(57)【要約】  【解決手段】  着床前因子（ＰＩＦ）は細胞内損傷を治療するために使用されることができる。本発明の態様は、細胞内損傷を治療するための方法を対象とするものであり、該方法は、それを必要とする対象にＰＩＦを投与する工程を有する。いくつかの態様は、細胞内損傷応答におけるサイトカイン分泌を増大させるための方法を対象とすることができ、該方法はそれを必要とする対象にＰＩＦを投与する工程を有する。該細胞内損傷は、リステリア・モノサイトゲネス感染、マラリア、ライム病、心疾患、十二指腸潰瘍、アテローム性動脈硬化、腹膜炎、または結核によって生じることがある。いくつかの態様において、結核を治療するための方法が開示され、該方法は、それを必要とする対象にＰＩＦを投与する工程を有する。いくつかの実施形態において、アテローム性動脈硬化を治療するための方法が開示され、該方法は、それを必要とする対象にＰＩＦを投与する工程を有する。いくつかの態様において、腹膜炎を治療するための方法が開示され、該方法は、それを必要とする対象にＰＩＦを投与する工程を有する。  【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内損傷を治療する方法であって、それを必要とする対象に配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４、配列ＩＤ番号５、配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、または配列ＩＤ番号８から選択されるＰＩＦペプチドの治療的有効量を投与する工程を有する、方法。
【請求項２】
請求項１記載の方法において、さらに、カリウムチャネル阻害剤を投与する工程を有する、方法。
【請求項３】
請求項３記載の方法において、前記カリウムチャネル阻害剤はＫｖｌ．３阻害剤である、方法。
【請求項４】
請求項３記載の方法において、前記カリウムチャネル阻害剤はＩＦＮγである、方法。
【請求項５】
請求項１記載の方法において、前記細胞内損傷は、リステリア・モノサイトゲネス感染、ライム病、心疾患、十二指腸潰瘍、アテローム性動脈硬化、または結核から選択される疾患によって生じるものである、方法。
【請求項６】
請求項１記載の方法において、前記治療は、さらに、前記細胞内損傷に応じてサイトカイン分泌を増大させる工程を有するものである、方法。
【請求項７】
細胞内感染を治療する方法であって、それを必要とする対象に配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４、配列ＩＤ番号５、配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、または配列ＩＤ番号８から選択されるＰＩＦペプチドの治療的有効量を投与する工程を有する、方法。
【請求項８】
請求項７記載の方法において、さらに、カリウムチャネル阻害剤を投与する工程を有する、方法。
【請求項９】
請求項８記載の方法において、前記カリウムチャネル阻害剤はＫｖｌ．３阻害剤である、方法。
【請求項１０】
請求項８記載の方法において、前記カリウムチャネル阻害剤はＩＦＮγである、方法。
【請求項１１】
請求項７記載の方法において、前記細胞内感染は、リステリア・モノサイトゲネス、ヒト型結核菌、ヘリコバクター・ピロリ、ボレリア・ブルグドフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ  ｓｅｎｓｕ  ｓｔｒｉｃｔｏ）、ボレリア・アフゼリ、およびボレリア・ガリニから選択されるものである、方法。
【請求項１２】
カリウムチャネルを調節する方法であって、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４、配列ＩＤ番号５、配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、および配列ＩＤ番号８から選択されるＰＩＦペプチドの治療的有効量を投与する工程を有する、方法。
【請求項１３】
請求項１２記載の方法において、前記カリウムチャネルはＫｖｌ．３チャネルである、方法。
【請求項１４】
請求項１２記載の方法において、さらに、カリウムチャネル阻害剤を投与する工程を有する、方法。
【請求項１５】
請求項１４記載の方法において、前記カリウムチャネル阻害剤はＫｖｌ．３阻害剤である、方法。
【請求項１６】
請求項１４記載の方法において、前記カリウムチャネル阻害剤はＩＦＮγである、方法。
【請求項１７】
結核を治療する方法であって、それを必要とする対象に配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４、配列ＩＤ番号５、配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、または配列ＩＤ番号８から選択されるＰＩＦペプチドの治療的有効量を投与する工程を有する、方法。
【請求項１８】
請求項１７記載の方法において、さらに、カリウムチャネル阻害剤を投与する工程を有する、方法。
【請求項１９】
請求項１８記載の方法において、前記カリウムチャネル阻害剤はＫｖｌ．３阻害剤である、方法。
【請求項２０】
請求項１８記載の方法において、前記カリウムチャネル阻害剤はＩＦＮγである、方法。
【請求項２１】
請求項１７記載の方法において、前記結核はヒト型結核菌感染によるものであることができる、方法。
【請求項２２】
請求項１７記載の方法において、前記治療は、さらに、ヒト型結核菌感染に応じてサイトカイン分泌を増大させる工程を有するものである、方法。
【請求項２３】
結核菌の播種を減少させる方法であって、それを必要とする対象に配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４、配列ＩＤ番号５、配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、および配列ＩＤ番号８から選択されるＰＩＦペプチドの治療的有効量を投与する工程を有する、方法。
【請求項２４】
請求項２３記載の方法において、さらに、カリウムチャネル阻害剤を投与する工程を有する、方法。
【請求項２５】
請求項２４記載の方法において、前記カリウムチャネル阻害剤はＫｖｌ．３である、方法。
【請求項２６】
請求項２４記載の方法において、前記カリウムチャネル阻害剤はＩＦＮγである、方法。
【請求項２７】
アテローム性動脈硬化を治療する方法であって、それを必要とする対象に配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４、配列ＩＤ番号５、配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、または配列ＩＤ番号８から選択されるＰＩＦペプチドの治療的有効量を投与する工程を有する、方法。
【請求項２８】
請求項２７記載の方法において、さらに、カリウムチャネル阻害剤を投与する工程を有する、方法。
【請求項２９】
請求項２８記載の方法において、前記カリウムチャネル阻害剤はＫｖｌ．３阻害剤である、方法。
【請求項３０】
請求項２８記載の方法において、前記カリウムチャネル阻害剤はＩＦＮγである、方法。
【請求項３１】
請求項２７記載の方法において、前記治療はプラ−クを減少させる工程、単球タンパク質を減少させる工程、脂質を減少させる工程、サイトカインを減少させる工程、およびそれらの組み合わせを有するものである、方法。
【請求項３２】
請求項３１記載の方法において、前記減少させる工程は大動脈弓、大動脈根、およびそれらの組み合わせにおいて達成されるものである、方法。
【請求項３３】
請求項３１記載の方法において、前記単球タンパク質は、血管細胞接着分子、単球走化性タンパク質、および分化クラスターの１若しくはそれ以上から選択されることができるものである、方法。
【請求項３４】
請求項３１記載の方法において、前記サイトカインは、インターロイキン１２、サブユニットベータ、およびインターフェロンガンマの１若しくはそれ以上から選択されることができるものである、方法。
【請求項３５】
請求項３１記載の方法において、循環脂質のレベルは実質的に影響しないものである、方法。
【請求項３６】
脂質を減少させる方法であって、それを必要とする対象に配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４、配列ＩＤ番号５、配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、または配列ＩＤ番号８から選択されるＰＩＦペプチドの治療的有効量を投与する工程を有する、方法。
【請求項３７】
請求項３６記載の方法において、さらに、カリウムチャネル阻害剤を投与する工程を有する、方法。
【請求項３８】
請求項３７記載の方法において、前記カリウムチャネル阻害剤はＫｖｌ．３阻害剤である、方法。
【請求項３９】
請求項３７記載の方法において、前記カリウムチャネル阻害剤はＩＦＮγである、方法。
【請求項４０】
請求項３６記載の方法において、前記治療はプラ−クを減少させる工程、単球タンパク質を減少させる工程、脂質を減少させる工程、サイトカインを減少させる工程、およびそれらの組み合わせを有するものである、方法。
【請求項４１】
請求項４０記載の方法において、前記減少させる工程は大動脈弓、大動脈根、およびそれらの組み合わせにおいて達成されるものである、方法。
【請求項４２】
請求項４０記載の方法において、前記単球タンパク質は血管細胞接着分子、単球走化性タンパク質、および分化クラスターの１若しくはそれ以上から選択されることができるものである、方法。
【請求項４３】
請求項４０記載の方法において、前記サイトカインは、インターロイキン１２、サブユニットベータ、およびインターフェロンガンマの１若しくはそれ以上から選択されることができるものである、方法。
【請求項４４】
腹膜炎を治療する方法であって、それを必要とする対象に配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４、配列ＩＤ番号５、配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、または配列ＩＤ番号８から選択されるＰＩＦペプチドの治療的有効量を投与する工程を有する、方法。
【請求項４５】
請求項４４記載の方法において、さらに、カリウムチャネル阻害剤を投与する工程を有する、方法。
【請求項４６】
請求項４５記載の方法において、前記カリウムチャネル阻害剤はＫｖｌ．３阻害剤である、方法。
【請求項４７】
請求項４５記載の方法において、前記カリウムチャネル阻害剤はＩＦＮγである、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、３５  Ｕ．Ｓ．Ｃ  §１１９のもとに、２０１１年３月２日に提出された米国仮特許出願第６１／４４８，４４６、「細胞内損傷の治療のための組成物および方法」に対して優先権を主張するものである。該開示は参照によって本明細書に組み込まれる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００２】
本明細書における実施形態は、細胞内損傷の治療における使用のための着床前因子（ＰＩＦ）を対象とするものである。実施形態は、細胞内損傷を治療するための方法を対象とするものであり、該方法はそれを必要とする対象にＰＩＦペプチドを投与する工程を有するものである。いくつかの実施形態において、ＰＩＦペプチドは、治療有効量で投与される。いくつかの実施形態において、該細胞損傷は病気によって生じるものであることができる。いくつかの実施形態において、該病気は、細胞内細菌によって生じるものである。いくつかの実施形態において、細胞内細菌は、リステリア・モノサイトゲネス、マイコバクテリウム結核菌、ヘリコバクター・ピロリ、ボレリア・ブルグドフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ  ｓｅｎｓｕ  ｓｔｒｉｃｔｏ）、ボレリア・アフゼリおよびボレリア・ガリニから選択されることができる。さらなる実施形態において、該病気は、リステリア、マラリア、ライム病、心疾患、十二指腸潰瘍、アテローム性動脈硬化、腹膜炎、および結核から選択されることができる。いくつかの実施形態において、細胞内損傷を治療するための方法はさらにカリウムチャネル阻害剤を投与する工程を有する。いくつかの実施形態において、該カリウムチャネル阻害剤は、Ｋｖ１．３阻害剤であることができる。いくつかの実施形態において、該カリウムチャネル阻害剤はＩＦＮγであることができる。
【０００３】
実施形態は結核を治療するための方法を対象とするものであり、該方法はＰＩＦペプチドを投与する工程を有する。いくつかの実施形態において、ＰＩＦはマイコバクテリウム結核菌（Ｍｔｂ）感染マクロファージによって誘発された局所免疫抑制を中和する、および／またはＭｔｂ感染に対する免疫応答のホストを増大させることができる。さらなる実施形態において、ＰＩＦは結核によって生じた細胞内損傷を予防することができる。いくつかの実施形態において、対象は結核の危険性がある。いくつかの実施形態において、該方法はさらに他の抗結核剤と組み合わせてＰＩＦを投与する工程を有する。
【０００４】
実施形態は、結核菌の播種を減少させるための方法を対象とするものであり、該方法はそれを必要とする対象にＰＩＦを投与する工程を有する。いくつかの実施形態において、該ＰＩＦペプチドは治療有効量において投与される。いくつかの実施形態において、該方法はさらに他の抗結核剤と組み合わせて投与する工程を有することができる。
【０００５】
実施形態は、細胞内損傷における炎症を防ぐための方法を対象とするものであり、該方法はそれを必要とする対象にＰＩＦペプチドを投与する工程を有する。いくつかの実施形態は、細胞内損傷応答におけるサイトカイン分泌の増大のための方法を記載するものであり、該方法はそれを必要とする対象にＰＩＦペプチドを投与する工程を有する。いくつかの実施形態において、該ＰＩＦは治療有効量で投与される。いくつかの実施形態において、細胞内損傷は病気によって生じることができる。いくつかの実施形態において、該病気は細胞内細菌によって生じる。さらなる実施形態において、該病気は、リステリア・モノサイトゲネス感染、マラリア、ライム病、心疾患、糖尿病、十二指腸潰瘍、アテローム性動脈硬化および結核から選択されることができる。いくつかの実施形態において、細胞内損傷における炎症を防ぐための方法がさらにカリウムチャネル阻害剤を投与する工程を有する。いくつかの実施形態において、該カリウムチャネル阻害剤は、Ｋｖ１．３阻害剤であることができる。いくつかの実施形態において、該カリウムチャネル阻害剤は、ＩＦＮγであることができる。
【０００６】
実施形態は、カリウムチャネルを調節するための方法を対象とし、該方法はＰＩＦペプチドを投与する工程を有する。いくつかの実施形態において、該カリウムチャネルはＫｖ１．３である。いくつかの実施形態において、該調節する工程はカリウムチャネルの活性をブロックする工程を有する。いくつかの実施形態において、ＰＩＦペプチドは該チャネルに結合することによって該カリウムチャネルを調節する。いくつかの実施形態において、該ＰＩＦは治療的有効量において投与される。
【０００７】
実施形態は、対象におけるアテローム性動脈硬化の治療の方法に対象とするものであり、該方法はＰＩＦペプチドを投与する工程を有する。いくつかの実施形態において、ＰＩＦの治療的有効量が投与される。いくつかの実施形態において、対象はアテローム性動脈硬化と診断される。いくつかの実施形態において、対象はアテローム性動脈硬化になる危険がある。いくつかの実施形態において、当該方法は、他の抗アテローム性動脈硬化剤との組み合わせにおいてＰＩＦを投与する工程をさらに有することができる。
【０００８】
いくつかの実施形態において、ＰＩＦは大動脈根におけるプラークを減らすことによってアテローム性動脈硬化を治療することができる。いくつかの実施形態において、ＰＩＦは大動脈弓におけるプラークを減らすことによってアテローム性動脈硬化を治療することができる。いくつかの実施形態において、ＰＩＦは大動脈弓における単球タンパク質を減らすことによってアテローム性動脈硬化を治療することができる。さらなる実施形態において、当該単球タンパク質は、血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ−１）、単球走化性タンパク質（ＭＣＰ−１）および分化クラスター（ＣＤ６８）から選択されることができる。いくつかの実施形態において、ＰＩＦは大動脈根におけるプラークを減らすことによってアテローム性動脈硬化を治療することができる。いくつかの実施形態において、ＰＩＦは大動脈根における単球タンパク質を減らすことによってアテローム性動脈硬化を治療することができる。さらなる実施形態において、当該単球タンパク質は、血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ−１）、単球走化性タンパク質（ＭＣＰ−１）および分化クラスター（ＣＤ６８）から選択されることができる。いくつかの実施形態において、ＰＩＦは大動脈根における脂質を減らすことによってアテローム性動脈硬化を治療することができる。いくつかの実施形態において、ＰＩＦはＴＨＰ−１細胞におけるサイトカインを減らすことによってアテローム性動脈硬化を治療することができる。さらなる実施形態において、当該サイトカインはインターロイキン１２、サブユニットベータ（ＩＬ−１２ｂ）およびインターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）から選択されることができる。大動脈上のプラーク減少における効果は、循環脂質に影響なく直接的である。
【０００９】
実施形態は、ＰＩＦペプチドを投与する工程を有する、対象における腹膜炎の治療の方法に向けられる。いくつかの実施形態において、ＰＩＦの治療的有効量が投与される。いくつかの実施形態において、対象は腹膜炎と診断される。いくつかの実施形態においては、対象は腹膜炎になる危険がある。いくつかの実施形態において、当該方法は他の抗腹膜炎剤との組み合わせにおいてＰＩＦを投与する工程をさらに有することができる。
【００１０】
実施形態において、当該ＰＩＦペプチドは配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４、配列ＩＤ番号５、配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、または配列ＩＤ番号から選択されることができる。実施形態において、当該ＰＩＦペプチドは配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３および配列ＩＤ番号４から選択されることができる。実施形態において、当該ＰＩＦペプチドは配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２および配列ＩＤ番号３から選択されることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
この特許の提出は、少なくとも１つのカラーで作成された写真または図面を含む。カラー図面（ｓ）または写真を有するこの特許のコピーは、要請および必要な料金の支払いに応じて特許商標局によって提供される。
【００１２】
本発明の性質および利点のより完全な理解のために、添付の図面に関連した以下の詳細な説明が参照されなければならない。
【図１】図１（Ａ）は、倍率２０００倍でＦＩＴＣ−ＰＩＦ結合（蛍光顕微鏡法）を示す拡大された免疫細胞；該取り込みは細胞内に見える、を示す。（Ｂ）は倍率４０倍でナイーブＰＢＭＣ（ｓ）に結合する最小のＦＩＴＣ−ＰＩＦ（位相差顕微鏡法）を示す。（Ｃ）ＦＩＴＣ−ＰＩＦが全ての非刺激ＣＤ１４＋細胞（右上のパネル）を結合すること；非刺激ＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞（左下および右下パネル）への最小結合を示す。（Ｄ）非染色陰性制御および（Ｅ）テストヒト血液がＲＢＣ溶解手順を受け、１５分間ＰＩＦ−ＦＩＴＣ（１μＭ）またはＰＢＳで培養されたことを示す。結果はＰＩＦ−ＦＩＴＣがＦＳＣ／ＳＳＣに基づいて顆粒白血球集団に主に結合することを示した。（Ｆ）ヒトの全血は、ＰＩＦ−ＦＩＴＣ＋ＣＤ６６ｂ（上のグラフ）またはＣＤ１４（下のグラフ）によって培養された。結果は、ＰＩＦ−ＦＩＴＣがＣＤ１４陽性単球に続いてＣＤ６６ｂ陽性顆粒白血球に強力に結合することを示した。（Ｇ）１００μＭのＰＩＦ−ＦＩＴＣ（５０μｌ）（上列）が頸静脈を介して２５ｇＣ５７／ＢＬ６に注射された。マウスは注射の５分後に選別された。血液はヘパリン管の下大静脈によって集められた。赤血球は溶解緩衝液によって溶解した。細胞はＦＡＣＳバッファーに再懸濁され、ＣＤ１４−ＰＥ（中列）およびＣＤ４５−ＡＰＣ（下列）のために着色された。結果は、顆粒白血球（Ｐ３）へのＰＩＦ−ＦＩＴＣの結合を示し、これらの顆粒白血球がＣＤ１４およびＣＤ４５マーカーを有することができることを示した。（Ｈ）ＰＩＦと相互作用する細胞タイプを示す。マウス血液および骨髄細胞は、ＰＩＦ−ＦＩＴＣ複合体および免疫細胞サブ集団とともに１時間かけて染色された。ＦＡＣＳ分析は、ＰＩＦがＣＤ１１ｂ＋単球と好適に相互作用することが明らかにした。（Ｉ）ＣＤ１４＋細胞へのＦＩＴＣ−ＰＩＦの用量依存性結合、ＦＩＴＣ−ＰＩＦの１０倍高い濃度ですら、ＣＤ８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ５６＋（ＮＫ細胞）およびＣＤ１９＋細胞の不完全な飽和で結合した。結果は細胞系統につき４〜１０のサンプルの平均値である。
【図２】図２は（Ａ）ＰＩＦがＭＬＲ分析において用量依存方法における異種リンパ球増殖を減らすことを示す。マウス脾細胞は混合リンパ球反応（ＭＬＲ）において使用された。Ｂａｌｂ／ｃ細胞は、４日間照射されたＣ５７／Ｂｌ細胞の存在下で培養された。ＰＩＦの異なる濃度が培地に加えられた。細胞増殖はＨ３チミジン取り込みアッセイによってテストされた。ＰＩＦは用量依存方法における細胞増殖を減らすことがわかった。陽性制御（Ｐｏｓ．）、１５０ｎＭおよび２００ｎＭのＰＩＦの差異は、重要である（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ：Ｐ≦０．０３）。一つの代表的な実験が４つの実行から示される。（Ｂ）ＰＩＦ治療をうけているＣＤ１１ｂ＋細胞が、Ｔ細胞増殖を阻害するとわかった。骨髄から派生した単球は、２００ｎＭのＰＩＦの存在下で１０日間培養において生育し、その後、４日間Ｔ細胞と共培養された。抗−ＣＤ３抗体はＴ細胞活性化のため培地に加えられた。細胞増殖はＨ３チミジン取り込みによってテストされた。ＰＩＦ治療を受けている単球は増殖を減少させたが、それを遮断することはなく、それはおそらくＰＩＦの効果が調節的であり、阻害的ではないからである。（Ｃ）ＰＩＦはＣＤ１１ｂ＋細胞におけるＢ７−Ｈ１調節タンパク質をアップ調節する。骨髄から派生した単球は、２００ｎＭのＰＩＦの存在下または非存在下で１０日間培養において生育した。７日目、１００ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγが加えられた。１０日後、細胞は抗Ｂ７−Ｈ１抗体を使用してＦＡＣＳ分析によって分析された。（Ｄ）マウス・マクロファージはＧＭ−ＣＳＦと１０日間培養された。ＩＦＮ−γは、細胞活性化のため７日目に培養組織に加えられた。ｓＰＩＦが０または７日目に培地に加えられた場合、Ｂ７−Ｈ１発現は顕著に増加した。Ｂ７−Ｈ１が新しく定義された抑制性Ｂ７ファミリー分子の一つであることにより、これは関連する。ＩＦＮガンマが強力にＡＰＣ上のＢ７−Ｈ１発現を刺激することは既知である。（Ｅ）ＰＩＦはＴＨＰ−１細胞におけるＶＣＡＭ−１、ＩＬ−１２ｂおよびＩＦＮｇを減少させる。ＴＨＰ−１細胞は４８時間かけて培養され、その後、１０ｕｇ／ＴＧＦ−ｂによって刺激され、０、１、８、１２および２４時間の時点で集められる。これは特定の時点での遺伝子調節変化を示した。８時間の時点は、細胞刺激の時間を見込んで選択された。遺伝子調節は急速に生じ、選択された時点は刺激のための時間を十分に過不足なく見込む。（Ｆ）ＰＩＦはｉｎ  ｖｉｖｏのＮｏｓ２発現およびＲＡＷ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのマウス・マクロファージ細胞株からのＮＯ分泌を減少させる。これらの結果は、「マウス炎症性応答および自己免疫」アレイを使用する肝臓における炎症性遺伝子発現のリアル−タイム定量ＰＣＲ分析の一部として利用された。ｃＤＮＡ試料は通常のマウスまたは半−同種異系（ａｌｌｏ．）／同系（ｓｉｎ．）骨髄移植後のマウスから得られ、ＰＩＦまたはＰＢＳで処理された。Ｎｏｓ２の発現は半−同種異系のＢＭＴマウスにおいて上昇し、通常のマウスと比較して１７倍であった。ＰＩＦはこの上昇を完全に防止した。（Ｇ）ＲＡＷ（マクロファージ細胞株）は２００ｎＭのＰＩＦとともに異なる時間の期間で培養された。実験の最後の２４時間に���いて、ＬＰＳは細胞活性のために培地に加えられた。グリース反応テストは上澄みにＮＯ分泌を検出するために実行された。ＰＩＦはＲＡＷからＮＯ分泌を減少させるとわかった。
【図３】図３（Ａ）および（Ｂ）は、マイトジェン刺激がＴおよびＢ細胞集団へのＦＩＴＣ−ＰＩＦ結合を強化することを示す。ＰＢＭＣはＰＨＡと２４時間培養された。異なるＰＢＭＣ集団へのＦＩＴＣ−ＰＩＦの結合は、二つの色のフローサイトメトリーによって測定された。結合は低かった（非刺激細胞において<１０％、上部パネル左から右）ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＮＫ、（ＣＤ５６＋）およびＢ（ＣＤ１９＋）細胞。しかしながら、ｂ（下部パネル左から右）において結合が〜３０倍の増加につながったＣＤ４＋、ＣＤ８＋およびＢ（ＣＤ１９＋）細胞。結合は、７２時間の培養期間後でもＮＫ細胞においては変化しなかった。（Ｃ）から（Ｆ）は、ｓＰＩＦが刺激されたＰＢＭＣｓにおいてＴＨ２／ＴＨ１サイトカイン・バイアスを促進することを示す。ＰＢＭＣｓは＋／−ｓＰＩＦ  ５０ｎＭ＋／−抗−ＣＤ３−ｍＡｂまたは５０ｎＭ  ＰＩＦ  ｓｃｒ＋／−抗−ＣＤ３−ｍＡｂとともに４〜９６時間かけて培養された。（Ｂ）ｓＰＩＦ（５０ｎＭ）；（Ｃ）ＰＩＦｓｃｒ（５０ｎＭ）；（Ｄ）ｓＰＩＦ（５０ｎＭ）＋抗−ＣＤ３  ｍＡｂ；（Ｅ）ＰＩＦｓｃｒ＋抗−ＣＤ３  ｍＡｂ。ｓＰＩＦは様々な刺激を与えたＰＢＭＣｓの個々のサイトカイン分泌に作用した。対象的に、ナイーブＰＢＭＣｓにおけるいくつかのサイトカイン分泌は減少した（図示せず）。ＰＩＦｓｃｒはＴＮＦα分泌のみに作用した（Ｎ＝５）。サイトカイン分泌はＬｕｍｉｎｅｘ  １０−ｐｌｅｘによって測定された。（Ｆ）ＰＩＦは、抗ＣＤ３／ＣＤ２８誘発ＴＨ２およびＴＨ１サイトカイン分泌を促進する。ＰＢＭＣｓは抗−ＣＤ３／抗−ＣＤ２８−Ｍａｂの存在下で２４〜４８時間かけて培養された。ＰＩＦはＴＣＲ刺激の後に続いてサイトカインの両方のタイプを増加させた。ＰＩＦ単独では、３つの異なる実験に代表されるように、サイトカイン分泌において顕著な促進効果を有さなかった。４８時間でのＰＢＭＣｓへの効果は、目立たなかった（データ図示せず）。実験終了後、ｍＲＮＡは抽出され、グローバル遺伝子発現はアフィメトリクス・チップを使用して分析された。
【図４】図４（Ａ）は、ＩＬ−ｌａがＭｔｂによって誘発されたこと、および、その後、ＰＩＦおよび抗−Ｋｖ１．３によって増殖されたことを示す。ＩＦＮの存在下における応答は失われた。（Ｂ）は、ＩＬ−ｌｂがＭｔｂによって誘発されたこと、および、その後、ＰＩＦおよび抗−Ｋｖ１．３によって増殖されたことを示す。ＩＦＮの存在下における応答は失われた。（Ｃ）は、（ＴＮＦ）ａがＭｔｂによって誘発されたこと、および、その後、ＰＩＦおよび抗−Ｋｖ１．３によって増殖されたことを示す。ＩＦＮの存在下における応答は失われた。（Ｄ）は、ＭＩＰ−１αがＭｔｂによって誘発されたこと、および、その後、ＰＩＦおよび抗−Ｋｖ１．３によって増殖されたことを示す。ＩＦＮの存在下における応答は失われた。（Ｅ）は、ＫＣがＭｔｂによって誘発されたこと、および、その後、ＰＩＦおよび抗−Ｋｖ１．３によって増殖されたことを示す。ＩＦＮの存在下における応答は失われた。
【図５】図５（Ａ）は、ＭＣＰ−１（ケモカイン）がＭｔｂによって誘発され、ＰＩＦおよびＫｖ１．３阻害剤によって増殖されたことを示す。ＩＦＮγの投与は、応答を停止させた。低ｓＰＩＦ投与は単離マクロファージによるＭＣＰ−１（単球走化性タンパク質−１）分泌を増加させた。Ｋｖ１．３阻害剤は１００ｎＭでｓＰＩＦ効果をブロックした。（Ｂ）ＩＬ−６はＭｔｂによって誘発され、この誘発はＰＩＦによって増加され、抗−Ｋｖ１．３によって減少した。ＩＦＮの投与は、応答を停止させた。（Ｃ）ＩＬ−５はＭｔｂによって誘発され、この誘発はＰＩＦによって増加され、抗−Ｋｖ１．３によって減少した。ＩＦＮの投与は、応答を停止させた。
【図６】図６は、ＰＩＦがマウス腹膜炎モデルにおいてＭＣＰ−１誘発された単球遊走を阻害することを示す。８〜１２週目のＣ５７ｂｌ６マウスは媒体制御としてＰＩＦまたはｓｃＰＩＦ（０．３ｎｍｏｌ／ｇ  腹腔内）またはＰＢＳが注射された。腹膜炎は腹腔内に３ｍｌ、４％のチオグリコール酸塩を注射することにより誘発され、２０時間後、該マウスは麻酔され、腹膜腔は５ｍｌの無菌ＰＢＳによって勢いよく流された。続いて、単球／マクロファージはフローサイトメトリーでＦ４／８０およびＣＤ１１ｂによって定量化された。ＰＩＦ（１μＭ&１０μＭ）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのトランスウェル遊走アッセイにおいてＴＨＰ−１細胞のＭＣＰ−１誘発された移動を顕著に減少させた（＊ｐ<０．０１）。PIFは、（B）に記載されたような腹膜炎モデルを使用する生体顕微鏡検査における腸間膜小静脈内の白血球粘着およびローリング、ローダミンによる細胞着色を阻害する。
【図７】図７は、ＰＩＦが（Ａ）大動脈根および（Ｂ）大動脈弓においてアテローム性動脈硬化プラーク面積を減少させることを示す。大動脈根および大動脈弓部分はＨＥによって染色された。平均アテローム性動脈硬化面積（μｍ２）±標準誤差が定量化された。ＰＩＦ  ０．１ｍｇ／ｋｇ／日の治療は、ＰＢＳ制御と比較して３０％大動脈根におけるプラーク面積を顕著に減少させた（＊＊ｐ＝０．０００８）。４６％のより大きな減少がＰＢＳと比較してＰＩＦ  １ｍｇ／ｋｇ／日において明らかとなった（＊＊＊＊ｐ<０．０００１）。ＰＩＦの高投与量は、ｓｃｒＰＩＦの両投与量と比較して統計的に顕著にプラーク面積を減少させた（＊＊＊＊ｐ<０．０００１）。ＰＩＦ  １ｍｇ／ｋｇ／日の治療は、ＰＢＳ制御と比較して４３％大動脈弓のプラーク面積を顕著に減少させた（＊＊ｐ<０．００２）。減少はＰＩＦ  １ｍｇ／ｋｇ／日およびｓｃｒＰＩＦの両投与量の間でも確認された（それぞれ、＊＊＊ｐ＝０．０００５、＊＊＊＊ｐ<０．０００１）。
【図８】図８（Ａ）から（Ｆ）は、ＰＩＦが高脂肪食を与えられたＡｐｏＥ−／−マウスの大動脈根および大動脈弓におけるＶＣＡＭ−１、ＭＣＰ−１およびＣＤ６８を減少させることを示す（それぞれｎ＝８、平均および標準誤差、＊ｐ<０．０５、＊＊ｐ<０．０１、＊＊＊ｐ<０．００１、＊＊＊＊ｐ<０．０００１）。
【図９】図９（Ａ）から（Ｄ）は、ｓｃｒＰＩＦではなくＰＩＦが大動脈根弓および大動脈根においてオイルレッドＯ（ＯＲＯ）着色を減少させることを示す。ＯＲＯ組織構造はマウスアテローム性動脈硬化プラークにおける脂質を同定させるのに使用される。脂質は、プラーク±標準誤差の面積の強度率を示す赤色によって定量化される。（Ａ）は、ＰＩＦ  １ｍｇ／ｋｇ／日の治療は、大動脈根において、ＳｃＰＩＦ  １ｍｇ／ｋｇ／日と比較して脂肪において顕著な減少を生じる（ｎ＝８、＊＊ｐ<０．０１、＊＊＊＊ｐ＝<０．０００１）。脂質および泡沫細胞の減少が全体として脂肪レベルではなくアテローム性動脈硬化型病変へのＰＩＦの作用によるものであったことを確認するため、Ｃｏｂａｓは、異なる治療群からのマウス血漿をコレステロールレベルの測定に用いられた。全ての動物は依然として高いコレステロールレベルを有し、測定値を得るために、該血漿は１：１０に希釈された。分析後、統計的差異はＴｕｋｅｙ’ｓ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  Ｔｅｓｔによって対となった一つの方法であるＡＮＯＶＡを使用するいかなる群の間でもみられなかった。
【図１０】図１０はＰＩＦが：（Ａ）大動脈根（＊＊ｐ＝０．００１７）および大動脈弓（＊＊ｐ＝０．００３５）におけるＣＤ６８を減少させること、および、（Ｂ）大動脈根（＊＊＊＊ｐ＝<０．０００１）および大動脈弓（＊＊ｐ＝０．００９３）における脂質を減少させることを示す。
【図１１】図１１はPIFが循環脂質に影響しないこと、および、血漿コレステロールにおける顕著な変化はないことを示す。ＣＯＢＡＳ分析器は様々な治療群からマウス血漿を使用することによってコレステロールレベルを測定するのに用いられた。全ての動物は依然として高いコレステロールレベルを有し、測定値を得るために、該血漿は１：１０に希釈される必要があった。統計的差異はＴｕｋｅｙ’ｓ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  Ｔｅｓｔによって対となった一つの方法であるＡＮＯＶＡを使用するいかなる群の間でもみられなかった。これは、脂質および泡沫細胞の減少が全体として脂肪レベルではなくアテローム性動脈硬化型病変へのＰＩＦの作用によるものであったことを立証した。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本願組成物および方法が記載される前に、本発明が特定のプロセス、組成物または方法論に限定されるものではなく、これらは変化することができるものであることが理解されなければならない。本記載において使用される用語は特定の見解または実施形態のみを記載するためのものであって、添付の特許請求の範囲によってのみ制限されるものである本願発明の範囲を制限することを目的としないことも理解されるものである。そうでなければ定められない限り、本明細書で使用される全ての技術的または科学的用語は従来技術において当業者によって共通に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されたものと同様または等しい任意の方法および材料が本願発明の実施形態の実行またはテストにおいて使用されることができるにもかかわらず、好適な方法、装置、および材料が現在記載されている。本明細書において言及される全ての刊行物は、その全体において参照により組み込まれる。本明細書は、本発明が従来の発明による開示に先行する権利がないという承認として解釈されるものでは何らない。
【００１４】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されるように、単数形「ａ」「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、前後関係で明確にそうではないと決定づけられない限り、複数への参照を含むものである。したがって、例えば、「ペプチド」への参照は、一つ以上のペプチドおよびそれらと同等のものへの参照であることは、当業者およびその他にとって公知である。
【００１５】
本明細書で使用する場合、用語「約」は使われている数字の数値のプラスまたはマイナス１０％を意味する。したがって、約５０％は４５％〜５５％の範囲を意味する。
【００１６】
治療薬と併せて使用される場合、「投与する」は、標的組織内または標的組織に直接的に治療薬を投与する、または、治療薬が標的とされる組織に確実に影響することによって患者に治療薬を投与することを意味する。したがって、本明細書で使用されるように、用語「投与する」は着床前因子（ＰＩＦ）と併せて使用される場合、これに限定されるわけではないが、標的組織内または標的組織にＰＩＦを提供すること、例えば、治療薬が標的組織に届くことによって、静脈注射で患者に全身的にＰＩＦを提供すること、（例えばいわゆる遺伝子治療技術と呼ばれているものによって）標的組織にそれらの配列をコードする形式でＰＩＦを提供することを含むことができる。組成物を「投与する」ことは、非経口、経口、または局所投与、またはその他の既知の技術と組み合わせた方法によって達成されることができる。このような組み合わせ技術は、加熱、放射線および超音波を含む。
【００１７】
本明細書で使用される用語「動物」または「患者」または「対象」は、これに限定されないが、ヒトおよび野生動物、飼育動物および家畜のようなヒト以外の脊椎動物を含む。好適には、用語「動物」または「患者」または「対象」はヒトに言及する。
【００１８】
用語「改善する」は、本発明が、提供、適用、または投与を受けた組織の外観、形態、特徴および／または物理的特性のいずれかを変化させることを伝達するのに使用される。形態における変化は、以下：リステリア・モノサイトゲネス感染、マラリア、ライム病、心疾患、十二指腸潰瘍、アテローム性動脈硬化、腹膜炎および結核のような病気の結果としての感染／炎症の治療、病気の症状の軽減、肉芽腫形成における増加、サイトカイン分泌における増加、パーフォリンおよびグラニュリシンの分泌における増加、疾患感染した食細胞のサイトカイン／ケモカイン分泌の調節および細菌の伝播における減少、の単独または組み合わせの任意によって明示されることができる。
【００１９】
用語「阻害する」は、症状の発現の予防、症状の軽減、または、病気、疾患または疾病を除去するための本願発明の化合物の投与を含む。
【００２０】
「薬学的に許容される」は、担体、希釈剤または賦形剤が製剤の他の成分と適合するものであり、それらの受容体に有害でないことを意味する。
【００２１】
本明細書で使用される用語「治療的に」は、患者の望ましくない疾患または病気を治療、治す、改善する、予防する、または改善するために使用される薬剤を意味する。一部分において、本願発明の実施形態は結核を治療するための方法を対象とする。
【００２２】
組成物の「治療的有効量」または「有効量」は、所望の効果、つまり、病気または疾患の症状を減少させる、阻害するまたは改善するために予め計算された量である。本方法によって考察された活性は、必要に応じて、医学治療的および／または予防的治療の両方を含む。治療的および／または予防的効果を得るために本発明にしたがって投与される化合物の特定の投与量は、もちろん、例えば、投与される化合物、投与経路、および治療される疾患を含む症例を取り巻く特定の状況で測定される。該化合物は広い投与量範囲にわたって効果的であり、例えば、通常一日当たりの投与量は、０．００１〜１０ｍｇ／ｋｇに収まり、より通常は０．０１〜１ｍｇ／ｋｇの範囲内である。しかしながら、投与される有効量が、治療される疾患、投与される化合物の選択、および選択された投与経路を含む状況に照らして、医師によって測定されること、したがって、上記投与量の範囲は本発明の範囲をいかなる形であれ制限することを意図するものではないことは理解される。本発明の実施形態の化合物の治療的有効量は、典型的には、生理的に許容できる賦形剤組成物において投与される場合の量であり、それは、組織内における有効的な全身濃度または局所濃度を達成するのに十分である。
【００２３】
本明細書で使用される用語「治療する」、「治療される」または「治療」は、治療的処置および予防的または予防手段の両方を意味するものであり、ここにおける目的は、望ましくない生理的状態、疾患または病気を予防または抑制する（減少させる）または、有益または望ましい臨床結果を得ることである。本発明の目的において、有益または望ましい臨床結果は、これに限定されるものではないが、症状の緩和、疾患、障害または病気の程度の減少、疾患、障害または病気の状態の安定（すなわち、悪化しない）、疾患、障害または病気の進行の開始における遅延または減速、疾患、障害または病気の改善、および、検出可能であるか、または検出不可能であるかにせよ鎮静（部分または全体）または疾患、障害または病気の強化または改善を含む。治療は過剰なレベルの副作用なしに臨床的に有意な反応を誘発することを含む。治療はまた、治療を受けなかった場合に予想される生存と比較して、生存を延長させることを含む。
【００２４】
リステリア・サイトモノギネス、グラム陽性条件的細胞内細菌は、食細胞において生存および複製し、肝細胞は続いて該食細胞から逃げる。リステリア感染への生来の免疫応答は、マクロファージ、ケモカイン（ＭＩＰ）−１ａおよびＫＣ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および好中球を含む多くの細胞タイプだけではなく、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−ａ、インターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、インターフェロン（ＩＮＦ）−ｃ、およびより最近同定された早期Ｔリンパ球活性化（Ｅｔａ）−１のような窒素中間体およびサイトカインも含む複雑なプロセスである。ＴＮＦ−ａおよび一酸化窒素（ＮＯ）、マクロファージおよび新たに同定されたＴＮＦ／ｉＮＯＳ生産樹状細胞から生産された誘導性一酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）の最終生成物が、ＮＫにより主に分泌される、ＩＮＦ−ｃと関連する早期リステリア感染からのホストの保護の原因となるキー・エフェクター分子であると広く信じられている。多数の研究も、ＣＤ８＋Ｔ−細胞免疫応答がＩＦＮ−ｃ−媒介機構によって感染したマウスにおけるリステリア・モノサイトギネスの完全なクリアランスにおいて優れた役割を果たし、それによって、食細胞からＬ．モノサイトギネスが逃れることを阻害し、マクロファージが活性化される。さらに、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ相互作用によるＤＣｓによりＢ７−１／Ｂ７−２−媒介副刺激を有するＣＤ８＋Ｔ細胞を提供することによって、および、免疫応答をＴヘルパータイプ１（Ｔｈ１）経路に分極化させることによって、抗リステリア抵抗に関与する。具体的には、Ｂ７−１およびＢ７−２副刺激分子は、リステリア感染の間Ｔｈ１  ＣＤ４＋Ｔ細胞からＩＦＮ−ｃおよびＩＬ−２の生産のために必要であることがある。（ＣＤ２７４およびＰＤ−Ｌ１としても知られる）Ｂ７−Ｈ１は、陽性または陰性にＴ細胞応答（ＴＣＲ）−媒介信号を制御するＢ７系統のメンバーである。拮抗的な抗−Ｂ７−Ｈ１抗体または遺伝子ノックアウトマウスのどちらかを使用する一連のｉｎ  ｖｉｖｏ研究の結果は、内因性Ｂ７−Ｈ１の共抑制の役割を支える；例えば、拮抗的なモノクローナル抗体を有するＢ７−Ｈ１のｉｎ  ｖｉｖｏ遮断は、エフェクターＴ細胞を活性化させることができ、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスにおける自己免疫性糖尿病の発病率の増加、通常のマウスにおけるハプテン誘導性接触過敏症、およびＢ７−Ｈ１ノックアウトマウスの実験的自己免疫性脳髄炎に感染しやすくなることにつながる。しかしながら、ｂ−島細胞によるＢ７−Ｈ１のトランスジェニック発現は、自然発症性糖尿病を誘発し、および、同種ホストにおけるｂ−島細胞の拒絶を加速し、Ｂ７−Ｈ１に対する拮抗的な抗体が炎症性腸疾患の病因を阻害するという研究結果は、Ｂ７−Ｈ１がｉｎ  ｖｉｖｏのＴ−細胞免疫において、共刺激な役割を果たすことを示唆する。Ｂ７―Ｈ１が多くの研究の癌進行、自己免疫および移植片拒否のＴ細胞免疫に関係するのに対し、感染症モデルの内因性Ｂ７―Ｈ１の役割を説明している報告はほとんどない。
【００２５】
ヒト型結核菌（Ｍｔｂ）によって生じる結核（ＴＢ）は、世界中で年間約８００万人が感染し、３００万人が死亡する深刻かつ致死的な疾患である。Ｍｔｂは肺胞マクロファージのエンドソーム内に侵入して複製し、それらの活性を変える。単核細胞肉芽腫における局所的免疫抑制は、続いてＭｔｂ感染症を呈する。マクロファージ、Ｔ−リンパ球、Ｂ−リンパ球および線維芽細胞は、感染したマクロファージを取り囲むリンパ球とともに肉芽腫を形成するのに凝集する細胞の一つである。肉芽腫の機能は播種の予防のみならず、免疫応答の細胞の伝達のための局所的な環境も提供する。肉芽腫内で、Ｔリンパ球は、それらが感染している細菌を破壊するためにマクロファージを活性化するインターフェロン（ＩＦＮ）−ガンマのようなサイトカインを分泌する。細胞毒性Ｔ細胞は、パーフォリンおよびグラニュリシンを分泌することによって感染した細胞を直接的に殺すこともできる。重要なことに、Ｍｔｂは潜伏状態になることで、肉芽腫内で生存することができる。
【００２６】
ライムボレリア症として知られるライム病は、北半球において最もよくあるダニ媒介の伝染病である。ライム病は、ボレリア属に属する細菌の少なくとも３つの種によって生じる。ボレリア・ブルグドフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ  ｓｅｎｓｕ  ｓｔｒｉｃｔｏ）菌は米国においてライム病の大部分の症例を生じるが、ボレリア・アフゼリおよびボレリア・ガリニはヨーロッパにおいてライム病の大部分の症例を生じる。ボレリア属は、マダニ属（「硬ダニ」）のわずかな種に属する感染したダニに咬まれることによって、ヒトに伝播する。初期症状は、熱、頭痛、疲労、鬱状態、および、遊走性紅斑（ＥＭ）と呼ばれる特徴的な皮膚発疹を含むことができる。治療しないまま放置すると、のちの症状は、関節、心臓、および中枢神経系を含むことができる。
【００２７】
動脈硬化性心疾患（ＡＳＶＤ）として知られているアテローム性動脈硬化は血管壁肥大で有名な疾患である。該肥大は、一般的に、プラークと呼ばれる硬い構造を形成するコレステロールのような脂肪質の蓄積の結果生じる。最近の臨床的および実験的証拠は、血管壁における炎症プロセスが、アテローム性動脈硬化に苦しむ患者における病変形成および臨床開発の率を占める決定的な要因であることを示す。証拠は、アテローム性動脈硬化の病変における単球の保持同様、単球の漸増はプラークの発達に関与することをさらに示した。
【００２８】
哺乳類の妊娠は、母体の免疫系が非常に効率的な方法で胎児と相互作用し、それが双方のために有益であるという独特な生理学的事象である。妊娠は免疫パラドックスであり、移植片対ホストまたはホスト対移植片効果を示さない。妊娠はこのような所望の有効的な免疫保護（抑制のない調節）を提供する、免疫調節状態である。そこにおいて、母体／ホストから新生児／同種移植への垂直感染は低く、ＨＩＶおよび多発性硬化症のような様々な免疫疾患に対して観察される保護に類似している。理論に束縛されることを望まずに、ホストの免疫系の活性化が結核の治療に役立つことができ、胚に特有な保護化合物は結核に対して極めて重要な保護的役割を有することができる。妊娠の免疫調節効果を非妊娠免疫状態にうまく移行することは、ＴＢを制御するために強力で有効的な非毒性ツールに結果としてなることができる。このように、抗−ＴＢ薬剤を有する相乗効果において作用できる薬剤を有することは、この深刻な病気に対する保護において重要な支えとなる要素を示すことができる。
【００２９】
新規な着床前因子（ＰＩＦ）は、胚／同種移植から母体／ホストへの早期（二細胞期）メッセージである。ＰＩＦは、必要に応じて病原体攻撃への応答において重要な役割を果たすとともに、免疫寛容および受容をつくる。ＰＩＦの合成類似体（ｓＰＩＦ）は、活性化した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）増殖およびサイトカイン分泌に対する天然ペプチドの効果を複製し、ＰＢＭＣにおける新規のサイトを介して作用し、既知の免疫抑制薬とは区別される効果を有する。本明細書で使用されるように、ＰＩＦまたはＰＩＦペプチドは合成ＰＩＦペプチドまたは単離された天然に存在するＰＩＦペプチドである。ＰＩＦの保護的効果は、ホストの基本免疫に作用することなく生存能力のある妊娠期全体にわたって生じる。ｓＰＩＦは生理的な相対物を模倣し、生存のために必要な基本免疫を損傷することなく免疫損傷の進行を阻害するおよび後退させるために「必要につき」免疫活性を増強する。このように、ＰＩＦは幅広い免疫抑制なしで炎症を制御する。単核細胞肉芽腫内の局所免疫抑制は、以下のＭｔｂ感染を呈する。よって、ＰＩＦはＴＢの治療において役立つことができる。したがって、ＰＩＦはＫｖ１．３カリウムチャネルを標的することができる、抗−ＴＢ標的と考えられる。
【００３０】
理論に束縛されることを望まないが、ｓＰＩＦは活性ＰＢＭＣｓ増殖を妨げ、ＴＨ２／ＴＨ１サイトカイン・バイアスを作成し、プロ−拒絶（ｐｒｏ−ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ）遺伝子を減少するとともにプロ−寛容（ｐｒｏ−ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）を進行させる。これはマクロファージおよび免疫抑制薬剤により使用されるＫ＋（Ｃａ＋＋ではない）チャネルにより活性化すると推定されるTおよびB細胞に対して活性化された細胞内でＰＩＦを結合することで達成される。妊娠子宮内で、ＰＩＦはNK細胞内で蓄積し、母性敵対を緩和する。そのため、胚−分泌ＰＩＦは末梢性および局所免疫を調節し、移植における胚のために良好な環境をつくり、栄養芽層への侵入を容易にする。このように、妊娠を促進する際のペプチドの基本的役割を明らかにする。
【００３１】
免疫細胞上のＰＩＦにおいて観察された二相性結合および効果は、妊娠関連の寛容に対して興味深い洞察を提供する。本研究は、刺激された（負荷）細胞および免疫ナイーブ細胞におけるＰＩＦの効果の違いを明確に示した。ＭＬＲに見られる減少は、ｓＰＩＦへの曝露の後に、減退した同種抗原応答を反映する。これは、ドナー胚（同種）がなぜうまく移植できるのか、および、遺伝子の類似または同一の種の増殖は必要ないことを説明できる。ＰＩＦは生存に必要な基本的免疫を維持し、胚にとって有害であるＴ細胞増殖の活性を遮断することにより自分に対する寛容を援助する。
【００３２】
ナイーブまたは刺激された、または共刺激されたＰＢＭＣｓにおけるｓＰＩＦの特異的な効果は、サイトカインにおいても明らかである。以前の状況において、ｓＰＩＦはプロ炎症性ＴＨ１応答を減少し、その一方でＰＢＭＣｓの刺激の後に、ｓＰＩＦはＴＨ２サイトカイン・バイアスを作成した。妊娠中のＴＨ１およびＴＨ２サイトカインの増加した濃度が最近報告された。ＩＬ−２における減少および（関連する遺伝子）細胞毒性Ｔ細胞増殖の主な誘因およびＴＮＦ−ファミリーメンバーは、CCL7、単球機能の調節遺伝子とともにナイーブ細胞、増加において特徴づけられる。刺激された細胞において、病原体に応答する必要があるため、有力なＴＨ１サイトカイン（ＩＦＮγおよびＴＮＦα）が増加した。ＩＬ１０分泌および遺伝子発現における互いに異なる効果（ナイーブ細胞における減少および活性化された細胞における増加）は、ＰＩＦが母体免疫に負荷が与えられた場合において、拒絶に対する保護するとともに、基本免疫下で有害な免疫抑制を防止することを示す。
【００３３】
グローバルなＰＭＢＣｓ遺伝子発現データはさらに、基本的および負荷環境におけるＰＩＦ誘発性差異を増強した。前者において、プロ−寛容遺伝子は胚性拒絶を促進するものが減らされるとともに、増加した。注目すべきことに、共刺激のもとで、抗−拒絶性遺伝子は、病気と闘うことを必要とする防衛機構を促進することによりバランスが保たれなければならなかった。ナイーブ細胞および刺激された細胞の両方でＴＧＦＢＲＩＩ発現が増加した。ＴＧＦβ結合はＴ細胞増殖を阻害し、マクロファージ活性化を防いだ。ｓＰＩＦはＦＫＢＰ１を増加し、ＦＫ５０６がタンパク質を結合し、寛容誘発において重要なカルシニューリン経路に関係した。興味深いことに、同一の遺伝子がｓＰＩＦ曝露に続いてヒト脱落膜においてもアップ調節された。刺激された細胞において、ｓＰＩＦは、ＩＦＮγおよびシクロフィリンBによって誘発されたＬ−トリプトファンを分解させるＩＤＯを増加させることによる寛容を促進し、寛容はシクロスポリンが結合する分子を誘導した。ＨＬＡ−Ｇ３発現にみられる増加は、胚への免疫細胞攻撃を緩和する。一方、母性免疫応答ｓＰＩＦを容易にすることは、２つのチロシンキナーゼ、ＴＣＲ連結シグナル形質導入経路内で鍵となる役割を果たすＬＣＫおよび細胞増殖の制御に関与するＦｙｎを増加させる。ＣＤ３１における減少は、ＣＣＲ４、プロ炎症性ケモカインの減少につれて、好中球の作用における減少を反映する。全体として、遺伝子データは、病気と闘うために母体免疫を支持することとのバランスをとることに結果としてなる、ＰＩＦの二重総合的な調節効果をさらに立証する。
【００３４】
ナイーブ（ＣＤ１４＋）または刺激されたＰＭＢＣ（ＴおよびＢ）のサブセットへの差異的なＦＩＴＣ−ｓＰＩＦ結合プロフィールは、観察された免疫調節効果に一致する。生来の免疫は、胚への攻撃を回避するために直ちに保護された。高いリガンド濃度におけるＴおよびＢ細胞および低濃度での活性化したＰＢＭＣｓにおける強化された結合は、免疫系の適応できる治療群と効果的な相互作用を反映する。ＮＫ細胞への限定的な結合のみが標的特性を反映するマイトジェン負荷において観察されるのに対し、ＰＩＦはＴｒｅｇ（ＦｏｘＰ３＋）活性Ｔ細胞サブタイプにも結合する。このように、ＰＩＦ結合特性はさらに、生来のおよび適応免疫において観察された差異を支持する。
【００３５】
ｓＰＩＦ機構は独特であり、カルシウムモビリゼーションによって動作せず、ＰＩＦが単独で効果を有さず、またはＰＢＭＣがＰＨＡまたはＰＭＡ／イオノマイシンによって活性化されることから、免疫抑制剤（シクロスポリン、ＦＫ５０６）に見られるＧＰＣＲ／Ｇｑ受容体に結合する。しかしながら、ＰＩＦは、ＩＬ−２、カルシニューリン信号伝達の主要生成物を刺激するために、ＦＫ５０６結合タンパク質アップ調節を促進し、経路における下流の関係を示唆するのに対し、抗−ＣＤ３ｍＡｂによってシナジーを与える。現在の研究による最近のデータは、Ｋ＋チャネルをＰＩＦ誘発性の観察された効果に関与させる。ＰＩＦはイオン孔を調節するＫｖ１．３ベータチャネルに結合し、遺伝子発現データはＫ＋遺伝子の調節を示す。
【００３６】
末梢性免疫を超えて、局所的子宮免疫は、成功的な生殖を達成するために制御されることが必要なこともある。胚−分泌ＰＩＦは、母体−胎児の接触面でネズミｕＮＫ細胞の顆粒内で局所化されることができ、場合によって、細胞内結合部位を標的とする。ＰＩＦは、ｕＮＫ細胞内に急速に拡散する周囲の栄養芽層細胞に由来する。このように、ＰＩＦは、ｕＮＫ細胞毒性機能をダウン調節することができる、または受胎産物の生存を支持するために、サイトカイン分泌を調節することができる。直接的な胚−母体相互作用が移植の間に起こるときに、ＰＩＦは他のプロ−移植要素と呼応して重要な役割を果たす。
【００３７】
ＰＩＦは、妊娠中にのみ観察される矛盾な「免疫パラドックス」プロフィールによって、完璧な免疫バランスをつくることにおいて本質的で調節的な役割を有することができる。負荷下におけるＴＨ１サイトカインにおける増加は感染に対して保護することができるのに対し、Ｔｒｅｇ細胞に結合することで連結されるＴＨ２サイトカインにおける増加は、胚を保護することができる。受精直前のPIF発現は、早期の妊娠事象において腫瘍な役割を反映することができる。
【００３８】
本明細書に記載の実施形態は、細胞内損傷を治療するためのＰＩＦの使用に向けられている。実施形態は、細胞内損傷を治療する方法に向けられ、それを必要とする被験者にＰＩＦペプチドを投与することを含む。いくつかの実施形態では、前記投与したＰＩＦは、細胞内損傷に応答してサイトカイン分泌を増加させる。いくつかの実施形態において、ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２，配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４、配列ＩＤ番号５，配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、および配列ＩＤ番号８から選択される。実施形態において、ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２，配列ＩＤ番号３、および配列ＩＤ番号４から選択される。他の実施形態において、ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２，および配列ＩＤ番号３から選択される。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦ投与は、治療的に有効な量である。いくつかの実施形態において、被験者は、細胞内損傷と診断されている。いくつかの実施形態において、被験者は、細胞内損傷の恐れがある。いくつかの実施形態では、細胞内損傷は、疾患の結果生じる。いくつかの実施形態において、前記疾患は、細胞内細菌によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、前記細胞内細菌は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、  Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ  ｓｅｎｓｕ  ｓｔｒｉｃｔｏ、  Ｂｏｒｅｌｉａ  ａｆｚｅｌｉｉ、  及び  Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｇａｒｉｎｉｉから選択される。さらなる実施形態において、前記疾患は、リステリア菌、マラリア、ライム病、心血管疾患、十二指腸消化性潰瘍、アテローム性動脈硬化症、腹膜炎、および結核から選択される。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、医薬組成物で投与され、当該医薬組成物は、治療有効量のＰＩＦペプチドおよび薬学的に許容される賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、非経口、経皮、直腸、経鼻、局所静脈内投与、又は経口投与から選択される経路から投与される。係る医薬組成物は、当技術分野で周知の方法で調製され、薬学的担体と共に、少なくとも１種のＰＩＦペプチドを含む。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、１日１回、１日２回、１日３回、または１日４回投与される。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、１週間、２週間、３週間、４週間、２箇月、３箇月、４箇月、６箇月、７箇月、８箇月、９箇月、１０箇月、１１箇月、１２箇月、１８箇月、２年、３年、４年または５年間投与される。いくつかの実施形態では、前記方法はさらに、他の抗細胞内損傷剤と組み合わせてＰＩＦを投与する工程を含む。
【００３９】
本発明の実施形態において、ＰＩＦペプチドを投与する工程を含む、被験者のアテローム性動脈硬化症を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態において、ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２，配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４配列ＩＤ番号５、配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、および配列ＩＤ番号８から選択される。実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４から選択される。他の実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２，配列ＩＤ番号３から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＩＦの治療有効量を投与する。いくつかの実施形態において、被験者は、アテローム性動脈硬化症と診断されている。いくつかの実施形態において、被験者は、アテローム性動脈硬化症の恐れがある。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、医薬組成物で投与され、当該医薬組成物は、治療有効量のＰＩＦペプチドおよび薬学的に許容される賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、非経口、経皮、直腸、経鼻、局所静脈内投与、又は経口投与から選択される経路から投与される。係る医薬組成物は、当技術分野で周知の方法で調製され、薬学的担体と共に、少なくとも１種の活性ＰＩＦペプチドを含む。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、１日１回、１日２回、１日３回、または１日４回投与される。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、１週間、２週間、３週間、４週間、２箇月、３箇月、４箇月、６箇月、７箇月、８箇月、９箇月、１０箇月、１１箇月、１２箇月、１８箇月、２年、３年、４年または５年間投与される。いくつかの実施形態では、前記方法はさらに、他の抗アテローム性動脈硬化剤と組み合わせてＰＩＦを投与する工程を含む。
【００４０】
いくつかの実施形態において、ＰＩＦは大動脈根のプラークを減らすことによって、アテローム性動脈硬化症を治療する。いくつかの実施形態において、ＰＩＦは、大動脈弓におけるプラークを減らすことによって、アテローム性動脈硬化症を治療する。いくつかの実施形態では、ＰＩＦは、大動脈弓における単球タンパク質を減少させることによって、アテローム性動脈硬化症を治療する。さらなる実施形態において、単球タンパク質は、血管細胞接着分子（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｃｅｌｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）（ＶＣＡＭ−１）、単球走化性タンパク質（ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ）（ＭＣＰ−１）および分化のクラスター（  ｃｌｕｓｔｅｒｓ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）（ＣＤ６８）から選択する。いくつかの実施形態では、ＰＩＦは、大動脈弓の単球タンパク質を減少させることによって、アテローム性動脈硬化症を治療する。さらなる実施形態において、前記単球タンパク質は、血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ−１）、単球走化性タンパク質（ＭＣＰ−１）および分化のクラスター（ＣＤ６８）から選択する。いくつかの実施形態では、ＰＩＦは、大動脈根の脂質を減少させることによって、アテローム性動脈硬化症を治療する。いくつかの実施形態において、ＰＩＦは、ＴＨＰ−１細胞中のサイトカインを減少させることによって、アテローム性動脈硬化症を治療する。さらなる態様において、前記サイトカインは、インターロイキン（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｅｉｎ）  １２、サブユニットβ（ＩＬ−１２ｂ）及びインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）から選択する。大動脈上のプラーク減少の効果は、循環脂質に影響を与えることなく、直接的である。実施形態では、循環脂質のレベルが実質的に影響を受けず、あるいはその他実質的に低減されない。
【００４１】
本開示の実施形態では、ＰＩＦペプチドを投与する工程を含む、被験者の結核を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態では、結核を治療する方法は、ＰＩＦペプチドを投与する工程を含んで、結核菌の播種を減らすことを含む。いくつかの実施形態において、結核を治療する方法は、ＰＩＦペプチドを投与することを含んで、結核菌感染に応答してサイトカイン分泌を増加させることを含む。いくつかの実施形態において、ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４配列ＩＤ番号５，配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、および配列ＩＤ番号８から選択される。実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２，配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４から選択される。他の実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＩＦの治療有効量を投与する。いくつかの実施形態において、被験者は、結核と診断されている。いくつかの実施形態において、前記被験者は、結核感染の恐れがある。いくつかの実施形態において、前記被験者は結核菌にさらされていた。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、医薬組成物で投与され、当該医薬組成物は、治療有効量のＰＩＦペプチドおよび薬学的に許容される賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、非経口、経皮、直腸、経鼻、局所静脈内投与、又は好ましくは
経口投与から選択される経路から投与される。係る医薬組成物は、当技術分野で周知の方法で調製され、薬学的担体と共に、少なくとも１種の活性ＰＩＦペプチドを含む。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、１日１回、１日２回、１日３回、または１日４回投与される。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、１週間、２週間、３週間、４週間、２箇月、３箇月、４箇月、６箇月、７箇月、８箇月、９箇月、１０箇月、１１箇月、１２箇月、１８箇月、２年、３年、４年または５年間投与される。いくつかの実施形態では、前記方法はさらに、他の抗結核剤と組み合わせてＰＩＦを投与する工程を含む。
【００４２】
本発明の実施形態では、ＰＩＦペプチドを投与することを含む、被験者の結核の症状を治療する方法が提供される。係る方法において、前記結核の症状は胸痛、咳、体重減少、倦怠感、食欲不振、発熱、寝汗、悪寒およびこれらの組み合わせから選択される。  いくつかの実施形態において、ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４、配列ＩＤ番号５，配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、および配列ＩＤ番号８から選択される。実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４から選択される。他の実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２，配列ＩＤ番号３から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＩＦの治療有効量を投与する。いくつかの実施形態では、ＰＩＦペプチドの治療上有効な量が投与される。いくつかの実施形態において、被験者は、結核と診断されている。いくつかの実施形態において、被験者は、結核感染の恐れがある。いくつかの実施形態において、被験者は結核菌にさらされていた。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、医薬組成物で投与され、当該医薬組成物は、治療有効量のＰＩＦペプチドおよび薬学的に許容される賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、非経口、経皮、直腸、経鼻、局所静脈内投与、又は経口投与から選択される経路から投与される。係る医薬組成物は、当技術分野で周知の方法で調製され、薬学的担体と共に、少なくとも１種の活性ＰＩＦペプチドを含む。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、１日１回、１日２回、１日３回、または１日４回投与される。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、１週間、２週間、３週間、４週間、２箇月、３箇月、４箇月、６箇月、７箇月、８箇月、９箇月、１０箇月、１１箇月、１２箇月、１８箇月、２年、３年、４年または５年間投与される。いくつかの実施形態では、前記方法はさらに、他の抗結核剤と組み合わせてＰＩＦを投与する工程を含む。
【００４３】
本開示の実施形態では、ＰＩＦペプチドを投与することを含む、被験者の腹膜炎の治療方法が提供される。  いくつかの実施形態において、ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４、配列ＩＤ番号５，配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、および配列ＩＤ番号８から選択される。実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４から選択される。他の実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＩＦの治療有効量を投与する。いくつかの実施形態において、被験者は、腹膜炎と診断されている。いくつかの実施形態において、前記被験者は、腹膜炎の恐れがある。いくつかの実施形態では、ＰＩＦペプチドは、カリウムチャネル阻害剤を併用する。さらなる実施形態では前記カリウムチャネル阻害剤は、ＩＦＮγ、Ｋｖ１．３阻害剤およびこれらの組み合わせから選択する。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、医薬組成物で投与され、当該医薬組成物は、治療有効量のＰＩＦペプチドおよび薬学的に許容される賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、非経口、経皮、直腸、経鼻、局所静脈内投与、又は経口投与から選択される経路から投与される。係る医薬組成物は、当技術分野で周知の方法で調製され、薬学的担体と共に、少なくとも１種の活性ＰＩＦペプチドを含む。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、１日１回、１日２回、１日３回、または１日４回投与される。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、１週間、２週間、３週間、４週間、２箇月、３箇月、４箇月、６箇月、７箇月、８箇月、９箇月、１０箇月、１１箇月、１２箇月、１８箇月、２年、３年、４年または５年間投与される。いくつかの実施形態では、前記方法はさらに、他の抗腹膜炎剤と組み合わせてＰＩＦを投与する工程を含む。
【００４４】
実施形態は、Ｂ７−Ｈ１を上方制御する方法に向けられ、それを必要とする被験者にＰＩＦペプチドを投与することを含む。いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ１は、Ｔ細胞受容体を介するシグナル伝達を正に制御し得る。他の実施形態において、Ｂ７−Ｈ１は、Ｔ細胞受容体を介するシグナル伝達を負に制御し得る。いくつかの実施形態は、Ｋｖ１．３チャネル阻害する方法に向けられ、それを必要とする被験者にＰＩＦペプチドを投与することを含む。いくつかの実施形態は、Ｋｖ１．３チャネルを阻害する方法に向けられ、更にそれを必要とする被験者にＫｖ１．３の阻害剤を投与することを含む。いくつかの実施形態において、前記ＰＩＦペプチド投与は、Ｋｖ１．３カリウムチャネルの活性を遮断する。いくつかの実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、前記チャネルに結合することによってＫｖ１．３チャネルの活性を遮断する。いくつかの実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４、配列ＩＤ番号５、配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、および配列ＩＤ番号８から選択される。いくつかの実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４から選択される。他の実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＩＦの治療有効量を投与する。いくつかの実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、医薬組成物で投与され、当該医薬組成物は、治療有効量のＰＩＦペプチドおよび薬学的に許容される賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、非経口、経皮、直腸、経鼻、局所静脈内投与、又は経口投与から選択される経路から投与される。係る医薬組成物は、当技術分野で周知の方法で調製され、薬学的担体と共に、少なくとも１種の活性ＰＩＦペプチドを含む。いくつかの実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、１日１回、１日２回、１日３回、または１日４回投与される。いくつかの実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、１週間、２週間、３週間、４週間、２箇月、３箇月、４箇月、６箇月、７箇月、８箇月、９箇月、１０箇月、１１箇月、１２箇月、１８箇月、２年、３年、４年または５年間投与される。
【００４５】
実施形態は、細胞内損傷からの炎症を治療する方法に向けられ、それを必要とする被験者にＰＩＦを投与することを含む。いくつかの実施形態は、細胞内損傷に応答してサイトカインの分泌を増加させる方法に向けられ、それを必要とする被験者へＰＩＦを投与することを含む。いくつかの実施形態は、細胞内損傷に応答してサイトカインの分泌を増加させる方法に向けられ、更に、それを必要とする被験者へＫｖ１．３阻害剤を投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４、配列ＩＤ番号５、配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、および配列ＩＤ番号８から選択される。実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４から選択される。他の実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２，配列ＩＤ番号３から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＩＦの治療上有効な量を投与する。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、医薬組成物で投与され、当該医薬組成物は、治療有効量のＰＩＦペプチドおよび薬学的に許容される賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、非経口、経皮、直腸、経鼻、局所静脈内投与、又は経口投与から選択される経路から投与される。係る医薬組成物は、当技術分野で周知の方法で調製され、薬学的担体と共に、少なくとも１種の活性ＰＩＦペプチドを含む。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、１日１回、１日２回、１日３回、または１日４回投与される。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、１週間、２週間、３週間、４週間、２箇月、３箇月、４箇月、６箇月、７箇月、８箇月、９箇月、１０箇月、１１箇月、１２箇月、１８箇月、２年、３年、４年または５年間投与される。
【００４６】
いくつかの態様では、結核菌の播種を減らす方法であって、それを必要とする被験者にＰＩＦを投与する工程を含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦ投与は、治療的に有効な量である。  いくつかの実施形態において、ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４、配列ＩＤ番号５、配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、および配列ＩＤ番号８から選択される。実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２，配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４から選択される。他の実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３から選択される。いくつかの実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、医薬組成物で投与され、当該医薬組成物は、治療有効量のＰＩＦペプチドおよび薬学的に許容される賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、非経口、経皮、直腸、経鼻、局所静脈内投与、又は経口投与から選択される経路から投与される。係る医薬組成物は、当技術分野で周知の方法で調製され、薬学的担体と共に、少なくとも１種の活性ＰＩＦペプチドを含む。いくつかの実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、１日１回、１日２回、１日３回、または１日４回投与される。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、１週間、２週間、３週間、４週間、２箇月、３箇月、４箇月、６箇月、７箇月、８箇月、９箇月、１０箇月、１１箇月、１２箇月、１８箇月、２年、３年、４年または５年間投与される。
【００４７】
さらなる実施形態は，Ｍｔｂに感染したマクロファージで誘導された局所免疫抑制を中和し、および／またはＭｔｂ感染に対するホストの免疫応答を増加するＰ０ＩＦの使用に向けられている。いくつかの実施形態において、ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２，配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４、配列ＩＤ番号５，配列ＩＤ番号６、配列ＩＤ番号７、および配列ＩＤ番号８から選択される。実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２、配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４から選択される。他の実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、配列ＩＤ番号１、配列ＩＤ番号２，配列ＩＤ番号３から選択される。いくつかの実施形態において、ＰＩＦペプチドの治療上有効な量が投与される。いくつかの実施形態において、被験者は、結核と診断されている。いくつかの実施形態において、被験者は、結核感染のおそれがある。いくつかの実施形態において、被験者は結核菌に曝らされていた。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、医薬組成物で投与され、当該医薬組成物は、治療有効量のＰＩＦペプチドおよび薬学的に許容される賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、非経口、経皮、直腸、経鼻、局所静脈内投与、又は経口投与から選択される経路から投与される。係る医薬組成物は、当技術分野で周知の方法で調製され、薬学的担体と共に、少なくとも１種の活性ＰＩＦペプチドを含む。いくつかの実施形態では、前記ＰＩＦペプチドは、１日１回、１日２回、１日３回、または１日４回投与される。いくつかの実施形態において、前記ＰＩＦペプチドは、１週間、２週間、３週間、４週間、２箇月、３箇月、４箇月、６箇月、７箇月、８箇月、９箇月、１０箇月、１１箇月、１２箇月、１８箇月、２年、３年、４年または５年間投与される。いくつかの実施形態において、前記方法はさらに、他の抗結核剤と組み合わせてＰＩＦを投与する工程を含む。さらに、ＰＩＦは結核によって引き起こされる細胞内損傷を防ぐ。大抵の従来の治療法は細胞外で作用するので、細胞内損傷に対処するのに無効になるのに対し、ＰＩＦは、細胞内で作用し、それによって免疫細胞が結核菌などの細胞内を襲う細菌に乗っ取られるのを防ぐ。
【００４８】
グルココルチコイドは、免疫系を抑制し、したがって、損傷部位における、炎症およびそれに伴う痛みと腫れとを軽減する。リガンド非結合グルココルチコイド受容体（"ＧＲ"）、Ｈｓｐ９０、およびチロシンキナーゼＬＣＫとＦＹＮとからなる多タンパク質複合体は、Ｔ細胞における抗原活性化Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）に補充される。このＧＲ複合体はＴＣＲシグナル伝達に必要である。活性化ＰＢＭＣにおいて、ＰＩＦは、ＬＣＫ、ＦＹＮを上方制御するが、ＢＡＧ３発現を減らすことで、ＨＳＰ７０および３２が活性化される。ＧＲにグルココルチコイドの結合後、この多タンパク質複合体は、解離し、ＴＣＲシグナル伝達を遮断し、免疫システムを抑制する。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）に結合することによって、ＰＩＦはコルチゾンにとって代わり、免疫抑制を防ぐ。さらに、コルチゾン部位に結合することによって、ＰＩＦはコルチゾンの副作用を軽減する。長期間のコルチゾンとの接触は、これらに限定されないが、高血糖、インスリン抵抗性、糖尿病、骨粗しょう症、不安、うつ、胃炎、大腸炎、高血圧症、発作、勃起障害、性腺機能低下症、甲状腺機能低下症、無月経、および網膜症等の他の問題を含む、潜在的に深刻な副作用を多くもたらす。したがって、ＰＩＦは、Ｍｔｂ−感染した食細胞、特にサイトカインおよびケモカインの分泌に影響を与え、また、Ｍｔｂ誘導免疫抑制を防ぐ。更に、ＰＩＦは、主要な免疫細胞機能を調節し、カリウム細束を制御する細胞内カリウムチャンネルのＫｖ１．３β（タンパク質（Ｋｖ１．３）のサブユニット）に結合し、また、細胞内インスリン分解酵素に結合し、ＣＤ３／ＣＤ２８で刺激されたＴ細胞でサイトカイン分泌を増加し得る。理論に束縛されることを望むものではないが、ＰＩＦは、Ｋｖ１．３のチャンネルに結合することで作用する、クロファジミン（ｃｌｏｆａｍｉｚｉｎｅ）（抗結核薬）と同様の様式で、結核の治療薬として作用し得る。ＰＩＦは、ＮＦＡＴ１とカルシニューリン経路をも遮断する。したがってｓＰＩＦの作用は感染したマクロファージ内で行動直接的な抗菌作用効果と共に。したがって、本発明の態様は、結核の治療のためのＰＩＦの使用に向けられている。
【００４９】
その特異的な免疫プロファイルのために、ＰＩＦは、相乗的に作用し、抗結核薬の効果を増強し、薬剤耐性及び潜伏性結核の発症の可能性を減少させることで、的確に肉芽腫内のＭｔｂに対する免疫応答を増強し、局所免疫抑制を相殺し得る。最近では、有効である為には、抗ＴＢ療法は数箇月間使用する必要があり、耐性結核の場合には複数の薬剤が必要とされる。しかし、ＰＩＦは、効果的に結核と潜伏性結核（ｌａｔｅｎｔ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（ＴＢおよびＬＴＢ）に対する免疫システムを活性化する。したがって、ＰＩＦは、治療期間を短縮するのに役立ち、さらに、複数の薬剤使用の必要性を減少さえする。また、ＰＩＦは、一般的なＴＢに関連して発生する他の病理学の側面（例えば器官損傷）にも対処する。したがって、いくつかの実施形態では、ＰＩＦは、他の抗結核薬と組み合わせて投与し得る。係る抗結核薬はイソニアジド（ｉｓｏｎｉａｚｉｄ）、リファンピン（ｒｉｆａｍｐｉｎ）、エタンブトール（ｅｔｈａｍｂｕｔｏｌ）、ピラジナミドン（ｐｙｒａｚｉｎａｍｉｄｅ）およびそれらの組み合わせから選択する。
【００５０】
いくつかの実施形態では、ＰＩＦは、潜在的に細胞内損傷のすべての段階で使用する：（１）初期段階の接触後、ＰＩＦが付与する免疫力の回復によって前記免疫系が支援される、（２）後期（発病が適時に捕捉されなかった場合）で、これに限定されないが、結核などの疾患または感染が進行してしまっている際、ＰＩＦは、副作用を最小限に抑え免疫系の復元を可能にすると期待される、及び（３）潜伏性感染、例えば、結核で、身体の抵抗の有効性を維持しながら、ＰＩＦはツベルクリンで誘導された病気の負担を低下する。
【００５１】
本明細書で用いる場合、用語"ペプチド"、"ポリペプチド"および"タンパク質"は交換可能に使用され、アミド結合又は非アミド等価物により共有結合で連結された２個またはそれ以上のアミノ酸を指す。本発明のペプチドは、任意の長さとし得る。例えば、ペプチドは、５〜１２、１２〜１５、１５〜１８、１８〜２５、２５〜５０、５０〜７５、７５〜１００又はそれ以上の長さなど、約２〜約１００またはそれ以上の残基を有する。好ましくは、ペプチドは、約２〜約１８残基である。本発明のペプチドは、ｌ−およびｄ−異性体とｌ−およびｄ−異性体との組み合わせとを含む。前記ペプチドは、通常タンパク質の翻訳後処理に関連する、例えば、環化（例えば、ジスルフィドまたはアミド結合）、リン酸化、グリコシル化、カルボキシル化、ユビキチン化、ミリスチル化、または脂質化修飾を含む。
【００５２】
本明細書で開示されたペプチドは、さらにアミノ酸の構造的および機能的類似体を有する化合物、例えば合成または非天然アミノ酸またはアミノ酸類似体を有するペプチド模倣物であって、該模倣物が本発明の化合物の１つまたはそれ以上の機能または活性を有する限り、それらを含むものである。したがって、本発明の前記化合物は、"模倣物"および"ペプチド模倣物"形態を含む。
【００５３】
用語「ミメティック（模倣物）」、「ペプチド・ミメティック（ペプチド模倣物」、及び「ペプチドミメティック（ペプチド模倣物）」は、本明細書で互換的に使用され、通常選択された天然ペプチド、または、タンパク質機能ドメイン（例えば、結合モチーフまたは活性部位）の三次構造結合または活性を模倣するペプチド、部分ペプチドまたは非ペプチド分子を指す。これらのペプチド模倣物は、組換え的にまたは化学的に修飾されたペプチド、及び更に以下に記載するような小分子薬剤模倣物などの非ペプチド剤を含む。
【００５４】
いくつかの態様では、本発明は、上記で定義した、ＰＩＦペプチドおよび薬学的に許容される担体又は希釈剤を含む医薬組成物、又は上記に定義した化合物を有効量含む医薬組成物に向けられる。
【００５５】
本発明の化合物は、これが活性であるである任意の経路で、従来の方式により投与し得る。投与は、全身、局所、または経口であり得る。例えば、投与は、非経口、皮下、経口、静脈内、筋肉内、腹腔内、経皮、経口、口腔内、口腔頬側、又は眼経路、または膣内、吸入、デポー注射、又は移植によることができるが、限定されない。したがって、本発明の化合物の投与の様式（単独または他の薬剤と組み合わせて）は、舌下、注射可能（速効性，持続性、移植、及びペレット形態で、皮下または筋肉内注射される）、または膣クリーム、坐剤、ペッサリー、膣持続性リング、直腸坐剤、子宮内デバイス、および、貼付剤（ｐａｔｃｈ）及びクリームのような経皮形態の使用であり得るが、これらに限定されない。
【００５６】
投与の特定様式は、徴候に依る。特定の投与経路および用量レジメンの選択は、最適な臨床上の応答を得るために公知の方法にしたがって臨床医によって調整または用量決定されるべきである。投与される化合物の量は、治療上有効な量である。投与される用量は、治療中の被験者の特徴、例えば、治療中の特定の動物、年齢、体重、健康状態、併用治療があればその種類、および治療の頻度に依存し、また、当業者により（例えば、臨床医により）容易に決定し得る。
【００５７】
本発明の治療薬および適切な担体を含有する医薬製剤は、錠剤、カプセル剤、カシェ剤、ペレット、丸剤、粉末および顆粒を含むが、これらに限定されない固体剤形態であり得、溶液、粉末、液体エマルジョン、液体懸濁液、半固体、軟膏、ペースト、クリーム、ゲルおよびゼリー、および発泡体とを含むが、これらに限定されない局所投与形態であり得、また、本発明の重合体または共重合体の有効量を含む溶液、懸濁液、エマルション、及び乾燥粉末を含むが、これらに限定されない非経口投与形態であり得る。前記活性成分は、薬学的に許容される希釈剤、充填剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、界面活性剤、疎水性のビヒクル、水溶性ビヒクル、乳化剤、緩衝剤、湿潤剤、保湿剤、可溶化剤、防腐剤などの製剤に含有され得ることも当該技術分野で知られている。投与のための手段及び方法は当該技術分野において公知であり、当業者は手引きとして様々な薬理学の参考文献を参照し得る。例えば、Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，  Ｂａｎｋｅｒ  &  Ｒｈｏｄｅｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．  （１９７９）；  及び  Ｇｏｏｄｍａｎ  &  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  ６ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８０）を参考にし得る。
【００５８】
本発明の化合物は、例えば急速投与（ｂｏｌｕｓ）注射または連続注入による非経口投与用に製剤化し得る。前記化合物は、約１５分〜約２４時間の期間をかけて皮下継続持続注入により投与し得る。注射用製剤は、単位剤形態で、保存剤を添加して、例えば、アンプルまたは複数回投与容器で提示し得る。前記組成物は、懸濁液、溶液または油性もしくは水性媒体中のエマルジョンのような形態をとることができ、懸濁化、安定化および／または分散剤などの製剤化剤を含有し得る。
【００５９】
前記化合物は、経口投与用に、これらの化合物を当技術分野で周知の薬学的に許容される担体と組み合わせることにより、容易に製剤化し得る。係る担体は、本発明の化合物を、治療中の患者による経口摂取用に、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして製剤化し得る。経口用の医薬製剤は、固体の賦形剤を添加して、選択的に得られた混合物を粉砕し、必要に応じて、適切な補助剤を添加後  顆粒の混合物を処理することによって得られ、錠剤または糖衣錠の芯剤を得る。適当な賦形剤は充填剤、例えばラクトース、スクロース、マンニトール、及びソルビトールを含むがこれらに限定されない糖類などを含み、また、玉蜀黍澱粉、小麦澱粉、米澱粉、馬鈴薯澱粉、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）を含むが、これらに限定されない、セルロース調合剤を含む。所望であれば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸またはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムなどの塩であって、これらに限定されない崩壊剤などを添加し得る。
【００６０】
糖衣錠芯剤は、適切なコーティングを設け得る。この目的のために、濃縮糖溶液を使用することができ、選択的にアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適切な有機溶媒または溶媒混合物を含み得る。染料または色素は、識別用または有効化合物用量の異なる組み合わせを特徴付けるのに、錠剤または糖衣錠コーティングに添加し得る。
【００６１】
経口で使用し得る医薬製剤は、ゼラチン製のプッシュ−フィットカプセル、ならびにゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤からなる軟質密封カプセル剤をむが、これらに限定されない。前記プッシュ−フィットカプセルは、例えば、ラクトース等の充填剤、例えば、澱粉等の結合剤、および／または、例えば、タルクまたはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤と、選択的に、安定剤などとの混合物中に有効成分を含有し得る。軟カプセルでは、前記有効化合物は、例えば、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの適切な液体中に溶解または懸濁し得る。更に、安定剤を添加し得る。経口投与のための全ての製剤は、係る投与に適した用量である。口腔頬側投与用には、前記組成物は、従来の様式で処方された、例えば、錠剤またはロゼンジ（ｒｏｚｅｎｇｅｓ）の形態をとり得る。
【００６２】
吸入による投与用に於いて、本発明で使用する化合物は、加圧パックまたは噴霧吸入器（ネブライザー）からエアロゾルスプレーのプレゼンテーション（実射）形態で、適切な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切な気体の使用で、簡便に送達される。加圧エアロゾルの場合、用量単位は計量された量を送達するためのバルブを提供することによって決定し得る。吸入器（ｉｎｈａｌｅｒ）または注入器（ｉｎｓｕｆｆｌａｔｏｒ）で使用する、例えば、ゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、前記化合物とラクトースまたは澱粉などの適切な粉末基剤との粉末混合物を含有するよう製剤化し得る。
【００６３】
本発明の化合物はまた、例えば、ココアバターまたは他のグリセリドのような従来の坐剤基剤を含有する、例えば、坐剤または停留浣腸などの直腸用組成物に製剤化し得る。
【００６４】
前述の製剤に加えて、本発明の化合物はまた、持続性（デポー）製剤として製剤化し得る。このような長時間作用性製剤は、移植（例えば、皮下または筋肉内）または筋肉内注射によって投与し得る。
【００６５】
デポー注射は約１〜約６箇月またはそれ以上の間隔で投与し得る。したがって、例えば、前記化合物は、適切なポリマーまたは疎水性材料（例えば許容される油中のエマルションとして）またはイオン交換樹脂と共に、或いは難溶性誘導体、例えば、難溶性塩として、配合し得る。
【００６６】
経皮投与において、本発明の前記化合物は、例えば、プラスターに適用し得、または結果的に当該生物に供給される経皮治療システムによって適用し得る。
【００６７】
前記化合物の医薬組成物は、適切な固体またはゲル相担体または賦形剤を含み得る。係る担体または賦形剤の例は、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖類、澱粉、セルロース誘導体、ゼラチン、および、例えば、ポリエチレングリコール等のポリマーを含むが、これらに限定されない。
【００６８】
本発明の前記化合物はまた、他の有効成分、例アジュバント、プロテアーゼ阻害剤、またはその他の適合換性のある薬物又は化合物であって、そのような組み合わせが  本明細書に記載の方法の所望の効果を達成するのに望ましいまたは有利であると見られる場合それらと組み合わせて投与し得る。
【００６９】
いくつかの実施形態では、前記崩壊剤成分は、クロスカルメロースナトリウム（ｃｒｏｓｃａｒｍｅｌｌｏｓｅ  ｓｏｄｉｕｍ）、カルメロースカルシウム（ｃａｒｍｅｌｌｏｓｅ  ｃａｌｃｉｕｍ）、クロスポビドン（ｃｒｏｓｐｏｖｉｄｏｎｅ）、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸カルシウム、イオン交換樹脂、食品用酸および一種の炭酸アルカリ成分に基づく発泡性システム、クレー、タルク、澱粉、アルファ化澱粉、澱粉グリコール酸ナトリウム、セルロースフロック、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ケイ酸カルシウム、金属炭酸塩、重炭酸ナトリウム、クエン酸カルシウム、又はリン酸カルシウムの一種またはそれ以上を含む。
【００７０】
いくつかの実施形態では、希釈剤成分は、マンニトール、ラクトース、スクロース、マルトデキストリン、ソルビトール、キシリトール、粉末セルロース、微結晶性セルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロース、澱粉、澱粉グリコール酸ナトリウム、アルファ化澱粉、一つのリン酸カルシウム、一つの金属炭酸塩、一つの金属酸化物、または一つの金属アルミノケイ酸塩の１つまたはそれ以上を含む。
【００７１】
いくつかの実施形態では、選択的な潤滑剤成分は、それが存在する場合、ステアリン酸、ステアリン酸金属塩、フマル酸ステアリルナトリウム、脂肪酸、脂肪アルコール、脂肪酸エステル、ベヘン酸グリセリル、鉱油、植物油、パラフィン、ロイシン、シリカ、ケイ酸、タルク、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ポリエトキシル化ヒマシ油、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリアルキレングリコール、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪アルコールエーテル、ポリエトキシル化ステロール、ポリエトキシル化ヒマシ油、ポリエトキシル化植物油、または塩化ナトリウムの一つまたはそれ以上をふくむ。
【００７２】
一実施形態において、本発明のＰＩＦペプチドは、２０個の遺伝的にコードされたアミノ酸（即ちＤアミノ酸）の一つまたはそれ以上の天然に存在する側鎖を他の側鎖、例えばアルキル、低級アルキル、環状４−、５−、６−、〜７員環アルキル、アミド、低級アルキルアミド、ジ（低級アルキル）アミド、低級アルコキシ、ヒドロキシ、カルボキシ及びその低級エステル誘導体、および４−、５−、６−、〜７員環の複素環４のような基で、置換することによって、修飾されペプチド模倣物を生成する。例えば、プロリンアナログは、プロリン残基の環の大きさを、５員から４，６、または７員に変えて形成し得る。環状基は飽和または不飽和であり、不飽和場合は、芳香族または非芳香族であり得る。複素環基は、１つまたはそれ以上の窒素、酸素および／または硫黄ヘテロ原子を含み得る。係る基の例は、フラザニル、フリル、イミダゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル（例えばモルホリノ）、オキサゾリル、ピペラジニル（例えば、１−ピペラジニル）、ピペリジル（例えば、１−ピペリジル、ピペリジノ）、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル（例えば、１  −  ピロリジニル）、ピロリニル、ピロリル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、チオモルホリニル（例えばチオモルホリノ）、およびトリアゾリルを含む。これらの複素環基は、置換または非置換であり得る。基が置換される場合、当該置換基はアルキル、アルコキシ、ハロゲン、酸素、置換または無置換のフェニル基であり得る。ペプチド模倣物はまた、化学的にリン酸化、スルホン化、ビオチン化、または他の部分の付加または除去によって修飾されたアミノ酸残基を有する。
【００７３】
対応する天然物と同じまたは類似の所望の生物活性を有するが、溶解性、安定性、および／または加水分解またはタンパク質分解に対する感受性に関して、前記ペプチドよりも有利な活性を有するペプチド模倣物を構築するのに、種々の技術が利用可能である、（参照例えば、Ｍｏｒｇａｎ  &  Ｇａｉｎｏｒ，Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，２４，２４３〜２５２，１９８９）。ある特定のペプチド模倣化合物は、本発明の前記ペプチドのアミノ酸配列に基づいている。多くの場合、ペプチド模倣化合物は、選択されたペプチドの三次元構造に基づいた、三次元構造（すなわち、"ペプチドモチーフ"）を有する合成化合物である。前記ペプチドモチーフは、当該模倣体化合物に所望の生物学的活性を与える、すなわち、ＰＩＦ受容体への結合であって、該模倣体化合物の結合活性は、実質的に低下せず、多くの場合、模倣物がモデルとした天然ペプチドの活性と同一或いはそれより大きい。ペプチド模倣化合物は、向上した細胞透過性と、より高い親和性および／または結合活性と、延長した生物学的半減期とのような治療への応用を高める更なる特性を有し得る。
【００７４】
ペプチド模倣のデザイン戦略は当該分野で容易に入手し得る（参照、例えば、Ｒｉｐｋａ  &  Ｒｉｃｈ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２，４４１〜４５２，１９９８；Ｈｒｕｂｙ等，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１，１１４〜１１９，１９９７；Ｈｒｕｂｙ  &  Ｂａｌｓｅ，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．９，９４５〜９７０，２０００）。ペプチド模倣化合物の一つのクラスは、部分的または完全に非ペプチドであるが、原子対原子でペプチド主鎖を模倣し、同様に天然アミノ酸残基の側鎖の機能を模倣する側基を含む、主鎖を有する。幾つかのタイプの化学結合、例えば、エステル、チオエステル、チオアミド、レトロアミド、還元したカルボニル、ジメチレンおよびケトメチレン結合は、プロテアーゼ耐性ペプチド模倣物の構築においてペプチド結合の通常有用な代替物であることが当技術分野で知られている。ペプチド模倣物の別のクラスは、別のペプチドまたはタンパク質に結合するが、必ずしも天然ペプチドの構造的模倣物ではない、小非ペプチド分子を含む。更に別のクラスペプチド模倣物は、コンビナトリアルケミストリーと大規模な化合ライブラリーの生成から生じている。これらは、一般的に天然ペプチドに構造的に無関係であっても、非ペプチド足場上に配置され、必要な官能基を有し、元のペプチドの"地形学的"模倣体として機能する、新規のテンプレートを有する（Ｒｉｐｋａ  &  Ｒｉｃｈ、１９９８、上記参照）。
【００７５】
本発明の実施形態と方法は、以下のＰＩＦペプチドのいずれかを使用する：Ｍｅｔ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｌａ  （配列ＩＤ番号１）；  Ｍｅｔ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（配列ＩＤ番号２）；  Ｍｅｔ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａｓｐ（配列ＩＤ番号３）；  Ｍｅｔ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（配列ＩＤ番号４）；  Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ（配列ＩＤ番号５）；  Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ（配列ＩＤ番号６）；  Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ  （配列ＩＤ番号７）；  Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｘａａ−Ｇｌｙ，ここで、Ｘａａは任意のアミノ酸であり得る（配列ＩＤ番号８）。
【００７６】
単離した、天然および合成両者のＰＩＦペプチドのリストは、以下の表１に提供される。種々のＰＩＦペプチドとスクランブルしたＰＩＦペプチドに対する抗体も提供されている。
【００７７】
【表１】
2014508164.tif 000002
【００７８】
（実施例）  
本発明および使用する方法と材料とを例示する実施形態は、以下の非限定実施例を参照して更に理解し得る。
【実施例１】
【００７９】
ペプチド合成：合成ＰＩＦ−１１５（ＭＶＲＩＫＰＧＳＡＮＫＰＳＤＤ）は、Ｆｍｏｃ（９−ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）化学を用いる，  固相ペプチド合成（Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）で得た。最終的な精製は、逆相ＨＰＬＣにより行われ、同定は，ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析およびアミノ酸分析で確認し、ＨＰＬＣで>９５％に精製し、質量分析（テキサス州Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ社）により実証されている。
【実施例２】
【００８０】
図４に示すように、培養された骨髄由来の食細胞は、ＰＩＦ（配列番号４ペプチド  ＭＶＲＩＫＰＧＳＡＮＫＰＳＤＤ）と、インターフェロン−γ（食細胞活性化サイトカイン）と、Ｍｔｂとに、接触させ、カリウムチャネル阻害剤Ｋｖ１．３の存在下または非存在下でサイトカインの応答を測定した。  ＭＣＰ−１（ケモカイン）インターロイキン（ＩＬ）−６およびＩＬ−５は、Ｍｔｂで増加し、この誘導は、ＰＩＦによって増大し、Ｋｖ１．３阻害により遮断された。ＩＦＮ活性化食細胞をＭｔｂに接触させ場合、ＭＩＧおよびＩＰ１０ケモカインはＰＩＦによってやや増強され、Ｋｖ１．３の阻害は、ＰＩＦの効果を減少させた。ＰＩＦは、ＭｔｂによるＶＥＧＦとＦＧＦβの誘導を増強（ＩＦＮγによる食細胞の活性化に関係なく）し、Ｋｖ１．３の阻害は、この応答を増強した。炎症性サイトカインＴＮＦ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＭＩＰ１α、及びＫＣは、Ｍｔｂによって誘導され、ＰＩＦによって増強され、さらに抗Ｋｖ１．３によって増強された。結論として、ＰＩＦで調製されたマクロファージは、Ｍｔｂに対して変更された応答を示す。ＰＩＦは、Ｍｔｂに対する食細胞応答を調節することができたので、病気の発症を調節し得る。
【実施例３】
【００８１】
ｓＰＩＦは効果的にＭｔｂ−感染したマクロファージを制御する。Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験は，培地で２４時間Ｍｔｂ＋／−ＰＩＦに接触させた、マウスの骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣｓ）を使用した。ｓＰＩＦは，低生理ＰＩＦの濃度（ｎＭ）でＭｔｂに対する食細胞の応答をはっきり調節した。ｓＰＩＦによる前処理は，特異的にＢＭＤＣの増強した応答をもたらし，炎症性サイトカインＴＮＦ、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂおよびＩＬ−６並びに、ケモカインＭＣＰ−１、ＭＩＰ１ａ、及びＫＣが増加した。重要なことに、インターフェロン−γによるプレ活性化が存在しない場合にさえ、ｓＰＩＦは作用して、ＢＭＤＣの応答性を高めたことである。ＶＥＧＦ及びＦＧＦｂ（成長因子）もｓＰＩＦで増強されたことで、このもののＢＭＤＣの改造活性を調節する、能力を示している。したがって、ＰＩＦは、インターフェロン−γの前処理によって表されるように、獲得免疫の不在及び存在下の両方で証明される、強力な抗結核菌の応答を発揮する。
【００８２】
Ｋｖ１．３ｂに結合することがＢＭＤＣ関係でも関連しているかどうかを、抗Ｋｖ１．３阻害剤を使用することによって実証された。多くのｓＰＩＦ誘導によるサイトカインおよびケモカインの分泌パターンは、阻害剤の存在下で修正さられた。まとめて言えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏデータ（ＢＭＤＣ  Ｍｔｂのデータ）は、Ｍｔｂ感染を制御するｓＰＩＦの有効性を支持する。
【実施例４】
【００８３】
図４及び５に示すように、本研究の目的は、（１）Ｍｔｂに感染した培養食細胞を調節する，及び（２）マウスモデルにおいて慢性取得Ｍｔｂの感染を制御する、ＰＩＦの能力を評価することであった。結果は、ＰＩＦがサイトカイン／ケモカイン分泌を調節することを示した。ＭＣＰ１、ＩＬ６、およびＩＬ５は、Ｍｔｂによって増加させられ、ＰＩＦによってさらに誘導され、Ｋｖ１．３の阻害剤によって遮断された。ＭＩＧおよびＩＰ１０は、ＩＦＮγがＭｔｂに添加された場合、ＰＩＦによってやや増強され、Ｋｖ１．３阻害剤はこの効果を遮断した。ＰＩＦは、ＶＥＧＦ、及びＭｔｂによるＦＧＦβ誘導（ＩＦＮγ活性化に関係なく）を推進し、また、Ｋｖ１．３阻害剤は、この効果を増強した。ＴＮＦα、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＭＩＰ１ａ、及びＫＣは、Ｍｔｂで誘導されたが、ＰＩＦによって増強され、さらにＫｖ１．３阻害剤によって増強される。マウスは、０日目にエアロゾルを介して７５  ｃｆｕのＭｔｂで感染させた。感染マウスは、次いで６０〜７０日目に、ＰＩＦ０．１ｍｇ／ｋｇを用いて毎日の注射で治療し、次いで、１０日間観察した。８０日目、治療後１０日、肺組織の生存Ｍｔｂの細菌数を評価した。インビボで、短期間の、低用量ＰＩＦ治療は、Ｍｔｂの感染を減少させた。この効果は、治療後１０日持続した（図５参照）。
【００８４】
結論として、ＰＩＦで治療した食細胞は、Ｍｔｂに対して変更した応答を示した。部分的にＫｖ１．３依存した応答において、ＰＩＦは、Ｍｔｂに感染した食細胞のサイトカイン／ケモカイン分泌を調節した。ＰＩＦは、慢性的にＭｔｂに感染したマウスに対する治療効果を有していた。ＰＩＦ  Ｒｘは低用量、短期であったが、ＰＩＦ投与終了後に持続する長期的な効果を達成した（０．１ｍｇ、１０日、治療後１０〜８０日）。
【実施例５】
【００８５】
二つの阻害剤を、刺激されたヒトＴリンパ球によるサイトカイン産生のＰＩＦ調節への影響について試験した。末梢血は、健康なドナー２名から得た。単核細胞を、Ｆｉｃｏｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ遠心分離で精製した。以下のいずれかのメディアを有する培養物をウェル毎に８ｘ１０４細胞で２通り調製した：（１）０、１、１０および５０ｎＭｍのＰＩＦ；  （２）１００ｎＭのＫｖ１．３阻害剤、５μＭＩＤＥ阻害剤の不在及び存在か、または両方一緒で抗ＣＤ３／ＣＤ２８の刺激、または（３）１００ｎＭのＫｖ１．３阻害剤、５μＭＩＤＥ阻害剤の不在及び存在か、または両方一緒で１、１０または５０ｎｍのＰＩＦと共に抗ＣＤ３／ＣＤ２８の刺激。培養上清を治療２４時間後に収集し、多重方式（Ｂｅｎｄｅｒ，Ｃａｔ．Ｎｏ．ＢＭＳ８１０ＦＦ。）を用いて１１個のＴｈ１／Ｔｈ２サイトカインについてアッセイした：ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ  −６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＩＦＮ−γ。
【００８６】
図３に示すように、結果は、ＰＩＦは単独で１、１０及び５０ｎＭで試験した複数の検体に影響を与えなかったことを示した。ＣＤ３／ＣＤ２８は、ＩＬ−１２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１ｂ及びＴＮＦβの産生を活性化しなかった。ＣＤ３／ＣＤ２８誘導無しで、ＩＬ−８のレベルは（定量上限−８．９１ｎｇ／ｍＬ超過）は非常に高い。ＣＤ３／ＣＤ２８はＩＬ−８産生を下方制御するようである。ＰＩＦまたはＫｖ１．３阻害剤、またはＩＤＥ阻害剤の有意な効果は、明確ではなかった。ＣＤ３／ＣＤ２８Ｔ細胞刺激はＩＦＮｇ、ＩＬ−２、ＩＬ−６およびＴＮＦαの分泌を誘導した。ドナー２細胞で、わずかにより高い誘導が観察された。１、１０および５０ｎＭのＰＩＦの存在下で、検体のレベルは、５μＭ  ＩＤＥ阻害剤の存在下で減少したが、１００ｎＭ、Ｋｖ１．３の阻害剤の存在下では減少しなかった。両方の阻害剤の存在下では、減少した。
【００８７】
結論として、特定のＩＤＥ阻害剤を用いた細胞ベースのアッセイにおいて、ＰＩＦは、細胞内のインスリン分解酵素（ＩＤＥ）と結合することが示された。
【実施例６】
【００８８】
ＰＩＦの抗病原効果はさらに、他の多くの遺伝子の中で，ＰＢＭＣ  ｍＲＮＡ調節のＴＯＬＬ受容体に記録されている。前記胚／同種移植は、母親／ホストによって許容され、一方病気と闘う彼女の防御機構を維持する、完全な移植である。着床前因子（ＰＩＦ）は、生存可能な妊娠で、着床を編成し、おそらく母性免疫を調節し、受け入れを支持するのに必要である。
【００８９】
図１に示すように、ｓＰＩＦ（ＰＩＦアナログ）を、ナイーブ（ｎａｉｖｅ）なＴＣＲ−Ｃｏ−活性化したヒトＰＢＭＣとについてテストし、増殖、サイトカイン分泌及びｍＲＮＡ発現を評価した。ＰＢＭＣをサブセットへのＦＩＴＣ−ｓＰＩＦ結合をフローサイトメトリー（ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）を用いて決定した。ｓＰＩＦのＣａ＋  ＋動員に対する効果は、Ｆｌｅｘステーションによってテストした。ＰＩＦは、抗−ＰＩＦモノクローナル抗体を用いて、妊娠マウスの子宮内で検出された。ｓＰＩＦはＰＢＭＣを調節することが判明した：抗ＣＤ３−Ｍａｂ刺激による増殖および混合リンパ球反応を遮断した。ナイーブなＰＢＭＣにおいて、ｓＰＩＦは、活性化したＰＢＭＣ中でＴＨ１（ＴＮＦ−α、ＩＬ２）サイトカインを減少させる。ｓＰＩＦは、ＴＨ２（ＩＬ−１０、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ３）及びＴＨ１（ＩＬ２、ＩＦＮγ）サイトカインを促進する。  共刺激は、ＴＨ２／ＴＨ１サイトカイン・バイアスを引き起こし、グローバルな遺伝子解析は、増加した耐性促進性（ｐｒｏ−ｔｏｌｒａｎｔ）と減少した炎症促進性プロファイルを示した。ＦＩＴＣ−ｓＰＩＦはすべてのＣＤ１４＋に結合し、また、Ｔ細胞、キー規制ＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇｓ（Ｔｒｅｇ）およびＢ細胞を活性化した。ＰＩＦは、免疫抑制薬のための通常の経路である、Ｃａ＋＋動員を介して作用しない。ＰＩＦは、優先的に妊娠マウス子宮内の子宮ＮＫ細胞に取り込まれる。
【００９０】
結論として、受精後の胚は、その包括的なＰＩＦに基づくシグナリングを通して、免疫抑制せずに周辺免疫を調節し，耐性を作る。負荷（ｃｈａｌｌｅｎｇｅｄ）条件下では、ＰＩＦは、病気と闘う母性能力を促進する。ＮＫ細胞の制御によって、ＰＩＦは、子宮内で胚に向けた母体の拒絶反応を減らし得る。全体的に、ＰＩＦは、前記着床プロセスで基本的な役割を果たし、母体の妊娠の認識を統合し、また、抹消及び局所の両方の免疫環境を制御する。ＰＩＦは、ＣＤ１４＋細胞に結合し、高い濃度ではＴおよびＢ  ５８０細胞に結合する。未刺激ＰＢＭＣを２４時間培養し、ＦＩＴＣ−ＰＩＦ  ５８１（０．３〜２５μｇ／ｍｌ）の特異なＰＢＭＣ亜集団に対する結合を、二色ステインまたは顕微鏡でフローサイトメトリーにより表面マーカー５８２を用いて決定した。図１は、細胞内のＦＩＴＣ−ＰＩＦの存在を示す。
【実施例７】
【００９１】
図２に示すように、細胞（２００，０００／ウェル）を、プレートに結合した抗ＣＤ３抗体、または抗−ＣＤ３／抗−ＣＤ２８ＭＡｂ１０μｇ／ｍｌ，または、異種混合リンパ球反応（ＭＬＲ）を用いて刺激し、２〜４日間０〜５００ｎｍのｓＰＩＦまたはＰＩＦｓｃｒを含む無血清培地（カリフォルニア州  ＧＩＢＣＯ（登録商標）ＡＩＭ−Ｖ  Ｍｅｄｉｕｍ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．，Ｃａｒｌｓｂａｄ）で培養した。いくつかの実験では、組換えＩＬ２ｒ（３０  Ｕ／ｍｌ）＋／−  ｓＰＩＦを添加した。増殖は，［３  Ｈ］−チミジンの取り込みにより測定した。他の実験では、ｓＰＩＦ０−１０００ｎｍを、ＭＬＲと抗−ＣＤ３／抗−ＣＤ２８ＭＡｂ１０μｇ／ｍｌ両者で刺激した、ＰＢＭＣｓ上の単独Ｔ細胞（ＣＤ３＋）でテストした。
【実施例８】
【００９２】
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社のＰｒｏｔｅｉｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ＳｅｒｖｉｃｅｓをＰｒｏｔｏＡｒｒａｙ（登録商標）  Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ  ｖ５．０上で実施し、９，０００を超えるヒトタンパク質との相互作用を調べた。  ＣＡＲＩ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ提供による、ＰＩＦ−Ａｌｅｘａ  ６４７と名付けたＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７−抱合した合成ペプチドを使用して、該マイクロアレイを２通り、２つの濃度（２５０  ｎｍおよび２．５μＭ）で調べた。これらのアッセイからの結果は、プローブのタンパク質を除いた、負の対照アッセイと比較した。マイクロアレイ上の固定化タンパク質とのプローブタンパク質のすべての相互作用は、配列内の指定した統計的閾値の基準で評価し、負の対照配列で観察された相互作用と比較した。正のヒットの目視確認も直接アレイ画像を検査することにより行い、前記信号の確実性と品質を確認した。これらの分析から、全部で１１組のヒトタンパク質は、ＰＩＦ、Ａｌｅｘａ  ６４７の候補相互作用物質として同定された。
【実施例９】
【００９３】
ＰＩＦの治療上の可能性を実証するために、オスのＡｐｏＥ−／−マウスは、７週間２２％の脂肪と０．１５％のコレステロールを含む高脂肪の洋風の食事を食べさせた。次いで、マウスを無作為に６クラスターの１つに割り当てた：即ち種々のＰＩＦ用量の３つの介入グループとｓｃｒＰＩＦ又はＰＢＳの３つのコントロールグループ。治療は、３日毎、１５０μＬ腹腔内注射により合計７週間投与した。
【００９４】
図７に示すように、ＰＩＦ  ０．１ｍｇ／ｋｇ／日の治療は，大幅にＰＢＳコントロール（Ｄ、＊＊ｐ＝０．０００８）に比べて大動脈根におけるプラーク面積を３０％減少させた。  ＰＩＦ  １ｍｇ／ｋｇ／日では、より大きな減少の４６％は、ＰＢＳ（Ｄ、＊＊＊＊  ｐ<０．０００１）と比較して、明らかであった。ＰＩＦのより高い用量もｓｃｒＰＩＦの両方の用量（＊＊＊＊Ｐ<０．０００１）と比較して、プラーク面積を統計的に有意に減少させた。ＰＩＦ１ｍｇ／ｋｇ／日の治療は、有意にＰＢＳ対照（Ｅ、＊＊ｐ<０．００２）と比較して大動脈弓のプラーク面積を４３％減少させた。減少することは、ＰＩＦ１ｍｇ／ｋｇ／日と，ｓｃｒＰＩＦ両用量（＊＊＊それぞれｐ＝０．０００５、＊＊＊＊Ｐ<０．０００１）との間でも、再度明らかになった。さらに、図８〜１０１に示すように、大動脈根と大動脈弓で，ＰＩＦは、ＶＣＡＭ−１、ＭＣＰ−１、ＣＤ６８および脂質を減少させた。
【００９５】
結論として、ＰＩＦは、前記病気になりやすく、高脂肪食を与えられているマウスモデルのアテローム性動脈硬化症の形成を軽減する。前記保護作用は直接的で、大動脈弓と大動脈根標的部位の両方でアテローム性動脈硬化プラークの減少を導いた。脂肪蓄積の減少は明らかで、炎症性マクロファージの減少及び脂肪泡沫細胞の数値の低下も同様であった。前記防護効果は、循環脂質類のレベルがＰＩＦの投与後に変化しなかったので、その変化に関連していなかった（図１１参照）。当該効果は、ＰＩＦｓｃｒとＰＢＳによって再現されなかったので、この効果は特異的であったＰＩＦは、主に先進国の主要な健康障害であるアテローム性動脈硬化症に対する防護のための新しく安全で的を絞った治療を提供する。
【実施例１０】
【００９６】
マウス腹膜炎モデルの研究を行い、ＰＩＦがＭＣＰ−１誘導単球遊走を阻害することを実証した。このモデルでは、８〜１２週齢のＣ５７ｂｌ６マウスに、ＰＩＦ、ｓｃＰＩＦ（０．３ｎｍｏｌ／ｇ、腹腔内）又は溶媒対照群としてＰＢＳのいずれかを注射した。腹膜炎は３ｍｌの４％チオグリコール酸塩を腹腔注射することによって誘導し，２０時間後に、マウスを麻酔し、前記腹腔を５ｍｌの滅菌ＰＢＳで洗い流した。続いて、単球およびマクロファージは、フローサイトメトリーでＦ４／８０とＣＤ１１ｂとを用いて定量した。
【００９７】
図６に示すように、該結果は、ＰＩＦ（１μＭ及び１０μＭ）が、インビトロ・トランスウェル遊走アッセイ（＊ｐ<０．０１）において、ＭＣＰ−１誘導によるＴＨＰ−１細胞の遊出を著しく減少させることを示した。ＰＩＦはさらに記載されているような腹膜炎モデルとローダミンによる細胞染色とを用い、生体顕微鏡において、腸間膜細静脈における白血球接着とローリング（ｒｏｌｌｉｎｇ）を阻害した。
【実施例１１】
【００９８】
健常な妊娠は、個別にまたはお互いに相乗効果で作用するいくつかの液性因子の調整を必要とする。それらの液性因子の例は、ＨＬＡ−Ｇ、サイトカイン、およびプロゲステロンを含む。前記液性因子類は、感染時に分泌され、これは、胎児の発育に影響を与え、多くの場合、流産に終わり得る合併症を起こす。ＰＩＦは、前記胚に自己分泌栄養保護効果を発揮し、胚の着床と栄養膜の侵入を促進する。ＰＩＦがマクロファージによるＬＰＳ（リポ多糖類）誘導亜酸化窒素（ＮＯ）の分泌に影響を与えるかどうか、及びどのようにＰＩＦはグラム陰性菌の主要なエンドトキシンであるＬＰＳにマクロファージの応答を限定するかどうかを測定した。
【００９９】
マクロファージ細胞株は、２日間及び５日間２００ｎｍのＰＩＦ（合成ＰＩＦアナログ）と共に培養した。実験の最後の２４時間で、ＬＰＳを、細胞活性化のために培養物に添加した。Ｇｒｅｉｓｓ試薬試験は、当該上清へのＮＯ分泌を検出するために行った。表面プラズモン共鳴分光法（Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｐｌａｓｍｏｎ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｓｐｅｃｔｒｏｅｃｏｐｙ（ＳＰＲ））を用いてＰＩＦ標識したセンサ表面に対する、ＬＰＳ及びＬＰＳ結合受容体の結合（ＴＬＲ４−ＭＤ２及びＣＤ１４）を評価した。ＬＰＳのケモタイプ（大腸菌Ｏ５５：Ｂ５と大腸菌ＥＨ１００から）２種を３つの濃度（５、２５、１００μＭ）で試験した。
【０１００】
その結果は、ＰＩＦ  ２００ｎＭが前記２または５日間のインキュベーションのいずれかでＮＯベースラインに影響を与えなかったことを示した。これとは対照的に、ＰＩＦは、ＬＰＳによる活性化後大幅にＮＯ産生を下方制御した。２日目の効果は５日目（Ｐ<０．０５）でより顕著であった。予備的な結果は、試験した両方のＬＰＳケモタイプに固定ＰＩＦの結合が明らかに存在しないことを示し、同様に、結合は、コントロール（ランダムな順序で同じアミノ酸のランダムなペプチド）として使用したスクランブルしたＰＩＦにも見られなかった。ＰＩＦが構造的に完全であることを確認するために、ＰＩＦ特異的抗体を精製ＰＩＦとともにインキュベートし、結果は、当該抗体がＰＩＦに結合したことを示した。ＳＰＲ分析用に設定された前記条件下において、ＰＩＦは、明らかなＬＰＳ結合を示さなかった。
【０１０１】
結論として、ＰＩＦは、休息マクロファージには無い酵素であるｉＮＯＳによって生成される、主要なＬＰＳ誘導による反応性窒素中間体である、ＮＯ分泌を遮断することが示された。ＰＩＦは、直接ＬＰＳに結合しないが、その作用は、ＣＤ１４、ＭＤ２，及びマクロファージスカベンジャー受容体（ＳＲ）などのＬＰＳ関連受容体への結合を含む可能性がある。係るデータは、自然免疫系に対するＰＩＦの標的抗炎症作用を支持する。
【図１Ａ−１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図１Ｆ】
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【図１Ｇ】
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【図１Ｈ】
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【図１Ｉ】
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【図１Ｊ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ−２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図２Ｇ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ−３Ｄ】
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【図３Ｅ−３Ｆ】
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【図３Ｇ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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