(57)【要約】【課題】「創薬可能性」の特性が改善された環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドを提供する。【解決手段】  このペプチドは、３３残基の長さを有し、２２番目の残基と２５番目の残基の間にラクタム結合を有する。ただし、Ｎ末端を３残基まで短縮してもよい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ酸配列Ｙ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｄ−Ｘａａ−Ｒ５−Ｒ６−Ｒ７−Ａｒｇ−Ｒ９−Ｒ１０−Ｒ１１−Ｒ１２−Ｒ１３−Ｒ１４−Ｒ１５−Ｒ１６−Ｒ１７−Ｒ１８−Ｒ１９−Ｒ２０−Ｒ２１−Ｇｌｕ−Ｒ２３−Ｒ２４−Ｒ２５−Ｒ２６−Ａｒｇ−Ｒ２８−Ｒ２９−Ｒ３０−Ｒ３１−Ｒ３２−Ｒ３３−ＮＨ２
（式中、ＹはＨ、ＴｙｒもしくはＤ−Ｔｙｒ、またはアシル基であって、１５個から２０個の炭素原子を有するアシル基、好ましくは１２個以下の炭素原子を有するアシル基、より好ましくは例えばＡｃ（アセチル基）、Ｆｏｒ（ホルミル基）、Ａｃｒ（アクリリル基）、またはＢｚ（ベンゾイル基）のような１個から７個の炭素原子を有するアシル基であり、Ｒ１はＡｓｐまたはｄｅｓ−Ｒ１であり、Ｒ２はＬｅｕまたはｄｅｓ−Ｒ２であり、Ｒ３はＳｅｒもしくはＴｈｒ、またはｄｅｓ−Ｒ３であり、Ｄ−ＸａａはＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｌｅｕ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−ｐＮＯ２Ｐｈｅ、Ｄ−Ｎａｌ、Ｄ−Ｔｒｐ、Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）、またはＤ−Ｐａｌであり、Ｒ５はＨｉｓ、Ｔｙｒ、またはＧｌｕであり、Ｒ６はＣＭＬまたはＬｅｕであり、Ｒ７はＬｅｕまたはＣＭＬであり、Ｒ９はＧｌｕ、ＣＭＬ、Ａｓｎ、またはＬｙｓであり、Ｒ１０はＶａｌ、ＣＭＬ、Ｎｌｅ、またはＭｅｔであり、Ｒ１１はＬｅｕ、ＣＭＬ、またはＩｌｅであり、Ｒ１２はＧｌｕ、Ｄ−Ｇｌｕ、またはＨｉｓであり、Ｒ１３はＮｌｅ、Ｌｅｕ、Ｎｖａ、またはＭｅｔであり、Ｒ１４はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｄｐｇ、Ｔｈｒ、Ｄ−Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、またはＤ−Ｇｌｕであり、Ｒ１５はＡｒｇ、Ｏｒｎ、またはＬｙｓであり、Ｒ１６はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｄｐｇ、またはＣＭＬであり、Ｒ１７はＧｌｕまたはＡｓｐであり、Ｒ１８はＧｌｎ、Ａｓｎ、またはＬｙｓであり、Ｒ１９はＬｅｕ、ＣＭＬ、Ａｉｂ、Ｄｐｇ、ＣＭＰ、またはＣＭＶであり、Ｒ２０はＡｌａ、Ｄｐｇ、またはＡｉｂであり、Ｒ２１はＧｌｎ、Ａｉｂ、Ｄｐｇ、またはＧｌｕであり、Ｒ２３はＡｌａ、Ｄｐｇ、またはＡｉｂであり、Ｒ２４はＡｉｂ、Ｄｐｇ、ＣＭＬ、Ｄ−ＣＭＬ、Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）、またはＤ−Ａｐｈ（Ｈｏｒ）であり、Ｒ２５はＬｙｓまたはＯｒｎであり、Ｒ２６はＡｓｎ、Ａｉｂ、Ｄｐｇ、ＣＭＬ、またはＤ−ＣＭＬであり、Ｒ２８はＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ａｒｇ、Ｈａｒ、ＣＭＬ、またはＬｅｕであり、Ｒ２９はＣＭＬ、Ｌｅｕ、またはＴｙｒであり、Ｒ３０はＮｌｅ、ＣＭＬ、またはＭｅｔであり、Ｒ３１はＧｌｕ、Ａｉｂ、Ｄｐｇ、またはＡｓｐであり、Ｒ３２はＣＭＰ、ＣＭＶ、ＣＭＬ、Ｉｌｅ、Ａｉｂ、Ｄｐｇ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、Ｎｖａ、Ｇｌｙ、またはＧｌｎであり、Ｒ３３はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｄｐｇ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＣＭＬ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、Ｎｖａ、またはＧｌｎであり、かつ、Ｒ１９をＡｉｂ、Ｄｐｇ、ＣＭＰ、またはＣＭＶとする第１の条件と、Ｒ２４をＣＭＬ、Ｄ−ＣＭＬ、ＣＭＶ、ＣＭＰ、Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）、またはＤ−Ａｐｈ（Ｈｏｒ）とする第２の条件とのうちの少なくとも一方を満たす）
で表され、かつ２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＲ２５との間に環化結合を有する
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチド、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
請求項１に記載の環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドであって、
式Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｉｂ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｉｂ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
で表され、かつ２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチド。
【請求項３】
請求項１に記載の環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドであって、
式Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−ＣＭＶ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＶ−Ｉｌｅ−ＮＨ２、または
式Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｉｂ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＶ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
で表され、かつ２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチド。
【請求項４】
請求項１に記載の環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドであって、
式Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−ＣＭＰ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＰ−Ｉｌｅ−ＮＨ２、
式Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｉｂ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＰ−Ｉｌｅ−ＮＨ２、
式Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−ＣＭＰ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｉｂ−Ｉｌｅ−ＮＨ２、または
式Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−ＣＭＬ−Ｇｌｎ−ＣＭＰ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＬ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
で表され、かつ２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチド。
【請求項５】
請求項１に記載の環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドであって、
式Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−ＣＭＬ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＬ−Ｉｌｅ−ＮＨ２、
式Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−ＣＭＬ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−ＣＭＬ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＬ−Ｉｌｅ−ＮＨ２、
式Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−ＣＭＬ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｄ−ＣＭＬ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＬ−Ｉｌｅ−ＮＨ２、または
式Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−ＣＭＬ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｐｈ（Ｈｏｒ）−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＬ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
で表され、かつ２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチド。
【請求項６】
請求項１記載の環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドであって、
前記アシル基はアセチル基、プロピオニル基、ブチロイル基、バレロイル基、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基、テトラデカノイル基、および２１−アミノ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサヘネイコサノイル基からなる群より選択される
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチド。
【請求項７】
アミノ酸配列Ｙ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｄ−Ｘａａ−Ｒ５−Ｒ６−Ｒ７−Ａｒｇ−Ｒ９−Ｒ１０−Ｒ１１−Ｒ１２−Ｎｌｅ−Ｒ１４−Ｒ１５−Ｒ１６−Ｒ１７−Ｒ１８−Ａｉｂ−Ｒ２０−Ｒ２１−Ｇｌｕ−Ｒ２３−Ａｉｂ−Ｒ２５−Ｒ２６−Ａｒｇ−Ｒ２８−Ｒ２９−Ｒ３０−Ｒ３１−Ａｉｂ−Ｒ３３−ＮＨ２
（式中、ＹはＨ、Ｔｙｒ、もしくはＤ−Ｔｙｒ、または２０個以下の炭素原子を有するアシル基であり、Ｒ１はＡｓｐまたはｄｅｓ−Ｒ１であり、Ｒ２はＬｅｕまたはｄｅｓ−Ｒ２であり、Ｒ３はＳｅｒもしくはＴｈｒ、またはｄｅｓ−Ｒ３であり、Ｄ−ＸａａはＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｌｅｕ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−Ｎａｌ、Ｄ−Ｔｒｐ、またはＤ−Ｐａｌであり、Ｒ５はＨｉｓ、Ｔｙｒ、またはＧｌｕであり、Ｒ６はＣＭＬまたはＬｅｕであり、Ｒ７はＬｅｕまたはＣＭＬであり、Ｒ９はＧｌｕ、ＣＭＬ、Ａｓｎ、またはＬｙｓであり、Ｒ１０はＶａｌ、ＣＭＬ、またはＮｌｅであり、Ｒ１１はＬｅｕ、ＣＭＬ、またはＩｌｅであり、Ｒ１２はＧｌｕまたはＨｉｓであり、Ｒ１４はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｔｈｒ、またはＧｌｕであり、Ｒ１５はＡｒｇ、Ｏｒｎ、またはＬｙｓであり、Ｒ１６はＡｌａ、Ａｉｂ、またはＣＭＬであり、Ｒ１７はＧｌｕまたはＡｓｐであり、Ｒ１８はＧｌｎ、Ａｓｎ、またはＬｙｓであり、Ｒ２０はＡｌａまたはＡｉｂであり、Ｒ２１はＧｌｎ、Ａｉｂ、またはＧｌｕであり、Ｒ２３はＡｌａまたはＡｉｂであり、Ｒ２５はＬｙｓまたはＯｒｎであり、Ｒ２６はＡｓｎ、Ａｉｂ、ＣＭＬ、またはＤ−ＣＭＬであり、Ｒ２８はＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ａｒｇ、Ｈａｒ、ＣＭＬ、またはＬｅｕであり、Ｒ２９はＣＭＬ、Ｌｅｕ、またはＴｙｒであり、Ｒ３０はＮｌｅまたはＣＭＬであり、Ｒ３１はＧｌｕ、Ａｉｂ、またはＡｓｐであり、Ｒ３３はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＣＭＬ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、Ｎｖａ、またはＧｌｎである）
で表され、かつ２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドまたはその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
請求項７に記載の環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドであって、
前記アシル基はアセチル基、プロピオニル基、ブチロイル基、バレロイル基、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基、テトラデカノイル基、および２１−アミノ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサヘネイコサノイル基からなる群から選択される
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチド。
【請求項９】
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドまたはその薬学的に許容される塩であって、
前記ペプチドはアミノ酸配列Ｙ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｉｂ−Ｒ２０−Ｒ２１−Ｇｌｕ−Ｒ２３−Ａｉｂ−Ｒ２５−Ｒ２６−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｒ３１−Ａｉｂ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
（ただし、ＹはＨ、Ｔｙｒ、もしくはＤ−Ｔｙｒ、または２０個以下の炭素原子を有するアシル基であり、Ｒ１はＡｓｐまたはｄｅｓ−Ｒ１であり、Ｒ２はＬｅｕまたはｄｅｓ−Ｒ２であり、Ｒ３はＳｅｒもしくはＴｈｒ、またはｄｅｓ−Ｒ３であり、Ｒ２０はＡｌａまたはＡｉｂであり、Ｒ２１はＧｌｎまたはＡｉｂであり、Ｒ２３はＡｌａまたはＡｉｂであり、Ｒ２５はＬｙｓまたはＯｒｎであり、Ｒ２６はＡｓｎまたはＡｉｂであり、Ｒ３１はＧｌｕである）
で表され、かつ２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＲ２５との間に環化結合を有する
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドまたはその薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
請求項９に記載の環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドであって、
前記アシル基はアセチル基、プロピオニル基、ブチロイル基、バレロイル基、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基、テトラデカノイル基、および２１−アミノ−４，７，１０，１３，１６、１９−ヘキサオキサヘネイコサノイル基からなる群から選択される
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチド。
【請求項１１】
請求項９に記載の環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドであって、
前記アシル基は、アセチル基である
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチド。
【請求項１２】
請求項９に記載の環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドであって、
前記アシル基は、プロピオニル基である
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチド。
【請求項１３】
請求項９に記載の環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドであって、
前記アシル基は、ブチロイル基である
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチド。
【請求項１４】
請求項９に記載の環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドであって、
前記アシル基は、バレロイル基である
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチド。
【請求項１５】
請求項９に記載の環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドであって、
前記アシル基は、ヘキサノイル基である
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチド。
【請求項１６】
請求項９に記載の環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドであって、
前記アシル基は、オクタノイル基である
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチド。
【請求項１７】
請求項９に記載の環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドであって、
前記アシル基は、デカノイル基である
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチド。
【請求項１８】
請求項９に記載の環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドであって、
前記アシル基は、テトラデカノイル基である
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチド。
【請求項１９】
請求項９に記載の環状ＣＲＦアンタゴニストペプチドであって、
前記アシル基は、２１−アミノ−４，７，１０、１３，１６，１９−ヘキサオキサヘネイコサノイル基である
環状ＣＲＦアンタゴニストペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般に、ペプチド、およびこのペプチドを用いた哺乳類の薬物治療に関する。より具体的には、本発明は、ＣＲＦヘンテトラコンタペプチドの環状アンタゴニスト、大きなファミリーであるＣＲＦ様ペプチドのメンバー、このような環状ＣＲＦアンタゴニストを含有する医薬組成物、このような環状ＣＲＦアンタゴニストを用いた哺乳類の治療方法、およびこのペプチドを用いた新薬のスクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
本出願は、２０１０年１２月２２日に出願された米国仮出願第６１／４２６，４２８号の優先権を主張するものであり、その開示が参照によって本明細書に組み込まれる。本発明は、米国国立衛生研究所によって与えられた助成金番号Ｐ０１−ＤＫ−２６７４１の下において、政府支援によりなされた。米国政府は本発明において一定の権利を有する。
【０００３】
実験的観察および臨床的観察により、下垂体前葉副腎皮質刺激ホルモン産生細胞の分泌機能の制御において、視床下部が重要な役割を担っているという概念が支持されている。視床下部に存在する因子をin vitroで培養し、あるいは臓器培養すると、下垂体からの副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）の分泌率が増加するということは５０年以上も前に実証済みである。しかし、ヒツジＣＲＦ（ｏＣＲＦ）が１９８１年に特徴付けられるまで、副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）は生理学的に特徴付けられていなかった。米国特許第４，４１５，５５８号（その開示が参照によって本明細書に組み込まれる）に開示されているように、ｏＣＲＦは４１残基のアミド化ペプチドであるということが分かっている。ｏＣＲＦを哺乳類に末梢注射すると、血圧が下がり、ＡＣＴＨおよびβ−エンドルフィンの分泌が促進される。
【０００４】
ラットＣＲＦ（ｒＣＲＦ）は後に単離、精製、特徴付けが行われ、特許文献１（その開示が参照によって本明細書に組み込まれる）に記載されているように、同族のアミド化ヘンテトラコンタペプチドであるということが分かった。その後、ヒトＣＲＦのアミノ酸配列がｒＣＲＦのアミノ酸配列と同じであることが発見された。ｒＣＲＦおよびｈＣＲＦはこのペプチドを表すために区別せずに用いられ、ｒ／ｈＣＲＦという表記はこのペプチドホルモンに対して頻繁に使用される。これらペプチドホルモンは、１９８５年１１月５から７日にかけて東京で開催された「Proceedings of the Naito International Symposium on Natural and Biological Activity」というシンポジウムにおけるValeらによる「Characterization of the Hypothalamic Peptide: Corticotropin releasing factor」、および非特許文献１に記載されているように、大きなファミリーである天然のＣＲＦ様ペプチドのメンバーの一部、ならびに哺乳類ＣＲＦ、魚類ＣＲＦ、ウロテンシン、およびソーバジン等の類似体を構成すると考えられる。
【０００５】
当初は視床下部−下垂体−副腎皮質（ＨＰＡ）系における役割を基に単離および特徴付けが行われたが、ＣＲＦは中枢神経系（ＣＮＳ）だけでなく副腎、胎盤、精巣等の神経外組織を通して広く分散されていることが発見された。それらの場所において、ＣＲＦはパラクリン調節因子または神経伝達物質として作用する可能性がある。また、ＣＲＦは不安、抑鬱、アルコール依存、および神経性無食欲等の情動障害、ならびに生殖および免疫応答の調節に関与している。このことは、ＣＲＦ発現の変化により重要な生理学的影響および病態生理学的影響がもたらされる可能性があるということを示唆している。例えば、ＨＰＡ系を含む調節ループが乱れることにより、高濃度の循環グルココルチコイドが慢性的に生成されることがよくある。このような患者は体幹の肥満、筋消耗、受精率低下等、クッシング症候群の身体的特徴を示す。
【０００６】
ＣＲＦはＨＰＡ系の活性を調節する役割を果たすだけでなく、自律神経系の変化および行動変化も調節するということが示されている。これら変化の中にはストレス応答の際に生じるものもある。これら行動変化の多くは、デキサメタゾン治療を実施しても再現されず、下垂体切除を行っても影響を受けないことから、ＨＰＡ活性とは関係なしに生じるということが示されている。また、ＣＲＦをＣＮＳに直接注入することにより、様々なストレッサーに対する自律応答および行動応答が再現される。これら変化の中には、ＣＲＦまたはＣＲＦアンタゴニストを末梢投与しても生じないものがあるので、食欲抑制、過覚醒、および学習能力等の機能に関して、ＣＲＦは脳に直接作用するようである。しかし、ＣＲＦアンタゴニストを末梢投与することで、内因性ＣＲＦによって調節されたＡＣＴＨ分泌の増加を阻害することができ、ＣＲＦアンタゴニストが脳室に到達すると、ストレスによる自律神経系の変化および行動変化が緩和される。
【０００７】
ＣＲＦは広範囲に及ぶ解剖学的分布および複数の生物学的作用を有するため、現在、この調節ペプチドは多くの生物学的過程に関与していると考えられている。ＣＲＦは炎症反応の制御にも関与する。ＣＲＦは、ある動物モデルにおいては炎症促進の役割を果たすということが観測されているものの、他のモデルにおいては、損傷による血管透過性の増加を低減することにより炎症を抑制するようである。
【０００８】
あるαアミノ酸のＤ異性体を含有するＣＲＦ類似体が開発されている。このＣＲＦ類似体の例としては、例えば、特許文献２に記載されているＣＲＦ類似体が挙げられる。合成ｒ／ｈＣＲＦおよびｏＣＲＦは、in vitroおよびin vivoでＡＣＴＨ活性およびβ−エンドルフィン様活性（β−ＥＮＤ−Ｌｉ）を促進し、末梢注射すると血圧が大幅に下がる。これらペプチドのアンタゴニスト、ならびにソーバジンおよびウロテンシンのアンタゴニストは、特許文献３（その開示が参照によって本明細書に組み込まれる）に開示されている。さらに、生物学的に効果のあるＣＲＦアンタゴニストが開発されており、特許文献４、特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９、および特許文献１０に開示されている。
【０００９】
周知のＣＲＦアンタゴニストと比較して高い生物活性を示し、しかも持続時間が長く、残留ＣＲＦアゴニスト活性をほとんど示さない、あるいは実質的に示さないＣＲＦアンタゴニストペプチドが、この１０年から１５年の間に開発されている。これらペプチドの多くは、高い受容体親和性を示す。
【００１０】
ＣＲＦ様ペプチドファミリーの様々なメンバーを改変することにより、生物学的効果の高いＣＲＦアンタゴニストを作製できるということが示されている。このＣＲＦアンタゴニストは、ＣＲＦＲｌおよびＣＲＦＲ２等の周知のＣＲＦ受容体（ＣＲＦ−Ｒ）と強く結合するが、結合したＣＲＦ受容体を著しく活性化させるようなことはない。結合することにより、この受容体における内因性ＣＲＦの作用を阻害する。また、ＣＲＦＲｌおよびＣＲＦＲ２に対して、ｏＣＲＦよりも高い親和性を示す。このような生物活性ＣＲＦアンタゴニストを作製するための改変の例として、例えば、天然の分子または他の分子のＮ末端を短縮して、ｒ／ｈＣＲＦ（９−４１）、ｒ／ｈＣＲＦ（１０−４１）、ｒ／ｈＣＲＦ（ｌｌ−４１）、およびｒ／ｈＣＲＦ（１２−４１）等のように、その長さを３０から３３残基に短縮すること、ならびに（ｃｙｃｌｏ３０−３３）［Ｇｌｕ３０，Ｌｙｓ３３］ｒ／ｈＣＲＦ（１２−４１）等のＣ端末残基から８番目および１１番目の位置にある残基の側鎖を結合する環化結合、好ましくはラクタムを組み込むことが挙げられる。このような環化による改変により、多くの場合、類似した直鎖ペプチドが有する生物学的効果が大幅に増加するということが分かっている。また、この環化結合とＮ末端のアシル化を組み合わせることにより、長時間作用継続型の分子が作製されること、さらにこのような効果は例えば（ｃｙｃｌｏ３０−３３）［Ａｃ−Ａｓｐ９，Ｇｌｕ３０，Ｌｙｓ３３］−ｒ／ｈＣＲＦ（９−４１）等の３３残基の長さを有するペプチドにおいて最大になる可能性があることも分かっている。ＣＲＦ様ペプチドのファミリーには、一般的に、ＣＲＦ受容体に結合し、単離および特徴付けが行われた最初の哺乳類のＣＲＦであるヒツジＣＲＦのアミノ酸構造と少なくとも約４５％の相同性を有するペプチドが含まれると考えられる。このＣＲＦ様ペプチドファミリーには、ヒツジＣＲＦ、ラット／ヒトＣＲＦ、ブタＣＲＦ、ウシＣＲＦ、魚類ＣＲＦ、コイウロテンシン、サッカーウロテンシン、マギーソールウロテンシン、カレイウロテンシン、ソーバジン、ウロコルチン１、２、および３、ならびにストレスコピン等の周知のペプチドが含まれるが、これに限定されない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許第４，４８９，１６３号
【特許文献２】米国特許第５，２７８，１４６号
【特許文献３】米国特許第４，６０５，６４２号
【特許文献４】米国特許第５，２４５，００９号
【特許文献５】米国特許第５，４９３，００６号
【特許文献６】米国特許第５，５１０，４５８号
【特許文献７】米国特許第５，６６３，２９２号
【特許文献８】米国特許第５，７７７，０７３号
【特許文献９】米国特許第５，８７４，２２７号
【特許文献１０】米国特許第６，３２３，３１２号
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Lederisら、「Neurohormones from Fish Tails, II: Actions of Urotensin I in Mammals and Fishes」、Recent Progress in Hormone Research、Academic Press社、１９８５年発行、第４１巻
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
ＣＲＦアンタゴニストを改変する試みにおいては、一般的に、アンタゴニストを１つだけ用いて、周知の受容体（ＣＲＦＲｌおよびＣＲＦＲ２）のどちらか一方、またはその両方（ＣＲＦＲｌ／２）に対する親和性を増加させることを主眼としていた。臨床的に安全で効果があり、安価に作製できる安定した類似体を得ること、すなわち、このような類似体の創薬可能性を向上させることを目的として物理特性／化学特性を最適化する試みは十分になされていなかった。そこで、本発明は、より高い創薬可能性を有するＣＲＦアンタゴニストを提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
現在、ある種のＣＲＦアンタゴニストペプチドが特定されており、このペプチドは一般式Ａ−Ｄ−Ｘａａ−Ｂ−Ｘａａｃ−Ｘａａａ−Ｘａａｂ−Ｘａａｃ−Ｃ−ＮＨ２（ただし、ＡはＡｓｐ−Ｌｅｕ−ＴｈｒもしくはＡｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ、またはそのＮ末端を短縮したものであり、Ｄ−ＸａａはＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−２Ｎａｌ、Ｄ−Ｌｅｕ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−ｐＮＯ２Ｐｈｅ、またはＤ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）であり、Ｂはｒ／ｈＣＲＦの１２番目に位置するＰｈｅと３０番目に位置するＧｌｎの間にある１７個のアミノ酸残基の配列、または上述の他のＣＲＦ様ペプチドファミリーにおける対応する配列であり、Ｘａａｃはアミノ酸残基の対を表し、その側鎖はラクタムブリッジ環化結合により結合されており、ＸａａａはＣｙｓ以外の天然のαアミノ酸残基であり、ＸａａｂはＣＭＬ、Ｄ−ＣＭＬ、ＣＭＶ、ＣＭＰ、Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）、またはＤ−Ａｐｈ（Ｈｏｒ）であり、ＣはＣＲＦペプチドファミリーのＣ末端部における最後の８個のアミノ酸残基の配列である）で定義されている。このペプチドのＮ末端は、Ｎアシル化されている。これら改変された環状ペプチドにおいて、例えばＭｅｔをＮｌｅまたはＬｅｕで置換する等、ＣＲＦアンタゴニストの分野において現在周知のものを含む置換をさらに実施してもよい。また、ＡｓｐもしくはＡｓｐ−Ｌｅｕ、またはすべてのＡ（すなわちｄｅｓＡ）を欠失させることでＮ末端を短縮し、ＣＲＦアンタゴニスト特性を示し続けるペプチドを提供してもよい。
【００１５】
上述のように、これらペプチドは哺乳類ＣＲＦであれば３０番目および３３番目の位置にあったであろう残基の間に環化結合を有する。この結合は、側鎖カルボキシ基および側鎖アミノ基の間のアミド結合（またはラクタムブリッジ）であることが好ましい。最も好ましくは、３０番目の位置の残基における側鎖カルボキシ基、好ましくはＧｌｕまたはＡｓｐと、３３番目の位置の残基における側鎖アミノ基、好ましくはＬｙｓもしくはＯｒｎ、またはＤｂｕ、Ｄｐｒ、もしくはＨｌｙとの間のラクタムブリッジである。ＣＲＦアゴニストはＨＰＡ系を診断する目的で臨床的に使用されているという事実を除けば、ヒツジＣＲＦ、ｒ／ｈＣＲＦ、ソーバジン、ウロテンシン、ウロコルチン１、２、および３、ならびにストレスコピン等の天然のＣＲＦは、長時間の作用継続性をもたらす安全性、化学的安定性、生物学的安定性の観点から、薬様特性を有しないと考えられる。
【００１６】
また、これらペプチドは、ｒ／ｈＣＲＦであれば１２番目に位置するであろうＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−２Ｎａｌ、もしくはＤ−Ｌｅｕ、またはＤ−ｐＮＯ２Ｐｈｅ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｒｐ、またはＤ−３Ｐａｌ等のＤ異性体同等物を含むのが好ましい。これらペプチドは、好ましくは、ｒ／ｈＣＲＦであれば２１番目および３８番目に位置したであろう天然に存在するＭｅｔの代替となるノルロイシン（Ｎｌｅ）を有する。当該技術分野においてよく知られているように、放射性同位体または蛍光染料を添加することによりこのペプチドを標識するのが望ましければ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｔｙｒ、またはヒドロキシアリール部分を有するアシル基（例えばｄｅｓ−ＮＨ２−Ｔｙｒ）をＮ末端に添加してもよい。あるいは、Ａｃ−Ｄ−ＴｙｒまたはＡｃ−Ｔｙｒを使用してもよい。Ｎ末端を放射ヨウ素標識する場合、より安定となる可能性があり構造的に同等と一般的に考えられるので、ＣＲＦであれば３６番目に位置するであろうＬｙｓをＡｒｇに置換するのが好ましい。上述のように、分子内のあらゆる部分において選択的に置換を行ってもよく、こうして得られた分子は、後述する具体的なペプチドと機能的に同等であると考えられる。例えば、１個以上のＬｅｕ残基をα炭素原子上のメチル基で置換した類似体、すなわちＣＭＬは、わずかに改善された特性を示すことが分かっている。また、ｒ／ｈＣＲＦのＡＡ配列に関して、ＣＭＬは１０、１４、１５、１７、１８、２４、２７、３６、３７、３８、４０、および／または４１番目の位置に任意に存在してもよい。同様に、αアミノイソ酪酸（Ａｉｂ）またはジプロピルグリシン（Ｄｐｇ）を２２、２４、２８、２９、３１、３２、３４、３９、４０、および４１番目の位置のうちの１つまたは複数の位置に任意に挿入してもよい。このような置換により、多くの場合、生物学的効果が高まり、および／または作用の持続時間が増加する可能性がある。また、このような置換による望ましくない効果は見つかっていない。
【００１７】
上述のように、これら改変されたＣＲＦアンタゴニストは、天然のＣＦＲ様ペプチドまたはその類似体のＮ末端を短縮し、所望の置換を行うことにより作製される。好ましくは、天然の分子のＮ末端から始まる８残基または９残基の配列を欠失させる。ただし、１０残基、１１残基を欠失させてもよい。例えば、哺乳類ＣＲＦのＮ末端を短縮する場合、欠失の結果生じる分子を、欠失させた残基の数に応じて、ＣＲＦ（９−４１）、ＣＲＦ（１０−４１）、ＣＲＦ（１１−４１）、またはＣＲＦ（１２−４１）と呼ぶ。アシル化Ｎ末端を有する長い類似体ＣＲＦ（９−４１）およびＣＲＦ（１０−４１）は、長時間持続する生物学的効果を示すペプチドとして好ましい。
【００１８】
特許文献９の教示に従って、好ましい特性を示すＣＲＦアンタゴニストを開発し、重要な試験をいくつか実施した。このＣＲＦアンタゴニストは、ｃｙｃｌｏ（３０−３３）［Ｄ−Ｐｈｅ１２，Ｎｌｅ２１，３８，Ｇｌｕ３０，Ｌｙｓ３３］−ｈ／ｒＣＲＦ（１２−４１）という式を有する３０残基の環状ペプチドであり、現在、アストレシンという短縮名で呼ばれることが多い。そのアミノ酸配列は、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−ＮＨ２であり、１９番目に位置するＧｌｕと２２番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。現在、アストレシンおよび実験室で開発された他のＣＲＦアンタゴニストと比べて創薬可能性が向上したＣＲＦアンタゴニストが開発されている。以下、これらＣＲＦアンタゴニストを、アゴニストｒ／ｈＣＲＦではなく、アンタゴニストアストレシンＢに基づく短縮名で呼ぶ。アストレシンＢは、アストレシンを改変したものであり、Ｎ末端がＡｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ残基によって拡張されており、３３残基ペプチドの１９番目と３２番目に該当する２７番目と４０番目の位置がＣＭＬで置換されている。これら改変ＣＲＦアンタゴニストの中には、注射されることで線維を構成し、これによりデポ製剤となるものがある。他の改変ＣＲＦアンタゴニストは、特に有利な溶解特性を示す一方、長時間持続する生物学的効果を示す。すなわち、アストレシンよりも水性緩衝液に溶けにくいこのような望ましいＣＲＦアンタゴニストまたはその塩は、油に対する溶解性が高く、逆の場合も同様である。
【００１９】
本発明に係る医薬組成物は、このようなＣＲＦアンタゴニストまたはその非毒性付加塩を含み、これらは薬学的に許容される液体または固体の担体中に分散している。これら特定の類似体が、生理的なｐＨにおいて、アストレシンＢよりも高いまたは低い溶解性を示すので、製剤を容易に製造することができる。皮下（ｓ．ｃ．）投与を行うために、マンニトール、コーンオイル、またはピーナッツオイルの水溶液製剤が好ましい可能性がある。このような製剤において、高い溶解性が維持される。
【００２０】
本発明において、ＡＣＴＨ、β−エンドルフィン、β−リポトロピン、コルチコステロン、および他のプロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）遺伝子産物の分泌を制御するために、および／または気分、行動機能、胃腸機能、および自律神経系活性に作用をもたらすために、このようなペプチドまたは薬学的に許容されるその塩を哺乳類、特にヒトに投与してもよい。例えば、これらＣＲＦアンタゴニストを、ＡＣＴＨの濃度を低減させることによりストレス関連の疾患を治療するため、特に過敏性腸症候群および消化管疾患の患者を治療するため、また、炎症性疾患、免疫抑制、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、アルツハイマー病、神経性無食欲、出血性ストレス、薬剤離脱症候群およびアルコール離脱症候群、薬物中毒、乾癬、関節リウマチ、ならびに不妊症を治療するために投与してもよい。ストレス関連の疾患には、脱毛を引き起こしたり消化管に影響を与えたりするストレスによる免疫応答等が含まれる。このように多様な効果をペプチドが有しているため、後述のように、ホルモン補充療法を用いてこれらペプチドを投与するのが望ましい可能性がある。
【００２１】
これらペプチドは、薬剤スクリーニングを行うための有益な方法の基礎を提供する可能性がある。このような方法により、より効果の高い分子が検出される可能性がある。これら分子はＣＲＦ受容体に対する親和性が高いので、ＣＲＦ受容体に結合することができ、および／またはＣＲＦ受容体を活性化することができる。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
このペプチドを定義するために使用する命名法は、１９６５年にAcademic Press社が発行したSchroderおよびLubkeによる「The Peptides」に基づいて規定されたものである。従来の表現によれば、ペプチドにおいてアミノ基は左に、カルボキシ基は右にあるように表現される。また、一般的な３文字の略語を使用してαアミノ酸残基を特定する。このアミノ酸残基が異性体を有する場合、別段の明示の定めがない限り、例えばＳｅｒ＝Ｌ−セリン、Ｏｒｎ＝Ｌ−オルニチン、Ｎｌｅ＝Ｌ−ノルロイシン、Ｎｖａ＝Ｌ−ノルバリン、Ａｇｌ＝アミノグリシン、Ｄｂｕ＝Ｌ−２，４−ジアミノ酪酸、Ｄｐｒ＝Ｌ−２，３−ジアミノプロピオン酸、Ｈｌｙ＝Ｌ−ホモリジン、およびＨａｒ＝Ｌ−ホモアルギニン等のＬ−アミノ酸を示す。また、以下の略語を使用する。ＣＭＬ＝ＣαＣＨ３−Ｌ−ロイシン、ＣＭＰ＝ＣαＣＨ３−Ｌ−フェニルアラニン、ＣＭＶ＝ＣαＣＨ３−Ｌ−バリン、Ａｉｂ＝２−アミノイソ酪酸、Ｄｐｇ＝ジプロピルグリシン、Ｎａｌ＝Ｌ−β−（ｌ−または２−ナフチル）アラニン、Ｐａｌ＝Ｌ−β−（２−，３−，または４−ピリジル）アラニン、Ｃｐａ＝Ｌ−（２−，３−，または４−クロロ）フェニルアラニン、Ａｐｈ＝Ｌ−（２−，３−，または４−アミノ）フェニルアラニン、Ａｍｐ＝（２−，３−，または４−アミノメチル）フェニルアラニン、Ｈｏｒ＝Ｌ−ヒドロオロチル、Ｎｉｃ＝３−カルボキシピリジン（またはニコチン酸）、Ｃｂｍ＝カルバモイル、Ａｃｒ＝アクリリル、Ｐｎ＝プロピオニル、ｉＰｎ＝イソプロピオニル、Ｂｔ＝ブチリル、ＶＩ＝バレリル、Ｖａｃ＝ビニルアセチル、Ｎｐｈ＝ナフトイル、Ｆｌｕ＝フルオレノイル。
【００２３】
これらＣＲＦアンタゴニストは、ｒ／ｈＣＲＦであれば１２番目、アストレシンＢであれば４番目に位置したであろう（ペプチドを伸長させるのが好ましいものの、Ｎ末端に存在し得る）Ｄ異性体を含む。この環状ペプチドは、
Ｙ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｄ−Ｘａａ−Ｒ５−Ｒ６−Ｒ７−Ａｒｇ−Ｒ９−Ｒ１０−Ｒ１１−Ｒ１２−Ｒ１３−Ｒ１４−Ｒ１５−Ｒ１６−Ｒ１７−Ｒ１８−Ｒ１９−Ｒ２０−Ｒ２１−Ｇｌｕ−Ｒ２３−Ｒ２４−Ｒ２５−Ｒ２６−Ａｒｇ−Ｒ２８−Ｒ２９−Ｒ３０−Ｒ３１−Ｒ３２−Ｒ３３−ＮＨ２
という式で表される環化ペプチド、または上記環状ペプチドと等価な非毒性塩であり、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＲ２５との間に環化結合を有する。上記式中、ＹはＨ、Ｔｙｒ、もしくはＤ−Ｔｙｒ、またはアシル基である。上記アシル基は、１５個から２０個の炭素原子を有するものであり、好ましくは１２個以下の炭素原子を有するものであり、より好ましくは例えばＡｃ（アセチル基）、Ｆｏｒ（ホルミル基）、Ａｃｒ（アクリリル基）、またはＢｚ（ベンゾイル基）のような１個から７個の炭素原子を有するものである。Ｒ１はＡｓｐまたはｄｅｓ−Ｒ１である。Ｒ２はＬｅｕまたはｄｅｓ−Ｒ２である。Ｒ３はＳｅｒもしくはＴｈｒ、またはｄｅｓ−Ｒ３である。Ｄ−ＸａａはＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｌｅｕ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−ｐＮＯ２Ｐｈｅ、Ｄ−Ｎａｌ、Ｄ−Ｔｒｐ、Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）、またはＤ−Ｐａｌである。Ｒ５はＨｉｓ、Ｔｙｒ、またはＧｌｕである。Ｒ６はＣＭＬまたはＬｅｕである。Ｒ７はＬｅｕまたはＣＭＬである。Ｒ９はＧｌｕ、ＣＭＬ、Ａｓｎ、またはＬｙｓである。Ｒ１０はＶａｌ、ＣＭＬ、Ｎｌｅ、またはＭｅｔである。Ｒ１１はＬｅｕ、ＣＭＬ、またはＩｌｅである。Ｒ１２はＧｌｕ、Ｄ−Ｇｌｕ、またはＨｉｓである。Ｒ１３はＮｌｅ、Ｌｅｕ、Ｎｖａ、またはＭｅｔである。Ｒ１４はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｄｐｇ、Ｔｈｒ、Ｄ−Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、またはＤ−Ｇｌｕである。Ｒ１５はＡｒｇ、Ｏｒｎ、またはＬｙｓである。Ｒ１６はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｄｐｇ、またはＣＭＬである。Ｒ１７はＧｌｕまたはＡｓｐである。Ｒ１８はＧｌｎ、Ａｓｎ、またはＬｙｓである。Ｒ１９はＬｅｕ、ＣＭＬ、Ａｉｂ、Ｄｐｇ、ＣＭＰ、またはＣＭＶである。Ｒ２０はＡｌａ、Ｄｐｇ、またはＡｉｂである。Ｒ２１はＧｌｎ、Ａｉｂ、Ｄｐｇ、またはＧｌｕである。Ｒ２３はＡｌａ、Ｄｐｇ、またはＡｉｂである。Ｒ２４はＡｉｂ、Ｄｐｇ、ＣＭＬ、Ｄ−ＣＭＬ、Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）、またはＤ−Ａｐｈ（Ｈｏｒ）である。Ｒ２５はＬｙｓまたはＯｒｎである。Ｒ２６はＡｓｎ、Ａｉｂ、Ｄｐｇ、ＣＭＬ、またはＤ−ＣＭＬである。Ｒ２８はＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ａｒｇ、Ｈａｒ、ＣＭＬ、またはＬｅｕである。Ｒ２９はＣＭＬ、Ｌｅｕ、またはＴｙｒである。Ｒ３０はＮｌｅ、ＣＭＬまたはＭｅｔである。Ｒ３１はＧｌｕ、Ａｉｂ、Ｄｐｇ、またはＡｓｐである。Ｒ３２はＣＭＰ、ＣＭＶ、ＣＭＬ、Ｉｌｅ、Ａｉｂ、Ｄｐｇ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、Ｎｖａ、Ｇｌｙ、またはＧｌｎである。Ｒ３３はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｄｐｇ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＣＭＬ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、Ｎｖａ、またはＧｌｎである。ただし、Ｒ１９をＡｉｂ、Ｄｐｇ、ＣＭＰ、またはＣＭＶとする第１の条件と、Ｒ２４をＣＭＬ、Ｄ−ＣＭＬ、ＣＭＶ、ＣＭＰ、Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）、またはＤ−Ａｐｈ（Ｈｏｒ）とする第２の条件とのうちの少なくとも一方を満たす。このようなＮ末端における任意のアシル化の代わりに、スルホンアミドを形成してもよい。あるいは、糖または脂質を添加することにより親水性を調節することができ、これにより作用の持続時間および溶解性を調節することもできる。「ｄｅｓ−Ｒ１」は、該当する位置にあったであろう残基を欠失させることを意味する。
【００２４】
好ましいＣＲＦアンタゴニストが有する別のグループは、
Ｙ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｄ−Ｘａａ−Ｒ５−Ｒ６−Ｒ７−Ａｒｇ−Ｒ９−Ｒ１０−Ｒ１１−Ｒ１２−Ｒ１３−Ｒ１４−Ｒ１５−Ｒ１６−Ｒ１７−Ｒ１８−Ａｉｂ−Ｒ２０−Ｒ２１−Ｇｌｕ−Ｒ２３−Ｒ２４−Ｒ２５−Ｒ２６−Ａｒｇ−Ｒ２８−Ｒ２９−Ｒ３０−Ｒ３１−Ａｉｂ−Ｒ３３−ＮＨ２
という式で表される環化ペプチド、または上記環状ペプチドと等価な非毒性塩であり、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＲ２５との間に環化結合を有する。式中、ＹはＨ、Ｔｙｒ、もしくはＤ−Ｔｙｒ、または１５個以下の炭素原子、好ましくは１２個以下の炭素原子、より好ましくは１個から７個の炭素原子を有する例えばＡｃ、Ｆｏｒ、Ａｃｒ、Ｂｚ等のアシル基である。Ｒ１は、Ａｓｐまたはｄｅｓ−Ｒ１である。Ｒ２はＬｅｕまたはｄｅｓ−Ｒ２である。Ｒ３はＳｅｒもしくはＴｈｒ、またはｄｅｓ−Ｒ３である。Ｄ−ＸａａはＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｌｅｕ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−Ｎａｌ、Ｄ−Ｔｒｐ、またはＤ−Ｐａｌである。Ｒ５はＨｉｓ、Ｔｙｒ、またはＧｌｕである。Ｒ６はＣＭＬまたはＬｅｕである。Ｒ７はＬｅｕまたはＣＭＬである。Ｒ９はＧｌｕ、ＣＭＬ、Ａｓｎ、またはＬｙｓである。Ｒ１０はＶａｌ、ＣＭＬ、Ｎｌｅ、またはＭｅｔである。Ｒ１１はＬｅｕ、ＣＭＬ、またはＩｌｅである。Ｒ１２はＧｌｕ、Ｄ−Ｇｌｕ、またはＨｉｓである。Ｒ１３はＮｌｅまたはＭｅｔである。Ｒ１４はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｔｈｒ、Ｄ−Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、またはＤ−Ｇｌｕである。Ｒ１５はＡｒｇ、Ｏｒｎ、またはＬｙｓである。Ｒ１６はＡｌａ、Ａｉｂ、またはＣＭＬである。Ｒ１７はＧｌｕまたはＡｓｐである。Ｒ１８はＧｌｎ、Ａｓｎ、またはＬｙｓである。Ｒ２０はＡｌａまたはＡｉｂである。Ｒ２１はＧｌｎ、Ａｉｂ、またはＧｌｕである。Ｒ２３はＡｌａまたはＡｉｂである。Ｒ２４はＨｉｓ、Ａｉｂ、Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）、またはＣＭＬである。Ｒ２５はＬｙｓまたはＯｒｎである。Ｒ２６はＡｓｎまたはＡｉｂである。Ｒ２８はＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ａｒｇ、Ｈａｒ、ＣＭＬ、またはＬｅｕである。Ｒ２９はＣＭＬ、Ｌｅｕ、またはＴｙｒである。Ｒ３０はＮｌｅ、ＣＭＬ、またはＭｅｔである。Ｒ３１はＧｌｕ、Ａｉｂ、またはＡｓｐである。Ｒ３３はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＣＭＬ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、Ｎｖａ、またはＧｌｎである。
【００２５】
好ましいＣＲＦアンタゴニストが有するさらに別のグループは、
Ｙ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｄ−Ｘａａ−Ｒ５−Ｒ６−Ｒ７−Ａｒｇ−Ｒ９−Ｒ１０−Ｒ１１−Ｒ１２−Ｒ１３−Ｒ１４−Ｒ１５−Ｒ１６−Ｒ１７−Ｒ１８−Ｒ１９−Ｒ２０−Ｒ２１−Ｇｌｕ−Ｒ２３−Ａｉｂ−Ｒ２５−Ｒ２６−Ａｒｇ−Ｒ２８−Ｒ２９−Ｒ３０−Ｒ３１−ＣＭＶ−Ｒ３３−ＮＨ２
という式で表される環化ペプチド、または上記式で表される環状ペプチドと等価な非毒性塩であり、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＲ２５との間に環化結合を有する。式中、ＹはＨ、Ｔｙｒ、もしくはＤ−Ｔｙｒ、またはアシル基である。上記アシル基は、１５個以下の炭素原子を有するものであり、好ましくは１２個以下の炭素原子を有するものであり、より好ましくは例えばＡｃ、Ｆｏｒ、Ａｃｒ、またはＢｚ等の１個から７個の炭素原子を有するものである。Ｒ１はＡｓｐまたはｄｅｓ−Ｒ１である。Ｒ２はＬｅｕまたはｄｅｓ−Ｒ２である。Ｒ３はＳｅｒもしくはＴｈｒ、またはｄｅｓ−Ｒ３である。Ｄ−ＸａａはＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｌｅｕ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−Ｎａｌ、Ｄ−Ｔｒｐ、またはＤ−Ｐａｌである。Ｒ５はＨｉｓ、Ｔｙｒ、またはＧｌｕである。Ｒ６はＣＭＬまたはＬｅｕである。Ｒ７はＬｅｕまたはＣＭＬである。Ｒ９はＧｌｕ、ＣＭＬ、Ａｓｎ、またはＬｙｓである。Ｒ１０はＶａｌ、ＣＭＬ、Ｎｌｅ、またはＭｅｔである。Ｒ１１はＬｅｕ、ＣＭＬ、またはＩｌｅである。Ｒ１２はＧｌｕ、Ｄ−Ｇｌｕ、またはＨｉｓである。Ｒ１３はＮｌｅまたはＭｅｔである。Ｒ１４はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｔｈｒ、Ｄ−Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、またはＤ−Ｇｌｕである。Ｒ１５はＡｒｇ、Ｏｒｎ、またはＬｙｓである。Ｒ１６はＡｌａ、Ａｉｂ、またはＣＭＬである。Ｒ１７はＧｌｕまたはＡｓｐである。Ｒ１８はＧｌｎ、Ａｓｎ、またはＬｙｓである。Ｒ１９はＣＭＶまたはＡｉｂである。Ｒ２０はＡｌａまたはＡｉｂである。Ｒ２１はＧｌｎ、Ａｉｂ、またはＧｌｕである。Ｒ２３はＡｌａまたはＡｉｂである。Ｒ２５はＬｙｓまたはＯｒｎである。Ｒ２６はＡｓｎまたはＡｉｂである。Ｒ２８はＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ａｒｇ、Ｈａｒ、ＣＭＬ、またはＬｅｕである。Ｒ２９はＣＭＬ、Ｌｅｕ、またはＴｙｒである。Ｒ３０はＮｌｅ、ＣＭＬ、またはＭｅｔである。Ｒ３１はＧｌｕ、Ａｉｂ、またはＡｓｐである。Ｒ３３はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＣＭＬ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、Ｎｖａ、またはＧｌｎである。このペプチドがｒ／ｈＣＲＦに非常に似ている場合、Ｒ１０をＶａｌ、Ｒ１４をＡｌａ、Ｒ１５をＡｒｇ、Ｒ１６をＡｌａ、Ｒ１７をＧｌｕ、Ｒ２０をＡｌａ、Ｒ３１をＧｌｕ、Ｒ３３をＩｌｅとして選択的に変更できるが、このような変更の全てまたは大部分を導入するのが望ましい。
【００２６】
好ましいＣＲＦアンタゴニストが有するさらに別のグループは、ｒ／ｈＣＲＦおよびｏＣＲＦの配列に基づく。この１０年間以上にわたって合成が実施されてきたが、ヒツジＣＲＦにおいて対応する位置にある残基のいずれも、生物学的効果を著しく変化させることなく、ｒ／ｈＣＲＦのアミノ酸配列と置換できることが一貫して示されている。このグループは、
Ｙ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｄ−Ｘａａ−Ｒ５−Ｒ６−Ｒ７−Ａｒｇ−Ｒ９−Ｒ１０−Ｒ１１−Ｒ１２−Ｒ１３−Ｒ１４−Ｒ１５−Ｒ１６−Ｒ１７−Ｒ１８−Ａｉｂ−Ｒ２０−Ｒ２１−Ｇｌｕ−Ｒ２３−Ａｉｂ−Ｒ２５−Ｒ２６−Ａｒｇ−Ｒ２８−Ｒ２９−Ｒ３０−Ｒ３１−Ａｉｂ−Ｒ３３−ＮＨ２
という式で表される環化ペプチド、または上記式で表される環状ペプチドと等価な非毒性塩であり、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＲ２５との間に環化結合を有する。式中、ＹはＨ、Ｔｙｒ、もしくはＤ−Ｔｙｒ、またはアシル基である。当該アシル基は、１５個以下の炭素原子を有するものであり、好ましくは１２個以下の炭素原子を有するものであり、より好ましくは例えばＡｃ、Ｆｏｒ、Ａｃｒ、またはＢｚ等の１個から７個の炭素原子を有するものである。Ｒ１はＡｓｐまたはｄｅｓ−Ｒ１である。Ｒ２はＬｅｕまたはｄｅｓ−Ｒ２である。Ｒ３はＳｅｒもしくはＴｈｒ、またはｄｅｓ−Ｒ３である。Ｄ−ＸａａはＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｌｅｕ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−Ｎａｌ、Ｄ−Ｔｒｐ、またはＤ−Ｐａｌである。Ｒ５はＨｉｓ、Ｔｙｒ、またはＧｌｕである。Ｒ６はＣＭＬまたはＬｅｕである。Ｒ７はＬｅｕまたはＣＭＬである。Ｒ９はＧｌｕ、ＣＭＬ、Ａｓｎ、またはＬｙｓである。Ｒ１０はＶａｌ、ＣＭＬ、Ｎｌｅ、またはＭｅｔである。Ｒ１１はＬｅｕ、ＣＭＬ、またはＩｌｅである。Ｒ１２はＧｌｕ、Ｄ−Ｇｌｕ、またはＨｉｓである。Ｒ１３はＮｌｅまたはＭｅｔである。Ｒ１４はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｔｈｒ、Ｄ−Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、またはＤ−Ｇｌｕである。Ｒ１５はＡｒｇ、Ｏｒｎ、またはＬｙｓである。Ｒ１６はＡｌａ、Ａｉｂ、またはＣＭＬである。Ｒ１７はＧｌｕまたはＡｓｐである。Ｒ１８はＧｌｎ、Ａｓｎ、またはＬｙｓである。Ｒ２０はＡｌａまたはＡｉｂである。Ｒ２１はＧｌｎ、Ａｉｂ、またはＧｌｕである。Ｒ２３はＡｌａまたはＡｉｂである。Ｒ２５はＬｙｓまたはＯｒｎである。Ｒ２６はＡｓｎまたはＡｉｂである。Ｒ２８はＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ａｒｇ、Ｈａｒ、ＣＭＬ、またはＬｅｕである。Ｒ２９はＣＭＬ、Ｌｅｕ、またはＴｙｒである。Ｒ３０はＮｌｅ、ＣＭＬ、またはＭｅｔである。Ｒ３１はＧｌｕ、Ａｉｂ、またはＡｓｐである。Ｒ３３はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＣＭＬ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、Ｎｖａ、またはＧｌｎである。
【００２７】
好ましいＣＲＦアンタゴニストが有するさらに別のグループは、
Ｙ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｄ−Ｘａａ−Ｒ５−Ｒ６−Ｒ７−Ａｒｇ−Ｒ９−Ｒ１０−Ｒ１１−Ｒ１２−Ｒ１３−Ｒ１４−Ｒ１５−Ｒ１６−Ｒ１７−Ｒ１８−Ｒ１９−Ｒ２０−Ｒ２１−Ｇｌｕ−Ｒ２３−Ｒ２４−Ｒ２５−Ｒ２６−Ａｒｇ−Ｒ２８−Ｒ２９−Ｒ３０−Ｒ３１−Ｒ３２−Ｒ３３−ＮＨ２
という式で表される環化ペプチド、または上記式で表される環状ペプチドと等価な非毒性塩であり、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＲ２５との間に環化結合を有する。式中、ＹはＨ、Ｔｙｒ、もしくはＤ−Ｔｙｒ、またはアシル基である。当該アシル基は、１５個以下の炭素原子を有するものであり、好ましくは１２個以下の炭素原子を有するものであり、より好ましくは例えばＡｃ、Ｆｏｒ、Ａｃｒ、またはＢｚ等の１個から７個の炭素原子を有するものである。Ｒ１はＡｓｐまたはｄｅｓ−Ｒ１である。Ｒ２はＬｅｕまたはｄｅｓ−Ｒ２である。Ｒ３はＳｅｒもしくはＴｈｒ、またはｄｅｓ−Ｒ３である。Ｄ−ＸａａはＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｌｅｕ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−Ｎａｌ、Ｄ−Ｔｒｐ、またはＤ−Ｐａｌである。Ｒ５はＨｉｓ、Ｔｙｒ、またはＧｌｕである。Ｒ６はＣＭＬまたはＬｅｕである。Ｒ７はＬｅｕまたはＣＭＬである。Ｒ９はＧｌｕ、ＣＭＬ、Ａｓｎ、またはＬｙｓである。Ｒ１０はＶａｌ、ＣＭＬ、Ｎｌｅ、またはＭｅｔである。Ｒ１１はＬｅｕ、ＣＭＬ、またはＩｌｅである。Ｒ１２はＧｌｕ、Ｄ−Ｇｌｕ、またはＨｉｓである。Ｒ１３はＮｌｅまたはＭｅｔである。Ｒ１４はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｔｈｒ、Ｄ−Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、またはＤ−Ｇｌｕである。Ｒ１５はＡｒｇ、Ｏｒｎ、またはＬｙｓである。Ｒ１６はＡｌａ、Ａｉｂ、またはＣＭＬである。Ｒ１７はＧｌｕまたはＡｓｐである。Ｒ１８はＧｌｎ、Ａｓｎ、またはＬｙｓである。Ｒ１９はＬｅｕまたはＣＭＬである。Ｒ２０はＡｌａまたはＡｉｂである。Ｒ２１はＧｌｎ、Ａｉｂ、またはＧｌｕである。Ｒ２３はＡｌａまたはＡｉｂである。Ｒ２４はＤ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）、ＣＭＬ、Ｄ−ＣＭＬ、またはＤ−Ａｐｈ（Ｈｏｒ）である。Ｒ２５はＬｙｓまたはＯｒｎである。Ｒ２６はＡｓｎまたはＡｉｂである。Ｒ２８はＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ａｒｇ、Ｈａｒ、ＣＭＬ、またはＬｅｕである。Ｒ２９はＣＭＬ、Ｌｅｕ、またはＴｙｒである。Ｒ３０はＮｌｅ、ＣＭＬ、またはＭｅｔである。Ｒ３１はＧｌｕ、Ａｉｂ、またはＡｓｐである。、Ｒ３２はＣＭＬ、Ｉｌｅ、Ａｉｂ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、Ｎｖａ、Ｇｌｙ、またはＧｌｎである。Ｒ３３はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＣＭＬ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、Ｎｖａ、またはＧｌｎである。高いＡＣＴＨ濃度およびコルチゾール濃度を低減させる見地から、特に生物学的に効果があると考えられるこのグループの特定の類似体は、［Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）２４］−アストレシンＢ、［ＣＭＬ２４］−アストレシンＢ、
［Ｄ−ＣＭＬ２４］−アストレシンＢ、および［Ｄ−Ａｐｈ（Ｈｏｒ）２４］−アストレシンＢである。ＴｙｒまたはＤ−ＴｙｒがＮ末端に存在すると、１２５Ｉを利用してペプチドを放射性同位体で標識することができるので便利である。
【００２８】
好ましいＣＲＦアンタゴニストが有するさらに別のグループは、
Ｙ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｄ−Ｘａａ−Ｒ５−Ｒ６−Ｒ７−Ａｒｇ−Ｒ９−Ｒ１０−Ｒ１１−Ｒ１２−Ｎｌｅ−Ｒ１４−Ｒ１５−Ｒ１６−Ｒ１７−Ｒ１８−Ａｉｂ−Ｒ２０−Ｒ２１−Ｇｌｕ−Ｒ２３−Ａｉｂ−Ｒ２５−Ｒ２６−Ａｒｇ−Ｒ２８−Ｒ２９−Ｒ３０−Ｒ３１−Ａｉｂ−Ｒ３３−ＮＨ２
という式で表される環化ペプチド、または上記式で表される環状ペプチドと等価な非毒性塩であり、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＲ２５との間に環化結合を有する。式中、ＹはＨ、Ｔｙｒ、もしくはＤ−Ｔｙｒ、またはアシル基である。当該アシル基は、１５個以下の炭素原子を有するものであり、好ましくは１２個以下の炭素原子を有するものであり、より好ましくは例えばＡｃ、Ｆｏｒ、Ａｃｒ、またはＢｚ等の１個から７個の炭素原子を有するものである。Ｒ１はＡｓｐまたはｄｅｓ−Ｒ１である。Ｒ２はＬｅｕまたはｄｅｓ−Ｒ２である。Ｒ３はＳｅｒもしくはＴｈｒ、またはｄｅｓ−Ｒ３である。Ｄ−ＸａａはＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｌｅｕ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−Ｎａｌ、Ｄ−Ｔｒｐ、またはＤ−Ｐａｌである。Ｒ５はＨｉｓ、Ｔｙｒ、またはＧｌｕである。Ｒ６はＣＭＬまたはＬｅｕである。Ｒ７はＬｅｕまたはＣＭＬである。Ｒ９はＧｌｕ、ＣＭＬ、Ａｓｎ、またはＬｙｓである。Ｒ１０はＶａｌ、ＣＭＬ、またはＮｌｅである。Ｒ１１はＬｅｕ、ＣＭＬ、またはＩｌｅである。Ｒ１２はＧｌｕまたはＨｉｓである。Ｒ１４はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｔｈｒ、またはＧｌｕである。Ｒ１５はＡｒｇ、Ｏｒｎ、またはＬｙｓである。Ｒ１６はＡｌａ、Ａｉｂ、またはＣＭＬである。Ｒ１７はＧｌｕまたはＡｓｐである。Ｒ１８はＧｌｎ、Ａｓｎ、またはＬｙｓである。Ｒ２０はＡｌａまたはＡｉｂである。Ｒ２１はＧｌｎ、Ａｉｂ、またはＧｌｕである。Ｒ２３はＡｌａまたはＡｉｂである。Ｒ２５はＬｙｓまたはＯｒｎである。Ｒ２６はＡｉｂ、ＣＭＬ、またはＤ−ＣＭＬである。Ｒ２８はＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ａｒｇ、Ｈａｒ、ＣＭＬ、またはＬｅｕである。Ｒ２９はＣＭＬ、Ｌｅｕ、またはＴｙｒである。Ｒ３０はＮｌｅまたはＣＭＬである。Ｒ３１はＧｌｕ、Ａｉｂ、またはＡｓｐである。Ｒ３３はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＣＭＬ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、Ｎｖａ、またはＧｌｎである。高いＡＣＴＨ濃度を低減させる見地から、特に生物学的に効果があると考えられるこのグループの類似体の１つは、［Ａｉｂ１９，２４，３２］−アストレシンＢである。
【００２９】
好ましいＣＲＦアンタゴニストが有するさらに別のグループは、
Ｙ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｄ−Ｘａａ−Ｒ５−Ｒ６−Ｒ７−Ａｒｇ−Ｒ９−Ｒ１０−Ｒ１１−Ｒ１２−Ｒ１３−Ｒ１４−Ｒ１５−Ｒ１６−Ｒ１７−Ｒ１８−Ｒ１９−Ｒ２０−Ｒ２１−Ｇｌｕ−Ｒ２３−Ａｉｂ−Ｒ２５−Ｒ２６−Ａｒｇ−Ｒ２８−Ｒ２９−Ｒ３０−Ｒ３１−Ｒ３２−Ｒ３３−ＮＨ２
という式で表される環化ペプチド、または上記式で表される環状ペプチドと等価な非毒性塩であり、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＲ２５との間に環化結合を有する。式中、ＹはＨ、Ｔｙｒ、もしくはＤ−Ｔｙｒ、またはアシル基である。当該アシル基は、１５個以下の炭素原子を有するものであり、好ましくは１２個以下の炭素原子を有するものであり、より好ましくは例えばＡｃ、Ｆｏｒ、Ａｃｒ、またはＢｚ等の１個から７個の炭素原子を有するものである。Ｒ１はＡｓｐまたはｄｅｓ−Ｒ１である。Ｒ２はＬｅｕ、またはｄｅｓ−Ｒ２である。Ｒ３はＳｅｒもしくはＴｈｒ、またはｄｅｓ−Ｒ３である。Ｄ−ＸａａはＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｌｅｕ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−Ｎａｌ、Ｄ−Ｔｒｐ、またはＤ−Ｐａｌである。Ｒ５はＨｉｓ、Ｔｙｒ、またはＧｌｕである。Ｒ６はＣＭＬまたはＬｅｕである。Ｒ７はＬｅｕまたはＣＭＬである。Ｒ９はＧｌｕ、ＣＭＬ、Ａｓｎ、またはＬｙｓである。Ｒ１０はＶａｌ、ＣＭＬ、Ｎｌｅ、またはＭｅｔである。Ｒ１１はＬｅｕ、ＣＭＬ、またはＩｌｅである。Ｒ１２はＧｌｕ、Ｄ−Ｇｌｕ、またはＨｉｓである。Ｒ１３はＮｌｅまたはＭｅｔである。Ｒ１４はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｔｈｒ、Ｄ−Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、またはＤ−Ｇｌｕである。Ｒ１５はＡｒｇ、Ｏｒｎ、またはＬｙｓであり、Ｒ１６はＡｌａ、Ａｉｂ、またはＣＭＬである。Ｒ１７はＧｌｕまたはＡｓｐである。Ｒ１８はＧｌｎ、Ａｓｎ、またはＬｙｓである。Ｒ１９はＡｉｂ、ＣＭＶ、またはＣＭＰである。Ｒ２０はＡｌａまたはＡｉｂである。Ｒ２１はＧｌｎ、Ａｉｂ、またはＧｌｕである。Ｒ２３はＡｌａまたはＡｉｂである。Ｒ２５はＬｙｓまたはＯｒｎである。Ｒ２６はＡｓｎまたはＡｉｂである。Ｒ２８はＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ａｒｇ、Ｈａｒ、ＣＭＬ、またはＬｅｕである。Ｒ２９はＣＭＬ、Ｌｅｕ、またはＴｙｒである。Ｒ３０はＮｌｅ、ＣＭＬ、またはＭｅｔである。Ｒ３１はＧｌｕ、Ａｉｂ、またはＡｓｐである。Ｒ３２はＡｉｂ、ＣＭＰ、またはＣＭＶである。Ｒ３３はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＣＭＬ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、Ｎｖａ、またはＧｌｎである。高いＡＣＴＨ濃度およびコルチゾール濃度を低減させる見地から、特に生物学的に効果があると考えられるこの基の類似体は、［ＣＭＰ１９，Ａｉｂ２４，３２］−アストレシンＢ、［ＣＭＰ１９，３２，Ａｉｂ２４］−アストレシンＢ、［Ａｉｂ１９，２４，ＣＭＰ３２］−アストレシンＢ、［ＣＭＶ１９，３２，Ａｉｂ２４］−アストレシンＢ、および［Ａｉｂ１９，２４，ＣＭＶ３２］−アストレシンＢである。
【００３０】
このペプチドは、排他的固相技術、部分的固相技術、断片縮合、または古典的溶液添加等の適切な方法によって合成される。例えば、特許文献８（その開示が参照によって本明細書に組み込まれる）に詳細に開示されている合成方法を利用してもよい。
【００３１】
ペプチドの化学合成において共通していることは、様々なアミノ酸部分の不安定な側鎖基を適切な保護基によって保護することであり、これにより、保護基が最終的に除去されるまでの間、化学反応がその部位で生じることが防止される。その物質がカルボキシ基において反応している間、アミノ酸または断片上にあるαアミノ基を保護すること、および次の反応をその部位において生じさせるためにαアミノ保護基を選択的に除去することもまた、ペプチドの化学合成において共通している。したがって、一般に、合成の一段階として、ペプチド鎖の所望の配列において、側鎖保護基を有する各アミノ酸残基を含む中間化合物が生成される。
【００３２】
例えば、１つの好ましい基からペプチド類似体を化学合成するためには、以下のアミノ酸配列の中間体を最初に形成してもよい。
Ｘ１−Ａｓｐ（Ｘ５）−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ（Ｘ２）−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｒ５（Ｘ７またはＸ５）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（Ｘ３）−Ｒ９（Ｘ５）−Ｒ１０−Ｌｅｕ−Ｒ１２（Ｘ５またはＸ８）−Ｎｌｅ−Ｒ１４（Ｘ２またはＸ５）−Ｒ１５（Ｘ３、Ｘ６、またはＸ８）−Ｒ１６−Ｒ１７（Ｘ５）−Ｒ１８（Ｘ４またはＸ６）−Ｒ１９−Ｒ２０−Ｒ２１（Ｘ４またはＸ５）−Ｒ２２（Ｘ５またはＸ８）−Ｒ２３−Ｒ２４（Ｘ３またはＸ７）−Ｒ２５（Ｘ６またはＸ８）−Ｒ２６（Ｘ４）−Ａｒｇ（Ｘ３）−Ｒ２８（Ｘ３またＸ６）−Ｒ２９（Ｘ７）−Ｎｌｅ−Ｒ３１（Ｘ５）−Ｒ３２（Ｘ２、Ｘ４、またはＸ５）−Ｒ３３（Ｘ４）−Ｘ９（ただし、Ｒ−基は上記で定義した通りである）。
【００３３】
Ｘ１は水素またはαアミノ保護基である。Ｘ１で表すαアミノ保護基は、当該技術分野においてポリペプチドの合成を段階的に行う際に有効であることが知られている。Ｘ１で表すαアミノ保護基の種類として、（１）好ましくはＮ末端でのみ使用される、ホルミル基（Ｆｏｒ）、アクリリル基（Ａｃｒ）、ベンゾイル基（Ｂｚ）、およびアセチル基（Ａｃ）等のアシル型保護基、（２）ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル基、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル基、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル基、およびｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基等のベンジルオキシカルボニル基（Ｚ）ならびに置換されたＺ等の芳香族ウレタン型保護基、（３）ｔ−ブチルオキシカルボニル基（ＢＯＣ）、ジイソプロピルメトキシカルボニル基、イソプロピルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、およびアリルオキシカルボニル基等の脂肪族ウレタン保護基、（４）フルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）、シクロペンチルオキシカルボニル基、アダマンチルオキシカルボニル基、およびシクロヘキシルオキシカルボニル基等のシクロアルキルウレタン型保護基、ならびに（５）フェニルチオカルボニル基等のチオウレタン型保護基が挙げられる。これらαアミノ保護基の中で好ましいのは、ＢＯＣおよびＦｍｏｃの２つである。
【００３４】
Ｘ２はＴｈｒまたはＳｅｒにおけるヒドロキシ基の保護基であり、好ましくは、アセチル基（Ａｃ）、ｔｅｒｔ−ブチル基、トリフェニルメチル（トリチル）基、テトラヒドロピラニル基、ベンジルエーテル基（Ｂｚｌ）、および２，６−ジクロロベンジル基（ＤＣＢ）からなる群から選択される。最も好ましい保護基はＢｚｌである。Ｘ２は水素とすることができる。すなわち、ヒドロキシ基に保護基がなくてもよい。
【００３５】
Ｘ３はＡｒｇまたはＨａｒにおけるグアニジノ基の保護基であり、好ましくは、ニトロ基、ｐ−トルエンスルホニル基（Ｔｏｓ）、Ｚ、アダマンチルオキシカルボニル基、およびＢＯＣからなる群から選択される。また、Ｘ３は水素とすることができる。ＢＯＣ戦略には、Ｔｏｓが最も好ましい。
【００３６】
Ｘ４はＡｓｎもしくはＧｌｎにおけるアミド基の保護基、または水素であり、好ましくはキサンチル基（Ｘａｎ）である。ＡｓｎまたはＧｌｎは、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）の存在下では、側鎖保護なしに結合することが多い。
【００３７】
Ｘ５はＡｓｐもしくはＧｌｕにおけるβ−カルボキシ基もしくはγ−カルボキシ基のエステル形成保護基、または水素であり、好ましくは、シクロヘキシル基（ＯＣｈｘ）、ベンジル基（ＯＢｚｌ）、２，６−ジクロロベンジル基、メチル基、エチル基、およびｔ−ブチル基（Ｏｔ−Ｂｕ）からなるエステル群から選択される。ＢＯＣ戦略にはＯＣｈｘが好ましい。
【００３８】
Ｘ６はＬｙｓもしくはＯｒｎにおける側鎖アミノ置換基の保護基、または水素である。適切な側鎖アミノ保護基の例としては、上記のＺ、２−クロロベンジルオキシカルボニル基（２Ｃｌ−Ｚ）、Ｔｏｓ、ｔ−アミルオキシカルボニル基（Ａｏｃ）、ＢＯＣ、芳香族ウレタン型保護基、および脂肪族ウレタン型保護基等が挙げられる。ＢＯＣ戦略には、２Ｃｌ−Ｚが好ましい。
【００３９】
Ｈｉｓが存在する場合、Ｘ７はＴｏｓおよび２，４−ジニトロフェニル基（ＤＮＰ）等のイミダゾール窒素の保護基、または水素であり、Ｔｙｒが存在する場合、Ｘ７はＤＣＢ等におけるヒドロキシ基の保護基、または水素である。Ｍｅｔが存在する場合、必要に応じて、硫黄を酸素で保護してもよい。
【００４０】
ペプチドの合成中において、αアミノ基が脱保護されている間に側鎖アミノ保護基が除去されるべきではない場合、側鎖アミノ保護基の選択が重要となる。したがって、αアミノ保護基と側鎖アミノ保護基とは、同一のものとすることができない。
【００４１】
Ｘ９はＮＨ２、エステル等の保護基、または固体樹脂支持体に結合させるための固相合成で使用されるアンカー結合を示す。固体樹脂支持体は、−ＮＨ−ベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂支持体、または−ＮＨ−パラメチルベンズヒドリルアミン（ＭＢＨＡ）樹脂支持体のどちらかであることが好ましい。ＢＨＡ樹脂またはＭＢＨＡ樹脂を開裂することにより、ＣＲＦ類似体アミドが直接生成される。このような樹脂のメチル誘導体を利用することにより、メチル置換アミドを生成することができる。このメチル置換アミドは、非置換アミドの同等物であると考えられる。
【００４２】
この中間体のアミノ酸配列において、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、およびＸ７のうち少なくとも１つは保護基である。あるいは、Ｘ９が樹脂支持体を含む。Ｒ−基ごとに選択された特定のアミノ酸により、付加された保護基の中に上記および当該技術分野において周知のものがあるかどうかが決定される。ペプチドを合成するために使用する特定の側鎖保護基を選択する際、（ａ）ペプチド合成の各段階において、試薬に対して、およびαアミノ保護基を除去するために選択する反応条件下において、保護基が安定であるべきこと、（ｂ）保護基は保護特性を保持すべきであり、結合条件下において分離すべきではないこと、および（ｃ）所望のアミノ酸配列を含むペプチドの合成が完了した際に、ペプチド鎖に影響を与えないという反応条件下において側鎖保護基を除去可能でなければならない、という規定に従う。
【００４３】
１５個以下の炭素原子、好ましくは１２個以下の炭素原子を有する、アセチル基（Ａｃ）、ホルミル基（Ｆｏｒ）、アクリリル基（Ａｃｒ）、ベンゾイル基（Ｂｚ）、プロピオニル基、ブチロイル基、バレロイル基、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基、およびテトラデカノイル基等のＹで表されるアシル基は、Ｎ末端をアシル化させるためには好ましいが、標識化を容易にするために４−ヒドロキシ−フェニルプロピオン酸（ｄｅｓ−ＮＨ２−Ｔｙｒ）および４−ヒドロキシ−フェニル酢酸等のヒドロキシアリール部分を含むアシル化剤を使用してもよい。あるいは、Ｙは適切な糖類または脂質でもよく、これら糖類および脂質は、親水性を調節するために利用できる同等物である。
【００４４】
本発明のペプチドは、古典的なペプチド溶液合成によって合成してもよい。また、このような合成は、大量生産を行うために好ましい可能性がある。例えば１ｋｇ未満等、限られた量のペプチドを取得するためには、１９６４年に発行された「Journal of American Chemical Society (J. Am. Chem. Soc ) 」第８５巻の２１４９ページにMerrifieldによって記載された固相合成法等の方法を利用して生成するのが好ましい。これにより、ＣＲＦアンタゴニストペプチドを簡単な方法で生成することができ、その生物活性を素早く試験して求めることができる。すなわち、様々なＣＲＦアンタゴニストペプチドを素早く生成して評価することができる。１９８１年１月２１日発行のRivierらによる米国特許第４，２４４，９４６号（その開示が参照によって本明細書に組み込まれる）に記載されているように、保護されたαアミノ酸を適切な樹脂に結合させることにより、ペプチドのＣ末端から固相合成が開始される。ヒトＣＲＦに基づくこのようなアンタゴニストの出発物質は、αアミノ保護ＩｌｅをＭＢＨＡ樹脂に結合させるによって生成することができる。
【００４５】
ＢＯＣで保護されたＩｌｅ（Ｒ３３）は、塩化メチレンおよび／またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）および／またはＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）中において、結合試薬を使用することによりＭＢＨＡ樹脂に結合される。ＢＯＣ−Ｉｌｅと樹脂支持体との結合に続いて、塩化メチレン中においてトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を使用することにより、あるいは、ＴＦＡを単独、またはジオキサン中においてＨＣｌと共に使用することによりαアミノ保護基を除去する。好ましくは、塩化メチレン中の５０体積％のＴＦＡを、０から５重量％の１，２エタンジチオールまたはｍ−クレゾールと共に使用する。脱保護は、約０℃から７０℃の間の温度で行う。Academic Press社が１９６５年に発行したSchroderおよびLubkeによる「The Peptides」第１巻の７２ページから７５ページに記載されているように、またはBaranyおよびMerrifieldによる周知の文書に記載されているように、他の一般的な開裂試薬を使用してもよく、さらに特定のαアミノ保護基を除去するための条件を利用してもよい。
【００４６】
Ｉｌｅのαアミノ保護基を除去した後、残存するαアミノおよび側鎖保護アミノ酸は、所望の順番で段階的に結合し、上記で定義したもの等の中間化合物が得られる。ペプチドの合成において、各アミノ酸を個別に添加する代わりに、そのうちのいくつかを固相反応器に添加する前に、溶液相において結合させてもよい。
【００４７】
ペプチドの固相合成で使用する活性化試薬または結合試薬は、ペプチドの分野において周知である。このような試薬の例として、Ν，Ν'−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、Ν，Ν'−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、およびＮ−エチル−Ｎ'−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等の適切なカルボジイミド類が挙げられる。他の活性化試薬およびペプチド結合におけるその使用法については、SchroderおよびLubkeによる「supra」第３章、および１９７０年発行のKapoorによる「Journal of Pharmaceutical Sciences (J. Phar. Sci) 」第５９巻の１ページから２７ページに記載されている。Ｐ−ニトロフェニルエステル（ＯＮｐ）を使用して、結合を行うためにＡｓｎまたはＧｌｎのカルボキシ末端を活性化することができる。例えば、ＤＭＦおよび塩化メチレンの５０％混合物中においてＨＯＢｔの同等物を使用することにより、一晩でＢＯＣ−Ａｓｎ（ＯＮｐ）を結合することができる。
【００４８】
より新しい他の結合試薬は、ＨＢＴＵ、ＴＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＢＯＰ、およびＰｙＢｏｐを含む。
【００４９】
各保護アミノ酸またはアミノ酸配列を３倍の過剰量で固相反応器に導入し、室温にて、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）：ＣＨ２Ｃｌ２（１：１）またはＣＨ２Ｃｌ２単独の溶媒で樹脂支持体への結合を実施する。あるいは、マイクロ波合成装置内で、ＮＭＰ中、トルエン：ＤＭＳＯ（７０：３０）の混合液中、または、ＤＭＦ中において、約７０℃まで温度を上昇させて樹脂支持体への結合を実施してもよい。このような結合を手作業で実施する場合、ペプチド合成の各段階において結合反応が成功したかどうかについては、１９７０年に発行されたE. Kaiserらによる「Analytical Biochemistry (Anal. Biochem)」第３４巻の５９５ページに記載されているように、ニンヒドリン反応により測定する。結合が不完全な場合、この結合手順を繰り返した後、次のアミノ酸の結合に先立ち、αアミノ保護基を除去する。この結合反応は、例えば、１９７８年に発行された、Rivierらによる「Biopolymers」第１７巻の１９２７ページから１９３８ページに記載されているもの等のプログラムを用いて、ＣＳＢｉｏ社製の自動合成装置モデル３５６上で自動的に実施することができる。
【００５０】
所望のアミノ酸配列が完成した後、上記のように、樹脂支持体に結合している間に環化結合を形成することが望まれない限り、樹脂支持体から中間体ペプチドを除去する。ペプチドを樹脂から開裂するだけでなく、（最終的なペプチド内に存在することが期待されるアシル基でない限り）側鎖保護基Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、およびＸ７ならびにαアミノ保護基Ｘ１が残っていれば、それらもすべて開裂する液体フッ化水素（ＨＦ）等の試薬で処理することによって、中間体ペプチドが除去され、ペプチドが得られる。ペプチドを開裂させるためにフッ化水素を使用する場合、アニソールまたはクレゾール、およびメチルエチル硫化物が捕捉剤として反応容器に含まれる。Ｍｅｔが配列に存在する場合、潜在的なＳ−アルキル化を防ぐために、ペプチドを樹脂から開裂する前に、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／エタンジチオールを用いてＢＯＣ保護基を開裂してもよい。
【００５１】
アミド環化結合（ラクタムブリッジ）を生じさせるために、米国特許第５，０６４，９３９号および米国特許第５，０４３，３２２号（その開示が参照によって本明細書に組み込まれる）に記載されているように、部分保護ペプチドが樹脂に結合している間に、環化を実施してもよい。このような手順により、ペプチド中間体内のＡｓｐ、Ｇｌｕ、および／またはＬｙｓ等の他の残基がその側鎖保護を維持しつつ、２つの所望の側鎖間に効果的にアミド環化結合が生じる。
【００５２】
アストレシンＢの２２番目の残基の側鎖カルボキシ基と２５番目の残基の側鎖アミノ基との間のアミド結合を介して環化を実施する場合、ＭＢＨＡ樹脂またはＢＨＡ樹脂上で保護ペプチドを合成し、ペプチドが依然として樹脂に結合している間に、特定のカルボン酸側鎖のベンジルエステルをヒドラジドに誘導体化し、これを米国特許第５，０４３，３２２号に記載の選択的に脱保護されたアミノ側鎖と反応させるのが好ましい。好ましくは、アミド結合ブリッジに関与する残基におけるカルボキシ側鎖の例えばＯＦｍ等の塩基に不安定な保護基、および関与する他の残基におけるアミノ側鎖の保護基としてのＦｍｏｃを利用して環化を実施する。ピペリジン等を利用することで塩基に不安定なこの２つの基は除去されるものの、中間体のＮ末端の残基におけるαアミノ保護基および他の側鎖保護基はすべて定位置にとどまる。このような選択的除去に続いて、アミド結合の生成を実質的に完了させるＤＩＰＥＡ塩基およびＰｙＢＯＰ試薬で処理することにより、環化を実施するための反応が起こる。環化に続き、ＨＦ等の試薬を用いることで、ペプチドが完全に脱保護され樹脂から開裂される。特にＮ末端がアシル化されている場合、ＴＦＡを用いて、任意に、ＢＯＣ保護基をＮ末端から最初に除去する。
【００５３】
あるいは、このようなアミド結合を生成することにより、米国特許第４，１１５，５５４号（１９７８年９月１９日）、米国特許第４，１３３，８０５号（１９７９年１月９日）、米国特許第４，１４０，７６７号（１９７９年２月２０日）、米国特許第４，１６１，５２１号（１９７９年７月１７日）、米国特許第４，１９１，７５４号（１９８０年３月４日）、米国特許第４，２３８，４８１号（１９８０年１２月９日）、米国特許第４，２４４，９４７号（１９８１年１月１３日）、および米国特許第４，２６１，８８５号（１９８１年４月１４日）の教示を利用して、ペプチドの環化を実施することもできる。
【００５４】
対象のペプチドがどのようなＣＲＦ活性を示すかを決定するために、単層培養したラット下垂体前葉細胞を利用して簡単なin vitro測定を実施することができる。この手順としては、１９７２年に発行された「Endocrinology」第９１巻の５６２ページに記載されている手順を使用する。この測定により、対象のペプチドがＣＲＦアゴニストとしての活性を示すかどうか、およびこのような細胞のＣＲＦ受容体を活性化することによりＡＣＴＨ分泌が促進されるかどうかが示される。このようにして、高容量の使用により内因性ＣＲＦ活性を測定する。チャレンジ容量のＣＲＦ（通常はｏＣＲＦまたはｒ／ｈＣＲＦ）と共に投与された場合、基本的には同様のin vitro測定を利用して、対象のペプチドが強いＣＲＦ拮抗特性を示すかどうかを決定する。
【００５５】
対象のＣＲＦアンタゴニストペプチドもまた、例えば、１９８６年発行の「Endocrinology」第１１８巻の１１７１ページから１１７９ページにPerrin, M.らによって記載されたＣＲＦ受容体等の周知のＣＲＦ受容体を用いた結合アッセイにより、容易に評価することができる。結合アッセイについては、本明細書の後半で詳述するが、ヒトＣＲＦ−Ｒを用いて実施してもよい。（ｃｙｃｌｏ３０−３３）［Ｉ１２５−Ｄ−Ｔｙｒ１２，Ｇｌｕ３０，Ｌｙｓ３３，Ｎｌｅ２１，３８］−ｒ／ｈＣＲＦ（１２−４１）等の放射性リガンド、およびＤ−Ｈｉｓ３２を有するその類似体は、ヒトＣＲＦ−Ｒに対して高い親和性を有する。例えば、最初に名付けられた化合物は、ｈＣＲＦ−Ｒｌに対して２．０ｎＭ（１．４−２．９）のＫＤを有する。これは、相当するＤ−Ｐｈｅ１２類似体のＫＤと基本的に同一である。ＣＲＦ−Ｒ受容体を利用したこのような代表的な結合アッセイは、１９９３年１０月発行の、Chenらによる「Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America (P.N.A.S.) 」第９０巻の８９６７ページから８９７１ページに記載されている。これら環状ペプチドの中には、周知のＣＲＦ受容体すべてに対して高い結合親和性を示すものがあるので、スクリーニングアッセイで使用すると特に有効である。高い親和性を有するこのような標識環状ＣＲＦアンタゴニストを用いて、ペプチド状の、または別の形状の潜在的なＣＲＦ様リガンドをスクリーニングするために、このようなアッセイを有利に利用する。
【００５６】
以下の実施例Ｉに、ＢＯＣ戦略を用いた固相法によってＣＲＦアンタゴニストを合成するための好ましい方法を記載する。
【００５７】
（実施例Ｉ）
アミノ酸配列Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−ＣＭＬ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＬ−Ｉｌｅ−ＮＨ２を有し、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する［Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）２４］−アストレシンＢの合成を段階的に実施した。
【００５８】
（ｃｙｃｌｏ（３０−３３）［ＤＰｈｅ１２，Ｎｌｅ２１，３８，Ｌｅｕ（Ｍｅ）２７，４０，Ｇｌｕ３０，ＤＡｐｈ（Ｃｂｍ）３２，Ｌｙｓ３３］Ａｃ−ｈＣＲＦ（９−４１）；［ＤＡｐｈ（Ｃｂｍ）２４］アストレシンＢの合成）
環化される残基の側鎖を直交保護（ＦｍｏｃおよびＯＦｍ）することで、ＢＯＣ戦略を用いて、ＭＢＨＡ樹脂上において、固相法により、段階的に本ペプチドを合成した。アミノ酸誘導体Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｓｎ（Ｘａｎ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ｃＨｅｘ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｇｌｎ（Ｘａｎ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ｃＨｅｘ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｄｎｐ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｎｌｅ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（２−Ｂｒ−Ｃｂｚ）−ＯＨ、およびＢｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨをBachem社（アメリカ合衆国カリフォルニア州トランス）、Chem-Impex International社（アメリカ合衆国イリノイ州ウッドデール）、Novabiochem社（アメリカ合衆国カリフォルニア州サンディエゴ）、Reanal社（ハンガリー、ブダペスト）、およびAApptec社（アメリカ合衆国ケンタッキー州ルイビル）から取得した。前述のように、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ（Ｍｅ）−ＯＨ｛Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ、１９９３＃１９７０｝およびＢｏｃ−ＤＡｐｈ（Ｃｂｍ）−ＯＨ｛Ｊｉａｎｇ、２００１＃２８２８｝を合成した。溶媒はすべて試薬用以上のものとした。ペプチド合成装置は、ＣＳＢｉｏ社の製品（モデル３５６）とした。１％のｍ−クレゾールを含有するＴＦＡを使用してＢｏｃ基を除去した。ＤＩＣ／ＨＯＢｔにより主鎖の集合を調節した。ＭＢＨＡ樹脂（０．４ｍＭ／ｇ）の元の置換に基づいて、１．６ｍＭ（４倍過剰量）の保護アミノ酸を使用した。結合時間は６０分としたが、Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ｃＨｅｘ）−ＯＨとＢｏｃ−Ｇｌｎ（Ｘａｎ）−ＯＨとの再結合を、それぞれ３２番目の残基（ＣＭＬ）および１９番目の残基（ＣＭＬ）の後に適用した。配列の決定後、過剰量の無水酢酸を用いて、Ｎ末端のアセチル化をＤＣＭ中で１５分間実施した。２０％のチオフェノールを用いて、ＮＭＰ中に３時間浸漬することにより、ヒスチジンの側鎖のＤＮＰ保護基を開裂した。２０％のピペリジン／ＮＭＰ（２×１０分）溶液を用いて、３３番目の残基（Ｌｙｓ）側鎖のＦｍｏｃ基および３０番目の残基（Ｇｌｕ）側鎖のＯＦｍ基の脱保護を同時に実施し、その後、ＮＭＰ、ＭｅＯＨ、１０％のＴＥＡ／ＤＣＭ、およびＤＣＭにより、連続的に洗浄した。ＮＭＰ溶液中にＰｙＢｏｐおよびＤＩＰＥＡを添加し、室温で数時間、ニンヒドリン試験で陰性を示すまで浸漬させることにより、ラクタム形成を実施した。
【００５９】
アニソール（５から１０％ｖ／ｖ）の存在下において、０℃で９０分間、無水ＨＦによりペプチドを開裂し、脱保護を実施した。粗ペプチドを沈殿させ、無水ジエチルエーテルで洗浄し、濾過し、ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（６０：４０）にＴＦＡを溶解させて得た０．１％のＴＦＡ溶液を用いて樹脂からペプチドを抽出し、凍結乾燥した。ＲＰ−ＨＰＬＣおよび３つの溶媒系（ｐＨ２．２５のＴＥＡＰ、ｐＨ６．５のＴＥＡＰ、および０．１％のＴＦＡを連続して）を用いてペプチドを精製した。第１の精製段階において、溶離液Ｂをベースラインの濃度から１分間につき０．３％の割合で直線的に増加させ（溶離液ＡはｐＨ２．２５のＴＥＡＰ、溶離液Ｂは６０％のＣＨ３ＣＮと４０％の上記Ａとの混合液）、その後、第２の精製段階では、溶離液Ｂをベースラインの濃度から１分間につき１％の割合で直線的に増加させた（溶離液ＡはｐＨ６．５のＴＥＡＰ、溶離液Ｂは６０％のＣＨ３ＣＮと４０％の上記Ａとの混合液）。
【００６０】
第３の精製段階において、溶離液Ｂをベースラインの濃度から１分間につき１％の割合で直線的に増加させることにより（溶離液Ａは０．１％のＴＦＡ、溶離液Ｂは６０％のＣＨ３ＣＮと４０％の上記Ａとの混合液）、ペプチドを脱塩した。無勾配条件（０．１％のＴＦＡを含有するＣＨ３ＣＮ（４５％）／Ｈ２０（５５％））において、Grace Vydac社製のＣ１８カラム上で、分析ＲＰ−ＨＰＬＣを用いて、実施毎に得られた画分を試験した。最後の精製段階の後、高品質の画分をプールして、凍結乾燥した。ＩＢＭパーソナルシステム／２モデル５０Ｚで制御されたベックマンＰ／ＡＣＥシステム２０５０およびChromJet積分器を用いて、キャピラリーゾーン電気泳動（ＣＺＥ）により、ペプチドの純度を求めた。電界強度は３０℃で１５ｋＶ、移動相はSupelcoP１７５キャピラリー（３６３μｍＯＤ×７５μｍＩＤ×５０ｃｍ長）において、ｐＨ２．５０で１００ｍＭのリン酸ナトリウム（Ｈ２０：ＣＨ３ＣＮ＝８５：１５）とした。純度は８５％であった。分析ＨＰＬＣによる純度は７８％（ＲＴ＝２５．８７分）であった。GE Healthcare AKTApurifier 10およびPhenomenex Kinetex XB-C18カラム（４．６×１００ｍｍ、粒径２．６μｍ、細孔径１００Å）を用いてＲＰ−ＨＰＬＣを実施した。この溶媒系は、溶離液Ａ（ｐＨ６．５で０．０１５ＭのＴＥＡＰ）および溶離液Ｂ（６０％のＣＨ３ＣＮと４０％の上記Ａとの混合液）を含む。１．２ｍＬ／分の流量で４０分間（溶離液Ｂが９０％の状態で維持）、溶離液Ｂが５０％から９０％になるまで直線的に増加させた。検出は２１４ｎｍにおいて実施した。生成物のＭＳ分析により、４０３０．１７Ｄａの［Ｍ＋Ｈ］＋質量が示されたが、これは算出された４０２９．２８Ｄａの値と一致する。
【００６１】
生成物ペプチドのin vitroでの生物学的効果は、以下のように測定することができる。雄ＳＤ（Sprague-Dawley）ラットの脳下垂体前葉をコラゲナーゼにより解離し、２％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有する培地にプレーティングする（４８個のウェルプレートに０．１６×１０６細胞／ウェル）。プレーティングしてから３日後、０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有する新しい培地で細胞を３回洗浄し、１時間培養する。１時間の前培養の後、細胞をもう１度洗浄し、１ｎＭのｏＣＲＦの存在下で試験ペプチドを添加する。３時間の培養期間の終わりに培地を回収し、ラジオイムノアッセイ（Diagnostic Products社）により、ＡＣＴＨの濃度を求める。
【００６２】
このペプチドを投与すると、ＡＣＴＨの分泌およびβ−エンドルフィン様免疫活性（β−ＥＮＤ−ＬＩ）が抑制される。さらに、このペプチドは、抑制持続時間が特に長い。これらＣＲＦアンタゴニストを試験するために採用されるin vivoアッセイでは、副腎摘出（ＡＤＸ）ラットを用いる。ハロタン麻酔下において、腰部アプローチにより、成熟雄ＳＤラット（２３０から２５０ｇ）の副腎を摘出する。ラットの餌としてオレンジを追加し、飲用水中には０．９％のＮａＣｌを添加した。実験の２日前、１９８２年発行のC. Rivierらによる「Endocrinology」第１１０巻の２７２ページから２７８ページに記載されているように、ラットに頸静脈カニューレを装着する。実験当日の朝、この頸静脈カニューレをヘパリン添加生理食塩水で満たしたラインに接続し、ラットを個別のバケツに入れ、そのまま２時間放置する。実験のために、第１の血液サンプルを０．３ｍＬ採血し、試験溶液を注射し（０．２から０．５ｍＬ容積）、その後、約１５分、４５分、９０分、１２０分後にそれぞれ血液サンプルを採取した。この血液サンプルを遠心分離し、ＡＣＴＨの値を測定するまで、分離した血漿を凍結（−２０°Ｃ）しておく。１９９４年発行の、C. Rivierらによる「The Journal of Neuroscience (J. Neuroscience) 」第１４巻の１９８５ページに記載されているようにして、血漿ＡＣＴＨ濃度を測定する。
【００６３】
１ｍｇ／ｋｇ体重の濃度でin vivo試験を実施した結果、注射後１５分に採取したサンプルにおいては、血清中のＡＣＴＨ濃度を低減させる上で、環状ＣＲＦアンタゴニストは一般的なＣＲＦアンタゴニストよりも有効であることが示されている。注射後４５分に採取したサンプルにおいては、この環状ＣＲＦアンタゴニストによって注射後１５分のサンプルよりもさらにＡＣＴＨ濃度が低減される。その一方、一般的なＣＲＦアンタゴニストを投与した場合、その効果は自然に消え、ＡＣＴＨ濃度は対照群とほぼ同じになる。注射後９０分のサンプルのＡＣＴＨ濃度は、この環状ＣＲＦアンタゴニストで処理されたラットの場合、対照群や一般的なＣＲＦアンタゴニストで処理されたラットのＡＣＴＨ濃度よりもはるかに低いレベルに維持される。注射後１２０分のサンプルのＡＣＴＨ濃度は、基本的に通常時のレベルに戻る。０．３ｍｇ／ｋｇ体重の濃度で試験した場合、注射後１５分のサンプルおよび注射後４５分のサンプルにおいては、基本的に同じ結果となる。しかし、注射後９０分のサンプルでは、一般的なＣＲＦアンタゴニストで処理されたラットよりも改善が見られる。ただし、これは１ｍｇ／ｋｇ体重の濃度で注射した場合ほど顕著ではない。
【００６４】
一連の試験をさらに実施する。この試験において、２組のラットには、０．１ｍｇ／ｋｇおよび０．０３ｍｇ／ｋｇの濃度の環状ＣＲＦアンタゴニストを注射し、他のラットには３ｍｇ／ｋｇの濃度の一般的なＣＲＦアンタゴニストを注射する。１５分のサンプルと４５分のサンプルにおいては、以前に実施した２回の試験と基本的に同じ結果となるが、３ｍｇ／ｋｇの一般的なＣＲＦアンタゴニストを注射した場合よりも、０．０３ｍｇ／ｋｇの環状ＣＲＦアンタゴニストを注射した時の方が改善が見られる。９０分のサンプルにおいては、３ｍｇ／ｋｇの一般的なＣＲＦアンタゴニストを注射したラットよりもさらに改善が見られる。しかし、１２０分のサンプルにおいては、ＡＣＴＨ濃度が基本的に試験の初めのレベル程度に戻ってしまう。試験により、この環状ＣＲＦアンタゴニストは、一般的なＣＲＦアンタゴニストの量の１／１００の濃度で使用しても、４５分間以上にわたって実質的に高い効果を示すことが分かっている。まとめると、これらデータは、環状ペプチドが長時間作用するということを示唆している。in vivoで皮下（ｓ．ｃ．）投与すると、環状ペプチドはアストレシンＢよりも実質上長く作用する。
【００６５】
このペプチドもまた、結合アッセイにより評価した。標準物質の存在下で、ＣＲＦＲｌまたはＣＲＦＲ２のどちらかを発現する細胞膜に対するペプチドの結合親和性（Ｋｉ，ｎＭ）を測定した。その値は、一時的に各受容体を発現するＣＯＳＭ６細胞の放射性リガンドおよび粗膜画分として非選択的１２５Ｉ−標識アゴニスト［Ｔｙｒ０，Ｇｌｕ１，Ｎｌｅ１７］−ソーバジンを利用した競合的放射性リガンド置換アッセイに基づく。すなわち、２００，０００ｃｐｍ（ｃａ．０．５ｎＭ）の１２５Ｉ−［Ｔｙｒ０，Ｇｌｕ１，Ｎｌｅ１７］−ソーバジンを０．２ｍＬのアッセイ緩衝液（ｐＨ７．５の５０ｍＭのＨｅｐｅｓナトリウム、１０ｍＭのＭｇＣ１２、２ｍＭのＥＧＴＡ、０．１％のＢＳＡ）中において０．１から１０００ｎＭまで濃度を増加させたペプチド（最初にＤＭＳＯ中において１０ｍｇ／ｍＬに希釈する）と組み合わせて、２０℃で９０分間培養した。Ｍｕｌｔｉ−Ｓｃｒｅｅｎ９６ウェルプレート（アメリカ合衆国マサチューセッツ州ベッドフォード、Millipore社）において、ＧＦ／Ｃフィルターを用いて反応を実施した。プレーティングを経た吸引により結合を完了し、その後、０．２ｍｌアッセイ緩衝液で洗浄した。すべてのアッセイにおいて、１００から２００ｎＭの非識別リガンドの存在下で残存する１分間ごとに数えられる非特異的結合のためのチューブを利用した。ＬＩＧＡＮＤコンピュータプログラム（１９８０年発行のMunson PJおよびRodbard Dによる「Analytical Biochemistry (Anal Biochem) 」第１０７巻の２２０ページから２３９ページに記載のLigand: A versatile computerized approach for characterization of ligand-binding systems）を利用して少なくとも３つの独立したアッセイからデータをプールすることにより、Ｋｉｓならびにその９５％信頼区間の上限値および下限値を求めた。このようにして合成された環状ペプチド生成物は、「一般的な」ペプチド、すなわち、アストレシンＢに比べて、ＣＲＦＲｌに対して約１．３倍およびＣＲＦＲ２に対して約３倍の生物学的効果を示す。
【００６６】
（実施例ＩＡ）
三重バッチを利用して実施例Ｉの合成を繰り返す。ただし、Ｎ末端でペプチドを短縮する。Ｄ−Ｐｈｅを添加し、それからＴｈｒを添加した後、元の樹脂の量の１／３を除去する。Ｌｅｕを添加することで合成は完了する。開裂後、［Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）２４］アストレシンＢ（２−３３）、［Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）２４］アストレシンＢ（３−３３）、および［Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）２４］アストレシンＢ（４−３３）の３つのペプチドが生成される。
【００６７】
上述のように、実験室レベルの一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢと比較しながら、各ペプチドの生物学的効果をin vitroで測定する。その結果は、一般的に実施例Ｉの結果と同じであるが、生物学的効果がわずかに低い。
【００６８】
（実施例ＩＩ）
Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）の代わりにＣＭＬを用いて実施例Ｉの合成を繰り返し、［ＣＭＬ２４］−アストレシンＢというペプチドを生成する。このペプチドは、
Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−ＣＭＬ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−ＣＭＬ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＬ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【００６９】
この生成物のＭＳ分析により、３９５１．３３Ｄａの［Ｍ＋Ｈ］＋質量が示され、これは算出された３９５１．２９Ｄａの値と一致する。この生成物の純度は、ＣＺＥで確認すると約７７％、ＨＰＬＣで確認すると９０％（ＲＴ＝２７．０４分）である。上述のようにして求めたペプチドの生物学的効果は、実験室レベルの一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢと比べて、ＣＲＦＲ１に対してはほぼ同じであり、ＣＲＦＲ２に対しては２倍の効果がある。
【００７０】
（実施例ＩＩＡ）
Ｄ−ＣＭＬの代わりにＣＭＬを用いて実施例ＩＩの合成を繰り返し、［Ｄ−ＣＭＬ２４］−アストレシンＢというペプチドを生成する。このペプチドは、
Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−ＣＭＬ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｄ−ＣＭＬ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＬ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【００７１】
この生成物のＭＳ分析により、３９５１．５９Ｄａの［Ｍ＋Ｈ］＋質量が示され、これは算出された３９５１．２９Ｄａの値と一致する。この生成物の純度は、ＣＺＥで確認すると約７５％、ＨＰＬＣ（ＲＴ＝２８．１４分）で確認すると８４％である。上述のようにして求めたペプチドの生物学的効果は、実験室レベルの一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢとほぼ同じである。
【００７２】
（実験例ＩＩＢ）
ＣＭＬの代わりにＤ−Ａｐｈ（Ｈｏｒ）を用いて実施例ＩＩの合成を繰り返し、［Ｄ−Ａｐｈ（Ｈｏｒ）２４］−アストレシンＢというペプチドを生成する。このペプチドは、
Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−ＣＭＬ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｐｈ（Ｈｏｒ）−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＬ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【００７３】
このペプチドの生物学的効果は、実験室レベルの一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢとほぼ同じである。
【００７４】
（実施例ＩＩＩ）
１９番目の残基はＣＭＬではなくＣＭＰであり、２４番目の残基および３２番目の残基は、それぞれＤ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）およびＣＭＬではなくＡｉｂである点を除き、実施例Ｉのようにして、Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−ＣＭＰ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｉｂ−Ｉｌｅ−ＮＨ２というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する［ＣＭＰ１９，Ａｉｂ２４，３２］−アストレシンＢの合成を実施する。
【００７５】
この生成物のＭＳ分析により、３９０１．０８Ｄａの［Ｍ＋Ｈ］＋質量が示され、これは算出された３９０１．１８Ｄａの値と一致する。この生成物の純度は、ＣＺＥで確認すると約９９％、ＨＰＬＣ（ＲＴ＝２３．５７分）で確認すると９４％である。上述のようにして求めたペプチドの生物学的効果は、実験室レベルの一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢとほぼ同じである。
【００７６】
（実験室ＩＩＩＡ）
実施例Ｉの一般合成を利用して、［ＣＭＰ１９，３２，Ａｉｂ２４］−アストレシンＢというペプチドを生成する。このペプチドは、
Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−ＣＭＰ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＰ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【００７７】
この生成物のＭＳ分析により、３９７７．７６Ｄａの［Ｍ＋Ｈ］＋質量が示され、これは算出された３９７７．２１Ｄａの値と一致する。この生成物の純度は、ＣＺＥで確認すると約９５％、ＨＰＬＣ（ＲＴ＝２６．９２分）で確認すると７７％である。上述のようにして求めたペプチドの生物学的効果は、ＣＲＦＲ１に対しては、一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢの０．５倍であり、ＣＲＦＲ２に対しては同じである。
【００７８】
（実施例ＩＩＩＡＡ）
実施例Ｉの一般合成を利用して、［ＣＭＰ１９，Ａｉｂ２４］−アストレシンＢというペプチドを生成する。このペプチドは、
Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−ＣＭＰ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＬ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【００７９】
上述のようにして求めたペプチドの生物学的効果は、一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢよりも高い。
【００８０】
（実施例ＩＩＩＢ）
実施例Ｉの一般合成を利用して、［Ａｉｂ１９，２４，ＣＭＰ３２］−アストレシンＢというペプチドを生成する。このペプチドは、
Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｉｂ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−ＧＬ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＰ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【００８１】
この生成物のＭＳ分析により、３９０１．１８Ｄａの［Ｍ＋Ｈ］＋質量が示され、これは算出された３９０１．１８Ｄａの値と一致する。この生成物の純度は、ＣＺＥで確認すると約８４％、ＨＰＬＣ（ＲＴ＝２４．１８分）で確認すると８０％である。上述のようにして求めたペプチドの生物学的効果は、一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢに比べ、ＣＲＦＲ１に対しては、約３分の１の効果があり、ＣＲＦＲ２に対しては１．３倍の効果がある。
【００８２】
（実施例ＩＩＩＣ）
実施例Ｉの一般合成を利用して、［ＣＭＶ１９，３２，Ａｉｂ２４］−アストレシンＢというペプチドを生成する。このペプチドは、
Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−ＣＭＶ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＶ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【００８３】
この生成物のＭＳ分析により、３８８１．１９Ｄａの［Ｍ＋Ｈ］＋質量が示され、これは算出された３８８１．２２Ｄａの値と一致する。この生成物の純度は、ＣＺＥで確認すると約９５％、ＨＰＬＣ（ＲＴ＝２３．８２分）で確認すると９１％である。上述のようにして求めたペプチドの生物学的効果は、一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢに比べ、ＣＲＦＲ１に対しては、約２分の１の効果があり、ＣＲＦＲ２に対しては１０倍の効果がある。
【００８４】
（実施例ＩＩＩＤ）
実施例Ｉの一般合成を利用して、［Ａｉｂ１９，２４，ＣＭＶ３２］−アストレシン−Ｂというペプチドを生成する。このペプチドは、
Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｉｂ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−ＣＭＶ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【００８５】
この生成物のＭＳ分析により、３８５３．０５Ｄａの［Ｍ＋Ｈ］＋質量が示され、これは算出された３８５３．１８Ｄａの値と一致する。この生成物の純度は、ＣＺＥで確認すると約９７％であり、ＨＰＬＣ（ＲＴ＝２２．０６分）で確認すると９０％である。上述のようにして求めたペプチドの生物学的効果は、一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢに比べ、ＣＲＦＲ１に対しては、約２分の１の効果があり、ＣＲＦＲ２に対しては３倍の効果がある。
【００８６】
（実施例ＩＩＩＥ）
実施例Ｉの一般合成を利用して、［Ａｉｂ１９，２４，３２］−アストレシンＢというペプチドを生成する。このペプチドは、
Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｉｂ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｉｂ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【００８７】
この生成物のＭＳ分析により、３８２４．９８Ｄａの［Ｍ＋Ｈ］＋質量が示され、これは算出された３８２５．１５Ｄａの値と一致する。この生成物の純度は、ＣＺＥで確認すると約９６％、ＨＰＬＣ（ＲＴ＝１９．９５分）で確認すると９８％である。上述のようにして求めたペプチドの生物学的効果は、一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢに比べ、ＣＲＦＲ１に対しては、約４分の１の効果があり、ＣＲＦＲ２に対しては４倍の効果がある。
【００８８】
これら実施例の様々なペプチドについて、結合アッセイを用いて、その溶解性を試験した。溶解性試験は、１０ｍｇ／ｍＬのペプチド濃度のＤＭＳＯ（２０％）および５％Ｄ−マンニトール水溶液（８０％）中において実施した。結果を以下の表１に示す。
【００８９】
【表１】
2014505680.tif 000002
【００９０】
（実施例ＩＩＩＥＡ）
一点だけ変更して、実施例ＩＩＩＥの一般合成を繰り返す。配列決定後に、ＤＩＣ活性剤を用いて１５分間、ＣＨ２Ｃｌ２中において１００倍を超える過剰モルのプロピオン酸によりＮ末端のアシル化を実施する。これにより、［Ａｉｂ１９，２４，３２］−プロピオニル−アストレシンＢというペプチドが生成される。このペプチドは、
プロピオニル−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｉｂ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｉｂ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【００９１】
この生成物のＭＳ分析により、３８３９．１９Ｄａの［Ｍ＋Ｈ］＋質量が示され、これは、算出された３８３９．１４Ｄａの値と一致する。この生成物の純度は、ＣＺＥで確認すると約９９％、ＨＰＬＣ（ＲＴ＝１７．１２分）で確認すると９６％である。上述のようにして求めたペプチドの生物学的効果は、一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢに比べ、ＣＲＦＲ１に対しては約２分の１の効果があり、ＣＲＦＲ２に対しては４倍の効果がある。
【００９２】
（実施例ＩＩＩＥＢ）
一点だけ変更して、実施例ＩＩＩＥの一般合成を繰り返す。配列決定後に１５分間、ＣＨ２Ｃｌ２中において過剰の無水酪酸により、Ｎ末端のアシル化を実施する。これにより、［Ａｉｂ１９，２４，３２］−ブチロイル−アストレシンＢというペプチドが生成される。このペプチドは、
ブチロイル−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｉｂ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｉｂ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【００９３】
この生成物のＭＳ分析により、３８５３．０２Ｄａの［Ｍ＋Ｈ］質量が示され、これは、算出された３８５３．１４Ｄａの値と一致する。この生成物の純度はＣＺＥで確認すると約９４％、ＨＰＬＣ（ＲＴ＝１８．６０分）で確認すると９６％である。上述のようにして求めたペプチドの生物学的効果は、一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢに比べ、ＣＲＦＲ１に対しては約２分の１の効果があり、ＣＲＦＲ２に対しては４倍の効果がある。
【００９４】
（実施例ＩＩＩＥＣ）
一点だけ変更して、実施例ＩＩＩＥの一般合成を繰り返す。配列決定後に、ＤＩＣ活性剤を用いて１５分間、ＣＨ２Ｃｌ２中において過剰のバレロイック酸により、Ｎ末端のアシル化を実施する。これにより、［Ａｉｂ１９，２４，３２］−バレロイル−アストレシンＢというペプチドが生成される。このペプチドは、
バレロイル−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｉｂ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｉｂ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【００９５】
この生成物のＭＳ分析により、３８６７．２０Ｄａの［Ｍ＋Ｈ］＋質量が示され、これは算出された３８６７．１４Ｄａの値と一致する。この生成物の純度はＣＺＥで確認すると約９８％、ＨＰＬＣ（ＲＴ＝２０．３６分）で確認すると９５％である。上述のようにして求めたペプチドの生物学的効果は、一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢに比べ、ＣＲＦＲ１に対しては約２分の１の効果があり、ＣＲＦＲ２に対しては４倍の効果がある。
【００９６】
（実施例ＩＩＩＥＤ）
一点だけ変更して、実施例ＩＩＩＥの一般合成を繰り返す。配列決定後に、ＤＩＣ活性剤を用いて１５分間、ＣＨ２Ｃｌ２中において過剰のヘキサン酸により、Ｎ末端のアシル化を実施する。［Ａｉｂ１９，２４，３２］−ヘキサノイル−アストレシンＢというペプチドが生成される。このペプチドは、
ヘキサノイル−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｉｂ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｉｂ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【００９７】
この生成物のＭＳ分析により、３８８１．８９Ｄａの［Ｍ＋Ｈ］＋質量が示され、これは算出された３８８１．２０Ｄａの値と一致する。この生成物の純度は、ＣＺＥで確認すると約９９％であり、ＨＰＬＣ（ＲＴ＝２２．５４分）で確認すると８４％である。上述のようにして求めたペプチドの生物学的効果は、一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢに比べ、ＣＲＦＲ１に対しては約２分の１の効果があり、ＣＲＦＲ２に対しては４倍の効果がある。
【００９８】
（実施例ＩＩＩＥＥ）
一点だけ変更して、実施例ＩＩＩＥの一般合成を繰り返す。配列決定後に、ＤＩＣ活性剤を用いて１５分間、ＣＨ２Ｃｌ２中において過剰のデカン酸により、Ｎ末端のアシル化を実施する。これにより、［Ａｉｂ１９，２４，３２］−デカノイル−アストレシンＢというペプチドが生成される。このペプチドは、
デカノイル−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｉｂ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｉｂ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【００９９】
この生成物のＭＳ分析により、３９３７．１０Ｄａの［Ｍ＋Ｈ］＋質量が示され、これは算出された３９３７．８９Ｄａの値と一致する。この生成物の純度は、ＣＺＥで確認すると約９１％、ＨＰＬＣ（ＲＴ＝３１．１７分）で確認すると８８％である。上述のようにして求めたペプチドの生物学的効果は、一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢに比べ、ＣＲＦＲ１に対しては約２分の１の効果があり、ＣＲＦＲ２に対しては４倍の効果がある。
【０１００】
（実施例ＩＩＩＥＦ）
一点だけ変更して、実施例ＩＩＩＥの一般合成を繰り返す。配列決定後に、ＤＩＣ活性剤を用いて１５分間、ＣＨ２Ｃｌ２中において過剰のテトラデカン酸により、Ｎ末端のアシル化を実施する。これにより、［Ａｉｂ１９，２４，３２］−テトラデカノイル−アストレシンＢというペプチドが生成される。このペプチドは、
テトラデカノイル−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｉｂ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｉｂ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【０１０１】
この生成物のＭＳ分析により、３９９４．２９Ｄａの［Ｍ＋Ｈ］＋質量が示され、これは、算出された３９９３．８９Ｄａの値と一致する。この生成物の純度はＣＺＥで確認すると約９６％、ＨＰＬＣ（ＲＴ＝４１．８３分）で確認すると９２％である。上述のようにして求めたペプチドの生物学的効果は、一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢに比べ、ＣＲＦＲ１に対しては約２．５分の１の効果があり、ＣＲＦＲ２に対しては２分の１の効果がある。
【０１０２】
（実施例ＩＩＩＥＧ）
一点だけ変更して、実施例ＩＩＩＥの一般合成を繰り返す。配列決定後に、ＤＩＣ活性剤を用いて１５分間、ＣＨ２Ｃｌ２中において過剰の２１−アミノ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサヘンエイコサンにより、Ｎ末端のアシル化を実施する。これにより、［Ａｉｂ１９，２４，３２］２１−アミノ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサヘネイコサノイル−アストレシンＢというペプチドが生成される。このペプチドは
２１?アミノ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサヘネイコサノイル−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｉｂ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｉｂ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【０１０３】
この生成物のＭＳ分析により、４１１８．５５Ｄａの［Ｍ＋Ｈ］＋質量が示され、これは算出された４１１７．３８Ｄａの値と一致する。この生成物の純度はＣＺＥで確認するとやく８８％、ＨＰＬＣ（ＲＴ＝１４．６６分）で確認すると８４％である。上述のようにして求めたペプチドの生物学的効果は、一般的なペプチド、すなわちアストレシンＢに比べ、ＣＲＦＲ１に対しては約１０分の１の効果があり、ＣＲＦＲ２に対してはわずかに効果が低い。
【０１０４】
これら実施例の様々なペプチドについて、結合アッセイを用いて、その溶解性を試験した。溶解性試験は、１０ｍｇ／ｍＬのペプチド濃度のＤＭＳＯ（２０％）および５％Ｄ−マンニトール水溶液（８０％）中において実施した。結果を以下の表２に示す。
【０１０５】
【表２】
2014505680.tif 000003
【０１０６】
（実施例ＩＶ）
実施例ＩＩの合成を繰り返す。ただし、Ｔｙｒを添加することでＮ末端を伸長させて、［Ｔｙｒ−Ａｓｐ１，Ａｉｂ１９，２４，３２］−アストレシンＢというペプチドを生成する。このペプチドは、
Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｉｂ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｉｂ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【０１０７】
このペプチドを投与することにより、ＡＣＴＨの分泌およびβ−ＥＮＤ−ＬＩが抑制される。１２５Ｉを利用することにより、このペプチドを放射性同位体で容易に標識することができる。
【０１０８】
（実施例Ｖ）
２５番目の残基がＬｙｓではなくＯｒｎである点を除いて、実施例ＩＩＩＥに記載したように［Ａｉｂ１９，２４，３２，Ｏｒｎ２５］−アストレシンＢの合成を実施する。このペプチドは、
Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｉｂ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｏｒｎ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｉｂ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【０１０９】
各ペプチドアンタゴニストを投与することにより、ＡＣＴＨおよびコルチコステロンの分泌が抑制される。
【０１１０】
（実施例ＶＩＡ）
コイウロテンシン１（９−４１）のアミノ酸配列に基づく、以下の式を有する３３−残基ペプチドを合成する。すなわち、当該ペプチドは、
Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｎｌｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ｖａｌ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【０１１１】
実施例Ｉに記載の一般的な手順に従って実施した試験により、この環状ペプチドがＡＣＴＨおよびコルチコステロンの分泌を抑制することが示された。
【０１１２】
（実施例ＶＩＢ）
ソーバジン（８−４０）のアミノ酸配列に基づく、以下の式を有する３３−残基ペプチドを合成する。すなわち、当該ペプチドは、
Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｎｌｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【０１１３】
実施例Ｉに記載の一般的な手順に従って実施した試験により、この環状ペプチドがＡＣＴＨおよびコルチコステロンの分泌を抑制することが示された。
【０１１４】
（実施例ＶＩＣ）
ヒツジＣＲＦ（９−４１）のアミノ酸配列に基づく、以下の式を有する３３−残基ペプチドを合成する。すなわち、当該ペプチドは、
Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ａｉｂ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｌａ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【０１１５】
実施例Ｉに記載の一般的な手順に従って実施した試験により、この環状ペプチドがＡＣＴＨおよびコルチコステロンの分泌を抑制することが示された。
【０１１６】
（実施例ＶＩＤ）
サッカーウロテンシンＩ（９−４１）のアミノ酸配列に基づく、以下の式を有する３３−残基ペプチドを合成する。すなわち、当該ペプチドは、
Ａｃ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｎｌｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ｖａｌ−ＮＨ２
というアミノ酸配列で表され、２２番目に位置するＧｌｕと２５番目に位置するＬｙｓとの間に環化結合を有する。
【０１１７】
このペプチドは、ＡＣＴＨおよびコルチコステロンの分泌を抑制する生物学的効果を有する。
【０１１８】
（実施例ＶＩＩ）
実施例Ｉに記載の手順を利用して、以下のＣＲＦアンタゴニストペプチドも作製した。
［Ｄｐｇ１９，２４，３２］−アストレシンＢ
［Ａｐｈ（Ｃｂｍ）２４］−アストレシンＢ
［Ａｉｂ１９，２６］−アストレシンＢ
［Ｄｐｇ１９，２４］−アストレシンＢ
［Ａｉｂ１９，２４］−アストレシンＢ
［Ｎｌｅ１０，Ｄ−ＣＭＰ１９，Ａｉｂ２４］−アストレシンＢ
［Ｄ−ＣＭＰ１９，Ａｉｂ２４，ＣＭＬ２８］−アストレシンＢ
［ＣＭＬ１１，Ｄ−ＣＭＰ１９，Ａｉｂ２４］−アストレシンＢ
［Ａｓｐ１７，Ｄ−ＣＭＰ１９，Ａｉｂ２４］−アストレシンＢ
［Ｌｙｓ１５，Ｄ−ＣＭＰ１９，Ａｉｂ２４］−アストレシンＢ
［ＣＭＶ１９，Ａｉｂ２４］−アストレシンＢ
［ＣＭＶ１９，Ａｉｂ２４，ＣＭＬ２９］−アストレシンＢ
［ＣＭＶ１９，Ａｉｂ２４］−アストレシンＢ
［Ｎｌｅ１０，ＣＭＶ１９，Ａｉｂ２４］−アストレシンＢ
［ＣＭＶ１９，Ａｉｂ２４，２６］−アストレシンＢ
［ＣＭＬ６，Ａｉｂ１９，２４，３２］−アストレシンＢ
［Ａｉｂ１９，２４，３２］−アストレシンＢ
［Ｎｌｅ１０，Ａｉｂ１９，２４，３２］−アストレシンＢ
［ＣＭＬ１１，Ａｉｂ１９，２４，３２］−アストレシンＢ
［Ｈｉｓ１３，Ａｉｂ１９，２４，３２］−アストレシンＢ
［Ａｉｂ１９，２４，３２，ＣＭＬ２８］−アストレシンＢ
［Ａｉｂ１９，２１，２４，ＣＭＰ３２］−アストレシンＢ
［Ａｉｂ１９，２４，２６，ＣＭＰ３２］−アストレシンＢ
［Ｌｙｓ１５，Ａｉｂ１９，２４，ＣＭＰ３２，ＣＭＬ２９］−アストレシンＢ
［Ａｉｂ１９，２４，３１，ＣＭＰ３２］−アストレシンＢ
［Ａｉｂ１９，２４，ＣＭＰ３２，ＣＭＬ２８］−アストレシンＢ
【０１１９】
これらペプチドは、様々な刺激に応答してＡＣＴＨおよびコルチコステロンの分泌を抑制する生物学的効果を有し、ＣＲＦＲ１およびＣＲＦＲ２に結合する。
【０１２０】
この環状ＣＲＦアンタゴニストは、ＣＲＦ受容体を本質的に活性化しないのが好ましい。例えば、実施例ＩのペプチドＩは、最高容量で投与すると、約３％以下の内因性ＣＲＦ活性しか有しない。一般的に、内因性活性が天然のＣＲＦアンタゴニストの約２０％以下と測定された場合、ペプチドはＣＲＦ受容体を著しく活性化させるわけではないと考えられている。好ましいアンタゴニストは、内因性活性が約１５％以下である。しかし、内因性活性は、アンタゴニストとしてのペプチドの効果と拮抗する１つの要因に過ぎない。
【０１２１】
ＣＲＦは視床下部副腎皮質系を強く刺激するので、ＣＲＦアンタゴニストは、ＡＣＴＨおよび内在性グルココルチコイドが多量に生成されてしまう患者において、この系の機能を抑制するのに有効である。例えば、下垂体性クッシング病患者またはＣＲＦ−Ｒ−保持腫瘍患者において、下垂体副腎機能を調整するのにＣＲＦアンタゴニストが有効である可能性がある。本発明が提供する好ましい改変ＣＲＦアンタゴニストは、高い親和性によりＣＲＦ受容体に結合し、受容体を著しく活性化することがない。すなわち、このＣＲＦアンタゴニストの内因性活性または作用性は、ヒツジＣＲＦの１５％未満である。また、このＣＲＦアンタゴニストは、末梢、例えば静脈（ｉ．ｖ．）、皮下（ｓ．ｃ．）、鼻腔内、肺内等に投与すると効果があると考えられ、これを使用することで、胃酸分泌にある程度原因がある、ストレスによる胃病に有効である可能性がある。
【０１２２】
他のほとんどの調節ペプチドが、内分泌系、中枢神経系、消化管において効果を有することが分かっている。ＡＣＴＨ分泌およびβ−ＥＮＤ−ＬＩは、ストレスに対する哺乳類の応答の「必須条件」であるので、脳において、ＣＲＦが体内における多くのストレス応答のメディエイターとして重要な効果を発揮するのは驚くことではない。したがって、脳に到達したＣＲＦアンタゴニストは、気分、学習、行動の修正、例えば、健常者および精神障害者の薬物依存症、薬物離脱およびアルコール離脱に応用されるべきである。さらに、ＣＲＦアンタゴニストは脳内に達すると、内在性ＣＲＦが寄与している可能性があるストレスによる病状を改善する。このストレスによる病状には、ある種の高血圧、神経性無食欲、出血性ストレス、不妊症、性欲減退、インポテンス、および高血糖が含まれる。末梢に投与したＣＲＦアンタゴニストは、ＡＣＴＨ、β−エンドルフィン、β−リポトロピン、他のプロオピオメラノコルチン遺伝子産物、およびコルチコステロンの濃度を低減させるので、このアンタゴニストを投与することにより、脳におけるこれらすべての物質の効果を低減させられる可能性がある。これにより、記憶力、気分、痛覚等、より具体的には、覚醒、抑鬱および／または不安に影響を与え、免疫系、消化管、および副腎皮質の発達と機能を調節する。このＣＲＦアンタゴニストはまた、ＨＩＶ感染症やアルツハイマー病の治療にも使用される。
【０１２３】
ＣＲＦアンタゴニストを投与することにより、他の機能（例えば免疫、神経等）に対して所望の効果がもたらされる場合、ＣＲＦアンタゴニストは、視床下部下垂体（ＨＰＡ）系を阻害し、これによりＡＣＴＨおよびコルチコステロンの分泌を阻害するので、恒常性を維持するのに必要なＣＲＦアンタゴニスト治療の添加物として、ホルモン補充療法（すなわち、ＡＣＴＨおよび／またはコルチコステロンの投与）が望ましい可能性がある。同様の例として、男性避妊を目的として健常者をＧｎＲＨアンタゴニストで治療する際、性欲を維持するため、テストステロン補充療法を利用する場合が多い。前立腺がんを治療する場合、このようなホルモン補充療法は望ましくない。
【０１２４】
ＣＲＦに関連するペプチドはすべて、腸間膜血管床を拡張することが示されている。ＣＲＦアンタゴニストは哺乳類、特にヒトの消化管の血流量を減少させるのに有効である。また、ＣＲＦは胃酸生成に影響するので、ＣＲＦアンタゴニストは消化管機能の調節にも有効であり、例えば過敏性腸症候群および炎症性疾患に有効である。
【０１２５】
ＣＲＦアンタゴニストまたはその非毒性付加塩と薬学的に許容される担体とを組み合わせて医薬組成物を形成し、これをヒト等の哺乳類の静脈内、皮下、筋肉内、肺内、または脳室内に投与してもよく、鼻腔内等に経皮投与してもよく、あるいは経口投与してもよい。ペプチドは少なくとも約９０％の純度を有し、好ましくは、少なくとも９８％の純度を有すべきである。しかし、純度が低くても有効であり、その場合、ヒト以外の哺乳類に使用できるであろう。この純度は、対象のペプチド内に存在するすべてのＣＲＦ様ペプチドおよびペプチド断片の重量％を意味する。内因性グルココルチコイドの生成を抑制するため、または上記のような利用可能性のために、医師がこのＣＲＦアンタゴニストをヒトに投与してもよい。錠剤、トローチ、粉末剤、シロップ剤、注射剤、注射用デポ製剤等の様々な剤形で投与してもよい。必要量は治療における特定の病状、病状の重症度、所望の治療の持続時間により変化する。また、１日に複数回投与してもよい。ストレスに関連する中枢神経系における内因性ＣＲＦの効果を阻害するためには、ＣＲＦアンタゴニストを脳室または髄液に供給することが必要となる可能性がある。あるいは、血液脳関門を貫通できるように、このアンタゴニストを改変する方法を見つけるべきである。非経口投与を実施するためには、ピーナッツオイル溶液、水性プロピレングリコール溶液、または滅菌水溶液を利用してもよいが、滅菌水性媒体は容易に利用することができる。適切に緩衝されたこのような水溶液は、特に静脈（ｉ．ｖ．）投与、筋肉内投与、皮下（ｓ．ｃ．）投与、および腹腔内投与に適している。皮下投与に対しては、コーンオイルまたは３％から６％のマンニトール溶液が好ましい可能性がある。このようなペプチドは多くの場合、酸付加塩、または亜鉛、鉄、カルシウム、バリウム、マグネシウム、アルミニウム等との金属錯体（本出願における付加塩と考えられる）等の薬学的に許容される非毒性塩の形態で投与される。このような酸付加塩として、従来の方法で調整することができる塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、桂皮酸塩、硫酸塩、スルファミン酸塩、スルホン酸塩、リン酸塩、タンニン酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、アルギン酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、パモ酸塩、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、酒石酸塩等が挙げられる。トリフルオロ酢酸塩およびパモ酸塩が好ましい可能性がある。これら活性成分を錠剤の形態で投与する場合、錠剤はトラガカント、コーンスターチ、もしくはゼラチン等の結合剤または添加剤、アルギン酸等の崩壊剤、またはステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤を含有してもよい。液体の形態で投与するのが望ましい場合、甘味料および／または香味料を使用してもよく、等張生理食塩水、リン酸緩衝液等による静脈投与を実施してもよい。
【０１２６】
ＣＲＦアンタゴニストペプチドを投与した場合に、１週間またはそれ以上等の長時間にわたって供給されるのが望ましい可能性もある。また、徐放性デポ剤形またはインプラント剤形を利用してもよい。例えば、注射に適した徐放性デポ製剤においては、米国特許第３，７７３，９１９号に記載されているように、ＣＲＦアンタゴニストまたはその塩が、ポリ乳酸／ポリグリコール酸ポリマー等の毒性または抗原性を有しない分解の遅いポリマー内に分散していてもよく、あるいはカプセル化されていてもよい。
【０１２７】
このペプチドは、医師の指導の下、１回または複数回投与すべきである。医薬組成物には通常、作用持続時間を延長できる周知の薬学的に許容される担体がこのペプチドとともに含有される。医師には周知のことであるが、有効な投与量は、一般的に、対象の投与経路、ならびに患者の年齢および体重等の他の要因によって決まる。また、治療する疾患にも依存する。ペプチドの投与量は通常、宿主動物の体重１ｋｇ当たり約０．０１から約１０ｍｇとなる。炎症性疾患を治療するためのペプチドの投与量は、一般的に約０．０１から約１ｍｇ／ｋｇである。消化管疾患、神経性無食欲、出血性ストレス、薬剤およびアルコール離脱症候群の治療、ならびに不妊問題の治療に対しては、約０．０１から約１ｍｇ／ｋｇとなる。１日投与量は、１回または３回以下に分けて服用してもよい。
【０１２８】
上述のように、ＣＲＦ受容体はすでにクローン化されており、上述のChenらの論文、１９９５年３月発行のPerrin, M.らによる「P.N.A.S」第９２巻の２９６９ページから２９７３ページ、および１９９５年１月発行のLovenberg, T.らによる「P.N.A.S.」第９２巻の８３６ページから８４０ページに開示されている。結合親和性は、リガンドと受容体との相互作用の強さを示すために使用される用語である。ＣＲＦ受容体に対する結合親和性を明示するために、当該技術分野において周知の結合アッセイ実験において、１２５Ｉで標識されたｏＣＲＦまたは［Ｄ−Ｔｙｒ１２，Ｎｌｅ２１，３８］−ｒ／ｈＣＲＦ（１２−４１）等の親和性が周知であるトレーサーリガンドを用いて、本発明のペプチドは容易に評価される。このようなアッセイの結果は、各リガンドがＣＲＦ受容体に結合する親和性を示し、この親和性はＫｉすなわち、周知の標準物質に対する阻害物質の結合親和性定数で表される。Ｋｉ（阻害物質の結合親和性定数）は、「標準物質」または「トレーサー」の放射性リガンドを用いて求められ、これにより受容体または結合タンパク質からのトレーサーの置換を測定する。Ｋｉは、このようなトレーサーを基準にして最も適切に表される。しかし、例えば受容体の濃度を比較的低くした特定の条件下においてこれらアッセイが慎重に実施される限り、算出されるＫｉは、その解離定数ＫＤと実質的に同じになる。解離定数ＫＤは、受容体等の結合部位の２分の１（５０％）を占有するのに必要なリガンドの濃度を表す。Ｋｉを試験することは、標識、例えば放射ヨウ素標識する必要のあるトレーサーが１種類だけであるため、特に効率的である。ＣＲＦ受容体に対する結合親和性の高い所与のリガンドは、ごく少量でも空いている結合部位の少なくとも５０％に結合することができるため、そのリガンドおよび受容体のＫＤ値は小さくなる。一方、特定のＣＲＦ受容体に対する結合親和性の低い所与のリガンドは、比較的高濃度でないと空いている部位の５０％に結合できないため、そのリガンドおよび受容体のＫＤ値は大きくなる。
【０１２９】
例えば、特定の受容体タンパク質に関してＣＲＦ類似体ペプチドのＫＤが約１０ｎＭ以下であった場合、この受容体タンパク質の活性結合部位の少なくとも５０％を占有するために、約１０ｎＭ以下の濃度のリガンド（すなわち、ＣＲＦ類似体ペプチド）が必要となる。このような値は、放射ヨウ素標識した標準物質と約０．８ｎＭ程度の受容体（約１０から２０ｐｍｏｌの受容体／膜タンパク質ｍｇ）とを利用して得た結果から正しく求めることができる。本発明が提供する好ましいペプチドは、受容体結合部位の少なくとも５０％を占有（または結合）するために、約１０ｎＭ以下の濃度のリガンドが必要となるような結合親和性（ＫＤ）を有するので、高い親和性を有すると考えられる。これらＣＲＦ類似体ペプチドの中には、約２ｎＭ以下の結合親和性を有するものがある。一般的に、本出願において、約５ｎＭ以下の解離定数を強い親和性を示すものであるとみなし、約２ｎＭ以下のＫＤを非常に強い親和性を示すものであるとみなす。例えば、実施例ＩＣの環状ペプチドは、ＫＤが約２．０ｎＭと非常に強い親和性でＣＲＦ−ＲＡを結合させる。このＣＲＦ類似体ペプチドの中には、ＣＲＦ−ＲＡ受容体およびＣＲＦ−ＲＢ受容体の２つのファミリーのうち１つに対する親和性が実質的に高いものがあり、したがって生物学的効果が選択的である点が特に有利であると考えられる。
【０１３０】
ＣＲＦ受容体を利用するこれら結合アッセイは、容易に実施することができ、最初に特定したペプチドまたは合成したペプチドを用いて実施することで、このようなペプチドが有効なＣＲＦアンタゴニストになるかどうかを判断することができる。一般的に、有効なＣＲＦアンタゴニストペプチドの内因性活性は、in vitro試験において約２５％以下であり、通常は約５％以下である。このＣＲＦアンタゴニストペプチドは、例えばヒツジＣＲＦ（１−４１）のモル濃度と同程度である約２５％よりも高い濃度でも、ＡＣＴＨの分泌を促進しない。しかし、経験が示すように、このような内因性アゴニスト活性は多くの場合、in vivo効果を生み出さず、したがって許容されるので、このような基準は重要でないと考えられる。このような結合アッセイは、当業者に周知の様々な方法により実施することができる。このようなアッセイの詳細な例が、「Endocrinology」に掲載されているPerrin, M.らによる論文に記載されている。実施例ＩＣまたはＩＶＡのペプチドを利用する競合的結合アッセイにより、対象のアンタゴニストが有効であるかどうかを判断する第１の段階として、例えばＣＲＦ−ＲＡ、ＣＲＦ−ＲＢＬ、およびＣＲＦ−ＲＢｓ等の様々なＣＲＦ受容体のそれぞれに対して、対象のペプチドおよび非ペプチドが高い親和性を有するかどうかを評価することが特に期待される。このようなアッセイにおいて、適切な環状ＣＲＦアンタゴニストは、１２５Ｉ等の放射性同位体、酵素、蛍光を発するタグ等の他の適切なタグ等の容易に検出される物質により適切に標識される。
【０１３１】
競合的結合アッセイを利用することは、新薬の候補のスクリーニングに特に有益だと考えられ、例えば、ＣＲＦ受容体に対してさらに高い選択的結合親和性を有する新しいＣＲＦ様ペプチドまたは他の化合物を特定することができる。したがって、この新薬の候補は薬剤として潜在的に有益であろう。アッセイにおいて、標識されたペプチドを置換するために、対象アンタゴニストの能力を測定する。例えば（ｃｙｃｌｏ３０−３３）［Ｉ１２５−Ｄ−Ｔｙｒ１２，Ｎｌｅ２１，３８，Ｇｌｕ３０，Ｄ−Ｈｉｓ３２，Ｌｙｓ３３］ｒ／ｈＣＲＦ（１２−４１）等の放射性同位体で標識された環状ＣＲＦアンタゴニストにより、このようなスクリーニングアッセイを利用して、潜在的なＣＲＦアゴニストをスクリーニングしてもよい。高い親和性を有する標識されたＣＲＦアンタゴニストを用いたアッセイを利用して、より効果のあるＣＲＦアゴニストをスクリーニングしてもよい。このＣＲＦアンタゴニストは、酵素または他の適切なタグで標識されてもよい。
【０１３２】
本明細書において、温度はすべて℃（摂氏温度）で表し、割合はすべて体積で表す。液体材料の割合は容積で表す。低級アルキル基はＣ１からＣ６を意味する。
【０１３３】
本発明者に現在知られている最良の態様を構成する好ましい実施形態に関して本発明を説明したが、添付の特許請求の範囲に記載の本発明の範囲から逸脱することなく、当業者にとって明らかな様々な変更および修正が可能であることが理解されよう。例えば、具体的に列挙はしないが、薬学的に許容される塩および他の類似した製剤は、明らかに、請求項に記載された主題の同等物である。アンタゴニストの効果を損なうことなく、詳細な説明に記載した第１の一般式に示すＣＲＦペプチド鎖の他の位置において、置換や改変を行ってもよい。当該技術分野の発展により、分子内において様々な特定の残基を有するペプチドはＣＲＦ活性を示すことが分かった。３３残基類似体のＮ末端は、ＴｙｒまたはＤ−Ｔｙｒにより伸長することができ、例えばアセチル基等の、２０個から１５個以下の炭素原子、好ましくは７個以下の炭素原子を有するアシル基によりアシル化することが好ましい。Ｄ−Ｔｙｒを含む場合、Ｌｙｓ２８ではなく例えばＮ末端で放射性ヨウ素化を実施するために、この位置において同等物であると考えられるＡｒｇで置換するのが好ましい可能性がある。
【０１３４】
Ｃ末端のアミドの代わりに、低級アルキル基で置換されたアミド、すなわち１個から４個の炭素原子、例えば、メチルアミドまたはエチルアミドを導入してもよい。Ｌｙｓ２２およびＧｌｕ２５の側鎖を結合させることで、同等のラクタム結合を生成することもできる。しかし、上述の結合が好ましい。メチル基を導入することにより、反応して２２−２５ラクタム環化結合を形成するアミノ基をアルキル化してもよい。このような変化により、環状ペプチド同等物が生成されると考えられる。このようなペプチドはすべて、本発明の範囲内にあると考えられる。
【０１３５】
本発明の様々な特徴は、特許請求の範囲において強調される。
【国際調査報告】
2014505680.tif 000004
2014505680.tif 000005
2014505680.tif 000006
2014505680.tif 000007