(57)【要約】  【解決手段】  認知機能低下、より詳細にはアルツハイマー病の治療の中枢神経系薬物候補である化合物を提供する。本発明の化合物または薬学的に許容される塩を用いる認知機能低下および／またはアルツハイマー病の治療、阻害、および／または軽減方法も提供される。本発明の化合物／組成物を調製する方法も提供される。  【選択図】      図１
2014511373.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ−０を有する化合物またはそれらの薬学的に許容される塩であって：
【化１】
2014511373.tif 000060
式中：
【化２】
2014511373.tif 000061
は、単結合および二重結合から選択され；
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；
Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；
Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される、
化合物またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物において、Ｒ１が、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物であって、
２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２−エン−４−オール；
２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２−エン−４−オール；
２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；
Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２ーエン−４−アミン；
４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；
４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オール、およびそれらの薬学的に許容される塩
から選択される化合物。
【請求項４】
式Ｉ−１を有する化合物またはそれらの薬学的に許容できる塩であって：
【化３】
2014511373.tif 000062
式中：
【化４】
2014511373.tif 000063
は、単結合および二重結合から選択され；
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；
Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；
Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される、
化合物またはそれらの薬学的に許容できる塩。
【請求項５】
請求項４に記載の化合物において、Ｒ１が、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される化合物。
【請求項６】
請求項４に記載の化合物であって：
（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２−エン−４−オール；
（６Ｓ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２ーエン−４−オール；
（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；
（６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２−エン−４−アミン；
（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；
（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オール、およびそれらの薬学的に許容される塩
から選択される化合物。
【請求項７】
式Ｉ−２を有する化合物またはそれらの薬学的に許容できる塩であって：
【化５】
2014511373.tif 000064
式中：
【化６】
2014511373.tif 000065
は、単結合および二重結合から選択され；
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；
Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；
Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される、
化合物またはそれらの薬学的に許容できる塩。
【請求項８】
請求項７に記載の化合物において、Ｒ１が、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される化合物。
【請求項９】
請求項７に記載の化合物であって、
（４Ｓ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２−エン−４−アミン；
（４Ｒ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２−エン−４−アミン、およびそれらの薬学的に許容される塩
から選択される化合物。
【請求項１０】
治療に有効な量の式Ｉ−０の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を有する医薬組成物であって；
【化７】
2014511373.tif 000066
式中：
【化８】
2014511373.tif 000067
は、単結合および二重結合から選択され；
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；
Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；
Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される、
医薬組成物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の医薬組成物において、Ｒ１が、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１０に記載の医薬組成物において、前記化合物が：
２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２−エン−４−オール；
２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２−エン−４−オール；
２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；
Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２ーエン−４−アミン；
４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；
４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オール、およびそれらの薬学的に許容される塩
から選択される医薬組成物。
【請求項１３】
治療に有効な量の式Ｉ−１の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を有する医薬組成物であって：
【化９】
2014511373.tif 000068
式中：
【化１０】
2014511373.tif 000069
は、単結合および二重結合から選択され；
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；
Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；
Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される、医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の医薬組成物において、Ｒ１が、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１３に記載の医薬組成物において、前記化合物が：
（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−オール；
（６Ｓ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２ーエン−４−オール；
（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；
（６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２ーエン−４−アミン；
（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；
（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オール、およびそれらの薬学的に許容される塩
から選択される医薬組成物。
【請求項１６】
治療に有効な量の式Ｉ−２の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を有する医薬組成物であって：
【化１１】
2014511373.tif 000070
式中：
【化１２】
2014511373.tif 000071
は、単結合および二重結合から選択され；
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；
Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；
Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される、医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１６の医薬組成物において、Ｒ１が、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される医薬組成物。
【請求項１８】
請求項１６の医薬組成物において、前記化合物が：
（４Ｓ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２−エン−４−アミン；
（４Ｒ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２−エン−４−アミン、およびそれらの薬学的に許容される塩
から選択される医薬組成物。
【請求項１９】
治療に有効な量の４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オールおよび治療に有効な量の４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オール、またはそれらの薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体との混合物を有する医薬組成物。
【請求項２０】
治療に有効な量の（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オールおよび治療に有効な量の（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オール、またはそれらの薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体との混合物を有する医薬組成物。
【請求項２１】
化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を形成する方法であって、この方法が：
（ａ）ウコン油を、４−イソブチルアミンと反応性アミノ化条件下で反応させる工程であって、粗生成物を製造し、このウコン油と４−イソブチルアミンとの重量比が約３．４：１である、前記反応させる工程と；
（ｂ）少なくとも８０重量％、８５重量％、９０重量％、または９５重量％の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を有する組成物を単離する工程と；
を有し、この化合物が、約２７４において［Ｍ＋Ｈ＋］の分析質量スペクトルピークを有する方法。
【請求項２２】
請求項２１に記載の方法において、前記化合物の１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）スペクトルが、おおよそ以下の化学シフト：δ９．０８，７．０９，７．０５，５．２６，３．７４，２．８４，２．５６，２．２８，２．１１−２．０７，１．７３，１．５７，１．１７，０．９１，０．８９にピークを有する方法。
【請求項２３】
請求項２１に記載の方法において、前記化合物の１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）スペクトルが、おおよそ以下の化学シフトδ９．１９−９．１７，７．１１，５．３０，３．４０，２．７８，２．６４−２．４８，２．３３，１．３０，１．１９，１．０４，０．９７にピークを有する方法。
【請求項２４】
患者の認知機能低下および／またはアルツハイマー病を治療する方法であって、治療に有効な量の式Ｉ−０の化合物またはそれらの薬学的に許容できる塩および薬学的に許容される担体を前記患者に投与する工程を有し、
【化１３】
2014511373.tif 000072
式中：
【化１４】
2014511373.tif 000073
は、単結合および二重結合から選択され；
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；
Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；
Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される、方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法において、Ｒ１が、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される方法。
【請求項２６】
請求項２４に記載の方法において、前記化合物が：
２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−オール；
２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２ーエン−４−オール；
２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；
Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２ーエン−４−アミン；
４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；および
４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オール、およびそれらの薬学的に許容される塩
から選択される方法。
【請求項２７】
請求項２４に記載の方法において、記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失からなる群から選択される１若しくはそれ以上の認知機能の低下の症状が治療される方法。
【請求項２８】
請求項２４に記載の方法において、治療が：
（ｉ）長期増強作用の回復；
（ｉｉ）神経変性の阻害、治療、および／または軽減；
（ｉｉｉ）一般アミロイド症の阻害、治療、および／または軽減；
（ｉｖ）アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイド−オリゴマー結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上の阻害、治療、および／または軽減；および
（ｖ）ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性／効果の阻害、治療、または軽減
の１若しくはそれ以上を有する方法。
【請求項２９】
請求項２４に記載の方法において、治療が、アミロイド産生の阻害、アミロイド構築の阻害、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害の１若しくはそれ以上を有する方法。
【請求項３０】
請求項２４に記載の方法において、治療が、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害を有する方法。
【請求項３１】
請求項２４に記載の方法において、前記化合物が、薬学的に許容される賦形剤を有する医薬組成物中に存在する方法。
【請求項３２】
患者の認知機能低下および／またはアルツハイマー病を治療する方法であって、治療に有効な量の式Ｉ−１の化合物、またはそれらの薬学的に許容できる塩、および薬学的に許容される担体を患者に投与する工程を有し、
【化１５】
2014511373.tif 000074
式中：
【化１６】
2014511373.tif 000075
は、単結合および二重結合から選択され；
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；
Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；
Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される、方法。
【請求項３３】
請求項３２に記載の方法において、Ｒ１が、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される方法。
【請求項３４】
請求項３２に記載の方法において、前記化合物が：
（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−オール；
（６Ｓ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２−エン−４−オール；
（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；
（６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２−エン−４−アミン；
（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；および
（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オール、およびそれらの薬学的に許容される塩
から選択される方法。
【請求項３５】
請求項３２に記載の方法において、記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失からなる群から選択される１若しくはそれ以上の認知機能の低下の症状が治療される方法。
【請求項３６】
請求項３２に記載の方法において、治療が：
（ｉ）長期増強作用の回復；
（ｉｉ）神経変性の阻害、治療、および／または軽減；
（ｉｉｉ）一般アミロイド症の阻害、治療、および／または軽減；
（ｉｖ）アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイド−オリゴマー結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上の阻害、治療、および／または軽減；および
（ｖ）ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性／効果の阻害、治療、または軽減
の１若しくはそれ以上を有する方法。
【請求項３７】
請求項３２に記載の方法において、治療が、アミロイド産生の阻害、アミロイド構築の阻害、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害の１若しくはそれ以上を有する方法。
【請求項３８】
請求項３２に記載の方法において、治療が、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害を有する方法。
【請求項３９】
請求項３２に記載の方法において、前記化合物が、薬学的に許容される賦形剤を有する医薬組成物中に存在する方法。
【請求項４０】
患者の認知機能低下および／またはアルツハイマー病を治療する方法であって、治療に有効な量の式Ｉ−２の化合物、またはそれらの薬学的に許容できる塩、および薬学的に許容される担体を患者に投与する工程を有し、
【化１７】
2014511373.tif 000076
式中：
【化１８】
2014511373.tif 000077
は、単結合および二重結合から選択され；
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；
Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；
Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される、方法。
【請求項４１】
請求項４０に記載の方法において、Ｒ１が、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される方法。
【請求項４２】
請求項４０に記載の方法において、前記化合物が：
（４Ｓ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２−エン−４−アミン；
（４Ｓ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２−エン−４−アミン、およびそれらの薬学的に許容される塩
から選択される方法。
【請求項４３】
請求項４０に記載の方法において、記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失からなる群から選択される１若しくはそれ以上の認知機能の低下の症状が治療される方法。
【請求項４４】
請求項４０に記載の方法において、治療が：
（ｉ）長期増強作用の回復；
（ｉｉ）神経変性の阻害、治療、および／または軽減；
（ｉｉｉ）一般アミロイド症の阻害、治療、および／または軽減；
（ｉｖ）アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイド−オリゴマー結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上の阻害、治療、および／または軽減；および
（ｖ）ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性／効果の阻害、治療、または軽減
の１若しくはそれ以上を有する方法。
【請求項４５】
請求項４０に記載の方法において、治療が、アミロイド産生の阻害、アミロイド構築の阻害、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害の１若しくはそれ以上を有する方法。
【請求項４６】
請求項４０に記載の方法において、治療が、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害を有する方法。
【請求項４７】
請求項４０に記載の方法において、前記化合物が、薬学的に許容される賦形剤を有する医薬組成物中に存在する方法。
【請求項４８】
治療に有効な量の４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オールおよび治療に有効な量の４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オール、またはそれらの薬学的に許容される塩の混合物を有する医薬組成物を患者に投与する工程を有する、患者の認知機能低下および／またはアルツハイマー病を治療する方法。
【請求項４９】
請求項４８に記載の方法において、記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失からなる群から選択される１若しくはそれ以上の認知機能の低下の症状が治療される方法。
【請求項５０】
請求項４８に記載の方法において、治療が：
（ｉ）長期増強作用の回復；
（ｉｉ）神経変性の阻害、治療、および／または軽減；
（ｉｉｉ）一般アミロイド症の阻害、治療、および／または軽減；
（ｉｖ）アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイド−オリゴマー結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上の阻害、治療、および／または軽減；および
（ｖ）ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性／効果の阻害、治療、または軽減
の１若しくはそれ以上を有する方法。
【請求項５１】
請求項４８に記載の方法において、治療が、アミロイド産生の阻害、アミロイド構築の阻害、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害の１若しくはそれ以上を有する方法。
【請求項５２】
請求項４８に記載の方法において、治療が、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害を有する方法。
【請求項５３】
請求項４８に記載の方法において、前記化合物が、薬学的に許容される賦形剤を有する医薬組成物中に存在する方法。
【請求項５４】
治療に有効な量の（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オールおよび治療に有効な量の（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オール、またはそれらの薬学的に許容される塩の混合物を有する医薬組成物を患者に投与する工程を有する、患者の認知機能低下および／またはアルツハイマー病を治療する方法。
【請求項５５】
請求項５４に記載の方法において、記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失からなる群から選択される１若しくはそれ以上の認知機能の低下の症状が治療される方法。
【請求項５６】
請求項５４に記載の方法において、治療が：
（ｉ）長期増強作用の回復；
（ｉｉ）神経変性の阻害、治療、および／または軽減；
（ｉｉｉ）一般アミロイド症の阻害、治療、および／または軽減；
（ｉｖ）アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイド−オリゴマー結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上の阻害、治療、および／または軽減；および
（ｖ）ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性／効果の阻害、治療、または軽減
の１若しくはそれ以上を有する方法。
【請求項５７】
請求項５４に記載の方法において、治療が、アミロイド産生の阻害、アミロイド構築の阻害、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害の１若しくはそれ以上を有する方法。
【請求項５８】
請求項５４に記載の方法において、治療が、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害を有する方法。
【請求項５９】
請求項５４に記載の方法において、前記化合物が、薬学的に許容される賦形剤を有する医薬組成物中に存在する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１１年２月２日に出願された米国仮出願第６１／４３８，９１６号の利益および優先権を主張する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００２】
本発明は、特に、認知機能低下を阻害、治療または軽減するのに有用な化合物およびその調製方法を提供する。「化学処理法」（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ）と呼ばれる方法において、本発明の特定の化合物は、ウコン（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ）に存在するような天然化合物から誘導される。本明細書に記載の化学処理法プロセスは、多様な生物抽出物に適用可能であり、可能性のある新しい薬物候補のスクリーニング用の一連の化合物を創製するために使用できる。さらに、一般的に、化学処理法プロセスによって誘導される化合物は、化学的に安定であり、構造的に多様であって、薬学的活性の薬物スクリーニングに使用するのに良い候補である。いくつかの実施形態では、ウコン油由来の化合物が提供される。本発明のいくつかの実施形態によれば、本明細書に記載の化学処理法プロセスによってウコン油由来の化合物が提供される。別の実施形態において、本発明は、ウコン油から一連の新規な化合物を調製する方法を提供する。いくつかの他の実施形態では、認知機能低下を阻害、治療、および／または軽減するのに有用な新規な化合物が化学合成によって調製される。
【０００３】
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉ−０の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を提供する：
【化１】
2014511373.tif 000003
【０００４】
式中：
【化２】
2014511373.tif 000004
【０００５】
は、単結合および二重結合から選択され；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【０００６】
いくつかの実施形態において、化合物は：２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−オール；２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２ーエン−４−オール；２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２ーエン−４−アミン；４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オール、および薬学的に許容される塩から選択される。
【０００７】
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉ−１の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を提供する：
【化３】
2014511373.tif 000005
【０００８】
式中：
【化４】
2014511373.tif 000006
【０００９】
は、単結合および二重結合から選択され；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【００１０】
いくつかの実施形態において、化合物は：（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−オール；（６Ｓ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２ーエン−４−オール；（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；（６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２ーエン−４−アミン；（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オール、およびそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【００１１】
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉ−２の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を提供する：
【化５】
2014511373.tif 000007
【００１２】
式中：
【化６】
2014511373.tif 000008
【００１３】
は、単結合および二重結合から選択され；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【００１４】
いくつかの実施形態において、化合物は：（４Ｓ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−アミン；（４Ｒ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−アミン、およびそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【００１５】
いくつかの実施形態は、治療に有効な量の式Ｉ−０の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を有する医薬組成物である：
【化７】
2014511373.tif 000009
【００１６】
式中：
【化８】
2014511373.tif 000010
【００１７】
は、単結合および二重結合から選択され；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【００１８】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は：２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−オール；２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２ーエン−４−オール；２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２ーエン−４−アミン；４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オール、およびそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【００１９】
いくつかの実施形態は、治療に有効な量の式Ｉ−１の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を有する医薬組成物である：
【化９】
2014511373.tif 000011
【００２０】
式中：
【化１０】
2014511373.tif 000012
【００２１】
は、単結合および二重結合から選択され；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【００２２】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は：（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−オール；（６Ｓ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２ーエン−４−オール；（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；（６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２ーエン−４−アミン；（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；および（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オールまたはそれらの薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体から選択される。
【００２３】
いくつかの実施形態は、治療に有効な量の式Ｉ−２の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を有する医薬組成物である：
【化１１】
2014511373.tif 000013
【００２４】
式中：
【化１２】
2014511373.tif 000014
【００２５】
は、単結合および二重結合から選択され；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【００２６】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は：（４Ｓ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−アミン；（４Ｒ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−アミン、およびそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【００２７】
いくつかの実施形態は、治療に有効な量の４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オールおよび治療に有効な量の４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オールまたはそれらの薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体の混合物を有する医薬組成物である。
【００２８】
いくつかの実施形態は、治療に有効な量の（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オールおよび治療に有効な量の（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オールまたはそれらの薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体の混合物を有する医薬組成物である。
【００２９】
いくつかの実施形態において、本発明は、治療に有効な量の式Ｉ−０の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を患者に投与する工程を有する、患者の認知機能低下および／またはアルツハイマー病を治療するための方法を提供する：
【化１３】
2014511373.tif 000015
【００３０】
式中：
【化１４】
2014511373.tif 000016
【００３１】
は、単結合および二重結合から選択され；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【００３２】
いくつかの実施形態において、化合物は：２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−オール；２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２ーエン−４−オール；２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；  Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２ーエン−４−アミン；４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；および４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オールまたはそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【００３３】
いくつかの実施形態において、記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失からなる群から選択される１若しくはそれ以上の認知機能の低下の症状を治療する。
【００３４】
さらに他の実施形態において、治療は：（ｉ）長期増強作用の回復；（ｉｉ）神経変性の阻害、治療、または軽減；（ｉｉｉ）一般アミロイド症の阻害、治療、または軽減；（ｉｖ）アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイド−オリゴマー結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上の阻害、治療、および／または軽減；および（ｖ）ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性／効果の阻害、治療、または軽減の１若しくはそれ以上を有する。
【００３５】
いくつかの実施形態において、治療は、アミロイド産生の阻害、アミロイド構築の阻害、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害の１若しくはそれ以上を有する。
【００３６】
いくつかの実施形態において、治療は、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害を有する。
【００３７】
いくつかの実施形態において、この化合物は、薬学的に許容される賦形剤を有する医薬組成物中にある。
【００３８】
いくつかの実施形態において、本発明は、治療に有効な量の式Ｉ−１の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を患者に投与する工程を有する、患者の認知機能低下および／またはアルツハイマー病を治療する方法を提供する：
【化１５】
2014511373.tif 000017
【００３９】
式中：
【化１６】
2014511373.tif 000018
【００４０】
は、単結合および二重結合から選択され；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【００４１】
いくつかの実施形態において、化合物は：（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−オール；（６Ｓ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２ーエン−４−オール；（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；（６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２ーエン−４−アミン；（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；および（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オールまたはそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【００４２】
いくつかの実施形態において、記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失からなる群から選択される１若しくはそれ以上の認知機能の低下の症状を治療する。
【００４３】
いくつかの実施形態において、治療は：（ｉ）長期増強作用の回復；（ｉｉ）神経変性の阻害、治療、または軽減；（ｉｉｉ）一般アミロイド症の阻害、治療、または軽減；（ｉｖ）アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイド−オリゴマー結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上の阻害、治療、および／または軽減；および（ｖ）ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性／効果の阻害、治療、または軽減の１若しくはそれ以上を有する。
【００４４】
いくつかの実施形態において、治療は、アミロイド産生の阻害、アミロイド構築の阻害、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害の１若しくはそれ以上を有する。
【００４５】
さらに他の実施形態において、治療は、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害を有する。
【００４６】
いくつかの実施形態において、この化合物は、薬学的に許容される賦形剤を有する医薬組成物中にある。
【００４７】
いくつかの実施形態において、本発明は、治療に有効な量の式Ｉ−２の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を患者に投与する工程を有する、患者の認知機能低下および／またはアルツハイマー病を治療する方法を提供する：
【化１７】
2014511373.tif 000019
【００４８】
式中：
【化１８】
2014511373.tif 000020
【００４９】
は、単結合および二重結合から選択され；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【００５０】
いくつかの実施形態において、化合物は：（４Ｓ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−アミン；（４Ｒ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−アミン、およびそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【００５１】
いくつかの実施形態において、記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失からなる群から選択される１若しくはそれ以上の認知機能の低下の症状を治療する。
【００５２】
いくつかの実施形態において、治療は：（ｉ）長期増強作用の回復；（ｉｉ）神経変性の阻害、治療、または軽減；（ｉｉｉ）一般アミロイド症の阻害、治療、または軽減；（ｉｖ）アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイド−オリゴマー結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上の阻害、治療、および／または軽減；および（ｖ）ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性／効果の阻害、治療、または軽減の１若しくはそれ以上を有する。
【００５３】
いくつかの実施形態において、治療は、アミロイド産生の阻害、アミロイド構築の阻害、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害の１若しくはそれ以上を有する。
【００５４】
さらに他の実施形態において、治療は、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害を有する。
【００５５】
いくつかの実施形態において、この化合物は、薬学的に許容される賦形剤を有する医薬組成物中にある。
【００５６】
いくつかの実施形態において、本発明は、治療に有効な量の（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オールおよび治療に有効な量の（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オールまたはそれらの薬学的に許容される塩の混合物を有する医薬組成物を患者に投与する工程を有する、患者の認知機能低下および／またはアルツハイマー病を治療する方法を提供する。
【００５７】
いくつかの実施形態において、記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失からなる群から選択される１若しくはそれ以上の認知機能の低下の症状を治療する。
【００５８】
さらに他の実施形態において、治療は：（ｉ）長期増強作用の回復；（ｉｉ）神経変性の阻害、治療、または軽減；（ｉｉｉ）一般アミロイド症の阻害、治療、または軽減；（ｉｖ）アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイド−オリゴマー結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上の阻害、治療、および／または軽減；および（ｖ）ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性／効果の阻害、治療、および／または軽減の１若しくはそれ以上を有する。
【００５９】
いくつかの実施形態において、治療は、アミロイド産生の阻害、アミロイド構築の阻害、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害の１若しくはそれ以上を有する。
【００６０】
いくつかの実施形態において、治療は、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害を有する。
【００６１】
いくつかの実施形態において、この化合物は、薬学的に許容される賦形剤を有する医薬組成物中にある。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】図１は、アミロイド前駆体タンパク質処理物の存在下および非存在下におけるＭＴＴアッセイの結果を示す。
【図２】図２は、ＣＴ０１０９による、アミロイド前駆体タンパク質処理物媒介の膜輸送効果の阻害を示す。
【図３】図３は、ＣＴ０１０９およびＣＴ００９３がアミロイド前駆体タンパク質処理物の記憶喪失効果を阻害することを示す。
【図４】図４は、ＣＴ００９３および精製された分画ＣＴ０１２９６、ＣＴ０１２９７、ＣＴ０１２９８によるアミロイド前駆体タンパク質処理物媒介膜輸送効果の阻害を示す。
【図５】図５は、ＣＴ００９３およびＣＴ０１０９によるアミロイド前駆体タンパク質処理物媒介シナプス損失の阻害を示す。
【図６】図６は、ＣＴ００９３による生体外の脳細胞へのアミロイド前駆体タンパク質処理物の結合の阻害を示す。
【図７】図７は、膜輸送を媒介するターゲットに関するアミロイド前駆体タンパク質処理物とＣＴ００９３との間の薬理学的競合を示し、化合物ＣＴ００９３およびＣＴ０１０９は、合成（Ａ，Ｂ）およびヒトのアルツハイマー患者由来（Ｃ，Ｄ）オリゴマーの両方に対する薬理学的競合を示し、アミロイドβオリゴマーの毒性を低下させることを示す。
【図８】図８は、化合物ＣＴ００９３およびＣＴ０１０９が、添加前または添加後にかかわらず、膜輸送のアミロイド前駆体タンパク質処理物の阻害を有効に阻害することを示す。
【図９】図９は、化合物ＣＴ００９３およびＣＴ０１０９が、アルツハイマー病の遺伝子導入マウスモデルにおける記憶欠損を改善することを示す。
【図１０】図１０は、化合物ＣＴ００９３およびＣＴ０１０９が、予防および治療プロトコルの両方に有効であることを示す。
【発明を実施するための形態】
【００６３】
記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失のような認知機能の低下は、程度は異なるが、人口の多くの割合が高齢化するにつれて発生する。認知機能低下のうち最も一般的な重度の不可逆的な認知機能低下が、アルツハイマー病であり、現時点では、常に致命的である。
【００６４】
認知機能低下およびアルツハイマー病の症状は、アミロイドβおよびその高度なオリゴマー形態の効果に起因すると考えられているが、これがニューロン（神経細胞）性能の劣化およびその後の症状の発症に寄与する。アミロイドは、体が正常に産生するタンパク質フラグメントの総称である。β−アミロイドは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）と呼ばれる別のタンパク質から切り取られたタンパク質のフラグメントである。健常な脳では、β−アミロイドタンパク質フラグメントは、分解され、排除される。アルツハイマー病および他の形態の認知機能低下の個体では、こうしたフラグメントが蓄積して堅い、不溶性のプラークを形成する。神経原線維タングルは、脳細胞の中に見出される不溶性のねじれた線維である。神経原線維タングルに含まれるタンパク質、すなわち、タウタンパク質は、神経細胞の一部分から他の部分へ栄養素およびその他の重要な物質を輸送するのを助ける微小管を形成する。アルツハイマー病においては、タウタンパク質が異常であって、微小管の構造が崩壊する。
【００６５】
β−セクレターゼは、ヒトの脳内にある酵素であって、アルツハイマー病の脳内の脳プラークおよびタングルの形成に関与する病原性物質である、β−アミロイドの産生に関与している。β−アミロイドおよびそのオリゴマー（β−アミロイドオリゴマーまたはアミロイドβオリゴマー）もプレアルツハイマー病の脳の初期で認知機能の低下に関与していると考えられる。β−セクレターゼを阻害することは、脳内のβ−アミロイドによる負担を軽減し、その結果、認知機能の低下を遅らせ、アミロイドオリゴマーの形成およびプラークおよびタングルの産生を阻止し、神経変性を停滞させ、軽度の認知障害およびより深刻な形態のアルツハイマー病などの認知障害を治療する可能性があることが期待される。しかし、βアミロイドのモノマーレベルの低下効果は知られていない。最近の臨床試験は、セクレターゼをターゲット化することは、実行可能な治療選択肢とならない可能性があることを示唆している。
【００６６】
世界中で数百万の人々が認知機能低下およびアルツハイマー病に冒されている。従って、認知機能の低下の阻害剤、特にアミロイド（アミロイドβオリゴマーを含む）の産生、アミロイド（アミロイドβオリゴマーを含む）の凝集および／またはアミロイド（アミロイドβオリゴマーを含む）の沈着（すなわち、プラーク産生）を阻害し、神経変性を阻害し、および／または長期増強を復元し、および／またはニューロン上のアミロイドβオリゴマーの活性／効果を阻害するような方法による、認知機能低下およびアルツハイマー病の治療および軽減に有用である化合物を発見することが強く求められている。また、化学的および生物学的に安定な、認知機能低下阻害剤の必要性もある。
【００６７】
植物は、認知機能低下およびアルツハイマー病の領域における創薬のための可能性のある、貴重な資源としては、余り注目を集めていなかった。植物抽出物を使用して薬剤として興味のある化合物の非天然性誘導体を生成することは、一般に使用されていない。従って、植物抽出物および他の生物源からの抽出物から薬剤として興味のある化合物を調製する方法も必要とされている。特に、認知機能低下およびアルツハイマー病の治療および軽減に有用である植物抽出物由来の化合物を生成し、識別する必要もある。
【００６８】
インドで豊かに生育するウコンは、インドの医学−アーユルヴェーダのシステムで非常に評判の薬草であって、Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ  Ｌ．Ｓｙｎ．Ｃｕｒｃｕｍａ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ  Ｖａｌｅｔｏｎ（Ｆａｍ．Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ）の根茎である。これは、長い間、食品のスパイスおよび着色剤として使用されてきた。その粉末または抽出物は、傷および炎症を治療するために推奨されてきた。ショウガ科のクルクマ属の根茎および葉の脂溶性抽出物は、神経脳血管（ｎｅｕｒｏｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃｕｌａｒ）障害の治療に有用であることが報告されている。ＷＯ２００３０５１３８０を参照。ウコン油は、ターメリック（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ）から二酸化炭素による超臨界流体抽出により単離できる。例えば次を参照：Ｂ．Ｇｏｐａｌａｎ，ｅｔ．ａｌ，「Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｄｉｏｘｉｄｅ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｕｒｍｅｒｉｃ（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ）」，Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．，２０００，４８（６），ｐｐ２１８９〜２１９２；次も参照、Ｌ−Ｈ  Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ  ｃａｒｂｏｎ  ｄｉｏｘｉｄｅ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｒｍｅｒｉｃ  ｏｉｌ  ｆｒｏｍ  Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ  Ｌｉｎｎ  ａｎｄ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｒｍｅｒｏｎｅｓ」，Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌｕｍｅ４７，Ｉｓｓｕｅ３，Ｊａｎｕａｒｙ  ２００６，Ｐａｇｅｓ１１９〜１２５。本発明は、一部、認知機能低下およびアルツハイマー病の治療および軽減に有用である、ウコン油由来の化合物（すなわちウコン油誘導体）の製造および識別に関する。本発明はまた、一部に、認知機能低下およびアルツハイマー病の治療および軽減に有用である化合物を化学的に合成することに関する。
【００６９】
本明細書に記載の化合物、組成物、および方法は、これらの必要性およびその他の目的を対象とする。
【００７０】
本発明の実施形態は、とりわけ、式Ｉ−０の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を提供する：
【化１９】
2014511373.tif 000021
【００７１】
式中：
【化２０】
2014511373.tif 000022
【００７２】
は、単結合および二重結合であり；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【００７３】
いくつかの実施形態において、化合物は：２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−オール；２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２ーエン−４−オール；２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２ーエン−４−アミン；４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オール、およびそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【００７４】
本発明の実施形態は、とりわけ、式Ｉ−１の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を提供する：
【化２１】
2014511373.tif 000023
【００７５】
式中：
【化２２】
2014511373.tif 000024
【００７６】
は、単結合および二重結合から選択され；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【００７７】
いくつかの実施形態において、化合物は：（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−オール；（６Ｓ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２ーエン−４−オール；（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；（６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２ーエン−４−アミン；（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オール、およびそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【００７８】
本発明の実施形態は、とりわけ、式Ｉ−２の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を提供する：
【化２３】
2014511373.tif 000025
【００７９】
式中：
【化２４】
2014511373.tif 000026
【００８０】
は、単結合および二重結合から選択され；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【００８１】
いくつかの実施形態において、化合物は：（４Ｓ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−アミン；（４Ｒ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−アミン、およびそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【００８２】
本明細書中の様々な箇所で、本発明の化合物の置換基は、グループまたは範囲で開示されている。それは具体的には、本発明の実施形態は、それぞれ、そのようなグループと範囲のメンバーのすべての個々のサブコンビネーションを含むよう意図されている。
【００８３】
変数が複数回表示される本発明の化合物については、各変数は、変数を定義するマーカッシュ群から選択された、異なる部分であることができる。例えば、ある構造が同一化合物上に同時に存在する２つのＲ基を有すると記載されている場合、この２つのＲ基はＲに定義されたマーカッシュ群から選択された異なる部分を表すことができる。
【００８４】
さらに、明確にするために、例えば、別の実施形態の文脈で説明されている、本発明の特定の機能はまた、単一の実施形態の中で組み合わせとして提供できることが理解される。逆に、簡潔にするため、単一の実施形態の文脈で説明されている、本発明の様々な機能が、また個別に、またはいずれかの適切なサブコンビネーションで提供できる。
【００８５】
ｎが通常整数である場合、用語「ｎ−員」は、環を形成する原子の数がｎである部分の環形原子の数を示している。例えば、ピリジンは、６−員環のヘテロ環の一例あり、チオフェンは５−員環のヘテロアリール基の一例である。
【００８６】
本明細書中で用いる場合、用語「アルキル」は直鎖または分枝状飽和炭化水素基を指すことを意味する。アルキル基の例は、これに限定されるものではないが、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（例えば、ｎ−プロピル、およびイソプロピル）、ブチル（例えば、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル）、ペンチル基（例えば、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル）などを含む。アルキル基は、１〜約２０、２〜約２０、１〜約１０、１〜約８、１〜約６、１〜約４、または１〜約３個の炭素原子を含むことができる。
【００８７】
本明細書で使用する場合、「アリール」は、例えば、フェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、インダニル、インデニルなどのような単環式または多環式（例えば、２、３または４個の縮合環を有する）芳香族炭化水素を指す。いくつかの実施形態では、アリール基は６〜約２０個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、アリール基は６〜約１０個の炭素原子を有する。
【００８８】
本明細書で使用する場合、「シクロアルキル」は、２０個以下の環形成炭素原子を含有する環化アルキル、アルケニル、およびアルキニル基を含む非芳香族環状炭化水素を指す。シクロアルキル基は、単環式または多環式（例えば、２、３または４個の縮合環を有する）環系ならびにスピロ環系を含むことができる。シクロアルキル基は、３〜約１５、３〜約１０、３〜約８、３〜約６、４〜約６、または３〜約５、または５〜約６個の環形成炭素原子を含むことができる。シクロアルキル基の環形成炭素原子は、選択的にオキソまたはスルフィドで置換することができる。シクロアルキル基の例は、これらに限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプタトリエニル、ノルボルニル、ノルピニル、ノルカルニル、アダマンチルなどを含む。また、シクロアルキルの定義に含まれる部分は、当該シクロアルキル環に１若しくはそれ以上の芳香環が縮合（すなわち、共通の結合を有する）した部分であり、例えばペンタン、ペンテン、ヘキサンなどのベンゾまたはチエニル誘導体（例えば、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル、または１Ｈ−インデン−２（３Ｈ）−オン−１−イル）である。好ましくは、「シクロアルキル」は２０個以下の環形成炭素原子を含む環化アルキル基を意味する。シクロアルキルの例は好ましくは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、アダマンチルなどを含む。
【００８９】
本明細書で使用する場合、「ヘテロアリール」基は、２０個以下の環形成原子および少なくとも１つの、硫黄、酸素、窒素などのヘテロ原子環員（環形成原子）を有する芳香族複素環を指す。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、硫黄、酸素、および窒素からそれぞれ独立して選ばれる少なくとも１若しくはそれ以上のヘテロ原子の環形成原子を有する。ヘテロアリール基は単環式および多環式（例えば、２、３または４の縮合環を持つ）システムを含む。ヘテロアリール基の例は、これに限定されるものではないが、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、フリル、キノリル、イソキノリル、チエニル、イミダゾリル、チアゾリル、インドリル、ピリル、オキサゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンズチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、インダゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、イソチアゾリル、ベンゾチエニル、プリニル、カルバゾリル、ベンゾイミダゾリル、インドリニルなどを含む。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は１〜約２０個の炭素原子を有し、さらなる実施形態では、約１〜約５、約１〜約４、約１〜約３、約１〜約２個の炭素原子を環形成原子として有する。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、３〜約１４、３〜約７、または５〜６個の環形成原子を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、１〜約４、１〜約３、または１〜２個のヘテロ原子を有する。
【００９０】
本明細書で使用する場合、「ヘテロシクロアルキル」は、１若しくはそれ以上の環形成炭素原子をＯ、ＮまたはＳ原子のようなヘテロ原子で置換された、環化アルキル、アルケニル、およびアルキニル基を含み、２０個以下の環形成原子を有する非芳香族複素環を指す。ヘテロシクロアルキル基は、単環式または多環式（例えば、縮合およびスピロシステムの両方）であり得る。「ヘテロシクロアルキル」基の例は、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペラジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、２，３−ジヒドロベンゾフリル、１，３−ベンゾジオキソール、ベンゾ−１，４−ジオキサン、ピペリジニル、ピロリジニル、イソオキサゾリジニル、イソチアゾリ、ピラゾリジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イミダゾリジニル、ピロリジン−２−オン−３−イルなどを含む。ヘテロシクロアルキル基の環形成炭素原子とヘテロ原子はオキソまたはスルフィドで選択的に置換することができる。例えば、環を形成するＳ原子を１または２個のオキソで置換できる［すなわち、Ｓ（Ｏ）またはＳ（Ｏ）２を形成］。別の例として、環形成Ｃ原子がオキソ（すなわち、カルボニル形成）で置換することができる。また、ヘテロシクロアルキルの定義に含まれるのは、１若しくはそれ以上の芳香環が、例えば、ピリジニル、チオフェニル、フタリミジル、ナフタリミジル、およびインドレン、イソインドレン、イソインドリン−１−オン−３−イル、４，５，６，７−テトラヒドロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−イル、５，６−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピリジン７（４Ｈ）−オン−５−イル、および３，４−ジヒドロイソキノリン−１（２Ｈ）−オン−３イル基などの複素環のベンゾ誘導体のような非芳香族複素環に縮合した（すなわち、その環と共通の結合を有する）部分である。環形成炭素原子とヘテロシクロアルキル基のヘテロ原子は、オキソまたはスルフィドで選択的に置換することができる。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は１〜約２０個の炭素原子を、さらなる実施形態では、約３〜約２０個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は３〜約１４、３〜約７、または５〜６個の環形成原子を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、１〜約４、１〜約３個、または１〜２個のヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は０〜３個の二重結合を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は０〜２個の三重結合を含む。
【００９１】
本明細書で使用する場合、「アルコキシ」は、−Ｏ−アルキル基を意味する。アルコキシ基の例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（例えば、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ）、ｔ−ブトキシなどを含む。
【００９２】
本明細書で使用する場合「アリールアルキル」はアリールで置換したＣ１〜６アルキルを指す。アリールアルキル基の例は、これに限定されるものではないが、Ｃ６〜１０アリール基（例えば、ベンジル）で置換したＣ１〜６アルキルを含む。
【００９３】
本明細書で使用する場合、「シクロアルキルアルキル」は、シクロアルキルで置換したＣ１〜６アルキルを指す。シクロアルキルアルキル基の例は、これに限定されるものではないが、Ｃ３〜１０シクロアルキルまたはＣ３〜７シクロアルキル（例えば、シクロプロピルメチル）で置換したＣ１〜６アルキルを含む。
【００９４】
本明細書で使用する場合、「アミノ」はＮＨ２を指す。
【００９５】
本明細書で使用する場合、用語「選択的に置換した」は、その置換は選択的であり、従って、非置換および置換の原子および部分の両方を含むことを意味する。「置換した」原子または部分は、指定された原子または部分上のいずれかの水素が指定された原子または部分の通常の原子価を超えず、当該置換が安定な化合物を生じる限り、指定された置換基から選択で置き換えることができることを示す。例えば、メチル基（すなわち、ＣＨ３）が選択的に置換されている場合、炭素原子上３つの水素原子を置換基で置換することができる。
【００９６】
本明細書の実施形態に記載の化合物は、非対称（例えば、１若しくはそれ以上の立体中心を有する）であることができる。特記しない限りエナンチオマーおよびジアステレオマーようなすべての立体異性体が意図されている。非対称置換炭素原子を含む本発明の化合物は、光学活性またはラセミ体で単離することができる。ラセミ混合物の分割または立体選択的合成などによって、光学活性出発材料から光学活性体を調製する方法は、当該技術分野で公知である。オレフィン、Ｃ＝Ｎ二重結合などの多くの幾何異性体は本明細書に記載の化合物中に存在することができ、すべてのそのような安定異性体は、本発明で考慮されている。本発明の化合物のシスおよびトランス幾何異性体は、記載されており、異性体の混合物または分離した異性形態として単離することができる。立体異性または幾何異性が可能な化合物が特定のＲ／Ｓまたはシス／トランス配置を参照せずに、その構造または名前で指定されている場合、そのようなすべての異性体が企図されるよう意図されている。
【００９７】
化合物のラセミ混合物（またはジアステレオ異性体の混合物）の分割は、当技術分野で公知の多数の方法のいずれかによって実施することができる。方法の例は、光学活性な塩を形成する有機酸である、キラル分割用酸を用いた分別再結晶を含む。分別再結晶法に適した分割剤は、例えば、ＤおよびＬ型の、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸、またはα−カンファースルホン酸のような様々な光学活性カンファースルホン酸のなどの光学活性な酸である。分別結晶方法に適した他の分割剤は、立体異性的に純粋な形態のα−メチル−ベンジル−アミン（例えば、ＳおよびＲ型、またはジアステレオマー的に純粋な型）、２−フェニルグリシノール、ノルエフェドリン、エフェドリン、Ｎ−メチルエフェドリン、シクロヘキシルエチルアミン、１，２−ジアミノシクロヘキサンなどを含む。
【００９８】
ラセミ混合物（またはジアステレオ異性体の混合物）の分割はまた、光学活性分割剤（例えば、ジニトロベンゾイルフェニルグリシン）を充填したカラムで溶出することにより行うことができる。適当な溶出溶媒組成は、当業者によって決定することができる。
【００９９】
本発明の実施形態の化合物はまた互変異性体形態を含む。互変異性形態は、隣接する二重結合と単結合の交換がプロトンの同時移行と共に起こる結果である。互変異性体は、同じ実験式および総電荷を有する、異性体のプロトン化状態である、プロトンによる互変異性体を含む。プロトンによる互変異性体の例は、ケトン−エノール対、アミド−イミド酸対、ラクタム−ラクチム対、アミド−イミド酸対、エナミン−イミン対、およびプロトンが、例えば、１Ｈ−と３Ｈ−イミダゾール、１Ｈ−、２Ｈ−および４Ｈ−１，２，４−トリアゾール、１Ｈ−と２Ｈ−イソインドール、および１Ｈと２Ｈ−ピラゾールのように、複素環系の２つ以上の位置を占有することができる環状体を含む。互変異性体は、平衡状態にあるか、または立体的に適切な置換によって１つの形に固定できる。
【０１００】
本発明の実施形態の化合物は、さらに水和物および溶媒和物、ならびに無水非溶媒和形態を含む。
【０１０１】
本明細書で使用する場合、用語「化合物」は、表示した構造のすべての立体異性体、幾何異性体、互変異性体、および同位体を含むことを意味する。
【０１０２】
すべての化合物およびその薬学的に許容される塩は調製することができ、または、水および溶媒（例えば水和物および溶媒和物）のような他の物質と一緒に存在、または分離できる。
【０１０３】
本発明の実施形態の化合物はまた、中間体または最終化合物に存在する原子のすべての同位体を含むことができる。同位体は同じ原子番号で異なる質量数を有する原子を含む。例えば、水素の同位体は、トリチウムおよび重水素を含む。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物またはその塩は実質的に単離される。「実質的に単離された」は、当該化合物が少なくとも部分的にまたは実質的にそれが形成または検出された環境から分離されることを意味する。部分的な分離は、例えば、本発明の化合物が濃縮された組成物を含むことができる。実質的な分離は、本発明の化合物またはその塩を、重量で少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、または少なくとも約９９％含む組成物を包含することができる。化合物およびその塩を単離する方法は当該技術分野では日常のことである。
【０１０５】
本発明の実施形態の化合物は、安定した構造を持つ化合物を含むことを意図している。本明細書中で使用する場合、「安定な化合物」および「安定な構造」は反応混合物から有用な程度の純度に、および製剤を有効な治療薬に、単離するのに耐える程十分に堅牢である化合物を示すことを意味する。
【０１０６】
語句「薬学的に許容される」は、本明細書において、正しい医学的判断の範囲内であり、ヒトおよび動物の組織と接触での使用に適し、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題または合併症がなく、合理的な利益／危険比に見合った、これらの化合物、材料、組成物、および／または剤形を指すために採用している。
【０１０７】
表現「周辺温度」および「室温」は、本明細書中で使用する場合、当該技術で理解されており、一般に温度、例えば反応温度を指し、反応が行われている部屋のおおよその温度、例えば約２０℃〜約３０℃を指す。
【０１０８】
本発明の実施形態は、本明細書に記載の化合物の薬学的に許容される塩も含む。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される塩」は開示された化合物の誘導体を指し、親化合物は、既存の酸または塩基部分をその塩の形態に変換することによって変更される。薬学的に許容される塩の例としては、これに限定されるものではないが、アミンなどの塩基性残基のミネラルまたは有機酸塩；およびカルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機塩などを含む。本発明の薬学的に許容される塩は、例えば非毒性の無機酸または有機酸から形成された親化合物の従来の非毒性塩を含む。本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法により、塩基性または酸性部分を含む親化合物から合成できる。一般に、このような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基型を、水または有機溶媒中で、または２つの混合物中で；適切な塩基または酸の化学量論量を反応させることにより調製することができる；エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリル（ＡＣＮ）のような、非水性媒体が好ましい。好適な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ．，１９８５，ｐ．１４１８およびＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｑｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２（１９７７）に記載されており、この参照によりこれら各々の文献全体が本明細書に組み込まれる。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、このようなウコン油などの生物抽出物から一連の化合物を調製する方法が提供される。
【０１１０】
「化学処理法」と呼ぶ、本発明の方法は、一般にすべての生物抽出物、特に通常または薬効がある、天然植物抽出物に適用できる。例えばそれぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＵＳ２００８０１９３５７４およびＷＯ２００８０４２７５５を参照。化学処理法は、容易に入手できる天然材料から新規の非天然性ドラッグ様化合物を生成する方法である。一般に、天然抽出物の「化学処理法」は化学処理法による抽出物のプレ分画と相まって、生化学的アッセイにおける偽の陽性の結果を生成する反応性天然化合物を破壊することによって抽出物の生化学的スクリーニングが好結果を収めるのを助ける。化学処理法は、新規のリード様でドラッグ様化合物を生成し、本明細書に記載の還元的アミノ化プロトコルおよび還元プロトコルで構造的に多様な含窒素、特にリード様でドラッグ様製品およびアルコール製品を生産することができる。
【０１１１】
本発明の特定の実施形態では、生物抽出物からの化合物の調製方法は、以下のスキーム１に例示されている。当該方法によれば、生物抽出物、例えば、植物抽出物が提供され、生物抽出物は、１若しくはそれ以上の生物化合物を有し、生物化合物は、各々１若しくはそれ以上の反応性求電子基を有する。生物抽出物中の生物化合物をアミンと反応させて、そのアミンを生物化合物に組み入れる。組み入れたアミンを有する生物化合物は、還元剤と反応させ、いずれかの可能性としての中間体イミンとエナミン化合物を還元して１若しくはそれ以上の窒素含有化合物を生成する。従って、得られた窒素含有化合物は、生物抽出物中の生物化合物の誘導体である。
【０１１２】
【化２５】
2014511373.tif 000027
【０１１３】
同様に、本発明の特定の他の実施形態では、生物抽出物からの化合物の調製方法は、以下のスキーム１ａに例示されている。第二級アミンは（Ｒ１＊およびＲ２＊は、それぞれアルキルなどでもよく；またはＲ１＊およびＲ２＊はこれらが結合しているＮ原子と、ピロリジンのような環状アミンを形成する）、化学処理法による抽出物で使用する。
【０１１４】
【化２６】
2014511373.tif 000028
【０１１５】
いくつかの実施形態では、化学処理法による抽出物中の化合物は、種々のアミンと、ケトンおよびアルデヒドを有する化合物との反応生成物である。この反応に次いで中間体イミンおよびエナミンを水素化物還元などで還元し、二級および三級アミンを生ずる。アミンと、ケトンおよびアルデヒドとの反応に次いで生成したイミンおよびエナミンを還元してアミンを生成するのは、当該技術分野で既知である。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、化学処理法による抽出化合物は、水素化物還元試薬（例えば、水素化ホウ素ナトリウム、水素化アルミニウムリチウム、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム）のような還元試薬と、ケトンとアルデヒドを有する化合物との反応生成物である。いくつかの実施形態では、ケトンとアルデヒドがアルコールに還元される。いくつかの実施形態では、化学処理法による抽出物中の化合物は、水素化物還元剤（例えば、水素化ホウ素ナトリウム、水素化アルミニウムリチウム、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム）のような還元剤の存在下で還元することができる、他の反応性官能基を有する化合物である。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の化学処理法による方法は、生物抽出物（例えば、ウコン油など）を採用し、多くの異なる試薬を用いて効率的に一連の窒素含有化合物を生成する。還元的アミノ化工程の原材料として使用するのに多くの低分子量アミンが商業的に容易に入手できるので、同一天然抽出物から多くの異なる、構造的に多様な中枢神経系ドラッグ様混合物の開発ができる。本方法での使用に適したアミンは、第一級アミン、第二級アミン、環状アミン、ピロリジン、アミノ酸からなる群から選択される。本発明の方法での使用に適した還元剤は、これに限定されるものではないが、水素化ホウ素ナトリウム、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム、および水素化リチウムアルミニウムを含む水素化物還元剤の群から選択される。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化学処理法による方法は、生物抽出物（例えば、ウコン油など）を採用し、１若しくはそれ以上の還元試薬を使用して効率的に一連のアルコール含有化合物（アルコール誘導体）を生成する。本発明の方法での使用に適した還元剤は、これに限定されるものではないが、水素化ホウ素ナトリウム、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム、および水素化リチウムアルミニウムを含む水素化物還元剤の群から選択される。
【０１１９】
方法はさらに、反応停止剤を用いて反応を停止することを有していてもよく、その際、当該反応停止剤は、これに限定されるものではないが、重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸ナトリウム１０水和物からなる群から選択される。方法はまた、１若しくはそれ以上の窒素含有化合物を、精製または未精製の形態で、単離することを有していてもよい。得られた窒素含有化学物質は、その後生物学的活性についてスクリーニングまたは試験されてもよい。
【０１２０】
本明細書に記載の還元または還元的アミノ化による化学処理法のプロセスは、ウコン油のようにケトン類を含む天然抽出物中にある反応性の求電子体を破壊し、アミンまたはアルコールのような化学的に安定な化合物に変換する。得られた化学処理法による抽出物は、天然化合物、および潜在的な薬剤候補である、新規の非天然窒素含有アミン製品またはアルコール製品の両方を含む。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載の還元的アミノ化による化学処理法のプロセスで、ウコン油のようにケトン類を含む天然抽出物中の反応性求電子剤は、破棄され、ケトン化合物は、アミンなどの他の化合物に変換される。いくつかの他の実施形態において、本明細書に記載の還元による化学処理法のプロセスで、ウコン油のようにケトン類を含む天然抽出物中の反応性求電子剤は、破棄され、ケトン化合物は、アルコールのような他の化合物に変換される。
【０１２１】
ウコン油の抽出物の場合には、当該窒素含有アミン誘導体およびアルコール誘導体は、中枢神経系の障害を治療するために使用されてもよい。
【０１２２】
本開示の目的では、以下の用語は以下の意味を有する。
【０１２３】
用語「生物化合物」は、本明細書で使用する場合、天然に存在する化合物を指す。
【０１２４】
用語「生物抽出物」は、本明細書で使用する場合、天然に存在する化合物を含有する、植物抽出物のような生物試料由来の抽出物、または有機物由来の他の抽出物を指す。
【０１２５】
用語「反応性求電子基」は、本明細書で使用する場合、求核剤と反応する能力を有する原子または原子のグループを指す。
【０１２６】
用語「窒素含有誘導体」は、本明細書で使用する場合、窒素原子を含有し、当該窒素原子が親化合物中の酸素のような他の原子を置換する、これらの誘導体を表す。
【０１２７】
用語「アルコール誘導体」は、本明細書で使用する場合、水酸基を含み、当該水酸基は、親化合物（ケトンまたはアルデヒド親化合物）のカルボニル基から還元されている、これらの誘導体を表す。
【０１２８】
１つの実施形態で、化学処理法プロセスの具体例を、以下のスキーム２に示す。スキーム２は、ケトン２−１ａおよび２−１ｂを有するウコン油をそれぞれアミン２−４ａと２−４ｂに変換する、方法の１つの実施形態に係るウコン油に実施した２段階の還元的アミノ化の化学処理法プロトコルを示す。スキーム２に示す方法に従って、ウコン油（ケトン２−１ａおよび２−１ｂとウコン中に存在する他の分子とを含む）はアミン２−２と反応させ［Ｒ３ｂはＣ１−６アルキル（例えば、イソブチル）などであることができる］、それぞれ化合物２−３ａおよび２−３ｂを生成する。次いで、得られた化合物２−３ａおよび２−３ｂは、水素化ホウ素のような還元剤で還元され、それぞれ窒素含有化合物２−４ａと２−４ｂを生成する（反応粗生成物は、他の化合物も含む）。
【０１２９】
【化２７】
2014511373.tif 000029
【０１３０】
本方法の次のステップでは、抽出物（２段階の還元的アミノ化プロセスの粗反応生成物）からアミン２−４ａと２−４ｂとが単離／精製される。化学処理法による抽出物は、フラッシュクロマトグラフィーによって分画できる。アミン２−４ａまたは２−４ｂを含む分画は、当業者に公知の方法に従ってさらに精製／分離できる。２−４ａまたは２−４ｂアミンを含む分画をさらに次いで単離および特性評価できる。いくつかの実施形態では、アミン２−４ａは、ジアステレオマーのそれぞれを分離するためにさらに分離（例えば、カラムクロマトグラフィーを使用するなど）できる。いくつかの実施形態では、アミン２−４ｂは、ジアステレオマーのそれぞれを単離するためにさらに分離（例えば、カラムクロマトグラフィーを使用するなど）されてもよい。単離したアミン２−４ａと２−４ｂは、本明細書に記載されている方法などによって、それらの生物活性がテストされる。
【０１３１】
スキーム２に示す本発明の化学処理法プロセスで使用するアミン２−２のいくつかの例は、メチルアミン、エチルアミン、ｎ−プロピルアミン、イソプロピルアミン、ｎ−ブチルアミン、２−ブチルアミン、イソブチルアミン、ｔｅｒｔ−ブチルアミンのようなアキルアミン；フェニルアミン、およびベンジルアミンを包含する。
【０１３２】
別の実施形態において、化学処理法のプロセスの具体例を以下のスキーム３に示す。スキーム３は、方法の１つの実施形態に係るウコン油に実施した還元的化学処理法プロトコル（または還元の化学処理法プロトコル）を示し、ここで、ケトン３−１ａおよび３−１ｂを有するウコン油は、アルコール３−２ａおよび３−２ｂにそれぞれ還元／変換される。いくつかの実施形態において、アルコール３−２ａは、ジアステレオ異性体のそれぞれを単離するために、さらに分離（例えば、カラムクロマトグラフィーを使用するなど）されてもよい。いくつかの実施形態において、アルコール３−２ｂは、ジアステレオ異性体のそれぞれを単離するためにさらに分離に供されることができる（例えばカラムクロマトグラフィーを用いることによって）。アルコール誘導体３−２ａおよび３−２ｂは、本明細書に記載されている方法などによって、それらの生物活性がテストされる。
【０１３３】
【化２８】
2014511373.tif 000030
【０１３４】
いくつかの実施形態では、アミン誘導体２−４ａおよび２−４ｂおよびアルコール誘導体３−２ａおよび３−２ｂのようなウコン油の誘導体は、βセクレターゼ阻害活性を有し、および／またはアミロイド産生、アミロイド構築、ニューロン（例えば脳内のニューロン）上のアミロイドβオリゴマーの活性／効果、アミロイド凝集、アミロイド（アミロイドオリゴマーを含む）結合、またはアミロイド沈着を阻害する。これらの化合物は、認知機能低下、アミロイド産生、神経変性、アルツハイマー病の治療および予防のために有用な治療薬である。
【０１３５】
この化学処理法によって生成される新規のリード化合物は、本明細書に記載された合成方法によっても調製されることができる。
【０１３６】
本発明の実施形態の化合物にはそれらの塩を含み、既知の有機合成技術を使用して調製されることができ、多数の可能な合成経路のいずれかによって合成されることができる。
【０１３７】
本発明の化合物を調製するための反応は、有機合成の当業者によって直ちに選択されることのできる適当な溶媒中で実行されることができる。適当な溶媒は、反応が行われる温度、例えば溶媒の凝固点温度から溶媒の沸点温度に及び得る温度において、出発物質（反応体）、中間体、または生成物と実質的に非反応性であることができる。所与の反応は、１つの溶媒中で、または１若しくはそれ以上の溶媒の混合物中で行われることができる。特定の反応工程によって、特定の反応工程のための適当な溶媒は、当業者によって選択されることができる。
【０１３８】
本発明の化合物の調製は、様々な化学反応基の保護および脱保護を含む。保護および脱保護の必要性および適当な保護基の選択は、当業者によって容易に決定されることができる。保護基の化学的性質は、例えば、その全体において参照により本明細書に組み込まれる、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ  &  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９９）において見受けられる。
【０１３９】
反応は、当該技術分野において既知のいずれかの適当な方法に従ってモニターされることができる。例えば、生成物の生成は、核磁気共鳴分光法（例えば、１Ｈまたは１３Ｃ）、赤外分光法、分光光度法（例えば、ＵＶ−可視）のような分光手段、質量分析法、または、高速液体クロマトグラフィー法（ＨＰＬＣ）または薄層クロマトグラフィー法（ＴＬＣ）のようなクロマトグラフィー法によってモニターされることができる。
【０１４０】
本発明の実施形態の化合物は、例えば、以下に記載された反応経路、合成手順および技術に従って調製されることができる。
【０１４１】
スキーム４に示したように、ここではＲ１がＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ４がＨであり、ケトン４−１は、ウィッティッヒ試薬、例えば４−２と反応させることができ、続いて加水分解して（例えば酸性条件下）、ケトン４−３を得る。ケトン４−３のエノラートと、試薬、例えばＬＤＡと、アセトンとが縮合し、続いてアルケンの共役還元によりケトン４−４を形成する。好適な水素化物、例えば水素化ホウ素ナトリウムの存在下、好適なアミンＲ３ｂＮＨ２（式中、Ｒ３ｂは、Ｃ１〜６アルキル（例えばイソブチル）などであることができる）とのケトン４−５の還元アミノ化により、アミン４−６を得ることができる。アミン４−６の異なるジアステレオマーは、当業者に既知の方法、例えばカラムクロマトグラフィーによって分離できる。
【０１４２】
【化２９】
2014511373.tif 000031
【０１４３】
スキーム４ａに示したように、ここではＲ１がＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ３ｂがＣ１〜６アルキルであり、Ｒ４がＨであり、芳香族化合物４ａ−０−１は、バーチ還元反応下で、シクロヘキサ−１，４−ジエン４ａ−０−２に還元される。例えば、Ｒａｂｉｄｅａｕ，Ｐ．Ｗ．，「Ｔｈｅ  ｍｅｔａｌ−ａｍｍｏｎｉａ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｒｏｍａｔｉｃ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，Ｖｏｌｕｍｅ４５，Ｉｓｓｕｅ６，１９８９，ｐａｇｅｓ１５７９〜１６０３を参照。酸性条件下（例えば、ＨＣｌまたは酢酸の触媒量の存在下）で、シクロヘキサ−１，４−ジエン４ａ−０２は、熱力学的により安定なシクロヘキサ−１，３−ジエン４ａ−１に転位できる。シクロヘキサ−１，３−ジエン４ａ−１は、スキーム４に記載されたものと類似の方法に従ってアルコール４ａ−６またはアミン４ａ−８に変換されることができる。
【０１４４】
【化３０】
2014511373.tif 000032
【０１４５】
スキーム５に示したように、ここではＲ１がＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ３ｂがＣ１〜６アルキルであり、ＡＤ−ｍｉｘ−αによるスチレン誘導体５−１の処理（例えばＳｈａｒｐｌｅｓｓ，Ｋ．Ｂ．；Ａｍｂｅｒｇ，Ｗ．；Ｂｅｎｎａｎｉ，Ｙ．Ｌ．；Ｃｒｉｓｐｉｎｏ，Ｇ．Ａ．；ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９２，５７，２７７１を参照）は、ジオール５−２を生成する。Ａ．Ｌｉ，ｅｔ．ａｌ，「Ｔｏｔａｌ  ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  （７Ｓ，９Ｒ）−（＋）−ｂｉｓａｃｕｍｏｌ」，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ（２００３），１４（１），７５〜７８を参照。ラネーニッケルによるジオール５−２のベンジル性ＯＨのステレオ選択的還元はアルコール５−３を与える。同文献を参照。５−２の異性体の両方は、Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ触媒の選択に基づいて得ることができる。塩化メチレンのような適当な溶媒中でのＰＰｈ３およびＣＢｒ４によるアルコール５−３の処理は、臭化物５−４を生成する。マグネシウム粉末およびＣＨ３Ｉの存在下での臭化物５−４のグリニャール試薬への変換（金属−ハロゲン交換による）、続くアセトアルデヒドによる反応は、アルコール５−５を提供する。アルコール５−５の異なるジアステレオマーは、カラムクロマトグラフィー法のような当業者において既知の方法によって分離できる。同文献を参照。アルコール５−５は、その対応するアミン化合物５−６に、スキーム４にその概要を示したものと類似の方法を使用して変換できる。アミン化合物５−８の異性体は、立体選択的イミン反応によって得ることができる。
【０１４６】
【化３１】
2014511373.tif 000033
【０１４７】
当業者は、本明細書に記載されたすべてのスキームにおいて、官能（反応）基がＲ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４などのような置換基上に存在する場合、さらなる修飾が、適当および／または所望の場合に行われ得ることについて認識できるものである。例えば、ＯＨ基は、Ｂｒによってのように、求核置換に適しているメシラートのような良好な脱離基に変換されることができる。このように、官能基を含む置換基を有する式Ｉの化合物（例えば、スキーム４の化合物４−８）は、異なる置換基を有する式Ｉの他の化合物に変換されることができる。
【０１４８】
本明細書で使用する場合、用語「反応する」は、化学変化が最初に導入された化合物とは異なる化合物を生成するように、指定された化学反応体を一緒にすることを指す。反応することは、溶媒の存在または非存在下で起こることができる。
【０１４９】
いくつかの実施形態は、治療に有効な量の式Ｉ−０の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を患者に投与する工程を有する、患者の認知機能低下および／またはアルツハイマー病を治療する方法である：
【化３２】
2014511373.tif 000034
【０１５０】
式中：
【化３３】
2014511373.tif 000035
【０１５１】
は、単結合および二重結合から選択され；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、この化合物は：２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−オール；２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２ーエン−４−オール；２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２ーエン−４−アミン；４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；および４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オールまたはそれらの薬学的に許容される塩から選択される。いくつかの実施形態において、この化合物は、薬学的に許容される賦形剤を有する医薬組成物中にある。
【０１５３】
いくつかの実施形態は、治療に有効な量の式Ｉ−１の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を患者に投与する工程を有する、患者の認知機能低下および／またはアルツハイマー病を治療する方法を提供する：
【化３４】
2014511373.tif 000036
【０１５４】
式中：
【化３５】
2014511373.tif 000037
【０１５５】
は、単結合および二重結合から選択され；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、化合物は：（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−オール；（６Ｓ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２ーエン−４−オール；（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；（６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２ーエン−４−アミン；（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；および（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オールまたはそれらの薬学的に許容される塩、ならびに薬学的に許容される担体から選択される。
【０１５７】
いくつかの実施形態は、治療に有効な量の式Ｉ−２の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を患者に投与する工程を有する、患者の認知機能低下および／またはアルツハイマー病を治療する方法を提供する：
【化３６】
2014511373.tif 000038
【０１５８】
式中：
【化３７】
2014511373.tif 000039
【０１５９】
は、単結合および二重結合から選択され；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２またはそれらの薬学的に許容される塩から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【０１６０】
いくつかの実施形態において、化合物は：（４Ｓ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−アミン；（４Ｒ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−アミン、およびそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【０１６１】
いくつかの実施形態において、記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失からなる群から選択される１若しくはそれ以上の認知機能の低下の症状を治療する。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、治療は：（ｉ）長期増強作用の回復；（ｉｉ）神経変性の阻害、治療、または軽減；（ｉｉｉ）一般アミロイド症の阻害、治療、または軽減；（ｉｖ）アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイド−オリゴマー結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上の阻害、治療、および／または軽減；および（ｖ）ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性／効果の阻害、治療、または軽減の１若しくはそれ以上を有する。
【０１６３】
さらに他の実施形態において、治療は、アミロイド産生の阻害、アミロイド構築の阻害、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害の１若しくはそれ以上を有する。
【０１６４】
他の実施形態において、治療は、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害を有する。
【０１６５】
いくつかの実施形態は、治療に有効な量の４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オールおよび治療に有効な量の４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オールまたはそれらの薬学的に許容される塩の混合物を有する医薬組成物を、患者に投与する工程を有する、患者の認知機能低下および／またはアルツハイマー病を治療する方法である。いくつかの実施形態において、この化合物は、薬学的に許容される賦形剤を有する医薬組成物中にある。
【０１６６】
いくつかの実施形態は、治療に有効な量の（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オールおよび治療に有効な量の（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オールまたはそれらの薬学的に許容される塩の混合物を有する医薬組成物を、患者に投与する工程を有する、患者の認知機能低下および／またはアルツハイマー病を治療する方法である。いくつかの実施形態において、この化合物は、薬学的に許容される賦形剤を有する医薬組成物中にある。
【０１６７】
さらに他の実施形態において、記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失からなる群から選択される１若しくはそれ以上の認知機能の低下の症状を治療する。
【０１６８】
いくつかの実施形態において、治療は：（ｉ）長期増強作用の回復；（ｉｉ）神経変性の阻害、治療、または軽減；（ｉｉｉ）一般アミロイド症の阻害、治療、または軽減；（ｉｖ）アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイド−オリゴマー結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上の阻害、治療、および／または軽減；および（ｖ）ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性／効果の阻害、治療、または軽減の１若しくはそれ以上を有する。
【０１６９】
さらなる実施形態において、治療は、アミロイド産生の阻害、アミロイド構築の阻害、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害の１若しくはそれ以上を有する。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、治療は、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性の阻害、アミロイド凝集の阻害、アミロイド結合の阻害、およびアミロイド沈着の阻害を有する。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイド（アミロイドβオリゴマーを含む）のニューロン（例えば脳内のニューロン）への結合を阻害、治療、および軽減（部分的に阻害）し、認知機能低下および／またはアルツハイマー病の阻害、治療、および軽減において有用である。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイド凝集、アミロイドオリゴマー結合およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上を阻害、治療、または軽減（部分的に阻害）する。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイド沈着を阻害、治療、または軽減（部分的に阻害）する。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、ニューロン（例えば脳内のニューロン）上のアミロイドβオリゴマーの活性／効果を阻害、治療、または軽減（部分的に阻害）し、認知機能低下および／またはアルツハイマー病の阻害、治療、および軽減において有用である。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイドβオリゴマーの破壊、ニューロンへのアミロイドβオリゴマーの結合の阻害、および／または、アミロイドβオリゴマー結合によって開始される作用のシグナル伝達機構の反作用によって、ニューロン（例えば脳内のニューロン）上のアミロイドβオリゴマーの活性／効果を阻害、治療、または軽減（部分的に阻害）する。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、化合物は、βセクレターゼアッセイにおいて活性を示し、認知機能低下およびアルツハイマー病の阻害、治療、および軽減において有用である。いくつかの実施形態において、ウコン油の誘導体は精製され、および単離された形態での化合物である（例えば、８０重量％、８５重量％、９０重量％、９５重量％、９８重量％、９９重量％以上の純度である）。本明細書に記載された化合物および方法は、記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失のような認知機能の低下および／またはアルツハイマー病の症状のうちの１若しくはそれ以上を治療するために使用されてもよい。さらに、本明細書に記載された化合物および方法は、長期増強作用を回復し、および／または神経変性および一般アミロイド症の１つ、または両方を阻害、治療、または軽減することによって、より具体的には、アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイド（アミロイドオリゴマーを含む）結合、およびアミロイド沈着のうち、１若しくはそれ以上を阻害、治療、および／または軽減することによって、認知機能の低下および／またはアルツハイマー病を阻害、治療、または軽減するのに有用であることがある。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイドオリゴマー結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上を阻害、治療または軽減することができる。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、長期増強作用を回復し、神経変性および一般のアミロイド症の１つまたは両方を阻害、治療、または軽減することができる。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイド凝集、アミロイドオリゴマー結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上を阻害、治療または軽減（部分的に阻害）する。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイド沈着を阻害（または部分的に阻害）する。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、ニューロン（例えば脳内ニューロン）へのアミロイド（アミロイドβオリゴマーを含む）の結合を阻害、治療、または軽減（部分的に阻害）する。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、認知機能低下および／またはアルツハイマー病を阻害、治療、および軽減するために有用である。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、βセクレターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、βセクレターゼを本明細書に記載された化合物または組成物のいずれか１若しくはそれ以上に接触させることにより、βセクレターゼの活性を阻害する方法において使用されることができる。
【０１７６】
本発明の別の態様は、本発明の化合物またはそれらの医薬組成物の治療に有効な量または服用量を個体に投与することによって、個体（例えば患者）における認知機能低下および／またはアルツハイマー疾患を治療する方法に関係する。
【０１７７】
本明細書の病気／疾患の治療は、病気／疾患に関連する症状、例えば、認知機能低下および／またはアルツハイマー病の症状の１若しくはそれ以上を治療することを有する。
【０１７８】
本明細書で使用する場合、用語「接触する」は、生体外系または生体内系において、示された部分を一緒にすることを指す。例えば、本発明の化合物とβセクレターゼまたはニューロン細胞（またはβアミロイドオリゴマーの１若しくはそれ以上の存在下でのニューロン細胞）を「接触させること」は、例えばヒトのような、βセクレターゼまたはニューロン細胞を有するヒトのような個体または患者に、本発明の化合物を投与することを含み、同様に、例えば、本発明の化合物を、βセクレターゼまたはニューロン細胞（またはβアミロイドオリゴマーの１若しくはそれ以上の存在下でのニューロン細胞）を含む細胞的なまたは精製された調製物を含む試料内に導入することを含む。
【０１７９】
本明細書で使用する場合、互換的に使用される用語「個体」または「患者」は、哺乳類、好適にはネズミ、ラット、他の齧歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、または霊長類、および最も好適にはヒトを含むいずれかの動物を指す。
【０１８０】
本明細書で使用される場合、用語「治療する」または「治療」は、患者の認知機能低下および／またはアルツハイマー病の阻害、治療および／または軽減の１若しくはそれ以上を指し、記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失からなる群から選択される１若しくはそれ以上の認知機能の低下の症状を阻害、治療および／または軽減を有する。
【０１８１】
本明細書で使用される場合、用語「治療する」または「治療」は、疾患に関連する１若しくはそれ以上の症状の阻害、治療および／または軽減を含む。本明細書で使用される場合、認知機能低下および／またはアルツハイマー病の阻害、治療、および／または軽減はさらに、（ｉ）長期増強作用の回復；および／または（ｉｉ）神経変性の阻害、治療、または軽減；（ｉｉｉ）一般アミロイド症の阻害、治療、または軽減；および／または（ｉｖ）アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイド−オリゴマー結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上の阻害、治療、および／または軽減；および（ｖ）ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性／効果の阻害、治療、および／または軽減の１若しくはそれ以上を含む。
【０１８２】
用語「治療する」または「治療」はまた、アミロイド産生、アミロイド構築、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの活性／効果、アミロイド凝集、アミロイド結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上の阻害、治療、および／または軽減を有する。
【０１８３】
用語「治療する」または「治療」はまた、ニューロン細胞上のアミロイドβオリゴマーの１若しくはそれ以上の活性、アミロイド凝集、アミロイド結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上の阻害、治療および／または軽減を有する。
【０１８４】
用語「医薬組成物」は、少なくとも１つの活性成分を有する組成物を意味し、それによって組成物は、哺乳類（例えば、限定されないが、ヒト）に特定の有効な成果のための調査に受け入れることができる。当業者は、活性成分が、当業者の必要性に基づいて所望の有効な成果を有するかどうかを決定するために適切な技術を理解し、認識する。
【０１８５】
本明細書で使用する場合、「治療に有効な量」は、研究者、獣医師、医師、または他の臨床医によって、組織、系、動物、個体またはヒトにおいて求められる生物学的または医薬応答を誘発する活性化合物または医薬剤の量を指し、以下の１若しくはそれ以上を含む：（１）病気を予防する；例えば、病気、状態または障害にかかりやすくなっているが、まだ病気の病理または症状を体験していない、または示していない個体において、病気、状態または障害を予防すること、（２）病気を阻害させる、例えば、病気、状態または障害の病理または症状を体験するまたは示している個体において、病気、状態または障害を阻害させること（すなわち病理および／または症状のさらなる発達の遅延）、および（３）病気を改善する、例えば病気、状態または障害の病理または症状を体験するまたは示している個体における病気、状態、または障害を改善すること（つまり、病理および／または症状の逆転）。本明細書で使用する場合、用語「治療に有効な量」はまた、研究者、獣医師、医師または他の臨床医が、組織、系、動物、個体またはヒトにおいて探される生物学的または医学的応答を誘発する活性化合物または医薬剤の量を指してもよい。
【０１８６】
特定の実施形態において、認知機能低下および／またはアルツハイマー病の治療のための１若しくはそれ以上の追加の医薬剤は、認知機能低下および／またはアルツハイマー病を治療するための本発明の化合物と組み合わせて使用できる。１若しくはそれ以上の追加医薬剤は、同時にまたは本発明の化合物に続いて患者に投与できる。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、１若しくはそれ以上の追加の医薬剤は、これに限定されないが、ドネペジル、ガランタミン、メマンチン、リバスチジミン、およびタクリンを含む。
【０１８８】
いくつかの実施形態は、治療に有効な量の４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オールおよび治療に有効な量の４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オールまたはそれらの薬学的に許容される塩、ならびに薬学的に許容される担体の混合物を有する医薬組成物である。
【０１８９】
いくつかの実施形態は、治療に有効な量の（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オールおよび治療に有効な量の（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オールまたはそれらの薬学的に許容される塩、ならびに薬学的に許容される担体の混合物を有する医薬組成物である。
【０１９０】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は医薬組成物の形態において投与されることができる。これらの化合物は、製薬技術では周知の方法で調製されることができ、局所または全身治療が要求されるかどうかによって、治療される部位によって、様々な経路で投与されることができる。投与は、局所（経皮、表皮、眼、および、鼻腔、膣および直腸送達を含む粘膜を含む）、肺（例えば、気管内または鼻腔内の噴霧吸入を含む、粉末または噴霧剤の吸入または吹送法）、口腔または非経口であることができる。非経口投与は、静脈内、動脈内、皮下、腹膜内、筋肉内、または、注射または点滴；または例えば、髄腔内または脳室内投与のような頭蓋内投与を含む。非経口投与は、１回のボーラス投与の形態であることができ、または、例えば、連続した注入ポンプによることがある。局所投与のための医薬組成物および製剤は、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、液滴、坐剤、スプレー、液剤および粉末を含むことがある。いくつかの実施形態は、これらに限定されないが、経口、直腸または鼻腔投与を含む経腸投与に好適な持続性放出医薬組成物を有していてもよい。実施形態において、医薬組成物は、経口投与に適したものであり、例えば錠剤、カプセルおよび液剤である。他の実施形態において、持続放出医薬組成物は、二層錠剤または変形カプセルであってもよい。持続放出医薬組成物はまた、これらに限定されないが、血管内投与、皮下注射、および筋肉内投与を含む非経口投与に適している場合もある。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、経口投与に好適であり、錠剤、カプセルまたは液剤、好ましくは錠剤またはカプセルに処方されてもよい。１つの実施形態において、医薬組成物は、多層錠剤、例えば二層錠剤であってもよい。別の実施形態において、医薬組成物は、他成分カプセル、例えば分割されたカプセルまたは別のカプセル内に含有されるカプセルであってもよい。医薬組成物はまた、直ちに放出される製剤、持続放出製剤、またはこれらの組み合わせを有していてもよい。従来の医薬担体、水性、粉剤または油状ベース、増粘剤などは、必要な場合も所望される場合もある。被覆されたコンドーム、グローブなども有用な場合がある。
【０１９１】
本発明の実施形態はまた、１若しくはそれ以上の薬学的に許容される担体（賦形剤）と組み合わせて１若しくはそれ以上の本発明の化合物を活性成分として含有する医薬組成物を含む。いくつかの実施形態は、治療に有効な量の式Ｉ−０の化合物または薬学的に許容される塩、ならびに薬学的に許容される担体を有する医薬組成物である：
【化３８】
2014511373.tif 000040
【０１９２】
式中：
【化３９】
2014511373.tif 000041
【０１９３】
は、単結合および二重結合から選択され；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【０１９４】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、治療に有効な量の：２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−オール；２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２ーエン−４−オール；２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２ーエン−４−アミン；４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；および４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オールまたはそれらの薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体から選択される。
【０１９５】
本発明の実施形態はまた、１若しくはそれ以上の薬学的に許容される担体（賦形剤）と組み合わせて上記の本発明の１若しくはそれ以上の化合物を活性成分として含有する医薬組成物を含む。いくつかの実施形態は、治療に有効な量の式Ｉ−１の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩、ならびに薬学的に許容される担体を有する医薬組成物である：
【化４０】
2014511373.tif 000042
【０１９６】
式中：
【化４１】
2014511373.tif 000043
【０１９７】
は、単結合および二重結合から選択され；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【０１９８】
いくつかの実施形態において、化合物は、（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−オール；（６Ｓ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタ−２ーエン−４−オール；（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２，４−ジオール；（６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（ｐ−トリル）ヘプタ−２−エン−４−アミン；（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール；（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オール、およびそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【０１９９】
本発明の実施形態はまた、１若しくはそれ以上の薬学的に許容される担体（賦形剤）と組み合わせて上記の本発明の１若しくはそれ以上の化合物を活性成分として含有する医薬組成物を含む。いくつかの実施形態は、治療に有効な量の式Ｉ−２の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩、ならびに薬学的に許容される担体を有する医薬組成物である：
【化４２】
2014511373.tif 000044
【０２００】
式中：
【化４３】
2014511373.tif 000045
【０２０１】
は、単結合および二重結合から選択され；Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＨ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｏ−アルキル、およびＯＣＦ３から選択され；Ｒ２は、ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨおよびＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）から選択され；Ｒ３は、ＯＨおよびＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、ＣＨ３およびＣＨ２から選択される。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は：（４Ｓ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−アミン；（４Ｒ，６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタ−２ーエン−４−アミン、およびそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【０２０３】
いくつかの実施形態は、治療に有効な量の４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オールおよび治療に有効な量の４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オールまたはそれらの薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体の混合物を有する医薬組成物である。
【０２０４】
いくつかの実施形態は、治療に有効な量の（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オールおよび治療に有効な量の（６Ｓ）−４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オールまたはそれらの薬学的に許容される塩、ならびに薬学的に許容される担体の混合物を有する医薬組成物である。
【０２０５】
本発明の組成物の製造において、活性成分は、典型的には、賦形剤と混合され、賦形剤によって希釈され、または、例えば、カプセル、サシェ、紙または他の容器の形態において担体内に封入される。賦形剤が、希釈剤として役立つ場合、それは、固体、半固体、または液剤であり、活性成分における媒体、担体、または媒質として作用する。よって、組成物は、錠剤、丸剤、粉剤、トローチ剤、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ剤、エアゾール剤（固体としてまたは液体媒質中）、例えば、活性化合物の最大１０重量％を含む軟膏、軟および硬ゼラチンカプセル剤、坐剤、殺菌した注射可能な溶液、および、殺菌包装された粉剤の形態であることができる。
【０２０６】
製剤の調製において、活性化合物は、他の成分と組み合わせる前に適当な粒径を提供するために製粉されることができる。活性化合物が実質的に不溶性である場合、それは、２００メッシュ未満の粒径に製粉されることができる。活性化合物が実質的に水溶性である場合、粒径は、製剤において実質的に同一の分布を提供するために、例えば約４０メッシュに製粉によって調整されることができる。
【０２０７】
本発明の化合物は、錠剤および他の処方タイプに適当な粒径を得るために、湿式ミルのような既知の製粉手順によって製粉されてもよい。本発明の化合物の微細に分割された（ナノ微粒子）調製は、当該技術分野において既知の手順によって調製されることができる。例えば、国際特許出願番号ＷＯ２００２／０００１９６を参照。
【０２０８】
好適な賦形剤のいくつかの例としては、ラクトース、ブドウ糖、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカントゴム、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、およびメチルセルロースを含む。製剤は、加えて、タルク、ステアリン酸マグネシウムおよび鉱油のような平滑剤；湿潤剤；乳化および懸濁剤；安息香酸メチルおよびヒドロキシ安息香酸プロピルのような保存剤；甘味剤；および香味剤を含む。本発明の組成物は、当業者に既知の手順によって患者に投与された後、活性成分の放出を早く、継続または遅らせて提供するために処方されることができる。
【０２０９】
組成物は、単位剤形において処方され、各投与量は、活性成分の約０．１ｍｇ〜約１０００ｍｇ（１ｇ）、さらに通常は、約１００〜約５００ｍｇを含む。用語「単位剤形」は、被験者および他の哺乳類における単位投与量として適当な物理学的に別々の単位を指し、各単位は、適当な医薬賦形剤に関連して所望の治療的効果を生成するために計算された活性材の予め決められた量を含むものである。
【０２１０】
活性化合物は、広い投与範囲にわたって有効であり、一般的に薬学的に有効な量で投与されることができる。例えば、それらを必要とする患者（例えば成人）の治療において使用される本発明の活性化合物の投与量は、投与の経路や頻度によって、１日あたり０．１〜３０００ｍｇであってもよい。この種の投与量は、１日あたり０．００１〜５０ｍｇ／ｋｇに対応する。いくつかの実施形態では、それらを必要とする患者（例えば成人）の治療において使用される本発明の活性化合物の投与量は、１日あたり１〜２０００ｍｇ、１日あたり１〜１０００ｍｇ、１日あたり１０〜１０００ｍｇ、または１日あたり１０〜５００ｍｇの範囲であってもよい。しかし、実際に投与される化合物の量が、通常、治療される状態、投与の選択された経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重および応答、患者の症状の重症度などを含む関連した状況に従って、医師によって決定されることは、理解されている。
【０２１１】
錠剤のような固体組成物を調製するために、主要な活性成分は、本発明の化合物の均質な混合物を含有する製剤前の固体組成物を形成するため、医薬賦形剤と混合されることができる。これらの処方前組成物を均一なものとするとき、組成物が、錠剤、丸剤、およびカプセル剤のように等しく有効な単位剤形に直ちに細分できるように、活性成分は、典型的には、組成物の全体にわたって均一に分散させる。それから、この製剤前の固体は、例えば、本発明の活性成分の約０．１〜約１０００ｍｇを含む上記のタイプの単位剤形に細分される。
【０２１２】
本発明の錠剤または丸剤は被覆されることができる、またはそうでなければ、長期にわたる作用の利益を与える剤形を提供するために化合されることができる。例えば、錠剤または丸剤は、内側投与量および外側投与量の成分を有することができ、後者は前者のエンベロープの形態となる。２つの成分は、胃における分解に抵抗し、内側成分がそのまま十二指腸内を通過する、または放出を遅延させることができる腸溶層によって切り離されることができる。様々な材料がこの種の腸溶層または被覆剤として使用でき、このような材料は、数多くの重合酸およびセラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースのような材料と重合酸の混合物を含む。
【０２１３】
経口投与または注射による投与に組み込まれることができる本発明の化合物および組成物における液体形態は、水溶液、適宜風味をつけたシロップ、水性または油性懸濁液、および、エリキシルおよび類似の薬学的な媒質と同様に、綿実油、胡麻油、ココナッツ油、または落花生油のような食物油で風味づけられたエマルジョンを含む。
【０２１４】
吸入または吹送法における組成物は、水性または有機溶媒、またはそれらの混合物中の薬学的に許容できる水溶液または懸濁液、および粉剤を含む。液体または固体組成物は、上記に記載されたような適当な薬学的に許容できる賦形剤を含むことがある。いくつかの実施形態では、組成物は、局所または全身への効果のために経口または鼻呼吸経路によって投与される。組成物は、不活性ガスを用いて霧状にされることができる。霧状にされた溶液は、噴霧吸入器から直接吸入されることができる、または噴霧吸入器は、フェイスマスクテントまたは間欠陽圧呼吸機に取り付けられることができる。溶液、懸濁液、または粉末組成物は、適当な方法で製剤を届ける装置から経口的にまたは経鼻的に投与されることができる。
【０２１５】
患者に投与される化合物または組成物の量は、何が投与されるのか、予防または治療のような投与の目的、患者の状態、投与の方法などによって様々である。治療的適用において、組成物は、疾患の症状およびその合併症を治癒する、または少なくとも部分的に抑えるために十分な量で、疾患を既に患っている患者に投与されることができる。有効量は、疾患の重症度、患者の年齢、体重、および一般的な状態などによる主治医の判断によるのと同様に、治療される疾患状態に依存する。
【０２１６】
患者に投与される組成物は、上記の医薬組成物の形態であることができる。これらの組成物は、従来の殺菌技術によって殺菌されることができる、または、滅菌濾過されてもよい。水溶液は、使用のために包装、または凍結乾燥され、凍結乾燥された調製物は、投与の前に無菌の水性担体と結合されることができる。化合物調製物のｐＨは典型的には３〜１１であり、より好適には５〜９、および最も好適には７〜８である。前述の賦形剤、担体、または安定剤で特定のものの使用は結果として薬学的な塩の形成となることは理解される。
【０２１７】
本発明の化合物の治療的投与量は、例えば、治療がなされるための特定の使用、化合物の投与の方法、患者の健康および状態、および処方医師の判断によって変化することができる。医薬組成物における本発明の化合物の比率または濃度は、投与量、化学的な特徴（例えば疎水性）、および投与の経路を含む多くの要因によって変化することができる、例えば、本発明の化合物は、非経口投与のための化合物の約０．１〜約１０％ｗ／ｖを含む水性生理的緩衝液において提供されることができる。いくつかの典型的な用量の範囲は、１日につき体重１ｋｇあたり約１μｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量の範囲は、１日につき体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇである。投与量は、疾患または障害の進行のタイプおよび範囲、特定の患者の全体の健康状態、選択された化合物の相対的な生物学的有効性、賦形剤の製剤およびその投与の経路のような変数に依存することがある。有効的な用量は、生体外または動物モデルテスト系に由来する用量−応答曲線から推定されることができる。
【０２１８】
本発明の組成物は、さらに、上記にその例がリストされた化学療法薬、ステロイド、抗炎症性化合物または免疫抑制薬のような付加的な医薬品の１若しくはそれ以上を含むことができる。
【０２１９】
本発明の別の態様は、放射性物質を用いた画像撮影法だけでなく、生体内でも生体外でもヒトを含む組織試料における酵素を局所化することおよび数量化するため、および標識された化合物の結合を阻害することによってリガンドを同定するためのアッセイにおいても役立つ本発明の標識された化合物（放射性標識、蛍光標識など）に関する。従って、本発明は、この種の標識された化合物を含む酵素アッセイを含む。
【０２２０】
本発明の実施形態は、さらに、本発明の同位体標識化合物を含む。「同位体」または「放射性標識された」化合物は、１若しくはそれ以上の原子が、自然において典型的に見受けられる（つまり自然発生の）原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子によって置き換えられる、または置換される本発明の化合物である。本発明の化合物に組み込まれ得ることのある適当な放射性核種は、これに限定されないが、２Ｈ（重水素、Ｄとも書く）、３Ｈ（三重水素、Ｔとも書く）、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、１８Ｆ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、８２Ｂｒ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉおよび１３１Ｉを含む。放射性標識された化合物に組み込まれる放射性核種は、放射性標識された化合物の特定の適用に依存する。例えば、生体内受容体標識および競合アッセイにおいて、３Ｈ、１４Ｃ、８２Ｂｒ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓを組み込む化合物は一般的に最も有用である。放射性物質を用いた画像撮影法への適用において、１１Ｃ、１８Ｆ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１３１Ｉ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒまたは７７Ｂｒは一般的に最も有用である。
【０２２１】
「放射性標識された化合物」は少なくとも１つの放射性核種を組み込まれた化合物であることが理解される。いくつかの実施形態では、放射性核種は、３Ｈ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３５Ｓおよび８２Ｂｒから選択される。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、本発明の標識された化合物は蛍光標識を含む。
【０２２３】
有機化合物内に放射性同位体および蛍光標識を組み込むための合成方法は、当業者において周知である。
【０２２４】
本発明の標識された化合物（放射性標識、蛍光標識など）は、化合物を同定／評価するためのスクリーニングアッセイにおいて使用されることができる。例えば、標識された新規の合成、または同定された化合物（つまりテスト化合物）は、標識化を追うことによりβセクレターゼまたはニューロン細胞（または１若しくはそれ以上のβアミロイドオリゴマーの存在下でのニューロン細胞）と接触させたときのその濃度変化をモニターすることによって、βセクレターゼまたはニューロン細胞（または１若しくはそれ以上のβアミロイドオリゴマーの存在下でのニューロン細胞）を結合するための能力において評価されることができる。別の例において、（標識された）テスト化合物は、βセクレターゼまたはニューロン細胞と結合することが知られている別の化合物（つまり標準化合物）の結合を減らすための能力において評価されることができる。従って、βセクレターゼまたはニューロン細胞と直接的に結合するための標準化合物と競合するためのテスト化合物の能力は、その結合親和性に相関する。逆に、いくつかの他のスクリーニングアッセイにおいては、標準化合物は標識され、テスト化合物は標識されない。従って、標識された標準化合物の濃度は、標準化合物およびテスト化合物間の競合を評価するためにモニターされ、テスト化合物の相対的結合親和性は、このように確認される。
【０２２５】
本発明の実施形態は、例えば、認知機能低下および／またはアルツハイマー病の治療または予防に有用な医薬キットも含み、この医薬キットは、本発明の化合物の治療に有効な量を有する医薬組成物を含む１若しくはそれ以上の容器を含む。このようなキットは、さらに、所望に応じて、例えば、１若しくはそれ以上の薬学的に許容される担体を含む容器、付加的容器などの１若しくはそれ以上の様々な従来の医薬キット成分を含み、このことは当業者において直ちに明らかなものである。挿入物として、または標識として、投与される成分の量を示した指示書、投与におけるガイドライン、および／または成分を混合することにおけるガイドラインはこのキットに含まれることもできる。
【０２２６】
本発明は、実施例においてより詳細に記載されている。以下の実施例は、説明の目的で提供されるものであり、いかなる方法によっても本発明を制限することを目的としない。当業者は、基本的に同じ結果を得るために変えられる、または変更される様々な重要でないパラメータを直ちに認識する。実施例の特定の化合物は、本明細書に提供された１若しくはそれ以上のアッセイに関連するアミロイド産生、アミロイド構築、ニューロン（例えば脳内のニューロン）上でのアミロイドβオリゴマーの活性／効果、アミロイド凝集、アミロイドオリゴマー結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上を阻害、治療、または軽減するとして発見された。さらなるいくつかの実施形態では、実施例の特定の化合物は、本明細書に提供された１若しくはそれ以上のアッセイに関連するニューロン（例えば脳内のニューロン）上でのアミロイドβオリゴマーの活性／効果、アミロイド凝集、アミロイド（アミロイドオリゴマーを含む）結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上を阻害、治療、または軽減することを見出した。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、ニューロン（例えば脳内のニューロン）上でのアミロイドβオリゴマーの活性／効果、アミロイド凝集、アミロイド（アミロイドオリゴマーを含む）結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上の阻害に関して、１００μＭ、５０μＭ、２０μＭ、１５μＭ、１０μＭ、５μＭ、１μＭ、５００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭまたは１０ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する。いくつかの実施形態では、ニューロン（例えば脳内のニューロン）上でのアミロイドβオリゴマーの活性／効果の阻害に関して、１００μＭ、５０μＭ、２０μＭ、１５μＭ、１０μＭ、５μＭ、１μＭ、５００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭまたは１０ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、ニューロン（例えば脳内のニューロン）上でのアミロイドβオリゴマーの活性／効果、アミロイド凝集、アミロイド（アミロイドオリゴマーを含む）結合、およびアミロイド沈着の１若しくはそれ以上に対する本発明の化合物の阻害割合は、１０ｎＭ〜１０μＭの濃度で測定される。いくつかの実施形態では、測定された阻害割合は、約１％〜約２０％、約２０％〜約５０％、約１％〜約５０％、または約１％〜約８０％である
本発明は、以下の実施例に参照される特定の態様において認められることができ、これらの実施例は、制限のためではなく、実例として提供されるものである。特に明記しない限り、以下の実施例において参照された材料、試薬などは、商業的供給源から得られるものである。
【実施例１】
【０２２９】
ウコン油の化学処理法による抽出（還元的アミノ化）：イソブチルアミンとウコン油との反応、続いて、メタノール中での水素化ホウ素ナトリウムによる還元、およびカラムクロマトグラフィーを使用する分画。
【０２３０】
本実施例において、ウコンからの軽油抽出物を、超臨界ＣＯ２抽出によって得た。ウコン油（１０ｇ）をメタノール（２５０ｍＬ）に溶かし、イソブチルアミン（４．０ｍＬ）を加えた。混合物を、室温で１６時間維持した。この時点で、反応混合物を氷浴上で０℃に冷却した。メタノール（５０ｍｌ）における水素化ホウ素ナトリウム（５ｇ）溶液を、３０分にわたって激しく攪拌しながら滴下した。添加完了後、結果として生じる混合物を、１６時間の還流下に維持した。この時点で、反応混合物を、室温に冷却し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３００ｍＬ）に注入した。結果として生じる混合物を、ロータリーエバポレーターによって濃縮し、水性残渣を、水およびクロロホルム間に分けた。クロロホルム層を、無水硫酸ナトリウムにより乾燥し、その後濾過し、濃縮した。粗生成物を、次いで１００％クロロホルムからクロロホルム：メタノール（４：１）までの勾配を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーを使用して分画された。比較的に非極性から極性までの併せて２０の分画が、集められ、および濃縮された。各分画は生物学的テストのために提出された。活性生成物含有分画は、比較的極性の分画であった。
【０２３１】
活性生成物含有分画（分画１Ａ）をさらに、カラムクロマトグラフィーによる分離に供され、２つの主な成分である成分１Ａ−１および成分１Ａ−２を単離した。
【０２３２】
還元的アミノ化で使用したイソブチルアミンに対するウコン油の重量比は約３：１（２〜４：１）である。１Ａの純度は、ＨＰＬＣによって測定された。２つの主なピーク（２成分）のみが存在した。使用したＨＰＬＣ条件は以下のとおりである：
ＨＰＬＣ条件は以下のとおりであった：移動相Ａ：水中で１３．３ｍＭギ酸アンモニウム／６．７ｍＭの水中ギ酸；移動相Ｂ：水／ＣＨ３ＣＮ（１／９，ｖ／ｖ）で６ｍＭギ酸アンモニウム／３ｍＭギ酸；カラム１：Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｆｕｓｉｏｎ−ＲＰ  １００Ａ  Ｍｅｒｃｕｒｙ、２×２０ｍｍ、２．５ミクロン（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｐａｒｔ  Ｎｏ  ００Ｍ−４４２３−Ｂ０＿ＣＥ）；カラム２：Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｍａｘ−ＲＰ  ８０、２×５０ｍｍ、４ミクロン（ｚＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｐａｒｔ  Ｎｏ  ００Ｂ−４３３７−Ｂ０）。
【０２３３】
【表１】
2014511373.tif 000046
【０２３４】
成分１Ａ−１：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．１１，７．０９，５．２３，３．７２，２．９４，２．５１，２．３４，２．３１，１．９２，１．７２，１．７１，１．５８，１．２９，１．２７，０．９２。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１４４．５０，１３５．３７，１３５．０３，１２９．０３，１２６．８９，１２６．７０，６６．９７，４９．２５，４６．３９，３５．０５，３２．４６，２５．８３，２０．９６，２０．６７，および１８．３６。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）ｍ／ｚ２７４．３。
【０２３５】
分画１Ａの構造、成分１Ａ−１は以下のとおりであると決定された。
【０２３６】
【化４４】
2014511373.tif 000047
【０２３７】
成分１Ａ−２：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ５．７７，５．６５，５．４５，５．２３，３．９６，２．９４，２．９３，２．５１，２．３１，２．３０，２．０５，１．９２，１．７２，１．７１，１．５８，１．２９，１．２７，０．９２。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  １４４．５０，１３５．３７，１３０．９６，１２７．８６，１２６．７０  １２０．８０，６６．７２，４９．２５，４６．３９，３５．０５，３２．４６，２５．８３，２１．７９，２１．７９，２０．６７，および１８．３６。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）ｍ／ｚ２７６．３。
【０２３８】
分画１Ａの構造、成分１Ａ−２は以下のとおりであると決定された。
【０２３９】
【化４５】
2014511373.tif 000048
【０２４０】
１Ｈ  ＮＭＲによって測定される化学シフトは変化することがあり、例えば、最大０．３ｐｐｍである。１３Ｈ  ＮＭＲによって測定される化学シフトは変化することがあり、例えば最大０．６ｐｐｍである。分析質量スペクトルは、＋／−０．４の実験誤差を有することがある。
【実施例２】
【０２４１】
ウコン油の化学処理法による抽出（還元）：メタノール中での水素化ホウ素ナトリウムによるウコン油の還元、およびカラムクロマトグラフィーを使用する分画：
この実施例において、ウコンからの軽油抽出物を超臨界ＣＯ２抽出によって得た。ウコン油（１０ｇ）をメタノール（２５０ｍＬ）に溶かした。反応混合物を、氷浴上で０℃に冷却した。メタノール（５０ｍＬ）中の水素化ホウ素ナトリウム（５ｇ）溶液を、３０分にわたって激しく攪拌しながら滴下した。添加完了後、混合物を、１６時間の還流において維持した。この時点で、反応混合物を、室温に冷却し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３００ｍＬ）に注入した。結果として生じる混合物を、ロータリーエバポレーターによって濃縮し、水性残渣を、水とクロロホルムとに分けた。クロロホルム層を、無水硫酸ナトリウムにより乾燥し、その後濾過し、濃縮した。生成物は次いで、１００％クロロホルムからクロロホルム：メタノール（４：１）までの勾配を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーを使用して分画された。比較的に非極性から極性まで併せて２０の分画が、集められ、濃縮された。各分画は生物学的テストのために提出された。活性生成物含有分画は、比較的極性の分画であった。
【０２４２】
アルコールへのケトンおよびアルデヒドの還元を確実にするための、ウコン油（その中のケトンおよびアルデヒド）に対する水素化ホウ素ナトリウムのモル比は、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１または６：１以上である。いくつかの実施形態では、ウコン油に対する水素化ホウ素ナトリウムの重量比は、約０．５：１（０．３：１〜約０．８：１）である。
【０２４３】
活性生成物含有分画（分画２Ａ）をさらに、カラムクロマトグラフィーによる分離に供し、２つの主な成分である成分２Ａ−１および成分２Ａ−２を単離した。
【０２４４】
成分２Ａ−１：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．１１，７．０９，５．１７，４．４５，２．３２，２．７６  １．７５，１．５８，１．５２，および１．２６。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  １４４．３，１３５．３７，１３５．０３，１２９．１１，１２８．３２，１２６．９０，６７．１０，４２．０５，３９．６４，２５．８１，２３．００，２１．０１，および１８．１２。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）ｍ／ｚ２１９．２。
【０２４５】
分画２Ａの構造、成分２Ａ−１は以下のとおりであると決定される。
【０２４６】
【化４６】
2014511373.tif 000049
【０２４７】
成分２Ａ−２：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ６．１８，５．７０，５．５６，５．１７，４．２４，２．３２，２．８０，２．２９，２．１５，１．９５，１．６８，１．７５，１．５８，１．４２，１．２７。１３Ｃ  ＮＭＲ  δ  １４４．１０，１３５．００，１３４．１０，１２９．５８，１２８．３２，１２５．３，６６．９０，４６．１８，４１．１７，３９．５５，３７．１４，２５．８１，２４．５０，２３．００，および１８．１２。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）ｍ／ｚ２２１．１。
【０２４８】
分画２Ａの構造、成分２Ａ−２は以下のとおりであると決定された。
【０２４９】
【化４７】
2014511373.tif 000050
【０２５０】
１Ｈ  ＮＭＲによって測定される化学シフトは変化することがあり、例えば、最大０．３ｐｐｍである。１３Ｈ  ＮＭＲによって測定される化学シフトは変化することができ、例えば、最大０．６ｐｐｍである。分析質量スペクトルは、＋／−０．４の実験誤差を有することがある。分画２Ａの純度をＨＰＬＣによって測定した。２つの主要ピーク（２つの成分）が存在した。
【実施例３】
【０２５１】
エキソサイトーシスアッセイ／ＭＴＴアッセイ
Ｅ１８スプラーグドーリーラット胚からの一次ニューロンは、ＮＢ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の３８４ウェルプレートにおいて最適化された濃度で蒔く。Ｎ２補助剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いたＮＢ培地の週２回の供給により、ニューロンは三週間培養において維持される。テスト化合物を細胞に加え、続いて、媒体またはアミロイドβオリゴマー調製物（１．５μＭ）を加え、５％ＣＯ２において３７℃で１〜２４時間保温培養される。ＭＴＴ試薬（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２イル）−２，５ジフェニルテトラゾリウムブロミド）（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）は、５ｍｇ／ｍＬまでリン酸緩衝食塩水において再構成される。ＭＴＴ標識試薬１０μＬが各ウェルに加えられ、３７℃で１時間保温培養され、それから撮像される。
【０２５２】
化合物が各プレート上でアミロイドβを有する、または有さないでテストされるように、各アッセイプレートはフォーマットされる。この設計は、早くからスクリーニングカスケード（第一スクリーニングのレベルで）毒性または代謝的に活性な化合物を除去する。
【０２５３】
エキソサイトーシスアッセイ／ＭＴＴアッセイにおける類似の手順は、文献においても見出されることができる。例えば、Ｌｉｕ  Ｙ，ｅｔ．ａｌ．，Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００４  Ｎｏｖ；９１（３）：６４８〜５６；Ｌｉｕ  Ｙ，ａｎｄ  Ｓｃｈｕｂｅｒｔ  Ｄ．「Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ３−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ（ＭＴＴ）ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ＭＴＴ  ｆｏｒｍａｚａｎ  ｅｘｏｃｙｔｏｓｉｓ．」Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１９９７  Ｄｅｃ；６９（６）：２２８５−９３；およびＬｉｕ  Ｙ，ａｎｄ  Ｓｃｈｕｂｅｒｔ  Ｄ「Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅｂｙ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ」  Ｃｕｒｒ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｓ．２００６  Ａｐｒ；３（２）：１２９〜３５を参照。発表された方法に従って作られるアミロイドβ１−４２オリゴマー［例えば、Ｄａｈｌｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ａｎｄ  ｆｉｂｒｉｌｌａｒ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ａｆｆｅｃｔ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ」Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００２  Ａｕｇ  ３０；２７７（３５）：３２０４６〜５３．Ｅｐｕｂ  ２００２  Ｊｕｎ  １０．；ＬｅＶｉｎｅ  Ｈ  ３ｒｄ．「Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｔ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ」  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００４  Ｄｅｃ  １；３３５（１）：８１〜９０；Ｓｈｒｅｓｔｈａ  ｅｔ．ａｌ，「Ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｄｖｅｒｓｅｌｙ  ａｆｆｅｃｔｓ  ｓｐｉｎｅ  ｎｕｍｂｅｒ  ａｎｄ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｎｅｕｒｏｎｓ」  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００６  Ｎｏｖ；３３（３）：２７４〜８２．Ｅｐｕｂ  ２００６  Ｓｅｐ  ８；Ｐｕｚｚｏ  ｅｔ  ａｌ．，「Ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ／ｃＧＭＰ／ｃＡＭＰ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐａｔｈｗａｙ  ｄｕｒｉｎｇ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ」Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００５  Ｊｕｌ  ２０；２５（２９）：６８８７−９７；Ｂａｒｇｈｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｇｌｏｂｕｌａｒ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒ−ａ  ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ  ａｎｄ  ｓｔａｂｌｅ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ」Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００５  Ｎｏｖ；９５（３）：８３４〜４７．Ｅｐｕｂ  ２００５  Ａ���ｇ  ３１；Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈｙｓｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ａ  ｂｅｔａ  １−４２  Ａｒｃｔｉｃ  ａｎｄ  Ａ  ｂｅｔａ  １−４２ｗｔ．ＦＥＢＳ  Ｊ．２００６  Ｊｕｎ；２  ７３（１２）：２６１８〜３０を参照］は、脳由来アミロイドβオリゴマーと同様（例えば、Ｗａｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｏｔｅｎｔｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｎａｔｕｒｅ（２００２）．４１６，５３５〜５３９；Ｌｅｓｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｒａｉｎ  ｉｍｐａｉｒｓ  ｍｅｍｏｒｙ．Ｎａｔｕｒｅ．２００６  Ｍａｒ  １６；４４０（７０８２）：３５２−７；Ｓｈａｎｋａｒ  ｅｔ  ａｌ，Ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｉｍｅｒｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｄｉｒｅｃｔｌｙ  ｆｒｏｍ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｂｒａｉｎｓ  ｉｍｐａｉｒ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２００８  Ａｕｇ；１４（８）：８３７〜４２．Ｅｐｕｂ  ２００８  Ｊｕｎ２２を参照）に、正の制御を構成する。負の制御は、メマンチンの２８μＭ濃度で処理されたニューロンと同様に、媒体処理されたニューロンを含む。メマンチンは、この用量でオリゴマー効果の５０％阻害を生じる。各プレート上のこれらの制御は、プレート毎のアッセイの実行を調整するために正常化の道具として役に立つ。
【０２５４】
一次ニューロン培養は、次のように調製される：一次ニューロン培養の最適細胞密度は、計測値としてのエキソサイトーシスアッセイを使用するアミロイドβオリゴマーへの細胞応答、および培養におけるニューロンに対するグリアの相対割合の免疫組織化学分析に基づいて決定される。培養は、ニューロン対グリア（グリア細胞）である培養の割合をモニターするため、免疫組織化学および画像処理に基づく定量化によって毎週モニターされる。生体外における２１日（２１ＤＩＶ）のスクリーニング世代で２０％を超えるグリア（ＧＦＡＰにおいて陽性）対ニューロン（ＭＡＰ２に対する抗体による明らかな染色）を含む培養は拒絶される。
【０２５５】
アミロイドβオリゴマーの調製は次のとおりである。ヒトアミロイドペプチド１−４２は、品質制御分析の不確かなロット選択によってＣａｌｉｆｏｒｎｉａ  Ｐｅｐｔｉｄｅから得られる。オリゴマー調製の品質制御は、オリゴマーサイズ範囲および相対的濃度を決定するためのウェスタン、および毒性のないエキソサイトーシス加速を確認するためのＭＴＴアッセイからなる。毒性は、ＤＮＡ結合色素ＤＡＰＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって視覚化された核形態学の定量化を経る各画像に基づくアッセイにおいてモニターされる。断片的な核は、後期アポトーシスにおいてあると考慮される（Ｍａｊｎｏ  ａｎｄ  Ｊｏｒｉｓ’９５）。ニューロン上の標準１．５μＭ濃度で異常ペプチドサイズ範囲または著しい毒性を生成するペプチドロットは拒絶される。再フォーマットされたプレートが、プレート間で１０％未満のＣＶを有し、慣用の基準に基づいて媒体およびアミロイドβオリゴマー処理されたニューロン（ｐ<０．０１、スチューデントｔ検定、不当分散）間で統計的に有意な２−フォールド分離の最小限を成し遂げ、その現在の実行と等しいとき、プレートベースの制御−アッセイ最適化は、完全である。
【０２５６】
データ処理および分析は、Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ  ＶＴＩ画像分析ソフトウェアおよびＳＴＯＲＥ自動データベースソフトウェアによって達成される。低いダイナミック範囲および３週間の培養後のニューロンのウェル−ウェル間可変性のために、統計比較は、アミロイドβ単独から化合物＋アミロイドβオリゴマー間および媒体から化合物単独間での分離の有意性を決定するために、ペアワイズＴｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒ分析を介してなされる。これらの統計は、動物行動テストにおいて示されることに、高スループットスクリーニングで過去２０年において使用されたｚの統計よりも類似している。成熟脳の電気生理学的に伝達されたシグナル伝達ネットワークにより近づけるために成熟した一次ニューロンの能力は、このスクリーニング戦略を正当化する。電力解析は、偽陰性（例えばＮ＝４）を最小化し、用量−応答確認スクリーニングへの実際のヒットから特徴的な偽陽性の負荷をシフトする多くの反復されたスクリーニングウェルに設定される。化合物の等級序列は、化合物構造の作用および物理化学的な性質の二次アッセイメカニズムを基礎としてなされる。特定のテスト化合物は、アミロイドβオリゴマーの効果を著しく逆転させるが、ニューロン代謝に影響を及ぼさない。
【０２５７】
分画１ＡはＭＴＴアッセイにおいて投与され、１０．５μＭのＥＣ５０を有するエキソサイトーシスのアミロイドβオリゴマーに誘発された加速をブロックすることを示し、成分１Ａ−１および成分１Ａ−２の１つまたは両方が、ニューロン細胞上でのアミロイドβオリゴマーの活性／効果をブロック／軽減することを示した。
【０２５８】
分画２ＡはＭＴＴアッセイにおいて投与され、２５．４μＭのＥＣ５０を有するエキソサイトーシスのアミロイドβオリゴマーに誘発された加速をブロックすることを示し、成分２Ａ−１および成分２Ａ−２の１つまたは両方が、ニューロン細胞上でのアミロイドβオリゴマーの活性／効果をブロック／軽減することを示した。
【実施例４】
【０２５９】
結合アッセイ
各テスト化合物はプレートに加えられ、続いて、アミロイドβ１−４２オリゴマーの１若しくはそれ以上を加えた。プレートは、１５分間リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）において３．７％パラホルムアルデヒドによって固定された。プレートは、各５分で３回、ＰＢＳによって洗浄された。プレートは、ＰＢＳ中で５％のヤギ血清および０．５％のトリトンＸ−１００（ＣＡＳ番号：９００２−９３−１）において１時間、室温でブロックされた。一次抗体（抗ＭＡＰ２ポリクローナル、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ＃ＡＢ５６２２および抗βアミロイド６Ｅ１０モノクローナル、Ｃｏｎｖａｎｃ＃ＳＩＧ−３９３００）は、ＰＢＳと５％ヤギ血清に１：１０００で希釈された。一次抗体は、４℃で一晩、またはＲＴで１時間保温培養された。プレートは、各５分で３回、ＰＢＳによって洗浄された。二次抗体（Ａｌｅｘ  Ｆｌｏｒ  ４８８ポリクローナル、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃Ａ１１００８およびＡｌｅｘａ  Ｆｌｏｒ６４７モノクローナル、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃Ａ２１２３５）は、ＰＢＳと５％ヤギ血清に１：１０００で希釈された。二次抗体は、ＲＴで１時間保温培養された。プレートは、ＰＢＳで１回洗浄された。次いでＤＡＰＩ（４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）は、０．０３μｇ／μＬで塗布され、ＲＴで５分間保温培養され、その後、ＰＢＳで洗浄された。画像処理は分析のために行われた。
【０２６０】
結合アッセイにおける類似の手順は、文献においても見出される。例えば、Ｌｏｏｋ  ＧＣ，ｅｔ．ａｌ．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ＡＤＤＬ−−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｄｒｕｇｓ  ｆｏｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｕｒｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｓ．２００７  Ｄｅｃ；４（５）：５６２−７．Ｒｅｖｉｅｗを参照。
【０２６１】
分画２ＡのＥＣ５０は結合アッセイによれば１４．５μＭであることが決定された。
【０２６２】
アミロイドβオリゴマー調製物ヒトアミロイドペプチド１−４２は、品質制御分析の不確かなロット選択によってＣａｌｉｆｏｒｎｉａ  Ｐｅｐｔｉｄｅから得られる。発表された方法［例えば、Ｄａｈｌｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ａｎｄ  ｆｉｂｒｉｌｌａｒ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ａｆｆｅｃｔ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ」Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００２  Ａｕｇ３０；２７７（３５）：３２０４６−５３．Ｅｐｕｂ  ２００２  Ｊｕｎ  １０．；ＬｅＶｉｎｅ  Ｈ  ３ｒｄ．「Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｔ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ」  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００４  Ｄｅｃ  １；３３５（１）：８１〜９０；Ｓｈｒｅｓｔｈａ  ｅｔ．ａｌ，「Ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｄｖｅｒｓｅｌｙ  ａｆｆｅｃｔｓ  ｓｐｉｎｅ  ｎｕｍｂｅｒ  ａｎｄ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｎｅｕｒｏｎｓ」  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００６  Ｎｏｖ；３３（３）：２７４〜８２．Ｅｐｕｂ  ２００６  Ｓｅｐ  ８；Ｐｕｚｚｏ  ｅｔ  ａｌ．，「Ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ／ｃＧＭＰ／ｃＡＭＰ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐａｔｈｗａｙ  ｄｕｒｉｎｇ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ」Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００５  Ｊｕｌ２０；２５（２９）：６８８７〜９７；Ｂａｒｇｈｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｇｌｏｂｕｌａｒ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒ−ａ  ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ  ａｎｄ  ｓｔａｂｌｅ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ」Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００５  Ｎｏｖ；９５（３）：８３４−４７．Ｅｐｕｂ  ２００５  Ａｕｇ３１；Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈｙｓｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｍｙｌｏｙｄβ  １−４２  Ａｒｃｔｉｃ  ａｎｄ  Ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  １−４２ｗｔ．ＦＥＢＳ  Ｊ．２００６  Ｊｕｎ；２  ７３（１２）：２６１８〜３０を参照］に従って作られたアミロイドβ１−４２は、脳由来アミロイドβオリゴマーと同様に（例えば、Ｗａｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｏｔｅｎｔｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｎａｔｕｒｅ（２００２）．４１６，５３５〜５３９；Ｌｅｓｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｒａｉｎ  ｉｍｐａｉｒｓ  ｍｅｍｏｒｙ．Ｎａｔｕｒｅ．２００６  Ｍａｒ  １６；４４０（７０８２��：３５２〜７；  Ｓｈａｎｋａｒ  ｅｔ  ａｌ，Ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｉｍｅｒｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｄｉｒｅｃｔｌｙ  ｆｒｏｍ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｂｒａｉｎｓ  ｉｍｐａｉｒ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２００８  Ａｕｇ；１４（８）：８３７〜４２．Ｅｐｕｂ  ２００８  Ｊｕｎ２２を参照）、正の制御として役に立つ。オリゴマー調製の品質制御は、オリゴマーサイズ範囲および相対的濃度を決定するためのウェスタン、および毒性のないエキソサイトーシス加速を確認するためのＭＴＴアッセイからなる。毒性は、ＤＮＡ結合色素ＤＡＰＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって視覚化された核形態学の定量化を経る各画像に基づくアッセイにおいてモニターされる。断片的な核は、後期アポトーシスにおいてあると考慮される（Ｍａｊｎｏ  ａｎｄ  Ｊｏｒｉｓ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ｏｎｃｏｓｉｓ，ａｎｄ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ．Ａｎ  ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ．Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １９９５；１４６：３〜１６）。ニューロン上の標準濃度で異常ペプチドサイズ範囲または著しい毒性を生成するペプチドロットは拒絶される。画像は、Ｎｅｕｒｏｎａｌ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇアルゴリズムを用いて捕捉され、Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ  ＶＴＩ自動顕微鏡プラットフォームによって分析される。統計分析において、不当分散を有するＴｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒペアワイズ比較が使用された。
【０２６３】
ウェスタンブロットは次のように行われた：アミロイドβ１−４２を含有する試料は、非還元レーンマーカー試料緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃１８５９５９４）に希釈された（１：５）。３０マイクロリットル（μＬ）の試料は、１８のウェルプレキャスト４〜１５％Ｔｒｉｓ−ＨＣｌゲル（ＢＩＯＲＡＤ＃３４５−００２８）にロードされた。電気泳動は、９０分間１２５ボルト（Ｖ）で、トリス−グリシン緩衝液を使用するＢＩＯ−ＲＡＤ  Ｃｒｉｔｅｒｉａｎプレキャストゲルシステムで行われた。ゲルは、１２０分間３０Ｖで、トリス−グリシン／１０％メタノール緩衝液内０．２μＭニトロセルロース膜上でブロットされた。膜は、ＰＢＳ溶液内で５分間煮沸され、４℃で一晩かけてＴＢＳ／５％乳溶液によりブロックされた。膜は、室温で１時間ＴＢＳ／１％乳溶液で１０μｇ／ｍＬに希釈された６Ｅ１０−ＨＲＰ（Ｃｏｖａｎｃｅ＃ＳＩＧ−３９３４５）によってプローブされた。膜は、ＴＢＳ／０．０５％ｔｗｅｅｎ−２０の溶液によって各４０分、３回洗浄され、ＥＣＬ試薬（ＢＩＯ−ＲＡＤ＃１６２−０１１２）で５分間現像された。画像獲得は、Ａｌｐｈａ  Ｉｎｎｏｔｅｃｈ  ＦｌｕｏｒＣｈｅｍ  Ｑ定量的画像システムで実行され、ＡｌｐｈａＶｉｅｗ  Ｑソフトウェアによって分析された。
【０２６４】
分画１Ａは、（画像処理アルゴリズムを使用する）結合アッセイに従って、３３％ニューロンへのアミロイドβオリゴマーリガンドの結合を部分的にブロックすることを示した。
【０２６５】
分画２Ａは、（画像処理アルゴリズムを使用する）結合アッセイに従って、３５％ニューロンへのアミロイドβオリゴマーリガンドの結合を部分的にブロックすることを示した。ＰＫ研究は、その標準的プロトコルに従って、ワシントン州レドモンドのＣＥＲＥＰ  Ｉｎｃ．で行われる。血漿試料はアセトニトリル沈殿を使用して処理され、ＨＰＬＣ−ＭＳまたはＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析された。ピーク領域は記録され、未知の血漿試料における未知のテスト化合物の濃度はそれぞれ校正曲線を使用して決定された。定量下限（ＬＬＱ）に加えて、アッセイの報告可能な線形範囲が決定された。活性分画は、１Ｈ  ＮＭＲ分光（Ｖａｒｉａｎ  ５００ＭＨｚ  ＮＭＲ分光計）によって分析され、精製された化合物は、１Ｄおよび２Ｄ、１Ｈ  ＮＭＲ実験および１３Ｃ  ＮＭＲ実験を併用して特徴付けられた。構造証明は、分子量を決定するための低解像度質量分光測定法、物質の組成物を決定するための高解像度質量分光測定法（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣＱ  Ｉｏｎ  ｔｒａｐ）を組み合わせたこれらのＮＭＲ技術を使用して得られた。
【実施例５】
【０２６６】
薬物動態研究
薬物動態研究は、以下のプロトコルに従って実行した：血漿試料は、アセトニトリル沈殿を使用して処理され、ＨＰＬＣ−ＭＳまたはＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析される。ピーク領域は記録され、および未知の血漿試料におけるテスト化合物の濃度をそれぞれ校正曲線を使用して決定される。定量下限（ＬＬＱ）に加えて、アッセイの報告可能な線形範囲が決定された。例えば、成分１Ａ−１は、１ｍｇ／Ｋｇで静脈内に注入されたときにラットの血漿において５０分の半減期を有すると決定され、成分１Ａ−２は、１ｍｇ／Ｋｇで静脈内に注入されたときにラットの血漿において７０分の半減期を有すると決定され、成分２Ａ−１は、１ｍｇ／Ｋｇで静脈内に注入されたときにラットの血漿において１８０分の半減期を有するために決定された。しかし、使用された実験的条件は、成分２Ａ−２における半リフトを検知しなかった。
【実施例６】
【０２６７】
アミロイドβオリゴマー形成阻害アッセイ
アミロイドβ４２オリゴマー形成は、マルチウェルフォーマットにおいて容易に分析されることができ、および可溶性高分子量（>２０ｋＤａ）オリゴマーの形成をブロックするテスト化合物の能力を決定するために使用されることができる。例えば、Ｈａｒｒｙ  ＬｅＶｉｎｅ  ＩＩＩ，「Ｂｉｏｔｉｎ−ａｖｉｄｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  β−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３５６（２００６）２６５２〜７２に記載されたアッセイを参照。
【０２６８】
５０ｍＭのＮａＰｉ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、および０．０２％（ｗ／ｖ）ＮａＮ３ｐＨ７．５内の異なる濃度のテスト化合物１００μＬは、ＤＭＳＯにおいて２μＬの新たなＨＦＩＰ（１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノール）−解重合２．５μｇ／ｍｌバイオ−アミロイドβ４２を含有し、５０ｎｇ／ｍｌ（１１ｎＭ）ペプチドおよび２％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯの総濃度を与える９６−ウェルプレートのウェルに加えた。室温で３０分後、５０μＬ一定分量は、ＮＡ／ＳＡ−ＨＲＰ（ニュートラアビジン／二次抗体およびストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ）単一サイトアッセイプレートに転写された。テトラメチルベンジジン／Ｈ２Ｏ２基質溶液の１００μＬが加えられ、およびプレートは、アッセイ中のバイオ−アミロイドβ４２ペプチドの濃度によって、２〜３０分間室温で保温培養される。ＯＤ４５０ｎｍは、１％（ｖ／ｖ）Ｈ２ＳＯ４の１００μＬとの反応を停止後、Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  ＨＴプレート上で決定される。可溶性高分子量（>２０ｋＤａ）オリゴマーの形成をブロックするためのテスト化合物の能力は、形成されたバイオ−アミロイドβ４２ペプチドの濃度によって決定される。同文献参照。
【０２６９】
このアッセイに従うと、分画１Ａはアミロイドβオリゴマーの形成を阻害しない。従って、分画１Ａは、オリゴマー結合を予防するためニューロン受容体に直接作用することによって、またはアミロイドβオリゴマーを分解されることによって、ニューロンと結合するアミロイドβオリゴマーを阻害するようである。
【実施例７】
【０２７０】
小分子アミロイドβオリゴマーブロッカーを検知するための一次ニューロンに基づいた機能的スクリーニングアッセイ
生体外で少なくとも３週間成長した一次ラットニューロンが、このスクリーニングアッセイのための基準として選ばれた。これらのニューロンは、成熟した脳においてニューロンの特徴的なシナプスタンパク質の総数を発現し、活性依存性電気シグナリングの複合ネットワークを呈する。このような培養におけるニューロンおよびグリアは、完全な脳回路により優れた記録を呈する分子シグナリングネットワークを有し、この理由において学習および記憶におけるモデルシステムとして２０年以上使用された（例えば、Ｋａｅｃｈ  Ｓ，Ｂａｎｋｅｒ  Ｇ．Ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｎｅｕｒｏｎｓ．Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ．２００６；１（５）：２４０６〜１５．Ｅｐｕｂ  ２００７  Ｊａｎ  １１；  Ｓｅｅ  ａｌｓｏ  Ｃｒａｉｇ  ＡＭ，Ｇｒａｆ  ＥＲ，Ｌｉｎｈｏｆｆ  ＭＷ．Ｈｏｗ  ｔｏ  ｂｕｉｌｄ  ａ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｓｙｎａｐｓｅ：  ｃｌｕｅｓ  ｆｒｏｍ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００６  Ｊａｎ；２９（１）：８〜２０．Ｅｐｕｂ  ２００５  Ｄｅｃ  ７．Ｒｅｖｉｅｗ参照）。急性型または器官型の脳スライスのようなより複雑なシステムは非常に有用であるが、高スループットスクリーニングに従わない。不死化または変換されたニューロン細胞株は、高スループットスクリーニングに従うが、一次ニューロン培養の電子生理的状態に依存するシグナリングを繰り返さず、疾患状態の最も初期の症状の間、オリゴマーによって生じるこのシグナリングにおいて微妙な変更を適切にモデル化できそうにない（例えば、Ｇｏｒｔｚ  Ｐ，Ｆｌｅｉｓｃｈｅｒ  Ｗ，Ｒｏｓｅｎｂａｕｍ  Ｃ，Ｏｔｔｏ  Ｆ，Ｓｉｅｂｌｅｒ  Ｍ．Ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｎｓ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．２００４  Ａｕｇ  ２０；１０１８（１）：１８〜２５）。この理由において、一次ニューロン培養は、高スループットスクリーンで使用されるそれらの能力および生体内で発生することに対する忠実さによって選択された。
【０２７１】
還元されたホルマザンは、細胞内小胞において最初に可視された（図１Ａ）。ニューロンの実施例は、染料のエンドサイトーシスおよび不溶性紫生成物への還元の後に標識された小胞によって満たされた（スケールバー＝図１Ａにおいて２０ミクロン）。最終的なホルマザンエキソサイトーシスは生体外で成熟海馬ニューロンにおいてアミロイドβオリゴマーを経て加速された（図１Ｂ）。ニューロンの実施例顕微鏡写真は、エキソサイトーシスを介して押し出された不溶性紫染料によって覆われた。染料は、培養の水性環境において沈殿し、針状の結晶をニューロンの表面上に形成した（図１Ｂ）。エンドサイトーシス率は、アミロイドβオリゴマーの存在下で変更された。（図１Ｃ）エキソサイトーシス率は、アミロイドβオリゴマーの存在下で変更された（図１Ｄ）。
【０２７２】
シナプスおよび記憶欠損および広範囲ではない細胞死は、アルツハイマー病の最も初期のステージで優勢であるため、これらの変化を測定するアッセイは、オリゴマー活性の小分子阻害剤を発見するために使用されることができる。ＭＴＴアッセイは培養において毒性の測定として使用されることができる。黄色テトラゾリウム塩は、細胞によってエンドサイトーシスされ、エンドソーム経路において不溶性紫ホルマザンに還元される。紫ホルマザンのレベルは、培養において活発に代謝する細胞の数の反映であり、ホルマザンの数における減少は、培養における細胞死または代謝毒性の尺度として受け止められる。顕微鏡で観察される場合、紫ホルマザンは、細胞を満たす細胞内小胞において最初に見えた（図１Ａ）。時間とともに、小胞はエキソサイトーシスされ、不溶性ホルマザンとして血漿膜の外表面に形成された針状結晶として沈殿されたホルマザンは、水性培地環境に曝された（図１Ｂ）。細胞は還元されたホルマザンのエキソサイトーシス率を選択的に加速することでアミロイドβオリゴマーの致死下のレベルに応答し、その一方で、エキソサイトーシス率を影響しないままであった。それは生体外における成熟した一次ニューロンにおいて示されることができ、自動顕微鏡検査および画像処理を経てこれらの形態学的シフトは定量化されることができる。培養ウェルへのテトラゾリウム塩を付加した後の任意の時点で、媒体処理された細胞は、図１Ａのそれらの外観を有し、その一方で、アミロイドβオリゴマー処理された細胞は図１Ｂのそれらの外観を有した。これらの状況下では、還元されたホルマザンの総量において全体の変化はなく、単にその形態におけるシフトがあった。このアッセイは、細胞死を引き起こさない低レベルのオリゴマーに対して敏感である。
【０２７３】
証拠は、膜輸送によって伝達されるニューロン表層受容体発現においてアミロイドβオリゴマーによって媒介される還元が、シナプス可塑性（ＬＴＰ）およびこのような学習および記憶の電子生理的測定のオリゴマー阻害の根拠であることを示唆している（Ｋａｍｅｎｅｔｚ  Ｆ，Ｔｏｍｉｔａ  Ｔ，Ｈｓｉｅｈ  Ｈ，Ｓｅａｂｒｏｏｋ  Ｇ，Ｂｏｒｃｈｅｌｔ  Ｄ，Ｉｗａｔｓｕｂｏ  Ｔ，Ｓｉｓｏｄｉａ  Ｓ，Ｍａｌｉｎｏｗ  Ｒ．ＡＰＰ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ａｎｄ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｎｅｕｒｏｎ．２００３  Ｍａｒ  ２７；３７（６）：９２５〜３７；およびＨｓｉｅｈ  Ｈ，Ｂｏｅｈｍ  Ｊ，Ｓａｔｏ  Ｃ，Ｉｗａｔｓｕｂｏ  Ｔ，Ｔｏｍｉｔａ  Ｔ，Ｓｉｓｏｄｉａ  Ｓ，Ｍａｌｉｎｏｗ  Ｒ．ＡＭＰＡＲ  ｒｅｍｏｖａｌ  ｕｎｄｅｒｌｉｅｓ  Ａｂｅｔａ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｓｐｉｎｅ  ｌｏｓｓ．Ｎｅｕｒｏｎ．２００６  Ｄｅｃ  ７；５２（５）：８３１〜４３を参照）。ホルマザン形態的シフトを経てオリゴマーによって誘発される膜輸送率の変化を測定することは、生体内齧歯動物において低アミロイドβが一様にする［Ｈｏｎｇ  ＨＳ，Ｒａｎａ  Ｓ，Ｂａｒｒｉｇａｎ  Ｌ，Ｓｈｉ  Ａ，Ｚｈａｎｇ  Ｙ，Ｚｈｏｕ  Ｆ，Ｊｉｎ  ＬＷ，Ｈｕａ  ＤＨ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｗｉｔｈ  ａ  ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ  ｐｙｒｏｎｅ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００９  Ｆｅｂ；１０８（４）：１０９７〜１１０８］アミロイドβオリゴマーブロッキング薬物を発見するために細胞株において使用された［Ｍａｅｚａｗａ  Ｉ，Ｈｏｎｇ  ＨＳ，Ｗｕ  ＨＣ，Ｂａｔｔｉｎａ  ＳＫ，Ｒａｎａ  Ｓ，Ｉｗａｍｏｔｏ  Ｔ，Ｒａｄｋｅ  ＧＡ，Ｐｅｔｔｅｒｓｓｏｎ  Ｅ，Ｍａｒｔｉｎ  ＧＭ，Ｈｕａ  ＤＨ，Ｊｉｎ  ＬＷ．Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ  ｐｙｒｏｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００６  Ｊｕｌ；９８（１）：５７−６７；Ｌｉｕ  Ｙ，Ｓｃｈｕｂｅｒｔ  Ｄ．Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ３−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ（ＭＴＴ）ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ＭＴＴ  ｆｏｒｍａｚａｎ  ｅｘｏｃｙｔｏｓｉｓ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１９９７  Ｄｅｃ；６９（６）：２２８５−９３；  Ｌｉｕ  Ｙ，Ｄａｒｇｕｓｃｈ  Ｒ，Ｂａｎｈ  Ｃ，Ｍｉｌｌｅｒ  ＣＡ，Ｓｃｈｕｂｅｒｔ  Ｄ．Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００４  Ｎｏｖ；９１（３）：６４８〜５６；  Ｌｉｕ  Ｙ，Ｓｃｈｕｂｅｒｔ  Ｄ．Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ���ｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ．Ｃｕｒｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｓ．２００６  Ａｐｒ；３（２）：１２９〜３５；Ｒａｎａ  Ｓ，Ｈｏｎｇ  ＨＳ，Ｂａｒｒｉｇａｎ  Ｌ，Ｊｉｎ  ＬＷ，Ｈｕａ  ＤＨ．Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ  ｏｆ  ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ  ｐｙｒｏｎｅｓ  ａｎｄ  ｐｙｒｉｄｉｎｏｎｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａ  ｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ＭＣ６５  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ．Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ．２００９  Ｆｅｂ  １；１９（３）：６７０〜４．Ｅｐｕｂ  ２００８  Ｄｅｃ  ２４；およびＨｏｎｇ  ＨＳ，Ｍａｅｚａｗａ  Ｉ，Ｂｕｄａｍａｇｕｎｔａ  Ｍ，Ｒａｎａ  Ｓ，Ｓｈｉ  Ａ，Ｖａｓｓａｒ  Ｒ，Ｌｉｕ  Ｒ，Ｌａｍ  ＫＳ，Ｃｈｅｎｇ  ＲＨ，Ｈｕａ  ＤＨ，Ｖｏｓｓ  ＪＣ，Ｊｉｎ  ＬＷ．Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ａｎｔｉ−Ａ  ｂｅｔａ  ｆｌｕｏｒｅｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｎａｌｏｇｓ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｉｍａｇｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ．２００８  Ｎｏｖ  １８．（Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ）］。［ＨＯＮＧ  ＨＳ，Ｒａｎａ  Ｓ，Ｂａｒｒｉｇａｎ  Ｌ，Ｓｈｉ  Ａ，Ｚｈａｎｇ  Ｙ，Ｚｈｏｕ  Ｆ，Ｊｉｎ  ＬＷおよびＨｕａ  ＤＨ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｗｉｔｈ  ａ  ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ  ｐｙｒｏｎｅ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００９  Ｆｅｂ；１０８８４９：１０９７−１１０８］。
【０２７４】
エキソサイトーシスアッセイは、生体外で３週間成長した成熟一次ニューロン培養の使用に適応された。アミロイドβオリゴマーは、還元された紫ホルマザンによって満たされた細胞内小胞（斑点）の量における用量依存性の減少を引き起こし（図２Ａ、正方形；３μＭ用量は図２Ｃにおける画像に対応する）、それはＣｅｌｌｏｍｉｃｓ  ＶＴＩ自動顕微鏡システムを使用する画像処理を介して測定された。アミロイドβオリゴマーの量を増加させることは、結局、明白な毒性をもたらした。このように、神経刺激性アミロイドβオリゴマーの濃度は、細胞死を引き起こすよりもかなり低かった。この減少は、抗アミロイドβモノクローナル抗体６Ｅ１０（ＩｇＧ）の化学量論的量を、オリゴマーを加える前に培養に加えることによってブロックできる（図２Ａ、円；この円は図２Ｄの画像に対応する；単独の抗体［下向き三角形］はニューロンに作用しない）。糖アルコールｓｃｙｌｌｏ−イノシトール（ＡＺＤ−１０３）、ｎＡＣｈＲアンタゴニストヘキサメソニウム臭化物、およびＮＭＤＡＲアンタゴニストＭＫ−８０１を含む、アミロイドβオリゴマーの効果をブロックすることが報告されたいくつかの化合物がテストされ、いずれも活性ではなかった（Ｆｅｎｉｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，’０７，Ｃａｌａｂｒｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，’０６，ＬｅＣｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，’０７）。
【０２７５】
アッセイは、媒体とアミロイドβオリゴマー処理されたニューロンとの間に統計学的に有意の２−フォールド分離を通常達成すること（スチューデントｔ検定、不当分散）、化合物フォーマティングおよびアッセイ・プレート・スタンピングのための自動液体ハンドリングロボットを有する３８４−ウェル・マイクロタイタ・プレートにおける実行のために最適化された。化合物は、まずニューロンに加えられ、それからオリゴマーが加えられた。このように構成されるとき、アッセイは、オリゴマーの破壊、ニューロンへのオリゴマー結合の阻害、またはオリゴマー結合によって開始される作用のシグナル形質導入メカニズムの反作用を介して作用する化合物を検知することが可能であった。
【０２７６】
化合物は、それらが膜輸送においてアミロイドβによって媒介される変化を著しくブロックするが、単独で投与されたときに膜輸送に著しく作用しない場合、活性であるとみなされた。一例は図２Ｂに示されており、ＣＴ０１０９は、７μＭのＥＣ５０による膜輸送でのオリゴマー効果を阻害する。
【０２７７】
ＣＴ０１０９は、４−（３−（４−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）ブチル）−２−メトキシフェノールであり、その構造は、以下のとおりである。
【０２７８】
【化４８】
2014511373.tif 000051
【０２７９】
図２Ａは細胞内ホルマザン充填小胞（斑点）の用量依存性の減少が、エキソサイトーシス（正方形）のアミロイドβ４２オリゴマー処理加速によって引き起こされたことを示す。オリゴマー効果は、抗アミロイドβＩｇＧ（円および上向き三角形；円はＩｇＧの化学量論的量、つまりアミロイドβの３μＭおよびＩｇＧの１．５μＭを指す；上向き三角形は準化学量論的ＩｇＧ、つまりアミロイドβの３μＭおよびＩｇＧの０．５μＭを指す）によってブロックされる。ＩｇＧ自体（下向き三角形）は作用しない。図２Ｂは膜輸送に作用するオリゴマーを阻害するＣＴ０１０９を示す。図２Ｃはオリゴマー膜輸送効果を示す生体外での２１ＤＩＶ海馬ニューロンの代表的な顕微鏡写真を示し（図２Ａにおいてデータポイント３μＭに対応する）、および図２Ｄは抗アミロイドβ抗体（図２Ａの円に対応）による遮断を示す。データは３つの実験の平均であった。スケールバー＝図２Ｄにおいて２０ミクロン。
【０２８０】
図１０に示されるように、ＣＴ０１０９およびＣＴ００９３は、予防（図１０Ｄ）および治療プロトコル（図１０Ｅ）の両方に有効であり、ここで２つの構造上区別可能なシリーズ（ＣＴ０１０９およびＣＴ００９３）からの有効な小分子の上昇用量はオリゴマー効果を停止し、培養は、媒体処理された培養のように見える（図１０Ａ−Ｃにおける顕微鏡写真の上方パネル）。分子はまた、オリゴマー添加前または添加後に存在したかにかかわらず、膜輸送のオリゴマー効果を防止でき、両方の薬物候補のＥＣ５０は、それぞれグラフの左下および右下に示されるように、添加の順序にかかわらず、同様に見える。これは、これらの薬物およびそれらのターゲットは、既存の欠損の予防および治療の両方に有効である可能性を示唆している。
【実施例８】
【０２８１】
恐怖条件付けアッセイ
ＣＴ０１０９およびＣＴ００９３は、恐怖条件付けとして知られる記憶依存行動タスクの動物モデルにおいてテストされた。研究プロトコルは、発表されたプロトコルに基づいて設計された（例えば、Ｐｕｚｚｏ  Ｄ，Ｐｒｉｖｉｔｅｒａ  Ｌ，Ｌｅｚｎｉｋ  Ｅ，Ｆａ  Ｍ，Ｓｔａｎｉｓｚｅｗｓｋｉ  Ａ，Ｐａｌｍｅｒｉ  Ａ，Ａｒａｎｃｉｏ  Ｏ．Ｐｉｃｏｍｏｌａｒ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ｉｎ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００８  Ｄｅｃ  ３１；２８（５３）：１４５３７〜４５を参照）。文脈記憶の形成は、海馬のような内側側頭葉構造の完全性によるものである。このアッセイにおいて、特定の顕著な文脈関係（条件つきの刺激；ＣＳ）が嫌悪する事象に関連すること、この場合においては穏やかな足へのショック（無条件刺激、ＵＳ）を記憶するようにネズミを訓練した。同じ文脈に戻されるとき、良好な学習を示す動物は、すくみ行動の増加を示す。このすくみは、新規の文脈においてはないものである。文脈において増加されたすくみは、動物における強い海馬依存性記憶形成を示す。恐怖条件付けにおいてテストされた記憶は、可溶性アミロイドβの上昇に敏感である。図３は、媒体投与（「ａ」で標識されている棒）と比較して、動物がテストされてから２４後に記憶欠損において生じるトレーニングの間のアミロイドβオリゴマーの投与の結果（「ｂ」で標識されている棒）を示す。ＣＴ０１０９およびＣＴ００９３は、膜輸送に対するアミロイドβオリゴマー媒介の効果を止めることに対して有効であった（図３）。アミロイドβオリゴマー投与の前に動物に投与されると、ＣＴ０１０９およびＣＴ００９３は、２ｐｍｏｌ用量で記憶におけるオリゴマー効果を完全にブロックした（図３、［ｃ］および「ｄ」で標識された棒）。この行動有効性は、膜輸送アッセイが、どの化合物がオリゴマーによって生じる行動記憶喪失を治療する際に有効であるかを予測できることを証明する。記憶における恐怖条件モデルは本明細書において記載されているように実行された。
【０２８２】
図３は、文脈的恐怖条件付け記憶タスクにおいて、媒体（ｐ<０．０５）に対してアミロイドβが記憶形成において著しく欠損を生成することを示している。図３は、ＣＴ０１０９＋アミロイドβ（２００ｎＭ）およびＣＴ００９３＋アミロイドβ（２００ｎＭ）の２ｐｍｏｌ用量が、記憶におけるアミロイドβの効果を完全にブロックしたことを示す（ｐ<０．０５、一方向分散分析、ボンフェローニ補正を有する事後比較）。化合物単独での効果は観察されなかった（データに示されていない）。逆行動変化はいかなる用量でも観察されなかった。
【実施例９】
【０２８３】
ＣＴ００９３活性立体異性体の特徴付け
セクレターゼ阻害剤のトライアルからの臨床データでは、全アミロイドβタンパク質レベルを低下させるように作用する薬物は、おそらくアミロイドβモノマーが正常認知のために必要とされ得るので、アルツハイマー病患者において臨床上有効であり得ないことを示唆している（Ｌ．Ａ．Ｈｙｄｅ，Ｒ．Ａ．Ｄｅｌ  Ｖｅｃｃｈｉｏ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｒｃｋ  Ｒｅｓ．Ｌａｂｓ，Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ，ＮＪ．Ｃｈｒｏｎｉｃ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  γ−ｓｅｃｒｅｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＳＣＨ  １３７５９７５  ｔｏ  ｐｏｓｔ−ｐｌａｑｕｅ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ＣＲＮＤ８−ＡＰＰｓｗｅ／ｉｎｄ（ＴｇＣＲＮＤ８）ｍｉｃｅ  ｄｒａｍａｔｉｃａｌｌｙ  ｒｅｄｕｃｅｄ  Ａ  ｂｅｔａ，ｈａｌｔｅｄ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｌａｑｕｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｗａｓ  ｗｅｌｌ  ｔｏｌｅｒａｔｅｄ．２０１０  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  ６５０．１６を参照）。排他的に病理学的種、すなわちアミロイドβ−オリゴマーの効果をブロックする薬物の開発は、良好な治療ターゲットであり得る。
【０２８４】
ＣＴ００９３は、アミロイドβ１−４２−オリゴマーとシナプスとの結合を阻害し、アミロイドβ−オリゴマー誘導膜輸送変化および生体外のシナプス欠損を完全にブロックする。ＣＴ００９３はまた、生体内の急性アルツハイマー病のマウスモデルにおいてオリゴマー誘導記憶欠損を完全にブロックする。ＮＭＲスペクトルは、オリジナルのＣＴ００９３親化合物が、４つの立体異性体の混合物であったことを示した。これらの構造を分割するために、ＣＴ００９３は、グラムスケールで逆相分取ＨＰＬＣ分離に供され、３つの精製された化合物を回収した。ＣＴ１２９６（４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，３−ジエニル）ヘプタン−２−オール）およびＣＴ１２９７（４−（イソブチルアミノ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプタン−２−オール）は、９８％純度で単離したが、それぞれ同じ分子量のジアステレオマーを含有していた。第３のＣＴ１２９８は７０％純度であったが、化合物の混合物を含有していた。ＣＴ１２９６およびＣＴ１２９７は、オリジナルのＣＴ００９３構造に似た類縁体を示す。高純度のジアステレオ異性体はまた、固定相カラムを用いるキラルクロマトグラフィーによって単離できる。単離された化合物は、オリゴマー誘導膜輸送欠損を測定する一次アッセイにてスクリーニングされた。有効な化合物は、生体外の成熟一次ニューロンにおける膜輸送割合のオリゴマー誘導欠損をブロックする（２１ＤＩＶ）、高い阻害率を生じる。ＣＴ０１２９６は、有効性はわずかに低かったが（図４）、親ＣＴ００９３と同様のＥＣ５０を有していた。ＣＴ１２９６およびＣＴ１２９７の追加の効果は、親化合物ＣＴ００９３の高い有効度の主要因であり得る。ＣＴ０１２９７および混合物ＣＴ０１２９８の両方は、親ＣＴ００９３よりも効力は顕著に低かった。
【０２８５】
合成経路は、別個のジアステレオマーとして仮定のＣＴ０１２９６／ＣＴ０１２９７構造とともに、オリジナルのＣＴ００９３構造の両方にアクセスするように設計されている。
【０２８６】
【表２】
2014511373.tif 000052
【０２８７】
オリゴマー効果を阻害する化合物は両方とも直ちにシナプスの持続性阻害を改善し、認知機能を改善するはずであり、結果としてオリゴマー効果としてのスパインの再成長がブロックされるというオリゴマーの仮定を保持する（Ｇ．Ａ  Ｋｒａｆｆｔ  ａｎｄ  Ｗ．Ｌ．Ｋｌｅｉｎ．ＡＤＤＬｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｗｅｂ  ｔｈａｔ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ‘ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２０１０）５９：２３０〜４２．）。オリゴマーを培養に添加する前または添加した後に、添加される場合の化合物の活性を、オリゴマー効果をブロックする際の有効性について比較した。結果は、ＣＴ００９３が、アミロイドβオリゴマーの添加の前（予防フォーマット）または添加後（治療フォーマット）に添加されるかどうかにかかわらず等しく有効であることを示すので、ニューロン機能におけるアミロイドβ誘導欠陥を治療するのに有効となる。
【０２８８】
【表３】
2014511373.tif 000053
【０２８９】
【表４】
2014511373.tif 000054
2014511373.tif 000055
【０２９０】
１  ＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）によって決定されるとおり。２  膜輸送アッセイにおける相対活性
【０２９１】
用量応答実験は、ＣＴ００９３の複数の濃度の存在下でアミロイドβを用いて行ったが、結果としてＣＴ００９３とアミロイドβとの間の競合相互作用を示すアミロイドβＥＣ５０の右方シフトが生じた。競合曲線のシルド分析は、１と区別できない傾きを有する線形関係および０．５７μＭの計算された阻害定数を与える。このマイクロモル以下の作用強度は、Ｃｈｅｎ−Ｐｒｕｓｏｆｆ関係を用いて同一出願人の出願に報告されている値と一致しており、競合メカニズムは、本出願人の化合物クラスが、より強力なアミロイドβリガンド、例えばヒトＡＤ脳に見られるようなリガンドに対してより強力であるという見解を支持する。
【０２９２】
ＣＴ００９３の単離された立体異性体の相対有効性は、一次スクリーニングアッセイおよび決定されたラットの薬物動態学的特性において実証されている。ＣＴ１２９６は、親化合物の作用強度を維持したが、いくぶん有効性が低くなった一方で、ＣＴ１２９７およびＣＴ１２９８は、親よりもほぼ２倍低い強度であった。ＣＴ１２９７は、血漿中のＣＴ１２９６よりも長い半減期を有する。これらの化合物の、輸送に対するアミロイドβオリゴマーの効果を反転させる能力は、ニューロン機能を保存することによってアルツハイマー病の疾患修飾治療の治療上の目的を支持する。
【実施例１０】
【０２９３】
行動効力
ＣＴ００９３は、月齢９ヶ月の雄Ｓｗｅ／Ｌｄｎマウスにおける欠損を反転させる能力について、浸透圧ミニポンプ方法を介して１および１０ｍｇ／ｋｇ／日でのパイロット研究にてテストされた。
【０２９４】
遺伝子導入マウス（赤）は、非遺伝子導入媒体処理された動物（青）よりも、学習３日目において顕著に悪化したが（ＡＮＯＶＡによって）、プローブトライアルではそうではなかった（図９）。
【０２９５】
１０ｍｇ／ｋｇ／日のＣＴ００９３の皮下投与（灰色の四角形および灰色実線および黒塗り棒に示される）は、５４０ｎＭの脳濃度に到達した（図９）。この濃度は、テストの第２および第４日目に遺伝子導入性能を顕著に改善し、記憶のプローブテストにおいてもそのような傾向にある（ｔ−検定による）。
【０２９６】
負の行動事象は研究の間に認められなかった。ＣＴ０１０９と同様に、ＣＴ００９３は、ＡＤの遺伝子導入モデルにおける認知性能を改善でき、構築された認知欠損を反転できる。この効力は、他の公開されている治療よりも短期間の治療期間で見られる。ＣＴ０１０９およびＣＴ００９３の両方の、これらマウスモデルにおけるアミロイドβ誘導記憶欠損を救出する能力は、実行可能な臨床候補の開発に向かう顕著な概念実証の道しるべである。
【実施例１１】
【０２９７】
ジアステレオマーの混合物の調製
【化４９】
2014511373.tif 000056
【０２９８】
ツルメロン（２１７ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）およびイソブチルアミン（１５０μＬ，１．５０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４ｍＬ）の溶液を、ＴｉＣｌ４（ＤＣＭ中の１Ｍ，２．００ｍＬ，２．０ｍｍｏｌ）にて−７８℃で処理した。混合物を、−７８℃で２時間攪拌した。反応混合物に、ＮａＢＨ４（２００ｍｇ）を添加した。得られた混合物を、０℃で３０分間かけて加温した。反応を酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。有機相を、分離し、乾燥し、濃縮した。
【０２９９】
残差を分取ＨＰＬＣによって精製し、標題化合物を得た（１４０ｍｇ，５１％）。ＬＣ−ＭＳ：２７４（Ｍ＋１）１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．４５（ｓ，１Ｈ），７．２６−６．９９（ｍ，４Ｈ），５．１３−５．０８（ｍ，１Ｈ），３．７６−３．７１（ｍ，１／２Ｈ），３．３６−３．３２（ｍ，１／２Ｈ），２．７６−２．３７（ｍ，２Ｈ），２．３１−２．２９（ｍ，２Ｈ），１．９５−１．７５（ｍ，５Ｈ），１．６０−１．１５（ｍ，６Ｈ），０．９９−０．９３（ｍ，９Ｈ）。
【実施例１２】
【０３００】
ジアステレオ異性体の分離
【化５０】
2014511373.tif 000057
【０３０１】
上記化合物（２９０ｍｇ）のジアステレオマーの混合物を、ＣｈｉｒａｌＣｅｌ  ＯＤ−Ｈカラム（ＣＯ２／エタノール／ＤＥＡ＝９５／５／０．１（ｖ／ｖ／ｖ））にて分離し、２つの分画を得た。両方の分画を、酢酸エチル中の１Ｎ  ＨＣｌで処理し、対応する塩を得た：ＡＢ３４９４およびＡＢ３４９５。
【０３０２】
【化５１】
2014511373.tif 000058
【０３０３】
ジアステレオマー１（ピーク１，６２ｍｇ）：ＬＣ−ＭＳ：２７４（Ｍ＋１）１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．０８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），５．２６（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），２．８４（ｂｒ  ｍ，１Ｈ），２．５６（ｍ，３Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ），２．１１−２．０７（ｍ，１Ｈ），１．７３（ｓ，３Ｈ），１．５７（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，３Ｈ），１．１７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．９１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．８９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
【０３０４】
【化５２】
2014511373.tif 000059
【０３０５】
ジアステレオマー２（ピーク２，１０１ｍｇ）ＬＣ−ＭＳ：２７４（Ｍ＋１）１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．１９−９．１７（ｂｒ  ｍ，１Ｈ），７．１１（ｓ，４Ｈ），５．３０（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），２．７８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），２．６４−２．４８（ｍ，３Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），１．３０（ｓ，３Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．０４（ｄ，Ｊ＝６．４，１Ｈ），０．９７（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ）。
【０３０６】
本発明が、その特定の好適なバージョンを参照して非常に詳細に記載されているにもかかわらず、他のバージョンも可能である。従って、本発明の趣旨および範囲は、本明細書において記載された好適なバージョンの記載に限られてはならない。
【０３０７】
要約および図面を含む本明細書において開示されたすべての特徴、および開示された任意の方法または手順におけるすべての工程は、このような特徴および／または工程の少なくともいくつかが互いに矛盾する場合での組み合わせを除いて、任意の組み合わせにおいて組み込まれることがある。要約および図面を含む本明細書に開示された各特徴は、明確に述べられない限り、同じ、等しいまたは類似の目的を担う代わりの特徴と置き換えられることができる。このように、明確に述べられない限り、開示される各特徴は、等しいまたは類似の一連の一般的な特徴のうち１つの実施例のみである。本発明の様々な変更態様は、本明細書に記載されているそれらに加えて、前述の記載から当業者において明らかである。このような変更態様は、添付の特許請求の範囲に含まれる。
【０３０８】
本出願における各引用文献は、その全体において参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
2014511373.tif 000078
【図２】
2014511373.tif 000079
【図３】
2014511373.tif 000080
【図４】
2014511373.tif 000081
【図５】
2014511373.tif 000082
【図６】
2014511373.tif 000083
【図７】
2014511373.tif 000084
【図８】
2014511373.tif 000085
【図９】
2014511373.tif 000086
【図１０】
2014511373.tif 000087
【国際調査報告】
2014511373.tif 000088