(57)【要約】  新規の抗凝固剤拮抗化合物、ならびに該化合物、該化合物を含む薬学的組成物を作製する方法、該化合物を用いて凝固阻害薬の抗凝固効果を拮抗する方法、および該化合物を含む診断分析が開示される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2014534270.tif 000032
の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
Ａは、置換もしくは非置換の芳香族もしくは非芳香族の炭素環式もしくは複素環式環、または直鎖部分であり、
ＬおよびＬ’は、同一であるかまたは異なり、かつリンカーであり、
ＸおよびＸ’は、同一であるかまたは異なり、かつ存在しないか、またはそれぞれ、前記リンカーＬをＭに、またリンカーＬ’をＭ’に結合させる官能基であり、
ＭおよびＭ’は、同一であるかまたは異なり、かつ存在しないか、またはそれぞれ、ＸをＹに、またＸ’をＹ’に結合させるリンカーであり、
ＹおよびＹ’は、同一であるかまたは異なり、かつ１つ以上のカチオン原子もしくは基、または生理条件下でカチオン性になる１つ以上の基を含有する部分である、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ａが、非芳香族の複素環式環または直鎖部分であり、前記環または前記直鎖部分が、存在する場合にＸおよび／もしくはＸ’、またはＹおよび／もしくはＹ’に対する結合を形成し得る反応性官能基を含有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ａが、ピペラジンまたはジケトピペラジンである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
ＸおよびＸ’が、存在する場合、リンカーＬをＹに、またリンカーＬ’をＹ’にそれぞれ結合させる官能基であり、前記官能基が、エステル、アミド、およびケトンからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｌおよび／またはＬ’が、Ｃ1〜Ｃ6である置換または非置換アルキレン鎖である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
前記化合物が、式ＩＩ：
【化２】
2014534270.tif 000033
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
前記化合物が、式ＩＩＩ：
【化３】
2014534270.tif 000034
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩である、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
前記化合物が、式ＩＶ：
【化４】
2014534270.tif 000035
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、ｎは３〜５であり、ｍは３〜６であり、Ｇは−ＮＨ2およびＯＨから選択される、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｇがアミノである、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
ＹおよびＹ’が独立して、
【化５】
2014534270.tif 000036
および―ＮＨ2から選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
ＹおよびＹ’が、
【化６】
2014534270.tif 000037
である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
式Ｖ
【化７】
2014534270.tif 000038
の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
式ＶＩ
【化８】
2014534270.tif 000039
の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
式ＶＩＩ
【化９】
2014534270.tif 000040
の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
式ＶＩＩＩ
【化１０】
2014534270.tif 000041
の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物と薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
【請求項１７】
前記組成物が、経腸投与用に適合される、請求項１６に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
前記組成物が、経口投与用に適合される、請求項１７に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、非経口投与用に適合される、請求項１６に記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
前記組成物が、静脈内投与または皮下投与用に適合される、請求項１９に記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
凝固阻害薬の抗凝固効果を完全または部分的に拮抗する方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。
【請求項２２】
前記凝固阻害薬が、未分画ヘパリン、低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）、第ＩＩａ因子阻害薬、および第Ｘａ因子阻害薬からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記凝固阻害薬が、第Ｘａ因子阻害薬である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記第Ｘａ因子阻害薬が、リバロキサバン、アピキサバン、エドキサバン、およびフォンダパリヌクスからなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記対象が、哺乳動物である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記対象が、ヒトである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記凝固阻害薬の抗凝固効果の完全または部分的拮抗が、抗第Ｘａ因子活性検査によって測定される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
前記それを必要とする対象が、抗凝固の緊急の拮抗または計画された拮抗が指示される対象である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２９】
前記抗凝固の緊急の拮抗または計画された拮抗が指示される対象が、抗凝固剤過量服用に苦しむ対象、出血を罹患する対象、計画的外科的介入を必要とする対象、生検を必要とする侵襲的もしくは非侵襲的処置を受ける対象、対象が抗凝固剤処置を受け続ける場合に、処置誤りが出血をもたらす可能性がある処置を受ける対象、または脊椎麻酔もしくは硬膜外麻酔を必要とする対象である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記それを必要とする対象が、脳卒中予防、心臓外科および診断的処置、不整脈、深部静脈血栓（ＤＶＴ）予防、肺塞栓症のため、または概して病理的血餅の予防のために抗凝固治療を受ける対象である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記凝固阻害薬が、ＬＭＷＨであり、前記ＬＭＷＨが、ベミパリン、セルトパリン（ｃｅｒｔｏｐａｒｉｎ）、ダルテパリン、エノキサパリン、ナドロパリン、パルナパリン、レビパリン、およびチンザパリンからなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項３２】
前記化合物または前記その薬学的に許容される塩が、約０．０１：１〜約１０００：１の間の前記化合物または前記その薬学的に許容される塩対抗凝固剤の投与質量比で投与される、請求項２１に記載の方法。
【請求項３３】
前記化合物または前記その薬学的に許容される塩が、約１０：１の前記化合物または前記その薬学的に許容される塩対抗凝固剤の投与質量比で投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記方法が、少なくとも１つの追加の治療薬を投与することを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項３５】
前記少なくとも１つの追加の治療薬は、ビタミンＫである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物を含む、診断キット。
【請求項３７】
前記キットが、血液中の抗凝固剤濃度を決定するための使用されるキットである、請求項３６に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１１年１１月２９日に出願された米国仮特許出願第６１／５６４，５５９号、２０１２年３月２２日に出願された米国仮特許出願第６１／６１４，２９２号、２０１２年５月２日に出願された米国仮特許出願第６１／６４１，６９８号、および２０１２年６月２９日に出願された米国仮特許出願第６１／６６６，２９１号からの優先権の利益を主張し、それらの内容は、その全体が本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は、例えば、未分画ヘパリン（「ＵＦＨ」）、低分子量ヘパリン（「ＬＭＷＨ」）、フォンダパリヌクス、および他の抗トロンビン結合抗凝固剤などの凝固阻害薬、ならびに直接第Ｘａ因子および第ＩＩａ因子阻害薬の抗凝固効果を完全にまたは部分的に拮抗する化合物を開示する。
【背景技術】
【０００３】
凝固カスケードは、血管損傷後の著しい失血または出血を予防することを目的とする正常な生理的プロセスである。しかしながら、血餅（血栓）が、不要な場合に生じることもある。例えば、例えば、急性医学的疾患、長期間の固定、外科手術、または癌などの幾つかの高リスク状態は、アテローム性動脈硬化症および／または不整脈などの重大な結果につながる可能性がある血餅を発症させるリスクを増大させる可能性がある。
【０００４】
凝固カスケードは、プロテアーゼが開裂し、次いで配列内の次のプロテアーゼを活性化する一連のステップからなる。各プロテアーゼは、一連の中の次のプロテアーゼの複数の分子を活性化することができ、この生物学的カスケードを増幅する。これらの反応の最終的な結果は、可溶性タンパク質であるフィブリノーゲンを不溶性のフィブリン束に変換することである。血小板と共に、フィブリン束は安定した血餅を形成する。
【０００５】
抗トロンビン（ＡＴ）は、セリンプロテアーゼ阻害薬であり、凝固プロテアーゼの主要な血漿阻害薬である。ＡＴは、凝固カスケードを、例えば、トロンビン（第ＩＩａ因子）および活性化因子Ｘ（第Ｘａ因子）を阻害することによって、遮断する。ヘパリン（未分画ヘパリン）および低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ；分画ヘパリン）は、五糖類配列を介したＡＴへの結合を通じて凝固プロセスを阻害する。この結合は、ＡＴの立体配座変化を導き、それは第ＩＩａ因子、第Ｘａ因子、および血栓形成に関与する他のプロテアーゼのその阻害を促進する。一度解離すると、ヘパリンおよびＬＭＷＨは、別の抗トロンビン分子に自由に結合することができ、その後更なるトロンビンおよび第Ｘａ因子を阻害する。
【０００６】
未分画ヘパリンは、イヌの肝臓において抗凝固性特性を有することが１９１６年にＪｏｈｎｓ  Ｈｏｐｋｉｎｓ  ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙにてＭｃＬｅａｎおよびＨｏｗｅｌｌによって発見されているグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の混合物である。抗凝固に加えて、未分画ヘパリンは抗炎症および血管形成を含む他の特性を有することが見出されている。ＬＭＷＨは、概して８０００Ｄａ未満の分子量を有する、多糖類の短鎖からなるヘパリンである。ＬＭＷＨおよびヘパリンは双方とも、体内で血液が血餅形成することを予防するために使用されるが、医療機関内で異なる状況で使用される。
【０００７】
ヘパリンは、非経口で投与される液体溶液として利用可能である。エノキサパリンなどのＬＭＷＨは、ヘパリンの低分子量画分である。これも同様に液体注射可能溶液として利用可能である。米国内でＦＤＡによって認可されている現在利用可能なＬＭＷＨの種類は、ＬＯＶＥＮＯＸ（登録商標）（一般名、エノキサパリン）およびＦＲＡＧＭＩＮ（登録商標）（一般名、ダルテパリン）である。
【０００８】
低分子量ヘパリンまたは分画ヘパリンは、血液第Ｘａ因子および第ＩＩａ因子活性に関して未分画ヘパリンよりも大きい特異性を有する。それに加えて、ＬＭＷＨは、凝固時間の測定値である活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）に関して、より再現可能効果を有する。ＬＷＭＨは、ヘパリン誘発性血小板減少症（ＨＩＴ）のより低い発生率を有する。何故なら、ＬＭＷＨは、より予測可能な有効性およびＨＩＴなどの副作用のより低い発生率を有するため、患者は、ＬＭＷＨを自身で自宅にて注射することができるが、同様に病院で使用されることも多い。これらの理由のため、ＬＭＷＨは、市場で主流の抗凝固剤となっている。
【０００９】
プロタミンは、正に荷電した分子であり、高度に負に荷電した未分画ヘパリンまたは低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）の投与の結果である抗凝固を拮抗するために使用することができる。プロタミンは、供給問題に関連付けられている天然物であり、これは、追加の、理想的には合成の拮抗剤オプションの必要性を強調する。ＬＭＷＨの抗凝固性活性は、プロタミンの静脈内投与によって部分的に拮抗することができるが、完全ではない。ＬＭＷＨの場合におけるプロタミンの低減された抗凝固拮抗作用に対する理由は、血液中のＬＭＷＨ画分に対する、未分画ヘパリンより少ない結合親和性に起因すると考えられる。プロタミンは、降圧効果およびアナフィラキシーに関する懸念のため、ゆっくりと投与されなければならない。
【００１０】
近年、追加の抗凝固剤が、規制認可を獲得し始めている。かかる抗凝固剤の例としては、ダビガトランまたはＰＲＡＤＡＸＡ（登録商標）、アルガトロバンまたはＡＲＧＡＴＲＯＢＡＮ（登録商標）、リバロキサバンまたはＸＡＲＥＬＴＯ（登録商標）、アピキサバンまたはＥＬＩＱＵＩＳ（登録商標）、エドキサバンまたはＬＩＸＩＡＮＡ（登録商標）、およびフォンダパリヌクスまたはＡＲＩＸＴＲＡ（登録商標）が挙げられる。これらの抗凝固剤は、第ＩＩａ因子か、または第Ｘａ因子かのいずれかが凝固を伝播するのを阻害する。
【００１１】
ダビガトラン、フォンダパリヌクス、リバロキサバン、およびアピキサバンなどの抗凝固剤は、認可された拮抗剤を有さない。ダビガトランまたはＰＲＡＤＡＸＡ（登録商標）拮抗に関する当該技術分野の現状は、活性炭を採用してダビガトランを血液から除去しようと試み、輸血を使用することである。プロトロンビン複合体濃縮物が、ダビガトランを拮抗することができるが、リバロキサバンはできないと小規模な臨床試験において報告しているＥｅｒｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２０１１  Ｏｃｔ  ４；１２４（１４）：１５７３−９．Ｅｐｕｂ  ２０１１  Ｓｅｐ  ６．以外に、これらの凝固第ＩＩａ因子または第Ｘａ因子阻害薬のいずれかを拮抗するためのデータまたは臨床的に利用可能な解毒剤はない。したがって、患者がこれらの薬剤を用いて抗凝固剤処置を受けている場合、過量服用に関連付けられる副作用、特に大量出血または致命的な出血は、未分画ヘパリンの投与に関連付けられる副作用より遥かに危険である。拮抗剤の欠如はしたがって、これらの薬物の使用を制限する。
【００１２】
これらの理由のため、新規の抗凝固拮抗剤に対する積年の強く、満たされていない臨床的ニーズが存在する。
【発明の概要】
【００１３】
ヘパリン、ヘパリン分画、フォンダパリヌクス、および他の第Ｘａ因子または第ＩＩａ因子阻害薬の阻害薬が開発された。関心の抗凝固性拮抗剤の一般構造は、Ｒ−Ｚ−Ｒ’であり、式中、ＲおよびＲ’は、生理的ｐＨで正に荷電した薬剤であり、かつ同一または異なる分子であることができ、またＺは、疎水性環式または縮合環化合物である。より具体的には、該阻害薬は、式Ｉによって表される化合物またはその薬学的に許容される塩であり、
【化１】
2014534270.tif 000002
式中、
Ａは、置換もしくは非置換の芳香族もしくは非芳香族の炭素環式もしくは複素環式環、または直鎖部分であり、
ＬおよびＬ’は、同一であるかまたは異なり、かつリンカーであり、
ＸおよびＸ’は、同一であるかまたは異なり、かつ存在しないか、またはそれぞれ、リンカーＬをＭに、またリンカーＬ’をＭ’に結合させる官能基であり、
ＭおよびＭ’は、同一であるかまたは異なり、かつ存在しないか、またはそれぞれ、ＸをＹに、またＸ’をＹ’に結合させるリンカーであり、
ＹおよびＹ’は、同一であるかまたは異なり、かつ１つ以上のカチオン原子もしくは基、または生理条件下でカチオン性になる１つ以上の基を含有する部分である。
【００１４】
化合物は、対称または非対称であることができ、すなわち、Ｌ、Ｌ’、Ｘ、Ｘ’、Ｍ、Ｍ’、Ｙ、またはＹ’のうちの１つ以上は、同一であるかまたは異なることができる。化合物は、キラルである（すなわち、１つ以上のキラル中心を含有する）、またはアキラルであることができる。
【００１５】
幾つかの実施形態では、Ａは複素環式部分である。他の実施形態では、Ａは複素環式部分であり、またＬおよびＬ’は置換または非置換アルキレン鎖である。また他の実施形態では、Ａは複素環式部分であり、ＬおよびＬ’は置換または非置換アルキレン鎖であり、またＸおよびＸ’は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−である。また他の実施形態では、Ａは複素環式部分であり、ＬおよびＬ’は置換または非置換アルキレン鎖であり、ＸおよびＸ’は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、またＭおよびＭ’は置換アルキレン鎖である。また他の実施形態では、Ａは複素環式部分であり、ＬおよびＬ’は置換または非置換アルキレン鎖であり、Ｘは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ＭおよびＭ’は置換アルキレン鎖であり、またＹおよびＹ’はグアニジン部分である。特定の実施形態では、Ａは、１，４または２，５二置換ピペラジン環である。
【００１６】
本発明の別の実施形態では、阻害薬は、式ＩＩによって表される化合物またはその薬学的に許容される塩であり、
【化２】
2014534270.tif 000003
式中、Ｌ、Ｌ′、Ｍ、Ｍ′、Ｙ、およびＹ′のそれぞれは、本明細書に説明される通りである。
【００１７】
本発明の別の実施形態では、阻害薬は、式ＩＩＩによって表される化合物またはその薬学的に許容される塩であり、
【化３】
2014534270.tif 000004
式中、Ｌ、Ｌ′、Ｍ、Ｍ′、Ｙ、およびＹ′は、本明細書に説明される通りである。
【００１８】
本発明のまた別の実施形態では、阻害薬は、式（ＩＶ）によって表される化合物またはその薬学的に許容される塩であり、
【化４】
2014534270.tif 000005
式中、ＹおよびＹ′は本明細書に説明される通りであり、またｎは３〜５であり、ｍは３〜６であり、Ｇは−ＮＨ2およびＯＨから選択される。最も好ましくは、Ｇはアミノである。
【００１９】
本発明のまた別の実施形態では、阻害薬は、式ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶのうちの任意のものによって表される化合物であり、またＹおよびＹ′は独立して、
【化５】
2014534270.tif 000006
および−ＮＨ2からなる群から選択される。
【００２０】
最も好ましくは、Ｇは、−ＮＨ2であり、またＹおよびＹ′は、
【化６】
2014534270.tif 000007
である。
【００２１】
好ましい実施形態では、化合物は、式Ｖに示されるジ−アルギニンピペラジン（ＤＡＰ）、または式ＶＩに示される関連する化合物、またはどちらかの化合物の薬学的に許容される塩である：
【化７】
2014534270.tif 000008
２−アミノ−５−グアニジノ−ペンタン酸（３−｛４−［３−（２−アミノ−５−グアニジノ−ペンタノイルアミノ）−プロピル］−ピペラジン（ｐｉｐｅｒａｚｉｎ）−１−イル｝−プロピル）−アミド、または
【化８】
2014534270.tif 000009
２−アミノ−５−グアニジノ−ペンタン酸｛５−［（２−アミノ−５−グアニジノ−ペンタノイルアミノ）−メチル］−ピペラジン（ｐｉｐｅｒａｚｉｎ）−２−イルメチル｝−アミド。
【００２２】
特定の実施形態では、式Ｖの化合物は、式ＶＩＩ：
【化９】
2014534270.tif 000010
に示されるように立体異性体である。
【００２３】
別の特定の実施形態では、式ＶＩの化合物は、式ＶＩＩＩ：
【化１０】
2014534270.tif 000011
に示されるように立体異性体である。
【００２４】
本発明の化合物は、ボーラスおよび／もしくは静脈内注入、皮下注射として、または経口で、水溶液として薬学的組成物中で投与することができる。好ましい実施形態では、化合物は、例えば、減菌蒸留水、生理食塩水、緩衝生理食塩水などの担体、または注射用の別の薬学的に許容される賦形剤中で、注射（静脈内、筋肉内、または皮下）によって投与される。幾つかの実施形態では、阻害薬は、経口で投与されてもよく、粘膜表面（鼻、肺、膣、直腸、または舌下）に、またはデポー剤によって投与されてもよい。
【００２５】
本発明の化合物は、ヘパリン、ＬＭＷＨ、または他のトロンビン阻害薬媒介抗凝固の拮抗を必要とする患者に、正常な凝固および止血を回復させるのに有効な量で、薬学的組成物中で投与されてもよい。本発明の化合物を含む薬学的組成物は、病院での使用または非緊急の家庭での拮抗に好適である。それは、ヘパリン、ＬＭＷＨ、または他のトロンビン阻害薬媒介抗凝固の拮抗を必要とする患者に、凝固を回復させるのに有効な量で投与される。本明細書に説明される化合物および薬学的組成物はまた、ヘパリン結合性成長因子の活性を低減するため、ならびに／または第ＩＩａ因子および／もしくは第Ｘａ因子抗凝固剤のうちの１つ以上の組み合わせを完全にまたは部分的に拮抗するために使用することもできる。
【００２６】
したがって、本発明の化合物は、凝固阻害薬の抗凝固効果を完全にまたは部分的に拮抗する方法にて使用することができる。本発明の化合物はまた、例えば、血液中の抗凝固剤の濃度を決定するための診断キットなど、診断キットの一部として使用することもできる。
【００２７】
実施例は、ＤＡＰは、リバロキサバン、アピキサバン、未分画ヘパリン、フォンダパリヌクス、およびＬＭＷＨに直接結合して、抗凝固剤活性を拮抗したことを実証している。ＤＡＰは、ラットにおいて、生体内で経口リバロキサバンおよび皮下ＬＭＷＨ抗凝固をａＰＴＴによって測定される通り、ならびに皮下フォンダパリヌクスをＸａ活性によって測定される通り拮抗した。ＤＡＰ拮抗は、ラット尾切断分析において統計的に有意な失血の低減によって確認され、アピキサバン、ダビガトラン、エドキサバン、およびリバロキサバンに対して示された。ＤＡＰは、抗Ｘａキットを用いて測定される通り、体外でヒトの血液中において約１０：１のＤＡＰ：抗凝固剤の投与質量比にて、アピキサバンおよびリバロキサバンを完全に拮抗した。ＤＡＰは、体外でヒトの血液中において、アピキサバンおよびリバロキサバンの用量依存性拮抗を示した。採取したてのヒト全血中のリバロキサバン拮抗は、体外ａＰＴＴ測定によって確認された。ＤＡＰは、体外で最大１：１０００のアルガトロバン濃度で結合しなかった。ＤＡＰは、ａＰＴＴによって測定される通り、ラットにおいて体内で経口ダビガトランを拮抗した。アルガトロバン投与ラットは、ＤＡＰの２００ｘ静脈内投与後、抗凝固された状態で留まり、ＤＡＰが安全であること、および拮抗相互作用は、ヘパリンおよび新規の経口抗凝固剤に特異的であることを示している。要約すると、実施例は、ヘパリンおよびＬＭＷＨに対するＤＡＰの複合体形成と、ＤＡＰは、ヒト血液を用いた体外分析、抗ＸａおよびａＰＴＴ試験、ならびに／または体外ラット尾切断分析において試験された通り、ヘパリン、ヘパリン様化合物、ならびにダビガトラン、認可低分子量ヘパリン、またリバロキサバン（ＸＡＲＥＬＴＯ（登録商標））、フォンダパリヌクス（ＡＲＩＸＴＲＡ（登録商標））、エドキサバン（ＬＩＸＩＡＮＡ（登録商標））、およびアピキサバン（ＥＬＩＱＵＩＳ（登録商標））を含む他のトロンビン阻害薬に対する優れた拮抗剤として機能することとを実証する。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】ＤＡＰを、−２０℃から２００℃に加熱し（「１」または「第１の加熱」）、−２０℃に冷却し、再び２００℃に加熱（「２」または「第２の加熱」）する示差走査熱量測定（ＤＣＳ）によって測定した際の、熱流対温度のグラフである。
【図２】ＤＡＰ単独、ＵＦＨ単独、およびＤＡＰ−ＵＦＨの組み合わせの、動的光散乱法（ＤＬＳ）によって測定した際の寸法（直径ｎｍ）と比較した体積パーセントの関数としてのグラフである。
【図３】ＤＡＰ単独、リバロキサバン単独、ならびに１：１および１０：１のＤＡＰ：リバロキサバン比のＤＡＰ−リバロキサバンの、ＤＬＳによって測定した際の寸法（直径ｎｍ）と比較した体積（パーセント）の関数としてのグラフである。
【図４】ＤＡＰ単独、アピキサバン単独、ならびに１：１、１０：１、および１００：１の比で結合するＤＡＰ−アピキサバンの、ＤＬＳによって測定した際の寸法（直径ｎｍ）と比較した体積（パーセント）の関数としてのグラフである。
【図５】ＤＡＰ単独、フォンダパリヌクス単独、ならびに１：１、１０：１、および１００：１の比で結合するＤＡＰ−フォンダパリヌクスの、ＤＬＳによって測定した際の寸法（直径ｎｍ）と比較した体積（パーセント）の関数としてのグラフである。
【図６】ＤＡＰ単独、ＬＭＷＨ単独、ならびに１：１、１：１０、および１００：１の比で結合するＤＡＰ−ＬＭＷＨの、ＤＬＳによって測定した際の寸法（直径ｎｍ）と比較した体積（パーセント）の関数としてのグラフである。
【図７】ＤＡＰ単独、アルガトロバン単独、ならびに１：１、１０：１、１００：１、および１０００：１の比で結合するＤＡＰ−アルガトロバンの、ＤＬＳによって測定した際の寸法（直径ｎｍ）と比較した体積（パーセント）の関数としてのグラフである。
【図８】ラットへの１０ｍｇのベミパリン（ＬＭＷＨ）の皮下投与後５時間の間の、時間経過（時間）に伴って測定した活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ、秒）のグラフである。処置開始４時間後、ラットは、２００ｍｇ／ｋｇ（１００ｍｇ）ＤＡＰの静脈内投与を受けた。
【図９】ラットへＰＲＡＤＡＸＡ（登録商標）（ダビガトラン）を経口投与し、次いで２００および１００ｍｇ／ｋｇ（１００ｍｇおよび５０ｍｇ）ＤＡＰを静脈内投与した後、時間経過（時間）に伴って測定した活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ、秒）のグラフである。
【図１０】ラットへ未分画ヘパリン（ＵＦＨ）を皮下投与し、次いで２００ｍｇ／ｋｇ（１００ｍｇ）および４００ｍｇ／ｋｇ（２００ｍｇ）ＤＡＰを静脈内投与した後、時間経過（時間）に伴って測定した活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）のグラフである。
【図１１】ラットへ５ｍｇ／ｋｇのリバロキサバンを経口投与し、次いで５ｍｇ／ｋｇ（２ｍｇ）ＤＡＰを静脈内投与した後、時間経過（時間）に伴って測定したａＰＴＴ（秒）のグラフである。
【図１２】ラットへ５ｍｇ／ｋｇフォンダパリヌクスを皮下投与し、次いで２００ｍｇ／ｋｇＤＡＰを静脈内投与した後（すなわち、「拮抗」）、時間経過（拮抗後の分数）に伴って測定した活性フォンダパリヌクス濃度（μｇ／ｍＬ）のグラフである。
【図１３】ラットへ１５．５ｍｇ／ｋｇＰＲＡＤＡＸＡ（登録商標）（ダビガトラン）を経口投与し、次いで１００ｍｇ／ｋｇＤＡＰを静脈内投与した後（すなわち、「拮抗」）、時間経過（拮抗後の分数）に伴って測定したａＰＴＴ（秒）のグラフである。
【図１４】０、２、１０、２５、５０、および１００ｍｇの静脈内投与したＤＡＰに対するａＰＴＴ時間（秒）のグラフである。
【図１５】２ｍｇリバロキサバンと０ｍｇＤＡＰ、２ｍｇリバロキサバンと２．５ｍｇＤＡＰ、２ｍｇリバロキサバンと１２．５ｍｇＤＡＰ、または見せ掛けの拮抗と抗凝固剤投与（「見せ掛け」）を受けるラットにおいて、ラット尾切断出血分析にて３０分にわたり収集した血液（すなわち、累積失血）のグラフである。３匹の年齢を適合させたラットの群において、１２．５ｍｇのＤＡＰは、失血を見せ掛けの投与レベルまで低減させ、リバロキサバンのみを受容するラットと統計的有意差（＊ｐ＜０．０５）を生じさせた。
【図１６】１．２５ｍｇアピキサバンと０ｍｇＤＡＰ、１．２５ｍｇアピキサバンと５ｍｇＤＡＰ、１．２５ｍｇアピキサバンと１２．５ｍｇＤＡＰ、または見せ掛けの拮抗と抗凝固剤投与（「見せ掛け」）を受けるラットにおいて、ラット尾切断出血分析にて３０分にわたり収集した血液（すなわち、累積失血）のグラフである。３匹の年齢を適合させたラットの群において、５ｍｇおよび１２．５ｍｇのＤＡＰは、失血を見せ掛けの投与レベルまで低減させ、アピキサバンのみを受容するラットと統計的有意差（＊＊＊ｐ＜０．０１）を生じさせた。
【図１７】１．２５ｍｇエドキサバンと０ｍｇＤＡＰ、１．２５ｍｇエドキサバンと１２．５ｍｇＤＡＰ、または見せ掛けの拮抗と抗凝固剤投与（「見せ掛け」）を受けるラットにおいて、ラット尾切断出血分析にて３０分にわたり収集した血液（すなわち、累積失血）のグラフである。３匹の年齢を適合させたラットの群において、１２．５ｍｇのＤＡＰは、失血を見せ掛けの投与レベルまで低減させ、エドキサバンのみを受容するラットと統計的有意差（＊ｐ＜０．０５）を生じさせた。
【図１８】１５ｍｇダビガトランエテキシラートと０ｍｇＤＡＰ、１５ｍｇダビガトランエテキシラートと５ｍｇＤＡＰ、１５ｍｇダビガトランエテキシラートと１２．５ｍｇＤＡＰ、または見せ掛けの拮抗と抗凝固剤投与（「見せ掛け」）を受けるラットにおいて、ラット尾切断出血分析にて３０分にわたり収集した血液（すなわち、累積失血）のグラフである。３匹の年齢を適合させたラットの群において、１２．５ｍｇのＤＡＰは、失血を見せ掛けの投与レベルまで低減させ、ダビガトランエテキシラートのみを受容するラットと統計的有意差（＊＊＊ｐ＜０．０１）を生じさせた。
【図１９】５０マイクログラム／ｍｌＤＡＰ、０．２５マイクログラム／ｍｌリバロキサバン、５０マイクログラム／ｍｌＤＡＰ、および０．２５マイクログラム／ｍｌリバロキサバン、または生理食塩水で体外処理した採取したてのヒト血液において測定した、ａＰＴＴ（秒）のグラフである。
【図２０】２１８μｇ／Ｌのリバロキサバンを単独でまたは１，２５０ｍｇ／ＬのＤＡＰと組み合わせて、および４５９μｇ／Ｌのリバロキサバンを単独でまたは６，２５０μｇ／ＬのＤＡＰと組み合わせて用いて体外で処理したヒト血漿において抗第Ｘａ因子活性検査によって測定した、有効抗凝固剤濃度を示すグラフである。
【図２１】１５６μｇ／Ｌのアピキサバンを単独でまたは１，１５６μｇ／ＬのＤＡＰと組み合わせて、および３１３μｇ／Ｌのアピキサバンを単独でまたは３，１２５μｇ／ＬのＤＡＰと組み合わせて用いて体外で処理したヒト血漿において抗第Ｘａ因子活性検査によって測定した、有効抗凝固剤濃度を示すグラフである。
【図２２】２１８μｇ／Ｌのリバロキサバンを単独でまたは増大する量（１．２５、１２．５、１２５、および１，２５０μｇ／Ｌ）のＤＡＰと組み合わせて用いて体外で処理したヒト血漿において抗第Ｘａ因子活性検査によって測定した、有効抗凝固剤濃度を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
Ｉ．  抗凝固剤拮抗剤
新規の抗凝固性拮抗剤が開示される。本発明の化合物は、本明細書に説明される化合物と、その薬学的に許容される塩とを含む。
【００３０】
ヘパリン、ヘパリン分画、フォンダパリヌクス、および第Ｘａ因子または第ＩＩａ因子阻害薬（例えば、経口第Ｘａ因子または第ＩＩａ因子阻害薬）の阻害薬が開発された。関心の抗凝固剤拮抗剤の一般構造は、Ｒ−Ｚ−Ｒ’であり、式中、ＲおよびＲ’は、生理的ｐＨで正に荷電した薬剤であり、かつ同一または異なる分子であることができ、またＺは、疎水性環式または縮合環化合物である。
【００３１】
より具体的には、該阻害薬は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩であり、
【化１１】
2014534270.tif 000012
式中、
Ａは、置換もしくは非置換の芳香族もしくは非芳香族の炭素環式もしくは複素環式環、または直鎖部分であり、
ＬおよびＬ’は、同一であるかまたは異なり、かつリンカーであり、
ＸおよびＸ’は、同一であるかまたは異なり、かつ存在しないか、またはそれぞれ、リンカーＬをＭに、またリンカーＬ’をＭ’に結合させる官能基であり、
ＭおよびＭ’は、同一であるかまたは異なり、かつ存在しないか、またはそれぞれ、ＸをＹに、またＸ’をＹ’に結合させるリンカーであり、
ＹおよびＹ’は、同一であるかまたは異なり、かつ１つ以上のカチオン原子もしくは基、または生理条件下でカチオン性になる１つ以上の基を含有する部分である。
【００３２】
化合物は、対称または非対称であることができ、すなわち、Ｌ、Ｌ’、Ｘ、Ｘ’、Ｍ、Ｍ’、Ｙ、またはＹ’のうちの１つ以上は、同一であるかまたは異なることができる。化合物は、キラルである（すなわち、１つ以上のキラル中心を含有する）、またはアキラルであることができる。
【００３３】
幾つかの実施形態では、Ａは複素環式部分である。他の実施形態では、Ａは複素環式部分であり、またＬおよびＬ’は置換または非置換アルキレン鎖である。また他の実施形態では、Ａは複素環式部分であり、ＬおよびＬ’は置換または非置換アルキレン鎖であり、またＸおよびＸ’は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−である。また他の実施形態では、Ａは複素環式部分であり、ＬおよびＬ’は置換または非置換アルキレン鎖であり、ＸおよびＸ’は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、またＭおよびＭ’は置換アルキレン鎖である。本明細書で使用する時、アルキレン鎖は、Ｃ1〜Ｃ10、好ましくはＣ3〜Ｃ6の長さである二価アルキレン（ａｌｋｅｌｅｎｅ）部分であり、置換であってもよく、または非置換であってもよい。例示的置換基としては、アルキル、ヒドロキシル、ヒドロキシルアルキル、アミノ、アミノアルキル、アルコキシ、アルキルアルコキシが挙げられる。本明細書で使用する時、用語「アルキル」は、Ｃ1〜Ｃ10、好ましくはＣ1〜Ｃ6の直鎖または分枝炭化水素である。また他の実施形態では、Ａは複素環式部分であり、ＬおよびＬ’は置換または非置換アルキレン鎖であり、Ｘは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ＭおよびＭ’は置換アルキレン鎖であり、またＹおよびＹ’はグアニジン部分である。
【００３４】
幾つかの実施形態では、Ａは、ピペラジンまたはジケトピペラジンなどの非芳香族の複素環式環である。他の実施形態では、Ａは、例えば、直鎖ジアミン、または存在する場合に、ＸおよびＸ’またはＹおよびＹ’に対する結合を形成することができる反応性官能基を含有する他の直鎖部分などの、直鎖部分である。幾つかの実施形態では、リンカーＬおよびＬ’は、例えば、ピペラジン内の２つの窒素原子など、環Ａ内のヘテロ原子に結合される。他の実施形態では、リンカーＬおよびＬ’は、例えば、炭素など、環内のヘテロ原子以外の原子に結合される。特定の実施形態では、Ａは、１，４または２，５二置換ピペラジン環である。幾つかの実施形態では、ＬおよびＬ’ならびに／またはＭおよびＭ’は、−（ＣＨ2）ｎ−などの置換または非置換アルキレン鎖であり、式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜６、例えば、１〜３の整数である。特定の実施形態では、ｎは３である。幾つかの実施形態では、Ｌおよび／またはＭは存在しない。
【００３５】
ＸおよびＸ’は、リンカーＬおよびＬ’をＹおよびＹ’に結合させる官能基である。例示的官能基としては、エステル、アミド、炭酸塩、およびケトンが挙げられるがこれらに限定されない。特定の実施形態では、ＸおよびＸ’は、アミド基などの単純加水分解に耐性のある官能基である。
【００３６】
ＹおよびＹ’は、カチオン性の、または生理条件下でカチオン性になる１つ以上の原子または基を含有する部分である。例としては、アミンおよびグアニジン部分、ならびに例えば、アルキルトリフェニルホスホニウム、テトラフェニルホスホニウム、テトラフェニルアルソニウム、トリベンジルアンモニウム、およびホスホニウム部分などのリン含有部分が挙げられる。追加のカチオン性部分としては、オリゴリジンまたはポリリジン、オリゴアルギニンまたはポリアルギニン、Ｎ−アルキル化ポリエチレンイミン、および同類のものなどのカチオン性オリゴマーおよびポリマーが挙げられる。他のカチオン性部分としては、Ｋｏｌｏｍｅｉｔｓｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．，Ｖｏｌ．４４，Ｎｏ．３３，５７９５−５７９８（２００３）に説明されるような、１〜３のカルビミノ（ｃａｒｂｉｍｉｎｏ）、スルフィミノ（ｓｕｌｆｉｍｉｎｏ）、またはホスフィニミノ（ｐｈｏｓｐｈｉｎｉｍｉｎｏ）単位を含有する非局在化親油性カチオンが挙げられる。
【００３７】
幾つかの実施形態では、化合物は、アミノ酸側鎖が１つ以上の正に荷電した原子、または生理条件下で正に荷電する原子を含有する、ピペラジン誘導体である。例としては、ジアルギニンピペラジンが挙げられる。正に荷電したまたは生理条件下で正に荷電する他のアミノ酸が、アルギニンに置換されることができる。
【００３８】
「芳香族」とは、本明細書で使用する時、所望により置換された、５〜１２員、好ましくは５、６、および７員の芳香族、複素環式、縮合芳香族、縮合複素環式、二芳香族、または二複素環式環系を指す。広範に定義すると、「Ａｒ」は、本明細書で使用する時、例えば、ベンゼン、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、トリアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、およびピリミジンなどの０〜４個のヘテロ原子を含むことができる５、６、および７員の単環芳香族基を含む。これらの環構造内にヘテロ原子を有するアリール基は、「アリール複素環」または複素芳香族」と称される場合もある。芳香族環は、１つ以上の環位置にて、例えば、ハロゲン、アジド、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホナート、ホスフィナート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、スルホンアミド、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族もしくは複素芳香族部分、−−ＣＦ3、−−ＣＮ、または同類のものなどの上述のような置換基と置換されることができる。用語「Ａｒ」はまた、２つ以上の炭素が２つの隣接する環に共通であり（すなわち、「縮合環」）、環のうちの少なくとも１つが芳香族であり、例えば、他の環式環または環が、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、および／または複素環であることができる、２つ以上の環式環を有する多環式環系を含む。複素環式環の例としては、ベンゾイミダソリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフラニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾキサゾリニル、ベンズチアゾリル、ベンズトリアゾリル、ベンズテトラゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンズイミダゾリニル、カルバゾリル、４ａＨカルバゾリル、カルボリニル、クロマニル、クロメニル、シンノリニル、デカヒドロキノリニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５，２−ジチアジニル、ジヒドロフロ［２，３ｂ］テトラヒドロフラン、フラニル、フラザニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリル、１Ｈ−インダゾリル、インドレニル、インドリニル、インドリジニル、インドリル、３Ｈ−インドリル、イサチノイル、イソベンゾフラニル、イソクロマニル、イソインダゾリル、イソインドリニル、イソインドリル、イソキノリニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、メチレンジオキシフェニル、モルホリニル、ナフチリジニル、オクタヒドロイソキノリニル、オキサジアゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、オキサゾリジニル、オキサゾリル、オキシインドリル、ピリミジニル、フェナンスリジニル（ｐｈｅｎａｎｔｈｒｉｄｉｎｙｌ）、フェナンスロリニル（ｐｈｅｎａｎｔｈｒｏｌｉｎｙｌ）、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサチニル、フェノキサジニル、フタラジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリドニル、４−ピペリドニル、ピペロニル、プテリジニル、プリニル、ピラニル、ピラ��ニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリドオキサゾール、ピリドイミダゾール、ピリドチアゾール、ピリジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、４Ｈ−キノリジニル、キノキサリニル、キヌクリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラゾリル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，２，５−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、チアンスレニル、チアゾリル、チエニル、チエノチアゾリル、チエノオキサゾリル、チエノイミダゾリル、チオフェニル、およびキサンテニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３９】
「複素環」または「複素環式」は、本明細書で使用する時、炭素と、非過酸化物酸素、硫黄、およびＮ（Ｒ）であって、式中、Ｒは不在であるか、またはＨ、Ｏ、（Ｃ1-4）アルキル、フェニル、またはベンジルであるＮ（Ｒ）からなる群からそれぞれ選択される１〜４個のヘテロ原子とからなり、所望により１〜３個の二重結合を含有し、また所望により１つ以上の置換基で置換される、３〜１０個の環原子、また好ましくは５〜６個の環原子を含有する一環式または二環式環の環炭素または環窒素を介して結合される環式ラジカルを指す。複素環式環の例としては、ベンゾイミダソリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフラニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾキサゾリニル、ベンズチアゾリル、ベンズトリアゾリル、ベンズテトラゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンズイミダゾリニル、カルバゾリル、４ａＨ−カルバゾリル、カルボリニル、クロマニル、クロメニル、シンノリニル、デカヒドロキノリニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５，２−ジチアジニル、ジヒドロフロ［２，３−ｂ］テトラヒドロフラン、フラニル、フラザニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリル、１Ｈ−インダゾリル、インドレニル、インドリニル、インドリジニル、インドリル、３Ｈ−インドリル、イサチノイル、イソベンゾフラニル、イソクロマニル、イソインダゾリル、イソインドリニル、イソインドリル、イソキノリニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、メチレンジオキシフェニル、モルホリニル、ナフチリジニル、オクタヒドロイソキノリニル、オキサジアゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、オキサゾリジニル、オキサゾリル、オキシインドリル、ピリミジニル、フェナンスリジニル（ｐｈｅｎａｎｔｈｒｉｄｉｎｙｌ）、フェナンスロリニル（ｐｈｅｎａｎｔｈｒｏｌｉｎｙｌ）、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサチニル、フェノキサジニル、フタラジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリドニル、４−ピペリドニル、ピペロニル、プテリジニル、プリニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリドオキサゾール、ピリドイミダゾール、ピリドチアゾール、ピリジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、４Ｈ−キノリジニル、キノキサリニル、キヌクリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラゾリル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，２，５−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、チアンスレニル、チアゾリル、チエニル、チエノチアゾリル、チエノオキサゾリル、チエノイミダゾリル、チオフェニル、およびキサンテニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４０】
本発明の別の実施形態では、阻害薬は、式ＩＩによって表される化合物またはその薬学的に許容される塩であり、
【化１２】
2014534270.tif 000013
式中、Ｌ、Ｌ′、Ｍ、Ｍ′、Ｙ、およびＹ′のそれぞれは、上述の通りである。
【００４１】
本発明の別の実施形態では、阻害薬は、式ＩＩＩによって表される化合物またはその薬学的に許容される塩であり、
【化１３】
2014534270.tif 000014
式中、Ｌ、Ｌ′、Ｍ、Ｍ′、Ｙ、およびＹ′は、上述の通りである。
【００４２】
本発明のまた別の実施形態では、阻害薬は、式（ＩＶ）によって表される化合物またはその薬学的に許容される塩であり、
【化１４】
2014534270.tif 000015
式中、ＹおよびＹ′は上述の通りであり、ｎは３〜５であり、ｍは３〜６であり、またＧは、−ＮＨ2およびＯＨから選択される。最も好ましくは、Ｇはアミノである。
【００４３】
本発明のまた別の実施形態では、阻害薬は、式ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶのうちの任意のものによって表される化合物であり、またＹおよびＹ′は独立して、
【化１５】
2014534270.tif 000016
および−ＮＨ2からなる群から選択される。
【００４４】
最も好ましくは、Ｇは、−ＮＨ2であり、またＹおよびＹ′は、
【化１６】
2014534270.tif 000017
である。
【００４５】
したがって、一実施形態では、本発明の化合物は、式Ｖの化合物などのジ−アルギニンピペラジン（「ＤＡＰ」）、または式ＶＩの関連する化合物、またはどちらかの化合物の薬学的に許容される塩である：
【化１７】
2014534270.tif 000018
２−アミノ−５−グアニジノ−ペンタン酸（３−｛４−［３−（２−アミノ−５−グアニジノ−ペンタノイルアミノ）−プロピル］−ピペラジン（ｐｉｐｅｒａｚｉｎ）−１−イル｝−プロピル）−アミド、または
【化１８】
2014534270.tif 000019
２−アミノ−５−グアニジノ−ペンタン酸｛５−［（２−アミノ−５−グアニジノ−ペンタノイルアミノ）−メチル］−ピペラジン（ｐｉｐｅｒａｚｉｎ）−２−イルメチル｝−アミド。
【００４６】
特定の実施形態では、式Ｖの化合物は、式ＶＩＩ：
【化１９】
2014534270.tif 000020
に示されるように立体異性体である。
【００４７】
別の特定の実施形態では、式ＶＩの化合物は、式ＶＩＩＩ：
【化２０】
2014534270.tif 000021
に示されるように立体異性体である。
【００４８】
化合物の「薬学的に許容される塩」という語句は、本明細書で使用する時、薬学的に許容され、また親化合物の所望の薬理学的活性を所有する塩を意味する。薬学的に許容される塩としては、本発明の化合物中に存在する酸性基または塩基性基の塩が挙げられる。薬学的に許容される酸付加塩としては、塩酸塩、水素酸塩、ヨウ化水素塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩（ｇｌｕｃａｒｏｎａｔｅ）、糖酸塩、蟻酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびパモ酸塩（すなわち、１，１′−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート））が挙げられるが、これらに限定されない。好適な塩基塩としては、アルミニウム塩、カルシウム塩、リチウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、亜鉛塩、およびジエタノールアミン塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４９】
本発明の化合物は、凝固阻害薬の活性を阻害する。本発明の化合物の作用の１つの提案されるメカニズムは、負に荷電している分子（例えば、本明細書に説明されるフォンダパリヌクス、未分画ヘパリン、ＬＭＷＨ）の結合を通じたものである。他の凝固阻害薬（例えば、本明細書に説明されるダビガトラン、アピキサバン、エドキサバン、およびリバロキサバンなどの第ＩＩａ因子および第Ｘａ因子阻害薬）も同様に負に荷電し、したがって、本発明の化合物は、これらの凝固阻害薬をそれらの負に荷電している部分の中和を通じて阻害する可能性がある。
【００５０】
本発明の化合物の作用の別の提案されるメカニズムは、凝固阻害薬との水素結合および疎水性相互作用などの弱い物理的相互作用を通じたものである。経口第ＩＩａ因子およびＸａ阻害薬は、本発明の化合物、例えば、ＤＡＰとの疎水性会合を生じさせることができる、疎水性部分を有する。
【００５１】
したがって、幾つかの実施形態では、本発明の化合物は、例えば、縮合環を含む脂肪族もしくは芳香族の環のうちの１つまたはその組み合わせといった、少なくとも１つの環式疎水性部分を含有する。他の実施形態では、本発明の化合物は、少なくとも１つの環式環式疎水性部分と、少なくとも２つの生理的ｐＨにて正に荷電しているまたは部分的に正に荷電している部分とを含有する。
【００５２】
本発明の幾つかの実施形態では、式ＶおよびＶＩの化合物（または式ＶＩＩおよびＶＩＩＩの化合物）の一方または双方のアルギニンは、１つ以上の正に荷電したアミノ酸、それらの誘導体、または同様の荷電した化合物、例えば、リシン、ヒスチジン、オルチニンなどによって置換される。式ＶおよびＶＩの化合物中のアルギニン、またはかかるアルギニンに置換される正に荷電したアミノ酸は、自然発生的アミノ酸（すなわち、Ｌ−アミノ酸）、それらの光学異性体（すなわち、Ｄ−アミノ酸）、またはそれらのラセミ混合物もしくは他の混合物であることができる。「光学異性体」とは、互いに重ね合わせることができない鏡像である化合物の２つの立体異性体を指す。
【００５３】
本明細書で使用する立体化学的定義および慣例は概して、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ  （１９８４）  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；およびＥｌｉｅｌ，Ｅ．  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  （１９９４）  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．に従う。多くの有機化合物は、光学活性された形態で存在し、すなわち、平面偏光面を回転させる能力を有する。光学活性された化合物を説明する際、接頭辞ＤおよびＬまたはＲおよびＳが、そのキラル中心（複数可）の周囲の分子の絶対配置を示すために使用される。接頭辞ＤおよびＬまたは（＋）および（−）は、化合物による平面偏光の回転の兆候を指定するために採用され、（−）またはＬは、該化合物が左旋性であることを意味する。接頭辞（＋）またはＤの付与された化合物は、右旋性である。所与の化学構造に関して、これらの立体異性体は、互いに鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体はまた、光学異性体と称されることもあり、かかる異性体の混合物は、光学異性体混合物と呼ばれることが多い。光学異性体の５０：５０混合物は、ラセミ混合物またはラセミ体と称され、それは、化学的反応またはプロセス中に立体選択または立体選択特異性が全く存在しなかった場所に生じることができる。用語「ラセミ混合物」および「ラセミ体」は、光学的活性を欠く２つの光学異性体種の等モル混合物を指す。
【００５４】
本発明の他の実施形態では、本発明の化合物は、例えば、縮合環を含む脂肪族および芳香族の環のうちの１つまたはその組み合わせといった、少なくとも１つの環式疎水性部分を含有する。関心の化合物は、少なくとも１つの環式疎水性部分と、少なくとも２つの生理的ｐＨにて正に荷電している、または部分的に荷電している部分とを含有する。
【００５５】
ペプチド系治療薬の設計には、かかる薬剤は対象に一度投与されると不要な、またしばしば深刻な免疫反応を引き起こすことがあるため、特別の配慮が払われるべきである。本発明の化合物は、免疫原性の問題を最小限にするのに十分に低い分子量のものであるように設計される。他の実施形態では、免疫反応の活性化を回避するために、化合物は、その分子量が、例えば、約５００ダルトンといった、１０００ダルトン未満または約１０００ダルトンなど、約５０００ダルトン未満であるように設計される。他の実施形態では、化合物の分子量は、約５１２ダルトンである。
【００５６】
本発明の化合物が、結合しない、または別の方法で心臓の導電率に寄与するカリウムイオンチャネル、ＥＲＧの機能に干渉しないことが好ましい。このカリウムチャネルの阻害は、致命的となる可能性のあるＱＴ延長症候群につながる可能性があり、そうでなければヒトＥＲＧ結合を示した成功的薬剤候補もある。
【００５７】
それに加えて、本発明の化合物は、膜結合型チトクロムｐ４５０（ＣＹＰ）酵素を阻害しない、またはそれに対する基質として働くことが望ましい。ＣＹＰは、薬剤代謝に関与する主要な酵素であり、ＣＹＰ活性の変調は、対象に投与される他の薬剤のクリアランスおよび代謝を干渉し、不要な薬剤相互作用を引き起こすこともある。
【００５８】
また好ましくは、本発明の化合物は、著しい体外血漿タンパク質結合（例えば、アルブミン結合）を示さない。本発明の化合物は、大部分は血漿タンパク質に結合しないため、短い活性半減期を示し、累積に基づく過量服用の危険性を最小にする。
【００５９】
ＩＩ．  抗凝固性拮抗剤の合成
本明細書に説明される化合物およびその薬学的に許容される塩は、市販の化合物、既知の化合物、または既知の方法によって調製される化合物から開始する種々の方法を用いて調製される。本明細書に説明される化合物（式Ｖの化合物、ジ−アルギニンピペラジン、「ＤＡＰ」）のうちの１つに対する例示的合成経路は、下記のスキームに含まれる。下記のスキームはまた、適切な立体異性体開始化合物を選択することによって、式ＶＩＩのＤＡＰ立体異性体化合物にも適応可能である。本発明の他の化合物は、類似の合成スキームに従って合成されることができる。本明細書に示されるステップの順序は、標的分子内に官能性を提供するために変更されてもよいことが、当業者によって理解される。同様に、種々の保護および脱保護ステップが合成に要求される場合があることも、当業者によって理解される。保護および脱保護の必要性、ならびに適切な保護基の選択は、例えば、参照によりその全体を本明細書に援用される、Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９９１）に見出される。
【００６０】
本発明の幾つかの実施形態では、保護基は、三級ブチルオキシカルボニル基（Ｂｏｃ）である。本発明の他の実施形態では、保護基は、２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル基（Ｐｂｆ）である。別の実施形態では、アミノ酸保護基は、２，２，５，７，８−ペンタメチル−クロマン−６−スルホニル（ＰＭＣ）であってよいが、これに限定されない。
【００６１】
保護基は、種々の経路によって除去されてよい。保護基の除去は、例えば、保護された化合物をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、水性ＨＣｌで処理すること、または酢酸中で加熱することを含む。保護基の除去、例えば、酸性条件下での保護基の除去は、ペプチド鎖上の官能基をアルキル化することが可能なカチオン性種の産生をもたらすことができるため、スカベンジャーは、自由な反応性種のうちの任意のものと反応するように脱保護ステップ中に添加されてもよい。スカベンジャーの例としては、水、アニソール誘導体、およびチオール誘導体が挙げられるがこれらに限定されない。したがって、一実施形態では、保護基の除去は、保護された化合物をＴＦＡとスカベンジャー（例えば、ＴＦＡと水）とで処理することを含む。
【００６２】
例えば、有機溶媒などの種々の溶媒が、合成のステップにおいて使用されてよい。適切な溶媒としては、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、塩化メチレン、トルエン、およびアセトンが挙げられるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態では、溶媒はＤＭＦである。
【００６３】
好適な酸結合剤が、合成のステップにおいて使用されてもよい。これらには、例えば、ピリジン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデス−７−エン（ＤＢＵ）、およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）などの有機塩基、ならびに例えば、水酸化ナトリウム、炭酸カリウム、および炭酸ナトリウムなどの無機塩基が挙げられるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態では、酸結合剤はＤＩＥＡである。
【００６４】
合成は、ペプチドカップリング試薬を含んでもよい。ペプチドカップリング試薬としては、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、活性Ｎ−ヒドロキシスクシンアミド（ＯＳｕ）エステル、Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスファート（ＨＢＴＵ）、およびそれらの組み合わせが挙げることができるが、これらに限定されない。一実施形態では、ペプチドカップリング試薬はＨＢＴＵである。別の実施形態では、ペプチドカップリング試薬はＥＤＣ／ＨＯＢｔである。また別の実施形態では、ペプチドカップリング試薬は活性ＯＳｕエステルである。
【００６５】
それに加えて、合成は、例えば、カラムクロマトグラフィーによって、粗生成物が精製されるステップを含んでもよい。各ステップまたは一連のステップの所望の生成物は、当該技術分野において一般的である技術によって、所望の度合いの均一性に分離および／または精製されてもよい。典型的には、かかる分離は、多相抽出、溶媒もしくは溶媒混合物からの結晶化、蒸留、凝華、またはクロマトグラフィーを含む。クロマトグラフィーは、例えば、逆位相および順相、寸法排除、イオン交換、高、中、および低圧液体クロマトグラフィー方法および装置、小規模分析、擬似移動床（ＳＭＢ）および分取薄層または厚層クロマトグラフィー、ならびに小規模薄層およびフラッシュクロマトグラフィーの技術を含む、任意の数の方法を含むことができる。
【００６６】
１つのスキームでは、式Ｖ
【化２１】
2014534270.tif 000022
の化合物（ＤＡＰ）は、余剰当量（例えば、少なくとも約２当量）の化合物１
【化２２】
2014534270.tif 000023
を、１当量の化合物２
【化２３】
2014534270.tif 000024
と、ペプチドカップリング試薬の存在下で反応させて、化合物３
【化２４】
2014534270.tif 000025
を得ることによって合成され、式中、Ｐ１は保護基であり、Ｐ２は保護基または水素である。
【００６７】
一実施形態では、ペプチドカップリング試薬は、ＨＢＴＵ、ＥＤＣ／ＨＯＢｔ、または活性ＯＳｕエステルである。一実施形態では、保護基Ｐ１はＢｏｃである。別の実施形態では、保護基Ｐ２はＰｂｆである。異なる実施形態では、保護基Ｐ１はＢｏｃであり、Ｐ２は水素である。
【００６８】
続いて、３を精製する。この精製は、当該技術分野において既知の種々のカラムクロマトグラフィー法を含んでもよい。
【００６９】
３の保護基は、式Ｖの化合物を得るために当該技術分野において既知の種々の方法によって除去されてよい。脱保護は、例えば、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）と水、ＴＦＡと水もしくは水性ＨＣｌを含むがそれに限定されない別のスカベンジャーとを用いた、または酢酸中で加熱することによる保護基の除去によって、得ることができる。
【００７０】
化合物は、例えば、塩緩衝液とのイオン交換クロマトグラフィー、または緩衝液としてトリフルオロ酢酸もしくは酢酸を用いた分取ＨＰＬＣなどのカラムクロマトグラフィーを用いて、更に精製されてもよい。
【００７１】
より具体的なスキームでは、カップリングは、Ｐ１がＢｏｃでありＰ２が水素である化合物１（Ｂｏｃ−Ａｒｇ−ＯＨＨＣｌとして下記に示す）を、下記に示す化合物２と反応させることを含んだ。
【化２５】
2014534270.tif 000026
得られた粗生成物は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって９５％超の純度であった。
【００７２】
続いて、脱保護ステップを、下記に示す通りに実行した。
【化２６】
2014534270.tif 000027
【００７３】
脱保護された生成物を、１％酢酸緩衝液を用いた分取ＨＰＬＣによって精製した。９８％以上の生成物純度が観察された。残留ＴＦＡを、低量のＤＯＷＥＸ樹脂によって除去した。ＤＡＰ（式Ｖの化合物）の分子量は５１２．４であり、また上述のスキームに従って合成された化合物は、質量分光測定法によって次の一次ピークを示した。［Ｍ＋Ｈ］+＝５１３．４。
【００７４】
ＩＩＩ．  薬学的組成物
本明細書に説明される化合物を含む薬学的組成物が提供される。かかる組成物は、本発明の化合物に加えて、薬学的に許容される担体または賦形剤を含有してもよい。用語「薬学的に許容される」とは、活性成分の物理的および化学的特徴と互換性があり、活性物の生物学的活性の有効性と干渉しない非毒性材料を意味する。組成物は、種々の希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤、および当該技術分野において周知の他の材料を含有してもよい。担体の特徴は、投与の経路に依存するものであり、また当該技術分野において一般的に周知である。
【００７５】
本発明の薬学的組成物は、組成物が、例えば、経口摂取、直腸投与などの消化管を通じて吸収される組成物の投与である経腸投与用に適合されてもよい。他の実施形態では、本発明の薬学的組成物は、組成物が、例えば、静脈内、皮下、皮膚、鼻、肺、膣、舌下経路などの、消化管以外の経路を介して導入される組成物の投与である非経口投与用に適合されてもよい。
【００７６】
好適な薬学的組成物、例えば、経口投与用の組成物は、例えば、参照により本明細書に援用される、担体、材料（例えば、コーティング材料）、錠剤およびカプセルを調製するための設備およびプロセス、ならびに錠剤、カプセル、および顆粒の遅延放出剤形に関する情報を提供する“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍ  ｔａｂｌｅｔｓ」，ｅｄｓ．Ｌｉｂｅｒｍａｎ  ｅｔ．  ａｌ．  （Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，１９８９）、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ  −  Ｔｈｅ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２０００、および“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ”，６th  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｎｓｅｌ  ｅｔ．ａｌ．，（Ｍｅｄｉａ，ＰＡ：  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，１９９５）などの参考文献に説明されるように調製されてもよい。
【００７７】
好適なコーティング材料の例としては、例えば、セルロースアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、およびヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートなどのセルロースポリマー、ポリビニルアセテートフタレート、アクリル酸ポリマーおよびコポリマー、ならびに、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）（Ｒｏｔｈ  Ｐｈａｒｍａ、Ｗｅｓｔｅｒｓｔａｄｔ、ドイツ）の商品名で市販されているメタクリル樹脂、ゼイン、セラック、ならびに多糖類が挙げられるが、これらに限定されない。それに加えて、コーティング材料は、可塑剤、顔料、着色剤、流動促進剤、安定剤、孔形成剤、および界面活性剤などの従来の担体を含有してもよい。
【００７８】
薬剤を含有する錠剤、ビーズ、顆粒、または粒子中に存在する追加の薬学的に許容される賦形剤としては、希釈剤、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、着色剤、安定剤、および界面活性剤が挙げられるがこれらに限定されない。
【００７９】
希釈剤は、「充填剤」と称されることもあり、典型的には、錠剤の圧縮またはビーズおよび顆粒の形成のために実用的寸法が提供されるように、固体剤形の嵩を増大させるために必要である。好適な希釈剤としては、ジカルシウムホスファートジヒドラート、硫酸カルシウム、乳糖、ショ糖、マンニトール、ソルビトール、セルロース、微結晶性セルロース、カオリン、塩化ナトリウム、乾燥澱粉、澱粉加水分解物、α化澱粉、二酸化シリコーン、酸化チタン、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、および粉糖が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８０】
結合剤は、固体投与製剤に粘着性質を付与し、したがって、錠剤またはビーズまたは顆粒が、剤形の形成後も無傷であることを確実にするために使用される。好適な結合材料としては、澱粉、α化澱粉、ゼラチン、糖（ショ糖、ブドウ糖、Ｄ形グルコース、乳糖、およびソルビトールを含む）、ポリエチレングリコール、蝋、天然および合成ゴム、例えば、アカシア、トラガカント、アルギン酸ナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロースを含むセルロース、およびヴィーガム（Ｖｅｅｇｕｍ）、ならびに合成ポリマー、例えば、アクリル酸およびメタクリル酸コポリマー、メタクリル酸コポリマー、メチルメタクリレートコポリマー、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、ポリアクリル酸／ポリメタクリル酸、およびポリビニルピロリドンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８１】
潤滑剤は、錠剤製造を促進するために使用される。好適な潤滑剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセロール、ポリエチレングリコール、タルク、および鉱油が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８２】
崩壊剤は、投与後の剤形分解または「崩壊」を促進するために使用され、概して、澱粉、澱粉グリコール酸ナトリウム、カルボキシメチル澱粉ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、α化澱粉、粘土、セルロース、アルギニン、ゴム、または例えば、架橋ＰＶＰ（ＧＡＦ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ製Ｐｏｌｙｐｌａｓｄｏｎｅ  ＸＬ）などの架橋ポリマーを含むが、これらに限定されない。
【００８３】
安定剤は、例としては、酸化反応物が挙げられる、薬剤分解反応を阻害または遅延させるために使用される。
【００８４】
界面活性剤は、アニオン性、カチオン性、両性、または非イオン性の界面活性剤であってよい。好適なアニオン性界面活性剤としては、カルボン酸イオン、スルホン酸イオン、および硫酸イオンを含有するものが挙げられるが、これらに限定されない。アニオン性界面活性剤の例としては、例えば、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムなどの、長鎖スルホン酸アルキルおよびスルホン酸アルキルアリールのナトリウム、カリウム、アンモニウム、例えば、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムなどのジアルキルナトリウムスルホスクシネート、例えば、ナトリウムビス−（２−（エチルチオキシル）−スルホスクシネートなどのジアルキルナトリウムスルホスクシネート、ならびに例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなどの硫酸アルキルが挙げられる。カチオン性界面活性剤としては、塩化ベンズアルコニウム、塩化ベンゼトニウム、臭化セトリモニウム、ステアリルジメチルベンジルアンモニウムクロライド、ポリオキシエチレン、およびココナッツアミンなどの四級アンモニウム化合物が挙げられるが、これらに限定されない。非イオン性界面活性剤の例としては、エチレングリコールモノステアレート、プロピレングリコールミリステート、グリセリルモノステアレート、グリセリルステアレート、ポリグリセリル−４−オレエート、ソルビタンアシレート、スクロースアシレート、ＰＥＧ−１５０ラウレート、ＰＥＧ−４００モノラウレート、ポリオキシエチレンモノラウレート、ポリソルベート、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル、ＰＥＧ−１０００セチルエーテル、ポリオキシエチレントリデシルエーテル、ポリプロピレングリコールブチルエーテル、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ（登録商標）４０１、ステアロイルモノイソプロパノールアミド、およびポリオキシエチレン水素化牛脂アミドが挙げられる。両性界面活性剤の例としては、ナトリウムＮ−ドデシル−β−アラニン、ナトリウムＮ−ラウリル−β−イミノジプロピオネート、ミリストアンホアセテート、ラウリルベタイン、およびラウリルスルホベタインが挙げられる。
【００８５】
本発明の薬学的組成物は、遅延性放出、持続性放出、拍動性放出、または他の改質された放出を提供するように設計されてもよい。
【００８６】
所望により、錠剤、ビーズ、顆粒、または粒子はまた、湿潤剤または乳化剤、染料、ｐＨ緩衝剤、および防腐剤などの少量の非毒性補助剤を含有してもよい。
【００８７】
生体付着性製剤もまた、摂取を促進するまたは放出を改質するために利用されてもよい。かかる製剤は、当該技術分野において既知である。例えば、参照により本明細書に援用される、Ｊａｃｏｂによる米国特許出願第２００６００４５８６５号を参照されたい。
【００８８】
鼻または肺投与を介した送達用に適合される薬学的組成物も、同様に有用であり得る。気道への治療薬の送達用のエアロゾールは、例えば、Ａｄｊｅｉ，Ａ．  ａｎｄ  Ｇａｒｒｅｎ，Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，７：  ５６５−５６９  （１９９０）、およびＺａｎｅｎ，Ｐ．  ａｎｄ  Ｌａｍｍ，Ｊ．−Ｗ．Ｊ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．，１１４：  １１１−１１５  （１９９５）に説明されている。呼気道とは、中咽頭および喉頭を含む上部気道、それに続く下部気道を含み、この下部気道には、気管支および細気管支への分岐点へと続く気管を含む。上部および下部気道は、誘導気道と称される。終末細気管支は次に、呼吸細気管支へと別れ、それは次に、最終的な呼吸領域、肺胞、または肺深部へとつながる。Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，６：２７３−３１３（１９９０）内のＧｏｎｄａ，Ｉ．″Ａｅｒｏｓｏｌｓ  ｆｏｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｄ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｇｅｎｔｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｔｒａｃｔ″。肺深部または肺胞は、全身的な薬剤送達のための吸入治療用エアロゾールの主要な標的である。
【００８９】
吸入によって投与される薬剤は、液体エアロゾール製剤としてもたらされてもよい。
【００９０】
注射用組成物（例えば、静脈内組成物）に関して、担体は、減菌蒸留水、生理食塩水、緩衝生理食塩水、または注射用の別の薬学的に許容される賦形剤である。添加剤としては、ｐＨを調節して、溶解性または摂取を変更するための防腐剤および酸または塩基を挙げることができる。
【００９１】
薬学的組成物が式ＶのＤＡＰ化合物（または式ＶＩＩのその立体異性体）を含み、該組成物が注射における非経口投与用に適合される一実施形態では、化合物は、適切な張性および重量モル濃度改質剤（例えば、リン酸塩緩衝生理食塩水）とともに水中に溶解される。ＤＡＰは、１００ｍｇ／ｍｌ超にて水溶性である。一実施形態では、ＤＡＰは、静脈内投与用の無菌液として適合される。一態様では、ＤＡＰが静脈内投与用に適合される薬学的組成物の重量モル濃度は、塩化ナトリウムを用いて２９０ｍＯｓｍ／Ｌに適合され、またｐＨは、水酸化ナトリウムを用いて７．４に適合される。好ましくは、薬学的組成物は、ゆっくりと押すことによって静脈内ボーラスとして投与される。
【００９２】
ＩＶ．  使用の方法
本発明は、凝固阻害薬の抗凝固効果を完全または部分的に拮抗する方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の本発明の化合物（例えば、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、もしくはＶＩＩＩの化合物）またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。本発明はまた、それを必要とする対象において凝固を促進する方法であって、対象が凝固阻害薬を受けており、該対象に治療的に有効な量の本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。それに加えて、本発明は、凝固阻害薬を中和または阻害する方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００９３】
本発明において、凝固阻害薬（本明細書では抗凝固剤としても称される）は、凝固プロセスを阻害する分子である。例示的凝固阻害薬としては、抗トロンビン活性剤（例えば、未分画ヘパリンおよびＬＭＷＨ）、第ＩＩａ因子阻害薬、および第Ｘａ因子阻害薬が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９４】
ヘパリン：ヘパリンは、体内で抗トロンビン余因子として作用し、血管内の血餅形成を予防する、自然発生的なムコ多糖類である。該物質は、好塩基球および肥満細胞によって産生され、それは肺毛細血管の周囲の結合組織、特に肺および肝臓内に多く見出される。ナトリウム塩の形態では、ヘパリンは、抗凝固剤として治療的に使用される。
【００９５】
低分子量ヘパリン：低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）は、アルデパリン（ＮＯＲＭＩＦＬＯ（登録商標））の製造に使用される過酸化水素を用いた酸化脱重合、セルトパリン（ｃｅｒｔｏｐａｒｉｎ）（ＳＡＮＤＯＰＡＲＩＮ（登録商標））の製造に使用される亜硝酸イソアミルを用いた脱アミノ開裂、エノキサパリン（ＬＯＶＥＮＯＸ（登録商標）およびＣＬＥＸＡＮＥ（登録商標））の製造に使用されるヘパリンのベンジルエステルのアルカリ性β脱離的開裂、パルナパリン（ＦＬＵＸＵＭ（登録商標））の製造に使用されるＣｕ2+および過酸化水素を用いた酸化脱重合、チンザパリン（ＩＮＮＯＨＥＰ（登録商標）およびＬＯＧＩＰＡＲＩＮ（登録商標））の製造に使用されるヘパリナーゼ酵素によるβ脱離的開裂、ダルテパリン（ＦＲＡＧＭＩＮ（登録商標））、レビパリン（ＣＬＩＶＡＲＩＮ（登録商標））、およびナドロパリン（ＦＲＡＸＩＰＡＲＩＮ（登録商標））の製造に使用される亜硝酸を用いた脱アミノ開裂を含む、種々の脱重合の方法を用いてヘパリンから作製され、産生されるオリゴ糖の還元末端における非天然アンヒドロマンノース残基の形成をもたらす。これは次いで、好適な還元剤を用いて無水マンニトールに変換されることができる。化学的および酵素的の双方のβ−脱離は、非還元末端における非天然で不飽和のウロン酸残基（ＵＡ）の形成をもたらす。
【００９６】
幾つかのＬＭＷＨの抗凝固剤活性のまとめを、表１に表す。
【表１】
2014534270.tif 000028
Ｇｒａｙ  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ，  ９９：  ８０７-８１８  （２００８）から採用。
【００９７】
臨床的に、ＬＭＷＨ（約４．５ｋＤａの平均分子量）は、種々の様式でヘパリン（すなわち、「未分画ヘパリン」、約１５ｋＤａの平均分子量）と異なる。（ａ）ＬＭＷＨは、静脈血栓塞栓症の術後予防のために、より少ない頻度の皮下投薬を必要とする。（２）ＬＭＷＨは、静脈血栓塞栓症および不安定狭心症の治療を受けている患者において、ヘパリンに対して必要とされる静脈内注入の代わりに、一日に一度または二度の皮下注射を必要とする。（３）ＬＭＷＨは、ａＰＴＴ凝固パラメータのモニタリングを必要としない。（４）ＬＭＷＨは、出血のより低い危険性をもたらす。（５）ＬＭＷＨの長期にわたる使用は、骨粗しょう症のより低い危険性をもたらす。および（６）ＬＭＷＨは、ヘパリン誘発性血小板減少症（ヘパリン投与の潜在的副作用）のより低い危険性をもたらす。しかしながら、ヘパリンの抗凝固効果は、典型的には硫酸プロタミンによって回復可能であり、それに対してプロタミンのＬＭＷＨへの効果は限定されている。それに加えて、ＬＭＷＨは、ヘパリンと比較してトロンビン（第ＩＩａ因子）活性に対してより少ない効果を有し、一方でＬＭＷＨとヘパリンとの双方は、第Ｘａ因子活性に対して同様の効果を有する。
【００９８】
トロンビンおよび他の第ＩＩａ因子またはＸａ阻害薬：トロンビン（第ＩＩａ因子）および第Ｘａ因子の阻害薬としては、例えば、ダビガトラン（ＰＲＡＤＡＸＡ（登録商標））、リバロキサバン（ＸＡＲＥＬＴＯ（登録商標））、アピキサバン（ＥＬＩＱＵＩＳ（登録商標））、エドキサバン（ＬＩＸＩＡＮＡ（登録商標））、フォンダパリヌクス（ＡＲＩＸＴＲＡ（登録商標））、およびアルガトロバン（ＡＲＧＡＴＲＯＢＡＮ（登録商標））などの抗凝固剤が挙げられる。
【００９９】
経口抗凝固剤ＰＲＡＤＡＸＡ（登録商標）の化学名、ダビガトランエテキシラートメシレートは、直接トロンビン阻害薬であり、β−アラニン，Ｎ−［［２−［［［４−［［［（ヘキシルオキシ）カルボニル］アミノ］イミノメチル］フェニル］アミノ］メチル］−１−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−５−イル］カルボニル］−Ｎ−２−ピリジニル−，エチルエステル、メタンスルホン酸塩である。ダビガトランおよびそのアシルグルクロニドは、競合的な直接トロンビン阻害薬である。トロンビン（第ＩＩａ因子、セリンプロテアーゼ）は、凝固カスケード中のフィブリノーゲンのフィブリンへの変換を可能にするため、その阻害は、血栓の発症を予防する。
【０１００】
リバロキサバン、第Ｘａ因子阻害薬は、ＸＡＲＥＬＴＯ（登録商標）中の活性成分であり、化学名５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソ−４−モルホリニル）フェニル］−１，３−オキサゾリジン（ｏｘａｚｏｌｉｄｉｎ）−５−イル｝メチル）−２−チオフェンカルボキサミドを有する。リバロキサバンは、純粋な（Ｓ）光学異性体である。ＸＡＲＥＬＴＯ（登録商標）は、第Ｘａ因子の活性部位を選択的に遮断し、また活性のために余因子（例えば、抗トロンビンＩＩＩなど）を必要としない経口で生物学的に利用可能な第Ｘａ因子阻害薬である。
【０１０１】
アピキサバンまたはＥＬＩＱＵＩＳ（登録商標）は、１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−６−［４−（２−オキソピペリジン（ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ）−１−イル）フェニル］−４，５−ジヒドロピラゾロ［５，４−ｃ］ピリジン−３−カルボキサミドである。それは、欧州で認可されており、また現在米国でフェーズＩＩＩトライアルを受けている静脈血栓塞栓症の予防用の経口投与直接第Ｘａ因子阻害薬である。
【０１０２】
エドキサバンまたはＬＩＸＩＡＮＡ（登録商標）は、Ｎ′−（５−クロロピリジン（ｃｈｌｏｒｏｐｙｒｉｄｉｎ）−２−イル）−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ）−４−（ジメチルカルバモイル）−２−［（５−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］チアゾロ［５，４−ｃ］ピリジン−２−カルボニル）アミノ］シクロヘキシル］オキサミドである。エドキサバンは、直接第Ｘａ因子阻害薬であり、日本で静脈血栓塞栓症の予防に使用するために認可されている。
【０１０３】
ＡＲＩＸＴＲＡ（登録商標）は、フォンダパリヌクスナトリウムである。それは、活性化された第Ｘ（Ｘａ）因子の合成の特異的阻害薬である。フォンダパリヌクスナトリウムは、メチルＯ−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−（スルホアミノ）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラ−ヌロノシル−（１→４）−Ｏ−２−デオキシ−３，６−ジ−Ｏ−スルホ−２−（スルホアミノ）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−Ｏ−２−Ｏ−スルホ−α−Ｌ−イドピラヌロノシル−（１→４）−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホ−２−（スルホアミノ）−α−Ｄ−グルコピラノシド、デカナトリウム塩である。フォンダパリヌクスナトリウムの分子式は、Ｃ31Ｈ43Ｎ3Ｎａ10Ｏ49Ｓ8であり、その分子量は１７２８である。構造式は、下記に提供される。
【化２７】
2014534270.tif 000029
【０１０４】
フォンダパリヌクスナトリウムの抗血栓活性は、第Ｘａ因子の抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）媒介性選択的阻害の結果である。ＡＴＩＩＩに選択的に結合することによって、フォンダパリヌクスナトリウムは、ＡＴＩＩＩによる第Ｘａ因子の生来の中和を増強する（約３００倍）。第Ｘａ因子の中和は、血液凝固カスケードを中断し、したがってトロンビン形成および血栓発症を阻害する。フォンダパリヌクスナトリウムは、トロンビン（活性第ＩＩ因子）を不活性化せず、また血小板機能に対して既知の効果を有していない。推奨される用量では、フォンダパリヌクスナトリウムは、線維素溶解活性または出血時間に影響を及ぼさない。フォンダパリヌクスナトリウムの薬力学／薬物動態学は、抗第Ｘａ因子活性を介して定量化されるフォンダパリヌクス血漿濃度に由来する。フォンダパリヌクスのみが、抗Ｘａ分析を較正するために使用することができる。（ヘパリンまたはＬＭＷＨの国際標準は、この使用に適切ではない）。結果として、フォンダパリヌクスナトリウムの活性は、フォンダパリヌクス較正器のミリグラム（ｍｇ）として表される。薬剤の抗Ｘａ活性は、増大する薬剤濃度とともに増大し、約３時間で最大値に到達する。皮下注射によって投与されたフォンダパリヌクスナトリウムは、迅速および完全に吸収される（絶対的生物学的利用能は１００％である）。フォンダパリヌクスナトリウム注射２．５ｍｇを用いて一日に一度処置を受けている患者において、ピーク定常状態血漿濃度は、平均で０．３９〜０．５０ｍｇ／Ｌであり、投薬後約３時間で到達される。これらの患者では、最小定常状態血漿濃度は、０．１４〜０．１９ｍｇ／Ｌである。フォンダパリヌクスナトリウム注射５ｍｇ（体重５０ｋｇ未満）、７．５ｍｇ（体重５０〜１００ｋｇ）、および１０ｍｇ（体重１００ｋｇ超）を用いて一日に一度処置を受けている症候性深部静脈血栓および肺塞栓症を罹患する患者では、体重によって調節された用量は、全ての体重カテゴリーにわたって同様の平均定常状態ピークおよび最小血漿濃度を提供する。平均定常状態血漿濃度は、１．２０〜１．２６ｍｇ／Ｌの範囲である。これらの患者では、平均最小定常状態血漿濃度は、０．４６〜０．６２ｍｇ／Ｌの範囲である。
【０１０５】
ＡＲＧＡＴＲＯＢＡＮ（登録商標）は、合成の直接トロンビン（第ＩＩａ因子）阻害薬であり、Ｌ−アルギニンに由来する。ＡＲＧＡＴＲＯＢＡＮ（登録商標）に対する化学名は、１−［５−［（アミノイミノメチル）アミノ］−１−オキソ−２−［［（１，２，３，４−テトラヒドロ−３−メチル−８−キノリニル）スルホニル］アミノ］ペンチル］−４−メチル−２−ピペリジンカルボキシル酸、一水和物である。ＡＲＧＡＴＲＯＢＡＮ（登録商標）の分子式は、Ｃ23Ｈ36Ｎ6Ｏ5ＳＨ2Ｏである。その分子量は５２６．６６である。ＡＲＧＡＴＲＯＢＡＮ（登録商標）は、トロンビン活性部位に可逆的に結合する直接トロンビン阻害薬である。ＡＲＧＡＴＲＯＢＡＮ（登録商標）は、抗血栓活性に対する余因子抗トロンビンＩＩＩを必要としない。ＡＲＧＡＴＲＯＢＡＮ（登録商標）は、注射によって投与され、フィブリン形成、凝固因子Ｖ、ＶＩＩＩ、およびＸＩＩＩの活性化、タンパク質Ｃの活性化、および血小板凝集を含むトロンビン触媒性反応またはトロンビン誘発性反応を阻害することよって、その抗凝固効果を発揮する。
【０１０６】
抗凝固効果は、凝固阻害薬（例えば、ヘパリン、ＬＭＷＨ、第Ｘａ因子阻害薬、第ＩＩａ因子阻害薬）の、凝固カスケードの伝搬のその遮断から得られる任意の効果である。抗凝固効果の非限定的例としては、抗トロンビン活性の上方調節、減少した第Ｘａ因子活性、減少した第ＩＩａ因子活性、増大した失血、および血餅形成因子の活性または濃度が血餅形成を阻害するような方法で変更される任意の他の条件が挙げられる。
【０１０７】
凝固阻害薬の活性（すなわち、その抗凝固効果）は、色素生成抗第Ｘａ因子活性検査、活性化部分トロンボプラスチン時間分析、プロトロンビン時間、出血分析（例えば、ラット尾出血分析）、トロンボエラストグラフィ、トロンビン生成分析、希釈ラッセル蛇毒時間、エカリン血餅形成時間、カオリン血餅形成時間、国際標準化比（ＩＮＲ）、フィブリノーゲン試験（Ｃｌａｕｓｓ）、トロンビン時間（ＴＣＴ）、混合時間、およびオイグロブリン溶解時間を含むがこれらに限定されない、種々の方法によって測定され得る。これらの方法は、種々の抗凝固パラメータの決定に役立ち、当業者に既知である。したがって、幾つかの実施形態では、抗凝固は、上述に列挙する分析法のうちの１つまたはそれらの組み合わせによって観察することができる。
【０１０８】
抗第Ｘａ因子分析は、抗第Ｘａ因子活性を直接的に測定する。抗第Ｘａ因子分析の背景となる方法論は、患者の血漿を、既知の量の余剰第Ｘａ因子および余剰抗トロンビンに添加するというものである。第Ｘａ因子阻害薬が患者の血漿中に存在していれば、第Ｘａ因子の酵素的活性を低減させるであろう。残留第Ｘａ因子の量は、血漿中の抗Ｘａ剤の量に反比例する。残留第Ｘａ因子の量は、第Ｘａ因子の天然基質を模倣する発色基質を添加すること、残留第Ｘａ因子にそれを開裂させること、分光光度計によって検出可能な着色化合物を放出することによって検出される。余剰量の抗トロンビンが反応中に提供されるため、患者における抗トロンビン欠乏は、分析に影響を及ぼさない。結果は、抗第Ｘａ因子の単位／ｍＬにおける抗凝固剤濃度で与えられ、高い値は高レベルの抗凝固を示唆し、低い値は低レベルの抗凝固を示唆する。
【０１０９】
活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）分析は、血液が血餅形成までにどれだけ時間がかかったかを測定する分析である。血液標本は、分析を実行することができるまでカルシウムによる凝固を停止させるように、シュウ酸塩およびクエン酸塩を用いて直接測定用に、またはチューブ内に収集される。該分析では、リン脂質、活性剤（シリカ、シーライト、カオリン、エラグ酸など）、およびカルシウムを血漿中に混合して、凝固を誘発する。該分析は、血栓（血餅）が形成されるまでの時間を測定する。
【０１１０】
ラット尾出血分析またはラット尾切断分析は、失血、例えば、薬剤投与後の失血を測定する分析である。本発明の化合物（例えば、ＤＡＰ）の効果が試験される、一実施形態では、抗凝固剤のＴｍａｘにてＤＡＰが静脈内投与される。２０分後、ラットの尾を先端から約１ｍｍ切断し、室温の生理食塩水中に定置し、血液を３０分間収集し、重さを測定する。
【０１１１】
凝固阻害薬の活性を測定するための使用される分析は、凝固阻害薬の抗凝固効果の拮抗、例えば、本発明の化合物を含む薬学的組成物の投与に起因する凝固阻害薬の抗凝固効果の拮抗を測定するために、実験室内でまたは医療機関内で使用されてもよい。したがって、一実施形態では、分析は、凝固阻害薬（例えば、ヘパリン、ＬＭＷＨ、第ＩＩａ因子阻害薬、および第Ｘａ因子阻害薬など）の抗凝固効果の完全または部分的な拮抗を測定するために利用される。
【０１１２】
凝固阻害薬の抗凝固効果の完全な拮抗は、抗凝固剤活性の中和に際して生じる。一実施形態では、凝固阻害薬の抗凝固効果の完全な拮抗は、抗Ｘａ活性検査によって測定する場合、抗凝固剤濃度が抗凝固に対する最小有効濃度（ＭＥＣ）を下回ったときに生じる。ＭＥＣは、本明細書で使用する時、治療的効果に必要とされる薬剤（例えば、凝固阻害薬）の最低量である。別の実施形態では、凝固阻害薬の抗凝固効果の完全な拮抗は、ａＰＴＴ分析によって測定する場合、ａＰＴＴがベースラインの約１０％以内に戻るときに生じる。ベースラインは、本明細書で使用する時、凝固阻害薬の不在下でのａＰＴＴを指す。
【０１１３】
多くの場合、抗凝固は、依然として所望されるであろうが、より低い度合いで所望されるであろう。したがって、凝固阻害薬の抗凝固効果の部分的拮抗が示唆されるであろう。凝固阻害薬の抗凝固効果の部分的拮抗は、抗Ｘａ活性検査によって測定する場合、抗凝固剤濃度が、抗凝固拮抗剤（例えば、本発明の化合物）の不在下における抗凝固剤濃度を下回るが、抗凝固に関するＭＥＣを上回ったままであるときに生じる。したがって、幾つかの実施形態では、凝固阻害薬の抗凝固効果の部分的拮抗は、抗凝固剤の濃度がＭＥＣの約４倍より低い、好ましくはＭＥＣの約２倍である、より好ましくはＭＥＣの約２倍より低い（例えば、概ねＭＥＣである）ときに生じる。凝固阻害薬の抗凝固効果の部分的拮抗は、ａＰＴＴ分析によって測定する場合、ａＰＰＴが抗凝固拮抗剤（例えば、本発明の化合物）の不在下における測定値未満に低減されるが、ベースラインを上回っているときに生じる。したがって、他の実施形態では、凝固阻害薬の抗凝固効果の部分的拮抗は、ａＰＴＴ測定値がベースラインの約４倍未満、好ましくはベースラインの約２倍、より好ましくはベースラインの約２倍未満に低減されるときに生じる。概して、抗凝固拮抗の範囲および持続時間は、医師または獣医によって決定される。
【０１１４】
本明細書で使用する時、「それを必要とする対象」は、例えば、抗凝固剤過量服用に苦しむ対象、出血（例えば、外傷誘発性出血または胃腸管もしくはその他の場所における不随意的出血）を罹患する対象、計画的外科的介入を必要とする対象、生検を必要とする侵襲的または非侵襲的処置を受ける対象、対象が抗凝固剤処置を受け続ける場合に、処置誤りが出血をおこすかもしれない危険がある処置を受ける対象、脊椎麻酔もしくは硬膜外麻酔を必要とする対象など、抗凝固の緊急の拮抗かまたは計画された拮抗かを必要とする対象である。「それを必要とする対象」は、直接因子阻害薬（第Ｘａ因子、第ＩＩａ因子、および／または抗トロンビン）の存在が出血効果を生み出す、または生み出す可能性のある患者であってよい。したがって、「それを必要とする対象」は、例えば、脳卒中予防、心臓外科および診断的処置、不整脈、深部静脈血栓（ＤＶＴ）予防、肺塞栓症、病理的血餅の形成の一般的予防などのために、抗凝固治療を受ける対象（例えば、ヘパリン、ＬＭＷＨ、第ＩＩａ因子阻害薬、または第Ｘａ因子阻害薬を受ける対象）であってもよい。
【０１１５】
「それを必要とする対象」は、本明細書で使用する時、動物である。「それを必要とする対象」としては、制限を伴わずに、ヒト、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、サル、チンパンジー、ヒヒ、またはアカゲザルが挙げられる。一実施形態では、「それを必要とする対象」は、哺乳類である。別の実施形態では、「それを必要とする対象」は、ヒトである。
【０１１６】
本明細書で使用するとき、「治療的に有効な量」とは、対象への単回投与または複数回投与（例えば、ボーラス投与および／または維持投与）に際して、凝固阻害薬の抗凝固効果を中和もしくは阻害する（完全または部分的に拮抗する）、または凝固を促進するのに有効な抗凝固拮抗剤（例えば、本明細書に説明される化合物）の量である。
【０１１７】
一態様では、治療的に有効な量は、重量で抗凝固剤用量の０．０１〜１０，０００倍の間の抗凝固拮抗剤の用量である。別の実施形態では、抗凝固拮抗剤は、例えば、１０：１の抗凝固拮抗剤対抗凝固剤などの１００：１の抗凝固拮抗剤対抗凝固剤といった、約１：１〜１０００：１の間の抗凝固拮抗剤対抗凝固剤の投与質量比にて投与される。本方法の一実施形態では、治療的に有効な量の抗凝固拮抗剤は、皮下、筋肉内、または静脈内投与経路によって投与されてもよい。例えば、それは無菌液として静脈内投与されてもよい。別の実施形態では、治療的に有効な量の抗凝固拮抗剤は、経口、経鼻、もしくは肺経路によって、または粘膜領域（口、直腸、もしくは膣）へ投与される。
【０１１８】
抗凝固拮抗剤（すなわち、本発明の化合物）の治療的に有効な量は、典型的には、体重１ｋｇにつき一日あたり約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇ、別の実施形態では、体重１ｋｇにつき一日あたり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約６００ｍｇ／ｋｇ、別の実施形態では、体重１ｋｇにつき一日あたり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２５０ｍｇ／ｋｇ、別の実施形態では、体重１ｋｇにつき一日あたり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約４００ｍｇ／ｋｇ、別の実施形態では、体重１ｋｇにつき一日あたり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、別の実施形態では、体重１ｋｇにつき一日あたり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、一実施形態では、体重１ｋｇにつき一日あたり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、別の実施形態では、体重１ｋｇにつき一日あたり約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、別の実施形態では、体重１ｋｇにつき一日あたり約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、別の実施形態では、体重１ｋｇにつき一日あたり約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、および別の実施形態では、体重１ｋｇにつき一日あたり約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。標準的な凝固分析（本明細書に説明されるものなど）および他の体外分析が、治療的に有効な量を決定するために使用されることができる。
【０１１９】
本発明の幾つかの態様では、本発明の化合物は、少なくとも１つの追加の治療薬と共に投与されてもよい。一実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬は、ビタミンＫであってよく、それは典型的にはワルファリン化合物によって誘発される血餅形成欠乏を正常化するために使用される。
【０１２０】
本発明はまた、血液中の抗凝固剤濃度を決定するための診断分析を提供する。後述の実施例１３に示す通り、ＤＡＰは、５１０ｋクリア抗第Ｘａ因子色素生成を用いて、ヒト血漿中の体外リバロキサバン拮抗において用量反応性傾向を実証している。したがって、本発明の化合物、例えば、ＤＡＰは、血液中の抗凝固剤、例えば、第Ｘａ因子阻害薬の濃度を決定するための診断分析に使用することができる。かかる分析において、本発明の化合物、例えば、ＤＡＰは、現在利用可能なキット試薬と一緒に、または現在利用可能なキット内に存在する合成因子の代わりに直接結合基質として使用することができる。一実施形態では、診断分析は、本発明の化合物（例えば、ＤＡＰ）を結合基質として含んでもよく、本発明の化合物は、血液標本中の抗凝固剤に結合し、また血餅形成因子（例えば、第Ｘａ因子）の残留活性は、標本中の抗凝固剤の濃度を決定するために定量化される。別の実施形態では、診断分析は、磁性ミクロ粒子に共役された本発明の化合物（例えば、ＤＡＰ）を含んでもよく、本発明の化合物は、標本から抗凝固剤を除去するためか、またはそれを濃縮するために、血液標本中の抗凝固剤に結合することができる。本発明のＤＡＰ系色素生成または治療現場分析は、対象における抗凝固剤レベルの決定に役立つことができ、それは、現行の診断は直接阻害薬の血中濃度を高精度に決定することができないため、現在の満たされていない大きな臨床的必要性である。
【０１２１】
それに加えて、本発明は、血液中に存在する抗凝固剤を拮抗するために必要とされる本発明の化合物、例えば、ＤＡＰなどの濃度を決定するための分析、例えば、色素生成分析を提供する。一実施形態では、分析は、種々の抗凝固剤に対する直接結合剤としてＤＡＰを使用する。
【０１２２】
本発明はまた、血液中の本発明の化合物、例えば、ＤＡＰなどの量を決定するための分析、例えば、色素生成分析も提供する。かかる分析は、所定の濃度の抗凝固剤を利用してもよい。
【０１２３】
本発明はまた、本明細書に上述される診断分析を組み込む診断キットも提供する。したがって一実施形態では、キットは、血液中の抗凝固剤濃度を決定するために使用される。キットは、他の構成要素、パッケージ、指示、試薬、ならびに／または抗凝固剤（例えば、第Ｘａ因子阻害薬）もしくはＤＡＰ濃度の決定を補助するため、およびキットの使用を補助するための他の材料を含有してもよい。それに加えて、キットは、ワルファリンは、本発明の化合物によって影響を受けず、一方他の抗凝固剤は拮抗されるであろうため、ワルファリンと別の抗凝固剤との組み合わせが存在するかどうかを決定するために使用されてもよい。
【０１２４】
下記の実施例に実証される通り、本発明の化合物（例えば、ＤＡＰ）は、ヘパリンに結合して、それを体内で不活性化することが可能である。したがって、凝固へのその効果に加えて、本発明の化合物は、ヘパリンの生化学的活性の組織を剥奪するために使用されてもよい。例えば、他のヘパリン結合性分子は、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、および他のヘパリン結合性成長因子を低減させる能力を有することを実証している。ＶＥＧＦおよびＦＧＦ剥奪は、抗癌治療に有用であることが示されており、本発明の化合物を、癌の処置に対する潜在的候補としている。したがって、一態様では、本発明は、対象において癌を処置、予防、または改善するための方法であって、治療的に有効な量の本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む、方法を提供する。
【０１２５】
実施例にて実証される通り、本発明の１つの化合物、ＤＡＰは、動的光散乱法（ＤＬＳ）によって測定する場合に、体外にてＸＡＲＥＬＴＯ（登録商標）、ＥＬＩＱＵＩＳ（登録商標）、ＡＲＩＸＴＲＡ（登録商標）、およびＬＭＷＨに結合した。ＤＡＰは、皮下投与されたＡＲＩＸＴＲＡ（登録商標）およびＬＭＷＨを体内で拮抗した。ＤＡＰは、ＸＡＲＥＬＴＯ（登録商標）、ＥＬＩＱＵＩＳ（登録商標）、ＰＲＡＤＡＸＡ（登録商標）、ＬＩＸＩＡＮＡ（登録商標）、未分画ヘパリン、およびベミパリンを体内で拮抗した。１００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、および４００ｍｇ／ｋｇ用量でラットに静脈内投与されたＤＡＰは、副作用を示さなかった。ＤＡＰは、ラットにおいて経口で生物学的に利用可能であった。ＤＡＰは、ヒトＥＲＧ結合を示さず、ＣＹＰ酵素の基質を阻害せず、またはＣＹＰ酵素の基質として機能せず、いかなる血漿タンパク質もはっきりと結合しなかった（データは示されていない）。それに加えて、ラットにおいて、ＰＲＡＤＡＸＡ（登録商標）によって誘発された抗凝固は、ＤＡＰの静脈内ボーラス投与後２０〜３０分で戻ったため、ＤＡＰは、短い脱離半減期を有しているようである。更に、ＤＡＰは、殺菌（２００℃までの加熱に耐えた）、および凍結乾燥粉末としての４℃での１年超の保管に対して安定していた。ＤＡＰによる抗凝固剤拮抗の要約を、表２に提示する。
【表２】
2014534270.tif 000030
＊プロタミンは低分子量ヘパリンを部分的に拮抗する。
【表３】
2014534270.tif 000031
リバロキサバンに関して６０％、アピキサバンに関して５０％、およびダビガトランに関して５％の経口生物学的利用能を想定。注射用抗凝固剤に関して１００％の生物学的利用能を想定。
【０１２６】
ＤＡＰを用いた処置の体外・体内相関の要約を、表３に提示する。ＤＬＳ結合性モル比を、見かけの直径で５０ｎｍを上回るリン酸塩緩衝生理食塩水中での会合として定義される、有意な結合を示す抗凝固剤に対するＤＡＰの最低質量比を、ＤＡＰと抗凝固剤の分子量比で除することによって計算する。計算に使用した分子量は、５１２Ｄａ（ＤＡＰ）、４３６Ｄａ（リバロキサバン）、４６０Ｄａ（アピキサバン）、１．７ｋＤａ（フォンダパリヌクス）、３．６ｋＤａ（ベミパリン）、６２８Ｄａ（ダビガトラン）、および５０９Ｄａ（ＡＲＧＡＴＲＯＢＡＮ（登録商標））であった。拮抗モル比を、ラット尾切断出血分析、色素生成抗Ｘａキットによって、または活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）によって測定する場合に、拮抗を得るために必要なＤＡＰの最小体内拮抗用量を用いて同様に計算した。出血分析に関して、抗凝固剤は、尾切断後３０分間の期間にわたる失血が、切断した尾を室温の整理食塩水に浸漬した状態で対照群（抗凝固剤が投与されていない）の２５％以内であるときに、拮抗されたと見なされた。Ｘａキットによって測定する際、拮抗は、有効抗凝固剤濃度が抗凝固に対する最小有効濃度（ＭＥＣ）を下回ったときに得られた。ａＰＴＴによって測定する際、拮抗は、抗凝固処置を受けているラットのａＰＴＴがベースラインの１０％以内に戻ったときに得られたと見なされた。フォンダパリヌクスの場合、２００ｍｇ／ｋｇのＤＡＰが体内で投与される最低用量であったにもかかわらず、体外データは、遥かにより低い拮抗用量が可能であることを示唆している。
【０１２７】
本願を通して記述される全ての参考文献、特許出願、および特許の全内容は、これによって参照により本明細書に援用される。
【０１２８】
実施例
本発明を、以下の非限定的実施例において更に例証する。これらの実施例は、本発明の理解を助けるために記載されるが、本発明の範囲をいかようにも制限することを意図せず、またそのように見なされるべきではない。実施例は、当業者に周知の従来の方法の詳細な説明を含まない。
【実施例１】
【０１２９】
ジアルギニンピペラジン（「ＤＡＰ」）の体外安定性試験
材料および方法
ＤＡＰのアセテート塩を、本明細書に説明される通りに調製した。これらの実施例にて説明される場合、ＤＡＰ固体または粉末は、アセテート塩を指し、それに対し溶液中ＤＡＰは、塩が水溶液中でイオン化する際の遊離塩基を指す。これらの実施例にて説明されるように、使用されたＤＡＰ化合物は、式ＶＩＩの化合物であった。
【０１３０】
ＤＡＰ粉末を、２通りの方法にて熱安定性に関して試験した。ＤＡＰを、使用に先んじて４℃にて７ヵ月間保管した。それに加えて、ＤＡＰ固体を、−２０℃から２００℃まで加熱し、−２０℃まで戻し、再び２００℃まで加熱することによって、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって試験した。
結果
【０１３１】
ＤＡＰ粉末は、４℃にて１２ヵ月を超えて安定していた。ＤＳＣの結果を、図１に示す。第２の加熱（「２」）は、第１の加熱（「１」）と類似した熱挙動を示し、ＤＡＰが２００℃までの反復加熱に耐えたことを示唆している。この発見は、ＤＡＰが、殺菌に必要な温度を上回る温度までの加熱に耐えることが可能であることを示唆している。
【実施例２】
【０１３２】
ＤＡＰのヘパリンおよびＬＭＷＨへの結合
材料および方法
動的光散乱法（ＤＬＳ）を使用して、１ｍｇ／ｍｌ未分画ヘパリンと１ｍｇ／ｍｌベミパリン（ＬＭＷＨ；ＨＩＢＯＲ（登録商標））との会合を、それぞれ単独でか、または１００ｍｇ／ｍｌの水中ＤＡＰ（１００：１のＤＡＰ対ヘパリンまたはＬＭＷＨの質量比）との組み合わせかで評価した。
【０１３３】
結果
ＤＡＰは、未分画ヘパリン（図２）およびＬＭＷＨ（図示なし）の双方と水中で物理的に会合して、見かけの直径を増大させる物理的会合を形成した。ＤＡＰの溶液をＬＭＷＨまたは未分画ヘパリンの溶液と混合すると、それらはその物理的相互作用に起因する粒子を形成し、このことは、ＤＡＰが、ヘパリンおよびＬＭＷＨ抗凝固をこれらの分子と物理的に会合することによって拮抗することができたという理論を支持している。
【実施例３】
【０１３４】
ＤＬＳによって測定する際の抗凝固剤へのＤＡＰ結合
材料および方法
リバロキサバン（ＸＡＲＥＬＴＯ（登録商標））単独、ＤＡＰ単独、および１：１および１０：１の質量比のＤＡＰ：リバロキサバンの組み合わせを、水溶液中に添加し、ＤＡＰとリバロキサバンとの会合を評価するために動的光散乱法（ＤＬＳ）によって解析した。同様の実験を、アピキサバン（ＥＬＩＱＵＩＳ（登録商標））単独、ＤＡＰ単独、および１：１、１０：１、および１００：１の質量比のＤＡＰ：アピキサバンの組み合わせについて行った。フォンダパリヌクス（ＡＲＩＸＴＲＡ（登録商標））単独、ＤＡＰ単独、および１：１、１０：１、および１００：１の質量比のフォンダパリヌクス：ＤＡＰの組み合わせを同様に試験した。ＬＭＷＨ（ベミパリン；ＨＩＢＯＲ（登録商標））単独、ＤＡＰ単独、および１：１、１０：１、および１００：１の質量比のＬＭＷＨ：ＤＡＰの組み合わせも同様に試験した。試験したＬＭＷＨの濃度は、０．１ｍｇ／ｍｌであった。したがって、１：１では０．１ｍｇ／ｍｌのＤＡＰを試験し、１０：１では１ｍｇ／ｍｌを試験し、また１００：１では１０ｍｇ／ｍｌのＤＡＰを試験した。
【０１３５】
それに加えて、ダビガトラン単独、ＤＡＰ単独、および１：１、１０：１、１００：１、１，０００：１、および１０，０００：１ＤＡＰの質量比のダビガトラン：ＤＡＰの組み合わせを試験した。最後に、ＡＲＧＡＴＲＯＢＡＮ（登録商標）単独、ＤＡＰ単独、または１：１、１０：１、１００：１、および１，０００：１の質量比のアルガトロバン：ＤＡＰの組み合わせを試験した。
【０１３６】
結果
結果を、リバロキサバンに関して図３アピキサバンに関して図４、フォンダパリヌクス（ＡＲＩＸＴＲＡ（登録商標））に関して図５、ＬＭＷＨに関して図６、およびアルガトロバンに関して図７に示す。各図は、水溶液中のＤＡＰおよび抗凝固剤単独を表す個々のピークを示す。抗凝固剤をＤＡＰと十分に高い質量比にて混合したとき、寸法の変化が観察された。この分析では、例えば僅かな寸法増加であっても２者間の物理的相互作用を示唆するが、しかしながら見かけの直径における有意な移行のみが体外・体内相関を評価するために使用される。見かけの直径は、相互作用の度合いの測定値である。
【実施例４】
【０１３７】
体内ＬＭＷＨ抗凝固のＤＡＰ拮抗
材料および方法
体重４７０ｇの雄アルビノラットに、１０ｍｇのベミパリン（ＬＭＷＨの過量服用）を皮下注射によって投与した。ａＰＴＴ時間を、５時間にわたって測定した。ＬＭＷＨ投与の４時間後、ラットは２００ｍｇ／ｋｇのＤＡＰ（１００ｍｇＤＡＰ）静脈内投与を受けた。
【０１３８】
結果
ＬＭＷＨの投与後、ａＰＴＴは、４時間にわたって５３秒から２４６秒に上昇した。２００ｍｇ／ｋｇのＤＡＰ（１００ｍｇＤＡＰ）の静脈内投与は、６０分以内にベースラインを下回るａＰＴＴ時間をもたらした（図８）。
【実施例５】
【０１３９】
体内ダビガトラン（ＰＲＡＤＡＸＡ（登録商標））抗凝固のＤＡＰ拮抗、過量服用研究
材料および方法
体重４３０ｇの雄アルビノラットに、４０ｍｇ／ｋｇのＰＲＡＤＡＸＡ（登録商標）（２０ｍｇＰＲＡＤＡＸＡ（登録商標）、ＰＲＡＤＡＸＡ（登録商標）の過量服用）を強制経口投与によって投与した。
【０１４０】
ＰＲＡＤＡＸＡ（登録商標）処置の約２時間後、２００ｍｇ／ｋｇＤＡＰ（１００ｍｇＤＡＰ）を静脈内ボーラス注射として投与した。約２時間後、ラットに１００ｍｇ／ｋｇのＤＡＰ（５０ｍｇＤＡＰ）投薬を投与した。更に１時間後、ラットに別の１００ｍｇ／ｋｇのＤＡＰ（５０ｍｇＤＡＰ）投薬を投与した。ａＰＴＴを、処置全体を通して測定した。
【０１４１】
結果
結果を、図９および１３に示す。ＰＲＡＤＡＸＡ（登録商標）の投与後２時間、ａＰＴＴは、４３秒から８１秒に上昇し、著しい抗凝固を示した。１００ｍｇのＤＡＰを静脈内ボーラス注射として投与し、それはａＰＴＴを２５分間以内でベースライン未満に降下させた。２時間後、ａＰＴＴは再び７９秒まで上昇し、ラットに５０ｍｇのＤＡＰの投薬を投与した。３０分以内で、ａＰＴＴはベースライン未満に降下された。２回とも、ＤＡＰ投与後６０分以内に、ａＰＴＴ水準はベースラインより上に戻った。第２のＤＡＰ投薬後、ａＰＴＴは５３秒に上昇した。第３のＤＡＰの投薬、１００ｍｇ／ｋｇのＤＡＰ（５０ｍｇＤＡＰ）を静脈内投与し、ａＰＴＴは２０分以内にベースラインまで降下した。図１３は、類似の実験を実証しており、１５．５ｍｇ／ｋｇのＰＲＡＤＡＸＡ（登録商標）投与後、ａＰＴＴは１００ｍｇ／ｋｇＤＡＰ処置の開始の約３０分以内に正常に戻った。
【実施例６】
【０１４２】
体内未分画ヘパリン（「ＵＨＦ」）抗凝固のＤＡＰ拮抗
材料および方法
体重５１５ｇの雄アルビノラットに、１０ｍｇ／ｋｇの未分画ヘパリン（５ｍｇＵＦＨ）を皮下注射によって投与した。
【０１４３】
２００ｍｇ／ｋｇのＤＡＰ（１００ｍｇＤＡＰ）を、２つの静脈内ボーラス注射としてＵＦＨ投与後に投与した。その後、ラットに４００ｍｇ／ｋｇのＤＡＰ（２００ｍｇのＤＡＰ）の投薬を投与した。ａＰＴＴを、処置全体を通して測定した。
【０１４４】
結果
図１０に実証される通り、ａＰＴＴ時間は、ヘパリン投与後の１時間にわたって、２８秒から１０２秒に著しく上昇した。１００ｍｇのＤＡＰを静脈内投与し、それによりａＰＴＴ時間は２０分で４８秒になった。１時間以内で、ａＰＴＴは１２０秒に上昇し、その後更に１００ｍｇのＤＡＰを静脈内投与した。１５分で、ａＰＴＴは４７秒に低下した。１時間以内で、ａＰＴＴは９６秒に上昇し、その後２００ｍｇ用量のＤＡＰを静脈内投与した。１０分後、ａＰＴＴは３３秒に降下した。
【実施例７】
【０１４５】
体内リバロキサバン（ＸＡＲＥＬＴＯ（登録商標））抗凝固のＤＡＰ拮抗
材料および方法
５ｍｇ／ｋｇリバロキサバン（ＸＡＲＥＬＴＯ（登録商標））を、ラットに経口投与した。４時間後、５ｍｇ／ｋｇのＤＡＰ（２ｍｇＤＡＰ）を静脈内投与した。ａＰＴＴを、ＤＡＰの投与前に０、１５、３０、４５、６０、および２４０分において測定した。ａＰＴＴを、ＤＡＰ投与後、約５、１０、２５、３５、４５、６０、１２０、および２４０分において再び測定した。
【０１４６】
結果
結果を図１１に示す。ＤＡＰは、ラットの体内でリバロキサバン（ＸＡＲＥＬＴＯ（登録商標））抗凝固を有効に拮抗した。
【実施例８】
【０１４７】
体内フォンダパリヌクス（ＡＲＩＸＴＲＡ（登録商標））抗凝固のＤＡＰ拮抗
材料および方法
５ｍｇ／ｋｇフォンダパリヌクスを、ラットに皮下投与した。２００ｍｇ／ｋｇＤＡＰを、２時間後に静脈内投与した。活性を、ＤＡＰ投与の１０、２０、３０、および６０分後に、色素生成５１０ｋクリア第Ｘａ因子分析（Ｂｉｏｐｈｅｎ）によって測定した。  
【０１４８】
結果
図１２は、投与１０分以内のフォンダパリヌクス抗凝固のＤＡＰ媒介性拮抗を実証する。
【実施例９】
【０１４９】
静脈内ＤＡＰは、ａＰＴＴに影響しない
材料および方法
０、２、１０、２５、５０、または１００ｍｇのＤＡＰを、体重を適合させた雄ＣＤラットに静脈内投与し、ａＰＴＴを測定した。
【０１５０】
結果
結果を図１６に示し、静脈内投与されたＤＡＰは、抗凝固剤の不在下で、用量依存性様式においてａＰＴＴに影響しなかったことを実証している。エラーバーは、９０分間にわたって平均化した７つのａＰＴＴ測定値からの標準誤差を表す。
【実施例１０】
【０１５１】
ラット尾切断モデルにおける抗凝固のＤＡＰ拮抗
材料および方法
３匹のラットに、２ｍｇのリバロキサバンをそれぞれ投与した。１匹のラットはＤＡＰを含有しない見せ掛けの拮抗を受け、第２のラットは２．５ｍｇのＤＡＰを、第３のラットは１２．５ｍｇのＤＡＰを受けた。第４のラットは、見せ掛けの抗凝固剤と拮抗投薬とを受けた（「見せ掛け」）。拮抗投薬の２０分後、尾を先端から１ｍｍ切断し、室温の生理食塩水中に定置し、失血を３０分間収集し、その後重さを測定した。
【０１５２】
同一の手順を、１．２５ｍｇのアピキサバン（ＥＬＩＱＵＩＳ（登録商標））単独、または５もしくは１２．５ｍｇのＤＡＰとの組み合わせ、１５．５ｍｇのダビガトランエテキシラート（ＰＲＡＤＡＸＡ（登録商標））単独で、または５もしくは１２．５ｍｇのＤＡＰとの組み合わせ、また５ｍｇのエドキサバン（ＬＩＸＩＡＮＡ（登録商標））単独で、または１２．５ｍｇのＤＡＰとの組み合わせに使用した。
【０１５３】
結果
結果を、リバロキサバンに関して図１５、アピキサバンに関して図１６、エドキサバンに関して図１７、およびダビガトランエテキシラートに関して図１８に示す。ラット尾切断出血分析は、緊急の抗凝固剤拮抗が必要とされる臨床的状況に類似している。結果は、ＤＡＰは、抗凝固剤活性を有効に拮抗し、抗凝固剤のみを受けたラットと比較して統計的に有意な失血低減を導いたことを示す。
【実施例１１】
【０１５４】
体外での採取したてのヒト血液におけるリバロキサバン（ＸＡＲＥＬＴＯ（登録商標））抗凝固のＤＡＰ拮抗
材料および方法
ヒト血液を有志者から採取した。０．２５μｇ／ｍｌのリバロキサバンを、単独で、または５０μｇ／ｍｌのＤＡＰと組み合わせて添加した。対照群は、５０μｇ／ｍｌのＤＡＰまたは生理食塩水を含有した。ａＰＴＴを、血液収集の２分以内に測定した。
【０１５５】
結果
図１９は、ＤＡＰの投与が、ａＰＴＴによって測定される通り、採取したてのヒト血液におけるリバロキサバン誘発性抗凝固の拮抗につながることを実証している。エラーバーは、３つの独立した実験からの標準誤差を表す。
【実施例１２】
【０１５６】
体外でのヒト血漿におけるリバロキサバンおよびアピキサバン抗凝固のＤＡＰ拮抗
材料および方法
２１８μｇ／Ｌまたは４５９μｇ／Ｌのリバロキサバンを、１，２５０μｇ／Ｌまたは６，２５０μｇ／ＬのＤＡＰとともに、またはそれらを伴わずに、ヒト血漿にそれぞれ添加した。同様に、１５６μｇ／Ｌまたは３１３μｇ／Ｌのアピキサバンを、１，１５６μｇ／Ｌまたは３，１２５μｇ／ＬのＤＡＰとともに、またはそれらを伴わずに、ヒト血漿にそれぞれ添加した。抗凝固剤へのＤＡＰ効果を、５１０ｋクリアＢｉｏｐｈｅｎ抗第Ｘａ因子色素生成分析によって測定した。リバロキサバン濃度を、血漿較正標準との比較によって決定し、それに対しアピキサバン濃度は、較正標準が未だ利用可能でないため、貯蔵液希釈から推測した。
【０１５７】
結果
リバロキサバンおよびアピキサバンの双方の濃度に関して、ＤＡＰは、最小有効濃度を下回るように有効抗凝固剤濃度を戻した。図２０は、リバロキサバンに関する結果を示し、また図２１はアピキサバンに関する結果を示す。
【実施例１３】
【０１５８】
体外でのヒト血漿におけるリバロキサバン抗凝固のＤＡＰ用量依存性拮抗
材料および方法
２１８μｇ／Ｌのリバロキサバンを、単独でか、または１．２５、１２．５、１２５、もしくは１，２５０μｇ／ＬのＤＡＰと組み合わせてヒト血漿に添加した。第Ｘａ因子活性を、５１０ｋクリアＢｉｏｐｈｅｎ抗Ｘａ色素生成分析キットによって測定した。リバロキサバン濃度を、血漿較正標準との比較によって決定した。
【０１５９】
結果
図２２は、ＤＡＰが、リバロキサバン濃度へのその効果（第Ｘａ因子活性検査によって測定）によって実証されるように、ヒト血漿中のリバロキサバン抗凝固の用量依存性拮抗において有効であったことを実証する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【国際調査報告】
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