(57)【要約】トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）、少なくとも一つの双性イオン、ならびに水を含む、電気泳動ゲルの電気泳動耐用期間を延長するための電解液が提供される。電解液は、例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥなどのゲル電気泳動のための緩衝系において用いられることができる。【選択図】図１
2014518397.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
電気泳動ゲルの電気泳動耐用期間を延長するための電解液であって、
２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール（ＡＭＰＤ）、Ｎ−（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＡＭＰＳＯ）、Ｎ−グリシルグリシン（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）、４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳまたはＨＥＰＰＳ）、３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、２−（シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス［２−ヒドロキシエチル］−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、（２−［２−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシメチル）エチルアミノ］エタンスルホン酸）（ＴＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、および３−Ｎ−モルホリノプロパンスルホン酸（ＰＯＰＳＯ）から選択される少なくとも一つの双性イオン、ならびに
水
を含む電解液。
【請求項２】
双性イオンが、４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳまたはＨＥＰＰＳ）である、請求項１に記載の電解液。
【請求項３】
双性イオンが、Ｎ−グリシルグリシン（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）および３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）から選択される、請求項１に記載の電解液。
【請求項４】
電解液のｐＨが、およそ８．０からおよそ１１．０までである、請求項１から３のいずれか一つに記載の電解液。
【請求項５】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）をさらに含む、請求項４に記載の電解液。
【請求項６】
ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）をさらに含む、請求項１に記載の電解液。
【請求項７】
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングリコール四酢酸（ＥＧＴＡ）、ニトリロ三酢酸三ナトリウム、ヒドロキシエチルエチレンジアミン酢酸三ナトリウム（ＨＥＤＴＡ三ナトリウム）、ジエチレントリアミノ酢酸五ナトリウム、またはウラミル酢酸二ナトリウムという名称のキレート剤をさらに含む、請求項１から６のいずれか一つに記載の電解液。
【請求項８】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）の濃度が、およそ１０ｍＭからおよそ５００ｍＭまでである、請求項５に記載の電解液。
【請求項９】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）の濃度が、およそ５０ｍＭからおよそ１５０ｍＭまでである、請求項８に記載の電解液。
【請求項１０】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）の濃度が、およそ５０ｍＭからおよそ３００ｍＭまでである、請求項８に記載の電解液。
【請求項１１】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）の濃度が、１５０ｍＭである、請求項８に記載の電解液。
【請求項１２】
双性イオンの濃度が、およそ１ｍＭからおよそ５００ｍＭまでである、請求項１から１１のいずれか一つに記載の電解液。
【請求項１３】
双性イオンの濃度が、およそ１０ｍＭからおよそ５００ｍＭまでである、請求項１２に記載の電解液。
【請求項１４】
双性イオンの濃度が、およそ２５ｍＭからおよそ７５ｍＭまでである、請求項１２に記載の電解液。
【請求項１５】
双性イオンの濃度が、およそ５０ｍＭからおよそ１００ｍＭまでである、請求項１２に記載の電解液。
【請求項１６】
双性イオンの濃度が、５０ｍＭである、請求項１５に記載の電解液。
【請求項１７】
双性イオンの濃度が、１００ｍＭである、請求項１５に記載の電解液。
【請求項１８】
ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度が、０．５％（質量／体積）以下である、請求項７から１７のいずれか一つに記載の電解液。
【請求項１９】
ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度が、０．１％（質量／体積）以下である、請求項１８に記載の電解液。
【請求項２０】
ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度が、０．１％（質量／体積）である、請求項１８に記載の電解液。
【請求項２１】
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）の濃度が、０．５％（質量／体積）以下である、請求項８から２０のいずれか一つに記載の電解液。
【請求項２２】
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）の濃度が、０．０５％（質量／体積）以下である、請求項２１に記載の電解液。
【請求項２３】
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）の濃度が、０．０３％（質量／体積）である、請求項２２に記載の電解液。
【請求項２４】
少なくとも一つのサンプルの電気泳動分離の間の電気泳動ゲルの電気泳動耐用期間を延長するための方法であって、
少なくとも一つのサンプルをその中に含む電気泳動ゲルと接触している請求項１から２３のいずれか一つに記載の電解液に電圧をかける段階
を含む方法。
【請求項２５】
少なくとも一つのサンプルの電気泳動分離の間の電気泳動ゲルの電気泳動耐用期間を延長するための方法であって、
２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール（ＡＭＰＤ）、Ｎ−（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＡＭＰＳＯ）、Ｎ−グリシルグリシン（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）、４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳまたはＨＥＰＰＳ）、３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、２−（シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス［２−ヒドロキシエチル］−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、（２−［２−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシメチル）エチルアミノ］エタンスルホン酸）（ＴＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、および３−Ｎ−モ
ルホリノプロパンスルホン酸（ＰＯＰＳＯ）から選択される少なくとも一つの双性イオンを、電気泳動バッファーに添加する段階
を含む方法。
【請求項２６】
前記双性イオンが、４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳまたはＨＥＰＰＳ）である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
双性イオンが、Ｎ−グリシルグリシン（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）および３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
少なくとも一つのサンプルをその中に含む電気泳動ゲルと接触している前記電気泳動バッファーに電圧をかける段階をさらに含む、請求項２５から２７のいずれか一つに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１１年７月１４日出願の米国特許仮出願第６１／５０７，８８３号の優先権を主張するものであり、その内容は参照として本明細書に組み込まれる。
【０００２】
技術分野
開示される発明は、全体としてゲル電気泳動に関するものである。より具体的には、開示される発明は、ゲル電気泳動の間の電気泳動ゲルの電気泳動耐用期間を延長するための、少なくとも一つの双性イオンおよび水を含む電解液に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
ゲル電気泳動は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、ポリペプチド、およびタンパク質などの生体分子の分離のための一般的な手法である。ゲル電気泳動において、分子は、付与される電場によって引き起こされる、濾過用ゲルを通した分子の泳動の速度にしたがって、バンドに分離される。
【０００４】
この技術において利用される基本的な装置は、ガラス管の中に入れられるか、ガラス製もしくはプラスチック製のプレートの間にスラブとして挟み込まれるか、またはプラスチックトレーの中に注がれるゲルから成る。ゲルは、導電性のバッファーで満たされる細孔を定める、目の粗い分子ネットワーク構造を有する。ゲルの至る所にあるこれらの細孔は、泳動する高分子を通過させるのに十分に大きい。
【０００５】
ゲルは、ゲルと電力供給の陰極または陽極との間を電気的に接触させるバッファーと接触して、槽の中に置かれる。高分子および追跡用染料を含むサンプルが、ゲルの頂部に置かれる。電位がゲルに加えられ、それによりサンプルの高分子および追跡用染料がゲルの底の方に泳動し始める。電気泳動は、追跡用染料がゲルの端に届く直前で停止される。
【０００６】
タンパク質の分離に用いられる最も一般的な緩衝系は、Ｌａｅｍｍｌｉ緩衝系であり、該緩衝系は、分離ゲルの中の、ＨＣｌを用いてｐＨ８．８に滴定された、０．３７５Ｍのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）から成る。濃縮ゲルは、ｐＨ６．８に滴定された、０．１２５Ｍのトリスから成る。陽極および陰極のランニングバッファーは、０．０２４Ｍのトリス、０．１９２Ｍのグリシン、０．１％のＳＤＳを含む。異なる組成、ｐＨ特性、電圧要求などを有する、多くのさまざまなゲル分離材料が開示されている。本分野におけるほとんどの最近の技術革新の目的は、より速い、より正確な、より安定した、またはそれ故により用途の広い電気泳動を行うために利用され得る電気泳動ゲルを提供することとなっている。
【０００７】
多くのさまざまなゲル緩衝系が、Ｌａｅｍｍｌｉのトリス−ＨＣｌグリシン緩衝系の使用を伴わない、中性ｐＨでのまたは中性ｐＨ前後での使用のために提案されている。
【０００８】
例えば、Ｕｐｄｙｋｅらの米国特許第６０９６１８２号明細書は、中性ｐＨでの電気泳動ゲルを開示している。このようなゲルを製造する利点は、このゲル系が安定であり、かつ反応性が低減しており、保存期間が増大していることである。
【０００９】
Ｈｊｅｒｔｅｎらの米国特許第５４６４５１７号明細書は、高い緩衝能力および低い導電性を有する電気泳動バッファーを開示している。とりわけキャピラリー電気泳動における、このタイプのバッファーの利点は、該バッファーによって、分離がより高い電圧で、またそれ故により迅速に行われ得ることである。
【００１０】
技術革新の大多数は、ゲルバッファーの新しい配合を提案することによって電気泳動を改善することに注目している。
【００１１】
現在のところ、電気泳動用プレキャストゲルの製造および販売における主要な障害は、それらのおよそ３か月というかなり短い保存期間である。例えば、プレキャストポリアクリルアミドゲルについて、それらの劣化は、基本的な条件下で、部分的にアニオン性のカルボン酸誘導体を形成するための、アミド基の加水分解が原因であると考えられている。それゆえに、高いｐＨ（例えばｐＨ８．０から９．５）は、保管に関してゲルの安定性を低めるものであると考えられている。加水分解は、分離された分子の分解の損失、分離された分子の泳動距離の減少、およびタンパク質の染色の濃度の減少をまねくものであると考えられている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
そのために、通常の使用期限（保存期間）が過ぎているゲルの電気泳動耐用期間を延長するようになる試薬が必要である。
【００１３】
第一の実施態様において、電気泳動ゲルの電気泳動耐用期間を延長するための電解液であって、
２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール（ＡＭＰＤ）、Ｎ−（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＡＭＰＳＯ）、Ｎ−グリシルグリシン（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）、４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳまたはＨＥＰＰＳ）、３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、２−（シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス［２−ヒドロキシエチル］−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、（２−［２−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシメチル）エチルアミノ］エタンスルホン酸）（ＴＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、および３−Ｎ−モルホリノプロパンスルホン酸（ＰＯＰＳＯ）から選択され得る少なくとも一つの双性イオン、ならびに
水
を含む電解液が開示される。
【００１４】
双性イオンは、４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳまたはＨＥＰＰＳ）であり得る。
【００１５】
双性イオンは、Ｎ−グリシルグリシン（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）および３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）から選択され得る。
【００１６】
電解液のｐＨは、およそ８．０からおよそ１１までであり得る。
【００１７】
電解液は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）をさらに含み得る。
【００１８】
電解液は、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）をさらに含み得る。
【００１９】
電解液は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングリコール四酢酸（ＥＧＴＡ）、ニトリロ三酢酸三ナトリウム、ヒドロキシエチルエチレンジアミン酢酸三ナトリウム（ＨＥＤＴＡ三ナトリウム）、ジエチレントリアミノ酢酸五ナトリウム、またはウラミル酢酸二ナトリウムという名称のキレート剤をさらに含み得る。
【００２０】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）の濃度は、およそ１０ｍＭからおよそ５００ｍＭまでであり得る。
【００２１】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）の濃度は、およそ５０ｍＭからおよそ１５０ｍＭまでであり得る。
【００２２】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）の濃度は、およそ５０ｍＭからおよそ３００ｍＭまでであり得る。
【００２３】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）の濃度は、１５０ｍＭであり得る。
【００２４】
双性イオンの濃度は、およそ１ｍＭからおよそ５００ｍＭまでであり得る。
【００２５】
双性イオンの濃度は、およそ１０ｍＭからおよそ５００ｍＭまでであり得る。
【００２６】
双性イオンの濃度は、およそ２５ｍＭからおよそ７５ｍＭまでであり得る。
【００２７】
双性イオンの濃度は、およそ５０ｍＭからおよそ１００ｍＭまでであり得る。
【００２８】
双性イオンの濃度は、５０ｍＭであり得る。
【００２９】
双性イオンの濃度は、１００ｍＭであり得る。
【００３０】
ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度は、０．５％（質量／体積）以下であり得る。
【００３１】
ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度は、０．１％（質量／体積）以下であり得る。
【００３２】
ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度は、０．１％（質量／体積）であり得る。
【００３３】
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）の濃度は、０．５％（質量／体積）以下であり得る。
【００３４】
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）の濃度は、０．０５％（質量／体積）以下であり得る。
【００３５】
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）の濃度は、０．０３％（質量／体積）であり得る。
【００３６】
別の実施態様によると、少なくとも一つのサンプルの電気泳動分離の間の電気泳動ゲルの電気泳動耐用期間を延長するための方法であって、以下の段階を含む方法が開示される。
【００３７】
少なくとも一つのサンプルをその中に含む電気泳動ゲルと接触している本発明による電解液に電圧をかける段階。
【００３８】
別の実施態様によると、少なくとも一つのサンプルの電気泳動分離の間の電気泳動ゲルの電気泳動耐用期間を延長するための方法であって、以下の段階を含む方法が開示される。
【００３９】
２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール（ＡＭＰＤ）、Ｎ−（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＡＭＰＳＯ）、Ｎ−グリシルグリシン（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）、４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳまたはＨＥＰＰＳ）、３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、２−（シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス［２−ヒドロキシエチル］−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、（２−［２−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシメチル）エチルアミノ］エタンスルホン酸）（ＴＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、および３−Ｎ−モルホリノプロパンスルホン酸（ＰＯＰＳＯ）から選択される少なくとも一つの双性イオンを、電気泳動バッファーに添加する段階。
【００４０】
双性イオンは、４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳまたはＨＥＰＰＳ）であり得る。
【００４１】
双性イオンは、Ｎ−グリシルグリシン（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）および３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）から選択され得る。
【００４２】
本発明の方法は、少なくとも一つのサンプルをその中に含む電気泳動ゲルと接触している電気泳動バッファーに電圧をかける段階を、さらに含み得る。
【００４３】
次の用語が、以下に定義される。
【００４４】
用語「改善した分解」は、より広い、またはより太いバンドを有する他の分離手段とは対照的に、互いに距離があるかまたは間隔のあいた、分子の、より鮮明な、またはより狭いバンドの分離を可能にする、より良好な分解を意味することを目的としている。これによって、分子量の全範囲にわたってこれらのバンドを生じさせるさまざまな分子の物理的分離または分子量同定が容易になる。
【００４５】
用語「電気泳動耐用期間」は、所有者への実用性の観点からの、電気泳動ゲルの通常の寿命を意味することを目的としている。これには、電気泳動ゲルの電気泳動の質の容認できない損失（例えば、分解の損失、泳動速度の減少、泳動のアーチファクト、ポリアクリルアミドゲルの過熱、ゲルの亀裂または歪みなど）のない期間、および電気泳動ゲルがその使用目的のために利用可能な状態を保っている期間が含まれる。
【００４６】
本発明の特徴および利点は、付属の図面に示されるような、選択された実施態様の以下の詳細な説明に鑑みて、より明らかになるであろう。当然のことながら、開示される、および特許請求の範囲に記載される発明は、特許請求の範囲から逸脱することなく、さまざまな点において変更が可能である。したがって、図面および明細書は、本質的に説明のためのものであって制限的なものではないと見なされるべきであり、また本発明の全範囲は、特許請求の範囲の中で説明されている。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】本発明の実施態様による電解液の中で電気泳動され、またトリス−グリシン−ＳＤＳ（ベースライン）溶液で電気泳動されたゲルと比較された、ポリアクリルアミドゲルを示す図である。すべての電気泳動されたゲルは、それらの使用期限を過ぎていた。
【図２】本発明の実施態様による電解液の中で電気泳動され、またトリス−グリシン−ＳＤＳ（ベースライン）溶液で電気泳動されたゲルと比較された、ポリアクリルアミドゲルを示す図である。すべての電気泳動されたゲルは、それらの使用期限を過ぎていた。
【図３】本発明の実施態様による電解液（Ａ）の中で電気泳動され、またトリス−グリシン−ＳＤＳ（ベースライン）溶液（Ｂ）で電気泳動されたゲルと比較された、ポリアクリルアミドゲルを示す図である。すべての電気泳動されたゲルは、それらの使用期限を過ぎていた。
【図４】本発明の実施態様による電解液の中で電気泳動されたポリアクリルアミドゲルを示す図である。電気泳動されたゲルは、それらの使用期限を過ぎている。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
本発明者らは、驚くべきことに、ゲル電気泳動で用いる電解液の調製に特定の双性イオンを選択することによって、電気泳動（または本明細書でも用いられるように電気泳動分離）で用いる電気泳動ゲルの耐用期間が予想外に延長し得ることを見出した。この新規で予想外の特性は、例えば電気泳動の速度の増大、ゲル分解の改善、またはその両方をもたらす特定の同定された双性イオンが有し得る何か他の特性に加えられるものである。この改善は、例えば、電解液を、期待された使用期限が過ぎている電気泳動ゲルを電気泳動で用いる電気泳動装置のランニングバッファー（「貯蔵槽（ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）」バッファーとも呼ばれる）として用いる場合に、観察することができる。
【００４９】
実施態様において、ゲル電気泳動を行うための電解液が開示される。電解液は、特定の成分を含む。
【００５０】
双性イオン
【００５１】
双性イオンは、０の正味荷電を有し、したがって電気的に中性であるが、さまざまな原子の形式電荷を有する化合物である。双性イオンは極性であり、通常非常に水溶性であるが、ほとんどの有機溶媒には溶解しにくい。双性イオンは、大抵は、特定のｐＨ範囲内の双性イオンとして存在する。平均電荷がゼロとなるｐＨは、分子の等電点として知られている。
【００５２】
本発明において着目される双性イオンは、生物学実験室において緩衝剤として通常用いられる緩衝液である、一般に生理的緩衝液と呼ばれるカテゴリーに属する。引用され得る生理的緩衝液の例は、ビス−ＴＲＩＳ（２−ビス［２−ヒドロキシエチル］アミノ−２−ヒドロキシメチル−１、３−プロパンジオール）、ＡＤＡ（Ｎ−［２−アセトアミド］−２−イミノ二酢酸）、ＡＣＥＳ（２−［２−アセトアミノ］−２−アミノエタンスルホン酸）、ＰＩＰＥＳ（１，４−ピペラジンジエタンスルホン酸）、ＭＯＰＳＯ（３−［Ｎ−モルホリノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ビス−ＴＲＩＳ  ＰＲＯＰＡＮＥ（１，３−ビス［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノプロパン］）、ＢＥＳ（Ｎ，Ｎ−ビス［２−ヒドロキシエチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、ＭＯＰＳ（３−［Ｎ−モルホリノ］プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（２−［２−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシメチル）エチルアミノ］エタンスルホン酸）、ＨＥＰＥＳ（Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン）酸）、ＤＩＰＳＯ（３−Ｎ，Ｎ−ビス［２−ヒドロキシエチル］アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＭＯＢＳ（４−Ｎ−モルホリノブタンスルホン酸）、ＴＡＰＳＯ（３［Ｎ−トリス−ヒドロキシメチル−メチルアミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＴＲＩＳ（２−アミノ−２−［ヒドロキシメチル］−１，３−プロパンジオール）、ＨＥＰＰＳＯ（Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−［２−ヒドロキシプロパンスルホン］酸）、ＰＯＰＳＯ（ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス［２−ヒドロキシプロパンスルホン］酸）、ＴＥＡ（トリエタノールアミン）、ＥＰＰＳ（またはＨＥＰＰＳ）（Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］−ピペラジン−Ｎ’−［３−プロパンスルホン］酸）、ＴＲＩＣＩＮＥ（Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル］メチルグリシン）、ＧＬＹ−ＧＬＹ（ジグリシン）、ＢＩＣＩＮＥ（Ｎ，Ｎ−ビス［２−ヒドロキシエチル］グリシン）、ＨＥＰＢＳ（Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−［４−ブタンスルホン］酸）、ＴＡＰＳ（Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル］メチル−３−アミノプロパンスルホン酸）、ＡＭＰＤ（２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール）、ＴＡＢＳ（Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル］メチル−４−アミノブタンスルホン酸）、ＡＭＰＳＯ（３−［（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＣＨＥＳ（２−（Ｎ−シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸）、ＣＡＰＳＯ（３−［シクロヘキシルアミノ］−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸）、ＡＭＰ（２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール）、ＣＡＰＳ（３−シクロヘキシルアミノ−１−プロパンスルホン酸）、およびＣＡＢＳ（４−［シクロヘキシルアミノ］−１−ブタンスルホン酸）として知られるものである。
【００５３】
これらの双性イオンの生物学的緩衝特性は認められているが、これらの双性イオンの選ばれたグループの、ゲル電気泳動の性能およびゲル電気泳動のためのゲルの電気泳動耐用期間にプラスの影響を与える能力は、認められなかった。
【００５４】
好ましくは、双性イオンには、２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール（ＡＭＰＤ）、Ｎ−（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＡＭＰＳＯ）、Ｎ−グリシルグリシン（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）、４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳまたはＨＥＰＰＳ）、３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、２−（シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス［２−ヒドロキシエチル］−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、（２−［２−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシメチル）エチルアミノ］エタンスルホン酸）（ＴＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、および３−Ｎ−モルホリノプロパンスルホン酸（ＰＯＰＳＯ）が含まれる。これらの双性イオンは、電解液を、電気泳動を行う電気泳動装置のためのランニングバッファー（「貯蔵槽（ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）」バッファーとも呼ばれる）として用いる場合に、使用期限が過ぎている電気泳動ゲルの電気泳動耐用期間を著しく改善する。双性イオンを、既存のランニングバッファーに添加することもできる。これらの双性イオンを本発明による電解液で用いる場合、電解液のｐＨを（例えばＮａＯＨまたはＨＣｌを使用して）、電気泳動を行うために最適なｐＨ値に調節することが望ましい。
【００５５】
別の実施態様によると、これらの双性イオンは、電気泳動が行われ得る速度も（従来のＬａｅｍｍｌｉのｐＨ８．３のトリス−グリシン−ＳＤＳと比べて）改善し得るし、分離された分子のより細いまたは狭いバンドを提供することにより明確さ（または鮮明さ）を改善することによって、分子間の分離（すなわち個々のバンドの間の距離）を改善することによって、または明確さ（または鮮明さ）および分子の分離の両方を改善することによって、（従来のＬａｅｍｍｌｉのｐＨ８．３のトリス−グリシン−ＳＤＳと比べて）分解も改善し得る。また該双性イオンは、ゲルの調製に用いられる場合、これらの電解液を用いて調製されたゲルの保存期間を増大させる。双性イオンは、単独でまたは組み合わせて用いることができる。
【００５６】
これらの双性イオンを本発明による電解液の調製に用いることができる、濃度の範囲は、本明細書において議論されるような電気泳動耐用期間の延長のためには、およそ１ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ１５０ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ２００ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ２５０ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ３００ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ３５０ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ４００ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ４５０ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ１ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ１５０ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ２００ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ２５０ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ３００ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ３５０ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ４００ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ１ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ１５０ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ２００ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ２５０ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ３００ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ３５０ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ１ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ１５０ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ２００ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ２５０ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ３００ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ３５０ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ１ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ１５０ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ２００ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ２５０ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ３００ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ１ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ１５０ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ２００ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ２５０ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ１ｍＭからおよそ２５０ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ２５０ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ２５０ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ２５０ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ２５０ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ２５０ｍＭまで、またはおよそ１５０ｍＭからおよそ２５０ｍＭまで、またはおよそ２００ｍＭからおよそ２５０ｍＭまで、またはおよそ１ｍＭからおよそ２００ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ２００ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ２００ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ２００ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ２００ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ２００ｍＭまで、またはおよそ１５０ｍＭからおよそ２００ｍＭまで、またはおよそ１ｍＭからおよそ１５０ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ１５０ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ１５０ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ１５０ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ１５０ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ１５０ｍＭまで、またはおよそ１ｍＭからおよそ１００ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ１００ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ１００ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ１００ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ１００ｍＭまで、またはおよそ１ｍＭからおよそ７５ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ７５ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ７５ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ７５ｍＭまで、またはおよそ１ｍＭからおよそ５０ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ５０ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ５０ｍＭまで、またはおよそ１ｍＭからおよそ２５ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ２５ｍＭまで、またはおよそ１ｍＭからおよそ１０ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ５０ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ１００ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ１００ｍＭまで、またはおよそ１ｍＭからおよそ１００ｍＭまで、またはおよそ１ｍＭからおよそ７５ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ７５ｍＭまで、またはおよそ１ｍＭからおよそ１０ｍＭまで、またはおよそ１ｍＭからおよそ５０ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ５０ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ３７５ｍＭまでであり、好ましくは１００ｍＭである。
【００５７】
４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳまたはＨＥＰＰＳ）を用いての最良の結果は、およそｐＨ８．０から１０．５までのｐＨで得られる。
【００５８】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩基（ＴＲＩＳ）
【００５９】
トリスは、（ＨＯＣＨ2）3ＣＮＨ2の式を伴う、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンとして既知の有機化合物の略語である。トリスは、生化学および分子生物学において幅広く利用される。生化学において、トリスは、とりわけ核酸の溶液のために、緩衝液の成分として、例えばＴＡＥおよびＴＢＥバッファーにおいて、広く利用され、また、トリス−グリシンバッファーにおけるタンパク質電気泳動で広く利用されるＬａｅｍｍｌｉバッファーの基本的な要素である。
【００６０】
トリスによってまた、本発明の電解液のｐＨを、より塩基性のｐＨ値に設定することができる。一つの実施態様によると、４７．５ｍＭのＥＰＰＳを含む本発明による電解液は、およそ５．９のｐＨを有し得る。（およそ１５０ｍＭの）トリスの添加により、ｐＨがおよそ８．７に増大する。トリスはまた、好ましい濃度域における泳動速度にプラスの影響を与える。
【００６１】
トリスは、本発明の電解液に用いられないかもしれない。とはいえ、トリス塩基を本発明による電解液の調製用に用いることができる、濃度の範囲は、およそ０ｍＭからおよそ５００ｍＭまでである。トリスの濃度は、溶液のｐＨに直接影響を与える。トリスの量が増えると、ｐＨも上昇する。これによって、本発明の電解液を異なるゲルの化学的性質に適合させる際の細かな調節、ならびにゲルおよびバッファーに適合する適切なｐＨ比率の維持が可能になる。トリスの濃度は、およそ０ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ１５０ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ２００ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ２５０ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ３００ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ３５０ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ４００ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ４５０ｍＭからおよそ５００ｍＭまで、またはおよそ０ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ１５０ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ２００ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ２５０ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ３００ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ３５０ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ４００ｍＭからおよそ４５０ｍＭまで、またはおよそ０ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ１５０ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ２００ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ２５０ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ３００ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ３５０ｍＭからおよそ４００ｍＭまで、またはおよそ０ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ１５０ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ２００ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ２５０ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ３００ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ３５０ｍＭからおよそ３７５ｍＭまで、またはおよそ０ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ１５０ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ２００ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ２５０ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ３００ｍＭからおよそ３５０ｍＭまで、またはおよそ０ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ１５０ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ２００ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ２５０ｍＭからおよそ３００ｍＭまで、またはおよそ０ｍＭからおよそ２５０ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ２５０ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ２５０ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ２５０ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ２５０ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ２５０ｍＭまで、またはおよそ１５０ｍＭからおよそ２５０ｍＭまで、またはおよそ２００ｍＭからおよそ２５０ｍＭまで、またはおよそ０ｍＭからおよそ２００ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ２００ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ２００ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ２００ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ２００ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ２００ｍＭまで、またはおよそ１５０ｍＭからおよそ２００ｍＭまで、またはおよそ０ｍＭからおよそ１５０ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ１５０ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ１５０ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ１５０ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ１５０ｍＭまで、またはおよそ１００ｍＭからおよそ１５０ｍＭまで、またはおよそ０ｍＭからおよそ１００ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ１００ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ１００ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ１００ｍＭまで、またはおよそ７５ｍＭからおよそ１００ｍＭまで、またはおよそ０ｍＭからおよそ７５ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ７５ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ７５ｍＭまで、またはおよそ５０ｍＭからおよそ７５ｍＭまで、またはおよそ０ｍＭからおよそ５０ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ５０ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ５０ｍＭまで、またはおよそ０ｍＭからおよそ２５ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ２５ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ５０ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ１００ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ１００ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ７５ｍＭまで、またはおよそ１０ｍＭからおよそ５０ｍＭまで、またはおよそ２５ｍＭからおよそ３７５ｍＭまでであり得る。好ましくは、トリスの濃度は、およそ５０ｍＭからおよそ３７５ｍＭまでであり、好ましくは１５０ｍＭである。
【００６２】
ドデシル硫酸ナトリウムまたは他の陰イオン界面活性剤
【００６３】
ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）（Ｃ12Ｈ25ＳＯ4Ｎａ）は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ技術における電気泳動のためのタンパク質の調製に一般に利用される、陰イオン界面活性剤である。分子は、硫酸基に付着した、１２の炭素原子からなる尾部を有し、これによって、洗剤に所要の両親媒性が分子に付与される。
【００６４】
ＳＤＳは、本発明の電解液に任意で添加することができる。本発明による電解液を用いて得られる優れた結果は、ＳＤＳの存在に関係なく得られる。ＳＤＳを本発明による電解液の調製に用いることができる、濃度の範囲は、本明細書において議論される全ての応用例のためには、およそ０．５％以下またはおよそ０．４％以下またはおよそ０．３％以下またはおよそ０．２％以下、またはおよそ０．１％以下、またはおよそ０．１％からおよそ０．５％まで、またはおよそ０．２％からおよそ０．５％まで、またはおよそ０．３％からおよそ０．５％まで、またはおよそ０．４％からおよそ０．５％まで、またはおよそ０．１％からおよそ０．４％まで、またはおよそ０．２％からおよそ０．４％まで、またはおよそ０．３％からおよそ０．４％まで、またはおよそ０．１％からおよそ０．３％まで、またはおよそ０．２％からおよそ０．３％まで、またはおよそ０．１％からおよそ０．２％までである。好ましくは、およそ０．１％以下であり、もっとも好ましくは０．１％である。
【００６５】
他の陰イオン界面活性剤が本発明の電解液に含まれ得るが、それは例えば、任意に限定はしないが、バッファーにタンパク質分析のための変性特性を付与するための一つの陰イオン界面活性剤：ＳＤＳ、ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸リチウム（ＬＤＳ）、ラウリル硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｌａｕｒｙｌ  ｓｕｌｆａｔｅ）（ＳＬＳ）、ラウリル硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｌａｕｒｉｌｓｕｌｆａｔｅ）またはナトリウム、ＮａＤＳである。これらを本発明による電解液の調製に用いることができる、濃度の範囲は、本明細書において議論される全ての応用例のためには、１．０％以下である。好ましくは、およそ０．１％以下であり、もっとも好ましくはおよそ０．１％である。
【００６６】
キレート剤
【００６７】
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）は、キレート剤としての役割、すなわちＣａ2+およびＦｅ3+などの金属イオンを「封鎖する」能力を有する。ＥＤＴＡが結合した後、金属イオンは溶液の中にとどまるが、減少した反応性を示す。他のキレート剤には、エチレングリコール四酢酸（ＥＧＴＡ）、ニトリロ三酢酸三ナトリウム、ヒドロキシエチルエチレンジアミン酢酸三ナトリウム（ＨＥＤＴＡ三ナトリウム）、ジエチレントリアミノ酢酸五ナトリウム、またはウラミル酢酸二ナトリウムが含まれ得る。
【００６８】
ＥＤＴＡは、本発明の電解液に任意で添加することができる。ＥＤＴＡを本発明による電解液の調製に用いることができる、濃度の範囲は、本明細書において議論される全ての応用例のためには、およそ０．５％以下、またはおよそ０．４％以下、またはおよそ０．３％以下、またはおよそ０．２％以下、またはおよそ０．１％以下、またはおよそ０．０５％以下、またはおよそ０．０３％からおよそ０．５％まで、またはおよそ０．０５％からおよそ０．５％まで、またはおよそ０．１％からおよそ０．５％まで、またはおよそ０．２％からおよそ０．５％まで、またはおよそ０．３％からおよそ０．５％まで、またはおよそ０．４％からおよそ０．５％まで、またはおよそ０．０３％からおよそ０．４％まで、またはおよそ０．０５％からおよそ０．４％まで、またはおよそ０．１％からおよそ０．４％まで、またはおよそ０．２％からおよそ０．４％まで、またはおよそ０．３％からおよそ０．４％まで、またはおよそ０．０３％からおよそ０．３％まで、またはおよそ０．０５％からおよそ０．３％まで、またはおよそ０．１％からおよそ０．３％まで、またはおよそ０．２％からおよそ０．３％まで、またはおよそ０．０３％からおよそ０．２％まで、またはおよそ０．０５％からおよそ０．２％まで、またはおよそ０．１％からおよそ０．２％まで、またはおよそ０．０３％からおよそ０．１％まで、またはおよそ０．０５％からおよそ０．１％まで、またはおよそ０．０３％からおよそ０．０５％までである。好ましくは、およそ０．０５％以下であり、もっとも好ましくは０．０３％である。
【００６９】
電解液の使用
【００７０】
使用にあたって、本発明の電解液は、非常に広い範囲の他の緩衝系と適合する。本発明の電解液は、適切な条件下で、本発明の緩衝系と同じ緩衝系または本発明と異なる緩衝系を用いて調製されたいかなるタイプのゲルの電気泳動を行うためにも用いることができるが、前記ゲルは、例えばバッファーとしてのＭＯＰＳ（例えば米国特許出願公開第２００６／０１１８４１８号明細書において記載されるバッファー）などの異なる化学を用いるゲルさえも含む。
【００７１】
本発明によると、電気泳動は、ＤＮＡまたはタンパク質または結果的に分離され得る他のいかなるタイプの分子のサンプルの分離、ならびに、膜、または他の適切な固体担体、例えばニトロセルロース、ナイロン、ＰＶＤＦ、またはウェスタン転写およびウェスタンブロッティングなどの用途に通常利用される他のタイプの膜の上への、それらの転写を含む。
【００７２】
本発明による電解液は、商業的製造の電気泳動槽および／または電気泳動系において用いることができる。例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標）、Ｓｕｒｅｌｏｃｋ（商標）、ＢｉｏＲａｄ（商標）、Ｍｉｎｉ−Ｐｒｏｔｅａｎ（登録商標）、Ｐｒｏｔｅａｎ（登録商標）２、Ｐｒｏｔｅａｎ（登録商標）ＩＩＩ、Ｐｒｏｔｅａｎ（登録商標）Ｔｅｔｒａである。他の同等の系もまた、同様に機能する。
【００７３】
本発明による電解液は、以下のような従来の参考文献において記載されるように、分子生物学および生化学で利用されるゲルの大部分において緩衝系として用いることができる：Ｕｒｉｅｌ  １９６６，Ｂｕｌｌ．Ｓｏｃ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．４８：９６９；Ｐｅａｃｏｃｋ  ＆  Ｄｉｎｇｍａｎ  １９６７，Ｂｉｏｃｈｅｍ  ６（６），１８１８−１８２７；Ｐｅａｃｏｃｋ  ＆  Ｄｉｎｇｍａｎ  １９６８，Ｂｉｏｃｈｅｍ  ７（２），６６８−６７４；Ｇａａｌ，Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，ｐ４２２，Ｗｉｌｅｙ，１９８０。本発明による電解液は、およそ４％からおよそ２５％までのアクリルアミド濃度で典型的には調製される、非変性条件下（ＳＤＳを伴わない）または変性条件下（ＳＤＳを伴う）のアクリルアミドゲル（ポリアクリルアミドゲル）の中に含めることができる。本発明による電解液は、およそ０．５％からおよそ３％までのアガロース濃度で典型的には調製されるアガロースゲルの中に含めることができる。
【００７４】
ＥＰＰＳ（またはＨＥＰＰＳ）、ＴＡＰＳ，ＴＥＳ、ＢＥＳ、またはＧｌｙｇｌｙを、２５ｍＭから１５０ｍＭ、好ましくは５０ｍＭの作用濃度で、Ｌａｅｍｍｌｉバッファートリス−グリシン−ＳＤＳに添加して、電気泳動ゲルの電気泳動耐用期間を延長することができる。
【００７５】
代替的な実施態様
【実施例１】
【００７６】
ＮＯＶＥＸ（登録商標）プレキャストゲルのゲル電気泳動
本発明による電解液を調製して、例えばＬａｅｍｍｌｉバッファーシステム（トリス−グリシン−ＳＤＳ）のような従来の配合を用いて作製されたポリアクリルアミドゲルとともに用いる。代表的な電解液は以下の通りである。
【００７７】
双性イオン：ＥＰＰＳ：６ｇ（４７．５ｍＭ）、トリス（塩基）：９ｇ（１４８．６ｍＭ）、ＳＤＳ：０．５ｇ（０．１％）。粉末を蒸留水に溶解して、５００ｍＬまでの体積にする。
【００７８】
５００ｍｌのランニングバッファーを、本発明による双性イオンを用いて、およびＬａｅｍｍｌｉバッファーシステム（トリス−グリシン−ＳＤＳ）による従来のランニングバッファーを用いて調製した。使用期限の過ぎた、同齢のＮＯＶＥＸ（登録商標）のプレキャストゲル（バッファーとしてのｐＨ８．３のトリスおよびＬａｅｍｍｌｉバッファーシステムによるグリシンを用いて作製）（図１に表示）は、各バッファーに対してランを行う。タンパク質分子量マーカーは、電気泳動ゲル上で分離される。電気泳動は、ゲルの製造会社が推奨するように、１２５Ｖで行われる。電気泳動のランの継続時間は記録され、ゲル泳動の質は採点される。電気泳動のランの後、泳動の最前部がゲルの底に到着するまでの泳動速度、および、１５ＫＤａから１７５ＫＤａの間の質量である１０本のバンドを含むプレステインド分子量マーカーの分解を測定する。本発明による電解液においてランされたゲルのこれらのバンドのそれぞれの分解は、Ｌａｅｍｍｌｉランニングバッファー（トリス−グリシン−ＳＤＳ、ＴＧＳ）における標準的なランと比較される。結果は、使用期限後３年を超えたゲルが、本発明の溶液において満足できる以上にランしたこと、一方、従来のＴＧＳ溶液においてランしたさらに古いゲルが、もっとも古いゲルについては泳動の間に崩壊したかまたははっきりした泳動アーチファクト（図１のゲル画像、二行目および四行目の最後の縦列を参照）を表示したことを示している。
【実施例２】
【００７９】
ＩＤＧＥＬ（商標）プレキャストゲルのゲル電気泳動
２０１０年６月４日に作製された熟成されたプレキャストゲル（ＩＤＧｅｌ（商標））が、２０１１年６月１０日の使用まで４℃で維持された。本発明による電解液は、実施例１と同一（ＥＰＰＳバッファー）であり、従来のＴＧＳ  Ｌａｅｍｍｌｉバッファー（ＴＧＳバッファー）と比較される。電気泳動は、１８０Ｖで３０分間（ＥＰＰＳバッファー）または４０分間（ＴＧＳバッファー）行われる。電気泳動のランの後、泳動の最前部がゲルの底に到着するまでの泳動速度、および、１５ＫＤａから１７５ＫＤａの間の質量である１０本のバンドを含むプレステインド分子量マーカーの分解を測定する。結果は、本発明によるＥＰＰＳバッファーにおいて分離されたＩＤＧｅｌ（商標）が、良好に泳動しまた鮮明ではっきりと分離されたバンドを表示したことを示している。対照ＴＧＳバッファーにおいて泳動したＩＤＧｅｌ（商標）は、明らかにより不鮮明なバンドを示した（図２のＮｏ．２０を参照）。ゲルマトリックスはまた、ゲルが伸びてゲルカセットから出て垂れ下がっているとき、電気泳動の間に歪んでいる（図２のＮｏ．３０を参照）。さらに、カセットのガラス板とゲルとの間に、過熱による気泡がはっきり見える（図２のＮｏ．１０を参照）。ＴＧＳバッファーにおいて測定された温度は、６５℃である。
【実施例３】
【００８０】
ＰＡＧＥｒ（商標）ＧＯＬＤプレキャストゲルのゲル電気泳動
使用期限を４か月過ぎた、８％から１６％のアクリルアミドの勾配を有するプレキャストゲル（Ｌｏｎｚａ提供のＰＡＧＥｒ（商標）Ｇｏｌｄ）は、使用まで４℃で維持される。本発明による電解液は、実施例１と同一（ＥＰＰＳバッファー）であり、従来のＴＧＳ  Ｌａｅｍｍｌｉバッファー（ＴＧＳバッファー）と比較される。電気泳動は、３００Ｖで２１分間（ＥＰＰＳバッファー）または２００Ｖで７４分間（ＴＧＳバッファー）行われる。ここで、図３ＡおよびＢを参照する。電気泳動のランの後、泳動の最前部がゲルの底に到着するまでの泳動速度、および、プレステインド分子量マーカーおよび他のタンパク質のサンプルの分解を比較する。結果は、本発明によるＥＰＰＳバッファーにおいて分離されたＰＡＧＥｒ（商標）Ｇｏｌｄゲル（図３Ａ）が、全体として良好に泳動しまた鮮明ではっきりと分離されたバンドを表示したことを示している。対照ＴＧＳバッファーにおいて泳動したＰＡＧＥｒ（商標）Ｇｏｌｄゲルは、あきらかにより不鮮明なバンドを示した（図３Ｂを参照）。それぞれのゲルに掛けられる電圧が異なることから、対照ＴＧＳバッファーにおいて分離されたＰＡＧＥｒ（商標）Ｇｏｌｄゲルは、その泳動を完了するのにより時間がかかることが予想される。しかしながら、本発明によるＥＰＰＳバッファーにおいて分離されたＰＡＧＥｒ（商標）Ｇｏｌｄゲルは、同一の電圧が掛けられた場合に予想される速度よりも迅速にその泳動を完了し、また対照ＴＧＳバッファーにおいて分離されたＰＡＧＥｒ（商標）Ｇｏｌｄゲルよりも優れた分解をもたらした。
【実施例４】
【００８１】
ＥＰＰＳプレキャストゲルのゲル電気泳動
ここで、図４を参照する。ＥＰＰＳベースのバッファーを含み、使用まで４℃で１３か月間保管されたプレキャストゲル（１２％のアクリルアミド）は、実施例１と同一の本発明による電解液（ＥＰＰＳバッファー）において分離される。電気泳動は、２２５Ｖで１９分間行われた。ここで、図４を参照するが、電気泳動のランの後、泳動の最前部がゲルの底に到着するまでの泳動速度、および、プレステインド分子量マーカーおよび他のタンパク質のサンプルの分解を評価する。結果は、本発明によるＥＰＰＳバッファーにおいて分離された全てのゲルが、その年齢にもかかわらず、良好に泳動し鮮明ではっきりと分離されたバンドを表示したことを示している。
【００８２】
本明細書で示される実施態様および実施例は、特許請求の範囲に記載される本発明の全体的性質を説明するためのものであり、限定するものではない。当業者には、いかにしてこれらの実施態様が、特許請求の範囲に開示される本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、さまざまな適用のためにかつさまざまな方法で容易に変更および／または適合され得るかが理解されるであろう。特許請求の範囲は、当然のことながら、本発明の全ての代替的な実施態様および同等物を制限なく含む。ここで使用される表現、単語、および専門用語は、説明するためのものであり、制限するものではない。法律で容認される場合には、本明細書において引用される全ての参考文献は、参照することによりその全体が組み込まれる。本明細書において開示されるさまざまな実施態様のいかなる態様も、可能な代替的実施態様の範囲内で組み合わされ得ることが理解され、その全てが特徴の組み合わせを変化させたものである、特徴の代替的な組み合せは、当然のことながら、特許請求の範囲に記載される本発明の一部を形成するものである。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【国際調査報告】
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