(57)【要約】  本明細書には、免疫治療及び／又は癌の処置のための、アジュバント及び免疫原を含むリポソームグリコリポペプチドワクチン製剤が、提供される。【選択図】図６Ａ
2014518841.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リポソームワクチン製剤であって、該リポソームワクチン製剤は、以下（ａ）乃至（ｄ）を含み：
（ａ）中心の直列反復：
ＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ、（配列番号１）、
配列番号１と少なくとも８５％同一の配列、或いはその直線的な並び換えの少なくとも２つの複製物を含むペプチド；
ここで、
ＳとＴは独立して、各発生時に、癌に関連する炭水化物エピトープＴｅで随意に置換される；
（ｂ）以下の式を有する（ａ）に共有結合的に付着するリポペプチド：
Ｈ２Ｎ−（ａａ１）＊（ａａ２）＊（ａａ３）−ＯＨ
ここで、
ａａ１は独立して、各発生時に、Ｓ、Ｔ、Ｋ、Ｒ、又はＣから選択され；
ａａ２は独立して、各発生時に、Ｓ、Ｔ、Ｋ、Ｒ、又はＣから選択され；
ａａ３は独立して、各発生時に、Ｌ又はＧから選択され；
＊は独立して、各発生時に、アミノ酸残基に共有結合的に付着する脂質を表わす；
（ｃ）式Ｉのアジュバント：
【化１】
2014518841.tif 000066
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７の少なくとも１つは、以下のものから成る基から選択される強力な親油基であり、
【化２】
2014518841.tif 000067
式中、Ｘ、Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３は独立して、−（ＣＯ）−又は−ＣＨ２−であり；
Ｚは−ＮＨ−又は−Ｏであり；
ｋ、ｍ、及びｒは独立して、０乃至３０を含む整数であり、
ｎとｑは独立して、０乃至６を含む整数であり；
式中、Ｙ４は、−Ｏ−、−Ｓ−、及び−ＮＨ−から成る基から選択されるスペーサーであり、
式中、Ｙ１Ｒ１、Ｙ２Ｒ２、Ｙ３Ｒ３、Ｙ５Ｒ５、Ｙ６Ｒ６、及びＹ７Ｒ７の少なくとも１つは、一価のリン酸塩同等物（ＭＰＥ）であり、
ここで、各々の一価のリン酸塩同等物は独立して、
（ａ）Ｒ’が１−４の炭素の置換又は非置換のアルキル基である−Ｒ’−Ｃ（Ｏ）ＯＨであるか、又は、
（ｂ）−ＯＢ（ＯＨ）ＯＲ、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＲ、−ＯＳ（Ｏ）（Ｏ）（ＯＨ）ＯＲ、及び−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）ＯＲから成る基から独立して選択され、
ここで、Ｒは水素、或いは１−４の炭素の置換又は非置換のアルキル基であり、Ｒが置換されたアルキル基である場合、置換基は−ＯＨ又は−ＮＨ２であり、
式中、Ｒ８は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ９、Ｙ８と組み合わせて前に定義されるような一価のリン酸塩同等物を形成する部分、及び上に定義されるような基（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から成る基から選択され；ここで、Ｒ９は、１乃至１０の炭素長さのアルキル基又はアシル基であり；及び
式中、グリコシド結合はα又はβである］
又はその薬学的に許容可能な塩；
或いは、
式ＩＩのアジュバント：
【化３】
2014518841.tif 000068
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３の少なくとも１つは、上記（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から成る基から選択される強力な親油基であり；
式中、Ｙ４は、−Ｏ−、−Ｓ−、及び−ＮＨ−から成る基から選択されるスペーサーであり、及び
式中、Ｙ１Ｒ１、Ｙ２Ｒ２、Ｙ３Ｒ３、Ｙ１１Ｒ１１、Ｙ１２Ｒ１２、及びＹ１３Ｒ１３の少なくとも１つは独立して、前に定義されるような一価のリン酸塩同等物であり；
式中、以下の制限は、上記（Ｉ）と（ＩＩ）の両方に適用され：
Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ１１、Ｙ１２、及びＹ１３は、−Ｏ−、−Ｓ−、及び−ＮＨ−から成る基から独立して選択されるスペーサーであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は独立して、水素、共通して番号付けされたＹ基が前に定義されるような一価のリン酸エステル同等物を形成する部分、又は上記（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から成る基から選択される強力な親油基であり；
前記化合物の強力な親油基は、少なくとも２つの主要な炭素鎖をまとめて提供し、前記強力な親油基の主要な炭素鎖は、少なくとも３０の炭素原子をまとめて提供する］
又はその薬学的に許容可能な塩、及び
（ｄ）１つ以上の担体脂質
を含むことを特徴とする、リポソームワクチン製剤。
【請求項２】
担体脂質は、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ；レシチン）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）から選択され、他の適切なリン脂質は、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）；ジミリストイルホスファチジン酸（ＤＭＰＡ）、ジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、又はそれらの薬学的に許容可能な塩、或いはそれらの組み合わせを更に含むことを特徴とする、請求項１に記載のワクチン製剤。
【請求項３】
アミノ酸残基に共有結合的に付着する脂質は独立して、各発生時に、ミリストイル鎖、パルミトイル鎖、ラウリル鎖、ステアロイル鎖、デカノイル鎖、及びオクタノイル鎖、或いはそれらの組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項１に記載のワクチン製剤。
【請求項４】
（ｂ）は、（ａ）のカルボキシ末端に付着することを特徴とする、請求項１に記載のワクチン製剤。
【請求項５】
（ａ）＋（ｂ）と（ｃ）は、１：１０から１０：１までの、重量（ａ）＋（ｂ）：重量（ｃ）の比率にあることを特徴とする、請求項１に記載のワクチン製剤。
【請求項６】
Ｔｅは独立して、各発生時に、以下の式、及びＴ−ハプテンから選択されることを特徴とする、請求項１に記載のワクチン製剤。
【化４】
2014518841.tif 000069
【請求項７】
Ｙ４は−Ｏ−であり；
Ｙ１、Ｙ２、及びＹ７は−Ｏ−であり；
Ｙ３、Ｙ５、及びＹ６は独立して、−Ｏ−又は−ＮＨ−であり；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６は独立して、水素、又は（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から選択された強い親油基であり；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６の少なくとも１つは、水素ではなく；
Ｒ２とＲ７は、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−ＳＯ３Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、及び−ＣＨ２ＣＯＯＨから成る基から独立して選択され；並びに
Ｒ８は、Ｈ、ＯＨ、ＯＳＯ３Ｈ、及びＯＲ９から成る基から選択され、ここで、Ｒ９は、１乃至１０の炭素長さのアルキル基又はアシル基である
ことを特徴とする、請求項１に記載のワクチン製剤。
【請求項８】
少なくとも１つの強力な親油基は、以下に記載される構造の１つであることを特徴とする、請求項１に記載のワクチン製剤。
【化５】
2014518841.tif 000070
【請求項９】
アジュバントは、以下の構造を有し：
【化６】
2014518841.tif 000071
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６は独立して、水素、又は以下のものから成る基から選択される親油基であり、
【化７】
2014518841.tif 000072
式中、Ｘ、Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３は独立して、−ＣＯ−又は−ＣＨ２−であり；
Ｚは、−ＮＨ−又は−Ｏ−であり；
ｋ、ｍ、及びｒは独立して、０乃至３０を含む整数であり、
ｎとｑは独立して、０乃至６を含む整数であり；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６の少なくとも１つは、水素ではなく；
Ｒ２とＲ７は、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−ＳＯ３Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、及び−ＣＨ２ＣＯＯＨから成る基から独立して選択され；及び
Ｒ９は、Ｈ、或いは１乃至１０の炭素長さのアルキル基又はアシル基である
ことを特徴とする、請求項１に記載のワクチン製剤。
【請求項１０】
アジュバントは、以下に述べられる構造の１つを有することを特徴とする、請求項１に記載のワクチン製剤。
【化８】
2014518841.tif 000073
【請求項１１】
ペプチドは、少なくとも６つのＴｅにより置換されることを特徴とする、請求項１に記載のワクチン製剤。
【請求項１２】
ペプチドは、
Ｈ２Ｎ−ＴＳＡＰＤＴ（Ｔｎ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｎ）Ｔ（Ｔｎ）ＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴ（Ｔｎ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｎ）Ｔ（Ｔｎ）ＡＰＰＡＨＧＶＳ＊Ｓ＊Ｌ−ＯＨ（配列番号２）
を含み、ここで、ＴｎはＧａｌＮＡｃα１を表わすことを特徴とする、請求項１に記載のワクチン製剤。
【請求項１３】
リポソームワクチン製剤であって、該リポソームワクチン製剤は：
（ａ）以下の構造のグリコリポペプチド：
Ｈ２Ｎ−ＴＳＡＰＤＴ（Ｔｎ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｎ）Ｔ（Ｔｎ）ＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴ（Ｔｎ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｎ）Ｔ（Ｔｎ）ＡＰＰＡＨＧＶＳ＊Ｓ＊Ｌ−ＯＨ（配列番号２）
ここで、
ＴｎはＧａｌＮＡｃα１を表わし；及び
＊は独立して、各発生時に、セリン残基に共有結合的に付着するＣ１４脂質を表わす；
（ｂ）以下の構造のアジュバント：
【化９】
2014518841.tif 000074
或いはその薬学的に許容可能な塩；及び
（ｃ）担体脂質
を含むことを特徴とする、リポソームワクチン製剤。
【請求項１４】
Ｃ１４脂質はミリストイル鎖であることを特徴とする、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
アジュバントは、以下の式、或いはその薬学的に許容可能な塩であることを特徴とする、請求項１３に記載の組成物。
【化１０】
2014518841.tif 000075
【請求項１６】
薬学的に許容可能な塩は、トリエチラミン塩であることを特徴とする、請求項１３に記載のアジュバント。
【請求項１７】
担体脂質は、ＤＭＰＧ、ＤＰＰＣ、又はそれらの薬学的に許容可能な塩、或いはそれらの組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１８】
コレステロールを更に含むことを特徴とする、請求項１３に記載の製剤。
【請求項１９】
ＭＵＣ１腫瘍関連抗原を発現する癌に苦しむ、又はその疑いのある個体を処置する方法であって、該方法は、請求項１のリポソームワクチン製剤を、一定期間それを投与する個体に投与する工程を含むことを特徴とする、方法。
【請求項２０】
癌は、乳癌、耳下腺癌、胃癌、食道癌、頭頸部癌、胆嚢癌、肝細胞癌、甲状腺癌、子宮内膜癌、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、急性／慢性のリンパ芽球性白血病、毛様細胞性白血病、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、形質細胞腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、膵臓癌、結腸癌、前立腺癌、卵巣癌、肺の腺癌、肺扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、腎臓癌、膀胱癌、又は尿路癌であることを特徴とする、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
個体における免疫反応を測定する工程を更に含むことを特徴とする、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
処置した個体における免疫反応を測定する工程は、個体におけるＴ細胞の増殖を測定する工程を含むことを特徴とする、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
処置した個体における免疫反応を測定する工程には、個体における抗体産生を測定する工程を含むことを特徴とする、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
ワクチン組成物は、筋肉内、静脈内、皮下、結節内、腫瘍内、腹腔内、又は皮内の注射、或いは埋め込み式ポンプによって投与されることを特徴とする、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
個体は、請求項１のワクチン製剤による処置の前に、シクロホスファミド、ダクリズマブ、又はイマチニブで処置されることを特徴とする、請求項１９に記載の方法。
【請求項２６】
個体における細胞及び液性の免疫反応を誘発及び／又は持続する方法であって、該方法は、請求項１のリポソームワクチン製剤を、一定期間、個体に投与する工程を含むことを特徴とする、方法。
【請求項２７】
方法は、個体におけるＴ細胞の増殖を測定する工程を更に含むことを特徴とする、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
方法は、個体における抗体産生を測定する工程を更に含むことを特徴とする、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
個体におけるヒポグリコシル化したＭＵＣ１に関連した疾患、障害、又は疾病を処置する方法であって、該方法は、請求項１のリポソームワクチン製剤を、一定期間、ヒポグリコシル化したＭＵＣ１を有する個体に投与する工程を含むことを特徴とする、方法。
【請求項３０】
個体におけるヒポグリコシル化したＭＵＣ１は、癌に関連することを特徴とする、請求項２９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
〈相互参照〉
この出願は、２０１１年２月２４日出願の米国仮特許出願第６１／４４６，３３２号、及び２０１１年３月３１日出願の米国仮特許出願第６１／４７０，４４９号の利益を主張するものであり、その各々は、引用によってその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
〈配列表〉
本出願は配列表を含み、該配列表は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩ形式ファイルで提出されており、引用によってその全体が組み込まれる。２０１２年２月２３日に作成された前記ＡＳＣＩＩのコピーは、３４３９５ＰＣＴ．ｔｘｔと命名され、７，６８３バイトのサイズである。
【背景技術】
【０００３】
癌の免疫療法は、腫瘍関連抗原を認識して癌細胞を攻撃するための免疫系に向けられる。
【発明の概要】
【０００４】
本明細書において、悪性腫瘍の処置のため免疫系を利用する、免疫原性ワクチン製剤が提供される。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される免疫療法製剤は、抗原特異性のＢ細胞及び／又はＴ細胞の反応を誘発する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるワクチン製剤は、腫瘍関連抗原を認識して癌細胞を攻撃する免疫反応を誘発する、合成抗原を含む。本明細書に記載される免疫原性ワクチン製剤は、既存の癌治療レジメンの効果を増強する。
【０００５】
本明細書において、以下（ａ）乃至（ｄ）を含むリポソームワクチン製剤が提供される：
（ａ）中心の直列反復：
ＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１）、
配列番号１と少なくとも８５％同一の配列、或いはその直線的な並び換えの少なくとも２つの複製物を含むペプチド；
ここで、
ＳとＴは独立して、各発生時に、癌に関連する炭水化物エピトープＴｅに随意に置換される；
（ｂ）以下の式を有する（ａ）に共有結合的に付着されるリポペプチド：
Ｈ２Ｎ−（ａａ１）＊（ａａ２）＊（ａａ３）−ＯＨ
ここで、
ａａ１は独立して、各発生時に、Ｓ、Ｔ、Ｋ、Ｒ、又はＣから選択され；
ａａ２は独立して、各発生時に、Ｓ、Ｔ、Ｋ、Ｒ、又はＣから選択され；
ａａ３は独立して、各発生時に、Ｌ又はＧから選択され；
＊は独立して、各発生時に、アミノ酸残基に共有結合的に付着する脂質を表わす；
（ｃ）式Ｉのアジュバント：
【０００６】
【化１】
2014518841.tif 000003
【０００７】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７の少なくとも１つは、以下のものから成る基から選択される強力な親油基であり、
【０００８】
【化２】
2014518841.tif 000004
【０００９】
式中、Ｘ、Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３は独立して、−（ＣＯ）−又は−ＣＨ２−であり；
Ｚは−ＮＨ−又は−Ｏであり；
ｋ、ｍ、及びｒは独立して、０乃至３０を含む整数であり、
ｎとｑは独立して、０乃至６を含む整数であり；
式中、Ｙ４は、−Ｏ−、−Ｓ−、及び−ＮＨ−から成る基から選択されるスペーサーであり、
式中、Ｙ１Ｒ１、Ｙ２Ｒ２、Ｙ３Ｒ３、Ｙ５Ｒ５、Ｙ６Ｒ６、及びＹ７Ｒ７の少なくとも１つは、一価のリン酸塩同等物（ＭＰＥ）であり、
ここで、各々の一価のリン酸塩同等物は独立して、
（ａ）Ｒ’が１−４の炭素の置換又は非置換のアルキル基である−Ｒ’−Ｃ（Ｏ）ＯＨであるか、又は、
（ｂ）−ＯＢ（ＯＨ）ＯＲ、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＲ、−ＯＳ（Ｏ）（Ｏ）（ＯＨ）ＯＲ、及び−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）ＯＲから成る基から独立して選択され、
ここで、Ｒは水素、或いは１−４の炭素の置換又は非置換のアルキル基であり、Ｒが置換されたアルキル基である場合、置換基は−ＯＨ又は−ＮＨ２であり、
式中、Ｒ８は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ９、Ｙ８と組み合わせて前に定義されるような一価のリン酸塩同等物を形成する部分、及び上に定義されるような基（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から成る基から選択され；ここで、Ｒ９は、１乃至１０の炭素長さのアルキル基又はアシル基であり；及び
式中、グリコシド結合はα又はβである］
又はその薬学的に許容可能な塩；
或いは、
式ＩＩのアジュバント：
【００１０】
【化３】
2014518841.tif 000005
【００１１】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３の少なくとも１つは、上記（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から成る基から選択される強力な親油基であり；
式中、Ｙ４は、−Ｏ−、−Ｓ−、及び−ＮＨ−から成る基から選択されるスペーサーであり、及び
式中、Ｙ１Ｒ１、Ｙ２Ｒ２、Ｙ３Ｒ３、Ｙ１１Ｒ１１、Ｙ１２Ｒ１２、及びＹ１３Ｒ１３の少なくとも１つは独立して、前に定義されるような一価のリン酸塩同等物であり；
式中、以下の制限は、上記（Ｉ）と（ＩＩ）の両方に適用され：
Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ１１、Ｙ１２、及びＹ１３は、−Ｏ−、−Ｓ−、及び−ＮＨ−から成る基から独立して選択されるスペーサーであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は独立して、水素、共通して番号付けされたＹ基が前に定義されるような一価のリン酸エステル同等物を形成する部分、又は上記（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から成る基から選択される強力な親油基であり；
前記の化合物の強力な親油基は、少なくとも２つの主要な炭素鎖をまとめて提供し、前記強力な親油基の主要な炭素鎖は、少なくとも３０の炭素原子をまとめて提供する］
又はその薬学的に許容可能な塩、及び
（ｄ）１つ以上の担体脂質。
【００１２】
幾つかの実施形態において、製剤は、凍結乾燥した粉末、乾燥した薄膜、又は乾燥した粉末である。幾つかの実施形態において、製剤は凍結乾燥した粉末である。幾つかの実施形態において、ワクチン製剤は、水中懸濁液、エマルジョン、又は油中懸濁液である。幾つかの実施形態において、製剤は水中懸濁液である。幾つかの実施形態において、製剤は、ｔｅｒｔ−ブタノールを更に含む。
【００１３】
幾つかの実施形態において、中心の直列反復配列は、（ａ）における配列と少なくとも９０％の相同性を有する。幾つかの実施形態において、中心の直列反復配列は、（ａ）における配列と少なくとも９５％の相同性を有する。
【００１４】
幾つかの実施形態において、担体脂質は、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ；レシチン）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）から選択される。他の適切なリン脂質は、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）；ジミリストイルホスファチジン酸（ＤＭＰＡ）、ジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、又はそれらの薬学的に許容可能な塩、或いはそれらの組み合わせを更に含む。
【００１５】
幾つかの実施形態において、担体脂質は、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、又はそれらの薬学的に許容可能な塩、或いはそれらの組み合わせから選択される。
【００１６】
幾つかの実施形態において、製剤はコレステロールを更に含む。
【００１７】
幾つかの実施形態において、アミノ酸残基に共有結合的に付着する脂質は独立して、各発生時に、ミリストイル鎖、パルミトイル鎖、ラウリル鎖、ステアロイル鎖、デカノイル鎖、及びオクタノイル鎖、或いはそれらの組み合わせから選択される。幾つかの実施形態において、アミノ酸残基に共有結合的に付着する脂質は独立して、各発生時に、ミリストイル鎖である。
【００１８】
幾つかの実施形態において、（ｂ）は、（ａ）のカルボキシ末端に付着する。幾つかの実施形態において、（ｂ）は、（ａ）のアミノ末端に付着する。
【００１９】
幾つかの実施形態において、（ａ）＋（ｂ）と（ｃ）は、１：１０から１０：１までの、重量（ａ）＋（ｂ）：重量（ｃ）の比率にある。幾つかの実施形態において、（ａ）＋（ｂ）と（ｃ）は、１：５から５：１までの、重量（ａ）＋（ｂ）：重量（ｃ）の比率にある。幾つかの実施形態において、（ａ）＋（ｂ）と（ｃ）は、１：２から２：１までの、重量（ａ）＋（ｂ）：重量（ｃ）の比率にある。
【００２０】
幾つかの実施形態において、Ｔｅは独立して、各発生時に、以下の式、及びＴ−ハプテンから選択される。
【００２１】
【化４】
2014518841.tif 000006
【００２２】
幾つかの実施形態において、Ｔｅは独立して、各発生時に、以下の式、及びＴ−ハプテンから選択される。
【００２３】
【化５】
2014518841.tif 000007
【００２４】
幾つかの実施形態において、ペプチドは、少なくとも１つの癌に関連する炭水化物Ｔｅで置換される。幾つかの実施形態において、ペプチドは、少なくとも２つのＴｅで置換される。幾つかの実施形態において、ペプチドは、少なくとも３つのＴｅで置換される。幾つかの実施形態において、ペプチドは、少なくとも４つのＴｅで置換される。幾つかの実施形態において、ペプチドは、少なくとも５つのＴｅで置換される。幾つかの実施形態において、ペプチドは、少なくとも５つのＴｅで置換される。幾つかの実施形態において、ペプチドは、少なくとも６つのＴｅで置換される。幾つかの実施形態において、ペプチドは、少なくとも７つのＴｅで置換される。幾つかの実施形態において、ペプチドは、少なくとも８つのＴｅで置換される。幾つかの実施形態において、ペプチドは、少なくとも９つのＴｅで置換される。幾つかの実施形態において、ペプチドは、少なくとも１０のＴｅで置換される。
【００２５】
幾つかの実施形態において、アジュバントは、式Ｉのものであり、又はその薬学的に許容可能な塩である。幾つかの実施形態において、アジュバントは、式ＩＩのものであり、又はその薬学的に許容可能な塩である。
【００２６】
幾つかの実施形態において、Ｙ４は、−Ｓ−である。幾つかの実施形態において、Ｙ４は、−ＮＨ−である。幾つかの実施形態において、Ｙ４は、−Ｏ−である。
【００２７】
幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は（ｉ）を満たし、少なくとも１つのそのような基に関して、ｋは整数４−３０である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は（ｉｉ）を満たし、少なくとも１つのそのような基に関して、２ｋ＋３ｎは整数４−３０である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は（ｉｉｉ）を満たし、少なくとも１つのそのような基に関して、ｍ＋ｎ＋ｌは４−３０である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は（ｉｖ）を満たし、少なくとも１つのそのような基に関して、ｍ＋ｎ＋１は４−３０である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は（ｖ）を満たし、少なくとも１つのそのような基に関して、ｍ＋ｎ＋ｋ＋１は４−３０である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は（ｖｉ）を満たし、少なくとも１つのそのような基に関して、ｋ＋ｍ＋２は４−３０である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は（ｖｉｉ）を満たし、少なくとも１つのそのような基に関して、ｋ＋ｑ＋ｍ＋ｎは４−３０である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は（ｖｉｉｉ）を満たし、少なくとも１つのそのような基に関して、ｒ＋ｋ＋ｑ＋ｍ＋ｎは５−３０である。
【００２８】
幾つかの実施形態において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ１１、Ｙ１２、及びＹ１３は独立して、−Ｏ−又は−ＮＨ−である。幾つかの実施形態において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、及びＹ７は独立して、−Ｏ−又は−ＮＨ−である。幾つかの実施形態において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ１１、Ｙ１２、Ｙ１３は独立して、−Ｏ−又は−ＮＨ−である。
【００２９】
幾つかの実施形態において、Ｙ４は−Ｏ−である。幾つかの実施形態において、各々の一リン酸塩等価物は−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＨ）である。
【００３０】
幾つかの実施形態において、式Ｉのアジュバントは化合物であり、ここで、
Ｙ４は−Ｏ−であり；
Ｙ１、Ｙ２、及びＹ７は−Ｏ−であり；
Ｙ３、Ｙ５、及びＹ６は独立して、−Ｏ−又は−ＮＨ−であり；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６は独立して、水素、又は（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から選択された強力な親油基であり；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６の少なくとも１つは、水素ではなく；
Ｒ２とＲ７は、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−ＳＯ３Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、及び−ＣＨ２ＣＯＯＨから成る基から独立して選択され；並びに
Ｒ８は、Ｈ、ＯＨ、ＯＳＯ３Ｈ、及びＯＲ９から成る基から選択され、ここで、Ｒ９は、１乃至１０の炭素長さのアルキル基又はアシル基である。
【００３１】
幾つかの実施形態において、式Ｉのアジュバントは化合物であり、ここで、
Ｙ４は−Ｏ−であり；
Ｙ２とＹ１２は−Ｏ−ｐであり；
Ｙ１、Ｙ３、Ｙ１１、及びＹ１３は、−Ｏ−、−ＮＨ−、及び−Ｓ−から成る基から独立して選択され；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ１１、及びＲ１３は独立して、水素、又は（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から選択される強力な親油基であり；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６の少なくとも１つは、水素ではなく；並びに
Ｒ２とＲ１２は、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、及び−ＣＨ２ＣＯＯＨから成る基から独立して選択される。
【００３２】
幾つかの実施形態において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６は独立して、水素、又は（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から成る基から選択される強力な親油基であり、少なくとも１つのＲ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６は、水素ではなく、Ｒ２とＲ７は、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−ＳＯ３Ｈ、−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、及び−ＣＨ２ＣＯＯＨから成る基から独立して選択され；並びにＲ８は、Ｈ、ＯＨ、ＯＳＯ３Ｈ、及びＯＲ９から成る基から選択され、ここで、Ｒ９は、１乃至１０の炭素長さのアルキル基又はアシル基である。
【００３３】
幾つかの実施形態において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ１１、及びＲ１３は独立して、水素、又は（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から選択される強力な親油基であり；Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６の少なくとも１つは、水素ではなく；並びにＲ２とＲ１２は、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、及び−ＣＨ２ＣＯＯＨから成る基から独立して選択される。
【００３４】
式Ｉの幾つかの実施形態において、各々の一リン酸塩同等物は、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＨ）である。式ＩＩの幾つかの実施形態において、各々の一リン酸塩同等物は−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＨ）である。
【００３５】
幾つかの実施形態において、前記化合物の強力な親油基は、少なくとも３つの主要な炭素鎖をまとめて提供し、ここで、前記強力な親油基の主要な炭素鎖は、少なくとも４０の炭素原子をまとめて提供し、前記アジュバントは免疫賦活性を有する。幾つかの実施形態において、前記化合物の強力な親油基は、少なくとも４つの主要な炭素鎖をまとめて提供し、ここで、主要な炭素鎖は、少なくとも５０の炭素原子をまとめて提供し、前記アジュバントは免疫賦活性を有する。幾つかの実施形態において、強力な親油基は、６つの主要な炭素鎖をまとめて提供する。幾つかの実施形態において、各々の主要な炭素鎖は、前記鎖内に１０、１２、１４、１６、１８、又は２０の炭素原子により特徴化される。
【００３６】
幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、以下に記載される構造の１つである：
【００３７】
【化６】
2014518841.tif 000008
【００３８】
幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、Ｒエナンチオマーを含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、Ｓエナンチオマーを含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、ラセミ化合物である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、ＲＲ、ＲＳ、ＳＲ、又はＳＳのジアステレオマーを含む。ラセミ化合物、エナンチオマー、又はジアステレオマーはすべて、本明細書で提示される実施形態の範囲内にあるものと熟慮される。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、以下に述べられた構造の１つである：
【００３９】
【化７】
2014518841.tif 000009
【００４０】
幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、以下に述べられた構造の１つである：
【００４１】
【化８】
2014518841.tif 000010
【００４２】
幾つかの実施形態において、式Ｉのアジュバントは、ＰＥＴリピドＡアナログである。幾つかの実施形態において、式Ｉのアジュバントは、以下の構造を有する：
【００４３】
【化９】
2014518841.tif 000011
【００４４】
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６は独立して、水素、又は以下のものから成る基から選択される親油基であり、
【００４５】
【化１０】
2014518841.tif 000012
【００４６】
式中、Ｘ、Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３は独立して、−ＣＯ−又は−ＣＨ２−であり；
Ｚは、−ＮＨ−又は−Ｏ−であり；
ｋ、ｍ、及びｒは独立して、０乃至３０を含む整数であり、
ｎとｑは独立して、０乃至６を含む整数であり；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６の少なくとも１つは、水素ではなく；
Ｒ２とＲ７は、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−ＳＯ３Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、及び−ＣＨ２ＣＯＯＨから成る基から独立して選択され；及び
Ｒ９は、Ｈ、或いは１乃至１０の炭素長さのアルキル基又はアシル基である。
【００４７】
幾つかの実施形態において、Ｒ１とＲ９は水素であり；Ｒ２は水素又はホスホノ基−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２であり；Ｒ７はホスホノ基−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２であり；及びＲ３、Ｒ５、及びＲ６は、以下の構造の同じ又は異なるアシル基であり、
【００４８】
【化１１】
2014518841.tif 000013
【００４９】
式中、ｍとｎは、６乃至１０の間を含む整数から独立して選択される。
【００５０】
幾つかの実施形態において、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６は同一である。
【００５１】
幾つかの実施形態において、アジュバントは、以下に述べられる構造の１つを有する：
【００５２】
【化１２】
2014518841.tif 000014
【００５３】
幾つかの実施形態において、アジュバントは以下の構造を有する：
【００５４】
【化１３】
2014518841.tif 000015
【００５５】
幾つかの実施形態において、アジュバントは、以下に述べられる構造の１つを有する：
【００５６】
【化１４】
2014518841.tif 000016
【００５７】
幾つかの実施形態において、アジュバントは以下の構造を有する：
【００５８】
【化１５】
2014518841.tif 000017
【００５９】
幾つかの実施形態において、アジュバントは以下の構造を有する：
【００６０】
【化１６】
2014518841.tif 000018
【００６１】
式中、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６は、以下の構造の同じ又は異なる置換基（複数）であり；
【００６２】
【化１７】
2014518841.tif 000019
【００６３】
式中、ｍとｎは、６乃至１０の間を含む整数から独立して選択される。
【００６４】
上記実施形態の幾つかにおいて、アジュバントは、トリエチルアミン塩、トリエタノールアミン塩、又はアンモニウム塩である。上記実施形態の幾つかにおいて、アジュバントはトリエチルアミン塩である。上記の実施形態の幾つかにおいて、アジュバントはＰＥＴリピドＡアナログのトリエチルアミン塩である。
【００６５】
上記の実施形態の幾つかにおいて、リポソームワクチン製剤は、Ｈ２Ｎ−ＴＳＡＰＤＴ（Ｔｎ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｎ）Ｔ（Ｔｎ）ＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴ（Ｔｎ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｎ）Ｔ（Ｔｎ）ＡＰＰＡＨＧＶＳ＊Ｓ＊Ｌ−ＯＨ（配列番号２）を含み、ここで、ＴｎはＧａｌＮＡｃα１を表わす。
【００６６】
上記の実施形態の幾つかにおいて、リポソームワクチン製剤は以下（ａ）と（ｂ）を含む：
（ａ）中心の直列反復：
Ｔ（Ｔｅ）Ｓ（Ｔｅ）ＡＰＤＴ（Ｔｅ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｅ）Ｔ（Ｔｅ）ＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１８）、
配列番号１８と少なくとも８５％同一の配列、或いはその直線的な並び換えの少なくとも２つの複製物を含むペプチド；
ここで、
Ｔｅは、癌に関連する炭水化物エピトープを表わす；
（ｂ）以下の式を有する（ａ）に共有結合的に付着するリポペプチド：
Ｈ２Ｎ−Ｓ＊Ｓ＊Ｌ−ＯＨ
ここで、
＊は独立して、各発生時に、セリン残基に共有結合的に付着する脂質を表わす。
【００６７】
上記の幾つかの実施形態において、ワクチン製剤は以下（ａ）と（ｂ）を含む：
（ａ）中心の直列反復：
ＴＳＡＰＤＴ（Ｔｅ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｅ）Ｔ（Ｔｅ）ＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１９）、
配列番号１９と少なくとも８５％同一の配列、或いはその直線的な並び換えの少なくとも２つの複製物を含むペプチド；
ここで、
Ｔｅは、癌に関連する炭水化物エピトープを表わす；
（ｂ）以下の式を有する（ａ）に共有結合的に付着されるリポペプチド：
Ｈ２Ｎ−Ｓ＊Ｓ＊Ｌ−ＯＨ
ここで、
＊は独立して、各発生時に、セリン残基に共有結合的に付着する脂質を表わす。
【００６８】
幾つかの実施形態において、製剤は、配列番号１８又は配列番号１９の中心の直列反復の配列の２−１０の間の直列反復を含む。幾つかの実施形態において、製剤は、配列番号１８又は配列番号１９の中心の直列反復の配列の２−５の間の直列反復を含む。幾つかの実施形態において、製剤は、配列番号１８又は配列番号１９の中心の直列反復の配列の２の直列反復を含む。
【００６９】
そのような実施形態の幾つかにおいて、製剤は、凍結乾燥した粉末、乾燥した薄膜、又は乾燥した粉末である。幾つかの実施形態において、製剤は、凍結乾燥した粉末である。そのような実施形態の幾つかにおいて、ワクチン製剤は、水中懸濁液、エマルジョン、又は油中懸濁液である。幾つかの実施形態において、製剤は、水中懸濁液である。そのような実施形態の幾つかにおいて、製剤は、ｔｅｒｔ−ブタノールを更に含む。
【００７０】
そのような実施形態の幾つかにおいて、中心の直列反復は、上記又は本明細書に記載の実施形態の何れかにおいて記載されるように、（ａ）の配列と少なくとも９０％の相同性を有する。そのような実施形態の幾つかにおいて、中心の直列反復は、上記又は本明細書に記載の実施形態の何れかにおいて記載されるように、（ａ）の配列と少なくとも９５％の相同性を有する。
【００７１】
そのような実施形態の幾つかにおいて、担体脂質は、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ；レシチン）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）から選択される。他の適切なリン脂質は、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）；ジミリストイルホスファチジン酸（ＤＭＰＡ）、ジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、又はそれらの薬学的に許容可能な塩、或いはそれらの組み合わせを更に含む。
【００７２】
そのような実施形態の幾つかにおいて、担体脂質は、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジル（ＤＰＰＣ）、又はそれらの薬学的に許容可能な塩、或いはそれらの組み合わせから選択される。
【００７３】
そのような実施形態の幾つかにおいて、アミノ酸残基に共有結合的に付着する脂質は、各発生時に、ミリストイル鎖、パルミトイル鎖、ラウリル鎖、ステアロイル鎖、デカノイル鎖、及びオクタノイル鎖から独立して選択される。
【００７４】
そのような実施形態の幾つかにおいて、製剤はコレステロールを更に含む。
【００７５】
そのような実施形態の幾つかにおいて、セリン残基に共有結合的に付着する脂質は独立して、各発生時に、ミリストイル鎖である。
【００７６】
そのような実施形態の幾つかにおいて、（ｂ）は、（ａ）のカルボキシ末端に付着する。そのような実施形態の幾つかにおいて、（ｂ）は、（ａ）のアミノ末端に付着する。
【００７７】
そのような実施形態の幾つかにおいて、（ａ）＋（ｂ）と（ｃ）は、約１：１０乃至約１０：１の重量（ａ）＋（ｂ）：重量（ｃ）の比率にある。そのような実施形態の幾つかにおいて、（ａ）＋（ｂ）と（ｃ）は、約１：５乃至約５：１の重量（ａ）＋（ｂ）：重量（ｃ）の比率にある。そのような実施形態の幾つかにおいて、（ａ）＋（ｂ）と（ｃ）は、約１：２乃至約２：１の重量（ａ）＋（ｂ）：重量（ｃ）の比率にある。
【００７８】
幾つかの実施形態において、ＴｅはＴｎであり、ここで、ＴｎはＧａｌＮＡｃα１を表わす。
【００７９】
幾つかの実施形態において、本明細書には、以下（ａ）乃至（ｃ）を含むリポソームワクチン製剤が提供される：
（ａ）以下の構造のグリコリポペプチド：
Ｈ２Ｎ−ＴＳＡＰＤＴ（Ｔｎ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｎ）Ｔ（Ｔｎ）ＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴ（Ｔｎ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｎ）Ｔ（Ｔｎ）ＡＰＰＡＨＧＶＳ＊Ｓ＊Ｌ−ＯＨ（配列番号２）
ここで、
ＴｎはＧａｌＮＡｃα１を表わし；及び
＊は独立して、各発生時に、セリン残基に共有結合的に付着されるＣ１４脂質を表わし；
（ｂ）以下の構造のアジュバント：
【００８０】
【化１８】
2014518841.tif 000020
【００８１】
【化１９】
2014518841.tif 000021
【００８２】
又はその薬学的に許容可能な塩；及び
（ｃ）担体脂質。
【００８３】
幾つかの実施形態において、Ｃ１４脂質はミリストイル鎖である。
【００８４】
幾つかの実施形態において、アジュバントは、以下の式、或いはその薬学的に許容可能な塩である。
【００８５】
【化２０】
2014518841.tif 000022
【００８６】
幾つかの実施形態において、薬学的に許容可能な塩は、トリエチルアミン塩である。
【００８７】
幾つかの実施形態において、担体脂質は、ＤＭＰＧ、ＤＰＰＣ、又はそれらの薬学的に許容可能な塩、或いはそれらの組み合わせから選択される。幾つかの実施形態において、リポソームワクチン製剤は、コレステロールを更に含む。
【００８８】
上記の実施形態の何れかにおいて、製剤は１以上のＭＵＣ１エピトープを含む。上記の実施形態の何れかにおいて、リポソームは、９０％（ｄ９０）≦約０．２５ｍｍの直径母分布（ｄｉａｍｅｔｅｒ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）を有する。上記の実施形態の何れかにおいて、リポソームは、９０％（ｄ９０）≦約０．２２ｍｍの直径母分布を有する。上記の実施形態の何れかにおいて、リポソームは、９０％（ｄ９０）≦約０．２０ｍｍの直径母分布を有する。
【００８９】
別の態様において、本明細書には、以下（ａ）乃至（ｄ）を含むリポソームワクチン製剤が提供される：
（ａ）中心の直列反復：
ＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１）、
配列番号１と少なくとも８５％同一の配列、或いはその直線的な並び換えの少なくとも２つの複製物を含むペプチド；
ここで、
ＳとＴは独立して、各発生時に、癌に関連する炭水化物エピトープＴｅで随意に置換される；
（ｂ）以下の式を有する（ａ）に共有結合的に付着するリポペプチド：
Ｈ２Ｎ−（ａａ１）＊（ａａ２）＊（ａａ３）−ＯＨ
ここで、
ａａ１は独立して、各発生時に、Ｓ、Ｔ、Ｋ、Ｒ、又はＣから選択され；
ａａ２は独立して、各発生時に、Ｓ、Ｔ、Ｋ、Ｒ、又はＣから選択され；
ａａ３は独立して、各発生時に、Ｌ又はＧから選択され；
＊は独立して、各発生時に、アミノ酸残基に共有結合的に付着する脂質を表わす；
（ｃ）アジュバント；及び
（ｄ）１つ以上の担体脂質。
【００９０】
幾つかの実施形態において、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、サポニン、ＴＬＲ−９アゴニスト、又はリピドＡアナログ、或いはそれらの薬学的に許容可能な塩、或いはそれらの組み合わせから選択される。
【００９１】
幾つかの実施形態において、リピドＡアナログは、式Ｉのアジュバント：
【００９２】
【化２１】
2014518841.tif 000023
【００９３】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７の少なくとも１つは、以下のものから成る基から選択される親油基であり、
【００９４】
【化２２】
2014518841.tif 000024
【００９５】
式中、Ｘ、Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３は独立して、−ＣＯ−又は−ＣＨ２−であり；
Ｚは−ＮＨ−又は−Ｏであり；
ｋ、ｍ、及びｒは独立して、０乃至３０を含む整数であり、
ｎとｑは独立して、０乃至６を含む整数であり；
式中、Ｙ４は、−Ｏ−、−Ｓ−、及び−ＮＨ−から成る基から選択されるスペーサーであり、
式中、Ｙ１Ｒ１、Ｙ２Ｒ２、Ｙ３Ｒ３、Ｙ５Ｒ５、Ｙ６Ｒ６、及びＹ７Ｒ７の少なくとも１つは、一価のリン酸塩同等物（ＭＰＥ）であり、
ここで、各々の一価のリン酸塩同等物は独立して、
（ａ）Ｒ’が１−４の炭素の置換又は非置換のアルキル基である、−Ｒ’−Ｃ（Ｏ）ＯＨであるか、又は
（ｂ）−ＯＢ（ＯＨ）ＯＲ、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＲ、−ＯＳ（Ｏ）（Ｏ）（ＯＨ）ＯＲ、及び−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）ＯＲから独立して選択され、
ここで、Ｒは水素、或いは１−４の炭素の置換又は非置換のアルキル基であり、Ｒが置換されたアルキル基である場合、置換基は−ＯＨ又は−ＮＨ２であり、
式中、Ｒ８は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ９、Ｙ８と組み合わせて前に定義されるような一価のリン酸エステル同等物を形成する部分、及び上で定義されるような基（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から選択され；ここで、Ｒ９は、１乃至１０の炭素長さのアルキル基又はアシル基であり；
式中、グリコシド結合はα又はβである］
又はその薬学的に許容可能な塩；
或いは、
式ＩＩのアジュバント：
【００９６】
【化２３】
2014518841.tif 000025
【００９７】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３の少なくとも１つは、上記（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から成る基から選択される強力な親油基であり；
式中、Ｙ４は、−Ｏ−、−Ｓ−、及び−ＮＨ−から成る基から選択されるスペーサーであり、
式中、Ｙ１Ｒ１、Ｙ２Ｒ２、Ｙ３Ｒ３、Ｙ１１Ｒ１１、Ｙ１２Ｒ１２、及びＹ１３Ｒ１３の少なくとも１つは独立して、前に定義されるような一価のリン酸塩同等物であり；
式中、以下の制限は、上記（Ｉ）と（ＩＩ）の両方に適用され：
Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ１１、Ｙ１２、及びＹ１３は、−Ｏ−、−Ｓ−、及び−ＮＨ−から成る基から独立して選択されるスペーサーであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は独立して、水素、共通して番号付けされたＹ基が前に定義されるような一価のリン酸エステル同等物を形成する部分、又は上記（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から成る基から選択される強力な親油基であり；
前記化合物の強力な親油基は、少なくとも２つの主要な炭素鎖をまとめて提供し、前記強力な親油基の主要な炭素鎖は、少なくとも３０の炭素原子をまとめて提供する］
又はその薬学的に許容可能な塩、である。
【００９８】
そのような実施形態の幾つかにおいて、製剤は、凍結乾燥した粉末、乾燥した薄膜、又は乾燥した粉末である。幾つかの実施形態において、製剤は凍結乾燥した粉末である。そのような実施形態の幾つかにおいて、ワクチン製剤は、水中懸濁液、エマルジョン、又は油中懸濁液である。幾つかの実施形態において、製剤は、水中懸濁液である。そのような実施形態の幾つかにおいて、製剤は、ｔｅｒｔ−ブタノールを更に含む。
【００９９】
そのような実施形態の幾つかにおいて、中心の直列反復は、上記又は本明細書に記載の実施形態の何れかにおいて記載されるように、（ａ）の配列と少なくとも９０％の相同性を有する。そのような実施形態の幾つかにおいて、中心の直列反復は、上記又は本明細書に記載の実施形態の何れかにおいて記載されるように、（ａ）の配列と少なくとも９５％の相同性を有する。
【０１００】
そのような実施形態の幾つかにおいて、担体脂質は、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ；レシチン）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）から選択される。他の適切なリン脂質は、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）；ジミリストイルホスファチジン酸（ＤＭＰＡ）、ジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、又はそれらの薬学的に許容可能な塩、或いはそれらの組み合わせを更に含む。
【０１０１】
そのような実施形態の幾つかにおいて、担体脂質は、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、又はそれらの薬学的に許容可能な塩、或いはそれらの組み合わせから選択される。
【０１０２】
そのような実施形態の幾つかにおいて、製剤はコレステロールを更に含む。
【０１０３】
そのような実施形態の幾つかにおいて、アミノ酸残基に共有結合的に付着する脂質は、各発生時に、ミリストイル鎖、パルミトイル鎖、ラウリル鎖、ステアロイル鎖、デカノイル鎖、及びオクタノイル鎖から独立して選択される。そのような実施形態の幾つかにおいて、アミノ酸残基に共有結合的に付着する脂質は独立して、各発生時に、ミリストイル鎖である。
【０１０４】
そのような実施形態の幾つかにおいて、（ｂ）は、（ａ）のカルボキシ末端に付着する。そのような実施形態の幾つかにおいて、（ｂ）は、（ａ）のアミノ末端に付着する。
【０１０５】
そのような実施形態の幾つかにおいて、（ａ）＋（ｂ）と（ｃ）は、約１：１０乃至約１０：１の重量（ａ）＋（ｂ）：重量（ｃ）の比率にある。そのような実施形態の幾つかにおいて、（ａ）＋（ｂ）と（ｃ）は、約１：５乃至約５：１の重量（ａ）＋（ｂ）：重量（ｃ）の比率にある。そのような実施形態の幾つかにおいて、（ａ）＋（ｂ）と（ｃ）は、約１：２乃至約２：１の重量（ａ）＋（ｂ）：重量（ｃ）の比率にある。
【０１０６】
そのような実施形態の幾つかにおいて、Ｔｅは、各発生時に、以下の式、及びＴ−ハプテンから独立して選択される：
【０１０７】
【化２４】
2014518841.tif 000026
【０１０８】
そのような実施形態の幾つかにおいて、ＴｅはＴｎである。そのような実施形態の幾つかにおいて、ＴｅはＴｎ’である。そのような実施形態の幾つかにおいて、ＴｅはＳＴｎである。そのような実施形態の幾つかにおいて、ＴｅはＳＴｎ’である。そのような実施形態の幾つかにおいて、ＴｅはＴＦである。そのような実施形態の幾つかにおいて、ＴｅはＴＦ’である。そのような実施形態の幾つかにおいて、ＴｅはＳＴＦである。そのような実施形態の幾つかにおいて、ＴｅはＳＴＦ’である。そのような実施形態の幾つかにおいて、ＴｅはＦ１αである。そのような実施形態の幾つかにおいて、ＴｅはＦ１α’である。そのような実施形態の幾つかにおいて、ＴｅはＴ−ハプテンである。そのような実施形態の幾つかにおいて、ＴｅはＴ−ハプテン’である。そのような実施形態の幾つかにおいて、Ｔｅは、各発生時に、Ｔｎ、Ｔｎ’、ＳＴｎ、及びＳＴｎ’から独立して選択される。そのような実施形態の幾つかにおいて、Ｔｅは、各発生時に、Ｔｎ及びＳＴｎから独立して選択される。
【０１０９】
そのような実施形態の幾つかにおいて、アジュバントは、式Ｉの化合物、サポニン、ＣｐＧ  ＯＤＮ、及びＴＬＲ−９アゴニスト、又はその薬学的に許容可能な塩、或いははその組み合わせから選択される。
【０１１０】
そのような実施形態の幾つかにおいて、アジュバントは、以下の式、サポニン、ＣｐＧ  ＯＤＮ、及びＴＬＲ−９アゴニスト、又はその薬学的に許容可能な塩、或いははその組み合わせから選択される。
【０１１１】
【化２５】
2014518841.tif 000027
【０１１２】
【化２６】
2014518841.tif 000028
【０１１３】
そのような実施形態の幾つかにおいて、ワクチン製剤は、以下（ａ）と（ｂ）を含む：
（ａ）中心の直列反復：
Ｔ（Ｔｅ）Ｓ（Ｔｅ）ＡＰＤＴ（Ｔｅ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｅ）Ｔ（Ｔｅ）ＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１８）、
配列番号１８と少なくとも８５％同一の配列、或いはその直線的な並び換えの少なくとも２つの複製物を含むペプチド；
ここで、
Ｔｅは、癌に関連する炭水化物エピトープを表わし；
（ｂ）以下の式を有する（ａ）に共有結合的に付着されるリポペプチド：
Ｈ２Ｎ−Ｓ＊Ｓ＊Ｌ−ＯＨ
ここで、
＊は独立して、各発生時に、セリン残基に共有結合的に付着する脂質を表わす。
【０１１４】
そのような実施形態の幾つかにおいて、ワクチン製剤は以下（ａ）と（ｂ）を含む：
（ａ）中心の直列反復：
ＴＳＡＰＤＴ（Ｔｅ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｅ）Ｔ（Ｔｅ）ＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１９）、
配列番号１９と少なくとも８５％同一の配列、或いはその直線的な並び換えの少なくとも２つの複製物を含むペプチド；
ここで、
Ｔｅは、癌に関連する炭水化物エピトープを表わし；
（ｂ）以下の式を有する（ａ）に共有結合的に付着されるリポペプチド：
Ｈ２Ｎ−Ｓ＊Ｓ＊Ｌ−ＯＨ
ここで、
＊は独立して、各発生時に、セリン残基に共有結合的に付着する脂質を表わす。
【０１１５】
そのような実施形態の幾つかにおいて、リポソームワクチン製剤は以下（ａ）を含む：
（ａ）以下の構造のグリコリポペプチド：
Ｈ２Ｎ−ＴＳＡＰＤＴ（Ｔｎ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｎ）Ｔ（Ｔｎ）ＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴ（Ｔｎ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｎ）Ｔ（Ｔｎ）ＡＰＰＡＨＧＶＳ＊Ｓ＊Ｌ−ＯＨ（配列番号２）
ここで、
ＴｎはＧａｌＮＡｃα１を表わし；及び
＊は独立して、各発生時に、セリン残基に共有結合的に付着されるＣ１４脂質を表わす。
【０１１６】
本明細書には、上記のリポソームワクチン製剤を、一定期間、それを必要とする個体に投与する工程を含む、ＭＵＣ１腫瘍関連抗原を発現する癌に苦しむ、又はその疑いのある個体を処置する方法が、提供される。
【０１１７】
幾つかの実施形態において、癌は、乳癌、耳下腺癌、胃癌、食道癌、頭頸部癌、胆嚢癌、肝細胞癌、甲状腺癌、子宮内膜癌、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、急性／慢性のリンパ芽球性白血病、毛様細胞性白血病、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、形質細胞腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、膵臓癌、結腸癌、前立腺癌、卵巣癌、肺の腺癌、肺扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、腎臓癌、膀胱癌、又は尿路癌である。
【０１１８】
幾つかの実施形態において、上記の方法は、個体における免疫反応を測定する工程を更に含む。幾つかの実施形態において、処置した個体における免疫反応を測定する工程は、個体におけるＴ細胞の増殖を測定する工程を含む。
【０１１９】
幾つかの実施形態において、期間は、少なくとも約５日、少なくとも約１週、少なくとも約２週、少なくとも約４週、少なくとも約８週、少なくとも約１６週、少なくとも約２０週、少なくとも約２４週、少なくとも約２８週、少なくとも約３２週、少なくとも約３６週、少なくとも約４０週、少なくとも約４４週、少なくとも約４８週、少なくとも約５２週、少なくとも約６０週、少なくとも約６８週、少なくとも約７２週、少なくとも約８０週、少なくとも約８８週、少なくとも約９６週、少なくとも約１０４週から選択される。
【０１２０】
幾つかの実施形態において、ワクチン組成物は、筋肉内、静脈内、皮下、結節内（ｉｎｔｒａｎｏｄａｌ）、腫瘍内、腹腔内、又は皮内の注射によって投与される。幾つかの実施形態において、ワクチン組成物は、皮下注射により投与される。幾つかの実施形態において、ワクチン組成物は、ポンプを介して投与される。幾つかの実施形態において、ワクチン組成物は、埋め込み式ポンプを介して（例えば、Ａｌｚｅｔ（登録商標）の浸透圧ポンプを介して）投与される。
【０１２１】
幾つかの実施形態において、個体は、上記のワクチン製剤による処置の前に、シクロホスファミド、ダクリズマブ、又はイマチニブで処置される。
【０１２２】
また本明細書には、上記のリポソームワクチン製剤を、一定期間、個体に投与する工程を含む、個体における細胞及び液性の免疫反応を誘発及び／又は持続する方法が、提供される。幾つかの実施形態において、上記の方法は、個体におけるＴ細胞の増殖を測定する工程を更に含む。他の実施形態において、上記の方法は、個体における抗体産生を測定する工程を含む。
【０１２３】
また本明細書には、上記のリポソームワクチン製剤を、一定期間、ヒポグリコシル化した（ｈｙｐｏｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）ＭＵＣ１を有する個体に投与する工程を含む、個体におけるヒポグリコシル化したＭＵＣ１に関連した疾患、障害、又は疾病を処置する方法が、提供される。幾つかの実施形態において、個体におけるヒポグリコシル化したＭＵＣ１は、癌に関連する。他の実施形態において、上記のリポソームワクチン製剤は、個体におけるヒポグリコシル化したＭＵＣ１に特異的な免疫反応を誘発及び／又は持続する。幾つかの例において、免疫反応は細胞免疫反応である。他の例において、免疫反応は液性免疫反応である。
【０１２４】
〈引用による組み込み〉
本明細書にて言及される出版物、特許、及び特許出願は全て、あたかも個々の出版物、特許、又は特許出願が、引用によって組み込まれると具体的及び個別に示されたものであるかのように、ある程度までの引用によって本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１２５】
本発明の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲内に特に明記されている。本発明の特徴と利点とのよりよい理解は、本発明の原理を利用している、説明的な実施形態を明記する以下の詳細な記載と、以下の添付図面を参照することによって得られるであろう：
【図１】リポソームワクチン製剤の合成方法を示す。
【図２Ａ】本明細書に記載のリポソームワクチン製剤のため、透過電子顕微鏡法（図２Ａ）による、ガラス化された処方したリポソームの画像を示す。
【図２Ｂ】本明細書に記載のリポソームワクチン製剤のため、光学顕微鏡検査法（図２Ｂ）による、再構成したリポソームワクチンの画像を示す。
【図２Ｃ】本明細書に記載のリポソームワクチン製剤のため、凍結割断電子顕微鏡法（図２Ｃ）による、再構成したリポソームワクチンの画像を示す。
【図３Ａ】本明細書に記載されるワクチン製剤により免疫化されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける、ＣＤ８＋（図３Ａ）のＴリンパ球中のＩＦＮγのエキソビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）の誘発を示す。
【図３Ｂ】本明細書に記載されるワクチン製剤により免疫化されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける、ＣＤ４＋（図３Ｂ）のＴリンパ球中のＩＦＮγのエキソビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）の誘発を示す。
【図４】本明細書に記載されるワクチン製剤で免疫化されたマウス血清からのＭＵＣ１抗原に結合するＩｇＧの線量反応を示す。
【図５】グリコシル化したＭＵＣ１抗原（上部）とグリコシル化しなかったＭＵＣ１抗原（下部）に結合するＩｇＧにおけるワクチン製剤ＢＬＰ２５（ワクチンＡ又はＶａｃＡ）に対する、配列番号２を含む、本明細書に記載されるリポソームワクチン製剤の比較を示す。
【図６Ａ】本明細書に記載されるワクチン製剤で免疫化したヒトＭＵＣ１遺伝子組み換えマウスにおける、脾細胞のＩＦＮγのエキソビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）誘発（図６Ａ）を示す。
【図６Ｂ】本明細書に記載されるワクチン製剤で免疫化したヒトＭＵＣ１遺伝子組み換えマウスにおける、ＩｇＧ抗体誘発（図６Ｂ及び６Ｃ）を示す。
【図６Ｃ】本明細書に記載されるワクチン製剤で免疫化したヒトＭＵＣ１遺伝子組み換えマウスにおける、ＩｇＧ抗体誘発（図６Ｂ及び６Ｃ）を示す。
【図７Ａ】本明細書に記載されるワクチン製剤でワクチン注射したマウスの血清を備えた、Ｂ１６−ＭＵＣ１及びＢ１６細胞（図７Ａ）のＦＡＣＳ分析を示す。
【図７Ｂ】本明細書に記載されるワクチン製剤でワクチン注射したマウスの血清を備えた、胸部上皮細胞及び乳癌細胞（図７Ｂ）のＦＡＣＳ分析を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１２６】
癌処置のための、多くの臨床的に役立つ治療がある。幾つかの例において、従来の癌処置の欠点は、処置が、非特異的に、正常細胞（ｈｅａｌｔｙ  ｃｅｌｌｓ）、同様に癌細胞に影響を及ぼし、有毒な副作用をもたらすということである。
【０１２７】
ＭＵＣ１ムチンは、正常細胞（ｎｏｒｍａｌ  ｃｅｌｌｓ）と、同様に癌細胞において発現される高分子量の糖タンパク質である。しかしながら、腫瘍に関連するムチンは、グリコシル化の変更されたパターンを運ぶ。多くの癌において、ＭＵＣ１は過剰発現され、及び／又は異常なグリコシル化の下にあり、或いは異常にグリコシル化される。癌組織中のＭＵＣ１の異常なグリコシル化は、免疫系への中心のペプチドエピトープの曝露をもたらす。これらの特徴は、腫瘍に関連したムチンを、正常細胞のカウンターパートムチン（ｎｏｒｍａｌ  ｃｅｌｌ  ｃｏｕｎｔｅｒｐａｒｔ  ｍｕｃｉｎ）とは抗原性的に異なるようにする。従って、本明細書には、腫瘍及び／又は癌組織において発現されるＭＵＣ１抗原を標的とする細胞及び／又は液性免疫反応を誘発する、免疫原のワクチン製剤が提供される。
【０１２８】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載される免疫原の製剤は、腫瘍関連抗原を認識して癌細胞を攻撃する、抗原特異性のＢ細胞及び／又はＴ細胞の反応を誘発する。そのような実施形態の幾つかにおいて、癌細胞は選択的に攻撃され、それにより、有毒な副作用の可能性を減らす。他の実施形態において、本明細書に記載される免疫原の製剤は、Ｂ細胞が癌抗原に対して抗体を生産するように促す。従って、本明細書に記載されるリポソームワクチン製剤の使用を含む免疫療法の手法には、既存の癌治療の効能を増大する可能性がある。幾つかの実施形態において、本明細書で提供されるリポソームワクチン製剤は、本明細書に記載されるワクチンによる処置を受ける個体の寿命を増やし、及び／又は前記個体のクオリティーオブライフを改善する。
【０１２９】
〈ＭＵＣ１ムチン〉
ムチンは、高分子量（＞１，０００，０００ダルトン）及び大規模なグリコシル化（大抵は８０％以上）によって特徴付けられた糖タンパク質である。ヒトＭＵＣ１遺伝子産物は、乳癌細胞、膵臓癌細胞、及び特定の卵巣癌細胞を含むがこれらに限定されない多くのヒト癌細胞にて強く発現される。様々な癌に発現される、ＭＵＣ１にコードされたムチンは、同じ直列反復の中心のペプチド配列を含むが、グリコシル化の違いは存在する。癌細胞における不十分なグリコシル化のために、癌細胞上のＭＵＣ１分子は、正常な上皮細胞上で発現されないエピトープを発現する。ＭＵＣ１ムチンは、細胞外ドメイン、膜内外ドメイン、及び細胞質ドメインを備えた、必須の膜タンパク質から成る。ＭＵＣ１の抗原性の構成要素は、下記のような配列番号１の２０量体のアミノ酸ユニットの直列反復から成る糖タンパク質を含む、ＭＵＣ１の細胞外ドメインに存在する。
【０１３０】
ヒトＭＵＣ１のアミノ酸配列は、Ｐ１５９４１としてＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴデータベースにおいて利用可能である。反復の数は高度に多様性がある。それは、北のヨーロッパの人口において２１から１２５まで異なる。最も頻繁な対立遺伝子は、４１と８５の反復を含む。マウスＭＵＣ１に関しては、ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴ  Ｑ０２４９６を参照。
【０１３１】
ＭＵＣ１は、以下の中心の２０量体の配列の、完全及び不完全な反復の変数によって特徴付けられた、多形態の抗原である：
【０１３２】
【化２７】
2014518841.tif 000029
【０１３３】
角括弧によって示されるように、直列に反復されたイコサペプチドは、３つの部分で多形の基礎をなす：ＴＳＡＰ［Ｄ／Ｅ］［ｔ／ｓ］ＲＰＡＰＧＳＴＡＰ［Ｐ／Ａ／Ｑ／Ｔ］ＡＨＧＶ（配列番号３）。一般的な多形は、協調（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ）二重突然変異ＤＴ−＞ＥＳ、及び単一の置換Ｐ−＞Ａ、Ｐ−＞Ｑ、及びＰ−＞Ｔである。最も頻繁な置換ＤＴ＞ＥＳは、５０％までの反復において生じる。
【０１３４】
本明細書で提示される実施形態の範囲内で、ＭＵＣ１の少なくとも１つの天然のＢ細胞及び／又はＴ細胞のエピトープ、又はそのような天然のエピトープとほぼ同一の少なくとも１つの突然変異体エピトープを含むグリコリポペプチドを含む、ワクチンが熟慮される。幾つかの実施形態において、グリコペプチドは、エピトープの一部でない追加のＭＵＣ１配列を随意に含む。
【０１３５】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるリポソームワクチン製剤に適したグリコペプチドは、ＭＵＣ１のＢ細胞エピトープ又はＴ細胞エピトープ（それぞれの場合において、自然のエピトープ、又はその許容された突然変異体であり得る）、或いはそれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、これらエピトープは、同一であり、重複し、又は異なっている。幾つかの実施形態において、抗原のＴ細胞及びＢ細胞のエピトープは、重複する。例えば、ＭＵＣ１の場合において、ＳＡＰＤＴＲＰ（配列番号４）（即ち、配列番号１のアミノ酸２−８）は、Ｔ細胞エピトープであり、一方、ＰＤＴＲＰ（配列番号５）（即ち、配列番号１のアミノ酸４−８）は、Ｂ細胞エピトープである。
【０１３６】
本明細書に記載されるワクチン製剤の中にある免疫原上のグリコシル化部位は随意に、（１）ＭＵＣ１由来の腫瘍糖タンパク質において実際にグリコシル化した部位、（２）グリコシル化可能であるが、腫瘍糖タンパク質において実際にはグリコシル化していない部位、及び／又は（３）腫瘍糖タンパク質とは相容れない部位の１以上である。ＭＵＣ１由来の腫瘍糖タンパク質において通常はグリコシル化されるグリコシル化部位の１つ、幾つか、又は全ては、本明細書で提供されるワクチン製剤に存在する免疫原においてグリコシル化され、或いは、前記部位の何れもグリコシル化されない。
【０１３７】
本明細書に記載されるワクチン製剤に適した免疫原は、前述の完全な反復配列又はその直線的な並び換えの２つ以上の複製物を含む。
【０１３８】
問題の各ＭＵＣ１エピトープは、可変の直列反復領域の１つ以上のエピトープに、又はその領域の外側のエピトープに随意に相当する。直列反復におけるエピトープは、例えば、ＲＰＡＰＧＳ（配列番号６）（即ち、配列番号１のアミノ酸７−１２）、ＰＰＡＨＧＶＴ（配列番号７）（即ち、配列番号１のアミノ酸１５−２０、及び１）、並びにＰＤＴＲＰ（配列番号８）（即ち、配列番号１のアミノ酸４−８）を含む。配列ＰＤＴＲＰＡＰＧＳ（配列番号９）（即ち、配列番号１のアミノ酸４−１２）は、２つの重複するエピトープを含む。ＰＤＴＲＰ配列（配列番号１０）は、溶媒に暴露され且つ安定したＩＩ型のβターンを形成する、突出ノブ（ｐｒｏｔｒｕｄｉｎｇ  ｋｎｏｂ）の先端を形成する。
【０１３９】
また本明細書で提示される実施形態の範囲内で、少なくとも１つの２０のアミノ酸配列（中心の直列反復）を含むグリコリポペプチドが熟慮され、該配列は、単に１つ以上の同類置換及び／又は単独の非同類置換だけ、ＭＵＣ１の直列反復とは異なり、且つ、ＭＵＣ１の可変性の直列反復領域のエピトープを含む（同じような、又は許容された突然変異体の何れか）。
【０１４０】
これら実施形態の部分集合において、グリコリポペプチドは、２（合計４０のアミノ酸について）、３（合計６０のアミノ酸について）、４、５、６、７、又は８などの、複数の重複しない中心の直列反復を含む。これら中央の直列反復は、互いに同一であるが、必ずしもそうである必要はない。対照的に、自然のヒトＭＵＣ１ムチンにおける反復の数は、典型的に２１−１２５である。
【０１４１】
また本明細書で提示される実施形態の範囲内で、グリコリポペプチドのペプチド部分に追加のアミノ酸サブ配列を随意に含む、ワクチン製剤が熟慮される。そのようなサブ配列は、ＭＵＣ１可変性の直列反復領域のエピトープ（中心の直列反復に満たない）、その領域の外からのＭＵＣ１エピトープ、又は他の癌抗原のエピトープを含む、追加のエピトープを含む。
【０１４２】
従って、本明細書には、ＭＵＣ１グリコリポペプチドを含むワクチン製剤が提供される。幾つかの実施形態において、そのような合成のＭＵＣ１グリコリポペプチドは、癌細胞に存在するＭＵＣ１ペプチドエピトープを模倣する、配列番号１の中心の直列反復のペプチドの１以上の複製物を含む。本明細書には、幾つかの実施形態において、中心の直列反復：
ＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１）、
配列番号１とほぼ同一の配列、或いはその直線的な並び換えの少なくとも２つの複製物を含むペプチドを含む、ＭＵＣ１グリコリポペプチドが提供され；
ここで、
ＳとＴは独立して、各発生時に、癌に関連する炭水化物エピトープＴｅに随意に置換される。
【０１４３】
この配列の多数の反復があるため、示される出発点は任意であり、直列反復の「直線的な並び換え」は変わる。例えば、１つの実施形態において、直列反復ユニットは、配列番号１のアミノ酸１９にて開始し、配列ＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨ（配列番号１１）の中心の直列反復を提供するため、配列番号１の全体のペプチド配列を繰り返す。別の典型的な実施形態において、直列反復ユニットは、単に配列番号１のアミノ酸６にて開始し、配列ＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤ（配列番号１２）の中心の直列反復を提供するため、配列番号１の全体のペプチド配列を繰り返す。他の類似した「直線的な並び換え」も、本明細書で提示される実施形態の範囲内で熟慮される。
【０１４４】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるリポソーム製剤は、配列番号１、配列番号１とほぼ同一の配列、或いはその直線的な並び換えの、中心の直列反復の１と３０の間の複製物を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるリポソーム製剤は、配列番号１、配列番号１とほぼ同一の配列、或いはその直線的な並び換えの、中心の直列反復の１と２０の間の複製物を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるリポソーム製剤は、配列番号１、配列番号１とほぼ同一の配列、或いはその直線的な並び換えの、中心の直列反復の１と１０の間の複製物を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるリポソーム製剤は、配列番号１、配列番号１とほぼ同一の配列、或いはその直線的な並び換えの、中心の直列反復の１と５の間の複製物を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるリポソーム製剤は、配列番号１、配列番号１とほぼ同一の配列、或いはその直線的な並び換えの、中心の直列反復の２の複製物を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるリポソーム製剤は、配列番号１、配列番号１とほぼ同一の配列、或いはその直線的な並び換えの、中心の直列反復の３の複製物を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるリポソーム製剤は、配列番号１、配列番号１とほぼ同一の配列、或いはその直線的な並び換えの、中心の直列反復の４の複製物を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるリポソーム製剤は、配列番号１、配列番号１とほぼ同一の配列、或いはその直線的な並び換えの、中心の直列反復の５の複製物を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるリポソーム製剤は、配列番号１、配列番号１とほぼ同一の配列、或いはその直線的な並び換えの、中心の直列反復の６の複製物を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるリポソーム製剤は、配列番号１、配列番号１とほぼ同一の配列、或いはその直線的な並び換えの、中心の直列反復の７の複製物を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるリポソーム製剤は、配列番号１、配列番号１とほぼ同一の配列、或いはその直線的な並び換えの、中心の直列反復の８の複製物を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるリポソーム製剤は、配列番号１、配列番号１とほぼ同一の配列、或いはその直線的な並び換えの、中心の直列反復の９の複製物を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるリポソーム製剤は、配列番号１、配列番号１とほぼ同一の配列、或いはその直線的な並び換えの、中心の直列反復の１０の複製物を含む。上記実施形態の何れかにおいて、配列番号１の中心の直列配列の１以上の複製物は、本明細書に記載されるようにグリコシル化される。
【０１４５】
本明細書で使用されるように、「配列番号１とほぼ同一の配列」とは、１つの実施形態において、配列番号１と少なくとも８０％同一である配列を意味する。他の実施形態において、「配列番号１とほぼ同一の配列」とは、配列番号１と少なくとも８５％同一である配列を意味する。他の実施形態において、「配列番号１とほぼ同一の配列」とは、配列番号１と少なくとも９０％同一である配列を意味する。他の実施形態において、「配列番号１とほぼ同一の配列」とは、配列番号１と少なくとも９５％同一である配列を意味する。
【０１４６】
〈ＭＵＣ１の中心の反復の変異体〉
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるワクチン製剤には、ＭＵＣ１の中心の反復の免疫学的に活性な相同体又は変異体（例えば、配列番号１の変異体）が組み込まれる。従って、本明細書で提示される実施形態には、配列番号１において描かれるアミノ酸配列に類似するが同一ではない配列を有する、ＭＵＣ１の中心の反復のペプチドの使用を含む。故にまた、本明細書で提示される実施形態の範囲内で、配列番号１の配列と比較して、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、又は８０％の配列相同性を有し、且つ、免疫学的に活性である、ＭＵＣ１の中心の反復の使用が熟慮される。
【０１４７】
幾つかの実施形態において、重要でない残基、又は重要でない領域にある残基を変化させるため、保存的な変動を含むように随意に修飾される。重要でないアミノ酸は、特定部位の突然変異誘発、結晶化、核磁気共鳴法、光親和性標識、又はアラニン系統的変異導入法などの、当該技術分野において既知の方法により、同定される（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２４４：１０８１−１０８５  （１９８９）；  Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２２４：８９９−９０４  （１９９２）；  ｄｅ  Ｖｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２５５：３０６−３１２  （１９９２））。修飾したタンパク質は、基質、開裂、インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）活性，又はインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）活性に結合するプロテアーゼなどの方法を介し免疫反応を誘発するための活性又は能力について試験される。
【０１４８】
幾つかの実施形態において、ＭＵＣ１の中心の反復の変異体には、ＭＵＣ１の中心の反復の安定性を改善する、１、２、３、４、又は５のアミノ酸置換基、又は酸化に対するＭＵＣ１の中心の反復の安定性を改善する異なる疎水性アミノ酸、或いはプロテアーゼに対するＭＵＣ１の中心の反復の安定性を改善する異なるアミノ酸が組み込まれる。故に、「変異体」ＭＵＣ１の中心の反復のポリペプチドは、１つ以上の置換、除去、挿入、反転、切断、修飾、又はそれらの組み合わせにより、アミノ酸配列の点において配列番号１において表わされる配列とは異なる。このような変異体は、与えられたアミノ酸を、類似の特徴を有する別のアミノ酸に置換するアミノ酸置換を随意に含む。同類置換は、脂肪族アミノ酸の中での、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシンの交換；ヒドロキシル残基セリン及びトレオニンの交換、酸性の残基アスパラギン酸塩及びグルタミン酸の交換、アミド残基アスパラギンとグルタミンの間の置換、塩基性の残基リジン及びアルギニンの交換、及び芳香性の残基フェニルアラニン及びチロシンの中での置換を含む。「Ｂｏｗｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２４７：１３０６−１３１０  （１９９０）」を参照。
【０１４９】
中心の直列反復領域は、以下に詳述されるように、変異体がＴ細胞活性化の特徴を保存する方法で、随意に修飾される。
【０１５０】
幾つかの実施形態において、ＭＵＣ１の変異体は、ＭＵＣ１のタンパク質のフラグメントである。幾つかの実施形態において、ＭＵＣ１の変異体には、タンパク質分解を生ずる開列に抵抗性のあるＭＵＣ１のフラグメント、又はＤ−アミノ酸等の１以上の非天然のアミノ酸を含むＭＵＣ１のフラグメントを含む。このような誘導体は、循環する半減期の増加の利益を有し、一方で有益なＴ細胞の特異性を保存する。
【０１５１】
別の実施形態において、ＭＵＣ１の変異体は、アミノ酸配列ＤＴＲ（配列番号１３）（Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ）、ＤＴＲＰ（配列番号１４）（Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ）、ＳＡＰＤＴＲＰ（配列番号１５）（Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ）、又はＴＳＡＰＤＴＲＰＡ（配列番号１６）を備えた、ＭＵＣ１の細胞外の直列反復領域の一部を含む。他のＭＵＣ１誘導体は、ＭＵＣ１のムチンの１つの切断型ペプチドの中心の反復（例えば、ＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡ（配列番号１７））から本質的に成る。もちろん、この切断型の中心の配列は、順序を変えられ、及び／又は上記のように変更される。
【０１５２】
〈ＭＵＣ１の中心の反復の修飾〉
ＭＵＣ１の中心の反復の変異体には、（ｉ）アミノ酸が、遺伝暗号によってコードされるものでないアミノ酸残基に置換され、（ｉｉ）成熟したポリペプチドが、ポリエチレングリコールなどの別の化合物と融合され、又は（ｉｉｉ）追加されたアミノ酸が、リーダー配列又は分泌の配列、或いはポリペプチドの精製のための配列などのＭＵＣ１ポリペプチドに融合される、誘導体又はアナログを含む。
【０１５３】
典型的な修飾は、限定されないが、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合的な付着、ヘム部分の共有結合的な付着、ヌクレオチド又はヌクレオチドの誘導体の共有結合的な付着、脂質又は脂質誘導体の共有結合的な付着、ホスファチジルイノシトールの共有結合的な付着、架橋結合、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合的な架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、ガンマカルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成（ＧＰＩ  ａｎｃｈｏｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ）、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解を生ずる処理、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化（ｓｅｌｅｎｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、アルギニル化（ａｒｇｉｎｙｌａｔｉｏｎ）などの転移ＲＮＡにより媒介されるタンパク質へのアミノ酸の追加、及びユビキチン化を含む。
【０１５４】
修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、及びアミノ末端又はカルボキシル末端を含む、ＭＵＣ１の中心の反復のポリペプチドのいずれかの場所で行われる。ＭＵＣ１の中心の反復の修飾に役立つ、特定の一般的なペプチド修飾は、グリコシル化、脂質付着、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマ−カルボキシル化、ヒドロキシル化、ＡＤＰ−リボシル化による、ポリペプチドにおけるアミノ基又はカルボキシ基、或いはその両方の封鎖、又は、共有結合修飾を含み得る。
【０１５５】
さらに、中心の反復の１つ以上のアミノ酸は、必須のＴ細胞を活性化する活性が維持されるような保存的な方法で変更される。典型的な置換は、アミノ酸の以下の基の中で行われる：（ａ）Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、及びＩ；（ｂ）Ｇ及びＰ；（ｃ）Ｓ、Ｃ、Ｔ、Ｍ；（ｄ）Ｆ、Ｙ、及びＷ；（ｅ）Ｈ、Ｋ、及びＲ；並びに（ｆ）Ｄ、Ｅ、Ｎ、及びＱ。他の置換は、以下の基を含む：（ｉ）Ｓ及びＴ；（ｉｉ）Ｐ及びＧ；並びに（ｉｉｉ）Ａ、Ｖ、Ｌ、及びＩ。
【０１５６】
また、本明細書で提供される実施形態の範囲内で、中心の反復のポリペプチドの修飾が熟慮され、ここで、ポリペプチドは、通常は関連しない別のポリペプチドに結合する（例えば、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）−融合タンパク質、ベータ−ガラクトシダーゼ融合、イースト２−ハイブリッドＧＡＬ融合、ポリ−Ｈｉｓ融合、Ｉｇ融合など）。故に、ＭＵＣ１の中心の反復のペプチドは、そのＮ末端又はＣ末端の何れかにて、ＭＵＣ１の中心の反復に実質的に類似しないアミノ酸配列を有する異種のポリペプチドに、随意に作用するように結合される。「作用するように結合される」とは、ＭＵＣ１の中心の反復のペプチド及び異種のポリペプチドが、両方ともインフレームにあることを示す。このような融合タンパク質は、宿主システム（ｈｏｓｔ  ｓｙｓｔｅｍ）から免疫学的な反応を誘発するため、ＭＵＣ１の中心の反復の能力、又はその機能的な変異体を変更する（例えば、増強する、弱める）。
【０１５７】
〈炭水化物エピトープ〉
ヒト癌はいくつかの炭水化物エピトープを示す。それらはラクト系（ｌａｃｔｏ  ｓｅｒｉｅｓ）１型及び２型の鎖、癌関連のガングリオ鎖（ｇａｎｇｌｉｏ  ｃｈａｉｎｓ）及び中性スフィンゴ糖脂質を含む。ラクト系１型及び２型の鎖の例は、限定されないが以下のものを含む：ルイスａ、ダイメリックルイスａ、ルイスｂ、ルイスｂ／ルイスａ、ルイスｘ、ルイスｙ、ルイスａ／ルイスｘ、ダイメリックルイスｘ、ルイスｙ／ルイスｘ、トリフコシル（ｔｒｉｆｕｃｏｓｙｌ）ルイスｙ、トリフコシルルイスｂ、シアロシル（ｓｉａｌｏｓｙｌ）ルイスｘ、シアロシルルイスｙ、シアロシルダイメリック（ｓｉａｌｏｓｙｌ  ｄｉｍｅｒｉｃ）ルイスｘ、Ｔｎ、シアロシル  Ｔｎ、シアロシル  ＴＦ、ＴＦ及びその他同種のもの。癌に関連するガングリオ鎖の例は、限定されないが、ＧＭ３、ＧＤ３、ＧＭ２、ＧＭ４、ＧＤ２、ＧＭ１、ＧＤ−１ａ、ＧＤ−１ｂ及びその他同種のものを含む。中性スフィンゴ糖脂質は、グロボトリオース、グロボテトラオース、グロボペンタオース、イソグロボトリオース、イソグロボテトラオース、ムコトリオース（ｍｕｃｏｔｒｉｏｓｅ）、ムコテトラオース（ｍｕｃｏｔｅｔｒａｏｓｅ）、ラクトトリオース（ｌａｃｔｏｔｒｉｏｓｅ）、ラクトテトラオース（ｌａｃｔｏｔｅｔｒａｏｓｅ）、ネオラクトテトラオース（ｎｅｏｌａｃｔｏｔｅｔｒａｏｓｅ）、ガングリオトリオース（ｇａｎｇｌｉｏｔｒｉｏｓｅ）、ガングリオテトラオース（ｇａｎｇｌｉｏｔｅｔｒａｏｓｅ）、ガラビオース（ｇａｌａｂｉｏｓｅ）、９−Ｏ−アセチル−ＧＤ３及びその他同種のものを含む。
【０１５８】
このような抗原の別の基は、腫瘍に関連するグリコシル化したムチンを含む。一般に、ムチンは、唾液、胃液などにおいて見られる糖タンパク質であり、粘稠溶液を形成し、身体の外部及び内部の表面上で潤滑剤又は保護剤として働く。癌組織は、正常な織より比較的グリコシル化されていない及び／又は過剰発現した、異常なムチンを産生する。癌細胞におけるタンパク質のグリコシル化機構の機能的変化により、腫瘍に関連するムチンは、短く不完全なグリカンを典型的に包含する。故に、一例として、人乳脂肪球に関連する正常なムチンは、主に、四糖グリカン、ｇａｌ  β  １−４  ｇｌｃＮＡｃｐ１−６（ｇａｌ  β  １−３）ｇａｌ  ＮＡｃ−α、及びそのシアル化したアナログを含有する。しかし、腫瘍に関連するＴｎハプテンは、単糖残基、α−２−アセトアミド−３−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノシルのみから成り、ｔ−ハプテンは二糖類β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１−３）−α−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−ｇａｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓ−ｙｌのみから成る。前記シアリル−Ｔｎ及び前記シアリル−ｔ（２−６）Ｔハプテンのような、腫瘍に関連するムチンの他のハプテンは、末端シアリル残基の付着から短いＴｎ及びＴグリカンまでを含む。
【０１５９】
前記Ｔ及びＴｎ抗原は、ほとんどの原発癌細胞及びそれらの転移（＞すべてのヒト癌腫の９０％）の外部表面膜上において免疫反応型で見られる。癌マーカーとして、Ｔ及びＴｎは、特定の癌腫の侵襲性について早期の免疫組織化学的検出及び予測を可能にする。Ｔ及びＴｎの発現の範囲は、しばしば特定の癌腫を含む癌の分化の程度と相関する。
【０１６０】
様々な炭水化物は、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤の中にある合成グリコリポペプチド免疫原への取り込みに適している。様々な炭水化物エピトープは、Ｗｏｎｇ，米国特許第６，０１３，７７９号に記載されており、開示のため参照により本明細書に組み込まれる。前記Ｔｎ、Ｔ、ＴＦ、シアリルＴｎ及びシアリル（２−−＞６）Ｔハプテンは、一般的なヒト癌において高度に発現する、腫瘍に関連する炭水化物エピトープの例であり、このような炭水化物エピトープは適切な方法を使用することで、アミノ化した化合物及び／又はアミノ酸に共役される。
【０１６１】
幾つかの実施形態において、配列番号１の中心直列反復（ｃｏｒｅ  ｔａｎｄｅｍ  ｒｅｐｅａｔ）のグリコシル化に適した炭水化物エピトープは、限定されないが以下のもの：
【０１６２】
【化２８】
2014518841.tif 000030
【０１６３】
Ｔ−ハプテン、及びその他同種のものを含む。
【０１６４】
自然なヒトの２０量体のＭＵＣ１ムチンには、１反復当たり５つの典型的なＯ結合型グリコシル化部位がある。正常なＭＵＣ１では、これら５つの部位のうち平均２．６が占有される。本明細書に示される実施形態の範囲内で考慮されるのは、１反復当たりのグリコシル化したアミノ酸の平均数が「自然の」値よりも少ない、同じ、又は多いＭＵＣ１糖タンパク質を含むワクチン製剤である。そのような実施形態のうちの幾つかにおいて、配列番号１の前記セリン又はトレオニンの残基の１つ以上はＯ−グリコシル化される。
【０１６５】
本明細書で用いられているように、グリコシル化したアミノ酸又はペプチドは、その側鎖が少なくとも１つの炭水化物単量ユニットを含む。随意に、グリコシル化したアミノ酸又はペプチドは、脂肪族及び／又は芳香族の部分を組み入れる。単にグリコシル化したアミノ酸又はペプチドは、−Ｏ−、−Ｓ−、及び−ＮＨ−、そして１つ以上の炭水化物ユニットで構成される基から選択されたリンカーから成る側鎖を有する。グリコシル化したアミノ酸又はペプチドは、ガラクトース、マンノース、グルコース、Ｎ−アセチルグルコサミン（Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｕｃｏｓａｍｉｎｅ）、Ｎ−アセチルガラクトサミン、シアル酸、フコース、キシロース及びその他同種のものから選択された単量体ユニットを含む。糖ユニットの数は約１から２０、又は１から１０、又は１から５、又は１から３、又は１から２で変動する。オリゴ糖鎖（すなわち２つ以上の糖ユニットの鎖）が付着した場合、前記鎖は直鎖又は分基鎖である。
【０１６６】
１つの実施形態において、グリコシル化したアミノ酸又はペプチドは、−Ｏ−グリコシル化又は−Ｎ−グリコシル化した残基を含む。Ｏ−グリコシル化は、例えばセリン又はトレオニンのような水酸基含有アミノ酸である。チロシン、ヒドロキシリシン及びヒドロキシプロリンも随意にＯ−グリコシル化される。他の実施形態において、グリコシル化したアミノ酸又はペプチドはＮ−グリコシル化した残基を含む。Ｎ−グリコシル化は、例えば、アスパラギンのようなアミド含有アミノ酸の側鎖又はタンパク質のアミノ末端である。Ｎ−グリコシル化した結合において、窒素は随意に非置換（−ＮＨ−）又は置換（−ＮＺ−）である。他の実施形態において、グリコシル化したアミノ酸又はペプチドはＳ−グリコシル化した残基を含む。Ｓ−グリコシル化は、例えばシステインのチオール基のＳ−グリコシル化である。
【０１６７】
従って、幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、配列番号１の前記セリン又はトレオニンの残基のうちの１つがグリコシル化した免疫原を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、配列番号１の前記セリン又はトレオニンの残基のうちの２つがグリコシル化した免疫原を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、配列番号１の前記セリン又はトレオニンの残基のうちの３つがグリコシル化した免疫源を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、配列番号１の前記セリン又はトレオニンの残基のうちの４つがグリコシル化した免疫原を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、配列番号１の前記セリン又はトレオニンの残基のうちの５つがグリコシル化した免疫原を含む。
【０１６８】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、配列番号１の中心直列反復配列の複製物を２つ以上含む。このような実施形態のうちの幾つかにおいて、本明細書に記載されているワクチン製剤は、配列番号１の前記セリン又はトレオニンの残基のうちの１つがグリコシル化するような、配列番号１の中心直列反復配列の複製物を２つ以上有する免疫原を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、配列番号１の前記セリン又はトレオニンの残基のうちの２つがグリコシル化するような、配列番号１の中心直列反復配列の複製物を２つ以上有する免疫原を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、配列番号１の前記セリン又はトレオニンの残基のうちの３つがグリコシル化するような、配列番号１の中心直列反復配列の複製物を２つ以上有する免疫原を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、配列番号１の前記セリン又はトレオニンの残基のうちの４つがグリコシル化するような、配列番号１の中心直列反復配列の複製物を２つ以上有する免疫原を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、配列番号１の前記セリン又はトレオニンの残基のうちの５つがグリコシル化するような、配列番号１の中心直列反復配列の複製物を２つ以上有する免疫原を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、配列番号１の前記セリン又はトレオニンの残基のうちの６つがグリコシル化するような、配列番号１の中心直列反復配列の複製物を２つ以上有する免疫原を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、配列番号１の前記セリン又はトレオニンの残基のうちの７つがグリコシル化するような、配列番号１の中心直列反復配列の複製物を２つ以上有する免疫原を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、配列番号１の前記セリン又はトレオニンの残基のうちの８つがグリコシル化するような、配列番号１の中心直列反復配列の複製物を２つ以上有する免疫原を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、配列番号１の前記セリン又はトレオニンの残基のうちの９つがグリコシル化するような、配列番号１の中心直列反復配列の複製物を２つ以上有する免疫原を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、配列番号１の前記セリン又はトレオニンの残基のうちの１０つがグリコシル化するような、配列番号１の中心直列反復配列の複製物を２つ以上有する免疫原を含む。配列番号１の中心直列反復配列の複製物数に応じて、さらなるセリン又はトレオニンの残基が随意にグリコシル化し、本明細書に示された実施形態の範囲内のものとして考慮される。
【０１６９】
配列番号１の中心直列反復配列の複製物を２つ以上有する免疫原に関する幾つかの実施形態において、配列番号１の所与の中心直列反復配列の前記グリコシル化パターンは、他の中心直列反復における各残基についても同じである。例えば、２つのトレオニン残基及び１つのセリン残基の上にグリコシル化を有する中心直列反復がある免疫原では、他の中心直列反復は対応する残基（すなわち２つのトレオニン残基及び１つのセリン残基）の上に同じグリコシル化を有する。
【０１７０】
配列番号１の中心直列反復配列の複製物を２つ以上有する免疫原に関する幾つかの実施形態において、配列番号１の中心直列反復配列のグリコシル化パターンは、他の中心直列反復における各残基について同じではない。すなわち、幾つかの実施形態において、中心直列反復は他の中心直列反復とは異なってグリコシル化する。これらの違いは、異なるグリコシル化の発生（例えば第１の中心直列反復上の４つのグリコシル化及び第２の中心直列反復上の２つのグリコシル化）、グリコシル化のための異なるアミノ酸残基及び中心直列反復間の異なるグリコシル基を含む。
【０１７１】
上記実施形態の何れかにおいて、配列番号１、又は配列番号１８、又は配列番号１９の中心直列反復配列上、又は本明細書に記載されている任意の他のペプチド配列上に存在する各グリコシル残基は、各発生時に独立して選択される。従って、本明細書に記載されているワクチン製剤におけるグリコシル化したペプチドは、種々のグリコシル残基と全く同じ、又は異なる、又は任意の組み合わせである炭水化物エピトープ（例えば、癌に関連するＴｅ炭水化物エピトープのような本明細書に記載されているグリコシル残基）を１つ以上含む。
【０１７２】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、トレオニン−６、セリン−１２及びトレオニン−１３が各中心直列反復のためにグリコシル化するような、配列番号１の中心直列反復配列の複製物を２つ以上有する免疫原を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、第１の中心直列反復のためにグリコシル化するセリン−１２及びトレオニン−１３や、第２の又はさらなる中心直列反復のためにグリコシル化するトレオニン−６をもたない配列番号１の中心直列反復配列の複製物を２つ以上有する免疫原を含む。
【０１７３】
〈脂質〉
幾つかの実施形態において、配列番号１の中心直列反復は、１つ以上の脂質付加されたアミノ酸に共有結合される。本明細書で用いられているように、「脂質」はパルミトイル基、ラウリル基、ミリストイル基、ステアロイル基又はデカノイル基、又はより一般的には、機能的な酸素、窒素又は硫黄族を所有するアミノ酸に付着した、任意のＣ２−Ｃ３０飽和、一不飽和又は多不飽和の分岐鎖あるいは直鎖の脂肪アシル基である。このようなアミノ酸は、限定されないが、トレオニン、セリン、リジン、アルギニン及びシステインを含む。
【０１７４】
「モノリポペプチド」は、１つの脂質のみ付着しているペプチドである。同様に、「ジリポペプチド」は、１つ又は２つのどちらかのアミノ酸に２つの脂質が付着したペプチドである。２つの脂質が２つのアミノ酸残基に付着している場合、これらの残基は任意の数のアミノ酸の間隔で配置される。１つを超える脂質が付着する場合、脂質は同じ脂質であるか、又は異なる脂質であるかのどちらかである。同様に、２つ以上の脂質が付着する場合、２つ以上の脂質は同であるか脂質はすべて異なる。
【０１７５】
従って、本明細書で提供される前記脂質付加されたペプチドは、そのペプチドの脂質部分がリポソームの脂質二重層へと自発的に統合するため、リポソームへ組み入れられる。故に、１つの実施形態において、リポペプチドはリポソームの「表面」上に示される。代替の実施形態において、ペプチドはリポソーム内に封入される。
【０１７６】
グリコリコペプチドは、グリコシル化したアミノ酸の少なくとも１つが腫瘍に関連する炭水化物エピトープのような、疾患に関連する炭水化物エピトープ、及び１つ以上の脂質付加されたアミノ酸を含むような、グリコシル化したアミノ酸を１つ以上含む。
【０１７７】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤に存在するグリコリコペプチドは、グリコシル化したジリポペプチドである。このような実施形態のうちの幾つかにおいて、配列番号１のグリコシル化した中心直列反復に付着した前記ジリポペプチドは、配列Ｈ２Ｎ−（ａａ１）＊（ａａ２）＊（ａａ３）−ＯＨを含み、
ここで、
ａａ１は、各発生時に、Ｓ、Ｔ、Ｋ、Ｒ又はＣから独立して選択され；
ａａ２は、各発生時に、Ｓ、Ｔ、Ｋ、Ｒ又はＣから独立して選択され；
ａａ３は、各発生時に、Ｌ又はＧから独立して選択され；
＊は、各発生時に、アミノ酸残基に共有結合した脂質を表わす。
【０１７８】
本明細書で用いられているように、「＊」によって表わされる脂質は、「＊」に先行するアミノ酸に共有結合している。したがって、Ｋ＊Ｃ＊Ｌは、Ｋ及びＣの残基が脂質に共有結合しているようなジ脂質付加（ｄｉｌｉｐｉｄａｔｅｄ）された配列を表わす。ジ脂質付加された配列の例は、限定されないが、Ｓ＊Ｓ＊Ｌ、Ｓ＊Ｓ＊Ｇ、Ｓ＊Ｋ＊Ｌ、Ｔ＊Ｓ＊Ｌ、Ｒ＊Ｓ＊Ｌ、Ｃ＊Ｔ＊Ｇ及びその他同種のものを含む。他の類似した置換も本明細書に示された実施形態の範囲内のものとして考慮される。
【０１７９】
このような実施形態のうちの幾つかにおいて、前記ジ脂質付加された配列は、配列番号１の中心直列反復のＮ末端へ付着している。他のこのような実施形態において、前記ジ脂質付加された配列は、配列番号１の中心直列反復の前記Ｃ末端へ付着している。
【０１８０】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤の中にあるグリコリコペプチドは、そのＣ末端領域に前記配列ＳＳＬを含み、そこで両セリンが脂質付加される。
【０１８１】
従って、本明細書で提供されるのは、ＭＵＣ１グリコリコペプチドを含むワクチン製剤である。幾つかの実施形態において、このような合成ＭＵＣ１グリコリコペプチドは、模倣のＭＵＣ１ペプチドエピトープが癌細胞上に存在する配列番号１の中心直列反復ペプチドの複製物を１つ以上含む。
【０１８２】
幾つかの実施形態において、本明細書には、以下（ａ）及び（ｂ）を含むＭＵＣ１グリコリポペプチドが提供され、
（ａ）中心直列反復：
ＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号：１）、
配列番号１と少なくとも８５％同一である配列、又はその直線的な並び換えの少なくとも２つの複製物を含むペプチド；
ここで、
ＳとＴは、各発生時に独立して、癌に関連する炭水化物エピトープＴｅと随意に置換され；
（ｂ）以下の式を有する（ａ）に共有結合的に付着するリポペプチド：
Ｈ２Ｎ−（ａａ１）＊（ａａ２）＊（ａａ３）−ＯＨ
ここで、
ａａ１は、各発生時に、Ｓ、Ｔ、Ｋ、Ｒ又はＣから独立して選択され；
ａａ２は、各発生時に、Ｓ、Ｔ、Ｋ、Ｒ又はＣから独立して選択され；
ａａ３は、各発生時に、Ｌ又はＧから独立して選択され；
＊は、各発生時に、アミノ酸残基に共有結合した脂質を独立して表わす。
【０１８３】
幾つかの実施形態において、本明細書には、以下（ａ）及び（ｂ）を含むＭＵＣ１グリコリポペプチドが提供され：
（ａ）中心直列反復：
Ｔ（Ｔｅ）Ｓ（Ｔｅ）ＡＰＤＴ（Ｔｅ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｅ）Ｔ（Ｔｅ）ＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１８）、
配列表１８に少なくとも８５％同一である配列、あるいはその直線的な並び換えの少なくとも２つの複製物を含むペプチド；
ここで、
Ｔｅは癌に関連する炭水化物エピトープを表わし；
（ｂ）以下の式を有する（ａ）に共有結合的に付着するリポペプチド：
Ｈ２Ｎ−Ｓ＊Ｓ＊Ｌ−ＯＨ
ここで、
＊は、各発生時に、セリン残基に共有結合した脂質を独立して表わす。
【０１８４】
幾つかの実施形態において、本明細書には、以下（ａ）及び（ｂ）を含むＭＵＣ１グリコリポペプチドが提供され：
（ａ）中心直列反復：
ＴＳＡＰＤＴ（Ｔｅ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｅ）Ｔ（Ｔｅ）ＡＰＰＡＨＧＶ（配列番号１９、
配列番号１９と少なくとも８５％同一である配列、或いはその直線的な並び換えの少なくとも２つの複製物を含むペプチド；
ここで、
Ｔｅは癌に関連する炭水化物エピトープであり；
（ｂ）以下の式を有する（ａ）に共有結合的に付着するリポペプチド：
Ｈ２Ｎ−（ａａ１）＊（ａａ２）＊（ａａ３）−ＯＨ
ここで、
ａａ１は、各発生時に、Ｓ、Ｔ、Ｋ、Ｒ又はＣから独立して選択され；
ａａ２は、各発生時に、Ｓ、Ｔ、Ｋ、Ｒ又はＣから独立して選択され；
ａａ３は、各発生時に、Ｌ又はＧから独立して選択され；
＊は、各発生時に、アミノ酸残基に共有結合した脂質を独立して表わす。
【０１８５】
具体的な実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤は、配列番号１の２つの複製物と共に４３のアミノ酸を含有している合成グリコリコペプチド、かつＣ末端に付着した下記のようなジ脂質付加されたトリペプチド配列：
ＴＳＡＰＤＴ（Ｔｎ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｎ）Ｔ（Ｔｎ）ＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴ（Ｔｎ）ＲＰＡＰＧＳ（Ｔｎ）Ｔ（Ｔｎ）ＡＰＰＡＨＧＶＳ＊Ｓ＊Ｌ−ＯＨ（配列番号２）であり、
ここで、
ＴｎはＧａｌＮＡｃα１である。
【０１８６】
６つのアルファ−グリコシル化したセリン及び（Ｔｎ）表示によって示されるトレオニン部分がある。Ｔｎは、アルファグリコシド結合（ＧａｌＮＡｃα１）によって結合された、Ｎ−アセチルガラクトサミンの省略形である。薬のリポソームにおけるペプチドを固定し、免疫認識を高める役目をもつＳ＊によって示された２つのＣ末端ミリスチルセリン残基がある。アミノ酸はすべて天然のＬ異性体であり、Ｏ−結合型ＧａｌＮＡｃの変更されたセリン及びトレオニンはすべてアルファグリコシド結合によって結合される。システインは配列に存在せず、したがってペプチド又はペプチド間の架橋結合においてジスルフィド結合三次構造の可能性はない。
【０１８７】
幾つかの実施形態において、本明細書で提供されるワクチン製剤は、配列番号２の塩を含む。このような塩の例は、限定されないが、酢酸塩、クエン酸塩酒石酸塩、メシル酸塩、ベシル酸塩、トシラート、マレイン酸塩、フマル酸塩、シュウ酸塩、トリフラート、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン塩、その他同種のものを含む。このような塩の更なる例は、限定されないが、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩及びその他同種のものを含む。他の実施形態において、配列番号２の塩はトリフルオロ酢酸塩である。具体的な実施形態において、配列番号２の塩は、式：Ｃ２４８Ｈ４０７Ｎ５９Ｏ９０・ＸＣ２Ｈ３Ｏ２を有する酢酸塩である。
【０１８８】
〈アジュバント〉
配列番号１の中心直列反復を含むグリコリコペプチドは、抗原に対する特異的な反応を高めるためにアジュバントと共に随意に投与される。１つの実施形態において、リピドＡ及びその誘導体など脂質をベースとしたアジュバントは、本明細書に記載されているグリコリコペプチドワクチン製剤との使用に適しています。モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）は、例えば、特異的なＴリンパ球に対するリポソーム抗原の提示を増加させる。別の実施形態において、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）も本明細書に記載されているワクチン製剤との使用に適したアジュバントである。
【０１８９】
さらなる実施形態において、本明細書で提供されるリポソームワクチン製剤用途との使用に適したアジュバントは、インターロイキン−２（ＩＬ−２）のような刺激性サイトカインを含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２はリポソームと有益に処方される。幾つかの実施形態において、アジュバントはトール様受容体のモジュレータである。トール様受容体のモジュレータの例は、ＴＬＲ−９アゴニストを含み、イミキモドのようなトール様受容体の小分子モジュレータに限定されない。式Ｉ又は式ＩＩのアジュバントと組み合わせて使用されるアジュバントの他の例は、限定されないが、サポニン、ＣｐＧ  ＯＤＮ及びその他同種のものを含む。
【０１９０】
リピドＡの合成された模倣物も本明細書に記載されているワクチン製剤の使用のために考慮される。このような実施形態のうちの幾つかにおいて、アジュバントは式Ｉの化合物：
【０１９１】
【化２９】
2014518841.tif 000031
【０１９２】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７の少なくとも１つは、以下の基から選択された強力な親油基であり、
【０１９３】
【化３０】
2014518841.tif 000032
【０１９４】
式中、Ｘ、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３は独立して−ＣＯ−又は−ＣＨ２−であり；
Ｚは−ＮＨ−又は−Ｏ−であり；
ｋ、ｍ及びｒは独立して０から３０を含む整数であり、ｎ及びｑは独立して０から６を含む整数であり；
ここで、Ｙ４は、−Ｏ−、−Ｓ−、及び−ＮＨ−から成る基から選択されたスペーサーであり、
ここで、Ｙ１Ｒ１、Ｙ２Ｒ２、Ｙ３Ｒ３、Ｙ５Ｒ５、Ｙ６Ｒ６及びＹ７Ｒ７の少なくとも１つは、一価のリン酸等価物（ＭＰＥ）であり、
ここで各一価のリン酸等価物は、独立して、
（ａ）Ｒ’が置換又は非置換の１−４の炭素である−Ｒ’−Ｃ（Ｏ）ＯＨであるか、又は、
（ｂ）−ＯＢ（ＯＨ）ＯＲ、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＲ、−ＯＳ（Ｏ）（Ｏ）（ＯＨ）ＯＲ、及び−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）ＯＲから成る基から選択され、
ここでＲは水素、又は１から４の炭素の置換又は非置換のアルキル基であり、ここで、Ｒが置換アルキル基である場合、置換は−ＯＨ又は−ＮＨ２であり、
ここで、Ｒ８は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ９、先に定義されたようにＹ８と組み合わさって１価のリン酸等価物を形成する部分、及び上記（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から成る基から選択され；ここで、Ｒ９は、１から１０の炭素の長さのアルキル又はアシル基であり；
及びここで、グリコシド結合はα又はβである］；
又は式ＩＩの化合物である化合物：
【０１９５】
【化３１】
2014518841.tif 000033
【０１９６】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３の少なくとも１つは、上記（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から成る基から選択される、強力な親油基であり；
ここで、Ｙ４は、−Ｏ−、−Ｓ−、及び−ＮＨ−から成る基から選択されるスペーサーであり、
ここで、Ｙ１、Ｒ１、Ｙ２Ｒ２、Ｙ３Ｒ３、Ｙ１１Ｒ１１、Ｙ１２Ｒ１２及びＹ１３Ｒ１３の少なくとも１つは、独立して先に定義されるような一価のリン酸等価物であり；
ここで、以下の限定は上記の（Ｉ）及び（ＩＩ）の両方に適用され：
Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ１１、Ｙ１２及びＹ１３は、−Ｏ−、−Ｓ−、及び−ＮＨ−から成る基から独立して選択されるスペーサーであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３は、独立して水素、共通に番号付けされたＹ基とともに先に定義されたような一価のリン酸等価物を形成する部分、又は上記の（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から成る基から選択される強力な親油基であり、
該化合物の強力な親油基は、集合的に少なくとも２つの主な炭素鎖を提供し、
前記強力な親油基の前記主な炭素鎖は、集合的に少なくとも３０の炭素原子を提供する］；
又は式Ｉ又はＩＩの薬学的に許容可能な塩の化合物である。
【０１９７】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤に適したアジュバントは、式Ｉの化合物、又はその薬学的に許容可能な塩である。
【０１９８】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤に適したアジュバントは、式ＩＩの化合物、又はその薬学的に許容可能な塩である。
【０１９９】
幾つかの実施形態において、Ｙ４は−Ｏ−である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、（ｉ）を満たし、そのような基の少なくとも１つに関して、ｋは４から３０の整数である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、（ｉｉ）を満たし、そのような基の少なくとも１つに関して、２ｋ＋３ｎは４から３０の整数である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、（ｉｉｉ）を満たし、そのような基の少なくとも１つに関して、ｍ＋ｎ＋ｌは４から３０である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、（ｉｖ）を満たし、そのような基の少なくとも１つに関して、ｍ＋ｎ＋１は４から３０である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、（ｖ）を満たし、そのような基の少なくとも１つに関して、ｍ＋ｎ＋ｋ＋１は４から３０である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、（ｖｉ）を満たし、そのような基の少なくとも１つに関して、ｋ＋ｍ＋２は４から３０である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、（ｖｉｉ）を満たし、そのような基の少なくとも１つに関して、ｋ＋ｑ＋ｍ＋ｎは４から３０である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、（ｖｉｉｉ）を満たし、そのような基の少なくとも１つに関して、ｒ＋ｋ＋ｑ＋ｍ＋ｎは５から３０である。
【０２００】
幾つかの実施形態において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６、Ｙ７、Ｙ１１、Ｙ１２及びＹ１３は、独立して−Ｏ−又は−ＮＨ−である。幾つかの実施形態において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６及びＹ７は、独立して−Ｏ−又は−ＮＨ−から成る。幾つかの実施形態において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ１１、Ｙ１２、Ｙ１３は、独立して−Ｏ−又は−ＮＨ−である。
【０２０１】
幾つかの実施形態において、各一リン酸等価物は、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＨ）である。
【０２０２】
幾つかの実施形態において、式Ｉのアジュバントは化合物であり、ここで、
Ｙ４は−Ｏ−であり；
Ｙ１、Ｙ２、及びＹ７は−Ｏ−であり；
Ｙ３、Ｙ５、及びＹ６は独立して−Ｏ−又は−ＮＨ−であり；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は独立して水素又は（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から選択された強力な親油基であり；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６のうち少なくとも１つは、水素ではなく；
Ｒ２及びＲ７は、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−ＳＯ３Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣ  Ｈ２ＣＨ２ＮＨ２）及び−ＣＨ２ＣＯＯＨから成る基から独立して選択され；
Ｒ８は、Ｈ、ＯＨ、ＯＳＯ３Ｈ及びＯＲ９から成る基から選択され、ここでＲ９は、１から１０の炭素の長さのアルキル又はアシル基である。
【０２０３】
式Ｉの幾つかの実施形態において、
Ｙ４は−Ｏ−であり；
Ｙ２及びＹ１２は−Ｏ−であり；
Ｙ１、Ｙ３、Ｙ１１及びＹ１３は、−Ｏ−、−ＮＨ−及び−Ｓ−から成る基から独立して選ばれ；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ１１及びＲ１３は、独立して、水素、又は（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から選択された強力な親油基であり；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６のうち少なくとも１つは、水素ではなく；
Ｒ２及びＲ１２は、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、及び−ＣＨ２ＣＯＯＨから成る基から独立して選択される。
【０２０４】
幾つかの実施形態において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は、独立して、水素又は（ｉ）から（ｖｉｉｉ）より選択された強力な親油基であり、少なくとも１つのＲ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は水素ではなく、Ｒ２及びＲ７は、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−ＳＯ３Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）及び−ＣＨ２ＣＯＯＨから成る基から独立して選択され；Ｒ８は、Ｈ、ＯＨ、ＯＳＯ３Ｈ、及びＲ９が１から１０の炭素の長さのアルキル又はアシル基であるＯＲ９から選択される。
【０２０５】
幾つかの実施形態において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ１１及びＲ１３は、独立して、水素、又は（ｉ）−（ｖｉｉｉ）から選択された強力な親油基であり；Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６のうち少なくとも１つは水素ではなく；Ｒ２及びＲ１２は、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）及び−ＣＨ２ＣＯＯＨから成る基から独立して選択される。
【０２０６】
幾つかの実施形態において、各一リン酸等価物は−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＨ）である。
【０２０７】
幾つかの実施形態において、上記の化合物の強力な親油基は、少なくとも３つの主な炭素鎖を提供し、ここで、該強力な親油基の主な炭素鎖は集団的に少なくとも４０の炭素原子を提供し、該化合物は免疫賦活作用を有する。幾つかの実施形態において、上記の化合物の強力な親油基は、少なくとも４つの主な炭素鎖を集団的に提供し、ここで、主な炭素鎖は集団的に少なくとも５０の炭素原子を提供し、該化合物は免疫賦活作用を有する。
【０２０８】
幾つかの実施形態において、前記強力な親油基は６つの主な炭素鎖を集団的に提供する。幾つかの実施形態において、各主な炭素鎖は、該鎖において１０、１２、１４、１６、１８又は２０の炭素原子によって特徴づけられる。
【０２０９】
幾つかの実施形態において、Ｙ３及びＹ５は−ＮＨ−であり、Ｙ６は−Ｏ−である。幾つかの実施形態において、ｋ、Ｘ１、ｍ、ｎ及びＸ２について独立して選ばれた値で、（ｖ）によってＲ３、Ｒ５及びＲ６は強力な親油基である。幾つかの実施形態においてＲ３、Ｒ５及びＲ６についてのｋとｍは独立して８から１８である。幾つかの実施形態において、Ｘ１は−ＣＯ−であり、Ｘ２は−ＣＯ−でありｎ＝１である。幾つかの実施形態において、ｋとｍは、独立して８、１０、１２、１４、１６又は１８である。幾つかの実施形態において、ｋとｍは１２である。幾つかの実施形態において、Ｒ８はＯＨである。幾つかの実施形態において、Ｙ７は−Ｏ−であり、Ｒ７は−−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）（ＯＨ）である。幾つかの実施形態において、Ｙ２は−Ｏ−でありＲ２はＨである。幾つかの実施形態において、Ｙ２は−Ｏ−であり、Ｒ２は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）（ＯＨ）である。幾つかの実施形態において、Ｒ１からＲ３は水素である。幾つかの実施形態において、Ｙ１からＹ３は−Ｏ−であり、Ｒ１からＲ３は水素である。幾つかの実施形態において、Ｒ１からＲ３は水素であり、Ｙ１からＹ３のうちの２つは−Ｏ−であり残りは−ＮＨ−である。幾つかの実施形態において、Ｒ１からＲ３のうちの２つは水素である。幾つかの実施形態において、−−Ｙ１Ｒ１、−Ｙ２Ｒ２、及び−Ｙ３Ｒ３のうちの２つは−ＯＨである。幾つかの実施形態において、−Ｙ１Ｒ１、−Ｙ２Ｒ２、及びＹ３Ｒ３のうちの１つは−ＯＨであり、−Ｙ１Ｒ１、−Ｙ２Ｒ２、及びＹ３Ｒ３のうちの１つは−ＮＨ２である。
【０２１０】
幾つかの実施形態において、Ｒ１からＲ４のうちの１つは水素である。幾つかの実施形態において、Ｒ１からＲ３はいずれも水素ではない。幾つかの実施形態において、Ｒ１からＲ３のうちの１つは強力な親油基である。幾つかの実施形態において、少なくともＲ１からＲ３の２つは強力な親油基を含む。幾つかの実施形態において、Ｒ１からＲ３のうちの２つは強力な親油基である。幾つかの実施形態において、Ｒ１からＲ４のうちの３つは強力な親油基である。
【０２１１】
幾つかの実施形態において、スペーサーＹ１からＹ４及びＹ１１からＹ１３の各々は−Ｏ−である。幾つかの実施形態において、スペーサーＹ１からＹ４のうちの３つは−Ｏ−であり残りのスペーサーは−ＮＨ−である。
【０２１２】
幾つかの実施形態において、式Ｉ又は式ＩＩの化合物は１つのリン酸等価物を提供する。幾つかの実施形態において、式Ｉ又は式ＩＩの化合物は２つのリン酸等価物を提供する。
【０２１３】
幾つかの実施形態において、（ｂ）が適用されＲは水酸基である。幾つかの実施形態において、（ｂ）が適用され、前記リン酸等価物は−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−を含む。幾つかの実施形態において、（ｂ）が適用され、Ｒは１から４の炭素の置換又は非置換のアルキル基である。
【０２１４】
幾つかの実施形態において、Ｒは、ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２である。幾つかの実施形態において、（ａ）が適用される。幾つかの実施形態において、Ｒ’は−ＣＨ２−である。幾つかの実施形態において、糖質はアミノ糖である。幾つかの実施形態において、糖質はグルコサミンである。
【０２１５】
幾つかの実施形態において、少なくとも１つのリン酸等価物はＹ５Ｒ５、Ｙ６Ｒ６、Ｙ７Ｒ７又はＹ８Ｒ８である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つのリン酸等価物は前記糖ユニットとつながっている。幾つかの実施形態において、少なくとも１つのリン酸等価物はＹ１Ｒ１、Ｙ２Ｒ２又はＹ３Ｒ３である。幾つかの実施形態において、Ｒ５からＲ８のうち少なくとも１つは強力な親油基を含む。幾つかの実施形態において、Ｒ５からＲ７のうち２つ以上は強力な親油基を含む。
【０２１６】
幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は１つの主な炭素鎖のみを含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は２つの主な炭素鎖のみを含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、３つの主な炭素鎖のみを含む。幾つかの実施形態において、強力な親油基は集団的に三大炭素鎖を提供する。幾つかの実施形態において、強力な親油基は集団的に４つの主な炭素鎖を提供する。幾つかの実施形態において、強力な親油基は集団的に５つの主な炭素鎖を提供する。幾つかの実施形態において、強力な親油基は集団的に６つの主な炭素鎖を提供する。幾つかの実施形態において、強力な親油基は集団的に７つの主な炭素鎖を提供する。幾つかの実施形態において、強力な親油基は集団的に８つの主な炭素鎖を提供する。
【０２１７】
幾つかの実施形態において、主な炭素鎖はそれぞれ１０から２０の炭素である。幾つかの実施形態において、主な炭素鎖はそれぞれ１２から１６の炭素である。幾つかの実施形態において、強力な親油基の主な炭素鎖は集団的に少なくとも４０の炭素原子を提供する。幾つかの実施形態において、強力な親油基の主な炭素鎖は集団的に少なくとも５０の炭素原子を提供する。幾つかの実施形態において、強力な親油基の主な炭素鎖は集団的に少なくとも６０の炭素原子を提供する。幾つかの実施形態において、強力な親油基の主な炭素鎖は集団的に少なくとも７０の炭素原子を提供する。幾つかの実施形態において、強力な親油基の主な炭素鎖は集団的に少なくとも８０の炭素原子を提供する。幾つかの実施形態において、強力な親油基の主な炭素鎖は集団的に少なくとも９０の炭素原子を提供する。幾つかの実施形態において、強力な親油基の主な炭素鎖は集団的に９０以下の炭素原子を提供する。幾つかの実施形態において、強力な親油基の主な炭素鎖は集団的に８０以下の炭素原子を提供する。幾つかの実施形態において、強力な親油基の主な炭素鎖は集団的に７０以下の炭素原子を提供する。幾つかの実施形態において、強力な親油基の主な炭素鎖は集団的に６０以下の炭素原子を提供する。
【０２１８】
幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、以下の式から成る基から選択される：
【０２１９】
【化３２】
2014518841.tif 000034
【０２２０】
【化３３】
2014518841.tif 000035
【０２２１】
【化３４】
2014518841.tif 000036
【０２２２】
【化３５】
2014518841.tif 000037
【０２２３】
【化３６】
2014518841.tif 000038
【０２２４】
【化３７】
2014518841.tif 000039
【０２２５】
【化３８】
2014518841.tif 000040
【０２２６】
【化３９】
2014518841.tif 000041
【０２２７】
幾つかの実施形態において、強力な親油基はすべて、構造（ｉ）から（ｖｉｉｉ）から成る基から選択される。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は構造（ｉ）である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は構造（ｉｉ）である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は構造（ｉｉｉ）である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は構造（ｉｖ）である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は構造（ｖ）である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は構造（ｖｉ）である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は構造（ｖｉｉ）である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は構造（ｖｉｉｉ）である。
【０２２８】
幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は以下に述べられた構造のうちの１つである。
【０２２９】
【化４０】
2014518841.tif 000042
【０２３０】
幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基はＲエナンチオマーを含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基はＳエナンチオマーを含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基はラセミ化合物である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの強力な親油基は、ＲＲ、ＲＳ、及びＳＲ又はＳＳジアステレオマーを含む。ラセミ化合物、エナンチオマー又はジアステレオマーはすべて本明細書に示された実施形態の範囲内のものとして考慮される。幾つかの実施形態において、前記少なくとも１つの強力な親油基は下記の構造のうちの１つである。
【０２３１】
【化４１】
2014518841.tif 000043
【０２３２】
幾つかの実施形態において、前記少なくとも１つの強力な親油基は下記の構造のうちの１つである。
【０２３３】
【化４２】
2014518841.tif 000044
【０２３４】
幾つかの実施形態において、各強力な親油基は独立して上記の構造のうちの１つである。
【０２３５】
幾つかの実施形態において、前記アジュバントは下に定義されるような化合物であり：
【０２３６】
【化４３】
2014518841.tif 000045
【０２３７】
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は独立して水素又は以下のものから成る基から選択された親油基であり、
【０２３８】
【化４４】
2014518841.tif 000046
【０２３９】
式中、Ｘ、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３は独立して−ＣＯ−又は−ＣＨ２−であり；
Ｚは−ＮＨ−又は−Ｏ−であり；
ｋ、ｍ及びｒは独立して０から３０を含む整数であり、
ｎとｑは独立して０から６を含む整数であり；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６の少なくとも１つは水素ではなく；
Ｒ２及びＲ７は、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−ＳＯ３Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、及び−ＣＨ２ＣＯＯＨから成る基から独立して選択され；
Ｒ９はＨ、又は１から１０の炭素の長さのアルキル又はアシル基である。
【０２４０】
幾つかの実施形態において、Ｒ１及びＲ９は水素であり；Ｒ２は、水素又はホスホノ基−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２であり；Ｒ７は前記ホスホノ基−−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２であり；Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は以下の構造の同じ又は異なるアシル基であり、
【０２４１】
【化４５】
2014518841.tif 000047
【０２４２】
式中、ｍとｎは、６から１０を含む間の整数から独立して選ばれる。
【０２４３】
幾つかの実施形態において、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は同一である。
【０２４４】
幾つかの実施形態において、アジュバントは以下のものである。
【０２４５】
【化４６】
2014518841.tif 000048
【０２４６】
幾つかの実施形態において、アジュバントは以下の構造を有する。
【０２４７】
【化４７】
2014518841.tif 000049
【０２４８】
幾つかの実施形態において、アジュバントは以下のものである。
【０２４９】
【化４８】
2014518841.tif 000050
【０２５０】
幾つかの実施形態において、アジュバントは以下の構造を有する。
【０２５１】
【化４９】
2014518841.tif 000051
【０２５２】
幾つかの実施形態において、アジュバントは以下の構造によって定義される化合物であり：
【０２５３】
【化５０】
2014518841.tif 000052
【０２５４】
式中、Ｙ３、Ｙ５及びＹ６は独立して−Ｏ−又は−ＮＨ−であり；
Ｙ１０は−Ｏ−、−ＮＨ−及び−Ｓ−から成る基から選択され；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は独立して水素又は以下のものから成る基から選択された親油基であり、
【０２５５】
【化５１】
2014518841.tif 000053
【０２５６】
式中、Ｘ、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３は独立してＣＯ又はＣＨ２であり；
ＺはＮＨ又はＯであり；
ｋ、ｍ及びｒは独立して０から３０を含む整数であり、
ｎ及びｑは独立して０から６を含む整数であり；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６のうち少なくとも１つは、水素原子ではなく；
Ｒ２はＨ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−ＳＯ３Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、及び−ＣＨ２ＣＯＯＨから成る基から選択され；
Ｒ１０は、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−ＳＯ３Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）−ＣＨ２ＣＯＯＨ、及び１から１０の炭素の長さのアルキル基、又はその薬学的に許容可能な塩から成る基から選択される。
【０２５７】
幾つかの実施形態において、アジュバントは以下の構造を有し：
【０２５８】
【化５２】
2014518841.tif 000054
【０２５９】
式中、Ｒ２及びＲ１０は独立して水素又はホスホノ基（−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２）であり、それらのうち少なくとも１つはホスホノ基であり；
Ｙ３は−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、
Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は独立して水素又は以下のものから成る基から選択された親油基であり
【０２６０】
【化５３】
2014518841.tif 000055
【０２６１】
式中、Ｘ、Ｘ１１、Ｘ２及びＸ３は独立してＣＯ又はＣＨ２であり；
ＺはＮＨ又はＯであり；
ｋ、ｍ及びｒは独立して０から３０を含む整数であり、
ｎとｑは独立して０から６を含む整数であり；
Ｒ３、Ｒ５及びＲ６のうち少なくとも１つは水素ではない。
【０２６２】
幾つかの実施形態において、前記アジュバントは以下の構造を有し、
【０２６３】
【化５４】
2014518841.tif 000056
【０２６４】
式中、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は以下の構造の同じ又は異なる置換基であり、
【０２６５】
【化５５】
2014518841.tif 000057
【０２６６】
式中、ｍ及びｎは、６から１０を含む間の整数から独立して選ばれる。
【０２６７】
幾つかの実施形態において、前記アジュバントは以下の構造を有し、
【０２６８】
【化５６】
2014518841.tif 000058
【０２６９】
式中、Ｙ３及びＹ１３は独立して−Ｏ−又は−ＮＨ−であり；Ｒ３及びＲ１３は同じ置換基であり、以下のものから成る基から選択される強力な親油基であり：
【０２７０】
【化５７】
2014518841.tif 000059
【０２７１】
式中、Ｘ、Ｘ１、Ｘ２及びＸは独立してＣＯ又はＣＨ２であり；ＺはＺＨ及びＯであり；ｋ、ｍ及びｒは独立して０から３０を含む整数であり、ｎ及びｑは独立して０から６を含む整数である。
【０２７２】
幾つかの実施形態において、前記アジュバントは以下の構造を有する。
【０２７３】
【化５８】
2014518841.tif 000060
【０２７４】
幾つかの実施形態において、前記アジュバントは以下の構造を有する。
【０２７５】
【化５９】
2014518841.tif 000061
【０２７６】
幾つかの実施形態において、該化合物の強力な親油基は集団的に少なくとも３つの主な炭素鎖を提供し、ここで、該強力な親油基の主な炭素鎖は、集団的に少なくとも４０の炭素原子を提供する。幾つかの実施形態において、該化合物の強力な親油基は集団的に少なくとも４つの主な炭素鎖を提供し、ここで、前記主な炭素鎖は、集団的に少なくとも５０の炭素原子を提供する。幾つかの実施形態において、該化合物の強力な親油基は集団的に少なくとも４つの主な炭素鎖を提供し、ここで、前記主な炭素鎖は、集団的に少なくとも５０の炭素原子を提供する。
【０２７７】
幾つかの実施形態において、式Ｉ又は式ＩＩの化合物はペンタエリトリトール（ＰＥＴ）ユニット又はＰＥＴユニットの誘導体を含む。そのような実施形態のうちの幾つかにおいて、ＰＥＴユニットは以下の構造を有する。
【０２７８】
【化６０】
2014518841.tif 000062
【０２７９】
幾つかの実施形態において、リピドＡは糖ユニットの開環によって変更され；ＰＥＴ基は随意に変更（例えばエーテル誘導体、アミド誘導体、エステル誘導体及びその他同種のものを産出すること）される。
【０２８０】
幾つかの実施形態において、式ＩＩの、少なくとも２つの主な炭素鎖は、任意の中間ＰＥＴユニットなしで、第１のＰＥＴユニットへつなげられ、また少なくとも２つの主な炭素鎖は任意の中間ＰＥＴユニットなしで第２のＰＥＴユニットにつなげられる。幾つかの実施形態において、少なくとも２つの主な炭素鎖は、任意の中間ＰＥＴユニットなしで、糖ユニットへつなげられ、少なくとも２つの主な炭素鎖は任意の中間糖ユニットなしでＰＥＴユニットへつなげられる。幾つかの実施形態において、強力な親油基は集団的に６つの主な炭素鎖を提供する。幾つかの実施形態において、強力な親油基は集団的に６つの主な炭素鎖を提供する。
【０２８１】
幾つかの実施形態において、主な炭素鎖はそれぞれ、該鎖において１０、１２、１４、１６、１８又は２０の炭素原子によって特徴付けられる。幾つかの実施形態において、主な炭素鎖はそれぞれ、該鎖において１０、１２、１４、１６、１８又は２０の炭素原子によって特徴付けられる。幾つかの実施形態において、主な炭素鎖はそれぞれ、１０、１２、１４、１６、１８又は２０の炭素である。幾つかの実施形態において、主な炭素鎖はそれぞれ、１０、１２、１４、１６、１８又は２０の炭素である。幾つかの実施形態において、主な炭素鎖はそれぞれ、１０、１２、１４、１６、１８又は２０の炭素である。
【０２８２】
幾つかの実施形態において、任意の上記のアジュバントはリピドＡアンタゴニスト活性を有する。
【０２８３】
幾つかの実施形態において、上記のアジュバントは、本明細書で提供されるリポソームワクチン製剤において塩として存在する。
【０２８４】
そのような塩の例は、限定されないが、トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン塩、他のアンモニウム塩、トリエタノールアミン塩、酢酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、ベシル酸塩、トシラート、マレイン酸塩、フマル酸塩、シュウ酸塩、トリフラート、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩及びその他同種のものを含む。他のそのような塩は、限定されないが、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＭｇＯＨ、ＣａＯＨ、ＺｎＯＨ、エチレンジアミン、エタノールアミン（２−アミノエタノール）、１Ｈ−イミダゾール、ジエチルアミン、ピペラジン、デアノール、コリン塩及びその他同種のものを含む。
【０２８５】
具体的な実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤は、ＰＥＴリピドＡ、すなわちホスホグリコ脂質（ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄ）アジュバントペンタエリトリトール−６−鎖−Ｃ１４−グルコサミン−モノ−リン酸塩を含む。具体的な実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤は、ＰＥＴリピドＡのトリエチルアミン塩を含む。ＰＥＴリピドＡ  ＴＥＡ塩のＩＵＰＡＣ名は、トリエチルアンモニウム（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−６−（３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−（（（Ｒ）−３−（テトラデカノイルオキシ）テトラデカンアミド）メチル）プロポキシ）−２−（ヒドロキシメチル）−５−（（Ｒ）−３−（テトラデカノイルオキシ）テトラデカンアミド）−４−（（Ｒ）−３−テトラデカノイルオキシ）テトラデカノイルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ｐｙｒａｎ−３−ｙｌリン酸水素である。ＰＥＴリピドＡの特定の物理特性は以下に示される：
【０２８６】
【表１】
2014518841.tif 000063
【０２８７】
〈リポソーム〉
本明細書に記載されるワクチン製剤はリポソームワクチン製剤である。前記製剤への組み入れに適切である典型的なリポソームは、限定されないが、多重層ベシクル（ＭＬＶ）、オリゴラメラベシクル（ＯＬＶ）、単層ベシクル（ＵＶ）、小型単層ベシクル（ＳＵＶ）、中型単層ベシクル（ＭＵＶ）、大型単層ベシクル（ＬＵＶ）、巨大単層ベシクル（ＧＵＶ）、多小胞ベシクル（ＭＶＶ）、逆相蒸発法によって作られた単一又はオリゴラメラベシクル（ＲＥＶ）、前記逆相蒸発法によって調製された多重層ベシクル（ＭＬＶ−ＲＥＶ）、安定したプルリラメラベシクル（ＳＰｌＶ）、冷凍及び解凍されたＭＬＶ（ＦＡＴＭｌＶ）、押出法によって調製されたベシクル（ＶＥＴ）、フレンチプレスによって調製されたベシクル（ＦＰＶ）、融合（ＦＵＶ）、脱水−再水和ベシクル（ＤＲＶ）、及びバブルソーム（ｂｕｂｂｌｅｓｏｍｅｓ）（ＢＳＶ）によって調製されたベシクルを含む。リポソームを調製するための技術は、例えばＣＯＬＬＯＩＤＡＬ  ＤＲＵＧ  ＤＥＬＩＶＥＲＹ  ＳＹＳＴＥＭＳ，  ｖｏｌ．  ６６  （Ｊ．  Ｋｒｅｕｔｅｒ  ｅｄ．，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．  （１９９４））に記載されている。
【０２８８】
前記調製の方法次第で、リポソームは単層又は多重層であり、約０．０２μｍから約１０μｍを超える範囲で直径の大きさが変動する。
【０２８９】
リポソームは多くの種類の細胞へ吸着し、次に、組み込まれた薬剤（例えば配列番号１の中心直列反復の複製物を１つ以上含むグリコリコペプチド）を放出する。幾つかの場合において、前記リポソームは前記標的細胞と融合し、それにより次に前記リポソームの内容は標的細胞へ流入する。代替的に、リポソームは、食作用のある細胞によって取り込まれる。エンドサイトーシスに続いて、リポソーム脂質の内リソソーム（ｉｎｔｒａｌｙｓｏｓｏｍａｌ）分解及び前記カプセル薬剤の放出が起こる。Ｓｃｈｅｒｐｈｏｆ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ４４６：  ３６８  （１９８５）。
【０２９０】
本明細書で提供されるリポソームは担体脂質も含む。幾つかの実施形態において、前記担体脂質はリン脂質である。リポソームを形成することができる担体脂質は、限定されないが、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ； レシチン）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）を含む。他の適切なリン脂質はさらにジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）、ジミリストイルホスファチジン酸（ＤＭＰＡ）、ジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミンなど（ＤＳＰＥ）及びその他同種のもの、又はそれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、前記リポソームはさらに、リポソーム製剤を調節するステロール（例えばコレステロール）を含む。幾つかの実施形態において、担体脂質は任意の既知の非リン酸塩極性脂質である。
【０２９１】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているリポソームは、ジ脂質付加されたアミノ酸配列に付着した配列番号１のグリコシル化した中心直列反復の１つ以上の複製物を含む。幾つかの他の実施形態において、本明細書に記載されているリポソームは、ジ脂質付加されたアミノ酸配列に付着した配列番号１のグリコシル化した中心直列反復の１つ以上の複製物、及びアジュバントも含む。またさらなる実施形態において、本明細書に記載されているリポソームは、ジ脂質付加されたアミノ酸配列に付着した配列番号１のグリコシル化した中心直列反復の１つ以上の複製物、アジュバント、及び担体脂質を含む。前述の実施形態のうちの何れかにおいて、本明細書に記載されているリポソームは、アジュバント（例えば式Ｉ及びＣｐＧ  ＯＤＮのアジュバント、合成ＴＬＲ−９アゴニスト、サポニン、又はその他同種のもの）の混合物を含む。
【０２９２】
具体的な実施形態において、本明細書に記載されているワクチン製剤は、有機相及び水相について制御混合があるような同時混合工程を使用して生産される。幾つかの実施形態において、有機相は有機溶媒を含む。幾つかの実施形態において、有機相は有機溶媒及び水の最大約２０％ｖ／ｖを含む。幾つかの実施形態において、有機相は有機溶媒及び水の最大約１５％ｖ／ｖを含む。幾つかの実施形態において、有機相は有機溶媒及び水の最大約１０％のｖ／ｖを含む。幾つかの実施形態において、有機相は有機溶媒及び最大約５％の水を含む。幾つかの実施形態において、有機相は有機溶媒及び水の約５％ｖ／ｖ未満を含む。そのような実施形態のうちの幾つかにおいて、前記有機相内の水の存在は、溶質（例えばグリコリコペプチド）の改善された溶解を可能とする。そのような実施形態のうちの幾つかにおいて、有機相は、水と混和できる有機溶媒を含む。
【０２９３】
幾つかの実施形態において、水相は、随意に有機溶媒の最大約２０％ｖ／ｖを含む。幾つかの実施形態において、水相は、随意に有機溶媒の最大１５％ｖ／ｖを含む。幾つかの実施形態において、水相は、随意に有機溶媒の最大１０％ｖ／ｖを含む。幾つかの実施形態において、水相は、随意に有機溶媒の最大５％ｖ／ｖを含む。
【０２９４】
一例として、前記担体脂質及びグリコリポペプチド（例えば配列番号２のグリコリコペプチド）及びアジュバント（例えばＰＥＴリピドＡ、（ＰＥＴリピドＡトリエチルアミン塩）は、最大５％ｖ／ｖの水（例えば最大５％ｖ／ｖの水を含有するｔ−ＢｕＯＨ）を随意に含有している有機相において完全に可溶化される。リポソームの大きさは、流量について制御された比率での前記２相の同時混合の使用を通じて制御される。無菌フィルタを通じてのろ過を可能にする約９０％（ｄ９０）＜０．２２μｍの母集団分布でリポソームを産出するために、前記有機相に対する前記水相の流量の比率は、一定して約３：１に保持される。幾つかの実施形態において、前記リポソームは約９０％（ｄ９０）＜０．４μｍの母集団分布を有する。幾つかの実施形態において、前記リポソームは約９０％（ｄ９０）＜０．３０μｍの母集団分布を有する。幾つかの実施形態において、前記リポソームは約９０％（ｄ９０）＜０．２５μｍの母集団分布を有する。幾つかの実施形態において、前記リポソームは約９０％（ｄ９０）＜０．２０μｍの母集団分布を有する。
【０２９５】
前記リポソームの調製において随意に変更される特定のパラメーターは、本明細書に記載されているワクチン製剤における組み込みに適したリポソームを得るための冷却速度だけでなく、前記水相／有機相の混合比、温度も含む。図１は、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤の製造のための典型的な手順を示す。
【０２９６】
〈脂質溶液と水の流量の比率〉
水及び有機相の流れの開始及び停止が同時である場合、有機溶液流量に対する水の割合は溶媒濃度及び、結果としてリポソームの大きさを決定する。溶媒濃度が高いほど、形成されるリポソームは大きくなる。従って、幾つかの実施形態において、水流と有機溶液流量の比率は、少なくとも２：１（最高約３３  １／３％の有機溶媒濃度を産出）、少なくとも３：１（最高約２５％の有機溶媒濃度を産出）である。幾つかの実施形態において、水流と有機溶液流量の比率は、少なくとも５．６７：１（最大約１５％の有機溶媒濃度を産出）であり、水流と有機溶液流量の比率は、典型的に最高１９．１である。幾つかの実施形態において、水流と有機溶液流量の比率は、１９：１（約５％の有機溶媒濃度を達成）と３  １／３：１（約３０％の有機溶媒濃度を達成）間ごろ、９：１（約１０％の有機溶媒濃度を達成）と５：１（約２０％の有機溶媒濃度を達成）の間ごろ、又は９：１と４：１（約２５％の有機溶媒濃度を達成）の間ごろである。一例として、十分に均一なｄ９０のリポソーム粒子の大きさを提供するために、８５ｍｌ／分の水を１５ｍｌ／分の有機相へ流すことによって、水内のｔ−ブタノールの１５％ｖ／ｖが得られる。前述の実施形態のうちの何かにおいて、有機相は本明細書に記載されている任意の有機相である。
【０２９７】
従って、比率が一定に保持されている限り、流量は与えられた所望のリポソームの大きさに関して現実的であるように調整される。故に、例えば、リポソームの約９９％以上が約２００ｎｍ未満の大きさであるリポソーム調剤を生産することが望ましく、有機溶液濃度が約２０％である場合、実際の混合時間及び使用される溶液の体積など実際的な考察に従って、水流と脂質溶液流量の割合を約４：１に保持している間に流量が調節される。
【０２９８】
〈液体の温度〉
液体は、それぞれの貯蔵タンク内にある間、随意に加熱され、該タンクは熱損失を減少するためにカバーで断熱され得る。どちらかの液体の温度は、約４０℃から４５℃、約４５℃から５０℃、約５０℃から５５℃、又は約５５℃から６０℃に保たれる。幾つかの実施形態において、どちらかの液体の温度は、約４２℃±２℃、４４℃±２℃、４７℃±２℃、５０℃±２℃、５３℃±２℃、５５℃±２℃、５７℃±２℃又は６０℃±２℃に保たれる。幾つかの実施形態において、どちらかの液体の温度は約５３℃±２℃に保たれる。
【０２９９】
〈冷却〉
幾つかの実施形態において、リポソーム形成直後の熱交換器の使用によって実行可能となった急冷は、リポソームの大きさの制御を可能にし、バッチサイズの独立性及びリポソームの大きさの可変性に対する障害を除去する。リポソームの大きさを維持するために、冷却の温度と時間は、例えば、５時間未満で約５５℃から約３５ ℃までの冷却、又は２時間未満で約５５℃から約３０℃までの冷却、又は３０分未満で約５５℃から約３０℃までの冷却など、５時間以内に約２０℃を超える冷却はするべきではない。所望である場合、前記混合物はより低温度に随意に冷却されるが、バルク溶液は凍結温度上に保たれる。
【０３００】
上記の手順を用いたリポソームの製造用の装置は、Ｕ．Ｓ．  Ｓｅｒ．  Ｎｏ．  １３／１４０，７８６  （ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ａｓ  Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔ．  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ２０１２／００３４２９４）に記載され、その開示は参照によって本明細書に組み入れられる。
【０３０１】
１つの実施形態において、上記の制御混合工程から得られた親液性（すなわちリポソームを含む懸濁液）は、除菌され、バイアルに移され、リポソームを含む凍結乾燥ケーク又は粉末を提供するために凍結乾燥にさらされる。そのようなケーク又は粉末は、それらを必要とする個体への投与前に食塩水（例えば０．９％ｗ／ｖの無菌食塩水）内で再構成される。別の実施形態において、上記の制御混合工程から得られた親液性物質（ａ  ｌｙｏｐｈｉｌｅ）（すなわちリポソームを含む懸濁液）は、除菌され、それを必要としている個体へ直接投与される。またさらなる他の実施形態において、上記の制御混合工程から得られた親液性物質（すなわちリポソームを含む懸濁液）は、乾燥した薄膜又は粉末を提供するために除菌され、バイアルに入れられ、蒸発及び／又は濃縮され（例えば、減圧の下で）、それらを必要としている個体への投与前に再構成される。
【０３０２】
幾つかの実施形態において、上記のリポソームの薄膜又は粉末又は凍結乾燥ケーク又は固体の再構成に使用された液体は、食塩水である（例えば０．９％ｗ／ｖの食塩水）。幾つかの実施形態において、上記のリポソームの薄膜又は粉末又は凍結乾燥ケーク又は個体の再構成に使用された液体は、任意の他の非経口的に許容可能な希釈液（例えば、Ｄ５Ｗ、乳酸リンゲル液、ブドウ糖溶液及びその他同種のもの）である。幾つかの実施形態において、上記のリポソームの薄膜又は粉末又は凍結乾燥ケーク又は固体の再構成に使用された液体は、油である。そのような実施形態のうちの幾つかにおいて、本明細書に示された実施形態の範囲内で考慮されるのは、徐放性ワクチン製剤の調合のために希釈液として薬学的に許容可能な油である。そのような実施形態のうちの幾つかにおいて、油内で懸濁液であるワクチン製剤は、投与時の徐放性デポ剤（例えば、油内の懸濁液の皮下又は筋肉内ポケット）の形成を可能にし、それにより持続性放出を可能にする。本明細書に記載されているリポソームを含む油内で懸濁液を形成するために使用されたそのような希釈液は、限定されないが、ダイズ油、オレイン酸及びそのグリセリド誘導体、オリーブオイル、ひまし油及びその他同種のものを含む。そのような実施形態のうちの幾つかにおいて、本明細書で提供されるリポソームワクチン製剤はエマルジョンである。そのような実施形態のうちの幾つかにおいて、本明細書で提供されるリポソームワクチン製剤は、油内の懸濁液である。
【０３０３】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤は、約１０：１から約１：１０のグリコジ脂質付加された（ｇｌｙｃｏｄｉｌｉｐｉｄａｔｅｄ）ペプチド（例えば配列番号２）とアジュバント（例えばＰＥＴリピドＡ、ＴＥＡ塩）の重量比を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤は、約８：１から約１：８のグリコジ脂質付加されたペプチド（例えば配列番号２）とアジュバント（例えばＰＥＴリピドＡ、ＴＥＡ塩）の重量比を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤は、５：１から約１：５のグリコジ脂質付加されたペプチド（例えば配列番号２）とアジュバント（例えばＰＥＴリピドＡ、ＴＥＡ塩）の重量比を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤は、約２：１から約１：２のグリコジ脂質付加されたペプチド（例えば配列番号２）とアジュバント（例えばＰＥＴリピドＡ、ＴＥＡ塩）の重量比を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤は、約１：１のグリコジ脂質付加されたペプチド（例えば配列番号２）とアジュバント（例えばＰＥＴリピドＡ、ＴＥＡ塩）の重量比を含む。幾つかの具体的な実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤は、約３００μｇのグリコジ脂質付加されたペプチド（例えば配列番号：２）及び約１５０μｇのアジュバント（例えばＰＥＴリピドＡ、ＴＥＡ塩）を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤は、約６００μｇのグリコジ脂質付加されたペプチド（例えば配列番号：２）及び約３００μｇのアジュバント（例えばＰＥＴリピドＡ、ＴＥＡ塩）を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤は約９００μｇのグリコジ脂質付加されたペプチド（例えば配列番号：２）及び約４５０μｇのアジュバント（例えばＰＥＴリピドＡ、ＴＥＡ塩）を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤は約１２００μｇのグリコジ脂質付加されたペプチド（例えば配列番号２）及び約６００μｇのアジュバント（例えばＰＥＴリピドＡ、ＴＥＡ塩）を含む。そのような実施形態のうちの幾つかにおいて、前記リポソーム製剤は、ワクチン製剤を提供するために食塩水（例えば０．９％ｗ／ｖの無菌食塩水）内で再構成された凍結乾燥された固体粉末又はケークである。
【０３０４】
グリコシル化した中心直列反復（配列番号１）の１つ以上の複製物、ジ脂質付加されたアミノ酸配列、及び前記様々な変に数ついての１つ以上の上記アジュバントの任意の組み合わせが、本明細書で考慮される。本明細書の全体にわたって、グリコリコペプチド、及びその使用のための組成物及び方法が提供され、それらを必要とする個体に適切な処置を提供するために選ばれる。
【０３０５】
〈処置の方法〉
本明細書において、幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤（例えば、配列番号１の１つ以上の複製物及びアジュバント（例えばＰＥＴリピドＡ）を含むグリコリポペプチド製剤）の投与を含む、それを必要とする個体の免疫系を刺激する方法が提供される。幾つかの例において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤の投与は、細胞反応を含む及び／又は持続させる。他の例において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤の投与は、液性免疫反応を含む及び／又は持続させる。さらなる例において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤の投与は液性免疫及び細胞性の反応の両方を含む及び／又は持続させる。
【０３０６】
また、本明細書において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤の投与を含む、それを必要とする個体の癌の処置のための方法が提供される。そのような実施形態の幾つかにおいて、前記個体は癌に苦しんでいる。他の実施形態において、前記個体は癌に苦しんでいると疑われる。また他の実施形態において、前記個体は、癌にかかる傾向がある（例えば乳癌にかかる傾向がある個体）。特定の実施形態において、前記癌は、乳癌、肺癌、肺の腺癌、肺扁平上皮癌、肺小細胞癌、肺非小細胞癌、頭頸部癌、脳癌、腹部癌、結腸癌、結直腸癌、食道癌、傍咽頭（ｐａｒａｐｈａｒｙｎｇｅａｌ）癌、消化器癌、神経膠腫、肝臓癌、口腔癌、舌癌、神経芽細胞腫、骨肉腫、卵巣癌、腎臓癌、膀胱癌、尿路癌、膵臓癌、網膜芽細胞腫、子宮頸癌、子宮癌、ウィルムス腫瘍、多発性骨髄腫、皮膚癌、リンパ腫、白血病、血病、甲状腺癌、骨癌、腺嚢胞腫瘍、軟骨肉腫、膵島細胞腫瘍、神経内分泌腫瘍、前立腺癌、卵巣癌、膠芽腫、子宮内膜癌腫、子宮内膜癌、平滑筋肉腫、胆嚢癌、肝細胞性の癌、血液の癌、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、急性の／慢性のリンパ芽球性白血病、有毛細胞白血病、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、形質細胞腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫からなる群から選択される。特定の実施形態において、前記癌は、頭頸部癌、肺癌、結腸癌又は前立腺癌である。特定の実施形態において、前記癌は肺非細胞肺癌である。幾つかの実施形態において、前記癌は血液癌である。
【０３０７】
幾つかの実施形態において、前記癌は、限定されないが、乳、肺非小細胞、卵巣、直腸、胃、前立腺、膵臓、及び腎細胞の癌を含む前記ＭＣＵ１抗原の発現と関連する。幾つかの実施形態において、前記癌は、固形腫瘍と関連する。特定の例において、前記固形腫瘍は、例えばステージ３又は４に進行している。幾つかの例において、前記腫瘍は、乳房腫瘍、肺非小細胞腫瘍、卵巣腫瘍、結直腸腫瘍、胃腫瘍、前立腺腫瘍、膵臓腫瘍及び腎細胞癌腫瘍である。特定の例において、前記固形腫瘍は、前記ＭＵＣ１抗原の発現と組織学的に関連する。
【０３０８】
本明細書で用いられるように、幾つかの実施形態において、「処置」又は「処置すること」又は「処理された」は、望ましくない生理学上の疾病、障害又は疾患を遅くすること（和らげる）又は有益であるか所望の臨床結果を得ることを目的とする、治療上の処置を指す。本明細書に記載されている目的のために、有益又は所望の臨床結果は、限定されないが、症状の緩和；疾病、障害又は疾患の範囲の減少；疾病、障害又は疾患の状態の安定化（すなわち、悪化せずに）；疾病、障害又は疾患の進行の開始の遅れ又は減速；疾病、障害又は疾患の状態の向上；及び、検出可能又は検出不可能、又は向上又は改善のいずれにせよ、疾病、障害又は疾患の寛解（部分的又は全体）を含む。処置は過度なレベルの副作用のない臨床的に有意義な反応を誘発することを含む。処置は、処置を受けない場合の生存率と比較して生存率を延長すること含む。他の実施形態において、「処置」又は「処置すること」又は「処理された」は、例えば疾患にかかる傾向のある人（例えば、乳癌などの疾患に関する遺伝マーカーをもつ個体）における望ましくない生理学上の疾病、障害又は疾患の発症を遅らせること又は重症度を軽減することを目的とする。
【０３０９】
本明細書に記載されている処置の方法は、局所的に進行、転移及び／又は再発している病期を含む癌の様々な病期を処置する。癌の病期診断において、局部的に進行しているものは一般的に局部から近くの組織及び又はリンパ節まで局在する癌として定義される。ローマ数字の診断システムにおいて、局所的に進行したものは通常、病期ＩＩ又は病期ＩＩＩに分類される。転移性の癌は、前記癌が身体全体の離れた組織や器官にまで広がる病期である。（病期ＩＶ）。再発性だと認定された癌は、大抵一定期間後、寛解期に入った後、又は腫瘍が明白に除去された後に、再発したと定義される。寛解は、局所的、すなわちオリジナルと同じ場所に現われ、又は、離れている、すなわち身体の異なる部分に現われる。特定の例において、本明細書に記載されている組み合わせ療法によって処置可能な癌は、切除不可能又は手術による除去不可能である。
【０３１０】
そのような実施形態のうちの幾つかにおいて、本明細書に記載されている処置の方法（例えば免疫療法）は、個体向けに処方された別の他の癌療法を提供する。従って、幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤は、限定されないが、メトトレキサート（ＲＨＥＵＭＡＴＲＥＸ（登録商標）、アメトプテリン）シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）、サリドマイド（ＴＨＡＬＩＤＯＭＩＤ（登録商標））、アクリジン・カルボキサミド、アクチミド（登録商標）、アクチノマイシン、１７−Ｎ−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン、アミノプテリン、アムサクリン、アントラサイクリン、抗悪性腫瘍剤、アンチネオプラストン、５−アザシチジン、アザチオプリン、ＢＬ２２、ベンダムスチン、ビリコダール（ｂｉｒｉｃｏｄａｒ）、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブリオスタチン、ブスルファン、カリクリン、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、シタラビン、ダカルバジン、ダサチニブ、ダウノルビシン、デシタビン、ジクロロ酢酸、ジスコデルモリド、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エリブリン、エストラムスチン、エトポシド、エキサテカン、エクシスリンド、フェルギノール、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、ホスフェストロール、ホテムスチン、ガンシクロビル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、ＩＴ−１０１、イダルビシン、イホスファミド、イミキモド、イリノテカン、イロフルベン、イクサベピロン、ラニキダル（ｌａｎｉｑｕｉｄａｒ）、ラパチニブ、レナリドミド、ロムスチン、ラルトテカン、マホスファミド、マソプロコール、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ネララビン、ニロチニブ、オブリメルセン、オキサリプラチン、ＰＡＣ−１、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、ピポブロマン、ピクサントロン、プリカマイシン、プロカルバジン、プロテアソーム阻害剤（例えばボルテゾミブ）、ラルチトレキセド、レベッカマイシン、レブラミド（登録商標）、ルビテカン、ＳＮ−３８、サリノスポラミドＡ、サトラプラチン、ストレプトゾトシン、スウェインソニン、タリキダル、タキサン、テガフール・ウラシル、テモゾロミド、テストラクトン、チオテパ、チオグアニン、トポテカン、トラベクテジン、トレチノイン、トリプラチンテトラニトラート、トリス（２−クロロエチル）アミン、トロキサシタビン、ウラシル・マスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ボリノスタット、ゾスキダル、又はその他同種のものを含む任意の他の抗癌剤での処置と組み合わせて投与される。
【０３１１】
追加の実施形態内において、本明細書に記載されている処置（例えば免疫療法）の方法、すなわち本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤は、放射線療法（例えば、γ−放射線、Ｘ線、及び／又は、腫瘍細胞へ向けられた放射性同位体の放出）と組み合わせて投与される。追加の実施形態において、本明細書に記載されている処置（例えば免疫療法）の方法、すなわち明細書に記載されているリポソームワクチン製剤は、遺伝子治療と組み合わせて投与される。治療上の遺伝子は、細胞増殖の誘導因子（癌遺伝子）、細胞増殖の阻害剤（腫瘍抑制遺伝子）、又はプログラム細胞死の誘導因子（アポトーシス促進遺伝子）のアンチセンス型を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されている前記組み合わせ療法は、手術（例えば切除）で投与される。
【０３１２】
追加の実施形態において、本明細書に記載されている処置（例えば免疫療法）の方法、すなわち、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤は、下痢止め剤、制吐剤、鎮痛剤、オピオイド及び／又は非ステロイド性の抗炎症剤と組み合わせて投与される。
【０３１３】
さらなる実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤（例えば配列番号２を含む製剤及びＰＥＴリピドＡ  ＴＥＡ塩）は、シクロホスファミド、又はイミタニブ、又はダクリツマブ、及び／又は任意の他の抗癌剤で前処置されている個体へ投与される。他の実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤は、シクロホスファミド及び／又は任意の他の抗癌剤で前処置されていない個体へ投与される。
【０３１４】
上記実施形態のうちの幾つかにおいて、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤（例えば配列番号２を含む製剤）は、癌に苦しんでいる個体の寿命を延長させ及び／又は生存率を増加させる。上記実施形態のうちの幾つかにおいて、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤（例えば配列番号２を含む製剤）は、癌に苦しんでいる個体のクォリティーオブライフを改善する（例えば、個体が本明細書に記載されているワクチン製剤によって免疫があるとき、前記個体は副作用を引き起こす抗癌薬のより低用量を必要とする）。
【０３１５】
上記実施形態のうちの幾つかにおいて、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤（例えば配列番号２を含む製剤）は、個体における免疫反応を生じさせる及び／又は持続させる。免疫応答は液性免疫反応（すなわち抗体の産生）、細胞応答（すなわちＴリンパ球の増殖及び刺激）又は両方を含む。細胞反応の活性化及び期間の測定は、例えば、細胞傷害性リンパ球（ＣＴＬ）アッセイを含む任意の既知の方法によって行われる。液性免疫反応は、ＩｇＧ又はＩｇＭ抗体の画分などリポソームワクチンに特有の抗体価の単離及び計量を含む既知の方法によっても測定される。
【０３１６】
個体において異常にグリコシル化されたＭＵＣ１と関連する疾患、障害、又は疾病を処置するための方法も本明細書に提供され、この方法は本明細書に記載されているグリコシル化されたＭＵＣ１リポソームワクチンを有する個体へ投与することを含む。本明細書に記載されている方法の実施形態の幾つかにおいて、前記方法は、正常なＭＵＣ１相当部分に対して過症−又は低グリコシル化を含む、グリコシル化の変更パターンでのＭＵＣ１の処置を含む。幾つかの実施形態において、前記変更パターンは、正常なＭＵＣ１相当部分に対する異なるグリコシルユニット（すなわち異なる糖類）からのものである。本明細書に記載されている方法のまた他の実施形態において、前記方法は過剰又は高グリコシル化により異常にグリコシル化したＭＵＣ１の処置を含む。
【０３１７】
ＭＵＣ１の低グリコシル化された形態を示す疾患、疾病及び障害は、限定されないが、癌の前駆体病変及び新組織形成（例えば前立腺肥大又は上皮過形成）；膵臓炎；炎症性腸疾患；ＭＵＣ１を発現させる組織における炎症を引き起こす事象（例えば乳汁分泌及び／又は乳腺炎、骨盤手術、流行性耳下腺炎ウイルス、及び喫煙；及び腸と結腸内の炎症のような他の炎症組織表現型。ＭＵＣ１の高グリコシル化した形態は、限定されないが、肺扁平上皮癌腫、ボーエン病及び幾つかの乳癌を含む特定の癌において見られる。
【０３１８】
〈用量〉
本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤（例えば、配列番号１の中心直列反復ペプチドの１つ以上の複製物を有するグリコリコペプチドを含む製剤）が個体に与えられているとき、当分野の技術者は、用量が、個体の体重、腫瘍のサイズ又は腫瘍の進行を含むがこれらに限定されない幾つかの要因に依存することを理解する。一般に、本明細書で用いられるように本明細書に記載されているワクチン製剤を受け取る個体（例えば、配列番号２及びＰＥＴリピドＡアジュバントを含む製剤）は、ひとつの生物である。特定の実施形態において、個体は哺乳動物である。具体的には、個体は男性又は女性のヒトである。多くの実施形態において、前記個体は、患者、又は医療ケアと処置を待っている又は受けている個人である。
【０３１９】
個体は、本明細書に記載されているＭＵＣ１ベースのグリコリポペプチド・リポソームワクチン製剤（例えば、配列番号２及びＰＥＴリピドＡアジュバントを含む製剤）の約５０μｇ、約１００μｇ、約２００μｇ、約３００μｇ、約４００μｇ、約５００μｇ、約６００μｇ、約７００μｇ、約８００μｇ、約９００μｇ、約１，０００μｇ、約１，０１０μｇ、約１，０２０μｇ、約１，０３０μｇ、約１，０４０μｇ、約１，０５０μｇ、約１，０６０μｇ、約１，０７０μｇ、約１，０８０μｇ、約１，０９０μｇ、約１，１００μｇ、１，２００μｇ、１，３００μｇ、１，４００μｇ、１，５００μｇ、１，６００μｇ、１，７００μｇ、１，８００μｇ、１，９００μｇ又は約２，０００μｇの投与量を、単一又は累積的な適用において随意に投与される。具体的な実施形態において、前記個体に与えられた投与量は１週間当たりでワクチン製剤の約１，０００μｇである。
【０３２０】
個体は、本明細書に記載されているＭＵＣ１ベースのグリコリポポリペプチド・リポソームワクチン製剤（例えば、配列番号２及びＰＥＴリピドＡアジュバントを含む製剤）の投与量を、例えば、一日複数回、毎日、隔日、週に一度、又は任意の他に適切な投与レジメンで随意に受け取る。１つの実施形態において、定期的に投与することは、本明細書に記載されているリポソームワクチンの投与量を一定期間にわたって一週間に一回投与すること包含する。もちろん、投与レジメンは、随意にＭＵＣ１ペプチド送達の他の置き換えを含む。すなわち、前記ワクチンは、医師の判断で、１週当たり１回、２回、３回、４回、５回、６回、又はより多くの回数を投与される。幾つかの実施形態において、個体は、一定期間にわたり少なく５回の投与量を与えられる。他の実施形態において、個体は５回より多い、又は５回未満の投与量を与えられる。故に、ひとつの実施形態において、個体は毎週前記ＭＵＣ１糖脂質付加された（ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄａｔｅｄ）ポリペプチドの約１，０００μｇの投与量を受け取る。代替的に、個体は、週に２度５００μｇの２投与量、又は５日間にわたり１日１００μｇの投与量を受け取る。
【０３２１】
これらの用量の実施例は、限定的なものではなく前記ＭＵＣ１糖脂質付加されたポリペプチドの約１，０００μｇを投与するための特別な投与レジメンを例示するためにだけ用いられる。例えば、与えられた状況に適切な投与量が１週当たり１，０００μｇである場合、投与量は、任意の数の置き換え（例えば１週当たり２５０μｇを４回注入）へ随意に分けられる。これは、特別な状況に適切な投与量が１，０００μｇより多い又は少ない場合にも当てはまる。
【０３２２】
ＭＵＣ１ベースのグリコリポポリペプチド・リポソームワクチン製剤（例えば配列番号２及びＰＥＴリピドＡアジュバントを含む製剤）が前記個体へ投与される一定期間は、前記癌の病期、前記患者の病歴及び担当医師の判断により決定される、任意の適切な期間である。そのような適切な期間の例は、限定されないが、少なくとも約３ヵ月、少なくとも約４ヵ月、少なくとも約５ヵ月、少なくとも約６ヵ月、少なくとも約７ヵ月、少なくとも約８ヵ月、少なくとも約９ヵ月、少なくとも約１０ヵ月、少なくとも約１１ヵ月、少なくとも約１２ヵ月、少なくとも約１３ヵ月、少なくとも約１４ヵ月、少なくとも約１５ヵ月、少なくとも約１６ヵ月、少なくとも約１７ヵ月、少なくとも約１８ヵ月、少なくとも約１９ヵ月、少なくとも約２０ヵ月、少なくとも約２１ヵ月、少なくとも約２２ヵ月、少なくとも約２３ヵ月又は少なくとも約２４ヵ月、又はそれ以上を含む。処置期間は２４ヵ月以上、望まれる場合、３０ヵ月、３１ヵ月、３２ヵ月、３３ヵ月、３４ヵ月、３５ヵ月、３６ヵ月、又は３６ヵ月より長い間継続される。
【０３２３】
別の実施形態中において、本明細書に記載されている方法のいずれかについて投与する期間は、少なくとも約２週間、少なくとも約４週間、少なくとも約８週間、少なくとも約１６週間、少なくとも約１７週間、少なくとも約１８週間、少なくとも約１９週間、少なくとも約２０週間、少なくとも約２４週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約４０週間、少なくとも約４４週間、少なくとも約４８週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６８週間、少なくとも約７２週間、少なくとも約８０週間、少なくとも約８８週間、少なくとも約９６週間、又は少なくとも約１０４週間である。
【０３２４】
本明細書に記載されている任意のリポソームワクチン製剤（例えば、配列番号２を含む製剤及びＰＥＴリピドＡアジュバント）は、異なる段階の処置において随意に投与される。例えば、前記ＭＵＣ１ベースのグリコリポポリペプチドのリポソームワクチン製剤は、処置段階及び維持段階の両方で投与される。幾つかの実施形態において、前記処置段階は、毎週の投与におけるリポソームワクチン製剤の投与を含む一方、前記維持段階はより長い期間であり、約６週ごと、約７週ごと、約８週ごと、約９週ごと、約１０週ごと、約１１週ごと、約１２週ごと、又はそれ以上である。幾つかの場合では、処置段階で与えられる用量は、維持段階で与えられる用量より大きくなる。しかし、処置及び維持の段階は、特定の個体に合わせて設計されているため、前記処置段階と維持段階の間の時間及び用量は上記の例とは異なる。一般に、前記維持段階は、適切だと思われる任意の時間に始められる。例えば、幾つかの実施形態において、前記処置段階は８週間であり、前記維持段階は個体の生涯にわたって継続する。他の実施形態において、処置又は維持の段階のみが行われる。
【０３２５】
またさらなる実施形態において、本明細書に記載されているリポソームワクチン（例えば、配列番号２及びＰＥＴリピドＡアジュバントを含む製剤）は、予防的に与えられる。これらの実施形態において、前記リポソームワクチン製剤の投与は、個体（例えば、遺伝的に乳癌のような癌を発症する傾向のある個体）における癌の発症を防ぐ。
【０３２６】
個体が、本明細書に記載されているワクチン製剤を受け続けるべき時間は、担当医師により決定される。幾つかの場合において、個体の生涯の残りの間、前記ワクチン製剤を投与することは好都合である。そのような実施形態のうちの幾つかにおいて、ワクチン製剤は、身体の４つの４分の１区（ｑｕａｄｒａｎｔ）、例えばリンパ節付近（例えば、各腋窩）、各臀部（例えば、皮下に）及びその他同種のものにおいて投与される。前記実施形態のうちの幾つかにおいて、ワクチン製剤はポンプを介して投与される。幾つかの実施形態において、ポンプ及び／又は送達装置は、慢性的な投薬を可能にするために個体へ移植される。移植可能なポンプの例は、限定されないがアルゼット（登録商標）浸透圧ポンプを含む。
【０３２７】
〈キット〉
本明細書で提供されるものは、本明細書に記載されているリポソームワクチン製剤を調剤するためのキットである。そのようなキットは、配列番号１の中心直列反復の１つ以上の複製物とアジュバント（ＰＥＴリピドＡ、トリエチルアミン塩）を含むグリコリコペプチドを含む第１の医薬品バイアル及び、再構成のために本明細書に記載されている適切な無菌の液体を含有する第２のバイアルを含む。幾つかの実施形態において。
【０３２８】
例えば、１つの実施形態において、そのようなキットは第１のバイアル、すなわち、配列番号１の中心直列反復の１つ以上の複製物を含む３００μｇのグリコリコペプチド、及び１５０μｇのアジュバンドを含有している医薬品バイアル包含している薬物結果バイアル）を含み、１２０％の充填を示す。この超過は、指定された投与量の退薬及び投与を促進するように意図される。キットは、注入用の０．９％の塩化ナトリウム溶液を最大１ｍＬ含有する第２のバイアルをさらに含む。注入用の塩化ナトリウム溶液（０．９％ｗ／ｖ）０．６ｍＬを備えた医薬品の再構成後、医薬品バイアルは、配列番号１の中心直列反復の１つ以上の複製物を含む２５０μｇグリコリコペプチドに対応する送達のために０．５ｍＬを生産する。一例として、投与量が合計１ｍｇである場合、１投与量当たり４つのバイアルが必要である。
【０３２９】
〈特定の定義〉
本明細書で用いられているように「主な炭素鎖」は、少なくとも６炭素の長さの炭素鎖を指す。炭素鎖の炭素原子は３、２、１又は０つの水素に結合され得る。主な炭素鎖において、−ＣＨ＜と＞Ｃ＜炭素は通常、別の炭素鎖の付着（リンカーの有無に関わらず）の分岐点である。幾つかの実施形態において、それらはアミノ、又は水酸基などの側基と置換され得る。任意の主な炭素鎖の炭素原子は、１つ以上のカルボニル基又はチオカルボニル炭素、すなわち、−Ｃ（＝Ｏ）−又は−Ｃ（＝Ｓ）−を含み得る。
【０３３０】
「強力な親油基」は、水素の他に少なくとも５つの原子を含む親油基を指し、メランアルゴリズムによって予想されたように、分配係数（ｌｏｇ  Ｐ）が３を超える。基の親油性は、標準気温と標準気圧（ＳＴＰ）で、非極性溶媒（例えば、エタノール、ジオキサン、アセトン、ベンゼン、Ｎ−オクタノール）と水の間で、分子ＨＺ（ここでＺは問題の側鎖である）の分配係数を測定することにより決定される。親油性はこの分配係数（ｌｏｇ  Ｐ）の対数として定義され得る。前記非極性溶媒を好む分子に関しては正である。故に、親油基はｌｏｇ  Ｐが０を超えるものである。
【０３３１】
分配係数（Ｐ）は、２つの大部分は混ざらない溶媒から成る二相システムにおいて溶質の平衡濃度の比率として定義される。１つのそのようなシステムは、Ｎ−オクタノール：水であり、オクタノール相は、約２０％の水を含み、水の相は約０．００８％のオクタノールを含有する。故に、関係する分配係数（Ｐｏｗ）は、オクタノールで飽和した水における溶質のモル濃度に対する、水で飽和したオクタノールにおける溶質のモル濃度の比率である。Ｎ−オクタノールは、多くの膜成分のように両親媒性であるため、生体膜の有用な代理である。（今後ｌｏｇ  Ｐの言及は、別に指示がない限り、ｌｏｇ  Ｐｏｗを意味する。）
【０３３２】
Ｐｏｗを測定する方法についてのより詳細な情報に関しては、Ｓａｎｇｓｔｅｒ，  Ｊ．，  Ｏｃｔａｎｏｌ−Ｗａｔｅｒ  Ｐａｒｔｉｔｉｏｎ  Ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ：  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ａｐｒｉｌ  １９９７）（ＩＳＢＮ  ０−４７１−９７３９）を参照のこと。オクタノール−水分配係数の作表に関しては、ＥＰＡ  “Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ：  ＯＰＰＴ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｆａｃｔ  Ｓｈｅｅｔｓ”  ｔｈｅ  ＵＳＤＡ  Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｄａｔａｂａｓｅ，  Ｓａｎｇｓｔｅｒ，  Ｊ．，  “Ｏｃｔａｎｏｌ−Ｗａｔｅｒ  Ｐａｒｔｉｔｉｏｎ  Ｃｏｅｆｆｉｃｉｅ，  Ｓａｎｇｓｔｅｒ，  Ｊ．，  ”Ｏｃｔａｎｏｌ−Ｗａｔｅｒ  Ｐａｒｔｉｔｉｏｎ  Ｃｏｅｆｆｉｃｉ （１９８９）；  Ｖｅｒｂｒｕｇｇｅｎ，  Ｅ．  Ｍ．  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｐｈｙｓｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｈｉｇｈｅｒ  Ｎｏｎａｒｏｍａｔｉｃ  Ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｓ：  Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ  Ｓｔｕｄｙ，”  Ｊ．  Ｐｈｙｓ．  Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｆ．  Ｄａｔａ，  ２９：１４３５−４６  （２０００）を参照のこと。異なる化合物のために集められたＰｏｗは、異なる方法論によって決定され得ることに注意されたい。
【０３３３】
メランの方法では、予想されたｌｏｇ  Ｐｏｗは、定数０．２２９０に各断片の加重係数（その断片の複製物の数を掛けた生の係数）を加えることにより得られる。考慮される断片は、脂肪付着の（ａｌｉｐｈａｔｉｃａｌｌｙ  ａｔｔａｃｈｅｄ）−ＣＨ３（０．５４７３）、−ＣＨ２−（０．４９１１）、−ＣＨ（０．３６１４）、−ＯＨ（−１．４０８６）、−ＮＨ２（−１．４１４８）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（−０．５２３６）、−ＳＨ（−０．０００１）、−ＮＨ−（−１．４９６２）、Ｎ＝Ｃ（−０．００１０）、−Ｏ−（−１．２５６６）、−ＣＨＯ（−０．９４２２）、−ｔｅｒｔＣｓｏ３＋Ｃａｔｔａｃｈｅｄ（０．２６７６）、Ｃ  ｎｏ  Ｈ  ｎｏｔ  ｔｅｒｔ（０．９７２３）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、−（−０．９５０５）、−Ｃ（＝Ｏ）−（−１．５５８６）、＝ＣＨ又はＣ＜（０．３８３６）、＃Ｃ（０．１３３４）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（−０．５２３６）、−Ｏ−ＣＯ−Ｃ−Ｎ−ＣＯ（−０．５）、−ＳＯ−Ｏ（−９）、−Ｏ−Ｐ（−０．０１６２）、Ｏ＝Ｐ（−２．４２３９）、リン酸塩付着−ＯＨ（０．４７５）、芳香族Ｃ（０．２９４０）、芳香族Ｎ（５員環）（−０．５２６２）、及び芳香付着（ａｒｏｍａｔｉｃａｌｌｙ  ａｔｔａｃｃｈｅｄ）−ＯＨ（−０．４８０２）を含む。
【０３３４】
強力な親油基に関して、メランアルゴリズムによって予想されたｌｏｇ  Ｐは少なくとも３である。さらなる実施形態において、強力な親油基に関して、ｌｏｇ  Ｐは、少なくとも４、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０又は１０より大きい。
【０３３５】
強力な親油基は１つ以上の炭素鎖を含み、幾つかの実施形態においては、１つ以上の主な炭素鎖を含む。強力な親油基は、単純（非分枝、非環式）脂質、又は複合（分枝及び／又は環式、部分的に芳香族を含む）脂質を含む。
【０３３６】
幾つかの実施形態において、前記強力な親油基は、水素以外の原子を最高１００、そのような原子を最高８０、そのような原子を最高６０、又はそのような原子を最高４０含む。
【０３３７】
前に示したように、前記強力な親油基は水素以外の少なくとも５つの原子を含まなければならない。幾つかの実施形態において、それはそのような原子を少なくとも６、より好ましくは少なくとも８、さらにより好ましくは少なくとも９、さらに好ましくは、それは少なくとも１１、さらにより好ましくは少なくとも１３、最も好ましくは少なくとも２１含む。
【０３３８】
幾つかの実施形態において、前記強力な親油基は、炭素、ケイ素、水素、酸素、窒素、硫黄、及びリンの元素に限定された元素組成を有する。幾つかの実施形態において、水素を含んでいない側鎖内の結合の大多数は、炭素−炭素結合である。
【０３３９】
酸素、窒素、硫黄、及びリンの存在は親油性を減少させる傾向があるため、幾つかの実施形態において、強力な親油基では非水素原子の５０％以上、又は７５％以上が炭素原子である。
【０３４０】
同じ理由により、前記強力な親油基は、幾つかの実施形態において、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、又は少なくとも１０の炭素原子を含む。
【０３４１】
強力な親油基への追加の言及は、米国特許第７，８２０，６２７号で見出され、親油性及び強力な親油基の議論及び適用に関する参照により組み込まれる。
【実施例】
【０３４２】
〈実施例１：リポソームワクチン製剤の合成〉
配列番号２（１５９ｍｇ）のグリコリポペプチド、ＰＥＴリピドＡ（９６ｍｇ）、ＤＰＰＣ（４．３６ｇ）、ＤＭＰＧナトリウム（０．５４ｇ）及びコレステロール（２．６０ｇ）は、５ｍＬの洗浄用滅菌水を含有する１１７グラムのｔ−ブタノールに溶解される。
【０３４３】
加熱されたｔ−ブタノール溶液及び加熱された滅菌水は、９０％（ｄ９０）＜０．２２μｇの母集団分布でリポソームを産生し、少なくとも１つの無菌フィルタを通しての濾過を可能にするために、水相と有機相の流量の比率が５．９：１であるような望ましい流量率に設定された個別のモーターの下で組み上げられる。図１に記載されている手順を用いて、凍結乾燥された固体を含有するバイアルが準備される。以下のバッチ式は、５００つのバイアルを表わす１Ｌスケールのバッチに使用される。式は前記バッチサイズの分数又は倍数において使用される。
【０３４４】
【表２】
2014518841.tif 000064
【０３４５】
ろ過及び凍結乾燥され、リポソーム混合物は無菌である。凍結乾燥された医薬品は、再構成すると、可視の粒子の乳白色の懸濁液を産出する無菌の粉末である。容器閉鎖システムは、１３ｍｍのＦｌｕｒｏｔｅｃ（登録商標）ストッパー及び１３ｍｍのアルミニウムシールを備えた５ｍＬの１型ガラスバイアルで構成される。代替的な実施形態において、容器閉鎖システムは、３ｍＬの１型ガラスバイアルで構成される。
【０３４６】
各バイアルは、注入用の塩化ナトリウム溶液（０．９％ｗ／ｖ）での再構成後の皮下投与を対象とした、凍結乾燥されたリポソーム製剤を提供する。
【０３４７】
上記のリポソームワクチン製剤も、最大９Ｌスケールのバッチまで拡大される。バッチ定式は以下の通りである：
【０３４８】
【表３】
2014518841.tif 000065
【０３４９】
図２は、上記の手順からのリポソームワクチンの典型的な画像を示す。図２Ａは、前記バッチ例からガラス化され処方されたリポソームの調剤されたリポソームの透過型電子顕微鏡写真を示す。図２Ｂは、光学顕微鏡法の下で、食塩水内で再構成された前記リポソームワクチンの画像を示す。図２Ｃは、電子顕微鏡法の下で前記再構成されたリポソームワクチンの凍結割断された画像を示す。
【０３５０】
〈実施例２：実施例１のリポソームワクチン製剤による、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋のＴリンパ球におけるＩＦＮγの導入〉
Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊの雌のマウスは、５μｇ／マウス、２５μｇ／マウス又は１００μｇ／マウスの濃度の実施例１のリポソームワクチン製剤を注入された。対照群は、５０μｇ／マウスでの塩水処置及びＰＥＴリピドＡだけの処置を含む。予防接種の後、脾細胞はＣ５７Ｂｌ／６マウスから単離され、配列番号２を有するＭＵＣ１ペプチド、配列ＣＴＲＰＮＮＮＴＲＫＳＩＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫＩＧＮＭＲＱＡＳ＊Ｓ＊Ｌ（配列番号２０、Ｓ＊は脂質付加されたセリン）を有する負の対照ペプチドＢＰ−１−１０９、生理食塩水ビヒクル又は無処置で、４８時間エキソビボで刺激される。
【０３５１】
図３は、様々な抗原でエキソビボで刺激されたＣＤ４−／ＣＤ８＋Ｔリンパ球（図３Ａ）又はＣＤ４＋／ＣＤ８−Ｔリンパ球（図３Ｂ）における細胞内ＩＦＮγ濃度を示す。データは、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋細胞集団の合計に対する％の陽性ＩＦＮγ細胞として示される。エキソビボでＭＵＣ１ペプチドで惹起された（ｃｈａｌｌｅｎｇｅｄ  ｗｉｔｈ）とき、実施例１のリポソームワクチン製剤の様々な濃度でインビボ処置を受けるマウスからのＴ細胞は、塩水処置に対して統計的に有意義な（ｐ＜０．０５）ＩＦＮγの誘発があった。
【０３５２】
〈実施例３：実施例１のリポソームワクチン製剤の体液性応答反応を検証するためのインビボ動物モデル〉
Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊマウスは、ワクチンの３つの異なる濃度（５、２５及び１００μＧ）で、実施例１のリポソームワクチン製剤を注入された。５０μｇの投与量のＰＥＴリピドＡ及び食塩水は負の対照として用いられた。マウスからの血清は分離され、続いて連続的に希釈され、配列番号２を有するＭＵＣ１抗原で覆われたプレート上で培養された。血清との培養後、プレートは洗浄され、標識化抗マウスＩｇＧ特異抗体が加えられた。前記抗体は洗い流され、前記マウスＩｇＧはＥＬＩＳＡリーダーによって測定された。図４におけるＥＬＩＳＡ分析は、３つの投与量群すべて、すなわち５μｇ／マウス、２５μｇ／マウス、１００μｇ／マウスにおいて前記抗体レベルが類似していたことを示す。対照的に、生理食塩水及びＰＥＴリピドＡで処置された動物は抗体反応を示さなかった。
【０３５３】
同様の実験において、マウスは、実施例１のリポソームワクチン製剤又は非グリコシル化ＭＵＣ１ワクチン（ワクチンＡ）を注入された。未感作な基は、負の対照として使用された。血清は分離され、希釈され、配列番号２を有するグリコシル化したＭＵＣ１ペプチド、又は非グリコシル化ＭＵＣ１ペプチドＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＫＧ（配列番号２１）のいずれかと培養される。図５は、例１のリポソームワクチンで処置されたマウス又はワクチンＡで処置されたマウスのいずれかの非グリコシル化ペプチドに結合しているＩｇＧ（下）に対する、例１のリポソームワクチンで処置されたマウス又はワクチンＡで処置されたマウスのいずれかのグリコシル化したペプチドに結合しているＩｇＧ（上）の比較を示す。
【０３５４】
〈実施例４：トランスジェニックヒトＭＵＣ１動物モデルにおける実施例１のリポソームワクチン製剤のＩＦＮγ及び抗体の導入〉
ヒトＭＵＣ１を発現するトランスジェニック（Ｔｇ）マウスは、Ｐｅａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ５２：１９５４−１９６０，  １９９２．に従って得られる。ＭＵＣ１  Ｔｇマウスは、ヒト内在性ＭＵＣ１発現に似ているパターン又はレベルのヒトＭＵＣ１導入遺伝子を発現した。
【０３５５】
以下の実験において、ＭＵＣ１  Ｔｇマウス（Ｎ＝５／群）は、（１）シクロホスファミドで前処置され（３日目）、８週間毎週実施例１のリポソームワクチン製剤の５、２５又は１００μＧで処置され、（２）生理用食塩水で処理され、又は（３）５０μｇ  ＰＥＴリピドＡアジュバントだけのいずれかであった。処置セッションの終わりに、マウスはＥＬＩＳＡによってＩＦＮγ導入によるＴ細胞反応及び抗体反応について評価された。
【０３５６】
ＩＦＮγ導入：プール（ｐｏｏｌｅｄ）脾細胞は、塩水処理された、ＰＥＴリピドＡで処置された、及びリポソームワクチン製剤で処置された、ＭＵＣ１  Ｔｇマウスの群のそれぞれから分離され、配列番号２を有するＭＵＣ１ペプチド、配列：
ＣＴＲＰＮＮＮＴＲＫＳＩＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫＩＧＮＭＲＱＡＳ＊Ｓ＊Ｌ（配列番号２０、Ｓ＊は脂質付加されたセリン）を有している負の対照ペプチドＢＰ−１−１０９、又はビヒクルで４８時間エキソビボで刺激される。エキソビボ処置後のＩＦＮγ発現又は導入は、Ｌｕｍｉｎｅｘ技術を用いて細胞培養上清み内で測定された（図６Ａ）。３つの濃度すべての実施例１のリポソームワクチン製剤で免疫をもつトランスジェニック動物は、配列番号２を有するＭＵＣ１ペプチドでのエキソビボ刺激に対してＩＦＮγ反応を示した。
【０３５７】
抗体導入：血清は上記の処置動物から集められ、先の実施例に類似する配列番号２を有するＭＵＣ１ペプチドでのＥＬＩＳＡ分析にさらされた。図６Ｂは、実施例１のリポソームワクチン製剤の５、２５又は１００μｇの予防摂取を受けた、あるいはリポソームＰＥＴリピドＡ又は生理食塩水の５０μｇで処置されたマウスからのＩｇＧレベルの合計を示す。図６Ｃは、実施例１のリポソームワクチン製剤の２５μｇで予防摂取を受けたマウスからのＩｇＧアイソタイプを示す。図６Ｂ及び図６Ｃにおけるプロットデータは、５匹の個々のマウスからの平均血清ＩｇＧレベルを示す。
【０３５８】
〈実施例５：実施例１のリポソームワクチン製剤及びヒト腫瘍ＭＵＣ１のための抗体特異性〉
Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊマウスは、実施例１のリポソームワクチン製剤の１００μｇで予防摂取を受けた。処置マウス又は未感作な動物からの血清は、Ｂ１６又はＢ１６−ＭＵＣ１マウス・メラノーマ細胞株のいずれかのＦＡＣＳ分析に用いられた。抗ＭＵＣ１抗体ＳＭ３（ＳＣＢＴＳＣ−５３３８１）は、低グリコシル化ＭＵＣ１のために正の対照として用いられた。図７Ａは、実施例１のリポソームワクチン製剤により免疫をもつマウスからのＩｇＧが選択的に細胞ＭＵＣ１に結合することを示す。
【０３５９】
同様の実験において、ヒト胸部上皮細胞及びＴ４７Ｄ乳癌細胞は、実施例１のリポソームワクチン製剤の１００μｇ又はＰＥＴリピドＡの５０μｇのいずれかにより免疫を持った、ヒトＭＵＣ１トランスジェニックマウスからの血清を用いて染色された。細胞の染色は、蛍光共役抗マウス二次抗体を用いたフローサイメトリーにより検出された。図７Ｂは、実施例１のリポソームワクチン製剤により免疫をもつマウスからのそのＩｇＧが、正常なＭＵＣ１と腫瘍ＭＵＣ１を識別することを示す。ＳＭ３は、低グリコシル化されたＭＵＣ１のために正の対照として再度用いられ、とＭＵＣ１モノクローナル抗体Ｂ２７．２９及び幹細胞（幹細胞技術）は完全にグリコシル化した正常ＭＵＣ１のために正の対照として用いられた。
【０３６０】
〈実施例６：実施例１のリポソームワクチン製剤の腫瘍成長に対する効果〉
Ｃ５７Ｂｌ／６マウスは、隔週のスケジュールで、生理用食塩水ビヒクル、５０μｇのリポソームＰＥＴリピドＡ、又は−４２日目から始まる実施例１のリポソームワクチン製剤の５μｇを用いて処置された。０日目には、マウスが、２×１０６  Ｂ１６−ＭＵＣ１、０．５×１０６  Ｂ１６、又は２×１０６  ＭＣ３８−ＭＵＣ１腫瘍細胞で誘発され、その後＋３日目及び＋１７日目に追加の予防接種を受ける。腫瘍成長は週に２度記録された。
【０３６１】
Ｂ１６−ＭＵＣ１モデルでは、実施例１ワクチン製剤で処置された動物は、４４日目時点で腫瘍がなかった。試験の終わりの実施例１ワクチン製剤群において、９／１２匹の動物に腫瘍がなかった。対照的に、生理食塩水及びＰＥＴリピドＡの群は類似した腫瘍成長曲線を示した。これらの２つの群の平均腫瘍容積は、１０日目までに約２００ｍｍ３であった。２４日目までの、平均腫瘍容積は、食塩水及びＰＥＴリピドＡの群について約１２００ｍｍ３である。
【０３６２】
ＭＣ３８−ＭＵＣ１モデルでは、試験の終わりの実施例１ワクチン製剤群において、３／１２匹の動物に腫瘍がなかった。生理食塩水及びＰＥＴリピドＡの群と比較して、腫瘍成長も減少した。３２日目までで、ＰＥＴリピドＡ群については約１２００ｍｍ３及び生理食塩水の群については約１７００ｍｍ３であったのと比較して、実施例１のワクチン製剤群についての平均腫瘍容積は約１２０ｍｍ３であった。
【０３６３】
腫瘍がＭＵＣ１を示さないＢ１６モデルにおいては、腫瘍成長は３つの群すべてに類似していた。
【０３６４】
〈実施例７：肺非小細胞癌の免疫療法に関するリポソームワクチン製剤の効果を検証する臨床試験〉
これは、病期ＩＩＩＢ又は病期ＩＶの肺非小細胞癌（ＮＳＣＬＣ）患者の処置に関する、特異的活動免疫療法（ａｃｔｉｖｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ）実施例１のリポソームワクチンの安全性及び有効性を検証するための、前向き非盲検、対照、無作為化試験である。適格であるために、試験に参加する患者は、第一選択治療（化学療法のみ、又は化学療法及び放射線療法）の後に安定した疾患又は臨床反応のいずれかを実証し、０、１又は２のＥＣＯＧパフォーマンスステータスを示す。３週間の休薬期間に続いて、患者は、疾患状態（病期ＩＩＩＢの局所領域の疾患、又は悪性胸水を伴う病期ＩＩＩＢ及び病期ＩＶ）によって分類され、最良の支持療法（ＢＳＣ）とワクチン免疫療法、又はＢＳＣのみのいずれかに無作為化される。
【０３６５】
実施例１のリポソームワクチン１，０００μｇでの８週の皮下予防摂取は、第０、１、２、３、４、５、６及び７週目に投与される。
【０３６６】
主要評価項目は、実施例１のリポソームワクチンの安全性プロフィールの文書化、及び試験の２つのアームにおける患者の生存率の比較である。副次評価項目は、実施例１のリポソームワクチンによって誘発された免疫反応を測定すること、及び免疫療法を受ける患者のためのクォリティーオブライフを評価することである。
【０３６７】
〈実施例８：進行性固形腫瘍の患者におけるリポソームワクチン製剤の最大耐性用量及び／又は推奨用量を検証するための臨床試験〉
これは、肺、肺非小細胞、卵巣、結直腸、胃、前立腺、膵臓、及び腎臓の細胞癌を含むがこれらに限定されないＭＵＣ１抗原の発現に関する組織診があり、過去に病期３又は４の固形腫瘍を処置された患者における、実施例１のリポソームワクチンによる反復投与予防接種の安全性及び免疫原性を評価するための、非盲検、第Ｉ相投与量漸増試験である。
【０３６８】
第１部は、８週間にわたって隔週１回（Ｑ２Ｗ）（合計４回分の投与量）又は８週間にわたって毎週１回（ＱＷ）（合計８回分の投与量）皮下的に投与される実施例１のリポソームワクチンの漸増する投与量レベルを評価し、試験の第２部のさらなる評価のために、各投与スケジュールの最大耐性投与量（ＭＴＤ）及び／又は推奨投与量（ＲＤ）を同定するため３＋３投与量漸増デザインを使用する。第２部は、それぞれ１５人の患者のコホート内において、Ｑ２Ｗ及びＱＷ  ＭＴＤ／ＲＤで８週間にわたり投与された実施例１のリポソームワクチンの安全性、免疫性、及び潜在的抗腫瘍活性を評価する。８週間の投与期間の後、患者は、第２０週まで安全性、免疫応答及び腫瘍反応について評価される。
【０３６９】
試験対象集団は、ＭＵＣ１の発現に関連する組織学をもち、過去に病期３又は４の固形腫瘍を処置された患者を含む。
【０３７０】
包含基準：
・同意時の年齢が１８歳から７０歳
・治験責任医師の判断により、少なくとも６か月の平均余命
・組織学的に確認された、胸、肺小細胞、卵巣、結直腸、胃、前立腺、膵臓、又は腎細胞癌、又は他の腫瘍の種類
・局所的に進行又は転移した疾患のための、化学療法、標的療法、又は免疫療法を含む全身療法の少なくとも１つを受けた後に、持続性、再発性又は進行性の疾患の証拠
・臨床病期３又は４の疾患
・ＥＣＯＧが０又は１
・充分な血液、腎臓、膵臓の機能のパラメーター
【０３７１】
除外基準：
・試験薬投与の４週間以内に任意の全身化学療法、放射線、又は実験的薬剤での処置を受けた
・自己免疫疾患、動脈炎又は血管炎の既知の病歴を有しているか、免疫欠損症（例えば、細胞性免疫不全、低ガンマグロブリン血症又は異ガンマグロブリン血症）が認識された
・慢性的なステロイド又は免疫抑制両方を要する任意の既存の病状
・ＨＩＶ、Ｂ型肺炎、又はＣ型肺炎陽性
・任意の他のワクチンの受け取り＜試験参加の４週間前
【０３７２】
投与の様式：すべての被検体は、−３日目にシクロホスファミド２５０ｍｇ／ｍ２の初期の静脈注入を受ける。実施例１のリポソームワクチンは、１コホート割付ごとに１日目から皮下的に投与される。すべての患者は、４つの個別注入部位への４回の個別注入（右上腕又はもも、左上腕又はもも、及び右と左の下腹部の各々に１注入）として投与される、実施例１のリポソームワクチンの用量を受ける。開始投与量は、１２５μｇのＰＥＴリピドＡアジュバントを含めたリポソームワクチンの２５０μｇである（２：１の比率）。追加の投与量レベルは、２：１の比率でアジュバントを含む、リポソームワクチンの５００及び１０００μｇを含む。投与量レベルは投与量倍増デザインを用いて選択される。ＭＴＤが１０００μｇ未満である場合、中間の投与量レベル７５０μｇが考慮される。
【０３７３】
８週間の投与についての第２部の評価および判断では、免疫反応評価基準は、ＩＦＮ−ガンマについて、実施例１のリポソームワクチンに特異的なＥＬＩＳＡ及びＭＵＣ−１特異的ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを用いた、ＭＵＣ−１特異抗体の血清力価を含む。免疫反応評価基準は、限定されないが、以下のものを含む：循環ＣＤ４及びＣＤ８Ｔリンパ球の割合、循環脊髄性免疫抑制細胞の母集団の割合、Ｔ細胞サイトカインのレベル、実施例１のリポソームワクチンに対するＩｇＧ抗体とＩｇＭ抗体の相対的な割合、及び循環サイトカインのレベル。腫瘍反応はＲＥＣＩＳＴ１．１に定義されるように判断される。
【０３７４】
本発明の好ましい実施形態が、本明細書中に示され記載されているがこのような実施形態はほんの一例として提供されることは問う業者に明白である。本発明から逸脱することなく、多数の変更、変化、及び置換がなされることが当業者に理解される。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々は代替が、本発明を実行する際に利用され得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義するものであり、これらの特許請求の範囲及びそれらの同等物の範囲内の方法及び構造が、それによって包含されることが意図される。
【図２Ａ】
2014518841.tif 000076
【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図１】
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【図３Ａ】
2014518841.tif 000080
【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
2014518841.tif 000083
【図６Ａ】
2014518841.tif 000084
【図６Ｂ】
2014518841.tif 000085
【図６Ｃ】
2014518841.tif 000086
【図７Ａ】
2014518841.tif 000087
【図７Ｂ】
2014518841.tif 000088
【国際調査報告】
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