(57)【要約】本発明は、ベンガルボダイジュ、ハス、およびクローバーのセラム画分を含む組成物に関する。老化皮膚の外観を改善する方法は、有効量のベンガルボダイジュセラム画分、ハスセラム画分、およびクローバーセラム画分を含む組成物を、皮膚表面上の老化の徴候に適用するステップであって、組成物は、老化皮膚の外観を改善するために十分な期間適用されるステップを含み得る。この方法は、顔の皮膚表面上の老化の徴候を特定するステップを含み得る。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
局所適用される皮膚用組成物を調合する際の使用に適したセラム画分ブレンドであって、
ａ．ベンガルボダイジュセラム画分；
ｂ．ハスセラム画分；および
ｃ．クローバーセラム画分
を含む、セラム画分ブレンド。
【請求項２】
前記ベンガルボダイジュ、ハス、およびクローバーのセラム画分のそれぞれが、
ａ．清浄で新鮮で萎れていない植物物質から植物細胞ジュースを分離して、新鮮な細胞ジュースを得るステップであって、前記分離の前または間に外来性液体が加えられないステップ；
ｂ．前記新鮮な細胞ジュースをろ過して、繊維を含まない細胞ジュースを得るステップ；および
ｃ．前記繊維を含まない細胞ジュースを分画して、前記セラム画分を得るステップ
を含む方法によって製造される、請求項１に記載のセラム画分ブレンド。
【請求項３】
ａ．０．００１％〜１５％のベンガルボダイジュセラム画分；
ｂ．０．００１％〜１５％のハスセラム画分；および
ｃ．０．００１％〜１５％のクローバーセラム画分
を含む、請求項１に記載のセラム画分ブレンド。
【請求項４】
ａ．０．００２％〜１０％のベンガルボダイジュセラム画分；
ｂ．０．００２％〜１０％のハスセラム画分；および
ｃ．０．００２％〜１０％のクローバーセラム画分
を含む、請求項１に記載のセラム画分ブレンド。
【請求項５】
ａ．０．０２５％〜１０％のベンガルボダイジュセラム画分；
ｂ．０．０２５％〜１０％のハスセラム画分；および
ｃ．０．０２５％〜１０％のクローバーセラム画分
を含む、請求項１に記載のセラム画分ブレンド。
【請求項６】
ａ．０．０５％〜５％のベンガルボダイジュセラム画分；
ｂ．０．０５％〜５％のハスセラム画分；および
ｃ．０．０５％〜５％のクローバーセラム画分
を含む、請求項１に記載のセラム画分ブレンド。
【請求項７】
ヒト表皮におけるクローディン−１およびアクアポリン−３の統計的に有意な上向き調節によって証明される、水分およびバリア機能の正の増加において有効である、請求項１に記載のセラム画分ブレンド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ベンガルボダイジュ、ハス、およびクローバーのセラム画分を含む組成物に関する。本発明はまた、ベンガルボダイジュ、ハス、およびクローバーのセラム画分を含む組成物を使用して、加齢哺乳動物の皮膚の外観を改善する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
表皮（皮膚の最外層）は、４つの層、すなわち、角質層（stratum corneum）、顆粒層、有棘層、および基底層からなる細胞連続体を含む。基底表皮角化細胞が、基底層から上方に移動して、増殖、分化、および細胞死の連続周期を受け、最終的に角質細胞を生成する過程に沿って、表皮の各細胞層は、様々な段階を示す。これらの角質細胞は、角質層として知られる角化層を形成する。
【０００３】
基底角化細胞は、表皮の下位部に存在する。これらの有糸分裂的に活性な細胞は、増殖周期を受け、有棘層および顆粒層中へと上方に物理的に移動される娘細胞を生成し、角質細胞への分化の進行を受ける。有棘細胞および顆粒細胞の層を通過すると、細胞は、それらがそれらの細胞生存性を失う場合に、それらを構造でより扁平にさせる形態変化を受け、代わりのケラチン発現プロファイルを受け、細胞残片に変わる。概して、若い表皮は、約１ヶ月で代謝回転し、老いた細胞を落とし、これらを新しいものと置き換えるが、この過程は、老いた皮膚では４０日を超えるまで増加し得る。
【０００４】
角質層の角質細胞は、タンパク質および脂質を介して他のものに接続されたままであり、生物体とその外部環境の間の保護バリアを作り出す。この厳重に調節された表皮透過性バリアは、化学的および生物的攻撃に対して物理的および選択的バリアとして機能する。このバリアの重要な機能としては、より深い層中へのフリーラジカルの透過の弱化、およびＵＶ線を含む有害な放射線の透過の予防が挙げられる。角質層はまた、透過性バリアとしても作用し、外部環境への身体水分の喪失を防止するように機能する。このバリアの機能不全は、慢性皮膚状態、疾患をもたらし、極端な場合には、生物体の生存可能性を脅かすことさえある。
【０００５】
皮膚老化は、紫外線（ＵＶ）暴露、環境毒、汚染物質、および喫煙を含む、内在性（経時的老化）因子および外来性（環境）因子の両方により促進された多因子過程である。皮膚の新しい層を周期的に生成する角質層の能力は、年齢とともに減少し、その結果、角質層の代謝回転率は、老いた皮膚で実質的に減少し、角化層は次第により薄くなることが当該技術分野において周知である。これは、バリアの機能性能力の減少をもたらし、その結果、有害な刺激物が角質層により容易に透過し、例えば、下にある皮膚層のＵＶ損傷、コラーゲンおよびエラスチンの分解をもたらし、最終的に皺および皮膚萎縮として外観に現れる。内在性および外来性加齢因子の総和による角質層の薄化は、細線および皺の目視可能な外観を増加させる。さらに、バリアは、フリーラジカルに対する老化関連性の透過性の増加および細胞間マトリックス中の脂質の量の減少を被り、より深い層から毒素を拡散するバリア能を低下させる。環境による攻撃に対するバリアの回復能も、年齢とともに実質的に低下する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上に述べたように、皮膚のバリア機能は、老化皮膚の外観からそれ自体を再生および保護する皮膚の能力にとって重要である。したがって、皮膚のバリア機能を改善し、さらにまた老化皮膚の外観を改善し得る組成物および処置の方法を提供することが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、ベンガルボダイジュ、ハス、およびクローバーのセラム画分ならびにこれらの混合物および／または組合せを含む組成物に関する。一実施形態において、本発明の組成物は、ベンガルボダイジュ、ハスおよびクローバーのセラム画分を含む。
【０００８】
有効量のベンガルボダイジュセラム画分とハスセラム画分とクローバーセラム画分とのブレンドを含む第１の組成物を老化皮膚の領域に適用するステップを含む、老化皮膚の外観を改善する方法であって、組成物は、老化皮膚の外観を改善するために十分な期間適用される、方法。ある実施形態において、組成物は、皮膚科学的に許容される担体も含む。
【０００９】
一部の実施形態において、老化皮膚の領域は、顔の老化皮膚である。特定の実施形態において、老化皮膚の外観の改善として、皺、細線、粗く深い線、割れ目、隆起、大きな穴の外観の改善；角質組織を厚くすること（例えば、皮膚の表皮および／または真皮および／または皮下層の構築）；皮膚−表皮境界の畳み込み（表皮突起としても知られる）の増加；美白；例えば、機能性皮膚エラスチンの損失、損傷および／または不活性化（弾性線維症、たるみ、変形からの皮膚反跳の損失などの状態をもたらす）による、皮膚弾力性の損失の予防；目の下の隈、斑点（例えば、酒さによる不均一な赤い着色）、血色の悪さ、色素沈着過剰に起因する皮膚の変色など；ならびにこれらの組合せが挙げられる。
【００１０】
背景で特定された問題に応じて、本発明は、他の形態を取ってもよい。本発明のさらなる形態は、以下に続く詳細な説明で理解される。
【００１１】
本発明は、添付の図面と併せて行われる以下の説明からより良く理解されると考えられる。参照される図面は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、ベンガルボダイジュ、クローバー、およびハスのセラム画分が、角化細胞アッセイにおいて、別個におよびブレンドとして評価される場合、アクアポリン−３（ＡＱＰ３）およびクローディン−１の上向き調節を示す棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
特に断りのない限り、本明細書で使用されるパーセントおよび比率のすべては、全組成物の重量によっており、行われる測定のすべては、２５℃においてである。数値範囲のすべては、より狭い範囲を含み；線引きされた上位および下位の範囲限界は、明示的に線引きされないさらなる範囲をもたらすために入れ替え可能である。
【００１４】
本発明の組成物は、本明細書で記載される必須成分および任意選択成分を含む、それらから本質的になる、またはそれらからなることができる。本明細書で使用される場合、「本質的になる」は、組成物または成分がさらなる成分を含んでもいてもよいが、さらなる成分が、特許請求の範囲で記載される組成物または方法の基本的および新規な特性を実質的に変更しない場合に限ることを意味する。
【００１５】
組成物への言及で使用される場合の「適用する」または「適用」という用語は、本発明の組成物を表皮などのヒトの皮膚表面上に適用するまたは広げることを意味する。
【００１６】
本明細書で使用される場合の「皮膚科学的に許容される」という用語は、記載される組成物または成分が、過度の毒性、不適合性、不安定性、アレルギー反応などがなく、ヒトの皮膚組織と接触して使用するために適していることを意味する。
【００１７】
本明細書で使用される場合の「有効量」という用語は、正の外観を有意に生じさせるおよび／または利点を感じるために十分であるが、重篤な副作用を回避するために（すなわち、当業者の健全な判断の範囲内で、危険比に対して合理的な利益を与えるために）十分低い、化合物または組成物の量を意味する。本明細書で使用される場合、ベンガルボダイジュと、ハスと、クローバーとのブレンドに関連した「有効量」は、正の外観を有意に生じさせるおよび／または利点を感じるために十分であるが、重篤な副作用を回避するために（すなわち、当業者の健全な判断の範囲内で、危険比に対して合理的な利益を与えるために）十分低い、３種の材料の組合せの量を意味する。
【００１８】
本明細書で使用される場合の「炎症後の色素沈着過剰」という用語は、一過性の炎症事象に対する反応としての色素沈着の急性から慢性の増加を指す。炎症後の色素沈着過剰は、限定されるものではないが、浅黒い皮膚対象に特によく見られる。炎症後の色素沈着過剰は、典型的には一過性炎症事象が消散後にすぐに治まる。一過性炎症事象の例には、限定されるものではないが、座瘡病変、内方発育毛、引掻き、虫刺され、界面活性剤損傷、および短期ＵＶ暴露が含まれる。
【００１９】
本明細書で使用される場合の「色素沈着過剰スポット」は、メラニンの局所化した慢性または全身性の過剰産生によって、色素沈着が、皮膚の隣接領域の色素沈着よりも大きい、皮膚の明確な領域を指す。色素沈着過剰スポットは、典型的には、直径で約２ｍｍから約１０ｍｍであるが、より小さいまたはより大きいスポットも可能である。色素沈着過剰スポットには、加齢染み（age spot）、日焼けスポット、日光性黒子、低メラニン性病変、そばかす、および肝斑スポットの１種または複数が含まれ得る。
【００２０】
本明細書で使用される場合の「加齢染み」は、色素沈着が、内在性または外来性の加齢因子に起因するメラニンの局所化した慢性的過剰産生による老化スポットを指す。
【００２１】
本明細書で使用される場合の「皮膚色調剤」は、メラニン産生シグナル、メラニンの合成、メラニン細胞と角化細胞の間のメラニンの全身性移動、および／またはメラニン分解を調節する薬剤である。皮膚色調剤は、美白化または色素沈着低下の化粧剤として作用することによって、均一でない皮膚色調の外観を改善し得る。
【００２２】
本明細書で使用される場合の「皮膚色調」は、メラニンの一過性よりはむしろ全身性の合成に起因する皮膚におけるメラニンの全体的な外観を指す。皮膚色調は、典型的には皮膚のより大きな領域にわたって特徴づけられる。領域は、理想的には１００ｍｍ２を超えていてもよいが、より大きな領域、例えば、顔の皮膚の全体または顔の皮膚表面のいずれかなどが想定される。皮膚色調は、イメージ分析により測定され得る。例えば、全体の明度は、Ｌ＊ａ＊ｂ＊色空間のＬ＊座標によって測定され得る（国際照明委員会(International Commission on Illumination)）。メラニンマッピングおよびメラニン濃度などの発色団マッピングが、全体の皮膚色調の指標として使用され得る。平均メラニンは、発色団マップデータから計算され得る。さらに、皮膚色調の均一性は、発色団マップデータからもまた計算できるメラニン均一性によって決定され得る。適切な発色団マッピング手法は、以下の実施例で検討される。
【００２３】
本明細書で使用される場合の「顔の皮膚表面」という用語は、額、眼窩周囲、頬、口周囲、顎、および鼻の皮膚表面の１つまたは複数を指す。
【００２４】
本明細書で使用される場合の「皮膚ケア活性剤」または「活性剤」は、皮膚に適用される場合、皮膚に利点または改善を与える化合物を意味する。
【００２５】
「老化皮膚の外観の改善」は、皮膚外観および／または感触において視覚的および／または触覚的に知覚可能な正の変化、または利点をもたらすことを意味する。本明細書で使用される場合、「老化皮膚の外観の改善」はまた、老化皮膚の外観の予防または遅延を含む。与えられ得る利益には、限定されるものではないが、以下、すなわち、皺および粗く深い線、細線、割れ目、隆起、大きな穴の外観の減少；角質組織を厚くすること（例えば、皮膚の表皮および／または真皮および／または皮下層の構築）；皮膚−表皮境界の畳み込み（表皮突起としても知られる）の増加；美白；例えば、機能性皮膚エラスチンの損失、損傷および／または不活性化（弾性線維症、たるみ、変形からの皮膚反跳の損失などの状態をもたらす）による、皮膚弾力性の損失の予防；皮膚に対する着色の変化、例えば、目の下の隈、斑点（例えば、酒さによる不均一な赤い着色）、血色の悪さ、色素沈着過剰に起因する変色などの１つまたは複数が含まれる。
【００２６】
本明細書で使用される場合の「皮膚老化の徴候」には、限定されるものではないが、皮膚老化による、任意のマクロまたはミクロ効果のみならず、外見上目視的および触覚的に知覚できる全ての徴候が含まれる。これらの徴候は、限定されるものではないが、きめの不連続性（例えば、皺および粗く深い皺、細線、皮膚線、割れ目、隆起、大きな穴、不均一性または粗さ）の発生；皮膚弾力性の損失；変色（目の下の隈を含む）；斑点；血色の悪さ；色素沈着過剰の皮膚領域（加齢染みおよびそばかすなど）；ケラトース；異常分化；角化亢進；弾力線維症；コラーゲン破壊、ならびに［角質層、真皮、表皮、脈管系（例えば、毛細血管拡張症またはクモ状脈管）および下層組織（例えば、脂肪および／または筋肉）、特に皮膚に対して隣接したもの］における他の組織学的変化、を含む過程から生じ得る。
【００２７】
本明細書で使用される場合、「色素沈着過剰」は、色素沈着が、皮膚の隣接する領域のものより大きい皮膚の領域（例えば、色素斑、加齢染みなど）を指す。
【００２８】
本明細書で使用される場合の「落屑（desquamation）、剥脱（exfoliation）、および／または代謝回転」は、角質層（角質層（horny layer）を含む）の上層の除去を意味する。
【００２９】
本明細書で使用される場合の「血色の悪さ」は、皮膚成分の損失、それへの損傷、それへの変化、および／またはそれにおける異常の結果として起こり、その結果、それらが、タンパク質糖化およびリポフスチンの蓄積などの過程によって、または典型的には皮膚老化に伴う末梢血流の低下において、着色される（例えば、色で黄色）、皮膚の蒼白な色、黄色の色などの状態を意味する。
【００３０】
本明細書で使用される場合、「外来性溶媒」は、生来的に植物材料中に存在しないが、化合物を植物材料から分離する（例えば、抽出する）ために植物材料と接触して置かれる任意の溶媒を意味する。
【００３１】
１．組成物
本発明は、様々な組成物に関し、より具体的には、皮膚表面への適用のための組成物に関する。組成物は、限定されるものではないが、溶液、懸濁液、ローション、クリーム、ゲル、トナー、スティック、ペンシル、スプレー、エアゾール、軟膏、クレンジング洗浄液およびソリッドバー、シャンプーおよびヘアコンディショナー、ペースト、フォーム、パウダー、ムース、シェービングクリーム、拭き取り布、ストリップ、パッチ、電動パッチ、創傷包帯およびガーゼ付き絆創膏、ヒドロゲル、膜形成製品、顔面マスクおよび皮膚マスク（不溶性シートを有するまたは有しない）、化粧品（ファンデーション、アイライナー、およびアイシャドウなど）などを含む多種多様な製品形態であり得る。組成物形態は、組成物中に存在する場合、選択される特定の皮膚科学的に許容される担体に由来し得る。
【００３２】
Ａ．セラム画分
本発明の組成物は、有効量のベンガルボダイジュセラム画分、ハスセラム画分、およびクローバーセラム画分を含む。
【００３３】
ベンガルボダイジュ、ハス、およびクローバーのセラム画分は、本質的に、ベンガルボダイジュ（Ficus Benghalensis）、ハス（Nelumbo Nucifera）およびクローバー（Trifolium Pratense）それぞれから得られる、花、葉および茎のセラム画分からなる。本明細書で好ましいセラム画分は、Ｆｉｃｕｓ  Ｂｅｎｇａｌｅｎｓｉｓ  Ｅｎｒｉｃｈｅｄ  Ｓｅｒｕｍ  Ｆｒａｃｔｉｏｎ（商標）（ＩＮＣＩ名：Ｆｉｃｕｓ  Ｉｎｄｉｃａ  Ｆｌｏｗｅｒ／Ｌｅａｆ／Ｓｔｅｍ  Ｊｕｉｃｅ）、Ｌｏｔｕｓ  Ｅｎｒｉｃｈｅｄ  Ｓｅｒｕｍ  Ｆｒａｃｔｉｏｎ（商標）（ＩＮＣＩ名：Ｎｅｌｕｍｂｏ  Ｎｕｃｉｆｅｒａ  Ｆｌｏｗｅｒ／Ｌｅａｆ／Ｓｔｅｍ  Ｊｕｉｃｅ）およびＲｅｄ  Ｃｌｏｖｅｒ  Ｅｎｒｉｃｈｅｄ  Ｓｅｒｕｍ  Ｆｒａｃｔｉｏｎ（商標）（ＩＮＣＩ名：Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ  Ｐｒａｔｅｎｓｅ（Ｃｌｏｖｅｒ）Ｆｌｏｗｅｒ／Ｌｅａｆ／Ｓｔｅｍ  Ｊｕｉｃｅ）の商品名の下で、Ａｋｚｏ  Ｎｏｂｅｌ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＬＬＣ（Ｏｓｓｉｎｉｎｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、米国）により製造されている。
【００３４】
一部の実施形態において、本組成物は、全組成物の重量で、０．００１％から１５％、代替として０．００２％から１０％、代わりに０．０２５％から１０％、他の実施形態において０．０５％から１０％、他において０．０５％から５％、他において０．１％から５％の量で、ベンガルボダイジュセラム画分を含み得る。本組成物は、全組成物の重量で、０．００１％から１５％、代替として０．００２％から１０％、代替として０．０１％から１５％、代わりに０．０２５％から１０％、他の実施形態において０．０５％から１０％、他において０．０５％から５％、他において０．１％から５％の量で、ハスセラム画分を含み得る。本組成物は、全組成物の重量で、０．００１％から１５％、代替として０．００２％から１０％、代替として０．０１％から１５％、代わりに０．０２５％から１０％、他の実施形態において０．０５％から１０％、他において０．０５％から５％、他において０．１％から５％の量で、クローバーセラム画分を含み得る。
【００３５】
セラム画分を製造する方法は、（ａ）清浄で、新鮮な、萎れていない植物物質から細胞ジュースを分離して、新鮮な細胞ジュースを得るステップであって、前記分離の前または間に外来性液体が加えられないステップ；（ｂ）前記新鮮な細胞ジュースをろ過して、繊維を含まない細胞ジュースを得るステップ；および（ｃ）前記繊維を含まない細胞ジュースを分画して、本明細書で使用するためのセラム画分を得るステップを含む。適切なセラム画分調製方法は、米国特許第７，４４２，３９１号、Ｋｏｇａｎｏｖに付与された「Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｂｏｔａｎｉｃａｌ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｉｒ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ」、およびＳｗａｎｓｏｎらにより２０１０年９月１０日に出願された、同時係属の米国仮出願第６１／３８１，７４８号に示されており、これらの開示は、本明細書での参照により本明細書に組み込まれる。
【００３６】
得られたセラム画分は、伝統的に調製された植物抽出物に対して優れた生物活性を有する。伝統的な抽出物と違って、このセラム画分は、新鮮な植物材料の残部から機械的に分離された新鮮な植物細胞ジュースから調製される。重要なことに、外来性溶媒（例えば、水、ヘキサン、アセトン、エタノール）は、ジュース分離工程の間にまったく加えられない。得られた細胞ジュースは、新鮮な植物物質で見出される、完全スペクトルの化合物を含有し、したがって、得られたセラム画分は、特定の溶媒で分離され得る狭い範囲の化合物だけを含有する伝統的な植物抽出物よりも、非常により広い範囲の活性化合物を含有する。
【００３７】
さらに、新鮮な植物の使用は、新鮮な植物物質中に生来的に存在する生物活性成分の完全性を維持する。伝統的な植物抽出物は、新鮮な植物物質からではなく、むしろ、乾燥された植物材料から調製され、これは、脱水による分解を起こした。脱水の間に、細胞壁は損なわれ、加水分解、酸化、重合、メイラード反応、および異性化などの機構によって化合物の分解を引き起こす。乾燥された葉が抽出される場合、得られた抽出物は、このようにして新鮮な植物物質に元々は存在していなかったこれらの分解生成物を含有する。したがって、得られた乾燥葉抽出物の組成物は、新鮮なジュースおよび得られたセラム画分のものと大きく異なる。
【００３８】
Ｂ．皮膚色調剤
一部の実施形態において、組成物中に皮膚色調剤を含むことが望ましくあり得る。皮膚色調剤は、全体の皮膚色調をさらに改善するために含むことができる。存在する場合、本発明の組成物は、組成物の重量で、最大で約５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、または３％までの皮膚色調剤を含有する。存在する場合、本発明の組成物は、組成物の重量で、少なくとも約０．００１％、０．０１％、０．１％、０．２％、０．５％、または１％の皮膚色調剤を含有する。適切な範囲は、組成物の重量で、約０．１％から約５０％；約０．２％から約２０％；または約１％から約１０％の適切な範囲の皮膚色調剤を含む、下限および上限の任意の組合せを含む。皮膚色調剤の最適量は、それらの効力が相当に変わることから選択される具体的な活性剤に依存するので、本明細書で列挙される量は、単に指針として使用されるべきである。
【００３９】
適切な色調剤には、限定されるものではないが、糖アミン、ビタミンＢ３化合物、アルブチン、デオキシアルブチン、１，３−ジヒドロキシ−４−アルキルベンゼン（ヘキシルレゾルシノールなど）、ジラウラン酸スクロース、バクチョイル（４−［（１Ｅ，３Ｓ）−３−エテニル−３，７−ジメチル−１，６−オクタジエニル］フェノールまたはモンテルペンフェノール）、ピレノイン（Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｍａｒｉｎｅ、仏国から入手可能）、キビ（panicum miliaceum）の種子抽出物、アルラトン二酸（arlatone dioic acid）、桂皮酸、フェルラ酸、アクロマキシル（achromaxyl）、メチルニコチンアミド、油溶性甘草（licorice）抽出物、葉酸、ウンデシレン酸（すなわち、ウンデセン酸）、ウンデシレン酸亜鉛、チアミン（ビタミンＢ１）およびその塩酸塩、Ｌ−トリプトファン、ヒマワリ（helianthus annus (sunflower)）およびブドウ（vitis vinifera (grape)）の葉抽出物、カルノシン（すなわち、ドラゴシン）、ゲンチシン酸メチル、１，２−ヘキサンジオールおよび１，２−オクタンジオール（すなわち、Ｓｙｍｒｉｓｅ  ＡＧ、独国よりＳｙｍｄｉｏｌ  ６８として販売されている組合せ）、イノシトール、デシレノイルフェニルアラニン（例えば、Ｓｅｐｐｉｃ、仏国よりＳｅｐｉｗｈｉｔｅという商品名の下で販売されている）、コジック酸、ヘキサミジン化合物、サリチル酸、およびレチノイド（レチノールおよびプロピオン酸レチニルを含む）が含まれる。
【００４０】
ある実施形態において、さらなる皮膚色調剤は、ビタミンＢ３化合物、糖アミン、ヘキサミジン化合物、サリチル酸、１，３−ジヒドロキシ−４−アルキルベンゼン（ヘキシルレゾルシノールなど）、およびレチノイドから選択される。本明細書で使用される場合、「ビタミンＢ３化合物」は、式：
【化１】
2014506595.tif 000003
（式中、Ｒは、−ＣＯＮＨ２（すなわち、ニアシンアミド）、−ＣＯＯＨ（すなわち、ニコチン酸）または−ＣＨ２ＯＨ（すなわち、ニコチニルアルコール）である）を有する化合物；その誘導体；および前述の任意の塩を意味する。本明細書で使用される場合、「糖アミン」には、その異性体および互変異性体ならびにその塩（例えば、ＨＣｌ塩）ならびにその誘導体のが含まれる。糖アミンの例には、グルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノサミン、Ｎ−アセチルマンノサミン、ガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、それらの異性体（例えば、立体異性体）、およびそれらの塩（例えば、ＨＣｌ塩）が含まれる。本明細書で使用される場合、「ヘキサミニド化合物」は、式：
【化２】
2014506595.tif 000004
（式中、Ｒ１およびＲ２は、任意選択的であるか、または有機酸（例えば、スルホン酸など）である）を有する化合物を意味する。一実施形態において、ヘキサミジン化合物は、ジイセチオン酸ヘキサミジンである。
【００４１】
Ｃ．抗炎症剤
色素沈着過剰は、皮膚炎症に起因し得る。色素沈着過剰を誘発する一過性炎症事象、より具体的には、炎症後色素沈着過剰には、限定されるものではないが、座瘡病変、内方発育毛、引掻き、虫刺され、界面活性剤損傷、アレルゲンおよび短期ＵＶ暴露が含まれる。炎症後色素沈着過剰を含む炎症誘発色素沈着過剰は、本発明の組成物中に抗炎症剤を組み込むことによって対処され得る。存在する場合、本発明の組成物は、組成物の重量で、最大約２０％、１０％、５％、３％、または１％までの抗炎症剤を含有する。存在する場合、本発明の組成物は、組成物の重量で、少なくとも約０．００１％、０．０１％、０．１％、０．２％、０．３％、０．５％、または１％の抗炎症剤を含有する。適切な範囲は、これらの下限および上限の任意の組合せを含む。適切な抗炎症剤には、限定されるものではないが、非ステロイド系抗炎症剤（限定されるものではないが、イブプロフェン、ナプロキセン、フルフェナム酸、エトフェナメート、アスピリン、メフェナム酸、メクロフェナム酸、ピロキシカムおよびフェルビナクを含むＮＳＡＩＤＳ）、グリシルリジン酸（グリシルリジン、グリシルリキシン酸、およびグリシルレチン酸グリコシドとしても知られる）および塩（グリシルリジン酸二カリウムなど）、グリシルレテン酸、甘草抽出物、ビサボロール（例えば、アルファビサボロール）、マンジスタ（manjistha）（ルビア（Rubia）属、特にルビア・コルディフォリア（Rubia cordifolia）の植物から抽出される）、およびグッガル（guggal）（コミフォラ属、特にコミフォラ・ムクル（Commiphora mukul）から抽出される）、コーラ抽出物、カモミール、クローバー抽出物（例えば、ムラサキツメクサ（red clover）抽出物）、ならびにムチヤギ（sea whip）抽出物（ヤギ（Gorgonacea）目の植物から抽出される）、前述のいずれかの誘導体、ならびにそれらの混合物が含まれる。
【００４２】
Ｄ．日焼け止め活性剤
対象発明の組成物は、１種または複数の日焼け止め活性剤（または日焼け止め剤）および／または紫外線吸収剤を含み得る。本明細書で、「日焼け止め活性」は、日焼け止め活性剤、日焼け止め剤、および／または紫外線吸収剤を集合的に包含する。日焼け止め活性剤は、日焼け止め剤と物理的日焼け防止剤の両方を包含する。日焼け止め活性剤は、有機物または無機物であってもよい。適切な日焼け止め活性剤の例は、Personal Care Products CouncilのInternational Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook、第13版に、「日焼け止め剤」として開示されている。特に適切な日焼け止め活性剤は、２−エチルヘキシル−ｐ−メトキシシンナメート（ＰＡＲＳＯＬ（商標）ＭＣＸとして市販されている）、４，４’−ｔ−ブチルメトキシジベンゾイル−メタン（ＰＡＲＳＯＬ（商標）１７８９として市販されている）、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、オクチルジメチル−ｐ−アミノ安息香酸、ジガロイルトリオレエート、２，２−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、エチル−４−（ビス（ヒドロキシプロピル））アミノベンゾエート、２−エチルヘキシル−２−シアノ−３，３−ジフェニルアクリレート、２−エチルヘキシル−サリチレート、グリセリル−ｐ−アミノベンゾエート、３，３，５−トリ−メチルシクロヘキシルサリチレート、メンチルアントラニレート、ｐ−ジメチル−アミノ安息香酸またはアミノベンゾエート、２−エチルヘキシル−ｐ−ジメチル−アミノ−ベンゾエート、２−フェニルベンズイミダゾール−５−スルホン酸、２−（ｐ−ジメチルアミノフェニル）−５−スルホベンゾオキサゾン酸、オクトクリレン、酸化亜鉛、ベンジリデンカンファーおよびその誘導体、二酸化チタン、ならびにそれらの混合物である。
【００４３】
一実施形態において、組成物は、組成物の重量で、約１％から約２０％、代替として約２％から約１０％の日焼け止め活性剤を含み得る。正確な量は、選択される日焼け止め活性剤および所望の日焼け防止指数（Sun Protection Factor (SPF)）に依存して変わり、これは、当業者の知識の範囲内である。
【００４４】
Ｅ．任意選択成分
本発明の組成物は、様々な他の成分を含有してもよいが、但し、それらが、本発明の利点を許容されないほど変えないことを条件とする。存在する場合、本発明の組成物は、組成物の重量で、約０．０００１％から約５０％；約０．００１％から約２０％；または代わりに、約０．０１％から約１０％の任意選択成分を含有し得る。組成物中に用いられる任意選択成分の最適量は、活性剤の効力が相当に変わることから選択される具体的な活性剤に依存するので、本明細書で列挙される量は、単に指針として使用されるべきである。したがって、本発明で有用な一部の任意選択成分の量は、本明細書で列挙される範囲外であってもよい。
【００４５】
本組成物に組み込まれる場合、任意選択成分は、過度の毒性、不適合性、非相溶性、アレルギー反応などがなく、ヒトの皮膚組織と接触しての使用に適切でなければならない。本発明の組成物は、任意選択成分、例えば、抗座瘡活性剤、落屑活性剤、抗セルライト剤、キレート剤、フラボノイド、日焼け活性物質（tanning active）、非ビタミン酸化防止剤およびラジカル捕捉剤、育毛調節剤、抗皺活性剤、抗異形成活性剤、ミネラル、植物ステロールおよび／または植物ホルモン、Ｎ−アシルアミノ酸化合物、抗菌または抗真菌活性剤、ならびに他の有用な皮膚ケア活性剤を含んでもよく、これらは、米国特許出願公開第ＵＳ２００６／０２７５２３７Ａ１号および同第ＵＳ２００４／０１７５３４７Ａ１号にさらに詳細に記載されており、これらの開示は、本明細書での参照により本明細書によって組み込まれる。
【００４６】
The Personal Care Product CouncilのInternational Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook、第13版には、スキンケア産業で一般に用いられる、多種多様な非限定的な化粧品および医薬品成分が記載されており、これらは、本発明の組成物に使用される適切な任意選択成分である。これらの成分分類の例には、研磨剤、吸収剤、美容成分、例えば、香料、顔料、着色剤（colorings/colorants）、精油、固化防止剤、消泡剤、抗菌剤、バインダー、生物学的添加剤、緩衝剤、増量剤、キレート剤、化学的添加剤、着色剤、化粧品収斂剤、化粧品殺菌剤、変性剤、薬物収斂剤、皮膚軟化剤、外用鎮痛剤、膜形成剤または材料、乳白剤、ｐＨ調整剤、保存剤、噴射剤、還元剤、金属イオン封鎖剤、皮膚冷却剤、皮膚保護剤、増粘調整剤、ビタミン、およびそれらの組合せが含まれる。
【００４７】
Ｆ．皮膚科学的に許容される担体
本発明の組成物は、組成物のための皮膚科学的に許容される担体（これは、「担体」と呼ばれ得る）も含み得る。本明細書で使用される場合、「皮膚科学的に許容される担体」という表現は、担体が角質組織への局所適用に適しており、良好な美的特性を有し、組成物中の活性剤と適合性であり、妥当でない安全性、または毒性の懸念をまったく引き起こさないことを意味する。一実施形態において、担体は、組成物の重量で、約５０％から約９９％、約６０％から約９８％、約７０％から約９８％、または代替として、約８０％から約９５％のレベルで存在する。
【００４８】
担体は、多種多様の形態であり得る。非限定的な例には、単純な溶液（例えば、水性、有機溶媒、または油ベース）、エマルション、および固体形態（例えば、ゲル、スティック、流動性を有する固体、または非晶質物質）が含まれる。ある実施形態において、皮膚科学的に許容される担体は、エマルションの形態である。エマルションは、一般に連続水相（例えば、水中油型および水中油中水型）または連続油相（例えば、油中水型および油中水中油型）を有するものと分類され得る。本発明の油相は、シリコーン油、非シリコーン油（炭化水素油など）、エステル、エーテルなど、およびそれらの混合物を含み得る。
【００４９】
水相は、典型的には水を含む。しかしながら、他の実施形態において、水相は、限定されるものではないが、水溶性保湿剤、コンディショニング剤、抗菌剤、湿潤剤および／または他の水溶性皮膚ケア活性剤を含めた、水以外の成分を含み得る。一実施形態において、組成物の非水成分は、グリセリンおよび／または他のポリオールなどの湿潤剤を含む。しかしながら、組成物は、実質的に（すなわち、１％未満の水）または完全に無水であってもよいことが理解されるべきである。
【００５０】
適切な担体は、所望の製品形態をもたらすように選択される。さらに、成分（例えば、抽出物、日焼け止め活性剤、追加の成分）の溶解性または分散性は、その担体の形態および特性を決定し得る。一実施形態において、水中油型または油中水型エマルションが好ましい。
【００５１】
エマルションは、乳化剤をさらに含み得る。組成物は、担体を十分に乳化するために任意の適切なパーセントの乳化剤を含み得る。適切な重量範囲は、組成物の重量に基づいて、約０．１％から約１０％、または約０．２％から約５％の乳化剤を包含する。乳化剤は、非イオン性、アニオン性またはカチオン性であってもよい。適切な乳化剤は、例えば、米国特許第３，７５５，５６０号、米国特許第４，４２１，７６９号、およびMcCutcheon's Detergents and Emulsifiers、北アメリカ版、317〜324頁（1986年)に開示されており、これらの開示は、本明細書で参照により本明細書によって組み込まれる。適切なエマルションは、所望の製品形態に依存して、広範な粘度を有し得る。
【００５２】
担体は、適切な粘度およびレオロジー特性を有する組成物を与えるために当技術分野で周知であるような増粘剤をさらに含み得る。
【００５３】
ＩＩ．処置の方法
処置、適用、調節、または改善の様々な方法が、前述の組成物を用い得る。老化皮膚の部位の特定は、身体の任意の皮膚表面で行われ得る。最大の関心事の皮膚表面は、典型的には衣類で覆われていない表面、例えば、顔の皮膚表面、手および腕の皮膚表面、足および脚の皮膚表面、ならび首および胸の皮膚表面（例えば、深い襟ぐり）である傾向がある。特に、老化皮膚の部位の特定は、額、口周囲、顎、眼窩周囲、鼻、および／または頬の皮膚表面を含む、顔の皮膚表面上であり得る。
【００５４】
この方法は、組成物を、前もって特定された老化皮膚の領域または老化皮膚の外観を予防することを求める領域に適用するステップを含み得る。多くのレジメンが、組成物の適用のために存在する。組成物は、処置期間の間、少なくとも１日１回、１日２回、またはより頻繁な１日基準で適用され得る。１日２回適用される場合、１回目と２回目の適用は、少なくとも１から約１２時間だけ隔てられる。典型的には、本組成物は、午前および／または就寝前の晩に適用され得る。
【００５５】
処置期間は、理想的には、老化皮膚の外観の改善を与えるために十分な時間のことである。処置期間は、少なくとも１週間であってもよく、一部の実施形態において、処置期間は、約４週間または約８週間続いてもよい。ある実施形態において、処置期間は、複数月（すなわち、３〜１２ヶ月）または複数年に及ぶ。一実施形態において、組成物は、少なくとも約４週間または少なくとも約８週間の処置期間の間、少なくとも１日１回適用される。一実施形態において、組成物は、少なくとも約４週間または少なくとも約８週間の処置期間の間、少なくとも１日２回適用される。
【００５６】
組成物を適用するステップは、局所化された適用によって達成されてもよい。組成物の適用への言及において、「局所化された」、「局所の」、または「局所的に」という用語は、組成物が、処置を必要としない皮膚表面への送達を最小化しながら、目標領域（例えば、加齢染み）に送達されることを意味する。組成物は、老化皮膚の領域中に適用および軽くマッサージされ得る。組成物または皮膚科学的に許容される担体の形態は、局所化された適用を容易にするように選択されるべきである。本発明のある実施形態が、組成物を領域に局所的に適用することを企図する一方で、本発明の組成物は、１つまたは複数の皮膚表面により全体的にまたは広く適用され得ることが理解される。
【００５７】
一部の実施形態において、組成物は、局所化されたおよび全体的な適用に適切な様々なアプリケータによって送達され得る。このようなアプリケータには、ドロッパー、アプリケータ棒、綿棒、または任意の他の適切な装置が含まれ得る。他の適切なアプリケータには、Ｓｈｙａ  Ｈｓｉｎ  Ｐｌａｓｔｉｃ  Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．、台湾から入手可能なＳＨ−０１２７ペンアプリケータ、およびＳｗａｂＰｌｕｓ，Ｉｎｃ．、中国から入手可能なＸｐｒｅｓｓ  Ｔｉｐまたは液体充填スワブのいずれかが含まれる。アプリケータは、約２ｍｍから約１０ｍｍのおおよその直径を有する加齢染みに組成物を容易に適用し、約１から約５０μＬ／ｃｍ２または約１から約５μＬ／ｃｍ２の組成物の投与量を可能にするように構成されてもよい。別の実施形態において、組成物は、１つまたは複数の老化スポットおよびより一般的には１つまたは複数の顔の皮膚表面に同時に適用される（すなわち、３０分間未満、またはより典型的には５分間未満の期間にわたる）。
【００５８】
本明細書で記載される一部の方法では、本発明の組成物をアプリケータで適用することが企図されるが、アプリケータを必要とせず、本発明の組成物を、人の指を用いることによってまたは他の従来の仕方で直接適用することもできることが理解される。
【００５９】
一実施形態において、この方法は、有効量のベンガルボダイジュセラム画分、ハスセラム画分、およびクローバーセラム画分を含む第１の組成物を皮膚表面に適用するステップ、ならびに第１の組成物の前または後に、第２の組成物を皮膚表面に適用するステップを含む。第１および第２の組成物は、本明細書で記載される任意の組成物であり得るが；しかしながら、第２の組成物は、第１の組成物中に存在する有効量のセラム画分を場合によって含み得る。第２の組成物は、１種または複数の色調剤、日焼け止め活性剤、抗炎症剤、または任意選択成分を含み得る。第１の組成物は、全体的または局所的に適用されてもよい一方で、第２の組成物は、第１の組成物が適用される老化皮膚を含む皮膚表面に全体的または局所的に適用されてもよい。ある実施形態において、皮膚表面は、額、口周囲、オトガイ、眼窩周囲、鼻、および頬の皮膚表面の１つまたは複数を含む、顔の皮膚表面である。別の実施形態において、第１および第２の組成物は、少なくとも頬、額、およびオトガイ／口周囲の皮膚表面に同時に適用される。皮膚表面、特に顔の皮膚表面への一般的な適用について、第１または第２の組成物の投与量は、適用当たり（すなわち、皮膚表面への１回の適用当たり）約１から約５０μＬ／ｃｍ２であり得る。
【００６０】
適切な方法は、前述のステップの任意の１つまたは複数を含み得る。前述のステップのすべては、老化皮膚外観の適用、処置、調節、および／または改善に適用可能である。老化皮膚の外観を改善する適切な方法の１つは、有効量のベンガルボダイジュセラム画分とハスセラム画分とクローバーセラム画分とのブレンドを含む組成物を、老化皮膚表面に局所的に適用するステップを含み、この組成物は、セラム画分ブレンドが該老化皮膚の外観を改善するために十分な期間適用される。
【００６１】
ＩＩＩ．作用機構
角質層は、厳重に調節された表皮の透過性バリアであり、外部環境への身体水分の損失を防止する透過性バリアとして作用するのみならず、化学的および生物学的攻撃に対して物理的および選択的バリアとして機能する。角質層の細胞は、これらのバリアを、それらを横切る水、イオン、およびタンパク質の移動を調節することによって制御する。しばしば傍細胞透過性経路とも呼ばれる、細胞間のイオンおよび分子の流れは、密な接合部によって調節される。（Koval, Michael. Claudins - Key pieces in the Tight JunctionPuzzle. Cell Communication and Adhesion. 13:124〜138頁、2006年）。
【００６２】
密な接合部は、細胞骨格に係留された複合体に組み立てられた、いくつかの膜貫通および周辺タンパク質から構成される細胞−細胞接触の部位である。これらの膜貫通タンパク質のうちで、「クローディン」と特定されるものは、細胞透過性の主たる決定因子である。クローディンは、バリア機能の維持にいくつかの役割を果たす。クローディンは、細胞間のタンパク質および他のマクロ分子の拡散を制限する透過性バリアを構成するストランドの主たる構成成分であり、それらは、細胞間のイオン拡散を調節する特異的な傍細胞チャネルも形成する。クローディン−１突然変異は、いくつかのタイプの魚鱗癬（乾燥、肥厚化、鱗状、または薄片状皮膚をもたらす皮膚障害のファミリー）と関連しており、研究により、クローディン−１欠損マウスの表皮バリア機能は、それらの細胞が、水を保持することができず、皮膚をすっかり乾燥させ、１日以内に死をもたらすほどに損なわれることが示された（M. Furuseら、The Journal of Cell Biology、156(No.6):1099〜1111頁、2002年）。
【００６３】
アクアポリン−３（ＡＱＰ３）は、表皮の角化細胞の基底層で発現される水およびグリセロールの膜トランスポータである。老いたヒトの皮膚は、ＡＱＰ３発現低下が起こることが示され、これはまた、若い非損傷皮膚と比較して、角質層の水含有量および弾力性の減少と相関する。ＡＱＰ３−ノックアウトマウスに関わる研究において、ＡＱＰ３−欠損表皮におけるＡＱＰ３依存性のグリセロール輸送低下は、脱水された非弾力性皮膚の要因であることが示されている。（「Aquaporin-3 functions as a glycerol transporter in mammalian skin」Hara-Chikuma M、Biol Cell. 2005年7月;97(7):479〜86頁）;(「Roles of Aquaporin-3 in the Epidermis」、Hara-Chikuma, M.、J Invest Dermatol. 2008年9月;128(9):2145〜51頁. Epub 2008年6月12日）;（「Glycerol replacement corrects defective skin hydration, elasticity, and barrier function in aqaporin-3-deficient mice」Hara M.、Proc Natl Acad Sci USA. 2003年6月10日;100(12):7360〜5頁. Epub 2003年3月27日）。
【００６４】
ベンガルボダイジュ、クロ−バー、およびハスのセラム画分のブレンドは、以下の実施例３でクローディン−１およびアクアポリン−３（「ＡＱＰ３」）の統計的に有意な上向き調節によって証明されるとおりに、水分およびバリア機能の正の増加をもたらした。
【００６５】
実施例２において、老化皮膚に関連した異なる９つの遺伝子へのブレンドの効果が評価された。これらの９つの遺伝子、およびそれらの関連した機能は、実施例２の表１に記載される。対照に対する、発現の増加／低下倍率は、異なる２つの濃度レベルにおいて老化関連遺伝子について決定した。両方の場合、表２ａおよび表２ｂに示されるように、ブレンドは、９つの遺伝子すべてで正の増加倍率をもたらし、その遺伝子の望ましい上向き調節、これによる抗老化に正の利益を示す。
【実施例】
【００６６】
［実施例１］
例示組成物
表１は、本発明の組成物の非限定的な実施例を示す。実施例は、説明の目的のためにだけ示され、本発明の限定と解釈されるべきではないが、それらの多くの変形が本発明の精神および範囲から逸脱することなく可能であり、これは、当業者によって理解されるからである。実施例において、特に断りのない限り、濃度のすべては、重量パーセントとして列挙され、賦形剤、充填剤などの副次的材料を除き得る。したがって、列挙された調合物は、列挙された成分およびこのような成分と関連した任意の副次的材料を含む。当業者に明らかなように、これらの副次的材料の選択は、本明細書で記載されるとおりに本発明を行うために選択される特定の成分の物理的および化学的特性に依存して変わる。
【００６７】
実施例のすべては、老化の１つまたは複数の徴候の外観を処置または改善するために使用され得る。本発明はさらに、第１の組成物（例えば、実施例Ａまたは実施例Ｂ）による１つまたは複数の老化徴候のための局所性処置、および第２の組成物（例えば、実施例Ｃまたは実施例Ｄ）（これは、老化の特定の徴候（例えば、顔全体にわたる）を改善する局所性処置の前または後に適用され得る）によるより広いまたは全体的な顔の皮膚処置を含むレジメンに関し得る。
【表１−１】
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【表１−２】
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【００６８】
本発明の組成物は、一般に局所組成物を製造する、当技術分野で知られているような従来の方法によって調製される。このような方法は、典型的には、加熱、冷却、真空の適用などとともにまたはそれらなしで、比較的均一な状態へ１つまたは複数のステップで成分を混合することを含む。典型的には、エマルションは、最初に脂肪相物質とは別個に水相物質を混合し、次いで、必要に応じて２つの相を合わせて、所望の連続相を生じさせることによって調製される。組成物は、好ましくは、例えば、活性物質の安定性（物理的安定性、化学的安定性、光安定性）および／または送達を最適化するように調製される。この最適化には、適切なｐＨ（例えば、７未満）、活性剤と複合し、したがって、安定性または送達に負に影響し得る物質の排除（例えば、汚染鉄の排除）、複合体の形成を防止する手法の使用（例えば、適切な分散剤または二重区画包装）、適切な光安定性手法の使用（例えば、日焼け止め剤／日焼け防止剤の組込み、不透明包装の使用）などが含まれてもよい。
【００６９】
［実施例２］
生体外組織分析
個々のベンガルボダイジュ、ハス、およびクローバーのセラム画分、ならびにそれらのブレンドを、本明細書で記載される方法によって異なる２つの濃度で評価した。対照に対する、発現における増加／低下倍率を、以下の表２で示される老化関連遺伝子について決定した。正の増加倍率は、その遺伝子の望ましい上向き調節、したがって、抗老化に正の利益を示す。
【００７０】
生体外組織法：皮膚移植片を手術廃棄物から収集し、媒地中、活性剤で処理する。対照皮膚は未処理とした。７日後、ＲＮＡ単離およびＰＣＲ分析用にパンチ生検を採取した。
【００７１】
ＲＴ−ＰＣＲ法：Ｑｕａｎｔａ  ｉＳｃｒｉｐｔ（商標）を用いて、精製したＲＮＡをｃＤＮＡに変換する。５００ｎｇのＲＮＡをｉＳｃｒｉｐｔと混合し、キット説明書に従って熱サイクラで実験する。次いで、１μｌの得られたｃＤＮＡを、説明書に従ってＱｕａｎｔａ  Ｐｅｒｆｅｃｔａ  Ｍａｓｔｅｒ（商標）ミックスと混合し、ＳＡｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（商標）カスタムアレープレートにわたってアリコートする。次いで、プレートを密封し、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（商標）製Ｓｔｅｐ−ｏｎｅ  Ｐｌｕｓ（商標）機械上で実験する。データ解析は、ＳＡｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（商標）製データ解析ソフトウェア中に生データをアップロードすることによって行う。
【表２】
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【００７２】
［実施例３］
クローディン１およびＡＱＰ−３発現についての角化細胞アッセイ
角化細胞培養：多重ｍＲＮＡ解析を行った。ＲＮＡは、新生児ヒト角化細胞から単離した。新生児ヒト角化細胞（Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ＃Ｃ−００１−５Ｃ）を６ウェル組織培養プレート中で４０％コンフルエンスに成長させ、次いで、化合物で２４時間処理した（処理当たり３つ組）。この処理液は、個々のジュースと一緒に、いくつかの濃度のベンガルボダイジュ＋クローバー＋ハスのブレンドを含んだ、さらに、ビヒクル対照を用いた。
【００７３】
いくつかの標的を、Ｐａｎｏｍｉｃｓ  ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ  Ｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙキット（マルチ被分析物定量的ビーズ系アッセイ）によって測定した。十分なＲＮＡを生じる試料についての蛍光強度値（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ１００装置で測定した）を、アクアポリン３およびクローディン１について示す。
【００７４】
図１のグラフは、クローディン−１およびＡＱＰ３が、本明細書におけるベンガルボダイジュ＋クローバー＋ハスのブレンドに応答して望ましく上向き調節されたことを示す。
【００７５】
［実施例４］
処置方法
試験対象は、実施例１の組成物Ａを顔全体に１日１回で８週間局所適用する。結果として、対象の顔の皮膚は、０週目時点よりもより水分が補給されていると感じ、かつそうであるように見え、対象は、細線および皺の外観の低下に気付く。
【００７６】
本明細書で開示される寸法および値は、記載される正確な数値に厳格に限定されると理解されるべきでない。代わりに、特に断りのない限り、このような寸法のそれぞれは、記載された値と、その値の周辺の機能的に同等な範囲との両方を意味することが意図される。例えば、「４０ｍｍ」と開示された寸法は、「約４０ｍｍ」を意味することが意図される。
【００７７】
本明細書で引用されるあらゆる文書は、相互参照されるまたは関連する特許または出願のいずれも含めて、明示的に排除されないまたは別に限定されない限り、その全体が参照によって本明細書に本明細書により組み込まれる。いずれの文書の引用も、それが、本明細書で開示されるまたは請求される発明のいずれかに関して従来技術であること、あるいはそれが、単独で、または他の参考文献（単数）もしくは参考文献（複数）と任意に組み合わせて、このような発明のいずれかを教示、示唆または開示することを是認するものではない。さらに、本文書中の用語のいずれかの意味または定義が、参照により組み込まれる文書中の同じ用語のいずれかの意味または定義と矛盾する場合、本文書中のその用語に帰された意味または定義が適用されるものとする。
【００７８】
本発明の特定の実施形態が説明および記載されてきたが、様々な他の変化および変更が、本発明の精神および範囲から逸脱することなくなされ得ることが当業者に明らかである。したがって、本発明の範囲内であるこのような変化および変更のいずれも添付の特許請求の範囲で包含することが意図される。
【図１】
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【国際調査報告】
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2014506595.tif 000010
2014506595.tif 000011