(57)【要約】  本発明は、反芻動物のメタン排出を低減する分野に関する。特に、反芻動物の消化活動から生じるメタンの生成を低減するため、および／または反芻動物の能力を改善するための、少なくとも１つの抗生物質と、少なくとも１つのニトロオキシ基によって任意の位置で置換された少なくとも１つの有機分子とを含む飼料組成物または飼料添加物の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
反芻動物の消化活動から生じるメタンの形成を低減するため、および／または反芻動物の能力を改善するための、少なくとも１つの抗生物質と、式（Ｉ）
【化１】
2014515930.tif 000009
（式中、Ｙは、以下の組成：ＣａＨｂＯｄＮｅＳｇの有機分子であり、ここで
ａは、１〜２５の間であり、
ｂは、２〜５１の間であり、
ｄは、０〜８の間であり、
ｅは、０〜５の間であり、
ｇは、０〜３の間である）
によって定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基によって任意の位置で置換された少なくとも１つの有機分子またはその塩とを含む飼料組成物または飼料添加物の使用。
【請求項２】
ａが１〜１０の間であり、
ｂが２〜２１の間であり、
ｄが０〜６の間であり、
ｅが０〜３の間であり、
ｇが０〜１の間である。
請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記式（Ｉ）の有機分子が式（ＩＩ）
【化２】
2014515930.tif 000010
（式中、
ｎは０〜１２の間であり、好ましくは０〜６の間であり、かつｎが０でない場合、炭素鎖は、線状、環状、もしくは分枝状の脂肪族炭素鎖（非置換であっても、あるいは３個までのヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基またはニトロオキシ基によって置換されていてもよい）、またはアルケニル、またはアルキニル炭素鎖（一不飽和または多価不飽和であり、任意の異性体形態である）であり、
Ｒ４は独立して、水素、または１〜１２個、好ましくは１〜６個の炭素原子を含有するアルキルもしくはアルケニル基の飽和直鎖、環状鎖もしくは分枝鎖であり、
Ｘは、水素、Ｒ５、Ｒ５≡Ｎ、−ＯＲ５、−ＯＣＯＲ５、−ＮＲ５Ｒ６、−ＯＮＯ２、−ＣＯＯＲ５、−ＣＯＮＲ５Ｒ６、−ＮＨＳＯ２Ｒ５、または−ＳＯ２ＮＨＲ５であり、
Ｒ５およびＲ６は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ１２直線状、分枝状または環状アルキル鎖（非置換であるか、あるいは３個までのヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基またはニトロオキシ基によって置換されている）、アルケニル、またはアルキニル炭素鎖（一不飽和または多価不飽和、ならびに任意の異性体形態であり得る）である）
の化合物である、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記式（Ｉ）の有機分子またはその塩が表１に記載される化合物の群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記抗生物質が、モネンシン、ラサロシド、ナラシン、マズラマイシン、セムズラマイシン、サリノマイシン、アボパルシン、アクタプラニン、およびペニシリンからなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記飼料組成物または飼料添加物がさらに、ジアリルジスルフィド、ニンニク油、アリルイソチオシアネート、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸およびこれらの誘導体からなる群から選択される少なくとも１つの付加的な活性物質と組み合わせられる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記反芻動物が、ウシ、ヤギ、ヒツジ、キリン、アメリカバイソン、ヨーロッパバイソン、ヤク、水牛、シカ、ラクダ、アルパカ、ラマ、ヌー、レイヨウ、プロングホーン、およびニルガイからなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
乾物摂取量１キログラムあたりのリットル数で計算される、前記反芻動物におけるメタン生成が、代謝チャンバー内で測定したときに少なくとも１０％低減される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記式（Ｉ）で定義される少なくとも１つの有機分子の前記反芻動物に投与される量が、飼料１ｋｇあたり１ｍｇ〜１０ｇであり、前記反芻動物に投与される前記抗生物質の量が飼料１ｋｇあたり０．５〜１００ｍｇである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
前記式（Ｉ）で定義される有機分子／前記抗生物質の重量比が０．０５〜５０の間である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
少なくとも、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗生物質および式（Ｉ）の有機分子を含む、飼料組成物または飼料添加物。
【請求項１２】
ミネラルプレミックス、ビタミンプレミックス、もしくはビタミンおよびミネラルを含むプレミックス、または巨丸剤である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
反芻動物の消化活動から生じるメタンの生成を低減するため、および／または反芻動物の能力を改善するための方法であって、少なくとも１つの抗生物質と、式（Ｉ）
【化３】
2014515930.tif 000011
（式中、Ｙは、以下の組成：ＣａＨｂＯｄＮｅＳｇの有機分子であり、ここで
ａは、１〜２５の間であり、
ｂは、２〜５１の間であり、
ｄは、０〜８の間であり、
ｅは、０〜５の間であり、
ｇは、０〜３の間である）
によって定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基によって任意の位置で置換された少なくとも１つの有機分子またはその塩とを含む、十分な量の飼料組成物または飼料添加物を前記動物に経口的に投与することを含む方法。
【請求項１４】
前記飼料組成物または飼料添加物が、ジアリルジスルフィド、ニンニク油、アリルイソチオシアネート、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸およびこれらの誘導体からなる群から選択される少なくとも１つの付加的な活性物質と組み合わせて前記動物に投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記反芻動物が、ウシ、ヤギ、ヒツジ、キリン、アメリカバイソン、ヨーロッパバイソン、ヤク、水牛、シカ、ラクダ、アルパカ、ラマ、ヌー、レイヨウ、プロングホーン、およびニルガイからなる群から選択される、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記式（Ｉ）で定義される少なくとも１つの有機分子の前記反芻動物に投与される量が、飼料１ｋｇあたり１ｍｇ〜１０ｇであり、前記反芻動物に投与される前記抗生物質の量が飼料１ｋｇあたり０．５ｍｇ〜１５０ｇである、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
乾物摂取量１キログラムあたりのリットル数で計算される、前記反芻動物におけるメタン生成が、代謝チャンバー内で測定したときに少なくとも１０％低減される、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記式（Ｉ）で定義される有機分子／前記抗生物質の重量比が０．０５〜５０の間である、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、反芻動物のメタン排出を低減する分野に関する。特に、反芻動物の消化活動から生じるメタンの生成を低減するため、および／または反芻動物の能力を改善するための、少なくとも１つの抗生物質と、少なくとも１つのニトロオキシ基によって任意の位置で置換された少なくとも１つの有機分子とを含む飼料組成物または飼料添加物の使用に関する。
【０００２】
本発明はさらに、上記の分子を含む動物飼料または動物飼料組成物および飼料添加物に関する。飼料または飼料組成物という用語は、動物による摂取に適した、あるいは動物による摂取を目的とした任意の化合物、調製物、混合物、または組成物を意味する。
【０００３】
本文脈では、反芻動物は、植物ベースの食物を最初に動物の第１の胃（第一胃として知られている）の中で軟化させ、次に半消化塊（これは食い戻しとして知られている）を吐き戻し、これを再度噛み砕くことによって消化する偶蹄目の哺乳類である。食い戻しを再度噛み砕いて植物質をさらに分解し、消化を刺激する過程は、「反芻」と呼ばれる。
【０００４】
第一胃発酵はいくつかの不都合をもたらす。嫌気性発酵の自然の結果としてメタンが生成され、これは、宿主動物にとってエネルギー損失を意味する。典型的な乳牛飼料において炭水化物は乾物の７０〜８０％を構成するが、これにもかかわらず胃腸管からの炭水化物の吸収は通常、非常に限られている。この理由は、主生成物としてアセタート、プロピオナートおよびブチラートの生成をもたらす第一胃内での炭水化物の徹底的な発酵である。これらの生成物は、いわゆる揮発性脂肪酸（ＶＦＡ）の一部である。
【０００５】
エネルギー損失に加えて、メタンは、ＣＯ２よりも何倍も強力な温室ガスでもある。その大気中の濃度は過去１世紀の間に倍増し、不安をいだかせるほど増加し続けている。反芻動物は生物起源のメタン形成の主要原因であり、反芻動物からのメタン形成を防止すると、大気中メタンの濃度がほぼ安定化され得ると推定されている。
【０００６】
さらに、２００９年のコペンハーゲン気候サミット（ｃｌｉｍａｔｅ  ｓｕｍｍｉｔ）によって追従される京都議定書のアセスメントは、マルチガス戦略の一環としてメタン排出を削減することをより一層優先している。
【０００７】
抗生物質、そしてより詳細にはイオノフォアは、反芻動物のメタン生成をわずかに低減することが示されている（Ｇｕａｎ  ｅｔ  ａｌ．２００６．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ；８４：１８９６−１９０６）。しかしながら、メタン形成に対する抗生物質の効果は、短期間（２〜３週間）のうちに意図される効果の完全な損失をもたらす細菌叢の急速な適応および／または耐性の発現のために、そしてヨーロッパでは抗生物質の非治療的な用途での使用は禁止されているために、いくつかの不都合を有する。
【０００８】
生体外第一胃シミュレーションモデルを用いて試験したときにメタン排出の低減をもたらす非抗生物質製品（胆汁酸誘導体）が最近公開されている（国際公開第２０１０／０７２５８４号パンフレット）。しかしながら、メタン排出の適度な低減を生じるために必要とされる量は、反芻動物飼料産業のコスト制約と両立できない。
【０００９】
さらに、生体外実験に基づいて反芻動物のメタン排出を低減するための強力な解決法として、いくつかの天然植物抽出物（ニンニク：国際公開第２００９／１５０２６４号パンフレット、ユッカ、シナモン、ルバーブなど）が科学文献において記載されている。しかしながら、副作用（乳中の残留物）のため、生体内で試験したときの効力の欠如のため、あるいは有意なメタンの低減を生じるために動物に供給される必要がある非常に大量の添加物のために、これらの解決法はどれも市販製品には至らなかった。
【００１０】
これらの状況下で反芻動物によって生じるメタンの形成を低減する新しい物質および組成物を開発することが依然として必要とされている。メタン排出の低減に加えて、このような組成物は、飼料転換率（ｆｅｅｄ  ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ  ｒａｔｉｏ）を改善し、飼料摂取量を低減し、体重増加を改善し、かつ／あるいは屠体または乳の生産量を改善することによって、反芻動物の能力を改善することにも寄与し得る。
【００１１】
本発明者らはここで驚くことに、宿主動物に有害であり得るような形で微生物発酵に影響を及ぼすことなくメタン形成を本質的に低減するために、本明細書中で以下に規定される組成物が、動物飼料中で使用する大きな可能性を有することを見出した。さらに、本発明の化合物は、第一胃内アセタート／プロピオナート比、飼料転換率、飼料摂取量、体重増加、屠体生産量、または乳生産量によって測定される全体的な動物能力に関しても大きな利益を有する。また前記組成物は従来技術に記載されるものよりも安定であり、動物およびヒトにとって安全であり、持続的なメタン低減効果をもたらし、おいしさに影響を与えず、動物栄養産業に適合したコストにおいて工業規模で生産することが可能であり、そして中でも、前記組成物が補給された動物の乳または食肉中の任意の代謝産物の蓄積を誘発せず、第一胃内において非常に低濃度で活性である。
【００１２】
従って、本発明は、反芻動物の消化活動から生じるメタンの形成を低減するため、および／または反芻動物の能力を改善するための、少なくとも１つの抗生物質と、式（Ｉ）によって定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基によって任意の位置で置換された少なくとも１つの有機分子またはその塩とを含む飼料組成物または飼料添加物の使用を提供する。
【００１３】
本発明はさらに、反芻動物の消化活動から生じるメタンの生成を低減するため、および／または反芻動物の能力を改善するための方法であって、動物に、少なくとも１つの抗生物質と、式（Ｉ）によって定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基によって任意の位置で置換された少なくとも１つの有機分子またはその塩とを含む、十分な量の飼料組成物または飼料添加物を動物に経口的に投与することを含む方法を提供する。経口投与とは、単純な摂食、または手作業の巨丸剤投与であると理解されるべきである。
【００１４】
本発明の全ての実施形態において、少なくとも１つのニトロオキシ基によって任意の位置で置換された有機分子またはその塩は、以下の式（Ｉ）：
【化１】
2014515930.tif 000002
によって定義され、式中、
Ｙは、以下の組成：ＣａＨｂＯｄＮｅＳｇの有機分子であり、ここで
ａは、１〜２５の間、好ましくは１〜１０の間であり、
ｂは、２〜５１の間、好ましくは２〜２１の間であり、
ｄは、０〜８の間、好ましくは０〜６の間であり、
ｅは、０〜５の間、好ましくは０〜３の間であり、
ｇは、０〜３の間、好ましくは０〜１の間である。
【００１５】
より好ましくは、本発明の全ての実施形態において、式（Ｉ）の有機分子は以下の組成ＣａＨｂＯｄＮｅＳｇを有し、式中、
ａは、１〜１０の間であり、
ｂは、２〜２１の間であり、
ｄは、０〜６の間であり、
ｅは、０〜３の間であり、
ｇは、０〜１の間である。
【００１６】
別の実施形態では、本発明に従う式（Ｉ）の好ましい化合物は、ｂが３〜５１の間であり、好ましくはｂが３〜２１の間である化合物である。
【００１７】
別の実施形態では、本発明に従う式（Ｉ）の好ましい化合物は、式（ＩＩ）
【化２】
2014515930.tif 000003
の化合物であり、式中、
ｎは０〜１２の間であり、好ましくは０〜６の間であり、かつｎが０でない場合、炭素鎖は、線状、環状、もしくは分枝状の脂肪族炭素鎖（非置換であっても、あるいは３個までのヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基またはニトロオキシ基によって置換されていてもよい）、またはアルケニル、またはアルキニル炭素鎖（一不飽和または多価不飽和であり、任意の異性体形態である）であり、
Ｒ４は独立して、水素、または１〜１２個、好ましくは１〜６個の炭素原子を含有するアルキルもしくはアルケニル基の飽和直鎖、環状鎖もしくは分枝鎖であり、
Ｘは、水素、Ｒ５、Ｒ５≡Ｎ、−ＯＲ５、−ＯＣＯＲ５、−ＮＲ５Ｒ６、−ＯＮＯ２、−ＣＯＯＲ５、−ＣＯＮＲ５Ｒ６、−ＮＨＳＯ２Ｒ５、または−ＳＯ２ＮＨＲ５であり、
Ｒ５およびＲ６は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ１２直線状、分枝状または環状アルキル鎖（非置換であるか、あるいは３個までのヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基またはニトロオキシ基によって置換されている）、アルケニル、またはアルキニル炭素鎖（一不飽和または多価不飽和、ならびに任意の異性体形態であり得る）である。
【００１８】
本発明の全ての実施形態について、式（Ｉ）の化合物および式（ＩＩ）の化合物は任意の異性体形態であり得ると理解されるべきである。式（ＩＩ）の化合物の上記定義において、ｎが２よりも大きい場合、炭素鎖は線状であるか、あるいは炭素鎖に沿った任意の位置で分枝され得ると理解されるべきである。加えて、炭素鎖は、炭素鎖に沿った異なる位置で多数の枝によって分枝され得る。さらに、ｎが３よりも大きい場合、脂肪族炭素鎖は環状部分を形成し得る。この環状部分は任意の位置（２、３、４）にニトロオキシ部分を有することができ、同様に、任意の脂肪族基によって多数の位置で分枝され得る。分枝脂肪族基は、好ましくは、メチル、エチルまたはプロピルである。さらに、炭素鎖は、３個までのヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基またはニトロオキシ基によってさらに置換されていてもよい。
【００１９】
式（ＩＩ）の誘導体の上記定義において、好ましいアルキル基は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、第２級ブチル、イソブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、シクロヘキシル、および２−エチル−ヘキシルおよびオクチルである。さらに、３個以上の炭素原子を含有するアルキルまたはアルケニル基はどれも、直鎖、分枝状、または環状であり得る。加えて、直鎖または分枝状Ｃ２〜Ｃ１０−アルケニレン基の場合、これは、１つまたは複数（Ｃ４から）の二重結合を有するアルケニレン基を包含すると理解され、このようなアルケニレン基の例は、式−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−および−（ＣＨ＝ＣＨ）２−を有するものである。
【００２０】
別の実施形態では、本発明に従う式（Ｉ）のより好ましい化合物は、表１においてその化学式と共に記載される化合物およびその塩のリストから選択される。
【００２１】
【表１】
2014515930.tif 000004
【００２２】
【表２】
2014515930.tif 000005
【００２３】
【表３】
2014515930.tif 000006
【００２４】
【表４】
2014515930.tif 000007
【００２５】
別の実施形態では、式（Ｉ）のさらにより好ましい化合物は、３−ニトロオキシプロパノール、エチル−３−ニトロオキシプロピオナート、メチル−３−ニトロオキシプロピオナート、および３−ニトロオキシプロピオン酸を含む化合物およびこれらの塩のリストから選択される。
【００２６】
本発明の式（Ｉ）の化合物はニトロオキシ有機分子の塩も含む。塩の調製のための好ましいカチオンは、ナトリウム（Ｎａ＋）、カリウム（Ｋ＋）、リチウム（Ｌｉ＋）、マグネシウム（Ｍｇ２＋）、カルシウム（Ｃａ２＋）、バリウム（Ｂａ２＋）、ストロンチウム（Ｓｒ２＋）、およびアンモニウム（ＮＨ４＋）からなる群から選択され得る。また塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属から調製されてもよい。
【００２７】
本発明に従う式（Ｉ）の化合物は、原則として、ニトロオキシ有機分子のためのそれ自体が既知である合成方法に従って、かつ／あるいはＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６９３３８号明細書、および欧州特許出願第１０１９５８５７．７号明細書において記載される方法に基づいて製造することができる。
【００２８】
全てのこれらの場合において、生成物（式（Ｉ）の化合物）を精製するために適切な方法は当業者によって選択することができ、すなわちカラムクロマトグラフィによるか、あるいは、それ自体が既知である方法によって、例えば、ジエチルエーテルまたは酢酸エチルなどの溶媒を添加して反応後の混合物から粗生成物の分離を引き起こし、捕集した粗生成物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させることによって、式（Ｉ）の化合物を単離および精製することができる。
【００２９】
抗生物質は、微生物を死滅させるか、あるいはその増殖を遅くする物質である。特定の抗生物質の種類として、イオノフォアは、一般に、細胞膜などの脂質バリアを横切るイオンの移動を容易にする物質であると定義される。
【００３０】
本発明の特定の実施形態では、少なくとも１つの抗生物質は、モネンシン、ラサロシド、ナラシン、マズラマイシン、セムズラマイシン、サリノマイシン、アボパルシン、アクタプラニン、およびペニシリンからなる群から選択される。より好ましくは、本発明に最も適した化合物はイオノフォアであり、さらに最も好ましくは、抗生物質は、モネンシン（Ｒｕｍｅｎｓｉｎ）またはラサロシド（Ｂｏｖａｔｅｃ）のいずれかである。両イオノフォアは、ＥｌａｎｃｏおよびＡｌｐｈａｒｍａからそれぞれ入手可能である。
【００３１】
反芻動物によるメタン排出は、当該技術分野で既知の方法によって、代謝チャンバー内で個々の動物において容易に測定することができる（Ｇｒａｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００７  Ｊ．Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ；９０：２７５５−２７６６）。さらに、レーザービームを用いる新たな技術によって、家畜小屋レベルで評価することもできる（ＭｃＧｉｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｑｕａｌｉｔｙ；３８：１７９６−１８０２）。あるいは、酪農反芻動物によって生成されるメタンは、国際公開第２００９／１５６４５３号パンフレットに従って乳中の脂肪酸プロファイルの測定によって評価することもできる。
【００３２】
反芻動物の能力は当該技術分野において周知の方法によって評価することができ、通常、飼料転換率、飼料摂取量、体重増加、屠体生産量、または乳生産量によって特徴付けられる。
【００３３】
また本発明は、第一胃内のメタン形成に関して類似の効果を示し、ジアリルジスルフィド、ニンニク油、アリルイソチオシアネート、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸およびこれらの誘導体からなる群から選択される少なくとも１つの付加的な活性物質と組み合わせた、少なくとも１つの抗生物質と、式（Ｉ）によって定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基によって任意の位置で置換された少なくとも１つの有機分子またはその塩とを含む飼料組成物または飼料添加物の使用に関する。
【００３４】
本発明に従う化合物と共に付与され得るさらなる成分は、例えば、酵母、オレガノ抽出物、および精油、例えば、チモール、３−メチルフェノール、バニリン、グアヤコールおよびオイゲノールである。
【００３５】
現在のところ、ジアリルジスルフィド、ニンニク油、アリルイソチオシアネート、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸およびこれらの誘導体は、例えば、飼料１ｋｇあたり０．０１〜５００ｍｇの活性物質（ｐｐｍ）の用量範囲で独立して投与されることが考えられる。これらの化合物は市販されているか、あるいは従来技術において周知の過程および方法を用いて当業者により容易に調製することができる。
【００３６】
本発明に従う反芻哺乳類には、ウシ、ヤギ、ヒツジ、キリン、アメリカバイソン、ヨーロッパバイソン、ヤク、水牛、シカ、ラクダ、アルパカ、ラマ、ヌー、レイヨウ、プロングホーン、およびニルガイが含まれる。
【００３７】
本発明のすべての実施形態のために、家畜牛、ヒツジおよびヤギがより好ましい種である。本発明の目的のために、最も好ましい種は家畜牛である。この用語は、全ての品種の家畜牛、および全ての生産種の牛、特に乳牛および肉牛を含む。
【００３８】
また本発明は、少なくとも１つの抗生物質と、式（Ｉ）によって定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基によって任意の位置で置換された少なくとも１つの有機分子またはその塩とを含む飼料組成物または飼料添加物の使用に関し、乾物摂取量１キログラムあたりのリットル数で計算される反芻動物のメタン生成は、代謝チャンバー内で測定したときに少なくとも１０％低減される。好ましくは、メタンの低減は、少なくとも１５％であり、より好ましくは少なくとも２０％、さらにより好ましくは少なくとも２５％、最も好ましくは少なくとも３０％である。レーザービームの使用、あるいは酪農反芻動物の場合にはメタン生成と乳中のＶＦＡプロファイルとの相関のように、代替的なメタン排出測定が使用されてもよい。
【００３９】
また本発明は、少なくとも１つの抗生物質と、式（Ｉ）によって定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基によって任意の位置で置換された少なくとも１つの有機分子またはその塩とを含む飼料組成物または飼料添加物の使用に関し、反芻動物の飼料転換率は、従来の能力試験で測定される場合に少なくとも１％低減される。好ましくは、飼料転換率は、少なくとも２％、より好ましくは少なくとも２．５％、さらにより好ましくは少なくとも３％、最も好ましくは少なくとも３．５％低減される。
【００４０】
畜産において、飼料転換率（ＦＣＲ）という用語は、動物が飼料質量を体重の増加に転換する効率の尺度である。具体的には、ＦＣＲは、特定の期間全体にわたって、摂取された飼料の質量を体重増加で割った値である。ＦＣＲは無次元である。
【００４１】
また本発明は、少なくとも１つの抗生物質と、式（Ｉ）によって定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基によって任意の位置で置換された少なくとも１つの有機分子またはその塩とを含む飼料組成物または飼料添加物の使用に関し、式（Ｉ）で定義される有機分子の反芻動物に投与される量は、飼料１Ｋｇあたり１ｍｇ〜１０ｇ、好ましくは飼料１Ｋｇあたり１０ｍｇ〜１ｇであり、より好ましくは飼料１Ｋｇあたり５０ｍｇ〜５００ｍｇであり、そして反芻動物に投与される抗生物質の量は、飼料１Ｋｇあたり０．５〜１５０ｍｇ、好ましくは飼料１Ｋｇあたり５〜５０ｍｇである。しかしながら、動物飼料において使用する場合、式（Ｉ）によって定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基によって任意の位置で置換された有機分子またはその塩はそれほど純粋である必要はなく、例えば、他の化合物および誘導体を含んでいてもよい。
【００４２】
本発明はさらに、少なくとも１つの抗生物質と、式（Ｉ）によって定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基によって任意の位置で置換された少なくとも１つの有機分子またはその塩とを含む飼料組成物または飼料添加物の使用に関し、飼料組成物または飼料添加物中の式（Ｉ）で定義される有機分子／抗生物質の重量比は、０．０５〜５０の間、好ましくは０．１〜１０の間、より好ましくは０．５〜５の間である。
【００４３】
反芻動物の飼料または飼料添加物は、飼料の配合および加工の分野においてそれ自体が既知である方法によって調製され得る。
【００４４】
従って、本発明のさらなる態様は、本明細書において上記で定義された組成物を含有する配合物、すなわち飼料添加物および動物飼料組成物である。
【００４５】
従って、本発明は、少なくとも１つの抗生物質と、少なくとも式（Ｉ）の化合物またはその塩とを含む飼料組成物または飼料添加物にも関する。好ましい実施形態では、組成物は、ミネラルプレミックス、ビタミンプレミックス（ビタミンおよびミネラルを含む）、または巨丸剤である。
【００４６】
飼料摂取によって動物に提供される本発明に従う組成物の通常の１日の投与量は、動物の種類およびその状態に依存する。通常、この投与量は、飼料１ｋｇあたり約１ｍｇ〜約１０ｇ、好ましくは約１０ｍｇ〜約１ｇ、より好ましくは５０ｍｇ〜５００ｍｇの化合物の範囲内でなければならない。
【００４７】
少なくとも１つの抗生物質と、式（Ｉ）によって定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基によって任意の位置で置換された少なくとも１つの有機分子またはその塩とを含む組成物は、炭酸カルシウム、電解質、例えば塩化アンモニウム、タンパク質、例えば大豆ミール、小麦、デンプン、ヒマワリミール、コーン、肉骨粉、アミノ酸、動物性脂肪、ビタミンおよび微量ミネラルなどの動物飼料組成物（食餌）中に存在する従来の成分と組み合わせて使用されてもよい。
【００４８】
本発明の組成物の特定の例は、以下の通りである：
−  （ａ）表１から選択される少なくとも１つの化合物、および（ｂ）抗生物質、（ｃ）少なくとも１つの脂溶性ビタミン、（ｄ）少なくとも１つの水溶性ビタミン、（ｅ）少なくとも１つの微量ミネラル、および／または（ｆ）少なくとも１つの多量ミネラルを含む動物飼料添加物、
−  抗生物質、および表１から選択される少なくとも１つの化合物を含み、粗タンパク質含量が５０〜８００ｇ／ｋｇ飼料である動物飼料組成物。
【００４９】
いわゆるプレミックスは本発明の動物飼料添加物の例である。プレミックスは、１つまたは複数の微量成分と、希釈剤および／またはキャリアとの好ましくは均一の混合物を示す。プレミックスは、より大きい混合物中での微量成分の均一な分散を容易にするために使用される。
【００５０】
本発明の活性成分は別として、本発明のプレミックスは、少なくとも１つの脂溶性ビタミン、および／または少なくとも１つの水溶性ビタミン、および／または少なくとも１つの微量ミネラル、および／または少なくとも１つの多量ミネラルを含有する。言い換えると、本発明のプレミックスは、脂溶性ビタミン、水溶性ビタミン、微量ミネラル、および多量ミネラルからなる群から選択される少なくとも１つの付加的な成分と共に、本発明に従う少なくとも１つの化合物を含む。
【００５１】
多量ミネラルは、単独で飼料に添加されてもよい。従って、特定の実施形態では、プレミックスは、脂溶性ビタミン、水溶性ビタミン、および微量ミネラルからなる群から選択される少なくとも１つの付加的な成分と共に、本発明の活性成分を含む。
【００５２】
以下は、これらの成分の例の非排他的なリストである：
−  脂溶性ビタミンの例は、ビタミンＡ、ビタミンＤ３、ビタミンＥ、およびビタミンＫ、例えばビタミンＫ３である。
−  水溶性ビタミンの例は、ビタミンＢ１２、ビオチンおよびコリン、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、葉酸およびパントテナート（ｐａｎｔｈｏｔｈｅｎａｔｅ）、例えば、Ｃａ−Ｄ−パントテナートである。
−  微量ミネラルの例は、マンガン、亜鉛、鉄、銅、ヨウ素、セレン、およびコバルトである。
−  多量ミネラルの例は、カルシウム、リンおよびナトリウムである。
【００５３】
雌ウシなどの反芻動物のための飼料組成物およびその成分に関して、反芻動物の食餌は、通常、容易に分解可能な画分（濃縮物と命名）と、繊維が豊富であまり容易に分解されない画分（干し草、まぐさ、または食物繊維と命名）とから構成される。
【００５４】
干し草は、乾燥した牧草、マメ科植物または全穀物で作られている。牧草としては、とりわけ、オオアワガエリ、ドクムギ、フェスク（ｆｅｓｃｕｅ）が挙げられる。マメ科植物としては、とりわけ、クローバー、ムラサキウマゴヤシまたはアルファルファ、エンドウ豆、豆およびカラスノエンドウが挙げられる。全穀物としては、とりわけ、大麦、トウモロコシ（コーン）、オート麦、ソルガムが挙げられる。その他のまぐさ作物としては、サトウキビ、ケール、セイヨウアブラナ、およびキャベツが挙げられる。また、カブ、スウェーデンカブ、マングル（ｍａｎｇｌｅ）、飼料用ビート、および甜菜（甜菜パルプおよびビート糖蜜を含む）などの根菜作物も、反芻動物を育てるために使用される。またさらなる作物は、ジャガイモ、キャッサバおよびサツマイモなどの塊茎である。サイレージは、繊維の豊富な画分（例えば、牧草、マメ科植物または全穀物から）がサイロ発酵されたものであり、制御された嫌気性発酵プロセス（自然発酵または添加剤処理による）によって高含水量の材料が処理される。
【００５５】
濃縮物は、大部分は穀物（醸造穀類および蒸留穀類を含む大麦、トウモロコシ、小麦、ソルガムなど）で作られているが、大豆、菜種、パーム核、綿実およびヒマワリなどのタンパク質が豊富な飼料成分を含有することも多い。
【００５６】
また雌ウシには、全ての食餌成分、例えば、まぐさ、サイレージおよび濃縮物が供給前に混合された完全混合飼料（ＴＭＲ）が与えられてもよい。
【００５７】
上記のように、プレミックスは、本発明に従う活性化合物を含むことができる飼料添加物の一例である。化合物は、異なる他の形態で動物に投与されてもよいことが理解される。例えば、第一胃内に入れられて、明確に定義された投与量において規定量の活性化合物を特定の期間にわたって連続的に放出し得る巨丸剤中に、化合物が含まれることも可能である。
【００５８】
本発明はさらに、反芻動物の消化活動から生じるメタンの生成を低減するため、および／または反芻動物の能力を改善するための方法に関し、少なくとも１つの抗生物質と、上記の好ましい実施形態により式（Ｉ）によって定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基によって任意の位置で置換された少なくとも１つの有機分子またはその塩とを含む、十分な量の飼料組成物または飼料添加物を経口的に投与することを含む。
【００５９】
さらに、本発明は、本発明に従う飼料組成物または飼料添加物が、ジアリルジスルフィド、ニンニク油、アリルイソチオシアネート、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸およびこれらの誘導体からなる群から選択される少なくとも１つの付加的な活性物質と組み合わせて動物に投与される、上記の方法にも関する。
【００６０】
また本発明は、反芻動物が、ウシ、ヤギ、ヒツジ、キリン、アメリカバイソン、ヨーロッパバイソン、ヤク、水牛、シカ、ラクダ、アルパカ、ラマ、ヌー、レイヨウ、プロングホーン、およびニルガイからなる群から選択され、より好ましくは、ウシ、ヤギおよびヒツジからなる群から選択される、上記の方法にも関する。
【００６１】
また本発明は、式（Ｉ）で定義される少なくとも１つの有機分子の反芻動物に投与される量が、飼料１ｋｇあたり約１ｍｇ〜約１０ｇ、好ましくは約１０ｍｇ〜約１ｇ、より好ましくは５０ｍｇ〜５００ｍｇの化合物であり、反芻動物に投与される抗生物質の量が、飼料１Ｋｇあたり０．５〜１５０ｍｇ、好ましくは飼料１Ｋｇあたり５〜５０ｍｇである、上記の方法にも関する。
【００６２】
また本発明は、乾物摂取量１キログラムあたりのリットル数で計算される反芻動物のメタン生成が、代謝チャンバー内で測定したときに少なくとも１０％低減された、上記の方法にも関する。好ましくは、メタンの低減は、少なくとも１５％、より好ましくは少なくとも２０％、さらにより好ましくは少なくとも２５％、最も好ましくは少なくとも３０％である。レーザービームの使用、あるいは酪農反芻動物の場合にはメタン生成と乳中のＶＦＡプロファイルとの相関のように、代替的なメタン排出測定が使用されてもよい。
【００６３】
また本発明は、反芻動物の飼料転換率が従来の能力試験で測定される場合に少なくとも１％低減された、上記の方法にも関する。好ましくは、飼料転換率は、少なくとも２％、より好ましくは少なくとも２．５％、さらにより好ましくは少なくとも３％、最も好ましくは少なくとも３．５％低減される。
【００６４】
また本発明は、飼料組成物または飼料添加物中の式（Ｉ）で定義される有機分子／抗生物質の重量比が０．０５〜５０の間であり、好ましくは０．１〜１０の間であり、より好ましくは０．５〜５の間である、上記方法にも関する。
【００６５】
本発明は、本発明の範囲を限定すると解釈されてはならない以下の実施例によってさらに説明される。
【００６６】
［実施例］
［実施例１：メタン生成についての生体外試験］
この生体外システムによって模倣される第一胃の機能に対する特定の化合物の効果を試験するために、「Ｈｏｈｅｎｈｅｉｍ  Ｆｏｒａｇｅ  ｖａｌｕｅ  Ｔｅｓｔ（ＨＦＴ）」の修正版を用いた。
【００６７】
［原理］
第一胃液の組成物および緩衝液の適切な混合物と共に、飼料をシリンジ内に供給する（ｇａｄｄｅｄ）。溶液を３９℃でインキュベートする。８時間後に、生成した気相の量（および組成）を測定し、転換のための式に入力する。
【００６８】
［試薬］
［質量要素溶液（ｍａｓｓ  ｅｌｅｍｅｎｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）］
−  ６．２ｇのリン酸二水素カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）
−  ０．６ｇの硫酸マグネシウム七水和物（ＭｇＳＯ４＊７Ｈ２Ｏ）
−  ９ｍｌの濃リン酸（１ｍｏｌ／ｌ）
−  蒸留水に溶解させて１ｌにする（ｐＨ約１．６）
［緩衝溶液］
−  ３５．０ｇの炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）
−  ４．０ｇの炭酸水素アンモニウム（（ＮＨ４）ＨＣＯ３）
−  蒸留水に溶解させて１ｌにする
［微量元素溶液］
−  １３．２ｇの塩化カルシウム二水和物（ＣａＣｌ２＊２Ｈ２Ｏ）
−  １０．０ｇの塩化マンガン（ＩＩ）四水和物（ＭｎＣｌ２＊４Ｈ２Ｏ）
−  １．０ｇの塩化コバルト（ＩＩ）六水和物（ＣｏＣｌ２＊６Ｈ２Ｏ）
−  ８．０ｇの塩化鉄（ＩＩＩ）（ＦｅＣｌ３＊６Ｈ２Ｏ）
−  蒸留水に溶解させて１００ｍｌにする
ナトリウム塩溶液：
−  １００ｍｇのナトリウム塩
−  蒸留水に溶解させて１００ｍｌにする
［還元溶液］
−  最初に３ｍｌの水酸化ナトリウム（ｃ＝１ｍｏｌ／ｌ）、次に４２７．５ｍｇの硫化ナトリウム水和物（Ｎａ２Ｓ＊Ｈ２Ｏ）を、７１．２５ｍｌのＨ２Ｏに添加する
−  溶液は、媒体溶液に添加する直前に調製されなければならない
【００６９】
［手順］
［サンプルの秤量］
通常はＴＭＲ（４４％の濃縮物、６％の干し草、３７％のトウモロコシサイレージおよび１３％の牧草サイレージ）である飼料材料を１ｍｍのふるいにかけ、６４本のシリンジ内に正確に秤量する。これらのシリンジのうちの４本は基質対照であり、試験化合物の効果がない場合のガス生成を示す。別の４本のシリンジは正の対照であり、ブロモエタンスルホナートが０．１ｍＭまで添加されている。必要であれば、４本のシリンジはキャリア対照を含有する（試験化合物がキャリアを必要とする場合）。残りのシリンジは、４本のシリンジ群によって試験物質を含有する。
【００７０】
［媒体溶液の調製］
成分をＷｏｕｌｆｆボトル内で以下の順序で混合する：
−  ７１１ｍｌの水
−  ０．１８ｍｌの微量元素溶液
−  ３５５．５ｍｌの緩衝溶液
−  ３５５．５ｍｌの質量要素溶液
完成溶液を３９℃まで温めた後、１．８３ｍｌのナトリウム塩溶液を添加し、３６℃の還元溶液を添加する。指示薬が無色になったら第一胃液を添加する。
【００７１】
［第一胃液の抽出］
継続的に攪拌しながらＣＯ２ガス処理の下、７５０ｍｌの第一胃液を約１，４００ｍｌの媒体溶液に添加する。
【００７２】
［シリンジの充填、インキュベーション、ならびにガス容積およびＶＦＡ値の決定］
希釈した第一胃流体（２４ｍｌ）をガラスシリンジに添加する。次に、シリンジを穏やかに攪拌しながら３９℃で８時間インキュベートする。８時間後に、生成したガスの容積を測定し、ガスクロマトグラフィによって気相中のメタンの割合を決定する。
【００７３】
［結果］
発酵される食物は、人工ＴＭＲ（４４％の濃縮物、６％の干し草、３７％のトウモロコシサイレージおよび１３％の牧草サイレージ）であった。モネンシンをＥｌａｎｃｏから入手し、０．０１％の乾物（ＤＭ）の濃度で使用した。３−ニトロオキシ−ペンタノールは、２つの異なる濃度０．０１％および０．００５％ＤＭで使用した。
【００７４】
結果は、以下の表２に示される。明白な相加効果が得られた。驚くことに、３−ニトロオキシプロパノールを０．０１％ＤＭで使用したときにメタン阻害が最大であっても、モネンシンを併用すると、動物の付加的な能力利益につながるアセタート／プロピオナート比に対してさらなる相加効果が観察された。
【００７５】
【表５】
2014515930.tif 000008
【国際調査報告】
2014515930.tif 000012
2014515930.tif 000013
2014515930.tif 000014