(57)【要約】  ポロ−ボックスドメイン（ＰＢＤ）を介してポロ様キナーゼと結合する新規な化合物を提供する。ある特定の実施態様では、新規な化合物はＰＥＧ化ペプチドである。本発明のＰＥＧ化ペプチドは高いＰＢＤ−結合親和性を明示する。ある特定の実施態様では、ＰＥＧ化ペプチドは全細胞系においても活性を達成した。本発明は、ポロ−ボックスドメインを介してポロ様ドメインと結合して、減少したアニオン電荷を有する化合物も提供する。ＰＥＧ化ペプチドを設計及び／又は合成する方法並びにその使用方法を更に提供する。本発明はこの化合物の使用方法及びこの化合物の合成方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１３２】
2014511877.tif 000171
（式中の、ＰＥＧはポリエチレングリコール部分又はその誘導体であり；
Ｚは、Ｏ、（Ｃ１〜６）アルキレン、又はＣＹ２であり、ここでＹはそれぞれの場合に独立して、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒであり；
ｎは、０、１又は２であり；
Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、Ｈ又は（Ｃ１〜６）アルキル−カルボニルであり；
Ｒ２は、Ｈ又はＲ９Ｏ−であり；
Ｒ９は、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル−カルボニル、又は（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル−カルボニル、Ｘ５−Ｏ−（Ｃ１〜６）アルキル、又はグリシン部分であり；
Ｒ３は、Ｈ又は（Ｘ４Ｏ）２Ｐ（Ｏ）−であり；
Ｒ４は、Ｈ、アシル、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルキル−カーボネート、又は（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−であり；
Ｘ１は、Ｈ又は（Ｃ１〜６）アルキルであるか；又はＸ１及びＸ２はそれらが連結している結合と共に５〜８員の複素環を形成し；
Ｘ２は、結合、又は（Ｃ１〜６）アルキレンであるか；又はＸ１及びＸ２はそれらが連結している結合と共に５〜８員のヘテロシクリル環を形成し；
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ’、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ’−（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｒ'は、Ｈ、アミノ−Ｏ−、（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−、（Ｃ２〜６）アルケニル、シクロアルキル、複素環、アリール−（Ｃ０〜６）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ０〜６）アルキルであり、ここで当該シクロアルキル、複素環、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、ヒドロスリフィド、アルキル、アルコキシ、アルケニル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、エステル、アミン、アミド、カルボキシル、及びアルキル−カルボニル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で置換されていてもよく；或いはＲ'は１つのＸ４基と結合して大環状環を形成し；
Ｘ４は、それぞれの場合に独立して、Ｈ、（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜２０）アルキル−Ｓｉ−、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ０〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜６）アルキル、又はアミノ（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここでＸ４位に現れるそれぞれのアルキル部分は更に１つ又はそれ以上のヒドロキシル又はアルコキシ基で置換されていてもよく；或いは１つのＸ４基はＲ'と結合して大環状環を形成し；
Ｘ５は、（Ｃ１〜６）アルアルキル、―Ｎ＝Ｒ１０であり、ここでＲ１０は糖成分から誘導され；
ＡＡ１は、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、及びＴｙｒの群から選ばれるアミノ酸部分であり；そして
ＡＡ２は、非存在、又はＨｉｓ、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、及びＴｙｒの群から選ばれるアミノ酸部分であり；
ここで、ＡＡ１又はＡＡ２に関するそれぞれのアミノ酸部分は、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜１０）アルキル、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、アリール−（Ｃ１〜１０）アルコキシ、アリール−（Ｃ１〜１０）アルコキシ、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−Ｓ−、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、ヘテロアリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−で置換されていてもよく、そしてそれぞれのアリール又はヘテロアリール部分は、アリール、ヘテロアリール、アルケニル、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アミン、アミド、カルボキシル、エステル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で置換されていてもよい）
の化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、或いは立体異性体。
【請求項２】
ＡＡ１がＬｅｕであり、そしてＡＡ２がＨｉｓ又はＧｌｎであって、ＡＡ１及びＡＡ２に関するアミノ酸部分は置換されていてもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＡＡ２が置換されていてもよいＨｉｓである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
当該化合物が式（ＩＡ）：
【化１３３】
2014511877.tif 000172
（式中の、ＺはＯ、ＣＨ２、又はＣＦ２であり；
ｎは、０、１又は２であり；
Ｘ１はＨであり；
Ｘ２は結合又はＣＨ２であるか；又はＸ１及びＸ２はそれらが連結している結合と共に５員の複素環を形成し；
Ｒ２は、Ｈ又は（Ｘ４Ｏ）２Ｐ（Ｏ）−であり；
Ｒ４は、Ｈ、又は（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｒ５及びＲ６の両方はＨであるか；又はＲ５及びＲ６の一方がＨで、他方がＸ５−Ｏ−（Ｃ１〜６）アルキル又はグリシン部分であり；ここでＸ５は−Ｎ＝Ｒ９であり、そしてＲ９は糖部分から誘導され；
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ'、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ'−（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｒ'は、Ｈ、アミノ−Ｏ−、（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル、複素環、アリール−（Ｃ０〜６）アルキル、又はヘテロでアリール−（Ｃ０〜６）アルキルあり、ここで当該シクロアルキル、複素環、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、アルキル、アルコキシ、アルケニル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、エステル、アミン、アミド、カルボキシル、及びアルキルカルボニル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で置換されていてもよく；そして
Ｇは、Ｈ、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、ヒドロキシルカルボニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、アミノ（Ｃ１〜２０）アルキル、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜２０）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ１〜２０）アルキルであり、ここで、アルキル、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは１つ又はそれ以上のハロゲン、ヒドロキシル又はアルコキシ基で置換されていてもよい）
の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
ＰＥＧが、
【化１３４】
2014511877.tif 000173
であり；
Ｂが、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル、又はヒドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここでそれぞれの（Ｃ１〜６）アルキル部分は、独立して、更にアミノ又はＦ−ｍｏｃ−アミノ基で置換されていてもよく；
ｎ'が、５〜２００から選ばれる整数であり；
Ｘ１及びＸ２が、それらが連結している結合と共に５員の複素環を形成し；そして
Ｒ５及びＲ６の両方がＨである、
請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
当該化合物が式（ａ）：
【化１３５】
2014511877.tif 000174
（式中の、Ｚは、Ｏ、ＣＨ２又はＣＦ２であり；
Ｒ１は、
【化１３６】
2014511877.tif 000175
であり；
Ｂは、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル、又はヒドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここでそれぞれの（Ｃ１〜６）アルキル部分は独立して、アミノ又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよく；
ｎ'は、５〜１００から選ばれる整数であり；
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ'、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ'−（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｒ'は、Ｈ、Ｈ２ＮＯ−、（Ｃ２〜６）アルケニル、フェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、フラニル−（Ｃ０〜６）アルキル、チオフェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、Ｎ−インドリル−（Ｃ１〜６）アルキル、フルオレニル、（Ｃ３〜８）シクロアルキル、イミダゾリル、キノリニル、ピリジニル、ピリミジニル、ジオキソ−ピリミジニル、フェナントレニル、又はビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−エニルであり、ここでＲ３は、ハロゲン、（Ｃ６〜１０）アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシ、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、（Ｃ１〜６）アルコキシカルボニル、シアノ、（Ｃ６〜１０）アリール−（Ｃ１〜６）アルコキシ、ヒドロキシル（Ｃ１〜６）アルキル、トリフルオロメチル、アミノ、及びニトロの群から選ばれる１つ又はそれ以上の置換基で更に置換されていてもよく；そして
Ｇは、Ｈ、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、ヒドロキシルカルボニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、アミノ（Ｃ１〜２０）アルキル、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜２０）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ１〜２０）アルキルであり、ここでアルキル、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは１つ又はそれ以上のハロゲン、ヒドロキシル又はアルコキシ基で置換されていてもよい）
の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物若しくは立体異性体である、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｚが、Ｏ又はＣＨ２であり；
ｎ'が、５と２０の間の整数であり；
Ｂが、（Ｃ１〜６）アルキル、
【化１３７】
2014511877.tif 000176
であり；
Ｒ'−Ｘ３が、Ｒ'、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、又はＲ'−（ＣＨ２）２−Ｏ−であり；
Ｒ'が、Ｈ、Ｈ２ＮＯ−、又はフェニル−（Ｃ１〜６）アルキルであり；そして
ＧがＨである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
当該化合物が、
【化１３８】
2014511877.tif 000177
【化１３９】
2014511877.tif 000178
【化１４０】
2014511877.tif 000179
【化１４１】
2014511877.tif 000180
【化１４２】
2014511877.tif 000181
（式中の、ｎ'は、それぞれ独立して、５〜８から選ばれる）
又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、或いは立体異性体の群から選ばれる、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
当該化合物が、
【化１４３】
2014511877.tif 000182
又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、或いは立体異性体である、請求項７に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｚが、Ｏ又はＣＨ２であり；
ｎ'が、５と２０の間の整数であり；
Ｂが、（Ｃ１〜６）アルキル、又はヒドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここでそれぞれの（Ｃ１〜６）アルキルは、独立して、アミノ又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよく；
Ｒ'−Ｘ３が、Ｒ'、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、又は（ＣＨ２）２−Ｏ−であり；
Ｒ'が、Ｈ、Ｈ２ＮＯ−、又はフェニル−（Ｃ１〜６）アルキルであり；そして
Ｇが、アルケニル−（Ｃ１〜１０）アルキル、ヒドロキシカルボニル−（Ｃ１〜６）アルキル、アミノ（Ｃ１〜６）アルキル、アリール−（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜１０）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ１〜６）アルキルであり；ここでそれぞれのアルキル部分は１つ又はそれ以上のヒドロキシル又はアミノ基で更に置換されていてもよい、
請求項６に記載の化合物。
【請求項１１】
ＺがＯであり；Ｒ'−Ｘ３がＨであり；そしてＢが、メチル、
【化１４４】
2014511877.tif 000183
である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
当該化合物が、下記の構造：
【化１４５】
2014511877.tif 000184
【化１４６】
2014511877.tif 000185
【化１４７】
2014511877.tif 000186
【化１４８】
2014511877.tif 000187
【化１４９】
2014511877.tif 000188
【化１５０】
2014511877.tif 000189
【化１５１】
2014511877.tif 000190
【化１５２】
2014511877.tif 000191
【化１５３】
2014511877.tif 000192
（式中の、ｎ'は、それぞれ独立して、５〜８から選ばれる整数である）を有しているか、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物又は立体異性体である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
当該化合物が、
【化１５４】
2014511877.tif 000193
であるか、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、又は立体異性体である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１４】
ＺがＯであり；Ｒ'−Ｘ３がＨであり；そしてＢがヒドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここで（Ｃ１〜６）アルキル部分がアミノで置換されている、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１５】
当該化合物が、
【化１５５】
2014511877.tif 000194
であるか、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、又は立体異性体である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
当該化合物が、式（ｂ）：
【化１５６】
2014511877.tif 000195
（式中の、ＺはＯ又はＣＨ２であり；
Ｒ１は、
【化１５７】
2014511877.tif 000196
であり；
Ｂは、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル、又はヒドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここでそれぞれの（Ｃ１〜６）アルキル部分は独立して、アミノ基又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよく；
ｎ’は５〜１００から選ばれる整数であり；
Ｒ３は、Ｈ又は（Ｘ４Ｏ）２Ｐ（Ｏ）−であり；
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ'、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ'−（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｒ'は、Ｈ、Ｈ２ＮＯ−、（Ｃ２〜６）アルケニル、フェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、フラニル（Ｃ０〜６）アルキル、チオフェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、Ｎ−インドリル−（Ｃ１〜６）アルキル、フルオレニル、（Ｃ３〜８）シクロアルキル、イミダゾリル、キノリニル、ピリジニル、ピリミジニル、ジオキソ−ピリミジニル、フェナントレニル、又はビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−エニルであり、ここでＲ３は、ハロゲン、（Ｃ６〜１０）アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシ、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、（Ｃ１〜６）アルコキシカルボキシ、シアノ、（Ｃ６〜１０）アリール−（Ｃ１〜６）アルコキシ、ヒドロキシル（Ｃ１〜６）アルキル、トリフルオロメチル、アミノ及びニトロの群から選ばれる１つ又はそれ以上の置換基で更に置換されていてもよく；そして
一方のＸ４はＨであり、そして他方のＸ４は、（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜２０）アルキル−Ｓｉ−、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル−、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ０〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜６）アルキル、又はミノ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここでそれぞれのアルキル部分は１つ又はそれ以上のヒドロキシル又はアルコキシ基で更に置換されていてもよい）
の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物若しくは立体異性体である、請求項５に記載の化合物。
【請求項１７】
ＺがＯであり；Ｒ３が（Ｘ４Ｏ）２Ｐ（Ｏ）−であり；ｎ'が５と２０の間の整数であり；Ｂが（Ｃ１〜６）アルキル、
【化１５８】
2014511877.tif 000197
であり；Ｒ'−Ｘ３が、Ｒ'、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、又はＲ'−（ＣＨ２）２−Ｏ−であり；そしてＲ'がＨ、Ｈ２ＮＯ−、又はフェニル−（Ｃ１〜６）アルキルである、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｂがメチル、
【化１５９】
2014511877.tif 000198
であり；Ｒ'−Ｘ３がＲ'であり；そしてＲ'がＨ又は（Ｃ２〜６）アルケニルである、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
一方のＸ４がＨであり、そして他方のＸ４が（Ｃ１〜１０）アルキル、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル、アルケニル−（Ｃ１〜１０）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜１０）アルキル、（Ｃ０〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜１０）アルキル、又はアミノ（Ｃ１〜１０）アルキルであって、ここでそれぞれのアルキル部分は１つ又はそれ以上のヒドロキシ、アミノ、又はアルコキシ基で更に置換されていてもよい、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
当該化合物が下記の構造：
【化１６０】
2014511877.tif 000199
【化１６１】
2014511877.tif 000200
【化１６２】
2014511877.tif 000201
【化１６３】
2014511877.tif 000202
【化１６４】
2014511877.tif 000203
【化１６５】
2014511877.tif 000204
（式中の、それぞれのｎ'は、独立して、５〜８から選ばれる整数である）を有しているか、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物若しくは立体異性体である、請求項１９に記載の化合物。
【請求項２１】
ＺがＯであり；Ｒ３がＨであり；ｎ'が５と２０の間の整数であり；Ｂが（Ｃ１〜６）アルキル、
【化１６６】
2014511877.tif 000205
であり；Ｒ'−Ｘ３が、Ｒ'、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、又はＲ'−（ＣＨ２）２−Ｏ−であり；そしてＲ'がＨ、Ｈ２ＮＯ−、又はフェニル−（Ｃ１〜６）アルキルである、請求項１６に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｂがメチル
【化１６７】
2014511877.tif 000206
であり；Ｒ'−Ｘ３がＲ'−（ＣＨ２）２−Ｏ−であり；そしてＲ'がフェニル−（Ｃ１〜６）アルキルである、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
当該化合物が、
【化１６８】
2014511877.tif 000207
（式中の、ｎ'は５，６、７、又は８である）
又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２４】
当該化合物が、式（ｃ）：
【化１６９】
2014511877.tif 000208
（式中の、Ｚは、Ｏ、ＣＨ２、又はＣＦ２であり；
Ｒ１は、
【化１７０】
2014511877.tif 000209
であり；
Ｂは、（Ｃ１〜６）アルキル、又はヒドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここで、ここに現れるそれぞれの（Ｃ１〜６）アルキル部分は、独立して、アミノ又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよく；
ｎ'は５〜１００から選ばれる整数であり；
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ'、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又は、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｒ'は、Ｈ、アミノ−Ｏ−、（Ｃ１〜６）アルキル―Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル、複素環、アリール−（Ｃ０〜６）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ０〜６）アルキルであり、ここで当該シクロアルキル、複素環、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、アルキル、アルコキシ、アルケニル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、エステル、アミン、アミド、カルボキシル、及びアルキルカルボニル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で置換されていてもよい）： 
の化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である、請求項５に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｚが、Ｏ又はＣＨ２であり；そして
Ｒ'が、アリール−（Ｃ０〜６）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここで当該アリール又はヘテロアリール部分はアリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、アルキル、アルコキシ、アルケニル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、エステル、アミン、アミド、カルボキシル、及びアルキルカルボニル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なる置換基で置換されていてもよい、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ'が、
【化１７１】
2014511877.tif 000210
の群から選ばれる、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
当該化合物が、
【化１７２】
2014511877.tif 000211
【化１７３】
2014511877.tif 000212
【化１７４】
2014511877.tif 000213
【化１７５】
2014511877.tif 000214
（式中の、それぞれのｎ'は、独立して、５〜８から選ばれる整数である）、
の群から選ばれる化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２８】
当該化合物が式（ＩＢ）：
【化１７６】
2014511877.tif 000215
（式中の、Ｚは、Ｏ、ＣＨ２又はＣＦ２であり；
ｎは、０、１又は２であり；
Ｘ１はＨであり；そしてＸ２は結合又はＣＨ２であるか；又はＸ１及びＸ２はそれらが連結している結合と共に５員の複素環を形成し；
Ｒ３は、Ｈ又は（Ｘ４Ｏ）２Ｐ（Ｏ）−であり；
Ｒ４は、Ｈ又は（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｒ５及びＲ６は、両方がＨであるか、又はＲ５及びＲ６の一方がＨで他方がＸ５−Ｏ−（Ｃ１〜６）アルキル又はグリシン部分であり、ここでＸ５は−Ｎ＝Ｒ９であり、そしてＲ９は糖部分から誘導され；
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ'、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ'−（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｒ'は、Ｈ、アミノ−Ｏ−、（Ｃ１〜６）アルキル―Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル、複素環、アリール−（Ｃ０〜６）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ０〜６）アルキルであり、ここで当該シクロアルキル、複素環、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、アルキル、アルコキシ、アルケニル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、エステル、アミン、アミド、カルボキシル、及びアルキルカルボニル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で置換されていてもよく；
Ｘ４は、それぞれの場合に独立して、Ｈ、（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜２０）アルキル−Ｓｉ−、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ０〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜６）アルアルキル、又はアミノ（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここでＸ４位に現れるそれぞれのアルキル部分は１つ又はそれ以上のヒドロキシル又はアルコキシ基で更に置換されていてもよく；そして
Ｇは、Ｈ、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、ヒドロキシルカルボニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、アミノ（Ｃ１〜２０）アルキル、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜２０）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ１〜２０）アルキルであり、ここで、アルキル、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは１つ又はそれ以上のハロゲン、ヒドロキシル又はアルコキシ基で置換されていてもよい）：
の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは立体異性体である、請求項３に記載の化合物。
【請求項２９】
ＰＥＧが、
【化１７７】
2014511877.tif 000216
であり；
Ｂが、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル、又はヒドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここで（Ｃ１〜６）アルキル部分のそれぞれは、独立して、アミノ又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよく、
ｎ'が５〜２００から選ばれる整数であり；
Ｘ１及びＸ２が、それらが連結している結合と一緒になって５員の複素環を形成し；そして
Ｒ５及びＲ６の両方がＨである、
請求項２８に記載の化合物。
【請求項３０】
当該化合物が、式（ｄ）：
【化１７８】
2014511877.tif 000217
（式中の、Ｚは、Ｏ又はＣＨ２であり；
Ｒ１は、
【化１７９】
2014511877.tif 000218
であり；
ＢはＨ、（Ｃ１〜６）アルキル、又はヒドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここで、それぞれの（Ｃ１〜６）アルキル部分は、独立して、アミノ又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよく；
ｎ'は、５〜１００から選ばれる整数であり；
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ’、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ’−（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｒ'は、Ｈ、Ｈ２ＮＯ−、（Ｃ２〜６）アルケニル、フェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、フラニル−（Ｃ０〜６）アルキル、チオフェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、Ｎ−インドリル−（Ｃ１〜６）アルキル、フルオレニル、（Ｃ３〜８）シクロアルキル、イミダゾリル、キノリニル、ピリジニル、ピリミジニル、ジオキソ−ピリミジニル、フェナントレニル、又はビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−エニルであり、ここでＲ３は、ハロゲン、（Ｃ６〜１０）アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシ、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、（Ｃ１〜６）アルコキシカルボニル、シアノ、（Ｃ６〜１０）アリール−（Ｃ１〜６）アルコキシ、ヒドロキシル（Ｃ１〜６）アルキル、トリフルオロメチル、アミノ、及びニトロの群から選ばれる１つ又はそれ以上の置換基で更に置換されていてもよく；
Ｘ４は、それぞれの場合に独立して、Ｈ、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、又はアルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキルであり；そして
Ｇは、Ｈ、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、又はアリール−（Ｃ１〜２０）アルキルである）：
の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｒ'−Ｘ３が、Ｒ'、又はＲ'−（Ｃ１〜６）アルキルであり；そしてＲ'が、Ｈ、フェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、又はイミダゾリルであり、ここでＲ３が更に置換されていてもよい、請求項３０に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｒ'が、Ａ−１、Ａ−２、Ａ−３、Ａ−４、Ａ−５、Ａ−６、及びＡ−７の群から選ばれる、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３３】
当該化合物が、
【化１８０】
2014511877.tif 000219
【化１８１】
2014511877.tif 000220
【化１８２】
2014511877.tif 000221
（式中のｎ'は、独立して、５〜８から選ばれる整数である）の群、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体から選ばれる、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３４】
当該化合物が、
【化１８３】
2014511877.tif 000222
又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３５】
当該化合物が、式（ｅ）：
【化１８４】
2014511877.tif 000223
（式中の、ＺはＯ、ＣＨ２、又はＣＦ２であり；
Ｒ１は、
【化１８５】
2014511877.tif 000224
であり；
Ｂは、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル、又はヒドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここでそれぞれの（Ｃ１〜６）アルキル部分は、独立して、アミノ又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよく；
ｎ'は、５〜１００から選ばれる整数であり；
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ’、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ’−（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｒ'は、Ｈ、アミノ−Ｏ−、（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル、複素環、アリール−（Ｃ０〜６）アルキル、又はヘテロでアリール−（Ｃ０〜６）アルキルであり、ここで当該シクロアルキル、複素環、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、アルキル、アルコキシ、アルケニル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、エステル、アミン、アミド、カルボキシル、及びアルキルカルボニル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で置換されていてもよく；
Ｘ４は、それぞれの場合に独立して、Ｈ、（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜２０）アルキル−Ｓｉ−、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ０〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜６）アルキル、又はアミノ（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここで、Ｘ４位に現れるそれぞれのアルキル部分は１つ又はそれ以上のヒドロキシル又はアルコキシ基で更に置換されていてもよく；そして
Ｇは、Ｈ、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、ヒドロキシルカルボニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、アミノ（Ｃ１〜２０）アルキル、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜２０）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ１〜２０）アルキルであり、ここで、アルキル、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは１つ又はそれ以上のハロゲン、ヒドロキシル又はアルコキシ基で置換されていてもよい）：
の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である、請求項２８に記載の化合物。
【請求項３６】
ＺがＣＨ２であり；ＧがＨであり；そしてＸ４がＨである、請求項３１に記載の化合物３５に記載の化合物。
【請求項３７】
当該化合物が、
【化１８６】
2014511877.tif 000225
（式中の、それぞれのｎ'は独立して５〜８から選ばれる整数である）
又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である、請求項３６に記載の化合物。
【請求項３８】
ＡＡ２が置換されていてもよいＧｌｎである、請求項２に記載の化合物。
【請求項３９】
当該化合物が，式（ＩＣ）：
【化１８７】
2014511877.tif 000226
（式中の、ＺはＯ、ＣＨ２又はＣＦ２であり；
ｎは、０、１又は２であり；
Ｘ１は、Ｈであるか；又はＸ１及びＸ２はそれらが連結している結合と共に５員の複素環を形成し；
Ｘ２は、結合又はＣＨ２であるか、又はＸ１及びＸ２はそれらが連結している結合と共に５員の複素環を形成し；
Ｒ３は、Ｈ又は（Ｘ４Ｏ）２Ｐ（Ｏ）−であり；
Ｒ４は、Ｈ、又は（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ’、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ’−（Ｃ１〜６）アルキルであり；そして
Ｒ'は、Ｈ、アミノ−Ｏ−、（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル、複素環、アリール−（Ｃ０〜６）アルキル、又はヘテロでアリール−（Ｃ０〜６）アルキルあり、ここで当該シクロアルキル、複素環、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、アルキル、アルコキシ、アルケニル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、エステル、アミン、アミド、カルボキシル、及びアルキルカルボニル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で置換されていてもよい）：
の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である３８に記載の化合物。
【請求項４０】
ＰＥＧが、
【化１８８】
2014511877.tif 000227
であり；
Ｂが、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル、又はヒドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここで、それぞれの（Ｃ１〜６）アルキル部分は、独立して、アミノ又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよく；
ｎ'が、５〜２００から選ばれる整数であり；そして
Ｘ１及びＸ２が、それらが連結している結合と共に５員の複素環を形成する、請求項３９に記載の化合物。
【請求項４１】
Ｒ'が、Ｈ、Ｈ２ＮＯ−、（Ｃ２〜６）アルケニル、フェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、フラニル−（Ｃ０〜６）アルキル、チオフェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、Ｎ−インドリル−（Ｃ１〜６）アルキル、フロオレニル、（Ｃ３〜８）シクロアルキル、イミダゾリル、キノリニル、ピリジニル、ピリミジニル、ジオキソ−ピリミジニル、フェナントレニル、又はビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−エニルであり、ここで、Ｒ３は、ハロゲン、（Ｃ６〜１０）アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシ、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、（Ｃ１〜６）アルコキシカルボニル、シアノ、（Ｃ６〜１０）アリール−（Ｃ１〜６）アルコキシ、ヒドロキシル（Ｃ１〜６）アルキル、トリフルオロメチル、アミノ、及びニトロの群から選ばれる１つ又はそれ以上の置換基で更に置換されていてもよい、請求項４０に記載の化合物。
【請求項４２】
Ｒ'が、Ａ−１、Ａ−２、Ａ−３、Ａ−４、Ａ−５、Ａ−６、及びＡ−７の群から選ばれる、請求項４１に記載の化合物。
【請求項４３】
Ｘ１がＨであり；そしてＸ２がＣＨ２である、請求項３９に記載の化合物。
【請求項４４】
Ｒ'が、Ａ−１、Ａ−２、Ａ−３、Ａ−４、Ａ−５、Ａ−６、及びＡ−７の群から選ばれる、請求項４３に記載の化合物。
【請求項４５】
当該化合物が、
【化１８９】
2014511877.tif 000228
（式中の、ｎ'は独立して５〜８から選ばれる整数である）：であるか又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である、
請求項１に記載の化合物。
【請求項４６】
式（ＩＩ）：
【化１９０】
2014511877.tif 000229
（式中の、ＰＥＧはポリエチレングリコール部分又はその誘導体であり；
Ｒ１０は、Ｈ又は（Ｃ１〜６）アルキル−カルボニルであり；
Ｒ１１は、Ｈ又はＲ９Ｏ−であり；
Ｒ９は、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル−カルボニル、又は（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｒ１３−Ｘ３は、Ｒ１３、Ｒ１３−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ１３−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｒ１３−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ１３−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ１３−（Ｃ１〜６）アルキルであり；
Ｒ１３は、Ｈ、アミノ−Ｏ−、（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−、（Ｃ２〜６）アルケニル、シクロアルキル、複素環、アリール−（Ｃ０〜６）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ０〜６）アルキルであり、ここで当該シクロアルキル、複素環、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、アルキル、アルコキシ、アルケニル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、エステル、アミン、アミド、カルボキシル、及びアルキルカルボニル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なる置換基で置換されていてもよく；
Ｒ１２は、糖部分から誘導され；
ＡＡ１は、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、及びＴｙｒの群から選ばれるアミノ酸部分であり；
ＡＡ２は、非存在、又はＨｉｓ、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、及びＴｙｒの群から選ばれるアミノ酸部分であり；
ここで、ＡＡ１又はＡＡ２に関するアミノ酸部分は、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜１０）アルキル、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、アリール−（Ｃ１〜１０）アルコキシ、アリール−（Ｃ１〜１０）アルコキシ、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−Ｓ−、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、ヘテロアリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−で置換されていてもよく、そしてそれぞれのアリール又はヘテロアリール部分は、アリール、ヘテロアリール、アルケニル、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アミン、アミド、カルボキシル、エステル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で更に置換されていてもよい）：
の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体。
【請求項４７】
ＰＥＧが、
【化１９１】
2014511877.tif 000230
であり；
ｎ'が、５〜２００から選ばれる整数であり；
Ｒ１０が、Ｈであり；そして
Ｒ１１が、Ｈである、
請求項４６に記載の化合物。
【請求項４８】
Ｒ１３−Ｘ３が、Ｒ１３であり；そしてＲ１３がＨである、請求項４７に記載の化合物。
【請求項４９】
化合物が、表６に列挙された化合物の群からえらばれ、ここで５〜８から選ばれる整数である請求項４８に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体。
【請求項５０】
式（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）：
【化１９２】
2014511877.tif 000231
（式中の、Ａは、
【化１９３】
2014511877.tif 000232
であり；
ＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥのそれぞれは独立して、Ｎ又はＣＲＡ（ＲＢ）であり、ここで少なくとも１つのＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥはＮであり；
Ｘは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｍ、ＮＲＭ、ＮＲＭＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＲＭ、ＯＣ（Ｏ）、又はＣ（Ｏ）Ｏであり；
ＲＣは、
【化１９４】
2014511877.tif 000233
であり；
ＲＤは、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールであり；
ｔは、１、２、３、４、又は５であり；
それぞれのＲＡは独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよい炭素環、置換されていてもよい複素環、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールであり；
それぞれのＲＢは独立して、非存在、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよい炭素環、置換されていてもよい複素環、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールであり；
或いは任意の２つのＲＡ基は、それぞれが結合している原子と共に縮合炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール環を形成してもよく、ここでそれぞれは置換されていてもよく；
ここでそれぞれのＡは１つ又はそれ以上のＲＤで更に置換されていてもよく、ここでそれぞれのＲＤは独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２、又は３個のヘテロ原子を含有している、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール；或いはハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、オキソ、又はシアノであり；
Ｄは、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいアルコキシであり；
ＺＡは、非存在、Ｏ、又はＣＲＡ（ＲＢ）であり；
ＹＡは、
【化１９５】
2014511877.tif 000234
であり；
ＹＢは、Ｏ、又はＣＲＡＲＡであり；
それぞれのＺ１は独立して、Ｈ、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２、又は３個のヘテロ原子を含有している、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールであり；
それぞれのＺ２は独立して、Ｈ、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２、又は３個のヘテロ原子を含有している、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールであり；
或いはＺＡ、ＹＡ、Ｚ１及びそれぞれが結合している原子は置換されていてもよい複素環又は置換されていてもよいヘテロ芳香環を形成し；
それぞれのＲＮは独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいアルコキシであり；
ＲＱは、Ｈ、それぞれが置換されていてもよい、アルキル、ベンジル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はヘテロアリールであり；
それぞれのＲＭは独立して、Ｈ又は置換されていてもよいアルキルであり；
ｍは、０、１、又は２であり；そして
ｎは、０、１、２、又は３であり；
ここで、式ＩにおいてＡが
【化１９６】
2014511877.tif 000235
である場合は、−ＺＡ−ＹＡは
【化１９７】
2014511877.tif 000236
ではない）：
の化合物。
【請求項５１】
Ａが、それぞれがＲＤで置換されていてもよい、ピロリジン、ピラゾリジン、イミダゾリジン、トリアゾリジン、テトラゾリジン、ジヒドロピロール、ジヒドロピラゾール、ジヒドロトリアゾール、ピラゾール、又はトリアゾールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５２】
Ａが、
【化１９８】
2014511877.tif 000237
であり、ここでそれぞれのＡが１つ又はそれ以上のＲＤで置換されていてもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項５３】
Ａが、
【化１９９】
2014511877.tif 000238
であり、ここでそれぞれのＡが１つ又はそれ以上のＲＤで置換されていてもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項５４】
式（ＩＩＩ）：
【化２００】
2014511877.tif 000239
（式中の、Ａは、
【化２０１】
2014511877.tif 000240
であり；
ＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥのそれぞれは独立して、Ｎ又はＣＲＡ（ＲＢ）であり、ここで少なくとも１つのＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥはＮであり；
ＲＣは、
【化２０２】
2014511877.tif 000241
であり；
ＲＤは、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールであり；
ｔは、１、２、３、４、又は５であり；
それぞれのＲＡは独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよい炭素環、置換されていてもよい複素環、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールであり；
それぞれのＲＢは独立して、非存在、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよい炭素環、置換されていてもよい複素環、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールであり；
或いはＲＡ基の任意の２つは、それぞれが結合している原子と共に縮合炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール環を形成してもよく、ここでそれぞれは置換されていてもよく；
ここでそれぞれのＡは１つ又はそれ以上のＲＤで更に置換されていてもよく；ここでそれぞれのＲＤは独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２、又は３個のヘテロ原子を含有している、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール；或いはハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、オキソ、又はシアノであり；
ＺＡは、Ｏ又はＣＨ２であり；
ＹＡは、
【化２０３】
2014511877.tif 000242
であり；
ＹＢは、Ｏ、又はＣＲＡＲＡであり；
それぞれのＺ１は独立して、Ｈ、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる１、２、又は３個のヘテロ原子を含有している、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールであり；
それぞれのＺ２は独立して、Ｈ、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる１、２、又は３個のヘテロ原子を含有している、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールであり；
或いは、ＺＡ、ＹＡ、Ｚ１、及びそれぞれが結合している原子は、置換されていてもよい複素環又は置換されていてもよい複素芳香環を形成し；
それぞれのＲ１は独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルコキシであり；
Ｒ２は、Ｈ、アルキル、ベンジル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はヘテロアリールであって、それぞれは置換されていてもよく；そして
ｎは、０、１、２、又は３である）：
の、請求項５０に記載の化合物。
【請求項５５】
Ｚが，Ｏ又はＣＨ２であり；そしてＹＡが、
【化２０４】
2014511877.tif 000243
である、請求項５４に記載の化合物。
【請求項５６】
ＺＡ、ＹＡ、Ｚ１、及びそれぞれが結合している原子が５〜６員の複素環又はヘテロアリール環を形成し、ここで少なくとも１つの環員原子がＮ、Ｏ、又はＳである、請求項５４に記載の化合物。
【請求項５７】
ＺＡ、ＹＡ、Ｚ１、及びそれぞれが結合している原子が形成する環が、それぞれ置換されていてもよい、ピリジニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、ピロリジニル、モルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、イソキサゾール、及びイミダゾリルから選ばれる、請求項５４に記載の化合物。
【請求項５８】
ＺＡ、ＹＡ、Ｚ１、及びそれぞれが結合している原子が形成する環が、
【化２０５】
2014511877.tif 000244
である、請求項５７に記載の化合物。
【請求項５９】
Ａが、
【化２０６】
2014511877.tif 000245
であり；
それぞれのＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥが独立してＮ又はＣＲＡ（ＲＢ）であり、ここでＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥの少なくとも１つがＮであり；
ＲＣが、
【化２０７】
2014511877.tif 000246
であり；
それぞれのＲＡが独立して、Ｈ又は置換されていてもよいアルキルであり；
それぞれのＲＢが独立して、非存在、Ｈ又は置換されていてもよいアルキルであり；
或いは任意の２つのＲＡ基は、それぞれが結合している原子と共に縮合炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール環を形成してもよく、ここでそれぞれは置換されていてもよく、ここでそれぞれは置換されていてもよい、
請求項５４に記載の化合物。
【請求項６０】
Ａが、
【化２０８】
2014511877.tif 000247
であり、ここでＡが１つ又はそれ以上のＲＤで置換されていてもよい、請求項５９に記載の化合物。
【請求項６１】
Ａが、
【化２０９】
2014511877.tif 000248
である、請求項６０に記載の化合物。
【請求項６２】
式ＩＩＩ：
【化２１０】
2014511877.tif 000249
（式中の、Ａは、−（ＣＨ２）ｎ―Ｘ−ＲＣであり；
Ｘは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｍ、ＮＲＭ、ＮＲＭＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲＭ、ＯＣ（Ｏ）、又はＣ（Ｏ）Ｏであり；
ＲＣは、
【化２１１】
2014511877.tif 000250
であり；
ＲＤは、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールであり；
ｔは、１、２、３、４、又は５であり；
ここで、それぞれのＡは１つ又はそれ以上のＲＤで更に置換されていてもよく、ここでそれぞれのＲＤは独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２、又は３つのヘテロ原子を含有している、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール；或いはハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、オキソ、又はシアノであり；
ＺＡは、非存在、Ｏ、又はＣＨ２であり；
ＹＡは、
【化２１２】
2014511877.tif 000251
であり；
ＹＢは、Ｏ、又はＣＲＡＲＡであり；
それぞれのＺ１は独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２又は３つのヘテロ原子を含有している、Ｈ、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールであり；
それぞれのＺ２は独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２又は３つのヘテロ原子を含有している、Ｈ、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールである。
或いは、ＺＡ、ＹＡ、Ｚ１、及びそれぞれが結合している原子は、置換されていてもよい複素環又は置換されていてもよい複素芳香環を形成し；
それぞれのＲＮは独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいアルコキシであり；
ＲＱは、それぞれが置換されていてもよいＨ、アルキル、ベンジル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はヘテロアリールであり；
それぞれのＲＭは独立して、Ｈ又は置換されていてもよいアルキルであり；
ｍは、０、１、又は２であり；そして
ｎは、０、１、２、又は３である）：
の、請求項５０に記載の化合物。
【請求項６３】
ＺＡが、Ｏ又はＣＨ２であり；そしてＹＡが、
【化２１３】
2014511877.tif 000252
である、請求項６２に記載の化合物。
【請求項６４】
Ａが、−（ＣＨ２）ｎ−Ｘ−ＲＣであり；
Ｘが、Ｏ、Ｏ（ＳＯ）ｍ、ＮＲ４、ＮＲ４Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ４、ＯＣ（Ｏ）、又はＣ（Ｏ）Ｏであり；そして
ＲＣが、
【化２１４】
2014511877.tif 000253
である、
請求項６２に記載の化合物。
【請求項６５】
Ａが、
【化２１５】
2014511877.tif 000254
であり、ここでそれぞれのＡは１つ又はそれ以上のＲＤで置換されていてもよい、請求項６４に記載の化合物。
【請求項６６】
式ＩＶ：
【化２１６】
2014511877.tif 000255
（式中の、Ａは、
【化２１７】
2014511877.tif 000256
であり；
それぞれのＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥは独立してＮ又はＣＲＡ（ＲＢ）であり、ここでＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥの少なくとも１つはＮであり；
ＲＣは、
【化２１８】
2014511877.tif 000257
であり；
ＲＤは、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールであり；
ｔは、１、２、３、４、又は５であり；
それぞれのＲＡは独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよい炭素環、置換されていてもよい複素環、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールであり；
それぞれのＲＢは独立して、非存在、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよい炭素環、置換されていてもよい複素環、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールであり；
或いはＲＡ基の任意の２つは、それぞれが結合している原子と共に縮合炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール環を形成してもよく、ここでそれぞれは置換されていてもよく；
ここでそれぞれのＡは１つ又はそれ以上のＲＤで更に置換されていてもよく；ここでそれぞれのＲＤは独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２、又は３個のヘテロ原子を含有している、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール；或いはハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、オキソ、又はシアノであり；
Ｄは、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいアルコキシであり；
ＺＡは、非存在、Ｏ又はＣＨ２であり；
ＹＡは、
【化２１９】
2014511877.tif 000258
であり；
それぞれのＺ１は独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２又は３つのヘテロ原子を含有している、Ｈ、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールであり；
それぞれのＺ２は独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２又は３つのヘテロ原子を含有している、Ｈ、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールであり；
或いは、ＺＡ、ＹＡ、Ｚ１、及びそれぞれが結合している原子は、置換されていてもよい複素環又は置換されていてもよい複素芳香環を形成し；
それぞれのＲＮは独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルコキシであり；
ＲＱは、それぞれが置換されていてもよいＨ、アルキル、ベンジル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はヘテロアリールであり；
それぞれのＲＭは独立して、Ｈ又は置換されていてもよいアルキルであり；そして
ｎは、０、１、２、又は３である）：
の、請求項５０に記載の化合物。
【請求項６７】
ＺＡが、Ｏ又はＣＨ２であり；そしてＹＡが、
【化２２０】
2014511877.tif 000259
である、請求項６６に記載の化合物。
【請求項６８】
Ａが、
【化２２１】
2014511877.tif 000260
であり；
それぞれのＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥが独立してＮ又はＣＲＡ（ＲＢ）であり；こでＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥの少なくとも１つがＮであり；
ＲＣが、
【化２２２】
2014511877.tif 000261
であり；
それぞれのＲＡが独立して、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキルであり；
それぞれのＲＢが独立して、非存在、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキルであり；
或いは任意の２つのＲＡ基は、それぞれが結合している原子と共に縮合炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールを形成してもよく、ここでそれぞれは置換されていてもよい、
請求項６６に記載の化合物。
【請求項６９】
Ａが、
【化２２３】
2014511877.tif 000262
であり、ここでそれぞれのＡは１つ又はそれ以上のＲＤで置換されていてもよい、請求項６８に記載の化合物。
【請求項７０】
Ｄがメチル又は置換されていてもよいアルコキシである、請求項６９に記載の化合物。
【請求項７１】
以下のもの：
【化２２４】
2014511877.tif 000263
【化２２５】
2014511877.tif 000264
【化２２６】
2014511877.tif 000265
から選ばれる化合物。
【請求項７２】
薬学的に許容される担体中の請求項１の組成物。
【請求項７３】
薬剤を製造するための請求項１の組成物の使用。
【請求項７４】
薬剤が、過剰増殖性疾患を予防、改善、又は治療するための薬剤を含有している、請求項７３に記載の使用。
【請求項７５】
過剰増殖性疾患が癌である、請求項７４に記載の使用。
【請求項７６】
請求項１の組成物を投与することを含んでなる、対象の過剰増殖性疾患を予防、改善、又は治療する方法。
【請求項７７】
方法が、過剰増殖性疾患に罹っているか又は罹る可能性のある対象の同定を更に含んでいる、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
過剰増殖性疾患の予防、改善、又は治療について対象を観察することを更に含んでいる、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
過剰増殖性疾患が癌を含んでいる、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
癌が、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、基底細胞癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、乳癌、子宮頸癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、食道癌、ユーイングファミリー腫瘍、網膜芽細胞腫、胃癌、胃腸腫瘍、神経芽腫、頭頸部癌、肝細胞（肝臓）癌、ホジキンリンパ腫、膵島腫瘍（膵内分泌部）、腎臓（腎細胞）癌、喉頭癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞型リンパ腫、髄芽腫、黒色腫、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、直腸癌、甲状腺癌よりなる群から選ばれる、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
請求項１に記載の少なくとも１つの化合物及び使用説明書を含んでなる、キット。
【請求項８２】
請求項１に記載の２つ又はそれ以上の化合物を含んでなる、化学ライブラリー。
【請求項８３】
中間体としてオルトゴナルに保護されたＮ−アルキルヒスチジン類縁体［ここで、オルトゴナルに保護されたＮ−アルキルヒスチジン類縁体は次の構造：
【化２２７】
2014511877.tif 000266
（式中の、Ｘ'は０又は１〜２０から選ばれる整数である）を有している］を用いることを含んでなる、ペプチド誘導体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（連邦支援研究によってなされた発明に対する権利の声明）
本研究は、グラント番号ＺＩＡ ＢＣ ００６１９８による国立衛生研究所（National Institute of Health）及び国立癌研究所（National Cancer Institute）の壁内研究プログラム（Intramural Research Program）によって支援された。本研究は国立衛生研究所の壁内研究プログラム及びグラント番号Ｒ０１ ＧＭ６０５９４；及びグラント番号Ｎ０１−ＣＯ−１２４００による国立癌研究所によって支援された。本発明に関して政府はある特定の権利を有している。
【０００２】
（関連出願）
本願は、２０１１年４月１２日に出願された米国仮特許出願第６１／４７４，６２１号、及び２０１２年１月１９日に出願された米国仮特許出願第６１／５８８，４７０号の優先権を主張する。上記関連出願の全内容は参照により本明細書に取り込まれている。
【背景技術】
【０００３】
様々な真核生物に見出される、ポロ様キナーゼ類（まとめて、Ｐｌｋｓ）は、細胞増殖に重要な役割を果たすＳｅｒ／Ｔｈｒキナーゼの保存的サブファミリーである。Ｐｌｋｓは、構造的に関連しているＰＢ１（Ｐｌｋ１中の残基４１１〜４８９）及びＰＢ２（残基５１１〜５９２）モチーフからなる高度に保存されているＣ末端ポロ−ボックスドメイン（ＰＢＤ）の存在によって特徴付けられている。Ｐｌｋ１、Ｐｌｋ２／Ｓｎｋ、Ｐｌｋ３／Ｐｒｋ／Ｆｎｋ、及びＰｌｋ４／Ｓａｋと呼ばれる、複数の形態が哺乳動物に存在する。Ｐｌｋ４はＰｌｋサブファミリーの最も端のメンバーであって、２つのＰｌｋ４異型の一方である、Ｓａｋ−ａは、異常に長いＣ末端延長の端部近くのＰＢ１モチーフのみを含有している。Ｐｌｋｓの中で、Ｐｌｋ１は細胞のチェックポイントを無効にして、ヒト細胞の癌化をもたらす、遺伝的不安定性を誘発する能力のために最も広範に研究されている。当然のことながら、Ｐｌｋ１は広範囲のヒトの癌で過剰に発現されていて、多くの種類の悪性腫瘍に対する新しい予後マーカーとして提案されている。
【０００４】
更に、Ｐｌｋ１機能の障害は多くの腫瘍細胞でアポトーシス細胞死をも誘導するが、正常細胞では誘導せずに、マウス異種移植モデルにおいて腫瘍の生育を減少する。細胞増殖及び腫瘍形成におけるＰｌｋ１の役割と対照的に、２つの最も近縁種であるキナーゼ、Ｐｌｋ２及びＰｌｋ３はチェックポイントが介在する細胞周期停止において、遺伝的安定性を確保して癌化を抑える役割を果たすと考えられている。
【０００５】
Ｐｌｋ１のＰＢＤは、正しい細胞内局在性及びリン酸化ＳＥｒ／Ｔｈｒペプチドと１位（Ｓ−ｐ−Ｓ／Ｔモチーフ）における不変Ｓｅｒ残基との相互作用によるＰｌｋ１の分裂機能に重要な役割を果たしている。ＰＢＤ結合を最適化するための人工ホスホペプチドとの複合体におけるＰｌｋ１ ＰＢＤの結晶構造は、ＰＢ１とＰＢ２モチーフがβ６α（６本のアンチパラレルなβシート及び１本のαヘリックス）と記載される同一の折り込み構造を有していて、ヘテロ二量体のホスホペプチド結合モジュールを形成することを明らかにしている。ホスホペプチドは、ＰＢ１とＰＢ２の間に形成された裂け目に結合して両方のポロ−ボックスからの主要なアミノ酸残基と相互作用する。ＰＢ２のＨｉｓ５３８及びＬｙｓ５４０は、ホスホＳｅｒ／Ｔｈｒ（ｐ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）残基の負に帯電しているリン酸基との静電相互作用に極めて重要であり、それに対してＰＢ１のＴｒｐ４１４は、Ｓｅｒ−１残基との２つの水素結合相互作用及びファン・デル・ワールス相互作用に関わる１位のＳｅｒの選択に重要である。これらの残基はＰｌｌ１、Ｐｌｋ２、及びＰｌｋ３（要するに、Ｐｌｋ１−３）のＰＢＤに保存されていて、それらの重要性を証明している（Ｐｌｋ４は異なった結合モジュール有していて単一のＰＢ１モチーフを通ってホモ二量体を形成する）。しかしながら、Ｐｌｋ１とその結合標的の間に特異性をもたらすのに重要な安定なＰＢＤ結合及び相互作用に必要な最小成分は殆ど解明されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、分裂現象及び細胞増殖能の調節因子である、ポロ様キナーゼ１（ｐｌｋ１）のペプチド模倣リガンドを包含している。特に、本発明は、ポロ−ボックスドメインを介してポロ様キナーゼと結合する新規な化合物を提供する。
【０００７】
ＰＢＤ結合ホスホペプチドを試験して、高い親和性でＰｌｋ１ ＰＢＤと特異的に相互作用するが、２つの関連するＰｌｋ２及びＰｌｋ３ ＰＢＤとは相互作用しない、５−ｍｅｒ  ホスホペプチド「ＰＬＨＳｐＴ」を同定した。このペプチド配列に基づいて、高いＰＢＤ結合親和性を有するペプチドを設計して製造できるだろう。しかしながら、恐らく、低い溶解性又は限定された膜透過性（又は両方）による弱いバイオアベイラビリティーに起因して、このペプチドが（高いＰＢＤ結合親和性を有していても）全細胞系で活性をもたらすことは困難である。増大したバイオアベイラビリティーを含む、改善された医薬特性を有するＰＢＤ結合ペプチドを設計して製造することが当該技術分野において必要である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
ある特定の実施態様では、新規化合物はポリエチレングリコール単位を有するペプチド誘導体（以後、ＰＥＧ化ペプチドとも言う）である。本発明によるＰＥＧ化ペプチドは高いＰＢＤ結合親和性を示す。いくつかのＰＥＧ化ペプチドは全細胞系においても活性をもたらす。本発明はＰＥＧ化ペプチドを設計及び／又は合成する方法、及びその使用方法も提供する。
【０００９】
Ｐｌｋ２又はＰｌｋ３ではなく、Ｐｌｋ１の特異的阻害が抗ｐｌｋ１癌治療に重要であることを本発明者らは認識した。本発明の好ましい態様によると、Ｐｌｋ１機能を特異的に阻害すること及びＰｌｋ１拮抗薬の細胞内への取り込みを減少することは、ポロ−ボックスドメインを介してポロ様キナーゼと結合でき、全細胞への取り込みを増大する減少したアニオン電荷を示す、好ましい化合物によって対処できる。
【００１０】
一態様では、本発明は式（Ｉ）の化合物：又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物或いは立体異性体を提供する。
【００１１】
【化１】
2014511877.tif 000002
【００１２】
式中の、ＰＥＧはポリエチレングリコール部分又はその誘導体である。
Ｚは、Ｏ、（Ｃ１〜６）アルキレン、又はＣＹ２であり、ここでＹはそれぞれの場合に独立して、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒである。
ｎは、０、１又は２である。
Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、Ｈ又は（Ｃ１〜６）アルキル−カルボニルである。
Ｒ２は、Ｈ又はＲ９Ｏ−である。
Ｒ９は、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル−カルボニル、又は（Ｃ１〜６）アルキルである。
Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル−カルボニル、Ｘ５−Ｏ−（Ｃ１〜６）アルキル、又はグリシン部分である。
Ｒ３は、Ｈ又は（Ｘ４Ｏ）２Ｐ（Ｏ）−である。
Ｒ４は、Ｈ、アシル、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルキル−カーボネート、又は（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−である。
Ｘ１は、Ｈ又は（Ｃ１〜６）アルキルであるか；又はＸ１及びＸ２はそれらが連結している結合と共に５〜８員のヘテロシクリル環を形成する。
Ｘ２は、結合、又は（Ｃ１〜６）アルキレンであるか；又はＸ１及びＸ２はそれらが連結している結合と共に５〜８員のヘテロシクリル環を形成する。
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ’、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ’−（Ｃ１〜６）アルキルである。
【００１３】
Ｒ'は、Ｈ、アミノ−Ｏ−、（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−、（Ｃ２〜６）アルケニル、シクロアルキル、複素環、アリール−（Ｃ０〜６）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ０〜６）アルキルであり、ここで当該シクロアルキル、複素環、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、ヒドロスリフィド、アルキル、アルコキシ、アルケニル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、エステル、アミン、アミド、カルボキシル、及びアルキル−カルボニル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で置換されていてもよく；或いはＲ'は１つのＸ４基と結合して大環状環を形成する。
Ｘ４は、それぞれの場合に独立して、Ｈ、（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜２０）アルキル−Ｓｉ−、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ０〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜６）アルキル、又はアミノ（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここでＸ４位に現れるそれぞれのアルキル部分は更に１つ又はそれ以上のヒドロキシル又はアルコキシ基で置換されていてもよく；或いは１つのＸ４基はＲ'と結合して大環状環を形成する。
Ｘ５は、（Ｃ１〜６）アルアルキル、―Ｎ＝Ｒ１０であり、ここでＲ１０は糖成分から誘導される。
ＡＡ１は、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、及びＴｙｒの群から選ばれるアミノ酸部分である。
ＡＡ２は、非存在、又はＨｉｓ、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、及びＴｙｒの群から選ばれるアミノ酸部分である。
ここで、ＡＡ１又はＡＡ２に関するそれぞれのアミノ酸部分は、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜１０）アルキル、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、アリール−（Ｃ１〜１０）アルコキシ、アリール−（Ｃ１〜１０）アルコキシ、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−Ｓ−、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、ヘテロアリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−で置換されていてもよく、そしてそれぞれのアリール又はヘテロアリール部分は、アリール、ヘテロアリール、アルケニル、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アミン、アミド、カルボキシル、エステル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で置換されていてもよい。
【００１４】
別の態様では、本発明は式ＩＩＩ又はＩＶの化合物を提供する。
【００１５】
【化２】
2014511877.tif 000003
【００１６】
式中の、Ａは、
【００１７】
【化３】
2014511877.tif 000004
【００１８】
又は−（ＣＨ２）ｎ−Ｘ−Ｒｃである。
それぞれのＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥは独立してＮ又はＣＲＡ（ＲＢ）であり、ここでＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥの少なくとも１つはＮである。
Ｘは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｍ、ＮＲＭ、ＮＲＭＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲＭ、ＯＣ（Ｏ）、又はＣ（Ｏ）Ｏである。
ＲＣは、
【００１９】
【化４】
2014511877.tif 000005
【００２０】
である。
ＲＤは、置換されていてもよいアリール又は置換されていてもよいヘテロアリールである。
ｔは、１、２、３、４、又は５である。
それぞれのＲＡは独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよい炭素環、置換されていてもよい複素環、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールである。
それぞれのＲＢは独立して、非存在、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよい炭素環、置換されていてもよい複素環、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールである。
或いはＲＡ基の任意の２つは、それぞれが結合している原子と共に縮合炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール環を形成してもよく、ここでそれぞれは置換されていてもよい。
ここでそれぞれのＡは１つ又はそれ以上のＲＤで更に置換されていてもよく、ここでそれぞれのＲＤは独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２、又は３つのヘテロ原子を含有している、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール；或いはハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、オキソ、又はシアノである。
Ｄは、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいアルコキシである。
ＺＡは、非存在、Ｏ又はＣＲＡ（ＲＢ）である。
ＹＡは、
【００２１】
【化５】
2014511877.tif 000006
【００２２】
である。
ＹＢは、Ｏ又はＣＲＡＲＡである。
それぞれのＺ１は独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２又は３つのヘテロ原子を含有している、Ｈ、アルキル、アルケニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールである。
それぞれのＺ２は独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２又は３つのヘテロ原子を含有している、Ｈ、アルキル、アルケニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールである。
或いは、ＺＡ、ＹＡ、Ｚ１、及びそれぞれが結合している原子は、置換されていてもよい複素環又は置換されていてもよい複素芳香環を形成する。
それぞれのＲＮは独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルコキシである。
ＲＱは、それぞれが置換されていてもよいＨ、アルキル、ベンジル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はヘテロアリールである。
それぞれのＲＭは独立して、Ｈ又は置換されていてもよいアルキルである。
ｍは、０、１、又は２である。
ｎは、０、１、２、又は３である。
ここで式Ｉにおいて、Ａが
【００２３】
【化６】
2014511877.tif 000007
【００２４】
の場合は、−ＺＡ−ＹＡは
【００２５】
【化７】
2014511877.tif 000008
【００２６】
ではない。
本発明は、薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、又は立体異性体としての化合物も提供する。別の態様では、本発明は、例えば、医薬品の調製に用いるための、本発明の上記化合物、薬学的に許容される担体を含む組成物を提供する。医薬品は、例えば、癌のような過剰増殖性疾患の予防、改善、又は治療のための医薬品である得る。
【００２７】
別の態様では、本発明は本発明の少なくとも１つの化合物及び使用説明書を含んでいるキットを提供する。本発明は更に、本発明の化合物を含んでいるキット、及び本発明の化合物を合成するキットを提供する。
【００２８】
別の態様では、本発明は本発明の２つ又はそれ以上の化合物を含んでいる化学ライブラリーを提供する。
【００２９】
ある特定の実施態様では、本発明の化合物は過剰増殖性疾患に対して対象を予防、改善、又は治療する方法に用いることができる。本発明の化合物は後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）にたいして対象を予防、改善、又は治療方法にも用いることができる。
【００３０】
本発明は、本発明の化合物の使用方法、及び本発明の化合物を合成する方法も含んでいる。
本発明の別の態様は以下に記載されている。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１ａは、ペプチドの固相合成を示し；  図１ｂは、合成されたペプチドの構造を示す。
【図２】図２ａ〜ｃは、各種ＰＬＨＳｐＴ由来化合物によるＰｌｋ１ ＰＢＤの阻害を示す。ＥＬＩＳＡに基づくＰＢＤ阻害アッセイを、実質的にＨＡ−ＥＧＦＰ−Ｐｌｋ１発現有糸分裂２３９Ａ細胞溶解物を用いる方法に記載されているように実施した。グラフ間の阻害曲線の僅かな差異は展開時間の差に起因している。各サンプルについての光学密度（Ｏ.Ｄ.）はＥＬＩＳＡプレートリーダーを用いて４５０ｎｍで測定した。
【図３】図３ａ〜ｅは、ペプチド１と４ｊのＰｌｋ１ ＰＢＤ複合体のＸ線共結晶構造を示す。図３ａは、４ｊとの複合体（ペプチド４ｊを有するタンパク質骨格）の上に重ね合わせた１との複合体中のＰＢＤ（ＰＢＤ ３ＨＩＫ；タンパク質骨格及びペプチドを示す）である。図３ｂは、Ｈｉｓ−Ｃ８Ｈ１６−フェニル基と相互作用する重要なタンパク質残基（棒として表示）を示しているＰＢＤ−４ｊ複合体である。残基側鎖の疎水性接触領域に陰影を付けて、相互作用の強さを棒の太さで示した。図３ｃは、３ｂで示した残基についての１及び４ｊとの複合体におけるＰＢＤの比較である。Δ（κ２）値を、著しく移動される、残基Ｙ４１７及びＹ４８１について示した。タンパク質骨格はＰＢＤ−１複合体からのものである。図３ｄ及び３ｅは、任意の静電ポテンシャルスケールに基づく、１（ｄ）及び４ｊ（ｅ）との複合体中ＰＢＤの着色した表面帯電である。グラフは、ＩＣＭ Ｃｋｅｍｉｓｔ Ｐｒｏ（Molsoft, Inc.）を用いて作成した。
【図４】図４は、膜透過性ＰＥＧ−４Ｊ＊によるＰｌｋ１ ＰＢＤの機能の特異的阻害を示す。図４ａは、表示されたタンパク質によるＰｌｋ１ ＰＢＤ結合の阻害である。図４ｂでは、Ｆｌａｇ−Ｐｌｋ１（Ｋ８２Ｍ）、Ｆｌａｇ−Ｐｌｋ２（Ｋ１０８Ｍ）、又はＦｌａｇ−Ｐｌｋ３（Ｋ５２Ｒ）を不活化するキナーゼを発現している有糸分裂２９３Ａ細胞溶解物を混合して、Ｎ末端Ｃｙｓ残基（ＰＥＧ−４ｊ＊及びＰＥＧ−４ｊ＊（Ｓ／Ａ）について）又はＣｙｓ−（ＣＨ２）６−ＣＯリンカー（１、ＰＬＨＳＴ、４ｊ、及び４ｊ（Ｓ／Ａ）について）を介してビーズと架橋している表示した化合物と培養した。沈殿物を８％のＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、抗Ｆｌａｇ抗体で免疫ブロットして、クーマシー（Coomassie; CBB）で染色した。数字は沈殿したタンパク質の相対量を示す。図３ｃでは、非同期的に生育しているＨｅＬａ細胞を２００μＭの表示した化合物で２４時間処理した（全ての化合物をＤＭＳＯに溶解した）。細胞をＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２で更に１０分間処理し、パラホルムアルデヒドで固定化して、次いで定量した。図４ｄ〜ｇでは、単一チミジンブロックから非同期的に放出されたＨｅＬａ細胞を２００μＭの表示した化合物で放出後４時間処理した（全てのＰＥＧか化合物をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に溶解した）。細胞を様々な時点で定量して集合形態にある有糸分裂細胞の画分を確認した（ｄ；死細胞を定量から除外した）。１３時間時点の同一サンプルを撮影して（ｅ）、免疫染色してＰｌｋ１の局在化を調べて（ｆ）、全有糸分裂群の間で、異常な紡錘体及びＤＡＰＩ形態を有する異常な有糸分裂細胞を定量した（ｇ）。図４ｆ中の記号：星印、中央に局在化したＰｌｋ１シグナル；矢印付括弧、動原体関連Ｐｌｋ１シグナル；矢印、正しく整列していない染色体。図４ｆにおけるＰＥＧ−４ｊ＊処理細胞が１極の中心体Ｐｌｋ１を非常に弱体化して（星印）別の極に検出不可能なＰｌｋ１を示すことに注目されたい。
【図５】図５はＰｌｋ−１ ＰＢＤ（ＰＢＤ：３ＨＩＫ）に結合しているＰＬＨＳｐＴ（１）のＸ線結晶構造である。任意の静電ポテンシャルスケールに基づいて半透明表面を着色して示してある。タンパク質骨格を幅広の紐状形態で表示し、ペプチド並びに重要なタンパク質残基を太い棒で表示して、原子で着色した。重要な水素結合を点で示した。ｐＴホスホリル基に近い結晶構造中で観察されるグリセロールの分子を明確に示した。この図は、ＩＣＭ Ｃｈｅｍｉｓｔ Ｐｒｏソフトウェア（Molsoft, Inc）を用いて作成した。
【図６】図６は、ＥＬＩＳＡによるＰｌｋ１ ＰＢＤ結合阻害アッセイの結果を示し；ＯＤは光学密度を表す。
【図７】図７は、ペプチドリガンド４ｊ（棒で表示）周辺で１σと１.５５Åに形成したシグマＡ加重２Ｆｏ−Ｆｃ電子密度図である。
【図８】図８は、ペプチド３ｊのＭＳ−ＭＳスペクトラムである。
【図９】図９は、ペプチド４ｊのＭＳ−ＭＳスペクトラムである。
【図１０】図１０Ａは、減少したアニオン電荷と初期Ｐｌｋ１ ＰＢＤ結合データを有するｐＴｈｒ模倣体の構造を示し；図１０Ｂは、ＥＬＩＳＡによるアッセイからの初期Ｐｌｋ１結合データを示す。
【図１１】図１１ＡはｐＴｈｒ模倣体及びペプチドの構造を示し；図１１Ｂは、ＥＬＩＳＡによるアッセイからの初期Ｐｌｋ１結合データを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
（定義）
「薬剤」は本明細書において、治療効果のある化合物又は潜在的に治療活性な化合物を包含すると理解される。薬剤は既知及び未知の化合物であってよい。本明細書で用いられる薬剤は通常細胞に基づいていない化合物であるが、薬剤は生物学的薬剤、例えば、ペプチド、核酸治療薬、サイトカイン、抗体等を包含できる。
【００３３】
「作動薬」は本明細書において、内因性物質又はリガンドがその標的と結合することによって通常生じるものと同様な反応又は活性を引き起こすことができる化学物質であると理解される。「拮抗薬」は本明細書において、内因性物質（例えば、内因性作動薬）がその標的と結合することによって通常生じる反応又は活性を阻害して、受容体を介するシグナル伝達を阻害し、下流のシグナル伝達を阻害し或いは標的の活性化の通常の結果である細胞事象（例えば、細胞周期を介する生育）を阻害できる化学物質であると理解される。拮抗薬は直接標的と結合できるか、或いはシグナル伝達に必要なタンパク質又は因子を介して作用することができる。作動薬及び拮抗薬は、標的と結合する内因性物質又はリガンドの幾つかの又は全ての活性を調節できる。拮抗薬は一般に、内因性作動薬の活性を阻害するのに必要な拮抗薬の量を確定することによって特徴付けられる。例えば、作動薬に対して０．０１、０．１、１、５、５０、１００、２００、５００、又は１０００倍モル濃度である阻害剤は作動薬の活性を少なくとも１０％、５０％、９０％、又はそれ以上阻害できる。
【００３４】
本明細書で用いられる「改善」又は「治療」は、特定の病気又は疾患の兆候、症候、症状、又は影響の少なくとも１つを減少又は低下することを意味すると理解される。例えば、癌の改善又は治療は、全身腫瘍組織量の評価を含む標準的なＲＥＣＩＳＴ（固形がんの治療効果判定のためのガイドライン）、生存期間、腫瘍マーカー（例えば、前立腺特異抗原）の減少した存在、又はその他の疾患状態又は進展のその他の臨床的に受入れられている何れかの指標を用いて確認できる。改善及び治療は薬剤又は治療薬の１回以上の用量の投与を必要とする。本明細書で用いられる「予防」は、発症の速度又は程度を制限し、減少するか、又は秒基又は疾患の少なくとも１つの兆候又は症状の進展を阻害することと理解される。例えば、疾患を発症する遺伝的素質を有する対象が高齢期に疾患を発症できる、例えば、乳癌発症を２０代又は３０代から４０代又はそれ以降に遅らせる。予防は薬剤又は治療薬の１回以上の用量の投与を必要とする。
【００３５】
本明細書で用いられる「アミノオキシ含有アミノ酸」は、改変プロリン、又はアルデヒドで改変するための普遍的な骨格を提供するように改変されたアミノ酸である。典型的な構造を提供する。
【００３６】
【化８】
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【００３７】
化学的分類及び基が本明細書に提供されていて化学名、共通名称、及び／又は化学構造によって言及されている。本明細書に明確な定義がない場合は、化学構造の定義は、化学事典、有機化学の教科書のような、科学の教科書、又は化学用語のIUPAC Compendium（これはHypertext Transfer Protocol://old.iupac.org/publications/compendium/からアクセスできる）のようなデータベースに見出すことができる。本明細書で通常言及される化学的分類及び基を以下のように提供される。
【００３８】
本明細書で用いられる「アルキル基」は、任意の炭素原子から水素原子を除去することによってアルケンから誘導される１価の基、−ＣｎＨ２ｎ＋１であると理解される。非分岐アルカンの末端炭素原子から水素原子の除去によって誘導された基は非分岐アルキル（ｎ−アルキル）基、Ｈ（ＣＨ２）ｎを形成する。ＲＣＨ２、Ｒ２ＣＨ（Ｒ≠Ｈ）、及びＲ３Ｃ（Ｒ≠Ｈ）はそれぞれ、１級、２級及び３級アルキル基である。「低級アルキル」は式−ＣｎＨ２ｎ＋１（ここで、ｎは６以下である）のアルキルであると理解される。「高級アルキル」は式−ＣｎＨ２ｎ＋１（ここで、ｎは６以上である）のアルキルであると理解される。
【００３９】
本明細書で用いられる「アルケン基」は、１つの炭素−炭素二重結合及び一般式ＣｎＨ２ｎ−１を有する、非環式の分岐又は非分岐炭化水素であると理解される。「低級アルケン」は、式−ＣｎＨ２ｎ−１（ｎは６以下である）のアルキルであると理解される。「高級アルケン」は、式−ＣｎＨ２ｎ−１（ｎは６以上である）のアルキルであると理解される。２つ以上の二重結合を有する非環式の分岐又は非分岐炭化水素は、アルカジエン、アルカトリエン等である。ヘテロアルケンは二重結合炭素原子がヘテロ原子で置き換わったアルケンの類似物である。
【００４０】
本明細書で用いられる用語「アルコキシ」は、酸素原子を介して別の部分と結合するアルキル基又はシクロアルキル基を示す。アルコキシ基は１つ又はそれ以上の置換基で置換されていてもよい。
【００４１】
用語「アルコキシアルキル」、「ポリアミノアルキル」及び「チオアルコキシアルキル」は、炭化水素骨格の１つ又はそれ以上の炭素原子を、例えば、酸素、窒素又は硫黄原子に置き換える酸素、窒素又は硫黄原子を更に含んでいる、上記のようなアルキル基を示す。
【００４２】
本明細書で用いられるアミドは、酸性水酸基がアミノ基又は置換アミノ基で置き換わっているオキソ酸の誘導体であるであると理解される。所定の窒素上に１つ、２つ又は３つのアシル基を有する化合物は一般に、それぞれ１級、２級及び３級アミド、例えば、ＰｈＣ（＝Ｏ）ＮＨ２ ベンズアミド、ＣＨ３Ｓ（＝Ｏ）２ＮＭｅ２ Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンスルホンアミド、［ＲＣ（＝Ｏ）］２ＮＨ ２級アミド（イミドを参照されたい）、［ＲＣ（＝Ｏ）］３Ｎ ３級アミド、ＰｈＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）ＮＨ２ フェニルホスホンアミド酸に含まれてそのように命名できる。本明細書で用いられるアミド基は、―ＮＨ２、ＮＨＲ、及びＮＨＲ２を有している基であると理解される。アミド基は、１級、２級及び３級の用語の意味によって区別してはならない。
【００４３】
本明細書で用いられるアミンは、形式的には１つ、２つ又は３つの水素原子をヒドロカルビル基で置き換えてアンモニアから誘導されて、一般構造ＲＮＨ２（１級アミン）、Ｒ２ＮＨ（２級アミン）、Ｒ３Ｎ（３級アミン）を有する化合物であると理解される。アミノ基は、構造−ＲＮＨ２、−Ｒ２ＮＨ、又は−Ｒ３Ｎを有していると理解される。
【００４４】
本明細書で用いられる「アリール基」は、フェニル、チオフェン、インドリル等であってよい、単純な芳香環から誘導される任意の官能基又は置換基を示すと理解される（IUPAC nomenclature, goldbook.inpac.org/A00464.html を参照されたい）。アリール基は環の炭素原子から水素原子の除去によって芳香族炭化水素（アレーン）から誘導された。複素芳香族炭化水素（ヘテロアーレン）から同様に誘導された基はこの定義に含めることがある。「アリール」は省略可又は一般化のために用いられる。例えば、ありふれたアリール基はフェニル、Ｃ６Ｈ５であり；これはベンゼンから誘導される。トリル基、ＣＨ３Ｃ６Ｈ４は、トルエン（メチルベンゼン）から誘導される。キシリル基、（ＣＨ３）２Ｃ６Ｈ３は、キシレン（ジメチルベンゼン）から誘導される。
【００４５】
単独で或いは大きな部分の一部として用いられる用語「脂環式（cycloaliphatic）」、「炭素環（carbocycle）」、「炭素環式（carbocyclyl）」、「炭素環式（carbocyclo）、「炭素環式（carbocyclic）」は、飽和又は部分飽和の環状脂肪族単環又は２環系を示し、本明細書に記載されているように、３〜１８の炭素原子を有し、ここで脂肪族環系は上で定義し明細書に記載されているように置換されていてもよい。脂環式の基は、これに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、シクロヘプテニル、シクロオクチル、シクロオクテニル、及びシクロオクタジエニルを包含する。ある実施態様では、シクロアルキルは３〜６の炭素を有している。用語「脂環式（cycloaliphatic）」、「炭素環（carbocycle）」、「炭素環式（carbocyclyl）」、「炭素環式（carbocyclo）、「炭素環式（carbocyclic）」は、デカヒドロナフチル、テトラヒドロナフチル、デカリン、又はビシクロ［２．２．２］オクタンのような、１つ又はそれ以上の芳香族又は非芳香族の環と縮合している脂肪族の環も包含し、ここでラジカル又は結合点は脂肪族環上にある。
【００４６】
単独で又は大きな部分、例えば、「ヘテロアラルキル」、又は「ヘテロアラルコキシ」の一部分として用いられる用語「ヘテロアリール」及び「ヘテロアル−（ｈｅｔｅｒｏａｒ−）」は、５〜１８の環員原子、好ましくは５、６、又は９環員原子を有し；環配列中で６、１０、又は１４π電子を共有していて；炭素原子に加えて、１〜５つのヘテロ原子を有している基を示す。用語「ヘテロ原子」は、これに限定されないが、窒素、酸素、又は硫黄を包含して、窒素又は硫黄の酸化形態の何れか、及び塩基性窒素の４級化形態の何れかを包含する。ヘテロアリールは単一の環、又は２つ以上の縮合環であってよい。ヘテロアリール基は、これに限定されないが、チエニル、フラニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、オキサジアゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、インダゾリジニル、プリニル、ナフチリジニル、及びプテリジニルを包含する。本明細書で用いられる用語「ヘテロアリール」及び「ヘテロアル−」は、ヘテロ芳香環が１つ以上のアリール、脂環式、又は複素環式の環と縮合している基も包含し、ここでラジカル又は結合点はヘテロ芳香環上にある。限定されない例は、インドリル、イソインドリル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、ジベンゾフラニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、４Ｈ−キノリジニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、及びピリド［２，３−ｂ］−１，４−オキサジン−３（４Ｈ）−オンを包含する。ヘテロアリール基は単環式又は二環式であってよい。用語「ヘテロアリール」は、用語「ヘテロアリール環」、「ヘテロアリール基」、又は「ヘテロ芳香族」と同じ意味で用いてよく、この用語の何れも置換されていてもよい環を包含している。用語「ヘテロアラルキル」はヘテロアリールで置換されているアルキル基を示し、ここでアルキル及びヘテロアリール部分は独立して置換されていてもよい。例は、これに限定されないが、ピリジニルメチル、ピリミジニルエチル等を包含する。
【００４７】
本明細書で用いられる用語「複素環（heterocycle）」、「ヘテロシクリル（heterocyclyl）」、「複素環ラジカル（heterocyclic radical）」、及び「複素環（heterocyclic ring）」は同じ意味で用いられて、飽和されているか或いは部分的に飽和されていて、炭素原子に加えて１つ又はそれ以上の、好ましくは４つの、上で定義したヘテロ原子を有している、安定な３〜７員の単環又は７〜１０員の二環式複素環部分を示す。複素環の環員原への言及で用いるときは、用語「窒素」は置換された窒素を包含している。例として、酸素、硫黄又は窒素から選ばれる０〜３のヘテロ原子を有している、飽和又は部分飽和している環において、窒素はＮ（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロリルにおけるように）、ＮＨ（ピロリジニルにおけるように）、又は＋ＮＲ（Ｎ−置換ピロリジニルにおけるように）であってよい。代表的なヘテロシクロアルキル基は、これに限定されないが、［１，３］ジオキソラン、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、及びテトラヒドロフリル等を包含する。
【００４８】
複素環は安定な構造をもたらすそのヘテロ原子又は炭素原子の何れかにあるペンダント基に結合することができ、環員原子はどれも置換されていてもよい。そのような飽和又は部分飽和の複素環ラジアルの例は、これに限定されないが、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピロリジニル、ピロリドニル、ピペリジニル、ピロリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デヒドロキノリニルオキサゾリジニル、ピペラジニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、ジアゼピニル、オキサゼピニル、チアゼピニル、モルホリニル、及びキヌクリジニルを包含する。用語「複素環（heterocycle）」、「複素環（heterocyclyl）」、「複素環（heterocyclyl ring）」、複素環基（heterocyclic group）」、「複素環部分(heterocyclic moiety)」、及び複素環ラジカル（heterocyclic radical）」は本明細書では同じ意味で用いて、インドリニル、３Ｈ−インドリル、クロマニル、フェナントリジニル、２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、オクタヒドロインドリル、又はテトラヒドロキノリニルのような、複素環が１つ以上のアリール、ヘテロアリール、又は脂環式の環に縮合している基も包含する。複素環基は単環式又は二環式であってよい。用語「ヘテロシクリルアルキル」は、ヘテロシクリルで置換されているアルキル基を示し、ここでアルキル及びヘテロシクリル部分は独立して置換されていてもよい。
【００４９】
本明細書で用いられる用語「部分的に不飽和の」は環員原子の間に少なくとも１つの二重結合又は三重結合を包含していて、芳香族ではない、環部分を示す。用語「部分的に不飽和の」は、複数の不飽和部位を有している環を包含するように意図されていて、上で定義された、アリール又はヘテロアリール部分を包含しないように意図されている。
【００５０】
本明細書で用いられる「カルボン酸」は、構造ＲＣ（＝Ｏ）ＯＨを有している基であると理解される。カルボン酸基は、その炭素原子を含めて−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨを示すと理解される。
【００５１】
本明細書で用いられる「カルボニル基」は、カルボニル基、Ｃ＝Ｏを含んでいる基であると理解される。この用語は狭義にはアルデヒド及びケトンに通常用いられたが、本明細書用いられるように、これはカルボ酸及び誘導体を包含する。
【００５２】
本明細書で用いられる「ハロゲン」、「ハロ」、又は「ｈａｌ」は、周期律表のＶＩＩＡ族に位置する元素であると理解される。ハロゲンは７つの価電子を有する反応性非金属である。ハロゲン基は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、及び−Ｉを包含する。
【００５３】
本明細書で用いられているような、用語「ヘテロ」を用いて化学基の種類の変更は、任意の炭素原子から水素原子を除去することによって官能基の特定の種類から誘導された官能基の種類であると理解される。
【００５４】
本明細書で用いる「オレフィン」は、芳香族化合物のホルマール体を別にして、１つ又はそれ以上の炭素−炭素二重結合を有している非環式又は環式炭化水素であると理解される。オレフィン種はアルケン及びシクロアルケン並びに対応するポリエンを包含する。
【００５５】
本明細書で用いられる用語「置換されていてもよい」、「置換されていてもよいアルキル」「置換されていてもよいアルケニル」、「置換されていてもよいアルキニル」、「置換されていてもよい炭素環」、「置換されていてもよいアリール」、「置換されていてもよいヘテロアリール」、「置換されていてもよい複素環」、及びその他の置換されていてもよい基は、それらの１つ、２つ又は３つ以上の水素原子の、これに限定されないが、以下のものを包含する具体的な置換基での独立した置き換えによって置換されているか又は置換されていない基を示す：
−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、
−ＯＨ、保護されたヒドロキシ、アルコキシ、オキソ、チオオキソ、
−ＮＯ２、−ＣＮ、ＣＦ３、Ｎ３、
−ＮＨ２、保護されたアミノ、−ＮＨアルキル、−ＮＨアルケニル、−ＮＨアルキニル、−ＮＨシクロアルキル、−ＮＨ−アリール、−ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨ−複素環、−ジアルキルアミノ、−ジアリールアミノ、−ジヘテロアリールアミノ、
−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルケニル、−Ｏ−アルキニル、−Ｏ−シクロアルキル、−Ｏ−アリール、−Ｏ−ヘテロアリール、−Ｏ−複素環、
−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルケニル、−Ｃ（Ｏ）−アルキニル、−Ｃ（Ｏ）−カルボシクリル、−Ｃ（Ｏ）−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロシクリル、
−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ−アルキル、−ＣＯＮＨ−アルケニル、−ＣＯＮＨ−アルキニル、−ＣＯＮＨ−カルボシクリル、−ＣＯＮＨ−アリール、−ＣＯＮＨ−ヘテロアリール、−ＣＯＮＨ−ヘテロシクリル、 
−ＯＣＯ２−アルキル、−ＯＣＯ２−アルケニル、−ＯＣＯ２−アルキニル、−ＯＣＯ２−カルボシクリル、−ＯＣＯ２−アリール、−ＯＣＯ２−ヘテロアリール、−ＯＣＯ２−ヘテロシクリル、
−ＯＣＯＮＨ２、−ＯＣＯＮＨ−アルキル、−ＯＣＯＮＨ−アルケニル、−ＯＣＯＮＨ−アルキニル、−ＯＣＯＮＨ−カルボシクリル、−ＯＣＯＮＨ−アリール、−ＯＣＯＮＨ−ヘテロアリール、−ＯＣＯＮＨ−ヘテロシクリル、
−ＮＨＣ（Ｏ）−アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｏ）−アルキニル、−ＮＨＣ（Ｏ）−カルボシクリル、−ＮＨＣ（Ｏ）−アリール−ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロシクリル、
−ＮＨＣＯ２−アルキル、−ＮＨＣＯ２−アルケニル、−ＮＨＣＯ２−アルキニル、−ＮＨＣＯ２−カルボシクリル、−ＮＨＣＯ２−アリール、−ＮＨＣＯ２−ヘテロアリール、−ＮＨＣＯ２−ヘテロシクリル、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−ルケニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−カルボシクリル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−ヘテロシクリル、
ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−アルキル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−アルキニル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−カルボシクリル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−ヘテロシクリル、
−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−アルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−カルボシクリル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロシクリル、
−ＮＨＣ（ＮＨ）−アルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−カルボシクリル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−アリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）−ヘテロシクリル、
−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−アルキル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−アルケニル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−アルキニル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−カルボシクリル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−アリール、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロアリール、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロシクリル、
−Ｓ（Ｏ）−アルキル、−Ｓ（Ｏ）−アルケニル、−Ｓ（Ｏ）−アルキニル、−Ｓ（Ｏ）−カルボシクリル、−Ｓ（Ｏ）−アリール、−Ｓ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｓ（Ｏ）−ヘテロシクリル、
−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ−アルキル、−ＳＯ２ＮＨ−アルケニル、−ＳＯ２ＮＨ−アルキニル、−ＳＯ２ＮＨ−カルボシクリル、−ＳＯ２ＮＨ−アリール、−ＳＯ２ＮＨ−ヘテロアリール、−ＳＯ２ＮＨ−ヘテロシクリル、
−ＮＨＳＯ２−アルキル、−ＮＨＳＯ２−アルケニル、−ＮＨＳＯ２−アルキニル、−ＮＨＳＯ２−カルボシクリル、−ＮＨＳＯ２−アリール、−ＮＨＳＯ２−ヘテロアリール、−ＮＨＳＯ２−ヘテロシクリル、
−ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、
−アルキル、−アルケニル、−アルキニル、−アリール、−アリールアルキル、−ヘテロアリール、−ヘテロアリールアルキル、−ヘテロシクロアルキル、−シクロアルキル、−炭素環、−複素環、ポリアルコキシアルキル、ポリアルコキシ、−メトキシメトキシ、メトキシエトキシ、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−Ｓ−アルケニル、−Ｓ−アルキニル、−Ｓ−カルボシクリル、−Ｓ−アリール、−Ｓ−ヘテロアリール、−Ｓ−ヘテロシクリル、又はメチルチオメチル。
【００５６】
アリール、ヘテロアリール、炭素環、複素環、アルキル等は更に置換できることは理解される。
【００５７】
環の何れの位置にでも結合できる可能性が示されている基の構造が以下に示すように提供される。
【００５８】
【化９】
2014511877.tif 000010
【００５９】
化合物において、アミノ酸位置はゼロ（０）位として任意に定義されているホスホスレオニンに対応して決定される。ペプチドのＣ末端に対して（右に対して）位置＋１（ホスホスレオニンに隣接）、＋２（ホスホスレオニンではなく、＋１に隣接）等のようにアミノ酸が示される。同様に、Ｎ末端近くのアミノ酸は位置−１（ホスホスレオニンに隣接）−２（ホスホスレオニンではなく、−１に隣接）等のようにアミノ酸が示される。
【００６０】
「細胞に接触すること」は本明細書では、薬剤又は単離した細胞が試験細胞又は処理する細胞と相互作用し、試験細胞又は処理する細胞によって潜在的に取り込まれて、試験細胞又は処理する細胞に影響を及ぼせるように、薬剤を試験細胞、例えば、培地中又は動物内で処理される細胞へもたらすことであると理解される。薬剤又は単離された細胞は細胞へ直接送達するか（例えば、培養培地へ薬剤の添加によるか、又は目的の細胞又は組織内への注射によって）、或いは血流、リンパ系、又はその他の方法で細胞へ送達するための経腸又は非経口経路で生体へ送達することによって送達できる。
【００６１】
本明細書で用いられる「コントロールのサンプル又は対象と比較して変化した」は、正常、未処置又はコントロールサンプルから得たサンプルより統計的に異なっているレベルである検出される被分析物又は診断或いは治療のインジケーターのレベルを有していることであると理解される。コントロールサンプルは、例えば、培養細胞、１つ又はそれ以上の実験動物、又は１人又はそれ以上のヒト対象を包含する。コントロールサンプルを選択及び試験する方法は当業者の技量範囲内である。被分析物質は、細胞又は生体よって特徴的に発現又は生じる天然の物質（例えば、ＰＳＡ）又はレポーター構築によって産生される物質（例えば、β−ガラクトシダーゼ又はルシフェラーゼ）であってよい。検出に用いる方法によって変化の量及び測定を変えることができる。例えば、存在する被分析物質の分解の量は、抽出反応条件及び薬剤に暴露した後のサンプルを採取する時間に依存するだろう。コントロール基準サンプルと比較した変化は、拮抗薬又はその他の阻害剤の存在下における、リガンドの受容体への減少した結合も包含する。統計的有意性の判定は当業者の能力の範囲内である。
【００６２】
本明細書で用いられる「検出（detecting）」、「検出（detection）」等は、サンプル中の特定の被分析物質又はサンプル中の受容体構築物からの産物の同定のために行われるアッセイであると理解される。検出はキナーゼ又はその他の酵素の活性化の同定も含むことができる。検出は、点突然変異、遺伝子のコード配列又は転写／翻訳調節配列の全欠失又は部分欠失、遺伝子配列の切断、或いは発現レベル又は遺伝子によって発現されたタンパク質の配列を変えることができる変化（特に配列の半価が対象における表現型の変化をもたらす場合）のような、遺伝子配列の突然変異の同定を包含できる。検出は、腫瘍のサイズ、転移の有無、血管形成の有無の確認を包含できる。サンプル中で検出された被分析物質の量は、無し又はアッセイ若しくは方法の検出レベル以下であろう。
【００６３】
本明細書で用いられる「診断」とは、病気、障害、又は疾患の少なくとも１つの兆候又は症状の存在による病気、障害、又は疾患を有する対象を識別するための、観察、試験、又は状況に基づいている対象の疾患の臨床的又はその他の評価を示す。一般的に、本発明の方法を用いる診断は、理学的検査、画像化、更なる臨床検査等による病気、障害、又は疾患のその他の兆候又は症状に関する対象の観察を包含する。
【００６４】
本明細書で用いられる「診断マーカー」は、病気治療又は予防的治療或いは方法の進展又は効果を観察するために、評価、特に定量的に評価できる病気又は疾患の１つ又はそれ以上の兆候又は症状であると理解される。診断マーカーは腫瘍から放出される物質（例えば、ＰＳＡのような抗原又は酵素）であってよい。診断マーカーは腫瘍サイズ及び／又は腫瘍の悪性度及び／又は腫瘍の生育速度であってよい。診断マーカーは血管形成の有無であってよい。診断マーカーは、インビトロアッセイで測定される血球数又は細胞機能、又は転移の存在又は特性（数及びサイズ）であってよい。
【００６５】
本明細書で用いられる用語「有効な」及び「有効性」は、薬理学的有効性及び生理学的安全性の両方を含んでいる。薬理学的安定性は、患者において所望の生物学的効果をもたらす治療の能力を示す。生理学的安全性は、治療薬の投与がもたらす細胞、臓器及び／又は生体レベルにおける毒性のレベル、又はその他の有害な生理学的効果（通常、副作用と言う）を示す。一方、用語「無効な」は、有害効果が存在しなくても、少なくとも無層別群において、治療的に有用であるのに十分な薬理学的効果をもたらさない治療であることを示す。（このような治療は、発現プロフィール（複数を含む）によって同定できる下位群において無効であろう。）「効果が弱い」は、治療的に有意に低いレベルの薬理学的効果及び／又は治療的に高いレベルの有害な生理学的効果をもたらす治療を意味する。
【００６６】
従って、薬物の投与に関しては、病気又は疾患「に対して有効な」薬物は、臨床的に適切な方法での投与が、少なくとも統計的に有意な患者の一部に対して、症状の改善、治癒、病気の兆候又は症状の減少、余命の延長、生活の質の改善、又は特定の種類の病気又は疾患を治療することに精通している医師によって有益であると一般的に認められているその他の効果のような、有益な効果をもたらす。
【００６７】
本明細書で用いられる「Ｆｍｏｃ」は、分子式Ｃ１５Ｈ１１ＣｌＯ２を有する９−フルオレニルメチルオキシカルボニルであると理解される。この保護基の構造は周知である。
【００６８】
本明細書で用いられる「異種タンパク質」におけるような「異種」は、それが発現される細胞において自然に発現されないタンパク質であると理解される。「異種タンパク質」は異なった種から得られるが、その必要はない。
【００６９】
用語「過剰増殖性疾患」又は「新生物」は、過剰な細胞増殖或いは生育、又は減少した細胞死によって特徴付けられる悪性腫瘍を包含する。特定の実施態様では、用語「癌」は、これに限定されないが、癌腫、肉腫、白血病、及びリンパ腫を包含する。用語「癌」は、原発性悪性腫瘍、例えば、その細胞が原発腫瘍の部位以外の対象の部位へ移行していないもの、及び続発性悪性腫瘍、例えば、原発腫瘍の部位とは異なる第２部位へ腫瘍細胞が移動する、転移から生じるもの、を包含する。腫瘍は固形腫瘍（非血液腫瘍）及び血腫を包含する。癌は、これに限定されないが、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、基底細胞癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、乳癌、子宮頸癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、食道癌、ユーイングファミリー腫瘍、網膜芽細胞腫、胃癌、胃腸腫瘍、神経芽腫、頭頸部癌、肝細胞（肝臓）癌、ホジキンリンパ腫、膵島腫瘍（膵内分泌部）、腎臓（腎細胞）癌、喉頭癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞型リンパ腫、髄芽腫、黒色腫、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、直腸癌、甲状腺癌を包含する。
【００７０】
ポリペプチドに関連して用いときに本明細書で用いられる「単離された」又は「精製された」は、天然のポリペプチド又はタンパク質がその正常な生理環境から取り除かれているか（例えば、血漿又は組織から単離されたタンパク質）、又は非天然環境で合成されている（例えば、インビトロの翻訳系で人工的に合成された）ことを意味する。従って、「単離された」或いは「精製された」ポリペプチドは無細胞溶液中に存在できるか又は異なった細胞環境に置かれることができる（例えば、異種細胞型中に発現される）。用語「精製された」は、ポリペプチドがポリペプチドだけで存在していることを意味しているのではなく、それと生来結びついている細胞又は生物物質を本質的に含んでいないので（約９０〜９５％、最大９９〜１００％まで純粋）、天然のポリペプチドと区別されることを意味している。同様に、単離された核酸はその正常な生理環境から取り除かれている。細胞に関連して用いられるときの「単離された」は、細胞培養又は組織培養の何れかで培養中の（動物中ではない）初代細胞又は細胞株の細胞を意味する。細胞は、正常動物、遺伝子組み換え動物、自然発生の遺伝子変化を有する動物、及び／又は遺伝子及び／又は遺伝子誘発疾患又は病気を有する動物から単離できる。
【００７１】
本明細書の用語「立体異性体」は、同じ分子式及び結合した原子の配列（構造）を有しているが、空間におけるそれらの原子の三次元配向だけが異なっている異性体分子を示す。構造異性体は同じ分子式を共有しているが、異なった原子及び／又は基の間の結合関係及び／又はその順序が異なっている。ある特定の実施態様では、立体異性体は構成原子の同じ順序及び結合関係を有しているが、空間で異なった配向性を有している（エナンチオマー及びジアステレオマーのような）化合物を示す。
【００７２】
用語「プロドラッグ」は、インビボで代謝できる部分を有している化合物を包含する。一般に、プロドラッグはインビボでエステラーゼによって又は別のメカニズムによって活性化合物に代謝される。プロドラッグの例及びその使用は当該技術分野において周知である（例えば、Berge et al. (1977) “Pharmaceutical Salts”, J. Pharm. Sci. 66:1-19を参照されたい）。プロドラッグは、化合物の最終単離及び精製の間にその場で製造するか、又は別に精製された化合物の遊離酸又はヒドロキシルを適切なエステル化剤で反応させて製造できる。水酸基はカルボン酸を用いる処理を介してエステルに変換できる。プロドラッグ部分の例は、置換及び非置換、分岐又は非分岐の低級アルキルエステル部分（例えば、プロピオン酸エステル）、低級アルケニルエステル、ジ低級アルキルアミノ低級−アルキルエステル（例えば、ジメチルアミノエチルエステル）、アシルアミノ低級アルキルエステル（例えば、アセチルオキシメチルエステル）、アシルオキシ低級アルキルエステル（例えば、ピバロイルオキシメチルエステル）、アリールエステル（フェニルエステル）、アリール低級アルキルエステル（例えば、ベンジルエステル）、置換（例えば、メチル、ハロ、又はメトキシ置換基で）アリール及びアリール−低級アルキルエステル、アミド、低級アルキルアミド、ジ低級アルキルアミド、及びヒドロキシアミドを包含する。好ましいプロドラッグ部分はプロピオンサン及びアシルエステルである。インビトロで別のメカニズムによって活性形態に変換するプロドラッグも包含される。
【００７３】
本明細書で用いられる「キット」は、本発明の方法で用いるための少なくとも１つの非標準実験試薬を含んでいると理解される。例えば、キットは少なくとも１つの改変のためのペプチド、ペプチドの改変のための１つ以上のアルデヒド分子、及び使用説明書の少なくとも１つの、好ましくは少なくとも２つを、全てを適切に包装して包含できる。キットは、乾燥粉末、濃縮溶液、そのまま使える溶液のような、本発明の方法を実施するのに必要なその他の成分を更に含むことができる。ある実施態様では、キットは本発明の方法で用いるための試薬を含む１つ又はそれ以上の容器を含んでいて、このような容器は、箱、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、ポーチ、ブリスターパック、又は当該技術分野で公知のその他の適切な容器であってよい。このような容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属箔、又は試薬を入れるのに適しているその他の材料で作ることができる。
【００７４】
本明細書で用いられる用語「標識」又は「検出可能な標識」は、検出可能な（好ましくは定量可能な）シグナルをもたらすために用いることができ、そして化学化合物、核酸又はタンパク質に付着できる何れかの原子又は分子を示す。標識は、蛍光、放射線、比色分析、重量測定、Ｘ線解析或いは吸収、磁力、酵素活性等によって検出可能なシグナルをもたらす。ポリペプチド及び糖タンパク質を標識化する様々な方法が当該技術分野で公知であって使用できる。ポリペプチドのための標識の例は、これに限定されないが、以下のものを包含する：放射性同位元素（例えば、３Ｈ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＩＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素標識（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、ベータガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）ビオチニル基、二次受容体によって認識される既定ポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープ標識）。ある実施態様では、標識は、潜在的な立体障害を減少するために多種の長さのスペーサーアームによって付着される。その他に、標識は、融合タンパク質、例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）の一部分である。
【００７５】
本明細書で用いられる「ライブラリー」は、化学ライブラリーであると理解される。化学ライブラリーは２以上の（１０以上、５０以上、１００以上、２００以上、５００以上、１０００以上、５０００以上、１０，０００以上等；又は述べられた値で括られる任意の範囲）、好ましくは構造及び／又は潜在的に機能タンパク質を有している化合物を包含する。ライブラリーは、例えば、所望の活性、例えば、キナーゼ結合、キナーゼ刺激、キナーゼ阻害活性を有する化合物を選択するスクリーニングアッセイのために用いることができる。
【００７６】
「得ること」は、製造すること、購入すること、又はその他の入手法であると理解される。
【００７７】
本明細書で用いられる「オリゴヌクレオチド配列」は、化学合成法によって、又は適切なプロモーター配列を含んでいる構築物からの転写によって製造された非−コード核酸配列であると理解される。本明細書で用いられる二本鎖ＲＮＡオリゴヌクレオチド配列はヘアピン構造（例えば、ｓｈＲＮＡ）を形成するか又は他の非核酸連鎖と結合する一本鎖、又は二本鎖構造を形成するためにアニールされた二本の異なった鎖を包含している。
【００７８】
「オキシム改変ペプチド」等は、少なくとも１つのアミノ酸がアルデヒドと反応してオキシム改変ペプチドを作る、アミノオキシ基、−Ｏ−ＮＨ２を包含している、ペプチドであると理解される。一実施態様では、アミノオキシ含有ペプチドはアルデヒド化合物のライブラリーと反応してオキシ改変ペプチドのライブラリーを提供する。例示的な反応スキームを示す。
【００７９】
【化１０】
2014511877.tif 000011
【００８０】
本明細書で用いられる「ペプチド」は、ペプチド結合で結合した独立して選ばれた２つ以上の天然又は非天然のアミノ酸であると理解される。ペプチドはペプチド結合で結合した２，３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２又はそれ以上の天然又は非天然アミノ酸を包含できる。
【００８１】
本明細書で用いられる「ペプチド−ペプチドハイブリッド」は、少なくとも１つのアミノ酸が下記の構造を有する非天然アミノ酸Ｎ−アルキルグリシンからなるペプチドであると理解される。
【００８２】
【化１１】
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【００８３】
「ペプトイド」は、Ｎ−置換グリシン残基（ＮＳＧ）のポリマーである。これらは生物活性を保持しながらタンパク分解への抵抗を示すペプチド模倣薬の重要な種類として浮上してきた。ペプチドとＮＳＧ残基の両方を含有しているペプチド−ペプトイドハイブリッドも著しい有用性を示している。例は、ＷＷ及びＳＨ３ドメイン−結合ペプチドにおいて重要なＰｒｏをＮＳＧ残基で置き換えてより高い選択性及び親和性をもたらすことによって提供される。
【００８４】
句「薬学的に許容される担体」は、当該技術分野で認識されていて、本発明の化合物を哺乳動物に投与するのに適している、薬学的に許容される物質、組成物又は賦形剤を包含している。担体は、対象薬剤を身体の１つの臓器、又は部分から、体の別の臓器、又は部分まで運搬又は輸送するのに関与している、液体又は固体の充填剤、希釈剤、賦形剤又は封入剤を包含する。担体は、製剤の他の成分と適合性があって、患者に有害ではないという意味で「許容され」なければならない。例えば、細胞の投与のための薬学的に許容される担体は一般に、注射による送達に対して許容される担体で、送達される細胞を損傷し得る洗浄剤又は別の化合物のような試薬を包含しない。薬学的に許容される担体として機能できる物質の幾つかの例は：乳糖、ブドウ糖及び蔗糖のような、糖類；コーンスターチ及び馬鈴薯澱粉のような、澱粉類；カルボキシメチル・セルロース・ナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロースのような、セルロース及びその誘導体；トラガガント；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバター及び坐薬ワックスのような、賦形剤；落花生油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油及び大豆油のような、油類；ポリエチレングリコールのような、グリコール類；グリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコールのような、ポリオール類；オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルのような、エステル類；寒天；水酸化マグネシウム及び水酸化アンモニウムのような、緩衝剤；アルギン酸；発熱性物質除去蒸留水；等張食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝溶液；及び医薬製剤で用いられる非毒性の適合性物質を包含する。
【００８５】
湿潤剤、乳化剤、及びラウリル硫酸ナトリウム並びにステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤、更に着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味剤、香味並びに芳香剤、保存剤及び抗酸化剤も組成物中に存在させることができる。
【００８６】
薬学的に許容される抗酸化剤は：アスコルビン酸、塩酸システイン、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等のような、水溶性抗酸化剤；パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＨＢＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、αトコフェロール等の脂溶性抗酸化剤；及びクエン酸、エチルジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸等の金属キレート剤を包含する。
【００８７】
本発明の製剤は、経口、経鼻、局所、経皮、口腔、舌下、筋肉内、腹腔内、直腸、膣内及び／又は非経口投与に適しているものを包含する。製剤は都合よく単回用量形態で提供でき、医薬の技術分野で公知の方法で製剤化できる。単回用量形態を製造するために担体物質と混合できる活性成分の量は、一般に治療効果をもたらす化合物の量であろう。
【００８８】
本明細書で用いられる薬学的に許容される塩は、これに限定されないが、酒石酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、酸性酒石酸塩、二塩酸塩、サリチル酸塩、ヘミコハク酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、塩酸塩、カルバミン酸塩、硫酸塩、硝酸塩、及び安息香酸塩、更にこれらの組み合わせ等を包含する。ペプチド模倣薬の何れの形態、例えば、ペプチド模倣薬の薬学的に許容される塩、ペプチド模倣薬の遊離塩基、又はこれらの混合物、も本発明の方法で用いるのに適している
【００８９】
本明細書の「複数」は、２以上であると理解される。例えば、複数は、少なくとも２、３、４、５、又はそれ以上を示す。
【００９０】
本明細書で用いられる「ポロ様キナーゼ」又は「Ｐｌｋ」は、任意の生命体由来、好ましくは哺乳動物体由来、好ましくは人体由来の、Ｐｌｋ−１（受託番号Ｎｏ．Ｐ５３３５０．１ ＧＩ：１７０９６５８として入所可能なヒト配列；  受託番号Ｑ０７８３２．２ ＧＩ：１７０９６５９として入手可能なマウス配列；  受託番号Ｎｏ．Ｑ６２６７３．１ ＧＩ：１２２３０３９６として入手可能ならラット配列；  受託番号Ｎｏ．ＸＰ＿００１１６３５８５．１ ＧＩ：１１４６６１６２０として入手可能なチンパンジー配列）；  Ｐｌｋ−２（受託番号Ｎｏ．Ｑ９ＮＹＹ３．３  ＧＩ：２２０９６３７４として入手可能なヒト配列）；  Ｐｌｋ−３（受託番号Ｎｏ．Ｑ９Ｈ４Ｂ４．２  ＧＩ：５１３３８８２２として入手可能なヒト配列）；  及びＰｌｋ−４（受託番号Ｎｏ．Ｏ００４４４．３  ＧＩ：１６０１１３１５０として入手可能なヒト配列)と呼ばれるタンパク質を纏めて示す。このようなタンパク質は適切な翻訳生成物をもたらす核酸によってコードされ得る；しかしながら、ある特定の実施態様では、ポロ様キナーゼはＧｅｎＢａｎｋ又は多数の公的に入手可能なデータベースの何れかを用いて容易に同定できる天然遺伝子によってコードされる。全てのＧｅｎＢａｎｋ番号は本願の出願日として参照により本明細書に取り込まれた。
【００９１】
本明細書で用いる「レポーター構築物」は、プロモーター配列の制御下に、プラスミド上によく存在し、検出可能な遺伝子産物を有する、外部から挿入された遺伝子であると理解される。プロモーターの活性は１つ又はそれ以上の公知細胞経路を介するシグナル伝達上で調節される。好ましくは、遺伝子産物は定量法を用いて容易に検出される。通常のレポーター遺伝子はルシフェラーゼ及びベータガラクトシダーゼを含んでいる。レポーター構築物はトランスフェクション又は感染方法によって一過的に細胞へ挿入できる。また、安定な細胞株は当業者に周知の方法を用いて作成できるか、或いはレポーター構築物を発現している遺伝し組み換え動物から得ることができる。特定のレポーター遺伝子又は検出方法は本発明の限定ではない。
【００９２】
「ＲＮＡ干渉」は、ｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡの何れかの、二本鎖ＲＮＡ分子を用いる特定のＲＮＡ転写物からの発現の崩壊に向けられた標的を示す。「ｓｉＲＮＡ」は低分子干渉ＲＮＡを示し、短鎖干渉ＲＮＡとしても知られていて、ＲＮＡ分子干渉（ＲＮＡｉ）経路に関与している（ここで、これは特定遺伝子の発現に干渉する）、２０〜２５ヌクレオ長の二本鎖ＲＮＡ分子の種類である。ｓｉＲＮＡは明確に同定された構造：何れかの末端上の２−ｎｔの３'突出部を有する、短い（通常は２１ｎｔ）ＲＮＡの二本鎖（ｄｓＲＮＡ）を有している。しかしながら、ｓｉＲＮＡは約１９〜約２４ヌクレオチド長に長さが様々である。それぞれの鎖は５'リン酸基及び３'水酸（−ＯＨ）基を有している。ｓｉＲＮＡの構造及び設計方法は、例えば、参照により本明細書に取り込まれている、国際特許出願公開第ＷＯ０２／４４３２１号に提供されている。本明細書で用いられる「低分子ヘアピン型ＲＮＡ」又は「短鎖ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）は、遺伝子を封じ込むために用いることができる強固なヘアピン型回転を形成するＲＮＡの配列である。ｓｈＲＮＡは、ＲＮＡをそれ自体の上に畳み込んで、分子内二本鎖領域及び不対ループ領域を有するステムループ構造を形成することを可能にする２つの自己相補的な領域を有する一本鎖ＲＮＡからなる。
【００９３】
本明細書で用いられる「サンプル」は、その環境（例えば、動物の血液又は組織、細胞、又は組織培養由来の馴化培地）から単離され、そして非分析物を含有していることが疑われるか、或いは知られている、腫瘍細胞又はレポーター構築物からの生成物のような、生物学的物質を示す。サンプルは組織又は体液の部分精製画分であってもよい。参照サンプルは、病気又は疾患を有していないドナー由来の、又は病気又は疾患を有している対象における正常組織（例えば、正常組織対主要組織）由来の、「正常」サンプルでよい。参照サンプルは、非治療ドナー、又は活性薬剤及び／又は刺激で処置していない（非処置又は賦形剤のみを投与）細胞培養物由来であってもよい。参照サンプルは、試験する薬剤又は細胞に接触させる前の「ゼロ（０）時点」に採取することもできる。
【００９４】
本明細書で用いられる「小分子」は、せいぜい約１５００Ｄａ、１０００Ｄａ、７５０Ｄａ、又は５００Ｄａの分子量を有する、典型的には有機化合物であると理解される。一実施態様では、小分子は、天然のアミノ酸及び／又はヌクレオチドのみを含有しているポリペプチド又は核酸を包含しない。
【００９５】
標的分子が、非特異的化合物、又は非特異的化合物のプールと比べて、少なくとも１００倍、好ましくは少なくとも５００倍、好ましくは少なくとも１０００倍、好ましくは少なくとも５０００倍、好ましくは１０，０００倍優先的に結合する場合に、薬剤、抗体、ポリペプチド、核酸、又はその他の化合物は、標的分子、例えば、抗原、ポリペプチド、核酸、又はその他の化合物と「特異的に結合する」。特異的に結合するは、物理的に関連している構造を有する２つ以上の化合物、例えば、２つのキナーゼ、特に２つのポロ様キナーゼのうちの１つと結合することに関連して用いることができる。例えば、薬剤、抗体、ポリペプチド、核酸又はその他の化合物は、１つのプロ様キナーゼ（例えば、Ｐｌｋ１）と、その他のプロ様キナーゼ、例えば、Ｐｌｋ２、Ｐｌｋ３、又はＰｌｋ４より、１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５００倍、１０，０００倍又はそれ以上優先的に、「特異的に結合」できる。結合優先性及び親和性は、例えば、各対について別々に親和性を確認することにより、又は競合アッセイ又は当該技術分野で公知のその他の方法を用いることによって、絶対的又は相対的に確認できる。
【００９６】
本明細書で用いられる「対象」は、生体を示す。ある特定の実施態様では、生体は哺乳動物である。ある特定の実施態様では、対象は哺乳動物である。ある特定の実施態様では、対象は家畜である。対象の例は、ヒト、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウマ、ヤギ、及びヒツジを包含する。ヒト対象は患者とも称する。
【００９７】
特定の病気、疾患、又は症候群に「罹っているか又は罹っている疑いのある」対象は、適確な個人が、対象が病気、疾患、又は症候群に罹っていると診断又は疑うことができるような十分な数の危険因子を有しているか、又は病気、疾患、又は症候群の兆候又は症状の十分な数又は組み合わせを提示する。癌のような疾患に罹っているか又は罹っている疑いがある対象を識別する方法は当業者の技術の範囲内である、特定の病気、疾患、又は症候群に罹っている対象及び罹っている疑いのある対象は、必ずしも異なった２つ群ではない。
【００９８】
本明細書で用いられる「治療有効量」は、単回又は複数回用量の細胞又は対象への投与によって、このような治療なしで期待されていたものを超えてこのような疾患を有する対象の生存性を延長するのに有効である薬剤の量を示す。
【００９９】
薬剤は、単独で又は１つ又はそれ以上の治療薬剤と、通常の賦形剤、例えば、薬学的に許容される担体と混合した医薬組成物として、又は放射線療法のような治療処置と組み合わせて、対象に投与できる。
【０１００】
医薬品は単回投与形態で便利に投与できて、医薬技術分野で周知の方法、例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co., Easton, PA, 1985) に記載されているような方法によって製造できる。非経口投与用の製剤は、滅菌水又は食塩水、ポリエチレングリコールのようなポリアルキレングリコール、植物起源の油類、水素化ナフタレン類等のような一般的な賦形剤を含有できる。特に、生物適合性で、生物分解性のラクチドポリマー、ラクチド／グリコリド共重合体、又はポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体は特定の薬剤の放出を制御するために有用な賦形剤である。
【０１０１】
当然のことながら、所定の治療に用いられる活性化合物の実際に好ましい量は、例えば、用いられる特定の化合物、製剤化された特定の組成物、投与の方法、及び対象の特徴、例えば、対象の人種、性別、体重、総体的な健康及び年齢によって変わるだろう。投与の所定プロトコールのための適切な投与速度は、先のガイドラインに関して行われた従来の用量決定試験を用いて当業者が容易に確定できる。
【０１０２】
本明細書で用いられる、特定の病気、又は疾患等「の影響を受けやすい」又は「の傾向がある」又は「に罹りやすい」は、遺伝、環境、健康、及び／又はその他の危険因子に基づいて、一般住民より病気又は疾患をより発症しやすい個人を示す。疾患を発症する可能性の増大は、約１０％、２０％、５０％、１００％、１５０％、２００％又はそれ以上の増大であろう。
【０１０３】
本明細書で用いられる用語「トランスフェクション」は、導入遺伝子の細胞内への導入を示す。本明細書で用いられる「導入遺伝子」は、実験操作によって細胞のゲノム内へ導入される核酸配列の何れかを示す。トランスフェクションは、リン酸ＤＮＡ共沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラン介在トランスフェクション、ポリブレン介在トランスフェクション、電気穿孔法、マイクロインジェクション、リポソーム融合、リポフェクション、プロトプラスト融合、レトロウィルス感染、微粒子銃（すなわち、粒子照射）等を含む、当該技術分野で公知の様々な手段で実施できる。
【０１０４】
用語「安定なトランスフェクション」又は「安定にトランスフェクトされた」は、トランスフェクトされる細胞内のゲノム内への、導入遺伝子の導入及び融合を示す。用語「安定な形質変換体（トランスフェクタント）」は、ゲノムＤＮＡ内に１つ又はそれ以上の導入遺伝子が安定に融合している細胞を示す。
【０１０５】
用語「一過性のトランスフェクタント」又は「一過的にトランスフェクトされた」は、宿主細胞のゲノム内への導入遺伝子の融合がないトランスフェクトされた細胞内への１つ又はそれ以上の導入遺伝子の導入を示す。用語一過性の形質転換体」は１つ又はそれ以上の誘導遺伝子を一過的に融合している細胞を示す。
【０１０６】
用語「野生型」は、自然源から単離されたときの遺伝子又は遺伝子産物の特徴を有している遺伝子又は遺伝子産物を示す。野生型遺伝子は個体群の中で最も高い頻度で観察されるので任意に遺伝子の「正常」又は「野生型」形態と呼ばれる。これに対して、「改変」又は「変異」は、野生型遺伝子又は遺伝子産物と比較すると、配列内に修正（例えば、欠失、置換等）及び／又は機能特性（すなわち、変化した特性）を表示する遺伝子又は遺伝子産物を示す。自然に生じた変異体は単離でき：野生型遺伝子又は遺伝子産物と比較するとこれらが変化した特性を有していることによって、これらを確認できるということに留意されたい。
【０１０７】
本明細書提供される範囲は、範囲内の全ての値の省略表現であると理解される。例えば、１〜５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、及び５０より成る群からの任意の数、数の組み合わせ、又は部分的な範囲を含んでいると理解される。
【０１０８】
特に述べられているか又は内容から明瞭である場合を除いて、本明細書で用いられる用語「又は（ｏｒ）」は包括的であると理解される。
【０１０９】
特に述べられているか又は内容から明瞭である場合を除いて、本明細書で用いられる用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、当該技術分野における正常な許容誤差の範囲内、例えば、平均値の２標準偏差以内であると理解される。約は、述べられた値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５又は０．０１以内であると理解できる。
【０１１０】
本明細書の可変基の定義の何れかにおける化学基のリストの列挙は、リストされた基の単一の基又は組み合わせの何れかとしての基の定義を含んでいる。可変基に関する実施態様又は本明細書の態様の列挙は任意の単一実施態様又はその他の実施態様或いはそれらの部分との組み合わせを含んでいる。シス−又はトランス−と具体的に定義していない化学結合は、シス−又はトランス−の何れかであってよい。本発明の化合物は化合物の立体異性体の混合物を包含できるか、又は特定の立体異性体のみを包含できるか、又は特定部位における特異的な立体異性体を包含できる。
【０１１１】
全てのオリゴヌクレオチド配列は、特に指摘しない限り、５'末端から３'末端へ記載されている。
【０１１２】
本明細書に提供されている任意の化合物又は方法を、本明細書に提供されている１つ又はそれ以上の任意の別の組成物及び方法と組み合わせることができる。
【０１１３】
（化合物）
ポロ様キナーゼ（Ｐｌｋｓ）は、細胞増殖に極めて重要な役割を果たすＳｅｒ／Ｔｈｒタンパク質キナーゼの保存サブファミリーである。Ｐｌｋ１発現は腫瘍形成に密接に関連しているので、Ｐｌｋ１は抗癌治療に対して魅力のある標的と考えられている。ＰｌｋｓのＣ末端非触媒領域に特異的に見出されるポロ−ボックスドメイン（ＯＢＤ）は、タンパク質−タンパク質相互作用のためのホスホエピトープ結合モジュールを形成する。本明細書は、２つの近縁腫であるＰｌｋ２及びＰｌｋ３ではなく、Ｐｌｋ１のＰＢＤと、高い親和性で、特異的に相互作用する最小ホスホペプチドの同定を提供する。複合体中のＰｌｋ１ ＰＢＤの最小ホスホペプチド（ＰＬＨＳｐＴ）或いはその誘導体ＰＰＨＳｐｔ、ＬＨＳｐＴＡ、又は非ペプチドとの競合結合試験及び結晶構造の分析は、Ｃ末端ＳｐＴジペプチドが高い親和性があるアンカーとして機能するのに対して、Ｎ末端ＰＬＨ残基はＰＢＤへとき性及び親和性の両方をもたらすのに重要であることを明らかにした。最小ホスホ−Ｔｈｒ模倣ペプチドの試験は、Ｐｌｋ１のＰＢＤの阻害は有糸分裂停止及びアポトーシス細胞死を誘発するのに十分であることを明らかにした。従って、ＰＬＨＳｐＴのＰＢＤとの結合様式は抗Ｐｌｋ１薬剤を設計するための重要な鋳型を提供するだろう。
【０１１４】
本明細書で提供される化合物、組成物及び方法は、更なる治療関連ＰＢＤ標的薬剤の開発を導くことができるＰＥＧ化ペプチドの設計及び合成への新しい手段を示す。更に、ある特定のＰＥＧ化ペプチドは、全細胞系に活性ももたらした。
【０１１５】
本発明は、非天然アミノ酸だけではなく、ペプチド−ペプトイドハイブリッド（Ｎ−アルキルグリシン残基を含有している）も有している高親和性化合物を提供する。ある特定の実施態様では、本発明の化合物はＰＥＧ化ペプチドである。ＰＥＧ化ペプチドは高いＰＢＤ結合親和性を示す。ある特定の実施態様では、ＰＥＧ化ペプチドは全細胞系に活性ももたらす。
【０１１６】
ある態様では、本発明は式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体を提供する。
【０１１７】
【化１２】
2014511877.tif 000013
【０１１８】
式中の、ＰＥＧはポリエチレングリコール部分又はその誘導体である。
Ｚは、Ｏ、（Ｃ１〜６）アルキレン、又はＣＹ２であり、ここでＹはそれぞれ存在する場合は独立して、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒである。
ｎは、０、１又は２である。
Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、Ｈ又は（Ｃ１〜６）アルキル−カルボニルである。
Ｒ２は、Ｈ又はＲ９Ｏ−である。
Ｒ９は、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル−カルボニル、又は（Ｃ１〜６）アルキルである。
Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル−カルボニル、Ｘ５−Ｏ−（Ｃ１〜６）アルキル、又はグリシン部分である。
Ｒ３は、Ｈ又は（Ｘ４Ｏ）２Ｐ（Ｏ）−である。
Ｒ４は、Ｈ、アシル、（Ｃ１〜６）アルキル−カーボネート、又は（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−である。
Ｘ１は、Ｈ又は（Ｃ１〜６）アルキルであるか；又はＸ１及びＸ２はそれらが連結している結合と共に５〜８員のヘテロシクリル環を形成する。
Ｘ２は、結合、又は（Ｃ１〜６）アルキレンであるか；又はＸ１及びＸ２はそれらが連結している結合と共に５〜８員のヘテロシクリル環を形成する。
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ’、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ’−（Ｃ１〜６）アルキルである。
【０１１９】
Ｒ'は、Ｈ、アミノ−Ｏ−、（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−、（Ｃ２〜６）アルケニル、シクロアルキル、複素環、アリール−（Ｃ０〜６）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ０〜６）アルキルであり、ここで当該シクロアルキル、複素環、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、ヒドロスリフィド、アルキル、アルコキシ、アルケニル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、エステル、アミン、アミド、カルボキシル、及びアルキル−カルボニル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で置換されていてもよい。
Ｘ４は、それぞれの場合に独立して、Ｈ、（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜２０）アルキル−Ｓｉ−、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ０〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜６）アルアルキル、又はアミノ（Ｃ１〜６）アルアルキルであり、ここでＸ４位にあるそれぞれのアルキル部分は更に１つ又はそれ以上のヒドロキシル又はアルコキシ基で置換されていてもよく；或いは１つのＸ４基はＲ'と結合して大環状環を形成する。
Ｘ５は、（Ｃ１〜６）アルアルキル、―Ｎ＝Ｒ１０であり、ここでＲ１０は糖成分から導かれる。
ＡＡ１は、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、及びＴｙｒの群から選ばれるアミノ酸部分である。
ＡＡ２は、非存在、又はＨｉｓ、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、及びＴｙｒの群から選ばれるアミノ酸部分である。
【０１２０】
ここで、ＡＡ１又はＡＡ２に関するアミノ酸部分は、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜１０）アルキル、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、アリール−（Ｃ１〜１０）アルコキシ、アリール−（Ｃ１〜１０）アルコキシ、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−Ｓ−、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、ヘテロアリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−で置換されていてもよく、そしてそれぞれのアリール又はヘテロアリール部分は、アリール、ヘテロアリール、アルケニル、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アミン、アミド、カルボキシル、エステル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で更に置換されていてもよい。
【０１２１】
一実施態様では、ＡＡ１は置換されていてもよいＬｅｕである。別の実施態様では、ＡＡ２はＨｉｓ又はＧｌｎであり、ここでＨｉｓ及びＧｌｎは置換されていてもよい。一つの特定の実施態様では、ＡＡ２は置換されていてもよいＨｉｓである。
【０１２２】
ある特定の実施態様では、本発明の化合物は、式（ＩＡ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物若しくは立体異性体である。
【０１２３】
【化１３】
2014511877.tif 000014
【０１２４】
式中の、ＺはＯ、ＣＨ２、又はＣＦ２である。
ｎは、０、１又は２である。
Ｘ１はＨであり、そしてＸ２は結合又はＣＨ２であるか、又はＸ１及びＸ２はそれらが連結している結合と共に５員の複素環を形成する。
Ｒ２は、Ｈ又は（Ｘ４Ｏ）２Ｐ（Ｏ）−である。
Ｒ４は、Ｈ、又は（Ｃ１〜６）アルキルである。
Ｒ５及びＲ６の両方はＨであるか、又はＲ５及びＲ６の一方がＨで、他方がＸ５−Ｏ−（Ｃ１〜６）アルキル又はグリシン部分であり、ここでＸ５は−Ｎ＝Ｒ９であり、そしてＲ９は糖部分から誘導される。
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ'、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ'−（Ｃ１〜６）アルキルである。
Ｒ'は、Ｈ、アミノ−Ｏ−、（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル、複素環、アリール−（Ｃ０〜６）アルキル、又はヘテロでアリール−（Ｃ０〜６）アルキルあり、ここで当該シクロアルキル、複素環、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、アルキル、アルコキシ、アルケニル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、エステル、アミン、アミド、カルボキシル、及びアルキルカルボニル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で置換されていてもよい。
Ｇは、Ｈ、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、ヒドロキシルカルボニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、アミノ（Ｃ１〜２０）アルキル、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜２０）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ１〜２０）アルキルであり、ここで、アルキル、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは１つ又はそれ以上のハロゲン、ヒドロキシル又はアルコキシ基で置換されていてもよい。
【０１２５】
式（ＩＡ）の化合物の一実施態様では、ＰＥＧが、
【０１２６】
【化１４】
2014511877.tif 000015
【０１２７】
である。一実施態様では、ＢはＨ、（Ｃ１〜６）アルキル、又はヒドロキシスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここで現れるそれぞれの（Ｃ１〜６）アルキルは独立して、アミノ又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよく、そしてｎ'は５〜２００の整数である。
【０１２８】
別の実施態様では、Ｘ１及びＸ２は、それぞれが連結している結合と共に５員の複素環を形成する。更に別の実施態様では、Ｒ５及びＲ６の両方がＨである。
【０１２９】
式（ＩＡ）の化合物のある特定の実施態様では、本発明の化合物は式（ａ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である。
【０１３０】
【化１５】
2014511877.tif 000016
【０１３１】
式中の、Ｚは、Ｏ、ＣＨ２又はＣＦ２である。
Ｒ１は、
【０１３２】
【化１６】
2014511877.tif 000017
【０１３３】
である。
Ｂは、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル、又はヒドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここでそれぞれの（Ｃ１〜６）アルキル部分は独立して、アミノ又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよい。
ｎ'は、５〜１００から選ばれる整数である。
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ'、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ'−（Ｃ１〜６）アルキルである。
Ｒ'は、Ｈ、Ｈ２ＮＯ−、（Ｃ２〜６）アルケニル、フェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、フラニル−（Ｃ０〜６）アルキル、チオフェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、Ｎ−インドリル−（Ｃ１〜６）アルキル、フルオレニル、（Ｃ３〜８）シクロアルキル、イミダゾリル、キノリニル、ピリジニル、ピリミジニル、ジオキソ−ピリミジニル、フェナントレニル、又はビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−エニルであり、ここでＲ３は、ハロゲン、（Ｃ６〜１０）アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシ、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、（Ｃ１〜６）アルコキシカルボニル、シアノ、（Ｃ６〜１０）アリール−（Ｃ１〜６）アルコキシ、ヒドロキシル（Ｃ１〜６）アルキル、トリフルオロメチル、アミノ、及びニトロの群から選ばれる１つ又はそれ以上の置換基で更に置換されていてもよい。
Ｇは、Ｈ、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、ヒドロキシルカルボニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、アミノ（Ｃ１〜２０）アルキル、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜２０）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ１〜２０）アルキルであり、ここでアルキル、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは１つ又はそれ以上のハロゲン、ヒドロキシル又はアルコキシ基で置換されていてもよい。
【０１３４】
式（ａ）のある特定の実施態様では、ＺはＯ又はＣＨ２であり、そしてｎ'は５〜２０の整数である。
【０１３５】
ある特定の実施態様では、Ｂは（Ｃ１〜６）アルキル又はヒドロキシスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここで、ここに現れるそれぞれの（Ｃ１〜６）アルキル部分は独立して、アミノ又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよい。例えば、Ｂはメチル、
【０１３６】
【化１７】
2014511877.tif 000018
【０１３７】
である。
一実施態様では、Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ'、ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、又はＲ'−（ＣＨ２）２−Ｏ−であり、ここでＲ'はＨ、Ｈ２ＮＯ−、又はフェニル−（Ｃ１〜６）アルキルである。
【０１３８】
例えば、Ｒ'は以下の群から選ばれる。
【０１３９】
【化１８】
2014511877.tif 000019
【０１４０】
【化１９】
2014511877.tif 000020
【０１４１】
【化２０】
2014511877.tif 000021
【０１４２】
一実施態様では、ＧはＨである。別の実施態様では、Ｇはアルケニル−（Ｃ１〜１０）アルキル、ヒドロキシルカルボニル−（Ｃ１〜６）アルキル、アミノ（Ｃ１〜６）アルキル、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル、（Ｃ１〜１０）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ１〜１０）アルキルであり、ここでそれぞれのアルキル部分は１つ又はそれ以上のヒドロキシル又はアミノ基で更に置換されていてもよい。特定の実施態様では、ＺがＯであり、Ｒ'−Ｘ３がＨであり、Ｂがメチル、
【０１４３】
【化２１】
2014511877.tif 000022
【０１４４】
である。
式（ａ）の特定の例示化合物は、これに限定されないが、以下の表１の化合物を包含する。
【０１４５】
【表１−１】
2014511877.tif 000023
【０１４６】
【表１−２】
2014511877.tif 000024
【０１４７】
【表１−３】
2014511877.tif 000025
【０１４８】
【表１−４】
2014511877.tif 000026
【０１４９】
【表１−５】
2014511877.tif 000027
【０１５０】
【表１−６】
2014511877.tif 000028
【０１５１】
【表１−７】
2014511877.tif 000029
【０１５２】
【表１−８】
2014511877.tif 000030
【０１５３】
【表１−９】
2014511877.tif 000031
【０１５４】
【表１−１０】
2014511877.tif 000032
【０１５５】
【表１−１１】
2014511877.tif 000033
【０１５６】
本発明の例示化合物は、前記表に見られるような化学構造中の「Ｂ」基に対応している、
【０１５７】
【化２２】
2014511877.tif 000034
【０１５８】
部分を有している化合物も包含する。実例として、このような化合物は次の構造を含んでいる。
【０１５９】
【化２３】
2014511877.tif 000035
【０１６０】
式（ＩＡ）の特定の実施態様では、本発明の化合物は式（ｂ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である。
【０１６１】
【化２４】
2014511877.tif 000036
【０１６２】
式中の、ＺはＯ又はＣＨ２である。
Ｒ１は、
【０１６３】
【化２５】
2014511877.tif 000037
【０１６４】
である。
Ｂは、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル、又はヒドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここでそれぞれの（Ｃ１〜６）アルキル部分は独立して、アミノ基又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよい。
ｎ’は５〜１００から選ばれる整数である。
Ｒ３は、Ｈ又は（Ｘ４Ｏ）２Ｐ（Ｏ）−である。
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ'、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ'−（Ｃ１〜６）アルキルである。
Ｒ'は、Ｈ、Ｈ２ＮＯ−、（Ｃ２〜６）アルケニル、フェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、フラニル（Ｃ０〜６）アルキル、チオフェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、Ｎ−インドリル−（Ｃ１〜６）アルキル、フルオレニル、（Ｃ３〜８）シクロアルキル、イミダゾリル、キノリニル、ピリジニル、ピリミジニル、ジオキソ−ピリミジニル、フェナントレニル、又はビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−エニルであり、ここでＲ３は、ハロゲン、（Ｃ６〜１０）アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシ、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、（Ｃ１〜６）アルコキシカルボキシ、シアノ、（Ｃ６〜１０）アリール−（Ｃ１〜６）アルコキシ、ヒドロキシル（Ｃ１〜６）アルキル、トリフルオロメチル、アミノ及びニトロの群から選ばれる１１つ又はそれ以上の置換基で更に置換されていてもよい。
一方のＸ４はＨであり、そして他方のＸ４は、（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜２０）アルキル−Ｓｉ−、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル−、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ０〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜６）アルキル、又はミノ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここでそれぞれのアルキル部分は１つ又はそれ以上のヒドロキシル又はアルコキシ基で更に置換されていてもよい。
【０１６５】
式（ｂ）の化合物の特定の実施態様では、ＺはＯであり、Ｒ３は（Ｘ４Ｏ）２Ｐ（Ｏ）−であり、ｎ'は５〜２０の整数であり、Ｂは、（Ｃ１〜６）アルキル、
【０１６６】
【化２６】
2014511877.tif 000038
【０１６７】
であり、Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ'、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、又は（ＣＨ２）２−Ｏ−であり、そしてＲ'は、Ｈ、Ｈ２ＮＯ−、又はフェニル−（Ｃ１〜６）アルキルである。
【０１６８】
一実施態様では、Ｂはメチルである。別の実施態様では、Ｂは、
【０１６９】
【化２７】
2014511877.tif 000039
【０１７０】
である。更に別の実施態様では、Ｂは、
【０１７１】
【化２８】
2014511877.tif 000040
【０１７２】
である。
一実施態様では、Ｒ'−Ｘ３はＲ３であり、そしてＲ'はＨ又は（Ｃ２〜６）アルケニルである。
【０１７３】
一実施態様では、Ｘ４の一方はＨであり、そして他方は（Ｃ１〜１０）アルキル、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル、アルケニル−（Ｃ１〜１０）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜１０）アルキル、（Ｃ０〜６）アルコキシカルボニル又はアミノ−（Ｃ１〜１０）アルキルであって、ここでそれぞれのアルキル部分は１つ又はそれ以上のヒドロキシル、アミノ、又はアルコキシ基で更に置換されていてもよい。
【０１７４】
式（ｂ）の化合物の別の実施態様では、ＺはＯであり、Ｒ３はＨであり、ｎ'は５〜２０の整数であり、Ｂはアルキル、
【０１７５】
【化２９】
2014511877.tif 000041
【０１７６】
であり、Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ'、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、又はＲ'−（ＣＨ２）２−Ｏ−であり、そしてＲ'は、Ｈ、Ｈ２ＮＯ−、又はフェニル−（Ｃ１〜６）アルキルである。
【０１７７】
一実施態様では、Ｂはメチルである。別の実施態様では、Ｂは、
【０１７８】
【化３０】
2014511877.tif 000042
【０１７９】
である。更に別の実施態様では、Ｂは、
【０１８０】
【化３１】
2014511877.tif 000043
【０１８１】
である。
別の実施態様では、Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ'−（ＣＨ２）２−Ｏ−であり、そしてはフェニル−（Ｃ１〜６）アルキルである。
【０１８２】
式（b）の特定の例示化合物は、これに限定されないが、次の表２の化合物を包含する。
【０１８３】
【表２−１】
2014511877.tif 000044
【０１８４】
【表２−２】
2014511877.tif 000045
【０１８５】
【表２−３】
2014511877.tif 000046
【０１８６】
【表２−４】
2014511877.tif 000047
【０１８７】
【表２−５】
2014511877.tif 000048
【０１８８】
【表２−６】
2014511877.tif 000049
【０１８９】
本発明の例示化合物は、前記表に見られるような化学構造中の「Ｂ」基に対応している、
【０１９０】
【化３２】
2014511877.tif 000050
【０１９１】
部分を有している化合物も包含する。実例として、このような化合物は次の構造を含んでいる。
【０１９２】
【化３３】
2014511877.tif 000051
【０１９３】
式中の、ｎ'は５〜８の整数である。ある特定の実施態様では、ｎ'は５である。
式（ＩＡ）のある特定の実施態様では、本発明の化合物は式（ｃ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物若しくは立体異性体である。
【０１９４】
【化３４】
2014511877.tif 000052
【０１９５】
式中の、ＺはＯ、ＣＨ２、又はＣＦ２である。
Ｒ１は、
【０１９６】
【化３５】
2014511877.tif 000053
【０１９７】
である。
Ｂは、（Ｃ１〜６）アルキル、又はヒドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここで、ここに現れるそれぞれの（Ｃ１〜６）アルキル部分、は独立して、アミノ又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよい。
ｎ'は５〜１００から選ばれる整数である。
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ'、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又は、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキルである。
Ｒ'は、Ｈ、アミノ−Ｏ−、（Ｃ１〜６）アルキル―Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル、複素環、アリール−（Ｃ０〜６）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ０〜６）アルキルであり、ここで当該シクロアルキル、複素環、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、アルキル、アルコキシ、アルケニル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、エステル、アミン、アミド、カルボキシル、及びアルキルカルボニル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で置換されていてもよい。
【０１９８】
一実施態様では、ＺはＯである。別の実施態様では、ＺはＣＨ２である。別個の実施態様では、Ｒ'は、アリール−（Ｃ０〜６）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ０〜６）アルキルであり、ここで当該アリール又はヘテロアリール部分はアリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、アルキル、アルコキシ、アルケニル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、エステル、アミン、アミド、カルボキシル、及びアルキルカルボニル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なる置換基で置換されていてもよい。
【０１９９】
ある特定の実施態様では、Ｒ'はＡ−１、Ａ−２、Ａ−３、Ａ−４、Ａ−５、Ａ−６、及びＡ−７の群から選ばれる。
【０２００】
式（ｃ）の特定の例示化合物は、これに限定されないが、次の表３の化合物を包含する。
【０２０１】
【表３−１】
2014511877.tif 000054
【０２０２】
【表３−２】
2014511877.tif 000055
【０２０３】
【表３−３】
2014511877.tif 000056
【０２０４】
本発明の例示化合物は、前記表に見られるような化学構造中の「Ｂ」基に対応している、
【０２０５】
【化３６】
2014511877.tif 000057
【０２０６】
部分を有している化合物も包含する。実例として、このような化合物は次の構造を含んでいる。
【０２０７】
【化３７】
2014511877.tif 000058
【０２０８】
式中の、ｎ'は５〜８から選ばれる整数である。ある特定の実施態様では、ｎ'は５である。
【０２０９】
本発明の特定の実施態様は、化合物が式（ＩＢ）の化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体であるとしている。
【０２１０】
【化３８】
2014511877.tif 000059
【０２１１】
式中の、ＺはＯ、ＣＨ２又はＣＦ２である。
ｎは、０、１又は２である。
Ｘ１は、Ｈであるか、又はＸ１及びＸ２はそれらが連結している結合と共に５員の複素環を形成する。
Ｘ２は、結合又はＣＨ２であるか、又はＸ１及びＸ２はそれらが連結している結合と共に５員の複素環を形成する。
Ｒ３は、Ｈ又は（Ｘ４Ｏ）２Ｐ（Ｏ）−である。
Ｒ４は、Ｈ又は（Ｃ１〜６）アルキルである。
Ｒ５及びＲ６は、両方がＨであるか、又はＲ５及びＲ６の一方がＨで他方がＸ５−Ｏ−（Ｃ１〜６）アルキル又はグリシン部分であり、ここでＸ５は−Ｎ＝Ｒ９であり、そしてＲ９は糖部分から誘導される。
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ'、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ'−（Ｃ１〜６）アルキルである。
Ｒ'は、Ｈ、アミノ−Ｏ−、（Ｃ１〜６）アルキル―Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル、複素環、アリール−（Ｃ０〜６）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ０〜６）アルキルであり、ここで当該シクロアルキル、複素環、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、アルキル、アルコキシ、アルケニル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、エステル、アミン、アミド、カルボキシル、及びアルキルカルボニル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で置換されていてもよい。
Ｘ４は、それぞれの場合に独立して、Ｈ、（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜２０）アルキル−Ｓｉ−、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ０〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜６）アルアルキル、又はアミノ（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここでＸ４位に現れるそれぞれのアルキル部分は更に１つ又はそれ以上のヒドロキシル又はアルコキシ基で置換されていてもよい。
Ｇは、Ｈ、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、ヒドロキシルカルボニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、アミノ（Ｃ１〜２０）アルキル、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜２０）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ１〜２０）アルキルであり、ここで、アルキル、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは１つ又はそれ以上のハロゲン、ヒドロキシル又はアルコキシ基で置換されていてもよい。
【０２１２】
式（ＩＢ）の一実施態様では、ＰＥＧは、
【０２１３】
【化３９】
2014511877.tif 000060
【０２１４】
である。
ある特定の実施態様は、ＢがＨ、（Ｃ１〜６）アルキル、又はヒドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここで、ここに現れるような（Ｃ１〜６）アルキル部分のそれぞれは、独立して、アミノ又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよく、そしてｎ'は５〜２００から選ばれる整数であると定めている。
【０２１５】
別の実施態様では、Ｘ１及びＸ２は、それらが連結している結合と共に５員の複素環を形成する。更に別の実施態様では、Ｒ５及びＲ６の両方がＨである。
【０２１６】
式（ＩＢ）のある特定の実施態様では、本発明の化合物は式（ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である。
【０２１７】
【化４０】
2014511877.tif 000061
【０２１８】
式中の、ＺはＯ又はＣＨ２である。
Ｒ１は、
【０２１９】
【化４１】
2014511877.tif 000062
【０２２０】
である。
ＢはＨ、（Ｃ１〜６）アルキル、又はヒドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここで、それぞれの（Ｃ１〜６）アルキル部分は、独立して、アミノ又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよい。
ｎ'は５〜１００から選ばれる整数である。
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ’、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ’−（Ｃ１〜６）アルキルである。
Ｒ'は、Ｈ、Ｈ２ＮＯ−、（Ｃ２〜６）アルケニル、フェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、フラニル−（Ｃ０〜６）アルキル、チオフェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、Ｎ−インドリル−（Ｃ１〜６）アルキル、フルオレニル、（Ｃ３〜８）シクロアルキル、イミダゾリル、キノリニル、ピリジニル、ピリミジニル、ジオキソ−ピリミジニル、フェナントレニル、又はビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−エニルであり、ここでＲ３は、ハロゲン、（Ｃ６〜１０）アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシ、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、（Ｃ１〜６）アルコキシカルボニル、シアノ、（Ｃ６〜１０）アリール−（Ｃ１〜６）アルコキシ、ヒドロキシル（Ｃ１〜６）アルキル、トリフルオロメチル、アミノ、及びニトロの群から選ばれる１つ又はそれ以上の置換基で更に置換されていてもよい。
Ｘ４は、それぞれの場合に独立して、Ｈ、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、又はアルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキルである。
Ｇは、Ｈ、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、又はアリール−（Ｃ１〜２０）アルキルである。
【０２２１】
式（ｄ）の一実施態様では、Ｒ'−Ｘ３はＲ'である。別の実施態様では、Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ'−（Ｃ１〜６）アルキルである。Ｒ'は、例えば、Ｈ、フェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、又はイミダゾリルであってよく、ここでＲ３は、更に置換されていてもよい。
【０２２２】
別の実施態様では、Ｒ'はＡ−１、Ａ−２、Ａ−３、Ａ−４、Ａ−５、Ａ−６、及びＡ−７の群から選ばれる。
【０２２３】
式（ｄ）の特定な例示化合物は、これに限定されないが、次の表４の化合物を包含する。
【０２２４】
【表４−１】
2014511877.tif 000063
【０２２５】
【表４−２】
2014511877.tif 000064
【０２２６】
【表４−３】
2014511877.tif 000065
【０２２７】
本発明の例示化合物は、前記表に見られるような化学構造中の「Ｂ」基に対応している、
【０２２８】
【化４２】
2014511877.tif 000066
【０２２９】
部分を有している化合物も包含する。
式（ＩＢ）の特定な実施態様では、本発明の化合物は式（ｅ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である。
【０２３０】
【化４３】
2014511877.tif 000067
【０２３１】
式中の、ＺはＯ、ＣＨ２、又はＣＦ２である。
Ｒ１は、
【０２３２】
【化４４】
2014511877.tif 000068
【０２３３】
である。
Ｂは、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル、又はヒドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここでそれぞれの（Ｃ１〜６）アルキル部分はアミノ又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよい。
ｎ'は、５〜１００から選ばれる整数である。
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ’、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ’−（Ｃ１〜６）アルキルである。
Ｒ'は、Ｈ、アミノ−Ｏ−、（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル、複素環、アリール−（Ｃ０〜６）アルキル、又はヘテロでアリール−（Ｃ０〜６）アルキルであり、ここで当該シクロアルキル、複素環、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、アルキル、アルコキシ、アルケニル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、エステル、アミン、アミド、カルボキシル、及びアルキルカルボニル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で置換されていてもよい。
Ｘ４は、それぞれの場合に独立して、Ｈ、（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜２０）アルキル−Ｓｉ−、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ０〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜６）アルキル、又はアミノ（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここでＸ４位に現れるそれぞれのアルキル部分は更に１つ又はそれ以上のヒドロキシル又はアルコキシ基で置換されていてもよい。
Ｇは、Ｈ、アルケニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシカルボニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、ヒドロキシルカルボニル−（Ｃ１〜２０）アルキル、アミノ（Ｃ１〜２０）アルキル、アリール−（Ｃ１〜２０）アルキル、（Ｃ１〜２０）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ１〜２０）アルキルであり、ここで、アルキル、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは１つ又はそれ以上のハロゲン、ヒドロキシル又はアルコキシ基で置換されていてもよい。
【０２３４】
式（ｅ）の化合物の一実施態様では、ＺはＣＨ２である。別の実施態様では、ＧはＨである。別個の実施態様では、Ｘ４はＨである。
【０２３５】
式（ｅ）の特定の例示化合物は、これに限定されないが、次の表５の化合物を包含する。
【０２３６】
【表５】
2014511877.tif 000069
【０２３７】
本発明の例示化合物は、前記表に見られるような化学構造中の「Ｂ」基に対応している、
【０２３８】
【化４５】
2014511877.tif 000070
【０２３９】
部分を有している化合物も包含する。ある特定の実施態様では、ｎ'は５である。
【０２４０】
式（Ｉ）の化合物の別の実施態様はＡＡ２がＧｌｎであると定めている。
【０２４１】
ある特定の実施態様では、本発明の化合物は式（ＩＣ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である。
【０２４２】
【化４６】
2014511877.tif 000071
【０２４３】
式中の、ＺはＯ、ＣＨ２又はＣＦ２である。
ｎは、０、１又は２である。
Ｘ１は、Ｈであるか、又はＸ１及びＸ２はそれらが連結している結合と共に５員の複素環を形成する。
Ｘ２は、結合又はＣＨ２であるか、又はＸ１及びＸ２はそれらが連結している結合と共に５員の複素環を形成する。
Ｒ３は、Ｈ又は（Ｘ４Ｏ）２Ｐ（Ｏ）−である。
Ｒ４は、Ｈ、又は（Ｃ１〜６）アルキルである。
Ｒ'−Ｘ３は、Ｒ’、Ｒ'−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｒ'−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ’−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ’−（Ｃ１〜６）アルキルである。
Ｒ'は、Ｈ、アミノ−Ｏ−、（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル、複素環、アリール−（Ｃ０〜６）アルキル、又はヘテロでアリール−（Ｃ０〜６）アルキルあり、ここで当該シクロアルキル、複素環、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、アルキル、アルコキシ、アルケニル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、エステル、アミン、アミド、カルボキシル、及びアルキルカルボニル基の基から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で置換されていてもよい。
【０２４４】
式（ＩＣ）の一実施態様では、ＰＥＧは、
【０２４５】
【化４７】
2014511877.tif 000072
【０２４６】
である。
ある特定の実施態様は、ＢはＨ、（Ｃ１〜６）アルキル、又はヒドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり（ここで、ここに存在するそれぞれの（Ｃ１〜６）アルキル部分は、独立して、アミノ又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよい）、そしてｎ'は５〜２００ｋら選ばれる整数であると定めている。
【０２４７】
別の実施態様では、Ｘ１及びＸ２はそれらが連結している結合と共に５員の複素環を形成する。
【０２４８】
ある特定の実施態様では、Ｒ'は、Ｈ、Ｈ２ＮＯ−、（Ｃ２〜６）アルケニル、フェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、フラニル−（Ｃ０〜６）アルキル、チオフェニル−（Ｃ０〜６）アルキル、Ｎ−インドリル−（Ｃ１〜６）アルキル、フルオレニル、（Ｃ３〜８）シクロアルキル、イミダゾリル、キノリニル、ピリジニル、ピリミジニル、ジオキソ−ピリミジニル、フェナントレニル、又はビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−エニルであり、ここでＲ３は、ハロゲン、（Ｃ６〜１０）アリール、ヘテロアリール、（Ｃ１〜６）アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシ、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、（Ｃ１〜６）アルコキシカルボニル、シアノ、（Ｃ６〜１０）アリール−（Ｃ１〜６）アルコキシ、ヒドロキシル（Ｃ１〜６）アルキル、トリフルオロメチル、アミノ、及びニトロの基から選ばれる１つ又はそれ以上の置換基で更に置換されていてもよい。Ｒ'は、例えば、Ａ−１乃至Ａ−４８の群から選ばれる１つであってよい。
【０２４９】
一実施態様では、Ｘ１はＨであり、そしてＸ２はＣＨ２である。別の実施態様では、Ｒ'はＡ−１、Ａ−２、Ａ−３、Ａ−４、Ａ−５、Ａ−６、及びＡ−７の群から選ばれる。
【０２５０】
式（Ｉ）の特定の例示化合物は、これに限定されないが、次のような化合物も包含する。
【０２５１】
【化４８】
2014511877.tif 000073
【０２５２】
上記構造中のｎ'は独立して、５、６、７、又は８である。ある特定の実施態様では、ｎ'は７である。別の実施態様では、ｎ'は５である。
【０２５３】
式（Ｉ）の特定の実施態様では、本発明の化合物は構造（１）の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である。
【０２５４】
【化４９】
2014511877.tif 000074
【０２５５】
特定の実施態様では、本発明の化合物は構造（２）の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である。
【０２５６】
【化５０】
2014511877.tif 000075
【０２５７】
本発明の別の態様は、式（ＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体を提供する。
【０２５８】
【化５１】
2014511877.tif 000076
【０２５９】
式中の、ＰＥＧはポリエチレングリコール部分又はその誘導体である。
Ｒ１０は、Ｈ又は（Ｃ１〜６）アルキル−カルボニルである。
Ｒ１１は、Ｈ又はＲ９Ｏ−である。
Ｒ９は、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル−カルボニル、又は（Ｃ１〜６）アルキルである。
Ｒ１３−Ｘ３は、Ｒ１３、Ｒ１３−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、Ｒ１３−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｏ−、Ｒ１３−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、Ｒ１３−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｓ−、又はＲ１３−（Ｃ１〜６）アルキルである。
Ｒ１３は、Ｈ、アミノ−Ｏ−、（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−、（Ｃ２〜６）アルケニル、シクロアルキル、複素環、アリール−（Ｃ０〜６）アルキル、又はヘテロアリール−（Ｃ０〜６）アルキルであり、ここで当該シクロアルキル、複素環、アリール及びヘテロアリール部分のそれぞれは、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、ヒドロスルフィド、アルキル、アルコキシ、アルケニル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、エステル、アミン、アミド、カルボキシル、及びアルキルカルボニル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なる置換基で置換されていてもよい。
Ｒ１２は、糖部分から誘導される。
ＡＡ１は、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、及びＴｙｒの群から選ばれるアミノ酸部分である。
ＡＡ２は、非存在、又はＨｉｓ、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、及びＴｙｒの群から選ばれるアミノ酸部分である。
【０２６０】
ここで、ＡＡ１又はＡＡ２に関するアミノ酸部分は、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜１０）アルキル、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−、アリール−（Ｃ１〜１０）アルコキシ、アリール−（Ｃ１〜１０）アルコキシ、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−Ｓ−、アリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−、ヘテロアリール−（Ｃ１〜１０）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ−で置換されていてもよく、そしてそれぞれのアリール又はヘテロアリール部分は、アリール、ヘテロアリール、アルケニル、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アミン、アミド、カルボキシル、エステル基の群から選ばれる１つ又はそれ以上の同一又は異なった置換基で更に置換されていてもよい。
【０２６１】
ある特定の実施態様では、ＧＥＧは、
【０２６２】
【化５２】
2014511877.tif 000077
【０２６３】
である。Ｂは、例えば、Ｈ、（Ｃ１〜６）アルキル、又はハイドロスルフィド−（Ｃ１〜６）アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ１〜６）アルキルであり、ここでここに存在する（Ｃ１〜６）アルキル部分は、独立して、アミノ又はＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ基で更に置換されていてもよい。
【０２６４】
一実施態様では、ｎ'は５〜２００から選ばれる整数である。別の実施態様では、ｎ'は５〜１００から選ばれる整数である。
【０２６５】
一実施態様では、Ｒ１０はＨである。別の施態様では、Ｒ１１はＨである。
【０２６６】
一実施態様は、Ｒ１３−Ｘ３はＲ１３であると定めている。Ｒ１３は、例えば、Ｈでよい。
【０２６７】
式（ＩＩ）の特定の例示化合物は、これに限定されないが、次の表６の化合物を包含する。
【０２６８】
【表６−１】
2014511877.tif 000078
【０２６９】
【表６−２】
2014511877.tif 000079
【０２７０】
本発明の例示化合物は、前記表に見られるような化学構造に結合している「Ｂ」基に対応している、
【０２７１】
【化５３】
2014511877.tif 000080
【０２７２】
部分を有している化合物も包含する。ある特定の実施態様では、ｎ'は５である。
【０２７３】
ある特定の実施態様では、本発明の化合物は構造（１）の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である。
【０２７４】
【化５４】
2014511877.tif 000081
【０２７５】
特定の実施態様では、本発明の化合物は構造（２）の化合物、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは立体異性体である。
【０２７６】
【化５５】
2014511877.tif 000082
【０２７７】
ある特定の実施態様では、本発明の例示化合物は、これに限定されないが、次のような表７の化合物を包含する。
【０２７８】
【表７】
2014511877.tif 000083
【０２７９】
別の態様では、本発明は式ＩＩＩ又はＩＶの化合物を提供する。
【０２８０】
【化５６】
2014511877.tif 000084
【０２８１】
式中の、Ａは、
【０２８２】
【化５７】
2014511877.tif 000085
【０２８３】
である。
ＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥのそれぞれは独立して、Ｎ又はＣＲＡ（ＲＢ）であり、ここで少なくとも１つのＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥはＮである。
Ｘは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｍ、ＮＲＭ、ＮＲＭＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＲＭ、ＯＣ（Ｏ）、又はＣ（Ｏ）Ｏである。
ＲＣは、
【０２８４】
【化５８】
2014511877.tif 000086
【０２８５】
である。
ＲＤは、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールである。
ｔは、１、２、３、４、又は５である。
【０２８６】
それぞれのＲＡは独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよい炭素環、置換されていてもよい複素環、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールである。
それぞれのＲＢは独立して、非存在、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよい炭素環、置換されていてもよい複素環、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールである。
或いは任意の２つのＲＡ基は、それぞれが結合している原子と共に縮合炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール環を形成してもよく、ここでそれぞれは置換されていてもよい。
【０２８７】
ここでそれぞれのＡは１つ又はそれ以上のＲＤで更に置換されていてもよく、ここでそれぞれのＲＤは独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２、又は３個のヘテロ原子を含有している、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール；或いはハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、オキソ、又はシアノである。
Ｄは、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいアルコキシである。
ＺＡは、非存在、Ｏ、又はＣＲＡ（ＲＢ）である。
ＹＡは、
【０２８８】
【化５９】
2014511877.tif 000087
【０２８９】
である。
ＹＢは、Ｏ、又はＣＲＡＲＡである。
それぞれのＺ１は独立して、Ｈ、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２、又は３個のヘテロ原子を含有している、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールである。
それぞれのＺ２は独立して、Ｈ、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２、又は３個のヘテロ原子を含有している、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールである。
或いはＺＡ、ＹＡ、Ｚ１及びそれぞれが結合している原子は置換されていてもよい複素環又は置換されていてもよいヘテロ芳香環を形成する。
それぞれのＲＮは独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいアルコキシである。
ＲＱは、Ｈ、それぞれが置換されていてもよい、アルキル、ベンジル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はヘテロアリールである。
それぞれのＲＭは独立して、Ｈ又は置換されていてもよいアルキルである。
ｍは、０、１、又は２である。
ｎは、０、１、２、又は３である。
ここで、式ＩにおいてＡが
【０２９０】
【化６０】
2014511877.tif 000088
【０２９１】
である場合は、−ＺＡ−ＹＡは
【０２９２】
【化６１】
2014511877.tif 000089
【０２９３】
ではない。
一実施態様では、Ａはピロリジン、ピラゾリジン、イミダゾリジン、トリアゾリジン、テトラゾリジン、ジヒドロピロール、ジヒドロピラゾール、ジヒドロトリアゾール、ピラゾール、又はトリアゾールであり、それぞれはＲＤで置換されていてもよい。
【０２９４】
別の実施態様では、Ａは
【０２９５】
【化６２】
2014511877.tif 000090
【０２９６】
であり、ここでそれぞれのＡは１つ又はそれ以上のＲＤで置換されていてもよい。
【０２９７】
別の実施態様では、Ａは
【０２９８】
【化６３】
2014511877.tif 000091
【０２９９】
であり、ここでそれぞれのＡは１つ又はそれ以上のＲＤで置換されていてもよい。
【０３００】
別の実施態様では、本発明は式ＩＩＩの化合物を提供する。
【０３０１】
【化６４】
2014511877.tif 000092
【０３０２】
式中の、Ａは
【０３０３】
【化６５】
2014511877.tif 000093
【０３０４】
である。
ＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥのそれぞれは独立して、Ｎ又はＣＲＡ（ＲＢ）であり、ここで少なくとも１つのＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥはＮである。
ＲＣは
【０３０５】
【化６６】
2014511877.tif 000094
【０３０６】
である。
ＲＤは、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールである。
ｔは、１、２、３、４、又は５である。
それぞれのＲＡは独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよい炭素環、置換されていてもよい複素環、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールである。
それぞれのＲＢは独立して、非存在、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよい炭素環、置換されていてもよい複素環、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールである。
或いはＲＡ基の任意の２つは、それぞれが結合している原子と共に縮合炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール環を形成してもよく、ここでそれぞれは置換されていてもよい。
【０３０７】
ここでそれぞれのＡは１つ又はそれ以上のＲＤで更に置換されていてもよく、ここでそれぞれのＲＤは独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２、又は３つのヘテロ原子を含有している、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール；或いはハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、オキソ、又はシアノである。
ＺＡは、Ｏ又はＣＨ２である。
ＹＡは、
【０３０８】
【化６７】
2014511877.tif 000095
【０３０９】
である。
ＹＢは、Ｏ、又はＣＲＡＲＡである。
それぞれのＺ１は独立して、Ｈ、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる１、２、又は３個のヘテロ原子を含有している、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールである。
それぞれのＺ２は独立して、Ｈ、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる１、２、又は３個のヘテロ原子を含有している、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールである。
或いは、ＺＡ、ＹＡ、Ｚ１、及びそれぞれが結合している原子は、置換されていてもよい複素環又は置換されていてもよい複素芳香環を形成する。
それぞれのＲ１は独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルコキシである。
Ｒ２は、Ｈ、アルキル、ベンジル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はヘテロアリールであって、それぞれは置換されていてもよい。
ｎは、０、１、２、又は３である。
【０３１０】
ある特定の実施態様では、ＺＡはＯ又はＣＨ２であって、ＹＡは
【０３１１】
【化６８】
2014511877.tif 000096
【０３１２】
である。
いくつかの実施態様では、ＺＡ、ＹＡ、Ｚ１、及びそれぞれが結合している原子は、５〜６員の炭素環又はヘテロアリール環を形成し、ここで少なくとも１個の環員原子はＮ、Ｏ、又はＳである。
【０３１３】
更なる実施態様では、ＺＡ、ＹＡ、Ｚ１、及びそれぞれが結合している原子が形成する環は、ピリジニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、ピロリジニル、モルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、イソキサゾリル、及びイミダゾリルから選ばれ、これらはそれぞれ置換されていてもよい。
【０３１４】
更なる実施態様では、ＺＡ、ＹＡ、Ｚ１、及びそれぞれが結合している原子が形成する環は、
【０３１５】
【化６９】
2014511877.tif 000097
【０３１６】
である。
いくつかの実施態様では、Ａは、
【０３１７】
【化７０】
2014511877.tif 000098
【０３１８】
である。
それぞれのＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥは独立してＮ又はＣＲＡ（ＲＢ）であり、ここでＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥの少なくとも１つはＮである。
ＲＣは、
【０３１９】
【化７１】
2014511877.tif 000099
【０３２０】
である。
それぞれのＲＡは独立して、Ｈ又は置換されていてもよいアルキルである。
それぞれのＲＢは独立して、非存在、Ｈ又は置換されていてもよいアルキルである。
或いは任意の２つのＲＡ基は、それぞれが結合している原子と共に縮合炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール環を形成してもよく、ここでそれぞれは置換されていてもよく、ここでそれぞれは置換されていてもよい。
更なる実施態様では、Ａは
【０３２１】
【化７２】
2014511877.tif 000100
【０３２２】
であり、ここでそれぞれのＡは１つ又はそれ以上のＲＤで置換されていてもよい。
【０３２３】
ある特定の実施態様では、Ａは、
【０３２４】
【化７３】
2014511877.tif 000101
【０３２５】
である。
別の実施態様では、本発明は式ＩＩＩの化合物を提供する。
【０３２６】
【化７４】
2014511877.tif 000102
【０３２７】
式中の、Ａは、−（ＣＨ２）ｎ―Ｘ−ＲＣである。
Ｘは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｍ、ＮＲＭ、ＮＲＭＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲＭ、ＯＣ（Ｏ）、又はＣ（Ｏ）Ｏである。
ＲＣは、
【０３２８】
【化７５】
2014511877.tif 000103
【０３２９】
である。
ＲＤは、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールである。
ｔは、１、２、３、４、又は５である。
【０３３０】
ここで、それぞれのＡは１つ又はそれ以上のＲＤで更に置換されていてもよく、ここでそれぞれのＲＤは独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２、又は３つのヘテロ原子を含有している、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール；或いはハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、オキソ、又はシアノである。
ＺＡは、非存在、Ｏ、又はＣＨ２である。
ＹＡは、
【０３３１】
【化７６】
2014511877.tif 000104
【０３３２】
である。
ＹＢは、Ｏ、又はＣＲＡＲＡである。
それぞれのＺ１は独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２又は３つのヘテロ原子を含有している、Ｈ、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールである。
それぞれのＺ２は独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２又は３つのヘテロ原子を含有している、Ｈ、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールである。
或いは、ＺＡ、ＹＡ、Ｚ１、及びそれぞれが結合している原子は、置換されていてもよい複素環又は置換されていてもよい複素芳香環を形成する。
それぞれのＲＮは独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいアルコキシである。
ＲＱは、それぞれが置換されていてもよいＨ、アルキル、ベンジル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はヘテロアリールである。
それぞれのＲＭは独立して、Ｈ又は置換されていてもよいアルキルである。
ｍは、０、１、又は２である。
ｎは、０、１、２、又は３である。
【０３３３】
ある特定の実施態様では、ＺＡはＯ又はＣＨ２であって、ＹＡは、
【０３３４】
【化７７】
2014511877.tif 000105
【０３３５】
である。
いくつかの実施態様では、
Ａは、−（ＣＨ２）ｎ−Ｘ−ＲＣであり、
Ｘは、Ｏ、Ｏ（ＳＯ）ｍ、ＮＲＭ、ＮＲＭＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲＭ、ＯＣ（Ｏ）、又はＣ（Ｏ）Ｏであり、そして
ＲＣは、
【０３３６】
【化７８】
2014511877.tif 000106
【０３３７】
である。
更なる実施態様では、Ａは、
【０３３８】
【化７９】
2014511877.tif 000107
【０３３９】
であり、ここでそれぞれのＡは１つ又はそれ以上のＲＤで置換されていてもよい。
【０３４０】
別の実施態様では、本発明は式ＩＶの化合物を提供する。
【０３４１】
【化８０】
2014511877.tif 000108
【０３４２】
式中の、Ａは、
【０３４３】
【化８１】
2014511877.tif 000109
【０３４４】
である。
それぞれのＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥは独立してＮ又はＣＲＡ（ＲＢ）であり、ここでＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥの少なくとも１つはＮである。
ＲＣは、
【０３４５】
【化８２】
2014511877.tif 000110
【０３４６】
である。
ＲＤは、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールである。
ｔは、１、２、３、４、又は５である。
それぞれのＲＡは独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよい炭素環、置換されていてもよい複素環、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールである。
それぞれのＲＢは独立して、非存在、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよい炭素環、置換されていてもよい複素環、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールである。
或いはＲＡ基の任意の２つは、それぞれが結合している原子と共に縮合炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール環を形成してもよく、ここでそれぞれは置換されていてもよい。
【０３４７】
ここでそれぞれのＡは１つ又はそれ以上のＲＤで更に置換されていてもよく、ここでそれぞれのＲＤは独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２、又は３つのヘテロ原子を含有している、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリール；或いはハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、オキソ、又はシアノである。
Ｄは、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいアルコキシである。
ＺＡは、非存在、Ｏ又はＣＨ２である。
ＹＡは、
【０３４８】
【化８３】
2014511877.tif 000111
【０３４９】
である。
それぞれのＺ１は独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２又は３つのヘテロ原子を含有している、Ｈ、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールである。
それぞれのＺ２は独立して、それぞれがＯ、Ｓ、又はＮから選ばれる０、１、２又は３つのヘテロ原子を含有している、Ｈ、アルキル、アルケニル、又はアルキニル；それぞれが置換されていてもよい、炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールである。
或いは、ＺＡ、ＹＡ、Ｚ１、及びそれぞれが結合している原子は、置換されていてもよい複素環又は置換されていてもよい複素芳香環を形成する。
それぞれのＲＮは独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルコキシである。
ＲＱは、それぞれが置換されていてもよいＨ、アルキル、ベンジル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はヘテロアリールである。
それぞれのＲＭは独立して、Ｈ又は置換されていてもよいアルキルである。
ｎは、０、１、２、又は３である。
【０３５０】
ある特定の実施態様では、ＺＡは、Ｏ、又はＣＨ２であり、そしてＹＡは、
【０３５１】
【化８４】
2014511877.tif 000112
【０３５２】
である。
別の実施態様では、Ａは、
【０３５３】
【化８５】
2014511877.tif 000113
【０３５４】
である。
それぞれのＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥは独立してＮ又はＣＲＡ（ＲＢ）であり、ここでＸＡ、ＸＢ、ＸＣ、ＸＤ、及びＸＥの少なくとも１つはＮである。
ＲＣは、
【０３５５】
【化８６】
2014511877.tif 000114
【０３５６】
である。
それぞれのＲＡは独立して、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキルである。
それぞれのＲＢは独立して、非存在、Ｈ、又は置換されていてもよいアルキルである。
或いは任意の２つのＲＡ基は、それぞれが結合している原子と共に縮合炭素環、複素環、アリール、又はヘテロアリールを形成してもよく、ここでそれぞれは置換されていてもよい。
【０３５７】
更なる実施態様では、Ａは、
【０３５８】
【化８７】
2014511877.tif 000115
【０３５９】
であり、ここでそれぞれのＡは１つ又はそれ以上のＲＤで置換されていてもよい。
【０３６０】
ある特定の実施態様では、Ｄはメチル又はＰＥＧ基のような置換されていてもよいアルコキシである。
【０３６１】
別の態様では、本発明は以下のものから選ばれる化合物を提供する。
【０３６２】
【化８８】
2014511877.tif 000116
【０３６３】
【化８９】
2014511877.tif 000117
【０３６４】
本発明の化合物は、これに限定されないが、以下のものを包含する。
【０３６５】
【化９０】
2014511877.tif 000118
【０３６６】
【化９１】
2014511877.tif 000119
【０３６７】
【化９２】
2014511877.tif 000120
【０３６８】
別の態様は、ＨＩＶ Ｔａｔ配列を付加した本明細書に詳述した化合物である。
【０３６９】
本発明は、本明細書に詳述された反応の１つ又はその組み合わせを用いる本明細書の何れかの式の化合物を作成／製造する方法を提供する。方法は、本明細書に詳述されている１つ又はそれ以上の中間体又は化学試薬の使用を包含できる。
【０３７０】
別の態様は、本明細書に詳述されている何れかの化合物の同位体で標識された化合物である。このような化合物は、化合物内に導入された放射性を有するか、又は有していない１つ又はそれ以上のアイソトープ原子（例えば、３Ｈ、２Ｈ、１４Ｃ、１３Ｃ、３５Ｃ、３２Ｐ、１２５Ｉ、及び１３１Ｉ）を有している。このような化合物は薬物代謝試験及び診断、更には治療適用のために有用である。
【０３７１】
本発明の化合物は、化合物の遊離塩基形態を薬学的に許容される無機又は有機酸と反応させることによって薬学的に許容される酸付加塩として製造できる。あるいは、化合物の遊離酸形態を薬学的に許容される無機又は有機塩基と反応させることによって、本発明の化合物の薬学的に許容される塩基付加塩を製造することができる。
【０３７２】
あるいは、出発物質又は中間体の塩を用いて本発明の化合物の塩形態を製造できる。
【０３７３】
本発明化合物の遊離さ酸又は遊離塩基形態は、それぞれ対応する塩基付加塩又は酸付加塩形態から製造できる。例えば、酸付加塩の形態にある本発明化合物を適切な塩基（例えば、水酸化アンモニウム溶液、水酸化ナトリウム等）で処理して対応する遊離塩基に変換できる。塩基付加塩の形態にある本発明化合物を適切な酸（例えば、塩酸等）で処理して対応する遊離酸に変換できる。
【０３７４】
本発明化合物のプロドラッグ誘導体は当業者に公知の方法（例えば、更なる詳細について、Saulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985 を参照されたい）。例えば、本発明の非誘導体化合物を適切なカルバミル化剤（例えば、１，１−アシルオキシアルキルカルミバン酸塩化物、パラ−ニトロフェニルカルバミン酸エステル等）と反応させて適切なプロドラッグを製造できる。
【０３７５】
本発明化合物の保護誘導体は当業者に公知の方法で製造できる。保護基の創出及びそれらの除去に適用できる技術の詳細な記載は、T. W. Greene, "Protecting Groups in Organic Chemistry", 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999 に見い出すことができる。
【０３７６】
本発明の化合物は好都合に製造されるか、又は本発明のプロセス中に、溶媒和物（例えば、水和物）として形成される。本発明化合物の水和物は、ジオキサン、テトラヒドロフラン又はメタノールのような有機溶媒を用いて、水性／有機溶媒の混合物から再結晶によって好都合に製造できる。
【０３７７】
本明細書の方法に有用な酸及び塩基は当該技術分野において公知である。酸触媒は、事実上無機（例えば、塩酸、硫酸、硝酸、三塩化アルミニウム）又は有機（例えば、カンファースルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、イッテルビウムトリフラート）であってよい、酸性化学物質である。酸は、化学反応を促進するための触媒又は化学量論量の何れかとして有用である。塩基は、事実上無機（例えば、重炭酸ナトリウム、水酸化カリウム）又は有機（例えば、トリエチルアミン、ピリジン）であってよい、塩基化学物質である。塩基は、化学反応を促進するための触媒又は化学量論量の何れかとして有用である。
【０３７８】
更に、本発明の一部の化合物は１つ又はそれ以上の二重結合、又は１つ又はそれ以上の不斉中心を有している。このような化合物は、ラセミ体、ラセミ混合物、単一のエナンチオマー、個々のジアステレオマー、ジアステレオマー混合物、及びシス−又はトランス−、或いはＥ−又はＺ−二重異性体として、並びに絶対立体化学の観点から、（Ｒ）−又は（Ｓ）−として、或いは（Ｄ）−又は（Ｒ）−として定義可能なその他の立体異性形態として存在し得る。これらの化合物のこのような異性体の全ては明確に本発明に包含される。光学異性体は個々の光学活性前駆体から、上記の手法で、又はラセミ混合物を光学分割して製造できる。光学分割は分割剤の存在下で、クロマトグラフィーで又は連続再結晶で、或いは当業者に公知であるこれらの技術の何れかの組み合わせによって実施できる。光学分割に関する更なる詳細は、Jacques, et al., Enantiomers, Racemates, and Resolutions (John Wiley & Sons, 1981)に見出すことができる。本発明の化合物は多様の互変異性体形態でも存在し、このような場合は、本発明は本明細書に記載されている化合物の全ての互変異性体形態を明確に包含する（例えば、環系のアルキル化は複数部位にアルキル化をもたらし、本発明はこのような反応産物の全てを明確に包含する）。本明細書に記載されている化合物がオレフィン二重結合又はその他の幾何学的非対称の中心を含んでいない場合、そして特段の規定がない場合は、その化合物はＥ及びＺ幾何異性体の両方を包含していると意図されている。同様に、全ての互変異性体形態も包含されるように意図されている。本明細書に現れている炭素−炭素二重結合の何れかの立体配置は便宜上のみで選択されていて、本文で述べていない限り特定の立体配置を指定していない；従って、本明細書にトランスと便宜的に記載された炭素−炭素二重結合は、シス、トランス、又は任意の割合の２つの混合物であり得る。このような化合物のこのような全ての異性体は本発明に明確に包含されている。本明細書に記載されている化合物の全ての結晶形態は本発明に明確に包含されている。
【０３７９】
合成された化合物は反応混合物から分離して、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、又は再結晶のような方法で更に精製できる。当業者が認めるように、本明細書の式化合物を合成する更なる方法は当業者には明確であろう。また、多種の合成工程は代替順序又は順番で実施して所望の化合物を得ることができる。更に、本明細書に詳述されている溶媒、温度、反応持続時間等は説明だけを目的としていて、反応条件の変化は本発明の望ましい架橋大環状産物を産生できることを当業者は認識するだろう。本明細書に記載されている化合物を合成するのに有用な合成化学変換及び保護基手法（保護及び脱保護）は当該技術分野において公知であって、例えば、R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed., John Wiley and Sons (1991); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); 及び L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995)、及びこれらの続編に記載されているようなものに含まれている。
【０３８０】
本発明の化合物は本明細書に詳述されている合成手段を介して多種の官能基を付加することによって改変して選択的生物学的特性を強化することができる。このような改変は当該技術分野において公知であって、生体系（例えば、血液、リンパ系、中枢神経系）内への生物学的浸透を増大する、経口利用性を増大する、注射による投与を可能にする溶解性を増大する、代謝を変える、そして排泄速度を変えるようなものを包含する。
【０３８１】
本発明の化合物は本明細書において、それらの化学構造及び／又は化学名によって定義される。化合物が化学構造及び化学名の両方で示されて、化学構造と化学名が矛盾する場合は、化学構造が化合物の定義に決定力がある。
【０３８２】
本明細書の可変基の定義の何れかにおける化学基のリストの列挙は、単一の基又はリストされた基の組み合わせとしての可変基の定義を包含する。本明細書の可変基に関する実施態様の列挙は単一の実施態様又は他の任意の実施態様若しくはその部分との組み合わせとしての実施態様を包含する。
【０３８３】
（本発明の化合物の設計）
本発明はＰＥＧ化ペプチドを設計及び／又は合成する方法及びそれを使用する方法も提供する。
【０３８４】
Ｐｌｋ１の過剰発現はヒト細胞の腫瘍性形質変化を誘発するのに対して、Ｐｌｋ１機能の障害は正常細胞ではなく腫瘍細胞におけるアポトーシスを誘発する。更に、Ｐｌｋ１過剰発現は、各種の癌における侵攻性の病期及び患者の低い生存率と関連している。長年にわたって、抗Ｐｌｋ１阻害剤を作り出す努力がなされて、Ｐｌｋ１のキナーゼ活性及び基質認識を競合的に阻害するまで進展した、いくつかの化合物（ＢＩ２５３６、ＧＳＫ化合物１、Ｃｙｃｌａｐｏｌｉｎ １、ＤＡＰ８１、及びＴＡＬ）をもたらした（Strebhardt, K. et al., Nat. Rev. Cancer 6, 321-330. (2006)）。しかしながら、主に全てのＰｌｋの触媒ドメインと他の関連キナーゼの間の構造類似性によって、Ｐｌｋ１特異的阻害剤の作出は困難であった。従って、非触媒ＰＢＤがＰｌｋサブファミリーのメンバーのみに見出されるので、Ｐｌｋ１のＰＢＤを標的にする新規な阻害剤が選択的にＰｌｋ１を標的にするための別の戦略であることを証明するだろう。
【０３８５】
Ｐｌｋ１とその物理学的結合標的ＰＢＩＰ１との相互作用についての検討を行っている間に、ＰＢＩＰ１のＴｈｒ７８領域由来の最小ホスホペプチドがＰｌｋ１ ＰＢＤにたいして高レベルの親和性及び特異性を示すことが確認された。非加水分解性ｐ−Ｔ７８模倣ペプチドの試験が、Ｐｌｋ１ ＰＢＤ機能の阻害が、先に細胞において優性阻害ＰＢＤを発現することが観察されたように（Seong, Y.S. et al. J. Biol. Chem. 277, 32282-32293 (2002); & Hanisch, A. et al., Mol. Biol. Cell 17, 448-459 (2006)）、有糸分裂停止及びアポトーシス細胞死を誘発する染色体の集合阻害をもたらすことを明らかにした。Ｐｌｋ１機能の障害が正常細胞ではなく殆どの腫瘍細胞にアポトーシスを誘導するので、これらの知見はＰＢＤ機能の阻害は、腫瘍細胞の細胞増殖活性を阻害するのに十分であることを明らかにしている。更に、本明細書に示されているデータは、Ｐｌｋ１ ＰＢＤの特異的な阻害は小分子模倣ペプチド又はその関連化合物によって達成可能であることの原理的な証明を直接もたらしている。
【０３８６】
Ｈｉｓ５３８及びＬｙｓ５４０残基とのＳｐＴ依存的静電相互作用が最適なペプチド（ＰＭＱＳｐＴＰＬ及びＭＱＳｐＴＰＬ）とＰｌｋ１ ＰＢＤ１２，１３との間の相互作用に重要であることが明らかにされている。ＰＢＤＳ＋Ｇ及びＰＢＤＳのホスホペプチド−結合ポケットとＰＢＤＰＬ、ＰＢＤＰＰ、及びＰＢＤＬＨとのインビトロにおける競合結合試験及び分析が、高親和性アンカーとして作用するホスホペプチドのＳｐＴモチーフに加えて、Ｎ−末端残基が３つの異なった相互作用を介して、Ｐｌｋ１ ＰＢＤに更なる結合親和性及び特異性をもたらすことを明らかにした。第一に、ＰＬＨＳｐＴ又はＬＨＳＰＴＡのＬｅｕ−３へのカルボニル酸素Ｎ末端とＰｌｋ１ ＰＢＤのＡｒｇ５１６のグアニジニウム部分との間の有極接点が高親和性及び特異性相互作用についての分子基盤をもたらす。第二に、Ｎ末端Ｐｒｏ−４側鎖のＴｒｐ１４とＰｈｅ５３５の周辺に生じたポケット内へのドッキングが、更なる親和性及び相互作用に対する特異性の恐らく別のレベルの特異性をもたらす。とりわけ、Ｐｌｋ２及びＰｌｋ３の両者に由来するＰＢＤはＰｌｋ１のＡｒｇ５１６及びＰｈｅ５３５残基に似ている位置にそれぞれ、Ｌｙｓ及びＴｙｒ残基を有しており、その結果、Ｎ末端Ｐｒｏ残基に適合した環境を有利に生み出すことができない。第三に、ペプチドのプルダウンアッセイが、Ｈｉｓ−２残基がＰｌｋ１ＰＢＤの別の層に特異的に付加していることを明らかにしている。
【０３８７】
Ｐｌｋ１結合親和性及び特異性を特徴付けることに関わっているｐ−Ｔ７８ペプチドのそれぞれのアミノ酸残基に加えて、ポケット内のホスホペプチド及びグリセロールの位置は、ホスホペプチドとＰＢＤの接触を介在している水分子のネットワークと共に、ホスホペプチド周辺のグリセロール及び水分子のネットワークの両方がホスホペプチドによるＰＢＤ認識の重要な要素であることを示唆している。更に、ＰＢＤＳ＋Ｇ、ＰＢＤＳ、及びＰＢＤＰＬの構造は顕著に類似していて、ホスホペプチド結合裂を占めている別のグリセロール分子及び硫酸アニオンをＳｐＴジペプチドの役割と置き換えられることを暗示している。
【０３８８】
収集したデータは、Ｐｌｋ１ ＰＢＤ−結合ポケットが（ｉ）コアＳｐＴモチーフ、（ｉｉ）Ｎ末端疎水性残基、（ｉｉｉ）グリセロール、及び（ｉｖ）接触水分子のネットワークに適合していることを明らかにしている。これら４つの要素の幾つか又は全ての組み合わせを薬剤設計の標的ために用いる可能性がある。ＰＢＤ相互作用の更なる理解と同様にＰＢＤ−結合剤の更なる単離及び開発が新種のＰｌｋ１特異性抗癌治療薬剤の発見を大きく促進するだろう。
【０３８９】
化合物４ｊ
【０３９０】
【化９３】
2014511877.tif 000121
【０３９１】
のヒスチジンアルキル化の位置を明確に確認して高い結合親和性の基盤を理解するために、化合物４ｊとの複合体中のＰｌｋ１ ＰＢＤの共結晶構造を解析した（図３）。この構造は、アルキル化がヒスチジン残基上で行われたことを示す、先のタンデム質量分析を裏付けた。Ｃ６Ｈ５（ＣＨ２）８−基がイミダゾール環のδ１窒素（Ｎ３）に結合したことも示された。
【０３９２】
ＰＢＤ−４ｊ複合体のＰＢＤ骨格は、化合物１と複合したＰｌｋ１ ＰＢＤの骨格（ＰＤＢ ＩＤ ：３ＨＩＫ）（Yun et al., Nat. Struct. Mol. Biol. 16, 876-882 (2009)）（タンパク質骨格の相違は主にαβ螺旋の位置にある）とほぼ重なり合うことを示した。結合したペプチド４ｊの結合芳香も３ＨＩＬ構造中の１とほぼ重なり合う（図３ａ）。２つの構造の違いは主に４ｊのＣ６Ｈ５（ＣＨ２）８−基の結合に原因しており、ここでポリメチレン鎖はヒスチジンのイミダゾール環から伸びてＰＢＤ１ユニットの一連の逆平行のβシート（β１〜β４）を横切っている。結合相互作用は、床面がＶ４１５（β１シートから生じている）で近位がＦ４８２（αβ螺旋から生じている）で遠位が構成されて反対の壁がＹ４１７（β１シートから生じている）及びＹ４８５（αβ螺旋から生じている）で定義される、しっかり構築されたチャンネル内で起こる。チャンネルの末端はＬ４７８及びＹ４８１（αβ螺旋から生じている）によって形成されている（図３ｂ）。この結合チャンネルの形成は、親の３ＨＩＫ構造と比べて側鎖方向のＹ４８５及びＦ４８２を殆ど移動する必要がなくそしてそれが際だっているが、未だＹ４１７の適度な移動は必要としている（κ２角を２０．８°に変える）。しかしながら、最も大規模な移動はＹ４８１アリール環の方向に生じ、これは３ＨＫにおける４４．５°のκ２角から１１５°に下方回転して、４ｊ複合体においてκ２＝１５９°とした（図３ｃ）。この移動はタンパク質表面のトポロジーにたして重大の効果を有していて、以前は閉塞していた、新たな結合チャンネルの顕出をもたらす（図３ｄと３ｅを比較されたい）。この疎水性チャンネルの形成は、ペプチドが結合しているＰＢＤの先の結晶構造に基づいて全く予測されていなかった。
【０３９３】
Ｐｍａｂを含有しているペプチド１＊（構造は以下に示されている）のＨｅＬａ細胞への微量注入は、Ｐｌｋ１の正しい細胞内局在を阻害して延長された有糸分裂停止の結果としてアポトーシス細胞死を誘導することが見出された（Yun et al., Nat. Struct. Mol. Biol. 16, 876-882 (2009); and Seong et al. J. Biol. Chem. 277, 32282-32293 (2002)）。しかしながら、２００μＭ迄の濃度で培養ＨｅＬａと１＊の直接培養は検出可能な細胞応答を導き出せなかった（データは示していない）、この不成功は乏しい溶解性及び低い膜輸送生じる限定された細胞内バイオアベイラビリティーに基づいている可能性がある。
【０３９４】
非ＰＥＧ化（１＊及び４ｊ）及びＰＥＧ化（それぞれ、ＰＥＧ１＊及びＰＥＧ−４＊）の両方は、インビトロＰＢＤ阻害アッセイにおいて同様なレベルのＰＢＤ結合親和性を示した（図４ａ）。ある特定の実施態様では、本発明のＰＥＧ化ペプチドは全細胞系において活性を明らかにしている。
【０３９５】
ショートペプチド（５ｍｅｒ）のＮ末端ＰＥＧ化は、ＰＢＤ−結合親和性に悪影響を及ばさず、そしてこのＰＥＧ化ペプチドは培養中の細胞に加えると増強した活性を示した。
【０３９６】
ポロ様キナーゼ（Ｐｌｋｓ）は細胞増殖に重要な役割を果たすＳｅｒ／Ｔｈｒタンパク質キナーゼのサブファミリーに保存されている。Ｐｌｋ１の過剰発現は腫瘍形成と密接に関連しているので、Ｐｌｋ１は抗癌治療の魅力的な標的と考えられている。ＰｌｋｓのＣ末端非触媒領域に独自に見出されるポロ−ボックスドメイン（ＰＢＤ）はタンパク質―タンパク質相互作用のためのホスホエピトープ−結合モジュールを形成する。２つの密接に関係しているＰｌｋ２及びＰｌｋ３ではなく、Ｐｌｋ１のＰＢＤと高い親和性で、特異的に相互作用する最小ホスホペプチドの同定を本明細書で提供する。複合体中のＰｌｋ１ ＰＢＤの最小ホスホペプチド（ＰＬＨＳｐＴ）或いはその誘導体ＰＰＨＳｐｔ、ＬＨＳｐＴＡ、又は非ペプチドとの競合結合試験及び結晶構造の分析は、Ｃ末端ＳｐＴジペプチドが高い親和性があるアンカーとして機能するのに対して、Ｎ末端ＰＬＨ残基はＰＢＤへとき性及び親和性の両方をもたらすのに重要であることを明らかにした。最小ホスホ−Ｔｈｒ模倣ペプチドの試験は、Ｐｌｋ１のＰＢＤの阻害は有糸分裂停止及びアポトーシス細胞死を誘発するのに十分であることを明らかにした。従って、ＰＬＨＳｐＴのＰＢＤとの結合様式は抗Ｐｌｋ１薬剤を設計するための重要な鋳型を提供するだろう。
【０３９７】
非天然のアミノ酸を担持している高親和性類縁体も、ペプチド−ペプトイドのハイブリッド（Ｎ−アルキルグリシン残基を含有している）も同様に本明細書で提供されている。
【０３９８】
保護されたホスホン酸よりなるｐＴｈｒ模倣薬の立体選択的合成を創出する方法及びこれらのペプチドのホスファターゼに安定な変異体の製造におけるこれらの適用を本明細書は提供する。
【０３９９】
本明細書で提供される組成物及び方法は、更なる治療関連ＰＢＤ標的薬剤の開発をもたらすことができるＰＢＤ−結合拮抗薬の設計及び合成への新しいアプローチを示している。
【０４００】
Ｐｌｋ１の過剰発現はヒト細胞の腫瘍性形質変化を誘発し、これに対してＰｌｋ１の障害は腫瘍細胞におけるアポトーシスを誘発するが正常細胞には誘発しない。更に、Ｐｌｋ１の過剰発現は、各種の癌における侵攻性の病期及び患者の低い生存率と関連している。長年にわたって、抗Ｐｌｋ１阻害剤を作り出す努力がなされて、Ｐｌｋ１のキナーゼ活性及び基質認識を競合的に阻害するまで進展した、いくつかの化合物（ＢＩ２５３６、ＧＳＫ化合物１、Ｃｙｃｌａｐｏｌｉｎ １、ＤＡＰ８１、及びＴＡＬ）をもたらした。しかしながら、主に全てのＰｌｋの触媒ドメインと他の関連キナーゼの間の構造類似性によって、ＰＬＫ１特異的阻害剤の作出は困難であった。従って、非触媒ＰＢＤがＰｌｋサブファミリーのメンバーのみに見出されるので、Ｐｌｋ１のＰＢＤを標的にする新規な阻害剤が選択的にＰｌｋ１を標的にするための別の戦略であることを証明するだろう。
【０４０１】
Ｐｌｋ１とその物理学的結合標的ＰＢＩＰ１との相互作用について検討している間に、Ｐｌｋ１ ＰＢＤにたいして高レベルの親和性及び特異性を示す、ＰＢＩＰ１のＴｈｒ７８領域から誘導される最小ホスホペプチドを同定した。非加水分解性ｐ−Ｔ７８模倣ペプチドの試験は、Ｐｌｋ１ ＰＢＤ機能の阻害が、優性阻害ＰＢＤを月源している細胞で先に観察されたように、有糸分裂停止及びアポトーシス細胞死を誘導する染色体の集合をもたらすことを明らかにしている。Ｐｌｋ１機能の障害が正常細胞ではなく、殆どの腫瘍細胞にアポトーシスを誘発するので、これらの知見はＰＢＤ機能の阻害が腫瘍細胞の細胞増殖活性を妨げるのに充分であるということを示唆している。更に、本明細書に示されている結果はＰｌｋ１ ＰＢＤの特異的阻害は小分子模倣ペプチド又はその関連化合物によって達成されるという原理証明を直接提供している。
【０４０２】
Ｈｉｓ５３８及びＬｙｓ５４０残基とのＳｐＴ依存的静電相互作用が最適なペプチド（ＰＭＱＳｐＴＰＬ及びＭＱＳｐＴＰＬ）とＰｌｋ１ ＰＢＤ１２，１３との間の相互作用に重要であることが明らかにされている。ＰＢＤＳ＋Ｇ及びＰＢＤＳのホスホペプチド−結合ポケットとＰＢＤＰＬ、ＰＢＤＰＰ、及びＰＢＤＬＨとのインビトロにおける競合結合試験及び分析が、高親和性アンカーとして作用するホスホペプチドのＳｐＴモチーフに加えて、Ｎ−末端残基が３つの異なった相互作用を介して、Ｐｌｋ１ ＰＢＤに更なる結合親和性及び特異性をもたらすことを明らかにした。第一に、ＰＬＨＳｐＴ又はＬＨＳＰＴＡのＬｅｕ−３へのカルボニル酸素Ｎ末端とＰｌｋ１ ＰＢＤのＡｒｇ５１６のグアニジニウム部分との間の有極接点が高親和性及び特異性相互作用についての分子基盤をもたらす。第二に、Ｎ末端Ｐｒｏ−４側鎖のＴｒｐ１４とＰｈｅ５３５の周辺に生じたポケット内へのドッキングが、更なる親和性及び相互作用に対する特異性の恐らく別のレベルの特異性をもたらす。とりわけ、Ｐｌｋ２及びＰｌｋ３の両者に由来するＰＢＤはＰｌｋ１のＡｒｇ５１６及びＰｈｅ５３５残基に似ている位置にそれぞれ、Ｌｙｓ及びＴｙｒ残基を有しており、その結果、Ｎ末端Ｐｒｏ残基に適合した環境を有利に生み出すことができない。第三に、ペプチドのプルダウンアッセイが、Ｈｉｓ−２残基がＰｌｋ１ＰＢＤの別の層に特異的に付加していることを明らかにしているが、基本的なメカニズムは現在明確に理解されていない。
【０４０３】
Ｐｌｋ１結合親和性及び特異性を特徴付けることに関わっているｐ−Ｔ７８ペプチドのそれぞれのアミノ酸残基に加えて、ポケット内のホスホペプチド及びグリセロールの位置は、ホスホペプチドとＰＢＤの接触を介在している水分子のネットワークと共に、ホスホペプチド周辺のグリセロール及び水分子のネットワークの両方がホスホペプチドによるＰＢＤ認識の重要な要素であることを示唆している。更に、ＰＢＤＳ＋Ｇ、ＰＢＤＳ、及びＰＢＤＰＬの構造は顕著に類似していて、ホスホペプチド結合裂を占めている別のグリセロール分子及び硫酸アニオンをＳｐＴジペプチドの役割と置き換えられることを暗示している。
【０４０４】
本明細書に提供されている結果は、Ｐｌｋ１ ＰＢＤ−結合ポケットが（ｉ）コアＳｐＴモチーフ、（ｉｉ）Ｎ末端疎水性残基、（ｉｉｉ）グリセロール、及び（ｉｖ）接触水分子のネットワークに適合していることを明らかにしている。これら４つの要素の幾つか又は全ての組み合わせを薬剤設計の標的のために用いる可能性がある。ＰＢＤ相互作用の更なる理解と同様にＰＢＤ−結合剤の更なる単離及び開発が新種のＰｌｋ１特異性抗癌治療薬剤の発見を大きく促進するだろう。
【０４０５】
別の態様では、ペプチド誘導体を製造するための方法が提供されており、ここで当該方法は、中間体としてオルトゴナルに保護された（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｌｙ−ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ）Ｎ−アルキルヒスチジンの使用を含んでいる。ある特定の実施態様では、オルトゴナルに保護されたＮ−アルキルヒスチジン類縁体は下記の構造の化合物である。
【０４０６】
【化９４】
2014511877.tif 000122
【０４０７】
式中の、Ｘ'は０又は１〜２０から選ばれる整数である。
合成スキームにおいて上記のオルトゴナルに保護されたＮ−アルキルヒスチジン類縁体の使用は非常に高い収率で最終産物（すなわち、ペプチド誘導体）をもたらすと考えられている。
【０４０８】
（組成物、方法、及びキット）
本発明は、例えば、薬剤の製造のために用いるための、薬学的に許容される担体中に本発明に何れかの化合物を含んでいる組成物を提供する。薬剤は、例えば、癌のような過剰増殖性疾患の予防、改善、又は治療のための薬剤であってよい。
【０４０９】
更に別の実施態様では、このような組成物は、癌のような過剰増殖性疾患の治療のために標識が付されている。更なる実施態様では、有効量は、本明細書に記載されているように、対象における癌のような過剰増殖性疾患を治療又は予防するのに有効である。
【０４１０】
ある特定の実施態様では、本発明の化合物は、過剰増殖性疾患について対称を予防、改善又は治療するための方法に用いることができる。このような方法は更に過剰増殖性疾患に罹っているか又は罹る疑いのある対象の同定及び過剰増殖性疾患の予防、改善又は治療について対象を観察すことを含んでいる。ある特定の実施態様では、過剰増殖性疾患は癌である。癌は固形腫瘍及び非固形腫瘍として特性化できる。癌は、これに限定されないが、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、基底細胞癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、乳癌、子宮頸癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、食道癌、ユーイングファミリー腫瘍、網膜芽細胞腫、胃癌、胃腸腫瘍、神経芽腫、頭頸部癌、肝細胞（肝臓）癌、ホジキンリンパ腫、膵島腫瘍（膵内分泌部）、腎臓（腎細胞）癌、喉頭癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞型リンパ腫、髄芽腫、黒色腫、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、直腸癌、甲状腺癌を包含する。
【０４１１】
本発明の化合物は、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）について対象を予防、改善、又は治療するための方法でも用いることができる。ある特定の実施態様では、本発明の化合物はＨＩＶ発芽を阻害するためにＨＩＶＴＡＴ配列を標的にできる。
【０４１２】
別の態様では、本発明はペプチド誘導体を製造する方法を提供し、そこで当該方法は、中間体として直角に保護されているＮ−アルキルヒスチジン類縁体を使用することを含んでいる。ある特定の実施態様では、直角に保護されているＮ−アルキルヒスチジン類縁体は以下の構造の化合物である。
【０４１３】
【化９５】
2014511877.tif 000123
【０４１４】
式中の、ｎ'は０又は１〜２０から選ばれる整数である。
【０４１５】
一実施態様では、化合物は薬学的に許容される製剤を用いて投与される。ある特定の実施態様では、組成物は対象への経口又は非経口投与に適している。更に別の実施態様では、以下に詳細に記載するように、本発明の医薬組成物は、次のものに適合しているものを包含している、個体又は液体形態で投与するように具体的に製剤化され得る：（１）経口投与、例えば、ドレンチ剤（水性又は非水性の溶液又は懸濁液）、錠剤、ボーラス剤、粉剤、顆粒剤、ペースト；（２）非経口投与、例えば、滅菌溶液又は懸濁液として、例えば、皮下、筋肉内、又は静脈内注射によって；（３）局所適用、例えば、皮膚に適用するクリーム、軟膏、又はスプレーとして；（４）膣内又は直腸内、例えば、ペッサリー、クリーム、又は発泡体として；（５）エアゾール、例えば、化合物を含有している水性エアゾール、リポゾーム製剤又は固体粒子として。ある特定の実施態様では、対象は哺乳動物、例えば、霊長類、例えば、ヒトである。
【０４１６】
本発明の方法は更に、薬学的に許容される賦形剤と組み合わせた化合物の治療有効量を患者に投与することを含んでいる。語句「薬学的に許容される」は正当な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、又はその他の問題若しくは合併症無しで、ヒト又は動物の組織に接触させて用いるのに適していて利益／リスク比が釣り合っている、本発明の化合物、このような化合物を含有している組成物、及び／又は投与形態を示す。
【０４１７】
語句「薬学的に許容される賦形剤」は、液体若しくは固体の増量剤、希釈剤、担体、溶媒又は封入剤のような、対象化合物を身体の臓器若しくは部分から身体のその他の臓器若しくは部分への輸送又は運搬に関わる薬学的に許容される物質、組成物若しくは賦形剤を包含する。それぞれの担体は製剤中の他の成分と適合性があって患者に有害でないという意味において「許容され」なければならない。薬学的に許容される担体としての機能を果たす物質の例は、（１）乳糖、ブドウ糖及び蔗糖のような、糖類；（２）トウモロコシ澱粉及び馬鈴薯澱粉のような、澱粉類；（３）カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロースのような、セルロース及びその誘導体；（４）粉末トラガラント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）ココアバター及び坐剤ワックスのような賦形剤；（９）落花生油、紅花油、ゴマ油、オリーブオイル、トウモロコシ油及び大豆油のような、油類；（１０）ポリエチレングリコールのような、グリコール類；（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコールのような、ポリオール類；（１２）オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルのような、エステル類；（１３）寒天；（１４）水酸化マグネシウム及び水酸化アンモニウムのような、緩衝剤；（１５）アルギン酸；（１６）パイロジェンフリー蒸留水；（１７）等張食塩水；（１８）リンゲル溶液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝液；及び（２１）医薬製剤で用いるのに適しているその他の非毒性適合性物質を包含する。
【０４１８】
湿潤剤、乳化剤、及びラウリル硫酸ナトリウム並びにステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤、更に着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味剤、香味並びに芳香剤、保存剤及び抗酸化剤も組成物中に存在させることができる。
【０４１９】
薬学的に許容される抗酸化剤の例は：（１）アスコルビン酸、塩酸システイン、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等のような、水溶性抗酸化剤；（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＨＢＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、αトコフェロール等のような、脂溶性抗酸化剤；及び（３）クエン酸、エチルジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸等のような、金属キレート剤を包含する。
【０４２０】
化合物（複数を含む）を含有している組成物は、経口、経鼻、局所（口腔及び舌下を包含している）、直腸、膣内、エアゾール及び／又は非経口投与に適しているものを包含する。組成物は単回投与形態で都合良く提供されてよく、そして調剤学の技術分野で周知の方法の何れかで調製できる。単回投与形態を製造するために担体物質と混合できる活性成分の量は治療されるホスト及び投与の特定な方法によって変化するだろう。単回投与形態を製造するために担体物質と混合できる活性成分の量は一般に、治療効果もたらす化合物の量である。一般に、１００パーセントを切って、この量は約１パーセントから約９９パーセント、好ましくは約５パーセントから約７０パーセント、最も好ましくは約１０パーセントから約３０パーセントの活性成分に及ぶ。
【０４２１】
これらの組成物を製造する方法は、化合物（複数を含む）を担体及び、随意に、１つ又はそれ以上の補助成分と会合させる工程を包含する。一般に、製剤は、化合物を液体の担体、又は微粉化した固体の担体、又はこの両方と均一且つ密に会合させ、次いで、所望により、この生成品を成形することによって製造される。
【０４２２】
経口投与に適している本発明の組成物は、それぞれが活性成分として所定量の化合物を含有している、カプセル、カシェー、ピル、錠剤、トローチ剤（香味剤、通常は蔗糖及びアカシア或いはトラガカント、を用いる）、粉末剤、顆粒剤の形態で、又は水性若しくは非水性液体中の溶液若しくは懸濁液として、又は水中油型若しくは油中水型の液体乳剤として、又はエリキシル剤若しくはシロップ剤として、又はトローチ（ゼラチン及びグリセリン、又は蔗糖及びアカシアのような、不活性基剤を用いる）及び／又は洗口剤等としてであってよい。化合物は丸薬、舐剤又はペーストとしても投与できる。
【０４２３】
経口投与のための本発明の固体剤形（カプセル、錠剤、ピル、糖衣錠、粉末剤、顆粒剤等）においては、活性成分を１つ又はそれ以上の薬学的に許容される担体、例えば、クエン酸ナトリウム又は第二リン酸カルシウム、及び／又は以下のものの何れか等と混合する：澱粉、乳糖、蔗糖、ブドウ糖、マンニトール、及び／又はケイ酸のような、充填剤又は増量剤；（２）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、蔗糖及び／又はアカシアのような、結合剤；（３）グリセロールのような、保湿剤；（４）寒天−寒天、炭酸カルシウム、馬鈴薯又はタピオカ澱粉、アルギン酸、いくつかのケイ酸塩、及び炭酸ナトリウムのような、崩壊剤；（５）パラフィンのような、溶液遅延剤；（６）４級アンモニウム化合物のような、吸収促進剤；（７）例えば、アセチルアルコール及びグリセロールモノステアレートのような湿潤剤；（８）カオリン及びベントナイト粘土のような、吸収剤；（９）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形ポリエチレングリコールラウリル硫酸ナトリウム、及びこれらの混合物のような、滑沢剤；及び着色剤。カプセル、錠剤及びピルの場合は、医薬組成物は緩衝剤も含有できる。同様のタイプの固形組成物は、乳糖、更には高い分子量のポリエチレングリコール等のような、賦形剤を用いる軟及び硬ゼラチンカプセルの充填剤としても用いられる。
【０４２４】
錠剤は、随意に１つ又はそれ以上の補助剤と共に、圧縮又は型打ちによって作ることができる。圧縮錠は、結合剤（例えば、ゼラチン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム又は架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性又は分散剤を用いて製造できる。型打ち錠は、不活性液体希釈剤で湿潤させた粉末の活性成分の混合物を適切な器械で型打ちして作成できる。
【０４２５】
錠剤、及び糖衣錠、カプセル、ピル並びに顆粒剤のような本、発明の医薬組成物の他の固形剤形は、随意に割線を入れるか、又は腸溶コーティング及び医薬製剤技術において周知のその他のコーティングのような、コーティング及び殻を用いて製造できる。これらは、例えば、所望の放出プロフィールをもたらすように割合を変えるヒドロキシプロピルメチルセルロース、その他のポリマーマトリックス、リポソーム及び／又はミクロスフェアを用いて、そこにある活性成分の遅延させた又は制御された放出を提供できるように製剤化することもできる。例えば、細菌保持性フィルターを通す濾過によって、又は滅菌剤を、滅菌水、若しくはその他の注射用媒体に使用直前に溶解できる滅菌固形組成物の形態に取り込むことによって、これらを滅菌できる。これらの組成物は乳白剤も随意に含有でき、そして活性成分のみを、好ましくは胃腸管のある特定の位置に、随意に、遅延手法で、放出する組成物であってもよい。用いることができる包埋組成物の例は、重合物質及びワックスを包含している。適切な場合は、活性成分を、１つ又はそれ以上の上記賦形剤と共に、マイクロカプセルの形態にすることもできる。
【０４２６】
化合物（複数を含む）の経口投与のための液体剤形は、薬学的に許容される乳剤、マイクロ乳剤、溶液、懸濁液、シロップ及びエルキシル剤を包含する。活性成分に加えて、液体剤形は、例えば、水又はその他の溶媒のような、当該技術分野で通常用いられている不活性希釈剤；エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油類（特に、綿実、落花生、トウモロコシ、胚芽、オリーブ、ヒマシ及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル、並びにこれらの混合物のような、溶解剤及び乳化剤を含有できる。
【０４２７】
不活性希釈剤に加えて、経口組成物は、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤のような、補助剤；甘味剤、香味剤、着色剤、着香料及び保存剤を包含できる。
懸濁剤は、活性化合物（複数を含む）に加えて、懸濁化剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル類、微結晶セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天−寒天及びトラガカント、並びにこれらの混合物を含有できる。
【０４２８】
直腸及び膣内投与のための本発明の医薬組成物は坐剤として提示でき、これは１つ又はそれ以上の化合物を、１つ又はそれ以上の適切な非刺激性賦形剤又は担体、例えば、ココアバター、ポリエチレングリコール、坐剤用ワックス又はサリチル酸塩と混合して製造でき、そしてこれは室温では固体であるが、体温では液体であるので、直腸又は膣腔内で溶解して活性薬物を放出する。
膣内投与に適している本発明の組成物は、当該技術分野で適切であると知られているような担体を含有しているペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、発泡剤、又はスプレー製剤も包含する。
【０４２９】
化合物（複数を含む）の局所又は経皮投与のための剤形は、粉末剤、スプレー剤、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、貼付剤及び吸入剤を包含する。活性化合物（複数を含む）を無菌条件下で、薬学的に許容される担体、及び保存剤、緩衝剤、又は必要な場合は噴射剤と混合できる。
【０４３０】
軟膏、ペースト、クリーム及びゲルは、本発明の化合物（複数を含む）に加えて、動物及び植物の脂肪類、油類、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、ケイ酸、タルク及び酸化亜鉛、又はこれらの混合物のような、賦形剤を含有してもよい。
【０４３１】
粉末剤及びスプレー剤は、化合物（複数を含む）に加えて、乳糖、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム及びポリアミド粉末、又はこれらの混合物のような、賦形剤を含有できる。スプレー剤は加えて塩化フッ化炭化水素、並びにブタン及びプロパンのような、揮発性非置換炭化水素のような通常の噴射剤を含有できる。
【０４３２】
化合物（複数を含む）は、代わりにエアゾールによって投与できる。これは、化合物を含有している水性エアゾール、リポソーム製剤又は固体粒子を製造することによって遂行される。非水性（例えば、フッ化炭素噴射剤）懸濁液を用いることができる。薬剤をせん断にさらすこと（これは化合物の分解をもたらす）を最小にするので、超音波ネブライザーが好ましい。
【０４３３】
通常、水性エアゾールは、薬剤の水性溶液又は懸濁液を従来型の薬学的に許容される担体及び安定化剤と製剤化することによって作られる。担体及び安定化剤は特定の化合物の要求によって変わるが、一般的に、非イオン性界面活性剤（ツイーン、プルロニクス（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）、又はポリエチレングリコール）、血清アルブミンのような無害のタンパク質、ソルビタンエステル、オレイン酸、レクチン、グリシンのようなアミノ酸、緩衝剤、塩、糖又は糖アルコールを包含する。エアゾールは一般的に、等張溶液から製造される。
【０４３４】
経皮貼付剤は化合物（複数を含む）の身体への制御送達をもたらすという更なる利点を有している。このような剤形は薬剤を適切な媒体に溶解又は分散することによって作ることができる。皮膚を経由する薬物の流れを増強するために吸収促進剤も用いるこができる。このような流れの速度を、速度調節膜を備えるか、又は活性成分をポリマーマトリックス又はゲルに分散させるかの何れかによって調節できる。
【０４３５】
点眼薬、眼軟膏、粉末、溶液等も本発明の範囲内であると意図されている。
【０４３６】
非経口投与に適している本発明の医薬組成物は、１つ又はそれ以上の化合物を、抗酸化剤、緩衝剤、静菌薬、製剤を対象とする受容者の血液と等張にする溶質、又は懸濁若しくは増量剤を含有していてもよい、１つ又はそれ以上の薬学的に許容される滅菌等張水性若しくは非水性の溶液、分散液、懸濁液又は乳化液、又は使用直前に滅菌注射用溶液又は分散液に再構築できる滅菌粉末と組み合わせて包含している。
【０４３７】
本発明の医薬組成物において用いることができる適切な水性及び非水性担体の例は、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、ポリエングリコール、ポリエチレングリコール、等のような）、並びにこれらの適切な混合物、オリーブ油のような植物油、及びオレイン酸エチルのような注射用有機エステルを包含する。例えば、レシチンのようなコーティング剤を用いて、分散剤の場合は必要な粒子サイズを保持して、及び界面活性剤の使用によって、適切な流動性を保持できる。
【０４３８】
これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤のような、補助剤も含有してよい。微生物の活性化の阻止は、多種の抗菌及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸を含有することによって確保される。組成物に、蔗糖、塩化ナトリウム等のような、等張剤を含めることも望ましい。更に、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンのような吸収を遅らせる物質を含ませることによって、注射用医薬形態の持続吸収をもたらすことができる。
【０４３９】
ある場合は、薬剤の効果を引き延ばすために、皮下又は筋肉内注射からの薬剤の吸収を遅らせることが望ましい。これは、低い水溶性を有している結晶性又は無晶形物質の液体懸濁液の使用によって達成される。次いで、薬剤の吸収速度はその溶解速度によって決まり、次に、結晶の大きさ及び結晶形によって決まる。また、非経口投与剤形の遅延吸収は薬剤を油賦形剤に溶解又は懸濁することによって達成される。
【０４４０】
注射可能なデポー製剤は、ポリアクチド−ポリグリコリドのような、生物分解性ポリマー中に化合物（複数を含む）のマイクロカプセル封入剤を形成することによって作成できる。薬剤とポリマーの比率、及び用いる特定のポリマーの特質によって、薬剤放出速度を調節できる。その他の生物分解性ポリマーの例は、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）を包含する。注射可能なデポー製剤は、身体組織に適合性があるリポソーム又はマイクロエマルジョンに薬剤を封入することによっても製造できる。
【０４４１】
化合物（複数を）を薬剤としてヒト及び動物に投与する場合は、それら自体を、又は、例えば、０．１〜９９．５％（好ましくは０．５〜９０％）の活性成分を薬学的に許容される担体と組み合わせて含有している医薬組成物として、与えることができる。
【０４４２】
選ばれた投与経路に関わらず、適切な水和形態で用いてもよい化合物（複数を含む）、及び／又は本発明の医薬組成物は、当業者に公知の通常の方法で薬学的に許容される剤形に製剤化される。
【０４４３】
本発明の医薬組成物における活性成分の実際の投与量レベル及び投与の経時変化は、特定の患者に対して所望の治療応答を達成するのに有効である活性成分の量、患者に対して毒性がない、組成物、及び投与の方法を得るために変化するだろう。典型的な用量範囲は、１日に体重１ｋｇ当り（ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）約０．１μｇ〜２０ｍｇ（例えば、０．μｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ、０．３〜３μｇ／ｋｇ、０．１８〜０．５４ｍｇ／ｋｇ）である。別の実施態様では、量は約０．１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙから約１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙに変化する。更に別の実施態様では、量は約０．００１μｇから約１００μｇ／ｋｇ（例えば、体重）に変化する。
【０４４４】
本発明は、過剰増殖性疾患に罹っているか又は罹る疑いのある対象の同定及び／又は過剰増殖性疾患の予防、改善、又は治療について患者を観察することを含んでいる方法も提供する。
【０４４５】
本発明は、癌のような過剰増殖性疾患の治療又は予防のためのキットを提供する。キットは少なくとも１つの本発明化合物及び使用説明書を含有している。一実施態様では、本発明化合物の治療有効量を単回投与形態で含有している治療用又は予防用組成物を含有している。本発明は、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の本発明化合物を有しているキットも提供する。
【０４４６】
本明細書で用いられる「キット」は通常、少なくとも本発明の方法で用いるための標準外の実験用試薬を含有していると理解される。例えば、キットは、改変様の少なくとも１つのペプチドの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、ペプチドの改変のための１つ又はそれ以上のアルデヒド分子、及び使用説明書の全てを適切に包装して含んでいる。キットは、乾燥粉末、濃縮溶液、又はすぐ使える溶液のように、発明の方法を実施するために必要なその他の任意の成分を更に含むことができる。ある実施態様では、発明の方法で使用するための試薬を収容する１つ又はそれ以上の容器を含有して、このような容器は箱、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、ポーチ、ブリスターパック又は当該技術分野で公知のその他の適切な容器形態でよい。このような容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属箔、又は試薬を保持するのに適しているその他の材質で作ることができる。
【０４４７】
いくつかの実施態様では、本発明の化合物は従来の治療薬と組み合わせて提供される。別の実施多様では、キットは、治療又は予防組成物を含有している滅菌容器を含んでいて、このような容器は箱、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、ポーチ、ブリスターパック又は当該技術分野で公知のその他の適切な容器形態でよい。このような容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属箔、又は医薬品を保持するのに適しているその他の材質で作ることができる。
【０４４８】
必要に応じて、本発明の化合物は、癌を有しているか又は発症する危険性のある対象へ化合物を投与するための使用説明書と共に提供される。使用説明書は一般に、癌の治療又は予防のための化合物の使用に関する情報を包含している。別の実施態様では、使用説明書は、以下のものの少なくとも１つを包含している：治療薬剤の説明；投与計画及び虚血及びその症状の治療又は予防のための投与；注意；警告；適応症；禁忌；過剰投与情報；副作用；動物薬理；臨床試験；及び／又は参考文献。使用説明書は直接容器に印刷して（存在する場合）、又はラベルとして容器に貼付するか、或いは別のシート、パンフレット、カード、又はホルダーとして容器内に又は容器と共に供給することができる。
【０４４９】
本発明は更に、少なくとも２つの本発明化合物を含有しているライブラリーを提供する。本明細書で用いられる「ライブラリー」は、化学ライブラリーであると理解される。化学ライブラリーは、好ましくは構造及び／又は潜在的な機能特性を有している、２つ又はそれ以上の化合物（１０又はそれ以上、５０又はそれ以上、１００又はそれ以上、２００又はそれ以上、５００又はそれ以上、１０００又はそれ以上、５０００又はそれ以上、１０，０００又はそれ以上、等；又は上記の値で囲った任意の範囲）を包含している。ライブラリーは例えば、望ましい活性、例えば、キナーゼ結合、キナーゼ刺激、キナーゼ阻害活性を有する化合物を選択するためのスクリーニングアッセイに用いられる。
【０４５０】
本明細書で提供される任意の組成物又は方法を本明細書で提供される１つ又はそれ以上の任意の別の組成物又は方法と組み合わせることができる。
【０４５１】
別に示されていない限り、本発明の実施は、十分に当業者の範囲内である従来の技術を用いる。そのような技術は以下のような文献に十分に説明されている：“Molecular Cloning: A Laboratory Manual”, second edition (Sambrook, 1989); “Oligonucleotide Synthesis” (Gait, 1984); “Animal Cell Culture” (Freshney, 1987); “Methods in Enzymology” “Handbook of Experimental Immunology” (Weir, 1996); “Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells” (Miller and Calos, 1987); “Current Protocols in Molecular Biology” (Ausubel, 1987); “PCR:  The Polymerase Chain Reaction”, (Mullis, 1994); “Current Protocols in Immunology” (Coligan, 1991)。特定の実施態様に関して特に有用な技術は以下の項で検討する。
【０４５２】
実施例において、化合物番号は実施例に記載されている化合物を示す。別の実施例にある別の参照番号を付された同じ化合物への相互参照を提供するために努力がなされている。
【０４５３】
以下の限定しない実施例は本発明を説明している。
【実施例】
【０４５４】
Ｉ．本発明の化合物の合成及び化学分析
Ａ．合成及び製造
本発明の化合物は本項、実施例、及び化学文献に記載されている方法で合成及び／又は製造できる。
【０４５５】
１．一般的な手順：
通則．湿度に敏感な化合物を使う全ての実験は標準的な注射器、カニューレ、及びセプタ装置を用いて乾燥条件下（正のアルゴン圧）で実施した。
溶媒：全ての溶媒は無水で購入して（Aldrich）直接用いた。ＨＰＬＣグレードのヘキサン、ＥｔＯＡｃ、ＣＨ２ＣＬ２、及びＭｅＯＨをクロマトグラフィーで用いた。
ＴＬＣ：分析ＴＬＣは、蛍光指示薬を含有しているＡｎａｌｔｅｃｈプレコートプレート（Uniplate、シリカゲルＧＨＬＦ、２５０ミクロン）上で実施した。
ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ Ｉｎｏｖａ  ４００ＭＨｚスペクトルメータを用いて記録して、ピークシフトはδ（ｐｐｍ）スケールで記録する。
低分解能マススペクトル（ＥＳＩ）は、Ａｇｉｌｅｎｔ １２００ ＬＣ／ＭＳＤ−ＳＬシステムを用いて測定して、高分解能マススペクトル（ＥＳＩ又はＡＰＣＩ）は、ＵＣＲ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ Ｆａｃｉｌｉｔｙ，  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，３４０１ Ｗａｔｋｉｎｓ Ｄｒ．，Ｒｉｖｅｒｓｉｄｅ ＣＡ，９２５２１で測定した。
旋光度は、５８９ｎｍにおいてＪａｓｃｏ Ｐ−１０１０上で測定した。
ＩＲスペクトルは、Ｊａｓｃｏ ＦＴ−ＩＲ／６１５スペクトルメータを用いて適切に得た。
【０４５６】
Ａ）固相ペプチド合成
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ＰＯ（ＯＢｚ）ＯＨ）−ＯＨ及びその他のＦｍｏｃ保護アミノ酸は、Novabiochem から購入した。ペプチドは、Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）中、標準Ｆｍｏｃ固相プロトコールを用いてＮｏｖａＳｙｎ（登録商標）ＴＧＲ樹脂（Novabiochem、カタログ番号０１−６４−００６０）上で合成した。１−Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート（ＨＢＴＵ）（５．０当量）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）（５．０当量）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１０．０当量）をカップリング試薬として用いた。１−アセチルイミダゾールを用いてＮ末端アセチル化を実施した。仕上がった樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、メタノール、ジクロロメタン及びジエチルエーテルで洗浄し、次いで真空下で乾燥した（１晩）。Ｐｍａｂ含有ペプチドの合成に関しては、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ＰＯ（ＯＢｚ）ＯＨ）−ＯＨの代わりに（２Ｓ，３Ｒ）−４−［ジ−（ｔｅｒｔ−ブチル）−オキシホスフィニル］−Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｌ−バリンを用いた（Liu, F. et al., Tetrahedron 65, 9673-9679 (2009)）。
【０４５７】
Ｂ）ミツノブ反応条件を用いる固相上での誘導体化
粗製のペプチド樹脂（２００ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）をジクロロメタンで膨張させて（１５分間）、次いで無水ジクロロメタン中室温で（２時間）トリフェニルホスフィン（２６２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、アジドジカルボン酸ジエチル（ＤＥＡＤ）（0.43ｍＬ、４０％トルエン溶液、１．０ｍｍｏｌ）及びアルコール（例えば、アルコールａ−ｌ；以下を参照されたい）で処理し、真空下で乾燥して（２時間）、トリフルオロ酢酸で処理して開裂した。
【０４５８】
【化９６】
2014511877.tif 000124
【０４５９】
Ｃ）ペプチドの開裂及び精製
ペプチド樹脂（２００ｍｇ）を、トリフルオロ酢酸：トリイソブチルシラン：Ｈ２Ｏ（９０：５：５）で処理して開裂した。濾過によって樹脂を除去して、濾液を真空下で濃縮し、次いでジエチルエーテルを添加してペプチドを沈殿して、沈殿物をエーテルで洗浄した。得られた固体を５０％の水性アセトニトリル（５ｍＬ）に溶解して、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃ１８カラム（直径２１ｍｍ×２５０ｍｍ、カタログ番号：００Ｇ−４４３６−Ｐ０）を用い、０％水性アセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸）〜１００％アセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸）の線形グラジエントで流速１０．０ｍＬ／分で３０分間の逆相分取ＨＰＬＣで精製した。凍結乾燥して白色粉末として生成物を得た。
【０４６０】
Ｄ）ＰＥＧ化ペプチドの固相合成
ＰＥＧ化ペプチドを、フィルターを有するポリプロピレンカラム（Thermo Scientific、カタログ番号２９９２４、容量：１０ｍＬ）において、標準Ｆｍｏｃ固相プロトコールを用いてＮｏｖａＳｙｎ（登録商標）樹脂（それぞれのペプチドに対して０．１ｍｍｏｌの樹脂を用いた。Novabiochem、カタログ番号０１−６４−００６０、０．２０−０．３０ｍｍｏｌ／ｇを負荷）上で合成した。それぞれのカップリング周期に対してＦｍｏｃ保護アミノ酸（５．０当量）、１−Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート（ＨＢＴＵ）（５．０当量）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）（５．０当量）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１０．０当量）を用いた。Ｎ−メチル−２−ピロリジン中、室温で２時間カップリングを継続した後、ＤＭＦで洗浄した（３．０ｍＬで５回）。樹脂を室温で２０分間ピペリジンの２０％Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（４．０ｍＬ）で処理して、次のカップリングの前に、洗浄した（ＤＭＦ、３．０ｍＬで５回）。ｍ−ｄＰＥＧ（登録商標）８−酸を用い、ＨＢＴＵ（５．０当量）、ＨＯＢＴ（５．０当量）及びＤＩＰＥＡ（１０．０当量）と４時間室温で反応させて、アミノ末端をアシル化した。樹脂をＤＭＦ（４．０ｍＬで５回）、メタノール（４．０ｍＬで５回）、メチレンクロライド（４．０ｍＬで５回）及びジエチルエーテル（４．０ｍＬで５回）で洗浄し、次いで真空下で乾燥した（１晩）。
【０４６１】
Ｅ）ＰＥＧ化ペプチド産物の樹脂開裂及びＨＰＬＣ精製
ＰＥＧ化ペプチドを、トリフルオロ酢酸：トリイソプロピルシラン：Ｈ２Ｏ（４０ｍＬ、０．１ｍＬ、０．１ｍＬ）で室温、４時間処理して樹脂（〜２００ｍｇ）から解離した。樹脂を濾過によって除去して濾液を真空下で濃縮し、次いでジエチルエーテルで洗浄した（５ｍＬで３回）。得られた固体を５０％水性アセトニトリル（５ｍＬ）に溶解して、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃ１８カラム（直径２１ｍｍ×２５０ｍｍ、カタログ番号：００Ｇ−４４３８−Ｐ０）を用いる逆相分取ＨＰＬＣで精製した。
【０４６２】
Ｆ）Ｘ線結晶解析
（タンパク質の精製及び結晶化）
Ｐｌｋ１ ＰＢＤタンパク質（残基３７１〜６０３）を先に記載されている方法（Yun, S.-M. et al. Nat. Struct. Mol. Biol. 16, 876-882 (2009)）のように精製した。水滴蒸気拡散法を用いて結晶を生育させた。１０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ８）、０．５ＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＤＴＴ、２％のＤＭＳＯ及び２ｍＭの化合物（ペプチド４ｊ）中の１２ｍｇ／ｍＬのＰＢＤタンパク質を、１５％（Ｖ／Ｖ）ＰＥＧ３３５０、０．１Ｍグリシン（ｐＨ９）、及び３００ｍＭ ＮａＣｌからなる保存溶液の当容量と混合した。１晩で結晶が現れ、数日かけて最大サイズに到達した。
【０４６３】
（データ収集、並びに構造決定及び精密化）
結晶を３３．３％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ３３５０、５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１Ｍのグリシン（ｐＨ９）、２ｍＭのペプチド４ｊ）、２％のＤＭＳＯ及び１０ｍＭのＤＴＴ中で冷凍保護して、Ｒｉｇａｋｕ ＲＵ−３００ ホームＸ線源を有するＭａｒ３４５画像プレート検出器上に１００Ｋでデータを収集した。データを、ＨＫＬ（Minor, W. et al. Acta Crystallogr. D Biol. Crystallogr. 62, 859-66 (2006)）及びＣＣＰ４ソフトウェアスイート（Acta Crystallogr. D Biol. Crystallogr. 50, 760-3 (1994)で処理した。構造３ＦＶＨのＡ鎖（Yun, S.-M. et al. Nat. Struct. Mol. Biol. 16, 876-882 (2009)を用いるＡｎｏＲｅ（Navaza, J. Acta Crystallogr. D Biol. Crystallogr. 57, 1367-72 (2001)を用いて分子置換によって構造を解明した。検索モデルとして、そしてＸｔａｌＶｉｅｗ（McRee, D.E. J. Struct. Biol. 125, 156-65 (1999)）に手動で適合させるＰＨＥＮＩＸ（Adams, P.D. et al. Acta Crystallogr. D Biol. Crystallogr. 66, 213-21）を用いて定義される（ＲＣＳＢ受入れコード）。Ｍｏｌｓｃｒｉｐｔ（Kraulis, P.J. J. Appl. Crystallogr. 24, 946-950 (1991)）及びＰｙＭＯＬを用いて形状を作出した。
【０４６４】
補助表１：データ収集及び精密化統計
ＰＤＢ  ＩＤ            ＸＸＸＸ            
空間基                  Ｐ２１
ａ（Å）                ３５．３
ｂ（Å）                ５１．２
ｃ（Å）                ５８．０
β                      １０１．０°
分解範囲（Å）          １５−１．５５
平均冗長性              ６．２
網羅性ａ                ９９．８％（９８．３％）
Ｒｓｙｍａ              ４．８（１９．７）
平均Ｉ／σａ            ３１．７（４．２）
Ｒ／Ｒｆｒｅｅ（％）    １５．１／１８．３
ａ最も高い解像殻の値を括弧内に示してある。
【０４６５】
２．合成スキーム及び実施例
【０４６６】
【化９７】
2014511877.tif 000125
【０４６７】
ミツノブカップリング化学（Swamy et al., Chem. Rev. 109, 2551-2651 (2009)）を前駆ペプチドの酸感受性固相樹脂への結合に適用した。基質アルコールと縮合する対象部位である、１つの遊離リン酸ヒドロキシル基を除いて、全ての官能性ヘテロ原子の全体的な保護を有している。末端ジオールを有している短鎖アルキル、カルボキシル、アルケニル、チオフラニル及びフェニル置換基を包含する（ａ〜ｆ、スキーム１）、様々なアルコールがエステル化に用いられる。ミツノブカップリングに従って、ペプチドが酸性条件下で樹脂から解離して予期されたリン酸ジエステル（３ａ〜３ｆ）が主要反応生成物として得られた。予想外に、それぞれのケースで、より速く溶出する（ＨＰＬＣ）予期した生成物と同一の分子量を示す構造未知の少量の副産物（４ａ〜４ｆ、スキーム１）が得られた。
【０４６８】
合成の１回目に得られた副産物（４ｆ）は、４−フェニルブタン−１−オールを用いるミツノブエステル化の結果であった。副産物（４ｄ及び４ｅ）もアルキル鎖に繋がっている不飽和基を有しているアルコールに由来している。この構造パターンの潜在的な異議を調査するために、末端フェニル環を有している漸進的に長くなるｎ−アルキル−１−オールを用いてミツノブエステル化反応を繰り返した。１回目の合成で既に観察されたように、それぞれの予期されたリン酸ジエステル生成物は、より速く溶出する副産物（それぞれ、４ｇ〜４ｌと示す）の形成を伴っていた。
【０４６９】
【化９８】
2014511877.tif 000126
【０４７０】
２．オルトゴナルに保護されたＮ−アルキルヒスチン−類縁体の合成
【０４７１】
【化９９】
2014511877.tif 000127
【０４７２】
試薬及び条件：（ｉ）Ｅｔ３Ｎ（２．０当量）、Ｂｏｃ２Ｏ（２．０当量）、ＭｅＯＨ、室温、４８時間（収率７３％）；
（ｉｉ）４（１．１当量）Ｔｆ２Ｏ（１．１当量）、ＤＩＰＥＡ（１．１当量）、ＣＨ２Ｃｌ２、−７５℃から室温、１６〜１８時間（収率６０％）；
（ｉｉｉ）１）ＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（２．０当量）、ＴＨＦ−（ｖ／ｖ４：１）、０℃から室温、１時間；２）４ＭのＨＣｌ（ジオキサン）（１０当量）、室温、１時間；３）Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ（１．５当量）。
【０４７３】
３．ライブラリー合成
アミノオキシ官能性及びカルボニル基の容易な縮合を生かして、アミノオキシ処理をタンパク質コンセンサス認識配列に取り込んで、これらを、連結成分を担持しているペプチドライブラリーの次の固相構築のために用いた。
【０４７４】
親ペプチド「ＰＬＨＳｐＴ」に基づいて、アミノ末端プロリンをトランス及びシス−４−アミノオキシプロリン（１及び２）で置き換えて、アミノオキシ含有ペプチド（４及び５）をもたらした。この手法は示したように親のプロリンピロリジン環系を保持しているこの残基におけるライブラリー多様性を可能にする。
【０４７５】
【化１００】
2014511877.tif 000128
【０４７６】
Ｃ末端位における広範な置換官能性を迅速に検索するために、精製せずに直接生物評価が可能な、タイプ７の生成物を誘導するポスト固相オキシム多様性のためのアミノオキシ含有ペプチド６を製造する。
【０４７７】
【化１０１】
2014511877.tif 000129
【０４７８】
オキシム含有ペプチドと反応するために考えられるアルデヒドは、これに限定されないが、次のものを包含する。
【０４７９】
【化１０２】
2014511877.tif 000130
【０４８０】
オキシム含有ペプチドは、ペプチド４又は５を１０個の選ばれたアルデヒド（上に示したアルデヒドａ〜ｊ）と共役することによって製造した。
【０４８１】
４．「サブモノマー手法」を用いるペプチド−ペプトイドハブリッドの製造
【０４８２】
【化１０３】
2014511877.tif 000131
【０４８３】
ハイブリッド１１を製造するために用いることができるアミンは、例えば、以下のような化合物を包含する。
【０４８４】
【化１０４】
2014511877.tif 000132
【０４８５】
製造された幾つかのペプトイド−ペプチドハイブリッド１１についてのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを表Ａに示す。
【０４８６】
【表８】
2014511877.tif 000133
【０４８７】
モノチャージリン酸及び環状ペプチドの製造
【０４８８】
【化１０５】
2014511877.tif 000134
【０４８９】
１．ミツノブ反応：樹脂０．１０ｍｍｏｌをＤＥＡＤ（０．４６ｍＬ、４０％トルエン溶液、１．０ｍｍｏｌ）、ＰＰｈ３（２６２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びアルコール（１１８μＬ、１．０ｍｍｏｌ）とＤＣＭ（２．５０ｍＬ）中で混合し、室温で３０分間静かに振盪し、次いでＤＣＭ及びＤＭＦで洗浄した。
２．ＲＣＭによる閉環：乾燥樹脂（０．０５ｍｍｏｌ、２００ｍｇ）をＤＣＥ（３．０ｍＬ）に溶解し、アルゴンで３分間脱ガスし、第二世代ホベイダグラブス触媒（１０ｍｇ）で補完し、１晩静かに振盪し、次いでＤＣＭで洗浄した。
【０４９０】
上記スキームに従って製造できる化合物は、これに限定されないが、以下の化合物を包含する。
【０４９１】
【化１０６】
2014511877.tif 000135
【０４９２】
６．オルトゴナルに保護された（２ｓ，３ｒ）−２−アミノ−３−メチル−４−ホスホの酪酸（Ｐｍａｂ）及び誘導体を製造するための合成スキーム
【０４９３】
【化１０７】
2014511877.tif 000136
【０４９４】
スキーム５．反応及び条件：（ａ）１．塩化オキサリル、ＤＭＳＯ、ＤＣＭ、−７８℃、２時間；２．ＮａＣｌＯ２、ＫＨ２ＰＯ４、２−メチル−２−ブテン、ｔｅｒｔ−ブタノール及びＨ２Ｏ、室温、１晩、１工程で９７％。（ｂ）１．トリメチルアセチルクロリド、トリエチルアミン、ＴＨＦ、−７８℃〜０℃、２０分；２．（Ｒ）−（＋）−フェニル−オキサゾリジオン・リチウム塩、ＴＨＦ、−７８℃〜０℃、１晩、１００％。（ｃ）トリブチルホスフィン、ＴＨＦ、室温、１時間、８４％。（ｄ）１．メチルマグネシウムクロリド、臭化銅（Ｉ）・ジメチルスルフィド、ジメチルスルフィド／ＴＨＦ、−７８℃〜−４０℃、２時間；２．ＮＢＳ、−７８℃、１．５時間；３．ＮａＮ３、ＤＭＦ、０℃、２時間、２工程で７９％。（ｅ）１．ｐ−トルエンスルホン酸・１水和物、ＭｅＯＨ、室温、６時間；２．１気圧のＨ２、１０％Ｐｄ・Ｃ（１０％）、ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ、室温、１晩；３．クロロギ酸ベンジル、ＮａＨＣＯ３、ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ、０℃、４時間、１１に関して３工程で４９％。
【０４９５】
オルトゴナルに保護されたＰｍａｂ（４）の立体選択的合成を、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）で単一保護された（２Ｅ）−２−ブテン−１，４−ジオール（５）のスワン酸化を用いて開始し、その後塩化ナトリウム酸化した。これはＺ二重結合配置を有する酸（６）をもたらした。酸（６）をエバンスのキラル補助剤、（４Ｒ）−４−フェニル−２−オキサゾリジノンとカップリングして、Ｚ二重結合配置をＴＨＦ中のトリ−ｎ−ブチルホスフィンで処理して異性化して所望のＥ異性体（７）を得た。（９）のα及びβ立体中心の両方を、メチルマグネシウムクロリドの不斉銅（１）触媒マイケル付加それに続く求電子的臭素化からなるタンデム配列によって構築した。次いで、粗製の（２Ｒ）−臭化物をアジ化ナトリウムを用いる求核ＳＮ２置換によって、対応する（２Ｓ）−アジドに変換した。単一の（２Ｓ，３Ｒ）ジアステレオマー（９）をクロマトグラフィー精製及び結晶化によって得た。絶対立体化学の割り当ては確立した文献方法（Navaza, J.Acta Cryst.  A50, 157-163 (1994); Brunger, A.T. Nat. Protoc. 2, 2728-2733 (2007); 及び Adams, P.D. et al. Acta Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 58, 1948-1954 (2002)）によった。触媒的ｐ−トルエンスルホン酸での処理によるＴＢＤＭＳ基の除去、それに続く環化によってエバンス補助基を除去すると５員のラクトンが得られた。アジドをＡｃＯＨとＭｅＯＨの混合物中で水素化してその位置を保護するとラクトン（１０）更に開環アルコールを１対４の比率で得られた。ラクトン（１０）を更に（１１）に変換した。
【０４９６】
【化１０８】
2014511877.tif 000137
【０４９７】
スキーム６．反応及び条件：（ａ）ＤＩＢＡＬ、ＴＨＦ、−４０℃〜０℃、４時間、６１％。（ｂ）１．１気圧のＨ２、１０％Ｐｄ・Ｃ（１０％）、ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ、室温、１晩；２．クロロギ酸ベンジル、ＮａＨＣＯ３、ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ、０℃、４時間。
【０４９８】
アルコール（１１）は公知のビス−メチルエステル（１３）を介してＬ−アスパラギン酸からも製造できる。ＤＩＢＡＬを用いる（１３）のγ−カルボキシルの選択的還元はアルコール（１４）をもたらす。この反応の秘訣は０．０３Ｍ未満の基質濃度の使用であった。上記と同様に、ＡｃＯＨとＭｅＯＨの混合物中での水素化による（１４）のＮ−脱保護及びそれに続くＣｂｚ保護によってラクトン（１０）及びアルコール（１１）を１対４の比率で得た。
【０４９９】
【化１０９】
2014511877.tif 000138
【０５００】
スキーム７．反応及び条件：（ａ）塩化オキザリル、ＤＭＳＯ、ＤＣＭ、−７８℃、２時間。（ｂ）１６、ＤＣＭ、室温、３時間。（ｃ）クエン酸、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ、室温、１晩、３工程で８８％。（ｄ）チオノギ酸０−フェニル、ＤＭＡＰ（触媒）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＣＭ、室温、１晩。（ｅ）トリブチル錫水和物、ＡＩＭＮ、トルエン、１００℃、２０分、２工程で５８％。（ｆ）１．ＬｉＯＨ、ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ、室温、１晩；２．１気圧のＨ２、１０％Ｐｄ・Ｃ（１０％）、ＭｅＯＨ、室温、１晩；３．ＦｍｏｃＯＳｕ、ＮａＨＣＯ３、ジオキサン／Ｈ２Ｏ、室温、１晩、３工程で１００％。
【０５０１】
アルコール（１１）のスワン酸化で対応するアルデヒド（１５）が得られる。このアルデヒドを、新たに製造したジ−ｔｅｒｔ−ブチルメチルシリルホスファイトによるホスホ−ムカイヤマアルドール反応に付すとアルデヒド（１７）が得られた（スキーム７）。続いてクエン酸で処理すると遊離のアルコール（１８）が得られ、これをフェニルチオカーバネート（１９）として誘導体化してＢａｒｔｏｎ−ＮｃＣｏｍｂｉｅデオキシ化に付すと、２０が得られた。メチルエステルの加水分解、次いで水素化及びＦｍｏｃ−ＯＳｕを用いる再保護がオルトゴナルに保護されたＰｍａｂ誘導体（４）をもたらした（以下を参照されたい）。
【０５０２】
【化１１０】
2014511877.tif 000139
【０５０３】
７．Ｐｍａｂ誘導体の設計及び製造
標準的な固相手法に適合している、直角に保護を有している加水分解に安定なリン酸スレオニン模倣薬として（２Ｓ，３Ｒ）−４−［ビス−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）ホスフィニル］−２−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ−３−メチルブタン酸［（Ｎ−Ｆｍｏｃ、Ｏ，Ｏ−（ビス−ｔｅｒｔ−ブチル）Ｐｍａｂ、（４）、上を参照されたい）の立体選択的合成。用いた合成手段は、キラル導入のためにエバンスのオキサソリジノンを利用する。
【０５０４】
ショルコフ（Ｓｃｈｏｌｌｋｏｐｆ）のビスラクチンエーテルを用いる、ｐＴｒ模倣薬、（２Ｓ，３Ｒ）−アミノ−３−メチル−４−ホスホノブタン酸（Ｐｍａｂ、（２）、上を参照されたい）の立体選択的合成は報告されている。これはＮ−Ｆｍｏｃ保護の他にホスホン酸基のＯ，Ｏ−（ビス−アリル）保護を有する誘導体化Ｐｍａｂを提供している（Hanisch, A. et al.., Mol. Biol. Cell 17, 448-459. (2006)）。Ｏ，Ｏ−（ビス−エチル）ホスホン酸及びＮ−Ｂｏｃ保護基を有している、対応する４，４−ジフルオロ類縁体（Ｆ２Ｐｍｏｂ、（３）、上を参照されたい）の合成が、キラルシントンとしての（Ｒ）−イソプロピリデングリセロール及びオッポルツアーのスルタムキラル補助剤の両方を用いて着手されている。この保護スキームは酸に不安定な樹脂上での標準的な固相プロトコールにおいて簡便な使用を可能にするだろう。
【０５０５】
ポロ−ボックスドメイン−結合ペプチドの合成への試薬（４）の適用。
ポロ様キナーゼ１（Ｐｌｋ１）は、セリン及びスレオニン残基をリン酸化する重要な有糸分裂調節因子として機能する。多数の癌におけるその過剰発現及びその予後不良との関連がそれを潜在的な抗癌治療標的にしている。Ｐｌｋ１阻害剤開発の主な焦点は、キナーゼ触媒ドメインに向けられている。しかしながら、Ｐｌｋ１は、ホスホセリン及びホスホスレオニン含有配列と特異的に結合してＰｌｋ１の臨界的な局在化をもたらすモジュラーＣ末端ＰＢＤを含んでいる。競合的にＰＢＤを結合する拮抗薬はキナーゼを標的とする薬剤とは異なるＰｌｋ１の阻害剤としての機能を果たすだろう。ＰＢＤ結合拮抗薬の開発における出発点は、ＰＢＤ−結合タンパク質、ＰＢＩＰ１のｐ−Ｔｈｒ７８領域（ｐ−Ｔ７８）から誘導されるコンセンサス結合配列をモデルにした短鎖ｐＴｒ含有ペプチドによってもたらされる。多種のＰＢＤ結合ホスホペプチドを試験することによって、５ｍｅｒのホスホペプチド「ＰＬＨＳｐＴ」（２１）が高い親和性（Ｋｄ＝０．４５μＭ）でＰｌｋ１ ＰＢＤと特的に相互作用することが最近示された。インビボによる検討にホスファターゼに安定なペプチドを提供するために、Ｆ２Ｐｍａｂ（３）も６ｍｅｒＴ７８ペプチドに組み込んで、対応するペプチド２５を得た。（注意：６ｍｅｒ配列「ＰＬＨ−Ｆ２Ｐｍａｂ−Ａ」（２５）は、５ｍｅｒ配列、「ＰＬＨ−Ｆ２Ｐｍａｂ」の不十分な合成のために合成された）。（２５）はｐ−Ｔ７８ペプチド、「ＰＬＨＳｐＴＡ」のそれぞれよりより低いＰＢＤ結合親和性を示して、細胞に基づいた試験で有意な毒性を提示することが見出された。毒性は、高い酸性のＣＦ２ＰＯ３Ｈ部分に起因している可能性がある。従って、固相技術及び標準的なＦｍｏｃに基づくプロトコールを用いて、我々はＰｍａｂ含有ペプチド２３及び２４を合成するために試薬（４）を使用した。
【０５０６】
８．生物学的に利用可能なＰＢＤ−結合ペプチドに組み込むためのプロドラッグ形態にあるＰｍａｂ ｐＴｈｒ模倣薬の設計及び合成。
【０５０７】
【化１１１】
2014511877.tif 000140
【０５０８】
Ｌ−アスパラギン酸から化合物（５）の製造は文献に従って行い（Humphrey, J. M.; Bridges, R. J.; Hart, J. A.; Chamberlin, A. R. J. Org. Chem. 1994, 59, 2467）、これらの反応は１０グラムスケールを超えても非常に再現可能である。化合物（９）からＰｍａｂ類縁体（１２）の製造を以下に記載する。
【０５０９】
化合物（１０）の製造。
ＴＨＦ（３．０ｍＬ）とＨ２Ｏ（３．０ｍＬ）の混合溶媒中の（９）（１８０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）とＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（３４ｍｇ、０．８１ｍｇ）の混合物を０℃〜室温で１晩撹拌し、ＮＨ４Ｃｌ（５０ｍＬ）でクエンチして、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ層を洗浄し（食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、ロータリーエバポレータで油状物に濃縮し、これをＤＭＦ（５．０ｍＬ）に溶解した。ＭａＨＣＯ３（１６８ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）、ベンジルブロマイド（１２０μＬ、１．０ｍｍｏｌ）及びＮａＩ（５ｍｇ）を上記ＤＭＦ溶液に加えた。得られた近を室温で１晩撹拌し、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、洗浄し（食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）で精製すると、無色油状物として（１０）が得られた（１３４ｍｇ、２工程で６５％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ；７．４０−７．２５（ｍ、１０Ｈ）、５．８６（ｄ、Ｊ  ＝８．４  Ｈｚ、１  Ｈ）、５．１３−５．０４（ｍ、４Ｈ）、４．３０  （ｄｄ、Ｊ＝８．０、６．４Ｈｚ、１  Ｈ）、２．３７（ｍ、１Ｈ）、１．７３（ｍ、１Ｈ）、１．５０−１．３５（ｍ、１９Ｈ）、１．０５（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ；１７１．４、１５６．２、１４２．３、  １３６．３、１３５．１、１２８．６、１２８．５、１２８．３、１２８．１、１２８．０、１１０．４、８２．１、６７．３、６６．９、５９．６、３４．４、３３．８、３２．３、３１．９、３０．３、２４．１、１７．４。
ＥＳＩ（＋ＶＥ）ｍ／ｚ：５５６．３（Ｍ  ＋  Ｎａ）＋。
【０５１０】
化合物（１１）の製造。
化合物（１０）（１４０ｍｇ、０．２６２ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（５．０ｍＬ）のジクロロメタン（５．０ｍＬ）溶液で２時間室温で処理した。溶媒をロータリーエバポレータで除去し、残渣をトルエン（１０ｍＬ）に溶解して、再び濃縮した。得られた残渣を高真空下（オイルポンプ）で２時間乾燥し、次いでジクロロメタン（５．０ｍＬ）に溶解して、０℃に冷却した。塩化オキザリル（０．２０ｍＬ）を、続いて１滴のＤＭＦを上記溶液に加えた。混合物を室温で２時間撹拌し、次いでロータリーエボレータで濃縮した。別のフラスコで、アラニンメチルエステル塩酸塩（２００ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．８０ｍＬ）をジクロロメタン（４．０ｍＬ）に溶解して０℃に冷却し、続いて上で製造したリン酸オキシクロリドのジクロロメタン（２．０ｍＬ）溶液をゆっくり加えた。得られた混合物を室温で１晩撹拌し、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、洗浄し（食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）で精製すると、無色油状物（４０ｍｇ、３工程で収率２６％）として（１１）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．３２−７．２５（ｍ、１０  Ｈ）、６．０１（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．１６（ｓ、２Ｈ）、５．０６（ｓ、２Ｈ）、  ４．５６（ｄｄ、Ｊ＝７．６、４．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．０５−３．９５（ｍ、２Ｈ）、  ３．６５（ｓ、３Ｈ）、３．６３（ｓ、３Ｈ）、３．４５（ｂｒｓ、１Ｈ）、３．２０（ｍ、  １Ｈ）、２．４５（ｍ、１Ｈ）、１．８５（ｍ、１Ｈ）、１．６５（ｍ、１Ｈ）、１．３３  −１．２８（ｍ、６Ｈ）、０．９７（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３  Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７５．１、１７５．０、１７１．０、１５６．０、１３６．２、１３４．９、１２８．７、１２８．５、１２８．１、６７．４、６７．０、５７．９、５２．２、４９．１、４８．２、３３．５、３２．２、２９．６、２１．２、２０．９、１７．６。
ＥＳＩ（＋ＶＥ）ｍ／ｚ：６１４．２（Ｍ  ＋  Ｎａ）＋。
【０５１１】
化合物（１２）の製造。
メタノール中の化合物（１１）（６０ｍｇ、０．１０２ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（１０％、１０ｍｇ）を１気圧の水素下、室温で５時間撹拌した。Ｐｄ／Ｃを濾去し、濾液を濃縮して、残渣をジオキサン（３．００ｍＬ）とＨ２Ｏ（３．０ｍＬ）の混合溶媒に溶解した後、ＮａＨＣＯ３（４２ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）及びＦｍｏｃＯＳｕ（７６ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で１晩撹拌した。ジオキサンをロータリーエバポレータで除去し、残った水層をエーテル（５０ｍＬ×２）で洗浄し、１ＮのＮＨＣｌでｐＨ３〜４に酸性化して、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出した。ＥｔＯＡＣ層を洗浄し（食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発させると白色のろう状物質（５０ｍｇ、２工程の収率８３％）として分析的に純粋な（１２）が得られた。これは更に精製せずに固相ペプチド合成に直接用いた。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．７１（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、  ７．５５（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．３７−７．３３（ｍ、２Ｈ）、７．２８−  ７．２３（ｍ、２Ｈ）、５．９６（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．７１（ｍ、１Ｈ）、  ４．３４−４．３１（ｍ、２Ｈ）、４．１８（ｍ、１Ｈ）、４．１０−３．９５（ｍ、２  Ｈ）、３．６６（ｓ、６Ｈ）、２．５０（ｍ、１Ｈ）、２．００−１．８５（ｍ、２Ｈ）、１．４５（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、１．３５（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、１．０１（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７４．７、１７１．８、１５５．８、  １４３．８、１４１．２、１２７．７、１２７．０、１２５．１、１２０．０、６７．０、６０．４、５２．４、４９．１、４８．３、４７．１、３１．５、２９．７、２０．７、１４．１。
ＥＳＩ（−ＶＥ）ｍ／ｚ：４１８．１（Ｍ＊−Ｈ）−。
ＥＳＩ（＋ＶＥ）ｍ／ｚ：４２０．１（Ｍ＊＋Ｈ）＋、４４２．２（Ｍ＊＋Ｎａ）＋。
【０５１２】
【化１１２】
2014511877.tif 000141
【０５１３】
９．ジアミドプロドラッグの合成
Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）中で、標準的なＦ−ｍｏｃ固相プロトコールを用いて、ＮｏｖａＳｙｎ（登録商標）（Novabiochem、カタログ番号０１−６４−００６０）上でペプチドを合成した。Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｇｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｉＢｕ）−ＯＨはNovabiochemから購入して用いた。Ｐｍａｂ類縁体（１２）を、ＮＭＰ中で（１２）（１．０当量）、ＨＡＴＵ（１．０当量）、ＨＯＢＴ（１．０当量）及びＤＩＰＥＡ（２．０当量）を用い、室温で１晩、樹脂にカップリングした。Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（５．０当量）、１−Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート（ＨＢＴＵ）（５．０当量）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）（５．０当量）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（５．０当量）を用いて、ＮＭＰ中、室温で２時間、残りの残基をカップリングする。Ｎ末端を１−アセチルイミダゾールでアセチル化した。最終的な樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、メタノール、ジクロロメタン及びエーテルで洗浄し、次いで真空下で乾燥した（１晩）。５ｍＬのトリフルオロ酢酸：トリイソブチルシラン：Ｈ２Ｏ（９０：５：５）で処理してペプチドを樹脂（２００ｍｇ）から解離した。樹脂を濾去して濾液を真空下で濃縮し、次いでエーテルで沈殿させて、沈殿物をエーテルで洗浄した。得られた固体を５０％水性アセトニトリル（５ｍＬ）に溶解して、ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＣ１８カラム（直径２１ｍｍ×２５０ｍｍ、カタログ番号：００Ｇ−４３６−Ｐ０）を用い、０％の水性アセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸）から１００％のアセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸）の線形グラジュエントで、流速１０．０ｍＬ／分の速度で２５分かけて逆相分取ＨＰＬＣによって精製した。
【０５１４】
【化１１３】
2014511877.tif 000142
【０５１５】
最終解離条件において５％のＨ２Ｏがメチルエステルを完全に加水分解したことが分かったので、放出されたＬ−アラニンがホスホン酸ペプチド（１４）をもたらす。
【０５１６】
１０．ペプチド合成の例示：
【０５１７】
【化１１４】
2014511877.tif 000143
【０５１８】
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ＰＯ（ＯＢｚｌ）ＯＨ）−ＯＨ及びその他のＦｍｏｃ保護アミノ酸はNovabiochemから購入した。Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）中、標準的なＦｍｏｃ固相プロトコールを用いて、ＮｏｖａＳｙｎ（登録商標）ＴＧＲ樹脂（Novabiochem、カタログ番号：０１−６４−００６０）上でペプチドを合成した。１−Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート（ＨＢＴＵ）（５．０当量）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）（５．０当量）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１０．０当量）をカップリング試薬として用いた。Ｎ末端を１−アセチルイミダゾールでアセチル化した。最終的な樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、メタノール、ジクロロメタン及びエーテルで洗浄し、次いで真空下で乾燥した（１晩）。５ｍＬのトリフルオロ酢酸：トリイソブチルシラン：Ｈ２Ｏ（９０：５：５）で処理してペプチドを樹脂（２００ｍｇ）から解離した。樹脂を濾去して濾液を真空下で濃縮し、次いでエーテルで沈殿させて、沈殿物をエーテルで洗浄した。得られた固体を５０％水性アセトニトリル（５ｍＬ）に溶解して、ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＣ１８カラム（直径２１ｍｍ×２５０ｍｍ、カタログ番号：００Ｇ−４３６−Ｐ０）を用い、０％の水性アセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸）から１００％のアセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸）の線形グラジュエントで、流速１０．０ｍＬ／分の速度で２５分かけて逆相分取ＨＰＬＣによって精製した。
ペプチド（２１）：ＥＳＩ（＋ＶＥ）ｍ／ｚ：５９５．３（Ｍ＋Ｈ）＋。ペプチド（２２）：ＥＳＩ（＋ＶＥ）ｍ／ｚ：６７５．３（Ｍ＋Ｈ）＋。ペプチド（２３）：ＥＳＩ（＋ＶＥ）ｍ／ｚ：６７３．３（Ｍ＋Ｈ）＋。ペプチド（２４）：ＥＳＩ（＋ＶＥ）ｍ／ｚ：６５７．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
分析的ＨＰＬＣ[ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＣ１８カラム（直径４．６０ｍｍ×２５０ｍｍ、カタログ番号：００Ｇ−４３５−０）を用い、５％の水性アセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸）から１００％のアセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸）の線形グラジュエントで、流速１．０ｍＬ／分の速度で２５分かけて逆相分取ＨＰＬＣによる]が、ペプチド（２１）：１００％、ペプチド（２２）：１００％、ペプチド（２３）：８７％、ペプチド（２４）：８３％の純度を示した。
【０５１９】
１１．リン酸モノエステル及びアリールアルキル−ヒスチジン含有ＰＢＤ結合ペプチドを含有しているペプチド
ミツノブ反応に基づく構造による合理的設計を用いてジエステルを作出した。この手法は、これに限定されないが、高効率のライブラリー構築、ホスファターゼに対する抵抗、及び増大した細胞透過性を含む、多種の利点をもたらす。
【０５２０】
樹脂上のペプチドの後改変は、約１：４の比率で同一分子量の生成物（３）及び（４）をもたらして、副生成物（３）主生成物（４）より一貫して高い効能をもたらした。
【０５２１】
【化１１５】
2014511877.tif 000144
【０５２２】
ペプチド（３ｌ）及び（４ｌ）のＳ／Ａ突然変異体も製造してＥＬＩＳＡで確認した。（５）は（３ｌ）と比較して１００倍減少した結合をもたらして、６は活性を何も示さなかった。
【０５２３】
【化１１６】
2014511877.tif 000145
【０５２４】
１２．プロリン類縁体の製造：
【０５２５】
【化１１７】
2014511877.tif 000146
【０５２６】
４−フェニル−１−ブタノールから４−フェニル−１−ヨードブタンを製造した。
水素化ナトリウム（鉱油中に６０％含有、１．９０ｇ、４７．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３０ｍＬ）懸濁液に０℃で、Ｂｏｃ−Ｌ−ヒドロキシプロリン（５．０ｇ、２１．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３０ｍＬ）溶液を５分かけて滴下した。混合物を更に１５分０℃で保持した後、４−フェニル−１−ヨードブタン（１６．９ｇ、６４．８ｍｍｏｌ）を加え、次いで０℃〜室温で１晩撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ（５０ｍＬ）で反応をクエンチして、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で抽出した。有機層を洗浄、乾燥して、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）で精製すると無職油状物（５．１ｇ、収率４８％）として（２１）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ  ７．２６−７．２３（ｍ、５Ｈ）、７．１６−７．１３（ｍ、５Ｈ）、４．３４（ｄｄ、Ｊ＝８．０、６．４Ｈｚ、０．３Ｈ）、４．２７（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、０．７Ｈ）、４．１４−４．０８（ｍ、２Ｈ）、３．９８（ｍ、  １Ｈ）、３．６０−３．５５（ｍ、２Ｈ）、３．４２−３．３３（ｍ、２Ｈ）、２．６５−  ２．５８（ｍ、４  Ｈ）、２．２５（ｍ、１Ｈ）、１．９８（ｍ、１Ｈ）、１．７０−１．６０（ｍ、８Ｈ）、１．４１（ｓ、３．５Ｈ）、１．３６（ｓ、５．５Ｈ）。
【０５２７】
ＴＨＦ（３０ｍＬ）、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１５ｍＬ）中で、（２１）（５．００ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）及びＯＨ・１水和物（８４８ｍｇ、２０．２ｍｍｏｌの混合物を室温で３時間撹拌した。有機溶媒をロータリーエバポレータで除去し、水層をエーテル（５０ｍＬ×２）で洗浄し、次いで１ＮのＨＣｌでｐＨ３〜４に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ層を洗浄、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮すると無色油状物が得られ、これをＴＨＦ（３０ｍＬ）及びジクロロメタン（３０ｍＬ）の混合物で、室温で２時間処理した。溶媒を除去して残渣をオイルポンプで２時間乾燥した。この残渣をジオキサン（３０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（３０ｍＬ）に溶解した後、ＮａＨＣＯ３（４．２０ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）及びＦｍｏｃＯＳｕ（３．７１ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１晩撹拌した。ジオキサンをロータリーエバポレータで除去し、残った水性物をエーテル（５０ｍＬ×２）で洗浄し、１ＮのＨＣｌでｐＨ３〜４に酸性化して、ＥｔＯＡｃ‘２００ｍＬ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ層を洗浄し（食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮すると、粘稠性油状物（５．１ｇ、収率１００％）として分析的に純粋な（２２）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１０．３６（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．７４  （ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．６８（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．５７−７．４６（ｍ、２Ｈ）、７．４０−７．２２（ｍ、７Ｈ）、７．１８−７．１２（ｍ、２Ｈ）、４．４９（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、０．５Ｈ）、４．４５−４．３２（ｍ、２．５Ｈ）、４．２４（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、０．５Ｈｚ）、４．１５−４．００（ｍ、１．５Ｈ）、３．７０（ｍ、０．４０Ｈ）、３．６０−３．５５（ｍ、１．６Ｈ）、３．４４−３．３４（ｍ、２Ｈ）、２．６４−２．５７（ｍ、２Ｈ）、２．３５（ｍ、１Ｈ）、０．８６（ｍ、１Ｈ）、１．７０−１．５５（ｍ、４Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７７．７、１７６．５、１７１．８、１５９．１、５８．６、１５５．９、１５４．９、１４３．７、１４２．２、１４１．３、１２８．４、１２８．３、２７．１、１１９．９、７６．８、７６．２、６９．２、６８．０、６０．７、５８．１、５７．５、５２．０、５１．７、４７．１、３６．８、３５．６、３５．０、２９．３、２７．９、２１．０、１４．１。
【０５２８】
【化１１８】
2014511877.tif 000147
【０５２９】
（２１）の製造のために上に記載したものと同じ方法を用いて、Ｎ−Ｂｏｃ−シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンから収率２９％で（２３）を製造した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．２８−７．２２（ｍ、５Ｈ）、７．１８−７．１２（ｍ、５Ｈ）、４．３９（ｄｄ、Ｊ＝８．４、３．６Ｈｚ、０．４Ｈ）、４．２７（ｄｄ、Ｊ＝８．４、４．０Ｈｚ、０．６Ｈ）、４．１５−３．９８（ｍ、２Ｈ）、３．９３（ｍ、１Ｈ）、３．６３（ｍ、０．６０Ｈ）、３．５５（ｄｄ、Ｊ＝１１．２、５．２Ｈｚ、０．４Ｈ）、３．４３（ｄｄｄ、Ｊ＝１８．４、１１．６、３．２Ｈｚ、１  Ｈ）、３．３６−３．２８（ｍ、２Ｈ）、２．６５−２．５５（ｍ、４Ｈ）、２．３０−２．１５（ｍ、２Ｈ）、１．７０−１．５５（ｍ、６Ｈ）、１．５５−１．４６（ｍ、２Ｈ）、１．４５（ｓ、３．５Ｈ）、１．４０（ｓ、５．５  Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７２．３、１７２．０、１５４．２、１５３．８、１４２．３、１４２．１、１４１．９、１２８．３、１２５．８、７９．９、７９．８、７７．４、７６．３、６８．９、６４．８、５７．８、５７．４、５２．０、５１．４、３６．２、３５．７、３５．４、３５．０、２９．４、２８．４、２８．３、２８．１、２７．９、２７．６。
【０５３０】
（２３）の製造のために上に記載したものと同じ方法を用いて、（２３）から収率３０％で（２４）を製造した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．７０（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．７３（ｄ、  Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．６９（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．６０−７．５０  （ｍ、２Ｈ）、７．４０−７．２５（ｍ、７Ｈ）、７．１７−７．１０（ｍ、２Ｈ）、４．５０−４．４３（ｍ、１．６Ｈ）、４．４０−４．３０（ｍ、１．４Ｈ）、４．２３（ｍ、０．６０Ｈ）、４．１７（ｍ、０．４０Ｈ）、４．００（ｍ、１Ｈ）、３．６３−３．５３  （ｍ、２Ｈ）、３．４５（ｍ、０．５Ｈ）、３．４０−３．３０（ｍ、１．５Ｈ）、２．６０−２．５３（ｍ、２Ｈ）、２．４２（ｍ、０．５Ｈ）、２．３０（ｍ、１Ｈ）、２．２０  （ｍ、０．５Ｈ）、１．７０−１．５０（ｍ、４Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７５．８、１７４．５、１５５．７、１４３．９、１４３．６、１４２．３、１４１．３，  １２８．３，  １２７．８，  １２７．０，  １２５．７，  １２５．０，  １２０．０、７６．３、６８．８、６７．８、６０．４、５８．１、５７．６、５２．２、４７．１、３６．０、３５．５、３４．１、３１．６、２９．１、２７．８、２５．４、２２．６、２１．０、１４．４。
【０５３１】
１３．ペプトイド−ペプチドハイブリッドの合成手法。
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ＰＯ（ＯＢｚｌ）ＯＨ）−ＯＨ及びその他のＦｍｏｃ保護アミノ酸はNovabiochemから購入した。Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）中、標準的なＦｍｏｃ固相プロトコールを用いて、ＮｏｖａＳｙｎ（登録商標）ＴＧＲ樹脂（Novabiochem、カタログ番号：０１−６４−００６０）上でペプチドを合成した。１−Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート（ＨＢＴＵ）（５．０当量）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）（５．０当量）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１０．０当量）をカップリング試薬として用いた。Ｌｅｕをカップリングしてそのアミン基を遊離にした後、樹脂をＮＭＰ中、ブロモ酢酸（１０．０当量）、ＤＩＣ（１０．０当量）及びＤＩＰＥＡ（２０．０当量）で３０分間処理した。この樹脂を洗浄して、ＤＭＳＯ中で、〜２．５Ｍの個々のアミンで１晩処理した。アミノ末端をアセチルイミダゾールで１晩、又は１，２−ジクロロメタン中の無水酢酸（１０．０当量）、ＤＩＰＥＡ（２０当量）で室温、２時間アセチル化した。最終的な樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、メタノール、ジクロロメタン及びエーテルで洗浄し、次いで真空下で乾燥した（１晩）。５ｍＬのトリフリオロ酢酸：トリイソブチルシラン：Ｈ２Ｏ（９０：５：５）で処理してペプチドを樹脂（２００ｍｇ）から解離した。樹脂を濾去して濾液を真空下で濃縮し、次いでエーテルで沈殿させて沈殿物をエーテルで洗浄した。得られた固体を５０％の水性アセトニトリル（５ｍＬ）に溶解して、ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＣ１８カラム（直径２１ｍｍ×２５０ｍｍ、カタログ番号：００Ｇ−４３６−Ｐ０）を用い、０％の水性アセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸）から１００％のアセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸）の線形グラジュエントで、流速１０．０ｍＬ／分の速度で２５分かけて逆相分取ＨＰＬＣによって精製した。
【０５３２】
１４．クリック化学によるペプチド後改変
対応するアルコールと塩化メタンスルホニルで続いてアジ化ナトリウムで処理してアジドを得た。
【０５３３】
銅触媒による環化：プラスチック管中で、乾燥樹脂７（１００ｍｇ）をアセトニトリル（４．０ｍＬ）及びＤＭＳＯ（１．０ｍＬ）に懸濁し、アルゴンで５分間脱ガスして、ＤＩＰＥＡ（１０μＬ）、ＣｕＩ（１９ｍｇ）及びアジド（１０．０当量）で補完した。管を閉じて室温で１晩撹拌した。樹脂をＤＭＦ、Ｈ２Ｏ、ＭｅＯＨ及びエーテルで洗浄し、解離前に４時間高真空下で乾燥した。
【０５３４】
熱駆動による環化：フラスコ内で、乾燥樹脂７（１００ｍｇ）及びアジド（１０．０当量）をＤＭＦ（２．０ｍＬ）中で混合して１００℃で２時間加熱した。得られた樹脂をＤＭＦ、メタノール、ジクロロメタン及びエーテルで洗浄して、解離前に高真空下で乾燥した。銅触媒反応の生成物は１，４−トリアゾール産物に帰属され、１，５−トリアゾール産物は熱駆動による環化産物のＨＰＬＣ保持時間を銅触媒環化についての１，４−トリアゾール産物と比較して同定した。
【０５３５】
【表９−１】
2014511877.tif 000148
【０５３６】
【表９−２】
2014511877.tif 000149
【０５３７】
【表１０】
2014511877.tif 000150
【０５３８】
１５．Ｆ２Ｐｍａｂ含有模倣ペプチドの合成
既に記載したように、４−メチルベンズヒドリルアミン（ＭＢＨＡ）樹脂上でのｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）による固相方法を利用して２−アミノ−４，４−ジフルオロ−３−メチル−４−ホスホブタン酸（Ｆ２Ｐｍａｂ）含有ペプチドの合成を実施した。ペプチドに基づくプルダウンアッセイのために、Ｎ末端Ｃｙｓ−（ＣＨ２）６リンカーを有しているペプチド（１ｍＭストック）を、ＳｕｌｆｏＬｉｎｋカップリングゲル（Pierce, Rockford, IL）を用いて、ビーズに架橋した。５ｍｅｒのＰＬＨＳ−Ｆ２Ｐｍａｂ模倣ペプチドを合成する初期の企ては、Ｆ２Ｐｍａｂの樹脂とのカップリングが不十分なために十分な量を生じなかった。従って、我々は６ｍｅｒのＦ２Ｐｍａｂ含有ペプチド（ＰＬＨＳ−Ｆ２Ｐｍａｂ−Ａ）を合成し、次いで対応するｐ−Ｔ７８ペプチドのそれと比較して、そのＰｌｋ１に対する親和性及び特異性を試験した。
【０５３９】
１６．ＨＩＶ−Ｔａｔ配列を付加したＰＥＧ化ペプチドの合成
【０５４０】
【化１１９】
2014511877.tif 000151
【０５４１】
１７．合成手法の詳細及び支持データ
（Ｅ）−４−[（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ]−２−ブテン−１−オール（５）。
（２Ｅ）−２−ブテン−１，４−ジオール（８．２２ｍＬ、０．１０モル）及びイミダゾール（８．５０ｇ、０．１２５モル）のＤＭＦ（５０ｍＬ）溶液に０℃で、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロライド（７．５０ｇ、０．０５０モル）を幾つかに分けて、１０分間で加えた。得られた混合物を室温で撹拌し（２時間）、次いでＨ２Ｏ（２００ｍＬ）に注下して、ＥｔＯＡｃ（２×１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を洗浄し（食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）で精製すると、無色油状物（９．０ｇ、収率８９％）として（５）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：５．６０−５．５０（ｍ、２Ｈ）、４．１８（ｍ、２Ｈ）、４．０９（ｍ、２Ｈ）、２．７６（ｂｒ、１Ｈ）、０．８３（ｓ、９Ｈ）、０．０１（ｓ、６Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１３６．３、１３５．４、６４．８、６３．８、３１．１、２３．６。
【０５４２】
Ｚ−４−[（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル]オキシ]−２−ブタン酸（６）。
塩化オキザリル（３．５５ｍＬ、４０．８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）溶液に−７８℃で、ＤＭＳＯ（５．８０ｍＬ、８１．７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）溶液を加えて、混合物を撹拌した（１５分）。ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中のアルコール（５）（５．５０ｇ、２７．２ｍｍｏｌ）を５分かけて加えて、混合物を−７５℃で撹拌し（２時間）、次いでトリエチルアミン（３１ｍＬ、０．２２モル）を加えた。混合物を室温まで温め、飽和ＮＨ４Ｃｌ（５０ｍＬ）を加えて、次いで混合物をＥｔ２Ｏ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を洗浄し（食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮すると、淡黄色の液体として中間体のアルデヒドが得られた。ｔｅｒｔ−ブタノール（１５０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（３０ｍＬ）中の、このアルデヒド、リン酸カリウム・１塩基（５．５５ｇ、４０．８ｍｍｏｌ）及び２−メチル−２−ブテン（１４．４ｍＬ、１３６ｍｍｏｌ）の混合物を精製せずに、これに０℃で、塩化ナトリウム（９．２３ｇ、８１．６ｍｍｏｌ、８０％工業的グレード）を幾つかに分けて１０分かけて補充した。混合物をゆっくり室温まで温めて撹拌した（１晩）。０℃まで冷却した後、硫酸水素ナトリウム（３１．８ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（１００ｍＬ）溶液をゆっくり加えて、混合物を撹拌して（１０分）、ＥｔＯＡｃ（２×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を洗浄し（食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）で精製すると、無色油状物（５．７０ｇ、収率９７％）として酸（６）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：６．４０（ｄｔ、Ｊ＝１１．６、４．６  Ｈｚ、１Ｈ）、５．６８（ｄｔ、Ｊ＝１２．０、２．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．６５（ｄｄ、Ｊ＝４．６、２．４Ｈｚ、２Ｈ）、０．８３（ｓ、９Ｈ）、０．００（ｓ、６Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７６．０、１５９．７、１２３．０、６７．１、３１．０、２３．０、０．００。
ＡＰＣＩ（−ＶＥ）ｍ／ｚ：２１５．２（Ｍ  −  Ｈ）−。
ＨＲ−ＥＳＩ ＭＳ：（Ｍ  −Ｈ）−（Ｃ１０Ｈ１９Ｏ３Ｓｉとして）；計算値：２１５．１１０９、実測値：２１５．１１０３。
【０５４３】
（４Ｒ）−３−[（２Ｚ）−[４−[（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル]オキシ]−１−オキソ−２−ブテン−１−イル]−４−フェニル−２−オキサゾリジノン（７）。
酸（６）のＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液に−７８℃で、トリエチルアミン（４００ｍＬ、２８．２ｍｍｏｌ）を加えた後、塩化トリメチル酢酸（３．４６ｍＬ、２８．２ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を２０分かけて０℃まで温め、次いで無水の混合物を−７８℃まで冷却した。別に、（Ｒ）−（＋）−フェニル−２−オキサゾリジノン（Aldrich）（４．６０ｇ、２８．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液をｎ−ＢｕＬｉ（２５０ＭのＴＨＦ溶液、１１．３ｍＬ、２８．２ｍｍｏｌ）に注意深く加えて混合物を撹拌し（３０分）、次いで無水の溶液に−７８℃で移した。最終反応混合物を室温まで温めて、撹拌した（１晩）。混合物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、洗浄し（Ｈ２Ｏ及び食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）で精製すると、無色油状物（１０．２ｇ、収率１００％）として（７）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．３６−７．２０（ｍ、５Ｈ）、７．１０（ｄｔ、Ｊ＝１１．６、２．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．５０（ｄｔ、Ｊ＝１２．０、４．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．４４（ｄｄ、Ｊ＝８．８、４．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．６８−４．５９（ｍ、３Ｈ）、４．２（ｄｄ、Ｊ＝８．８、４．０Ｈｚ、１Ｈ）、０．８５（ｓ、９Ｈ）、０．００（ｓ、６  Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１６９．３、１６０．６、１５８．８、１４４．３、１３４．５、１３４．０、１３１．０、１２２．０、７５．２、６７．９、６２．８、３１．１、２３．４、０．００。
ＥＳＩ（＋ＶＥ  ｍ／ｚ：３８４．１（Ｍ  ＋  Ｎａ）＋。
ＨＲ−ＥＳＩ：（Ｍ  ＋Ｎａ）＋（Ｃ１９Ｈ２８ＮＯ４Ｓｉとして）：計算値：３６２．１７８２、実測値：３６２．１７８９。
【０５４４】
（４Ｒ）−３−[（２Ｅ）−[４−[（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル]オキシ]−１−オキソ−２−ブテン−１−イル]−４−フェニル−２−オキサゾリジノン（８）。
（７）（５．００ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（７０ｍＬ）溶液へ室温で、トリブチルホスフィン（０．３４ｍＬ、１．３９ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を室温で撹拌し（６０分）、次いでＥｔＯＡＣ（２００ｍＬ）で希釈し、洗浄し（Ｈ２Ｏ及び食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）で精製すると、白色固体（４．２０ｇ、収率８４％）として（８）を得た。
［α］２０Ｄ：−５４．５（ｃ １．４０、ＣＨＣｌ３）。
ｍｐ．：７９−８１℃。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．４８（ｄｔ、Ｊ＝１５．２、２．４  Ｈｚ、１Ｈ）、７．３０−７．２１（ｍ、５Ｈ）、７．０２（ｄｔ、Ｊ＝１５．２、３．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．３９（ｄｄ、Ｊ＝８．６、３．８Ｈｚ、１  Ｈ）、４．６０（ｔ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．２８（ｄｄ、Ｊ＝３．４、２．２Ｈｚ、２  Ｈ）、４．１７（ｄｄ、Ｊ＝８．８、４．０Ｈｚ、１Ｈ）、０．８５（ｓ、９Ｈ）、０．００（ｓ、６  Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７０．０、１５９．０、１５５．４、１４４．５、１３４．６、１３４．１、１３１．４、１２４．１、７５．３、６８．１、  ６３．２、３１．３、２３．８、０．００。
ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ：２９２７、２８５５、１７５９、１６９３、１３２４、１２０１、１１０４、９５１、８３４、７１５ｃｍ−１。
ＥＳＩ（＋ＶＥ）ｍ／ｚ：３８４．１（Ｍ  ＋  Ｎａ）＋。
ＨＲ−ＥＳＩ：（Ｍ  ＋Ｎａ）＋（Ｃ１９Ｈ２８ＮＯ４Ｓｉとして）；計算値：３６２．１７８２、実測値：３６２．１７９０．
【０５４５】
（４Ｒ）−３−［（２Ｓ，３Ｒ）−［２−アジド−４［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］−３−メチル−１−オキソ−ブチル）］−４−フェニル］−２−オキサゾリジノン（９）。
臭化銅（Ｉ）・ジメチルスルフィド錯体（２．５６ｇ、１２．４５ｍｍｏｌ）のジメチルスルフィド（２０ｍＬ）及びＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液に−７８℃で、塩化メチルマグネシウムの溶液（３．０ＭのＴＨＦ溶液、５．５０ｍＬ、１６．４ｍｍｏｌ）を加えた。懸濁液を−７８℃で撹拌し（２０分）、次いで０℃に温め（２０分）て、−７８℃に冷却した。次いで混合物を、予め冷却してある（−７８℃）（８）（１８．０ｇ、４．９８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１６．０ｍＬ）及びＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）溶液にカニューレを用いて移した。得られた混合物を−７８℃に保持し（６０分）、次いで−４０℃に温めて（６０分）、再び−７８℃に冷却した。混合物に予め冷却してある（−７８℃）Ｎ−ブロモスクシンイミド（４．４５ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液を加えて、混合物を−７８℃で撹拌した（９０分）。飽和ＭａＨＳＯ３（５０ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を洗浄し（Ｈ２Ｏ及び食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）で精製すると、白色固体（１．９３ｇ）として必須なα−ブロモ含有中間体が得られた。α−ブロモ化合物（１．９３ｇ）のＤＭＦ（２５ｍＬ）溶液に０℃で、アジ化ナトリウム（１．００ｇ、１５．４ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を撹拌した（２時間）。混合物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、洗浄し（Ｈ２Ｏ及び食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）で精製し、次いで結晶化すると（ＥｔＯＡｃ：石油エーテル）、白色固体（１．６５ｇ、収率７９％）としてアジド（９）が得られた。
［α］２０Ｄ：−７３．０（ｃ１．１０、ＣＨＣｌ３）。
融点：８０−８２℃。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．４０−７．３０（ｍ、５Ｈ）、５．４９（ｄｄ、Ｊ＝８．８、４．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．１７（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．７５（ｔ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．３４（ｄｄ、Ｊ＝８．８、４．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．６５（ｄｄ、Ｊ＝１０．２、５．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．４８（ｄｄ、Ｊ＝１０．２、３．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．１４（ｍ、１Ｈ）、０．８９（ｓ、９  Ｈ）、０．８３（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、０．０３（ｓ、３  Ｈ）、０．００（ｓ、３  Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７５．７、１５８．７、１４３．９、１３４．８、１３４．６、１３１．９、７５．７、６９．３、６６．７、６３．４、４３．５、３１．４、２３．８、１９．４、０．００。
ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ：２９３０、２３５９、２１０６、１７８６、１７１０、１２０６、１０９７、８３３、７７８ｃｍ−１。
ＥＳＩ（＋ＶＥ）ｍ／ｚ：４４１．１（Ｍ  ＋  Ｎａ）＋。
ＨＲ−ＥＳＩ ＭＳ：（Ｍ  ＋Ｈ）＋（Ｃ２０Ｈ３１Ｎ４Ｏ４Ｓｉとして）：計算値：４１９．２１０９、実測値：４１９．２１１４。
【０５４６】
［（３Ｓ，４Ｒ）−テトラヒドロ−４−メチル−２−オキソ−３−フラニル］−カルバミン酸フェニルメチルエステル（１０）及び（２Ｓ，３Ｒ）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（フェニルメトキシカルボニル）−Ｌ−バリンメチルエステル（１１）。
（９）（６００ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）溶液に室温で、ｐ−トルエンスルホン酸・１水和物（１４ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で撹拌し（６時間）、次いでＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、洗浄し（Ｈ２Ｏ及び食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）で精製すると、無色液体（２７０ｍｇ、少量のＥｔＯＡｃを含有している）として中間体のアジド含有ラクトンが得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：４．３６（ｄｄ、Ｊ＝８．８、６．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．２６（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．０２（ｄｄ、Ｊ＝９．２、４．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．７５（ｍ、１Ｈ）、１．１３（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。
ＭｅＯＨ（９．０ｍＬ）及び酢酸（１．０ｍＬ）中のこのラクトンとＰｄ・Ｃ‘１０％、６０ｍｇ）の懸濁液をＨ２下（１気圧）、室温で撹拌した（１晩）。アルゴン下、セライトパッドで濾過して触媒を除去して、濾液を濃縮した。Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）を含有しているＴＨＦ（１０．０ｍＬ）に残渣を再溶解し、次いで℃に冷却した。これにクロロギ酸ベンジル（０．３２ｍＬ、２．２５ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（８４０ｍｇ、１０．０ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を撹拌した（４時間）。混合物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、洗浄し（Ｈ２Ｏ及び食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）で精製すると、白色結晶性固体（９０ｍｇ、３工程で収率２５％）として（１０）、及び粘性油状物（２５０ｍｇ、３工程で収率４９％）として（１１）を得た。
（１０）について：
融点：１２５−１２７  ℃。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．４０−７．３０（ｍ、５Ｈ）、５．３３（ｍ、１Ｈ）、５．１０（ｓ、２Ｈ）、４．５３（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．３５（ｄｄ、Ｊ＝９．２、５．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．０５（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．９２（ｍ、１  Ｈ）、０．９５（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７４．５、１５６．１、１３５．９、１２８．５、１２８．３、１２８．１、７２．４、６７．３、５４．５、３４．１、１２．７。
ＥＳＩ（＋ＶＥ）ｍ／ｚ：２７２．１（Ｍ  ＋  Ｎａ）＋。
ＨＲ−ＥＳＩ：（Ｍ  ＋  Ｈ）＋（Ｃ１３Ｈ１６ＮＯ４として）：計算値：２５０．１０７４、実測値：２５０．１０８１。
（１１）について：
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．２９−７．２８（ｍ、５Ｈ）、５．９８（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．０４（ｓ、２Ｈ）、４．３４（ｍ、１Ｈ）、３．６５（ｓ、３Ｈ）、３．５４（ｄｄ、Ｊ＝１１．２、４．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．４４（ｄｄ、Ｊ＝１１．２、６．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．９２（ｓ、１Ｈ）、２．１４（ｍ、１Ｈ）、０．９２（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３  Ｈ）。
ＥＳＩ（＋ＶＥ）ｍ／ｚ：３０４．２（Ｍ  ＋  Ｎａ）＋。
Ｒ−ＥＳＩ ＭＳ；（Ｍ  ＋  Ｈ）  ＋（Ｃ１４Ｈ２０ＮＯ５として）：計算値：２８２．１３３６、実測値：２８２．１３４３． 
【０５４７】
（２Ｓ，３Ｒ）−４−ヒドロキシ−Ｎ−（９−フェニルフルオレン−９−イル）−Ｎ−ベンジル−Ｌ−バリンメチルエステル（１４）。
（１３）（４．００ｇ、７．９１ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２６０ｍＬ）溶液に−４０℃で、ＤＩＢＡＬ（１．０Ｍのヘキサン溶液、１９．８ｍＬ、１９．８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を４時間撹拌（−４０℃〜０℃）した後、−７８℃に冷却し、アセトン（１０ｍＬ）でクエンチし、室温まで温め、１ＮのＫＨ２ＰＯ４（５００ｍＬ）及び酒石酸カリウム（３０．５ｇ）と共に１晩撹拌し、セライトで濾過した。濾液をＥｔＯＡｃで抽出し、洗浄し（Ｈ２Ｏ及び食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｔＯＡｃ）で精製すると、白色ろう状物質（２．３０ｇ、収率６１％、回収した出発物質に基づくと定量的）としてアルコール（１４）及び白色ろう状物質（１．６０ｇ）として再生された（１３）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．７６−７．６０（ｍ、８Ｈ）、７．３５−７．２０（ｍ、１０Ｈ）、４．７０（ＡＢ、ＪＡＢ＝１３．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．３８（ＡＢ、ＪＡＢ＝１３．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｄｄ、Ｊ＝１０．８、３．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．３３（ｄｄ、Ｊ＝１０．８、６．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．０４（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．９３（ｓ、３  Ｈ）、１．４０（ｍ、１Ｈ）、０．３４（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７１．７、１４８．３、１４４．８、１４４．０、１４２．０、１４１．３、１３９．７、１２９．７、１２８．６、１２８．４、１２８．０、１２７．７、１２７．３、１２７．２、１２７．１、１２７．０、１２５．３、１２０．２、８０．３、６５．５、６３．３、５０．６、３６．３、１４．２。
ＥＳＩ（＋ＶＥ）ｍ／ｚ：４７８．２（Ｍ  ＋  Ｈ）＋。
Ｒ−ＥＳＩ ＭＳ：（Ｍ  ＋  Ｈ）＋（Ｃ３２Ｈ３２ＮＯ３として）：計算値：４７８．２３７７，実測値：４７８．２３８５。 
【０５４８】
（２Ｓ，３Ｒ）−４−［ジ−（ｔｅｒｔ−ブチル）−オキシホスフィニル］−４−ヒドロキシ−Ｎ−フェニルメトキシカルボニル）−Ｌ−バリンメチルエステル（１８）。
塩化オキザリル（０．９６ｍＬ、１０．１ｍｍｏｌのＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）溶液に−７８℃で、ＤＭＳＯ（１．６０ｍＬ、２０．２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液を加えて、混合物を撹拌した（１５分）。これに、無水ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中のアルコール（１１）（０．６３ｇ、２．２４ｍｍｏｌ）を５分かけて加えて、混合物を−７５℃で撹拌した（２時間）。トリエチルアミン（８．４０ｍＬ、５３．８ｍｍｏｌ）を加えて混合物を室温まで温めた。これに、飽和ＮＨ４Ｃｌ（５０ｍＬ）を加えて、混合物をＥｔ２Ｏ（１００ｍＬ×２）で抽出して、合わせた有機層を洗浄し（食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）で精製した。出発アルコール（１１）（１６０ｍｇ）と共に、粘性無色油状物（４５０ｍｇ、回収した出発物質に基づくと収率９６％）としてアルデヒド（１５）が得られた。亜リン酸ジｔｅｒｔ−ブチル（０．３０ｍＬ，１．５０ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０．２１ｍＬ、１．５０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液に０℃で、クロロトリメチルシラン（０．１９ｍＬ、１．５０ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を撹拌し（５分）、次いでアルデヒド（１５）（３００ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液に室温で移して、混合物を撹拌した（３時間）。混合物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、洗浄し（食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。得られた粗製のシリルで保護した（１７）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に再溶解し、これにＨ２Ｏ（１．０ｍＬ）及びクエン酸（２００ｍｇ）を加えて、混合物を室温で撹拌した（１晩）。混合物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、洗浄し（飽和ＮａＨＣＯ３及び食塩水）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）
で精製すると、γ−炭素におけるエピマーである白色ろう状物（４５０ｍｇ、収率８８％）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．３０−７．２９（ｍ、５Ｈ）、６．３０（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、０．７Ｈ）、５．３０（ｍ、０．３Ｈ）、５．１０−５．０５（ｍ、２Ｈ）、４．３０（ｍ、０．７Ｈ）、４．０９（ｍ、０．３Ｈ）、３．７５−３．５５（ｍ、４  Ｈ）、２．５１（ｍ、０．７Ｈ）、１．５１−１．４０（ｍ、１８Ｈ）、１．１５−１．００（ｍ、３Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７２．３、１５６．７、１３６．４、１２８．４、１２８．０、７０．５、６８．８、６７．３、６６．８、５９．８、５３．９、５３．１、５２．２、３６．６、３５．４、３０．３、２４．１、１４．７、１１．５、９．４。
ＥＳＩ（＋ＶＥ）ｍ／ｚ：４９６．２（Ｍ  ＋  Ｎａ）＋。
ＨＲ−ＥＳＩ ＭＳ；（Ｍ  ＋  Ｎａ）＋（Ｃ２２Ｈ３６ＮＯ８ＮａＰとして）：計算値：４９６．２０７１，実測値：４９６．２０６５。
【０５４９】
（２Ｓ，３Ｒ）−４−［ジ−（ｔｅｒｔ−ブチル）−オキシホスフィニル］−Ｎ−（フェニルメトキシカルボニル）−Ｌ−バリンメチルエステル（２０）。
アルコール（１８）（２５０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）、クロロチオノギ酸 Ｏ−フェニル（２１５μＬ、１．６０ｍｍｏｌ）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＡＭＰ（１５ｍｇ、０．２０当量）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３６３μＬ、２．１０ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（８．０ｍＬ）溶液を室温で撹拌した（１晩）。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、洗浄し（飽和ＮａＨＣＯ３）、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）で精製すると、淡褐色ろう状物質（２２５ｍｇ）として中間体チオカルバメート（１９）が得られた。粗製の（１９）をトルエン（１０ｍＬ）に溶解し、これにトリブチルン水和物（０．４２ｍＬ、１．５９ｍｍｏｌ）及びアザビイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）（スパーテルの先端１杓）を加えた。混合物を１００℃に保ち（２０分）、次いで室温まで冷却して真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）で精製すると、粘性の無色油状物（１４０ｍｇ、２工程で収率５８％）として（２０）が得られた。
［α］２０Ｄ：＋  ２．４（ｃ ０．８５、ＣＨＣｌ３）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．２７−７．２０（ｍ、５Ｈ）、５．８０（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．０７（ＡＢ、ＪＡＢ＝１２．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．０２（ＡＢ、ＪＡＢ＝１２．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．２３（ｍ、１Ｈ）、３．６７（ｓ、３Ｈ）、２．３３（ｍ、１Ｈ）、１．６９−１．１０（ｍ、２０Ｈ）、１．０５（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７２．１、１５６．２、１３６．３、１２８．４、１２８．１、８２．１、６６．９、５９．４、５２．２、３２．２、３０．３、２９．６、２７．８、２６．８、１７．５、１３．５。
ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ：２９７６、１７２０、１５３５、１３２２、１２５２、９７５ｃｍ−１。
ＥＳＩ（＋ＶＥ）ｍ／ｚ：４８０．３（Ｍ  ＋  Ｎａ）＋。
ＨＲ−ＥＳＩ ＭＳ；（Ｍ  ＋Ｎａ）＋（Ｃ２２Ｈ３６ＮＯ７ＮａＰとして）：計算値：４８０．２１２２、実測値：４８０．２１２６。
【０５５０】
（２Ｓ，３Ｒ）−４−［ジ−（ｔｅｒｔ−ブチル）オキソホスフィニル］−Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］-Ｌ−バリン（４）。
（２０）（１４０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３．０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（３．０ｍＬ）溶液に０℃で、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２６ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を室温で撹拌した（１晩）。ＴＨＦをロータリーエバポレータで除教して残りの水層に飽和水性ＮＨ４Ｃｌ（２０ｍＬ）を加えて中和して、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）、食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。得られた残渣をＭ４ＯＨ（２０ｍＬ）に溶解して、１０％Ｐｄ・Ｃ（４０ｍｇ）上、室温で水素化（１気圧のＨ２）した（１晩）。濾過によって触媒を除去して濾液を濃縮した。得られた残渣をジオキサン（５．０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（５．０ｍＬ）に溶解し、９−フルオレニルメチル−スクシンイミジルカーボネートＦｍｏｃ−ＯＳＵ（１７３ｍｇ、０．４６５ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（６２ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を室温で撹拌した（１晩）。反応混合物に飽和ＮＨ４Ｃｌ（２０ｍＬ）を加えて中和して、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ層をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）、食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製すると、白色ろう状物質（１６６ｍｇ、３工程で定量的収率）として（４）が得られた。
［α］２０Ｄ：＋  １６．５（ｃ ０．６５、ＣＨＣｌ３）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳ）−ｄ６）δ：７．８８（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．７０（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．４１（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．３１（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、４．３０−４．１９（ｍ、４Ｈ）、３．８４（ｍ、１Ｈ）、２．３１（ｍ、１Ｈ）、１．８０−１．５５（ｍ、２Ｈ）、１．４２（ｓ、１８Ｈ）、０．９６（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３  Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１５５．８、１４３．９、１４０．７、１２７．６、１２７．０、１２５．１、１２０．０、８０．７、６５．４、６０．５、４６．７、３１．５、３０．０、１６．９。
ＥＳＩ（＋ＶＥ）ｍ／ｚ：５５４．２（Ｍ  ＋  Ｎａ）＋。
ＨＲ−ＥＳＩ ＭＳ；（Ｍ  ＋Ｎａ）＋（Ｃ２８Ｈ３８ＮＯ７ＮａＰとして）；計算値：５５４．２２７８、実測値：５５４．２２７７。
【０５５１】
実施例１．リン酸モノエステル及びアリールアルキル−ヒスチジン含有ＰＢＤ−結合ペプチドを含有しているペプチド。
後ミツノブ反応条件をアリールアルキル−ヒスチジンと結合しているモノエステルペプチドを作出するために用いた。固相ペプチド合成を手段として、５ｍｅｒペプチド（１）に結合している樹脂を得た。樹脂上ミツノブ反応及び解離工程の後に、異なったモノエステルを含有しているペプチド（３）を合成して、生物学的評価のために用いることができた。
【０５５２】
【化１２０】
2014511877.tif 000152
【０５５３】
アルコールのライブラリーを以下に提示する。
【０５５４】
【化１２１】
2014511877.tif 000153
【０５５５】
親ペプチド（Ｒ＝Ｈ）と比較すると、モノアニオン性エステルの何れについても親和性の損失は殆ど観察されず、驚くべきことに、７つの誘導体（３ａ〜３ｄ、及び３ｉ〜３ｊ）については親のジアニオン性ペプチドについてより非常に大きい親和性が見られた。
【０５５６】
ペプチド合成手法。
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ＰＯ（ＯＢｚ）ＯＨ）−ＯＨ及びその他のＦｍｏｃ保護アミノ酸は、Novabiochem から購入した。Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｎ＊−（ＣＨ２）８Ｐｈ）−ＯＨは先に刊行された本発明者らの論文（J. Org. Chem. 2011, 76, 8885）によって合成した。Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）中、標準的なＦｍｏｃ固相プロトコールを用いて、ＮｏｖａＳｙｎ（登録商標）ＴＧＲ樹脂（Novabiochem、カタログ番号：０１−６４−００６０）上でペプチドを合成した。１−Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート（ＨＢＴＵ）（５．０当量）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）（５．０当量）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１０．０当量）をカップリング試薬として用いた。Ｎ末端を１−アセチルイミダゾールでアセチル化した。最終的な樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、メタノール、ジクロロメタン及びエーテルで洗浄し、次いで真空下で乾燥した（１晩）。
【０５５７】
ミツノブ反応によるペプチドの後改変
上記樹脂（２００ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン中で１５分間膨張させ、無水ジクロロメタン中のトリフェニルホスフィン（２６２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、ＤＥＡＤ（０．４６ｍＬ。４０％のトルエン溶液、０．１０ｍｍｏｌ）及びアルコールａ〜ｌ（０．１０ｍｍｏｌ）で２時間、室温で処理し、解離の前に真空下で２時間乾燥した。
【０５５８】
ペプチドの解離及び精製。
５ｍＬのトリフルオロ酢酸：トリイソブチルシラン：Ｈ２Ｏ（９０：５：５）で処理して（４時間）ペプチドを樹脂（２００ｍｇ）から解離した。樹脂を濾去して濾液を真空下で濃縮し、次いでエーテルで沈殿させて沈殿物をエーテルで洗浄した。得られた固体を５０％の水性アセトニトリル（５ｍＬ）に溶解して、ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＣ１８カラム（直径２１ｍｍ×２５０ｍｍ、カタログ番号：００Ｇ−４３６−Ｐ０）を用い、０％の水性アセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸）から１００％のアセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸）の線形グラジュエントで、流速１０．０ｍＬ／分の速度で３０分かけて逆相分取ＨＰＬＣによって精製した。凍結乾燥して、白色粉末の生成物を得た。
【０５５９】
【表１１−１】
2014511877.tif 000154
【０５６０】
【表１１−２】
2014511877.tif 000155
【０５６１】
ＩＩ．生物学的実施例
Ａ：材料及び方法
方法
ペプチド結合、ＧＳＴ−ＰＢＤプルダウン、及びＥＬＩＳＡに基づくＰＢＤ−結合阻害アッセイ。
ペプチド結合及びＧＳＴ−ＰＢＤプルダウンアッセイは、前述（１５）のように実施した。ＥＬＩＳＡによるＰＢＤ−結合阻害アッセイは固定化したビオチン化９ｍｅｒ ｐ−Ｔ７８８ペプチド［ビオチン−Ｃ−（ＣＨ２）６−（ＣＨ２）６−ＤＰＰＬＨＳｐＴＡＩ−ＮＨ２］及びＨＡ−ＥＧＦＰ−Ｐｌｋ１を発現している細胞溶解物を用いて実施した。
【０５６２】
等温滴定熱量測定分析。
細菌細胞由来の精製した組み換えＰＢＤ（Ｐｌｋ１及びＰｌｋ２のため）及び表示されたペプチドを用いて熱量滴定を実施した。更なる詳細はオンライン補完資料に存在している。
【０５６３】
結晶化、データ収集、及び精製
Ｐｌｋ１ ＰＢＤ−ＰＬＨＳｐＴ複合体に関する全ての初期結晶化スクリーニングは、Ｉｎｄｅｘ (Hampton Research, Aliso Viejo, CA)及び ＰＥＧｓ(Qiagen, Valencia, CA) 結晶化キットを用いる、Ａｒｔ Ｒｏｂｂｉｎｓ Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｌｉｑｕｉｄ Ｈａｎｄｌｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ上で実施した。その後の全ての結晶は室温で水滴拡散法を用いて成長させた。ＰＢＤ及びＰｌｋ１のキナーゼドメインを緩衝液Ａ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ８．０、５００ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＤＴＴ）中で〜３０ｍｇ／ｍｌに濃縮した。リン酸ペプチドＡｃ−ＰＬＨＳｐＴを緩衝液Ａに溶解した。リン酸ペプチド及びＰＢＤを２：１の理論混合比で加えて、最終濃度を〜１５ｍｇ／ｍｌに調節した。この複合体の１μｌをウェル溶液（０．２Ｍリン酸二カリウム、２０ｖ／ｖ％のＰＥＧ３３５０）の１μｌに加えてこの複合体の結晶を成長させた。ＰＢＤとキナーゼドメイン間の複合体を、１：１の理論混合比、及びウェル溶液として０．２Ｍの硫酸リチウム・１水和物、０．１Ｍ Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ５．５、２５ｖ／ｖ％のＰＥＧ３３５０を用いて、同様に形成した。結晶は１週間以内に形成されて、液体窒素内で急速冷凍する前に２０ｖ／ｖ％のグリセロールからなる母液中に５分間浸す。ＰＢＤとＡｃ−ＰＬＨＳｐＴの複合体は、空間群Ｐ２１２１２１（ａ＝３５．１９Å、ｂ＝６５．７６Å、ｃ＝１０４．１１Å）内に結晶化した。Ｐｌｋ１のキナーゼドメインは沈殿して、ＰＢＤは空間群Ｐ２１（ａ＝３５．２９Å、ｂ＝１０２．２９Å、ｃ＝６８．５５Å、β＝９３．２４°）内に結晶化した。
【０５６４】
Ｐｌｋ１ ＰＢＤ−ＰＰＨＳｐＴ複合体の結晶は、１５％のＰＥＧ３３５０を含有している０．１ＭのＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０）のウェル溶液を用いて同様に得られた。結晶を、液体窒素内で凍結する前に、１５ｖ／ｖ％のグリセロール、１０ｍＭのＤＴＴ及び２ｍＭのリン酸ペプチドＡｃ−ＰＰＨＳｐＴからなる母液中に浸した。この複合体は空間群Ｐ２１２１２１（ａ＝３５．４４Å、ｂ＝６６．５０Å、ｃ＝１０５．８２Å）内に結晶化した。
全てのデータを１００Ｋで収集した。ＰＢＤ、及びＡｃ−ＰＬＨＳｐＴとの複合体中のＰＢＤについてのデータは、ＭＡＲ３００ＣＣＤ検出器上で、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｈｏｔｏｎ Ｓｏｕｒｃｅ（ＡＰＳ）における、ＳＥＲ−ＣＡＴビームライン２２−ＩＤに収集した。ＰＢＤとＡｃ−ＰＰＨＳｐＴの複合体についてのデータは１００ＫでＡＰＳビームライン２４−ＩＤ−Ｃに収集した。すべてのデータは、ＨＫＬ２０００パッケージ２０を用いて処理して縮小した。データの相化は既に公表されている構造（ＰＢＤＩＤ：１ＵＭＷ）を用いて分子置換によって行った。構造を互いに独立して、プログラムＲＥＦＭＡＣ５２１及びＣＮＳ１．１２２で精緻化した。Ｃｏｏｔ（２３）及びＸｔａｌＶｉｅｗ（２４）を用いてモデル構築を実施した（表４）。
【０５６５】
Ｐｌｋ１ ＰＢＤ−ＬＨＳｐＴＡ複合体の結晶を、３２．５％のＰＥＧ２０００ＭＭＥ、０．１ＭのＴｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ８．５、０．２Ｍのトリメチル−アミン Ｎ−オキシドからなる１μｌのウェル溶液と混合した１μｌのタンパク質溶液（１０ｍＭのＴｒｉｓ−Ｃｌ中１２ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ８．０、０．５ＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＤＴＴ、２ｍＭのＡｃ−ＬＨＳｐＴＡ−ＮＨ２ペプチド）を用いる水滴蒸気拡散によって成長させた。結晶は、室温で１晩で成長した。データ収集のために、結晶を液滴から環状にして、１００Ｋの低温流へ直接移して急速冷凍した。Ｒｉｇａｇｋｕ Ｒ−ａｘｉｓ ＩＶ検出器上の回転アノードホームソースでデータを収集して、ＨＫＬ２０００パッケージ２０を用いて処理した。ＡＭｏＲｅ（２５）と分子置換溶液を作成した。ＸｔａｌＶｉｅｗ（２４）を用いるマニュアルモデル適合によってＣＮＳ１．２１２６で初期精製を行った。精製の最終回はライディング水素の添加によって、ＰＨＮＩＸ １．３（２７）中で完了した。
【０５６６】
ペプチドプルダウンアッセイ：
ペプチドプルダウンアッセイは実質的に既に記載されているようにして実施した（Yun, S.-M. et al. Nat. Struct. Mol. Biol. 16, 876-882 (2009)）。Ｐｌｋ１ ＰＢＤ−結合特異性を検討するために、ｐ−Ｔ７８ペプチド又はその誘導体を、Ｎ末端Ｃｙｓ−（ＣＨ２）６−ＣＯリンカー［ＰＬＨＳｐＴ、４ｊ及び４ｊ（Ｓ／Ａ）］又はＰＥＧ部分に結合しているＮ末端Ｃｙｓ残基［ＰＥＧ−４ｊ＊及びＰＥＧ−４ｊ＊（Ｓ／Ａ）］の何れかを介して、ＳｕｌｆｏＬｉｎｋ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｇｅｌ（Pierce, Rockford, IL）を用いて、ビーズに架橋した。Ｆｌａｇ−Ｐｌｋ１（Ｋ８２Ｍ）、Ｆｌａｇ−Ｐｌｋ２（Ｋ１０８Ｍ）又はＦｌａｇ−Ｐｌｋ３（Ｋ５２Ｒ）（Wei Dai, New York University School of Medicine, NY の寄贈）でトランスフェクトされた２９３Ｔ細胞からＰｌｋ１〜３を発現する有糸分裂細胞溶解物を製造して、２００ｎｇ／ｍｌのノコダゾールで１６時間処理した。製造した細胞溶解物を、ＴＢＳ緩衝液｛２０ｍＭのＴｒｉｓ−Ｃｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．５％のＮｐ−４０、５ｍＭのＥＧＴＡ、１．５ｍＭのＥＤＴＡ、２０ｍＭのｐ−ニトロフェニルリン酸及びプロテアーゼ阻害剤の混合物（Roche, Nutley, NJ）｝中で、ビーズに固定化されたリガンドと４℃で２時間培養した後、タンパク質を結合しているリガンドを沈殿させ、洗浄し、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）サンプル緩衝液中で煮沸し、８％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）で分離して、抗Ｆｌａｇ抗体及び強化化学発光（ＥＣＬ）検出システム（Pierce）で免疫ブロット分析に付した。同じ膜もクーマシー（ＣＢＢ）で染色した。Ｉｍａｇｅ Ｊ プログラムを用いてシグナル強度を数値化した。
【０５６７】
ペプチド及びＧＳＴ−ＰＢＤのプルダウンアッセイ：
固定化ペプチドとのＰｌｋ１プルダウンアッセイのために、有糸分裂ＨｅＬａ細胞から製造した細胞溶解物の全てを用いた。ＨｅＬａ細胞はＰｌｋ１コード配列にに突然変異を含んでいなく、そしてＰｌｋ１の発現レベルは高い（２）。２００ｎｇ／ｍｌのノコダゾールで１６時間処理した細胞をＴＢＳＮ緩衝液｛２０ｍＭのＴｒｉｓ−Ｃｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．５％のＮｐ−４０、５ｍＭのＥＧＴＡ、１．５ｍＭのＥＤＴＡ、０，５ｍＭのＮａ３ＶＯ４、２０ｍＭのｐ−ニトロフェニルリン酸及びプロテアーゼ阻害剤の混合物（Roche, Nutley, NJ）｝中で溶解し、次いで１５，０００ｘｇで２０分間、４℃で遠心分離して澄明にした。得られた溶解物をビーズに固定化したペプチド（結合あたり４０μＭ）と２時間培養し、沈殿させ、洗浄し、次いでドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）サンプル緩衝液中で煮沸して結合したタンパク質を溶出した。サンプルを１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）で分離し、次いで強化化学発光（ＥＣＬ）検出システム（Pierce）を用いるこうＰｌｋ１抗体との免疫ブロット分析のために、銀で染色するか又はＰＶＤＦ膜へ移送した。
【０５６８】
各種Ｐｌｋ、Ｆｌａｇ−Ｐｌｋ１（Ｋ８２Ｍ）、Ｆｌａｇ−Ｐｌｋ２（Ｋ１０８Ｍ）３又はＦｌａｇＰｌｋ３（Ｋ８２Ｒ）（Wei Dai, New York University School of Medicine, NY の寄贈）へのｐ−Ｔ７８の結合特異性を調べるために、構築物を最初にＨｅＬａ細胞にトランスフェクとした。上記のようにして細胞溶解物を製造し、混合し、次いで提示した固定化ペプチドとＴＭＳＮ緩衝液中で培養した。
【０５６９】
ＰＬＨＳｐＴがリン酸のはさみ型裂隙に結合するか否かを確認するために、固定化ＰＬＨＳｐＴ又は非リン酸化ＰＬＨＳＴ制御ペプチドを、溶解性コントロールＧＳＴ、ＧＳＴ−ＰＢＤ、又はＧＳＴ−ＰＢＤ（Ｈ５３８Ａ Ｋ５４０ｍＭ）４と２時間培養し、洗浄し、次いで沈殿画分を分析した。
【０５７０】
ｐ−Ｃｄｃ２５Ｃのプルダウンアッセイのために、ＧＳＴ−ＰＢＤ又は対応するＧＳＴ−ＰＢＤ（Ｈ５３８Ａ Ｋ５４０ｍＭ）の何れかを有糸分裂ＨｅＬａ細胞溶解物と、２ｍＭのＤＴＴを補完したＴＢＳＮ緩衝液中で培養した。表示したペプチドのＰＤＰ−ｐ−Ｃｄｃ２５Ｃ相互作用に競合する能力を試験するために、溶解物を表示したペプチドの添加前に、ＧＳＴ−ＰＢＤと１．５時間前培養した。次いで溶解物を更に１．５時間培養し、結合緩衝液中で洗浄して、分析した。ｐ−Ｃｄｃ２５Ｃと内因性Ｐｌｋ１の間の相互作用の競合のために、有糸分裂溶解物をＴＢＳＮ中で製造して表示したペプチドと培養した後、抗Ｐｌｋ１抗体による免疫沈降に付した。
【０５７１】
ＥＬＩＳＡに基づくＰＢＤ結合阻害アッセイ：
ビオチン化ｐ−Ｔ７８を最初に１Ｘコーティング溶液で最終濃度０．３Ｍまで希釈し、次いで得られた溶液の１００μｌを９６ウェルのストレプタビンでコーティングしたプレート（Nalgene Nunc, Rochester, NY）上に固定した。ウェルをＰＢＳプラス０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）で１度洗浄して２００μｌのＰＢＳプラス１％ＢＳＡ（遮断緩衝液）と１時間培養して非特異的結合を防いだ。ＨＡ−ＥＧＦＰ−Ｐｋｌ１を発現している有糸分裂２３９Ａ溶解物ＴＢＳＮ緩衝液中で製造し（１００μｌの緩衝液中に〜６０μｇの総溶解物）、表示した量の競合物（ｐ−Ｔ７８ペプチド及びその誘導化合物）と混合し、ビオチン化ペプチドでコーティングしたＥＬＩＳＡウェルの上に直接載せ、次いで常に振動させて２５℃で１時間培養した。培養に続いて、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳＴで４回洗浄した。結合したＨＡ−ＥＧＦＰ−Ｐｌｋ１を検出するために、プレートを、遮断緩衝液中の濃度０．５μｇ／ｍｌの抗ＨＡ抗体の１００μｌ／ウェルで２時間プローブし、次いで５回洗浄した。プレートを更に、遮断緩衝液で１：１，０００に希釈したＨＲＰ共役２次抗体（GE Healthcare, Piscataway, NJ）の１００μｌ／ウェルでプローブした。プレートをＰＢＳＴで５回洗浄して、基質として１００μｌ／ウェルの３，３'，５，５'−テトラメチルベンズイミド（ＴＭＢ）溶液（Sigma, St. Louis, MO）と所望の吸光度に達するまで培養した。１００μｌ／ウェルの停止溶液（Cell Signaling Technology, Danvers, MA）で反応を停止した。光学密度（Ｏ．Ｄ．）をＥＬＩＳＡプレートリーダー（Molecular Devices, Sunnyvale, CA）を用いて４５０ｎｍで測定した。
【０５７２】
細胞培養、細胞増殖及び異常な有糸分裂集団の分析、及び間接免疫蛍光顕微鏡法：
ＨｅＬａ子宮頸癌細胞株ＣＣＬ２、２３９Ａ及び２３９Ｔ細胞をＡｎｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Manassas, VA）が推奨するように培養した。をＡｎｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Manassas, VA）が推奨するように培養した。ＨＡ−ＥＧＦＰ−Ｐｌｋ１を発現する有糸分裂２３９Ａ細胞を製造するために、ＨＡ−ＥＧＦＰ−Ｐｌｋ１を発現しているアデノウィルスで細胞を感染させて、２００ｎｇ／ｍｌのノコダゾールで１６時間静止した。培養細胞中の表示した化合物の効果を分析するために、対数的に生育しているＨｅＬａ細胞を２００μＬの表示した化合物で２４時間（有糸分裂的に静止している細胞を強化するのに十分な時間量）処理し、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２で１０分処理して、４％のパラホルムアルデヒドで固定した。
【０５７３】
別の実験で、ＨｅＬａ細胞を２．５ｍＭのチミジンで１６時間静止して、新鮮なビ地に放出した、放出の４時間後に、細胞を２００μＭの化合物で処理し、表示した時点で採取し、次いで分析した。先に記載されているように（Liu, F. et al. Tetrahedron 65, 9673-9679 (2009)）、抗Ｐｌｋ１（Santa Cruz Biotechnologies, Santa Cruz, CA）及び抗−α−チューブリン（Sigma）抗体、続いて、Ａｌｅｘａ ｒｅｄ（赤）及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８（緑）−共役２次抗体をそれぞれ用いて、間接免疫蛍光研究を実施した。Ｚｅｉｓｓ Ａｘｉｏｖｅｒｔ １００ Ｍ 顕微鏡 (Carl Zeiss MicroImaging, Inc., Thornwood, NY) に取り付けた Ｚｅｉｓｓ ＬＳＭ５１０ システムを用いて共焦画像を得た。
【０５７４】
等温滴定熱量測定分析。
Ｖｐ−ＩＴＣ滴定熱量計（Microcal, Inc., Northampton, MA）上で熱量滴定を実施した。典型的な実験では、５μｌアリコートのリン酸化ペプチドを２５０μｌの注射器から、急速に撹拌している（３００ｒｐｍ）Ｐｌｋ１ ＰＢＤ溶液（細胞容量＝１．３４７２ｍｌ）注入した。対照実験は、当量のペプチド溶液をＰｌｋ１ ＰＢＤを含んでいない緩衝液に注入することを含んでいた。Ｐｌｋ１ ＰＢＤの濃度は０．０３３〜０．０５２ｍＭであって、ペプチドのそれは０．１４５〜０．３６５ｍＭであり、全ての濃度値はアミノ酸分析で確認した。滴定は、２０ｍＭのＴｒｉｓ−Ｃｌ（ｐＨ７．５）、１００ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＤＴＴにおいて２５℃で実施した。希釈／緩衝効果に補正された、等温線をＯｒｉｇｉｎ ＩＴＣ Ａｎａｌｙｓｉｓ ソフトウェアを用い製造会社のプロトコールに従って適合させた。非線形最少二乗法を用いて滴定データを適合させて誤差を計算した。構造データと一致して、１：１の化学量論が推定されてデータは１部位結合モデルに適合した。消す号曲線から、エンタルピーに対する値及び結合親和性が抽出された。ΔＧ＝−ＲＴｌｎＫａ、ΔＧ＝ΔＨ−ＴΔＳを用いて熱力学パラメータを計算した。
【０５７５】
クローニング、タンパク質発現、及び精製。
Ｐｌｋ１ ＰＢＤの２つの形態（残渣３２６−６０３及び残渣３６７−６０３）をＮベクター内の末端Ｈｉｓ６−ＤｓＲｅｄ断片との融合構築物として、ｐＤｅｓｔ−５２７（Addgene, Cambridge, MA）に基づいて発現した。Ｐｌｋ１ ＰＢＤの別の形態（残基３７１−６０３）を、ｐＥＴ−２８ａ（Novagen, Madison, WI）に基づいて、ベクター内のＮ末端Ｈｉｓ６−ＭＰＢ断片と共に発現した。ＴＥＶプロテアーゼ開裂部位を断片とＰＢＤの間に調製した。Ｅ．ｃｏｌｉ Ｂ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ又はＲｏｓｅｔｔａ２細胞（Ｎｏｖａｇｅｎ）の何れかに同様の収率でベクターを発現した。細胞は、３０℃で激しく震盪して光学密度０．４まで生育した。培養液を２０℃まで冷却し、ＩＰＴＧの添加によって最終濃度を０．４ｍＭにして、１２時間培養した。細胞を採取して溶解する前にペレットを凍結した。これに続く全ての精製は４℃で行った。凍結したペレットを緩衝液Ａ（２０ｍＭのＴｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ８．０、５００ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＤＴＴ）中で解凍して、４ｖ／ｖ％のＢｕｇＢｕｓｔｅｒ１０Ｘタンパク質抽出試薬（Novagen）及び０．１ｍｇ／ｍｌのＤＮアーゼ（Sigma）を加えて溶解した。溶解物を４００００ｘＧで３０分間遠心分離して、細胞残屑をペレットにし、０．２μｍのフィルターで濾過した。溶解物を１００ｍＭのイミダゾールと共にＨｉｓＴｒａｐ ＨＰカラム（Amersham Biosciences, Piscataway, NJ）に載せ、緩衝液Ａ中の１００ｍＭイミダゾールで洗浄して、緩衝液Ａ中の５００ｍＭイミダゾールで溶出した。融合タンパク質を含有しているピークを、緩衝液Ａに対する透析によって、ＴＥＶプロテアーゼ（１：１００のモル比）で消化した。消化物をイミダゾールなしでＨｉｓＴｒａｐ ＨＰカラムに再び載せ、緩衝液Ａで洗浄して、緩衝液中の８０ｍＭイミダゾールで溶出した。緩衝液Ａで平衡化したＨｉＬｏａｄ１６／６０ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ゲル濾過カラム（Amersham）を精製の最終工程として用いた。全長ＰＢＤを低塩濃度緩衝液（２０ｍＭのＴｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７．５、１００ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＤＴＴ）に対して透析して、熱量実験で用いた。ＰＢＤの切断形態を結晶学に用いた。Ｐｌｋ１のキナーゼドメイン（残基１−３３７）を同じ方法で精製した。Ｈｉｓ６−ＭＢＰ構築物を、アミロース−アガロースカラムに充填し、次いで緩衝液｛１０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ８）、０．５ＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＤＴＴ｝中の５０ｍＭマルトースで溶出する、ニッケル金属アフィニティークロマトグラフィーで精製した。得られたタンパク質をＴＥＶプロテアーゼで消化してｄンペンを開裂した後、ニケルカラムに通し、次いで最後にゲル濾過に付した。ヒトＰｌｋ２のＰＢＤ（残基３７３−６８５）をＴＥＶプロテアーゼ開裂部位とのＭＢＰ融合体としてクローンしてＰｌｋ１のＰＢＤとの同じ融合体として精製した。
【０５７６】
細胞培養及びマイクロインジェクション。
ＨｅＬａ細胞を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ (Manassas, VA)が推奨する条件下で準濃密単層として培養した。Ｃｄｃ２キナーゼ活性を非常に強く阻害するために、２００ｎｇ／ｍｌのノコダゾールで１６時間静止させたＨｅＬａ細胞を２００ｎＭのＢＭＩ−１０２６で１０分間処理した。２００ｎＭのＢＭＩ−１０２６で１０分間処理している間に有糸分裂が存在していないことを観察した。Ｐｍａｂ含有模倣ペプチドによる微量注入実験のために、細胞を２５ｍＭのチミジン（Sigma）で１６時間静止して、新鮮な培地に放出した。Ｓ期阻害から放出の２時間後に、表示したペプチド（ＰＢＳに保存したものを２．５ｍＭ）を、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ（登録商標）Ｔｒａｎｓｊｅｃｔｏｒ（Eppendorf（登録商標）, Westbury, NY）を用い、１５０ｈＰａの気圧レベル、０．５秒の注入時間で細胞内へ微量注入した。単一グリッド中の全ての細胞を注入した後、更に培養して細胞周期進行を観察した。Ｆ２Ｐｍａｂ含有模倣ペプチドによる微量注入実験のために、細胞を２．５ｍＭのチミジンで９時間の放出間隔をおいて１６時間で２回静止し、次いで新鮮な培地に放出した。Ｇ１／Ｓ期から放出の７時間後に、表示したペプチド（ＰＢＳに保存したものを４ｍＭ）を、上記と同様にして微量注入した。表示してある場合は、最終濃度２０ｎｇ／μｌのｐＥＧＦＰ−Ｃ１ベクター（Clonotech（登録商標）, Mountain View, CA）を含有しているペプチドを、注入された細胞を可視化するために用いた。
【０５７７】
微量注入されたＰＬＨ−ＰｍａｂペプチドによるＰｌｋ１非局在化のレベルを測定するために、単一チミジン（Ｓ期）阻害から５時間細胞を放出した後、微量注入した。微量注入の４時間後に、細胞を固定化して以下の記載のように免疫染色分析した。
【０５７８】
表示したペプチドを用いる図１６に示した実験のために同様な方法を用いた。ＨｅＬａ細胞を２度のチミジン処理によるＧ１／Ｓ境界域で静止して、新鮮な培地に放出した。放出から６時間後に、３ｍＭのペプチド２１、２３又は２４と３０ｎｇ／μＬのｐＥＧＦＰ−Ｃ１ベクターとの混合物を細胞に微量注入し、次いでＧ１／Ｓ放出の１５時間後に細胞を写真に撮った。同時に注入したＥＧＦＰプラスミドは微量注入された細胞をふぉう呈するために有利なマーカーをもたらした。
【０５７９】
電気穿孔。
ペプチドの長期効果を調べる目的で、６ｍｅｒビオチンに共役したｐ−７８模倣ペプチド｛ビオチン−（ＣＨ）６−ＰＬＨ−Ｆ２Ｐｍａｂ−Ａ−ＮＨ２｝を、Ｂｉｏ−Ｒａｄ（登録商標）Ｇｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ（Bio-Rad（登録商標）, Laboratories, Hercules, CA）を２５０μＦＤ及び３００Ｖで用いて、非同期的に生育しているＨｅＬａ細胞内に電気穿孔した。次いで細胞を２日間培養し、固定化し、次いで免疫染色分析した。
【０５８０】
間接免疫蛍光法及び共焦点顕微鏡法。
抗Ｐｌｋ１抗体（Santa Cruz Biotechnologies, Santa Cruz, CA）及び抗ＣＲＥＳＴ抗血清（Cortex Biochem, San Leandro, CA）を用いて間接免疫染色を先に記載したように実施した（５）。全ての適切な２次抗体はJackson ImmunoResserch Laboratories, Inc.（West Grove, PA）から購入した。ビオチン化Ｆ２Ｐｍａｂ陽性細胞を、ＦＩＴｃ共役すＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ（Invitrogen（登録商標）, Carlsbad, CA）と共染色して検出した。染色体を、４'，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）（Sigma）で可視化した。Ｚｅｉｓｓ  ＬＳＭ５１０共焦点顕微鏡を用いてデジタル画像を収集した。蛍光シグナル強度を定量するために、不飽和蛍光シグナルの画像を、５１２×５１２ピクセル及び１２ビット解像度の同一レザー光量で得た。局在化したシグナルの蛍光強度は、Ｚｅｉｓｓ ＡＩＭ共焦点ソフトウェアを用い、バックグラウンドシグナルを差し引いた後に確定した。
【０５８１】
実施例１：ｐＴリン酸ジエステルの製造及びＰＢＤ結合活性の評価
酸感受性固相樹脂に結合した前駆ペプチドにミツノブカップリング化学（Swamy et al., Chem. Rev. 109, 2551-2651 (2009)）を適用してリン酸ジエステルのライブラリーをもたらした（図１を参照されたい）。ミツノブカップリングに続いて、ペプチドを酸性条件下で樹脂から解離して予期されたリン酸ジエステル（３ａ〜３ｆ）を主反応生成物として得た。予想外に、それぞれの場合に、期待された生成物と同一の分子量を示す、構造未知の高速溶出（ＨＰＬＣ）マイナーな副生成物（４ａ〜４Ｆと表示、図１）が得られた。
【０５８２】
ＥＬＩＳＡに基づく９６ウェルアッセイ（Yun, S.-M. et al. Nat. Struct. Mol. Biol. 16, 876-882 (2009)）を用いて号せ失せ失せ売物のＰｌｋ１ ＰＢＤ結合親和性を評価すると、全ての期待されたリン酸ジエステル生成物（３ａ〜３ｆ）は測定可能な親和性を示して、チオフリル誘導体（３ｅ）が最も高い親和性を示した。対応する３ａ及びｓｂとの混合物として試験した、４ａ及び４ｂを除いて、反応副生成物（４ｃ〜４ｆ）はそれらの対応するリン酸ジエステル対照物より有意に高い親和性を一様に示して、副生成物４ｄ、４ｅ及び４ｆは親のリン酸ペプチドより高い親和性を示した（図６）。
【０５８３】
１回目の合成からの最も親和性が高い副生成物（４ｆ）は、４−フェニルブタン−１−オールを用いるミツノブエステル化に由来した。次に高い親和性はこれもアルキル鎖に結合している不飽和基を有しているアルコールに由来している副生成物（４ｄ及び４ｅ）が示した。この構造パターンの潜在的な優位性を説明するために、末端フェニル環を有している漸進的に長くなるｎ−アルキル−１−オールを用いてミツノブエステル化反応を繰り返した。
【０５８４】
１回目の合成中に既に観察されたように、それぞれの期待されたリン酸ジエステル生成物（３ｇ〜３ｌ）は高速溶出副生成物（それぞれ４ｇ〜４ｌと表示する）の形成を伴っていた。ｎ＝８の鎖長を有するリン酸ジエステル生成物（３ｊ）のＰｌｋ１ＰＢＤ結合親和性は、親ペプチド１と等しいか又はやや高い親和性であった（図２ａ〜２ｃ）。これは、モノアニオン性リガンドが良好な親和性を示すことを明らかにして、リン酸ジアニオン電荷が絶対条件であるか否かという我々の最初の照会に対処した。しかしながら、この試験のより有意な結果は、期待された親リン酸ジエステル（３ｇ〜３ｌ）より非常に高い親和性を示すマイナーな副反応生成物（４ｇ〜４ｌ）の形成であった。ｎ＝４（４ｆ）の最初のアルキル鎖長から始まって、副生成物の親和性はおおよそアルキル鎖の延長とともに増大して（ｎ＝６及びｎ＝７を除外して、図２も参照されたい）、ｎ＝８（４ｊ）に関して最大に到達した。この長さを超える鎖の延長は結合親和性の減少を伴った（４ｋ、４ｌ）。最も強力な類縁体（４ｊ）の親和性は１の大きさのほぼ３オーダーを超えた（１、ＩＣ５０＝１３μＭ；４ｊ、１８ｎＭ）（図２）。
【０５８５】
本発明者らは、３ｊ及び４ｊの対応するＳ／Ａ突然変異体［それぞれ、３ｊ（Ｓ／Ａ）及び４ｊ（Ｓ／Ａ）］を製造して、Ｓ／Ａ突然変異ペプチドに対して生じた親和性の有意な減少を観察した（図２ｃ）。Ｓ／Ａ突然変異によって３ｊ及び４ｊのＰＢＤ結合親和性を完全に消失できなかったことは、先に報告されたように（Elia, A.E.H. et al., Science 299, 1228-1231 (2003)）、実質的に増加したＳｅｒ依存性相互作用の存在に起因している。このことは、３ｊ及び４ｊの結合が事実上特異的であることを強く明らかにしている。
【０５８６】
実施例２：ヒスチジン付加物としての高親和性副生成物の同定
最高の親和性の副生成物（４ｊ）の構造を同定するために、タンデムＭＳ分析を４ｊ及び関連するリン酸ジエステル生成物（３ｊ）の両方に対して実施した（図８及び９）（表Ｄ及びＦも参照されたい）。
【０５８７】
Ｃ６Ｈ５Ｃ８Ｈ１６−付加物のペプチド３ｊ及び４ｊにおける付加部位を明らかにするためにタンデムＭＳの検討を行った。デュアルエレクトロスプレー源を設けたＡｇｉｌｅｎｔ６５２０Ａｃｃｕｒａｔｅ−Ｍａｓｓ Ｑ−ＴＯＦ ＬＣ／ＭＳ Ｓｙｓｔｅｍ（Agilent Technologies, Inc., Santa Clara, CA）上で、陽性イオンモードで操作して、マススペクトルのデータを得た。Ｚｏｒｂａｘ ３００ＳＢ−Ｃ１８ Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌカラム（２．１ｍｍ×７５ｍｍ、粒子サイズ５μｍ）上で分離を実施した。０．１％のギ酸Ｈ２Ｏ溶液／０．１％のギ酸アセトニトリル溶液の溶媒系を用い、１ｍｌ／分の流速で、５〜１００％の有機溶媒グラジュエントで４分間かけて１分間有機溶媒を保持して、検体を溶出した。フルスキャンＴＯＦモード又はプロダクトイオンスキャン（ＭＳ／ＭＳ）モードの何れかで器械を用いた。ＭＳ供給パラメータは４ｋＶのキャピラリー電圧、１７５Ｖのフラグメント電圧及びスキマー６５Ｖと共にセットした。ガス温度は３５０℃、乾燥ガス流は１２Ｌ／分、そして噴霧圧は５５ｐｓｉｇであった。高純度の窒素を衝突ガスとして用いた。データは高分解能（１，７００ｍ／ｚ）、４ＧＨｚで得た。ＴＯＦ−ＭＳスペクトルを１００〜１６００ｍ／ｚに渡って記録した。Ｑ−ＴＯＦ−ＭＳ／ＭＳ］実験を１．４スペクトル／秒のスキャン速度で、３５Ｖの衝突エネルギーを用いて、５０〜１０００ｍ／ｚの範囲で実施した。データ収集及び分析は、ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（バージョンＢ．０２．００）を用いて実施した。質量精度を保持するために、基準イオンｍ／ｚ１２１．０５０８７３及びｍ／ｚ９３３．００９７９８を含有している、内部質量キャリブレーション溶液をＬＣ／ＭＳを行っている間中、連続して注入した。
【０５８８】
ペプチドの断片化は通常、カルボキサミド基の部位にあるペプチド骨格に沿って連続的に生じる。ペプチドのＮ末端から始まるそれぞれの残基に対して、フラグメントに「ａ」から始まる連続的なアルファベット順の表示、例えば、図８に示すような、残渣１に対してａ１、ｂ１、ｃ１；残渣２に対してａ２、ｂ２、ｃ２等、が与えられる。同じ方法で、ペプチドのＣ末端から始まって、各残渣に対する断片は、図に示すように、ｚから始まってアルファベット順に表示される。最も一般的に観察されるイオンは「ａ」、［ｂ］及び「ｙ」タイプのものである。ペプチド３ｊに関しては、ＭＳ断片はｂ６＋Ｈ、ｂ５及びｙ２である（以下の表を参照されたい）。ペプチド４ｊに関しては、断片はＨｉｓ残基上にあるＣ６Ｈ５Ｃ８Ｈ１６付加物からなり、重要な断片はｂ４及びｙ４である。データはＨｉｓ断片上の付加物結合の部位を示していないことに留意されたい。
【０５８９】
予想されたように、３ｊに関するマススペクトルデータは、意図されたリン酸ジエステルであった。しかしながら、副生成物４ｊの断片がヒスチジン残基上のＣ６Ｈ５（ＣＨ２）８―基の配置で良く説明された。ヒスチジン側鎖は、アルキル化の可能性がある部位として２つの窒素原子が存在している（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）環からなる。タンデムＭＳデータから、２つのヒスチジン窒素上でアルキル化が起きていることを確認することは不可能であった。
【０５９０】
【表１２−１】
2014511877.tif 000156
【０５９１】
【表１２−２】
2014511877.tif 000157
【０５９２】
【表１３−１】
2014511877.tif 000158
【０５９３】
【表１３−２】
2014511877.tif 000159
【０５９４】
【表１３−３】
2014511877.tif 000160
【０５９５】
実施例３：ヒスチジンアルキル化の部位の同定及び新規なＰＢＤ結合様式の発見。
ヒスチジンアルキル化の部位を一義的に同定して、４ｊの高い結合親和性の根拠を理解するために４ｊとの複合体中のＰｌｋ１ＰＢＤの共結晶構造を解析した（図３）。この構造は、アルキル化がヒスチジン残基上で生じていることを示して、先のタンデムＭＳの結果を確認した。Ｃ６Ｈ５（ＣＨ２）８−基がイミダゾール環上のδ１窒素（Ｎ３）に付加したことも示した。
【０５９６】
ＰＢＤ−４ｊ複合体中のＰＢＤ骨格は、先に報告された１に複合体化されたＰｌｋ１ ＰＢＤ（ＰＢＤＩＤ：３ＨＩＫ）（Yun, S.-M. et al. Nat. Struct. Mol. Biol. 16, 876-882 (2009)）の骨格とほぼ重ね合わすことができることを示した。タンパク質骨格の差は主にαβらせんの部分で生じている。結合したペプチド４ｊの結合方向は３ＨＩＫ構造中の１とほぼ重ね合わすことができる（図３ａ）。
【０５９７】
２つの構造の差異は主に、ペプチド４ｊのＣ６Ｈ５（ＣＨ２）８−基の結合に起因していて、ここではメチレン鎖がヒスチジンのイミダゾール環から伸びて、ＰＢＤ１ユニットの一連の逆並行βシート（β１〜β４）を越えて横方向に横切っている。結合相互作用は、床面が近位のＶ４１５（β１シートから生じている）及び遠位のＦ４８２（αβらせんから生じている）からなり、その反対側の壁がＹ４１７（β１シートから生じている）及びＹ４８５（αβらせんから生じている）で定義される、よく形成されるチャンネル内で起こる。チャンネルの末端はＬ４７８及びＹ４８１（αβらせんから生じている）によって形成される（図３ｂ）。この結合チャンネルの形成には、親の３ＨＩＫ構造と比べてそして明白に、Ｙ４８５とＦ４８２の側鎖配向を動かすことが殆ど必要なく、それにもかかわらず、Ｙ４１７の側鎖のほんの少しの移動を必要とする（κ３角の２０．８°変更）。
【０５９８】
しかしながら、Ｙ４８１アリール環の方向に最も劇的な動きが生じる。これは３ＨＩＫ中の４４．５°のκ２角を１１５°下方に回転して、４ｊ複合体中でκ２＝１５９．５°にすることである。この動きはタンパク質表面のトポロジーに対する計り知れない影響を有していて、以前は塞がれていた新しい結合チャンネルの提示をもたらした（図３ｄと３ｅを比較されたい）。この疎水性チャンネルの形成は、ペプチド結合したＰＢＤの従来の結晶構造に基づくとまったく予想外であった。
【０５９９】
実施例４：細胞バイオアベイラビリティーの増強及びＰｌｋ１ＰＢＤ機能の阻害のためのペプチド改変
Ｐｍａｂ含有ペプチド１＊（図１ｂ）のＨｒＬａ細胞内への微量注入がＰｌｋ１の細胞内局在化と相互作用して延長された有糸分裂停止の結果であるアポトーシス細胞死を誘導することが明らかにされた（Yun, S.-M. et al. Nat. Struct. Mol. Biol. 16, 876-882 (2009)及び Seong, Y.-S. et al. . J. Biol. Chem. 277, 32282-32293 (2002)）。しかしながら、１＊の最高２００μＭ濃度の培養したＨｅＬａ細胞との直接培養は、検出可能な細胞応答を引き出すことができなかった（データは示していない；下記も参照されたい）。この失敗は、乏しい溶解性及び低い膜透過性から生じた限られた細胞内バイオアベイラビリティーに起因している可能性がある。
【０６００】
４ｊは、１より強度がほぼ３オーダー高いＰＢＤ結合親和性を示したので。４ｊが培養した細胞において高Ｐｌｋ１活性を示すか否かを実験するために、対応するＮ末端ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と共役している４ｊの非加水分解性形態（すなわち、ＰＥＧ−４ｊ＊；図１ｂ）を作り出してバイオアベイラビリティーを増大した。ＰＥＧ化を表示した化合物のＮ末端に適用した（図１ｂ）。非ＰＥＧ化（１＊及び４ｊ）及びＰＥＧ化形態（それぞれ、ＰＥＧ−１＊及びＰＥＧ−４＊）の両方がインビトロＰＢＤ阻害アッセイにおいて同じレベルのＰＢＤ結合親和性を示した（図４ａ）。
【０６０１】
ＰＥＧ化化合物の特異性を試験するために、Ｎ末端Ｃｙｓ残基をＰＥＧ部分に導入して、Ｃｙｓ残基をビーズに架橋した。非ＰＥＧ化親形態もＮ末端Ｃｙｓ含有リンカーを介して架橋した。結果は、４ｊ及びそのＰＥＧ化、非加水分解性形態であるＰＥＧ−４ｊ＊の両方が、トランスフェクトした２９３Ｔ細胞を用いるＰＢＤプルダウンアッセイにおいて親の１よりほぼ４０倍優位にＰｌｋ１と相互作用した（図４ｂ）。際立って、４ｊ及びＰＥＧ−４ｊ＊の両方はＰｌｋ２及びＰｌｋ３と優位に相互作用せず、ＰＥＧ化はＰｌｋ１特異性のレベルを落とさないことを示唆している。対応する４ｊ（Ｓ／Ａ）及びＰＥＧ−４ｊ＊（Ｓ／Ａ）突然変異体がこれらのプルダウン条件下で少なくとも４〜５倍の損失を示したので、結合はＰＢＤ特異的であった（図４ｂ）。
【０６０２】
上の観察と一致して、２００μＭのＰＥＧ−４ｊ＊によるＨｅＬａ細胞の直接処理は有糸分裂停止及びアポトーシス細胞死を効果的に誘導したのに対して、ＰＥＧ−４Ｊ＊（Ｓ／Ａ）は誘導しなかった（図４ｃ〜ｅ）。有糸分裂停止に続くアポトーシス細胞死の増大したレベルの結果として、停止細胞の数がその後の時点になって縮小した。とりわけ、ＰＥＧ−１＊（Ｓ／Ａ）ではなく、ＰＥＧ−１＊もこれらの条件下で弱いが有意なレベルの有糸分裂停止を誘導した。
【０６０３】
これに対して、非ＰＥＧ化１＊及び４は、それらのＰＢＤ阻害活性がそれらのそれぞれのＰＥＧ化形態のそれと匹敵しているにも関わらず、検出可能なレベルの細胞効果を生み出せなかった（図４ａ及び図４ｂ）。これらの知見は、細胞応答の誘導におけるＰＥＧ化の重要性を強調している。観察された有糸分裂停止がＰＢＤ機能の阻害の結果であると予期したように、ＰＥＧ−４Ｊ＊（Ｓ／Ａ）ではなく、ＰＥＧ−４Ｊ＊によるＨｅＬａ細胞の処理が、中心体及び動原体から劇的Ｐｌｋ１非局在化、及び極端に不整列な染色体を誘導した（図４ｆ〜ｇ、データは示していない）（Ahonen, L.J. et al. Curr. Biol. 15, 1078-1089 (2005)）。ＰＢＤ結合の程度と密接に相関して、ＰＥＧ−１＊（Ｓ／Ａ）突然変異体ではなく、ＰＥＧ−１＊は穏やかなＰｌｋ１非局在化を適度なレベルの不整列な染色体と共に誘導した。
【０６０４】
実施例５．ＰＬｋ１のＰＢＤに結合する最小のｐ−Ｔ７８ペプチドの同定。
ＰＢＩＰ１／ＭＬＦ１ＩＰ／ＫＬＩＰ１／ＣＥＮＰ−５０／ＣＥＮＰ−Ｕ（以後はＰＢＩＰ１）を、中心体への局在化及び適切な染色体の分離に重要であるＰＢＤ相互作用タンパク質として単離した。Ｐｋｌ１−ＰＢＩＰＩ相互作用の検討は、Ｐｌｋ１のＰＢＤはリン依存的にＰＢＩＰＩのＴ７８領域に結合することを示す。Ｐｌｋ１ ＰＢＤのＳ７７−ｐ−Ｔ７８モチーフとの結合特性をより良く理解するために、インビトロ結合分析のために多種のｐ−Ｔ７８ペプチドを合成した。先の観察と一致して、ビーズに固定化された１０−ｍｅｒ又は１４−ｍｅｒのホスホ−Ｔ７８（ｐ−Ｔ７８）ペプチドが（それぞれのホスホ形態ではない）、有糸分裂ＨｅＬａ細胞から主な結合タンパク質としてＰｌｋ１を沈殿した。相互作用するのに十分なＴ７８モチーフの最小配列を確認するために、１０ｍｅｒのｐ−Ｔ７８ペプチド（ＰＬＨＳｐＴＡＩＹＡＤ）から始めて系統的欠失解析を実施して得られたそれぞれのペプチドのＰｌｋ１と結合する能力を試験した。意外にも、Ｃ末端からｐ−Ｔ７８残基まで全てのアミノ酸残基の除去はＰｌｋ１結合のレベルを消失させず、ｐ−Ｔ７８以後のこれらＣ末端残基はＰＢＤ結合に関しては重要ではないことを示唆していた。更に、ＰＬＨＳｐＴのＮ末端欠失解析は、Ｎ末端Ｐｒｏを欠失しているＬＨＳｐＴは大きく減少した（〜７倍）ＰｌＫ１との結合親和性を有していたのに対して、Ｐｒｏ及びＬｅｕ残基の両方を欠失しているＨＳｐＴは有意なレベルの結合を何も示さなかった。これらのデータは、ＰＬＨＳｐＴは初期の１０又は１４ｍｅｒのｐ−Ｔ７８のように有効にＰｌｋ１と結合すること、及びＳｐＴジペプチドを除いて、Ｎ末端Ｐｒｏ−ＬｅｕモチーフはＰＢＤとの親和性の更なるレベルをもたらすために非常に重要であることを示唆している。
【０６０５】
その後の欠失スキームの片寄りを除くために、ＳｐＴモチーフを包含しているその他の５ｍｅｒペプチドがＰｌｋ１と効果的に結合するか否かも試験した。興味深いことに、Ｎ末端Ｐｒｏを欠失しているがＣ末端Ａｌａを有している、ＬＨＳｐＴＡは殆どＰＬＨＳｐＴのように効果的にＰｌｋ１と結合して、Ｎ末端Ｐｒｏの欠失はＣ末端Ａｌａの付加によって殆ど相殺されることを示唆した。しかしながら、Ｐｒｏ及びＬｅｕの両方を欠失しているが、その代わりにＳｐＴモチーフの後に２つの追加Ｃｍａｔｔａｎ残基を有している、ＨＳｐＴＡＩは僅かにＰｌｋ１と結合したので、Ｐｒｏ−４残基の非存在におけるＬｅｕ−３残基の重要性を強調した。先のデータがＰｒｏ、Ｃｙｓ、及びＧｌｙ残基は、ｐ−Ｔｈｒ＋１位置１３の残基のために選ばれることを示したので、ＬＨＳｐＴＡとＰＢＤの間の高レベルの相互作用は多少予想外であった。４ｍｅｒの間では、ＬＨＳｐＴとＨＳｐＴＡの両方が、ＳｐＴＡＩよりＰｌｋ１により良く結合して、ＰＢＩＰＩのＴ７８領域における中央のＰＢＤ結合モチーフはＬＨＳｐＴとＨＳｐＴＡのコア配列の周りに作られていることを示唆した。ｐ−Ｔ７８ペプチドの強力な結合親和性と一致して、先に特性化した最適なＰＢＤ結合ペプチド（ＭＱＳｐＴＰＬ）１３の短鎖形態と類縁ｐ−Ｔ７８ペプチド（ＬＨＳｐＴＡＩ）との間の競合結合試験が、後者の結合親和性が前者のそれと同等であることを示した。
【０６０６】
実施例６：最小ｐ−Ｔ７８ペプチドとＰｌｋ１ ＰＢＤの間の特異的且つ高親和性結合。
次に、最小化したｐ−Ｔ７８ペプチドのＰｌｋ１ ＰＢＤに対する特異性を試験した。Ｐｌｋ４ ＰＢＤの異なった結合特性のために、Ｐｌｋ４をこれらの分析に含めなかった。結果は、初期の１４ｍｅｒペプチドと同様に、最小化したｐ−Ｔ７８ペプチドは同じレベルのＰｌｋ１、Ｐｌｋ２，及びＰｌｋ３を含有している溶解物からＰｌｋ１を特異的に沈殿したことを示した。対照的に、６ｍｅｒ最適化ＭＱＳｐＴＰＬペプチドは、同じ条件下でＰｌｋ１の〜２７％効率でＰｌｋ２を沈殿して、これがＰＬＨＳｐＴより有意に低いＰｌｋ１特異性を有していることを示唆した。この概念と一致して、ｐ−Ｔ７８ペプチドではなく、ＭＱＳｐＴＰＬは、Ｐｌｋ２のみを発現しているＨｅＬａ溶解物からＰｌｋ２を沈殿した。著しいことに、初期の１４ｍｅｒペプチドより長さが最も短いにもかかわらず、最小ｐ−Ｔ７８ペプチドである、ＰＬＨＳｐＴは低下していないＰｌｋ１特異性を示し、そして総ＨｅＬａ溶解物からの唯一の主要結合タンパク質としてＰｌｋ１を沈殿した。別の５ｍｅｒである、ＬＨＳｐＴＡも同様であるがいくらか低下したレベルのＰｌｋ１親和性を示した。これらの所見はＰｌｋ１結合親和性及び特異性に対して重要な要素はこれらの最小配列に存在していることを示唆する。ＰＬＨＳｐＴを用いる更なる実験は、これがＧＳＴに融合したＰＢＤ（ＧＳＴ−ＰＢＤ）と特異的に結合するが、対応するＧＳＴ−ＰＢＤ（Ｈ５３８Ａ、Ｋ５４０Ａ）のリン酸で挟んだ突然変異体とは僅かに結合して、無傷のリン酸エピトープ結合モジュールはＰＬＨＳｐＴ−Ｐｌｋ１ ＰＢＤ相互作用を必要としていることを示唆した。
【０６０７】
次に、組み換えＰｌｋ１ ＰＢＤを用いて（外部）等温滴定熱量測定を実施して、最小化Ｐ−Ｔ７８ペプチドの結合パラメータを定量した。試験した最小化ペプチドのうちで、５ｍｅｒのＰＬＨＳｐＴは他の５ｍｅｒペプチドである、ＬＨＳｐＴＡと同等の総結合親和性（Ｋｄ〜０．４５μＭ）を示したにも関わらず、これはＰＢＤと最も優れた結合接触を介在した（ΔＨ＝−１４．５Ｋｃａｌ／モル）。同じ条件下で、合成最適化６ｍｅｒペプチドである、ＭＱＳｐＴＲＬは０．５３４μＭのＫｄでＰＢＤと結合した（表１）、この値は５ｍｅｒのｐ−Ｔ７８ペプチドのそれと同じである。別の２つの６ｍｅｒペプチド（ＰＬＨＳｐＴＡ及びＬＨＳｐＴＡＩ）は５ｍｅｒペプチドよりやや高い親和性を示した一方、４ｍｅｒのもの（ＬＨＳｐＴ及びＨＳｐＴＡ）は非常に低い親和性を示した（表１）。
【０６０８】
上記ペプチドの結合の特異性を試験するために、組み換えＰｌｋ２ ＰＢＤを用いて熱量測定結合実験を行った。適切な結合は観察されず、そして全てのケースでの結合曲線の欠如結果のように、結合エンタルピー又は結合親和性に関する値は推定できなかった。しかしながら、ペプチドの相互作用の初期熱の明確な差異が装置の検出限界（１ｋｃａｌ／モル）より上で観察された。２つの最小化ｐ−Ｔ７８ペプチドである、ＰＬＨＳｐＴ及びＬＨＳｐＴＡはＰｌｋ２との相互作用を実質的に示さず（基準熱だけが検出された）、これに対してＰＬｋ２ ＰＢＤに滴定されたＭＱＳｐＴＲＬは−１．６８ｋｃａｌ／モルの初期熱を発生した。これらの結果は最小化ｐ−Ｔ７８ペプチドのＰｌｋ２を超えるＰｌｋ１に対する特異性を更に裏付けている。
【０６０９】
実施例７：ｐ−Ｔ７８ペプチドはＰＢＤ−Ｃｄｃ２５Ｃ相互作用を妨害する。
最小化ｐ−Ｔ７８ペプチドを、これらがＰｌｋ１ ＰＢＤとその生理学的結合標的であるリン酸−Ｃｄｃ２５Ｃ（ｐ−Ｃｄｃ２５Ｃ）との相互作用を妨害する能力を有しているかどうかを確認するために試験した。先の知見と一致して、ＧＳＴ−ＰＢＤはｐ−Ｃｄｃ２５Ｃを沈殿したが、有糸分裂ＨｅＬａ細胞由来の非リン酸化形態を沈殿しなかった。有糸分裂溶解物へのＰＬＨＳｐＴ（それぞれの非リン酸化ペプチドではない）の添加は、予め形成されたＰＢＤ−ｐ−Ｃｄｃ２５Ｃ複合体を、リン酸及び濃度依存的の両方で分断した。ＬＨＳｐＴもＰＢＤ−ｐ−Ｃｄｃ２５Ｃ相互作用を妨害するが、ＰＬＨＳｐＴより効果が非常に少ない。
【０６１０】
別の実験で、ＬＨＳｐＴＡが予め形成されたＰＢＤ−ｐ−Ｃｄｃ２５Ｃ複合体をＰＬＨＳｐＴとほぼ同じ効果で分断したのに対して、ＬＨＳｐＴ及びＨＳｐＴＡの両方はこの複合体を弱く分断した。これらの観察と一致して、対応する非リン酸化ペプチドではなく、ＰＬＨＳｐＴがインビボでＰｌｋ１−ｐ−Ｃｄｃ２５Ｃ相互作用を効率的に分断した。データはｐ−Ｔ７８ペプチドがＯＢＤとその結合標的の間の相互作用を、ＰＢＤに競合的に結合して妨害することを明らかにしている。
【０６１１】
実施例８：Ｐｌｋ１ ＰＢＤの結合特性。
ＰＬＨＳｐＴがＰｌｋ１ ＰＢＤに高い親和性及び特異性を示したので、Ｐｌｋ１、特にそのＮ末端に対する特異性に重要な相互作用を確認するためにＰＢＤに対するこのペプチドの結合特性を調べた。この目的を達成するために、リン酸ペプチドＰＬＨＳｐＴとの複合体（この後、ＰＢＤＰＬと称する）及びＰＰＨＳｐＴとの複合体（ＰＢＤＰＰ；相互作用のためのＮ末端残基の重要性を調べるため）中のＰｌｋ１ ＰＢＤの結晶構造をそれぞれ、１．７Å及び２．３Åの分解能で溶解した。更に、それぞれを別々に発現して精製したＰＢＤ（リン酸ペプチドなし）とキナーゼドメインを混合して複合体を結晶化する試みを行った。しかしながら、沈殿したキナーゼドメインとＰＢＤだけが回析品質の結晶に見出された。この新規な結晶形態は、非対称ユニット当たり、それぞれＡ鎖及びＢ鎖に対してＰＢＤＳ+Ｇ（硫酸エステル及びグリセロールを有する）及びＰＢＤＳ（硫酸エステルのみを有する）と称する２つのＰＢＤ分子を含有していた。ＰＢＤＰＬ、ＰＢＤＳ＋Ｇ、及びＰＢＤＳに対する陽性密度差の、水分子であると解釈できない、幾つかの強いピークがＦｏ−Ｆｃマップに見出された。これらのピークは硫酸エステル、グリセロール、及びエチレングリコールとしてモデル化した。ＰＢＤＰＬは、リン酸ペプチド、２つの水分子、及びＰＢＤで形成された空洞を占めている、リン酸ペプチド結合裂溝内にグリセロール分子を含んでいた。
【０６１２】
このグリセロール分子の３つの水酸基は、リン酸ペプチド及びＰＢＤの骨格カルボニル、ｐ−ｔｈｒのリン酸基、及び１つの水分子との水素結合に関わっていた。ＰＢＤＳ＋Ｇ及びＰＢＤＳは、通常はｐ−Ｔｈｒのリン酸エステルによって占められている領域内にある、同じポケットに硫酸アニオンを含有していた。リン酸エステルの代わりに硫酸エステルとしてこのポケット内の密度をモデル化する選択は、結晶化溶媒中に０．３Ｍの硫酸リチウムが存在したことに発していた。ＰＢＤＳ＋Ｇはリン酸ペプチド結合裂溝内にグリセロール分子を含有していた。このグリセロール分子は、通常リン酸ペプチドが裂溝中にあるときにＳｅｒによって占められている、１位に位置していた。ＰＢＤＳ内のＬ２ループはＰＢＤＳ＋Ｇ構造内に比べて殆どオーダーされない。対称に関連している分子との接触の分析は、Ｌ２領域において観察されたおーだーの程度のこの差は恐らく結晶充填に起因していることを示した。特に、ＰＢＤＳ＋Ｇ、ＰＢＤＳ、及びＰＢＤＰＬについての構造は、それらの間で著しく似ていて、グリセロール分子及び硫酸アニオンがＰＢＤ結合におけるＳｐＴジペプチドの役割を模倣することができるという可能性を高めている。
【０６１３】
実施例９：Ｐｌｋ１結合親和性及び特異性に関するｐ-Ｔ７８のＮ末端残基の役割。
ＰＬＨＳｐＴ−ＰＢＤ複合体の構造の精密な検討が、先に記載されたＳｐＴ依存性相互作用（Cheng, K.Y. et al., EMBO J. 22, 5757-5768. (2003); & Elia, A.E. et al. Cell 115, 83-95 (2003)）に加えて、Ｎ末端Ｐｒｏ残基が、２つの異なった相互接続した相互作用を結び付けることによるＰＢＤ結合に更なる安定性をもたらすのに不可欠であることを明らかにした。Ｎ末端Ｐｒｏのカルボニル酸素はＡｒｇ５１６のグアジニウム部分と極性接触にあった（すなわち、水素結合相互作用）のに対して、Ｐｒｏ残基のピロリジン環は、周囲のＴｒｐ４１４及びＰｈｅ５３５によって形成された浅い疎水性のポケット内に結合して相互作用を増強した。Ｐｒｏ結合ポケットとの後者の相互作用の重要性は、Ｎ末端カルボニル酸素からＬｅｕ−３残基を経るＡｒｇ５１６と極性接触が未だできる、ＬＨＳｐＴがＰＬＨＳｐＴより〜５０倍弱い結合を示したことによって明らかになった。
【０６１４】
ＰＢＤ結合におけるＮ末端Ｐｒｏ残基の重要な役割はＰＰＨＳｐＴを用いる実験で直接明らかになった。ここで、Ｐｒｏ−３残基はＰＬＨＳｐＴの配座に相対する配座中のリン酸ペプチドの骨格を閉じ込めるので、ＰＰＨＳｐＴの４位にあるＮ末端ＰｒｏをＰｒｏ結合ポケットから飛び出させて極性接触及び疎水性相互作用を引き起こすことを不可能にした。Ｐｒｏ結合ポケットからＮ末端Ｐｒｏの除去及びＡｒｇ５１６のグアニジニウム部分による極性接触の損失の効果は、Ｐｌｋ１に対するＰＰＨＳｐＴの結合親和性を劇的に減少させた（２０倍）ことに反映した。別の実験において、Ｐｒｏ−４からＭｅｔ−４への突然変異体である、ＭＬＨＳｐＴは大きく減少したＰｌｋ１ ＰＢＤ結合のレベルを示し、更にポケット内へ安定に結合しているＰｒｏ−４残基の重要性を強調した。これらの観察と一致して、ＰＭＱＳｐＴＰＬ中のＰｒｏ−４残基はＰｒｏ結合ポケット１３内に結合したのに対して、Ｎ末端Ｐｒｏ−４が存在しないときは、ＭＱＳｐＴＰＬ中のＮ末端非アセチル化（すなわち、遊離アミン）Ｍｅｔ３の側鎖がＰｒｏ結合ポケット内に広がっていた。
【０６１５】
Ｐｒｏ−４残基が存在していなくても、ＬＨＳｐＴＡも高レベルのＰｌｋ１ ＰＢＤ結合親和性及び特異性を示したことは特筆すべきことである。ＬＨＳｐＴＡ（ＰＢＤＬＨ）との複合体中のＰｌｋ１ ＰＢＤの結晶構造は、ＰＬＨＳｐＴのＬｅｕ−３と同様に、ＬＨＳｐＴＡのＮ末端Ｌｅｕ−３側鎖が分子間空洞内へ導かれていること及び周辺のＰＢＤ残基と相互作用関わっていると思われないことを明らかにした。ＬＨＳｐＴＡのＮ末端アセチルカルボニルもＡｒｇ５１６と極性接触しているので、ＰＬＨＳｐＴのＰｒｏ−４のカルボニル酸素によって結合した相互作用を置き換えている。Ｐｌｋ１とは違って、Ｐｌｋ２及びＰｌｋ３の両方はＰｌｋ１のＡｒｇ５１６に類似した位置にＬｙｓ残基（それぞれ、Ｌｙｓ６０７及びＬｙｓ５６８）を有していて、観察された極性接触はＰｌｋ１特異性であることを示唆している。ＰＬＨＳｐＴ及びＬＨＳｐＴＡの両方が高レベルのＰｌｋ１ ＰＢＤ結合特異性を示すので、Ｎ末端Ｌｅｕ−３のカルボニル酸素とＡｒｇ５１６のグアニジニウムの間の極性接触はＰｌｋ１ ＰＢＤ特異性の１つの決定要因であると思われる。更に、ＬＨＳｐＴＡナウのＮ末端Ｐｒｏの存しての結果としての、Ｐｒｏ−４残基のピロリジン環とＰｒｏ結合ポケットの間の相互作用の損失は、Ｃ末端Ａｌａ＋１によって作られたファン・デル・ワールス接触によって大部分が相殺されると思われるので、ＬＨＳｐＴＡがＰｌｋ１ ＰＢＤと比較的高い親和性結合を達成できたかを説明している
【０６１６】
前述のようなＬｅｕ−３のリン酸ペプチド骨格領域は別として、ＰＢＤＰＬ構造において観察された低い総電子密度（|Ｆｏ|−|Ｆｃ|）が、ロイシン側鎖が混乱してＰＢＤとの特異的相互作用と関われないことを示唆した。しかしながら、ＰＬＨＳｐＴのＬｅｕ−３のＡｌａへの突然変異はＰｌｋ１結合のレベルを有意に減少した（〜３倍）のに対して、Ｇｌｎへの突然変異はＰｌｋ１親和性を変えなかった（むしろ、Ｐｌｋ２結合のレベルを増大したと思われる）Ｌｅｕ−３の側鎖はその他のＰＢＤ残基と相互作用すると思われないので、Ｌｅｕ又はＧｌｎ残基のかさ高い側鎖が、Ｎ末端ＰｒｏがＰｒｏ欠ポケット内にうまく結合できるような方法で、リン酸ペプチド骨格の構造的柔軟性を制限することによってＰＢＤ結合に間接的に貢献することが可能である。
【０６１７】
Ｐｌｋ１特異性に対する２位にあるＨｉｓの重要性を次に試験した。結晶構造において、Ｈｉｓ−２残基の側鎖はＰＢＤ残基との結合に直接介在しなかった。際立って、Ｈｉｓ−２のＧｌｎへの突然変異はＰｌｋ２結合のレベルを実質的に増大した（２４倍）。熱量測定実験において、ＰＬＱＳｐＴ突然変異体のＰｌｋ２ ＰＢＤへの滴定は、親のＰＬＨＳｐｔに対する事実上の基礎熱と比較して約−１．１ｋｃａｌ／モルの相互作用の初期熱を生成して、突然変異ペプチドがＰｌｋ２ ＰＢＤとの結合拘束を介在するのに対して、親ペプチドはＰｌｋ１ ＰＢＤに対する選択性だけであることを示唆した。２位におけるＨｉｓのＮΔ１が１位におけるＳｅｒのカルボニル酸素との水素結合に関与したので、これらの２つの残基間の水素結合がＰｌｋ１特異性を与えるために重要であると憶測された。また、２位にＧｌｎ残基が存在することは強力なＰｌｋ２介在相互作用に対して重要であろう。
【０６１８】
まとめると、本明細書にもたらされた結果は、４及び３位のＮ末端Ｐｒｏ−ＬｅｕモチーフがＰｌｋ１ ＰＢＤとの高親和性且つ高特異性相互作用に極めて重要であるのに対して、２位のＨｉｓ残基はＰｌｋ１特異性の更なるレベルを保証するのに重要であることを明らかにした。これらの知見は一つには、Ｐｒｏ結合ポケットのためにＮ末端Ｍｅｔを有していて重大なＨｉｓ−２残基を欠失している、ＭＱＳｐＴＰＬが何故有意なレベルのＰｌｋ２親和性と共に低いＰｌｋ１特異性を示したかを説明している。更に、ＰＢＩＰ１中のＴ７８残基が通常見られるＰｒｏ残基の代わりのＡｌａに続いている。Ｐｒｏ介在性Ｃｄｃ２ではなく、Ｐｌｋ１がｐ−Ｔ７８エピトープを作出することに関与しているので、Ａｌａ＋１残基は非Ｐｒｏ介在キナーゼをＴ７８残基のリン酸化に向けるために重要な役割を果たすだろう。
【０６１９】
実施例１０：ｐ−Ｔ７８模倣タンパク質によるＰｌｋ１ ＰＢＤの機能の阻害。
増大している証拠が、標的を含有している様々なＳ−ｐ−Ｓ／ＴとのＰＢＤ依存性相互作用がＰｌｋ１の中心体、動原体、及び中央体への局在化に重要であることを示唆している。この概念と一致して、ＰＢＤ結合部位を刺激する主要キナーゼの１つである、Ｃｄｃ２の活性の急激な阻害は、前中期細胞においてＰｌｋ１の中心体及び動原体への局在化のレベルを劇的に減少した。この観察は、Ｐｌｋ１ ＰＢＤに対する最小化ｐ−Ｔ７８ペプチドの高い親和性及び特異性と共に、最小化ｐ−Ｔ７８がインビボにおいてＰｌｋ１の局在化を混乱してＰｌｋ１の機能を阻害できるか否かを試験するように促した。ＰＢＤプルダウンアッセイと一致して、それぞれの非リン酸化ペプチドではなく、ＰＬＨＳｐＴはインビトロにおいてｐ−Ｔ７８依存的にＰＢＤ相互作用を効率的に阻害したのに対して、ＬＨＳｐＴＡはやや低下したレベルでＰＢＤを阻害した。Ｔ７８残基のリン酸基はＰＢＤ結合のために厳密には必須であるが、これは細胞内のホスファターゼ活性によって脱リン酸化の影響を受けやすい。ホスファターゼに耐性のｐ−Ｔｈｒ模倣体である、（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−メチル−４−ホスホノ酪酸（Ｐｍａｂ）を保護形態で合成して、それをｐ−Ｔｈｒ残基の代わりにペプチド内に取り込んだ。ビーズに固定化したＰＬＨ−Ｐｍａｂは、それぞれのＰＬＨＳｐＴペプチドのように効果的に有糸分裂ＨｅＬａ細胞から、Ｐｌｋ１を沈殿したが、Ｐｌｋ２又はＰｌｋ３は沈殿しなかった（実験はホスファターゼ阻害剤の存在下で実施した）。
【０６２０】
結合がＰＢＤに依存的であったと想定したように、常に必要なＳｅｒ−１残基のＡｌａへの突然変異体｛ＰＬＨＡ−Ｐｍａｂ；要するにＰｍａｂ（Ｓ７７Ａ）｝はＰｌｋ１結合を破壊した。更に、それぞれのＰｍａｂ（Ｓ７７Ａ）突然変異体ではなく、ＰＬＨＳ−Ｐｍａｂペプチドはｐ−Ｔ７８依存性のＰｌｋ１ ＰＢＤ結合を効率的に阻害して、ＰＬＨ−Ｐｍａｂペプチドが、インビボでＰＢＤを試験するために適していることを示唆した。
【０６２１】
Ｓ期ブロックから放出されたＨｅＬａ細胞を用いる微量注入試験を実施してインビボにおけるＰｍａｂ含有模倣ペプチドの効果を調べて負に荷電したペプチドの低い膜透過性を克服した。非リン酸化Ｔ７８ペプチドと共に微量注入された細胞は正常に細胞周期をたどった。しかしながら、Ｐｌｋ１の機能が阻害されたかどうか予想したように、それぞれのＰｍａｂ（Ｓ７７Ａ）突然変異体ではなく、Ｐｍａｂペプチドは微量注入された群の〜６０％に劇的な有糸分裂停止を誘導した。停止群の〜２５％（ｎ＞１８０細胞）のＰＢＤ機能の喪失に関連した表現型のｒｅｍｉｎｉｓｃｅｎｔが染色体集合欠陥を示した。長期にわたる有糸分裂遮断に続くアポトーシス細胞死の増大によって停止細胞の総数がその後の時点で（１２及び１３時間時点）減少し始めた。これらの観察と一致して、それぞれのＰｍａｂ（Ｓ７７Ａ）又は非リン酸化Ｔ７８ペプチドではなく、Ｐｍａｂペプチドは、有糸分裂中心体及び動原体両方にＰＬｋ１が局在化することを阻害して、Ｐｌｋ１の蛍光シグナルをＣｄＫ１阻害剤である、ＢＭＩ−１０２６の処理後に観察されたものと同じレベルまで減少した。２回目の実験において、別のタイプのｐ−Ｔ７８模倣ペプチドである、６ｍｅｒのＦ２Ｐｍａｂ含有ＰＬＨＳ−Ｆ２Ｐｍａｂ−Ａを合成して（５ｍｅｒのＰＬＨＳ−Ｆ２Ｐｍａｂ模倣ペプチドの合成はＦ２Ｐｍａｂの樹脂への不十分なカップリングのために十分な量を生成しなかった）、ＨｅＬａ細胞におけるその効果を調べた。
【０６２２】
恐らくジフルオライドの強い電気陰性度の結果としてＰＬＨ−Ｐｍａｂペプチドのように効果的ではないが、それぞれのＦ２Ｐｍａｂ（Ｓ７７Ａ）突然変異体ではなく、ＰＬＨＳ−Ｆ２Ｐｍａｂ−Ａは有意にＰｌｋ１を沈殿して、最終的に有糸分裂停止及びアポトーシス細胞死を導く適正なＰｌｋ１局在化及び染色体集合の異常を誘発した。まとめると、ｐ−Ｔ７８模倣ペプチドによるＰＢＤの阻害はＰｌｋ１の細胞内局在化及び有糸分裂機能を妨げるのに十分であるということを強く示唆している。
【０６２３】
実施例１１：オキシムによる固相後誘導体化のポロ−ボックスドメイン結合ペプチドの最適化への適用。
Ｐｌｋ１は、細胞内局在化及び基質認識に必須である、リン酸ペプチドに結合しているＰＢＤを有している。ＰＢＤはＰｌｋに特有であるので、これらはＰｌｋ１機能を選択的に阻害するために理想的な標的である。多様なＰＢＤ結合リン酸ペプチドを試験して、高い親和性（Ｋｄ＝０．４５μＭ）でＰｌｋ１ ＰＢＤと特異的に相互作用するが、２つの近接したＰｌｋ２及びＰｌｋ３とは相互作用しない、５ｍｅｒのリン酸ペプチド「ＰＬＨＳｐＴ」を同定した。
【０６２４】
ペプトイド−ペプチド ハイブリッド ライブラリーのポロ−ボックスドメイン結合ペプチドの最適化への適用
【０６２５】
構造研究がここにＰＢＤタンパク質に結合している５ｍｅｒのＰＬＨＳｐＴペプチドを提供する。ＰＬＨＳｐＴ・ＰＢＤ複合体において、Ｓｅｒ及びｐＴｈｒ残基は重要なタンパク質接触をもたらす。しかしながら、Ｎ末端Ｐｒｏ残基は、２つの芳香族残基Ｔｒｐ４１４及びＰｈｅ５３５によって形成された疎水性ポケット内に結合してタンパク質との更なる相互作用をもたらす。重要なことは、このＰｒｏがＰｌｋ２及びＰｌｋ３と比べてＰｌｋ１に対するタンパク質の結合特異性に不可欠であることである。最近のＥＩＲ固相でＮＳＧ含有ライブラリーの合成を「サブモノマー手法」で達成し、ここで、ペプチド（８）のＮ末端Ｌｅｕ残基を最初にブロモアセチル化して（９）を得て、次いで各種のアミンと反応させて、ペプトイド−ペプチドハイブリッド含有する対応するＮＳＧを得た。アセチル化して最終生成物（１１）を得た。
【０６２６】
ハイブリッド（１１Ｄ）及び（１１Ｅ）は結合親和性を劇的に減少し、これは陽性及び陰性の両方の荷電はこの位置では許容されないことを示した。元の５ｍｅｒと比べて、ハイブリッド（１１Ａ）、（１１Ｃ）及び（１１Ｊ）（表示した置換基）はやや高い結合親和性を示したのに対して、（１１Ｆ）及び１１Ｉ）は同様な親和性を示して、残りの類縁体は弱い結合剤であった。実験は、Ｐｒｏ位の更なるＮＳＧ残基を調べるためにそして他の重要な残基と置き換えるＮＳＧ残基を調べるのにこの手法を適用するために進行中である。
【０６２７】
実施例１２：単一荷電リン酸エステル及び環状ペプチド
単一荷電のリン酸ペプチド及び環状ペプチドを作成してＰｌｋ１との特異的結合を試験した。
【０６２８】
表示したペプチドによるＰＢＤ結合阻害の効果を定量的に確認するために、ＥＬＩＳＡによる阻害アッセイを実施した。固定化したビオチン化ｐ−Ｔ７８に結合したＨＡ−ＥＧＦＰ−Ｐｌｋ１のレベルを様々な量の競合ペプチドの存在下で定量した。単一電荷リン酸エステルＦＡ５０８のマイナー異性体はＷＴ ５ｍｅｒと同等の結合有効性を有していた。環状ペプチドＦＡ５０７はＦＡ５０９より良く結合した。
【０６２９】
実施例１３：Ｐｍａｂ及びＦ２Ｐｍａｂ含有ペプチドのＰＢＤ依存性相互作用を阻害する能力。
【０６３０】
【化１２２】
2014511877.tif 000161
【０６３１】
各種濃度の合成ペプチドの存在下でＰｌｋ１ ＰＢＤ結合阻害アッセイを実施した。「ＰＬＨ−Ｐｍａｂ」（２３）は、Ｐｌｋ１ ＰＢＤのビオチン化９ｍｅｒのｐ−Ｔ７８［ビオチン−Ｃｙｓ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−ＤＰＰＬＨＳｐＴＡＩ−ＮＨ２］との相互作用を、野生型ペプチド、「ＰＬＨＳｐＴ」（２２）のような有効性で阻害することが見出された。対照的に、ペプチド、「ＰＬＨＳ−Ｆ２Ｐｍａｂ−Ａ」（２５）はこの相互作用をいくらか減少したレベルで阻害する。重要な（ｐＴｈｒ−１）Ｓｅｒ残基をアラニンと置き換えること（Ｓ５７７Ａ突然変異体と同じ）はＰＢＤ結合親和性を有意に減少させることが知られている。非リン酸化対照ペプチド、ＰＬＨＳＴ（２１）及びＰｍａｂ及びＦ２Ｐｍａｂ含有ペプチドのＳ７７Ａ突然変異体（それぞれ、２４及び２６）は１０倍高いモル濃度においても、ＰＢＤ結合を阻害しなかった。固定化したビオチン化９ｍｅｒのｐ−Ｔ７８ペプチド［ビオチン−Ｃｙｓ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−ＤＰＰＬＨＳｐＴＡＩ−ＮＨ２］及びＨＡ−ＥＧＦＰ−Ｐｌｋ１を発現している細胞溶解物を用いて、ＥＬＩＳＡに基づくＰＢＤ結合阻害アッセイを実行した。ＰＢＤがＰｌｋ１の細胞内局在化及び有糸分裂機能に需要な役割を果たすことを証拠が示唆している。ＰＢＤのドミナントネガティブ形態を発現によるＰＢＤ依存性のＰｌｋ１機能の破壊は最終的にアポトーシス細胞死を誘導する有糸分裂停止をもたらす。Ｐｌｋ１ ＰＢＤを阻害することの効果を調べるために、ペプチド（２１）、（２３）及び（２４）をＨｅＬａ細胞内に導入した。負に荷電したＰｍａｂ含有ペプチドの低い膜透過性を克服するために、微量注入を採用した。ＨｅＬａを二重チミジン処理によってＧ１／Ｓ境界に止めて新鮮な培地に放出した。放出の６時間後に、３ｍＭのペプチド（２１）、（２３）又は（２４）と３０ｎｇ／μＬのｐＥＧＦＰ−Ｃ１ベクターの混合物を細胞に微量注入し、次いでＧ１／Ｓ放出の１５時間後に細胞を撮影した。一緒に注入したＥＧＦＰプラスミド微量注入された細胞を同定するための便利なマーカーを提供した。非リン酸化ペプチド（２１）又はそれぞれのＳ７７Ａ突然変異多（２４）ではなく、Ｐｍａｂ含有ペプチド（２３）が有糸分裂停止、集合、注入されたものの約５０％に形態変化、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）陽性をもたらした（図１６Ｂ）。これらの結果は、Ｐｍａｂ含有ｐ−Ｔ７８模倣ペプチドによるＰＢＤ機能の阻害は、Ｐｌｋ１の有糸分裂機能を妨げるのに十分であることを明らかにしている。
【０６３２】
実施例１４：プロリン−オキシム及びプロリン−エーテル含有ＰＢＤ結合ペプチド。
プロリンオキシムを製造した。一連の（４ａ）〜（４ｐ）［（４ａ）〜（４ｊ）］ペプチドのうち、（４ｂ）、（４ｉ）及び（４ｊ）が最も高いＰＢＤ結合親和性をもたらした。ペプチド（４ｂ）（すなわち、４ユニットの炭素鎖長）が最適なリンカー長を示した。（４ｂ）を更に最適化するために、「メチルスキャン」を実施した［（４ｋ）〜（４ｍ）］。ここではメチル基をフェニル環上に置換した。オルト−、パラ−位のメチル基［それぞれ、（４ｋ）及び（４ｍ）］結合親和性に対して殆ど効果を有してなかった。しかしながら、メタ−メチル置換（４ｌ）は僅かに結合親和性を増大した。更に３つのメタ−置換類縁体［（４ｎ）〜（４ｐ）］を製造した。全てが４ｂと同様な結合有効性をもたらし；３−メトキシ（４ｎ）は結合有効性を僅かに増大して；３−フェニル（４ｐ）は結合有効性を僅かに減少した。
【０６３３】
実施例１６：プロリンのアミドオキシ及びエーテル誘導体。
（４ｂ）の更なる改変を単純化するために、オキシム結合をアミドオキシ又はエーテル官能基で置き換えた。アミドオキシ類縁体（６）を製造するために、従来のＢｏｃの代わりにＭＴＴをアミノオキシ保護基として用いた。ＭＴＴ基はＤＣＭ中１％のＴＦＡで開裂できる。アミノ脱保護に続いて、ヒドロ桂皮酸を用いてアミド化を実施した。残念ながら、アミド類縁体（６）は結合親和性の有意な減少を示した。以前に誘導体化されたプロリン類縁体を用いて、エーテル類縁体（７）も製造した。意外なことに、（７）の結合有効性は（４ｂ）と比べて増大した。従って、（５ｂ）をそのエーテル型（８）に変換した。これも高い結合親和性をもたらした。（７）の非リン酸形態［ペプチド（１）］及び（７）と（８）のＳ／Ａ突然変異体［ペプチド（９）及び（１１）］も製造した。これらは結合親和性を１００倍以上減少したか、あるいは親和性が無いことを示した。
【０６３４】
【化１２３】
2014511877.tif 000162
【０６３５】
実施例１７：更なるペプチド−ペプトイドハイブリッドの生物学的評価
「サブモノマー手法」（上で検討した）によってＮＳＧ含有ライブラリーの合成を実施した。
【０６３６】
これらのペプチド−ペプトイドハイブリッドの５つの異なる濃度の存在下でＥＬＩＳＡに基づくＰｌｋ１ ＰＢＤ結合阻害アッセイを行った。ハイブリッド（４ａ）及び（４ｅ）劇的に結合親和性を減少し、これは正電荷及び負電荷の両方がこの位置では許容されないことをしめした。ＷＴの５ｍｅｒ（Ａｃ−ＰＬＨＳｐＴ−ＮＨ２）と比べて、ハイブリッド（４ａ）、（４ｃ）及び（４ｊ）（下図に示したような置換基）が僅かに高い結合親和性を示したのに対して、（１１ｆ）及び（１１ｉ）は同様な親和性を示して、残りの類縁体は弱い結合物質であった。
【０６３７】
【化１２４】
2014511877.tif 000163
【０６３８】
非荷電の疎水基が好ましいのに対して、嵩高すぎる基は結合親和性を下げるという先の結果に基づいて、次第に長さが増大する一連のリンカーが結合したフェニル基を更に検討した。意外にも、この一連のペプトイド−ペプチドハイブリッド［（４ｆ）及び（４ｍ）〜（４ｒ）］の結合有効性はリンカーの長さに従って増大して、ＥＬＩＳＡアッセイ結果によると（４ｑ）及び（４ｒ）が最も高い結合有効性をもたらした。（４ｑ）のＳｅｒからＡｌａへの突然変異体である、ペプチド（５）は活性ではなかった。
【０６３９】
【化１２５】
2014511877.tif 000164
【０６４０】
（４ｑ）と同じリンカー長のテトラペプチド（６）を製造し、これは（４ｑ）と同じ結合有効性をもたらした。（６）中の長いリンカーの柔軟性を部分的に制限してクリック化学を企てた。アルキンを含有しているペプチド（７）を樹脂上で製造し、続いてＣｕ（Ｉ）触媒による１，４−ヒュスゲン環化をアジドで行った後、樹脂を開裂して（８）及び（９）を得た。従来の加熱条件（ＤＭＦ中１００℃、２日間）で１，４及び１，５−トリアゾール生成物を得た。従って類縁体（１０）及び（１１）をもたらした。しかしこれら全てのペプチド［（８）〜（１１）］は減少した結合有効性をもたらした。
【０６４１】
実施例１８：Ｐｌｋ１特異性試験
ペプトイド−ペプチドハイブリッドのペプトイド阻害剤への更なる変換を行って全てがペプトイドであるリガンドを生成した。天然アミノ酸を用いることによって体系的なペプチドライブラリーを構築して文献中で評価し、これは他の４つの残基に好ましい側鎖があるとの情報をもたらした。Ｐｒｏ位に最良のＮＳＧ（４ｑ）を保持しながら、Ｌｅｕの位置を更に検討することを最初に試みた。それらの全てが（４ｑ）と比べて減少した結合有効性をもたらしたが、意外にも、Ｌｅｕ模倣体（１６ｓ）のＮＳＧとのハイブリッドが最も優れた化合物である。
【０６４２】
【化１２６】
2014511877.tif 000165
【０６４３】
（１６ｓ）に基づいてペプトイド−ペプチドハイブリッドリガンドを更に開発して、３つのハイブリッドを製造したが、それらの全て［（１７ｆ）〜（ｆｕ）］は更に減少した結合を示した。
【０６４４】
【化１２７】
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【０６４５】
実施例１９：リン酸モノエステルを含有しているペプチド及びアリールアルキルヒスチジン含有ＰＢＤ結合ペプチド
ミツノブ反応に基づく構造ベースの合理的設計方法を用いてジ−エステルを作成した。この手法は、これに限定されないが、高効率のライブラリー構築、ホスファターゼに対する抵抗、及び増大した細胞透過性を包含する多数の利便性を提供する。
【０６４６】
樹脂上のペプチドの後改変が、同じ分子量を有し、１：４の比で、副生成物（３）が主要生成物（４）より一貫してより高い有効性を有している、２つの生成物（３）及び（４）をもたらした。
【０６４７】
【化１２８】
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【０６４８】
一回目のアルコールライブラリーにおいて、ジ−オール、炭素鎖、カルボン酸、アミン、及び複素環を含む、多数の官能基を試験した。疎水性の基Ｐｈ−（ＣＨ２）４が副生成物（３）に対して最も高い結合親和性をもたらすことが確認された。（４ｈ）は（３ｈ）より非常に低い活性であり、ＷＴよりも低い活性であった。
【０６４９】
【化１２９】
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【０６５０】
二回目の集中的アルコールライブラリリーにおいて、リンカーの長さを体系的に試験して、ＥＬＩＳＡアッセイの結果に基づいてアルコールｌが最もよくヒットしたことが分かった。
【０６５１】
【化１３０】
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【０６５２】
ペプチド３ｌと４ｌのＳ／Ａ突然変異体も製造してＥＬＩＳＡで確認した。（５）は（３ｌ）と比べて１０倍低い結合をもたらして、（６）は活性を何も示さなかった。
【０６５３】
【化１３１】
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【０６５４】
ＰＢＤタンパク質に結合している３ｌのＸ線結晶構造を解明した。この構造情報はリガンド設計に貴重な情報を提供する。
【０６５５】
実施例２０−ＨＩＶ出芽阻害に対するＨＩＶ−Ｔａｔ標識ＰＥＧ化ペプチドの評価
報告されているように、ＨＩＶ Ｇａｇのｐ６領域及びＴＳＧ１０１のＵＥＶドメインは両方ともＧａｇ−ＴＳＧ１０１相互作用ために必須且つ十分である。Ｇａｇのｐ６領域及びＴＳＧ１０１のＵＥＶドメインを発現するＤＮＡ断片をＲＴＨＳプラスミドに導入してＥ．ｃｏｌｉ中のこれらの構築物をクローンする（Tavassoli et al., ACS Chem. Bio., 3, 12, 2008, 757-764 を参照されたい）。遺伝子断片の発現はイソプロピル １３−Ｄ−チオガラクトシド（ＩＰＴＧ）誘導プロモーターの制御下にある（Tavassoli et al も参照されたい）。ｐ６−Ｐ２２．４３４及びＵＥＡ−４３４レプレッサー融合タンパク質をコードするカセットをＥ．ｃｏｌｉレポーター株の染色体内に組み込む（Tavassoli et al；及びTavassoli et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 44, 2005, 2760-2763 も参照されたい）。ｐ６−ＵＥＶが染色体に組み込まれると、逆ツーハイブリッドシステム、ｏ−ニトロフェニル １３−ガラクトシド（ＯＮＰＧ）アッセイを実施して、ＬａｃＺ遺伝子産物（１３−ガラクトシダーゼ）のＩＰＴＧ依存性抑制を測定する。増大した融合タンパク質のＩＰＴＧ依存性発現は増大した１３−ガラクトシダーゼ活性をもたらし、逆ツーハイブリッドシステムにおけるＵＥＶとｐ６の相互作用を示す（Tavassoli et al., ACS Chem. Bio., 3, 12, 2008, 757-764 を参照されたい）。
【０６５６】
Ｇａｇ−ＶＬＰ（ウィルス様粒子）アッセイを行って、ＨＩＶウィルス出芽に対する本発明のＰＥＧ化ペプチドの効果を観察する。ＨＩＶ ＴＡＴ由来の短いペプチド配列をＰＥＧ化ペプチド（上記合成スキームを参照されたい）に付加した。
ＧＡＧ ＶＬＰアッセイ：ＧＦＰで標識した野生型ＧＡＧ発現構築物（L. Hermida-Matsumoto et al. J. Virol, 74, 2000, 8670-8679 を参照されたい）又はＧＦＰで標識したＰＴＡＰマイナス変異体ＧＡＧ（ＰＴＡＰをＬＩＲＬに変えた）構築物（J.E. Garrus et al. Cell, 107, 2001, 55-65 を参照されたい）を２９３Ｔ細胞にトランスフェクトする。トランスフェクションの開始から４８時間後に、培養上澄液を採取して０．４５ｐｍ孔径のフィルターで濾過する。培養上澄液中のウィルス様粒子を、Ｂｅｃｋｍａｎ ＳＷ５０．１Ｔｉローターを用いて４５，０００ｒｐｍで、９０分間４℃で２０％スクロースのクッションを介して超遠心分離によって単離する。ペレット中のウィルス粒子をＳＤＳサンプル負荷緩衝液に再懸濁してＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウェスタンブロットに付す。
【０６５７】
実施例２１．ＥＬＩＳＡに基づくＰＢＤ結合阻害アッセイ。
実質的に記載されているように（Nat. Struct. Mol. BioI. 16(8):876-882; Nat Chern
BioI 7:595-601）ペプチドプルダウンアッセイを実施した。最初にビオチン化ｐ−Ｔ７８ペプチドをＩＸ含有溶液（KPL Inc., Gaithersburg, MD）で希釈して最終濃度を０．３μＭにし、次いで得られた溶液の１００μＬを９６ウェルのストレプタビンでコーティングしたプレート（Nalgene Nunc, Rochester, NY）上に固定した。ウェルをＰＢＳと０．０５％のツイーン２０（ＰＢＳＴ）で１回洗浄して、２００μＬのＰＢＳプラスＢＳＡ（遮断緩衝液）と１時間培養して非特異的結合を防いだ。ＨＡ−ＥＧＦＰ−Ｐｌｋ１を発現している有糸分裂２９３Ａ溶解物をＴＢＳＮ緩衝液中で調製し（１００μｇの緩衝液中〜６０μｇの総溶解物）、標示された量のペプチドリガンドと混合して、ビオチン化Ｐ−Ｔ７８ペプチドでコーティングしたＥＬＩＳＡのウェルに直ちに加え、次いで絶えず振盪して２５℃で１時間培養した。培養に続いて、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳＴで４回洗浄した。結合したＨＡ−ＥＧＦＰＰｌｋ１を検出するために、遮断緩衝液中濃度０．５μｇ／ｍＬの抗ＨＡ抗体１００μＬ／ウェルで２時間プレートをプローブし、次いで５回洗浄した。遮断緩衝液で１：１，０００に希釈したＨＲＰ共役二次抗体（GE Healthcare, Piscataway, NJ）１００μＬ／ウェルで１時間プレートを更にプローブした。プレートをＰＢＳＴで５回洗浄して、１００μＬ／ウェルの３，３'，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質溶液（Sigma, St. Louis, MO）と所望の吸収に到達するまで培養した。１００μＬ／ウェルの停止溶液（Cell Signaling Technology, Danvers, MA）で反応を停止して、ＥＬＩＳＡプレートリーダー（Molecular Devices, Sunnyvale, CA）を用いて４５０ｎｍで光学密度を測定した。図１及び図２を参照されたい。
【０６５８】
本願を通して引用された全ての参照の内容は、参照によりそれらの全てが本明細書に明確に取り込まれている。特に定義されていない限り、本明細書で用いられている全ての技術及び科学用語は当業者に通常知られている意味に従っている。
【０６５９】
本明細書に記載されている特定の実施態様の均等物を当業者は認識するか、或いは僅かに通常の実験を用いて確かめることができるだろう。このような均等物は以下の特許請求の範囲に包含されることが意図されている。
【図１ａ】
2014511877.tif 000267
【図１ｂ】
2014511877.tif 000268
【図２ａ】
2014511877.tif 000269
【図２ｂ】
2014511877.tif 000270
【図２ｃ】
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【図３−１】
2014511877.tif 000272
【図３−２】
2014511877.tif 000273
【図３−３】
2014511877.tif 000274
【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図４−４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ−１】
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【図１０Ａ−２】
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【図１０Ａ−３】
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【図１０Ａ−４】
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【図１０Ａ−５】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ−１】
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【図１１Ａ−２】
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【図１１Ａ−３】
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【図１１Ａ−４】
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【図１１Ａ−５】
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【図１１Ａ−６】
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【図１１Ａ−７】
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【図１１Ａ−８】
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【図１１Ａ−９】
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【図１１Ｂ】
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【国際調査報告】
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