(57)【要約】  対象体へ投与され、迅速に除去される方法及びそのために使用される剤の組合せが提供される。これは、反応性基を持つ投与剤（例えばプレターゲットのためのプローブ）及び他の反応性基を持つ除去剤を提供することで達成でき、前記反応性基が生体−直交性反応対を形成する。好ましくは前記反応性基対は、１つの反応物としてシクロオクテン又はシクロオクチン、及び他の反応物としてジエンを含む。本方法及び組合せは、循環系から任意の結合性分子を除去するために使用でき、例えば、プレターゲット方法、ターゲット方法又は造影法のために輸送された過剰な剤の除去、又は循環系に存在する任意に生体分子の除去のために使用できる。
2014500307.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象体へ投与される投与剤と、同じ対象体へ投与して、前記対象体の血液から循環する投与剤を除去するための除去剤との組合せであり、ここで前記投与剤が第１の反応性基を含み、かつ前記除去剤が第２の反応性基を含み、前記第１及び第２の反応性基が、生体−直交反応性基であり、お互いに生体−直交反応性であるように選択され、前記生体−直交反応性基のいずれかがジエノフィルであり、他の基がジエンであり、前記ジエノフィルが式（１）を満たす８員環ジエノフィルであり：
【化２７】
2014500307.tif 000040
ここで、それぞれのＲは独立して、Ｈ又は最大６まで、アルキル、アリ−ル、Ｏ−アリ−ル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アリ−ル、Ｓ−アルキル、Ｓ（Ｏ）−アリ−ル、Ｓ（Ｏ）−アルキル、Ｓ（Ｏ）２−アリ−ル、Ｓ（Ｏ）２−アルキル、Ｓｉ−アリ−ル、Ｓｉ−アルキル、Ｓｉ−Ｏ−アルキル、ＯＣＯ−アルキル、ＯＣＯ−アリ−ル、ＳＣＯ−アルキル、ＳＣＯ−アリ−ル、ＯＣＳ−アルキル、ＯＣＳ−アリ−ル、ＳＣＳ−アルキル、ＳＣＳ−アリ−ル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｎ３、ＳＯ２Ｈ、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ４Ｈ、ＰＯ３Ｈ、ＰＯ４Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＯ２、ＮＯ、ＣＮ、ＯＣＮ、ＳＣＮ、ＮＣＯ、ＮＣＳ、ＣＦ３、ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル、アリ−ル）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−アルキル、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−アリ−ル）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アリ−ル又はアルキル）、ＮＲ’ＣＯ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’−アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’−アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’−アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’−アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＣＲ’ＮＲ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、からなる群から選択される置換基で置換され、ここで２つのＲ基は共に環を形成し、及びここで、Ｘ及びＹはそれぞれ独立して、Ｈ、又は、アルキル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ２、ＮＯ２、及びＮＲＲ’（Ｒ及びＲ’はそれぞれ独立してＨ又はアルキル）を表し、又は共に結合を形成し、１つのＲは前記それぞれの投与剤又は除去剤へ場合によりスペ−サ−を介して連鎖（リンケ−ジ）を形成する、組合せ。
【請求項２】
請求項１に記載の組合せであり、前記除去剤がさらに、タンパク質、デンドリマー及びポリマーからなる群から選択される足場、又はミクロ−又はナノ粒子などの粒状足場から選択される足場を含む、組合せ。
【請求項３】
請求項１又は２のいずれか一項に記載の組合せであり、前記除去剤がさらに、１以上のヘキソース系基を含む、組合せ。
【請求項４】
請求項１乃至３のいずれか一項に記載の組合せであり、前記ジエノフィルが、８−員環ジエノフィルであり、次の式（１ａ）を満たす：
【化２８】
2014500307.tif 000041
ここで、Ｘ、Ｙ、Ｒ及びＲａのそれぞれは独立して、Ｈ又は最大６まで、アルキル、アリ−ル、Ｏ−アリ−ル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アリ−ル、Ｓ−アルキル、Ｓ（Ｏ）−アリ−ル、Ｓ（Ｏ）−アルキル、Ｓ（Ｏ）２−アリ−ル、Ｓ（Ｏ）２−アルキル、Ｓｉ−アリ−ル、Ｓｉ−アルキル、Ｓｉ−Ｏ−アルキル、ＯＣＯ−アルキル、ＯＣＯ−アリ−ル、ＳＣＯ−アルキル、ＳＣＯ−アリ−ル、ＯＣＳ−アルキル、ＯＣＳ−アリ−ル、ＳＣＳ−アルキル、ＳＣＳ−アリ−ル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｎ３、ＳＯ２Ｈ、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ４Ｈ、ＰＯ３Ｈ、ＰＯ４Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＯ２、ＮＯ、ＣＮ、ＯＣＮ、ＳＣＮ、ＮＣＯ、ＮＣＳ、ＣＦ３、ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−アルキル、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−アリ−ル）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アリ−ル又はアルキル）、ＮＲ’ＣＯ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’−アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’−アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’−アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’−アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＣＲ’ＮＲ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、からなる群から選択される置換基で置換され、Ｒ又はＲａの１つが、前記プレターゲットプローブ又は前記エフェクタープローブのいずれかへの、場合によりスペ−サ−を介してリンカ−基を含み；２つのＲ又はＲａが共に環を形成し；及びＲａの少なくとも１つ及び最大４つが水素ではない、組合せ。
【請求項５】
請求項４に記載の組合せであり、前記式（１ａ）のジエノフィルが次の１以上を持たす：
（ａ）Ｘはメチル；
（ｂ）Ｙはメチル；
（ｃ）Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ５ａの１以上がＯ−アルキル；
（ｄ）Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ５ａの１以上がＯ−アリール；
（ｅ）Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ５ａの１以上がアリール；
（ｆ）Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ５ａの１以上がアルキル、である、組み合わせ。
【請求項６】
請求項４又は５のいずれか一項に記載の組合せであり、Ｘはメチル又は水素、Ｙはメチル又は水素、及びＲ３ａ、Ｒ４ａがＯ−アルキル又はＯ−アリールである、組合せ。
【請求項７】
請求項１乃至６のいずれか一項に記載の組合せであり、前記ジエンが、以下の式（２）、（３）、（４）、（５）、（６）及び（７）の化合物からなる群から選択される、組合せである：
【化２９】
2014500307.tif 000042
ここで、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、アル−ル、ＣＦ３、ＣＦ２、ＣＦ２−Ｒ’、ＯＲ’、ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’、ＮＲ’（＝Ｓ）ＳＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’Ｒ’’’（ここで、Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’はそれぞれ独立してＨ、アルキル又はアルキル）からなる群から選択され；Ａ及びＢはそれぞれ独立して、アルキル置換炭素、アリ−ル置換炭素、Ｎ＋Ｏ−、Ｎ＋Ｒ（Ａ及びＢは共に炭素でない場合にＲはアルキル）からなる群から選択され；Ｘは、Ｏ、Ｎ−アルキル及びＣ＝Ｏからなる群から選択され、及びＹは、ＣＲであり、ＲはＨ、アルキル、アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’（ここで、Ｒ’、Ｒ’’はＨ、アリ−ル又はアルキル）からなる群から選択される；
【化３０】
2014500307.tif 000043
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリ−ル、ＣＦ３、ＣＦ２−Ｒ’、ＮＯ２、ＯＲ’、ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’（ここでＲ’及びＲ’’はそれぞれ独立してＨ、アリ−ル及びアルキルであり、Ｒ’’’は独立してアリ−ル又はアルキル）からなる群から選択され；Ａは、Ｎ−アルキル、Ｎ−アリ−ル、Ｃ＝Ｏ及びＣＮ−アルキルからなる群から選択され；
ＢはＯ又はＳであり；Ｘは、Ｎ、ＣＨ，Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＣＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’（ここでＲ’及びＲ’’はそれぞれ独立してＨ、アリ−ル又はアルキル基であり、Ｒ’’’はそれぞれ独立してアリ−ル又はアルキル）から成る群から選択され；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、Ｎ及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；
【化３１】
2014500307.tif 000044
ここでＲ１及びＲ２はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から選択され；Ａは、ＣＯ、Ｃ−アルキル、ＣＮ−アルキル、Ｎ−アルキル及びＮ−アリ−ルからなる群から選択され；ＢはＯであり；Ｘは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル及びＮであり；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、Ｎ及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；
【化３２】
2014500307.tif 000045
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリ−ル、ＣＦ３、ＣＦ２−Ｒ’、ＮＯ２、ＯＲ’、ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’（ここでＲ’及びＲ’’はそれぞれ独立してＨ、アリ−ル及びアルキルであり、Ｒ’’’は独立してアリ−ル又はアルキル）からなる群から選択され；Ａは、Ｎ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；ＢはＮであり；Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＣＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’（ここでＲ’及びＲ’’はそれぞれ独立してＨ、アリ−ル又はアルキル基であり、Ｒ’’’はそれぞれ独立してアリ−ル又はアルキル）から成る群から選択され；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、Ｎ及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；
【化３３】
2014500307.tif 000046
ここで、Ｒ１は、Ｈ，アルキル、アリ−ル、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から選択され；Ｒ２は、Ｈ、アルキル、アリ−ル、ＣＮ、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から選択され；Ａは、Ｎ、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；ＢはＮであり；Ｘは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル及びＮからなる群から選択され；Ｙは、ＣＨ、ＣＣＮ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；
【化３４】
2014500307.tif 000047
ここで、ここでＲ１及びＲ２はそれぞれ独立して、Ｈ、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２、６−ピリミジル、２、５−ピリミジル、３、５−ピリミジル、２、４−ピリミジル又はフェニ−ルであって，これらは場合によりＮＯ２、Ｆ，Ｃｌ，ＣＦ３，ＣＮ，ＣＯＯＨ，ＣＯＯＲ，ＣＯＮＨ２，ＣＯＮＨＲ，ＣＯＮＲ２，ＣＨＯ，ＣＯＲ，ＳＯ２Ｒ，ＳＯ２ＯＲ，ＮＯ，Ａｒなどの１以上の電子吸引基で置換されていてもよい（ＲはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ａｒとは芳香族基、特にフェニ−ル、ピリジル又はナフチル基を表す）、からなる群から選択される。
【請求項８】
請求項１乃至７のいずれか一項に記載の組合せであり、前記投与剤がプレターゲットプローブであり、好ましくは第１のターゲット部分をとして抗体を含む、組合せ。
【請求項９】
請求項１乃至８のいずれか一項に記載の組合せであり、前記投与剤が、ターゲット造影又は利用のための剤である、組合せ。
【請求項１０】
生体−直行反応性基及び１以上のヘキソース系部分を含む除去剤であり、前記生体−直行反応性基が、請求項１乃至７のいずれか一項に定められたジエン又はジエノフィルである、除去剤。
【請求項１１】
請求項１０に記載の除去剤であり、前記ヘキソース系部分がガラクトース部分である、除去剤。
【請求項１２】
プレターゲット方法であり、対象体へ、請求項８に記載の前記プレターゲットプローブである投与剤を投与すること、前記投与剤を、前記対象体内で、前記第１のターゲット部分が第１のターゲットへ結合を達成するために効果的な期間、循環させ、次に非−結合性の投与剤を前記身体から、請求項１０又は１１に記載の除去剤を投与することで除去することを含む、方法。
【請求項１３】
動物又は人対象体での循環から生体分子を除去する方法であり、投与剤及び除去剤を投与することを含み、前記投与剤が第１の反応性基を含み、前記除去剤が第２の反応性基を含み、前記第１及び第２の反応性基が、お互いに生体−直交的に反応するように選択され、及び前記反応性基が、請求項３乃至７のいずれか一項に定められている、方法。
【請求項１４】
請求項１乃至７のいずれか一項に記載の投与剤及び除去剤の、動物又は人の循環から生体分子を除去するための使用であり、前記投与剤が、前記生体分子へ結合可能な部分を含む、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、対象体の循環系から生体分子、例えばタ−ゲット薬物治療、タ−ゲット造影、プレタ−ゲットなどの目的で対象体へ投与された生体分子を除去するための除去剤に関する。本発明は特に、プレタ−ゲット方法で使用される除去剤に関する。本発明はまた、タ−ゲット基の循環分画、又は事前に投与された治療剤又は造影剤を捕捉するなどの、循環系から生体分子を除去するための除去剤の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
医学診断及び治療の多くの分野において、患者などの対象体の身体の特定の位置又は限定された領域へ、治療薬（医薬）又は診断薬（例えば造影剤）などの剤を選択的に輸送することが望まれている。
【０００３】
器官や組織の積極的タ−ゲット化は、望ましい活性基（例えば造影剤又は細胞毒性化合物）をタ−ゲット化構成物に直接又は間接的共役させることで達成され、これは細胞表面に結合し、又は興味対象位置での又は近くでの細胞内取り込みを促進するものである。かかる剤をタ−ゲットするために使用されるタ−ゲット化基は通常、細胞表面タ−ゲット（例えば膜レセプタ−）、構造タンパク質（例えばアミロイド斑）、又は細胞間タ−ゲット（例えばＲＮＡ、ＤＮＡ、酵素、細胞シグナル伝達系）への親和性を持つ構造を持つ。これらの分子は、抗体（断片）、タンパク質、アプタマ−、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド、オリゴ糖類、同じくペプチド、ペプタイド及び特定の疾患又は障害において蓄積される知られた有機医薬化合物であり得る。又は、造影／治療剤は、代謝経路をタ−ゲットすることができ、これは疾患（感染や癌）の際にアップレギュレ−トされる、例えばＤＮＡ、タンパク質及び膜合成又は炭水化物取り込みなどである。疾患組織では、前記マ−カ−は、疾患細胞と正常細胞を識別し、早期発見、特定診断及び（タ−ゲットの）治療のためのユニ−クな可能性を提供する。
【０００４】
一般的に、造影／治療剤及び、特に核造影／治療剤を成功させる重要な基準は、それらが高いタ−ゲット取り込みを示す一方で、非タ−ゲット組織及び血液からの迅速な除去を示す、ことである。しかし、これは問題を生じる：例えば、人の造影研究は、腫瘍位置で放射性ラベル抗体の最大濃度は２４時間以内に達成され得るが、循環系で前記ラベル化抗体の濃度が、造影をうまく行うために十分低濃度となるまでさらに数日を要する、ということである。
【０００５】
遅い又は不十分なタ−ゲット組織への蓄積及び非タ−ゲット領域からの除去が遅いというこの問題は（特に核造影及び治療）プレタ−ゲット方法の応用につながる。
【０００６】
プレタ−ゲット化（方法）は、タ−ゲット化方法におけるひとつのステップであり、ここでは第１のタ−ゲット（例えば細胞表面）がプレタ−ゲットプロ−ブとして準備される。これは第２のタ−ゲットを含み、これは最終的に、第２のタ−ゲット基を持つさらなるプロ−ブ（エフェクタ−プロ−ブ）でタ−ゲット化されるものである。
【０００７】
従って、プレタ−ゲットでは、プレタ−ゲットプロ−ブが、プライマリ−タ−ゲットへ結合される。前記プレタ−ゲットプロ−ブはまた、第２のタ−ゲット（以下「タグ」と記載する場合がある）を持ち、これは診断（造影）及び／又は治療剤である、前記エフェクタ−プロ−ブへ特異的共役を容易にする。前記プレタ−ゲットプロ−ブを形成する前記構造が前記タ−ゲット位置で局在化されると（例えば２４時間）、過剰な前記プレタ−ゲットプロ−ブは前記血液から除去される必要がある。
【０００８】
自然除去はしばしば不十分であり、除去剤の使用が望まれる。除去剤は、循環系から、それらを特定の器官又は組織へ方向付けることで化合物を除去するように作用する。従って、一般的に、除去剤は、前記レシピエントの循環系の存在する投与された基（例えば、タ−ゲット化基−リガンド、タ−ゲット化基−抗リガンド又は抗リガンドのみ）と結合、複合化又は伴うことの可能な剤である。前記除去剤は好ましくは、サイズ、荷電、構造又はそれらの組合せで特徴付けられ、これにより、前記除去剤と同様の処理手順で使用されるタ−ゲット化基により認識されるタ−ゲット化細胞の集団へ除去剤が近づくことを低減させる。通常は、除去剤は前記プレタ−ゲット化抗体に結合する。又は、望ましくは、タ−ゲット化細胞へ近づくことが可能となる前に循環系から迅速に除去する除去剤を提供することが望ましい。この目的で、迅速に反応できる（除去される生体分子と高い反応速度を示す）除去剤を提供することが好ましい。
【０００９】
米国特許出願公開第２００３／０１２９１９１号には、リガンド誘導体又は抗リガンド誘導体に導入する除去剤が開示されている。ここでは本質的に、かかる誘導体は、前記化合物の天然形よりも、前記相補的リガンド／抗リガンドペア体へのより低い親和性を示す。従って、ビオチン−アビジン又はビオチン−ストレプトアビジンリガンド／抗リガンド対が適用される場合、前記除去剤は、ビオチン又はアビジンよりもより低いアビジン又はストレプトアビジンへの親和性を示すビオチン誘導体、又はアビジン又はストレプトアビジンよりもより低いビオチンへの親和性を示すストレプトアビジン誘導体のいずれかを導入する。
【００１０】
Ｒｏｓｓｉｎらの「Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．、Ｅｄ２０１０、４９、ｐ．３３７５−３３７８」は、逆電子要求ディ−ルスアルダ−反応を用いる腫瘍プレタ−ゲット化に関する。
【００１１】
国際公開第２０１０／１１９３８２Ａ１号及び２０１０／１１９３８９Ａ２号は、プレタ−ゲットプロ−ブ及びエフェクタ−プロ−ブ間の結合を与える［４＋２］逆電子要求（レトロ）ディ−ルスアルダ−化学を使用することを含むプレタ−ゲット化方法に関する。
【００１２】
米国特許第７０５２８７２Ｂ１号は、タ−ゲット組織に結合する少なくとも１つの腕と、タ−ゲット可能共役に特異的に結合する少なくとも１つの腕を持つ二重特異的抗体又は抗体断片に関する。
【００１３】
米国特許第５、９６５、１３１Ａ号は、タ−ゲット位置へ診断剤又は治療剤を輸送するプレタ−ゲット方法であって、前記タ−ゲット化種のタ−ゲット結合サイトに結合する除去剤を用い、抗イデオタイプ抗体及び抗体断片が好ましい除去剤である。
【００１４】
さらに、現在のプレタ−ゲットシステムはその生物学的性質に伴う因子に阻害されている。ビオチンは内因性分子であり、その共役体は血清ビオチニダ−ゼ酵素により開裂され得る。アンチセンスプレタ−ゲット化を使用する場合、前記オリゴヌクレオチドはＲＮＡ分解酵素及びＤＮＡ分解酵素に攻撃される対象とされ得る。タンパク質及びペプチドはまた、天然分解経路の対象とされる。これらの相互作用はさらに、その非共有結合性及び動態性により阻害され、タ−ゲット上のレジデンスタイム（滞留時間）を限定することとなる。また、内因性ビオチンは、ストレプトアビジン結合でのビオチン共役体と競合する。最後にストレプトアビジンは高度に免疫原性である。
【００１５】
さらに、タ−ゲットの造影は、時には、前記タ−ゲットの循環分画で阻害され、造影剤を、望ましい位置（座）にタ−ゲットを到達させる前に造影剤を捕捉する。望ましいことは、かかる循環タ−ゲットが前記造影剤を投与する前に除去され得るシステムが提供されることである。また、他の状況、例えば治療では、循環系から生体分子を除去することが望まれる。例えば、治療が、ある腫瘍の細胞外マトリクスで、しかしまた血清中で生じるＭＭＰ−２（マトリクス金属プロテイナ−ゼ−２）などの酵素との相互作用へ向けられる場合、除去という考え方が望まれる。
【００１６】
他の例はＣＥＡ（癌胎児性抗原）であり、放射線免疫治療のタ−ゲット化のひとつのタ−ゲットであり、またこれは血清中にも生じ、従って、そこで放射性活性を捕捉する。他の例は、抗体酵素プロドラッグ治療（ＡＤＥＰＴ）のために使用される抗体共役体であり、これは抗体共役体を、前記プロドラッグ投与の前に循環系から除去することが好ましい。除去方法が好ましい他の治療剤は、抗体−薬剤共役体である。これらの共役物は、長時間循環するが、高い毒性薬物を含み、高い安定性を得るために共役リンカ−を必要とする。除去剤を用いることは、全ての遊離の抗体医薬表薬物を、十分な量が腫瘍に結合した後循環系から除去することを可能にする。
【００１７】
望まれることは、循環系から除去されるべき投与された基へ迅速に結合され、かつプレタ−ゲット方法で使用可能である、除去剤を提供することを可能にする、除去の考えが見出されることである。
【００１８】
従って、前記除去剤への高い要求を満たす新規な除去剤を提供するための強い要求が存在する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１９】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００３／０１２９１９１号明細書
【特許文献２】国際公開第２０１０／１１９３８２Ａ１号明細書
【特許文献３】国際公開第２０１０／１１９３８９Ａ２明細書
【特許文献４】米国特許第７０５２８７２Ｂ１号明細書
【特許文献５】米国特許第５９６５１３１Ａ号明細書
【非特許文献】
【００２０】
【非特許文献１】Ｒｏｓｓｉｎｅｔａｌ．、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ  ２０１０、４９、ｐ．３３７５−３３７８
【発明の概要】
【００２１】
本発明は、循環系からの生体分子の新規な除去剤を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明は、とりわけ、ここで説明される除去剤は、例えば腫瘍などの前記タ−ゲットには迅速に反応することなく、迅速に血液中で反応して、それにより以下定められるＴＣＯなどのタ−ゲット結合分子を、前記プレタ−ゲットプロドラッグとの反応のために遊離させる、という認識に基づく。前記の要求の１以上により好ましく取り組むために、本発明は、１つの側面で、対象体に投与されるべき投与剤と、同じ対象体へ投与されて前記対象体の血液から循環する投与剤を除去するための除去剤との組合せを提供し、ここで前記投与剤が第１の反応性基を含み、かつ前記除去剤が第２の反応性基を含み、前記第１及び第２の反応性基が、生体−直交反応性基であり、お互いに生体−直交反応性であるように選択され、前記生体−直交反応性基のいずれかがジエノフィルであり、他の基がジエンであり、前記ジエノフィルが式（１）を満たす８員環ジエノフィルであり：
【００２３】
【化１】
2014500307.tif 000003
ここで、それぞれのＲは独立して、Ｈ又は最大６まで、アルキル、アリ−ル、Ｏ−アリ−ル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アリ−ル、Ｓ−アルキル、Ｓ（Ｏ）−アリ−ル、Ｓ（Ｏ）−アルキル、Ｓ（Ｏ）２−アリ−ル、Ｓ（Ｏ）２−アルキル、Ｓｉ−アリ−ル、Ｓｉ−アルキル、Ｓｉ−Ｏ−アルキル、ＯＣＯ−アルキル、ＯＣＯ−アリ−ル、ＳＣＯ−アルキル、ＳＣＯ−アリ−ル、ＯＣＳ−アルキル、ＯＣＳ−アリ−ル、ＳＣＳ−アルキル、ＳＣＳ−アリ−ル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｎ３、ＳＯ２Ｈ、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ４Ｈ、ＰＯ３Ｈ、ＰＯ４Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＯ２、ＮＯ、ＣＮ、ＯＣＮ、ＳＣＮ、ＮＣＯ、ＮＣＳ、ＣＦ３、ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル、アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−アルキル、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−アリ−ル）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アリ−ル又はアルキル）、ＮＲ’ＣＯ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’−アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’−アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’−アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’−アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＣＲ’ＮＲ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、からなる群から選択される置換基で置換され、ここで２つのＲ基は共に環を形成し、及びここで、Ｘ及びＹはそれぞれ独立して、Ｈ、又は、アルキル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ２、ＮＯ２、及びＮＲＲ’（Ｒ及びＲ’はそれぞれ独立してＨ又はアルキル）を表し、又は共に結合を形成し、１つのＲは前記それぞれの投与剤又は除去剤へ場合によりスペ−サ−を介して連鎖（リンカー、リンケ−ジ）を形成する、組合せ。
【００２４】
本発明は、他の側面では、タ−ゲット化医学造影及び／又は治療のためのキットを提供し、これは、少なくとも１つのプレタ−ゲットプロ−ブ及び少なくとも１つのエフェクタ−プロ−ブを含み、前記プレタ−ゲットプロ−ブが、プライマリ−タ−ゲット基と第１の生体−直交性反応性基を持ち、及び前記エフェクタ−プロ−ブが、ラベル又は薬学的活性化合物などのエフェクタ−基と、第２の生体−直交性反応性基を持ち、前記第２の生体−直交性反応性基が、前記第１の生体−直交性反応性基と反応し、前記キットがさらに、前記第１の生体−直交性反応性基へ生体−直交性的に反応性である反応基を持つ除去剤を含む。
【００２５】
さらに他の側面では、本発明は、対象体へ投与されるべき投与剤及び前記投与剤を前記対象体の循環系から除去するための除去剤を提供するための、生体−直交性反応性対の使用を提供する。
【００２６】
さらに他の側面では、本発明は、１以上のヘキソ−ス基及びジエン基を持つ化合物を含む除去剤を含む。
【００２７】
さらに他の側面では、本発明は、１以上のヘキソ−ス基及びジエノフィル基板を持つ化合物を含む除去剤を含む。
【００２８】
さらに他の側面では、本発明は、動物又は人対象体の循環系から生体分子を除去剤するための方法を提供するものであり、前記方法は、投与剤及び除去剤を投与することを含み、前記投与剤は第１の反応性基を持ち、かつ前記除去剤は第２の反応性基を持ち、前記第１の反応性基及び第２の反応性基が、お互いに生物−直交的反応性であるように選択される。さらなる側面に関連して、本発明は、上で定めた投与剤及び除去剤の、動物又は人対象体の循環系から生体分子を除去するための使用を含む。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】図１は、上で説明したプレタ−ゲット方法の概念を一般形に示す。
【図２】図２は、（３、６）−ジ−（２−ピリジル）−ｓ−テトラジン及びＥ−シクロオクテンとの［４＋２］ディ−ルスアルダ−反応とその後の生成物と窒素が形成されるレトロディ−ルスアルダ−反応のスキ−ムを示す。このタイプのディ−ルスアルダ−反応は、しばしば、「逆電子要求ディ−ルスアルダ−反応」として参照される。以下の説明において、連続した両方の反応ステップ、即ち最初のディ−ルスアルダ−シクロ付加（通常、逆電子要求ディ−ルスアルダ−シクロ付加反応）及び続くレトロディ−ルスアルダ−反応は、短く「レトロディ−ルスアルダ−反応」又は「レトロ−ＤＡ」と参照される。
【図３】図３は、プレタ−ゲット方法の概念を一般的に示すものであり、（１）では、モノクロ−ナル抗体（ｍＡｂ）−タグ（即ち、トランスシクロオクテン）が循環系へ分配され、腫瘍に蓄積され、次に（２）では、前記循環ｍＡｂ−タグは、レトロ−ＤＡ反応により、ガラクト−ス基を持つ足場構造と、相補的タグ（例えば、テトラジン）を含む除去剤と反応し、アシュレルレセプタ−を介して肝臓で捕捉され、次に（３）では、前記相補的タグ（例えばテトラジン）を担持する放射性プレタ−ゲット化エフェクタ−が注入され、及び（４）で、前記エフェクタ−が、レトロ−ＤＡ反応により、腫瘍内の前記ｍＡｂ−タグと反応し、又は迅速に循環系から除去される。
【図４】図４は、実施例で参照される化合物の合成経路及び化学構造を示す。
【図５】図５は、実施例で参照される化合物の合成経路及び化学構造を示す。
【図６】図６は、実施例で参照される化合物の合成経路及び化学構造を示す。
【図７】図７は、実施例で参照される化合物の合成経路及び化学構造を示す。
【図８】図８は、放射性−ＩＴＬＣの結果を示し、（Ａ）は粗生成物及び（Ｂ）は精製１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ、（Ｃ）は放射活性及び（Ｄ）は粗生成物及び精製１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯの染色タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥを示し、及び（Ｅ）は精製１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯのＵＶＳＥＣ−ＨＰＬＣクロマトグラム（２６０ｎｍ及び２８０ｎｍ）の結果を示す。
【図９】図９は、実施例５からの正常マウスでの１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯの血液プロフィルを示す。デ−タポイントは、平均％ＩＤ／ｇであり、誤差バ−は１標準偏差を表す（ｎ＝３）。
【図１０】図１０は実施例５での、（Ａ）ガラクト−ス−ＭＳＡ−テトラジン（１２）の投与、及び（Ｂ）ＢＳＡ−テトラジン（１４）でコ−ティングされたポリスチレンビ−ズの投与の前後での、正常マウスの１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯの血液プロフィルを示す。デ−タポイントは、平均％ＩＤ／ｇであり、誤差バ−は１標準偏差を表す（ｎ＝３）。
【図１１】図１１は、実施例５での、（Ａ）ガラクト−ス−ＭＳＡ−テトラジン（１２）の投与、及び（Ｂ）ＢＳＡ−テトラジン（１４）でコ−ティングされたポリスチレンビ−ズの投与の後での選択された器官での１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯの生体内分布を示す。バ−は、平均％ＩＤ／ｇであり、誤差バ−は１標準偏差を表す（ｎ＝３）。
【図１２】図１２は、実施例６での、１００μｇＣＣ４９−ＴＣＯを投与され、続いてガラクト−ス−ＭＳＡ−テトラジン（１２）の種々の量を投与された腫瘍保持マウスでの１１１Ｉｎ−テトラジンの生体内分布を示す。バ−は、平均％ＩＤ／ｇを示し、誤差バ−は１標準偏差を表す（ｎ＝３から４）。
【図１３】図１３は、ＴＣＯ（Ｅ−マイナ−）−２、５−ジオキソピロリジン−１−イル  ４−（（シクロオクタ−４−エニルオキシ）メチル）ベンゾエ−ト１８の合成経路を示す。
【図１４】図１４は、ＴＣＯ（Ｅ）−２、５−ジオキソピロリジン−１−イル  ２−（（シクロオクタ−４−エン−１−イルオキシ）アセテ−ト２０の合成経路を示す。
【図１５】図１５は、腫瘍保持マウスの（Ａ）１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＣＣ４９及び（Ｂ）ＣＣ４９−ＴＣＯ１８プレタ−ゲット化１７７Ｌｕ−テトラジン１５の血液プロフィルを示す。デ−タポイントと誤差バ−は、平均％ＩＤ／ｇ、１標準偏差をそれぞれ表す（ｎ＝４）。
【図１６】図１６は、腫瘍マウスの１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＣＣ４９及びＣＣ４９−ＴＣＯ１８プレタ−ゲット化１７７Ｌｕ−テトラジン１５の分泌プロフィル（糞及び尿を合わせた）を示す。デ−タポイントと誤差バ−は、平均％ＩＤ／ｇ及び１標準偏差をそれぞれ表す（ｎ＝４）。
【図１７】図１７は、ＰＰＩ−Ｇ１−（ガラクト−ス）２−（テトラジン）２（２３）の合成経路を示す。
【図１８】図１８は、ＰＰＩ−Ｇ３−（ガラクト−ス）１２−（テトラジン）４（２３）の合成経路を示す。
【図１９】図１９は、ＰＰＩ−Ｇ５−（ガラクト−ス）１２−（テトラジン）４（２３）の合成経路を示す。
【００３０】
広い意味で、本発明は、生体−直交性化学（現代的プレタ−ゲット概念など）が、基本的に全ての結合可能な分子を動物、好ましく人対象体の循環系から除去するために使用され得るという賢明な認識を含む。結合可能分子とは、一般的に生化学的又は有機性分子であり、バインダ−又はリガンド（抗体を含む）が提供され得る全ての分子を意味するとして理解されるべきである。結合可能分子は循環系に既に存在している分子であり得る（タンパク質の循環画分など）。または、体内で作用する目的で投与された分子（プレタ−ゲットプロ−ブなど）であり、及び過剰分が循環系から除去されるものである。
【００３１】
本発明は１つの側面において、リガンドなどを第１の生体−直交性反応性基を含む投与剤を介して投与し、続いて第２の生体−直交性反応性基を含む除去剤を投与し、前記基がお互いに生体−直交的に反応することが可能である、という概念を表す。
【００３２】
本発明は、投与剤及び除去剤の組合せを提供する。用語「組合せ」とは、広い意味で理解されるべきであり、両方の成分を含むキットに限定されるものではない。従って、投与剤及び除去剤は、全体としてそれぞれ別々に提供され得る。理解されるべきことは、除去剤の機能は、投与剤との組合せで作用する、ということである。
【００３３】
本発明の投与剤は、対象体へ投与され、循環系から除去される剤、化合物又は基である。この除去は、投与剤自体の除去（除去されることが望ましい過剰なプレタ−ゲット剤など）又は、前記投与剤と循環している生体分子（かかるタ−ゲットの結合画分の造影を邪魔する生体タ−ゲットの循環画分など）により形成される共役物の除去を意味する。従って、ある実施態様では、投与剤は、身体中のある位置、例えば腫瘍へタ−ゲットさせる目的のために投与され得るものであり、その後循環する過剰な剤は除去される。他の実施態様では、投与剤は、造影されるべきタ−ゲットの循環画分を捕捉する目的、又は局所治療を輸送する目的で投与され、非循環の実際の（例えば腫瘍細胞結合）タ−ゲットが造影されるか、前記タ−ゲットされた治療剤が輸送される前に、この循環画分が除去される。この実施態様では、投与剤は、プレタ−ゲット化の必要はないが、それ自体造影されるべきタ−ゲットのためのリガンドを含み得る。投与剤はまた、タ−ゲット化造影又は治療のための試剤であり、例えば抗体−医薬供薬物（即ち、プレタ−ゲットには必ずしも必要ではない）である。例えば、注入される注入可能な放射性ｍＡｂは循環し、及び（部分的に）腫瘍に結合し、次に除去剤が注入されて放射性ｍＡｂを肝臓へ輸送する。
【００３４】
除去剤は、除去されるべき投与剤に結合又は複合体化させ、循環系から除去されるように方向づけられる目的で対象体へ投与される。後者は一般的に、肝臓レセプタ−−系機構を通じて達成されるが、循環系から分泌される他の機構も存在する。
【００３５】
広い意味で、本発明は、生体−直交反応性対が、投与された試剤を循環系から除去する目的で使用され得るという認識に基づく。この目的のため、投与剤は、反応性基を持ち、これは相補的（生体−直交的に）反応性基と生体−直交性反応を行うことが可能である。後者は、除去剤（特に以下説明する）に存在する。
【００３６】
生体−直交性化学が、循環系から除去する目的のために使用可能であるという認識は、広い可能性を開くこととなる。事実、投与されるべき全ての試剤、薬物や造影剤は、生体−直交性反応基の形でタグ化されている。及び循環系からの除去に影響することができる全ての試剤は、生体−直交性反応基の形で相補的タグを持って提供され、これは前記第１の反応性基と生体−直交性反応を行うことができるものである。
【００３７】
循環系から投与された試剤を除去するという概念は、一般的に、タ−ゲット治療及びタ−ゲット造影に関連し、特にプレタ−ゲット方法に関連する。
【００３８】
本発明はさらに、具体的な実施態様に関して説明され、かついくつかの図面に沿って説明されるが、本発明はこれらに限定されるものではなく、特許請求の範囲で限定されるものである。特許請求の範囲のいかなる符号も、本発明の範囲を限定するように解釈されるべきではない。記載された図面は模式的であり、なんらを限定するものではない。図面において、ある要素のサイズは誇張されている可能性があり、説明目的のために寸法通りに描かれているものではない。用語「含む」は、本発明の説明及び特許請求の範囲で使用される場合には、他の要素又はステップを排除するものではない。単数を示す不定冠詞「１つの」、「ひとつの」は、特に記載がない限り、複数を含む。
【００３９】
さらに留意すべきことは、詳細な説明及び特許請求の範囲で使用される用語「含む」は、続いて列挙される手段に限定されるものではなく、他の要素及びステップを排除するものではない、ということである。従って、「手段Ａ及びＢを含む装置」なる表現の範囲は、部品Ａ及びＢのみからなる装置に限定されるものではない。本発明に関しては、これは、前記装置の単に関連する部品がＡ及びＢである、ということを意味する。
【００４０】
いくつかの化学式で、「アルキル」及び「アリ−ル」が参照される。この観点で、「アルキル」とは、それぞれ独立して、Ｏ、Ｎ又はＳなどの１〜３のヘテロ原子を含み得る、炭素原子１０まで、好ましくは１〜６の炭素原子の、脂肪族、直鎖、分岐又は環状アルキル基を示し、「アリ−ル」とは、それぞれ独立して、Ｎ又はＳなどの１〜３のヘテロ原子を含み得る、炭素原子１０までの芳香族又はヘテロ芳香族基を示す。いくつかの式で、基又は置換基は、「Ａ」、「Ｂ」、「Ｘ」、「Ｙ」などの文字、及び「Ｒ」基の種々の数字を参照して示される。これらの文字の定義は、それぞれの式に付されており、即ち特に記載のない限り異なる式ではこれらの文字はそれぞれ独立して異なる意味を持ち得る。
【００４１】
本発明のさらなる好ましい実施態様では、以下いくつかの化学式において、「アルキル」及び「アリ−ル」が参照される。この側面で、「アルキル」とは、それぞれ独立して、１〜１０のＯ、Ｎ又はＳなどのヘテロ原子を含み得る、１０までの炭素電子の、脂肪族、直鎖、分岐、飽和、不飽和及び／又は環状ヒドロカルビル基を示し、及び「アリ−ル」とは、それぞれ独立して、２０炭素原子までの芳香族又はヘテロ方構造基を示し、これは１〜１０のＯ、Ｎ又はＳなどのヘテロ原子を含み得る。「アリ−ル」基はまた、「アルキルアリ−ル」又は「アリ−ルアルキル」基（簡単例：ベンジル基）を含む。「アルキル」、「アリ−ル」、「アルキルアリ−ル」及び「アリ−ルアルキル」が含み得る炭素原子の数は、かかる用語に先行する指定用語により示される（砂割、Ｃ１〜１０アルキルとは、前記アルキル基が炭素原子を１〜１０含み得る、ということを意味する）。本発明のいくつかの化合物は、キラル中心及び／又は互変異性体（ト−トマ−）を含み得るが、全てのエナンチオマ−、ジアステレオマ−及び互変異性体は本発明の範囲に含まれる。
【００４２】
投与剤
本発明の除去の概念は、以前に投与された投与剤の循環系からの除去のために妥当である。投与剤は、循環系から過剰分が除去されることが望ましい全ての試剤であり得る。これは具体的には、特に人対象体の身体内の腫瘍などの位置に薬物又は造影剤をタ−ゲット輸送する場合である。本発明においては、投与剤の化学的機能や構造は特別の役割を演じるものではない。唯一の要求は、それが生体−直交性反応基を持つ、ということである。前記生体−直交性反応基の投与剤との正確な結合は、両方の分子構造に依存するが、しかし、留意すべきことは、これは当業者にとって特別困難なことではなく、種々の生体分子について多くの知られた結合基板が存在する、ということである。前記結合は、場合により、２から２００、具体的には３から１１３及び好ましくは５から５０のポリエチレングリコ−ル（ＰＥＧ）鎖などのスペ−サ−を介することも可能である。
【００４３】
好ましい実施態様では、投与剤は、治療剤又は造影剤などのプレタ−ゲット化輸送で使用されるプレタ−ゲットプロ−ブである。ここで、投与剤に加えられる反応性機能、即ち、一組の生体−直交性反応物の前記生体−直交性反応性基のいずれかが、循環系からの除去及び続くエフェクタ−プロ−ブのプレタ−ゲットプロ−ブへの付加の機能を持つ。
【００４４】
他の好ましい実施態様では、投与剤は、循環系に既に存在する生体分子のためのリガンドを含む。これは、例えば、造影されるべきタンパク質タ−ゲットへのモノクロ−ナル抗体、又は又治療が施される局所薬物治療を意味する。留意されるべきは、一般的に、これは広い範囲の生体タ−ゲット、及び当業者に知られる対応するリガンドへ応用可能である、ということである。
【００４５】
さらなる実施態様では、投与剤は、タ−ゲットされるべきタ−ゲット化基（抗体など）及び薬物（又は造影剤）を含む。
【００４６】
除去剤
除去剤は、その最小成分として、除去目的成分と結合成分を含む。前記結合成分は、前記説明した生体−直交性反応基である。前記除去目的成分は、前記捕捉された投与剤を排出器官へ送ることで循環系からの除去することを保証する。
【００４７】
本発明除去剤は、血液を比較的短時間で循環するが、前記循環系を去る前に血液中で残留する投与剤（モノクロ−ナル抗体タグなど）と結合するために十分反応性である。これらは、例えば腫瘍結合ｍＡｂ−タグと反応する十分な時間及び機会がなく、これは肝臓ヘキソ−スレセプタ−とのサイズ又は相互作用のよるか、又は循環系を去る速度の結果とであり得る。
【００４８】
場合により、造影可能なシグナルを生成することが可能な除去剤が使用され得る。
従って、非侵襲造影化技術が、対象体の身体内に前記除去剤の分布をモニタ−するために使用され得る。
【００４９】
前記除去剤は、一般的に、それ自体が、既に投与された投与剤に、その望ましい位置で結合されることを防止する（即ち、除去剤は投与剤の循環する過剰分と結合し、実質的にはそのタ−ゲット化種には結合しない）ように作用するようなサイズ、構造、荷電又はこれらの性質の組合せを持つ。この目的で、前記除去剤は一般的に足場構造を持つ。好適な足場構造は、当業者に知られており、例えばタンパク質、デンドリマ−及び高分子量ポリマ−などである。他の好ましい除去剤は生体−直交性反応基で変性された、ナノ又はミクロ粒子足場構造を含み、例えばリポソ−ム又はポリメリソ−ム、脂質又はポリマ−又はタンパク質殻バブル、脂質又はポリマ−又はタンパク質粒子、鉄酸化物又は金又はシリカ粒子、量子ドット、カ−ボンナノチュ−ブ、ヨウ素化合物で満たされたカプセル又は他のナノ及びミクロ構造などである。前記粒子自体は除去目的基として機能する。
【００５０】
好ましくは除去剤は、ヘキソ−ス系及び非ヘキソ−ス系基を持つ。ヘキソ−ス系除去剤は、アシュウェルレセプタ−、又は肝細胞、内皮細胞及び／又は肝臓のクプファ−細胞に伴うマンノ−ス／Ｎ−アセチルグルコサミンレセプタ−などのその他のレセプタ−により認識される１以上のヘキソ−ス（６炭素糖基）を導入するために誘導体化されている。
【００５１】
かかるヘキソ−スの例示は、ガラクト−ス、マンノ−ス、マンノ−ス−６−フォスフェ−ト、Ｎ−アセチルグルコサミン、ペンタマンノシルフォスフェ−トなどである。グルコ−ス、Ｎ−ガラクト−スアミン、Ｎ−アセチルガラクト−スアミン、ペンタマンノシルフォスフェ−ト、ガラクト−スのチオグリコシド及び一般的にＤ−ガタクトシド及びグルコシドなどを含む他のアシュウェルレセプタ−により認識される基もまた、本発明の実施に使用され得る。ガラクト−スは、この詳細な説明の目的において典型的な除去剤ヘキソ−ス誘導体である。タンパク質へのガラクト−スチオグリコシド共役物は、好ましくは、以下の手順に従い、これはＬｅｅらの「２−Ｉｍｉｎｏ−２−ｍｅｔｈｏｘｙｅｔｈｙｌ  １−Ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ：Ｎｅｗ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ａｔｔａｃｈｉｎｇ  Ｓｕｇａｒｓ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１５（１８）：３９５６、１９７６）」の教示に類似する。他の有用なガラクト−スチオグリコシド共役方法は、Ｄｒａｎｔｚらの「Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｌｉｖｅｒ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ」（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１５（１８）：３９６３、１９７６）」に説明された方法である。
【００５２】
生体−直交性反応基
本発明は、一般的に、お互いに生体−直交性反応性を示す非生物的反応性化学基の全ての対へ適用可能である。生体−直交性反応は、前記生体−直交性反応性基がお互いのみ認識し、一方それらの細胞的／生理学的環境は無視するような生理的条件下で起こる。
【００５３】
かかる反応の例は広い範囲にわたり、急速に進展している。最近の進展はスタウジンガ−リゲ−ションであり、即ち反応相手がアジド及びホスフィンである。タ−ゲットされる医学的造影剤及び／又は治療のためのプレタ−ゲット方法での使用のために、この技術は国際公開第２００６／０３８１８５号に記載されている。他の例は、［３＋２］アジド−アルキンシクロ付加反応であり、これは国際公開第２００７／０３９８５８号に記載されており、「クリック化学」として知られている。他のタイプのカップリング化学反応は、「ＮｅａｌＫ．Ｄｅｖａｒａｊ、ＲａｌｐｈＷｅｉｓｓｌｅｄｅｒ、ａｎｄ  ＳｃｏｔｔＨｉｌｄｅｒｂｒａｎｄ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．２００８、１９、２２９７−２２９９」に記載されている。これは、生体細胞ラベル化への生体−直交性テトラジンシクロ付加反応の応用に関する。ここで反応相手は、３−（ｐ−ベンジルアミノ）−１、２、４、５−テトラジン及びノルボルネン、即ち（１Ｓ、２Ｓ、４Ｓ）−ビシクロ［２、２、１］ヘプタ−５−エン−２−イル酢酸であり、これはディ−ルスアルダ−シクロ付加反応を、次にレトロディ−ルスアルダ−反応を行い、窒素（Ｎ２）を放出する。このカップリング反応はまた、逆電子要求ディ−ルスアルダ−反応と参照される。他の例示は、国際公開第２０１０／０５１５３０号に記載されており、ここでプレタ−ゲット方法は、テトラジンなどのジエン及びｔｒａｎｓ−シクロオクテノ−ル（ＴＣＯ）などのジエノフィルとの間の反応性に基づく。他の逆電子要求ディ−ルスアルダ−反応（又は「レトロディ−ルスアルダ−反応」）の参照文献及び反応種の挙動については：「Ｔｈａｌｈａｍｍｅｒ、Ｆ；Ｗａｌｌｆａｈｒｅｒ、Ｕ；Ｓａｕｅｒ、Ｊ、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９９０、３１（４７）、６８５１−６８５４」；「Ｗｉｊｎｅｎ、ＪＷ；Ｚａｖａｒｉｓｅ、Ｓ；Ｅｎｇｂｅｒｔｓ、ＪＢＦＮ、Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９６、６１、２００１−２００５」；「Ｂｌａｃｋｍａｎ、ＭＬ；Ｒｏｙｚｅｎ、Ｍ；Ｆｏｘ、ＪＭ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ＯｆＴｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、２００８、１３０（４１）、１３５１８−１９）」；「Ｒ．Ｒｏｓｓｉｎ、Ｐ．ＲｅｎａｒｔＶｅｒｋｅｒｋ、ＳａｎｄｒａＭ．ｖａｎｄｅｎＢｏｓｃｈ、Ｒ．Ｃ．Ｍ．Ｖｕｌｄｅｒｓ、ｌ．Ｖｅｒｅｌ、Ｊ．Ｌｕｂ、Ｍ．Ｓ．Ｒｏｂｉｌｌａｒｄ、Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  ＩｎｔＥｄ２０１０、４９、３３７５−７８」；「Ｎ．Ｋ．Ｄｅｖａｒａｊ、Ｒ．Ｕｐａｄｈｙａｙ、Ｊ．Ｂ．Ｈａｕｎ、Ｓ．Ａ．Ｈｉｌｄｅｒｂｒａｎｄ、Ｒ．Ｗｅｉｓｓｌｅｄｅｒ、Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  ＩｎｔＥｄ２００９、４８、７０１３」及び「Ｄｅｖａｒａｊｅｔａｌ．、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．、２００９、４８、１−５」が挙げられる。
【００５４】
理解されるべきことは、前記投与剤は、生体−直交性反応基対を形成する前記２つの生体−直交性反応基のいずれかを持ち、又前記除去剤は前記対の他方を持つ、ということである。除去剤の好ましい使用において、第１のプレタ−ゲットプロ−ブが投与される。最終的には、エフェクタ−プロ−ブが投与されて、前記プレタ−ゲットプロ−ブとその望ましい位置（即ち腫瘍細胞）で反応するように作用する。前記エフェクタ−プロ−ブ及び除去剤の前記反応基は、同一でも異なっていてもよいが、前記プレタ−ゲットプロ−ブの前記生体−直交性反応基に対しての反応性は同じである。即ち、プレタ−ゲットプロ−ブがジエノフィルである場合、除去剤およびエフェクタ−プロ−ブはジエンを含みが、これらのジエンは必ずしも同一であることは必要ではない。
【００５５】
好ましくは、前記投与剤及び除去剤は、生体−直交性［４＋２］シクロ付加反応性であるように選択される。より好ましくは、両方の試剤はお互いに、「レトロディ−ルスアルダ−」反応を介して反応する。
【００５６】
前記レトロディ−ルスアルダ−カップリング化学は一般的には、１対の反応物を含み、これらはカップリングして不安定な中間体を形成し、前記中間体はレトロディ−ルスアルダ−反応の唯一の副生成物として小分子（これは出発物質に依存し、例えばＮ２、ＣＯ２、ＲＣＮなど）を除去して安定な生成物を形成する。前記一対の反応物は、１つの反応物として（即ち１つの生体直交反応性基）、テトラジンの誘導体など、及び他の反応物として（即ち他の生体直交反応性基）、式（１）により歪シクロオクテンを含む。
【００５７】
例えば電子欠乏性（置換）テトラジンと、例えば歪Ｅ−シクロオクテンとの例外的に速い反応により、中間体を経て、Ｎ２を［４＋２］レトロディ−ルスアルダ−シクロ付加での唯一の副生成物として除去することで安定なジヒドロピリダジンへ変換される結果となる。これは図２に示される。
【００５８】
この２つの反応種は非生物的であり、従ってインビボでの迅速な代謝を受けない。これらは生体−直交性であり、例えば選択的にお互いと生理的媒体中で反応する。逆電子要求ディ−ルスアルダ−反応及び、反応種の挙動についても参考文献は：「Ｔｈａｌｈａｍｍｅｒ、Ｆ；Ｗａｌｌｆａｈｒｅｒ、Ｕ；Ｓａｕｅｒ、Ｊ、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９９０、３１（４７）、６８５１−６８５４」；「Ｗｉｊｎｅｎ、ＪＷ；Ｚａｖａｒｉｓｅ、Ｓ；Ｅｎｇｂｅｒｔｓ、ＪＢＦＮ、Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９６、６１、２００１−２００５」；「Ｂｌａｃｋｍａｎ、ＭＬ；Ｒｏｙｚｅｎ、Ｍ」；及び「Ｆｏｘ、ＪＭ、Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、２００８、１３０（４１）、１３５１８−１９」が挙げられる。
【００５９】
本発明の好ましい通常の実施態様によれば、前記生体−直交性反応基のいずれかがジエノフィルであり、他がジエンであり、ここで前記ジエノフィルが８−員環ジエノフィルであって式（１）を満たすものである：
【００６０】
【化２】
2014500307.tif 000004
ここで、それぞれのＲは独立して、Ｈ又は最大６まで、アルキル、アリ−ル、Ｏ−アリ−ル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アリ−ル、Ｓ−アルキル、Ｓ（Ｏ）−アリ−ル、Ｓ（Ｏ）−アルキル、Ｓ（Ｏ）２−アリ−ル、Ｓ（Ｏ）２−アルキル、Ｓｉ−アリ−ル、Ｓｉ−アルキル、Ｓｉ−Ｏ−アルキル、ＯＣＯ−アルキル、ＯＣＯ−アリ−ル、ＳＣＯ−アルキル、ＳＣＯ−アリ−ル、ＯＣＳ−アルキル、ＯＣＳ−アリ−ル、ＳＣＳ−アルキル、ＳＣＳ−アリ−ル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｎ３、ＳＯ２Ｈ、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ４Ｈ、ＰＯ３Ｈ、ＰＯ４Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＯ２、ＮＯ、ＣＮ、ＯＣＮ、ＳＣＮ、ＮＣＯ、ＮＣＳ、ＣＦ３、ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−アルキル、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−アリ−ル）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アリ−ル又はアルキル）、ＮＲ’ＣＯ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’−アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’−アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’−アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’−アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＣＲ’ＮＲ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、から選択される置換基で置換され、ここで２つのＲ基は共に環を形成し、及びここで、Ｘ及びＹはそれぞれ独立して、Ｈ、又は、アルキル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ２、ＮＯ２、及びＮＲＲ’（Ｒ及びＲ’はそれぞれ独立してＨ又はアルキル）を表し、又は共に結合を形成し、１つのＲは前記それぞれの投与剤又は除去剤へ場合によりスペ−サ−を介して連鎖（リンケ−ジ）、又は前記除去剤の機能的成分を形成する。前者の場合、これは通常はプレタ−ゲットプロ−ブの連結（リンケ−ジ）を含み、後者の場合は除去目的基への連結（リンケ−ジ）であり得る。
【００６１】
当業者は、前記レトロディ−ルスアルダ−反応で反応性であるジエンの多くを認識する。
【００６２】
好ましくはジエンは、以下式（２）から（７）に示される。
【００６３】
【化３】
2014500307.tif 000005
ここで、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、アル−ル、ＣＦ３、ＣＦ２、ＣＦ２−Ｒ’、ＯＲ’、ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’、ＮＲ’（＝Ｓ）ＳＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’Ｒ’’’（ここで、Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’はそれぞれ独立してＨ、アルキル又はアルキル）からなる群から選択され；Ａ及びＢはそれぞれ独立して、アルキル置換炭素、アリ−ル置換炭素、Ｎ＋Ｏ−、Ｎ＋Ｒ（Ａ及びＢは共に炭素でない場合にＲはアルキル）からなる群から選択され；Ｘは、Ｏ、Ｎ−アルキル及びＣ＝Ｏからなる群から選択され、及びＹは、ＣＲであり、ＲはＨ、アルキル、アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’（ここで、Ｒ’、Ｒ’’はＨ、アリ−ル又はアルキル）からなる群から選択される。
【００６４】
シクロオクテンの反応相手として好適なジエンは：
【００６５】
【化４】
2014500307.tif 000006
であり、ここで、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリ−ル、ＣＦ３、ＣＦ２−Ｒ’、ＮＯ２、ＯＲ’、ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’（ここでＲ’及びＲ’’はそれぞれ独立してＨ、アリ−ル及びアルキルであり、Ｒ’’’は独立してアリ−ル又はアルキル）からなる群から選択され；
Ａは、Ｎ−アルキル、Ｎ−アリ−ル、Ｃ＝Ｏ及びＣＮ−アルキルからなる群から選択され；ＢはＯ又はＳであり；Ｘは、Ｎ、ＣＨ，Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＣＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’（ここでＲ’及びＲ’’はそれぞれ独立してＨ、アリ−ル又はアルキル基であり、Ｒ’’’はそれぞれ独立してアリ−ル又はアルキル）から成る群から選択され；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、Ｎ及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択される。
【００６６】
シクロオクチンの反応相手として特に好ましい同様のジエンは：
【００６７】
【化５】
2014500307.tif 000007
であり、ここでここでＲ１及びＲ２はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アリ−ル、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、ＣＦ３、Ｃ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−アルキル及びＮＯ２からなる群から選択され；Ａは、ＣＯ、Ｃ−アルキル、ＣＮ−アルキル、Ｖ−アルキル及びＮ−アリ−ルからなる群から選択され；ＢはＯであり；Ｘは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル及びＮであり；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、Ｎ及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択される。
【００６８】
シクロオクテンの反応相手として特に好ましい他のジエンは：
【００６９】
【化６】
2014500307.tif 000008
であり、ここで、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリ−ル、ＣＦ３、ＣＦ２−Ｒ’、ＮＯ２、ＯＲ’、ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’（ここでＲ’及びＲ’’はそれぞれ独立してＨ、アリ−ル及びアルキルであり、Ｒ’’’は独立してアリ−ル又はアルキル）からなる群から選択され；Ａは、Ｎ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；ＢはＮであり；Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＣＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’（ここでＲ’及びＲ’’はそれぞれ独立してＨ、アリ−ル又はアルキル基であり、Ｒ’’’はそれぞれ独立してアリ−ル又はアルキル）から成る群から選択され；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、Ｎ及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択される。
【００７０】
シクロオクチンの反応相手として特に好ましい同様のジエンは：
【００７１】
【化７】
2014500307.tif 000009
であり、ここで、Ｒ１は、Ｈ，アルキル、アリ−ル、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から選択され；Ｒ２は、Ｈ、アルキル、アリ−ル、ＣＮ、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から選択され；Ａは、Ｎ、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；ＢはＮであり；Ｘは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル及びＮ、からなる群から選択され；Ｙは、ＣＨ、ＣＣＮ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択される。
【００７２】
特に有用なテトラジン誘導体は電子欠乏性テトラジンであり、即ち一般的には電子供与として保持しない置換基、好ましくは電子吸引性置換基で置換されたテトラジンである。
【００７３】
この電子欠乏性テトラジンは一般に次の構造式を満たす：
【００７４】
【化８】
2014500307.tif 000010
ここでＲ１及びＲ２はそれぞれ独立して、Ｈ、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２、６−ピリミジル、２、５−ピリミジル、３、５−ピリミジル、２、４−ピリミジル又はフェニ−ルであって，これらは場合によりＮＯ２、Ｆ，Ｃｌ，ＣＦ３，ＣＮ，ＣＯＯＨ，ＣＯＯＲ，ＣＯＮＨ２，ＣＯＮＨＲ，ＣＯＮＲ２，ＣＨＯ，ＣＯＲ，ＳＯ２Ｒ，ＳＯ２ＯＲ，ＮＯ，Ａｒなどの１以上の電子吸引基で置換されていてもよい（ＲはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ａｒとは芳香族基、特にフェニ−ル、ピリジル又はナフチル基を表す）、からなる群から選択される。
【００７５】
式（２）から（７）のそれぞれによる化合物で、Ｒ１及びＲ２基（そのＸ及びＹ基を含む）は、さらに、以下説明するような好適なリンカ−又はスペ−サ−を含み得る。同様に又は独立して、前記式（１）のジエノフィルはさらに、以下説明するような好適なリンカ−又はスペ−サ−を含み得る。
【００７６】
本発明で使用される歪シクロオクテンジエノフィルは以下Ｅ−シクロオクテンとする。前記従来命名を参照する上で理解されるべきことは、置換基Ｘ又はＹの結果として、前記置換基の位置及び分子量に依存して、同じシクロオクテン異性体が形式的にＺ異性体となり得る、ということである。本発明及び本発明の全ての変更例において、形式的「Ｅ」又は「Ｚ」、又は「シス」又は「トランス」異性体かどうかは、無置換トランス−シクロオクテン又は無置換Ｅ−シクロオクテンの誘導体と考えられる。用語「トランス−シクロオクテン」（ＴＣＯ）はＥ−シクロオクテン同様、交換可能に使用され、本発明の全てのジエノフィルについて維持され、又置換基が形式的に逆の命名を必要とする場合であっても、維持される。即ち、本発明は、シクロオクテンに関し、ここで以下で炭素原子１及び６と数字付けされた炭素原子がＥ（エントゲ−ゲン）又はトランス位置にある。
【００７７】
【化９】
2014500307.tif 000011
【００７８】
さらなる好ましい実施態様では、前記ジエノフィルは式（１ａ）を満たすジエノフィルであり、
【００７９】
【化１０】
2014500307.tif 000012
ここで、Ｒの位置はエカトリアルであり、Ｒａの位置はアキシャルであり、ここで、Ｘ、Ｙ、Ｒ及びＲａのそれぞれは独立して、Ｈ又は最大６まで、アルキル、アリ−ル、Ｏ−アリ−ル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アリ−ル、Ｓ−アルキル、Ｓ（Ｏ）−アリ−ル、Ｓ（Ｏ）−アルキル、Ｓ（Ｏ）２−アリ−ル、Ｓ（Ｏ）２−アルキル、Ｓｉ−アリ−ル、Ｓｉ−アルキル、Ｓｉ−Ｏ−アルキル、ＯＣＯ−アルキル、ＯＣＯ−アリ−ル、ＳＣＯ−アルキル、ＳＣＯ−アリ−ル、ＯＣＳ−アルキル、ＯＣＳ−アリ−ル、ＳＣＳ−アルキル、ＳＣＳ−アリ−ル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｎ３、ＳＯ２Ｈ、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ４Ｈ、ＰＯ３Ｈ、ＰＯ４Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＯ２、ＮＯ、ＣＮ、ＯＣＮ、ＳＣＮ、ＮＣＯ、ＮＣＳ、ＣＦ３、ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル、アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−アルキル、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−アリ−ル）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アリ−ル又はアルキル）、ＮＲ’ＣＯ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’−アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’−アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’−アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’−アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＣＲ’ＮＲ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、からなる群から選択される置換基で置換され、Ｒ又はＲａの１つが、前記投与剤又は除去剤のいずれかへの、場合によりスペ−サ−を介してリンカ−基を含み；２つのＲ又はＲａが共に環を形成し；及びＲａの少なくとも１つ及び最大４つが水素ではない。
【００８０】
これらの好ましいアキシャル置換シクロオクテンジエノフィルは、前記生体−直交性カップリング反応の反応速度を１０倍以上増加させる。又は言い換えると、反応時間が最初必要とされた時間の１０％で良いということである。又は言い換えると、１つの反応物の濃度が１０倍低くてもよいということである。
【００８１】
説明したように、Ｒａの少なくとも１つ最大４つが水素ではなく、これはかかるＲａが置換基でありリンカ−構造の一部分であることを意味する。好ましくは、非水素Ｒａの数は１又は２である。
【００８２】
より好ましくは、非水素のＲａの少なくとも１つ最大４つが、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ及びＲ５ａからなる群から選択される位置にある。なお好ましくは、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ及びＲ５ａの１又は２が非水素である。最も好ましくは、置換基又はリンカ−構造が、Ｒ３ａ又はＲ４ａの１つ又は両方に存在することである。
【００８３】
好ましくは、前記置換基は、上で定められた式（１ａ）を参照して上で定められた基から選択される。
より好ましくは、前記Ｒａはアルキル又はＯ−アルキル、より好ましくはメチル又はＯ−ｔ−ブチルである。特に好ましい実施態様では、前記Ｒａはアリ−ル又はＯ−アルキルである。
【００８４】
留意すべきことは、Ｒａについては場合により好ましくは、置換基がエカトリアル位置に存在するかどうか（即ち上で定められた式（１ａ）でのＲ基）、他の炭素上か同じ炭素上にあるかどうかには関係しない。好ましくは、１以上のアキシャル置換基に加えて、また１以上のエカトリアル置換基が存在し、前記置換基が好ましくはリンカ−構造の一部分であるＲ又はＲａを含む。しかし、他の好ましい実施態様では、合成努力と反応性の間のバランスから鑑みて、好ましくは１又は２のＲａが水素ではなく、かつ他の全てのＲ及びＲａが水素である。
【００８５】
さらに好ましくは、Ｘ及び／又はＹはＯ−アルキル又はアルキルであり、より好ましくはメチルである。
【００８６】
好ましい実施態様では、前記ジエノフィル、例えばテトラジンは広い範囲の反応性及び安定性を示し、これにより特定の応用に合わせてプロ−ブを設計することに用いられる。例えば、プレタ−ゲットプロ−ブでのテトラジン基に比較して低い反応性を持つテトラジン基が除去剤で使用され、除去剤が腫瘍結合ＴＣＯと反応してプレタ−ゲットプロ−ブをブロックする状況を防止することができる。
【００８７】
プレタ−ゲットプロ−ブ
前記の通り、好ましい実施態様では前記投与剤はプレタ−ゲットプロ−ブである。
【００８８】
プレタ−ゲット方法の一般的に概念は図１に示される。ここでエフェクタ−プロ−ブは、造影モダリティのための検出可能なラベルを含む造影プロ−ブである。前記造影プロ−ブは、（プレ）−結合プレプターゲットプロ−ブへ、その第２のタ−ゲット化基を介して結合する。
【００８９】
プレタ−ゲットプロ−ブは、前記興味対象であるプライマリ−タ−ゲットへ結合することができる。
【００９０】
前記タ−ゲット基は通常は、細胞表面タ−ゲット（例えば膜レセプタ−）、構造タンパク質（例えばアミロイド斑）又は細胞内タ−ゲット（例えばＲＮＡ、ＤＮＡ、酵素、細胞シグナル経路）へ親和性を持つ構造物である。これらの基は、抗体（断片）、タンパク質、アプタマ−、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド、オリゴ糖、同様にペプチド、ペプトイド及び具体的な疾患又は障害で蓄積されることが知られている有機薬物化合物である。
【００９１】
本発明のキットで使用される好適なプライマリ−タ−ゲット基の具体的な実施態様はここで説明され、レセプタ−結合性ペプチド及び抗体を含む。本発明の具体的な実施態様は、細胞透過性タ−ゲットプロ−ブを得るために、ペプチドなどの小さいタ−ゲット基の使用に関する。
【００９２】
本発明で使用される「第１のタ−ゲット基」は、第１のタ−ゲットへ結合する前記タ−ゲットプロ−ブの部分に関連する。第１のタ−ゲット基の具体的な例は、レセプタ−に結合するペプチド又はタンパク質である。第１のタ−ゲット基の他の例は、細胞成分に結合する抗体又はその断片である。抗体はタンパク質又はペプチドと同様に非タンパク性化合物とし得る。他の第１のタ−ゲット基は、アプタマ−、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド、オリゴ糖、同じくペプトイド及び有機薬物化合物から形成され得る。第１のタ−ゲット基は好ましくは、高特異的に、高親和性で、場合により共有結合的に、結合し、かつ前記第１のタ−ゲットは好ましくは身体で安定である。
【００９３】
前記列挙の第１のタ−ゲットの特異的タ−ゲットを可能にするために、前記タ−ゲットプロ−ブの第１のタ−ゲット部分は、限定されるものではないが、Ｆａｂ２、Ｆａｂ、ｓｃＦＶなどの抗体断片、二重特異的抗体、ポリマ−（ＥＰＲ効果による腫瘍タ−ゲット化）タンパク質、ペプチド例えばオクトレオチド及び誘導体、ＶＩＰ、ＭＳＨ、走化性ペプチド、ボンベシン、エラスチン、ペプチド類似物、炭水化物、単糖類、多糖類、ウイルス、全細胞、ファ−ジ、医薬物、化学療法医薬、レセプタ−作動薬及び拮抗剤、が含まれる。本発明に含まれる有機化合物の例は、エストラジオ−ル、アンドロゲン、プロゲスチン、コルチコステロイド、パクリタキセル、エトポシド、ドキソルブリシン、メトトレキサ−ト、葉酸及びコレステロ−ルなどのエストラゲン又はその誘導体である。
【００９４】
本発明の１つの具体的実施態様によると、前記第１のタ−ゲットは、限定されるものではないが、レセプタ−などのリガンド又はその一部分であってなお前記レセプタ−に結合するもの、例えばレセプタ−結合性タンパク質リガンドの場合のレセプタ−結合性ペプチドである。
【００９５】
タンパク質性の第１のタ−ゲット部分の他の例は、アルファ、ベ−タ、ガンマインタ−フェロンなどのインタ−フェロン、インタ−ロイキン、及び腫瘍成長因子などのタンパク質成長因子、例えばアルファ、ベ−タ腫瘍成長因子、血小板成長因子（ＰＤＧＦ）、μＰＡＲタ−ゲットタンパク質、アポリポタンパク質、ＬＤＬ、アネキシンＶ、エンドスタチン及びアンジオスタチンを含む。
【００９６】
第１のタ−ゲット部分の他の例は、例えば前記第１のタ−ゲットと相補的である、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＰＮＡ及びＬＮＡを含む。
【００９７】
本発明の１つの具体的実施態様によると、細胞内の第１のタ−ゲットへ結合し得る小さい脂質親和性第１のタ−ゲット部分が使用される。
【００９８】
本発明のさらなる具体的実施態様によると、前記第１のタ−ゲット及び第１のタ−ゲット部分は、癌、炎症、感染症、心血管疾患などの組織又は疾患、血栓、アテロ−ム性動脈硬化症などの心臓欠陥疾患、脳卒中などの低酸素サイト、腫瘍、心臓血管疾患、脳疾患、アポト−シス、血管形成、器官、およびレポ−タ−遺伝子／酵素などの特異的タ−ゲット化又は強調タ−ゲット化を可能にする。これは、組織、細胞又は疾患特異的発現を用いて第１のタ−ゲットを選択することで達成できる。例えば、膜葉酸レセプタ−は、葉酸エステル及びメトトレキサ−トなどの類似物の細胞内蓄積を媒介する。発現は正常組織では限定されているが、種々の腫瘍細胞タイプではレセプタ−が過剰発現している。
【００９９】
１つの実施態様によると、前記プレタ−ゲットプロ−ブ及び前記エフェクタ−プロ−ブは、多量体化合物であって、複数の第１の及び／又は第２のタ−ゲット及び／又はタ−ゲット部分を含む。これらの多量体化合物は、ポリマ−、デンドリマ−、リポソ−ム、ポリマ−粒子又は他のポリマ−性構造物であり得る。検出シグナルの増幅の特に興味あることは、１以上の第２のタ−ゲットを持つタ−ゲットプロ−ブであり、これはいくつかのエフェクタ−プロ−ブの結合を可能にする。
【０１００】
プレタ−ゲットプロ−ブはさらに、前記の第１の生体−直交反応基を持つ。この基は、前記レトロディ−ルスアルダ−カップリング化学の前第１の反応相手を与える前記タ−ゲットプロ−ブの部分として、「第２のタ−ゲット」として作用する。
【０１０１】
前記第２のタ−ゲットは前記の通り、前記カップリング反応のいずれかの相手となり得る。即ち、１つの実施態様では、電子欠乏テトラジンである。他の実施態様では、前記式（１）のアキシャル置換ＴＣＯであり、より好ましくは式（１ａ）のアキシャル置換シクロオクテンである。
【０１０２】
前記プレタ−ゲットでは、前記第１のタ−ゲット部分及び前記第１の生体直交反応基はお互いに直接リンクされている。これらはまた、お互いにリンカ−を介して結合され、さらにこれらは共に第１のタ−ゲット足場（ｓｃａｆｆｏｌｄ）、例えばポリペプチドなどの生体ポリマ−にリンクされ得る。即ち、最も単純な意味で、前記リンカ−部は１つの結合である。好適なリンカ−部はさらに、限定されるものではないが、２から２００、具体的には３から１１３、及び好ましくは５から５０の間の繰り返し単位のポリエチレングリコ−ル鎖（ＰＥＧ）を含む。前記ＰＥＧ鎖長を調節することで、生理的システム中での前記プロ−ブの循環時間を変更することができる。これはプレタ−ゲットプロ−ブについて特に関係がある（前記第１のタ−ゲット部分と前記第１のタ−ゲットをリンクする最初のタ−ゲットステップが、比較的遅いプロセスを含み、比較的長い循環時間を必要とするからである）。リンカ−部は場合により生体ポリマ−断片、例えばオリゴ又はポリペプチド又はポリラクチドを含む。
【０１０３】
理解されるべきは、本発明は、前記ジエンとジエノフィルが前記プレタ−ゲット又はエフェクタ−プロ−ブのいずれかに攻撃され得る全ての方法を含む、ということである。これらのプローブへの共役を有効にする方法は、例えばリジンやシステインなどのアミノ基を通じて行うことは当業者に知られている。
【０１０４】
本発明のひとつの実施態様によれば、タ−ゲット化造影のために使用される。
【０１０５】
この実施態様では、特定の第１のタ−ゲットの造影は、前記プレタ−ゲットプロ−ブの前記第１のタ−ゲット部分への特異的結合及びこの結合を前記エフェクタ−プロ−ブに含まれる検出可能なラベルを用いて検出することで達成可能となる。
【０１０６】
第１のタ−ゲット
本発明で使用される「第１のタ−ゲット」は、診断及び／又はイメ−ジング方法で検出されるタ−ゲット、及び／又は変更され、結合され又は医薬活性化合物が輸送されるタ−ゲットに関連する。
【０１０７】
前記第１のタ−ゲットは、ヒト又は動物体内又は病原体や寄生虫の全ての好適なタ−ゲットから選択され得るものであり、例えば、細胞膜や細胞壁などの細胞、細胞膜受容体のような受容体、ゴルジ体やミトコンドリアなどの細胞内構造、酵素、受容体、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ウイルスまたはウイルス粒子、抗体、タンパク質、炭水化物、単糖類、多糖類、サイトカイン、ホルモン、ステロイド、ソマトスタチン受容体、モノアミン酸化酵素、ムスカリン受容体、心筋神経系、例えば白血球上ロイコトリエン受容体、ウロキナ−ゼプラスミノ−ゲン活性化因子受容体（ｕＰＡＲ）、葉酸受容体、アポト−シスマ−カ−、（抗）血管新生マ−カ−、ガストリン受容体、ド−パミン系、セロトニン作動系、ＧＡＢＡ作動性システム、アドレナリン作動系、コリン作動系、オポイド受容体、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体や他の血栓関連受容体、フィブリン、カルシトニン受容体、タフシン受容体、インテグリン受容体、ＶＥＧＦ／ＥＧＦ受容体、ＥＧＦマトリックスメタロプロテア−ゼ（ＭＭＰ）、Ｐ／Ｅ／Ｌセレクチン受容体、ＬＤＬ受容体、Ｐ−糖蛋白質、ニュ−ロテンシン受容体、神経ペプチド受容体、サブスタンスＰ受容体、ＮＫ受容体、ＣＣＫ受容体、シグマ受容体、インタ−ロイキン受容体、単純ヘルペスウイルスチロシンキナ−ゼ、ヒトチロシンキナ−ゼを含む群から選択される。
【０１０８】
本発明の特に具体的な実施態様によると、前記第１のタ−ゲットはレセプタ−などのタンパク質である。又は、前記第１のタ−ゲットは、感染や癌などの疾患の際にアップレギュレ−トされる代謝経路であり得、例えばＤＮＡ、合成、タンパク質合成、膜合成及び炭水化物取り込みなどである。これらの疾患組織で、前記マ−カ−は健康な組織とは異なり、早期検出、特異的診断及び治療、特にタ−ゲット治療のためのユニ−クな可能性を提供し得る。
【０１０９】
エフェクタ−プロ−ブ
エフェクタ−プロ−ブは、望ましい診断、イメ−ジング、及び／又は治療の効果を与えることのできるエフェクタ−部分を含む。前記エフェクタ−プロ−ブは第２のタ−ゲット部分を含む。
【０１１０】
前記第２のタ−ゲット部分は、利用可能な第２のタ−ゲットの反応相手、即ち前記プレタ−ゲットプロ−ブ内に含まれる前記生体直交反応基を形成する前記エフェクタ−プロ−ブの部分である。例えば、前記第２のタ−ゲットが式（１）のジエノフィルである場合、前記第２のタ−ゲット部分はテトラジンなどのジエンであり、逆もそうである。
【０１１１】
前記エフェクタ−部分は、例えば検出可能なラベルであり得る。ここで使用される「検出可能なラベル」とは、前記エフェクタ−プロ−ブの部分であり、例えば細胞、組織又は器官内に存在する場合に前記プロ−ブの検出を可能にする部分を意味する。本発明の範囲に含まれる検出可能なラベルの１つのタイプは造影剤である。異なるタイプの検出可能なラベルが本発明の範囲に含まれ以下説明される。
【０１１２】
従って、本発明の具体的な実施態様によれば、本発明のプレタ−ゲットキット及び方法は造影（イメ−ジング）において使用され、特に医用造影において使用される。前記第１のタ−ゲットを識別するために、エフェクタ−プロ−ブとして、１以上の検出可能なラベルを含む造影（イメ−ジング）プロ−ブが使用される。前記イメ−ジングプロ−ブの検出可能なラベルの具体的な例は、ＭＲＩ−イメ−ジング可能構造物、スピンラベル、光学ラベル、超音波応答構造物、Ｘ線応答部分、放射性元素、（生体）発光及びＦＲＥＴタイプの色素などの従来のイメ−ジングシステムで使用される造影部分である。本発明に含まれる検出可能なラベルの例は、限定されるものではないが、蛍光分子、例えば自動発光分子、試薬に接触すると発光する分子、放射性元素ラベル；蛍光タグ、常磁性金属を含むＭＲＩのためのイメ−ジング構造物、米国特許第４、７４１、９００号及び５、３２６、８５６号に記載されたイメ−ジング試薬を含む。イメ−ジングに使用される放射性元素は、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ、１９Ｆ、５１Ｃｒ、５２Ｆｅ、５２Ｍｎ、５５Ｃｏ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６２Ｚｎ、６２Ｃｕ、６３Ｚｎ、６４Ｃｕ、６６Ｇａ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７０Ａｓ、７１Ａｓ、７２Ａｓ、７４Ａｓ、７５Ｓｅ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、８０Ｂｒ、８２Ｂｒ、８２Ｒｂ、８６Ｙ、８８Ｙ、８９Ｓｒ、８９Ｚｒ、９７Ｒｕ、９９Ｔｃ、１１０Ｉｎ、１１１Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１４Ｉｎ、１１７Ｓｎ、１２０Ｉ、１２２Ｘｅ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１６６Ｈｏ、１６７Ｔｍ、１６９Ｙｂ、１９３Ｐｔ、１９５Ｐｔ、２０１Ｔｌ及び２０３Ｐｂからなる群から選択される。
【０１１３】
他の元素及び同位体で、治療のためなどに使用されるものはまた、ある応用においてイメ−ジングのために適用され得る。
【０１１４】
ＭＲＩイメ−ジング可能部分は、例えば常磁性イオン又は超常磁性粒子であり得る。前記常磁性イオンは、Ｇｄ、Ｆｅ、Ｍｎ、Ｃｒ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｐｒ、Ｎｄ、Ｙｂ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｓｍ、Ｅｕ、Ｔｉ、Ｐａ、Ｌａ、Ｓｃ、Ｖ、Ｍｏ、Ｒｕ、Ｃｅ、Ｄｙ、Ｔｌからなる群から選択され得る。超音波応答部分は、マイクロバブル、リン脂質からなるシェル及び／又は（生分解性）ポリマ−、及び／又はヒト血清アルブミンを含み得る。前記マイクロバブルは、フッ化ガス又は液体で充填され得る。
【０１１５】
Ｘ線応答部分は、限定されるものではないが、ヨウ素、バリウム、硫酸バリウム、ガストログラフィンを含み、又ベシクル、リポソ−ム又はヨウ素及び／又は硫酸バリウムで充填されたポリマ−性カプセルを含み得る。
【０１１６】
さらに、本発明に含まれる検出可能なラベルはまた、例えば検出可能なラベル化抗体の結合により又はサンドイッチタイプのアッセイにより結合抗体を検出することにより、検出されるペプチド又はポリペプチドを含む。１つの実施態様では、検出可能なラベルは小さいサイズの有機ＰＥＴ及びＳＰＥＣＴラベルであり、１８Ｆ、１１Ｃ又は１２３Ｉである。この小さいサイズにより、有機ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴラベルは、細胞内事象をモニタ−するための理想的に好適であり、というのはそれらは一般に前記タ−ゲット装置の性質及び具体的にその膜輸送へ大きくは影響しないからである。ＰＥＴラベル及び第２のタ−ゲット部分としていずれかの前記レトロディ−ルスアルダ−活性部分を含むイメ−ジングプロ−ブは脂質親和性であり、結合相手を見出すまで細胞内を又は細胞から能動的に拡散され得る。さらに、両方の成分は、血液脳関門の横断を排除せず、従って脳内の領域をイメ−ジングすることを可能にする。
【０１１７】
前記エフェクタ−プロ−ブが、ランタニド（例えばＧｄ）などの金属に基づくＭＲＩの造影強化のための脱着可能なラベルを含むことができ、これは好ましくはキレ−トに形で提供される。かかる場合には、エフェクタ−プロ−ブは好ましくは、かかる金属と配位錯体を形成し得る構造部分を持つ。ここで好ましい例は、大環状ランタニド（ＩＩＩ）キレ−トであり、１、４、７、１０−テトラアザシクロドデカン−１、４、７、１０−四酢酸（Ｈ４ｄｏｔａ）、及び１、４、７、１０−テトラアザシクロドデカン−α、α’、α’’、α’’’−テトラメチル−１、４、７、１０−四酢酸（Ｈ４ｄｏｔｍａ）である。
【０１１８】
前記エフェクタ−部分はまた、医薬活性化合物などの治療部分である得る。医薬活性化合物の例はここで与えられている。治療プロ−ブは、場合によりまた検出可能なラベルを含む。
【０１１９】
従って、他の実施態様によると、本発明の前記プレタ−ゲットキット及び方法は、タ−ゲット治療に使用される。これは、第２のタ−ゲット部分及び１以上の医薬活性試薬（即ち、医薬又は放射線治療での放射性同位元素）を含むエフェクタ−プロ−ブの使用を行うことで達成される。タ−ゲット医薬輸送の使用に好適な医薬は当技術部分野で知られている。場合により、治療プロ−ブはまた、１以上のイメ−ジング試薬などの検出可能なラベルを含むことができる。治療のために使用される放射性同位元素は、例えば、２４Ｎａ、３２Ｐ、３３Ｐ、４７Ｓｃ、５９Ｆｅ、６７Ｃｕ、７６Ａｓ、７７Ａｓ、８０Ｂｒ、８２Ｂｒ、８９Ｓｒ、９０Ｎｂ、９０Ｙ、１０３Ｒｕ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１１１Ｉｎ、１２１Ｓｎ、１２７Ｔｅ、１３１Ｉ、１４０Ｌａ、１４１Ｃｅ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１４４Ｐｒ、１４９Ｐｍ、１４９Ｔｂ、１５１Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５９Ｇｄ、１６１Ｔｂ、１６５Ｄｙ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｒ、１７２Ｔｍ、１７５Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１１Ｂｉ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｂ、２１３Ｂｉ、２１４Ｂｉ、２２３Ｒａ、及び２２５Ａｃからなる群から選択される。
【０１２０】
又は前記治療プロ−ブは、インビボで治療位置、例えばＴ細胞、ナチュラルキラ−細胞又はその他のタンパク質などの内因性構造物へ結合する認識部分を含む。
【０１２１】
又は前記治療プロ−ブは、インビボで治療位置、例えばＴ細胞、ナチュラルキラ−細胞又はその他のタンパク質などの内因性構造物へ結合する認識部分を含む。
【０１２２】
エフェクタ−プロ−ブで、前記第２のタ−ゲット部分、即ち第２の生体直交反応基及び前記エフェクタ−部分は、お互いに直接リンクされ得る。これらはまた、リンカ−を介してお互いに結合され、さらにこれらは共に第２のタ−ゲット足場（ｓｃａｆｆｏｌｄ）に結合され得る。前記リンカ−は、独立して、同じ部分から選択されることができ、例えば前記のポリエチレングリコ−ルである。前記第２のタ−ゲット足場は、例えばポリペプチドなどの生体ポリマ−であり得る。
【０１２３】
本発明はまた、プレタ−ゲット方法に関し、これは前記第２のタ−ゲット及び循環するプレタ−ゲットプロ−ブの除去の両方のためにレトロディ−ルスアルダ−反応を利用する。ここで、好適なジエン、好ましくは前記式（２）から（７）のいずれかの化合物、又は前記式（１）のシクロオクテンで官能基化された第１のタ−ゲット部分を含むプレタ−ゲットプロ−ブ（例えば抗体及び抗体断片又はレセプタ−結合ペプチド）を対象物に注入される。前記タ−ゲット（例えば第１の又は転移性腫瘍性病変、動脈硬化性プラ−ク、梗塞領域、炎症又は感染サイトなど）への結合の後、
前記プレタ−ゲットプロ−ブ上の前記生体−直交性反応基へ反応性である生体−直交性反応基を含む除去剤が投与され、それにより循環するプレタ−ゲットプロ−ブを捕捉し、かつ循環系から及び非タ−ゲット化組織（例えば欠エに、肝臓、脾臓、腎臓など）からの除去を可能にする。その後、例えばシクロオクテン又はテトラジン誘導体をそれぞれ（即ち、前記プレタ−ゲットプロ−ブ内の前記生体−直交性反応基の反応相手）を持つ第２のタ−ゲット部分を持つエフェクタ−プロ−ブが注入される。前記エフェクタ−プロ−ブは前記第１のタ−ゲット部分に結合し、前記疾患サイトの造影又は選択的処置を提供する。前記プレタ−ゲットプロ−ブ内に存在する前記生体−直交性反応基の反応相手は、前記除去剤に含まれる反応相手（前記プレタ−ゲットプロ−ブに存在する同じ生体−直交性反応基のために）と同じでも異なっていてもよい。
【０１２４】
本発明はまた、一般的な代謝経路のタ−ゲットに関し、これは疾患（感染や癌など）の際にアップレギュレ−トされるものであり、例えばＤＮＡ、タンパク質及び膜合成及び炭水化物取り込みなどである。好適なプロ−ブは、［１１Ｃ］−メチオニン、［１８Ｆ］−フルオロデオキシグルコ−ス（ＦＤＧ）、デオキシ−［１８Ｆ］−フルオロチミジン（ＦＬＴ）及び［１１Ｃ］−コリンで現在使用されている代謝トレ−サ−に類似する、ジエン又はジエノフィルラベル化アミノ酸、糖、核酸及びコリンが含まれる。高い代謝や増殖を行う細胞はこれらをより多く取り込む。この方法で、例えばテトラジン又はＥ−シクロオクテン誘導体がこれらの又は他の経路に入り細胞内及び／又は細胞上に蓄積される。十分な蓄積がなされ遊離プロ−ブを洗浄した後、検出可能にラベル化された又は医薬担持（細胞透過性）テトラジンプロ−ブ又はＥ−シクロオクテンプロ−ブ（又は本発明により他のジエン／ジエノフィル担持プロ−ブ）は、前記蓄積されたＥ−シクロオクテン、テトラジン代謝物それぞれに結合するために送られる。通常のＦＤＧ（フッ素１８フルオロデオキシグルコ−ス）タイプのイメ−ジングでの利点は、放射活性物を導入する前に前記タ−ゲット部分を高蓄積させる十分な時間があり、それにより前記タ−ゲットと非タ−ゲットとの比率を増加させることができる、ということである。又は、疾患に特異的な代謝経路及び／又は代謝物がタ−ゲットされ得る。
【０１２５】
本発明はまた、細胞内タ−ゲットのプレタ−ゲットに関する。サイズが小さいことから、有機ＰＥＴラベル（１８Ｆ、１１Ｃ）は細胞内事象をモニタ−するために理想的であり、というのは一般に前記タ−ゲット装置及び特に（大ききかつ極性の放射性金属キレ−ト構造共役と対照的に）前記膜輸送に対して大きな影響を与えないからである。本発明で使用される前記置換テトラジン部分及び前記Ｅ−シクロオクテンは、小さいことは必須ではなく、それらは比較的非極性であり、細胞内のタンパク質、ｍＲＮＡ、シグナル伝達経路などのイメ−ジングのために使用され得る。前記第２（例えばＰＥＴラベル）の置換テトラジン部分又はＥ−シクロオクテンプロ−ブ（即ちエフェクタ−プロ−ブ）は、その結合相手を見出すまで細胞内で又は細胞外へ能動的に拡散核酸することができ、又は活性取り込み機構の対象となる。これらの性質はまた、両方の成分が脳血管関門を横断することを排除しないから、脳内でプレタ−ゲットのためにレトロディ−ルスアルダ−反応の使用を可能にする。
【０１２６】
本発明はまた、プレタ−ゲットシグナル増幅及び／又は多価装備に関する。少なくとも１つの第１のタ−ゲット装置が、多数のテトラジン部分を含むデンドリマ−、ポリマ−−又はナノ粒子へ共役される。レセプタ−結合後、核イメ−ジング（例えば放射性金属キレ−ト、放射性ハロゲンなど）又はＭＲＩ（例えばＧｄキレ−ト）のための１以上の造影部分が共役された（１又はそれ以上の）シクロオクテンが注入される。その結果前記続くレトロディ−ルスアルダ−反応により、前記タ−ゲット組織でＭＲＩ造影剤は高濃度となる。さらに、前記タ−ゲットサイトでの多価性は、前記ＴＣＯエフェクタ−共役の反応速度を増加させ、例えばＭＲＩ造影剤の効果的なタ−ゲット蓄積を可能にする。通常は、前記置換ＴＣＯはまた、前記タ−ゲット装置共役で、及び前記レセプタ−と共役された前記テトラジン（又は本発明の他のジエン）で使用され得る。
【０１２７】
本発明の部分はまた、プレタ−ゲット方法であり、前記記載のプレタ−ゲット剤を対象体に投与すること、及び前記剤を前記対象体のシステム中で、前記第１のタ−ゲット部分が第１のタ−ゲットへ結合するために十分な時間循環させ、次に前記身体から、上で定めた除去剤の手段により、非結合剤を除去剤することを、含む。このために時間は通常１２から９６時間、特には約４８時間である。
【０１２８】
さらに、本発明は、造影方法を提供し、前記方法は、前記のプレタ−ゲット方法を実施し、ついで本発明による造影プロ−ブを投与することを含み、ここで前記プレタ−ゲットプロ−ブ内及び前記造影プロ−ブ内の前記生体−直交性反応基とは［４＋２］レトロディ−ルスアルダ−の反応相手である。同様に本発明は、対象体のタ−ゲット化医学治療の方法を提供し、前記のプレタ−ゲット方法実施し、続いて本発明による治療プロ−ブを投与することを含み、ここで前記プレタ−ゲットプロ−ブ内及び前記治療プロ−ブ内の前記生体−直交性反応基とは［４＋２］レトロディ−ルスアルダ−の反応相手である。
【０１２９】
本発明はまた、前記の造影又は治療方法での前記除去剤の使用を含む。
【０１３０】
本発明は以下、非限定的な実施例及び添付図面を参照して説明される。
【実施例】
【０１３１】
材料：
全ての試薬及び溶媒は、市販品（試薬はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ａｃｒｏｓ、ＡＢＣＲ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ及びＭｅｒｃｋから入手、通常及び重水素化溶媒はＢｉｏｓｏｌｖｅ、Ｍｅｒｃｋ及びＣａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｉｓｏｔｏｐｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手）から入手し、特に記載されていない限りさらに精製することなく使用した。ポリスチレンミクロビ−ズ（ポリビ−ズ、０．５μｍ）はＰｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓから入手した。［１１１Ｉｎ］インジウム塩化物及び［１２５Ｉ］ヨウ化ナトリウム溶液はＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒから入手した。水は蒸留して、ｍｉｌｌｉ−Ｑ水濾過システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で脱イオン化（１８ＭΩｃｍ）した。前記ラベル緩衝液は、Ｃｈｅｌｅｘ−１００樹脂（ＢｉｏＲａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で一晩処理し、次に０．２２μｍを通して４℃で貯蔵した。ビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイのキット、ゲルコ−ド青色タンパク質染色溶液及びＺｅｂａ脱塩スピンカラム（４０ｋＤａＭＷカットオフ、０．５−２ｍＬ）はＰｉｅｒｃｅ  ＰｒｏｔｅｉｎＲｅｓｅａｒｃｈ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）から入手した。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ７．４を調製するための錠剤はＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ（Ｍｅｒｃｋ）から入手した。ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ−４及びＵｌｔｒａ−１５遠心濾過ユニット（５０ｋＤａＭＷカットオフ）はＭｉｌｌｉｐｏｒｅから入手した。マウス血清はＩｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈから入手した。テトラジン１５の合成及び放射性ラベル化（図７）、及びトランスシクロオクテンのｍＡｂ共役は、Ｒｏｓｓｉｎらの「Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  ＩｎｔＥｄ  ２０１０、４９、３３７５−８」に記載の方法で実施した。
【０１３２】
方法：
ＮＭＲスペクトルはＣＤＣｌ３又は［Ｄ６］ＤＭＳＯ中で、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ３００スペクトルメータ又はＢｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ４００スペクトルメータで測定した。１３ＣＮＭＲ多重性（ｑ＝４級、ｔ＝３級、ｓ＝２級及びｐ＝１級）はＤＥＰＴパルスシーケンスを用いて識別した。赤外線吸収スペクトルは、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ１６００ＦＴ−ＩＲを用いて測定した。前記ＭＳＡ−共役物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトル（陽、直線モード）は、α−シアノ−４−ヒドロキシ−ケイ皮酸（ＣＨＣＡ）のマトリクスを用いてＶｏｙａｇｅｒ−ＤＥ（商標）Ｐｒｏ（ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＰＥ）により測定した。
【０１３３】
分取カラムクロマトグラフは、ＳｉｌｉＣｙｃｌｅシリカカラムを用いて、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ装置（ＴｅｌｅｄｙｎｅＩｓｃｏ）で行った。分取ＨＰＬＣは、Ａｇｉｌｅｎｔ１２００装置を用いて、Ｃ１８Ｚｏｒｂａｘカラム（２１．２ｘ１５０ｍｍ、５μｍ粒子）で、０．１％ＴＦＡを含む水とＭｅＣＮのグラジエント溶出液を用いて行った。分析放射性−ＨＰＬＣは、Ｇａｂｉ放射性検出装置（Ｒａｙｔｅｓｔ）を付けたＡｇｉｌｅｎｔ１１００システムを用いて行った。サンプルを、Ａｇｉｌｅｎ  ｔＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢ−Ｃ１８カラム（４．６Ｘ１５０ｍｍ、５μｍ粒子）に負荷し、０．１％ＴＦＡを含む水中でＭｅＣＮの直線的勾配（２分間は１９％ＭｅＣＮで、次に１１分間４５％ＭｅＣＮに増加）を用いて１ｍＬ／分で溶出した。ＵＶ波長は２５４ｎｍｍと設定された。サイズ排除（ＳＥＣ）ＨＰＬＣは、Ｇａｂｉ放射性検出装置（Ｒａｙｔｅｓｔ）を付けたＡｇｉｌｅｎｔ１２００システムを用いて行った。サンプルを、ＢｉｏＳｅｐ−ＳＥＣ−Ｓ２０００カラム（３００ｘ７．８ｍｍ、５μｍ粒子、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）に負荷し、２０ｍＭリン酸、１５０ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ６．８を用いて、１ｍＬ／分で溶出した。ＵＶ波長は２６０及び２８０ｎｍに設定された。
【０１３４】
１１１Ｉｎ及び１７７Ｌｕラベル化の収率は、ＩＴＬＣ−ＳＧストリップ（Ｐａｌｌ）による放射性ＴＬＣにより行い、０．９％ＮａＣｌ水溶液中の２００ｍＭＥＤＴＡで溶出させ、発光イメージング装置（ＦＬＡ−７０００、Ｆｕｊｉｆｉｌｍ）上で画像化された。これらの条件で、遊離の１１１Ｉｎ及び１７７Ｌｕは、Ｒｆ＝０．９で移動し、一方１１１Ｉｎ／１７７Ｌｕ−テトラジンは最初の位置にとどまった。１２５Ｉラベル化収率はまた、ＩＴＬＣ−ＳＧストリップ（Ｐａｌｌ）による放射性ＴＬＣにより行い、１：１ＭｅＯＨ／酢酸エチル混合物で溶出させ、発光イメージング装置上で画像化された。この条件で、遊離の１２５Ｉ及び１２５Ｉ−ＳＨＰＰは、Ｒｆ＝０．９で移動し、一方１２５Ｉ−ｍＡｂは最初の位置にとどまった。
【０１３５】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥは、７．５％のＰＡＧＥ均一ゲル（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）を用いてＰｈａｓｔｇｅｌｓｙｓｔｅｍで実施した。タンパク質ＭＷ標準溶液（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｐｌｕｓ  ｄｕａｌｃｏｌｏｒ  ｓｔａｎｄａｒｄ）をＢｉｏＲａｄから購入した。電気泳動の際に、前記ゲルをゲルコードブルーで時間染色し、水で一晩脱色して、従来にフラットベッドスキャナーでデジタル化した。
【０１３６】
アルブミンへ共役するテトラジンの数及びＣＣ４９溶液の濃度は、ＮａｎｏＤｒｏｐ１０００スペクトルメータ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で３２２ｎｍ及び２８０ｎｍでの吸収から、それぞれ決定された。マウス血清アルブミン分子当たりのテトラジンの数はまた、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦで決定された。ＣＣ４９の濃度はまた、ＢＣＡで決定された。
【０１３７】
アルブミン−テトラジンでコーティングされたポリスチレンビーズの平均流体力学的直径は、動的光散乱（ＡＬＶ−ＬＳＥ、α＝９０°）により決定された。前記ビース分散物中の凝集物の不存在及びマウスに駐車されたビーズの数は、５０μｍ開口チューブを用いてＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（マルチサイザー３）で決定された。前記溶液の一部を５０ｍＬのＩｓｏｔｏｎＩＩ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）と混合し、それからの１００μｌを、１．１μｍから３０μｍの範囲の直径で分析した。
【０１３８】
ＬＳ１７４Ｔ腫瘍モデル：
ヒト大腸癌細胞下部ＬＳ１７４ＴはＡＴＣＣから入手し、１０％熱不活性化ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）及び２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘを追加したＥａｇｌｅの最小必要培地（Ｓｉｇｍａ）中に保持した。ヌードメスＢａｌｂ／Ｃマウス（２０〜２５ｇ体重、ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に、１００μＬの滅菌ＰＢＳ中の５ｘ１０６細胞を皮下接種した。
【０１３９】
実施例１：
前記テトラジン誘導体部分を本発明の除去剤を得るために足場へリンクする一例として分子５を製造する。分子５は、Ｎ−ヒドロスクシニミジル部分であり、前記分子を前記足場例えばタンパク質に存在するアミノ基へ結合させるために使用される。
【０１４０】
５の合成は図４に示されており、Ｒｏｓｓｉらにより合成された、５−オキソ−５−（６−（６−（ピリジンｎ−２−イル）−１、２、４、５−テトラジン−３−イル）ピリジン−３−イルアミノ）ペンタン酸（１）から出発する（Ｒｏｓｓｉｎｅｔａｌ、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＥｄｉｔｉｏｎ２０１０、４９（１９）、３３７５−８．）。
【０１４１】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４１、４５−ジオキソ−４５−（（６−（６−（ｐリジン−２−イル）−１、２、４、５−テトラジン−３−イル）ピリジン−３−イル）アミノ）−４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７−ドデカオキサ−４０−アザペンタテトラコンタノ−１−エート（３）：
ｔｅｒｔ−ブチル  １−アミノ−３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６−ドデカオキサノナトリアコンタノ−３９−エート２（１２３ｍｇ、０．１８２ｍｍｏｌ；ＩＲＩＳＢｉｏｔｅｃｈＧｍｂＨ）を、乾燥したい反応管へ、共沸２回蒸留したトルエンと共に添加した。前記容器を窒素雰囲気下でさらに乾燥ＤＭＦ（２ｍｌ）を添加して無色溶液とした。さらに乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ）中に溶解した、１（１００ｍｇ、０．２７４ｍｍｏｌ）及び（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ；２６７ｍｇ、０．６０３ｍｍｏｌ）を順に、窒素雰囲気下で反応溶液に添加し赤色懸濁物を得た。最後に、ＤＩＰＥＡ（０．５ｍＬ、２．７４ｍｍｏｌ）を反応溶液に滴下し、得られた溶液を一晩撹拌した。得られた混合物を蒸発させて乾燥させ、これをＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、ＤＣＭ中１から１０％ＭｅＯＨのグラジエントを用いて、シリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフにより精製した。関連する画分を集めて真空蒸発させて、暗ピンク色個体として３を得た（１６７ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ、９０％）。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１０．５８（ｓ、１Ｈ）、９．０５（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．９３（ｄｄｄ、Ｊ１＝０．９Ｈｚ、Ｊ２＝１．７Ｈｚ、Ｊ３＝４．７Ｈｚ、１Ｈ）、８．６２（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、８．５９（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．４３（ｄｄ、Ｊ１＝２．４Ｈｚ、Ｊ２＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、８．１５（ｔｄ、Ｊ１＝１．８Ｈｚ、Ｊ２＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．９３（ｔ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．７３（ｄｄｄ、Ｊ１＝１．１Ｈｚ、Ｊ２＝４．７Ｈｚ、Ｊ３＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．５７（ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．５３−３．４７（ｂｒｏａｄｓ、４６Ｈ）、３．２５−３．１６（ｍ、２Ｈ）、３．４１（ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．４４（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）、２．１７（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）、１．８５（ｑ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）、１．３８（ｓ、９Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７２．１（ｑ）、１７１．７（ｑ）、１７０．４（ｑ）、１６３．０（ｑ）、１６２．８（ｑ）、１５０．６（ｔ）、１５０．２（ｑ）、１４３．８（ｑ）、１４１．３（ｔ）、１３８．５（ｑ）、１３７．８（ｔ）、１２６．５（ｔ）、１２６．１（ｔ）、１２４．８（ｔ）、１２４．２（ｔ）、７９．７（ｑ）、６９．８（ｓ）、６９．７（ｓ）、６９．６（ｓ）、６９．５（ｓ）、６９．１（ｓ）、６６．２（ｓ）、３８．５（ｓ）、３５．８（ｓ）、３５．７（ｓ）、３４．４（ｓ）２７．７（ｐ）、２０．９（ｓ）。
【０１４２】
４１、４５−ジオキソ−４５−（（６−（６−（ピリジン−２−イル）−１、２、４、５−テトラジン−３−イル）ピリジン−３−イル）アミノ）−４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７−ドデカオキサ−４０−アザペンタテトラコンタン−１−酸（４）：
撹拌した、３（１６０ｍｇ、０．１５７ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２ｍＬ）溶液中に、窒素雰囲気下でＴＦＡ（２ｍＬ）を添加した。反応混合液を２時間室温で撹拌し、その後蒸発乾燥させた。残渣を乾燥ＤＣＭ（２ｍＬ）に再溶解して再びＴＦＡ（２ｍＬ）と２時間処理した。この処理を再度繰り返した。最後に前記反応混合液を蒸発させて乾燥し、ＤＣＭで２回共沸させ、脱保護された生成物４を定量的に得た。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１０．５７（ｓ、１Ｈ）、９．０５（ｂｒｏａｄｓ、１Ｈ）、８．９４（ｂｒｏａｄｓ、１Ｈ）、８．６３（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．６０（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．４３（ｄｄ、Ｊ１＝２．４Ｈｚ、Ｊ２＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、８．１６（ｔｄ、Ｊ１＝１．７Ｈｚ、Ｊ２＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．９３（ｔ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．７４（ｄｄ、Ｊ１＝４．７Ｈｚ、Ｊ３＝６．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．５８（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．５３−３．４６（ｂｒｏａｄｓ、４６Ｈ）、３．４１（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．２５−３．１７（ｍ、２Ｈ）、２．４４（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）、２．１７（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）、１．８５（ｑ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）。
【０１４３】
２、５−ジオキソピロリジン−１−イル  ４１、４５−ジオキソ−４５−（（６−（６−（ピリジン−２−イル）−１、２、４、５−テトラジン−３−イル）ピリジン−３−イル）アミノ）−４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７−ドデカオキサ−４０−アザペンタテトラコンタノ−１−エート（５）：
無水ＤＣＭ（４ｍＬ９中の４（１５０ｍｇ，０．１５５５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液中に、窒素雰囲気下で０℃で、順に、ジ−（Ｎ−スクシニミジル）カーボネート（４７．８ｍｇ、０．１８７ｍｍｏｌ）、ピリジン（１５μＬ）及びトリエチルアミン（０．２５ｍＬ）を添加した。混合物を２時間撹拌し、その間に室温へ暖め、次に蒸発させて乾燥し、ＤＣＭ（２０ｍＬ９へ再溶解して、Ｈ２Ｏで洗浄（１０ｍＬで３回）した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、漏斗した後真空蒸発させて、暗ピンク色固体として５を得た（９４ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ，５７％）。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝９．６７（ｓ、１Ｈ）、９．０１−８．９７（ｍ、２Ｈ）、８．７７−８．７１（ｍ、２Ｈ）、８．６４（ｄｄ、Ｊ１＝２．４Ｈｚ、Ｊ２＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、８．０２（ｔｄ、Ｊ１＝１．７Ｈｚ、Ｊ２＝７．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．５８（ｄｄｄ、Ｊ１＝１．１Ｈｚ、Ｊ２＝４．７Ｈｚ、Ｊ３＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．６０（ｔ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．７０−３．５５（ｂｒｏａｄｓ、４６Ｈ）、３．５２−３．４３（ｍ、２Ｈ）、２．９０（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．８５（ｓ、４Ｈ）、２．５８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．３７（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．０９（ｑ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７２．９（ｑ）、１７２．５（ｑ）、１６８．９（ｑ）、１６６．７（ｑ）、１６３．６（ｑ）、１６３．４（ｑ）、１５１．０（ｔ）、１５０．３（ｑ）、１４４．０（ｑ）、１４２．０（ｔ）、１３８．６（ｑ）、１３７．４（ｔ）、１２６．５（ｔ）、１２６．４（ｔ）、１２５．１（ｔ）、１２４．３（ｔ）、７０．７（ｓ）、７０．５（ｓ）、７０．２（ｓ）、６９．６（ｓ）、６５．７（ｓ）３９．３（ｓ）、３５．９（ｓ）、３５．０（ｓ）、３２．１（ｓ）２５．６（ｓ）、２１．３（ｓ）。
【０１４４】
実施例２：
図３で示される除去剤の一例として化合物１２（図５参照）を合成した。化合物１２は、９から１０テトラジン分子で前記反応相手と反応させるために機能化されたタンパク質状足場（マウス血清アルブミン；ＭＳＡ）を含み、前記反応相手はこの場合はシクロオクテン誘導体であり、レトロ−ＤＡ反応を介するプレターゲットプローブ上にあり、かつ肝臓のアシュウェルレセプターと相互作用するための１６から１８ガラクトース分子を持つ。
【０１４５】
前記除去剤は、最初はガラクトース、次にテトラジンとの２段階のＭＳＡの共有結合変性で順に製造される。ガラクトース変性は、アミノ−反応性の２−イミノ−２−メトキシエチル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（９）を用いて達成され、これはリジン又はアルブミンと共役する。この剤は、米国特許出願公開第２００３０１２９１９１号に開示された手順（手順１）で、μｍｏｌスケールで、アルブミン−共役の前に市販化合物であるシアノメチル  ２、３、４、６−テトラ−Ｏ−アセチル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（８）から直接合成される。我々はこの手順を改善した（手順２）：前記アミン−反応性カップリング剤２−イミノ−２−メトキシエチル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（９）自体が、以下説明する最適化手順で高純度で単離され、単一のステップでアルブミンとカップリングさせることができる。
【０１４６】
ガラクトース−ＭＳＡ（１１、手順１図５）の合成：
０．１Ｍのシアノメチル  ２、３、４、６−テトラ−Ｏ−アセチル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（８）の無水ＭｅＯＨ溶液に、０．１Ｍの無水ＭｅＯＨ中ＮａＯＭｅ溶液の容積の１／１０を添加し、前記混合物を一晩反応させた（１０００ｒｐｍで振盪）。生成物の比率（化合物９と化合物１０との）を１Ｈ−ＮＭＲで決定し（以下のスペクトル山荘）、通常は０．７と１の間であった。
【０１４７】
前記粗生成物混合物（機能化させるべきＭＳＡの望ましい量に対して化合物９の約３３モル当量を含む）の必要な容積をエッペンドルフバイアル中で凍結乾燥させ、及びＰＢＳｐＨ７．４／０．５Ｍホウ酸緩衝液ｐＨ８．５の１０：１混合物（２００μＬ）中に溶解したＭＳＡ（３．５ｍｇ、０．０５３０μｍｏｌ）が添加された。反応混合物を室温で２時間振盪（１０００ｒｐｍ）し、その後一晩４℃で保存した。反応混合物をまず水で平衡化して、Ｚｅｔａ脱塩スピンカートリッジ（７ｋＤａＭＷＣＯ、ＰｉｅｒｃｅＰｉｅｒｃｅ）を用いて脱塩した。前記ガラクトース変性の程度を続いて、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦにより分析した（通常、約１５から１９ガラクトース／ＭＳＡ、化合物１１）。
【０１４８】
ガラクトース−ＭＳＡ（１１、手順２、図５）の合成：
ガラクトースカップリング剤２−イミノ−２−メトキシエチル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（９）は図５に示されるように、２、３、４、６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルブロミド（６）から出発して３段階で、中間体２−Ｓ−（２、３、４、６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−チオウロニウムブロミド（７）及びシアノメチル  ２、３、４、６−テトラ−Ｏ−アセチルｌ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（８）を経て製造された。
【０１４９】
２−Ｓ−（２、３、４、６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−チオウロニウムビロミド（７）、２、３、４、６−テトラ、−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルブロミド（６；１５．００ｇ、３６．４８ｍｍｏｌ）及びチオ尿素（３．０５ｇ、４０．０７ｍｍｏｌ）をアセトン（７５ｍｌ）に溶解した。前記溶液を加熱して２時間還流し、続いて濾過し、２０℃へ冷却した。ペンタンを添加して生成物を白色結晶性固体として沈殿させた（１６．１１ｇ，９１％）。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、）：δ＝１．９５（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、２．０１（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、２．０８（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、２．１４（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、４．０９（ｍ、２Ｈ、Ｈ６、Ｈ６’）、４．４５（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ５）、５．１１（ｔ、Ｊ２、３＝１０Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ２）、５．２２（ｄｄ、Ｊ２、３＝９．９Ｈｚ、Ｊ３、４＝３．２Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ３）、５．３９（ｄ、Ｊ３．２Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ４）、５．７１（ｄ、Ｊ１、２＝１０Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ１）、９．１１（ｂｒ、２Ｈ、ＮＨ２）、９．３５（ｂｒ、２Ｈ、ＮＨ２）。
【０１５０】
シアノメチル  ２、３、４、６−テトラ−Ｏ−アセチル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（８）：
２−Ｓ−（２、３、４、６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−チオウロニウムブロミド（７；１６．１１ｇ、３１．０７ｍｍｏｌ）、メタ亜硫酸ナトリウム（１１．８１ｇ、６２．１４ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（４．７２ｇ、３４．１８ｍｍｏｌ）及びクロロアセトニトリル（８．２１ｇ、１０８．７ｍｍｏｌ）をアセトン／水（５０：５０体積／体積、２００ｍＬ）中に溶解し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を氷水（３００ｍＬ）へ投入し、かつさらに２時間撹拌した。白色沈殿を集めて濾過し、熱メタノール（３０ｍＬ）から再結晶した。生成物を濾過し、白色結晶固体として得た（９．６１ｇ、７７％）。融点＝９７℃（文献：９５から９７℃）。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝２．００（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、２．０７（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、２．０９（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、２．１７（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．３５（ｄ、Ｊ＝１７Ｈｚ、１Ｈ、Ｓ−ＣＨ）、３．６４（ｄ、Ｊ＝１７Ｈｚ、１Ｈ、Ｓ−ＣＨ’）、４．０１（ｔ、Ｊ６．９Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ５）、４．１６（ｍ、２Ｈ、Ｈ６、Ｈ６’）、４．７（ｄ、Ｊ１、２＝１０Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ１）、５．１１（ｄｄ、Ｊ３、４＝３．２Ｈｚ、Ｊ２、３＝１０Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ３）、５．２４（ｔ、Ｊ＝１０Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ２）、５．４７（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ４）。ＦＴ−ＩＲ（ＡＴＲ）：ν＝２２４９（ＣＮ、ｗ）、１７３９（Ｃ＝Ｏ、ｓ）。
【０１５１】
２−イミノ−２−メトキシエチル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（９）：
シアノメチル  ２、３、４、６−テトラ−Ｏ−アセチル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（８；２．０２ｇ、５．００ｍｍｏｌ）を無水ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液（２５重量％、１１５μＬ、０．５０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２４時間撹拌し、続いて１５ｍＬまで容積を濃縮した。生成物を室温で、さらに−１８℃で再結晶化させた（１．１１ｇ；８３％）。融点＝１２９℃。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）：δ＝３．４４（ｄｄ、Ｊ２、３＝１０Ｈｚ、Ｊ３、４＝４．２Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ３）、３．５２（ｄｄ、Ｊ２、３＝１０Ｈｚ、Ｊ１、２＝９．０Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ２）、３．５４（ｍ、１Ｈ、Ｈ５）、３．７３（−ＯＣＨ３）、３．７８（ｍ、２Ｈ、Ｈ６、Ｈ６’）、３．８７（ｄｄ、Ｊ３、４＝４．０Ｈｚ、Ｊ４、５＝１．５Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ４）、４．２７（ｄ、Ｊ１、２＝９．６Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ１）。ＦＴ−ＩＲ（ＡＴＲ）：ν＝３２８７（Ｎ−Ｈ、ｓ）、１６５０（Ｃ＝ＮＨ、ｓ）。
【０１５２】
ＭＳＡ−カップリング：
ＰＢＳｐＨ７．４／０．５Ｍホウ酸緩衝液ｐＨ８．５の１０：１混合物（９００μＬ）に溶解したＭＳＡ（２０ｍｇ、０．３０３μｍｏｌ）の溶液に、同じ緩衝液（２００μＬ）中の新たに調製した２−イミノ−２−メトキシエチル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（９）の１８．２ｍｇ／ｍｌストック溶液を添加し、ＭＳＡに関して４５−倍モル過剰のガラクトースカップリング剤（９）を得た。前記反応混合物を室温で２時間振盪（１０００ｒｐｍ）し、予め水で平衡化させた後Ｚｅｂａ脱塩スピンカートリッジ（７ｋＤａＭＷＣＯ、Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて脱塩した。凍結乾燥後、ガラクトース−ＭＳＡ（化合物１１）を白色綿状固体として得た（１５．３ｍｇ，７２％）。ガラクトース変性の程度は続いてＭＡＬＤＩ−ＴＯＦにより分析した：ＭＳＡ：ＭＨ＋＝６５９４１。ガラクトース−ＭＳＡ：ＭＨ＋＝６９８２３であり、これは平均１６．５ガラクトース／ＭＳＡ（添加ガラクトース断片の質量は２３６Ｄａ）である。異なるバッチ間の変動は、約１６から１８ガラクトース／ＭＳＡであった。４℃での水中でガラクトース−ＭＳＡの１０ｍｇ／ｍｌ溶液の安定性は、全部で５ヶ月かけて２週間ごとにＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析を繰り返して評価した。共役物は安定であることが示された。
【０１５３】
ガラクトース−ＭＳＡ−テトラジン（１２）の合成：
ＰＢＳ中のガラクトース−機能化マウス血清アルブミン（１１、ガラクトース−ＭＳＡ、１ｍｇ）の溶液を、ＤＭＦ中テトラジン−ＮＨＳ（５）の１０ｍｇ／ｍＬ溶液（３０μＬ、ガラクトース−ＭＳＡに対して２０当量）と混合し、さらに１Ｍ炭酸緩衝液ｐＨ９．６（７．５μＬ）を添加した。溶液（２５０μＬ合計）を３７℃で３０分間インキュベーションし、次にこれをＵｌｔｒａ−１５遠心濾過ユニット（３０ｋＤａＭＷカットオフ）へ移した。生成物１２を水で完全に洗浄し、次に一晩凍結乾燥してピンク色綿状粉末を得た。テトラジン変性の程度は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦで分析した。ガラクトース−ＭＳＡ−テトラジン：ＭＨ＋＝７９０１０であり、これは平均９．７テトラジン／ガラクトース（１６．４）−ＭＳＡに対応する（添加テトラジン断片の質量は９４８Ｄａ；ＭＨ＋（ガラクトース（１６．４）−ＭＳＡ）＝６９８２３）。ナノドロップでのＵＶ−ＶＩＳ測定は、分子当たり９から１０のテトラジンの存在を確認した（測定値：８．９テトラジン／ガラクトース（１６．４）−ＭＳＡ）。
【０１５４】
実施例３：
化合物１４は、前記レトロＤＡ反応を介して血液中でプレターゲットプローブと反応し、それを、サイズなどの物理化学的性質により排出器官、例えば肝臓へ輸送する除去剤の例として合成される。化合物１４は、テトラジン機能化学反応タンパク質でコーティングされたポリスチレンビーズを含み、図６で示されるように合成された。
【０１５５】
リン酸緩衝生理食塩（ＰＢＳ）中のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、１．５ｍｇ）の溶液を、ＤＭＦ中のテトラジン−ＮＨＳ（５）の１０ｍｇ／ｍＬ溶液（６３μＬ、ＢＳＡに関して２６当量）と混合し、そこに１Ｍの炭酸緩衝液ｐＨ９．６（７．５μＬ）を添加した。前記溶液（２５０μＬ）を３７℃で３０分間インキュベーションし、次に低ＭＷ成分を溶液から、ＰＢＳで前洗浄したＺｅｔａ脱塩スピンカートリッジ（７ｋＤａＭＷＣＯ、Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて除去した。ＰＢＳ中のＢＳＡ−テトラジン（１３）を含む溶液を、Ｈ２Ｏ中のポリスチレンビーズ（ポリビーズ、０．５μｍ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅ）懸濁物７５０μＬへ添加し、得られた懸濁物を室温で、転倒回転ミキサー（１０ｒｐｍ）でインキュベーションした。インキュベーション後、ＢＳＡ−テトラジン（１４）でコーティングしたビーズの懸濁物を、１２０００ｒｐｍで４分間遠沈させた。上澄みを注意して除き、得られたペレットを１ｍＬのＰＢＳ中の０．３％ＢＳＡ（重量／体積）中に、低パワーのチップシニケーターで再懸濁（Ｓｏｎｉｃｓ  ＶｉｂｒａＣｅｌｌ、５秒パルス４回、４０％パワー）させた。遠心沈殿−再懸濁サイクルを３回繰り返し、次いで前記ビーズペレットをＰＢＳ中の７５０μＬの０．３％ＰＢＳ中に懸濁させた。前記ビーズ懸濁物中にミクロ凝集物は存在しないことが、Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｃｏｕｎｔｅｒ測定（粒子の９９％が２．７μｍ未満）で確認され、及び５０６ビーズ直径（数重み付け）が動的散乱により測定された。
【０１５６】
実施例４：
テトラジン放射線ラベル化：
ＤＯＴＡ共役テトラジン（１５；図７、Ｒｏｓｓｉｎらの「Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  ＩｎｔＥｄ  ２０１０、４９、３３７５」に記載）を、０．２Ｍ酢酸アンモニウムｐＨ７．０中に溶解（１ｍｇ／ｍＬ）し、使用前に−８０℃で保存した。１５の一定量を［１１１Ｉｎ］塩化インジウムの適切な量と組み合わせて、ゆっくりと撹拌しつつ３７℃で１０分間インキュベートし、次に、５μＬの１０ｍｍＤＴＰＡを添加して溶液をさらに５分間インキュベートした。通常は定量的ラベル収率及び９８％を超える放射化学純度がこの方法で得られた。
【０１５７】
ｍＡｂ放射線ラベル化学反応：
５０μＬのＰＢＳ中の［１２５Ｉ］ヨウ素（５〜１５ＭＢｑ）の適切な量に、ＤＭＳＯ中のＢｏｌｔｏｎ−Ｈｕｎｔｅｒ試薬（Ｎ−スクシミジル−３−［４−ヒドロキシフェニル］プロピオネート（ＳＨＰＰ））の１ｍｇ／ｍＬ溶液の１μＬ、及び｀ＰＢＳ中のクロラミン−Ｔ（Ｎ−クロロ−４−メチルベンゼンスルホンアミド、ナトリウム塩）の４ｍｇ／ｍＬの２５μＬを添加した。得られた溶液を１０〜２０秒混合して、５μＬＤＭＦ及び１００μＬトルエンを前記容器に投入し、及び１２５Ｉ−ＳＨＰＰを有機層に抽出し、次にこれをガラスバイアルに移した。トルエンをＮ２のゆっくりとした流れで除去し、その後ＣＣ４９−ＴＣＯ溶液（５０〜２５０μＬＰＢＳ中の０．１〜０．５ｍｇ、Ｒｏｓｓｉｎらの「Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  ＩｎｔＥｄ２０１０、４９、３３７５−８」に記載の手順）を加え、ｐＨを炭酸塩緩衝液で９に調節し、及び反応混合物を室温で３０分間ゆっくりと振り混ぜながらインキュベートした。インキュベート後、前記ラベル化収率を放射性−ＩＴＬＣで決定した。粗反応混合物を次に、生理食塩水で前平衡化させたＺｅｂａスピン脱塩カラム（４０ｋＤａＭＷＣＯ、Ｐｉｅｒｃｅ）に負荷した。前記反応バイアルを２０μＬ生理食塩水でリンスし、リンスされたものも前記カラムに同様に負荷した。Ｚｅｂａ精製後、１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ溶液の放射性純度を放射性−ＩＴＬＣ及びＳＤＳ−ＰＡＧＥで決定し；タンパク質濃度はＢＣＡアッセイで決定した。
【０１５８】
通常、この手順で、７０％を超える１２５Ｉ−ＳＨＰＰｍＡｂ共役及び、精製１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯの放射性純度は９８％を超えるものが得られた（図８参照）。
【０１５９】
実施例５：
本発明の除去剤を使用する方法の一例として、除去剤１２及び１４の注入の有無での１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯの血中動態を示す。
【０１６０】
３匹のヌードメスマウス（２０〜２５ｇ体重）が、１２５Ｉ−ラベル化ＣＣ４９−ＴＣＯ（約９ＴＣＯ／ｍＡｂ；マウス当たり１００μｇ／１００μＬ、ｔ＝０）を皮下注射され、血液サンプルを、伏在静脈から、５分、３時間、６時間、１日、２日及び３日で取り出した。注射後４日で、マウスを屠殺し心臓穿刺して血液を取り出した。血液サンプルは秤量し、１ｍＬＰＢＳで希釈し、放射活性を、血液の１グラム当たりの注入投与量％（％ＩＤ／ｇ）を決定するために標準と共にガンマカウンターでカウントした。この実験の結果が図９に示される。血液データを双方向指数関数的減衰フィッティング（（ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍｖ４．１、Ｒ２＝０．９７２）し、前記アルファ−相での半減期が１．９７時間、前記ベータ相での半減期が２３．５時間と決定された。
【０１６１】
３匹のヌードメスマウス（体重２０から２５ｇ）が、１２５Ｉ−ラベル化ＣＣ４９−ＴＣＯ（約２０μｇ／７５μＬ、ｔ＝０）を皮下注射され、血液サンプルを、伏在静脈から、５分、３０分で取り出した。その後（ｔ＝３５分）、それぞれのマウスは、ガラクトース−ＭＳＡ−テトラジン（１２、マウス当たり１２０μｇ／１００μＬ）、又はＢＳＡ−テトラジン（１４、マウス当たり約４ｘ１０７ビーズ／１００μＬ）が注射され、血液サンプルが、４５分、６０分、９０分及び１５０分後に取り出された。ｍＡｂ注射後２１０分で、マウスを屠殺し、心臓穿刺して血液を取り出した。血液サンプル及び組織（ブロット乾燥）は秤量され、１ｍＬＰＢＳが添加され、放射活性を、標準と共にガンマカウンターでカウントした。２つの血液動態の結果を図１０に示した。血液中の１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ濃度の大きな減少が、除去剤投与の直ぐ後に観察された（１２注射前５分で３５．８±４．７％ＩＤ／ｇ及び注射後２５分で１．６±０．４％ＩＤ／ｇ、及び１４注射前５分で３２．３±４．７％ＩＤ／ｇ及び注射後１０分で２．７±０．４％ＩＤ／ｇ）。血液放射濃度の突然の減少は、血液中で、前記除去剤と前記ｍＡｂ−ＴＣＯとの反応が起こったこと、及び得られた共役物が肝臓に取り込まれ（図１１）、従って、腸内を通じて除去された、ことを示す（１２及び１４の注射後１７５分でそれぞれ、注射されたｍＡｂの投与量の２２．８±４．９％及び１３．０±１．８％）。
【０１６２】
実施例６：
本発明の除去剤を使用する方法の例示として、プレターゲットプローブ（１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ）を注射し、続いて異なる量の除去剤（１２）の投与を含む前記エフェクタープローブ（１１１Ｉｎ−１５）を注射する場合に得られる腫瘍取り込み及び腫瘍−対−血液（Ｔ／Ｂ）比率が示される。
【０１６３】
ＬＳ１７４Ｔ異種移植されたヌードメスマウス（ｎ＝３から４）は、１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ（ｔ＝０、マウス当たり１００μｇ／１００μｌ）を注射され、続いて、１００μｌ生理食塩溶液に溶解した２０から２００μｇのガラクトース−ＭＳＡ−テトラジン（１２）（ｔ＝２４時間）及び１１１Ｉｎ−ラベル化１５（マウス当たり、２１．３μｇ／７５μｌ、ｔ＝２６時間）を注射された。ｍＡｂ注射後２９時間で、マウスを屠殺し、血液を心臓穿刺で取り出し、選択された器官及び組織を取り出しブロット乾燥した。血液サンプル及び組織を秤量し、１ｍＬＰＢＳを加えて、放射活性を標準と共にガンマカウンターで測定して、％ＩＤ／ｇを決定した（表１）。
【０１６４】
表１：二重同位体実験からの、異なる量のガラクトース−ＭＳＡ−テトラジン（１２）を注射された腫瘍を持つマウスにおける、１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ及び１１１Ｉｎ−テトラジンの腫瘍取り込み（％ＩＤ／ｇ）及び腫瘍−対−血液比率。データは平均±１標準偏差で表される（ｎ＝３から４）。
【表１】
2014500307.tif 000013
【０１６５】
予想通り、腫瘍を持つマウスへの化合物１２の投与量を増加することは、血液中に循環する残留１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯを減少させる結果となった（マウス当たり２０μｇで、２．９±０．３％ＩＤ／ｇからマウス当たり１６０μｇでの０．５±０．０％ＩＤ／ｇ）。このことは、除去剤のテトラジン分子とｍＡｂのトランスシクロオクテン分子とのレトロ−ＤＡ反応、及び続いて肝細胞のアッシュウェルレセプターにより捕捉を含む機構を支持する。この改善された循環系からのｍＡｂ除去は、マウス当たり２０μｇから１６０μｇの１２注射で、１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ比率について５倍のＴ／Ｂ増加となる結果である。注意すべきは、マウス当たり１６０μｇまでの除去剤の量の増加は、１１１Ｉｎ−テトラジンの腫瘍取り込みを阻害しない、ということである。これは化合物１２のサイズが最も寄与し、注射と肝臓での捕捉の間の短い時間で腫瘍組織内への血管外漏出を阻害する。
【０１６６】
循環系からの効果的なＣＣ４９−ＴＣＯの除去は、血液中および血液の多い器官の１１１Ｉｎ−テトラジン滞留時間を減少させる（従って、より高いＴ／Ｂ比率）（図１２）。
同時に、前記ｍＡｂ−除去剤構成物が肝臓細胞へ取り込まれる場合に肝臓で１１１Ｉｎ放射活性の増加が見られず、ここでは極性テトラジンとの相互作用の機会を持たないように思われる。
【０１６７】
除去剤がマウス当たり１６０μｇを超えると、しかし、肝臓は恐らく飽和し、全てのｍＡｂ−除去剤付加物及び残留未反応除去剤を処理できない。事実、血液中に循環するｍＡｂ−関連放射活性は、血液中を循環するｍＡｂ種が１１１Ｉｎ−テトラジンとは反応しないことから、１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯによるものではなく減少する（１．１±０．６％ＩＤ／ｇ）。この知見は、高投与量で、前記除去剤−ｍＡｂ共役物は十分には除去されないことを示唆する。２００μｇ除去剤投与量で、腫瘍での１１１Ｉｎ−テトラジンの取り込みは、この組織では高い量のＣＣ４９−ＴＣＯが存在するにも拘わらず、やや減少する。前記差は有意ではないが、これは、漏出除去剤による腫瘍ブロッキングの結果であり得る。このあり得る現象は、低除去剤投与量では問題とはならず、肝臓によりより効果的に排出される。
【０１６８】
実施例７：
本発明の除去剤の使用の方法の例として、前記プレターゲットプローブ（１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ）を注射し、その後除去剤１２の単一投与及び繰り返し投与量を持つ投与によるエフェクタープローブ（１１１Ｉｎ−１５）の注射の際の、選択された組織での生体内分布及び腫瘍−対−器官（Ｔ／Ｂ）比率が示される。
【０１６９】
ＬＳ１７４Ｔ異種移植を持つヌードメスマウス（ｎ＝４から６）は、１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ（ｔ＝０、マウス当たり１００μｇ／１００μＬ）を注射し、続いて、（ａ）ｍＡｂ注射４８時間後、ガラクトース−ＭＳＡ−テトラジン（１２）の１回の１６０μｇ／１００μｌ投与量、又は（ｂ）ｍＡｂ注射４６時間及び４８時間後、１２の２回の１６０μｇ／１００μｌ投与量、又は（ｃ）ｍＡｂ注射２８時間及び４８時間後、１２の２回の１６０μｇ／１００μｌ投与量を注射した。ｍＡｂ注射５０時間後で、マウスは、８．５２μｇの１１１Ｉｎ−テトラジンを受け、３時間後の屠殺され、血液が心臓穿刺で取り出され、及び選択された器官及び組織が取り出されブロット乾燥された。前記血液サンプル及び組織は秤量され、１ｍＬＰＢＳを添加され、放射活性が、標準と共にガンマーカウンターで測定されて５ＩＤ／ｇを決定した。１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ及び１１１Ｉｎ−テトラジンの生体内分布データは表２に示され、及び１１１Ｉｎ−テトラジンＴ／器官値は表３に示される。
【０１７０】
表２：腫瘍持ちマウスでの１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ及び１１１Ｉｎ−テトラジンの生体内分布を示す：ここで（ａ）ｍＡｂ注射後４８時間で除去剤１２を１回投与、又は（ｂ）ｍＡｂ投与後４６時間で１回投与かつ４８時間で１回投与、又は（ｃ）ｍＡｂ注射後２８時間で１回投与かつ４８時間で１回投与。データは平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差（ｎ＝４から６）。
【表２】
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【０１７１】
表３：腫瘍持ちマウスでの１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ及び１１１Ｉｎ−テトラジンの生体内分布を示す：ここで（ａ）ｍＡｂ注射後４８時間で除去剤１２を１回投与、又は（ｂ）ｍＡｂ投与後４６時間で１回投与かつ４８時間で１回投与、又は（ｃ）ｍＡｂ注射後２８時間で１回投与かつ４８時間で１回投与。データは、平均腫瘍−対−器官比率（Ｔ／器官）±１標準偏差（ｎ＝４から６）。
【表３】
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【０１７２】
この実施例は、腫瘍持ちマウスでの１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯの生体内分布への、従って、１１１Ｉｎ−テトラジンの滞留への、除去剤１２の一回投与対二回投与の効果を示す。
【０１７３】
Ｒｏｓｓｉｎらの「Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  ＩｎｔＥｄ２０１０、４９、３３７５−８」では、前記ＣＣ４９−ＴＣＯ構成体は、血液循環系で維持されることが記載されている。従って、除去剤を使用しない場合には、１００μｇｍＡｂ／マウスの注射後２７時間ではＴ／血液比率は低い（２．８±０．８）。その結果、非−腫瘍結合性ｍＡｂ−ＴＣＯ及びプレターゲットエフェクタープローブ（１１１Ｉｎ−テトラジン）はまた低いＴ／血液比率となり（ｍＡｂ注射後２４時間で２１．３μｇテトラジン／マウスを投与）、非−ターゲット器官で比較的高い１１１Ｉｎ−放射活性バックグラウンドを生じる。
【０１７４】
ここで、マウス当たり１００μｇのＣＣ４９−ＴＣＯを投与し、続いて一回の除去剤１２の投与（１６０μｇ、ｔ＝４８時間）は、血液からｍＡｂの枯渇により高いＴ／器官比率を与える結果となる（表２、表３）。予想されるように、血液、筋肉及び血液の多い器官（肝臓及び脾臓を除く）のＴ／器官値は、第２の除去剤をさらに第１の除去剤投与の後投与することで増加し、これは、前記第１の投与でなお循環系に残留する１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯを除去するからである。留意すべきは、前記２回の除去剤投与の間の時間遅延が、２から２０時間へ増加する場合は、血液からの１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯの除去が最も効果的となる、ということである。このことは、肝臓が第１のｍＡｂ−除去剤構成物を処理するために長時間を要することに起因すると考えられる。事実、ガラクトース−含有構成物は肝臓細胞のアッシュウェルレセプターに強く結合し、次に前記レセプター−リガンド複合体はエンドサイトーシス小胞体内に取り込まれ、ゆっくりとレセプターから解離し（Ｋｏｆｆ＜０．９×１０−５秒−１）、ゴルジ−リソソーム領域へ運ばれ、そこで分解される一方で前記レセプターは細胞表面で再利用される（Ａ．Ｌ．Ｓｃｈｗａｒｔｚ、Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、１９８４、１６、２０７−２３３）。前記生態分布データは、ｍＡｂ−除去剤構成物の代謝及び排出がむしろ遅いことを示す。事実、除去剤の２回投与がｍＡｂ注射後４６及び４８時間で投与される場合には、マウス屠殺の際（ｍＡｂ注射後５３時間）にも相当量の放射活性がなを肝臓内（２．３５±０．３９％ＩＤ／ｇ）及び腸内（１．４４±０．６７％ＩＤ）に存在する。一方、第１の除去剤が第２の除去剤投与の前２０時間で投与される場合、マウス屠殺の際には、肝臓及び腸内のｍＡｂ−関連放射性活性は大きく減少している（それぞれ、０．９５±０．１３％ＩＤ／ｇ及び０．５６±０．１３％ＩＤ）。
【０１７５】
前記系から非−腫瘍結合性ＣＣ４９−ＴＣＯが枯渇することは、腫瘍（テトラジンが腫瘍−結合ＣＣ４９−ＴＣＯと反応する）及び腎臓（テトラジン排出）以外の全ての考慮している器官内で１１１Ｉｎ−テトラジンの滞留を大きく減少させることとなる。従って、改善された実験条件では（２回の除去剤を長時間の間隔で別々に投与する）、１１１Ｉｎ−テトラジンのＴ／血液及びＴ／筋肉比率は、それぞれ８９．０±１４．３及び１４６．３±３０．３となり、これは、除去剤の１回投与で達成し得る場合（Ｔ／血液＝８．２±４．１及びＴ／筋肉＝９．２±３．６）に比較して骨髄などの放射線感受性の器官での線量測定のために好ましい意味を有する。
【０１７６】
実施例８：
追加のトランス−シクロオクテン構成物の合成及びその対応する抗体共役物
前記ＴＣＯと抗体の共役は、Ｒ．Ｒｏｓｓｉｎ、Ｐ．ＲｅｎａｒｔＶｅｒｋｅｒｋ、ＳａｎｄｒａＭ．ｖａｎｄｅｎＢｏｓｃｈ、Ｒ．Ｃ．Ｍ．Ｖｕｌｄｅｒｓ、ｌ．Ｖｅｒｅｌ、Ｊ．Ｌｕｂ、Ｍ．Ｓ．Ｒｏｂｉｌｌａｒｄの「Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  ＩｎｔＥｄ２０１０、４９、３３７５−７８」の記載に基づき行った。
【０１７７】
ＴＣＯ  （Ｅ−マイナー）−２、５−ジオキシピロリジン−１−イル  ４−（（シクロオクタ−４−エニルオキシ）メチル）ベンゾエート１８：
図１３が参照される。
【０１７８】
（Ｅ）−シクロオクタ−４−エノール（１６、マイナー異性体）は文献の手順にしたがって合成した。６０％の水素化ナトリウム（２．１ｇ、５３ｍｍｏｌ）を、５０ｍＬテトラヒドロフラン中の氷浴冷却された１６（２．５３ｇ、２０．１ｍｍｏｌ）へ添加した。４時間室温で撹拌した後、混合物を再び冷却し、４−ブロモメチル安息香酸（４．５３ｇ，２１．１ｍｍｏｌ）を５分間で分けながら添加した。テトラヒドロフラン２５ｍｌを添加して、懸濁液を４日、室温で撹拌した。氷を加え、続いて１２．０ｇのクエン酸を加えた。混合物を２回１５０ｍＬのｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルで抽出した。有機層を２５ｍＬの水で洗浄し、乾燥して蒸発させた。残渣を、８０ｇシリカゲル及び溶出液としてヘキサン中に酢酸エチルをグラジエントとして用いてクロマトグラフにより精製した。
分取された生成物（生成物と出発物質とは完全に分離されていない）を集めて、約３０ｍＬのヘプタンから再結晶させ、白色固体として１７を得た（０．８６ｇ、１７％）。
これを４０ｍＬジクロロメタンに溶解した。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（０．４８ｇ、４．１７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を氷冷した。Ｎ、Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（０．８０ｇ，３．８８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を氷冷して３０分間撹拌し、次に室温で１８時間撹拌した。濾過し、ジクロロメタンで洗浄し、ロータリーエバポレーターで蒸発させ、及び２５ｇのシリカゲルで、ヘプタン−酢酸エチル溶出液を用いてクロマトグラフを行い生成物を得た。蒸発させた生成物画分を７５ｍＬのｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルと混合し、混合物を６０℃に温めて溶液とした。前記溶液を２０ｍＬへ濃縮した。５０ｍＬヘプタンを徐々に加えることで、生成物を沈殿させた。沈殿を濾過して集め、ヘプタンで洗浄して１．０５ｇの１８を得た（１５％）。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝８．１０（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．４６（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、５．７３（ｍ、１Ｈ）、５．５２（ｍ、１Ｈ）、４．６０（ｄ、Ｊ＝１３．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．４５（ｄ、Ｊ＝１３．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．６５（ｍ、１Ｈ）、２．９２（ｓ、４Ｈ）、２．４３−１．１０（ｍ、１０Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１６９．０（ｑ）、１６１．５（ｑ）、１４６．７（ｑ）、１３５．１（ｔ）、１３２．１（ｔ）、１３０．４（ｔ）、１２７．０（ｔ）、１２３．７（ｑ）、８５．３（ｔ）、６８．０（ｓ）、４０．５（ｓ）、３７．７（ｓ）、３４．２（ｓ）、３２．７（ｓ）、３１．４（ｓ）、２５．４（ｓ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ、ｍ／ｚ）：計算値Ｃ２０Ｈ２３ＮＯ５Ｎａ＋（［Ｍ−Ｎａ］＋）：３８０．１４７４、実測値：３８０．１４７２。
【０１７９】
ＴＣＯ  マイナー（Ｅ）−２、５−ジオキソピロリジン−１−イル  ２−（シクロオクタ−４−エン−１−イルオキシ）アセテート２０：
合成経路の詳細は図１４を参照。
【０１８０】
ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の１６（マイナー、０．７８ｇ、６．１９ｍｍｏｌ）を氷冷し、そこにオイル中の水素化ナトリウム（６０％、０．９４ｇ、２３．５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１５分間室温で撹拌し、その後５０℃に１時間加熱した。混合物を氷冷し、ブロモ酢酸（１．４１ｇ，１０．１４っもｌ）を添加した。懸濁物を約２５℃で２０時間撹拌し（カップリングが生じていないことが示されるサンプル）、その後５５℃で６時間、２５℃で３日間及びさらに５５℃で６時間撹拌した。ロータリーエバポレーターでＴＨＦをほとんど除去し、５０ｍＬのＭＴＢＥを加え、続いて氷及び２５ｍＬｎｏ水を加えた。層分離して水層を３０ｍＬのＭＴＢＥで抽出した。有機層を集めて２５ｍＬの水で洗浄した。水層を集めて氷で冷却し、５０ｍＬＭＴＢＥを添加し、次いで５．１ｇクエン酸を添加した。前記層を分離し、水層を５０ｍＬＭＴＢＥで抽出した。これを乾燥してロータリーエバポレーターで蒸発させて得られた残渣（１９）を次にステップに使用した（これは相当量のブロモ酢酸を含む）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝１．２−２．４５（ｍ、１０Ｈ）、３．６５−３．７５（ｍ、１Ｈ）、４．１（ｓ、２Ｈ）、５．４５−５．６５（ｍ、２Ｈ）。
【０１８１】
生成物１９を３０ｍＬのジクロロメタンに溶解した。Ｎ−ヒドロキシスクシニミド（１．６０ｇ、１３．９１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を氷冷した。ＤＣＣ（３．１１ｇ、１５．１０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を氷冷して３０分間撹拌し、その後室温で３時間撹拌した。濾過しロータリーエバポレーターで濃縮し、トルエン次いでジクロロメタンを溶出液として用いて４０ｇのシリカゲルでクロマトグラフして、２０を、ブロモ酢酸のＮＨＳエステルと共に得た。混合物を２５ｍＬのＭＴＢＥ中に溶解し、及び２５ｍＬのヘプタンを溶液に添加した。２時間撹拌後、混合物を濾過した（固体は、ブロモ酢酸のＮＨＳエステルである）。濾液をロータリーエバポレーターで濃縮し、得られた残渣を温ＭＴＢＥに溶解し、ヘプタンを添加し、溶液を室温へ冷却した。これにより生成物が沈殿した。濾過により３０ｍｇの生成物２０を得た（０．１１ｍｍｏｌ、２％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ＝１．１−２．４５（ｍ、１０Ｈ）、２．８５（ｓ、４Ｈ）、３．６５−３．７５（ｍ、１Ｈ）、４．４（ｓ、２Ｈ）、５．４−５．７（ｍ、２Ｈ）。
【０１８２】
実施例９：
本発明の除去剤を使用する方法の例示として、プレターゲットプローブ（１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ）を注射し、続いて異なる量の除去剤（１２）の投与を含む前記１１１Ｌｕ−ラベル化テトラジン１５を注射する場合に得られる選択された器官の生体分布及び腫瘍−対−血液（Ｔ／器官）比率が示される。この実施例で使用されたガラクトース−ＭＳＡ−テトラジン１２は、図５で示される手順により合成され、ここで合成中間体１１は、５との反応の前にサイズ排除クロマトグラフで精製してアルブミン凝固物を除去した。
【０１８３】
ＬＳ１７４Ｔ異種移植されたヌードメスマウス（ｎ＝４）（０．２９±０．１６ｇ）は、１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ１８（ｔ＝０、マウス当たり１００μｇ／１００μｌ）が注射され、ついで、ｍＡｂ注射後３０時間で、１回の１６０μｇ／１００μｌのガラクトース−ＭＳＡ−テトラジン（１２）を投与するか、又はｍＡｂ注射後３０及び４８時間で、２回の１６０μｇ／１００μｌの１２を投与した。最後の除去剤投与の後２時間でマウスは、１７７Ｌｕ−ラベル化テトラジン１５（ｍＡｂに対して１０当量）を投与し、テトラジン注射後３時間でマウスを屠殺した。血液を心臓穿刺で取り出し、選択された器官及び組織を取り出しブロット乾燥した。血液サンプルおよび組織を秤量し、１ｍＬのＰＢＳを添加し、標準と共にガンマカウンターで測定して％ＩＤ／ｇを決定した。生体分布データ及び腫瘍／器官比率を表４及び５に示す。列間の差は、両側不対−ｔテスト（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍｖ．５．０１）を用いて解析した。
【０１８４】
表４：腫瘍持ちマウスでの１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ１８及び１７７Ｌｕ−テトラジン１５の生体内分布を示す：ｍＡｂ注射後３０時間で除去剤１２を１回投与、又はｍＡｂ投与後３０及び４８時間で１回投与。データは平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差（ｎ＝４）。
【表４】
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【０１８５】
表５：：腫瘍持ちマウスでの１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ１８及び１７７Ｌｕ−テトラジン１５の生体内分布を示す：ｍＡｂ注射後３０時間で除去剤１２を１回投与、又はｍＡｂ投与後３０及び４８時間で１回投与。データは平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差（ｎ＝４）。
【表５】
2014500307.tif 000017
【０１８６】
実施例７と同様に、得られた結果は、除去剤１２の２回投与が、血液及び正常組織から１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ１８を枯渇させるために一回投与よりもより効果的であることを示す。さらに、ここで我々は、前記系から非−腫瘍結合性ＣＣ４９−ＴＣＯの改善された除去剤が、ほとんどの考慮される正常組織内での１７７Ｌｕ−テトラジン滞留時間を大幅に減少させることを示す。留意すべきは、腫瘍内のテトラジン蓄積は、二回の除去剤投与には影響されないということであり、前記％ＩＤ／ｇで観察されるわずかな減少（表４）は、急速な腫瘍の成長による腫瘍内での放射性活性の「希釈」によるものと考えられる（１回投与対２回投与での腫瘍の平均サイズは、それぞれ０．２４±０．２２ｇ及び０．４０±０．０７ｇであった）。ガラクトース−ＭＳＡ−テトラジンによる腫瘍のブロックの欠如は、Ｇａｌ−ＭＳＡ−テトラジンの高ＭＷにより、注射及び肝臓捕捉の間の短い時間で腫瘍組織への漏出を阻害することによると考えられる。留意すべきは、ガラクトース−ＨＳＡ−ビオチンとは対照的に、腫瘍ブロック代謝物は、肝臓でガラクトース−ＭＳＡ−テトラジンの分解後に循環されないということである。これにより、除去剤代謝に続いて放出され得る未反応テトラジンが、プロトン化され（及び従って、捕捉され）及び／又は肝細胞のリソソーム区画内で分解されることが予想される。その結果、最適化実験条件では（長時間の間隔で分けた２回投与）、非常に高いＴ／血液比率が１７７Ｌｕ−テトラジンで得られる（１９５．７±１２．９；表５）。これは、除去剤の１回投与で達成し得る場合（Ｔ／血液＝４５．９±１４．２）に比較して骨髄などの放射線感受性の器官での線量測定のために好ましい意味を有する。
【０１８７】
実施例１０：
ＣＣ４９−ＴＣＯ２０でプレターゲットされた腫瘍マウスでの１７７Ｌｕ−テトラジン１５の生体分布：
腫瘍マウス（約１００ｍｍ３腫瘍サイズ；ｎ＝４）は、７．５ＴＣＯ−２０グループグループ（１００μｇ／マウス、約０．２ＭＢｑ）で機能化された１２５Ｉ−ＣＣ４９を注射された。ｍＡｂ注射後３０及び４８時間で、マウスは一回の除去剤ガラクトース−ＭＳＡ−テトラジン、１６０μｇ／投与）を投与され、続いて２時間後に１７７Ｌｕ−テトラジン１５（前記ｍＡｂに対して１０当量、約０．５ＭＢｑ）を投与された。テトラジン投与後３時間で、マウスは麻酔され頸椎脱臼で屠殺し、心臓穿刺で血液を取り出し、対象となる組織及び器官を取り出してブロット乾燥した。全ての集めたサンプルは秤量され、１ｍＬＰＢＳを添加された。前記サンプルの放射性は、二重同位体手順に従い（１２５Ｉでは１０から８０ｋｅＶ窓、１７７Ｌｕについては１５５から３８０ｋｅＶ窓）、１グラムの組織当たりの注入投与量パーセント（％ＩＤ／ｇ）を決定するために標準と共にガンマ−カウンターで測定された。
【０１８８】
生体分布データは、腫瘍による高い１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ２０の取り込みを示した。前記腫瘍取り込みは、他のＴＣＯ構成物で得られた値よりも高く（下記参照）、これは７．５  ＴＣＯ−２０グループで機能化されたＣＣ４９の長い血液循環によるものと考えられる。一方で、全ての他の器官でのｍＡｂ滞留時間は、除去剤の２回投与により低く、これは除去剤が循環ＣＣ４９−ＴＣＯを捕捉して肝臓へ送り、そこで迅速に代謝されるからである。腫瘍でのより高いｍＡｂ取り込みの結果として、１７７Ｌｕ−テトラジン取り込みもまた、これまでの実施例で得られたものよりも有意に高くなった（以下説明）。また、テトラジン投与の前の捕捉段階で非−腫瘍結合性ＣＣ４９−ＴＣＯの除去により、全ての他の器官での１７７Ｌｕ取り込みは無視できる。腎臓のみがむしろ高い１７７Ｌｕ滞留を示したが、これはテトラジンの尿中排出の結果である。これは、腎臓以外の全ての考慮する器官で、高いターゲット−対−非ターゲット比率を与える結果となる。留意すべきは、腫瘍及び血液内に存在する前記ＴＣＯの、それぞれ３４±４％及び１０±１％がテトラジンと反応したことである。
【０１８９】
表６：二重同位体生体分布データ：１７７Ｌｕ−テトラジン１５（８マウス当たり．５μｇ／８０μｍＬ、約０．５ＭＢｑ）注射後３時間、１２５Ｉ−ＣＣ４９−ＴＣＯ−２０（マウス当たり１００μｇ／１００μｍＬ、約０．２ＭＢｑ）投与後５０時間。
データは、％ＩＤ／ｇ±ＳＤ又は腫瘍／器官比率±ＳＤ（ｎ＝４）で表す。
【表６】
2014500307.tif 000018
【０１９０】
実施例１１：
抗体ＤＯＴＡ共役及び１７７Ｌｕ−放射性ラベル化：
２ｍｇＣＣ４９（ＰＢＳの５ｍｇ／ｍＬ溶液）を、４当量のＤＯＴＡ−ＮＨＳ（１０ｍｇ／ｍＬＤＭＳＯ；Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ）を全容積５００μｌＰＢＳ中で変性した。ｐＨを１Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液ｐＨ９．６で９に調節した。反応は、室温で３０分間暗所で撹拌することで行った。続いて、ＤＯＴＡ−ＣＣ４９をＰＢＳで、ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ−１５遠心装置で十分に洗浄し、最終溶液中のｍＡｂ濃度をＮａｎｏｄｒｏｐにて測定した。ｍＡｂ分子当たりのＤＯＴＡグループの数は、既定量のＤＯＴＡ−ＣＣ４９を既定量の過剰なＬｕＣｌ３（放射性１７７Ｌｕがスパイクされた）と２時間３７℃で反応させ、放射性−ＩＴＬＣ（ｎＤＯＴＡ＝ｎＬｕｘ反応収率／１００）を通して％結合Ｌｕを測定した。この手順で、共役後、ＣＣ４９分子当たり、平均３ＤＯＴＡグループが検出された。
【０１９１】
１７７Ｌｕのストック溶液は、１Ｍ酢酸アンモニウムｐＨ５．０（金属不含）で調製された。その後、望ましい量の放射線活性が前記ＤＯＴＡ−ＣＣ４９溶液（０．２Ｍ酢酸アンモニウムｐＨ７．０中の１００μｇ）に添加され、前記溶液は、１Ｍ酢酸アンモニウムｐＨ５．０で５０μＬへ希釈された。前記ラベル化混合物は、１時間３７℃でインキュベートされ、その後５μＬの１０ｍＭＤＴＰＡが添加され、前記溶液を１０分間さらにインキュベートされた。放射線ラベル化収率は、放射性−ＩＴＬＣで決定され（通常は６５から７０％）、次に前記粗１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＣＣ４９が、生理食塩水で前平衡化されたＺｅｂａ脱塩スピンカラム（７から４０ｋＤａＭＷカットオフ）に２回通して精製された。その後溶出溶液中１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＣＣ４９の回収は、前記ラベル化収率及び前記スピンカラムカラムから回収された放射活性から評価された。１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＣＣ４９の放射性純度は、ＩＴＬＣ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びＳＥＣ−ＨＰＬＣで評価され（通常は９８％を超える）、その後比活性を、非−放射性ｍＡｂを加えることで望ましい値に調節された。
【０１９２】
実施例１２：
１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＣＣ４９及びＣＣ４９−ＴＣＯ−１８プレターゲット１７７Ｌｕ−テトラジンの比較生体分布：
ＬＳ１７４Ｔ異種移植（７０から１００ｍｍ３）された４マウスの群に、直接ラベル化された１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＣＣ４９（マウス当たり１００μｇ／１００μｌ、約０．５ＭＢｑ）又はＣＣ４９−ＴＣＯ−１８でプレターゲット化１７７Ｌｕ−テトラジン１５（１００μｇ／１００μｌＣＣ４９−ＴＣＯ−１８、続いて２回の１６０μｇ／１００μｌ投与量のガラクトース−ＭＳＡ−テトラジン１２を３０及び４８時間、及びマウス当たり８．５２μｇ／８０μｍｌ１７７Ｌｕ−テトラジン１５、マウス当たり０．８から１．２ＭＢｑ、１００μｇゲンチシン酸を含む）を注射した。１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＣＣ４９を注射されたマウスの１群及びプレターゲット化された１７７Ｌｕ−テトラジンを注射されたマウスの１群が、選択された時間で、伏在静脈から血液サンプルを取り出しで２つのトレーサーの初期に血液分布を評価した（１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＣＣ４９については、２、３０及び６０分、及びプレターゲット化された１７７Ｌｕ−テトラジンについては２、５、１０、２０３０及び４５分後）（図１５）。これらの２つの群のマウスを次に、１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＣＣ４９及び１７７Ｌｕ−テトラジンの注射後それぞれ３時間及び１時間後に屠殺された。全ての他のマウス群は、注射後７日まで種々の時間で屠殺された。屠殺後、血液を心臓穿刺により取り出し、選択された器官及び組織が取り出されブロット乾燥された。血液サンプル及び組織サンプルは秤量されて、１ｍＬＰＢＳを加え、放射活性を、標準と共にガンマ計測して％ＩＤ／ｇ及び％ＩＤを決定した（表７、８）。腫瘍マウスの前記２つの群は、排泄プロフィルのために使用された（図１６）。１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＣＣ４９を注射されたマウスは、濾過カゴユニット内に置かれて種々の時間で床を標準と共にガンマ計測した。マウスの他の群はより高い比放射能１７７Ｌｕ−テトラジン（マウス当たり約１２ＭＢｑ／８．５２μｇテトラジン）を注射され、全身除去を種々の時間で線量計装置で動物を測定することでモニターした。
【０１９３】
表７：腫瘍マウスでの１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＣＣ４９の生体分布
データは、平均％ＩＤ／ｇ及び％ＩＤ±１標準偏差で表される（ｎ＝４）。
【表７】
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【０１９４】
表８：腫瘍マウスのＣＣ４９−ＴＣＯ−１８プレターゲット化１７７Ｌｕ−テトラジン１５の生体分布。
データは、平均％ＩＤ／ｇ及び％ＩＤ±１標準偏差で表される（ｎ＝４）。
【表８】
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【０１９５】
予想の通り、直接ラベル化した１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＣＣ４９は、２相血液除去プロフィル（Ｔα＝１．０時間及びＴβ＝３２．６時間、及び全半減期２２時間（Ｔ１／２＝ｌｎ２ｘＡＵＣ／Ｃ０から計算））を持って長い循環を示した。長い血液循環の結果として、腫瘍のｍＡｂ取り込みは腫瘍−対−血液比率が、注射後約６時間で１から注射後４日で３０の範囲で高かった。全身体ｍＡｂ除去は、ゆっくりであり、注射後４日で、注射された放射活性の２０％のみが尿及び糞から回収された。従って、全観測期間（７日）で、高濃度の放射性が全ての考慮される器官、特に肺、肝臓、脾臓及び生殖器官に保持されていた。
【０１９６】
一方、ＣＣ４９−ＴＣＯプレターゲット化マウスでは、１７７Ｌｕ−テトラジンは血液から迅速に除去され（Ｔ１／２＝１１．２分）、注射後３時間で、注射された放射活性の９５％が既に尿中に排泄されていた。その結果、腫瘍取り込み（％ＩＤ／ｇ）は注射後数時間内でピークとなりその後時間と共に減少した（表８）。しかし、実験の７日間では腫瘍からの放射活性の放出は観測されず、このことはインビボでのディールスアルダー反応生成物の安定性を確認するものであり、かつ腫瘍取り込み減少は主に腫瘍増殖によることを確認する。考慮される器官においては、テトラジンのかなりの量を保持する非ターゲット器官は腎臓のみであった。しかし、注射後数日内には、この器官からもまた効果的に放射活性が除去された。留意すべきは、比較的低い絶対腫瘍取り込みにも拘わらず、プレターゲット化された１７７Ｌｕ−テトラジンの腫瘍−対−血液比率は、注射後約３時間で既に約２００となり、実験の終了時までの５００を超えるまで増加した、ということである。
このことは、１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＣＣ４９の高い腫瘍取り込みにも拘わらず、直接ラベル化されたｍＡｂの循環の骨髄などの放射性感受性器官での線量について好ましいことである。
【０１９７】
実施例１３：
人及びマウス線量：従来の放射免疫治療とディールスアルダー反応を使用するプレターゲット方法との比較：
推定放射線線量は、男性人モデル（標準７３ｋｇ成人）と、ボクセル化マウスモデルにつて、ＭＩＲＤ手法により前記のマウス生体分布データ（実施例１２、表７及び８）を用いて行った。これらの器官の活性濃度は、注射量パーセント（％ＩＤ）に変換され、崩壊については注射時に補正された。血液、筋肉及び骨についての％ＩＤは、組織の％ＩＤ／ｇ及び身体の６％、４２％及び１１％と仮定して評価された。可能な場合には、時間活性曲線は、２相指数関数的除去関数でフィッティングさせた。フィッティング関数は次に分析的に積分して器官での滞留時間を計算した（表９）。曲線フィッティングができない場合には、積分は、最後の生体分布時間を過ぎた活性は放射線崩壊によってのみ減少する、と仮定して台形方法で実行した。腫瘍での家政時間曲線は、Ｆ（ｔ）＝ａ０（１−ｅｘｐ（−ａ１ｔ））として定められる単一の指数関数的取り込み関数によりフィッティングさせた。
【０１９８】
表９：滞留時間（時間）。
【表９】
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【０１９９】
１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡ−ＣＣ４９については、いくらかの放射活性が、尿及び糞の混合物として回収された。残留する測定されない活性は、身体の残部にあるものとした（１２１時間）。プレターゲット化１７７Ｌｕ−テトラジンについては、合計９７．８％ＩＤが排泄された。動物の残量活性から、２０％が残部又は身体で観察されたか、滞留時間１時間に対応するものであった。
【０２００】
人放射線量（表１０）は、前記の測定滞留時間及び次の仮定の元でＯＬＩＮＤＡ／ＥＸＭプログラムを用いて計算された：
・血液滞留時間の１０％は、心臓内容物に、及び９０％は身体の残部に帰属する；
・小腸及び大腸で測定された活性は、器官内容物に帰属する、しかし投与線量は器官自体に帰属する；
・大腸の活性は上部及び株大腸に均等に帰属する；
・骨の活性は、骨梁及び海綿状褒め成分に均等に帰属する。
ＯＬＩＮＤＡ／ＥＸＭにおいて膀胱排尿モデルが使用された。赤色骨髄への滞留時間は、血液滞留時間の部分として計算した（τ骨髄＝０．０８τ血液）。
【０２０１】
表１０：器官放射線線量（ｍＧｙ／ＭＢｑ）。
【表１０】
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【０２０２】
マウス器官への放射線線量は、ＭＩＲＤ手法を用いて評価し、マウスのＳ−ファクタは、マウスのボクセル化モデルを用いて計算し、電子移送プログラムＥＧＳＮＲＣを用いてエネルギー蓄積を計算した。ＳｅｇａｒｓらのＭＯＢＹマウスファントムを０．２ｍｍ格子に、さらに、次の器官が含まれるようにボクセル化した：腸壁と内容物、胃壁と内容物、膀胱壁と内容物及び２０μＬの胆嚢。最終的に、０．５３ｇ腫瘍が、動物の首の左側に追加された。２７の独立したシミュレーション、一千万崩壊につきそれぞれ、プログラムＥＧＳＮＲＣを実行してそれぞれの元の器官につきそれぞれのターゲット化器官でのエネルギー蓄積を計算した。このシミュレーションは、１７７Ｌｕからの全ての崩壊粒子、ｗｗｗ．ｎｎｄｃ．ｂｎｌ．ｇｏｖ／ＭＩＲＤｔａｂｌｅｓに列記された粒子を含む。これらのＳ−ファクタは次に前記測定された器官滞留時間と共に使用された。両方の成分につき、器官放射線線量は表１１に列記される。
【０２０３】
表１１：マウスモデルでの器官放射線線量（ｍＧｙ／ＭＢｑ）。
【表１１】
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【０２０４】
実施例１４：ガラクトース及びテトラジン基で官能基化されたデンドリマー状除去剤の合成：
ＰＰＩ−Ｇ１−（ガラクトース）２−（テトラジン）２（２３）の合成；合成経路の詳細は図１７を参照：
ＰＰＩ−Ｇ１−（ガラクトース）２−（ＮＨ２）２（２２）：
ＰＰＩ−Ｇ１−（ＮＨ２）２（２１；３５．８６ｍｇ；１．１３ｘ１０−４ｍｏｌ）を水（１．５ｍＬ）の溶解し、酢酸（３０ｍｇ；５．０９ｘ１０−４ｍｏｌ）を添加した。２−イミノ−メトキシエチル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（９；６０．５６ｍｇ；２．２７ｘ１０−４ｍｏｌ）を添加し、反応混合物を２時間室温で撹拌した。続いて反応混合物を凍結乾燥して精製物２２を白色固体として得た（８６．０ｍｇ；９７％）。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ＝４．５２（ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、２Ｈ、ｇａｌａｃｔｏｓｅＨ１）、３．９６（ｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ、２Ｈ、ガラクトースＨ２）、３．７５−３．５（ｍ、１４Ｈ、ガラクトースＨ３＋Ｈ４＋Ｈ５＋Ｈ６＋Ｈ６’＋ＣＨ２Ｓ）、３．４５（ｂｒ．ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ））、３．０２（ｍ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、４Ｈ、ＣＨ２ＮＨ２）、３．０−２．８（ｂｒ．ｍ、１２Ｈ、ＣＨ２Ｎ）、１．９７（ｂｒ．ｍ、８Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｎ）、１．６２（ｂｒ．ｍ、４Ｈ、ＮＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ）ｐｐｍ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３１６．３、５５１．４、７８６．５、１０２１．６Ｄａ（計算値：７８７．１Ｄａ）。
【０２０５】
ＰＰＩ−Ｇ１−（ガラクトース）２−（テトラジン）２（２３）：
ＰＰＩ−Ｇ１−（ガラクトース）２−（ＮＨ２）２（２２；７．４７ｍｆ；９．３６ｘ１０−６ｍｏｌ）を水（０．５ｍＬ）に溶解した。一水素リン酸二ナトリウム（６．００ｍｇ；４．２１ｘ１０−５ｍｏｌ）を添加して、混合物のｐＨを９の調節した。次に、ＮＨＳ−活性化テトラジン（５；１９．９ｍｇ；１．８７ｘ１０−５ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、透明ピンク色溶液を得た。続いて反応混合物を凍結乾燥して、生成物２３をピンク色固体として得た（３０．５ｍｇ；１２２％）。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ＝８．９−７．４（ｂｒ．ｍ、１２Ｈ、テトラジン）、４．５６（ｄ、２Ｈ、ガラクトースＨ１）、３．９９（ｓ、２Ｈ、ガラクトースＨ２）、３．８−３．６（ｍ、１０２Ｈ、ＰＥＧＣＨ２Ｏ＋ガラクトースＨ３＋Ｈ４＋Ｈ５＋Ｈ６＋Ｈ６’＋ＣＨ２Ｓ）、３．４３（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＮＨＣＯ）、３．３６（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ））、３．２１（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＮＨＣＯ）、２．９−２．６（ｂｒ．ｍ、１２Ｈ、ＣＨ２Ｎ）、２．５１（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＯ）、２．４−２．２（ｂｒ．ｍ、８Ｈ、ＣＨ２ＣＯ）、２．０−１．６５（ｂｒ．ｍ、１２Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｎ）、１．５７（ｂｒ．ｍ、４Ｈ、ＮＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ）ｐｐｍ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝１９７１．６、２６８４．４、３３９４．４Ｄａ（計算値：２６７９．８Ｄａ）。
【０２０６】
ＰＰＩ−Ｇ３−（ガラクトース）１２−（テトラジン）４（２６）の合成：
合成経路の詳細は図１８を参照。
【０２０７】
ＰＰＩ−Ｇ３−（ガラクトース）１２−（ＮＨ２）２（２５）：
ＰＰＩ−Ｇ３−（ＮＨ２）１６（２４；３３．８ｍｇ；２．００ｘ１０−５ｍｏｌ）を水（０．６ｍＬ）に溶解し、酢酸（１０ｍｇ；１．６７ｘ１０−４ｍｏｌ）を添加した。２−イミノ−２−メトキシメチル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（９；６４．３ｍｇ；２．４０ｘ１０−４ｍｏｌ）を添加して、反応混合物を２時間室温で撹拌した。続いて反応混合物を水（２ｍＬ）に希釈し、凍結乾燥して白色固体として生成物を得た（８９ｍｇ；９９％）。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ＝４．５３（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、１２Ｈ、ガラクトースＨ１）、３．９９（ｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ、１２Ｈ、ｇａｌａｃｔｏｓｅＨ２）、３．８−３．６（ｍ、６０Ｈ、ガラクトースＨ３＋Ｈ４＋Ｈ５＋Ｈ６＋Ｈ６’）、３．２９（ｂｒ．ｍ、２４Ｈ、ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ））、２．７２（ｂｒ．ｍ、８Ｈ、ＣＨ２ＮＨ２）、２．６５−２．４（ｂｒ．ｍ、８４Ｈ、ＣＨ２Ｎ）、１．８３（ｂｒ．ｍ、２４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ））、１．６６（ｂｒ．ｍ、３２Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｎ）、１．４６（ｂｒ．ｍ、４Ｈ、ＮＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ）ｐｐｍ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３８０７．３、４０４３．４、４２７８．８、４５１４．４、４７５０．０、４９８４．１Ｄａ（計算値：４５１０．１Ｄａ）。
【０２０８】
ＰＰＩ−Ｇ３−（ガラクトース）１２−（テトラジン）４（２６）：
ＰＰＩ−Ｇ３−（ガラクトース）１２−（ＮＨ２）２（２５；１０．０ｍｇ；２．３４ｘ１０−６ｍｏｌ）を水（０．６ｍＬ）に溶解し、ＮＨＳ−活性化テトラジン（５；１２．４ｍｇ；１．１７ｘ１０−５ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、透明なピンク色溶液を得た。続いて、反応混合物を水（３ｍＬ）で希釈し、凍結乾燥して、生成物をピンク色固体として得た（２１．１ｍｇ；１００％）。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ＝８．７−７．３（ｂｒ．ｍ、４０Ｈ、テトラジン）、４．５４（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、１２Ｈ、ガラクトースＨ１）、３．９９（ｂｒ．ｍ、１２Ｈ、ガラクトースＨ２）、３．９−３．６（ｍ、３５５Ｈ、ＰＥＧＣＨ２Ｏ＋ガラクトースＨ３＋Ｈ４＋Ｈ５＋Ｈ６＋Ｈ６’）、３．４２（ｂｒ．ｍ、１０Ｈ）、３．３５（ｂｒ．ｍ、２４Ｈ、ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ））、３．１２（ｂｒ．ｍ、１０Ｈ）、３．０−２．６（ｂｒ．ｍ、８４Ｈ、ＣＨ２Ｎ）、２．５２（ｂｒ．ｍ、１０Ｈ）、２．２６（ｂｒ．ｍ、２０Ｈ）、２．０−１．６（ｂｒ．ｍ、６０Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｎ）ｐｐｍ。ＦＴ−ＩＲ：ν＝３２９８、２８７１、１６７１、１６４３、１５８３、１５３８、１３９４、１２００、１１２４、１０８２ｃｍ−１。
【０２０９】
ＰＰＩ−Ｇ５−（ガラクトース）５０−（テトラジン）１４（２９）の合成：
合成の詳細は図１９を参照。
【０２１０】
ＰＰＩ−Ｇ５−（ガラクトース）５０−（ＮＨ２）１４（２８）：
ＰＰＩ−Ｇ５−（ＮＨ２）６４（２７；２０．９ｍｇ；２．９２ｘ１０−６ｍｏｌ）を水（０．６ｍＬ）に溶解し、酢酸（１７．５ｍｇ；２．９２ｘ１０−４ｍｏｌ）を添加した。２−イミノ−２−メトキシエチル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（９；４６．８ｍｆ；１．７５ｘ１０−４ｍｏｌ）を添加し、反応混合物を４時間室温で撹拌した。続いて、反応混合物を水（２ｍＬ９で希釈し凍結乾燥して、精製物を白色固体として得た（７４．４ｍｇ；１２０％）。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ＝４．６１（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、５０Ｈ、ガラクトースＨ１）、４．０４（ｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ、５０Ｈ、ガラクトースＨ２）、３．８−３．６（ｍ、３５０Ｈ、ガラクトースＨ３＋Ｈ４＋Ｈ５＋Ｈ６＋Ｈ６’＋ＣＨ２Ｓ）、３．４１（ｂｒ．ｍ、１００Ｈ、ＣＨ２ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ））、３．１−２．６（ｂｒ．ｍ、３８０Ｈ、ＣＨ２Ｎ）、１．９５（ｂｒ．ｍ、２５２Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｎ）、１．９８（ｓ、２７０Ｈ、ＣＨ３ＣＯＯＨ）ｐｐｍ。
【０２１１】
ＰＰＩ−Ｇ５−（ガラクトース）５０−（テトラジン）１４（２９）：
ＰＰＩ−Ｇ５−（ｇａｌａｃｔｏｓｅ）５０−（ＮＨ２）１４（２８；２８．３ｍｇ；１．２５ｘ１０−６ｍｏｌ）を水（０．６ｍＬ）に溶解した。一水素リン酸二ナトリウム（１７．７ｍｇ；１．２５ｚ１０−４ｍｏｌ）を添加してｐＨを９に調節した。次に、ＮＨＳ−活性化テトラジン（５；１９．９ｍｇ；１．８８ｘ１０−５ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で９０分間撹拌し、透明ピンク色溶液を得た。続いて反応混合物を低ＭＷ副生成物をＰＤ−１０カラムを通すことで除去して精製した。高ＭＷ分画を集めて凍結乾燥して、生成物をピンク色固体として得た（１０．９ｍｇ；２７％）。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ＝８．９−７．６（ｂｒ．ｍ、１０５Ｈ、テトラジン）、４．５９（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、５０Ｈ、ガラクトースＨ１）、４．０２（ｓ、５０Ｈ、ガラクトースＨ２）、３．９−３．５（ｍ、１０７０Ｈ、ＰＥＧＣＨ２Ｏ＋ガラクトースＨ３＋Ｈ４＋Ｈ５＋Ｈ６＋Ｈ６’＋ＣＨ２Ｓ）、３．４１（ｂｒ．ｍ、１５８Ｈ）、３．０−２．６（ｂｒ．ｍ、３８０Ｈ、ＣＨ２Ｎ）、２．４７（ｂｒ．ｍ、４０Ｈ）、２．３５（ｂｒ．ｍ、８０Ｈ）、２．１−１．７（ｂｒ．ｍ、２５２Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｎ）ｐｐｍ。
【０２１２】
さらにいくつかの本発明の実施態様を以下に示す。
［１］  対象体へ投与される投与剤と、同じ対象体へ投与して、前記対象体の血液から循環する投与剤を除去するための除去剤との組合せであり、ここで前記投与剤が第１の反応性基を含み、かつ前記除去剤が第２の反応性基を含み、前記第１及び第２の反応性基が、生体−直交反応性基であり、お互いに生体−直交反応性であるように選択され、前記生体−直交反応性基のいずれかがジエノフィルであり、他の基がジエンであり、前記ジエノフィルが式（１）を満たす８員環ジエノフィルであり：
【０２１３】
【化１１】
2014500307.tif 000024
ここで、それぞれのＲは独立して、Ｈ又は最大６まで、アルキル、Ｏ−アリ−ル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ２、ＮＯ２；ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アリ−ル又はアルキル）、ＯＣＯアルキル、ＯＣＯアリール、ＮＲ’ＣＯ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯアリ−ル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏアルキル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏアリ−ル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏアルキル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏアリ−ル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、ここで２つのＲ基は共に環を形成し、及びここで、Ｘ及びＹはそれぞれ独立して、アルキル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ２、ＮＯ２、及びＮＲＲ’（Ｒ及びＲ’はそれぞれ独立してＨ又はアルキル）を表し、又は共に結合を形成し、１つのＲは前記それぞれの投与剤又は除去剤へ場合によりスペ−サ−を介して連鎖（リンケ−ジ）を形成し、前記除去剤がさらに、１以上のヘキソース系部分を含む、組合せ。
［２］  前記［１］の組合せであり、前記ジエノフィルが８−員環ジエノフィルであり式（１ａ）を満たす：
【０２１４】
【化１２】
2014500307.tif 000025
ここで、それぞれのＸ、Ｙ、Ｒ及びＲａは独立して、Ｈ又は最大６まで、アルキル、Ｏ−アリ−ル、Ｏ−アルキル、Ｓｉ−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ２、ＳＯ３、ＳＯ４、ＮＯ２；ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アリ−ル又はアルキル）、ＯＣＯアルキル、ＯＣＯアリール、ＮＲ’ＣＯ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯアリ−ル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏアルキル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏアリ−ル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏアルキル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏアリ−ル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）であり、Ｒ又はＲａは、リンカー部分に含まれ、場合によりスペーサを介して、前記プレターゲットプローブ又はエフェクタープローブへ結合され；２つのＲ又はＲａ部分は共に環を形成してもよく；Ｒａの少なくとも１つ最大４つが水素ではない、組合せ。
［３］  組合せ［２］により組合せであり、前記式（１ａ）のジエノフィルが次の要求の１以上を満たす：
（ａ）Ｘはメチル；
ｂ）Ｙはメチル；
（ｃ）Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ５ａの１以上がＯ−アルキル；
（ｄ）Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ５ａの１以上がＯ−アリールである。
［４］  ［２］、［３］の組合せであり、Ｘがメチル又は水素、Ｙがメチル又は水素、及びＲ３ａ、Ｒ４ａがＯ−アルキル又はＯ−アリールである、組合せ。
［５］  ［１］乃至［４」のいずれかに記載の組合せであり、前記ジエンが以下の式（２）、（３）、（４）、（５）、（６）及び（７）の化合物からなる群から選択される、組合せである：
【０２１５】
【化１３】
2014500307.tif 000026
ここで、、Ｒ１は、アルキル、アリール、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリール、Ｓ−アルキル、Ｓ（＝Ｏ）２−アルキル、及びＮＲ’Ｒ’’はそれぞれ独立して水素又はアルキル；Ａ及びＢはそれぞれ独立して、アルキル置換炭素、アリ−ル置換炭素、窒素、Ｎ＋Ｏ−、Ｎ＋Ｒ（Ａ及びＢは共に炭素でない場合にＲはアルキル）からなる群から選択され；Ｘは、Ｏ、Ｎ−アルキル及びＣ＝Ｏからなる群から選択され、及びＹは、ＣＲであり、ＲはＨ、アルキル、アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏアルキルからなる群から選択され；
【０２１６】
【化１４】
2014500307.tif 000027
ここで、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリ−ル、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２；Ａは、Ｎ−アルキル、Ｎ−アリ−ル、Ｃ＝Ｏ及びＣＮ−アルキルからなる群から選択され；ＢはＯであり；Ｘは、Ｎ、ＣＨ，Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）ｏ−アルキルから成る群から選択され；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、Ｎ及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；
【０２１７】
【化１５】
2014500307.tif 000028
ここでＲ１及びＲ２はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から選択され；Ａは、ＣＯ、Ｃ−アルキル、ＣＮ−アルキル、Ｎ−アルキル及びＮ−アリ−ルからなる群から選択され；ＢはＯであり；Ｘは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル及びＮであり；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、Ｎ及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；
【０２１８】
【化１６】
2014500307.tif 000029
ここでＲ１及びＲ２はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から選択され；Ａは、Ｎ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリール、及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；ＢはＮであり；Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−あるきるから成る群から選択され；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、Ｎ及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；
【０２１９】
【化１７】
2014500307.tif 000030
ここで、Ｒ１は、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から選択され；Ｒ２は、Ｈ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から選択され；Ａは、Ｎ、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；ＢはＮであり；Ｘは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル及びＮからなる群から選択され；Ｙは、ＣＨ、ＣＣＮ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、Ｎ及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；
【０２２０】
【化１８】
2014500307.tif 000031
ここで、ここでＲ１及びＲ２はそれぞれ独立して、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、ピリミド、フェニ−ル及び、これらは場合により好ましくはＮＯ２、Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ，ＣＯＯＨ，ＣＯＯＲ，ＣＯＮＨ２，ＣＯＮＨＲ，ＣＯＮＲ２，ＣＨＯ，ＣＯＲ，ＳＯ２Ｒ，ＳＯ２ＯＲ，ＮＯ及びＡｒなどの１以上の電子吸引基で置換されていてもよいフェニール（ＲはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ａｒとは芳香族基、特にフェニ−ル、ピリジル、ピリミジル及びナフチル基を表す）、からなる群から選択される。
［６］  ［１］乃至［５］のいずれか一項に記載の組合せであり、前記投与剤がプレターゲットプローブであり、好ましくは第１のターゲット部分として抗体を含む、組合せ。
［７］  ［１］乃至［５］のいずれか一項に記載の組合せであり、前記投与剤がターゲット造影又は治療のための剤である、組合せ。
［８］  生体−直交性反応基と１以上のヘキソース系部分を持つ除去剤であり、前記生体−直交性反応基が、［１］乃至［５］のいずれか一項に記載のジエン又はジエノフィルである、組合せ。
［９］  ［８］の組合せであり、前記ヘキソース系部分がガラクトース部分である、組合せ。
［１０］  プレターゲット方法であり、前記方法が、［６］に記載されたプレターゲットプローブである投与剤を対象体に投与し、前記投与剤を、対象体のシステム内で、前記第１のターゲット部分の第１のターゲットへの結合が達成されるために効果的な時間の間循環させ、次に非結合投与剤を身体から、［８］又は［９］による除去剤を投与することで除去することを含む、プレターゲット方法。
［１１］  動物又は人対象体で循環系から生体分子を除去するための方法であり、前記方法が、投与剤と除去剤を投与することを含み、前記投与剤が第１の反応性基を持ち、前記除去剤が第２の反応性基を持ち、前記第１の反応性基と第２の反応性基がお互いに直交的に反応するように選択され、前記除去剤が［１］乃至［５］のいずれか一項に記載に反応基である、方法。
［１２］  ［１］乃至［５］のいずれか一項に記載の投与剤及び除去剤の使用であり、動物又は人対象体から生体分子を除去するための使用であり、前記投与剤が前記生体分子と結合し得る部分を含む、使用。
【０２２１】
本発明のさらなる実施態様は以下示される。
［実施態様１］  対象体へ投与される投与剤と、同じ対象体へ投与して、前記対象体の血液から循環する投与剤を除去するための除去剤との組合せであり、
前記投与剤が第１の反応性基を持ち、前記除去剤が第２の反応性基を持ち、前記第１及び第２の反応性基がお互いに生体−直交性反応を行うように選択されている。
［実施態様２］
実施態様［１］による組合せであり、前記生体−直交性反応基のいずかが、ジエノフィルであり他のジエンであり、ここで前記ジエンが８−員環ジエノフィルであり、式（１ａ）を満たす：
【０２２２】
【化１９】
2014500307.tif 000032
ここで、それぞれのＲは独立して、Ｈ又は最大６まで、アルキル、Ｏ−アリ−ル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ２、ＮＯ２；ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アリ−ル又はアルキル）、ＯＣＯアルキル、ＯＣＯアリール、ＮＲ’ＣＯ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯアリ−ル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏアルキル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏアリ−ル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏアルキル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏアリ−ル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、ここで２つのＲ基は共に環を形成し、及びここで、Ｘ及びＹはそれぞれ独立して、アルキル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ２、ＮＯ２、及びＮＲＲ’（Ｒ及びＲ’はそれぞれ独立してＨ又はアルキル）を表し、又は共に結合を形成し、１つのＲが、場合によりスペーサーを介してそれぞれの投与剤又は除去剤とリンケージを形成する。
［実施態様３］  「実施態様２］による組合せであり、前記ジエノフィルが８−員環ジエノフィルであり、式（１ａ）を満たす：
【０２２３】
【化２０】
2014500307.tif 000033
ここで、それぞれのＸ、Ｙ、Ｒ及びＲａは独立して、Ｈ又は最大６まで、アルキル、Ｏ−アリ−ル、Ｏ−アルキル、Ｓｉ−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ２、ＳＯ３、ＳＯ４、ＮＯ２；ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アリ−ル又はアルキル）、ＯＣＯアルキル、ＯＣＯアリール、ＮＲ’ＣＯ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯアリ−ル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏアルキル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏアリ−ル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏアルキル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏアリ−ル（Ｒ’はＨ又はアルキル）、
ＮＲ’ＣＯＮＲ’’アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）であり、Ｒ又はＲａは、リンカー部分に含まれ、場合によりスペーサを介して、前記プレターゲットプローブ又はエフェクタープローブへ結合され；２つのＲ又はＲａ部分は共に環を形成してもよく；Ｒａの少なくとも１つ最大４つが水素ではない、組合せ。
［実施態様４］  ［実施態様３］により組合せであり、前記式（１ａ）のジエノフィルが次の要求の１以上を満たす：
（ａ）Ｘはメチル；
ｂ）Ｙはメチル；
（ｃ）Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ５ａの１以上がＯ−アルキル；
（ｄ）Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ５ａの１以上がＯ−アリールである。
［実施態様５］  ［実施態様３］、［実施態様４］の組合せであり、Ｘがメチル又は水素、Ｙがメチル又は水素、及びＲ３ａ、Ｒ４ａがＯ−アルキル又はＯ−アリールである、組合せ。
［実施態様６］  ［実施態様２］乃至［実施態様５」のいずれかに記載の組合せであり、前記ジエンが以下の式（２）、（３）、（４）、（５）、（６）及び（７）の化合物からなる群から選択される、組合せである：
【０２２４】
【化２１】
2014500307.tif 000034
ここで、、Ｒ１は、アルキル、アリール、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリール、Ｓ−アルキル、Ｓ（＝Ｏ）２−アルキル、及びＮＲ’Ｒ’’はそれぞれ独立して水素又はアルキル；Ａ及びＢはそれぞれ独立して、アルキル置換炭素、アリ−ル置換炭素、窒素、Ｎ＋Ｏ−、Ｎ＋Ｒ（Ａ及びＢは共に炭素でない場合にＲはアルキル）からなる群から選択され；Ｘは、Ｏ、Ｎ−アルキル及びＣ＝Ｏからなる群から選択され、及びＹは、ＣＲであり、ＲはＨ、アルキル、アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏアルキルからなる群から選択され；
【０２２５】
【化２２】
2014500307.tif 000035
ここで、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、
水素、アルキル、アリ−ル、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２；Ａは、Ｎ−アルキル、Ｎ−アリ−ル、Ｃ＝Ｏ及びＣＮ−アルキルからなる群から選択され；ＢはＯであり；Ｘは、Ｎ、ＣＨ，Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）ｏ−アルキルから成る群から選択され；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、Ｎ及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；
【０２２６】
【化２３】
2014500307.tif 000036
ここでＲ１及びＲ２はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から選択され；Ａは、ＣＯ、Ｃ−アルキル、ＣＮ−アルキル、Ｎ−アルキル及びＮ−アリ−ルからなる群から選択され；ＢはＯであり；Ｘは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル及びＮであり；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、Ｎ及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；
【０２２７】
【化２４】
2014500307.tif 000037
ここでＲ１及びＲ２はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から選択され；Ａは、Ｎ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリール、及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；ＢはＮであり；Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキルから成る群から選択され；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、Ｎ及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；
【０２２８】
【化２５】
2014500307.tif 000038
ここで、Ｒ１は、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から選択され；Ｒ２は、Ｈ、アルキル、アリール、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から選択され；Ａは、Ｎ、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；ＢはＮであり；Ｘは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル及びＮからなる群から選択され；Ｙは、ＣＨ、ＣＣＮ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、Ｎ及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；
【０２２９】
【化２６】
2014500307.tif 000039
ここで、ここでＲ１及びＲ２はそれぞれ独立して、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、ピリミド、フェニ−ル及び、これらは場合により好ましくはＮＯ２、Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ，ＣＯＯＨ，ＣＯＯＲ，ＣＯＮＨ２，ＣＯＮＨＲ，ＣＯＮＲ２，ＣＨＯ，ＣＯＲ，ＳＯ２Ｒ，ＳＯ２ＯＲ，ＮＯ及びＡｒなどの１以上の電子吸引基で置換されていてもよいフェニール（ＲはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ａｒとは芳香族基、特にフェニ−ル、ピリジル、ピリミジル及びナフチル基を表す）、からなる群から選択される。
［実施態様７］  ［実施態様１］乃至［実施態様６］のいずれか一項に記載の組合せであり、前記投与剤がプレターゲットプローブであり、好ましくは第１のターゲット部分として抗体を含む、組合せ。
［実施態様８］  ［実施態様１］乃至［実施態様６］のいずれか一項に記載の組合せであり、前記投与剤がターゲット造影又は治療のための剤である、組合せ。
［実施態様９］  生体−直交性反応性基及び１以上のヘキソース、好ましくはガラクトース部分を含む除去剤。
［実施態様１０」  ［実施態様９］による除去剤であり、前記生体−直交性反応性基が、［実施態様２］乃至［実施態様５］のいずれか一項に記載のジエン又はジエノフィルである、除去剤。
［実施態様１１］  プレターゲット方法であり、前記方法が、［実施態様７］に記載されたプレターゲットプローブである投与剤を対象体に投与し、前記投与剤を、対象体のシステム内で、前記第１のターゲット部分の第１のターゲットへの結合が達成されるために効果的な時間の間循環させ、次に非結合投与剤を身体から、［実施態様１］乃至［実施態様６］のいずれか一項による除去剤、好ましくは［実施態様９］又は［実施態様１０］に記載の除去剤を投与することで除去することを含む、プレターゲット方法。
［実施態様１２］  動物又は人対象体で循環系から生体分子を除去するための方法であり、前記方法が、投与剤と除去剤を投与することを含み、前記投与剤が第１の反応性基を持ち、前記除去剤が第２の反応性基を持ち、前記第１の反応性基と第２の反応性基がお互いに直交的に反応するように選択される、方法。
［実施態様１３］  ［実施態様１２］に記載の方法であり、前記反応性基が、［実施態様２］乃至［実施態様６］のいずれか一項に定められる、方法。
［実施態様１４］  ［実施態様１］乃至［実施態様６］のいずれか一項に記載の投与剤及び除去剤の使用であり、動物又は人対象体から生体分子を除去するための使用であり、前記投与剤が前記生体分子と結合し得る部分を含む、使用。
【図１】
2014500307.tif 000048
【図２】
2014500307.tif 000049
【図３】
2014500307.tif 000050
【図４】
2014500307.tif 000051
【図５】
2014500307.tif 000052
【図６】
2014500307.tif 000053
【図７】
2014500307.tif 000054
【図８Ａ】
2014500307.tif 000055
【図８Ｂ】
2014500307.tif 000056
【図８Ｃ】
2014500307.tif 000057
【図８Ｄ】
2014500307.tif 000058
【図８Ｅ】
2014500307.tif 000059
【図９】
2014500307.tif 000060
【図１０】
2014500307.tif 000061
【図１１】
2014500307.tif 000062
【図１２】
2014500307.tif 000063
【図１３】
2014500307.tif 000064
【図１４】
2014500307.tif 000065
【図１５】
2014500307.tif 000066
【図１６】
2014500307.tif 000067
【図１７】
2014500307.tif 000068
【図１８】
2014500307.tif 000069
【図１９】
2014500307.tif 000070
【手続補正書】
【提出日】平成25年6月24日(2013.6.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象体へ投与される投与剤と、同じ対象体へ投与して、前記対象体の血液から循環する投与剤を除去するための除去剤との組合せであり、ここで前記投与剤が第１の反応性基を含み、かつ前記除去剤が第２の反応性基を含み、前記第１及び第２の反応性基が、生体−直交反応性基であり、お互いに生体−直交反応性であるように選択され、前記生体−直交反応性基のいずれかがジエノフィルであり、他の基がジエンであり、前記ジエノフィルが式（１）を満たす８員環ジエノフィルであり：
【化２７】
2014500307.tif 000071
ここで、それぞれのＲは独立して、Ｈ又は最大６まで、アルキル、アリ−ル、Ｏ−アリ−ル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アリ−ル、Ｓ−アルキル、Ｓ（Ｏ）−アリ−ル、Ｓ（Ｏ）−アルキル、Ｓ（Ｏ）２−アリ−ル、Ｓ（Ｏ）２−アルキル、Ｓｉ−アリ−ル、Ｓｉ−アルキル、Ｓｉ−Ｏ−アルキル、ＯＣＯ−アルキル、ＯＣＯ−アリ−ル、ＳＣＯ−アルキル、ＳＣＯ−アリ−ル、ＯＣＳ−アルキル、ＯＣＳ−アリ−ル、ＳＣＳ−アルキル、ＳＣＳ−アリ−ル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｎ３、ＳＯ２Ｈ、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ４Ｈ、ＰＯ３Ｈ、ＰＯ４Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＯ２、ＮＯ、ＣＮ、ＯＣＮ、ＳＣＮ、ＮＣＯ、ＮＣＳ、ＣＦ３、ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル）、アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−アルキル、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−アリ−ル）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アリ−ル又はアルキル）、ＮＲ’ＣＯ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’−アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’−アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’−アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’−アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＣＲ’ＮＲ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、からなる群から選択される置換基で置換され、ここで２つのＲ基は共に環を形成し、及びここで、Ｘ及びＹはそれぞれ独立して、Ｈ、又は、アルキル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ２、ＮＯ２、及びＮＲＲ’（Ｒ及びＲ’はそれぞれ独立してＨ又はアルキル）を表し、又は共に結合を形成し、１つのＲは前記それぞれの投与剤又は除去剤へ場合によりスペ−サ−を介してリンケ−ジを形成する、組合せ。
【請求項２】
請求項１に記載の組合せであり、前記除去剤がさらに、タンパク質、デンドリマー及びポリマーからなる群から選択される足場、又はミクロ−又はナノ粒子などの粒状足場から選択される足場を含む、組合せ。
【請求項３】
請求項１又は２のいずれか一項に記載の組合せであり、前記除去剤がさらに、１以上のヘキソースを含む、組合せ。
【請求項４】
請求項１乃至３のいずれか一項に記載の組合せであり、前記ジエノフィルが、８−員環ジエノフィルであり、次の式（１ａ）を満たす：
【化２８】
2014500307.tif 000072
ここで、Ｘ、Ｙ、Ｒ及びＲａのそれぞれは独立して、Ｈ又は最大６まで、アルキル、アリ−ル、Ｏ−アリ−ル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アリ−ル、Ｓ−アルキル、Ｓ（Ｏ）−アリ−ル、Ｓ（Ｏ）−アルキル、Ｓ（Ｏ）２−アリ−ル、Ｓ（Ｏ）２−アルキル、Ｓｉ−アリ−ル、Ｓｉ−アルキル、Ｓｉ−Ｏ−アルキル、ＯＣＯ−アルキル、ＯＣＯ−アリ−ル、ＳＣＯ−アルキル、ＳＣＯ−アリ−ル、ＯＣＳ−アルキル、ＯＣＳ−アリ−ル、ＳＣＳ−アルキル、ＳＣＳ−アリ−ル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｎ３、ＳＯ２Ｈ、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ４Ｈ、ＰＯ３Ｈ、ＰＯ４Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＯ２、ＮＯ、ＣＮ、ＯＣＮ、ＳＣＮ、ＮＣＯ、ＮＣＳ、ＣＦ３、ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ又はアルキル、アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−アルキル、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−アリ−ル、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−アルキル、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ−アリ−ル）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アリ−ル又はアルキル）、ＮＲ’ＣＯ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アルキル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）ＯＣＯＮＲ’（＝Ｏ）Ｏ−アリ−ル（Ｒ’はＨ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’−アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＯＮＲ’’−アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’−アルキル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＮＲ’ＣＳＮＲ’’−アリ−ル（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、ＣＲ’ＮＲ’’（Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル又はアリ−ル）、からなる群から選択される置換基で置換され、Ｒ又はＲａの１つが、前記プレターゲットプローブ又は前記エフェクタープローブのいずれかへの、場合によりスペ−サ−を介してリンカ−基を含み；２つのＲ又はＲａが共に環を形成し；及びＲａの少なくとも１つ及び最大４つが水素ではない、組合せ。
【請求項５】
請求項４に記載の組合せであり、前記式（１ａ）のジエノフィルが次の１以上を持たす：
（ａ）Ｘはメチル；
（ｂ）Ｙはメチル；
（ｃ）Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ５ａの１以上がＯ−アルキル；
（ｄ）Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ５ａの１以上がＯ−アリール；
（ｅ）Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ５ａの１以上がアリール；
（ｆ）Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ５ａの１以上がアルキル、である、組み合わせ。
【請求項６】
請求項４又は５のいずれか一項に記載の組合せであり、Ｘはメチル又は水素、Ｙはメチル又は水素、及びＲ３ａ、Ｒ４ａがＯ−アルキル又はＯ−アリールである、組合せ。
【請求項７】
請求項１乃至６のいずれか一項に記載の組合せであり、前記ジエンが、以下の式（２）、（３）、（４）、（５）、（６）及び（７）の化合物からなる群から選択される、組合せである：
【化２９】
2014500307.tif 000073
ここで、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、アル−ル、ＣＦ３、ＣＦ２、ＣＦ２−Ｒ’、ＯＲ’、ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’、ＮＲ’（＝Ｓ）ＳＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’Ｒ’’’（ここで、Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’はそれぞれ独立してＨ、アルキル又はアルキル）からなる群から選択され；Ａ及びＢはそれぞれ独立して、アルキル置換炭素、アリ−ル置換炭素、Ｎ＋Ｏ−、Ｎ＋Ｒ（Ａ及びＢは共に炭素でない場合にＲはアルキル）からなる群から選択され；Ｘは、Ｏ、Ｎ−アルキル及びＣ＝Ｏからなる群から選択され、及びＹは、ＣＲであり、ＲはＨ、アルキル、アリ−ル、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’（ここで、Ｒ’、Ｒ’’はＨ、アリ−ル又はアルキル）からなる群から選択される；
【化３０】
2014500307.tif 000074
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリ−ル、ＣＦ３、ＣＦ２−Ｒ’、ＮＯ２、ＯＲ’、ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’（ここでＲ’及びＲ’’はそれぞれ独立してＨ、アリ−ル及びアルキルであり、Ｒ’’’は独立してアリ−ル又はアルキル）からなる群から選択され；Ａは、Ｎ−アルキル、Ｎ−アリ−ル、Ｃ＝Ｏ及びＣＮ−アルキルからなる群から選択され；
ＢはＯ又はＳであり；Ｘは、Ｎ、ＣＨ，Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＣＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’（ここでＲ’及びＲ’’はそれぞれ独立してＨ、アリ−ル又はアルキル基であり、Ｒ’’’はそれぞれ独立してアリ−ル又はアルキル）から成る群から選択され；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、Ｎ及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；
【化３１】
2014500307.tif 000075
ここでＲ１及びＲ２はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から選択され；Ａは、ＣＯ、Ｃ−アルキル、ＣＮ−アルキル、Ｎ−アルキル及びＮ−アリ−ルからなる群から選択され；ＢはＯであり；Ｘは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル及びＮであり；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、Ｎ及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；
【化３２】
2014500307.tif 000076
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリ−ル、ＣＦ３、ＣＦ２−Ｒ’、ＮＯ２、ＯＲ’、ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’’’、ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、ＳＣ（＝Ｓ）Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’’、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’（ここでＲ’及びＲ’’はそれぞれ独立してＨ、アリ−ル及びアルキルであり、Ｒ’’’は独立してアリ−ル又はアルキル）からなる群から選択され；Ａは、Ｎ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；ＢはＮであり；Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）Ｒ’、ＣＳ（＝Ｏ）２Ｒ’’’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｏ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｓ）Ｓ−Ｒ’、ＣＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、ＣＣ（＝Ｓ）ＮＲ’Ｒ’’（ここでＲ’及びＲ’’はそれぞれ独立してＨ、アリ−ル又はアルキル基であり、Ｒ’’’はそれぞれ独立してアリ−ル又はアルキル）から成る群から選択され；Ｙは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、Ｎ及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；
【化３３】
2014500307.tif 000077
ここで、Ｒ１は、Ｈ，アルキル、アリ−ル、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から選択され；Ｒ２は、Ｈ、アルキル、アリ−ル、ＣＮ、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル、ＣＦ３及びＮＯ２からなる群から選択され；Ａは、Ｎ、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；ＢはＮであり；Ｘは、ＣＨ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル、ＣＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル及びＮからなる群から選択され；Ｙは、ＣＨ、ＣＣＮ、Ｃ−アルキル、Ｃ−アリ−ル及びＮ＋Ｏ−からなる群から選択され；
【化３４】
2014500307.tif 000078
ここで、ここでＲ１及びＲ２はそれぞれ独立して、Ｈ、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２、６−ピリミジル、２、５−ピリミジル、３、５−ピリミジル、２、４−ピリミジル又はフェニ−ルであって，これらは場合によりＮＯ２、Ｆ，Ｃｌ，ＣＦ３，ＣＮ，ＣＯＯＨ，ＣＯＯＲ，ＣＯＮＨ２，ＣＯＮＨＲ，ＣＯＮＲ２，ＣＨＯ，ＣＯＲ，ＳＯ２Ｒ，ＳＯ２ＯＲ，ＮＯ，Ａｒなどの１以上の電子吸引基で置換されていてもよい（ＲはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ａｒとは芳香族基、特にフェニ−ル、ピリジル又はナフチル基を表す）、からなる群から選択される。
【請求項８】
請求項１乃至７のいずれか一項に記載の組合せであり、前記投与剤がプレターゲットプローブであり、好ましくは第１のターゲット部分をとして抗体を含む、組合せ。
【請求項９】
請求項１乃至８のいずれか一項に記載の組合せであり、前記投与剤が、ターゲット造影又は利用のための剤である、組合せ。
【請求項１０】
生体−直行反応性基及び１以上のヘキソースを含む除去剤であり、前記生体−直行反応性基が、請求項１乃至７のいずれか一項に定められたジエン又はジエノフィルである、除去剤。
【請求項１１】
請求項１０に記載の除去剤であり、前記ヘキソースがガラクトース部分である、除去剤。
【請求項１２】
プレターゲット方法であり、対象体へ、請求項８に記載の前記プレターゲットプローブである投与剤を投与すること、前記投与剤を、前記対象体内で、前記第１のターゲット部分が第１のターゲットへ結合を達成するために効果的な期間、循環させ、次に非−結合性の投与剤を前記身体から、請求項１０又は１１に記載の除去剤を投与することで除去することを含む、方法。
【請求項１３】
動物又は人対象体での循環から生体分子を除去する方法であり、投与剤及び除去剤を投与することを含み、前記投与剤が第１の反応性基を含み、前記除去剤が第２の反応性基を含み、前記第１及び第２の反応性基が、お互いに生体−直交的に反応するように選択され、及び前記反応性基が、請求項３乃至７のいずれか一項に定められている、方法。
【請求項１４】
請求項１乃至７のいずれか一項に記載の投与剤及び除去剤の、動物又は人の循環から生体分子を除去するための使用であり、前記投与剤が、前記生体分子へ結合可能な部分を含む、使用。
【国際調査報告】
2014500307.tif 000079
2014500307.tif 000080
2014500307.tif 000081