(57)【要約】  本発明は、同位体標識したオクタン酸塩を使用した呼気検査を反映して、肝臓のミトコンドリアによるオクタン酸塩代謝物のレベルが活動中のＨＣＣの存在と相関し、ＨＣＣを検出および監視することが可能なことを初めて開示する。特に、例えば、１３Ｃ−オクタン酸塩呼気検査などの同位体標識したオクタン酸塩呼気検査（ＯＢＴ）の値が低くなると、活動中のＨＣＣを表す。驚くべきことに、活動していないＨＣＣを有する対象およびＨＣＣを有していない対照となる対象と比較して、活動中のＨＣＣを有する対象では、１３Ｃオクタン酸塩呼気検査値が有意に低いことが見いだされた。以下の本明細書に例示される活動していないＨＣＣを有する対象は、ＴＡＣＥ治療を経験しており、この手法の直後および最大３か月後に評価される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における肝細胞癌（ＨＣＣ）の検出、判定、予後診断および／または経過観察のための方法であって、
（ｉ）同位体標識したオクタン酸塩の投与の後に、前記対象の呼気中で同位体標識したオクタン酸塩の代謝産物を監視することと、
（ｉｉ）前記対象中のオクタン酸塩代謝産物と基準オクタン酸塩代謝産物とを比較することと、
を含み、
オクタン酸塩代謝物の有意な減少が、活動中の肝細胞癌を示す、
方法。
【請求項２】
前記基準オクタン酸塩代謝産物が、ＨＣＣに罹患していない対象において決定される、対照となるオクタン酸塩代謝物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記比較に基づき、活動中の肝細胞癌と活動していない肝細胞癌とを識別することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
監視を、標識したオクタン酸塩の単一投与の後に、所定の期間にわたって連続して測定することにより実施する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
標識したオクタン酸塩の単一投与の後に、所定の期間にわたって周期的な間隔で前記対象から複数の呼気サンプルを収集する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記代謝産物が、ＣＯ２である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記同位体が、炭素１３、炭素１４、酸素１８からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記同位体が、１３Ｃである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記対象中のオクタン酸代謝物と基準オクタン酸塩代謝産物とを比較することが、前記対象のＤＯＢ（ｄｅｌｔａ  ｏｖｅｒ  ｂａｓｅｌｉｎｅ）曲線、ＰＤＲ（ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ  ｄｏｓｅ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ）曲線、およびＣＰＤＲ（ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ  ＰＤＲ）曲線のうちの少なくとも１つを作成することと、基準となるＤＯＢ、ＰＤＲ、ＣＰＤＲ曲線、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つのパラメータと、前記ＤＯＢ、ＰＤＲ、ＣＰＤＲ曲線のうちの少なくとも１つのパラメータとを比較することとを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記対象中のオクタン酸塩代謝物と基準オクタン酸塩代謝産物とを比較することが、ＰＤＲ曲線を作成し、基準となるＰＤＲのうちの少なくとも１つのパラメータと前記ＰＤＲ曲線のうちの少なくとも１つのパラメータを比較することを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記少なくとも１つのパラメータが、ピークの高さ、前記ピークの存在する時間、および前記代謝物の比率の勾配からなる群から選択させる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記パラメータが、ピークの高さである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ピークの高さの低下が、ＨＣＣを示す、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記パラメータが、ピークに対する時間である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
ピークまでの時間が長くなると、ＨＣＣを示す、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記少なくとも１つのパラメータが、選択した時点での１つ以上のＰＤＲ値（％用量／時間）、選択した時点での１つ以上のＣＰＤＲ値、および選択した時点での１つ以上のＤＯＢ値から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１７】
選択した時点でＰＤＲ、ＣＰＤＲ、および／またはＤＯＢ値の減少が、ＨＣＣを示す、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
同位体標識したオクタン酸塩の第１の投与の後に、前記対象の呼気中の同位体標識したオクタン酸塩代謝物を監視することにより、前記肝機能の第１の評価を実施し、同位体標識したオクタン酸塩の第２の投与の後に、前記対象の呼気中の同位体標識したオクタン酸塩の代謝産物を監視することにより、所定時間後に、前記肝機能の第２の評価を実施することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記所定時間後に第２の評価を実施するステップが、複数回繰り返される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記基準オクタン酸塩代謝物が、前記肝機能の第１の評価中に決定されたオクタン酸塩代謝物である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
病因により前記ステップ（ｉ）において得られた値を標準化することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記病因が、ＮＡＳＨおよびＮＡＦＬＤからなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
１つ以上の血液検査の結果により前記ステップ（ｉ）において得られた値を標準化することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記１つ以上の血液検査が、空腹時血糖値、インシュリン値、ＡＬＴ値、ＡＳＴ値、ＡＬＰ値、ＧＧＴＰ値、ビルビリン値、アルブミン値およびナトリウム値から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
治療により前記ステップ（ｉ）において得られた値を標準化することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記治療が、ソラフェニブの投与である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記対象が、肝細胞癌に罹患するリスクを有する対象、肝細胞癌を有する疑いのある対象、および肝細胞癌に罹患している対象からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記対象が、肝細胞癌に罹患しており、治療を受けたことがあるか、治療を受けている、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記治療が、ソラフェニブの投与以外である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記対象が、少なくとも１つの慢性肝疾患を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
前記慢性肝疾患が、ＮＡＳＨ、ＮＡＦＬＤ、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎、ならびにいずれかの病因による硬変からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記慢性肝疾患が、ＮＡＳＨまたはＮＡＦＬＤ以外である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記対象の呼気中の総ＣＯ２を監視することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
前記同位体標識したオクタン酸塩が、経口的、静脈内、または鼻腔内に投与される、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肝細胞癌（ＨＣＣ）の診断、予後診断、監視および治療に関する。特に、本発明は、ＨＣＣの検出および監視における、同位体標識したオクタン酸塩に基づく呼気検査の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
肝細胞癌（ＨＣＣ、悪性肝癌とも呼ぶ）は、慢性ウイルス肝炎（例えば、Ｂ型肝炎）および／またはいずれかの病因による肝硬変の患者で最も広く見られる。同様に、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）も、ＨＣＣの発生の危険因子であることが見いだされている。他の危険因子の例は、アフラトキシンの曝露およびヘモクロマトーシスなどのヘモクロマトーシスが挙げられる。場合によっては、原因不明のＨＣＣは、肝疾患の病歴または知られている危険因子を有していない患者で発生することもある。
【０００３】
ＨＣＣの発生率は、常に世界中で増加している。サハラ砂漠以南のアフリカ、中国、香港、および台湾などの世界の一部地域において、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎等の肝炎ウイルスの高曝露および環境病原菌の地域的曝露のために、ＨＣＣはほぼ確実に主要な健康問題となっている。
【０００４】
このＨＣＣの病因は、完全に知られてはいないが、ミトコンドリア機能不全が、この原因に含まれることが示唆されている。ＨＣＣ細胞は、減少したミトコンドリアの機能で遺伝的かつ代謝的に変質していることが示される（Ｗａｒｂｕｒｇ  Ｏ  （１９５６）．  “Ｏｎ  ｔｈｅ  ｏｒｉｇｉｎ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ”．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １２３  （３１９１）：  ３０９−１４）。
【０００５】
ＨＣＣの治療は、治癒を目標とするものもあれば、症状の軽減および延命に焦点を当てるものもある。治療の種類は、一般に、腫瘍の大きさとステージとにより選択される。この腫瘍が小さい場合（２〜３ｃｍ未満の合）、肝臓の脈管構造の浸潤の所見がなく、肝機能が良好に維持されている場合、肝臓の一葉に限局して外科的に摘出してもよい。他の治療の選択肢は、肝臓移植、高周波アブレーション（ＲＦＡ）、（治療のアルゴリズムによる）肝動脈化学塞栓術（ＴＡＣＥ）（例えば、バルセロナクリニック肝臓癌（ＢＣＬＣ）ステージングシステムを基準）を含む。ＲＦＡでは、（Ｘ線のスクリーニング、ＣＴスキャン、または超音波などの）画像のガイダンスの下で、この腫瘍内へと進行する針電極を介して腫瘍に高周波エネルギーを伝導する。この針を介した高周波により、熱凝結およびタンパク質の変性によって腫瘍が破壊される。ＴＡＣＥでは、化学療法により、カテーテルを介して腫瘍に直接投与され、かつ腫瘍への血液供給がカットオフされる。上述した手法に加え、内服薬を投与してもよい。例えば、進行したＨＣＣを有する患者に対して、トシル酸ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））、内因性ミトコンドリア経路を活性化することにより腫瘍の成長を妨害する内服薬（Ｋｕｒｏｓｕ，  “Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｉｎ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ＢＣＲ／ＡＢＬ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ｉｔｓ  ｋｉｎａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  ａｃｔｉｖａｔｅ  ｔｈｅ  ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐａｔｈｗａｙ”，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００９  Ｍａｙ  ｌ；６９（９）：３９２７−３６．）が承認されている。
【０００６】
一般的に、診断が早期の場合は、小さい腫瘍または進行の遅い腫瘍は治療を成功させることができる。しかしながら、ＨＣＣに罹患する患者の大部分は、長期にわたる肝疾患に関連する症状以外の症状を有さないため、早期診断はある程度困難である。ＨＣＣの早期検出を促進するために、通常、硬変した患者のような高いリスクのグループの観察が行われている（例えば、ＡＡＳＬＤガイドライン基準）。
【０００７】
ＨＣＣの検出および診断は、概して、画像検査、血清学的検査、および場合によっては生検に基づく。画像試験は、例えば、腹部超音波検査、ヘリカルコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、３相ＣＴスキャン、および磁気共鳴画像（ＭＲＩ）を含む。血清学的検査は、α−胎児型タンパク質（ＡＦＰ）の血液レベルの測定を含むものであって、高レベルのＡＦＰはＨＣＣに関連する。この典型的な戦略は、ＡＦＰおよび超音波により１ヶ月観察する。
【０００８】
同様に、ＨＣＣの評価は、部分的な治療後の監視として実施される。治療の有効性の評価、ならびに、ＨＣＣが活動中であるか活動していないかの決定は、通常、造影ＣＴまたはＭＲＩを使用して放射線学的に実施される。例示的な造影剤は、ｌｉｐｉｏｄｏｌ（登録商標）、腫瘍の微小血管内に選択的に維持されるヨウ素化油剤である。治療した病変において血管の増強がなくなることは、通常この治療に対して肯定的な反応であることを示す。ＡＦＰは、経過観察の手段として十分に正確なものではなく、治療後のＡＦＰレベルの監視は、画像に置き換わるものではない。理想的な画像間隔は知られていないが、当初は、初期治療後のＨＣＣの病変を監視するために３から４か月の間隔が使用されている。
【０００９】
このＨＣＣ診断および経過観察の標準的な技術はいくつかの欠陥を有する。例えば、ＣＴまたはＭＲＩに基づくイメージング方法は高価格であり、熟練した実務家により病院内で実施され、かつＣＴ／ＭＲＩの場合に、高放射および造影剤によって誘発する腎障害などの副作用と関わらなければならない。さらに、ＡＦＰ測定などの方法は、不十分な感度または効力である。
【００１０】
肝臓による１３Ｃ標識基質の代謝の副生成物である１３ＣＯ２の監視に基づいた呼気検査が、肝機能の評価の手段として提案されてきた。試験化合物の肝代謝が、二酸化炭素を形成する結果となり、適切な炭素が標識される場合、（例えば、質量分析器または非分散形赤外分析計において測定可能である）標識されたＣＯ２の呼息は、もともと標識した化合物の肝クリアランスを反映し、特異的な肝機能を評価するために使用されてもよい。例えば、肝細胞のシトクロムＰ４５０酵素により代謝された化合物が、肝臓のミクロソームの機能において使用されてもよい。例示的な化合物は、メタセチンである。別の例として、肝臓のミトコンドリアでの代謝で起こる化合物を、肝臓のミトコンドリア機能の評価として使用しても、特定の肝機能を検出するために使用してもよい。（例えば、Ｇｒａｔｔａｇｌｉａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，  ４０  （９）：  ８４３−８５０  ａｎｄ  Ｐｏｒｔｉｎｃａｓａ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｃｌｕｊｕｌ  Ｍｅｄｉｃａｌ，  ８３  ：  ２３−２６基準）
【００１１】
１つの例示的な分子は、肝臓のミトコンドリアにおいて脱炭酸を起こす化合物である、ケトイソカプロン酸（ＫＩＣＡ）である。ＨＣＣ患者の肝機能の評価におけるＫＩＣＡ呼気検査の使用が記録されてきた（Ｐａｌｍｉｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １５７，  １９９−２０７）。この研究において、肝機能に関する２つの異なるＨＣＣ治療の効果が評価された。ＨＣＣを有する硬化性の患者およびＨＣＣを有していない硬化性の患者を、特にＫＩＣＡの脱炭酸を使用して試験した。ベースラインでは、ＨＣＣを有する患者は、健康な対照およびＨＣＣを有していない患者と比較して１３Ｃ−ＫＬＣＡ呼気検査の値が有意に低かった。ＨＣＣを有していない硬化性の患者および健康な対照の間に、小さいが有意な１３Ｃ−ＫＬＣＡ呼気検査の値の変化が現れた（健康な対照と比較してＨＣＣを有していない硬化性の患者でより低い値が観察された）。この患者を、１３Ｃ−ＫＬＣＡのレベルを、１日後、３０日後、および１８０日後に再び試験した後、ＴＡＣＥまたはＲＦＡのどちらかで治療した。この著者は、「ケトイソカプロン酸の脱炭酸は、ＴＡＣＥに反映されるものではないが、ＲＦＡ後減少した（−２７％，  Ｐ＜  ０．０５）」とまとめ、「ＲＦＡではなくＴＡＣＥが、残留する（ミクロソームの）肝臓の質量を分離するが、ミトコンドリアの機能に関する効果を機能不全にするこのような経過を誘導するようだ」と結論づけた。
【００１２】
肝臓のミトコンドリアにより代謝される別の例示的な分子は、オクタン酸塩である。オクタン酸塩は、ミトコンドリアに侵入する中間鎖脂肪酸であり、アセチルコエンザイムＡ（アセチル−ＣｏＡ）を産生させるβ−酸化を起こす。アセチル−ＣｏＡはクレバス回路に入り、他のエネルギーが豊富な化合物の合成に利用されない限り、ＣＯ２へと酸化される。
【００１３】
国際出願公開第２００７／０５４９４０号は、本発明の出願人によるものであり、肝機能の評価および代謝能力のため、または肝臓の健康状態および／または肝損傷の度合いを評価するための呼気検査装置および方法を開示する。例えば、肝臓の状態を評価する方法が開示されており、この方法は、同位体標識したオクタン酸、オクタン酸の塩または誘導体を対象に投与した後、対象のオクタン酸、オクタン酸の塩または誘導体の代謝産物をオンラインで監視することを含む。別の例では、肝臓の状態を評価するための装置が開示され、この装置は、対象の呼気中の標識したオクタン酸、その塩または誘導体の代謝産物の同位体のレベルをオンラインで監視するように適合した１つ以上のセンサおよび連続した状態で１つ以上のセンサの測定結果をサンプリングするように適合したコントローラを含む。この方法および装置を、対象の非アルコール性脂肪肝および非アルコール性脂肪性肝炎の状態の間を識別する際に使用してもよい。
【００１４】
国際出願公開第２０１０／０１３２３５号は、本発明の出願人によるものであり、肝機能の評価および代謝能力の評価のため、または肝臓の健康状態および／または肝損傷の度合いを評価するために使用されてもよい呼気検査装置および方法を開示する。例えば、インシュリン耐性またはアルコール性肝疾患または非アルコール性脂肪性肝疾患またはメタボリックシンドロームに関連する異常なβ−酸化を検出する方法が開示され、この方法は、対象に同位体標識したオクタン酸、その塩または誘導体を対象に投与した後、対象の呼気中のオクタン酸、その塩または誘導体の代謝産物を監視することを含む。
【００１５】
肝臓の代謝の複雑度は、肝機能を評価する際に試練を課すものであり、それゆえに、呼気検査の結果の解釈は常にわかりやすいものではない。呼気検査結果の解釈を潜在的に限定する例は、交絡変数（例えば、運動）の存在、動力学的胃排出の類型論、投与される気質の肝臓を最初に通過する代謝物、ならびに化合物の排出物および大使者物の競合経路の存在を含む。考慮にいれるべき追加的な因子は、例えば、肝臓以外の臓器で起こるミトコンドリアの代謝の存在（肝代謝が、例えば、試験の相関関係に陰性である場合の肝代謝を除く）、標識していないより大きなプール中の外因的に標識した化合物の希釈が起こり得ること、および対象から対象に実質的に変動することのできる標識していないＣＯ２の外因的産物を含む。さらに、異なる肝臓の機能に影響してもよく、異なる呼気検査の結果となってもよい、患者内、患者間の変動、および異なる病因となる多くの因子が存在する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
原発性肝細胞癌に関する費用効果、観察、検出、予後診断、監視の正確かつ簡潔な方法およびシステムのニーズが未だに存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明は、治療に関して改善したＨＣＣ検出、評価、および監視のための、オクタン酸またはそれらの塩もしくは誘導体を使用する方法およびシステムを提供する。
【００１８】
本発明は、同位体標識したオクタン酸を使用した呼気検査に反映するとして、肝臓のミトコンドリアによるオクタン酸の代謝のレベルが、活動中のＨＣＣの存在と相関し、かつＨＣＣを検出し監視するために使用することができることを最初に開示した。特に、同位体標識したオクタン酸の呼気検査（ＯＢＴ）、例えば、１３Ｃ−オクタン酸塩の呼気検査の値が低いほど、活動中のＨＣＣを示す。驚くべきことに、有意に低い１３Ｃ−オクタン酸塩の呼気検査の値が、活動していないＨＣＣを有する対象およびＨＣＣを有していない対照となる患者と比較して、活動中のＨＣＣを有する対象で観察されることが観察された。以下の本明細書で例示される活動していないＨＣＣを有する対象は、ＴＡＣＥ治療を経験しており、この手法が終了してから最大３か月後に評価された。特に、「ＴＡＣＥは、ＲＦＡで観察されるミトコンドリアの機能の初期の低下を導入してはおらず、このミトコンドリアの機能の手法の特異的な干渉を示唆するものではない」という出版が早期に開始されたという観点から、この観察された結果は驚くべきものであった（Ｐａｌｍｉｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １５７，  １９９−２０７）。
【００１９】
本発明は、ＯＢＴ値は、初期のステージであってもＨＣＣの検出に使用してもよいことをさらに開示する。特に、＜２ｃｍのＨＣＣなどの、肝臓の質量の非常に小さな部分を有した患者であっても、ＯＢＴの測定が有意に低下することが見いだされた。本発明は、ＯＢＴの値がこの疾患の治療および／または再発に関する評価のために、ＨＣＣを有する患者の治療後の経過観察として使用されてもよいことをさらに開示する。
【００２０】
本発明の方法およびシステムは、小さくかつより大きな腫瘍のスクリーニング／観察および初期検出に適用することができてもよい。同様に、本発明の方法およびシステムは、いくつかの種類のＨＣＣ治療、例えば、ＴＡＣＥおよびＲＦＡ治療に関する監視に適用することができてもよい。同様に、ＯＢＴは、腫瘍の摘出または肝移植の後の再発を初期に検出することができてもよい。
【００２１】
１つの実施態様において、本発明は、対象の予後診断および／または経過観察を決定するＨＣＣの検出のための方法であって、
（ｉ）同位体標識したオクタン酸塩を投与した後に、対象の呼気中の同位体標識したオクタン酸塩の代謝産物を監視することと、
（ｉｉ）対象のオクタン酸塩代謝物と基準オクタン酸塩代謝物とを比較することと、を含み、オクタン酸の有意な減少が、活動中のＨＣＣを示す、方法を提供する。
【００２２】
一部の実施形態において、本方法は、以下に詳細に記載される病因により呼気検査値を標準化することをさらに含む。追加の実施形態または代替的実施形態において、本方法は、以下に詳細に記載される治療により呼気検査を標準化することをさらに含む。一部の実施形態において、本方法は、活動中のＨＣＣと活動していないＨＣＣとの比較に基づき識別することをさらに含む。
【００２３】
本発明の実施形態による方法は、初期の活動中のＨＣＣ、例えば、２ｃｍより小さいＨＣＣの検出に有益である。小さな活動中のＨＣＣ（例えば、＜２ｃｍ）を有する患者のＯＢＴの減少を、肝臓の質量の大多数による代謝間および代謝内の変動により遮蔽することができ、このことは、先行技術に詳細には説明されていない。特定の作用の理論または作用機構に拘束することを意図するものではないが、本方法は、これらの患者の肝臓内の総合的なミトコンドリアの機能に影響する腫瘍細胞により分泌される因子に影響を与えてもよい。この因子を中和するいずれかの種類の治療は、悪性腫瘍の経過を軽減する効果を有していてもよい。代替的にあるいは上記に加えて、本方法が、腫瘍の中、例えば、その血管過多領域内、または腫瘍細胞内、または細胞および血管の間のオクタン酸塩を補足することによるものであってもよい。この腫瘍に関連する血管内の変化は、腫瘍の直接の腫瘤にわたって効果を増強に起因してもよい。潜在的な補足効果は、腫瘍に対する造影剤または治療剤を送達する手段として有益であってもよい。ＨＣＣに対する送達機構は、全身性の副作用がなく腫瘍中において高濃度の治療剤を得ることができてもよい。
【００２４】
本発明は、例えば、１３Ｃ−ＫＩＣＡ呼気検査などのいくつかの先行文献の限定を示す。先行技術で使用したＫＩＣＡとは対照的に、オクタン酸塩の代謝は、肝機能全体に影響を与えるものではなく、慢性的な患者においても正常に維持される。有利な点として、ＨＣＣのない（線維症ステージまたは肝硬変による）障害のある肝臓、すなわち、正常な対象と同様のオクタン酸塩代謝を有し、かつＫＩＣＡのような肝臓の貯蔵機能の低下による減少がない患者ならびにＨＣＣを有した患者の間で、オクタン酸呼気検査で有意な差異がみることができた。
【００２５】
本明細書に使用される、「オクタン酸塩」という用語は、オクタン酸などのオクタン酸塩およびそれらの塩または誘導体を含む。１３Ｃによって標識された「オクタン酸塩」は、カプリル酸のナトリウム塩であり、カプリル酸ナトリウムの一般名により知られている。カプリル酸ナトリウムのＩＵＰＡＣ名は、１−１３Ｃオクタン酸ナトリウムである。追加的な同義語は、１−１３Ｃ−オクタン酸ナトリウム、オクタン酸ナトリウム、オクタン酸ナトリウム塩、ナトリウム  ｎ−オクタン酸塩、オクタノン酸ナトリウムを含む。
【００２６】
本明細書で使用される「同位体標識したオクタン酸塩の代謝産物の監視」は、所定時間、対象の呼気中の同位体の比の変化を検出および測定することを意味する。「同位体比率」という用語は、標識したオクタン酸塩で選択した同位体および天然に多く存在する同位体の間の比率を意味する。一部の実施形態において、監視は、標識したオクタン酸塩の単一投与の後、所定の期間にわたる連続測定により実施される。他の実施形態において、この同位体比率は、標識したオクタン酸塩の単一投与の後、定期的な間隔で対象から収集した呼気サンプルにおいて測定される。これらの実施形態により、複数のサンプルが、所定の期間にわたって収集された。
【００２７】
いくつかの典型的な実施形態において、この代謝産物は、ＣＯ２である。一部の実施形態において、この同位体は、炭素１３、炭素１４、および酸素１８からなる群から選択される。いくつかの典型的な実施形態において、この同位体は１３Ｃである。
【００２８】
一部の実施形態において、基準オクタン酸塩代謝物と対象のオクタン酸塩代謝物とを比較することは、対象のＤＯＢ（ｄｅｌｔａ  ｏｖｅｒ  ｂａｓｅｌｉｎｅ）曲線、ＰＤＲ（ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ  ｄｏｓｅ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ）曲線、およびＣＰＤＲ（ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ  ＰＤＲ）曲線を作成することと、基準となるＤＯＢ、ＰＤＲ、ＣＰＤＲ、またはそれらの組み合わせの内の少なくとも１つのパラメータと、対象のＤＯＢ、ＰＤＲ、またはＣＰＤＲの内の少なくとも１つのパラメータを比較することを含む。
【００２９】
一部の実施形態において、対象のオクタン酸塩代謝物と基準オクタン酸塩代謝産物とを比較することは、ＰＤＲ曲線を作成することと、基準となるＰＤＲの内の少なくとも１つのパラメータと、対象のＰＤＲの内の少なくとも１つのパラメータとを比較することとを含む。
【００３０】
一部の実施形態において、この少なくとも１つのパラメータは、ＰＤＲの最大レベル（ピークとなる高さ）、ピークの存在する時間（ピーク時間）、および代謝物の比率の勾配からなる群から選択される。可能な形態のそれぞれが、本発明のそれぞれの実施形態に示される。
【００３１】
いくつかの特定の実施形態において、このパラメータはピークの高さである。これらの実施形態によると、ピークの高さの低下が、ＨＣＣを示す。
【００３２】
追加的な特定の実施形態において、このパラメータはピークの時間である。これらの実施形態によると、ピークの時間が長くなることが、ＨＣＣを示す。
【００３３】
さらなる追加的な特定の実施形態において、少なくとも１つのパラメータが、選択した時点での１つ以上のＰＤＲ値（％用量／時間）である。これらの実施形態によると、選択した時点でのＰＤＲ値の減少がＨＣＣを示す。
【００３４】
いくつかの特定の実施形態において、少なくとも１つのパラメータは、選択した時点での１つ以上のＣＰＤＲ値である。これらの実施形態によると、選択した時点でのＣＰＤＲ値の減少が、ＨＣＣを示す。
【００３５】
いくつかの特定の実施形態において、少なくとも１つのパラメータは、選択した時点での１つ以上のＤＯＢ値である。これらの実施形態によると、選択した時点でのＤＯＢ値の減少がＨＣＣを示す。
【００３６】
いくつかの典型的な実施形態において、標識したオクタン酸塩は、経口的に投与される。他の実施形態において、静脈内または鼻腔内に投与される。
【００３７】
いくつかの典型的な実施形態において、標識したオクタン酸塩は、所定の単一用量（例えば、各患者に１００ｍｇ）で投与される。他の実施形態においては、患者の体重に基づき（例えば、体重１キログラムあたり２ｍｇ）投与される。
【００３８】
一部の実施形態において、本方法は、対象のＨＣＣ治療に関連した経過観察および監視に適合される。
【００３９】
一部の実施形態において、本方法は、同位体標識したオクタン酸塩の第１の投与の後、対象の呼気中の同位体標識したオクタン酸塩の代謝産物を監視することにより、肝機能の第１の評価を実施し、同位体標識したオクタン酸塩の第２の投与の後、対象の呼気中の同位体標識したオクタン酸塩の代謝産物を監視することにより、所定時間後に肝機能の第２の評価を実施することを含む。
【００４０】
一部の実施形態において、所定時間後に第２の評価を実施するステップを複数回繰り返す。
【００４１】
「肝機能の第１の評価」および「肝機能の第２の評価」という用語は、初期の評価セッションおよびその後の連続したセッションに限定されるものではないが、いずれか２つの別々の評価セッションに関連してもよい。
【００４２】
本明細書に使用される、「減少する」、「有意に減少する」、または「有意な減少」は、概して、当業者に知られている標準的な方法により定義することのできる、統計的に有意な差異を意味する。
【００４３】
一部の実施形態において、「基準オクタン酸塩代謝産物」は、ＨＣＣに罹患していない対照となる患者内で決定される、対照となるオクタン酸塩を意味する。一部の実施形態において、この対照となる対象は、少なくとも１つの慢性肝疾患を有しているが、ＨＣＣを有していない。いくつかの例示的な実施形態において、対照となる対象は、ＨＣＣを有していない肝硬変の患者である。他の実施形態において、対照となる対象は、肝疾患に罹患していない健康な個体である。
【００４４】
他の実施形態において、「基準オクタン酸塩代謝産物」は、例えば、以前に試験した対象で測定したオクタン酸塩代謝物などの、肝機能の第１の評価の間に決定されるオクタン酸塩代謝物を意味する。例えば、本発明の方法が治療に関連する監視のために使用される場合、特定の対象からの第１の測定で得られた呼気検査の結果は、同一の対象の第２の測定で得られた呼気検査の基準として使用されてもよい。例えば、第１の測定は、治療の開始前に実施されても、第２の測定が、治療後所定の時間が経過した後に実施されてもよい。この場合、第１の測定と比較した第２の測定で、呼気検査でオクタン酸塩が増加していると、治療に陽性であることを示している。
【００４５】
いくつかの典型的な実施形態において、試験した対象は哺乳類であり、好ましくはヒトである。
【００４６】
一部の実施形態において、試験した対象は、ＨＣＣが発生するリスクを有する対象、ＨＣＣを有する疑いのある対象、およびＨＣＣに罹患している対象からなる群から選択される。可能な形態のそれぞれが、本発明のそれぞれの実施形態に示される。
【００４７】
一部の実施形態において、この対象は、ＨＣＣに罹患している対象であり、治療を受けたことがあるか現在治療を受けている対象である。可能な形態のそれぞれが、本発明の実施形態のそれぞれに示される。
【００４８】
一部の実施形態において、この治療は、ＴＡＣＡおよびＲＦＡまたは、チロシンキナーゼ阻害剤および限定するものではないが、アドリアマイシンを含む化学療法剤のいずれかの種類を含むＨＣＣのための他の薬剤、ならびに限定するものではないが、パルス樹状細胞を含むＨＣＣのために使用されるいずれかの種類の免疫療法、およびこれらの治療のいずれかの組み合わせからなる群から選択される。同様に、この治療は、外科的摘出または肝移植を受けた患者のいずれかの補助薬物療法の反応の経過観察をも含む。可能な形態のそれぞれが、本発明のそれぞれの実施形態に示される。
【００４９】
一部の実施形態において、試験した対象は、少なくとも１つの慢性肝疾患を有する。一部の実施形態において、慢性肝疾患は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、またはいずれかの病因による肝硬変を有する患者からなる群から選択される。一般的にこの疾患は、肝硬変を有する他の種類の慢性肝疾患、または肝硬変を有していない他の種類の慢性肝疾患であってもよく、突発性肝硬変を有する患者を含み、患者に原発性肝癌および／または転移反応が顕在化していてもよい。可能な形態のそれぞれが、本発明のそれぞれの実施形態に示される。
【００５０】
一部の実施形態において、慢性肝疾患は、ＮＡＳＨおよびＮＡＦＬＤからなる群から選択される。可能な形態のそれぞれが、本発明のそれぞれの実施形態に示される。これらの実施形態によると、本発明は、ＯＢＴ値を標準化することをさらに含み、ＮＡＳＨ／ＮＡＦＬＤは、肝臓のミトコンドリアの機能に影響することが知られている（例えば、Ｇｒａｔｔａｇｌｉａｎｏ  Ｉ．  ｅｔ  ａｌ，  １３Ｃ−ｂｒｅａｔｈ  ｔｅｓｔｓ  ｆｏｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｉｖｅｒ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ；  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２０１０；  ４０  （９）：  ８４３−８５０基準）。一部の実施形態において、ＮＡＳＨ／ＮＡＦＬＤ患者の値を訂正するためにあるアルゴリズムを使用する。一部の実施形態において、異なるカットオフ値は、ＮＡＳＨ／ＮＡＦＬＤを有する対象のために決定される。
【００５１】
一部の実施形態において、試験した対象は、ＮＡＳＨ以外の肝疾患を有する。一部の実施形態において、試験した対象は、ＮＡＦＬＤ以外の肝疾患を有する。一部の実施形態において、ＮＡＳＨおよびＮＡＦＬＤからなる群から選択した肝疾患を有する対象は、本発明の方法を使用して試験した対象から除外される。
【００５２】
一部の実施形態において、試験した対象を、（ミトコンドリアの機能を高めることが知られている）ソラフェニブで治療する。これらの実施形態によると、本方法は、ＯＢＴ値を標準化することをさらに含む。一部の実施形態において、ソラフェニブで治療した患者の値を訂正するためにあるアルゴリズムを使用する。一部の実施形態において、ソラフェニブで治療した対象のために、異なるカットオフ値が決定される。
【００５３】
同様に、このことは、いずれかの化学療法、放射線療法、および補助薬物療法、免疫療法または細胞内機構の阻害剤、または上記の組み合わせを含む他のいずれかの種類にも適用される。
【００５４】
他の実施形態において、この対象を、ソラフェニブまたは他のいずれかの制癌剤で治療する。一部の実施形態において、ソラフェニブまたは他のいずれかの制癌剤で治療した対象は、本発明の方法を使用した試験から除外される。
【００５５】
したがって、一部の実施形態において、本方法は、病因によりステップ（ｉ）で得られる値を標準化することをさらに含む。追加的または代替的な実施形態において、本方法は、治療によりステップ（ｉ）で得られる値を標準化することをさらに含む。
【００５６】
一部の実施形態において、本方法は、例えば、カプノグラフィーにより、呼吸中の総ＣＯ２を同時に監視することを含む。このことにより、肝臓の試験評価が変動することのなくなった代謝率およびＣＯ２産物の試験の長さおよびばらつきを最小限にすることが可能となってもよい。
【００５７】
本発明の方法ならびにさらなる実施態様および特性は、以下の、図面、詳細な説明、実施例、および請求項から明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】活動中のＨＣＣと活動していないＨＣＣとの比較、および対照の１３Ｃオクタン酸塩の呼気検査のボックスプロット図およびダイアモンド型平均値の表示を示す。
【図２】活動中のＨＣＣと活動していないＨＣＣとの比較、および対照における１３Ｃオクタン酸塩の呼気検査のＲＯＣ曲線。
【図３】ソラフェニブで治療した患者を除く、活動中のＨＣＣと活動していないＨＣＣとの比較、および対照における１３Ｃオクタン酸塩の呼気検査のＲＯＣ曲線。
【図４】ＨＣＣを有したＮＡＳＨの対象およびソラフェニブで治療した患者を除く、活動中のＨＣＣと活動していないＨＣＣとの比較、および対照における１３Ｃオクタン酸塩の呼気検査のボックスプロット図およびダイアモンド型平均値の表示。
【図５】ＨＣＣを有さない、６１歳男性のＨＣＶ患者の１３Ｃオクタン酸塩の呼気検査のＰＤＲ曲線。
【図６】活動中のＨＣＣを有する７４歳女性のＨＣＶ患者の１３Ｃオクタン酸塩の呼気検査のＰＤＲ曲線。
【図７】ＨＣＣの再発前後の、ＨＣＣを有する６９歳女性のＮＡＳＨ患者の３つの連続した１３Ｃオクタン酸塩の呼気検査のＰＤＲ曲線。
【図８】連続したＨＣＣ治療の前後の、突発性肝硬変を有する６１歳男性の３つの連続した１３Ｃオクタン酸塩の呼気検査のＰＤＲ曲線。
【図９】ＨＣＣ治療の前後の、ＨＣＶ肝硬変を備えた５８歳男性の２つの連続した１３Ｃオクタン酸塩の呼気検査のＰＤＲ曲線。
【００５９】
本発明は、ＨＣＣの診断、予後診断、および経過観察のための同位体標識したオクタン酸塩、またはその塩もしくは誘導体の使用を目的とする。
【００６０】
本発明の方法およびシステムは、活動していないＨＣＣを有する、またはＨＣＣを有していない対象と活動中のＨＣＣを有する対象の差異を効果的に識別する。したがって、本発明の方法およびシステムは、対象のＨＣＣの検出、診断、および監視に有益である。同様に、本発明の方法およびシステムは、ＨＣＣのスクリーニング、腫瘍の進行状態、再発、予後、およびステージングの検出にも有益であってもよい。同様に、本発明の方法は、腫瘍の寸法の評価およびいずれかの種類の治療に対する反応に有益であってもよい。同様に、本発明の方法は、ＨＣＣの再発を検出するために有益であってもよい。
【００６１】
本発明の方法は、呼気検査のパラメータの分析に基づく。知られている定量として、同位体標識した外因的な基質、すなわち、同位体標識したオクタン酸塩が対象に投与され、この標識した基質の代謝物を、以下のように定量化および定性化する。ここで得られた呼気検査パラメータを、基準とするデータと比較する。この得られたパラメータは、対象のＨＣＣ状態を示す。本発明の実施形態による呼気検査は、対象の呼気中の同位体標識した代謝産物の検出ならびに標識した代謝産物および非標識の代謝産物の間の比率の測定に基づく。このデータを、例えば、標識した代謝産物の呼息の比率を計算し、ＰＤＲ曲線を作成することにより、さらに処理する。
【００６２】
呼気検査において肝臓の状態を評価することが困難であるにも関わらず、対象のオクタン酸塩代謝物のレベルおよびＨＣＣの状態の間で相関関係が見られた。
【００６３】
１つの実施態様により、本発明は、対象のＨＣＣの早期検出、予後診断および経過観察のための方法であって、この方法が、
（ｉ）同位体標識したオクタン酸塩を投与した後、対象の呼気サンプル中の同位体標識したオクタン酸塩の代謝産物を監視することにより、対象のオクタン酸塩代謝物を決定することと、
（ｉｉ）基準とするオクタン酸塩の代謝産物と対象のオクタン酸塩の代謝産物を比較することであって、オクタン酸塩の代謝産物が有意に減少した場合、ＨＣＣを示すことと
を含む方法を提供する。
【００６４】
一部の実施形態において、対象のＨＣＣの予後診断および／または経過観察を決定する、検出のための方法であって、同位体標識したオクタン酸塩の投与後、対象の呼気中の同位体標識したオクタン酸塩の代謝産物を監視することにより決定され対象中のるオクタン酸代謝産物を、基準オクタン酸塩代謝産物と比較することであって、オクタン酸塩代謝物が有意に減少した場合、活動中のＨＣＣを表すことを含む、方法を本明細書に提供する。
【００６５】
硬化性の患者では、総合的に、肝機能に障害を有する。先行技術として使用されているＫＩＣＡの代謝物は、総合的な肝機能に影響があり、ＫＩＣＡ呼気検査に影響があり、肝硬変を有していない対象の通常値と比較して、それらの値が低下している肝硬変により、機能障害となることが知られている。しかしながら、ＨＣＣ患者の中には、肝硬変でない患者もいることが知られている。したがって、肝硬変を有してはいないが、ＨＣＣを有している患者を、ＫＩＣＡにより効率的に検出できないことが予測される。本発明の実施形態による方法は、代謝物が総合的な肝機能に影響を与えない化合物を利用する点において有利である。健康な対象、肝硬変を有した対照、または活動していないＨＣＣを有する対象対（実質的な肝機能不全から独立している）ＨＣＣを有する対象のＯＢＴ値のピーク値は、類似するものであった。したがって、肝硬変を有していないが、ＨＣＣを有している患者は、オクタン酸塩呼気検査により検出することができることが予測される。
【００６６】
概して、同位体標識したオクタン酸塩を対象に投与し、呼気サンプルを収集する。一部の実施形態において、監視を、所定の期間にわたる連続的な測定により実施する。一部の実施形態において、連続的な測定を、例えば、ＢｒｅａｔｈＩＤ（登録商標）システム（Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｔｄ．）を使用して実施する。このような測定により、ＰＤＲのピークの正確な評価が可能となり、このことにより、ＨＣＣの存在のために現在好ましいと示唆される測定であり、小さな腫瘍の早期検出用に使用されてもよい。
【００６７】
他の実施形態において、監視を、同位体標識したオクタン酸塩の単一投与後の所定の期間にわたる所定の間隔または所定の時点で対象から複数の呼気サンプルを収集し、このサンプルの同位体比率を測定することにより実施する。
【００６８】
一部の実施形態において、サンプルを、連続的なオンラインサンプリングにより収集する。
【００６９】
一部の実施形態において、周期的な期間は、約０．１から１時間、０．１から２時間、約０．１から３時間、約１から２時間、約１から３時間、約１から４時間、約２から４時間、の範囲である。可能な形態のそれぞれが、本発明のそれぞれの実施形態に示されている。
【００７０】
一部の実施形態において、呼気サンプルの収集の周期的な間隔は、約０．５から３０分、約１０から３０分、約２０から６０分、約３０から６０分の範囲である。可能な形態のそれぞれが、本発明のそれぞれの実施形態に示されている。
【００７１】
一部の実施形態において、監視は、標識した基質の投与後のみに開始される。他の実施形態において、監視は、標識した基質の投与前に開始される。一部の実施形態において、ベースラインの読み取りまたはベースライン値が作成される。
【００７２】
一部の実施形態において、吐き出された同位体標識した代謝産物は、例えば、ＰＤＲ（ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ  ｄｏｓｅ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ）曲線を作成するために、少なくとも３つの時点で測定される。この代謝活性は、このＰＤＲから決定されてもよい。
【００７３】
一部の実施形態において、本方法は、同位体標識したオクタン酸塩を対象に投与した後に、対象のオクタン酸塩の代謝産物をオンラインで監視することを含む。
【００７４】
いくつかの典型的な実施形態において、この代謝産物は、ＣＯ２である。一部の実施形態において、この同位体は、炭素−１３、炭素−１４、および酸素−１８からなる群から選択される。いくつかの典型的な実施形態において、この同位体は、１３Ｃである。例えば、肝臓の１３Ｃオクタン酸塩代謝物を、呼気中の１３Ｃ／１２Ｃの比率を測定することにより評価してもよい。炭素−１３は安定であり、非放射性同位体であり、肝臓による代謝および１３ＣＯ２の産生の後に放出されるように、試験基質の分子内の特定の位置に組み込まれることができる。１３Ｃ化合物を経口的に投与しても、その後、１３ＣＯ２を、所定の期間内の呼気において測定してもよい。
【００７５】
一部の実施形態において、監視は、ＰＤＲ（ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ  ｄｏｓｅ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ）曲線、ＣＰＤＲ（ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ  ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ  ｄｏｓｅ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ）曲線およびＤＯＢ（ｄｅｌｔａ  ｏｖｅｒ  ｂａｓｅｌｉｎｅ）曲線の内の少なくとも１つを作成し、このＰＤＲ、ＣＰＤＲ、およびＤＯＢ曲線のうちの少なくとも１つを計算することを含む。
【００７６】
一部の実施形態において、比較することは、基準となるＰＤＲ曲線、ＣＰＤＲ曲線およびＤＯＢ曲線の内の少なくとも１つと、計算した少なくとも１つのパラメータとを比較することを含む。
【００７７】
一部の実施形態において、基準オクタン酸塩代謝産物と対象のオクタン酸塩代謝物とを比較することは、対象のＰＤＲ（ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ  ｄｏｓｅ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ）曲線を作成し、基準となるＰＤＲ曲線の少なくとも１つのパラメータとこの対象のＰＤＲ曲線の少なくとも１つのパラメータを比較することを含む。ＰＤＲ曲線は、当業者に知られている。このような曲線により、呼気で測定するように％用量／時間（時間あたりに回収した用量のパーセンテージ）における標識した基質の代謝物の比率を割り出す。ＰＤＲ曲線は、肝臓の動的反応に反映する。
【００７８】
一部の実施形態において、少なくとも１つのパラメータは、ピークの高さ、ピークが現れる時間、および代謝物の比率の勾配からなる群から選択される。可能な形態のそれぞれが、本発明のそれぞれの実施形態に示される。代替的または追加的な実施形態において、このパラメータは、選択した時点での１つ以上のＰＤＲ値（％用量／時間）である。
【００７９】
一部の実施形態において、基準オクタン酸塩代謝産物と対象のオクタン酸塩代謝物とを比較することは、対象のＣＰＤＲ（ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ  ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ  ｄｏｓｅ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ）曲線を作成し、基準となるＣＤＰＲ曲線の少なくとも１つのパラメータと、この対象のＣＰＤＲ曲線の少なくとも１つのパラメータを比較することを含む。ＣＤＰＲ曲線は、当業者に知られている。このような曲線は、呼気で測定されるように、％用量（ある時間にわたって回収した投与量の累積率）において、代謝した標識基質の量を検出した。この呼気中の標識したＣＯ２の累積回収を、ＰＤＲの曲線（ＡＵＣ）の下の領域として計算することができる。
【００８０】
一部の実施形態において、このパラメータは、選択した時点での１つ以上のＣＰＤＲ値であり、例えば、３０、４０、および／または４５分でのＣＰＤＲ値である。
【００８１】
一部の実施形態において、基準オクタン酸塩代謝産物と対象内のオクタン酸塩代謝物を比較することは、ＤＯＢ（ｄｅｌｔａ  ｏｖｅｒ  ｂａｓｅｌｉｎｅ）を作成し、基準となるＤＯＢ曲線のうちの少なくとも１つのパラメータと、対象のＤＯＢ曲線のうちの少なくとも１つのパラメータを比較することを含む。ＤＯＢ曲線は、当業者に知られている。このような曲線は、ある時点で収集した試験サンプル中の同位体比率（例えば、１３ＣＯ２／１２ＣＯ２）およびベースラインサンプルにおける対応する比率の間の差異を示す。
【００８２】
一部の実施形態において、このパラメータは、選択した時点での１つ以上のＤＯＢ値である。
【００８３】
ＰＤＲ曲線は、投与された基質の高さおよび重量および量に基づき、対象のＣＯ２の産生比率を考慮した対象あたりのＤＯＢの標準化を示す。一部の実施形態において、この対象の重量（例えば、キロあたり１ｍｇもしくは２ｍｇもしくは３ｍｇ）に基づきオクタン酸塩の用量を投与し、これらの実施形態により、ＤＯＢ曲線は、分析にとってより好ましい。他の実施形態において、この対象に、固定された所定の用量のオクタン酸塩（例えば、１００ｍｇ）で投与する。これらの実施形態において、ＰＤＲ曲線は、分析にとってより好ましい。
【００８４】
概して、本発明の実施形態による分析のための呼気検査のパラメータの分類は、余分な肝臓の代謝の問題に対処し、または余分な肝臓代謝の問題を解決する。一般的に、分析は、ピーク、例えば、ピークの高さおよびピークの時間が検出されるまで得られる情報のために実施されてきた、
【００８５】
いくつかの特定の実施形態において、このパラメータはピークの高さである。これらの実施形態において、ピークの高さの低下が、ＨＣＣを示す。
【００８６】
いくつかの典型的な実施形態において、標識したオクタン酸塩は、経口的、静脈内、または鼻腔内に投与される。
【００８７】
一部の実施形態において、本方法は、対象のＨＣＣ治療に関する経過観察および監視に適合される。一部の実施形態において、本方法は、同位体標識したオクタン酸塩の投与の後、対象の呼気中の同位体標識したオクタン酸塩の代謝産物を監視することにより、肝機能の第１の評価を実施し、所定時間後に、対象の呼気中の同位体標識したオクタン酸塩の代謝産物を監視することにより、肝機能の第２の評価を実施することを含む。一部の実施形態において、所定時間後に第２の評価を実施するステップは、複数回繰り返される。
【００８８】
「多数」という用語は、１より多いいずれかの数を意味してもよい。一部の実施形態において、「多数」という用語は、２より多いいずれかの数を意味する。他の実施形態において、「多数」という用語は、３より多いいずれかの数を意味する。
【００８９】
本明細書で使用される「減少した」、「有意に減少した」、または「有意な減少」は、一般的に、当業者に知られている標準的な方法により定義することのできる統計的に有意な差異を意味する。
【００９０】
一般的に、対照となるオクタン酸塩代謝物は、ＨＣＣに罹患していない対照において決定される。一部の実施形態において、対照となる対象は、ＨＣＣを有していない少なくとも１つの慢性肝疾患を有する。いくつかの例示的な実施形態において、対照となる対象は、ＨＣＣのない硬化性の患者である。他の実施形態において、対照となる対象は、肝疾患を有していない健康な個体である。
【００９１】
本発明の原則による対照となるオクタン酸塩代謝物は、少なくとも１つの対照、好ましくは複数の対象において決定される。対照となる対象において決定される一連の対照パラメータを、基準とするデータ収集として保存してもよい。
【００９２】
いくつかの典型的な実施形態において、試験した対照は哺乳類であり、好ましくはヒトである。
【００９３】
一部の実施形態において、この試験した対象は、ＨＣＣが発生するリスクを有する対象、ＨＣＣを有する疑いのある対象、およびＨＣＣに罹患している対象からなる群から選択される。可能な形態のそれぞれが、本発明の実施形態のそれぞれに示される。
【００９４】
一部の実施形態において、この対象は、ＨＣＣを患っており、治療を経験しているか、または現在治療中である。可能な形態のそれぞれが、本発明の実施形態のそれぞれに示される。
【００９５】
一部の実施形態において、この治療は、ＴＡＣＡおよびＲＦＡまたは、チロシンキナーゼ阻害剤のいずれかの種類および限定するものではないが、アドリアマイシンを含むいずれかの種類の化学療法剤を含むＨＣＣのための他の薬剤、ならびに限定するものではないが、パルス樹状細胞を含むＨＣＣのために使用されるいずれかの種類の免疫療法、ならびにこの治療のいずれかの組み合わせからなる群から選択される。同様にこのことは、外科摘出または肝移植を受けた患者の補助薬物療法の反応の経過観察をも含む。可能な形態のそれぞれが、本発明のそれぞれの実施形態に示される。
【００９６】
一部の実施形態において、本方法は、病因によりステップ（ｉ）において得られた値を標準化することをさらに含む。一部の実施形態において、この病因は、ＮＡＳＨおよびＮＡＦＬＤからなる群から選択される。
【００９７】
代替的または追加的な実施形態において、本方法は、１つ以上の血液研鑽の結果によりステップ（ｉ）において得られた値を標準化することをさらに含む。一部の実施形態において、この１つ以上の血液試験は、空腹時血糖値、インシュリン値、ＡＬＴ値、ＡＳＴ値、ＡＬＰ値、ＧＧＴＰ値、ビリルビン値、アルブミン値、およびナトリウム値からなる群から選択される。
【００９８】
代替的または追加的な実施形態において、本方法は、対象が受けているまたはすでに受けているＨＣＣの治療によりステップ（ｉ）において得られた値を標準化することをさらに含む。一部の実施形態において、この治療は、ソラフェニブの投与である。
【００９９】
一部の実施形態において、同位体標識した呼気の代謝産物は、例えば、赤外分光法により分光的にまたは質量分析により測定される。
【０１００】
一部の実施形態において、対象の呼気中の同位体標識したオクタン酸塩の代謝産物を監視することは、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、ガスクロマトグラフ質量分析（ＧＣ−ＭＳ）、陽子移動反応質量分析計（ＰＴＲ−ＭＳ）、電子ノーズデバイス、および水晶膜厚計（ＱＣＭ）からなる群から選択される少なくとも１つの技術を使用することを含む。可能な形態のそれぞれが、本発明の実施形態のそれぞれを示す。
【０１０１】
一部の実施形態において、試験した対象は、少なくとも１つの慢性肝疾患を有する。一部の実施形態において、この慢性肝疾患は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎、または原発性肝癌および／または転移を患者に曝す硬変を有する、またはこの硬変を有していない他の種類の慢性疾患からなる群から選択される。可能な形態のそれぞれが、本発明の実施形態のそれぞれに示される。
【０１０２】
一部の実施形態において、この慢性肝疾患は、ＮＡＳＨおよびＮＡＦＬＤからなる群から選択される。可能な形態のそれぞれが、本発明の実施形態のそれぞれに示される。これらの実施形態において、本方法は、ＯＢＴ値を標準化することをさらに含む。ＮＡＳＨ／ＮＡＦＬＤは、肝臓のミトコンドリアの機能に影響することが知られている（例えば、Ｇｒａｔｔａｇｌｉａｎｏ  Ｉ．  ａｔ  ａｌ．  １３Ｃ−ｂｒｅａｔｈ  ｔｅｓｔｓ  ｆｏｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｉｖｅｒ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ；  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２０１０；  ４０  （９）：  ８４３−８５０基準）。
【０１０３】
一部の実施形態において、ＮＡＳＨ／ＮＡＦＬＤ患者の値を修正するために、あるアルゴリズムおよび／または異なるカットオフを使用する。適切なアルゴリズムは、限定するものではないが、空腹時血糖値、インシュリン値、および／または肝パネル（例えば、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、ＧＧＴＰ、ビリルビン、アルブミン、ナトリウム値）を含む、特定の血液試験結果が、この患者の疾患の重症度を示すことを含んでもよい。
【０１０４】
一部の実施形態において、試験した対象は、ＮＡＳＨ／ＮＡＦＬＤ以外の肝疾患を有する。
【０１０５】
一部の実施形態において、試験した対象は、（ミトコンドリアの機能を高める）ソラフェニブで治療される。これらの実施形態によると、本方法は、ＯＢＴ値の標準化および／または異なるカットオフの使用をさらに含む。一部の実施形態において、ソラフェニブで治療した患者の値を修正するためにあるアルゴリズムを使用する。例えば、呼気検査の結果を、ソラフェニブの用量、頻度、およびすでに終了した治療の回数の関数として標準化してもよい。
【０１０６】
同様に、このことが、いずれかの化学療法、放射線療法および補助薬物療法、免疫療法、または細胞内機構の阻害剤、または上記の組み合わせを含む他のいずれかの種類の療法に使用されてもよい。他の実施形態において、この対象は、ソラフェニブで治療されていない対象である。
【０１０７】
本方法は、呼気中の総ＣＯ２を監視することを含む。ＣＯ２は、例えば、カプノグラフィーにより監視されてもよい。このことは、ＨＣＣの評価に関連しない変数を導入する代謝率および／またはＣＯ２産物における試験の長さおよび変動を最小限にしてもよい。
【０１０８】
本方法は、呼気中の総ＣＯ２を監視することにより得られる少なくとも１つの関連パラメータと組み合わせて、オクタン酸塩の代謝産物を監視することにより得られた少なくとも１つの呼気に関連したパラメータを分析することを含む。本方法は、少なくとも１つの生理学的および／または医学的パラメータと組み合わせて、オクタン酸塩の代謝産物を監視することにより得られる少なくとも１つの呼気に関連したパラメータを分析することをさらに含む。この生理学的および／または医学的パラメータは、年齢、性別、体重、身長、血液に関連するパラメータ、肥満度指数（ＢＭＩ）、腹囲、薬物療法関連パラメータ、背景となる疾患、またはそれらのいずれかの組み合わせを含んでもよい。可能な形態のそれぞれが、本発明の実施形態のそれぞれを示す。
【０１０９】
一部の実施形態において、予測スコアを作成するために、オクタン酸塩呼気検査の結果を、対象の人工統計または臨床データと組み合わせてもよい。
【０１１０】
一部の実施形態においては、人工統計のパラメータをも考慮し、評価する。
【０１１１】
一部の実施形態において、本方法は、少なくとも呼気検査に関連したパラメータおよび人口統計のパラメータに基づいた肝障害スコア（ＨＩＳ）をコンピュータで計算することをさらに含む。
【０１１２】
限定するものではないが、人口統計のパラメータの例は、身長、体重、年齢、性別、喫煙の習慣、病因、合併症に関して知られている情報、またはそれらの組み合わせを含む。この人口統計の情報は、
（ｉ）呼気検査に影響する患者間の因子を補填する、および／または
（ｉｉ）呼気検査データと共に、疾患に影響する因子を処理する
ために使用され、疾患の重症度および／または状態の信頼可能な予測を提供することができてもよい。この情報は、以下の、身長および体重、年齢、性別、喫煙の習慣、病因、（限定するものではないが、シャント、門脈高血圧症、脳症、静脈瘤、静脈りゅう出血、ビルビリンなどの血液検査の異常、浮腫および／または腹水症、非代償性肝硬変、オクタン酸塩の代謝経路に影響があってもよい特定の薬剤の消費を含む）合併症に関して知られている情報、ならびにＣＴＰ（Ｃｈｉｌｄ−Ｔｕｒｃｏｔｔｅ−Ｐｕｇｈ）、ＭＥＬＤ（Ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  Ｅｎｄｓｔａｇｅ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ）スコアおよび／またはナトリウムＭＥＬＤ（Ｎａ−ＭＥＬＤ）スコアなどの肝疾患の重症度を評価する一般的なスコアなどのリスト（および／または他のいずれかの関連情報）から選択した１つ以上の項目に関連してもよい。
【０１１３】
ＨＩＳスコアをコンピュータで計算する情報は、国際公報第２０１０／０１３２３５号に見出すことができる。
【０１１４】
一般的に、本明細書に説明される、検出、監視、区別、評価、測定、識別、定量化などは、装置、呼気収集システム、分析器ユニット、キャブリレーション装置、アルゴリズムおよび米国特許第６，１８６，９５８号、第６，４９１，６４３号および第６，６５６，１２７号および米国特許出願公報第２００３／０２１６６６０号および第２００１／００２１８１５号に開示される方法のいずれかにより行われてもよい。
【０１１５】
本発明の方法に適切な装置の追加的な例は、限定するものではないが、国際公報第２００７／０５４９４０号および国際公報第２０１０／０１３２３５号に記載される。
【０１１６】
概して、本発明の方法に適切な装置は、異なる分子量である、２つの化学的に同一の気体の比率を測定することのできる、非常に感度の良いガス分析器を含む、呼気検査分析器を含む。この気体分析器は、対象の呼気中に存在してもよい同位体標識した気体のわずかな定量を測定することができる。
【０１１７】
一部の実施形態において、呼気サンプルを分析するための少なくとも２つの様式がある。この分析器は、個体の呼気に関する分析を実施することができ、または患者から連続して収集した患者の呼気の複数のサンプルをオンライン上で分析することができる。
【０１１８】
一部の実施形態において、この呼気検査分析器は、呼気分析チャンバ、患者から呼気分析チャンバまで呼気を運搬する呼気注入管、ならびに吐気分析チャンバ内の気体を分析し、患者により吐き出された気体の第１の分析を行うために作動する気体分析器を含む。
【０１１９】
一部の実施形態において、同位体標識したオクタン酸塩の代謝産物の監視は、連続して測定することにより行われる。一部の実施形態において、オンラインの監視はリアルタイムで行われ、対象はその後の分析のために呼気を提供し続ける。オンライン監視に適切な装置は、例えば、標識したオクタン酸塩、またはオクタン酸塩もしくは誘導体の代謝産物内の同位体レベルを監視するために適合した１つ以上の呼気センサ、および連続モードの際の１つ以上のセンサのオンラインサンプルの測定に適合したコントローラを含んでもよい。
【０１２０】
この装置は、連続モードの際の１つ以上のセンサのサンプル測定に適合してもよく、この対象は、例えば鼻カニューレを介して呼気のサンプリングの間、装置と接触している。この装置は、呼気サンプルを自動的に収集および分析するために適合されてもよい。
【０１２１】
この装置は、カプノグラフィーセンサなどの、呼気中のＣＯ２を監視するために適合した１つ以上の呼気センサをさらに含んでもよい。
【０１２２】
この装置は、呼気中のＣＯ２を監視することにより得られる少なくとも１つの呼気関連パラメータと組み合わせて、オクタン酸塩などの標識した基質の代謝産物内の同位体レベルを監視することにより得られる少なくとも１つの呼気関連パラメータを分析するように適合されたプロセッサをさらに含んでもよい。このプロセッサは、呼気検査を介した対象のＣＯ２呼気／産物における変化を訂正してもよい。
【０１２３】
一部の実施形態において、持ち運びできる診療所用のシステムは、対象に装着した鼻カニューレを介して、オンラインおよびリアルタイムで、連続して呼気を検出かつ収集し、ＣＯ２を分析してもよく、ならびに、リアルタイムでＨＣＣの状態を評価し、それにより、臨床での肝臓の経過観察の方法を提供することができてもよい。一部の実施形態において、このような試験は、１３ＣＯ２／１２ＣＯ２比率が１／１０００と同様に臨床的に関連する変分を正確に検出するための感度および正確度を提供するように設計される。
【０１２４】
一部の実施形態において、本発明の実施形態による呼気検査は、ポイントオブケア検査で実施されてもよい。
【０１２５】
いずれかの理論または作動機構にしばられるものではないが、一部の実施形態において、２ｃｍより小さな腫瘍をも含む、活動中のＨＣＣを有する患者のＯＢＴの低下が、これらの患者の総合的なミトコンドリアの機能に影響する腫瘍細胞により分泌される因子に反映されてもよい。
【０１２６】
一部の実施形態において、この推定上の因子を阻害するいずれかの種類の療法が、悪性（腫瘍）工程の緩和にある効果があってもよい。
【０１２７】
いずれかの理論または作用機構にしばられるものではないが、一部の実施形態において、その腫瘍の血管過多による腫瘍内、または腫瘍細胞内もしくはその細胞の間のいずれかの腫瘍におけるオクタン酸塩を補足する。
【０１２８】
一部の実施形態において、オクタン酸塩または腫瘍細胞により分泌される因子を補足する両機構が、同時に行われてもよい。
【０１２９】
一部の実施形態において、オクタン酸塩は、腫瘍内の化学療法を送達し、それにより、望まれていない薬剤の全身性の副作用を予防および低減し、腫瘍内部に高濃度の薬剤を使用することができる方法としての化学療法剤と組み合わせることができる。
【０１３０】
一部の実施形態において、これらの治療剤は、同様に、化学療法、限定するものではないが、イリジウムなどの放射性基質を含む放射線療法、免疫療法、遺伝子療法、または上述のいずれかの組み合わせの内のいずれかの種類をも含む。したがって、このオクタン酸塩は、この療法を送達するための薬剤またはキャリアーとして扱うことができる。
【０１３１】
一部の実施形態において、このオクタン酸塩は、腫瘍内に濃縮されるため、画像検査の手段として、例えば、ＣＴまたはＭＲＩで使用される場合のリポドールのような、現在知られている薬剤の効率的な代替物として扱うこともできる。
【０１３２】
本発明の方法は、肝臓のミトコンドリアによるオクタン酸塩代謝物（Ｃ８Ｈ１６Ｏ２）に基づく。（オクタン酸塩などの）脂肪酸の代謝物および１３ＣＯ２の形体の１３Ｃ炭素の放出は、β酸化、１３Ｃに標識したアセチル−ＣｏＡ（ＡｃＣｏＡ）の産生および（クエン酸回路もしくはクレバス回路としても知られている）トリカルボン酸（ＴＣＡ）回路での１３Ｃのその後の放出を含む、複合的なステップを必要とする。不適当なＴＣＡの機能は、ＡｃＣＯＡの蓄積を引き起こしてもよい。代替的な経路がＡｃＣｏＡに存在することにより、ケトン体を産生し、または脂質を生合成することとなり、呼気検査内で検出されなくなることが知られている。ＴＣＡ回路内で反応し続けている標識したオクタン酸塩のパーセンテージ対キナーゼ体の産生が行われる標識したオクタン酸塩のパーセンテージは、対象の生理条件に依存してもよい。例えば、飢餓条件／空腹条件において、効率的でないＴＣＡ工程となるオクタン酸が、（グルコース合成／糖新生において細胞により使用されるために）必要とされる。このＴＣＡ回路の経路で「取得した」標識したオクタン酸塩の量および代替的な経路で「取得した」標識したオクタン酸塩の量の間の変動（場合によっては予期していない）比率は、呼気検査の正確度に影響してもよい。一部の実施形態において、
ａ．ＴＣＡ回路が飽和することを避けるために、オクタン酸またはオクタン酸塩の（約１００ｍｇの範囲内など）低用量を使用するステップであって、一般的に投与されるオクタン酸塩の用量は、例えば、約１ｍｇ／ｋｇから３ｍｇ／ｋｇで、体重により選択され、約１５ｍｇ（子供の場合、１ｍｇ／ｋｇ）から約４５０ｍｇ（肥満患者の場合、３ｍｇ／ｋｇ）の範囲の用量とすることのできるステップと、
ｂ．患者を、代謝条件が多少安定しており、食事を消費することによる変分に対して感度が低いことを保証する飢餓状態後＞８時間より後に試験してもよいステップと、
ｃ．試験食が、グルコースおよび１３Ｃオクタン酸塩を含んでもよいステップと、
ｄ．試験食が、アスパルテーム（および１３Ｃオクタン酸塩）を含んでもよく、オキサロ酢酸の源であるアスパラギン酸を提供するステップと、
ｅ．ｃおよび／またはｄに対する代替物のステップであって、グルコース／アスパルテームを、この試験の前に投与するステップと、
ｆ．ケトン産生経路を阻害／低減する薬剤（例えば、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤）を使用するステップと、
ｇ．１３Ｃオクタン酸塩呼気検査と結合して、生化学検査でケトン体の産生物（ケトン尿および／または血清もしくは血漿ケトン体の濃度）を測定して、この試験の診断正確度を改善するステップと、
ｈ．血液中の１３Ｃオクタン酸塩の形跡を探索するステップと、
を、オクタン酸呼気検査の診断の正確度を上げるために、相互に独立して、または任意に組み合わせることにより、提供する。
【０１３３】
別の実施態様により、本発明は、対象のＨＣＣの検出、予後診断、および／または経過観察のための装置であって、この装置が、対象のオクタン酸塩代謝物および対照となるオクタン酸塩代謝物の間の差異を検出するように構成されるプロセッサを含む装置を提供し、オクタン酸塩代謝物が減少すると、ＨＣＣを示す。
【０１３４】
一部の実施形態において、このプロセッサは、同位体標識したオクタン酸塩の投与の後に、対象の呼気中の同位体標識したオクタン酸塩の代謝産物を監視し、基準オクタン酸塩代謝物と、対象のオクタン酸塩代謝物を比較するように構成され、オクタン酸塩代謝物が有意に減少すると、活動中のＨＣＣを示す。
【０１３５】
一部の実施形態において、このプロセッサは、病因、治療、またはそれらの組み合わせによる呼気検査の値を標準化するように適合される。
【０１３６】
一部の実施形態において、このプロセッサは、ＤＯＢ曲線、ＰＤＲ曲線、およびＣＰＤＲ曲線のうちの少なくとも１つを計算および作成し、ならびに、基準となるパラメータの少なくとも１つと、このＤＯＢ、ＰＤＲまたはＣＰＤＲの内の少なくとも１つを比較するように適合される。
【０１３７】
一部の実施形態において、この少なくとも１つのパラメータは、ＰＤＲの最大値（ピークの高さ）ピークの存在する時間（ピーク時間）および代謝物の比率の勾配からなる群から選択される。可能な形態のそれぞれが、本発明の実施形態のそれぞれに示される。
【０１３８】
一部の実施形態において、このプロセッサは、オクタン酸塩代謝物の差異に基づくＨＣＣに関連した出力表示をコンピュータ計算するようにさらに適合される。
【０１３９】
一部の実施形態において、このプロセッサは、ＤＯＢ、ＰＤＲ、および／またはＣＰＤＲのうちの少なくとも１つのパラメータの差異に基づき、ＨＣＣに関連する出力表示をコンピュータ計算するようにさらに適合される。
【０１４０】
一部の実施形態において、このプロセッサは、呼気中の総ＣＯ２を同時に監視するようにさらに適合される。
【０１４１】
以下の実施例は、本発明のある実施形態をより完全に例示するために存在する。しかしながら、これらは本発明の広い範囲を限定するものとみなされるものではない。当業者は、本発明の範囲を逸脱することなく、本明細書に開示される原則の多くの変分および修正を容易に読み取ることができる。
【実施例】
【０１４２】
実施例１：活動中のＨＣＣと活動していないＨＣＣとの比較、および対照における１３Ｃオクタン酸塩呼気検査値
活動中のＨＣＣまたは（成功した療法後の）活動していないＨＣＣを有する患者を募集した。この活性の度合いを、ＣＴおよび／またはＭＲＩの下で、対照媒体（ｌｉｐｉｏｄｏｌ（登録商標））の注入に基づき決定した。さらに、いずれのＨＣＣの兆候を有さない硬化性の患者をも同様に募集した（対照のグループとして使用した）。この研究の集団に関する情報を、本明細書の以下の表１、２、および３に提供する。
【表１】
2014517261.tif 000002
【表２】
2014517261.tif 000003
※１人の男性患者は、ＯＢＴ処理前にネクサバール（商標）（ソラフェニブ）の治療中であった。
【表３】
2014517261.tif 000004
【０１４３】
治療の前後にＢｒｅａｔｈＩＤ（登録商標）装置（Ｅｘａｌｅｎｚ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｔｄ．）を使用して、動的１３Ｃオクタン酸塩呼気検査（ＯＢＴ）をすべての患者に行った。３人の男性の対象であって、２人はＨＣＶを有し、１人はＮＡＳＨ活動中のＨＣＣを有する対象を（１つを治療前に、１つを試験の後に）２回試験を行った。
【０１４４】
この呼気検査を、以下の手順により実施した。
ａ．この研究の対象の調製
（監視する薬物療法を含む）一晩の飢餓状態の後、呼気検査を行うよう患者に依頼した。この患者は、試験の１時間前までに少量の水を飲むことが許可されていた。（呼吸率および脈拍が、この試験を介して正常かつ一定であることを保証するために、）
試験の開始前に、患者は３から５分間の休憩を行った。
ｂ．１３Ｃオクタン酸塩の調製
空の使い捨て紙カップに１００ｍｇの１３Ｃオクタン酸塩および１５０ｃｃの水を添加した。この混合物を、この基質が完全に溶解するまで混合した。
この試験の直前に、使い捨てコップにこの溶液を注いだ。
ｃ．呼気検査の投与
ｉ．各患者に室内の椅子に座るように依頼してこの試験を実施した。
ｉｉ．鼻カニューレをＢｒｅａｔｈＩＤ（登録商標）装置および患者に取り付けた。
ｉｉｉ．ＢｒｅａｔｈＩＤ（登録商標）装置を起動し、約２分間、患者が吐出したＣＯ２のベースラインを収集した。
ｉｖ．その後、医療スタッフおよび試験基質を飲用するための装置に関する表示により説明が行われた。
ｖ．椅子に座ったままの患者は、その後の６０分間、正常な方法で呼吸した。
ｖｉ．ＢｒｅａｔｈＩＤ（登録商標）装置で、リアルタイムで患者の呼気を連続的に測定および分析した。この試験基質が代謝されると、１３ＣＯ２／１２ＣＯ２比率の値が変化し、ＢｒｅａｔｈＩＤ（登録商標）システムにより、リアルタイムでこの値を計算した。同様に、ＢｒｅａｔｈＩＤ（登録商標）は、％／時間で表現されるＰＤＲ（ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ  ｄｏｓｅ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ）およびＣＰＤＲ（ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ  ＰＤＲ）をもリアルタイムで計算した。リアルタイムで計算した際に、ＢｒｅａｔｈＩＤ（登録商標）装置のスクリーン上にこれらの値が表示される。
ｖｉｉ．どんな時もこの装置が患者の呼気を検出するわけではない場合、または所望の試験に必要なものから逸脱したものがある場合、この装置では適切な警告信号が生じる。
ｖｉｉｉ．この手法が完了した際に、患者の鼻カニューレをはずし、患者を試験室から退出させた。
【０１４５】
内科医または他のいずれかの資格を有するいずれかのスタッフの監督の下で、この患者の全試験が行われた。
【０１４６】
各呼気検査のために、ＰＤＲ（ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ  ｄｏｓｅ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ）およびＣＰＤＲ（ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ  ＰＤＲ）曲線を作成した。このＰＤＲのピーク値は、活動中のＨＣＣ／活動していないＨＣＣおよび対照によりグループ分けし、ボックスプロット図に表示した。ダイアモンド型平均値の表示も同様に作成した。この結果を図１に示す。
【０１４７】
このデータを、有効なエクセルシートに記入し、バージョン２．１２のＡｎａｌｙｚｅ−Ｉｔ（登録商標）ソフトウェアで分析した。
【０１４８】
さらに、ＲＯＣ（ｒｅｃｅｉｖｅｒ  ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）曲線を作成し（図２）、活動中のＨＣＣと、活動していない（非活動）ＨＣＣまたは対照とを区別する際にＰＤＲピークの予測値を評価するために、ＡＵＣＲＯＣを計算した。０．８９（９５％ＣＩ  ０．７４−１．００，ｐ０．０００１）のＡＵＣＲＯＣ値を得た。
【０１４９】
（図１の）ボックスプロット図の異常値は、ＨＣＣの存在により、ＯＢＴ試験の前にソラフェニブで治療した患者から得たサンプルと対応する。以前の研究（例えば、Ｋｕｒｏｓｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６９：３９２７−３９３６基準）で、ソラフェニブはミトコンドリアの機能を改善できることが示されてきた。したがって、ＯＢＴ値は、ソラフェニブで治療したＨＣＣ患者においてより高い値であることが予測される。この結果の第２の分析を実施し、この分析を、ソラフェニブで治療した患者から得られたサンプルのない状態で実施した。このＲＯＣ曲線は、０．９５のＡＵＣＲＯＣ値（９５％ＣＩ  ０．８６−１．００，ｐ０．０００１）を示す図３に示される。
【０１５０】
ＮＡＳＨの存在が、ＯＢＴ値を高めることが以前の研究から知られている（例えば、Ｂｒａｕｎ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．  “Ｔｈｅ  ｕｎｉｑｕｅ  ｂｒｅａｔｈ  ＩＤ  ｔｅｓｔ  ｓｙｓｔｅｍ  ｄｉａｇｎｏｓｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｅｄｉｃｔｓ  ｔｈｅ  ｅｘｔｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｉｎｊｕｒｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ”，  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，  ２００５；４２：  ７５２Ａ．を基準）。実際、本研究において、ＨＣＣを有する２人のＮＡＳＨの対象のサンプルは、ＯＢＴの結果が上昇した。第３の分析を実施し、この分析では、ＨＣＣを有し、ソラフェニブで治療した患者を含まないＮＡＳＨの対象から得られたサンプルを使用していない。このより明らかとなったサンプルからボックスプロットを再作成した（図４基準）。ＲＯＣ分析により、ＮＡＳＨがなく、ソラフェニブで治療した対象を含まないデータセットを分析する際に、活動中のＨＣＣおよび活動していないＨＣＣまたは対照の間を完全に区別されることを意味する、１のＡＵＣＲＯＣ値を示した（ｐ＜０．０００１）。この観察から、診断の目的のために、病因（例えば、ＮＡＳＨを有するかまたは有さないかが）含まれることが示唆される。ＮＡＳＨのないカットオフは、ピークが２６％／時間であることが示唆される（図４中の破線を基準）。
【０１５１】
上述するように、（２人はＨＣＶを有し、１人はＮＡＳＨを有する）３人の男性の対象を（治療の前に１回、その後に１回）２回試験した。これらの対象の呼気検査の値が、ＯＢＴおよび患者の状態間で完全に一致したことを示した。
対象１−成功した治療
第１の診断で、ＯＢＴピーク＝１６．３０％／時間を示した。
ＴＡＣＥの３か月後の第２の診断で、ＯＢＴピーク＝３１．７８％時間を示した。
ＨＣＣは、ＴＡＣＥの後不活性となった。（ＡＦＰは、それぞれ５．８４および５．４８ｎｇ／ｍｌであり、ＡＦＰの測定の感度限界を示す。概して、１０ｎｇ／ｍｌより大きなＡＦＰ値は、異常と考えられる。通常の範囲内の変化（９以下）は、それぞれ判定されず、評価することができない）。
対象２−ＴＡＣＥ後活性したままのＨＣＣ
第１の診断で、ＯＢＴピーク＝２５．３６％／時間を示した。
ＴＡＣＥの３か月後の第２の診断で、ＯＢＴピーク＝２２．１９％／時間を示した。
患者が臨床的に悪化し、ＡＦＰは、３５００から４８００ｎｇ／ｍｌまで増加した。
対象５−ＴＡＣＥ後治療の成功したＮＡＳＨ患者
第１の診断にて、ＯＢＴピーク＝３０．３５％／時間を示した。
ＴＡＣＥの５か月後の第２の診断で、ＯＢＴピーク＝３７．６３％／時間を示した。
患者が臨床的に改善し、ＣＴは活動していないＨＣＣを示した。
同様に、このＨＣＣの活性が、治療の経過観察のために決定することもできることが観察された。このＮＡＳＨの対象は、ＨＣＣの活性状態を決定する別の閾値を有していてもよいが、このＯＢＴピークは、成功した治療の後に、ＮＡＳＨの患者において改善した。
【０１５２】
異なる分析から得られたＯＢＴの性能のパラメータをまとめて、以下の本明細書の表４に提供する。
【表４】
2014517261.tif 000005
【０１５３】
活動中のＨＣＣおよび活動していないＨＣＣ＋対照の間の差異を完全に示す上述の１のＡＵＣＲＯＣ値（ｐ＜０．０００１）は、ネクサバール（商標）およびＮＡＳＨを除いたデータセットにて得られた。
【０１５４】
実施例２  ＰＤＲ曲線
追加的な１３Ｃオクタン酸塩呼気検査（ＯＢＴ）を実施し、この結果を図５から９に示した。この試験を、上記の実施例１に記載される手順により実施した。
【０１５５】
図５は、肝臓癌のない典型的な硬化性患者のＯＢＴ  ＰＤＲ曲線を示す。３０分以内にＰＤＲピークに到達し、このピークは相対的に高い（〜３０％時間）
【０１５６】
図６は、肝臓癌を有する典型的な硬化性の患者のＯＢＴ  ＰＤＲ曲線を示す。このピークは遅く（３０分後であり）、概して低い。
【０１５７】
図７は、肝臓癌を有する典型的な硬化性の患者の、３つの連続したＯＢＴのＰＤＲ曲線を示す。すべての曲線は低く、ＴＡＣＥの治療（部分的に成功した治療後の２番目のＯＢＴ治療）が、いくらかの改善を曲線番号２で示したにも関わらず、ＨＣＣが再発したことを、第３の曲線ではっきりと見ることができる（以前の試験から１ヶ月後の３番目の曲線は、ＨＣＣの再発を示す）。
【０１５８】
図８は、成功したＴＡＣＥの治療を行った肝臓癌を有する典型的な硬化性の患者の、３つの連続したＯＢＴのＰＤＲ曲線を示す。治療前の２つの曲線は低い。第３の曲線は、非ＨＣＣの場合の特性（高いＰＤＲピーク）を示し、それゆえに、ＨＣＣ治療が成功したという事実を指摘する。この病巣は、７ｃｍのまま成長しておらず、不活性であった。
【０１５９】
図９は、成功したＴＡＣＥの治療を行った肝臓癌を有する典型的な硬化性の患者の、２つの連続したＯＢＴのＰＤＲ曲線を示す。治療前の曲線は低い。第２の曲線は、非ＨＣＣの場合の特性（高いＰＤＲピーク）を示し、それゆえに、ＨＣＣ治療が成功したという事実を指摘する。
【０１６０】
前述の特定の実施形態の説明は、現在の知識を適用することにより、本発明の一般的な性質を完全に開示し、過度の実験をすることなく、一般的な概念から逸脱することなく、このような特異的な実施形態のような多様な使用法を容易に修正および／または適合することができ、したがって、このような適合および修正は、開示された実施形態と同様の意味および範囲内と理解される意図を有する。本明細書で使用される文言および用語は、記述を目的とするものであり、限定するものではない。開示された多様な機能を実施するための手段、材料およびステップは、本発明を逸脱するものではない代替的な形態の変動ととられてもよい。
【図１】
2014517261.tif 000006
【図２】
2014517261.tif 000007
【図３】
2014517261.tif 000008
【図４】
2014517261.tif 000009
【図５】
2014517261.tif 000010
【図６】
2014517261.tif 000011
【図７】
2014517261.tif 000012
【図８】
2014517261.tif 000013
【図９】
2014517261.tif 000014
【国際調査報告】
2014517261.tif 000015