(57)【要約】  本発明は、タバコ近交系植物ＮＣＢＥＸ１Ｆ及びＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０を提供する。本発明はまた、そのような植物の一部及びそれらの一部から製造される製品を提供する。本発明はまた、ハイブリッドを含む、提供される植物の後代を含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆの種子から栽培されるタバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている、タバコ製品。
【請求項２】
前記製品が、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎたばこ、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、及び刻みタバコから成る群から選択される、請求項１に記載のタバコ製品。
【請求項３】
減少した量のノルニコチンを有する、請求項２に記載のタバコ製品。
【請求項４】
タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳの種子から栽培されるタバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている、タバコ製品。
【請求項５】
前記製品が、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎたばこ、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ及び刻みタバコから成る群から選択される、請求項４に記載のタバコ製品。
【請求項６】
減少した量のノルニコチンを有する、請求項５に記載のタバコ製品。
【請求項７】
タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆの種子であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている、種子。
【請求項８】
請求項７に記載の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部。
【請求項９】
請求項８に記載のタバコ植物又はその一部の収穫された葉。
【請求項１０】
減少した量のノルニコチンを有する、請求項９に記載の収穫された葉。
【請求項１１】
前記減少した量のノルニコチンが、前記葉の燃焼から生じる煙流において減少される、請求項１０に記載の収穫された葉。
【請求項１２】
タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳの種子であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている、種子。
【請求項１３】
請求項１２に記載の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部。
【請求項１４】
請求項１３に記載のタバコ植物又はその一部の収穫された葉。
【請求項１５】
減少した量のノルニコチンを有する、請求項１４に記載の収穫された葉。
【請求項１６】
前記減少した量のノルニコチンが、前記葉の燃焼から生じる煙流において減少される、請求項１５に記載の収穫された葉。
【請求項１７】
タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＦのＦ2後代植物であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている、Ｆ2後代植物。
【請求項１８】
タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳのＦ2後代植物であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている、Ｆ2後代植物。
【請求項１９】
細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である、請求項１７に記載のＦ2後代植物。
【請求項２０】
細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である、請求項１８に記載のＦ2後代植物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１１年２月２８日に提出された米国仮出願６１／４４７４４３（係属中）及び２０１１年１０月１３日に提出された米国仮出願６１／５４６５７３（係属中）の３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９に基づく利益を主張し、そのそれぞれは、参照により、そのそれぞれの配列表を含むその全体が本出願に組み込まれる。
【０００２】
配列表の組み込み
これにより、配列表は参照によりその全体が組み込まれ、参照によりその全体が同様に本出願に組み込まれる、２８６７２バイトのサイズであり２０１２年２月１７日に作成された、Ｐ３３８３１ＵＳ０２．ｔｘｔと名付けられたファイルを含む。
【０００３】
発明の分野
本発明は、タバコ近交系植物ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０を提供する。本発明はまた、そのような植物の一部及びそれらの一部から作られた製品を提供する。本発明はまた、ハイブリッドを含む提供される植物の後代を含む。
【背景技術】
【０００４】
タバコ（ニコチアナ・タバカムＬ（Nicotiana tabacum L.））は、米国に加えて他の国においても重要な商品作物である。タバコ植物において、ニコチンのＮ−脱メチル化は、乾葉におけるＮ−ニトロソノルニコチン（”ＮＮＮ”）の形成のための前駆物質であると知られている第二級アルカロイドである、ノルニコチンを生じる。
【０００５】
市販のタバコ品種（variety）において見出される優勢なアルカロイドはニコチンであり、典型的には、総アルカロイドプールの９０〜９５％を占める。残りのアルカロイド部分は、主に三種の更なるピリジンアルカロイド、ノルニコチン、アナバシン、及びアナタビン（anatabine）から成る。ノルニコチンは、酵素ニコチンＮ−デメチラーゼの活性によって、ニコチンから直接生成される。ノルニコチンは、通常、総ピリジンアルカロイドプールの５％未満に相当するが、「転換」と称されるプロセスによって、最初はごくわずかな量のノルニコチンを生産するタバコ植物が、大部分の葉のニコチンをノルニコチンに代謝的に「転換」する後代を生じる。遺伝的に転換しているタバコ植物（「コンバータ」と称される）において、ノルニコチン生産の大部分は、成葉の老化（senescence）及び乾燥（curing）の間に生じる（Wernsman and Matzinger (1968) Tob. Sci. 12:226-228）。バーレイタバコは、特に遺伝的転換をする傾向があり、いくつかの栽培品種において観察される１世代につき２０％の高さの率を有する。
【０００６】
タバコの葉の乾燥及び加工の間、ノルニコチンの一部は、実験動物において発癌性であると主張されているタバコ特異的ニトロソアミン（ＴＳＮＡ）である、化合物ＮＮＮに代謝される（Hecht and Hoffmann (1990) Cancer Surveys 8:273-294; Hoffmann et al. (1994) J. Toxicol. Environ. Health 41:1-52; Hecht (1998) Chem. Res. Toxicol. 11:559-603）。鉄管乾燥タバコ（flue-cured tobacco）において、ＴＳＮＡは、従来の乾燥バーン（curing barn）において見出される直接燃焼加熱系によって形成される燃焼ガス中に存在する微量の窒素酸化物とのアルカロイドの反応によって、優勢に形成されることが見出される（Peele and Gentry (1999) “Formation of Tobacco-specific Nitrosamines in Flue-cured Tobacco,” CORESTA Meeting, Agro-Phyto Groups, Suzhou, China）。熱交換器によるこれらの乾燥バーンの改良は、乾燥空気との燃焼ガスの混合を事実上排除し、この方法で乾燥される（cure）タバコにおけるＴＳＮＡの形成を劇的に減少させた（Boyette and Hamm (2001) Rec. Adv. Tob, Sci. 27:17-22.）。対照的に、空気乾燥（air-cured）バーレイタバコにおいて、ＴＳＮＡ形成は、葉媒介性（leaf-borne）微生物によって触媒されるプロセスである、亜硝酸塩とのタバコアルカロイドの反応によって主に進行する（Bush et al. (2001) Rec. Adv. Tob. Sci, 27:2346）。これまで、許容され得る品質規格を維持しながら、乾燥条件の変更によってＴＳＮＡを減らす試みは、空気乾燥タバコについて成功することを証明していない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を含む。
【０００８】
別の特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部を含む。
【０００９】
更なる特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部の収穫された葉又はその一部を含む。
【００１０】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物の収穫された葉又はその一部を含み、前記葉は、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有する。
【００１１】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、収穫された葉又はその一部を含み、前記葉は、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有し、前記減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）は、前記葉の燃焼から生じる煙流において、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉の燃焼と比較して、減少される。
【００１２】
更なる特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を含み、前記製品は、パイプタバコ、シガータバコ（cigar tobacco）、シガレットタバコ（cigarette tobacco）、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ（shredded tobacco）、及び刻みタバコから成る群から選択される。
【００１３】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を含み、前記製品は、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット（non-ventilated recess filter cigarette）、通気式リセスフィルターシガレット（vented recess filter cigarette）、シガー（cigar）、嗅ぎタバコ、及び噛みタバコから成る群から選択される。
【００１４】
別の特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を含み、前記製品は、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎタバコ、及び噛みタバコから成る群から選択され、前記製品は、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種から製造された製品と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有する。
【００１５】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物の一部を含み、前記一部は、葉、花粉、胚珠、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、プロトプラスト、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや及び葉柄から成る群から選択される。
【００１６】
別の特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部由来のプロトプラスト又は細胞から生産される組織培養を含み、前記組織培養の細胞又はプロトプラストは、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや及び葉柄から成る群から選択される植物部位から生産される。
【００１７】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部由来のプロトプラスト又は細胞から生産される組織培養から再生されるタバコ植物を含み、前記組織培養の細胞又はプロトプラストは、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや及び葉柄から成る群から選択される植物部位から生産され、前記再生される植物は、同じ環境条件下で栽培されるとき、栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆの本質的に全ての形態学的及び生理学的特徴を有する。
【００１８】
別の特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣ ＥＸ９０の種子を含む。
【００１９】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣ ＥＸ９０の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部を含む。
【００２０】
更なる特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣ ＥＸ９０の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物の収穫された葉又はその一部を含む。
【００２１】
別の特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣ ＥＸ９０の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物の収穫された葉又はその一部を含み、前記葉は、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０ ＬＣ若しくは大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有する。
【００２２】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣ ＥＸ９０の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物の収穫された葉又はその一部を含み、前記葉は、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有し、前記減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）は、前記葉の燃焼から生じる煙流において、同様の条件下で栽培されるとき、ＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉の燃焼と比較して、減少される。
【００２３】
更なる特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣ ＥＸ９０の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を含み、前記製品は、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、及び刻みタバコから成る群から選択される。
【００２４】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣ ＥＸ９０の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を含み、前記製品は、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎタバコ、及び噛みタバコから成る群から選択される。
【００２５】
別の特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣ ＥＸ９０の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を含み、前記製品は、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎタバコ、及び噛みタバコから成る群から選択され、前記製品は、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種から製造された製品と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有する。
【００２６】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣ ＥＸ９０の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物の一部を含み、前記一部は、葉、花粉、胚珠、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、プロトプラスト、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや及び葉柄から成る群から選択される。
【００２７】
更なる特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣ ＥＸ９０の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部由来のプロトプラスト又は細胞から生産される組織培養を含み、前記組織培養の細胞又はプロトプラストは、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや及び葉柄から成る群から選択される植物部位から生産される。
【００２８】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣ ＥＸ９０の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部由来のプロトプラスト又は細胞から生産される組織培養から再生されるタバコ植物を含み、前記組織培養の細胞又はプロトプラストは、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや及び葉柄から成る群から選択される植物部位から生産され、前記再生される植物は、同じ環境条件下で栽培されるとき、栽培品種ＮＣ ＥＸ９０の本質的に全ての形態学的及び生理学的特徴を有する。
【００２９】
別の特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を含む。
【００３０】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部を含む。
【００３１】
別の特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物の収穫された葉又はその一部を含む。
【００３２】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物の収穫された葉又はその一部を含み、前記葉は、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有する。
【００３３】
別の特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物の収穫された葉又はその一部を含み、前記葉は、同様の条件下で栽培されるとき、ＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有し、前記減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）は、前記葉の燃焼から生じる煙流において、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉の燃焼と比較して、減少される。
【００３４】
更なる特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を含み、前記製品は、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、及び刻みタバコから成る群から選択される。
【００３５】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を含み、前記製品は、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎタバコ及び噛みタバコから成る群から選択される。
【００３６】
別の特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を含み、前記製品は、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎタバコ、及び噛みタバコから成る群から選択され、前記製品は、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種から製造された製品と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有する。
【００３７】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物の一部を含み、前記一部は、葉、花粉、胚珠、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、プロトプラスト、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや及び葉柄から成る群から選択される。
【００３８】
別の特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部由来のプロトプラスト又は細胞から生産される組織培養を含み、前記組織培養の細胞又はプロトプラストは、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや及び葉柄から成る群から選択される植物部位から生産される。
【００３９】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部由来のプロトプラスト又は細胞から生産される組織培養から再生されるタバコ植物を含み、前記組織培養の細胞又はプロトプラストは、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや及び葉柄から成る群から選択される植物部位から生産され、前記植物は、同じ環境条件下で栽培されるとき、栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳの本質的に全ての形態学的及び生理学的特徴を有する。
【００４０】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）のＦ1後代植物を含む。
【００４１】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）のＦ1後代植物を含む。
【００４２】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣ ＥＸ９０のＦ1後代植物を含む。
【００４３】
別の特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）のＦ1後代植物を含み、前記Ｆ1植物は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である。
【００４４】
別の特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む、タバコ種子を生産する方法を含み、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物である。
【００４５】
別の特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む、タバコ種子を生産する方法を含み、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物であり、前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆの植物は、雌親である。
【００４６】
別の特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む、タバコ種子を生産する方法を含み、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物であり、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である。
【００４７】
別の特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産されるＦ1後代種子を含み、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物であり、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である。
【００４８】
ある特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産される、Ｆ1後代種子のコンテナを含み、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物であり、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である。
【００４９】
ある特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産される種子を栽培することによって生産される、Ｆ1後代植物を含み、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物であり、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である。
【００５０】
ある特徴において、本発明はまた、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産される種子を栽培することによって生産される、Ｆ1後代植物の収穫された葉を含み、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物であり、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である。
【００５１】
別の特徴において、本発明は、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有し、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産される種子を栽培することによって生産される、Ｆ1後代植物の収穫された葉を更に含み、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物であり、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である。
【００５２】
ある特徴において、本発明はまた、Ｆ1後代植物の収穫された葉を含み、前記収穫された葉は、葉の燃焼から生じる煙流において、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉の燃焼と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）を有し、前記植物は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産される種子を栽培することによって生産され、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物であり、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である。
【００５３】
ある特徴において、本発明は、Ｆ1後代タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を含み、前記植物又はその一部は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産されるＦ1後代種子を栽培することによって生産され、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産され、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔であり、前記タバコ製品は、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、及び刻みタバコから成る群から選択される。
【００５４】
ある特徴において、本発明は、Ｆ1後代タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を更に含み、前記植物又はその一部は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産されるＦ1後代種子を栽培することによって生産され、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産され、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔であり、前記タバコ製品は、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎタバコ、及び噛みタバコから成る群から選択される。
【００５５】
ある特徴において、本発明は、Ｆ1後代タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を更に含み、前記植物又はその一部は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産されるＦ1後代種子を栽培することによって生産され、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産され、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔であり、前記タバコ製品は、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎタバコ、及び噛みタバコから成る群から選択され、更に前記製品は、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種から製造される製品と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有する。
【００５６】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の後代植物を含む。
【００５７】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）の後代植物を含む。
【００５８】
ある特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣ ＥＸ９０の後代植物を含む。
【００５９】
別の特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の後代植物を含み、前記後代植物は、細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である。
【００６０】
別の特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む、タバコ種子を生産する方法を含み、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物である。
【００６１】
別の特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む、タバコ種子を生産する方法を含み、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物であり、前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆの植物は雌親である。
【００６２】
別の特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む、タバコ種子を生産する方法を含み、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物であり、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である。
【００６３】
別の特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産される後代種子を含み、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物であり、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である。
【００６４】
ある特徴において、本発明はまた、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産される後代種子のコンテナを含み、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物であり、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である。
【００６５】
ある特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産される種子を栽培することによって生産される後代植物を含み、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物であり、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である。
【００６６】
ある特徴において、本発明はまた、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産される種子を栽培することによって生産される後代植物の収穫された葉を含み、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物であり、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である。
【００６７】
別の特徴において、本発明は、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有し、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産される種子を栽培することによって生産される、後代植物の収穫された葉を更に含み、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物であり、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である。
【００６８】
ある特徴において、本発明はまた、後代植物の収穫された葉を含み、前記収穫された葉は、葉の燃焼から生じる煙流において、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種由来の葉の燃焼と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）を有し、前記植物は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産される種子を栽培することによって生産され、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物であり、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である。
【００６９】
ある特徴において、本発明は、後代タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を含み、前記植物又はその一部は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産される後代種子を栽培することによって生産され、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産され、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔であり、前記タバコ製品は、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、及び刻みタバコから成る群から選択される。
【００７０】
ある特徴において、本発明は、後代タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を更に含み、前記植物又はその一部は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産される後代種子を栽培することによって生産され、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産され、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔であり、前記タバコ製品は、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎタバコ及び噛みタバコから成る群から選択される。
【００７１】
ある特徴において、本発明は、後代タバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品を更に含み、前記植物又はその一部は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む方法によって生産される後代種子を栽培することによって生産され、少なくとも一種のタバコ植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産され、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔であり、前記タバコ製品は、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎタバコ、及び噛みタバコから成る群から選択され、更に前記製品は、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種から製造される製品と比較して、減少した量のノルニコチン及び／又はＮ’−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）及び／又はより安定して低いニコチン転換を有する。
【００７２】
ある特徴において、本発明は、二種のタバコ植物を交配する工程、及び結果として生じるタバコ種子を収穫する工程を含む、タバコ種子を生産する方法を含み、少なくとも一種のタバコ植物は細胞質雄性不稔であり、前記細胞質雄性不稔植物は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）の植物である。
【００７３】
ある特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物由来の繁殖することができる組織を培養して繁殖苗条（proliferated shoot）を得る工程、並びに（ｂ）前記繁殖苗条を根付かせて、根付いた小植物を得る工程、を含む、タバコ栽培品種の植物を無性的に（vegetatively）繁殖させる方法を含む。
【００７４】
ある特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物由来の繁殖することができる組織を培養して繁殖苗条を得る工程、（ｂ）前記繁殖苗条を根付かせて、根付いた小植物を得る工程、並びに（ｃ）前記根付いた小植物由来の植物を栽培する工程、を含む、タバコ栽培品種の植物を無性的に繁殖させる方法を含む。
【００７５】
ある特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、所望の形質を含む第二のタバコ植物と交配してＦ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子を栽培し、前記所望の形質を含むＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配Ｆ2後代種子を生産する工程、（ｄ）前記Ｆ2後代種子を栽培し、前記所望の形質を含む戻し交配Ｆ2後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して３回以上繰り返して、前記所望の形質及び同じ環境条件下で栽培されるとき、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴を含む、選択された第４代以降（fourth or higher）の戻し交配後代を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法を含む。
【００７６】
ある特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、所望の形質を含む第二のタバコ植物と交配してＦ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子を栽培し、前記所望の形質を含むＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配Ｆ2後代種子を生産する工程、（ｄ）前記Ｆ2後代種子を栽培し、前記所望の形質を含む戻し交配Ｆ2後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して３回以上繰り返して、前記所望の形質及び同じ環境条件下で栽培されるとき、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴を含む、選択された第４代以降の戻し交配後代を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法を含み、前記形質は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である。
【００７７】
ある特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、所望の形質を含む第二のタバコ植物と交配してＦ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子を栽培し、前記所望の形質を含むＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配Ｆ2後代種子を生産する工程、（ｄ）前記Ｆ2後代種子を栽培し、前記所望の形質を含む戻し交配Ｆ2後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して３回以上繰り返して、同じ環境条件下で栽培されるとき、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての形態学的及び生理学的特徴、及び前記所望の形質を含む、選択された第４代以降の戻し交配後代を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法を含み、前記形質は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）であり、前記ＣＭＳ形質はニコチアナ・スアベオレンス（Nicotiana suaveolens）の細胞質から得られる。
【００７８】
ある特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、所望の形質を含む第二のタバコ植物と交配してＦ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子を栽培し、前記所望の形質を含むＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配Ｆ2後代種子を生産する工程、（ｄ）前記Ｆ2後代種子を栽培し、前記所望の形質を含む戻し交配Ｆ2後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して３回以上繰り返して、同じ環境条件下で栽培されるとき、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴、及び前記所望の形質を含む、選択された第４代以降の戻し交配後代を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法を含み、前記形質は細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）であり、前記ＣＭＳ形質はニコチアナ・スアベオレンスの細胞質から得られ、前記第二のタバコ植物はＴＮ ９０ ＬＣ ＣＭＳである。
【００７９】
ある特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、所望の形質を含む第二のタバコ植物と交配してＦ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子を栽培し、前記所望の形質を含むＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配Ｆ2後代種子を得る工程、（ｄ）前記Ｆ2後代種子を栽培し、前記所望の形質を含む戻し交配Ｆ2後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して３回以上繰り返して、前記所望の形質及び同じ環境条件下で栽培されるとき、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴を含む、選択された第４代以降の戻し交配後代を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する工程を含む方法によって生産されるタバコ植物を含む。
【００８０】
別の特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、後代植物を生産するために所望の形質を含む別のタバコ栽培品種の植物と交配し、前記所望の形質が、除草剤抵抗性、害虫抵抗性、耐病性、高収率、高グレード指数（high grade index）、治癒可能性、乾燥品質、機械的収穫可能性（harvestability）、保持能力、葉の品質、高さ、植物成熟、早期成熟、早期〜中間の成熟、中間の成熟、中間〜遅い成熟、遅い成熟、小さい茎、中間の茎、大きい茎、植物あたりの葉の数、植物あたり５〜１０の葉、植物あたり１１〜１５の葉、植物あたり１６〜２１の葉、及びそれらのあらゆる組み合わせから成る群から選択される、Ｆ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子をＦ1後代植物に栽培し、前記所望の形質を有するＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配Ｆ２後代植物種子を生産する工程、（ｄ）前記戻し交配Ｆ２後代植物種子を戻し交配Ｆ２後代植物に栽培し、前記所望の形質を含むＦ２戻し交配後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して１回以上繰り返して、前記所望の形質及び同じ環境条件下で栽培されるとき、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての形態学的及び生理学的特徴を含む、選択された第４代以降の戻し交配後代植物を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法を含む。
【００８１】
別の特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、後代植物を生産するために所望の形質を含む別のタバコ栽培品種の植物と交配し、前記所望の形質が、除草剤抵抗性、害虫抵抗性、耐病性、高収率、高グレード指数、治癒可能性、乾燥品質、機械的収穫可能性、保持能力、葉の品質、高さ、植物成熟、早期成熟、早期〜中間の成熟、中間の成熟、中間〜遅い成熟、遅い成熟、小さい茎、中間の茎、大きい茎、植物あたりの葉の数、植物あたり５〜１０の葉、植物あたり１１〜１５の葉、植物あたり１６〜２１の葉、及びそれらのあらゆる組み合わせから成る群から選択される、Ｆ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子をＦ1後代植物に栽培し、前記所望の形質を有するＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配後代植物種子を生産する工程、（ｄ）前記戻し交配後代植物種子を戻し交配後代植物に栽培し、前記所望の形質を含む戻し交配後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して１回以上繰り返して、前記所望の形質及び同じ環境条件下で栽培されるとき、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴を含む、選択された第４代以降の戻し交配後代植物を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法を含む。
【００８２】
別の特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、後代植物を生産するために所望の形質を含む別のタバコ栽培品種の植物と交配し、前記所望の形質が、除草剤抵抗性、害虫抵抗性、耐病性、高収率、高グレード指数、治癒可能性、乾燥品質、機械的収穫可能性、保持能力、葉の品質、高さ、植物成熟、早期成熟、早期〜中間の成熟、中間の成熟、中間〜遅い成熟、遅い成熟、小さい茎、中間の茎、大きい茎、植物あたりの葉の数、植物あたり５〜１０の葉、植物あたり１１〜１５の葉、植物あたり１６〜２１の葉、及びそれらのあらゆる組み合わせから成る群から選択される、Ｆ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子をＦ1後代植物に栽培し、前記所望の形質を含むＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配後代植物種子を生産する工程、（ｄ）前記戻し交配後代植物種子を戻し交配後代植物に栽培し、前記所望の形質及び同じ環境条件下で栽培されるとき、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴を含む、戻し交配後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して１回以上繰り返して、前記所望の形質及び同じ環境条件下で栽培されるとき、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴を含む、選択された第４代以降の戻し交配後代植物を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法を含み、前記植物は耐病性の所望の形質を有する。
【００８３】
別の特徴において、本発明は、以下の工程、配列番号１又は配列番号２に示されるヌクレオチド配列を有する第一のタバコ植物を識別する工程、前記第一のタバコ植物を第二のタバコ植物と交配し、Ｆ1種子を回収する工程、前記Ｆ1種子から栽培された植物を自殖（selfing）し又は前記Ｆ1種子から栽培された植物を第三のタバコ植物に交配してＦ2種子を得る工程、及び配列番号１又は配列番号２に示されるヌクレオチド配列に関してホモ接合である前記Ｆ2種子から栽培されたタバコ植物を識別する工程、を含み、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種と比較して、減少した及びより安定なニコチン転換を有するタバコ植物を生産する方法を含む。
【００８４】
ある特徴において、本発明は、以下の工程、配列番号１又は配列番号２に示されるヌクレオチド配列を有する第一のタバコ植物を識別する工程、前記第一のタバコ植物を第二のタバコ植物と交配し、Ｆ1種子を回収する工程、前記Ｆ1種子から栽培された植物を自殖し又は前記Ｆ1種子から栽培された植物を第三のタバコ植物に交配してＦ2種子を得る工程、及び配列番号１又は配列番号２に示されるヌクレオチド配列に関してホモ接合である前記Ｆ2種子から栽培されたタバコ植物を識別する工程、を含み、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種と比較して、減少した及びより安定なニコチン転換を有するタバコ植物を生産する方法を含み、前記第二のタバコ植物は、配列番号１又は配列番号２に示されるヌクレオチド配列を有する。
【００８５】
ある特徴において、本発明は、以下の工程、配列番号１又は配列番号２に示されるヌクレオチド配列を有する第一のタバコ植物を識別する工程、前記第一のタバコ植物を第二のタバコ植物と交配し、Ｆ1種子を回収する工程、前記Ｆ1種子から栽培された植物を自殖し又は前記Ｆ1種子から栽培された植物を第三のタバコ植物に交配してＦ2種子を得る工程、及び配列番号１又は配列番号２に示されるヌクレオチド配列に関してホモ接合である前記Ｆ2種子から栽培されたタバコ植物を識別する工程、を含み、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種と比較して、減少した及びより安定なニコチン転換を有するタバコ植物を生産する方法を含み、前記第二のタバコ植物は、配列番号１又は配列番号２に示されるヌクレオチド配列を有さず、前記第三のタバコ植物は、配列番号１又は配列番号２に示されるヌクレオチド配列を有するタバコ植物である。
【００８６】
ある特徴において、本発明は、以下の工程、配列番号１又は配列番号２に示されるヌクレオチド配列を有する第一のタバコ植物を識別する工程、前記第一のタバコ植物を第二のタバコ植物と交配し、Ｆ1種子を回収する工程、前記Ｆ1種子から栽培された植物を自殖し又は前記Ｆ1種子から栽培された植物を第三のタバコ植物に交配してＦ2種子を得る工程、及び配列番号１又は配列番号２に示されるヌクレオチド配列に関してホモ接合である前記Ｆ2種子から栽培されたタバコ植物を識別する工程、を含み、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種と比較して、減少した及びより安定なニコチン転換を有するタバコ植物を生産する方法を含み、前記第三のタバコ植物は、配列番号１及び配列番号２に示されるヌクレオチド配列を有するタバコ植物である。
【００８７】
ある特徴において、本発明は、以下の工程、配列番号１又は配列番号２に示されるヌクレオチド配列を有する第一のタバコ植物を識別する工程、前記第一のタバコ植物を第二のタバコ植物と交配し、Ｆ1種子を回収する工程、前記Ｆ1種子から栽培された植物を自殖し又は前記Ｆ1種子から栽培された植物を第三のタバコ植物に交配してＦ2種子を得る工程、及び配列番号１又は配列番号２に示されるヌクレオチド配列に関してホモ接合である前記Ｆ2種子から栽培されたタバコ植物を識別する工程、を含み、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種と比較して、減少した及びより安定なニコチン転換を有するタバコ植物を生産する方法を含み、前記第一のタバコ植物は、ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物である。
【００８８】
ある特徴において、本発明は、以下の工程、配列番号１又は配列番号２に示されるヌクレオチド配列を有する第一のタバコ植物を識別する工程、前記第一のタバコ植物を第二のタバコ植物と交配し、Ｆ1種子を回収する工程、前記Ｆ1種子から栽培された植物を自殖し又は前記Ｆ1種子から栽培された植物を第三のタバコ植物に交配してＦ2種子を得る工程、及び配列番号１又は配列番号２に示されるヌクレオチド配列に関してホモ接合である前記Ｆ2種子から栽培されるタバコ植物を識別する工程、を含み、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種と比較して、減少した及びより安定なニコチン転換を有するタバコ植物を生産する方法を含み、前記第三のタバコ植物は、ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物である。
【００８９】
別の特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）所望の形質を与える導入遺伝子を、ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物由来の繁殖することができる組織に導入する工程、を含む、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択され、更なる所望の形質を有するタバコ栽培品種の植物を生産する方法を含む。
【００９０】
別の特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物又はその一部を、導入遺伝子を用いて形質転換する工程を含む、除草剤抵抗性タバコ植物を生産する方法を含み、前記導入遺伝子は、除草剤に対する抵抗性を与える。いくつかの非制限的な例において、除草剤は、イミダゾリノン、シクロヘキサンジオン、スルホニル尿素、グリホサート、グルホシネート、フェノキシプロピオン酸、Ｌ−ホスフィノトリシン、トリアジン及びベンゾニトリルから成る群から選択される。
【００９１】
別の特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物又はその一部を、導入遺伝子を用いて形質転換する工程を含む方法によって生産される除草剤抵抗性タバコ植物を含み、前記導入遺伝子は、イミダゾリノン、シクロヘキサンジオン、スルホニル尿素、グリホサート、グルホシネート、フェノキシプロピオン酸、Ｌ−ホスフィノトリシン、トリアジン及びベンゾニトリルから成る群から選択される除草剤に対する抵抗性を与える。
【００９２】
別の特徴において、本発明は、害虫又は昆虫抵抗性タバコ植物を生産する方法を含み、前記方法は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物を、害虫又は昆虫抵抗性を与える導入遺伝子を用いて形質転換する工程を含む。
【００９３】
更なる特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物を、害虫又は昆虫抵抗性を与える導入遺伝子を用いて形質転換する工程を含む方法によって生産される害虫又は昆虫抵抗性タバコ植物を含む。
【００９４】
更なる特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物を、害虫又は昆虫抵抗性を与える導入遺伝子を用いて形質転換する工程を含む方法によって生産される害虫又は昆虫抵抗性タバコ植物を含む。いくつかの特徴において、前記導入遺伝子は、バチルススリンギエンシス（Bacillus thuringiensis）（ＢＴ）内毒素をコードする。
【００９５】
別の特徴において、本発明は、耐病性タバコ植物を生産する方法を含み、前記方法は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物を、耐病性を与える導入遺伝子を用いて形質転換する工程を含む。
【００９６】
更なる特徴において、本発明は、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物を、耐病性を与える導入遺伝子を用いて形質転換する工程を含む方法によって生産される耐病性タバコ植物を含む。
【００９７】
配列の簡単な説明
配列番号１は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐヌクレオチド配列を示す。
配列番号２は、ｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐヌクレオチド配列を示す。
配列番号３は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐアミノ酸配列を示す。
配列番号４は、ｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐアミノ酸配列を示す。
配列番号５は、ＣＹＰ８２Ｅ４野生型ヌクレオチド配列を示す。
配列番号６は、ＣＹＰ８２Ｅ５ｖ２野生型ヌクレオチド配列を示す。
配列番号７は、ＣＹＰ８２Ｅ４野生型アミノ酸配列を示す。
配列番号８は、ＣＹＰ８２Ｅ５ｖ２野生型アミノ酸配列を示す。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】図１は、ＴＮ ９０ ＬＣ認定植物及びＮＣ ＥＸ９０（”ＴＮ ９０ ＲＣ”）植物を示す。
【図２】図２は、本発明の塩基配列及びアミノ酸配列を示す。図２Ａ及び２Ｂはそれぞれ、ＴＮ ９０ ＬＣ及びＮＣＢＥＸ１ＭＳの５０の植物についてのニコチン転換の割合を示す。
【発明を実施するための形態】
【００９９】
本発明は、その中で発明の好ましい態様が示される添付の図面及び明細書を参照して、以下により十分に記載される。しかしながら、本発明は、異なる形態で具体化されてもよく、本願に示される態様に限定されると解釈されるべきでない。
別な方法で定義しない限り、本願において使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。発明の説明において本願に用いられる専門用語は、特定の態様のみを説明する目的のためであり、発明の限定であることを意図されていない。
本願に引用される全ての刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献は、参照によりその全体が、参照が存在する文及び／又は段落に関連する教示のために、組み込まれる。
【０１００】
発明の説明及び添付される特許請求の範囲において使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が明確に別な方法で示さない限り、複数形をも含むことが意図されている。
また、本願に使用されるように、「及び／又は」は、一つ以上の関連する列挙された項目のあらゆる及び全ての可能な組み合わせに加えて、択一的に（「又は」）解釈されるときは、組み合わせの欠如も言及し、且つ、包含する。
用語「約」は、化合物の量（例えば、ノルニコチンの量）等のような測定可能な値に言及するときに本願に使用されるように、特定される量の±２０％、±１０％、±５％、±１％、±０．５％、又は±０．１％の変動さえも包含することを意味される。
【０１０１】
ＮＣ ＥＸ９０
本発明は、ＮＣ ＥＸ９０由来のタバコ栽培品種及びその一部を含む。別の特徴において、本発明は、ＮＣ ＥＸ９０の種子を栽培することによって生産されるタバコ植物又はその一部を含む。本発明の植物は、同じ環境条件下で栽培されるとき、栽培品種ＮＣ ＥＸ９０の本質的に全ての形態学的及び生理学的特徴を有する植物を含み得る。
【０１０２】
方法によって制限されないが、ＮＣ ＥＸ９０は、テネシー９０ローコンバータ（Tennessee 90 Low Converter）（「ＴＮ ９０ ＬＣ」）への二つの変異ＣＹＰ８２遺伝子の導入の結果である。二つの遺伝子は、ルイスら（Three nicotine demethylase genes mediate nornicotine biosynthesis in Nicotiana tabacum L.: Functional characterization of the CYP82E10 gene, Phytochemistry 71 (2010) 1988-1998 (ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐを示す配列番号１、これにより参照によりその全体が組み込まれる)）に３２５−６＃７７５として挙げられている変異ＣＹＰ８２Ｅ４遺伝子、及びルイスら（上記（supra））に３２５−６＃１−１３として挙げられている変異ＣＹＰ８２Ｅ５ｖ２（ｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐを示す配列番号２、全ての文献が、参照によりその全体が本願に組み込まれる）である。これらの変異は共に、切断されたタンパク質を結果として生じる。ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐは、ルイスら（上記）の表２に挙げられるような、強コンバータ（strong converter）バーレイバックグランド（background）ＤＨ９８−３２５−６系統におけるｅ４ｅ５｜ｅ４ｅ５二重変異体からＴＮ ９０ ＬＣバックグランドに導入される。
【０１０３】
ＮＣ ＥＸ９０は、ＴＮ ９０ ＬＣを反復親として５回戻し交配し、２回自殖することによって産生される。ＮＣ ＥＸ９０は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐの両方についてホモ接合である。再び、いかなる特定の科学的理論によっても制限されないが、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐは、劣性である。ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐは、ニコチン又はノルニコチンを転換する減少した又は除去された能力を有するタンパク質をコードする。ＮＥ  ＥＸ９０は、ＴＮ ９０ ＬＣと少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同様である遺伝的バックグランドを有する。ＮＣ ＥＸ９０は低いＮＮＮを示し、高ＮＮＮ’ｓへの転換を受けない（図１参照）。
【０１０４】
ＮＣＢＥＸ１ＭＳ
本発明はまた、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ由来のタバコ栽培品種及びその一部を提供し、この栽培品種の典型的なサンプル種子は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている。本発明はまた、ＮＣＢＥＸ１ＭＳの種子を栽培することによって生産されるタバコ植物又はその一部を含む。本発明の植物は、同じ環境条件下で栽培されるとき、栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳの本質的に全ての形態学的及び生理学的特徴を有する植物を含み得る。方法によって制限されないが、ＮＣＢＥＸ１ＭＳは、雄親としてＮＣ ＥＸ９０ ＢＣ5Ｆ1をＴＮ ９０ ＬＣ ＣＭＳと交配してＣＭＳ Ｆ1後代植物を作成することによる、ＮＣ ＥＸ９０ ＢＣ5Ｆ1由来のｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異のＴＮ ９０ ＬＣ細胞質雄性不稔（「ＣＭＳ」）植物への導入の結果である。
【０１０５】
ＢＣ5Ｆ1×ＴＮ ９０ ＬＣ ＣＭＳ交配のＣＭＳ Ｆ1後代植物は、雄性不稔である。複数のＢＣ5Ｆ1×ＴＮ ９０ ＬＣ ＣＭＳ Ｆ1植物（例えば、ＣＭＳ Ｆ1後代植物）は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異について選別され、雌親としてＮＣ ＥＸ９０と交配されてＢＣ7Ｆ1 ＣＭＳ後代が作成される。ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異についてホモ接合であるＢＣ7Ｆ1 ＣＭＳ後代は、遺伝子型判定によって識別され、ＮＣＢＥＸ１ＭＳと呼ばれる。ＮＣＢＥＸ１ＭＳは、ＴＮ ９０ ＬＣと少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同様である遺伝的バックグランドを有する。ＮＣＢＥＸ１ＭＳは低いＮＮＮを示し、高ＮＮＮ’ｓへの転換を受けない。
【０１０６】
ＮＣＢＥＸ１Ｆ
本発明はまた、ＮＣＢＥＸ１Ｆ由来のタバコ栽培品種及びその一部を提供し、この栽培品種の典型的なサンプル種子は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている。本発明はまた、ＮＣＢＥＸ１Ｆの種子を栽培することによって生産されるタバコ植物又はその一部を含む。本発明の植物は、同じ環境条件下で栽培されるとき、栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆの本質的に全ての形態学的及び生理学的特徴を有する植物を更に含み得る。ＮＣＢＥＸ１Ｆは、反復親としてＴＮ ９０ ＬＣを用いる７回の戻し交配、続いてｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異のホモ接合についての選別と共に２回の自殖でＢＣ7Ｆ3植物を産する結果である。ＮＣＢＥＸ１Ｆは、ＴＮ ９０ ＬＣと少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同様である遺伝的バックグランドを有する。ＮＣＢＥＸ１Ｆは低いＮＮＮを示し、高ＮＮＮ’ｓへの転換を受けない。
【０１０７】
他の植物
本出願の後代植物は、二種の親植物の交配又は一種の植物の自殖のいずれかによって得られる、Ｆ1、Ｆ2、Ｆ3、Ｆ4以降の世代の植物であり得る。
本出願において定義される同様の条件下とは、同様の環境条件下又は同様の実験室条件下であり得る。
【０１０８】
本発明は、二種の親タバコ植物を交配し、結果として生じるタバコ種子を収穫することによって生産されるタバコ種子を含み、少なくとも一種の親タバコ植物はＮＣＢＥＸ１Ｆである。ある特徴において、ＮＣＢＥＸ１Ｆは、雄親植物である。別の特徴において、ＮＣＢＥＸ１ＭＳは、雌親植物である。本発明の一つの特徴は、それぞれ配列番号１及び配列番号２のｃｙｐ８２ｅ４及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２座位の両方でホモ接合であり、ＴＮ ９０又はＴＮ ９０ ＬＣと７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％超の遺伝的バックグランドを共有する、タバコ植物を提供する。一つの特徴において、５０％、７５％、又は１００％に近いまたはそれを超える後代の遺伝的特質は、配列番号１及び配列番号２のｃｙｐ８２ｅ４及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２座位の両方でホモ接合である本発明の植物によって提供される。一つの特徴において、本発明の植物は、ＴＮ ９０ ＬＣと少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同様である遺伝的バックグランドを有する。別の特徴において、本発明の植物は、低いＮＮＮを示し、高ＮＮＮ’ｓへの転換を受けない。一つの特徴において、本発明の植物は、つる割病（Fusarium wilt）抵抗性である雌又は雄親植物の後代植物である。
【０１０９】
一つの特徴において、本発明の植物は、適度に高い収率可能性を有する、中間〜遅い成熟品種である。別の特徴において、本発明の植物は、広範囲の重要な農学的特性を提供する。更なる特徴において、本発明の植物は、タバコ疫病に対する適度な抵抗性、アオカビに対するいくらかの耐性、微粒菌核病抵抗性、及び一般のウイルス疾患に対する抵抗性を含む、一つ、二つ、三つ、四つ以上の形質を有する。別の特徴において、本発明の植物は、アオカビ耐性並びにタバコ疫病及び高根腐病抵抗性の両方の種に対するレベル４抵抗性を有する。一つの特徴において、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０のような本発明の植物は、つる割病抵抗性を欠く。別の特徴において、本発明の植物は、つる割病抵抗性である。
【０１１０】
ある特徴において、本発明の植物は、減少した又は排除された、ニコチンをノルニコチンに転換する能力を有する。ある特徴において、ニコチン転換率は、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種において見られるニコチン転換率の、約７５％、約７０％、約６０％、約５０％、又は約２５％未満である。ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０を含む本発明の植物におけるニコチン転換は、約４％、約３．５％、約３％、約２．５％、約２％、約１．５％、約１％未満、約３〜１％、約３〜０．５％、又は約２〜０．５％である。好ましい特徴において、ニコチン転換率は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐを有さないＴＮ ９０において見られるニコチン転換率の、約２５％、約１０％、約５％又は約２％未満である。ある特徴において、本発明のタバコ植物は、約３．５、約３．２５、約３．０又は約２．７５％以下のニコチン転換率を有する。別の特徴において、本発明のタバコ植物のニコチン転換率は、約４．０、３．９、３．８、３．７、３．６、３．５、３．４、３．３、３．２、３．１、３．０、２．９、２．８、２．７、２．６、２．５、２．４、２．３、２．２、２．１、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１．０、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５％以下であり得る。別の特徴において、本発明のタバコ植物のニコチン転換率は、約２．９、２．８、２．７、２．６、２．５、２．４、２．３、２．２、２．１、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１．０、０．９、０．８、０．７、０．６％以下であり得る。別の特徴において、ニコチン転換率は、約０．５〜０．９％、０．５〜１．５％、０．５〜２．０％、０．５〜２．５％、０．５〜２．７５％及び０．５〜３．０％であり得る。別の特徴において、ニコチン転換率は、約１．０〜１．５％、１．０〜１．７５％、１．０〜２．０％、１．０〜２．５％、１．０〜２．７５％及び１．０〜３．０％であり得る。別の特徴において、本発明の植物におけるニコチン転換率は、約２．９、２．７５、２．５、２．２５、２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１又は１．０％未満であってもよい。ある特徴において、本発明のタバコ植物は、３．５、３．２５、３．０又は２．７５％以下のニコチン転換率を有する。
【０１１１】
別の特徴において、本発明のタバコ植物は、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種と比較して、乾燥質量で約０．１０％未満の減少した量のノルニコチンを典型的に有する。例えば、そのような植物におけるノルニコチン含有量は、乾燥質量で約１．２、１．０、０．７、０．５、０．４、０．２、０．１、０．０９、０．０８５、０．０８、０．０７５、０．０７、０．０６５、０．０６、０．０５５、０．０５、０．０４５、０．０４、０．０３５、０．０２５、０．０１、０．００９、０．００７５、０．００５、０．００２５、０．００１、０．０００９、０．０００７５、０．０００５、０．０００２５、０．０００１％又は検出不能であり得る。別の特徴において、ノルニコチン含有量は、乾燥質量で約１．２、１．０、０．９、０．８、０．７、０．５、０．４、０．２、０．１、０．０７５、０．０５、０．０２５、０．０１、０．００９、０．００７５、０．００５、０．００２５、０．００１、０．０００９、０．０００７５、０．０００５、０．０００２５、０．０００１％未満であり得る。別の特徴において、そのような植物におけるノルニコチン含有量は、乾燥質量で約１．２〜１．０、０．７〜０．５、０．４〜０．２、０．１〜０．０７５、０．０５〜０．０２５、０．０１〜０．００７５、０．００５〜０．００２５、０．００１〜０．０００７５、０．０００５〜０．０００２５、又は０．０００５〜０．０００１％であり得る。本発明の植物において、ノルニコチンは、ＴＮ ９０ ＬＣの市販のシードロット（seedlot）と比較して、植物中の総アルカロイドの比較的小さな割合である。本発明の植物中のノルニコチンは、総アルカロイドの２〜１％、３％未満、約２％、約１．５％、約１％、又は０．７５％の割合であってもよい。
【０１１２】
同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種から製造される製品と比較して、減少した量のノルニコチン含有量及び／又はより安定して低いニコチン転換を有するタバコ製品は、本発明の植物及び植物部位由来のタバコ植物材料を使用して製造され得る。本発明のタバコ植物から生産されるタバコ製品は、約３ｍｇ／ｇ未満のノルニコチン量を有し得る。例えば、そのような製品中のノルニコチン含有量は、約３．０ｍｇ／ｇ、２．５ｍｇ／ｇ、２．０ｍｇ／ｇ、１．５ｍｇ／ｇ、１．０ｍｇ／ｇ、７５０μｇ／ｇ、５００ｐｇ／ｇ、２５０ｐｇ／ｇ、１００ｐｇ／ｇ、７５ｐｇ／ｇ、５０ｐｇ／ｇ、２５ｐｇ／ｇ、１０ｐｇ／ｇ、７．０ｐｇ／ｇ、５．０ｐｇ／ｇ、４．０ｐｇ／ｇ、２．０ｐｇ／ｇ、１．０ｐｇ／ｇ、０．５ｐｇ／ｇ、０．４ｐｇ／ｇ、０．２ｐｇ／ｇ、０．１ｐｇ／ｇ、０．０５ｐｇ／ｇ、０．０１ｐｇ／ｇ、又は検出不能であり得る。いくつかの特徴において、本発明のタバコ植物から製造されるタバコ製品は、約１０ｐｇ／ｇ未満のＮＮＮ量を有し得る。例えば、そのような製品中のＮＮＮ含有量は、約１０ｐｇ／ｇ、７．０ｐｇ／ｇ、５．０ｐｇ／ｇ、４．０ｐｇ／ｇ、２．０ｐｇ／ｇ、１．０ｐｇ／ｇ、０．５ｐｇ／ｇ、０．４ｐｇ／ｇ、０．２ｐｇ／ｇ、０．１ｐｇ／ｇ、０．０５ｐｇ／ｇ、０．０１ｐｇ／ｇ、又は検出不能であり得る。本発明の植物中の総アルカロイド含有量に対する第二級アルカロイドの割合は、ＴＮ ９０ ＬＣの市販のシードロットと統計的に異ならなくてもよい。
【０１１３】
二種の近交系タバコ品種又は二種のハイブリッドタバコ品種の間の相違は、統計学的アプローチを用いて評価され得る。統計学的分析は、平均値の計算、変動源の統計学的有意性の決定、及び適切な分散成分の計算を含む。統計学的有意性の決定方法は、当分野において周知である。統計学的ソフトウェアは利用可能であり、例えば、ＳＡＳのＰＲＯＣ ＧＬＭ機能である。有意性は、一般に、「ｐ値」として与えられる。統計学的に有意なｐ値は、０．１０未満である。好ましい特徴において、ｐ値は０．０５以下である。別の特徴において、ｐ値は、０．０４以下、０．０３以下、０．０２以下である。更に別の特徴において、統計学的に有意な値は、０．０１未満である。更に別の特徴において、統計学的に有意な値は、０．００９未満、０．００８未満、０．００７未満、０．００６未満、０．００５未満、０．００４未満、０．００３未満、０．００２未満、又は０．００１未満であり得る。
【０１１４】
ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ対立遺伝子についてホモ接合である本発明のタバコ植物は、野生型ニコチンデメチラーゼＣＹＰ８２Ｅ４及びＥ５遺伝子を有する相当する対照低コンバータ植物よりも、統計学的に有意に低い転換率を有する。更に、ホモ接合ＣＹＰ８２Ｅ４及びＣＹＰ８２Ｅ５二重変異タバコ植物は、約２．０％未満、例えば、検出不能〜約２．０％、約１．０〜２．０％、約０．８〜１．８％、約０．８〜２．０％、又は約１．０〜２．０％の、ノルニコチンへのニコチンの転換率を有する。
【０１１５】
ニコチン及びノルニコチンは、当分野において周知の方法（例えば、ガスクロマトグラフィー）を用いて、エチレン処理された葉において測定され得る。試料中のニコチン脱メチル化率は、試料中に測定されるニコチン及びノルニコチンの合わせたレベルでノルニコチンのレベルを割り、１００を掛けることによって計算される。本発明の植物由来の試料中のニコチン脱メチル化率は、ＴＮ ９０の市販のシードロットから栽培される個々の植物由来の試料の５０、４０、３０、２０、１０パーセントである。
【０１１６】
ある特徴において、本発明のタバコ植物は、約７３、約７２、約７１、約７０、約６９、約６８、約６７又は約６６のＵＳＤＡ品質指数を有する。ある特徴において、本発明のタバコ植物は、約６５のＵＳＤＡ品質指数を有する。別の特徴において、品質指数は、少なくとも約５５、６０、６２．５以上であってもよい。別の特徴において、本発明のタバコ植物は、約６０〜６５、約６０〜７０、約６２．５〜６５、約６２．５〜７０、又は６５〜７０の範囲の、又はその中のあらゆる範囲の品質指数を有する。
【０１１７】
ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、及びＮＣ ＥＸ９０を含む本発明の植物は、高い（例えば、３０００ｌｂｓ／Ａ超）、適度に高い（例えば、２２００〜３０００ｌｂｓ／Ａ）、及び適度な（例えば、２０００ｌｂｓ／Ａ未満）収率可能性を含む、あらゆる収率を有し得る。
【０１１８】
別の特徴において、本発明はまた、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、又はＮＣ ＥＸ９０植物の種子から栽培される植物に加え、そのような植物由来の植物部位及び組織培養を提供し（provide for）、その中で、前記種子から栽培されるタバコ植物から得られるアルカロイドは、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種と比較して、減少したノルニコチン及び／又はより安定して低いニコチン転換を有し、これらの栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣに寄託されており、例えば、ＮＣＢＥＸ１ＦについてはＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８、ＮＣＢＥＸ１ＭＳについてはＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９である。
【０１１９】
本発明の特徴は、栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０の一部を提供する。例えば、本願において用いられるように、植物部位は、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、根、根端、葯、花、胚珠、苗条、茎、柄（stalk）、髄及びさく果、葉柄、さや、栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及び／又はＮＣ ＥＸ９０の組織、カルス（callus）、細胞又はプロトプラストを含む組織培養を含むが、それらに制限されない。別の特徴において、本発明は、栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及び／又はＮＣ ＥＸ９０を親又は祖先として持つハイブリッド由来の一部、及びＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及び／又はＮＣ ＥＸ９０由来のタバコ植物を提供する。更に別の特徴において、本発明は、前述の植物及び組織培養の遺伝子組み換え（例えば、従来の育種又は遺伝子工学技術による）形態由来の一部を提供する。
【０１２０】
本発明の更なる特徴は、タバコを含む製品を提供し、前記タバコは更に本発明の植物及びその一部由来のタバコを含む。発明の他の特徴は、本発明の植物由来の、乾燥した植物の葉及び他の植物部位を提供する。従って、いくつかの特徴において、乾燥植物部位は、葉、花粉、胚珠、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、プロトプラスト、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや、葉柄、さく果等、及びそれらの組み合わせを含むが、それらに制限されない。
【０１２１】
従って、いくつかの特徴において、本発明は、ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）と呼ばれるタバコ植物の葉を含む乾燥タバコを提供する。別の特徴において、本発明は、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）と呼ばれるタバコ植物の葉を含む乾燥タバコを提供する。更に別の特徴において、本発明は、ＮＣ ＥＸ９０と呼ばれるタバコ植物の葉を含む乾燥タバコを提供する。
【０１２２】
ある特徴において、本発明は、本発明は、ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）と呼ばれるタバコ植物の茎を含む乾燥タバコを提供する。別の特徴において、本発明は、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）と呼ばれるタバコ植物の茎を含む乾燥タバコを提供する。更に別の特徴において、本発明は、ＮＣ ＥＸ９０と呼ばれるタバコ植物の茎を含む乾燥タバコを提供する。
【０１２３】
更に他の特徴において、本発明は、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及び／又はＮＣ ＥＸ９０と呼ばれるタバコ植物の葉及び茎を含む乾燥タバコを提供し、これらの栽培品種の典型的なサンプル種子は、ＮＣＢＥＸ１ＦについてはＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８、及びＮＣＢＥＸ１ＭＳについてはＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている。
【０１２４】
本発明はまた、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、若しくはＮＣ ＥＸ９０種子又は本発明の他の種子（例えば、ハイブリッド、近交系等）のコンテナを提供し、その中で、５０％超の種子から栽培されるタバコ植物から得られるアルカロイドは、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種と比較して、減少したノルニコチン及び／又はより安定して低いニコチン転換を有する。別の特徴において、前記コンテナ中５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％超の種子から栽培される、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、若しくはＮＣ ＥＸ９０植物又は本発明の他の植物から得られるアルカロイドは、同様の条件下で栽培されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種と比較して、減少したノルニコチン及び／又はより安定して低いニコチン転換を有し、栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ及びＮＣＢＥＸ１ＭＳの典型的なサンプル種子は、ＮＣＢＥＸ１ＦについてはＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８、及びＮＣＢＥＸ１ＭＳについてはＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている。
【０１２５】
ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、若しくはＮＣ ＥＸ９０種子又は本発明の他の種子のコンテナは、あらゆる数、質量又は体積の種子を含んでもよい。例えば、コンテナは、少なくとも、又はより多く、約１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００以上の種子を含み得る。あるいは、コンテナは、少なくとも、又はより多く、約２８ｇ(１オンス)、約１４２ｇ（５オンス）、約２８３ｇ（１０オンス）、約４５４ｇ（１ポンド）、約９０７ｇ（２ポンド）、約１３６１ｇ（３ポンド）、約１８１４ｇ（４ポンド）、約２２６８ｇ（５ポンド）以上の種子を含み得る。ＮＣＢＥＸ１Ｆ及びＮＣＢＥＸ１ＭＳ栽培品種の典型的なサンプル種子は、それぞれＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８及びＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている。
【０１２６】
ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、若しくはＮＣ ＥＸ９０種子又は本発明の他の種子のコンテナは、当分野において利用可能なあらゆるコンテナであってよい。非制限的な例の目的で、コンテナは、箱、袋、小包、小袋、テープロール（tape roll）、バケツ、ホイル、又は筒であってもよく、これらの栽培品種の典型的なサンプル種子は、ＡＴＣＣに寄託されている。ＮＣＢＥＸ１Ｆ及びＮＣＢＥＸ１ＭＳ栽培品種の典型的なサンプル種子は、それぞれＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８及びＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている。
【０１２７】
別の特徴において、本発明はまた、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、又はＮＣ ＥＸ９０種子のコンテナを提供し、その中で、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、若しくはＮＣ ＥＸ９０種子又は本発明の他の種子の５０％超は、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種と比較して、減少したノルニコチン及び／又はより安定して低いニコチン転換を有する。ＮＣＢＥＸ１Ｆ及びＮＣＢＥＸ１ＭＳ栽培品種の典型的なサンプル種子は、それぞれＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８及びＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている。
【０１２８】
一つの特徴において、本発明は、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、若しくはＮＣ ＥＸ９０植物又は本発明の他の植物の種子を提供し、前記種子から栽培される植物は、雄性不稔である。ＮＣＢＥＸ１Ｆ及びＮＣＢＥＸ１ＭＳ栽培品種の典型的なサンプル種子は、それぞれＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８及びＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている。
【０１２９】
本発明のタバコ栽培品種、系統、品種又はハイブリッドから得られる、制限無しにあらゆる植物部位、例えば、葉、中央脈、及び茎、を含むタバコ材料を使用して、制限なしに、シガレット製品（例えば、シガレット及び巻きタバコ）、シガー製品（例えば、シガー包装タバコ及びシガリロ）、パイプタバコ製品、無煙シガレット製品、無煙タバコ製品（例えば、湿式嗅ぎタバコ、乾式嗅ぎタバコ、及び噛みタバコ）、フィルム、噛めるもの（chewable）、タブ（tab）、形状部品（shaped part）、ゲル、消費単位（consumable unit）、不溶性マトリックス、中空形状（hollow shape）等を含むタバコ製品を製造し得る。例えば、参照によりその全体が本願に組み込まれる、米国特許公報ＵＳ２００６／０１９１５４８を参照されたい。
【０１３０】
本発明の植物由来のタバコ製品はまた、シガレット及び他の喫煙品、特にフィルタエレメントを含む喫煙品、を含み、喫煙可能な（smokeable）材料のロッドは、タバコブレンド内の乾燥タバコを含む。ある特徴において、タバコ製品は、パイプタバコ、シガータバコ、シガッレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ及び刻みタバコであってもよい。
【０１３１】
ある特徴において、本発明のタバコ製品は、混合タバコ製品であり得る。発明の他の特徴において、本発明のタバコ製品は、減少ニコチンタバコ製品であり得る。更に他の特徴において、本発明のタバコ製品は、減少したニコチン含有量を有する混合タバコ製品であり得る。従って、本発明のタバコ製品は、混合減少ニコチンタバコ製品であり得る。タバコ製品材料は、本発明由来のタバコ材料のブレンドを含み、前記ブレンドは、タバコ材料の乾燥質量に基づき、少なくとも約５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は９５質量％の乾燥タバコを含む。ＵＳ２００８／０２４５３７７は、ブレンド混合物に関する参照によりその全体が本願に組み込まれる。
【０１３２】
ある特徴において、減少した量のニトロソアミン含有量を有するタバコ製品は、本発明の植物及び／又は植物部位由来のタバコ植物材料を用いて製造され得る。タバコ製品は、典型的に、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種から製造される製品と比較して、約３ｍｇ／ｇ未満の減少した量のノルニコチンを有する。例えば、そのような製品中のノルニコチン含有量は、３．０ｍｇ／ｇ、２．５ｍｇ／ｇ、２．０ｍｇ／ｇ、１．５ｍｇ／ｇ、１．０ｍｇ／ｇ、７５０μｇ／ｇ、５００ｐｇ／ｇ、２５０ｐｇ／ｇ、１００ｐｇ／ｇ、７５ｐｇ／ｇ、５０ｐｇ／ｇ、２５ｐｇ／ｇ、１０ｐｇ／ｇ、７．０ｐｇ／ｇ、５．０ｐｇ／ｇ、４．０ｐｇ／ｇ、２．０ｐｇ／ｇ、１．０ｐｇ／ｇ、０．５ｐｇ／ｇ、０．４ｐｇ／ｇ、０．２ｐｇ／ｇ、０．１ｐｇ／ｇ、０．０５ｐｇ／ｇ、０．０１ｐｇ／ｇ、又は検出不能であり得る。本発明の植物又はその植物部位由来のタバコ材料を含むタバコ製品は、典型的に、同様の条件下で栽培及び加工されるＴＮ ９０ ＬＣ又は大部分の他の市販のバーレイタバコ栽培品種から製造される製品と比較して、約１０ｐｇ／ｇ未満の減少した量のＮＮＮを有する。例えば、そのような製品中のノルニコチン含有量は、約１０ｐｇ／ｇ、７．０ｐｇ／ｇ、５．０ｐｇ／ｇ、４．０ｐｇ／ｇ、２．０ｐｇ／ｇ、１．０ｐｇ／ｇ、０．５ｐｇ／ｇ、０．４ｐｇ／ｇ、０．２ｐｇ／ｇ、０．１ｐｇ／ｇ、０．０５ｐｇ／ｇ、０．０１ｐｇ／ｇ、又は検出不能であり得る。本発明の植物中に含まれる総アルカロイド含有量に対する第二級アルカロイドの割合は、ＴＮ ９０ ＬＣの市販のシードロットと統計学的に異ならなくてもよい。
【０１３３】
ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、又はＮＣ ＥＸ９０と呼ばれ、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ対立遺伝子を持つ本発明のタバコ植物を植物育種プログラムにおいて用いて、有用な系統、栽培品種、品種、後代、近交系、及び／又はハイブリッドを作り出し得る。従って、いくつかの特徴において、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ対立遺伝子を含むＦ1、Ｆ2、Ｆ3、以降の世代のタバコ植物は、第二のニコチアナ（Nicotiana）植物と交配され、その中にｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ対立遺伝子が存在する、前記交配の後代が識別される。第二のニコチアナ植物はＴＮ ９０又はＴＮ ９０ ＬＣであり、任意に、更なる所望の形質を有することが理解されるであろう。いくつかの特徴において、更なる所望の形質は、以下に述べる除草剤抵抗性であり得る。第二のＴＮ ９０又はＴＮ ９０ ＬＣニコチアナ植物は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ対立遺伝子を含み得ることもまた理解されるであろう。
【０１３４】
更に他の特徴において、本発明の方法は、自家受粉又は本発明の雄性不稔ハイブリッドのような本発明の後代植物の産生において使用され得る花粉ドナーを用いる、雄性不稔花粉アクセプターの受粉を更に含む。雄性不稔花粉アクセプター植物又は花粉ドナー植物のいずれかは、ニコチンデメチラーゼ座位に、少なくとも一つ、好ましくは二つの、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐのような変異対立遺伝子を有する。ある特徴において、それぞれのニコチンデメチラーゼ座位の両方の対立遺伝子は変異対立遺伝子であり、植物をｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐに関してホモ接合にする。
【０１３５】
育種は、あらゆる周知の手段を介して実施され得る。ＤＮＡフィンガープリント、ＳＮＰ又は同様の技術を、マーカー利用選択（ＭＡＳ）育種プログラムにおいて使用して、ニコチンデメチラーゼ遺伝子の変異対立遺伝子を他のタバコに移し又は掛け合わせ（breed）てもよい。例えば、育種家は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ対立遺伝子を含む遺伝子型の農学的に望ましい遺伝子型とのハイブリダイゼーションから、分離集団を作り出し得る。Ｆ2又は戻し交配世代における植物は、当分野において周知の技術又は本願に挙げられる技術の一つを用いて、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ若しくはｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ対立遺伝子又はそれらのフラグメントから開発されるマーカーを用いて選別され得る。ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ対立遺伝子を有するとして識別される植物を、戻し交配又は自家受粉して、選別される第二の集団を作り出し得る。予想される固有のパターン又は使用されるＭＡＳ技術に依存して、戻し交配のそれぞれのサイクルの前に選択された植物を自家受粉して、望ましい個々の植物の識別を補助することが必要であってもよい。戻し交配又は他の育種手段は、反復親の所望の表現型が回復されるまで繰り返されてもよい。本発明における反復親は、ＮＣＢＥＸ１Ｆ又はＮＣ ＥＸ９０であり得る。他の育種技術は、例えば、参照によりその全体が本願に組み込まれるWernsman, E. A., and Rufty, R. C. 1987. Chapter Seventeen. Tobacco. Pages 669-698 In: Cultivar Development. Crop Species. W. H. Fehr (ed.), MacMillan Publishing Go., Inc., New York, N.Y.中に見出され得る。
【０１３６】
ニコチアナ・タバカムとの育種適合性を示すニコチアナ種は、ニコチアナ・アンプレキシカウリス（Nicotiana amplexicaulis）、ＰＩ２７１９８９、ニコチアナ・ベンサミアナ（Nicotiana benthamiana）、ＰＩ５５５４７８、ニコチアナ・ビゲロビー（Nicotiana bigelovii）、ＰＩ５５５４８５、ニコチアナ・デブネイ（Nicotiana debneyi）、ニコチアナ・エクセルシオー（Nicotiana excelsior）、ＰＩ２２４０６３、ニコチアナ・グルチノサ（Nicotiana glutinosa）、ＰＩ５５５５０７、ニコチアナ・グッドスピーディー（Nicotiana goodspeedii）、ＰＩ２４１０１２、ニコチアナ・ゴッセイ（Nicotiana gossei）、ＰＩ２３０９５３、ニコチアナ・ヘスペリス（Nicotiana hesperis）、ＰＩ２７１９９１、ニコチアナ・ナイチアナ（Nicotiana knightiana）、ＰＩ５５５５２７、ニコチアナ・マリチマ（Nicotiana maritima）、ＰＩ５５５５３５、ニコチアナ・メガロシフォン（Nicotiana megalosiphon）、ＰＩ５５５５３６、ニコチアナ・ヌジカウリス（Nicotiana nudicaulis）、ＰＩ５５５５４０、ニコチアナ・パニキュラタ（Nicotiana paniculata）、ＰＩ５５５５４５、ニコチアナ・プラムバギニフォリア（Nicotiana plumbaginifolia）、ＰＩ５５５５４８、ニコチアナ・レパンダ（Nicotiana repanda）、ＰＩ５５５５５２、ニコチアナ・ルスチカ（Nicotiana rustica）、ニコチアナ・スアベオレンス、ＰＩ２３０９６０、ニコチアナ・シルベストリス（Nicotiana sylvestris）、ＰＩ５５５５６９、ニコチアナ・トメントサ（Nicotiana tomentosa）、ＰＩ２６６３７９、ニコチアナ・トメントシフォーミス（Nicotiana tomentosiformis）、及びニコチアナ・トリゴノフィラ（Nicotiana trigonophylla）、ＰＩ５５５５７２を含む。これにより参照によりその全体が組み込まれる、米国植物病理学会により刊行されているタバコ病の概論、又は日本たばこ産業株式会社により刊行されている図解ニコチアナ属も参照されたい。
【０１３７】
本願に記載されるタバコ植物を用いる植物育種プログラムの結果は、有用な系統、栽培品種、品種、後代、近交系、及びハイブリッドを含む。本願に使用されるように、用語「品種」は、同種の他の植物からそれらを分離する一定の特性を共有する植物の集団を言う。品種はしばしば、常にではないが、商業的に販売されている。一つ以上の特有の形質を有するが、品種は、その品種内の固体間のごく小さな全体的な変化によって更に特徴付けられる。「純系」品種は、自家受粉及び選択のいくつかの世代、又は組織又は細胞培養技術を用いる単一の親からの栄養繁殖によって作り出されてもよい。品種は、別の系統又は品種に本質的に由来し得る。植物の新品種の保護に関する国際会議によって定義されるように（１９６１年１２月２日、ジェノバで１９７２年１１月１０日、１９７８年１０月２３日、及び１９９１年３月１９日に改正）、ａ）それが主に最初の品種、又は最初の品種に主に由来する品種に由来し、最初の品種の遺伝子型又は遺伝子型の組み合わせから生じる本質的な特徴の発現は維持する場合、ｂ）それが最初の品種から明確に区別できる場合、及びｃ）誘導の作用から生じる相違を除いて、それが最初の品種の遺伝子型又は遺伝子型の組み合わせから生じる本質的な特徴の発現において最初の品種に一致する、場合に、品種は最初の品種に「本質的に由来」する。本質的に由来する品種は、例えば、天然の若しくは誘導された変異体、体細胞繁殖系変異体、最初の品種の植物由来の変異個体の選別、戻し交配、又は形質転換によって得られる。品種と区別される「系統」は、ほとんどの場合、非商業的に、例えば植物研究において、使用される植物の群を意味する。系統は、典型的に、対象の一つ以上の形質に関して個体間にほとんど全体的な多様性を表さないが、他の形質に関しては個体間にいくらかの多様性があってもよい。
【０１３８】
ハイブリッドタバコ品種は、第一の品種の雌親植物（すなわち、種親）の自家受粉を妨げ、第二の品種の雄親植物由来の花粉に雌親植物を受精させ、及びＦ1ハイブリッド種子を雌植物において形成させることによって産生され得る。雌植物の自家受粉は、花の発生の初期段階で花を去勢（emasculate）することによって妨げられ得る。あるいは、花粉形成は、雄性不稔の形態（form）を用いて雌親植物において妨げられ得る。例えば、雄性不稔は、細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）、又は形質転換雄性不稔によって生産され得、導入遺伝子は小胞子生成及び／又は花粉形成を阻害する、すなわち自家不和合性である。ＣＭＳを含む雌親植物は、特に有用である。雌親植物がＣＭＳである特徴において、花粉を雄稔性植物から収穫してＣＭＳ雌親植物の柱頭に手作業で適用し、結果として生じるＦ1種子を収穫してもよい。
【０１３９】
植物を使用して単交雑タバコＦ1ハイブリッドを形成し得る。そのような特徴において、親品種の植物を実質的に同種の隣接する集団として栽培し、雄親植物から雌親植物への天然の他家受粉を促進し得る。雌親植物において形成されるＦ1種子は、従来の方法によって選択的に収穫される。二種の親植物品種をバルクで栽培し、雌親において形成されるＦ1ハイブリッド種子及び自家受粉の結果として雄親において形成される種子のブレンドを収穫することもできる。あるいは、三系交雑を実施し得、単交雑Ｆ1ハイブリッドを雌親として用いて異なる雄親と交配し得る。別の方法として、二重交雑ハイブリッドが作り出され得、二種の異なる単交雑のＦ1後代は、交配されるそれ自体である。二重交雑ハイブリッドを形成するときに雌親の自家受粉を妨げる特別の利点のために、自家不和合性を使用し得る。
【０１４０】
いくつかの特徴において、成功した交配は、繁殖性であり、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ対立遺伝子を有し、必要に応じてＮＣＢＥＸ１Ｆ又はＮＣ ＥＸ９０のような親の一種を用いて戻し交配され得るＦ1植物を生じる。いくつかの特徴において、Ｆ2世代における植物集団は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ対立遺伝子について選別される。選択された植物を親の一種と交配し得、第一の戻し交配（ＢＣ１）世代植物を自家受粉して、変異ニコチンデメチラーゼ遺伝子発現（例えば、ニコチンデメチラーゼ遺伝子のヌルバージョン）について再び選別されるＢＣ１ Ｆ2集団を生産する。戻し交配、自家受粉、及び選別の工程は、最終的な選別が、繁殖性であり、反復親と適度に似ている植物を産生するまで、例えば、少なくとも４回繰り返される。必要に応じて、この植物を自家受粉し、続いて後代を再び選別して、前記植物がＮＣＢＥＸ１Ｆと同じ低く安定なニコチン転換表現系を示すことを確かめる。選択された植物の原原種は、例えば、野外試験、ニコチンデメチラーゼのヌル条件の確認、アルカロイドのレベルを決定するための乾燥葉の化学的分析及び／又はノルニコチンのニコチン＋ノルニコチンに対する比を決定するための乾燥葉の化学的分析を含む標準的な方法を用いて産生される。
【０１４１】
一つの特徴において、Ｆ1後代は、雄性不稔であるＦ1後代を生み出すための、ＮＣＢＥＸ１ＦとＮＣＢＥＸ１ＭＳとの間の交配の結果である。雄性不稔タバコ植物は、当分野において周知のいかなる方法によって産生されてもよい。雄性不稔タバコを産生する方法は、Wernsman, E. A., and Rufty, R. C. 1987. Chapter Seventeen. Tobacco. Pages 669-698 In: Cultivar Development. Crop Species. W. H. Fehr (ed.), MacMillan Publishing Go., Inc., New York, N.Y. 761 ppに記載されている。
【０１４２】
本発明は、栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及び／又はＮＣ ＥＸ９０の一種をそれ自体又は異なるタバコ系統と交配することによって、タバコ植物を生産する方法を更に提供する。発明は更に、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及び／又はＮＣ ＥＸ９０栽培品種の植物を第二のタバコ植物と交配し、後代種子を栽培してＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、又はＮＣ ＥＸ９０由来タバコ植物を産することによって、栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及び／又はＮＣ ＥＸ９０に由来する他のタバコ栽培品種又は育種系統を生産する方法に関する。本発明の更なる特徴は、本発明の栽培品種を一つ以上の導入遺伝子を含む第二のタバコ植物と交配して、任意に一つ以上の調節因子と作用可能に連結する前記導入遺伝子を含む後代を生産する工程を含む、一つ以上の導入遺伝子をその遺伝物質に含むタバコ植物を生産する方法を提供する。一つの特徴において、第二の栽培品種は、一つ以上の導入遺伝子を用いて形質転換された栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及び／又はＮＣ ＥＸ９０由来の植物であってもよい。
【０１４３】
発明は更に、栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及び／又はＮＣ ＥＸ９０、それらのハイブリッド及び後代の植物の栄養繁殖を提供する。一つの特徴において、発明は、栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及び／又はＮＣ ＥＸ９０の植物由来の繁殖することができる組織を培養して繁殖苗条を得る工程、及び前記繁殖苗条を根付かせて、根付いた小植物を得る工程、を含む、タバコ栽培品種の植物を無性的に繁殖する方法を提供する。別の特徴において、前記植物組織は、栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及び／又はＮＣ ＥＸ９０の植物のＦ1ハイブリッド由来であってもよい。ある特徴において、前記植物組織は、栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及び／又はＮＣ ＥＸ９０の植物を育種することによって得られるＦ2、Ｆ3、Ｆ4以降の後代植物由来であってもよい。
【０１４４】
ニコチンデメチラーゼ遺伝子に変異を含む植物は、変異誘発された植物物質、又はその後代を選択又は選別することによって識別され得る。そのような選別及び選択方法論は、当業者に周知である。選別及び選択方法論の例は、サザン解析、ポリヌクレオチドの検出のためのＰＣＲ増幅、ノーザンブロット、ＲＮａｓｅプロテクション、プライマー伸長、ＲＮＡ転写を検出するためのＲＴ−ＰＣＲ増幅、ポリペプチド及びポリヌクレオチドの酵素及びリボザイム活性を検出するための酵素分析、並びにポリペプチドを検出するためのタンパク質ゲル電気泳動、ウェスタンブロット、免疫沈降、及び酵素結合免疫測定を含むが、それらに制限されない。インサイツハイブリダイゼーション、酵素染色、及び免疫染色のような他の技術を使用して、ポリペプチド及び／又はポリヌクレオチドの存在又は発現を検出することもできる。全ての参照される技術を実施するための方法は、周知である。
【０１４５】
ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ及び／又はＮＣ ＥＸ９０を含む本発明のタバコ植物は、当分野において周知の技術を用いて遺伝子構築物又は導入遺伝子によって形質転換され得ることが理解される。制限無しに、所望の形質の例は、除草剤抵抗性、害虫抵抗性、耐病性、高収率、高グレード指数、治癒可能性、乾燥品質、機械的収穫可能性、保持能力、葉の品質、高さ、植物成熟（例えば、早期成熟、早期〜中間の成熟、中間の成熟、中間〜遅い成熟、又は遅い成熟）、茎のサイズ（例えば、小さい、中間の、又は大きい茎）、又は植物あたりの葉の数（例えば、小さい（例えば、５〜１０の葉）、中間の（例えば、１１〜１５の葉）、又は大きい（例えば、１６〜２１の葉）数の葉）、又はそれらのあらゆる組み合わせである。本発明のあらゆる植物は、組織培養のベースとして使用され、再生され、形質転換され、又はそれらのあらゆる組み合わせがなされ得る。ある特徴において、組織培養、形質転換、又は両方によって誘導される本発明の植物は、同様の条件下で栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ又はＮＣ ＥＸ９０の本質的に全ての形態学的及び生理学的特徴を有する。
【０１４６】
発明を一般的に記載してきたが、説明の目的で提供され、特定されない限り本発明の限定であることを意図されない以下の実施例の参照によって、発明はより容易に理解されるであろう。
【実施例１】
【０１４７】
ホモ接合ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異植物のＴＮ ９０ ＬＣバックグランドへの育種
ＮＣ ＥＸ９０は、ニコチンデメチラーゼ酵素をコードすると既に記述されている（ルイスら、上記）二つの遺伝子ｃｙｐ８２ｅ４及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２に導入された有害変異を持つ、バーレイタバコ栽培品種ＴＮ ９０ ＬＣの戻し交配由来バージョンである。ＮＣ ＥＸ９０を作成するために、ＴＮ ９０ ＬＣの市販のシードトロットから栽培された個々の植物を選択し、初めに温室内で植物ＧＨ０８Ｂ−１４と交配させる。ＧＨ０８Ｂ−１４は、ルイスら（２０１０）によって記載されるｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異についてヘテロ接合であるバーレイタバコ栽培品種である。複数のＦ1植物をｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異の存在について選別する。個々のＦ1植物を選択し、温室内でＴＮ ９０ ＬＣと戻し交配させて、ＢＣ1Ｆ1後代を生産する。複数のＢＣ1Ｆ1後代を選別し、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異についてヘテロ接合である個々の植物を識別する。ヘテロ接合の選択されたＢＣ1Ｆ1植物を温室内でＴＮ ９０ ＬＣと戻し交配させて、ＢＣ2Ｆ1種子を生産する。複数のＢＣ2Ｆ1植物をｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異の存在について選別し、その後の戻し交配育種のラウンドのためにヘテロ接合の後代植物を識別する。この戻し交配手順を用いて、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異を有する個々のヘテロ接合植物を、ＢＣ3Ｆ1、ＢＣ4Ｆ1、及びＢＣ5Ｆ1後代において識別する。
【０１４８】
ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異についてホモ接合の植物を生産するために、ＢＣ5Ｆ1後代植物をｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異について選別して、ヘテロ接合植物を識別する。ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異についてヘテロ接合の個々の植物を自家受粉させて、ＢＣ5Ｆ2種子を生産する。複数のＢＣ5Ｆ2後代を遺伝子型同定し、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異の両方についてホモ接合の個体を識別する。四つの個々のＢＣ5Ｆ2後代植物を自家受粉して、四つのＢＣ5Ｆ3後代系統を生産する。ＢＣ5Ｆ3は、ＣＹＰ８２Ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びＣＹＰ８２Ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異についてホモ接合である。
【０１４９】
所望の形質を有するＢＣ5Ｆ3後代系統の識別
四つのＢＣ5Ｆ3後代系統由来の植物を、乾燥葉化学、収率、及び物理的品質の評価のために３ヶ所のノースカロライナのフィールド研究場所で、２０１０年の間（Waynesville、Laurel Springs、及びReidsville）、３回の反復を有するランダム化された完備ブロック計画で栽培する。それぞれの反復されるブロックは、２０植物プロットである。植物は、成熟で切断された茎であり、空気乾燥され、以前のＵＳＤＡタバコグレーダ（grader）によって評価される。プロット質量を用いて、約４０４７ｍ2（１エーカー）当たりの収量を決定する。５０グラムの混成の葉のサンプルを、それぞれのプロットから回収し、ニコチン、ノルニコチン、アナタビン、及びアナバシンの割合についてガスクロマトグラフィーによって分析する。高い収量、高グレード及び所望のアルカロイド含有量を有するＢＣ5Ｆ3後代系統＃３を識別し、「ＮＣ ＥＸ９０」と名づける。
【０１５０】
ＮＣ ＥＸ９０の分析
ガスクロマトグラフィーアルカロイド分析の結果は、表１に示される。
１自由度ＣＯＮＳＴＲＡＳＴステートメントによる分析を、ＳＡＳのＰＲＯＣ ＧＬＭ機能を用いて行なう。この系統は、ＴＮ ９０ ＬＣの市販のシードロットと比較して、有意により低いレベルのノルニコチン（Ｐ＜０．０００１）及びニコチン転換（Ｐ＝０．０００２）を示す（表１）。総アルカロイドに対する第二級アルカロイドの比は、ＴＮ ９０ ＬＣに対してＮＣ ＥＸ９０について有意に低い（Ｐ＝０．００７１）。二つの系統は、ニコチン、アナタビン、アナバシン、収量、又は乾燥葉品質に関して有意には異ならない。
【０１５１】
【表１】
2014515596.tif 000003
【実施例２】
【０１５２】
近交系ＮＣＢＥＸ１Ｆの作成
近交系ＮＣＢＥＸ１Ｆを作成するため、上記実施例１において作成された個々のＢＣ5Ｆ1後代植物の、２回の追加のラウンドの戻し交配を行なった。複数のＢＣ5Ｆ1植物を、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異の存在について選別して、その後の戻し交配育種のラウンドのためにヘテロ接合の後代植物を識別する。この戻し交配手順を用いて、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異を有する個々のヘテロ接合植物を、ＢＣ6Ｆ1及びＢＣ7Ｆ1後代において識別する。
【０１５３】
ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異についてホモ接合の植物を生産するために、ＢＣ7Ｆ1後代植物をｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異について選別して、ヘテロ接合植物を識別する。ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異についてヘテロ接合の個々の植物を自家受粉させて、ＢＣ7Ｆ2種子を生産する。複数のＢＣ7Ｆ2後代を遺伝子同定し、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異の両方についてホモ接合の個体を識別する。個々のＢＣ7Ｆ2後代植物を自家受粉させて、個々のＢＣ7Ｆ3後代系統を生産する。ＮＣＢＥＸ１Ｆ後代系統は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異についてホモ接合である。
【実施例３】
【０１５４】
細胞質雄性不稔系統の作成
細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）系統を作成するため、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異についてヘテロ接合である、上記実施例１において記載されるように作成されたＢＣ5Ｆ1後代植物を選択し、ＴＮ ９０ ＬＣ ＣＭＳと呼ばれるノースカロライナ州立大学の所有する（proprietary）ＣＭＳ不稔系統に対して花粉親として交配する。ＴＮ ９０ ＬＣ ＣＭＳは、ＴＮ ９０ ＬＣ植物をタバコ種ニコチアナ・スアベオレンスの植物と交配することによって作成される。Ｆ1後代植物はＴＮ ９０ ＬＣと９回戻し交配されてＢＣ9Ｆ1植物を生産し、ＴＮ ９０ ＬＣ ＣＭＳと名づけられる。ＴＮ ９０ ＬＣ ＣＭＳ系統は、ＴＮ ９０ ＬＣと戻し交配することによって維持される。
【０１５５】
ＢＣ5Ｆ1×ＴＮ ９０ ＬＣ ＣＭＳのＦ1後代植物は、雄性不稔である。複数のＢＣ5Ｆ1×ＴＮ ９０ ＬＣ ＣＭＳ Ｆ1植物（例えば、Ｆ1後代植物）を、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異について選別し、ＴＮ ９０ ＬＣに対して雌親として交配して、ＢＣ7Ｆ1 ＣＭＳ後代を作成する。ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ変異についてヘテロ接合のＢＣ7Ｆ1 ＣＭＳ後代を、遺伝子型同定によって識別する。２ラウンドのＮＣ ＥＸ９０に対する交配を行なって、ＢＣ7Ｆ3 ＣＭＳ植物を作成し、系統ＮＣＢＥＸ１ＭＳと名づける。系統を維持するため、系統ＮＣＢＥＸ１ＭＳ植物の植物をＮＣＢＥＸ１Ｆ植物と受粉する。
【実施例４】
【０１５６】
ＴＮ ９０ ＬＣに対するＮＣＢＥＸ１ＭＳのニコチン転換における形質安定性の証明
ＮＣＢＥＸ１ＭＳ及びＴＮ ９０ ＬＣの５０の植物由来の葉を、ジャックらのImplications of reducing nornicotine accumulation in burley tobacco: Appendix A - The LC Protocol. Rec. Adv. Tob. Sci. 2007, 33, 58-79に開示されるような「ＬＣ」方法を用いて回収する。葉を空気乾燥し、ガスクロマトグラフィーを用いてアルカロイドプロファイルについて分析する。図２Ａ及び２Ｂ並びに表２を参照されたい。
【０１５７】
１自由度ＣＯＮＳＴＲＡＳＴステートメントによる分析を、ＳＡＳのＰＲＯＣ ＧＬＭ機能を用いて行なう。この系統は、ＴＮ ９０ ＬＣの市販のシードロットと比較して、有意により低いレベルのノルニコチン（Ｐ＜０．０５）及びニコチン転換（Ｐ＜０．０５）を示す。ニコチン転換率及びノルニコチンレベルは有意に減少するが、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ系統の収量及び品質は、ＴＮ ９０ ＬＣと有意には異ならない（差は０．０５レベルの有意性のＬＳＤを超えない）。
【０１５８】
2014515596.tif 000004
【０１５９】
寄託情報
上記に開示され、添付の特許請求の範囲において挙げられる所有の近交系植物系統の少なくとも２５００の種子の寄託は、アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）、１０８０１大学大通り、マナサス、ＶＡ２０１１０、になされている。ＮＣＢＥＸ１Ｆ及びＮＣＢＥＸ１ＭＳに関する寄託の日付は、それぞれ２０１１年９月６日及び２０１１年９月６日であった。それぞれの品種についての２５００の種子の寄託は、本願の出願日前から維持されている同じ寄託から受け継がれた。特許の付与があると、寄託についての全ての制限は取り除かれ、寄託は３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８０１−１．８０９の全ての用件を満たすことを意図される。近交系統ＮＣＢＥＸ１Ｆ及びＮＣＢＥＸ１ＭＳについてのＡＴＣＣ受託番号は、それぞれＰＴＡ−１１７１８、ＰＴＡ−１１７１９である。これらの寄託は、３０年の期間、又は最後のリクエストの後５年、又は特許の有効期間のいずれか長いものに亘って保管所において維持され、また、その期間に必要に応じて交換されるであろう。出願人は、この特許又は植物多様性保護法（７Ｕ．Ｓ．Ｃ．２３２１以下参照）の下に認められるその権利のいかなる侵害も無視しない。
【図２Ａ】
2014515596.tif 000005
【図２Ｂ】
2014515596.tif 000006
【図１】
2014515596.tif 000007
【配列表】
2014515596000001.app
【国際調査報告】
2014515596.tif 000008
2014515596.tif 000009
2014515596.tif 000010