(57)【要約】  本発明は、（ａ）エリブリンまたはその医薬として許容される塩および（ｂ）ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを投与することによる、乳癌を有する対象の治療方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）治療的有効量のエリブリンまたはその医薬として許容される塩および（ｂ）ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを対象に投与することを含む、乳癌に罹患している対象の治療方法。
【請求項２】
乳癌が腺癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
乳癌が炎症性乳癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
乳癌が転移性乳癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
対象が転移性乳癌の治療のために少なくとも１つの化学療法を事前に受けている、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
対象が転移性乳癌の治療のために少なくとも２つの化学療法を事前に受けている、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
被験者が、アントラサイクリンまたはタキサンまたはそれらの両方の投与を含む１以上の化学療法を事前に受けている、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
乳癌が葉酸受容体アルファ発現または過剰発現乳癌である、請求項１から請求項７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
乳癌がＨＥＲ２陰性乳癌である、請求項１または請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
乳癌がＨＥＲ２陽性乳癌である、請求項１または請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
乳癌がＥＲ陰性およびＰＲ陰性である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
乳癌がＥＲ陰性およびＰＲ陽性、ＥＲ陽性およびＰＲ陽性、またはＥＲ陽性およびＰＲ陰性である、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
乳癌がＥＲ陰性、ＰＲ陰性およびＨＥＲ２陰性乳癌である、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
乳癌がホルモン療法に対して治療抵抗性である、請求項１１または請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
乳癌がＥＲ陰性およびＰＲ陽性、ＥＲ陽性およびＰＲ陽性、またはＥＲ陽性およびＰＲ陰性であり、ホルモン療法に対して治療抵抗性である、請求項９または請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
ホルモン療法がタモキシフェンまたはアロマターゼインヒビターでの療法である、請求項１４または請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩およびファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを交互に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
対象における腫瘍成長が抑制される、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩およびファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントの投与が対象における腫瘍退縮をもたらす、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩およびファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントが対象における完全な腫瘍退縮をもたらす、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩を約１４〜３５日ごとに１〜３回、対象に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩を２１〜２８日ごとに少なくとも１回、対象に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩を２１〜２８日周期の第１日および第８日に対象に投与する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを２１〜２８日周期の第１日に対象に投与する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩を２１日周期の第１日および第８日に対象に投与する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを２１日周期の第１日に投与する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントをエリブリンまたはその医薬として許容される塩の投与の直後に対象に投与する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩を第１日にファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントの投与の後で対象に投与する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを週１回、対象に投与する、請求項２３に記載の方法。
【請求項３０】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩を約０．５ｍｇ／ｍ２〜約３．０ｍｇ／ｍ２の量で対象に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩を約０．７ｍｇ／ｍ２〜約２．０ｍｇ／ｍ２の量で対象に投与する、請求項２０に記載の方法。
【請求項３２】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩を１．４ｍｇ／ｍ２の量で対象に投与する、請求項２３から請求項２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
対象が軽度の肝障害を有し、エリブリンまたはその医薬として許容される塩を１．１ｍｇ／ｍ２の量で対象に投与する、請求項２３に記載の方法。
【請求項３４】
対象が中等度の肝障害を有し、エリブリンまたはその医薬として許容される塩を０．７ｍｇ／ｍ２の量で対象に投与する、請求項２３に記載の方法。
【請求項３５】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩を対象に静脈内投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約４．０ｍｇ／ｋｇの量で週１回、対象に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの量で週１回、対象に投与する、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを約２．５ｍｇ／ｋｇの量で週１回、対象に投与する、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを約３．００ｍｇ／ｋｇ〜約９．００ｍｇ／ｋｇの量で３週間ごとに対象に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを約７．５０ｍｇ／ｋｇの量で対象に投与する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩およびファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを対象に静脈内投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項４２】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩がメシル酸エリブリンである、請求項１に記載の方法。
【請求項４３】
ファーレツズマブを投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項４４】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩およびファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを癌に対する第二線級またはそれ以降の療法として対象に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項４５】
（ａ）エリブリンまたはその医薬として許容される塩を２１〜２８日周期の第１日および第８日に、ならびに（ｂ）ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを同じ２１〜２８日周期の第１日に、対象に投与することを含む、乳癌に罹患している対象の治療方法。
【請求項４６】
ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントの、少なくとも１つの負荷用量を、最初の２１〜２８日周期中に対象に投与することを更に含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを最初の周期の第１日および第８日に投与する、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
（ａ）エリブリンまたはその医薬として許容される塩を２１〜２８日周期の第１日および第８日に、ならびに
（ｂ）ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを
（ｉ）最初の２１〜２８日周期の第１日および第８日、および
（ｉｉ）それぞれの後続の２１〜２８日周期の第１日に対象に投与することを含む、乳癌に罹患している対象の治療方法。
【請求項４９】
周期が２１日周期である、請求項４５から請求項４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩およびファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを静脈内投与する、請求項４５から請求項４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
メシル酸エリブリンである、エリブリンの医薬として許容される塩を投与する、請求項１から請求項５０のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は乳癌の治療のためのエリブリンおよびファーレツズマブの共投与に関する。
【背景技術】
【０００２】
乳癌は女性における癌による第２位の死亡原因であり、これを上回るのは肺癌だけである。乳癌が女性の死亡を招く確率は約３６分の１（約３％）である。Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙは、米国で２０１２年に約３９，５１０人の女性が乳癌で死亡し、約２２６，８７０の新たな浸潤性乳癌症例が女性において診断されると見積もっている。
【０００３】
乳癌治療は、現在、細胞タンパク質発現に応じて適合化されている。エストロゲン受容体／プロゲステロン受容体（ＥＲ／ＰＲ）を発現する乳癌は内分泌療法で治療され、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）を過剰発現する乳癌は、抗ＨＥＲ２物質を含む療法で治療される。これらのマーカーを欠く癌は、現在のところ、予後不良を示し、典型的に、伝統的な細胞毒性化学療法で尚も治療されている。したがって、前記マーカーの１以上を欠いている可能性のある乳癌（例えば、「トリプルネガティブ」乳癌）を含む乳癌に対する新規かつ有効な療法が必要とされている。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、乳癌を有する対象（患者）の治療方法を提供する。該方法は、治療的有効量の（ａ）エリブリン（ｅｒｉｂｕｌｉｎ）またはその医薬として許容される塩、および（ｂ）ファーレツズマブ（ｆａｒｌｅｔｕｚｕｍａｂ）またはその抗原結合性フラグメントを、乳癌に罹患している対象に投与することを含む。
【０００５】
乳癌は、腺癌、炎症性乳癌、転移性乳癌、葉酸受容体アルファ発現または過剰発現乳癌、ＨＥＲ２陽性乳癌またはＨＥＲ２陰性乳癌でありうる。
【０００６】
幾つかの実施形態においては、乳癌はエストロゲン受容体（ＥＲ）陰性およびプロゲステロン受容体（ＰＲ）陰性、ＥＲ陰性およびＰＲ陽性、ＥＲ陽性およびＰＲ陽性、またはＥＲ陽性およびＰＲ陰性である。
【０００７】
幾つかの実施形態においては、乳癌はトリプルネガティブ、すなわち、ＨＥＲ２陰性、ＥＲ陰性およびＰＲ陰性である。
【０００８】
幾つかの実施形態においては、乳癌は、タモキシフェンまたはアロマターゼインヒビターのようなホルモン療法に対して治療抵抗性である。
【０００９】
幾つかの実施形態においては、乳癌はＥＲ陰性およびＰＲ陽性、ＥＲ陽性およびＰＲ陽性、またはＥＲ陽性およびＰＲ陰性であり、ホルモン療法に対して治療抵抗性である。
【００１０】
本発明の幾つかの実施形態においては、乳癌は転移性乳癌であり、対象は転移性疾患の治療のために少なくとも１つの化学療法を事前に受けている。
【００１１】
本発明の幾つかの実施形態においては、乳癌は転移性乳癌であり、対象は転移性疾患の治療のための少なくとも２つの化学療法を事前に受けている。
【００１２】
本発明の他の実施形態においては、対象は、アントラサイクリンまたはタキサンまたはそれらの両方の投与を含む化学療法を事前に受けている。
【００１３】
幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは中間に投与されうる。
【００１４】
本発明の種々の実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩およびファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは、相乗的抗癌作用を得るのに有効な量で投与される。
【００１５】
ある実施形態においては、対象における腫瘍成長が抑制される。
【００１６】
本発明の他の実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩およびファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントの投与は対象における腫瘍退縮をもたらす。本発明の他の実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩およびファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは対象における完全な腫瘍退縮をもたらす。
【００１７】
幾つかの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩は約１４〜３５日ごとに１〜３回、または２１〜２８日ごとに約１回、対象に投与されうる。１つの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩は２１〜２８日周期の第１日および第８日に対象に投与される。幾つかの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩は２８日周期の第１日および第８日に対象に投与される。
【００１８】
幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは、約７〜２８日ごとに１〜４回、対象に投与されうる。幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは２１〜２８日周期中に１回投与される。幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは２１〜２８日周期の第１日に対象に投与されうる。幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは２８日周期の第１日または２１日周期の第１日に対象に投与されうる。
【００１９】
本発明の幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントはエリブリンまたはその医薬として許容される塩の投与の直後に対象に投与される。
【００２０】
本発明の幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは週１回、対象に投与される。
【００２１】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩は、約０．５ｍｇ／ｍ２〜約３．０ｍｇ／ｍ２の量、約１．０ｍｇ／ｍ２〜約２．０ｍｇ／ｍ２の量、約１．４ｍｇ／ｍ２の量、または約１．１ｍｇ／ｍ２の量で対象に投与されうる。
【００２２】
１つの実施形態においては、対象は軽度または中等度の肝障害を有し、エリブリンまたはその医薬として許容される塩は、それぞれ１．１ｍｇ／ｍ２または０．７ｍｇ／ｍ２の量で対象に投与される。
【００２３】
１つの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩はリポソーム製剤中に製剤化される。ある実施形態においては、リポソーム製剤は更に、アンモニウム塩を含む。
【００２４】
幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは、約１．００ｍｇ／ｋｇ〜約４．０ｍｇ／ｋｇの量で週１回、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの量で週１回、約２．５ｍｇ／ｋｇの量で週１回、または約３．００ｍｇ／ｋｇの〜約９．００ｍｇ／ｋｇの量で３週間ごとに、対象に投与されうる。
【００２５】
他の実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性部分は約７．０ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、約８．０ｍｇ／ｋｇまたは約８．５ｍｇ／ｋｇの量で投与される。
【００２６】
エリブリンまたはその医薬として許容される塩、およびファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは対象に静脈内投与されうる。
【００２７】
本発明の１つの実施形態においては、エリブリンの医薬として許容される塩はメシル酸エリブリンである。
【００２８】
本発明の１つの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩、およびファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは癌に対する第二線級またはそれ以降の療法として対象に投与されうる。
【００２９】
もう１つの態様においては、本発明は、乳癌に罹患している対象の治療方法を提供する。該方法は、（ａ）エリブリンまたはその医薬として許容される塩を２１〜２８日周期の第１日および第８日に、ならびに（ｂ）ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを同じ２１〜２８日周期の第１日に、対象に投与することを含む。幾つかの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩を２１日周期の第１日および第８日に、ならびにファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを同じ２１日周期の第１日に投与する。幾つかの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩を２８日周期の第１日および第８日に投与し、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを同じ２８日周期の第１日に投与する。
【００３０】
本発明の方法は、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントの負荷（ローディング）用量を投与することを含みうる。例えば、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントの、少なくとも１つの負荷用量を、最初の２１〜２８日周期中に投与することが可能である。幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを最初の周期の第１日および第８日に投与する。例えば、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを最初の２１日周期の第１日および第８日ならびに後続の２１日周期の第１日に投与することが可能である。
【００３１】
もう１つの態様においては、本発明は、乳癌に罹患している対象の治療方法を提供する。該方法は、エリブリンまたはその医薬として許容される塩を２１〜２８日周期の第１日および第８日に対象に投与、例えば静脈内投与すること、ならびにファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを最初の２１〜２８日周期の第１日および第８日ならびに後続の２１〜２８日周期の第１日に対象に投与、例えば静脈内投与することを含む。幾つかの実施形態においては、該周期は２１日周期である。
【００３２】
（発明の詳細な説明）
本発明は乳癌の治療方法を提供する。本発明の方法は、一般に、治療的有効量の（ａ）エリブリンまたはその医薬として許容される塩、および（ｂ）ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントを、乳癌に罹患している対象に投与することを含む。
【００３３】
幾つかの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩、およびファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは、相乗的抗癌作用を得るのに有効な量で投与される。
【００３４】
本明細書中で用いる「相乗的抗癌作用」なる語は、腫瘍成長の抑制が、それぞれの単独療法のみの投与と比較して相加的な場合を超えるような、本明細書に記載されている療法の投与の際の腫瘍の成長の抑制を意味する。例えば、幾つかの実施形態においては、相乗的抗癌作用は癌の成長の相違により測定されうる。他の実施形態においては、相乗的抗癌作用は腫瘍成長および／または腫瘍退縮の抑制の相違により測定されうる。相乗的作用は、減少した量の（ａ）エリブリンもしくはその医薬として許容される塩、および／または（ｂ）ファーレツズマブもしくはその抗原結合性フラグメントの使用を可能にしうる。
【００３５】
エリブリンは非タキサン微小管動力学インヒビターである。エリブリンは、海生海綿ハリコンドリア・オカダイ（Ｈａｌｉｃｈｏｎｄｒｉａ  ｏｋａｄａｉ）から単離された産物であるハリコンドリンＢの合成類似体である。エリブリンの化学名は１１，１５：１８，２１：２４，２８−トリエポキシ−７，９−エタノ−１２，１５−メタノ−９Ｈ，１５Ｈ−フロ［３，２−ｉ］フロ［２’，３’：５，６］ピラノ［４，３ｂ］［１，４］ジオキサシクロペンタコシン−５（４Ｈ）−オン、２−［（２Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル］ヘキサコサヒドロ−３−メトキシ−２６−メチル−２０，２７−ビス（メチレン）−、（２Ｒ，３Ｒ，３ａＳ，７Ｒ，８ａＳ，９Ｓ，１０ａＲ，１１Ｓ，１２Ｒ，１３ａＲ，１３ｂＳ，１５Ｓ，１８Ｓ，２１Ｓ，２４Ｓ，２６Ｒ，２８Ｒ，２９ａＳ）である。それは遊離塩基では７２９．９、そしてメシル酸塩では８２６．０の分子量を有する。エリブリンは式Ｉの構造を有し、メシル酸エリブリンは式ＩＩの構造を有する。
【００３６】
【化１】
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【００３７】
メシル酸エリブリンは、転移性乳癌の治療のために少なくとも２つの化学療法を事前に受けている転移性乳癌を有する患者の治療に関して承認されている。
【００３８】
本明細書中で用いる「ファーレツズマブ」または「ＭＯＲＡｂ−００３」なる語は、ＦＲαに結合する抗体を意味し、マウスＬＫ２６重鎖および軽鎖由来の以下のＣＤＲを含む：ＣＤＲＨ１としての配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２としての配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３としての配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１としての配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２としての配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３としての配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）。ファーレツズマブは、本明細書に添付されている図３の配列番号７および配列番号８に示されているアミノ酸配列を有する。ファーレツズマブならびにその製造方法および使用方法は米国特許第５，６４６，２５３号（その内容を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている。米国特許第５，６４６，２５３号（その内容を参照により本明細書に組み入れることとする）に教示されているフレームワーク領域内の突然変異を含むものを含む追加的な抗ＦＲα抗体が、対象における乳癌を治療するために、エリブリンまたはその医薬として許容される塩と共に使用されうる。
【００３９】
本明細書中で用いる「抗体」なる語は、ジスルフィド結合により互いに連結された４本のポリペプチド鎖、すなわち、２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖、ならびにＩｇ分子の必須エピトープ結合特性を保有するそのいずれかの機能性（すなわち、抗原結合性）フラグメント、突然変異体、変異体または誘導体を含む。そのような突然変異体、変異体または誘導体抗体形態は当技術分野で公知であり、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄフラグメント、Ｆａｂｃフラグメント、Ｓｃ抗体（一本鎖抗体）、ジアボディ、個々の抗体軽鎖、個々の抗体重鎖、抗体鎖間のキメラ融合体などのような分子を含む。免疫グロブリン分子は、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＡ）またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）のものでありうる。
【００４０】
各重鎖は重鎖可変領域（本明細書においてはＨＣＲＶまたはＶＨと略される）および重鎖定常領域から構成される。ＩｇＧ、ＩｇＤおよびＩｇＡの重鎖定常領域は３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。ＩｇＭおよびＩｇＥの重鎖定常領域は４つのドメインＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４を含む。各軽鎖は軽鎖可変領域（本明細書においてはＬＣＶＲまたはＶＬと略される）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は１つのドメインＣＬから構成される。ＶＩＩおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される、超可変性の領域に更に細分されることが可能であり、それらのＣＤＲの間には、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より保存的な領域が介在している。各ＶＨおよびＶＬは３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成され、これらはアミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序で配置されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。軽鎖はカッパまたはラムダのいずれかとして分類される。重鎖はガンマ、ミュー、アルファ、デルタまたはイプシロンとして分類され、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥとして抗体のイソタイプ（すなわち、クラス）を定める。
【００４１】
重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介しうる。
【００４２】
本明細書中で用いる、抗体の「抗原結合性部分またはフラグメント」なる語は、抗原に特異的に結合する能力を保有する、抗体の１以上のフラグメント（例えば、細胞結合ＦＲα、細胞に結合していないＦＲα）を意味する。抗体の抗原結合機能は完全長抗体のフラグメントにより果たされうることが示されている。「抗原結合性部分またはフラグメント」なる語に含まれる結合性フラグメントの例には、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる１価フラグメントであるＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む２価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；（ｖ）ＶＨおよびＶＬドメインを含むｄＡｂ；（ｖｉ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，５４４−５４６））；（ｖｉｉ）ＶＨまたはＶＬドメインからなるｄＡｂ；ならびに（ｖｉｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）または（ｉｘ）合成リンカーにより連結されていてもよい２以上の単離されたＣＤＲの組合せが含まれる。更に、Ｆｖフラグメントの、２つのドメイン、すなわち、ＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子によりコードされているが、それらは、ＶＬおよびＶＨ領域がペアになって１価分子（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知である；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２，４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５，５８７９−５８８３を参照されたい）を形成する単一タンパク質鎖にそれらがなることを可能にする合成リンカーにより、組換え法を用いて連結されうる。そのような一本鎖抗体は抗体の「抗原結合性部分またはフラグメント」なる語に含まれると意図される。これらの抗体フラグメントは、当業者に公知の通常の技術を用いて得られ、該フラグメントは、完全抗体と同様にして有用性に関してスクリーニングされる。抗原結合性部分は、組換えＤＮＡ技術により、または完全免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断により製造されうる。
【００４３】
１つの実施形態においては、ファーレツズマブの抗原結合性部分、フラグメントまたは誘導体は、前記に挙げられているＣＤＲ（配列番号１〜６）の１以上を含むことが可能であり、あるいはＬＫ２６ＨｕＶＫ（米国特許第５，６４６，２５３号の配列番号１３）、ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ（米国特許第５，６４６，２５３号の配列番号１４）、ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ（米国特許第５，６４６，２５３号の配列番号１５）およびＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（米国特許第５，６４６，２５３号の配列番号１６）からなる群から選択される可変領域軽鎖、および／またはＬＫ２６ＨｕＶＨ（米国特許第５，６４６，２５３号の配列番号１７）、ＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＦＡＩＳ，Ｎ（米国特許第５，６４６，２５３号の配列番号１８）、ＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＳＬＦ（米国特許第５，６４６，２５３号の配列番号１９）、ＬＫ２６ＨｕＶＨ  Ｉ，Ｉ（米国特許第５，６４６，２５３号の配列番号２０）、およびＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（米国特許第５，６４６，２５３号の配列番号２１）からなる群から選択される可変領域重鎖を含むことが可能である。米国特許第５，６４６，２５３号および米国特許第６，１２４，１０６号を参照されたい。もう１つの実施形態においては、ファーレツズマブの抗原結合性部分、フラグメントまたは誘導体は、重鎖可変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（米国特許第５，６４６，２５３号の配列番号２１）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（米国特許第５，６４６，２５３号の配列番号１６）、重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＳＬＦ（米国特許第５，６４６，２５３号の配列番号１９）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（米国特許第５，６４６，２５３号の配列番号１６）、または重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＦＡＩＳ，Ｎ（米国特許第５，６４６，２５３号の配列番号１８）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（米国特許第５，６４６，２５３号の配列番号１６）を含みうる。
【００４４】
本明細書中で用いる「抗体」なる語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体およびヒト抗体、ならびに天然に存在する抗体または当技術分野でよく知られた方法により組換え製造された抗体を含む。
【００４５】
種々の実施形態においては、本発明の抗体、例えばファーレツズマブは、免疫エフェクター活性を更に示しうる。本明細書中で用いる「免疫エフェクター活性」なる語は、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）により細胞を殺す本発明の抗体の能力を意味する。当技術分野でよく知られているとおり、ＡＤＣＣは、エフェクター細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞、好中球および好酸球）活性が、体液性応答の一部として抗体（例えば、ファーレツズマブ）が結合した標的細胞を細胞溶解する、細胞性免疫のメカニズムを意味する。同様に、ＣＤＣは、直接的な細胞傷害を招く、補体への抗体の結合を意味する。
【００４６】
本明細書中で用いる「対象」なる語は、哺乳類、例えば霊長類（例えば、ヒト、サル、チンパンジー）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウスなどを含む。幾つかの実施形態においては、対象はヒトである。
【００４７】
本発明の１つの態様においては、治療方法は、２以上の治療用物質（例えば、（ａ）エリブリンまたはその医薬として許容される塩、および（ｂ）ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメント）の投与を含むことを特徴とする。
【００４８】
幾つかの実施形態においては、乳癌は腺癌、炎症性乳癌および／または転移性乳癌である。幾つかの実施形態においては、乳癌はＨＥＲ２陽性またはＨＥＲ２陰性乳癌である。他の実施形態においては、乳癌はＨＥＲ２陰性、ＥＲ陰性およびＰＲ陰性癌（すなわち、トリプルネガティブ乳癌）である。更に他の実施形態においては、乳癌はＨＥＲ２陰性、ＥＲ陰性およびＰＲ陽性癌である。更に他の実施形態においては、乳癌はＨＥＲ２陰性、ＥＲ陽性およびＰＲ陽性癌である。更に他の実施形態においては、乳癌はＨＥＲ２陰性、ＥＲ陽性およびＰＲ陰性癌である。更に他の実施形態においては、乳癌はＥＲα発現トリプルネガティブ乳癌である。ＦＲα発現は、種々の方法により、例えば、実施例４に記載されているとおりに評価されうる。ＥＲ、ＰＲおよびＨＥＲ２状態を決定するために、標準的な方法が用いられうる。
【００４９】
本明細書中で用いる「ＨＥＲ２」は、Ｎｅｕ、ＥｒｂＢ−２、ＣＤ３４０（分化３４０のクラスター）またはｐ１８５としても公知であり、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ）ファミリーのメンバーであるタンパク質である。ヒトにおいては、ＨＥＲ２はＥＲＢＢ２遺伝子によりコードされている。
【００５０】
幾つかの実施形態においては、乳癌は内分泌不応性またはホルモン不応性である。「内分泌不応性」および「ホルモン不応性」なる語は、ホルモン療法、例えばアロマターゼインヒビターまたはタモキシフェンでの治療に抵抗性である癌を意味する。
【００５１】
幾つかの実施形態においては、乳癌は、葉酸受容体−αを発現または過剰発現する癌である。本明細書中で用いる「葉酸受容体アルファ」（ＦＲα、ＦＲ−アルファ、ＦＯＬＲ−１、ＦＯＬＲ１またはＦＲＡとも称される）なる語は葉酸の高アフィニティ受容体のアルファアイソフォームを意味する。膜結合ＦＲαはグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーにより細胞表面に結合し、細胞外区画とエンドサイトーシス区画との間を再循環し、葉酸を細胞内に輸送しうる。ＦＲαは、雌生殖管、胎盤、乳房、腎近位尿細管、脈絡叢、肺および唾液腺の上皮組織を含む種々の上皮組織において発現される。ＦＲαの可溶性形態は膜固定葉酸受容体に対するプロテアーゼまたはホスホリパーゼの作用により誘導されうる。
【００５２】
本明細書中で用いる「細胞に結合していないＦＲα」または「可溶性ＦＲα」なる語は、癌細胞のような細胞の細胞膜に固定されていないＦＲαを意味する。特定の実施形態においては、細胞に結合していないＦＲαはいずれの細胞にも結合せず、生物学的流体（例えば、尿または血清）中で自由に浮遊し又は可溶化される。例えば、ＦＲαは、正常または癌細胞から、例えば、癌細胞の表面から、生物学的流体中へ放出され、分泌され、または輸出されうる。
【００５３】
ＦＲαを発現または過剰発現する癌である乳癌は、被験者（対象）由来のサンプル中のＦＲα、例えば可溶性ＦＲαのレベルを測定することにより特定されうる。本明細書中で用いる「サンプル」なる語は、被験者から単離された類似した細胞または組織、ならびに被験者における組織、細胞および流体の集合体を意味する。「サンプル」なる語は、被験者からのいずれかの体液（例えば、血漿、血液、リンパ、婦人科学的流体、嚢胞性流体、尿、眼液、腹水、ならびに気管支洗浄および／または腹膜洗浄により集められた流体）または組織または細胞を含む。１つの実施形態においては、組織または細胞は被験者から摘出される。もう１つの実施形態においては、組織または細胞は被験者内に存在する。他の被験者サンプルは涙滴、血清、脳脊髄液、便、喀痰および細胞抽出物を含む。１つの実施形態においては、生物学的サンプルは被験者からのタンパク質分子を含有する。もう１つの実施形態においては、生物学的サンプルは被験者からのｍＲＮＡ分子または被験者からのゲノムＤＮＡ分子を含有しうる。
【００５４】
拡散またはタンパク質レベルでのＦＲαの発現のレベルを検出するのに適した実質的にあらゆる技術的手段が、ＦＲαのレベルを検出するために用いられうる、と当業者により容易に理解されるであろう。
【００５５】
例えば、被験者から得たサンプルからｍＲＮＡを抽出し、標準的な分子生物学的技術、例えばＰＣＲ分析を用いて、サンプル中のＦＲαをコードするｍＲＮＡの発現を検出し、および／または定量することが可能である。例えば、酸フェノール／グアニジンイソチオシアナート抽出（ＲＮＡｚｏｌ  Ｂ；Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）、ＲＮｅａｓｙ  ＲＮＡ調製キット（Ｑｉａｇｅｎ）またはＰＡＸｇｅｎｅ（ＰｒｅＡｎａｌｙｔｉｘ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用することを含むＲＮＡ抽出技術を用いて、ＲＮＡを細胞から抽出することが可能である。例えば、マイクロアレイ分析、核ラン・オン（ｎｕｃｌｅａｒ  ｒｕｎ−ｏｎ）アッセイ、ＲＮアーゼ保護アッセイ（例えば、Ｍｅｌｔｏｎら，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１２：７０３５を参照されたい）、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、膜ブロット技術（例えば、ノーザン、サザン、ドットなどのようなハイブリダイゼーション分析において使用されるもの）を用いて、またはマイクロウェル、サンプルチューブ、ゲル、ビーズもしくは繊維（または結合核酸を含むいずれかの固体支持体）における検出により、ＲＮＡをアッセイすることが可能である。
【００５６】
本発明の１つの実施形態においては、ＦＲαの発現のレベルを検出するために、マイクロアレイが用いられる。マイクロアレイは、異なる実験における再現性ゆえに、この目的に特に適している。マイクロアレイは多数の遺伝子の発現レベルの同時測定のための１つの方法を提供する。各アレイは、固体支持体に結合した捕捉プローブの、再現可能なパターンからなる。標識ＲＮＡまたはＤＮＡをアレイ上の相補的プローブにハイブリダイズさせ、ついでレーザースキャニングにより検出する。アレイ上の各プローブのハイブリダイゼーション強度を決定し、相対遺伝子発現レベルを表す定量値に変換する。米国特許第６，０４０，１３８号、第５，８００，９９２号および第６，０２０，１３５号、第６，０３３，８６０号および第６，３４４，３１６号（これらを参照により本明細書に組み入れることとする）を参照されたい。サンプルにおける多数のＲＮＡの遺伝子発現プロファイルを決定するためには、高密度オリゴヌクレオチドアレイが特に有用である。
【００５７】
幾つかの実施形態においては、サンプルにおけるＦＲαの発現のレベルを決定するための方法は、例えばＲＴ−ＰＣＲ（Ｍｕｌｌｉｓ，１９８７，米国特許第４，６８３，２０２号に記載されている実験的実施形態）、リガーゼ連鎖反応（Ｂａｒａｎｙ（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１８９−１９３）、セルフ・サステインド（ｓｅｌｆ  ｓｕｓｔａｉｎｅｄ）配列複製（Ｇｕａｔｅｌｌｉら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：１８７４−１８７８）、転写増幅系（Ｋｗｏｈら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１１７３−１１７７）、Ｑ−ベータ・レプリカーゼ（Ｌｉｚａｒｄｉら（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１１９７）、ローリングサークル複製（Ｌｉｚａｒｄｉら，米国特許第５，８５４，０３３号）またはいずれかの他の核酸増幅法による核酸増幅および／または（ｃＤＮＡを調製するための）例えばサンプル中のｍＲＮＡの逆転写、ならびにそれに続く、本明細書に記載されている技術および／または当業者に公知の他の技術を用いる、増幅された分子の検出の過程を含む。これらの検出法は、核酸分子が非常に少数で存在する場合の核酸分子の検出に特に有用である。本発明の特定の態様においては、ＦＲαの発現のレベルは定量的発蛍光ＲＴ−ＰＣＲ（すなわち、ＴａｑＭａｎＴＭ  Ｓｙｓｔｅｍ）により決定される。
【００５８】
ＦＲαのレベルは、例えば、タンパク質レベルの測定のための当技術分野で公知のいずれかの方法を用いることによっても決定されうる。そのような方法には、例えば、電気泳動、毛管電気泳動、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、超拡散クロマトグラフィー、流体またはゲル沈降素反応、吸収分光法、比色アッセイ、分光光度アッセイ、フローサイトメトリー、免疫拡散法（単純または二重）、免疫電気泳動、ウエスタンブロット法、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光アッセイ、および電気化学発光イムノアッセイ（後記に例示）などが含まれる。好ましい実施形態においては、該レベルは、抗体に基づく技術を用いて決定される。そのような方法は、２０１０年１１月５日付け出願の米国仮特許出願第６１／４１０，４９７号（発明の名称「Ｆｏｌａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ａｓ  ａ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｍａｒｋｅｒ  ｆｏｒ  ｆｏｌａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｃａｎｃｅｒｓ」）（その全内容を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている。もう１つの実施形態においては、該レベルは、例えばＫａｌｌｉら，“Ｆｏｌａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ａｓ  ａ  ｔｕｍｏｒ  ｔａｒｇｅｔ  ｉｎ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ”，Ｇｙｎｅｃｏｌ  Ｏｎｃｏｌ．２００８  Ｍａｒｃｈ；１０８（３）：６１９−６２６（これを参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されているような免疫組織化学的技術を用いることにより決定される。
【００５９】
ＦＲαの検出のための、抗体に基づく技術には、限定的なものではないが、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、フローサイトメトリー、免疫細胞化学的方法、組織免疫化学的方法、ウエスタンブロットおよび免疫沈降が含まれる。これらの技術において使用される抗ＦＲα抗体またはその抗原結合性部分はＦＲαのインビトロまたはインビボ検出のために製造可能であり、あるいは商業的入手元から入手可能である。更に、ＦＲαは、生物学的サンプルを抗ＦＲα抗体またはその抗原結合性部分と接触させ、結合した抗体またはその抗原結合性部分を検出することにより検出されうる。抗ＦＲα抗体またはその抗原結合性部分は、検出可能な標識で直接的に標識されることが可能であり、あるいは未標識体でありうる。未標識抗体が使用される場合には、該抗ＦＲα抗体に結合しうる標識された二次抗体または他の分子が、ＦＲαに結合した抗体を検出するために使用される。当業者によく知られているとおり、一次抗体の特定の種およびクラスに特異的に結合しうる二次抗体が選択される。例えば、抗ＦＲα抗体がヒトＩｇＧを含む場合には、二次抗体は、標識された抗ヒトＩｇＧ抗体でありうる。抗体に結合しうる他の分子には、限定的なものではないが、共に例えばＰｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏから商業的に入手可能であるプロテインＡおよびプロテインＧが含まれる。抗体または二次分子のための適切な標識には、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、磁性物質および放射活性物質が含まれる。適切な酵素の例にはホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、Ｏ−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが含まれ、適切な補欠分子族複合体の例にはストレプトアビジンおよびアビジン／ビオチンが含まれ、適切な蛍光物質の例にはウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが含まれ、発光物質の例にはルミノールが含まれ、磁性物質の例にはガドリニウムが含まれ、適切な放射活性物質の例には１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓまたは３Ｈが含まれる。
【００６０】
抗ＦＲα抗体またはその抗原結合性部分は、生物学的サンプル中のＦＲαの存在、レベルおよび／または局在を決定することにより、ＦＲαを発現または過剰発現する癌である乳癌を検出するために使用されうる。抗ＦＲα抗体またはそのような抗体の抗原結合性部分は、例えば組織内または細胞の表面上のＦＲαを検出、定量および／または局在化するために使用されうる。ＦＲαの存在および／または局在化、例えば細胞表面レベルを決定するための好ましいイムノアッセイは、免疫組織化学（ＩＨＣ）／免疫細胞化学（ＩＣＣ）アッセイである。免疫組織化学的および免疫細胞化学的方法は当技術分野でよく知られている。試験される組織または細胞は、リン酸バッファー中のパラホルムアルデヒド、過ヨウ素酸／リシン／リン酸バッファー中のパラホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド（透過型電子顕微鏡用）または冷アセトンもしくはアルコール（凍結サンプル用）の存在下のパラホルムアルデヒド（これらに限定されるものではない）を含む種々の固定条件のいずれかを用いて固定されうる。また、組織はＩＨＣ用の包埋媒体内に包埋されうる。免疫組織化学実験用の包埋媒体には、限定的なものではないが、パラフィンロウ、またはいずれかの形態のクリオマトリックス（凍結サンプル用）が含まれうる。三次元イメージを得るために、ホールマウント調製物を使用して免疫組織化学実験を行うことも可能でありうる。
【００６１】
ＦＲα発現を検出するために用いられうる適切なＩＨＣアッセイには、例えば実施例４に記載されているものが含まれる。ＦＲα発現を検出するためにＩＨＣを用いる場合、幾つかの実施形態においては、陽性サンプルは、腫瘍細胞の＞５％、＞１０％、＞１５％、＞２０％、＞２５％、＞３０％、＞３５％、＞４０％、＞４５％、＞５０％、＞５５％、＞６０％、＞６５％、＞７０％、＞７５％、＞８０％、＞８５％、＞９０％または＞９５％がいずれかの強度で染色（例えば、膜染色）されるものである。
【００６２】
ＦＲαを検出するために使用されうる典型的な抗体は抗体２６Ｂ３（２６Ｂ３．Ｆ２とも称される）であり、これは２０１１年５月１９日付けでＰＴＡ−１１８８５としてＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）に寄託されている。この抗体は、２０１１年７月１５日付け出願の米国仮出願第６１／５０８，４４４号、２０１２年２月２８日付け出願の第６１／６０４，４１２号、および２０１２年２月２９日付け出願の第６１／６０４，９５４号に記載されている。前記出願のそれぞれの全内容を参照により本明細書に組み入れることとする。
【００６３】
抗原の回収は、必要に応じて、熱誘発性エピトープ回収（ＨＩＥＲ）またはタンパク質分解誘発性エピトープ回収（ＰＩＥＲ）またはそれらの組合せにより達成されうる。ＩＨＣ／ＩＣＣのための細胞または組織の抗体浸透は、必要に応じて、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、サポニンまたは水素化ホウ素ナトリウム（これらに限定されるものではない）を含む種々の試薬を使用して達成されうる。ブロッキング処理は、必要に応じて、血清アルブミン（これに限定されるものではない）を含む種々のブロッキング試薬で細胞または組織を処理することにより行われうる。組織または細胞サンプルにおけるＦＲαの検出方法は多種多様であり、限定的なものではないが、直接抗体検出、間接抗体検出、ペルオキシダーゼ・抗ペルオキシダーゼ法、アビジン−ビオチン複合体法、標識ストレプトアビジン・ビオチン法または種々の重合体シグナル増幅法のいずれかのものを包含しうる。他の検出方法には、例えば、核酸に基づく検出方法、または葉酸に基づく検出方法（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ，Ｃ．ら，Ｊ．Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ．２００８  Ｆｅｂ；４９（２）：３１０−３１７（イメージング剤としての放射性医薬品の使用）を参照されたい）が含まれる。
【００６４】
幾つかの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩と、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントとは、同時、間欠的、連続的または随伴的に投与される。本明細書中で用いる「同時」なる語は、２つの活性物質の投与の少なくとも一部が同時に行われる、そのような２つの活性物質の投与に関するものである。本明細書中で用いる「連続的」なる語は、一方の活性物質の投与が他方の活性物質の投与の終了から約１日以内に行われる、そのような２つの活性物質の投与に関するものである。本明細書中で用いる「随伴的」なる語は、一方の活性物質の投与が他方の活性物質の投与計画中の或る時点で行われる、そのような２つの活性物質の投与に関するものである。本明細書中で用いる「間欠的」なる語は、２つの活性物質の投与が概ね同じ時期（例えば、３０日にわたって）に行われるが必ずしも同時に行われるのではない、そのような２つの活性物質の投与に関するものである。幾つかの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩と、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントとは、間欠的、連続的または随伴的に投与される。幾つかの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩と、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントとは、間欠的に投与される。それらの薬物は任意の順序で投与されうる、と前記から理解されるであろう。
【００６５】
本明細書中で用いる、エリブリンまたはその医薬として許容される塩およびファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントの「治療的有効量」なる語は、所望の治療結果を達成するのに、必要な投与および期間において、有効な量を意味する。治療的有効量は、例えば、個体の病態、年齢、性別および体重ならびにエリブリンまたはその医薬として許容される塩とファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントとの組合せが所望の応答を個体において惹起する能力のような要因に応じて変動しうる。
【００６６】
幾つかの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩は約１０〜４０日ごとに１〜５回、例えば、約１４〜３５日ごとに１〜３回投与される。幾つかの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩は２１〜２８日ごとに約１回投与される。他の実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩は２１〜２８日ごとに約２回投与される。幾つかの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩は２１〜２８日周期の第１日および第８日に投与される。
【００６７】
幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは週１回投与される。他の実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは３週間ごとに投与される。幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは約７〜２８日ごとに１〜４回投与される。幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは２１〜２８日周期中に１回投与される。他の実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは２１〜２８日周期の第１日に投与される。幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは、その後、毎週投与される。幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントはエリブリンまたはその医薬として許容される塩の投与の直後に投与される。
【００６８】
幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントの負荷用量が使用される。例えば、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは、２１〜２８日周期の第１日および第８日ならびに後続周期の第１日に投与されうる。
【００６９】
本発明の方法の幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは、エリブリンまたはその医薬として許容される塩の前、例えば、エリブリンの投与の前に投与される。１つのそのような実施形態は後記の実施例５に記載されている。あるいは、エリブリンまたはその医薬として許容される塩が、最初に、例えば、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントの投与の前に投与されうる。
【００７０】
例えば、エリブリンまたはその医薬として許容される塩は２１日周期の第１日および第８日に静脈内投与され、ファーレツズマブまたは抗原結合性フラグメントは同じ２１周期の第１日に、例えば、エリブリンまたはその医薬として許容される塩の静脈内投与の直前または直後に投与される。この２１日周期は、示されているとおりに対象において反復されうる。例えば、それは１〜２、２〜５、１０またはそれ以上の周期にわたって反復されうる。幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントの負荷用量が使用される。例えば、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは最初の２１日周期の第１日および第８日ならびに後続周期の第１日に静脈内投与されうる。
【００７１】
幾つかの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩の投与およびファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントの投与は重複しない。例えば、投与は２１日周期を含み、ここで、エリブリンまたはその医薬として許容される塩は該周期の第１日に投与され、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは該周期の第２〜１６日のいずれかにおいて１回投与される。幾つかの実施形態においては、投与は２８日周期を含み、ここで、エリブリンまたはその医薬として許容される塩は該周期の第１日および第８日に投与され、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは該周期の第１５〜２８日のいずれかにおいて１回投与される。
【００７２】
幾つかの実施形態においては、対象は、約２〜約５０治療周期、例えば約３〜約３０治療周期を受ける。幾つかの実施形態においては、対象は約４〜約６治療周期の投与を受ける。
【００７３】
幾つかの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩は約０．１ｍｇ／ｍ２〜約５．０ｍｇ／ｍ２、例えば、約０．２ｍｇ／ｍ２〜約４．０ｍｇ／ｍ２の量で投与される。例えば、エリブリンまたはその医薬として許容される塩は約０．５ｍｇ／ｍ２〜約３．０ｍｇ／ｍ２、例えば、約０．５ｍｇ／ｍ２、約０．７ｍｇ／ｍ２、約１．０ｍｇ／ｍ２、約１．１ｍｇ／ｍ２、約１．２ｍｇ／ｍ２、約１．３ｍｇ／ｍ２、約１．４ｍｇ／ｍ２、約１．５ｍｇ／ｍ２、約２．０ｍｇ／ｍ２、約２．５ｍｇ／ｍ２、または約３．０ｍｇ／ｍ２の量で投与される。１つの実施形態においては、用量は、２１日周期の第１日および第８日に２〜５分間にわたって静脈内投与される１．４ｍｇ／ｍ２である。もう１つの実施形態においては、対象は軽度の肝障害を有し、量は、２１日周期の第１日および第８日に２〜５分間にわたって静脈内投与される１．１ｍｇ／ｍ２である。もう１つの実施形態においては、対象は中等度の肝障害を有し、量は、２１日周期の第１日および第８日に２〜５分間にわたって静脈内投与される０．７ｍｇ／ｍ２である。更にもう１つの実施形態においては、対象は中等度の腎障害（３０〜５０ｍＬ／分のクレアチニンクリアランス）を有し、量は、２１日周期の第１日および第８日に２〜５分間にわたって静脈内投与される１．１ｍｇ／ｍ２である。
【００７４】
幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約４．００ｍｇ／ｋｇの量で毎週投与される。幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは約１．００〜約３．００ｍｇ／ｋｇの量で毎週、例えば、約１．００ｍｇ／ｋｇ、１．２５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．７５ｍｇ／ｋｇ、２．００ｍｇ／ｋｇ、２．２５ｍｇ／ｋｇ、２．５０ｍｇ／ｋｇ、２．７５ｍｇ／ｋｇまたは３．００ｍｇ／ｋｇの量で毎週投与される。
【００７５】
幾つかの実施形態においては、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは、約３．００ｍｇ／ｋｇ〜約９．００ｍｇ／ｋｇの量で３週間ごとに、すなわち、３週間に１回投与される。例えば、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは、例えば、約３．００ｍｇ／ｋｇ、３．２５ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、３．７５ｍｇ／ｋｇ、４．００ｍｇ／ｋｇ、４．２５ｍｇ／ｋｇ、４．５０ｍｇ／ｋｇ、４．７５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．２５ｍｇ／ｋｇ、５．５０ｍｇ／ｋｇ、５．７５ｍｇ／ｋｇ、６．００ｍｇ／ｋｇ、６．２５ｍｇ／ｋｇ、６．５０ｍｇ／ｋｇ、６．８５ｍｇ／ｋｇ、７．００ｍｇ／ｋｇ、７．２５ｍｇ／ｋｇ、７．５０ｍｇ／ｋｇ、７．７５ｍｇ／ｋｇ、８．００ｍｇ／ｋｇ、８．２５ｍｇ／ｋｇ、８．５０ｍｇ／ｋｇ、８．７５ｍｇ／ｋｇまたは約９．００ｍｇ／ｋｇの量で、３週間ごとに投与される。
【００７６】
幾つかの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩はリポソーム製剤中に製剤化される。例えば、幾つかの実施形態においては、リポソーム製剤は更に、アンモニウム塩を含む。例えば、ＷＯ  ２０１０／１１３９８４を参照されたい。
【００７７】
幾つかの実施形態においては、対象における腫瘍成長は、適切な対照と比較して少なくとも約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％または約１００％抑制される。幾つかの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩とファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントとの投与は対象における腫瘍退縮をもたらす。幾つかの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩とファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントとの投与は対象における完全な腫瘍退縮をもたらす。本明細書中で用いる「腫瘍退縮」なる語は腫瘍サイズの減少を意味する。退縮は完全または部分的でありうる。腫瘍成長または腫瘍退縮の抑制は原発性および／または転移性腫瘍において観察されうる。
【００７８】
本発明の方法の幾つかの実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩とファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントとの投与は、進行を伴わない生存における改善をもたらす。本発明の方法の他の実施形態においては、エリブリンまたはその医薬として許容される塩とファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントとの投与は、１以上の臨床結果変数、例えば、客観的応答率（ＯＲＲ）：完全応答および部分応答（ＣＲ＋ＰＲ）；応答までの時間（ＴＴＲ）；応答の持続時間（ＤｏＲ）；疾患制御率（ＤＣＲ；ＣＲ＋ＰＲ＋安定疾患［ＳＤ］）；臨床利益率（ＣＢＲ：ＣＲ＋ＰＲ＋持続性安定疾患［ｄＳＤ，ＳＤ＞１２週の持続期間］）における改善をもたらす。該改善は、いずれかの適切な対照との比較として、例えば、対照個体または対照群、例えば、エリブリンまたはその医薬として許容される塩（例えば、メシル酸エリブリン）および場合によってはプラセボで治療された群と比較された場合の治療個体における又は治療個体群における改善として観察されうる。
【００７９】
幾つかの実施形態においては、本発明の方法は更に、エリブリンまたはその医薬として許容される塩またはファーレツズマブまたは抗原結合性フラグメントまたはそれらの両方での維持療法を含む。
【００８０】
抗癌薬を投与するための多数のアプローチが当技術分野で公知であり、エリブリンまたはその医薬として許容される塩およびファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントでの本発明における使用に容易に適合化されうる。例えば、それらの薬物は、一緒に、単一組成物として、または別々に、総合的治療計画の一部として、および任意の順序で投与されうる。全身投与の場合、該薬物は、例えば静脈内注入（連続的またはボーラス）により投与されうる。投与方式はそれぞれの投与薬物によって様々となりうる。そのような投与の適切な計画および用量は、例えば、動物における前臨床研究およびヒトにおける臨床研究（例えば、第Ｉ相研究）に基づいて、当業者により容易に決定されうる。また、当技術分野で十分に理解されているとおり、患者における血球数（例えば、好中球および血小板数）およびバイタルサインのようなモニター因子が用いられうる。
【００８１】
幾つかの実施形態においては、本発明の方法により治療される対象はエリブリンまたはその医薬として許容される塩および／またはファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントの投与の前に前投薬されていることが可能である。例えば、対象は、ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントの注入の前に、例えばアセトアミノフェン、例えば約６５０〜１０００ｍｇのアセトアミノフェンまたは臨床的等価体で前投薬されていることが可能である。また、対象は過敏症および注入関連反応に対する一次予防の形態（例えば、抗ヒスタミン剤、解熱薬、全身ステロイドおよび必要に応じて使用される追加的援助手段の組合せ）の随伴的な前投薬を受けていることが可能である。また、対象は抗悪心薬で前投薬を受けていることが可能である。対象は、本発明の方法の治療を受けながら、定期的に又は必要に応じて、抗悪心薬で治療されうる。
【００８２】
本発明はまた、場合によっては追加的な治療用物質と組合された、（ａ）エリブリンまたはその医薬として許容される塩と、（ｂ）ファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントとを含む組成物（例えば、医薬として許容される担体を含む医薬組成物）を含む。これらの組成物中の薬物は、好ましくは、患者への投与のために配合され、あるいは投与前に更なる加工を要する形態でありうる。例えば、該組成物は、凍結乾燥形態または希釈を要する濃縮形態の薬物を含みうる。化学療法に使用される薬物の製剤化は、当技術分野における標準的な方法を用いて行われうる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ），Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編，１９９０，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡを参照されたい）。
【００８３】
また、エリブリンまたはその医薬として許容される塩とファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントとを含むキットも本発明に含まれる。エリブリンまたはその医薬として許容される塩およびファーレツズマブまたはその抗原結合性フラグメントは、例えばバイアルのような単一容器内に存在することが可能であり、あるいは別々の容器内に存在することが可能である。更に、そのまま投与される形態または更なる処方を要する形態（例えば、凍結乾燥形態）で、異なる物質が存在しうる。該キットは、該物質用の希釈剤、該物質の投与のための説明、該キットの内容物を一覧している１以上のラベル、および／または物質の投与において使用される装置をも含みうる。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】細胞表面上のＦＲαの発現レベルを決定するための乳癌細胞系ＣＡＬ５１、Ｔ４７Ｄ、ＨＣＣ−１９５４およびＢＴ４７４のフローサイトメトリー分析の結果を示す。ＢＴ４７４以外の全ての系はＦＲα陽性であることが判明した。
【図２】乳癌細胞系Ｔ４７Ｄ、ＣＡＬ５１、ＩＧＲＯＶ（陽性対照として使用した卵巣癌細胞系）およびＨＣＣ１９５４に対するファーレツズマブ媒介性ＡＤＣＣを示す一連のグラフを示す。
【図３−１】ファーレツズマブ（ＭＯＲＡｂ−００３）の配列を示す。
【図３−２】ファーレツズマブ（ＭＯＲＡｂ−００３）の配列を示す。
【図３−３】ファーレツズマブ（ＭＯＲＡｂ−００３）の配列を示す。
【図３−４】ファーレツズマブ（ＭＯＲＡｂ−００３）の配列を示す。
【００８５】
本発明は更に、以下の実施例により例示される。該実施例は、更に限定するものであると解釈されるべきではない。本出願の全体にわたって引用されている全ての図面および全ての参考文献、特許ならびに公開特許出願の内容の全体を参照により明示的に本明細書に組み入れることとする。
【実施例】
【００８６】
［実施例１］：乳癌細胞系上の葉酸受容体アルファ（ＦＲα）の発現
４つの乳癌細胞系上のＦＲα発現状態およびメシル酸エリブリンＩＣ５０値を決定した。ＩＧＲＯＶ−１細胞（卵巣腫瘍細胞系）をＦＲαに関する陽性対照として使用した。該細胞を集め、洗浄し（１２００ＲＰＭで５分間遠心分離し）、ＦＡＣＳバッファー（冷ＰＢＳ＋２％  ＦＢＳ）に懸濁させた。該細胞を、Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒ  ＡｕｔｏＴ４を使用して計数し、９６ウェルＵ底プレートに（５０，０００細胞／ウェルで）加え、１２００ＲＰＭで５分間遠心分離した。該バッファーを除去した。ＦＡＣＳバッファー中で希釈されたファーレツズマブ（１０μｇ／ｍＬまたは１μｇ／ｍＬ）を該ウェルに加え（希釈されたファーレツズマブの１００μＬ／ウェルを加え）、氷上のインキュベーションを１時間行った。該プレートを２００μＬ／ウェルのＦＡＣＳバッファーで３回洗浄した。ＦＡＣＳバッファー中で希釈された二次抗体（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈから入手した１：１００のヤギ抗ヒトＩｇ−ＦＩＴＣ）１００μＬ／ウェルを加えた。氷上のインキュベーションを１時間行った。該プレートを２００μＬ／ウェルのＦＡＣＳバッファーで３回洗浄した。２００μＬのＦＡＣＳバッファーを各ウェルに加え、ＢＤ  ＦＡＣＳ  ＣＡＮＴＯ  ＩＩフローサイトメータ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＦＡＣＳ分析を行った。結果を表１に示す。
【００８７】
【表１】
2014508165.tif 000003
【００８８】
また、ＦＡＣＳを使用する第２の実験において、該細胞系を分析し、これらの細胞系のＦＲα発現状態を確認した。２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、抗生物質および１０％  熱不活性化ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からなる完全ＲＰＭＩにおいて細胞を増殖させた。ＴｒｙｐＬＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して該細胞を集め、１ｍｌの集めた細胞をＶｉＣｅｌｌ（Ｂｅｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）で計数した。５Ｅ４細胞を、１００μｌ／ウェルまで、ＰＢＳ＋２％  ＦＢＳ（ＦＡＣＳバッファー）中のＦＡＣＳ染色のために、９６ウェルＵ底アッセイプレート内にピペッティングした。ファーレツズマブおよびイソタイプ対照抗体を、１０μｇ／ｍＬで、細胞を含有する各ウェル（細胞のみ以外）に加え、穏やかに混合した。６０分間のインキュベーション時間の後、細胞を追加的な１５０μｌのＦＡＣＳバッファーで２回洗浄した。ついで細胞を、ＦＩＴＣ結合ヤギ抗ヒト抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ロット＃  Ｆ７００６−ＱＦ２０Ｂ）と共に〜１００μｌのＦＡＣＳバッファーに再懸濁させ、氷上で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳバッファー中での２時間の洗浄の後、該細胞を２００μＬのＦＡＣＳバッファーに再懸濁させ、ＥａｓｙＣｙｔｅ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｇｕａｖａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で分析した。図１は、ＦＲαが乳癌細胞系ＣＡＬ５１、Ｔ４７ＤおよびＨＣＣ−１９５４細胞上では発現されたが、ＢＴ４７４細胞上では発現されなかったことを示している。
【００８９】
［実施例２］：ファーレツズマブ媒介性の抗体依存性細胞性細胞傷害
ファーレツズマブが単独で前記乳癌細胞系（ＢＴ４７４、ＨＣＣ−１９５４、Ｔ４７ＤおよびＣＡＬ５１）に対してＡＤＣＣを引き起こすかどうかを評価するために、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅプラットフォーム（Ｒｏｃｈｅ）を使用した。ＩＧＲＯＶ−１細胞系を陽性対照として使用した。ＴｒｙｐＬＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で集めた細胞を計数し、細胞型（ＨＣＣ−１９５４、ＩＧＲＯＶ−１、Ｔ４７Ｄ、ＢＴ４７４は４０，０００細胞／ｍＬ、ＣＡＬ５１は２５，０００細胞／ｍＬ）に基づく所定の最適細胞密度で再懸濁させた。１００μＬの完全ＲＰＭＩをＥｐｌａｔｅ  ９６（Ｒｏｃｈｅ）の各ウェルに加え、バックグラウンドの読取りをｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅで行った。１００μＬの細胞を該プレート上の各専用ウェルに加えた。ついで該プレートを室温で３０分間インキュベートして、該細胞を適切に沈殿させた。該プレートをｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅ内に配置し、夜通し１０分ごとに読取りを行った。同時に、実証されたドナー（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）からのヒトＰＢＭＣ（「ＰＢＭＣ」）を、２ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）で補足された完全ＲＰＭＩ中で一晩培養した。翌日、該ウェルの底の細胞単層を損なうことなく、１００μＬの培地を各ウェルから除去した。ＲＰＭＩ中の５０μＬの希釈抗体を、望まれる最終濃度の４倍（４×）の濃度で該ウェルに加えた。該プレート（細胞＋抗体）をｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅ内に配置し、（１０分ごとに読取りを行いながら）１時間インキュベートした。この時間中、ＰＢＭＣを掻き集め、計数した。該ＰＢＭＣを遠心沈降させ、５０μＬ／ウェルで、それらが細胞型に応じて２０：１または１０：１の比（ＰＢＭＣ：標的細胞）で加えられるように、ＲＰＭＩに再懸濁させた。該ＰＢＭＣを該プレートに加えた後、それをｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅに戻し、読取りを連続的に一晩行った。細胞傷害性率（％）を以下のとおりに計算した：％殺傷＝（１−（細胞指数ファーレツズマブウェル／細胞指数補体単独ウェル））＊１００。
【００９０】
ＡＤＣＣ活性を測定するために、細胞を所望の密度でＥ−プレート上にプレーティングし、一晩付着させた。翌日、精製ファーレツズマブを、図２に示されている最終濃度で加え（ＨＣＣ１９５４細胞の場合、ファーレツズマブを１０μｇ／ｍＬで使用した）、３０分間インキュベートした。ついで健常ドナーからのＩＬ−２（２ｎｇ／ｍＬ）活性化ＰＢＭＣを２０：１のエフェクター：標的比で加えた。ＡＤＣＣ活性を１５分ごとにモニターした。ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ系（Ｒｏｃｈｅ）を使用して、読取りを行った。図２は該ＡＤＣＣアッセイの結果を示す。ファーレツズマブは中等度の及び力価測定可能なＡＤＣＣ活性をＴ４７ＤおよびＣＡＬ５１細胞にもたらした。１０μｇ／ｍＬのファーレツズマブはＨＣＣ１９５４細胞の〜５０％をＡＤＣＣにより殺すことが可能であった。ファーレツズマブは、ＦＲα陰性ＢＴ４７４細胞には、測定可能なＡＤＣＣ活性をもたらさなかった（データ非表示）。これらの結果は、単独で投与されたファーレツズマブがＦＲα発現乳癌細胞系においてＡＤＣＣを媒介しうることを示している。
【００９１】
［実施例３］：メシル酸エリブリンとファーレツズマブとの組合せ効果
メシル酸エリブリン（Ｅ７３８９）およびファーレツズマブ媒介性ＡＤＣＣの組合せ効果を評価するために、ＨＣＣ−１９５４またはＣＡＬ５１細胞を組織培養フラスコ内で４日間にわたって２つの濃度のメシル酸エリブリン（Ｅ７３８９）で前処理した（後記の表２および３を参照されたい）。前処理された細胞を第４日に集め、染色し、計数し、メシル酸エリブリンの細胞傷害性の比率を以下のとおりに計算した：％細胞傷害性＝（１−（エリブリン存在下の細胞数／エリブリン非存在下の細胞数））×１００。ついで懸濁液中の細胞を、１０μｇ／ｍＬの１つの一定濃度のファーレツズマブおよび対照抗体と共に、通常のＡＤＣＣアッセイの場合と同様に、Ｅｐｌａｔｅ  ９６（Ｒｏｃｈｅ）内に播いた。該ＡＤＣＣアッセイを前記と同様にして行い、ファーレツズマブの細胞傷害性の比率を以下のとおりに計算した：％細胞傷害性＝（１−（細胞指数ファーレツズマブウェル／細胞指数補体単独ウェル））×１００。４＋２日間のアッセイ期間の経過中のエリブリンおよびファーレツズマブの組合せ効果は以下のとおりに計算される：％全細胞傷害性＝（１−（エリブリン存在下の細胞数／エリブリン非存在下の細胞数）×（細胞指数ファーレツズマブウェル／細胞指数補体単独ウェル））×１００。
【００９２】
表２は、ファーレツズマブＡＤＣＣ活性が単独でＨＣＣ−１９５４細胞の５２％を殺したことを示している。同じ細胞を２つの用量のメシル酸エリブリンで４日間にわたって前処理した場合には、細胞成長はそれぞれ３４％および５１％抑制された。ファーレツズマブ媒介性ＡＤＣＣは、後の２日間で、それらの前処理細胞のそれぞれ６４％および５７％を殺した。総合すると、全細胞傷害性は、それらの２つの用量のエリブリン処理の場合、それぞれ７７％および７９％と計算されることが可能であった。一方、イソタイプ対照抗体はエリブリン処理細胞に最小限の傷害性を加えたに過ぎなかった。
【００９３】
同様に、表３は、ファーレツズマブＡＤＣＣ活性が単独でＣＡＬ５１細胞の３８％を殺したことを示している。同じ細胞を２つの用量のメシル酸エリブリンで４日間にわたって前処理した場合には、細胞成長はそれぞれ１８％および２９％抑制された。ファーレツズマブ媒介性ＡＤＣＣは、後の２日間で、それらの前処理細胞のそれぞれ５４％および５１％を殺した。総合すると、全細胞傷害性は、それらの２つの用量のメシル酸エリブリン処理の場合、それぞれ６２％および６５％と計算されることが可能であった。一方、イソタイプ対照抗体はメシル酸エリブリン処理細胞に最小限の傷害性を加えたに過ぎなかった。
【００９４】
【表２】
2014508165.tif 000004
【００９５】
【表３】
2014508165.tif 000005
【００９６】
前記結果により示されるとおり、エリブリンおよびファーレツズマブはＦＲα発現乳癌細胞に対して少なくとも相加的細胞傷害性をもたらした。
【００９７】
［実施例４］：葉酸受容体アルファ発現および乳癌のトリプルネガティブ形態との関連性
乳癌組織サンプルによるＦＲαの発現を評価するために、免疫組織化学的研究を行った。ＦＲαに対する一次マウスモノクローナル抗体（２６Ｂ３）で染色されたホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織学的サンプルおよび組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）サンプルを使用して（Ｏ’Ｓｈａｎｎｅｓｓｙら，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ  ２（１２）：１２２７−４３（２０１１））、分析を行った。
【００９８】
免疫組織化学
ＴＭＡサンプル（ＵＳ  Ｂｉｏｍａｘ，Ｉｎｃ．，カタログ＃ＢＲ１５０３ａ；７２ケース，二重コア）またはＦＦＰＥ試料（Ｇｅｎｚｙｍｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓのアーカイブから入手）およびＭＡＣＨ４汎用ＨＲＰ−重合体検出キット（Ｂｉｏｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｃｏｎｃｏｒｄ，ＣＡ）を使用して、免疫組織化学的研究を行った。ＦＦＰＥ試料を５μｍで正荷電ガラススライド上に切片化し、６０℃で約６０分間加熱した。スライドをそれぞれ３分間の３回の連続的なキシレン浴において脱パラフィン化し、それぞれ３分間の３回の連続的な１００％アルコール浴に移し、ついでそれぞれ３分間の３回の連続的な９５％アルコール浴に付し、ついで脱イオン（ＤＩ）水で５分間洗浄した。ついでスライドを、ＤＩ水中で１：１０希釈されたＤｉｖａ熱誘発性エピトープ回収溶液（Ｂｉｏｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ）中で前処理し、５００ｍＬのＤＩ水で既に満たされた加圧脱離室内に配置した。抗原回収のために、３０秒間にわたって加圧インキュベーションが１６ＰＳＩにおいて最高１２５℃に達する脱離室内でスライドを１５分間インキュベートし、ついで９５℃まで１５分間冷却した。室温に冷却した後、スライドをそれぞれ３分間の３回の連続的なＴｒｉｓ緩衝食塩水／０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０（登録商標）洗浄バッファー（ＴＢＳＴ）浴において洗浄し、ついでペルオキシダーゼ（Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）−１（Ｂｉｏｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ）ブロッキング溶液中に室温で５分間配置した。前記のとおりにＴＢＳＴ中で洗浄した後、Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ  Ｓｎｉｐｅｒ（Ｂｉｏｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ）無血清汎用ブロッキング試薬を室温で１０分間適用した。染色のために、サンプルを、抗体希釈剤（Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｉｌｕｅｎｔ）（Ｄａｋｏ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ，Ｉｎｃ．，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）中で希釈された２．５μｇ／ｍＬの精製抗体２６Ｂ３もしくは抗体ＢＮ３．２（Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｂｕｆｆａｌｏ  Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ）または汎用陰性対照（Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ）（そのまま使用されるマウス陰性対照抗体（Ｄａｋｏ，陰性イソタイプ組織用））と共に室温で６０分間インキュベートした。洗浄後、スライドをＭＡＣＨ４マウスプローブ一次抗体増強剤（Ｍｏｕｓｅ  Ｐｒｏｂｅ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｈａｎｃｅｒ）と共に１５分間、ついで重合体（Ｐｏｌｙｍｅｒ）−ＨＲＰ試薬と共に２０分間インキュベートし、３，３’−ジアミノベンジジンテトラヒドロクロリド（ＤＡＢ）溶液（Ｄａｋｏ）で５分間現像し、ヘマトキシリン（Ｄａｋｏ）で５分間、対比染色し、ここで、全てのインキュベーションは室温で行った。当該部局により認められた１人の病理学者により、強度に関する通常の評価および各強度における染色腫瘍の比率を用いて、染色の評価が行われた。
【００９９】
統計分析
全ての統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ（Ｐｒｉｚｍ）を使用して行った。
【０１００】
ＴＭＡサンプルの陽性染色結果および棄却
該評価病理学者により膜染色に関して陽性だとみなされた腫瘍面積の比率が任意の強度において５％以上であった場合に、サンプル（ＴＭＡコアまたはＦＦＰＥ試料）はＦＲα発現に関して陽性とみなされた。ＴＭＡコアが完全に欠落している（空コア）、壊死組織から構成される、または正常組織を表すとみなされる、と該評価病理学者が判定した場合には、ＴＭＡコアは棄却され、したがって該分析に含まれなかった。コアの組織病理学的診断は該評価病理学者により行われた。
【０１０１】
Ｍスコア−半定量的染色アルゴリズム
各サンプルの染色に関する測定基準を以下のとおりに定義した。
【０１０２】
【数１】
2014508165.tif 000006
該式において、ｘｉｊは、患者ｉに関して強度ｊで染色された腫瘍の百分率であり、ｗｊは強度の絶対値である。該測定基準はゼロ（陽性染色無し）から５０（１００％  ３＋）までの理論的範囲を有する。したがって、Ｍスコアは、ＦＲα陽性細胞の比率と染色強度との両方をとらえるＦＲα  ＩＨＣ腫瘍細胞膜染色の加重スコアである。
【０１０３】
適切な場合には、各患者／サンプルのＭスコアを二重ＴＭＡコアまたはＦＦＰＥ試料にわたって平均した。決定（コア）が結果を欠いていた（すなわち、腫瘍または壊死組織が存在しなかった）場合には、該Ｍスコアを非空（ｎｏｎ−ｖｏｉｄ）決定に割り当てた。
【０１０４】
Ｍスコアに関する前記式の実際の適用を以下に示す。
【０１０５】
【表４】
2014508165.tif 000007
【０１０６】
ここで、ｘ＝強度３＋で染色された腫瘍の％；ｙ＝強度２＋で染色された腫瘍の％；ｚ＝強度１＋で染色された腫瘍の％。
【０１０７】
ＦＲα発現に関する陽性率を、陽性結果（＞５％腫瘍細胞膜染色）の定義に従い陽性に染色された腫瘍の比率として計算した。この手法を特定の組織学的亜群にも適用した。全体的な第１種の過誤を制御する事後検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡまたはフィッシャー正確確率検定を用いて、平均値の差を決定した。
【０１０８】
実験結果
抗体２６Ｂ３は、乳房を含む種々の組織のＦＦＰＥ切片上のＦＲαを認識することが示された。びまん性細胞質染色も観察されたが、２６Ｂ３によるＦＲαの染色パターンは膜局在に合致した。細胞質染色は膜染色の非存在下では観察されなかった。
【０１０９】
乳癌ＴＭＡ上に存在する組織構造の分布を表４に示す。示されている症例の大多数は浸潤性導管癌（ＩＤＣ）として特定された。ＴＭＡは２つの正常乳房サンプルを含んでおり、これは、抗体２６Ｂ３での染色による判定で、ＦＲα発現に関して陽性であった。正常乳房における染色は、内腔および膜染色を伴う導管細胞に限局していた。３例中２例の繊維腺腫の症例（６７％）、０／２の細胞肉腫の症例（０％）および１／６の上皮内導管癌の症例（１７％）がＦＲαに関して陽性であった。１つの浸潤性上皮内小葉性癌（ＩＬＣ）がＦＲα染色に関して陰性であった。５９個のＩＤＣサンプルのうち、１８個（３１％）がＦＲαに関して陽性であった。このＴＭＡにおける少数の陽性症例を考慮すると、病期または等級に関するＦＲα発現の妥当な分析は可能でなかったが、サンプルの大多数がＴ１またはＴ２であったことは注目されるべきである。ＦＲα発現は、ＥＲ／ＰＲ陽性腫瘍と比較してＥＲ／ＰＲ陰性腫瘍に（ｐ＝０．０１２）、およびトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）に関連していることが示された（ＥＲ／ＰＲ＋またはＨｅｒ２＋対ＥＲ／ＰＲ／Ｈｅｒ２−，ｐ＜０．０００１）。
【０１１０】
【表５】
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【０１１１】
１８例のＦＲα陽性ＩＤＣ症例のうち、２例（１１％）がＨｅｒ２陽性であった。このことは、大多数（８９％）がＨｅｒ２陰性であったことを意味する。これらのデータは、ＦＲα陽性が、Ｈｅｒ２陰性に、より厳密に一致することを示唆している。更に、１８例のＦＲα陽性のＩＤＣ症例のうち、３例がエストロゲン受容体（ＥＲ）陽性であり、４例がプロゲステロン受容体（ＰＲ）陽性であったが、全てのＥＲ／ＰＲ陽性／ＦＲα陽性症例はＨｅｒ２陰性であった。また、ＦＲα陽性ＩＤＣ症例の１２／１８（６７％）がトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）であり、このことは、ＦＲαが非常に不良な予後のＴＮＢＣ分子亜型のマーカーおよび標的でありうることを示唆している。ＴＭＡを全体として見ると、全Ｈｅｒ２陽性症例の２／１３（１５％）はＦＲαに関しても陽性であり、一方、Ｈｅｒ２陰性症例の１６／４６（３５％）はＦＲα陽性でもあり、これらのことは、ＦＲα発現がＨｅｒ２発現に負に相関するという示唆を支持している。更に、ＦＲα発現は乳癌の新規分子亜型（ＦＲα＋）を特定するようである。
【０１１２】
前記のＴＭＡは主として早期段階の乳癌から構成されていた［病期Ｉ，６／６０（１０％）、病期ＩＩ，４４／６０（７３％）、病期ＩＩＩ，１０／６０（１７％）］。したがって、該ＴＭＡにおいて得られた結果を証明し拡張するために、０〜１００％陽性の範囲の既知ＥＲ／ＰＲ発現を有する病期ＩＶ（Ｔ４）Ｈｅｒ２陰性乳癌からの６１個のＦＦＰＥ組織ブロックを評価した。これらのサンプルの全６１個は原発性腫瘍ではなく転移性腫瘍からのものであった。
【０１１３】
これらの患者の２２／６１（３６％）においてＦＲα発現が検出された。このことは、早期段階の疾患で決定されたＦＲα陽性試料／腫瘍の比率が、Ｈｅｒ２陰性集団において、後期段階の転移性疾患で保持されていることを示している（ＴＭＡ陽性＝３５％；病期ＩＶ転移性疾患＝３６％）。２２名のＦＲα陽性の病期ＩＶ転移性患者のうち、３名（１４％）のみがＥＲ／ＰＲに関する陽性を示し、そのような陽性は低い範囲（３０％まで）に傾いていた。したがって、１９／２２（８６％）のＦＲα陽性患者はトリプルネガティブ分子亜型のものであった。これらのデータ（表５）は、全ＦＲα陽性患者の６７％がトリプルネガティブ亜型を示した該ＴＭＡにおける早期段階の疾患において得られたデータと比べて優れている。
【０１１４】
病期ＩＶ転移性疾患からのサンプルは、リンパ節、皮膚および肝臓を含む幾つかの転移部位から得たもの、ならびに主として胸膜および穿刺術から得た流体および細針吸引物（ＦＮＡ）サンプルであった。これらの「流体生検物」の幾つかはＦＲαに関して染色されたが、このことは、記載されているＩＨＣ法の、多数のサンプル型に対する汎用的な適用性の可能性を示唆している。
【０１１５】
【表６】
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【０１１６】
［実施例５］：ＨＥＲ２陰性転移性乳癌のメシル酸エリブリンとファーレツズマブとの組合せ治療の効力および安全性
メシル酸エリブリンとファーレツズマブとの組合せ治療の効力および安全性を判定するために、多施設ランダム化二重盲検並行群研究を行う。ＨＥＲ２陰性転移性乳癌を有する被験者を、（ｉ）メシル酸エリブリンおよびファーレツズマブ（Ａｒｍ  Ａ）または（ｉｉ）メシル酸エリブリンおよびプラセボ（Ａｒｍ  Ｂ）の組合せのいずれかの投与を受ける２つの治療群にランダム化する。以下の層別要因を考慮する：ｉ）転移性疾患に対する過去の治療（第一線級または第二線級）；ｉｉ）ホルモン受容体表現型（陽性対陰性）。
【０１１７】
被験者
以下のものを含む選択基準および除外基準に基づいて被験者を選択する。
【０１１８】
選択基準
被験者は参加前に書面のインフォームドコンセントを提出しなければならない。被験者はインフォームドコンセントの時点で１８歳以上の女性または男性でなければならない。
【０１１９】
被験者は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｎｅｔｗｏｒｋ（ＮＣＣＮ）ｖｅｒ．１．２０１２によるＨＥＲ２陰性転移性乳癌（ＭＢＣ）を有さなければならない。彼女らはＦＲαの陽性発現および測定可能な疾患を示さなければならない。
【０１２０】
除外基準
ＨＥＲ２陽性ＭＢＣ（ＮＣＣＮ  ｖｅｒ．１．２０１２による）を有する被験者を除外する。
【０１２１】
治療
被験者を、ファーレツズマブと組合されたメシル酸エリブリン（ａｒｍ  Ａ）またはプラセボと組合されたメシル酸エリブリン（ａｒｍ  Ｂ）の投与を受けるようにランダムに割り当てる。
【０１２２】
エリブリン治療
メシル酸エリブリンを各２１日周期の第１日および第８日に２〜５分間にわたるＩＶ注入として１．４ｍｇ／ｍ２の用量で投与する。以下の説明に従い、エリブリン関連毒性による用量の減少および中断を行う。
【０１２３】
各周期の第１日における用量変更
以下の事象の発生の際には、周期の第１日にメシル酸エリブリンを１．１ｍｇ／ｍ２に減少させる：（ｉ）前周期において１４日以内に等級２に回復した、および以下のものからなる等級３または４の血液学的毒性：７日を超える等級４の好中球減少症、等級３もしくは４の熱性好中球減少症ならびに／または抗生物質および／もしくは増殖因子での治療を要する感染、等級４の血小板減少症、あるいは血小板または血液またはそれらの両方の輸血を要する等級３の血小板減少症；（ｉｉ）最大限の援助ケアを伴う又は伴わない７日以内に等級２に回復した等級３または４の非血液学的毒性；（ｉｉｉ）毒性のために前周期の第８日のエリブリンの投与が不可能。
【０１２４】
等級３または４の血液学的毒性が１４日以内に等級２に回復しない場合、あるいは非血液学的な等級３または４の毒性が７日以内に等級２に回復しない場合には、被験者に対するエリブリンでの治療を中断する。しかし、被験者が臨床的利益を有するとみなされる場合には、エリブリンが継続されうる。
【０１２５】
各周期の第８日における用量変更：
血液学的毒性（ＡＮＣ＜１．０×１０９／Ｌ（１，０００／ｍｍ３）または血小板数＜７５×１０９／Ｌ（７５，０００／ｍｍ３））または非血液学的毒性（不適切に治療された悪心および／または嘔吐を除く、いずれかの等級２を超える毒性）が第８日（投与前）に生じた場合には、前記の血液値への、および非血液学的毒性においては等級２以下への回復まで、エリブリンでの治療を延期する。回復が第１５日またはその前に生じた場合には、メシル酸エリブリンを１．１ｍｇ／ｍ２の低減用量で再開し、これが新たな第８日となる。
【０１２６】
毒性が第１５日に前記値まで回復していない場合には、該周期におけるエリブリンの第２投与を省略する。前記値までの回復が生じたら、メシル酸エリブリンを、１．１ｍｇ／ｍ２の低減用量で、および次周期の第１日に計画されたとおりに再開する。
【０１２７】
等級３または４の血液学的毒性が１４日以内に等級２まで回復しない場合、あるいは非血液学的な等級３または４の毒性が７日以内に等級２まで回復しない場合には、被験者に対するエリブリンでの治療を中断する。しかし、被験者が臨床的利益を有するとみなされる場合には、エリブリンが継続されうる。
【０１２８】
後続の用量変更
１．１ｍｇ／ｍ２への用量低減および造血増殖因子の使用にもかかわらず血清学的毒性（ＡＮＣ＜１．０×１０９／Ｌ（１，０００／ｍｍ３）または血小板数＜７５×１０９／Ｌ（７５，０００／ｍｍ３））が再発生した場合には、メシル酸エリブリンの用量は０．７ｍｇ／ｍ２へと更に低減される。１．１ｍｇ／ｍ２への用量低減にもかかわらず等級３または４の非血液学的毒性が再発生した場合には、メシル酸エリブリン用量は０．７ｍｇ／ｍ２へと低減される。
【０１２９】
０．７ｍｇ／ｍ２への用量低減の後に等級３または４の血液学的毒性が１４日以内に等級２まで、あるいは非血液学的な等級３または４の毒性が７日以内に等級２まで回復しない場合には、被験者に対するエリブリンでの治療を中断する。しかし、被験者が臨床的利益を有するとみなされる場合には、エリブリンの継続が考慮されうる。
【０１３０】
ファーレツズマブ治療
ファーレツズマブ７．５ｍｇ／Ｋｇを各３週間周期の第１日にｉ．ｖ．注入として投与する。しかし、第１周期だけは、第１日および第８日に７．５ｍｇ／Ｋｇのファーレツズマブを投与する。治療の遅延の場合には、毎週ｑ／３の投与の再開まで、２．５ｍｇ／ｋｇの用量が適度なファーレツズマブレベルを維持する。
【０１３１】
ファーレツズマブまたはプラセボは、直列の低タンパク質または非タンパク質結合性０．２０または０．２２ミクロンフィルターを使用して、静脈内投与される。被験者には最初は０．４ｍＬ／分のファーレツズマブまたはプラセボの静脈内投与を行うべきであり、許容されるにつれて速度を２ｍＬ／分まで上げるべきである。推奨される増加率は５分当たり０．４ｍＬ／分である。２ｍＬ／分が十分に許容されれば、後続の注入はその速度で開始されうる。注入に関連した有害効果が生じた場合には、注入速度を少なくとも５０％減少させ、十分に許容される最高速度に戻す。
【０１３２】
ファーレツズマブの許容できない毒性の場合には、被験者への投与は中断されうる。エリブリン投与の１週間の遅れの場合、２．５ｍｇ．ｋｇの補足的ファーレツズマブ用量が、治療の再開まで、ファーレツズマブレベルを維持する。
【０１３３】
ファーレツズマブはメシル酸エリブリンの投与の前に投与される。留置静脈アクセス装置を使用する場合には、可能であれば採血に用いたのとは異なる内腔（ルーメン）を介してファーレツズマブまたはプラセボを投与する。可能であれば、薬物レベル分析を複雑化する可能性を軽減するために、多ルーメンカテーテルの最も遠位の内腔を介してファーレツズマブまたはプラセボを投与する。
【０１３４】
プラセボ治療
正常食塩水をプラセボとして使用する。プラセボは、ａｒｍ  Ａにおける被験者にファーレツズマブが投与されたのと全く同様にして、ａｒｍ  Ｂにおける被験者に投与される。
【０１３５】
随伴的薬物／療法
抗悪心／嘔吐投薬が許容される。ファーレツズマブ（またはプラセボ）注入の前に経口経路または臨床的慣例に従う臨床的に等価な経路によりアセトアミノフェン６５０〜１０００ｍｇを全被験者に前投薬する。被験者は、過敏症および注入関連反応の一次予防の形態で、抗ヒスタミン剤、解熱剤、全身ステロイドおよび必要に応じて使用される追加的援助手段の組合せからなりうる随伴的前投薬を受けることも可能である。
【０１３６】
試験物（ファーレツズマブまたはプラセボ）注入に関連すると考えられる薬物過敏反応の場合には、流体停留および／または過敏反応の頻度／重症度を軽減するために、後続注入のために、臨床的慣例に従い解熱剤またはヒスタミン受容体遮断薬（例えば、ジフェンヒドラミンなど）が被験者に前投薬されうる。アレルギー反応の場合には、研究者は、医学的に適切な治療手段を実施する。
【０１３７】
評価法
研究的治療の開始の前の２８日以内にスクリーニングを行う。陽性サンプルは、５％以上の腫瘍細胞が免疫組織化学法（ＩＨＣ）によりいずれかの強度で染色されていることと定義される。ＦＲα発現に関してＩＨＣ（ＦＦＰＥまたはＦＮＡ）により被験者をスクリーニングする。該治験はスクリーニングのための新たな生検の収集を要求していないため、過去の又は新たに得られた組織サンプルがＦＲαの特徴づけに使用されうる。
【０１３８】
腫瘍評価は、既知の又は疑われる疾患の、胸部、腹部、骨盤、脳および他の領域の放射線撮影評価からなる。プロトコールイメージング基準を満たす標準的なケアスキャンは、ランダム化の前の２８日以内に行われていれば、スクリーニング／ベースラインスキャンとして用いられる。過去の骨スキャンは、ランダム化の前の６週間（４２日）以内に行われていれば、用いられうる。
【０１３９】
効力評価
腫瘍評価は、ＲＥＣＩＳＴ  １．１に基づいて行われる。効力分析は研究者の評価に基づく。
【０１４０】
応答評価（コンピュータ断層撮影［ＣＴ］／磁気共鳴イメージング［ＭＲＩ］）は（部位放射線専門医と共に）研究者により評価され、適切な症例報告書（ＣＲＦ）に入力される。全ての腫瘍評価スキャンは、独立した精査のために中央イメージング中核的研究所に送られる。
【０１４１】
研究エンドポイント
研究エンドポイントには以下のものが含まれうる：進行を伴わない生存（ＰＦＳ）（ランダム化の日から、疾患進行の最初の独立して確認された客観的実証の日または死亡日のうちの早いほうの日までの時間として定義される）；客観的応答率（完全な応答［ＣＲ］または部分的応答［ＰＲ］の最良の客観的応答を示す被験者の比率）；疾患抑制率（完全な応答［ＣＲ］または部分的応答［ＰＲ］または安定疾患［ＳＤ］の最良の客観的応答を示す被験者の比率）；臨床的利益率（ＣＲ＋ＰＲ＋ｄＳＤ［ｄＳＤ，ＳＤ＞１２週間の持続期間］最良の客観的応答を示す被験者の比率）；全体的生存（ランダム化の日から、いずれかの原因による死亡の日までに測定されたもの；追跡不能になった被験者、およびデータカットオフの日に生存している被験者は、被験者の生存が最後に知られた日においてセンサリングされる）；応答の持続期間（実証されている応答から、進行の証拠の時までの期間）；応答までの時間（ランダム化の日から、最初に実証された確認された応答までの期間）。該研究エンドポイントは、適切な分析の組合せ、および統計方法を用いて分析される。
【０１４２】
均等物
当業者は、単なる通常の実験を用いて、本明細書に記載されている本発明の具体的な実施形態に対する多数の均等物を認識し、または確認しうるであろう。そのような均等物は以下の特許請求の範囲に含まれると意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図３−４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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