(57)【要約】  本発明は、ＧＤＦ８及びアクチビンＡに特異的に拮抗することを含む組成物及び方法を提供する。ある実施態様では、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質を含む組成物が提供される。例えば、本発明は、抗ＧＤＦ８抗体及び抗アクチビンＡ抗体を含む組成物を含み、他の実施態様では、ＧＤＦ８特異的結合ドメイン及びアクチビンＡ特異的結合ドメインを含む抗原結合分子が提供される。例えば、発明は、ＧＤＦ８及びアクチビンＡを結合する二重特異性抗体を含む。本発明の組成物は、筋肉量又は筋力低下を特徴とする疾患及び容態、並びにＧＤＦ８及び／又はアクチビンＡ活性に拮抗することによって処置可能な他の容態の処置に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＧＤＦ８特異的結合タンパク質及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質を含む組成物。
【請求項２】
ＧＤＦ８特異的結合タンパク質は、抗ＧＤＦ８抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
アクチビンＡ特異的結合タンパク質は、抗アクチビンＡ抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
ＧＤＦ８特異的結合タンパク質は、抗ＧＤＦ８抗体又はその抗原結合フラグメントであり、そしてアクチビンＡ特異的結合タンパク質は、抗アクチビンＡ抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
抗ＧＤＦ８抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）、及び配列番号１３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
抗ＧＤＦ８抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２を含む３つのＨＣＤＲ、及び配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６を含む３つのＬＣＤＲを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
ＧＤＦ８特異的結合ドメイン及びアクチビンＡ特異的結合ドメインを含む抗原結合分子。
【請求項８】
ＧＤＦ８特異的結合ドメインは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、請求項７に記載の抗原結合分子。
【請求項９】
アクチビンＡ特異的結合ドメインは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、請求項７に記載の抗原結合分子。
【請求項１０】
ＨＣＶＲは、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）を含み、そしてＬＣＶＲは、配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、請求項８に記載の抗原結合分子。
【請求項１１】
ＧＤＦ８特異的結合ドメインは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、そしてアクチビンＡ特異的結合ドメインは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、請求項７に記載の抗原結合分子。
【請求項１２】
抗原結合分子は二重特異性抗体である、請求項１１に記載の抗原結合分子。
【請求項１３】
方法は、アクチビンＡ特異的結合タンパク質を対象に投与することを含む、対象の筋肉量又は筋力を増加させる方法。
【請求項１４】
アクチビンＡ特異的結合タンパク質は、抗アクチビンＡ抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
方法は、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質を対象に投与することを含む、対象の筋肉量又は筋力を増加させる方法。
【請求項１６】
ＧＤＦ８特異的結合タンパク質は、抗ＧＤＦ８抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
アクチビンＡ特異的結合タンパク質は、抗アクチビンＡ抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
ＧＤＦ８特異的結合タンパク質は、抗ＧＤＦ８抗体又はその抗原結合フラグメントであり、そしてアクチビンＡ特異的結合タンパク質は、抗アクチビンＡ抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
抗ＧＤＦ８抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）、及び配列番号１３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
抗ＧＤＦ８抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２を含む３つのＨＣＤＲ、及び配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６を含む３つのＬＣＤＲを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
方法は、ＧＤＦ８特異的結合ドメイン及びアクチビンＡ特異的結合ドメインを含む抗原結合分子を対象に投与することを含む、対象の筋肉量又は筋力を増加させる方法。
【請求項２２】
ＧＤＦ８特異的結合ドメインは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
アクチビンＡ特異的結合ドメインは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
ＨＣＶＲは、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）を含み、そしてＬＣＶＲは、配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
ＧＤＦ８特異的結合ドメインは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、そしてアクチビンＡ特異的結合ドメインは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
抗原結合分子は、二重特異性抗体を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
方法は、アクチビンＡ特異的結合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む、筋肉量又は筋力低下を特徴とする疾患又は障害を処置する方法。
【請求項２８】
方法は、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む、筋肉量又は筋力低下を特徴とする疾患及び障害を処置する方法。
【請求項２９】
方法は、ＧＤＦ８特異的結合ドメイン及びアクチビンＡ特異的結合ドメインを含む抗原結合分子を、それを必要とする対象に投与することを含む、筋肉量又は筋力低下を特徴とする疾患及び障害を処置する方法。
【請求項３０】
方法は、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質を対象に投与することを含む、対象の筋肉量又は筋力を増加させるための薬剤の製造におけるＧＤＦ８特異的結合タンパク質及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質の使用。
【請求項３１】
ＧＤＦ８特異的結合タンパク質は、抗ＧＤＦ８抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
アクチビンＡ特異的結合タンパク質は、抗アクチビンＡ抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項３０に記載の使用。
【請求項３３】
ＧＤＦ８特異的結合タンパク質は、抗ＧＤＦ８抗体又はその抗原結合フラグメントであり、そしてアクチビンＡ特異的結合タンパク質は、抗アクチビンＡ抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項３０に記載の使用。
【請求項３４】
抗ＧＤＦ８抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）、及び配列番号１３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、請求項３１に記載の使用。
【請求項３５】
抗ＧＤＦ８抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２を含む３つのＨＣＤＲ、及び配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６を含む３つのＬＣＤＲを含む、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
対象の筋肉量又は筋力を増加させるための薬剤の製造における、ＧＤＦ８特異的結合ドメイン及びアクチビンＡ特異的結合ドメインを含む、抗原結合分子の使用。
【請求項３７】
ＧＤＦ８特異的結合ドメインは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
アクチビンＡ特異的結合ドメインは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、請求項３６に記載の使用。
【請求項３９】
ＨＣＶＲは、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）を含み、そしてＬＣＶＲは、配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、請求項３７に記載の使用。
【請求項４０】
ＧＤＦ８特異的結合ドメインは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、そしてアクチビンＡ特異的結合ドメインは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、請求項３６に記載の使用。
【請求項４１】
抗原結合分子は二重特異性抗体である、請求項４０に記載の使用。
【請求項４２】
筋肉量又は筋力低下を特徴とする疾患及び障害を処置するための薬剤の製造における、アクチビンＡ特異的結合タンパク質の使用。
【請求項４３】
筋肉量又は筋力低下を特徴とする疾患及び障害を処置するための薬剤の製造における、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質の使用。
【請求項４４】
筋肉量又は筋力低下を特徴とする疾患及び障害を処置するための薬剤の製造における、ＧＤＦ８特異的結合ドメイン及びアクチビンＡ特異的結合ドメインを含む抗原結合分子の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、対象（subject）の筋肉量及び筋力を増加させる組成物及び方法に関する。更に具体的には、発明は、ＧＤＦ８及びアクチビンＡを特異的に結合する組成物、及び筋肉量又は筋力低下を特徴とする疾患及び障害を処置するためのそのような組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
増殖分化因子８（ＧＤＦ８、ミオスタチンともいう）は、増殖因子のトランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーに属する分泌リガンドである。ＧＤＦ８は、筋肉量の負の調節因子として作用する骨格筋の発達及び維持において中心的役割を果す。ミオスタチンヌルマウス表現型は発達段階でのマウスサイズの制御におけるＧＤＦ８の重要性を示す一方で、筋肥大はまた、中和抗体、おとり受容体、又はアンタゴニストによるＧＤＦ８の阻害を通して成体マウスに誘発することができる。ＧＤＦ８中和抗体の投与は、１０と３０％間の筋肉量増加をもたらすことが報告されている。筋肉量増加が見られるのは、筋線維過形成（線維数）と対照的に線維径増加に因る。いくつかの研究はまた、攣縮及び強縮力を含むサイズ増加と釣り合った筋力又は性能の増加を報告している。ＧＤＦ８プロペプチドの切断抵抗性バージョンの使用はまた、筋肉サイズの増加をもたらす。
【０００３】
他のＧＤＦ８アンタゴニストは成体マウスに使用されて骨格筋肉量に対して顕著な効果を示す。これらは、ＩｇＧＦｃドメインへの融合によって安定化された、タイプＩＩＧＤＦ８受容体、ＡｃｔＲＩＩＢ、の細胞外部分を含む（「ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ」）。臨床分子「ＡＣＥ−０３１」はＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ分子の例である。
【０００４】
ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃは、実験動物において筋肉量を増加することが示されているが、ヒト臨床試験で、この分子は種々の有害な副作用を引き起こすことが示された。例えば、第Ｉｂ相漸増用量試験において閉経後女性へのＡＣＥ−０３１の投与は、ヘモグロビンの望ましくない増加及びＦＳＨレベルの減少をもたらすことが示された。また、筋ジストロフィーの小児患者におけるＡＣＥ−０３１の第ＩＩ相試験は、鼻及び歯肉の出血を含む副作用に因り中断された。ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃで処置した患者では血管拡張も認められる。
【０００５】
実験から、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃの筋成長誘導効果は減弱するが、ミオスタチンヌルマウスでは排除されないことから、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃは、ＧＤＦ８に加えて１つ又は複数の他のＡｃｔＲＩＩＢリガンドに拮抗することによって、その筋肉量誘導効果を示すことを示唆している。ＡｃｔＲＩＩＢを結合する他のリガンドは、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、インヒビンＡ、インヒビンＢ、ＧＤＦ３、ＧＤＦ１１、Ｎｏｄａｌ、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、及びＢＭＰ７を含む。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明者らは、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃの筋成長効果増強、並びにその望ましくない副作用は、ＧＤＦ８以外の更なるリガンドへのこの分子の結合に因るという仮説を立てた。それ故、発明者らは、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃの筋成長効果増強をもたらすために、一方で同時にこの分子に関連する望ましくない有害な副作用を回避して、あるＡｃｔＲＩＩＢリガンドだけに特異的に拮抗し、しかし他とは拮抗しないことが可能であるかを決定しようと試みた。本明細書の実施例で設定された実験を通して、驚くべきことに、アクチビンＡに特異的に拮抗することによって顕著な筋成長増強が実現され得ることが発見された。重要なことに、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃの所望の治療効果（例えば、骨格筋成長の増強）は、ＧＤＦ８及びアクチビンＡに特異的に拮抗するが、他のＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０など）には拮抗しないことによって、望ましくない副作用無しに実現され得ることも明らかとなった。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
このように、本発明の１つの態様によれば、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質を含む組成物が提供される。ある実施態様では、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質は抗ＧＤＦ８抗体であり、及び／又はアクチビンＡ特異的結合タンパク質は抗アクチビンＡ抗体である。本発明の関連態様によれば、ＧＤＦ８特異的結合ドメイン及びアクチビンＡ特異的結合ドメインを含む抗原結合分子が提供される。発明のこの態様の１つの実施態様では、抗原結合分子は、ＧＤＦ８を特異的に結合する第１の可変ドメイン、及びアクチビンＡを特異的に結合する第２の可変ドメインを含む二重特異性抗体である。
【０００８】
本発明は、アクチビンＡ特異的結合タンパク質を対象に投与することによって対象の筋肉量又は筋力を増加させる方法を提供する。本発明はまた、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質を対象に投与することによって、又はＧＤＦ８特異的結合ドメイン及びアクチビンＡ特異的結合ドメインを含む抗原結合分子を対象に投与することによって、対象の筋肉量又は筋力を増加させる方法を提供する。発明のこの態様による方法は、例えは、悪液質、サルコペニア及び他の筋肉消耗状態を含む、筋肉量、筋力又筋パワー低下に関連する疾患又は障害を処置するのに有用である。
【０００９】
本発明の他の実施態様は、次の詳細な説明の検討から明らかになり得る。
【００１０】
本発明の記載の前に、当然のことながら、そのような方法及び条件は変動し得るので、この発明は、記載された特定の方法及び実験条件に限定されるものではない。また当然のことながら、本明細書に使用される用語は、特定の実施態様を記載する目的のためだけであり、そして本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってだけ限定され得ることから、限定を意図するものではない。
【００１１】
他に定義されなければ、本明細書に使われる全ての技術的及び科学的用語は、この発明が属する当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に使用されるように、特定の列挙された数値に関連して使用されるとき、用語「約」は、値がわずか１％だけ列挙された値から変動し得ることを意味する。例えば、本明細書に使用されるように、表現「約１００」は、９９及び１０１及び（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）間にあるすべての値を含む。
【００１２】
抗原特異的結合タンパク質
本発明は、抗原特異的結合タンパク質を含む組成物に関する。より具体的には、本発明は、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質を含む組成物を提供する。
【００１３】
本明細書で使用されるように、表現「抗原特異的結合タンパク質」は、特定の抗原を特異的に結合する少なくとも１つのドメインを含むタンパク質を意味する。抗原特異的結合タンパク質の例示的カテゴリーは、抗体、抗体の抗原結合部分、特定の抗原と特異的に相互作用するペプチド（例えば、ペプチボディ）、特定の抗原と特異的に相互作用する受容体分子、及び特定の抗原を特異的に結合する受容体のリガンド結合部分を含むタンパク質を含む。
【００１４】
本発明は、ＧＤＦ８を特異的に結合する抗原特異的結合タンパク質、即ち、「ＧＤＦ８特異的結合タンパク質」を含む。用語「ＧＤＦ８」（「増殖分化因子８」及び「ミオスタチン」ともいう）は、配列番号２５のアミノ酸配列を有するタンパク質（成熟タンパク質）を意味する。本発明によれば、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質は、ＧＤＦ８を特異的に結合するが、ＧＤＦ３、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ１１、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌなどの他のＡｃｔＲＩＩＢリガンドを結合しない。
【００１５】
本発明はまた、アクチビンＡを特異的に結合する抗原特異的結合タンパク質、即ち「アクチビンＡ特異的結合タンパク質」を含む。アクチビンは、βＡ及び／又はβＢサブユニットを含むホモ及びヘテロ二量体分子である。βＡサブユニットは、配列番号２６のアミノ酸配列を有し、そしてβＢサブユニットは配列番号２８のアミノ酸配列を有する。アクチビンＡは２つのβＡサブユニットのホモ二量体であり；アクチビンＢは２つのβＢサブユニットのホモ二量体であり；そしてアクチビンＡＢは１つのβＡサブユニット及び１つのβＢサブユニットのヘテロ二量体である。アクチビンＡ特異的結合タンパク質は、βＡサブユニットを特異的に結合する抗原特異的結合タンパク質であり得る。βＡサブユニットは、アクチビンＡ及びアクチビンＡＢ分子の両方に見出されることから、「アクチビンＡ特異的結合タンパク質」は、アクチビンＡ並びにアクチビンＡＢを特異的に結合する抗原特異的結合タンパク質であり得る（βＡサブユニットとのその相互作用のおかげで）。したがって、本発明によれば、アクチビンＡ特異的結合タンパク質は、アクチビンＡ、又はアクチビンＡ及びアクチビンＡＢを特異的に結合するが、アクチビンＢ、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ１１、Ｎｏｄａｌなどの他のＡｃｔＲＩＩＢリガンドを結合しない。
【００１６】
本発明との関連で、ＡｃｔＲＩＩＢ受容体のリガンド結合部分を含む、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ（例えば、「ＡＣＥ−０３１」）などの分子は、そのような分子がＧＤＦ８、アクチビンＡ及びアクチビンＡＢ以外の複数のリガンドを結合することから、「ＧＤＦ８特異的結合タンパク質」又は「アクチビンＡ特異的結合タンパク質」とは考えられない。
【００１７】
２つの異なる抗原特異的結合ドメインを備えた抗原結合分子
本発明はまた、２つの異なる抗原特異的結合ドメインを含む抗原結合分子を含む。特に本発明は、ＧＤＦ８特異的結合ドメイン及びアクチビンＡ特異的結合ドメインを含む抗原結合分子を含む。本明細書で使用される用語「抗原特異的結合ドメイン」は、（ｉ）抗体分子の抗原結合フラグメント、（ｉｉ）特定の抗原と特異的に相互作用するペプチド（例えば、ペプチボディ）、及び／又は（ｉｉｉ）特定の抗原を特異的に結合する受容体のリガンド結合部分：を含む又はそれから成るポリペプチドを含む。例えば、本発明は、ＧＤＦ８を特異的に結合する第１の重鎖可変領域／軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）ペアを含む１つのアーム、及びアクチビンＡを特異的に結合する第２のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲペアを含む別のアームを備えた二重特異性抗体を含む。
【００１８】
特異的結合
本明細書で使用される用語「特異的に結合する」などは、抗原特異的結合タンパク質、又は抗原特異的結合ドメインが、５００ｐＭ以下の解離定数（ＫD）で特徴付けられる特定の抗原との複合体を形成し、そして通常の試験条件下で他の無関係の抗原を結合しないことを意味する。「無関係の抗原」は、互いに９５％より小さいアミノ酸同一性を有するタンパク質、ペプチド又はポリペプチドである。２つの分子が互いに特異的に結合するかどうかを決定する方法は、当技術分野で周知であり、そして例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などを含む。例えば、本発明との関連で使用される抗原特異的結合タンパク質又は抗原特異的結合ドメインは、表面プラズモン共鳴アッセイで測定して、約５００ｐＭより小さい、約４００ｐＭより小さい、約３００ｐＭより小さい、約２００ｐＭより小さい、約１００ｐＭより小さい、約８０ｐＭより小さい、約７０ｐＭより小さい、約６０ｐＭより小さい、約５０ｐＭより小さい、約３０ｐＭより小さい、約２０ｐＭより小さい、約１０ｐＭより小さい、約５ｐＭより小さい、約４ｐＭより小さい、約２ｐＭより小さい、約１ｐＭより小さい、約０．５ｐＭより小さい、約０．２ｐＭより小さい、約０．１ｐＭ、又は約０．０５ｐＭより小さい、ＫDを備えた特定の抗原（例えば、ＧＤＦ８、又はアクチビンＡ及び／又はＡＢ）又はその部分を結合する分子を含む。
【００１９】
本明細書で使用されるように、抗原特異的結合タンパク質又は抗原特異的結合ドメインは、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて２５℃で分子に対する結合をテストしたとき、タンパク質又は結合ドメインが、１０００ｐＭより大きいＫDを示し、又はそのようなアッセイ又はその同等物におけるいずれの結合をも示すことができない場合、特定分子に「結合しない」（例えば、「ＧＤＦ１１を結合しない」、「ＢＭＰ９を結合しない」、「ＢＭＰ１０を結合しない」など）。
【００２０】
本明細書で使用される用語「表面プラズモン共鳴」は、バイオセンサマトリックス内でタンパク質濃度の変化の検出により、例えばBIAcore（商標） システム(Biacore Life Sciences division of GE Healthcare, Piscataway, NJ)を用いて、リアルタイム相互作用の解析を可能にする光学現象をいう。
【００２１】
本明細書で使用される用語「ＫD」は、特定のタンパク質−タンパク質相互作用（例えば、抗体−抗体相互作用）の平衡解離定数を意味する。他に示されなければ、本明細書に開示のＫD値は、２５℃における表面プラズモン共鳴アッセイで測定されたＫD値をいう。
【００２２】
抗体及び抗体の抗原結合フラグメント
上に示したように、抗原特異的結合タンパク質は、抗体又は抗体の抗原結合フラグメントを含み又はそれから成ることができる。更に、２つの異なる抗原特異的結合ドメインを含む抗原結合分子の場合には、１つ又は両方の抗原特異的結合ドメインは、抗体の抗原結合フラグメントを含み又はそれから成ってよい。
【００２３】
本明細書で使用される用語「抗体」は、４つのポリペプチド鎖、ジスルフィド結合によって連結された２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖、並びにその多量体（例えば、ＩｇＭ）を含む免疫グロブリン分子をいうことを意図する。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書でＨＣＶＲ又はＶHと略称する）及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は３つのドメイン、ＣH１、ＣH２及びＣH３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書でＬＣＶＲ又はＶLと略称する）及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は１つのドメイン（ＣL１）を含む。ＶH及びＶL領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称する、超可変性の領域に更に細分でき、フレームワーク領域（ＦＲ）と称する、より保存された領域と散在できる。各ＶH及びＶL領域は、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲで構成され、以下：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順で、アミノ末端からカルボキシ末端まで配置される。発明の異なる実施態様では、発明の抗体のＦＲ（又はその抗原結合部分）は、ヒト生殖細胞系配列と同一であり得て、又は自然に若しくは人工的に修飾され得る。アミノ酸コンセンサス配列は２つ又はそれ以上のＣＤＲの並列解析に基づいて規定され得る。
【００２４】
本明細書で使用される、用語「抗体」はまた完全な抗体分子の抗原結合フラグメントを含む。本明細書で使用される、用語、抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合フラグメント」などは、複合体を形成するために抗原を特異的に結合する、天然産の、酵素的に入手可能な、合成の、又は遺伝子改変の、いかなるポリペプチド又は糖タンパク質をも含む。抗体の抗原結合フラグメントは、例えば、タンパク分解などのいかなる適切な標準技術、又は抗体可変及び場合により定常ドメインをコード化するＤＮＡの操作及び発現を含む組換遺伝子工学技術を用いて、完全な抗体分子から誘導され得る。そのようなＤＮＡは公知であり及び／又は例えば、商業的供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ−抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能で、又は合成することができる。ＤＮＡは、１つ又はそれ以上の可変及び／又は定常ドメインを適切な立体配置に配置するために、又はコドンを導入し、システイン残基を作成し、アミノ酸などを修飾し、加え又は削除するために、配列決定されそして化学的に又は分子生物学技術を用いることによって操作され得る。
【００２５】
抗原結合フラグメントの限定されない例は：（ｉ）Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント；（ｉｖ）Ｆｖフラグメント；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント；及び（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離相補性決定領域（ＣＤＲ））、又は拘束ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドを模倣するアミノ酸残基から成る最小認識ユニット：を含む。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠損抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ−移植抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、ミニボディ、ナノボディ（例えば一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫医薬品（ＳＭＩＰｓ）、及びサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の人工分子（engineered molecule）も、本明細書で使用される表現「抗原結合フラグメント」内に包含される。
【００２６】
抗体の抗原結合フラグメントは、通常少なくとも１つの可変ドメインを含むであろう。可変ドメインはいずれのサイズ及びアミノ酸組成物であってよく、そして一般的に、１つ又はそれ以上のフレームワーク配列を備えたフレームに隣接して又はその中にある少なくとも１つのＣＤＲを含むであろう。ＶLドメインと関連するＶHドメインを有する抗原結合フラグメントにおいて、ＶH及びＶLドメインは、互いに対していずれの適切な配列にも位置し得る。例えば、可変領域は二量体であり、そしてＶH−ＶH、ＶH−ＶL又はＶL−ＶL二量体を含有し得る。あるいは、抗体の抗原結合フラグメントは、単量体のＶH及びＶLドメインを含有し得る。
【００２７】
ある実施態様では、抗体の抗原結合フラグメントは、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合した少なくとも１つの可変ドメインを含有し得る。本発明の抗体の抗原結合フラグメント内に見出され得る、可変及び定常ドメインの限定されない、例示的立体配置は：（ｉ）ＶH−ＣH１；（ｉｉ）ＶH−ＣH２；（ｉｉｉ）  ＶH−ＣH３；（ｉｖ）ＶH−ＣH１−ＣH２；（ｖ）ＶH−ＣH１−ＣH２−ＣH３；（ｖｉ）ＶH−ＣH２−ＣH３；（ｖｉｉ）ＶH−ＣL；（ｖｉｉｉ）ＶL−ＣH１；（ｉｘ）ＶL−ＣH２；（ｘ）ＶL−ＣH３；（ｘｉ）ＶL−ＣH１−ＣH２；（ｘｉｉ）ＶL−ＣH１−ＣH２−ＣH３；（ｘｉｉｉ）ＶL−ＣH２−ＣH３；及び（ｘｉｖ）ＶL−ＣL：を含む。上記に掲載された例示的立体配置のいずれをも含む、可変及び定常ドメインのいずれの立体配置においても、可変及び定常ドメインは、互いに直接連結され得るか又は完全若しくは部分ヒンジ若しくはリンカー領域によって連結され得る。ヒンジ領域は、単一ポリペプチド分子中の隣接可変及び／又は定常ドメイン間の可撓性又は半可撓性連結をもたらす、少なくとも２つの（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０又はそれ以上）アミノ酸から成り得る。その上、本発明の抗体の抗原結合フラグメントは、互いと及び／又は１つ又はそれ以上の単量体ＶH又はＶLドメインと非共有結合に関係して（例えば、１つ又は複数のジスルフィド結合）、上記に掲載された可変及び定常ドメイン立体配置のいずれかのホモ二量体又はヘテロ二量体（又は他の多量体）を含んでよい。
【００２８】
本発明の分子は、ヒト抗体及び／又は組換ヒト抗体、又はそのフラグメントを含み又はそれから成り得る。本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列由来の可変及び定常領域を有する抗体を含む。ヒト抗体はそれでも尚、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列（例えば、インビトロでランダム若しくは部位特異的変異誘発によって、又はインビボで体細胞突然変異によって導入される突然変異）によって、例えばＣＤＲそして特にＣＤＲ３においてコード化されないアミノ酸残基を含んでよい。しかしながら、本明細書で使用される用語［ヒト抗体］は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系由来ＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列上でグラフトされている抗体を含むことを意図するものではない。
【００２９】
本発明の分子は、組換ヒト抗体又はその抗原結合フラグメントを含み又はそれから成り得る。本明細書で使用される用語「組換ヒト抗体」は、宿主細胞（更に下記に記載）にトランスフェクトされた組換発現ベクターを用いて発現される抗体、組換コンビナトリアルヒト抗体ライブラリー（更に下記に記載）から単離される抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子（例えば、 Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295参照）に対してトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離される抗体、又は他のＤＮＡ配列へのヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを含む他の手段によって調製され、発現され、作成され又は単離される抗体などの、組換手段によって調製され、発現され、作成され又は単離されるすべてのヒト抗体を含むことを意図する。そのような組換ヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列由来の可変及び定常領域を有する。ある実施態様では、しかしながら、そのような組換ヒト抗体はインビトロ変異誘発（又は、ヒトＩｇ配列に対するトランスジェニック動物が使用されるときには、インビボ体細胞変異誘発）にかけられ、そしてそれ故、組換抗体のＶH及びＶL領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系ＶH及びＶL配列から由来しそして関連する一方で、インビボではヒト抗体生殖細胞系レパトア内に天然で存在し得ない可能性がある。
【００３０】
抗ＧＤＦ８抗体及びその抗原結合フラグメント
本発明のある特定の実施態様では、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質、又はＧＤＦ８特異的結合ドメインは、抗ＧＤＦ８抗体又はその抗原結合フラグメントを含み又はそれから成る。抗ＧＤＦ８抗体は、例えば、ＵＳ特許番号６，０９６，５０６；７，３２０，７８９；７，２６１，８９３；７，８０７，１５９；７，８８８，４８６；７，６３５，７６０；７，６３２，４９９に；ＵＳ特許出願公開番号２００７／０１７８０９５；２０１０／０１６６７６４；２００９／０１４８４３６；及び国際特許出願公開番号ＷＯ２０１０／０７００９４に言及されている。抗ＧＤＦ８抗体はまた、２０１１年５月２５日に出願され、そしてＵＳ２０１１／ｘｘｘｘｘｘｘとして公開された、ＵＳ特許出願番号１３／１１５，１７０に記載されていて、８Ｄ１２、Ｈ４Ｈ１６５７Ｎ２、及びＨ４Ｈ１６６９Ｐと命名された抗体を含む。前述の特許又は刊行物のいずれかに言及され又は記載された抗ＧＤＦ８抗体、又はその抗原結合フラグメントのいずれかは、そのような抗体及び／又は抗原結合フラグメントがＧＤＦ８を「特異的に結合する」限り、その発現は本明細書に規定されるように、本発明の関連で使用することができる。
【００３１】
表１は、本発明の関連で使用することができる、ある限定されない、例示的抗ＧＤＦ８抗体のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及びＣＤＲの配列識別子を示す。
【００３２】
【表１】
2014534239.tif 000002
【００３３】
抗アクチビンＡ抗体及びその抗原結合フラグメント
本発明のある具体的な実施態様では、アクチビンＡ特異的結合タンパク質、又はアクチビンＡ特異的結合ドメインは、アクチビンＡを特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含み又はそれから成る。ある実施態様では、アクチビンＡ特異的結合タンパク質は、βＡサブユニットを特異的に結合する。βＡサブユニットを特異的に結合する抗原特異的結合タンパク質は、アクチビンＡ（βＡ／βＡホモ二量体）もアクチビンＡＢ（βＡ／βＢヘテロ二量体）も認識し得る。このように、本発明によれば、アクチビンＡ特異的結合タンパク質はアクチビンＡもアクチビンＡＢ（アクチビンＢではない）も結合し得る。抗アクチビンＡ抗体は、例えば、米国特許出願公開番号２００９／０２３４１０６に言及されている。特定の抗アクチビンＡ抗体は、「ＭＡＢ３３８１」と命名され、そしてR&D Systems, Inc, Minneapolis, MNから市販されている。ＭＡＢ３３８１はアクチビンＡ（ホモ二量体）並びにアクチビンＡＢ（ヘテロ二量体）を特異的に結合する。前述の抗アクチビンＡ抗体、又はその抗原結合フラグメントのいずれかは、そのような抗体及び／又は抗原結合フラグメントが、本明細書で規定されるように、アクチビンＡ及び／又はアクチビンＡＢを「特異的に結合する」限り、本発明の関連で使用することができる。
【００３４】
医薬組成物及び投与方法
本発明は、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質を含む医薬組成物を含む。本発明はまた、ＧＤＦ８特異的結合ドメイン及びアクチビンＡ特異的結合ドメインを含む抗原結合分子を含む医薬組成物を含む。本発明の医薬組成物は、適切な担体、賦形剤、及び適切な移動、送達、耐性などをもたらす他の薬剤と一緒に製剤化される。多数の適切な製剤は、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton PAに見出すことができる。適切な製剤は、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ジェリー剤、ワックス、オイル、脂質、ベシクル（LIPOFECTIN（商標）など）を含有する脂質（カチオン又はアニオン）、ＤＮＡ複合体、無水吸収ペースト剤、水中油型及び油中水型エマルジョン、エマルジョンカーボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、及びカーボワックスを含有する半固体混合物を含む。更なる適切な製剤はまた、Powell et al. “Compendium of excipients for parenteral formulations” PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311に記載されている。
【００３５】
種々の送達システム、例えば、リポソームへのカプセル化、微粒子、マイクロカプセル、変異体ウイルスを発現することができる組換細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Wu et al., 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432参照）が公知であり、そして本発明の医薬組成物を投与するのに使用することができる。投与方法は、限定されるものではないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口経路を含む。組成物は、いずれかの従来型経路によって、例えば、注入及びボーラス注射によって、上皮及び皮膚粘膜ライニング（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸粘膜など）を介した吸収によって投与されてよく、そして他の生物活性薬剤と一緒に投与してよい。
【００３６】
本発明の医薬組成物は、標準の針及びシリンジを用いて皮下に又は静脈内に送達することができる。また、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスは本発明の医薬組成物を送達するのに容易に用途を有する。そのようなペン型送達デバイスは再使用可能又は使い捨てであってよい。再使用可能ペン型送達デバイスは一般に、医薬組成物を含有する交換可能カートリッジを利用する。一度カートリッジ内の医薬組成物の全てが投与されそしてカートリッジが空になると、空のカートリッジは容易に廃棄できてそして医薬組成物を含有する新しいカートリッジと交換することができる。ペン型送達デバイスはそのとき再使用することができる。使い捨てペン型送達デバイスでは、交換可能カートリッジはない。むしろ、使い捨てペン型送達デバイスは、デバイス内のリザーバに保持された医薬組成物でプレフィルドされるようになる。一度リザーバの医薬組成物が空になるとデバイス全体が廃棄される。
【００３７】
数多くの再使用可能ペン型及び自己注射器送達デバイスは、本発明の医薬組成物の皮下送達に用途を有する。限定されるものではないが、その例としては、２〜３例を挙げると、AUTOPEN（商標）(Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK)、DISETRONIC（商標）ペン (Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25（商標）ペン、HUMALOG（商標）ペン、HUMALIN 70/30（商標）ペン(Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN)、NOVOPEN（商標）I、II 及びIII (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark)、NOVOPEN JUNIOR（商標）(Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark)、BD（商標）ペン(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ)、 OPTIPEN（商標）、OPTIPEN PRO（商標）、OPTIPEN STARLET（商標）、及び OPTICLIK（商標）(sanofi-aventis, Frankfurt, Germany)が挙げられる。本発明の医薬組成物の皮下送達に用途を有する使い捨てペン型送達デバイスの例は、限定されるものではないが、ほんの２〜３例を挙げると、SOLOSTAR（商標）ペン(sanofi-aventis)、FLEXPEN（商標）(Novo Nordisk)、及びKWIKPEN（商標）(Eli Lilly)、 SURECLICKTM Autoinjector (Amgen, Thousand Oaks, CA)、PENLETTM（商標）(Haselmeier, Stuttgart, Germany)、EPIPEN (Dey, L.P.)、及び HUMIRATM ペン(Abbott Labs, Abbott Park IL)が挙げられる。
【００３８】
ある状況では、本発明の医薬組成物は、制御放出システムで送達することができる。１つの実施態様では、ポンプが使用し得る（Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201参照）。別の実施態様では、高分子材料が使用し得る；Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida参照。尚別の実施態様では、制御放出システムは組成物の標的に近接して置くことができ、それ故全身用量のほんの一部だけを必要とする（例えば、Goodson, 1984, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138参照）。他の制御放出システムが、Langer, 1990, Science 249:1527-1533によるレビューで論じられている。
【００３９】
注射用製剤は、静脈内、皮下、皮内及び筋肉内注射剤、点滴剤などのための剤形を含んでよい。これらの注射用製剤は公知の方法によって調製され得る。例えば、注射用製剤は、例えば、上記の抗体又はその塩を注射用に通常使用される滅菌水性媒体又は油性媒体中に溶解し、懸濁し又は乳化することにより調製され得る。注射剤用水性媒体としては、アルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］などの適切な可溶化剤と組み合わせて使用し得る、例えば、生理食塩水、グルコース又は他の補助剤を含有する等張液などがある。油性媒体としては、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と組み合わせて使用され得る、例えば、ゴマ油、大豆油などがある。このようにして調製された注射剤は好ましくは適切なアンプル中に充填される。
【００４０】
有利なことには、上記の経口又は非経口用の医薬組成物は、有効成分の用量に適合させるのに適する単位用量の剤形に調剤される。そのような単位用量の剤形は、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤などを含む。
【００４１】
投薬量
対象に投与することができる有効成分（例えば、抗ＧＤＦ８抗体及び抗アクチビンＡ抗体）の量は、一般的に、治療的有効量である。本明細書で使用されるように、語句「治療的有効量」は、以下のパラメータの１つ又はそれ以上：体重、筋肉量（例えば、前脛骨筋［ＴＡ］筋肉量、腓腹筋［ＧＡ］筋肉量、大腿四頭筋［Ｑｕａｄ］筋肉量など）、筋力／筋パワー、及び／又は筋機能、の検出可能な増加をもたらす抗原特異的結合タンパク質及び／又は抗原結合分子の用量を意味する。例えば、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質及び／又はアクチビンＡ特異的結合タンパク質の「治療的有効量」は、試験対象に投与されるとき、例えば本明細書で実施例１に示されるように、対照の処置された対象と比べて、少なくとも２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％又はそれ以上のＴＡ又はＧＡ筋肉量増加をもたらす、例えば、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質及び／又はアクチビンＡ特異的結合タンパク質の量を含む。
【００４２】
本発明の抗体（例えば、抗ＧＤＦ８抗体、抗アクチビンＡ抗体、又はＧＤＦ８及びアクチビンＡを特異的に結合する二重特異性抗体）の場合に、治療的有効量は、それぞれの抗体の約０．０５ｍｇから約６００ｍｇまで；例えば約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５９０ｍｇ、又は約６００ｍｇ、であってよい。
【００４３】
個々の用量内に含有される本発明の抗体（例えば、抗ＧＤＦ８抗体、抗アクチビンＡ抗体、又はＧＤＦ８及びアクチビンＡを特異的に結合する二重特異性抗体）の量は、患者体重のキログラム当りの抗体のミリグラム（即ち、ｍｇ／ｋｇ）で表され得る。例えば、本発明の抗ＧＤＦ８、抗アクチビンＡ及び／又は抗ＧＤＦ８／抗アクチビンＡ二重特異性抗体は、患者体重の約０．０００１〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量（例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、１０．０ｍｇ／ｋｇ、１０．５ｍｇ／ｋｇ、１１．０ｍｇ／ｋｇ、１１．５ｍｇ／ｋｇなど）で患者に投与され得る。
【００４４】
本発明の組成物は、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質の等量を含んでよい。あるいは、組成物中のＧＤＦ８特異的結合タンパク質の量は、アクチビンＡ特異的結合タンパク質の量よりも小さいか又は大きくてよい。当業者は、ルーチン実験を使用して、所望の治療効果をもたらすのに必要な本発明の組成物中の個々の成分の適切な量を決定することができ得る。
【００４５】
治療方法
本発明は、個人の筋力／筋パワー及び／又は筋肉量及び／又は筋機能を増加させることにより、又はＧＤＦ８、及び／又はアクチビンＡ、及び／又はアクチビンＡＢを特異的に結合することにより、そして他のＡｃｔＲＩＩＢリガンドを結合させないで、代謝を有利に変えること（炭水化物、脂質及びタンパク質プロセシング）により、治癒、軽減又は改善することができる、容態又は苦痛を処置する方法を含む。例えば、本発明は、アクチビンＡ特異的結合タンパク質を対象に投与することにより、対象の筋力／筋パワー及び／又は筋肉量及び／又は筋機能を増加させる、又は対象の筋肉量又は筋力低下を特徴とする疾患又は障害を処置する方法を含む。本発明はまた、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質を対象に投与することにより、対象の筋力／筋パワー及び／又は筋肉量及び／又は筋機能を増加させる、又は対象の筋肉量又は筋力低下を特徴とする疾患又は障害を処置する方法を含む。本明細書に開示される又は記載されるＧＤＦ８特異的結合タンパク質及び／又はアクチビンＡ特異的結合タンパク質のいずれも、本発明のこれら態様の関連で使用することができる。例えば、本発明の治療方法は、抗ＧＤＦ８抗体及び／又は抗アクチビンＡ抗体を対象に投与することを含む。
【００４６】
ＧＤＦ８特異的結合タンパク質及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質を対象に投与すること含む方法では、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質は、対象に同じ又は実質的に同じ時間に、例えば、単回治療的投薬量で、又は同時に又は互いに約５分より短い時間内に投与される２つの別々の投薬量で投与され得る。あるいは、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質は、対象に順次、例えば、約５分より長い時間的に互いに隔たりがある別々の医療投薬量で投与され得る。
【００４７】
本発明はまた、ＧＤＦ８特異的結合ドメイン及びアクチビンＡ特異的結合ドメインを含む抗原結合分子を対象に投与することにより、対象の筋力／筋パワー及び／又は筋肉量及び／又は筋機能を増加させる、又は対象の筋肉量又は筋力低下を特徴とする疾患又は障害を処置する方法を含む。本明細書に開示される又は参照される抗原結合分子のいずれも、発明のこの態様の関連で使用することができる。例えば、本発明の治療方法は、ＧＤＦ８を特異的に結合するＨＣＶＲ／ＬＣＶＲペアを含む第１の可変ドメイン及びアクチビンＡを特異的に結合するＨＣＶＲ／ＬＣＶＲペアを含む第２の可変ドメインを含む二重特異性抗体を対象に投与することを含む。
【００４８】
本発明の組成物は、例えば、増殖因子阻害剤、免疫抑制薬、抗炎症薬、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞毒性／細胞増殖抑制剤を含む、１つ又はそれ以上の更なる治療薬と一緒に対象に投与し得る。更なる１つ又は複数の治療薬は、本発明のＧＤＦ８及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質の投与に先立って、同時に、又は後に投与され得る。
【００４９】
本発明の組成物で処置することができる例示的疾患、障害及び容態は、限定されるものではないが、サルコペニア、悪液質（他の容態、例えば、癌、慢性腎不全、又は慢性閉塞性肺疾患に特発するか又は続発する）、筋損傷、筋肉消耗及び筋萎縮症、例えば、廃用、固定化、ベッドでの安静、傷害、内科治療又は外科的介入（例えば、股関節骨折、人工股関節置換、膝関節置換など）又は人工呼吸の必要によって、引き起こされる又はそれに伴う筋萎縮症又は筋肉消耗を含む。発明の組成物はまた、癌、肥満、糖尿病、関節炎、多発性硬化症、筋ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、骨粗鬆症、変形性関節症、メタボリックシンドローム（限定されるものではないが、肥満、栄養障害、臓器萎縮症、慢性閉塞性肺疾患、及び食欲不振を含む）などの疾患を処置、予防又は改善するのに使用され得る。
【００５０】
副作用の回避
本発明は、複数の（例えば、３つ又はそれ以上の）ＡｃｔＲＩＩＢリガンドを結合する分子の投与に伴う有害な副作用を引き起こすこと無しに、対象の筋力／筋パワー及び／又は筋肉量及び／又は筋機能を増加させる、又は対象の筋肉量又は筋力低下を特徴とする疾患又は障害を処置する方法を含む。例えば、ＡＣＥ−０３１（Acceleron Pharma, Inc., Cambridge, MA）と呼ばれる臨床分子は、ＩｇＧＦｃドメイン（この分子は本明細書で「ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ」ともいう）に融合されたＡｃｔＲＩＩＢの細胞外部分からなる多量体である。ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃは、ＧＤＦ８並びに例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、及びＴＧＦβなど他のＡｃｔＲＩＩＢリガンドを結合し、そしてヒト患者に投与されるとき種々の有害な副作用を引き起こすことが知られている。意義深いことには、本発明者らは、ＧＤＦ８及びアクチビンＡを特異的に阻害すること（例えば、抗ＧＤＦ８抗体及び抗アクチビンＡ抗体を投与することによって）が、一方でアクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、及びＴＧＦβなどの他のＡｃｔＲＩＩＢリガンドを阻害しないで、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃなどの非特異的アクチビン結合剤に伴う有害な副作用を引き起こすこと無しに、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃの投与によって認められるのと少なくとも同等の筋肉量増加をもたらすことを思いがけず発見した。
【００５１】
投与計画
本発明のある実施態様によれば、本発明の組成物（例えば、ＧＤＦ８特異的結合ドメイン及びアクチビンＡ特異的結合ドメインを含むＧＤＦ８及び／又はアクチビンＡ特異的結合タンパク質又は抗原結合分子を含む組成物）の複数回投与は、規定された時間経過にわたって対象に投与され得る。本発明のこの態様による方法は、本発明の組成物の複数回投与を対象に順次投与することを含む。本明細書で使用される、用語「順次投与すること」は、本発明の組成物の各用量が、対象に異なる時点、例えば、所定の間隔（例えば、時間、日、週又は月）で区切られた異なる日に投与されることを意味する。本発明は、患者に本発明の組成物の初回用量を逐次的投与すること、続いて組成物の１つ又はそれ以上の二次用量を、そして場合により続いて組成物の１つ又はそれ以上の三次用量を投与することを含む方法を含む。
【００５２】
用語「初回用量」、「二次用量」、及び「三次用量」は、本発明組成物の投与の時間的順序をいう。したがって、「初回用量」は処置計画の初めに投与される用量であり（「ベースライン用量」とも呼ばれる）；「二次用量」は初回用量後に投与される用量であり；そして「三次用量」は二次用量後に投与される用量である。初回、二次、三次用量は全て、同じ量の１つ又は複数の有効成分を含有し得るが、一般的には投与頻度に関して互いに異なるであろう。しかしながら、ある実施態様では、初回、二次及び／又は三次用量に含有される１つ又は複数の有効成分の量は、処置の過程で互いに異なるであろう（例えば、必要に応じて上に又は下に調整される）。
【００５３】
本発明の１つの例示的実施態様では、各二次及び／又は三次用量は、直前の用量後の１〜３０（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、又はそれ以上）日に投与される。本明細書で使用される語句「直前用量」は、一連の複数回投与において、介入用量のない順序での、まさに次の用量の投与に先立って対象に投与される、本発明の組成物の１つ又は複数の用量を意味する。
【００５４】
本発明のこの態様による方法は、本発明の組成物の二次及び／又は三次用量の幾らでも患者に投与することを含んでよい。例えば、ある実施態様では、わずか単回の二次用量が患者に投与される。他の実施態様では、２つ又はそれ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、又はそれ以上）の二次用量が患者に投与される。同様に、ある実施態様では、わずか単回の三次用量が患者に投与される。他の実施態様では、２つ又はそれ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、又はそれ以上）の三次用量が患者に投与される。
【００５５】
複数の二次用量を含む実施態様では、各二次用量は他の二次用量と同じ頻度で投与され得る。例えば、各二次用量は、直前の用量後１〜２９日に患者に投与され得る。同様に、複数回の三次用量を含む実施態様では、各三次用量は他の三次用量と同じ頻度で投与され得る。例えば、各三次用量は、直前用量後１〜６０日に患者に投与され得る。あるいは、二次及び／又は三次用量が患者に投与される頻度は、処置計画の過程にわたって変動できる。投与頻度はまた、臨床検査後に個々の患者の要求に応じて医師により処置過程中に調整し得る。
【実施例】
【００５６】
下記の実施例は、本発明の方法及び組成物を作製しそして使用する方法の完全な開示及び説明を当業者に提供するために提示され、そして発明者らがそれらの発明と見なすものの範囲を限定することを意図するものではない。使用される数字（例えば、量、温度など）に対する正確性を保証する取り組みがなされているが、幾つかの実験誤差及び逸脱は配慮されるべきである。他に明示されなければ、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度はセ氏度であり、そして圧力は大気圧又はその近くである。
【００５７】
〔実施例１〕ＧＤＦ８及びアクチビンＡの特異的阻害は骨格筋肉量の相乗増加をもたらす序論
ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃは、ＩｇＧＦｃドメインへの融合によって安定化されたＡｃｔＲＩＩＢ受容体の細胞外部分から成るＧＤＦ８アンタゴニストである。ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃは、抗ＧＤＦ８抗体よりも大きくマウスの筋肉量を増加させることが示されている。本発明者らは、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃの活性強化が、ＧＤＦ８以外の更なるＡｃｔＲＩＩＢを結合するその能力に因る可能性があるとの仮説を立てた。特に、アクチビンＡのアンタゴニズムは、ＧＤＦ８のアンタゴニズムに加えて、抗ＧＤＦ８抗体単独で処置した動物に認められているものよりも骨格筋肉量のより大きい増加をもたらす可能性があることを提案した。それ故、本実施例は、ＧＤＦ８及びアクチビンＡの特異的阻害が、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃを用いて観察された増加と少なくとも同等である程度に骨格筋肉量を増加できるかどうかを、決定するためにデザインされた。
【００５８】
結果及び考察
ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃの投与によって誘導された骨格筋肥大の程度を、ＧＤＦ８特異抗体、アクチビンＡ特異抗体、又は抗ＧＤＦ８＋抗アクチビンＡ抗体の組み合わせの投与効果と比較した。この実施例に使用したＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ構築物は、配列番号２７のアミノ酸配列を有する。この実施例で使用した抗ＧＤＦ８抗体は、Ｈ４Ｈ１６５７Ｎ２と命名された抗体である（表１参照）。この実施例で使用した抗アクチビンＡ抗体は、ＭＡＢ３３８１（R&D Systems, Inc., Minneapolis, MNから入手可能）と命名された抗体である。アイソタイプ適合（ｈＩｇＧ４）抗体を陰性対照として使用した。
【００５９】
簡潔には、ほぼ１０週齢の２５匹の雄のＣＢ１７ＳＣＩＤマウスを、処置（に基づいて体重によって均等に５群に分けたアイソタイプ対照ｍＡｂ、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ、Ｈ４Ｈ１６５７Ｎ２、ＭＡＢ３３８１、又はＨ４Ｈ１６５７Ｎ２＋ＭＡＢ３３８１）。試薬は、最初の週の間に（０日及び３日目に）２回１０ｍｇ／ｋｇの用量で皮下に、そして次の３週の間に（７日、１４日及び２１日目に）週１回投与した。２８日目に、マウスを安楽死させて重量測定し、前脛骨（ＴＡ）筋、及び緋腹（ＧＡ）筋を解剖し重量測定した。組織を開始時の体重に正規化し、そしてアイソタイプ適合（ｈＩｇＧ４）対照抗体にわたる重量のパーセント変化を算出した。結果を表２にまとめて、そして陰性対照±平均の標準誤差にわたるパーセント増加として表した。
【００６０】
【表２】
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【００６１】
筋肥大が筋線維サイズの増加の結果であったことを確認するために、前脛骨（ＴＡ）筋を、ＯＣＴに埋め込み、そして組織学的検査及び免疫組織化学的ラベリングのためにイソペンタン凍結した。筋線維の輪郭を描く（outline）ためにＴＡ筋の断面を抗ラミニン抗体で染色し、そして平均断面積（ＣＳＡ）を画像解析システムを用いることによって決定した。２つの独立した実験（Ｅｘｐ＃１及びＥｘｐ＃２）の結果を表２Ｂにまとめた。全データは平均値±平均の標準誤差として表した。
【００６２】
【表３】
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【００６３】
表２Ａに示されるように、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃは、検査したすべての筋肉で顕著な肥大を誘導し、ＴＡ筋肉量の４４．８８±５．３５％の増加、及びＧＡ筋肉量の３４．２５±６．９７％の増加を示した。Ｈ４Ｈ１６５７Ｎ２（抗ＧＤＦ８）、又はＭＡＢ３３８１（抗アクチビンＡ）単独による処置もまた、ＴＡ筋肉量（それぞれ、２２．４２±１．６５％及び１９．０９±２．０４％）及びＧＡ筋肉量（それぞれ、２４．１７±１．８４及び１４．０２±０．９１％）に顕著な肥大を誘導したが、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃほど際立っていなかった。しかしながら、Ｈ４Ｈ１６５７Ｎ２及びＭＡＢ３３８１の組み合わせは、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ処置動物で観察されたものよりも尚一層大きな、ＴＡ（５５．１３±５．１６％）及びＧＡ（４１．７２±３．６３％）の増加を誘導した。更に、観察された筋肥大は筋線維サイズの増加の結果であることが確認された（表２Ｂ参照）。
【００６４】
重要なことには、抗ＧＤＦ８＋抗アクチビンＡ組み合わせに対する体重、ＴＡ筋、及びＧＡ筋の増加の程度は、抗ＧＤＦ８＋抗アクチビンＡ単独療法対象で観察されたこれらパラメータの増加の合計よりも実質的に大きかった。このように、ＧＤＦ８及びアクチビンＡの併用阻害は、体重及び骨格筋肉量の相乗増加をもたらし、そしてこれらの増加は、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ処置動物で観察されたものよりもより際立っていた。その上、下記の実施例に示されるように、ＧＤＦ８及びアクチビンＡ特異的結合剤で処置した動物の体重及び骨格筋肉量の増加は、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃなどの分子で観察された有害な副作用を引き起こすこと無しに達成することができる。
【００６５】
〔実施例２〕ＧＤＦ８及びアクチビンＡの特異的アンタゴニズムは非特異的アクチビンリガンド結合剤と関連する有害な副作用を引き起こさない
背景
ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃは複数のＡｃｔＲＩＩＢを結合し、そして顕著な副作用を引き起こす。本実施例は、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃと関連する有害な副作用が、あるＡｃｔＲＩＩＢリガンド、即ちＧＤＦ８及び／又はアクチビンＡだけに選択的に拮抗することによって回避することができることを実証した。特に、バイオマーカー、タンパク質発現研究、及びヒトにおけるＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ副作用に関係するように見える、インビボ赤血球特性（即ち、エンドグリンレベル上昇及び赤血球分布幅増加）は、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃで処置した動物だけに見られたが、抗ＧＤＦ８抗体、抗アクチビンＡ抗体又は抗ＧＤＦ８抗体及び抗アクチビンＡ抗体の組み合わせで処置した動物には見られなかった。このように、総合すると、下記の結果は、ＧＤＦ８及び／又はアクチビンＡの特異的アンタゴニズムは、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、及び／又はＴＧＦβなどの他のＡｃｔＲＩＩＢリガンドに拮抗すること無しに、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃと関連する望ましくない表現型をもたらさないことを示した。
【００６６】
結果及び考察
実施例１（即ち、最初の週の間に［０日及び３日目に］２回１０ｍｇ／ｋｇの用量で、そして次の３週の間に［７日、１４日及び２１日目に］週１回）に記載の服薬スケジュールに従って、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ（配列番号２７）、Ｈ４Ｈ１６５７Ｎ２（抗ＧＤＦ８）、ＭＡＢ３３８１（抗アクチビンＡ）、又はＨ４Ｈ１６５７Ｎ２＋ＭＡＢ３３８１の組み合わせで処置したマウスを用いて、血液学的研究を実施した。具体的には、ヘモグロビンレベル及び赤血球分布幅（ＲＤＷ）（貧血などのある血液障害の指標）を、種々の薬剤で処置したマウスから採取した血液サンプルから測定した。ＲＤＷ結果（アイソタイプ対照値に正規化した）を表３にまとめた。
【００６７】
【表４】
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【００６８】
処置の２８日後に、いずれの群もＨｂレベルの有意な増加を有さなかった。しかしながら、表３に示されるように、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃで処置したマウスは、サンプル中の赤血球のサイズ変動の程度を反映する、赤血球分布幅（ＲＤＷ）の有意な増加を有した。驚くべきことに、抗ＧＤＦ８抗体、抗アクチビンＡ抗体、又は抗ＧＤＦ８＋抗アクチビンＡ抗体の組み合わせで処置したマウスは、アイソタイプ対照処置マウスと比べて％ＲＤＷの明らかな程度の増加を示さなかった。したがって、これらの実験は、ＧＤＦ８又はアクチビンＡ単独のアンタゴニズム、又は抗ＧＤＦ８抗体＋抗アクチビンＡ抗体の組み合わせは、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ処置で観察された血液学的表現型をもたらさなかった。
【００６９】
ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ処置対象と抗ＧＤＦ８＋抗アクチビンＡ併用処置対象間の副作用の差異を更に検討するために、マイクロアレイ及びタンパク質発現研究を実施した。
【００７０】
マイクロアレイ解析をアイソタイプ対照、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ、及びＨ４Ｈ１６５７Ｎ２（抗ＧＤＦ８）で処置したマウス由来の骨格筋サンプルで実施した。これらの実験から、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃによりユニークに影響される遺伝子のセットが同定された。ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ処置対象からのサンプルの骨格筋中のエンドグリンｍＲＮＡレベルのアップレギュレーションはとりわけ興味深いものであった。エンドグリンは、主として内皮細胞中に発現する膜貫通タンパク質であり、そしてＴＧＦβ、ＢＭＰ９、又はＢＭＰ１０に対応してＴＧＦβファミリー（ＡＬＫ１）の受容体を通して相互作用しそしてシグナル伝達を促進する。内皮細胞中でＡｌｋ１及びエンドグリンによって媒介されるシグナル伝達は、正常血管構造を維持するのに必要とされる。ヒトのＡｌｋ１及びエンドグリン遺伝子の突然変異は、遺伝性出血性毛細管拡張症（ＨＨＴ）を引き起こす。ＨＨＴを患う患者は、血管拡張、及び鼻、口腔、及び胃腸粘膜の出血を含む血管表現型を表す。このように、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃによって引き起こされるエンドグリンレベル上昇は、この治療薬で処置された患者に観察される有害な副作用の少なくとも幾つかを反映する可能性がある。
【００７１】
次に、エンドグリンｍＲＮＡに認められる変化もまた以前の実験からの筋肉サンプルを用いたタンパク質発現レベルで反映されたことを確認する実験を実施した。エンドグリンタンパク質レベルの定量的ウェスタンブロット解析を、アイソタイプ対照、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ、Ｈ４Ｈ１６５７Ｎ２（抗ＧＤＦ８）、ＭＡＢ３３８１（抗アクチビンＡ）、及びＨ４Ｈ１６５７Ｎ２＋ＭＡＢ３３８１組み合わせで処置したマウス由来のサンプルで実施した。ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ処置が内皮コンパートメントを増加させないことを確認するために、エンドグリンの発現を内皮細胞マーカーＣＤ３１によって正規化した。結果（アイソタイプ対照値で正規化された）は表４にまとめた。
【００７２】
【表５】
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【００７３】
表４に示されるように、エンドグリンタンパク質のレベルは、ＡｃｔＲＩＩＢ−ｈＦｃ群で顕著に上昇したが、抗ＧＤＦ８又は抗アクチビンＡ処置群では上昇しなかった。興味深いことに、エンドグリンレベルは、抗ＧＤＦ８＋抗アクチビンＡ組み合わせ処置群でも上昇しなかった。
【００７４】
要約及び結論
前の実施例（実施例１）で示された結果は、抗ＧＤＦ８＋抗アクチビンＡ処置の組み合わせがＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ処置で観察されたものと少なくとも同等である筋肥大効果をもたらすことができることを示す。本実施例２は、ＲＤＷ上昇及びエンドグリン発現上昇などのＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ処置の有害な副作用の指標が、抗ＧＤＦ８、抗アクチビンＡ、又は抗ＧＤＦ８＋抗アクチビンＡ併用処置で観察されなかったことを示す。このように、本発明者らは驚くべきことに、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質、又はアクチビンＡ特異的結合タンパク質、又はＧＤＦ８特異的結合タンパク質及びアクチビンＡ特異的結合タンパク質の組み合わせでの処置が、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃによって引き起こされる有害な副作用を回避する、筋肉量及び筋力を増加させる非常に有効な方法をもたらすことを発見している。
【００７５】
〔実施例３〕創傷治癒に対するＧＤＦ８及びアクチビンＡアンタゴニストの効果
ＧＤＦ８アンタゴニスト及びアクチビンＡアンタゴニストなどの筋肉量及び筋力を増加させるように機能する医薬品は、患者が手術を受けている（又は手術を受けようとする）設定において、例えば、関節置換又は修復などに対して、有用性を有する。そのように、筋肉量のレスキューを促進するために投与される薬剤は、創傷治癒などの術後回復の他の態様を理想的には干渉しないであろう。
【００７６】
したがって、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ処置の効果と比べて、創傷治癒に対する、ＧＤＦ８遮断、アクチビンＡ遮断、及びその組み合わせの効果を決定する実験を実施した。これらの研究はＳＣＩＤマウスで行った。特に、単回処置として又は互いとの組み合わせでの創傷治癒に対するＨ４Ｈ１６５７Ｎ２（抗ＧＤＦ８）及びＭＡＢ３３８１（抗アクチビンＡ）投与の効果を、より広範囲に作用するおとり受容体ＡｃｔＲＩＩＢ−ｈＦｃ（配列番号２７）の創傷治癒効果と比較した。簡潔には、円形皮膚切除創傷を、ほぼ７〜８週齢の３０匹の雄ＳＣＩＤマウスの左側腹部に作製した。動物を、５処置群（群当りｎ＝６）に分けて、各々はアイソタイプ対照抗体、ＡｃｔＲＩＩＢ−ｈＦｃ、Ｈ４Ｈ１６５７Ｎ２、ＭＡＢ３３８１、又はＨ４Ｈ１６５７Ｎ２＋ＭＡＢ３３８１の５つの皮下注射を受けた。全試薬は３〜４日毎に１０ｍｇ／ｋｇを投与した。最初の用量は動物の創傷前日に与え、そして最終の用量は１４日目に試験を終了する２日前に与えた。創傷のデジタル画像は０（創傷日）、６、９、１２、及び１４日目に取り、切除創傷サイズの変化を測定しそしてアイソタイプ対照群と比べた。結果は表５にまとめた。全データは平均全創傷サイズ±平均の標準誤差で表した。
【００７７】
【表６】
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【００７８】
表５に示されるように、実験の終了時の創傷サイズ解析の結果、Ｈ４Ｈ１６５７Ｎ２、ＭＡＢ３３８１、又はＨ４Ｈ１６５７Ｎ２＋ＭＡＢ３３８１による処置は、アイソタイプ対照群と比べて初回切除後のいずれの時点においても創傷サイズに有意差をもたらさなかった。対照的に、ＡｃｔＲＩＩＢ−ｈＦｃは、Ｈ４Ｈ１６５７Ｎ２、ＭＡＢ３３８１、Ｈ４Ｈ１６５７Ｎ２＋ＭＡＢ３３８１、又はアイソタイプ対照で処置したマウスの創傷治癒と比べて、６、９、１２、及び１４日でのより大きい創傷サイズによって示されるように創傷閉鎖を顕著に遅延させた。
【００７９】
この実験から、ＧＤＦ８アンタゴニズム、アクチビンＡアンタゴニズム、又はＧＤＦ８＋アクチビンＡ二重アンタゴニズムを含む治療的処置は、創傷治癒を顕著には修復しないが、一方で、より小さい特異性のアンタゴニストＡｃｔＲＩＩＢ−ｈＦｃは、創傷治癒を有意に修復することを実証した。したがって、本実施例は、ＧＤＦ８及びアクチビンＡの特異的アンタゴニズムが、ＡｃｔＲＩＩＢ−ｈＦｃ処置で見られるのと類似して、筋肉量及び筋機能の増強をもたらすことができ、しかしＡｃｔＲＩＩＢ−ｈＦｃ処置と関連する有害な副作用はないという概念への更なる支持を提供する。
【００８０】
本発明は、本明細書に記載の特定の実施態様によって範囲が限定されるものではない。実際、本明細書に記載の方法に加えて本方法の種々の変更が、前述の説明及び添付図面から当業者に明らかになるであろう。そのような変更は特許請求の範囲に含まれるものである。
【配列表】
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【国際調査報告】
2014534239.tif 000008
2014534239.tif 000009
2014534239.tif 000010
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