｄ．本明細書の図８中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４、画分５又は画分９、
ｅ．本明細書の図１０中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４ｂ、画分５ａ、画分５ｂ又は画分６、
のいずれか１つ以上であるか又はれらの特定的特徴を有する１つ以上の脂質画分中に存在する１つ以上の脂質が濃縮されている、請求項２１記載の組成物。
【請求項２３】
以下、
ａ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ８６のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｂ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  １４７のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｃ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４４５のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｄ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６５６のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｅ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４５４のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｆ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｇ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ３９３のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｈ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｉ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９３のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｊ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９５のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｋ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７１７のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｌ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ５３１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｍ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ８６．０２の質量を有する脂質、又は、
ｎ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  １４６．９７の質量を有する脂質、又は、
ｏ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４４４．８２の質量を有する脂質、又は、
ｐ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６５５．９４の質量を有する脂質、又は、
ｑ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４５４．１９の質量を有する脂質、又は、
ｒ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５０．６６の質量を有する脂質、又は、
ｓ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ３９３．３９の質量を有する脂質、又は、
ｔ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５０．６７の質量を有する脂質、又は、
ｕ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９２．６９の質量を有する脂質、又は、
ｖ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９４．７２の質量を有する脂質、又は、
ｗ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７１６．７１の質量を有する脂質、又は、
ｘ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ５３１．３４の質量を有する脂質、
の１つ以上が濃縮されている、請求項２１記載の組成物。
【請求項２４】
濃縮されていない組成物中に存在する量に対して、少なくとも約１，  ２，  ３，  ４，  ５，  ６，  ７，  ８，  ９，  １０，  １５，  ２０，  ２５，  ３０，  ３５，  ４０，  ４５，  ５０，  ５５，  ６０，  ６５，  ７０，  ７５，  ８０，  ８５，  ９０，  ９５又は９９％濃縮されている、請求項２１〜２３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２５】
１種以上の昆虫を、請求項１〜１１のいずれか１項記載の脂質又は脂質画分、又は、請求項１２〜２４のいずれか１項記載の組成物と接触させることを含む、１種以上の昆虫の防除方法。
【請求項２６】
植物又はその周囲に、請求項１〜１１のいずれか１項記載の脂質又は脂質画分、又は、請求項１２〜２４のいずれか１項記載の組成物を施用することを含む、１種以上の昆虫の防除方法。
【請求項２７】
子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の１種以上の真菌の培養物を提供すること、
少なくとも１種の脂質又は脂質画分の産生に適する条件下に前記培養物を維持すること、及び、
ｉ）前記少なくとも１種の脂質又は脂質画分をキャリアと組み合わせること、又は、
ｉｉ）前記少なくとも１種の脂質又は脂質画分を、１種以上の昆虫病原性真菌又はその培養物と組み合わせること、又は、
ｉｉｉ）前記少なくとも１種の脂質又は脂質画分を真菌から分離すること、又は、
ｉｖ）本発明の少なくとも１種の脂質を少なくとも部分的に精製し又は単離すること、又は、
ｖ）（ｉ）〜（ｉｖ）の２つ以上の組み合わせ、
を含む、生物学的防除組成物の製造方法。
【請求項２８】
前記脂質又は脂質画分が、請求項２〜１１のいずれか１項記載の脂質又は脂質画分であり、該脂質又は脂質画分を含み、又は、該脂質又は脂質画分からなる、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の１種以上の真菌の培養物の有機溶媒抽出物を提供すること、
少なくとも部分的に１種以上の非酸性脂質を１種以上の酸性脂質から分離すること、及び、
前記１種以上の非酸性脂質又は脂質画分を回収すること、
を含む、殺虫性脂質又は脂質画分の調製方法。
【請求項３０】
子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の１種以上の真菌の培養物の有機溶媒抽出物を提供すること、
少なくとも部分的に１種以上の極性脂質を１種以上の非極性脂質から分離すること、及び、
前記１種以上の極性脂質又は極性脂質画分を回収すること、
を含む、殺虫性脂質又は脂質画分の調製方法。
【請求項３１】
前記有機溶媒が、短鎖アルキルアルコールを含むアルカノール、メタノール、エタノール、プロパノール、イソ−プロパノール又はブタノールであるか、又は、クロロホルムである、請求項２９又は３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
前記回収される脂質又は脂質画分が、請求項２〜１１のいずれか１項記載の脂質又は脂質画分であるか、該脂質又は脂質画分を含み、又は、該脂質又は脂質画分からなる、請求項２９〜３１のいずれか１項記載の方法。
【請求項３３】
１種以上の殺虫剤又は１種以上の昆虫病原性剤に対する昆虫の耐性を完全に又は部分的に反転させる方法であって、昆虫を請求項１〜１１のいずれか１項記載の脂質又は脂質画分、又は、請求項１２〜２４のいずれか１項記載の組成物に接触させることを含む方法。
【請求項３４】
前記昆虫を、１種以上の殺虫剤もしくは昆虫病原性剤又はそれらの任意の組み合わせとともに、前記脂質又は脂質画分と接触させることを含む、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
投与された前記１種以上の殺虫剤又は１種以上の昆虫病原性剤が、前記昆虫が耐性であるか、又は、耐性であることが予測されもしくは耐性となることが予測されるものと同一である、請求項３３記載の方法。
【請求項３６】
請求項１〜１１のいずれか１項記載の脂質又は脂質画分、又は、請求項１２〜２４のいずれか１項記載の組成物と接触した１種以上の昆虫を防除する方法であって、該１種以上の昆虫を防除するのに有効な量の殺虫剤又は昆虫病原性剤と前記１種以上の昆虫を接触させることを含む方法。
【請求項３７】
前記１種以上の殺虫剤又は１種以上の昆虫病原性剤が、前記脂質又は脂質画分の投与の前に、その投与と同時に、又は、その投与の後に投与される、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
前記組成物が、昆虫病原性真菌を、任意で、別の殺虫剤又は昆虫病原性剤とともに含む、請求項３３〜３７のいずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、一般に、生物学の分野に関し、より詳細には、特定の実施形態は糸状菌により調製される脂質、前記脂質を含む組成物、及び、このような脂質及び組成物の生物学的防除剤としての使用に関する。脂質及び該脂質を含む組成物を用いた、植物病原性昆虫を含む昆虫の防除方法も提供する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
昆虫及び昆虫個体群を防除する能力はヒト及び動物の健康、農業、及び、広範な経済活動にとって非常に重要である。例えば、昆虫は多くの重大なヒト疾患の媒介生物であり、蚊はマラリア、ウエストナイル病及びデング熱の媒介生物であり、マダニはリケッチア疾患、例えば、チフス、アフリカダニ咬傷発熱及びライム病の媒体生物であり、一方、ノミはペストの媒介生物である。同様に、害虫及び病原（以下、総称して「植物病原」）により生じる植物疾患又は損失は、植物をベースとする農業及び産業に対する重大な経済的コストである。損失は収穫前及び収穫後の両方の作物の腐敗、植物自体の損失、又は、成長及び生産能力の低減により発生することがある。
【０００３】
従来的に、昆虫、例えば、植物害虫及び病原の大規模防除は物理的方法（例えば、トラッピング、ピッキング、バリア）を採用することもできるが、化学殺虫剤の施用により進められてきた。化学物質の使用は多くの欠点を受ける。昆虫、例えば、植物害虫及び病原は時間経過により化学物質に対する耐性を持つことができそして持つようになり、耐性個体群を生じた。殺虫剤に対する耐性が、植物ベースの農業及び園芸業などの産業の実行可能性への最大の課題であることは確かである。
【０００４】
この問題は、幾つかの経済的に重要な植物病原性昆虫を参照して特に説明される。ミカンキイロアザミウマの個体群は世界中で、以下の例を含む農薬のほとんどの群：アセフェート、アバメクチン、クロルピリホス、エンドスルファン、メソミル、メチオカルブ、オメトエート、ピラゾホス及びタウフルバリネートに耐性であることが報告されている。ニュージーランドにおけるネギアザミウマの個体群はデルタメトリンへの耐性を持つようになっており、地域個体群はダイアジノン及びジクロルボスに耐性であることが報告されている。米国におけるネギアザミウマは多くの農薬に耐性であることが報告されている（グロスマン、１９９４）。温室コナジラミは、報告によると、有機塩素、オルガノホスフェート、カルバメート及びピレスロイド系殺虫剤に耐性を持つようになっている（例えば、Ｇｅｏｒｇｈｉｏｕ  １９８１，  Ａｎｉｓ  ＆  Ｂｒｅｎｎａｎ  １９８２，  Ｅｌｈａｇ  ＆  Ｈｏｒｎ  １９８３，  Ｗａｒｄｌｏｗ  １９８５及びＨｏｍｍｅｓ  １９８６）。より新しい殺虫剤であるブプロフェジン及びテフルベンズロンにおいても耐性が報告されている（Ｇｏｒｍａｎら２０００）。
【０００５】
化学残留物は環境上の危険性をもたらし、健康上の懸念を提起することがある。過去２０年間にわたる微生物殺虫剤などの生物学的防除への興味の復活は化学毒性の懸念に応答して直接的に世論の圧力から生じている。生物学的防除は、現在の方法よりも潜在的に有効かつ特異的である、植物病原を防除し、また、化学物質依存性を低減する代替手段を提示する。このような生物学的防除方法は化学殺虫剤に対する「自然」代替品として認識されており、より公に認められ、環境汚染を低減し、そして持続可能性が高められるという利点がある。
【０００６】
生物学的防除のメカニズムは多様である。有効であることが実証されている１つのメカニズムは、植物病原性昆虫を防除するための細菌などの拮抗微生物の使用である。例えば、バチルス・チューリンゲンシスの大規模生産により、ニュージーランドのオークランドでペインティッドアップルモス（ｐａｉｎｔｅｄ  ａｐｐｌｅ  ｍｏｔｈ）を防除するために、細菌殺虫剤の使用が可能になった。
【０００７】
しかしながら、生物学的防除剤（ＢＣＡ）の施用で上手くいく例はほとんど無く、今日まで、ＢＣＡは有意な生産者の容認を受けておらず、非経済的であると認識されてきたようである。
【０００８】
このため、植物病原性昆虫を含む昆虫を有効に防除する薬剤及び方法、特に、現在入手可能な殺虫剤よりも速く作用し、昆虫を防除する効力が高められており、施用の頻度が少なく又は集約的でなく、コストが低く、又は、得られる毒性が低い薬剤の需要が存在する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
それゆえ、本発明の目的は、この要求を満たすようにし、、植物病原性昆虫含む昆虫及び昆虫個体群の防除に有用である１種以上の薬剤及び方法を提供し、又は少なくとも公に有用な選択肢を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
発明の要旨
本発明は殺虫性脂質及びその調製方法を提供する。既知の殺虫剤に対するこれらの脂質の非類似性は新規のクラスの殺虫剤の存在を示す。
【００１１】
したがって、第一の態様において、本発明は子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の真菌からの１種以上の殺虫性脂質又は１種以上の殺虫性脂質画分に関する。
【００１２】
特定の実施形態において、１種以上の殺虫性脂質は非酸性脂質である。特定の実施形態において、１種以上の殺虫性脂質画分は非酸性画分である。
【００１３】
ある例示の実施形態において、１種以上の殺虫性脂質又は１種以上の殺虫性脂質画分は殺虫性である。
【００１４】
第二の態様において、本発明は子嚢菌門の真菌からの単離された、精製された又は実質的に純粋な殺虫性脂質に関する。
【００１５】
１つの例示の実施形態において、本発明は子嚢菌門の真菌からの単離された、精製された又は実質的に純粋な殺虫性非酸性脂質に関する。
【００１６】
第三の態様において、本発明は子嚢菌門の真菌からの１種以上の殺虫性脂質又は１種以上の殺虫性脂質画分を含む組成物に関する。
【００１７】
第四の態様において、本発明は子嚢菌門の真菌からの単離された、精製された又は実質的に純粋な殺虫性脂質画分に関する。
【００１８】
１つの例示の実施形態において、本発明は子嚢菌門の真菌からの単離された、精製された又は実質的に純粋な殺虫性非酸性脂質画分に関する。
【００１９】
本発明は本明細書中に開示される１種以上の脂質を少なくとも１種の農業上許容されるキャリアとともに含む組成物及び配合物を提供し、１種以上の本発明の脂質及び１種以上の真菌類を含む組成物及び配合物を含む。このような組成物はこのような脂質を産生する細胞の細胞抽出物、細胞懸濁液、細胞ホモジネート、細胞溶解物、細胞上清、細胞ろ液又は細胞ペレットであることができる。特定の例示の実施形態において、組成物は子嚢菌門の真菌からの非酸性脂質画分を含む。特定の例示の実施形態において、組成物は精製又は添加などにより、本発明の１種以上の脂質又は脂質画分が濃縮されている。他の例示の実施形態において、組成物は添加された本発明の１種以上の脂質又は脂質画分を含む。例えば、１つの実施形態において、組成物は上記のとおりの細胞抽出物、細胞懸濁液、細胞ホモジネート、細胞溶解物、細胞上清、細胞ろ液又は細胞ペレットであって、それに本発明の１種以上の脂質又は脂質画分が添加されたものである。
【００２０】
さらなる態様において、本発明は吸汁性昆虫、又は、甲虫、双翅目又は鱗翅目昆虫などの昆虫に対する殺虫作用を有する脂質又は脂質画分の調製方法を提供する。その方法は、一般に、子嚢菌門の１種以上の真菌の培養物、例えば、ビューベリア属（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３細胞の培養物などの適切な細胞の培養物から本明細書中に記載される１種以上の脂質又は脂質画分を分離することを含む。特定の実施形態において、細胞は菌糸成長を維持することができる条件下に成長される又は成長されたものである。このような脂質は細胞培養物もしくは上清又は細胞培養物から得られる胞子懸濁液から分離することができ、そしてネイティブ形態で使用するか、又は、特定の用途に適するように、精製もしくは濃縮されてよい。
【００２１】
昆虫個体群の防除方法も本発明により提供される。その方法は、一般に、個体群を、殺虫有効量の非酸性脂質などの本明細書中に記載されるとおりの脂質と、又は、非酸性脂質画分などの本明細書中に記載されるとおりの脂質画分と接触させることを含む。このような方法は、所与の領域において標的昆虫を殺傷し又はその数を低減するために使用されても、又は、昆虫による蔓延の危険性を防止するために環境領域に予防的に施用されてもよい。
【００２２】
なおもさらなる態様において、本発明は生物学的防除組成物の製造方法であって、
子嚢菌門の１種以上の真菌の培養物を提供すること、
本発明の少なくとも１種の脂質又は脂質画分の産生に適する条件下に前記培養物を維持すること、及び、
ｉ）本発明の少なくとも１種の脂質又は脂質画分をキャリアと組み合わせること、又は、
ｉｉ）本発明の少なくとも１種の脂質又は脂質画分を、本明細書中に記載される１種以上の昆虫病原性真菌と組み合わせること、又は、
ｉｉｉ）本発明の少なくとも１種の脂質又は脂質画分を真菌から分離すること、又は、
ｉｖ）本発明の少なくとも１種の脂質又は脂質画分を少なくとも部分的に精製し又は単離すること、又は、
ｖ）（ｉ）〜（ｉｖ）の２つ以上の任意の組み合わせ、
を含む、方法を提供する。
【００２３】
本発明はさらに、１種以上の植物病原性昆虫などの１種以上の昆虫を防除するための、本発明の脂質又は脂質画分あるいは本発明の組成物の使用に関する。
【００２４】
さらなる態様において、本発明は１種以上の昆虫を防除する方法であって、該１種以上の昆虫を、本発明の脂質又は脂質画分あるいはその機能的変異体と接触させることを含む方法を提供する。
【００２５】
本発明はさらに、１種以上の植物病原性昆虫などの１種以上の昆虫を防除する方法であって、植物又はその周囲に、本発明の脂質又は脂質画分あるいはその機能的変異体を、場合により、本明細書中に記載されるとおりの少なくとも１種の昆虫病原性真菌とともに施用することを含む方法を提供する。
【００２６】
別の態様において、本発明は１種以上の殺虫剤又は１種以上の昆虫病原性剤に対する昆虫の耐性を完全に又は部分的に反転させる方法であって、昆虫を本発明の脂質又は脂質画分に接触させることを含む方法を提供する。
【００２７】
場合により、その方法は、昆虫を、１種以上の殺虫剤もしくは昆虫病原性剤又はそれらの任意の組み合わせとともに、本発明の脂質又は脂質画分と接触させることを含む。
【００２８】
変形実施形態において、投与された１種以上の殺虫剤又は１種以上の昆虫病原性剤は、昆虫が耐性であるか、又は、耐性であることが予測されもしくは耐性となることが予測されるものと同一である。
【００２９】
さらなる態様において、本発明は、本発明の１種以上の脂質又は脂質画分と接触された１種以上の昆虫を、該１種以上の昆虫を防除するのに有効な量の殺虫剤又は昆虫病原性剤により防除する方法を提供する。
【００３０】
１種以上の殺虫剤又は１種以上の昆虫病原性剤は、本発明の脂質又は脂質画分の投与の前に、その投与と同時に、又は、その投与の後に投与されてよい。したがって、本発明の１種以上の脂質又は脂質画分の投与及び１種以上の殺虫剤又は１種以上の昆虫病原性剤の投与は同時であっても、順次であっても、又は、別個であってもよい。
【００３１】
別の態様において、本発明は１種以上の殺虫剤又は１種以上の昆虫病原性剤に対する昆虫の耐性を完全に又は部分的に反転させる方法であって、１種以上の昆虫を本発明の１種以上の脂質又は脂質画分及び本発明の昆虫病原性真菌と、場合により、別の殺虫剤又は昆虫病原性剤とともに接触させることを含む方法を提供する。
【００３２】
１つの実施形態において、その方法は１種以上の昆虫を、昆虫病原性真菌と、本発明の１種以上の脂質とともに接触させることを含む。
【００３３】
下記の実施形態は本明細書中の態様のいずれかと関連することができる。
【００３４】
１つの実施形態において、少なくとも１種の真菌はフンタマカビ綱（Ｓｏｒｄａｒｉｏｍｙｃｅｔｅｓ）のものであり、下記のサブクラスの１種以上の真菌を含む。
ヒポクレオミセチダエ（Ｈｙｐｏｃｒｅｏｍｙｃｅｔｉｄａｅ）、例えば、１種以上の下記の目に属する真菌：コロノフォラエレス（Ｃｏｒｏｎｏｐｈｏｒａｌｅｓ）、ヒポクレアレス（Ｈｙｐｏｃｒｅａｌｅｓ）、メラノスポラレス（Ｍｅｌａｎｏｓｐｏｒａｌｅｓ）又はミクロアスカレス（Ｍｉｃｒｏａｓｃａｌｅｓ）、
ソルダリオミセチダエ（Ｓｏｒｄａｒｉｏｍｙｃｅｔｉｄａｅ）、例えば、１種以上の下記の目に属する真菌：ボリニアレス（Ｂｏｌｉｎｉａｌｅｓ）、カロスファエリアレス（Ｃａｌｏｓｐｈａｅｒｉａｌｅｓ）、カエトスファエリアレス（Ｃｈａｅｔｏｓｐｈａｅｒｉａｌｅｓ）、コニオカエタレス（Ｃｏｎｉｏｃｈａｅｔａｌｅｓ）、ジアポルタレス（Ｄｉａｐｏｒｔｈａｌｅｓ）、マグナポルタレス（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈａｌｅｓ）、オフィオストマタレス（Ｏｐｈｉｏｓｔｏｍａｔａｌｅｓ）、ソルダリアレス（Ｓｏｒｄａｒｉａｌｅｓ）、
キシラリオミセチダエ（Ｘｙｌａｒｉｏｍｙｃｅｔｉｄａｅ）、例えば、１種以上の下記の目に属する真菌：キシラリアレス（Ｘｙｌａｒｉａｌｅｓ）及び下記の目に属する真菌：コラリオナステタレス（Ｋｏｒａｌｉｏｎａｓｔｅｔａｌｅｓ）、ルルウォルチアレス（Ｌｕｌｗｏｒｔｈｉａｌｅｓ）、メリオラレス（Ｍｅｌｉｏｌａｌｅｓ）、フィラコラレス（Ｐｈｙｌｌａｃｈｏｒａｌｅｓ）及びトリコスファエリアレス（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｈａｅｒｉａｌｅｓ）。
【００３５】
１つの実施形態において、１種以上の真菌はヒポクレアレス（Ｈｙｐｏｃｒｅａｌｅｓ）目、例えば、下記の科の１種以上の真菌：ビオネクトリアセアエ（Ｂｉｏｎｅｃｔｒｉａｃｅａｅ）、クラビシピタセアエ（Ｃｌａｖｉｃｉｐｉｔａｃｅａｅ）、ヒポクレアセアエ（Ｈｙｐｏｃｒｅａｃｅａｅ）、ネクトリアセアエ（Ｎｅｃｔｒｉａｃｅａｅ）ニエスリアセアエ（Ｎｉｅｓｓｌｉａｃｅａｅ）又はオフィオコルジシピタセアエ（Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｉｐｉｔａｃｅａｅ）のものである。
【００３６】
１つの実施形態において、１種以上の真菌は下記の科：クラビシピタセアエ（Ｃｌａｖｉｃｉｐｉｔａｃｅａｅ）のものであり、例えば、下記の属からの１種以上の真菌：
アシクロスポリウム（Ａｃｉｃｕｌｏｓｐｏｒｉｕｍ）、アスコポリポラス（Ａｓｃｏｐｏｌｙｐｏｒｕｓ）、アトキンソネラ（Ａｔｋｉｎｓｏｎｅｌｌａ）、アトリコルジセプ（Ａｔｒｉｃｏｒｄｙｃｅｐ）、バランシア（Ｂａｌａｎｓｉａ）、ベルケレラ（Ｂｅｒｋｅｌｅｌｌａ）、カビマラム（Ｃａｖｉｍａｌｕｍ）、セプシクラバ（Ｃｅｐｓｉｃｌａｖａ）、クラビセプス（Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ）、コルジセピオデウス（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｉｏｉｄｅｕｓ）、コルジセプス（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ）、ズシエラ（Ｄｕｓｓｉｅｌｌａ）、エピクロエ（Ｅｐｉｃｈｌｏｅ）、エピクレア（Ｅｐｉｃｒｅａ）、ヘルミンタスカス（Ｈｅｌｍｉｎｔｈａｓｃｕｓ）、ヘテロエピクロエ（Ｈｅｔｅｒｏｅｐｉｃｈｌｏｅ）、ヒペルデルミウム（Ｈｙｐｅｒｄｅｒｍｉｕｍ）、ヒポクレラ（Ｈｙｐｏｃｒｅｌｌａ）、コンラジア（Ｋｏｎｒａｄｉａ）、ルカリストロマ（Ｌｏｃｕｌｉｓｔｒｏｍａ）、メタコルジセプス（Ｍｅｔａｃｏｒｄｙｃｅｐｓ）、モエレリエラ（Ｍｏｅｌｌｅｒｉｅｌｌａ）、ミコマルマス（Ｍｙｃｏｍａｌｍｕｓ）、ミリオゲノスポラ（Ｍｙｒｉｏｇｅｎｏｓｐｏｒａ）、ネオバルヤ（Ｎｅｏｂａｒｙａ）、ネオクラビセプス（Ｎｅｏｃｌａｖｉｃｅｐｓ）、ネオコルジセプス（Ｎｅｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ）、パレピクロエ（Ｐａｒｅｐｉｃｈｌｏｅ）、フィトコルジセプス（Ｐｈｙｔｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ）、ポドクレラ（Ｐｏｄｏｃｒｅｌｌａ）、レジオクレラ（Ｒｅｇｉｏｃｒｅｌｌａ）、ロマノア（Ｒｏｍａｎｏａ）、シミズオミセス（Ｓｈｉｍｉｚｕｏｍｙｃｅｓ）、スファエロコルジセプス（Ｓｐｈａｅｒｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ）、ステレオクレア（Ｓｔｅｒｅｏｃｒｅａ）、トルビエラ（Ｔｏｒｒｕｂｉｅｌｌａ）、ワケフィエルジオミセス（Ｗａｋｅｆｉｅｌｄｉｏｍｙｃｅｓ）、アカントミセス（Ａｋａｎｔｈｏｍｙｃｅｓ）、アスケルソニア（Ａｓｃｈｅｒｓｏｎｉａ）、ビューベリア（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ）、カウノピクニシス（Ｃｈａｕｎｏｐｙｃｎｉｓ）、コラロシトストロマ（Ｃｏｒａｌｌｏｃｙｔｏｓｔｒｏｍａ）、クリシノミセス（Ｃｕｌｉｃｉｎｏｍｙｃｅｓ）、ドレクメリア（Ｄｒｅｃｈｍｅｒｉａ）、エフェリス（Ｅｐｈｅｌｉｓ）、ジベルラ（Ｇｉｂｅｌｌｕｌａ）、ハプトシリウム（Ｈａｐｔｏｃｉｌｌｉｕｍ）、ハルポスポリウム（Ｈａｒｐｏｓｐｏｒｉｕｍ）、ヒルステラ（Ｈｉｒｓｕｔｅｌｌａ）、ヒメノスチルベ（Ｈｙｍｅｎｏｓｔｉｌｂｅ）、イサリア（Ｉｓａｒｉａ）、レカニシリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、マリアナエア（Ｍａｒｉａｎｎａｅａ）、メタルヒジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）、ミクロヒルム（Ｍｉｃｒｏｈｉｌｕｍ）、ネオムンキア（Ｎｅｏｍｕｎｋｉａ）、ネオチフォジウム（Ｎｅｏｔｙｐｈｏｄｉｕｍ）、ノムラエア（Ｎｏｍｕｒａｅａ）、パエシロミセス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）、ポコニア（Ｐｏｃｈｏｎｉａ）、ポリセファロミセス（Ｐｏｌｙｃｅｐｈａｌｏｍｙｃｅｓ）、シュードジベルラ（Ｐｓｅｕｄｏｇｉｂｅｌｌｕｌａ）、シムプリシリウム（Ｓｉｍｐｌｉｃｉｌｌｉｕｍ）、ソロスポレラ（Ｓｏｒｏｓｐｏｒｅｌｌａ）、トリポクラジウム（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）又はウスチラジノイデア（Ｕｓｔｉｌａｇｉｎｏｉｄｅａ）である。
【００３７】
例えば、１種以上の真菌はビューベリア（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ）属のものであり、例えば、下記の１種以上の株：ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）、ビューベリア・ブロングニアルチイ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂｒｏｎｇｎｉａｒｔｉｉ）、ビューベリア・フェリナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｆｅｌｉｎａ）又はビューベリア・グロブリフェリア（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｇｌｏｂｕｌｉｆｅｒａ）を含む。
【００３８】
別の実施形態において、１種以上の真菌はヒポクレアセアエ（Ｈｙｐｏｃｒｅａｃｅａｅ）科のものであり、下記の１種以上の属：
アフィシオストロマ（Ａｐｈｙｓｉｏｓｔｒｏｍａ）、クラドボツイウム（Ｃｌａｄｏｂｏｔｒｙｕｍ）、グリオクラジウム（Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ）、ヒポクレア（Ｈｙｐｏｃｒｅａ）、ヒポクレオプシス（  Ｈｙｐｏｃｒｅｏｐｓｉｓ）、ヒポマイセス（  Ｈｙｐｏｍｙｃｅｓ）、ミコゴネ（Ｍｙｃｏｇｏｎｅ）、ポドストロマ（  Ｐｏｄｏｓｔｒｏｍａ）、プロトクレア（Ｐｒｏｔｏｃｒｅａ）、ロゲルソニア（Ｒｏｇｅｒｓｏｎｉａ）、サラワクス（Ｓａｒａｗａｋｕｓ）、セペドニウム（Ｓｅｐｅｄｏｎｉｕｍ）、スファエロスチルベラ（Ｓｐｈａｅｒｏｓｔｉｌｂｅｌｌａ）、スポロファゴミセス（  Ｓｐｏｒｏｐｈａｇｏｍｙｃｅｓ）ステファノマ（  Ｓｔｅｐｈａｎｏｍａ）又はトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）を含む。
【００３９】
１つの実施形態において、１種以上の真菌はトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属のものであり、下記の１種以上：
トリコデルマ・アグレシバム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｇｇｒｅｓｓｉｖｕｍ）、トリコデルマ・アスペレラム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｓｐｅｒｅｌｌｕｍ）、トリコデルマ・アトロビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｏｖｉｒｉｄｅ）、トリコデルマ・アウレオビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｕｒｅｏｖｉｒｉｄｅ）、トリコデルマ・アウストロコニンギイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｕｓｔｒｏｋｏｎｉｎｇｉｉ）、トリコデルマ・ブレビコムパクタム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｂｒｅｖｉｃｏｍｐａｃｔｕｍ）、トリコデルマ・カンジダム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｃａｎｄｉｄｕｍ）、トリコデルマ・カリバエウム変種アエクアトリアレ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｃａｒｉｂｂａｅｕｍ  ｖａｒ．  ａｅｑｕａｔｏｒｉａｌｅ）、トリコデルマ・カリバエウム変種カリバエウム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｃａｒｉｂｂａｅｕｍ  ｖａｒ．  ｃａｒｉｂｂａｅｕｍ）、トリコデルマ・カトプトロン（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｃａｔｏｐｔｒｏｎ）、トリコデルマ・クレメウム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｃｒｅｍｅｕｍ）、トリコデルマ・セラミクム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｃｅｒａｍｉｃｕｍ）、トリコデルマ・セリヌム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｃｅｒｉｎｕｍ）、トリコデルマ・クロロスポルム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｃｈｌｏｒｏｓｐｏｒｕｍ）、トリコデルマ・クロルノスペルマム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｃｈｒｏｒｎｏｓｐｅｒｍｕｍ）、トリコデルマ・シナモネウム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｃｉｎｎａｍｏｍｅｕｍ）、トリコデルマ・シトリノビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｃｉｔｒｉｎｏｖｉｒｉｄｅ）、トリコデルマ・クラスム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｃｒａｓｓｕｍ）、トリコデルマ・クレメウム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｃｒｅｍｅｕｍ）、トリコデルマ・ジングレエアエ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｄｉｎｇｌｅｙｅａｅ）、トリコデルマ・ドロテアエ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｄｏｒｏｔｈｅａｅ）、トリコデルマ・エフスム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｅｆｆｕｓｕｍ）、トリコデルマ・エリナセウム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｅｒｉｎａｃｅｕｍ）、トリコデルマ・エストニクム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｅｓｔｏｎｉｃｕｍ）、トリコデルマ・フェルチル（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｆｅｒｔｉｌｅ）、トリコデルマ・ゲラチノサス（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｇｅｌａｔｉｎｏｓｕｓ）、トリコデルマ・グハセンセ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｇｈａｎｅｎｓｅ）、トリコデルマ・ハマツム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｈａｍａｔｕｍ）、トリコデルマ・ハルジアヌム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｈａｒｚｉａｎｕｍ）、トリコデルマ・ヘリクム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｈｅｌｉｃｕｍ）、トリコデルマ・イントリカツム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｉｎｔｒｉｃａｔｕｍ）、トリコデルマ・コニラングブラ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）、トリコデルマ・コニンギイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｋｏｎｉｎｇｉｉ）、トリコデルマ・コニンギオプシス（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｋｏｎｉｎｇｉｏｐｓｉｓ）、トリコデルマ・ロンギブラチアツム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ）、トリコデルマ・ロンギピレ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｌｏｎｇｉｐｉｌｅ）、トリコデルマ・ミヌチスポラム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｍｉｎｕｔｉｓｐｏｒｕｍ）、トリコデルマ・オブロギスポラム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｏｂｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｍ）、トリコデルマ・オバリスポラム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｏｖａｌｉｓｐｏｒｕｍ）、トリコデルマ・ペテルセニイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｐｅｔｅｒｓｅｎｉｉ）、トリコデルマ・フィロスタヒディス（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｐｈｙｌｌｏｓｔａｈｙｄｉｓ）、トリコデルマ・ピルリフェルム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｐｉｌｕｌｉｆｅｒｕｍ）、トリコデルマ・プレウロチコルタ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｐｌｅｕｒｏｔｉｃｏｌａ）、トリコデルマ・プレウロツム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｐｌｅｕｒｏｔｕｍ）、トリコデルマ・ポリスポラム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｐｏｌｙｓｐｏｒｕｍ）、トリコデルマ・シュードコニンギイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｐｓｅｕｄｏｋｏｎｉｎｇｉｉ）、トリコデルマ・プベスセンス（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ）、トリコデルマ・レイセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、トリコデルマ・ロゲルソニイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｏｇｅｒｓｏｎｉｉ）、トリコデルマ・ロシクム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｏｓｓｉｃｕｍ）、トリコデルマ・サツルニスポラム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓａｔｕｒｎｉｓｐｏｒｕｍ）、トリコデルマ・シネシス（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、トリコデルマ・シヌオスム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｉｎｕｏｓｕｍ）、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）  ｓｐ．  ＭＡ  ３６４２、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）  ｓｐ．  ＰＰＲＩ  ３５５９、トリコデルマ・スピラレ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｐｉｒａｌｅ）、トリコデルマ・ストラミネウム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｔｒａｍｉｎｅｕｍ）、トリコデルマ・ストリゴスム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｔｒｉｇｏｓｕｍ）、トリコデルマ・ストロマチクム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｔｒｏｍａｔｉｃｕｍ）、トリコデルマ・スロツンダム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｕｒｒｏｔｕｎｄｕｍ）、トリコデルマ・タイワニーズ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｔａｉｗａｎｅｎｓｅ）、トリコデルマ・タイランヂカム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｔｈａｉｌａｎｄｉｃｕｍ）、トリコデルマ・テレフォリコルム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｔｈｅｌｅｐｈｏｒｉｃｏｌｕｍ）、トリコデルマ・セオブロミコラ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｔｈｅｏｂｒｏｍｉｃｏｌａ）、トリコデルマ・トメントスム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｔｏｍｅｎｔｏｓｕｍ）、トリコデルマ・ベルチナム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｖｅｌｕｔｉｎｕｍ）、トリコデルマ・ビレンス（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｖｉｒｅｎｓ）、トリコデルマ・ビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｖｉｒｉｄｅ）、トリコデルマ・ビリデセンス（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｖｉｒｉｄｅｓｃｅｎｓ）を含み、又は、１種以上のヒポクレア（Ｈｙｐｏｃｒｅａ）種のものであり、ヒポクレア・フィロスタキディス（Ｈｙｐｏｃｒｅａ  ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｄｉｓ）を含む。
【００４０】
種々の実施形態において、１種以上の真菌はビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）  Ｋ４Ｂ３  ＮＭＩＡ  Ｎｏ．  Ｖ０８／０２５８５５又はその特定的特徴を有する株、レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株  Ｋ４Ｖ１  （ＮＭＩＡ  Ｎｏ．  ＮＭ０５／４４５９３）  又はその特定的特徴を有する株、レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株  Ｋ４Ｖ２  （ＮＭＩＡ  登録番号  Ｎｏ．  ＮＭ０５／４４５９４）  又はその特定的特徴を有する株、レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株Ｋ４Ｖ４  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０６／００００７）  又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ１  （ＮＭＩＡ  登録番号  Ｎｏ．  ＮＭ０５／４４５９５）  又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ２  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０６／０００１０）  又はその特定的特徴を有する株、レカニシリウム・ロンギスポラム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｍ）株ＫＴ４Ｌ１  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０６／００００９）  又はその特定的特徴を有する株、及び、パエシロミセス・フモソロセウス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅｕｓ）株Ｋ４Ｐ１  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０６／００００８）  又はその特定的特徴を有する株から選ばれる１種以上の株から選ばれる。
【００４１】
種々の実施形態において、１種以上の殺虫性脂質は非酸性脂質である。ある実施形態において、１種以上の殺虫性脂質は実質的に酸性脂質を含まず、又は、実質的に遊離脂肪酸を含まない。
【００４２】
種々の実施形態において、１種以上の殺虫性脂質画分は非酸性脂質画分である。ある実施形態において、１種以上の殺虫性脂質画分は実質的に酸性脂質を含まず、又は、実質的に遊離脂肪酸を含まない。
【００４３】
種々の実施形態において、１種以上の殺虫性脂質画分は非酸性脂質画分を含む。ある実施形態において、１種以上の殺虫性脂質画分は実質的に酸性脂質を含まず、又は、実質的に遊離脂肪酸を含まない。
【００４４】
種々の実施形態において、１種以上の殺虫性脂質画分は少なくとも約１０，  １５，  ２０，  ２５，  ３０，  ３５，  ４０，  ４５，  ５０，  ５５，  ６０，  ６５，  ７０，  ７５，  ８０，  ８５，  ９０，  ９５又は９９質量  ％の非酸性脂質を含む。
【００４５】
種々の実施形態において、脂質画分中の非酸性脂質／酸性脂質のｗ／ｗ比は少なくとも約５：４，  ４：３，  ３：２，  ２：１，  ５：３，  ５：２，  ３：１，  ４：１又は５：１である。
【００４６】
１つの実施形態において、脂質は極性脂質である。
【００４７】
種々の実施形態において、１種以上の殺虫性脂質画分は少なくとも約１０，  １５，  ２０，  ２５，  ３０，  ３５，  ４０，  ４５，  ５０，  ５５，  ６０，  ６５，  ７０，  ７５，  ８０，  ８５，  ９０，  ９５又は９９質量  ％の極性脂質を含む。
【００４８】
種々の実施形態において、脂質画分中の極性脂質／非極性脂質のｗ／ｗ比は少なくとも約５：４，  ４：３，  ３：２，  ２：１，  ５：３，  ５：２，  ３：１，  ４：１又は５：１である。
【００４９】
種々の実施形態において、脂質画分は、図４中に示し又は本明細書の例２に記載されるとおりの画分１、画分５又は画分６であるか又はその特定的特徴を有する。
【００５０】
種々の実施形態において、脂質画分は、図７中に示し又は本明細書の例２に記載されるとおりの画分２、画分４又は画分５であるか又はその特定的特徴を有する。
【００５１】
種々の実施形態において、脂質画分は、図８中に示し又は本明細書の例２に記載されるとおりの画分２、画分３、画分４、画分５又は画分９であるか又はその特定的特徴を有する。
種々の実施形態において、脂質画分は、図８中に示し又は本明細書の例２に記載されるとおりの画分２、画分３、画分４、画分５又は画分９であるか又はその特定的特徴を有する。
【００５２】
種々の実施形態において、脂質画分は、図１０中に示し又は本明細書の例２に記載されるとおりの画分１、画分２、画分３、画分４ｂ、画分５ａ、画分５ｂ又は画分６であるか又はその特定的特徴を有する。
【００５３】
種々の実施形態において、画分２、画分３、画分４ｂ、画分５ａ、画分５ｂ又は画分６の特定的特徴は図１２ａ〜１２ｆのいずれかに示すとおりのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析  （ＭＳ）プロファイルである。
【００５４】
１つの実施形態において、脂質画分は図１０中に示し又は本明細書の例２に記載されるとおりの画分３であるか又はその特定的特徴を有する。１つの実施形態において、特定的特徴は図１３に示すとおりのＮＭＲスペクトルである。
【００５５】
１つの実施形態において、脂質は下記の１種以上であるか又は脂質画分はそれを含む又はからなる：
ａ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ８６のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｂ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  １４７のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｃ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４４５のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｄ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６５６のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｅ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４５４のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｆ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｇ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ３９３のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｈ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｉ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９３のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｊ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９５のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｋ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７１７のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｌ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ５３１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｍ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ８６．０２の質量を有する脂質、又は、
ｎ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  １４６．９７の質量を有する脂質、又は、
ｏ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４４４．８２の質量を有する脂質、又は、
ｐ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６５５．９４の質量を有する脂質、又は、
ｑ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４５４．１９の質量を有する脂質、又は、
ｒ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５０．６６の質量を有する脂質、又は、
ｓ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ３９３．３９の質量を有する脂質、又は、
ｔ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５０．６７の質量を有する脂質、又は、
ｕ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９２．６９の質量を有する脂質、又は、
ｖ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９４．７２の質量を有する脂質、又は、
ｗ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７１６．７１の質量を有する脂質、又は、
ｘ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ５３１．３４の質量を有する脂質。
【００５６】
１つの実施形態において、脂質はＭＳによりｍ／ｚ  ８６．０２の質量を有する脂質であるか、又は脂質画分はそれを含む。１つの実施形態において、脂質はＭＳによりｍ／ｚ  １４６．９７の質量を有する脂質であるか、又は脂質画分はそれを含む。
【００５７】
種々の実施形態において、特に、子嚢菌門の１種以上の真菌の培養物を含み又はそれから得られた組成物の中で、組成物は本発明の１種以上の脂質又は脂質画分が濃縮されている。特定の実施形態において、濃縮は濃縮されていない組成物、例えば、濃縮されていない培養物又は成長培地中に存在する量と比較して、少なくとも約１，  ２，  ３，  ４，  ５，  ６，  ７，  ８，  ９，  １０，  １５，  ２０，  ２５，  ３０，  ３５，  ４０，  ４５，  ５０，  ５５，  ６０，  ６５，  ７０，  ７５，  ８０，  ８５，  ９０，  ９５又は９９％の濃縮である。他の実施形態において、濃縮は濃縮されていない組成物中に存在する量と比較して、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍又は１００倍である。
【００５８】
特定の実施形態において、濃縮は添加による。他の実施形態において、濃縮は、通常の増殖条件下に産生されるのと比較して、１種以上の脂質又は脂質画分の増大した産生量（例えば、本明細書中に詳細に記載されるとおりの脂質画分の特定的特徴の１つの存在のための成長培地のアッセイにより証明）に貢献する条件下に真菌を培養することによる。
【００５９】
種々の実施形態において、子嚢菌門の真菌から得られた又は得ることができる組成物又は単離物は少なくとも約１，  ２，  ３，  ４，  ５，  ６，  ７，  ８，  ９，  １０，  １５，  ２０，  ２５，  ３０，  ３５，  ４０，  ４５，  ５０，  ５５，  ６０，  ６５，  ７０，  ７５，  ８０，  ８５，  ９０，  ９５又は９９質量％の脂質、好ましくは非酸性脂質を含み、そして有用な範囲はこれらの値の間から選ばれることができる（例えば、約１〜約９９、約５〜約  ９９、約１０〜約９９、約１５〜約  ９９、約２０〜約９９、約２５〜約９９、約３０〜約  ９９、約３５〜約９９、約４０〜約９９、約４５〜約９９、約５０〜約９９、約５５〜約９９、約６０〜約９９、約６５〜約９９、約７０〜約９９、約７５〜約９９、約８０〜約９９、約８５〜約９９又は約９０〜約９９質量％）。
【００６０】
本発明で有用な任意の組成物又は単離物は子嚢菌門の１種以上の真菌を含む培養物から得られた又は得ることができる組成物及び単離物を含み、そして子嚢菌門の１種以上の真菌が存在している、又は、存在していたが、それから除去された培養物から得ることができる組成物及び単離物を含むことが理解されるべきである。
【００６１】
１つの実施形態において、本発明に有用な組成物は少なくとも約０．００１，  ０．００５，  ０．０１，  ０．０５，  ０．１，  ０．２，  ０．３，  ０．４，  ０．５，  ０．６，  ０．７，  ０．８，  ０．９，  １．０，  １．１，  １．２，  １．３，  １．４，  １．５，  ２，  ３，  ４，  ５，  ６，  ７，  ８，  ９，  １０，  １１，  １２，  １３，  １４，  １５，  １６，  １７，  １８，  １９，  ２０，  ２５，  ３０，  ３５，  ４０，  ４５，  ５０，  ５５，  ６０，  ６５，  ７０，  ７５，  ８０，  ８５，  ９０，  ９５又は１００  ｍｇ／ｍＬの脂質、好ましくは非酸性脂質を含み、そして有用な範囲はこれらの値の任意の値の間から選択されうる  （例えば、約０．０１〜約  １．０、約０．０１〜約１０、約０：０１〜約２０、約０．０１〜約３０、約０．０１〜約４０、約０．０１〜約５０、約０．０１〜約６０、約０．０１〜約７０、約０．０１〜約８０、約０．０１〜約９０、約０．０１〜約１００、約０．１〜約１．０、約０．１〜約１０、約０．１〜約２０、約０．１〜約３０、約０．１〜約４０、約０．１〜約５０、約０．１〜約６０、約０．１〜約７０、約０．１〜約８０、約０．１〜約９０、約０．１〜約１００、約０．７〜約１．０、約０．７〜約１０、約０．７〜約２０、約０．７〜約３０、約０．７〜約４０、約０．７〜約５０、約０．７〜約６０、約０．７〜約７０、約０．７〜約８０、約０．７〜約９０又は約０．７〜約１００  ｍｇ／ｍＬ）。
【００６２】
本発明の１種以上の脂質を産生する例示の真菌細胞としては、豪州全国計測協会（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）（ＮＭＩＡ）に登録番号Ｎｏ．  Ｖ０８／０２５８５５で寄託された、２００８年９月２３日寄託のビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３、又は、その特定的特徴を有する培養物、又は、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株ＡＭ２、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｆ４８０、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）単離物１３２８を含むトリコデルマ種、及び、メタルヒジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）種、又は、それらのいずれかの特定的特徴を有する株が挙げられる。
【００６３】
１つの実施形態において、本発明は脂質又は脂質画分の調製方法に関し、該方法は、
子嚢菌門の１種以上の真菌の培養物の有機溶媒抽出物を提供すること、
少なくとも部分的に１種以上の非酸性脂質を１種以上の酸性脂質から分離すること、及び、
前記１種以上の非酸性脂質又は脂質画分を回収すること、
を含む。
【００６４】
１つの実施形態において、本発明は殺虫性脂質又は脂質画分の調製方法に関し、該方法は、
子嚢菌門の１種以上の真菌の培養物の有機溶媒抽出物を提供すること、
少なくとも部分的に１種以上の極性脂質を１種以上の非極性脂質から分離すること、及び、
前記１種以上の極性脂質又は極性脂質画分を回収すること、
を含む。
【００６５】
特定の実施形態において、子嚢菌門の真菌から殺虫活性を有する脂質又は脂質画分を調製する方法は本質的に本明細書中に記載されるとおりである。
【００６６】
１つの例示の実施形態において、有機溶媒はクロロホルムであるか又はそれを含む。例えば、有機溶媒はメタノール及びクロロホルムを含む。
【００６７】
種々の実施形態において、有機溶媒は、短鎖アルキルアルコールを含むアルカノールであり、例えば、限定するわけではないが、メタノール、エタノール、プロパノール、イソ  −  プロパノール又はブタノールであるか、又は、クロロホルムである。
【００６８】
種々の実施形態において、有機溶媒は、本明細書中に記載されるとおりのキャリアを含む農業上許容されるキャリアである。
【００６９】
種々の実施形態において、分離はアニオン交換クロマトグラフィー及び薄層クロマトグラフィーを含むクロマトグラフィーによる。１つの例示の実施形態において、アニオン交換クロマトグラフィーはＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｄｅｘを用いる。
【００７０】
本発明の組成物は粉末、ダスト、ペレット、粒剤、スプレー剤、乳剤、コロイド、溶液などとして配合でき、そして脂質を含む細胞の培養物の乾燥、凍結乾燥、均質化、抽出、ろ過、遠心分離、沈降又は濃縮などの従来の手段により調製されうる。少なくとも１種のこのような殺虫性脂質を含む例示の組成物の幾つかの実施形態において、脂質は約１〜約９９質量％の濃度で存在する。
【００７１】
好ましくは、このような組成物は本明細書中に記載されるＢ．  ｂａｓｓｉａｎａ細胞の１種以上の培養物から得ることができる。例示の殺虫性脂質配合物は菌糸体を産生するのに有効な条件下に適切なビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３細胞を培養すること、少なくとも部分的に精製された菌糸体を提供すること、及び、菌糸体から１種以上の脂質を得ることの工程を含む、方法により調製されうる。
【００７２】
さらなる実施形態において、本発明は殺虫性脂質組成物の調製方法を提供する。例示の実施形態において、このような脂質は殺虫剤としての使用のために配合でき、そして農業環境などを含む環境中の昆虫個体群を防除するために使用できる。ある実施形態において、配合物は、局所施用、又は、昆虫による脂質組成物の摂取のいずれかにより、昆虫又は昆虫個体群を殺生するために使用されうる。他の実施形態において、配合物は、ここでも、局所施用、又は、昆虫によるペプチド組成物の摂取のいずれかにより、昆虫又は昆虫個体群に対抗するために使用されうる。特定の例において、土壌への施用、又は、植物、樹木、灌木などの上又はその付近への施用、生体植物、家畜、居住地、農機具、建物などの付近への施用を行うように本発明の脂質を配合することが望ましいであろう。
【００７３】
本発明の１種以上の脂質及び１種以上の真菌を含む組成物の種々の実施形態において、１種以上の真菌は再生生存可能な形態及び量である。
【００７４】
１つの実施形態において、本発明は本明細書中に記載されるとおりの１種以上の脂質及び少なくとも１種の真菌から得ることができる胞子を少なくとも１種のキャリアとともに含む組成物を提供する。
【００７５】
好ましくは、前記組成物は生物学的防除組成物であり、より好ましくは前記生物学的防除組成物は殺虫性組成物である。
【００７６】
好ましくは、前記生物学的防除組成物は少なくとも１種の農業上許容されるキャリアを含む。
【００７７】
好ましくは、前記少なくとも１種のキャリアは農業上許容されるキャリアであり、より好ましくは、フィラー刺激剤、固結防止剤、湿潤剤、乳化剤及び酸化防止剤からなる群より選ばれ、より好ましくは、前記組成物はフィラー刺激剤、固結防止剤、湿潤剤、乳化剤及び酸化防止剤の各々のうちの少なくとも１つを含む。
【００７８】
好ましくは、前記フィラー刺激剤は炭水化物源であり、例えば、スクロース、フルクトース、グルコース又はデキストロースであり、前記団結防止剤はタルク、二酸化ケイ素、ケイ酸カルシウム又はケランクレーから選ばれ、前記湿潤剤は脱脂粉乳であり、前記乳化剤はダイズ系乳化剤、例えば、レシチン、又は、植物系乳化剤、例えば、モノジグリセリドであり、そして前記酸化防止剤はグルタミン酸ナトリウム又はクエン酸である。
【００７９】
種々の実施形態において、組成物は、約２週間を超え、好ましくは約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月を超え、より好ましくは約６ヶ月を超える期間、真菌の再生生存可能性を維持することができ、又は、殺虫効率を保持することができる安定な組成物である。
【００８０】
特定の実施形態において、組成物は真菌の単一株を含む。１つの例示の実施形態において、真菌はビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３  （ＮＭＩＡ  Ｎｏ．  Ｖ０８／０２５８５５、２００８年９月２３日寄託）である。
【００８１】
又は、組成物は前記真菌の複数株を含む。１つの実施形態において、組成物は本発明の１種以上の脂質を、再生生存可能な形態及び量で、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）  Ｋ４Ｂ３  ＮＭＩＡ  Ｎｏ．  Ｖ０８／０２５８５５又はその特定的特徴を有する株、レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株Ｋ４Ｖ１  （ＮＭＩＡ  Ｎｏ．  ＮＭ０５／４４５９３）又はその特定的特徴を有する株、レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株  Ｋ４Ｖ２  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０５／４４５９４）又はその特定的特徴を有する株、レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株Ｋ４Ｖ４  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０６／００００７）又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ１  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０５／４４５９５）又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ２  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０６／０００１０）又はその特定的特徴を有する株、レカニシリウム・ロンギスポラム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｍ）株ＫＴ４Ｌ１  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０６／００００９）又はその特定的特徴を有する株、及び、パエシロミセス・フモソロセウス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅｕｓ）株Ｋ４Ｐ１  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０６／００００８）又はその特定的特徴を有する株、及び、少なくとも１種の農業上許容されるキャリアとともに含む、生物学的防除組成物である。
【００８２】
１つの実施形態において、生物学的防除組成物の製造方法は、
ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）  Ｋ４Ｂ３  Ｖ０８／０２５８５５の培養物を提供すること、
本発明の少なくとも１種の脂質又は脂質画分の産生に適する条件下に前記培養物を維持すること、及び、
ｉ）本発明の少なくとも１種の脂質又は脂質画分をキャリアと組み合わせること、又は、
ｉｉ）本発明の少なくとも１種の脂質又は脂質画分を、本明細書中に記載される１種以上の昆虫病原性真菌と組み合わせること、又は、
ｉｉｉ）本発明の少なくとも１種の脂質又は脂質画分をビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）Ｋ４Ｂ３  Ｖ０８／０２５８５５から分離すること、又は、
ｉｖ）本発明の少なくとも１種の脂質をビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）  Ｋ４Ｂ３  Ｖ０８／０２５８５５から少なくとも部分的に精製し又は単離すること、又は、
ｖ）（ｉ）〜（ｉｖ）の２つ以上の任意の組み合わせ、
を含む。
【００８３】
特定の実施形態において、本方法は維持工程の後に、１つ以上の細胞溶解工程をさらに含むことができる。
【００８４】
種々の実施形態において、分離は遠心分離又はろ過による。
【００８５】
種々の実施形態において、分離は約  ５０％を超える真菌、例えば、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）  Ｋ４Ｂ３  Ｖ０８／０２５８５５、約  ５５％を超え、約  ６０％を超え、約  ６５％を超え、約  ７０％を超え、約  ７５％を超え、約  ８０％を超え、約  ８５％を超え、約９０％を超え、約  ９５％を超え、約  ９９％を超え、又は、約  １００％の真菌、例えば、約  １００％のビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）  Ｋ４Ｂ３  Ｖ０８／０２５８５５を除去するのに有効である。
【００８６】
したがって、１つの特定の考えられる実施形態において、本方法はビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）  Ｋ４Ｂ３  Ｖ０８／０２５８５５の培養物を提供すること、本発明の少なくとも１種の分泌された脂質又は脂質画分の産生に適する条件下に培養物を維持すること、及び、本発明の少なくとも１種の分泌された脂質又は脂質画分を、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）  Ｋ４Ｂ３  Ｖ０８／０２５８５５から分離することを含む。
【００８７】
好ましくは、キャリアは農業上許容されるキャリアであり、好ましくは少なくとも１種のキャリアはフィラー刺激剤、固結防止剤、湿潤剤、乳化剤及び酸化防止剤からなる群より選ばれ、より好ましくは、前記組成物はフィラー刺激剤、固結防止剤、湿潤剤、乳化剤及び酸化防止剤の各々のうちの少なくとも１つを含む。
【００８８】
種々の実施形態において、植物病原性昆虫は半翅目（Ｈｅｍｉｐｔｅｒａ）である。好ましくは、前記１種以上の病原性昆虫は蚊、コナガを含む蛾、アザミウマ（Ｔｈｙｓａｎｏｐｔｅｒａ）、アブラムシ（Ａｐｈｉｄｓ）、オオヨコバイ上科（Ｐｓｙｌｌｉｄｓ）、スケール（Ｓｃａｌｅ）又はコナジラミ（Ｗｈｉｔｅｆｌｙ）（Ｈｅｍｉｐｔｅｒａ）からなる群より選ばれる。
【００８９】
１つの例において、本発明の脂質もしくは脂質画分又はその機能的変異体は本明細書中に記載されるとおりの組成物中に存在することができる。
【００９０】
１つの実施形態において、組成物は本発明の２種以上の脂質を含む。
【００９１】
種々の実施形態において、組成物は本発明の少なくとも１種の脂質を、
ｉ）少なくとも１種のビューベリシン（ｂｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ）、
ｉｉ）少なくとも１種のバシアノリデ（ｂａｓｓｉａｎｏｌｉｄｅ）、
ｉｉｉ）少なくとも１種の昆虫病原性真菌、
ｉｖ）  上記  （ｉ）〜（ｉｉｉ）の任意の２つ以上
とともに含む。
【００９２】
１つの実施形態において、本発明の脂質又は組成物は植物又はその周囲に直接的に施用される。例えば、本発明の組成物は溶媒と混合されるか、又は、乳化され（例えば、水により）、そして本明細書中に記載されるとおりに施用される。
【００９３】
１つの実施形態において、本発明は１種以上の植物病原性昆虫などの１種以上の昆虫の防除方法を提供し、該方法は、本発明の組成物を植物又はその周囲に施用することを含む。
【００９４】
種々の実施形態において、本発明の脂質又は組成物を、例えば、植物が植物病原により汚染され又はそれに暴露される前に、予防的に施用する。他の実施形態において、汚染が確立し又は病原が存在するときに、例えば、植物が植物病原に汚染され又は暴露されたときに、あるいは、植物病原が植物又はその周囲の上に又はその中に存在するときに、組成物を施用する。
【００９５】
好ましくは、施用の前に約０．５ｇｍ／Ｌ〜約ｌＯｇｍ／Ｌの脂質最終濃度、より好ましくは約１  ｇｍ／Ｌの脂質最終濃度となるように組成物と水を混合する。
【００９６】
好ましくは、乾燥保護剤、例えば、Ｄｅｅｐ  Ｆｒｉｅｄ（登録商標）、Ｆｏｒｔｕｎｅ（登録商標）、又はＦｏｒｔｕｎｅ  Ｐｌｕｓ（登録商標）を、施用の前に最終濃度が約ｌｍｌ／Ｌとなるように混合する。
【００９７】
１種以上の昆虫病原性真菌を含む組成物では、例示の濃度範囲は約１  ｘ  １０２  〜約１  ｘ  １０１２  胞子／ｍｌ、約１  ｘ  １０２  〜約１  ｘ  １０１１胞子／  ｍｌ、約１  ｘ  １０２  〜約１０１０  胞子／ｍｌ、約１  ｘ  １０２  〜約１  ｘ  １０９  胞子／ｍｌ、約１  ｘ  １０３  〜約１  ｘ  １０９  胞子／ｍｌ、約１  ｘ  １０４  〜約１  ｘ  １０９  胞子／ｍｌ、好ましくは約１  ｘ  １０５  〜約５  ｘ  １０８、より好ましくは約１  ｘ  １０６  〜約２  ｘ  １０８  胞子／ｍｌである。特定の実施形態において、組成物は施用の際に少なくとも１０７  胞子／ミリリットルを含み、施用の際に少なくとも５  ｘ  １０７  胞子／ミリリットル、又は、施用の際に少なくとも１０８胞子／ｍｌである。
【００９８】
種々の実施形態において、組成物中に１種以上の真菌が存在するときには、本発明の組成物は約１  ｘ  １０８〜約１  ｘ  １０１５  感染単位（ＩＵ）／ヘクタール、約１  ｘ  １０９〜約１  ｘ  １０１５  ＩＵ／ヘクタール、約１  ｘ  １０１０〜約１  ｘ  １０１５  ＩＵ／ヘクタール、約１  ｘ  １０１１〜約１  ｘ  １０１５  ＩＵ  ／ヘクタール、好ましくは約１  ｘ  １０１０〜約１  ｘ  １０１４  ＩＵ／ヘクタール、より好ましくは約５  ｘ  １０１０〜約１  ｘ  １０１４  ＩＵ／ヘクタール、より好ましくは約１  ｘ  １０１１〜約５  ｘ  １０１１  ＩＵ／ヘクタールの割合で施用されうる。
【００９９】
１つの実施形態において、感染単位は内生胞子などの胞子であり、そして組成物は約  １  ｘ  １０８〜約  １  ｘ  １０１５  胞子／ヘクタール、約  １  ｘ  １０９〜約  １  ｘ  １０１５  胞子／ヘクタール、約  １  ｘ  １０１０〜約  １  ｘ  １０１５  胞子／ヘクタール、約  １  ｘ  ｌＯ１１〜約  １  ｘ  １０１５  胞子／ヘクタール、好ましくは約  １  ｘ  １０１０〜約  １  ｘ  １０１４  胞子／ヘクタール、より好ましくは約  ５  ｘ  １０１０〜約  １  ｘ  １０１４  胞子／ヘクタール、より好ましくは約  １  ｘ  １０１１〜約  ５  ｘ  １０１１胞子／ヘクタールの割合で施用される。
【０１００】
便利には、このような施用割合は前記組成物を約  １０８  胞子／ミリリットル以上で配合し、そして前記組成物を約  １Ｌ／ヘクタールの割合で施用することにより達成されうる。本明細書中で議論されるとおり、このような施用割合は組成物をより大きい体積の農業上許容される溶媒、例えば、水中に溶解させることにより便利に達成されうる。
【０１０１】
好ましくは、組成物は施用の前に水と混合される。１つの実施形態において、組成物は水と混合され、そして少なくとも約  １００Ｌ水／Ｈａ、少なくとも約  １５０Ｌ／Ｈａ、少なくとも約  ２００Ｌ／Ｈａ、少なくとも約  ２５０Ｌ／Ｈａ、少なくとも約  ３００Ｌ／Ｈａ、少なくとも約  ３５０Ｌ／Ｈａ、少なくとも約  ４００Ｌ／Ｈａ、少なくとも約  ４５０Ｌ／Ｈａ、又は、少なくとも約  ５００Ｌ／Ｈａで施用される。好ましい実施形態において、組成物は施用前に、水と最終濃度約  １  ｘ  ｌＯ１１〜約  ５  ｘ  １０１１  胞子／  ５００Ｌ水で混合され、そして５００Ｌ／ヘクタールの割合で施用される。
【０１０２】
好ましくは、前記施用はスプレイ散布による。
好ましくは、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  Ｖ０８／０２５８５５）  又はその特定的特徴を有する培養物を含む組成物を、約  １  ｘ  １０１０〜約  １  ｘ  １０１５  胞子／ヘクタール、好ましくは約  １  ｘ  １０１２〜約  １  ｘ  １０１４  胞子／ヘクタール、より好ましくは約  ５  ｘ  １０１２〜約  １  ｘ  １０１４  胞子／ヘクタール、より好ましくは約  １〜３  ｘ  １０１３  胞子／ヘクタールの割合で施用する。
【０１０３】
便利には、このような施用割合は約  １０７  胞子／ミリグラム以上で組成物を配合し、そして前記組成物を約  １ｋｇ／ヘクタールの割合で施用することにより達成されうる。本明細書中で議論されるとおり、このような施用割合はより多量の農業上許容される溶媒、例えば、水中で組成物の溶解を行うことにより達成されうる。
【０１０４】
本発明は、任意の植物又はその周囲に応用可能である。例示の植物は、特定の実施形態において、単子葉又は双子葉植物、例えば、アルファルファ、オオムギ、キャノーラ、トウモロコシ、綿、亜麻、カポック、ピーナッツ、バレイショ、オート、コメ、ライ麦、ソルガム、ダイズ、テンサイ、サトウキビ、ヒマワリ、タバコ、トマト、コムギ、芝草、牧草、地草、果実、果物、マメ科植物、野菜、観賞植物、低木、サボテン、多肉植物及び木である。
【０１０５】
さらなる例示の実施形態において、植物は任意の植物であってよく、ナス目（Ｓｏｌａｎａｌｅｓ）から選ばれる植物、例えば、下記の科の植物：ヒルガオ科（Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌａｃｅａｅ）、ヒドロレアセアエ（Ｈｙｄｒｏｌｅａｃｅａｅ）、モンチニアセアエ（Ｍｏｎｔｉｎｉａｃｅａｅ）、ナス科（Ｓｏｌａｎａｃｅａｅ）及びナガボノウルシ科（Ｓｐｈｅｎｏｃｌｅａｃｅａｅ）、及び、クサスギカズラ目（Ａｓｐａｒａｇａｌｅｓ）から選ばれる植物、例えば、下記の科の植物：ヒガンバナ科（Ａｍａｒｙｌｌｉｄａｃｅａｅ）、クサスギカズラ科（Ａｓｐａｒａｇａｃｅａｅ）、アステリアセアエ（Ａｓｔｅｌｉａｃｅａｅ）、ブランドホルジアセアエ（Ｂｌａｎｄｆｏｒｄｉａｃｅａｅ）、ボリアセアエ（Ｂｏｒｙａｃｅａｅ）、ドリアンタセアエ（Ｄｏｒｙａｎｔｈａｃｅａｅ）、キンバイザサ科（Ｈｙｐｏｘｉｄａｃｅａｅ）、アヤメ科（Ｉｒｉｄａｃｅａｅ）、オキシオリリアセアエ（Ｉｘｉｏｌｉｒｉａｃｅａｅ）、ラナリアセアエエ（Ｌａｎａｒｉａｃｅａｅ）、ラン科（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）、テコフィラエアセアエ（Ｔｅｃｏｐｈｉｌａｅａｃｅａｅ）、ススキノキ科（Ｘａｎｔｈｏｒｒｈｏｅａｃｅａｅ）及びキセロネマタセアエ（Ｘｅｒｏｎｅｍａｔａｃｅａｅ）を含む。
【０１０６】
本発明に関する技術の当業者には、添付の特許請求の範囲中に規定される本発明の範囲から逸脱することなく、本発明の構成の多くの変更及び異なる実施形態及び応用が提案されるであろう。本明細書中の開示及び記載は純粋に例示であって、いかなる意味でも限定することが意図されない。
【０１０７】
本明細書中で、特許明細書、他の外部文書又は他の情報源を参照するときに、これは一般に本発明の特徴を議論するために内容を提供することを目的とする。特に指示がない限り、このような外部文書の参照は、あらゆる権限において、このような文書、又は、このような情報源が従来技術であり、又は、当該技術分野における共通の一般的知識の一部を形成すると認めたものと解釈されるべきでない。
【０１０８】
本明細書中に開示される数値範囲（例えば、１〜１０）の参照はその範囲に入るすべての合理数（例えば、１，  １．１，  ２，  ３，  ３．９，  ４，  ５，  ６，  ６．５，  ７，  ８，  ９及び１０）の参照をも取り込み、また、その範囲に入る任意の範囲の合理数（例えば、２〜８、１．５〜５．５及び３．１〜４．７）をも含み、それゆえ、すべての範囲のすべての副次範囲は本明細書中に明確に開示され、それにより、明示されていることが意図される。これらは詳細に意図されたものの例に過ぎず、示された最も低い数値と最も高い数値の間の数値のすべての可能な組み合わせも同様に本明細書中に明確に記載されているものと考えられるべきである。
【図面の簡単な説明】
【０１０９】
図面の説明
【図１】図１は遠心分離された材料の薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を示す。２つの異なるサンプルを装填し、そして脂質標準（右側ライン）を分析した。
【図２】図２は出発材料と比較した酸性／非酸性画分のＴＬＣを示す。酸性画分（Ａ）は主として強い脂肪酸バンドを示し、一方、非酸性  （ＮＡ）  画分は多くの他の脂質バンドを含む。
【図３】図３は酸性／非酸性画分のバイオアッセイ結果を示す。
【図４】図４は６つのクロマトグラフィー画分のＴＬＣを示す。右側のパネルはすべての脂質に最適な条件を用いて、繰り返しの画分１，  ５及び６を示す。
【図５】図５は６つのクロマトグラフィー画分のバイオアッセイ結果を示す。
【図６】図６は１１のメタノールクロマトグラフィー画分のＴＬＣを示す。
【図７】図７はクロマトグラフィー画分のバイオアッセイ結果を示す。
【図８】図８は分取ＴＬＣプレート１からの画分の分析ＴＬＣを示す。
【図９】図９は分取ＴＬＣ画分  （プレート１から）のバイオアッセイ結果を示す。
【図１０】図１０は分取ＴＬＣプレート２からの画分の分析ＴＬＣを示す。
【図１１】図１１は分取ＴＬＣ画分  （プレート２から）のバイオアッセイ結果を示す。
【図１２】図１２は画分２，  ３，  ４ｂ，  ５ａ，  ５ｂ（上から下まで）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳを示す。
【図１３】図１３は画分３の低質量の範囲のＭＳスペクトルを示す。
【図１４】図１４はアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）に対するバイオアッセイ結果を示す。
【図１５】図１５はアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）に対するＫ４Ｂ３  菌糸体培養物  （ｒｅｐｌｉｃａｔｅ  ｔｕｂｅｓ）からのクロロホルム抽出物のバイオアッセイを示す。
【図１６】図１６はアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）に対するバイオアッセイ結果を示す。
【図１７】図１７はコナガ（ｄｉａｍｏｎｄｂａｃｋ  ｍｏｔｈ）に対するバイオアッセイ結果を示す。
【図１８】図１８は本明細書中の例５に記載されるとおりビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株ＡＭ２，  Ｆ４８０及びＫ４Ｂ３から抽出された総脂質のバイオアッセイにおける、２０時間（２０℃）でのモモアカアブラムシ（ｇｒｅｅｎ  ｐｅａｃｈ  ａｐｈｉｄ）の％累積死亡率を示す。サンプル１〜９はＫ４Ｂ３脂質の種々の画分である。
【図１９】図１９は本明細書中の例５に示すとおりのビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３  （Ｂｅａｕｖｅｒｉａ）、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）及びメタルヒジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）からの種々の脂質画分のバイオアッセイにおける、２１時間（２０℃）でのモモアカアブラムシ（ｇｒｅｅｎ  ｐｅａｃｈ  ａｐｈｉｄ）の％死亡率を示す。Ｋ４Ｂ３−脂質１及びＫ４Ｂ３−脂質２は同一バッチ培養物からの繰り返し単離物であり、メタノールをネガティブコントロールとして使用する。
【図２０】図２０は図１９のバイオアッセイにおけるモモアカアブラムシ（ｇｒｅｅｎ  ｐｅａｃｈ  ａｐｈｉｄ）の％累積死亡率を示し、本明細書中の例５に記載されるとおりである。
【図２１】図２１は本明細書中の例５に示すとおりのビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３  （Ｂｅａｕｖｅｒｉａ）、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）及びメタルヒジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）からの種々の脂質画分のバイオアッセイにおける、コナガ（ｄｉａｍｏｎｄｂａｃｋ  ｍｏｔｈ）幼虫の％累積死亡率を示す。
【図２２】図２２は本明細書中の例５に示すとおりのビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３  （ＦＳ及びビューブラスト（Ｂｅａｕｂｌａｓｔ）（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ））及びトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）からの種々の脂質画分のバイオアッセイにおける、２１時間（２０℃）でのモモアカアブラムシ（ｇｒｅｅｎ  ｐｅａｃｈ  ａｐｈｉｄ）の％死亡率を示す。試験した画分はメタノール抽出（−ＭｅＯＨ）及びクロロホルム抽出（−Ｃｈｌｏｒｏ）画分を含み、メタノール及び水をネガティブコントロールとして用いた。
【発明を実施するための形態】
【０１１０】
発明の詳細な説明
本発明は、部分的に、ビューベリア種（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｓｐｐ．）及びトリコデルマ種（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｐｐ．）を含む子嚢菌門真菌（Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ  ｆｕｎｇｉ）の種々の株から単離される、植物病原性昆虫などの昆虫に対して効力を有する１種以上の脂質、及び、植物病原性昆虫などの昆虫を防除することにおけるこのような脂質の使用に関する。
【０１１１】
定義
用語「生物学的防除剤」（ＢＣＡ）は、本明細書中で使用されるときに、通常、植物病原性昆虫などの１種以上の植物病原などの１種以上の病原である１種以上の生物の拮抗剤として作用するか、又は、１種以上の植物病原などの１種以上の病原を防除することができる生物学的薬剤である又は該生物学的薬剤から得られる薬剤を指す。拮抗作用は多くの形態を取ることができる。１つ形態において、生物学的防除剤は単純に忌避剤として作用することができる。別の形態において、生物学的防除剤は病原に好ましくない環境を提供することができる。さらなる好ましい形態では、生物学的防除剤は病原に寄生し、無力化し、生殖力を無くし、病原の成長を妨害し、病原の広がり又は分布を妨害し、及び／又は病原を殺生することができる。したがって、拮抗作用のメカニズムは、限定するわけではないが、抗菌、寄生、固定化、無生殖化及び毒性化を含む。それゆえ、１種以上の病原性昆虫の拮抗剤から得られる、又は、拮抗剤として作用する薬剤は昆虫病原性効力又は殺虫活性を有するものであると言われることができる。さらに、植物病原性昆虫を含む昆虫の拮抗剤である生物学的薬剤は昆虫病原性剤であると言われることができる。
【０１１２】
本明細書中に使用されるときに、「生物学的防除性組成物」は１種以上の植物病原などの１種以上の病原の拮抗剤である少なくとも１種の生物学的防除剤を含む組成物である。このような防除剤としては、限定するわけではないが、忌避剤として作用する薬剤、病原に好ましくない環境とする薬剤、及び、病原を無力化し、生殖力を無くし及び／又は殺生する薬剤が挙げられる。
【０１１３】
したがって、本明細書中に使用されるときに、「抗植物病原性組成物」は１種以上の植物病原の拮抗剤である少なくとも１種の薬剤を含む組成物である。このような組成物は、ここで、抗植物病原効力を有するものと考えられる。
【０１１４】
用語「含む」（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）は、本明細書中に使用されるときに、「から少なくとも部分的になる」（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｉｎ  ｐａｒｔ  ｏｆ）を意味する。用語「含む」を含む本明細書中の各記述を解釈するときに、その用語で示す特徴以外の特徴が存在してよい。「含む」（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）及び（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）などの関連用語は同様に解釈されるべきである。
【０１１５】
用語「防除」（ｃｏｎｔｒｏｌ）又は（ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ）は、本明細書中に使用されるときに、一般に、１種以上の植物病原による感染などの１種以上の病原による感染を防止し、低減し又は根絶すること、又は、このような感染の速度及び程度を抑制し、例えば、植物もしくくはその周囲における又はその上における植物病原個体数を低減することを網羅し、ここで、感染又は個体数のこのような予防又は低減は未処理の感染又は個体数と比較して統計的に有意である。治療処置も考えられる。好ましくは、このような防除は病原個体群における死亡率の増加により達成される。
【０１１６】
用語「昆虫病原活性」及び「昆虫病原効力」は本明細書中で相互互換的に使用され、そして、特定の微生物又は特定の微生物から得られる薬剤などの特定の薬剤が１種以上の植物病原性昆虫などの病原性昆虫に対抗する能力を指す。
【０１１７】
種々の実施形態において、前記昆虫病原効力は、好ましくは昆虫と接触して１４日以内に、より好ましくは７日以内に、病原性昆虫などの１種以上の昆虫に寄生しそして無力化し、生殖力を無くし、昆虫の成長を妨害し、又は昆虫を殺生することができる能力を指し、なおもより好ましくは、７日以内に１種以上の病原性昆虫を殺生する能力を指す。又は、前記昆虫病原効力は１種以上の昆虫病原性真菌などの１種以上の昆虫病原性微生物の成長を支持し又は促進することができる能力である。
【０１１８】
したがって、本明細書中に使用されるときに、「昆虫病原性組成物」は、通常、１種以上の病原性昆虫の拮抗剤である少なくとも１種の薬剤を含む組成物である。このような組成物は、ここで、昆虫病原性効力を有するものと考えられる。
【０１１９】
用語「殺虫活性」及び「殺虫効力」は本明細書中で相互互換的に使用され、１種以上の植物病原性昆虫などの１種以上の昆虫を無力化し、生殖力を無くし、その成長を妨害し又は殺生する、特定の微生物から得られる薬剤などの特定の薬剤の能力を指す。
【０１２０】
種々の実施形態において、前記殺虫効力は、好ましくは昆虫と接触して１４日以内に、より好ましくは７日以内に、植物病原性昆虫などの１種以上の昆虫を無力化し、生殖力を無くし、昆虫の成長を妨害し、又は昆虫を殺生することができる能力であり、なおもより好ましくは、７日以内に１種以上の昆虫を殺生する能力である。
【０１２１】
特定の実施形態において、昆虫病原活性は殺虫活性である。例えば、本発明の脂質又は脂質画分の特定の実施形態は殺虫性である。
【０１２２】
したがって、本明細書中に使用されるときに、「殺虫性組成物」は、通常、１種以上の昆虫を無力化し、生殖力を無くし、昆虫の成長を妨害し又は昆虫を殺生することができる少なくとも１種の薬剤を含む組成物である。このような組成物は、ここで、殺虫効力を有するものと考えられる。
【０１２３】
実施例中に例示されるとおりの１種以上の脂質画分に関連して本明細書中に使用される用語「機能的変異体」は具体的に特定されたものとは異なる脂質又は脂質画分を指し、例えば、１つ以上の脂肪酸基などの１つ以上の基が欠けており、置換されており、又は、追加されているが、具体的に特定されたものの１種以上の生物学的活性を少なくとも部分的に有し、例えば、具体的に特定された脂質又は脂質画分により導き出される１種以上の生物学的効果を導き出す能力を有する。機能的変異体は同一種又は他の種からのものであってよく、ホモログ、パラログ及びオルソログを包含することができる。
【０１２４】
この場合において、機能的変異体は、好ましくは、具体的に特定された脂質又は脂質画分の殺虫活性の少なくとも一部分を保持している。
【０１２５】
本発明の脂質又は脂質画分により導き出される１種以上の生物学的効果、例えば、殺虫効力を決定するための方法及びアッセイは当該技術分野でよく知られており、そしてこのような方法及びアッセイは本発明の１種以上の脂質又は脂質画分の１種以上の機能的変異体を特定し又は確認するために使用することができる。例えば、実施例に記載されているような標的昆虫を殺生し又はその成長に対抗するための本発明の脂質の能力のアッセイは脂質の１種以上の機能的変異体を特定するのに受け入れられる。
【０１２６】
用語「特定的特徴」は、本明細書中に使用されるときに、分光分析プロファイル上の特定のピークの存在又は不在、クロマトグラフィーアッセイにおいて所与の移動度又は溶出プロファイルを有する化合物又は画分の存在又は不在、ＴＬＣ上の所与の移動度を有するバンドの存在又は不在などの物理化学的特徴などを含む、参照物が保有しそして決定する１種以上の属性が考えられる。
【０１２７】
用語「脂質」は本明細書中に使用されるときに、水中に不溶性であり、１種以上の脂肪酸、通常、長さが４〜３６個の炭素原子の範囲にある炭化水素鎖を有するカルボン酸を含む、高度に還元された炭素リッチの物質を包含する。脂質としては、トリアシルグリセロール、リン脂質、例えば、グリセロリン脂質及びスフィンゴ脂質、糖脂質及びステロールが挙げられる。
【０１２８】
用語「脂質画分」は、本明細書中に使用されるときに、１種以上の脂質、遊離脂肪酸又はその両方を含む組成物を包含し、ここで、画分は画分化されていない原料中に存在する総脂質の部分集合を含む又は部分集合からなる。通常、脂質画分は、決定可能かつ特定可能な組成物を有し、例えば、特徴的なクロマトグラフィープロファイル又は質量分析的プロファイルを有する。脂質画分の例は本明細書中に示されている。
【０１２９】
用語「植物」は、本明細書中に使用されるときに、全植物を包含するだけでなく、植物部分、伐採部ならびに植物生成物まで拡張し、根、葉、花、種子、茎、カルス組織、ナッツ及びフルーツ、球根、塊茎、球茎、穀物、挿し木、根茎又は穂を含み、また、植え付け前、成長の間及び収穫時又は収穫後のいずれかの任意の植物材料を含む。本発明の施用から利益を得ることができる植物は広い範囲の農業及び園芸作物を網羅する。本発明の組成物は、また、有機生産システムにおける施用に特に適する。
【０１３０】
殺虫性脂質又は昆虫病原性真菌株などの殺虫剤に関して使用するときに、用語「殺虫効力を保持する」又は「昆虫病原効力を保持する」及びその文法的等価物及び派生語は薬剤が有用な殺虫又は昆虫病原活性を有することを意味することが意図される。好ましくは、保持される活性は初期活性の少なくとも約３５，  ４０，  ４５，  ５０，  ５５，  ６０，  ６５，  ７０，  ７５，  ８０，  ８５，  ９０，  ９５，  ９９又は１００％であり、そして有用な範囲はこれらの任意の値の間で選択されうる（例えば、約３５〜約１００％、約５０〜約１００％、約６０〜約１００％、約７０〜約１００％、約８０〜約１００％、及び、約９０〜１００％）。例えば、本発明の好ましい脂質の機能的変異体又は画分は殺虫活性を保持すべきであり、すなわち、特定された親脂質又は脂質画分の殺虫活性の少なくとも約３５，  ４０，  ４５，  ５０，  ５５，  ６０，  ６５，  ７０，  ７５，  ８０，  ８５，  ９０，  ９５，  ９９又は１００％を保持すべきである。したがって、本明細書中に記載された１つの脂質画分の機能的変異体、例えば、実施例において例示された脂質画分の変異体は、それぞれの脂質画分の殺虫活性の少なくとも約３５，  ４０，  ４５，  ５０，  ５５，  ６０，  ６５，  ７０，  ７５，  ８０，  ８５，  ９０，  ９５，  ９９又は１００％を保持すべきである。同様に、本発明の好ましい組成物はそれに含まれる昆虫病原性剤の有用な昆虫病原活性の維持を支持することができ、そして、理想的には、ここに考えられる方法を用いて施用されるまで、昆虫病原活性を保持するといわれることができる。
【０１３１】
本明細書中に使用されるときに、本発明の組成物に関連して使用されるときの用語「安定」は、数週間、好ましくは１週間、約２週間、３週間、約４週間、好ましくは５ヶ月、より好ましくは６ヶ月又はそれ以上の間、殺虫効力又は昆虫病原効力を支持することができる組成物を意味する。例えば、１種以上の昆虫病原性真菌をさらに含む組成物に関連して使用されるときに、用語「安定」は、数週間、好ましくは約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、好ましくは約５ヶ月、より好ましくは約６ヶ月又はそれ以上の間、昆虫病原性真菌の再生生存を支持することができる組成物を指す。
【０１３２】
特定された株のホモログ又は変異種を含む、「［特定された株］の特定的特徴を有する株」、又は、「［特定された株］の特定的特徴を有する培養物」は、特定された株と密接な関係があり（すなわち、それと共通の祖先を共有する）、又は、特定された株から得られるが、通常、１つ以上の遺伝子型もしくは表現型特性において、特定された株とは異なるであろう。変異種は、一般に、遺伝子型差異の評価をとおして特定可能である。ホモログは、遺伝子的な生化学的かつ形態学的差異の度合いの評価、及び、分岐論などの分析を含む分類学的方法の使用をとおして特定可能である。しかしながら、特定された株のホモログ又は変異種を含む、［特定された株］の特定的特徴を有する株は昆虫病原効力を保持し、他の株と識別可能であり、そして本明細書中に記載される技術を用いて、親株のホモログ又は変異種として特定可能であろう。
【０１３３】
本発明の真菌、方法及び組成物に付される植物に関して使用するときに、用語「周囲」としては植物又はその根、塊茎などに隣接し又はその近辺にある土壌、水、落葉及び／又は成長培地、隣接植物、前記植物の伐木、支持体、植物に投与する水、及び種子被覆を含むコーティングが挙げられる。保護コーティング、ボックス及びラッパーなどの貯蔵、包装又は処理材料、ならびに、植付、保全及び収穫装置がさらに挙げられる。
【０１３４】
植物病原の防除
本発明は、例えば、米国、ニュージーランド及び欧州の多くの国を含む、多くの国の園芸部門が植物病原性害虫の間で殺虫剤耐性が増加しているという問題に直面していることを認識している。このことは、規制障壁により新規の化学殺虫剤の入手性が低減していることにより幾つかの規制制度下に複雑化されている。
【０１３５】
真菌から得られる殺虫性脂質の生物学的防除剤としての使用はこの問題の解決策を提示する。有効な生物学的防除剤は標的植物病原性昆虫又は昆虫個体群を無力化させ又は殺生する能力によって選択されうる。貢献する条件の下では、アブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）、アザミウマ（ｔｈｒｉｐｓ）及びコナジラミ（ｗｈｉｔｅｆｌｙ）などの植物病原虫は、植物及び、土壌、落葉、隣接植物、支持体などを含む、その周囲に感染することができる。真菌から得られる殺虫性脂質及びそれから得られる薬剤を、植物病原性昆虫を無力化し及び／又は殺生するように施用し、それにより、病原の疾患発症能力を防止し又は制限することができる。この分野における真菌から得られるこれらの殺虫性脂質の有効性は、頻繁に、断続的な湿潤期間及び乾燥などの変化している気候条件で殺虫効力を保持する能力に依存する。本明細書中に記載される脂質などの、昆虫病原性真菌から得られる薬剤の有効性は、通常、生存力の維持を要求せず、むしろ殺虫効率の維持を要求する。
【０１３６】
植物病原性昆虫などの昆虫に対して有効であり、そしてそれゆえ、本発明による使用に適する、本発明の脂質又は脂質画分は、本発明の脂質又はその機能的変異体が比較される対照処理剤に対して統計的に有意な量で標的昆虫の個体数を低減するのに有効であるものと特定される。このような脂質又は脂質画分は殺虫効力を有するものと考えることができる。本明細書中に記載されるときに、標的昆虫の個体数の低減は様々な拮抗メカニズムによる。例えば、脂質は、植物病原性昆虫を無力化し、生殖力を無くし、その成長又は発育を抑制し、及び／又は、好ましくは、それを殺生し、又は、本発明の脂質又は脂質画分とともに組成物中に存在する昆虫病原性真菌などの、１種以上の昆虫病原の成長を支持し又は促進し、そしてその昆虫病原効力を支持し又は促進することができる（別個に、同時に又は順次に）。このようにして、本発明の脂質又は脂質画分は植物病原性昆虫に寄生し、それを無力化し、生殖力を無くし、及び／又は、好ましくはそれを殺生する能力を可能にし又は支持することができる。本発明の脂質又は脂質画分は、また、１種以上の真菌が施用された植物又はその周囲などの環境を植物病原性昆虫にとって好ましくない環境とすることにより標的昆虫の個体数を低減することができる。この実施形態において、脂質又は脂質画分は忌避剤として作用し、そして、植物又はその周囲の近傍において標的昆虫の有効個体数を低減するものと考えられる。
【０１３７】
１つの実施形態において、脂質は本明細書中に規定されるとおりの機能的変異体である。
【０１３８】
好ましくは、本発明の適切な脂質もしくは脂質画分又はその機能的変異体は対照処理剤と比較した関連昆虫種の個体数の百分率低減値として表現して、約５％の殺虫効力、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、より好ましくは少なくとも約５０％の殺虫効力を示す。例として、本明細書中に記載される方法を種々の標的昆虫に対して有効なビューベリア脂質画分単離物を特定するために使用したが、本明細書中に記載されるのと類似の手順は他の真菌及び昆虫種に関して使用することができる。
【０１３９】
殺虫効力は脂質又は脂質画分が生物学的防除剤としての使用に適すると考えられるための原則的な必須要件であるが、脂質又は脂質画分は生物学的防除剤としての使用に適するために追加の特徴を有することができる。
【０１４０】
例えば、脂質又は脂質画分は合理的な期間にわたって有効な形態で貯蔵することができ、最終的に、生物学的防除剤として有効である形態及び濃度で標的植物又はその周囲に施用できるように貯蔵することができるべきである。
【０１４１】
当業者は本発明の脂質又は脂質画分及び組成物は本明細書中に例示されているものを含む、本発明の１種以上の脂質又は脂質画分の１種以上の機能的変異体を含むことができ、又は、本発明の方法はそのような機能的変異体を使用することができることを認識するであろう。脂質又は脂質画分とその機能的変異体との組み合わせもここで有用である。
【０１４２】
脂質の単離方法
本発明の１種以上の脂質又は脂質画分を産生しそして単離する例示の方法を本明細書中に記載する。これらの方法は子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の１種以上の真菌、例えば、ビューベリア・バシアナ（Ｂ．  ｂａｓｓｉａｎａ  Ｋ４Ｂ３）を含むビューベリア種又はトリコデルマ種などの１種以上の真菌の培養物からの１種以上の脂質又は脂質画分の単離を含む。
【０１４３】
又は、本発明の、その機能的変異体を含む脂質又は脂質画分は、当該技術分野でよく知られた脂質合成方法を用いて調製されうる。
【０１４４】
昆虫病原性真菌を含む組成物
昆虫病原性真菌の輸入は特定の規制体制の元に不可能でないとしても、しばしば問題となり、高価となり、そして非実用的となる。例えば、所与の国の国外で入手可能な昆虫病原性真菌は規制及び法律上の除外のためにその国の国内で園芸家に入手可能でないことがある。それゆえ、本発明は、このような真菌からの昆虫病原効力を有するか、又は、昆虫病原性真菌（又は他の昆虫病原）の成長を支持し又は促進することができ、そのため、広範な環境条件でこのような昆虫病原が繁栄するのを助けることができる、又は、その両方である薬剤を特定しそして調製することに明確な利点があることを認識している。
【０１４５】
前記真菌の単離物は植物、その周囲を含む環境から、及び、前記植物の病原から便利に得ることができる。特定の実施形態において、前記真菌の単離物は、標的昆虫から得ることができ、又は、前記真菌を含む生物学的防除剤又は前記真菌を含む組成物が次いで施用されるであろう植物種（又はその周囲）から得ることができる。
【０１４６】
異なる温度を含む異なる条件下に、異なる培地又は他の基体上での前記真菌の成長を測定するための方法は当該技術分野においてよく知られている。同様に、本発明の脂質が真菌の成長に与える正の効果、例えば、脂質の不在下に観測されるのと比較した、脂質の存在下での前記真菌の毒性又は昆虫病原効力の増加を測定するための方法も当該技術分野においてよく知られている。種々の温度での真菌の成長に影響を及ぼす、又は、種々の植物、環境又は標的生物に影響を及ぼす本発明の脂質の能力を決定するための方法の例は本明細書中に記載される。
【０１４７】
昆虫病原効力は単離物が生物学的防除剤としての使用に適すると考えられるための原則的な必須要件であるが、真菌単離物は生物学的防除剤としての使用に適する追加の特徴を有するべきである。
【０１４８】
例えば、真菌は合理的な期間にわたって生存可能な形態で貯蔵することができ、最終的に、生物学的防除剤として有効である形態及び濃度で標的植物又はその周囲に施用できるように貯蔵することができるべきである。
【０１４９】
真菌は、生物学的防除剤としての使用に適するために、植物又はその周囲に施用されるときに、感染しきい値を達成することもできるべきである。本明細書中に使用されるときに、感染しきい値は標的植物及びその周囲に真菌を根付かせ、その後、昆虫病原効力を有するようにするために要求される真菌の濃度を指す。理解されるとおり、感染しきい値を達成するために、幾つかの真菌単離物は非実用的又は実行不能なほどの高い割合での施用を要求することがある。さらに、幾つかの真菌単離物は施用される濃度又は割合に関係なく、感染しきい値を達成することができないことがある。適切な昆虫病原性真菌は１０１０  胞子／ヘクタール以上の割合で施用されるときに、又は、組成物が約ｌｋｇ／ｌＯＯＯＬ／ヘクタールの割合で施用される際に１０７  胞子／ミリグラム組成物以上の濃度で施用されるときに、感染しきい値を達成することができる。
【０１５０】
感染しきい値を決定する方法は当該技術分野でよく知られており、そのような方法の例を本明細書中に示す。特定の実施形態において、感染しきい値は、例えば、標的植物、その周囲及び／又は前記植物の病原から得られる１つ以上のサンプルを分析し、前記サンプル上又は中の真菌の存在又は量を決定することにより、直接的に決定されうる。他の実施形態において、感染しきい値は、例えば、１種以上の植物病原性昆虫の個体数の低減を観測することにより間接的に決定されうる。このような方法の組み合わせも考えられる。
【０１５１】
ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）は、例えば、バッタ（ｇｒａｓｓｈｏｐｐｅｒｓ）、アブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）、アザミウマ（ｔｈｒｉｐｓ）、蛾（ｍｏｔｈｓ）及び幾つかの他の種を含む、幼体及び成体昆虫を攻撃する土壌で生まれる真菌である。通常、ビューベリア・バシアナ（Ｂ．  ｂａｓｓｉａｎａ）はアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）、せん孔性害虫（ｂｏｒｅｒｓ）及びアザミウマ（ｔｈｒｉｐｓ）などの昆虫の死体から単離することができ、また、土壌から単離することができる。例示の昆虫病原性ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３は本発明の特定の実施形態において使用でき、そして特許手続きの目的でブタペスト条約により、豪州全国計測協会（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）（ＮＭＩＡ、以前の豪州政府分析実験室（Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  （ＡＧＡＬ））、１  Ｓｕａｋｉｎ  Ｓｔｒｅｅｔ，  Ｐｙｍｂｌｅ，  Ｎｅｗ  Ｓｏｕｔｈ  Ｗａｌｅｓ，  Ａｕｓｔｒａｌｉａに２００８年９月２３日に寄託された。その単離物には寄託番号Ｖ０８／０２５８５５が与えられている。
【０１５２】
したがって、１つの態様において、本発明は、再生生存可能な形態及び量のビューベリア・バシアナ（Ｂ．  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３，  ＮＭＩＡ  Ｎｏ．  Ｖ０８／０２５８５５又は株Ｋ４Ｂ３，  ＮＭＩＡ  Ｎｏ．  Ｖ０８／０２５８５５の特定的特徴を有するビューベリア（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ）とともに、本発明の１種以上の脂質、又は、それをエンコードする１種以上のポリヌクレオチドを頼りにすることを含む方法及びそれらを含む組成物を提供する。
【０１５３】
ビューベリア・バシアナ（Ｂ．  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３は特に有効な生物学的防除剤であり、断続的な湿潤期間、乾燥で生き延びることができ、そして植物病原性昆虫にコロニー形成し、無力化しそして殺生することができ、植物病原性昆虫は、限定するわけではないが、例えば、地面にいるアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）、キャタピラ（ｃａｔｅｒｐｉｌｌａｒｓ）、コナジラミ（ｗｈｉｔｅｆｌｙ）、蛾（ｍｏｔｈｓ）、ミツバチヘギイタダニ（Ｖａｒｒｏａ  ｍｉｔｅ）、蝉（ｃｉｃａｄａ）及びアザミウマ（ｔｈｒｉｐｓ）である。
【０１５４】
本発明の他の実施形態において、ビューベリア・バシアナ（Ｂ．  ｂａｓｓｉａｎａ）  Ｋ４Ｂ３は本明細書中に特定されるとおりの１種以上の脂質を含む組成物を調製するために使用されうる。
【０１５５】
１つの実施形態において、その方法は少なくとも１種の脂質の産生に適する条件下にビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）  Ｋ４Ｂ３  Ｖ０８／０２５８５５の培養物を維持すること、及び、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）  Ｋ４Ｂ３  Ｖ０８／０２５８５５から少なくとも１種の脂質を分離することを含む。
【０１５６】
１つの実施形態において、組成物は本明細書中に記載されるとおりの２種以上の脂質を含む。特に、これらの脂質のいずれも、ビューベリシン（ｂｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ）、ビューベリシンＦ（ｂｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ−Ｆ）及びバシアノリデ（ｂａｓｓｉａｎｏｌｉｄｅ）などのビューベリア（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ）で知られた殺虫剤と有意な同一性又は類似性を有する。１つの実施形態において、組成物は本明細書中に記載されるとおりの２種以上の脂質を含む相乗的組成物である。
【０１５７】
別の実施形態において、組成物は追加的に約１ｍｇＬ−１  未満のビューベリシン（ｂｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ）、約０．５ｍｇＬ−１未満のビューベリシン、約０．１ｍｇＬ−１  未満のビューベリシン、約０．０５ｍｇＬ−１未満のビューベリシン、約０．０１ｍｇＬ−１  未満のビューベリシン、約０．００５ｍｇＬ−１  未満のビューベリシン、約０．００１  ｍｇＬ−１  未満のビューベリシン、約０．０００５ｍｇＬー１  未満のビューベリシン、又は、約０．０００１ｍｇＬ−１  未満のビューベリシンを含む。
【０１５８】
別の実施形態において、組成物は追加的に、約１ｍｇＬ−１  未満のビューベリシンＦ（ｂｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ−Ｆ）、約０．５ｍｇＬ−１  未満のビューベリシンＦ、約０．１  ｍｇＬ−１  未満のビューベリシンＦ、約０．０５ｍｇＬ−１  未満のビューベリシンＦ、約０．０１ｍｇＬ−１  未満のビューベリシンＦ、約０．００５ｍｇＬ−１  未満のビューベリシンＦ、約０．００１ｍｇＬ−１  未満のビューベリシンＦ、約０．０００５ｍｇＬ−１  未満のビューベリシンＦ、又は、約０．０００１ｍｇＬ−１  未満のビューベリシンＦを含む。
【０１５９】
別の実施形態において、組成物は、追加的に、約１ｍｇＬ−１  未満のバシアノリデ（ｂａｓｓｉａｎｏｌｉｄｅ）、約０．５ｍｇＬ−１  未満のバシアノリデ、約０．１  ｍｇＬ−１  未満のバシアノリデ、約０．０５ｍｇＬ−１  未満のバシアノリデ、約０．０１ｍｇＬ−１  未満のバシアノリデ、約０．００５ｍｇＬ−１  未満のバシアノリデ、約０．００１ｍｇＬ−１  未満のバシアノリデ、約０．０００５ｍｇＬ−１  未満のバシアノリデ、又は、約０．０００１ｍｇＬ−１  未満のバシアノリデを含む。
【０１６０】
種々の実施形態において、組成物は本明細書中に記載されるとおりの１種以上脂質を１種以上のビューベリシン（ｂｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ）、例えば、ビューベリシンＡ（ｂｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ−Ａ）、ビューベリシンＤ（ｂｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ−Ｄ）、ビューベリシンＥ（ｂｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ−Ｅ）もしくはビューベリシンＦ（ｂｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ−Ｆ）、又は、１種以上のバシアノリデ（ｂａｓｓｉａｎｏｌｉｄｅ）、あるいは、それらの任意の組み合わせとともに含む、相乗的組成物である。
【０１６１】
例えば、組成物は追加的に、約０．１ｍｇＬ−１  を超えるビューベリシン（ｂｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ）、約０．５ｍｇＬ−１  を超えるビューベリシン、約１  ｍｇＬ−１  を超えるビューベリシン、約５ｍｇＬ−１  を超えるビューベリシン、約１０ｍｇＬ−１  を超えるビューベリシン、約５０ｍｇＬ−１  を超えるビューベリシン、又は、約１００ｍｇＬ−１  を超えるビューベリシンを含む。
【０１６２】
別の例において、組成物は追加的に、約０．１ｍｇＬ−１  を超えるバシアノリデ（ｂａｓｓｉａｎｏｌｉｄｅ）、約０．５ｍｇＬ−１  を超えるバシアノリデ、約１  ｍｇＬ−１  を超えるバシアノリデ、約５ｍｇＬ−１  を超えるバシアノリデ、約１０ｍｇＬ−１  を超えるバシアノリデ、約５０ｍｇＬ−１  を超えるバシアノリデ、又は、約１００ｍｇＬ−１  を超えるバシアノリデを含む。
【０１６３】
別の実施形態において、組成物は本明細書中に記載されるとおりの１種以上の脂質及び本明細書中に記載されるとおりの１種以上の昆虫病原性真菌を、１種以上のビューベリシン（ｂｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ）、例えば、ビューベリシンＡ（ｂｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ−Ａ）、ビューベリシンＤ（ｂｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ−Ｄ）、ビューベリシンＥ（ｂｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ−Ｅ）もしくはビューベリシンＦ（ｂｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ−Ｆ）、又は、１種以上のバシアノリデ（ｂａｓｓｉａｎｏｌｉｄｅ）、あるいは、それらの任意の組み合わせとともに含む、相乗的組成物である。
【０１６４】
本発明のビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株  Ｋ４Ｂ３は単独で使用されても、又は、本明細書中に記載される他の昆虫病原性真菌との組み合わせで使用されてもよい。昆虫病原性真菌の例を下記により詳細に記載する。
【０１６５】
ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株  Ｋ４Ｂ１をＢｏｍｂａｙ，  Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄにある松林内のせん孔性害虫の幼虫から分離した。このビューベリア・バシアナ（Ｂ．  ｂａｓｓｉａｎａ）単離物は特許手続きの目的でブタペスト条約により、豪州全国計測協会（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）、１  Ｓｕａｋｉｎ  Ｓｔｒｅｅｔ，  Ｐｙｍｂｌｅ，  Ｎｅｗ  Ｓｏｕｔｈ  Ｗａｌｅｓ，  Ａｕｓｔｒａｌｉａに２００５年３月１６日に寄託された。この単離物には寄託番号ＮＭ０５／４４５９５が与えられている。
【０１６６】
ビューベリシン・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）単離物  Ｋ４Ｂ１はアザミウマ（ｔｈｒｉｐｓ）成体に選好性を示し、また、幼若期及びさなぎのアザミウマ（ｔｈｒｉｐ  ｊｕｖｅｎｉｌｅｓ  ａｎｄ  ｐｕｐａｅ）、アブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）及びコナジラミ（ｗｈｉｔｅｆｌｙ）に対して病原性がある。Ｋ４Ｂ１の分生子はクリーム状集合体を形成する。
【０１６７】
ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）単離物Ｋ４Ｂ２はＡｋａ  Ａｋａ  ｆｌａｔｓ，  Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄでひまわり上の鱗翅目の幼虫（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ  ｃａｔｅｒｐｉｌｌａｒ）から単離された。このビューベリア・バシアナ（Ｂ．  ｂａｓｓｉａｎａ）単離物は特許手続きの目的でブタペスト条約により、豪州全国計測協会（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）に２００６年３月３日に寄託された。この単離物には寄託番号ＮＭ０６／０００１０が与えられている。
【０１６８】
ビューベリシン・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）単離物Ｋ４Ｂ２はダイズルーパーキャタピラ（ｓｏｙｂｅａｎ  ｌｏｏｐｅｒ  ｃａｔｅｒｐｉｌｌａｒ）及び白蝶（ｗｈｉｔｅ  ｂｕｔｔｅｒｆｌｙ）及びアーミーワームキャタピラ（ａｒｍｙ  ｗｏｒｍ  ｃａｔｅｒｐｉｌｌａｒ）を含むキャタピラに選好性を示す。この単離物は、また、幼若期、成体及びさなぎのアザミウマ（ｔｈｒｉｐ  ｊｕｖｅｎｉｌｅｓ，  ａｄｕｌｔｓ，  ａｎｄ  ｐｕｐａｅ）、アブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）及びコナジラミ（ｗｈｉｔｅｆｌｙ）に対して病原性がある。Ｋ４Ｂ２の分生子は黄色ダスト状集合体を形成する。
【０１６９】
ＮＭＩＡ  Ｎｏ．  Ｖ０８／０２５８５５，  ＮＭＩＡ  Ｎｏ．  ＮＭ０５／４４５９５，  ＮＭＩＡ  Ｎｏ．  ＮＭ０６／０００１０及びビューベリア・バシアナ（Ｂ．  ｂａｓｓｉａｎａ）の他の適切な単離物は本発明の１種以上の脂質又はその機能的変異体もしくはそのフラグメントとの組み合わせで使用されてよく、そして特に有効な生物学的防除剤であり、断続的な湿潤期間、乾燥で生き延びることができ、そして植物病原性昆虫にコロニー形成し、無力化しそして殺生することができ、植物病原性昆虫は、限定するわけではないが、例えば、地面にいるアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）、キャタピラ（ｃａｔｅｒｐｉｌｌａｒｓ）、コナジラミ（ｗｈｉｔｅｆｌｙ）、蛾（ｍｏｔｈｓ）、ミツバチヘギイタダニ（Ｖａｒｒｏａ  ｍｉｔｅ）及びアザミウマ（ｔｈｒｉｐｓ）である。ビューベリア・バシアナ（Ｂ．  ｂａｓｓｉａｎａ）のこれらの単離物がコナジラミ（ｗｈｉｔｅｆｌｙ）、アザミウマ（ｔｈｒｉｐｓ）及びアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）を殺生する程度は、一般に、上記のとおりの一般的に使用されている殺虫剤と同様に良好である。これらの殺虫剤に対する耐性は発現されており、これら及び他の場合に、ビューベリア・バシアナ（Ｂ．  ｂａｓｓｉａｎａ）単離物を含む組成物又はその単離物を用いる方法は昆虫防除のための有効な代替品を提供する。ビューベリア・バシアナ（Ｂ．  ｂａｓｓｉａｎａ）により誘発される植物病原性のいかなる観察も伴わずに得られる植物疾患の防除の強力な活性はこれらの種の単離物が生物学的防除剤としての使用のための望ましい属性を有することを実証する。
【０１７０】
トリコデルマ種（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）は、以前に、殺虫活性又は効果がもたらされていなかった。トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）培養物は、通常、２５〜３０℃で急速に成長するが、３５℃では成長しないであろう。コロニーは、コーンミールデキストロース寒天（ＣＭＤ）などの培地上で最初に透明であり、又は、ポテトデキストロース寒天（ＰＤＡ）などのよりリッチな培地上で白色である。菌糸体は、通常、ＣＭＤ上で明確でなく、分生子は、通常、緑又は黄色あるいはあまり頻繁ではないが白色のシェードで密な又は緩いふさで１週間以内に形成する。黄色の色素を寒天中に分泌し、特にＰＤＡ上に分泌することができる。ある種は特徴的な甘い又は「ココナツ」臭を生じる。
【０１７１】
分生子柄は高度に枝分かれであり、このため、画定又は測定するのが困難であり、緩く又は密に房形成し、しばしば、明確な同心環で形成され、又は、空気欠乏菌糸（ｓｃａｎｔ  ａｅｒｉａｌ  ｈｙｐｈａｅ）に沿って生じる。分生子柄の主な枝は対となっていても又は対となっていなくてもよい側方枝を生じ、先端から最も遠位の枝及びしばしば、フィアライドは先端付近の主軸から直接的に生じている。枝は再枝分かれすることができ、その二次枝分かれはしばしば対になっており、そして最も長い二次枝分かれは主軸に最も近い。すべての一次及び二次枝分かれは主軸に対して９０°で又はその付近で生じる。対になった枝分かれを有する典型的なトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）分生子柄は角錐アスペクトであると考えられる。通常、分生子柄は１つ又は幾つかのフィアライドを終端とする。ある種では  （例えば、Ｔ  ｐｏｌｙｓｐｏｒｕｍ）では、主枝は長く、単純な又は枝分かれした、カギ状の、まっすぐな又は波状の、隔たりのある、薄肉の、無菌の又は末端に繁殖力がある伸長部を終端とする。主軸はフィアライドの基部と同一の幅であることができ、又は、ずっと広いことができる。
【０１７２】
フィアライドは、通常、中央で大きくなっているが、筒状又はほとんど球形に近いこともできる。フィアライドは渦において、渦の他の部材に対して９０°で保持されることができ、又は、様々に毛筆状（グリオクラジウム状）であることができる。フィアライドは幅広い主軸上に密にクラスター化されていてよく  （例えば、Ｔ．  ｐｏｌｙｓｐｏｒｕｍ，  Ｔ．  ｈａｍａｔｕｍ）、又は、孤立していてもよい  （例えば、Ｔ．  ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ）。
【０１７３】
分生子は、通常、乾燥して見えるが、ある種では透明な緑又は黄色の液体の液滴を保持していることがある  （例えば、Ｔ．  ｖｉｒｅｎｓ，  Ｔ．  ｆｌａｖｏｆｕｓｃｕｍ）。ほとんどの種の分生子は楕円体、３〜５  ｘ  ２〜４  μｍ  （Ｌ／Ｗ  ＝  ＞  １．３）  であり、球形分生子  （Ｌ／Ｗ  ＜  １．３）はまれである。分生子は、通常、滑らかであるが、結節で覆われたものから微細イボ状の分生子は幾つかの種で知られている。
【０１７４】
シンアナモルフは典型的なトリコデルマプステルをも有する幾つかの種により形成される。シンアナモルフは、輪生分枝され、そして各フィアライドの先端に透明な緑色の液滴で分生子を有する孤立した分生子柄と認識されている。
【０１７５】
厚膜胞子はすべての種により産生されるが、すべての種がＣＭＤ上で２０℃にて１０日以内に厚膜胞子を産生する訳ではない。厚膜胞子は、通常、単細胞のほぼ球形であり、そして短い菌糸の末端にあり、又は、菌糸細胞内に形成することもできる。幾つかの種の厚膜胞子は多細胞である（例えば、Ｔ．  ｓｔｒｏｍａｔｉｃｕｍ）。
【０１７６】
レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）は昆虫病原性真菌であり、同翅類昆虫及び他の節足動物群を含む広い範囲の宿主を有する。レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌ．  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）は変更された形態学的及び生物化学的特性の単離物を含む、上種と考えられている。通常、レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌ．  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）はアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）、アザミウマ（ｔｈｒｉｐｓ）、コナジラミ（ｗｈｉｔｅｆｌｙ）及びカイガラムシ（ｍｅａｌｙ  ｂｕｇｓ）などの昆虫の死体から単離でき、また、土壌から単離できる。
【０１７７】
レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株Ｋ４Ｖ１はＰｕｋｅｋｏｈｅ，  Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄの温室トマト作物中のコナジラミ（ｗｈｉｔｅｆｌｙ）から単離された。このレカニシリウム・ムスカリウム（Ｌ．  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）単離物は特許手続きの目的でブタペスト条約により、豪州全国計測協会（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）に２００５年３月１６日に寄託された。この単離物には寄託番号ＮＭ０５／４４５９が与えられている。
【０１７８】
Ｋ４Ｖ１は追加的な特定的特徴を有する−コナジラミ（ｗｈｉｔｅｆｌｙ）の鱗粉上で６０％分生子１．０ｘ１．０  ミクロン、若年期アザミウマ（ｔｈｒｉｐ  ｊｕｖｅｎｉｌｅｓ）（若虫）上で３０％  分生子２．０ｘ１．０  ミクロン、アザミウマのさなぎ（ｔｈｒｉｐ  ｐｕｐａｅ）上で１０％分生子２．５ｘ１．３  ミクロン。疎らに皺になった菌糸体葉状体の裏側で、菌糸体葉状体は寒天から非常に容易に除去される。
【０１７９】
レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌ．  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株Ｋ４Ｖ２  はＲｕａｋａｋａ，  Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄにおいて、キュウリ温室中でコナジラミ（ｗｈｉｔｅｆｌｙ）から単離された。このレカニシリウム・ムスカリウム（Ｌ．  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）単離物は特許手続きの目的でブタペスト条約により、豪州全国計測協会（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）に２００５年３月１６日に寄託された。この単離物には寄託番号ＮＭ０５／４４５９４が与えられている。
Ｋ４Ｖ２は追加的な特定的特性を有する−５０％分生子２．０  ｘ  １．５μｍ、３０％  分生子２．０ｘ１．０  μｍ、２０％分生子１．０  ｘ１．０μｍ、コナジラミ（Ｗｈｉｔｅｆｌｙ）に対して病原性であり、一方、分芽胞子はアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）成体に対して病原性である。頻繁に皺になった菌糸体葉状体の裏側で、菌糸体葉状体は寒天から除去するのが困難である。
【０１８０】
レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌ．  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株  Ｋ４Ｖ４は野外有機タマリロ作物から単離された。このレカニシリウム・ムスカリウム（Ｌ．  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）単離物は特許手続きの目的でブタペスト条約により、豪州全国計測協会（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）に２００６年３月３日に寄託された。この単離物には寄託番号ＮＭ０６／００００７が与えられている。
【０１８１】
Ｋ４Ｖ４は追加の特定的特徴を有する−５０％  分生子１．０  ｘ  ０．５μｍ、コナジラミ（ｗｈｉｔｅｆｌｙ）鱗粉及び成体に対して病原性であり、低い湿度６５〜７５％、高温２８〜３２℃で非常に攻撃的である。一般にｖ．ｌ  ＞  ７５％。５０％  分生子  ０．５  ｘ  ０．５μｍ。疎らに皺になった菌糸体葉状体の裏側で、菌糸体葉状体は培地中でカスタード系黄色から薄オレンジ色の色素を拡散する。
【０１８２】
ＮＭＩＡ  Ｎｏ．  ＮＭ０５／４４５９３，  ＮＭＩＡ  Ｎｏ．  ＮＭ０５／４４５９４，  ＮＭＩＡ  Ｎｏ．  ＮＭ０６／００００７及びレカニシリウム・ムスカリウム（Ｌ．  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）の他の適切な単離物は本発明の１種以上の脂質又は機能的変異体と組み合わせて使用されてよく、そして特に有効な生物学的防除剤であり、断続的な湿潤期間、乾燥で生き延びることができ、そして植物病原性昆虫にコロニー形成し、無力化しそして殺生することができ、植物病原性昆虫は、限定するわけではないが、例えば、地面にいるアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）、コナジラミ（ｗｈｉｔｅｆｌｙ）、カイガラムシ（ｍｅａｌｙ  ｂｕｇｓ）、ミツバチヘギイタダニ（Ｖａｒｒｏａ  ｍｉｔｅ）及びアザミウマ（ｔｈｒｉｐｓ）である。
【０１８３】
レカニシリウム・ロンギスポラム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｍ）はアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）に対して特に病原性である昆虫病原性真菌である。レカニシリウム・ロンギスポラム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｍ）株ＫＴ４Ｌ１はＦｒａｎｋｌｉｎ，  Ａｕｃｋｌａｎｄ，  Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄで、大麦若葉バンカー植物（Ｂａｒｌｅｙ  ｇｒａｓｓ    Ｂａｎｋｅｒ  ｐｌａｎｔｓ）におけるアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）から単離された。このレカニシリウム・ロンギスポラム（Ｌ．  ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｍ）単離物は特許手続きの目的でブタペスト条約により、豪州全国計測協会（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）に２００６年３月３日に寄託された。この単離物には寄託番号ＮＭ０６／００００９が与えられている。
【０１８４】
単離物ＫＴ４Ｌ１は下記の特定的特徴を有する：  １００％  分生子６．０  ｘ  ２．１  μｍ、菌糸体葉状体はオフホワイトから黄色であり、コンシステンシーに粒々があると記載されるように非常に荒く成長する。菌糸体葉状体は薄い赤褐色の色を拡散する。
【０１８５】
ＮＭＩＡ  Ｎｏ．  ＮＭ０６／００００９及びレカニシリウム・ロンギスポラム（Ｌ．  ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｍ）の他の適切な単離物は本発明の１種以上の脂質又は機能的変異体との組み合わせで使用でき、そして特に有効な生物学的防除剤であり、断続的な湿潤期間、乾燥で生き延びることができ、そして地面にいるアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）などの植物病原性昆虫にコロニー形成し、無力化しそして殺生することができる。
【０１８６】
パエシロミセス・フモソロセウス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅｕｓ）は感染した、死んだ昆虫中に発見される昆虫病原性真菌であり、そして幾つかの土壌において、パエシロミセス・フモソロセウス（Ｐ．  ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅｕｓ）は、通常、コナジラミ（ｗｈｉｔｅｆｌｉｅｓ）、アザミウマ（ｔｈｒｉｐｓ）アブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）及びキャタピラ（ｃａｔｅｒｐｉｌｌａｒｓ）に感染する。
【０１８７】
パエシロミセス・フモソロセウス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅｕｓ）のＫ４Ｐ１株はＲｕｎｃｉｍａｎ，  Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄでキャベツ上に存在するコナガ幼虫（Ｄｉａｍｏｎｄ  Ｂａｃｋ  Ｍｏｔｈ  ｃａｔｅｒｐｉｌｌａｒ）から単離された。このパエシロミセス・フモソロセウス（Ｐ．  ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅｕｓ）単離物は、特許手続きの目的でブタペスト条約により、豪州全国計測協会（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）に２００６年３月３日に寄託された。この単離物には寄託番号ＮＭ０６／００００８が与えられている。
【０１８８】
ＮＭＩＡ  Ｎｏ．  ＮＭ０６／００００８及びパエシロミセス・フモソロセウス（Ｐ．  ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅｕｓ）の他の適切な単離物は本発明の１種以上の脂質又は機能的変異体との組み合わせで使用されてよく、特に有効な生物学的防除剤であり、断続的な湿潤期間、乾燥で生き延びることができ、そして植物病原性昆虫にコロニー形成し、無力化しそして殺生することができ、植物病原性昆虫は、限定するわけではないが、例えば、地面にいるコナジラミ（ｗｈｉｔｅｆｌｙ）、ミツバチヘギイタダニ（Ｖａｒｒｏａ  ｍｉｔｅ）及び鱗翅目キャタピラ（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ  ｃａｔｅｒｐｉｌｌａｒ）である。
【０１８９】
上記で議論したとおり、多くの植物病原性昆虫は多くの殺虫剤に対して耐性を発現しており、これら及び他の例では、場合により、上述のような１種以上の真菌単離物とともに含む又は投与される本発明の組成物は昆虫防除剤の有効な代替品を提供する。これらの薬剤により誘発される植物病原性のいかなる観察も伴わずに得られる植物疾患の防除に強力な活性は本発明の脂質、及び、存在する場合には、これらの種の真菌単離物が生物学的防除剤としての使用のための望ましい属性を有することを実証する。
【０１９０】
本発明は、１種以上の昆虫病原性真菌とともに本発明の１種以上の脂質又はその機能的変異体及び１種以上のキャリアを含む組成物を提供する。
【０１９１】
組成物は、昆虫病原性真菌の複数の株を含むことができ、そして特定の実施形態において、複数の株はある数の植物病原性種又は単一の植物病原のある数の異なる発育段階、あるいは、実際にはその組み合わせを標的とするように使用できる。例えば、病原性昆虫のさなぎ形態は１種の真菌株により標的とされることができ、一方、病原性昆虫の成体形態は別の真菌株により標的とされることができ、ここで、両方の株は本発明の組成物中に含まれる。他の実施形態において、３種以下の株は好ましく、しばしば、単一の株が好ましいであろう。
【０１９２】
適切には、組成物はレカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株Ｋ４Ｖ１  （ＮＭＩＡ  登録番号  Ｎｏ．  ＮＭ０５／４４５９３）又はその特定的特徴を有する株、レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株Ｋ４Ｖ２  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０５／４４５９４）  又はその特定的特徴を有する株、レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株Ｋ４Ｖ４  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０６／００００７）  又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ１  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０５／４４５９５）  又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ２  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０６／０００１０）  又はその特定的特徴を有する株、レカニシリウム・ロンギスポラム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｍ）株ＫＴ４Ｌ１  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０６／００００９）  又はその特定的特徴を有する株、及び、パエシロミセス・フモソロセウス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅｕｓ）株Ｋ４Ｐ１  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０６／００００８）  又はその特定的特徴を有する株からなる群より選ばれる真菌を含む。
【０１９３】
本発明の１種以上の脂質又はその機能的変異体及びレカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株  Ｋ４Ｖ１  （ＮＭ０５／４４５９３）  又はその特定的特徴を有する株を含む組成物、本発明の１種以上の脂質又はその機能的変異体及びレカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株Ｋ４Ｖ２  （ＮＭ０５／４４５９４）  又はその特定的特徴を有する株を含む組成物、及び、本発明の１種以上の脂質又はその機能的変異体及び両方のレカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株Ｋ４Ｖ１  （ＮＭ０５／４４５９３）  又はその特定的特徴を有する株を含む組成物、本発明の１種以上の脂質又はその機能的変異体及びレカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株Ｋ４Ｖ２  （ＮＭ０５／４４５９４）  又はその特定的特徴を有する株を含む組成物は特に考えられる。
【０１９４】
昆虫病原性真菌を含む組成物の例は当該技術分野においてよく知られており、そして例えば、Ｍｙｃｏｔｅｃｈ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのＷＯ９５／１０５９７  （ＰＣＴ／ＵＳ９４／１１５４２として公開）、農務長官により代表されるアメリカ合衆国のＷＯ２００３／０４３４１７  （ＰＣＴ／ＵＳ２００２／０３７２１８として公開）、ＭｃＣａｂｅらの米国特許第４，５３０，８３４号及びＷｒｉｇｈｔらの米国特許出願第１０／６５７，９８２号  （ＵＳ  ２００４／００４７８４１として公開）  に記載されたものを含み、各々の全体を参照により本明細書中に取り込む。
【０１９５】
植物又はその周囲への施用に適するように、前記少なくとも１種のキャリアは農業上許容されるキャリアであり、より好ましくはフィラー刺激剤、固結防止剤、湿潤剤、乳化剤及び酸化防止剤からなる群より選ばれ、より好ましくは、前記組成物はフィラー刺激剤、固結防止剤、湿潤剤、乳化剤及び酸化防止剤の各々のうちの少なくとも１つを含む。好ましくは、前記フィラー刺激剤は炭水化物源であり、例えば、ジサッカリド、例えば、スクロース、フルクトース、グルコース又はデキストロースであり、前記団結防止剤はタルク、二酸化ケイ素、ケイ酸カルシウム又はケランクレーから選ばれ、前記湿潤剤は脱脂粉乳であり、前記乳化剤はダイズ系乳化剤、例えば、レシチン、又は、植物系乳化剤、例えば、モノジグリセリドであり、そして前記酸化防止剤はグルタミン酸ナトリウム又はクエン酸である。しかしながら、当該技術分野でよく知られた他の例は、組成物が殺虫もしくは昆虫病原効力を支持することができるかぎり、置換されてよく、そして必要な場合には、真菌生存性が維持される。
【０１９６】
好ましくは、前記組成物は生物学的防除剤である。生物学的防除剤として有効であることが要求される組成物中に存在する本発明の殺虫性脂質又は脂質画分の濃度は、最終用途、植物の生理学的条件；タイプ  （昆虫種を含む）、病原感染の濃度及び程度、温度、季節、成長時期の段階、及び、植物の年齢、施用される従来の殺虫剤又は他の処理剤（殺真菌剤を含む）の数及びタイプにより変化し、植物処理（デリーフィング及び剪定など）はすべて組成物を配合する際に考慮されうる。
【０１９７】
殺虫性組成物
脂質組成物及びその使用方法
本発明の発明者は、本明細書中に開示される脂質組成物は畑作物、草、果物及び野菜、芝生、木及び／又は観賞植物への局所及び／又は全体施用のためのＢＣＡ組成物として特に有用性を見いだすであろうと考える。又は、本明細書中に開示される脂質は昆虫を殺生するために、又は、昆虫個体群を防除するために、スプレイ、ダスト、粉末又はエアロゾルとして配合されるであろう。本明細書中に開示される脂質組成物は、処理されるべき特定の環境で標的昆虫が特定されると、その環境に対して予防的に使用され、又は、別のやり方で投与されることができる。脂質組成物は個々の脂質を含んでも、又は、本明細書中に開示される種々の脂質の組み合わせを含んでもよい。
【０１９８】
施用方法に関係なく、活性脂質成分は殺虫有効量で施用され、その量は、例えば、防除しようとする特定の標的昆虫、特定の環境、場所、植物、作物又は処理される農業地、環境条件、及び、殺虫活性脂質組成物の施用の方法、速度、濃度、安定性及び量などの要因によって変わるであろう。配合は気候条件、環境考慮点及び／又は施用頻度及び／又は昆虫繁殖の重症度に関係しても変わるであろう。
【０１９９】
記載される組成物は、１種以上の脂質、その機能的変異体又は機能的画分を、場合により、真菌細胞及び／又は胞子懸濁液と一緒に、所望の農業上許容されるキャリアと配合することにより製造されうる。組成物は適当な手段で、例えば、凍結乾燥し（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ）、凍結乾燥し（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）、乾燥し、又は、生理食塩水又は他のバッファーなどの水性キャリア、媒体、又は適切な希釈剤中で投与前に配合されうる。配合された組成物はダストもしくは粒剤材料、又は、オイル（植物油又は鉱油）中の懸濁液、又は、水もしくはオイル／水乳剤、又は、湿潤可能な粉末として、又は、農業施用に適する任意の他のキャリア材料との組み合わせの形態であることができる。適切な農業用キャリアは固体又は液体であることができ、そして当該技術分野でよく知られている。用語「農業上許容されるキャリア」は殺虫剤配合技術に通常に使用されているすべてのアジュバント、不活性成分、分散剤、界面活性剤、粘着付与剤、バインダーなどを包含し、これは殺虫剤配合の当業者によく知られている。配合物は１種以上の固体又は液体アジュバントと混合され、従来の配合技術を用いて、適切なアジュバントと殺虫剤組成物を均質混合、ブレンディング及び／又はグラインドするなどの種々の手段により調製されうる。
【０２００】
組成物は１種以上の真菌株を含むことができ、１種以上の細菌種を含むことができ、又はその両方を含むことができる。例示の細菌種としては、バルチス・チューリンゲンシス（Ｂ．  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）、バルチス・メガテリウム（Ｂ．  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、枯草菌、バルチス・セレウス（Ｂ．  ｃｅｒｅｕｓ）、大腸菌、サルモネラ属、アグロバクテリウム属又はシュードモナス属が挙げられる。
【０２０１】
オイル流動性懸濁液
１つの例示の実施形態において、バイオ殺虫性組成物は本発明の１種以上の脂質、その機能的変異体又は機能的画分のオイル流動性懸濁液を、場合により、本明細書中に開示される１種以上の新規タンパク質を発現する１種以上の真菌細胞を含む１種以上の真菌細胞とともに含む。
【０２０２】
水分散性粒剤
別の重要な例示の実施形態において、バイオ殺虫性組成物は水に分散可能な粒剤を含む。この粒剤は本発明の１種以上の脂質、その機能的変異体又は機能的画分を、場合により、本明細書中に開示される本発明の脂質又は脂質画分を産生する１種以上の真菌細胞を含む１種以上の真菌細胞とともに含む。
【０２０３】
粉末、ダスト及び胞子配合物
第三の重要な例示の実施形態において、バイオ殺虫性組成物は湿潤可能な粉末、ダスト、胞子配合物、細胞ペレット又はコロイド濃厚物を含む。この粉末は本発明の１種以上の脂質、その機能的変異体又は機能的画分を、場合により、本明細書中に開示される本発明の脂質又は脂質画分を産生する１種以上の真菌細胞を含む１種以上の真菌細胞とともに含む。殺虫性組成物のこのような乾燥形態は湿潤時に即座に溶解し、又は、制御解放、持続解放又は他の時間依存的様式で溶解するように配合されうる。このような組成物は標的昆虫に施用し、又は、昆虫により摂取され、そしてこのようにして、所与の環境での昆虫の数を制御し、又は、このような昆虫の広がりを制御するために使用される。
【０２０４】
水性懸濁液及び真菌細胞ろ液又は溶解物
第四の重要な例示の実施形態において、バイオ殺虫性組成物は本発明の１種以上の脂質、その機能的変異体又は機能的画分の水性懸濁液を、場合により、本明細書中に開示される本発明の脂質又は脂質画分を産生することができる１種以上の真菌細胞を含む１種以上の真菌細胞とともに含む。このような水性懸濁液は施用前に希釈される濃縮原料として提供され、又は、別のやり方では、そのまま施用する希釈溶液として提供されることができる。
【０２０５】
殺虫性組成物が注目の脂質を産生する完全細胞を含むときに、そのような細胞は種々のやり方で配合されうる。組成物は種々の不活性材料、例えば、無機鉱物（フィロシリケート、炭酸塩、硫酸塩、リン酸塩等）又は植物材料（粉末トウモロコシ穂軸、もみ殻、クルミ殻など）と混合することにより湿潤可能な粉末、粒剤又はダストとして使用できる。配合物はスプレッダー−スティッカーアジュアバント、安定剤、他の農薬添加剤又は界面活性剤を含むことができる。液体配合物は水性又は非水性であることができ、そしてフォーム、懸濁液、乳化可能な濃厚物などとして使用できる。成分はレオロジー剤、界面活性剤、乳化剤、分散剤又はポリマーを含むことができる。
【０２０６】
又は、新規の殺虫性脂質はインビトロでの天然又は組み換え発現系により調製され、そして続いて行う農地施用のために単離されうる。このような脂質又は脂質画分は、活性殺生物製剤に配合される前に、粗製の細胞溶解物、懸濁液、コロイドなどであっても、又は、純粋化され、精製され、緩衝液処理され及び／又はさらに加工されていてもよい。同様に、特定の環境下に、脂質を産生する培養物から脂質又は胞子を単離し、そしてこのような脂質又は胞子の溶液、懸濁液又はコロイド調製物を活性バイオ殺虫性組成物として施用することが望ましいであろう。
【０２０７】
多機能性配合物
特定の実施形態において、複数昆虫種の防除が望まれているなどの場合に、本明細書中に記載される殺虫剤配合物は、また、１種以上の化学農薬（例えば、化学農薬、殺線虫剤、殺真菌剤、殺ウイルス剤、殺微生物剤、抗アメーバ剤、殺虫剤など）、及び／又は、本明細書中に特定される殺虫性脂質又は脂質画分と同一又は異なる殺虫活性又は殺虫特異性を有する１種以上の脂質又は脂質画分を含むこともできる。殺虫脂質又は脂質画分は、また、肥料、除草剤、凍結防止剤、界面活性剤、洗浄剤、殺虫石鹸、休眠油、ポリマー及び／又は配合物の単一施用の後の標的領域の長期間投与を可能にする徐放性又は生分解性キャリア配合物などの他の処理剤と組み合わせて使用することができる。同様に、配合物は食用「餌」中に調製され、又は、殺虫性配合物の標的昆虫による摂食又は摂取を可能にする昆虫「トラップ」とすることができる。
本発明の殺虫剤組成物は、また、単独で、又は、１種以上の追加の殺虫剤、農薬、化学物質、肥料又は他の化合物と組み合わせて、環境サイトに、連続又は同時施用で使用されうる。
【０２０８】
真菌を含む組成物
生物学的防除剤としての使用のために、組成物中に存在する場合には、本発明の昆虫病原性真菌は再生生存可能な形態とすべきである。用語「再生生存可能」は、本明細書中に使用されるときに、真菌の菌糸体及び胞子を含む。例えば、ほとんどの目的で、真菌株は望ましくは、胞子（分生子又は分芽胞子）の形態で組成物中に取り込まれる。胞子は本明細書中に記載されるすべての真菌株から得ることができ、そして既知の技術を用いて生産できる。本発明の１種以上の脂質、その機能的変異体又は機能的画分を、場合により、本明細書中に記載される真菌株から得られる１種以上の胞子を含む１種以上の真菌細胞とともに含む組成物は本発明のさらなる態様を形成する。組成物中の真菌胞子の濃度は組成物が置かれようとする用途によるであろう。例示の濃度範囲は約１  ｘ  １０６〜１  ｘ  １０１２  胞子／ｍｌ、好ましくは１  ｘ  １０７  〜２  ｘ  １０１０、そして最も好ましくは１  ｘ  １０７  〜１  ｘ  １０８  胞子／ｍｌである。
【０２０９】
理論上、１感染単位は宿主を感染するのに十分であるはずだが、実際の状況では、最小数の感染単位が感染を開始するのに要求される。化学農薬で正式に使用されている致死量（ＬＤ）の概念は、昆虫病原活性の特定の要素が昆虫病原性真菌による植物又はその周囲のコロニー形成に頼る微生物農薬では不適当である。感染量  （ＩＤ）又は感染濃度  （ＩＣ）の概念はより正確又は応用可能である。ＩＤ又はＩＣは、感染を開始するのに必要な感染単位の実際数、又は、病原に暴露されて死亡させる感染単位の数を指す。それゆえ、病原に対して農地又は温室で施用される感染単位数は防除の程度に影響を及ぼすであろう。害虫の良好な防除性を得るために、適切な場所に、適切な時に、所望の濃度の抗植物病原性真菌を施用することが重要であり、このことは「感染しきい値」として知られている。
【０２１０】
施用のために配合された組成物中の真菌胞子の濃度が貯蔵などのために配合された組成物中の濃度よりも低いことができることは明らかであろう。出願人は、本明細書中に記載される昆虫病原性真菌を用いて、約１Ｌ／ヘクタールの割合で施用したときに、感染しきい値は約１０７  胞子／ｍｌスプレイ可能溶液で起こるものと決定した。したがって、１つの例において、施用のために配合される組成物は、好ましくは、少なくとも約１０７  胞子／ｍｌの濃度を有するであろう。別の例において、貯蔵のために配合される組成物  （例えば、施用に適する組成物への配合が可能な湿潤可能な粉末などの組成物）は、好ましくは、約１０１０  胞子／グラムの濃度を有するであろう。貯蔵のために配合され、そして施用に適する組成物への配合を行うための組成物の胞子濃度は、施用のための組成物が感染しきい値に到達して施用されうるために十分な濃度となるのに十分でなければならないことは明らかであろう。
【０２１１】
特定の実施形態において、組成物は、約２週間を超え、好ましくは約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月を超え、より好ましくは約６ヶ月を超える期間にわたって、殺虫効力（例えば、１種以上の脂質の殺虫効力）を支持することができる安定な組成物である。本明細書中に記載されるとおりの昆虫病原性真菌などの１種以上の昆虫病原を利用する実施形態での使用に適するように、組成物は、好ましくは、約６ヶ月を超える期間にわたって、昆虫病原の再生生存可能性又は昆虫病原効力を支持することができる。
【０２１２】
当該技術分野でよく知られた従来の固体基材及び液体発酵技術を用いて、本発明の殺虫性脂質は、生物学的防除剤としての使用を可能とするのに十分な量で製造されうる。例えば、本発明の脂質及び脂質画分はこれらの成長技術を用いて十分な量で製造でき、そして例示の技術を実施例において本明細書中で示す。成長は、一般に、生物の成長に満足な任意の温度で好気条件下に行われる。例えば、ビューベリア・バシアナ（Ｂ．  ｂａｓｓｉａｎａ）では、好ましいのは１０〜３２℃の温度範囲、好ましくは２５〜３０℃、そして最も好ましくは２３℃である。成長培地のｐＨは若干酸性から中性であり、すなわち、約５．０〜７．０であり、そして最も好ましくは５．５である。インキュベーション時間は単離物が静的成長相に達するために十分な時間であり、２３℃でインキュベートしたときに約２１日であり、そして通常の光周期で起こるであろう。
【０２１３】
選択される株からの胞子は栄養膜、液体培養、コメ基材成長技術（ｒｉｃｅ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｇｒｏｗｉｎｇ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）を用いて農地施用のためにバルクで生産されうる。胞子は、従来のろ過又は沈降法（例えば、遠心分離）などの当該技術分野でよく知られた方法により収穫でき、又は、サイクロン装置を用いて乾燥した状態で収穫できる。胞子は即座に使用されるか、又は、再生生存可能である範囲で０〜６℃、好ましくは２℃にて貯蔵し、冷蔵しうる。しかしながら、本発明の組成物中に取り込まれないときに、収穫から２週間以内に使用することが一般に好ましい。
【０２１４】
同様に、必要なときには、ビューベリア・バシアナ（Ｂ．  ｂａｓｓｉａｎａ）  Ｋ４Ｂ３により産生される１種以上の脂質は、細胞溶解工程（例えば、細胞内脂質の場合）と組み合わせて、又は、組み合わせないで（例えば、成長培地中に分泌される脂質の場合）、分別、ろ過又は沈降技術（例えば、遠心分離）などにより、当該技術分野でよく知られた方法によりＢ．  ｂａｓｓｉａｎａ  Ｋ４Ｂ３から分離できる。
【０２１５】
本発明の組成物は、また、１種以上のキャリアを含むことができ、好ましくは１種以上の農業上許容されるキャリアを含むことができる。１つの実施形態において、農業上許容されるキャリアなどのキャリアは固体又は液体であることができる。ここで有用なキャリアとしては、農業用組成物を配合するために通常に使用されている任意の物質が挙げられる。
【０２１６】
１つの実施形態において、農業上許容されるキャリアは、フィラー、溶媒、賦形剤、界面活性剤、懸濁剤、スプレッダー／ステッカー（接着剤）、消泡剤、分散剤、湿潤剤、ドリフト低下剤、助剤、アジュバント又はそれらの混合物を含む群から選ばれることができる。
【０２１７】
本発明の組成物は、例えば、濃厚物、溶液、スプレー、エアロゾル、浸漬浴、ディップ、乳剤、湿潤可能な粉末、溶解性粉末、懸濁液濃厚物、ダスト、粒剤、水分散性粒剤、マイクロカプセル、ペースト、ゲル及びその他の十分に確立された手順による配合物タイプとして配合されうる。
【０２１８】
これらの手順はフィラー、溶媒、賦形剤、界面活性剤、懸濁剤、スプレッダー／ステッカー（接着剤）、消泡剤、分散剤、湿潤剤、ドリフト低下剤、助剤及びアジュバントなどの農業上許容されるキャリア物質とともに、活性成分を混合し及び／又はミリングすることを含む。１つの実施形態において、固体キャリアとしては、限定するわけではないが、鉱物土、例えば、ケイ酸、シリカゲル、ケイ酸塩、タルク、カオリン、アタパルガスクレー、石灰石、石灰、チョーク、赤土、黄土、クレー、ドロマイト、珪藻土、アルミナ硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、酸化マグネシウム、粉砕プラスチック、肥料、例えば、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素、及び、植物製品、例えば、穀物粉、樹皮粉、木粉、堅果殻粉、セルロース粉末などが挙げられる。粒剤のための固体キャリアとしては下記のものが好ましい：破砕もしくは分別天然岩、例えば、方解石、大理石、軽石、セピオライト及びドロマイト、無機又は有機粉の合成顆粒、有機材料の顆粒、例えば、おが屑、ココナッツ殻、トウモロコシ穂軸、トウモロコシ殻又はタバコ茎、珪藻土、リン酸三カルシウム、コルク粉又は吸収性カーボンブラック、水溶性ポリマー、樹脂、ワックス又は固体肥料が挙げられる。このような固体組成物は、所望ならば、１種以上の適合性湿潤剤、分散剤、乳化剤又は着色剤を含むことができ、それが固体であるときには、希釈剤として作用することもできる。
【０２１９】
１つの実施形態において、キャリアは、また、液体であることができ、例えば、水、アルコール、特にブタノール又はグリコール、ならびに、そのエーテル又はエステル、特に、メチルグリコールアセテート、ケトン、特に、アセトン、シクロヘキサノン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン又はイソホロン、パラフィン系又は芳香族炭化水素、特にキシレン又はアルキルナフタレンなどの石油画分、鉱油又は植物油、脂肪族塩素化炭化水素、特にトリクロロエタン又は塩化メチレン、芳香族塩素化炭化水素、特にクロロベンゼン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド又はＮ−メチルピロリドンなどの水溶性又は強極性溶媒、液化ガスなど、あるいは、それらの混合物が挙げられる。
【０２２０】
１つの実施形態において、界面活性剤としては、非イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤及び／又は両性界面活性剤が挙げられ、そしてスプレイの間に集合体が溶液中に残ることができる能力を向上させる。
【０２２１】
スプレッダー／スティッカーは本発明の組成物が植物表面に付着することができる能力を向上させる。界面活性剤、スプレッダー／スティッカーの例としては、限定するわけではないが、Ｔｗｅｅｎ及びＴｒｉｔｏｎ  （Ｒｈｏｍ  ａｎｄ  Ｈａｓｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ）、Ｄｅｅｐ  Ｆｒｉｅｄ（商標）、Ｆｏｒｔｕｎｅ（登録商標）、Ｐｕｌｓｅ，  Ｃ．  Ｄａｘｏｉｌ（登録商標）、Ｃｏｄａｃｉｄｅ  ｏｉｌ（登録商標）、Ｄ−Ｃ．  Ｔａｔｅ（登録商標）、Ｓｕｐａｍｅｔ  Ｏｉｌ，  Ｂｏｎｄ（登録商標）、Ｐｅｎｅｔｒａｎｔ，  Ｇｌｏｗｅｌｔ（登録商標）及びＦｒｅｅｗａｙ，  Ｃｉｔｏｗｅｔｔ（登録商標）、Ｆｏｒｔｕｎｅ  Ｐｌｕｓ（商標）、Ｆｏｒｔｕｎｅ  Ｐｌｕｓ  Ｌｉｔｅ，  Ｆｒｕｉｍｅｃ，  Ｆｒｕｉｍｅｃ  ｌｉｔｅ，  リグニンスルホン酸、フェノールスルホン酸、ナフタレンスルホン酸及びジブチルナフタレンスルホン酸などの芳香族スルホン酸及び脂肪酸のアルカリ金属、アルカリ土類金属及び及びアンモニウム塩、アルキル及びアルキルアリールスルホネート、及び、アルキル、ラウリルエーテル及び脂肪族アルコールスルフェート、及び、硫酸化ヘキサデカノール、ヘプタデカノール及びオクタデカノールの塩、脂肪族アルコールグリコールエーテルの塩、スルホン化ナフタレン及びナフタレン誘導体のホルムアルデヒドとの縮合生成物、ナフタレンもしくはナフタレンスルホン酸とフェノール及びホルムアルデヒドとの縮合生成物、ポリオキシエチレンオクタフェノールエーテル、エトキシル化イソオクチルフェノール、エトキシル化オクチルフェノール及びエトキシル化ノニルフェノール、アルキルフェノールポリグリコールエーテル、トリブチルフェニルポリグリコールエーテル、アルキルアリールポリエーテルアルコール、イソトリデシルアルコール、脂肪族アルコールエチレンオキシド縮合物、エトキシル化ヒマシ油、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、エトキシル化ポリオキシプロピレン、ラウリルアルコールポリグリコールエーテルアセタール、ソルビトールエステル、リグニン−スルフィット廃液及びメチルセルロースが挙げられる。包含されることが選択された場合には、Ｔｗｅｅｎなどの１種以上の農業用界面活性剤は望ましくは既知の手順により組成物中に包含される。
【０２２２】
湿潤剤は組成物における水の表面張力を低減し、このようにして、所与の量の組成物が施用される表面積を増加させる。湿潤剤の例としては、限定するわけではないが、ポリアクリル酸の塩、リグノスルホン酸の塩、フェノールスルホン酸又はナフタレンスルホン酸の塩、脂肪族アルコール又は脂肪酸又は脂肪酸エステル又は脂肪族アミンとエチレンオキシドの重縮合物、置換フェノール（特に、アルキルフェノール又はアリールフェノール）、スルホコハク酸エステルの塩、タウリン誘導体（特に、アルキルタウレート）、アルコールのリン酸エステル又はエチレンオキシドとフェノールとの重縮合物のリン酸エステル、脂肪酸とポリオールのエステル、又は、上記化合物の硫酸、スルホン酸又はリン酸官能性誘導体が挙げられる。
【０２２３】
１つの実施形態において、本発明の化合物又は組成物の施用の好ましい方法は、ハンドガン又はエアブラストにより希釈もしくは濃厚溶液をスプレイすることである。
【０２２４】
上記の通り、本発明の組成物は単独で使用されても又は１種以上の他の農業用薬剤と組み合わせて使用してもよく、その農業用薬剤としては、農薬、殺虫剤、殺ダニ剤、殺真菌剤、殺細菌剤（ただし、このような殺真菌剤又は殺細菌剤は組成物中に存在するいかなる真菌又は細菌に対しても有害でなく又は毒性がない）、除草剤、抗生物質、抗微生物剤、殺線虫剤、殺鼠剤、昆虫病原物質、フェロモン、誘引剤、植物生長調節剤、植物ホルモン、昆虫成長調節剤、化学不妊剤、微生物防除剤、忌避剤、ウイルス、接触刺激物質（ｐｈａｇｏｓｔｉｍｕｌｅｎｔｓ）、植物栄養素、植物肥料及び生物学的防除剤が挙げられる。他の農業用薬剤と組み合わせて使用されるときに、２種以上の薬剤の投与は別々であっても、同時であっても又は順次であってもよい。これらの農業用薬剤の具体的な例は当業者に知られており、そして多くは容易に商業的に入手可能である。
【０２２５】
植物栄養素の例としては、限定するわけではないが、窒素、マグネシウム、カルシウム、ホウ素、カリウム、銅、鉄、リン、マンガン、モリブデン、コバルト、ホウ素、銅、ケイ素、セレン、ニッケル、アルミニウム、クロム及び亜鉛が挙げられる。
【０２２６】
抗生物質の例としては、限定するわけではないが、オキシテトラサイクリン及びストレプトマイシンが挙げられる。
【０２２７】
殺真菌剤の例としては、限定するわけではないが、下記のクラスの真菌剤が挙げられる：  カルボキサミド、ベンズイミダゾール、トリアゾール、ヒドロキシピリジン、ジカルボキサミド、フェニルアミド、チアジアゾール、カルバメート、シアノ−オキシム、桂皮酸誘導体、モルホリン、イミダゾール、β−メトキシアクリレート及びピリジン／ピリミジンが挙げられる。
【０２２８】
殺真菌剤のさらなる例としては、限定するわけではないが、天然の殺真菌剤、有機殺真菌剤、硫黄系殺真菌剤、銅／カルシウム殺真菌剤及び植物宿主防御のエリシターが挙げられる。
【０２２９】
天然殺真菌剤の例としては、限定するわけではないが、全乳、乳清、脂肪酸又はエステル化脂肪酸が挙げられる。
【０２３０】
有機殺真菌剤の例としては、限定するわけではないが、生物防除剤、天然物、エリシター（いくつかはまた、天然物として分類される場合がある）、及び、硫黄及び銅殺真菌剤（制限使用に限る）などの有機認証標準に合格する任意の殺真菌剤が挙げられる。
【０２３１】
硫黄系殺真菌剤の例はＫｕｍｕｌｕｓ（商標）ＤＦ  （ＢＡＳＦ，  ドイツ）である。
【０２３２】
銅殺真菌剤の例はＫｏｃｉｄｅ（登録商標）  ２０００  ＤＦ  （Ｇｒｉｆｆｉｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，  ＵＳＡ）である。
【０２３３】
エリシターの例としては、限定するわけではないが、キトサン、Ｂｉｏｎ（商標）ＢＡＢＡ  （ＤＬ−３−アミノ−ｎ−ブタン酸，  β−アミノ酪酸）及びＭｉｌｓａｎａ（商標）（Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｆａｒｍ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  Ｉｎｃ．，  ＵＳＡ）が挙げられる。
【０２３４】
幾つかの実施形態において、非有機殺真菌剤は用いられてよい。非有機殺真菌剤の例としては、限定するわけではないが、Ｂｒａｖｏ（商標）（ウリ科植物上でＰＭの防除）；  Ｓｕｐｅｒｓｈｉｅｌｄ（商標）  （Ｙａｔｅｓ，  ＮＺ）  （バラの上でのボトリチス病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）及びＰＭの防除）；  Ｔｏｐａｓ（登録商標）  ２００ＥＷ  （ブドウ及びウリ科植物上でのＰＭの防除）；  Ｆｌｉｎｔ（商標）（リンゴ及びウリ科植物上でのＰＭの防除）、Ａｍｉｓｔａｒ（登録商標）  ＷＧ  （穀草類上でのサビ病及びＰＭ  の防除）及びＣａｐｔａｎ（商標），  Ｄｉｔｈａｎｅ（商標），  Ｅｕｐａｒｅｎ（商標），  Ｒｏｖｒａｌ（商標），  Ｓｃａｌａ（商標），  Ｓｈｉｒｌａｎ（商標），  Ｓｗｉｔｃｈ（商標）及びＴｅｌｄｏｒ（商標）  （ブドウ上でのボトリチス病の防除）が挙げられる。
【０２３５】
農薬の例としては、限定するわけではないが、アゾキシストロビン、ビテルタノール、カルボキシン、Ｃｕ２Ｏ、シモキサニル、シプロコナゾール、シプロジニル、ジクロフルアミド（ｄｉｃｈｌｏｆｌｕａｍｉｄ）、ジフェノコナゾール、ジニコナゾール、エポキシコナゾール、フェンピクロニル、フルジオキソニル、フルキコナゾール（ｆｌｕｑｕｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、フルシラゾール、フルトリアホール、フララキシル、グアザチン、ヘキサコナゾール、ヒメキサゾール、イマザリル、イミベンゾコナゾール（ｉｍｉｂｅｎｃｏｎａｚｏｌｅ）、イプコナゾール、クレソキシムメチル、マンコゼブ、メタラキシル、Ｒ−メタラキシル、メトコナゾール、オキサジキシル、ペルフラゾエート（ｐｅｆｕｒａｚｏａｔｅ）、ペンコナゾール、ペンシクロン、プロクロラズ、プロピコナゾール、ピロキロン（ｐｙｒｏｑｕｉｌｏｎｅ）、ＳＳＦ−１０９、スピロキサミン（ｓｐｉｒｏｘａｍｉｎ）、テブコナゾール、チアベンダゾール、トリフルアミド（ｔｏｌｉｆｌｕａｍｉｄ）、トリアゾキシド、トリアジメホン、トリアジメノール、トリフルミゾール、トリチコナゾール及びウニコナゾールが挙げられる。
【０２３６】
本明細書中に記載される真菌株以外の生物学的防除剤の例はウロクラジウム・オウデマンシイ（Ｕｌｏｃｌａｄｉｕｍ  ｏｕｄｅｍａｎｓｉｉ）を含むＢｏｔｒｙＺｅｎ（商標）  生物学的防除剤である。
【０２３７】
組成物は、また、活性成分を向上させるために使用される安定剤及び浸透剤、及び、胞子活力、発芽及び生存性を改良するためにいわゆる「ストレス」添加剤（‘ｓｔｒｅｓｓｉｎｇ’  ａｄｄｉｔｉｖｅｓ）、例えば、塩化カリウム、グリセロール、塩化ナトリウム及びブドウ糖などの広範な添加剤を含むことができる。添加剤は、また、長期保存において微生物生存可能性を維持するのを助ける組成物を含むことができ、例えば、粗製コーン油及び外側に油及びワックスの混合物を含み、そして内側に水、アルギン酸ナトリウム及び分生子を含む、いわゆる逆相エマルジョンである。
【０２３８】
当業者に理解されるとおり、いかなる添加剤も生物学的防除剤の有効性を阻害しない量で存在することが重要である。
【０２３９】
キャリア、防腐剤、界面活性剤、湿潤剤、スプレッダー及び栄養素を含む適切な組成物の例は米国特許第５，７８０，０２３号明細書に提供されており、参照によりその全体を本明細書中に取り込む。
【０２４０】
出願人は、多くの一般的に使用されている殺真菌剤は、本明細書中に記載される昆虫病原性真菌が存在するときに、該真菌に悪影響を及ぼさないことも測定した。前記真菌を含む本発明の組成物は、それゆえ、このような殺真菌剤も含むことができる。又は、組成物は、別個にではあるが、防除プログラムの中でこのような殺真菌剤と組み合わせて使用してもよい。
【０２４１】
本発明は、また、本発明の１種以上の脂質もしくは脂質画分又はその１種以上の機能的変異体、及び、本明細書中に記載される１種以上の昆虫病原性真菌を含む組成物の製造方法も提供し、該方法は、再生生存可能な形態の前記昆虫病原性真菌を提供すること、及び、前記再生生存可能な形態の前記昆虫病原性真菌を、本発明の１種以上の脂質もしくは脂質画分又はその１種以上の機能的変異体及び少なくとも１種の農業上許容されるキャリアを合わせることを含む。
【０２４２】
組成物は多くの形態で調製されうる。１つの製剤は植物又はその周囲にダスト散布されうる粉末化形態の本発明の組成物を含む。さらなる形態において、組成物は、水などの希釈剤と混合されてスプレイ、フォーム、ゲル又はディップを形成し、そして既知の手順を用いて適切に施用されうる。現在のところ好ましい実施形態において、上記のとおりに配合される組成物は、約１ｇｍ／Ｌ、又は、１ｈａあたり１０００Ｌ以上の水で約１〜３ｋｇ／ｈａとして、加圧スプレイ器を用いて水と混合される。好ましくは、Ｄｅｅｐ  Ｆｒｉｅｄ（商標）又はＦｏｒｔｕｎｅ  Ｐｌｕｓ（商標）はＵＶ及び乾燥保護剤として約１ｍｌ／Ｌで組成物中に添加される。Ｌ．  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ，  Ｌ．  ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｍ又はＰ．  ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅｕｓを含む組成物は同様に施用されうる。
【０２４３】
注入、ラビング及びブラシ塗布などの他の施用方法のために配合される組成物も使用でき、確かに、いかなる公知技術の方法も使用できる。植物の周囲又は土壌、水などの環境への組成物の間接施用又は種子被覆は潜在的に可能性がある。
【０２４４】
上記のとおり、本明細書中に記載されるとおりの昆虫病原性真菌を含む組成物を含む、本発明の組成物が有効な生物学的防除剤となるように施用される濃度は最終使用、植物の生理学的条件、タイプ（昆虫種を含む）、病原感染の濃度及び程度、温度、季節、湿度、成長時期の段階及び植物の年齢、施用される従来の殺虫剤又は他の処理剤（殺真菌剤を含む）の数及びタイプ、及び、植物処理（例えば、葉の摘み取り及び剪定）によって変わるであろう。
【０２４５】
ダスト散布、スプリンクリング、土壌浸漬、土壌注入、種子被覆、苗被覆、葉面スプレイ散布、通気、ミスト散布、噴霧、燻蒸、エアロゾル化などを含む他の施用技術も実行可能であり、例えば、根又は茎の侵入を引き起こす昆虫などの特定の環境下で、あるいは、繊細な植物又は観葉植物への施用のために要求されることがある。これらの施用手順も当業者によく知られている。
【０２４６】
本発明の殺虫性組成物はある領域に防止又は予防的施用のために配合でき、そして特定の環境下に、害虫、家畜、動物用床敷に、又は、農機具、納屋、居住地又は農業もしくは産業設備の中及びその付近などに施用されうる。
【０２４７】
環境、全身、局所又は葉面施用のために使用される殺虫性組成物の濃度は、特定の配合物の性質、施用手段、環境条件及び殺生物活性によって広く変わるであろう。通常、バイオ殺虫性組成物は少なくとも約１質量％の濃度で施用される配合物中に存在し、そして約９９質量％まで（その値を含む）の量であることができる。脂質組成物の乾燥配合物は約１〜約９９質量％又はそれ以上の脂質又は脂質画分組成物であることができ、一方、液体配合物は約１〜約９９質量％又はそれ以上のの活性成分を含むことができる。このように、様々な配合物は調製可能であり、例えば、約５〜約９５質量％又はそれ以上の殺虫性脂質を含む配合物であり、例えば、約１０〜約９０質量％又はそれ以上の殺虫性脂質を含む配合物である。自然に、約１５〜約８５質量％又はそれ以上の殺虫性脂質を含む組成物及び約２０〜約８０質量％又はそれ以上の殺虫性脂質を含む配合物も本開示の範囲内に該当とするものと考えられる。
【０２４８】
殺虫性脂質を含む真菌完全細胞が含まれる組成物の場合には、調製物は、一般に、約１０４〜約１０８  細胞／ｍｇで含むが、特定の実施形態では、約１０２〜約１０４  細胞／ｍｇを含む配合物を使用することが望ましいことがあり、又は、より濃厚な配合物が望ましいときには、約１０８〜約１０１０又は１０１１  細胞／ｍｇを含む組成物も配合されうる。あるいは、約１０１２  〜１０１３  細胞／ｍｇ相当の活性脂質を含む細胞ペースト、胞子濃厚物、又は、脂質もしくは脂質画分懸濁液濃厚物は調製でき、このような濃厚物は施用前に希釈されうる。
【０２４９】
上記の殺虫性配合物は、必要に応じて１回以上の施用で特定の植物又は標的領域に投与でき、１ヘクタール当たりの典型的な農地施用割合は約５０  ｇ／ヘクタール〜約５００  ｇ／ヘクタールの活性成分の大きさの範囲であり、あるいは、約５００  ｇ／ヘクタール〜約１０００  ｇ／ヘクタールは使用されうる。特定の場合には、殺虫性配合物を約１０００  ｇ／ヘクタール〜約５０００  ｇ／ヘクタール又はそれ以上の活性成分の施用割合で標的領域に施用することがさらに望ましいであろう。実際、約５０  ｇ活性脂質／ヘクタール〜約１０，０００  ｇ／ヘクタールの範囲のすべての施用割合はこのような殺虫性配合物を用いて標的害虫を管理し、防除し、そして殺生するのに有用であると考えられる。このように、約１００  ｇ／ヘクタール、約２００  ｇ／ヘクタール、約３００  ｇ／ヘクタール、約４００  ｇ／ヘクタール、約５００  ｇ／ヘクタール、約６００  ｇ／ヘクタール、約７００  ｇ／ヘクタール、約８００  ｇ／ヘクタール、約９００  ｇ／ヘクタール、約１  ｋｇ／ヘクタール、約１．１  ｋｇ／ヘクタール、約１．２  ｋｇ／ヘクタール、約１．３  ｋｇ／ヘクタール、約１．４  ｋｇ／ヘクタール、約１．５  ｋｇ／ヘクタール、約１．６  ｋｇ／ヘクタール、約１．７  ｋｇ／ヘクタール、約１．８  ｋｇ／ヘクタール、約１．９  ｋｇ／ヘクタール、約２．０  ｋｇ／ヘクタール、約２．５  ｋｇ／ヘクタール、約３．０  ｋｇ／ヘクタール、約３．５  ｋｇ／ヘクタール、約４．０  ｋｇ／ヘクタール、約４．５  ｋｇ／ヘクタール、約６．０  ｋｇ／ヘクタール、約７．０  ｋｇ／ヘクタール、約８．０  ｋｇ／ヘクタール、約８．５  ｋｇ／ヘクタール、約９．０  ｋｇ／ヘクタール、さらには、約１０．０  ｋｇ／ヘクタール（その値を含む）又はそれ以上の活性脂質の割合は、上記の農薬配合物の特定の農業、産業及び家庭用施用で使用されうる。
【０２５０】
例えば、特定の用途では、本明細書中に記載されるとおりの真菌を含む組成物は約１  ｘ  １０１０  〜約１  ｘ  １０１５  胞子／ヘクタール、好ましくは約１  ｘ  １０１２  〜約１  ｘ  １０１４  胞子／ヘクタール、より好ましくは約５  ｘ  １０１２  〜約ｌ  ｘ  ｌ０１４  胞子／ヘクタール、より好ましくは、約１〜３  ｘ  １０１３  胞子／ヘクタールの割合で施用されうる。
【０２５１】
さらなる態様において、本発明は、本明細書中に記載されるとおりの脂質又は脂質画分を植物又はその周囲に施用することを含む、１種以上の植物病原性昆虫の防除方法を提供する。
【０２５２】
１つの実施形態において、施用は本明細書中に例示されるとおりの１種以上の脂質又は脂質画分を、本明細書中に記載されるとおりの１種以上の昆虫病原性真菌とともに行う。
【０２５３】
好ましくは、前記１種以上の他の真菌はビューベリア・バシアナ（Ｂ．  ｂａｓｓｉａｎａ）  Ｋ４Ｂ３  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  Ｖ０８／０２５８５５）又はその特定的特徴を有する株、レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株  Ｋ４Ｖ１  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０５／４４５９３）  又はその特定的特徴を有する株、レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株  Ｋ４Ｖ２  （ＮＭＩＡ  登録番号  Ｎｏ．  ＮＭ０５／４４５９４）  又はその特定的特徴を有する株、レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）株Ｋ４Ｖ４  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０６／００００７）  又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ１  （ＮＭＩＡ  登録番号  Ｎｏ．  ＮＭ０５／４４５９５）  又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ２  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０６／０００１０）  又はその特定的特徴を有する株、レカニシリウム・ロンギスポラム（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｍ）株ＫＴ４Ｌ１  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０６／００００９）  又はその特定的特徴を有する株、及び、パエシロミセス・フモソロセウス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅｕｓ）株Ｋ４Ｐ１  （ＮＭＩＡ  登録番号Ｎｏ．  ＮＭ０６／００００８）  又はその特定的特徴を有する株からなる群より選ばれる。
【０２５４】
また、本発明の複数種の脂質は、１種以上の植物病原性昆虫種に対して活性を有する昆虫病原性真菌の複数の株との組み合わせで又はそのような組み合わせでなく、防除方法において使用されうる。
【０２５５】
若実生苗は、通常、最も害虫に損傷を受けやすい。それゆえ、本発明の組成物の施用は新たに植え付けた栽培植物に対して発芽時に施用することと同様に発芽前に施用することが考えられる。
【０２５６】
作物サイクルにおいて同時又は異なる時の繰り返しの施用も考えられる。本発明の殺虫性脂質、本発明の殺虫性脂質を含む組成物は季節の早い時期又は遅い時期のいずれで施用してもよい。これは、開花に時期にわたり、又は、結実の間であってもよい。本発明の殺虫性脂質、又は、本発明の殺虫性脂質を含む組成物は、また、収穫の直前、又は、収穫の後に、施用されてよく、それにより、壊死又は老化葉、実、茎、機械収穫された茎などに急速にコロニー形成し、昆虫のコロニー形成を防止することができる。本発明の殺虫性脂質、又は、本発明の組成物は、また、冬場に休眠植物に施用して、休眠組織上の昆虫成長を遅らせることもできる。
【０２５７】
施用はつぼみが開く前又は後、及び、収穫の前及び後の時に行うことができる。しかしながら、処理は好ましくは開花及び収穫の間に行う。効力を上げるために、本発明の殺虫性脂質又は本発明の組成物の複数施用  （例えば、開花から結実までの段階にわたる２〜６回の施用）は好ましい。
【０２５８】
本発明の殺虫性脂質又は組成物の再施用は雨の後とすることが考えられるべきである。昆虫感染予測モデル又は感染分析データを用いて、ＢＣＡの施用は昆虫感染危険時期を考慮したタイミングとすることもできる。
【０２５９】
種々の例示の実施形態において、本発明の脂質又は脂質画分及びこのような脂質又は脂質画分を含む組成物は殺虫効力を達成することができる投与割合で施用したときに、植物又は植物周囲に対して悪影響を及ぼさない。
【０２６０】
現在のところ好ましい実施形態において、本発明の殺虫性脂質又はそれを含む組成物は、例えば、加圧スプレイ器を用いて、上記のとおりに、溶液で施用される。植物部分は流れる直前まで軽くスプレイされるべきである。施用は植物及び／又はその周囲の任意の部分に行われてよく、例えば、全植物被、花及び結実が集中する植物被の領域に、又は、植物の茎及び／又は土壌、水、又は、根、塊茎などに隣接する又はその周囲の成長培地などに行われてよい。
【０２６１】
好ましくは、組成物は安定である。本明細書中に記載されるときに、用語「安定」は数週間、好ましくは約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、好ましくは約５ヶ月、より好ましくは約６ヶ月又はそれ以上の間、殺虫効力を支持することができる組成物を指す。好ましくは、組成物は冷蔵又は冷凍などの特殊な条件下での貯蔵の必要性なしに安定である。
【０２６２】
施用される組成物は植物病原性昆虫を防除する。植物病原性昆虫は多くの収穫前及び収穫後の疾患の原因となり、その疾患は植物部分を攻撃し、そして成長速度、開花、結実、生産を減じ、そして影響を受けた植物の死をもたらすことができる。本明細書中に記載されるときに、植物病原性昆虫としては、それ自体が植物病原である昆虫、及び、植物病原性真菌及び細菌などの、他の植物病原のための媒介動物として作用しうる昆虫が挙げられる。他の植物病原のための媒介動物として作用する宿主昆虫を防除することにより、植物疾患の発生及び／又は重症度を最小限とすることができることが理解されるであろう。
【０２６３】
ニュージーランドで生育される多くの重要な園芸作物に影響を与える主要な植物病原性昆虫の例を下記の表１に示す。
【０２６４】
【表１】
2014508803.tif 000003
【０２６５】
本発明の脂質及び脂質画分、組成物及び方法を用いた、上記の作物に含まれる半翅目（Ｈｅｍｉｐｔｅｒａ）、例えば、コナジラミ（ｗｈｉｔｅｆｌｙ）、アザミウマ（ｔｈｒｉｐｓ）、アブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）及びキャタピラ（ｃａｔｅｒｐｉｌｌａｒｓ）の防除は特に考えられる。本発明の脂質又は脂質画分を、単独で又は１種以上のビューベリア・バシアナ（Ｂ．  ｂａｓｓｉａｎａ）真菌株、又は、レカニシリウム・ムスカリウム（Ｌ．  ｍｕｓｃａｒｉｕｍ）もしくはパエシロミセス・フモソロセウス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅｕｓ）とともに用いたバロアダニ（Ｖａｒｒｏａ  ｍｉｔｅ）の防除、及び、それを含む本発明の組成物を用いたバロアダニ（Ｖａｒｒｏａ  ｍｉｔｅ）の防除も特に考えられる。
【０２６６】
本発明の方法は、収穫前又は収穫後のいずれかに植物及び植物製品に特定の施用を施す。例えば、本発明の組成物は果実、野菜、切花及び種子を含む上記のタイプの貯蔵製品に施用されうる。適切な施用技術は上記の方法、特にスプレイ塗布を包含する。
【０２６７】
組成物は植物への直接施用とは対照的に土壌又は種子を処理し又は予備処理するために潜在的に使用されうる。組成物は、保護コーティング、ボックス及びラッパーなどの植物処理材料に用途を見いだすことができる。
【０２６８】
また、本発明の脂質又は本発明の組成物で直接的に処理された植物、植物製品、土壌及び種子が本発明に含まれる。
【０２６９】
本発明は上記の事柄からなり、構造も考えられ、下記は例のみを示し決してその範囲を限定しない。
【実施例】
【０２７０】
例１−昆虫防除のバイオアッセイ
本例は、種々の脂質又は脂質画分の殺虫効力を決定するための、しっかりしたバイオアッセイの開発を記載する。
標的昆虫アッセイは基準１）入手性、２）罹病性及び３）使用の容易さを用いて開発されそして評価された。
恒温室中でキャベツ植物上で育てた、標的昆虫であるモモアカアブラムシ（Ｍｙｚｕｓ  ｐｅｒｓｉｃａｅ）  （アカアブラムシ（ｇｒｅｅｎ  ｐｅａｃｈ  ａｐｈｉｄ）、カメムシ目（Ｈｅｍｉｐｔｅｒｄ））をすべての実験で用いた。脂質画分サンプルをアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）に接種するために、１％  水寒天プレートの表面上で、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ８０を葉と寒天との間の湿潤剤として用いてアブラムシをキャベツ葉片に移した。混合年齢のアブラムシ（Ａｐｈｉｄｓ）を、通常、３０〜５０／ペトリ皿で用いた。
ハンドヘルドのＰａａｓｃｈｅエアブラシをミクロ体積を取るように変更し、３００  μｌの試験又は対照溶液を噴霧化するために用いた。次いで、アブラムシで処理したプレートを２０℃に１２時間明、１２時間暗に維持し、毎日チェックした。死んだものは取り出した。接種されたアブラムシ計数はスプレイ散布後に直接的に行い、新生アブラムシを％死亡率に含めることを避けたが、接種の間に新生若虫を除去するための努力はしなかった。
【０２７１】
例２−殺虫性脂質の特定
本例はビューベリア・バシアナＫ４Ｂ３からの殺虫性脂質画分のある範囲の特定及び調製を記載する。
【０２７２】
方法
サンプル
有機溶媒抽出したＫ４Ｂ３  菌糸体サンプルを供給しそしてその研究に用いた。
【０２７３】
分析ＴＬＣ
分析ＴＬＣを、Ｍａｃａｌａら（１９８３）により記載された溶媒系を用いて展開されるメルク（Ｍｅｒｃｋ）高性能薄層クロマトグラフィー（ＨＰＴＬＣ）プレートにて行った。プレートを、硫酸銅−リン酸中に浸漬し、そして１７０℃で１５〜３０分間加熱することにより可視化した。
【０２７４】
ＳＡＸ酸性／非酸性分別
Ｗａｔｅｒｓ  ＡｃｃｅｌｌＰｌｕｓ  ＱＭＡ固相抽出カートリッジを、酸性脂質の非酸性分からのアニオン交換分離のために用いた。カートリッジをクロロホルム−メタノール−０．８Ｍ酢酸ナトリウム（３０：６０：８）で最初に状態調節し、そしてその後、クロロホルム−メタノール−水  （３０：６０：８）で洗浄した。サンプルをその溶媒混合物中に装填し、その溶媒は、非保持分（非酸性分）を溶離するためにも用いた。保持された酸性脂質をクロロホルム−メタノール−０．８Ｍ酢酸ナトリウム（３０：６０：８）で溶離した。
【０２７５】
ＷＡＸ酸性／非酸性分別
非酸性分からの酸性脂質の大規模分離のために、上記の手順に従ったが、カラムは、クロロホルム−メタノール−０．８Ｍ酢酸ナトリウム（３０：６０：８）で状態調節されたＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ａ５０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）で自己充填（ｓｅｌｆ−ｐａｃｋｅｄ）されており、その後、クロロホルム−メタノール−水  （３０：６０：８）で平衡化した。
【０２７６】
順相クロマトグラフィー
クロロホルム中に自己充填したシリカゲル６０  （ＢＤＨ，  １２０メッシュ）カラムで順相クロマトグラフィーを行った。サンプルをクロロホルム中に装填し、そしてクロロホルム  （約７床体積）、クロロホルム−アセトン（９：１、約７床体積）及び、最後に、メタノール  （約７床体積）で溶離した。
【０２７７】
分取ＴＬＣ
クロロホルムで比２：１又は３：１で希釈されたクロロホルム−メタノール−酢酸−ギ酸−水（３５：１５：６：２：１）１を用いて展開される２０  ｘ  ２０  ｃｍ  シリカゲルプレート  （Ｍｅｒｃｋ，  ２  ｍｍ厚さ）にて分取ＴＬＣを行った。クロロホルム中のヨウ素の溶液中に、展開されたプレートの約１ｃｍの各垂直縁を浸漬することによりバンドを見いだす。その後、干渉領域をプレートから削り取り、そして分離された成分をメタノールでシリカゲルから溶離した。
【０２７８】
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＴＯＦ質量分析
Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ  Ｕｌｔｒａｆｌｅｘ  ＩＩＩ  ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＴＯＦを化合物の質量測定及びＭＳ／ＭＳ  フラグメンテーションに用いた。α−シアノ−ヒドロキシ桂皮酸をＭＡＬＤＩマトリックスとして用いた。サンプルをマトリックスと混合し、そしてＢｒｕｋｅｒ  Ａｎｃｈｏｒｃｈｉｐ  標的プレート上に配置した。Ｂｒｕｋｅｒペプチド検量ミックスを用いて検量を行った。
【０２７９】
ＮＭＲ
Ｖａｒｉａｎ  ５００  ＭＨｚ  ＮＭＲを用いて、順相クロマトグラフィーからのメタノール溶離画分である画分３の分析を行った。
【０２８０】
結果及び議論
遠心分離分別
出発材料を遠心分離した。遠心分離された粒子材料及びろ過された上層液をバイオアッセイにて試験した。すべてのバイオ活性は粒状材料中に含まれていることが判った。この材料は脂肪状コンシステンシーを有し、そして水中の可溶性が低かった。材料の顕微鏡分析は明確な画定又は特定構造を示さなかった。
【０２８１】
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を脂質の存在に関して行い、試験した。図１は展開されたＴＬＣプレートを示す。サンプルは脂質標準品と同様に移行した多くの成分を明らかに含んでいた。強脂肪酸成分は特に明らかである。
【０２８２】
酸性／非酸性分別
ＳＡＸ  ＳＰＥ  （強アニオン交換固相抽出）を用いて酸性及び非酸性画分に脂質を分離した。両方の画分をＴＬＣで操作し（図２）、そしてバイオアッセイにて試験した。結果は、非酸性分からの酸性分のわずかな不完全分離が達成されたが、非酸性画分において、より強い活性が明らかになったことを示した（図３）。
【０２８３】
順相クロマトグラフィー
非酸性サンプルを順相クロマトグラフィーを用いて極性によって分別した。６つの画分を回収し、ＴＬＣで操作し（図４）、そしてバイオアッセイにて試験した（図５）。画分１も接種２日後に活性を示したが、最も強い活性は画分５において見いだされた。このことは複数の化合物からのバイオ活性を示唆した。
【０２８４】
画分１はクロロホルムで溶離され、そして主に低い極性の成分を含んだが、画分５はメタノールで溶離され、高い割合の高度に極性の材料を含んだ。
【０２８５】
上記のとおりに調製されたサンプルは評価可能な量の酸性脂質を含んだ（図４）。それゆえ、交互のアニオン交換クロマトグラフィー媒体（ＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ）用いた新規の酸性／非酸性分別技術を実施し、本質的にすべて酸性である脂質を効果的に除去した（図６のレーン２により示すとおり）。
【０２８６】
新規順相クロマトグラフィー分別を行い、メタノールで溶離する画分に集中している、より小さい副次画分の集合体を回収した。１１の画分を回収しそしてＴＬＣを用いて分析した  （図６）。幾つかの画分（４〜５及び７〜１１）を合わせ、バイオアッセイにて試験した  （図７）。画分２及び４〜５は最も高いバイオ活性を示した。
【０２８７】
分取ＴＬＣ
活性化合物をさらに精製するために、分取ＴＬＣを行い、比較的に多量の各分離バンドの回収が可能であった。９つのバンドを分取ＴＬＣプレートから回収し、そして分析ＴＬＣにより分析し（図８）、良好な分別を示した。残念ながら、画分３はロータリーエバポレーションの間に失われた。
【０２８８】
８つの画分をバイオアッセイにて分析した（図９）。画分４及び５は最も高い活性を示し、次いで、画分２及び９であった。注目すべきことに、画分３はＴＬＣ中の強いバンドを示し、それは画分４及び５の少量成分としても存在しており、直接的なバイオアッセイデータがないにも係わらず、続いて行う分析で含まれていた。
【０２８９】
極性領域（以前の画分２〜５）での分離を最大化するのを最適化した条件で新規の分取ＴＬＣを行った。
新規の分離は６つの画分を提供した：  ２，  ３，  ４ｂ，  ５ａ，  ５ｂ  及び６  （これらの画分の番号付けは以前の分離と一貫している）。サンプルを、分析ＴＬＣを用いて試験し（図１０）、それは以前の分取ＴＬＣにおいて達成されたよりも良好な成分分離が達成されたことが明らかとなった。バイオアッセイの最も強い活性は画分３，  ４ｂ，  ５ａ及び５ｂで観測された（図１１）。これらの画分のバイオアッセイの結果は以前の結果と高度に一貫していた（図９）。
【０２９０】
質量分析
画分２，  ３，  ４ｂ，  ５ａ及び５ｂをＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  質量分析（ＭＳ）を用いて分析した（図１２）。注目のピークの数を観測し、そしてＭＳ／ＭＳ  （フラグメンテーション）分析のために選んだ  （表  ２）。
【０２９１】
【表２】
2014508803.tif 000004
【０２９２】
画分３はＴＬＣ及びＭＳにて最も純粋な化合物として示されたので、次いで行う調査のために第一の画分として選択した。さらに、この画分はバイオアッセイ分析に付されるときに最も低い絶対量の材料（質量基準）（他の画分の中で約５０％の量）を含んが、画分４ｂ，  ５ａ及び５ｂと同一のレベルでバイオ活性を示した。
【０２９３】
画分３のＮＭＲ分析は低分子量化合物の証拠を示した。実際に、低分子量範囲で、ＭＳ分析  （図  １３）はｍ／ｚ  ８６．０２及び１４６．９７で候補となるマスを示した。このため、画分３はバイオ活性の起因となる１種より多くの化合物を含むものと結論付けた。
【０２９４】
改良調製手順
活性化合物の特性の洞察により、化合物調製手順の改良のための初期的な提案が可能となった。この手順は実験室スケール（５０  ｍｌ）で応用され、そしてバイオアッセイにて試験された。この最適化された調製物の活性は非常に高いことが確認された。
【０２９５】
追加の分別
メタノール抽出されたサンプル中の脂肪残留物をバイオアッセイにより試験し、この固体画分が活性化合物を含むかどうかを確認した。アブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）に対して、Ｋ４Ｂ３−ＭｅＯＨサンプルからのこの固体画分が液体部分よりも活性であることが判った  （図１４）。このバイオアッセイは、また、ビューベリア・バシアナ（Ｂ．  ｂａｓｓｉａｎａ）  Ｋ４Ｂ３の別の培養物から菌糸をろ過した後にほとんど活性を示さなかった。
【０２９６】
Ｋ４Ｂ３菌糸体培養物からのクロロホルム抽出
クロロホルム抽出を用いて、他の画分から脂質を分離した。Ｋ４Ｂ３菌糸体培養物を生じた５０  ｍｌのバイオリアクターを遠心分離して菌糸体を回収し、それを均質化し、そして４０  ｍｌの１：２  メタノール：クロロホルムを用いてろ過した。９ｍｌの０．０２％  ＣａＣｌ２  を添加しそして混合した。相が分離したときに、上相を取り除き、そして残ったクロロホルムを室温にて一晩蒸発させた。１ｍｌのメタノールを用いて、乾燥した残留物を再懸濁させた。３００μＬのこの溶液をアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）に対してアッセイし  （図１５）、そして高度に活性であることを示した。
【０２９７】
ＨＰ２０サンプル
Ｋ４Ｂ３菌糸体培養物の培養物ろ液（ＨＰ２０サンプル）のメタノール抽出はアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）に対して活性を欠くが（図１６）、コナガ（ｄｉａｍｏｎｄｂａｃｋ  ｍｏｔｈ）の幼虫に対して活性であることが判った（図  １７）。ＨＰ２０サンプルは４〜５日のバイオアッセイにわたって葉に対する影響を及ぼし、このことはある量の植物毒性成分が存在しうることを示唆する。
【０２９８】
結論
これらの実験は、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）  Ｋ４Ｂ３などの糸状菌により産生される複数の活性殺虫性脂質が存在することを示唆する。改良された殺虫活性を含む、改良されたバイオ活性を有する脂質画分は本発明により提供される調製方法を用いて製造された。
【０２９９】
例３−昆虫防除のバイオアッセイ
本例は  様々な脂質又は脂質画分の殺虫効力を決定するために広い範囲のバイオアッセイの開発を記載する。幾つかの標的昆虫アッセイを基準１）入手性、２）罹病性及び３）使用の容易さを用いて開発しそして評価した。４つの昆虫系を試験する：  コナジラミ（ｗｈｉｔｅｆｌｉｅｓ）、コナガ（ｄｉａｍｏｎｄ  ｂａｃｋ  ｍｏｔｈ）、ゴミムシダマシ（ｍｅａｌｗｏｒｍ）及び蚊（ｍｏｓｑｕｉｔｏ）。
【０３００】
１．  コナジラミ若虫（Ｗｈｉｔｅｆｌｉｅｓ  ｎｙｍｐｈｓ）（半翅目（Ｈｅｍｉｐｔｅｒａ））
コナジラミは主要な標的種であり、現在、適切な防除剤がない。コナジラミ若虫はＢｉｏｆｏｒｃｅ  Ｌｔｄ  （Ａｕｃｋｌａｎｄ，  Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ）から得た。Ｋ４Ｂ３脂質画分のサンプル及び対照ブロス（培養液）を用いて、約１００匹の若虫群をポッタータワー（Ｐｏｔｔｅｒ  Ｔｏｗｅｒ）をとおして接種した。
【０３０１】
２．  ゴミムシダマシ（Ｍｅａｌｗｏｒｍ）  （チャイロコメノゴミムシダマシ（Ｔｅｎｅｂｒｉｏ  ｍｏｌｉｔｏｒ））幼虫（甲虫目（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ））
チャイロコメノゴミムシダマシの幼虫をバイオサプライヤから得た。１０の幼虫をＫ４Ｂ３脂質サンプル又は水対照物でスプレイし、そして２週間モニターした。
【０３０２】
３．  コナガ（Ｄｉａｍｏｎｄｂａｃｋ  ｍｏｔｈ）−ＤＢＭ  （Ｐｌｕｔｅｌｌａ  ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）  幼虫（鱗翅目（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ））
コナガ  は世界中でアブラナ属（ｂｒａｓｓｉｃａ）作物の主要害虫であり、そしてほとんどの防除化学品に対して耐性となった。培養物はＫ４Ｂ３脂質サンプルで試験するためにＬｉｎｃｏｌｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙから得られた。
【０３０３】
標準法はポッタータワー（Ｐｏｔｔｅｒ  Ｔｏｗｅｒ）のミニバージョンを用いる。ハンドヘルドＡ３２０エアブラシを脂質サンプル又は対照液を噴霧化するための微細体積をとるように変更する。０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ８０を用いて水寒天プレート（水＋１％寒天）の表面上に保持されたキャベツ葉上で幼虫（Ｌａｒｖａｅ）を維持する。すべてのサイズ（一齢〜前蛹）の５〜２０匹の幼虫を各実験で用いる。１つの試験において、幼虫を、また、溶液の液滴中に浸漬する。毒性が局所によるものか又接種によるものかを決定するために液滴供給を試みる。
【０３０４】
３８匹の二齢から六齢幼虫にＫ４Ｂ３脂質画分を接種し、そして１９匹に対照物を接種する。幼虫を接種後に２０℃で１６ｈＬ：８ｈＤに維持する。
【０３０５】
４．  蚊の幼虫
カレックス・ペルビリガンス（Ｃｕｌｅｘ  ｐｅｒｖｉｌｉｇａｎｓ）の幼虫を含む約１２．５ｍｌの水のボトルに様々な量のＫ４Ｂ３脂質画分を添加して、バイオアッセイを行う。幼虫は蛹化に近く、そして幾つかは実験の間に蛹化しうる。
【０３０６】
例４−ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）  Ｋ４Ｂ３  脂質の哺乳動物モデルにおける毒性
前書き
本例はＫ４Ｂ３  脂質の哺乳動物モデルにおける毒性の評価を記載する。
【０３０７】
方法
Ｋ４Ｂ３脂質画分を例２に上記したとおりに単離する。
ＯＥＣＤ  ガイドライン４２５  （急性経口毒性−  アップダウン手順）によりマウスに試験を行う。この材料は非常に毒性であることが期待されないので、経口挿管により２，０００  ｍｇ／ｋｇの単一用量レベルでの限界テストを選ぶ。この用量は、例外環境下を除いて、急性毒性の評価のためにＯＥＣＤにより推奨される最も高い量である。
単一の２，０００  ｍｇ／ｋｇ用量のＫ４Ｂ３脂質を経口挿管により５匹の雌のスイスマウスに下記のとおりに投与する。
【０３０８】
試験条件
約４ｐｍにマウスのうちの１匹から食料を断ち、その体重を測定する。翌朝、マウスを再び計量し、２，０００  ｍｇ／ｋｇの用量を提供するのに要求される  Ｋ４Ｂ３脂質の重量を計算する。この量を計量し、そして１５０  μｌの水で希釈する。全体積を強制飼養によりマウスに投与する。
【０３０９】
投与後に、マウスを食料へのアクセスを即座に許容する。化学物質の試験のためのＯＥＣＤガイドライン、修正ドラフトガイドライン４２５、２０００年１０月（ＯＥＣＤ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，  Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｄｒａｆｔ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ４２５，  Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２０００）に特定されているとおりに、投与後に６０分間集中的に、その後、投与当日及び以降の日をとおして幾つかの間隔で観測する。第一の投与の４８時間後に、再び２，０００  ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、第二のマウスにＫ４Ｂ４  ポリペプチドを投与する。第三、第四及び第五のマウスに、次々と４８時間間隔ですべて２，０００  ｍｇ／ｋｇで投与する。
【０３１０】
マウスを個々に水及び食料を自由にして収容する（投与前の一晩の絶食を除く）。マウス毎日観察し、そして体重を投与後の２週間測定する。体重を投与後の一日、１週及び２週間後に記録し、その後に、動物を二酸化炭素吸入により屠殺し、検死試験に付す。
【０３１１】
結果
結果はＫ４Ｂ３複合体の投与後の毒性効果がないことを示し、マウスは観察期間をとおして良好な健康状態を保持し、投与直後の摂食及び投与当日及び実験をとおしての通常の挙動により、毒性がないことを示す。
【０３１２】
体重
結果は実験をとおしての様々な時間間隔でのマウスの平均体重は変化していないことを示し、下記の表３に示すとおりである。
【０３１３】
【表３】
2014508803.tif 000005
【０３１４】
一晩の絶食の後に、マウスは、通常、平均で体重を２．４  グラム失う。食料へのアクセス後の翌日までにこの損失を大体取り戻し、投与後に回復する状況で、投与後の２週間の観測期間をとおしてマウスが体重を維持する状況において、毒性を示さない。
【０３１５】
検死後の発見
結果は検死時にマウスに異常が観察されないことを示し、そして下記の表４に示すとおりの結果はマウスの肝臓、腎臓、膵臓、心臓、肺及び腸（幽門から肛門まで）の重量は正常範囲内にあることを示し、毒性を示さない。
【０３１６】
【表４】
2014508803.tif 000006
【０３１７】
議論
結果は、２，０００  ｍｇ／ｋｇの用量でのマウスへのＫ４Ｂ３ポリペプチドの経口投与により、識別可能な悪影響を生じないことを示し、ここで、死亡に至らず、検死時に異常が報告されず、器官重量が正常範囲内にあり、そしてマウスの挙動は完全に正常であり、急性毒性が低いことが示される。
【０３１８】
このような結果は、Ｋ４Ｂ３脂質が低い急性毒性を示すことの指標となり、ＬＤ５０  は２，０００  ｍｇ／ｋｇ体重より大きい。このような結果はＫ４Ｂ３脂質がニュージーランド危険物質新生物体法（Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  Ｈａｚａｒｄｏｕｓ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｏｒｇａｎｉｓｍｓ  （ＨＳＮＯ）  Ａｃｔ  １９９６）の元で最も低い危険性カテゴリーに分類されることを示す。
【０３１９】
例５−アブラムシ（ＡＰＨＩＤＳ）及びコナガ（ＤＩＡＭＯＮＤＢＡＣＫ  ＭＯＴＨ）に対する毒性に関する真菌からの総脂質の評価
前書き
本例は種々の糸状菌からの脂質のアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）及びコナガ（ｄｉａｍｏｎｄｂａｃｋ  ｍｏｔｈ）に対する毒性の評価を記載する。
方法  
４種の真菌を用いて脂質抽出物を調製した。
１．  ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株ＡＭ２
２．  ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｆ４８０
３．  トリコデルマ菌種（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｐ．）単離物１３２８
４．  メタルヒジウム菌種（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ  ｓｐ．）
【０３２０】
すべての真菌を、１４０〜１６０  ｒｐｍで振とうしている１００  ｍｌのＰＤＢ中で室温にて約３日間成長させた。５０  ｍｌの真菌培養物を３０００  ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を捨て、そしてペレット化された菌糸体を２０  ｍｌの１：２  メタノール：クロロホルムに添加した。菌糸体を手動で均質化し、その後、ワットマンＮｏ．１ろ紙をとおしてろ過した。さらに２０  ｍ  １：２  メタノール：クロロホルムを用いてフィルターを洗浄した。９ｍｌの０．０２％  ＣａＣｌ２  を添加し、そして混合物を２時間又はそれ以上放置して分離させた。上層を捨て、そしてクロロホルム／脂質溶液を一晩放置して蒸発させた。乾燥したら、１  ｍｌ  ｏｆ  １００％メタノールを用いて脂質を再懸濁した。
【０３２１】
上記のとおりに調製したビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３からの脂質抽出物（５０  ｍｌ）も用いた。
【０３２２】
恒温室中でキャベツ植物上で飼育されたモモアカアブラムシ（Ｍｙｚｕｓ  ｐｅｒｓｉｃａｅ）（ｇｒｅｅｎ  ｐｅａｃｈ  ａｐｈｉｄ）又はコナガ（Ｄｉａｍｏｎｄｂａｃｋ  ｍｏｔｈ）の幼虫を用いた。混合齢のアブラムシ（Ａｐｈｉｄｓ）を、通常、３０〜５０／ペトリ皿で用いた。３〜５齢のＤＢＭ  幼虫を用いた。
【０３２３】
アブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）又は幼虫を抽出物で接種するために、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ８０を葉と寒天との間の湿潤剤として用いて、１％水寒天プレートの表面上のキャベツ葉片に昆虫を移した。
【０３２４】
ハンドヘルドＰａａｓｃｈｅエアブラシを、３００  μｌの試験液又は対照液を噴霧化するための微細体積をとるように変更する。次いで、昆虫で処理したプレートを２０℃で１２時間明所、１２時間暗所に維持し、そして毎日チェックした。死亡したものを取り除いた。接種されたアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）の計数をスプレイ後に直接的に行い、％死亡率に新生アブラムシを含むのを回避したが、接種の間に新生若虫を除去する努力を行わなかった。
【０３２５】
結果
一般に、５０  ｍｌのビューベリア（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ）及びメタルヒジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）培養物は約３  ｍｌ相当の湿潤菌糸を生じさせた。５０  ｍｌのトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）培養物は１５  ｍｌの湿潤菌糸相当物を生じさせた。
【０３２６】
ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株ＡＭ２，  Ｆ４８０及びＫ４Ｂ３から抽出された総脂質のバイオアッセイはこれらの脂質が極端に強力な殺虫活性を有することを示す。図１８で判るように、各株からの総脂質の施用により、わずか２１時間後にほぼ１００％死亡率となった。同様に、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３からの脂質画分４及び５は標的アブラムシで１００％死亡率を引き出した。
【０３２７】
これらの結果は、また、他の糸状菌からの総脂質でも観察された。ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）からの脂質と同様に、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）及びメタルヒジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）からの脂質は強力な殺虫活性を示す。図１９に示すとおり、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）及びビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３からの脂質に暴露されたアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）に対して１００％近くの死亡率がわずか２１時間後に観測され、同時点で、メタルヒジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）からの脂質に暴露されたアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）に対して５０％死亡率が観測された。ベースライン死亡率はメタノールネガティブコントロールにより得られた。
【０３２８】
このバイオアッセイを合計で３日間続けた。モモアカアブラムシ（Ｍｙｚｕｓ  ｐｅｒｓｉｃａｅ）（ｇｒｅｅｎ  ｐｅａｃｈ  ａｐｈｉｄ）の％累積死亡率を図２０に示す。このデータはこれらの脂質により示される殺虫活性が急速に作用し、より長い時間フレームにわたってさらなる殺生を行うことを示唆する。
【０３２９】
コナガ（Ｄｉａｍｏｎｄｂａｃｋ  ｍｏｔｈ）の幼虫に対するビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３  （Ｂｅａｕｖｅｒｉａ）、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）及びメタルヒジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）からの種々の脂質画分のバイオアッセイは、これらのうちの特定の脂質が、アブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）に対するよりも低い有効性であるが、なおもコナガの幼虫に対してある程度の殺虫活性を示していることを示唆する。図２１に示されるとおり、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３及びメタルヒジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）からの脂質を用いて、３０％を超える累積死亡率が４〜５日で観測された。
【０３３０】
図２２は、例５中に記載されるとおりのビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３及びトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）からの種々の脂質画分のバイオアッセイにおける２１時間（２０℃）でのモモアカアブラムシ（ｇｒｅｅｎ  ｐｅａｃｈ  ａｐｈｉｄ）の％死亡率を示す。試験した画分はメタノール抽出（−ＭｅＯＨ）及びクロロホルム抽出（−Ｃｈｌｏｒｏ）画分を含み、メタノール及び水をネガティブコントロールとして用いる。
【０３３１】
アブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）に対するトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）及びビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）からの種々の脂質画分のバイオアッセイは、クロロホルム抽出脂質画分及びメタノール抽出脂質画分が強力な殺虫活性を有したことを示す。図２２に示されるとおり、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）及びビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３からのクロロホルム抽出脂質及びメタノール抽出脂質に暴露されたアブラムシ（ａｐｈｉｄｓ）の１００％近い死亡率がわずか２１時間暴露後に観測された。ＦＳ−ＭｅＯＨ及びＢｅａｕｂｌａｓｔ−ＭｅＯＨはＫ４Ｂ３製品とは異なる抽出物である。
【０３３２】
議論
本例は、殺虫性脂質がある範囲の糸状菌から調製され、そしてこのような脂質の製造はビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）  Ｋ４Ｂ３  株に限定されないことを示す。抽出された脂質は強力な殺虫活性を有し、しばしば、２４時間暴露以内に標的昆虫の１００％近くを殺生する。
【０３３３】
産業上の利用性
上記の記載から明らかなとおり、本発明は糸状菌からの殺虫性脂質又は脂質画分を提供し、また、植物病原性昆虫などの昆虫の防除に有用な前記脂質又は脂質画分を含む組成物を提供する。このような脂質及び脂質画分の、植物病原性昆虫などの昆虫を防除するための方法における使用も提供される。本発明の脂質又は脂質画分及び組成物は広範な農業用途及び園芸用途に有用性を有する。
【０３３４】
【表５】
2014508803.tif 000007
【図１】
2014508803.tif 000008
【図２】
2014508803.tif 000009
【図３】
2014508803.tif 000010
【図４】
2014508803.tif 000011
【図５】
2014508803.tif 000012
【図６】
2014508803.tif 000013
【図７】
2014508803.tif 000014
【図８】
2014508803.tif 000015
【図９】
2014508803.tif 000016
【図１０】
2014508803.tif 000017
【図１１】
2014508803.tif 000018
【図１２】
2014508803.tif 000019
【図１３】
2014508803.tif 000020
【図１４】
2014508803.tif 000021
【図１５】
2014508803.tif 000022
【図１６】
2014508803.tif 000023
【図１７】
2014508803.tif 000024
【図１８】
2014508803.tif 000025
【図１９】
2014508803.tif 000026
【図２０】
2014508803.tif 000027
【図２１】
2014508803.tif 000028
【図２２】
2014508803.tif 000029
【手続補正書】
【提出日】平成25年12月3日(2013.12.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の真菌の菌糸体から単離された、精製された又は実質的に純粋な、１種以上の殺虫性脂質又は脂質画分。
【請求項２】
前記脂質又は脂質画分が、１種以上の非酸性脂質又は非酸性脂質画分である、又は、該非酸性脂質又は非酸性脂質画分を含む、又は、該非酸性脂質又は非酸性脂質画分からなる、請求項１記載の殺虫性脂質又は脂質画分。
【請求項３】
酸性脂質を実質的に含まない、請求項１又は２のいずれかに記載の脂質画分。
【請求項４】
遊離脂肪酸を実質的に含まない、請求項１〜３のいずれか１項記載の脂質画分。
【請求項５】
以下、
ａ．本明細書の図４中に示され、又は例２に記載される、画分１、画分５又は画分６、
ｂ．本明細書の図７中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分４又は画分５、
ｃ．本明細書の図８中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４、画分５又は画分９、
ｄ．本明細書の図８中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４、画分５又は画分９、
ｅ．本明細書の図１０中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４ｂ、画分５ａ、画分５ｂ又は画分６、
のいずれか１つ以上であるか又はそれらの特定的特徴を有する、請求項１〜４のいずれか１項記載の脂質画分。
【請求項６】
画分２、画分３、画分４ｂ、画分５ａ、画分５ｂ又は画分６の特定的特徴が、図１２ａ〜１２ｆのいずれか１つに示されるＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析  （ＭＳ）プロファイルである、請求項１〜５のいずれか１項記載の脂質画分。
【請求項７】
本明細書の図１０中に示され、又は例２に記載される画分３であるか又はその特定的特徴を有する、請求項１〜６のいずれか１項記載の脂質画分。
【請求項８】
前記特定的特徴が、図１３に示すＮＭＲスペクトルである、請求項７記載の脂質画分。
【請求項９】
以下、
ａ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ８６のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｂ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  １４７のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｃ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４４５のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｄ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６５６のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｅ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４５４のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｆ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｇ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ３９３のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｈ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｉ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９３のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｊ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９５のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｋ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７１７のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｌ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ５３１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｍ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ８６．０２の質量を有する脂質、又は、
ｎ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  １４６．９７の質量を有する脂質、又は、
ｏ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４４４．８２の質量を有する脂質、又は、
ｐ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６５５．９４の質量を有する脂質、又は、
ｑ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４５４．１９の質量を有する脂質、又は、
ｒ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５０．６６の質量を有する脂質、又は、
ｓ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ３９３．３９の質量を有する脂質、又は、
ｔ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５０．６７の質量を有する脂質、又は、
ｕ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９２．６９の質量を有する脂質、又は、
ｖ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９４．７２の質量を有する脂質、又は、
ｗ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７１６．７１の質量を有する脂質、又は、
ｘ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ５３１．３４の質量を有する脂質、
のいずれか１つである、請求項１〜８のいずれか１項記載の脂質画分。
【請求項１０】
以下、
ａ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ８６のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｂ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  １４７のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｃ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４４５のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｄ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６５６のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｅ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４５４のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｆ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｇ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ３９３のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｈ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｉ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９３のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｊ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９５のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｋ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７１７のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｌ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ５３１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｍ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ８６．０２の質量を有する脂質、又は、
ｎ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  １４６．９７の質量を有する脂質、又は、
ｏ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４４４．８２の質量を有する脂質、又は、
ｐ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６５５．９４の質量を有する脂質、又は、
ｑ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４５４．１９の質量を有する脂質、又は、
ｒ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５０．６６の質量を有する脂質、又は、
ｓ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ３９３．３９の質量を有する脂質、又は、
ｔ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５０．６７の質量を有する脂質、又は、
ｕ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９２．６９の質量を有する脂質、又は、
ｖ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９４．７２の質量を有する脂質、又は、
ｗ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７１６．７１の質量を有する脂質、又は、
ｘ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ５３１．３４の質量を有する脂質、
の１つ以上を含む又はからなる、請求項１〜８のいずれか１項記載の脂質画分。
【請求項１１】
前記子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の真菌が、豪州全国計測協会（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）（ＮＭＩＡ）に登録番号Ｎｏ．  Ｖ０８／０２５８５５で寄託された、２００８年９月２３日寄託のビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株ＡＭ２又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｆ４８０又はその特定的特徴を有する株、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）単離物１３２８を含む１種以上のトリコデルマ種又はその特定的特徴を有する株、及び、１種以上のメタルヒジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）種を含む群から選ばれる、請求項１〜１０のいずれか１項記載の脂質又は脂質画分。
【請求項１２】
子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の真菌の菌糸体からの１種以上の殺虫性脂質又は１種以上の殺虫性脂質画分を少なくとも１種のキャリアとともに含む組成物。
【請求項１３】
子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の真菌の菌糸体からの１種以上の殺虫性脂質又は１種以上の殺虫性脂質画分を少なくとも１種のキャリアとともに添加した、組成物。
【請求項１４】
子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の真菌の菌糸体培養物からの、培養物、細胞抽出物、細胞懸濁液、細胞ホモジネート、細胞溶解物、細胞上清、細胞ろ液、細胞ペレット、又は、成長培地である、又は、それらを含む、請求項１２又は１３記載の組成物。
【請求項１５】
子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の真菌から得ることができる胞子をさらに含む、請求項１２〜１４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１６】
豪州全国計測協会（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）（ＮＭＩＡ）に登録番号Ｎｏ．  Ｖ０８／０２５８５５で寄託された、２００８年９月２３日寄託のビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３又はその特定的特徴を有する株、又は、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株ＡＭ２又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｆ４８０又はその特定的特徴を有する株、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）単離物１３２８を含む１種以上のトリコデルマ種又はその特定的特徴を有する株、及び、１種以上のメタルヒジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）種を含む群から選ばれる真菌から得ることができる胞子を含む、請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】
ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３から得ることができる胞子を含む、請求項１６記載の組成物。
【請求項１８】
豪州全国計測協会（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）（ＮＭＩＡ）に登録番号Ｎｏ．  Ｖ０８／０２５８５５で寄託された、２００８年９月２３日寄託のビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株ＡＭ２又はその特定的特徴を有する株、ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖａｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｆ４８０又はその特定的特徴を有する株、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）単離物１３２８を含む１種以上のトリコデルマ種又はその特定的特徴を有する株、及び、１種以上のメタルヒジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）種を含む群から選ばれる真菌からの１種以上の脂質又は脂質画分を含む、請求項１２〜１７のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９】
ビューベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）株Ｋ４Ｂ３からの１種以上の脂質又は脂質画分を含む、請求項１８記載の組成物。
【請求項２０】
以下、
ａ．本明細書の図４中に示され、又は例２に記載される、画分１、画分５又は画分６、
ｂ．本明細書の図７中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分４又は画分５、
ｃ．本明細書の図８中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４、画分５又は画分９、
ｄ．本明細書の図８中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４、画分５又は画分９、
ｅ．本明細書の図１０中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４ｂ、画分５ａ、画分５ｂ又は画分６、
のいずれか１つ以上であるか又はそれらの特定的特徴を有する１つ以上の脂質画分を含む、請求項１２〜１９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２１】
非酸脂質が濃縮されている、請求項１２〜２０のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２２】
以下、
ａ．本明細書の図４中に示され、又は例２に記載される、画分１、画分５又は画分６、
ｂ．本明細書の図７中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分４又は画分５、
ｃ．本明細書の図８中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４、画分５又は画分９、
ｄ．本明細書の図８中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４、画分５又は画分９、
ｅ．本明細書の図１０中に示され、又は例２に記載される、画分２、画分３、画分４ｂ、画分５ａ、画分５ｂ又は画分６、
のいずれか１つ以上であるか又はれらの特定的特徴を有する１つ以上の脂質画分中に存在する１つ以上の脂質が濃縮されている、請求項２１記載の組成物。
【請求項２３】
以下、
ａ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ８６のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｂ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  １４７のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｃ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４４５のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｄ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６５６のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｅ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４５４のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｆ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｇ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ３９３のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｈ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｉ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９３のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｊ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９５のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｋ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７１７のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｌ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ５３１のおおよその質量を有する脂質、又は、
ｍ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ８６．０２の質量を有する脂質、又は、
ｎ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  １４６．９７の質量を有する脂質、又は、
ｏ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４４４．８２の質量を有する脂質、又は、
ｐ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６５５．９４の質量を有する脂質、又は、
ｑ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ４５４．１９の質量を有する脂質、又は、
ｒ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５０．６６の質量を有する脂質、又は、
ｓ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ３９３．３９の質量を有する脂質、又は、
ｔ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７５０．６７の質量を有する脂質、又は、
ｕ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９２．６９の質量を有する脂質、又は、
ｖ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ６９４．７２の質量を有する脂質、又は、
ｗ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ７１６．７１の質量を有する脂質、又は、
ｘ．  ＭＳ／ＭＳによりｍ／ｚ  ５３１．３４の質量を有する脂質、
の１つ以上が濃縮されている、請求項２１記載の組成物。
【請求項２４】
濃縮されていない組成物中に存在する量に対して、少なくとも約１，  ２，  ３，  ４，  ５，  ６，  ７，  ８，  ９，  １０，  １５，  ２０，  ２５，  ３０，  ３５，  ４０，  ４５，  ５０，  ５５，  ６０，  ６５，  ７０，  ７５，  ８０，  ８５，  ９０，  ９５又は９９％濃縮されている、請求項２１〜２３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２５】
１種以上の昆虫を、請求項１〜１１のいずれか１項記載の脂質又は脂質画分、又は、請求項１２〜２４のいずれか１項記載の組成物と接触させることを含む、１種以上の昆虫の防除方法。
【請求項２６】
植物又はその周囲に、請求項１〜１１のいずれか１項記載の脂質又は脂質画分、又は、請求項１２〜２４のいずれか１項記載の組成物を施用することを含む、１種以上の昆虫の防除方法。
【請求項２７】
子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の１種以上の真菌の培養物を提供すること、
菌糸体の増殖を支持することが可能であり、少なくとも１種の菌糸体の脂質又は菌糸体の脂質画分の産生に適する条件下に前記培養物を維持すること、及び、
ｉ）前記少なくとも１種の脂質又は脂質画分をキャリアと組み合わせること、又は、
ｉｉ）前記少なくとも１種の菌糸体の脂質又は菌糸体の脂質画分を、１種以上の昆虫病原性真菌又はその培養物と組み合わせること、又は、
ｉｉｉ）前記少なくとも１種の菌糸体の脂質又は菌糸体の脂質画分を真菌から分離すること、又は、
ｉｖ）本発明の少なくとも１種の菌糸体の脂質を少なくとも部分的に精製し又は単離すること、又は、
ｖ）（ｉ）〜（ｉｖ）の２つ以上の組み合わせ、
を含む、生物学的防除組成物の製造方法。
【請求項２８】
前記脂質又は脂質画分が、請求項２〜１１のいずれか１項記載の脂質又は脂質画分であり、該脂質又は脂質画分を含み、又は、該脂質又は脂質画分からなる、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の１種以上の真菌の培養物の有機溶媒抽出物を提供すること、
少なくとも部分的に１種以上の非酸性脂質を１種以上の酸性脂質から分離すること、及び、
前記１種以上の非酸性脂質又は脂質画分を回収すること、
を含む、殺虫性脂質又は脂質画分の調製方法。
【請求項３０】
子嚢菌門（ｐｈｙｌｕｍ  Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）の１種以上の真菌の培養物の有機溶媒抽出物を提供すること、
少なくとも部分的に１種以上の極性脂質を１種以上の非極性脂質から分離すること、及び、
前記１種以上の極性脂質又は極性脂質画分を回収すること、
を含む、殺虫性脂質又は脂質画分の調製方法。
【請求項３１】
前記有機溶媒が、短鎖アルキルアルコールを含むアルカノール、メタノール、エタノール、プロパノール、イソ−プロパノール又はブタノールであるか、又は、クロロホルムである、請求項２９又は３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
前記回収される脂質又は脂質画分が、請求項２〜１１のいずれか１項記載の脂質又は脂質画分であるか、該脂質又は脂質画分を含み、又は、該脂質又は脂質画分からなる、請求項２９〜３１のいずれか１項記載の方法。
【請求項３３】
１種以上の殺虫剤又は１種以上の昆虫病原性剤に対する昆虫の耐性を完全に又は部分的に反転させる方法であって、昆虫を請求項１〜１１のいずれか１項記載の脂質又は脂質画分、又は、請求項１２〜２４のいずれか１項記載の組成物に接触させることを含む方法。
【請求項３４】
前記昆虫を、１種以上の殺虫剤もしくは昆虫病原性剤又はそれらの任意の組み合わせとともに、前記脂質又は脂質画分と接触させることを含む、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
投与された前記１種以上の殺虫剤又は１種以上の昆虫病原性剤が、前記昆虫が耐性であるか、又は、耐性であることが予測されもしくは耐性となることが予測されるものと同一である、請求項３３記載の方法。
【請求項３６】
請求項１〜１１のいずれか１項記載の脂質又は脂質画分、又は、請求項１２〜２４のいずれか１項記載の組成物と接触した１種以上の昆虫を防除する方法であって、該１種以上の昆虫を防除するのに有効な量の殺虫剤又は昆虫病原性剤と前記１種以上の昆虫を接触させることを含む方法。
【請求項３７】
前記１種以上の殺虫剤又は１種以上の昆虫病原性剤が、前記脂質又は脂質画分の投与の前に、その投与と同時に、又は、その投与の後に投与される、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
前記組成物が、昆虫病原性真菌を、任意で、別の殺虫剤又は昆虫病原性剤とともに含む、請求項３３〜３７のいずれか１項記載の方法。
【国際調査報告】
2014508803.tif 000030
2014508803.tif 000031
2014508803.tif 000032
2014508803.tif 000033