(57)【要約】  本発明は、タバコ近交系植物ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳを提供する。本発明はまた、そのような植物の一部及びそれらの一部から製造される製品を提供する。本発明はまた、ハイブリッドを含む、提供される植物の後代を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆの種子を栽培することによって生産されるタバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている、タバコ製品。
【請求項２】
前記製品が、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎたばこ、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、刻みタバコ、及び噛みタバコから成る群から選択される、請求項１に記載のタバコ製品。
【請求項３】
減少した量のノルニコチンを有する、請求項２に記載のタバコ製品。
【請求項４】
タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳの種子を栽培することによって生産されるタバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている、タバコ製品。
【請求項５】
前記製品が、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎたばこ、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、刻みタバコ、及び噛みタバコから成る群から選択される、請求項４に記載のタバコ製品。
【請求項６】
減少した量のノルニコチンを有する、請求項５に記載のタバコ製品。
【請求項７】
タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆの種子であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている、種子。
【請求項８】
請求項７に記載の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部。
【請求項９】
請求項８に記載のタバコ植物又はその一部の収穫された葉。
【請求項１０】
減少した量のノルニコチンを有する、請求項９に記載の収穫された葉。
【請求項１１】
前記減少した量のノルニコチンが、前記葉から生じる煙流において減少される、請求項１０に記載の収穫された葉。
【請求項１２】
葉、花粉、胚珠、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、プロトプラスト、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや及び葉柄から成る群から選択される、請求項８に記載の植物の一部。
【請求項１３】
タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳの種子であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている、種子。
【請求項１４】
請求項１３に記載の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部。
【請求項１５】
請求項１４に記載のタバコ植物又はその一部の収穫された葉。
【請求項１６】
減少した量のノルニコチンを有する、請求項１５に記載の収穫された葉。
【請求項１７】
前記減少した量のノルニコチンが、前記葉から生じる煙流において減少される、請求項１６に記載の収穫された葉。
【請求項１８】
葉、花粉、胚珠、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、プロトプラスト、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや及び葉柄から成る群から選択される、請求項１４に記載の植物の一部。
【請求項１９】
タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＦのＦ2後代植物であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている、Ｆ2後代植物。
【請求項２０】
タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳのＦ2後代植物であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている、Ｆ2後代植物。
【請求項２１】
雄性不稔（ＭＳ）である、請求項１９に記載のＦ2後代植物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１１年２月２８日に提出された米国仮出願６１／４４７４８７（係属中）及び２０１１年７月１４日に提出された米国仮出願６１／５０７７３２（係属中）の３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９に基づく利益を主張し、そのそれぞれは、参照により、そのそれぞれの配列表を含むその全体が本願に組み込まれる。
【０００２】
配列表の組み込み
本出願は、参照によりその全体が本願に組み込まれる、配列表を含む。電子的な等価なペーパーコピー／コンピュータ可読様式の配列表は、本願と共に電子的にＥＦＳウェブを介して提出され、１６３８４バイトのサイズであり（Windows XPで測定された）、２０１２年２月２３日に作成され、参照によりその全体が本願に組み込まれる”P33794US02_seqlist.txt”と名づけられたファイルを含む。
【０００３】
発明の分野
本発明は、タバコ近交系植物ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳを提供する。本発明はまた、そのような植物の一部及びそれらの一部から作られる製品を提供する。本発明はまた、ハイブリッドを含む提供される植物の後代を含む。
【背景技術】
【０００４】
タバコ（ニコチアナ・タバカムＬ（Nicotiana tabacum L.））は、米国に加えて他の国においても重要な商品作物である。タバコ植物において、ニコチンのＮ−脱メチル化は、乾葉におけるＮ−ニトロソノルニコチン（”ＮＮＮ”）の形成のための前駆物質であると知られている第二級アルカロイドである、ノルニコチンを生じる。
【０００５】
市販のタバコ品種（variety）において見出される優勢なアルカロイドはニコチンであり、典型的には、総アルカロイドプールの９０〜９５％を占める。残りのアルカロイド部分は、主に三種の更なるピリジンアルカロイド、ノルニコチン、アナバシン、及びアナタビン（anatabine）から成る。ノルニコチンは、酵素ニコチンＮ−デメチラーゼの活性によって、ニコチンから直接生成される。ノルニコチンは、通常、総ピリジンアルカロイドプールの５％未満に相当するが、「転換」と称されるプロセスによって、最初はごくわずかな量のノルニコチンを生産するタバコ植物が、大部分の葉のニコチンをノルニコチンに代謝的に「転換」する後代を生じる。遺伝的に転換しているタバコ植物（「コンバータ」と称される）において、ノルニコチン生産の大部分は、成葉の老化（senescence）及び乾燥（curing）の間に生じる（Wernsman and Matzinger (1968) Tob. Sci. 12:226-228）。バーレイタバコは、特に遺伝的転換をする傾向があり、いくつかの栽培品種において観察される１世代につき２０％の高さの率を有する。
【０００６】
タバコの葉の乾燥及び加工の間、ノルニコチンの一部は、実験動物において発癌性であると主張されているタバコ特異的ニトロソアミン（ＴＳＮＡ）である、化合物ＮＮＮに代謝される（Hecht and Hoffmann (1990) Cancer Surveys 8:273-294; Hoffmann et al. (1994) J. Toxicol. Environ. Health 41:1-52; Hecht (1998) Chem. Res. Toxicol. 11:559-603）。鉄管乾燥タバコ（flue-cured tobacco）において、ＴＳＮＡは、従来の乾燥バーン（curing barn）において見出される直接燃焼加熱系によって形成される燃焼ガス中に存在する微量の窒素酸化物とのアルカロイドの反応によって、優勢に形成されることが見出される（Peele and Gentry (1999) “Formation of Tobacco-specific Nitrosamines in Flue-cured Tobacco,” CORESTA Meeting, Agro-Phyto Groups, Suzhou, China）。熱交換器によるこれらの乾燥バーンの改良は、乾燥空気との燃焼ガスの混合を事実上排除し、この方法で乾燥される（cure）タバコにおけるＴＳＮＡの形成を劇的に減少させた（Boyette and Hamm (2001) Rec. Adv. Tob, Sci. 27:17-22.）。対照的に、空気乾燥（air-cured）バーレイタバコにおいて、ＴＳＮＡ形成は、葉媒介性（leaf-borne）微生物によって触媒されるプロセスである、亜硝酸塩とのタバコアルカロイドの反応によって主に進行する（Bush et al. (2001) Rec. Adv. Tob. Sci, 27:2346）。これまで、許容され得る品質規格を維持しながら、乾燥条件の変更によってＴＳＮＡを減らす試みは、空気乾燥タバコについて成功することを証明していない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子は、２０１１年２月２８日に、Ａｌｔｒｉａ Ｃｌｉｅｎｔ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ株式会社に代わって、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を含む。
【０００８】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部を含む。
【０００９】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物の収穫された葉又はその一部を含む。
【００１０】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物の収穫された葉又はその一部を含み、前記葉は、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有する。
【００１１】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物の収穫された葉を含み、前記葉は、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有し、前記減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）は、前記葉から生じる煙流において、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉と比較して、減少される。
【００１２】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を含み、前記製品は、パイプタバコ、シガータバコ（cigar tobacco）、シガレットタバコ（cigarette tobacco）、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ（shredded tobacco）、及び刻みタバコから成る群から選択される。
【００１３】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を含み、前記製品は、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、及び刻みタバコから成る群から選択され、前記製品は、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット（non-ventilated recess filter cigarette）、通気式リセスフィルターシガレット（vented recess filter cigarette）、シガー（cigar）、嗅ぎタバコ、及び噛みタバコから成る群から更に選択される。
【００１４】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を含み、前記製品は、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、及び刻みタバコから成る群から選択され、前記製品は、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎタバコ、及び噛みタバコから成る群から更に選択され、前記製品は、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種から製造された製品と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有する。
【００１５】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、植物の一部を含み、前記植物部位は、葉、花粉、胚珠、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、プロトプラスト、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや及び葉柄から成る群から選択される。
【００１６】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される植物由来のプロトプラスト又は細胞から生産される組織培養を含み、前記組織培養の細胞又はプロトプラストは、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや及び葉柄から成る群から選択される植物部位から生産される。
【００１７】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される植物由来のプロトプラスト又は細胞から生産される組織培養から再生されるタバコ植物を含み、前記組織培養の細胞又はプロトプラストは、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや及び葉柄から成る群から選択される植物部位から生産され、前記植物は、同様の条件下で栽培される栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆの本質的に全ての形態学的及び生理学的特徴を有する。
【００１８】
別の特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子は、２０１１年２月２８日に、Ａｌｔｒｉａ Ｃｌｉｅｎｔ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ株式会社に代わって、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を含む。
【００１９】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部を提供する。
【００２０】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物の収穫された葉又はその一部を提供する。
【００２１】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物の収穫された葉又はその一部を提供し、前記葉は、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有する。
【００２２】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物の収穫された葉又はその一部を提供し、前記葉は、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）を有し、前記減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）は、前記葉から生じる煙流において、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉と比較して、減少される。
【００２３】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を提供し、前記製品は、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、及び刻みタバコから成る群から選択される。
【００２４】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を提供し、前記製品は、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、及び刻みタバコから成る群から選択され、前記製品は、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎタバコ及び噛みタバコから成る群から選択される。
【００２５】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部から製造される製品を提供し、前記製品は、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、及び刻みタバコから成る群から選択され、前記製品は、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎタバコ、及び噛みタバコから成る群から選択され、前記製品は、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種から製造された製品と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有する。
【００２６】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、植物の一部を提供し、前記植物の一部は、葉、花粉、胚珠、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、プロトプラスト、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや及び葉柄から成る群から選択される。
【００２７】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される植物由来のプロトプラスト又は細胞から生産される組織培養を提供し、前記組織培養の細胞又はプロトプラストは、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや及び葉柄から成る群から選択される植物部位から生産される。
【００２８】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される植物由来のプロトプラスト又は細胞から生産される組織培養から再生されるタバコ植物を提供し、前記組織培養の細胞又はプロトプラストは、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや及び葉柄から成る群から選択される植物部位から生産され、前記植物は、同様の条件下で栽培される栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳの本質的に全ての形態学的及び生理学的特徴を有する。
【００２９】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）のＦ1後代植物を含む。
【００３０】
タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）のＦ1後代植物は、雄性不稔（ＭＳ）である。
【００３１】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）のＦ1後代植物を含む。
【００３２】
ある特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む、タバコ種子を生産する方法を提供し、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）のタバコ植物である。
【００３３】
ある特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む、タバコ種子を生産する方法を提供し、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）のタバコ植物であり、前記ＡＬＢＥＸ１Ｆ植物は、雌親である。
【００３４】
ある特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む、タバコ種子を生産する方法を提供し、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）のタバコ植物であり、他方のタバコ植物は、雄性不稔（ＭＳ）である。
【００３５】
ある特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程から成る方法によって生産されるＦ1後代種子を提供し、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）のタバコ植物であり、他方のタバコ植物は、雄性不稔（ＭＳ）である。
【００３６】
ある特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程から成る方法によって生産される、Ｆ1後代種子のコンテナを提供し、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）のタバコ植物であり、他方のタバコ植物は、雄性不稔（ＭＳ）である。
【００３７】
ある特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程から成る方法によって生産される種子を栽培することによって生産される、Ｆ1後代植物を提供し、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）のタバコ植物であり、他方のタバコ植物は、雄性不稔（ＭＳ）である。
【００３８】
ある特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程から成る方法によって生産される種子を栽培することによって生産される、Ｆ1後代植物のタバコ植物の収穫された葉又はその一部を提供し、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）のタバコ植物であり、他方のタバコ植物は雄性不稔（ＭＳ）である。
【００３９】
ある特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程から成る方法によって生産される種子を栽培することによって生産される、Ｆ1後代植物の収穫された葉を提供し、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）のタバコ植物であり、他方のタバコ植物は雄性不稔（ＭＳ）であり、前記葉は、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有する。
【００４０】
ある特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程から成る方法によって生産される種子を栽培することによって生産される、Ｆ1後代植物の収穫された葉を提供し、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）のタバコ植物であり、他方のタバコ植物は雄性不稔（ＭＳ）であり、前記葉は、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有し、前記減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）は、前記葉から生じる煙流において、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉と比較して、減少される。
【００４１】
ある特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程から成る方法によって生産される種子を栽培することによって生産されるＦ1後代植物から製造されるタバコ製品を提供し、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）のタバコ植物であり、他方のタバコ植物は雄性不稔（ＭＳ）であり、前記製品は、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、及び刻みタバコから成る群から選択される。
【００４２】
ある特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程から成る方法によって生産される種子を栽培することによって生産されるＦ1後代植物から製造されるタバコ製品を提供し、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）のタバコ植物であり、他方のタバコ植物は雄性不稔（ＭＳ）であり、前記製品は、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、及び刻みタバコから成る群から選択され、前記製品は、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎタバコ、及び噛みタバコから成る群から更に選択される。
【００４３】
ある特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程から成る方法によって生産される種子を栽培することによって生産されるＦ1後代植物から製造されるタバコ製品を提供し、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）のタバコ植物であり、他方のタバコ植物は雄性不稔（ＭＳ）であり、前記製品は、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、及び刻みタバコから成る群から選択され、前記製品は、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎタバコ、及び噛みタバコから成る群から更に選択され、前記製品は、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種から製造される製品と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有する。
【００４４】
ある特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む、タバコ種子を生産する方法を提供し、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）のタバコ植物であり、他方のタバコ植物は雄性不稔（ＭＳ）であり、前記ＭＳ植物は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）の植物である。
【００４５】
ある特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物由来の繁殖することができる組織を回収する工程、（ｂ）前記組織を培養して繁殖苗条（proliferated shoot）を得る工程、並びに（ｃ）前記繁殖苗条を根付かせて、根付いた小植物を得る工程、を含む、タバコ栽培品種の植物を無性的に（vegetatively）繁殖させる方法を含む。
【００４６】
ある特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物由来の繁殖することができる組織を培養して、繁殖苗条を得る工程、並びに（ｂ）前記繁殖苗条を根付かせて、根付いた小植物を得る工程、を含む、タバコ栽培品種の植物を無性的に繁殖させる方法を含み、前記方法は、前記根付いた小植物由来の植物を栽培する工程を更に含む。
【００４７】
ある特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、所望の形質を含む第二のタバコ植物と交配して、Ｆ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子を栽培し、前記所望の形質を含むＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配Ｆ2後代種子を生産する工程、（ｄ）前記Ｆ2後代種子を栽培し、前記所望の形質を含む戻し交配Ｆ2後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して３回以上繰り返して、前記所望の形質及びＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴を含む、選択された第４代以降（fourth or higher）の戻し交配後代を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法を含む。
【００４８】
ある特徴において、本発明は、（ａ）ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、所望の形質を含む第二のタバコ植物と交配して、Ｆ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子を栽培し、前記所望の形質を含むＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配Ｆ2後代種子を生産する工程、（ｄ）前記Ｆ2後代種子を栽培し、前記所望の形質を含む戻し交配Ｆ2後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して３回以上繰り返して、前記所望の形質及びＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴を含む、選択された第４代以降の戻し交配後代を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法を提供し、前記形質は雄性不稔（ＭＳ）である。
【００４９】
ある特徴において、本発明は、（ａ）ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、所望の形質を含む第二のタバコ植物と交配して、Ｆ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子を栽培し、前記所望の形質を含むＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配Ｆ2後代種子を生産する工程、（ｄ）前記Ｆ2後代種子を栽培し、前記所望の形質を含む戻し交配Ｆ2後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して３回以上繰り返して、前記所望の形質及びＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴を含む、選択された第４代以降の戻し交配後代を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法を提供し、前記形質は雄性不稔（ＭＳ）であり、更に、前記ＭＳ形質はニコチアナ・スアベオレンス（Nicotiana suaveolens）の細胞質から得られる。
【００５０】
ある特徴において、本発明は、（ａ）ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、所望の形質を含む第二のタバコ植物と交配して、Ｆ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子を栽培し、前記所望の形質を含むＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配Ｆ2後代種子を生産する工程、（ｄ）前記Ｆ2後代種子を栽培し、前記所望の形質を含む戻し交配Ｆ2後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して３回以上繰り返して、前記所望の形質及びＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴を含む、選択された第４代以降の戻し交配後代を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法を提供し、前記形質は雄性不稔（ＭＳ）であり、前記ＭＳ形質はニコチアナ・スアベオレンスの細胞質から得られ、更に、前記第二のタバコ植物はＭＳ ＴＮ ９０である。
【００５１】
ある特徴において、本発明は、（ａ）ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、所望の形質を含む第二のタバコ植物と交配して、Ｆ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子を栽培し、前記所望の形質を含むＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配Ｆ2後代種子を生産する工程、（ｄ）前記Ｆ2後代種子を栽培し、前記所望の形質を含む戻し交配Ｆ2後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して３回以上繰り返して、前記所望の形質及びＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴を含む、選択された第４代以降の戻し交配後代を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法によって生産されるタバコ植物を提供し、前記形質は雄性不稔（ＭＳ）である。
【００５２】
別の特徴において、本発明は、（ａ）ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、後代植物を生産するために所望の形質を含む別のタバコ栽培品種の植物と交配し、前記所望の形質が、除草剤抵抗性、害虫抵抗性、耐病性、高収率、高グレード指数（high grade index）、治癒可能性、乾燥品質、機械的収穫可能性（harvestability）、保持能力、葉の品質、高さ、植物成熟、早期成熟、早期〜中間の成熟、中間の成熟、中間〜遅い成熟、遅い成熟、小さい茎、中間の茎、大きい茎、植物あたりの葉の数、植物あたり５〜１０の葉、植物あたり１１〜１５の葉、植物あたり１６〜２１の葉、及びそれらのあらゆる組み合わせから成る群から選択される、Ｆ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子をＦ1後代植物に栽培し、前記所望の形質を有するＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配後代植物種子を生産する工程、（ｄ）前記戻し交配後代植物種子を戻し交配後代植物に栽培し、前記所望の形質を含む戻し交配後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して１回以上繰り返して、前記所望の形質及び同様の条件下で栽培されるＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴を含む、選択された第４代以降の戻し交配後代植物を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法を含む。
【００５３】
ある特徴において、本発明は、（ａ）ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、後代植物を生産するために所望の形質を含む別のタバコ栽培品種の植物と交配し、前記所望の形質が、除草剤抵抗性、害虫抵抗性、耐病性、高収率、高グレード指数、治癒可能性、乾燥品質、機械的収穫可能性、保持能力、葉の品質、高さ、植物成熟、早期成熟、早期〜中間の成熟、中間の成熟、中間〜遅い成熟、遅い成熟、小さい茎、中間の茎、大きい茎、植物あたりの葉の数、植物あたり５〜１０の葉、植物あたり１１〜１５の葉、植物あたり１６〜２１の葉、及びそれらのあらゆる組み合わせから成る群から選択される、Ｆ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子をＦ1後代植物に栽培し、前記所望の形質を有するＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配後代植物種子を生産する工程、（ｄ）前記戻し交配後代植物種子を戻し交配後代植物に栽培し、前記所望の形質を含む戻し交配後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して１回以上繰り返して、前記所望の形質及び同様の条件下で栽培されるＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴を含む、選択された第４代以降の戻し交配後代植物を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法によって生産されるタバコ植物を含み、前記植物は前記所望の形質を有する。
【００５４】
ある特徴において、本発明は、（ａ）ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、後代植物を生産するために所望の形質を含む別のタバコ栽培品種の植物と交配し、前記所望の形質が、除草剤抵抗性、害虫抵抗性、耐病性、高収率、高グレード指数、治癒可能性、乾燥品質、機械的収穫可能性、保持能力、葉の品質、高さ、植物成熟、早期成熟、早期〜中間の成熟、中間の成熟、中間〜遅い成熟、遅い成熟、小さい茎、中間の茎、大きい茎、植物あたりの葉の数、植物あたり５〜１０の葉、植物あたり１１〜１５の葉、植物あたり１６〜２１の葉、及びそれらのあらゆる組み合わせから成る群から選択される、Ｆ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子をＦ1後代植物に栽培し、前記所望の形質を有するＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配後代植物種子を生産する工程、（ｄ）前記戻し交配後代植物種子を戻し交配後代植物に栽培し、前記所望の形質を含む戻し交配後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して１回以上繰り返して、前記所望の形質及び同様の条件下で栽培されるＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴を含む、選択された第４代以降の戻し交配後代植物を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法によって生産されるタバコ植物を含み、前記植物は前記所望の形質を有し、前記所望の形質は除草剤抵抗性である。
【００５５】
別の特徴において、本発明は、配列番号１に示される配列を有する第一のタバコ植物を識別する工程、前記第一のタバコ植物を第二のタバコ植物と交配し、Ｆ1種子を回収する工程、前記Ｆ1種子から栽培された植物を第三のタバコ植物に交配する工程、及び配列番号１に示される配列に関してホモ接合であるタバコ植物を識別する工程、を含む、減少したニコチン転換を有するタバコ植物を生産する方法を含む。
【００５６】
ある特徴において、本発明は、配列番号１に示される配列を有する第一のタバコ植物を識別する工程、前記第一のタバコ植物を第二のタバコ植物と交配し、Ｆ1種子を回収する工程、前記Ｆ1種子から栽培された植物を第三のタバコ植物に交配する工程、及び配列番号１に示される配列に関してホモ接合であるタバコ植物を識別する工程、を含む、減少したニコチン転換を有するタバコ植物を生産する方法を含み、前記第二のタバコ植物は、配列番号１に示される配列を有する。
【００５７】
ある特徴において、本発明は、配列番号１に示される配列を有する第一のタバコ植物を識別する工程、前記第一のタバコ植物を第二のタバコ植物と交配し、Ｆ1種子を回収する工程、前記Ｆ1種子から栽培された植物を第三のタバコ植物に交配する工程、及び配列番号１に示される配列に関してホモ接合であるタバコ植物を識別する工程、を含む、減少したニコチン転換を有するタバコ植物を生産する方法を含み、前記第二のタバコ植物は、配列番号１に示される配列を有さず、前記第三のタバコ植物は、配列番号１に示される配列を有するタバコ植物である。
【００５８】
ある特徴において、本発明は、配列番号１に示される配列を有する第一のタバコ植物を識別する工程、前記第一のタバコ植物を第二のタバコ植物と交配し、Ｆ1種子を回収する工程、前記Ｆ1種子から栽培された植物を第三のタバコ植物に交配する工程、及び配列番号１に示される配列に関してホモ接合であるタバコ植物を識別する工程、を含む、減少したニコチン転換を有するタバコ植物を生産する方法を含み、前記第一のタバコ植物は、ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物である。
【００５９】
ある特徴において、本発明は、配列番号１に示される配列を有する第一のタバコ植物を識別する工程、前記第一のタバコ植物を第二のタバコ植物と交配し、Ｆ1種子を回収する工程、前記Ｆ1種子から栽培された植物を第三のタバコ植物に交配する工程、及び配列番号１に示される配列に関してホモ接合であるタバコ植物を識別する工程、を含む、減少したニコチン転換を有するタバコ植物を生産する方法を含み、前記第一のタバコ植物は、ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物であり、前記第三のタバコ植物は、ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物である。
【００６０】
別の特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物由来の繁殖することができる組織を回収する工程、及び（ｂ）所望の形質を与える導入遺伝子を前記組織に導入する工程、を含む、更なる所望の形質を有するＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳから成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を生産する方法を含む。
【００６１】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物を、導入遺伝子を用いて形質転換する工程を含む、除草剤抵抗性タバコ植物を生産する方法を含み、前記導入遺伝子は、イミダゾリノン、シクロヘキサンジオン、スルホニル尿素、グリホサート、グルホシネート、フェノキシプロピオン酸、Ｌ−ホスフィノトリシン、トリアジン及びベンゾニトリルから成る群から選択される除草剤に対する抵抗性を与える。
【００６２】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物を、導入遺伝子を用いて形質転換する工程を含む、除草剤抵抗性タバコ植物を生産する方法によって生産される除草剤抵抗性タバコ植物を含み、前記導入遺伝子は、イミダゾリノン、シクロヘキサンジオン、スルホニル尿素、グリホサート、グルホシネート、フェノキシプロピオン酸、Ｌ−ホスフィノトリシン、トリアジン及びベンゾニトリルから成る群から選択される除草剤に対する抵抗性を与える。
【００６３】
ある特徴において、本発明は、害虫又は昆虫抵抗性タバコ植物を生産する方法を含み、前記方法は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子によって生産されるタバコ植物を、害虫又は昆虫抵抗性を与える導入遺伝子を用いて形質転換する工程を含む。
【００６４】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子によって生産されるタバコ植物を、害虫又は昆虫抵抗性を与える導入遺伝子を用いて形質転換することによって生産される害虫又は昆虫抵抗性タバコ植物を含む。
【００６５】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子によって生産されるタバコ植物を、害虫又は昆虫抵抗性を与える導入遺伝子を用いて形質転換することによって生産される害虫又は昆虫抵抗性タバコ植物を含み、前記導入遺伝子は、バチルススリンギエンシス（Bacillus thuringiensis）（ＢＴ）内毒素をコードする。
【００６６】
ある特徴において、本発明は、耐病性タバコ植物を生産する方法を含み、前記方法は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物を、耐病性を与える導入遺伝子を用いて形質転換する工程を含む。
【００６７】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物を、耐病性を与える導入遺伝子を用いて形質転換することによって生産される耐病性タバコ植物を含む。
【００６８】
配列の簡単な説明
配列番号１は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐヌクレオチド配列を示す。
配列番号２は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐアミノ酸配列を示す。
配列番号３は、ＣＹＰ８２Ｅ４野生型ヌクレオチド配列を示す。
配列番号４は、ＣＹＰ８２Ｅ４野生型アミノ酸配列を示す。
【発明を実施するための形態】
【００６９】
ＡＬＢＥＸ１Ｆ
本発明は、ＡＬＢＥＸ１Ｆ由来のタバコ栽培品種及びその一部を含み、この栽培品種の典型的なサンプル種子は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている。別の特徴において、本発明は、ＡＬＢＥＸ１Ｆの種子を栽培することによって生産されるタバコ植物又はその一部を含む。本発明の植物は、同様の条件下で栽培される栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆの本質的に全ての形態学的及び生理学的特徴を有する植物を含み得る。
【００７０】
方法によって制限されないが、ＡＬＢＥＸ１Ｆは、Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ９０（ＬＣでない）（「ＴＮ ９０」）栽培品種への変異ＣＹＰ８４遺伝子の導入の結果である。前記遺伝子は、２００６年１２月１５日に提出され、２００７年８月２３日にＵＳ２００７／０１９９０９７として公開された、米国特許出願第１１／６１１７８２号に４２４６として挙げられている変異ＣＹＰ８２Ｅ４遺伝子(ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐを示す配列番号１、これにより参照によりその全体が組み込まれる)である。前記変異は、切断されたタンパク質を結果として生じる。
【００７１】
ＡＬＢＥＸ１Ｆは、ＴＮ ９０を反復親として５回戻し交配し、２回自殖することによって産生される。ＡＬＢＥＸ１Ｆは、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐについてホモ接合である。再び、いかなる特定の科学的理論によっても制限されないが、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐは、劣性である。ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐは、ニコチンをノルニコチンに転換する減少した又は除去された能力を有するタンパク質をコードする。ＡＬＢＥＸ１Ｆは、ＴＮ ９０と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同様である遺伝的バックグランドを有する。ＡＬＢＥＸ１ＦＣは低いＮＮＮを示し、高ＮＮＮ’ｓへの転換を受けない。
【００７２】
ＡＬＢＥＸ１ＭＳ
本発明はまた、ＡＬＢＥＸ１ＭＳ由来のタバコ栽培品種及びその一部を提供し、この栽培品種の典型的なサンプル種子は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている。本発明はまた、ＡＬＢＥＸ１ＭＳの種子を栽培することによって生産されるタバコ植物又はその一部を含む。本発明の植物は、同様の条件下で栽培される栽培品種ＡＬＢＥＸ１ＭＳの本質的に全ての形態学的及び生理学的特徴を有する植物を含み得る。方法によって制限されないが、ＡＬＢＥＸ１ＭＳは、ＢＣ5Ｆ1 ＴＮ ９０由来のｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異を導入し、雄親としてＴＮ ９０雄性不稔（「ＭＳ」）と交配してＭＳ Ｆ1後代植物を作成する結果（a result of introducing the cyp82e4 W329Stop mutation from a BC5F1 TN 90 and crossed as the male parent to TN 90 male sterile ("MS") to prepare MS F1 progeny plants）である。
【００７３】
ＢＣ5Ｆ1×ＭＳ ＴＮ ９０交配のＭＳ Ｆ1後代植物は、雄性不稔である。これらのＭＳ Ｆ1後代植物（例えば、ＢＣ6Ｆ1 ＭＳ）は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異について選別される。同様に、ＢＣ5Ｆ1をＴＮ ９０と交配して、前記変異について選別される稔性ＢＣ6Ｆ1植物を産する。前記変異を有すると識別されるＭＳ Ｆ1後代植物は、後の前記変異を有する稔性雄親ＢＣ6Ｆ1との交配における雌親である。この交配の後代（例えば、ＢＣ7Ｆ1 ＭＳ後代）は雄性不稔であり、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異についてホモ接合である後代は、遺伝子型判定によって識別され、ＡＬＢＥＸ１ＭＳと呼ばれる。前記系統を維持するため、系統ＡＬＢＥＸ１ＭＳ植物の植物をＡＬＢＥＸ１Ｆ植物と受粉する。ＡＬＢＥＸ１ＭＳは、ＴＮ ９０と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同様である遺伝的バックグランドを有する。ＡＬＢＥＸ１ＭＳは低いＮＮＮを示し、高ＮＮＮ’ｓへの転換を受けない。
【００７４】
他の植物
本出願の後代植物は、二種の親植物の交配又は一種の植物の自殖のいずれかによって得られる、Ｆ1、Ｆ2、Ｆ3、Ｆ4以降の世代の植物であり得る。
【００７５】
本出願において定義される同様の条件下とは、同様の環境条件下又は同様の実験室条件下であり得る。
【００７６】
本発明は、二種の親タバコ植物を交配し、結果として生じるタバコ種子を収穫することによって生産されるタバコ種子を含み、少なくとも一種の親タバコ植物はＡＬＢＥＸ１Ｆである。ある特徴において、ＡＬＢＥＸ１Ｆは、雌親植物である。別の特徴において、ＡＬＢＥＸ１ＭＳは、雄親植物である。本発明の一つの特徴は、配列番号１のｃｙｐ８２ｅ４座位でホモ接合であり、ＴＮ ９０の７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％超の遺伝的バックグランドを共有する、タバコ植物を提供する。一つの特徴において、５０％、７５％、又は１００％に近い又はそれを超える後代の遺伝的特質は、配列番号１のｃｙｐ８２ｅ４座位でホモ接合である本発明の植物によって提供される。一つの特徴において、本発明の植物は、ＴＮ ９０と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同様である遺伝的バックグランドを有する。別の特徴において、本発明の植物は、低いＮＮＮを示し、高ＮＮＮ’ｓへの転換を受けない。一つの特徴において、本発明の植物は、つる割病（Fusarium wilt）抵抗性である雌又は雄親植物の後代植物である。
【００７７】
一つの特徴において、本発明の植物は、適度に高い収率可能性を有する、中間〜遅い成熟品種である。別の特徴において、本発明の植物は、広範囲の重要な農学的特性を提供する。更なる特徴において、本発明の植物は、タバコ疫病に対する適度な抵抗性、アオカビに対するいくらかの耐性、微粒菌核病抵抗性、及び一般のウイルス疾患に対する抵抗性を含む、一つ、二つ、三つ、四つ以上の形質を有する。別の特徴において、本発明の植物は、アオカビ耐性並びにタバコ疫病及び高根腐病抵抗性の両方の種に対するレベル４抵抗性を有する。一つの特徴において、ＡＬＢＥＸ１Ｆ又はＡＬＢＥＸ１ＭＳのような本発明の植物は、つる割病抵抗性を欠く。別の特徴において、本発明の植物は、つる割病抵抗性である。
【００７８】
ある特徴において、本発明の植物は、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種と比較して、減少した又は排除された、ニコチンをノルニコチンに転換する能力を有する。ある特徴において、ニコチン転換率は、ＴＮ ９０において見られるニコチン転換率の、７５％、７０％、６０％、５０％、又は２５％未満である。ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳを含む本発明の植物におけるニコチン転換は、約４％未満、３〜１％、３〜０．５％、２〜０．５％、約２％、約１％であり得る。好ましい特徴において、ニコチン転換率は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異を有さないＴＮ ９０において見られるニコチン転換率の、２５％、１０％、５％、又は２％未満である。ある特徴において、本発明のタバコ植物は、３．５、３．２５、３．０又は２．７５％以下のニコチン転換率を有する。別の特徴において、本発明のタバコ植物のニコチン転換率は、２．９、２．８、２．７、２．６、２．５、２．４、２．３、２．２、２．１、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１．０、０．９、０．８、０．７、０．６％以下であり得る。別の特徴において、ニコチン転換率は、０．５〜０．９％、０．５〜１．５％、０．５〜２．０％、０．５〜２．５％、０．５〜２．７５％及び０．５〜３．０％であり得る。別の特徴において、ニコチン転換率は、１．０〜１．５％、１．０〜１．７５％、１．０〜２．０％、１．０〜２．５％、１．０〜２．７５％、及び１．０〜３．０％であり得る。別の特徴において、本発明の植物におけるニコチン転換率は、２．９、２．７５、２．５、２．２５、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１又は１．０％未満であってもよい。ある特徴において、本発明のタバコ植物は、３．５、３．２５、３．０又は２．７５％以下のニコチン転換率を有する。別の特徴において、本発明のタバコ植物のニコチン転換率は、２．９、２．８、２．７、２．６、２．５、２．４、２．３、２．２、２．１、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１．０、０．９、０．８、０．７、０．６％以下であり得る。別の特徴において、ニコチン転換率は、０．５〜０．９％、０．５〜１．５％、０．５〜２．０％、０．５〜２．５％、０．５〜２．７５％及び０．５〜３．０％であり得る。別の特徴において、ニコチン転換率は、１．０〜１．５％、１．０〜１．７５％、１．０〜２．０％、１．０〜２．５％、１．０〜２．７５％、及び１．０〜３．０％であり得る。別の特徴において、本発明の植物におけるニコチン転換率は、２．９、２．７５、２．５、２．２５、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１又は１．０％未満であってもよい。
【００７９】
別の特徴において、本発明のタバコ植物は、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種と比較して、乾燥質量で約０．１０％未満の減少した量のノルニコチンを典型的に有する。例えば、そのような植物におけるノルニコチン含有量は、乾燥質量で１．２、１．０、０．７、０．５、０．４、０．２、０．１、０．０７５、０．０５、０．０２５、０．０１、０．００９、０．００７５、０．００５、０．００２５、０．００１、０．０００９、０．０００７５、０．０００５、０．０００２５、０．０００１％又は検出不能であり得る。別の特徴において、ノルニコチン含有量は、乾燥質量で１．２、１．０、０．７、０．５、０．４、０．２、０．１、０．０７５、０．０５、０．０２５、０．０１、０．００９、０．００７５、０．００５、０．００２５、０．００１、０．０００９、０．０００７５、０．０００５、０．０００２５、０．０００１％未満であり得る。別の特徴において、そのような植物におけるノルニコチン含有量は、乾燥質量で１．２〜１．０、０．７〜０．５、０．４〜０．２、０．１〜０．０７５、０．０５〜０．０２５、０．０１〜０．００７５、０．００５〜０．００２５、０．００１〜０．０００７５、０．０００５〜０．０００２５、又は０．０００５〜０．０００１％であり得る。本発明の植物において、ノルニコチンは、ＴＮ ９０の市販のシードロット（seedlot）と比較して、植物中の総アルカロイドの比較的小さな割合である。本発明の植物中のノルニコチンは、総アルカロイドの２〜１％、３％未満、約２％、約１．５％、約１％、又は０．７５％の割合であってもよい。同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種から製造される製品と比較して、減少した量のノルニコチン含有量及び／又はより安定して低いニコチン転換を有するタバコ製品は、本発明の植物及び植物部位由来のタバコ植物材料を使用して製造され得る。前記タバコ製品は、約３ｍｇ／ｇ未満の減少した量のノルニコチンを典型的に有する。例えば、そのような製品中のノルニコチン含有量は、３．０ｍｇ／ｇ、２．５ｍｇ／ｇ、２．０ｍｇ／ｇ、１．５ｍｇ／ｇ、１．０ｍｇ／ｇ、７５０μｇ／ｇ、５００ｐｇ／ｇ、２５０ｐｇ／ｇ、１００ｐｇ／ｇ、７５ｐｇ／ｇ、５０ｐｇ／ｇ、２５ｐｇ／ｇ、１０ｐｇ／ｇ、７．０ｐｇ／ｇ、５．０ｐｇ／ｇ、４．０ｐｇ／ｇ、２．０ｐｇ／ｇ、１．０ｐｇ／ｇ、０．５ｐｇ／ｇ、０．４ｐｇ／ｇ、０．２ｐｇ／ｇ、０．１ｐｇ／ｇ、０．０５ｐｇ／ｇ、０．０１ｐｇ／ｇ、又は検出不能であり得る。前記タバコ製品は、約１０ｐｇ／ｇ未満の減少した量のＮＮＮを典型的に有する。例えば、そのような製品中のＮＮＮ含有量は、約１０ｐｇ／ｇ、７．０ｐｇ／ｇ、５．０ｐｇ／ｇ、４．０ｐｇ／ｇ、２．０ｐｇ／ｇ、１．０ｐｇ／ｇ、０．５ｐｇ／ｇ、０．４ｐｇ／ｇ、０．２ｐｇ／ｇ、０．１ｐｇ／ｇ、０．０５ｐｇ／ｇ、０．０１ｐｇ／ｇ、又は検出不能であり得る。本発明の植物中に含まれる総アルカロイド含有量に対する第二級アルカロイドの割合は、ＴＮ ９０の市販のシードロットと統計的に異ならなくてもよい。
【００８０】
二種の近交系タバコ品種又は二種のハイブリッドタバコ品種の間の相違は、統計学的アプローチを用いて評価され得る。統計学的分析は、平均値の計算、変動源の統計学的有意性の決定、及び適切な分散成分の計算を含む。統計学的有意性の決定方法は、当分野において周知である。統計学的ソフトウェアは利用可能であり、例えば、ＳＡＳのＰＲＯＣ ＧＬＭ機能である。有意性は、一般に、「ｐ値」として与えられる。統計学的に有意なｐ値は、０．１０未満である。好ましい特徴において、ｐ値は０．０５以下である。別の特徴において、ｐ値は、０．０４以下、０．０３以下、０．０２以下である。更に別の特徴において、統計学的に有意な値は、０．０１未満である。更に別の特徴において、統計学的に有意な値は、０．００９未満、０．００８未満、０．００７未満、０．００６未満、０．００５未満、０．００４未満、０．００３未満、０．００２未満、又は０．００１未満であり得る。
【００８１】
ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ対立遺伝子についてホモ接合である本発明のタバコ植物は、野生型ニコチンデメチラーゼＣＹＰ８２Ｅ４遺伝子を有する相当する対照ＴＮ ９０植物よりも、統計学的に有意に低い転換率を有する。更に、ホモ接合ＣＹＰ８２Ｅ４変異タバコ植物は、３％未満、例えば、１〜３％、２〜３％、１．８〜３．１５％、１．８〜２．０％、又は１．０〜２．０％の、ノルニコチンへの転換率を有する。本発明の植物はまた、これにより参照によりその全体が組み込まれる、２００６年１２月１５日に提出され、２００７年８月２３日にＵＳ２００７／０１９９０９７として公開された、米国特許出願第１１／６１１７８２号に示されるような、減少した転換率を有する非コンバータ（non-converter）であり得る。
【００８２】
ニコチン及びノルニコチンは、当分野において周知の方法（例えば、ガスクロマトグラフィー）を用いて、エチレン処理された葉において測定され得る。試料中のニコチン脱メチル化率は、試料中に測定されるニコチン及びノルニコチンの合わせたレベルでノルニコチンのレベルを割り、１００を掛けることによって計算される。本発明の植物由来の試料中のニコチン脱メチル化率は、ＴＮ ９０の市販のシードロットから栽培される個々の植物由来の試料の５０、４０、３０、２０、１０パーセントである。
【００８３】
ある特徴において、本発明のタバコ植物は、約６５のＵＳＤＡ品質指数を有する。別の特徴において、品質指数は、少なくとも約５５、６０、６２．５以上であってもよい。別の特徴において、本発明のタバコ植物は、６０〜６５、６０〜６５、６０〜６５、６０〜７０、６２．５〜６５、６２．５〜７０、又は６５〜７０の品質指数を有する。
【００８４】
ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳを含む本発明の植物は、高い（例えば、３０００ｌｂｓ／Ａ超）、適度に高い（例えば、２２００〜３０００ｌｂｓ／Ａ）、及び適度な（例えば、２０００ｌｂｓ／Ａ未満）収率可能性を含む、あらゆる収率を有し得る。
【００８５】
別の特徴において、本発明はまた、ＡＬＢＥＸ１Ｆ又はＡＬＢＥＸ１ＭＳ植物の種子から栽培される植物を提供し（provide for）、その中で、前記種子から栽培されるタバコ植物から得られるアルカロイドは、減少したノルニコチンを有し、また、そのような植物由来の植物部位及び組織培養も提供し、これらの栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣに寄託されており、それぞれＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６及びＰＴＡ−１１７１７である。
【００８６】
本発明の特徴は、栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳの一部を提供する。例えば、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、根、根端、葯、花、胚珠、苗条、茎、柄（stalk）、髄及びさく果、栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳの組織、カルス（callus）、細胞又はプロトプラストを含む組織培養。別の特徴において、本発明は、栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳを親又は祖先として持つハイブリッド由来の一部、及びＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ由来のタバコ植物を提供する。更に別の特徴において、本発明は、前述の植物及び組織培養の遺伝子組み換え（例えば、従来の育種又は遺伝子工学技術による）形態由来の一部を提供する。
【００８７】
本発明の更なる特徴は、タバコを含む製品を提供し、前記タバコは更に本発明の植物及びその一部由来のタバコを含む。発明の他の特徴は、乾燥した植物の葉及び他の植物部位を提供する。従って、いくつかの特徴において、乾燥植物部位は、葉、花粉、胚珠、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、プロトプラスト、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや、葉柄等、及びそれらの組み合わせを含むが、それらに制限されない。
【００８８】
従って、いくつかの特徴において、本発明は、ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）と呼ばれるタバコ植物の葉を含む乾燥タバコを提供する。別の特徴において、本発明は、ＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）と呼ばれるタバコ植物の葉を含む乾燥タバコを提供する。
【００８９】
従って、いくつかの特徴において、本発明は、ＡＬＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６でＡＴＣＣに寄託されている）と呼ばれるタバコ植物の茎を含む乾燥タバコを提供する。別の特徴において、本発明は、ＡＬＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている）と呼ばれるタバコ植物の茎を含む乾燥タバコを提供する。
【００９０】
更に他の特徴において、本発明は、ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳと呼ばれるタバコ植物の葉及び茎を含む乾燥タバコを提供し、これらの栽培品種の典型的なサンプル種子は、それぞれＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６及びＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている。
【００９１】
本発明はまた、ＡＬＢＥＸ１Ｆ若しくはＡＬＢＥＸ１ＭＳ種子又は本発明の他の種子のコンテナを提供し、その中で、５０％超の種子から栽培されるタバコ植物から得られるアルカロイドは、減少したノルニコチンを有する。別の特徴において、前記コンテナ中５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％超の種子から栽培される、ＡＬＢＥＸ１Ｆ若しくはＡＬＢＥＸ１ＭＳ植物又は本発明の他の植物から得られるアルカロイドは、減少したノルニコチンを有し、これらの栽培品種の典型的なサンプル種子は、それぞれＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６及びＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている。
【００９２】
ＡＬＢＥＸ１Ｆ若しくはＡＬＢＥＸ１ＭＳ種子又は本発明の他の種子のコンテナは、あらゆる数、質量又は体積の種子を含んでもよい。例えば、コンテナは、少なくとも、又はより多く、約１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００以上の種子を含み得る。あるいは、コンテナは、少なくとも、又はより多く、約２８ｇ(１オンス)、約１４２ｇ（５オンス）、約２８３ｇ（１０オンス）、約４５４ｇ（１ポンド）、約９０７ｇ（２ポンド）、約１３６１ｇ（３ポンド）、約１８１４ｇ（４ポンド）、約２２６８ｇ（５ポンド）以上の種子を含み得る。ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ栽培品種の典型的なサンプル種子は、それぞれＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６及びＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている。
【００９３】
ＡＬＢＥＸ１Ｆ若しくはＡＬＢＥＸ１ＭＳ種子又は本発明の他の種子のコンテナは、当分野において利用可能なあらゆるコンテナであってよい。非制限的な例の目的で、コンテナは、箱、袋、小包、小袋、テープロール（tape roll）、バケツ、ホイル、又は筒であってもよく、これらの栽培品種の典型的なサンプル種子は、ＡＴＣＣに寄託されている。ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ栽培品種の典型的なサンプル種子は、それぞれＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６及びＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている。
【００９４】
別の特徴において、本発明はまた、ＡＬＢＥＸ１Ｆ又はＡＬＢＥＸ１ＭＳのコンテナを提供し、その中で、ＡＬＢＥＸ１Ｆ若しくはＡＬＢＥＸ１ＭＳ種子又は本発明の他の種子の５０％超は、減少したノルニコチンを有し、これらの栽培品種の典型的なサンプル種子は、ＡＴＣＣに寄託されている。ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ栽培品種の典型的なサンプル種子は、それぞれＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６及びＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている。
【００９５】
一つの特徴において、本発明は、ＡＬＢＥＸ１Ｆ若しくはＡＬＢＥＸ１ＭＳ植物又は本発明の他の植物の種子を提供し、種子から栽培される植物は、雄性不稔である。ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ栽培品種の典型的なサンプル種子は、それぞれＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１６及びＰＴＡ−１１７１７でＡＴＣＣに寄託されている。
【００９６】
本発明のタバコ系統、品種又はハイブリッドから得られるタバコ材料を使用して、制限なしに、シガレット製品（例えば、シガレット及び巻きタバコ）、シガー製品（例えば、シガー包装タバコ及びシガリロ）、パイプタバコ製品、無煙シガレット製品、無煙タバコ製品（例えば、湿式嗅ぎタバコ、乾式嗅ぎタバコ、及び噛みタバコ）、フィルム、噛めるもの（chewable）、タブ（tab）、形状部品（shaped part）、ゲル、消費単位（consumable unit）、不溶性マトリックス、中空形状（hollow shape）等を含むタバコ製品を製造し得る。例えば、参照によりその全体が本願に組み込まれる、米国特許公報ＵＳ２００６／０１９１５４８を参照されたい。
【００９７】
本発明の植物由来のタバコ製品はまた、シガレット及び他の喫煙品、特にフィルタエレメントを含む喫煙品、を含み、喫煙可能な（smokeable）材料のロッドは、タバコブレンド内の乾燥タバコを含む。ある特徴において、タバコ製品は、パイプタバコ、シガータバコ、シガッレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、及び刻みタバコであってもよい。
【００９８】
ある特徴において、本発明のタバコ製品は、混合タバコ製品であり得る。発明の他の特徴において、本発明のタバコ製品は、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種から製造される製品と比較して、減少ニコチンタバコ製品であり得る。更に他の特徴において、本発明のタバコ製品は、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種から製造される製品と比較して、減少したニコチン含有量を有する混合タバコ製品であり得る。従って、本発明のタバコ製品は、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種から製造される製品と比較して、混合減少ニコチンタバコ製品であり得る。タバコ製品材料は、本発明由来のタバコ材料のブレンドを含み、前記ブレンドは、タバコ材料の乾燥質量に基づき、少なくとも約５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は９５質量％の乾燥タバコを含む。ＵＳ２００８／０２４５３７７は、ブレンド混合物に関する参照によりその全体が本願に組み込まれる。
【００９９】
ある特徴において、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種から製造される製品と比較して、減少した量のニトロソアミン含有量及び／又はより安定して低いニコチン転換を有するタバコ製品は、本発明の植物及び植物部位由来のタバコ植物材料を用いて製造され得る。タバコ製品は、典型的に、約３ｍｇ／ｇ未満の減少した量のノルニコチンを有する。例えば、そのような製品中のノルニコチン含有量は、３．０ｍｇ／ｇ、２．５ｍｇ／ｇ、２．０ｍｇ／ｇ、１．５ｍｇ／ｇ、１．０ｍｇ／ｇ、７５０μｇ／ｇ、５００ｐｇ／ｇ、２５０ｐｇ／ｇ、１００ｐｇ／ｇ、７５ｐｇ／ｇ、５０ｐｇ／ｇ、２５ｐｇ／ｇ、１０ｐｇ／ｇ、７．０ｐｇ／ｇ、５．０ｐｇ／ｇ、４．０ｐｇ／ｇ、２．０ｐｇ／ｇ、１．０ｐｇ／ｇ、０．５ｐｇ／ｇ、０．４ｐｇ／ｇ、０．２ｐｇ／ｇ、０．１ｐｇ／ｇ、０．０５ｐｇ／ｇ、０．０１ｐｇ／ｇ、又は検出不能であり得る。タバコ製品は、典型的に、約１０ｐｇ／ｇ未満の減少した量のＮＮＮを有する。例えば、そのような製品中のノルニコチン含有量は、約１０ｐｇ／ｇ、７．０ｐｇ／ｇ、５．０ｐｇ／ｇ、４．０ｐｇ／ｇ、２．０ｐｇ／ｇ、１．０ｐｇ／ｇ、０．５ｐｇ／ｇ、０．４ｐｇ／ｇ、０．２ｐｇ／ｇ、０．１ｐｇ／ｇ、０．０５ｐｇ／ｇ、０．０１ｐｇ／ｇ、又は検出不能であり得る。本発明の植物中に含まれる総アルカロイド含有量に対する第二級アルカロイドの割合は、ＴＮ ９０ ＬＣの市販のシードロットと統計学的に異ならなくてもよい。
【０１００】
ＡＬＢＥＸ１Ｆ又はＡＬＢＥＸ１ＭＳと呼ばれ、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ対立遺伝子を持つ本発明のタバコ植物を植物育種プログラムにおいて用いて、有用な系統、栽培品種、品種、後代、近交系、及び／又はハイブリッドを作り出し得る。従って、いくつかの特徴において、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ対立遺伝子を含むＦ1、Ｆ2、Ｆ3以降の世代のタバコ植物は、第二のニコチアナ（Nicotiana）植物と交配され、その中にｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ対立遺伝子が存在する、前記交配の後代が識別される。第二のニコチアナ植物はＡＬＢＥＸ１Ｆ又はＡＬＢＥＸ１ＭＳであり、任意に、以下に述べる除草剤抵抗性のような更なる所望の形質を有することが理解されるであろう。第二のＴＮ ９０又はＴＮ ９０ ＬＣニコチアナ植物は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ対立遺伝子を含むこともまた理解されるであろう。
【０１０１】
更に他の特徴において、本発明の方法は、自家受粉又は本発明の雄性不稔ハイブリッドのような本発明の後代の生産において使用され得る花粉ドナーを用いる、雄性不稔花粉アクセプターの受粉を更に含む。雄性不稔花粉アクセプター植物又は花粉ドナー植物のいずれかは、ニコチンデメチラーゼ座位に、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐのような、少なくとも一つの変異対立遺伝子を有する。ある特徴において、ニコチンデメチラーゼ座位の対立遺伝子は変異対立遺伝子であり、植物をｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐに関してホモ接合にする。
【０１０２】
育種は、あらゆる周知の手段を介して実施され得る。ＤＮＡフィンガープリント、ＳＮＰ又は同様の技術を、マーカー利用選択（ＭＡＳ）育種プログラムにおいて使用して、ニコチンデメチラーゼ遺伝子の変異対立遺伝子を他のタバコに移し又は掛け合わせ（breed）てもよい。例えば、育種家は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ対立遺伝子を含む遺伝子型の農学的に望ましい遺伝子型とのハイブリダイゼーションから、分離集団を作り出し得る。Ｆ2又は戻し交配世代における植物は、当分野において周知の技術又は本願に挙げられる技術の一つを用いて、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ対立遺伝子又はそのフラグメントから開発されるマーカーを用いて選別され得る。ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ対立遺伝子を有するとして識別される植物を、戻し交配又は自家受粉して、選別される第二の集団を作り出し得る。予想される固有のパターン又は使用されるＭＡＳ技術に依存して、戻し交配のそれぞれのサイクルの前に選択された植物を自家受粉して、望ましい個々の植物の識別を補助することが必要であってもよい。戻し交配又は他の育種手段は、反復親の所望の表現型が回復されるまで繰り返され得る。本発明における反復親は、ＡＬＢＥＸ１Ｆ又はＴＮ ９０であり得る。他の育種技術は、例えば、参照によりその全体が本願に組み込まれるWernsman, E. A., and Rufty, R. C. 1987. Chapter Seventeen. Tobacco. Pages 669-698 In: Cultivar Development. Crop Species. W. H. Fehr (ed.), MacMillan Publishing Go., Inc., New York, N.Y.中に見出され得る。
【０１０３】
ニコチアナ・タバカムとの育種適合性を示すニコチアナ種は、ニコチアナ・アンプレキシカウリス（Nicotiana amplexicaulis）、ＰＩ２７１９８９、ニコチアナ・ベンサミアナ（Nicotiana benthamiana）ＰＩ５５５４７８、ニコチアナ・ビゲロビー（Nicotiana bigelovii）ＰＩ５５５４８５、ニコチアナ・デブネイ（Nicotiana debneyi）、ニコチアナ・エクセルシオー（Nicotiana excelsior）ＰＩ２２４０６３、ニコチアナ・グルチノサ（Nicotiana glutinosa）ＰＩ５５５５０７、ニコチアナ・グッドスピーディー（Nicotiana goodspeedii）ＰＩ２４１０１２、ニコチアナ・ゴッセイ（Nicotiana gossei）ＰＩ２３０９５３、ニコチアナ・ヘスペリス（Nicotiana hesperis）ＰＩ２７１９９１、ニコチアナ・ナイチアナ（Nicotiana knightiana）ＰＩ５５５５２７、ニコチアナ・マリチマ（Nicotiana maritima）ＰＩ５５５５３５、ニコチアナ・メガロシフォン（Nicotiana megalosiphon）ＰＩ５５５５３６、ニコチアナ・ヌジカウリス（Nicotiana nudicaulis）ＰＩ５５５５４０、ニコチアナ・パニキュラタ（Nicotiana paniculata）ＰＩ５５５５４５、ニコチアナ・プラムバギニフォリア（Nicotiana plumbaginifolia）ＰＩ５５５５４８、ニコチアナ・レパンダ（Nicotiana repanda）ＰＩ５５５５５２、ニコチアナ・ルスチカ（Nicotiana rustica）、ニコチアナ・スアベオレンスＰＩ２３０９６０、ニコチアナ・シルベストリス（Nicotiana sylvestris）ＰＩ５５５５６９、ニコチアナ・トメントサ（Nicotiana tomentosa）ＰＩ２６６３７９、ニコチアナ・トメントシフォーミス（Nicotiana tomentosiformis）、及びニコチアナ・トリゴノフィラ（Nicotiana trigonophylla）ＰＩ５５５５７２を含む。これにより参照によりその全体が組み込まれる、米国植物病理学会により刊行されているタバコ病の概論、又は日本たばこ産業株式会社により刊行されている図解ニコチアナ属も参照されたい。
【０１０４】
本願に記載される変異タバコ植物を用いる植物育種プログラムの結果は、有用な系統、栽培品種、品種、後代、近交系、及びハイブリッドを含む。本願に使用されるように、用語「品種」は、同種の他の植物からそれらを分離する一定の特性を共有する植物の集団を言う。品種はしばしば、常にではないが、商業的に販売されている。一つ以上の特有の形質を有するが、品種は、その品種内の固体間のごく小さな全体的な変化によって更に特徴付けられる。「純系」品種は、自家受粉及び選択のいくつかの世代、又は組織若しくは細胞培養技術を用いる単一の親からの栄養繁殖によって作り出されてもよい。品種は、別の系統又は品種に本質的に由来し得る。植物の新品種の保護に関する国際会議によって定義されるように（１９６１年１２月２日、ジェノバで１９７２年１１月１０日、１９７８年１０月２３日、及び１９９１年３月１９日に改正）、ａ）それが主に最初の品種、又は最初の品種に主に由来する品種に由来し、最初の品種の遺伝子型又は遺伝子型の組み合わせから生じる本質的な特徴の発現は維持する場合、ｂ）それが最初の品種から明確に区別できる場合、及びｃ）誘導の作用から生じる相違を除いて、それが最初の品種の遺伝子型又は遺伝子型の組み合わせから生じる本質的な特徴の発現において最初の品種に一致する、場合に、品種は最初の品種に「本質的に由来」する。本質的に由来する品種は、例えば、天然の若しくは誘導された変異体、体細胞繁殖系変異体、最初の品種の植物由来の変異個体の選別、戻し交配、又は形質転換によって得られる。品種と区別される「系統」は、ほとんどの場合、非商業的に、例えば植物研究において、使用される植物の群を意味する。系統は、典型的に、対象の一つ以上の形質に関して個体間にほとんど全体的な多様性を表さないが、他の形質に関しては個体間にいくらかの多様性があってもよい。
【０１０５】
ハイブリッドタバコ品種は、第一の品種の雌親植物（すなわち、種親）の自家受粉を妨げ、第二の品種の雄親植物由来の花粉に雌親植物を受精させ、及びＦ1ハイブリッド種子を雌植物において形成させることによって生産され得る。雌植物の自家受粉は、花の発生の初期段階で花を去勢（emasculate）することによって妨げられ得る。あるいは、花粉形成は、雄性不稔の形態（form）を用いて雌親植物において妨げられ得る。例えば、雄性不稔は、雄性不稔（ＭＳ）、又は形質転換雄性不稔によって生産され得、導入遺伝子は小胞子生成及び／又は花粉形成を阻害する、すなわち自家不和合性である。ＭＳを含む雌親植物は、特に有用である。雌親植物がＭＳである特徴において、花粉を雄稔性植物から収穫してＭＳ雌親植物の柱頭に手作業で適用し、結果として生じるＦ1種子を収穫してもよい。
【０１０６】
植物を使用して単交雑タバコＦ1ハイブリッドを形成し得る。そのような特徴において、親品種の植物を実質的に同種の隣接する集団として栽培し、雄親植物から雌親植物への天然の他家受粉を促進し得る。雌親植物において形成されるＦ1種子は、従来の方法によって選択的に収穫される。二種の親植物品種をバルクで栽培し、雌親において形成されるＦ1ハイブリッド種子及び自家受粉の結果として雄親において形成される種子のブレンドを収穫することもできる。あるいは、三系交雑を実施し得、単交雑Ｆ1ハイブリッドを雌親として用いて異なる雄親と交配し得る。別の方法として、二重交雑ハイブリッドが作り出され得、二種の異なる単交雑のＦ1後代は、交配されるそれ自体である。二重交雑ハイブリッドを形成するときに雌親の自家受粉を妨げる特別の利点のために、自家不和合性を使用し得る。
【０１０７】
成功した交配は、繁殖性であり、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ対立遺伝子を有し、必要に応じてＡＬＢＥＸ１Ｆ又はＴＮ ９０のような親の一種を用いて戻し交配され得るＦ1植物を生じる。いくつかの特徴において、Ｆ2世代における植物集団は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ対立遺伝子について選別される。選択された植物を親の一種と交配し得、第一の戻し交配（ＢＣ１）世代植物を自家受粉して、変異ニコチンデメチラーゼ遺伝子発現（例えば、ニコチンデメチラーゼ遺伝子のヌルバージョン）について再び選別されるＢＣ１ Ｆ2集団を生産する。戻し交配、自家受粉、及び選別の工程は、最終的な選別が、繁殖性であり、反復親と適度に似ている植物を産生するまで、例えば、少なくとも４回繰り返される。必要に応じて、この植物を自家受粉し、続いて後代を再び選別して、前記植物がＡＬＢＥＸ１Ｆと同じ低いニコチン転換表現系を示すことを確かめる。選択された植物の原原種は、例えば、野外試験、ニコチンデメチラーゼのヌル条件の確認、アルカロイドのレベルを決定するための乾燥葉の化学的分析及び／又はノルニコチンのニコチン＋ノルニコチンに対する比を決定するための乾燥葉の化学的分析を含む標準的な方法を用いて産生される。
【０１０８】
一つの特徴において、Ｆ1後代は、雄性不稔であるＦ1後代を生み出すための、ＡＬＢＥＸ１ＦとＡＬＢＥＸ１ＭＳとの間の交配の結果である。雄性不稔タバコ植物は、当分野において周知のいかなる方法によって生産されてもよい。雄性不稔タバコを生産する方法は、Wernsman, E. A., and Rufty, R. C. 1987. Chapter Seventeen. Tobacco. Pages 669-698 In: Cultivar Development. Crop Species. W. H. Fehr (ed.), MacMillan Publishing Go., Inc., New York, N.Y. 761 ppに記載されている。
【０１０９】
本発明は、栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳの一種をそれ自体又は異なるタバコ系統と交配することによって、タバコ植物を生産する方法を更に提供する。発明は更に、栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳの植物を第二のタバコ植物と交配し、後代種子を栽培してＡＬＢＥＸ１Ｆ又はＡＬＢＥＸ１ＭＳ由来タバコ植物を産することによって、栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳに由来する他のタバコ栽培品種又は育種系統を生産する方法に関する。本発明の更なる特徴は、本発明の栽培品種を一つ以上の導入遺伝子を含む第二の栽培品種と交配する工程を含む、一つ以上の導入遺伝子をその遺伝物質に含むタバコ植物を生産する方法を提供し、後代が生産され、前記交配から生じる前記後代の遺伝物質は、任意に一つ以上の調節因子と作用可能に連結する導入遺伝子を含む。一つの特徴において、第二の栽培品種は、一つ以上の導入遺伝子を用いて形質転換された栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ又はＡＬＢＥＸ１ＭＳ由来の植物であってもよい。
【０１１０】
発明は更に、栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳ、それらのハイブリッド及び後代の植物の栄養繁殖を提供する。一つの特徴において、発明は、栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳの植物由来の繁殖することができる組織を回収する工程、前記組織を培養して繁殖苗条を得る工程、及び前記繁殖苗条を根付かせて、根付いた小植物を得る工程、を含む、タバコ栽培品種の植物を無性的に繁殖する方法を提供する。別の特徴において、前記植物組織は、栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳの植物のＦ1ハイブリッドから回収されてもよい。ある特徴において、前記植物組織は、栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳの植物を育種することによって得られるＦ2、Ｆ3、Ｆ4以降の後代植物から回収されてもよい。
【０１１１】
ニコチンデメチラーゼ遺伝子に変異を含む植物は、変異誘発された植物物質、又はその後代を選択又は選別することによって識別され得る。そのような選別及び選択方法論は、当業者に周知である。選別及び選択方法論の例は、サザン解析、ポリヌクレオチドの検出のためのＰＣＲ増幅、ノーザンブロット、ＲＮａｓｅプロテクション、プライマー伸長、ＲＮＡ転写を検出するためのＲＴ−ＰＣＲ増幅、ポリペプチド及びポリヌクレオチドの酵素又はリボザイム活性を検出するための酵素分析、並びにポリペプチドを検出するためのタンパク質ゲル電気泳動、ウェスタンブロット、免疫沈降、及び酵素結合免疫測定を含むが、それらに制限されない。インサイツハイブリダイゼーション、酵素染色、及び免疫染色のような他の技術を使用して、ポリペプチド及び／又はポリヌクレオチドの存在又は発現を検出することもできる。全ての参照される技術を実施するための方法は、周知である。
【０１１２】
ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳを含む本発明のタバコ植物は、当分野において周知の技術を用いて、遺伝子構築物又は導入遺伝子によって形質転換され得ることが理解される。制限無しに、所望の形質の例は、除草剤抵抗性、害虫抵抗性、耐病性、高収率、高グレード指数、治癒可能性、乾燥品質、機械的収穫可能性、保持能力、葉の品質、高さ、植物成熟（例えば、早期成熟、早期〜中間の成熟、中間の成熟、中間〜遅い成熟、又は遅い成熟）、茎のサイズ（例えば、小さい、中間の、又は大きい茎）、又は植物あたりの葉の数（例えば、小さい（例えば、５〜１０の葉）、中間の（例えば、１１〜１５の葉）、又は大きい（例えば、１６〜２１）数の葉）、又はあらゆる組み合わせである。本発明のあらゆる植物は、組織培養のベースとして使用され、再生され、形質転換され、又はこれらのあらゆる組み合わせがなされ得る。ある特徴において、組織培養、形質転換、又は両方によって誘導される本発明の植物は、同様の条件下で栽培される栽培品種ＡＬＢＥＸ１Ｆ又はＡＬＢＥＸ１ＭＳの本質的に全ての形態学的及び生理学的特徴を有する。
【０１１３】
発明を一般的に記載してきたが、説明の目的で提供され、特定されない限り本発明の限定であることを意図されない以下の実施例の参照によって、発明はより容易に理解されるであろう。
【実施例１】
【０１１４】
ホモ接合ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異植物のＴＮ ９０バックグランドへの育種
ＡＬＢＥＸ１Ｆは、ニコチンデメチラーゼ酵素をコードすると既に記述されている遺伝子ｃｙｐ８２ｅ４に導入された有害変異を持つ、バーレイタバコ栽培品種ＴＮ ９０の戻し交配由来バージョンである。ＡＬＢＥＸ１Ｆを作成するために、ＴＮ ９０の市販のシードトロットから栽培された個々の植物を選択し、初めに温室内で植物４２４６−８と交配させる。４２４６−８は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異についてヘテロ接合であるタバコ栽培品種である。複数のＦ1植物をｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異の存在について選別する。個々のＦ1植物を選択し、温室内でＴＮ ９０と戻し交配させて、ＢＣ1Ｆ1後代を生産する。複数のＢＣ1Ｆ1後代を選別し、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異についてヘテロ接合である個々の植物を識別する。ヘテロ接合の選択されたＢＣ1Ｆ1植物を温室内でＴＮ ９０と戻し交配させて、ＢＣ2Ｆ1種子を生産する。複数のＢＣ2Ｆ1植物をｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異の存在について選別し、その後の戻し交配育種のラウンドのためにヘテロ接合の後代植物を識別する。この戻し交配手順を用いて、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異を有する個々のヘテロ接合植物を、ＢＣ3Ｆ1、ＢＣ4Ｆ1、及びＢＣ5Ｆ1後代において識別する。
【０１１５】
ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異についてホモ接合の植物を生産するために、ＢＣ5Ｆ1後代植物をｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異について選別して、ヘテロ接合植物を識別する。ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異についてヘテロ接合の個々の植物を自家受粉させて、ＢＣ5Ｆ2種子を生産する。複数のＢＣ5Ｆ2後代を遺伝子型同定し、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異についてホモ接合の個体を識別する。四つの個々のＢＣ5Ｆ2後代植物を自家受粉して、四つのＢＣ5Ｆ3後代系統を生産する。ＢＣ5Ｆ3は、ＣＹＰ８２Ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異についてホモ接合である。
【実施例２】
【０１１６】
雄性不稔系統の作成
雄性不稔（ＭＳ）系統を作成するため、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異についてヘテロ接合である、実施例１（上記）において作成されたＢＣ5Ｆ1の後代植物を選択し、ＭＳ ＴＮ ９０に対して花粉親として交配する。ＢＣ5Ｆ1×ＭＳ ＴＮ ９０交配のＭＳ Ｆ1後代植物は、雄性不稔である。これらのＭＳ Ｆ1後代植物（例えば、ＢＣ6Ｆ1 ＭＳ）を、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異について選別する。同様に、ＢＣ5Ｆ1をＴＮ ９０と交配して、前記変異について選別される稔性ＢＣ6Ｆ1植物を生じる。前記変異を有するとして識別される前記ＭＳ Ｆ1後代植物は、その後の前記変異を有する稔性雄親ＢＣ6Ｆ1との交配において雌親である。この交配の後代（例えば、ＢＣ7Ｆ1 ＭＳ後代）は雄性不稔であり、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ変異についてホモ接合の後代を、遺伝子型同定によって識別し、ＡＬＢＥＸ１ＭＳと名づける。系統を維持するため、系統ＡＬＢＥＸ１ＭＳ植物の植物をＡＬＢＥＸ１Ｆ植物と受粉する。
【実施例３】
【０１１７】
ＡＬＢＥＸ１ＭＳハイブリッドの野外試験
四つのＡＬＢＥＸ１ＭＳ後代系統由来の植物を、乾燥葉化学、収率、及び物理的品質の評価のために、ブラックストーンフィールド研究場所で、２０１０年の間、３回の反復を有するランダム化された完備ブロック計画で栽培する。それぞれの反復されるブロックは、プロットあたり２５の植物を有する２列プロットである。植物は、成熟で切断された茎であり、空気乾燥され、以前のＵＳＤＡタバコグレーダ（grader）によって評価される。プロット質量を用いて、約４０４７ｍ2（１エーカー）当たりの収量を決定する。１２の異なる試験植物の上端から４番目の葉を回収して、それぞれのプロット由来の５０グラムの混成の葉のサンプルを作成する。混成サンプルを、ニコチン、ノルニコチン、アナタビン、及びアナバシンの割合についてガスクロマトグラフィーによって分析する。
【０１１８】
ＡＬＢＥＸ１ＭＳハイブリッドの分析
ガスクロマトグラフィーアルカロイド分析の結果は、表１に示される。ガスクロマトグラフィー結果を、ＪＭＰ統計ソフトウェアを用いて分析し、一元配置分散分析（one-way analysis of variance）を実施する。ＡＬＢＥＸ１ＭＳハイブリッドは、ニコチン、ノルニコチン、アナバシン、アナタビン、ニコチン転換、総アルカロイドに対する第二級アルカロイドの比、収量、又は乾燥葉品質に関して有意には異ならないことがわかる。
【０１１９】
【表１】
2014511184.tif 000002
【０１２０】
寄託情報
上記に開示され、添付の特許請求の範囲において挙げられる所有の（proprietary）近交系植物系統の少なくとも２５００の種子の寄託は、アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）、１０８０１大学大通り、マナサス、ＶＡ２０１１０、になされている。ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳに関する寄託の日付は、２０１１年２月２８日であり、共にＡｌｔｒｉａ Ｃｌｉｅｎｔ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ株式会社の代わりである。それぞれの品種についての２５００の種子の寄託は、本願の出願日前から維持されている同じ寄託から受け継がれた。特許の付与があると、寄託についての全ての制限は取り除かれ、寄託は３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８０１−１．８０９の全ての用件を満たすことを意図される。近交系統ＡＬＢＥＸ１Ｆ及びＡＬＢＥＸ１ＭＳについてのＡＴＣＣ受託番号は、それぞれＰＴＡ−１１７１６、及びＰＴＡ−１１７１７である。これらの寄託は、３０年の期間、又は最後のリクエストの後５年、又は特許の有効期間のいずれか長いものに亘って保管所において維持され、また、その期間に必要に応じて交換されるであろう。出願人は、この特許又は植物多様性保護法（７Ｕ．Ｓ．Ｃ．２３２１以下参照）の下に認められるその権利のいかなる侵害も無視しない。
【配列表】
2014511184000001.app
【国際調査報告】
2014511184.tif 000003
2014511184.tif 000004
2014511184.tif 000005
2014511184.tif 000006