(57)【要約】本発明は、アミロイド形成／アミロイドーシスを防止する能力がある超小型ペプチド阻害剤を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式
Ｚ−（Ｘ）ｍ−プロリン−（Ｘ）ｎ
［式中、
Ｚは、Ｎ末端保護基であり；
Ｘは、それぞれ独立して、アミノ酸及びアミノ酸誘導体より選択され；そして
ｍ及びｎは、アミノ酸及びアミノ酸誘導体の数を示し、独立して１〜５より選択される整数であり、ｍ＋ｎは≦６である］
を有する、単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項２】
Ｘが、それぞれ独立して、天然アミノ酸より選択される、請求項１記載の単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項３】
少なくとも一つのＸが、Ｄ−アミノ酸又はペプチド模倣アミノ酸である、請求項１又は２記載の単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項４】
Ｘが、それぞれ独立して、非芳香族アミノ酸及びアミノ酸誘導体より選択される、請求項１〜３のいずれか記載の単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項５】
前記非芳香族アミノ酸が、イソロイシン、ロイシン、バリン、アラニン、グリシン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、トレオニン及びリシンから成る群より選択される、請求項４記載の単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項６】
前記ペプチドのＮ末端アミノ酸が、該ペプチドのＣ末端アミノ酸よりも疎水性が大きい、請求項１〜５のいずれか記載の単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項７】
ｍ＋ｎが≦５、好ましくは≦４、より好ましくは≦３である、請求項１〜６のいずれか記載の単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項８】
ｍ及びｎが１である、請求項１〜７のいずれか記載の単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項９】
Ｎ末端保護基が一般式−Ｃ（Ｏ）−Ｒ［式中、Ｒは、Ｈ、アルキル及び置換アルキルから成る群より選択される］を有する、請求項１〜８のいずれか記載の単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項１０】
Ｎ末端保護基がアセチル基である、請求項９記載の単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項１１】
ペプチドのＣ末端がアミド化又はエステル化されており、ここで、好ましくはＣ末端が、式−ＣＯＮＨＲ［式中、Ｒは、Ｈ、アルキル及び置換アルキルから成る群より選択される］又は式−ＣＯＯＲ［式中、Ｒは、アルキル及び置換アルキルから成る群より選択される］を有する、請求項１〜１０のいずれか記載の単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項１２】
ペプチドが、場合により生理緩衝液を含む水溶液中に提供される、請求項４〜１１のいずれか記載の単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項１３】
医薬として使用するための、請求項１〜１２のいずれか記載の単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項１４】
アミロイドーシス関連疾患の処置に使用するための、請求項１〜１２のいずれか記載の単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項１５】
アミロイドーシス関連疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）及びクロイツフェルト・ヤコブ病などのプリオン関連又は海綿状脳症、レビー小体型認知症、パーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、脊髄小脳失調症、脊髄小脳失調症１７型、球脊髄性筋萎縮症、遺伝性歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、家族性英国型認知症、家族性デンマーク型認知症のような神経変性疾患、ＩＩ型糖尿病、甲状腺髄様ガン、心房アミロイドーシス、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、脳下垂体プロラクチノーマ、注射限局性アミロイドーシス（Injection-localized amyloidosis）、大動脈中膜アミロイドーシス、遺伝性格子状角膜ジストロフィー、睫毛乱生に関連する角膜アミロイドーシス、白内障、歯原性石灰化上皮腫、肺胞タンパク症、封入体筋炎、皮膚苔癬アミロイドーシスのような非神経障害性限局性疾患、ならびにＡＬアミロイドーシス、ＡＡアミロイドーシス、家族性地中海熱、老人性全身性アミロイドーシス、家族性アミロイド多発性神経障害、血液透析関連アミロイドーシス、ＡｐｏＡＩアミロイドーシス、ＡｐｏＡＩＩアミロイドーシス、ＡｐｏＡＩＶアミロイドーシス、フィンランド型遺伝性アミロイドーシス、リゾチームアミロイドーシス、フィブリノーゲンアミロイドーシス、アイスランド型遺伝性脳アミロイドアンギオパチー、家族性アミロイドーシス、及び複数の組織に生じる、軽鎖アミロイドーシスなどの全身性アミロイドーシスのような非神経障害性全身アミロイドーシスから成る群より選択される、請求項１４記載の単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項１６】
ペプチドが経口投与される、請求項１３〜１５のいずれか記載の単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項１７】
請求項１〜１２のいずれか記載の単離されたαヘリックス破壊ペプチドを含む薬学的組成物。
【請求項１８】
さらに、少なくとも１種の薬学的に許容されうる担体、希釈剤及び／又は賦形剤を含む、請求項１７記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
さらに、１価又は２価金属塩を含む、請求項１７又は１８記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
金属が、ナトリウム、マグネシウム、カルシウム及び亜鉛から成る群より選択される、請求項１９記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミロイド形成／アミロイドーシスを防止する能力のある超小型ペプチド阻害剤を提供する。
【０００２】
本発明者らは、最近、系統的に設計された超小型ペプチドの一クラスが、段階的形成によってアミロイド構造を形成できることを見出した。その開始段階は、重要なαヘリックス中間構造を経て起こり、αヘリックス中間構造は、最終的なβ型アミロイド構造が形成される前に築かれる。抗アミロイド形成ペプチド治療薬を開発する理論的根拠は、αヘリックス中間構造の形成を防止する阻害ペプチドを使用するという考えに基づく。
【０００３】
アミロイドは、クロスβプリーツシート構造に富む不溶性タンパク質性フィブリルの組織沈着物である。アミロイドフィブリルの形成過程は、多様で構造的に無関係な病理過程における重要な事象である。これらには、多数の慢性で衰弱性の、ますます蔓延しつつある疾患が挙げられ、それらは、概して、１）神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、２）非神経障害性限局性アミロイドーシス、例えばＩＩ型糖尿病、及び３）複数の組織に発生する全身性アミロイドーシスに分類することができる。これらのタンパク質異常折りたたみ病（ＰＭＤ）に関連する症状及びタンパク質モノマーの差異にかかわらず、タンパク質凝集の基礎となる、分子レベルで共通のメカニズムがあると思われる。アミロイドフィブリルの形成は、典型的には、「核又は種子」の形成のための熱力学的に不利な遅滞期から開始する分子認識及び自己集合過程を経由する。これに、熱力学的に好都合な指数成長期が続き、指数成長期で成長途中の核にモノマー／オリゴマーが付加される。ランダムコイル型の可溶性形態からαヘリックス中間体を経て不溶性のクロスβプリーツ線維凝集物へのタンパク質のコンフォメーション転移は、アミロイド形成における重要な事象であると考えられている。
【０００４】
最近の科学研究は、アミロイドーシスを阻害するためにこの過程での分子認識及び自己集合のメカニズムをより大きく洞察することに焦点を合わせたが、これらの疾患のいずれかに有効な予防法も治療法もまだ存在しない。アミロイド形成と安全に拮抗してそれを防止する小型分子が、治療薬として切望されている。抗アミロイド形成性候補薬は、また、効率的で容易な取り込み、in vivoで十分な半減期及び循環時間、無毒性、ならびに神経変性状態を処置するために必要な血液脳関門（ＢＢＢ）透過性などの厳密な要件を満たすことができるべきである。さらに、プレフィブリルオリゴマー中間体が成熟アミロイド線維よりもいっそう有毒でありうるという証拠がますます増えてきているので、自己集合過程を初期段階で停止又は後退させることが重要である。
【０００５】
したがって、上記の性質を有する新規化合物を提供することが、本発明の目的であった。
【０００６】
本発明の目的は、一般式
Ｚ−（Ｘ）ｍ−プロリン−（Ｘ）ｎ
［式中、
Ｚは、Ｎ末端保護基であり；
Ｘは、それぞれ独立して、アミノ酸及びアミノ酸誘導体より選択され；
ｍ及びｎは、アミノ酸及びアミノ酸誘導体の数を示し、独立して１〜５より選択される整数であり、ｍ＋ｎは≦６である］
を有する、単離されたαヘリックス破壊ペプチドによって解決される。
【０００７】
プロリンは、３文字表記（Ｐｒｏ）又は１文字表記（Ｐ）のいずれかを用いて略記される。
【０００８】
一態様では、ｍ＋ｎは≦５、好ましくは≦４、より好ましくは≦３である。
【０００９】
「アミノ酸及びアミノ酸誘導体」には、天然及び非天然のＬ−及びＤ−アミノ酸、ならびに標準的な細胞機構によって産生されないか、又は翻訳後修飾後のタンパク質中に、もしくは代謝中間体としてのみ見出される、ヒドロキシプロリン、セレノメチオニン、カルニチン、２−アミノイソ酪酸、デヒドロアラニン、ランチオニン、ＧＡＢＡ及びβ−アラニンなどのアミノ酸誘導体、ペプチド模倣アミノ酸及び非標準アミノ酸が挙げられる。
【００１０】
一態様では、Ｘは、それぞれ独立して、天然アミノ酸より選択される。
【００１１】
一態様では、少なくとも１個のＸは、Ｄ−アミノ酸又はペプチド模倣アミノ酸である。
【００１２】
一態様では、Ｘは、それぞれ独立して、非芳香族アミノ酸及びアミノ酸誘導体より選択される。
【００１３】
一態様では、該非芳香族アミノ酸は、イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、バリン（Ｖａｌ、Ｖ）、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、トレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）及びリシン（Ｌｙｓ、Ｋ）からなる群より選択される。
【００１４】
一態様では、該ペプチドのＮ末端アミノ酸は、該ペプチドのＣ末端アミノ酸よりも疎水性が大きい。一態様では、疎水性はＮ末端からＣ末端にかけて減少する。
【００１５】
一態様では、ｍ及びｎは１であり、すなわち、該ペプチドは、一般式
Ｚ−Ｘ−プロリン−Ｘ
を有する。
【００１６】
一態様では、該Ｎ末端保護基は、一般式−Ｃ（Ｏ）−Ｒ［式中、Ｒは、Ｈ、アルキル及び置換アルキルから成る群より選択される］を有する。一態様では、Ｒは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル及びイソブチルから成る群より選択される。
【００１７】
好ましい一態様では、該Ｎ末端保護基は、アセチル基（Ｒ＝メチル）である。
【００１８】
一態様では、該ペプチドのＣ末端は、アミド化又はエステル化されており、ここで、好ましくはＣ末端は、式−ＣＯＮＨＲ［式中、Ｒは、Ｈ、アルキル及び置換アルキルから成る群より選択される］又は式−ＣＯＯＲ［式中、Ｒは、アルキル及び置換アルキルから成る群より選択される］を有する。
【００１９】
一態様では、該ペプチドは、場合により生理緩衝液を含む水溶液中に提供される。
【００２０】
一態様では、該ペプチドは、
【化１】
2014524913.tif 000002
から成る群より選択されるペプチドをベースとし、その際、Ｎ末端アミノ酸及びＣ末端アミノ酸以外のアミノ酸１個がプロリン（Ｐｒｏ、Ｐ）に置換されている。例えば、本発明の単離されたαヘリックス破壊ペプチドは、上記リストのペプチドＺ−ＬＩＶＡＧＤ（配列番号３）をベースとすることから、
【化２】
2014524913.tif 000003
より選択されうる。
【００２１】
一態様では、該ペプチドは、
【化３】
2014524913.tif 000004
から成る群より選択される。配列番号４５〜６０は、上記配列の特定の態様を表す。
【００２２】
本発明の目的は、また、医薬として使用するための、上記と同義の単離されたαヘリックス破壊ペプチドによって解決される。
【００２３】
本発明の目的は、さらに、アミロイドーシス関連疾患の処置に使用するための、上記と同義の単離されたαヘリックス破壊ペプチドによって解決される。
【００２４】
一態様では、該アミロイドーシス関連疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）及びクロイツフェルト・ヤコブ病などのプリオン関連又は海綿状脳症、レビー小体型認知症、パーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、脊髄小脳失調症、脊髄小脳失調症１７型、球脊髄性筋萎縮症、遺伝性歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、家族性英国型認知症、家族性デンマーク型認知症のような神経変性疾患、ＩＩ型糖尿病、甲状腺髄様ガン、心房アミロイドーシス、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、脳下垂体プロラクチノーマ、注射限局性アミロイドーシス（Injection-localized amyloidosis）、大動脈中膜アミロイドーシス、遺伝性格子状角膜ジストロフィー、睫毛乱生に関連する角膜アミロイドーシス、白内障、歯原性石灰化上皮腫、肺胞タンパク症、封入体筋炎、皮膚苔癬アミロイドーシスのような非神経障害性限局性疾患、ならびにＡＬアミロイドーシス、ＡＡアミロイドーシス、家族性地中海熱、老人性全身性アミロイドーシス、家族性アミロイド多発性神経障害、血液透析関連アミロイドーシス、ＡｐｏＡＩアミロイドーシス、ＡｐｏＡＩＩアミロイドーシス、ＡｐｏＡＩＶアミロイドーシス、フィンランド型遺伝性アミロイドーシス、リゾチームアミロイドーシス、フィブリノーゲンアミロイドーシス、アイスランド型遺伝性脳アミロイドアンギオパチー、家族性アミロイドーシス、及び複数の組織に生じる、軽鎖アミロイドーシスなどの全身性アミロイドーシスのような非神経障害性全身アミロイドーシスから成る群より選択される。
【００２５】
一態様では、該ペプチドは、経口投与される。
【００２６】
本発明の目的は、また、上記と同義の単離されたαヘリックス破壊ペプチドを含む薬学的組成物によって解決される。
【００２７】
一態様では、該薬学的組成物は、さらに、少なくとも１種の薬学的に許容されうる担体、希釈剤及び／又は賦形剤を含む。
【００２８】
一態様では、該薬学的組成物は、さらに、１価又は２価金属塩、好ましくは２価金属塩を含む。
【００２９】
一態様では、該金属は、ナトリウム、マグネシウム、カルシウム及び亜鉛から成る群より選択される。
【００３０】
本発明の目的は、さらに、アミロイドーシス関連疾患の処置のための医薬の製造に、上記と同義の単離されたαヘリックス破壊ペプチドの使用によって解決される。
【００３１】
本発明の目的は、また、アミロイドーシス関連疾患の処置方法であって、上記と同義の単離されたαヘリックス破壊ペプチド又は上記と同義の薬学的組成物を、それを必要とするヒトに投与するステップを含む方法によって解決される。好ましくは、単離された該αヘリックス破壊ペプチド又は該薬学的組成物は、経口投与される。
【００３２】
本発明の目的は、さらに、アミロイドプラークを脱凝集、又はその形成を防止する方法であって、上記と同義の単離されたαヘリックス破壊ペプチドを該アミロイドプラークと接触させることによって、該アミロイドプラークを脱凝集又はその形成を防止することを含む方法によって解決される。
【００３３】
一態様では、その方法は、さらに、該アミロイドプラークを１価又は２価金属塩、好ましくは２価金属塩と接触させることを含み、その際好ましくは、該金属は、ナトリウム、マグネシウム、カルシウム及び亜鉛から成る群より選択される。
【００３４】
本発明者らは、驚くことに、合理的に設計された特異的超小型ペプチドがアミロイド形成を阻害できることを見出した。これらの阻害剤ペプチドは、αヘリックス中間体構造を妨害及び防止する能力がある３〜７個の天然アミノ酸から成る。これらの中間体構造は、アミロイド凝集物の形成を推進する故にアミロイド形成を指令する重要なコンフォメーション転移状態であると考えられる。具体的には、本発明者らは、ランダムコイルからαヘリックスへのタンパク質のコンフォメーション変化が分子の自己認識に重要な役割を果たすと考えている。αヘリックスへの転移を破壊又は阻害することによって、アミロイド凝集過程をごく初期に（すなわち直ちに又は数分以内に）停止／後退することができる。したがって、これらの抗アミロイド形成ペプチドは、また、αヘリックス破壊剤として見なすことができる。これらの抗アミロイド形成ペプチドは、ミスフォールディングしたタンパク質の短鎖アミロイド形成認識モチーフを認識し、それと相互作用する能力があるが、一方でそれら自体は、秩序化された超分子構造に自己集合する傾向が非常に低い。これらのペプチドは、特に３アミノ酸長の場合、長さが短いせいで、プロテアーゼ認識及び分解を回避する一方で、容易な経口デリバリー及びＢＢＢ透過性を促進する潜在性を有する。加えて、これらの超小型ペプチドは、無毒性のアミノ酸及びアミノ酸誘導体、好ましくは天然アミノ酸からできているので、無毒性である。さらに、既存のアミロイドの脱凝集を補助するために、１価又は２価金属塩が存在することが好ましい。
【００３５】
要約すれば、これらの超短鎖ペプチドが小型であることは、薬物送達の主要な利点である、容易で効果的な経口取り込みを可能にする。さらに、超短鎖ペプチドが小型であることは、単純なバッチ合成を低コストで保証する。好ましい一態様では、ペプチドベースの治療薬は、天然アミノ酸でできているので、無毒性、非免疫原性及び生体適合性である。ちょうど３アミノ酸長の超短鎖ペプチドは、また、血液脳関門を通過することができ、これは、神経変性障害をターゲティングする治療薬の重要な要件である。最終的に、短鎖ペプチドモチーフは、内因性ペプチダーゼによる認識及び分解を回避する故に、生体液及び組織中でより大きな半減期及びバイオアベイラビリティーを提供するものと思われる。
【００３６】
特に、アミロイド凝集の分子的基盤が広範な疾患に共通であることを示す幅広い証拠があるので、アミロイド形成を阻害する有効な小分子薬の開発は、巨大で魅力的な市場潜在性を有する。例えば、アミロイドーシスを伴う多数の疾患の一つに過ぎないアルツハイマー病は、高齢期の認知症の最多原因（５０〜７０％）であり、先進国世界における主な死亡原因である。２０１０年に、３５６０万人が認知症を有すると推定され、この数字は、２０３０年までに６５７０万人へとほぼ倍増し、２０５０年までに１億１５４０万人に達すると予想されている。別の例は、成人糖尿病の全診断例の９０〜９５％を占めるＩＩ型糖尿病である。現在入手可能な経口薬は、血糖の良好な制御を維持すること目標としているので、膵臓細胞死の原因である膵島アミロイドの形成を防止する経口治療薬を開発する必要がある。現在の薬物のいくつかは、また、天然生体高分子の使用によって克服される深刻な副作用を有する。この点で、本発明の超小型阻害剤ペプチドは、現在の治療上のニーズに取り組むための潜在性が有望である一方で、同時に既存薬の問題及び限界を克服しようとしている。
【００３７】
以下に図面を参照する。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】溶液中（低濃度）及びヒドロゲル形態（高濃度）のペプチドＡｃ−ＬＤ６、Ａｃ−ＮＬ６及びＡｃ−ＩＤ３の円偏光二色性（ＣＤ）スペクトルを示す図である。
【図２】アルツハイマーコア配列ＫＥ７に結合するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）（＝陽性対照；１００μM）を、経時的な蛍光増加と対比させて示す図である。各時点で９個の独立した試料を測定した（実験のために設定したゲイン値：５５）。
【図３】阻害剤ペプチド１〜５及び７〜１６の不在下及び存在下でアルツハイマーコア配列ＫＥ７に結合するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を示す図である。各時点で９個の独立した試料を測定した（実験のために設定したゲイン値：５５）。
【図４】阻害剤ペプチド１〜５及び７〜１６の不在下及び存在下でアルツハイマーコア配列ＫＥ７に結合するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を示す図である。各時点で９個の独立した試料を測定した（実験のために設定したゲイン値：５５）。
【図５】阻害剤ペプチド１〜５及び７〜１６の不在下及び存在下でアルツハイマーコア配列ＫＥ７に結合するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を示す図である。各時点で９個の独立した試料を測定した（実験のために設定したゲイン値：５５）。
【図６】阻害剤ペプチド１〜５及び７〜１６の不在下及び存在下でアルツハイマーコア配列ＫＥ７に結合するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を示す図である。各時点で９個の独立した試料を測定した（実験のために設定したゲイン値：５５）。
【図７】阻害剤ペプチド１〜５及び７〜１６の不在下及び存在下でアルツハイマーコア配列ＫＥ７に結合するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を示す図である。各時点で９個の独立した試料を測定した（実験のために設定したゲイン値：５５）。
【図８】阻害剤ペプチド１〜５及び７〜１６の不在下及び存在下でアルツハイマーコア配列ＫＥ７に結合するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を示す図である。各時点で９個の独立した試料を測定した（実験のために設定したゲイン値：５５）。
【図９】阻害剤ペプチド１〜５及び７〜１６の不在下及び存在下でアルツハイマーコア配列ＫＥ７に結合するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を示す図である。各時点で９個の独立した試料を測定した（実験のために設定したゲイン値：５５）。
【図１０】阻害剤ペプチド１〜５及び７〜１６の不在下及び存在下でアルツハイマーコア配列ＫＥ７に結合するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を示す図である。各時点で９個の独立した試料を測定した（実験のために設定したゲイン値：５５）。
【図１１】阻害剤ペプチド１〜５及び７〜１６の不在下及び存在下でアルツハイマーコア配列ＫＥ７に結合するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を示す図である。各時点で９個の独立した試料を測定した（実験のために設定したゲイン値：５５）。
【図１２】阻害剤ペプチド１〜５及び７〜１６の不在下及び存在下でアルツハイマーコア配列ＫＥ７に結合するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を示す図である。各時点で９個の独立した試料を測定した（実験のために設定したゲイン値：５５）。
【図１３】阻害剤ペプチド１〜５及び７〜１６の不在下及び存在下でアルツハイマーコア配列ＫＥ７に結合するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を示す図である。各時点で９個の独立した試料を測定した（実験のために設定したゲイン値：５５）。
【図１４】阻害剤ペプチド１〜５及び７〜１６の不在下及び存在下でアルツハイマーコア配列ＫＥ７に結合するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を示す図である。各時点で９個の独立した試料を測定した（実験のために設定したゲイン値：５５）。
【図１５】阻害剤ペプチド１〜５及び７〜１６の不在下及び存在下でアルツハイマーコア配列ＫＥ７に結合するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を示す図である。各時点で９個の独立した試料を測定した（実験のために設定したゲイン値：５５）。
【図１６】阻害剤ペプチド１〜５及び７〜１６の不在下及び存在下でアルツハイマーコア配列ＫＥ７に結合するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を示す図である。各時点で９個の独立した試料を測定した（実験のために設定したゲイン値：５５）。
【図１７】阻害剤ペプチド１〜５及び７〜１６の不在下及び存在下でアルツハイマーコア配列ＫＥ７に結合するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を示す図である。各時点で９個の独立した試料を測定した（実験のために設定したゲイン値：５５）。
【図１８】対照値（水及びＴｈＴ色素）の分布を示す図である。
【図１９】阻害剤ペプチド自体は強化ＴｈＴ蛍光を与えないことを示す図である。
【図２０】阻害剤ペプチド自体は強化ＴｈＴ蛍光を与えないことを示す図である。
【図２１】本発明の阻害剤ペプチドのためのスクリーニング手順を要約した図である。
【図２２】電界放射型走査電子顕微鏡法（ＦＥＳＥＭ）を用いた本発明の阻害剤ペプチドの形態研究を示す図である。
【図２３】本発明の阻害剤ペプチドの生体適合性を検査する溶血アッセイを示す図である。
【図２４】異なるＮａＣｌ濃度で１０mg/mL Ａｃ−ＬＤ６（Ｌ）から得られたヒドロゲルの貯蔵弾性率Ｇ’／機械的強度を角周波数（rad/sec）の関数として示す図である。
【図２５】異なる３濃度のペプチドＡｃ−ＮＬ６の円偏光二色性（ＣＤ）スペクトル（Ａ）ならびにペプチドＡｃ−ＮＬ６及びＡｃ−ＬＤ６のヒドロゲル（Ｂ）を示す図である。
【図２６】１．５mM Ａｃ−ＫＥ７によって形成されたヒドロゲル（緑色）、ならびに１．５mM Ａｃ−ＫＥ７をＡｃ−ＬＰＥ及びＡｃ−ＬＰＧと１：２０のモル比で混合したときのペプチド−阻害剤溶液（ゲル化なし）（それぞれ赤ワイン色及び赤色）についてのレオロジーデータを示す図である。グラフに貯蔵弾性率（Ｇ’、単位Ｐａ）を、（Ａ）歪み１％での角周波数（rad/sec）及び（Ｂ）室温２５℃における角周波数１rad/secでの振動歪み（％）の関数として示す。
【図２７】阻害剤溶液の中和を行う又は行わない場合の、異なる濃度の阻害剤ペプチドＡｃ−ＬＧ３及びＡｃ−ＬＥ３についてのＵ８７ヒト神経膠芽腫細胞を用いた生／死細胞傷害性アッセイの結果を示す図である。
【図２８】阻害剤溶液の中和を行う又は行わない場合の、異なる濃度の阻害剤ペプチドＡｃ−ＬＧ３及びＡｃ−ＬＥ３についてのＷＳＴ−１アッセイの結果を示す図である。
【図２９】阻害剤溶液の中和を行う又は行わない場合の、異なる濃度の本発明の阻害剤ペプチドについてのＨｅＬａ細胞及びＳＨＳＹ５Ｙ神経芽腫細胞を用いた生／死細胞傷害性アッセイの結果を示す図である。mg/mlで表した値は、９６ウェルプレートの各ウェル中の阻害剤の終濃度を表す。
【図３０】阻害剤ペプチドＡｃ−ＬＰＧ及びＡｃ−ＬＰＥのＩＣ５０のＳ字曲線を示す図である。
【図３１】本発明の阻害剤ペプチドの製造のために使用された固相ペプチド合成の図式ならびに１Ｈ ＮＭＲ及びＬＣ−ＭＳによるそれらの特徴づけの一例を示す図である。
【図３２】阻害剤ペプチド１及び２の不在下及び存在下におけるペプチドＡｃ−ＫＥ７及びＡｃ−ＮＬ６のゲル化研究の結果（Ａ）ならびに本発明の阻害剤のＦＥＳＥＭ画像（Ｂ）を示す図である。
【００３９】
以下の実施例によって本発明をこれからさらに説明する。これらの実施例は、本発明を例示することを意図されたものであるが、本発明を限定することを意図されたものではない。
【００４０】
実験手順
ペプチドベースのヒドロゲル調製。全てのペプチド（純度≧９５％）は、American Peptide Company（Sunnyvale）から、厳密な品質管理対策及びアミノ酸分析の後に購入した。末端電荷の効果を抑制するために全てのペプチドをＮ末端でアセチル化した。５分間ボルテックス撹拌することによってペプチドを熱milliQ水（６０〜７０℃）中に溶解し、室温でそのまま放置してヒドロゲルを形成させた。ペプチド濃度に応じて、自己集合過程は、直ちに、数時間以内に、又はさらには数日以内に起こった（ゲル化の実験的時間枠）。
【００４１】
円偏光二色性（ＣＤ）研究。ＣＤスペクトルは、ペルチェ温度コントローラーを備えるAviv 410 ＣＤ分光光度計で、ペプチド試料の濃度に最適な光路長（例えば１mm）を有するキャップ付き角形クオーツキュベットを使用して収集した。より高いペプチド濃度（１０〜２０mg/ml）については、光路長０．０１mmのクオーツキュベットを使用した。データ取得は、波長範囲１８０〜２６０nmでスペクトル帯域幅１．０nmを用いて０．５nm又は１．０nmのステップで行った。ＣＤスペクトルの再現性を保証するために、各ペプチドの３試料を個別に測定したが、スペクトルの平均はとらなかった。milliQ水を基準として用いて、全てのスペクトルのベースラインを補正した。
【００４２】
電界放射型走査電子顕微鏡法（ＦＥＳＥＭ）研究。ヒドロゲルの試料を−２０℃で、又は、より望ましくは−８０℃で凍結させた。次に、凍結した試料を凍結乾燥させた。凍結乾燥試料を導電性テープで試料ホルダー上に固定し、JEOL JFC-1600高解像度スパッタコーターで上面と側面との両方からプラチナでスパッタリングした。使用したコーティング電流は３０mAであり、この工程を６０秒間継続した。次に、関心が持たれる表面をJEOL JSM-7400F電界放射型走査電子顕微鏡システムで、加速電圧５〜１０kVを用いて観察した。
【００４３】
レオロジー。粘弾性特性／挙動を決定するために、ARES-G2レオメーター（TA Instruments, Piscataway, NJ）を使用して、直径２５．０mmのステンレス鋼又はチタン製のパラレルプレートジオメトリーを用い、ギャップ距離が０．８mm又は１〜２mmで、ペプチドベースのヒドロゲルを動的時間、歪み及び周波数の掃引実験に供した。完全なゲル化を確実にし、異なる濃度の種々のペプチドの多様なゲル化速度を考慮するために、レオロジーの測定は試料調製の２ヶ月後に行った。振動周波数掃引研究（角周波数（ω）に対する貯蔵弾性率（Ｇ’）を測定）は、１％歪みを用いて０．１〜１００rad/sで行った。振動振幅掃引研究（振動歪み％（γ）に対する貯蔵弾性率（Ｇ’）を測定）は、歪み０．０１〜１００％を一定の角周波数１rad/sで用いて行った。全ての測定は２５℃で実施した。
【００４４】
生体適合性：細胞傷害性／生存率アッセイ。哺乳動物細胞との阻害剤ペプチド溶液の生体適合性は、定性的及び定量的に評価した。定性アッセイのために、生／死細胞傷害性アッセイを採用して、ペプチド溶液と共に４８〜９６時間インキュベーション後に生細胞及び死細胞を染色した。細胞生存率の定量的判定は、Roche製のＷＳＴ−１試薬を使用して行った。Ｕ８７神経膠芽腫及びＳＨＳＹ５Ｙ神経芽腫などの細胞系は、アルツハイマー型アミロイドプラークを処置するために設計された薬物候補に、より大きく関連する神経細胞系であるので、これらの細胞系を特異的に選択した。ＷＳＴ−１は、複雑な細胞メカニズムによって可溶性ホルマザン（着色産物）に切断される安定なテトラゾリウム塩である。その還元が主に生細胞でのＮＡＤ（Ｐ）Ｈの糖分解産生に依存するので、形成されるホルマザン色素の量は、培養物中の代謝活性細胞数と直接相関する。定量アッセイのために、ＨｅＬａ細胞及びＵ８７細胞について細胞５，０００個/ウェル、ならびにＳＨＳＹ５Ｙ神経芽腫細胞について細胞２０，０００個/ウェルを９６ウェルプレートに播種した。阻害剤ペプチドと共に４８又は７２時間インキュベーション後に、細胞生存率／細胞傷害性を評価した。全ての阻害剤溶液を、血清も他の添加物／成長因子も含まない単純な成長培地に入れて調製した。阻害剤溶液の中和は、ｐＨが中和範囲に達するまで５Ｍ ＮａＯＨで行った。
【００４５】
生物学的適合性：溶血アッセイ。ウサギ新鮮血１mlを採取し、冷ＰＢＳ（ｐＨ約７．３）溶液で３回洗浄した。最終的にペレット状にした赤血球（ＲＢＣ）を冷ＰＢＳ４ml中に再懸濁し、アッセイに使用した。１×ＰＢＳ（ｐＨ約７．３）を陰性対照として使用し、ＰＢＳに溶かした１％ Triton-Xを陽性対照として使用した。阻害剤ペプチド溶液１６０μlを新鮮ＲＢＣ溶液４０μlと混合し、３７℃で１時間インキュベーションした。各試料について５回の繰り返しを行った。次に、試料を遠心分離してインタクトなＲＢＣを底に沈降させ、プレートリーダーを使用して５６７nmにおける上清１００μlの吸光度を測定した。
【００４６】
ＩＣ５０値の決定。ＴｈＴを含有する溶液、自己組織化ペプチドを含有する溶液及び阻害剤を含有する溶液（合計体積１００μL/ウェル）をGreiner ９６ウェルプレート（GRE96ft）のウェルに注入し、蛍光強度を蛍光プレートリーダー（Tecan Safire 2）で１分間隔で測定した。最適化された測定パラメーターは、励起波長４５２nm；励起帯域幅９nm；発光波長４８５nm；発光帯域幅２０nm；ゲイン値４５；温度２６〜２８℃である。様々なモル過剰の阻害剤を１００μM ＫＥ７に添加した。各アッセイで少なくとも５回繰り返した、５回の独立したアッセイの結果から、ＩＣ５０のＳ字状曲線をプロットした。Ｓ字状曲線について、（差が最大となった）特定の時点で検出されたＴｈＴ蛍光強度を阻害剤の濃度の対数値に対してプロットした。
【００４７】
ゲル化研究。天然コアアミロイド形成配列ＮＬ６（ヒトのアミリン由来）及びＫＥ７（アルツハイマーのアミロイドβ由来）を阻害剤ペプチドと混合した。１．５mMコア配列（終濃度）を１０及び２０モル過剰の阻害剤と混合した。ペプチドを溶解させるために室温のMilli-Q水を使用し、次にそれを３ヶ月間静置した。
【００４８】
阻害剤：合成及び特徴づけ。固相ペプチド合成は、Kirin et al. (2007) J. Chem. Educ. 84:108-111にしたがって行った。全ての反応は、手に持ったシリンジ中で実施した。合成された生成物（出発物質は樹脂約１ｇ；粗ペプチドの全重量は約１７０mg）は、水に高度に可溶性であり、それを標準的な質量分析（ＭＳ）技法及び核磁気共鳴（Ｄ２Ｏを用いた１Ｈ ＮＭＲ）技法によって特徴づけた（図３１参照）。
【００４９】
結果
ヒドロゲル形成トリペプチド及びヘキサペプチドのＣＤスペクトル及びレオロジーデータ
Ａｃ−ＬＤ６は、ヘキサペプチドＡｃ−ＬＩＶＡＧＤ（配列番号３参照）を表し、Ａｃ−ＮＬ６は、ヘキサペプチドＡｃ−ＮＦＧＡＩＬ（配列番号６１）を表し、Ａｃ−ＩＤ３は、トリペプチドＡｃ−ＩＶＤ（配列番号２０参照）を表す。ペプチドＮＦＧＡＩＬは、２型糖尿病と関連づけられている、ヒトのアミリン中の天然コア配列であり、一方でペプチドＬＩＶＡＧＤ及びＩＶＤは、合理的に設計されたペプチドである。
【００５０】
図１に、１．２mg/ml Ａｃ−ＬＤ６（Ａ）、０．５mg/ml Ａｃ−ＮＬ６（Ｃ）及び５mg/ml Ａｃ−ＩＤ３（Ｅ）のＣＤスペクトルを示すが、これらは、ランダムコイルコンフォメーションから準安定な一過性αヘリックス状態（２２２nmで最小）への超小型ペプチドの転移を示している。より高い濃度の２．５mg/ml Ａｃ−ＬＤ６（Ｂ）、１．２mg/ml Ａｃ−ＮＬ６（Ｄ）及び７．５mg/ml Ａｃ−ＩＤ３（Ｆ）で、β型構造が観察される（約２２０nmで最小；芳香族ペプチド配列についてやや青色シフト）。全てのスペクトルを室温２５℃で測定した。（Ｆ）では、αヘリックス中間体からβ型構造への平衡転移過程を見ることができる（２０８nmにショルダー）。
【００５１】
図２５Ａに、また、天然コア配列ＮＬ６がαヘリックス中間体を表すことを示す。天然コア配列ＮＬ６及び設計されたペプチドＬＤ６の両方は、異なる濃度でヒドロゲルを形成する（図２５Ｂ参照）。
【００５２】
図２６に、１．５mM Ａｃ−ＫＥ７によって形成されたヒドロゲル（緑色）、ならびに１．５mM Ａｃ−ＫＥ７をＡｃ−ＬＰＥ及びＡｃ−ＬＰＧと１：２０のモル比で混合したときのペプチド−阻害剤溶液（ゲル化なし）（それぞれ赤ワイン色及び赤色）についてのレオロジーデータを示す。グラフに貯蔵弾性率（Ｇ’、Ｐａ単位）を（Ａ）１％歪みでの角周波数（rad/sec）及び（Ｂ）室温２５℃における角周波数１rad/secでの振動歪み（％）の関数として示す。阻害剤を添加されていないＡｃ−ＫＥ７対照は、ヒドロゲルを形成し、そのヒドロゲルは、振幅掃引について直線状の粘弾性範囲、及び周波数掃引測定について直線プロファイルを示した。これらは、この自己組織化ペプチドの特徴であった。しかし、同濃度のＡｃ−ＫＥ７であっても、阻害剤と１：２０のモル比で混合するとヒドロゲルを形成しなかった。このことは、レオロジーデータから理解することができる。そのデータでは、ペプチド−阻害剤溶液が振幅掃引測定及び周波数掃引測定の両方の場合に変動性の高い曲線を与えており、それは、ペプチド−阻害剤溶液がゲル形態ではなく溶液形態であることを理由とする。
【００５３】
抗アミロイドペプチド治療薬(経口取り込み用超小型ペプチド阻害剤)
チオフラビンＴ（ベーシックイエロー１又はＣＩ４９００５）は、塩酸の存在下でデヒドロチオトルイジンをメタノールでメチル化することによって得られるベンゾチアゾール塩である（図２１Ｂ参照）。この色素は、アミロイドと呼ばれるミスフォールディングしたタンパク質凝集物（例えば、アルツハイマー病患者の脳内に見られるアミロイドβから構成されるプラーク）の存在をin vitro及びin vivoの両方で視覚化及び定量するために広く使用されている。この色素が、アミロイド凝集物中にあるものなどのβシートリッチ構造に結合すると、強化蛍光を示す。以下の実験では、アミロイド凝集物を形成するアミロイドβ（１−４２）の天然コア配列であるペプチドＫＥ７をモデル系及び陽性対照として使用する（図２及び１８参照）。
【００５４】
阻害研究のために、ＫＥ７を阻害剤ペプチドと１：１０のモル比で混合した（図２１Ｃ参照）。添加された色素の濃度は、陽性対照の濃度と同じであり、蛍光シグナルを１時間にわたりモニタリングした。
【００５５】
図３〜１７ならびに２１Ｅ及びＦは、阻害剤ペプチド１〜５及び７〜１６で例示される本発明の阻害剤ペプチドがＫＥ７の凝集を抑制することを明らかに示している。ＫＥ７は、阻害剤ペプチドなしではアミロイドフィブリルの形成による蛍光強化を示すが、阻害剤ペプチドが添加されると蛍光シグナルが顕著に減少する。阻害剤１〜１６は、添付の配列リスト中の配列番号２１〜４４のリストからの個別の阻害剤ペプチドに対応する。
【００５６】
さらに、阻害剤ペプチド１及び２の不在下及び存在下でペプチドＡｃ−ＫＥ７及びＡｃ−ＮＬ６を用いたゲル化研究は、阻害剤ペプチドとの混合がペプチドＡｃ−ＫＥ７及びＡｃ−ＮＬ６のヒドロゲル形成を防止／阻害したことを示した（図３２Ａ）。
【００５７】
半数阻害濃度（ＩＣ５０）は、化合物が特定の生物学的過程を阻害する有効性の一尺度である。この定量尺度は、所与の過程、この場合はアミロイドの凝集を効果的に抑制するために特定の薬物又は他の物質（阻害剤）がどれだけ多く必要かを示している。ペプチドＡｃ−ＬＰＥ及びＡｃ−ＬＰＧ（配列番号４７及び４９に対応する阻害剤ペプチド３及び５；Ａｃ−ＬＥ３及びＡｃ−ＬＧ３とも呼ばれる）についてのＩＣ５０のＳ字状曲線を図３０に示す。
【００５８】
図１９、２０及び２１Ｄに、阻害剤ペプチド単独（濃度８μm及び１００μm）を色素と混合したときに、蛍光強化がない（ＰＭＴのゲイン１３１を用いて水＋色素で得られた陰性対照範囲内の値に類似の値）ことを示す。
【００５９】
図２１Ａに示されるバイアルは、本発明によるプロリン含有阻害剤ペプチドが水に可溶性であることを示す。水溶液への溶解性良好であることは、特に、完全に溶解させるために有機溶媒を必要とする芳香族化合物に比べた場合、薬物開発への応用に有利である。
【００６０】
図２２Ａ及びＢに、電界放射型走査電子顕微鏡法（ＦＥＳＥＭ）を用いて、本発明による阻害剤ペプチドの典型的な形態を異なる倍率で示す。阻害剤ペプチドを水に完全に溶解させることによって１０mg/mlペプチド溶液を調製した。次に、瞬間凍結（shock frozen）し、凍結乾燥し、プラチナ薄層でコーティングして電子顕微鏡法用の伝導性試料を調製した。通常は、アミロイド線維は、普通の光学顕微鏡であっても観察することができ、ヒドロゲルを形成するアミロイドコア配列の場合、約３０００倍から始まる倍率で線維構造をはっきりと見ることができる。阻害剤ペプチド１について、３７，０００倍以上というより高い倍率であっても線維は観察されなかった（図３２Ｂも参照）。ペプチドをアミロイドーシスに有効な阻害剤薬物として使用するには、阻害剤が天然アミロイド／成長途中のアミロイドフィブリルを効果的に認識してそれと結合できるが、それ自体は線維を形成しないことを保証することが必要である。
【００６１】
図２３に、阻害剤の生物学的適合性を試験する溶血アッセイの結果を示す。あらゆる薬物候補は、血液及び生体組織との生物学的適合性について最初に試験されなければならない。ここで、阻害剤ペプチドが赤血球に何らかの有害作用を有するかどうかを決定するために溶血アッセイを行った。３種の阻害剤ペプチドを水に２．５、５及び１０mg/mlの濃度で使用した。これらの溶液のｐＨを測定し、より高濃度のペプチドを有する試料が酸性（ｐＨ＜４）であることが見出された。したがって、比較のために、中和されたペプチド溶液のセット（１％w/v ＮａＯＨで中和）を同濃度で調製した。低ペプチド濃度（２．５mg/ml）及び阻害剤ペプチドの中和溶液で溶血は観察されず、このことは、より高い濃度である５及び１０mg/mlについて観察された２５％溶血が、ペプチド自体よりもむしろ酸性ｐＨが原因であったことを示している。
【００６２】
様々な細胞系を用いたＷＳＴ−１アッセイ及び生／死細胞傷害性アッセイで類似の結果が得られた（図２７〜２９参照）。
【００６３】
ペプチド由来ヒドロゲルの機械的安定性に塩濃度が及ぼす影響
図２４に、ＮａＣｌ濃度の増加が、１０mg/mL Ａｃ−ＬＤ６（Ｌ）から得られたヒドロゲルの貯蔵弾性率Ｇ’／機械的強度を減少させたことを示す。
【００６４】
本明細書、特許請求の範囲、及び／又は添付の図面に開示された本発明の特徴は、別々及びそれらの任意の組み合わせの両方で、本発明をその様々な形態で実現するための資料でありうる。
【図１】
2014524913.tif 000005
【図２】
2014524913.tif 000006
【図３】
2014524913.tif 000007
【図４】
2014524913.tif 000008
【図５】
2014524913.tif 000009
【図６】
2014524913.tif 000010
【図７】
2014524913.tif 000011
【図８】
2014524913.tif 000012
【図９】
2014524913.tif 000013
【図１０】
2014524913.tif 000014
【図１１】
2014524913.tif 000015
【図１２】
2014524913.tif 000016
【図１３】
2014524913.tif 000017
【図１４】
2014524913.tif 000018
【図１５】
2014524913.tif 000019
【図１６】
2014524913.tif 000020
【図１７】
2014524913.tif 000021
【図１８】
2014524913.tif 000022
【図１９】
2014524913.tif 000023
【図２０】
2014524913.tif 000024
【図２１】
2014524913.tif 000025
【図２２】
2014524913.tif 000026
【図２３】
2014524913.tif 000027
【図２４】
2014524913.tif 000028
【図２５】
2014524913.tif 000029
【図２６】
2014524913.tif 000030
【図２７】
2014524913.tif 000031
【図２８】
2014524913.tif 000032
【図２９】
2014524913.tif 000033
【図３０】
2014524913.tif 000034
【図３１】
2014524913.tif 000035
【図３２】
2014524913.tif 000036
【配列表】
2014524913000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成25年9月3日(2013.9.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミロイドーシス関連疾患の処置に使用するための単離されたαヘリックス破壊ペプチドであって、該単離されたαヘリックス破壊ペプチドが、一般式
Ｚ−（Ｘ）ｍ−プロリン−（Ｘ）ｎ
［式中、
Ｚは、Ｎ末端保護基であり；
Ｘは、それぞれ独立して、アミノ酸より選択され；そして
ｍ及びｎは、アミノ酸の数を示し、独立して１〜５より選択される整数であり、ｍ＋ｎは≦６である］
を有し、
ここで、該Ｎ末端保護基が、一般式−Ｃ（Ｏ）−Ｒ［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチルおよびイソブチルから成る群より選択される］を有し、
ここで、Ｘが、それぞれ独立して、非芳香族アミノ酸より選択され、
ここで、該ペプチドの該Ｎ末端アミノ酸が、該ペプチドのＣ末端アミノ酸よりも疎水性が大きく、
ここで、該アミロイドーシス関連疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）及びクロイツフェルト・ヤコブ病などのプリオン関連又は海綿状脳症、レビー小体型認知症、パーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、脊髄小脳失調症、脊髄小脳失調症１７型、球脊髄性筋萎縮症、遺伝性歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、家族性英国型認知症、家族性デンマーク型認知症のような神経変性疾患、ＩＩ型糖尿病、甲状腺髄様ガン、心房アミロイドーシス、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、脳下垂体プロラクチノーマ、注射限局性アミロイドーシス（Injection-localized amyloidosis）、大動脈中膜アミロイドーシス、遺伝性格子状角膜ジストロフィー、睫毛乱生に関連する角膜アミロイドーシス、白内障、歯原性石灰化上皮腫、肺胞タンパク症、封入体筋炎、皮膚苔癬アミロイドーシスのような非神経障害性限局性疾患、ならびにＡＬアミロイドーシス、ＡＡアミロイドーシス、家族性地中海熱、老人性全身性アミロイドーシス、家族性アミロイド多発性神経障害、血液透析関連アミロイドーシス、ＡｐｏＡＩアミロイドーシス、ＡｐｏＡＩＩアミロイドーシス、ＡｐｏＡＩＶアミロイドーシス、フィンランド型遺伝性アミロイドーシス、リゾチームアミロイドーシス、フィブリノーゲンアミロイドーシス、アイスランド型遺伝性脳アミロイドアンギオパチー、家族性アミロイドーシス、及び複数の組織に生じる、軽鎖アミロイドーシスなどの全身性アミロイドーシスのような非神経障害性全身アミロイドーシスから成る群より選択される、
単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項２】
Ｘが、それぞれ独立して、天然アミノ酸より選択される、請求項１記載のアミロイドーシス関連疾患の処置に使用するための単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項３】
少なくとも一つのＸが、Ｄ−アミノ酸又はペプチド模倣アミノ酸である、請求項１又は２記載のアミロイドーシス関連疾患の処置に使用するための単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項４】
前記非芳香族アミノ酸が、イソロイシン、ロイシン、バリン、アラニン、グリシン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、トレオニン及びリシンから成る群より選択される、請求項１〜３のいずれか記載のアミロイドーシス関連疾患の処置に使用するための単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項５】
ｍ＋ｎが≦５、好ましくは≦４、より好ましくは≦３である、請求項１〜４のいずれか記載のアミロイドーシス関連疾患の処置に使用するための単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項６】
ｍ及びｎが１である、請求項１〜５のいずれか記載のアミロイドーシス関連疾患の処置に使用するための単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項７】
前記Ｎ末端保護基がアセチル基である、請求項１〜６のいずれか記載のアミロイドーシス関連疾患の処置に使用するための単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項８】
前記ペプチドのＣ末端がアミド化又はエステル化されており、ここで、好ましくはＣ末端が、式−ＣＯＮＨＲ［式中、Ｒは、Ｈ、アルキル及び置換アルキルから成る群より選択される］又は式−ＣＯＯＲ［式中、Ｒは、アルキル及び置換アルキルから成る群より選択される］を有する、請求項１〜７のいずれか記載のアミロイドーシス関連疾患の処置に使用するための単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項９】
前記ペプチドが、場合により生理緩衝液を含む水溶液中に提供される、請求項１〜８のいずれか記載のアミロイドーシス関連疾患の処置に使用するための単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項１０】
前記ペプチドが経口投与される、請求項１〜９のいずれか記載のアミロイドーシス関連疾患の処置に使用するための単離されたαヘリックス破壊ペプチド。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか記載の単離されたαヘリックス破壊ペプチドを含む、アミロイドーシス関連疾患の処置に使用するための薬学的組成物であって、
ここで、該アミロイドーシス関連疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）及びクロイツフェルト・ヤコブ病などのプリオン関連又は海綿状脳症、レビー小体型認知症、パーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、脊髄小脳失調症、脊髄小脳失調症１７型、球脊髄性筋萎縮症、遺伝性歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、家族性英国型認知症、家族性デンマーク型認知症のような神経変性疾患、ＩＩ型糖尿病、甲状腺髄様ガン、心房アミロイドーシス、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、脳下垂体プロラクチノーマ、注射限局性アミロイドーシス（Injection-localized amyloidosis）、大動脈中膜アミロイドーシス、遺伝性格子状角膜ジストロフィー、睫毛乱生に関連する角膜アミロイドーシス、白内障、歯原性石灰化上皮腫、肺胞タンパク症、封入体筋炎、皮膚苔癬アミロイドーシスのような非神経障害性限局性疾患、ならびにＡＬアミロイドーシス、ＡＡアミロイドーシス、家族性地中海熱、老人性全身性アミロイドーシス、家族性アミロイド多発性神経障害、血液透析関連アミロイドーシス、ＡｐｏＡＩアミロイドーシス、ＡｐｏＡＩＩアミロイドーシス、ＡｐｏＡＩＶアミロイドーシス、フィンランド型遺伝性アミロイドーシス、リゾチームアミロイドーシス、フィブリノーゲンアミロイドーシス、アイスランド型遺伝性脳アミロイドアンギオパチー、家族性アミロイドーシス、及び複数の組織に生じる、軽鎖アミロイドーシスなどの全身性アミロイドーシスのような非神経障害性全身アミロイドーシスから成る群より選択される、
薬学的組成物。
【請求項１２】
さらに、少なくとも１種の薬学的に許容されうる担体、希釈剤及び／又は賦形剤を含む、アミロイドーシス関連疾患の処置に使用するための請求項１１記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
さらに、１価又は２価金属塩を含む、アミロイドーシス関連疾患の処置に使用するための請求項１１又は１２記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記金属が、ナトリウム、マグネシウム、カルシウム及び亜鉛から成る群より選択される、アミロイドーシス関連疾患の処置に使用するための請求項１３記載の薬学的組成物。  
【国際調査報告】
2014524913.tif 000037
2014524913.tif 000038
2014524913.tif 000039
2014524913.tif 000040
2014524913.tif 000041
2014524913.tif 000042