(57)【要約】  対象における治療またはディクテクションを目的とした抗ＣＸＣＬ１３および抗ＣＸＣＲ５抗体の使用が開示される。
2014505239.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における癌の存在を検出するための方法であって：前記対象から採取した生物学的サンプル中の１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現のレベルを検出すること；および
前記生物学的サンプル中の前記１つまたはそれ以上の癌マーカーの前記発現のレベルを前記１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現の正常レベルと比較することを含み、
前記生物学的サンプル中の前記１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現の正常より高いレベルが前記対象における癌の存在を示すことを特徴とし、
前記１つまたはそれ以上の癌マーカーの前記発現の正常レベルが事前に決定された数値であるかまたは前記生物学的サンプルと同じ起源または種類の既知の正常非癌性細胞の対照サンプルから得られることを特徴とし、かつ
前記癌が芽腫、癌腫、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫または肉腫であることを特徴とし、かつ
前記１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５またはＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５の両者を含むことを特徴とする前記方法。
【請求項２】
請求項１に記載の前記方法であって、前記１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１６またはＣＸＣＲ６またはＣＸＣＬ１６およびＣＸＣＲ６の両者をさらに含むことを特徴とする前記方法。
【請求項３】
請求項２に記載の前記方法であって、前記１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２５−１、ＣＣＬ２５−２、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１１、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＲＮＡ結合モチーフ３（「ＲＢＭ３」）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、クロムグラニンＡ（ＣＧＡ）、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）、神経特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、プロラクチン、Ｂ７−Ｈ３、セプラーゼポリペプチド、抗ｐ５３、オステオポンチン、フェリチン、リゾフォスファチジルコリン、キネシンファミリー構成要素４Ａ（ＫＩＦ４Ａ）、神経ペントラキシンＩ（ＮＰＴＸ１）および線維芽細胞増殖因子受容体１癌遺伝子パートナー（ＦＧＦＲ１ＯＰ）タンパク質からなる群から選択される１つまたはそれ以上の癌マーカーをさらに含むことを特徴とする前記方法。
【請求項４】
請求項１に記載の前記方法であって、前記癌が黒色腫であり、かつ前記１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１６またはＣＸＣＲ６またはＣＸＣＬ１６およびＣＸＣＲ６の両者をさらに含むことを特徴とする前記方法。
【請求項５】
請求項４に記載の前記方法であって、前記１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＣＬ２５、ＣＣＬ２７、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１２、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、およびＣＸ３ＣＲ１からなる群から選択される１つまたはそれ以上の癌マーカーをさらに含むことを特徴とする前記方法。
【請求項６】
請求項１に記載の前記方法であって、前記癌が癌腫であり、かつ前記１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１６またはＣＸＣＲ６またはＣＸＣＬ１６およびＣＸＣＲ６の両者をさらに含むことを特徴とする前記方法。
【請求項７】
請求項６に記載の前記方法であって、前記１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＣＬ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、およびＣＸ３ＣＲ１からなる群から選択される１つまたはそれ以上の癌マーカーをさらに含むことを特徴とする前記方法。
【請求項８】
請求項６に記載の前記方法であって、前記癌腫が乳癌であることを特徴としかつ１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸ３ＣＲ１、ＲＮＡ結合モチーフ３（「ＲＢＭ３」）および癌胎児性抗原（ＣＥＡ）からなる群から選択される１つまたはそれ以上の癌マーカーをさらに含むことを特徴とする前記方法
【請求項９】
請求項６に記載の前記方法であって、前記癌腫が前立腺癌であることを特徴としかつ１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸ３ＣＲ１、ＰＳＡ、ＣＥＡ、ＣＧＡ、ＤＨＥＡ、ＮＳＥ、ＰＡＰ、プロラクチンおよびＢ７−Ｈ３からなる群から選択される１つまたはそれ以上の癌マーカーをさらに含むことを特徴とする前記方法。
【請求項１０】
請求項６に記載の前記方法であって、前記癌腫がコロンレクタル癌であることを特徴としかつ１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸ３ＣＲ１、セプラーゼポリペプチド、抗ｐ５３、オステオポンチン、およびフェリチンからなる群から選択される１つまたはそれ以上の癌マーカーをさらに含むことを特徴とする前記方法。
【請求項１１】
請求項６に記載の前記方法であって、前記癌腫が卵巣癌であることを特徴としかつ１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸ３ＣＲ１、癌抗原１２５（ＣＡ−１２５）、ＨＥ−４、ＯＶＸ−１マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）およびリゾフォスファチジルコリンからなる群から選択される１つまたはそれ以上の癌マーカーをさらに含むことを特徴とする前記方法。
【請求項１２】
請求項６に記載の前記方法であって、前記癌腫が肺癌であることを特徴としかつ１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸ３ＣＲ１、キネシンファミリー構成要素４Ａ（ＫＩＦ４Ａ）、神経ペントラキシンＩ（ＮＰＴＸ１）、線維芽細胞増殖因子受容体１癌遺伝子パートナー（ＦＧＦＲ１ＯＰ）タンパク質およびＣＥＡからなる群から選択される１つまたはそれ以上の癌マーカーをさらに含むことを特徴とする前記方法。
【請求項１３】
請求項６に記載の前記方法であって、前記癌腫が膵臓癌または胃癌であることを特徴としかつ１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸ３ＣＲ１およびＣＥＡからなる群から選択される１つまたはそれ以上の癌マーカーをさらに含むことを特徴とする前記方法。
【請求項１４】
請求項１に記載の前記方法であって、前記生物学的サンプルが血漿サンプル、唾液サンプルまたは尿サンプルであることを特徴とする前記方法。
【請求項１５】
癌を有する対象の予後を評価するための方法であって：
前記対象に由来する生物学的サンプル中の１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現レベルを判定すること、および
前記生物学的サンプル中の前記１つまたはそれ以上の癌マーカーの前記発現のレベルを前記１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現の対照レベルと比較することを含み、
前記生物学的サンプル中の前記１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現の前記対照レベルに対してより高いレベルが前記対象の前記予後が不良であることを示すことを特徴とし、
前記生物学的サンプル中の前記１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現の前記対照レベルに対してより低いかまたは同様のレベルが前記対象の前記予後が良好であることを示すことを特徴とし、
不良である予後が前記癌が侵襲型または浸潤型であることを示すことを特徴とし、前記癌が芽腫、癌腫、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫または肉腫であることを特徴とし、かつ
前記１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５またはＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５の両者を含むことを特徴とする前記方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の前記方法であって、前記１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１６またはＣＸＣＲ６またはＣＸＣＬ１６およびＣＸＣＲ６の両者をさらに含むことを特徴とする前記方法。
【請求項１７】
対象における癌治療の経過をモニタリングするための方法であって：
前記治療中または治療後に前記対象から採取した１つまたはそれ以上の生物学的サンプル中の１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現レベルを判定すること、および
前記１つまたはそれ以上の生物学的サンプル中の前記１つまたはそれ以上の癌マーカーの前記発現のレベルを前記１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現の対照レベルと比較することを含み、
前記１つまたはそれ以上の癌マーカーの前記対照レベルが前記対象における前記１つまたはそれ以上の癌マーカーの治療前レベルまたは事前に定められた参照レベルであることを特徴とし、
前記１つまたはそれ以上の生物学的サンプル中の前記１つまたはそれ以上の癌マーカーが前記対照レベルと同様であるかまたはこれより低い場合に前記治療が有効であると考えられることを特徴とし、
前記癌が芽腫、癌腫、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫または肉腫であることを特徴とし、かつ
前記１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５またはＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５の両者を含むことを特徴とする前記方法。
【請求項１８】
請求項１７に記載の前記方法であって、前記１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１６またはＣＸＣＲ６またはＣＸＣＬ１６およびＣＸＣＲ６の両者をさらに含むことを特徴とする前記方法。
【請求項１９】
癌を検出するかまたは癌の進行をモニタリングするためのキットであって：
生物学的サンプル中のＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の発現を判定するための試薬；および前記試薬を用いる方法の指示を含み、
前記試薬が抗ＣＸＣＬ１３抗体、抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその両者を含むことを特徴としかつ前記癌が芽腫、癌腫、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫または肉腫であることを特徴とする前記キット。
【請求項２０】
請求項１９に記載の前記キットであって：
生物学的サンプル中のＣＸＣＬ１６および／またはＣＸＣＲ６の発現を判定するための試薬；および前記試薬を用いる方法の指示をさらに含み、
前記試薬が抗ＣＸＣＬ１６抗体、抗ＣＸＣＲ６抗体または両者を含むことを特徴とする前記キット。
【請求項２１】
対象における癌を治療するための方法であって：
抗ＣＸＣＬ１３抗体、または抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせの治療的に有効な量を前記対象に投与することを含み、
前記癌が黒色腫、癌腫、肉腫、芽腫、白血病、骨髄腫またはリンパ腫であることを特徴とし、かつ前記抗ＣＸＣＬ１３抗体、または前記抗ＣＸＣＲ５抗体、または前記抗ＣＸＣＬ１３抗体と前記抗ＣＸＣＲ５抗体の組み合わせが１ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の用量範囲で与えられることを特徴とする前記方法。
【請求項２２】
請求項２１に記載の方法であって、前記癌が黒色腫、リンパ腫、または癌腫であり、前記癌腫が卵巣癌、膣癌、子宮頸癌、子宮体癌、前立腺癌、肛門癌、直腸癌、結腸癌、胃癌、膵臓癌、インスリノーマ、腺癌、線扁平上皮癌、神経内分泌腫瘍、乳癌、肺癌、食道癌、口腔癌、脳癌、髄芽腫、神経外胚葉性腫瘍、神経膠腫、下垂体癌および骨癌からなる群から選択されることを特徴とする前記方法。
【請求項２３】
請求項２１に記載の前記方法であって、前記抗ＣＸＣＬ１３抗体、または抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせが癌性組織内に直接投与されるか、または化学療法剤と共に投与されることを特徴とする前記方法。
【請求項２４】
請求項２１に記載の前記方法であって、前記癌が癌腫でありかつ前記抗ＣＸＣＬ１３抗体、または前記抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせがＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＸ３ＣＬ１およびＣＸ３ＣＲ１からなる群から選択される１つまたはそれ以上のケモカインまたはケモカイン受容体と特異的に結合する１つまたはそれ以上の抗体と共に投与されることを特徴とする前記方法。
【請求項２５】
請求項２１に記載の前記方法であって、前記癌が黒色腫でありかつ前記抗ＣＸＣＬ１３抗体、または前記抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせがＣＣＬ２５、ＣＣＬ２７、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１６、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７およびＣＸ３ＣＲ１からなる群から選択される１つまたはそれ以上のケモカインまたはケモカイン受容体と特異的に結合する１つまたはそれ以上の抗体と共に投与されることを特徴とする前記方法。
【請求項２６】
請求項２１に記載の前記方法であって、前記癌がリンパ腫でありかつ前記抗ＣＸＣＬ１３抗体、または前記抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせがＣＸＣＬ１２およびＣＸＣＲ４からなる群から選択される１つまたはそれ以上のケモカインまたはケモカイン受容体と特異的に結合する１つまたはそれ以上の抗体と共に投与されることを特徴とする前記方法。
【請求項２７】
請求項２１に記載の前記方法であって：
前記対象に由来する組織中のＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５発現のレベルを判定すること、および、ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の上昇レベルが検出される場合、前記抗ＣＸＣＬ１３抗体、前記抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせの治療的に有効な量を前記対象に投与することを含む前記方法。
【請求項２８】
請求項２１に記載の前記方法であって、前記対象が癌細胞中のＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５発現上昇をもたらす癌と診断されることを特徴とする前記方法。
【請求項２９】
請求項２１に記載の前記方法であって、前記抗ＣＸＣＬ１３抗体、または前記抗ＣＸＣＲ５抗体、または前記抗ＣＸＣＬ１３抗体と前記ＣＸＣＲ５抗体の組み合わせが１ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｎｇ／ｋｇ体重／日、１０ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１μｇ／ｋｇ体重／日、１００ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１０μｇ／ｋｇ体重／日、１μｇ／ｋｇ体重／日から約１００μｇ／ｋｇ体重／日、１０μｇ／ｋｇ体重／日から約１ｍｇ／ｋｇ体重／日、または１００μｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日の用量範囲で与えられることを特徴とする前記方法。
【請求項３０】
対象におけるＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の発現が上昇した癌細胞の遊走または転移の予防または阻害のための方法であって：
抗ＣＸＣＬ１３抗体、または抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせの治療的に有効な量を前記対象に投与することを含み、
前記抗ＣＸＣＬ１３抗体、または前記抗ＣＸＣＲ５抗体、または前記抗ＣＸＣＬ１３抗体と前記抗ＣＸＣＲ５抗体の組み合わせが１ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の用量範囲で与えられることを特徴とし、かつ前記癌細胞が黒色腫細胞、癌腫細胞、骨髄腫細胞、白血病細胞またはリンパ腫細胞であることを特徴とする前記方法。
【請求項３１】
化学療法の効果を増強するための方法であって：
抗ＣＸＣＬ１３抗体、または抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせの有効量を、癌に対する化学療法を受けている対象に投与することを含み、かつ前記対象が黒色腫、癌腫、骨髄腫、白血病またはリンパ腫に対する化学療法を受けていることを特徴とする前記方法。
【請求項３２】
対象における癌を治療するための方法であって：
有効量のＣＸＣＬ１３免疫原および／またはＣＸＣＲ５免疫原で前記対象を免疫してＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害する抗体を誘導することを含み、
前記癌が黒色腫、癌腫、肉腫、芽腫、白血病、骨髄腫またはリンパ腫であることを特徴とする方法。
【請求項３３】
請求項３２に記載の前記方法であって、前記ＣＸＣＬ１３免疫原がRSSSTLPVPVFKRKIP, PRGNGCPRKEIIVWKK, LPRGNGCPRKEIIVWK, QILPRGNGCPRKEIIV, ILPRGNGCPRKEIIVW, RIQILPRGNGCPRKEI, RGNGCPRKEIIVWKKN, KRSSSTLPVPVFKRKI, IQILPRGNGCPRKEII, DRIQILPRGNGCPRKE, RKRSSSTLPVPVFKRK, RCRCVQESSVFIPRRF, GNGCPRKEIIVWKKNK, CVQESSVFIPRRFIDR, IDRIQILPRGNGCPRK, LRCRCVQESSVFIPRR, FIDRIQILPRGNGCPR, RCVQESSVFIPRRFID, CRCVQESSVFIPRRFI, QESSVFIPRRFIDRIQ, RFIDRIQILPRGNGCP, VQESSVFIPRRFIDRI, ESSVFIPRRFIDRIQI, SLRCRCVQESSVFIPR, NGCPRKEIIVWKKNKS, PQAEWIQRMMEVLRKR, RRFIDRIQILPRGNGC, LRKRSSSTLPVPVFKR, VQESSVFIPRR, EWIQRMMEVLRKRSSSTLPVPVFKRK, KKNK, RKRSSS, RGNGCP, VYYTSLRCRCVQESSVFIPRR, DRIQILP, RKEIIVW and KSIVCVDPQからなる群から選択される１つまたはそれ以上の配列を含むペプチドであることを特徴とし、かつ前記ＣＸＣＲ５免疫原がTSLVENHLCPATE, EGSVGWVLGTFLCKT, LPRCTFS, LARLKAVDNT and MASFKAVFVPからなる群から選択される１つまたはそれ以上の配列を含むペプチドであることを特徴とする前記方法。
【請求項３４】
対象におけるＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の発現が上昇した癌細胞の遊走または転移の予防または阻害のための方法であって：
有効量のＣＸＣＬ１３免疫原および／またはＣＸＣＲ５免疫原で前記対象を免疫してＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害する抗体を誘導することを含み、
前記癌が黒色腫、癌腫、肉腫、芽腫、白血病、骨髄腫またはリンパ腫であることを特徴とする方法。
【請求項３５】
対象における癌を治療するための方法であって：
前記対象に由来する生物学的サンプルにおけるＣＸＣＬ１３発現および／またはＣＸＣＲ５発現のレベルを検出すること、および
前記生物学的サンプル中にＣＸＣＬ１３発現および／またはＣＸＣＲ５発現の上昇レベルが検出される場合、有効量のＣＸＣＬ１３免疫原および／またはＣＸＣＲ５免疫原で前記対象を免疫してＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害する抗体を誘導することを含む前記方法。
【請求項３６】
化学療法の効果を増強するための方法であって：
癌に対する化学療法を受けている対象に有効量のＣＸＣＬ１３免疫原および／またはＣＸＣＲ５免疫原を投与してＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害する抗体を誘導することを含む前記方法。
【請求項３７】
対象における癌を治療するための方法であって：
有効量のＣＸＣＬ１６免疫原および／またはＣＸＣＲ６免疫原で前記対象を免疫してＣＸＣＬ１６および／またはＣＸＣＲ６の生物学的活性を阻害する抗体を誘導することを含み、
前記癌が黒色腫、リンパ腫、白血病、肉腫、芽腫、または癌腫であることを特徴とし、
前記ＣＸＣＬ１６免疫原がAAGPEAGENQKQPEKN, SQASEGASSDIHTPAQ, STLQSTQRPTLPVGSL, SWSVCGGNKDPWVQEL, GPTARTSATVPVLCLL, SGIVAHQKHLLPTSPP, RLRKHL, LQSTQRP, SSDKELTRPNETT, AGENQKQPEKNA, NEGSVT, ISSDSPPSV, CGGNKDPW, LLPTSPPISQASEGASSDIHT, STQRPTLPVGSLSSDKELTRPNETTIHT, SLAAGPEAGENQKQPEKNAGPTARTSA, TGSCYCGKR, DSPPSVQ, RKHLRAYHRCLYYTRFQLLSWSVCGG, WVQELMSCLDLKECGHAYSGIVAHQKHLLPTSPPISQ, SDIHTPAQMLLSTLQ, RPTLPVGSL, TAGHSLAAG, GKRISSDSPPSVQ , KDPWVQELMSCLDLKECGHAYSGIVAHQKHからなる群から選択される１つまたはそれ以上の配列を含むペプチドであることを特徴とし、かつ
前記ＣＸＣＲ６免疫原がHQDFLQFSKV, AGIHEWVFGQVMCK, PQIIYGNVFNLDKLICGYHDEAI and YYAMTSFHYTIMVTEAからなる群から選択される１つまたはそれ以上の配列を含むペプチドであることを特徴とする前記方法。
【請求項３８】
対象における癌を治療するための方法であって：
１つまたはそれ以上のＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５免疫原の有効量および１つまたはそれ以上のＣＸＣＬ１６およびＣＸＣＲ６免疫原の有効量により前記対象を免疫することを含み、
前記癌が黒色腫、リンパ腫、白血病、肉腫、芽腫、または癌腫であることを特徴とする前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２０１０年１２月１４日に出願された米国特許出願第１２／９６７，２７３号の一部継続出願である、２０１１年９月１５日に出願された米国特許出願第１３／２３３，７６９号の一部継続出願である、２０１１年９月２９日に出願された米国特許出願第１３／２４８，９０４号からの優先権を主張する。本願は、２０１０年１２月１４日に出願された米国特許出願第１２／９６７，２７３号の一部継続出願である、２０１１年１２月６日に出願された米国特許出願第１３／３１２，３４３号からの優先権の主張でもある。
【０００２】
本願は、全般的に癌の分野に関する。具体的には、本願は抗ケモカインおよび／または抗ケモカイン受容体抗体を用いて癌を検出または治療するための方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
癌は米国における主要な死因の１つである。大半の癌はたった１個の腫瘍細胞から始まる。腫瘍細胞は増殖して局所「腫瘍」を形成する。腫瘍は単純に腫脹を意味し；必ずしも癌性でない。その場所または発生箇所でのみ成長し、遠隔拡散できない腫瘍は良性腫瘍であり、癌ではない。しかし、拡散する能力のある腫瘍は（実際に拡散してもしなくても）悪性腫瘍または癌と呼ばれる。癌は、転移と呼ばれるプロセスを介し、血液またはリンパ系を経て所属リンパ節および遠隔部位に拡散しうる。転移した癌は、今度は数多くの様々な組織および器官に拡散するため、治療することがより難しい。乳癌、結腸癌、卵巣癌および前立腺癌などの多くの種類の癌において、早期治療が生存を高めることが証明されている。
【０００４】
ケモカインは、加水分解抵抗性である小さなサイトカイン様タンパク質のスーパーファミリーであり、血管新生または内皮細胞増殖の阻害を促進し、細胞骨格改変を誘導し、リンパ球を活性化または不活性化し、かつＧタンパク質共役受容体との相互作用により走化性を媒介する。ケモカインは、その受容体を発現する宿主細胞の増殖および遊走を媒介することができる。
【０００５】
ＣＸＣＬ１３はＣＸＣケモカインファミリーに属する小さなケモカインである。その名称が示唆するように、このケモカインはＢ−１およびＢ−２サブセットの両者に属するＢ細胞に対し選択的に走化性であり、またケモカイン受容体ＣＸＣＲ５と相互作用することによりその作用を誘発する。ＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５は、リンパ組織の濾胞内でＢ細胞の器質化を制御する。ＣＸＣＲ５はヒトの肝臓、脾臓、リンパ節および腸に高度に発現する。ＣＸＣＲ５はＢ細胞遊走において不可欠な役割を果たす。
【０００６】
Ｔリンパ球においては、ＣＸＣＬ１３発現はＴ細胞が胚中心由来であることを反映しうる。したがって、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫などのＴ細胞リンパ腫におけるＣＸＣＬ１３の発現は、腫瘍性Ｔ細胞が胚中心由来であることを反映すると考えられる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の１つの態様は、対象における黒色腫、肉腫、芽腫、癌腫、リンパ腫、骨髄腫または白血病を治療するための方法に関する。１つの実施形態においては、方法は、抗ＣＸＣＬ１３抗体、または抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせの治療的に有効な量を対象に投与することという段階を含む。他の実施形態においては、方法は、タンパク質、ペプチドまたはコード遺伝子としてのＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５免疫原の有効量により対象を免疫してＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害する抗体を誘導することという段階を含む。他の実施形態においては、方法は、対象において抗ＣＸＣＬ１３抗体、または抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせを発現する発現ベクターを前記対象に投与することという段階を含む。他の実施形態においては、方法は、（１）ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の発現を阻害すること、（２）ＣＸＣＬ１３とＣＸＣＲ５の相互作用を阻害すること、または（３）ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害することができる物質を発現する有効量の発現ベクターを対象に投与することという段階を含む。
【０００８】
本願の他の態様は、対象におけるＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の発現が上昇した癌細胞の遊走または転移の予防または阻害のための方法に関する。１つの実施形態においては、方法は、抗ＣＸＣＬ１３抗体、抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせの治療的に有効な量を対象に投与することという段階を含む。他の実施形態においては、方法は、タンパク質、ペプチドまたはコード遺伝子としてのＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５免疫原の有効量により対象を免疫してＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害する抗体を誘導することという段階を含む。他の実施形態においては、方法は対象において抗ＣＸＣＬ１３抗体、または抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせを発現する発現ベクターを前記対象に投与することという段階を含む。他の実施形態においては、方法は、（１）ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の発現を阻害すること、（２）ＣＸＣＬ１３とＣＸＣＲ５の相互作用を阻害すること、または（３）ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害することができる物質を発現する有効量の発現ベクターを対象に投与することという段階を含む。
【０００９】
本願の他の態様は、対象における癌を治療するための方法に関する。方法は、前記対象に由来する生物学的サンプル中のＣＸＣＬ１３発現および／またはＣＸＣＲ５発現のレベルを検出すること、および前記生物学的サンプル中にＣＸＣＬ１３発現および／またはＣＸＣＲ５発現の上昇レベルが検出される場合、（１）ＣＸＣＬ１３に対する抗体および／またはＣＸＣＲ５に対する抗体の治療的に有効な量、または（２）対象において抗ＣＸＣＬ１３抗体、または抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせを発現する発現ベクターを前記対象に投与することという段階を含む。他の実施形態においては、方法は、前記対象に由来する生物学的サンプル中のＣＸＣＬ１３発現および／またはＣＸＣＲ５発現のレベルを検出すること、および前記生物学的サンプル中にＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ３発現の上昇レベルが検出される場合、有効量のＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５免疫原で対象を免疫してＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害する抗体応答を誘発することという段階を含む。他の実施形態においては、方法は、前記対象に由来する生物学的サンプル中のＣＸＣＬ１３発現および／またはＣＸＣＲ５発現のレベルを検出すること、および前記生物学的サンプル中にＣＸＣＬ１３発現および／またはＣＸＣＲ５発現の上昇レベルが検出される場合、（１）ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の発現を阻害すること、または（２）ＣＸＣＬ１３と抗ＣＸＣＲ５の相互作用を阻害すること、または（３）ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害することのできる物質を発現する有効量の発現ベクターを対象に投与することという段階を含む。
【００１０】
本願の他の態様は、化学療法の効果を増強するための方法に関する。方法は、抗ＣＸＣＬ１３抗体、または抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせの有効量を、癌に対する化学療法を受けている対象に投与することを含む。他の実施形態においては、方法は、タンパク質、ペプチドまたはコード遺伝子としての-ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５免疫原の有効量で＋癌に対する化学療法を受けている対象を免疫し、ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害する抗体を誘導することという段階を含む。他の実施形態においては、方法は、抗ＣＸＣＬ１３抗体、または抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせを発現する発現ベクターを、癌に対する化学療法を受けている対象に投与することという段階を含む。他の実施形態においては、方法は、（１）ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の発現を阻害すること、または（２）ＣＸＣＬ１３とＣＸＣＲ５の相互作用を阻害すること、または（３）ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害することのできる物質を発現する有効量の発現ベクターを対象に投与するという段階を含む
【００１１】
本願の他の態様は、１つまたはそれ以上のＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５免疫原の有効量および１つまたはそれ以上のＣＸＣＬ１６およびＣＸＣＲ６免疫原の有効量を用いて用いて対象を免疫することにより対象における癌を治療するための方法であって、前記の癌が黒色腫、リンパ腫、白血病、肉腫、芽腫、または癌腫であることを特徴とする方法に関する。
【００１２】
本願の他の態様は、有効量のＣＸＣＬ１６免疫原および／またはＣＸＣＲ６免疫原で対象を免疫してＣＸＣＬ１６および／またはＣＸＣＲ６の生物学的活性を阻害する抗体を誘導することにより対象における癌を治療するための方法であって、癌が黒色腫、リンパ腫、白血病、肉腫、芽腫、または癌腫であることを特徴とし、ＣＸＣＬ１６免疫原がAAGPEAGENQKQPEKN (SEQ ID（配列番号） NO:87), SQASEGASSDIHTPAQ (SEQ ID NO:88), STLQSTQRPTLPVGSL (SEQ ID NO:89), SWSVCGGNKDPWVQEL (SEQ ID NO:90), GPTARTSATVPVLCLL (SEQ ID NO:91), SGIVAHQKHLLPTSPP (SEQ ID NO:92), RLRKHL (SEQ ID NO:93), LQSTQRP (SEQ ID NO:94), SSDKELTRPNETT (SEQ ID NO:95), AGENQKQPEKNA (SEQ ID NO:96), NEGSVT (SEQ ID NO:97), ISSDSPPSV (SEQ ID NO:98), CGGNKDPW (SEQ ID NO:99), LLPTSPPISQASEGASSDIHT (SEQ ID NO:100), STQRPTLPVGSLSSDKELTRPNETTIHT (SEQ ID NO:101), SLAAGPEAGENQKQPEKNAGPTARTSA (SEQ ID NO:102), TGSCYCGKR (SEQ ID NO:103), DSPPSVQ (SEQ ID NO:104), RKHLRAYHRCLYYTRFQLLSWSVCGG (SEQ ID NO:105), WVQELMSCLDLKECGHAYSGIVAHQKHLLPTSPPISQ (SEQ ID NO:106), SDIHTPAQMLLSTLQ (SEQ ID NO:107), RPTLPVGSL (SEQ ID NO:108), TAGHSLAAG (SEQ ID NO:109), GKRISSDSPPSVQ (SEQ ID NO:110) and KDPWVQELMSCLDLKECGHAYSGIVAHQKH (SEQ ID NO:111)からなる群から選択される１つまたはそれ以上の配列を含むペプチドであることを特徴とし、かつＣＸＣＲ６免疫原がHQDFLQFSKV (SEQ ID NO:112), AGIHEWVFGQVMCK (SEQ ID NO:113), PQIIYGNVFNLDKLICGYHDEAI (SEQ ID NO:114) and YYAMTSFHYTIMVTEA (SEQ ID NO:115)からなる群から選択される１つまたはそれ以上の配列を含むペプチドであることを特徴とする方法に関する。
【００１３】
本願の他の態様は、対象における癌を検出することに関する。方法は、対象から採取した生物学的サンプル中の１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現のレベルを検出すること；および生物学的サンプル中の１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現のレベルを１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現の正常レベルと比較することを含み、生物学的サンプル中の前記の１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現の正常よりも高いレベルが対象における癌の存在を示すことを特徴とし、１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現の正常レベルが事前に決定された数値であるかまたは生物学的サンプルと同じ起源または種類の既知の正常非癌性細胞の対照サンプルから得られることを特徴とし、癌が芽腫、癌腫、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫または肉腫であることを特徴とし、かつ１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５またはＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５の両者を含むことを特徴とする。
【００１４】
本願の他の態様は、癌を有する対象の予後を評価するための方法に関する。方法は、対象に由来する生物学的サンプル中の１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現レベルを判定すること、および生物学的サンプル中の１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現のレベルを１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現の対照レベルと比較することを含み、生物学的サンプル中の１つまたはそれ以上の癌マーカーの対照レベルに対してより高い発現のレベルが対象の予後が不良であることを示すことを特徴とし、かつ生物学的サンプル中の１つまたはそれ以上の癌マーカーの対照レベルに対してより低いかまたは同様の発現のレベルが対象の予後が良好であることを示すことを特徴とし、不良である予後は癌が侵襲型または浸潤型であることを示すことを特徴とし、癌が芽腫、癌腫、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫または肉腫であることを特徴とし、かつ１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５またはＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５の両者を含むことを特徴とする。
【００１５】
本願の他の態様は、対象における癌治療の経過をモニタリングするための方法に関する。方法は、治療中または治療後に対象から採取した１つまたはそれ以上の生物学的サンプル中の１つまたそれ以上の癌マーカーの発現レベルを判定すること、および１つまたはそれ以上の生物学的サンプル中の１つまたそれ以上の癌マーカーの発現のレベルを１つまたそれ以上の癌マーカーの発現の対照レベルと比較することを含み、１つまたはそれ以上の癌マーカーの対照レベルが対象における１つまたはそれ以上の癌マーカーの治療前レベルまたは事前に決定された参照レベルであることを特徴とし、１つまたはそれ以上の生物学的サンプル中の１つまたそれ以上の癌マーカーが対照レベルと同様であるかまたはこれよりも低い場合は治療が有効であると考えられることを特徴とし、癌が芽腫、癌腫、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫または肉腫であることを特徴とし、かつ１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５またはＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５の両者を含むことを特徴とする。
【００１６】
本願の他の態様は、癌を検出するための、または癌の進行をモニタリングするためのキットに関する。キットは、生物学的サンプル中のＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の発現を判定するための試薬；および試薬を使用する方法についての指示を含み、試薬が抗ＣＸＣＬ１３抗体、抗ＣＸＣＲ５抗体または両者を含むことを特徴とする。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】前立腺癌細胞（ＰＣａ）細胞株によるＤＯＣＫ２の発現を示す。
【図２】ＣＸＣＬ１３−ＣＸＣＲ５相互作用がＤＯＣＫ２非依存的なＬＮＣａＰおよびＰＣ３細胞浸潤を促進することを示す。
【図３】ＡｋｔおよびＥＲＫ１／２活性化のＣＸＣＬ１３調節を示す。
【図４】ＰＣ３細胞においてＣＸＣＬ１３がＤＯＣＫ２を経てＪＮＫを活性化することを示す。
【図５】ＪＮＫおよびＤＯＣＫ２を経たＰＣａ細胞増殖のＣＸＣＬ１３調節を示す。
【図６】ＪＮＫ阻害およびＤＯＣＫ２ノックダウンが、アポトーシスによる細胞死が原因でないＰＣａ細胞増殖の減少につながることを示す。
【図７】ＰＣａ細胞株におけるシグナリングカスケードのＣＸＣＬ１３モジュレーションを示す。
【図８】前立腺癌細胞株によるＧタンパク質のαサブユニットアイソフォームの発現を示す。
【図９】前立腺癌細胞株によるＧタンパク質βおよびγサブユニットアイソフォーム発現を示す。
【図１０】ＣＸＣＬ１３処理したかまたは処理していない前立腺癌細胞株におけるＣＸＣＲ５および関連するＧタンパク質の発現を示す。
【図１１】免疫沈降法によるＧｑ／１１タンパク質およびＧαｉ２タンパク質のＣＸＣＲ５との関連の検証を描出する。
【図１２】ＣＸＣＬ１３刺激後にＧα１３と結合したＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ５の同定を示す。
【図１３】前立腺癌細胞におけるＣＸＣＲ５相互作用の仮説モデルを描出する。
【図１４】ＣＸＣＬ１３が細胞周期に関与する重要な分子をどのように調節するか描出する。
【図１５】ＣＸＣＬ１３が細胞遊走に関与する重要な分子をどのように調節するか描出する。
【図１６】ＣＸＣＬ１３が細胞の生存および増殖に関与する重要な分子をどのように調節するか描出する。
【図１７】ＰＣ３細胞においてＣＸＣＬ１３により調節される正準経路を描出する。
【図１８】ＰＩ３Ｋ／ＡｋｔおよびＳＡＰＫ／ＪＮＫシグナリング経路に属するタンパク質の識別的リン酸化のＣＸＣＬ１３メディエーションを示す。
【図１９】ＣＸＣＬ１３−ＣＸＣＲ５相互作用によってモジュレートされるシグナリング経路の要約図である。
【図２０】主要なＣＸＣＬ１３−ＣＸＣＲ５細胞シグナリングカスケードの確認を示す。
【図２１】ＡＫＴ活性化に必要とされるＣＸＣＬ１３−ＣＸＣＲ５シグナリング事象を示す。
【図２２Ａ】ＣＸＣＬ１３を介したＣＸＣＲ５ライゲーションおよび核へのトランスロケーションを描出する。
【図２２Ｂ】ＣＸＣＬ１３を介したＣＸＣＲ５ライゲーションおよび核へのトランスロケーションを描出する。
【図２３】抗ＣＸＣＬ１３抗体投与が前立腺癌の進行および骨転移を阻害することを示す。
【図２４Ａ−１】ＣＸＣＬ１３遮断が骨における前立腺腫瘍増殖を阻害することを示す。
【図２４Ａ−２】ＣＸＣＬ１３遮断が骨における前立腺腫瘍増殖を阻害することを示す。
【図２４Ｂ】ＣＸＣＬ１３遮断が骨における前立腺腫瘍増殖を阻害することを示す。
【図２５】ＣＸＣＬ１３遮断が骨における骨溶解性前立腺腫瘍増殖を抑止することを示す。
【図２６】ＣＸＣＬ１３遮断が前立腺癌の骨への転移によって誘発される骨塩密度（ＢＭＤ）減少を阻害することを示す。
【図２７】健常対照および肺癌被験者の血清ＣＸＣＬ１３レベルを描出する。
【図２８】非腫瘍性肺組織および肺癌組織によるＣＸＣＲ５発現を示す。
【図２９】非腫瘍性乳房組織および乳癌組織によるＣＸＣＲ５発現を示す。
【図３０】非腫瘍性対照と比較した結腸癌組織によるＣＸＣＲ５およびＣＸＣＬ１３発現の描出である。
【図３１】非腫瘍性対照と比較した卵巣癌組織によるＣＸＣＲ５およびＣＸＣＬ１３発現の描出である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下の詳細な説明は、任意の当業者に本発明を作製しかつ使用することを可能とするために提示する。説明を目的として、本発明の完全な理解を提供するために具体的な用語が述べられている。しかし、これらの具体的な詳細は本発明を実施する上で必要とされないことが当業者に明らかとなるであろう。具体的な施用の説明は典型的な例としてのみ提供される。本発明は提示した実施例に限定されることを意図しないが、本願に開示される原則および特性と一致する可能な限り最も広い範囲に適合することとする。
【００１９】
別途定義しない限り、本願に関連して用いられる科学的および技術的用語は当業者が共通して理解する意味を有する。さらに、文脈が別途必要としない限り、単数形の語句は複数形を含みかつ複数形の語句は単数形を含む。
【００２０】
（定義）
本願で用いられる以下の用語は以下の意味を有する：
【００２１】
本願で用いられる用語「治療する」、「治療すること」または「治療」は、障害および／またはその随伴症状を緩和するかまたは抑止するための方法を意味する。本願で用いられる用語「予防する」、「予防すること」または「予防」は、対象が障害および／またはその随伴症状を獲得することを妨げる方法を意味する。一定の実施形態においては、用語「予防する」、「予防すること」または「予防」は、障害および／またはその随伴症状を獲得するリスクを低下させる方法を意味する。
【００２２】
本願で用いられる用語「抗体」は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の免疫学的活性部分、すなわち抗原と特異的に結合する（免疫反応する）抗原結合部位を含む分子を意味する。用語「抗体」は、最も広い意味で用いられ、かつ具体的には、所望の生物学的活性を示す限り、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例：二重特異性抗体など）、および抗体フラグメントを包含する。「特異的に結合する」または「免疫反応する」によって、抗体が所望の抗原の１つまたはそれ以上の抗原決定基と反応しかつ他のポリペプチドとは反応（すなわち結合）しないか、または他のポリペプチドとさらにより低い親和性で結合することが意味される。用語「抗体」は、一般的には全長抗体の抗原結合領域または可変領域である、全長抗体の一部を含む抗体フラグメントも含む。抗体フラグメントの例はＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメント；二重特異性抗体；線形抗体；単鎖抗体（ｓｃＦｖ）；および抗体フラグメントより形成される多重特異性抗体を含む。本発明の一定の実施形態においては、たとえば腫瘍浸透性を高めるために、無傷の抗体よりもむしろ抗体フラグメントを用いることが望ましいこともある。この場合、その血清半減期を延長するために、技術上既知である任意の手段で修飾されている抗体フラグメントを用いることが望ましいこともある。
【００２３】
本願で用いられる用語「モノクローナル抗体」は相当均一な抗体の母集団から得られる抗体を意味し、すなわち母集団を構成する個々の抗体は少量存在しうる天然に発生する可能性のある変異を除いて同一である。本願のモノクローナル抗体は、具体的には、Ｈ鎖および／またはＬ鎖の一部が特定の種に由来するかまたは特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同である一方で、分子鎖の残りの部分が他の種に由来するかまたは他の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同である「キメラ」抗体、および所望の生物学的活性を示す限りそのような抗体のフラグメントを含む（米国特許第４，８１６，５６７号；およびMorrison他、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855（1984））。
【００２４】
非ヒト抗体の「ヒト化」型は、最小限の非ヒト免疫グロブリン由来配列を含むキメラ抗体である。ヒト化抗体は、ほとんどの場合、所望の特異性、親和性および／または能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基によってレシピエントの超可変領域に由来する残基が置換されているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ヒト化および他のキメラ抗体を作製するための方法は技術上既知である。
【００２５】
「二重特異性抗体」は、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有する抗体である。本例においては、結合特異性のうち一方はＣＸＣＬ１６またはＣＸＣＲ６に対するものである。第２の結合標的は他の任意の抗原であり、細胞表面タンパク質または受容体または受容体サブユニットであることが好都合である。二重特異性抗体を作製するための方法は技術上既知である。
【００２６】
「ヘテロ複合体抗体」の使用も本発明の範囲内である。ヘテロ複合体抗体は共有結合で連結される２つの抗体より構成される。このような抗体は、たとえば免疫系細胞を望ましくない細胞に標的化することが提唱されている（米国特許第Ｎｏ．４，６７６，９８０号）。架橋剤を包含するものを含むタンパク質合成化学における既知の方法を用いて、インビトロで抗体を調製できることが意図されている。
【００２７】
「ヘテロ複合体抗体」の使用も本発明の範囲内である。ヘテロ複合体抗体は共有結合で連結される２つの抗体より構成される。このような抗体は、たとえば免疫系細胞を望ましくない細胞に標的化することが提唱されている（米国特許第Ｎｏ．４，６７６，９８０号）。架橋剤を包含するものを含むタンパク質合成化学における既知の方法を用いてインビトロで抗体を調製できることが意図されている。
【００２８】
本発明は、毒素（例：細菌、真菌、植物または動物由来の酵素的活性毒素またはそのフラグメント）などの細胞毒性物質、または放射性同位元素（すなわち放射性複合体）と複合体化した抗体を含む「免疫複合体」の使用も想定する。使用することのできる酵素的活性毒素およびそのフラグメントは、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、エキソトキシンＡ鎖（シュードモナス・アエルギノサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、アレウリテス・フォルディイ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンシンタンパク質、フィトラカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、モモルディカ・カランティア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害物質、クルシン、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害物質、ゲロニン、マイトジェリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセンを含む。放射性複合抗体の生成のために多様な放射性核種を利用することができる。例は２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ、および１８６Ｒｅを含む。
【００２９】
薬理学的な意味において、本発明の文脈では、抗体の「治療的に有効な量」は、その治療に抗体が有効である障害の予防または治療において有効な量を意味する。「障害」は、癌腫および化学療法抵抗性を含めた、抗体による治療によって利益を得るあらゆる状態である。これは、哺乳類に当該の障害の素因をもたらす病的状態を含めた、慢性および急性の障害または疾患を含む。
【００３０】
本願で用いる用語「腫瘍」は、新生物または細胞の異常増殖によって形成される固形病変を意味する。腫瘍は、良性であることも、前悪性であることも、あるいは悪性であることもある。
【００３１】
「原発性腫瘍」は、対象の体内の最初の部位に出現する腫瘍であり、かつ対象の体内で原発性腫瘍より遠隔の部位に出現する「転移性腫瘍」と識別することができる。
【００３２】
本願で用いられる用語「癌」は、調節されない細胞増殖によって典型的に特徴付けられる、哺乳類における生理学的状態を意味するか、または記述する。典型的な癌は：癌腫、黒色腫、肉腫、リンパ腫、白血病、胚細胞腫瘍、および芽腫を含む。このような癌のより具体的な例は扁平上皮癌（例：上皮性扁平上皮癌）、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌および肺扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化器癌を含む胃癌または胃癌、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿道癌、肝癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮体癌、唾液腺癌、腎臓または腎臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、多発性骨髄腫およびＢ細胞性リンパ腫、脳、および頭頸部癌、および随伴する転移を含む。
【００３３】
本願で用いられる用語「癌腫」は、形質転換上皮細胞、または組織発生が不明であるがサイトケラチンまたは細胞間橋の生成などの上皮細胞と関連する特異的な分子的または組織学的特性を有する形質転換細胞からなる浸潤性悪性腫瘍を意味する。本願の典型的な癌腫は卵巣癌、膣癌、子宮頸癌、子宮体癌、前立腺癌、肛門癌、直腸癌、結腸癌、胃癌、膵臓癌、インスリノーマ、腺癌、線扁平上皮癌、神経内分泌腫瘍、乳癌、肺癌、食道癌、口腔癌、脳癌、髄芽腫、神経外胚葉性腫瘍、神経膠腫、下垂体癌および骨癌を含む。
【００３４】
本願で用いられる用語「リンパ腫」は、免疫系のリンパ細胞の癌である。リンパ腫は、典型的には固形腫瘍として存在する。典型的なリンパ腫は：小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、ヴァルデンストロームマクログロブリン血症、脾辺縁帯リンパ腫、形質細胞腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、バーキットリンパ腫、Ｂ細胞性慢性リンパ性リンパ腫、古典的ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫、鼻型節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、芽球型ＮＫ細胞リンパ腫、菌状息肉症、セザリー症候群、皮膚原発ＣＤ３０陽性Ｔリンパ球増殖性疾患、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、不特定末梢Ｔ細胞リンパ腫、および未分化大細胞リンパ腫を含む。典型的な形態の古典的ホジキンリンパ腫は：結節硬化型、混合細胞型、リンパ球豊富型、およびリンパ球減少または非減少型を含む。
【００３５】
本願で用いられる用語「肉腫」は、胚体中胚葉から発生した数多くの組織の１つにおける形質転換細胞から発生する癌である。したがって、肉腫は骨、軟骨、脂肪、筋肉、血管、および造血組織の腫瘍を含む。たとえば、骨肉腫は骨から発生し、軟骨肉腫は軟骨から発生し、脂肪肉腫は脂肪から発生し、かつ平滑筋肉腫は平滑筋から発生する。典型的な肉腫は：Ａｓｋｉｎ腫瘍、ボトリオディーズ、軟骨肉腫、ＥｗｉｎｇのＰＮＥＴ、悪性血管内皮腫、悪性シュワン腫、骨肉腫、軟部組織肉腫を含む。軟部組織肉腫のサブクラスは：胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、葉状嚢肉腫、皮膚線維肉腫類腱腫、線維形成性小円形細胞性腫瘍、類上皮肉腫骨外性軟骨肉腫、骨外性骨肉腫、線維肉腫、血管周皮細胞腫、血管肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパンジオサルコマル、リンパ肉腫、悪性線維性組織球腫、神経線維肉腫、横紋筋肉腫、および滑膜肉腫を含む。
【００３６】
本願で用いる用語「白血病」は、白血球の異常な増加を特徴とする血液または骨髄の癌である。白血病は一連の疾患を包含する幅広い用語である。さらには、血液腫瘍と呼ばれるさらにより幅広い群の一部である。白血病は種々の大分類に細分され；第１の分類は急性型白血病と慢性型白血病の分類である。急性白血病は幼若血液細胞数の急速な増加を特徴とする。そのような細胞による密集によって骨髄は健常な血液細胞を産生できなくなる。慢性白血病は、比較的成熟しているがやはり異常な白血球の過剰な蓄積を特徴とする。典型的には進行に数ヶ月から数年かかり、細胞は正常細胞よりもさらに高い率で生成され、血液中の異常な白血球が増加する。白血病は罹患する血液細胞によっても細別される。この分類により白血病はリンパ芽球性またはリンパ球性白血病と骨髄性または骨髄原性白血病に分類される。リンパ芽球性またはリンパ球性白血病では、癌性変化は、通常では続いてリンパ球を形成する種類の骨髄細胞に発生する。骨髄性または骨髄原性白血病では、癌性変化は、通常では続いて赤血球、他の一部の種類の白血球および血小板を形成する種類の骨髄細胞に発生する。これら２種類の分類の複合により、合計４つの主要カテゴリーが提供される。典型的には、これら４つの主要カテゴリーのそれぞれの中に数種類のサブカテゴリーがある。これらの分類スキームから外れた希少種もある。典型的な白血病は：急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄原性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄原性白血病（ＣＭＬ）、ヘアリーセル白血病（ＨＣＬ）、Ｔ細胞性前リンパ球性白血病、大顆粒リンパ球性白血病、若年性骨髄単球性白血病、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、バーキット白血病、および成人性Ｔ細胞白血病を含む。
【００３７】
本願で用いられる用語「黒色腫」は、メラニン細胞の癌または悪性腫瘍である。メラニン細胞は、皮膚の色をもたらす暗色色素メラニンを産生する細胞である。主として皮膚に発生するが、腸および眼を含む身体の他の部分にも認められる。黒色腫は以下の定型およびサブタイプに分類される：悪性黒子、悪性黒子型黒色腫、表在拡大型黒色腫、末端黒子型黒色腫、粘膜黒色腫、結節型黒色腫、ポリープ状黒色腫、線維形成性黒色腫、無色素性黒色腫、軟部組織黒色腫、小母斑様細胞を伴う黒色腫、スピッツ母斑の特性を有する黒色腫、およびぶどう膜黒色腫。
【００３８】
本願で用いられる用語「転移」は、１つの器官または部分から隣接しない他の器官または部分への癌または癌腫の拡散を意味する。
【００３９】
用語「阻害する」は相対的な用語であり、物質の投与後に反応または状態が定量的に減少する場合、または物質の投与後に参照物質と比較して減少する場合、物質は反応または状態を阻害する。同様に、用語「予防する」は、反応または状態の特性のうち少なくとも１つが除去される限り、必ずしもある物質が完全に反応または状態を除去することを意味しない。したがって、感染または病的反応といった反応を低減または予防する組成物は、そのような感染または反応を除去することができるが、感染または反応が、物質非存在下での感染または反応の、または参照物質と比較して少なくとも約７０％、または約８０％、またはさらに約９０％（すなわち１０％未満に）といった少なくとも約５０％などの測定可能な程度で減少する限り、必ずしも完全に除去しない。
【００４０】
用語「ＣＸＣＬ１３免疫原」および「ＣＸＣＲ５免疫原」は、（１）ＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５に由来する免疫原性ペプチドおよび／または（２）ＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５に由来する免疫原性ペプチドをコードし、かつ発現することのできる発現ベクターを含む免疫原性組成物を意味する。ＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５に由来する免疫原性ペプチドは、他の部分と融合させてその免疫原性を増強しうる。ＣＸＣＬ１３免疫原性ペプチドの例はRSSSTLPVPVFKRKIP (SEQ ID NO:45), PRGNGCPRKEIIVWKK (SEQ ID NO:46), LPRGNGCPRKEIIVWK (SEQ ID NO:47), QILPRGNGCPRKEIIV (SEQ ID NO:48), ILPRGNGCPRKEIIVW (SEQ ID NO:49), RIQILPRGNGCPRKEI (SEQ ID NO:50), RGNGCPRKEIIVWKKN (SEQ ID NO:51), KRSSSTLPVPVFKRKI (SEQ ID NO:52), IQILPRGNGCPRKEII (SEQ ID NO:53), DRIQILPRGNGCPRKE (SEQ ID NO:54), RKRSSSTLPVPVFKRK (SEQ ID NO:55), RCRCVQESSVFIPRRF (SEQ ID NO:56), GNGCPRKEIIVWKKNK (SEQ ID NO:57), CVQESSVFIPRRFIDR (SEQ ID NO:58), IDRIQILPRGNGCPRK (SEQ ID NO:59), LRCRCVQESSVFIPRR (SEQ ID NO:60), FIDRIQILPRGNGCPR (SEQ ID NO:61), RCVQESSVFIPRRFID (SEQ ID NO:62), CRCVQESSVFIPRRFI (SEQ ID NO:63), QESSVFIPRRFIDRIQ (SEQ ID NO:64), RFIDRIQILPRGNGCP (SEQ ID NO:65), VQESSVFIPRRFIDRI (SEQ ID NO:66), ESSVFIPRRFIDRIQI (SEQ ID NO:67), SLRCRCVQESSVFIPR (SEQ ID NO:68), NGCPRKEIIVWKKNKS (SEQ ID NO:69), PQAEWIQRMMEVLRKR (SEQ ID NO:70), RRFIDRIQILPRGNGC (SEQ ID NO:71), LRKRSSSTLPVPVFKR (SEQ ID NO:72), VQESSVFIPRR (SEQ ID NO:73, EWIQRMMEVLRKRSSSTLPVPVFKRK (SEQ ID NO:74), KKNK (SEQ ID NO:75), RKRSSS (SEQ ID NO:76), RGNGCP (SEQ ID NO:77), VYYTSLRCRCVQESSVFIPRR (SEQ ID NO:78), DRIQILP (SEQ ID NO:79), RKEIIVW (SEQ ID NO:80) and KSIVCVDPQ (SEQ ID NO:81)からなる群から選択される１つまたはそれ以上の配列からなるか、またはこれを含むペプチドを含むが、これに限定されない。ＣＸＣＲ５免疫原性ペプチドの例は、 TSLVENHLCPATE (SEQ ID NO:82), EGSVGWVLGTFLCKT (SEQ ID NO:83), LPRCTFS (SEQ ID NO:84), LARLKAVDNT (SEQ ID NO:85) and MASFKAVFVP (SEQ ID NO:86)からなる群から選択される１つまたはそれ以上の配列からなるか、またはこれを含むペプチドを含むが、これに限定されない。
【００４１】
用語「ＣＸＣＬ１６免疫原」および「ＣＸＣＲ６免疫原」は、（１）ＣＸＣＬ１６またはＣＸＣＲ６に由来する免疫原性ペプチドおよび／または（２）ＣＸＣＬ１６またはＣＸＣＲ６に由来する免疫原性ペプチドをコードし、かつ発現することのできる発現ベクターを含む免疫原性組成物を意味する。ＣＸＣＬ１６またはＣＸＣＲ６に由来する免疫原性ペプチドは、融合タンパク質の形態としてその免疫原性を増強しうる。ＣＸＣＬ１６免疫原性ペプチドの例はAAGPEAGENQKQPEKN (SEQ ID NO:87), SQASEGASSDIHTPAQ (SEQ ID NO:88), STLQSTQRPTLPVGSL (SEQ ID NO:89), SWSVCGGNKDPWVQEL (SEQ ID NO:90), GPTARTSATVPVLCLL (SEQ ID NO:91), SGIVAHQKHLLPTSPP (SEQ ID NO:92), RLRKHL (SEQ ID NO:93), LQSTQRP (SEQ ID NO:94), SSDKELTRPNETT (SEQ ID NO:95), AGENQKQPEKNA (SEQ ID NO:96), NEGSVT (SEQ ID NO:97), ISSDSPPSV (SEQ ID NO:98), CGGNKDPW (SEQ ID NO:99), LLPTSPPISQASEGASSDIHT (SEQ ID NO:100), STQRPTLPVGSLSSDKELTRPNETTIHT (SEQ ID NO:101), SLAAGPEAGENQKQPEKNAGPTARTSA (SEQ ID NO:102), TGSCYCGKR (SEQ ID NO:103), DSPPSVQ (SEQ ID NO:104), RKHLRAYHRCLYYTRFQLLSWSVCGG (SEQ ID NO:105), WVQELMSCLDLKECGHAYSGIVAHQKHLLPTSPPISQ (SEQ ID NO:106), SDIHTPAQMLLSTLQ (SEQ ID NO:107), RPTLPVGSL (SEQ ID NO:108), TAGHSLAAG (SEQ ID NO:109), GKRISSDSPPSVQ (SEQ ID NO:110), KDPWVQELMSCLDLKECGHAYSGIVAHQKH (SEQ ID NO:111)からなる群から選択される１つまたはそれ以上の配列からなるか、またはこれを含むペプチドを含むが、これに限定されない。ＣＸＣＲ６免疫原性ペプチドの例は、HQDFLQFSKV (SEQ ID NO:112), AGIHEWVFGQVMCK (SEQ ID NO:113), PQIIYGNVFNLDKLICGYHDEAI (SEQ ID NO:114) and YYAMTSFHYTIMVTEA (SEQ ID NO:115)からなる群から選択される１つまたはそれ以上の配列からなるか、またはこれを含むペプチドを含むが、これに限定されない。
【００４２】
用語「生物学的サンプル」は、組織、組織サンプル、細胞サンプル、腫瘍サンプル、糞便サンプル、および、たとえば血液、血漿、血清、唾液、尿、脳または脊髄液、リンパ液、および乳頭吸引物などの生体液を含む、哺乳類対象、好ましくはヒト対象から採取された生物学的材料のサンプルを意味する。生物学的サンプルは、たとえば、吸引生検、ブラシ生検、表面生検、針生検、穿孔生検、切除生検、開放生検、切開生検、および内視鏡的生検などの組織生検の形態で採取しうる。１つの実施形態においては、生物学的サンプルは血液、血清または血漿サンプルである。他の実施形態においては、生物学的サンプルは唾液サンプルである。さらに他の実施形態においては、生物学的サンプルは尿サンプルである。
【００４３】
生物学的サンプルの「分離物」（例：組織または腫瘍サンプルの分離物）は、サンプルより分別、誘導、抽出、精製または分離された材料または組成物（例：生物学的材料または組成物）を意味し、かつ好ましくは生物学的サンプルに付随する望ましくない組成物および／または不純物または汚染物をほとんど含まない。
【００４４】
「組織サンプル」は、対象、好ましくはヒト対象の無傷の組織より採取または切除された組織の一部、断片、部分、セグメント、または分画を含む。
【００４５】
「腫瘍サンプル」は、たとえば対象、好ましくはヒト対象から採取または切除された腫瘍（例：対象の組織から切除または摘出）などの、腫瘍の一部、断片、部分、セグメント、または分画に対して含む。腫瘍サンプルは、原発性腫瘍または転移性腫瘍から採取しうる。
【００４６】
治療を目的とした用語「哺乳類」は、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ウマ、ネコ、ウシなどの家畜および畜産動物、および動物園、スポーツまたは愛玩用動物を含む、哺乳類に分類される任意の動物を意味する。好ましくは、哺乳類はヒトである。
【００４７】
用語「上昇レベル」は、関連技術において習慣的に定義されるかまたは用いられる正常または対照レベルよりも高いレベルを意味する。たとえば、組織の免疫染色の上昇レベルは、当業者であれば対照組織の免疫染色のレベルよりも高いとみなす免疫染色のレベルである。
【００４８】
本願において、範囲は「おおよその」１つの特定の数値から、かつ／または「おおよその」他の特定の数値までとして表示することがある。そのような範囲が表示される場合、他の実施形態は１つの特定の数値からかつ／または他の特定の数値までを含む。同様に、先行する「おおよそ」の使用によって数値が近似として表示される場合、当該の特定の数値が他の実施形態を形成することが理解されるであろう。さらに、各範囲の端点は、もう一方の端点に関しても、もう一方の端点と無関係でも重要であることが理解されるであろう。本願には数多くの数値が開示されており、かつ本願において各数値はその具体的な数値自体に付け加えて「おおよその」その数値として開示されることも理解される。たとえば、数値「１０」が開示される場合、「約１０」も開示される。ある数値が開示される場合、当業者が適切に理解するように、その数値「よりも小さいかまたはこれと等しい」、「その数値よりも大きいかまたはこれと等しい」、および数値間の可能な範囲も開示されることも理解される。たとえば、数値「１０」が開示される場合、「１０より小さいかまたはこれと等しい」、および「１０より大きいかまたはこれと等しい」も開示される。
【００４９】
（ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の発現または活性を測定することにより癌を検出するための方法）
Ｂリンパ球化学誘引物質（ＢＬＣ）としても知られるＣＸＣＬ１３は、ＣＸＣＲ５ケモカイン受容体のリガンドである。ケモカインも受容体も、癌の転移および浸潤の調節において役割を果たすと見られる。ＣＸＣＬ１３もＣＸＣＲ５も、卵巣癌、肺癌、乳癌、前立腺癌、骨癌および膵臓癌を含めた複数の癌腫組織の種類において、正常組織と比較して局所的にアップレギュレートされる。ＣＸＣＬ１３レベルは、それらの癌を有する患者の血清においても上昇する。さらに、可溶性ＣＸＣＬ１３ケモカインは、癌細胞のインビボおよびインビトロ増殖および遊走を促進する。
【００５０】
ＣＸＣＲ５（ＣＤ１８５）は、Ｂｕｒｋｅｔｔリンパ腫受容体１（ＢＬＲ１）としても知られ、推定上化学療法剤に対する保護を支持する癌細胞生存における多様な役割を有しうるＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）のケモカイン受容体ファミリーの構成要素である。ＣＸＣＲ５のＣＸＣＬ１３との相互作用によりＤＯＣＫ２（サイトキネシスのデディケーター２）が活性化され、これがＤＯＣＫ結合タンパク質ＥＬＭＯ１（貪食および細胞運動性タンパク質１）と結合し、リンパ球内でＤＯＣＫ２媒介性Ｒａｃ（Ｒａｃ関連Ｃ３ボツリヌス毒素基質タンパク質、ＧＴＰアーゼのＲｈｏファミリーのサブファミリーであるシグナリングＧタンパク質のファミリー）活性化を可能とする。ＤＯＣＫ２はＲａｃ１およびＲａｃ２アイソフォームのいずれにも結合し、またＤＯＣＫ２依存性Ｒａｃ活性化により好中球ＮＡＤＰＨオキシダーゼが調節され、かつ好中球の化学走性にとって重要である。本願においては、用語「ＣＸＣＲ５」はＣＸＣＲ５ａ（ＣＸＣＲ５転写変異体２）およびＣＸＣＲ５ｂ（ＣＸＣＲ５転写変異体１）などのＣＸＣＲ５転写変異体を含む。
【００５１】
本願の１つの態様は、対象における癌の存在を検出するための方法に関する。１つの実施形態においては、方法は、対象から採取した生物学的サンプル中の１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現のレベルを検出すること、および生物学的サンプル中の１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現のレベルを１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現の正常レベルと比較することを含み、生物学的サンプル中の１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現の正常よりも高いレベルが対象における癌の存在を示すことを特徴とし、１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現の正常レベルが事前に決定された数値であるかまたは生物学的サンプルと同じ起源または種類の既知の正常非癌性細胞の対照サンプルから得られることを特徴とし、１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５またはＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５の両者であることを特徴とする。
【００５２】
他の実施形態においては、１つまたはそれ以上の癌マーカーは（１）ＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５またはＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５の両者、および（２）ＣＸＣＬ１６またはＣＸＣＲ６またはＣＸＣＬ１６およびＣＸＣＲ６の両者を含む。
【００５３】
他の実施形態においては、１つまたはそれ以上の癌マーカーは（１）ＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５またはＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５の両者、（２）ＣＸＣＬ１６またはＣＸＣＲ６またはＣＸＣＬ１６およびＣＸＣＲ６の両者、および（３）１つまたはそれ以上の他の癌マーカーを含む。
【００５４】
本願の文脈においては、用語「検出すること」は予測および可能性分析を包含することを意図している。本方法は、治療的介入、病期などの診断基準、および疾患モニタリングおよび癌のサーベイランスを含めて、治療様式に関する決定を下す際に臨床的に用いられることを意図している。本願に従って対象の状態を検討するための中間的な結果が提供されうる。そのような中間的な結果は、追加的な情報と複合され、医師、看護師、または他の実践者に対し、対象が疾患に罹患していると診断することを支援する。代替的に、本願を用いて対象に由来する組織中の癌性細胞を検出し、さらに対象が癌に罹患していると診断するための有用な情報を提供しうる。本方法によって診断しようとする対象は好ましくはヒトであるが、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマおよびウシなどの他の哺乳類も含みうる。
【００５５】
一定の実施形態においては、癌は芽腫、癌腫、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫または肉腫である。他の一部の実施形態においては、生物学的サンプルは血漿サンプル、唾液サンプルまたは尿サンプルである。
【００５６】
（癌を有する対象の予後を予測するための方法）
癌を診断するための本方法は、患者由来の生物学的サンプル中の１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現レベルを参照サンプルのそれと比較することにより、癌患者の予後を評価するために施用しうる。１つの実施形態においては、方法は、患者に由来する生物学的サンプル中の１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現レベルを判定することを含み、生物学的サンプル中の１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現の対照値、たとえば対照中のレベルに対してより高いレベルが対象の予後が不良であることを示す一方で、生物学的サンプル中の１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現の対照のそれに対してより低いかまたは同様のレベルは対象の予後が良好であることを示すことを特徴とする。不良である予後は、癌が侵襲型または浸潤型であり、急速に進行する可能性がありかつ／または転移する可能性があることを示し、１つまたはそれ以上の癌マーカーがＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５またはＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５の両者を含むことを特徴とする。
【００５７】
他の実施形態においては、１つまたはそれ以上の癌マーカーは（１）ＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５またはＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５の両者、および（２）ＣＸＣＬ１６またはＣＸＣＲ６またはＣＸＣＬ１６およびＣＸＣＲ６の両者を含む。
【００５８】
他の実施形態においては、１つまたはそれ以上の癌マーカーは（１）ＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５またはＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５の両者、（２）ＣＸＣＬ１６またはＣＸＣＲ６またはＣＸＣＬ１６およびＣＸＣＲ６の両者、および（３）１つまたはそれ以上の他の癌マーカーを含む。
【００５９】
代替的に、生物学的サンプル中の１つまたはそれ以上の癌マーカーのレベルは、患者の予後を評価するために、一連の病期に渡って測定されうる。１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現レベルの正常な対照レベルと比較した上昇は、より好ましくない予後を示す。正常な対照レベルと比較した１つまたはそれ以上の癌マーカーの発現レベルの類似は、患者のより好ましい予後を示す。
【００６０】
一定の実施形態においては、癌は芽腫、癌腫、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫または肉腫である。他の一部の実施形態においては、生物学的サンプルは血漿サンプル、唾液サンプルまたは尿サンプルである。
【００６１】
（癌治療の経過をモニタリングするための方法）
一定の実施形態においては、１つまたはそれ以上の癌マーカーのレベルを用いて癌の治療の経過をモニタリングする。この方法においては、被験生物学的サンプルは癌に対する治療を受けている対象から提供される。好ましくは、治療前、治療中または治療後の様々な時点において対象より複数の被験生物学的サンプルを採取する。次に、治療後サンプル中の癌マーカーの発現レベルを治療前サンプルの中の癌マーカーのレベル、または、その代わりに参照サンプル（例：正常対照レベル）と比較してもよい。たとえば、治療後マーカーレベルが治療前マーカーレベルより低い場合、治療が有効であると結論づけることができる。同様に、治療後マーカーレベルが正常対照マーカーレベルと同様、または同じである場合も、治療が有効であると結論づけることができる。
【００６２】
「有効な」治療とは、対象における癌マーカーのレベルまたは癌のサイズ、有病率または転移の可能性の低下につながるものである。治療が予防的に施用される場合、「有効な」は治療が癌の発生を遅延または予防するかまたは癌の臨床症状を緩和することを意味する。癌の評価は、標準的な臨床プロトコルを用いて行うことができる。さらに、治療の有効性は、癌を診断または治療するための任意の既知の方法と関連して判定することができる。癌は、たとえば病理組織学的に、または体重減少または食欲減退などの病的な異常によって特定することにより常用的に診断することができる。
【００６３】
１つの実施形態においては、生物学的サンプル中の癌マーカーレベルを、正常対照サンプルなどの参照サンプルと関連した癌マーカーレベルと比較する。語句「正常対照レベル」は、癌に罹患していない母集団の生物学的サンプル中に典型的に認められる癌マーカーのレベルを意味する。参照サンプルは、好ましくは被験サンプルの性質と同様の性質である。たとえば、被験サンプルが患者血清を含む場合、参照サンプルも血清でなければならない。対照由来および被験対象由来の生物学的サンプル中の癌マーカーレベルを同時に判定しても、またはその代わりに、対照群から事前に採取したサンプル中の癌マーカーのレベルを分析することで得られた結果に基づく統計的な方法によって正常対照レベルを判定してもよい。
【００６４】
一定の実施形態においては、癌は芽腫、癌腫、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫または肉腫である。他の一部の実施形態においては、生物学的サンプルは血漿サンプル、唾液サンプルまたは尿サンプルである。
【００６５】
（癌マーカー）
本願で用いる用語「癌マーカー」は、単独の、または他のポリペプチドまたはポリヌクレオチドと複合したその発現レベルが癌または癌の予後と相関するポリペプチドまたはポリヌクレオチドを意味するか、または記述する。相関は、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの発現上昇または発現減少のいずれかと関連することができる。たとえば、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの発現が癌を示してもよく、またはポリペプチドまたはポリヌクレオチドの発現の欠落が癌患者の予後の不良と相関してもよい。
【００６６】
用語「癌マーカーの発現レベル」は、その場合はポリヌクレオチドの存在および／または量を判定する転写レベルか、またはその場合はポリペプチドの存在および／または量を判定する、翻訳レベルで測定することができる。癌マーカー発現は、任意の適切な方法を用いて特性分析することができる。
【００６７】
癌マーカーの例は、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２５−１、ＣＣＬ２５−２、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１１、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＲＮＡ結合モチーフ３（「ＲＢＭ３」）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、クロムグラニンＡ（ＣＧＡ）、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）、神経特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、プロラクチン、Ｂ７−Ｈ３、セプラーゼポリペプチド、抗ｐ５３、オステオポンチン、フェリチン、リゾフォスファチジルコリン、キネシンファミリー構成要素４Ａ（ＫＩＦ４Ａ）、神経ペントラキシンＩ（ＮＰＴＸ１）および線維芽細胞増殖因子受容体１癌遺伝子パートナー（ＦＧＦＲ１ＯＰ）タンパク質などの他のケモカイン、およびケモカイン受容体を含む。
【００６８】
１つの実施形態においては、上述の癌マーカーはＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２７、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１６、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６およびＣＸ３ＣＲ１を含む黒色腫マーカーパネルから選択される。黒色腫パネル中のマーカーは黒色腫を検出するために用いても、または黒色腫を有する対象の予後を予測するために用いてもよい。
【００６９】
１つの実施形態においては、上述の癌マーカーはＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５、ＣＣＬ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６およびＣＸ３ＣＲ１を含む癌腫マーカーパネルから選択される。癌腫パネル中のマーカーは癌腫を検出するために用いても、または癌腫を有する対象の予後を予測するために用いてもよい。
【００７０】
他の実施形態においては、上述の癌マーカーはＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５、ＣＣＬ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＸ３ＣＲ１、ＲＮＡ結合モチーフ３（「ＲＢＭ３」）および癌胎児性抗原（ＣＥＡ）を含む乳癌マーカーパネルから選択される。乳癌パネル中のマーカーは乳癌を検出するために用いても、または乳癌を有する対象の予後を予測するために用いてもよい。
【００７１】
他の実施形態においては、上述の癌マーカーはＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸ３ＣＲ１、ＰＳＡ、ＣＥＡ、ＣＧＡ、ＤＨＥＡ、ＮＳＥ、ＰＡＰ、プロラクチンおよびＢ７−Ｈ３を含む前立腺癌マーカーパネルから選択される。乳癌パネル中のマーカーは前立腺癌を検出するために用いても、または前立腺癌を有する対象の予後を予測するために用いてもよい。
【００７２】
他の実施形態においては、上述の１つまたはそれ以上の癌マーカーはＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸ３ＣＲ１、セプラーゼポリペプチド、抗ｐ５３、オステオポンチン、およびフェリチンを含むコロンレクタル癌マーカーパネルから選択される。コロンレクタル癌パネル中のマーカーはコロンレクタル癌を検出するために用いても、またはコロンレクタル癌を有する対象の予後を予測するために用いてもよい。
【００７３】
他の実施形態においては、上述の癌マーカーはＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸ３ＣＲ１、癌抗原１２５（ＣＡ−１２５）、ＨＥ−４、ＯＶＸ−１マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）およびリゾフォルファチジルコリンを含む卵巣癌マーカーパネルから選択される。卵巣癌パネル中のマーカーは卵巣癌を検出するために用いても、または卵巣癌を有する対象の予後を予測するために用いてもよい。
【００７４】
他の実施形態においては、上述の癌マーカーはＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸ３ＣＲ１、キネシンファミリー構成要素４Ａ（ＫＩＦ４Ａ）、神経ペントラキシンＩ（ＮＰＴＸ１）、線維芽細胞増殖因子受容体１癌遺伝子パートナー（ＦＧＦＲ１ＯＰ）タンパク質およびＣＥＡを含む肺癌マーカーパネルから選択される。肺癌パネル中のマーカーは肺癌をデテクトシングするために用いても、または肺癌を有する対象の予後を予測するために用いてもよい。
【００７５】
他の実施形態においては、上述の１つまたはそれ以上の癌マーカーはＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸ３ＣＲ１およびＣＥＡを含む膵臓癌マーカーパネルから選択される。膵臓癌パネル中のマーカーは膵臓癌を検出するために用いても、または膵臓癌を有する対象の予後を予測するために用いてもよい。
【００７６】
他の実施形態においては、上述の１つまたはそれ以上の癌マーカーはＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５、ＣＣＬ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６およびＣＸ３ＣＲ１およびＣＥＡを含む胃癌マーカーパネルから選択される。胃癌パネル中のマーカーは胃癌を検出するために用いても、または胃癌を有する対象の予後を予測するために用いてもよい。
【００７７】
（検出方法）
癌マーカーの発現は、転写レベル（すなわちｍＲＮＡの量）または翻訳レベル（すなわちタンパク質の量）で判定することができる。一定の実施形態においては、癌マーカーの発現は定量的ＲＴ−ＰＣＲ、ノーザンブロットまたは当業者に既知の他の方法によってｍＲＮＡレベルで判定される。他の実施形態においては、癌マーカーの発現はＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、または抗ＣＸＣＬ１３および抗ＣＸＣＲ５抗体などの抗癌マーカー抗体を用いた他の種類の免疫検出法によってタンパク質レベルで判定される。
【００７８】
一定の実施形態においては、抗ＣＸＣＬ１３および／または抗ＣＸＣＲ５抗体はＣＸＣＬ１３ペプチドまたはＣＸＣＲ５ペプチドと特異的に結合する抗体を含む。ＣＸＣＬ１３ペプチドの例は、RSSSTLPVPVFKRKIP (SEQ ID NO:45), PRGNGCPRKEIIVWKK (SEQ ID NO:46), LPRGNGCPRKEIIVWK (SEQ ID NO:47), QILPRGNGCPRKEIIV (SEQ ID NO:48), ILPRGNGCPRKEIIVW (SEQ ID NO:49), RIQILPRGNGCPRKEI (SEQ ID NO:50), RGNGCPRKEIIVWKKN (SEQ ID NO:51), KRSSSTLPVPVFKRKI (SEQ ID NO:52), IQILPRGNGCPRKEII (SEQ ID NO:53), DRIQILPRGNGCPRKE (SEQ ID NO:54), RKRSSSTLPVPVFKRK (SEQ ID NO:55), RCRCVQESSVFIPRRF (SEQ ID NO:56), GNGCPRKEIIVWKKNK (SEQ ID NO:57), CVQESSVFIPRRFIDR (SEQ ID NO:58), IDRIQILPRGNGCPRK (SEQ ID NO:59), LRCRCVQESSVFIPRR (SEQ ID NO:60), FIDRIQILPRGNGCPR (SEQ ID NO:61), RCVQESSVFIPRRFID (SEQ ID NO:62), CRCVQESSVFIPRRFI (SEQ ID NO:63), QESSVFIPRRFIDRIQ (SEQ ID NO:64), RFIDRIQILPRGNGCP (SEQ ID NO:65), VQESSVFIPRRFIDRI (SEQ ID NO:66), ESSVFIPRRFIDRIQI (SEQ ID NO:67), SLRCRCVQESSVFIPR (SEQ ID NO:68), NGCPRKEIIVWKKNKS (SEQ ID NO:69), PQAEWIQRMMEVLRKR (SEQ ID NO:70), RRFIDRIQILPRGNGC (SEQ ID NO:71), LRKRSSSTLPVPVFKR (SEQ ID NO:72), VQESSVFIPRR (SEQ ID NO:73, EWIQRMMEVLRKRSSSTLPVPVFKRK (SEQ ID NO:74), KKNK (SEQ ID NO:75), RKRSSS (SEQ ID NO:76), RGNGCP (SEQ ID NO:77), VYYTSLRCRCVQESSVFIPRR (SEQ ID NO:78), DRIQILP (SEQ ID NO:79), RKEIIVW (SEQ ID NO:80) and KSIVCVDPQ (SEQ ID NO:81)からなる群から選択される１つまたはそれ以上の配列からなるか、またはこれを含むペプチドを含むが、これに限定されない。ＣＸＣＲ５ペプチドの例は、TSLVENHLCPATE (SEQ ID NO:82), EGSVGWVLGTFLCKT (SEQ ID NO:83), LPRCTFS (SEQ ID NO:84), LARLKAVDNT (SEQ ID NO:85) and MASFKAVFVP (SEQ ID NO:86)からなる群から選択される１つまたはそれ以上の配列からなるか、またはこれを含むペプチドを含むが、これに限定されない。
【００７９】
他の実施形態においては、抗ＣＸＣＬ１３および／または抗ＣＸＣＲ５抗体は抗ＣＸＣＬ１６抗体および／またはＣＸＣＲ６抗体と共に使用される。抗ＣＸＣＬ１６および／または抗ＣＸＣＲ６抗体はＣＸＣＬ１６ペプチドまたはＣＸＣＲ６ペプチドと特異的に結合する抗体を含む。ＣＸＣＬ１６ペプチドの例は、AAGPEAGENQKQPEKN (SEQ ID NO:87), SQASEGASSDIHTPAQ (SEQ ID NO:88), STLQSTQRPTLPVGSL (SEQ ID NO:89), SWSVCGGNKDPWVQEL (SEQ ID NO:90), GPTARTSATVPVLCLL (SEQ ID NO:91), SGIVAHQKHLLPTSPP (SEQ ID NO:92), RLRKHL (SEQ ID NO:93), LQSTQRP (SEQ ID NO:94), SSDKELTRPNETT (SEQ ID NO:95), AGENQKQPEKNA (SEQ ID NO:96), NEGSVT (SEQ ID NO:97), ISSDSPPSV (SEQ ID NO:98), CGGNKDPW (SEQ ID NO:99), LLPTSPPISQASEGASSDIHT (SEQ ID NO:100), STQRPTLPVGSLSSDKELTRPNETTIHT (SEQ ID NO:101), SLAAGPEAGENQKQPEKNAGPTARTSA (SEQ ID NO:102), TGSCYCGKR (SEQ ID NO:103), DSPPSVQ (SEQ ID NO:104), RKHLRAYHRCLYYTRFQLLSWSVCGG (SEQ ID NO:105), WVQELMSCLDLKECGHAYSGIVAHQKHLLPTSPPISQ (SEQ ID NO:106), SDIHTPAQMLLSTLQ (SEQ ID NO:107), RPTLPVGSL (SEQ ID NO:108), TAGHSLAAG (SEQ ID NO:109), GKRISSDSPPSVQ (SEQ ID NO:110), KDPWVQELMSCLDLKECGHAYSGIVAHQKH (SEQ ID NO:111)からなる群から選択される１つまたはそれ以上の配列からなるか、またはこれを含むペプチドを含むが、これに限定されない。ＣＸＣＲ６ペプチドの例は、HQDFLQFSKV (SEQ ID NO:112), AGIHEWVFGQVMCK (SEQ ID NO:113), PQIIYGNVFNLDKLICGYHDEAI (SEQ ID NO:114) and YYAMTSFHYTIMVTEA (SEQ ID NO:115)からなる群から選択される１つまたはそれ以上の配列からなるか、またはこれを含むペプチドを含むが、これに限定されない。
【００８０】
１つの実施形態においては、抗体は固形支持体に複合体化される。「固形支持体」により、本願の抗体がそこに付着または結合することのできる非水性マトリクスが意味される。本願に包含される固相の例は、ガラスによって部分的にまたは全体的に形成されるもの（例：空隙率調節ガラス）、多糖類（例：アガロース）、ポリアクリルアミド、シリコン、およびポリスチレン、ポリプロピレンおよびポリビニルアルコールなどのプラスチックを含む。
【００８１】
（酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ））
一定の実施形態においては、癌マーカーは、典型的には抗体コーティングした分析プレートまたはウェルを用いて遂行される酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いて検出される。一般的に使用されるＥＬＩＳＡ測定は、サンドイッチイムノアッセイまたは競合結合イムノアッセイのいずれかを用いる。
【００８２】
簡潔に述べると、サンドイッチイムノアッセイは、抗原またはリガンド上の異なる部位と結合する２種類の抗体を用いる方法である。抗原に対する特異性の高い一次抗体を、固形表面に結合させる。次に抗原を添加し、その後検出抗体と呼ばれる二次抗体を添加する。検出抗体は、一次抗体とは異なるエピトープで抗原と結合する。その結果、抗原は２種類の抗体によって「サンドイッチ」される。通常、抗原に対する抗体結合親和性はイムノアッセイの感度の主要な決定因子である。抗原濃度が上昇すると検出抗体の量が増加し、測定される応答がより高くなる。サンドイッチ結合測定の標準曲線は正の勾配を有する。結合の程度を定量するために種々のレポーターを用いることができる。典型的には、一次抗体と異なる種で生成されなければならない二次抗体（すなわち、二次抗体はヤギ、ニワトリなどに由来するがウサギには由来しない抗ウサギ抗体であるよりも、一次抗体がウサギ抗体である場合）に酵素を結合する。酵素に対する基質を、検出シグナルとして比色読み出しを形成する反応物に添加する。生成したシグナルは、サンプル中に存在する標的抗原の量に比例する。
【００８３】
結合事象を測定するために用いる抗体と結合したレポーターは、検出様式を決定する。比色検出には分光測定プレートリーダーを用いることができる。最近、イムノアッセイの感度を高めるために数種類のレポーターが開発されている。たとえば、さらにシグナルを増幅しかつ発光プレートリーダー上で読み取ることのできる化学発光基質が開発されている。また、測定の酵素段階が蛍光体タグ抗体に置き換えられた蛍光読み出しが非常に普及している。この読み出しは次に蛍光プレートリーダーで測定する。
【００８４】
競合結合測定法は、限られた数の抗体結合部位に対する標識化リガンドと非標識化リガンドの競合に基づいている。競合的阻害測定法は、しばしば小さな分析物に対して用いられる。これらの測定法は、分析物と適合化させた抗体対が存在しない場合にも用いられる。競合結合ＥＬＩＳＡにおいては１種類の抗体のみを用いる。これは、２種類の抗体が非常に小さな分子と結合しようとする場合に起こる立体障害によるものである。不変量の標識リガンド（トレーサー）および可変量の非標識リガンドを抗体と共にインキュベートする。質量作用の法則によれば、標識リガンドの量は標識および非標識リガンドの総濃度の関数である。非標識リガンドの濃度が上昇すると、抗体と結合することのできる標識リガンドが少なくなり、また測定される反応が減少する。したがって、シグナルが低下すればするほどサンプル中にある標識分析物は多くなる。競合結合測定の標準曲線は負の勾配を有する。
【００８５】
（マイクロビーズ）
他の一定の実施形態においては、癌マーカーは抗体コーティングされたマイクロビーズを用いて検出される。一定の実施形態においては、マイクロビーズは磁気ビーズである。他の実施形態においては、ビーズは蛍光色素で内部的にカラーコードが付与され、またビーズの表面は、被験サンプル中の癌マーカーに結合することのできる抗癌マーカー抗体（例：抗ＣＸＣＬ１３または抗ＣＸＣＲ５抗体）でタグ付けされる。癌マーカーの方は、蛍光タグで直接標識されるか、または蛍光タグと複合体化された抗マーカー抗体を用いて間接的に標識される。したがって、一方はビーズ、もう一方は蛍光タグからの２つの色の発生源がある。代替的に、ビーズには種々のサイズによって内部的にコード付与することもできる。
【００８６】
測定法は、２種類の色素による異なる蛍光強度の混合、および種々のサイズのビーズを用いて、数百種類までの癌マーカーを測定することができる。測定中、色／サイズコードを付与したビーズ、蛍光標識抗マーカー抗体、およびサンプルを含む混合物を合わせ、精密流体工学を用いてビーズを整列する機器に注入する。次に、レーザー中にビーズを通過させ、またその色またはサイズに基づき、整列するかまたは色の強度を測定し、これを処理して各反応の定量的データとする。
【００８７】
サンプルを蛍光体で直接標識する場合、システムは溶液中の未結合蛍光体を除去せずにビーズ上の蛍光のみを読み取りかつ定量することができる。測定は、多様に着色するかまたは多様なサイズとしたビーズを識別することにより多重化することができる。非標識サンプルに対するサンプルが直接必要とされる場合、リアルタイム測定の実現が可能である。標準的な測定段階は、サンプルの、抗マーカー抗体でコーティングしたビーズとのインキュベーション、ビオチンまたは蛍光体標識二次抗体とのインキュベーション、および蛍光シグナルの検出を含む。蛍光シグナルは、（ビオチニル化二次抗体用にストレプトアビジン−蛍光体複合体を添加することにより）ビーズ上で発生させてビーズアナライザーで読み出すことができる。ビーズ表面に固定した抗マーカーに応じて、ビーズイムノアッセイをサンドイッチ型または競合型イムノアッセイとすることができる。
【００８８】
（検査スティック）
一部の実施形態においては、液状生体サンプル中の癌マーカーは検査スティックを用いて検出される。検査スティックは、典型的には液状物不浸透性ハウジングおよび１つまたはそれ以上の検出ゾーンを有する液状物浸透性「スティック」を含む。１つの実施形態においては、各検出ゾーンは生体サンプル中の癌マーカーと結合する乾燥結合試薬を含む。他の実施形態においては、乾燥結合試薬は標識結合試薬である。他の実施形態においては、検査スティックは、測定検査が成功裏に遂行されていること、すなわち検査スティック中に試薬が存在すること、および試薬が検査の実行中に可動化されかつ流路に沿って運ばれることを示す対照ゾーンをさらに含みうる。対照ゾーンは、装置内の試薬が免疫化学的相互作用を実施可能であることを示し、装置の化学的完全性を確認することもできる。一定の温度範囲内の乾燥条件下での装置の保管および輸送を考慮する場合、これは重要である。対照ゾーンは、典型的には検出ゾーンよりも下流に位置し、かつたとえば標識結合試薬に対する固定された結合試薬を含みうる。標識結合試薬は、対照ゾーンおよび検出ゾーンより上流に可動的な形態で存在しうる。標識結合試薬は、癌マーカーに対する標識結合試薬と同一であっても異なっていてもよい。
【００８９】
１つの実施形態においては、検査スティックは１つまたはそれ以上の流路と流動接続しかつその上流にある多孔性サンプル受容部を含む。多孔性サンプル受容部は全ての測定に共通でありうる。したがって、装置の共通サンプル施用領域に施用された液状サンプルは、１つまたはそれ以上の流路に沿ってそれぞれの検出ゾーンに移動することができる。多孔性サンプル受容部は、ハウジングの内部に提供されることも、または前記ハウジングの外部に少なくとも部分的に延伸しかつたとえば体液を採取する役割を果たすこともありうる。多孔性サンプル受容部は液状物レザバーとして作用することもある。多孔性サンプル受容部材は、液状物を迅速に吸収することのできる任意の吸収性、多孔性または線維性材料から作製することができる。材料の多孔性は一方向性（すなわち細孔または線維が部材の軸に完全にまたはおおむね平行に走る）でも、または多方向性（部材が非晶質の海面状構造を有するような全方向性）でもありうる。ポリプロピレン、ポリエチレン（好ましくは超高分子量）、ポリフッ化ビニリデン、エチレン酢酸ビニル共重合体、アクリロニトリルおよびポリテトラフルオロ−エチレンなどの多孔性プラスチック材料を用いることができる。他の適切な材料はグラスファイバーを含む。
【００９０】
所望する場合、吸収剤「シンク」を担体材料の遠位末端に提供することができる。吸収剤シンクは、たとえばワットマン３ＭＭクロマトグラフィーペーパーなどを含んでもよく、かつあらゆる未結合標識結合試薬を検出ゾーンより洗い出せるよう十分な吸収能力を提供しなければならない。そのようなシンクの代替物として、多孔性固相材料を検出ゾーンの先まで延伸する長さとすることが十分となり得る。
【００９１】
結合試薬の検出ゾーンへの施用後、多孔質固相材料の残余を処理して残る結合部位を全てブロックすることがある。ブロッキングは、たとえばタンパク質（例：ウシ血清アルブミンまたは牛乳タンパク質）、またはポリビニルアルコールまたはエタノールアミン、またはその組み合わせによる処理で達成することができる。多孔性担体をサンプルで湿らせた時に標識結合試薬の自由な運動性を助けるために、多孔性担体はショ糖または乳糖などの糖類、および／またはポリビニルアルコール（ＰＶＡ）またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの他の物質をさらに含むこともある。そのような材料は、標識結合試薬を施用しようとする領域にたとえば水溶液として付着させてもよい。そのような材料を第１の施用として多孔質担体に施用した後標識を施用することも可能であり；代替的に、そのような材料を標識と混合し、さらに担体に施用することも可能であり、あるいは両者の組み合わせも可能である。そのような材料は、標識結合領域の上流に付着させても、または標識結合領域に付着させてもよい。
【００９２】
代替的に、製造時点では多孔質担体をブロックせず；その替わりに多孔質担体をブロックするための手段を多孔質担体の上流の材料に含めてもよい。テストストリップを湿らせた直後に多孔質担体をブロッキングするための手段が可動化し、またブロッキング手段は流動の進行につれてブロッキングしながら多孔質担体に流入および通過する。ブロッキング手段は、ＢＳＡおよびカゼインなどのタンパク質、さらにはＰＶＰ、ＰＶＡなどのポリマー、さらには糖類およびＴｒｉｔｏｎ−Ｘ１００などの界面活性剤を含む。ブロッキング手段は、マクロ孔質担体材料内に存在することも可能である。
【００９３】
乾燥させた結合試薬は、検出ゾーンを含む多孔質担体材料より上流に提供された多孔質担体材料上に提供してもよい。上流の多孔質担体材料はマクロ孔質であってもよい。マクロ孔質担体材料は、非特異的結合を最小化し、かつ液状サンプルがマクロ孔質体を湿らせた後の標識試薬の自由な動きを促進するために、低タンパク結合性または非タンパク結合性でなければならないか、またはＢＳＡまたはＰＶＡなどの試薬によって容易にブロックできなければならない。マクロ孔質担体材料は、必要であれば界面活性剤または溶媒によって前処理してより親水性とし、液状サンプルの迅速な取り込みを促進することができる。マクロ孔質担体に適した材料は、ポリエチレンおよびポリプロピレンなどのプラスチック材料、または紙またはグラスファイバーなどの他の材料を含む。標識結合試薬が検出可能な粒子によって標識されている場合、マクロ孔質体は粒子ラベルの最大粒径よりも少なくとも１０倍大きな孔径を有しうる。孔径が大きいほど標識試薬の放出は良好となる。マクロ孔質担体の代替物として、検出ゾーンよりも上流に提供された非孔質基板であって、前記非孔質基板が流路の一部を形成する非孔質基板上に標識結合試薬が提供されてもよい。
【００９４】
他の実施形態においては、検査スティックは液状サンプルを受容するためのサンプル受容部材をさらに含みうる。サンプル受容部材は、ハウジングより延伸しうる。
【００９５】
ハウジングは、液体不透過性材料で構築しうる。ハウジングは、望ましくは環境光線を排除もするであろう。ハウジングは、装置の外部の可視光線入射の１０％未満、好ましくは５％未満、また最も好ましくは１％未満が装置の内部に透過する場合、環境光線を相当排除するとみなされるであろう。ポリカーボネート、ＡＢＳ、ポリスチレン、ポリスチロール、高密度ポリエチレン、または適切な遮光性色素を含有するポリプロピレンなどの光不透過性合成プラスチック材料は、ハウジングの製作における使用に適した選択である。ハウジングの外部に、ハウジング内の内部空間内に提供された測定と連絡する開口部が提供されてもよい。代替的に、開口部は多孔質サンプル受容部がハウジングからハウジング外部の位置まで延伸することを可能とする役割を果たしてもよい。
【００９６】
（マイクロアレイ）
他の実施形態においては、癌マーカーはその表面上に固定された癌マーカー特異性抗体を含むタンパク質マイクロアレイによって検出される。マイクロアレイは、マイクロアレイ上の抗体が被験サンプルの癌マーカーを捕捉し、かつ捕捉されたマーカーが、捕捉されたマーカーと特異的に結合する標識二次抗体によって検出される「サンドイッチ」測定法で用いることができる。好ましい実施形態においては、二次抗体はビオチニル化または酵素標識される。検出は、その後のストレプトアビジン−蛍光体複合体（蛍光検出用）または酵素基質（比色検出用）とのインキュベーションにより達成される。
【００９７】
典型的には、マイクロアレイ測定法は、サンプルとのインキュベーションおよび多様な試薬（例：一次抗体、二次抗体、レポーティング試薬など）とのインキュベーションを含む複数のインキュベーション段階を含む。インキュベーション段階の間の反復的な洗浄も必要とされる。１つの実施形態においては、マイクロアレイ測定法は１回または２回のインキュベーションのみを必要とする迅速測定様式で実施される。タンパク質マイクロアレイをサンプルと必要な全ての試薬の混合物に曝露することにより、検出可能な免疫複合体（例：捕捉された癌マーカー／抗マーカー抗体／標識複合体）の形成を１回のインキュベーション段階で達成することも想定される。１つの実施形態においては、一次および二次抗体は同じ抗体である。
【００９８】
他の実施形態においては、タンパク質マイクロアレイは競合イムノアッセイを提供する。簡潔に述べると、固定抗マーカー抗体を含むマイクロアレイを、標識癌マーカー標準品の存在下で被験サンプルとインキュベートする。標識癌マーカーは、固定抗原特異性抗体との結合について被験サンプル中の非標識癌マーカーと競合する。このような競合的条件においては、被験サンプル中の特異的癌マーカーの濃度の上昇は標識癌マーカー標準品の固定抗体との結合の減少、およびこれによる標識からのシグナル強度の低下につながるであろう。
【００９９】
マイクロアレイは手動、半自動または自動モードで処理することができる。手動モードは、試薬およびサンプルのマイクロアレイへの送達、サンプルインキュベーションおよびマイクロアレイの洗浄を含む全ての測定段階についての手動操作を意味する。半自動モードは、インキュベーションおよび洗浄段階が自動的に作動する一方での、サンプルおよび試薬のマイクロアレイへの送達についての手動操作を意味する。自動モードにおいては、３つの段階（サンプル／試薬送達、インキュベーションおよび洗浄）はコンピュータまたはキーパッドを有する一体型ブレッドボードによって制御することができる。たとえば、マイクロアレイはＰｒｏｔｅｉｎＡｒｒａｙ  Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ（パーキンエルマーライフサイエンス、マサチューセッツ州ボストン）またはＡｓｓａｙ１２００（登録商標）．Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ（Ｚｙｏｍｙｘ、カリフォルニア州ヘイワード）を用いて処理することができる。蛍光、比色および化学発光によるスキャナーを用いて、マイクロアレイシグナルを検出しかつマイクロアレイ画像をキャプチャすることができる。マイクロアレイ測定の定量は、質量分析法および表面プラズマ共鳴などの他の手段によって達成することもできる。キャプチャされたマイクロアレイ画像は、スタンドアローン型画像分析ソフトウェアによってか、または画像取得および分析ソフトウェアパッケージを用いて分析することができる。たとえば、抗原マイクロアレイの定量は蛍光ＰＭＴベーススキャナー―ＳｃａｎＡｒｒａｙ  ３０００（ジェネラルスキャニング、マサチューセッツ州ウォータータウン）または比色ＣＣＤベーススキャナー―ＶｉｓｉｏｎＳｐｏｔ（Ａｌｌｉｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、メリーランド州イジャムズビル）を用いて実現することができる。典型的には、画像分析はデータ取得および別のソフトウェアパッケージによる測定レポートの作成を含むであろう。画像のキャプチャから測定レポートの生成までの測定プロセス全体を迅速化するために、画像キャプチャ、画像分析、およびレポート生成を含む全ての分析段階を、１つのソフトウェアパッケージに限定および／またはこれにより制御することができる。そのような一体化制御システムは、画像分析および測定レポートの生成をユーザーフレンドリーな様式で提供するであろう。
【０１００】
（埋め込み式バイオセンサー）
他の実施形態においては、癌マーカーは埋め込み式バイオセンサーを用いて検出される。バイオセンサーは、生物学的相互作用の結果として電子的信号を生成する電子装置である。１つの実施形態においては、バイオセンサーは、典型的には結合ペアのもう一方の構成要素である、癌マーカーと結合する抗体、受容体、核酸、またはその他の結合ペアの構成要素を用いる。バイオセンサーは血液サンプルと共に用いられて、自動化イムノアッセイシステムにおいて典型的に必要とされるサンプル調製および／または分離段階を必要とせずに癌マーカーの存在を判定する。
【０１０１】
１つの実施形態においては、センサーはナノスケール装置である。センサーシステムは、ナノワイヤに着接する生物学的認識素子およびナノワイヤと関連する性質を判定することのできる検出器を含む。生物学的認識素子は、測定する癌マーカーが結合ペアの一方の構成要素である、結合ペアのもう一方の構成要素である（例：癌マーカーの受容体または抗癌マーカー抗体）。好ましくは、ナノワイヤセンサーは、その上に外面を形成してゲート電極を形成する半導体ナノワイヤ、および導体と電気的に接触してソース電極を形成する第１の末端、および導体と接触してドレイン電極を形成する第２の末端を含む。１つの実施形態においては、センサーは、絶縁材料で形成される基板、ソース電極、ドレイン電極、およびその間に排置される、生物学的認識素子がナノワイヤの表面に着接された半導体ナノワイヤを含む電界効果トランジスターである。生物学的認識素子とその特異的結合パートナーの間に結合事象が発生すると、電界効果トランジスターの電流−電圧特性に検出可能な変化が発生する。
【０１０２】
他の実施形態においては、センサーシステムはセンサーのアレイを含む。アレイ中の１つまたはそれ以上のセンサーは、付属のセンサーが周辺環境と相互作用するのを防ぐ保護部材を伴う。選択された時点で保護部材を不能とすることによってセンサーが作動を開始し、周辺の液状物または組織と相互作用するので、その結合ペアの構成要素が存在すれば生物学的認識素子がそのペアのもう一方の構成要素と相互作用することができる。
【０１０３】
他の実施形態においては、保護部材は、酸化することが可能で、生体適合性、生体吸収性であり、かつ電位が印可されると血液などの溶液に溶解しうる伝導性材料で形成される。たとえば、生体適合性金属または電気腐食性ポリマーなどの伝導性材料によって被覆される基板のウェル内でセンサーを形成することができる。他の実施形態においては、保護部材は事前に決定された時間で溶解する材料を用いて形成される。
【０１０４】
（質量分析）
他の実施形態においては、癌マーカーはＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ（飛行時間）、ＳＥＬＤＩ／ＴＯＦ、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）、ガスクロマトグラフィー−質量分析（ＧＣ−ＭＳ）、高速液体クロマトグラフィー−質量分析（ＨＰＬＣ−ＭＳ）、キャピラリー電気泳動−質量分析、核磁気共鳴分析、またはタンデム質量分析（例：ＭＳ／ＭＳ、ＭＳ／ＭＳ／ＭＳ、ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳなど）などの質量分析（ＭＳ）を用いて検出される。
【０１０５】
質量分析法は技術上周知であり、かつタンパク質などの生体分子を定量および／または同定するために用いられてきた。さらに、質量分析技術は、分離したタンパク質の新規シークエンシングを少なくとも部分的に可能として開発されている。一定の実施形態においては、気相イオン分光光度計が用いられる。他の実施形態においては、レーザー脱離／イオン化質量分析を用いてサンプルを分析する。モデムレーザー脱離／イオン化質量分析（「ＬＤＩ−ＭＳ」）は、２つの主要な変法：マトリクス支援レーザー脱離／イオン化（「ＭＡＬＤＩ」）質量分析および表面増強レーザー脱離／イオン化（「ＳＥＬＤＩ」）で実践することができる。ＭＡＬＤＩにおいては、分析物はマトリクスを含有する溶液と混合され、さらに液状物の滴を基板の表面に付置する。次に、マトリクス溶液を生物学的分子と共結晶化させる。基板を質量分析計に挿入する。レーザーエネルギーを基板表面の方向に誘導し、そこで生物学的分子を有意に断片化することなく脱離させかつイオン化する。ＳＥＬＤＩにおいては、基板表面が脱離プロセスに能動的に関与するよう基板表面を修飾する。１つの実施形態においては、表面は吸着剤および／または目的のタンパク質と選択的に結合する捕捉試薬によって誘導体化される。他の実施形態においては、表面はレーザーで攻撃するとき脱離しないエネルギー吸収分子によって誘導体化される。他の実施形態においては、表面は、目的のタンパク質と結合しかつレーザー施用時に切断される光分解性結合を含む分子によって誘導体化される。これらの方法のそれぞれにおいて、誘導体化剤は、一般的に、サンプルが施用される基板表面の特定の位置に局在する。たとえば米国特許第５，７１９，０６０号（HutchensおよびYip）および国際公開第９８／５９３６１号（HutchensおよびYip）を参照されたい。２つの方法は、たとえば、ＳＥＬＤＩアフィニティ表面を用いて分析物を捕捉しかつマトリクス含有液状物を捕捉した分析物に添加してエネルギー吸収材料を提供することによって組み合わせることができる。
【０１０６】
癌マーカーの存在の検出は、典型的にはシグナル強度の検出を包含するであろう。これはさらに基板とのポリペプチド結合の量および特性を反映することができる。たとえば、一定の実施形態においては、第１のサンプルと第２のサンプルのスペクトルのピーク値のシグナル強度を（例：肉眼、コンピュータ分析などにより）比較し、特定の生体分子の相対的な量を判定することができる。Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  Ｗｉｚａｒｄプログラム（サイファージェンバイオシステムズ社、カリフォルニア州フレモント）などのソフトウェアプログラムを用いて質量スペクトルの分析を支援することができる。質量分析計およびその技術は当業者に周知である。
【０１０７】
当業者は、質量分析計の任意の構成要素（例：脱離ソース、質量分析装置、検出など）および多様なサンプル調製を、本願に記載されるか、または技術上周知の他の適切な構成要素または調製と組み合わせることができることを理解する。たとえば、一部の実施形態においては、対照サンプルは重分子（例：１３Ｃ）を含むことがあり、これにより同じ質量分析の実行において被験サンプルを既知の対照サンプルと混合することが可能となる。
【０１０８】
１つの実施形態においては、レーザー脱離飛行時間（ＴＯＦ）質量分析計を用いる。レーザー脱離質量分析においては、結合マーカーを有する基板をインレットシステムに導入する。マーカーはイオン化ソースからのレーザーによって脱離およびイオン化されて気相となる。生成されたイオンはイオン光学アセンブリに、次に飛行時間質量分析装置に捕集され、イオンは短い高電圧場を経て加速され高真空チャンバー中で浮動させられる。高真空チャンバーの末端で、加速されたイオンは異なる時間に高感度検出器表面を攻撃する。飛行時間はイオンの質量の関数であるので、イオン形成とイオン検出器衝突の間の経過時間を用いて特定の質量電荷比の分子の有無を鑑別することができる。
【０１０９】
一部の実施形態においては、第１または第２のサンプルに存在する１つまたはそれ以上の癌マーカーの相対量が、部分的に、コンピュータを用いたアルゴリズムの実行によって判定される。アルゴリズムは、第１の質量スペクトルおよび第２の質量スペクトルにおいて少なくとも１つのピーク値を同定する。次にアルゴリズムは、質量スペクトルの第１の質量スペクトルのピーク値のシグナル強度と第２の質量スペクトルのピーク値のシグナル強度を比較する。相対シグナル強度は、第１および第２のサンプルに存在する癌マーカーの量の指標である。既知の量の癌マーカーを含有する標準品を第２のサンプルとして分析し、第１のサンプル中に存在する生体分子の量をより良好に定量することができる。一定の実施形態においては、第１および第２のサンプル中の癌マーカーの同一性も判定することができる。
【０１１０】
（標準値、特異度および感度の判定）
本願においては、ＣＸＣＬ１３の血中濃度などの癌マーカーの標準発現レベルは統計的に決定することができる。たとえば、健常者のＣＸＣＬ１３の血中濃度を測定してＣＸＣＬ１３の標準血中濃度を統計的に決定することができる。統計的に十分な母集団を集めることができる場合、平均値から標準偏差（Ｓ．Ｄ．）の２から３倍の範囲の数値がしばしば標準値として用いられる。したがって、平均値＋２×Ｓ．Ｄ．または平均値＋３×Ｓ．Ｄ．に対応する数値を標準値として用いうる。記載された通りに設定した標準値は、理論的にはそれぞれ健常者の９０％および９９．７％を含む。
【０１１１】
代替的に、標準値は癌患者における実際の発現レベル（例：ＣＸＣＬ１３の血中レベル）を基にして設定することもできる。一般的に、この方式で設定される標準値は偽陽性百分率を最小化し、かつ検出感度を最大化することのできる条件を満足する数値の範囲から選択される。本願において、偽陽性百分率は、健常者のうち、そのＣＸＣＬ１３血中濃度が標準値よりも高いと判断される患者の百分率を意味する。対照的に、健常者のうち、そのＣＸＣＬ１３血中濃度が標準値よりも低いと判断される患者の百分率は特異度を示す。すなわち、偽陽性百分率と特異度の和は常に１である。検出感度は、癌の存在が判定されている者の母集団内の全癌患者のうち、その血中ＣＸＣＬ１３濃度が標準値よりも高いと判断される患者の百分率を意味する。
【０１１２】
本願で用いられる用語「検査の感度」は、スクリーニング検査が真の疾患を特定する能力であり、高感度検査であることを特徴とし低い偽陰性率を示し、さらに検査は疾患の有病率とは無関係である。検査の感度は、検査を受けた罹患患者総数に対する検査真陽性として算出され、百分率として表示される。
【０１１３】
用語「検査の特異性」は、疾患の非存在下で正しく陰性であるスクリーニング検査であり、高い特異度および低い偽陽性を有し、疾患の有病率とは無関係である。検査の特異度は、検査を受けた非罹患者数に対する検査真陰性として算出され、百分率として表示される。
【０１１４】
用語「ＰＰＶ」（陽性的中度）は疾患を有する検査陽性患者の百分率であり、またしたがって検査陽性の信頼性を評価する。計算法：
１．ＰＰＶ＝（真陽性）／（真陽性＋偽陽性）。
【０１１５】
用語「ＮＰＶ」（陰性的中度）は疾患のない検査陰性患者を意味し、かつ検査陰性の信頼性を評価する。計算法：
２．ＮＰＶ＝（真陰性）／（真陰性および偽陰性）。
【０１１６】
上に示す関係が指摘するように、診断の正確度を評価するための指標である感度、特異度、陽性的中度および陰性的中度についての各数値は、ＣＸＣＬ１３の血中濃度のレベルを判断するための標準値に応じて変化する。
【０１１７】
標準値は、通常偽陽性比が低くかつ感度が高くなるように設定する。しかし、上に示す関係より明らかであるように、偽陽性比率と感度の間にはトレードオフが存在する。すなわち、標準値を低くすると、検出感度が上昇する。しかし、偽陽性比率も上昇するため、「低い偽陽性比率」を有するという条件を満足することは難しい。この状況を考慮すると、たとえば、本願においては以下の予測結果をもたらす数値を好ましい標準値として選択しうる：（１）その偽陽性比率が５０％またはそれ以下である標準値（すなわち、その特異度が５０％未満でない標準値）および（２）その感度が２０％未満でない標準値。
【０１１８】
標準値は、受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線を用いて設定することができる。ＲＯＣ曲線は、縦軸に検出感度および横軸に偽陽性比（すなわち「１−特異度」）を示すグラフである。ＲＯＣ曲線は、ＣＸＣＬ１３などの癌マーカーの血中濃度の高い／低い度合いを判定するための標準値を連続的に変化させた後で得られた感度と偽陽性比率の変化をプロットすることによって得ることができる。
【０１１９】
ＲＯＣ曲線を得るための「標準値」は、統計分析を行うために一時的に用いられる数値である。ＲＯＣ曲線を得るための「標準値」は、一般的に、選択可能な全ての標準値を包含することを可能とする範囲内で連続的に変化させることができる。たとえば、標準値は分析母集団において測定された最小および最大血中ＣＸＣＬ１３値の間で変化させることができる。
【０１２０】
得られたＲＯＣ曲線に基づき、本願において用いる好ましい標準値を上述の条件を満たす範囲から選択することができる。代替的に、標準値は、血中ＣＸＣＬ１３測定値の大半を含む範囲から標準値を変化させることにより生成したＲＯＣ曲線に基づいて選択することができる。
【０１２１】
（癌を検出また癌の進行をモニタリングするためのキット）
本願の他の態様は、癌を検出するための、または癌の進行をモニタリングするためのキットに関する。１つの実施形態においては、キットは、生物学的サンプル中のＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の発現を判定するための試薬、および試薬を使用する方法についての指示を含み、試薬が抗ＣＸＣＬ１３抗体、抗ＣＸＣＲ５抗体または両者を含むことを特徴とする。
【０１２２】
（抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５、抗ＣＸＣＬ１６および／または抗ＣＸＣＲ６抗体を用いた癌を治療または予防するための方法）
本発明の１つの態様は、抗ＣＸＣＬ１３抗体および／または抗ＣＸＣＲ５抗体を用いて癌を治療または予防するための方法に関する。方法は、そのような治療を必要とする対象に、抗ＣＸＣＬ１３抗体、または抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせの治療的に有効な量を投与することを含む。１つの実施形態においては、癌は黒色腫、リンパ腫、骨髄腫、白血病、肉腫、芽腫、または癌腫である。癌腫の例は細葉細胞癌、腺様嚢胞癌、腺癌、腺扁平上皮癌、副腎皮質腺腫、副腎皮質癌、退形成癌、アプドーマ、基底細胞癌、カルチノイド、癌肉腫、明細胞癌、円柱腫、嚢胞腺癌、管癌、ガストリン産生腫瘍、巨細胞癌、神経膠腫、グルカゴン産生腫瘍、ヒュルトレ細胞癌、インスリノーマ、大細胞癌、小葉癌、髄芽腫、髄様癌、粘液性嚢胞腺腫、粘膜表皮癌、神経外胚葉性腫瘍、膨大細胞腫、乳頭状汗腺腫、乳頭腫、多形細胞癌、肺芽腫、肉腫様癌、漿液性嚢腺腫、印環細胞癌、小細胞癌、ソマトスタチン産生腫瘍、紡錘細胞癌、扁平上皮癌、胸腺腫、疣状癌、および内皮、外胚葉または上皮細胞に由来する器官または身体の内面または外面を被覆する組織を含むがこれに限定されない。これらの器官および組織は：骨、乳房、中枢神経系、子宮頸部、結腸、子宮内膜、食道、ファローピウス管、消化管、腎臓、肺、リンパ系、乳腺、口腔、卵巣、膵臓、下垂体、前立腺、直腸、生殖管、気道、胃、汗腺、胸腺、甲状腺、子宮、膣を含むが、これに限定されない。
【０１２３】
他の実施形態においては、対象は癌細胞におけるＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５発現上昇をもたらす癌と診断される。そのような癌の例は黒色腫、リンパ腫、骨髄腫、白血病、肉腫、芽腫、および癌腫を含むが、これに限定されない。１つの実施形態においては、対象は脳癌と診断される。他の実施形態においては、対象は前立腺癌と診断される。他の実施形態においては、方法は、タンパク質、ペプチドまたはコード遺伝子としてのＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５免疫原の有効量により対象を免疫してＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害する抗体を誘導することという段階を含む。他の実施形態においては、対象は骨癌と診断される。他の実施形態においては、対象は下垂体癌と診断される。さらに他の実施形態においては、対象は卵巣癌と診断される。他の実施形態においては、対象は肺癌と診断される。他の実施形態においては、対象は乳癌と診断される。他の実施形態においては、対象は結腸癌と診断される。他の実施形態においては、対象はリンパ腫または骨髄腫と診断される。他の実施形態においては、対象は白血病と診断される。
【０１２４】
他の実施形態においては、方法は、タンパク質、ペプチドまたはコード遺伝子としてのＣＸＣＬ１６および／またはＣＸＣＲ６免疫原の有効量で対象を免疫してＣＸＣＬ１６および／またはＣＸＣＲ６の生物学的活性を阻害する抗体を誘導するという段階を含む。
【０１２５】
他の実施形態においては、方法は、１つまたはそれ以上のＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５免疫原の有効量および１つまたはそれ以上のＣＸＣＬ１６およびＣＸＣＲ６免疫原の有効量により対象を免疫するという段階を含む。
【０１２６】
本発明の他の態様は、抗ＣＸＣＬ１３抗体および／または抗ＣＸＣＲ５抗体を用いたそれを必要とする対象の治療により癌の転移を阻害または予防するための方法に関する。１つの実施形態においては、抗ＣＸＣＬ１３抗体および／または抗ＣＸＣＲ５抗体は癌による組織の浸潤を阻害または予防する。他の実施形態においては、方法は、タンパク質、ペプチドまたはコード遺伝子としてのＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５免疫原の有効量により対象を免疫してＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害する抗体を誘導することという段階を含む。一部の実施形態においては、癌は前立腺癌である。他の実施形態においては、癌は黒色腫である。一部の実施形態においては、前記組織は骨である。
【０１２７】
本発明の他の態様は、確立された腫瘍の退縮を引き起こす抗ＣＸＣＬ１３抗体および／または抗ＣＸＣＲ５抗体を用いたそれを必要とする対象の治療のための方法に関する。一定の実施形態においては、方法は、タンパク質、ペプチドまたはコード遺伝子としてＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５免疫原の有効量により対象を免疫してＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害する抗体を誘導するという段階を含む。具体的な実施形態においては、確立された腫瘍は進行性腫瘍である。一部の実施形態においては、確立された腫瘍は転移性腫瘍である。
【０１２８】
本発明の他の態様は、骨における腫瘍の骨溶解性増殖を予防または阻害するための抗ＣＸＣＬ１３抗体および／または抗ＣＸＣＲ５抗体を用いたそれを必要とする対象の治療のための方法に関する。一部の実施形態においては、方法は、タンパク質、ペプチドまたはコード遺伝子としてのＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５免疫原の有効量により対象を免疫してＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害する抗体を誘導するという段階を含む。一部の他の実施形態においては、腫瘍は黒色腫、リンパ腫、肉腫、芽腫または癌腫である。一部の実施形態においては、腫瘍は癌腫である。具体的な実施形態においては、腫瘍は前立腺癌である。一部の実施形態においては、抗ＣＸＣＬ１３抗体および／または抗ＣＸＣＲ５抗体による治療は腫瘍による骨溶解または骨再吸収を予防する。
【０１２９】
他の実施形態においては、方法は、対象に由来する組織中のＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５発現のレベルを判定すること、および、ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の上昇レベルが検出される場合、抗ＣＸＣＬ１３抗体、抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせの治療的に有効な量を対象に投与することをさらに含む。他の実施形態においては、方法は、タンパク質、ペプチドまたはコード遺伝子としてのＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５免疫原の有効量により対象を免疫してＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害する抗体を誘導することという段階を含む。
【０１３０】
本発明の好ましい抗体は、ヒトＣＸＣＬ１３と結合し、かつ好ましくはＣＸＣＬ１３がＣＸＣＲ５を含むがこれに限定されない受容体と結合する能力を（部分的または完全に）遮断するものである。本発明の他の好ましい抗体は、ヒトＣＸＣＲ５と結合し、かつ好ましくは、腫瘍または癌腫細胞などの、ＣＸＣＲ５ケモカイン受容体をその細胞表面に発現する細胞がＣＸＣＬ１３を含むがこれに限定されないリガンドと結合する能力を（部分的または完全に）遮断するものである。本発明のさらなる他の好ましい抗体は、ヒトＣＸＣＲ５と結合し、かつ好ましくは可溶性ＣＸＣＲ５ケモカイン受容体がＣＸＣＬ１３を含むがこれに限定されないリガンドと結合する能力を（部分的または完全に）遮断するものである。
【０１３１】
１つの実施形態においては、抗ＣＸＣＬ１３抗体および／または抗ＣＸＣＲ５抗体はモノクローナル抗体である。他の実施形態においては、抗ＣＸＣＬ１３抗体および／または抗ＣＸＣＲ５抗体はヒト化抗体である。他の実施形態においては、抗ＣＸＣＬ１３抗体および／または抗ＣＸＣＲ５抗体はヒト化抗体フラグメントである。
【０１３２】
本発明の具体的な実施形態においては、抗ＣＸＣＬ１３および／または抗ＣＸＣＲ５抗体による対象の治療は、他の抗原に対して特異的である少なくとも１つの他の抗体の治療的に有効な量による事前、同時または事後の対象の治療と併用される。１つの実施形態においては、他の抗原は、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５ａ、ＣＸＣＲ５ｂ、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２５−１、ＣＣＬ２５−２、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１１、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸ３ＣＬ１などの他のケモカインまたはケモカイン受容体である。
【０１３３】
他の実施形態においては、他の抗原は癌腫と関連するケモカインまたはケモカイン受容体であり、かつＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸ３ＣＬ１およびＣＸ３ＣＲ１からなる群から選択される。
【０１３４】
他の実施形態においては、他の抗原は黒色腫と関連するケモカインまたはケモカイン受容体であり、かつＣＣＬ２５、ＣＣＬ２７、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１６、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７およびＣＸ３ＣＲ１からなる群から選択される。
【０１３５】
他の実施形態においては、他の抗原はリンパ腫と関連するケモカインまたはケモカイン受容体であり、かつＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＣＣＲ２からなる群から選択される。
【０１３６】
他の実施形態においては、他の抗原は骨髄腫または白血病と関連するケモカインまたはケモカイン受容体である。
【０１３７】
他の実施形態においては、他の抗原は表１および／または表２に引用されたポリペプチド、および前記ポリペプチドのいずれかのフラグメントから選択される。
【０１３８】
他の典型的な抗原は、レニン；ヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモンを含む成長ホルモン；成長ホルモン放出因子；副甲状腺ホルモン；甲状腺刺激ホルモン；リポタンパク質；ａ−１−アンチトリプシン；インスリンＡ鎖；インスリンＢ鎖；プロインスリン；卵胞刺激ホルモン；カルシトニン；黄体形成ホルモン；グルカゴン；第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、組織因子、およびフォンウィルブランド因子などの凝血因子；プロテインＣなどの抗凝血因子；心房性ナトリウム利尿因子；肺表面活性物質；ウロキナーゼまたはヒト尿または組織プラスミノーゲンアクチベータ（ｔ−ＰＡ）などのプラスミノーゲンアクチベータ；ボンベシン；トロンビン；造血性成長因子；腫瘍壊死因子−αおよび−β；エンケファリナーゼ；ヒト血清アルブミンなどの血清アルブミン；ミューラー管抑制物質；リラキシンＡ鎖；リラキシンＢ鎖；プロリラキシン；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；β−ラクタマーゼなどの微生物タンパク質；ＤＮアーゼ；ＩｇＥ；ＣＴＬＡ−４などの細胞毒性Ｔリンパ球関連抗原（ＣＴＬＡ）；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）；ホルモンまたは成長因子受容体；プロテインＡまたはＤ；リウマチ因子；骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３、−４、−５、または−６（ＮＴ−３、ＮＴ４、ＮＴ−５、またはＮＴ−６）などの神経栄養因子またはＮＧＦ−βなどの神経成長因子；血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）；ａＦＧＦおよびｂＦＧＦなどの線維芽急成長因子；表皮細胞成長因子（ＥＧＦ）；ＥＧＦ受容体などのＥｒｂＢ受容体ファミリー構成要素；ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β４、またはＴＧＦ−β５を含むＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−βなどの形質転換成長因子（ＴＧＦ）；インスリン様成長因子−Ｉおよび−ＩＩ（ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−ＩＩ）；ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、インスリン様成長因子結合タンパク質；ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ３４などのＣＤタンパク質；エリスロポエチン；骨誘導因子；免疫毒素；骨形成タンパク質（ＢＭＰ）；インターフェロン−α、−β、および−γなどのインターフェロン；たとえばＭ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＧ−ＣＳＦなどのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；たとえばＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９および／またはＩＬ−１０などインターロイキン（ＩＬ）；スーパーオキシドジスムターゼ；Ｔ細胞受容体；表面膜タンパク質；解離促進因子；たとえばＡＩＤＳエンベロープの一部などのウイルス抗原；輸送タンパク質；ホーミング受容体；アドレシン；調節タンパク質；ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１８、ＡＮ  ＩＣＡＭ、ＶＬＡ−４およびＶＣＡＭなどの、そのａまたはｂサブユニットを含むαｖ／β３インテグリン；前立腺特異抗原（ＰＳＡ）；癌胎児抗原（ＣＥＡ）、ＣＫ２、ＣＡ１２５、ＴＡ９０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３またはＨＥＲ４受容体などの腫瘍関連抗原；血液型抗原；ｆｌｋ２／ｆｌｔ３受容体；肥満（ＯＢ）受容体；ｍｐｌ受容体；ＣＴＬＡ−４；プロテインＣ；補体活性化第一経路、補体レクチン経路、または補体活性化第二��路に由来するタンパク質のうちいずれか１つ；および上記のポリペプチドのいずれかのフラグメントなどの分子を含む。
【０１３９】
抗体は、ボーラスまたはある時間に及ぶ連続注入としての静脈内投与、筋肉内、腹腔内、イントラセロブロスパイナル、皮下、関節内、滑液内、鞘内、口腔内、局所または吸入経路によるなどの既知の方法で対象に投与しうる。一定の実施形態においては、抗体は、侵襲的手技中の腫瘍母地への直接的な投与を含めて、腫瘍または癌組織に直接投与される。抗体は、罹患組織への標的ケモカインに対する投与を目的としてスポンジまたはガーゼなどの固形支持体上に付置される。
【０１４０】
本発明の抗体は、通常許容される医薬品として許容できる担体中で投与することができる。許容できる担体は食塩水、緩衝食塩水、およびブドウ糖食塩水溶液を含むが、これに限定されない。固形支持体、リポソーム、ナノ粒子、マイクロ粒子、ナノスフェアまたはマイクロスフェアも、抗体の投与を目的とした担体として用いうる。
【０１４１】
抗体の適切な用量（「治療的に有効な量」）は、たとえば治療しようとする状態、状態の重症度および経過、抗体が予防的目的で投与されるかまたは治療的目的で投与されるか、前治療、患者の臨床履歴および抗体に対する応答、使用する抗体の種類、および担当医の裁量などに依存するであろう。抗体は単回、または一連の治療に渡って特許に適度に投与され、かつ診断から先の任意の時点で患者に投与してもよい。抗体は、単独の治療として投与しても、または当該の状態の治療において有用な他の薬剤または治療と共に投与してもよい。
【０１４２】
一般的な提案として、投与する抗体の治療的に有効な量は、単回投与であれそれ以上の投与であれ約１ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲内となるであろう。具体的な実施形態においては、投与する抗体の範囲は約１ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１μｇ／ｋｇ体重／日、１ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｎｇ／ｋｇ体重／日、１ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｎｇ／ｋｇ体重／日、１０ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１μｇ／ｋｇ体重／日、１０ｎｇ／体重／日から約１００ｎｇ／ｋｇ体重／日、１００ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１μｇ／ｋｇ体重／日、１００ｎｇ／ｋｇ体重／日から約１０μｇ／ｋｇ体重／日、１μｇ／ｋｇ体重／日から約１０μｇ／ｋｇ体重／日、１μｇ／ｋｇ体重／日から約１００μｇ／ｋｇ体重／日、１０μｇ／ｋｇ体重／日から約１００μｇ／ｋｇ体重／日、１０μｇ／ｋｇ体重／日から約１ｍｇ／ｋｇ体重／日、１００μｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日、１ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日および１０ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日である。
【０１４３】
他の実施形態においては、抗体は１ｎｇ〜１０ｎｇ／注射、１０ｎｇから１００ｎｇ／注射、１００ｎｇから１μｇ／注射、１μｇから１０μｇ／注射、１０μｇから１００μｇ／注射、１００μｇから１ｍｇ／注射、１ｍｇから１０ｍｇ／注射、１０ｍｇから１００ｍｇ／注射、および１００ｍｇから１０００ｍｇ／注射の用量範囲で投与される。抗体は連日、または２、３、４、５、６および７日毎、または１、２、３または４週間毎に注射することができる。
【０１４４】
他の具体的な実施形態においては、投与する抗体の用量範囲は約１ｎｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇである  さらに他の具体的な実施形態においては、投与する抗体の用量範囲は約１ｎｇ／ｋｇから約１０ｎｇ／ｋｇ、約１０ｎｇ／ｋｇから約１００ｎｇ／ｋｇ、約１００ｎｇ／ｋｇから約１μｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇから約１０μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇから約１００μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇ、および約１ｍｇ／ｋｇから約１５ｍｇ／ｋｇである。
【０１４５】
他の具体的な実施形態においては、投与する抗体の量は、またはおおよその量は０．０００６、０．００１、０．００３、０．００６、０．０１、０．０３、０．０６、０．１、０．３、０．６、１、３、６、１０、３０、６０、１００、３００、６００および１０００ｍｇ／日である。予測される様に、用量は患者の状態、サイズ、年齢および状態に依存するであろう。
【０１４６】
抗体は、適宜または表示通りに、ボーラスとしてまたは連続注入により単回投与、またはボーラスとしてまたは連続注入により複数回投与で投与することができる。複数回投与は、たとえば１日に複数回、毎日、２、３、４、５、６または７日毎、毎週、２、３、４、５または６週間毎にまたは毎月１回投与することができる。しかし、他の投与法を用いてもよい。この治療の進行は従来の技術によって容易にモニタリングされる。
【０１４７】
本発明の具体的な実施形態においては、治療的に有効な量の抗ＣＸＣＬ１３および／または抗ＣＸＣＲ５抗体は、単独の治療薬としてそれを必要とする対象に対して投与しうる。具体的な実施形態においては、腫瘍または癌腫細胞を死滅させるかまたはそのアポトーシスを促進するための治療的に有効な量の抗ＣＸＣＬ１３および／または抗ＣＸＣＲ５抗体。他の具体的な実施形態においては、治療的に有効な量の抗ＣＸＣＬ１３および／または抗ＣＸＣＲ５抗体は腫瘍または癌腫の確立を阻害または予防する。さらに具体的な実施形態においては、治療的に有効な量の抗ＣＸＣＬ１３および／または抗ＣＸＣＲ５抗体は、既存の腫瘍または癌腫からの腫瘍または癌腫細胞の遊走または転移を阻害または予防する。さらに他の実施形態においては、治療的に有効な量の抗ＣＸＣＬ１３および／または抗ＣＸＣＲ５抗体は腫瘍または癌腫細胞の非癌性組織への浸潤を阻害または予防する。
【０１４８】
本発明の具体的な実施形態においては、治療的に有効な量の抗ＣＸＣＬ１３および／または抗ＣＸＣＲ５抗体は、１つまたはそれ以上の追加的な治療的に有効な抗体と共にそれを必要とする対象に投与しうる。前記の１つまたはそれ以上の追加的な治療的に有効な抗体は、ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５上の追加的な決定基、他のケモカイン、他のケモカイン受容体、腫瘍または癌腫特異抗原、ウイルス、細菌または寄生虫抗原、癌細胞生成物またはアポトーシスのレムナントを含むがこれに限定されない他の可溶性または細胞表面リガンドまたは受容体に向けられてもよい。抗ＣＸＣＬ１３および／または抗ＣＸＣＲ５抗体は、１つまたはそれ以上の追加的な治療的に有効な抗体の前、同時、および／またはその後に投与しうる。
【０１４９】
具体的な実施形態においては、治療的に有効な量の抗ＣＸＣＬ１３および／または抗ＣＸＣＲ５抗体は、１つまたはそれ以上の追加的な治療的に有効な抗体の腫瘍または癌腫細胞を死滅させる際の有効性を増強する。より具体的な実施形態においては、治療的に有効な量の抗ＣＸＣＬ１３および／または抗ＣＸＣＲ５抗体は、腫瘍または癌腫細胞を死滅させるために必要とされる１つまたはそれ以上の追加的な治療的に有効な抗体の量を減少させる。さらに具体的な実施形態においては、治療的に有効な量の抗ＣＸＣＬ１３および／または抗ＣＸＣＲ５抗体は、確立した腫瘍または癌腫からの腫瘍または癌腫細胞の遊走または転移を阻害または予防し、１つまたはそれ以上の追加的な治療に有効な抗体の腫瘍または癌腫細胞を死滅させる際の局所的有効性を増強する。さらに他の実施形態においては、治療的に有効な量の抗ＣＸＣＬ１３および／または抗ＣＸＣＲ５抗体は、腫瘍または癌腫細胞の非癌性組織への浸潤を阻害または予防し、１つまたはそれ以上の追加的な治療的に有効な抗体の腫瘍または癌腫細胞を死滅させる際の局所的有効性を増強する。
【０１５０】
１つの実施形態においては、抗ＣＸＣＬ１３抗体および／または抗ＣＸＣＲ５抗体は細胞毒性物質と複合体化した抗体である。他の実施形態においては、抗ＣＸＣＬ１３抗体および／または抗ＣＸＣＲ５抗体は、化学療法剤などの他の抗癌剤と共に投与される。
【０１５１】
本発明の他の態様は、哺乳類のＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＬ１３の一部と結合する抗体またはその機能的フラグメントの有効量と細胞を接触させることを含む、ケモカインＣＸＣＬ１３のそれに対する受容体との相互作用を阻害する方法に関する。
【０１５２】
本発明の他の態様は、ＣＸＣＬＲ５を担持する細胞を哺乳類のＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ５の一部と結合する抗体またはその機能的フラグメントの有効量と接触させることを含む、細胞のＣＸＣＬＲ５のリガンドとの相互作用を阻害する方法に関する。
【０１５３】
他の実施形態においては、癌を治療する方法は、癌または悪性細胞において抗ＣＸＣＬ１３抗体、抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせを発現する有効量の発現ベクターを、そのような治療を必要とする対象に投与することを含む。他の実施形態においては、癌を治療する方法は、有効量のＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５免疫原により対象を免疫して宿主にＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害する抗体の産生を誘導するという段階を含む。
【０１５４】
発現ベクターは、抗ＣＸＣＬ１３抗体および／または抗ＣＸＣＲ５抗体をコードするヌクレオチドを標的細胞内にヌクレオチド送達し、かつ標的細胞において抗ＣＸＣＬ１３抗体および／または抗ＣＸＣＲ５抗体を発現することができる任意のベクターとすることができる。他の実施形態においては、発現ベクターはＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ６をコードするヌクレオチドを標的細胞内に送達して宿主に抗ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５抗体の産生を誘導することができる。発現ベクターの例はウイルスベクターおよび非ウイルスベクターを含む。
【０１５５】
ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、およびヘルペスウイルスおよびワクシニアウイルスなどの他の大容量ウイルスベクターを含むが、これに限定されない。これらのウイルスを発現ベクターとしての使用に適切とするその性質を共有する任意のウイルスファミリーも含まれる。
【０１５６】
（レトロウイルスベクター）
レトロウイルスは、任意の種類、サブファミリー、属および親和性を含めた、レトロウイルス科に属する動物ウイルスである。遺伝子療法のためにレトロウイルスベクターを用いるための方法の例は、その教示を参照文献として本願に援用する、米国特許第４，８６８，１１６号および第４，９８０，２８６号；ＰＴＣ国際出願第９０／０２８０６号および第８９／０７１３６号；およびMulligan（Science 260:926-932 (1993)；に記載されている。
【０１５７】
（アデノウイルスベクター）
組換えアデノウイルスは、気道上皮、肝細胞、血管内皮、ＣＮＳ実質、および数多くの他の組織部位への直接的インビボ送達後に、高効率ウイルス転移を達成することが示されている。組換えアデノウイルスは特異的な細胞表面受容体と結合することにより遺伝子形質導入を達成し、ウイルスはその後野生種または複製欠損アデノウイルスと同じ様式で受容体を介したエンドサイトーシスにより内部移行する。
【０１５８】
ウイルスベクターは、１つまたはそれ以上のウイルス遺伝子が除去されたアデノウイルスに基づくものであることが可能であり、かつこれらのビリオンはヒト２９３細胞株などの補体細胞株によって生成される。１つの実施形態においては、Ｅ１遺伝子がアドネオウイルスベクターから除去される。他の実施形態においては、Ｅ１およびＥ３遺伝子がともにアドネオウイルスベクターから除去される。他の実施形態においては、Ｅ１およびＥ４遺伝子がともにアドネオウイルスベクターから除去される。他の実施形態においては、アデノウイルスベクターはガットレスアデノウイルスベクターである。
（アデノ随伴ウイルスベクター）
【０１５９】
他の種類のウイルスベクターはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に基づいている。この欠損パルボウイルスは、多くの細胞型に感染することができかつヒトに対して非病原性であるので、好ましいベクターである。ＡＡＶ型ベクターは約４から５ｋｂを輸送することが可能であり、かつ野生種ＡＡＶは１９番染色体に安定的に挿入されることが知られている。この部位特異的組み込み特性を含むベクターが好ましい。この種のベクターの特に好ましい実施形態は、カリフォルニア州サンフランシスコのＡｖｉｇｅｎにより生成されるＰ４．１  Ｃベクターであり、これは単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼウイルス遺伝子、ＨＳＶ−ｔｋ、および／または緑色蛍光タンパク質ＧＦＰをコードする遺伝子などのマーカー遺伝子を含むことができる。
【０１６０】
他の種類のＡＡＶウイルスにおいては、ＡＡＶは、異種遺伝子と機能的に関連する細胞特異性発現を誘導するプロモーターを含む少なくとも１つのカセットの両側にある１対の末端逆位配列（ＩＴＲ）を含む。この文脈において、異種はＡＡＶまたはＢ１９パルボウイルスにとって固有でない任意のヌクレオチド配列または遺伝子を意味する。
【０１６１】
典型的には、ＡＡＶおよびＢ１９コード領域は欠失し、安全で非細胞毒性のベクターを生成している。ＡＡＶ  ＩＴＲ、またはその修飾は感染性または部位特異的組み込みを付与するが、細胞毒性は付与せず、かつプロモーターは細胞特異的発現を誘導する。米国特許第６，２６１，８３４号は、ＡＡＶベクターに関連する材料について本願に参照文献として援用する。
【０１６２】
（大ペイロードウイルスベクター）
大型ヒトヘルペスウイルスを用いた分子遺伝学実験により、それによってヘルペスウイルスへの感染を許容する細胞に大きな異種ＤＮＡフラグメントをクローニングし、増殖させ、かつ確立することのできる手段が提供されている（Sun他、Nature genetics 8: 33-41, 1994；CotterおよびRobertson, Curr Opin Mol Ther 5: 633-644, 1999）。これらの大型ＤＮＡウイルス（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）およびエプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）は、＞１５０ｋｂのヒト異種ＤＮＡフラグメントを特定の細胞に送達する可能性を有する。ＥＢＶ組換え体は、感染Ｂ細胞において大きなＤＮＡ片をエピソームＤＮＡとして維持することができる。ヒトゲノムインサートを３３０ｋｂまで担持する個々のクローンは遺伝学的に安定と見られる。これらのエピソームの維持は、ＥＢＶ感染中に構成的に発現する特異的なＥＢＶ核タンパク質であるＥＢＮＡ１を必要とする。さらに、これらのベクターは、一時的にインビトロで大量のタンパク質を生成することのできるトランスフェクションを目的として使用することができる。ヘルペスウイルスアンプリコン系も、＞２２０ｋｂのＤＮＡ片をパッケージ化してＤＮＡをエピソームとして安定的に維持できる細胞を感染させるために使用されている。他の有用な系は、たとえば複製および宿主制限非複製ワクシニアウイルスベクターを含む。
【０１６３】
非ウイルスベクターはプラスミド発現ベクターを含む。プラスミドベクターは、典型的には、その中に追加的なＤＮＡセグメントを挿入することのできる環状二重鎖ＤＮＡループを含む。
【０１６４】
ウイルスおよび非ウイルス発現ベクターの両者において、単数または複数の抗体をコードするポリヌクレオチドは、典型的には、ｍＲＮＡ合成を誘導するための適切な転写制御配列（プロモーター、および任意に１つまたはそれ以上のエンハンサー）の近傍かつその方向に配置される。すなわち、目的のポリヌクレオチド配列は適切な転移制御配列と機能的に関連する。そのようなプロモーターの例は：ＣＭＶの前初期プロモーターであるＬＴＲまたはＳＶ４０プロモーターなどのウイルスプロモーター、バキュロウイルスの多面体プロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉ  ｌａｃまたはｔｒｐプロモーター、ファージＴ７およびλＰＬプロモーター、および真核生物細胞またはそのウイルスの遺伝子の発現を制御することが知られている他のプロモーターを含む。プロモーターは組織特異的プロモーターでもよい。
【０１６５】
発現ベクターは、典型的には翻訳開始のためのリボソーム結合部位、および転写ターミネータも含む。ベクターは、発現を増幅するための適切な配列を含んでもよい。さらに、発現ベクターは、真核細胞培養についてのジヒドロ葉酸レダクターゼまたはネオマイシン耐性などの、またはＥ．ｃｏｌｉにおけるテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性などの形質転換された宿主細胞の選択のための表現型形質を提供する１つまたはそれ以上の選択マーカー遺伝子を含んでもよい。
【０１６６】
発現ベクターは、たとえば翻訳の効率を改善するなどの、追加的発現要素も含むことができる。これらのシグナルは、たとえばＡＴＧ開始コドンおよび隣接配列などを含むことができる。たとえば一部の例では、翻訳開始コドンおよび関連配列要素は目的のポリヌクレオチド配列（例：天然開始コドン）と同時に適切な発現ベクターに挿入される。そのような場合、追加的翻訳調節シグナルは不要である。しかし、ポリペプチドコード配列、またはその一部のみが挿入される場合は、ＡＴＧ開始コドンを含む外因的翻訳調節シグナルが提供される。開始コドンは、目的のポリヌクレオチド配列を確実に翻訳するために、正しいリーディングフレームに配置される。外因性翻訳要素および開始コドンは、天然および合成の多様な由来とすることができる。望まれる場合、使用する細胞系に適したエンハンサーの封入により発現効率をさらに増強することができる（Scharf他、(1994) Results Probl Cell Differ 20:125-62；Bitter他、(1987) Methods in Enzymol 153:516-544）。
【０１６７】
１つの実施形態においては、発現ベクターは誘導可能なまたは調節可能な発現系を含む。調節可能な発現系を以下に簡潔に記述する：
【０１６８】
（エクジソン系）
エクジソン系は、ショウジョウバエに認められる脱皮誘導系に基づいているが、修飾して哺乳類細胞における発現の誘導を可能としている。系は、ショウジョウバエステロイドホルモンエクジソンの類似体ムリステロンＡを用いて、ヘテロ二量体核酸受容体を介した目的の遺伝子の発現を活性化する。発現レベルは、哺乳類細胞の生理学に影響することなく、基礎レベルを２００倍上回ると報告されている。
【０１６９】
（プロゲステロン系）
プロゲステロン受容体は、通常は刺激されて特異的なＤＮＡ配列と結合し、かつそのホルモンリガンドとの相互作用を経て転写を活性化する。逆に、プロゲステロン拮抗物質ミフェプリストン（ＲＵ４８６）は、ホルモン誘導性核輸送およびその後のＤＮＡ結合を遮断することができる。刺激されてＲＵ４８６との相互作用を経て結合することのできるプロゲステロン受容体の変異型が生成されている。特異的で調節可能な転写因子を生成するために、プロゲステロン受容体のＲＵ４８６結合ドメインは、酵母転写因子ＧＡＬ４のＤＮＡ結合ドメインおよびＨＳＶタンパク質ＶＰ１６のトランス活性化ドメインと融合されている。キメラ因子はＲＵ４８６の非存在下で不活性である。しかし、ホルモンの付加はキメラタンパク質の立体構造変化を誘導し、さらにこの変化はＧＡＬ−４結合部位との結合およびＧＡＬ−４結合部位を含むプロモーターからの転写の活性化を可能とする。
【０１７０】
（ラパマイシン系）
ＦＫ５０６およびラパマイシンなどの免疫抑制剤は、特異的細胞タンパク質と結合しかつその二量体化を促進することにより作用する。たとえば、ラパマイシンのＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）との結合によりもう１つのラパマイシン結合タンパク質ＦＲＡＰとのヘテロ二量体化がもたらされ、これは薬剤の除去により逆転することができる。薬剤の添加により２つのタンパク質を接合する能力により、転写を含む数多くの生物学的プロセスの調節が増強される。キメラＤＮＡ結合ドメインはＦＫＢＰと融合されており、これにより融合タンパク質の特異的ＤＮＡ結合配列との結合が可能となる。転写活性化ドメインもＦＲＡＰと融合されている。これら２つの融合タンパク質が同じ細胞において共発現する場合、ラパマイシンの添加に媒介されたヘテロ二量体化により完全に機能的な転写因子を形成することができる。二量体化キメラ転写因子は、その後合成ＤＮＡ結合配列のコピーを含む合成プロモーター配列と結合することができる。この系は、アデノウイルスおよびＡＡＶベクターに成功裏に組み込まれている。マウスおよびヒヒにおいて、長期間調節可能なウイルス発現が達成されている。
【０１７１】
（ＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５の発現または活性を阻害する物質を用いて癌を治療または予防するための方法）
本発明の他の態様は、ＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５の発現または活性を阻害する物質を用いることにより癌を治療または予防するための方法に関する。他の実施形態においては、方法は、（１）ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の発現を阻害するか、または（２）ＣＸＣＬ１３とＣＸＣＲ５の相互作用を阻害するか、または（３）ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の生物学的活性を阻害する物質を発現する有効量の発現ベクターを、そのような治療を必要とする対象に投与することを含む。１つの実施形態においては、ＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５の生物学的活性はＣＸＣＬ１３とＣＸＣＲ５の相互作用を含む。
【０１７２】
他の実施形態においては、対象は癌細胞におけるＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５発現上昇をもたらす癌と診断される。そのような癌の例は黒色腫、リンパ腫、骨髄腫、白血病、および卵巣癌、膣癌、子宮頸癌、子宮体癌、前立腺癌、肛門癌、直腸癌、結腸癌、胃癌、膵臓癌、インスリノーマ、グルカゴン産生腫瘍、腺癌、線扁平上皮癌、神経内分泌腫瘍、乳癌、肺癌、食道癌、口腔癌、脳癌、髄芽腫、神経外胚葉性腫瘍、神経膠腫、下垂体癌および骨癌などの癌腫を含むが、これに限定されない。
【０１７３】
他の実施形態においては、方法は、対象に由来する組織中のＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５発現のレベルを判定し、かつ組織においてＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の上昇レベルが検出される場合にのみ、対象に対して物質を投与することをさらに含む。
【０１７４】
１つの実施形態においては、発現ベクターはウイルスベクターである。他の実施形態においては、発現ベクターは非ベクターベクターである。他の実施形態においては、発現ベクターはＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５をコードするヌクレオチドを標的細胞に送達して抗ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５抗体を産生するよう宿主を誘導することができる。
【０１７５】
他の実施形態においては、物質は抗ＣＸＣＬ１３抗体、抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせである。
【０１７６】
さらに他の実施形態においては、物質は機能的核酸である。機能的核酸は、標的分子と結合することまたは特異的反応を触媒することなどの特異的機能を有する核酸分子である。機能的核酸分子は、標的分子が有する特異的活性の阻害物質として作用することができる。機能的核酸分子は、ＤＮＡ、ＲＮＡおよびポリペプチドなどの任意の巨大分子と相互作用することができる。したがって、機能的核酸はＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５のｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡと相互作用して発現を阻害したり、あるいはＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５タンパク質と相互作用して活性を阻害したりすることができる。機能的核酸は、しばしば標的分子と機能的核酸分子の配列相同性に基づいて他の核酸と相互作用するよう設計される。他の状況では、機能的核酸分子と標的分子の間の特異性認識は、機能的核酸分子と標的分子の間の配列相同性に基づくのではなく、むしろ特異的認識が発生することを可能とする三次構造の形成に基づく。機能的核酸分子の例はｓｉＲＮＡ、アンチセンス分子、アプタマー、リボザイム、三重鎖形成分子、および外部ガイド配列を含む。
【０１７７】
ｓｉＲＮＡは、２段階機構：開始段階およびエフェクター段階を包含するＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）に関与する。第１の段階では、投入二重鎖（ｄｓ）ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）が処理されて２１〜２３ヌクレオチドの「ガイド配列」などの小さなフラグメントとなる。ＲＮＡ増幅は全ての動物で発生する。典型的には、その後、ガイドＲＮＡはＲＮＡを分解することのできるタンパク質ＲＮＡ複合体であるヌクレアーゼ複合体に組み込まれることがあり、これはＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と呼ばれている。このＲＩＳＣ複合体は第２のエフェクター段階で作用し、ガイドＲＮＡによって塩基対形成相互作用を経て認識されるｍＲＮＡを破壊する。ＲＮＡｉは、標的ＲＮＡの分解を引き起こす事象の引き金となる、任意の手段による二重鎖ＲＮＡの細胞への導入を包含する。ＲＮＡｉは、転写後遺伝子サイレンシングの１形態である。本願に開示されたｓｉＲＮＡに加えて、ＲＮＡｉにおいて作用することのできるＲＮＡヘアピンも開示される。ＲＮＡｉ分子を作製しかつ使用することの記載については、その全文、および少なくともＲＮＡｉ分子の送達および作製に関する形成材料を本願に参照文献として援用するHammond他、Nature Rev Gen 2: 110-119 (2001)；Sharp, Genes Dev 15: 485-490 (2001), Waterhouse他、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95(23): 13959-13964（1998）を参照されたい。
【０１７８】
ＲＮＡｉは、哺乳類細胞を含む多くの種類の細胞で作用することが示されている。哺乳類細胞で作用するには、ＲＩＳＣ複合体内で標的化配列として用いられるＲＮＡ分子がより短いことが好ましい。たとえば、５０または４０または３０または２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、または１０ヌクレオチド長未満またはこれと等しい。これらのＲＮＡ分子は、開裂させようとする標的ＲＮＡに対して３’および５’末端に突出を有することも可能である。これらの突出は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、または２０ヌクレオチド長、またはこれ未満またはこれと等しいことが可能である。
【０１７９】
アンチセンス分子は、正準または非正準塩基対形成を経て標的核酸分子と相互作用するよう設計される。アンチセンス分子と標的分子の相互作用は、たとえばＲＮアーゼＨ媒介性ＲＮＡ−ＤＮＡハイブリッド分解などを経た標的分子の破壊を促進するよう設計される。代替的に、アンチセンス分子は、転写または複製などの、標的分子上で通常発生するプロセシング機能を中断するよう設計される。アンチセンス分子は標的分子の配列に基づいて設計することができる。標的分子で最もアクセスしやすい領域を発見することによるアンチセンス効率の最適化のための数多くの方法が存在する。典型的な方法は、インビトロ選択実験、およびＤＭＳおよびＤＥＰＣを用いたＤＮＡ修飾試験であろう。アンチセンス分子が１０−６、１０−８、１０−１０、または１０−１２未満かまたはこれと等しい解離定数（ｋｄ）で標的分子と結合することが好ましい。アンチセンス分子の設計および使用を支援する方法および技術の典型的な見本は、以下の非制限的な米国特許の一覧に認めることができる：第５，１３５，９１７号、第５，９９４，３２０号、第６，０４６，３１９号、および第６，０５７，４３７号。
【０１８０】
アプタマーは、好ましくは特異的な様式で、標的分子と相互作用する分子である。典型的には、アプタマーは、ステムループまたはＧ−四重鎖などの規定の二次および三次構造に折りたたまれる長さの範囲が１５〜５０塩基の小さな核酸である。アプタマーはケモカインと結合しかつその機能を遮断することができる（例：Marro他、Biochem Biophys Res Commun. 2006 Oct 13;349:270-6などを参照）。アプタマーは、標的分子から１０−１２Ｍ未満のｋｄで非常に堅く結合することができる。アプタマーは１０−６、１０−８、１０−１０、または１０−１２未満のｋｄで標的分子と結合することが好ましい。アプタマーは非常に高度の特異性で標的分子と結合することができる。たとえば、アプタマーは分離され、標的分子と、分子上でただ１つの位置が異なる他の分子の結合親和性は１００００倍以上異なる（米国特許第５，５４３，２９３号）。アプタマーは、標的分子との間のｋｄが、バックグラウンド結合分子との間のｋｄより少なくとも１０、１００、１０００、１０，０００、または１００，０００分の１低いことが好ましい。多様な種々の標的分子と結合するアプタマーを作製および使用する方法の典型的な例は、以下の非制限的な米国特許の一覧に認めることができる：第５，４７６，７６６号、第５，８６１，２５４号、第６，０３０，７７６号、および第６，０５１，６９８号。
【０１８１】
リボザイムは、分子内または分子間のいずれかで化学反応を触媒することのできる核酸分子である。したがって、リボザイムは触媒的核酸である。リボザイムが分子間反応を触媒することは好ましい。ハンマーヘッド型リボザイム（例：米国特許第５，３３４，７１１号および第５，８６１，２８８号、国際公開第９８５８０５８号および第９７１８３１２号などを参照）、ヘアピンリボザイム（例：米国特許第５，６３１，１１５号および第６，０２２，９６２号などを参照）、およびテトラヒメナリボザイム（例：米国特許第５，５９５，８７３号および５，６５２，１０７号などを参照）などの、天然の系に認められるリボザイムに基づくヌクレアーゼまたは核酸ポリメラーゼ型反応を触媒する数多くの異なる種類のリボザイムがある。天然の系には認められないが、新規に特異的反応を触媒するよう設計されているリボザイムも数多くある（例：米国特許第５，５８０，９６７号および第５，９１０，４０８号を参照）。好ましいリボザイムはＲＮＡまたはＤＮＡ基質を開裂し、またより好ましくはＲＮＡ基質を開裂する。リボザイムは、典型的には、標的基質の認識およびこれとの結合およびその後の開裂を経て核酸基質を開裂する。この認識は、多くの場合大部分が正準または非正準塩基対相互作用に基づく。標的基質の認識は標的基質の配列に基づくので、この特性により、リボザイムは核酸の標的特異的な開裂にとって特に優れた候補となる。種々の多様な反応を触媒するリボザイムを作製および使用する方法の典型的な例は、米国特許：第５，６４６，０４２号、第５，８６９，２５３号、第５，９８９，９０６号、および第６，０１７，７５６号に認めることができる。
【０１８２】
三重鎖形成機能性核酸分子は、二重鎖または単鎖核酸のいずれかと相互作用することのできる分子である。三重鎖分子が標的領域と相互作用すると、三重鎖と呼ばれる構造が形成され、ここで３本のＤＮＡ鎖がワトソン−クリックおよびフーグスティン型塩基対の両者に依存する複合体を形成している。三重鎖分子は標的領域と高い親和性および特異性で結合することができるので好ましい。三重鎖形成分子は１０−６、１０−８、１０−１０、または１０−１２未満のｋｄで標的分子と結合することが好ましい。種々の多様な標的分子と結合する三重鎖形成分子を作製および使用する方法の典型的な例は、米国特許：第５，１７６，９９６号、第５，６８３，８７４号、第５，８７４，５６６号、および第５，９６２，４２６号に認めることができる。
【０１８３】
外部ガイド配列（ＥＧＳ）は、複合体を形成する標的核酸分子と結合する分子であり、またこの複合体は標的分子を開裂するＲＮアーゼＰによって認識される。ＥＧＳは、選択したＲＮＡ分子を特異的標的とするよう設計することができる。ＲＮアーゼＰは、細胞内でトランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）のプロセシングを支援する。標的ＲＮＡ：ＥＧＳ複合体に天然ｔＲＮＡ基質を模倣させるＥＧＳを用いることにより、細菌ＲＮアーゼＰを補充してほぼあらゆるＲＮＡ配列を開裂することができる（例：Yaleによる国際公開第９２／０３５６６号、およびForsterおよびAltman、Science 238:407-409 (1990)を参照）。
【０１８４】
同様に、ＲＮＡの真核細胞ＥＧＳ／ＲＮアーゼＰ指向開裂を利用して、真核細胞内で所望の標的を開裂することができる。（Yuan他、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:8006-8010 (1992)；Yaleによる国際公開第９３／２２４３４号；Yaleによる国際公開第９５／２４４８９号；YuanおよびAltman, EMBO J 14:159-168 (1995)、およびCarrara他、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:2627-2631 (1995)を参照）。種々の多様な標的分子の開裂を促進するＥＧＳ分子を作製および使用する方法の典型的な例は、以下の非制限的な米国特許の一覧に認めることができる：第５，１６８，０５３号、第５，６２４，８２４号、第５，６８３，８７３号、第５，７２８，５２１号、第５，８６９，２４８号、および第５，８７７，１６２号。
【０１８５】
（ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の発現が上昇した癌細胞の遊走または転移を予防または阻害するための方法）
本発明の他の態様は、対象におけるＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の発現が上昇した癌細胞の遊走または転移の予防または阻害のための方法に関する。
【０１８６】
１つの実施形態においては、方法は抗ＣＸＣＬ１３抗体、または抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせの治療的に有効な量を対象に投与することという段階を含む。
【０１８７】
他の実施形態においては、方法は対象において抗ＣＸＣＬ１３抗体、または抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせを発現する発現ベクターを前記対象に投与することという段階を含む。
【０１８８】
他の実施形態においては、方法は、ＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５の発現、またはＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５の生物学的活性、またはＣＸＣＬ１３とＣＸＣＲ５の相互作用を阻害することのできる物質を発現する発現ベクターを対象に投与することを含む。１つの実施形態においては、発現ベクターはＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５をコードするヌクレオチドを標的細胞に送達して抗ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５抗体を産生するよう宿主を誘導することができる。
【０１８９】
癌細胞におけるＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５の発現は、免疫染色または定量的ＰＣＲなどの技術上周知の方法を用いて判定することができる。ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５を過剰発現することが知られている癌細胞は、黒色腫細胞および癌腫細胞を含むが、これに限定されない。癌腫の例は卵巣癌、膣癌、子宮頸癌、子宮体癌、前立腺癌、肛門癌、直腸癌、結腸癌、胃癌、膵臓癌、インスリノーマ、腺癌、線扁平上皮癌、神経内分泌腫瘍、乳癌、肺癌、食道癌、口腔癌、脳癌、髄芽腫、神経外胚葉性腫瘍、神経膠腫、下垂体癌および骨癌を含むが、これに限定されない。
【０１９０】
１つの実施形態においては、癌細胞は脳癌細胞である。他の実施形態においては、癌細胞は骨癌細胞である。他の実施形態においては、癌細胞は下垂体癌細胞である。さらに他の実施形態においては、癌細胞は卵巣癌細胞である。
【０１９１】
（化学療法の効果を増強するための方法）
本発明の他の態様は、化学療法の効果を増強するための方法に関する。１つの実施形態においては、方法は、癌に対する化学療法を受けている対象に、抗ＣＸＣＬ１３抗体、または抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせの有効量を投与することを含む。
【０１９２】
他の実施形態においては、方法は、癌に対する化学療法を受けている対象に、抗ＣＸＣＬ１３抗体、または抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせを発現する有効量の発現ベクターを投与することを含む。
【０１９３】
他の実施形態においては、方法は、癌に対する化学療法を受けている対象に、ＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５の発現、またはＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５の生物学的活性、またはＣＸＣＬ１３とＣＸＣＲ５との相互作用を阻害することができる物質を発現する発現ベクターを投与することを含む。他の実施形態においては、発現ベクターはＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５をコードするヌクレオチドを標的細胞に送達して抗ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５抗体を産生するよう宿主を誘導することができる。
【０１９４】
１つの実施形態においては、対象は黒色腫、リンパ腫、骨髄腫、白血病、または癌腫に対する化学療法を受けている。他の実施形態においては、対象は脳癌のための化学療法を受けている。他の実施形態においては、対象は骨癌のための化学療法を受けている。他の実施形態においては、対象は下垂体癌のための化学療法を受けている。さらに他の実施形態においては、対象は卵巣癌のための化学療法を受けている。
【０１９５】
（癌を予防することを治療するための組成物およびキット）
本発明の他の態様は、癌を治療または予防するための組成物およびキットに関する。１つの実施形態においては、組成物は（１）抗ＣＸＣＬ１３抗体、抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせ、および（２）医薬品として許容できる担体を含む。他の実施形態においては、組成物は（１）抗ＣＸＣＬ１３抗体、抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその組み合わせについてのコード配列を担持する発現ベクター、および（２）医薬品として許容できる担体を含む。他の実施形態においては、組成物は、（１）ＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５の発現、またはＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５の生物学的活性、またはＣＸＣＬ１３とＣＸＣＲ５との相互作用を阻害する物質についてのコード配列を担持する発現ベクター、および（２）医薬品として許容できる担体を含む。
【０１９６】
本発明の組成物は、抗ＣＸＣＬ１３または抗ＣＸＣＲ５抗体単独などの単一の種類の抗体を含むことも、あるいは両種類の抗体を含むこともある。組成物は、治療する具体的な適応症に対する必要に応じ、上述の１つまたはそれ以上の追加的な抗原に特異的な抗体、好ましくは互いに有害に作用しない相補的な活性を有する抗体の治療的に有効な量も含むことがある。たとえば、治療する癌腫が卵巣癌である場合、単一の製剤に抗ＣＸＣＬ１３および／またはＣＸＣＲ５を、抗ＣＥＡ、抗ＣＡ１２５および／または抗ＴＡ９０などの１つまたはそれ以上のさらなる抗癌決定因子抗体と共に含む治療的製剤を調製することが望ましいこともある。本発明の一部の実施形態においては、治療的抗体を化学療法剤または細胞毒性剤と組み合わせることもある。本発明の他の実施形態においては、治療的抗体を抗炎症剤または血栓溶解剤と組み合わせることもある。このような薬剤は、意図する目的にとって効果的である量で組み合わせて適切に存在する。
【０１９７】
本願で用いられる文言「医薬品として許容できる担体」は、医薬品としての投与に適合した、任意のかつ全ての溶媒、可溶化剤、充填剤、安定化剤、結合剤、吸収剤、基剤、緩衝剤、滑沢剤、放出制御担体、希釈剤、乳化剤、湿潤剤、滑沢剤、分散媒体、コーティング、抗菌または抗真菌剤、等張化および吸収遅延剤などを含むことを意図する。医薬品として活性である物質に対するそのような媒体および薬剤の使用は技術上周知である。任意の従来の媒体または薬剤が有効化合物として不適合である範囲を除き、組成物におけるその使用は想定される。補足的な薬剤も組成物に組み入れることができる。一定の実施形態においては、医薬品として許容できる担体は血清アルブミンを含む。
【０１９８】
本発明の医薬組成物は、その意図する投与経路に適合するよう製剤化される。投与経路の例は、鞘内、動脈内、静脈内、皮内、皮下、口腔内、経皮（局所）および経粘膜などの非経口投与を含む。一定の実施形態においては、医薬組成物は腫瘍組織中に直接投与される。
【０１９９】
非経口、皮内、または皮下適用に用いられる溶液または懸濁液は、以下の成分を含むことができる：注射用蒸留水、食塩水溶液、不揮発油、ポリエチレングリコール、グリセリンなどの無菌希釈剤；プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または重硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩などの緩衝剤、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの等張性調節剤。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基によって調節することができる。非経口製剤はガラスまたはプラスチック製のアンプル、ディスポーザブルシリンジ、または多人数用バイアルに封入することができる。
【０２００】
注射用途に適した医薬組成物の例は、無菌水溶液（水溶性の場合）、または分散剤および無菌注射液または分散剤の即時調製のための無菌粉末を含む。静脈内投与用の適切な担体は生理食塩水、静菌水、クレモフォールＥＬ（登録商標）（ＢＡＳＦ、ニュージャージー州パーシパニー）、またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）である。いずれの場合も、注射用組成物は無菌でなければならず、かつ容易なシリンジ操作性が存在する程度まで流動性でなければならない。製造および保存条件下で安定でなければならず、かつ細菌または真菌などの微生物の汚染作用に対して保存されなければならない。担体は、たとえば水、エタノール、ポリオール（たとえばグリセロール、プロピレングリコールおよび液状ポリエチレングリコールなど）、およびその適切な混合物を含む溶媒または分散媒体とすることができる。適切な流動性は、たとえばレシチンなどのコーティングなどの使用、分散剤の場合は報いられる粒子径の維持、および界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の予防は、たとえばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどの多様な抗菌および抗真菌剤によって達成することができる。多くの場合、たとえば糖類、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール類および塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含めることが好ましいであろう。注射用組成物の長期間の吸収は、たとえばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤を組成物中に含めることによって引き起こすことができる。
【０２０１】
無菌注射液は、適切な溶媒中の必要とされる量の活性化合物（例：ニューレグリン）を、必要に応じて、上に列挙された成分のうち１つまたはこれらの組み合わせに組み入れたのち、濾過滅菌することにより調製することができる。分散剤は、一般的に、上に列挙した成分より基本分散媒体および必要とされる他の成分を含有する無菌担体に活性化合物を組み入れることによって調製される。無菌注射液を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、事前に滅菌濾過したその溶液から活性成分＋任意の所望の追加的成分の粉末を得る真空乾燥および凍結乾燥である。
【０２０２】
経口組成物は、一般的に不活性溶媒または食用担体を含む。それらはゼラチンカプセルに封入するか、または圧縮して錠剤とすることができる。経口治療投与を目的として、活性化合物を添加剤と組み合わせかつ錠剤、トローチまたはカプセルの形態で使用することができる。経口組成物は、液状担体中の化合物が口腔的に施用されかつ素早く動かした後で喀出または嚥下されることを特徴とする、含嗽液としての使用のための液状担体を用いて調製することもできる。医薬品として適合する結合剤、および／またはアジュバント材料を組成物の一部として含めることができる。錠剤、丸剤、カプセル、トローチなどは、以下の成分のうちいずれか、または同様の性質の化合物を含むことができる：微結晶性セルロース、ガムトラガント、またはゼラチンなどの結合剤；デンプンまたは乳糖などの賦形剤、アルギニン酸、プリモゲル、またはコーンスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｔｅｓなどの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの滑剤；ショ糖またはサッカリンなどの甘味料；またはペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジ香料などの着香料。
【０２０３】
化合物は、吸入による投与のために、加圧容器からのエアロゾルスプレー、またはたとえば二酸化炭素といったガスなどの適切な噴射剤を収容するディスペンサー、またはネブライザーの形態で送達される。
【０２０４】
全身投与も、経粘膜的手段によるかまたは経皮的手段によることができる。経粘膜的または経皮的投与のために、透過しようとするバリアに適した浸透剤を製剤に用いる。そのような浸透剤は技術上周知であり、かつ、たとえば経粘膜投与のために界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は鼻腔内スプレーまたは坐薬の使用によって達成することができる。経皮投与のために、医薬組成物は技術上周知である通りに軟膏、蝋膏、ゲル、またはクリームに製剤化する。
【０２０５】
一定の実施形態においては、医薬組成物は、活性成分の持続放出または制御放出のために製剤化される。エチレン酢酸ビニル共重合体、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生体分解性、生体適合性ポリマーを用いることができる。そのような製剤を調製するための方法は、当業者にとって明らかである。材料は、たとえばＡｌｚａ社やＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社などから商業的に入手することができる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を有する感染細胞に標的化したリポソームを含む）も、医薬品として許容できる単体として用いることができる。これらは、たとえば米国特許第４，５２２，８１１に記載されているように、当業者に既知の方法に従って調製することができる。
【０２０６】
投与を容易にし、かつ用量を均一化するために経口または非経口組成物を用量単位形態に製剤化することは特に有益である。本願で用いられる用量単位形態は、治療しようとする対象に単位用量として適合化した物理的に分離した単位を含み；各単位は、必要とされる医薬品担体と共に、所望の治療的効果を生成するよう算出された事前に定められた量の活性化合物を含む。本発明の用量単位形態の規格は、活性化合物の特有の性質および達成しようとする具体的な治療効果、および個体の治療のためのそのような活性化合物を調合する技術に固有の制限によって規定されかつこれに直接依存する。
【０２０７】
そのような化合物の毒性および治療的効果は、たとえばＬＤ５０（母集団の５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ５０（母集団の５０％において治療的に有効な用量）を判定するためなどの、細胞培養または実験動物における標準的な医薬的手順によって判定することができる。毒性効果と治療効果の間の用量比率は治療係数であり、比率ＬＤ５０／ＥＤ５０として表示することができる。大きな治療係数を示す化合物が望ましい。毒性副作用を示す化合物を用いることもあるものの、非罹患細胞に対する潜在的な障害を最小化し、かつこれにより副作用を低下させるために、そのような化合物の標的を罹患組織の部位とする送達システムを設計するよう注意を払うべきである。
【０２０８】
細胞培養測定および動物試験から得られたデータを、ヒトにおいて用いるための用量範囲の製剤化に用いることができる。そのような化合物の用量は、好ましくは毒性をほとんど伴わずにＥＤ５０を含む血中濃度の範囲内にある。用量は、使用する剤型および利用する投与経路に依存してこの用量範囲内で変動しうる。本発明の方法において用いられる任意の化合物について、治療的に有効な用量は始めに細胞培養分析から推定することができる。用量は、動物モデルにおいて、細胞培養で判定されるＩＣ５０（すなわち症状の最大阻害の半分を達成する被験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するよう製剤化される。そのような情報を用いて、ヒトにおいて有用な用量をより正確に判定することができる。一定の実施形態においては、１回用量は０．０１ｕｇから５０ｍｇのキメラニューレグリンを含有する。医薬組成物は、容器、パック、またはディスペンサーに投与のための指示と共に収容することができる。
【０２０９】
本発明は、制限的と解釈すべきでない以下の実施例によってさらに例示される。本願の全体に引用された全ての参照文献、特許および公開特許明細の内容、さらには図面および表は、本願に参照文献として組み入れられる。
【実施例１】
【０２１０】
（癌細胞株におけるＤＯＣＫ２発現および癌細胞浸潤のＣＸＣＬ１３：ＣＸＣＲ５介在のインビトロ分析）
ＲＷＰＥ−１、ＬＮＣａＰ、およびＰＣ３細胞に由来する総細胞溶解物（６０μｇ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離しＤＯＣＫ２に対する抗体を用いた免疫ブロッティングに付した（図１Ａ）。ＧＡＰＤＨは装填対照となった。図１Ｂにおいては、メーカーのプロトコル（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）にしたがってＤＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡ二本鎖２μＭでＰＣ３細胞をトランスフェクトし、さらに細胞を０、２４、４８、および７２時間インキュベートすることによりＤＯＣＫ２サイレンシング条件を最適化した。ＤＯＣＫ２サイレンシングの効果はウェスタンブロット分析により判定した。
【０２１１】
ＣＸＣＬ１３−ＣＸＣＲ５相互作用は好中球のＤＯＣＫ２依存性走化性を媒介することが知られているが、その一方でＣＸＣＬ１３−ＣＸＣＲ５相互作用はＤＯＣＫ２非依存性癌細胞転移および浸潤も促進することができると確認された。図２においては、ＣＸＣＬ１３（１００ｎｇ／ｍＬ）、抗ヒトＣＸＣＲ５抗体（１μｇ／ｍＬ）、ＤＯＣＫ２または対照ｓｉＲＮＡの存在下で、ＬＮＣａＰおよびＰＣ３細胞を、ＭＡＴＲＩＧＥＬ（登録商標）マトリクスに浸潤しかつ８．０μｍ孔径膜を通過して遊走するその能力について試験した。膜の下面に浸潤した細胞はクリスタルバイオレットで染色し、倍率４０×の顕微鏡により計数した。細胞浸潤百分率はメーカーの指示（ＢＤバイオサイエンス）に従って算出した。エラーバーは、３回の独立した試験の平均の標準誤差を表す。アスタリクス（＊）は、ＣＸＣＬ１３処理細胞（対照）に対する有意差（ｐ＜０．０５）を示す。
【０２１２】
図３に示すように、ＣＸＣＬ１３はＡｋｔおよびＥＲＫ１／２の活性化も調節する。ＦＡＣＥ分析を実施してＬＮＣａＰおよびＰＣ３細胞株における活性および総ＡｋｔまたはＥＲＫ１／２を測定した。ＣＸＣＬ１３（１００  ｎｇ／ｍＬ）の存在下で、抗ヒトＣＸＣＲ５抗体、ＤＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡ、対照ｓｉＲＮＡ、またはＪＮＫ阻害剤で細胞を０、５または１０分間処理した。実験は３回ずつ実施し、結果は総ＡｋｔまたはＥＲＫ１／２に対する活性（リン酸化）ＡｋｔまたはＥＲＫ１／２の比率を示す。エラーバーは、３回の独立した実験の平均の±標準誤差を表す。アスタリクス（＊）は、リン酸化の有意な（ｐ＜０．０５）減少を示す。
【０２１３】
図４は、ＰＣ３細胞においてＣＸＣＬ１３がＤＯＣＫ２を介してＪＮＫ活性化を誘導することを示す。ＣＸＣＬ１３（１００ｎｇ／ｍＬ）の存在下または非存在下で、ＲＷＰＥ−１、ＬＮＣａＰ、およびＰＣ３細胞をＤＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡおよび対応する対照で処理した。ＣＸＣＬ１３刺激後に溶解物を５分間捕集し、サンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離した。膜をリン酸ＪＮＫ（４６ｋＤａ）についてブロッティングした。ＧＡＰＤＨは装填対照となる。
【０２１４】
図５においては、ＣＸＣＬ１３がＪＮＫおよびＤＯＣＫ２を介してＰＣａ細胞増殖を調節することを示す。１００ｎｇ／ｍＬ  ＣＸＣＬ１３、１μｇ／ｍＬ抗ＣＸＣＲ５抗体、ＤＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡおよび／または１０μＭ  ＪＮＫ阻害剤の存在下または非存在下で、減少血清条件（２％ＦＢＳ）でＲＷＰＥ−１、ＬＮＣａＰ、およびＰＣ３細胞を増殖させた。ＭＴＴ分析を３日間にわたって実施し、細胞増殖を評価した。エラーバーは、３回の独立した実験の平均の±標準誤差を表す。アスタリクス（＊）は、ＣＸＣＬ１３処理細胞に対する有意な（ｐ＜０．０５）変化を示す。
【０２１５】
図６は、ＪＮＫ阻害およびＤＯＣＫ２ノックダウンが、アポトーシスが原因でないＰＣａ細胞増殖の減少につながることを示す。１００ｎｇ／ｍＬ  ＣＸＣＬ１３、１μｇ／ｍＬ抗ＣＸＣＲ５抗体、ＤＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡ、１０μＭ  ＪＮＫ阻害剤、または１μＭワートマニンの存在下または非存在下で、減少血清条件（２％ＦＢＳ）でＲＷＰＥ−１、ＬＮＣａＰ、およびＰＣ３細胞を増殖させた。メーカーの指示に従ってＣＡＳＰＡＳＥ−ＧＬＯ  ３／７  Ａｓｓａｙ（プロメガ、ウィスコンシン州マジソン）を用い、カスパーゼ活性を測定した。アスタリクス（＊）は、無添加に対する有意な（ｐ＜０．０５）変化を示す。
【０２１６】
図７は、ＰＣａ細胞株におけるシグナリングカスケードのＣＸＣＬ１３モジュレーションを示す。ＣＸＣＬ１３はその同族受容体ＣＸＣＲ５を介してＡｋｔおよびＥＲＫ１／２活性化を誘発する。ＬＮＣａＰ細胞においては、ＣＸＣＬ１３は、推定上ＣＸＣＲ５と結合したＧαｑ／１１を介してＪＮＫ活性化も調節し、これがホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）およびプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）の活性化を媒介する。しかしＰＣ３細胞においては、ＪＮＫ活性化はＤＯＣＫ２を経て媒介される。
【０２１７】
図８Ａ〜Ｃは、前立腺癌細胞株におけるＧタンパク質のαサブユニットアイソフォームの発現を示す。ＲＷＰＥ−１、ＬＮＣａＰ、Ｃ４−２Ｂ、およびＰＣ３細胞に由来する等量のタンパク質（５０μｇ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離した。（Ａ）Ｇαｉ１，２，３、Ｇαｓ；（Ｂ）Ｇα１２、Ｇα１３および（Ｃ）Ｇαｑ／１１およびＧα１６の発現をイムノブロットにより判定した。ＧＡＰＤＨは装填対照となった。
【０２１８】
図９は、前立腺癌細胞株におけるＧタンパク質βおよびγサブユニットアイソフォームの発現を示す。ＲＷＰＥ−１、ＬＮＣａＰ、Ｃ４−２Ｂ、およびＰＣ３細胞に由来する等量のタンパク質（５０μｇ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離した。Ｇα１，２，３，４，５およびＧα１，２，３，４，５，７，９，１０，１３の発現はイムノブロットにより測定した。ＧＡＰＤＨは装填対照となった。
【０２１９】
図１０Ａ〜Ｄは、ＣＸＣＬ１３を用いるかまたは用いずに処理した前立腺癌細胞株におけるＣＸＣＲ５および関連するＧタンパク質の発現を示す。（図１０Ａ）ＲＷＰＥ−１、ＬＮＣａＰ、Ｃ４−２Ｂ、およびＰＣ３細胞溶解物（５０μｇ）のウェスタンブロットによりＣＸＣＲ５タンパク質レベルを分析した。ＧＡＰＤＨは装填対照となった。細胞株はＣＸＣＬ１３の存在下または非存在下で処理しかつ溶解した。ＣＸＣＲ５を免疫沈降（ＩＰ）して、総細胞溶解物から関連タンパク質を捕捉した。ＩＰ細胞溶解物をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、さらに（図１０Ｂ）Ｇαｉ１、Ｇαｉ２、Ｇαｉ３、Ｇαｓ、Ｇαｑ／１１、Ｇα１２、Ｇα１３、（図１０Ｃ）Ｇβ１、Ｇβ２、Ｇβ３、Ｇβ４、および（図１０Ｄ）Ｇγ５、Ｇγ７、Ｇγ９、Ｇγ１０の発現をイムノブロットで検討した。
【０２２０】
免疫沈降法によるＧｑ／１１およびＧγ５ｉ２タンパク質のＣＸＣＲ５との関連の検証を図１１に示す。細胞株をＣＸＣＬ１３の存在下および非存在下で処理し、溶解した（Ａ）Ｇαｑ／１１および（Ｂ）Ｇαｉ２を総細胞溶解物より免疫沈降（ＩＰ）した。ＩＰ細胞分離物をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、さらにＣＸＣＲ５発現をイムノブロットで検討した。
【０２２１】
ＣＸＣＬ１３刺激後にＧα１３と結合したＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ５の同定を図１２Ａ〜Ｃに示す。細胞株はＣＸＣＬ１３の存在下または非存在下で処理しかつ溶解した。Ｇα１３に対する抗体を用いて総細胞溶解物から免疫沈降（ＩＰ）した。ＩＰ細胞溶解物をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分解し、さらに（図１２Ａ）ＣＸＣＲ５および（図１２Ｂ）ＣＸＣＲ４について免疫ブロットした。（図１２Ｃ）ＣＸＣＬ１３処理の前後にＣＸＣＲ５  ＩＰ溶解物についてのＣＸＣＲ４発現のウェスタンブロット分析も実施した。ＧＡＰＤＨは装填対照となった。
【０２２２】
図１３は、前立腺癌細胞におけるＣＸＣＲ５相互作用の仮説モデルを描出する。ＣＸＣＲ５は、その特異的リガンドＣＸＣＬ１３の非存在下でＣＸＣＲ４と会合し、かつアンドロゲン依存性ＬＮＣａＰ細胞株においてはＧαｑ／１１／Ｇβ３／Ｇγ９ヘテロ三量体と結合するか、またはホルモン抵抗性Ｃ４−２ＢおよびＰＣ３細胞株においてはＧαｉ２／Ｇβ３／Ｇγ９ヘテロ三量体と結合する。ＣＸＣＬ１３刺激を受けると、直後にＧタンパク質がＣＸＣＲ５から解離してエフェクター分子を活性化する。さらに、ＣＸＣＬ１３活性化ＣＸＣＲ５は、Ｇα１３タンパク質を発生させ、会合し、または隔離してＰＣａ細胞の運動性を促進するシグナルを促す。
【０２２３】
表１は、前立腺癌細胞の抗ＣＸＣＬ１３および／または抗ＣＸＣＲ５処理によって影響される種々のネットワーク、およびそれらのネットワークがそれぞれ関与する前立腺癌細胞における機能を示す。スコアは、各ネットワークに関与することが知られている分子の数を示す。フォーカス分子（太字で表示）は、各ネットワークにおいて特に関係するかまたは重要な分子である。
【０２２４】
（表１．ＣＸＣＬ１３処理した転移性前立腺癌に関与する最高スコアのネットワーク）
【表１】
2014505239.tif 000003
【０２２５】
表２は、前立腺癌細胞においてＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５によって調節されることが確認されているタンパク質を示す。分子は、細胞内で関係する具体的な生物学的機能、および細胞におけるその発現上昇をマーカーとして用いることができる機能または疾患によって配列される。
【０２２６】
（表２．ＰＣ３細胞においてＣＸＣＬ１３によって調節されるタンパク質およびその関連する生物学的機能）
【表２】
2014505239.tif 000004
【０２２７】
図１４は、ＣＸＣＬ１３が細胞周期に関与する重要な分子をどのように調節するか描出する。リン酸特異的抗体マイクロアレイをＣＸＣＬ１３処理または未処理ＰＣ３細胞溶解物で個別にハイブリダイズした。非リン酸化分子に対するリン酸化分子の比率を算出し、データセットをＩｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙｓ  Ａｎａｌｙｓｉｓアプリケーションにアップロードした。分子の接続性に基づいてネットワークをアルゴリズム的に生成した。結果をＧＡＰＤＨレベルに対して正規化した。色はリン酸化におけるフォールディングの変化を表す。ベースラインに対し、灰色はリン酸化状態に変化がないことを示し、緑はリン酸化の低下を表し、ピンクはベースラインリン酸化を表し、また赤はリン酸化の亢進を示す。
【０２２８】
図１５は、ＣＸＣＬ１３が細胞遊走に関与する重要な分子をどのように調節するか描出する。リン酸特異的抗体マイクロアレイをＣＸＣＬ１３処理または未処理ＰＣ３細胞溶解物で個別にハイブリダイズした。非リン酸化分子に対するリン酸化分子の比率を算出し、データセットをＩｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙｓ  Ａｎａｌｙｓｉｓアプリケーションにアップロードした。分子の接続性に基づいてネットワークをアルゴリズム的に生成した。結果をＧＡＰＤＨレベルに対して正規化した。色はリン酸化におけるフォールディングの変化を表す。ベースラインに対し、灰色はリン酸化状態に変化がないことを示し、緑はリン酸化の低下を表し、ピンクはベースラインリン酸化を表し、また赤はリン酸化の亢進を示す。
【０２２９】
図１６は、ＣＸＣＬ１３が細胞の生存および増殖に関与する重要な分子をどのように調節するか描出する。リン酸特異的抗体マイクロアレイをＣＸＣＬ１３処理または未処理ＰＣ３細胞溶解物で個別にハイブリダイズした。非リン酸化分子に対するリン酸化分子の比率を算出し、データセットをＩｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙｓ  Ａｎａｌｙｓｉｓアプリケーションにアップロードした。分子の接続性に基づいてネットワークをアルゴリズム的に生成した。結果をＧＡＰＤＨレベルに対して正規化した。色はリン酸化におけるフォールディングの変化を表す。ベースラインに対し、灰色はリン酸化状態に変化がないことを示し、緑はリン酸化の低下を表し、ピンクはベースラインリン酸化を表し、また赤はリン酸化の亢進を示す。
【０２３０】
データセット全体を用いた右側フィッシャーの正確検定を用いて算出したその有意性（ｐ−値）に基づき、ＣＸＣＬ１３によって調節される上位１０種類のシグナリング経路を図１７に示す。
【０２３１】
図１８に示すように、ＣＸＣＬ１３はＰＩ３Ｋ／ＡｋｔおよびＳＡＰＫ／ＪＮＫシグナリング経路に属するタンパク質（彩色した分子）の識別的リン酸化を媒介することが確認された。２つの正準経路を融合し、ＣＸＣＬ１３処理または未処理ＰＣ３細胞に由来する分析したマイクロアレイデータと重塁した。ベースラインに対し、灰色はリン酸化状態に変化がないことを示し、緑はリン酸化の低下を表し、ピンクはベースラインリン酸化を表し、また赤はリン酸化の亢進を示す。
【０２３２】
図１９は、ＣＸＣＬ１３−ＣＸＣＲ５相互作用によってモジュレートされるシグナリング経路を要約する。ＣＸＣＬ１３のＣＸＣＲ５との結合により、それぞれ細胞の生存、浸潤、および増殖に関与するＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ、インテグリン／３３／Ｓｒｃ／ＦＡＫ、およびＤＯＣＫ２／Ｒａｃ／ＪＮＫ経路の活性化がもたらされる。
【０２３３】
主要なＣＸＣＬ１３−ＣＸＣＲ５細胞シグナリングカスケードの確認を図２０に示す。ＬＮＣａＰ（青い円）またはＰＣ３（マゼンタ色の円）細胞は無添加であるか（白抜き円）または１００ｎｇ／ｍＬのＣＸＣＬ１３を５または１０分間添加した（塗りつぶし円）。ＦＡＣＥ（登録商標）測定（アクティブモティフ、カリフォルニア州カールズバッド）を用いて、刺激より５または１０分間後に活性および不活性（総）ＰＩ３Ｋ、ＥＲＫ、ＦＡＫ、ＳｒｃキナーゼおよびＮＦｋｂタンパク質を検出した。総タンパク質に対する活性（リン酸化）タンパク質の比率を、３回ずつ測定した３回の独立した実験から±ＳＥＭで提示する。
【０２３４】
Ａｋｔ活性化に必要とされるＣＸＣＬ１３−ＣＸＣＲ５シグナリング事象を図２１に示す。ＦＡＣＥ分析を実施してＬＮＣａＰおよびＰＣ３細胞株における活性および総Ａｋｔレベルを測定した。ＣＸＣＲ５遮断、百日咳毒素、Ｕ−７３１２２、ワートマニン、ＰＩ−１０３、ＴＧＸ２２１、およびＡＳ６０５２４０、ＤＯＣＫ２  ｓｉＲＮＡ、ＳＵ６６５６およびＰＦ−５７３２２８を添加または無添加でＣＸＣＬ１３を用いて（または用いずに）細胞を５または１０分間処理した。実験は３回ずつ実施し、結果は総Ａｋｔに対するｐ−Ａｋｔの比率を示す。
【０２３５】
図２２Ａ〜ＢはＣＸＣＬ１３を介したＣＸＣＲ５ライゲーションおよび核へのトランスロケーションを示す。ＬＮＣａＰ（図２２Ａ）およびＰＣ３（図２２Ｂ）癌細胞株を、０または１００ｎｇ／ｍＬのＣＸＣＬ１３で処理した後、ＦＩＴＣ（緑色）複合体化抗ＣＸＣＲ５抗体、Ａｌｅｘａ４５５（橙色）複合体化抗ＣＸＣＬ１３抗体および核染色として７ＡＡＤ（赤色）により３０および６０分間染色した。ヒストグラムは、ＣＸＣＲ５とＣＸＣＬ１３のシグナル相関またはこれらのペアの核との相関の度合いを示す。正の母集団閾値についてのゲートは、暗視野と７ＡＡＤの類似性スコアをＡｍｎｉｓ  Ｉｍａｇｅｓｔｒｅａｍ  ＩＮＳＰＩＲＥ（登録商標）およびＩＤＥＡＳ（登録商標）取得および分析ソフトウェアおよびシステムと参照して判定した。トランスロケーションした細胞の割合は「トランスロケーション（Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｄ）」領域バー上に示す。
【実施例２】
【０２３６】
（抗ＣＸＣＬ１３抗体投与は骨における転移および腫瘍増殖を阻害する）
図２３Ａ〜Ｂに前立腺癌の進行および骨転移を阻害するための抗ＣＸＣＬ１３抗体投与を示す。週齢１０週間の１０匹の雄性Ｂ６．Ｃｇ−Ｆｏｘｎ−Ｎｕ／Ｊマウス２群を、５０μＬ食塩水中のルシフェラーゼ陽性ＰＣ３細胞１０６個を心臓内注射することにより攻撃した。前立腺腫瘍を３０日間発達させ；その後、群に対して対照（図２３Ａ）または抗ＣＸＣＬ１３（図２３Ｂ）抗体０．５μｇを３日おきにさらに３０日間投与した。この典型的画像は、Ｃａｌｉｐｅｒ／Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ  １００撮像システム（Ｃａｌｉｐｅｒ、カリフォルニア州サンディエゴ）を用いたインビボ撮像により分析した腫瘍負荷および骨転移の変化を示す。
【０２３７】
図２４Ａ〜Ｂは、ＣＸＣＬ１３遮断が骨における前立腺腫瘍の増殖を阻害することを示す。雄性Ｎｕ／Ｎｕマウスにルシフェラーゼ陽性ＰＣ３（ＰＣ３−ｌｕｃ）細胞１０６個を脛骨内注射し、さらに腫瘍を１週間発達させた。その後、マウスに無菌食塩水１００μＬに懸濁したアイソタイプ対照または抗ＣＸＣＬ１３抗体４７５μｇ／ｋｇを７２時間おきに１週間腹腔内注射した。実験群は、Ｃａｌｉｐｅｒ／Ｘｅｎｏｇｅｎ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ撮像システム１００を用いて週１回４週間画像撮像し、さらにＣａｌｉｐｅｒ  ＬＩＶＩＮＧ  ＩＭＡＧＥ（登録商標）（Ｃａｌｉｐｅｒ、カリフォルニア州サンディエゴ）ソフトウェアを用いて分析した。図２４Ａは骨におけるＰＣ３−ｌｕｃ腫瘍増殖の典型的な画像を示す。図２４Ｂは、攻撃後７、１４、２１、および２８日目の骨におけるＰＣ３−ｌｕｃ腫瘍のルミネッセンス（光子／秒／ｃｍ２）±ＳＥＭを示す。アスタリクス（＊）は、アイソタイプ対照と抗ＣＸＣＬ１３抗体処理群間の有意な（ｐ＜０．０５）差を示す。
【０２３８】
図２５Ａ〜Ｂに示すように、ＣＸＣＬ１３遮断は骨における骨溶解性前立腺腫瘍増殖も抑止する。雄性Ｎｕ／Ｎｕマウスにルシフェラーゼ陽性ＰＣ３（ＰＣ３−ｌｕｃ）細胞１０６個を脛骨内注射し、さらに腫瘍を１週間発達させた。その後、マウスに無菌食塩水１００μＬに懸濁したアイソタイプ対照または抗ＣＸＣＬ１３抗体４７５μｇ／ｋｇを７２時間おきに１週間腹腔内注射した。実験群は、攻撃後２８日目にＳｉｅｍｅｎｓ  ｍｉｃｒｏＣＴ  Ｓｃａｎ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて撮像した。各群５匹から撮影した低解像度（図２５Ａ）および高解像度（図２５Ｂ）画像を、ＯｓｉｒｉＸ  ｉｍａｇｉｎｇソフトウェアを用いて処理して示す。
【０２３９】
図２６Ａ〜Ｂは、ＣＸＣＬ１３遮断が前立腺癌骨転移によって誘発される骨塩密度（ＢＭＤ）減少を阻害することを示す。雄性Ｎｕ／Ｎｕマウスに１０６個のルシフェラーゼ陽性ＰＣ３（ＰＣ３−ｌｕｃ）細胞株を脛骨内注射し、さらに腫瘍を１週間発達させた。その後、マウスに無菌食塩水１００μＬに懸濁したアイソタイプ対照または抗ＣＸＣＬ１３抗体４７５μｇ／ｋｇを７２時間おきに１週間腹腔内注射した。実験群は、攻撃後２８日目にＳｉｅｍｅｎｓ  ｍｉｃｒｏＣＴ  Ｓｃａｎ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて撮像した。図２６Ａは骨塩密度画像の典型的なものを示す。図２６Ｂは、各対象についての大腿骨幹ＢＭＤ（ｍｇ／ｃｍ３）スキャンを示し、これらはＭｉｃｒｏＶｉｅｗソフトウェアバージョン２．１．１（ゼネラルエレクトリックメディカル）を用いて定量した。アスタリクス（＊）は、アイソタイプ対照または抗ＣＸＣＬ１３抗体処理群間の統計的有意性（ｐ＜０．０５）を示す。
【実施例３】
【０２４０】
（多様な腫瘍におけるＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５発現の検出）
図２７は、健常対照および肺癌被験者の血清中のＣＸＣＬ１３レベルを示す。＞５ｐｇ／ｍＬのＣＸＣＬ１３を検出することが可能なＥＬＩＳＡ測定を実施し、健常ドナー（ｎ＝９）または扁平上皮癌（ＳＳＣ；ｎ＝１７）または腺癌（Ａｄｅｎｏ  Ｃａ；ｎ＝１４）と診断された患者に由来する血清のＣＸＬＣ１３レベルを定量した。塗りつぶした円は個々の血清ＣＸＣＬ１３レベルを示し、線は各群の濃度の中央値を示す。アスタリクス（＊）は、健常ドナー（すなわち対照）または肺癌患者血清サンプル間の有意差（ｐ＜０．０５）を示す。
【０２４１】
図２８に、非腫瘍性肺組織および肺癌組織によるＣＸＣＲ５発現を示す。非腫瘍性（ＮＮ；ｎ＝８）、扁平上皮癌（ＳＣＣ；ｎ＝２４）、および腺癌（ＡｄｅｎｏＣａ；ｎ＝５４）由来の肺組織をアイソタイプ対照または抗ＣＸＣＲ５抗体で染色した。茶色（ＤＡＢ）はＣＸＣＲ５染色を示す。４０×対物レンズを搭載したＡｐｅｒｉｏ  ＳｃａｎＳｃｏｐｅ  ＣＳシステムで各スライドのデジタル画像をキャプチャした。典型的な例を示し、かつＡｐｅｒｉｏ  ＩｍａｇｅＳｃｏｐｅ  ｖ．６．２５画像分析ソフトウェアを用いてＣＸＣＲ５の免疫強度を定量した。アスタリクス（＊）は、非腫瘍組織と肺癌組織の間の有意差（ｐ＜０．０１）を示す。
【０２４２】
図２９は、非腫瘍性乳房組織および乳癌組織によるＣＸＣＲ５発現を例示する。非腫瘍（ＮＮ；ｎ＝８）、および腺癌（ＡｄｅｎｏＣａ；ｎ＝１６）由来の乳房組織をアイソタイプ対照または抗ＣＸＣＲ５抗体で染色した。茶色（ＤＡＢ）はＣＸＣＲ５染色を示す。４０×対物レンズを搭載したＡｐｅｒｉｏ  ＳｃａｎＳｃｏｐｅ  ＣＳシステムで各スライドのデジタル画像をキャプチャした。典型的な例を示し、かつＡｐｅｒｉｏ  ＩｍａｇｅＳｃｏｐｅ  ｖ．６．２５画像分析ソフトウェアを用いてＣＸＣＲ５の免疫強度を定量した。アスタリクス（＊）は、非腫瘍組織と癌性組織の間の有意差（ｐ＜０．０１）を示す。
【０２４３】
図３０に示すように、結腸癌組織においてもＣＸＣＲ５およびＣＸＣＬ１３発現が非腫瘍性対照と比較して上昇する。非腫瘍（ｎ＝８）および腺癌（ｎ＝１６）由来の結腸組織をアイソタイプ対照、抗ＣＸＣＲ５、または抗ＣＸＣＬ１３抗体で染色した。茶色（ＤＡＢ）およびマゼンタ色の染色はそれぞれＣＸＣＲ５およびＣＸＣＬ１３陽性を示す。４０×対物レンズを搭載したＡｐｅｒｉｏ  ＳｃａｎＳｃｏｐｅ  ＣＳシステムでデジタル画像をキャプチャした。典型的な例を、Ａｐｅｒｉｏ  ＩｍａｇｅＳｃｏｐｅ  ｖ．６．２５ソフトウェアを用いて定量した、非腫瘍対照組織に対する結腸癌組織の相対的ＣＸＣＲ５およびＣＸＣＬ１３免疫強度比率と共に示す。アスタリクス（＊）は、非腫瘍組織と癌性組織の間の有意差（ｐ＜０．０１）を示す。
【０２４４】
図３１に示すように、卵巣癌組織によるＣＸＣＲ５およびＣＸＣＬ１３発現は非腫瘍性対照に対して有意に高いことも確認された。非腫瘍性（ｎ＝８）、および腺癌（ｎ＝１６）由来の卵巣組織をアイソタイプ対照、抗ＣＸＣＲ５、または抗ＣＸＣＬ１３抗体で染色した。茶色（ＤＡＢ）およびマゼンタ色の染色はそれぞれＣＸＣＲ５およびＣＸＣＬ１３陽性を示す。４０×対物レンズを搭載したＡｐｅｒｉｏ  ＳｃａｎＳｃｏｐｅ  ＣＳシステムでデジタル画像をキャプチャした。典型的な例を、Ａｐｅｒｉｏ  ＩｍａｇｅＳｃｏｐｅ  ｖ．６．２５ソフトウェアを用いて定量した非腫瘍対照組織に対する卵巣癌組織の相対的ＣＸＣＲ５およびＣＸＣＬ１３免疫強度比率と共に示す。アスタリクス（＊）は、非腫瘍組織と癌性組織の間の有意差（ｐ＜０．０１）を示す。
【実施例４】
【０２４５】
（リアルタイムＰＣＲ分析によりケモカイン発現レベルを検出すること）
（プライマー設計）
ＮＩＨ−ＮＣＢＩ遺伝子バンクデータベースよりＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ５ａ、ＣＸＣＲ５ｂ、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２５−１、ＣＣＬ２５−２、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１１、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸ３ＣＬ１についてのメッセンジャーＲＮＡ配列を取得した。プライマーはＢｅａｃｏｎＪ  ２．０コンピュータプログラムを用いて設計した。コンピュータプログラム：Ｐｒｉｍｅｒ  ＰｒｅｍｉｅｒＪおよびＭＩＴ  Ｐｒｉｍｅｒ  ３を用いてプライマーの熱力学分析を実施した。生成したプライマーセットをヒトゲノム全体と比較して特異性を確認した。
【０２４６】
（リアルタイムＰＣＲ分析）
癌細胞株（ＡＴＣＣ、メリーランド州ロックヴィル）を、非必須アミノ酸Ｌ−グルタミン酸、およびピルビン酸ナトリウムを添加した１０％ウシ胎児血清を含有するＲＭＰＩ−１６４０（完全培地）中で培養した。臨床切除組織より原発性腫瘍および正常ペアマッチング組織（Ｃｌｉｎｏｍｉｃｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、メリーランド州フレデリックおよびＵＡＢ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｐｒｏｃｕｒｅｍｅｎｔ、アラバマ州バーミンガム）を採取した。メーカーのプロトコルに従ってＴｒｉＲｅａｇｅｎｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ、オハイオ州シンシナティ）を用い、１０６個の細胞からメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を分離した。ＲＮアーゼ非含有ＤＮアーゼ（インビトロジェン、カリフォルニア州サンディエゴ）１０Ｕ／Ｆｌを用いて３７℃で１５分間処理することで、これらのサンプルより潜在的なゲノムＤＮＡ汚染を除去した。その後、ＲＮＡを沈殿させ、ＲＮＡ  Ｓｅｃｕｒｅ（Ａｍｂｉｏｎ、テキサス州オースチン）に再懸濁した。メーカーのプロトコルにしたがってＴａｑｍａｎ７逆転写試薬（アプライドバイオシステムズ、カリフォルニア州フォスターシティ）を用い、総ＲＮＡ約２μｇを逆転写することによりｃＤＮＡを生成した。その後、メーカーのプロトコルにしたがってＳＹＢＲ７  Ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲマスターミックス試薬（アプライドバイオシステムズ）を用い、ｃＤＮＡをＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ５ａ、ＣＸＣＲ５ｂ、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２５−１、ＣＣＬ２５−２、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１１、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸ３ＣＬ１に対する特異的ヒトｃＤＮＡプライマーにより増幅した。これらの標的のｍＲＮＡのコピーレベルを、ＢｉｏＲａｄ  Ｉｎｃｙｃｌｅｒおよびソフトウェア（カリフォルニア州ハーキュリーズ）を用いたリアルタイムＰＣＲ分析により評価した。
【０２４７】
ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ５ａ、ＣＸＣＲ５ｂ、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２５−１、ＣＣＬ２５−２、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１１、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸ３ＣＬ１特異性プライマーセットを用いて得られたＲＴ−ＰＣＲ生成物は、宿主配列にアニーリングしたプライマー（ＮＩＨ−ＮＣＢＩ遺伝子バンク）を排除したので、他の遺伝子標的と交差反応しなかった。プライマーは、ＣＸＣＲ５ａ対ＣＸＣＲ５ｂおよびＣＣＬ２５、ＣＣＬ２５−１対ＣＣＬ２５−２をもたらす種々のサイズのアンプリコン生成物相対的多型を生成した。この目的に向けて、腺腫、癌腫、白血病、リンパ腫、黒色腫、および／または骨髄腫細胞株および腫瘍組織のＲＴ−ＰＣＲ分析により、ケモカインおよびケモカイン受容体は癌細胞により識別的に発現されることが明らかとなった。
【実施例５】
【０２４８】
（抗ケモカインおよび抗ケモカイン受容体抗体はインビトロおよびインビボで腫瘍細胞増殖を阻害する）
（抗血清の調製）
ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＲ５ａ、ＣＸＣＲ５ｂ、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２５−１、ＣＣＬ２５−２、ＣＸ３ＣＲ１、およびＣＸ３ＣＬ１から１５アミノ酸ペプチドを合成し（シグマジェノシス、テキサス州ザ／ウッドランド）、さらにその後の抗血清調製またはモノクローナル抗体生成のための免疫用に、鶏卵リゾチーム（Ｐｉｅｒｃｅ、イリノイ州ロックフォード）と複合体化して抗原を生成した。発色性リムルスアメーバ様細胞溶解物測定（Ｃａｐｅ  Ｃｏｄ社、ミシシッピー州ファルマス）によりケモカインペプチド複合体のエンドトキシンレベルを定量したところ＜５ＥＵ／ｍｇであることが示された。初回免疫用に、抗原１００μｇを免疫原としてフロイントの完全アジュバントＲｉｂｉ  Ａｄｊｕｖａｎｔシステム（ＲＡＳ）と共に最終体積１．０ｍＬで用いた。この混合物の１００ｍＬ分取をウサギの背部の２部位に皮下投与し、また各後脚の筋肉に４００ｍＬずつ筋肉内投与した。３から４週間後、ウサギに、フロイントの不完全アジュバントに加えて抗原１００μｇを投与してその後３回免疫した。抗−ＣＸＣＲ１、−ＣＸＣＲ２、−ＣＸＣＬ１、−ＣＸＣＬ２、−ＣＸＣＬ３、−ＣＸＣＬ５、−ＣＸＣＬ６  −ＣＸＣＬ７、−ＣＸＣＬ８、−ＣＸＣＬ１２、−ＣＸＣＲ５ａ、−ＣＸＣＲ５ｂ、−ＣＸＣＬ１３、−ＣＸＣＲ６、−ＣＸＣＬ１６、−ＣＣＬ１６、−ＣＣＬ２５、−ＣＣＬ２５−１、−ＣＣＬ２５−２、−ＣＸ３ＣＲ１、および−ＣＸ３ＣＬ１抗体価が１：１，０００，０００に達したときに抗血清を採取した。続いて、正常または抗血清を熱不活化しさらにＰＢＳで１：５０希釈した。
【０２４９】
（モノクローナル抗体の調製）
ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＲ５ａ、ＣＸＣＲ５ｂ、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２５−１、ＣＣＬ２５−２、ＣＸ３ＣＲ１、およびＣＸ３ＣＬ１から１５アミノ酸ペプチドを合成し（シグマジェノシス）、さらにその後の抗血清調製またはモノクローナル抗体生成のための免疫用に、鶏卵リゾチーム（Ｐｉｅｒｃｅ）と複合体化して「抗原」を生成した。発色性リムルスアメーバ様細胞溶解物測定（Ｃａｐｅ  Ｃｏｄ社、ミシシッピー州ファルマス）によりケモカインペプチド複合体のエンドトキシンレベルを定量したところ＜５ＥＵ／ｍｇであることが示された。初回免疫用に、抗原１００μｇを免疫原としてフロイントの完全アジュバントＲｉｂｉ  Ａｄｊｕｖａｎｔシステム（ＲＡＳ）と共に最終体積２００μＬで用いた。その後、この混合物の１００μＬ分取をラット、マウス、または免疫グロブリンヒト化マウスの背部の２部位に投与した。２週間後、動物にはフロイントの不完全アジュバントに加えて抗原１００μｇを投与してその後３回免疫した。血清を採取し、かつ抗−ＣＸＣＲ１、−ＣＸＣＲ２、−ＣＸＣＬ１、−ＣＸＣＬ２、−ＣＸＣＬ３、−ＣＸＣＬ５、−ＣＸＣＬ６  −ＣＸＣＬ７、−ＣＸＣＬ８、−ＣＸＣＬ１２、−ＣＸＣＲ５ａ、−ＣＸＣＲ５ｂ、−ＣＸＣＬ１３、−ＣＸＣＲ６、−ＣＸＣＬ１６、−ＣＣＬ１６、−ＣＣＬ２５、−ＣＣＬ２５−１、−ＣＣＬ２５−２、−ＣＸ３ＣＲ１、および−ＣＸ３ＣＬ１抗体価が１：２，０００，０００に達したとき、宿主を屠殺しかつ脾細胞を分離してハイブリドーマを生成した。簡潔に述べると、免疫した宿主の脾臓またはリンパ節に由来するＢ細胞を不死骨髄腫細胞株（例：ＹＢ２／０など）と融合させた。次に、選択培養条件（すなわちＨＡＴ添加培地）およびハイブリドーマクローニングの限定希釈法後にハイブリドーマを分離した。ＥＬＩＳＡを用いて所望の特異性を有する抗体を産生する細胞を選択した。正常ラットまたはマウスに由来するハイブリドーマを、一般的に用いられる分子生物学的技術を用いてヒト化した。高親和性および増殖性ハイブリドーマをクローニングした後、腹水または培養上清から抗体を分離し、力価１：２，０００，０００に調節しさらにＰＢＳで１：５０希釈した。
【０２５０】
（抗血清またはモノクローナル抗体投与）
Ｔ、Ｂ、およびＮＫ細胞を欠く免疫不全ヌードＮＩＨ−ＩＩＩマウス（週齢８から１２週、チャールズリバーラボラトリー、マサチューセッツ州ウィルミントン）に１×１０６個の癌細胞を皮下に与えて腫瘍を確立した。対応して、用時切除したかまたは液体窒素で凍結した腫瘍組織１ｇを、腸脂肪組織に外科的に移植して腫瘍を生成した。一旦異種移植腫瘍の増殖がサイズ５ｍｍに達したならば、ＮＩＨ−ＩＩＩマウスに抗血清またはモノクローナル抗体のいずれかの２００μＬ腹腔内注射を３日毎に実施し、さらに腫瘍増殖の進行または退縮についてモニタリングした。
【０２５１】
（データ分析）
ＳｉｇｍａＳｔａｔ２０００（イリノイ州シカゴ）ソフトウェアを用いて、データの統計的有意性を分析および確認した。その後、２因子不対検定を用いたスチューデントのｔ−検定でデータを分析した。この分析においては、投与サンプルを非投与サンプルと比較した。有意水準はｐ＜０．０５に設定した。
【０２５２】
（インビトロ増殖試験）
腺腫、癌腫、白血病、リンパ腫、黒色腫、および／または骨髄腫細胞株をＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６  ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＲ５ａ、ＣＸＣＲ５ｂ、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＬ１６、ＣＣＲ９、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２５−１、ＣＣＬ２５−２、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸ３ＣＬ１に対して特異的な抗体の存在するまたは存在しない完全培地内で増殖させた。ＣＸＣＲ１および／またはＣＸＣＲ２を発現する癌細胞株の増殖は、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、またはＣＸＣＬ８に対する抗体によって阻害された。同様に、ＣＸＣＲ４を発現する癌細胞株の増殖はＣＸＣＲ４またはＣＸＣＬ１２に対する抗体によって阻害された。ＣＸＣＲ５ａまたはＣＸＣＲ５ａを発現する癌細胞株の増殖はＣＸＣＲ５ａ、ＣＸＣＲ５ｂ、またはＣＸＣＬ１３に対する抗体によって阻害された。ＣＸＣＲ６を発現する癌細胞株の増殖はＣＸＣＲ６またはＣＸＣＬ１６に対する抗体によって阻害された。ＣＣＲ９を発現する癌細胞株の増殖はＣＣＲ９、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２５−１、またはＣＣＬ２５−２に対する抗体によって阻害された。ＣＸ３ＣＲ１を発現する癌細胞株の増殖はＣＸ３ＣＲ１またはＣＸＣ３Ｌ１に対する抗体によって阻害された。興味深いことに、可溶性リガンドＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２５−１、ＣＣＬ２５−２、またはＣＸ３ＣＬ１に対する抗体は、膜受容体に向けられたものの増殖阻害において、より効果的である。
【０２５３】
（インビトロ血管新生試験）
微小血管内膜細胞（Ｃｅｌｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ワシントン州カークランド）を供給者のプロトコルにしたがって増殖させ、さらにＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＲ５ａ、ＣＸＣＲ５ｂ、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＬ１６、ＣＣＲ９、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２５−１、ＣＣＬ２５−２、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸ３ＣＬ１に特異的な抗体の存在下または非存在下で、血管新生についてのインビトロ測定（ＢＤ−Ｂｉｏｃｏａｔ、カリフォルニア州ハーキュリーズ）において微細血管細静脈を形成させた。血管新生は、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＲ６またはＣＸＣＬ１６に対する抗体によって阻害された。
【０２５４】
（インビボ増殖試験）
癌細胞株または原発性腫瘍組織をＮＩＨ−ＩＩＩマウスに養子移入し、さらに目的の異種移植腫瘍を形成させた。ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＲ５ａ、ＣＸＣＲ５ｂ、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＬ１６、ＣＣＲ９、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２５−１、ＣＣＬ２５−２；ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸ３ＣＬｌに対する抗体は、腫瘍サイズの進行および退縮に識別的に影響した。一定の場合において、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＲ６またはＣＸＣＬ１６に向けられた抗体は、効果的に腫瘍増殖の退縮にも進行の阻害にもつながる。ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＲ５ａ、ＣＸＣＲ５ｂ、ＣＸＣＬ１３、ＣＣＬ１６、ＣＣＲ９、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２５−１、ＣＣＬ２５−２、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸ３ＣＬ１に向けられた抗体は、腫瘍サイズの進行の阻害において効果的である。
【０２５５】
本願で用いられるケモカインのタンパク質配列はＮＩＨ−ＮＣＢＩ  ＧｅｎＢａｎｋに以下のように記録される：(1) CXCR1 (ACCESSION#（受託番号） NP 000625), SEQ ID NO:1, (2) CXCR2(ACCESSION# NP  001548), SEQ ID NO:2, (3) CXCL1 (ACCESSION# NP 001502), SEQ ID NO:3, (4) CXCL2 (ACCESSION# NP 002080), SEQ ID NO:4, (5) CXCL3 (ACCESSION# NP 002081), SEQ ID NO:5, (6) CXCL5 (ACCESSION# NP  002985), SEQ ID NO:6, (7) CXCL6 (ACCESSION# NP 002984), SEQ ID NO:7, (8) CXCL7 (ACCESSION# NP 002695). SEQ ID NO:8, (9) CXCL8 (IL-8, ACCESSION# NP 000575), SEQ ID NO:9, (10) CXCR4 (ACCESSION# NP 003458), SEQ ID NO:10, (11) CXCL12 (ACCESSION# NP  000600), SEQ ID NO:11, (12) CXCR5A (ACCESSION# NP 116743), SEQ ID NO:12, (13) CXCR5B (ACCESSION# NP 001707), SEQ ID NO:13, (14) CXCL13 (ACCESSION# NP 006410), SEQ ID NO:14, (15) CXCR6 (ACCESSION# NP  006555), SEQ ID NO:15, (16) CXCL16 (ACCESSION# NP 071342), SEQ ID NO:16, (17) CCL16 (ACCESSION# NP 004581), SEQ ID NO:17, (18) CCL25 (ACCESSION# NP-005615.2), SEQ ID NO:18, (19) CCL25-1 (ACCESSION# NP  005615), SEQ ID NO:19, (20) CCL25-2 (ACCESSION# NP 683686), SEQ ID NO:20, (21) CX3CR1 (ACCESSION# NP  001328), SEQ ID NO:21, and (22) CX3CL1 (ACCESSION# NP  002987), SEQ ID NO:22。
【０２５６】
ｃＤＮＡ配列は既知でありかつＮＩＨ−ＮＣＢＩ  ＧｅｎＢａｎｋにおいて以下の受入番号の下で利用可能である：(23) CXCR1 (ACCESSION# NM 000634), SEQ ID NO:23, (24) CXCR2(ACCESSION# NM  001557), SEQ ID NO:24, (25) CXCL1 (ACCESSION# NM 001511), SEQ ID NO:25, (26) CXCL2 (ACCESSION# NM 002089), SEQ ID NO:26, (27) CXCL3 (ACCESSION# NM 002090), SEQ ID NO:27, (28) CXCL5 (ACCESSION# NM  002994), SEQ ID NO:28, (29) CXCL6 (ACCESSION# NM 002993), SEQ ID NO:29, (30) CXCL7 (ACCESSION# NM 002704), SEQ ID NO:30, (31) CXCL8 (IL-8, ACCESSION# NM 000584), SEQ ID NO:31, (32) CXCR4 (ACCESSION# NM 003467), SEQ ID NO:32, (33) CXCL12 (ACCESSION# NM  000609), SEQ ID NO:33, (34) CXCR5A (ACCESSION# NM 032966), SEQ ID NO:34, (35) CXCR5B (ACCESSION# NM 001716), SEQ ID NO:35, (36) CXCL13 (ACCESSION# NM 006419), SEQ ID NO:36, (37) CXCR6 (ACCESSION# NM  006564), SEQ ID NO:37, (38) CXCL16 (ACCESSION# NM 022059), SEQ ID NO:38, (39) CCL16 (ACCESSION# NM 004590), SEQ ID NO:39, (40) CCL25 (ACCESSION# NM_005624.3), SEQ ID NO:40, (41) CCL25-1 (ACCESSION# NM 005624), SEQ ID NO:41, (42) CCL25-2 (ACCESSION# NM 148888), SEQ ID NO:42, (43) CX3CR1 (ACCESSION# NM 001337), SEQ ID NO:43, and (44) CX3CL1 (ACCESSION# NM 002996), SEQ ID NO:44。
【０２５７】
以下の表に示すように、大半が何らかの腫瘍を発現する個別のケモカインは変動しうる。本願の方法は、個別の患者に対し、患者自身の腫瘍において過剰発現されるケモカインに応じてカスタマイズしうる。本願の方法を用いて腫瘍において過剰発現される個別のケモカインを同定し、かつその過剰発現されたケモカインに対する抗体を投与することが可能である。癌患者に合わせた治療の調節は新規であり、かつ本願の特に有益な態様である。
【０２５８】
以下のページにある表は、検討した個別の腫瘍において過剰発現された個別のケモカインの種々の量を示す。
【０２５９】
（表３．ケモカイン、ケモカイン受容体および癌の関連（疾患の病期による））
【表３】
2014505239.tif 000005
【実施例６】
【０２６０】
（ＰＣａ化学療法抵抗性に関与するＣＸＣＲ５−ＣＸＣＬ１３誘発性抗アポトーシスおよび／または生存シグナル）
ＬＮＣａＰ（ホルモン反応性、野生型ｐ５３発現）、ＰＣ３（ホルモン抵抗性、ｐ５３完全欠損）、およびＤＵ１４５（ホルモン抵抗性、ｐ５３変異）細胞株を、ＣＸＣＬ１３を添加または無添加で、かつドキソルビシン（１μＭ／２μＭ／４μＭ）、エトポシド（２０μＭ／４０μＭ）、エストラムスチン（４μＭ／１０μＭ）、またはドセタキセル（１０ｎＭ／２０ｎＭ／４０ｎＭ）を添加または無添加で４、８、１２、および２４時間増殖させる。細胞生存、プロアポトーシスおよび抗アポトーシスシグナル（Ａｋｔ、Ｓｒｃ、ＣａｍＫＩＩ、ＦＡＫ、ＦＫＨＲ、ＦＯＸＯ、ＣＲＥＢ、ＮＦ−κＢ、Ｍｙｃ、Ｆｏｓ、Ｊｕｎ  Ａｐａｆ１、Ｂａｘ、Ｂｃｌ２、ＢｃｌＸＬ、ＢａＫ、Ｂａｄ、Ｂｉｋ、Ｂｉｍ、ＴＰ５３、カスパーゼ−３、−６、−８、−９、サバイビン、ビトロネクチン、β−カテニン）、および薬剤耐性または代謝を担う分子（Ｔｗｉｓｔ−１、Ｓｎａｉｌ−１、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ−π（ＧＳＴ−π）、ｐ５３、トポイソメラーゼＩ、ＩＩα、ＩＩβ、およびＡＢＣ薬物輸送体）の発現および活性化を、リアルタイムＰＣＲおよびウェスタンブロッティングで評価する。簡潔に述べると、細胞処理後にリアルタイムＰＣＲを用いて遺伝子発現の変化を試験する。シグナリング分子の活性化も、リン酸特異的抗体（すなわちウェスタンブロット分析）によって試験する。活性化シグナリング分子の役割をさらに確認するため、ＣＸＣＬ１３処理後に、化学的阻害物質またはｓｉＲＮＡを用いて候補分子の発現または活性を阻害し、また標的遺伝子をリアルタイムＰＣＲおよびウェスタンブロット分析で分析する。その後、化学療法剤に対する処理細胞の反応をＶｙｂｒａｎｔアポトーシス測定（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐｒｏｂｅｓ）キットで評価する。
【０２６１】
（ＲＮＡ分離およびリアルタイムＰＣＲ）
ＴＲＩＺＯＬ（登録商標）（インビトロジェン）法で総ＲＮＡを分離し、紫外線分光測定によって定量する。電気泳動法によりＲＮＡの品質を分析する。ＩＳＣＲＩＰＴ（登録商標）ｃＤＮＡ合成キット（ＢｉｏＲａｄ）をメーカーの記載する通りに用いてｃＤＮＡ合成を完遂する。ＩＱ（登録商標）ＳＹＢＲグリーンスーパーミックス（ＢｉｏＲａｄ）をメーカーの記載する通りに用い、さらにＦＡＫ、ＦＫＨＲ、ＦＯＸＯ、Ａｐａｆ１、Ｂａｘ、Ｂｃｌ２、ＢｃｌＸＬ、ＢａＫ、Ｂａｄ、Ｂｉｄ、ＸＩＡＰ、Ｂｉｋ、Ｂｉｍ、ＴＰ５３、チトクロームＣ、カスパーゼ−３、−６、−８、−９、サバイビン、ラミン、ＣａｍＫＩＩ、ビトロネクチン、β−カテニン、カドヘリン、Ｔｗｉｓｔ−１、Ｓｎａｉｌ−１、ＣＲＥＢ、ＮＦ−κＢ、Ｍｙｃ、Ｆｏｓ、Ｊｕｎ、β−アクチンおよびＧＡＰＤＨに対して設計された特異的プライマーを用いてリアルタイムＰＣＲを実施する。結果をΔΔＣｔ法によって算出し、非処理群に対するｍＲＮＡ変化が何倍かを定量する。
【０２６２】
（ウェスタンブロッティング）
細胞を回収し、溶解緩衝液に再懸濁して総タンパク質を抽出する。溶解緩衝液は、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１％デオキシコール酸、０．１％ＳＤＳ、５ｍＭ  ＥＤＴＡを含有し、プロテアーゼ阻害剤、１ｍＭフッ化フェニルメチルスルフォニル、１ｍＭベンズアミジン、１０μｇ／ｍＬ大豆トリプシン阻害剤、５０μｇ／ｍＬロイペプチン、１μｇ／ｍＬペプスタチンおよび２０μｇ／ｍＬアプロチニンを添加する。細胞溶解液を氷上で３０分間保存し、４℃で２０分間遠心分離し（１４０００×ｇ）、さらに上清をｍＲＮＡレベルの有意なモジュレーションを示す遺伝子のウェスタンブロット分析に用いる。同様に、蛍光体特異性抗体を用いてＡｋｔ１／２／３、ｍＴＯＲ、ＦＡＫ、ＦＫＨＲ、ＦＯＸＯ、およびＧＳＫ−３βのリン酸化のレベルの変化を試験する。さらに、特異抗体を用いて開裂後のカスパーゼおよびＰＡＲＰの活性化を評価する。ＥＣＬプラス試薬（Ｐｈａｒｍｅｃｉａ）によるＸ線フィルム上でのタンパク質バンドの化学発光検出後に得られた結果を、Ｉｍａｇｅ  Ｊ画像分析ソフトウェア（ＮＩＨ）を用いてβアクチンおよび／またはＧＡＰＤＨに対して正規化する。
【０２６３】
（チトクロームＣ放出の検出）
細胞を採取し、さらにＰＢＳで洗浄し、さらに２２０ｍＭマンニトール、６８ｍＭショ糖、５０ｍＭ  ＰＩＰＥＳ−ＫＯＨ、ｐＨ７．４、５０ｍＭ  ＫＣｌ、５ｍＭ  ＥＧＴＡ、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、およびプロテアーゼ阻害剤を含有する抽出緩衝液に再懸濁する。氷上で３０分間インキュベートした後、Ｇｌａｓｓ−Ｔｅｆｌｏｎホモジナイザーを用いて細胞をホモジナイズし、さらにホモジネートを１４，０００ｇで１５分間遠心分離する。サイトゾルの抽出物を、抗チトクロームＣモノクローナル抗体（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）を用いたウェスタンブロット分析に用いる。
【０２６４】
（ｓｉＲＮＡトランスフェクション、化学的阻害剤、およびアポトーシス検出）
前立腺癌細胞株を、ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００（インビトロジェン）を用いて遺伝子特異性および非特異性対照ｓｉＲＮＡ（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）によってトランスフェクトする。至適な遺伝子ノックダウン時間およびｓｉＲＮＡ濃度をウェスタンブロット分析で確認し、またＣＸＣＬ１６、対照抗体、および／または抗ＣＸＣＲ６抗体を用いて、または用いずに薬剤処理した後の細胞の生存についてさらに評価する。生存、アポトーシス、および壊死細胞の変化の検出は以下のように評価する：細胞の生存は、ＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーターおよびＣｅｌｌＱｕｅｓｔ（登録商標）ソフトウェア（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を用い、Ｖｙｂｒａｎｔ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓによってメーカー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐｒｏｂｅ）の記載通りに試験する。遺伝子ノックダウン後の下流遺伝子発現の変化は、リアルタイムＰＣＲおよびウェスタンブロッティングを用いて試験する。
【０２６５】
ＣＸＣＬ１６で処理した細胞は細胞生存および薬物輸送体の発現の亢進を示し、これはホルモン反応性および非反応性細胞においてその発現パターンの差を示す。抗ＣＸＣＬ１６  ＡｂはＰＣａ細胞においてＣＸＣＬ１６の効果を有効に反転させる。ドキソルビシン、エストラムスチン、エトポシドおよびドセタキセルは、ＣＸＣＬ１６処理（またはＣＸＣＲ６遮断）していないＰＣａ細胞のアポトーシスを誘導する。
【実施例７】
【０２６６】
（ＡＢＣ薬物輸送体におけるＣＸＣＲ５−ＣＸＣＬ１３誘導性変化）
ＬＮＣａＰ、ＰＣ３、およびＤＵ１４５細胞を、ＣＸＣＬ１３、対照抗体、および／または抗−ＣＸＣＲ５抗体を添加または無添加で、ドキソルビシン、エストラムスチン、エトポシド、またはドセタキセルと共にまたはこれを加えずに、前述の通りに４、８、１２または１６時間増殖させる。処理後、ＡＢＣ輸送体およびＴｗｉｓｔ−１のｍＲＮＡ発現の変化を、ＡＢＣおよびＴｗｉｓｔ−１  ｃＤＮＡに向けられた特異的プライマーを用いて、上述の通りにリアルタイムＰＣＲで定量する。ｍＲＮＡ発現の有意な変化を示す遺伝子をウェスタンブロット分析でさらに試験する。処理細胞に由来する核抽出物をクロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）測定によって評価し、ＣＸＣＬ１３結合によって誘導される転写因子がＡＢＣ輸送体およびＴｗｉｓｔ−１のプロモーター領域と結合するか判定する。
【０２６７】
（クロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ））
実施例６の結果は、調節される遺伝子、さらにはＣＸＣＲ５−ＣＸＣＬ１３相互作用によって活性化される転写因子をモジュレートしうる遺伝子についての情報を提供する。これらの結果に基づき、標的転写因子および遺伝子を選択する。特異的ＰＣＲプライマーを、転写因子の結合部位を含むこれらの遺伝子のプロモーター領域に対して設計する。ＰＣＲプライマーを用いて、転写因子と共に沈殿するＤＮＡを増幅する。２０ｍＭ酪酸塩の存在下で細胞をトリプシン処理により回収する。５０，０００個の細胞をＰＢＳ／酪酸５００μＬに再懸濁する。１％ホルムアルデヒドを用いてタンパク質とＤＮＡを室温で８分間架橋し、さらに１２５ｍＭグリシンを５分間用いて架橋を停止する。細胞をソフト減速条件のスイングアウトローターで４℃、４７０ｇで１０分間遠心分離し、氷冷ＰＢＳ／酪酸０．５ｍＬ中でボルテックス振盪したのち遠心分離して２回洗う。溶解緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、１％ＳＤＳ、プロテアーゼ阻害剤カクテル（シグマアルドリッチ）、１ｍＭ  ＰＭＳＦ、２０ｍＭ酪酸塩を添加し、ボルテックスで振盪し、またその後遠心分離することにより細胞を溶解する。この手順は、５００ｂｐのクロマチンフラグメントを生成することが知られている。超音波処理した溶解物を、プロテアーゼ阻害剤カクテル、１ｍＭ  ＰＭＳＦおよび２０ｍＭ酪酸塩を含有するＲＩＰＡ緩衝液（ＲＩＰＡ  ＣｈＩＰ緩衝液）で８倍希釈する。ＲＩＰＡ  ＣｈＩＰ緩衝液（３３０μＬ）をペレットに添加し、ボルテックスで混合する。ＣｈＩＰ材料の免疫沈降および洗浄は、特異的転写因子に向けられた抗体の使用によって実現される。抗体ビーズ複合体を収容するチューブにクロマチンを分取する。投入サンプルを、フェノール−クロロホルムイソアミルアルコール分離用チューブに入れる。免疫沈降材料を３回洗い、ＴＥ中にある間に新しいチューブに移す。１％ＳＤＳでのＤＮＡ溶離、架橋の逆転およびプロテイナーゼＫ消化は、６８℃で２時間１段階で実施する。アクリルアミド担体（シグマアルドリッチ）の存在下でフェノール−クロロホルムイソアミルアルコール、およびエタノール沈降によりＤＮＡを抽出し、ＴＥに溶解する。３〜４つの独立したＣｈＩＰから免疫沈降したＤＮＡをリアルタイムＰＣＲで分析する。リアルタイムＰＣＲデータは、３回の独立した再現ＣｈＩＰ分析において、投入ＤＮＡに対する沈殿（抗体結合）ＤＮＡの百分率（±ＳＤ）で表示する。
【０２６８】
ＣＸＣＲ５−ＣＸＣＬ１３シグナリングを介したＣＲＥＢ、Ｆｏｓ、Ｊｕｎ、およびＮＦｋＢなどの転写因子のリン酸化および活性化は、その後ＡＢＣ輸送体およびＴｗｉｓｔ−１の発現の増大につながる。同じプロモーターに負の調節要素が存在する場合、遺伝子発現の低下が認められる。ホルモン依存性および抵抗性ＰＣａ細胞はこれらの細胞内シグナリング分子の発現に差があるので、ホルモン依存性および抵抗性条件によってモジュレートされる遺伝子に多様性を示す。遺伝子発現におけるモジュレーションは、ＣＸＣＬ１３の存在下およびＣＸＣＬ１３投与の非存在下で薬物投与による差を示す。
【実施例８】
【０２６９】
（ＣＸＣＬ１３に向けられた治療法のインビボ評価）
雄性ヌードマウスを、ルシフェラーゼ発現アンドロゲン反応性（ＬＮＣａＰ−Ｌｕｃ）および非反応性（ＰＣ３−Ｌｕｃ）細胞で皮下攻撃する。インビボ撮像システムを用いて腫瘍の発達を非侵襲的に測定する。測定可能な腫瘍の確立後、マウスを投与群（Ａ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥ）と対照群（Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、ＪおよびＫ）に分ける。「Ａ」群にはＣＸＣＬ１３中和抗体（１２．５ｍｇ／ｋｇ／日）を１日おきに投与し、対照（Ｆ群）にはアイソタイプ対照抗体を投与する（１２．５ｍｇ／ｋｇ／日）。「Ｂ」、「Ｃ」、「Ｄ」および「Ｅ」群にはＣＸＣＬ１３中和抗体（１２．５ｍｇ／ｋｇ／日）を、それぞれドキソルビシン腹腔内注射（１から３日目、その後１５日目から１７日目に５ｍｇ／ｋｇ／日投与）、エトポシド静脈内注射（１０ｍｇ／ｋｇ／日；１、５、９、１４、１９および２４日目）、エストラムスチン静脈内注射（１〜５日目および２６〜３１日目に４ｍｇ／ｋｇ／日投与）、またはドセタキセル腹腔内注射（８ｍｇ／ｋｇ／日で週２回４週間）と共に投与する。これらの投与群の対照（それぞれ「Ｇ」、「Ｈ」、「Ｉ」および「Ｊ」）には、これらの薬剤を同様の濃度および注射プロトコルを用いてアイソタイプ対照抗体（１２．５ｍｇ／ｋｇ／日）と共に投与する。「Ｋ」群にはＰＢＳを投与し、プラセボとなる。投与および対照の腫瘍進行および退縮をインビボ撮像で非侵襲的に評価する。投与群および非投与群から腫瘍を切除し、免疫組織化学検査によって細胞生存および薬剤抵抗性タンパク質の変化について評価する。
【０２７０】
（統計（有意性）およびサンプルサイズ）
サンプルサイズ（または検定力）の算出は予備試験の設計および提案された実験の要件を判定することにとって重要である。我々の結果を解釈するためには、有意性検定および統計分析も重要である。従来のα値、すなわちｐ＝０．０１を用いて本試験の統計的有意性を評価する。提案された実験は、各群最小１０匹のマウスを必要とするであろう。データは平均±ＳＥＭで表示され、かつ正規分布サンプルについては両側対（または非対）スチューデントｔ−検定を、または正規分布しないサンプルについてはノンパラメトリック検定として非対マンホイットニーＵ検定により比較する。結果は、ＳＹＳＴＡＴ（Ｓｙｓｔａｔ  ｓｏｆｔｗａｒｅ社）統計プログラムを用いて分析する。一因子および二因子分散ＡＮＯＶＡ分析を用いて、それぞれ群およびサブグループを評価する。したがって、結果はｐ値が＜０．０５である場合に統計的に有意とみなす。
【０２７１】
（動物）
週齢６から８週間の雄性ヌードマウスにＰＣａ細胞を皮下注射する。簡潔に述べると、５×１０６個のルシフェラーゼ発現ＰＣ３細胞を無菌ＰＢＳ１００μＬに再懸濁し、イソフルラン麻酔下でヌードマウスの側腹部に注射する。ルシフェラーゼ発現ＬＮＣａＰ細胞（５×１０６個）を５０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ（ベクトンディッキンソン）と混合し、イソフルラン麻酔下でヌードマウスの側腹部に注射する。
【０２７２】
（インビボ腫瘍増殖の分析）
腫瘍担持ヌードマウスに、撮像の１５分前に２５×５／８”ゲージ針を用いた腹腔内注射によりＤ−ルシフェリン（Ｘｅｎｏｇｅｎ）１５０ｍｇ／ｋｇを投与する。マウスはＩＶＩＳ１００インビボ撮像システムを用いて撮像し、結果を光子／秒／ｃｍ２／ｓｒで表示する。腫瘍体積はノギスを用いて測定し、式（長径）×（短径）２×０．５で算出する。
【０２７３】
（細胞生存、アポトーシスおよび薬剤耐性遺伝子発現分析）
投与プロトコル完了の３日後に全群から腫瘍を切除する。腫瘍を４％ＰＦＡで固定し、さらにパラフィン包埋する。パラフィン切片（厚さ７μｍ）をガラススライドに載置し、脱パラフィンし、さらに再水和する（キシレンで５分、無水エタノール、９５％エタノールおよび７０％エタノールで１分ずつ）。再水和した切片を用いて、薬物輸送体ＰＩ３Ｋ、Ａｋｔ、ＦＡＫ、ＦＫＨＲ、ＦＯＸＯ、Ａｐａｆ１、Ｂａｘ、Ｂｃｌ２、ＢｃｌＸＬ、ＢａＫ、Ｂａｄ、Ｂｉｄ、ＸＩＡＰ、Ｂｉｋ、Ｂｉｍ、ＴＰ５３、チトクロームＣ、カスパーゼ−３、−６、−８、−９、サバイビン、ラミン、ＣａｍＫＩＩ、ビトロネクチン、β−カテニン、カドヘリン、Ｔｗｉｓｔ−１、ＣＲＥＢ、ＮＦ−κＢ、Ｍｙｃ、Ｆｏｓ、Ｊｕｎ、ＣＸＣＲ５およびＣＸＣＬ１３について、ペルオキシダーゼベースで免疫組織化学染色する。染色後、スライドをＡｐｅｒｉｏスキャンスコープ（Ａｐｅｒｉｏ）システムによりスキャンおよび分析する。
【０２７４】
ＣＸＣＬ１３中和は、薬剤に反応した細胞生存の低下による腫瘍体積の減少につながる。しかし、形成される腫瘍の間でも反応はホルモン感受性（ＬＮＣａＰ）およびホルモン抵抗性（ＰＣ３細胞）によって異なる。さらに、化学療法剤は、これらの薬剤を細胞外に輸送することが知られているＡＢＣタンパク質の発現を亢進しうる機能的ＣＸＣＲ５−ＣＸＣＬ１３軸を有する腫瘍においては、効果が低い。
【０２７５】
上の記述は、当業者に対して本発明を実践する方法を教示することを目的とし、かつ記述を読めば当業者に対してすぐに明らかになるそれら全ての明白な変更およびその変法を詳述することを意図していない。しかし、そうした全ての明白な変更および変法が本発明の範囲に含まれることが意図され、それは以下の請求項によって定義される。請求項は、文脈が具体的にそうでないと示さなければ、そこで意図される目的に合致するために効果的な任意の順番の要素および段階を包含することを意図する。本明細書に引用された全ての参照文献は、その全文を本願に参照文献として援用する。
【図２】
2014505239.tif 000006
【図３】
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【図５】
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【図６】
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【図１７】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２４Ｂ】
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【図１】
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【図４】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３】
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【図２４Ａ−１】
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【図２４Ａ−２】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【国際調査報告】
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