(57)【要約】本発明は、４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランのエステルと、それを作製および使用する方法を開示する。また、本発明は、治療的に活性な４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランへのインビボでのエステルの変換も開示する。本発明は、増殖性疾患を含む種々の適応症の治療のための４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランのエステルを含む薬学的組成物をさらに開示する。【選択図】図１
2014511384.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物
【化１】
2014511384.tif 000017
またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
ｎは０〜４であり、
各Ｒ１は、独立して、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ＋（Ｒ）３、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であるか、またはＣ１−１２脂肪族、３〜１４員のカルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、６〜１４員のアリール、もしくは５〜１４員のへテロアリールから選択される任意に置換された基であるか、あるいは
隣接する炭素原子上の２つのＲ１基は、それらの介在原子と一緒になって、３〜１４員の炭素環、３〜１４員の複素環、６〜１４員のアリール環、または５〜１４員のへテロアリール環から選択される任意に置換された環を形成し、
各Ｒ２およびＲ３は、独立して、水素、−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲａ、−Ｐ（＝Ｏ）ＯＲａＯＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃであり、式中、各ＲａおよびＲｂは、独立して、水素、ナトリウム、カリウム、アミンカチオンであるか、またはＣ１−１２脂肪族、３〜１４員のカルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、６〜１４員のアリール、もしくは５〜１４員のへテロアリールから選択される任意に置換された基であるか、あるいは
ＲａおよびＲｂは、それらの介在原子と一緒になって、任意に置換された３〜１４員の複素環を形成し、
Ｒｃは、水素、−Ｎ（Ｒ）２、−ＯＲ、−ＳＲであるか、またはＣ１−１２脂肪族、３〜１４員のカルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、６〜１４員のアリール、もしくは５〜１４員のへテロアリールから選択される任意に置換された基であり、
Ｒ４は、独立して、水素、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ＋（Ｒ）３、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であるか、またはＣ１−１２脂肪族、３〜１４員のカルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、６〜１４員のアリール、もしくは５〜１４員のへテロアリールから選択される任意に置換された基であるか、あるいは
Ｒ４およびＲ５は、それらの介在原子と一緒になって、３〜１４員の炭素環または３〜１４員の複素環から選択される任意に置換された環を形成し、
Ｒ５は、独立してハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ＋（Ｒ）３、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であるか、またはＣ１−１２脂肪族、３〜１４員のカルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、６〜１４員のアリール、もしくは５〜１４員のへテロアリールから選択される任意に置換された基であるが、但し、Ｒ５は、メチルまたはエチルではないものとするか、あるいは
Ｒ４およびＲ５は、それらの介在原子と一緒になって、３〜１４員の炭素環または３〜１４員の複素環から選択される任意に置換された環を形成し、
各Ｒは、独立して、水素であるか、またはＣ１−１２脂肪族、３〜１４員の炭素環、３〜１４員の複素環、６〜１４員のアリール環、もしくは５〜１４員のへテロアリール環から選択される任意に置換された基であるが、
但し、
（ａ）Ｒ２およびＲ３が各々アセチルである場合、Ｒ１はアセトキシではなく、
（ｂ）Ｒ２およびＲ３が各々アセチルであり、Ｒ４がエトキシカルボニルである場合、Ｒ５は２−オキソ−プロピルではなく、
（ｃ）Ｒ２、Ｒ３、およびＲ５が各々アセチルである場合、Ｒ１またはＲ４のいずれかは水素ではないものとする、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
ｎは０である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ｎは１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１はハロゲンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２は水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２は−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃであり、式中、Ｒｃは、任意に置換されたＣ１−１２脂肪族である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２は−Ｐ（＝Ｏ）ＯＲａＯＲｂであり、式中、ＲａおよびＲｂは、各々独立して、水素、ナトリウム、またはカリウムである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２は−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲａであり、式中、Ｒａは、水素、ナトリウム、またはカリウムから選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ３は水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ３は−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃであり、式中、Ｒｃは、任意に置換されたＣ１−１２脂肪族である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ３は−Ｐ（＝Ｏ）ＯＲａＯＲｂであり、式中、ＲａおよびＲｂは、各々独立して、水素、ナトリウム、またはカリウムである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ３は−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲａであり、式中、Ｒａは、水素、ナトリウム、またはカリウムから選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ４は水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ５は−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃであり、式中、Ｒｃは、任意に置換されたＣ１−１２脂肪族である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ５は−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃであり、式中、Ｒｃは、任意に置換されたアリールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒｃはメチルである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１７】
【化２】
2014511384.tif 000018
2014511384.tif 000019
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか１項において請求されるような化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤とを含む、薬学的組成物。
【請求項１９】
前記化合物は、非晶質固体である、請求項１８に記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
２−アセチル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン（化合物ＸＩＩＩ）の非晶質固体と、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤とを含む、薬学的組成物。
【請求項２１】
２−アセチル−４，９−ジアセトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランの非晶質固体と、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤とを含む、薬学的組成物。
【請求項２２】
疾患、障害、もしくは状態に罹患しているかまたは罹患しやすい対象を治療する方法であって、前記対象に治療的有効量の請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物または請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２３】
前記疾患、障害、または状態は、増殖性疾患、障害、または状態である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記疾患、障害、または状態は、肥満、肥満に関連する障害もしくは状態、糖尿病、代謝疾患、または変性疾患から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記疾患、障害、または状態は、ミトコンドリア機能障害に関連する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記増殖性疾患は癌である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
前記対象に治療的有効量の第２の化学療法剤を投与することをさらに含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
前記対象は、臨床的寛解にあるか、または前記対象が外科手術によって治療されている場合、限定された未切除疾患を有する、請求項２６または２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記癌は固形腫瘍である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
放射線療法を用いた前記癌の治療をさらに含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記癌は、結腸癌、肺癌、骨癌、膵臓癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、食道癌、皮膚癌、脳癌、肝臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、子宮癌、精巣癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、神経内分泌癌、乳癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、眼癌、上咽頭癌、胆嚢癌、喉頭癌、口腔癌、陰茎癌、腺管腫瘍、直腸癌、小腸癌、頭頸部癌、多発性骨髄腫、結腸直腸癌、カポジ肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、平滑筋肉腫、神経膠腫、髄膜腫、髄芽腫、メラノーマ、尿道癌、および膣癌からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
前記癌は転移性である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記対象は哺乳動物である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記治療的有効量は、約１ｍｇ／ｍ２〜約５，０００ｍｇ／ｍ２（静脈内投与）、または約１ｍｇ／ｍ２〜約５０，０００ｍｇ／ｍ２（経口投与）の投与量である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記治療的有効量は、約２ｍｇ／ｍ２〜約３，０００ｍｇ／ｍ２（静脈内投与）、または約１０ｍｇ／ｍ２〜約３０，０００ｍｇ／ｍ２（経口投与）の投与量である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
式ＩＩ
【化３】
2014511384.tif 000020
の化合物を調製する方法であって、式中、
ｎは０〜４であり、
各Ｒ１は、独立してハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ＋（Ｒ）３、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であるか、または、Ｃ１−１２脂肪族、３〜１４員のカルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、６〜１４員のアリール、もしくは５〜１４員のへテロアリールから選択される任意に置換された基であり、
隣接する炭素原子上の２つのＲ１基は、それらの介在原子と一緒になって、３〜１４員の炭素環、３〜１４員の複素環、６〜１４員のアリール環、または５〜１４員のへテロアリール環から選択される任意に置換された環を形成し、
Ｒ２は、ハロゲン、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であるか、またはＣ１−１２脂肪族、３〜１４員のカルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、６〜１４員のアリール、もしくは５〜１４員のへテロアリールから選択される任意に置換された基であり、
Ｒ３は、Ｃ１−１２脂肪族、３〜１４員のカルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、６〜１４員のアリール、または５〜１４員のへテロアリールから選択される任意に置換された基であり、
式ＩＩＩ
【化４】
2014511384.tif 000021
の化合物を式ＩＶ
【化５】
2014511384.tif 000022
の化合物と、好適な塩基および１００℃を超える沸点を有する溶媒の存在下において反応させ、式ＩＩの化合物を形成するステップを含むが、但し、前記１００℃を超える沸点を有する溶媒はトルエンではない、方法。
【請求項３７】
前記溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシドである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記好適な塩基は、第３級アミンである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記好適な塩基は、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデス−７−エンである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
式ＩＩＩの化合物は、
【化６】
2014511384.tif 000023
から選択される、請求項３６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
幅広い治療用途を有する自然発生型の化合物の一種はキノンである。キノン化合物は、微生物、植物、および動物中に広く存在する（Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｒ  Ｈ  Ｎａｔｕｒａｌｌｙ  Ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ  Ｑｕｉｎｏｎｅｓ  ＩＶ：Ｒｅｃｅｎｔ  Ａｄｖａｎｃｅｓ．１９９６年にＳｐｒｉｎｇｅｒ社より出版）。キノン化合物は、酸化還元可能であり、１つまたはいくつかの化学種としてインビボで存在する。コエンザイムＱ１０は、インビボで完全に同定された化学種プロファイルを有する数少ないキノン化合物の１つである（Ｂｈａｇａｖａｎ  Ｈ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉｏｎ，２００７，７Ｓ：Ｓ７８−８８）。ヒトにおいて循環するコエンザイムＱ１０は、ほぼ完全にハイドロキノンの形態であり、経口投与されたユビキノン（コエンザイムＱ１０の酸化形態）のハイドロキノンへの変換は、リンパ管輸送されて循環系に入る前に腸細胞で行われる（Ｃｒａｆｔ  Ｎ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２００５，１９，Ａ４４９、Ｂｈａｇａｖａｎ  Ｈ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．２００７，３３３：１１２−１１７、Ｍｏｈｒ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｄｏｘ  Ｒｅｐ．１９９９，４：７９−８７）。
【０００２】
認可されている抗癌性キノン化合物は、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシン、およびマイトマイシンを含む。それらの抗癌活性は、主として、ＤＮＡを直接損傷するまたはＤＮＡ複製に関与するタンパク質と相互作用することによって、癌細胞におけるＤＮＡ複製を阻害する能力に起因する。ナフトフランキノンは、様々な生物学的活性も有する。それらのうちのいくつかは、抗癌活性および他の活性を有することが示されている。例えば、興味深い生物学的活性を有するいくつかの自然発生型のナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンが植物から単離されており（Ｒａｏ  Ｍ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，１９８２，４５：６００−６０４、Ｔｉｓｌｅｒ  Ｍ，"Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｑｕｉｎｏｎｅｓ  ｉｎ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ"Ｖｏｌ．４５，ｅｄ．Ｋａｔｒｉｔｚｋｙ  Ａ  Ｒ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９８９，５６−６３）、それらの類似体は、細胞傷害活性を有することがさらに明らかになっている（Ｏｇａｗａ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００６，７０：１００９−１０１２、米国特許第２００６０１４２２７１号、国際公開第２００９０３６０５９号、国際公開第２００９０３６０９９号、国際公開第２００９０３６１０１号）。
【０００３】
２００４年の世界保健機関の統計によれば、癌は、全ての死因の１３％を占める、世界的に一番多い死亡原因であるため、癌のより効果的な治療に有用な医薬品有効成分としての新規化合物の必要性がまだ存在する。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、癌ならびに他の疾患、障害、および状態のより効果的な治療のための医薬品有効成分としての新規化合物を提供する。
【０００５】
特に、本発明は、式Ｉ
【化１】
2014511384.tif 000003
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供し、
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびｎの各々は、本明細書に定義および記載される通りである。
【０００６】
また、本発明は、エステルの治療的に活性な４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランへのインビボでの変換に関する。
【０００７】
さらに、本発明は、主として、４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランの、それらが活性酸素種（ＲＯＳ）を導入する能力に起因する、治療的活性に関する。
【０００８】
さらに、本発明は、本明細書に記載される化合物を含む薬学的組成物、ならびに種々の疾患、障害、および状態の治療における該化合物および組成物の使用に関する。
【０００９】
さらに、本発明は、増殖性疾患を含む種々の適応症の治療のための薬学的組成物の構成成分としての、４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランまたはナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンのエステルの非晶質固体に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ヒドロ亜硫酸ナトリウムと種々のナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンとの反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラフィー。（Ａ）ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン（化合物ＸＩ）、（Ｂ）２−アセチル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン（化合物ＸＩＩＩ）、（Ｃ）２−メチルスルホニル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン（化合物ＸＶ）、（Ｄ）２−メチルスルフィニル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン（化合物ＸＶＩ）
【図２】４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランの例示的なエステルと、それをヒト血漿とインキュベートした混合物のＨＰＬＣクロマトグラフィー。ＨＰＬＣ分析の前に、９倍の体積のアセトニトリルを添加し、次いで遠心分離することにより、ヒト血漿とインキュベートした混合物中のタンパク質を除去した。
【図３】化合物ＩおよびＸＩＩＩの代謝物の１つとしての化合物ＸＩＩのインビボまたはインビトロでの同定、ヒト全血における化合物ＸＩＩの形成の経時変化および干渉因子。（Ａ）マウス血漿のＨＰＬＣクロマトグラフィー。化合物ＸＩＩＩの非晶質固体を２００ｍｇ／ｋｇの投与量で経口経管栄養によりマウスに摂取させ、次いで２時間後に血液を採取した。（Ｂ）マウス血漿のＨＰＬＣクロマトグラフィー。化合物Ｉの非晶質固体を１００ｍｇ／ｋｇの投与量で経口経管栄養によりマウスに摂取させ、次いで１時間後に血液を採取した。（Ｃ）２０μΜ化合物ＸＩＩＩをヒト全血中３７℃でインキュベーションした混合物中における化合物ＸＩＩの形成の経時変化。（Ｄ）２０μΜ化合物ＸＩＩＩおよび異なる濃度のβラパコンをヒト全血中３７℃で３０分インキュベートしたときの化合物ＸＩＩおよびＸＩＩＩの相対量。
【図４】ジクマロール（（ＮＱ０１阻害剤）（Ｒｉｌｅｙ  Ｒ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９２，４３：１６５７−１６６９、Ｒｏｓｓ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．１９９３，１２：８３−１０１）が化合物の生物学的活性に及ぼす影響。
【図５】４０μΜジクロロフルオレセインジアセタート（ＤＣＦＨ−ＤＡ）で処理し、その後、０．３μΜ試験化合物、または１００μΜ過酸化水素、またはＤＭＳＯのみ（対照）で処理した後のＤＬＤ１細胞の蛍光写真。写真は、励起フィルターを４８８ｎｍに、発光フィルターを５３０ｎｍに設定して、倒立蛍光顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＩＸ７０）で撮影された。
【図６】ＤＬＤ１細胞に対する過酸化水素または化合物ＸＩＩＩによって誘導される毒性に及ぼす抗酸化剤Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン（ＮＡＣ）の影響。
【図７】化合物ＸＩＩＩのインキュベーション時間が癌細胞増殖の抑制に及ぼす影響。
【図８】粉末Ｘ線回折。（Ａ）化合物ＸＩＩＩの結晶性、（Ｂ）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロホスホコリン（ＤＭＰＣ）と化合物ＸＩＩＩの非晶質混合物（２：１）、（Ｃ）Ｐｌａｓｄｏｎｅ  Ｋ−２５（ＰＶＰ）と化合物ＸＩＩＩの非晶質混合物（２：１）、（Ｄ）２−アセチル−４，９−ビス（アセトキシ）−ナフト［２，３−ｂ］フランの結晶性、（Ｅ）ＤＭＰＣと２−アセチル−４，９−ビス（アセトキシ）−ナフト［２，３−ｂ］フランの非晶質混合物（２：１）、（Ｆ）ＰＶＰと２−アセチル−４，９−ビス（アセトキシ）−ナフト［２，３−ｂ］フランの非晶質混合物（１：１）
【図９】定義された固体の物理的状態にある化合物ＩおよびＸＩＩＩの経口摂取の評価。マウス血漿中の化合物ＸＩＩＩの濃度はＨＰＬＣ分析を用いて得られ、全てのデータポイントは、３つのマウス血漿濃度の平均である。
【図１０】１週間にわたる毎日の投与前のマウスの体重。化合物Ｉの非晶質固体を１，２００ｍｇ／ｋｇの用量で、または化合物ＸＩＩＩの非晶質固体を８００ｍｇ／ｋｇの用量で、１日１回、３匹のマウスに経口経管栄養により摂取させた。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
定義
以下に、本発明の開示の特定の化合物、および特定の官能基の定義についてより詳細に記載する。本開示の目的のために、化学元素は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ第７５版の内表紙に記載される元素周期表（ＣＡＳ版）に従って特定され、特定の官能基は、概して本明細書に記載されるように定義される。また、有機化学の一般原則、ならびに特定の官能性部分および反応性は、「Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」（Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９９）に記載され、その内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【００１２】
本明細書で使用される場合、別途指定のない限り、以下の定義が適用される。
【００１３】
本明細書で使用される場合、「脂肪族」または「脂肪族基」という用語は、完全に飽和しているかまたは１つ以上の不飽和単位を含有する、直鎖（すなわち、非分岐）または分岐鎖の置換または非置換の炭化水素鎖、あるいは完全に飽和しているかまたは１つ以上の不飽和単位を含有するが、芳香族ではなく（本明細書において「炭素環」、「環状脂肪族」、または「シクロアルキル」とも称される）、分子の残りの部分との単一結合点を有する、単環式炭化水素または二環式炭化水素を指す。別途既定のない限り、脂肪族基は、１〜２０個の脂肪族炭素原子を含有する。いくつかの実施形態において、脂肪族基は、１〜１２個の脂肪族炭素原子を含有する。いくつかの実施形態において、脂肪族基は、１〜６個の脂肪族炭素原子を含有する。いくつかの実施形態において、脂肪族基は、１〜５個の脂肪族炭素原子を含有する。他の実施形態において、脂肪族基は、１〜４個の脂肪族炭素原子を含有する。さらに他の実施形態において、脂肪族基は、１〜３個の脂肪族炭素原子を含有し、さらに他の実施形態において、脂肪族基は、１〜２個の脂肪族炭素原子を含有する。いくつかの実施形態において、「環状脂肪族」（または「炭素環」もしくは「シクロアルキル」）は、完全に飽和しているか、または１つ以上の不飽和単位を含有するが、芳香族ではなく、分子の残りの部分との単一結合点を有する単環式Ｃ３−Ｃ６炭化水素を指す。好適な脂肪族基は、限定されないが、直鎖または分岐鎖の、置換または非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル基、およびそれらのハイブリッド、例えば、（シクロアルキル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキル、または（シクロアルキル）アルケニル等を含む。特定の実施形態において、「３〜１４員の炭素環」は、３〜８員の飽和もしくは部分的に不飽和の単環式炭素環、または７〜１４員の飽和もしくは部分的に不飽和の多環式炭素環を指す。
【００１４】
本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、１〜６個の炭素原子を含有する脂肪族部分から１個の水素原子の除去によって誘導される、直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素を指す。別途既定のない限り、アルキル基は、１〜１２個の炭素原子を含有する。特定の実施形態において、アルキル基は、１〜８個の炭素原子を含有する。特定の実施形態において、アルキル基は、１〜６個の炭素原子を含有する。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１〜５個の炭素原子を含有する。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１〜４個の炭素原子を含有する。特定の実施形態において、アルキル基は、１〜３個の炭素原子を含有する。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１〜２個の炭素原子を含有する。アルキル基の例として、限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｓｅｃ−ペンチル、イソ−ペンチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、ｓｅｃ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−デシル、ｎ−ウンデシル、ドデシル等が挙げられる。
【００１５】
本明細書で使用される場合、「アルケニル」という用語は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖または分岐鎖の脂肪族部分から単一の水素原子の除去によって誘導される一価の基を意味する。別途既定のない限り、アルケニル基は、２〜１２個の炭素原子を含有する。特定の実施形態において、アルケニル基は、２〜８個の炭素原子を含有する。特定の実施形態において、アルケニル基は、２〜６個の炭素原子を含有する。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２〜５個の炭素原子を含有する。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２〜４個の炭素原子を含有する。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２〜３個の炭素原子を含有する。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２個の炭素原子を含有する。アルケニル基は、例えば、エテニル、プロペニル、ブテニル、１−メチル−２−ブテン−１−イル等を含む。
【００１６】
本明細書で使用される場合、「アルキニル」という用語は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する直鎖または分岐鎖の脂肪族部分から単一の水素原子の除去によって誘導される一価の基を指す。別途既定のない限り、アルキニル基は、２〜１２個の炭素原子を含有する。特定の実施形態において、アルキニル基は、２〜８個の炭素原子を含有する。特定の実施形態において、アルキニル基は、２〜６個の炭素原子を含有する。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、２〜５個の炭素原子を含有し、いくつかの実施形態において、アルキニル基は、２〜４個の炭素原子を含有し、さらに他の実施形態において、アルキニル基は、２〜３個の炭素原子を含有し、さらに他の実施形態において、アルキニル基は、２個の炭素原子を含有する。代表的なアルキニル基は、限定されないが、エチニル、２−プロピニル（プロパルギル）、１−プロピニル等を含む。
【００１７】
「ヘテロ原子」という用語は、酸素、硫黄、窒素、リン、あるいはケイ素（窒素、硫黄、リン、もしくはケイ素の任意の酸化形態、任意の塩基性窒素の第四級形態、または複素環式環の置換可能な窒素、例えば、Ｎ（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロリルの場合）、ＮＨ（ピロリジニルの場合）、もしくはＮＲ＋（Ｎ置換ピロリジニルの場合））のうちの１つ以上を意味する。本明細書で使用される場合、「不飽和」という用語は、ある部分が１つ以上の不飽和単位を有することを意味する。
【００１８】
単独で、またはより大きな部分の一部として使用される「アシル」という用語は、カルボン酸からヒドロキシ基を除去することによって形成される基を指す。
【００１９】
「ハロゲン」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを意味する。
【００２０】
単独で、または「アリールオキシアルキル」のようにより大きな部分の一部として使用される「アリール」という用語は、全部で５〜１４個の環員を有する単環式または二環式の環系を指し、系内の少なくとも１つの環は芳香族であり、系内の各環は３〜７個の環員を含有する。「アリール」という用語は、「アリール環」という用語と交換可能に使用されてもよい。本開示の特定の実施形態において、「アリール」は、限定されないが、１つ以上の置換基を担持してもよい、フェニル、ビフェニル、ナフチル、アントラシルを含む芳香族環系を指す。本明細書で使用される場合、同様に「アリール」という用語の範囲内に含まれるのは、芳香族環が１つ以上の非芳香族環に縮合している基、例えば、インダニル、フタルイミジル、ナフトイミジル（ｎａｐｈｔｈｉｍｉｄｙｌ）、フェナントリジニル、または、またはテトラヒドロナフチル等である。特定の実施形態において、「６〜１４員のアリール」という用語は、フェニルまたは８〜１４員の多環式アリール環を指す。
【００２１】
単独で、または、例えば「ヘテロアラルキル」または「ヘテロアラルコキシ」等のより大きな部分の一部として使用される「ヘテロアリール」および「ヘテロア−（ｈｅｔｅｒｏａｒ−）」という用語は、５〜１０個の環原子、好ましくは５、６または９個の環原子を有し、環状配列内で共有される６、１０、または１４πの電子を有し、炭素原子に加えて１〜５個のヘテロ原子を有する基を指す。「ヘテロ原子」という用語は、窒素、酸素、または硫黄を指し、窒素または硫黄の任意の酸化形態、および塩基性窒素の任意の第四級形態を含む。ヘテロアリール基は、制限なしに、チエニル、フラニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリジニル、プリニル、ナフチリジニル、およびプテリジニルを含む。「ヘテロアリール」および「ヘテロア−（ｈｅｔｅｒｏａｒ−）」という用語はまた、本明細書で使用される場合、ヘテロ芳香族環が１つ以上のアリール環、環状脂肪族環、またはヘテロシクリル環に縮合し、ラジカルまたは結合点がヘテロ芳香族環上にある基を含む。非制限的な例として、インドリル、イソインドリル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、ジベンゾフラニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、４Ｈ−キノリジニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、およびピリド［２，３−ｂ］−１，４−オキサジン−３（４Ｈ）−オンが挙げられる。ヘテロアリール基は、単環式または二環式であってもよい。「ヘテロアリール」という用語は、「ヘテロアリール環」、「ヘテロアリール基」、または「ヘテロ芳香族」という用語と交換可能に使用されてもよく、これらの用語のいずれも任意に置換された環を含む。「ヘテロアラルキル」および「ヘテロアリールアルキル」という用語は、ヘテロアリール部分で置換されたアルキル基を指し、アルキルおよびヘテロアリール部分は、独立して任意に置換されている。特定の実施形態において、「５〜１４員のへテロアリール」という用語は、窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員のへテロアリール環、または窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１４員の多環式へテロアリール環を指す。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「複素環」、「ヘテロシクリル」、「複素環ラジカル」、および「複素環式環」という用語は、交換可能に使用され、飽和または部分的に不飽和のいずれかであり、炭素原子に加えて、１つ以上の、好ましくは１〜４個の（上で定義されたような）ヘテロ原子を有する、安定した５〜７員の単環式、または７〜１０員の二環式複素環の部分を指す。複素環の環原子と関連して使用される場合、「窒素」という用語は置換された窒素を含む。一例として、酸素、硫黄、または窒素から選択される０〜３個のヘテロ原子を有する、飽和または部分的に不飽和の環において、窒素は、Ｎ（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロリルの場合）、ＮＨ（ピロリジニルの場合）、または＋ＮＲ（Ｎ置換されたピロリジニルの場合）であり得る。いくつかの実施形態において、「３〜１４員の複素環」という用語は、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する３〜８員の飽和もしくは部分的に不飽和の単環式複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１４員の飽和もしくは部分的に不飽和の多環式複素環式環を指す。
【００２３】
複素環式環は、安定した構造をもたらす任意のヘテロ原子または炭素原子でそのペンダント基に結合することができ、環原子のいずれも任意に置換され得る。そのような飽和または部分的に不飽和の複素環ラジカルの例として、制限なしに、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニルピロリジニル、ピペリジニル、ピロリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、ジアゼピニル、オキサゼピニル、チアゼピニル、モルホリニル、およびキヌクリジニルが挙げられる。「複素環」、「ヘテロシクリル」、「ヘテロシクリル環」、「複素環基」、「複素環部分」、および「複素環ラジカル」という用語は、本明細書において交換可能に使用され、ヘテロシクリル環が１つ以上のアリール環、ヘテロアリール環、または環状脂肪族環に縮合した基、例えば、インドリニル、３Ｈ−インドリル、クロマニル、フェナントリジニル、またはテトラヒドロキノリニル等も含み、ラジカルまたは結合点は、ヘテロシクリル環上にある。ヘテロシクリル基は、単環式または二環式であってよい。「ヘテロシクリルアルキル」という用語は、ヘテロシクリルで置換されたアルキル基を指し、アルキルおよびヘテロシクリルの部分は、独立して任意に置換されている。
【００２４】
本明細書で使用される場合、「部分的に不飽和の」という用語は、少なくとも１つの二重結合または三重結合を含む環部分を指す。「部分的に不飽和の」という用語は、複数の不飽和部位を有する環を包含することを意図するが、本明細書において定義されるようなアリールまたはヘテロアリール部分を含むことは意図されない。
【００２５】
別途記載のない限り、本明細書に示される構造は、その構造の全ての異性体（例えば、鏡像異性、ジアステレオマー、および幾何学的（または立体構造的））形態、例えば、各立体中心のＲおよびＳ立体配置、ＺおよびＥ二重結合異性体、ならびにＺおよびＥ立体構造異性体も含むことを意味する。したがって、本発明の化合物の単一の立体化学異性体、ならびに鏡像異性、ジアステレオマー、および幾何学的（または立体構造的）混合物は、本開示の範囲内である。別途記載のない限り、本開示の化合物の全ての互変異性形態は、本開示の範囲内である。
【００２６】
例えば、本発明の化合物の特定の鏡像異性体が所望される場合、それは、不斉合成、キラルクロマトグラフィーによって、またはキラル補助を用いた誘導によって調製することができ、得られたジアステレオマー混合物は分離され、補助基が切断され、純粋な所望の鏡像異性体が提供される。代替として、分子がアミノ等の塩基性官能基またはカルボキシル等の酸性官能基を含有する場合、適切な光学活性な酸または塩基を用いてジアステレオマー塩が形成され、次に、そのように形成されたジアステレオマーが当該技術分野で周知の分別結晶またはクロマトグラフィー手段によって分割され、続いて純粋な鏡像異性体が回収される。
【００２７】
また、別途記載のない限り、本明細書に示される構造は、１つ以上の同位体濃縮原子の存在下においてのみ異なる化合物を含むことも意味する。例えば、本発明の構造を有する化合物（重水素もしくはトリチウムによる水素の置き換え、または１３Ｃ−もしくは１４Ｃ−濃縮炭素による炭素の置き換えを含む）は、本開示の範囲内である。そのような化合物は、例えば、分析ツールとして、生物学的アッセイにおけるプローブとして、または本開示に従う治療剤として有用である。
【００２８】
本明細書中に記載されるように、本開示の化合物は、「任意に置換された」部分を含有することができる。一般的に、「置換された」という用語は、「任意に」という用語が前に付いているかどうかにかかわらず、指定された部分の１つ以上の水素が適切な置換基で置き換えられていることを意味する。別途指定のない限り、「任意に置換された」基は、基の置換可能な各位置に好適な置換基を有することができ、任意の所与の構造における１つより多くの位置が、特定された基から選択される１つより多くの置換基で置換されていてもよい場合、置換基は、全ての位置で同一であるかまたは異なるかのいずれかであってよい。本開示によって想定される置換基の組み合わせは、安定したまたは化学的に実現可能な化合物の形成をもたらすものであることが好ましい。「安定した」という用語は、本明細書で使用される場合、それらの生成、検出、また特定の実施形態においてはそれらの回収、精製、および本明細書に開示される目的のうちの１つ以上のための使用を可能にする条件に供されたときに、実質的に変化しない化合物を指す。
【００２９】
「任意に置換された」基の置換可能な炭素原子上の好適な一価の置換基は、独立して、ハロゲン、−（ＣＨ２）０−４Ｒ°、−（ＣＨ２）０−４ＯＲ°、−Ｏ（ＣＨ２）０−４Ｒ°、−Ｏ−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＲ°、−（ＣＨ２）０−４ＣＨ（ＯＲ°）２、−（ＣＨ２）０−４ＳＲ°、Ｒ°で置換されてもよい−（ＣＨ２）０−４Ｐｈ、Ｒ°で置換されてもよい−（ＣＨ２）０−４Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、Ｒ°で置換されてもよい−ＣＨ＝ＣＨＰｈ、Ｒ°で置換されてもよい−（ＣＨ２）０−４Ｏ（ＣＨ２）０−１−ピリジル、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ３、−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ°）２、−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）Ｒ°、−Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｓ）Ｒ°、−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２、−Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｓ）ＮＲ°２、−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＯＲ°、−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）Ｒ°、−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２、−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＯＲ°、−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）Ｒ°、−Ｃ（Ｓ）Ｒ°、−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＲ°、−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＳＲ°、−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＳｉＲ°３、−（ＣＨ２）０−４ＯＣ（Ｏ）Ｒ°、−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）０−４ＳＲ−、−ＳＣ（Ｓ）ＳＲ°、−（ＣＨ２）０−４ＳＣ（Ｏ）Ｒ°、−（ＣＨ２）０４Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２、−Ｃ（Ｓ）ＮＲ°２、−Ｃ（Ｓ）ＳＲ°、−ＳＣ（Ｓ）ＳＲ°、−（ＣＨ２）０−４ＯＣ（Ｏ）ＮＲ°２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＲ°）Ｒ°、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ°、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ°、−Ｃ（ＮＯＲ°）Ｒ°、−（ＣＨ２）０−４ＳＳＲ°、−（ＣＨ２）０−４Ｓ（Ｏ）２Ｒ°、−（ＣＨ２）０−４Ｓ（Ｏ）２ＯＲ°、−（ＣＨ２）０−４ＯＳ（Ｏ）２Ｒ°、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ°２、−（ＣＨ２）０−４Ｓ（Ｏ）Ｒ°、−Ｎ（Ｒ°）Ｓ（Ｏ）２ＮＲ°２、−Ｎ（Ｒ°）Ｓ（Ｏ）２Ｒ°、−Ｎ（ＯＲ°）Ｒ°、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ°２、−Ｐ（Ｏ）２Ｒ°、−Ｐ（Ｏ）Ｒ°２、−ＯＰ（Ｏ）Ｒ°２、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ°）２、−ＳｉＲ°３、−（Ｃ１−４直鎖もしくは分岐鎖のアルキレン）Ｏ−Ｎ（Ｒ°）２、または−（Ｃ１−４直鎖もしくは分岐鎖のアルキレン）Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｎ（Ｒ°）２であり、式中、各Ｒ°は、以下に定義されるように置換されてもよく、独立して、水素、Ｃ１−６脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、−ＣＨ２−（５〜６員のへテロアリール環）、または窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であるか、あるいは上記定義にかかわらず、独立して出現する２つのＲ°が、それらの介在原子（複数可）と一緒になって、以下に定義されるように置換されてもよい、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する、３〜１２員の飽和環、部分不飽和環、またはアリールの単環式環もしくは二環式環を形成する。
【００３０】
Ｒ°上の好適な一価の置換基（または独立して出現する２つのＲ°が、それらの介在原子と一緒になることによって形成される環）は、独立して、ハロゲン、−（ＣＨ２）０−２Ｒ●、−（ハロＲ●）、−（ＣＨ２）０−２ＯＨ、−（ＣＨ２）０−２ＯＲ●、−（ＣＨ２）０−２ＣＨ（ＯＲ●）２、−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｎ３、−（ＣＨ２）０−２Ｃ（Ｏ）Ｒ●、−（ＣＨ２）０−２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）０−２Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−（ＣＨ２）０−２ＳＲ●、−（ＣＨ２）０−２ＳＨ、−（ＣＨ２）０−２ＮＨ２、−（ＣＨ２）０−２ＮＨＲ●、−（ＣＨ２）０−２ＮＲ●２、−ＮＯ２、−ＳｉＲ●３、−ＯＳｉＲ●３、−Ｃ（Ｏ）ＳＲ●、−（Ｃ１−４直鎖もしくは分岐鎖のアルキレン）Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、または−ＳＳＲ●であり、式中、Ｒ●は、非置換であるか、または「ハロ」が前に付いている場合は１つ以上のハロゲンでのみ置換され、Ｃ１−４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５−６員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環から独立して選択される。Ｒ°の飽和炭素原子上の好適な二価の置換基は、＝Ｏおよび＝Ｓを含む。
【００３１】
「任意に置換された」基の飽和炭素原子上の好適な二価の置換基は、＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮＲ＊２、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ＊、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ＊、＝ＮＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ＊、＝ＮＲ＊、＝ＮＯＲ＊、−Ｏ（Ｃ（Ｒ＊２））２−３Ｏ−、または−Ｓ（Ｃ（Ｒ＊２））２−３Ｓ−を含み、式中、独立して出現する各Ｒ＊は、水素、以下に定義されるように置換されてもよいＣ１−６脂肪族、または、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換の５−６員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環から選択される。「任意に置換された」基の近接する置換可能な炭素に結合した好適な二価の置換基は、−Ｏ（ＣＲ＊２）２−３Ｏ−を含み、式中、独立して出現する各Ｒ＊は、水素、以下に定義されるように置換されていてもよいＣ１−６脂肪族、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換の５−６員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環から選択される。
【００３２】
Ｒ＊の脂肪族基上の好適な置換基は、ハロゲン、−Ｒ●、−（ハロＲ●）、−ＯＨ、−ＯＲ●、−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、−ＮＨＲ●、−ＮＲ●２、または−ＮＯ２を含み、式中、各Ｒ●は、非置換であるか、または「ハロ」が前に付いている場合は１つ以上のハロゲンでのみ置換され、独立して、Ｃ１−４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５−６員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環である。
【００３３】
「任意に置換された」基の置換可能な窒素上の好適な置換基は、−Ｒ†、−ＮＲ†２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ†、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ†２、−Ｃ（Ｓ）ＮＲ†２、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ†２、または−Ｎ（Ｒ†）Ｓ（Ｏ）２Ｒ†を含み、式中、各Ｒ†は、独立して、水素、以下に定義されるように置換されてもよいＣ１−６脂肪族、非置換の−ＯＰｈ、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換の５−６員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であるか、あるいは上記定義にかかわらず、独立して出現する２つのＲ†が、それらの介在原子（複数可）と一緒になって、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する、非置換の３〜１２員の飽和環、部分不飽和環、またはアリールの単環式環もしくは二環式環を形成する。
【００３４】
Ｒ†の脂肪族基上の好適な置換基は、独立して、ハロゲン、−Ｒ●、−（ハロＲ●）、−ＯＨ、−ＯＲ●、−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、−ＮＨＲ●、−ＮＲ●２、または−ＮＯ２であり、式中、各Ｒ●は、非置換であるか、または「ハロ」が前に付いている場合は１つ以上のハロゲンでのみ置換され、独立して、Ｃ１−４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５−６員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環である。
【００３５】
「非晶質」という用語は、原子の位置に長距離秩序が存在しない固体の物理的形態を説明するために使用される。
【００３６】
本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上、別途、明らかにそうではないという指示のない限り、複数形の指示対照を含む。よって、例えば、「化合物」への言及は、複数のそのような化合物を含む。
【００３７】
「投与する」、「投与すること」、または「投与」という用語は、本明細書で使用される場合、化合物または組成物のいずれかを患者に直接投与することを指す。
【００３８】
「薬学的に許容される」という句は、健全な医学的判断の範囲内で、合理的な利益／リスク比に見合った、過度の毒性、刺激、アレルギー応答、またはその他の問題もしくは合併症を示さない、ヒトおよび動物の組織と接触させて使用するのに好適な化合物、材料、組成物、および／または剤形を指して本明細書において用いられる。
【００３９】
本明細書で使用される場合、「プロドラッグ」という用語は、インビボで親薬物に変換される物質を意味する。特定の実施形態において、プロドラッグは、親薬物よりも投与しやすい。特定の実施形態において、プロドラッグは、親薬物と比較して改善された経口投与によるバイオアベイラビリティを有する。また、プロドラッグは、薬学的組成物中で、親薬物よりも改善された安定性を示し得る。特定の実施形態において、プロドラッグは、意図しない標的組織への不必要な暴露を回避することによって、親薬物と比較して低い毒性を有する。
【００４０】
本明細書において使用される「非経口投与」および「非経口的に投与される」という句は、通常は注射による、経腸および局所投与以外の投与方法を意味し、制限なしに、静脈内、筋内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、脳脊髄内、および胸骨内注射ならびに注入を含む。
【００４１】
本明細書で使用される「全身投与」、「全身に投与される」、「末梢投与」、および「末梢に投与される」という句は、患者の系に進入し、それによって代謝および他の同様のプロセスに供されるような、中枢神経系内への直接投与以外の化合物、薬物、または他の材料の投与、例えば、皮下投与を意味する。
【００４２】
「対症的」という用語は、疾患の症状および／または治療計画の副作用の緩和に重きを置くが、治癒的ではない治療を指す。
【００４３】
本明細書で使用される場合、「血液脳関門」とは、脳毛細血管内皮原形質膜内において緊密な結合によって形成される末梢循環と脳および脊髄との間の関門を指し、たとえ分子量６０Ｄａの尿素と同じくらい小さい分子であっても、脳内への分子の輸送を制限する極めて厳重な関門を形成する。脳内の血液脳関門、脊髄内の血液脊髄関門、および網膜内の血液網膜関門は、中枢神経系（ＣＮＳ）内の近接した毛細血管関門であり、本明細書において、集合的に血液脳関門またはＢＢＢと称される。
【００４４】
本明細書で使用される場合、「治療的有効量」という用語は、治療計画の一部として投与されたときに所望の生物学的応答を誘発する物質（例えば、治療剤、組成物、および／または製剤）の量を意味する。いくつかの実施形態において、物質の治療的有効量は、疾患、障害、および／もしくは状態に罹患しているかまたは罹患しやすい対象に投与されたときに、その疾患、障害、および／または状態を治療するのに十分な量である。当業者には理解されるように、物質の有効量は、所望の生物学的エンドポイント、送達される物質、標的細胞および組織等の要因に応じて異なり得る。例えば、疾患、障害、および／または状態を治療するための製剤における化合物の有効量は、疾患、障害、および／または状態の１つ以上の症状または特徴を緩和する、寛解させる、軽減する、阻害する、防止する、発症を遅延させる、重症度を低下させる、および／または発生率を減少させる量である。いくつかの実施形態において、治療的有効量は単回用量で投与され、いくつかの実施形態において、治療的有効量を送達するためには複数の単位用量が必要である。
【００４５】
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療」、または「治療すること」という用語は、疾患、障害、および／または状態の１つ以上の症状または特徴を、部分的にまたは完全に、緩和する、寛解させる、軽減する、阻害する、防止する、発症を遅延させる、重症度を低下させる、および／または発生率を減少させるために使用される任意の方法を指す。治療薬は、疾患、障害、および／または状態の徴候を示さない対象に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、疾患、障害、および／または状態に関連する病態を発症するリスクを減少させる目的で、治療薬が、疾患、障害、および／または状態の初期徴候のみを示す対象に投与されてもよい。
【００４６】
本明細書で使用される「単位用量」という表現は、治療を受ける対象にとって適切な製剤の物理的な個別単位を指す。しかしながら、本発明の製剤の全体的な１日使用量は、健全な医学的判断の範囲内で担当医の判断によって決定されることを理解されたい。いずれか特定の対象または生物のための特定の有効用量レベルは、治療される疾患および疾患の重症度；用いられる特定の活性化合物の活性；用いられる特定の組成物；対象の年齢、体重、総体的健康、性別、および食生活；投与の時間、および用いられる特定の活性化合物の排泄率；治療期間；用いられる特定の化合物（複数可）と併用してまたは同時に使用される薬物および／または追加の治療薬；ならびに医療分野で周知の同様の要因を含む様々な要因に依存し得る。具体的な単位用量は、治療的有効量の治療剤を含有してもまたはしなくてもよい。
【００４７】
疾患、障害、および／もしくは状態に「罹患している」個体は、該疾患、障害、および／もしくは状態であると診断されており、かつ／またはそれらの１つ以上の症状を示している。
【００４８】
疾患、障害、および／または状態に「罹患しやすい」個体は、該疾患、障害、および／もしくは状態であると診断されていない。いくつかの実施形態において、疾患、障害、および／または状態に罹患しやすい個体は、該疾患、障害、および／または状態の症状を示し得る。いくつかの実施形態において、疾患、障害、および／または状態に罹患しやすい個体は、疾患、障害、および／または状態の症状を示さない可能性がある。いくつかの実施形態において、疾患、障害、および／または状態に罹患しやすい個体は、疾患、障害、および／または状態を発症する。いくつかの実施形態において、疾患、障害、および／または状態に罹患しやすい個体は、疾患、障害、および／または状態を発症しない。
特定の実施形態の詳細な説明
【００４９】
本発明は、特に、増殖性ならびに他の疾患、障害、および状態の治療に有用な新規化学療法薬を提供する。
【００５０】
特定の実施形態において、本発明は、式Ｉ
【化２】
2014511384.tif 000004
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供し、
式中、
ｎは０〜４であり、
各Ｒ１は、独立して、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ＋（Ｒ）３、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であるか、またはＣ１−１２脂肪族、３〜１４員のカルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、６〜１４員のアリール、もしくは５〜１４員のへテロアリールから選択される任意に置換された基であるか、あるいは
隣接する炭素原子上の２つのＲ１基は、それらの介在原子と一緒になって、３〜１４員の炭素環、３〜１４員の複素環、６〜１４員のアリール環、または５〜１４員のへテロアリール環から選択される任意に置換された環を形成し、
各Ｒ２およびＲ３は、独立して、水素、−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲａ、−Ｐ（＝Ｏ）ＯＲａＯＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃであり、式中、各ＲａおよびＲｂは、独立して、水素、ナトリウム、カリウム、アミンカチオンであるか、またはＣ１−１２脂肪族、３〜１４員のカルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、６〜１４員のアリール、もしくは５〜１４員のへテロアリールから選択される任意に置換された基であるか、あるいは
ＲａおよびＲｂは、それらの介在原子と一緒になって、任意に置換された３〜１４員の複素環を形成し、
Ｒｃは、水素、−Ｎ（Ｒ）２、−ＯＲ、−ＳＲであるか、またはＣ１−１２脂肪族、３〜１４員のカルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、６〜１４員のアリール、もしくは５〜１４員のへテロアリールから選択される任意に置換された基であり、
Ｒ４は、独立して、水素、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ＋（Ｒ）３、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であるか、またはＣ１−１２脂肪族、３〜１４員のカルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、６〜１４員のアリール、もしくは５〜１４員のへテロアリールから選択される任意に置換された基であるか、あるいは
Ｒ４およびＲ５は、それらの介在原子と一緒になって、３〜１４員の炭素環または３〜１４員の複素環から選択される任意に置換された環を形成し、
Ｒ５は、独立して、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ＋（Ｒ）３、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であるか、またはＣ１−１２脂肪族、３〜１４員のカルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、６〜１４員のアリール、もしくは５〜１４員のへテロアリールから選択される任意に置換された基であるか、または
Ｒ４およびＲ５は、それらの介在原子と一緒になって、３〜１４員の炭素環または３〜１４員の複素環から選択される任意に置換された環を形成し、
各Ｒは、独立して、水素であるか、またはＣ１−１２脂肪族、３〜１４員の炭素環、３〜１４員の複素環、６〜１４員のアリール、もしくは５〜１４員のへテロアリールから選択される任意に置換された基である。
【００５１】
いくつかの実施形態において、Ｒ５はメチルではない。いくつかの実施形態において、Ｒ５はエチルではない。
【００５２】
いくつかの実施形態において、Ｒ２およびＲ３が各々アセチルである場合、Ｒ１はアセトキシではない。
【００５３】
いくつかの実施形態において、Ｒ２およびＲ３が各々アセチルであり、Ｒ４がエトキシカルボニルである場合、Ｒ５は２−オキソ−プロピルではない。
【００５４】
Ｒ２、Ｒ３、およびＲ５が各々アセチルである場合、Ｒ１またはＲ４のいずれかは水素ではない。
【００５５】
いくつかの実施形態において、ｎは０である。いくつかの実施形態において、ｎは１である。いくつかの実施形態において、ｎは２である。いくつかの実施形態において、ｎは３である。いくつかの実施形態において、ｎは４である。
【００５６】
特定の実施形態において、Ｒ１はハロゲンである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−ＣＮである。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−ＣＦ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ１は−ＯＨである。
【００５７】
いくつかの実施形態において、Ｒ２は水素である。いくつかの実施形態において、Ｒ２は−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃであり、式中、Ｒｃは任意に置換されたＣ１−１２脂肪族である。いくつかの実施形態において、Ｒ２は−Ｐ（＝Ｏ）ＯＲａＯＲｂであり、式中、ＲａおよびＲｂは、各々独立して、水素、ナトリウム、カリウム、または任意に置換されたＣ１−１２脂肪族である。いくつかの実施形態において、Ｒ２は−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲａであり、式中、Ｒａは、水素、ナトリウム、またはカリウムである。
【００５８】
いくつかの実施形態において、Ｒ３は水素である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃであり、式中、Ｒｃは任意に置換されたＣ１−１２脂肪族である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−Ｐ（＝Ｏ）ＯＲａＯＲｂであり、式中、ＲａおよびＲｂは、各々独立して、水素、ナトリウム、カリウム、または任意に置換されたＣ１−１２脂肪族である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲａであり、式中、Ｒａは、水素、ナトリウム、またはカリウムである。
【００５９】
いくつかの実施形態において、Ｒ４は水素である。いくつかの実施形態において、Ｒ４は水素以外である。いくつかの実施形態において、Ｒ４は任意に置換された６〜１４員のアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ４は任意に置換されたフェニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ４は−Ｎ（Ｒ）２であり、式中、Ｒは、独立して、Ｃ１−１２脂肪族または６〜１４員のアリールから選択される任意に置換された基である。
【００６０】
特定の実施形態において、Ｒ５は−ＮＯ２である。いくつかの実施形態において、Ｒ５は−Ｃ（Ｏ）Ｒであり、式中、Ｒは、Ｃ１−１２脂肪族または６〜１４員のアリールから選択される任意に置換された基である。いくつかの実施形態において、Ｒ５は−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり、式中、各Ｒは、独立して、Ｃ１−１２脂肪族または６〜１４員のアリールから選択される任意に置換された基である。
【００６１】
特定の実施形態において、Ｒ４およびＲ５は、それらの介在原子と一緒になって、３〜１４員の炭素環または３〜１４員の複素環から選択される任意に置換された環を形成する。
【００６２】
いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ハロゲン、シアノ、またはＣＦ３であり、ｎは、０、１、または２であり、Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、水素、イソブチリル、ピバロイル、アセチル、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グリシニル、またはＮ，Ｎ−ジメチルグリシニルであり、Ｒ４は、水素または−Ｎ（Ｒ）２であり、Ｒ５は−Ｃ（Ｏ）Ｒであり、式中、Ｒは、Ｃ１−１２脂肪族または６〜１４員のアリールから選択される任意に置換された基である。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ハロゲンまたはＣＦ３であり、ｎは、０、１、または２であり、Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、アセチルまたはＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グリシニルであり、Ｒ４は水素であり、Ｒ５は−Ｃ（Ｏ）Ｒであり、式中、Ｒは、任意に置換されたＣ１−１２脂肪族である。
【００６３】
式Ｉの例示的な化合物を下の表１に記載する。
【表１】
2014511384.tif 000005
2014511384.tif 000006
【００６４】
いくつかの実施形態において、提供される化合物は、４，９−ビス（イソブトキシ）−ナフト［２，３−ｂ］フランである。いくつかの実施形態において、提供される化合物は、４，９−ビス（ピバロキシ）−ナフト［２，３−ｂ］フランである。いくつかの実施形態において、提供される化合物は、４，９−ビス（ジクロロアセトキシ）−ナフト［２，３−ｂ］フランである。いくつかの実施形態において、提供される化合物は、４−アセトキシ−９−ヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランである。いくつかの実施形態において、提供される化合物は、４−ヒドロキシ−９−アセトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランである。いくつかの実施形態において、提供される化合物は、４，９−ビス｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］アセトキシ｝−ナフト［２，３−ｂ］フランである。いくつかの実施形態において、提供される化合物は、４−アセトキシ−９−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］アセトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランである。いくつかの実施形態において、提供される化合物は、４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］アセトキシ−９−アセトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランである。いくつかの実施形態において、提供される化合物は、４−ヒドロキシ−９−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］アセトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランである。いくつかの実施形態において、提供される化合物は、４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］アセトキシ−９−ヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランである。いくつかの実施形態において、提供される化合物は、４−リン酸エステル−９−アセトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランである。いくつかの実施形態において、提供される化合物は、４，９−ビス（リン酸エステル）−ナフト［２，３−ｂ］フランである。いくつかの実施形態において、提供される化合物は、４−スルフェート−９−アセトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランである。
合成
【００６５】
ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの合成に関する数多くの報告が存在する（Ｊ．ｏｆ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，１９８２，４５：６００−６０４、Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ，１９９９，５１：４９７−５００、米国特許第２００６／０１４２２７１号、国際公開第２００９０３６０５９号、Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００６，７０：１００９−１０１２、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９７１，Ｃ：１５３、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９７４，３０：３１９３、Ａｎ．Ａｃａｄ．Ｂｒａｓ．Ｃｉｅｎｃ．，１９９０，６２：３２９、Ｊ．Ｈｅｒｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍ．，１９９４，３１：１３０３−１３０４、Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９７４，５２：８８−９４、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９７９，３：１８８−１８９、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９８８，８：１４１５−１４１８、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ，２００５，１３１：５２０−５２９）。２位の置換基が、例えば、アルキルカルボニルまたはアリールカルボニルである場合、ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの合成は、報告されるように行うことができ（Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ，１９９９，５１：４９７−５００）、それをスキーム１に示す。
スキーム１：
【化３】
2014511384.tif 000007
式中、ＤＢＵは１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデス−７−エンであり、ＴＨＦはテトラヒドロフランであり、Ｒ１、Ｒ４、Ｒｃ、およびｎは、本明細書に定義および記載される通りである。
【００６６】
スキーム１に示す方法は、大規模調製を容易にし、望ましくない副産物であるナフト［２，３−ｂ］ジヒドロフラン−４，９−ジオンを回避するように改良された。改良された方法をスキーム２として記載する。
スキーム２：
【化４】
2014511384.tif 000008
式中、ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであり、ＴＥＡはトリエチルアミンであり、ＤＢＵおよびＴＨＦはスキームＩに記載され、Ｒ１、Ｒ４、Ｒｃ、およびｎは、本明細書に定義および記載される通りである。
【００６７】
スキーム２において、大規模調製では、安全性を考慮して、高沸点の溶媒を開放空気中で使用することが好ましい。いくつかの実施形態において、高沸点の溶媒は１００℃を超える沸点を有する。特定の実施形態において、溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシドである。いくつかの実施形態において、溶媒はトルエンではない。スキーム２に示すように、ナフトジヒドロフランジオン（例えば、２−アルキルカルボニル−ナフト［２，３−ｂ］ジヒドロフラン−４，９−ジオン）も同様に調製され、満足の行く収率で精製され、開放空気中で好適な塩基を使用して、定量的収率でナフトフランジオン（例えば、２−アルキルカルボニル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン）に変換された。いくつかの実施形態において、好適な塩基は第３級アミンである。いくつかの実施形態において、好適な塩基はＤＢＵである。いくつかの実施形態において、好適な塩基はＴＥＡである。これによって、スキーム１に示した最終反応ステップの機構が説明され、ＤＢＵまたはＴＥＡ等の追加の塩基を加えることにより、ワンポット合成において望ましくないジヒドロフラン副産物を排除するのに役立つ。
【００６８】
例示的なナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン化合物を下の表２に記載する。
【表２】
2014511384.tif 000009
【００６９】
表２に列挙した化合物の合成は、例証の項目に記載する。表２に列挙した全ての化合物の中で、化合物ＸＩＩＩおよびＸＩＶのみがスキーム２に記載されるように合成される。
【００７０】
Ｒ２もしくはＲ３のいずれかまたはそれらの両方が−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃである場合、式Ｉの化合物の合成は、ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン、または４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランの誘導体を出発材料のうちの１つとして使用して、スキーム３に記載されるように行われる。
スキーム３：
【化５】
2014511384.tif 000010
式中、ＴＥＡはトリエチルアミンであり、ＨＢＴＵはＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロリン酸塩であり、ＤＭＦはスキーム２に定義される通りである。
【００７１】
Ｒ２もしくはＲ３のいずれかまたはそれらの両方が−Ｐ（＝Ｏ）ＯＲａＯＲｂである場合、式Ｉの化合物の合成は、ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン、または４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランの誘導体を出発材料のうちの１つとして使用して、スキーム４に記載されるように行われる。
スキーム４：
【化６】
2014511384.tif 000011
式中、ＭＳＮＴは１−（２−メシチレンスルホニル）−３−ニトロ−１Ｈ−１，２，４−トリアゾールであり、塩化アシルは塩化ピバロイルである。
【００７２】
Ｒ２もしくはＲ３のいずれかまたはそれらの両方が−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲａである場合、式Ｉの化合物の合成は、ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン、または４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランの誘導体を出発材料のうちの１つとして使用して、スキーム５に記載されるように行われる。
スキーム５:
【化７】
2014511384.tif 000012
式中、ＤＣＣＩはジシクロヘキシルカルボジイミドであり、ＴＥＡおよびＤＭＦはスキーム３に定義される通りである。
インビボで治療的に活性な化学種
【００７３】
ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンは、ヒドロ亜硫酸ナトリウムによって容易に還元される（Ｋｏｙａｎａｇｉ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍ．１９９７，３４：４０７−４１２、および我々の非公開データ）。化合物ＸＩ、ＸＩＩＩ、ＸＶ、またはＸＶＩのＤＭＳＯ溶液を、過剰なヒドロ亜硫酸ナトリウム水溶液と混合した。ＨＰＬＣを用いた各混合物の分析により、還元された４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フラン生成物の安定性が異なることが示された。図１に示すＨＰＬＣクロマトグラフィーにおいて、化合物ＸＩの混合物のピークを除いて、４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランのピークとナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンのピークとの間に起伏のある領域がある。起伏のある領域は、ＨＰＬＣ分離プロセスの間に、酸素によって４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランが対応するナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンに酸化したことを示す。
【００７４】
インビボまたはインビトロのいずれかにおいて、式Ｉの化合物は、エステラーゼまたは他のタンパク質またはいくつかの求核低分子によって４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランに分解することができる。しかしながら、ヒドロ亜硫酸ナトリウム還元反応において示されるように（図１）、４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランは、酸素によって対応するナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンに酸化することができる。下のスキーム６は、ヒト血漿等のインビトロの生体液中での式Ｉの化合物の化学変換を示した。
スキーム６：
【化８】
2014511384.tif 000013
【００７５】
式Ｉの化合物を３７℃で２時間ヒト血漿中でインキュベートし、次いで、混合物をアセトニトリルで処理してタンパク質を除去し、得られた上清をＨＰＬＣにより分析した（図２）。２−アセチル−４，９−ビス（アセトキシ）−ナフト［２，３−ｂ］フランのインキュベーションでは、唯一の検出可能な生成物は化合物ＸＩＩＩであり、化合物ＩおよびＩＶの場合、検出可能な生成物は、化合物ＸＩＩＩおよび部分的に分解された生成物であった。しかしながら、化合物ＩＩは、立体障害（ここではデータを示さない）のために、同じ条件下ではほとんど分解されない。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、式Ｉの化合物の直接加水分解生成物４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランとその部分酸化生成物セミハイドロキノン（スキーム６に示される）は、タンパク質を含まない環境では不安定性のために検出されないものの、インビボで共存し、重要な生物学的役割を果たすと考えられる。
【００７６】
第１に、キノン化合物は、酸化還元可能であり、いくつかの化学種としてインビボで存在することができる。コエンザイムＱ１０は、インビボで完全に同定された化学種プロファイルを有する数少ないキノン化合物の１つである（Ｂｈａｇａｖａｎ  Ｈ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉｏｎ，２００７，７Ｓ：Ｓ７８−Ｓ８８）。ヒトにおいて循環するコエンザイムＱ１０は、ほぼ完全にハイドロキノン（またはキノール）の形態である（Ｃｒａｆｔ  Ｎ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２００５，１９，Ａ４４９、Ｂｈａｇａｖａｎ  Ｈ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．２００７，３３３：１１２−１１７、Ｍｏｈｒ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｄｏｘ  Ｒｅｐ．１９９９，４：７９−８７）。マイトマイシンＣ、Ｅ０９、およびＡＺＱ等のいくつかの他のキノン化合物は、ＮＱ０１（またはＤＴ−ジアホラーゼ）によって触媒される反応により、それらの対応するハイドロキノンにインビボで変換され、それらのアルキル化官能基が活性化され、よって癌細胞に対して作用する（Ｄａｎｓｏｎ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｒｅｖｉｅｗ，２００４，３０：４３７−４４９）。自然発生型のナフトキノンであるβラパコンは、癌細胞においてＮＱ０１の補助を得ることで癌細胞に対して作用する（Ｐｉｎｋ  Ｊ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０００，２７５：５４１６−５４２４、Ｂｅｙ  Ｅ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００７，１０４：１１８３２−１１８３７）。癌細胞において、βラパコンは、細胞内ＮＱＯ１によって触媒される無益な酸化還元サイクルに供され、その間に有害な活性酸素種（ＲＯＳ）が産生され、癌細胞を死滅させる。理論に拘束されることを望むものではないが、還元型の抗癌剤であるマイトマイシンＣ、Ｅ０９、ＡＺＱ、およびβラパコンは、治療的に活性な化学種であると考えられる。
【００７７】
上述の他のキノン化合物のように、ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンも、インビボで化学的に活性であり、ＮＱ０１、チトクロムｂ５、およびＰ４５０還元酵素（非公開の観察）等の還元酵素の優れた基質である。しかしながら、それらの化学変換と生物学的活性との間の一般的な関係、またはインビボでの化学変換のみについてさえも論じる報告が存在しない。
【００７８】
第２に、ヒト全血、または癌細胞可溶化物、または肝ミクロソーム、またはマウス経口摂取系等の生体液中での化合物Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＶＩ、またはＸＩＩＩのインキュベーション後に見られた主な代謝物は、化合物ＸＩＩ（図３）であった。同様に、生体液中での化合物Ｖ、ＶＩＩ、またはＸＩＶのインキュベーション後に見られた主な代謝物は、２−（１−ヒドロキシ−ｎ−プロピル）−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン（データは図示せず）であった。ヒト全血の化合物ＸＩＩＩのインキュベーション混合物中での化合物ＸＩＩの形成にβラパコンが及ぼす影響によって実証されるように、２位の置換基であるカルボニル基の還元は、キノンの酸化還元反応の一部である（図３のパートＤ）。スキーム７に示されるような可能性のある反応機構が提案され、２電子還元は、ＮＱ０１によって触媒される還元であり得るか、または２つの連続したチトクロムｂ５還元酵素もしくはｐ４５０還元酵素によって触媒される反応であり得る。これらの酵素の基質として、βラパコンは、２電子反応または１電子反応に対して競合し得、よって代謝産物の形成が減少する。
スキーム７：
【化９】
2014511384.tif 000014
【００７９】
第３に、ＮＱ０１は、ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの生物学的活性において重要な役割を果たす（図４）。ＮＱ０１は、キノンの不可避な２電子還元を触媒する、重要な解毒酵素である（Ｒｉｌｅｙ  Ｒ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９２，４３：１６５７−１６６９、Ｒｏｓｓ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．１９９３，１２：８３−１０１）。ＮＱ０１酵素活性は、ジクマロールによって特異的に阻害することができる（Ｔｒａｖｅｒ  Ｒ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，１９９７，７５：６９−７５）。図４に示すように、処理した癌細胞（例えば、ＤＬＤ１）が著しいＮＱ０１酵素活性を有する場合、ジクマロールは、２−アセチル−４，９−ジアセトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランおよび化合物ＸＩＩＩの抗癌活性を減衰させる。反対に、処理した癌細胞（例えば、Ｐａｎｃ−１）が著しいＮＱ０１酵素活性を有しない場合、ジクマロールはほとんど効果を示さなかった。式Ｉの化合物および他のナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン（データは図示せず）の抗癌活性にも同様のジクマロールの効果が観察された。
【００８０】
第４に、式Ｉの化合物、それらの類似体、およびナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンは、図５に示すように癌細胞において著しいＲＯＳを産生する。活性酸素種（ＲＯＳ）は、不完全に還元された酸素の化学種の一般名称である。ＲＯＳは、スーパーオキシドアニオンラジカル、過酸化水素、およびヒドロキシルラジカルを含む。ＲＯＳは、特に癌に対する幅広い治療用途を有し得る（Ｔｒａｃｈｏｏｔｈａｍ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ  &  Ｒｅｄｏｘ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，２００８，１０：１３４３−１３７４、Ｆｒｕｅｈａｕｆ  Ｊ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００７，１３：７８９−７９４、Ｐｅｌｉｃａｎｏ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔ  Ｕｐｄａｔｅ  ２００４，７：９７−１１０、Ｈｕａｎｇ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ２０００，４０７：３９０−３９５、Ｔｒａｃｈｏｏｔｈａｍ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗ  ２００９，８：５７９−５９１）。生理学的条件下において、細胞は、ＲＯＳの産生と排除との間の適切な平衡を制御することによってレドックスホメオスタシスを維持する。しかしながら、ＲＯＳの増加があるレベルに達すると、細胞の抗酸化剤の能力を圧倒し、細胞死プロセスを引き起こす可能性がある。したがって、ＲＯＳの基礎産生量がより高い癌細胞は、抗酸化剤システムにより依存し、さらなる酸化ストレス誘発剤の影響をより受けやすい。外来性ＲＯＳ産生剤の使用によるＲＯＳストレスのさらなる増加は、癌細胞における閾値レベルを超えて優先的にＲＯＳを増加させ、細胞死を引き起こし得る。
【００８１】
ジクロロフルオレセインジアセタート（ＤＣＦＨ−ＤＡ）で前処理した癌細胞において、微量なマイクロモルの式Ｉの化合物またはナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンを用いて３０分未満の間さらに処理すると、１００μΜの過酸化水素の処理と同様の効果を有する（図５）。
【００８２】
第５に、ｎ−アセチル−Ｌ−システイン（ＮＡＣ）は、図６に示すようにナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの抗癌活性をブロックする。ＮＡＣは、効果的なＲＯＳスカベンジャーの１つであり、ＲＯＳによって誘導された細胞毒性を低下させるかまたはブロックする。培養培地中のＮＡＣと化合物ＸＩＩＩとの間の反応の可能性は、ＨＰＬＣ分析によって排除された。
【００８３】
最後に、化合物ＸＩＩＩは、図７に示すように、ＮＱ０１活性が高い癌細胞株には急速な細胞毒性を示すが、ＮＱ０１活性の見られない癌細胞株には細胞毒性を示さない。急速な細胞毒性とは、時間単位で数えられる短い時間で薬物によって引き起こされる癌細胞株への損傷を意味し、その損傷は、後に細胞死を引き起こすのに十分である。ＲＯＳによって誘導される細胞毒性は、典型的な急速な細胞毒性である。図４のパートＡに示されるように、ＤＬＤ１およびＡ５４９細胞株は著しいＮＱ０１活性を有し、化合物ＸＩＩＩを用いたフルタイムの処理または４時間の処理は、細胞増殖の抑制において有意な差をもたらさなかった。対照的に、図４のパートＡに示されるように、Ｈ１２９９およびＰａｎｃ  １細胞株は、ＮＱ０１活性を有さず、化合物ＸＩＩＩを用いたフルタイムの処理によって、４時間の処理よりも遥かに高い細胞増殖の抑制がもたらされた。
【００８４】
４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランは、好気条件下のタンパク質を含まない環境において不安定であるが、生体液中に存在し、以下のことからも明らかなように、式Ｉの化合物およびナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの生物学的活性における重要な役割を果たす：（１）インビボでの酸化還元反応は、キノンおよびハイドロキノン化合物における一般的な化学特性であり、ハイドロキノンは重要な生物学的役割を果たす、（２）化合物Ｉ、ＩＩＩ〜ＶＩＩ、ＸＩＩＩ、およびＸＩＶにおいて、２位の置換基であるカルボニル基のヒドロキシアルキルへの還元は、キノンの酸化還元反応と関連しており、２位の置換基であるヒドロキシアルキル基を有する代謝物の前駆体は、４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランである可能性が高い、（３）ＮＱ０１は、化学物質における４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランの形成を触媒し、式Ｉの化合物、それらの類似体、およびナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの生物学的活性に関する重要な役割を果たす、（４）式Ｉの化合物、それらの類似体、およびナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンは、癌細胞において著しいＲＯＳを産生する、および（５）ＮＡＣの効果および急速な細胞毒性は、式Ｉの化合物、それらの類似体、およびナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの生物学的活性に関するＲＯＳの役割を裏付けるものである。スキーム８は、ＮＱ０１、ＲＯＳの産生、およびＲＯＳの生物学的役割を合理的に一緒に関連付ける。ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンまたは式Ｉの化合物は、治療的に活性なハイドロキノン（キノール）、４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランに還元または加水分解される。治療的に活性なキノールは、酸素をスーパーオキシドアニオンに還元し、キノール自体は、酸化され、別の酸素分子をスーパーオキシドアニオンに還元するセミハイドロキノン（セミキノン）になり、セミキノン自体は、酸化されてナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン（キノン）に戻る。ＮＱ０１によって触媒される無益な酸化還元サイクルによって産生されるＲＯＳは、細胞の抗酸化剤の能力を圧倒し、細胞死プロセスを引き起こす可能性がある。したがって、ＲＯＳの基礎レベルがより高い癌細胞は、抗酸化剤システムにより依存し、さらなる酸化ストレス誘発剤の影響をより受けやすく、一方、ＮＱ０１酵素のレベルがより高い癌細胞は、さらに、ＮＱ０１依存性の外来性ＲＯＳ産生剤によって引き起こされるより高いＲＯＳストレスに直面する。理論に拘束されることを望むものではないが、４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランは治療的に活性な化合物であり、式Ｉの化合物およびナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンは、４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランのプロドラッグであると考えられる。
スキームＶＩＩＩ：
【化１０】
2014511384.tif 000015
式中、キノールはハイドロキノンであり、セミキノンはセミハイドロキノンであり、キノンはナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンである。
薬学的組成物
【００８５】
本発明は、式Ｉの化合物と、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤または担体または希釈剤とを含む薬学的組成物も提供する。
【００８６】
本明細書で使用される場合、薬学的に許容される賦形剤または担体または希釈剤は、薬学的投与に適合するあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤、ならびに吸収遅延剤等を含むことが意図される。薬学的に許容される賦形剤または担体または希釈剤は、限定されないが、水、生理食塩水、デキストロース溶液、トリアセチン、ヒトアルブミンまたはその誘導体、グリセロールモノ−（またはジ−）脂肪酸エステル、レシチン、リン脂質（ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン等）、コレステロール、ＰＥＧ−リン脂質、ＰＥＧ−コレステロール、ＰＥＧ−コレステロール誘導体、ＰＥＧ−ビタミンＡ、ＰＥＧ−ビタミンＥ、ＰＥＧ−グリセロールモノ−（またはジ−）脂肪酸エステル、エチレングリコールモノ脂肪酸エステル、プロピレングリコールモノ脂肪酸エステル、３−ジアルキル（Ｃ１−８）アミノ−プロピレングリコールジ脂肪酸エステル、ポリ（エチレングリコール）モノ脂肪酸エステル、ステアリン酸、ソルビタンエステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポロキサマー、ポロキサミン，ステアリン酸スクロースとジステアリン酸スクロースの混合物、酢酸ビニルとビニルピロリドンのランダムコポリマー、デオキシコール酸、グリコデオキシコール酸、タウロコール酸、アニオン性バイオポリマー（カゼインまたはその誘導体等）、アニオン性ポリマー、カチオン性バイオポリマー、それらの酸（デオキシコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、タウロコール酸）の塩、増量剤、およびそれらの混合物を含む。増量剤は、デンプンまたはその誘導体、マンニトール、ラクトース、マルチトール、マルトデキストリン、マルトース、デキストレート、デキストリン、デキストロース、フルクトース、ソルビトール、グルコース、スクロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶質セルロース、エチルセルロース、メチルセルロース、他の好適なセルロース誘導体、ゼラチン、アルギン酸およびその塩、コロイド状シリコンジオキシド、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ポビドン、ベンジルギ酸フェニル、クロロブタノール、フタル酸ジエチル、ステアリン酸カルシウム、グリセリルパルミトステアレート、酸化マグネシウム、ポロキサマー、ポリビニルアルコール、安息香酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、フマル酸ステアリルナトリウム、ステアリン酸、滑石、ステアリン酸亜鉛、アカシア、アクリルとメタクリル酸のコポリマー、グアーガム等のガム、乳清等の牛乳誘導体、薬学的光沢剤、グリセリルパルミトステアレート、水素化植物油、カオリン、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、ポリメタクリレート、塩化ナトリウム、およびそれらの混合物を含む。
【００８７】
式Ｉの化合物の製剤は、経口、経鼻、局所（口腔および舌下を含む）、直腸、膣内、および／または非経口投与に好適なものを含む。製剤は、都合よく単位剤形で提示することができ、薬学分野で周知の任意の方法によって調製されてもよい。単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、一般的に治療効果をもたらす化合物の量である。一般的に、この量は、１００％のうち、例えば、活性成分の約１％〜約９９％、約５％〜約７０％、約１０％〜約３０％と異なる。
【００８８】
いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物は、経口、経鼻、局所（口腔および舌下を含む）、直腸、膣内、および／または非経口投与に好適な乳化懸濁液（ｅｍｕｌｓｉｏｎ  ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）として調合される。乳化懸濁液は、式Ｉの化合物が溶解した水非混和性有機溶媒、水溶液、および表面活性剤を含有する。いくつかの実施形態において、乳化懸濁液中の水非混和性有機溶媒はトリアセチンである。いくつかの実施形態において、乳化懸濁液中の表面活性剤はレシチンである。いくつかの実施形態において、乳化懸濁液中の水溶液は生理食塩水である。
【００８９】
経口投与に好適な式Ｉの化合物の製剤は、各々が、所定の量の式Ｉの化合物を活性成分として含む、カプセル剤、丸剤、錠剤、カシェ剤、散剤、顆粒剤の形態であってもよいか、あるいは、水性または非水性または水性有機溶媒のエマルション液中の溶液もしくは懸濁液であってもよい。
【００９０】
経口投与のための式Ｉの化合物の固形剤形において、結晶、微粒子結晶、ナノ粒子、または非晶質形態といった物理的形態にある式Ｉの化合物は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体または希釈剤、例えば、グリセロールモノ−（またはジ−）脂肪酸エステル、レシチン、リン脂質（ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン等）、コレステロール、ＰＥＧ−リン脂質、ＰＥＧ−コレステロール、ＰＥＧ−コレステロール誘導体、ＰＥＧ−ビタミンＡ、ＰＥＧ−ビタミンＥ、ＰＥＧ−グリセロールモノ−（またはジ−）脂肪酸エステル、エチレングリコールモノ脂肪酸エステル、プロピレングリコールモノ脂肪酸エステル、３−ジアルキル（Ｃ１−８）アミノ−プロピレングリコールジ脂肪酸エステル、ポリ（エチレングリコール）モノ脂肪酸エステル、ステアリン酸、ソルビタンエステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポロキサマー、ポロキサミン、ステアリン酸スクロースとジステアリン酸スクロースの混合物、酢酸ビニルとビニルピロリドンのランダムコポリマー、デオキシコール酸、グリコデオキシコール酸、タウロコール酸、アニオン性バイオポリマー（カゼインまたはその誘導体等）、アニオン性ポリマー、カチオン性バイオポリマー、それらの酸（デオキシコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、タウロコール酸）の塩、増量剤、およびそれらの混合物等と混合される。増量剤は、デンプンまたはその誘導体、マンニトール、ラクトース、マルチトール、マルトデキストリン、マルトース、デキストレート、デキストリン、デキストロース、フルクトース、ソルビトール、グルコース、スクロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶質セルロース、エチルセルロース、メチルセルロース、他の好適なセルロース誘導体、ゼラチン、アルギン酸およびその塩、コロイド状シリコンジオキシド、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ポビドン、ベンジルギ酸フェニル、クロロブタノール、フタル酸ジエチル、ステアリン酸カルシウム、グリセリルパルミトステアレート、酸化マグネシウム、ポロキサマー、ポリビニルアルコール、安息香酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、フマル酸ステアリルナトリウム、ステアリン酸、滑石、ステアリン酸亜鉛、アカシア、アクリルとメタクリル酸のコポリマー、グアーガム等のガム、乳清等の牛乳誘導体、薬学的光沢剤、グリセリルパルミトステアレート、水素化植物油、カオリン、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、ポリメタクリレート、塩化ナトリウム、およびそれらの混合物を含む。
【００９１】
経口、経鼻、局所、直腸、膣内、および非経口投与のための式Ｉの化合物の液体または半液体剤形において、式Ｉの化合物は、各々が、所定の量の式Ｉの化合物を活性成分として含む、水性または非水性または水性有機溶媒のエマルション液または半液体中の溶液もしくはナノ粒子懸濁液として、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体または希釈剤と混合される。特定の実施形態において、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤は、限定されないが、水、生理食塩水、デキストロース溶液、トリアセチン、ヒトアルブミンまたはその誘導体、グリセロールモノ−（またはジ−）脂肪酸エステル、レシチン、リン脂質（ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン等）、コレステロール、ＰＥＧ−リン脂質、ＰＥＧ−コレステロール、ＰＥＧ−コレステロール誘導体、ＰＥＧ−ビタミンＡ、ＰＥＧ−ビタミンＥ、ＰＥＧ−グリセロールモノ−（またはジ−）脂肪酸エステル、エチレングリコールモノ脂肪酸エステル、プロピレングリコールモノ脂肪酸エステル、３−ジアルキル（Ｃ１−８）アミノ−プロピレングリコールジ脂肪酸エステル、ポリ（エチレングリコール）モノ脂肪酸エステル、ステアリン酸、ソルビタンエステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポロキサマー、ポロキサミン、ステアリン酸スクロースとジステアリン酸スクロースの混合物、酢酸ビニルとビニルピロリドンのランダムコポリマー、デオキシコール酸、グリコデオキシコール酸、タウロコール酸、アニオン性バイオポリマー（カゼインまたはその誘導体等）、アニオン性ポリマー、カチオン性バイオポリマー、これらの酸（デオキシコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、タウロコール酸）の塩、増量剤、およびそれらの混合物を含む。増量剤は、デンプンまたはその誘導体、マンニトール、ラクトース、マルチトール、マルトデキストリン、マルトース、デキストレート、デキストリン、デキストロース、フルクトース、ソルビトール、グルコース、スクロースを含む。
【００９２】
ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン（例えば、２−アセチル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンおよび２−（１−ヒドロキシエチル）−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン）ならびにそれらの類似体または誘導体は、高度に結晶性の固体を形成する傾向にある。そのような化合物の結晶化は合成プロセスに有用である一方で、経口バイオアベイラビリティの障害となり得る。解決策として、我々は、ナフト［２．３−ｂ］フラン−４，９−ジオンならびにそれらの類似体および誘導体の非晶質固体を調製する方法を発見した。これらの方法は、実施例および図において本明細書に記載される。
用途
【００９３】
理論に拘束されることを望むものではないが、本発明の化合物は、「インビボで治療的に活性な化学種」の項目において論じられるように、インビボで治療的に活性なジヒドロキシナフトフラン化学種になるプロドラッグであると考えられる。特定の実施形態において、式Ｉの化合物は、インビトロで治療的に活性な対応する化学種よりも安定している。特定の実施形態において、式Ｉの化合物は、対応するキノンプロドラッグよりも経口バイオアベイラビリティが高い（図９を参照）。特定の実施形態において、式Ｉの化合物は、対応するキノンプロドラッグよりも低い毒性を示す（図１０を参照）。
【００９４】
本発明の化合物は、インビトロまたはインビボで使用することができる。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は薬物中に使用するために提供される。いくつかの実施形態において、本発明は、対象に治療的有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、疾患、障害、もしくは状態に罹患しているかまたは罹患しやすい対象を治療する方法を提供する。特定の実施形態において、式Ｉの化合物は、増殖性疾患の治療において有用である。しかしながら、上述の本発明の化合物は、研究目的または臨床目的（例えば、式Ｉの化合物に対する患者の疾患の感受性を判定する、作用機序を調べる、細胞経路またはプロセスをを解明する）のためにインビトロでも使用することができる。
【００９５】
いくつかの実施形態において、本発明は、対象に治療的有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、増殖性疾患、障害、もしくは状態に罹患しているかまたは罹患しやすい対象を治療する方法を提供する。特定の実施形態において、増殖性疾患は良性新生物である。特定の実施形態において、増殖性疾患は癌である。特定の実施形態において、増殖性疾患は炎症性疾患である。特定の実施形態において、増殖性疾患は自己免疫疾患である。特定の実施形態において、増殖性疾患は糖尿病性網膜症である。
【００９６】
式Ｉの化合物は、新生物の治療において使用することができる。特定の実施形態において、新生物は良性新生物である。他の実施形態において、新生物は悪性新生物である。
【００９７】
いくつかの実施形態において、本発明は、対象に治療的有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、癌に罹患しているかまたは罹患しやすい対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、癌は血液系腫瘍である。特定の実施形態において、癌は固形腫瘍である。式Ｉの化合物を使用して治療することができる癌の例として、ほんの数例ではあるが、結腸癌、肺癌、骨癌、膵臓癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、食道癌、皮膚癌、脳癌、肝臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、子宮癌、精巣癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、神経内分泌癌、乳癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、眼癌、上咽頭癌、胆嚢癌、喉頭癌、口腔癌、陰茎癌、腺管腫瘍、直腸癌、小腸癌、頭頸部癌、多発性骨髄腫、結腸直腸癌、カポジ肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、平滑筋肉腫、神経膠腫、髄膜腫、髄芽腫、メラノーマ、尿道癌、膣癌が挙げられる。
【００９８】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物は、脳、髄膜、および中枢神経系の疾患、障害、および状態の治療に有用である。特定の理論に束縛されることを望むものではないが、式Ｉの化合物またはそれらの分解生成物（治療的に活性な化学種）は、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過することができ、したがって、ＢＢＢを通過するように全身投与される治療薬を必要とする疾患、障害、および状態を治療するために有用であり得ると考えられる。
【００９９】
血液系腫瘍は、血液、骨髄、および／またはリンパ節に影響を及ぼす癌の種類である。式Ｉの化合物を使用して治療することができる血液系腫瘍の例として、限定されないが、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリーセル白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、マントル細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、急性前骨髄球性白血病、および多発性骨髄腫が挙げられる。
【０１００】
式Ｉの化合物は、難治性または再発性の悪性腫瘍を治療するためにも使用することができる。特定の実施形態において、癌は難治性および／または再発性の血液系腫瘍である。例えば、癌は、特定の化学療法剤に抵抗性であり得る。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、本発明は、有効量の式Ｉの化合物を用いて、癌幹細胞の生存および／または自己再生を阻害するまたは低下させる方法を提供する。
【０１０２】
式Ｉの化合物はまた、インビトロまたはインビボで治療するおよび／または細胞を死滅させるために使用することもできる。特定の実施形態において、細胞を死滅させるために、細胞毒性濃度の式Ｉの化合物を細胞と接触させる。いくつかの実施形態において、致死量以下の濃度の式Ｉの化合物が細胞を治療するために使用される。特定の実施形態において、式Ｉの化合物の濃度は、０．１ｎＭ〜１００μΜの範囲である。特定の実施形態において、式Ｉの化合物の濃度は、０．０１μΜ〜１００μΜの範囲である。特定の実施形態において、式Ｉの化合物の濃度は、０．１μΜ〜５０μΜの範囲である。特定の実施形態において、式Ｉの化合物の濃度は、１μΜ〜１０μΜの範囲である。特定の実施形態において、式Ｉの化合物の濃度は、１μΜ〜１０μΜ、より具体的には１μΜ〜５μΜの範囲である。
【０１０３】
いずれの種類の細胞も、式Ｉの化合物を用いて検査するまたは死滅させることができる。そのような細胞は、いずれの動物、植物、細菌、または真菌源に由来してもよく、いずれの分化または発達の段階にあってもよい。特定の実施形態において、細胞は動物細胞である。特定の実施形態において、細胞は脊椎動物細胞である。特定の実施形態において、細胞は哺乳類細胞である。特定の実施形態において、細胞はヒト細胞である。細胞は、いずれの発達段階にあるヒトの男性または女性に由来してもよい。特定の実施形態において、細胞は霊長類細胞である。他の実施形態において、細胞はげっ歯類（例えば、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、スナネズミ）に由来する。特定の実施形態において、動物は、イヌ、ネコ、ウシ、ヤギ、ブタ等の飼育動物に由来する。細胞はまた、トランスジェニックマウス等の遺伝子操作された動物または植物に由来してもよい。
【０１０４】
本発明に従って使用される細胞は、野生型細胞または突然変異細胞であってもよく、遺伝子操作されていてもよい。特定の実施形態において、細胞は正常細胞である。特定の実施形態において、細胞は血液細胞である。特定の実施形態において、細胞は白血球である。特定の具体的な実施形態において、細胞は白血球の前駆体（例えば、幹細胞、前駆細胞、芽細胞）である。特定の実施形態において、細胞は新生物細胞である。特定の実施形態において、細胞は癌細胞である。特定の実施形態において、細胞は血液系腫瘍に由来する。他の実施形態において、細胞は固形腫瘍に由来する。例えば、細胞は、患者の腫瘍に由来してもよい（例えば、生検または手術のための切除による）。特定の実施形態において、細胞は、対象の血液試料または骨髄生検に由来する。特定の実施形態において、細胞はリンパ節生検に由来する。そのような細胞毒性についての検査は、患者が特定の併用療法に応答するかどうかを判定する際に有用であり得る。また、そのような検査は、悪性腫瘍を治療するために必要な投与量を決定する際にも有用であり得る。このように式Ｉの化合物に対する患者の癌の感受性を検査することにより、患者への効果を示さない不必要な薬物の投与を回避する。また、検査することによって、患者の癌が式Ｉの化合物に対して特に感受性が高い場合、式Ｉの化合物をより低い用量で使用することもできる。
【０１０５】
特定の実施形態において、細胞は癌細胞株に由来する。例えば、特定の実施形態において、細胞は、ＣＤ３４＋骨髄細胞等の造血前駆細胞である。特定の実施形態において、細胞は、Ａ５４９、ＤＬＤ１、ＳＷ４８０、ＬＯＶＯ、ＨＴ−２９、Ｕ−２０Ｓ、ＭＥＳ−ＳＡ、ＳＫ−ＭＥＬ−２８、Ｐａｎｃ−１、ＤＵ−１４５、ＣＮＥ、Ｕ２５１、Ｅｃａ−１０９、ＭＧＣ８０−３、ＳＧＣ−７９０１、ＱＧＹ−７７０１、ＢＥＬ−７４０４、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５、Ｈｕｈ−７、ＭＯＬＴ−３（急性リンパ芽球性Ｔ細胞）、ＳＫＮＬＰ（神経芽細胞腫）、ＰＣ９（腺癌）、Ｈ１６５０（腺癌）、Ｈ１９７５（腺癌）、Ｈ２０３０（腺癌）、Ｈ３２５５（腺癌）、ＴＣ７１（ユーイング肉腫）、ＨＴＰ−１５（神経膠芽腫）、Ａ４３１（上皮癌）、ＨｅＬａ（子宮頸部腺癌）、またはＷＤ００８２（十分に分化した脂肪肉腫）細胞である。特定の実施形態において、細胞株は、特定の化学療法剤に抵抗性である。
【０１０６】
いくつかの実施形態において、本発明は、対象に治療的有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、肥満または肥満に関連する障害もしくは状態に罹患しているかまたは罹患しやすい対象を治療する方法を提供する。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、本発明は、対象に治療的有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、糖尿病に罹患しているかまたは罹患しやすい対象を治療する方法を提供する。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、本発明は、対象に治療的有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、代謝性疾患、障害、もしくは状態に罹患しているかまたは罹患しやすい対象を治療する方法を提供する。
【０１０９】
いくつかの実施形態において、本発明は、対象に治療的有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、変性疾患、障害、もしくは状態に罹患しているかまたは罹患しやすい対象を治療する方法を提供する。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、本発明は、対象に治療的有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、ミトコンドリア機能障害に関連する疾患、障害、または状態に罹患しているかまたは罹患しやすい対象を治療する方法を提供する。
【０１１１】
いくつかの実施形態において、本発明は、対象に治療的有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、循環器疾患、障害、もしくは状態に罹患しているかまたは罹患しやすい対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、疾患、障害、または状態は、高血圧症、うっ血性心不全、心臓発作、高血圧性心疾患、粥状動脈硬化、冠動脈疾患、狭心症、虚血、虚血発作からなる群から選択される。
【０１１２】
いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物は、国際公開第２００９／０３６０５９号および国際公開第２００６／０８８３１５号（それらの各々の内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるような他の疾患、障害、または状態を治療するために有用であり得る。
【０１１３】
特定の実施形態において、本発明の化合物および薬学的組成物は、併用療法に用いることができる、すなわち、１つ以上の他の所望の治療薬または医療手技と同時に、その前に、またはその後に、化合物および薬学的組成物を投与することができる。併用療法において用いられる治療（治療薬または手技）の具体的な組み合わせは、所望の治療薬および／または手技の適合性、ならびに達成される所望の治療効果を考慮に入れる。また、用いられる治療は、同じ障害に対して所望の効果を達成することができる（例えば、本発明の化合物は、別の抗癌剤と同時に投与されてもよい）か、または異なる効果を達成することができる（例えば、任意の有害な影響の制御）ことも理解されたい。
【０１１４】
特定の実施形態において、本発明の抗癌剤と組み合せて使用することができる他の治療または抗癌剤は、外科手術、放射線療法（いくつか例を挙げると、γ線照射、中性子線治療、電子線治療、陽子線治療、密封小線源治療、および前身放射性同位元素）、内分泌療法、生物反応修飾物質（いくつか例を挙げると、インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ））、温熱療法および寒冷療法、任意の有害影響を減衰させるための薬剤（例えば、制吐剤）、ならびに、限定されないが、いくつか例を挙げると、アルキル化剤（メクロレタミン、クロラムブシル、シクロホスファミド、メルファラン、イホスファミド）、代謝物拮抗薬（メトトレキサート）、プリン拮抗薬およびピリミジン拮抗薬（６−メルカプトプリン、５−フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン）、紡錘体毒（ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、パクリタキセル）、ポドフィロトキシン（エトポシド、イリノテカン、トポテカン）、抗生物質（ドキソルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシン）、ニトロソウレア（カルムスチン、ロムスチン）、無機イオン（シスプラチン、カルボプラチン）、酵素（アスパラギナーゼ）、およびホルモン（タモキシフェン、リュープロリド、フルタミド、およびメゲストロール）を含む他の認可された化学療法剤を含む。また、本発明は、現在治験が行われており、最終的にはＦＤＡによって認可され得る、特定の細胞毒性剤または抗癌剤（限定されないが、エポチロンおよびその類似体、ならびにゲルダナマイシンおよびその類似体を含む）の使用も包含する。最新の癌治療のより包括的な検討については、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ，Ｅｉｇｈｔｅｅｎｔｈ  Ｅｄ．２００６（その内容全体が、参照によって本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０１１５】
特定の実施形態において、本発明の化合物は、臨床的寛解にある対象を治療する上で有用である。いくつかの実施形態において、対象は手術によって治療されており、限定された未切除疾患を有する可能性がある。
【０１１６】
所望の場合、活性化合物の有効１日用量は、任意に単位剤形で、１日を通して適切な間隔で別個に投与される２回、３回、４回、５回、６回、またはそれ以上のサブ用量として投与されてもよい。
【０１１７】
本発明の薬学的組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、患者に対して毒性を示すことなく、特定の患者、組成物、および投与方法で所望の治療応答を達成するのに効果的な活性成分の量を得るために異なり得る。
【０１１８】
選択される投与量レベルは、用いられる本発明の特定の化合物、またはそのエステル、塩、もしくはアミドの活性、投与経路、投与の時間、用いられる特定の化合物の排泄率または代謝率、治療期間、用いられる特定の化合物と併用して使用される他の薬物、化合物、および／または材料、治療を受ける患者の年齢、性別、体重、状態、総体的健康、および以前の病歴、ならびに医療分野で周知の同様の要因を含む様々な要因に依存する。
【０１１９】
当該技術分野における通常の技術を有する医師または獣医師は、必要な薬学的組成物の有効量を容易に決定および処方することができる。例えば、医師または獣医師は、薬学的組成物中に用いられる本発明の化合物の用量を、所望の治療効果を達成するために必要とされるよりも少ないレベルで開始し、次いで、所望の効果が達成されるまで投与量を徐々に増加することができる。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物または薬学的組成物は、対象に慢性的に提供される。慢性的治療は、１ヶ月以上、１ヶ月〜１年、１年以上、またはそれ以上の反復投与等、長期にわたる任意の形態の反復投与を含む。いくつかの実施形態において、慢性的治療は、対象の一生にわたって、本発明の化合物または薬学的組成物を繰り返し投与することを伴う。いくつかの実施形態において、慢性的治療は、例えば、１日１回以上、１週間に１回以上、または１ヶ月に１回以上の定期的な投与を伴う。一般に、本発明の化合物の１日用量等の好適な用量は、治療効果をもたらすために効果的な最も少ない用量である化合物の量である。そのような有効量は、概して、上述の要因に依存する。一般的に、患者のための本発明の化合物の用量は、適応される効果のために使用される場合、１日当たり、体重１ｋｇ当たり約０．０００１〜約１００ｍｇの範囲である。好ましくは、１日の投与量は、体重１ｋｇ当たり０．００１〜５０ｍｇの化合物の範囲であり、さらにより好ましくは、体重１ｋｇ当たり０．０１〜１０ｍｇの化合物の範囲である。しかしながら、より少ないまたはより多い用量が使用されてもよい。いくつかの実施形態において、対象に投与される用量は、年齢、疾患の進行、体重、または他の要因に応じて対象の生理機能が変化するにつれて修正することができる。
【０１２１】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物の治療的有効量は、約１ｍｇ／ｍ２〜約５，０００ｍｇ／ｍ２（静脈内投与）、または約１ｍｇ／ｍ２〜約５０，０００ｍｇ／ｍ２（経口投与）である。特定の実施形態において、式Ｉの化合物の治療的有効量は、約２ｍｇ／ｍ２〜約３，０００ｍｇ／ｍ２（静脈内投与）、または約１０ｍｇ／ｍ２〜約３０，０００ｍｇ／ｍ２（経口投与）である。
【０１２２】
特定の実施形態において、式Ｉの化合物は、当該技術分野で既知の従来の手順に従って、式Ｉの化合物の治療的有効量を、上に列挙される少なくとも１つの賦形剤または担体または希釈剤と組み合わせることによって調製される好適な剤形において投与される。癌の治療のための剤形は、腫瘍内に直接注射されてもよいか、血流もしくは体腔内に注射されてもよいか、または経口的に摂取されてもよいか、または貼付剤を用いて皮膚を通して適用されてもよい。
【０１２３】
本発明は、さらに、本発明の化合物の薬学的組成物を含むキットを提供する。特定の実施形態において、そのようなキットは、本発明の化合物と別の化学療法剤との組み合わせを含む。薬剤は、別個にまたは一緒に梱包されてもよい。キットは、薬物を調合するための指示を任意に含む。特定の実施形態において、キットは、各薬剤の複数用量を含む。キットは、１週間、２週間、３週間、４週間、または数ヶ月の間対象を治療するために十分な量の各構成要素を含んでもよい。キットは、化学療法の全サイクルを含んでもよい。特定の実施形態において、キットは、複数サイクルの化学療法を含む。
例証
【実施例１】
【０１２４】
ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの調製（化合物ＸＩ）
１００ｍＬのジクロロメタン中の５グラム（４７．２ｍｍｏｌ）のメチルビニルスルホンの溶液に、７．９グラム（４９．５ｍｍｏｌ）の臭素を加えた。混合物を６時間還流し、次いで、粘着性残渣になるまで蒸発させた。氷浴中で冷却した１５０ｍＬのテトラヒドロフラン中の残渣溶液に、７．５グラム（４９．５ｍｍｏｌ）の１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデス−７−エン（ＤＢＵ）を激しく撹拌しながら２０分かけて徐々に滴下した。反応混合物を氷浴中でさらに３０分撹拌し、次いで、８．２グラム（４７．２ｍｍｏｌ）の２−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノンおよび７．５グラム（４９．５ｍｍｏｌ）の１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデス−７−エン（ＤＢＵ）を加えた。混合物を６時間還流し、次いで、粘着性残渣になるまで蒸発させた。残渣を３００ｍＬのジクロロメタンに溶解し、３００ｍＬの水、３００ｍＬの２％クエン酸水溶液で連続的に洗浄し、３０グラムの無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ジクロロメタン／ヘキサン（３：１）を溶出溶媒として使用したシリカゲルカラムを用いてナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン生成物を精製した。２．３グラムの生成物（全体収率２５％）を得、１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ中）δ７．１７（ｄ，Ｊ＝２，１Ｈ），７．８６〜７．９１（ｍ，２Ｈ），８．０９〜８．１３（ｍ，２Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝２，１Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は１９９である。
【実施例２】
【０１２５】
２−アセチル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの調製（化合物ＸＩＩＩ、方法１）
３−ブテン−２−オンの調製
１Ｌ丸底フラスコに、６００ｍlの４−ヒドロキシ−２−ブタノン、１００ｍＬの水、５０ｍlのメタノール、および２０ｍlの８５％リン酸を加えた。混合物を室温で３０分撹拌し、次いで、減圧下（１５０〜２００ｍｍＨｇ）で蒸留した。６５〜８０℃の沸点で画分を回収した。回収した画分に８０グラムの塩化ナトリウムを加えた。得られた混合物を４℃で１時間撹拌し、次いで、漏斗を用いて上部有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、使用するために４℃に維持した。
２−アセチル−ナフト［２，３−ｂ］ジヒドロフラン−４，９−ジオンの調製
【０１２６】
氷塩浴中で冷却した１６．１グラム（０．２３ｍｏｌ）の３−ブテン−２−オンおよび４０ｍlのジクロロメタンを含む５００ｍl丸底フラスコに、１０ｍlのジクロロメタン中に希釈した３６．７グラム（０．２３ｍｏｌ）の臭素を１５分かけて滴下で加えた。混合物を５０ｍlの水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させてジクロロメタンを除去した。４３．４グラム（０．１９ｍｏｌ）の残渣を１Ｌ丸底フラスコに移し、４０ｍlのＤＭＦで希釈し、氷塩浴中で冷却した。激しく撹拌しながら、５０ｍlのＤＭＦで希釈した２７．３グラム（０．１８ｍｏｌ）の１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデス−７−エン（ＤＢＵ）を１５分かけて滴下で加えた。混合物に３１．４グラム（０．１８ｍｏｌ）の２−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノンを加え、氷塩浴を除去した。激しく撹拌しながら、かつ開放空気中で、５０ｍlのＤＭＦで希釈した２５．８グラム（０．１７ｍｏｌ）のＤＢＵを室温で３０分かけて滴下で加えた。４時間撹拌した後、５００ｍlの氷冷水を混合物に加えた。粗生成物を濾過し、水、５％含水重炭酸ナトリウム、水、２％酢酸水溶液、氷冷エタノールで連続的に洗浄した。エタノール中で結晶化することにより純粋な生成物（２１．８グラム、収率５０．１％）を得、１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３中）δ２．４１（ｓ，３Ｈ），３．４２〜３．４５（ｍ，２Ｈ），５．３０（ｍ，１Ｈ），７．７１〜７．７８（ｍ，２Ｈ），８．０９〜８．１３（ｍ，２Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は２４３である。
２−アセチル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの調製
【０１２７】
５００ｍl丸底フラスコに、１０グラム（４１．３ｍｍｏｌ）の２−アセチル−ナフト［２，３−ｂ］ジヒドロフラン−４，９−ジオン、２５０ｍlのエタノール、および５．１グラム（３４ｍｍｏｌ）のＤＢＵを加えた。空気中に開放しながら、混合物を３０分還流した。氷中で冷却した後、２５０ｍlの氷水を加えた。粗生成物を濾過し、水、２％酢酸水溶液、氷冷エタノールで連続的に洗浄した。ギ酸中で結晶化することにより純粋な生成物（７．９３グラム、収率８０％）を得、１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ中）δ２．６１（ｓ，３Ｈ），７．９１〜７．９５（ｍ，２Ｈ），８．０６（ｓ，１Ｈ），８．１３〜８．１７（ｍ，２Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は２４１である。
【実施例３】
【０１２８】
２−アセチル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの調製（化合物ＸＩＩＩ、方法２）
氷塩浴中で冷却した１６．１グラム（０．２３ｍｏｌ、実施例２に記載したように調製した）の３−ブテン−２−オンおよび４０ｍlのジクロロメタンを含む５００ｍl丸底フラスコに、１０ｍlのジクロロメタン中に希釈した３６．７グラム（０．２３ｍｏｌ）の臭素を１５分かけて滴下で加えた。混合物を５０ｍlの水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させてジクロロメタンを除去した。４３．４グラム（０．１９ｍｏｌ）の残渣を１Ｌ丸底フラスコに移し、４０ｍlのＤＭＦで希釈し、氷塩浴中で冷却した。激しく撹拌しながら、５０ｍlのＤＭＦで希釈した２７．３グラム（０．１８ｍｏｌ）の１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデス−７−エン（ＤＢＵ）を１５分かけて滴下で加えた。混合物に３１．４グラム（０．１８ｍｏｌ）の２−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノンを加え、氷塩浴を除去した。激しく撹拌しながら、かつ開放空気中で、５０ｍlのＤＭＦで希釈した３４．５グラム（０．２３ｍｏｌ）のＤＢＵを室温で３０分かけて滴下で加えた。４時間撹拌した後、５００ｍlの氷冷水を混合物に加えた。粗生成物を濾過し、水、５％含水重炭酸ナトリウム、水、２％酢酸水溶液、氷冷エタノールで連続的に洗浄した。ギ酸中で結晶化することにより純粋な生成物（１４．６グラム、収率３６．５％）を得、１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ中）δ２．６１（ｓ，３Ｈ），７．９１〜７．９５（ｍ，２Ｈ），８．０６（ｓ，１Ｈ），８．１３〜８．１７（ｍ，２Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は２４１である。
【実施例４】
【０１２９】
２−プロピオニル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの調製（化合物ＸＩＶ）
実施例３に記載した手順を使用することにより、１６．０グラム（０．１９ｍｏｌ）の１−ペンテン−３−オンおよび３１．４グラム（０．１８ｍｏｌ）の２−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノンから、１３．７グラム（５４ｍｍｏｌ）の２−プロピオニル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンを全体収率３０．０％で得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ中）δ１．１２（ｔ，Ｊ＝７，３Ｈ），３．０５（ｑ，Ｊ＝７，２Ｈ），７．９２〜７．９４（ｍ，２Ｈ），８．０３（ｓ，１Ｈ），８．１３〜８．１７（ｍ，２Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は２５５である。
【実施例５】
【０１３０】
２−（１−ヒドロキシエチル）−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの調製（化合物ＸＩＩ）
２５０ｍlビーカー中、２グラム（８．３ｍｍｏｌ）の２−アセチル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン（実施例２または３で調製した）を加熱により４０ｍlのＤＭＦに溶解した。この溶液に、撹拌しながら１０ｍlの水中の１グラム（２６．４ｍｍｏｌ）の水素化ホウ素ナトリウムを加えた。混合物を開放空気中で３０分撹拌し、次いで２５０ｍlの水を加えることにより希釈した。得られた混合物を１００ｍlのジクロロメタンで２回抽出した。合わせた有機相を２００ｍlの水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥するまで蒸発させた。酢酸エチル中で残渣を結晶化し、１．６グラム（６．６ｍｍｏｌ）の純粋な生成物を全体収率８０％で得た。純粋な生成物を１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ中）δ１．４７（ｄ，Ｊ＝７，３Ｈ），４．８８（ｍ，１Ｈ），５．８３（ｄ，Ｊ＝５，１Ｈ），６．９１（ｓ，１Ｈ），７．８４〜７．９０（ｍ，２Ｈ），８．０６〜８．１１（ｍ，２Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は２４３である。
【実施例６】
【０１３１】
４，９−ジメトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランの調製
１５０ｍＬのテトラヒドロフラン／水（２：１）中の２グラム（１０．１ｍｍｏｌ）のナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの溶液（実施例１で調製した）に、７．０３グラム（４０．４ｍｍｏｌ）のハイドロサルファイトナトリウム、０．８１グラム（２０．２ｍｍｏｌ）の水酸化ナトリウム、０．６４グラム（２ｍｍｏｌ）の臭化テトラブチルアンモニウム、および３．８４グラム（４０．４ｍｍｏｌ）の臭化メチルを同時に加えた。密閉した丸底フラスコ中、室温で４時間混合物を撹拌し、次いで、蒸発させてテトラヒドロフランを除去した。残りの水溶液をジクロロメタンで２回抽出した。合わせた有機相を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥するまで蒸発させた。ジクロロメタン／ヘキサン（２：１）を溶出溶媒として使用したシリカゲルカラムを用いて残渣中の生成物を精製した。１．８グラムの生成物（収率８０％）を得、１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３中）δ４．２０（ｓ，３Ｈ），４．３０（ｓ，３Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝２，１Ｈ），７．４５〜７．５３（ｍ，２Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝２，１Ｈ），８．２６〜８．３２（ｍ，２Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は２２９である。
【実施例７】
【０１３２】
２−メチルスルホニル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの調製（化合物ＸＶ）
（１）２−トリメチルシリル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの調製
氷浴中、２０ｍＬの無水テトラヒドロフランで希釈した４ｍＬの２．２Ｍ  ｎ−ブチルリチウムの溶液に、２０ｍＬの無水テトラヒドロフラン中の１グラム（４．４ｍｍｏｌ）の４，９−ジメトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フラン（実施例６で調製した）を５分にわたり滴下で加えた。混合物を氷浴中でさらに３０分撹拌し、次いで０．９５グラム（８．８ｍｍｏｌ）のクロロトリメチルシランを５分にわたり滴下で加えた。混合物を氷浴中でさらに２０分撹拌し、次いで、室温でさらに３０分撹拌した。１００ｍＬの０．１Ｎ塩酸の添加により反応混合物を停止し、次いで、蒸発させてテトラヒドロフランを除去した。残りの水溶液をジクロロメタンで２回抽出した。合わせた有機相を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥するまで蒸発させた。１．２グラム（４ｍｍｏｌ）の粗生成物２−トリメチルシリル−４，９−ジメトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランを得、精製せずに次のステップの反応に使用した。
【０１３３】
氷浴中の５０ｍＬのアセトニトリル／水（４：１）中の１．２グラム（４ｍｍｏｌ）の粗生成物２−トリメチルシリル−４，９−ジメトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランに、５０ｍＬのアセトニトリル／水（１：４）中の４．８グラム（８．７ｍｍｏｌ）の硝酸アンモニウムセリウム（ＣＡＮ）溶液を１０分にわたり滴下で加えた。混合物を氷浴中でさらに１時間撹拌し、次いで、蒸発させてアセトニトリルを除去した。残りの水性懸濁液を濾過し、回収した固体を水で洗浄し、エタノール／水中で結晶化した。純粋な結晶生成物を濾過し、真空下で乾燥した。０．８９グラムの生成物（全体収率７５％）を得、１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３中）δ０．４１（ｓ，９Ｈ），７．１６（ｓ，１Ｈ），７．７５〜７．７８（ｍ，２Ｈ），８．１９〜８．２６（ｍ，２Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は２７１である。
（２）２−ブロモ−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの調製
【０１３４】
室温の２０ｍＬのアセトニトリル中の０．８グラム（３．０ｍｍｏｌ）の２−トリメチルシリル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの溶液に、２０ｍＬのアセトニトリル中の０．５３グラム（３．３ｍｍｏｌ）の臭素を５分にわたり滴下で加えた。混合物を室温でさらに３０分撹拌し、次いで乾燥するまで蒸発させた。エタノール／水中で残渣を結晶化した。純粋な結晶生成物を濾過し、真空下で乾燥した。０．７５グラムの生成物（収率９０％）を得、１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３中）δ６．９６（ｓ，１Ｈ），７．７６〜７．８２（ｍ，２Ｈ），８．１８〜８．２５（ｍ，２Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は２７７および２７９である。
（３）２−メチルチオ−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの調製
【０１３５】
室温の２０ｍＬのテトラヒドロフラン中の０．７グラム（２．５ｍｍｏｌ）の２−ブロモ−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの溶液に、５ｍＬの水中の０．４グラム（５．０ｍｍｏｌ）のＭｅＳＮａを１分にわたり滴下で加えた。混合物を室温でさらに２時間撹拌し、次いで蒸発させてテトラヒドロフランを除去した。この残渣に、２０ｍＬの１Ｎ塩酸を加え、得られた混合物を濾過した。固体を水で洗浄し、次いでエタノール／水中で結晶化した。純粋な結晶生成物を濾過し、真空下で乾燥した。０．５５グラムの生成物（収率９０％）を得、１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３中）δ２．６６（ｓ，３Ｈ），６．７９（ｓ，１Ｈ），７．７５〜７．７９（ｍ，２Ｈ），８．１８〜８．２５（ｍ，２Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は２４５である。
（４）２−メチルスルホニル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの調製（化合物ＸＶ）
【０１３６】
氷浴中の３０ｍＬのジクロロメタン中の０．５グラム（２．０５ｍｍｏｌ）の２−メチルチオ−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの溶液に、０．５７グラム（２．４６ｍｍｏｌ）の純度７０％の３−クロロ過安息香酸を加えた。混合物を氷浴中で３０分撹拌し、室温でさらに２時間撹拌し、次いで、１００ｍＬのジクロロメタンで希釈し、１５０ｍＬの５％重炭酸ナトリウムで２回洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥するまで蒸発させた。エタノール／水中で残渣を結晶化した。０．４８グラムの生成物（収率８５％）を得、１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３中）δ３．３４（ｓ，１Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ），７．８５〜７．８７（ｍ，２Ｈ），８．２６〜８．３０（ｍ，２Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は２７７である。
【実施例８】
【０１３７】
２−メチルスルフィニル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの調製（化合物ＸＶＩ）
室温の２０ｍＬのアセトニトリル中の０．５グラム（２．０５ｍｍｏｌ）の２−メチルチオ−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン（実施例７で調製した）の溶液に、０．４９グラム（２．１５ｍｍｏｌ）の過ヨウ素酸、続いて２ｍｇの塩化第二鉄を加えた。混合物を室温で１０分撹拌し、次いで５０ｍＬの水を加え、得られた混合物を蒸発させてアセトニトリルを除去した。残りの水性懸濁液を濾過し、得られた固体を水で洗浄し、真空下で乾燥した。ジクロロメタン／酢酸エチル（９：１）を溶出溶媒として使用したシリカゲルクロマトグラフを用いて粗固体生成物を精製した。０．４３グラムの生成物（収率８０％）を得、１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ中）δ３．１４（ｓ，３Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），７．９２〜７．９４（ｍ，２Ｈ），８．１２〜８．１７（ｍ，２Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は２６１である。
【実施例９】
【０１３８】
２−アセチル−４，９−ビス（アセトキシ）−ナフト［２，３−ｂ］フランの調製
５００ｍl丸底フラスコ中、８グラム（３３．３ｍｍｏｌ）の２−アセチル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン（実施例２または３で調製した）を加熱により１５０ｍlのＤＭＦに溶解した。この溶液に、１４ｍlのＴＥＡ、８グラムの亜鉛粉末、１グラムの臭化テトラブチルアンモニウム、および２９グラム（１６６．７ｍｍｏｌ）のヒドロ亜硫酸ナトリウムを加えた。混合物を密閉するかまたは空気から隔離した。次いで、注射器を用いて１７グラム（１６６．７ｍｍｏｌ）の無水酢酸を加え、得られた混合物を室温で３時間激しく撹拌した。３００ｍlの酢酸エチルの添加後、反応混合物を濾過し、固体を２００ｍlの酢酸エチルで洗浄した。濾液を合わせ、氷冷した３００ｍlの３％クエン酸水溶液で２回抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。有機相を乾燥するまで蒸発させた。残渣を６０ｍlの氷冷エタノールで洗浄し、次いで、濾過した固体を２５０ｍlのエタノール中で結晶化した。５．５グラム（１６．９ｍｍｏｌ、収率５０．７％）の生成物を得、１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３中）δ２．５９（ｓ，３Ｈ），２．６２（ｓ，３Ｈ），２．６６（ｓ，３Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ），７．５３〜７．６２（ｍ，２Ｈ），８．００〜８．０３（ｍ，２Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は３２７であり、質量（Ｍ＋Ｎａ）は３４９である。
【実施例１０】
【０１３９】
２−アセチル−４，９−ビス（イソブトキシ）−ナフト［２，３−ｂ］フランの調製（化合物Ｉ）
実施例９に記載した手順を使用することにより、８グラム（３３．３ｍｍｏｌ）の２−アセチル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン（実施例２または３で調製した）、および無水酢酸の代わりの２６．４グラム（１６６．７ｍｍｏｌ）の無水イソ酪酸から、９．４１グラム（２４．６ｍｍｏｌ）の生成物を７４．０％の全体収率で得た。生成物を１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３中）δ１．５４（ｄ，Ｊ＝７，６Ｈ），１．５６（ｄ，Ｊ＝７，６Ｈ），２．６５（ｓ，３Ｈ），３．１１〜３．２０（ｍ，２Ｈ），７．４３（ｓ，１Ｈ），７．５３〜７．６０（ｍ，２Ｈ），７．９９〜８．０２（ｍ，２Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は３８３である。
【実施例１１】
【０１４０】
２−アセチル−４，９−ビス（ピバロキシ）−ナフト［２，３−ｂ］フランの調製（化合物ＩＩ）
実施例９に記載した手順を使用することにより、８グラム（３３．３ｍｍｏｌ）の２−アセチル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン（実施例２または３で調製した）、および無水酢酸の代わりの２０．１グラム（１６６．７ｍｍｏｌ）の塩化ピバロイルから、８．３７グラム（２０．４ｍｍｏｌ）の生成物を６１．３％の全体収率で得た。生成物を１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３中）δ１．５９（ｓ，９Ｈ），１．６１（ｓ，９Ｈ），２．６５（ｓ，３Ｈ），７．４０（ｓ，１Ｈ），７．５１〜７．６１（ｍ，２Ｈ），７．９７〜８．００（ｍ，２Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は４１１である。
【実施例１２】
【０１４１】
２−アセチル−４−ヒドロキシ−９−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］アセトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランの調製（化合物ＩＩＩ）
２５０ｍＬの丸底フラスコ中、２グラム（８．３ｍｍｏｌ）の２−アセチル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン（実施例２または３で調製した）を加熱により５０ｍlのＤＭＦに溶解した。この溶液に、３．５ｍlのＴＥＡ、２グラムの亜鉛粉末、０．３グラムの臭化テトラブチルアンモニウム、２．３３グラム（１３．３ｍｍｏｌ）の［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］酢酸、５．０４グラム（１３．３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＨＢＴＵ）、および７．２５グラム（４１．７ｍｍｏｌ）のヒドロ亜硫酸ナトリウムを加えた。混合物を密閉するかまたは空気から隔離し、次いで室温で一晩激しく撹拌した。１００ｍＬの酢酸エチルの添加後、反応混合物を濾過し、固体を５０ｍＬの酢酸エチルで洗浄した。濾液を合わせ、氷冷した１００ｍＬの３％クエン酸水溶液で２回抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。有機相を乾燥するまで蒸発させた。ジクロロメタン／酢酸エチル（４：１）を溶出溶媒として使用したシリカゲルクロマトグラフにより生成物を精製した。１．６４グラム（４．１ｍｍｏｌ）の生成物を４９．４％の収率で得、１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ中）δ１．４４（ｓ，９Ｈ），２．５９（ｓ，３Ｈ），４．２８（ｄ，Ｊ＝６，２Ｈ），７．４９〜７．６５（ｍ，３Ｈ），７．９７（ｍ，１Ｈ），８．２０〜８．３５（ｍ，２Ｈ），１１．４（ｓ，１Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は４００であり、質量［Ｍ−（ｔｅｒｔ−ブチル）＋２Ｈ］は３４４である。
【実施例１３】
【０１４２】
２−アセチル−４−アセトキシ−９−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］アセトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランの調製（化合物ＩＶ）
１００ｍl丸底フラスコ中、０．８グラム（２．０ｍｍｏｌ）の２−アセチル−４−ヒドロキシ−９−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］アセトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フラン（実施例１２で調製した）を加熱により３０ｍlのＤＭＦに溶解した。この溶液に、０．９ｍlのＴＥＡおよび０．５ｍlの無水酢酸を加えた。混合物を密閉するかまたは空気から隔離し、次いで室温で一晩激しく撹拌した。１００ｍlの酢酸エチルの添加後、反応混合物を氷冷した８０ｍlの３％クエン酸水溶液で２回抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。有機相を乾燥するまで蒸発させた。ジクロロメタンを溶出溶媒として使用したシリカゲルクロマトグラフにより生成物を精製した。０．６グラム（１．３６ｍｍｏｌ）の生成物を６８．０％の収率で得、１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ中）δ１．４４（ｓ，９Ｈ），２．６２（ｓ，３Ｈ），２．６３（ｓ，３Ｈ），４．３４（ｄ，Ｊ＝６，２Ｈ），７．６７〜７．７１（ｍ，３Ｈ），８．１５〜８．１７（ｍ，２Ｈ），８．２５（ｓ，１Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は４４２であり、質量［Ｍ−（ｔｅｒｔ−ブチル）＋２Ｈ］は３８６である。
【実施例１４】
【０１４３】
２−プロピオニル−４，９−ビス｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］アセトキシ｝−ナフト［２，３−ｂ］フランの調製（化合物Ｖ）
２５０ｍl丸底フラスコ中、２グラム（７．８７ｍｍｏｌ）の２−プロピオニル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン（実施例４で調製した）を加熱により５０ｍlのＤＭＦに溶解した。この溶液に、３．５ｍlのＴＥＡ、２グラムの亜鉛粉末、０．３グラムの臭化テトラブチルアンモニウム、４．１４グラム（２３．６１ｍｍｏｌ）の［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］酢酸、８．９５グラム（２３．６１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−ｙｌ）ウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＨＢＴＵ）、および７．２５グラム（４１．７ｍｍｏｌ）のヒドロ亜硫酸ナトリウムを加えた。混合物を密閉するかまたは空気から隔離し、次いで室温で一晩激しく撹拌した。１００ｍlの酢酸エチルの添加後、反応混合物を濾過し、固体を５０ｍlの酢酸エチルで洗浄した。濾液を合わせ、氷冷した１００ｍlの３％クエン酸水溶液で２回抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。有機相を乾燥するまで蒸発させた。ジクロロメタン／酢酸エチル（１０：１）を溶出溶媒として使用したシリカゲルクロマトグラフにより生成物を精製した。１．８３グラム（３．２１ｍｍｏｌ）の生成物を４０．８％の収率で得、１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ中）δ１．１５（ｔ，Ｊ＝７，３Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），３．０６（ｑ，Ｊ＝７，２Ｈ），４．３１〜４．３５（ｍ，４Ｈ），７．６２〜７．７７（ｍ，４Ｈ），８．１１〜８．２０（ｍ，３Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は５７１であり、質量［Ｍ−（ｔｅｒｔ−ブチル）＋２Ｈ］は５１５であり、質量［Ｍ−２（ｔｅｒｔ−ブチル）＋３Ｈ］は４５９である。
【実施例１５】
【０１４４】
２−アセチル−４，９−ビス（ジクロロアセトキシ）−ナフト［２，３−ｂ］フランの調製（化合物ＶＩ）
実施例９に記載した手順を使用することにより、８グラム（３３．３ｍｍｏｌ）の２−アセチル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン（実施例２または３で調製した）、無水酢酸の代わりの４０．１グラム（１６６．７ｍｍｏｌ）の無水ジクロロ酢酸、および８グラムの代わりの２グラムの亜鉛から、４．０グラム（８．６ｍｍｏｌ）の生成物を２５．８％の全体収率で得た。生成物を１Ｈ  ＮＭＲおよび質量スペクトルにより特徴付けた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３中）δ２．６８（ｓ，３Ｈ），６．４３（ｓ，１Ｈ），６．５０（ｓ，１Ｈ），７．５１（ｓ，１Ｈ），７．６２〜７．７２（ｍ，２Ｈ），８．１１〜８．１５（ｍ，２Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）は４６３、４６５、４６７であり、質量（Ｍ＋Ｎａ）は４８５、４８７、４８９である。
【実施例１６】
【０１４５】
２−アセチル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンの非晶質固体の調製（化合物ＸＩＩＩ）
５．０グラムの２−アセチル−ナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオンと、１０グラムのＰｌａｓｄｏｎｅ  Ｋ−２５または１０グラムの１，２ジミリストイル−ｓｎ−グリセロホスホコリン（ＤＭＰＣ）との混合物を２，０００ｍlのジクロロメタンに溶解した。次いで、入口温度９０℃および出口温度４５℃でＬａｂｐｌａｎｔ  ＳＤ−Ｂａｓｉｃ小型噴霧乾燥機を用いて混合物溶液を噴霧乾燥した。乾燥した粉末をＸＲＤによる結晶の形態学的解析に供した（図８）。
【実施例１７】
【０１４６】
２−アセチル−４，９−ジアセトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランの非晶質固体または式Ｉの化合物の調製
５．０グラムの２−アセチル−４，９−ジアセトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランまたは式Ｉの化合物と、１０グラムのＰｌａｓｄｏｎｅ  Ｋ−２５または１０グラムの１，２ジミリストイル−ｓｎ−グリセロホスホコリン（ＤＭＰＣ）との混合物を５００ｍlのアセトンに溶解した。次いで、真空下、高い水槽温度（４５〜５０℃）で、ロータリーエバポレーターにて混合物溶液を迅速に乾燥した。乾燥した粉末をＸＲＤによる結晶の形態学的解析に供した（図８）。
【実施例１８】
【０１４７】
ＨＰＬＣ分析を伴う試験
ＨＰＬＣカラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８、２５０X４．６０ｍｍ  ５ミクロン、移動相：緩衝液Ａ、９０％５ｍＭリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ６．８、１０％アセトニトリル、緩衝液Ｂ、１５％５ｍＭ  リン酸カリウム緩衝液、ｐＨ６．８、８５％アセトニトリル、検出器：Ｗａｔｅｒｓ  ２９９８  Ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ
【０１４８】
勾配Ａ：０〜３分、２０％緩衝液Ｂ、３〜２３分、２０％〜１００％緩衝液Ｂ、２３〜２６分、１００％緩衝液Ｂ、２６〜２８分、１００％〜２０％緩衝液Ｂ、２８〜３０分、２０％緩衝液Ｂ、流速１ｍl／分
【０１４９】
勾配Ｂ：０〜３分、５０％緩衝液Ｂ、３〜５分、５０％〜１００％緩衝液Ｂ、５〜１８分、１００％緩衝液Ｂ、１８〜２２分、１００％〜５０％緩衝液Ｂ、２２〜２５分、２０％緩衝液Ｂ、流速１ｍl／分
４，９−ジヒドロキシ−ナフト［２，３−ｂ］フラン化合物の分析（図１）
【０１５０】
１ｍlの５０ｍＭヒドロ亜硫酸ナトリウムおよび１ｍＭ水酸化ナトリウムの水溶液に、１０μlの１０ｍＭナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン化合物を加え、密閉バイアル中で５分ボルテックスした。１０μlの混合物を勾配Ａを用いたＨＰＬＣ分析に使用した。
式Ｉの化合物およびそれらをヒト血漿とインキュベートした混合物の分析（図２）
【０１５１】
（化合物ＶＩはＤＭＦ中であったが）ＤＭＳＯ中の１０ｍＭの式Ｉの化合物を５０％アセトニトリルで１０μΜに希釈し、１０μlの混合物を勾配Ｂを用いたＨＰＬＣ分析に使用した。
【０１５２】
（化合物ＶＩはＤＭＦ中であったが）ＤＭＳＯ中の１０ｍＭの式Ｉの化合物またはその類似体をヒト血漿で２０μΜに希釈し、得られた混合物を３７℃で２時間インキュベートした。血漿試料に９倍の体積のアセトニトリルを加えた。得られた混合物をボルテックスし、ドライアイス中で３０分、または−２０℃の冷凍庫内で３時間インキュベートし、次いで遠心分離し、勾配Ｂを用いたＨＰＬＣ分析に上清を使用した。
全血試料（図３および９）または他の生物系試料の分析
式Ｉの化合物もしくはその類似体、または化合物ＸＩＩＩのインビボでの代謝および経口摂取に関する予備試験
【０１５３】
化合物の結晶性固体または非晶質固体を賦形剤と混合し、乳鉢中の０．５％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）溶液に懸濁した。次いで、混合物を所定の投与量でＩＣＲマウスに経口投与した。所定の時点でマウスから血液を採取し、ヘパリンを含むバイアルに保存した。血液試料を６，０００ｒｐｍで１０分遠心分離し、血漿を分離した。各血漿試料に９倍の体積のアセトニトリル／トリフルオロメタンスルホン酸メチル（１０００：１）またはアセトニトリル／濃縮ＨＣｌ（１０００：１）を加えた。得られた混合物をボルテックスし、ドライアイス中で３０分、または−２０℃の冷凍庫内で３時間インキュベートし、次いで遠心分離し、勾配Ｂを用いたＨＰＬＣ分析のために上清を分離した。
式Ｉの化合物もしくはその類似体、または化合物ＸＩＩＩのインビトロでの代謝に関する予備試験
【０１５４】
インビトロ代謝試験のための生物系は、クエン酸ナトリウムを用いて安定化したヒト全血、癌細胞可溶化物（凍結融解法を使用して得られる、１０ｍｇ／ｍlのタンパク質濃度で使用）、ＮＡＤＰＨ生成系を含む肝ミクロソーム（中国北京のｉＰｈａｓｅ  Ｐｈａｒｍａによって提供されたプロトコルに従って調製した）を含む。
【０１５５】
（化合物ＶＩはＤＭＦ中であったが）ＤＭＳＯ中の１０ｍＭの式Ｉの化合物もしくはその類似体または化合物ＸＩＩＩを生物系に加え、最終濃度を２０μΜとした。混合物を３７℃で所定時間インキュベートした。次いで、各試料に９倍の体積のアセトニトリルを加えた。得られた混合物をボルテックスし、ドライアイス中で３０分、または−２０℃の冷凍庫内で３時間インキュベートし、次いで遠心分離し、勾配Ｂを用いたＨＰＬＣ分析のために上清を分離した。
【実施例１９】
【０１５６】
生物学的アッセイ
細胞培養：Ａ５４９、ＤＬＤ１、ＳＷ４８０、ＬＯＶＯ、ＨＴ−２９、Ｈｅｌａ、Ｕ−２０Ｓ、ＭＥＳ−ＳＡ、ＳＫ−ＭＥＬ−２８、Ｐａｎｃ−１、ＤＵ−１４５、ＣＮＥ、Ｕ２５１、Ｅｃａ−１０９、ＭＧＣ８０−３、ＱＧＹ−７７０１、ＢＥＬ−７４０４、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５、Ｈｕｈ−７、およびＳＧＣ−７９０１細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Ｓｉ  Ｊｉ  Ｑｉｎｇ、中国杭州）および１％ペニシリン／ストレプトマイシン／アンホテリシンＢ（米国カリフォルニア州カールスバッドのＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎより輸入）を補充したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）（米国カリフォルニア州カールスバッドのＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎより輸入）中に維持した。
【０１５７】
細胞生存率の測定：一般的なＭＴＴ法（Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，１９９３，３０３：４７４−４８２）を使用して本発明の薬物のインビトロでの効果をスクリーニングした。端的に述べると、９６ウェルプレートにて１ウェル当たり５０００〜１００００個の細胞を播種した。一晩のインキュベーション後、完全培養培地中、１０μΜ、５μΜ、２．５μΜ、１．２５μΜ、または１μΜ、０．７５μΜ、０．５μΜ、および０．２５μΜの最終濃度でウェルに薬物を加えた。各用量レベルは４つの等しいウェルに及んだ。４８時間のインキュベーション後、５ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ（チアゾリルブルーテトラゾリウムブロミド、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）原液の１０分の１の体積を加え、インキュベーションを２時間継続した。次いで、培地を除去し、８６％イソプロパノール、４％１Ｎ塩酸水溶液、および１０％ＳＤＳ水溶液（濃度１０％）を含む１００μＬのイソプロパノール溶液を加えた。２０分緩やかに振盪した後、マイクロプレートリーダーにより波長５７０ｎｍで各ウェルの吸光度を測定した。５０％細胞生存率の薬物濃度（ＩＣ５０）をＬＯＧＩＴ法により計算した。
【表３】
2014511384.tif 000016
1n/a=検査を行わなかった。
【０１５８】
細胞可溶化物中におけるＮＱ０１酵素活性の測定（図４のパートＡ）：論文（Ｔｒａｖｅｒ  Ｒ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，１９９７，７５：６９−７５）に記載されるようにアッセイを行った。癌細胞を８０％コンフルエンスまで増殖させ、次いでＰＢＳ緩衝液で洗浄し、氷冷緩衝液（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１２５ｍＭスクロース）中に掻き入れた。癌細胞懸濁液を３回凍結融解し、次いで５ｍｇ／ｍlのタンパク質濃度になるよう調整した。混合物をＮＱ０１酵素活性アッセイの細胞可溶化物として使用した。アッセイ混合物は、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、０．７ｍｇ／ｍlウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、０．２ｍＭ  ＮＡＤＨ、および４０μΜジクロロフェノリンドフェノール（ＤＣＰＩＰ）を含み、標準液としてジクマロール（ＮＱ０１阻害剤）をアッセイ混合物に加えた。１％の体積の細胞可溶化物をアッセイ混合物および標準液にそれぞれ加えた。得られた混合物を２５℃で１０分インキュベートした。インキュベートしたアッセイ混合物と標準液との間の６００ｎｍでの吸光度の差から相対的なＮＱ０１酵素活性を得た。
【０１５９】
ＮＱ０１阻害剤（ジクマロール）が２−アセチル−４，９−ジアセトキシ−ナフト［２，３−ｂ］フランおよび化合物ＸＩＩＩの生物学的活性に及ぼす影響（図４のＢおよびＣ）：この実験にはＭＴＴアッセイを用いた。「細胞生存率の測定」の項目に記載したのと同じ手順。端的に述べると、９６ウェル培養プレート上に癌細胞を播種した。一晩のインキュベーション後、図４に示す最終濃度で各ウェルに薬物を加えた。別のセットのウェルには、同じ薬物およびジクマロールを４０μΜの最終濃度で加えた。細胞培養インキュベータにおいて４８時間インキュベーションした後、各ウェルの細胞の生存率を読み取った。
【０１６０】
蛍光顕微鏡を用いた細胞中の活性酸素種（ＲＯＳ）レベルの評価（図５）：８ウェルプレート上の各ウェルに、細胞培地中の１，０００μlのＤＬＤ１細胞懸濁液（１００〜１５０細胞／μl）を充填し、次いでプレートを３７℃で一晩インキュベートした。プレートに播種した細胞をＰＢＳ緩衝液で２回洗浄し、次いで、細胞培地中に新しく調製した４０μΜジクロロフルオレセインジアセタート（ＤＣＦＨ−ＤＡ）を加え、混合物を３７℃で５分インキュベートした。ＰＢＳで数回洗浄した後、０．３μΜ試験化合物、または１００μΜ過酸化水素、またはＤＭＳＯのみ（対照）を含む１，０００μlの培地に細胞を暴露した。３７℃で３０分インキュベートした後、励起フィルターを４８８ｎｍに、発光フィルターを５３０ｎｍに設定して、倒立蛍光顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＩＸ７０）を使用して各ウェルから蛍光写真を撮影した。
【０１６１】
抗酸化剤Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン（ＮＡＣ）が過酸化水素および化合物ＸＩＩＩの生物学的活性に及ぼす影響（図６）：この実験にはＭＴＴアッセイを用いた。「細胞生存率の測定」の項目に記載したのと同じ手順。端的に述べると、９６ウェル培養プレート上に癌細胞を播種した。一晩のインキュベーション後、図６に示す最終濃度で各ウェルに過酸化水素（または薬物）を加えた。別のセットのウェルには、最初にＮＡＣを４０ｍＭの濃度まで加え、３０分後に同じ過酸化水素（または薬物）を加えた。細胞培養インキュベータにおいて４８時間インキュベーションした後、各ウェルの細胞の生存率を読み取った。
【０１６２】
薬物インキュベーション時間が化合物ＸＩＩＩの生物学的活性に及ぼす影響（図７）：この実験にはＭＴＴアッセイを用いた。「細胞生存率の測定」の項目に記載したのと同じ手順。端的に述べると、９６ウェル培養プレート上に癌細胞を播種した。一晩のインキュベーション後、図７に示す最終濃度で各ウェルに化合物ＸＩＩＩを加えた。４時間のインキュベーション後、４時間処理したプレートを培養培地で洗浄して薬物を除去し、新しい培地で充填し、次いで全てのプレートをさらに４８時間インキュベートした。ＭＴＴ法を用いて各ウェルの細胞の生存率を読み取った。
【０１６３】
化合物ＩおよびＸＩＩＩの予備毒性試験（図８および１０）：化合物ＩまたはＸＩＩＩの非晶質固体を、乳鉢中の０．５％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）溶液に、化合物Ｉは９０ｍｇ／ｍl、化合物ＸＩＩＩは６０ｍｇ／ｍlの濃度で懸濁した。次いで、各々の混合物を、化合物Ｉは１，２００ｍｇ／ｋｇ、または化合物ＸＩＩＩは８００ｍｇ／ｍlの投与量で１日１回７日間経口経管栄養により３匹のＩＣＲマウス（平均体重３０グラム）に経口投与した。経管栄養摂取の前に各マウスの体重を記録した。
他の実施形態
【０１６４】
本明細書に開示される本発明の明細書または実践を考慮すると、本発明の他の実施形態が当業者には明らかであろう。明細書および実施例は例示に過ぎず、本発明の真の範囲は以下の特許請求の範囲によって示されることが意図される。
参考文献の組み込み
【０１６５】
本明細書に引用される全ての刊行物および特許文献は、あたかも各個々の刊行物または特許文献の内容が本明細書に組み込まれているかのように、参照によってそれらの全体が組み込まれる。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４−１】
2014511384.tif 000029
【図４−２】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６】
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【図７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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