(57)【要約】抗フェニキシン抗体の生成、診断スクリーニングおよびアッセイにおいて、ならびにｃＡＭＰの細胞濃度を調節することにおいて有用なヒトフェニキシンペプチド、アナログおよび摸倣物、ならびに細胞中のｃＡＭＰもしくはＣａ２＋濃度に関連する障害の処置、高血圧症および心血管機能の調節、性腺刺激細胞および胃内容物排出の調節。例えば、配列番号２〜配列番号６０のうちのいずれか１つを含む、精製および単離されたポリペプチドが提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号２９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９および配列番号６０のうちのいずれか１つを含む、精製および単離されたポリペプチド。
【請求項２】
配列番号２からなるポリペプチド、配列番号３からなるポリペプチド、配列番号４からなるポリペプチド、配列番号５からなるポリペプチド、配列番号６からなるポリペプチド、配列番号７からなるポリペプチド、配列番号８からなるポリペプチド、配列番号９からなるポリペプチド、配列番号１０からなるポリペプチド、配列番号１１からなるポリペプチド、配列番号１２からなるポリペプチド、配列番号１３からなるポリペプチド、配列番号１４からなるポリペプチド、配列番号１５からなるポリペプチド、配列番号１６からなるポリペプチド、配列番号１７からなるポリペプチド、配列番号１８からなるポリペプチド、配列番号１９からなるポリペプチド、配列番号２０からなるポリペプチド、配列番号２１からなるポリペプチド、配列番号２２からなるポリペプチド、配列番号２３からなるポリペプチド、配列番号２４からなるポリペプチド、配列番号２５からなるポリペプチド、配列番号２６からなるポリペプチド、配列番号２７からなるポリペプチド、配列番号２８からなるポリペプチド、配列番号２９からなるポリペプチド、配列番号３０からなるポリペプチド、配列番号３１からなるポリペプチド、配列番号３２からなるポリペプチド、配列番号３３からなるポリペプチド、配列番号３４からなるポリペプチド、配列番号３５からなるポリペプチド、配列番号３６からなるポリペプチド、配列番号３７からなるポリペプチド、配列番号３８からなるポリペプチド、配列番号３９からなるポリペプチド、配列番号４０からなるポリペプチド、配列番号４１からなるポリペプチド、配列番号４２からなるポリペプチド、配列番号４３からなるポリペプチド、配列番号４４からなるポリペプチド、配列番号４５からなるポリペプチド、配列番号４６からなるポリペプチド、配列番号４７からなるポリペプチド、配列番号４８からなるポリペプチド、配列番号４９からなるポリペプチド、配列番号５０からなるポリペプチド、配列番号５１からなるポリペプチド、配列番号５２からなるポリペプチド、配列番号５３からなるポリペプチド、配列番号５４からなるポリペプチド、配列番号５５からなるポリペプチド、配列番号５６からなるポリペプチド、配列番号５７からなるポリペプチド、配列番号５８からなるポリペプチド、配列番号５９からなるポリペプチド、および配列番号６０からなるポリペプチドのうちのいずれか１つからなる、請求項１に記載の精製および単離されたポリペプチド。
【請求項３】
前記精製および単離されたポリペプチドは、少なくとも１個の保存的アミノ酸置換を有する、請求項１または２のいずれか１項に記載の精製されたポリペプチド。
【請求項４】
前記少なくとも１個の保存的アミノ酸置換は、Ｌ型アミノ酸残基の、Ｄ型アミノ酸残基での置換を含む、請求項４のいずれか１つに記載の精製されたポリペプチド。
【請求項５】
前記精製および単離されたポリペプチドは、アミドＣ末端を有する、請求項３に記載の精製されたポリペプチド。
【請求項６】
前記精製および単離されたポリペプチドは、アセチルＮ末端を有する、請求項３に記載の精製されたポリペプチド。
【請求項７】
前記精製および単離されたポリペプチドは、アミドＣ末端を有する、請求項５に記載の精製されたポリペプチド。
【請求項８】
フェニキシンペプチドの検出のためのキットであって、該キットは、配列番号２からなるポリペプチド、配列番号３からなるポリペプチド、配列番号４からなるポリペプチド、配列番号５からなるポリペプチド、配列番号６からなるポリペプチド、配列番号７からなるポリペプチド、配列番号８からなるポリペプチド、配列番号９からなるポリペプチド、配列番号１０からなるポリペプチド、配列番号１１からなるポリペプチド、配列番号１２からなるポリペプチド、配列番号１３からなるポリペプチド、配列番号１４からなるポリペプチド、配列番号１５からなるポリペプチド、配列番号１６からなるポリペプチド、配列番号１７からなるポリペプチド、配列番号１８からなるポリペプチド、配列番号１９からなるポリペプチド、配列番号２０からなるポリペプチド、配列番号２１からなるポリペプチド、配列番号２２からなるポリペプチド、配列番号２３からなるポリペプチド、配列番号２４からなるポリペプチド、配列番号２５からなるポリペプチド、配列番号２６からなるポリペプチド、配列番号２７からなるポリペプチド、配列番号２８からなるポリペプチド、配列番号２９からなるポリペプチド、配列番号３０からなるポリペプチド、配列番号３１からなるポリペプチド、配列番号３２からなるポリペプチド、配列番号３３からなるポリペプチド、配列番号３４からなるポリペプチド、配列番号３５からなるポリペプチド、配列番号３６からなるポリペプチド、配列番号３７からなるポリペプチド、配列番号３８からなるポリペプチド、配列番号３９からなるポリペプチド、配列番号４０からなるポリペプチド、配列番号４１からなるポリペプチド、配列番号４２からなるポリペプチド、配列番号４３からなるポリペプチド、配列番号４４からなるポリペプチド、配列番号４５からなるポリペプチド、配列番号４６からなるポリペプチド、配列番号４７からなるポリペプチド、配列番号４８からなるポリペプチド、配列番号４９からなるポリペプチド、配列番号５０からなるポリペプチド、配列番号５１からなるポリペプチド、配列番号５２からなるポリペプチド、配列番号５３からなるポリペプチド、配列番号５４からなるポリペプチド、配列番号５５からなるポリペプチド、配列番号５６からなるポリペプチド、配列番号５７からなるポリペプチド、配列番号５８からなるポリペプチド、配列番号５９からなるポリペプチド、および配列番号６０からなるポリペプチドのうちの１種以上を含む、キット。
【請求項９】
配列番号２からなるポリペプチド、配列番号３からなるポリペプチド、配列番号４からなるポリペプチド、配列番号５からなるポリペプチド、配列番号６からなるポリペプチド、配列番号７からなるポリペプチド、配列番号８からなるポリペプチド、配列番号９からなるポリペプチド、配列番号１０からなるポリペプチド、配列番号１１からなるポリペプチド、配列番号１２からなるポリペプチド、配列番号１３からなるポリペプチド、配列番号１４からなるポリペプチド、配列番号１５からなるポリペプチド、配列番号１６からなるポリペプチド、配列番号１７からなるポリペプチド、配列番号１８からなるポリペプチド、配列番号１９からなるポリペプチド、配列番号２０からなるポリペプチド、配列番号２１からなるポリペプチド、配列番号２２からなるポリペプチド、配列番号２３からなるポリペプチド、配列番号２４からなるポリペプチド、配列番号２５からなるポリペプチド、配列番号２６からなるポリペプチド、配列番号２７からなるポリペプチド、配列番号２８からなるポリペプチド、配列番号２９からなるポリペプチド、配列番号３０からなるポリペプチド、配列番号３１からなるポリペプチド、配列番号３２からなるポリペプチド、配列番号３３からなるポリペプチド、配列番号３４からなるポリペプチド、配列番号３５からなるポリペプチド、配列番号３６からなるポリペプチド、配列番号３７からなるポリペプチド、配列番号３８からなるポリペプチド、配列番号３９からなるポリペプチド、配列番号４０からなるポリペプチド、配列番号４１からなるポリペプチド、配列番号４２からなるポリペプチド、配列番号４３からなるポリペプチド、配列番号４４からなるポリペプチド、配列番号４５からなるポリペプチド、配列番号４６からなるポリペプチド、配列番号４７からなるポリペプチド、配列番号４８からなるポリペプチド、配列番号４９からなるポリペプチド、配列番号５０からなるポリペプチド、配列番号５１からなるポリペプチド、配列番号５２からなるポリペプチド、配列番号５３からなるポリペプチド、配列番号５４からなるポリペプチド、配列番号５５からなるポリペプチド、配列番号５６からなるポリペプチド、配列番号５７からなるポリペプチド、配列番号５８からなるポリペプチド、配列番号５９からなるポリペプチド、および配列番号６０からなるポリペプチドのうちの１種以上を含むフェニキシンペプチドを結合する抗体。
【請求項１０】
配列番号２からなるポリペプチド、配列番号３からなるポリペプチド、配列番号４からなるポリペプチド、配列番号５からなるポリペプチド、配列番号６からなるポリペプチド、配列番号７からなるポリペプチド、配列番号８からなるポリペプチド、配列番号９からなるポリペプチド、配列番号１０からなるポリペプチド、配列番号１１からなるポリペプチド、配列番号１２からなるポリペプチド、配列番号１３からなるポリペプチド、配列番号１４からなるポリペプチド、配列番号１５からなるポリペプチド、配列番号１６からなるポリペプチド、配列番号１７からなるポリペプチド、配列番号１８からなるポリペプチド、配列番号１９からなるポリペプチド、配列番号２０からなるポリペプチド、配列番号２１からなるポリペプチド、配列番号２２からなるポリペプチド、配列番号２３からなるポリペプチド、配列番号２４からなるポリペプチド、配列番号２５からなるポリペプチド、配列番号２６からなるポリペプチド、配列番号２７からなるポリペプチド、配列番号２８からなるポリペプチド、配列番号２９からなるポリペプチド、配列番号３０からなるポリペプチド、配列番号３１からなるポリペプチド、配列番号３２からなるポリペプチド、配列番号３３からなるポリペプチド、配列番号３４からなるポリペプチド、配列番号３５からなるポリペプチド、配列番号３６からなるポリペプチド、配列番号３７からなるポリペプチド、配列番号３８からなるポリペプチド、配列番号３９からなるポリペプチド、配列番号４０からなるポリペプチド、配列番号４１からなるポリペプチド、配列番号４２からなるポリペプチド、配列番号４３からなるポリペプチド、配列番号４４からなるポリペプチド、配列番号４５からなるポリペプチド、配列番号４６からなるポリペプチド、配列番号４７からなるポリペプチド、配列番号４８からなるポリペプチド、配列番号４９からなるポリペプチド、配列番号５０からなるポリペプチド、配列番号５１からなるポリペプチド、配列番号５２からなるポリペプチド、配列番号５３からなるポリペプチド、配列番号５４からなるポリペプチド、配列番号５５からなるポリペプチド、配列番号５６からなるポリペプチド、配列番号５７からなるポリペプチド、配列番号５８からなるポリペプチド、配列番号５９からなるポリペプチド、および配列番号６０からなるポリペプチドを含む群から選択される精製されたポリペプチドのうちの１種以上に応答する障害を処置することを包含する、方法。
【請求項１１】
細胞におけるシグナル伝達を調節する方法であって、該方法は、
ａ）細胞と、配列番号２からなるポリペプチド、配列番号３からなるポリペプチド、配列番号４からなるポリペプチド、配列番号５からなるポリペプチド、配列番号６からなるポリペプチド、配列番号７からなるポリペプチド、配列番号８からなるポリペプチド、配列番号９からなるポリペプチド、配列番号１０からなるポリペプチド、配列番号１１からなるポリペプチド、配列番号１２からなるポリペプチド、配列番号１３からなるポリペプチド、配列番号１４からなるポリペプチド、配列番号１５からなるポリペプチド、配列番号１６からなるポリペプチド、配列番号１７からなるポリペプチド、配列番号１８からなるポリペプチド、配列番号１９からなるポリペプチド、配列番号２０からなるポリペプチド、配列番号２１からなるポリペプチド、配列番号２２からなるポリペプチド、配列番号２３からなるポリペプチド、配列番号２４からなるポリペプチド、配列番号２５からなるポリペプチド、配列番号２６からなるポリペプチド、配列番号２７からなるポリペプチド、配列番号２８からなるポリペプチド、配列番号２９からなるポリペプチド、配列番号３０からなるポリペプチド、配列番号３１からなるポリペプチド、配列番号３２からなるポリペプチド、配列番号３３からなるポリペプチド、配列番号３４からなるポリペプチド、配列番号３５からなるポリペプチド、配列番号３６からなるポリペプチド、配列番号３７からなるポリペプチド、配列番号３８からなるポリペプチド、配列番号３９からなるポリペプチド、配列番号４０からなるポリペプチド、配列番号４１からなるポリペプチド、配列番号４２からなるポリペプチド、配列番号４３からなるポリペプチド、配列番号４４からなるポリペプチド、配列番号４５からなるポリペプチド、配列番号４６からなるポリペプチド、配列番号４７からなるポリペプチド、配列番号４８からなるポリペプチド、配列番号４９からなるポリペプチド、配列番号５０からなるポリペプチド、配列番号５１からなるポリペプチド、配列番号５２からなるポリペプチド、配列番号５３からなるポリペプチド、配列番号５４からなるポリペプチド、配列番号５５からなるポリペプチド、配列番号５６からなるポリペプチド、配列番号５７からなるポリペプチド、配列番号５８からなるポリペプチド、配列番号５９からなるポリペプチド、および配列番号６０からなるポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの１種以上の十分量とを接触させる工程；ならびに
ｂ）該１種以上のポリペプチドの該量と接触した該細胞の細胞内ｃＡＭＰもしくはＣａ２＋の生成を増大させる工程、
を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本国際特許協力条約による特許出願は、２０１１年５月２６日に出願された米国仮特許出願第６１／５１９，７４７号および２０１１年５月２８日に出願された米国仮特許出願第６１／５１９，７４６号の利益を主張する。これらの出願は各々、これにより、本明細書に参考として援用される。
【０００２】
（Ｉ．技術分野）
抗フェニキシン抗体の生成、診断スクリーニングおよびアッセイにおいて、ならびにｃＡＭＰの細胞濃度を調節することにおいて有用なヒトフェニキシン（ｐｈｏｅｎｉｘｉｎ）ペプチド、アナログおよび摸倣物、ならびに細胞中のｃＡＭＰ濃度を調節する方法、または細胞中のｃＡＭＰ濃度を調節し得るペプチドによって利益がもたらされる障害の処置、高血圧症および心血管機能の調節、性腺刺激細胞（ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｈｓ）および胃内容物排出（ｇａｓｔｒｉｃ  ｅｍｐｔｙｉｎｇ）の調節の方法。
【背景技術】
【０００３】
（ＩＩ．背景）
ヒトプロペプチド  Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ：Ｑ８Ｎ５Ｇ０（「Ｑ８Ｎ５Ｇ０」ともいわれる）は、図１（配列番号１）において示されるとおりの１６８アミノ酸を含み、プロセシングされて、心血管応答、血圧、胃内容物排出、および平滑筋応答という細胞ホメオスタシスを調節することが示されたペプチド形態が得られ得る。
【０００４】
しかし、上記ヒトプロペプチドＱ８Ｎ５Ｇ０のプロセシングされた形態は全て、完全には同定も記載も未だされてきておらず、本発明より前に知られていたものより少ない残基数を有し、安定性がより高く、より高い活性を有する、活性な化学合成されたペプチドは、以下のために有用である：ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の生成；診断スクリーニングおよびアッセイ；生化学経路の調節；細胞中のｃＡＭＰもしくはＣａ２＋の濃度、平滑筋応答、胃内容物排出の調節；または細胞中のｃＡＭＰもしくはＣａ２＋の濃度、平滑筋応答、胃内容物排出を調節し得るペプチドで処置可能な障害の処置など。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（ＩＩ．発明の概要）
よって、本発明の広い目的は、新規な精製および単離された天然のペプチドまたは化学合成され、精製および単離されたペプチド（「フェニキシンペプチド」ともいわれる）（各々は、図１（配列番号１）に示されるとおりの１６８アミノ酸を含むヒトプロペプチドＱ８Ｎ５Ｇ０（または（図７１（配列番号６１〜６６）に示されるとおりの他の種の類似のプロペプチド（個々にもおよびまとめても、本明細書において「フェニキシンプロペプチド」といわれる））の一部に対応するか、またはそれらの模倣物を全体としてもしくは部分的に提供する）を提供することであり得る。天然のフェニキシンペプチドは、ヒト、マウス、ラット、ブタ、ウシおよびイヌのような種間で同一であり得る。上記精製および単離された天然のフェニキシンプロペプチドおよび化学合成され、単離されたフェニキシンペプチドは、細胞中でのｃＡＭＰの生成、心血管応答、血圧、胃内容物排出、および平滑筋応答のホメオスタシスのうちの１つ以上を調節することにおいて有用であり得るか、または細胞でのｃＡＭＰの生成、心血管応答、血圧、胃内容物排出、および平滑筋応答のホメオスタシスのうちの１つ以上を調節することによって利益を受ける障害の処置のために有用である。
【０００６】
本発明の別の広い目的は、水性溶液、組織、組織ホモジネート、細胞培養物、その成分を含む溶出された画分などにおいて可溶性でありかつ十分に安定な、化学合成され、精製および単離されたフェニキシンペプチドを提供すること、フェニキシンプロペプチドのレベル、ヒト、ウシ、ラット、マウス、ブタ、もしくはイヌのフェニキシンプロペプチドのプロセシングから生じる天然のフェニキシンペプチドのレベル、化学合成されたフェニキシンペプチドのレベルなどのうちの１つ以上の決定に関連した有用なスクリーニングアッセイおよび診断手順を提供することであり得る。
【０００７】
本発明の別の広い目的は、ヒト、ウシ、ラット、マウス、ブタ、イヌ、もしくは他のフェニキシンプロペプチド、ヒトフェニキシンプロペプチドのプロセシングされた形態、フェニキシンプロペプチドの天然のフラグメント、または化学合成され、精製および単離されたフェニキシンペプチドのうちの１種以上を結合するポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の生成のために利用され得る、精製および単離された化学合成フェニキシンペプチドを提供することであり得る。
【０００８】
本発明の別の広い目的は、先行技術の既知のペプチドと比較して、結合した基質に関して、類似の機能、類似もしくは新たでかつ予測外に大きな活性もしくは特異性、またはその両方を有し、特定の実施形態に関しては、既知のペプチドに由来する１もしくはそれより多くのアミノ酸残基を省き得、生成しやすさ、増大した効力、低下したコスト、可溶性、安定性などに関して、広く種々の利点を付与する形態においてこのような機能、活性もしくは特異性を付与する、精製および単離されたフェニキシンペプチドを提供することであり得る。
【０００９】
本発明の別の広い目的は、組織もしくは細胞ホモジネート、またはゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーなどを使用する精製および単離プロトコルから生じる溶出された画分のラジオイムノアッセイ（「ＲＩＡ」）、酵素結合イムノソルベントアッセイ（「ＥＬＩＳＡ」）、もしくは酵素イムノアッセイ（「ＥＩＡ」）などのうちの１つ以上において有用な、ならびに組織の免疫組織化学分析のために有用な、またはクロマトグラフィーもしくは質量分析法のための標準として有用な、あるいは特定のアナログ、アゴニスト、アンタゴニスト、部分的摸倣物、およびそれらの生成、代謝および処分（ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ）を調節する因子の決定のためのスクリーニングおよび調査法において有用な、１種以上の精製および単離されたフェニキシンペプチドを含み、１種以上のフェニキシンペプチドに対して惹起された抗体をさらに含み得るキットを提供することであり得る。
【００１０】
本発明の別の広い目的は、細胞におけるシグナル伝達を調節する方法であり得る。ここで１種以上の精製および単離されたフェニキシンペプチドの有効量もしくは治療上の量が細胞と接触させられ得るか、さもなければ、ｃＡＭＰもしくはＣａ２＋、またはその両方の生成を調節もしくは増大させるように、あるいは細胞、組織もしくは動物におけるシグナル伝達の脱調節（ｄｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）に関する障害を処置するように投与され得る。
【００１１】
当然のことながら、本発明のさらなる目的は、本明細書の他の部分、図面、写真、および特許請求の範囲の全体をとおして開示される。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
（ＩＩＩ．図面の簡単な説明）
【図１】図１は、ヒトコスペプチン（ｃｏｓｐｅｐｔｉｎ）プレプロペプチド（Ｑ８Ｎ５Ｇ０）の残基１〜１６８の配列（配列番号１）を示す。
【図２】図２は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１４６〜１６５の配列に対応する、フェニキシン（１〜２０）の配列（配列番号２）を示す。
【図３】図３は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６６の配列に対応する、フェニキシン（７〜２１）の配列（配列番号３）を示す。
【図４】図４は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応する、フェニキシン（７〜２０）の配列（配列番号４）を示す。
【図５】図５は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５４〜１６６の配列に対応する、フェニキシン（９〜２１）の配列（配列番号５）を示す。
【図６】図６は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５３〜１６５の配列に対応する、フェニキシン（８〜２０）の配列（配列番号６）を示す。
【図７】図７は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１４６〜１６５の配列に対応し、Ｃ末端アミドを有する、フェニキシン（１〜２０）アミドの配列（配列番号７）を示す。
【図８】図８は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５３〜１６５の配列に対応し、Ｃ末端アミドを有する、フェニキシン（８〜２０）アミドの配列（配列番号８）を示す。
【図９】図９は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応し、Ｃ末端アミドを有する、フェニキシン（７〜２０）アミドの配列（配列番号９）を示す。
【図１０】図１０は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５１〜１６５の配列に対応し、Ｎ末端ピログルタミン酸およびＣ末端アミドを有する、ｐＧｌｕ−フェニキシン（６〜２０）アミドの配列（配列番号１０）を示す。
【図１１】図１１は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５４〜１６５の配列に対応し、Ｃ末端アミドを有する、フェニキシン（９〜２０）アミドの配列（配列番号１１）を示す。
【図１２】図１２は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５５〜１６５の配列に対応し、Ｎ末端ピログルタミン酸を有しかつＣ末端アミドを有する、ｐＧｌｕ−フェニキシン（９〜２０）アミドの配列（配列番号１２）を示す。
【図１３】図１３は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１４６〜１６５の配列に対応し、Ｃ末端メチルアミドを有する、フェニキシン（１〜２０）メチルアミドの配列（配列番号１３）を示す。
【図１４】図１４は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５３〜１６５の配列に対応し、Ｃ末端メチルアミドを有する、フェニキシン（８〜２０）メチルアミドの配列（配列番号１４）を示す。
【図１５】図１５は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応し、Ｃ末端メチルアミドを有する、フェニキシン（７〜２０）メチルアミドの配列（配列番号１５）を示す。
【図１６】図１６は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５１〜１６５の配列に対応し、Ｎ末端ピログルタミン酸およびＣ末端メチルアミドを有する、ｐ−ｇｌｕフェニキシン（６〜２０）メチルアミドの配列（配列番号１６）を示す。
【図１７】図１７は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５４〜１６５の配列に対応し、Ｃ末端メチルアミドを有する、フェニキシン（９〜２０）メチルアミドの配列（配列番号１７）を示す。
【図１８】図１８は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５５〜１６５の配列に対応し、Ｎ末端ピログルタミン酸を有しかつＣ末端メチルアミドを有する、ｐＧｌｕ−フェニキシン（９〜２０）メチルアミドの配列（配列番号１８）を示す。
【図１９】図１９は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１４６〜１６５の配列に対応し、Ｃ末端エチルアミドを有する、フェニキシン（１〜２０）エチルアミドの配列（配列番号１９）を示す。
【図２０】図２０は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５３〜１６５の配列に対応し、Ｃ末端エチルアミドを有する、フェニキシン（８〜２０）エチルアミドの配列（配列番号２０）を示す。
【図２１】図２１は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応し、Ｃ末端エチルアミドを有する、フェニキシン（７〜２０）エチルアミドの配列（配列番号２１）を示す。
【図２２】図２２は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５１〜１６５の配列に対応し、Ｎ末端ピログルタミン酸を有しかつＣ末端エチルアミドを有する、ｐＧｌｕ−フェニキシン（６〜２０）エチルアミドの配列（配列番号２２）を示す。
【図２３】図２３は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５４〜１６５の配列に対応し、Ｃ末端エチルアミドを有する、フェニキシン（９〜２０）エチルアミドの配列（配列番号２３）を示す。
【図２４】図２４は、コスペプチンプレプロペプチドの残基１５５〜１６５の配列に対応し、Ｎ末端ピログルタミン酸を有しかつＣ末端エチルアミドを有する、ｐＧｌｕ−フェニキシン（９〜２０）エチルアミドの配列（配列番号２４）を示す。
【図２５】図２５は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応し、残基１５３においてｄ形態のバリンを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシン（７〜２０，ｄバリン（８））アミドの配列（配列番号２５）を示す。
【図２６】図２６は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応し、残基１５５においてｄ形態のプロリンを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシン（７〜２０，ｄプロリン（１０））アミドの配列（配列番号２６）を示す。
【図２７】図２７は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応し、残基１５６においてｄ形態のプロリンを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシン（７〜２０，ｄプロリン（１１））アミドの配列（配列番号２７）を示す。
【図２８】図２８は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応し、残基１５７においてグリシンの代わりにｄ形態のアラニンを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシン（７〜２０，ｄアラニン（１２）アミド）の配列（配列番号２８）を示す。
【図２９】図２９は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応し、残基１５８においてｄ形態のロイシンを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシン（７〜２０，ｄロイシン（１３））アミドの配列（配列番号２９）を示す。
【図３０】図３０は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応し、残基１６０においてｄ形態のバリンを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシン（７〜２０，ｄバリン（１５））アミドの配列（配列番号３０）を示す。
【図３１】図３１は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応し、残基１６１においてｄ形態のトリプトファンを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシン（７−２０，ｄトリプトファン（１６））アミドの配列（配列番号３１）を示す。
【図３２】図３２は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応し、残基１６４においてｄ形態のプロリンを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシン（７〜２０，ｄプロリン（１９））アミドの配列（配列番号３２）を示す。
【図３３】図３３は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応し、残基１６５においてｄ形態のフェニルアラニンを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシン（７〜２０，ｄフェニルアラニン（２０））アミドの配列（配列番号３３）を示す。
【図３４】図３４は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応し、ｌ形態のフェニルアラニンの代わりに残基１６５において１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸を有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシン（７〜２０，Ｔｉｃ（２０））アミドの配列（配列番号３４）を示す。
【図３５】図３５は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１４６〜１６５の配列に対応し、残基１４６においてｄ形態のアラニンを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシン（１〜２０，ｄアラニン（１））アミドの配列（配列番号３５）を示す。
【図３６】図３６は、コスペプチンプレプロペプチドの残基１４６〜１６５の配列に対応し、ｌ形態のグリシンの代わりに残基１４７においてｄ形態のアラニンを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシン（１〜２０，ｄアラニン（２））アミドの配列（配列番号３６）を示す。
【図３７】図３７は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１４６〜１６５の配列に対応し、残基１４９においてｄ形態のバリンを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシン（１〜２０，ｄバリン（４））アミドの配列（配列番号３７）を示す。
【図３８】図３８は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１４６〜１６５の配列に対応し、残基１５３においてｄ形態のバリンを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシン（１〜２０，ｄバリン（８））アミドの配列（配列番号３８）を示す。
【図３９】図３９は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１４６〜１６５の配列に対応し、残基１６２においてｄ形態のセリンを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシン（１〜２０，ｄセリン（１７））アミドの配列（配列番号３９）を示す。
【図４０】図４０は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１４６〜１６５の配列に対応し、残基１６４においてｄ形態のプロリンを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシン（１〜２０，ｄプロリン（１９））アミドの配列（配列番号４０）を示す。
【図４１】図４１は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１４６〜１６５の配列に対応し、残基１６５においてｄ形態のフェニルアラニンを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシン（１〜２０，ｄフェニルアラニン（２０））アミドの配列（配列番号４１）を示す。
【図４２】図４２は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１４６〜１６５の配列に対応し、Ｎ末端アセチルを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシンアセチル（１〜２０）アミド（配列番号４２）の配列を示す。
【図４３】図４３は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５３〜１６５の配列に対応し、Ｎ末端アセチルを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシンアセチル（８〜２０）アミドの配列（配列番号４３）を示す。
【図４４】図４４は、コスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応し、Ｎ末端アセチルを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシンアセチル（７〜２０）アミドの配列（配列番号４４）を示す。
【図４５】図４５は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１４６〜１６５の配列に対応し、Ｎ末端ホルミルを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシンホルミル（１〜２０）アミドの配列（配列番号４５）を示す。
【図４６】図４６は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５１〜１６５の配列に対応し、Ｎ末端ホルミルを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシンホルミル（６〜２０）アミドの配列（配列番号４６）を示す。
【図４７】図４７は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応し、Ｎ末端ホルミルを有しかつＣ末端アミドを有する、フェニキシンホルミル（７〜２０）アミドの配列（配列番号４７）を示す。
【図４８】図４８は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１４６〜１６４の配列に対応し、Ｃ末端ナフタレン（ｎａｐｈｔｈｅｌｅｎｅ）を有する、フェニキシン（１〜１９）ナフタレン（ｎａｐｔｈａｌｅｎｅ）の配列（配列番号４８）を示す。
【図４９】図４９は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６４の配列に対応し、Ｃ末端ナフタレンを有する、フェニキシン（７〜１９）ナフタレンの配列（配列番号４９）を示す。
【図５０】図５０は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５３〜１６４の配列に対応し、Ｃ末端ナフタレンを有する、フェニキシン（８〜１９）ナフタレンの配列（配列番号５０）を示す。
【図５１】図５１は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５１〜１６４の一次配列に位置する配列、Ｎ末端におけるピログルタミン酸およびＣ末端ナフタレンを有する、ｐＧｌｕ−フェニキシン（６〜１９）ナフタレンの配列（配列番号５１）を示す。
【図５２】図５２は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５４〜１６４の配列に対応し、Ｃ末端ナフタレンを有する、フェニキシン（９〜１９）ナフタレンの配列（配列番号５２）を示す。
【図５３】図５３は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５５〜１６４の配列に対応し、Ｎ末端におけるピログルタミン酸およびＣ末端ナフタレンを有する、ｐＧｌｕ−フェニキシン（９〜１９）ナフタレンの配列（配列番号５３）を示す。
【図５４】図５４は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１４６〜１６５の配列に対応し、残基１６５においてフェニルアラニンがトリプトファンで置換されている、フェニキシン（１〜２０，トリプトファン（２０））の配列（配列番号５４）を示す。
【図５５】図５５は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応し、残基１６５においてフェニルアラニンがトリプトファンで置換されている、フェニキシン（ｈｏｅｎｉｘｉｎ）（７〜２０，トリプトファン（２０））の配列（配列番号５５）を示す。
【図５６】図５６は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５３〜１６５の配列に対応し、残基１６５においてフェニルアラニンがトリプトファンで置換されている、フェニキシン（８〜２０，  トリプトファン（２０））の配列（配列番号５６）を示す。
【図５７】図５７は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５１〜１６５の配列に対応し、Ｎ末端においてピログルタミン酸を有し、残基１６５においてフェニルアラニンがトリプトファンで置換されている、ｐＧｌｕ−フェニキシン（５〜２０，トリプトファン（２０））の配列（配列番号５７）を示す。
【図５８】図５８は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５４〜１６５の配列に対応し、残基１６５においてフェニルアラニンがトリプトファンで置換されている、フェニキシン（９〜２０，  トリプトファン（２０））の配列（配列番号５８）を示す。
【図５９】図５９は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５５〜１６５の配列に対応し、Ｎ末端においてピログルタミン酸を有し、残基１６５においてフェニルアラニンがトリプトファンで置換されている、ｐＧｌｕ−フェニキシン（９〜２０，トリプトファン（２０））の配列（配列番号５９）を示す。
【図６０】図６０は、ヒトコスペプチンプレプロペプチドの残基１５２〜１６５の配列に対応し、残基１６１においてＤアイソフォームのトリプトファンを有し、残基１６５においてフェニルアラニンがトリプトファンで置換されている、フェニキシン（７〜２０，ｄトリプトファン（ＩＩ）トリプトファン（２０））の配列（配列番号６０）を示す。
【図６１】図６１は、ラット組織ホモジネートのサイズ分画精製から得られた免疫反応性画分へのＲＰ−ＨＰＬＣの適用から得られた免疫反応性ペプチドの溶出（ベースラインより上のピーク）を示す第１のＲＰ−ＨＰＬＣ分離プロットである。
【図６２】図６２は、図６１の第１のＲＰ−ＨＰＬＣ分離において約２６．５分において溶出するピークを含む画分の質量分析から得られたマススペクトルプロフィールである。
【図６３】図６３は、図６１の第１のＲＰ−ＨＰＬＣ分離において約２７分において溶出した画分の高電圧モードでの質量分析から得られたマススペクトルプロフィールである。
【図６４】図６４は、図６１の上記第１のＲＰ−ＨＰＬＣ分離によって得られた免疫反応性画分へのＲＰ−ＨＰＬＣの適用から得られたペプチドの溶出（ベースラインより上のピーク）を示す第２のＲＰ−ＨＰＬＣ分離プロットである。
【図６５】図６５は、図６４の第２のＲＰ−ＨＰＬＣ分離において約２６．５分において溶出するピークを含む画分の質量分析から得られたマススペクトルプロフィールである。
【図６６】図６６Ａ〜６６Ｄは、固定し、図７において示されるとおりのＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）に対して惹起された抗フェニキシン抗体を使用して免疫染色したガラススライド上のラット髄質（ｍｅｄｕｌｌａ）の組織切片の画像である。
【図６７】図６７Ａ〜６７Ｄは、固定し、図７に示されるＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）に対して惹起された抗フェニキシン抗体を使用して免疫染色したガラススライド上のラット前脳の組織切片の画像である。
【図６８】図６８Ａ〜６８Ｆは、固定し、図７に示されるＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）に対して惹起された抗フェニキシン抗体を使用して免疫染色したガラススライド上のラット脊髄の組織切片の画像である。
【図６９】図６９は、図７および図９において示されるとおりのＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）およびＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号９）に対応する天然フェニキシンペプチドの組織分布および濃度をプロットする棒グラフである。
【図７０】図７０は、図７に示されるとおりのＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）でチャレンジしたラット下垂体細胞、図３に示されるとおりのＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦＧ（配列番号３）でチャレンジしたラット下垂体細胞、図９に示されるとおりのＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号９）でチャレンジしたラット下垂体細胞、およびリン酸緩衝化食塩水（「ＰＢＳ」）コントロールでチャレンジしたラット下垂体細胞中のｃＡＭＰの生成を比較する棒グラフである。
【図７１】図７１は、異なる動物種におけるフェニキシン（１〜２０）、フェニキシン（７〜２０）、およびフェニキシン（７〜２１）の領域のアラインメントを示す。この配列アラインメントから、プレプロペプチドにおけるフェニキシン（１〜２０）の配列は、ヒト、ウシ、ラット、およびマウスの種間で同一である。イヌ種およびブタ種におけるフェニキシン（１〜２０）のペプチドは、バリンもしくはイソロイシンをイソロイシンもしくはバリンの残基の代わりに使用するという１残基差異を有する。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
（ＩＶ．好ましい実施形態の詳細な説明）
この説明から容易に理解され得るように、本発明の基本的概念は、種々の方法によって具現化され得る。それは、胃腸、心血管、視床下部−下垂体軸、および中枢神経系の組織において細胞機能の調節におけるプロテイン共役レセプターのリガンドである精製および単離されたポリペプチドおよびペプチド摸倣物を生成および使用する方法を包含する。
【００１４】
ここで図１を主に参照すると、１６８アミノ酸のヒトフェニキシンプロペプチド（Ｑ８Ｎ５Ｇ０）（配列番号１）は、図２に示されるとおりの長さ２０アミノ酸のＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ（配列番号２）；図３に示されるとおりの長さ１５アミノ酸残基のＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦＧ（配列番号３）；図４に示されるとおりの長さ１４アミノ酸残基のＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ（配列番号４）、図５において示されるとおりの長さ１３アミノ酸残基のＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦＧ（配列番号５）、および図６に示されるとおりの長さ１３アミノ酸のＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ（配列番号６）を含む種々のペプチド形態へとプロセシングされ得る。
【００１５】
天然のフェニキシンペプチドは、上記のように、カルボキシル末端において遊離酸の形態にあり得るか、または図７に示されるとおりのＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）、図８に示されるとおりのＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号８）、もしくは図９において示されるとおりＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号９）の形態にアミド化され得る。
【００１６】
フェニキシンペプチドの特定の残基（遊離酸であろうとアミドであろうと）は、Ｌアイソフォームアミノ酸もしくはＤアイソフォームアミノ酸であり得る。例えば、図９に示されるとおりのＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦＧ−ＮＨ２（配列番号９）および図３１に示されるとおりのＤＶＱＰＰＧＬＫＶｄＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号３１）。
【００１７】
フェニキシン転写物は、消化管、視床下部、髄質、前脳、心臓、下垂体、腎臓、膵臓、肝臓、脾臓、胸腺、および他の組織というヒト組織において発現され得る。
【００１８】
（フェニキシン配列の推測）
ペプチドライブラリーを、約１００個の既知のプレプロホルモンフェニキシン配列における潜在的な一塩基もしくは二塩基の切断部位から設計した。ペプチド合成の候補を、上記プレプロホルモンフェニキシンタンパク質が、一塩基残基（例えば、ＡｒｇもしくはＬｙｓ）、二塩基性残基対（例えば、Ａｒｇ−Ａｒｇ）、多塩基性切断部位、もしくは３つ組みＧｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇにおいてインビボでプロセシングされ得、これらは、タンパク質分解切断の際に、ヒトフェニキシンのインビボプロセシングされた形態、またはヒトフェニキシンのプロセシングされた形態の捕捉のための抗体生成に適切な他の形態を生じ得るという予測に基づいて選択した。上記モデリングは、候補の一次配列を生じ、ここから、以下を化学合成のために選択した：ＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ（配列番号２）、ＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦＧ（配列番号３）およびＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ（配列番号４）。
【００１９】
（フェニキシンペプチドの生成）
ここで図２〜６０を主に参照すると、配列番号２、配列番号３、および配列番号４の一次配列がモデリングによって決定されたら、その対応するＣ末端遊離酸（配列番号２〜６）、Ｃ末端アミド（配列番号７〜１２）、Ｃ末端メチルアミド（配列番号１３〜１８）、Ｃ末端エチルアミド（配列番号１９〜２４）、Ｄ形態アミノ酸ペプチド（配列番号２４〜４１および６０）、Ｎ末端アセチル（配列番号４２〜４４）、Ｎ末端ホルミル（配列番号４５〜４７）、Ｃ末端ナフタレン（配列番号４８〜５０および５２）、およびフェニルアラニンの代わりに使用されたトリプトファン（配列番号５４〜６０）のペプチドを、フルオレニルオキシメチルカルボニル（ＦＭＯＣ）アミノ酸もしくはｔｅｒｔブチルオキシメチルカルボニル（ＢＯＣ）アミノ酸を化学的に使用して、製造業者のプロトコルに従って自動化ペプチド合成機（例えば、Ｒａｎｉｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｓｙｍｐｈｏｎｙ−Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘペプチド合成機）または当業者に周知の技術によって理解されるように手動のいずれかで、化学合成した。Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：  Ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ，  Ｅ．  Ａｔｈｅｒｔｏｎ  ａｎｄ  Ｒ．Ｃ．  Ｓｈｅｐｐａｒｄ，  ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｏｘｆｏｒｄ，  Ｅｎｇｌａｎｄ（これにより参考として援用される）もまた参照のこと。
【００２０】
Ｎ末端アセチル、Ｎ末端ホルミル、Ｎ末端ピログルタミン酸、Ｃ末端アミド、Ｃ末端メチルアミド、Ｃ末端エチルアミド、Ｃ末端ナフタレン、Ｃ末端トリプトファン、１もしくはそれより多くのＬアイソフォームアミノ酸残基の、同じＤアイソフォームアミノ酸での置換、のうちの１種以上を提供するために改変された特定のフェニキシンペプチドは、その対応する元の天然のペプチドと比較して、より安定であること、より可溶性であること、もしくはより大きな効力を有することという利点のうちの１つまたはそれより多く（ｏｎｅ  ｍｏｒｅ）を有し得る。例えば、Ｗｅｉ  Ｅ．Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．  １９９８；  １９（７）：  １１８３−９０（これにより参考として援用される）を参照のこと。
【００２１】
化学合成からのポリペプチドの得られた混合物は、互いから、逆相（「ＲＰ」）高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）によって、８０オングストローム（「Å」）〜３００Åの間の孔を有し、Ｃ−４、Ｃ−８、もしくはＣ−１８リガンドのうちのいずれか１つが結合したシリカを充填したカラムを使用して、精製および単離され得る。上記カラムを、当業者によって理解されるように、カラムサイズに依存する流速において水中０．１％  トリフルオロ酢酸で平衡化した。上記合成ペプチド混合物を、逆相ＨＰＬＣカラムに適用し、約１時間の期間にわたって約０％〜約６０％の勾配を使用して、アセトニトリル中０．１％  トリフルオロ酢酸で溶出した。約０．５分間隔において画分を集めた。画分を、逆相ＨＰＬＣシステムからの再適用および溶出、質量分析法、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、もしくは製造業者のプロトコルに従って、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ／Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍｏｄｅｌ  ４７０Ａタンパク質配列決定機での自動化エドマン分解によって均質性についてその後分析した。
【００２２】
本発明はさらに、ラット下垂体細胞における細胞内サイクリックアデノシン一リン酸（「ｃＡＭＰ」）濃度を調節する機能を保持する図２〜６０に示されるフェニキシンペプチド（配列番号２〜６０）のうちの１種以上に実質的に類似の精製および単離されたペプチドを包含する。非限定的例として、ポリペプチドの構造、コンホメーションもしくは活性を顕著に変化させない、構造的にもしくは化学的に類似の残基での残基の置換残基であるサイレントな置換。このようなサイレント置換は、その後の非仮特許出願において出願され得る特許請求の範囲内に入ることが意図される。よって、本発明およびこの説明は、１もしくはそれより多くの残基が、いずれかの末端もしくは両方の末端から、または内部領域から除去されているか、あるいは１もしくはそれより多くの残基がいずれかの末端もしくは両方の末端に、またはペプチド中の内部位置に付加されている、配列番号２〜６０に関連するペプチド、または化学標識もしくは放射性標識のために付加された化学部分もしくは残基（例えば、１２５ヨウ素標識のための付加されたチロシン）を有するペプチドをさらに含むことが理解される。同様に、上記Ｎ末端は、アミノ、アセチル、ホルミルとして調製され得るか、または残りのＦＭＯＣもしくはＢＯＣ基をインタクトなまま残し得る。上記Ｃ末端は、樹脂に結合したままにされ得るか、または対応する４−ヒドロキシメチル−フェニルアセトアミドメチル（「ＰＡＭ」）樹脂もしくは４−メチルベンズヒドリルアミンヒドロクロリド塩（「ＭＢＨＡ」）樹脂を選択することによって、カルボキシルもしくはアミドとして切断され得る。上記Ｃ末端は、メチルアミド、エチルアミド、ナフタレン、もしくは他の部分を提供するために改変され得る。
【００２３】
（抗フェニキシンおよびフェニキシンペプチド抗体の生成）
抗体を、配列番号３、配列番号７、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１に対応する、上記化学合成し、精製および単離したペプチドの各々に対して惹起した。抗体を、従来の方法（ここで上記化学合成したペプチドを既知の免疫原性キャリア（例えば、キーホールリンペット・ヘモシアニン（「ＫＬＨ」）、Ｂ型肝炎ウイルスの表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、他のウイルスもしくは真核生物タンパク質など）に結合体化した免疫原として使用する）に従って調製した。種々のアジュバントを、適切な場合、一連の注射とともに使用し得る。モノクローナル抗体については、１回以上のブースター注射の後に、脾臓を単離し得、そのリンパ球を細胞融合によって不死化し得、次いで、高親和性抗体結合についてスクリーニングし得る。次いで、所望の抗体を生成する上記不死化細胞（ハイブリドーマ）を、増幅し得る。より詳細な説明については、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  ｅｄｓ．，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，  １９８８（これにより参考として援用される）を参照のこと。
【００２４】
（天然のフェニキシンペプチドの単離）
成体ラットの心臓組織から、ホモジネートを調製した。ラット心臓ホモジネートの上清を、Ｃ１８カラム抽出カートリッジおよびＰ６ゲル濾過を通過させて、天然のペプチド候補物をさらに精製した。上記免疫反応性画分を、上記の標識された化学合成ペプチドが、非標識の天然のフェニキシンペプチドと、上記のように生成された制限された量の上記抗フェニキシンペプチド抗体に関して競合する従来の酵素イムノアッセイ（「ＥＩＡ」）によって決定した。上記標識は、ストレプトアビジン西洋ワサビペルオキシダーゼとの反応、および西洋ワサビペルオキシダーゼと比色基質もしくは蛍光基質とのその後の反応により定量され得るビオチン複合体であり得る。免疫反応性画分は、Ｐ６サイズ分画ゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，  ＣＡ）もしくはカルボキシメチルセルロース（「ＣＭＣ」）樹脂への適用および０．２Ｍ  酢酸アンモニウムでの溶出によるイオン交換のいずれかによって、さらに精製した。上記Ｐ６サイズ分画は、最良の免疫反応性結果を与えたので、この免疫反応性画分を、その後、上記に記載される第１のＲＰ−ＨＰＬＣ分離によってさらに精製し、得られた免疫反応性画分を、上記のように、その後の第２のＲＰ−ＨＰＬＣ分離によってさらに精製した。
【００２５】
ここで図６１を主に参照すると、第１のＲＰ−ＨＰＬＣ分離プロットは、上記イオン交換手順によって得られた免疫反応性画分へのＲＰ−ＨＰＬＣの適用から生じる、ペプチド（ベースラインより上のピーク）の溶出を示す。ペプチドを含む溶出した画分を、上記ＥＩＡ手順によってアッセイし、免疫反応性のレベルを、上記第１のＲＰ−ＨＰＬＣプロットの上に重ね合わせた。これは、約２６．５分および約２７分においてそれぞれ生じるピークと対応する溶出した画分が、上記のように生成したその対応する抗ペプチド抗体を結合する天然のフェニキシンペプチドを含むことを示す。
【００２６】
ここで図６２を主に参照すると、これは、上記第１のＲＰ−ＨＰＬＣ分離において約２６．５分で溶出するペプチドを含む画分の質量分析法から得られたマススペクトルを示す。マトリクス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間（「ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ」）によって達成されたマススペクトルは、約２６．５分で溶出したピークに対応する画分が、天然のフェニキシンペプチドＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号９）、ＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号１１）およびＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）を含むことを示す。
【００２７】
ここで図６３を主に参照すると、これは、上記第１のＲＰ−ＨＰＬＣ分離において約２７分で溶出するピークを含む画分の質量分析法から得られるマススペクトルを示す。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦでの高電圧出力によるマススペクトルは、約２７分で溶出するピークを含む画分が、いくつかの天然のフェニキシンペプチドＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦＧ（配列番号５）、ＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号８）、ＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号９）、ＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦＧ（配列番号３）およびＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）を含むことを示す。
【００２８】
ここで図６４を主に参照すると、これは、上記第１のＲＰ−ＨＰＬＣ分離によって得られた免疫反応性画分へのＲＰ−ＨＰＬＣの適用から得られるペプチド（ベースラインより上のピーク）の溶出を示す第２のＲＰ−ＨＰＬＣ分離プロットを示す。ペプチドを含む溶出した画分を、上記ＥＩＡ手順によってアッセイし、免疫反応性のレベルを上記第１のＲＰ−ＨＰＬＣプロットの上に重ね合わせた。これは、約２６〜２６．５分において生じるピークと対応する溶出した画分が、上記のように、その対応する抗ペプチド抗体を結合する天然のフェニキシンペプチドを含むことを示す。
【００２９】
ここで図６５を主に参照すると、これは、上記第２のＲＰ−ＨＰＬＣ分離において約２６〜２６．５分で溶出する画分の質量分析法から得られるマススペクトルを示す。上記マススペクトルは、約２６〜２６．５分でのピークに対応する溶出した画分が、天然のフェニキシンペプチドＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦＧ（配列番号３）およびＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号９）を含むことを示す。
【００３０】
（組織切片におけるフェニキシンペプチドの検出）
ここで図６６Ａ〜６６Ｄを主に参照すると、これらの各々は、固定し、ＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）およびＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号９）に対して惹起された抗フェニキシン抗体を使用する従来の免疫組織化学染色手順によって免疫染色されたガラススライド上のラット髄質の組織切片を示す。フェニキシン免疫蛍光細胞突起は、図６６Ａの三叉神経脊髄路（ｓｐｉｎａｌ  ｔｒｉｇｅｍｉｎａｌ  ｔｒａｃｔ）（Ｓｐ５）および迷走神経求心路；図６６Ｂの三叉神経脊髄路核および迷走神経求心路の拡大した領域；図６６Ｃの孤束の内側核（ＳｏｌＭ）および孤束の中心核（ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｕｃｌｅｕｓ  ｏｆ  ｓｏｌｉｔａｒｙ  ｔｒａｃｔ）（ＳｏｌＣ）における免疫蛍光細胞突起；図６６Ｄの三叉神経脊髄路から疑核（ｎＡｍｂ）まで伸びる（ｐｒｏｊｅｃｔｉｎｇ）免疫蛍光細胞突起において示される。スケールバー：Ａ，２５０μｍ；Ｂ、ＣおよびＤ、１００μｍ。
【００３１】
一般に、凍結組織切片での免疫組織化学染色は、ガラススライド上に組織切片を定着させることを含む。適切な固定剤（例えば、予め冷やしておいたアセトン（−２０℃））で１０分間にわたって組織切片を固定する。上記固定剤が流して除去され得、残りのアセトンは蒸発させられ得る。上記スライドは、中性ｐＨの緩衝液（例えば、１０ｍＭ  リン酸緩衝化食塩水（ＰＢＳ））で、２回替えて各５分間すすがれ得る。上記スライドは、内因性ペルオキシダーゼ活性をブロックするために、ＰＢＳ中約０．３％Ｈ２Ｏ２溶液中で、室温において１０分間にわたってインキュベートされ得る。続いて、上記スライドは、３００ｍｌ  ＰＢＳ中、２回替えて各５分間すすがれる。必要に応じたブロッキング緩衝液が使用され得（例えば、組織切片上へのＰＢＳ中の１０％  正常ヤギ血清を含む）、室温において１時間にわたってインキュベートされ得る。抗体希釈緩衝液（ＰＢＳ中０．５％  ウシ血清アルブミン）中に希釈された、配列番号７および配列番号９に対して惹起された一次抗体を上記スライドの切片へと適用し、１時間にわたって室温において、もしくは一晩４℃においてインキュベートする。約３００ｍｌ  ＰＢＳ中で、２回替えて各５分、上記スライドをすすぐ。上記抗体希釈緩衝液中に適切に希釈したビオチン化二次抗体１００μｌを、上記スライド上の組織切片に適用し、室温において約３０分間にわたってインキュベートする。３００ｍｌ  ＰＢＳ中、２回替えて各５分、上記スライドをすすぐ。上記抗体希釈緩衝液を使用して、１００μｌの予め希釈した西洋ワサビ結合体を上記スライド上の切片に添加し、加湿チャンバ中室温において３０分間にわたって、遮光してインキュベートする。約３００ｍｌ  ＰＢＳ中、２回替えて各５分、上記スライドをすすぐ。使用直前に新たに作製した約１００μｌ  ３，３’−ジアミノベンジジン（「ＤＡＢ」）基質溶液（ＰＢＳ中０．０５％  ＤＡＢ−０．０１５％  Ｈ２O２）を上記スライド上の切片に適用して、抗体染色の色を示す。所望の色強度に達するまで、５分間未満にわたって発色させる。３００ｍｌ  ＰＢＳ中、２回替えて各５分、スライドを洗浄する。必要に応じて、スライドをヘマトキシリン中に１〜２分間にわたって浸漬することによって、スライドを対比染色する。水道水を流しながら１５分間より長い時間にわたって、上記スライドをすすぐ。上記組織スライドを、アルコールを４回替えて（９５％、９５％、１００％および１００％）脱水する（各５分）。キシレンを３回替えて上記組織スライドをきれいにし、マウント溶液を使用してカバースリップをかける。上記組織切片における抗体染色の色を顕微鏡下で観察する。
【００３２】
ここで図６７Ａ〜６７Ｄを参照すると、上記のように調製したラット前脳の組織サンプル中の天然フェニキシンペプチドの免疫活性が示される。フェニキシン免疫反応性細胞体は、図６７Ａにおいて尾状核被殻（ｃａｕｄａｔｅ  ｐｕｔａｍｅｎ）（ＣＰｕ）において検出される；微細な細胞突起はまた、図６７ＢのＣＰｕ；図６７Ｃの扁桃、および図６７Ｄの脳室周囲核（ｐｅｒｉｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｎｕｃｌｅｕｓ）（Ｐｅ）において認められ得る。スケールバー：Ａ、１００μｍ；Ｂ、ＣおよびＤ、５０μｍ。
【００３３】
ここで図６８Ａ〜６８Ｆを参照すると、上記のように調製されたラット脊髄の組織切片における天然のフェニキシンペプチドの免疫反応性が示される。フェニキシン免疫蛍光は、頚部の後角表層（図６８Ａおよび６８Ｂ）、胸部（図６８Ｃおよび６８Ｄ）、および腰部（図６８Ｅ）において起こる。図６８Ｆは、上記ペプチドを予め吸収させた（１μｇ／ｍｌ  一晩）フェニキシン抗血清で処理した腰部切片を示す；免疫蛍光は、後角において検出されない。スケールバー：Ａ、Ｃ、ＥおよびＦ、２５０μｍ；ＢおよびＤ、１００μｍ。
【００３４】
（組織ホモジネート抽出物および血漿におけるフェニキシンペプチドの検出）
ここで図６９を主に参照すると、これは、ＡＧＩＶＱＥＤＶＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）およびＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号９）に対応する天然のフェニキシンペプチドの組織分布および濃度をプロットする棒グラフを示す。心臓、肺、腎臓、脊髄、小腸、肝臓、膵臓、視床下部、脾臓、および胸腺のブタもしくはウシもしくはラットの組織のホモジネートを、上記のように調製し、得られた画分を上記ペプチド抽出手順によって処理し、ＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）に対して惹起された抗体を使用して、ラジオイムノアッセイ（「ＲＩＡ」）もしくは酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）によってアッセイした。ＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）に対して惹起された上記抗体はまた、ＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号９）と１００％交叉反応性であることが示されたが、ＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦＧ（配列番号３）とは０．５％未満の交叉反応性であることが示された。上記アッセイ内変動性は、検出限界が約３４ピコグラム／ミリリットル（「ｐｇ／ｍＬ」）でかつＥＣ５０が約２００ｐｇ／ＭＬで約５％であった。タンパク質濃度を、製造業者Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，  Ｉｌｌｉｎｏｉｓのプロトコルに従って、ウシ血清アルブミン（「ＢＳＡ」）を標準物質として使用して、ビシンコニン酸（「ＢＣＡ」）タンパク質アッセイによって、決定した。データは、タンパク質１ｍｇあたりの免疫反応性フェニキシンペプチドにおける３回の二連のアッセイの結果の平均±ＳＥＭとして表される。
【００３５】
図６９および以下の表１において示されるように、肝臓、膵臓、脾臓、腎臓および胸腺の組織は、心臓および視床下部の組織よりも実質的に少ない免疫反応性フェニキシンペプチドを生成する。蛍光フェニキシン酵素イムノアッセイを使用して、Ｃ１８抽出なしのヒト血漿中の上記フェニキシンペプチドレベルは、約３５．５±１．７２ｐｇ／ｍｌであると決定された。
【００３６】
【表１】
2014518881.tif 000002
【００３７】
（下垂体細胞に対するフェニキシンペプチドの効果）
ここで図７０を主に参照すると、棒グラフは、図７に示されるとおりのＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）でチャレンジしたラット下垂体細胞、図３に示されるとおりのＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦＧ（配列番号３）でチャレンジしたラット下垂体細胞、図９に示されるとおりのＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号９）でチャレンジしたラット下垂体細胞およびＰＢＳコントロールでチャレンジしたラット下垂体細胞におけるｃＡＭＰの生成を比較する。
【００３８】
ラット下垂体腺腫細胞ＲＣ−４Ｂ／Ｃ（ＣＲＬ−１９０３；  ＡＴＣＣ，  Ｍａｎａｓｓａｓ，  ＶＡ，  ＵＳＡ）を、０．０１ｍＭ  非必須アミノ酸、１５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、２．５ｎｇ／ｍｌ  上皮増殖因子、および透析し、熱非働化したウシ胎仔血清（「ＦＢＳ」）を補充したダルベッコ改変イーグル培地および最小必須α培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）中で、５％  二酸化炭素（「ＣＯ２」）を含む加湿細胞インキュベーター中で３７℃で培養した。２４ウェルプレート中で２日間細胞培養した後に、細胞を、２時間にわたって、無血清培地中で平衡化し、無血清培地中０．１ｍＭ  ３−イソブチル−１−メチルキサンチン（「ＩＢＭＸ」）とともに再び３０分間にわたってインキュベートした。次いで、細胞を、ＩＢＭＸの存在下で、１００ｎＭのＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）、ＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦＧ（配列番号３）、ＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号９）、またはＰＢＳコントロールのいずれかでチャレンジし、３０分間にわたってインキュベートした。インキュベーション後、次いで上清培地を吸引し、各ウェル中の細胞を、７０％  冷エタノールによって抽出した。アルコールを真空濃縮機（ＰＮ：  ＡＥＳ  ２０００，  Ｓａｖａｎｔ，  Ｈｉｃｋｓｖｉｌｅ，  ＮＹ，  ＵＳＡ）中でエバポレートした、その後、ｃＡＭＰ  Ｂｉｏｔｒａｋ酵素イムノアッセイキット（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ−Ａｍｅｒｓｈａｍ，  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，  ＮＪ，  ＵＳＡ）を、製造業者のプロトコルに従って使用することによって、ｃＡＭＰ含有量を決定した。
【００３９】
また、ラット下垂体腺腫細胞ＲＣ−４Ｂ／Ｃ細胞を、放射性リガンド結合のアッセイにおいて使用した。結合置換のために、細胞を、３０分間にわたって５０ｐＭ  １２５Ｉ−Ｙ０−フェニキシン−２０（アミド配列番号７）とともに、漸増濃度の非標識フェニキシン−２０アミド（アミド配列番号７）もしくはフェニキシン−１４アミド（アミド配列番号９）の非存在下もしくは存在下において、インキュベートした。非特異的結合を、１μＭ  非標識フェニキシン−２０アミド（アミド配列番号７）もしくはフェニキシン−１４アミド（アミド配列番号９）の存在下での全結合として定義した。上記細胞を１ｍｌの冷ＰＢＳで洗浄することによって結合反応を終わらせた後、細胞を０．５ｍｌの１％  ＳＤＳで可溶化し、放射活性をガンマカウンターで検出した。非線形曲線のあてはめによれば、フェニキシン−２０アミドのＩＣ５０は、２１．５ｎＭであり、フェニキシン−１４アミドのＩＣ５０は、１７．９ｎＭである。
【００４０】
図７０に示されるように、ＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）、ＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦＧ（配列番号３）、ＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号９）は、ラット下垂体腺腫細胞中の細胞内ｃＡＭＰ生成をＰＢＳコントロールの２倍より大きく、およびさらには３倍より大きく増大させ得る。データは、コントロール値（ＰＢＳ−コントロール、１００％；４．９４±０．５ｐｍｏｌ／ｍｇタンパク質）のパーセンテージとして表される。
【００４１】
（フェニキシンペプチドの使用）
配列番号２〜６０のフェニキシンペプチドは、４つの一般領域において利用され得る。第１に、上記のもしくは以下に記載されるアッセイにおいて、または上記に記載されるように、モノクローナル抗体もしくはポリクローナル抗体を惹起するために利用され得る１種以上の配列番号２〜６０のフェニキシンペプチドの形態にある抗原として。得られるモノクローナル抗体もしくはポリクローナル抗体は、上記フェニキシンプロペプチド、フェニキシンペプチドなどのうちの１種以上を結合することにおいて有用であり得る。
【００４２】
第２に、フェニキシンペプチドのうちの１種以上に対して惹起された抗体を付随し得る、１種以上の化学合成された配列番号２〜６０のフェニキシンペプチドを含むキットにおける分子ツールもしくは試薬として。上記キットは、組織もしくは細胞ホモジネートの、またはゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、免疫沈降などを使用する精製プロトコルから得られた溶出画分の、例えば、ラジオイムノアッセイ（「ＲＩＡ」）、酵素結合イムノソルベントアッセイ（「ＥＬＩＳＡ」）、もしくは酵素イムノアッセイ（「ＥＩＡ」）などにおいて、ならびに組織の免疫組織化学分析のために、またはクロマトグラフィーもしくは質量分析法の標準物質として、または疾患スクリーニングにおけるバイオマーカーとして、有用であり得る。
【００４３】
第３に、特定の疾患の評価のための臨床使用法における診断ツールとして。天然のフェニキシンペプチドは、ヒトもしくは動物の生理において機能的ペプチドであり得るので、フェニキシンペプチドの非存在もしくは異常なレベル（正常値と比較して、異常に高かろうが低かろうが）は、具体的疾患を示す他の生理学的因子または症状と相関し得る。血中もしくは組織中の特定の量のフェニキシンペプチドの存在は、指標（ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）として、または特定の医学的処置のガイド指数として使用され得る。
【００４４】
第４に、上記フェニキシンペプチドは、正常な生理において機能的役割を果たし得る。天然のフェニキシンペプチドの過剰発現もしくは過小発現は、関連疾患もしくは機能不全を生じ得る。従って、動物もしくはヒトの身体への１種以上のフェニキシンペプチドもしくはフェニキシンペプチドの投与、または、フェニキシンペプチドを結合するか、競合的に結合するか、移動させるか、もしくは別の方法で利用して生理学的経路を制御もしくは調節する細胞との接触は、上記疾患状態を改善もしくは適正化（ｃｏｒｒｅｃｔ）し得る。治療効果を最大にするために、１種以上のフェニキシンペプチドの投与が、単独の、または他の薬学的試薬と組み合わせた、種々の方法（例えば、静脈内、筋肉内、皮下など）を介して、治療効果（例えば、血圧を低下させる心血管応答、腸内容物を排出する、ゴナドトロピンを放出する、など）を生成するために十分な量で達成され得る。ほんの一例として、配列番号２〜６０のフェニキシンのうちの１種以上が、血圧の低下を達成するために動物に投与され得る。さらに、１種以上の配列番号２〜６０のフェニキシンペプチドは、細胞シグナルを制御するために投与され得、特に、フェニキシンペプチド
【化１】
2014518881.tif 000003
は、細胞中のｃＡＭＰ生成を調節するために利用され得る。
【００４５】
ここで図７１を参照すると、フェニキシン（１〜２０）、フェニキシン（７〜２０）、およびフェニキシン（７〜２１）の領域のアラインメントが、種々の動物種において示される。上記配列アラインメントは、プレプロタンパク質におけるフェニキシン（１〜２０）の配列が、ヒト、ウシ、ラット、およびマウスの種の間で同一であり、イヌおよびブタの種におけるフェニキシン（１〜２０）が、残基イソロイシンもしくはバリンの代わりにバリンもしくはイソロイシンによる１置換である１残基の差異を有することの証拠となる。よって、上記のとおりのフェニキシンペプチドの配列、合成もしくは単離、分析および機能は、種間で保存され得る。
【００４６】
ここで一般に図面および上記の図の説明を参照すると、プロペプチドヒトフェニキシン（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ：  Ｑ８Ｎ５Ｇ０）における残基位置識別子に沿ったヒトフェニキシンもしくはヒトフェニキシンペプチドへの何らかの言及は、アラインメントへの言及のために過ぎず、これらの言及が、上記図に示されるかもしくは上に記載されるフェニキシンペプチドのうちのいずれかが、先行技術において同定されたこと、天然に存在すること、またはプロペプチドヒトフェニキシンの構造もしくは機能が、上記のフェニキシンペプチドに類似であることを認めることも示唆することも意図しない。
【００４７】
前述から容易に理解され得るように、本発明の基本的概念は、種々の方法において具現化され得る。最良の形態を含む本発明は、抗体の生成、診断スクリーニングおよびアッセイ、細胞ｃＡＭＰの調節、ならびにｃＡＭＰ、高血圧、および平滑筋応答を調節し得るペプチドによって利益を受ける障害の処置のために有用なフェニキシン／フェニキシンペプチドの多くのかつ種々の実施形態を包含する。
【００４８】
よって、上記最良の形態を含む説明によって開示されるか、または本願に添付の図もしくは表において示される、本発明の特定の実施形態もしくは特定の要素は、本発明によって包括的に包含される多くのかつ種々の実施形態またはこれらの任意の特定の要素に関して包含される等価物を限定することは意図されておらず、むしろ、その例示であることが意図される。さらに、本発明の単一の実施形態もしくは要素の具体的説明は、考えられる全ての実施形態もしくは要素を明示的に記載していないかもしれない；多くの代替物が、上記説明および図面によって暗に開示される。
【００４９】
装置の各要素もしくは方法の各工程が、装置の用語もしくは方法の用語によって記載され得ることは理解されるべきである。このような用語は、本発明が権利を与えられる暗に広い適用範囲を明らかにすることが望まれる場合に置き換えられ得る。ほんの一例として、方法の全ての工程が行為、その行為を行うための手段、またはその行為を引き起こす要素として開示され得ることが理解されるべきである。同様に、装置の各要素は、物理的要素、またはその物理的要素が促進する行為として開示されうる。ほんの一例として、「化学合成されたペプチド」という開示は、明示的に考察されていようが考察されていまいが、「ペプチドを化学合成する」という行為の開示を包含することが理解されるべきである。逆に言えば、「ペプチドを化学合成する」という行為の開示が有効になされていたら、このような開示は、「化学合成されたペプチド」およびさらには「ペプチドを化学合成するための手段」という開示を包含すると理解されるべきである。各要素もしくは工程についてのこのような代替の用語は、上記説明において明示的に含まれると理解されるべきである。
【００５０】
さらに、使用される各用語に関して、本願におけるその利用がこのような解釈と矛盾しなければ、一般の辞書の定義は、ｔｈｅ  Ｒａｎｄｏｍ  Ｈｏｕｓｅ  Ｗｅｂｓｔｅｒ’ｓ  Ｕｎａｂｒｉｄｇｅｄ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ，  ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（各定義は、これにより、参考として援用される）に含まれるとおり、各用語の説明に含まれると理解されるべきである。
【００５１】
さらに、本発明の目的のために、用語「１つの（ａ）」もしくは「１つの（ａｎ）」の実体は、１つ以上のその実体をいう；例えば、「１つの光源」とは、それら光源のうちの１つ以上をいう。よって、用語「１つの（ａ）」もしくは「１つの（ａｎ）」、「１以上」および「少なくとも１」は、本明細書において交換可能に使用されうる。
【００５２】
本明細書中の全ての数値は、明示的に示されていようがいまいが、用語「約」によって修飾されていると想定される。本発明の目的のために、範囲は、「約」１つの特定の値から「約」別の特定の値までとして表されうる。このような範囲が表される場合、別の実施形態は、上記１つの特定の値から他の特定の値までを含む。端点（ｅｎｄｐｏｉｎｔ）による数値範囲の記載は、その範囲内に包含される全ての数値を含む。１〜５の数値範囲は、例えば、数値１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５などを含む。上記範囲の各々の端点が、他の端点に関連して両方とも、および他の端点とは無関係に有効であることはさらに理解される。値が先行詞「約」の使用によって近似値として表される場合、上記特定の値が別の実施形態を形成することが理解される。
【００５３】
従って、本出願人は、ｉ）本明細書で開示されかつ記載されるフェニキシンペプチドの各々、ｉｉ）開示されかつ記載される関連方法、ｉｉｉ）これらデバイスおよび方法の各々の類似の、等価な、およびさらには暗黙のバリエーション、ｉｖ）示されるか、開示されるか、もしくは記載される機能の各々を達成する代替の実施形態、ｖ）開示されかつ記載されるものを達成することが暗に示されるものとして示される機能の各々を達成する代替の設計および方法、ｖｉ）別個のかつ独立した発明として示される各特徴、構成要素、および工程、ｖｉｉ）開示される種々のシステムもしくは構成要素によって増強される適用、ｖｉｉｉ）このようなシステムおよび構成要素によって生成される、得られる生成物、ｉｘ）実質的に本明細書の上記に、および添付の例のうちのいずれかを参照して記載されるとおりの方法および装置、ｘ）開示された先の要素の各々の種々の組み合わせ（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）および置き換え（ｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎ）を少なくとも特許請求することが理解されるべきである。
【００５４】
本特許出願の背景の節は、本発明が関係する努力の分野の言明を提供する。この節はまた、本発明が関係する技術の水準についての情報、課題、もしくは懸念を関連付けることにおいて有用な、特定の米国特許、特許出願、公報、もしくは本願発明の主題の分かりやすい言い換えを組み込み得るか、または含み得る。本明細書に引用もしくは組み込まれる任意の米国特許、特許出願、公報、陳述もしくは他の情報が、本発明に関する先行技術と認めると判断される（ｉｎｔｅｒｐｒｅｔｅｄ）ことも、解釈される（ｃｏｎｓｔｒｕｅｄ）ことも、またはみなされることも意図されない。
【００５５】
本明細書に示される特許請求の範囲（あるとすれば）は、これにより本発明の説明の一部として参考として援用され、本出願人は、上記請求項のうちのいずれかもしくは全て、またはその任意の要素もしくは構成要素を裏付けるさらなる説明として、このような請求項のこのような組み込まれた内容のうちの全てもしくは一部を使用する権利を明らかに保有し、本出願人はさらに、本願によって、またはそのいずれかの引き続く出願もしくは継続出願、分割出願、一部継続出願によって保護が求められる事項を定義するために、あるいはあらゆる国もしくは条約の特許法、規則（ｒｕｌｅ）、もしくは施行規則（ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）のあらゆる利益を得るか、これらに関する料金の削減を得るか、またはこれらを満たすために、必要に応じて、このような請求項の組み込まれた内容のうちのいずれか一部もしくは全て、または上記説明に由来するいずれかの要素もしくは構成要素を、請求項へと移す（またはその逆も同じ）権利を明らかに保有している。そして参考として援用されるこのような内容は、任意のその引き続く継続出願、分割出願、もしくは一部継続出願、それらに対するあらゆる再発行もしくは延長を含む本願の係属中はずっと生き続けるものとする。
【００５６】
本明細書に示される特許請求の範囲（あるとすれば）はさらに、本発明の好ましい実施形態の限定された数の境界（ｔｈｅ  ｍｅｔｅｓ  ａｎｄ  ｂｏｕｎｄｓ）を記載することが意図され、特許請求されうる本発明の最も広い実施形態もしくは本発明の実施形態の完全な列挙として解釈されるべきではない。本出願人は、任意の継続出願、分割出願、もしくは一部継続出願、または類似の出願の一部として上記の説明に基づいてさらなる請求項をつくるあらゆる権利を放棄しない。
【図１】
2014518881.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６Ａ】
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【図６６Ｂ】
2014518881.tif 000070
【図６６Ｃ】
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【図６６Ｄ】
2014518881.tif 000072
【図６８Ａ】
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【図６８Ｂ】
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【図６８Ｃ】
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【図６８Ｄ】
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【図６８Ｅ】
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【図６８Ｆ】
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【図６９】
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【図７０】
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【図７１】
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【図６７】
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【配列表】
2014518881000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成26年1月23日(2014.1.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９および配列番号６０のうちのいずれか１つを含む、精製および単離されたポリペプチド。
【請求項２】
配列番号２からなるポリペプチド、配列番号３からなるポリペプチド、配列番号４からなるポリペプチド、配列番号５からなるポリペプチド、配列番号６からなるポリペプチド、配列番号７からなるポリペプチド、配列番号８からなるポリペプチド、配列番号９からなるポリペプチド、配列番号１０からなるポリペプチド、配列番号１１からなるポリペプチド、配列番号１２からなるポリペプチド、配列番号１３からなるポリペプチド、配列番号１４からなるポリペプチド、配列番号１５からなるポリペプチド、配列番号１６からなるポリペプチド、配列番号１７からなるポリペプチド、配列番号１８からなるポリペプチド、配列番号１９からなるポリペプチド、配列番号２０からなるポリペプチド、配列番号２１からなるポリペプチド、配列番号２２からなるポリペプチド、配列番号２３からなるポリペプチド、配列番号２４からなるポリペプチド、配列番号２５からなるポリペプチド、配列番号２６からなるポリペプチド、配列番号２７からなるポリペプチド、配列番号２８からなるポリペプチド、配列番号２９からなるポリペプチド、配列番号３０からなるポリペプチド、配列番号３１からなるポリペプチド、配列番号３２からなるポリペプチド、配列番号３３からなるポリペプチド、配列番号３４からなるポリペプチド、配列番号３５からなるポリペプチド、配列番号３６からなるポリペプチド、配列番号３７からなるポリペプチド、配列番号３８からなるポリペプチド、配列番号３９からなるポリペプチド、配列番号４０からなるポリペプチド、配列番号４１からなるポリペプチド、配列番号４２からなるポリペプチド、配列番号４３からなるポリペプチド、配列番号４４からなるポリペプチド、配列番号４５からなるポリペプチド、配列番号４６からなるポリペプチド、配列番号４７からなるポリペプチド、配列番号４８からなるポリペプチド、配列番号４９からなるポリペプチド、配列番号５０からなるポリペプチド、配列番号５１からなるポリペプチド、配列番号５２からなるポリペプチド、配列番号５３からなるポリペプチド、配列番号５４からなるポリペプチド、配列番号５５からなるポリペプチド、配列番号５６からなるポリペプチド、配列番号５７からなるポリペプチド、配列番号５８からなるポリペプチド、配列番号５９からなるポリペプチド、および配列番号６０からなるポリペプチドのうちのいずれか１つからなる、請求項１に記載の精製および単離されたポリペプチド。
【請求項３】
前記精製および単離されたポリペプチドは、少なくとも１個の保存的アミノ酸置換を有する、請求項１または２のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項４】
前記少なくとも１個の保存的アミノ酸置換は、Ｌ型アミノ酸残基の、Ｄ型アミノ酸残基での置換を含む、請求項３に記載のポリペプチド。
【請求項５】
前記精製および単離されたポリペプチドは、アミドＣ末端を有する、請求項３に記載のポリペプチド。
【請求項６】
前記精製および単離されたポリペプチドは、アセチルＮ末端を有する、請求項３に記載のポリペプチド。
【請求項７】
前記精製および単離されたポリペプチドは、アミドＣ末端を有する、請求項６に記載のポリペプチド。
【請求項８】
フェニキシンペプチドの検出のためのキットであって、該キットは、配列番号２からなるポリペプチド、配列番号３からなるポリペプチド、配列番号４からなるポリペプチド、配列番号５からなるポリペプチド、配列番号６からなるポリペプチド、配列番号７からなるポリペプチド、配列番号８からなるポリペプチド、配列番号９からなるポリペプチド、配列番号１０からなるポリペプチド、配列番号１１からなるポリペプチド、配列番号１２からなるポリペプチド、配列番号１３からなるポリペプチド、配列番号１４からなるポリペプチド、配列番号１５からなるポリペプチド、配列番号１６からなるポリペプチド、配列番号１７からなるポリペプチド、配列番号１８からなるポリペプチド、配列番号１９からなるポリペプチド、配列番号２０からなるポリペプチド、配列番号２１からなるポリペプチド、配列番号２２からなるポリペプチド、配列番号２３からなるポリペプチド、配列番号２４からなるポリペプチド、配列番号２５からなるポリペプチド、配列番号２６からなるポリペプチド、配列番号２７からなるポリペプチド、配列番号２８からなるポリペプチド、配列番号２９からなるポリペプチド、配列番号３０からなるポリペプチド、配列番号３１からなるポリペプチド、配列番号３２からなるポリペプチド、配列番号３３からなるポリペプチド、配列番号３４からなるポリペプチド、配列番号３５からなるポリペプチド、配列番号３６からなるポリペプチド、配列番号３７からなるポリペプチド、配列番号３８からなるポリペプチド、配列番号３９からなるポリペプチド、配列番号４０からなるポリペプチド、配列番号４１からなるポリペプチド、配列番号４２からなるポリペプチド、配列番号４３からなるポリペプチド、配列番号４４からなるポリペプチド、配列番号４５からなるポリペプチド、配列番号４６からなるポリペプチド、配列番号４７からなるポリペプチド、配列番号４８からなるポリペプチド、配列番号４９からなるポリペプチド、配列番号５０からなるポリペプチド、配列番号５１からなるポリペプチド、配列番号５２からなるポリペプチド、配列番号５３からなるポリペプチド、配列番号５４からなるポリペプチド、配列番号５５からなるポリペプチド、配列番号５６からなるポリペプチド、配列番号５７からなるポリペプチド、配列番号５８からなるポリペプチド、配列番号５９からなるポリペプチド、および配列番号６０からなるポリペプチドのうちの１種以上を含む、キット。
【請求項９】
配列番号２からなるポリペプチド、配列番号３からなるポリペプチド、配列番号４からなるポリペプチド、配列番号５からなるポリペプチド、配列番号６からなるポリペプチド、配列番号７からなるポリペプチド、配列番号８からなるポリペプチド、配列番号９からなるポリペプチド、配列番号１０からなるポリペプチド、配列番号１１からなるポリペプチド、配列番号１２からなるポリペプチド、配列番号１３からなるポリペプチド、配列番号１４からなるポリペプチド、配列番号１５からなるポリペプチド、配列番号１６からなるポリペプチド、配列番号１７からなるポリペプチド、配列番号１８からなるポリペプチド、配列番号１９からなるポリペプチド、配列番号２０からなるポリペプチド、配列番号２１からなるポリペプチド、配列番号２２からなるポリペプチド、配列番号２３からなるポリペプチド、配列番号２４からなるポリペプチド、配列番号２５からなるポリペプチド、配列番号２６からなるポリペプチド、配列番号２７からなるポリペプチド、配列番号２８からなるポリペプチド、配列番号２９からなるポリペプチド、配列番号３０からなるポリペプチド、配列番号３１からなるポリペプチド、配列番号３２からなるポリペプチド、配列番号３３からなるポリペプチド、配列番号３４からなるポリペプチド、配列番号３５からなるポリペプチド、配列番号３６からなるポリペプチド、配列番号３７からなるポリペプチド、配列番号３８からなるポリペプチド、配列番号３９からなるポリペプチド、配列番号４０からなるポリペプチド、配列番号４１からなるポリペプチド、配列番号４２からなるポリペプチド、配列番号４３からなるポリペプチド、配列番号４４からなるポリペプチド、配列番号４５からなるポリペプチド、配列番号４６からなるポリペプチド、配列番号４７からなるポリペプチド、配列番号４８からなるポリペプチド、配列番号４９からなるポリペプチド、配列番号５０からなるポリペプチド、配列番号５１からなるポリペプチド、配列番号５２からなるポリペプチド、配列番号５３からなるポリペプチド、配列番号５４からなるポリペプチド、配列番号５５からなるポリペプチド、配列番号５６からなるポリペプチド、配列番号５７からなるポリペプチド、配列番号５８からなるポリペプチド、配列番号５９からなるポリペプチド、および配列番号６０からなるポリペプチドのうちの１種以上を含むフェニキシンペプチドを結合する抗体。
【請求項１０】
配列番号２からなるポリペプチド、配列番号３からなるポリペプチド、配列番号４からなるポリペプチド、配列番号５からなるポリペプチド、配列番号６からなるポリペプチド、配列番号７からなるポリペプチド、配列番号８からなるポリペプチド、配列番号９からなるポリペプチド、配列番号１０からなるポリペプチド、配列番号１１からなるポリペプチド、配列番号１２からなるポリペプチド、配列番号１３からなるポリペプチド、配列番号１４からなるポリペプチド、配列番号１５からなるポリペプチド、配列番号１６からなるポリペプチド、配列番号１７からなるポリペプチド、配列番号１８からなるポリペプチド、配列番号１９からなるポリペプチド、配列番号２０からなるポリペプチド、配列番号２１からなるポリペプチド、配列番号２２からなるポリペプチド、配列番号２３からなるポリペプチド、配列番号２４からなるポリペプチド、配列番号２５からなるポリペプチド、配列番号２６からなるポリペプチド、配列番号２７からなるポリペプチド、配列番号２８からなるポリペプチド、配列番号２９からなるポリペプチド、配列番号３０からなるポリペプチド、配列番号３１からなるポリペプチド、配列番号３２からなるポリペプチド、配列番号３３からなるポリペプチド、配列番号３４からなるポリペプチド、配列番号３５からなるポリペプチド、配列番号３６からなるポリペプチド、配列番号３７からなるポリペプチド、配列番号３８からなるポリペプチド、配列番号３９からなるポリペプチド、配列番号４０からなるポリペプチド、配列番号４１からなるポリペプチド、配列番号４２からなるポリペプチド、配列番号４３からなるポリペプチド、配列番号４４からなるポリペプチド、配列番号４５からなるポリペプチド、配列番号４６からなるポリペプチド、配列番号４７からなるポリペプチド、配列番号４８からなるポリペプチド、配列番号４９からなるポリペプチド、配列番号５０からなるポリペプチド、配列番号５１からなるポリペプチド、配列番号５２からなるポリペプチド、配列番号５３からなるポリペプチド、配列番号５４からなるポリペプチド、配列番号５５からなるポリペプチド、配列番号５６からなるポリペプチド、配列番号５７からなるポリペプチド、配列番号５８からなるポリペプチド、配列番号５９からなるポリペプチド、および配列番号６０からなるポリペプチドを含む群から選択される精製されたポリペプチドのうちの１種以上を含む組成物であって、該ポリペプチドのうちの１種以上に応答する障害を処置するための、組成物。
【請求項１１】
細胞におけるシグナル伝達を調節するための組成物であって、該組成物は、配列番号２からなるポリペプチド、配列番号３からなるポリペプチド、配列番号４からなるポリペプチド、配列番号５からなるポリペプチド、配列番号６からなるポリペプチド、配列番号７からなるポリペプチド、配列番号８からなるポリペプチド、配列番号９からなるポリペプチド、配列番号１０からなるポリペプチド、配列番号１１からなるポリペプチド、配列番号１２からなるポリペプチド、配列番号１３からなるポリペプチド、配列番号１４からなるポリペプチド、配列番号１５からなるポリペプチド、配列番号１６からなるポリペプチド、配列番号１７からなるポリペプチド、配列番号１８からなるポリペプチド、配列番号１９からなるポリペプチド、配列番号２０からなるポリペプチド、配列番号２１からなるポリペプチド、配列番号２２からなるポリペプチド、配列番号２３からなるポリペプチド、配列番号２４からなるポリペプチド、配列番号２５からなるポリペプチド、配列番号２６からなるポリペプチド、配列番号２７からなるポリペプチド、配列番号２８からなるポリペプチド、配列番号２９からなるポリペプチド、配列番号３０からなるポリペプチド、配列番号３１からなるポリペプチド、配列番号３２からなるポリペプチド、配列番号３３からなるポリペプチド、配列番号３４からなるポリペプチド、配列番号３５からなるポリペプチド、配列番号３６からなるポリペプチド、配列番号３７からなるポリペプチド、配列番号３８からなるポリペプチド、配列番号３９からなるポリペプチド、配列番号４０からなるポリペプチド、配列番号４１からなるポリペプチド、配列番号４２からなるポリペプチド、配列番号４３からなるポリペプチド、配列番号４４からなるポリペプチド、配列番号４５からなるポリペプチド、配列番号４６からなるポリペプチド、配列番号４７からなるポリペプチド、配列番号４８からなるポリペプチド、配列番号４９からなるポリペプチド、配列番号５０からなるポリペプチド、配列番号５１からなるポリペプチド、配列番号５２からなるポリペプチド、配列番号５３からなるポリペプチド、配列番号５４からなるポリペプチド、配列番号５５からなるポリペプチド、配列番号５６からなるポリペプチド、配列番号５７からなるポリペプチド、配列番号５８からなるポリペプチド、配列番号５９からなるポリペプチド、および配列番号６０からなるポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの１種以上の十分量を含み、ここで、該細胞が該組成物と接触した後に、細胞内ｃＡＭＰもしくはＣａ２＋の生成が増大することを特徴とする、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
当然のことながら、本発明のさらなる目的は、本明細書の他の部分、図面、写真、および特許請求の範囲の全体をとおして開示される。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号２９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９および配列番号６０のうちのいずれか１つを含む、精製および単離されたポリペプチド。
（項目２）
配列番号２からなるポリペプチド、配列番号３からなるポリペプチド、配列番号４からなるポリペプチド、配列番号５からなるポリペプチド、配列番号６からなるポリペプチド、配列番号７からなるポリペプチド、配列番号８からなるポリペプチド、配列番号９からなるポリペプチド、配列番号１０からなるポリペプチド、配列番号１１からなるポリペプチド、配列番号１２からなるポリペプチド、配列番号１３からなるポリペプチド、配列番号１４からなるポリペプチド、配列番号１５からなるポリペプチド、配列番号１６からなるポリペプチド、配列番号１７からなるポリペプチド、配列番号１８からなるポリペプチド、配列番号１９からなるポリペプチド、配列番号２０からなるポリペプチド、配列番号２１からなるポリペプチド、配列番号２２からなるポリペプチド、配列番号２３からなるポリペプチド、配列番号２４からなるポリペプチド、配列番号２５からなるポリペプチド、配列番号２６からなるポリペプチド、配列番号２７からなるポリペプチド、配列番号２８からなるポリペプチド、配列番号２９からなるポリペプチド、配列番号３０からなるポリペプチド、配列番号３１からなるポリペプチド、配列番号３２からなるポリペプチド、配列番号３３からなるポリペプチド、配列番号３４からなるポリペプチド、配列番号３５からなるポリペプチド、配列番号３６からなるポリペプチド、配列番号３７からなるポリペプチド、配列番号３８からなるポリペプチド、配列番号３９からなるポリペプチド、配列番号４０からなるポリペプチド、配列番号４１からなるポリペプチド、配列番号４２からなるポリペプチド、配列番号４３からなるポリペプチド、配列番号４４からなるポリペプチド、配列番号４５からなるポリペプチド、配列番号４６からなるポリペプチド、配列番号４７からなるポリペプチド、配列番号４８からなるポリペプチド、配列番号４９からなるポリペプチド、配列番号５０からなるポリペプチド、配列番号５１からなるポリペプチド、配列番号５２からなるポリペプチド、配列番号５３からなるポリペプチド、配列番号５４からなるポリペプチド、配列番号５５からなるポリペプチド、配列番号５６からなるポリペプチド、配列番号５７からなるポリペプチド、配列番号５８からなるポリペプチド、配列番号５９からなるポリペプチド、および配列番号６０からなるポリペプチドのうちのいずれか１つからなる、項目１に記載の精製および単離されたポリペプチド。
（項目３）
前記精製および単離されたポリペプチドは、少なくとも１個の保存的アミノ酸置換を有する、項目１または２のいずれか１項に記載の精製されたポリペプチド。
（項目４）
前記少なくとも１個の保存的アミノ酸置換は、Ｌ型アミノ酸残基の、Ｄ型アミノ酸残基での置換を含む、項目４のいずれか１つに記載の精製されたポリペプチド。
（項目５）
前記精製および単離されたポリペプチドは、アミドＣ末端を有する、項目３に記載の精製されたポリペプチド。
（項目６）
前記精製および単離されたポリペプチドは、アセチルＮ末端を有する、項目３に記載の精製されたポリペプチド。
（項目７）
前記精製および単離されたポリペプチドは、アミドＣ末端を有する、項目５に記載の精製されたポリペプチド。
（項目８）
フェニキシンペプチドの検出のためのキットであって、該キットは、配列番号２からなるポリペプチド、配列番号３からなるポリペプチド、配列番号４からなるポリペプチド、配列番号５からなるポリペプチド、配列番号６からなるポリペプチド、配列番号７からなるポリペプチド、配列番号８からなるポリペプチド、配列番号９からなるポリペプチド、配列番号１０からなるポリペプチド、配列番号１１からなるポリペプチド、配列番号１２からなるポリペプチド、配列番号１３からなるポリペプチド、配列番号１４からなるポリペプチド、配列番号１５からなるポリペプチド、配列番号１６からなるポリペプチド、配列番号１７からなるポリペプチド、配列番号１８からなるポリペプチド、配列番号１９からなるポリペプチド、配列番号２０からなるポリペプチド、配列番号２１からなるポリペプチド、配列番号２２からなるポリペプチド、配列番号２３からなるポリペプチド、配列番号２４からなるポリペプチド、配列番号２５からなるポリペプチド、配列番号２６からなるポリペプチド、配列番号２７からなるポリペプチド、配列番号２８からなるポリペプチド、配列番号２９からなるポリペプチド、配列番号３０からなるポリペプチド、配列番号３１からなるポリペプチド、配列番号３２からなるポリペプチド、配列番号３３からなるポリペプチド、配列番号３４からなるポリペプチド、配列番号３５からなるポリペプチド、配列番号３６からなるポリペプチド、配列番号３７からなるポリペプチド、配列番号３８からなるポリペプチド、配列番号３９からなるポリペプチド、配列番号４０からなるポリペプチド、配列番号４１からなるポリペプチド、配列番号４２からなるポリペプチド、配列番号４３からなるポリペプチド、配列番号４４からなるポリペプチド、配列番号４５からなるポリペプチド、配列番号４６からなるポリペプチド、配列番号４７からなるポリペプチド、配列番号４８からなるポリペプチド、配列番号４９からなるポリペプチド、配列番号５０からなるポリペプチド、配列番号５１からなるポリペプチド、配列番号５２からなるポリペプチド、配列番号５３からなるポリペプチド、配列番号５４からなるポリペプチド、配列番号５５からなるポリペプチド、配列番号５６からなるポリペプチド、配列番号５７からなるポリペプチド、配列番号５８からなるポリペプチド、配列番号５９からなるポリペプチド、および配列番号６０からなるポリペプチドのうちの１種以上を含む、キット。
（項目９）
配列番号２からなるポリペプチド、配列番号３からなるポリペプチド、配列番号４からなるポリペプチド、配列番号５からなるポリペプチド、配列番号６からなるポリペプチド、配列番号７からなるポリペプチド、配列番号８からなるポリペプチド、配列番号９からなるポリペプチド、配列番号１０からなるポリペプチド、配列番号１１からなるポリペプチド、配列番号１２からなるポリペプチド、配列番号１３からなるポリペプチド、配列番号１４からなるポリペプチド、配列番号１５からなるポリペプチド、配列番号１６からなるポリペプチド、配列番号１７からなるポリペプチド、配列番号１８からなるポリペプチド、配列番号１９からなるポリペプチド、配列番号２０からなるポリペプチド、配列番号２１からなるポリペプチド、配列番号２２からなるポリペプチド、配列番号２３からなるポリペプチド、配列番号２４からなるポリペプチド、配列番号２５からなるポリペプチド、配列番号２６からなるポリペプチド、配列番号２７からなるポリペプチド、配列番号２８からなるポリペプチド、配列番号２９からなるポリペプチド、配列番号３０からなるポリペプチド、配列番号３１からなるポリペプチド、配列番号３２からなるポリペプチド、配列番号３３からなるポリペプチド、配列番号３４からなるポリペプチド、配列番号３５からなるポリペプチド、配列番号３６からなるポリペプチド、配列番号３７からなるポリペプチド、配列番号３８からなるポリペプチド、配列番号３９からなるポリペプチド、配列番号４０からなるポリペプチド、配列番号４１からなるポリペプチド、配列番号４２からなるポリペプチド、配列番号４３からなるポリペプチド、配列番号４４からなるポリペプチド、配列番号４５からなるポリペプチド、配列番号４６からなるポリペプチド、配列番号４７からなるポリペプチド、配列番号４８からなるポリペプチド、配列番号４９からなるポリペプチド、配列番号５０からなるポリペプチド、配列番号５１からなるポリペプチド、配列番号５２からなるポリペプチド、配列番号５３からなるポリペプチド、配列番号５４からなるポリペプチド、配列番号５５からなるポリペプチド、配列番号５６からなるポリペプチド、配列番号５７からなるポリペプチド、配列番号５８からなるポリペプチド、配列番号５９からなるポリペプチド、および配列番号６０からなるポリペプチドのうちの１種以上を含むフェニキシンペプチドを結合する抗体。
（項目１０）
配列番号２からなるポリペプチド、配列番号３からなるポリペプチド、配列番号４からなるポリペプチド、配列番号５からなるポリペプチド、配列番号６からなるポリペプチド、配列番号７からなるポリペプチド、配列番号８からなるポリペプチド、配列番号９からなるポリペプチド、配列番号１０からなるポリペプチド、配列番号１１からなるポリペプチド、配列番号１２からなるポリペプチド、配列番号１３からなるポリペプチド、配列番号１４からなるポリペプチド、配列番号１５からなるポリペプチド、配列番号１６からなるポリペプチド、配列番号１７からなるポリペプチド、配列番号１８からなるポリペプチド、配列番号１９からなるポリペプチド、配列番号２０からなるポリペプチド、配列番号２１からなるポリペプチド、配列番号２２からなるポリペプチド、配列番号２３からなるポリペプチド、配列番号２４からなるポリペプチド、配列番号２５からなるポリペプチド、配列番号２６からなるポリペプチド、配列番号２７からなるポリペプチド、配列番号２８からなるポリペプチド、配列番号２９からなるポリペプチド、配列番号３０からなるポリペプチド、配列番号３１からなるポリペプチド、配列番号３２からなるポリペプチド、配列番号３３からなるポリペプチド、配列番号３４からなるポリペプチド、配列番号３５からなるポリペプチド、配列番号３６からなるポリペプチド、配列番号３７からなるポリペプチド、配列番号３８からなるポリペプチド、配列番号３９からなるポリペプチド、配列番号４０からなるポリペプチド、配列番号４１からなるポリペプチド、配列番号４２からなるポリペプチド、配列番号４３からなるポリペプチド、配列番号４４からなるポリペプチド、配列番号４５からなるポリペプチド、配列番号４６からなるポリペプチド、配列番号４７からなるポリペプチド、配列番号４８からなるポリペプチド、配列番号４９からなるポリペプチド、配列番号５０からなるポリペプチド、配列番号５１からなるポリペプチド、配列番号５２からなるポリペプチド、配列番号５３からなるポリペプチド、配列番号５４からなるポリペプチド、配列番号５５からなるポリペプチド、配列番号５６からなるポリペプチド、配列番号５７からなるポリペプチド、配列番号５８からなるポリペプチド、配列番号５９からなるポリペプチド、および配列番号６０からなるポリペプチドを含む群から選択される精製されたポリペプチドのうちの１種以上に応答する障害を処置することを包含する、方法。
（項目１１）
細胞におけるシグナル伝達を調節する方法であって、該方法は、
ａ）細胞と、配列番号２からなるポリペプチド、配列番号３からなるポリペプチド、配列番号４からなるポリペプチド、配列番号５からなるポリペプチド、配列番号６からなるポリペプチド、配列番号７からなるポリペプチド、配列番号８からなるポリペプチド、配列番号９からなるポリペプチド、配列番号１０からなるポリペプチド、配列番号１１からなるポリペプチド、配列番号１２からなるポリペプチド、配列番号１３からなるポリペプチド、配列番号１４からなるポリペプチド、配列番号１５からなるポリペプチド、配列番号１６からなるポリペプチド、配列番号１７からなるポリペプチド、配列番号１８からなるポリペプチド、配列番号１９からなるポリペプチド、配列番号２０からなるポリペプチド、配列番号２１からなるポリペプチド、配列番号２２からなるポリペプチド、配列番号２３からなるポリペプチド、配列番号２４からなるポリペプチド、配列番号２５からなるポリペプチド、配列番号２６からなるポリペプチド、配列番号２７からなるポリペプチド、配列番号２８からなるポリペプチド、配列番号２９からなるポリペプチド、配列番号３０からなるポリペプチド、配列番号３１からなるポリペプチド、配列番号３２からなるポリペプチド、配列番号３３からなるポリペプチド、配列番号３４からなるポリペプチド、配列番号３５からなるポリペプチド、配列番号３６からなるポリペプチド、配列番号３７からなるポリペプチド、配列番号３８からなるポリペプチド、配列番号３９からなるポリペプチド、配列番号４０からなるポリペプチド、配列番号４１からなるポリペプチド、配列番号４２からなるポリペプチド、配列番号４３からなるポリペプチド、配列番号４４からなるポリペプチド、配列番号４５からなるポリペプチド、配列番号４６からなるポリペプチド、配列番号４７からなるポリペプチド、配列番号４８からなるポリペプチド、配列番号４９からなるポリペプチド、配列番号５０からなるポリペプチド、配列番号５１からなるポリペプチド、配列番号５２からなるポリペプチド、配列番号５３からなるポリペプチド、配列番号５４からなるポリペプチド、配列番号５５からなるポリペプチド、配列番号５６からなるポリペプチド、配列番号５７からなるポリペプチド、配列番号５８からなるポリペプチド、配列番号５９からなるポリペプチド、および配列番号６０からなるポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの１種以上の十分量とを接触させる工程；ならびに
ｂ）該１種以上のポリペプチドの該量と接触した該細胞の細胞内ｃＡＭＰもしくはＣａ２＋の生成を増大させる工程、
を包含する、方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
（組織ホモジネート抽出物および血漿におけるフェニキシンペプチドの検出）
ここで図６９を主に参照すると、これは、ＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）およびＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号９）に対応する天然のフェニキシンペプチドの組織分布および濃度をプロットする棒グラフを示す。心臓、肺、腎臓、脊髄、小腸、肝臓、膵臓、視床下部、脾臓、および胸腺のブタもしくはウシもしくはラットの組織のホモジネートを、上記のように調製し、得られた画分を上記ペプチド抽出手順によって処理し、ＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）に対して惹起された抗体を使用して、ラジオイムノアッセイ（「ＲＩＡ」）もしくは酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）によってアッセイした。ＡＧＩＶＱＥＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号７）に対して惹起された上記抗体はまた、ＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦ−ＮＨ２（配列番号９）と１００％交叉反応性であることが示されたが、ＤＶＱＰＰＧＬＫＶＷＳＤＰＦＧ（配列番号３）とは０．５％未満の交叉反応性であることが示された。上記アッセイ内変動性は、検出限界が約３４ピコグラム／ミリリットル（「ｐｇ／ｍＬ」）でかつＥＣ５０が約２００ｐｇ／ＭＬで約５％であった。タンパク質濃度を、製造業者Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，  Ｉｌｌｉｎｏｉｓのプロトコルに従って、ウシ血清アルブミン（「ＢＳＡ」）を標準物質として使用して、ビシンコニン酸（「ＢＣＡ」）タンパク質アッセイによって、決定した。データは、タンパク質１ｍｇあたりの免疫反応性フェニキシンペプチドにおける３回の二連のアッセイの結果の平均±ＳＥＭとして表される。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2014518881000001.app
【国際調査報告】
2014518881.tif 000083
2014518881.tif 000084
2014518881.tif 000085