(57)【要約】  本発明は、ｍＴＯＲに関連する宿主細胞の酵素のモジュレーターを使用してウイルス感染を治療又は予防する方法を提供する。また、本発明は、ｍＴＯＲに関連する宿主細胞の酵素のモジュレーター及び小胞体ストレス応答のモジュレーターを使用してウイルス感染を治療又は予防する方法も提供する。【選択図】図１
2014505076.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類におけるウイルス感染を治療又は予防する方法であり、治療有効量の化合物、又はそのプロドラッグ、又は当該化合物の医薬として許容される塩若しくはエステル、又はそのプロドラッグを、当該方法の適用を必要とする哺乳類の対象に投与することを含み、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であり、当該化合物が、式ＶＩＩＩ
【化１】
2014505076.tif 000030
［式中、
ＸはＯ又はＳであり；
Ｒ１  は、Ｈ，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  −ＣＲ１４Ｒ１５−ＮＲ１６Ｒ１７，  −ＣＲ１４Ｒ１５−ＮＨＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（Ｒ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＯＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＳ（Ｏ）２Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＳ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（ＯＲ１０）Ｒ１１Ｒ１４，  −Ｃ（Ｒ１４）＝ＣＲ１８Ｒ１９，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１２ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１２（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＯ２，  −ＮＨＲ１２，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −ＮＲ１２ＳＯ２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  Ｃ２−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ１２アルキル−Ｒ１０，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，又はＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから選択され；
Ｒ２  は、Ｈ，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（−Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，及びＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから選択され；
Ｒ３は、Ｃ２−Ｃ５ヘテロシクリル，  Ｃ２−Ｃ５ヘテロアリール，融合二環式Ｃ４−Ｃ２０ヘテロシクリル  又は融合二環式Ｃ３−Ｃ２０ヘテロアリールであり、それらはそれぞれ置換されておらず、又は任意で置換され；
Ｒ１０，  Ｒ１１及びＲ１２は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，又はＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールであり、又は
Ｒ１０とＲ１１は、それらに結合している窒素原子と共に、任意で、部分的に不飽和の、又は完全に不飽和のＣ３−Ｃ２０複素環を形成し、当該環は、任意でＮ，  Ｏ又はＳから選択される１つ以上の追加の環原子を有し、当該複素環は、オキソ，  （ＣＨ２）ｍＯＲ１０ＮＲ１０Ｒ１１，  ＣＦ３，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＳＯ２Ｒ１０，  Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１０，  ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１１，  ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１，  Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール及びＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから独立して選択される１つ以上の基で任意で置換され；
Ｒ１４及びＲ１５は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  ｏｒ  −（ＣＨ２）ｎ−アリールから選択され、又は
Ｒ１４及びＲ１５は、それらに結合している原子と共に、飽和した、又は部分的に不飽和のＣ３−Ｃ１２炭素環を形成し；
Ｒ１６及びＲ１７は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル、又はＣ６−Ｃ２０アリールから選択され、
Ｒ１８及びＲ１９は、それらに結合している炭素原子と共に、Ｃ３−Ｃ２０複素環を形成し、
ここで、上記アルキル，アルケニル，アルキニル，カルボシクリル，ヘテロシクリル，アリール及びヘテロアリールは、  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，オキソ，  Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＝ＮＲ１２，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  任意に置換されたＣ１−Ｃ１２アルキル，  任意に置換された  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ８アルキニル，  任意に置換されたＣ３−Ｃ１２カルボシクリル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  任意に置換されたＣ６−Ｃ２０アリール，  任意に置換されたＣ１−Ｃ２０ヘテロアリール，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  及び（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔＮＲ１０Ｒ１１から独立して選択された１つ以上の基で任意に置換され；
Ｙは、Ｏ，  Ｓ，又はＮＲ１２であり；
ｍ  は、０，  １，  ２，  ３，  ４，  ５又は６であり；
ｎは、１，  ２，  ３，  ４，  ５又は６であり；そして
ｔは、１，  ２，  ３，  ４，  ５又は６であり、ここでアルキル，アルケニル，アルキニル，カルボシクリル，ヘテロシクリル，アリール，ヘテロアリール，融合二環式ヘテロシクリル及び融合二環式ヘテロアリールである前記置換基が、Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，  −ＮＨ２，オキソ，  Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＝ＮＲ１２，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  任意に置換されたＣ１−Ｃ１２アルキル，  任意に置換された  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ８アルキニル，  任意に置換されたＣ３−Ｃ１２カルボシクリル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  任意に置換されたＣ６−Ｃ２０アリール，  任意に置換されたＣ１−Ｃ２０ヘテロアリール，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  ａｎｄ  （ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１０Ｒ１１からなる群から選択される１つ以上の置換基で任意で置換される］
の化合物である、当該方法。
【請求項２】
前記式ＶＩＩＩの化合物が、ＧＮＥ−４９３である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記式ＶＩＩＩの化合物が、ＧＮＥ−０９４１である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記化合物がｍＴＯＲＣ１の阻害剤である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記化合物がｍＴＯＲＣ２の阻害剤である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記ウイルス感染がヘルペスウイルスによるものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ａ、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ｂ、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８及びオナガザル（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１からなる群から選択されるヘルペスウイルスによるものである、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
小胞体ストレス応答（ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）の阻害剤を哺乳類対象に投与することを更に含む、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、４−フェニルブチレートである、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、タウロウルソデオキシコール酸である、請求項８記載の方法。
【請求項１１】
（ｉ）化合物又はそのプロドラッグ、又は当該化合物の医薬として許容される塩若しくはエステル、又はそのプロドラッグ、及び（ｉｉ）医薬として許容される担体を含有する、治療有効量の組成物を含有する、ウイルス感染を治療又は予防するための医薬組成物であり、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であり、当該化合物が、式ＶＩＩＩ
【化２】
2014505076.tif 000031
［式中、
ＸはＯ又はＳであり；
Ｒ１  は、Ｈ，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  −ＣＲ１４Ｒ１５−ＮＲ１６Ｒ１７，  −ＣＲ１４Ｒ１５−ＮＨＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（Ｒ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＯＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＳ（Ｏ）２Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＳ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（ＯＲ１０）Ｒ１１Ｒ１４，  −Ｃ（Ｒ１４）＝ＣＲ１８Ｒ１９，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１２ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１２（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＯ２，  −ＮＨＲ１２，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −ＮＲ１２ＳＯ２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  Ｃ２−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ１２アルキル−Ｒ１０，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，又はＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから選択され；
Ｒ２  は、Ｈ，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（−Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，及びＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから選択され；
Ｒ３は、Ｃ２−Ｃ５ヘテロシクリル，  Ｃ２−Ｃ５ヘテロアリール，融合二環式Ｃ４−Ｃ２０ヘテロシクリル  又は融合二環式Ｃ３−Ｃ２０ヘテロアリールであり、それらはそれぞれ置換されておらず、又は任意で置換され；
Ｒ１０，  Ｒ１１及びＲ１２は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，又はＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールであり、又は
Ｒ１０とＲ１１は、それらに結合している窒素原子と共に、任意で、部分的に不飽和の、又は完全に不飽和のＣ３−Ｃ２０複素環を形成し、当該環は、任意でＮ，  Ｏ又はＳから選択される１つ以上の追加の環原子を有し、当該複素環は、オキソ，  （ＣＨ２）ｍＯＲ１０ＮＲ１０Ｒ１１，  ＣＦ３，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＳＯ２Ｒ１０，  Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１０，  ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１１，  ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１，  Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール及びＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから独立して選択される１つ以上の基で任意で置換され；
Ｒ１４及びＲ１５は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  ｏｒ  −（ＣＨ２）ｎ−アリールから選択され、又は
Ｒ１４及びＲ１５は、それらに結合している原子と共に、飽和した、又は部分的に不飽和のＣ３−Ｃ１２炭素環を形成し；
Ｒ１６及びＲ１７は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル、又はＣ６−Ｃ２０アリールから選択され、
Ｒ１８及びＲ１９は、それらに結合している炭素原子と共に、Ｃ３−Ｃ２０複素環を形成し、
ここで、上記アルキル，アルケニル，アルキニル，カルボシクリル，ヘテロシクリル，アリール及びヘテロアリールは、  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，オキソ，  Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＝ＮＲ１２，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  任意に置換されたＣ１−Ｃ１２アルキル，  任意に置換された  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ８アルキニル，  任意に置換されたＣ３−Ｃ１２カルボシクリル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  任意に置換されたＣ６−Ｃ２０アリール，  任意に置換されたＣ１−Ｃ２０ヘテロアリール，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  及び（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔＮＲ１０Ｒ１１から独立して選択された１つ以上の基で任意に置換され；
Ｙは、Ｏ，  Ｓ，又はＮＲ１２であり；
ｍ  は、０，  １，  ２，  ３，  ４，  ５又は６であり；
ｎは、１，  ２，  ３，  ４，  ５又は６であり；そして
ｔは、１，  ２，  ３，  ４，  ５又は６であり、
ここで、アルキル，アルケニル，アルキニル，カルボシクリル，ヘテロシクリル，アリール，ヘテロアリール，融合二環式ヘテロシクリル及び融合二環式ヘテロアリールである前記置換基が、Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，  −ＮＨ２，オキソ，  Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＝ＮＲ１２，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  任意に置換されたＣ１−Ｃ１２アルキル，  任意に置換された  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ８アルキニル，  任意に置換されたＣ３−Ｃ１２カルボシクリル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  任意に置換されたＣ６−Ｃ２０アリール，  任意に置換されたＣ１−Ｃ２０ヘテロアリール，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  ａｎｄ  （ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１０Ｒ１１からなる群から選択される１つ以上の置換基で任意で置換される］
の化合物である、当該医薬組成物。
【請求項１２】
前記式ＶＩＩＩの化合物が、ＧＮＥ−４９３である、請求項１１記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記式ＶＩＩＩの化合物が、ＧＮＥ−０９４１である、請求項１１記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記化合物がｍＴＯＲＣ１の阻害剤である、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記化合物がｍＴＯＲＣ２の阻害剤である、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記ウイルス感染がヘルペスウイルスによるものである、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ａ、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ｂ、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８及びオナガザルヘルペスウイルス１からなる群から選択されるヘルペスウイルスによるものである、請求項１１〜１３のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項１８】
小胞体ストレス応答の阻害剤を哺乳類対象に投与することを更に含む、請求項１１〜１３のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、４−フェニルブチレートである、請求項１８記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、タウロウルソデオキシコール酸である、請求項１８記載の医薬組成物。
【請求項２１】
ウイルス感染を治療又は予防するための医薬の生産における、化合物、又はそのプロドラッグ、又は当該化合物の医薬として許容される塩、又はそのプロドラッグの使用であり、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であり、当該化合物が、式ＶＩＩＩ
【化３】
2014505076.tif 000032
［式中、
ＸはＯ又はＳであり；
Ｒ１  は、Ｈ，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  −ＣＲ１４Ｒ１５−ＮＲ１６Ｒ１７，  −ＣＲ１４Ｒ１５−ＮＨＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（Ｒ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＯＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＳ（Ｏ）２Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＳ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（ＯＲ１０）Ｒ１１Ｒ１４，  −Ｃ（Ｒ１４）＝ＣＲ１８Ｒ１９，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１２ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１２（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＯ２，  −ＮＨＲ１２，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −ＮＲ１２ＳＯ２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  Ｃ２−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ１２アルキル−Ｒ１０，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，又はＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから選択され；
Ｒ２  は、Ｈ，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（−Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，及びＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから選択され；
Ｒ３は、Ｃ２−Ｃ５ヘテロシクリル，  Ｃ２−Ｃ５ヘテロアリール，融合二環式Ｃ４−Ｃ２０ヘテロシクリル  又は融合二環式Ｃ３−Ｃ２０ヘテロアリールであり、それらはそれぞれ置換されておらず、又は任意で置換され；
Ｒ１０，  Ｒ１１及びＲ１２は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，又はＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールであり、又は
Ｒ１０とＲ１１は、それらに結合している窒素原子と共に、任意で、部分的に不飽和の、又は完全に不飽和のＣ３−Ｃ２０複素環を形成し、当該環は、任意でＮ，  Ｏ又はＳから選択される１つ以上の追加の環原子を有し、当該複素環は、オキソ，  （ＣＨ２）ｍＯＲ１０ＮＲ１０Ｒ１１，  ＣＦ３，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＳＯ２Ｒ１０，  Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１０，  ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１１，  ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１，  Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール及びＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから独立して選択される１つ以上の基で任意で置換され；
Ｒ１４及びＲ１５は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  ｏｒ  −（ＣＨ２）ｎ−アリールから選択され、又は
Ｒ１４及びＲ１５は、それらに結合している原子と共に、飽和した、又は部分的に不飽和のＣ３−Ｃ１２炭素環を形成し；
Ｒ１６及びＲ１７は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル、又はＣ６−Ｃ２０アリールから選択され、
Ｒ１８及びＲ１９は、それらに結合している炭素原子と共に、Ｃ３−Ｃ２０複素環を形成し、
ここで、上記アルキル，アルケニル，アルキニル，カルボシクリル，ヘテロシクリル，アリール及びヘテロアリールは、  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，オキソ，  Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＝ＮＲ１２，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  任意に置換されたＣ１−Ｃ１２アルキル，  任意に置換された  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ８アルキニル，  任意に置換されたＣ３−Ｃ１２カルボシクリル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  任意に置換されたＣ６−Ｃ２０アリール，  任意に置換されたＣ１−Ｃ２０ヘテロアリール，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  及び（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔＮＲ１０Ｒ１１から独立して選択された１つ以上の基で任意に置換され；
Ｙは、Ｏ，  Ｓ，又はＮＲ１２であり；
ｍ  は、０，  １，  ２，  ３，  ４，  ５又は６であり；  
ｎは、１，  ２，  ３，  ４，  ５又は６であり；そして
ｔは、１，  ２，  ３，  ４，  ５又は６であり、ここでアルキル，アルケニル，アルキニル，カルボシクリル，ヘテロシクリル，アリール，ヘテロアリール，融合二環式ヘテロシクリル及び融合二環式ヘテロアリールである前記置換基が、Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，  −ＮＨ２，オキソ，  Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＝ＮＲ１２，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  任意に置換されたＣ１−Ｃ１２アルキル，  任意に置換された  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ８アルキニル，  任意に置換されたＣ３−Ｃ１２カルボシクリル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  任意に置換されたＣ６−Ｃ２０アリール，  任意に置換されたＣ１−Ｃ２０ヘテロアリール，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  ａｎｄ  （ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１０Ｒ１１からなる群から選択される１つ以上の置換基で任意で置換される］
の化合物である、当該使用。
【請求項２２】
前記式ＶＩＩＩの化合物が、ＧＮＥ−４９３である、請求項２１記載の使用。
【請求項２３】
前記式ＶＩＩＩの化合物が、ＧＮＥ−０９４１である、請求項２１記載の使用。
【請求項２４】
前記化合物がｍＴＯＲＣ１の阻害剤である、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２５】
前記化合物がｍＴＯＲＣ２の阻害剤である、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２６】
前記ウイルス感染がヘルペスウイルスによるものである、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２７】
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ａ、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ｂ、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８及びオナガザルヘルペスウイルス１からなる群から選択されるヘルペスウイルスによるものである、請求項２１〜２３のいずれか１項記載の使用。
【請求項２８】
小胞体ストレス応答の阻害剤を哺乳類対象に投与することを更に含む、請求項２１〜２３のいずれか１項記載の使用。
【請求項２９】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、４−フェニルブチレートである、請求項２８記載の使用。
【請求項３０】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、タウロウルソデオキシコール酸である、請求項２８記載の使用。
【請求項３１】
哺乳類におけるウイルス感染の治療又は予防に使用される、化合物、又はそのプロドラッグ、又は当該化合物の医薬として許容される塩若しくはエステル、又はそのプロドラッグであり、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であり、式ＶＩＩＩ
【化４】
2014505076.tif 000033
［式中、
ＸはＯ又はＳであり；
Ｒ１  は、Ｈ，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  −ＣＲ１４Ｒ１５−ＮＲ１６Ｒ１７，  −ＣＲ１４Ｒ１５−ＮＨＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（Ｒ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＯＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＳ（Ｏ）２Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＳ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（ＯＲ１０）Ｒ１１Ｒ１４，  −Ｃ（Ｒ１４）＝ＣＲ１８Ｒ１９，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１２ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１２（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＯ２，  −ＮＨＲ１２，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −ＮＲ１２ＳＯ２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  Ｃ２−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ１２アルキル−Ｒ１０，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，又はＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから選択され；
Ｒ２  は、Ｈ，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（−Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，及びＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから選択され；
Ｒ３は、Ｃ２−Ｃ５ヘテロシクリル，  Ｃ２−Ｃ５ヘテロアリール，融合二環式Ｃ４−Ｃ２０ヘテロシクリル  又は融合二環式Ｃ３−Ｃ２０ヘテロアリールであり、それらはそれぞれ置換されておらず、又は任意で置換され；
Ｒ１０，  Ｒ１１及びＲ１２は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，又はＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールであり、又は
Ｒ１０とＲ１１は、それらに結合している窒素原子と共に、任意で、部分的に不飽和の、又は完全に不飽和のＣ３−Ｃ２０複素環を形成し、当該環は、任意でＮ，  Ｏ又はＳから選択される１つ以上の追加の環原子を有し、当該複素環は、オキソ，  （ＣＨ２）ｍＯＲ１０ＮＲ１０Ｒ１１，  ＣＦ３，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＳＯ２Ｒ１０，  Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１０，  ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１１，  ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１，  Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール及びＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから独立して選択される１つ以上の基で任意で置換され；
Ｒ１４及びＲ１５は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  ｏｒ  −（ＣＨ２）ｎ−アリールから選択され、又は
Ｒ１４及びＲ１５は、それらに結合している原子と共に、飽和した、又は部分的に不飽和のＣ３−Ｃ１２炭素環を形成し；
Ｒ１６及びＲ１７は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル、又はＣ６−Ｃ２０アリールから選択され、
Ｒ１８及びＲ１９は、それらに結合している炭素原子と共に、Ｃ３−Ｃ２０複素環を形成し、
ここで、上記アルキル，アルケニル，アルキニル，カルボシクリル，ヘテロシクリル，アリール及びヘテロアリールは、  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，オキソ，  Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＝ＮＲ１２，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  任意に置換されたＣ１−Ｃ１２アルキル，  任意に置換された  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ８アルキニル，  任意に置換されたＣ３−Ｃ１２カルボシクリル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  任意に置換されたＣ６−Ｃ２０アリール，  任意に置換されたＣ１−Ｃ２０ヘテロアリール，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  及び（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔＮＲ１０Ｒ１１から独立して選択された１つ以上の基で任意に置換され；
Ｙは、Ｏ，  Ｓ，又はＮＲ１２であり；
ｍ  は、０，  １，  ２，  ３，  ４，  ５又は６であり；
ｎは、１，  ２，  ３，  ４，  ５又は６であり；そして
ｔは、１，  ２，  ３，  ４，  ５又は６であり、ここでアルキル，アルケニル，アルキニル，カルボシクリル，ヘテロシクリル，アリール，ヘテロアリール，融合二環式ヘテロシクリル及び融合二環式ヘテロアリールである前記置換基が、Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，  −ＮＨ２，オキソ，  Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＝ＮＲ１２，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  任意に置換されたＣ１−Ｃ１２アルキル，  任意に置換された  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ８アルキニル，  任意に置換されたＣ３−Ｃ１２カルボシクリル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  任意に置換されたＣ６−Ｃ２０アリール，  任意に置換されたＣ１−Ｃ２０ヘテロアリール，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  ａｎｄ  （ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１０Ｒ１１からなる群から選択される１つ以上の置換基で任意で置換される］
の化合物である、当該化合物。
【請求項３２】
前記式ＶＩＩＩの化合物が、ＧＮＥ−４９３である、請求項３１記載の化合物。
【請求項３３】
前記式ＶＩＩＩの化合物が、ＧＮＥ−０９４１である、請求項３１記載の化合物。
【請求項３４】
前記化合物がｍＴＯＲＣ１の阻害剤である、請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３５】
前記化合物がｍＴＯＲＣ２の阻害剤である、請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３６】
前記ウイルス感染がヘルペスウイルスによるものである、請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３７】
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ａ、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ｂ、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８及びオナガザルヘルペスウイルス１からなる群から選択されるヘルペスウイルスによるものである、請求項３１〜３３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項３８】
小胞体ストレス応答の阻害剤を哺乳類対象に投与することを更に含む、請求項３１〜３３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項３９】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、４−フェニルブチレートである、請求項３８記載の化合物。
【請求項４０】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、タウロウルソデオキシコール酸である、請求項３８記載の化合物。
【請求項４１】
哺乳類におけるウイルス感染を治療又は予防する方法であり、治療有効量の化合物、又はそのプロドラッグ、又は当該化合物の医薬として許容される塩若しくはエステル、又はそのプロドラッグを、当該方法の適用を必要とする哺乳類の対象に投与することを含み、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であり、当該化合物が、式ＩＸ
【化５】
2014505076.tif 000034
［式中、
Ｈｅｔ１及びＨｅｔ２は、独立して、  （ｉ）Ｏ，  Ｎ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜７員複素環基、及びＯ，  Ｎ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する６〜１０員二環式複素環基から選択され；ここで各（ｉ）又は（ｉｉ）は、Ｃ１−Ｃ４アルキル，  ＮＨ２，  −Ｏ−Ｒ０，  ＣＮ，及びハロから選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換され；
Ｘ及びＺは、Ｎ及びＣＨから独立して選択され；
Ｒ１は、以下：
（ｉ）  Ｃ１−Ｃ１０アルキル，  Ｃ２−Ｃ１０アルケニル，  Ｃ２−Ｃ１０アルキニル，及びＣ３〜Ｃ１０シクロアルキル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル），アリール，ヘテロアリール，  及びヘテロシクリルからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｉ）アリール，ヘテロアリール及びヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロシクリル，  −Ｏ−Ｒ０，  −（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−ＯＲ０，  −Ｏ−（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−ＯＲ０，  −（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ０）−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，及び−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−アリールからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｉｉ）  −アリール−Ｃ（＝Ｏ）−アリール，  −アリール−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロアリール，及び−アリール−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，及び−ＯＲ０からなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｖ）  −アリール−アリール，  −アリール−ヘテロアリール，及び−アリール−ヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，  −Ｏ−Ｒ０からなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
からなる群から選択され、各Ｒ０は、Ｈ及びＣ１−Ｃ６アルキルから独立して選択され；又は窒素原子に結合した隣接する２つのＲ０が一緒になって、Ｎ，  Ｏ及びＳから選択される０〜２個の追加の環ヘテロ原子を有する５又は６員複素環を形成し、当該環は、Ｃ１−Ｃ４アルキル，  ＮＨ２，  −ＯＨ，  ＣＮ，及びハロからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される］
の化合物である、当該方法。
【請求項４２】
前記式ＩＸの化合物が、Ｗｙｅｔｈ  ＢＭＣＬ  ２０１０２６４４−１３である、請求項４１記載の方法。
【請求項４３】
前記式ＩＸの化合物が、Ｗｙｅｔｈ  ＢＭＣＬ  ２０１０２６４８−２７である、請求項４１記載の方法。
【請求項４４】
前記化合物がｍＴＯＲＣ１の阻害剤である、請求項４１〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記化合物がｍＴＯＲＣ２の阻害剤である、請求項４１〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
前記ウイルス感染がヘルペスウイルスによるものである、請求項４１〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ａ、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ｂ、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８及びオナガザル（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１からなる群から選択されるヘルペスウイルスによるものである、請求項４１〜４３のいずれか１項記載の方法。
【請求項４８】
小胞体ストレス応答（ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）の阻害剤を哺乳類対象に投与することを更に含む、請求項４１〜４３のいずれか１項記載の方法。
【請求項４９】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、４−フェニルブチレートである、請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、タウロウルソデオキシコール酸である、請求項４８記載の方法。
【請求項５１】
（ｉ）化合物又はそのプロドラッグ、又は当該化合物の医薬として許容される塩若しくはエステル、又はそのプロドラッグ、及び（ｉｉ）医薬として許容される担体を含有する、治療有効量の組成物を含有する、ウイルス感染を治療又は予防するための医薬組成物であり、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であり、当該化合物が、式ＩＸ
【化６】
2014505076.tif 000035
［式中、
Ｈｅｔ１及びＨｅｔ２は、独立して、  （ｉ）Ｏ，  Ｎ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜７員複素環基、及びＯ，  Ｎ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する６〜１０員二環式複素環基から選択され；ここで各（ｉ）又は（ｉｉ）は、Ｃ１−Ｃ４アルキル，  ＮＨ２，  −Ｏ−Ｒ０，  ＣＮ，及びハロから選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換され；
Ｘ及びＺは、Ｎ及びＣＨから独立して選択され；
Ｒ１は、以下：
（ｉ）  Ｃ１−Ｃ１０アルキル，  Ｃ２−Ｃ１０アルケニル，  Ｃ２−Ｃ１０アルキニル，及びＣ３〜Ｃ１０シクロアルキル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル），アリール，ヘテロアリール，  及びヘテロシクリルからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｉ）アリール，ヘテロアリール及びヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロシクリル，  −Ｏ−Ｒ０，  −（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−ＯＲ０，  −Ｏ−（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−ＯＲ０，  −（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ０）−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，及び−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−アリールからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｉｉ）  −アリール−Ｃ（＝Ｏ）−アリール，  −アリール−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロアリール，及び−アリール−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，及び−ＯＲ０からなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｖ）  −アリール−アリール，  −アリール−ヘテロアリール，及び−アリール−ヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，  −Ｏ−Ｒ０からなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
からなる群から選択され、各Ｒ０は、Ｈ及びＣ１−Ｃ６アルキルから独立して選択され；又は窒素原子に結合した隣接する２つのＲ０が一緒になって、Ｎ，  Ｏ及びＳから選択される０〜２個の追加の環ヘテロ原子を有する５又は６員複素環を形成し、当該環は、Ｃ１−Ｃ４アルキル，  ＮＨ２，  −ＯＨ，  ＣＮ，及びハロからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される］
の化合物である、当該医薬組成物。
【請求項５２】
前記式ＩＸの化合物が、Ｗｙｅｔｈ  ＢＭＣＬ  ２０１０２６４４−１３である、請求項５１記載の医薬組成物。
【請求項５３】
前記式ＩＸの化合物が、Ｗｙｅｔｈ  ＢＭＣＬ  ２０１０２６４８−２７である、請求項５１記載の医薬組成物。
【請求項５４】
前記化合物がｍＴＯＲＣ１の阻害剤である、請求項５１〜５３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
前記化合物がｍＴＯＲＣ２の阻害剤である、請求項５１〜５３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
前記ウイルス感染がヘルペスウイルスによるものである、請求項５１〜５３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５７】
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ａ、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ｂ、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８及びオナガザル（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１からなる群から選択されるヘルペスウイルスによるものである、請求項５１〜５３のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項５８】
小胞体ストレス応答（ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）の阻害剤を哺乳類対象に投与することを更に含む、請求項５１〜５３のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項５９】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、４−フェニルブチレートである、請求項５８記載の医薬組成物。
【請求項６０】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、タウロウルソデオキシコール酸である、請求項５８記載の医薬組成物。
【請求項６１】
ウイルス感染を治療又は予防するための医薬の生産における、化合物、又はそのプロドラッグ、又は当該化合物の医薬として許容される塩、又はそのプロドラッグの使用であり、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であり、当該化合物が、式ＩＸ
【化７】
2014505076.tif 000036
［式中、
Ｈｅｔ１及びＨｅｔ２は、独立して、  （ｉ）Ｏ，  Ｎ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜７員複素環基、及びＯ，  Ｎ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する６〜１０員二環式複素環基から選択され；ここで各（ｉ）又は（ｉｉ）は、Ｃ１−Ｃ４アルキル，  ＮＨ２，  −Ｏ−Ｒ０，  ＣＮ，及びハロから選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換され；
Ｘ及びＺは、Ｎ及びＣＨから独立して選択され；
Ｒ１は、以下：
（ｉ）  Ｃ１−Ｃ１０アルキル，  Ｃ２−Ｃ１０アルケニル，  Ｃ２−Ｃ１０アルキニル，及びＣ３〜Ｃ１０シクロアルキル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル），アリール，ヘテロアリール，  及びヘテロシクリルからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｉ）アリール，ヘテロアリール及びヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロシクリル，  −Ｏ−Ｒ０，  −（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−ＯＲ０，  −Ｏ−（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−ＯＲ０，  −（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ０）−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，及び−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−アリールからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｉｉ）  −アリール−Ｃ（＝Ｏ）−アリール，  −アリール−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロアリール，及び−アリール−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，及び−ＯＲ０からなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｖ）  −アリール−アリール，  −アリール−ヘテロアリール，及び−アリール−ヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，  −Ｏ−Ｒ０からなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
からなる群から選択され、各Ｒ０は、Ｈ及びＣ１−Ｃ６アルキルから独立して選択され；又は窒素原子に結合した隣接する２つのＲ０が一緒になって、Ｎ，  Ｏ及びＳから選択される０〜２個の追加の環ヘテロ原子を有する５又は６員複素環を形成し、当該環は、Ｃ１−Ｃ４アルキル，  ＮＨ２，  −ＯＨ，  ＣＮ，及びハロからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される］
の化合物である、当該使用。
【請求項６２】
前記式ＩＸの化合物が、Ｗｙｅｔｈ  ＢＭＣＬ  ２０１０２６４４−１３である、請求項６１記載の使用。
【請求項６３】
前記式ＩＸの化合物が、Ｗｙｅｔｈ  ＢＭＣＬ  ２０１０２６４８−２７である、請求項６１記載の使用。
【請求項６４】
前記化合物がｍＴＯＲＣ１の阻害剤である、請求項６１〜６３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６５】
前記化合物がｍＴＯＲＣ２の阻害剤である、請求項６１〜６３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６６】
前記ウイルス感染がヘルペスウイルスによるものである、請求項６１〜６３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６７】
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ａ、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ｂ、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８及びオナガザル（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１からなる群から選択されるヘルペスウイルスによるものである、請求項６１〜６３のいずれか１項記載の使用。
【請求項６８】
小胞体ストレス応答（ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）の阻害剤を哺乳類対象に投与することを更に含む、請求項６１〜６３のいずれか１項記載の使用。
【請求項６９】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、４−フェニルブチレートである、請求項６８記載の使用。
【請求項７０】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、タウロウルソデオキシコール酸である、請求項６８記載の使用。
【請求項７１】
哺乳類におけるウイルス感染の治療又は予防に使用される、化合物、又はそのプロドラッグ、又は当該化合物の医薬として許容される塩若しくはエステル、又はそのプロドラッグであり、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であり、式ＩＸ
【化８】
2014505076.tif 000037
［式中、
Ｈｅｔ１及びＨｅｔ２は、独立して、  （ｉ）Ｏ，  Ｎ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜７員複素環基、及びＯ，  Ｎ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する６〜１０員二環式複素環基から選択され；ここで各（ｉ）又は（ｉｉ）は、Ｃ１−Ｃ４アルキル，  ＮＨ２，  −Ｏ−Ｒ０，  ＣＮ，及びハロから選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換され；
Ｘ及びＺは、Ｎ及びＣＨから独立して選択され；
Ｒ１は、以下：
（ｉ）  Ｃ１−Ｃ１０アルキル，  Ｃ２−Ｃ１０アルケニル，  Ｃ２−Ｃ１０アルキニル，及びＣ３〜Ｃ１０シクロアルキル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル），アリール，ヘテロアリール，  及びヘテロシクリルからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｉ）アリール，ヘテロアリール及びヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロシクリル，  −Ｏ−Ｒ０，  −（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−ＯＲ０，  −Ｏ−（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−ＯＲ０，  −（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ０）−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，及び−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−アリールからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｉｉ）  −アリール−Ｃ（＝Ｏ）−アリール，  −アリール−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロアリール，及び−アリール−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，及び−ＯＲ０からなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｖ）  −アリール−アリール，  −アリール−ヘテロアリール，及び−アリール−ヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，  −Ｏ−Ｒ０からなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
からなる群から選択され、各Ｒ０は、Ｈ及びＣ１−Ｃ６アルキルから独立して選択され；又は窒素原子に結合した隣接する２つのＲ０が一緒になって、Ｎ，  Ｏ及びＳから選択される０〜２個の追加の環ヘテロ原子を有する５又は６員複素環を形成し、当該環は、Ｃ１−Ｃ４アルキル，  ＮＨ２，  −ＯＨ，  ＣＮ，及びハロからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される］
の化合物である、当該化合物。
【請求項７２】
前記式ＩＸの化合物が、Ｗｙｅｔｈ  ＢＭＣＬ  ２０１０２６４４−１３である、請求項７１記載の化合物。
【請求項７３】
前記式ＩＸの化合物が、Ｗｙｅｔｈ  ＢＭＣＬ  ２０１０２６４８−２７である、請求項７１記載の化合物。
【請求項７４】
前記化合物がｍＴＯＲＣ１の阻害剤である、請求項７１〜７３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７５】
前記化合物がｍＴＯＲＣ２の阻害剤である、請求項７１〜７３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７６】
前記ウイルス感染がヘルペスウイルスによるものである、請求項７１〜７３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７７】
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ａ、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ｂ、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８及びオナガザル（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１からなる群から選択されるヘルペスウイルスによるものである、請求項７１〜７３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７８】
小胞体ストレス応答（ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）の阻害剤を哺乳類対象に投与することを更に含む、請求項６１〜６３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７９】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、４−フェニルブチレートである、請求項７８記載の化合物。
【請求項８０】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、タウロウルソデオキシコール酸である、請求項７８記載の化合物。
【請求項８１】
哺乳類におけるウイルス感染を治療又は予防する方法であり、治療有効量の化合物、又はそのプロドラッグ、又は当該化合物の医薬として許容される塩若しくはエステル、又はそのプロドラッグを、当該方法の適用を必要とする哺乳類の対象に投与することを含み、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であり、当該化合物が、式Ｘ
【化９】
2014505076.tif 000038
［式中、
Ｒ１が、ナフチル又はフェニルから選択され、（ｉ）ハロゲン；（ｉｉ）ハロゲン、シアノ、イミダゾール又はトリアゾリルにより置換されず、又は置換された低級アルキル；（ｉｉｉ）シクロアルキル；（ｉｖ）低級アルキル、低級アルキルスルホニル、低級アルコキシ及び低級アルコキシ低級アルキルアミノからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されたアミノ；（ｖ）低級アルキル及び低級アルキルスルホニルからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されない、又は置換されたピペラジニル；（ｖｉ）２―オキソ―ピロリジニル；（ｖｉｉ）低級アルコキシ低級アルキル；（ｖｉｉｉ）イミダゾリル；（ｉｘ）ピラゾリル；及び（ｘ）トリアゾリルからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されず、又は置換され；
Ｒ２がＯ又はＳであり；
Ｒ３が低級アルキルであり；
Ｒ４が、（ｉ）ハロゲン、シアノ、低級アルキル、低級アルコキシ又は低級アルキルにより置換されない、又は置換されたピペラジニルにより、置換されない、又は置換されたピリジル；（ｉｉ）低級アルコキシにより置換されない、又は置換されたピリミジニル；（ｉｉｉ）ハロゲンにより置換されない、又は置換されたキノリニル；又は（ｉｖ）キノキサリニルから選択され；
Ｒ５が、水素又はハロゲンであり；
ｎが０又は１であり；
Ｒ６がオキシドであり；但しｎ＝１のとき、Ｒ６基と結合するＮ原子は正電荷を有する；そして
Ｒ７は水素又はアミノである］
の化合物である、当該方法。
【請求項８２】
前記式Ｘの化合物が、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５である、請求項８１記載の方法。
【請求項８３】
前記化合物がｍＴＯＲＣ１の阻害剤である、請求項８１又は８２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８４】
前記化合物がｍＴＯＲＣ２の阻害剤である、請求項８１又は８２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８５】
前記ウイルス感染がヘルペスウイルスによるものである、請求項８１又は８２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８６】
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ａ、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ｂ、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８及びオナガザル（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１からなる群から選択されるヘルペスウイルスによるものである、請求項８１又は８２のいずれか１項記載の方法。
【請求項８７】
小胞体ストレス応答（ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）の阻害剤を哺乳類対象に投与することを更に含む、請求項８１又は８２のいずれか１項記載の方法。
【請求項８８】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、４−フェニルブチレートである、請求項８７記載の方法。
【請求項８９】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、タウロウルソデオキシコール酸である、請求項８７記載の方法。
【請求項９０】
（ｉ）化合物又はそのプロドラッグ、又は当該化合物の医薬として許容される塩若しくはエステル、又はそのプロドラッグ、及び（ｉｉ）医薬として許容される担体を含有する、治療有効量の組成物を含有する、ウイルス感染を治療又は予防するための医薬組成物であり、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であり、当該化合物が、式Ｘ
【化１０】
2014505076.tif 000039
［式中、
Ｒ１が、ナフチル又はフェニルから選択され、（ｉ）ハロゲン；（ｉｉ）ハロゲン、シアノ、イミダゾール又はトリアゾリルにより置換されず、又は置換された低級アルキル；（ｉｉｉ）シクロアルキル；（ｉｖ）低級アルキル、低級アルキルスルホニル、低級アルコキシ及び低級アルコキシ低級アルキルアミノからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されたアミノ；（ｖ）低級アルキル及び低級アルキルスルホニルからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されない、又は置換されたピペラジニル；（ｖｉ）２―オキソ―ピロリジニル；（ｖｉｉ）低級アルコキシ低級アルキル；（ｖｉｉｉ）イミダゾリル；（ｉｘ）ピラゾリル；及び（ｘ）トリアゾリルからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されず、又は置換され；
Ｒ２がＯ又はＳであり；
Ｒ３が低級アルキルであり；
Ｒ４が、（ｉ）ハロゲン、シアノ、低級アルキル、低級アルコキシ又は低級アルキルにより置換されない、又は置換されたピペラジニルにより、置換されない、又は置換されたピリジル；（ｉｉ）低級アルコキシにより置換されない、又は置換されたピリミジニル；（ｉｉｉ）ハロゲンにより置換されない、又は置換されたキノリニル；又は（ｉｖ）キノキサリニルから選択され；
Ｒ５が、水素又はハロゲンであり；
ｎが０又は１であり；
Ｒ６がオキシドであり；但しｎ＝１のとき、Ｒ６基と結合するＮ原子は正電荷を有する；そして
Ｒ７は水素又はアミノである］
の化合物である、当該医薬組成物。
【請求項９１】
前記式Ｘの化合物が、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５である、請求項９０記載の医薬組成物。
【請求項９２】
前記化合物がｍＴＯＲＣ１の阻害剤である、請求項９０又は９１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９３】
前記化合物がｍＴＯＲＣ２の阻害剤である、請求項９０又は９１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９４】
前記ウイルス感染がヘルペスウイルスによるものである、請求項９０又は９１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９５】
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ａ、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ｂ、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８及びオナガザル（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１からなる群から選択されるヘルペスウイルスによるものである、請求項９０又は９１のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項９６】
小胞体ストレス応答（ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）の阻害剤を哺乳類対象に投与することを更に含む、請求項９０又は９１のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項９７】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、４−フェニルブチレートである、請求項９６記載の医薬組成物。
【請求項９８】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、タウロウルソデオキシコール酸である、請求項９６記載の医薬組成物。
【請求項９９】
ウイルス感染を治療又は予防するための医薬の生産における、化合物、又はそのプロドラッグ、又は当該化合物の医薬として許容される塩、又はそのプロドラッグの使用であり、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であり、当該化合物が、式Ｘ
【化１１】
2014505076.tif 000040
［式中、
Ｒ１が、ナフチル又はフェニルから選択され、（ｉ）ハロゲン；（ｉｉ）ハロゲン、シアノ、イミダゾール又はトリアゾリルにより置換されず、又は置換された低級アルキル；（ｉｉｉ）シクロアルキル；（ｉｖ）低級アルキル、低級アルキルスルホニル、低級アルコキシ及び低級アルコキシ低級アルキルアミノからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されたアミノ；（ｖ）低級アルキル及び低級アルキルスルホニルからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されない、又は置換されたピペラジニル；（ｖｉ）２―オキソ―ピロリジニル；（ｖｉｉ）低級アルコキシ低級アルキル；（ｖｉｉｉ）イミダゾリル；（ｉｘ）ピラゾリル；及び（ｘ）トリアゾリルからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されず、又は置換され；
Ｒ２がＯ又はＳであり；
Ｒ３が低級アルキルであり；
Ｒ４が、（ｉ）ハロゲン、シアノ、低級アルキル、低級アルコキシ又は低級アルキルにより置換されない、又は置換されたピペラジニルにより、置換されない、又は置換されたピリジル；（ｉｉ）低級アルコキシにより置換されない、又は置換されたピリミジニル；（ｉｉｉ）ハロゲンにより置換されない、又は置換されたキノリニル；又は（ｉｖ）キノキサリニルから選択され；
Ｒ５が、水素又はハロゲンであり；
ｎが０又は１であり；
Ｒ６がオキシドであり；但しｎ＝１のとき、Ｒ６基と結合するＮ原子は正電荷を有する；そして
Ｒ７は水素又はアミノである］
の化合物である、当該使用。
【請求項１００】
前記式Ｘの化合物が、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５である、請求項９９記載の使用。
【請求項１０１】
前記化合物がｍＴＯＲＣ１の阻害剤である、請求項９９又は１００のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０２】
前記化合物がｍＴＯＲＣ２の阻害剤である、請求項９９又は１００のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０３】
前記ウイルス感染がヘルペスウイルスによるものである、請求項９９又は１００のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０４】
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ａ、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ｂ、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８及びオナガザル（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１からなる群から選択されるヘルペスウイルスによるものである、請求項９９又は１００のいずれか１項記載の使用。
【請求項１０５】
小胞体ストレス応答（ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）の阻害剤を哺乳類対象に投与することを更に含む、請求項９９又は１００のいずれか１項記載の使用。
【請求項１０６】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、４−フェニルブチレートである、請求項１０５記載の使用。
【請求項１０７】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、タウロウルソデオキシコール酸である、請求項１０５記載の使用。
【請求項１０８】
哺乳類におけるウイルス感染の治療又は予防に使用される、化合物、又はそのプロドラッグ、又は当該化合物の医薬として許容される塩若しくはエステル、又はそのプロドラッグであり、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であり、式Ｘ
【化１２】
2014505076.tif 000041
［式中、
Ｒ１が、ナフチル又はフェニルから選択され、（ｉ）ハロゲン；（ｉｉ）ハロゲン、シアノ、イミダゾール又はトリアゾリルにより置換されず、又は置換された低級アルキル；（ｉｉｉ）シクロアルキル；（ｉｖ）低級アルキル、低級アルキルスルホニル、低級アルコキシ及び低級アルコキシ低級アルキルアミノからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されたアミノ；（ｖ）低級アルキル及び低級アルキルスルホニルからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されない、又は置換されたピペラジニル；（ｖｉ）２―オキソ―ピロリジニル；（ｖｉｉ）低級アルコキシ低級アルキル；（ｖｉｉｉ）イミダゾリル；（ｉｘ）ピラゾリル；及び（ｘ）トリアゾリルからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されず、又は置換され；
Ｒ２がＯ又はＳであり；
Ｒ３が低級アルキルであり；
Ｒ４が、（ｉ）ハロゲン、シアノ、低級アルキル、低級アルコキシ又は低級アルキルにより置換されない、又は置換されたピペラジニルにより、置換されない、又は置換されたピリジル；（ｉｉ）低級アルコキシにより置換されない、又は置換されたピリミジニル；（ｉｉｉ）ハロゲンにより置換されない、又は置換されたキノリニル；又は（ｉｖ）キノキサリニルから選択され；
Ｒ５が、水素又はハロゲンであり；
ｎが０又は１であり；
Ｒ６がオキシドであり；但しｎ＝１のとき、Ｒ６基と結合するＮ原子は正電荷を有する；そして
Ｒ７は水素又はアミノである］
の化合物である、当該化合物。
【請求項１０９】
前記式Ｘの化合物が、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５である、請求項１０８記載の化合物。
【請求項１１０】
前記化合物がｍＴＯＲＣ１の阻害剤である、請求項１０８又は１０９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１１】
前記化合物がｍＴＯＲＣ２の阻害剤である、請求項１０８又は１０９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１２】
前記ウイルス感染がヘルペスウイルスによるものである、請求項１０８又は１０９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１３】
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ａ、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ｂ、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８及びオナガザル（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１からなる群から選択されるヘルペスウイルスによるものである、請求項１０８又は１０９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１１４】
小胞体ストレス応答（ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）の阻害剤を哺乳類対象に投与することを更に含む、請求項１０８又は１０９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１１５】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、４−フェニルブチレートである、請求項１１４記載の化合物。
【請求項１１６】
前記小胞体ストレス応答の阻害剤が、タウロウルソデオキシコール酸である、請求項１１４記載の化合物。
【請求項１１７】
哺乳類のウイルス感染を治療又は予防する方法であり、治療有効量の化合物、又はそのプロドラッグ、又は当該化合物の医薬として許容される塩若しくはエステル、又はそのプロドラッグを、当該方法の適用を必要とする哺乳類の対象に投与することを含み、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であり、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であり、当該化合物が、ＡＺＤ２０１４，  ＣＣ−２２３  （ＴＯＲＫｉ），  ＳＢ−２０１５，  ＮＶＰ−ＢＧＴ−２２６，  ＬＹ２９４００２，  ＧＳＫ２１２６４５８，  ＸＬ１４７，  ＸＬ７６５，  ＰＦ−０４６９１５０２，  Ｐ−２２８１，  ＧＤＣ−０９８０，  ＥＴＰ−４５６５８，  ＷＪＤ００８，  ＰＫＩ−１７９，  ＰＫＩ−４０２，  ＰＫＩ−５８７，  ＯＸＡ−０１，  化合物４０１，  ＺＳＴＫ−４７４，  ＰＩ−１０３，  及びパロミド−５２９から選択される、当該方法。
【請求項１１８】
前記ウイルス感染が、ペルぺスウイルスによるものである、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ａ、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ｂ、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８及びオナガザル（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１からなる群から選択されるヘルペスウイルスによるものである、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１２０】
（ｉ）化合物又はそのプロドラッグ、又は当該化合物の医薬として許容される塩若しくはエステル、又はそのプロドラッグ、及び（ｉｉ）医薬として許容される担体を含有する、治療有効量の組成物を含有する、ウイルス感染を治療又は予防するための医薬組成物であり、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であり、当該化合物が、ＡＺＤ２０１４，  ＣＣ−２２３  （ＴＯＲＫｉ），  ＳＢ−２０１５，  ＮＶＰ−ＢＧＴ−２２６，  ＬＹ２９４００２，  ＧＳＫ２１２６４５８，  ＸＬ１４７，  ＸＬ７６５，  ＰＦ−０４６９１５０２，  Ｐ−２２８１，  ＧＤＣ−０９８０，  ＥＴＰ−４５６５８，  ＷＪＤ００８，  ＰＫＩ−１７９，  ＰＫＩ−４０２，  ＰＫＩ−５８７，  ＯＸＡ−０１，化合物４０１，  ＺＳＴＫ−４７４，  ＰＩ−１０３，  及びパロミド−５２９から選択される、当該医薬組成物。
【請求項１２１】
前記ウイルス感染が、ペルぺスウイルスによるものである、請求項１２０に記載の医薬組成物。
【請求項１２２】
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ａ、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ｂ、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８及びオナガザル（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１からなる群から選択されるヘルペスウイルスによるものである、請求項１２０に記載の医薬組成物。
【請求項１２３】
ウイルス感染を治療又は予防するための医薬の生産における、化合物、又はそのプロドラッグ、又は当該化合物の医薬として許容される塩、又はそのプロドラッグの使用であり、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であり、当該化合物が、ＡＺＤ２０１４，  ＣＣ−２２３  （ＴＯＲＫｉ），  ＳＢ−２０１５，  ＮＶＰ−ＢＧＴ−２２６，  ＬＹ２９４００２，  ＧＳＫ２１２６４５８，  ＸＬ１４７，  ＸＬ７６５，  ＰＦ−０４６９１５０２，  Ｐ−２２８１，  ＧＤＣ−０９８０，  ＥＴＰ−４５６５８，  ＷＪＤ００８，  ＰＫＩ−１７９，  ＰＫＩ−４０２，  ＰＫＩ−５８７，  ＯＸＡ−０１，化合物４０１，  ＺＳＴＫ−４７４，  ＰＩ−１０３，  及びパロミド−５２９から選択される、当該使用。
【請求項１２４】
前記ウイルス感染が、ペルぺスウイルスによるものである、請求項１２３に記載の使用。
【請求項１２５】
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ａ、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ｂ、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８及びオナガザル（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１からなる群から選択されるヘルペスウイルスによるものである、請求項１２３に記載の使用。
【請求項１２６】
哺乳類におけるウイルス感染の治療又は予防に使用される、化合物、又はそのプロドラッグ、又は当該化合物の医薬として許容される塩若しくはエステル、又はそのプロドラッグであり、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であり、ＡＺＤ２０１４，  ＣＣ−２２３  （ＴＯＲＫｉ），  ＳＢ−２０１５，  ＮＶＰ−ＢＧＴ−２２６，  ＬＹ２９４００２，  ＧＳＫ２１２６４５８，  ＸＬ１４７，  ＸＬ７６５，  ＰＦ−０４６９１５０２，  Ｐ−２２８１，  ＧＤＣ−０９８０，  ＥＴＰ−４５６５８，  ＷＪＤ００８，  ＰＫＩ−１７９，  ＰＫＩ−４０２，  ＰＫＩ−５８７，  ＯＸＡ−０１，化合物４０１，  ＺＳＴＫ−４７４，  ＰＩ−１０３，  及びパロミド−５２９から選択される、当該化合物。
【請求項１２７】
前記ウイルス感染が、ペルぺスウイルスによるものである、請求項１２６に記載の化合物。
【請求項１２８】
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ａ、ヒトヘルペスウイルス６変異体Ｂ、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８及びオナガザル（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１からなる群から選択されるヘルペスウイルスによるものである、請求項１２６に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホスト細胞のｍＴＯＲに関する酵素の調節因子を用いて、ウイルス感染を治療又は防止する方法を提供する。また、本発明は、ホスト細胞のｍＴＯＲに関する酵素の調節因子及び小胞体ストレス応答（ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）の調節因子を使用して、ウイルス感染を治療又は防止する方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
特許に関する政府の権利の宣言
本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈに表彰されたＧｒａｎｔ  Ｎｏ．  ＣＡ０８５７８６の下、政府の支援を受けてなされたものである。政府は、本発明において一定の権利を有する。
【０００３】
関連出願の相互参照
本発明２０１１年１月２７日に出願された米国出願番号６１／４３６９７０を基礎とした優先権を主張する。当該基礎出願は、全てが本願中で援用される。
【０００４】
発明の背景
哺乳類におけるラパマイシンの標的（ｍＴＯＲ）は、転写制御機能を有するセリン／スレオニンキナーゼである。ｍＴＯＲには、ｍＴＯＲ複合体１（ｍＴＯＲＣｌ）及びｍＴＯＲ複合体２（ｍＴ０ＲＣ２）と称される２つの複合体が存在する。ｍＴＯＲ触媒サブユニットに加え、ｍＴＯＲＣ１は、Ｒａｐｔｏｒ、ｍＬＳＴ８及びＰＲＡＳ４０のタンパク質を更に含む。ｍＴＯＲＣ２は、ｍＴＯＲ及びｍＬＳＴ８を含むが、更に、制御タンパク質のＲｉｃｔｏｒ、ｍＳＩＮ１及びＰＲＯＴＯＲも含む。更に、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２は、それらの活性を阻害する、ＤＥＰＴＯＲと相互作用する。
【０００５】
ラパマイシンは、臓器移植において拒絶反応を防止するのに使用される、免疫抑制剤である。ラパマイシン及びその類似体は、ＦＫＢＰ−１２タンパク質に結合して、ｍＴＯＲのＦＫＢＰ−ラパマイシン結合（ＦＫＢ）ドメインとの複合体の形成を媒介することにより、ｍＴＯＲを阻害する。この相互作用は、ｍＴＯＲＣ１のＳ６Ｋリン酸化等の幾つかの機能を阻害する。しかしながら、ｍＴＯＲＣ１には、４ＥＢＰ（ｅＩＦ４Ｅ結合タンパク質）のリン酸化等、ラパマイシンに耐性の他の機能が存在する。更に、ＦＫＢＰ−ラパマイシン複合体は、ｍＴＯＲＣ２と相互作用しないので、ｍＴＯＲＣ２の機能は、ラパマイシンにより阻害されない。
【０００６】
より安全に、効果的に、かつ確実に、ＨＩＶから風邪に至るウイルス感染を治療するための薬剤の、医療上の需要は到底満たされていない。ヒトサイトメガロウイルス（現行の薬剤は毒性が顕著で効率が低い）、当該需要は、単純ヘルペスウイルス（現行の薬剤は有効であるが救済が不完全である（ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｌｉｅｆ））、インフルエンザＡ（現行の薬剤に耐性のウイルスが蔓延している）、及びＣ型肝炎ウイルス（病害対策が不完全であるため多くの患者が死亡している）等を治療するためのより良い薬剤の一般的需要を含む。更に、当該需要は、広範囲のウイルスに作用し、原因となる病原体の同定を要さずに臨床的に使用できる薬剤の一般的需要も含む。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
第一の側面において、本発明は、哺乳類におけるウイルス感染を治療又は防止する方法に関し、当該方法は、治療有効量の、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤である化合物、又はそのプロドラッグ、又はそれらの薬剤若しくはプロドラッグの医薬として許容される塩若しくはエステルを、これを必要とする哺乳類の対象に投与する工程を含む。
【０００８】
他の側面において、本発明は、ウイルス感染を治療又は防止するための医薬組成物に関し、当該組成物は、（ｉ）化合物、若しくはそのプロドラッグ、又は当該化合物若しくはプロドラッグの医薬として許容される塩；及び（ｉｉ）医薬として許容される担体を含有し、ここで当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤である、治療有効量の組成物を含有する。
【０００９】
他の側面において、本発明は、化合物若しくはそのプロドラッグ、又は当該化合物若しくはそのプロドラッグの医薬として許容される塩の使用であり、当該化合物が、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤である、ウイルス感染を治療又は防止するための医薬の製造における、前記使用に関する。
【００１０】
他の態様において、本発明は、哺乳類におけるウイルス感染を治療又は予防するために使用される、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤である、化合物若しくはそのプロドラッグ、又は当該化合物若しくはそのプロドラッグの医薬として許容される塩に関する。
【００１１】
一つの態様において、前記ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤は、式ＶＩＩＩ
【化１】
2014505076.tif 000003
［式中、
ＸはＯ又はＳであり；
Ｒ１  は、Ｈ，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  −ＣＲ１４Ｒ１５−ＮＲ１６Ｒ１７，  −ＣＲ１４Ｒ１５−ＮＨＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（Ｒ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＯＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＳ（Ｏ）２Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＳ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（ＯＲ１０）Ｒ１１Ｒ１４，  −Ｃ（Ｒ１４）＝ＣＲ１８Ｒ１９，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１２ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１２（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＯ２，  −ＮＨＲ１２，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −ＮＲ１２ＳＯ２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  Ｃ２−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ１２アルキル−Ｒ１０，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，又はＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから選択され；
Ｒ２  は、Ｈ，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（−Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，及びＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから選択され；
Ｒ３は、Ｃ２−Ｃ５ヘテロシクリル，  Ｃ２−Ｃ５ヘテロアリール，融合二環式Ｃ４−Ｃ２０ヘテロシクリル  又は融合二環式Ｃ３−Ｃ２０ヘテロアリールであり、それらはそれぞれ置換されておらず、又は任意で置換され；
Ｒ１０，  Ｒ１１及びＲ１２は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，又はＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールであり、又は
Ｒ１０とＲ１１は、それらに結合している窒素原子と共に、任意で、部分的に不飽和の、又は完全に不飽和のＣ３−Ｃ２０複素環を形成し、当該環は、任意でＮ，  Ｏ又はＳから選択される１つ以上の追加の環原子を有し、当該複素環は、オキソ，  （ＣＨ２）ｍＯＲ１０ＮＲ１０Ｒ１１，  ＣＦ３，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＳＯ２Ｒ１０，  Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１０，  ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１１，  ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１，  Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール及びＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから独立して選択される１つ以上の基で任意で置換され；
Ｒ１４及びＲ１５は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  ｏｒ  −（ＣＨ２）ｎ−アリールから選択され、又は
Ｒ１４及びＲ１５は、それらに結合している原子と共に、飽和した、又は部分的に不飽和のＣ３−Ｃ１２炭素環を形成し；
Ｒ１６及びＲ１７は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル、又はＣ６−Ｃ２０アリールから選択され、
Ｒ１８及びＲ１９は、それらに結合している炭素原子と共に、Ｃ３−Ｃ２０複素環を形成し、
ここで、上記アルキル，アルケニル，アルキニル，カルボシクリル，ヘテロシクリル，アリール及びヘテロアリールは、  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，オキソ，  Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＝ＮＲ１２，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  任意に置換されたＣ１−Ｃ１２アルキル，  任意に置換された  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ８アルキニル，  任意に置換されたＣ３−Ｃ１２カルボシクリル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  任意に置換されたＣ６−Ｃ２０アリール，  任意に置換されたＣ１−Ｃ２０ヘテロアリール，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  及び（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔＮＲ１０Ｒ１１から独立して選択された１つ以上の基で任意に置換され；
Ｙは、Ｏ，  Ｓ，又はＮＲ１２であり；
ｍ  は、０，  １，  ２，  ３，  ４，  ５又は６であり；
ｎは、１，  ２，  ３，  ４，  ５又は６であり；そして
ｔは、１，  ２，  ３，  ４，  ５又は６であり、ここでアルキル，アルケニル，アルキニル，カルボシクリル，ヘテロシクリル，アリール，ヘテロアリール，融合二環式ヘテロシクリル及び融合二環式ヘテロアリールである前記置換基が、Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，  −ＮＨ２，オキソ，  Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＝ＮＲ１２，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  任意に置換されたＣ１−Ｃ１２アルキル，  任意に置換された  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ８アルキニル，  任意に置換されたＣ３−Ｃ１２カルボシクリル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  任意に置換されたＣ６−Ｃ２０アリール，  任意に置換されたＣ１−Ｃ２０ヘテロアリール，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  ａｎｄ  （ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１０Ｒ１１からなる群から選択される１つ以上の置換基で任意で置換される］
の化合物である。
【００１２】
一つの態様において、前記式ＶＩＩＩの化合物は、ＧＮＥ−４９３である。一つの態様において、前記式ＶＩＩＩの化合物は、ＧＮＥ−０９４１である。
【００１３】
一つの態様において、前記式ＶＩＩＩの化合物は、ｍＴＯＲの特異的阻害剤である。一つの態様において、前記式ＶＩＩＩの化合物は、ｍＴＯＲＣ１の阻害剤である。他の態様において、前記式ＶＩＩＩの化合物は、ｍＴＯＲＣ２の阻害剤である。
【００１４】
一つの態様において、前記ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤は、式ＩＸ
【化２】
2014505076.tif 000004
［式中、
Ｈｅｔ１及びＨｅｔ２は、独立して、  （ｉ）Ｏ，  Ｎ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜７員複素環基、及びＯ，  Ｎ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する６〜１０員二環式複素環基から選択され；ここで各（ｉ）又は（ｉｉ）は、Ｃ１−Ｃ４アルキル，  ＮＨ２，  −Ｏ−Ｒ０，  ＣＮ，及びハロから選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換され；
Ｘ及びＺは、Ｎ及びＣＨから独立して選択され；
Ｒ１は、以下：
（ｉ）  Ｃ１−Ｃ１０アルキル，  Ｃ２−Ｃ１０アルケニル，  Ｃ２−Ｃ１０アルキニル，及びＣ３〜Ｃ１０シクロアルキル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル），アリール，ヘテロアリール，  及びヘテロシクリルからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｉ）アリール，ヘテロアリール及びヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロシクリル，  −Ｏ−Ｒ０，  −（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−ＯＲ０，  −Ｏ−（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−ＯＲ０，  −（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ０）−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，及び−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−アリールからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｉｉ）  −アリール−Ｃ（＝Ｏ）−アリール，  −アリール−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロアリール，及び−アリール−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，及び−ＯＲ０からなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｖ）  −アリール−アリール，  −アリール−ヘテロアリール，及び−アリール−ヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，  −Ｏ−Ｒ０からなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
からなる群から選択され、各Ｒ０は、Ｈ及びＣ１−Ｃ６アルキルから独立して選択され；又は窒素原子に結合した隣接する２つのＲ０が一緒になって、Ｎ，  Ｏ及びＳから選択される０〜２個の追加の環ヘテロ原子を有する５又は６員複素環を形成し、当該環は、Ｃ１−Ｃ４アルキル，  ＮＨ２，  −ＯＨ，  ＣＮ，及びハロからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される］
の化合物である。
【００１５】
一つの態様において、前記式ＩＸの化合物は、Ｗｙｅｔｈ  ＢＭＣＬ２０１０２６４４−１３である。一つの態様において、前記式ＩＸの化合物は、Ｗｙｅｔｈ  ＢＭＣＬ２０１０２６４８−２７である。
【００１６】
一つの態様において、前記式ＩＸの化合物は、ｍＴＯＲの特異的阻害剤である。一つの態様において、前記式ＩＸの化合物は、ｍＴＯＲＣ１の阻害剤である。他の態様において、前記式ＩＸの化合物は、ｍＴＯＲＣ２の阻害剤である。
【００１７】
一つの態様において、前記ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤は、式Ｘ
【化３】
2014505076.tif 000005
［式中、
Ｒ１が、ナフチル又はフェニルから選択され、（ｉ）ハロゲン；（ｉｉ）ハロゲン、シアノ、イミダゾール又はトリアゾリルにより置換されず、又は置換された低級アルキル；（ｉｉｉ）シクロアルキル；（ｉｖ）低級アルキル、低級アルキルスルホニル、低級アルコキシ及び低級アルコキシ低級アルキルアミノからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されたアミノ；（ｖ）低級アルキル及び低級アルキルスルホニルからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されない、又は置換されたピペラジニル；（ｖｉ）２―オキソ―ピロリジニル；（ｖｉｉ）低級アルコキシ低級アルキル；（ｖｉｉｉ）イミダゾリル；（ｉｘ）ピラゾリル；及び（ｘ）トリアゾリルからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されず、又は置換され；
Ｒ２がＯ又はＳであり；
Ｒ３が低級アルキルであり；
Ｒ４が、（ｉ）ハロゲン、シアノ、低級アルキル、低級アルコキシ又は低級アルキルにより置換されない、又は置換されたピペラジニルにより、置換されない、又は置換されたピリジル；（ｉｉ）低級アルコキシにより置換されない、又は置換されたピリミジニル；（ｉｉｉ）ハロゲンにより置換されない、又は置換されたキノリニル；又は（ｉｖ）キノキサリニルから選択され；
Ｒ５が、水素又はハロゲンであり；
ｎが０又は１であり；
Ｒ６がオキシドであり；但しｎ＝１のとき、Ｒ６基と結合するＮ原子は正電荷を有する；そして
Ｒ７は水素又はアミノである］
の化合物である。
【００１８】
一つの態様において、前記式Ｘの化合物は、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５である。
【００１９】
一つの態様において、前記式Ｘの化合物は、ｍＴＯＲの特異的阻害剤である。一つの態様において、前記式Ｘの化合物は、ｍＴＯＲＣ１の阻害剤である。他の態様において、前記式Ｘの化合物は、ｍＴＯＲＣ２の阻害剤である。
【００２０】
一つの態様において、前記化合物は、ＡＺＤ２０１４，  ＣＣ−２２３  （ＴＯＲＫｉ），  ＳＢ−２０１５，  ＮＶＰ−ＢＧＴ−２２６，  ＬＹ２９４００２，  ＧＳＫ２１２６４５８，  ＸＬ１４７，  ＸＬ７６５，  ＰＦ−０４６９１５０２，  Ｐ−２２８１，  ＧＤＣ−０９８０，  ＥＴＰ−４５６５８，  ＷＪＤ００８，  ＰＫＩ−１７９，  ＰＫＩ−４０２，  ＰＫＩ−５８７，  ＯＸＡ−０１，  化合物４０１，  ＺＳＴＫ−４７４，  ＰＩ−１０３，  及びパロミド−５２９から選択される。
【００２１】
一つの態様において、前記ウイルス感染は、ヘルペスウイルスによるものである。一つの態様において、前記ウイルス感染は、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ）及び２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（変異体Ａ及びＢ）、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８（カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ＫＳＨＶ）、並びにケルコピテキン（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１（Ｂウイルス）からなる群から選択されるウイルスによるものである。一つの態様において、前記ウイルス感染は、ヒトサイトメガロウイルス及びヒト単純ヘルペスウイルス１型から選択される。
【００２２】
一つの態様において、本発明は、更に、小胞体ストレス応答の阻害剤を、哺乳類の対象に投与する工程を含む。一つの態様において、当該小胞体ストレス応答の阻害剤は、４−フェニルブチレートである。一つの態様において、当該小胞体ストレス応答は、タウロウルソデオキシコール酸である。
【００２３】
一つの態様において、本発明は、ｍＴＯＲの阻害剤である、第一の化合物若しくはそのプロドラッグ、又は当該第一の化合物若しくはそのプロドラッグの医薬として許容される塩、及び、小胞体ストレス応答の阻害剤である、第二の化合物若しくはそのプロドラッグ、又は当該第二の化合物若しくはそのプロドラッグの医薬として許容される塩の、ウイルス感染を治療又は防止するための医薬の製造における使用に関する。
【００２４】
一つの態様において、本発明は、哺乳類におけるヘルペスウイルス感染を治療又は防止する方法であり、処置を必要とする哺乳類の対象に、治療有効量の、化合物若しくはそのプロドラッグ、又は当該化合物若しくはそのプロドラッグの医薬として許容される塩を投与する工程を含み、当該化合物が、小胞体ストレス応答の阻害剤である、前記方法に関する。一つの態様において、前記化合物は、化学シャペロンである。一つの態様において、前記化合物は、４−フェニルブチレートである。一つの態様において、前記化合物は、タウロウルソデオキシコール酸である。一つの態様において、前記ヘルペスウイルスは、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ）及び２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（変異体Ａ及びＢ）、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８（カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ＫＳＨＶ）、並びにケルコピテキン（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１（Ｂウイルス）からなる群から選択される。
【００２５】
一つの態様において、本発明は、哺乳類におけるヘルペスウイルス感染を治療又は防止するための医薬組成物であり、（ｉ）化合物若しくはそのプロドラッグ、又は当該化合物若しくはプロドラッグの医薬として許容される塩；及び（ｉｉ）医薬として許容される塩を含有し、当該化合物が、小胞体ストレス応答の阻害剤である、前記医薬組成物に関する。一つの態様において、前記化合物は、化学シャペロンである。一つの態様において、前記化合物は、４−フェニルブチレートである。一つの態様において、前記化合物は、タウロウルソデオキシコール酸である。一つの態様において、前記ヘルペスウイルスは、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ）及び２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（変異体Ａ及びＢ）、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８（カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ＫＳＨＶ）、並びにケルコピテキン（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１（Ｂウイルス）からなる群から選択される。
【００２６】
他の態様において、本発明は、ヘルペスウイルス感染を治療又は防止するため医薬の製造における、化合物若しくはそのプロドラッグ、又は当該化合物若しくはプロドラッグの医薬として許容される塩の使用であり、当該化合物が、小胞体ストレス応答の阻害剤である、前記使用に関する。一つの態様において、前記化合物は、化学シャペロンである。一つの態様において、前記化合物は、４−フェニルブチレートである。一つの態様において、前記化合物は、タウロウルソデオキシコール酸である。一つの態様において、前記ヘルペスウイルスは、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ）及び２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（変異体Ａ及びＢ）、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８（カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ＫＳＨＶ）、並びにケルコピテキン（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１（Ｂウイルス）からなる群から選択される。
【００２７】
他の態様において、哺乳類におけるヘルペスウイルス感染を治療又は防止するのに使用される、小胞体ストレス応答の阻害剤である、化合物若しくはそのプロドラッグ、又は当該化合物若しくはプロドラッグの医薬として許容される塩に関する。一つの態様において、前記化合物は、化学シャペロンである。一つの態様において、前記化合物は、４−フェニルブチレートである。一つの態様において、前記化合物は、タウロウルソデオキシコール酸である。一つの態様において、前記ヘルペスウイルスは、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ）及び２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（変異体Ａ及びＢ）、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８（カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ＫＳＨＶ）、並びにケルコピテキン（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１（Ｂウイルス）からなる群から選択される。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】ＨＣＭＶの複製は、Ｔｏｒｉｎ  １により阻害される。血清飢餓コンフルエントヒト線維芽細胞に、０．０５  ＰＦＵ／ｃｅｌｌの多重度で、ＨＣＲＶを感染させた。無細胞ウイルスは、ＴＣＩＤ５０アッセイにより定量し、エラーバーは、２つの独立した実験をそれぞれ２回行った結果の平均の標準誤差を表す。（Ａ）Ｔｏｒｉｎ  １は、ラパマイシンよりも強力にＨＣＭＶの複製を阻害する。ウイルスの吸収直後に、細胞を、ビヒクル単独（Ｎ）（黒棒）（ジメチルスルホキシド［ＤＭＳＯ］）、ラパマイシン（Ｔ）（灰色棒）（２０μＭ）、又はＴｏｒｉｎ  １（Ｔ）（白棒）（２５０ｎＭ）で処理した。上澄を一日おきに回収し、適切な成分を含有する新鮮な培地に差し替え、表示された日の、上澄中のウイルス数をアッセイした。（Ｂ）ＨＣＭＶの複製の阻害は用量依存的であり、細胞毒性によるものではない。感染した線維芽細胞を、様々な用量のＴｏｒｉｎ  １で処理した。薬剤を加えた培地を一日おきに差し替え、上澄中のウイルス数を、感染後８日目にアッセイした（黒棒）。８日の時点で、２番目の培養細胞のセットを２回洗浄し、薬剤を含まない無血清培地を各ウェルに添加し、更に８日経過後（感染後１６日）に、ウイルス数をアッセイした（白色棒）。（Ｃ）Ｔｏｒｉｎ  １は、無感染ヒト線維芽細胞に対し毒性を有しない。Ｔｏｒｉｎ  １（２５０ｎＭ）で処理した線維芽細胞の生存率を、トリパンブルー排除アッセイにより、１０日のタイムコースでモニタリングした。
【００２９】
【図２】Ｔｏｒｉｎ  １は、ＨＣＭＶのヒト線維芽細胞への挿入に影響しない。血清飢餓コンフルエント線維芽細胞に、多重度３  ＰＦＵ／ｃｅｌｌで、ＨＣＭＶを感染させた。（Ａ）Ｔｏｒｉｎ  １は、ウイルスＤＮＡの挿入をブロックしない。無血清コンフルエント線維芽細胞を、感染前（Ｐｒｅ）、又は吸収の直後１ｈｐｉ（Ｐｏｓｔ）、Ｔｏｒｉｎ  １（Ｔ）（２５０ｎＭ）で２４時間前処理した。対照の培養細胞には、Ｔｏｒｉｎ  １を溶解させていたビヒクルを添加した（ＮＴ）。２ｈｐｉで細胞を回収し、細胞に付着していたウイルスＤＮＡを、リアルタイムＰＣＲにより定量した。エラーバーは、２つの独立した試験を２回行い、その平均の標準誤差を表す。（Ｂ）Ｔｏｒｉｎ  １は、ＨＣＭＶ  ＩＥ１タンパク質の蓄積を変化させない。ＩＥ１のレベルは、ＩＥ１特異的モノクローナル抗体を使用するウエスタンブロットアッセイにより、６ｈｐｉの時点で決定された。画像は、２つの独立した試験の結果を表す。（Ｃ）Ｔｏｒｉｎ  １は、感染細胞のパーセンテージを変化させない。薬剤を添加した場合と不添加の場合における、ウイルスゲノム中に存在するＧＦＰマーカー遺伝子の発現を、感染後２４時間時点でモニタリングした。
【００３０】
【図３】Ｔｏｒｉｎ  １は、前初期タンパク質（ｉｍｍｅｄｉａｔｅ−  ｅａｒｌｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ）及び初期タンパク質（ｅａｒｌｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ）の蓄積に殆ど影響しないが、ＨＣＭＶ  ＤＮＡ及び後期タンパク質の蓄積を阻害する。（Ａ）ラパマイシン耐性ｍＴＯＲ活性は、全てではないが一部のＨＣＭＶタンパク質の蓄積を必要とする。血清飢餓コンフルエントヒト線維芽細胞に、多重度３  ＰＦＵ／ｃｅｌｌでＨＣＭＶを感染させ、続いて吸収直後に、ビヒクル（Ｎ）  （ＤＭＳＯ）、ラパマイシン（Ｒ）  （２０  ｎＭ）、又はＴｏｒｉｎ  １  （Ｔ）  （２５０  ｎＭ）でインキュベーションした。細胞は表示されている時間で回収され、ウエスタンブロットにより、表示されるタンパク質の蓄積が測定された。（Ｂ）Ｔｏｒｉｎ  １は、ＨＣＭＶ  ＤＮＡの蓄積を阻害する。血清飢餓コンフルエントヒト線維芽細胞に、多重度０．０５ＰＦＵ／ｃｅｌｌでＨＣＭＶを感染させ、上記（Ａ）と同様に、ビヒクル、ラパマイシン又はＴｏｒｉｎ  １でインキュベーションした。表示されている時間にＤＮＡを単離し、ウイルスＤＮＡを、ｑＰＣＲにより定量した。各試料ごとに同量のＤＮＡを解析に付し、結果を、試料あたりのアクチンＤＮＡのレベルで補正した。（Ｃ）ウイルス後期転写単位ＵＬ９９は、Ｔｏｒｉｎ  １処理により阻害される。ヒト線維芽細胞を、多重度３  ＰＦＵ／ｃｅｌｌでＨＣＭＶを感染させ、上記（Ａ）と同様に、ビヒクル、ラパマイシン又はＴｏｒｉｎ  １でインキュベーションした。表示されている時間に、ＵＬ９９のＲＮＡをｑＰＣＲにより定量し、そしてその結果を、各試料中のアクチンＲＮＡの量で補正した。
【００３１】
【図４】ラパマイシン耐性ｍＴＯＲ活性は、ＨＣＭＶ感染時の４ＥＢＰ１リン酸化及びｅＩＦ４Ｆ複合体の統合を必要とする。血清飢餓コンフルエントヒト線維芽細胞に多重度３  ＰＦＵ／ｃｅｌｌでＨＣＭＶを感染させた。１ｈｐｉの時点で、細胞を、薬剤を溶解させていたビヒクル（Ｎ）  （ＤＭＳＯ）、ラパマイシン（Ｒ）  （２０  ｎＭ）、又はＴｏｒｉｎ  １  （Ｔ）  （２５０  ｎＭ）で処理した。（Ａ）４８ｈｐｉの時点で、ｍＴＯＲＣ１の標的のリン酸化状態を、リン酸化された標的（４ＥＢＰ１−ＰＴ３７／４６及びｒｐＳ６−ＰＳ２３５／６）に対する、及び全タンパク質に対する抗体を使用するウエスタンブロットにより評価した。チューブリンをローディング対照とした。（Ｂ）細胞を表示されている時点で回収した点を除き、（Ａ）と同じである。（Ｃ及びＤ）モック感染（Ｍ）又はＨＣＭＶ感染（ＷＴ）を多重度３  ＰＦＵ／ｃｅｌｌで行い、培養細胞を、表示されている時点で回収した。各試料から同量のタンパク質を取り、ｍ７ＧＴＰ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅでインキュベーションし、そして単離されたタンパク質複合体を、ｅＩＦ４Ｆ複合体及び４ＥＢＰ１に対する表示されている抗体を使用して、ウエスタンブロットにより解析した。全ての場合において、記載の結果は、２つ以上の独立した実験の代表である。ｌｙｓは、ライゼートを意味する。
【００３２】
【図５】Ｔｏｒｉｎ  １により、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）の複製が阻害される。（Ａ）Ｔｏｒｉｎ  １はＭＣＭＶの子孫形成を阻害するが、ラパマイシンは阻害しない。マウス胚線維芽細胞（ＭＥＦ）に多重度０．０５  ＰＦＵ／ｃｅｌｌでＭＣＭＶを感染させ、そしてビヒクル（黒棒）  （ＤＭＳＯ）、ラパマイシン（灰色棒）  （２０  ｎＭ）、又はＴｏｒｉｎ  １  （白棒）  （２５０  ｎＭ）で処理した。薬物を含有する新鮮な無血清培地を、一日おきに添加した。表示されている時間に、無細胞上澄を回収し、そして上澄中のウイルス数をＴＣＩＤ５０法により定量した。エラーバーは、２つの独立した実験を２回行った平均の標準誤差を表す。（Ｂ）ＭＥＦに多重度３ＰＦＵ／ｃｅｌｌでＭＣＭＶを感染させ、上記（Ａ）と同じくビヒクル（Ｎ）、ラパマイシン（Ｒ）、若しくはＴｏｒｉｎ  １（Ｔ）で処理し、又はＬＹ２９４００２  （ＬＹ）  （２０  μＭ）で処理した。４８ｈｐｉの時点での、表示されているｍＴＯＲＣ１の標的のリン酸化状態を、リン酸化標的（４ＥＢＰ１−ＰＴ３７／４６及びｒｐＳ６−ＰＳ２３５／６）に対する、及び全タンパク質に対する抗体を使用する、ウエスタンブロットアッセイにより解析した。記載の結果は、３つの独立した実験の代表である。
【００３３】
【図６】ｍＴＯＲＣ２及びその標的のＡｋｔは、ラパマイシン耐性ｍＴＯＲ活性に関与しない。（Ａ）ＭＣＭＶの増殖は、ＲｉｃｔｏｒヌルＭＥＦ中のＴｒｉｎ１により阻害される。コンフルエント血清飢餓細胞に、多重度０．０５  ＰＦＵ／ｃｅｌｌでＭＣＭＶを感染させ、１ｈｐｉの時点で、ビヒクル（黒棒）（ＤＭＳＯ）、ラパマイシン（灰色棒）（２０  ｎＭ）又はＴｏｒｉｎｌ（白棒）（２５０  ｎＭ）を添加した。感染の６日後、無細胞の上澄中のＭＣＭＶの数を、ＴＣＩＤ５０法により判定した。（Ｂ）Ｔｏｒｉｎ  １は、ＲｉｃｔｏｒヌルＭＥＦ中の４ＥＢＰ１のリン酸化を阻害する。ＭＥＦには、多重度３  ＰＦＵ／ｃｅｌｌで、モック（Ｍ）又はＭＣＭＶ（ＷＴ）を感染させ、そして上記（Ａ）と同様に、ビヒクル（Ｎ）、ラパマイシン（Ｒ）又はＴｏｒｉｎ  １（Ｔ）で処理した。４８ｈｐｉで、ｍＴＯＲＣ１の標的のリン酸化状態を、表示されているタンパク質に特異的な抗体を使用するウエスタンブロットにより評価した。（Ｃ）ＲｉｃｔｏｒヌルＭＥＦの遺伝型を確認する。野生型及びＲｉｃｔｏｒヌルＭＥＦから全ＤＮＡを単離し、ＰＣＲを使用して遺伝型を確認した。（Ｄ）Ａｋｔ１ヌルＭＥＦ及びＡｋｔ２ヌルＭＥＦを使用した点を除き、（Ａ）と同様の試験を行った。（Ｅ）Ａｋｔ１ヌルＭＥＦ及びＡｋｔ２ヌルＭＥＦを使用した点を除き、（Ｂ）と同様の試験を行った。Ｂ及びＥにおいて、エラーバーは、それぞれ２回行われる独立した２つ以上の実験の平均の標準誤差を表す。Ｃ及びＥにおいて、チューブリンをローディング対照としてアッセイした。（Ｆ）Ａｋｔ１ヌル、及びＡｋｔ２ヌルＭＥＦにおいて、Ａｋｔは発現していない。野生型及び突然変異ＭＥＦから採取したタンパク質を、Ａｋｔに特異的な抗体を使用したウエスタンブロットにより解析した。
【００３４】
【図７】ｍＴＯＲＣ１の標的の４ＥＢＰ１の欠失は、Ｔｏｒｉｎ  １の存在下でのＭＣＭＶの複製を救済する。（Ａ）４ＥＢＰ１ヌルＭＥＦにおいて、ＭＣＭＶの増殖は、Ｔｏｒｉｎ  １により阻害されない。コンフルエント血清飢餓細胞に、多重度０．０５  ＰＦＵ／ｃｅｌｌでＭＣＭＶを感染させ、１ｈｐｉの時点で、ビヒクル（黒棒）（ＤＭＳＯ）、ラパマイシン（灰色棒）（２０  ｎＭ）又はＴｏｒｉｎｌ（白棒）（２５０  ｎＭ）を添加した。感染の６日後、無細胞の上澄中のＭＣＭＶの数を、ＴＣＩＤ５０法により判定した。エラーバーは、それぞれ２回行われる独立した３つの実験の平均の標準誤差を表す。（Ｂ）Ｔｏｒｉｎ  １は、４ＥＢＰ１ヌルＭＥＦ中のｃａｐ結合複合体からｅＩＦ４Ｇ又はｅＩＦ４Ａを排除しない。細胞には、多重度３  ＰＦＵ／ｃｅｌｌでＭＣＭＶ（ＷＴ）を感染させ、そして上記（Ａ）と同様に、ビヒクル（Ｎ）、ラパマイシン（Ｒ）又はＴｏｒｉｎ  １（Ｔ）で処理した。４８ｈｐｉで、ｍＴＯＲＣ１の標的のリン酸化状態を、表示されているタンパク質に特異的な抗体を使用するウエスタンブロットにより評価した。４８ｈｐｉの時点で、細胞のライゼートから回収した同量のタンパク質を、ｍ７Ｇ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅと共にインキュベーションした。Ｃａｐ類似体に結合するｅＩＦ４Ｆ複合体のコンポーネントの存在は、ウエスタンブロットにより判定された。当該結果は、２つの独立した実験の代表である。
【００３５】
【図８】ラパマイシン耐性ｍＴＯＲ活性は、代表的なα及びγヘルペスウイルスによるに必須である。（Ａ）コンフルエント血清飢餓ＭＥＦに、多重度０．０５  ＰＦＵ／ｃｅｌｌで、ＨＳＶ−１又はγＨＶ６８を感染させた。無細胞上澄中のウイルス数は、７２ｈｐｉでＨＳＶ−Ｉ（左）について、並びに感染後６日でγＨＣ６８（右）について、ＴＣＩＤ５０法により判定した。黒棒は、ビヒクルで処理した試料（Ｎ）（ＤＭＳＯ）を表し、灰色棒は、ラパマイシンで処理した試料（Ｒ）  （２０  ｎＭ）を表し、そして白棒は、Ｔｏｒｉｎ  １で処理した試料（Ｔ）  （２５０  ｎＭ）を表す。エラーバーは、独立した２つ以上の実験の平均の標準誤差を表す。（Ｂ）  コンフルエント血清飢餓ＭＥＦの単層に、多重度３ＰＦＵ／ｃｅｌｌで、ＨＳＶ−１又はγＨＶ６８を感染させた。８ｈｐｉで感染細胞のライゼートを回収し、同量のタンパク質を、ウエスタンブロットにより解析した。（Ｃ）ＷＴ又は４ＥＢＰ１ヌルＭＥＦに、多重度０．０５  ＰＦＵ／ｃｅｌｌで、ＨＳＶ−Ｉを感染させた。７２ｈｐｉで上澄中に存在する無細胞ウイルスの数をＴＣＩＤ５０法により定量した。エラーバーは、独立した２つ以上の実験の平均の標準誤差を表す。
【００３６】
【図９】ｍＴＯＲキナーゼを指向するｓｉＲＮＡによるヒト線維芽細胞の処理で引き起こされるＨＣＭＶの阻害を表す。ＭＲＣ５線維芽細胞（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−１７１）の継代２３〜２４番を、９６ウェルプラスチック組織培養ディッシュに、１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ）を添加したＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ−  Ａｌｄｒｉｃｈ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ＃Ｄ５７５６，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）中、７５００  ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で播種した。細胞を〜７０％コンフルエントになるまで増殖させた後、Ｏｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ）を使用して、説明書に従い、ＧＦＰ  ｍＲＮＡ  （非特異的）、ウイルスＩＥ２  ｍＲＮＡ又はｍＴＯＲキナーゼを標的とするｓｉＲＮＡを、１ｎｍｏｌトランスフェクションした。ＩＥ２  ｓｉＲＮＡ配列：  ５’−ＡＡＡＣＧＣＡＵＣＵＣＣＧＡＧＵＵＧＧＡＣ−３’  （配列番号：１）；  ＧＦＰ  ｓｉＲＮＡ配列：  ５’−ＧＣＡＡＧＣＵＧＡＣＣＣＵＧＡＡＧＵＵＣ  ＡＵ−３’  （配列番号：２）；  ｍＴＯＲキナーゼ（ＦＲＡＰ  １＿２）  ｓｉＲＮＡ配列：  ５’−  Ｇ  ＡＧＵＵＡＣ  ＡＧＵＣ  ＧＧＧＣ  ＡＵ  ＡＵ−３’  （配列番号：３）。全てのｓｉＲＮＡは、Ｓｉｇｍａ−  Ａｌｄｒｉｃｈから取得した。感染の４時間後、培地に、最終濃度が１０％となるようにＦＢＳを添加した。感染の２８時間後、培地の上澄を除去し、濃度０．１  ｐｆｕ／ｃｅｌｌのＨＣＭＶ株ＡＤ１６９を含む１００μｌのＤＭＥＭ／１０％ＦＢＳに置き換えた。感染は９６時間行われ、９６時間目に、培地の上澄を回収し、そして９６ウェルフォーマットの９０％コンフルエントＭＲＣ細胞の新鮮なプレートへの感染に使用された。当該レポータープレートへの感染の２４時間後、試料を−２０℃の氷冷メタノールで１５分間固定し、続いて、感染価を定量するために、免疫蛍光染色を行った。結果は、「ロバストＺスコア（ｒｏｂｕｓｔ  Ｚ  ｓｃｏｒｅ）」で表される。このスコアは、ｓｉＲＮＡ処理がない場合にもたらされる感染価の平均値の標準偏差に対応する。故に、ｍＴＯＲキナーゼ特異的ｓｉＲＮＡは２標準偏差を越える高度に顕著な効率で、感染性ＨＣＭＶの収率を低下させたことになる。
【００３７】
【図１０】４−ＰＢＡは、用量依存的に、ＨＣＭＶの複製を阻害する。ヒト線維芽細胞に、多重度０．１  ｐｆｕ／ｃｅｌｌでＨＣＭＶ株ＡＤ  １６９を感染させ、そして１０％ウシ胎児血清及び表示されている量の薬物を含有する培地中で維持した。薬物を含有する培地は、１日おきに交換した。細胞から離れた及び細胞と接したウイルスは、感染後８日で回収され、ＴＣＩＤ５０法により力価測定を行った。データは、２つの試料の力価のログ平均を表す。
【００３８】
【図１１】４−ＰＢＡは、非感染又は感染コンフルエントヒト線維芽細胞に対して毒性ではない。（Ａ）表示されている濃度の４−ＰＢＡを含有する培地中で、線維芽細胞を８日間維持した。タイムコースの期間中、一日置きに培地を交換した。処理期間の最後に、トリパンブルー排除アッセイにより細胞の生存率を測定した。データ点は、２つのウェルの平均を表す。（Ｂ）線維芽細胞に、多重度０．１  ｐｆｕ／ｃｅｌｌでＨＣＭＶを感染させた。表示されている濃度の４−ＰＢＡを含有する新鮮な培地を、１日置きに細胞に与えた。感染の８日後、細胞を培地で１回洗浄し、そして薬剤を含まない培地を加えた。更に８日後（感染の１６日後）、上澄中の無細胞ウイルスを、ＴＣＩＤ５０法により定量した。データ点は、２つのウェルの平均を表す。
【００３９】
【図１２】４−ＰＢＡは、ｍＴＯＲ阻害剤と協調して、用量依存的に、ＨＣＭＶ複製に干渉する。ヒト線維芽細胞に、多重度０．１  ｐｆｕ／ｃｅｌｌで、ＨＣＭＶ株ＡＤ  １６９を感染させ、そして１０％ウシ胎児血清及び表示されている量の薬物を含有する培地中で維持した。薬物は、以下の濃度で使用された：４−ＰＢＡ，  １  ｍＭ；  Ｔｏｒｉｎ  １，  ２５０  ｎＭ；  ラパマイシン，  ２０  ｎＭ。薬物を含有する培地は、１日おきに交換した。細胞から離れた及び細胞と接したウイルスは、感染後０、４、８及び１２日で回収され、ＴＣＩＤ５０法により力価測定を行った。データは、２つの試料の力価のログ平均を表す。
【００４０】
【図１３】ヒトサイトメガロウイルスの複製は、ｍＴＯＲ阻害剤により用量依存的に阻害される。約９５％コンフルエントのＭＲＣ５ヒト繊維芽細胞に、多重度０．５  ｐｆｕ／ｃｅｌｌでＨＣＭＶを感染させ、感染の２時間後、培地を、所定の濃度のＢＥＺ２３５  （右上），  ＩＮＫ１２８  （左上），  ＯＳＩ−０２７  （右下），  Ｗｙｅｔｈ  -  化合物２７  （Ｗｙｅｔｈ−ＢＭＣＬ２０１０２６４８  -  ２７）  （左下）を含有する新鮮な培地に交換した。感染後９６時間のＨＣＭＶの収量を判定し、未処理細胞のウイルス収量に対するパーセンテージとして表現した。当該アッセイで試験した化合物の効果の比較物に、Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（市販のＨＣＭＶ薬物）を使用した。処理後９６時間における未感染ＭＲＣ５細胞の生存率に対する前記化合物の効果は、Ｔｏｘｉｌｉｇｈｔバイオアッセイキット（Ｌｏｎｚａ）を使用して評価された。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
詳細な説明
ウイルスの複製は、宿主細胞の代謝ネットワークに由来する、エネルギー及び巨大分子前駆体を必要とする。代謝流束をプロファイリングするための統合的アプローチを使用して、発明者らは、ウイルス感染に応答して、特定の代謝物の濃度及びフラックスが変化することを見出した。当該プロファイリング手法は、ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００６９５９に記載されており、当該文献は、その全文を参照により本書に組み込む。このアプローチを使用して、様々な代謝経路における特定の酵素、特に鍵となる「スイッチ」とみなされる酵素が、ウイルスの複製を妨げ、正常な代謝流束のプロフィールを修復するための介入の標的；即ち代謝流束を方向転換するための標的として有用であり、ゆえに、抗ウイルス治療の標的とみなされることが見出された。加えて、代謝経路における「不可逆」反応又は関与段階（ｃｏｍｍｉｔｔｅｄ  ｓｔｅｐ）を触媒する酵素は、抗ウイルス治療の酵素標的として、有利に使用出来る。
【００４２】
下記に、本発明に係る抗ウイルス化合物及び標的酵素、新規抗ウイルス化合物を同定及び特定するスクリーニングアッセイ、並びにウイルス感染を治療及び防止する抗ウイルス治療剤としてのそれらの使用を、より詳細に記載する。本発明に係る化合物として、ｍＴＯＲ活性の阻害剤及び小胞体ストレス応答の阻害剤が挙げられ、それらは単独で、又は組み合わせて、ウイルス感染の治療又は防止に使用出来る。
【００４３】
１．ｍＴＯＲの調節因子
一つの態様において、本発明は、哺乳類におけるウイルス感染を治療又は予防する方法を提供し、当該方法は、治療有効量の化合物又はその関連物質、類似体、又は誘導体を、当該方法の適用を必要とする対象に投与することを含み、当該化合物は、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤である。ｍＴＯＲの阻害剤は、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２、又はｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２の両方を阻害できる。一つの態様において、前記化合物は、ｍＴＯＲの特異的阻害剤である。一つの態様において、前記化合物は、ｍＴＯＲ及び他のキナーゼ、例えばＰＩ３Ｋの阻害剤である。
【００４４】
ラパマイシン及びその類似体は、ＦＫＢＰ−１２タンパク質に結合し、ｍＴＯＲのＦＫＢＰ−ラパマイシン結合（ＦＫＢ）ドメインとの複合体の形成を仲介する。この相互作用は、Ｓ６Ｋのリン酸化等の、ｍＴＯＲＣ１の特定の機能を阻害する。しかしながら、ｍＴＯＲＣ１には、４ＥＰＢ（ｅＩＦ４Ｅ結合タンパク質）のリン酸化等、ラパマイシンに耐性の他の機能が存在する。加えて、前記ＦＫＢＰ−ラパマイシン複合体はｍＴＯＲＣ２と相互作用しないので、ｍＴＯＲＣ２の機能はラパマイシンによる阻害に耐性である。故に、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性の機能は、ｍＴＯＲＣｌ及び／又はｍＴ０ＲＣ２のいずれにも存在する。
【００４５】
低分子阻害剤
ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能を阻害する化合物は、ｍＴＯＲキナーゼドメイン阻害剤を含む。そのような化合物は、例えば、ｍＴＯＲキナーゼドメインのＡＴＰ結合部位に選択的に結合できる。ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤は、例えばＩＣ５０で比較したとき、表１に記載した１つ以上のキナーゼと比較して、ｍＴＯＲにおいて、＞２，  ＞５，  ＞１０，  ＞２０，  ＞５０，  又は＞１００倍の選択性を示す。好ましい態様において、前記ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤の選択性は、ＰＩ３Ｋと比較して、＞２，  ＞５，  ＞１０，  ＞２０，  ＞５０，  又は＞１００倍の選択性を有する。一つの態様において、ｍＴＯＲキナーゼの阻害剤である化合物は、他のキナーゼ、例えばＰＩ３Ｋの阻害剤でもある。
【００４６】
本発明に係る化合物として、小分子が挙げられる。本明細書中で使用されるとき、「化学剤」及び「小分子」という用語は区別されずに用いられ、いずれの用語も、分子量が最大で約４０００原子質量単位（Ｄａｌｔｏｎ）、好ましくは最大で約２０００Ｄａｌｔｏｎ、そしてより好ましくは、最大で約１０００Ｄａｌｔｏｎの物質を指す。他に特段の言及が無い限り、本明細書中で使用されるとき、「小分子」という用語は、化学剤のみを指し、生物剤を指さない。本明細書中で使用されるとき、「生物剤」は、分子量が約２０００原子質量単位（Ｄａｌｔｏｎ）以上の、タンパク質、ポリペプチド及び核酸を含む分子である。本発明に係る化合物として、塩、エステル及びそれらの化合物の医薬として許容される形態が挙げられる。
【００４７】
その全文を参照により本書に組み込むＷＯ２０１０／０４４８８５には、ｍＴＯＲの小分子調節因子が記載されている。この文献には、式Ｉ：
【化４】
2014505076.tif 000006
［式中、
Ｒ１は、６−１０員アリール；Ｃ７−１５アリールアルキル；  Ｃ６−１５ヘテロアリールアルキル；  Ｃ１−１２ヘテロ脂肪族（ｈｅｔｅｒｏａｌｉｐｈａｔｉｃ）；  Ｃ１−１２脂肪族；窒素、酸素及び硫黄からなる群から独立して選択される１−４のヘテロ原子を有する５−１０−員ヘテロアリール；並びに窒素、酸素及び硫黄からなる群から独立して選択される１−２のヘテロ原子を有する４−７−員複素環；からなる群から選択される任意で置換された基であり、
それぞれの場合に、Ｒ２は、独立して、ハロゲン、−ＮＲ２、−ＯＲ、−ＳＲ、又はＣ１−１２アシル；  ６−１０−員アリール；  Ｃ７−１５アリールアルキル；  Ｃ６−１５ヘテロアリールアルキル；  Ｃ１−１２ヘテロ脂肪族；  Ｃ１−１２脂肪族；窒素、酸素及び硫黄からなる群から独立して選択される１−４のヘテロ原子を有する５−１０−員ヘテロアリール；並びに窒素、酸素及び硫黄からなる群から独立して選択される１−２のヘテロ原子を有する４−７−員複素環；からなる群から選択される任意で置換された基であり；ｊは１〜４の整数であり；
Ｒ３及びＲ４は、独立して、水素、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロゲン、又は任意で置換されたＣ１−６脂肪族であり、但しＲ３及びＲ４は一緒に環を形成せず；そして各Ｒは独立して、水素、Ｃ１−１２アシル；  ６−１０−員アリール；  Ｃ７−１５アリールアルキル；  Ｃ６−１５ヘテロアリールアルキル；  Ｃ１−１２脂肪族；窒素、酸素及び硫黄からなる群から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５−１０−員ヘテロアリール；窒素、酸素及び硫黄からなる群から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４−７−員複素環；並びに窒素、酸素及び硫黄からなる群から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有するＣ１−１２ヘテロ脂肪族；からなる群から選択される任意で置換された基であり；又は
同一の窒素原子上の２つのＲが、その窒素と一緒に、窒素、酸素及び硫黄からなる群から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４−７−員複素環を形成する］
のピリジノンキノリンが記載されている。
【００４８】
ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤として、以下のものが挙げられる。
【００４９】
Ｔｏｒｉｎ  １
【化５】
2014505076.tif 000007
は、ＩＣ５０が約２−１０  ｎＭの、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２のＡＴＰ−競合的阻害剤である、ピリジノンキノリン化合物である。Ｔｏｒｉｎ  １は、ヘルペスウイルスに対する活性を有する抗ウイルス剤として、本明細書中で例示されている。
【００５０】
その全文を参照により本書に組み込むＵＳ  ２００９／００９９１７４には、ｍＴＯＲの選択的阻害剤が記載されている。この文献には、式ＩＩ：
【化６】
2014505076.tif 000008
［式中、
Ｘ５、Ｘ６及びＸ８の１つ又は２つがＮであり、それ以外はＣＨであり；
Ｒ７は、ハロ、ＯＲＯ１、ＳＲＳ１、ＮＲＮ１ＲＮ２、ＮＲＮ７ａＣ（＝Ｏ）Ｒα、ＮＲＮ７ｂＳＯ２ＲＳ２ａ、任意で置換されたＣ５−２０ヘテロアリール基、又は任意で置換されたＣ５−２０アリール基から選択され、ここで、Ｒ０１及びＲＳ１は、Ｈ、任意で置換されたＣ５−２０アリール基、任意で置換されたＣ５−２０ヘテロアリール基、又は任意で置換されたＣ１−７アルキル基から選択され；ＲＮ１及びＲＮ２は、独立して、Ｈ、任意で置換されたＣ１−７アルキル基、任意で置換されたＣ５−２０ヘテロアリール基、任意で置換されたＣ５−２０アリール基から選択され、又はＲＮ１及びＲＮ２は、それらが結合する窒素と一緒になって３〜８個の環原子を含む複素環を形成し；ＲＣ１は、Ｈ、任意で置換されたＣ５−２０アリール基、任意で置換されたＣ５−２０ヘテロアリール基、任意で置換されたＣ１−７アルキル基、又はＮＲＮ８ＲＮ９から選択され、ここでＲＮ８及びＲＮ９は、独立して、Ｈ、任意で置換されたＣ１−７アルキル基、任意で置換されたＣ５−２０ヘテロアリール基、任意で置換されたＣ５−２０アリール基から選択され、又はＲＮ８及びＲＮ９は、それらが結合する窒素と一緒になって３〜８個の環原子を含む複素環を形成し；ＲＳ２ａは、Ｈ、任意で置換されたＣ５−２０アリール基、任意で置換されたＣ５−２０ヘテロアリール基、又は任意で置換されたＣ１−７アルキル基から選択され；ＲＮ７ａ及びＲＮ７ｂは、Ｈ及びＣ１−４アルキル基から選択され；
ＲＮ３及びＲＮ４は、それらが結合する窒素と一緒になって、３〜８個の環原子を含む複素環を形成し；
Ｒｚは、Ｈ、ハロ、ＯＲＯ２、ＳＲＳ２ｂ、ＮＲＮ５ＲＮ６、任意で置換されたＣ５−２０ヘテロアリール基、及び任意で置換されたＣ５−２０アリール基から選択され、ここでＲ０２及びＲＳ２ｂは、Ｈ、任意で置換されたＣ５−２０アリール基、任意で置換されたＣ５−２０ヘテロアリール基、又は任意で置換されたＣ１−７アルキル基から選択され；ＲＮ５及びＲＮ６は、独立して、Ｈ、任意で置換されたＣ１−７アルキル基、任意で置換されたＣ５−２０アリール基から選択され、又はＲＮ５及びＲＮ６は、それらが結合する窒素と一緒になって、３〜８個の環原子を有する複素環を形成する］
の化合物が記載されている。
【００５１】
化合物Ｋｕ−００６３７９４は、ｍＴＯＲの選択的阻害剤であり、以下の化学構造を有する。
【化７】
2014505076.tif 000009
Ｋｕ−００６３７９４は、ｍＴＯＲを１０ｎＭのＩＣ５０で阻害し、ＰＩ３キナーゼについて選択的である（Ｐ１１０αアイソフォーム、ＩＣ５０  １０ｎＭ）  （Ｇａｒｃｉａ−Ｍａｒｔｉｎｅｚ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｊ．  ４２１：２９−４２）。
【００５２】
その全文を参照により本書に組み込むＷＯ２０１０／００６０７２には、式ＩＩＩ又は式ＩＶ：
【化８】
2014505076.tif 000010
［式中、
ｎは、１〜５の整数であり；ｚは１〜２の整数であり；
Ｒ１、Ｒ３、及びＲ４は、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＳＯ２、−ＣＯＯＨ、置換された、若しくは置換されていないアルキル、置換された、若しくは置換されていないヘテロアルキル、置換された、若しくは置換されていないシクロアルキル、置換された、若しくは置換されていないヘテロシクロアルキル、置換された、若しくは置換されていないアリール、又は置換された、若しくは置換されていないヘテロアリールであり；
Ｒ２及びＲ６は、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＲ５、−ＮＨ２、−ＳＯ２、−ＣＯＯＨ、置換された、若しくは置換されていないアルキル、置換された、若しくは置換されていないヘテロアルキル、置換された、若しくは置換されていないシクロアルキル、置換された、若しくは置換されていないヘテロシクロアルキル、置換された、若しくは置換されていないアリール、又は置換された、若しくは置換されていないヘテロアリールであり；かつ
Ｒ５は、独立して、水素、置換された、若しくは置換されていないアルキル、置換された、若しくは置換されていないヘテロアルキル、置換された、若しくは置換されていないシクロアルキル、置換された、若しくは置換されていないヘテロシクロアルキル、置換された、若しくは置換されていないアリール、又は置換された、若しくは置換されていないヘテロアリールである］
のｍＴＯＲの選択的阻害剤が記載されている。
【００５３】
化合物ＰＰ３０は、ｍＴＯＲの選択的阻害剤であり、以下の化学構造を有する。
【化９】
2014505076.tif 000011
ＰＰ３０は、ｍＴＯＲを８０ｎＭのＩＣ５０で阻害し、ＰＩ３キナーゼについて選択的である（Ｐ１１０αアイソフォーム、ＩＣ５０  ３ｎＭ）。
【００５４】
化合物ＰＰ２４２は、式ＩＩＩの化合物の一つであり、以下の化学構造を有する。
【化１０】
2014505076.tif 000012
ＰＰ２４２は、ｍＴＯＲを８ｎＭのＩＣ５０で阻害し、ＰＩ３キナーゼについて選択的である（Ｐ１１０αアイソフォーム、ＩＣ５０  ２ｎＭ）。
【００５５】
本発明は、更に、式Ｖ及びＶＩの選択的ｍＴＯＲ阻害剤、並びに式Ｖ、ＶＩ及びＶＩＩのデュアルｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ阻害剤を提供する。
【化１１】
2014505076.tif 000013
［式中、
Ｒ１，  Ｒ３，  Ｒ４，  及びＲ７は、独立して水素、ハロゲン，  −ＣＮ，  −ＣＦ３，  −ＯＨ，  −ＮＨ２，  −ＳＯ２，  −ＣＯＯＨ，  置換された、若しくは置換されていないアルキル，  置換された、若しくは置換されていない  ヘテロアルキル，  置換された、若しくは置換されていないシクロアルキル，  置換された、若しくは置換されていないヘテロシクロアルキル，  置換された、若しくは置換されていないアリール，  又は置換された、若しくは置換されていないヘテロアリールであり；
あるいはＲ３及びＲ４は、それらと結合する窒素原子と共に、（ｉ）Ｎ，Ｏ及びＳから選択される０〜２個の追加のヘテロ原子を有する５〜７員複素環基、又は（ｉｉ）Ｎ，Ｏ及びＳから選択される０〜３個の追加のヘテロ環を有する６〜９員複素二環基を形成し；各（ｉ）（ｉｉ）は、ハロゲン、−ＣＮ，  −ＣＦ３，  −ＯＨ，  −ＮＨ２，  −ＳＯ２，  −ＣＯＯＨ，  置換された、若しくは置換されていないアルキルからなる群から選択された１〜３個の置換基で置換されず、又は置換されてもよい；
Ｒ８は-ＯＨ，  -ＮＨ２，  置換された、若しくは置換されていない尿素であり；
Ｘ及びＺは、独立してＮ又はＣＨであり；そして
ＹはＳ又はＮＲ７である］
【００５６】
ＷＹＥ−１２５１３２及びＷｙｅｔｈ−ＢＭＣＬ２００９６８３０-２７は式Ｖの化合物であり、以下の化学構造を有する。
【化１２】
2014505076.tif 000014
【００５７】
ＧＮＥ−４９３及びＧＮＥ−０９４１は式ＶＩの化合物であり、以下の化学構造を有する。
【化１３】
2014505076.tif 000015
【００５８】
Ｗｙｅｔｈ  ＢＭＣＬ  ２０１０２６４４−１３及びＷｙｅｔｈ  ＢＭＣＬ  ２０１０２６４８−２７は式ＶＩＩの化合物であり、以下の化学構造を有する。
【化１４】
2014505076.tif 000016
【００５９】
更に、本発明は、式（ＶＩＩＩ）の化合物、及びその医薬として許容される塩を提供する。
【化１５】
2014505076.tif 000017
［式中、
ＸはＯ又はＳであり；
Ｒ１  は、Ｈ，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  −ＣＲ１４Ｒ１５−ＮＲ１６Ｒ１７，  −ＣＲ１４Ｒ１５−ＮＨＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（Ｒ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＯＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＳ（Ｏ）２Ｒ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＳ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（ＯＲ１０）Ｒ１１Ｒ１４，  −Ｃ（Ｒ１４）＝ＣＲ１８Ｒ１９，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１２ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１２（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＯ２，  −ＮＨＲ１２，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −ＮＲ１２ＳＯ２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  Ｃ２−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ１２アルキル−Ｒ１０，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，又はＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから選択され；
Ｒ２  は、Ｈ，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（−Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｍＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，及びＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから選択され；
Ｒ３は、Ｃ２−Ｃ５ヘテロシクリル，  Ｃ２−Ｃ５ヘテロアリール，融合二環式Ｃ４−Ｃ２０ヘテロシクリル  又は融合二環式Ｃ３−Ｃ２０ヘテロアリールであり、それらはそれぞれ置換されておらず、又は任意で置換され；
Ｒ１０，  Ｒ１１及びＲ１２は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール，又はＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールであり、又は
Ｒ１０とＲ１１は、それらに結合している窒素原子と共に、任意で、部分的に不飽和の、又は完全に不飽和のＣ３−Ｃ２０複素環を形成し、当該環は、任意でＮ，  Ｏ又はＳから選択される１つ以上の追加の環原子を有し、当該複素環は、オキソ，  （ＣＨ２）ｍＯＲ１０ＮＲ１０Ｒ１１，  ＣＦ３，  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＳＯ２Ｒ１０，  Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１０，  ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１１，  ＮＲ１２Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１，  Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル，  Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  Ｃ６−Ｃ２０アリール及びＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから独立して選択される１つ以上の基で任意で置換され；
Ｒ１４及びＲ１５は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  ｏｒ  −（ＣＨ２）ｎ−アリールから選択され、又は
Ｒ１４及びＲ１５は、それらに結合している原子と共に、飽和した、又は部分的に不飽和のＣ３−Ｃ１２炭素環を形成し；
Ｒ１６及びＲ１７は、独立してＨ，  Ｃ１−Ｃ１２アルキル，  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  Ｃ２−Ｃ８アルキニル，  Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル、又はＣ６−Ｃ２０アリールから選択され、
Ｒ１８及びＲ１９は、それらに結合している炭素原子と共に、Ｃ３−Ｃ２０複素環を形成し、
ここで、上記アルキル，アルケニル，アルキニル，カルボシクリル，ヘテロシクリル，アリール及びヘテロアリールは、  Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，オキソ，  Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＝ＮＲ１２，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  任意に置換されたＣ１−Ｃ１２アルキル，  任意に置換された  Ｃ２−Ｃ８アルケニル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ８アルキニル，  任意に置換されたＣ３−Ｃ１２カルボシクリル，  任意に置換されたＣ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  任意に置換されたＣ６−Ｃ２０アリール，  任意に置換されたＣ１−Ｃ２０ヘテロアリール，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  及び（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔＮＲ１０Ｒ１１から独立して選択された１つ以上の基で任意に置換され；
Ｙは、Ｏ，  Ｓ，又はＮＲ１２であり；
ｍ  は、０，  １，  ２，  ３，  ４，  ５又は６であり；
ｎは、１，  ２，  ３，  ４，  ５又は６であり；そして
ｔは、１，  ２，  ３，  ４，  ５又は６である］
【００６０】
上記式（ＶＩＩＩ）において、アルキル，アルケニル，アルキニル，カルボシクリル，ヘテロシクリル，アリール，ヘテロアリール，  融合二環ヘテロシクリル，  及び融合二環ヘテロアリールである置換基は、任意で、Ｆ，  Ｃｌ，  Ｂｒ，  Ｉ，  ＣＮ，  ＣＦ３，  −ＮＯ２，  −ＮＨ２，オキソ，  Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＮＲ１０Ｒ１１，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｎＯＲ１０，  −ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＯＲ１１，  −ＮＲ１２Ｃ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０，  ＝ＮＲ１２，  ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＯＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  −ＯＳ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＯＰ（＝Ｙ）（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  −ＯＰ（ＯＲ１０）（ＯＲ１１），  ＳＲ１０，  −Ｓ（Ｏ）Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０，  −Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１０Ｒ１１，  −Ｓ（Ｏ）（ＯＲ１０），  −Ｓ（Ｏ）２（ＯＲ１０），  −ＳＣ（＝Ｙ）Ｒ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＯＲ１０，  −ＳＣ（＝Ｙ）ＮＲ１０Ｒ１１，  任意で置換されたＣ１−Ｃ１２  アルキル，  任意で置換されたＣ２−Ｃ８  アルケニル，  任意で置換されたＣ２−Ｃ８アルキニル，  任意で置換されたＣ３−Ｃ１２カルボシクリル，  任意で置換されたＣ２−Ｃ２０ヘテロシクリル，  任意で置換されたＣ６−Ｃ２０アリール，  任意で置換されたＣ１−Ｃ２０  ヘテロアリール，  −（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲ１４Ｒ１５）ＮＲ１０Ｒ１１，  及び（ＣＲ１４Ｒ１５）ｔ−ＮＲ１０Ｒ１１からなる群から選択される１つ以上の置換基で置換される。
【００６１】
式ＶＩＩＩの化合物は、ＧＮＥ−４９３及びＧＮＥ−０９４１（構造は上記）、ＧＮＥ−４９０及びＧＮＥ−４７７を含む。
【化１６】
2014505076.tif 000018
【００６２】
本発明は、更に、式ＩＸのｍＴＯＲ阻害剤を提供する。
【化１７】
2014505076.tif 000019
［式中、
Ｈｅｔ１及びＨｅｔ２は、独立して、  （ｉ）Ｏ，  Ｎ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜７員複素環基、及びＯ，  Ｎ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する６〜１０員二環式複素環基から選択され；ここで各（ｉ）又は（ｉｉ）は、Ｃ１−Ｃ４アルキル，  ＮＨ２，  −Ｏ−Ｒ０，  ＣＮ，及びハロから選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換され；
Ｘ及びＺは、Ｎ及びＣＨから独立して選択され；
Ｒ１は、以下：
（ｉ）  Ｃ１−Ｃ１０アルキル，  Ｃ２−Ｃ１０アルケニル，  Ｃ２−Ｃ１０アルキニル，及びＣ３〜Ｃ１０シクロアルキル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル），アリール，ヘテロアリール，  及びヘテロシクリルからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｉ）アリール，ヘテロアリール及びヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロシクリル，  −Ｏ−Ｒ０，  −（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−ＯＲ０，  −Ｏ−（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−ＯＲ０，  −（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｏ−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，  −Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ０）−（Ｃ２−Ｃ１０アルキル）−Ｎ（Ｒ０）２，及び−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−アリールからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｉｉ）  −アリール−Ｃ（＝Ｏ）−アリール，  −アリール−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロアリール，及び−アリール−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，及び−ＯＲ０からなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
（ｉｖ）  −アリール−アリール，  −アリール−ヘテロアリール，及び−アリール−ヘテロシクリル；それぞれ、ハロ，  −Ｎ（Ｒ０）２，  ＣＮ，  ＮＯ２，  Ｃ１−Ｃ６アルキル，  Ｃ２−Ｃ６アルケニル，  −Ｏ−Ｒ０からなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される；
からなる群から選択され、各Ｒ０は、Ｈ及びＣ１−Ｃ６アルキルから独立して選択され；又は窒素原子に結合した隣接する２つのＲ０が一緒になって、Ｎ，  Ｏ及びＳから選択される０〜２個の追加の環ヘテロ原子を有する５又は６員複素環を形成し、当該環は、Ｃ１−Ｃ４アルキル，  ＮＨ２，  −ＯＨ，  ＣＮ，及びハロからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されず、又は置換される］
【００６３】
式ＩＸの化合物は、Ｚａｓｋ  ｅｔ  ａｌ，  Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔ．  （２０１０）  ２０：２６４４−２６４７に開示される化合物１〜１５及びに開示される化合物１８〜３９も含む。これらの式ＩＸの化合物は、Ｗｙｅｔｈ  ＢＭＣＬ  ２０１０２６４４−１３及びＷｙｅｔｈ  ＢＭＣＬ  ２０１０２６４８−２７を含む。
【００６４】
本発明は、更に、式ＸのｍＴＯＲ及びｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ阻害剤を提供する。
【化１８】
2014505076.tif 000020
［式中、
Ｒ１が、ナフチル又はフェニルから選択され、（ｉ）ハロゲン；（ｉｉ）ハロゲン、シアノ、イミダゾール又はトリアゾリルにより置換されず、又は置換された低級アルキル；（ｉｉｉ）シクロアルキル；（ｉｖ）低級アルキル、低級アルキルスルホニル、低級アルコキシ及び低級アルコキシ低級アルキルアミノからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されたアミノ；（ｖ）低級アルキル及び低級アルキルスルホニルからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されない、又は置換されたピペラジニル；（ｖｉ）２―オキソ―ピロリジニル；（ｖｉｉ）低級アルコキシ低級アルキル；（ｖｉｉｉ）イミダゾリル；（ｉｘ）ピラゾリル；及び（ｘ）トリアゾリルからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基により置換されず、又は置換され；
Ｒ２がＯ又はＳであり；
Ｒ３が低級アルキルであり；
Ｒ４が、（ｉ）ハロゲン、シアノ、低級アルキル、低級アルコキシ又は低級アルキルにより置換されない、又は置換されたピペラジニルにより、置換されない、又は置換されたピリジル；（ｉｉ）低級アルコキシにより置換されない、又は置換されたピリミジニル；（ｉｉｉ）ハロゲンにより置換されない、又は置換されたキノリニル；又は（ｉｖ）キノキサリニルから選択され；
Ｒ５が、水素又はハロゲンであり；
ｎが０又は１であり；
Ｒ６がオキシドであり；但しｎ＝１のとき、Ｒ６基と結合するＮ原子は正電荷を有する；そして
Ｒ７は水素又はアミノである］
【００６５】
ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５は式Ｘの化合物の一つであり、以下の化学構造を有する。
【化１９】
2014505076.tif 000021
【００６６】
上記で開示した化合物に加えて、本発明で使用出来る選択的ｍＴＯＲ阻害剤として、ＫＵ−ＢＭＣＬ−２００９０８０６９−１；  ＫＵ−ＢＭＣＬ−２００９０８０６９−５  （ＩＣ５０  ２１  ｎｍｏｌ；  ＰＩ３Ｋの＞５００倍の選択性）；  ＷＡＹ−６００  （ＩＣ５０  ９  ｎｍｏｌ；ＰＩ３Ｋαの＞１００倍の選択性及びＰＩ３Ｋγの＞５００倍の選択性）；  ＷＹＥ−６８７  （ＩＣ５０  ７  ｎｍｏｌ；  ＰＩ３Ｋαの＞１００倍の選択性及びＰＩ３Ｋγの＞５００倍の選択性）；  ＷＹＥ−３５４  （ＩＣ５０  ５  ｎｍｏｌ；  ＰＩ３Ｋαの＞１００倍の選択性及びＰＩ３Ｋγの＞５００倍の選択性）；  Ｗｙｅｔｈ−ＢＭＣＬ−２００９１００７５−９ｂ  （ＩＣ５０  ０．７  ｎｍｏｌ；  ＰＩ３Ｋの＞１０００倍の選択性）；  Ｗｙｅｔｈ−ＢＭＣＬ−２００９１００９６−２７  （ＩＣ５０  ０．６  ｎｍｏｌ；  ＞ＰＩ３Ｋαの＞２００倍の選択性）；  ＩＮＫ１２８  （Ｉｎｔｅｌｌｉｋｉｎｅ，  Ｉｎｃ．）  （ＩＣ５０  １  ｎｍｏｌ；  ＞ＰＩ３Ｋの＞１００倍の選択性）；  ＸＬ３８８  （Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）  （ｍＴＯＲＣ１に対しＩＣ５０  ９．８  ｎｍｏｌ及びｍＴＯＲＣ２に対し１６６  ｎＭ；  １４０のプロテインキナーゼ（ＩＣ５０  ＞３μＭ）の＞１００倍の選択性）；  ＡＺＤ８０５５  （Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）  （ＩＣ５０  ０．１３  ｎｍｏｌ；ｐ１００αの＞１０，０００倍の選択性）；及びＯＳＩ−０２７  （ＯＳＩ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）が含まれる。他のＡＴＰ競合性特異的ｍＴＯＲ阻害剤として、ＷＹＥ−１２５１３２  （ＩＣ５０  ０．１９  ｎｍｏｌ；ＰＩ３Ｋの＞５，０００倍の選択性）が含まれる。本発明に使用出来る他のｍＴＯＲ阻害剤として、ＷＯ２００６／０９０１６７，  ＷＯ２００６／０９０１６９，  ＷＯ２００７／０６０４０４，  ＷＯ２００７／０８０３８２，  及びＷＯ２００８／０２３１６１に開示されるものが含まれる。
【化２０】
2014505076.tif 000022
【００６７】
本発明に使用出来る追加のｍＴＯＲ阻害剤及び二元ｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ阻害剤として、ＡＺＤ２０１４  （Ｚａｓｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ．  Ｐａｔｅｎｔｓ  （２０１１）  ２１：１１０９−１１２７）；  ＣＣ−２２３  （ＴＯＲＫｉ）  （Ｚａｓｋ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１））：  ＳＢ−２０１５  （Ｂｏｎｄａｙ，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，  Ｄｅｎｖｅｒ，  ＣＯ，  ＵＳＡ  （２００９）  １００：Ａｂｓ  ３７１０）；  ＮＶＰ−ＢＧＴ−２２６  （Ｚａｓｋ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）；  Ｒｉｃｈａｒｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．  ＆  Ｄｅｖ．  （２０１０）  １３：４２８−４４０）；及び以下の化合物が含まれる。
【化２１】
2014505076.tif 000023
【００６８】
本発明において、以下のｍＴＯＲ阻害剤（ＷＯ  ２０１０／０５１０４３）も使用できる。
【化２２−１】
2014505076.tif 000024
【化２２−２】
2014505076.tif 000025
【化２２−３】
2014505076.tif 000026
【００６９】
本明細書中で使用されるとき、「医薬として許容される塩」という用語は、医薬として許容される、無毒性の、無機酸及び塩基並びに有機酸及び塩基を含む、酸又は塩基から調製される塩を指す。前記化合物の医薬として許容される塩基付加塩として適切なものとして、限定されないが、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム及び亜鉛等から作られる金属塩、又はリシン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）及びプロカイン等の有機塩が挙げられる。適切な無毒性の酸として、限定されないが、酢酸、アルギン酸、アントラニル酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エテンスルホン酸、蟻酸、フマル酸、フロン酸、ガラクツロン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グリコール酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、硝酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、リン酸、プロピオン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、硫酸、酒石酸、及びｐ−トルエンスルホン酸が挙げられる。具体的な無毒性の酸として、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、及びメタンスルホン酸が挙げられる。具体的な塩の例として、塩酸塩およびメシル酸塩（ｍｅｓｙｌａｔｅ）が挙げられる。他にも当該技術分野で周知の塩が挙げられ、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １８ｔｈ  ｅｄｓ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  Ｅａｓｔｏｎ  ＰＡ  （１９９０）  ｏｒ  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  １９ｔｈ  ｅｄｓ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  Ｅａｓｔｏｎ  ＰＡ  （１９９５）を参照されたい。
【００７０】
本明細書中で使用され、他に特段の言及がないとき、「水和物」という用語は、共有結合でない分子間力により結合した、化学量論的、又は非化学量論的量の水を更に含有する、化合物、又はその塩を意味する。
【００７１】
本明細書中で使用され、他に特段の言及がないとき、「溶媒和物」という用語は、共有結合でない分子間力により結合した、化学量論的、又は非化学量論的量の溶媒を更に含有する、化合物、又はその塩を意味する。
【００７２】
本明細書中で使用され、他に特段の言及がないとき、「プロドラッグ」という用語は、加水分解し、酸化し、又は他の生物学的条件下での反応（インビトロ又はインビボ）により、化合物を提供する、化合物の誘導体を意味する。プロドラッグの例として、限定されないが、生体加水分解性（ｂｉｏｈｙｄｒｏｌｙｚａｂｌｅ）アミド、生体加水分解性エステル、生体加水分解性カルバミン酸塩、生体加水分解性炭酸塩、生体加水分解性ウレイド、及び生体加水分解性リン酸塩類似体等の、生体加水分解性部分を含む化合物の誘導体及び代謝物が挙げられる。幾つかの態様において、カルボキシル官能基を有する化合物のプロドラッグは、カルボン酸の低級アルキルエステルである。当該カルボン酸エステルは、当該分子中に存在する任意のカルボン酸部分をエステル化することにより容易に形成される。プロドラッグは、典型的には、周知の方法を使用して調製出来、例えばＢｕｒｇｅｒ’ｓ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ６ｔｈ  ｅｄ．  （Ｄｏｎａｌｄ  Ｊ．  Ａｂｒａｈａｍ  ｅｄ．，  ２００１，  Ｗｉｌｅｙ）  ａｎｄ  Ｄｅｓｉｇｎ及びＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  （Ｈ．  Ｂｕｎｄｇａａｒｄ  ｅｄ．，  １９８５，  Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｇｍｆｈ）に記載されている方法を使用出来る。
【００７３】
本明細書中で使用され、他に特段の言及がないとき、「立体異性体」又は「立体異性体的に純粋」という用語は、ある化合物の立体異性体が、有機分子又は無機分子であって、その化合物の他の立体異性体を実質的に含まないことを意味する。例えば、１つのキラル中心を有する立体異性体的に純粋な化合物は、その化合物の他方の鏡像異性体を実質的に含まない。２つのキラル中心を有する立体異性体的に純粋な化合物は、その化合物の他のジアステレオ異性体を実質的に含まない。典型的な立体異性体的に純粋な化合物は、その化合物の一つの立体異性体を８０重量％超、及びその化合物の他の立体異性体を２０重量％未満含み、その化合物の一つの立体異性体を９０重量％超、及びその化合物の他の立体異性体を１０重量％未満含み、その化合物の一つの立体異性体を９５重量％超、及びその化合物の他の立体異性体を５重量％未満含み、又はその化合物の一つの立体異性体を９７重量％超、及びその化合物の他の立体異性体を３重量％未満含む。前記化合物はキラル中心を有している場合があり、ラセミ化合物（ｒａｃｅｍａｔｅ）、個別の鏡像異性体、又はジアステレオ異性体、及びそれらの混合物として存在出来る。それらの異性体形態は、混合物も含め、本明細書中に開示される態様の中に包含される。
【００７４】
様々な化合物が１つ以上のキラル中心を含み、そして鏡像異性体のキラル混合物、ジアステレオ異性体の混合物、又は鏡像異性体的に、又は光学的に純粋な化合物として存在出来る。そのような家具汚物の立体異性体的に純粋な形態は、それらの混合物の使用と同じく、本明細書中に開示される態様に包含される。例えば、特定の化合物の鏡像異性体を等量、又は不等量含有する混合物が、本明細書中に開示される方法及び組成物に使用されてもよい。これらの異性体は、キラルカラム又はキラル分割剤等の標準的な技術を使用して、非対象的に合成され、又は分割されてもよい。例えば、Ｊａｃｑｕｅｓ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，  Ｒａｃｅｍａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  （Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８１）；  Ｗｉｌｅｎ，  Ｓ．  Ｈ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ３３：２７２５  （１９７７）；  Ｅｌｉｅｌ，  Ｅ．  Ｌ．，  Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  （ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，  ＮＹ，  １９６２）；及びＷｉｌｅｎ，  Ｓ．  Ｈ．，  Ｔａｂｌｅｓ  ｏｆ  Ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  ｐ．  ２６８  （Ｅ．Ｌ．  Ｅｌｉｅｌ，  Ｅｄ．，  Ｕｎｉｖ．  ｏｆ  Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ，  ＩＮ，  １９７２）を参照されたい。
【００７５】
有機又は無機分子の化合物が、Ｅ及びＺ異性体、又はそれらの混合物、並びにシス及びトランス異性体、又はそれらの混合物を含み得ることも留意すべきである。特定の態様において、化合物は、Ｅ又はＺ異性体のいずれかとして単離される。化合物は、Ｅ及びＺ異性体の混合物である。
【００７６】
本発明において、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤、又はこれに関連する化合物若しくは類似体又はそれらのプロドラッグが、増殖及び／又は蔓延がｍＴＯＲ機能の維持に依存するウイルスの感染を治療又は防止するために使用される。一つの態様において、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤、又はこれに関連する化合物若しくは類似体又はそれらのプロドラッグは、ヘルペスウイルスの感染を治療又は防止するために使用される。ヘルペスウイルス（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）は、二本鎖ＤＮＡゲノムを有するウイルスのファミリーである。例えば、本明細書中で例示するように、ナノモラー濃度のＴｏｒｉｎ  １は、α−ヘルペスウイルスである単純ヘルペスウイルス−１（ＨＳＶ−Ｉ）；β−ヘルペスウイルスであるヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）；及びγ−ヘルペスウイルスであるγ−ヘルペスウイルス６８の複製を阻害する。
【００７７】
本明細書中で使用されるとき、対象に治療剤を投与する際の「有効量」とは、（ｉ）ウイルス感染またはそれに関連した症状の重症度を低減または回復する、（ｉｉ）ウイルス感染またはそれに関連した症状の持続時間を短縮する、（ｉｉｉ）ウイルス感染またはそれに関連した症状の進行を阻止する、（ｉｖ）ウイルス感染またはそれに関連した症状を回帰させる、（ｖ）ウイルス感染またはそれに関連した症状の進展または発症を阻止する、（ｖｉ）ウイルス感染またはそれに関連した症状の再発を阻止する、（ｖｉｉ）１つの細胞から別の細胞、または１つの組織から別の組織へのウイルスの蔓延を低減または阻止する、（ｉｘ）１人の対象から別の対象へのウイルスの蔓延を阻止または低減する、（ｘ）ウイルス感染に関連した器官の不全を低減する、（ｘｉ）対象の入院を減少させる、（ｘｉｉ）入院期間を短縮させる、（ｘｉｉｉ）ウイルス感染した対象の生存率を増加させる、（ｘｉｖ）ウイルス感染を除去する、および／または（ｘｖ）別の治療の予防効果または療法効果を高めるか改善する、の１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上を達成するのに充分な治療剤の量を指す。
【００７８】
本明細書中で使用されるとき、「有効量」という用語は、細胞培養に関連した生成物において使用する化合物という文脈で、細胞培養におけるウイルスの力価を減少させるか、または細胞培養におけるウイルスの複製を阻止するために十分な化合物の量を意味する。
【００７９】
哺乳類におけるウイルス感染を治療又は防止するのに使用されるｍＴＯＲ阻害剤の好ましい用量は、＜１００ｍｇ／ｋｇ、＜５０ｍｇ／ｋｇ、＜２０ｍｇ／ｋｇ、＜１０ｍｇ／ｋｇ、＜５ｍｇ／ｋｇ、＜２ｍｇ／ｋｇ、＜１ｍｇ／ｋｇ、＜０．５ｍｇ／ｋｇ、＜０．２ｍｇ／ｋｇ、＜０．１ｍｇ／ｋｇ、＜０．０５ｍｇ／ｋｇ、＜０．０２ｍｇ／ｋｇ、又は＜０．０１ｍｇ／ｋｇである。哺乳類におけるウイルス感染を治療又は防止するのに使用されるｍＴＯＲ阻害剤の好ましい用量は、全血清濃度で、＜１００μＭ、＜５０μＭ、＜２０μＭ、＜１０μＭ、＜５μＭ、＜１μＭ、＜５００ｎＭ、ｏｒ＜２５０ｎＭである。
【００８０】
また、本発明は、抗ウイルス活性を有することが望ましい細胞培養に関連する生成物における、ｍＴＯＲ阻害剤の使用を提供する。一つの態様において、ｍＴＯＲ阻害剤は、細胞培養培地に添加される。細胞培養培地に使用されるｍＴＯＲ阻害剤として、対象の治療において強すぎる毒性が認められない化合物が挙げられる。
【００８１】
２．  小胞体ストレス応答の阻害剤
一つの態様において、本発明は、哺乳類の対象におけるウイルス感染を治療又は防止する方法を提供し、当該方法は、小胞体ストレス応答（ＵＰＲ）を阻害する治療有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む。一つの態様において、当該阻害剤は、ウイルス感染を治療又は予防するために、ｍＴＯＲ阻害剤と組み合わせられる。
【００８２】
ウイルスにコードされる糖タンパク質の合成を含む、ウイルスタンパク質の合成は、感染の進行を劇的に増大させる。糖タンパク質の合成が、細胞がこれらのタンパク質を適切に折り畳み、輸送する許容量を越えると、その細胞は、小胞体ストレス応答、又はＵＰＲと称される、ストレス応答を誘導する。ＵＰＲが細胞のストレスを解消する機構は、複数の側面を有する。それらは、シャペロンタンパク質の発現の増大、細胞ストレスを解消するタンパク質の発現の増大、及びタンパク質合成の速度の低下を含む。総合すると、これらのＵＰＲイベントは、細胞のホメオスタシスの維持の役割を果たす。ストレスが存在して、ＵＰＲが存在しない場合、細胞は、細胞死に至る一連のイベントを誘導する。
【００８３】
故に、一つの態様において、本発明の化合物は、化学シャペロンとして働き、ＵＰＲを阻害する。そのような化学シャペロンの一例として、４−フェニルブチレート（４−ＰＢＡ）が挙げられる。他の化学シャペロンとして、タウロウロデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、トリメチルアミントリオキシド（ＴＭＯ）及びベタインが挙げられる。
【００８４】
哺乳類におけるウイルス感染を治療又は防止するのに使用されるＵＰＲの阻害剤の好ましい用量は、＜１００ｍｇ／ｋｇ、＜５０ｍｇ／ｋｇ、＜２０ｍｇ／ｋｇ、＜１０ｍｇ／ｋｇ、＜５ｍｇ／ｋｇ、＜２ｍｇ／ｋｇ、＜１ｍｇ／ｋｇ、＜０．５ｍｇ／ｋｇ、＜０．２ｍｇ／ｋｇ、＜０．１ｍｇ／ｋｇ、＜０．０５ｍｇ／ｋｇ、＜０．０２ｍｇ／ｋｇ、又は＜０．０１ｍｇ／ｋｇである。哺乳類におけるウイルス感染を治療又は防止するのに使用されるＵＰＲの阻害剤の好ましい用量は、全血清濃度で、＜１００μＭ、＜５０μＭ、＜２０μＭ、＜１０μＭ、＜５μＭ、＜１μＭ、＜５００ｎＭ、又は＜２５０ｎＭである。
【００８５】
また、抗ウイルス活性を有するのが望ましい細胞培養に関連する生成物における、ＵＰＲの阻害剤の使用を提供する。一つの態様において、ＵＰＲの阻害剤は、細胞培養培地に添加される。細胞培養培地に使用されるＵＰＲの阻害剤として、対象の治療において強すぎる毒性が認められない化合物が挙げられる。
【００８６】
３．ｍＴＯＲ阻害剤と小胞体ストレス応答阻害剤の組合せ
一つの態様において、本発明は、治療有効量の、ｍＴＯＲの阻害剤である、第一の化合物又はその相対物、類似物、若しくは誘導体、及び小胞体ストレス応答の阻害剤である、第二の化合物又はその相対物、類似物、若しくは誘導体の組合せを、それを必要とする対象に投与する工程を含む、哺乳類におけるウイルス感染を治療又は防止する方法を提供する。一つの態様において、ＵＰＲの阻害剤との組合せに使用されるｍＴＯＲ阻害剤は、ｍＴＯＲの特異的阻害剤である。他の態様において、ｍＴＯＲ阻害剤は、ＸＬ７６５、ＰＩ−１０３、ＰＦ−４６９１５０２、ＬＹ２９４００２、及びＬＯＲ−２２０等の、他のタンパク質キナーゼに対する顕著かつ特異的な活性が低いものである。他の態様において、ｍＴＯＲの阻害剤は、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能、ｍＴＯＲのラパマイシン感受性機能、又はそれらの両方を阻害する。
【００８７】
よって、セクション１に記載されたｍＴＯＲ阻害剤に加えて、ＵＰＲの阻害剤と組み合わせて使用出来るｍＴＯＲ阻害剤として、ラパマイシン及びそのアナログ（ラパログ）、例えば：ノルラパマイシン、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）（ＣＣＩ−７７９）、リダフォロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ）（ＡＰ２３５７３）、ゾタロリムス（ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ）、デオキソラパマイシン、デスメチルラパマイシン、デスメトキシラパマイシン、ＡＰ２２５９４、２８−エピ−ラパマイシン、２４，３０−テトラヒドロ−ラパマイシン、リダフォロリムス（ＡＰ２３５７３）、トランス−３−アザ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−カルボン酸ラパマイシン、ＡＢＴ−５７８、ＳＤＺＲＡＤ、ＡＰ２０８４０、ＡＰ２３４６４、ＡＰ２３６７５、ＡＰ２３８４１、ＡＰ２４１７０、ＴＡＦＡ９３、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニロキシ−３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニロキシ−３２（Ｓ又はＲ）−ジヒドロ−ラパマイシン、１６−ペント−２−イニロキシ−３２（Ｓ又はＲ）−ジヒドロ−４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、４０−［３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシ−メチル）−２−メチルプロパノエート］−ラパマイシン（ＣＣ１７７９）、４０−エピ−（テトラゾリル）−ラパマイシン（ＡＢＴ５７８）、ＴＡＦＡ−９３、ビオリムス（ｂｉｏｌｉｍｕｓ）−７、ビオリムス−９、ビオリムスＡ９及びそれらの組合せ等が挙げられる。
【００８８】
本明細書中で使用されるとき、対象に２つ以上の治療剤を投与する文脈における、「組合せ」という用語は、２つ以上の治療剤（例えば２つ以上の予防剤及び／又は治療剤）の使用を意味する。用語「組合せ」の使用は、治療剤がウイルス感染した患者に投与される順番を限定しない。第一の治療剤（例えば第一の予防剤又は治療剤）が、ウイルス感染した患者に投与されるのは、第二の治療剤の投与の前（例えば５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週、２週、３週、４週、５週、６週、８週、又は１２週前）、同時、又は後（５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週、２週、３週、４週、５週、６週、８週、又は１２週後）であってもよい。
【００８９】
４．ｍＴＯＲの阻害剤を特定するスクリーニング試験法
ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能の阻害剤であると知られている化合物は、当該技術で知られているかおよび／または下に記載したアッセイ（例えば、セクション５．４以降を参照）を使用して、抗ウイルス活動のスクリーニングを直接行うことができる。随意ではあるが、当業者に周知のアッセイおよび／または下記を使用して、こうした阻害剤の誘導体または同属種、またはその他任意の化合物を、ｍＴＯＲ機能の調節の能力について検定することができる。これらのｍＴＯＲ昨日を調節することが分かっている化合物は、抗ウイルス活動についてさらに検定することができる。
【００９０】
別の方法として、化合物は抗ウイルス活動について直接的に検定できる。抗ウイルス活性を示すそれらの化合物、または抗ウイルス性があるが、許容できない特異性または毒性を持つことが知られているそれらの化合物を、ｍＴＯＲ阻害活性に対してスクリーニングすることができる。酵素標的を調節する抗ウイルス化合物は、活性プロファイルが改善されるように最適化することができる。
【００９１】
ｍＴＯＲキナーゼ活性に関する化合物を試験するアッセイは、当該技術分野で公知である（例えば、Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  （２００９）  ６９：６２３２−６２４０；  Ｔｈｏｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （２００９）  ２８４：８０２３−８０３２；  Ｒｅｉｃｈｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ．  （２００８）  １３：２３８−２４４を参照されたい）。
【００９２】
ｍＴＯＲキナーゼ活性を阻害する化合物の選択性を判定するため、前記化合物は、表１に列挙されている１つ以上のキナーゼ等の一連のキナーゼのキナーゼ活性の阻害について試験され得る。
【表１】
2014505076.tif 000027
タンパク質キナーゼ、例えばセリン／スレオニンキナーゼ、及び脂質キナーゼ、例えばＰＩ３Ｋ等の阻害を試験する方法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｚａｓｋ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  （２００８）  ５１  ：１３１９−１３２３；  Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  （２００９）  ６９：６２３２−６２４０；  Ｔｈｏｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （２００９）  ２８４：８０２３−８０３２を参照されたい）。
【００９３】
例えば、脂質キナーゼアッセイは、Ｔｈｏｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （２００９）  ２８４：８０２３−８０３２に記載されている。反応は、様々な量の阻害剤、並びに、１０  μＭ  ＡＴＰ、２  ｍＭ  ＤＴＴ及びキナーゼに特異的な緩衝剤及び基質が用いられ、三回実施される。Ｐ１１０α／ｐ８５α、ｐ１１０β／ｐ８５α及びｐ１１０γには、５０  μＭ  ＰＩＰ２：ＰＳ脂質キナーゼ基質が使用出来る。Ｐ１１０δ／ｐ８５αには、１００  μＭ  ＰＩＰ２：ＰＳ脂質キナーゼ基質が使用出来る。ＰＩ３Ｋ−Ｃ２α及びＰＩ３Ｋ−Ｃ２βには、１００  μＭ  ＰＩ脂質キナーゼ基質が使用出来る。ｈＶＰＳ３４には、１００  μＭ  ＰＬＰＳ脂質キナーゼ基質が使用出来る。Ｐ１１０δ／ｐ５８α、ｐ１１０β／ｐ８５α、ｐ１１０δ／ｐ８５α、ＰＩ３Ｋ−Ｃ２α、及びＰＩ３Ｋ−Ｃ２β用の緩衝剤は、５０  ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ  ７．５、３  ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１  ｍＭ  ＥＧＴＡ、１００  ｍＭ  ＮａＣｌ、及び０．０３％  ＣＨＡＰＳである。ｈＶＰＳ３４用の緩衝剤は、５０  ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ  ７．３、０．１％  ＣＨＡＰＳ、１  ｍＭ  ＥＧＴＡ、及び５  ｍＭ  ＭｎＣｌ２である。ｐ１１０α／ｐ８５α、ｐ１１０β／ｐ８５α、ｐ１１０δ／ｐ５８α、ｐ１ｌＯγ、ＰＩ３Ｋ−Ｃ２α、ＰＩ３Ｋ−Ｃ２β、及びｈＶＰＳ３４の酵素濃度は、それぞれ０．１２、４．５、０．７９、３．５、６．３、４２、及び２．８  ｎＭである。室温で１時間置いた後、１２  ｎＭ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７（登録商標）ＡＤＰ  Ｔｒａｃｅｒ、６  ｎＭ  ＡｄａｐｔａＴＭ  Ｅｕ−抗−ＡＤＰ抗体、２０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ  ７．５、０．０１％  ＮＰ−４０、及び３０  ｍＭ  ＥＤＴＡを含有する、５μＬの検出混合物を添加する。３０分後、プレートを、Ｔｅｃａｎ  ＩｎｆｉｎｉＴＥ（登録商標）Ｆ５００又はＢＭＧ  ＰＨＥＲＡｓｔａｒプレートリーダーで読取ることが出来る。に適した装置の設定は、３４０ｎｍでの励起後６６５及び６１５ｎｍでの放出測定、時間差１００μｓ、及び積分時間２００μｓとする。一次放出率（ｒａｗ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｒａｔｉｏ）（６６５ｎｍでの放出÷６１５ｎｍでの放出）の値を、ヌクレオチド（ＡＴＰ：ＡＤＰ）標準曲線を使用して、生産物の形成率（ＡＴＰの生産％）に変換する。化合物の濃度対生産物形成率のプロットから、ＩＣ５０値を計算する。
【００９４】
ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能に関連する任意の宿主細胞酵素は、抗ウイルス治療のための潜在的標的として意図されている。さらに、細胞の転写活性の調節に直接的または間接的に役割を持つ、その他の宿主細胞酵素は、抗ウイルス治療のための潜在的標的として意図される。
【００９５】
本発明の一部の実施態様において、化合物により、酵素の活性が増加する（例えば、ｍＴＯＲの負の調節因子である酵素は、潜在的な抗ウイルス性の化合物によりその活性を増加させうる）。特定の実施態様において、化合物により、酵素の活性が、少なくともおよそ１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％増加する。一部の実施態様において、化合物により、酵素の活性が低下する。特定の実施態様において、化合物により、酵素の活性が、少なくともおよそ１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または１００％低下する。一定の実施態様において、化合物により、単一の酵素が排他的に調節される。一部の実施態様において、化合物により、１つの酵素が他に比べて大きな度合いで調節されるかもしれないが、複数の酵素が調節される。本書に記載した標準的な酵素活性アッセイを使用して、化合物の活性を特性づけできる。一実施態様において、化合物は特定の酵素の不可逆的な阻害または活性化を示す。一部の実施態様において、化合物は酵素を可逆的に抑制または活性化する。一部の実施態様において、化合物は酵素の動態を変化させる。
【００９６】
一実施態様において、例えば、試験化合物および宿主標的酵素の間の相互作用の評価には、（ｉ）試験化合物の酵素に対する結合の評価、（ｉｉ）酵素の生物活性の評価、（ｉｉｉ）試験化合物の存在下および不在下での酵素の酵素活性（例えば、キナーゼ活性）の評価のうち、１つ以上が含まれる。インビトロでの接触には、試験化合物、酵素、任意の必要な補助因子（例えば、ビオチン）またはエネルギー源（例えば、ＡＴＰ、または放射標識したＡＴＰ）、基質（例えば、アセチル−ＣｏＡ、糖、ポリペプチド、ヌクレオシド、または標識の有無によらずその他任意の代謝生成物）が含まれる反応混合物の形成、および基質の生成物への変換の評価が含まれうる。生成物の形成の評価には、例えば、炭素またはリン酸塩（例えば、化学的に、または標識、例えば、放射標識を使用して）の移動の検出、反応生成物の検出、第一の反応に依存した二次的な反応の検出、または基質の物理的性質（例えば、分子量、電荷、またはｐＩの変化）の検出などが含まれうる。
【００９７】
スクリーニング試験法に使用するための標的酵素は、天然原料、例えば、細胞、脂肪細胞（例えば、脂肪組織）から構成される組織または器官、肝臓、等から精製できる。別の方法として、標的酵素は、任意の数の異なる組み換えＤＮＡ発現系で発現でき、また大量に獲得でき、生物活性について検定できる。組み換えバクテリアの細胞（例えば、大腸菌の発現について、細胞は、任意の数の適切な培養液（例えばＬＢ）中で成長し、および組み換えポリペプチドの発現は、ＩＰＴＧを培養液に加えることで、または培養を高い温度に切り換えることで誘発される。さらにバクテリアを２時間〜２４時間の間で培養した後、細胞は遠心分離で回収され、洗浄して残留した培養液が除去される。次に、バクテリアの細胞を、例えば細胞破砕機内での分裂により溶解させ、遠心分離して、高密度の封入体および細胞膜を可溶性の細胞成分から分離する。この遠心分離は、蔗糖などの糖類を緩衝液に取り込み、および選択的な速度で遠心分離することで、高密度の封入体が選択的に濃縮される条件下で実施できる。組み換えポリペプチドが封入内で発現される場合、これらは、いくつかあるうちどれかの溶液中で洗浄し、汚染する宿主タンパク質の一部を除去した後、βメルカプトエタノールまたはＤＴＴ（ジチオスレイトール）などの還元剤の存在下で、高濃度の尿素（例えば、８  Ｍ）または塩酸グアニジンなどのカオトロピック剤が含まれる溶液に可溶化することができる。この段階で、ポリペプチドがリフォールディングプロセスを起こして、天然のポリペプチドとより厳密に類似した高次構造となるために適切な条件下で、ポリペプチドを数時間培養することが有益となりうる。こうした条件には、一般に、低ポリペプチド（濃度が５００  ｍｇ／ｍｌ未満）、低レベルの還元剤、２  Ｍ未満の濃度の尿素、また時には、タンパク質分子内でのジスルフィド結合の交換を促進する還元型および酸化型のグルタチオンの混合物などの試薬の存在が含まれる。リフォールディングプロセスは、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより、または天然の分子に特異的な抗体を用いて監視することができる。リフォールディングに続き、ポリペプチドは、イオン交換樹脂、ゲル透過樹脂などいくつかあるうちどれかの担体上で、または各種のアフィニティーカラム上で、クロマトグラフィーにより、さらに精製してリフォールディングする混合物から分離できる。
【００９８】
宿主細胞を発現したポリペプチド、またはその断片の分離および精製は、限定はされないものの、調製用クロマトグラフィーおよび単クローン性または多クローン性の抗体が関与する免疫学的分離を含む従来の手段により実施できる。
【００９９】
これらのポリペプチドは、組み換えＤＮＡ技術によるなどを含め多様な方法で生成して、本発明の目的で化合物をスクリーニングするために有用な純粋で生物学的に活性の標的酵素の大規模製造が可能となる。別の方法として、スクリーニングの対象となる標的酵素は、細胞ライゼート中またはその他の溶液または混合物中で、部分的に精製または検定しうる。
【０１００】
基質および生成物のレベルは、インビトロの系内、例えば、生化学的抽出物内、例えば、タンパク質の抽出物内で評価できる。例えば、抽出物には、可溶性のすべてのタンパク質またはタンパク質の部分集合（例えば、７０％または５０％のアンモニウム硫酸塩切片）、標的酵素を含む部分集合として定義されたタンパク質の有用な部分集合が含まれうる。試験化合物の効果は、例えば、試験化合物を含む反応で、かつ試験化合物を含まない並行した制御反応で、基質および生成物のレベルを時間経過の開始時点で測定し、そのレベルを予定時間（例えば、０．５時間、１時間、または２時間）経過後と比較することで評価できる。これは、インビトロでの基質と生成物の比率に対する試験化合物の影響を判断する１つの方法である。反応率は、それぞれの培養についての反応時間に対して取り込んだ放射能またはその他の標識の線形回帰分析により入手できる。ＫＭおよびＶｍａｘの値は、初期速度の非線形回帰分析により、標準的なアンリ−ミヒャエリス−メンテン方程式に従い決定できる。ｋｃａｔは、Ｖｍａｘ値を、例えば、比色タンパク質測定（例えば、Ｂｉｏ−ＲＡＤタンパク質試験法、ブラッドフォード法、ローリー法）により導き出された酵素の反応濃度で割ることで入手できる。一実施態様において、化合物は標的酵素を不可逆的に不活性化する。別の実施態様において、化合物は標的酵素を可逆的に抑制する。一部の実施態様において、化合物は拮抗阻害により標的酵素を可逆的に抑制する。一部の実施態様において、化合物は非拮抗阻害により標的酵素を可逆的に抑制する。一部の実施態様において、化合物は不拮抗阻害により標的酵素を可逆的に抑制する。さらなる実施態様において、化合物は混合型阻害により標的酵素を抑制する。化合物による阻害の機序は、当業者に周知の標準的なアッセイにより決定できる。
【０１０１】
位相分割系を利用した酵素活性の定量的測定の方法が、米国特許第６，９９４，９５６号に記載されており、この全文を参照により本書に組み込む。特に、放射標識した基質およびその反応の生成物は、水相および非混合性のシンチレーション流体を含む有機相に差別的に分離され、放射標識を含む有機可溶部分を生成物分子に取り込む（信号試験法の利得）、または放射標識を含む有機可溶部分を基質分子から欠失させる（信号試験法の欠失）のいずれかにより酵素活性が評価される。シンチレーションは、放射性核種が有機の閃光体（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）を含む相であるときにのみ検出される。こうした方法は、標的酵素の活性を抑制する化合物の能力の試験に採用できる。
【０１０２】
細胞アッセイを採用することもできる。模範的な細胞試験法には、試験化合物を培養細胞（例えば、哺乳類の培養細胞、例えば、ヒト培養細胞）に接触させ、次に、例えば、本書に記載した任意の方法、例えば逆相ＨＰＬＣ、ＬＣ−ＭＳ、又はＬＣ−ＭＳ／ＭＳ等を使用して細胞内での基質および生成物のレベルを評価する方法が含まれる。
【０１０３】
基質および生成物のレベルは、例えば、ＮＭＲ、ＨＰＬＣ（例えば、『Ｂａｋ，  Ｍ．  Ｉ．，  ａｎｄ  Ｉｎｇｗａｌｌ，  Ｊ．  Ｓ．  （１９９４）  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ９３，  ４０−４９』を参照）、質量分析法、薄層クロマトグラフィー、または放射標識した成分（例えば、キナーゼ試験法用に放射標識したＡＴＰ）の使用により評価できる。例えば、３１Ｐ  ＮＭＲを使用してＡＴＰおよびＡＭＰのレベルを評価できる。一実施において、細胞および／または組織を、１０ｍｍ  ＮＭＲ試料チューブ内に配置し、８９  ｃｍの穴付の９．４−Ｔｅｓｌａ超電導磁石内に位置する１Ｈ／３１Ｐ二重同調プローブに挿入することができる。希望に応じて、細胞は、スキャンに指標を付けるために、明確なピークのある物質と接触させることができる。６つの３１Ｐ  ＮＭＲスペクトル（それぞれ１０４の自由誘導減衰を平均した信号により得られる）は、ＧＥ−４００  Ω  ＮＭＲ分光計（Ｂｒｕｋｅｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、米国カリフォルニア州フリーモント）を用いて、フリップ角６０°、パルス１５ミリ秒、遅延２．１４秒、掃引幅６，０００  Ｈｚ、およびデータ点２０４８個を使用して収集することができる。スペクトルは、２０−Ｈｚ指数乗算および０次および１次位相修正を使用して分析される。共振ピーク領域は、ＮＭＲ１ソフトウェア（Ｎｅｗ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．、米国ニューヨーク州シラキュース）を使用して、ローレンツ型線形により、当てはめることができる。完全緩和スペクトル（再循環時間：１５秒）および部分的飽和スペクトル（再循環時間：２．１４秒）のピーク領域を比較することで、ピークについて飽和の補正因子を計算できる。ピーク領域は、細胞および／または組織の重さまたは数に対して基準化し、任意の面積単位で表現できる。例えば、ＡＴＰおよびＡＭＰのレベルなど評価の別の方法には、抽出物を形成するための試料内での細胞の溶解、および逆相ＨＰＬＣによる抽出物の分離（２６０  ｎｍで吸光度を監視）が含まれる。
【０１０４】
別のタイプのインビトロでの試験法では、第一の酵素経路構成要素と第二の酵素経路構成要素との間の相互作用を調節する試験化合物の能力を評価する。このタイプの試験法は、標識化した構成要素の第二の経路構成要素に対する結合が、複合体において標識化した化合物を検出することで決定できるように、例えば、成分の１つを放射性同位元素または酵素ラベルと結合させることで達成できる。酵素経路構成要素は、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３Ｈ、および放射放出の直接計数により、またはシンチレーション計数により検出される放射性同位元素直接的または間接的に標識化できる。別の方法として、構成要素は、例えば、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、またはルシフェラーゼ、および適切な基質の生成物への変換の決定により検出される酵素ラベルにより酵素的に標識化できる。拮抗アッセイを使用して、試験化合物と標的との間の物理的相互作用を評価することができる。
【０１０５】
可溶性および／または膜結合型の単離したタンパク質（例えば、酵素経路構成要素およびその受容体またはその生物学的に活性のタンパク質）を本発明の無細胞アッセイで使用できる。酵素の膜結合型を使用するとき、可溶化剤を利用することが望ましい。こうした可溶化剤の例には、ｎ−オクチルグルコシド、ｎ−ドデシルグルコシド、ｎ−ドデシルマルトシド、オクタノイル−Ｎ−メチルグルクアミド、デカノイル−Ｎ−メチルグルクアミド、トリトンＸ−１００、トリトンＸ−１１４、テシット、イソトリデシルポリ（エチレングリコールエーテル）ｎ、３−［（３−コラミドプロピル）ジメチルアンミニオ］−１−プロパンスルホナート（ＣＨＡＰＳ）、３−［（３−コラミドプロピル）ジメチルアンミニオ］−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホナート（ＣＨＡＰＳＯ）、またはＮ−ドデシル−Ｎ、Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホナートなどの非イオン性洗浄剤が含まれる。別の例において、酵素経路構成要素（例えば、ＡＭＰＫの場合にＧＬＵＴ−４）は、薄膜（例えば、リポソームまたはその他の小胞）内に存在できる。
【０１０６】
無細胞アッセイには、標的酵素および試験化合物が相互作用および結合して、除去および／または検出ができる複合体を形成するために十分な条件下、および時間での、この２つの成分の反応混合物の調製が関与する。一つの態様において、前記標的酵素は、１つ以上、そして通常数百又は数千個の試験化合物を含有する溶液と混合される。いずれかの結合した試験化合物を含む前記標的酵素は、例えばサイズ排除クロマトグラフィーやアフィニティークロマトグラフィー等により、結合していない（即ち遊離状態）試験化合物から分離される。前記標的と結合した試験化合物は、有機溶媒中で酵素を変性させる等により、標的酵素から分離され、そしてそれらの化合物は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ等の適切な解析手段により同定される。
【０１０７】
２つの分子（例えば、標的酵素および試験化合物）の間の相互作用は、例えば、少なくとも１つの分子が例えば蛍光的に標識化されている蛍光性試験法を使用して検出して、試験化合物と標的酵素との間の相互作用を評価することもできる。こうした試験法の一例には、蛍光性エネルギー移動（蛍光共鳴エネルギー移動のＦＥＴまたはＦＲＥＴ）が含まれる（例えば、『Ｌａｋｏｗｉｃｚ  ｅｔ  ａｌ．』、米国特許第５，６３１，１６９号、『Ｓｔａｖｒｉａｎｏｐｏｕｌｏｓ，  ｅｔ  ａｌ．』、米国特許第４，８６８，１０３号を参照）。第一の「ドナー」分子のフルオロフォア標識は、その放出された蛍光エネルギーが、第二の「アクセプター」分子の蛍光標識により吸収され、吸収されたエネルギーにより今度はこれが蛍光を発することができるように選択される。別の方法として、タンパク質性の「ドナー」分子は、単にトリプトファン残基の自然の蛍光エネルギーを利用することもできる。ラベルは、「アクセプター」分子の標識を「ドナー」の標識から区別しうるように、異なる光の波長を発するものが選択される。ラベル間でのエネルギー移動の効率は、分子を隔てる距離に関連するため、分子間の空間的関係が評価できる。結合が分子間で発生する場合には、この試験法での「アクセプター」分子標識の蛍光放出は、最大値とすべきである。ＦＥＴ結合事象は、当該技術でよく知られた標準的な蛍光定量的検出手段（例えば、蛍光分光計の使用）によって都合よく測定できる。
【０１０８】
蛍光性試験法の別の例は、蛍光偏光（ＦＰ）である。ＦＰでは、１つの構成要素のみを標識化する必要がある。結合相互作用は、標識化した構成要素の分子サイズの変化により検出される。サイズの変化により、溶液中の構成要素の反転率が変化し、ＦＰの変化として検出される。例えば、『Ｎａｓｉｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ  ＨＴＳ  ２：１７７−１９０』、『Ｊａｍｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２４６：２８３』、『Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２５５：２５７  （１９９８）』を参照。蛍光偏光は、マルチウェルプレートで監視できる。例えば、『Ｐａｒｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ５  ：７７−８８』、および『Ｓｈｏｅｍａｎ，  ｅｔ  ａｌ．．  （１９９９）  ３８，  １６８０２−１６８０９』を参照。
【０１０９】
別の実施態様において、目標の分子を結合する標的酵素の能力の判断は、リアルタイムの生体分子相互作用分析（ＢＩＡ）を用いて達成できる（例えば、『Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ，  Ｓ．  ａｎｄ  Ｕｒｂａｎｉｃｚｋｙ，  Ｃ．  （１９９１）  Ａｎａｌ．  Ｃｈｅｍ．  ６３：２３３８−２３４５』および『Ｓｚａｂｏ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．  ５：６９９−７０５』を参照）。「表面プラズモン共鳴」または「ＢＩＡ」は、どの反応体（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ）も標識化することなく、生物特異性相互作用をリアルタイムで検出する。結合表面での質量の変化（結合事象を表示）は、表面付近での光の屈折率の変化（表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）の光学的現象）をもたらし、結果的に、生体分子間のリアルタイムの反応の指標として使用できる検出可能な信号が発生する。
【０１１０】
一実施態様において、標的酵素は、固相に固定される。固相上に固定された標的酵素／試験化合物の複合体は、反応、例えば、結合反応の終わりに検出できる。例えば、標的酵素は、固体の表面に固定させることができ、また試験化合物（これは固定されない）は、本書で考察した検出可能ラベルにより直接的または間接的に標識化できる。
【０１１１】
一方または両方のタンパク質について非複合型からの複合型の分離を促すために、また、試験法を自動化するための便宜を図るために、標的酵素または抗標的酵素抗体のいずれかを固定することが望ましいともいえる。標的酵素への試験化合物の結合、または化合物候補の存在下や不在下での標的酵素の第二の構成要素との相互作用は、反応物質を含むために適切な任意の容器内で達成できる。こうした容器の例には、マイクロタイタープレート、試験管、およびマイクロ遠心チューブが含まれる。一実施態様において、一方または両方のタンパク質が基質に結合できるようにするドメインを追加する融合タンパク質を提供できる。例えば、グルタチオン−Ｓ−転移酵素／標的酵素融合タンパク質は、グルタチオンセファロースビーズ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、米国ミズーリ州セントルイス）またはグルタチオン誘導体化マイクロタイタープレートに吸収させ、次にこれを試験化合物または試験化合物と非吸収性の標的酵素のどれかと混合し、その混合物を複合体の生成を助長する条件下（例えば、塩およびｐＨについて生理学的条件）で培養することができる。培養の後、ビーズまたはマイクロタイタープレートのウェルを洗浄し、未結合の成分があれば除去し、ビーズの場合には基質を固定化し、および複合体を直接的または間接的に、例えば上記のとおりに決定する。別の方法として、複合体は、基質から解離することができ、また標的酵素の結合または活性のレベルは、標準技術を使用して決定される。
【０１１２】
標的酵素または試験化合物のいずれかを基質に固定化するその他の技術には、ビオチンおよびストレプトアビジンの接合の使用が含まれる。ビオチン化した標的酵素または試験化合物は、当該技術で知られている技術（例えば、ビオチン化キット、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、イリノイ州ロックフォード）を用いて、ビオチン−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシ−スクシニミド）から準備でき、ストレプトアビジン−被覆した９６ウェルプレートのウェル（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）に固定化される。
【０１１３】
この試験法を実施するために、固定化されていない構成要素が、固定させた構成要素を含む被覆した表面に追加される。反応が完了した後、形成された任意の複合体が固体表面上に固定されたまま残るような条件下で、未反応の成分が除去される（例えば、洗浄による）。固体表面上に固定化した複合体の検出は、多数の方法で達成できる。それ以前に固定化されていなかった構成要素が前標識されている場合、表面に固定化された標識が検出されると、複合体が形成されたことを示す。それ以前に固定化されていなかった構成要素が前標識されていない場合には、間接的な標識を使用して、表面に固定させた複合体の検出をすることができ、これには例えば、固定化した構成要素に特異的な標識化した抗体を使用するなどがある（この抗体が今度は、例えば、標識化されたアンチ−Ｉｇ抗体などによって直接的に標識化または間接的に標識化することができる）。
【０１１４】
一実施態様において、この試験法は、抗体の標的酵素との反応性を利用して実施されるが、標的酵素の試験化合物および／または基質との結合を干渉することはない。こうした抗体によって、プレートのウェルに誘導体化でき、ウェルに捕捉された標的酵素が抗体の結合により開放される。こうした複合体を検出する方法には、ＧＳＴ−固定化した複合体について上記に記載したものに加え、抗体の標的酵素との反応性を使用した複合体の免疫検出、および標的酵素に関連した酵素活性の検出に依存した酵素結合アッセイが含まれる。
【０１１５】
別の方法として、無細胞アッセイを液相で実施できる。こうした試験法において、反応生成物が、多数の標準技術のどれかにより、未反応の成分から分離されるが、この技術には、限定されないものの、分画遠心法（例えば、『Ｒｉｖａｓ，  Ｇ．，  ａｎｄ  Ｍｉｎｔｏｎ，  Ａ．  Ｐ．，  （１９９３）  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｃｉ  １８：２８４−７』を参照）、クロマトグラフィー（ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー）、電気泳動法（例えば、『Ａｕｓｕｂｅｌ，  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １９９９，  Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ：  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ』を参照）、および免疫沈降（例えば、『Ａｕｓｕｂｅｌ，  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．  （１９９９）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ：  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ』を参照）がある。こうした樹脂およびクロマトグラフ技術は、当業者に知られている（例えば、『Ｈｅｅｇａａｒｄ，  Ｎ．  Ｈ．，  （１９９８）  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ  １１：１４１−８』、『Ｈａｇｅ，  Ｄ．  Ｓ．，  ａｎｄ  Ｔｗｅｅｄ，  Ｓ．  Ａ．  （１９９７）  Ｊ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  Ｂ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｓｃｉ  Ａｐｐｌ．  ６９９：４９９−５２５』を参照）。さらに、蛍光性エネルギー移動も、複合体を溶液からそれ以上精製することなく結合を検出するために、本書に記載のとおり、好都合に利用される。
【０１１６】
１つの望ましい実施態様において、試験法には、標的酵素またはその生物学的に活性な部分を標的酵素と結合する既知の化合物と接触させて、試験法の混合物を形成する手順、試験法の混合物を試験化合物と接触させる手順、および標的酵素と相互作用する試験化合物の能力を決定する手順が含まれ、ここで、標的酵素と相互作用する試験化合物の能力を決定する手順には、試験化合物を標的酵素に優先的に結合するか、または標的酵素の活性を調製する能力を、既知の化合物と比較して決定する手順が含まれる（例えば、拮抗実験法）。別の実施態様において、試験化合物の標的酵素に結合しその活性を調節する能力が、そうした標的酵素の既知の活性化剤または阻害剤と比較される。
【０１１７】
本発明の標的酵素は、１つ以上の細胞またはタンパク質など細胞外の高分子とインビボで相互に作用することができるが、これらは宿主細胞にとって異質であるか、宿主細胞に内在し、また組み換え型として発現されていても、またそうでなくてもよい。この考察の目的で、こうした細胞および細胞外の高分子は、本書では「結合パートナー」と呼ぶ。こうした相互作用を妨害する化合物は、標的酵素の活性の調節において有用でありうる。こうした化合物には、限定されないものの抗体、ペプチド、および小分子などの分子が含まれうる。別の一実施態様において、本発明は、こうした標的酵素の下流エフェクターの活性を調節することによって試験化合物の標的酵素の活性を調節する能力を決定する方法を提供する。例えば、該当する標的に対するエフェクター分子の活性、また該当する標的に対するエフェクターの結合は、前述のとおりに決定できる。
【０１１８】
標的酵素およびその細胞または細胞外の結合パートナーの間の相互作用に干渉する化合物を特定するために、標的酵素および結合パートナーを含む反応混合物は、２つの生成物が複合体を形成できるような条件下およびそれに十分な時間で調製される。抑制化合物を試験するために、反応混合物は、試験化合物の存在下および不在下で提供される。試験化合物は、最初から反応混合物に含めることも、標的およびその細胞または細胞外の結合パートナーを追加した後で追加することもできる。制御反応混合物は、試験化合物なしで、またはプラシーボとともに培養される。その後、標的生成物と細胞または細胞外の結合パートナー間での何らかの複合体の生成について検出される。試験化合物を含む反応混合物においてではなく、制御反応における複合体の生成は、化合物が標的生成物および相互作用的な結合パートナーの相互作用に干渉することを示す。さらに、試験化合物および正常な標的酵素を含む反応混合物内での複合体生成も、試験化合物および突然変異体の標的酵素を含む反応混合物内での複合体生成と比較することができる。この比較は、正常な標的酵素ではなく突然変異体の相互作用を妨害する化合物の識別が望ましいケースでは重要なものとなりうる。
【０１１９】
本書に記載したアッセイは、不均一または均一な型で実施できる。不均一なアッセイには、標的酵素または結合パートナー、基質、または試験化合物のいずれかを固相に固着し、反応終了時に固相に固定した複合体を検出する手順が関与する。均一なアッセイでは、反応全体は、液相中で実施される。どちらのアプローチでも、反応物質を加える順序は、試験の対象の化合物についての異なる情報を得るために変化させることができる。例えば、標的酵素と結合パートナーまたは基質との間の相互作用に（例えば、拮抗により）干渉する試験化合物は、試験物質の存在下で反応を実施することにより識別できる。別の方法として、前もって形成した複合体を妨害する試験化合物、例えば、複合体から成分の１つを置き換える高めの結合定数を持つ化合物は、複合体が形成された後に試験化合物を反応混合物に加えることにより検査することができる。様々な型について、以下に簡単に説明する。
【０１２０】
不均一なアッセイ系において、標的酵素または相互作用的な細胞または細胞外の結合パートナーまたは基質のいずれかが固体表面（例えば、マイクロタイタープレート）に固定される一方、固定させていない種は、直接的または間接的に標識化される。固定させた種は、非共有結合または共有結合により固定化できる。別の方法として、固定化する種に特異的な固定化した抗体を、固体表面に種を固着するために使用できる。
【０１２１】
この試験法を実施するために、固定化した種のパートナーは、試験化合物を用いて、または用いずに被覆した表面にさらされる。反応が完了した後、未反応の成分が除去され（例えば洗浄による）、形成された複合体は固体表面上に固定されたまま残る。固定化されなかった種が前標識されている場合、表面に固定化された標識が検出されると、複合体が形成されたことを示す。固定化されなかった種が前標識されていない場合には、間接的な標識を使用して、表面に固定させた複合体を検出することができ、これには例えば、固定化した種に特異的な標識化した抗体を使用するなどがある（この抗体が今度は、例えば、標識化された抗Ｉｇ抗体などで直接的に標識化または間接的に標識化することができる）。反応成分を加える順序に応じて、複合体の生成を抑制するか、またはあらかじめ形成された複合体を妨害する試験化合物が検出できる。
【０１２２】
別の方法として、反応は、液相中で、試験化合物、未反応の成分から分離した反応生成物、および検出された複合体の存在下または不在下で実施でき、例えば、溶液中に形成された任意の複合体を固着させるための、結合成分の１つに特異的な固定化した抗体、および固定させた複合体を検出するための、他のパートナーに特異的な標識化された抗体を使用するなどである。繰り返しになるが、反応物質を液相に加える順序に応じて、複合体を抑制するか、またはあらかじめ形成した複合体を妨害する試験化合物を識別できる。
【０１２３】
別の発明の一実施態様において、均質なアッセイを使用できる。例えば、標的酵素および相互作用的な細胞または細胞外の結合パートナー生成物または基質から成るあらかじめ形成された複合体は、標的酵素またはその結合パートナーまたは基質のいずれかが標識化されているが、複合体の生成のために標識により生成される信号は消滅した状態で調製される（例えば、イムノアッセイにこのアプローチを利用した米国特許第４，１０９，４９６号を参照）。あらかじめ形成された複合体からの種の１つと競合し、それを置き換える試験物質を加えることにより、上記背景の信号が生成されることになる。このように、標的酵素結合パートナーまたは基質接触面を妨害する試験化合物が識別される。
【０１２４】
またさらに別の一面で、標的酵素は、ｔｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ試験法またはｔｈｒｅｅ−ｈｙｂｒｉｄ試験法（例えば、米国特許第５，２８３，３１７号、『Ｚｅｒｖｏｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｃｅｌｌ  ７２：２２３−２３２』、『Ｍａｄｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６８：１２０４６−１２０５４』、『Ｂａｒｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １４：９２０−９２４』、『Ｉｗａｂｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ８：１６９３−１６９６』、およびＢｒｅｎｔ、国際特許出願公開第ＷＯ９４／１０３００）で、標的酵素に結合するか、または相互に作用し（「標的酵素結合タンパク質」または「標的酵素−ｂｐ」）、標的酵素経路活性に関与する他のタンパク質を識別するために「おとりのタンパク質」として使用できる。こうした標的酵素−ｂｐは、例えば、標的酵素経路の下流要素として、標的酵素または標的酵素標的の活性化剤または阻害剤とすることができる。
【０１２５】
別の実施態様において、標的酵素の遺伝子発現の修飾因子が識別される。例えば、細胞または無細胞の混合物を化合物候補と接触させ、標的酵素ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現を化合物候補の不在下での標的酵素ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルに対して評価する。標的酵素構成要素ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現が、化合物候補の存在下においてその不在下よりも大きいとき、その化合物候補は、標的酵素ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現の刺激物質として識別される。逆に、標的酵素ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現が、化合物候補の存在下においてその不在下よりも小さい（統計的に有意なだけ小さい）とき、化合物候補は、標的酵素ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現の阻害剤として識別される。標的酵素ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルは、標的酵素ｍＲＮＡまたはタンパク質を検出する方法により決定でき、例えば、これには、Ｗｅｓｔｅｒｎｓ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｓ、ＰＣＲ、質量分析、２−Ｄゲル電気泳動などがあるが、これらはすべて当業者には周知のものである。
４．１  化合物
【０１２６】
関心のある化合物を、ｍＴＯＲの活性を調節する能力について試験することができる。別の方法として、こうした化合物がｍＴＯＲ調節活性を持つものとして特定されたら、本明細書中で説明するとおり、その抗ウイルス活性についてさらに試験することができる。別の方法として、化合物は、抗ウイルス活性についてスクリーニングすることができ、また本書で説明したｍＴＯＲスクリーニングアッセイを使用して任意に特性づけができる。
【０１２７】
加えて、ｍＴＯＲ調節活性を有するものとして同定された化合物は、更に、選択性について試験することが出来る。
【０１２８】
一実施態様において、高速大量処理スクリーニング法を使用して、多数の潜在的な治療用化合物（潜在的な修飾因子またはリガンド化合物）を含む、コンビナトリアルケミカルライブラリまたはペプチドライブラリ（例えば、公に利用できるライブラリ）が提供される。こうした「コンビナトリアルケミカルライブラリ」または「リガンドライブラリ」が次に、本明細書に記載したとおり、１つ以上のアッセイでスクリーニングされ、望ましい特性的な活性（例えばｍＴＯＲ活性の阻害）を示すライブラリ構成要素（特定の化学物質種またはサブクラス）が特定される。こうして、特定された化合物は、従来的な「リード化合物」としての役目を果たすか、または潜在的または実際の治療薬としてそれ自体を使用することができる。
【０１２９】
コンビナトリアルケミカルライブラリは、化学合成または生物学的合成のいずれかにより、試薬などの多数の化学物質「基本要素」を組み合わせることにより生成された多様な化学物質を集めたものである。例えば、ポリペプチドライブラリなどの線形コンビナトリアルケミカルライブラリは、化学物質基本要素（アミノ酸）の組を所定の化合物の長さについて考えられるすべての方法で組み合わせることにより形成されたものである（すなわち、ポリペプチド化合物内のアミノ酸の数）。数百万の化学物質を、化学物質基本要素のこうしたコンビナトリアル混合によって合成できる。
【０１３０】
コンビナトリアルケミカルライブラリ準備およびスクリーニングについては、当業者にはよく知られている。こうしたコンビナトリアルケミカルライブラリには、限定されないものの、ペプチドライブラリが含まれる（例えば、米国特許第５，０１０，１７５号、『Ｆｕｒｋａ，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｅｐｔ．  Ｐｒｏｔ．  Ｒｅｓ．  ３７：４８７−４９３  （１９９１）』および『Ｈｏｕｇｈｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：８４−８８  （１９９１）』を参照）。化学物質の多様性ライブラリを生成するためにその他の化学反応も使用できる。こうした化学反応には、限定されないものの、ペプトイド（例えば、ＰＣＴ公報第ＷＯ  ９１／１９７３５号）、コードされたペプチド（例えば、ＰＣＴ公報第ＷＯ  ９３／２０２４２号）、無作為なバイオ−オリゴマー（例えば、ＰＣＴ公報第ＷＯ  ９２／０００９１号）、ベンゾジアゼピン（例えば、米国特許第５，２８８，５１４号）、ヒダントイン、ベンゾジアゼピンおよびジペプチドなどのダイバーソマー（『Ｈｏｂｂｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：６９０９−６９１３  （１９９３）』）、ビニローグ性ポリペプチド（『Ｈａｇｉｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ａｍｅｒ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １１４：６５６８  （１９９２）』）、ブドウ糖足場材料を持つ非ペプチド性ペプチド模倣分子（『Ｈｉｒｓｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ａｍｅｒ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １１４：９２１７−９２１８  （１９９２）』）、小規模化合物ライブラリの類似した有機合成（『Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ａｍｅｒ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １１６：２６６１  （１９９４）』）、オリゴカルバミン酸塩（『Ｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１：１３０３  （１９９３）』）、および／またはホスホン酸ペプチジル（『Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ５９：６５８  （１９９４）』）、核酸ライブラリ（Ａｕｓｕｂｅｌ、ＢｅｒｇｅｒおよびＳａｍｂｒｏｏｋ（すべて上記）を参照）、ペプチド核酸ライブラリ（例えば、米国特許第５，５３９，０８３号を参照）、抗体ライブラリ（例えば、『Ｖａｕｇｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  １４（３）：３０９−３１４  （１９９６）』およびＰＣＴ／ＵＳ９６／１０２８７を参照）、炭水化物ライブラリ（例えば、『Ｌｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２７４：１５２０−１５２２  （１９９６）』および国際特許出願公開第ＷＯ  １９９７／０００２７１号を参照）、低分子有機分子ライブラリ（例えば、ベンゾジアゼピン、『Ｂａｕｍ  Ｃ＆ＥＮ，  Ｊａｎｕａｒｙ  １８，  ｐａｇｅ  ３３  （１９９３）』、イソプレノイド、米国特許第５，５６９，５８８号、チアゾリジノンおよびメタチアザノン、米国特許第５，５４９，９７４号、ピロリジン、米国特許第５，５２５，７３５号および第５，５１９，１３４号、モルホリノ化合物、米国特許第５，５０６，３３７号、ベンゾジアゼピン、米国特許第５，２８８，５１４号、およびこれに類するものを参照）が含まれる。分子ライブラリ合成のその他の例については、当該技術に、例えば、『ＤｅＷｉｔｔ  ｅｔ  ��ｌ．  （１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９０：６９０９』、『Ｅｒｂ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９１：１１４２２』、『Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ３７：２６７８』、『Ｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１：１３０３』、『Ｃａｒｒｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  Ｅｎｇｌ．  ３３：２０５９』、『Ｃａｒｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  Ｅｎｇｌ．  ３３：２０６１』、および『Ｇａｌｌｏｐ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ３７：１２３３』に記載がある。
【０１３１】
一部の模範的なライブラリは、特定のリード化合物からの変異体の生成に使用される。１つの方法には、コンビナトリアルライブラリの生成が含まれ、ここでリード化合物の１つ以上の官能基が、例えば、誘導体化により変化する。こうして、コンビナトリアルライブラリには、共通の構造的特徴（例えば、足場（ｓｃａｆｆｏｌｄ）や骨格（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ）を持つクラスの化合物が含まれうる。コンビナトリアルライブラリの準備用の装置は市販されている（例えば、３５７  ＭＰＳ、３９０  ＭＰＳ、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｔｅｃｈ、ケンタッキー州ルイビル、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ、Ｒａｉｎｉｎ、マサチューセッツ州ウォーバーン、４３３Ａ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カリフォルニア州フォスターシティ、９０５０  Ｐｌｕｓ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、マサチューセッツ州ベッドフォードを参照）。さらに、多数のコンビナトリアルライブラリはそれ自体が市販されている（例えば、ＣｏｍＧｅｎｅｘ、ニュージャージー州プリンストン、Ａｓｉｎｅｘ、ロシア、モスクワ、Ｔｒｉｐｏｓ，  Ｉｎｃ．、ミズーリ州セントルイス、ＣｈｅｍＳｔａｒ，  Ｌｔｄ、ロシア、モスクワ、３Ｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ペンシルバニア州エクストン、Ｍａｒｔｅｋ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、メリーランド州コロンビア等を参照）。試験化合物は、生物学的ライブラリ、ペプチドライブラリ（ペプチドの機能性を持つ分子のライブラリであるが、酵素による劣化に対する抵抗性があるにもかかわらず生物活性を維持する新規の非ペプチドバックボーンを持つライブラリ、例えば、『Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎ，  Ｒ．  Ｎ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ３７：２６７８−８５』）を参照、空間的にアドレス可能な並列の固相または溶液の位相ライブラリ、逆重畳積分を必要とする合成ライブラリ法、「１ビーズ１化合物」ライブラリ法、およびアフィニティークロマトグラフィー選択を使用した合成ライブラリ法から得ることもできる。生物学的ライブラリには、核酸ライブラリおよびタンパク質ライブラリが含まれる。一部の核酸ライブラリは、多様なセットのタンパク質（例えば、天然および人工のタンパク質）をコードし、その他は、例えば核酸アプタマーまたはリボザイムなどの機能的ＲＮＡおよびＤＮＡ分子を提供する。ペプトイドライブラリは、ペプチドライブラリに類似した構造が含まれるように作成できる。（『Ｌａｍ  （１９９７）  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．  １２：１４５』も参照）。タンパク質ライブラリは、発現ライブラリまたはディスプレイライブラリ（例えば、ファージディスプレイライブラリ）により生成することもできる。化合物のライブラリは、溶液中（例えば、『Ｈｏｕｇｈｔｅｎ  （１９９２）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １３：４１２−４２１』）、またはビーズ（『Ｌａｍ  （１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：８２−８４』）、チップ（『Ｆｏｄｏｒ  （１９９３）  Ｎａｔｕｒｅ  ３６４：５５５−５５６』）、バクテリア（Ｌａｄｎｅｒ、米国特許第５，２２３，４０９号）、胞子（Ｌａｄｎｅｒ  米国特許第５，２２３，４０９号）、プラスミド（『Ｃｕｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ���  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：１８６５−１８６９』）またはファージ（『Ｓｃｏｔ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ  （１９９０）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：３８６−３９０』、『Ｄｅｖｌｉｎ  （１９９０）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：４０４−４０６』、『Ｃｗｉｒｌａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ８７：６３７８−６３８２』、『Ｆｅｌｉｃｉ  （１９９１）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２２：３０１−３１０』、Ｌａｄｎｅｒ上掲）上で提示することもできる。酵素は、コンビナトリアルケミカルライブラリまたはその他何らかの適切な出所から選択可能な化合物を特定するためにスクリーニングできる（『Ｈｏｇａｎ，  Ｊｒ．，  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １５：３２８，  １９９７』）。
【０１３２】
本明細書にある任意のアッセイ、例えば、インビトロでのアッセイまたはインビボでのアッセイは、個別に、例えば、試験化合物のみとともに、または適切な対照群とともに実施できる。例えば、試験化合物のない並列アッセイ、またはその他の反応成分のない、例えば、標的のないものや基質のないものなど、その他の並列アッセイである。別の方法として、アッセイの結果を基準、例えば、基準値、例えば、評価の前に文献から入手できるもの、およびその他などと比較することが可能である。適切な相関および当該技術で既知の統計的方法を使用して、評価結果を評価できる。
【０１３３】
化合物が望ましい効果を持つことが判明したら、製造量の化合物を合成することができ、例えば、少なくとも５０  ｍｇ、５００  ｍｇ、５  ｇ、または５００  ｇの化合物が製造される。宿主細胞を貫通できる化合物が、本発明の実施において望ましいものの、化合物は、またはその溶解性を維持するために、または宿主細胞への侵入を助けるために、可溶化剤と組み合わせたり、別の化合物（単一または複数）と組み合わせて投与（例えば、脂質との混合物により）することができる。化合物は、例えば、対象への投与のために製剤化でき、また対象のために投与することもできる。
【０１３４】
５．  化合物の抗ウイルス活性の特定
５．１  ウイルス
本発明は、ウイルス感染の防止、管理および／または治療に使用される化合物を提供する。任意のウイルスに対する化合物の抗ウイルス活性は、本明細書下記に記載した技術を使用して試験できる。
【０１３５】
一つの態様において、前記ウイルスは、ヘルペスウイルス（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）である。ヘルペスウイルスは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１型及び２型、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（変異体Ａ及びＢ）、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８（カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ＫＳＨＶ）、及びケルコピテキン（ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ）ヘルペスウイルス１（Ｂウイルス）が挙げられる。Ｂウイルスは、ヒトに感染する場合もあるサルのウイルスである。ヒトヘルペスウイルスを、表２に示す。
【表２】
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【０１３６】
特定の実施態様において、ウイルスはヒトに感染する。その他の実施態様において、ウイルスはヒト以外の動物に感染する。特定の実施態様において、ウイルスは、ブタ、家禽、その他の家畜、またはペットに感染する。
【０１３７】
［００７３９］ウイルスの任意のタイプ、サブタイプまたは株に対して、化合物の抗ウイルス活性を評価できる。例えば、自然発生的な株、変異体または突然変異体、突然変異誘発ウイルス、リアソータントおよび／または遺伝子組み換えウイルスに対して、化合物の抗ウイルス活性を評価できる。
【０１３８】
一部の実施態様において、ウイルスは、細胞培養または対象において、４時間以下、６時間以下、８時間以下、１２時間以下、１６時間以下、または２４時間以下以内にピーク力価を達成する。その他の実施態様において、ウイルスは、細胞培養または対象において、４８時間以下、７２時間以下、または１週間以下以内にピーク力価を達成する。その他の実施態様において、ウイルスは、１週間よりも後にピーク力価を達成する。これらの実施態様に従い、ウイルス力価は感染した組織内または血清中で測定することができる。
【０１３９】
一部の実施態様において、ウイルスは、細胞培養内で１０４  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０４ｕ／ｍｌ以上、１０５  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０５  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０６  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０６  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０７  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０７  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０８  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０８  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０９  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０９  ｐｆｕ／ｍｌ以上、または１０１０  ｐｆｕ／ｍｌ以上のウイルス力価を達成する。一定の実施態様において、ウイルスは、細胞培養内で１０４  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０４  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０５  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０５  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０６  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０６  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０７  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０７  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０８  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０８  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０９  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０９  ｐｆｕ／ｍｌ以上、または１０１０  ｐｆｕ／ｍｌ以上のウイルス力価を、４時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、または２４時間以下以内に達成する。その他の実施態様において、ウイルスは、細胞培養内で１０４  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０４  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０５  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０５  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０６  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０６  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０７  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０７  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０８  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０８  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０９  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０９  ｐｆｕ／ｍｌ以上、または１０１０  ｐｆｕ／ｍｌ以上のウイルス力価を、４８時間、７２時間、または１週間以内に達成する。
【０１４０】
一部の実施態様において、ウイルスは、対象において、１  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０１  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０２  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０２  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０３  ｐｆｕ／ｍｌ以上、２．５×１０３  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０３  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０４  ｐｆｕ／ｍｌ以上、２．５×１０４  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０４  ｐｆｕ／ｍｌ以上、または１０５  ｐｆｕ／ｍｌ以上のウイルス収率を達成する。一定の実施態様において、ウイルスは、対象において、１  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０１  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０２  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０２  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０３  ｐｆｕ／ｍｌ以上、２．５×１０３  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０３  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０４  ｐｆｕ／ｍｌ以上、２．５×１０４  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０４  ｐｆｕ／ｍｌ以上、または１０５  ｐｆｕ／ｍｌ以上のウイルス収率を、４時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、２４時間、または４８時間以内に達成する。一定の実施態様において、ウイルスは、対象において、１  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０１  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０１  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０２  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０２  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０３  ｐｆｕ／ｍｌ以上、２．５×１０３  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０３  ｐｆｕ／ｍｌ以上、１０４  ｐｆｕ／ｍｌ以上、２．５×１０４  ｐｆｕ／ｍｌ以上、５×１０４  ｐｆｕ／ｍｌ以上、または１０５  ｐｆｕ／ｍｌ以上のウイルス収率を、４８時間、７２時間、または１週間以内に達成する。これらの実施態様に従い、ウイルス収率は感染した組織内または血清中で測定することができる。特定の実施態様において、対象は免疫適格性である。別の実施態様において、対象は免疫無防備状態または免疫抑制性である。
【０１４１】
一部の実施態様において、ウイルスは、対象において、１  ｐｆｕ以上、１０  ｐｆｕ以上、５×１０１ｐｆｕ以上、１０２ｐｆｕ以上、５×１０２ｐｆｕ以上、１０３ｐｆｕ以上、２．５×１０３ｐｆｕ以上、５×１０３  ｐｆｕ以上、１０４  ｐｆｕ以上、２．５×１０４  ｐｆｕ以上、５×１０４  ｐｆｕ以上、または１０５  ｐｆｕ以上のウイルス収率を達成する。一定の実施態様において、ウイルスは、対象において、１  ｐｆｕ以上、１０  ｐｆｕ以上、５×１０１  ｐｆｕ以上、１０２  ｐｆｕ以上、５×１０２  ｐｆｕ以上、１０３  ｐｆｕ以上、２．５×１０３  ｐｆｕ以上、５×１０３  ｐｆｕ以上、１０４  ｐｆｕ以上、２．５×１０４  ｐｆｕ以上、５×１０４  ｐｆｕ以上、または１０５  ｐｆｕ以上のウイルス収率を、４時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、２４時間、または４８時間以内に達成する。一定の実施態様において、ウイルスは、対象において、１  ｐｆｕ以上、１０  ｐｆｕ以上、１０１  ｐｆｕ以上、５×１０１  ｐｆｕ以上、１０２  ｐｆｕ以上、５×１０２  ｐｆｕ以上、１０３  ｐｆｕ以上、２．５×１０３  ｐｆｕ以上、５×１０３  ｐｆｕ以上、１０４  ｐｆｕ以上、２．５×１０４  ｐｆｕ以上、５×１０４  ｐｆｕ以上、または１０５  ｐｆｕ以上のウイルス収率を、４８時間、７２時間、または１週間以内に達成する。これらの実施態様に従い、ウイルス収率は感染した組織内または血清中で測定することができる。特定の実施態様において、対象は免疫適格性である。別の実施態様において、対象は免疫無防備状態または免疫抑制性である。
【０１４２】
一部の実施態様において、ウイルスは、対象において、感染単位数１以上、感染単位数１０以上、感染単位数５×１０１以上、感染単位数１０２以上、感染単位数５×１０２以上、感染単位数１０３以上、感染単位数２．５×１０３以上、感染単位数５×１０３以上、感染単位数１０４以上、感染単位数２．５×１０４以上、感染単位数５×１０４以上、または感染単位数１０５以上のウイルス収率を達成する。一定の実施態様において、ウイルスは、対象において、感染単位数１以上、感染単位数１０以上、感染単位数５×１０１以上、感染単位数１０２以上、感染単位数５×１０２以上、感染単位数１０３以上、感染単位数２．５×１０３以上、感染単位数５×１０３以上、感染単位数１０４以上、感染単位数２．５×１０４以上、感染単位数５×１０４以上、または感染単位数１０５以上のウイルス収率を、４時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、２４時間、または４８時間以内に達成する。一定の実施態様において、ウイルスは、対象において、感染単位数１以上、感染単位数１０以上、感染単位数１０１以上、感染単位数５×１０１以上、感染単位数１０２以上、感染単位数５×１０２以上、感染単位数１０３以上、感染単位数２．５×１０３以上、感染単位数５×１０３以上、感染単位数１０４以上、感染単位数２．５×１０４以上、感染単位数５×１０４以上、または感染単位数１０５以上のウイルス収率を、４８時間、７２時間、または１週間以内に達成する。これらの実施態様に従い、ウイルス収率は感染した組織内または血清中で測定することができる。特定の実施態様において、対象は免疫適格性である。別の実施態様において、対象は免疫無防備状態または免疫抑制性である。特定の実施態様において、ウイルスは、感染単位数１０４未満の収率を達成する。その他の実施態様において、ウイルスは、感染単位数１０５以上の収率を達成する。
【０１４３】
一部の実施態様において、ウイルスは、対象において、１ｍｌ当たりの感染単位数１以上、１ｍｌ当たりの感染単位数１０以上、１ｍｌ当たりの感染単位数５×１０１以上、１ｍｌ当たりの感染単位数１０２以上、１ｍｌ当たりの感染単位数５×１０２以上、１ｍｌ当たりの感染単位数１０３以上、１ｍｌ当たりの感染単位数２．５×１０３以上、１ｍｌ当たりの感染単位数５×１０３以上、１ｍｌ当たりの感染単位数１０４以上、１ｍｌ当たりの感染単位数２．５×１０４以上、１ｍｌ当たりの感染単位数５×１０４以上、または１ｍｌ当たりの感染単位数１０５以上のウイルス力価を達成する。一定の実施態様において、ウイルスは、対象において、１ｍｌ当たりの感染単位数１０以上、１ｍｌ当たりの感染単位数５×１０１以上、１ｍｌ当たりの感染単位数１０２以上、１ｍｌ当たりの感染単位数５×１０２以上、１ｍｌ当たりの感染単位数１０３以上、１ｍｌ当たりの感染単位数２．５×１０３以上、１ｍｌ当たりの感染単位数５×１０３以上、１ｍｌ当たりの感染単位数１０４以上、１ｍｌ当たりの感染単位数２．５×１０４以上、１ｍｌ当たりの感染単位数５×１０４以上、または１ｍｌ当たりの感染単位数１０５以上のウイルス力価を４時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、２４時間、または４８時間以内に達成する。一定の実施態様において、ウイルスは、対象において、１ｍｌ当たりの感染単位数１以上、１ｍｌ当たりの感染単位数１０以上、１ｍｌ当たりの感染単位数５×１０１以上、１ｍｌ当たりの感染単位数１０２以上、１ｍｌ当たりの感染単位数５×１０２以上、１ｍｌ当たりの感染単位数１０３以上、１ｍｌ当たりの感染単位数２．５×１０３以上、１ｍｌ当たりの感染単位数５×１０３以上、１ｍｌ当たりの感染単位数１０４以上、１ｍｌ当たりの感染単位数２．５×１０４以上、１ｍｌ当たりの感染単位数５×１０４以上、または１ｍｌ当たりの感染単位数１０５以上のウイルス力価を４８時間、７２時間、または１週間以内に達成する。これらの実施態様に従い、ウイルス力価は感染した組織内または血清中で測定することができる。特定の実施態様において、対象は免疫適格性である。別の実施態様において、対象は免疫無防備状態または免疫抑制性である。特定の実施態様において、ウイルスは、１  ｍｌ当たりの感染単位数１０４未満の力価を達成する。一部の実施態様において、ウイルスは、１ｍｌ当たりの感染単位数１０５以上の力価を達成する。
【０１４４】
一部の実施態様において、ウイルスは細胞に感染し、細胞１個当たり１０１以上、２．５×１０１以上、５×１０１以上、７．５×１０１以上、１０２以上、２．５×１０２以上、５×１０２以上、７．５×１０２以上、１０３以上、２．５×１０３以上、５×１０３以上、７．５×１０３以上、１０４以上、２．５×１０４以上、５×１０４以上、７．５×１０４以上、または１０５以上のウイルス粒子を生成する。一定の実施態様において、ウイルスは細胞に感染し、細胞１個当たり１０以上、１０１以上、２．５×１０１以上、５×１０１以上、７．５×１０１以上、１０２以上、２．５×１０２以上、５×１０２以上、７．５×１０２以上、１０３以上、２．５×１０３以上、５×１０３以上、７．５×１０３以上、１０４以上、２．５×１０４以上、５×１０４以上、７．５×１０４以上、または１０５以上のウイルス粒子を４時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、または２４時間以内に生成する。その他の実施態様において、ウイルスは細胞に感染し、細胞１個当たり１０以上、１０１以上、２．５×１０１以上、５×１０１以上、７．５×１０１以上、１０２以上、２．５×１０２以上、５×１０２以上、７．５×１０２以上、１０３以上、２．５×１０３以上、５×１０３以上、７．５×１０３以上、１０４以上、２．５×１０４以上、５×１０４以上、７．５×１０４以上、または１０５以上のウイルス粒子を４８時間、７２時間、または１週間以内に生成する。
【０１４５】
その他の実施態様において、ウイルスは、少なくとも約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、または１５日間潜伏する。別の実施態様において、ウイルスは、少なくとも約１週間、または２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、または１０週間潜伏する。さらなる実施態様において、ウイルスは、少なくとも約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、または１１カ月間潜伏する。さらに、別の実施態様において、ウイルスは、少なくとも約１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、または１５年間潜伏する。一部の実施態様において、ウイルスは１５年よりも長く潜伏する。
【０１４６】
５．２  抗ウイルス活性を検出するためのインビトロでのアッセイ
化合物の抗ウイルス活性は、本明細書に記載したか、または当業者に周知の他の様々なインビトロでのアッセイで評価することができる。こうしたウイルスに対する抗ウイルス活性を持つ化合物について検定しうるウイルスの非限定的な例については、本明細書中に掲載している。特定の実施態様において、化合物は、そのウイルス複製を抑制する能力にみあった活性プロファイルを示し、一方で真核細胞、好ましくは哺乳類の細胞に関して低い毒性を維持する。例えば、ウイルスの複製に対する化合物の効果は、様々な希釈度の化合物の存在下または不在下で、異なる希釈度のウイルスで感染させる手順、および例えば、ウイルス複製、ウイルスゲノム複製および／またはウイルスタンパク質の合成に対する化合物の効果を評価する手順により決定しうる。別の方法として、ウイルスの複製に対する化合物の効果は、細胞を様々な希釈度の化合物またはプラシーボと接触させる手順、細胞を異なる希釈度のウイルスで感染させる手順、および例えば、ウイルス複製、ウイルスゲノム複製、および／またはウイルスタンパク質の合成に対する化合物の効果を評価する手順により決定しうる。ウイルス複製の変化は、例えば、粥腫の生成により評価しうる。ウイルスタンパク質の生成は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、免疫蛍光染色またはフローサイトメトリー分析により評価しうる。ウイルス核酸の生成は、例えば、ＲＴ−ＰＣＲ、ＰＣＲ、ノーザン分析、またはサザンブロットにより評価しうる。
【０１４７】
一定の実施態様において、化合物は、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知の他のアッセイで、負の対照群（例えば、ＰＢＳ、ＤＭＳＯ）に対してウイルスの複製をおよそ１０％、好ましくは１５％、２５％、３０％、４５％、５０％、６０％、７５％、９５％以上減少させる。一部の実施態様において、化合物は、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知の他のアッセイで、負の対照（例えば、ＰＢＳ、ＤＭＳＯ）に対してウイルスの複製を約少なくとも１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、７５倍、１００倍、５００倍、または１０００倍減少させる。その他の実施態様において、化合物は、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知の他のアッセイで、負の対照群（例えば、ＰＢＳ、ＤＭＳＯ）に対してウイルスの複製を約少なくとも１．５〜３倍、２〜４倍、３〜５倍、４〜８倍、６〜９倍、８〜１０倍、２〜１０倍、５〜２０倍、１０〜４０倍、１０〜５０倍、２５〜５０倍、５０〜１００倍、７５〜１００倍、１００〜５００倍、５００〜１０００倍、または１０〜１０００倍減少させる。その他の実施態様において、化合物は、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知の他のアッセイで、負の対照（例えば、ＰＢＳ、ＤＭＳＯ）に対してウイルスの複製を約１  ｌｏｇ、１．５  ｌｏｇ、２  ｌｏｇ、２．５  ｌｏｇ、３  ｌｏｇ、３．５  ｌｏｇ、４  ｌｏｇ、４．５  ｌｏｇ、５  ｌｏｇ以上減少させる。これらの実施態様に従い、こうした化合物は、本明細書中に記載したアッセイで、安全性および効力についてさらに評価することができる。
【０１４８】
一定の実施態様において、化合物は、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知の他のアッセイで、負の対照群（例えば、ＰＢＳ、ＤＭＳＯ）に対してウイルス性ゲノムの複製をおよそ１０％、好ましくは１５％、２５％、３０％、４５％、５０％、６０％、７５％、９５％以上減少させる。一部の実施態様において、化合物は、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知の他のアッセイで、負の対照（例えば、ＰＢＳ、ＤＭＳＯ）に対してウイルス性ゲノムの複製を約少なくとも１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、７５倍、１００倍、５００倍、または１０００倍減少させる。その他の実施態様において、化合物は、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知の他のアッセイで、負の対照（例えば、ＰＢＳ、ＤＭＳＯ）に対してウイルス性ゲノムの複製を約少なくとも１．５〜３倍、２〜４倍、３〜５倍、４〜８倍、６〜９倍、８〜１０倍、２〜１０倍、５〜２０倍、１０〜４０倍、１０〜５０倍、２５〜５０倍、５０〜１００倍、７５〜１００倍、１００〜５００倍、５００〜１０００倍、または１０〜１０００倍減少させる。その他の実施態様において、化合物は、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知の他のアッセイで、負の対照群（例えば、ＰＢＳ、ＤＭＳＯ）に対してウイルス性ゲノムの複製を約１  ｌｏｇ、１．５  ｌｏｇ、２  ｌｏｇ、２．５  ｌｏｇ、３  ｌｏｇ、３．５  ｌｏｇ、４  ｌｏｇ、４．５  ｌｏｇ、５  ｌｏｇ以上減少させる。これらの実施態様に従い、こうした化合物は、本明細書中に記載したアッセイで、安全性および効力についてさらに評価することができる。
【０１４９】
一定の実施態様において、化合物は、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知の他のアッセイで、負の対照群（例えば、ＰＢＳ、ＤＭＳＯ）に対してウイルスタンパク質の合成をおよそ１０％、好ましくは１５％、２５％、３０％、４５％、５０％、６０％、７５％、９５％以上減少させる。一部の実施態様において、化合物は、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知の他のアッセイで、負の対照群（例えば、ＰＢＳ、ＤＭＳＯ）に対してウイルスタンパク質の合成をおよそ少なくとも１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、７５倍、１００倍、５００倍、または１０００倍減少させる。その他の実施態様において、化合物は、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知の他のアッセイで、負の対照群（例えば、ＰＢＳ、ＤＭＳＯ）に対してウイルスタンパク質の合成をおよそ少なくとも１．５〜３倍、２〜４倍、３〜５倍、４〜８倍、６〜９倍、８〜１０倍、２〜１０倍、５〜２０倍、１０〜４０倍、１０〜５０倍、２５〜５０倍、５０〜１００倍、７５〜１００倍、１００〜５００倍、５００〜１０００倍、または１０〜１０００倍減少させる。その他の実施態様において、化合物は、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知の他のアッセイで、負の対照群（例えば、ＰＢＳ、ＤＭＳＯ）に対してウイルスタンパク質の合成をおよそ１  ｌｏｇ、１．５  ｌｏｇ、２  ｌｏｇ、２．５  ｌｏｇ、３  ｌｏｇ、３．５  ｌｏｇ、４  ｌｏｇ、４．５  ｌｏｇ、５  ｌｏｇ以上減少させる。これらの実施態様に従い、こうした化合物は、本明細書中に記載したアッセイで、安全性および効力についてさらに評価することができる。
【０１５０】
一部の実施態様において、化合物により、ウイルス複製１ラウンド当たり約１．５倍以上、２倍以上、３倍以上、４倍以上、５倍以上、６倍以上、７倍以上、８倍以上、９倍以上、１０倍以上、１５倍以上、２０倍以上、２５倍以上、３０倍以上、３５倍以上、４０倍以上、４５倍以上、５０倍以上、６０倍以上、７０倍以上、８０倍以上、９０倍以上、または１００倍以上のウイルス収率の低減がもたらされる。一定の実施態様において、化合物により、ウイルス複製１ラウンド当たり約２倍以上のウイルス収率の低減がもたらされる。特定の実施態様において、化合物により、ウイルス複製１ラウンド当たり約１０倍以上のウイルス収率の低減がもたらされる。
【０１５１】
インビトロでの抗ウイルスアッセイは、初代細胞および樹立株細胞を含めた任意の真核細胞を使用して実施できる。選択した細胞または株細胞は、所定のウイルスにより感染の影響を受けやすいべきである。それぞれのウイルスについて標準的なインビトロでの抗ウイルスアッセイ（例えば、ウイルス細胞変性効果アッセイ、ニュートラルレッド摂取アッセイ、ウイルス収率アッセイ、プラーク減少アッセイに使用可能な哺乳類株細胞の非限定的な例を、表３に掲載する。
【表３】
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【０１５２】
以下のセクション５．  ２．１〜５．２．７は、それぞれのウイルスに対する化合物の抗ウイルス活性を特性づけるために使用できる抗ウイルスアッセイの非限定的な例を記載したものである。当業者であれば、セクション５．２．１〜５．２．７に記載した方法を、例えば、表３に記載したものなどの細胞系およびウイルス病原体を変化させることによるなど、その他のウイルスに対して適応させる方法が分かる。
【０１５３】
５．２．１  ウイルス細胞変性効果（ＣＰＥ）アッセイ
ＣＰＥは、培養した細胞が大抵のウイルスによって感染すると経験する形態学的な変化である。これらの形態学的な変化は、固定も染色もされていない細胞で顕微鏡によって簡単に観察できる。ＣＰＥの形態には、ウイルスに応じて変化があるが、限定されないものの、細胞の円形化、感染細胞の細胞核および／または細胞質内の封入体の外観、および合胞体の生成、または多核細胞（多数の核を含む大規模な細胞質の集団）などが含まれる。アデノウイルス感染では、アデノウイルスカプシドの結晶性アレイ（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  ａｒｒａｙｓ）が、細胞核に蓄積され、封入体が形成される。
【０１５４】
ＣＰＥアッセイによって、化合物の抗ウイルス効果の手段が提供されうる。こうしたアッセイの非限定的な例の１つにおいて、化合物は、（例えば、１０００、５００、１００、５０、１０、１  μｇ／ｍｌ）に連続的に希釈され、９６ウェル式プレートのうち、細胞単層（好ましくは、８０〜１００％集密の哺乳類の細胞）を含む３つのウェルに追加される。５分以内に、ウイルスを加えてプレートを密封し、３７°Ｃで、近似最大値のウイルスのＣＰＥを誘発するために必要な標準時間だけ培養する（例えば、ウイルスおよび感染多重度（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）にも依るがおよそ４８〜１２０時間）。ＣＰＥは、各試験において化合物と並行して既知の正の対照薬物が評価された後で、顕微鏡によって読み取られる。データは、５０％有効濃度または近似的なウイルス−抑制性濃度、５０％エンドポイント（ＥＣ５０）および細胞−抑制性濃度、５０％エンドポイント（ＩＣ５０）として表現される。一般的な選択性指標（「ＳＩ」）は、ＩＣ５０をＥＣ５０で割ったものとして計算される。これらの値は、例えば、Ｍ．Ｎ．  Ｐｒｉｃｈａｒｄ、Ｋ．Ｒ．  Ａｓａｌｔｉｎｅ、およびＣ．  Ｓｈｉｐｍａｎ，  Ｊｒ．（ミシガン大学、ミシガン州アンアーバー）によるコンピュータソフトウェアプログラムＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ  ＩＩなど、当該技術で既知の任意の方法を使用して計算できる。
【０１５５】
一実施態様において、化合物は、３、または４、または５、または６、または７、または８、または９、または１０、または１１、または１２、または１３、または１４、または１５、または２０、または２１、または２２、または２３、または２４、または２５、または３０、または３５、または４０、または４５、または５０、または６０、または７０、または８０、または９０、または１００、または２００、または３００、または４００、または５００、１，０００、または１０，０００よりも大きいＳＩを持つ。一部の実施態様において、化合物は、１０よりも大きいＳＩを持つ。特定の実施態様において、１０よりも大きいＳＩを持つ化合物が、さらに本明細書に記載したかまたは当該技術で既知のインビトロおよびインビボでのその他のアッセイで評価され、安全性および効力が特性づけられる。
【０１５６】
５．２．２  ニュートラルレッド（ＮＲ）染料摂取アッセイ
ＮＲ染料摂取アッセイを、ＣＰＥ阻害アッセイを検証するために使用することができる。こうしたアッセイの非限定的な一例において、ＣＰＥ阻害アッセイに使用されるものと同一の９６ウェル式マイクロプレートを使用できる。ニュートラルレッドを媒体に加えると、ウイルスによる損傷を受けていない細胞が、より大きな量の染料を取り込む。生存可能な細胞を示す摂取のパーセント値を、マイクロプレートオートリーダー上で、バックグラウンドを除去するための差異のある４０５および５４０  ｎｍの二波長で読み取る。（『ＭｃＭａｎｕｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ａｐｐｌ．  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  ３１：３５−３８、１９７６』を参照）。ＥＣ５０は、感染細胞があり化合物と接触した試料について決定され、またＩＣ５０は、化合物と接触した非感染性の細胞のある試料について決定される。
【０１５７】
５．２．３  ウイルス収率アッセイ
溶解させた細胞およびＣＰＥ阻害アッセイでのものなど、感染細胞からの上澄をウイルス収率（初代感染語のウイルス粒子の生成）のアッセイに使用できる。非限定的な一例において、これらの上澄は、連続的に希釈され、単層の影響を受けやすい細胞（例えば、ベロ細胞）上に追加される。これらの細胞内でのＣＰＥの発生は、上澄内の感染性ウイルスの存在を示すものである。ウイルス収率を１  ｌｏｇ１０抑制する試験化合物の濃度である９０％有効濃度（ＥＣ９０）が、当該技術で既知の計算方法を使用したこれらのデータから決定される。一実施態様において、化合物のＥＣ９０は、負の対照試料のＥＣ９０よりも少なくとも１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、または５０倍少ない。
【０１５８】
５．２．４  プラーク減少アッセイ
こうしたアッセイの非限定的な一例において、ウイルスは、様々な濃度に希釈され、３通りに作成された単層の標的の哺乳類細胞を含むそれぞれのウェルに加えられる。次にプレートを培養し、対照試料の効果的な感染を達成するための時間だけ培養する（例えば、１５分ごとに振盪して１時間）。培養期間の後、同量の１％アガロースを、２×の濃度で準備した同量のそれぞれの化合物希釈物に加える。一定の実施態様において、０．０３  μｇ／ｍｌ〜１００  μｇ／ｍｌの間の最終的な化合物濃度が、０．５％の最終アガロースオーバーレイ濃度で検査できる。薬物アガロースの混合物を、２  ｍｌの容積のそれぞれのウェルに注ぎ、およびプレートを３日間培養し、その後、細胞をニュートラルレッド１．５％溶液で染色する。４〜６時間の培養期間の終わりに、ニュートラルレッド溶液を吸引し、実体顕微鏡を使用してプラークを計数する。別の方法として、最終アガロース濃度０．４％を使用しうる。その他の実施態様において、プレートは３日よりも長く培養され、適切な場合に４日目および８日目に追加的なオーバーレイが注がれる。別の実施態様において、オーバーレイ媒体は、半流動性ではなく液体である。
【０１５９】
５．２．５  ウイルス力価アッセイ
この非限定的な例において、単層の標的の哺乳類の細胞株を、異なる量（例えば、３プラーク形成単位（ｐｆｕ）または５  ｐｆｕの多重度）のウイルス（例えば、ＨＣＭＶまたはＨＳＶ）で感染させ、その後、様々な希釈度の化合物（例えば、０．１  μｇ／ｍｌ、１  μｇ／ｍｌ、５  μｇ／ｍｌ、または１０  μｇ／ｍｌ）の存在下または不在下で培養する。感染した細胞は、感染後４８時間または７２時間に収穫し、適切な標的株細胞（例えば、ベロ細胞、ＭＲＣ５  細胞）上で、当該技術で既知の標準プラークアッセイで力価を測定する。一定の実施態様において、化合物の存在下で感染細胞を培養することで、化合物の不在下での感染細胞の培養に比較して、感染性ウイルスの収量が少なくとも１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、１００倍、５００倍、または１０００倍減少する。特定の実施態様において、化合物の存在下で感染細胞を培養することで、化合物の不在下での感染細胞の培養に比較して、ＰＦＵ／ｍｌが少なくとも１０倍減少する。
【０１６０】
一定の実施態様において、化合物の存在下で感染細胞を培養することで、化合物の不在下での感染細胞の培養に比較して、感染性ウイルスの収量が少なくとも０．５  ｌｏｇ１０、１  ｌｏｇ１０、１．５  ｌｏｇ１０、２  ｌｏｇ１０、２．５  ｌｏｇ１０、３  ｌｏｇ１０、３．５  ｌｏｇ１０、４  ｌｏｇ１０、４．５  ｌｏｇ１０、５  ｌｏｇ１０、５．５  ｌｏｇ１０、６  ｌｏｇ１０、６．５  ｌｏｇ１０、７  ｌｏｇ１０、７．５  ｌｏｇ１０、８  ｌｏｇ１０、８．５  ｌｏｇ１０、または９  ｌｏｇ１０だけ減少する。特定の実施態様において、化合物の存在下で感染細胞を培養することで、化合物の不在下での感染細胞の培養に比較して、感染性ウイルスの収量が少なくとも１  ｌｏｇ１０または２  ｌｏｇ１０だけ減少する。別の特定の実施態様において、化合物の存在下で感染細胞を培養することで、化合物の不在下での感染細胞の培養に比較して、感染性ウイルスの収量が少なくとも２  ｌｏｇ１０だけ減少する。
【０１６１】
５．２．６  フローサイトメトリーアッセイ
化合物の存在下または不在下で培養した、感染した標的の細胞におけるウイルス抗原の発現を検出するために、フローサイトメトリーを利用できる（例えば、『ＭｃＳｈａｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｖ．，  １９９４，  ７：５７６−６０４』を参照）。フローサイトメトリーによって細胞表面上で検出可能なウイルスの抗原の非限定的な例には、限定されないものの、ＨＳＶのｇＢ、ｇＣ、ｇＣ、およびｇＥ、水痘帯状疱疹ウイルスのｇｐＩ、ＨＣＭＶのｇＢ、及びＨＨＶ−６のｇｐ１１０／６０が含まれる。その他の実施態様において、細胞内のウイルス抗原またはウイルス核酸は、当該技術で既知の技術により、フローサイトメトリーにより検出可能である。
【０１６２】
５．２．７  抗ウイルスアッセイのための遺伝子組換え株細胞
抗ウイルスアッセイで使用するための様々な株細胞は、ウイルス感染またはウイルス複製のためのより適切な宿主、またウイルス−感染細胞を迅速に検出するためにより都合の良い基質とするために遺伝子操作ができる（例えば、『Ｏｌｉｖｏ，  Ｐ．Ｄ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  Ｒｅｖ．，  １９９６，  ９：３２１−３３４』を参照）。一部の面において、これらの株細胞は、転写、翻訳、プリゲノムキャプシド形成、逆転写、粒子集合および放出などの、ウイルス複製の任意の手順の遮断に対する化合物の抗ウイルス活性の試験に利用できる。それぞれのウイルスについて、抗ウイルスアッセイに使用するための遺伝子組み換え細胞の非限定的な例について、以下に説明する。
【０１６３】
ＥＢＶに対する化合物の抗ウイルス効果は、Ｄａｕｄｉ細胞内のウイルスカプシド抗原（ＶＣＡ）生成レベルを、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して測定することで評価できる。化合物の様々な濃度について検査でき（例えば、５０  ｍｇ／ｍｌ〜０．０３  ｍｇ／ｍｌ）、また、未処理の細胞および化合物で処理した細胞から得られた結果が、ＥＣ５０値の計算に使用される。毒性も無く良好なＥＢＶ  ＶＣＡ生成に対する活性を持つ化合物を選択して、ＥＢＶ  ＤＮＡ合成を抑制する能力について試験する。
【０１６４】
ＨＳＶを用いたアッセイでは、ＨＳＶ−１  ＵＬ３９プロモーターの転写制御下で大腸菌ｌａｃＺ遺伝子により安定的に形質転換させたＢＨＫＩＣＰ６ＬａｃＺ株細胞を使用できる（『Ｓｔａｂｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３８：１９５−２０４』を参照）。感染細胞は、当該技術で既知のβ−ガラクトシダーゼアッセイ、例えば、比色分析法を使用して検出される。
【０１６５】
化合物の安全性及び効力の特性付け
化合物の安全性および効力は、当業者に周知の技術を使用して評価できる。下記のセクション５．４および５．５では、化合物の安全性および効力を特性づけるための、細胞毒性試験および動物モデルアッセイについてそれぞれ、非限定的な例を提供している。一定の実施態様において、本明細書中に記載した細胞毒性試験は、本明細書中に記載したインビトロでの抗ウイルスアッセイの前に、同時に、又は後に実施される。
【０１６６】
一部の実施態様において、化合物は、非感染性の細胞およびウイルス感染した細胞の生存能力に差異的に影響する。ウイルス感染細胞および非感染性の細胞の生存能力に対する化合物の特異的効果は、本明細書中に記載した技術などの技術、または当業者にとって既知のその他の技術を使用して評価しうる。一定の実施態様において、化合物は、非感染性の細胞よりもウイルスに感染した細胞に対する毒性が高い。特定の実施態様において、化合物は、ウイルスに感染した細胞の生存能力に優先的に影響する。任意の特定の概念に拘束されることなく、未感染の細胞およびウイルス感染細胞の生存能力に対する化合物の差異的な効果は、差異的に発現または調節されるか、または未感染の細胞およびウイルス感染細胞において差異的な活性を持つ特定の酵素またはタンパク質を標的化した化合物の結果でありうる。例えば、感染した宿主細胞におけるウイルス感染および／またはウイルス複製は、酵素および／またはタンパク質の発現、調節、および／または活性により変化しうる。従って、一部の実施態様において、同一の酵素、タンパク質または代謝経路を標的とするその他の化合物が、抗ウイルス活性について検査される。その他の実施態様において、ウイルス感染した細胞の生存能力に差異的に影響する化合物の同属種が設計され、抗ウイルス活性について検査される。化合物の抗ウイルス活性を評価するために使用できる抗ウイルスアッセイの非限定的な例について、本明細書中に記載されている。
【０１６７】
５．４  細胞毒性試験
１つの望ましい実施態様において、細胞は、初代細胞および株細胞を含めた動物の細胞である。一部の実施態様において、細胞は、ヒト細胞である。一定の実施態様において、細胞毒性は、Ｕ９３７（ヒト単球株細胞）、初代末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、Ｈｕｈ７（ヒト肝芽腫株細胞）、２９３Ｔ（ヒト胎児由来腎臓株細胞）、およびＴＨＰ−１（単球細胞）といった１つ以上の株細胞で評価される。化合物の細胞毒性の試験に使用可能なその他の株細胞の非限定的な例を、表３に掲載する。
【０１６８】
化合物への暴露の後で、細胞（感染または未感染）の生存能力または株細胞の評価するために、当該技術でよく知られた数多くのアッセイが使用でき、こうして、化合物の細胞毒性が決定される。例えば、細胞増殖は、ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の取り込みの測定（例えば、『Ｈｏｓｈｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８６，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ３８，  ３６９』、『Ｃａｍｐａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈ．  １０７：７９』を参照）により、（３Ｈ）チミジンの取り込みの測定（例えば、『Ｃｈｅｎ，  Ｊ．，  １９９６，  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １３：１３９５−４０３』、『Ｊｅｏｕｎｇ，  Ｊ．，  １９９５，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０：１８３６７  ７３』を参照）により、直接的な細胞計数により、またはがん原遺伝子（例えば、ｆｏｓ、ｍｙｃ）または細胞周期マーカー（Ｒｂ、ｃｄｃ２、ｃｙｃｌｉｎ  Ａ、Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｅ、等）など既知の遺伝子の転写、翻訳または活性の変化の検出により評価できる。こうしたタンパク質およびｍＲＮＡおよび活性のレベルは、当該技術でよく知られた任意の方法により決定できる。例えば、タンパク質は、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロッティングまたは免疫沈降など、既知の免疫診断法により、市販の抗体を含めた、抗体を使用して定量化できる。ｍＲＮＡは、例えば、ノーザン分析、ＲＮａｓｅプロテクション、またはポリメラーゼ連鎖反応を逆転写とともに使用するなど、当該技術で既知および日常的な方法を使用して、定量化できる。細胞の生存能力は、トリパンブルー染色または当該技術で既知のその他の細胞死または生存能力マーカーを使用して評価できる。特定の実施態様において、細胞のＡＴＰレベルが測定され、細胞の生存能力が決定される。
【０１６９】
特定の実施態様において、細胞の生存能力は、細胞内ＡＴＰレベルを測定するＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）など、当該技術で標準的なアッセイを使用して、３日および７日の期間で測定される。細胞のＡＴＰの減少は、細胞障害効果を示すものである。別の特定の実施態様において、細胞の生存能力は、ニュートラルレッド摂取アッセイで測定できる。その他の実施態様において、形態学的な変化の目視観察には、拡張、粒度（ｇｒａｎｕｌａｒｉｔｙ）、ギザギザの縁（ｒａｇｇｅｄ  ｅｄｇｅｓ）のある細胞、薄膜様の外観、円形化、ウェル表面からの脱離、またはその他の変化（変更）が含まれうる。これらの変化は、観察された細胞毒性の度合いに従い、Ｔ（１００％毒性）、ＰＶＨ（部分的毒性−非常に重度−８０％）、ＰＨ（部分的毒性−重度−６０％）、Ｐ（部分的毒性−４０％）、Ｐ（部分的に毒性−軽度−２０％）、または０（無毒性−０％）が指定される。これらのデータの回帰分析により５０％の細胞抑制性（細胞毒性）濃度（ＩＣ５０）が決定される。
【０１７０】
化合物は、動物モデルにおけるインビボ毒性について試験できる。例えば、化合物の抗ウイルス活性を試験するために使用される、本明細書に記載したおよび／または当該技術で既知のその他の動物モデルを、これらの化合物のインビボ毒性を決定するために使用することもできる。例えば、動物には、化合物の多様な濃度で投与される。その後、動物は時間経過に伴って、組織損傷を示すことになりうる、死亡率、体重減少または体重増加の不成功、および／または血清マーカーレベルについて監視される（例えば、一般的な組織損傷の指標としてのクレアチンホスホキナーゼレベル、肝臓損傷の可能性の指標としてのグルタミン酸シュウ酸トランスアミラーゼまたはピルビン酸トランスアミラーゼのレベル）。これらのインビボでのアッセイは、投与量に加えて、様々な投与モードおよび／または療法の毒性の試験に適応させることもできる。
【０１７１】
本発明による化合物の毒性および／または効力は、細胞培養または実験動物における、例えば、ＬＤ５０（母集団の５０％に対して致命的な用量）およびＥＤ５０（母集団の５０％で治療的に効果的な用量）の決定についての標準的な製薬の手順により決定できる。毒性および療法効果の用量比が治療係数で、これはＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表現しうる。本発明に従い識別された化合物で、大きな治療指数を示すものが望ましい。本発明に従い識別された化合物で、毒性副作用を示すものを使用することもできるが、影響のある組織の部位へのこうした薬剤を標的とした送達系の設計には、非感染性の細胞への潜在的損傷を最小限に抑えるように、またそれにより副作用を低減するように、注意が必要である。
【０１７２】
細胞培養アッセイおよび動物実験から得られたデータは、本発明に従い識別された化合物の多様な投薬をヒトで使用するための調剤のために使用できる。こうした薬剤の投薬は、循環濃度の範囲内が好ましく、これには、ＥＤ５０値で低毒性か無毒性のものが含まれる。投薬は、採用される剤形および利用される投与経路に応じて、この範囲内で変化しうる。本発明の方法で使用される任意の薬剤について、治療的に効果的な用量は、まずは細胞培養アッセイにより予想できる。用量は、動物モデルで循環する血漿濃縮の範囲を達成するために策定することができ、これには、細胞培養で決定されたＩＣ５０（すなわち、症状の最大半減阻害を達成する試験化合物の濃度）が含まれる。こうした情報は、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定するために使用できる。血漿中のレベルは、例えば、高性能液体クロマトグラフィーにより測定できる。投薬量の決定に関するそれ以外の情報については、本明細書中に記載する。
【０１７３】
５．５  動物モデル
化合物および組成物は、ヒトでの使用の前に、望ましい治療または予防の活性を得るために、インビボで評価するのが望ましい。例えば、インビボでのアッセイは、化合物および／または別の治療薬を投与することが好ましいかどうかを決定するために使用される。例えば、ウイルス感染を阻止するための化合物の使用を評価するために、動物がウイルスに感染する前に化合物を投与することができる。別の実施態様において、化合物は、動物に、動物がウイルスに感染するのと同時に投与できる。ウイルス感染を治療または管理するための化合物の使用を評価するために、一実施態様において、化合物は、動物のウイルス感染の後で投与される。別の実施態様において、化合物は、ウイルス感染を治療および／または管理するために、動物がウイルスに感染するのと同時に動物に投与される。特定の実施態様において、２回以上にわたり化合物が動物に投与される。
【０１７４】
化合物は、限定されないものの、ラット、マウス、ニワトリ、雌ウシ、サル、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ウサギ、モルモット等を含めた動物モデル系で、ウイルスに対する抗ウイルス活性について試験することができる。発明の特定の実施態様において、化合物は、マウスモデル系で試験される。こうしたモデル系は、幅広く使用され、当業者によく知られている。
【０１７５】
動物をウイルスに感染させ、それと同時的または経時的に化合物またはプラシーボで処理する。動物（例えば、血清、尿、痰、精液、唾液、プラズマ、または組織の試料）から得られた試料は、当該技術でよく知られた方法、例えば、変化したウイルス複製（例えば、プラーク生成により決定されるもの）またはウイルスタンパク質の生成（例えば、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、またはフローサイトメトリー分析により決定されるもの）またはウイルス核酸（例えば、室温−ＰＣＲ、ノーザン分析またはサザンブロットにより決定されるもの）を測定する方法により、ウイルス複製を試験できる。組織試料におけるウイルスの定量化のために、組織試料をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で均質化し、浄化した均質物の希釈液を、３７°Ｃで単層の細胞（例えば、Ｖｅｒｏ、ＣＥＦまたはＭＤＣＫ細胞）に１時間吸収させる。その他のアッセイにおいて、病理組織検査は感染後に実施されるが、ウイルスが感染の標的として知られている器官の評価が好ましい。ウイルス特異的単クローン抗体を使用してウイルス免疫組織化学が実施される。下記の非限定的な模範的な動物モデルを、その他のウイルス系に適応させることができる。
【０１７６】
ウイルスの毒性に対する化合物の効果は、化合物の投与を受けた感染した対象におけるウイルスの力価、化合物の投与を受けた感染した対象の生存期間、化合物の投与を受けた感染した対象での免疫応答、化合物の投与を受けた感染した対象における症状の数、持続時間および／または重症度、および／または化合物の投与を受けた感染した対象における１つ以上の症状が発症する前の期間が評価されるインビボアッセイを使用して決定できる。当業者に周知の技術が、こうした効果を測定するために使用できる。
【０１７７】
５．５．１  単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）
インビボでの化合物の抗ウイルス活性を評価するために、単純ヘルペスウイルス１型または２型（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）のマウスモデルを採用できる。ＢＡＬＢ／ｃマウスは一般的に使用されるが、感受性のあるその他の適切なマウス系を使用できる。マウスは、適切な感染多重度（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）のＨＳＶ（例えば、１０５  ｐｆｕのＨＳＶ−１菌株Ｅ−３７７または４×１０４  ｐｆｕのＨＳＶ−２菌株ＭＳ）を持つ様々な経路により培養した後、化合物およびプラシーボを投与する。腹腔内（ｉ．ｐ．）接種では、ＨＳＶ−１は、腸、肝臓、および脾臓で複製し、ＣＮＳに伝播する。経鼻（ｉ．ｎ．）接種では、ＨＳＶ−１は、上咽喉で複製し、ＣＮＳに伝播する。最適な投与量および治療法を決定するために、化合物をその他の治療と組み合わせて使用して、投与の任意の適切な投与経路（例えば、経口、局所的、全身性、経鼻）、頻度および用量を検査できる。
【０１７８】
ＨＳＶ−２性病のマウスモデルにおいて、ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２のある雌のスイスウェブスターマウスの膣内接種を実施し、および膣スワブを入手し、ウイルス複製に対する治療の効果を評価する（例えば、『Ｃｒｕｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ２００２，  ８：３８６−３９１』を参照）。例えば、プラークアッセイによるウイルス力価は、膣スワブから決定できる。皮膚の病変を研究するための、ＳＫＨ−１マウス（免疫適格性の無毛マウスの菌株）を使用したＨＳＶ−１のマウスモデルも、当該技術で説明されている（例えば、『Ｃｒｕｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ２００２，  ８：３８６−３９１』および『Ｂｏｌｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．，  １９９７，  ３５：１５７−１６５』を参照）。ＨＳＶのモルモットモデルについても説明があり、例えば、『Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｖｉｒｏｌ．  Ｊ，  ２００４  Ｎｏｖ  ２３，  １：１１』を参照のこと。統計的分析を実施して有意性を計算する（例えば、Ｐ値が０．０５以下）。
【０１７９】
５．５．２  ＨＣＭＶ
ＨＣＭＶは、一般には実験動物に感染しないため、マウスＣＭＶ（ＭＣＭＶ）感染のマウスモデルは、インビボでの化合物の抗ウイルス活性の評価に使用できる。例えば、ＢＡＬＢ／ｃマウスＭＣＭＶマウスモデルを、感染したマウスに投与したときのインビボでの化合物の抗ウイルス活性を評価するために使用できる（例えば、『Ｋｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，  ２００４，  ４８：４７４５−４７５３』を参照）。化合物で治療したまたは未治療の感染したマウスから単離した組織の均質物を、マウス胚線維芽細胞（ＭＥＦ）を用いた標準プラークアッセイを使用して試験する。次に、統計的分析を実施して有意性を計算する（例えば、Ｐ値が０．０５以下）。
【０１８０】
別の方法として、ヒトの組織（すなわち、網膜組織または胎児胸腺および肝臓組織）をＳＣＩＤマウスに移植して、その後、マウスを、好ましくは組織グラフトの部位でＨＣＭＶに感染させる（例えば、『Ｋｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，  ２００４，  ４８：４７４５−４７５３』を参照）。接種に使用するＨＣＭＶのｐｆｕは、実験およびウイルス菌株に応じて変化しうる。任意の適切な投与経路（例えば、経口、局所的、全身性、経鼻）、頻度および投与の用量を試験して、化合物を使用し、随意にその他の治療と組み合わせて、最適な投与量および治療法を決定できる。化合物で治療したかまたは未治療の感染したマウスから、様々な時点で単離した移植組織の均質物を、ヒト包皮線維芽細胞（ＨＦＦ）を用いた標準プラークアッセイを使用して試験する。次に、統計的分析を実施して有意性を計算する（すなわち、Ｐ値が０．０５以下）。
【０１８１】
抗ウイルス薬を研究するためのＣＭＶのモルモットモデルについてもこれまでに記載があり、例えば、『Ｂｏｕｒｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．，  ２０００，  ４７：１０３−１０９』、『Ｂｒａｖｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．，  ２００３，  ６０：４１−４９』、および『Ｂｒａｖｏ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，  ２００６，  １９３：５９１−５９７』を参照されたい。
【０１８２】
６．  医薬組成物
本明細書に記載したか、または参照により組み込んだ任意の化合物は、任意で、化合物を含有する組成物の形態であってもよい。
【０１８３】
本明細書で提供した一定の実施態様において、組成物（医薬組成物を含む）は、化合物および医薬として許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含有する。
【０１８４】
その他の実施態様において、本明細書で提供したものは、有効量の化合物および医薬として許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含有する医薬組成物である。医薬組成物は、獣医用および／またはヒトへの投与に適切である。
【０１８５】
本明細書で提供した医薬組成物は、対象に投与されるようにする任意の形態を取ることができ、前記対象は、動物であることが好ましく、これには、限定はされないものの、ヒト、哺乳動物、または雌ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、家禽、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット等などヒト以外の動物、また、哺乳動物であることがさらに好ましく、およびヒトが最も好ましい。
【０１８６】
特定の実施態様において、またこの文脈において、「医薬として許容される担体、賦形剤または希釈剤」という用語は、連邦政府または州政府の規制当局により認可を受けたか、または米国薬局方（Ｕ．Ｓ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ）または動物での、さらに具体的にはヒトでの使用にその他一般に認められている薬局方にリストされている担体、賦形剤または希釈剤を意味する。「担体」という用語は、それとともに治療が投与される希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全および不完全））、賦形剤、または媒体を意味する。こうした薬剤学的担体は、水および油などの無菌の液体とすることができ、ラッカセイ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油およびこれに類するものなど、石油、動物、植物を起源とするものや、合成的なものが含まれる。水は、医薬組成物が静脈内に投与されるとき、好ましい担体である。生理食塩水および水溶性のブドウ糖およびグリセロール溶液も、液体担体として、特に注射用溶液用に採用できる。適切な薬剤学的担体の例については、Ｅ．Ｗ．  Ｍａｒｔｉｎによる『Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ』に記載がある。
【０１８７】
一般的な組成物および剤形は、１つ以上の賦形剤を含有する。適切な賦形剤は、製薬学の当業者にとってよく知られており、また適切な賦形剤の非限定的な例には、デンプン、ブドウ糖、ラクトース、蔗糖、ゼラチン、麦芽、イネ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ナトリウムステアリン酸塩、モノステアリン酸グリセリン、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールおよびこれに類するものが含まれる。特定の賦形剤が医薬組成物または剤形への組み込みにとって適切かどうかは、当該技術でよく知られている多様な要因に依存し、これには、限定はされないものの、剤形が患者に投与される方法およびその剤形に含まれる特定の有効成分などがある。望ましい場合、組成物または単一単位の剤形には、少量の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨ緩衝薬を含めることができる。
【０１８８】
ラクトースを含まない組成物は、当該技術でよく知られており、また例えば、米国薬局方（ＵＳＰ）ＳＰ  （ＸＸＩ）／ＮＦ  （ＸＶＩ）にリストされている賦形剤を含有しうる。一般に、ラクトースを含まない組成物は、医薬品としての適合性がありかつ医薬として許容される量の有効成分、結合剤／賦形剤、および潤滑剤を含有する。好ましいラクトースを含まない剤形は、化合物、微結晶性セルロース、アルファ化でんぷん、およびステアリン酸マグネシウムが挙げられる。
【０１８９】
さらに、本明細書で提供されているのは、水は一部の化合物の劣化を促進することがあるため、１つ以上の化合物を含有する無水の医薬組成物および剤形である。例えば、水（例えば、５％）を加えることは、製薬の技術では、有効期間や時間経過に伴う製剤の安全性などの特性を決定するために、長期的な保管をシミュレートする手段として広く受け入れられている。例えば、『Ｊｅｎｓ  Ｔ．  Ｃａｒｓｔｅｎｓｅｎ，  Ｄｒｕｇ  Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，  ２ｄ．  Ｅｄ．，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  ＮＹ，  ＮＹ，  １９９５，  ｐｐ．  ３７９  ８０』を参照のこと。事実上、水および熱によって、一部の化合物の分解が促進される。こうして、水分および／または湿気は、製剤の製造、取り扱い、包装、保管、出荷、および使用中に一般的に遭遇するものであるため、製剤形態に対する水の効果は、重要な意義を持つものとなりうる。
【０１９０】
本明細書で提供した無水の組成物および剤形は、無水または低水分を含む成分および低水分または低湿度の条件を使用して、調製できる。一級または二級アミンから構成されるラクトースおよび少なくとも１つの化合物を含有する組成物および剤形は、製造、包装、および／または保管中に水分および／または湿気とかなり接触することが予想される場合には、無水であることが好ましい。
【０１９１】
無水の組成物は、その無水の性質が維持されるように調製および保管されるべきである。従って、無水の組成物は、適切な処方キットに含めることができるよう、水への暴露を阻止することが知られている素材を使用して包装することが好ましい。適切な包装の例には、限定されないものの、密閉された箔、プラスチック、単位用量容器（例えば、バイアル）、ブリスター包装、およびストリップ包装が含まれる。
【０１９２】
さらに、本明細書で提供されているのは、化合物が分解する速度を低下させる１つ以上の薬剤を含有する組成物および剤形である。本明細書では「安定剤」と呼ぶこうした薬剤には、限定されないものの、アスコルビン酸、ｐＨ緩衝液、または塩緩衝液などの酸化防止剤がある。
【０１９３】
組成物および単一単位の剤形は、溶液、懸濁液、乳濁液、錠剤、ピル、カプセル、粉末、徐放性製剤およびこれに類する形態を取りうる。経口の製剤形態には、製薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム、等の標準的担体が含まれうる。こうした組成物および剤形には、予防的または治療的に有効な量の化合物（好ましくは精製した形態）と、それとともに行う患者への適切な投与のための形態が提供されるように適切な量の担体が含まれる。製剤形態は、投与方法に適したものであるべきである。１つの望ましい実施態様において、組成物または単一単位の剤形は、無菌で、対象、好ましくは被験動物、より好ましくは哺乳類の被検体、および最も好ましくはヒト対象への投与に適した形態である。
【０１９４】
本明細書で提供した組成物は、意図される投与経路に適合するように調製される。投与経路の例には、限定されないものの、非経口的、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口的（例えば、吸入）、鼻腔内、経皮的（局所的）、経粘膜、滑液包内、眼科的および直腸投与が含まれる。特定の実施態様において、組成物は、日常的な手順に従い、ヒトへの静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内、眼科的または局所的投与に適応させた組成物として、調製される。１つの望ましい実施態様において、組成物は、日常的な手順に従い、ヒトに対する皮下投与用に調製される。一般に、静脈内投与のための組成物は、無菌で等張性の水溶性緩衝液に入れた溶液である。必要に応じて、組成物には、可溶化剤および注射の部位での苦痛を和らげるためのリグノカインなどの局所麻酔薬も含まれうる。剤形の例には、限定されないものの、錠剤、カプレット、カプセル（弾性ゼラチン軟カプセルなど）、カシェー、トローチ、ロゼンジ（トローチ剤）、分散性顆粒剤、座薬、軟膏、パップ剤（パップ）、ペースト、粉末、ドレッシング（包帯）、クリーム、プラスター、溶液、パッチ、エアロゾル（例えば、スプレー式点鼻剤または吸入器）、ゲル、患者への経口または経粘膜の投与に適した液体剤形（懸濁液を含む）（例えば、水溶性のまたは非水溶性の液体懸濁液、水中油乳濁液、または油中水乳濁液）、溶液、および特効薬、患者への非経口的投与に適した液体剤形、および無菌の固体（例えば、患者への非経口的投与に適した液体剤形を提供するために再構成されうる結晶性または非晶質の固体）が含まれる。
【０１９５】
本発明の組成物、形状、および剤形タイプは、一般に、これらの用途に応じて変化する。
【０１９６】
一般に、本明細書で提供した組成物の成分は、例えば、その量の活性薬剤を表示したアンプルまたはサッシェなどの密閉容器に入れた冷凍乾燥粉末または無水の濃縮物として、別個にまたは単位剤形に一緒に混入して供給される。組成物が注入により投与される場合には、無菌製薬グレードの水または生理食塩水の入った注入ビンで調剤しうる。組成物が注射により投与される場合、投与の前に成分を混合することができるよう、注射用の無菌水または生理食塩水のアンプルを提供しうる。
【０１９７】
経口投与に適した本明細書で提供した医薬組成物は、限定されないものの、錠剤（例えば、咀嚼錠）、カプレット、カプセル、および液体（例えば、味付きシロップ）などの個々の剤形として提供しうる。こうした剤形には、所定の量の有効成分が含まれ、また当業者にとってよく知られた製薬学の方法により調製しうる。『Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １８ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  Ｅａｓｔｏｎ  ＰＡ  （１９９０）』を全般的に参照のこと。
【０１９８】
本明細書で提供されている典型的な経口投与形態は、伝統的な製薬の配合技術に従い、少なくとも１つの賦形剤と均質に混合した化合物を組み合わせることで調製される。賦形剤は、投与のために望ましい調製の形態に応じて、非常に多様な形態を取ることができる。例えば、経口液体またはエアロゾル剤形での使用に適した賦形剤には、限定されないものの、水、グリコール、油、アルコール類、香味剤、防腐剤、および着色剤が含まれる。固体の経口剤形（例えば、粉末、錠剤、カプセル、およびカプレット）での使用に適した賦形剤の例には、限定されないものの、デンプン、糖類、微結晶セルロース、希釈剤、顆粒薬、潤滑剤、結合剤、および崩壊剤が含まれる。
【０１９９】
投与のしやすさから、錠剤およびカプセルは、最も有利な単位経口剤形であり、この場合、固体賦形剤が採用される。希望に応じて、錠剤は、標準的な水性または非水系の技術により被覆することができる。こうした剤形は、製薬学の任意の方法により調製できる。一般に、医薬組成物および剤形は、有効成分を液体担体と均一かつ均質に混合する、固体担体を細粒にする、またはその両方を行った後、必要に応じて、生成物を希望の体裁に形作ることで調製される。
【０２００】
例えば、錠剤は圧縮または成型により調製できる。圧縮錠剤は、粉末または顆粒などの自由に流動する形態の有効成分を適切な機械で圧縮することにより調製でき、これが任意に賦形剤と混合される。成型錠剤は、不活性の液体希釈剤で湿らせた粉末の化合物の混合物を適切な機械で成型することにより作成できる。
【０２０１】
本明細書で提供されている経口剤形で使用できる賦形剤の例には、限定されないものの、結合剤、賦形剤、錠剤分解物質、および潤滑剤が含まれる。医薬組成物および剤形での使用に適した結合剤には、限定されないものの、コーンスターチ、ポテトスターチ、またはその他のデンプン、ゼラチン、天然ゴムおよび合成ゴム（アカシアなど）、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、その他のアルギン酸塩、粉末トラガカント、グアールガム、セルロースおよびその誘導体（例えば、エチルセルロース、酢酸繊維素、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ナトリウムカルボキシメチルセルロース）、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、アルファ化でんぷん、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、（例えば、２２０８番、２９０６番、２９１０番）、微結晶性セルロース、およびその混合物が含まれる。
【０２０２】
本明細書で提供されている医薬組成物および剤形での使用に適した賦形剤の例には、限定されないものの、タルク、炭酸カルシウム（例えば、顆粒または粉末）、微結晶性セルロース、粉末セルロース、デキストレート、カオリン、マンニトール、ケイ酸、ソルビトール、デンプン、アルファ化でんぷん、およびその混合物が含まれる。本明細書で提供されている医薬組成物中の結合剤または賦形剤は、一般的に医薬組成物または剤形の約５０〜約９９重量パーセントで存在する。
【０２０３】
微結晶性セルロースの適切な形態には、限定されないものの、ＡＶＩＣＥＬ  ＰＨ  １０１、ＡＶＩＣＥＬ  ＰＨ  １０３、ＡＶＩＣＥＬ  ＲＣ  ５８１、ＡＶＩＣＥＬ  ＰＨ  １０５（ＦＭＣ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｖｉｓｃｏｓｅ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ、Ａｖｉｃｅｌ  Ｓａｌｅｓ（ペンシルベニア州マーカスフック）より入手可能）として販売されている素材、およびその混合物が含まれる。特定の結合剤は、ＡＶＩＣＥＬ  ＲＣ  ５８１として販売されている微結晶性セルロースおよびナトリウムカルボキシメチルセルロースの混合物である。適切な無水または低水分の賦形剤または添加物には、ＡＶＩＣＥＬ  ＰＨ  １０３ＴＭおよびデンプン１５００  ＬＭが含まれる。
【０２０４】
錠剤分解物質は、水性の環境にさらされたときに分解する錠剤を提供するために、本明細書で提供した組成物に使用される。錠剤分解物質の含有量が多すぎる錠剤は、保管中に分解することがあり、一方、含有量が少なすぎる錠剤は、望ましい速度でまたは望ましい条件で分解しないことがある。従って、有効成分の放出を不利益に変化させるために多過ぎでも少な過ぎでもない十分な量の錠剤分解物質を、本明細書で提供されている固体の経口剤形を形成するために使用すべきである。使用する錠剤分解物質の量は、製剤タイプによって異なり、また、当業者には容易に認識できる。典型的な医薬組成物は、約０．５〜約１５重量パーセントの錠剤分解物質を含有し、特に、約１〜約５重量パーセントの錠剤分解物質を含有する。
【０２０５】
本明細書で提供されている医薬組成物および剤形で使用できる錠剤分解物質には、限定されないものの、寒天、アルギン酸、炭酸カルシウム、微結晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポラクリリンカリウム、グリコール酸デンプンナトリウム、バレイショデンプンまたはタピオカデンプン、アルファ化デンプン、その他のデンプン、粘土、その他のアルギン、その他のセルロース、ゴム、およびその混合物が含まれる。
【０２０６】
本明細書で提供されている医薬組成物および剤形で使用できる潤滑剤には、限定されないものの、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、鉱油、軽油、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、その他のグリコール、ステアリン酸、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、硬化植物油（例えば、ラッカセイ油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、およびダイズ油）、ステアリン酸亜鉛、オレイン酸エチル、エチルラウレアート、寒天、およびその混合物が含まれる。それ以外の潤滑剤には、例えば、シロイドシリカゲル（ＡＥＲＯＳＩＬ  ２００、製造元Ｗ．Ｒ．  Ｇｒａｃｅ  Ｃｏ．、メリーランド州ボルチモア）、合成シリカの凝固エアロゾル（販売元Ｄｅｇｕｓｓａ  Ｃｏ．、テキサス州プレーノ）、ＣＡＢ  Ｏ  ＳＩＬ（焼成二酸化ケイ素製品、販売元Ｃａｂｏｔ  Ｃｏ．、マサチューセッツ州ボストン）、およびその混合物が含まれる。使用する場合には、潤滑剤は、一般に約１重量パーセント未満の量の医薬組成物または剤形が、組み込み先に使用される。
【０２０７】
化合物は、放出制御手段または当業者によく知られた送達装置により投与することができる。例には、限定されないものの、米国特許第３，８４５，７７０号、第３，９１６，８９９号、第３，５３６，８０９号、第３，５９８，１２３号、および第４，００８，７１９号、第５，６７４，５３３号、第５，０５９，５９５号、第５，５９１，７６７号、第５，１２０，５４８号、第５，０７３，５４３号、第５，６３９，４７６号、第５，３５４，５５６号、および第５，７３３，５６６号に記載されたものが含まれ、それぞれを参照し本明細書に組み込む。こうした剤形は、例えば、ヒドロプロピルメチルセルロース、その他の高分子マトリクス、ゲル、隔膜、浸透圧系、多層膜コーティング、微小粒子、リポソーム、細粒、またはその組み合わせを使用して異なる比率での希望の放出プロファイルを提供するために、１つ以上の有効成分の緩徐なまたは制御された放出を提供するために使用できる。当業者に周知の適切な徐放性製剤は、本明細書に記載されているものも含めて、発明の有効成分とともに使用するために、容易に選択できる。こうして、発明には、経口投与に適した単一単位剤形が含まれ、これには限定はされないものの、放出制御に適応させる錠剤、カプセル、ジェルキャップ、およびカプレットなどがある。
【０２０８】
すべての徐放性製薬製品は、制御しない対応物により達成されるものよりも薬物治療を改善するという共通の目的を持つ。理想的には、薬物療法における最適に設計された徐放性調製品の使用は、最小限の薬剤原料が、最小限の時間で、病状を治癒または管理するために採用されることで特性づけられる。徐放性製剤の利点には、薬物の長時間にわたる活性、投薬頻度の減少、および患者の服薬順守の増加が含まれる。さらに、徐放性製剤は、薬物の血液レベルなど、作用の発現またはその他の特性の時間に影響を及ぼすために使用できるため、副作用（例えば、有害な副作用）の発生に影響を与えることができる。
【０２０９】
ほとんどの徐放性製剤は、その治療的または予防的な効果のレベルを長時間にわたり維持するために、望ましい療法効果を即座に起こすある量の薬物（有効成分）を当初放出し、またその他の量の薬物を徐々にかつ連続的に放出するよう設計されている。薬物のこの体内での一定レベルを維持するためには、代謝されて体内から排出される薬物量を置き換える速度で剤形から放出される必要がある。有効成分の放出制御は、限定はされないものの、ｐＨ、温度、酵素、水、またはその他の生理学的条件または薬剤などを含めた、様々な条件により促すことができる。
【０２１０】
非経口的な剤形は、限定はされないものの、皮下、静脈内（大量瞬時投与を含む）、筋肉内、および動脈内を含めた様々な経路により、患者に投与できる。こうした投与は、一般的に患者の汚染物質に対する自然防御を迂回するため、非経口的剤形は、無菌であるか、または患者に投与する前に滅菌できることが好ましい。非経口的な剤形の例には、限定されないものの、注射用にすぐ使用できる溶液、注射用に医薬品として容認される溶媒にすぐに溶解または懸濁できる乾燥物、注射用にすぐに使用できる懸濁液、および乳濁液が含まれる。
【０２１１】
本明細書で提供されている非経口的な剤形を提供するために使用できる適切な媒体は、当業者によく知られている。例には、限定されないものの、注射ＵＳＰ用の水のほか、限定はされないものの、生理食塩液注射液、リンガー液、ブドウ糖注射、ブドウ糖および生理食塩液注射液、および乳酸リンゲル液といった水溶性溶媒、限定はされないものの、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、およびポリプロピレングリコールといった水混和性媒体、ならびに限定はされないものの、トウモロコシ油、綿実油、ラッカセイ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、および安息香酸ベンジルといった非水溶性媒体が含まれる。
【０２１２】
本明細書で提供されている１つ以上の化合物の溶解性（溶解度）を増加させる薬剤を、本明細書で提供されている非経口的な剤形に組み込むこともできる。
【０２１３】
本明細書で提供されている経皮的、局所的、および経粘膜の剤形には、限定されないものの、眼科用溶液、噴霧剤、エアロゾル、クリーム、ローション、軟膏、ゲル、溶液、乳濁液、懸濁液、または当業者に周知のその他の形態が含まれる。例えば、『Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １６ｔｈ  ａｎｄ  １８ｔｈ  ｅｄｓ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  Ｅａｓｔｏｎ  ＰＡ  （１９８０  ＆  １９９０）』、および『Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，  ４ｔｈ  ｅｄ．，  Ｌｅａ  ＆  Ｆｅｂｉｇｅｒ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  （１９８５）』を参照のこと。口腔内の粘膜組織の治療に適した剤形は、うがい薬または経口ゲル剤として調製できる。さらに、経皮的剤形には、「リザーバー型」または「マトリクス型」のパッチが含まれ、これが、皮膚に貼られ、望ましい量の有効成分の浸透が許容されるよう特定の期間だけ着用される。
【０２１４】
本明細書で提供されている経皮的、局所的、および経粘膜の剤形を提供するために使用できる適切な賦形剤（例えば、担体および希釈剤）およびその他の素材は、製薬技術の当業者によく知られており、また所定の医薬組成物または剤形が貼り付けられる特定の組織によっても異なる。その事実を念頭に置き、典型的な賦形剤には、限定されないものの、水、アセトン、エタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブタン１，３ジオール、ミリスチン酸イソプロピル、イソプロピル  パルミチン酸塩、鉱油、およびローション、チンキ、クリーム、乳濁液、ゲルまたは軟膏を形成するためのその混合物が含まれ、これらは、無毒性でかつ医薬として許容されるものである。保湿剤または湿潤剤を、希望に応じて、医薬組成物および剤形に加えることもできる。それ以外のこうした成分の例は、当該技術でよく知られている。例えば、『Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １６ｔｈ  ａｎｄ  １８ｔｈ  ｅｄｓ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  Ｅａｓｔｏｎ  ＰＡ  （１９８０  ＆  １９９０）』を参照のこと。
【０２１５】
治療の対象となる特定の組織に応じて、それ以外の成分を、化合物による治療の前に、それと同時に、またはその後に使用することもできる。例えば、組織への有効成分の送達を支援するために浸透エンハンサーを使用することもできる。適切な透過促進剤には、限定されないものの、アセトン、様々なアルコール類（エタノール、オレイル、およびテトラヒドロフリルなど）、アルキルスルホキシド類（ジメチルスルホキシドなど）、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド、ポリエチレングリコール、ピロリドン（ポリビニルピロリドンなど）、コリドングレード（ポビドン、ポリビドン）、尿素、および様々な水溶性または不溶性の糖エステル（Ｔｗｅｅｎ  ８０（ポリソルビン酸８０）およびＳｐａｎ  ６０（ソルビタンモノステアラート）など）が含まれる。
【０２１６】
医薬組成物または剤形のｐＨ、または医薬組成物または剤形を適用する組織のｐＨも、１つ以上の化合物の送達を改善するために調節することができる。同様に、溶剤の担体の極性、そのイオン強度、または緊張度を調節して、送達を改善することができる。ステアリン酸塩などの薬剤を、医薬組成物または剤形に加えて、送達を改善するために１つ以上の化合物の親水性または親油性を有利に変化させることもできる。これに関連して、ステアリン酸塩は、製剤形態のためのリピド媒体として、乳化剤または界面活性剤として、また送達を促進または浸透を促進する薬剤としての役割を果たさせることができる。化合物の異なる塩、水和物または溶媒和物を、結果的に生じる組成物の性質（特性）をさらに調節するために使用することができる。
【０２１７】
一定の特定の実施態様において、組成物は、経口剤、注射剤、または経皮剤である。特定の一実施態様において、組成物は、経口投与の形態である。別の特定の実施態様において、組成物は、注射剤の形態である。別の特定の実施態様において、組成物は経皮剤の形態である。
【０２１８】
７．  予防及び治療の方法
本発明により、ウイルス感染を予防、治療および／または管理する方法が提供され、前記方法は、１つ以上の化合物を、それを必要とする対象に投与する手順から構成される。特定の実施態様において、発明によりウイルス感染を予防、治療および／または管理する方法が提供され、前記方法は、予防的にまたは治療的に有効な量の１つ以上の化合物または化合物を含有する組成物の１用量を、それを必要とする対象に投与する手順を含む。化合物または化合物を含有する組成物は、ウイルス感染について、どの系統の治療にも使用しうる（例えば、第一選択、第二選択、第三選択、第四選択または第五選択の治療）。
【０２１９】
別の実施態様において、本発明は、ヒト対象において、それを必要とするヒト対象に、有効量の１つ以上の化合物または１つ以上の化合物を含有する組成物を投与することにより、ウイルス感染によって変化した代謝流束を反転または再配向する方法に関連する。例えば、ウイルス感染は、有益な結果（例えば、相乗効果、副作用の低減、治療指数の向上）を生み出す酵素阻害化合物の組み合わせを使用して治療ができる。
【０２２０】
特定の実施態様において、化合物が、前記ウイルス感染を阻止、治療、管理または改善するために投与される唯一の有効成分である。一定の一実施態様において、化合物を含有する組成物が唯一の有効成分である。
【０２２１】
本発明には、抗ウイルス療法が利用出来ない、ウイルス感染を予防、治療および／または管理する方法が含まれる。また本発明には、他の公知の治療に代わるものとしての、ウイルス感染を予防、治療および／または管理する方法が含まれる。
【０２２２】
また本発明は、ウイルス感染を予防、治療および／または管理する方法を提供するが、前記方法は、それを必要とする対象に１つ以上の化合物および１つ以上のその他の治療剤（例えば、予防薬または治療薬）を投与することを含む。特定の実施態様において、他の治療剤は、現時点で使用されているもの、使用されてきたもの、またはウイルス感染の予防、治療および／または管理に有用であることが知られているものである。こうした治療の非限定的な例については、本明細書中に掲載している。特定の実施態様において、１つ以上の化合物が、本明細書中に記載した１つ以上の治療との組み合わせで対象に投与される。別の実施態様において、１つ以上の化合物が、補助的治療剤、苦痛を軽減する薬剤、または抗ウイルス活性を持たないその他の治療剤との組み合わせで、対象に投与される。
【０２２３】
本発明の組合せ治療剤は、経時的または同時的に投与できる。一実施態様において、本発明の組合せ治療剤は、ｍＴＯＲ阻害剤である化合物、及びＵＰＲを阻害する化合物を含有する。一実施態様において、本発明の組合せ治療剤は、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能を阻害する化合物、及びＵＰＲを阻害する化合物を含有する。一実施態様において、本発明の組合せ治療剤は、ｍＴＯＲのラパマイシン耐性機能を阻害する化合物、及び分子シャペロンである化合物を含有する。一実施態様において、本発明の組合せ治療剤は、化合物および同一の作用機序を持つ少なくとも１つのその他の治療剤を含有する。別の実施態様において、本発明の組合せ治療剤は、化合物および化合物とは異なる作用機序を持つ少なくとも１つのその他の治療剤を含有する。
【０２２４】
特定の実施態様において、本発明の組合せ治療剤は、化合物とともに機能して、相加効果または相乗効果を持つことにより、化合物の予防的および／または療法効果を改善する。別の実施態様において、本発明の組合せ治療剤は、各治療を単独で受けた場合に関連した副作用を低減する。
【０２２５】
組合せ治療剤の予防薬または治療薬は、同一の医薬組成物で対象に投与できる。別の方法として、組合せ治療剤の予防薬または治療薬は、別個の医薬組成物で、対象に同時的に投与できる。予防薬または治療薬は、同一または異なる投与経路で対象に投与しうる。
【０２２６】
７．１  患者母集団
本発明において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、ウイルス感染を受けた対象に投与される。その他の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、ウイルス感染にかかりやすいまたは敏感な対象に投与される。一部の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、ウイルス感染の発生があったか、またはそれが考えられる地域に住む対象に投与される。一部の実施態様において、ウイルス感染は、潜伏性のウイルス感染である。一実施態様において、化合物または組合せ治療剤が、ヒト乳児に投与される。一実施態様において、化合物または組合せ治療剤が、ヒト早産児ヒト乳児に投与される。その他の実施態様において、ウイルス感染は、活動性感染である。さらに、その他の実施態様において、ウイルス感染は、慢性ウイルス感染である。ウイルス感染のタイプの非限定的な例には、本明細書中に記載したものを原因とする感染が含まれる。
【０２２７】
特定の実施態様において、ウイルス感染は、エンベロープウイルス感染である。一部の実施態様において、エンベロープウイルスは、ＤＮＡウイルスである。その他の実施態様において、エンベロープウイルスは、ＲＮＡウイルスである。一部の実施態様において、エンベロープウイルスは二本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡゲノムを持つ。その他の実施態様において、エンベロープウイルスは一本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡゲノムを持つ。特定の実施態様において、ウイルスはヒトに感染する。
【０２２８】
一定の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、０〜６カ月、６〜１２カ月、１〜５歳、５〜１０歳、１０〜１５歳、１５〜２０歳、２０〜２５歳、２５〜３０歳、３０〜３５歳、３５〜４０歳、４０〜４５歳、４５〜５０歳、５０〜５５歳、５５〜６０歳、６０〜６５歳、６５〜７０歳、７０〜７５歳、７５〜８０歳、８０〜８５歳、８５〜９０歳、９０〜９５歳または９５〜１００歳である哺乳動物に投与される。一定の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、ウイルス感染の危険にさらされているヒトに投与される。一定の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、ウイルス感染したヒトに投与される。一定の実施態様において、患者は、０〜６カ月、６〜１２カ月、１〜５歳、５〜１０歳、５〜１２歳、１０〜１５歳、１５〜２０歳、１３〜１９歳、２０〜２５歳、２５〜３０歳、２０〜６５歳、３０〜３５歳、３５〜４０歳、４０〜４５歳、４５〜５０歳、５０〜５５歳、５５〜６０歳、６０〜６５歳、６５〜７０歳、７０〜７５歳、７５〜８０歳、８０〜８５歳、８５〜９０歳、９０〜９５歳または９５〜１００歳のヒトである。一部の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、ヒト乳児に投与される。その他の実施態様において、化合物、または組合せ治療剤が、ヒト小児に投与される。その他の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、ヒト成人に投与される。さらに、その他の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、高齢者に投与される。
【０２２９】
一定の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、ペット、例えば、イヌまたはネコに投与される。一定の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、家畜または家畜、例えば、ブタ、雌ウシ、ウマ、ニワトリなどに投与される。一定の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、鳥、例えば、アヒルまたはニワトリに投与される。
【０２３０】
一定の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、免疫無防備状態や免疫抑制状態にあるか、または免疫無防備状態や免疫抑制状態になる危険性のある霊長類、好ましくはヒト、またはその他の哺乳動物（ブタ、雌ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコおよびげっ歯類など）に投与される。一定の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、免疫抑制薬治療を受けているか、その治療から回復中の対象に投与される。一定の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、がん、エイズ、その他のウイルス感染、または細菌感染を持つか、またはそれらに感染する危険性のある対象に投与される。一定の実施態様において、対象は、手術、化学療法および／または放射線療法を受けているか、それを受ける予定であるか、またはそれを受けた対象である。一定の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、嚢胞性線維症、肺線維症、または対象がウイルス感染しやすくなるその他の病気を持つ対象に投与される。一定の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、組織移植を行った組織移植予定の、またはその経験のある対象に投与される。一部の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、養護施設、グループホーム（すなわち、対象１０人以上の施設）、または刑務所に住む対象に投与される。一部の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、学校（例えば、小学校、中学校、高校または大学）または託児所に通う対象に投与される。一部の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、医師または看護師などヘルスケア分野または病院で働く対象に投与される。一定の実施態様において、化合物、化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が、妊娠中または妊娠する予定の対象に投与される。
【０２３１】
一部の実施態様において、何らかの有害影響または化合物以外の治療に対する不耐性が現れる前に、患者に、化合物または化合物を含有する組成物、または組合せ治療剤が投与される。一部の実施態様において、化合物または１つ以上の化合物、または組合せ治療剤を含有する組成物が、難治性の患者に投与される。一定の一実施態様において、難治性の患者は、標準的な抗ウイルス療法に対して難治性の患者である。一定の実施態様において、ウイルス感染している患者は、感染が有意には根絶されていないとき、および／または症状が有意には軽減されていないとき、治療に対して難治性である。患者が難治性かどうかの決定は、感染症の治療の効果を評価するために当該技術で知られている任意の方法により、そうした状況において当該技術で容認されている「難治性」の意味を用いて、インビボまたはインビトロのいずれでも行うことができる。各種の実施態様において、ウイルス感染している患者は、ウイルス複製が減少しないかまたは増加したとき、難治性である。
【０２３２】
一部の実施態様において、化合物または１つ以上の化合物、または組合せ治療剤を含有する組成物が、こうした感染症を発症する危険性のある患者において、ウイルス感染の発症または再発を阻止するために、患者に投与される。一部の実施態様において、化合物または１つ以上の化合物、または組合せ治療剤を含有する組成物が、従来的な治療に対する有害な反応に影響を受けやすい患者に投与される。
【０２３３】
一部の実施態様において、１つ以上の化合物または１つ以上の化合物、または組合せ治療剤を含有する組成物が、化合物以外の治療に対して難治性であることが判明しており、それらの治療をもはや受けていない患者に投与される。一定の実施態様において、本発明の方法に従い管理または治療を受けている患者は、抗生物質、抗ウイルス薬、抗真菌薬、またはその他の生物療法／免疫療法による治療を既に受けている患者である。これらの患者のなかには、難治性の患者、従来的な治療には若すぎる患者、および従来の治療による管理または治療にもかかわらず、ウイルス感染を併発している患者がいる。
【０２３４】
一部の実施態様において、１つ以上の化合物または１つ以上の化合物、または組合せ治療剤を含有する組成物を投与する対象は、化合物や組成物または組合せ治療剤の投与前には、治療を受けていない。その他の実施態様において、１つ以上の化合物または１つ以上の化合物、または組合せ治療剤を含有する組成物が、１つ以上の化合物または１つ以上の化合物、または組合せ治療剤を含有する組成物の投与の前に治療を受けたことのある対象に投与される。一部の実施態様において、化合物または化合物を含有する組成物の投与を受ける対象は、以前の治療に対して難治性であったか、または以前の治療に対して有害副作用を経験したか、または対象に対する容認できない毒性レベルが理由で以前の治療が中断されたものである。
【０２３５】
７．２  投与方法
患者に投与するとき、化合物は、医薬品として容認される溶媒を含有する任意の組成物の構成要素として投与することが好ましい。組成物は、経口的に、またはその他の任意の好都合な経路により、例えば、注入または大量瞬時投与により、上皮または粘膜皮膚層による吸収（例えば、口腔粘膜、直腸、および腸管粘膜）により投与でき、また他の生物活性のある薬剤とともに投与することもできる。投与は、全身的でも局所的でもよい。様々な送達系が知られており、例えば、リポソーム、微小粒子、マイクロカプセル、カプセルへの封入があり、化合物およびその医薬として許容される塩を投与するため使用できる。
【０２３６】
投与の方法には、限定されないものの、非経口的な、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、経口、舌下、鼻腔内、脳内、膣内、経皮的、直腸、吸入、または局所的、特に耳、鼻、眼、または皮膚が含まれる。投与方法は、医師の裁量に任せられている。ほとんどの場合に、投与によって、化合物が血流に放出されることになる。
【０２３７】
特定の実施態様において、化合物を局所的に投与することが望ましい場合がある。これは、例えば、限定はされないが、局所的な注入、局所投与、例えば、創傷包帯とともに、注射により、カテーテルの手段により、坐薬の手段により、または植え込み錠の手段により達成することができるが、前記植え込み錠は、多穴性、非多孔、または膜（シアラスティック膜など）、または繊維を含めたゼラチン質材料のものである。それらの場合に、投与によって、化合物は、実質的に血流に放出されることなく、局所的な組織に選択的に集中し得る。
【０２３８】
一定の実施態様において、脳室内、くも膜下腔内および硬膜外注射を含めた何らかの適切な経路により、化合物を中枢神経系に導入することが望ましい場合がある。脳室内注射は、脳室内カテーテルにより、例えば、オンマヤリザーバーなどのリザーバーに取り付けて、促進することもできる。
【０２３９】
肺投与も採用することができ、例えば、吸入器または噴霧器の使用により、またエアロゾル剤による製剤形態で、または過フッ化炭化水素または合成肺胞界面活性物質内の灌流による。一定の実施態様において、化合物は、トリグリセリドなどの従来的な結合剤および媒体とともに、坐薬として調製される。
【０２４０】
皮膚徴候を伴うウイルス感染については、化合物は局所的に管理できる。同様に、眼の症候を伴うウイルス感染については、化合物は眼から投与できる。
【０２４１】
別の実施態様において、化合物は、小胞、特にリポソームに入れて送達される（『Ｌａｎｇｅｒ，  １９９０，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７  １５３３』、『Ｔｒｅａｔ  ｅｔ  ａｌ．（Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）』、『Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｆｉｄｌｅｒ  （ｅｄｓ．），  Ｌｉｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ｐｐ．  ３５３  ３６５  （１９８９）』、『Ｌｏｐｅｚ  Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，  ｉｂｉｄ．，  ｐｐ．  ３１７  ３２７』を参照、同書を全般的に参照）。
【０２４２】
別の実施態様において、化合物は放出制御系に入れて送達される（例えば、『Ｇｏｏｄｓｏｎ，  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  ｓｕｐｒａ，  ｖｏｌ．  ２，  ｐｐ．  １１５  １３８  （１９８４）』を参照）。放出制御系の例については、『Ｌａｎｇｅｒ，  １９９０，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７  １５３３』によるレビューに考察があり、それを使用しうる。一実施態様において、ポンプを使用することもできる（『Ｌａｎｇｅｒ，  ｓｕｐｒａ；  Ｓｅｆｔｏｎ，  １９８７，  ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｆ．  Ｂｉｏｍｅｄ．  Ｅｎｇ．  １４：２０１』、『Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８０，  Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７』、『Ｓａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３２１：５７４』を参照）。別の実施態様において、高分子材料を使用することができる（『Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ  （ｅｄｓ．），  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，  Ｆｌｏｒｉｄａ  （１９７４）』、『Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，  Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ  （ｅｄｓ．），  Ｗｉｌｅｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８４）』、『Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，  １９８３，  Ｊ．  Ｍａｃｒｏｍｏｌ．  Ｓｃｉ．  Ｒｅｖ．  Ｍａｃｒｏｍｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２３：６１』を参照、また『Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８５，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０』、『Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ２５：３５１』、『Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．  ７１：１０５』も参照）。特定の実施態様において、化合物を含有する放出制御系は、予防、治療および／または管理の対象となるウイルスに感染した組織のすぐそばに配置される。この実施態様に従い、放出制御系が感染のごく近くにあることで、全身的に投与する場合に、化合物の用量の一部分のみを必要としうる。
【０２４３】
一定の実施態様において、化合物がそれに対する抗ウイルス活性を持つ、ウイルス感染の自然な経路により投与することが望ましい場合がある。例えば、発明の化合物を、ウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）による気道の感染を治療または阻止するために、何らかの適切な経路で肺に投与することが望ましい場合がある。肺投与は、例えば、吸入器または噴霧器の使用により、また噴霧剤としての使用するためのエアロゾル剤による製剤形態を採用することもできる。
【０２４４】
７．３  化合物との組合せに使用される薬剤
ウイルス感染の予防、治療および／または管理のために、化合物との組み合わせに使用できる治療薬または予防薬には、限定されないものの、小分子、合成薬物、ペプチド（環状ペプチドを含む）、ポリペプチド、タンパク質、核酸（例えば、ＤＮＡおよびＲＮＡヌクレオチドで、これには限定はされないものの、アンチセンスヌクレオチド配列、三重らせん体、ＲＮＡｉ、および生物学的に活性のタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む）、抗体、合成的または天然の無機分子、模倣薬剤、および合成的または天然の有機分子が含まれる。こうした薬剤の特定の例には、限定されないものの、免疫調整薬（例えば、インターフェロン）、抗炎症薬（例えば、副腎コルチコイド、副腎皮質ステロイド（例えば、ベクロメタゾン、ブデソニド、フルニソリド、フルチカゾン、トリアムシノロン、メチルプレドニゾロン、プレドニソロン、プレドニゾン、ヒドロコルチゾン）、糖質コルチコイド、ステロイド、および非ステロイド系抗炎症性薬物（例えば、アスピリン、イブプロフェン、ジクロフェナク、およびＣＯＸ−２阻害剤））、鎮痛剤、ロイコトリエン拮抗薬（例えば、モンテルカスト、メチルキサンチン、ザフィルルカスト、およびジロートン）、β２−作動薬（例えば、アルブテロール、ビテロール、フェノテロール、イソエタリー、メタプロテレノール、ピルブテロール、サルブタモール、テルブタリンホルモテロール、サルメテロール、およびサルブタモールテルブタリン）、抗コリン作用薬（例えば、臭化イプラトロピウムおよびオキシトロピウム臭化物）、スルファサラジン、ペニシラミン、ダプソン、抗ヒスタミン薬、抗マラリア剤（例えば、ヒドロキシクロロキン）、抗ウイルス薬（例えば、ヌクレオシド類似体（例えば、ジドブジン、アシクロビル、ガングシクロビル、ビダラビン、イドクスウリジン、トリフルリジン、およびリバビリン）、フォスカーネット、アマンタジン、リマンタジン、サキナビル、インジナビル、リトナビル、およびＡＺＴ）ならびに抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧称アクチノマイシン）、ブレオマイシン、エリスロマイシン、ペニシリン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））が含まれる。
【０２４５】
ウイルス感染の予防、管理、および／または治療に有用であることが知られているか、または使用されてきたか、または現在使用されている、あるいは発明に従って化合物と組み合わせて使用できる任意の治療については、本明細書に記載している。ウイルス感染の予防、治療および／または管理に使用されてきたか、または現在使用されている治療（例えば、予防薬または治療薬）に関する情報については、例えば、『Ｇｉｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  １０ｔｈ  ｅｄ．，  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ２００１』、『Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｂｅｒｋｏｗ，  Ｍ．Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．），  １７ｔｈ  Ｅｄ．，  Ｍｅｒｃｋ  Ｓｈａｒｐ  ＆  Ｄｏｈｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｒａｈｗａｙ，  ＮＪ，  １９９９』、『Ｃｅｃｉｌ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ２０ｔｈ  Ｅｄ．，  Ｂｅｎｎｅｔｔ  ａｎｄ  Ｐｌｕｍ  （ｅｄｓ．），  Ｗ．Ｂ．  Ｓａｕｎｄｅｒｓ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  １９９６』および『Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  （６１ｓｔ  ｅｄ．  １００７）』を参照。
【０２４６】
７．３．１  抗ウイルス剤
化合物との組み合わせに使用できる抗ウイルス剤には、限定されないものの、非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害薬、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、および融合阻害剤が含まれる。一実施態様において、抗ウイルス剤は、アマンタジン、オセルタミビルリン酸塩、リマンタジン、およびザナミビルからなる群から選択される。別の実施態様において、抗ウイルス剤は、デラビルジン、エファビレンツ、およびネビラピンからなる群から選択した非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害薬である。別の実施態様において、抗ウイルス剤は、アバカビル、ジダノシン、エムトリシタビン、エムトリシタビン、ラミブジン、スタブジン、テノホビルＤＦ、ザルシタビン、およびジドブジンからなる群から選択したヌクレオシド逆転写酵素阻害剤である。別の実施態様において、抗ウイルス剤は、アンプレナビル、アタザナビル、ホスアンプレナビル、インジナビル、ロピナビル、ネルフィナビル、リトナビル、およびサキナビルからなる群から選択したプロテアーゼ阻害剤である。別の実施態様において、抗ウイルス剤は、エンフビルチドなどの融合阻害剤である。
【０２４７】
それ以外に組み合わせ化合物に使用するための抗ウイルス剤の非限定的な例には、リファンピシン、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（例えば、ＡＺＴ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、３ＴＣ、ｄ４Ｔ）、非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害薬（例えば、デラビルジン、エファビレンツ、ネビラピン）、プロテアーゼ阻害剤（例えば、アプレナビル、インジナビル、リトナビル、およびサキナビル）、イドクスウリジン、シドホビル、アシクロビル、ガンシクロビル、ザナミビル、アマンタジン、およびパリビズマブが含まれる。その他の抗ウイルス剤の例には、限定されないものの、エースマンナン、アシクロビル、アシクロビルナトリウム、アデホビル、アロブジン、アルビルセプトスドトックス、塩酸アマンタジン（ＳＹＭＭＥＴＲＥＬＴＭ）、アリルドン、アリルドン、アテビルジンメシラート、アブリジン、シドホビル、シパムフィリン、シタラビン塩酸塩、メシル酸デラビルジン、デスシクロビル、ジダノシン、ジソキサリル、エドクスジン、エンビラデン、エンビロキシム、ファムシクロビル、塩酸ファモチン、フィアシタビン、フィアルリジン、ホサリラート、フォスカメットナトリウム、ホスホネットナトリウム、ガンシクロビル、ガンシクロビルナトリウム、イドクスウリジン、ケトキサール、ラミブジン、ロブカビル、メモチン塩酸塩、メチサゾン、ネビラピン、オセルタミビルリン酸塩（ＴＡＭＩＦＬＵＴＭ）、ペンシクロビル、ピロダビル、リバビリン、リマンタジン塩酸塩（ＦＬＵＭＡＤＩＮＥＴＭ）、メシル酸サキナビル、ソマンタジン塩酸塩、ソリブジン、スタトロン、スタブジン、チロロン塩酸塩、トリフルリジン、塩酸バラシクロビル、ビダラビン、ビダラビンリン酸塩、ビダラビンリン酸ナトリウム、ビロキシム、ザルシタビン、ザナミビル（ＲＥＬＥＮＺＡＴＭ）、ジドブジン、およびジンビロキシムが含まれる。
【０２４８】
７．３．２  抗細菌剤
化合物との組み合わせに使用できる抗細菌剤（抗生物質を含む）には、限定されないものの、アミノグリコシド系抗生物質、糖ペプチド、アンフェニコール抗生物質、アンサマイシン系抗生物質、セファロスポリン、セファマイシンオキサゾリジノン、ペニシリン、キノロン、ストレプトグラミン（ｓｔｒｅｐｔｏｇａｍｉｎｓ）、テトラサイクリン、およびその類似体が含まれる。一部の実施態様において、抗生物質は、細菌感染を阻止および／または治療するための化合物と組み合わせて投与される。
【０２４９】
特定の実施態様において、化合物は、限定はされないものの、ストレプトマイシン、ネオマイシン、エリスロマイシン、カルボマイシン、およびスピラマイシンを含むその他のタンパク質合成阻害薬と組み合わせて使用される。
【０２５０】
一実施態様において、抗菌性の薬剤は、アンピシリン、アモキシシリン、シプロフロキサシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ペニシリンＧ、ストレプトマイシン、スルファニルアミド、およびバンコマイシンからなる群から選択される。別の実施態様において、抗菌性の薬剤は、アジトロマイシン、セフォニシド、セフォテタン、セファロチン、セファマイシン、クロルテトラサイクリン、クラリトロマイシン、クリンダマイシン、サイクロセリン、ダルホプリスチン、ドキシサイクリン、エリスロマイシン、リネゾリド、ムピロシン、オキシテトラサイクリン、キヌプリスチン、リファンピン、スペクチノマイシン、およびトリメトプリムからなる群から選択される。
【０２５１】
化合物との組み合わせに使用される抗細菌剤のそれ以外の非限定的な例には、アミノグリコシド系抗生物質（例えば、アプラマイシン、アルベカシン、バンベルマイシン、ブチロシン、ジベカシン、ネオマイシン、ネオマイシン、ウンデシレン酸塩、ネチルマイシン、パロモマイシン、リボスタマイシン、シソマイシン、およびスペクチノマイシン）、アンフェニコール抗生物質（例えば、アジダムフェニコール、クロラムフェニコール、フロルフェニコール、およびチアンフェニコール）、アンサマイシン系抗生物質（例えば、リファミドおよびリファンピン）、カルバセフェム（例えば、ロラカルベフ）、カルバペネム（例えば、ビアペネムおよびイミペネム）、セファロスポリン（例えば、セファクロル、セファドロキシル、セファマンドール、セファトリジン、セファゼドン、セフォゾプラン、セフピミゾール、セフピラミド、およびセフピロム）、セファマイシン（例えば、セフブペラゾン、セフメタゾール、およびセフミノクス）、葉酸類似体（例えば、トリメトプリム）、糖ペプチド（例えば、バンコマイシン）、リンコサミド（例えば、クリンダマイシン、およびリンコマイシン）、マクロライド（例えば、アジトロマイシン、カルボマイシン、クラリスロマイシン、ジリトロマイシン、エリスロマイシン、およびエリスロマイシンアシストラート）、モノバクタム（例えば、アズトレオナム、カルモナム、およびチゲモナム）、ニトロフラン（例えば、フラルタドン、および塩化フラゾリウム）、オキサセフェム（例えば、フロモキセフ、およびモキサラクタム）、オキサゾリジノン（例えば、リネゾリド）、ペニシリン（例えば、アムジノシリン、アムジノシリン・ピボキシル、アモキシシリン、バカンピシリン、ベンジルペニシリン酸、ベンジルペニシリンナトリウム、エピシリン、フェンベニシリン、フロキサシリン、ペナムシリン、ペネタマートヨウ化水素酸塩、ペニシリンｏベネタミン、ペニシリン０、ペニシリンＶ、ペニシリンＶベンザチン、ペニシリンＶヒドラバミン、ペニメピサイクリン、およびフェンシヒシリンカリウム）、キノロンおよびその類似体（例えば、シノキサシン、シプロフロキサシン、クリナフロキサシン、フルメキン、グレパフロキサシン、レボフロキサシン、およびモキシシリト）、ストレプトグラミン（例えば、キヌプリスチンおよびダルホプリスチン）、スルホンアミド（例えば、アセチルスルファメトキシピラジン、ベンジルスルファミド、ノプリルスルファミド、フタリルスルファセタミド、スルファクリソイジン、およびスルファシチン）、スルホン類（例えば、ジアチモスルホン、グルコスルホンナトリウム、およびソラスルホン）、およびテトラサイクリン（例えば、アピシクリン、クロルテトラサイクリン、クロモサイクリン、およびデメクロサイクリン）が含まれる。それ以外の例には、サイクロセリン、ムピロシン、チュベリンアンホマイシン、バシトラシン、カプレオマイシン、コリスチン、エンデュラシジン、エンビオマイシン、および２，４ジアミノピリミジン（例えば、ブロジモプリム）が含まれる。
【０２５２】
７．４  投与の用量と頻度
ウイルス感染の予防、治療および／または管理において有効な化合物の量、または化合物を含有する組成物の量は、標準的な臨床技術により決定できる。インビトロでまたはインビボでのアッセイを、最適な投薬範囲を特定する助けとして任意に採用できる。採用する正確な用量は、例えば、投与経路、発明のタイプ、および感染の重症度にも依存し、また開業医およびそれぞれの患者または対象の状況の判断に従い決定されるべきである。
【０２５３】
一部の実施態様において、化合物の投薬は、動物実験で決定された最大無毒性量（ＮＯＡＥＬ）からの推定により決定される。この推定投薬量は、ヒトの臨床試験についての最大推奨初回投与量の決定において有用である。例えば、ＮＯＡＥＬは、ヒト相当用量（ＨＥＤ）を決定するために推定できる。一般に、ＨＥＤは、体表面積（すなわち、ｍｇ／ｍ２）に対して規準化した用量をもとに、ヒト以外の動物の用量から推定される。特定の実施態様において、ＮＯＡＥＬは、マウス、ハムスター、ラット、ケナガイタチ、モルモット、ウサギ、イヌ、霊長類、霊長類（サル、マモセット、リスザル、ヒヒ）、マイクロまたはミニブタで決定される。ヒト相当用量を決定するためのＮＯＡＥＬおよびその推定法の使用に関する考察については、『Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｓａｆｅ  Ｓｔａｒｔｉｎｇ  Ｄｏｓｅ  ｉｎ  Ｉｎｉｔｉａｌ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｅｖａｌｕｔａｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （ＣＤＥＲ）（米国保健福祉省食品医薬品局医薬品評価センター），  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，  Ｊｕｌｙ  ２００５）』を参照のこと。一実施態様において、化合物またはその組成物は、ＮＯＡＥＬのヒト相当用量（ＨＥＤ）よりも低い用量で、１週間、２週間、３週間、１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、６カ月、９カ月、１年、２年、３年、４年以上の期間にわたり投与される。
【０２５４】
一定の実施態様において、ヒト対象のための投薬方法は、動物モデルの研究から、１０％の動物が死ぬ致死量（ＬＤ１０）を用いて推定できる。一般に、第Ｉ相治験の初回投与量は、臨床前試験に基づく。臨床前試験における薬物の標準的な毒性の測定手段は、治療のために死んだ動物の割合である。動物実験でのＬＤ１０と、ヒト初回投与量の推定の基礎として、体表面積について修正されたヒトでの最大耐用量（ＭＴＤ）との相関は、十分に当該技術の範囲内である。一部の実施態様において、１つの動物モデルについての投与量の相互関係は、例えば、『Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  Ｒｅｐ．，  １９６６，  ５０：２１９−２４４』に記載のある換算係数（体表面積平方メートル当たりのミリグラム数による）を使用して、別の動物での使用に変換できる。体表面積は、患者の身長および体重からおおよそ決定できる。例えば、『Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｔａｂｌｅｓ，  Ｇｅｉｇｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ａｒｄｌｅｙ，  Ｎ．  Ｙ．，  １９７０，  ５３７』を参照のこと。一定の実施態様において、体表面積の調整には、例えば、表面積、体重、代謝、組織分布、吸収速度、および排泄率などの宿主の要因が含まれる。さらに、投与経路、賦形剤の用途、および標的とする特定の病気またはウイルスも、考慮する要因である。一実施態様において、標準的な控えめな初回投与量は、マウスのＬＤ１０の約１／１０であるが、その他の種（すなわち、イヌ）がその化合物に対して感応性がより高い場合には、これよりもさらに低くなりうる。その他の実施態様において、標準的な控えめな初回投与量は、マウスのＬＤ１０の約１／１００、１／９５、１／９０、１／８５、１／８０、１／７５、１／７０、１／６５、１／６０、１／５５、１／５０、１／４５、１／４０、１／３５、１／３０、１／２５、１／２０、１／１５、２／１０、３／１０、４／１０、または５／１０である。その他の実施態様において、ヒトにおける化合物の初回投与量は、動物モデルの研究から推定した用量よりも低い。別の実施態様において、ヒトにおける化合物の初回投与量は、動物モデルの研究から推定した用量よりも高い。比較的低いレベルで活性の組成物の用量を開始すること、また最小限の毒性で希望の効果を達成するために、必要に応じて、投薬を増加または減少することは、十分に当該技術の範囲内である。
【０２５５】
化合物または組成物の模範的な用量には、対象または試料の体重１キログラム当たりのミリグラムまたはマイクログラムの量が含まれる（例えば、１  ｋｇ当たり約１マイクログラム〜１  ｋｇ当たり約５００ミリグラム、１  ｋｇ当たり約５ミリグラム〜１  ｋｇ当たり約１００ミリグラム、または１  ｋｇ当たり約１マイクログラム〜１  ｋｇ当たり約５０ミリグラム）。特定の実施態様において、１日量は、少なくとも５０  ｍｇ、７５  ｍｇ、１００  ｍｇ、１５０  ｍｇ、２５０  ｍｇ、５００  ｍｇ、７５０  ｍｇ、または少なくとも１  ｇである。
【０２５６】
一実施態様において、投薬は、０．０１〜５０００  ｍＭ、１〜３００  ｍＭ、１０〜１００  ｍＭおよび１０  ｍＭ〜１  Ｍの濃度である。別の実施態様において、投薬は、少なくとも５  μＭ、少なくとも１０  μＭ、少なくとも５０  μＭ、少なくとも１００  μＭ、少なくとも５００  μＭ、少なくとも１  ｍＭ、少なくとも５  ｍＭ、少なくとも１０  ｍＭ、少なくとも５０  ｍＭ、少なくとも１００  ｍＭ、または少なくとも５００  ｍＭの濃度である。特定の実施態様において、投薬は、患者の体重に対して０．２５  μｇ／ｋｇ以上、好ましくは０．５  μｇ／ｋｇ以上、１  μｇ／ｋｇ以上、２  μｇ／ｋｇ以上、３  μｇ／ｋｇ以上、４  μｇ／ｋｇ以上、５  μｇ／ｋｇ以上、６  μｇ／ｋｇ以上、７  μｇ／ｋｇ以上、８  μｇ／ｋｇ以上、９  μｇ／ｋｇ以上、または１０  μｇ／ｋｇ以上、２５  μｇ／ｋｇ以上、好ましくは５０  μｇ／ｋｇ以上、１００  μｇ／ｋｇ以上、２５０  μｇ／ｋｇ以上、５００  μｇ／ｋｇ以上、１  ｍｇ／ｋｇ以上、５  ｍｇ／ｋｇ以上、６  ｍｇ／ｋｇ以上、７  ｍｇ／ｋｇ以上、８  ｍｇ／ｋｇ以上、９  ｍｇ／ｋｇ以上、または１０  ｍｇ／ｋｇ以上である。
【０２５７】
一実施態様において、前記投薬は、０．０１〜５０００  ｍＭ、１〜３００  ｍＭ、１０〜１００  ｍＭ及び１０  ｍＭ〜１  Ｍの濃度である。別の実施態様において、前記投薬は、少なくとも５  μＭ、少なくとも１０  μＭ、少なくとも５０  μＭ、少なくとも１００  μＭ、少なくとも５００  μＭ、少なくとも１  ｍＭ、少なくとも５  ｍＭ、少なくとも１０  ｍＭ、少なくとも５０  ｍＭ、少なくとも１００  ｍＭ、又は少なくとも５００  ｍＭの濃度である。特定の実施態様において、投薬は、患者の体重に対して０．２５  μｇ／ｋｇ以上、好ましくは０．５  μｇ／ｋｇ以上、１  μｇ／ｋｇ以上、２  μｇ／ｋｇ以上、３  μｇ／ｋｇ以上、４  μｇ／ｋｇ以上、５  μｇ／ｋｇ以上、６  μｇ／ｋｇ以上、７  μｇ／ｋｇ以上、８  μｇ／ｋｇ以上、９  μｇ／ｋｇ以上、または１０  μｇ／ｋｇ以上、２５  μｇ／ｋｇ以上、好ましくは５０  μｇ／ｋｇ以上、１００  μｇ／ｋｇ以上、２５０  μｇ／ｋｇ以上、５００  μｇ／ｋｇ以上、１  ｍｇ／ｋｇ以上、５  ｍｇ／ｋｇ以上、６  ｍｇ／ｋｇ以上、７  ｍｇ／ｋｇ以上、８  ｍｇ／ｋｇ以上、９  ｍｇ／ｋｇ以上、または１０  ｍｇ／ｋｇ以上である。
【０２５８】
別の実施態様において、投薬は、５  ｍｇ、好ましくは１０  ｍｇ、５０  ｍｇ、１００  ｍｇ、１５０  ｍｇ、２００  ｍｇ、２５０  ｍｇ、３００  ｍｇ、３５０  ｍｇ、４００  ｍｇ、５００  ｍｇ、５５０  ｍｇ、６００  ｍｇ、６５０  ｍｇ、７００  ｍｇ、７５０  ｍｇ、８００  ｍｇ以上の単位用量である。別の実施態様において、投薬は、約５  ｍｇ〜約１００  ｍｇ、約１００  ｍｇ〜約２００  μｇ、約１５０  ｍｇ〜約３００  ｍｇ、約１５０  ｍｇ〜約４００  ｍｇ、２５０  μｇ〜約５００  ｍｇ、約５００  ｍｇ〜約８００  ｍｇ、約５００  ｍｇ〜約１０００  ｍｇ、または約５  ｍｇ〜約１０００  ｍｇの範囲の単位用量である。
【０２５９】
一定の実施態様において、経口投与に適した投薬範囲は、体重１キログラム、１日当たりの化合物約０．００１ミリグラム〜約５００ミリグラムである。発明の特定の実施態様において、経口用量は、体重１キログラム、１日当たり約０．０１ミリグラム〜約１００ミリグラム、約０．１ミリグラム〜約７５ミリグラムまたは約０．５ミリグラム〜５ミリグラムである。本明細書に記載した投薬量は、投与される総量を意味し、つまり、２種以上の化合物が投与される場合には、一部の実施態様において、投与量は、投与された総量に一致する。特定の実施態様において、経口組成物には、本発明の化合物が約１０重量％〜約９５重量％含まれる。
【０２６０】
静脈内（ｉ．ｖ．）投与の適切な投薬範囲は、体重１キログラム１日当たり約０．０１ミリグラム〜約１００ミリグラム、体重１キログラム１日当たり約０．１ミリグラム〜約３５ミリグラム、および体重１キログラム１日当たり約１ミリグラム〜約１０ミリグラムである。一部の実施態様において、鼻腔内投与の適切な投薬範囲は、体重１キログラム、１日当たり約０．０１  ｐｇ／ｋｇ〜約１  ｍｇ／ｋｇである。座薬には、体重１キログラム、１日当たり一般的に約０．０１ミリグラム〜約５０ミリグラムの発明の化合物が含まれ、約０．５重量％〜約１０重量％の範囲の有効成分を含有する。
【０２６１】
皮内、筋肉内、腹腔内、皮下、硬膜外、舌下の、脳内、膣内、経皮的な投与または吸入による投与について推奨される投与量は、体重１キログラム、１日当たり約０．００１ミリグラム〜約５００ミリグラムの範囲である。局所的投与について適切な用量には、投与の領域によっても異なるが、約０．００１ミリグラム〜約５０ミリグラムの範囲の用量が含まれる。効果的な用量は、インビトロでまたは動物モデルでの試験系から得られた用量−反応曲線から推定することもできる。こうした動物モデルおよび系は、当該技術でよく知られている。
【０２６２】
別の実施態様において、対象には、用量１回分以上の予防的または治療的に有効な量の化合物または組成物が投与され、ここで、予防的または治療的に有効な量は、毎回の用量で同じではない。別の実施態様において、対象には、用量１回分以上の予防的にまたは治療的に有効な量の化合物または組成物が投与され、ここで、前記対象に投与される予防的または治療的に有効な量の用量は、例えば、０．０１  μｇ／ｋｇ、０．０２  μｇ／ｋｇ、０．０４  μｇ／ｋｇ、０．０５  μｇ／ｋｇ、０．０６  μｇ／ｋｇ、０．０８  μｇ／ｋｇ、０．１  μｇ／ｋｇ、０．２  μｇ／ｋｇ、０．２５  μｇ／ｋｇ、０．５  μｇ／ｋｇ、０．７５  μｇ／ｋｇ、１  μｇ／ｋｇ、１．５  μｇ／ｋｇ、２  μｇ／ｋｇ、４  μｇ／ｋｇ、５  μｇ／ｋｇ、１０  μｇ／ｋｇ、１５  μｇ／ｋｇ、２０  μｇ／ｋｇ、２５  μｇ／ｋｇ、３０  μｇ／ｋｇ、３５  μｇ／ｋｇ、４０  μｇ／ｋｇ、４５  μｇ／ｋｇ、または５０  μｇ／ｋｇにより、治療の進行に伴い増加する。別の実施態様において、対象には、用量１回分以上の予防的にまたは治療的に有効な量の化合物または組成物が投与され、ここで、用量は、例えば、０．０１  μｇ／ｋｇ、０．０２  μｇ／ｋｇ、０．０４  μｇ／ｋｇ、０．０５  μｇ／ｋｇ、０．０６  μｇ／ｋｇ、０．０８  μｇ／ｋｇ、０．１  μｇ／ｋｇ、０．２  μｇ／ｋｇ、０．２５  μｇ／ｋｇ、０．５  μｇ／ｋｇ、０．７５  μｇ／ｋｇ、１  μｇ／ｋｇ、１．５  μｇ／ｋｇ、２  μｇ／ｋｇ、４  μｇ／ｋｇ、５  μｇ／ｋｇ、１０  μｇ／ｋｇ、１５  μｇ／ｋｇ、２０  μｇ／ｋｇ、２５  μｇ／ｋｇ、３０  μｇ／ｋｇ、３５  μｇ／ｋｇ、４０  μｇ／ｋｇ、４５  μｇ／ｋｇ、または５０  μｇ／ｋｇにより、治療の進行に伴い減少する。
【０２６３】
一定の実施態様において、対象には、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知のその他のアッセイを使用して決定された負の対照に対して、ウイルスゲノム複製を少なくとも２０％〜２５％、好ましくは少なくとも２５％〜３０％、少なくとも３０％〜３５％、少なくとも３５％〜４０％、少なくとも４０％〜４５％、少なくとも４５％〜５０％、少なくとも５０％〜５５％、少なくとも５５％〜６０％、少なくとも６０％〜６５％、少なくとも６５％〜７０％、少なくとも７０％〜７５％、少なくとも７５％〜８０％、または最高少なくとも８５％抑制するかまたは低減するために効果的な量の化合物または組成物が投与される。その他の実施態様において、対象には、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知のその他のアッセイを使用して決定された負の対照に対して、ウイルスゲノム複製を少なくとも２０％〜２５％、好ましくは少なくとも２５％〜３０％、少なくとも３０％〜３５％、少なくとも３５％〜４０％、少なくとも４０％〜４５％、少なくとも４５％〜５０％、少なくとも５０％〜５５％、少なくとも５５％〜６０％、少なくとも６０％〜６５％、少なくとも６５％〜７０％、少なくとも７０％〜７５％、少なくとも７５％〜８０％、または最高少なくとも８５％抑制するかまたは低減するために効果的な量の化合物または組成物が投与される。一定の実施態様において、対象には、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知のその他のアッセイを使用して決定された負の対照に対して、ウイルスゲノム複製を少なくとも１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、４倍、５倍、８倍、１０倍、１５倍、２０倍、または２〜５倍、２〜１０倍、５〜１０倍、または５〜２０倍抑制するかまたは低減するために効果的な量の化合物または組成物が投与される。
【０２６４】
一定の実施態様において、対象には、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知のその他のアッセイを使用して決定された負の対照に対して、ウイルスのタンパク質合成を少なくとも２０％〜２５％、好ましくは少なくとも２５％〜３０％、少なくとも３０％〜３５％、少なくとも３５％〜４０％、少なくとも４０％〜４５％、少なくとも４５％〜５０％、少なくとも５０％〜５５％、少なくとも５５％〜６０％、少なくとも６０％〜６５％、少なくとも６５％〜７０％、少なくとも７０％〜７５％、少なくとも７５％〜８０％、または最高少なくとも８５％抑制するかまたは低減するために効果的な量の化合物または組成物が投与される。その他の実施態様において、対象には、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知のその他のアッセイを使用して決定された負の対照に対して、ウイルスのタンパク質合成を少なくとも２０％〜２５％、好ましくは少なくとも２５％〜３０％、少なくとも３０％〜３５％、少なくとも３５％〜４０％、少なくとも４０％〜４５％、少なくとも４５％〜５０％、少なくとも５０％〜５５％、少なくとも５５％〜６０％、少なくとも６０％〜６５％、少なくとも６５％〜７０％、少なくとも７０％〜７５％、少なくとも７５％〜８０％、または最高少なくとも８５％抑制するかまたは低減するために効果的な量の化合物または組成物が投与される。一定の実施態様において、対象には、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知のその他のアッセイを使用して決定された負の対照に対して、ウイルスのタンパク質合成を少なくとも１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、４倍、５倍、８倍、１０倍、１５倍、２０倍、または２〜５倍、２〜１０倍、５〜１０倍、または５〜２０倍抑制するかまたは低減するために効果的な量の化合物または組成物が投与される。
【０２６５】
一定の実施態様において、対象には、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知のその他のアッセイを使用して決定された負の対照に対して、ウイルス感染を少なくとも２０％〜２５％、好ましくは少なくとも２５％〜３０％、少なくとも３０％〜３５％、少なくとも３５％〜４０％、少なくとも４０％〜４５％、少なくとも４５％〜５０％、少なくとも５０％〜５５％、少なくとも５５％〜６０％、少なくとも６０％〜６５％、少なくとも６５％〜７０％、少なくとも７０％〜７５％、少なくとも７５％〜８０％、または最高少なくとも８５％抑制するかまたは低減するために効果的な量の化合物または組成物が投与される。一部の実施態様において、対象には、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知のその他のアッセイを使用して決定された負の対照に対して、ウイルス感染を少なくとも１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、４倍、５倍、８倍、１０倍、１５倍、２０倍、または２〜５倍、２〜１０倍、５〜１０倍、または５〜２０倍抑制するかまたは低減するために効果的な量の化合物または組成物が投与される。
【０２６６】
一定の実施態様において、対象には、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知のその他のアッセイを使用して決定された負の対照に対して、ウイルス複製を少なくとも２０％〜２５％、好ましくは少なくとも２５％〜３０％、少なくとも３０％〜３５％、少なくとも３５％〜４０％、少なくとも４０％〜４５％、少なくとも４５％〜５０％、少なくとも５０％〜５５％、少なくとも５５％〜６０％、少なくとも６０％〜６５％、少なくとも６５％〜７０％、少なくとも７０％〜７５％、少なくとも７５％〜８０％、または最高少なくとも８５％抑制するかまたは低減するために効果的な量の化合物または組成物が投与される。一部の実施態様において、対象には、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知のその他のアッセイを使用して決定された負の対照に対して、ウイルス複製を少なくとも１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、４倍、５倍、８倍、１０倍、１５倍、２０倍、または２〜５倍、２〜１０倍、５〜１０倍、または５〜２０倍抑制するかまたは低減するために効果的な量の化合物または組成物が投与される。その他の実施態様において、対象には、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知のその他のアッセイを使用して決定された負の対照に対して、ウイルス複製を１  ｌｏｇ、１．５  ｌｏｇ、２  ｌｏｇ、２．５  ｌｏｇ、３  ｌｏｇ、３．５  ｌｏｇ、４  ｌｏｇ、５  ｌｏｇ以上抑制するかまたは低減するために効果的な量の化合物または組成物が投与される。
【０２６７】
一定の実施態様において、対象には、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知のその他のアッセイを使用して決定された負の対照に対して、他の個人に伝播させるウイルスの能力を少なくとも２０％〜２５％、好ましくは少なくとも２５％〜３０％、少なくとも３０％〜３５％、少なくとも３５％〜４０％、少なくとも４０％〜４５％、少なくとも４５％〜５０％、少なくとも５０％〜５５％、少なくとも５５％〜６０％、少なくとも６０％〜６５％、少なくとも６５％〜７０％、少なくとも７０％〜７５％、少なくとも７５％〜８０％、または最高少なくとも８５％抑制するかまたは低減するために効果的な量の化合物または組成物が投与される。その他の実施態様において、対象には、本明細書に記載したアッセイまたは当業者に周知のその他のアッセイを使用して決定された負の対照に対して、対象内の他の細胞、組織または器官に蔓延させるウイルスの能力を少なくとも２０％〜２５％、好ましくは少なくとも２５％〜３０％、少なくとも３０％〜３５％、少なくとも３５％〜４０％、少なくとも４０％〜４５％、少なくとも４５％〜５０％、少なくとも５０％〜５５％、少なくとも５５％〜６０％、少なくとも６０％〜６５％、少なくとも６５％〜７０％、少なくとも７０％〜７５％、少なくとも７５％〜８０％、または最高少なくとも８５％抑制するまたは低減するために効果的な量の化合物または組成物が投与される。
【０２６８】
一定の実施態様において、化合物または組成物の用量が、対象に毎日、１日おきに、２日に１回、３日目ごと、毎週１回、毎週２回、毎週３回、または２週間に１回投与される。その他の実施態様において、２、３または４用量の化合物または組成物が、対象に毎日、２日に１回、３日目ごと、毎週１回または２週間に１回投与される。一部の実施態様において、用量１回分の化合物または組成物が、２日間、３日間、５日間、７日間、１４日間、または２１日間投与される。一定の実施態様において、化合物または組成物の用量が、１カ月間、１．５カ月間、２カ月間、２．５カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間以上投与される。
【０２６９】
ウイルス感染の予防、治療および／または管理について使用されてきたか、現在使用されている予防薬または治療薬の投与量は、臨床医が利用できる参考資料、例えば『Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（処方医薬品情報事典）（６１ｓｔ  ｅｄ．  ２００７）』を使用して決定できる。好ましくは、感染を阻止、処置および／または管理するために、使用されてきたか、現在使用されている量よりも低い投与量が、１つ以上の化合物または組成物と組み合わせて利用される。
【０２７０】
ウイルス感染の予防、治療または管理以外の用途に認可されてきた化合物について、安全な用量の範囲は、例えば、『Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  （６１ｓｔ  ｅｄ．  ２００７）』など、臨床医が利用できる参考資料を使用して容易に決定できる。
【０２７１】
上述の投与スケジュールは、例証目的でのみ提供されているもので、および限定的であるとは考慮されるべきではない。当業者であれば、本発明の範囲内であることを容易に理解する。
【０２７２】
本明細書中に開示される発明を、その原理の範囲中で変化させることが、当業者によりなされ得ることを、理解され、及び予想されたい。また、そのような変更は、本発明の範囲内に包含されるべきことが意図される。
【０２７３】
本願の全体にわたり、様々な文献を挿入して参照している。これらの文献の開示内容の全体を、本願に参照により援用することにより、本発明に関連する先行技術の言及事項をより完全に記載している。下記実施例は、本発明を更に例証するものであるが、いかなる場合も、本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【０２７４】
実施例１−Ｔｏｒｉｎ  １は、ＨＣＭＶの生産を阻害する
【０２７５】
ｍＴＯＲ阻害剤であるＴｏｒｉｎ  １の、ＨＣＭＶ複製に対する効果を判定するために、線維芽細胞を血清飢餓により増殖停止させ、ＨＣＭＶを感染させ、そしてＴｏｒｉｎ  １又はラパマイシンで処理し、そして、ウイルス複製複数回分の期間、増殖をモニタリングした。
【０２７６】
初代ヒト包皮線維芽細胞を、１０％正常ウシ血清を含有するＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  ｍｅｄｉｕｍ  （ＤＭＥＭ）中で培養し、６〜１４代で使用した。ウイルスの多段階増殖解析を、以下のように行った。ヒト線維芽細胞をコンフルエントにプレーティングし、下記感染前４８時間血清飢餓に置いた。細胞に、多重度０．０５  ＰＦＵ／ｃｅｌｌで、ＨＣＭＶを感染させた。６ウェルプレート中で、細胞を、３００μｌの培地中のウイルスと共に、１５分毎に揺らして１時間インキュベーションした。吸収が行われた後、前記接種材料を除去し、そして新鮮な無血清培地に置き換えた。無細胞上澄中に存在するウイルスの量を、初代ヒト線維芽細胞に対する、５０％組織培養感染用量（ＴＣＩＤ５０）法により、定量した。
【０２７７】
図１Ａに記載されているように、ラパマイシン処理は、中程度にＨＣＭＶ複製を阻害し、１０日時点で約８倍の効果に達した。対照的に、Ｔｏｒｉｎ  １は、ＨＣＭＶの収率を、１０日時点で約１６０倍低下させた。Ｔｏｒｉｎ  １は、試験した範囲内の全ての濃度で、ＨＣＭＶの子孫の生産の阻害に効果的で、５０％阻害濃度（ＩＣ５０）は、約６０ｎＭであった（感染後８日）（図１Ｂ）。この用量は、Ｔｏｒｉｎ  １がｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２のキナーゼ活性を阻害するＩＣ５０の２〜１０ｎＭに劣らない（４７）。
【０２７８】
過去の報告では、Ｔｏｒｉｎ  １は実質的に細胞の増殖を阻害するが、５００ｎＭまでの濃度では細胞を死滅させないことが示されている。発明者らは、トリパンブルー排除アッセイを使用して、２５０ｎＭのＴｏｒｉｎ  １の、増殖停止線維芽細胞の生存率に対する影響を試験した。Ｔｏｒｉｎ  １処理後１０日を超えて、９５％以上の細胞生存状態を維持しており、Ｔｏｒｉｎ  １処理は、これらの細胞生存率に影響しなかった（図１Ｃ）。
【０２７９】
前記ウイルスの増殖の阻害が細胞毒性によるものではないことを確認するために、発明者らは、薬物放出試験を実施した。感染細胞を一定の範囲のＴｏｒｉｎ  １で８日間処理し、その後、細胞をＴｏｒｉｎ  １を含有しない培地中で維持した。８日後、上澄中のウイルスを、ＴＣＩＤ５０法により定量した（感染後１６日）（図１Ｂ）。薬剤の除去後、ＨＣＭＶの複製は、最初に１ｍＭの薬剤を与えた培養細胞で部分的に回復し、２５０ｎＭの薬物を与えた細胞で実質的に回復し、そして１００ｎＭのＴｏｒｉｎ  １を与えた細胞において、完全に回復した。８日間のＴｏｒｉｎ  １処理の後薬剤を除去することでウイルス収率が１００倍超増大したことは、更に、２５０ｎＭ未満の薬物で処理した細胞が生存状態を維持していたことを実証する。
【０２８０】
これらの結果は、Ｔｏｒｉｎ  １が、ＨＣＭＶ複製の強力な阻害剤であることを実証する。ｍＴＯＲキナーゼに対するＴｏｒｉｎ  １の選択性及びそのラパマイシン耐性ｍＴＯＲＣ１活性を阻害する効果を実証する従来の研究から得たデータに基づき、このｍＴＯＲＣ１活性は、ＨＣＭＶの溶解性複製において重要であることが推察される。
【０２８１】
実施例２：Ｔｏｒｉｎ  １は、ウイルスＤＮＡ及び後期ウイルスタンパク質の蓄積を阻害する
【０２８２】
Ｔｏｒｉｎ  １によるウイルスの生活環の阻害の性質を判定するために、発明者らは、２５０ｎＭの用量の薬物の、ＨＣＭＶの侵入に対する影響を最初に試験した。細胞を、感染前に、又はウイルスの吸収の直後に、Ｔｏｒｉｎ  １で２４時間処理した。
【０２８３】
感染細胞内のウイルスＤＮＡ及び転写産物の蓄積が判定された。ＨＣＭＶ感染の過程でのウイルスＤＮＡの蓄積は、上記のように、定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）によりモニタリングされた（Ｔｅｒｈｕｎｅ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ８１：３１０９−３１２３）。
【０２８４】
概説すると、まず、初代ヒト線維芽細胞に、多重度０．０５  ＰＦＵ／ｃｅｌｌで、ＢＡＤｉｎＧＦＰを感染させた。細胞のペレットを、４００  ｍＭ  ＮａＣｌ、１０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ  （ｐＨ  ７．５）、及び１０  ｍＭ  ＥＤＴＡを含有する溶液５００μｌに再懸濁した。表示されている時間で、細胞をスクレーピングにより培地中に回収し、解析まで凍結細胞ペレットとして保存した。４００  ｍＭ  ＮａＣｌ、１０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ  （ｐＨ  ７．５）、及び１０  ｍＭ  ＥＤＴＡを含有する溶液５００μｌに、細胞ペレットを再懸濁した。プロテイナーゼＫ（２０μｇ）を、２０％ＳＤＳ溶液４μｌと一緒に添加した。ライゼートを、フェノールクロロホルムで抽出した。ＲＮａｓｅ  Ａ（２０μｌ）を添加し、当該ライゼートを、３７℃で１時間インキュベーションした。ライゼートを、フェノール−クロロホルムで、続いてクロロホルムで抽出した。１００％エタノール１ｍｌを添加し、１４０００ｘｇで３０分間遠心分離して、ＤＮＡを沈殿させた。ＤＮＡを７０％エタノールで１回洗浄した後、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ  ７．５）５０μｌ中で再懸濁した。例えば、各試料において、ＤＮＡを、ＮａｎｏＤｒｏｐ分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて定量した。５００ナノグラムのＤＮＡを、１２．５  μｌ  ２ｘ  ＳＹＢＲ  ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲ  ｍａｓｔｅｒ  ｍｉｘ  （Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及び２μＭの各プライマーの混合物に添加し、全体積を２５μｌとした。ローディングの量が等しいことの追加対照として、各試料のウイルスＤＮＡの量を、各試料中の細胞内グリセルアルデヒド−３−リン酸塩脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）遺伝子の量で補正した。
【０２８５】
Ｔｏｒｉｎ  １で感染２４時間前に処理した、又はウイルス吸収の１時間後に当該薬剤で処理したヒト線維芽細胞について、タンパク質のウエスタンブロット解析を実施した。細胞を、プロテアーゼ阻害剤（完全ＥＤＴＡ不含；Ｒｏｃｈｅ）を含有する、放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）緩衝剤（５０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ［ｐＨ  ７．４］、１％  ＮＰ−４０、０．２５％  デオキシコール酸ナトリウム、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌ、１  ｍＭ  ＥＤＴＡ）に溶解させた。各ライゼート中のタンパク質濃度は、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイにより判定された。試料あたり３０μｇのタンパク質を解析した。細胞ライゼート中のタンパク質は、ＳＤＳ含有１０％ポリアクリルアミドゲルで分離された。タンパク質は、セミドライ転写装置を使用して、タンパク質メンブレン上に転写された。０．１％Ｔｗｅｅｎ  ２０（ＰＢＳ−Ｔ）及び５％脱脂粉乳を含有する燐酸緩衝生理食塩水でメンブレンを１時間インキュベーションした後、一次抗体とインキュベーションした。１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するＰＢＳ−Ｔで抗ＩＥ−１モノクローナル抗体（５６）又は抗チューブリン抗体（Ｓｉｇｍａ）を希釈し、前記メンブレンと１時間質オンでインキュベーションした。ＰＢＳ−Ｔで更に洗浄した後、ブロットを、１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ−Ｔで５０００倍に希釈した、ヤギ抗マウス西洋わさびペルオキシダーゼを結合した二次抗体とインキュベーションした。その後メンブレンを再びＰＢＳ−Ｔで洗浄し、タンパク質を、ＥＣＬ試薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を使用して、化学発光により可視化した。
【０２８６】
感染の２時間後（２ｈｐｉ）の時点で、細胞に結合したウイルスＤＮＡのレベルは、実験条件中の薬物に影響されなかった（図２Ａ）。ＨＣＭＶ前初期ＩＥ１タンパク質の発現をこれらの条件下で試験したとき、Ｔｏｒｉｎ  １で処理した、及び処理していない細胞の間で、６ｈｐｉの時点で、細胞にコードされるチューブリンに相対的な、ＩＥ１の量に、顕著な差は無かった（図２Ｂ）。更に、薬剤処理は、２４ｈｐｉの時点で、ウイルスゲノムに由来して発現するＧＦＰマーカータンパク質を発現する細胞のパーセンテージを変化させなかった。同様に、これらの結果は、ウイルスの結合及び侵入、並びに前初期タンパク質の発現等、ＨＣＭＶの生活環の初期段階は、Ｔｏｒｉｎ  １の影響を受けないことを実証する。
【０２８７】
実施例３：Ｔｏｒｉｎ  １とラパマイシンの、ウイルスタンパク質の蓄積に対する影響の比較
【０２８８】
６〜９６ｈｐｉでの動的クラス（ｋｉｎｅｔｉｃ  ｃｌａｓｓ）の代表的なウイルスタンパク質ＩＥ１、ｐＵＬ４４、及びｐＵＬ９９の蓄積に及ぼす効果について、上記と同様のウエスタンブロットにより、Ｔｏｒｉｎ  １とラパマイシンを比較した（図３Ａ）。ｐＵＬ９９に対する抗体は、既に記載されている（Ｓｉｌｖａ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  （２００３）  ７７：  １０５９４−１０６０５）。加えて、ＨＣＭＶ  ＤＮＡの蓄積は、上記と同様の方法を使用して、感染後にモニタリングされた。
【０２８９】
感染後のＵＬ９９の転写レベルは、上記と同様の手段で判定された（Ｄｅｐｔｏ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ６６：３２４１−３２４６）。概説すると、まず、表示されている時間に、Ｔｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）抽出により、全ＲＮＡを回収した。ＤＮａｓｅで処理したＲＮＡ  （０．５  μｇ）を、ランダムヘキサマープライマーを使用して、ＴａｑＭａｎ逆転写試薬キット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で、逆転写した。ＳＹＢＲ  ｇｒｅｅｎ  ｍａｓｔｅｒ  ｍｉｘ  （Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）と、ＵＬ９９に特異的なプライマー（５’−ＧＴＧＴＣＣＣＡＴＴＣＣＣＧＡＣＴＣＧ−３’  （配列番号：４）及び５’−ＴＴＣＡＣＡＡＣＧＴＣＣＡＣＣＣＡＣＣ−３’（配列番号：５））に、ｃＤＮＡを２マイクロリットル添加した。同じ試料中のアクチンのレベルを、５’−ＴＣＣＴＣＣＴＧＡＧＣＧＣＡＡＧＴＡＣＴＣ−Ｓ’  （配列番号：６）及び５’−ＣＧＧＡＣＴＣＧＴＣＡＴＡＣＴＣＣＴ  ＧＣＴＴ−３’  （配列番号：７）のプライマーを使用して測定した。各試料における閾値サイクルを、アクチン遺伝子がＵＬ２１．５遺伝子座に挿入された組換えＨＣＭＶ  ＢＡＣの連続希釈からなる標準曲線と比較することにより、ＵＬ９９及びアクチン転写産物のコピー数を決定した。全ての実験の標準曲線のＲ値は、０．９８を超えていた。
【０２９０】
ラパマイシンは、前初期タンパク質ＩＥ１及び初期タンパク質ｐＵＬ４４の蓄積に殆ど影響せず、また後期タンパク質ｐＵＬ９９のレベルを中程度に低下させた（図３Ａ）。Ｔｏｒｉｎ  １は、ＩＥ１及びｐＵＬ４４の蓄積の阻害は限定的であったが、ｐＵＬ９９の蓄積量の低下は劇的であった。ｐＵＬ９９の発現はウイルスＤＮＡの複製の阻害に依存するので、発明者らは、Ｔｏｒｉｎ  １がウイルスＤＮＡ蓄積を阻害するか否かを試験した（図３Ｂ）。ウイルスＤＮＡの蓄積は、ラパマイシン又はＴｏｒｉｎ  １で処理した線維芽細胞の定量リアルタイムＰＣＲにより測定された。ラパマイシンはウイルスＤＮＡの蓄積を中程度に阻害し、これは、ＨＣＭＶの子孫の生産に対するラパマイシンの効果と一致する。対照的に、Ｔｏｒｉｎ  １は、９６ｈｐｉの時点で、ウイルスＤＮＡの蓄積を１５０倍抑制した。この知見は、ウイルス後期タンパク質の阻害が、ウイルスの後期ＲＮＡの転写を低下させることにより、ウイルスＤＮＡの蓄積を阻害することを示唆する。この仮説を検証するために、発明者らは、Ｔｏｒｉｎ  １およびラパマイシンの存在下で、ＵＬ９９のｍＲＮＡの発現のレベルを測定した。ラパマイシン及びＴｏｒｉｎ  １のいずれもＵＬ９９ｍＲＮＡのレベルを低下させ、Ｔｏｒｉｎ  １の効率はラパマイシンを上回っていた（図３Ｃ）。Ｔｏｒｉｎ  １で処理した細胞のＵＬ９９  ｍＲＮＡのレベルの低下の程度は、観察されたウイルスＤＮＡの蓄積の阻害の程度と一致していた。ＵＬ９９タンパク質の低下レベルは、ＵＬ９９  ｍＲＮＡレベルの低下よりも著しい場合があり、ｍＴＯＲ活性が、後期タンパク質の合成に特異的に関与する可能性が高い。しかしながら、後期転写に対する影響に関するこれらの結果の解釈は、ＤＮＡ蓄積に対する薬物の効果により混乱させられる。即ち、これらの結果は、ラパマイシン非感受性ｍＴＯＲ活性が、充分なＨＣＭＶ  ＤＮＡの蓄積に必要であるが、ウイルス前初期及び初期タンパク質の発現にとって重要でないことを示している。
【０２９１】
実施例４：Ｔｏｒｉｎ  １はＨＣＭＶ感染細胞内で４ＥＢＰ１のリン酸化を阻害する
【０２９２】
ＨＣＭＶ感染の過程でのｍＴＯＲＣ１標的のリン酸化に対するＴｏｒｉｎ  １の効果が調査された。ＨＣＭＶの感染はｍＴＯＲＣ１活性を誘導するが、ｍＴＯＲＣ１標的のリン酸化の感受性は、ｍＴＯＲＣ１阻害剤のラパマイシンに特異的であった。Ｐ７０Ｓ６キナーゼ、続いてｒｐＳ６のｍＴＯＲＣ１によるリン酸化は、ＨＣＭＶ感染の過程でラパマイシンにより阻害され、他のｍＴＯＲＣ１の標的である４ＥＢＰ１のリン酸化は、ラパマイシンに耐性である。このｍＴＯＲ標的に対する異なった効果は、感染の過程で、ｍＴＯＲ以外のキナーゼが４ＥＢＰ１のリン酸化に関与していることを示唆し得る。この可能性を検証するために、ＨＣＭＶを感染させた線維芽細胞をラパマイシン及びＴｏｒｉｎ  １で処理し、４ＥＢＰ１及びｒｐＳ６のリン酸化状態を測定した。いずれの薬剤も、ＨＣＭＶ感染で通常認められるｒｐＳ６のリン酸化の誘導を顕著に阻害したが、Ｔｏｒｉｎ  １のみ、実質的に、４ＥＢＰ１のリン酸化を阻害していた（図４Ａ）。これは、Ｔｏｒｉｎ  １の存在下で、リン酸化形態に特異的な抗体を用いてリン酸化４ＥＢＰ１−ＰＴ３７／４６を検出出来なかったこと、及び全４ＥＢＰ１の移動度の変化の両方から証明された。全４ＥＢＰ１、ｒｐＳ６、及びチューブリンのレベルはモニタリングされて、タンパク質回収の対照に用いられた。この薬剤ごとに異なる効果は、感染期間を通して観察された（図４Ｂ）。これらの結果は、ＨＣＭＶ感染の過程での４ＥＢＰ１のラパマイシン耐性のリン酸化は、他のキナーゼの作用よりもむしろＴｏｒｉｎ  １感受性のｍＴＯＲ活性に依存していることを実証する。
【０２９３】
４ＥＢＰ１のリン酸化状態は、キャップ（ｃａｐ）依存的タンパク質翻訳を制御する。リン酸化されていない４ＥＢＰ１はｅＩＦ４Ｅと結合して、ｅＩＦ４Ｅ複合体の形成を阻害するが、４ＥＢＰ１のリン酸化は、ｅＩＦ４Ｅとの相互作用を阻害する。Ｔｏｒｉｎ  １が４ＥＢＰ１のリン酸化を顕著に阻害する能力は、発明者らにＴｏｒｉｎ  １で処理された細胞中のｅＩＦ４Ｅ複合体のレベルを試験させた。ＨＣＭＶの感染は、４ＥＢＰ１の、ｍ７Ｇ  キャップの類似体であるｍ７ＧＴＰ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅとの複合体との結合の低下を引き起こし（図４Ｃ）、これは既に開示されている情報と一致していた（Ｗａｌｓｈ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ７９：８０５７−８０６４）。
【０２９４】
ラパマイシン処理は、前記キャップアナログと４ＥＰＢ１との結合の量を増大させず、これは、感染の過程で４ＥＢＰ１のリン酸化を阻害するラパマイシンの機能と一致していた。対照的に、Ｔｏｒｉｎ  １処理は、感染期間を通じて、４ＥＢＰ１とｍ７ＧＴＰ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅの結合の実質的増大を引き起こした。ＨＣＭＶ感染自体はキャップ類似体とｅＩＦｅＥとの結合率を変化させず、これをローディング対照とした。加えて、ｃａｐ類似体にロードされた各試料中のタンパク質の量が等しいことを確認するために、細胞ライゼート中のチューブリンの量を試験した。ｍ７ＧＴＰＳｅｐｈａｒｏｓｅと結合した４ＥＢＰ１のレベルの増大は、Ｔｏｒｉｎ  １処理後のｅＩＦ４Ｇ及びｅＩＦ４Ａとキャップ類似体との結合の低下と一致していた（図４Ｄ）。ｅＩＦ４Ｇ及びｅＩＦ４Ａの結合に対するラパマイシンの効果は、最低限であった。ｅＩＦ４Ｅレベルは薬剤の影響を受けず、ローディング対照とされた。これらの結果は、ラパマイシン耐性ｍＴＯＲによる４ＥＢＰ１のリン酸化が、ＨＣＭＶ感染の過程でのｅＩＦ４Ｆ複合体の統合の維持に必須であることを示唆する。
【０２９５】
実施例５：Ｔｏｒｉｎ  １は４ＥＢＰ１ヌル細胞においてＭＣＭＶ複製を阻害しない
【０２９６】
ｍＴＯＲシグナル経路中のタンパク質の機能的役割の同定は、個別のｍＴＯＲ構成要素を欠いたノックアウトマウスを作製することにより促進されてきた。例えば、必須ｍＴＯＲＣ２構成要素であるＲｉｃｔｏｒを欠いたマウス胚線維芽細胞（ＭＥＦ）を利用して、ｍＴＯＲＣ２の、Ａｋｔの完全な活性化に関与するキナーゼ複合体としての明確な同定がもたらされた。発明者らは、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）及びｍＴＯＲシグナル経路の構成要素を欠いたＭＥＦ株を利用して、ラパマイシン耐性リン酸化イベントに対するｍＴＯＲＣ２の潜在的な貢献を評価した。ＭＣＭＶがＨＣＭＶと同様に振舞い、ｍＴＯＲシグナリングイベントの解析の適切なモデルであることを確認するために、発明者らは、ＭＥＦにおけるＭＣＭＶの増殖及びｍＴＯＲ依存的リン酸化イベントに対する、Ｔｏｒｉｎ  １及びラパマイシンの効果を判定した。ＨＣＭＶと同様に、ラパマイシンはそうではないが、Ｔｏｒｉｎ  １は、ＭＣＭＶ複製を阻害した（図５Ａ）。特に、ラパマイシンはＨＣＭＶの収率を中程度に低下させた（図１Ａ）が、ＭＣＭＶに対しては阻害作用を有しなかった。また、ＨＣＭＶで観察されたように（図４Ａ）、ｒｐＳ６のリン酸化の増大が測定されたことから、ＭＣＭＶの感染は、ｍＴＯＲＣ１活性を誘導していたことが分かった。ＲｐＳ６のリン酸化はラパマイシン、Ｔｏｒｉｎ  １、及びＬＹ２９４００２、、クラス１ホスファチジルイノシトール３−キナーゼの阻害剤及びｍＴＯＲにより完全に阻害されたが、４ＥＢＰ１のリン酸化は、Ｔｏｒｉｎ  １及びＬＹ２９４００２により阻害されたが、ラパマイシンではされなかった（図５Ｂ）。全ｒｐＳ６タンパク質がアッセイされ、ローディング対照とされた。ＨＣＭＶと同様、ＭＣＭＶはｍＴＯＲシグナリング経路を誘導し、また４ＥＢＰ１のリン酸化を誘導するラパマイシン耐性ｍＴＯＲ活性に依存していた。
【０２９７】
ＭＣＭＶは、ＨＣＭＶと同様に、ｍＴＯＲシグナリングイベントを誘導することが判明した後、ｍＴＯＲの作用の様々なエフェクターを欠いたＭＥＦに対するＴｏｒｉｎ  １及びラパマイシン処理の効果の特徴付けをおこなった。発明者らは、第一に、ＭＣＭＶの複製におけるｍＴＯＲＣ２の要求性を調査した。ＲｉｃｔｏｒヌルＭＥＦはウイルスの増殖を支持し（無処理）（図６Ａ）、これは、ｍＴＯＲＣ２が、充分なＭＣＭＶ複製に必須でないことを示す。更に、Ｔｏｒｉｎ  １は、これらの細胞において、ＭＣＭＶ複製（図６Ａ）及び４ＥＢＰ１リン酸化（図６Ａ）を効果的に阻害し、これは、ｍＴＯＲＣ２が、ＭＣＭＶ感染細胞において、Ｔｏｒｉｎ  １の標的でないことを示唆する。最後に、これらの細胞は、ＰＣＲにより、無傷の遺伝子座を欠くことが確認された（図６Ｃ）。また、発明者らは、ｍＴＯＲＣ２の標的の一つであるＡｋｔキナーゼの潜在的な役割を評価するために、Ａｋｔｌ／Ａｋｔ２ヌルＭＥＦを利用した。これらの細胞はＴｏｒｉｎ感受性のＭＣＭＶ複製を支持し（図６Ｄ）、Ｔｏｒｉｎ  １は、Ａｋｔの非存在下で４ＥＢＰ１のリン酸化を阻害したことにより（図６Ｅ）、ＭＣＭＶ感染細胞において、このキナーゼがＴｏｒｉｎ  １の標的である可能性は排除された。また、これらの細胞は、ウエスタンブロットアッセイにより、Ａｋｔの欠損が確認された（図６Ｆ）。Ｔｏｒｉｎ  １によるＨＣＭＶの阻害は４ＥＢＰ１の脱リン酸化と対応しており（図３及び４）、これは、このリン酸化イベントが重要なＴｏｒｉｎ  １の標的である可能性を示唆する。従って、発明者らは４ＥＢＰ１ヌルＭＥＦ（４８）におけるＭＣＭＶの複製を阻害するＴｏｒｉｎ  １の能力を試験した。正常のＭＥＦの場合と同様にＭＣＭＶは良好に複製し、これは、４ＥＢＰ１が、サイトメガロウイルスの複製に必須でないことを示唆する（４ＥＢＰ１−／−、無処理）（図７Ａ）。対照細胞と同様、ラパマイシンは、４ＥＢＰ１ヌル細胞において、ＭＣＭＶ複製に対する影響は最小限であった。重要なことに、Ｔｏｒｉｎ  １は、４ＥＢＰ１を欠いた細胞で、ＭＣＭＶ複製を阻害することは出来ない（図７Ａ）。４ＥＢＰ１は、ｍＴＯＲＣ１によるリン酸化で不活性化されない限り、ｅＩＦ４Ｆ複合体の組み立てを阻害する機能を有する。Ｔｏｒｉｎ  １処理は対照細胞におけるｅＩＦ４Ｆ複合体の形成を阻害したが、そのような効果は、４ＥＢＰ１ヌル細胞では認められなかった（図７Ｂ）。最後に、ＭＥＦのフェノタイプを確認するウエスタンブロットアッセイにより、これらの細胞のライゼート中に、４ＥＢＰ１は検出されなかった。発明者らは、４ＥＢＰ１が、サイトメガロウイルス感染の過程でＴｏｒｉｎ  １に対する感受性を提供する標的であると結論付け、ラパマイシン耐性ｍＴＯＲＣ１は、ウイルスの生活環において、キャップ依存的翻訳の維持に必須であると推測する。
【０２９８】
実施例６：３つのヘルペスウイルスサブファミリーのメンバーの全てがＴｏｒｉｎ  １により阻害される
【０２９９】
ＭＥＦに、アルファヘルペスウイルス、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）、及びガンマヘルペスウイルスのマウスガンマヘルペスウイルス６８（γＨＶ６８）を感染させた（図８Ａ）。これらのウイルスは、サイトメガロウイルスとして、同一の薬物感受性を呈した。ラパマイシンはＨＳＶ−Ｉ及びγＨＶ６８複製の防止に有効でなかったが、Ｔｏｒｉｎ  １は、複数回のウイルス複製期間を通じて、両方のウイルスを阻害した。加えて、ラパマイシンはそうではないが、Ｔｏｒｉｎ  １は、ＨＳＶ−Ｉ感染の過程で４ＥＢＰ１のリン酸化を阻害し（図８Ｂ）、そしてＴｏｒｉｎ  １は、４ＥＢＰ１を欠いた細胞においてＨＳＶ−Ｉの生産を阻害しなかった（図８Ｃ）。発明者らは、ラパマイシン耐性ｍＴＯＲ活性は、複数種のヘルペスウイルスの複製にとって必須であると結論付けた。
【０３００】
実施例７：ｍＴＯＲキナーゼを指向するｓｉＲＮＡでの線維芽細胞の処理によるＨＣＭＶ収量の阻害
【０３０１】
継代２３〜２４番のＭＲＣ５線維芽細胞（ＡＴＣＣ  ＃  ＣＣＬ−１７１）を９６ウェルプラスチック組織培養ディッシュ（ＴＲＰ＃９２６９６，  Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）中に、１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ）を添加したＤＭＥＭ  （Ｓｉｇｍａ−  Ａｌｄｒｉｃｈ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ＃Ｄ５７５６，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）中、７５００  ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で播種した。細胞を〜７０％コンフルエントまで増殖させた後、Ｏｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ）を使用して、説明書に従い、ＧＦＰ  ｍＲＮＡ  （非特異的）、ウイルスＩＥ２  ｍＲＮＡ又はｍＴＯＲキナーゼを標的とするｓｉＲＮＡを、１ｎｍｏｌトランスフェクションした。ＩＥ２  ｓｉＲＮＡ配列：  ５’−ＡＡＡＣＧＣＡＵＣＵＣＣＧＡＧＵＵＧＧＡＣ−３’  （配列番号：１）；  ＧＦＰ  ｓｉＲＮＡ配列：  ５’−ＧＣＡＡＧＣＵＧＡＣＣＣＵＧＡＡＧＵＵＣ  ＡＵ−３’  （配列番号：２）；  ｍＴＯＲキナーゼ（ＦＲＡＰ  １＿２）  ｓｉＲＮＡ配列：  ５’−  Ｇ  ＡＧＵＵＡＣ  ＡＧＵＣ  ＧＧＧＣ  ＡＵ  ＡＵ−３’  （配列番号：３）。全てのｓｉＲＮＡは、Ｓｉｇｍａ−  Ａｌｄｒｉｃｈから取得した。感染の４時間後、培地に、最終濃度が１０％となるようにＦＢＳを添加した。感染の２８時間後、培地の上澄を除去し、濃度０．１  ｐｆｕ／ｃｅｌｌのＨＣＭＶ株ＡＤ１６９を含む１００μｌのＤＭＥＭ／１０％ＦＢＳに置き換えた。感染は９６時間行われ、９６時間目に、培地の上澄を回収し、そして９６ウェルフォーマットの９０％コンフルエントＭＲＣ細胞の新鮮なプレートへの感染に使用された。当該レポータープレートへの感染の２４時間後、試料を−２０℃の氷冷メタノールで１５分間固定し、続いて、感染価を定量するために、免疫蛍光染色を行った。図９の結果は、「ロバストＺスコア（ｒｏｂｕｓｔ  Ｚ  ｓｃｏｒｅ）」で表される。このスコアは、ｓｉＲＮＡ処理がない場合にもたらされる感染価の平均値の標準偏差に対応する。故に、ｍＴＯＲキナーゼ特異的ｓｉＲＮＡは２標準偏差を越える高度に顕著な効率で、感染性ＨＣＭＶの収率を低下させたことになる。
【０３０２】
実施例８：小胞体ストレス応答の阻害剤での線維芽細胞の処理によるＨＣＭＶ収量の阻害
【０３０３】
ＨＣＭＶが、高レベルのウイルス糖タンパク質の発現に拘らず細胞のホメオスタシスを維持するためにＵＰＲが起こることを実際に必要とするという仮説を調査するため、ＨＣＭＶ感染ヒト線維芽細胞（ＨＦＦ）をＵＰＲの阻害剤である、化学シャペロンの４−フェニルブチレート（４−ＰＢＡ）で処理した。４−ＰＢＡでの処理は、ウイルス複製を用量依存的に効率的に阻害した（図１０）。
【０３０４】
４−ＰＢＡが細胞に毒性であって細胞生存率の低下により間接的にＨＣＭＶを阻害している可能性を排除するため、２つの実験を実施した（図１１）。第一の実験（図１１Ａ）において、異なる濃度の薬物で８日間処理したコンフルエントヒト線維芽細胞に対し、細胞生存率を測定するアッセイを実施した（図１１Ａ）。試験した最大の薬物用量であっても、トリパンブルー排除アッセイにおいて、細胞生存率に対する影響は認められなかった。第二の実験において、前記薬物は、両面的であることが示された（図１１Ｂ）。感染細胞は様々な濃度の薬物の存在下で８日間維持され、そしてそれらの飼料は、ウイルスの収率を判定するのに利用された。上記実験（図１０）と同様に、前記薬物は、用量依存的に、ウイルスの生産を阻害した。そして、前記薬物は除去され、ウイルスの用量が８日後に判定された。試験された全ての用量において、ウイルスは回復し、正常な収率をもたらした。細胞は正常なウイルス収率を維持することが出来たことから、前記薬物が８日間の処理の過程で細胞にダメージを与えなかったことが示唆される。
【０３０５】
このことは、ＨＣＭＶが、感染性の子孫の正常な収率を生じるのに、ＵＰＲを必要とすることを実証する。重要なことに、このデータは、ＵＰＲを阻害する薬物が、抗ＨＣＭＶ治療剤として振舞うことも示す。多くのウイルスにおいて感染の過程で高レベルのウイルス性糖タンパク質が発現することから、ＵＰＲを阻害する薬物は、他のヘルペスウイルス及び他のウイルスに対しても抗ウイルス作用を有することが予想される。この類の薬物として、４−ＰＢＡやタウロウルソデオキシコール酸  （ＴＵＤＣＡ）が挙げられる。４−ＰＢＡは、現在、新生児の尿素サイクルの機能不全の治療に臨床的に使用される。本研究に使用されるものと同様の血清濃度は、４−ＰＢＡで処置された患者において測定されている。このことは、４−ＰＢＡは、免疫系の機能が不完全な個体に対して安全かつ十分に耐えられるものであるから、サイトメガロウイルスが感染した患者についても同様であり、ＨＣＭＶ複製を阻害するレベルの４−ＰＢＡの用量は、インビボで達成出来ることを示す。
【０３０６】
実施例９：ｍＴＯＲ阻害剤及び小胞体ストレス応答の阻害剤で処理した線維芽細胞におけるＨＣＭＶ収量の阻害
【０３０７】
Ｔｏｒｉｎ  １は、４−ＰＢＡと組み合わせると、いずれかの薬物単独の場合よりも強力にＨＣＭＶを阻害し、また、４−ＰＢＡをラパマイシンと組み合わせた場合も、いずれかの薬物単独の場合よりも強力にＨＣＭＶを阻害した（図１２）。ヒト線維芽細胞に、多重度０．１  ｐｆｕ／ｃｅｌｌで、ＨＣＭＶ株ＡＤ  １６９を感染させ、そして１０％ウシ胎児血清を含有し、かつラパマイシン又はＴｏｒｉｎ  １を単独で、及び４−ＰＢＡと組み合わせて含有する培地中で維持した。薬物は、以下の濃度で使用された：４−ＰＢＡ，  １  ｍＭ；  Ｔｏｒｉｎ  １，  ２５０  ｎＭ；  ラパマイシン，  ２０  ｎＭ。薬物を含有する培地は、１日おきに交換した。細胞から離れた及び細胞と接したウイルスは、感染後０、４、８及び１２日で回収され、ＴＣＩＤ５０法により力価測定を行った。
【０３０８】
実施例１０：ｍＴＯＲ阻害剤によるヒトサイトメガロウイルスの複製の用量依存的阻害
【０３０９】
９５％コンフルエントのＭＲＣ５ヒト繊維芽細胞を、多重度０．５  ｐｆｕ／ｃｅｌｌでＨＣＭＶに感染させた。感染の２時間後、細胞培養培地を、ＢＥＺ２３５  （濃度０．０００８  μ  Ｍ〜５  μＭ）；  ＩＮＫ１２８  （濃度０．０００８  μ  Ｍ〜５  μＭ）；  ＯＳＩ−０２７  （濃度０．００７４  μ  Ｍ〜５  μＭ）；およびＷｙｅｔｈ  -  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ２７  （Ｗｙｅｔｈ−ＢＭＣＬ２０１０２６４８  -  ２７）  （濃度０．０００８  μ  Ｍ〜５  μＭ）のいずれかを含有する新鮮な培地に交換した。感染後９６時間でＨＣＭＶの収量を決定し、収量は、未処理細胞のウイルス収量に対するパーセンテージで表現した。処理後９６時間における未感染ＭＲＣ５細胞の生存率に対する前記化合物の効果は、Ｔｏｘｉｌｉｇｈｔバイオアッセイキット（Ｌｏｎｚａ）を使用して評価された。図１３に示す結果は、構造が関連していないｍＴＯＲ阻害剤がウイルス生産を阻害することを実証している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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