(57)【要約】タンパク質ＴＲＦ２の調節物質である新規ペプチドおよびそれを含む組成物  本発明は以下の一般式（Ｉ）：  Ｒ１−（ＡＡ）ｎ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｘ４−（ＡＡ）ｐ−Ｒ２  のペプチド化合物に関する。  前記ペプチド化合物は、ＴＲＦ２タンパク質調節化合物として使用することができ、かつＤＮＡ二本鎖切断に対する予防作用を有し得る。さらに、本発明は、生理学的に許容される媒体中に一般式（Ｉ）の少なくとも１つのペプチドを含む化粧品組成物、および老化および光老化の皮膚症状を予防および／または治療するための化粧品組成物の美容的使用に関する。本発明は最後に、本発明による前記ペプチドを用いた美容処理方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（Ｉ）：
Ｒ１−（ＡＡ）ｎ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｘ４−（ＡＡ）ｐ−Ｒ２
のペプチド化合物であって、
式中、
前記Ｘ１はアスパラギン、グリシン、トレオニン、アラニン、または非アミノ酸を表し、
前記Ｘ２はイソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、または非アミノ酸を表し、
前記Ｘ３はトレオニン、アスパラギン、セリン、または非アミノ酸を表し、
前記Ｘ４はセリン、システイン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、または非アミノ酸を表し、
前記ＡＡは任意のアミノ酸を表し、前記ｎおよび前記ｐは０〜２の間の整数であり、
前記Ｒ１はＮ末端アミノ酸の第一級アミン官能基、−ＮＨ２を表し、２つの水素原子のうちの１つは、アセチル型の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ３０アルキル鎖によって、またはベンゾイル型、トシル型、またはベンジルオキシカルボニル型の芳香族基によって、置換されても置換されなくてもよく、
前記Ｒ２はＣ末端アミノ酸のカルボキシル官能基の水酸基、−ＯＨを表し、水素原子は、Ｃ１〜Ｃ３０のアルキル鎖、またはＮＨ２、ＮＨＹ、もしくはＮＹＹ基（ＹはＣ１〜Ｃ４のアルキル鎖を表す）で置換されても置換されなくてもよく、
前記一般式（Ｉ）の配列は、５〜１３のアミノ酸残基から成る、ペプチド化合物。
【請求項２】
請求項１に記載のペプチド化合物であって、前記ｎおよび前記ｐはゼロに等しく、かつ前記一般式（Ｉ）の配列は５〜９のアミノ酸残基から成ることを特徴とする、ペプチド化合物。
【請求項３】
請求項１または２に記載のペプチド化合物であって、該ペプチド化合物は下記の式：
（ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．１）Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−ＮＨ２
（ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．２）Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−ＮＨ２
（ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．３）Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ
（ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．４）Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−ＮＨ２
（ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．５）Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ
（ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．６）Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
のうちの１つに相当することを特徴とする、ペプチド化合物。
【請求項４】
請求項１〜３のうちいずれか一項に記載のペプチド化合物であって、該ペプチド化合物は、水、グリセロール、エタノール、プロパンジオール、ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、エトキシル化またはプロポキシル化ジグリコール、環状ポリオール、またはこれらの溶媒の任意の混合物から選択される１以上の生理学的に適した溶媒に可溶化することを特徴とする、ペプチド化合物。
【請求項５】
活性成分として請求項１〜４のうちいずれか一項に記載の前記ペプチド化合物、および化粧品学的に許容される媒体を含む化粧品組成物。
【請求項６】
請求項５に記載の組成物であって、該組成物は、クリーム、水中油型エマルション、または油中水型エマルション、または多重エマルション、溶液、懸濁液、マイクロエマルション、水性もしくは無水のゲル、血清もしくは小胞の分散体、パッチ、スプレー、軟膏、ポマード、ローション、コロイド、乳液、スティック、またはパウダーから選択される局所適用に適した形態であることを特徴とする、組成物。
【請求項７】
請求項５または６に記載の組成物であって、前記ペプチド化合物は、約０．１〜５００ｐｐｍの間の濃度で前記組成物中に存在することを特徴とする、組成物。
【請求項８】
請求項７に記載の組成物であって、前記ペプチド化合物は、約１〜１５０ｐｐｍの間の濃度で前記組成物中に存在することを特徴とする、組成物。
【請求項９】
請求項６〜８のうちいずれか一項に記載の組成物であって、該組成物はまた、植物ペプチド加水分解物、他のペプチド化合物、日焼け防止剤、抗フリーラジカル剤、または抗しわ剤から選択される少なくとも１つの他の活性成分を含むことを特徴とする、組成物。
【請求項１０】
老化の皮膚症状を予防および／または遅延および／または治療するための、請求項５〜９のうちいずれか一項に記載の組成物の美容的使用。
【請求項１１】
テロメア結合タンパク質（ＴＲＦ）の量を調節するため、および／または皮膚細胞における老化を遅延するための、請求項１０に記載の美容的使用。
【請求項１２】
請求項１１に記載の美容的使用であって、前記テロメア結合タンパク質は、ＴＲＦ２および／またはＰＯＴ１で表されることを特徴とする、美容的使用。
【請求項１３】
損傷時の皮膚細胞におけるＤＮＡ二本鎖切断の発生を予防するための、請求項１０に記載の美容的使用。
【請求項１４】
請求項１０に記載の美容的使用であって、前記老化の皮膚症状は、しわ、深くて起伏のあるしわ、小じわ、ひび割れ、皮膚および皮下組織のたるみ、皮膚の弾力性の喪失および弛緩、張りおよび色合いの喪失、ならびに皮膚萎縮であることを特徴とする、美容的使用。
【請求項１５】
皮膚の光老化における皮膚症状を予防および／または治療するための、請求項１０に記載の美容的使用。
【請求項１６】
外部ストレスから皮膚を保護するための、請求項１０に記載の美容的使用。
【請求項１７】
請求項１６に記載の美容的使用であって、前記外部ストレスは紫外線または酸化的ストレスであることを特徴とする、美容的使用。
【請求項１８】
老化の皮膚症状を予防および／または治療するために、請求項１〜４のうちいずれか一項において定義したペプチド化合物の有効量を含む組成物を、朝晩に皮膚に適用することによって特徴付けられる、美容処理方法。
【請求項１９】
テロメラーゼの量および／または活性を変更することなくテロメア分解を制限するために、請求項１〜４のうちいずれか一項において定義したペプチド化合物の有効量を含む組成物を定期的に適用することによって特徴付けられる、美容処理方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は化粧品の分野に関する。本発明はＴＲＦ２タンパク質調節化合物として、したがってテロメア保護作用およびＤＮＡ二本鎖切断に対する予防作用を有する、次の一般式（Ｉ）：
Ｒ１−（ＡＡ）ｎ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｘ４−（ＡＡ）ｐ−Ｒ２  （Ｉ）
のペプチド化合物に関する。化粧品組成物中に含まれる前記ペプチド化合物は、老化の皮膚症状を予防および／または遅延および／または治療することを目的としている。
【０００２】
老化はヒトを含む「通常」全ての細胞に影響を及ぼす生物学的過程である。理学的に、これは細胞が皮膚細胞、毛髪細胞、臓器細胞であることを問わず、人体の一般的な老化を含む。
【０００３】
老化は、特にテロメアの短縮化（複製老化）によって、または例えば、酸化ストレスなどの生理的ストレス信号への急性的または慢性的な暴露によって引き起こされることが科学的に実証されている。細胞老化を制限するため、したがってヒトの老化の兆候を制限するために調査される手段のうちの１つは、テロメアの短縮化に作用すること、および／またはＤＮＡに対する酸化ストレス作用を制限することから構成される。
【０００４】
テロメアは、配列ＴＴＡＧＧＧの繰り返しおよび特定のタンパク質により形成されている。テロメアは染色体の末端に位置し、かつその安定性を確保している。テロメアに結合するタンパク質の中には、二本鎖テロメアＤＮＡに直接結合するＴＲＦ１およびＴＲＦ２のタンパク質（ＴＲＦ：テロメア結合因子）、またはそれ自体が一本鎖３’末端に結合するＰＯＴ１タンパク質がある。細胞分裂において、ＴＴＡＧＧＧモチーフは複製の間の遷移において失われる。このテロメアの損失は、逆転写酵素のテロメラーゼによって部分的に補われる。テロメラーゼは既存のテロメア末端において新たにテロメア反復を合成し、それによって最適な長さを確保する。生じる問題は、このテロメラーゼの活性は体細胞において非常に低いことであり、それは各染色体複製においてテロメアの短縮をもたらす。現在のところ、皮膚の老化およびその兆候を制限するために使用されている戦略の１つは、皮膚細胞のテロメラーゼ活性を増加させることから成る。しかしながら、これは前記細胞の不死化につながり、それは不死化細胞が癌細胞に関連し得るために望ましくない。
【０００５】
出願人は、テロメア結合タンパク質、より具体的にはＴＲＦ２タンパク質の量を調節することにより、細胞老化の遅延を試みる別の手法を検討した。こうして、出願人は、次の一般式（Ｉ）：
Ｒ１−（ＡＡ）ｎ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｘ４−（ＡＡ）ｐ−Ｒ２  （Ｉ）
のペプチド化合物を開発した。
【０００６】
前記化合物により、テロメア結合タンパク質（ＴＲＦ）の量を調節して、老化の皮膚症状を予防および／または遅延および／または治療することが可能である。前記化合物はまた、細胞中に存在するＴＲＦタンパク質の量を調節することにより、損傷時の皮膚細胞におけるＤＮＡ二本鎖切断の発生を予防するのに有用である。
【０００７】
ＴＲＦタンパク質調節化合物、またはテロメア安定剤は、特許出願の米国特許出願公開第２００２００７６７１９号、国際公開第９８３６０６６号、または同第２００４０９２３９５号に記載されているように、以前に提案されている。しかしながら、上記の引用文献はいずれも本特許出願に開示されているようなペプチド化合物、または老化の皮膚症状と戦う作用薬としてのこのような化合物の美容的使用は、記載または開示していない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００２００７６７１９号明細書
【特許文献２】国際公開第９８３６０６６号
【特許文献３】国際公開第２００４０９２３９５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
したがって、本発明は、第１に、次の一般式（Ｉ）：
Ｒ１−（ＡＡ）ｎ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｘ４−（ＡＡ）ｐ−Ｒ２  （Ｉ）
のペプチド化合物に関する。
【００１０】
本発明は、第２に、活性成分として、前記式（Ｉ）のペプチド化合物を含む化粧品組成物に関する。
【００１１】
さらに、本発明は、第３に、老化の皮膚症状を予防および／または遅延および／または治療するための、前記式（Ｉ）のペプチド化合物を含む組成物の美容的使用に関する。特に、前記化粧品組成物は、（ｉ）テロメア結合タンパク質（ＴＲＦ）の量の調節、および／または皮膚細胞における老化の遅延に、（ｉｉ）損傷時の皮膚細胞におけるＤＮＡ二本鎖切断の発生の予防に、（ｉｉｉ）皮膚の光老化の皮膚症状の予防および／または治療に、最後に（ｉｖ）外部ストレスからの皮膚の保護に有用であり得る。
【００１２】
最後に、本発明は、第４に、テロメラーゼの量および／または活性を変更することなくテロメア分解を制限するために、前記式（Ｉ）のペプチド化合物を含む組成物を用いて処理される皮膚または皮膚付属器を美容処理する方法、または本発明によるペプチドを用いて美容処理する方法に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明によるペプチド化合物は以下により特徴付けられる：
【００１４】
−ペプチド化合物はテロメア結合タンパク質（ＴＲＦ）、特にＴＲＦ２タンパク質の量を調節する；
【００１５】
−ペプチド化合物は老化細胞表現型を有する細胞内のビメンチン細胞骨格タンパク質の増加および凝集を制限する；
【００１６】
−ペプチド化合物はメチルグリオキサールに暴露された皮膚の生検における損傷外観を制限する；および
【００１７】
−結論として、ペプチド化合物により、処理される細胞における老化症状を予防および／または遅延および／または治療することを可能とする。
【００１８】
本発明は、第１に、一般式（Ｉ）：
Ｒ１−（ＡＡ）ｎ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｘ４−（ＡＡ）ｐ−Ｒ２  （Ｉ）
のペプチド化合物に関し、
【００１９】
式中、
Ｘ１はアスパラギン、グリシン、トレオニン、アラニン、または非アミノ酸を表し、
【００２０】
Ｘ２はイソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、または非アミノ酸を表し、
【００２１】
Ｘ３はトレオニン、アスパラギン、セリン、または非アミノ酸を表し、
【００２２】
Ｘ４はセリン、システイン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、または非アミノ酸を表し、
【００２３】
ＡＡは任意のアミノ酸を表し、ｎおよびｐは０〜２の間の整数であり、
【００２４】
Ｒ１はＮ末端アミノ酸の第一級アミン官能基、−ＮＨ２を表し、２つの水素原子のうちの１つは、アセチル型の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ３０アルキル鎖によって、またはベンゾイル型、トシル型、またはベンジルオキシカルボニル型の芳香族基によって、置換されても置換されなくてもよく、
【００２５】
Ｒ２はＣ末端アミノ酸のカルボキシル官能基の水酸基、−ＯＨを表し、水素原子は、Ｃ１〜Ｃ３０のアルキル鎖、またはＮＨ２、ＮＨＹ、もしくはＮＹＹ基（ＹはＣ１〜Ｃ４のアルキル鎖を表す）で置換されても置換されなくてもよく、
【００２６】
前記一般式（Ｉ）の配列は、５〜１３のアミノ酸残基から成る。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
用語「ペプチド化合物」または「ペプチド」は、ペプチド結合または修飾ペプチド結合により互いに結合した２以上のアミノ酸の鎖を指す。
【００２８】
「ペプチド化合物」または「ペプチド」は、上記の本発明の天然または合成のペプチド、またはタンパク質分解により、もしくは合成的に得られるかどうかに関わらず、その断片の少なくとも１つ、または配列が上記のペプチド配列の全体または部分から成るあらゆる天然または合成のペプチドを意味する。
【００２９】
本発明によるペプチド化合物を構成するアミノ酸は、左旋性、つまりＬ−型、および／または右旋性、つまりＤ−型であり得る。したがって、本発明によるペプチドはＬ−、Ｄ−、またはＤＬ−の形態であり得る。
【００３０】
分解耐性を改善するために、本発明によるペプチドの保護された形態を使用する必要があり得る。保護の形態は明らかに生物学的に適合した形態でなければならず、かつ化粧品の分野での使用に適合しなければならない。好ましくは、Ｎ末端アミノ酸の第一級アミン官能基を保護するために、アセチル基または芳香族基から選択され得る、飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ３０アルキル鎖を有するアシル型によるＲ１基の置換が使用される。好ましくは、Ｃ末端アミノ酸のカルボキシル官能基を保護するために、Ｃ１〜Ｃ３０のアルキル鎖、またはＮＨ２、ＮＨＹ、もしくはＮＹＹ基（ＹはＣ１〜Ｃ４のアルキル鎖を表す）によるＲ２基の置換が使用される。
【００３１】
本発明によるペプチドは、Ｎ末端もしくはＣ末端、または両末端が保護され得る。
【００３２】
本発明の第１実施形態では、一般式（Ｉ）において、ｎおよびｐはゼロに等しく、一般式（Ｉ）の配列は５〜９のアミノ酸残基から成る。したがって、これは、一般式（Ｉ）において以下を意味する:
【００３３】
Ｘ１はアスパラギン、グリシン、トレオニン、アラニン、または非アミノ酸を表し、
【００３４】
Ｘ２はイソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、または非アミノ酸を表し、
【００３５】
Ｘ３はトレオニン、アスパラギン、セリン、または非アミノ酸を表し、
【００３６】
Ｘ４はセリン、システイン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、または非アミノ酸を表し、
【００３７】
整数ｎおよびｐはゼロに等しく、
【００３８】
Ｒ１はＮ末端アミノ酸の第一級アミン官能基、−ＮＨ２を表し、２つの水素原子のうちの１つは、アセチル型の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ３０アルキル鎖によって、またはベンゾイル型、トシル型、またはベンジルオキシカルボニル型の芳香族基によって、置換されても置換されなくてもよく、
【００３９】
Ｒ２はＣ末端アミノ酸のカルボキシル官能基の水酸基、−ＯＨを表し、水素原子は、Ｃ１〜Ｃ３０のアルキル鎖、またはＮＨ２、ＮＨＹ、もしくはＮＹＹ基（ＹはＣ１〜Ｃ４のアルキル鎖を表す）で置換されても置換されなくてもよく、
【００４０】
前記一般式（Ｉ）の配列は、５〜９のアミノ酸残基から成る。
【００４１】
第２の好ましい実施形態では、ペプチド化合物は以下の式のうちの１つに相当する：
【００４２】
（ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．１）Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−ＮＨ２
【００４３】
（ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．２）Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−ＮＨ２
【００４４】
（ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．３）Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ
【００４５】
（ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．４）Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−ＮＨ２
【００４６】
（ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．５）Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ
【００４７】
（ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．６）Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
【００４８】
本発明はまた、これらの配列の相同形態に関する。本発明による用語「相同」は、少なくとも５０％、または好ましくは少なくとも８０％、かつさらにより好ましくは少なくとも９０％、配列ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．１〜ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．６から選択される前記ペプチド配列と同一であるあらゆるペプチド配列を指す。語句「少なくともＸ％同一であるペプチド配列」は、２つの配列の最適アラインメント後に得られる、比較される２つの配列のアミノ酸残基間の同一性の割合を意味する。最適アラインメントは、例えば、ＮＣＢＩのサイトから入手可能なＢＬＡＳＴ  Ｐコンピュータソフトウェアプログラムによって使用されるような、局所相同性アルゴリズムにより得られる。
【００４９】
用語「相同」はまた、化学的に等価なアミノ酸による置換によって、すなわち同様の特性を有する他の残基による１残基の置換によって、配列ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．１〜ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．６のペプチド配列とは異なるペプチドも指す。したがって、一般的な置換は、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅの間で；ＳｅｒおよびＴｈｒの間で；酸残基のＡｓｐおよびＧｌｕの間で；ＡｓｎおよびＧｌｎの間で；および塩基性残基のＬｙｓおよびＡｒｇの間で；または芳香族残基のＰｈｅおよびＴｙｒの間で行われる。
【００５０】
本発明による一般式（Ｉ）のペプチドは、構成アミノ酸またはその誘導体を用いて、一般的な化学合成（固相中または均一な液相中で）、または酵素合成（Ｋｕｌｌｍａｎｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９８０；２２５：８２３４）のどちらかにより得ることができる。
【００５１】
本発明によるペプチドは、天然起源または合成起源であってもよい。好ましくは、本発明によれば、ペプチドは化学合成により得られる。
【００５２】
最後に、活性成分は、単一ペプチド、ペプチドの混合物、またはペプチド誘導体であってもよく、および／またはアミノ酸誘導体で構成されてもよい。
【００５３】
本発明の有利な実施形態によれば、本発明によるペプチド化合物は、例えば水、グリセロール、エタノール、プロパンジオール、ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、エトキシル化またはプロポキシル化ジグリコール、環状ポリオール、またはこれらの溶媒の任意の混合物などの、当業者によって一般的に使用される１以上の生理学的に適した溶媒に可溶化する。
【００５４】
本発明のさらに他の有利な実施形態によれば、本発明によるペプチド化合物は、化粧品学的または薬学的なベクター、例えばリポソームで可溶化され、または粉末状の有機ポリマー、無機物担体、例としてタルクおよびベントナイト上に吸着され、より一般的には任意の生理学的に適したベクターで可溶化、またはベクター上に固定される。
【００５５】
本発明は、第２に、活性成分として前記一般式（Ｉ）のペプチド化合物を含む化粧品組成物に関する。
【００５６】
好ましくは、本発明による組成物は、化粧品学的に許容される媒体を含む局所適用に適した形態である。「化粧品学的に許容される」により、我々は、毒性、不適合性、不安定性、アレルギー反応等の危険を伴わずに、ヒトの皮膚または皮膚付属器と接触して使用するのに適している媒体を意味している。皮膚に適用されることを目的とした組成物は、クリーム、水中油型エマルション、または油中水型エマルション、または多重エマルション、溶液、懸濁液、マイクロエマルション、水性もしくは無水のゲル、血清もしくは小胞の分散体、パッチ、スプレー、軟膏、ポマード、ローション、コロイド、乳液、ローション、スティック、またはパウダーの形態とすることができ、その全ては皮膚、口唇、および／または皮膚付属器への適用に適している。
【００５７】
好ましくは、前記ペプチド化合物は、約０．１〜５００ｐｐｍの間の濃度で、好ましくは１〜１５０ｐｐｍの間の濃度で組成物中に存在する。
【００５８】
さらにより好ましくは、本発明による組成物は、少なくとも１つの他の活性成分も含む。非限定的な方法にて、以下の種類の成分：植物ペプチド加水分解物、他のペプチド化合物、日焼け防止剤、抗フリーラジカル剤、または抗しわ剤を挙げることが可能である。また、ビタミンＣおよびその誘導体、ビタミンＢ群、ＤＨＥＡ（デヒドロエピアンドロステロン）、植物ステロール類、サリチル酸およびその誘導体、レチノイド類、フラボノイド類、糖アミン類、アゾール類、金属塩類、またはポリマー類を挙げることも可能である。
【００５９】
組成物はまた、治癒剤、抗老化剤、抗しわ剤、緩和剤、保湿剤、および抗炎症剤、ならびに分化、皮膚の色素沈着または色素脱失などを調節する作用薬を含むことができる。
【００６０】
より具体的な実施形態では、本発明による組成物は、式（Ｉ）のペプチド化合物に加えて、以下を含むことができる:
【００６１】
−１つ（以上）のシトクロムｃ活性化化合物、および／または；
【００６２】
−１つ（以上）のアクアポリン活性化化合物、および／または；
【００６３】
−１つ（以上）のサーチュイン活性化化合物、および／または；
【００６４】
−細胞接着を増加させる１つ（以上）の化合物、および／または；
【００６５】
−コラーゲン型またはラミニン型等のマトリックスタンパク質の産生を増加させる１つ（以上）の化合物；
【００６６】
−１つ（以上）のｈｓｐタンパク質調節化合物；
【００６７】
−細胞エネルギーを増加させる１つ（以上の）化合物；
【００６８】
−皮膚バリア機能を向上させる１つ（以上）の化合物；
【００６９】
−例えばＣｌｏｃｋ、Ｐｅｒ１、またはＢｍａｌのタンパク質を調節する作用薬など、細胞同調を改善する１つ（以上）の化合物；
【００７０】
−１つ（以上）のミトコンドリア保護化合物。
【００７１】
上述の前記化合物は、天然起源、例えば植物ペプチドまたは非ペプチドの加水分解物、または合成起源、例えばペプチド化合物であってもよい。
【００７２】
さらに、添加物、例えば溶媒、希釈剤、色素、日焼け防止剤、セルフタンニング剤、顔料、賦形剤、防腐剤、臭気吸収剤、増粘剤、乳化剤、湿潤剤、皮膚軟化剤、香料、酸化防止剤、膜形成剤、キレート剤、金属イオン封鎖剤、および調整剤などを組成物に加えることが可能である。
【００７３】
全ての場合において、補助剤およびその割合は、本発明による組成物の所望の有利な特性に悪影響を与えないように選択されることを当業者は確認するであろう。これらの補助剤は、例えば組成物の全重量の０．０１〜２０％の間とすることができる。本発明の組成物がエマルションのとき、脂肪相は組成物の全重量に対して、５〜８０重量％、好ましくは５〜５０重量％とすることができる。組成物に使用される乳化剤および共乳化剤は、検討される分野で一般的に使用される乳化剤および共乳化剤の中から選択することができる。例えば、それらは組成物の全重量に対して０．３〜３０重量％の割合範囲で使用することができる。
【００７４】
本発明は、第３に、老化の皮膚症状を予防および／または遅延および／または治療するための、化粧品学的に許容される媒体中に前記ペプチド化合物を含む組成物の美容的使用に関する。「老化の皮膚症状」は、限定されるものではないが、老化によって引き起こされる皮膚上の目に見えるあらゆる兆候を含む。これは特に、しわ、深くて起伏のあるしわ、小じわ、ひび割れ、皮膚および皮下組織のたるみ、皮膚の弾力性の喪失および弛緩、張りおよび色合いの喪失、ならびに皮膚萎縮を意味する。さらに、「老化の皮膚症状」は、真皮および表皮における、拡大した毛穴、不完全性、褪色、シミ、角化症、コラーゲンの損失、および他の変化を指すだけでなく、例えば角質層の表面粗さなどの老化による皮膚および皮膚付属器の外観のすべての変化、また、例えば真皮の菲薄化など、変化した外面を系統的に伴わない皮膚のあらゆる内部変化も指す。
【００７５】
本発明の第１実施形態では、前記化粧品組成物はテロメア結合タンパク質の量を調節し、および／または皮膚細胞の老化を遅延することを可能とする。語句「テロメア結合タンパク質（ＴＲＦ）の量を調節する」は、細胞内に存在するＴＲＦタンパク質の量を増加または減少させること、または（遺伝子発現の直接的または間接的な調節により、または）例えばＲＮＡメッセンジャー転写物の安定化／不安定化などの他の生物学的過程により、ＴＲＦタンパク質のタンパク質合成を増加／減少させることを指す。好ましくは、ＴＲＦタンパク質はＴＲＦ２および／またはＰＯＴ１タンパク質で表される。
【００７６】
本発明の第２の好ましい実施形態では、化粧品組成物は損傷時の皮膚細胞におけるＤＮＡ二本鎖切断の発生を予防するために使用される。実際に、皮膚細胞が負う損傷、特に紫外線または酸化ストレスによる損傷において、前記細胞のＤＮＡは二本鎖切断によって現れる損傷を受ける可能性がある。本発明によるペプチド化合物は、この種の損傷に対するペプチド化合物のＤＮＡ保護作用を実証した。
【００７７】
本発明によるペプチドの他の使用は、皮膚の光老化における皮膚症状の予防および／または治療から成る。「光老化」は、太陽への長時間、かつ累積的な曝露によって引き起こされる皮膚の早期老化を指す。
【００７８】
本発明によるペプチドは、外部ストレスから皮膚を保護するために使用することも可能である。「外部ストレス」は、環境によって生成され得るストレスを指す。例えば、汚染、紫外線、酸化ストレスを引き起こすストレス、または刺激性の製品、例えば界面活性剤、防腐剤、もしくは香料など、機械的ストレス、例えば表皮剥脱、シェービング、もしくは脱毛などのストレスを挙げることができる。しかしながら、好ましくは、外部ストレスは主に紫外線、特にＵＶＢ放射から成り、ストレスは酸化ストレスを引き起こす。
【００７９】
最終的に、本発明は、老化の皮膚症状を予防および／または治療するために、上記に定義したペプチド化合物の有効量を含む組成物を朝晩に皮膚に適用することを特徴とする美容処理方法に最後に関する。本発明の別の実施形態は、テロメラーゼの量および／または活性を変更することなくテロメア分解を制限するために、本発明による組成物を用いた皮膚の美容処理方法を実施することを含む。実際には、本発明によるペプチドは、テロメラーゼの活性および／または量に影響を与えることなく、テロメア分解を安定化および／または制限することを可能とする。したがって細胞不死化の危険性がないであろうため、それは重要なことである。
【００８０】
以下の実施例は、本発明に記載のペプチド化合物の効力を説明および実証するが、本発明を限定するものとして解釈してはならない。
【実施例１】
【００８１】
複製老化によって老化した線維芽細胞に対するペプチドＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．２の効果の研究
ヒト線維芽細胞を特定の培地中で培養し、培養培地中に保持して１％または３％の濃度のペプチドＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．２を毎日適用して長期処理する（１７継代超）。ビメンチン免疫蛍光検出実験を培養継代６および１７の細胞において行う。その後、細胞をＰＢＳで洗浄し、３．７％のホルムアルデヒドで１０分間固定し、０．２％トリトンＸ−１００により１０分間透過処理し（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）、かつ１％のＢＳＡ（Ｅｕｒｏｍｅｄｅｘ社）で１５分間インキュベートする。その後、抗ビメンチン抗体（Ｔｅｂｕ  Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ社）を添加し、室温で２時間、１／２００に希釈してインキュベートする。ＰＢＳで洗浄した後、標識Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８と結合したロバ抗マウスＩｇＧ抗体を１／１０００に希釈して添加し、室温で１時間インキュベートする。最後に、切片をＦｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ  Ｇ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ社）に載せ、顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ８０ｉ、４０倍拡大）で観察する。
【００８２】
結果／結論：
ペプチドＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．２で処理した老化線維芽細胞は、処理されてない老化線維芽細胞よりも少ないビメンチンを発現することに留意される。ビメンチンの増加および凝集は、老化現象を伴う細胞骨格における修飾に関連する。したがって、本発明によるペプチド化合物ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．２を用いた処理により、線維芽細胞の老化によるビメンチンの増加および凝集を制限することが可能となったと結論付けることができる。
【実施例２】
【００８３】
メチルグリオキサールを用いてインビトロで老化された生検モデルに対するペプチドＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．４の効果の研究
ヒトの皮膚生検をメチルグリオキサール（ＭＧＯ）で処理することにより、インビトロで人為的に老化させる。このために、６ｍｍのヒトの皮膚パンチ生検を特定の培養培地中で気液界面にてインキュベートする。その後、これらを５ｍＭまたは１０ｍＭのＭＧＯ（Ｓｉｇｍａ社）で処理し、ＭＧＯは生検の表面および培養培地中に堆積する。その後、生検を以下の条件で処理する：
【００８４】
−条件１：２０μＬのＰＢＳ１倍、または
【００８５】
−条件２：２０μＬのペプチドＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．４  １％、または
【００８６】
−条件３：２０μＬのペプチドＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．４  ３％。
【００８７】
生検を固定し、パラフィンに包埋させた後、ミクロトームを用いて４μｍの切片に切断する。ヘマトキシリン／エオシン（Ｈ＆Ｅ）免疫標識を先に切断した断片において行い、それらの形態および構造を顕微鏡観察（Ｎｉｋｏｎ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｅ６００顕微鏡を用いて、対物レンズ４０倍）で調査する。
【００８８】
結果／結論:
対照１条件、すなわちペプチドの添加なしでは、ＭＧＯは皮膚生検、より具体的にはその構造に著しい損傷をもたらしたことに留意される。より多くの損傷がＭＧＯの１０μＭの量で観察されるので、引き起こされた損傷は用量依存的である。
【００８９】
生検がペプチド化合物ＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．４で処理されるとき、前記生検の構造に与えた損傷は、対照条件下よりもはるかに小さいことに留意される。より少ない損傷が１％の用量よりも３％の用量で観察されるので、ペプチドの保護効果は用量依存的であることに留意される。
【００９０】
したがって、細胞構造が重大な損傷および早期老化をもたらすストレスにさらされるときに、ペプチドＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．４は細胞構造に対して保護効果を有していたと結論付けることができる。
【実施例３】
【００９１】
ペプチドＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．２で処理したヒト線維芽細胞におけるｓｉＲＮＡによるＴＲＦ２タンパク質の発現の研究
ヒト線維芽細胞集団におけるＴＲＦ２の過剰発現に対する本発明によるペプチド化合物の効力を定量化するために、ＴＲＦ２をコードする遺伝子をｓｉＲＮＡ技術を用いて「オフ状態」とした。
【００９２】
手順：
繊維芽細胞を６０％集密するまで６ウェルプレート中で培養する。以下に記載の条件下で１％のペプチドＳＥＱ  ＩＤ  ｎｏ．２を追加することで培養培地を新しくする。その後、最終的に１０ｎＭのＴＲＦ２ｓｉＲＮＡおよびトランスフェクション剤を含む前もって作成した１００μＬの混合物を、一度に一滴、かつ一度に１ウェルにゆっくりと添加する。細胞培養プレートを３７℃で５％のＣＯ２中で７２時間インキュベートする。培養培地を２日ごとに新しくする。４つの条件を以下の通り確立した：
【００９３】
−条件１：ｓｉＲＮＡなし、かつ活性剤なしの対照
【００９４】
−条件２：活性剤なしで、ｓｉＲＮＡでトランスフェクトされた細胞
【００９５】
−条件３：トランスフェクトされていないが、活性剤で処理した細胞
【００９６】
−条件４：ｓｉＲＮＡでトランスフェクトされ、かつ活性剤で処理した細胞
【００９７】
ＴＲＦ２発現の定量化を、抗ＴＲＦ２抗体を用いて行われる一般的な免疫移動（ｉｍｍｕｎｏｔｒａｎｓｆｅｒ）技術（ウェスタンブロット法）により、かつ一般的な手順に従って観察する。ｓｉＲＮＡでトランスフェクトされた線維芽細胞中のペプチドによってもたらされる補償を分析するために、遺伝子がｓｉＲＮＡによってオフされなかった未処理の線維芽細胞と比較する。
【００９８】
結果／結論:
条件１と３との間では、ペプチドの添加により、対照に対してＴＲＦ２タンパク質の発現において１７％の増加がもたらされたことに留意される。条件１と２との間では、ＴＲＦ２タンパク質の発現に対するｓｉＲＮＡの効果は、明確に示される：実質的に２６％減少する。しかしながら、ｓｉＲＮＡでトランスフェクトされた細胞への活性剤の添加により、ＴＲＦ２発現を回復することが可能となり、かつｓｉＲＮＡの存在による減少は対照条件に対して１８％以下である。
【００９９】
結論として、本発明による活性剤は、処理された線維芽細胞におけるＴＲＦ２タンパク質発現の減少（特定のｓｉＲＮＡによって誘導された減少）を補うことが可能である。
【実施例４】
【０１００】
抗老化フェースクリームの組成
【０１０１】
【表１】
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【０１０２】
相Ａを６５−７０℃で調製および溶解する。相Ｃを６５−７０℃で加熱する。相Ｂを相Ａに添加し、その直後にＡをＣ中で乳化する。約４５℃で、相Ｄを添加してカルボマーを中和する。その後、約３０℃で相Ｅを軽く撹拌しながら添加し、２５℃になるまで冷却を継続する。その後、必要に応じて相Ｆを添加する。
【配列表】
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【国際調査報告】
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