(57)【要約】  本発明は、異なる形態のＨＣＶ阻害性化合物に関する。【選択図】図１
2014524442.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下よりなる群から選択される形態を持つ、化合物Ａ：
ａ）（ｉ）銅Ｋα放射線を用いて得られる、約２０．５、５．０および１８．２度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターン；または（ｉｉ）約５．１４、６．３１、１２．４９、１８．３５、２６．８１、２８．０３、３０．３３、３１．２７、３４．９５、３５．９９、３８．６８、４２．０１、５４．９３、５６．３９、６０．１４、７４．２０、１０７．０２、１２０．１１、１２１．６０、１２９．７３、１３４．３５、１３５．９５、１４２．８９、１４８．４７、１５５．３７、１５７．３２、１６０．９０、１６８．３２、１７２．１７および１７５．５３ｐｐｍにおけるピークを含む固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲのいずれかを特徴とする、水和物ＩＩＩ；
ｂ）銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１１．７、１６．６および１１．２度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする、水和物ＩＩ；
ｃ）銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１８．４、９．１および９．８度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする結晶性Ｎａ塩；
ｄ）銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１８．２、８．９および２０．３度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする結晶性Ｋ塩；
ｅ）（ｉ）銅Ｋα放射線を用いて得られる、約８．６、２０．６および２６．６度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターン；または（ｉｉ）約４．２２、７．２３、１１．４５、１７．７９、２４．０４、２６．９５、２８．２９、３１．１５、３２．４７、３２．４７、３３．４６、３４．０３、３５．７４、４２．３２、５３．５０、５６．０５、５６．９６、７７．４９、１０８．９５、１１９．６５、１２２．５５、１３１．０５、１３３．１３、１３５．３８、１４２．２８、１５０．７８、１５６．０３、１５７．９９、１６１．３６、１７１．４０、１７３．４２、１７４．３０ｐｐｍにおけるピークを含む固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲのいずれかを特徴とする、水和物Ｉ；
ｆ）（ｉ）銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１４．７、１１．５および７．１度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターン；または（ｉｉ）約３．９０、５．３０、６．９９、１０．４９、１３．１３、１７．８１、２４．７３、２７．５２、２８．１４、２９．４２、３１．０２、３２．８０、３６．０８、３９．２２、４２．４５、５３．６２、５５．９３、５９．１４、６０．７６、７４．７７、１０９．２２、１１１．１９、１１．３８、１２０．２４、１２２．５０、１３３．９６、１３９．７４、１４７．２、１４８．９０、１５４．６５、１５８．２５、１５９．５３、１６０．１２、１７０．１４、１７１．０５、１７２．０８、１７３．４７および１７４．４６ｐｐｍにおけるピークを含む固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲのいずれかを特徴とする、水和物ＩＶ；
ｇ）（ｉ）銅Ｋα放射線を用いて得られる、約９．１、１８．３および１９．８度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターン；または（ｉｉ）約７．８６、８．９２、１３．１０、１８．３１、２３．７２、２７．４４、２８．４７、３０．７７、３５．７９、３６．２５、３７．１５、３７．１５、４２．９５、５３．１３、５５．６７、５７．３１、６０．４７、６２．０６、７５．０９、１１０．５９、１１２．２４、１１８．３２、１３２．１８、１３４．０５、１３５．８３、１３９．８８、１４８．３０、１５５．１９、１５７．９７、１５９．４１、１７０．３１および１７５．２０におけるピークを含む固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲのいずれかを特徴とする、水和物Ｖ；ならびに
ｈ）（ｉ）銅Ｋα放射線を用いて得られる、約２０．５、１２．８および１９．４度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターン；または（ｉｉ）約４．８７、６．２４、１１．７０、１２．８５、１８．３６、２６．５５、２８．３１ｍ  ３１．５１、３４．９８、３８．４７、４２．０９、５４．２７、５６．１２、６０．１０、７３．４９、７３．９７、１０５．９１、１０８．０４、１１８．３９、１１９．７５、１２１．３３、１２９．９６、１３３．８７、１３６．１３、１４２．２６、１４２．９７、１４６．８５、１４８．３６、１５４．９７、１５７．３２、１６０．７１、１６８．２３、１７２．２１および１７５．３４ｐｐｍにおけるピークを含む固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲのいずれかを特徴とする、水和物ＶＩ。
【請求項２】
治療的有効量の請求項１に記載の化合物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項３】
患者に治療的有効量の請求項１に記載の化合物を投与する工程を含む、患者におけるＨＣＶを処置する方法。
【請求項４】
有効量の請求項１に記載の化合物を含む、患者におけるＨＣＶの処置に用いられる薬物製剤。
【請求項５】
ＨＣＶの処置における使用のための、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物を作成する方法であって、化合物Ａが水和物ＩＩＩであり、８０：２０ｖ／ｖアセトン対水から０：１００ｖ／ｖアセトン対水のアセトン／水比を用いて化合物Ａを結晶化させ、そして乾燥させることを含むプロセスにより作成される方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、異なる形態のＨＣＶ阻害性化合物に関する。ＨＣＶ阻害性化合物は、治療および研究の用途を持つ。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染は、重大な健康問題である。ＨＣＶ感染は、感染した個体の相当数を慢性肝臓疾患、例えば硬変および肝細胞癌などに至らせる。いくつかのウイルスによりコードされる酵素、メタロプロテアーゼ（ＮＳ２−３）、セリンプロテアーゼ（ＮＳ３）、ヘリカーゼ（ＮＳ３）およびＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂ）などが、治療的介入の推定標的である。
【０００３】
ＨＣＶ感染に対する可能性のある処置は、Ｂａｌｓａｎｏ，Ｍｉｎｉ  Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．８（４）：３０７−３１８，２００８、Ｒｏｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ８：５３３−５６２，２００８、Ｓｈｅｌｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ  １６（８）：１１７１−１１８１，２００７およびＤｅ  Ｆｒａｎｃｅｓｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８：１−１６，２００３などの異なる参考文献中で論じられている。
【０００４】
ＨＣＶプロテアーゼ活性を阻害することができるマクロラクタム化合物を記載している刊行物の例として、ＭｃＣａｕｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２０１１０１４４８７号パンフレット；Ｈａｒｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２０１００１１５６６号パンフレット；Ｌｉｖｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００９１３４６２４号パンフレット；ＭｃＣａｕｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００９１０８５０７号パンフレット；Ｌｉｖｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００９０１０８０４号パンフレット；Ｌｉｖｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００８０５７２０９号パンフレット；Ｌｉｖｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００８０５１４７７号パンフレット；Ｌｉｖｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００８０５１５１４号パンフレット；Ｌｉｖｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００８０５７２０８号パンフレット；Ｃｒｅｓｃｅｎｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００７１４８１３５号パンフレット；Ｄｉ  Ｆｒａｎｃｅｓｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００７１３１９６６号パンフレット；Ｈｏｌｌｏｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００７０１５８５５号パンフレット；Ｈｏｌｌｏｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００７０１５７８７号パンフレット；Ｈｏｌｌｏｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００７０１６４４１号パンフレット；Ｈｏｌｌｏｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００６１１９０６１号パンフレット；Ｌｉｖｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１３０：４６０７−４６０９，２００８；およびＬｉｖｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ５４：３０５−３１１，２０１０が挙げられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２０１１／０１４４８７号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２０１０／０１１５６６号パンフレット
【特許文献３】国際公開第２００９／１３４６２４号パンフレット
【特許文献４】国際公開第２００９／１０８５０７号パンフレット
【特許文献５】国際公開第２００９／０１０８０４号パンフレット
【特許文献６】国際公開第２００８／０５７２０９号パンフレット
【特許文献７】国際公開第２００８／０５１４７７号パンフレット
【特許文献８】国際公開第２００８／０５１５１４号パンフレット
【特許文献９】国際公開第２００８／０５７２０８号パンフレット
【特許文献１０】国際公開第２００７／１４８１３５号パンフレット
【特許文献１１】国際公開第２００７／１３１９６６号パンフレット
【特許文献１２】国際公開第２００７／０１５８５５号パンフレット
【特許文献１３】国際公開第２００７／０１５７８７号パンフレット
【特許文献１４】国際公開第２００７／０１６４４１号パンフレット
【特許文献１５】国際公開第２００６／１１９０６１号パンフレット
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｂａｌｓａｎｏ，Ｍｉｎｉ  Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．８（４）：３０７−３１８，２００８
【非特許文献２】Ｒｏｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ８：５３３−５６２，２００８
【非特許文献３】Ｓｈｅｌｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ  １６（８）：１１７１−１１８１，２００７
【非特許文献４】Ｄｅ  Ｆｒａｎｃｅｓｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８：１−１６，２００３
【非特許文献５】Ｌｉｖｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１３０：４６０７−４６０９，２００８
【非特許文献６】Ｌｉｖｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ５４：３０５−３１１，２０１０
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、異なる形態の化合物Ａまたはその薬学的な塩を包含する。
【化１】
2014524442.tif 000003
【０００８】
結晶性化合物Ａを対象とする本発明の態様として、治療的有効量の化合物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物；ＨＣＶ感染患者の化合物での処置；医薬における化合物の使用；患者におけるＨＣＶの処置に用いられる薬物製剤；ならびにアセトンおよび水を用いて化合物Ａから水和物ＩＩＩを作成する方法が挙げられる。
【０００９】
本発明の他の実施形態、態様および特徴は、本明細書中でさらに記載されるか、または後に続く記載、実施例および添付の特許請求の範囲から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】化合物Ａ結晶性水和物ＩＩのＸ線回折パターンを示す図である。
【図２】化合物Ａ水和物ＩＩＩのＸ線回折パターンを示す図である。
【図３】化合物Ａ水和物ＩＩＩの熱重量分析曲線を示す図である。
【図４】化合物Ａ水和物ＩＩＩの示差走査熱量測定曲線を示す図である。
【図５】化合物Ａ水和物ＩＩＩについての固体Ｃ−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲを示す図である。
【図６】結晶性化合物Ａ  Ｎａ塩のＸ線回折パターンを示す図である。
【図７】結晶性化合物Ａ  Ｋ塩のＸ線回折パターンを示す図である。
【図８】化合物Ａ結晶性水和物１のＸ線回折パターンを示す図である。
【図９】化合物Ａ水和物Ｉについての固体Ｃ−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲを示す図である。
【図１０】化合物Ａ結晶性水和物ＩＶのＸ線回折パターンを示す図である。
【図１１】化合物Ａ水和物ＩＶについての固体Ｃ−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲを示す図である。
【図１２】化合物Ａ結晶性水和物ＶのＸ線回折パターンを示す図である。
【図１３】化合物Ａ水和物Ｖについての固体Ｃ−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲを示す図である。
【図１４】化合物Ａ結晶性水和物ＶＩのＸ線回折パターンを示す図である。
【図１５】化合物Ａ水和物ＶＩについての固体Ｃ−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
ＨＣＶ活性を阻害することができるマクロラクタム化合物には、ＨＣＶ活性をインビボで阻害すること、ＨＣＶ活性をインビトロで阻害すること、およびＨＣＶ  ＮＳ３酵素活性を阻害することを含む異なる使途がある。ＨＣＶ活性のインビボ阻害は、治療的用途のために用いることができる。ＨＣＶ活性をインビトロで阻害することには、ＨＣＶ抵抗性変異体を得るために用いること、さらに、ＨＣＶレプリコンまたは酵素活性を阻害する官能基の能力を特性評価すること、およびＨＣＶの複製またはプロテアーゼ活性を研究することを含む異なる用途がある。
【００１２】
化合物Ａは、Ｈａｒｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２０１００１１５６６号パンフレット中に記載されている。Ｈａｒｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，の国際公開第２０１００１１５６６号パンフレットは、ＨＣＶレプリコン活性およびＮＳ３／４Ａを阻害する化合物Ａの能力を示すデータを包含する。
【００１３】
化合物Ａの形態
６個の異なる化合物Ａ水和物を同定した（形態Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶおよびＶ）。水和物ＩＩＩは、同定された最も安定な水和物形態であった。
【００１４】
水和物ＩＩを対象とする第一の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線（すなわち、放射線源がＣｕ  Ｋα１およびＫα２放射線の組み合わせである）を用いて得られる、３またはそれ以上の特徴的なピークを含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。特徴的なピークは図１中に示される。
【００１５】
第二の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１１．７、１６．６および１１．２度のおよその２Θ値の度合いの２Θ値（すなわち、２Θ値における反射）を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００１６】
本明細書中で提供される２Θ値に関する「約」への言及は、±０．１を示す。
【００１７】
この実施形態および後に続く類似した実施形態において、用語「約」は、２Θ値の各々を修飾するものと理解される。例として、表現「約１１．７、１６．６および１１．２」は、「約１１．７、約１６．６および約１１．２」についての省略表現である。
【００１８】
水和物ＩＩを対象とする第三の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１１．７、１６．６、１１．２、１５．１および１６．１度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００１９】
水和物ＩＩを対象とする第四の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１１．７、１６．６、１１．２、１５．１、１６．１、２３．０、２０．９、８．０、２３．９、２５．０、１６．８、１７．８、１９．８、２２．５および８．３度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００２０】
別の実施形態において、水和物ＩＩは実質的に純粋である。「実質的に純粋である」への言及は、特定の形態が、存在する化合物のうちの少なくとも５０％を占めることを意味する。異なる実施形態において、水和物ＩＩは、存在する化合物Ａのうちの少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または約９４％〜９８％を占める。
【００２１】
水和物ＩＩＩを対象とする第一の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、３またはそれ以上の特徴的なピークを含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。特徴的なピークは図２中に示される。
【００２２】
水和物ＩＩＩを対象とする第二の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約２０．５、５．０および１８．２度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００２３】
水和物ＩＩＩを対象とする第三の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約２０．５、５．０、１８．２、２０．１および２０．７度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００２４】
水和物ＩＩＩを対象とする第四の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約２０．５、５．０、１８．２、２０．１、２０．７、１４．１、２３．７、１３．１、１８．９、１５．３、２０．９、１１．４、１８．４、１４．７および１３．８度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００２５】
水和物ＩＩＩを対象とする第五の実施形態において、水和物は、図３中に提供される熱重量分析を特徴とする。
【００２６】
水和物ＩＩＩを対象とする第六の実施形態において、水和物は、図４中に提供される示差走査熱量測定曲線を特徴とする。
【００２７】
第七の実施形態は水和物ＩＩＩを対象とし、この水和物は、図５中に提供される固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲスペクトルを特徴とする。
【００２８】
第八の実施形態は水和物ＩＩＩを対象とし、この水和物は、約５．１４、６．３１、１２．４９、１８．３５、２６．８１、２８．０３、３０．３３、３１．２７、３４．９５、３５．９９、３８．６８、４２．０１、５４．９３、５６．３９、６０．１４、７４．２０、１０７．０２、１２０．１１、１２１．６０、１２９．７３、１３４．３５、１３５．９５、１４２．８９、１４８．４７、１５５．３７、１５７．３２、１６０．９０、１６８．３２、１７２．１７および１７５．５３ｐｐｍにおけるピークを含む固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲを特徴とする。
【００２９】
本明細書中で提供される固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲ  ２Θ値に関する「約」への言及は、±０．１を示す。
【００３０】
別の実施形態において、水和物ＩＩＩは実質的に純粋である。「実質的に純粋である」への言及は、特定の形態が、存在する化合物のうちの少なくとも５０％を占めることを意味する。異なる実施形態において、水和物ＩＩＩは、存在する化合物Ａのうちの少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または約９４％〜９８％を占める。
【００３１】
付加的な態様において、化合物Ａは、ＫまたはＮａ結晶性塩として提供される。これらの塩は水和物である。
【００３２】
化合物Ａ結晶性Ｎａ塩を対象とする第一の実施形態において、化合物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、３またはそれ以上の特徴的なピークを含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。特徴的なピークは図６中に示される。
【００３３】
化合物Ａ結晶性Ｎａ塩を対象とする第二の実施形態において、化合物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１８．４、９．１および９．８度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００３４】
化合物Ａ結晶性Ｎａ塩を対象とする第三の実施形態において、化合物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１８．４、９．１、９．８、９．６、１９．３、１５．３および１６．５度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００３５】
化合物Ａ結晶性Ｎａ塩を対象とする第四の実施形態において、化合物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１８．４、９．１、９．８、９．６、１９．３、１５．３、１６．５、２２．５、１７．４、２０．２、８．４、２１．３、２６．９、４．８および２６．２度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００３６】
別の実施形態において、化合物Ａ結晶性Ｎａ塩は実質的に純粋である。「実質的に純粋である」への言及は、特定の形態が、存在する化合物のうちの少なくとも５０％を占めることを意味する。異なる実施形態において、化合物Ａ結晶性Ｎａ塩は、存在する化合物Ａのうちの少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または約９４％〜９８％を占める。
【００３７】
化合物Ａ結晶性Ｋ塩を対象とする第一の実施形態において、化合物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、３またはそれ以上の特徴的なピークを含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。特徴的なピークは図７中に示される。
【００３８】
化合物Ａ結晶性Ｋ塩を対象とする第二の実施形態において、化合物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１８．２、８．９および２０．３度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００３９】
化合物Ａ結晶性Ｋ塩を対象とする第三の実施形態において、化合物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１８．２、８．９、２０．３、１８．７および２２．５度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００４０】
化合物Ａ結晶性Ｋ塩を対象とする第四の実施形態において、化合物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１８．２、８．９、２０．３、１８．７、２２．５、８．４、１９．６、１６．７、２７．１、１０．３、２１．９、９．４、２１．２、２５．９および１２．５度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００４１】
別の実施形態において、化合物Ａ結晶性Ｋ塩は実質的に純粋である。「実質的に純粋である」への言及は、特定の形態が、存在する化合物のうちの少なくとも５０％を占めることを意味する。異なる実施形態において、化合物Ａ結晶性Ｋ塩は、存在する化合物Ａのうちの少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または約９４％〜９８％を占める。
【００４２】
水和物Ｉを対象とする第一の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、３またはそれ以上の特徴的なピークを含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。特徴的なピークは図８中に示される。
【００４３】
水和物Ｉを対象とする第二の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約８．６、２０．６および２６．６度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００４４】
水和物Ｉを対象とする第三の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約８．６、２０．６、２６．６、１７．４および１６．６度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００４５】
水和物Ｉを対象とする第四の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約８．６、２０．６、２６．６、１７．４、１６．６、１２．２、２１．２、１８．８、１５．０、２３．０、１４．１および１６．９度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００４６】
第七の実施形態は水和物Ｉを対象とし、この水和物は、図９中に提供される固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲスペクトルを特徴とする。
【００４７】
第八の実施形態は水和物Ｉを対象とし、この水和物は、約４．２２、７．２３、１１．４５、１７．７９、２４．０４、２６．９５、２８．２９、３１．１５、３２．４７、３２．４７、３３．４６、３４．０３、３５．７４、４２．３２、５３．５０、５６．０５、５６．９６、７７．４９、１０８．９５、１１９．６５、１２２．５５、１３１．０５、１３３．１３、１３５．３８、１４２．２８、１５０．７８、１５６．０３、１５７．９９、１６１．３６、１７１．４０、１７３．４２、１７４．３０ｐｐｍにおけるピークを含む固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲを特徴とする。
【００４８】
別の実施形態において、水和物Ｉは実質的に純粋である。「実質的に純粋である」への言及は、特定の形態が、存在する化合物のうちの少なくとも５０％を占めることを意味する。異なる実施形態において、水和物Ｉは、存在する化合物Ａのうちの少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または約９４％〜９８％を占める。
【００４９】
水和物ＩＶを対象とする第一の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、３またはそれ以上の特徴的なピークを含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。特徴的なピークは図１０中に示される。
【００５０】
水和物ＩＶを対象とする第二の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１４．７、１１．５および７．１度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００５１】
水和物ＩＶを対象とする第三の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１４．７、１１．５、７．１、９．３および１５．６度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００５２】
水和物ＩＶを対象とする第四の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１４．７、１１．５、７．１、９．３、１５．６、７．７および８．０度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００５３】
第七の実施形態は水和物ＩＶを対象とし、この水和物は、図１１中に提供される固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲスペクトルを特徴とする。
【００５４】
第八の実施形態は水和物ＩＶを対象とし、この水和物は、約３．９０、５．３０、６．９９、１０．４９、１３．１３、１７．８１、２４．７３、２７．５２、２８．１４、２９．４２、３１．０２、３２．８０、３６．０８、３９．２２、４２．４５、５３．６２、５５．９３、５９．１４、６０．７６、７４．７７、１０９．２２、１１１．１９、１１．３８、１２０．２４、１２２．５０、１３３．９６、１３９．７４、１４７．２、１４８．９０、１５４．６５、１５８．２５、１５９．５３、１６０．１２、１７０．１４、１７１．０５、１７２．０８、１７３．４７および１７４．４６ｐｐｍにおけるピークを含む固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲを特徴とする。
【００５５】
別の実施形態において、水和物ＩＶは実質的に純粋である。「実質的に純粋である」への言及は、特定の形態が、存在する化合物のうちの少なくとも５０％を占めることを意味する。異なる実施形態において、水和物ＩＶは、存在する化合物Ａのうちの少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または約９４％〜９８％を占める。
【００５６】
水和物Ｖを対象とする第一の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、３またはそれ以上の特徴的なピークを含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。特徴的なピークは図１２中に示される。
【００５７】
水和物Ｖを対象とする第二の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約９．１、１８．３および１９．８度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００５８】
水和物Ｖを対象とする第三の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約９．１、１８．３、１９．８、１５．２および２３．２度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００５９】
水和物Ｖを対象とする第四の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約９．１、１８．３、１９．８、１５．２、２３．２、１０．９、１７．６および２３．９度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００６０】
第七の実施形態は水和物Ｖを対象とし、この水和物は、図１３中に提供される固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲスペクトルを特徴とする。
【００６１】
第八の実施形態は水和物Ｖを対象とし、この水和物は、約７．８６、８．９２、１３．１０、１８．３１、２３．７２、２７．４４、２８．４７、３０．７７、３５．７９、３６．２５、３７．１５、３７．１５、４２．９５、５３．１３、５５．６７、５７．３１、６０．４７、６２．０６、７５．０９、１１０．５９、１１２．２４、１１８．３２、１３２．１８、１３４．０５、１３５．８３、１３９．８８、１４８．３０、１５５．１９、１５７．９７、１５９．４１、１７０．３１および１７５．２０ｐｐｍにおけるピークを含む固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲを特徴とする。
【００６２】
別の実施形態において、水和物Ｖは実質的に純粋である。「実質的に純粋である」への言及は、特定の形態が、存在する化合物のうちの少なくとも５０％を占めることを意味する。異なる実施形態において、水和物Ｖは、存在する化合物Ａのうちの少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または約９４％〜９８％を占める。
【００６３】
水和物ＶＩを対象とする第一の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、３またはそれ以上の特徴的なピークを含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。特徴的なピークは図１４中に示される。
【００６４】
水和物ＶＩを対象とする第二の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約２０．５、１２．８および１９．４度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００６５】
水和物ＶＩを対象とする第三の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約２０．５、１２．８、１９．４、２１．２および１６．８度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００６６】
水和物ＶＩを対象とする第四の実施形態において、水和物は、銅Ｋα放射線を用いて得られる、約２０．５、１２．８、１９．４、２１．２、１６．８、１３．９、５．０、１８．５、２３．７および２６．８度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００６７】
第七の実施形態は水和物ＶＩを対象とし、この水和物は、図１５中に提供される固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲスペクトルを特徴とする。
【００６８】
第八の実施形態は水和物ＶＩを対象とし、この水和物は、約４．８７、６．２４、１１．７０、１２．８５、１８．３６、２６．５５、２８．３１ｍ  ３１．５１、３４．９８、３８．４７、４２．０９、５４．２７、５６．１２、６０．１０、７３．４９、７３．９７、１０５．９１、１０８．０４、１１８．３９、１１９．７５、１２１．３３、１２９．９６、１３３．８７、１３６．１３、１４２．２６、１４２．９７、１４６．８５、１４８．３６、１５４．９７、１５７．３２、１６０．７１、１６８．２３、１７２．２１および１７５．３４ｐｐｍにおけるピークを含む固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲを特徴とする。
【００６９】
別の実施形態において、水和物ＶＩは実質的に純粋である。「実質的に純粋である」への言及は、特定の形態が、存在する化合物のうちの少なくとも５０％を占めることを意味する。異なる実施形態において、水和物ＶＩは、存在する化合物Ａのうちの少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または約９４％〜９８％を占める。
【００７０】
別の態様は、アセトン／水の使用および乾燥を含む、化合物Ａから水和物ＩＩＩを作成する方法を対象とする。異なる比のアセトン／水を利用することができる。異なる実施形態において、アセトン対水の比は、８０：２０ｖ／ｖアセトン対水と０：１００ｖ／ｖアセトン対水との間である。付加的な実施形態において、アセトン対水の比は６５：３５、５０：５０、約６５：３５もしくは約５０：５０であり、および／または化合物Ａの水和物ＩＩもしくは水和物ＩＶは水和物ＩＩＩを作成する出発点として用いられ、および／または化合物は最初にアセトン中に溶解される。
【００７１】
アセトン：水の比に関する約への言及は、各成分について±１０の範囲を示す。例えば、比６５：３５についての「約」は、アセトンが５５〜７５に変動できることを示す。
【００７２】
ある実施形態において、未精製物（水和物ＩＩ）は、アセトン中に溶解される。水は、溶媒組成を８５：１５  アセトン：水にするためにプロセスに加えられる。プロセスは次いで結晶化を開始するためにシードされ、次いで収量を改善するために水が加えられ、最終溶媒組成は５０：５０  アセトン：水である。
【００７３】
同位体濃縮
本明細書中で記載される化合物中の原子は、その天然の同位体存在量を呈するものであってもよく、または原子のうちの１もしくは複数は、同じ原子番号を持つが天然で優勢に見出される原子質量もしくは質量数と異なる原子質量もしくは質量数を持つ特定の同位体に人工的に濃縮されていてもよい。本発明は、本明細書中で記載される化合物の全ての好適な同位体バリエーションを包含することを意味する。例えば、水素（Ｈ）の異なる同位体形態として、プロチウム（１Ｈ）および重水素（２Ｈ）が挙げられる。プロチウムは天然で見出される優勢な水素同位体である。重水素の濃縮は、ある特定の治療上の利点、例えばインビボでの半減期を増大させること、もしくは必要用量を低減させることなどを与え得るものであり、または生物学的試料の特性評価のための標準品として有用である化合物を提供し得る。
【００７４】
本明細書中で記載される同位体濃縮された化合物は、過度の実験を伴わずに、当業者に周知の従来の技術により、または本明細書中で提供されるスキームおよび実施例中に記載されるものと類似したプロセスにより、適切な同位体濃縮された試薬および／または中間体を用いて調製することができる。
【００７５】
投与および組成物
薬学的に許容される塩は、患者、好ましくはヒトへの投与に好適である。好適な塩として酸付加塩が挙げられ、これは、例えば、化合物の溶液を薬学的に許容される酸、例えば塩酸、硫酸、酢酸、トリフルオロ酢酸または安息香酸などの溶液と混合することにより形成され得る。酸性部分を有する化合物は、好適な薬学的に許容される塩と混合されて、例えば、アルカリ金属塩（例として、ナトリウムまたはカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例として、カルシウムまたはマグネシウム塩）、および好適な有機リガンド、例えば四級アンモニウム塩などと共に形成される塩を提供することができる。また、酸（−ＣＯＯＨ）またはアルコール基が存在する場合、薬学的に許容されるエステルが利用されて、化合物の溶解性または加水分解特性を改変することができる。
【００７６】
化合物Ａは、ＨＣＶに感染した患者に投与することができる。用語「投与」およびその変形（例として、化合物を「投与すること」）とは、処置の必要がある個体に化合物を供給することを意味する。化合物が１または複数の他の活性薬剤（例として、ＨＣＶ感染を処置するのに有用な抗ウイルス薬）との組み合わせで与えられる場合、「投与」およびその変形は、各々、化合物または塩および他の薬剤の同時および連続的な供給を包含するものと理解される。
【００７７】
本明細書中で用いられるように、用語「組成物」は、特定の成分を含む生成物、ならびに特定の成分を組み合わせることによって直接的または間接的に生じる任意の生成物を包含することが意図される。
【００７８】
「薬学的に許容される」とは、医薬組成物の成分が互いに適合性であり、その受容者に好適であることを意味する。
【００７９】
本明細書中で用いられる用語「対象」（あるいは本明細書中で「患者」と呼ばれる）は、処置、観察または実験の目的である動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。
【００８０】
用語「有効量」は、治療的または予防的効果を発揮するのに十分な量を示す。ＨＣＶに感染した患者の場合、有効量は、以下の効果：ＨＣＶが複製する能力を低減させること、ＨＣＶ負荷を低減させること、およびウイルスのクリアランスを向上させることのうちの１または複数を達成するのに十分である。ＨＣＶに感染していない患者の場合、有効量は、ＨＣＶ感染のしやすさの低減、および慢性疾患のために持続性感染を確立する感染中のウイルスの能力の低減のうちの１または複数を達成するのに十分である。
【００８１】
ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼを阻害し、そしてＨＣＶ感染を処置する、および／またはＨＣＶ感染の可能性もしくは症状の重症度を低減させる目的のため、塩の形態であってもよい化合物は、活性薬剤と薬剤作用部位との接触を生み出す手段により投与することができる。これらは、医薬を伴う使用のために利用できる従来の手段により、個別の治療薬または治療薬の組み合わせのいずれかとして投与することができる。これらは単独で投与することができるが、典型的には、選ばれた投与経路および標準的な医薬実務に基づいて選択される医薬担体と共に投与する。
【００８２】
化合物は、例えば、以下の経路：経口、非経口（皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨下注射または点滴技術など）、吸入（スプレー形態など）、または直腸内のうちの１または複数により、有効量の化合物ならびに薬学的に許容される担体（例として、ヒト患者への投与に好適な担体）、アジュバントおよび媒体を含有する医薬組成物の単位用量の形態で投与することができる。経口投与に好適な液体製剤（例として、懸濁液、シロップ、エリキシル剤など）は、水、グリコール、油、アルコールなどの媒体を利用することができる。経口投与に好適な固体製剤（例として、散剤、丸薬、カプセルおよび錠剤）は、デンプン、糖、カオリン、滑沢剤、バインダー、崩壊剤などの固体添加剤を利用することができる。非経口の組成物は、担体として滅菌水を典型的に利用し、および他の成分、例えば溶解助剤などを利用してもよい。注射可能な溶液は、例えば、生理食塩水溶液、グルコース溶液または生理食塩水およびグルコースの混合物を含有する溶液を含む担体を用いて調製することができる。医薬組成物の調製における使用に好適である方法についてのさらなるガイダンスは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００６）中に提供される。
【００８３】
治療的化合物は、１日あたり０．００１から１０００ｍｇ／ｋｇ哺乳動物（例として、ヒト）体重の用量範囲で、単回投与または分割投与で、経口的に投与することができる。一用量範囲として、単回投与または分割投与で経口的に１日あたり０．０１から５００ｍｇ／ｋｇ体重である。別の用量範囲は、単回投与または分割投与で経口的に１日あたり０．１から１００ｍｇ／ｋｇ体重である。経口投与の場合、組成物は、処置される患者への用量の対症的調整のため、１．０から５００ｍｇの活性成分、とりわけ１、５、１０、１５、２０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００および７５０ｍｇの活性成分を含有する錠剤またはカプセルの形態で提供することができる。任意の特定の患者についての具体的な用量レベルおよび投薬の頻度は、変動し得るものであり、利用される具体的な化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用の長さ、年齢、体重、全般的な健康状態、性別、食事、投与様式および時間、排泄速度、薬の組み合わせ、特定の病状の重症度ならびに宿主が受けている治療などの種々の因子に依存する。
【００８４】
本発明の他の実施形態として、以下が挙げられる。
【００８５】
（ａ）有効量の化合物Ａおよび薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【００８６】
（ｂ）ＨＣＶ抗ウイルス薬、免疫調節薬および抗感染薬よりなる群から選択される第二の治療薬をさらに含む、（ａ）の医薬組成物。
【００８７】
（ｃ）ＨＣＶ抗ウイルス薬が、ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤、ＮＳ５Ａ阻害剤およびＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤よりなる群から選択される抗ウイルス薬である、（ｂ）の医薬組成物。
【００８８】
（ｄ）（ｉ）化合物Ａ、ならびに（ｉｉ）ＨＣＶ抗ウイルス薬、免疫調節薬および抗感染薬よりなる群から選択される第二の治療薬、である医薬の組み合わせであって、化合物Ａおよび第二の治療薬が、各々、ＨＣＶ複製の阻害、ＨＣＶ感染の処置および／またはＨＣＶ感染の可能性もしくは症状の重症度の低減に有効な組み合わせの量で利用される、医薬の組み合わせ。
【００８９】
（ｅ）ＨＣＶ抗ウイルス薬が、ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤、ＮＳ５Ａ阻害剤およびＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤よりなる群から選択される抗ウイルス薬である、（ｄ）の組み合わせ。
【００９０】
（ｆ）その必要がある対象に有効量の化合物Ａを投与することを含む、その対象においてＨＣＶ複製を阻害する方法。
【００９１】
（ｇ）その必要がある対象に有効量の化合物Ａを投与することを含む、その対象においてＨＣＶ感染を処置する、および／またはＨＣＶ感染の可能性もしくは症状の重症度を低減させる方法。
【００９２】
（ｈ）化合物が、ＨＣＶ抗ウイルス薬、免疫調節薬および抗感染薬よりなる群から選択される少なくとも１の有効量の第二の治療薬との組み合わせで投与される、（ｇ）の方法。
【００９３】
（ｉ）ＨＣＶ抗ウイルス薬が、ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤、ＮＳ５Ａ阻害剤およびＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤よりなる群から選択される抗ウイルス薬である、（ｈ）の方法。
【００９４】
（ｊ）その必要がある対象に（ａ）、（ｂ）もしくは（ｃ）の医薬組成物または（ｄ）もしくは（ｅ）の組み合わせを投与することを含む、その対象においてＨＣＶ複製を阻害する方法。
【００９５】
（ｋ）その必要がある対象に（ａ）、（ｂ）もしくは（ｃ）の医薬組成物または（ｄ）もしくは（ｅ）の組み合わせを投与することを含む、その対象においてＨＣＶ感染を処置する、および／またはＨＣＶ感染の可能性もしくは症状の重症度を低減させる方法。
【００９６】
本発明はまた、医薬における使用のための；または（ｉ）薬物における、（ｉｉ）（ａ）ＨＣＶ複製を阻害する、または（ｂ）ＨＣＶ感染を処置する、および／もしくはＨＣＶ感染の可能性もしくは症状の重症度を低減させるための薬物の調製、における使用のための本発明の化合物を包含する。これらの使途において、本発明の化合物は、ＨＣＶ抗ウイルス薬、抗感染薬および免疫調節薬より選択される１以上の第二の治療薬との組み合わせで利用してもよい。
【００９７】
ＨＣＶ阻害活性
ＨＣＶ  ＮＳ３活性、ＨＣＶレプリコン活性およびＨＣＶ複製活性を阻害する化合物の能力は、当該技術分野で周知の技術を用いて評価することができる（例えば、Ｃａｒｒｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：１１９７９−１１９８４，２００３を参照）。
【００９８】
一のかかるアッセイは、下記の、ならびにＭａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３７３：１−８，２００８およびＭａｏ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００６／１０２０８７号パンフレット中に記載される、ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ時間分解蛍光（ＴＲＦ）アッセイである。ＮＳ３プロテアーゼアッセイは、例えば、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１５％グリセロール、０．１５％ＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、１０ｍＭ  ＤＴＴおよび０．１％ＰＥＧ８０００を含有する、最終容量１００μｌのアッセイバッファー中で行うことができる。ＮＳ３およびＮＳ４Ａは、様々な濃度の阻害剤と共にＤＭＳＯ中で、予め３０分間インキュベートされる。反応は、ＴＲＦペプチド基質（最終濃度１００ｎＭ）を加えることにより開始される。基質のＮＳ３媒介性加水分解は、室温で１時間後に、１００μｌの５００ｍＭ  ＭＥＳ、ｐＨ５．５を使用してクエンチされる。生成物の蛍光は、ＶＩＣＴＯＲ  Ｖ２またはＦＵＳＩＯＮ蛍光光度計（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）のいずれかを用いて、３４０ｎｍの励起波長および６１５ｎｍの発光波長を使用して、４００μ秒の遅延時間を使用して検出される。異なる酵素形態の試験濃度は、１０〜３０のシグナル対バックグラウンド比（Ｓ／Ｂ）をもたらすように選択される。ＩＣ５０値は、データへの標準的４パラメーターフィットを用いて導出される。Ｋｉ値は、以下の式を用いてＩＣ５０値から導出される。
【００９９】
ＩＣ５０＝Ｋｉ（１＋［Ｓ］／ＫＭ）、式（１）、
式中、［Ｓ］は反応中の基質ペプチド濃度であり、ＫＭはミカエリス定数である。Ｐ．Ｇａｌｌｉｎａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，３８  ＢＩＯＣＨＥＭ．５６２０−３２（１９９９）；Ｐ．Ｇａｌｌｉｎａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，７２  Ｊ．ＶＩＲＯＬ．６７５８−６９（１９９８）；Ｍ．Ｔａｌｉａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２４０  ＡＮＡＬ．ＢＩＯＣＨＥＭ．６０−６７（１９９６）；およびＭａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３７３：１−８，（２００８）を参照。
【０１００】
略語
ＢＯＣ：ｔ−ブトキシカルボニル
Ｃｂｚ：ベンジルオキシカルボニル
ＣＤＩ：１，１’−カルボニルジイミダゾール
ＣＩＰ：２−クロロ−１−メチルピリジニウムヨージド
ＣＰＭＥ：シクロペンチルメチルエーテル
ＤＡＢＯ：１，４−ジアザビシクロ［２．２．２．］オクタン
ＤＢＡ：サルトジベンジルアミン（ｓａｌｔｄｉｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｅ）
ＤＢＵ：１，８−ジアゾビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン
ＤＣＣ：Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＩＣ：Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡｃ：Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド
ＤＭＰＵ：Ｎ，Ｎ−ジメチルプロピレン尿素
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメチルオキシカルボニル
ＨＡＴＵ：２−（１Ｈ−７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＡＴ：１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢＴ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＯＰＯ：２−ヒドロキシピリジン−Ｎ−オキシド
ＨＯＳｕ：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
ＩＰＡ：イソプロパノール
ＩＰＡｃ：酢酸イソプロピル
ＭＴＢＥ：ｔ−ブチルメチルエーテル
ＭｓＯＨおよびＭＳＡ：ＣＨ３ＳＯ３Ｈまたはメタンスルホン酸
Ｍｏｚ：ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル
Ｍｓｚ：４−メチルスルフィニルベンジルオキシカルボニル
ＮＭＰ：Ｎ−メチルピロリドン
ＰＦＰ：ペンタフルオロフェノール
Ｔ３Ｐ：プロピルホスホン酸無水物
ＴＢＡ：ｔ−ブチルアミン
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ｐＴＳＡおよびＴｓＯＨは、各々、ｐ−トルエンスルホン酸の略語である。
【０１０１】
実施例
以下に提供される実施例は、本発明およびその実施を説明することを意図する。特許請求の範囲において特に提供されない限り、実施例は、本発明の範囲または趣旨に対する限定として解釈されるべきではない。
【０１０２】
実施例１：２−［２−（３−クロロ−プロピル）−シクロプロピル］−４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン（化合物３）の調製
【化２】
2014524442.tif 000004
【０１０３】
化合物２は、Ｓｈｉｒａｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  １１：１８１４−１８２０，２００４により記載されるように調製することができる。
【０１０４】
化合物３を次のように生産した。窒素注入口、機械撹拌器、滴下漏斗および熱電対を備えた５Ｌフラスコに、Ｎ２下で、８００ｍＬジクロロメタンおよび８００ｍＬのヘプタン中の１Ｍジエチル亜鉛溶液（０．８ｍｏｌ、１．０７当量）を加えた。溶液を、氷浴で内部温度３℃まで冷却した。ついで、フラスコに、滴下漏斗から、５７．６ｍＬのトリフルオロ酢酸（０．７４８ｍｏｌ、１．０当量）の２００ｍＬジクロロメタン中の溶液を１時間かけて加え、内部温度を１０℃未満で維持した。得られた懸濁液を３℃で３０分間撹拌した。次いで、フラスコに７２．４ｍＬジヨードメタン（０．８９７ｍｏｌ、１．２当量）を一度に加えた。３℃で３０分間撹拌した後、１７２ｍＬの２（０．７４８ｍｏｌ、１．０当量）を溶液に一度に加えた。次いで、フラスコを室温まで温めたところ、白色沈殿が形成し始めた。３時間後、ＧＣ分析は、反応が９０％変換であることを示した。懸濁液を、さらに１７時間または２の完全な消費が観察されるまで、熟成させた。その時点で、８００ｍＬの１Ｍ  ＨＣｌ（０．８ｍｏｌ、１．０７当量）を加え、＋５℃の発熱を観察した。二層性の混合物を３０分間撹拌して沈殿した固体を溶解し、有機層を分離した。水層を２００ｍＬジクロロメタンで抽出し、合わせた有機層を５００ｍＬ食塩水で洗浄し、減圧下で濃縮し、１９４ｇの３を黄色油として得た（ＤＣＭ中７４重量％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ３．５９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）、１．９０（ｐｅｎｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）、１．４９（ｓｅｘｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）、１．３６（ｓｅｘｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）、１．２３（ｓ，１２Ｈ）、０．９３（ｍ，１Ｈ）、０．７１（ｍ，１Ｈ）、０．４４（ｍ，１Ｈ）、−０．３５（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．４，５．７Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８２．８２、４４．７４、３２．６７、３２．２２、２４．６４、１７．２２、１１．２４、０．５（ｂｓ）；ＧＣ：ＨＰ１（３０ｍ×０．３２ｍｍ；０．２５μｍ）、２５ｐｓｉ、２００℃前面注入口。５分＠５０℃、勾配２５℃／分で２５０℃まで、次いで４分間保持、ｔｒ（２）＝９．７８分、ｔｒ（３）＝１０．０８分。
【０１０５】
実施例２：２−（３−クロロ−プロピル）−シクロプロパノール（化合物４）の調製
【化３】
2014524442.tif 000005
【０１０６】
窒素注入口、機械撹拌器、滴下漏斗および熱電対を備えた３Ｌフラスコに、１Ｌメタノール中の１４３ｇの３（０．５８５ｍｏｌ、１．０当量）を加えた。次いで、フラスコに、滴下漏斗から、５８．５ｍＬの１０Ｍ水酸化ナトリウム（０．５８５ｍｏｌ、１．０当量）を、外部冷却を使用して内部温度を１０℃未満で維持しながら３０分かけて加えた。３０分間撹拌した後、１２０ｍＬの３０重量％過酸化水素溶液（１．１７ｍｏｌ、２当量）を滴下漏斗から１時間かけて徐々に加え、内部温度を１０℃未満で維持した。添加が完了したら、次いで、得られた無色のスラリーを、外界温度で３０分間または３の完全な消費がＧＣにより観察されるまで、撹拌した。２Ｍ  ＨＣｌ（３７５ｍＬ）を滴下漏斗から３０分かけて加え、内部温度を１０℃未満で維持した。次いで、この透明な黄色溶液に５００ｍＬの１Ｍ  Ｎａ２ＳＯ３溶液を滴下漏斗から徐々に加え、内部温度を１０℃未満に維持した。次いで、得られた懸濁液をろ過し、３×２００ｍＬ  ＭＴＢＥで抽出した。濃縮の後にピナコールをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（６：４  ヘキサン：酢酸エチル）により除去し、６０．６ｇの生成物４を透明な油として得た（９０重量％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ３．６２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）、３．２７（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．３，２．６Ｈｚ）、１．８９（ｐｅｎｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、１．８５（ｂｓ，ＯＨ）、１．４３（ｓｅｘｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）、１．２８（ｓｅｘｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）、０．９４（ｍ，１Ｈ）、０．７５（ｍ，１Ｈ）、０．３８（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ５２．２１、４４．６９、３１．９１、２８．６９、１９．６９、１４．１５；ＧＣ：ＨＰ１（３０ｍ×０．３２ｍｍ；０．２５μｍ）、２５ｐｓｉ、２００℃前面注入口。５分＠５０℃、勾配２５℃／分で２５０℃まで、次いで４分間保持、ｔｒ（３）＝１０．０８分、ｔｒ（４）＝７．１５分。
【０１０７】
実施例３：２−ペンタ−４−イニル−シクロプロパノール（ｒａｃ−化合物５）の調製
【化４】
2014524442.tif 000006
【０１０８】
温度プローブ、Ｎ２注入口およびセプタムを備えた２首の１５ｍＬフラスコに、１ｇの４（７．２８ｍｍｏｌ、１．０当量）および３．０ｍＬ  ＴＨＦを加えた。溶液を、氷浴で内部温度０℃まで冷却した。この溶液に２．９５ｍＬの３３重量％ｎ−ヘキシルリチウム（７．２８ｍｍｏｌ、１．０当量）を、シリンジポンプによって１時間かけて徐々に加えた。内部温度は６．８℃まで上昇し、溶液は黄色になった。温度プローブ、Ｎ２注入口およびセプタムを備えた別の３首１００ｍＬフラスコ中で、０．８２ｇのリチウムアセチリド−エチレンジアミン錯体（８．０１ｍｍｏｌ、１．１当量）を、室温で、５．０ｍＬのＤＭＰＵ中にスラリー化させた。この室温スラリーに、脱プロトン化シクロプロパノールの冷溶液をカニューレによって５分間かけて移した。添加後、茶色の混合物を、加熱マントルを使用して３時間または９８％超の変換がＧＣにより観察されるまで内部温度５２℃まで加熱した。茶色の混合物を氷浴で３℃まで冷却し、次いで凍結を防ぐために氷浴を除去した。これに１７．５ｍＬの０．５Ｎ  ＨＣｌを徐々に加え、氷浴をあてて内部温度を２１℃未満で維持した。次いで、混合物を１０ｍＬ  ＭＴＢＥおよび５ｍＬの水で希釈した後、分液漏斗に移して水層を除去した。水層を１５ｍＬ  ＭＴＢＥで１回抽出し、次いで、合わせた有機層を、２０ｍＬ水、その後に２０ｍＬ食塩水で洗浄した。次いで、有機層を減圧下で濃縮し、１．２７ｇのｒａｃ−５を黄色油として与えた（７２重量％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ３．２４（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝２．６，５．３Ｈｚ）、２．２５（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ＝２．６，７．６Ｈｚ）、１．９６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ）、１．９２（ｓ，１Ｈ，ＯＨ）、１．６４（ｐｅｎｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）、１．３８（ｓｅｘｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、１．２４（ｓｅｘｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、０．９３（ｍ，１Ｈ）、０．７２（ｍ，１Ｈ）、０．３５（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８４．４９、６８．３７、５２．４５、３０．５０、２７．７４、２０．１７、１８．０１、１４．２５；ＧＣ：ＨＰ１（３０ｍ×０．３２ｍｍ；０．２５μｍ）、２５ｐｓｉ、２００℃前面注入口。５分＠５０℃、勾配２５℃／分で２５０℃まで、次いで４分間保持、ｔｒ（４）＝７．１５分、ｔｒ（ｒａｃ−５）＝６．７２分。
【０１０９】
実施例４：酢酸ラセミｔｒａｎｓ−２−ペンタ−４−イニル−シクロプロピルエステル（ｒａｃ−化合物６）の調製
【化５】
2014524442.tif 000007
【０１１０】
窒素注入口、機械撹拌器、滴下漏斗および熱電対を備えた５Ｌフラスコに、Ｎ２下、３１．２ｇのｒａｃ−５（２５１ｍｍｏｌ、１．０当量）、３５０ｍＬのＭＴＢＥおよび４５．５ｍＬのトリエチルアミン（３２７ｍｍｏｌ、１．３当量）を加えた後、溶液をアセトン／氷浴中で内部温度＜５℃まで冷却した。溶液に、滴下漏斗から、２３．７ｍＬの塩化アセチル（３０１ｍｍｏｌ、１．１当量）を内部温度を＜１０℃に維持しながら３０分間かけて加えた。次いで、得られたスラリーを、室温まで温め、２時間熟成させた。次いで、反応混合物を２００ｍＬの水で希釈した。有機層を２００ｍＬの２Ｎ  ＨＣｌで、次いで３００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した後、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、４１．８ｇのｒａｃ−６を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ３．８４（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．７，２．９Ｈｚ）、２．２５（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ＝２．７，７．０Ｈｚ）、２．０３（ｓ，３Ｈ）、１．９５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ）、１．６７（ｍ，２Ｈ）、１．３９（ｍ，２Ｈ）、１．０１（ｍ，１Ｈ）、０．８９（ｍ，１Ｈ）、０．５７（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７１．６０、８４．１５、６８．４７、５４．２０、３０．１２、２７．４０、２０．８５、１７．９２、１７．８３、１１．８１；ＧＣ：Ｒｅｓｔｅｋ  ＲＴ−Ｂｄｅｘ  ＳＡ（３０ｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ）、６０ｃｍ／秒の直線速度、２０：１スプリット、１２０℃等温、ｔｒ（５）＝２５．０、２９．６分、ｔｒ（６）＝１７．１、１７．５分。
【０１１１】
実施例５：（１Ｒ，２Ｒ）−２−ペンタ−４−イニル−シクロプロパノール（ｅｎｔ−化合物−５）の調製
【化６】
2014524442.tif 000008
【０１１２】
オーバーヘッド撹拌器および温度プローブを備えた１Ｌフラスコに、６０重量％のｒａｃ−６のＭＴＢＥ中の溶液（４４．８ｇ、０．２７ｍｏｌ）、およびさらに７３０ｍｌの、０．１Ｍ  ｐＨ７リン酸水性バッファーで飽和したＭＴＢＥを加え、ｒａｃ−６の最終溶液濃度を６０ｇ／ｌにした。フラスコを氷浴中に置き、７３０ｍｇ  Ｎｏｖｏｚｙｍ４３５の添加により加水分解反応を開始させ、その間ずっと内部温度を約１０℃で維持した。反応を１０℃で約４時間、変換が４１％に達するまで熟成させたが、この時点でｅｎｔ−５のｅｅは９６％であった。次いで、反応混合物を１５０ｍｌの中間孔ガラスフィルター漏斗を通してろ過し、固体の固定化酵素を８０ｍｌ  ＭＴＢＥで３回洗浄した。次いで、得られたＭＴＢＥ溶液をヘプタンへと溶媒切り替えした。ヘプタン中の混合物（３９．２ｋｇ、約５０Ｌ）を、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｆｌａｓｈ  ４００Ｌカートリッジ（４０×６０ｃｍ、４０ｋｇシリカゲル、６０オングストローム、４０−６３ｕｍ）にアプライし、１６５Ｌの２．５：９７．５  ＥｔＯＡｃ／ヘプタン、７５Ｌの１０：９０  ＥｔＯＡｃ／ヘプタンおよび３３０Ｌの２５：７５  ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（ｖ／ｖ）で順次溶出した。混合物をカラムにアプライした後、１８Ｌの画分を採取した。アルコールｅｎｔ−５のリッチカット画分をＴＬＣ（シリカ、２０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）により探し出し、次いでＧＣ（ＨＰ−１、３０ｍ×３２０ｕｍ×０．２５ｕｍフィルム、９．１４ｐｓｉ定Ｈｅ圧、１５：１スプリット、５０℃で５分間、次いで２５度／分で２７５℃まで、５分保持、アルコールのＲＴ  ８．８分）により分析した。画分１５−２１を濃縮して、３．４８ｋｇ（８０重量％、９２％ｅｅ）の所望のｅｎｔ−５（化合物７）を得た。
【０１１３】
ＧＣ：Ｒｅｓｔｅｋ  ＲＴ−Ｂｄｅｘ  ＳＡ（３０ｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ）、６０ｃｍ／秒の直線速度、２０：１スプリット、１２０℃等温、ｔｒ（５）＝２５．０、２９．６分、ｔｒ（６）＝１７．１、１７．５分。
【０１１４】
実施例６：（Ｓ）−３，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−２−ペンタ−４−イニル−シクロプロポキシカルボニルアミノ）−酪酸（化合物８）の調製
【化７】
2014524442.tif 000009
【０１１５】
機械撹拌器、熱電対および還流冷却器を備えた５０Ｌ丸底フラスコに、化合物７（ＮＭＲにより３．４７７ｋｇ＠８１重量％、９２％ｅｅ）および１４．１Ｌ（５Ｌ／ｋｇ）のヒューニッヒ塩基を加えた。得られた均一な溶液にＣＤＩを固体として、内部温度を２１〜２５℃の間で維持しながら少量ずつ加えた。得られたスラリーを室温で１時間熟成させた。スラリーにＬ−ｔｅｒｔ−ロイシンを固体として加え、反応混合物を内部温度９５℃まで２．５時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、１７Ｌの水で希釈した。混合物を３０分間熟成させて全ての固体を溶解させ、次いで１００Ｌ円筒抽出器に移した。次いで、水層を１２ＬのＭＴＢＥで洗浄した。水層を８ＬのＭＴＢＥで洗浄した。得られた水層を、濃ＨＣｌにより、最終ｐＨを１．５〜２．０にｐＨ調整した。二層性の混合物をＭＴＢＥ（２×１２Ｌ）で抽出し、合わせた有機層を、６Ｌの水、その後に５Ｌの食塩水で洗浄した。
【０１１６】
次いで、ＭＴＢＥ層を、機械撹拌器、熱電対およびバッチ濃縮器を備えた５０Ｌ丸底フラスコ中に減圧下で移し、溶媒を、蒸留中のバッチの内部温度を＜２０℃で維持しながら減圧下で除去した。次いで、溶媒を、約５ＬのＣＰＭＥで洗い流すことによりシクロペンチルメチルエーテル（ＣＰＭＥ）へと切り替え、次いで希釈して最終容量を約２０Ｌにした。この物質は、さらに精製することなく次の反応で用いた。
【０１１７】
分析試料を、シリカゲルクロマトグラフィーにより無色の油として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ０．５４（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）、０．８３（ｍ，１Ｈ）、０．９９（ｍ，１Ｈ）、１．０１（ｓ，９Ｈ）、１．４０（ｍ，２Ｈ）、１．６７（ｍ，２Ｈ）、１．９４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ）、２．２３（ｍ，２Ｈ）、３．７７（ｂｒ  ｍ，１Ｈ）、４．２０（ｂｒ  ｍ，１Ｈ）、５．２８（ｂｒ  ｍ，１Ｈ）、９．４０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）δ１１．８、１８．０、２６．５、２７．４、３０．１、３４．６、５５．０、６２．０、６８．４、８４．２、１５６．７、１７５．８。
【０１１８】
実施例７：６−メトキシ−キノキサリン−２，３−ジオール（化合物１０）の調製
【化８】
2014524442.tif 000010
【０１１９】
機械撹拌器、熱電対および冷却器を備えた５０Ｌフラスコ中に、４−メトキシ−１，２−フェニレンジアミン二塩酸塩（化合物９）（２．６５ｋｇ＠９８重量％、１２．３０ｍｏｌ）、シュウ酸（１．５８２ｋｇ＠９８重量％、１７．２２ｍｏｌ）および３Ｎ  ＨＣｌ（水溶液）（１７．８Ｌ）を窒素下で加えた。灰色の不均一なスラリーを、蒸気を使用して９０℃まで７．２５時間加熱した。反応をＨＰＬＣによりモニターした。次いで、得られた灰色のスラリーを内部温度２０℃まで一晩冷却した。スラリーをろ過し、移動を助けるために水（１．０〜１．５Ｌ／Ｋｇ）を用いた。薄灰色の固体をケークの２倍量の水（５．０〜５．５Ｌ／Ｋｇ）で洗浄した。固体を減圧／Ｎ２スイープ下で２４時間乾燥させたが、その時点で固体はまだ非常に湿っていた。次いで、生成物をメタノールでスラリー洗浄し、４８時間かけて４０〜４５℃で真空乾燥器中で乾燥させ、化合物１０をＨＰＬＣアッセイによる純度が９９．９５％である灰白色の生成物として得た。ＮＭＲによるとメタノールは存在せず、ＫＦ＝０．０５重量％水であった。
【０１２０】
ＨＰＬＣ条件：Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ  Ｃ１８  ５０×４．６ｍｍ、１．８ｕｍ、１．５ｍＬ／分、２１０ｎｍ、２５℃、溶出液：水  ０．１％Ｈ３ＰＯ４（Ａ）、アセトニトリル（Ｂ）。９０％Ａを０分、５％Ａを５分、５％Ａを６分。
【０１２１】
化合物９（ジアミンＨＣｌ塩）  ０．３９４分
化合物１０                    １．５５分（時折、２ピーク）
【０１２２】
実施例８：２，３−ジクロロ−６−メトキシキノキサリン（化合物１１）の調製
【化９】
2014524442.tif 000011
【０１２３】
機械撹拌器、熱電対および冷却器を備えた２２Ｌ丸底フラスコ中に、２，３−ジクロロ−６−メトキシキノキサロン化合物１０（３．８ｋｇ）を加えた。室温で徐々にＰＯＣｌ３（５．９２Ｌ＠９９％）を負荷した。灰色のスラリーを９８℃まで２０時間加熱した。２〜３時間後、スラリーは灰色から緑色に、次いで黄色に変わり、最終的に均一な赤色に変わった。スラリーがＰＯＣｌ３中で均一になるにつれ、相当量のＨＣｌオフガス（ｏｆｆ−ｇａｓｓｉｎｇ）が生み出された。濃赤色の均一な溶液を８０℃未満まで徐々に冷却した。この時点で１９Ｌのアセトニトリル（５．０Ｌ／Ｋｇ）を負荷したところ、濃茶色のスラリーが生み出された。反応を氷浴中で１０〜１５℃まで冷却し、１００Ｌ円筒容器中の４５．６Ｌの冷水（１２．０Ｌ／Ｋｇ）内でリバースクエンチした。この発熱性のクエンチを、２７℃未満で維持した。ＭｅＣＮ（約４Ｌ）を、スラリー移動を補助するために用いた。茶色のスラリーをろ過し、フラスコを洗浄するのに５Ｌの水を用いた。固体をケークの１倍量の水（約５Ｌ）で洗浄した。ろ液のｐＨは酸性であった。次に、固体をケークの２倍量の５％炭酸水素ナトリウム（約２０．００Ｌ）で置換洗浄した。ｐＨは８〜９の間であった。スラリー洗浄をケークの２倍量の水（計２０Ｌ）で行った。ｐＨは変化しなかった。固体を７２時間、減圧および窒素フロー下で乾燥させ、黄褐色の生成物であって、ＨＰＬＣアッセイによる純度が９９．５％でＫＦ＝０．５重量％水である化合物１１を得た。
【０１２４】
ＨＰＬＣ条件：Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ  Ｃ１８  ５０×４．６ｍｍ、１．８ｕｍ、１．５ｍＬ／分、２１０ｎｍ、２５℃；溶出液：水  ０．１％Ｈ３ＰＯ４（Ａ）、アセトニトリル（Ｂ）。９０％Ａを０分、５％Ａを５分、５％Ａを６分。
【０１２５】
化合物１０  １．５５分（時折、２ピーク）
化合物１１  ４．５５分
分析試料を、シリカゲルクロマトグラフィーにより無色の泡として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ０．５０（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ）、１．０４（ｂｒ  ｓ，１１Ｈ）、１．２０（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、１．４５（ｂｒ  ｓ，１３Ｈ）、１．７２（ｍ，２Ｈ）、２．４０（ｍ，１Ｈ）、２．６３（ｍ，１Ｈ）、２．９３（９ｍ，２Ｈ）、３．６８−３．９４（ｍ，９Ｈ）、４．１５（ｂｒ  ｍ，１Ｈ）、４．４６および４．６０（ｔ，回転異性体による，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ）、５．２７（ｂｒ  ｍ，１Ｈ）、５．７８（ｂｒ  ｍ，１Ｈ）、７．１８（ｍ，１Ｈ）、７．２０（ｍ，１Ｈ）、７．８５（ｍ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）δ１１．９、１８．５、２６．６、２７．０、２８．１、２８．３、２８．４、２９．１、３０．９、３２．９、３４．１、３５．７、３６．６、４９．４、５２．１、５２．２、５２．４、５５．１、５５．７、５７．７、５８．２、６２．３、７３．５、７４．１、８０．７、１０６．０、１１８．８、１２８．５、１３３．７、１４１．１、１４８．２、１５３．９、１５４．５、１５５．３、１５７．１、１６０．４、１７３．２、１７３．３、１７４．４。
【０１２６】
実施例９：（２Ｓ，４Ｒ）−４−（３−クロロ−７−メトキシキノキサリン−２−イルオキシ）−２−（メトキシカルボニル）ピロリジニウムメタンスルホネート（１４）の調製
【化１０】
2014524442.tif 000012
【０１２７】
２，３−ジクロロキノキサリン１１（１００ｇ、０．４３７ｍｏｌ）およびＮ−Ｂｏｃ−４−ｔｒａｎｓ−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンメチルエステル（１２、１１８ｇ、０．４８ｍｏｌ）のＤＭＡｃ（５００ｍｌ、ＫＦ＜１５０）中のスラリーに、外界温度で、ＤＢＵ（８６ｇ、０．５６８ｍｏｌ）を加えた。スラリーを４０〜４５℃で約３５時間かき混ぜた。次いで、バッチを１５℃まで冷却した。酢酸エチル（１．２Ｌ）、続いてクエン酸（１０％、５０４ｍＬ、１６２ｍｍｏｌ）を、内部温度を＜２５℃に維持しながら加えた。有機層を１０％クエン酸（２００ｍＬ）の溶液および水（２００ｍＬ）で、その後に水（４００ｍＬ×２）で洗浄した。有機層を共沸乾燥させ、最終容量約８８０ｍＬでＭｅＣＮへと溶媒切り替えした。ＭｅＳＯ３Ｈ（３６ｍＬ、０．５５５ｍｏｌ）を加え、反応混合物を４０℃で約１６時間熟成させた。反応スラリーにＭＴＢＥ（１．０５Ｌ）を２時間かけて３５℃で滴下して加えた。次いで、バッチを０〜５℃までさらに冷却し、２〜３時間熟成させてろ過した。湿ケークを、ＭＴＢＥ中の３０％ＭｅＣＮ（６００ｍＬ×２）で置換洗浄し、真空乾燥器で４０℃で乾燥させて、生成物１４を得た。
【０１２８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）δ９．７４（ｓ，ｂｒ，２Ｈ）、７．８６（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．３４（ｄｄ，Ｊ＝９．２，２．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２６（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、５．７７（ｍ  １Ｈ）、４．６９（ｄｄ，Ｊ＝１０．６，７．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．９２（ｓ，３Ｈ）、３．８９（ｄｄ，Ｊ＝１３．２，５．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．８１（ｓ，３Ｈ）、３．６３（ｍ，１Ｈ）、２．７１（ｍ，１Ｈ）、２．６０（ｍ，１Ｈ）、２．３５（ｓ，３Ｈ）。
【０１２９】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）δ１６８．３、１６１．０、１５１．８、１４０．４、１３５．４、１３３．３、１２８．６、１１９．８、１０６．０、７５．６、５８．０、５６．０、５３．２、５０．５、３９．６、３３．９。
【０１３０】
ＨＰＬＣ条件：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  Ｇｏｌｄ  ＰＦＰカラム、１５０×４．６ｍｍ、３．０ｕｍ；４０℃のカラム温度；１．８ｍＬ／分の流速；および２１５ｎｍの波長。
【０１３１】
勾配：分        ＣＨ３ＣＮ  ０．１％Ｈ３ΡＯ４
０          ２５          ７５
１２        ７０          ３０
１２．１    ２５          ７５
１４        ２５          ７５
保持時間：                      分
ジクロロキノキサリン１１      ７．８
プロリンキノキサリン１３      ９．８
Ｄｅ−Ｂｏｃキノキサリン１４  ３．６
【０１３２】
実施例１０：（Ｓ）−２−（（（１Ｒ，２Ｒ）−２−（５−（６−メトキシ−３−（（３Ｒ，５Ｓ）−５−（メトキシカルボニル）ピロリジン−３−イルオキシ）キノキサリン−２−イル）ペンタ−４−イニル）シクロプロポキシ）カルボニルアミノ）−３，３−ジメチルブタン酸（１６）およびアルキン大環状エステル（１７）の調製
【化１１】
2014524442.tif 000013
【０１３３】
３首のフラスコに、ヨウ化銅（Ｉ）（０．２１９ｇ、１．１５２ｍｍｏｌ）、クロロキノキサリンＭｓＯＨ塩１４（５０ｇ、１１５ｍｍｏｌ）、アルキン酸ＴＢＡ塩１５（４９．３ｇ、１２１ｍｍｏｌ）およびビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（０．４０４ｇ、０．５７３ｍｍｏｌ）を加えた。フラスコを減圧してＮ２で脱気した。ＭｅＯＨ（５００ｍｌ）を加え、反応混合物を再び減圧してＮ２で脱気した。トリエチルアミン（３２．１ｍｌ、２３０ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を３５℃で３〜５時間熟成させた。次いで、バッチを、減圧下で約１００ｍＬの容量まで濃縮した。ＴＨＦ（２５０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）を加えた。反応混合物を５℃未満まで冷却した。ＨＣｌ溶液（１Ｎ、約１８０ｍＬ）を、反応溶液のｐＨを約２に調整するまで、５℃未満で徐々に加えた。ＮａＣｌ水溶液（１０％、３５０ｍＬ）を加えた。分離した水層を、ＴＨＦ（２５０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）の溶液で逆抽出した。合わせた有機層を１０％ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ）で洗浄した。有機層を、２０℃未満で、溶液のＫＦが５００ｐｐｍより少なくなるまで、減圧下でＴＨＦと共に共沸濃縮した。次いで、反応溶媒を、２０℃未満で、減圧下、ＤＭＡｃ（６５０ｍＬ）へと切り替えた。
【０１３４】
ＨＡＴＵ（５５．１ｇ、１４５ｍｍｏｌ）のＤＭＡｃ（６５０ｍＬ）中の溶液を、外界温度で減圧してＮ２で脱気した。次いで、溶液を０℃まで冷却し、ＤＩＰＥＡ（５８．５ｍＬ、３３５ｍｍｏｌ）を０〜５℃未満で滴下して加えた。次いで、アルキンキノキサリン酸１６（６５ｇアッセイ、１１２ｍｍｏｌ）のＤＭＡｃ中の上記溶液を、１０時間かけて内部温度を０℃で維持しながら滴下して加えた。添加後、バッチを０℃でさらに２時間かき混ぜた。ＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）を５℃未満で加えた。１０％ＮａＣｌ水溶液（４００ｍＬ）、水（１２５ｍＬ）および１Ｎ  ＨＣｌ溶液（１００ｍＬ）の溶液を、バッチ温度を５℃未満で維持しながら徐々に加えた。次いで、溶液を、１Ｎ  ＨＣｌ（約２５ｍＬ）でｐＨ＝２に調整した。分離した水層をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で逆抽出した。合わせた有機層を１０％ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ）で洗浄した。１０％ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ）を合わせた有機層に加えた後、混合した溶液を０〜５℃まで冷却した。１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（約２５ｍＬ）を加えて、ｐＨ＝約７に調整した。分離した有機層をＣｅｌｉｔｅを通してろ過し、最終容量３００ｍＬでＩＰＡへと溶媒切り替えした。酢酸（５．０ｍＬ）を加え、次いで、バッチを還流に至るまで３０分間加熱した。スラリーを６０℃まで冷却し、水（２５０ｍＬ）を１時間かけて滴下して加えた。添加後、バッチをさらに３０分間熟成させ、その後、約２時間の間、外界温度まで徐々に冷却した。少なくとも１時間熟成させた後、バッチをろ過した。湿ケークを５０％ＩＰＡ水溶液（１００ｍＬ）で置換洗浄した。外界温度で吸引乾燥させ、５６ｇの大環状アルキンエステル１７を与えた。
【０１３５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．８０（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．１７（ｄｄ，Ｊ＝９．２，２．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．０４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、５．８２（ｔ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．２６（ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．６２（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，７．３Ｈｚ，１Ｈ）、４．５１（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．４０（ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．０３（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．９１（ｓ，３Ｈ）、３．８７（ｍ，１Ｈ）、３．７３（ｓ，３Ｈ）、２．８５（ｄｔ，Ｊ＝１２．１，４．２Ｈｚ，１Ｈ）、２．７６（ｄ，Ｊ＝１４．４，７．３Ｈｚ，１Ｈ）、２．４９（ｄｔ，Ｊ＝１２．２，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．３０（ｄｄｄ，Ｊ＝１４．６，１０．１，４．２Ｈｚ，１Ｈ）、１．９９（ｍ，１Ｈ）、１．８２（ｍ，１Ｈ）、１．７４（ｍ，１Ｈ）、１．０８（ｓ，９Ｈ）、０．９２（ｍ，２Ｈ）、０．７６（ｍ，１Ｈ）、０．４７（ｍ，１Ｈ）。
【０１３６】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７２．３、１７１．３、１６１．２、１５７．４、１５６．３、１４０．４、１３４．３、１３０．２、１２９．５、１１９．５、１０５．７、９８．９、７５．５、７５．２、５９．４、５８．１、５５．７、５５．６、５４．１、５２．３、３５．３、３５．０、２９．９、２８．０、２６．３、１８．７、１８．３、１０．３。
【０１３７】
ＩＰＣ  ＨＰＬＣ条件：Ａｓｃｅｎｔｉｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｃ１８カラム、１００×４．６ｍｍ、２．７ミクロン；４０℃のカラム温度；１．８ｍＬ／分の流速；および２１５ｎｍの波長。
【０１３８】
勾配：分        ＣＨ３ＣＮ  ０．１％Ｈ３ΡＯ４
０          １０          ９０
６          ９５          ５
９          ９５          ５
９．１      １０          ９０
保持時間：                      分
Ｄｅ−Ｂｏｃキノキサリン１４  ２．３
アルキンキノキサリン酸１６    ３．３
アルキン大環状エステル１７    ５．７
【０１３９】
実施例１１：大環状エステル１８の調製
【化１２】
2014524442.tif 000014
【０１４０】
アルキン大環状エステル１７（１０．０ｇ、１７．７１ｍｍｏｌ）および５％Ｐｄ／Ｃ  ５０％湿性（３．５ｇ、０．８２２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）中の混合物を、外界温度で、４０ｐｓｉｇの水素下、少なくとも１０時間水素添加した。反応が完了したら、バッチをＣｅｌｉｔｅを通してろ過し、ろ過した触媒をＴＨＦ（１００ｍＬ）で洗浄した。合わせたろ液を、減圧下、最終容量約５０ｍＬまでＩＰＡへと溶媒切り替えした。スラリーを還流に至るまで約１時間加熱した。次いで、バッチを５０℃まで冷却し、水（３０ｍＬ）を１時間かけて滴下して加えた。バッチを０℃未満まで２時間かけて徐々に冷却し、０℃でさらに１時間撹拌した後、ろ過した。湿ケークを水中５７％ＩＰＡの冷（０〜５℃）溶液（１７．５ｍＬ）で洗浄した。外界温度で吸引乾燥させ、８．５ｇの所望の大環状エステル１８を得た。
【０１４１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．８３（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．１８（ｄｄ，Ｊ＝９．２，２．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．１（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、５．９８（ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ）、５．２４（ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．６０（ｄｄ，Ｊ＝１０．７，７．３Ｈｚ，１Ｈ）、４．４６（ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．４０（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．０１（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，４．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．９３（ｓ，３Ｈ）、３．８０（ｍ，１Ｈ）、３．７５（ｓ，３Ｈ）、２．９０（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．７，１１．５，４．８Ｈｚ，１Ｈ）、２．７９（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．７，１２．１，４．８Ｈｚ，１Ｈ）、２．６９（ｄｄ，Ｊ＝１４．２，６．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．２８（ｄｄｄ，Ｊ＝１４．５，１０．７，４．３Ｈｚ，１Ｈ）、１．７６（ｍ，２Ｈ）、１．６６（ｍ，２Ｈ）、１．５２（ｍ，３Ｈ）、１．０９（ｓ，９Ｈ）、０．９９（ｍ，１Ｈ）、０．９２（ｍ，１Ｈ）、０．６７（ｍ，１Ｈ）、０．４６（ｍ，１Ｈ）。
【０１４２】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７２．４、１７１．５、１６０．４、１５７．５、１５５．１、１４８．７、１４０．１、１３４．６、１２９．４、１１８．７、１０６．１、７４．４、５９．４、５８．２、５５．８、５５．５、５４．４、５２．５、３５．７、３５．２、３４．０、３０．９、２９．５、２８．６、２８．３、２６．５、１８．９、１１．２。
【０１４３】
ＩＰＣ  ＨＰＬＣ条件：Ａｓｃｅｎｔｉｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｃ１８  Ｃｏｌｕｍｎ、１００×４．６ｍｍ、２．７ミクロン；４０℃のカラム温度；１．８ｍＬ／分の流速；および２１５ｎｍの波長。
【０１４４】
勾配：分        ＣＨ３ＣＮ  ０．１％Ｈ３ΡＯ４
０          １０          ９０
６          ９５          ５
９          ９５          ５
９．１      １０          ９０
保持時間：                                          分
アルキン大環状エステル１７                        ５．７
ｃｉｓ−アルケン大環状エステル（反応中間体）      ６．０
ｔｒａｎｓ−アルケン大環状エステル（反応中間体）  ６．１
化合物１８                                        ６．２
【０１４５】
実施例１２：大環状酸（１９）の調製
【化１３】
2014524442.tif 000015
【０１４６】
大環状エステル１８（９０ｇ、１５８．３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（７２０ｍＬ）中のスラリーに、外界温度で、２Ｍ  ＮａＯＨ（２３７．４ｍＬ、４７５ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応混合物を５０℃で２〜３時間熟成させた。反応溶液を３５〜４０℃まで冷却し、５０％ＭｅＯＨ水溶液中の５Ｎ  ＨＣｌ（７０ｍＬ）を滴下して加えた。バッチを遊離酸半水和物１９（約１００ｍｇ）を使用してシードし、４０℃で３０分間から１時間熟成させた。さらに５０％ＭｅＯＨ水溶液中の５Ｎ  ＨＣｌ（３０ｍＬ）を、２〜４時間かけて、４０℃で滴下して加えた。スラリーをさらに１時間熟成させた後、外界温度まで冷却した。スラリーをさらに１時間熟成させた後、ろ過した。湿ケークを水中の６５％ＭｅＯＨで洗浄した（３×２７０ｍＬ、置換洗浄、スラリー洗浄および置換洗浄）。外界温度での吸引乾燥または乾燥Ｎ２スイープを使用した６０〜８０℃での真空乾燥器乾燥により、８５．６ｇの大環状酸半水和物１９を灰白色の固体として得た。
【０１４７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．８５（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．１９（ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．１３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）、５．９９（ｔ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ）、５．４５（ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．８０（ｓ，ｂｒ，２Ｈ，ＣＯＯＨ，Ｈ２Ｏ半水和物）、４．６４（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．４９（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．４４（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．９９（ｄｄ，Ｊ＝１１．７，４．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．９４（ｓ，３Ｈ）、３．８１（ｍ，１Ｈ）、２．９０（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．８，１１．８，４．８，１Ｈ）、２．８０（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．８，１１．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ）、２．７１（ｄｄ，Ｊ＝１４．３，７．３，１Ｈ）、２．４２（ｄｄｄ，Ｊ＝１４．４，１０．６，４．２Ｈｚ，１Ｈ）、１．７６（ｍ，２Ｈ）、１．６６（ｍ，２Ｈ）、１．５２（ｍ，３Ｈ）、１．０７（ｓ，９Ｈ）、０．９６（ｍ，２Ｈ）、０．６７（ｍ，１Ｈ）、０．４７（ｍ，１Ｈ）。
【０１４８】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７４．５、１７２．１、１６０．５、１５７．６、１５５．１、１４８．６、１４１．０、１３４．３、１２９．１、１１８．９、１０６．１、７４．３、５９．６、５８．３、５５．６、５４．６、３５．６、３５．３、３３．７、３０．８、２９．４、２８．６、２８．３、２６．５、１８．９、１１．２。
【０１４９】
ＩＰＣ  ＨＰＬＣ条件：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  Ｇｏｌｄ  ＰＦＰ  Ｃｏｌｕｍｎ、１５０×４．６ｍｍ、３．０μｍ、４０℃のカラム温度；１．８ｍＬ／分の流速；および２１５ｎｍの波長
勾配：分        ＣＨ３ＣＮ  ０．１％Ｈ３ΡＯ４
０          ２５          ７５
１２        ８０          ２０
１２．１    ２５          ７５
１４        ２５          ７５
保持時間：    分
化合物１８  ６．７８
化合物１９  ５．４１
【０１５０】
実施例１３：化合物Ａの調製
【化１４】
2014524442.tif 000016
【０１５１】
大環状酸半水和物１９（１０．１６ｇ、１８．０３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０〜９０ｍＬ）中に溶解した。溶液を最終容量１００ｍＬで共沸乾燥させた。スルホンアミドｐＴＳＡ塩２０（７．９８ｇ、１．９８３ｍｍｏｌ）、その後にＤＭＡｃ（１５ｍＬ）を外界温度で加えた。バッチを０〜１０℃まで冷却し、ピリジン（１０ｍＬ）を滴下して加えた。次いで、ＥＤＣ  ＨＣｌ（４．４９ｇ、２３．４４ｍｍｏｌ）を、複数回に分けてまたは一度に０〜１０℃で加えた。反応混合物を０〜１０℃で１時間熟成させ、次いで１５〜２０℃まで２〜４時間温めた。ＭｅＯＡｃ（１００ｍＬ）、その後に５％ＮａＣｌ水溶液中の１５重量％クエン酸（５０ｍＬ）を、外部冷却を使用して内部温度を＜２５℃に維持しながら加えた。分離した有機層を５％ＮａＣｌ水溶液中の１５重量％クエン酸（５０ｍＬ）で、その後に５％ＮａＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を、最終容量約８０ｍＬで、アセトンへと溶媒切り替えした。水（１０ｍＬ）を３５〜４０℃で滴下して加えた。バッチを化合物Ａ一水和物形態ＩＩＩ（約１０ｍｇ）を使用してシードし、３５〜４０℃で０．５〜１時間熟成させた。さらに水（２２ｍＬ）を、２〜４時間かけて３５〜４０℃で滴下して加えた。スラリーを２０℃で２〜４時間熟成させた後、ろ過した。湿ケークを水中６０％アセトン（４０ｍＬ×２）で置換洗浄した。外界温度で吸引乾燥させて、化合物Ａ一水和物形態ＩＩＩを白色固体として得た。
【０１５２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．９５（ｓ，ｂｒ，１Ｈ）、７．８１（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．１８（ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．１６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ）、７．１３（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ）、５．９６（ｔ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，１Ｈ）、５．７２（ｍ，１Ｈ）、５．６８（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．１９（ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．０７（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ）、４．５２（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．４５（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．３６（ｄ，Ｊ＝１０．５，６．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．０５（ｄｄ，Ｊ＝１１．５，３．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．９３（ｓ，３Ｈ）、３．７８（ｍ，１Ｈ）、２．９０（ｍ，１Ｈ）、２．８２（ｔｔ，Ｊ＝８．０，４．８Ｈｚ，１Ｈ）、２．７４（ｄｔ，Ｊ＝１３．２，４．８Ｈｚ，１Ｈ）、２．５９（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，６．７Ｈｚ，１Ｈ）、２．４０（ｄｄｄ，Ｊ＝１４．０，１０．６，４．０Ｈｚ，１Ｈ）、２．１０（ｄｄ，Ｊ＝１７．７，８．７Ｈｚ，１Ｈ）、１．９８（２Ｈ、Ｈ２Ｏ一水和物）、１．８８（ｄｄ，Ｊ８．２，５．９Ｈｚ，１Ｈ０、１．７４（ｍ，３Ｈ）、１．６１（ｍ，１Ｈ）、１．５０（ｍ，３Ｈ）、１．４２（ｄｄ，Ｊ＝９．６，５．８Ｈｚ，１Ｈ）、１．２２（ｍ，２Ｈ）、１．０７（ｓ，９Ｈ）、０．９５（ｍ，４Ｈ）、０．６９（ｍ，１Ｈ）、０．４７（ｍ，１Ｈ）。
【０１５３】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７３．５、１７２．１、１６９．１、１６０．４、１５７．７、１５４．９、１４８．４、１４１．０、１３４．３、１３２．７、１２９．１、１１８．８、１１８．７、１０６．５、７４．４、５９．６、５９．４、５５．８、５５．５、５４．９、４１．８、３５．４、３５．３、３５．２、３４．３、３１．２、３０．７、２９．５、２８．６、２８．２、２６．６、２２．６、１８．７、１１．２、６．３１、６．１７。
【０１５４】
ＨＰＬＣ条件：Ａｓｃｅｎｔｉｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｃｏｌｕｍｎ、１０ｃｍ×４．６ｍｍ×２．７μｍ；４０℃のカラム温度；１．８ｍＬ／分の流速；および２１５ｎｍの波長
勾配：分        ＣＨ３ＣＮ  ０．１％Ｈ３ΡＯ４
０          ２０          ８０
５          ５５          ４５
１５        ５５          ４５
２５        ９５          ５
２７        ９５          ５
２７．１    ２０          ８０
３２        ２０          ８０
保持時間：    分
化合物Ａ  １４．５０
【０１５５】
実施例１４：化合物Ａを作成するための代替的手法
【化１５】
2014524442.tif 000017
【０１５６】
オーバーヘッド撹拌器を備えた５０Ｌフラスコに、大環状酸１９（１．０６ｋｇ未精製物、１．００当量）、アミン−ｐＴＳＡ（８６２ｇ未精製物、１．１２ｑ）およびＭｅＣＮ７．４２Ｌを１９℃で加えた。スラリーを水浴中で冷却し、ピリジン（２．１２Ｌ、１３．８当量）を加え、１５分熟成させ、次いでＥＤＣ（５８６ｇ、１．６０当量）を一度に加え、１．５時間熟成させたところ、熟成の間に透明な均一の溶液に変わった。
【０１５７】
溶液を水浴中で冷却し、次いで２Ｎ  ＨＣｌ（１．７Ｌ）を使用してクエンチし、シードし（９．２ｇ）、１５分熟成させ、ＨＣｌ水溶液の残りを２．５時間かけて加えた。黄色のスラリーが形成された。スラリーをＲＴで一晩熟成させ、ろ過し、ＭｅＣＮ／水（１：１ｖ／ｖ）８Ｌで洗浄して化合物Ａ（水和物ＩＩ）を得た。
【０１５８】
化合物Ａをアセトン４Ｌ中にＲＴで溶解し、ろ過して、オーバーヘッド撹拌器を有する１２Ｌ  ＲＢＦに移し、追加のアセトン１Ｌですすぎ、５０℃まで加熱し、水０．９Ｌを加え、１０ｇをシードし、１５分熟成させ、次いで水０．８Ｌを２．５時間かけて加え、追加の水３．３ｖを２．５時間かけて加え、加熱を停止し、ＲＴまで冷却し、ＲＴで一晩熟成させ、ろ過し、水／アセトン（１：１ｖ／ｖ）４Ｌで洗浄し、空気中、減圧下で乾燥させた。化合物Ａ水和物ＩＩＩ、６７０ｇを灰白色の固体として得た。
【０１５９】
実施例１５：大環状エステル（１８）の代替的調製
【化１６】
2014524442.tif 000018
【０１６０】
３首のフラスコに、ヨウ化銅（Ｉ）（０．０２０ｇ、０．１０４ｍｍｏｌ）、クロロキノキサリンＭｓＯＨ塩１４（４．５ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）、アルキン酸ＴＢＡ塩１５（４．４ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）およびビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（０．０３６ｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を加えた。フラスコを減圧してＮ２で脱気した。ＭｅＯＨ（４５ｍｌ）を加え、反応混合物を再び減圧してＮ２で脱気した。トリエチルアミン（２．８９ｍｌ、２０．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を３５℃で３〜５時間熟成させた。次いで、バッチを、減圧下、約９ｍＬの容量まで濃縮した。ＴＨＦ（２３ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（２３ｍＬ）を加えた。反応混合物を５℃未満まで冷却した。ＨＣｌ溶液（１Ｎ、約１６ｍＬ）を、反応溶液のｐＨが約２に調整されるまで５℃未満で徐々に加えた。ＮａＣｌ水溶液（１０％、３２ｍＬ）を加えた。分離した水層を、ＴＨＦ（２３ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（２３ｍＬ）の溶液で逆抽出した。合わせた有機層を１０％ＮａＣｌ水溶液（４５ｍＬ）で洗浄した。溶媒を、減圧下、２０℃未満でＭｅＯＨ（７５ｍＬ）へと切り替えた。
【０１６１】
反応混合物にＤＡＲＣＯ  ＫＢ−Ｂ（１．０ｇ）を添加し、得られた懸濁液を２０℃で１時間撹拌し、その後にＣｅｌｉｔｅを通してろ過した。湿ケークをＭｅＯＨ（２５ｍＬ）で洗浄した。合わせたろ液を、Ｐｅａｒｌｍａｎ触媒（１．２ｇ、炭素上２０％Ｐｄ（ＯＨ）２、５０％湿性）の存在下、１気圧の水素下、外界温度で少なくとも５時間水素添加した。反応が完了したら、懸濁液をＣｅｌｉｔｅを通してろ過し、酸２１を含有するろ液をＤＭＡｃ（６５ｍＬ）へと溶媒切り替えした。
【０１６２】
ＨＡＴＵ（５．０５ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）のＤＭＡｃ（６５ｍＬ）中の溶液を、外界温度で減圧してＮ２で脱気した。溶液を０℃まで冷却し、ＤＩＰＥＡ（５．４ｍＬ、３０．９ｍｍｏｌ）を０〜５℃で滴下して加えた。次いで、酸２１（５．９８ｇアッセイ、１０．２ｍｍｏｌ）のＤＭＡｃ中の上記溶液を、内部温度を０℃で維持しながら１０時間かけて滴下して加えた。添加後、バッチを０℃でさらに２時間かき混ぜて、大環状エステル１８を与えた。ワークアップ手法および大環状エステル１８の単離は、実施例１１中で記載されたものと同じであった。
【０１６３】
実施例１６：化合物Ａ水和物ＩＩ
水和物ＩＩは、化合物Ａ遊離塩基を、７５％ＲＨ（相対湿度）以上の水分活性を有する比率でアセトニトリル：水を含有する溶液に加えてアセトニトリル溶媒和化合物を形成し、次いで上昇させた温度で乾燥させることにより調製した。
【０１６４】
水和物ＩＩを、Ｘ線粉末回折、熱重量分析および示差走査熱量測定曲線ＴＧを含む異なる方法により特性評価した。Ｘ線粉末回折パターンは、ＰＷ３０４０／６０コンソールを有するＰｈｉｌｉｐｓ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｘ’Ｐｅｒｔ  ＰＲＯ  Ｘ−ｒａｙ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ上で作成した。ＰＷ３３７３／００セラミックＣｕ  ＬＥＦ  Ｘ線管Ｋ−Ａｌｐｈａ線を線源として用いた。
【０１６５】
ＤＳＣデータは、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＤＳＣ２９１０または同等品を用いて取得した。２から６ｍｇの間の試料をパン内に秤量し、被覆する。このパンを次いでクリンプし、熱量計セル内の試料位置に置く。空のパンを基準位置に置く。熱量計セルを閉じて窒素流をセルに通す。加熱プログラムは、加熱速度１０℃／分で温度約２５０℃まで試料を加熱するように設定する。加熱プログラムを開始する。ランが完了したら、データを、システムソフトウェア中に含有されるＤＳＣ分析プログラムを用いて分析する。熱イベントは、熱イベントが観察される温度範囲の上下にあるベースライン温度点の間で積分する。報告されるデータは、開始温度、ピーク温度およびエンタルピーである。
【０１６６】
ＴＧデータは、Ｐｅｒｋｉｎ  ＥｌｍｅｒモデルＴＧＡ７を用いて取得した。実験は、窒素流下で、加熱速度１０℃／分を最大温度約２５０℃まで用いて行った。自動的にバランスの風袋重量を量った後、５から２０ｍｇの試料を白金パンに加え、炉を上昇させ、加熱プログラムを開始する。重量／温度データは、機器により自動的に収集される。結果の分析は、機器ソフトウェア内のＤｅｌｔａ  Ｙ関数を選択し、重量損失が計算される間の温度を選ぶことにより実施する。重量損失は、分解／蒸発の開始まで報告される。
【０１６７】
図１は、化合物Ａの結晶性水和物ＩＩの特徴的なＸ線回折パターンを示す。水和物ＩＩは、以下のｄ−間隔に対応する特徴的な反射を呈した。
【表１】
2014524442.tif 000019
【０１６８】
実施例１６：水和物ＩＩＩ
水和物ＩＩＩを、Ｘ線粉末回折、熱重量分析、示差走査熱量測定曲線ＴＧおよび固体炭素−１３核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを含む異なる方法により特性評価した。Ｘ線粉末回折パターンは、ＰＷ３０４０／６０コンソールを有するＰｈｉｌｉｐｓ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｘ’Ｐｅｒｔ  ＰＲＯ  Ｘ−ｒａｙ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ上で作成した。ＰＷ３３７３／００セラミックＣｕ  ＬＥＦ  Ｘ線管Ｋ−Ａｌｐｈａ線を線源として用いた。
【０１６９】
ＤＳＣデータは、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＤＳＣ２９１０または同等品を用いて取得した。２から６ｍｇの間の試料をパン内に秤量し、被覆する。このパンを次いでクリンプし、熱量計セル内の試料位置に置く。空のパンを基準位置に置く。熱量計セルを閉じて窒素流をセルに通す。加熱プログラムは、加熱速度１０℃／分で温度約２５０℃まで試料を加熱するように設定する。加熱プログラムを開始する。ランが完了したら、データを、システムソフトウェア中に含有されるＤＳＣ分析プログラムを用いて分析する。熱イベントは、熱イベントが観察される温度範囲の上下にあるベースライン温度点の間で積分する。報告されるデータは、開始温度、ピーク温度およびエンタルピーである。
【０１７０】
ＴＧデータは、Ｐｅｒｋｉｎ  ＥｌｍｅｒモデルＴＧＡ７を用いて取得した。実験は、窒素流下で、加熱速度１０℃／分を最大温度約２５０℃まで用いて行った。自動的にバランスの風袋重量を量った後、５から２０ｍｇの試料を白金パンに加え、炉を上昇させ、加熱プログラムを開始する。重量／温度データは、機器により自動的に収集される。結果の分析は、機器ソフトウェア内のＤｅｌｔａ  Ｙ関数を選択し、重量損失が計算される間の温度を選ぶことにより実施する。重量損失は、分解／蒸発の開始まで報告される。
【０１７１】
炭素−１３スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶ４００  ＮＭＲ分光器上で、Ｂｒｕｋｅｒ  ４ｍｍ  Ｈ／Ｆ／Ｘ  ＢＢ二重共鳴ＣＰＭＡＳプローブを用いて記録した。スペクトルは、８０ｋＨｚでのプロトン／炭素−１３変調振幅交差分極（ＶＡＣＰ）を使って、３ｍ秒の接触時間を使用して収集した。データ取得のために用いた他の実験パラメーターは、１００ｋＨｚのプロトン９０度パルス、１００ｋＨｚでのＳＰＩＮＡＬ６４デカップリング、２秒のパルス遅延および２６８２４スキャンのシグナル平均化であった。マジック角スピニング（ＭＡＳ）速度を１３ｋＨｚに設定した。１０Ｈｚのローレンツ線幅拡大をスペクトルに適用した後、フーリエ変換を行った。化学シフトは、ＴＭＳスケール上で、グリシンのカルボニル炭素（１７６．７０ｐｐｍ）を二次基準として用いて報告される。
【０１７２】
図２は、結晶性水和物ＩＩＩの特徴的なＸ線回折パターンである。水和物ＩＩＩは、以下のｄ−間隔に対応する特徴的な反射を呈した。
【表２】
2014524442.tif 000020
【０１７３】
図３は、結晶性水和物ＩＩＩの典型的な熱重量分析曲線を示す。
【０１７４】
図４は、結晶性水和物ＩＩＩの示差走査熱量測定曲線を示す。
【０１７５】
図５は、化合物Ａ水和物ＩＩＩについての固体Ｃ−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲを示す。水和物ＩＩＩについての特徴的なピークは、５．１４、６．３１、１２．４９、１８．３５、２６．８１、２８．０３、３０．３３、３１．２７、３４．９５、３５．９９、３８．６８、４２．０１、５４．９３、５６．３９、６０．１４、７４．２０、１０７．０２、１２０．１１、１２１．６０、１２９．７３、１３４．３５、１３５．９５、１４２．８９、１４８．４７、１５５．３７、１５７．３２、１６０．９０、１６８．３２、１７２．１７および１７５．５３ｐｐｍにおいて観察される。
【０１７６】
実施例１８：さらなる水和物
水和物Ｉ、ＩＶ、ＶおよびＶＩをＸ線粉末回折および炭素−１３  ＮＭＲにより特性評価した。Ｘ線粉末回折パターンは、ＰＷ３０４０／６０コンソールを有するＰｈｉｌｉｐｓ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｘ’Ｐｅｒｔ  ＰＲＯ  Ｘ−ｒａｙ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ上で作成した。ＰＷ３３７３／００セラミックＣｕ  ＬＥＦ  Ｘ線管Ｋ−Ａｌｐｈａ線を線源として用いた。炭素−１３スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶ４００  ＮＭＲ分光器上で、Ｂｒｕｋｅｒ  ４ｍｍ  Ｈ／Ｆ／Ｘ  ＢＢ二重共鳴ＣＰＭＡＳプローブを用いて記録した。スペクトルは、８０ｋＨｚでのプロトン／炭素−１３変調振幅交差分極（ＶＡＣＰ）を使って、１００ｋＨｚのプロトン９０度パルス、１００ｋＨｚでのＳＰＩＮＡＬ６４デカップリングを使用して収集した。３０Ｈｚのローレンツ線幅拡大をスペクトルに適用した後、フーリエ変換を行った。化学シフトは、ＴＭＳスケール上で、グリシンのカルボニル炭素（１７６．７０ｐｐｍ）を二次基準として用いて報告される。他の実験パラメーターは以下の各セクション中で概説される。
【０１７７】
水和物Ｉ
水和物Ｉは、遊離形態をニートのメタノールに加え、約２４時間、室温で平衡化させ、空気乾燥させることにより調製した。
【０１７８】
図８は、本発明の化合物Ｉの結晶性水和物形態Ｉの特徴的なＸ線回折パターンである。水和物形態Ｉは、以下のｄ−間隔に対応する特徴的な反射を呈した。
【表３】
2014524442.tif 000021
【０１７９】
水和物Ｉを、その固体炭素−１３核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルに基づいて特性評価した。データ取得のために用いた他の実験パラメーターは、２秒のパルス遅延および２０４８０スキャンのシグナル平均化であった。マジック角スピニング（ＭＡＳ）速度を１３ｋＨｚに設定し、温度を２７０Ｋに設定した（図１９）。水和物Ｉについての特徴的なピークは、４．２２、７．２３、１１．４５、１７．７９、２４．０４、２６．９５、２８．２９、３１．１５、３２．４７、３２．４７、３３．４６、３４．０３、３５．７４、４２．３２、５３．５０、５６．０５、５６．９６、７７．４９、１０８．９５、１１９．６５、１２２．５５、１３１．０５、１３３．１３、１３５．３８、１４２．２８、１５０．７８、１５６．０３、１５７．９９、１６１．３６、１７１．４０、１７３．４２、１７４．３０ｐｐｍにおいて観察された。
【０１８０】
水和物ＩＶ
水和物ＩＶは、カリウム塩を、１当量のＨＣｌを有する１：１  アセトン：水の溶液に加え、ＲＴで乾燥させることにより調製した。
【０１８１】
図１０は、結晶性水和物ＩＶの特徴的なＸ線回折パターンである。水和物ＩＶは、以下のｄ−間隔に対応する特徴的な反射を呈した。
【表４】
2014524442.tif 000022
【０１８２】
水和物ＩＶを、その固体炭素−１３核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルに基づいて特性評価した。データ取得のために用いた他の実験パラメーターは、２秒のパルス遅延および１２４５スキャンのシグナル平均化であった。マジック角スピニング（ＭＡＳ）速度を１３ｋＨｚに設定し、温度を２７５Ｋに設定した（図１１）。水和物ＩＶについての特徴的なピークは、３．９０、５．３０、６．９９、１０．４９、１３．１３、１７．８１、２４．７３、２７．５２、２８．１４、２９．４２、３１．０２、３２．８０、３６．０８、３９．２２、４２．４５、５３．６２、５５．９３、５９．１４、６０．７６、７４．７７、１０９．２２、１１１．１９、１１．３８、１２０．２４、１２２．５０、１３３．９６、１３９．７４、１４７．２、１４８．９０、１５４．６５、１５８．２５、１５９．５３、１６０．１２、１７０．１４、１７１．０５、１７２．０８、１７３．４７および１７４．４６ｐｐｍにおいて観察される。
【０１８３】
水和物Ｖ
水和物Ｖは、水和物ＩＶを８１％より高い相対湿度に曝露することにより調製した。
【０１８４】
図１２は、結晶性水和物Ｖの特徴的なＸ線回折パターンである。水和物Ｖは、以下のｄ−間隔に対応する特徴的な反射を呈した。
【表５】
2014524442.tif 000023
【０１８５】
水和物Ｖを、その固体炭素−１３核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルに基づいて特性評価した（図１３）。スペクトルは、８０ｋＨｚでのプロトン／炭素−１３変調振幅交差分極（ＶＡＣＰ）を使って、２ｍ秒の接触時間を使用して収集した。データ取得のために用いた他の実験パラメーターは、３秒のパルス遅延および３４２５スキャンのシグナル平均化であった。マジック角スピニング（ＭＡＳ）速度を１３ｋＨｚに設定した。水和物Ｖについての特徴的なピークは、７．８６、８．９２、１３．１０、１８．３１、２３．７２、２７．４４、２８．４７、３０．７７、３５．７９、３６．２５、３７．１５、３７．１５、４２．９５、５３．１３、５５．６７、５７．３１、６０．４７、６２．０６、７５．０９、１１０．５９、１１２．２４、１１８．３２、１３２．１８、１３４．０５、１３５．８３、１３９．８８、１４８．３０、１５５．１９、１５７．９７、１５９．４１、１７０．３１および１７５．２０ｐｐｍにおいて観察される。
【０１８６】
水和物ＶＩ
水和物ＶＩは、遊離塩基をメタノール／アセトンの５０／５０混合物に加え、室温で乾燥させることにより調製した。
【０１８７】
図１４は、結晶性水和物ＶＩの特徴的なＸ線回折パターンである。水和物ＶＩは、以下のｄ−間隔に対応する特徴的な反射を呈した。
【表６】
2014524442.tif 000024
【０１８８】
水和物ＶＩを、その固体炭素−１３核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルに基づいて特性評価した（図１５）。スペクトルは、８０ｋＨｚでのプロトン／炭素−１３変調振幅交差分極（ＶＡＣＰ）を使って、３ｍ秒の接触時間を使用して収集した。データ取得のために用いた他の実験パラメーターは、２秒のパルス遅延および３４２５スキャンのシグナル平均化であった。
【０１８９】
水和物ＶＩについての特徴的なピークは、４．８７、６．２４、１１．７０、１２．８５、１８．３６、２６．５５、２８．３１ｍ  ３１．５１、３４．９８、３８．４７、４２．０９、５４．２７、５６．１２、６０．１０、７３．４９、７３．９７、１０５．９１、１０８．０４、１１８．３９、１１９．７５、１２１．３３、１２９．９６、１３３．８７、１３６．１３、１４２．２６、１４２．９７、１４６．８５、１４８．３６、１５４．９７、１５７．３２、１６０．７１、１６８．２３、１７２．２１および１７５．３４ｐｐｍにおいて観察される。
【０１９０】
水和物Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの水中での相対的安定性は、１２時間後に水和物ＩＩが優勢であり、５日後に水和物ＩＩＩが優勢であることを示した。水和物ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶの相対的安定性は、アセトン、水およびそれらの混合物中で、２５℃および５０℃において、水和物ＩＩＩが優勢であることを示した。
【０１９１】
水和物形態の相対的安定性は、０．０７２から１の範囲の水分活性であるアセトン：水の中での、室温での競合的スラリーターンオーバー実験により決定した。全ての場合において、水和物形態ＩＩＩがこれらの実験から生じる固体であったが、このことは、調査した溶媒中の水和物形態のうち、これが最も安定であることを示す。
【０１９２】
実施例１９：化合物Ａ  Ｋ＋およびＮａ＋塩の生産
化合物Ａ  Ｋ＋およびＮａ＋塩を次のように生産した。
【０１９３】
化合物Ｋ  Ｎａ塩の調製
【化１７】
2014524442.tif 000025
【０１９４】
機械撹拌器、熱電対および窒素注入口を備えた、３０Ｌの２：１  ＭｅＣＮ：ＥｔＯＨを含有する５０Ｌのジャケット付き円筒容器に、３．３ｋｇ化合物Ａ遊離酸を加えた。次いで、これをインラインフィルターを通して、機械撹拌器、熱電対および窒素注入口を備えた７２Ｌ  ＲＢＦに移した。この溶液に、１時間かけてＥｔＯＨ中ＫＯＥｔを加えた。ＥｔＯＨ中ＫＯＥｔの２０％を添加した後、溶液を形態ＩＩを使用してシードした。得られたスラリーを、３時間外界温度で撹拌し、次いでろ過した。
【０１９５】
次いで、懸濁液をろ過し、２×１０ＬのＭｅＣＮで洗浄し、Ｎ２／減圧スイープ下で乾燥させ、３．４０ｋｇの化合物Ａカリウム塩（９８．３重量％、９８．１ＬＣＡＰ、９９％収率）を得た。
【０１９６】
ＨＰＬＣ条件：Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ  Ｃ１８  ５０×４．６ｍｍ、１．８μｍ、Ａ＝０．１％リン酸、Ｃ＝アセトニトリル：１０％から９５％Ｃ、５分；９５％Ｃ、６分；１０％Ｃ、６．１分；２分ポスト、１．５ｍＬ／分、２３０ｎｍ、２５℃。
【０１９７】
化合物Ａ  ５．４１分
化合物Ａ  Ｎａ塩の調製
【化１８】
2014524442.tif 000026
【０１９８】
１００ｍＬの２首丸底フラスコ中で、窒素下、化合物Ａ遊離酸を、５０℃で０．２ｍＬ水を含む４０ｍＬ  ＥｔＯＨ中に溶解した。これに１．３０ｍＬ  ２Ｍ水酸化ナトリウム溶液を３０分かけて徐々に加え、固体が形成されるまで５０℃で保持し、次いで室温まで徐々に冷却して３時間熟成させた。次いで、スラリーを氷浴中で冷却し、次いで、懸濁液をろ過し、２×１０ｍＬのＭｅＣＮで洗浄し、Ｎ２／減圧スイープ下で乾燥させ、２．０１ｇの化合物Ａナトリウム塩（９８．３ＬＣＡＰ、９９％収率）を得た。
【０１９９】
ＨＰＬＣ条件：Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ  Ｃ１８  ５０×４．６ｍｍ、１．８μｍ、Ａ＝０．１％リン酸、Ｃ＝アセトニトリル：１０％から９５％Ｃ、５分；９５％Ｃ、６分；１０％Ｃ、６．１分；２分ポスト、１．５ｍＬ／分、２３０ｎｍ、２５℃。
【０２００】
化合物Ａ  ５．４１分
実施例２０：化合物Ａ  Ｋ＋およびＮａ＋塩の特性評価
Ｘ線粉末回折パターンは、ＰＷ３０４０／６０コンソールを有するＰｈｉｌｉｐｓ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｘ’Ｐｅｒｔ  ＰＲＯ  Ｘ−ｒａｙ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ上で作成した。ＰＷ３３７３／００セラミックＣｕ  ＬＥＦ  Ｘ線管Ｋ−Ａｌｐｈａ線を線源として用いた。
【０２０１】
ＤＳＣデータは、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＤＳＣ２９１０または同等品を用いて取得した。２から６ｍｇの間の試料をパン内に秤量し、被覆する。このパンを次いでクリンプし、熱量計セル内の試料位置に置く。空のパンを基準位置に置く。熱量計セルを閉じて窒素流をセルに通す。加熱プログラムは、加熱速度１０℃／分で温度３００℃超まで試料を加熱するように設定する。加熱プログラムを開始する。ランが完了したら、データを、システムソフトウェア中に含有されるＤＳＣ分析プログラムを用いて分析する。熱イベントは、熱イベントが観察される温度範囲の上下にあるベースライン温度点の間で積分する。報告されるデータは、開始温度、ピーク温度およびエンタルピーである。
【０２０２】
ＴＧデータは、Ｐｅｒｋｉｎ  ＥｌｍｅｒモデルＴＧＡ７を用いて取得した。実験は、窒素流下で、加熱速度１０℃／分を最大温度３００℃超まで用いて行った。自動的にバランスの風袋重量を量った後、５から２０ｍｇの試料を白金パンに加え、炉を上昇させ、加熱プログラムを開始する。重量／温度データは、機器により自動的に収集される。結果の分析は、機器ソフトウェア内のＤｅｌｔａ  Ｙ関数を選択し、重量損失が計算される間の温度を選ぶことにより実施する。重量損失は、分解／蒸発の開始まで報告される。
【０２０３】
化合物Ａ  Ｎａ塩
図６は、化合物Ａの結晶性Ｎａ塩の特徴的なＸ線回折パターンを示す。Ｎａ塩は、以下のｄ−間隔に対応する特徴的な反射を呈した。
【表７】
2014524442.tif 000027
【０２０４】
化合物Ａ  Ｋ塩
図１１は、化合物Ａの結晶性Ｋ塩の特徴的なＸ線回折パターンを示す。Ｋ塩は、以下のｄ−間隔に対応する特徴的な反射を呈した。
【表８】
2014524442.tif 000028
【０２０５】
本出願の全体にわたって記載される参考文献は、いずれも特許請求の範囲に記載の発明に対する先行技術であると認められるものではない。
【図１】
2014524442.tif 000029
【図２】
2014524442.tif 000030
【図３】
2014524442.tif 000031
【図４】
2014524442.tif 000032
【図５】
2014524442.tif 000033
【図６】
2014524442.tif 000034
【図７】
2014524442.tif 000035
【図８】
2014524442.tif 000036
【図９】
2014524442.tif 000037
【図１０】
2014524442.tif 000038
【図１１】
2014524442.tif 000039
【図１２】
2014524442.tif 000040
【図１３】
2014524442.tif 000041
【図１４】
2014524442.tif 000042
【図１５】
2014524442.tif 000043
【手続補正書】
【提出日】平成26年4月21日(2014.4.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下よりなる群から選択される形態を持つ、化合物Ａ：
ａ）（ｉ）銅Ｋα放射線を用いて得られる、約２０．５、５．０および１８．２度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターン；または（ｉｉ）約５．１４、６．３１、１２．４９、１８．３５、２６．８１、２８．０３、３０．３３、３１．２７、３４．９５、３５．９９、３８．６８、４２．０１、５４．９３、５６．３９、６０．１４、７４．２０、１０７．０２、１２０．１１、１２１．６０、１２９．７３、１３４．３５、１３５．９５、１４２．８９、１４８．４７、１５５．３７、１５７．３２、１６０．９０、１６８．３２、１７２．１７および１７５．５３ｐｐｍにおけるピークを含む固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲのいずれかを特徴とする、水和物ＩＩＩ；
ｂ）銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１１．７、１６．６および１１．２度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする、水和物ＩＩ；
ｃ）銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１８．４、９．１および９．８度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする結晶性Ｎａ塩；
ｄ）銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１８．２、８．９および２０．３度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする結晶性Ｋ塩；
ｅ）（ｉ）銅Ｋα放射線を用いて得られる、約８．６、２０．６および２６．６度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターン；または（ｉｉ）約４．２２、７．２３、１１．４５、１７．７９、２４．０４、２６．９５、２８．２９、３１．１５、３２．４７、３２．４７、３３．４６、３４．０３、３５．７４、４２．３２、５３．５０、５６．０５、５６．９６、７７．４９、１０８．９５、１１９．６５、１２２．５５、１３１．０５、１３３．１３、１３５．３８、１４２．２８、１５０．７８、１５６．０３、１５７．９９、１６１．３６、１７１．４０、１７３．４２、１７４．３０ｐｐｍにおけるピークを含む固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲのいずれかを特徴とする、水和物Ｉ；
ｆ）（ｉ）銅Ｋα放射線を用いて得られる、約１４．７、１１．５および７．１度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターン；または（ｉｉ）約３．９０、５．３０、６．９９、１０．４９、１３．１３、１７．８１、２４．７３、２７．５２、２８．１４、２９．４２、３１．０２、３２．８０、３６．０８、３９．２２、４２．４５、５３．６２、５５．９３、５９．１４、６０．７６、７４．７７、１０９．２２、１１１．１９、１１．３８、１２０．２４、１２２．５０、１３３．９６、１３９．７４、１４７．２、１４８．９０、１５４．６５、１５８．２５、１５９．５３、１６０．１２、１７０．１４、１７１．０５、１７２．０８、１７３．４７および１７４．４６ｐｐｍにおけるピークを含む固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲのいずれかを特徴とする、水和物ＩＶ；
ｇ）（ｉ）銅Ｋα放射線を用いて得られる、約９．１、１８．３および１９．８度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターン；または（ｉｉ）約７．８６、８．９２、１３．１０、１８．３１、２３．７２、２７．４４、２８．４７、３０．７７、３５．７９、３６．２５、３７．１５、３７．１５、４２．９５、５３．１３、５５．６７、５７．３１、６０．４７、６２．０６、７５．０９、１１０．５９、１１２．２４、１１８．３２、１３２．１８、１３４．０５、１３５．８３、１３９．８８、１４８．３０、１５５．１９、１５７．９７、１５９．４１、１７０．３１および１７５．２０におけるピークを含む固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲのいずれかを特徴とする、水和物Ｖ；ならびに
ｈ）（ｉ）銅Ｋα放射線を用いて得られる、約２０．５、１２．８および１９．４度の２Θ値を含むＸ線粉末回折パターン；または（ｉｉ）約４．８７、６．２４、１１．７０、１２．８５、１８．３６、２６．５５、２８．３１ｍ  ３１．５１、３４．９８、３８．４７、４２．０９、５４．２７、５６．１２、６０．１０、７３．４９、７３．９７、１０５．９１、１０８．０４、１１８．３９、１１９．７５、１２１．３３、１２９．９６、１３３．８７、１３６．１３、１４２．２６、１４２．９７、１４６．８５、１４８．３６、１５４．９７、１５７．３２、１６０．７１、１６８．２３、１７２．２１および１７５．３４ｐｐｍにおけるピークを含む固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲのいずれかを特徴とする、水和物ＶＩ。
【請求項２】
治療的有効量の請求項１に記載の化合物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項３】
ＨＣＶの処置用の医薬を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項４】
有効量の請求項１に記載の化合物を含む、患者におけるＨＣＶの処置に用いられる薬物製剤。
【請求項５】
ＨＣＶの処置における使用のための、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物を作成する方法であって、化合物Ａが水和物ＩＩＩであり、８０：２０ｖ／ｖアセトン対水から０：１００ｖ／ｖアセトン対水のアセトン／水比を用いて化合物Ａを結晶化させ、そして乾燥させることを含むプロセスにより作成される方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
化合物Ａの形態
６個の異なる化合物Ａ水和物を同定した（形態Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＶおよびＶＩ）。水和物ＩＩＩは、同定された最も安定な水和物形態であった。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６３】
実施例１６：化合物Ａ水和物ＩＩ
水和物ＩＩは、化合物Ａ遊離塩基を、溶液に加えてアセトニトリル溶媒和化合物を形成し、次いで上昇させた温度で乾燥させることにより調製した。
【国際調査報告】
2014524442.tif 000044