(57)【要約】  顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子受容体α（ＧＭ−ＣＳＦＲα）のＴｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎモチーフを標的とする、治療用抗体マブリリムマブまたはその他の阻害剤を投与することを含んでなる、１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下および／またはＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０またはＡＣＲ７０によって判定される改善をはじめとする、患者において臨床上の便益を提供する、関節リウマチ（ＲＡ）の治療法。マブリリムマブなどのＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤の使用は、安定用量のＤＭＡＲＤ、特にメトトレキサートを投与されているＲＡ患者において、臨床上の便益を向上させる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者において関節リウマチを治療して、１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下および／または１９８７年米国リウマチ学会（ＡＣＲ）基準による判定で治効の少なくとも２０％の改善（ＡＣＲ２０）によって判定される、臨床上の便益を提供する方法であって、
前記方法は、ＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤の治療有効量を含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなり、
阻害剤は、配列番号２０６のヒトＧＭ−ＣＳＦＲα配列の位置２２６〜２３０においてＴｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎモチーフと結合して、ＧＭ−ＣＳＦのＧＭ−ＣＳＦＲαへの結合を阻害し、阻害剤は、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて５ｎＭ以下の親和力（ＫＤ）で、ヒトＧＭ−ＣＳＦＲαの細胞外ドメインと結合する、前記方法。
【請求項２】
患者において関節リウマチを治療して、１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下および／または１９８７年ＡＣＲ基準による判定で治効の少なくとも２０％の改善（ＡＣＲ２０）によって判定される、臨床上の便益を提供する方法で使用するためのＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤を含んでなる組成物であって、阻害剤は、配列番号２０６のヒトＧＭ−ＣＳＦＲα配列の位置２２６〜２３０においてＴｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎモチーフと結合して、ＧＭ−ＣＳＦのＧＭ−ＣＳＦＲαへの結合を阻害し、阻害剤は、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて５ｎＭ以下の親和力（ＫＤ）で、ヒトＧＭ−ＣＳＦＲαの細胞外ドメインと結合する、前記組成物。
【請求項３】
（ｉ）容器内に包装されたＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤を含んでなる組成物と；
（ｉｉ）患者において関節リウマチを治療して、１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下および／または１９８７年ＡＣＲ基準による判定で治効の少なくとも２０％の改善（ＡＣＲ２０）によって判定される、臨床上の便益を提供する方法で阻害剤を使用するための使用説明が記載された、添付文書またはラベルとを含んでなる製品であって、
阻害剤は、配列番号２０６のヒトＧＭ−ＣＳＦＲα配列の位置２２６〜２３０においてＴｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎモチーフと結合して、ＧＭ−ＣＳＦのＧＭ−ＣＳＦＲαへの結合を阻害し、阻害剤は、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて５ｎＭ以下の親和力（ＫＤ）で、ヒトＧＭ−ＣＳＦＲαの細胞外ドメインと結合し、
方法は、阻害剤の治療有効量を患者に投与するステップを含んでなる、前記製品。
【請求項４】
臨床上の便益が１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下を含んでなる、請求項１に記載の方法、請求項２に記載の組成物または請求項３に記載の製品。
【請求項５】
方法が、治療に続いて患者をモニターして、ＤＡＳ２８−ＣＲＰを測定し、治療が１．２を超えてＤＡＳ２８−ＣＲＰを低下させたと判定することをさらに含んでなる、請求項４に記載の方法、組成物または製品。
【請求項６】
臨床上の便益が、関節リウマチの寛解、または寛解開始までの時間の短縮を含んでなる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項７】
臨床上の便益が、患者の少なくとも１０％または少なくとも２０％における関節リウマチの寛解を含んでなる、請求項６に記載の方法、組成物または製品。
【請求項８】
方法が、治療に続いて患者をモニターし、関節リウマチの寛解を観察することをさらに含んでなる、請求項７に記載の方法、組成物または製品。
【請求項９】
臨床上の便益が、１９８７年ＡＣＲ基準による判定で、治効の少なくとも２０％の改善（ＡＣＲ２０）を含んでなる、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項１０】
臨床上の便益が、１９８７年ＡＣＲ基準による判定で、治効の少なくとも５０％の改善（ＡＣＲ５０）を含んでなる、請求項９に記載の方法、組成物または製品。
【請求項１１】
臨床上の便益が、１９８７年ＡＣＲ基準による判定で、治効の少なくとも７０％の改善（ＡＣＲ７０）を含んでなる、請求項１０に記載の方法、組成物または製品。
【請求項１２】
治療に続いて患者をモニターし、１９８７年ＡＣＲ基準に従って治効を評価して、ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０またはＡＣＲ７０の達成を判定することをさらに含んでなる、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項１３】
臨床上の便益が、患者の少なくとも２０％または少なくとも３０％におけるＡＣＲ５０の達成を含んでなる、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項１４】
臨床上の便益が、患者の少なくとも５％、少なくとも１０％または少なくとも１５％におけるＡＣＲ７０の達成を含んでなる、請求項１３に記載の方法、組成物または製品。
【請求項１５】
臨床上の便益が、８５日間以内に達成される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項１６】
方法が、ＨＡＱ−ＤＩによる判定で、ＲＡ患者の身体機能を改善することをさらに含んでなる、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項１７】
ＨＡＱ−ＤＩによる判定で、ＲＡ患者の身体機能を改善する方法であって、
方法は、ＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤の治療有効量を含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなり、
阻害剤は、配列番号２０６のヒトＧＭ−ＣＳＦＲα配列の位置２２６〜２３０においてＴｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎモチーフと結合して、ＧＭ−ＣＳＦのＧＭ−ＣＳＦＲαへの結合を阻害し、阻害剤は、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて５ｎＭ以下の親和力（ＫＤ）で、ヒトＧＭ−ＣＳＦＲαの細胞外ドメインと結合する、前記方法。
【請求項１８】
ＨＡＱ−ＤＩによる判定でＲＡ患者の身体機能を改善する方法で利用するためのＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤を含んでなる組成物であって、阻害剤は、配列番号２０６のヒトＧＭ−ＣＳＦＲα配列の位置２２６〜２３０においてＴｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎモチーフと結合して、ＧＭ−ＣＳＦのＧＭ−ＣＳＦＲαへの結合を阻害し、阻害剤は、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて５ｎＭ以下の親和力（ＫＤ）で、ヒトＧＭ−ＣＳＦＲαの細胞外ドメインと結合する、前記組成物。
【請求項１９】
（ｉ）容器内に包装されたＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤を含んでなる組成物と；
（ｉｉ）ＨＡＱ−ＤＩによる判定でＲＡ患者の身体機能を改善する方法で阻害剤を使用するための使用説明が記載された、添付文書またはラベルと
を含んでなる製品であって、
阻害剤は、配列番号２０６のヒトＧＭ−ＣＳＦＲα配列の位置２２６〜２３０においてＴｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎモチーフに結合して、ＧＭ−ＣＳＦのＧＭ−ＣＳＦＲαへの結合を阻害し、阻害剤は、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて５ｎＭ以下の親和力（ＫＤ）でヒトＧＭ−ＣＳＦＲα細胞外ドメインに結合し、
方法は、阻害剤の治療有効量を患者に投与するステップを含んでなる、前記製品。
【請求項２０】
方法が、ＨＡＱ−ＤＩスコアを少なくとも０．２５改善することを含んでなる、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項２１】
方法が、治療に続いて患者をモニターし、ＨＡＱ−ＤＩを測定して、患者のＨＡＱ−ＤＩスコアが少なくとも０．２５改善されたことを判定することを含んでなる、請求項２０に記載の方法、組成物または製品。
【請求項２２】
ＨＡＱ−ＤＩの改善が６週間以内に達成される、請求項１６〜２１のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項２３】
方法が、阻害剤を９０〜１１０ｍｇの皮下用量で患者に投与することを含んでなる、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項２４】
用量が１００ｍｇである、請求項２３に記載の方法、組成物または製品。
【請求項２５】
組成物が皮下投与のために調合される、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項２６】
方法が、１つまたは複数の追加的な治療薬と組み合わせて、組成物を患者に投与することを含んでなる、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項２７】
１つまたは複数の追加的な治療薬が、１つまたは複数の疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を含んでなる、請求項２６に記載の方法、組成物または製品。
【請求項２８】
方法が、メトトレキサートと組み合わされた組成物を患者に投与することを含んでなる、請求項２７に記載の方法、組成物または製品。
【請求項２９】
方法が、メトトレキサートを週あたり７．５〜２５ｍｇの用量で投与することを含んでなる、請求項２８に記載の方法、組成物または製品。
【請求項３０】
関節リウマチ患者が、ＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤の投与に先だって、メトトレキサートの安定用量を少なくとも４週間にわたり投与された者であり、方法が、メトトレキサートの継続投与と組み合わされた組成物を患者に投与することを含んでなる、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項３１】
メトトレキサートの用量が週あたり７．５〜２５ｍｇである、請求項３０に記載の方法、組成物または製品。
【請求項３２】
患者が、治療に先だって少なくとも３．２の基線ＤＡＳ２８−ＣＲＰを有する、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項３３】
患者が、治療に先だって５．１を超える基線ＤＡＳ２８−ＣＲＰを有する、請求項３２に記載の方法、組成物または製品。
【請求項３４】
患者が、治療に先だって、リウマチ因子および／または抗環状シトルリン化ペプチド（ＣＣＰ）ＩｇＧ抗体について検査で陽性である、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項３５】
方法が、少なくとも８５日間の期間にわたり、隔週間隔で阻害剤の治療有効量を患者に投与することを含んでなる、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項３６】
患者が、医学的な意義を持つ呼吸器疾患を有しない者である、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項３７】
阻害剤が抗体分子を含んでなる、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項３８】
抗体分子が、相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の組と、フレームワークとを含んでなる抗体ＶＨドメインを含んでなり、相補性決定領域の組が、配列番号３または配列番号１７３のアミノ酸配列のＣＤＲ１と、配列番号４のアミノ酸配列のＣＤＲ２と、配列番号５；配列番号１５；配列番号２５；配列番号３５；配列番号４５；配列番号５５；配列番号６５；配列番号７５；配列番号８５；配列番号９５；配列番号１０５；配列番号１１５；配列番号１２５；配列番号１３５；配列番号１４５；配列番号１５５；配列番号１６５；配列番号１７５；配列番号１８５；および配列番号１９５からなる群から選択されるアミノ酸配列のＣＤＲ３を含んでなり；あるいは１つまたは２つのアミノ酸置換があるＣＤＲ配列の組を含んでなる、請求項３７に記載の方法、組成物または製品。
【請求項３９】
抗体分子が、相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、フレームワークとを含んでなる抗体ＶＨドメインを含んでなり、ＶＨ  ＣＤＲ３中のＫａｂａｔ残基Ｈ９７がＳである、請求項３７または３８に記載の方法、組成物または製品。
【請求項４０】
ＶＨ  ＣＤＲ３が、Ｋａｂａｔ残基Ｈ９５におけるＶ、Ｎ、ＡまたはＬ；Ｋａｂａｔ残基Ｈ９９におけるＳ、Ｆ、Ｈ、Ｐ、ＴまたはＷ；Ｋａｂａｔ残基Ｈ１００ＢにおけるＡ、Ｔ、Ｐ、Ｓ、ＶまたはＨの１つまたは複数をさらに含んでなる、請求項３９に記載の方法、組成物または製品。
【請求項４１】
Ｋａｂａｔ残基Ｈ９５がＶである、請求項４０に記載の方法、組成物または製品。
【請求項４２】
Ｋａｂａｔ残基Ｈ９９がＳである、請求項４０または４１に記載の方法、組成物または製品。
【請求項４３】
Ｋａｂａｔ残基Ｈ１００ＢがＡまたはＴである、請求項３７〜４２のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項４４】
ＶＨ  ＣＤＲ３が、配列番号５、配列番号１５、配列番号３５、配列番号４５、配列番号５５、配列番号６５、配列番号７５、配列番号８５、配列番号９５、配列番号１０５、配列番号１１５、配列番号１２５、配列番号１３５、配列番号１４５、配列番号１５５、配列番号１６５、配列番号１７５、配列番号１８５、および配列番号１９５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項４０に記載の方法、組成物または製品。
【請求項４５】
ＶＨ  ＣＤＲ１中のＫａｂａｔ残基Ｈ３４がＩである、請求項３９〜４４のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項４６】
ＶＨ  ＣＤＲ１が配列番号３のアミノ酸配列を有する、請求項３７〜４５のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項４７】
ＶＨ  ＣＤＲ２が、Ｋａｂａｔ残基Ｈ５４におけるＥおよび／またはＫａｂａｔ残基Ｈ５７におけるＩを含んでなる、請求項３９〜４６のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項４８】
ＶＨ  ＣＤＲ２が配列番号４のアミノ酸配列を有する、請求項３９〜４７のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項４９】
ＶＨドメインフレームワーク中のＫａｂａｔ残基Ｈ１７がＳである、請求項３９〜４９のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項５０】
相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、フレームワークとを含んでなる抗体ＶＬドメインを含んでなる、請求項３９〜４９のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項５１】
ＶＬ  ＣＤＲ３が、Ｋａｂａｔ残基Ｌ９０におけるＳ、ＴまたはＭ；Ｋａｂａｔ残基Ｌ９２におけるＤ、Ｅ、Ｑ、Ｓ、ＭまたはＴ；Ｋａｂａｔ残基Ｌ９６におけるＳ、Ｐ、ＩまたはＶの１つまたは複数を含んでなる、請求項５０に記載の方法、組成物または製品。
【請求項５２】
Ｋａｂａｔ残基Ｌ９０がＳである、請求項５１に記載の方法、組成物または製品。
【請求項５３】
Ｋａｂａｔ残基Ｌ９２がＤまたはＥである、請求項５１または５２に記載の方法、組成物または製品。
【請求項５４】
Ｋａｂａｔ残基Ｌ９５ＡがＳである、請求項５１〜５３のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項５５】
Ｋａｂａｔ残基Ｌ９６がＳである、請求項５１〜５４のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項５６】
ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号１０、配列番号２０、配列番号４０、配列番号５０、配列番号６０、配列番号７０、配列番号８０、配列番号９０、配列番号１００、配列番号１１０、配列番号１２０、配列番号１３０、配列番号１４０、配列番号１５０、配列番号１６０、配列番号１７０、配列番号１８０、配列番号１９０、および配列番号２００からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項５０または５５に記載の方法、組成物または製品。
【請求項５７】
ＶＬ  ＣＤＲ１が、Ｋａｂａｔ残基２７ＡにおけるＳ；Ｋａｂａｔ残基２７ＢにおけるＮ；Ｋａｂａｔ残基２７ＣにおけるＩ；Ｋａｂａｔ残基３２におけるＤの１つまたは複数を含んでなる、請求項５０〜５６のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項５８】
ＶＬ  ＣＤＲ１が配列番号８のアミノ酸配列を有する、請求項５０〜５７のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項５９】
ＶＬ  ＣＤＲ２が、Ｋａｂａｔ残基５１におけるＮ；Ｋａｂａｔ残基５２におけるＮ；Ｋａｂａｔ残基５３におけるＫの１つまたは複数を含んでなる、請求項５０〜５８のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項６０】
ＶＬ  ＣＤＲ２が配列番号９のアミノ酸配列を有する、請求項５０〜５９のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項６１】
その中でＫａｂａｔ残基Ｈ９４がＩである抗体ＶＨドメインを含んでなる、請求項３７〜６０のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項６２】
抗体分子が、
ＶＨドメイン配列番号２およびＶＬドメイン配列番号２０８；
ＶＨドメイン配列番号１２およびＶＬドメイン配列番号２１０；
ＶＨドメイン配列番号２２およびＶＬドメイン配列番号２１２；
ＶＨドメイン配列番号３２およびＶＬドメイン配列番号２１４；
ＶＨドメイン配列番号４２およびＶＬドメイン配列番号２１６；
ＶＨドメイン配列番号５２およびＶＬドメイン配列番号２１８；
ＶＨドメイン配列番号６２およびＶＬドメイン配列番号２２０；
ＶＨドメイン配列番号７２およびＶＬドメイン配列番号２２２；
ＶＨドメイン配列番号８２およびＶＬドメイン配列番号２２４；
ＶＨドメイン配列番号９２およびＶＬドメイン配列番号２２６；
ＶＨドメイン配列番号１０２およびＶＬドメイン配列番号２２８；
ＶＨドメイン配列番号１１２およびＶＬドメイン配列番号２３０；
ＶＨドメイン配列番号１２２およびＶＬドメイン配列番号２３２；
ＶＨドメイン配列番号１３２およびＶＬドメイン配列番号２３４；
ＶＨドメイン配列番号１４２およびＶＬドメイン配列番号２３６；
ＶＨドメイン配列番号１５２およびＶＬドメイン配列番号２３８；
ＶＨドメイン配列番号１６２およびＶＬドメイン配列番号２４０；
ＶＨドメイン配列番号１７２およびＶＬドメイン配列番号２４２；
ＶＨドメイン配列番号１８２およびＶＬドメイン配列番号２４４；
またはＶＨドメイン配列番号１９２およびＶＬドメイン配列番号２４６
から選択されるアミノ酸配列があるＶＨドメインおよびＶＬドメインを有する抗体分子と、ヒトＧＭ−ＣＳＦＲαの細胞外ドメインへの結合について競合する、ヒトまたはヒト化抗体分子を含んでなる、請求項３７〜６１のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項６３】
抗体分子がヒトまたはヒト化抗体分子である、請求項３７〜６２のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項６４】
ＶＨドメインフレームワークが、ヒト生殖細胞系ＶＨ１  ＤＰ５またはＶＨ３  ＤＰ４７フレームワークである、請求項６３に記載の方法、組成物または製品。
【請求項６５】
ＶＬドメインフレームワークが、ヒト生殖細胞系ＶＬａｍｂｄａ  １  ＤＰＬ８、ＶＬａｍｂｄａ  １  ＤＰＬ３またはＶＬａｍｂｄａ  ６＿６ａフレームワークである、ＶＬドメインを含んでなる、請求項６３または６４に記載の方法、組成物または製品。
【請求項６６】
抗体分子が、
配列番号５２で示されるＶＨドメインアミノ酸配列があるＶＨドメイン、または１つまたは２つのアミノ酸改変があるその変異体と、
配列番号２１８で示されるＶＬドメインアミノ酸配列があるＶＬドメイン、または１つまたは２つのアミノ酸改変があるその変異体と
を含んでなり、
アミノ酸改変は、置換、挿入、および欠失からなる群から選択される、
請求項３７〜６５のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項６７】
抗体分子がＩｇＧ４である、請求項６３〜６６のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項６８】
抗体分子が、配列番号５２で示されるアミノ酸配列があるＶＨドメインと、配列番号２１８で示されるアミノ酸配列があるＶＬドメインとを含んでなる、ヒトＩｇＧ４である、請求項６７に記載の方法、組成物または製品。
【請求項６９】
阻害剤が、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて１ｎＭ以下の親和力（ＫＤ）でヒトＧＭ−ＣＳＦＲα細胞外ドメインに結合する、請求項１〜６８のいずれか１項に記載の方法、組成物または製品。
【請求項７０】
阻害剤が、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて０．５ｎＭ以下の親和力（ＫＤ）でヒトＧＭ−ＣＳＦＲα細胞外ドメインに結合する、請求項６９に記載の方法、組成物または製品。
【請求項７１】
マブリリムマブを含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなる、患者においてＲＡを治療して、８５日間以内の１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下によって判定される、臨床上の便益を提供する方法であって、組成物は、皮下投与によって隔週１００ｍｇの用量で投与される、前記方法。
【請求項７２】
マブリリムマブを含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなる、患者においてＲＡを治療して、８５日間以内の少なくともＡＣＲ５０または少なくともＡＣＲ７０の改善によって判定される、臨床上の便益を提供する方法であって、組成物は、皮下投与によって隔週１００ｍｇの用量で投与される、前記方法。
【請求項７３】
臨床上の便益が４２日間以内に達成される、請求項７１または７２に記載の方法。
【請求項７４】
臨床上の便益が１４日間以内に達成される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
マブリリムマブの治療有効量を含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなる、２．６未満のＤＡＳ２８−ＣＲＰによって判定される、患者においてＲＡの寛解を誘導する方法であって、組成物は、皮下投与によって隔週１００ｍｇの用量で投与され、寛解開始は８５日間以内である、前記方法。
【請求項７６】
寛解開始が４２日間以内である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
寛解開始が１４日間以内である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
マブリリムマブを含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなる、ＨＡＱ−ＤＩによる判定でＲＡ患者の身体機能を改善する方法であって、組成物は皮下投与によって隔週１ｍｌ中の１００ｍｇの用量で投与され、ＨＡＱ−ＤＩ改善は１２週間以内に達成される、前記方法。
【請求項７９】
改善が患者のＨＡＱ−ＤＩスコアの少なくとも０．２５の低下である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
改善が６週間以内に達成される、請求項７８または７９に記載の方法。
【請求項８１】
患者が、１つまたは複数の追加的な疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）によってもまた治療される、請求項７１〜８０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８２】
追加的な薬剤がメトトレキサートである、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
患者がまた、１つまたは複数の鎮痛剤および／または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）および／またはステロイドで（経口および／または非経口）治療される、請求項７１〜８２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８４】
請求項７１〜８３のいずれか１項に記載の方法で使用するための、マブリリムマブを含んでなる組成物。
【請求項８５】
メトトレキサートと組み合わせて投与するためのものである、請求項８４に記載の使用するためのマブリリムマブを含んでなる組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療用抗体、マブリリムマブなどの阻害剤を投与することで、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子受容体αサブユニット（ＧＭ−ＣＳＦＲα）の生物学的効果を阻害することによる、関節リウマチの治療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
関節リウマチ（ＲＡ）は、工業化社会の人口のほぼ１％に影響を及ぼす、慢性の炎症性で破壊的な関節疾患である。女性は、男性よりも約３倍この影響を受けやすく、発症は、一般に４０〜６０才の間である。ＲＡは、滑膜の過形成と炎症、滑液内炎症、および周囲の骨と軟骨の進行性破壊を特徴とする。これは有痛性の病状であり、重度の身体障害を引き起こし得て、究極的に、日常的作業を行う個人の能力に影響を及ぼす。ＲＡの影響は、個人間で様々であるが、疾患は、非常に迅速に進行し得て、関節周囲の軟骨および骨の腫脹と損傷を引き起こす。あらゆる関節が影響を受けてもよいが、それは通常、手、足、および手首である。肺、心臓、および眼などの内臓器官もまた、影響を被り得る。
【０００３】
ＲＡの原因は、未知のままであるが、研究は、疾患の根本的な炎症過程のいくつかの側面を解明している。ＲＡは、Ｔ細胞が媒介する抗原特異的過程を通じて開始され、駆動されると考えられる。手短に述べると、感受性のある宿主中の未同定抗原の存在がＴ細胞応答を開始し、それがＴ細胞サイトカイン産生をもたらして、結果的に好中球、マクロファージ、およびＢ細胞をはじめとする炎症細胞を動員すると考えられる。
【０００４】
多数の炎症促進性および抗炎症性サイトカインが、リウマチ性関節中で産生される。疾患の進行、再活性化、およびサイレンシングは、関節内サイトカイン産生の動的変化を通じて媒介される。特に、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１は、ＲＡの発病において中心的役割を果たすと見なされている。
【０００５】
ＧＭ−ＣＳＦは、Ｉ型炎促進性サイトカインであり、好中球およびマクロファージの活性化、分化、および生存を通じて、ＲＡの発病に寄与すると考えられている。齧歯類モデルにおける研究は、ＲＡの発症および進行における、ＧＭ−ＣＳＦの中心的かつ必須の役割を示唆している［１、２、３、４、５］。例えば、マウスにおけるコラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）および単関節の関節炎モデルにおいて、マウス抗ＧＭ−ＣＳＦモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の投与は、疾患重症度を有意に改善した。ＣＩＡモデルにおいて、ｍＡｂ治療は、確立された疾患、組織病理の進行を治療して、関節ＩＬ−１およびＴＮＦ−αレベルを有意に低下させるのに有効であった。これに加えて、関節炎発症に先だつｍＡｂ治療は、ＣＩＡ疾患の重症度を低下させた［５、６］。国際公開第２００７／１１０６３１号パンフレットは、治療用抗体を使用するＧＭ−ＣＳＦＲαの阻害を通じた、新規ＲＡ治療法を提案した。
【０００６】
マブリリムマブ（ＣＡＭ−３００１）は、ＧＭ−ＣＳＦＲのαサブユニットを標的にする、ヒトモノクローナル抗体である。ＲＡがある３２人の被験者におけるマブリリムマブの第１相単回漸増静脈内投与試験は、適切な安全性および耐容性プロファイルと、中等度の疾患活動性がある患者における、急性期反応物質の正常化、および疾患活動性スコア２８関節評価（ＤＡＳ２８）の可能な低下などの生物学的活性の初期徴候とを示した［７］。
【０００７】
現行の薬剤によるＲＡ管理としては、特に鎮痛剤および非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）である対症療法と、病態修飾薬（ＤＭＡＲＤ）および生物製剤をはじめとする疾患重症度および進行を制限する治療法とが挙げられる。ＤＭＡＲＤを使用したＲＡの確立された管理としては、例えばメトトレキサート、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキンまたはレフルノミドなどの単一ＤＭＡＲＤの投与、およびそれらの併用が挙げられ、例えばメトトレキサートをスルファサラジンおよび／またはヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）と組み合わせてもよい。メトトレキサートは、代謝拮抗剤および抗葉酸剤であるが、ＲＡにおけるその効能は、Ｔ細胞活性化および接着分子（ＩＣＡＭ−１）発現の抑制に起因すると考えられる［８］。
【０００８】
ＲＡのための生物剤の臨床利用には、主にＴＮＦα阻害剤が関与する。これらとしては、インフリキシマブ（レミケード（登録商標））、エタネルセプト（エンブレル（登録商標））、アダリムマブ（ヒュミラ（登録商標））、セルトリズマブペゴル（シムジア（登録商標））、およびゴリムマブ（シンポニー（登録商標））が挙げられる。インフリキシマブが静脈輸液により投与されるのに対し、その他の４種の薬剤は患者によって自宅で皮下注射される。抗インターロイキン１阻害剤であるキネレット（登録商標）もまた、開発されている。より最近では、抗Ｂリンパ球薬剤リツキシマブ（マブセラ（登録商標）またはリツキサン（登録商標））が、抗ＴＮＦ治療法が効かなかったＲＡ患者を治療するために、認可されている。マブセラ（登録商標）は、１４日間間隔の２回の輸液の初期治療として投与される。最高６ヶ月間持続する改善を経験した患者には、反復輸液を投与し得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
これらの進歩にもかかわらず、ＲＡは、顕著な満たされていない医学的必要性に相当する。初期診断および治療は長期予後を改善し得るが、目下ＲＡの治療法はない。疾患の重症度と進行を緩和して患者の生活の質を改善するために、改善された治療法が必要である。
【００１０】
Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．［９］による最近のレビューは、ＲＡ治療のための次世代モノクローナル抗体の開発を考察する。
【００１１】
ＲＡがいかに良く管理されているかの１つの尺度は、疾患活動性スコア（ＤＡＳ）である［１０］。ＤＡＳは、ＲＡの身体的症状をはじめとする疾患活動性の様々な検証された尺度に基づいて、開業医によって計算される。ＤＡＳの低下は、疾患重症度の低下を反映する。２．６未満のＤＡＳは、疾患寛解を示す。２．６〜３．２のＤＡＳは、低い疾患活動性を示す。３．２を超えるＤＡＳは疾患活動性の増大を示し、このレベルでは、患者の治療法が見直されて、治療法の変更が正当化されるかどうか判断されることもある。５．１を超えるＤＡＳは、重度の疾患活動性を示す。ＤＡＳ計算のバリエーションとしては、患者における異なる数の関節の評価、および異なる血液成分のモニタリングが挙げられる。ＤＡＳ２８は、その中で体内の２８の関節が評価されて、圧痛関節数と腫脹関節数が判定される、疾患活動性スコアである［１１］。ＤＡＳ２８計算が、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）でなく、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の測定を含む場合、それはＤＡＳ２８−ＣＲＰと称される［１２］、［１３］。ＣＲＰは、ＥＳＲに比べて、炎症のより直接的な測定と考えられ、短期変化に対してより高感度である［１４］。ＣＲＰ産生は、ＲＡの放射線学的進行に付随して［１５］、ＲＡ疾患活動性を測定する上で、少なくともＥＳＲと同程度に妥当であると見なされる［１６、１７］。
【００１２】
米国リウマチ学会（ＡＣＲ）は、ＲＡを分類する基準の組を提案した。一般に使用される基準は、ＡＣＲの１９８７年改訂基準である［１８］。ＡＣＲ基準に従ったＲＡの診断は、患者が圧痛または腫脹関節数、硬直、疼痛、Ｘ線検査徴候、および血清リウマチ因子の測定などの列挙される基準の最小数を満たすことを要する。ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、およびＡＣＲ７０は、特に臨床試験でＲＡ治療法の効能を表すために、一般に使用される尺度である。ＡＣＲ２０は、測定されたＡＣＲ基準の２０％の改善に相当する。同様に、ＡＣＲ５０は測定されたＡＣＲ基準の５０％改善に相当し、ＡＣＲ７０は測定されたＡＣＲ基準の７０％改善に相当する。
【００１３】
個々の患者が報告するＲＡ患者における身体障害の尺度は、健康評価質問票を用いた機能障害指数（ＨＡＱ−ＤＩ）である。ＨＡＱ−ＤＩスコアは、患者が活動を行う際に経験する困難さのレベルをはじめとする、患者が報告する日常的作業を実施する能力の観点から、身体機能を表す。日常的活動を実行する患者の能力を記録することによって、ＨＡＱ−ＤＩスコアは、彼らの生活の質の１つの尺度として使用し得る。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、ＤＡＳ２８−ＣＲＰの低下と、ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、およびＡＣＲ７０による判定で、臨床上の便益を得る患者数の増大をはじめとする、臨床上の便益を提供するＲＡの治療法に関する。さらに本発明は、ＨＡＱ−ＤＩによる測定でＲＡ患者の身体機能を改善する方法と組成物に関する。
【００１５】
本明細書では、抗ＧＭＣＳＦＲα抗体マブリリムマブをＲＡ患者に投与した第２相臨床試験からの有意な肯定的結果が、初めて報告される。
【００１６】
この二重盲検試験では、ＤＡＳ２８−ＣＲＰに準じて少なくとも中等度の疾患活動性があり、安定用量のメトトレキサートによる治療を既に受けているＲＡ患者が、様々な皮下用量のマブリリムマブまたはプラセボについて無作為化された。１００ｍｇ用量のマブリリムマブで治療された群では、ＤＡＳ２８−ＣＲＰで１．２を超える低下を達成した患者の比率は、対照群の約２倍であった。ＡＣＲスコア、ならびにそれらの個々の構成要素もまた、同様規模の有意な改善を示した。ヨーロッパの臨床試験における最高用量群（１００ｍｇ）では、８５日目に、プラセボ群の６．７％の患者と比較して、２３．１％の患者でＤＡＳ２８寛解基準が満たされた。合算したヨーロッパおよび日本の臨床試験では、１００ｍｇ用量では、８５日目に、プラセボを投与した患者の７．６％と比較して、２３．４％の患者でＤＡ２８寛解基準が満たされた。この治験では、処置期間を通じて、または１２週間の追跡調査期間中に、呼吸機能パラメータの変化、日和見感染、重篤な過敏性反応、または検査所見の異常は観察されず、優れた安全性プロファイルが示された。
【００１７】
これはＲＡ治療におけるＧＭ−ＣＳＦＲαの標的化が、特により高用量のコホートにおいて、迅速かつ著明な奏効開始がある、可能な新しい治療法の選択肢を提供し得ることを示す、最初の研究である。
【００１８】
マブリリムマブは、ＧＭ−ＣＳＦＲαを標的にすることで、マクロファージの活性化、分化、および生存を調節するようにデザインされたヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。これはＧＭ−ＣＳＦＲαの生物学的活性の強力な中和剤であり、理論による拘束は望まないが、ＲＡ患者の滑膜関節内の白血球上ＧＭ−ＣＳＦＲαに結合することで治療効果を発揮して、細胞生存および活性化の低下をもたらすかもしれない。国際公開第２００７／１１０６３１号パンフレットは、高い効力でＧＭ−ＣＳＦＲαの生物学的活性を中和する能力を共有する、マブリリムマブとその変異体の単離および特性評価を報告する。これらの抗体の機能特性は、少なくともある程度は、配列番号２０６で示されるヒトＧＭ−ＣＳＦＲαの位置２２６〜２３０のＴｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎモチーフに結合して、それによってＧＭ−ＣＳＦＲαとそのリガンドＧＭ−ＣＳＦ間の結合を阻害することに帰せられると思われる。
【００１９】
したがって第１の態様では、本発明は、ＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤の治療有効量を含んでなる組成物を患者に投与するステップを含んでなる、患者においてＲＡを治療して、１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下、および／または１９８７年ＡＣＲ基準による判定で治効の少なくとも２０％の改善（ＡＣＲ２０）によって判定される、臨床上の便益を提供する方法である。
【００２０】
本発明によるさらなる方法は、ＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤の治療有効量を含んでなる組成物を患者に投与するステップを含んでなる、ＨＡＱ−ＤＩによる判定で、ＲＡ患者の身体機能を改善する方法である。
【００２１】
好ましくは、阻害剤はマブリリムマブである。マブリリムマブの変異体もまた使用してもよく、本明細書に記載される。本発明は、ＧＭ−ＣＳＦＲαの細胞外ドメインへの結合、ＧＭ−ＣＳＦのＧＭ−ＣＳＦＲαへの結合阻害、配列番号２０６で示されるヒトＧＭ−ＣＳＦＲαの位置２２６〜２３０におけるＴｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎモチーフへの結合、および／または表面プラズモン共鳴アッセイにおける５ｎＭ以下の親和力（ＫＤ）でのヒトＧＭ−ＣＳＦＲα細胞外ドメインへの結合のいずれか１つまたは複数などのマブリリムマブの機能特性を共有する、抗体分子またはその他の阻害剤の使用を包含する。
【００２２】
第２の態様では、本発明は、患者において関節リウマチを治療して、１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下および／または１９８７年ＡＣＲ基準による判定で治効の少なくとも２０％の改善（ＡＣＲ２０）によって判定される、臨床上の便益を提供する方法で使用するための、および／またはＨＡＱ−ＤＩによる測定でＲＡ患者の身体機能を改善する方法で使用するための、ＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤を含んでなる組成物である。
【００２３】
第３の態様では、本発明は、
（ｉ）容器内に包装された、ＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤を含んでなる組成物と、
（ｉｉ）患者において関節リウマチを治療して、１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下および／または１９８７年ＡＣＲ基準による判定で治効の少なくとも２０％の改善（ＡＣＲ２０）によって判定される臨床上の便益を提供する方法で阻害剤を使用するための、および／またはＨＡＱ−ＤＩによる測定でＲＡ患者の身体機能を改善する方法で阻害剤を使用するための使用説明が記載された、添付文書またはラベルと
を含んでなる製品またはキットであり、方法は、阻害剤の治療有効量を患者に投与するステップを含んでなる。
【００２４】
このような製品またはキットでは、構成要素は、一般に無菌であり、密封バイアルまたはその他の容器内にある。
【００２５】
治療される患者は、１９８７年ＡＣＲ基準によって判定されるＲＡを有してもよい。治療に先だって患者は、リウマチ因子（ＲＦ）および／または抗環状シトルリン化ペプチド（ＣＣＰ）ＩｇＧ抗体について、検査で陽性であってもよい。ＲＦ陽性および抗ＣＣＰ抗体陽性状態は、ＲＡ診断を裏付ける。患者は、例えば５〜１０年間など、少なくとも５年または少なくとも７年の期間にわたり、ＲＡを有してもよい。
【００２６】
治療される患者は、ＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤による治療開始前の測定で、少なくとも３．２または少なくとも５．１の基線ＤＡＳ２８−ＣＲＰを有してもよい。本発明による阻害剤は、治療前の基線ＤＡＳ２８−ＣＲＰが５．１を超える患者をはじめとする、重症ＲＡ患者においてさえも、効果的であることが示されている。
【００２７】
治療される患者には、本発明のＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤による治療と組み合わせて、メトトレキサートなどのＤＭＡＲＤの安定用量を投与してもよい。好ましくは、治療される患者は、本発明による阻害剤での治療開始に先だって、例えばメトトレキサートなどのＤＭＡＲＤの安定用量を少なくとも４週間投与される。メトトレキサート投与は、好ましくは週あたり７．５〜２５ｍｇである。
【００２８】
好ましくは、本発明による阻害剤で治療される患者は、呼吸器疾患を有しない。患者は、ＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤の投与前に試験して、例えば間質性肺炎などの医学的な意義を持つ呼吸器疾患を有しないことを確認してもよい。呼吸器疾患の試験法としては、胸部Ｘ線と、スパイロメトリーおよび一酸化炭素肺拡散能力（ＤＬＣＯ）による肺機能評価とが挙げられる。患者はまた、好ましくは、Ｃ型肝炎または慢性活動性Ｂ型肝炎感染症などの臨床的な意義を持つ慢性または再発性感染症を有しない。患者は、本発明による治療に先だって、このような感染症について試験してもよい。
【００２９】
本明細書中で「患者」に関して治療および臨床上の便益が記述される場合、これは、一群の患者の治療を含み得ることが理解されるであろう。患者は、好ましくは成人である。患者は、例えば１８〜８０才であってもよい。
【００３０】
本明細書に記載される方法において達成される臨床上の便益は、以下の成果のいずれか１つまたは複数を含んでなってもよい。
【００３１】
臨床上の便益は、１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下であってもよい。ＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下は、治療される患者の少なくとも４０％、少なくとも５０％または少なくとも６０％で達成されてもよい。臨床上の便益は、阻害剤で治療されない対照患者と比較して、１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下を達成した患者の比率の増大を含んでなってもよい。
【００３２】
臨床上の便益は、ＲＡの寛解を含んでなってもよい。典型的に、寛解は、２．６未満のＤＡＳ２８−ＣＲＰによって規定される。寛解は、少なくとも１０％の患者、または少なくとも２０％の患者で達成されてもよい。本明細書に記載されるように治療された患者では、寛解開始までの時間は、本発明によるＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤で治療されない患者と比較して短縮されてもよい。寛解までの時間は、およそ５０％短縮されてもよい。
【００３３】
臨床上の便益は、１９８７年ＡＣＲ基準による判定で少なくとも２０％、少なくとも５０％または少なくとも７０％の治効の改善であってもよく、すなわち臨床上の便益は、ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０またはＡＣＲ７０をそれぞれ達成してもよい。好ましくは、臨床上の便益は、少なくとも４０、５０、６０または７０％の患者におけるＡＣＲ２０の達成を含んでなる。それは患者の少なくとも２０％または少なくとも３０％におけるＡＣＲ５０達成を含んでなってもよい。それは患者の少なくとも５％、１０％または１５％におけるＡＣＲ７０達成を含んでなってもよい。
【００３４】
ＲＡ患者にとって特に価値がある臨床上の便益形態は、日常的活動を実行する彼らの能力の改善である。本発明の方法は、ＨＡＱ−ＤＩとして知られている健康評価質問票によって測定される、患者の自己評価身体障害の改善を含んでなってもよい。方法は、ＲＡ患者に臨床上の便益を提供することを含んでなり、臨床上の便益は、ＨＡＱ−ＤＩによる判定でＲＡ患者の身体機能を改善することを含んでなり、このような方法で使用される組成物およびキットは、全て本発明の態様である。臨床上の便益は、ＨＡＱ−ＤＩによる測定でＲＡ患者の身体機能を改善することを含んでなってもよい。好ましくは、ＨＡＱ−ＤＩの統計的に有意な改善は、本発明による治療開始の１２、１０、８または６週間以内、より好ましくは４週間以内、またはより好ましくは２週間以内に達成される。改善は、ＨＡＱ−ＤＩの少なくとも０．２５の改善、すなわち患者のＨＡＱ−ＤＩスコアの０．２５以上の低下であってもよい。好ましくは、改善は、ＨＡＱ−ＤＩスコアの少なくとも０．３０、０．４０または０．４５の改善である。改善は、本発明による阻害剤での治療に先だつ患者の基線平均ＨＡＱ−ＤＩスコアを参照して、一般に測定される。一群の患者が治療される場合、改善は、治療された患者の少なくとも５０％、少なくとも６０％または少なくとも７０％で観察されてもよい。
【００３５】
臨床上の便益は、本発明による阻害剤で治療されない患者と比較して、治療された患者において、より早期に達成されてもよい。例えば、メトトレキサートと組み合わせて、本発明による阻害剤で治療された患者は、メトトレキサートのみで治療された患者よりも、臨床上の便益をより早期に達成してもよい。奏効開始までの時間、または臨床上の便益が達成される前の処置期間は、阻害剤で治療されない患者と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％短縮されてもよい。好ましくは、臨床上の便益は、８５日間以内に達成される。したがって例えば、ＤＡＳ２８−ＣＲＰは、８５日間以内に１．２を超えて低下してもよい。より好ましくは、奏効開始は２週間以内に起きる。したがって、臨床上の便益は、阻害剤での治療の１４日間以内に達成されてもよい。
【００３６】
本明細書で提示される臨床試験からのデータは、本発明による阻害剤が、早期の治療作用の開始と関係することを示す。速いＤＡＳ２８−ＣＲＰ奏効開始は、早くも２週間で観察され、２９日目には差が有意になった。疼痛の改善は８日目までに観察されて、腫脹および圧痛関節の改善は２９日目までに観察された。
【００３７】
阻害剤での治療過程中に、および／またはそれに続いて、患者をモニターして、例えばＤＡＳ２８−ＣＲＰの測定によって臨床上の便益レベルを評価し、および／またはＡＣＲ基準および／またはＨＡＱ−ＤＩ測定によって臨床上の便益を判定してもよい。方法は、本明細書の他の箇所で考察されるように、例えばＤＡＳ２８−ＣＲＰの特定の低下、および／またはＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０またはＡＣＲ７０の達成、および／またはＨＡＱ−ＤＩスコアの改善など、臨床上の便益の達成を判定することを含んでなってもよい。
【００３８】
臨床上の便益は、本発明による阻害剤で治療されない患者と比較して、改善されてもよい。例えば、方法は、例えばメトトレキサートなどのＤＭＡＲＤのような１つまたは複数の追加的な治療薬と組み合わされた阻害剤を投与して患者を治療して、阻害剤でなく例えばＤＭＡＲＤなどのもう一方の治療薬または作用薬を投与された患者と比較して、改善された臨床上の便益を提供することを含んでなってもよい。改善された臨床上の便益は、阻害剤で治療された患者のより大きな割合であってもよい。好ましくは、（例えばメトトレキサートなどのＤＭＡＲＤと組み合わされた）本明細書に記載される阻害剤で治療された患者は、阻害剤で治療されない患者（例えばＤＭＡＲＤのみを投与された患者）と比較して、少なくとも２０％より多くが臨床上の便益を達成する。
【００３９】
本明細書に記載される方法は、患者に阻害剤を治療有効量で投与することを含んでなってもよい。阻害剤は、３０〜１５０ｍｇ、好ましくは９０ｍｇ〜１１０ｍｇ、より好ましくは１００ｍｇの用量で投与されてもよい。これらの投与は、好ましくは皮下投与であり、それは好ましくは１ｍｌの体積である。好ましくは、用量は、１４日間隔で（すなわち１日目、１５日目、２９日目など）投与される。代案としては、用量は、２８日間隔で投与されてもよい。可能な投与量および投与のさらなる詳細は、本明細書の他の箇所に記載される。方法は、好ましくは１４日間隔の投与によって、少なくとも８５日間の持続期間にわたり、阻害剤を患者に投与することを含んでなってもよいが、治療は、好ましくは８５日間を超えて継続され、患者を適切にモニターするという条件で、治療が無期限に継続されてもよい。好ましくは臨床上の便益は、治療の８５日目までに、より好ましくは１４日目までに達成される。好ましくは臨床上の便益は、阻害剤での治療の単回投与のみの後に、または２回の投与のみの後に達成される。
【００４０】
本明細書で報告される試験データによって示されるように、阻害剤での治療を通じて得られた臨床上の便益は、少なくとも８５日間の臨床試験の治療過程の終わりまで維持される。したがって本発明によって臨床上の便益が達成された場合、その便益は、阻害剤での継続的治療期間にわたり維持されてもよく、例えば本発明による治療結果は、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１年間以上の期間にわたり、阻害剤での治療を継続することで、患者において維持されてもよい。
【００４１】
阻害剤は、あらゆる適切な方法によって投与されてもよい。典型的な抗体投与法は、皮下または静脈内送達である。好ましくは、阻害剤は、皮下または静脈内投与のために調合される。
【００４２】
ＲＡの治療法は、１つまたは複数の追加的な治療薬と組み合わされた、本発明による阻害剤を含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなってもよい。追加的な治療薬は、以下のいずれか１つまたは複数を含んでなってもよい：鎮痛剤；ＮＳＡＩＤ；ステロイド；例えばメトトレキサート、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）、レフルノミドなどの「ＲＡ治療」のためのＤＭＡＲＤ。生物学的ＤＭＡＲＤとしては、例えばインフリキシマブ（レミケード（登録商標））；エタネルセプト（エンブレル（登録商標））、アダリムマブ（ヒュミラ（登録商標））、セルトリズマブペゴル（シムジア（登録商標））、ゴリムマブ（シンポニー（登録商標））などのＴＮＦα阻害剤と、例えばキネレット（登録商標）などのＩＬ−１阻害剤と、例えばリツキシマブ、アバタセプト（ヒュミラ（登録商標））またはトシリズマブ（ｔｏｃｌｉｚｕｍａｂ）などの抗Ｂリンパ球薬剤とが挙げられる。
【００４３】
方法は、好ましくは、メトトレキサートと組み合わされた阻害剤を患者に投与することを含んでなる。メトトレキサートは、好ましくは週あたり７．５〜２５ｍｇの用量で投与される。
【００４４】
以下の番号付けされた条項が、本発明の態様に相当する。
【００４５】
１．患者において関節リウマチを治療して、１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下および／または１９８７年米国リウマチ学会（ＡＣＲ）基準による判定で治効の少なくとも２０％の改善（ＡＣＲ２０）によって判定される、臨床上の便益を提供する方法であって、
方法は、ＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤の治療有効量を含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなり、
阻害剤は、配列番号２０６のヒトＧＭ−ＣＳＦＲα配列の位置２２６〜２３０においてＴｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎモチーフと任意選択的に結合して、ＧＭ−ＣＳＦのＧＭ−ＣＳＦＲαへの結合を阻害し、阻害剤は、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて５ｎＭ以下の親和力（ＫＤ）で、ヒトＧＭ−ＣＳＦＲαの細胞外ドメインと任意選択的に結合する。
【００４６】
２．患者において関節リウマチを治療して、１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下および／または１９８７年ＡＣＲ基準による判定で治効の少なくとも２０％の改善（ＡＣＲ２０）によって判定される、臨床上の便益を提供する方法で使用するためのＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤を含んでなる組成物であって、阻害剤は、配列番号２０６のヒトＧＭ−ＣＳＦＲα配列の位置２２６〜２３０においてＴｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎモチーフと任意選択的に結合して、ＧＭ−ＣＳＦのＧＭ−ＣＳＦＲαへの結合を阻害し、阻害剤は、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて５ｎＭ以下の親和力（ＫＤ）で、ヒトＧＭ−ＣＳＦＲαの細胞外ドメインと任意選択的に結合する。
【００４７】
３．（ｉ）容器内に包装されたＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤を含んでなる組成物と；
（ｉｉ）患者において関節リウマチを治療して、１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下および／または１９８７年ＡＣＲ基準による判定で治効の少なくとも２０％の改善（ＡＣＲ２０）によって判定される、臨床上の便益を提供する方法で阻害剤を使用するための使用説明が記載された、添付文書またはラベルとを含んでなる製品であって、
阻害剤は、配列番号２０６のヒトＧＭ−ＣＳＦＲα配列の位置２２６〜２３０においてＴｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎモチーフと任意選択的に結合して、ＧＭ−ＣＳＦのＧＭ−ＣＳＦＲαへの結合を阻害し、阻害剤は、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて５ｎＭ以下の親和力（ＫＤ）で、ヒトＧＭ−ＣＳＦＲαの細胞外ドメインと任意選択的に結合し、
方法は、阻害剤の治療有効量を患者に投与するステップを含んでなる。
【００４８】
４．臨床上の便益が１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下を含んでなる、条項１に記載の方法、条項２に記載の組成物または条項３に記載の製品。
【００４９】
５．方法が、治療に続いて患者をモニターして、ＤＡＳ２８−ＣＲＰを測定し、治療が１．２を超えてＤＡＳ２８−ＣＲＰを低下させたと判定することをさらに含んでなる、条項４に記載の方法、組成物または製品。
【００５０】
６．臨床上の便益が、関節リウマチの寛解、または寛解開始までの時間の短縮を含んでなる、先行する条項のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００５１】
７．臨床上の便益が、患者の少なくとも１０％または少なくとも２０％における関節リウマチの寛解を含んでなる、条項６に記載の方法、組成物または製品。
【００５２】
８．方法が、治療に続いて患者をモニターし、関節リウマチの寛解を観察することをさらに含んでなる、条項７に記載の方法、組成物または製品。
【００５３】
９．臨床上の便益が、１９８７年ＡＣＲ基準による判定で、治効の少なくとも２０％の改善（ＡＣＲ２０）を含んでなる、先行する条項のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００５４】
１０．臨床上の便益が、１９８７年ＡＣＲ基準による判定で、治効の少なくとも５０％の改善（ＡＣＲ５０）を含んでなる、条項９に記載の方法、組成物または製品。
【００５５】
１１．臨床上の便益が、１９８７年ＡＣＲ基準による判定で、治効の少なくとも７０％の改善（ＡＣＲ７０）を含んでなる、条項１０に記載の方法、組成物または製品。
【００５６】
１２．治療に続いて患者をモニターし、１９８７年ＡＣＲ基準に従って治効を評価して、ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０またはＡＣＲ７０の達成を判定することをさらに含んでなる、条項９〜１１のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００５７】
１３．臨床上の便益が、患者の少なくとも２０％または少なくとも３０％におけるＡＣＲ５０の達成を含んでなる、条項９〜１２のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００５８】
１４．臨床上の便益が、患者の少なくとも５％、少なくとも１０％または少なくとも１５％におけるＡＣＲ７０の達成を含んでなる、条項１３に記載の方法、組成物または製品。
【００５９】
１５．臨床上の便益が、８５日間以内に達成される、先行する条項のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００６０】
１６．方法が、ＨＡＱ−ＤＩによる判定で、関節リウマチ患者の身体機能を改善することをさらに含んでなる、先行する条項のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００６１】
１７．ＨＡＱ−ＤＩによる判定で、関節リウマチ患者の身体機能を改善する方法であって、
方法は、ＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤の治療有効量を含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなり、
阻害剤は、配列番号２０６のヒトＧＭ−ＣＳＦＲα配列の位置２２６〜２３０においてＴｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎモチーフと結合して、ＧＭ−ＣＳＦのＧＭ−ＣＳＦＲαへの結合を阻害し、阻害剤は、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて５ｎＭ以下の親和力（ＫＤ）で、ヒトＧＭ−ＣＳＦＲαの細胞外ドメインと結合する。
【００６２】
１８．ＨＡＱ−ＤＩによる判定でＲＡ患者の身体機能を改善する方法で利用するためのＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤を含んでなる組成物であって、阻害剤は、配列番号２０６のヒトＧＭ−ＣＳＦＲα配列の位置２２６〜２３０においてＴｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎモチーフと結合して、ＧＭ−ＣＳＦのＧＭ−ＣＳＦＲαへの結合を阻害し、阻害剤は、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて５ｎＭ以下の親和力（ＫＤ）で、ヒトＧＭ−ＣＳＦＲαの細胞外ドメインと結合する。
【００６３】
１９．（ｉ）容器内に包装されたＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤を含んでなる組成物と；
（ｉｉ）ＨＡＱ−ＤＩによる判定でＲＡ患者の身体機能を改善する方法で阻害剤を使用するための使用説明が記載された、添付文書またはラベルと
を含んでなる製品であって、
阻害剤は、配列番号２０６のヒトＧＭ−ＣＳＦＲα配列の位置２２６〜２３０においてＴｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎモチーフに結合して、ＧＭ−ＣＳＦのＧＭ−ＣＳＦＲαへの結合を阻害し、阻害剤は、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて５ｎＭ以下の親和力（ＫＤ）でヒトＧＭ−ＣＳＦＲα細胞外ドメインに結合し、
方法は、阻害剤の治療有効量を患者に投与するステップを含んでなる。
【００６４】
２０．方法が、ＨＡＱ−ＤＩスコアを少なくとも０．２５改善することを含んでなる、条項１６〜１９のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００６５】
２１．方法が、治療に続いて患者をモニターし、ＨＡＱ−ＤＩを測定して、患者のＨＡＱ−ＤＩスコアが少なくとも０．２５改善されたことを判定することを含んでなる、条項２０に記載の方法、組成物または製品。
【００６６】
２２．ＨＡＱ−ＤＩの改善が６週間以内に達成される、条項１６〜２１のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００６７】
２３．方法が、阻害剤を９０〜１１０ｍｇの皮下用量で患者に投与することを含んでなる、先行する条項のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００６８】
２４．用量が１００ｍｇである、条項２３に記載の方法、組成物または製品。
【００６９】
２５．組成物が皮下投与のために調合される、先行する条項のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００７０】
２６．方法が、１つまたは複数の追加的な治療薬と組み合わせて、組成物を患者に投与することを含んでなる、先行する条項のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００７１】
２７．１つまたは複数の追加的な治療薬が、１つまたは複数の疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を含んでなる、条項２６に記載の方法、組成物または製品。
【００７２】
２８．方法が、メトトレキサートと組み合わされた組成物を患者に投与することを含んでなる、条項２７に記載の方法、組成物または製品。
【００７３】
２９．方法が、メトトレキサートを週あたり７．５〜２５ｍｇの用量で投与することを含んでなる、条項２８に記載の方法、組成物または製品。
【００７４】
３０．関節リウマチ患者が、ＧＭ−ＣＳＦＲα阻害剤の投与に先だって、メトトレキサートの安定用量を少なくとも４週間にわたり投与された者であり、方法が、メトトレキサートの継続投与と組み合わされた組成物を患者に投与することを含んでなる、先行する条項のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００７５】
３１．メトトレキサートの用量が週あたり７．５〜２５ｍｇである、条項３０に記載の方法、組成物または製品。
【００７６】
３２．患者が、治療に先だって少なくとも３．２の基線ＤＡＳ２８−ＣＲＰを有する、先行する条項のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００７７】
３３．患者が、治療に先だって５．１を超える基線ＤＡＳ２８−ＣＲＰを有する、条項３２に記載の方法、組成物または製品。
【００７８】
３４．患者が、治療に先だって、リウマチ因子および／または抗環状シトルリン化ペプチド（ＣＣＰ）ＩｇＧ抗体について検査で陽性である、先行する条項のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００７９】
３５．方法が、少なくとも８５日間の期間にわたり、隔週間隔で阻害剤の治療有効量を患者に投与することを含んでなる、先行する条項のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００８０】
３６．患者が、医学的な意義を持つ呼吸器疾患を有しない者である、先行する条項のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００８１】
３７．阻害剤が抗体分子を含んでなる、先行する条項のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００８２】
３８．抗体分子が、相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の組と、フレームワークとを含んでなる抗体ＶＨドメインを含んでなり、相補性決定領域の組が、アミノ酸配列番号３または配列番号１７３のＣＤＲ１と、アミノ酸配列番号４のＣＤＲ２と、配列番号５；配列番号１５；配列番号２５；配列番号３５；配列番号４５；配列番号５５；配列番号６５；配列番号７５；配列番号８５；配列番号９５；配列番号１０５；配列番号１１５；配列番号１２５；配列番号１３５；配列番号１４５；配列番号１５５；配列番号１６５；配列番号１７５；配列番号１８５；および配列番号１９５からなる群から選択されるアミノ酸配列のＣＤＲ３を含んでなり；あるいは１つまたは２つのアミノ酸置換があるＣＤＲ配列の組を含んでなる、条項３７に記載の方法、組成物または製品。
【００８３】
３９．抗体分子が、相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、フレームワークとを含んでなる抗体ＶＨドメインを含んでなり、ＶＨ  ＣＤＲ３中のＫａｂａｔ残基Ｈ９７がＳである、条項３７または３８に記載の方法、組成物または製品。
【００８４】
４０．ＶＨ  ＣＤＲ３が、Ｋａｂａｔ残基Ｈ９５におけるＶ、Ｎ、ＡまたはＬ；Ｋａｂａｔ残基Ｈ９９におけるＳ、Ｆ、Ｈ、Ｐ、ＴまたはＷ；Ｋａｂａｔ残基Ｈ１００ＢにおけるＡ、Ｔ、Ｐ、Ｓ、ＶまたはＨの１つまたは複数をさらに含んでなる、条項３９に記載の方法、組成物または製品。
【００８５】
４１．Ｋａｂａｔ残基Ｈ９５がＶである、条項４０に記載の方法、組成物または製品。
【００８６】
４２．Ｋａｂａｔ残基Ｈ９９がＳである、条項４０または４１に記載の方法、組成物または製品。
【００８７】
４３．Ｋａｂａｔ残基Ｈ１００ＢがＡまたはＴである、条項３７〜４２のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００８８】
４４．ＶＨ  ＣＤＲ３が、配列番号５、配列番号１５、配列番号３５、配列番号４５、配列番号５５、配列番号６５、配列番号７５、配列番号８５、配列番号９５、配列番号１０５、配列番号１１５、配列番号１２５、配列番号１３５、配列番号１４５、配列番号１５５、配列番号１６５、配列番号１７５、配列番号１８５、および配列番号１９５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、条項４０に記載の方法、組成物または製品。
【００８９】
４５．ＶＨ  ＣＤＲ１中のＫａｂａｔ残基Ｈ３４がＩである、条項３９〜４４のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００９０】
４６．ＶＨ  ＣＤＲ１がアミノ酸配列番号３を有する、条項３７〜４５のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００９１】
４７．ＶＨ  ＣＤＲ２が、Ｋａｂａｔ残基Ｈ５４におけるＥおよび／またはＫａｂａｔ残基Ｈ５７におけるＩを含んでなる、条項３９〜４６のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００９２】
４８．ＶＨ  ＣＤＲ２がアミノ酸配列番号４を有する、条項３９〜４７のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００９３】
４９．ＶＨ中のＫａｂａｔ残基Ｈ１７がＳである、条項３９〜４８のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００９４】
５０．相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、フレームワークとを含んでなる抗体ＶＬドメインを含んでなる、条項３９〜４９のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００９５】
５１．ＶＬ  ＣＤＲ３が、Ｋａｂａｔ残基Ｌ９０におけるＳ、ＴまたはＭ；Ｋａｂａｔ残基Ｌ９２におけるＤ、Ｅ、Ｑ、Ｓ、ＭまたはＴ；Ｋａｂａｔ残基Ｌ９６におけるＳ、Ｐ、ＩまたはＶの１つまたは複数を含んでなる、条項５０に記載の方法、組成物または製品。
【００９６】
５２．Ｋａｂａｔ残基Ｌ９０がＳである、条項５１に記載の方法、組成物または製品。
【００９７】
５３．Ｋａｂａｔ残基Ｌ９２がＤまたはＥである、条項５１または５２に記載の方法、組成物または製品。
【００９８】
５４．Ｋａｂａｔ残基Ｈ９５ＡがＳである、条項５１〜５３のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【００９９】
５５．Ｋａｂａｔ残基Ｌ９６がＳである、条項５１〜５３のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【０１００】
５６．ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号１０、配列番号２０、配列番号４０、配列番号５０、配列番号６０、配列番号７０、配列番号８０、配列番号９０、配列番号１００、配列番号１１０、配列番号１２０、配列番号１３０、配列番号１４０、配列番号１５０、配列番号１６０、配列番号１７０、配列番号１８０、配列番号１９０、および配列番号２００からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、条項５０または条項５５に記載の方法、組成物または製品。
【０１０１】
５７．ＶＬ  ＣＤＲ１が、Ｋａｂａｔ残基２７ＡにおけるＳ；Ｋａｂａｔ残基２７ＢにおけるＮ；Ｋａｂａｔ残基２７ＣにおけるＩ；Ｋａｂａｔ残基３２におけるＤの１つまたは複数を含んでなる、条項５０〜５６のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【０１０２】
５８．ＶＬ  ＣＤＲ１がアミノ酸配列番号８を有する、条項５０〜５７のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【０１０３】
５９．ＶＬ  ＣＤＲ２が、Ｋａｂａｔ残基５１におけるＮ；Ｋａｂａｔ残基５２におけるＮ；Ｋａｂａｔ残基５３におけるＫの１つまたは複数を含んでなる、条項５０〜５８のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【０１０４】
６０．ＶＬ  ＣＤＲ２がアミノ酸配列番号９を有する、条項５０〜５９のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【０１０５】
６１．その中でＫａｂａｔ残基Ｈ９４がＩである抗体ＶＨドメインを含んでなる、条項３７〜６０のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【０１０６】
６２．抗体分子が、以下から選択されるアミノ酸配列があるＶＨドメインおよびＶＬドメインを有する抗体分子と、ヒトＧＭ−ＣＳＦＲαの細胞外ドメインへの結合について競合する、ヒトまたはヒト化抗体分子を含んでなる、条項３７〜６１のいずれかに記載の方法、組成物または製品：
ＶＨドメイン配列番号２およびＶＬドメイン配列番号２０８；
ＶＨドメイン配列番号１２およびＶＬドメイン配列番号２１０；
ＶＨドメイン配列番号２２およびＶＬドメイン配列番号２１２；
ＶＨドメイン配列番号３２およびＶＬドメイン配列番号２１４；
ＶＨドメイン配列番号４２およびＶＬドメイン配列番号２１６；
ＶＨドメイン配列番号５２およびＶＬドメイン配列番号２１８；
ＶＨドメイン配列番号６２およびＶＬドメイン配列番号２２０；
ＶＨドメイン配列番号７２およびＶＬドメイン配列番号２２２；
ＶＨドメイン配列番号８２およびＶＬドメイン配列番号２２４；
ＶＨドメイン配列番号９２およびＶＬドメイン配列番号２２６；
ＶＨドメイン配列番号１０２およびＶＬドメイン配列番号２２８；
ＶＨドメイン配列番号１１２およびＶＬドメイン配列番号２３０；
ＶＨドメイン配列番号１２２およびＶＬドメイン配列番号２３２；
ＶＨドメイン配列番号１３２およびＶＬドメイン配列番号２３４；
ＶＨドメイン配列番号１４２およびＶＬドメイン配列番号２３６；
ＶＨドメイン配列番号１５２およびＶＬドメイン配列番号２３８；
ＶＨドメイン配列番号１６２およびＶＬドメイン配列番号２４０；
ＶＨドメイン配列番号１７２およびＶＬドメイン配列番号２４２；
ＶＨドメイン配列番号１８２およびＶＬドメイン配列番号２４４；
またはＶＨドメイン配列番号１９２およびＶＬドメイン配列番号２４６。
【０１０７】
６３．抗体分子がヒトまたはヒト化抗体分子である、条項３７〜６２のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【０１０８】
６４．ＶＨドメインフレームワークが、ヒト生殖細胞系ＶＨ１  ＤＰ５またはＶＨ３  ＤＰ４７フレームワークである、条項６３に記載の方法、組成物または製品。
【０１０９】
６５．ＶＬドメインフレームワークが、ヒト生殖細胞系ＶＬａｍｂｄａ  １  ＤＰＬ８、ＶＬａｍｂｄａ  １  ＤＰＬ３またはＶＬａｍｂｄａ  ６＿６ａフレームワークである、ＶＬドメインを含んでなる、条項６３または条項６４に記載の方法、組成物または製品。
【０１１０】
６６．抗体分子が、
配列番号５２で示されるＶＨドメインアミノ酸配列があるＶＨドメイン、または１つまたは２つのアミノ酸改変があるその変異体と、
配列番号２１８で示されるＶＬドメインアミノ酸配列があるＶＬドメイン、または１つまたは２つのアミノ酸改変があるその変異体と
を含んでなる、条項３７〜６５のいずれかに記載の方法、組成物または製品であって；
アミノ酸改変は、置換、挿入、および欠失からなる群から選択される。
【０１１１】
６７．抗体分子がＩｇＧ４である、条項６３〜６６のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【０１１２】
６８．抗体分子が、配列番号５２で示されるアミノ酸配列があるＶＨドメインと、配列番号２１８で示されるアミノ酸配列があるＶＬドメインとを含んでなる、ヒトＩｇＧ４である、条項６７に記載の方法、組成物または製品。
【０１１３】
６９．阻害剤が、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて１ｎＭ以下の親和力（ＫＤ）でヒトＧＭ−ＣＳＦＲα細胞外ドメインに結合する、先行する条項のいずれかに記載の方法、組成物または製品。
【０１１４】
７０．阻害剤が、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて０．５ｎＭ以下の親和力（ＫＤ）でヒトＧＭ−ＣＳＦＲα細胞外ドメインに結合する、条項６９に記載の方法、組成物または製品。
【０１１５】
７１．マブリリムマブを含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなる、患者においてＲＡを治療して、８５日間以内の１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下によって判定される、臨床上の便益を提供する方法であって、組成物は、皮下投与によって隔週１００ｍｇの用量で投与される。
【０１１６】
７２．マブリリムマブを含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなる、患者においてＲＡを治療して、８５日間以内の少なくともＡＣＲ５０または少なくともＡＣＲ７０の改善によって判定される、臨床上の便益を提供する方法であって、組成物は、皮下投与によって隔週１００ｍｇの用量で投与される。
【０１１７】
７３．臨床上の便益が４２日間以内に達成される、条項７１または条項７２に記載の方法。
【０１１８】
７４．臨床上の便益が１４日間以内に達成される、条項７３に記載の方法。
【０１１９】
７５．マブリリムマブの治療有効量を含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなる、２．６未満のＤＡＳ２８−ＣＲＰによって判定される、患者においてＲＡの寛解を誘導する方法であって、組成物は、皮下投与によって隔週１００ｍｇの用量で投与され、寛解開始は８５日間以内である。
【０１２０】
７６．寛解開始が４２日間以内である、条項７５に記載の方法。
【０１２１】
７７．寛解開始が１４日間以内である、条項７６に記載の方法。
【０１２２】
７８．マブリリムマブを含んでなる組成物を患者に投与することを含んでなる、ＨＡＱ−ＤＩによる判定でＲＡ患者の身体機能を改善する方法であって、組成物は皮下投与によって隔週１ｍｌ中の１００ｍｇの用量で投与され、ＨＡＱ−ＤＩ改善は１２週間以内に達成される。
【０１２３】
７９．改善が患者のＨＡＱ−ＤＩスコアの少なくとも０．２５の低下である、条項７８に記載の方法。
【０１２４】
８０．改善が６週間以内に達成される、条項７８または条項７９に記載の方法。
【０１２５】
８１．患者が、１つまたは複数の追加的な疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）によってもまた治療される、条項７１〜８０のいずれかに記載の方法。
【０１２６】
８２．追加的な薬剤がメトトレキサートである、条項８１に記載の方法。
【０１２７】
８３．患者がまた、１つまたは複数の鎮痛剤および／または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）および／またはステロイドで治療される、請求項７１〜８２のいずれかに記載の方法。
【０１２８】
８４．条項７１〜８３のいずれかに記載の方法で使用するための、マブリリムマブを含んでなる組成物。
【０１２９】
８５．メトトレキサートと組み合わせて投与するためのものである、条項８４に記載の用途で使用するためのマブリリムマブを含んでなる組成物。
【図面の簡単な説明】
【０１３０】
【図１】以下の処置群中の患者について、ヨーロッパの臨床試験における８５日目に判定された奏効率（％）を示す：プラセボ（ｎ＝７５）；１０ｍｇマブリリムマブ（ｎ＝３９）、３０ｍｇ（ｎ＝４１）；５０ｍｇ（ｎ＝３９）；１００ｍｇ（ｎ＝３９）。奏効率データは、以下について示される（左から右）：ＤＡＳ２８−ＣＲＰ改善＞１．２；ＥＵＬＡＲ中等度の良好な奏効；ＥＵＬＡＲ良好な奏効；ＤＡＳ２８−ＣＲＰ寛解（＜２．６）。
【図２】用量コホートによって示される、マブリリムマブ（ＣＡＭ−３００１）またはプラセボのいずれかを投与された患者について、ヨーロッパの臨床試験で８５日目に判定されたＤＡＳ２８−ＣＲＰ奏効率（％）を示す。
【図３】ヨーロッパの臨床試験における各処置群について、来院によるＤＡＳ２８−ＣＲＰ奏効率（％）を示す。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図４】ヨーロッパの臨床試験における各処置群について、ＤＡＳ２８−ＣＲＰ奏効開始時間を示す。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図５】ヨーロッパの臨床試験における８５日目のＤＡＳ２８−ＣＲＰの実験による分布プロットである。
【図６】ヨーロッパの臨床試験における各処置群について、来院による寛解率（％）を示す。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。寛解は、ＤＡＳ２８−ＣＲＰ＜２．６によって定義される。
【図７】ヨーロッパの臨床試験におけるそれぞれ処置群について、ＤＡＳ２８−ＣＲＰ寛解開始時間を示す。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図８】ヨーロッパの臨床試験における以下の処置群中の患者について、８５日目に判定された奏効率（％）を示す：プラセボ（ｎ＝７５）；１０ｍｇマブリリムマブ（ｎ＝３９）、３０ｍｇ（ｎ＝４１）；５０ｍｇ（ｎ＝３９）；１００ｍｇ（ｎ＝３９）。奏効率データは、ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、およびＡＣＲ７０について示される（左から右）。
【図９】ヨーロッパの臨床試験における各処置群について、１５、２９、４３、５７、７１、および８５日目に判定されたＡＣＲ２０奏効率（％）を示す。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図１０】ヨーロッパの臨床試験における各処置群について、１５、２９、４３、５７、７１、および８５日目に判定されたＡＣＲ５０奏効率（％）を示す。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図１１】ヨーロッパの臨床試験における各処置群について、１５、２９、４３、５７、７１、および８５日目に判定されたＡＣＲ７０奏効率（％）を示す。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図１２】ヨーロッパの臨床試験における８５日目の実験による、ＡＣＲｎ実験分布プロットである。
【図１３】ヨーロッパの臨床試験における各処置群について、８５日間の処置期間にわたり測定された、基線からの腫脹関節数変化（平均値＋／−ＳＥ）を示す。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図１４】ヨーロッパの臨床試験における各処置群について、８５日間の処置期間にわたり測定された、基線からの圧痛関節数変化（平均値＋／−ＳＥ）を示す。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図１５】ヨーロッパの臨床試験における各処置群について、スクリーニング時および８５日間の処置期間にわたる、疾患活動性（ＣＭ）評価によって表わされる、医師による全体的評価（平均値＋／−ＳＥ）を示す。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図１６】ヨーロッパの臨床試験における各処置群について、スクリーニング時および８５日間の処置期間にわたる、疾患活動性（ＭＭ）評価によって表わされる、患者による全体的評価（平均値＋／−ＳＥ）を示す。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図１７】ヨーロッパの臨床試験における各処置群について、スクリーニング時および８５日間の処置期間にわたる、患者による疼痛評価（平均値＋／−ＳＥ）を示す。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図１８ａ】ヨーロッパの臨床試験における各処置群について、８５日間の処置期間にわたる、基線からのＨＡＱ−ＤＩ変化（平均値＋／−）ＳＥ）を示す。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図１８ｂ】ヨーロッパの臨床試験におけるＨＡＱ−ＤＩについて８５日目の％奏効率を示し、ＨＡＱ−ＤＩレスポンダーは、基線からの≧０．２５改善の達成として定義される。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図１９】ヨーロッパの臨床試験における各処置群について、スクリーニング時および８５日間の処置期間にわたり測定された、ＣＲＰ濃度（ｍｇ／ｌ、幾何平均）を示す。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図２０】ヨーロッパの臨床試験における各処置群について、スクリーニング時および８５日間の処置期間にわたり測定された、赤血球沈降分離速度（ＥＳＲ）（ＭＭ／ＨＲ、幾何平均）を示す。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図２１】ヨーロッパの臨床試験における、１６９日目のＩＴＴ集団についての平均（＋／−ＳＥ）ＤＡＳ２８（ＣＲＰ）のプロットである。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図２２】ヨーロッパの臨床試験における、１６９日目のＩＴＴ集団についての来院によるＤＡＳ２８（ＣＲＰ）奏効率のプロットである。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図２３】ヨーロッパの臨床試験における、ＩＴＴ集団についての来院によるＡＣＲ２０奏効率のプロットである。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。
【図２４】ヨーロッパの臨床試験における、ＩＴＴ集団についての来院による基線からの平均（＋／−ＳＥ）ＨＡＱ−ＤＩ変化のプロットである。ＣＡＭ−３００１＝マブリリムマブ。水平基準線は、基線からの−０．２２のＨＡＱ−ＤＩ変化に相当する。
【発明を実施するための形態】
【０１３１】
阻害剤
本明細書に記載されるのは、ヒトＧＭ−ＣＳＦＲαに結合して、ヒトＧＭ−ＣＳＦのＧＭ−ＣＳＦＲαへの結合を阻害する阻害剤である。一般に、阻害剤は、ＧＭ−ＣＳＦＲαの細胞外ドメインに結合する。阻害剤は、好ましくは、成熟ヒトＧＭ−ＣＳＦＲα（配列番号２０６）の位置２２６〜２３０において、配列番号２０１のＴｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ（ＹＬＤＦＱ）の少なくとも１つの残基に結合する。阻害剤は、ヒトＧＭ−ＣＳＦＲαのＹＬＤＦＱ配列中の少なくとも１つの残基に結合してもよく、例えばそれは、ＹＬＤＦＱ配列の１、２、３または４つの残基に結合してもよい。したがって阻害剤は、この配列内の１つまたは複数の残基を認識してもよく、任意選択的にそれはまた、ＧＭ−ＣＳＦＲαの細胞外ドメイン中の追加的な側面に位置する残基または構造的に隣接する残基に結合してもよい。
【０１３２】
結合は、あらゆる適切な方法によって判定してもよく、例えば、本明細書の他の箇所で詳述されるような、ＰＥＰＳＣＡＮベースの酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）などのペプチド結合スキャンを使用してもよい。ＰＥＰＳＣＡＮシステムによって提供されるようなタイプのペプチド結合スキャンでは、抗原に由来する短い重複ペプチドが、阻害剤への結合について体系的にスクリーニングされる。ペプチドは、支持体表面に共有結合して、一続きのペプチドを形成してもよい。簡単に述べると、ペプチド結合スキャン（例えば「ＰＥＰＳＣＡＮ」）は、その中でペプチドが配列番号２０６の断片に相当するアミノ酸配列を有する（例えば配列番号２０６の約１５個の連続残基のペプチド）、それに阻害剤が結合するペプチドの組を（例えばＥＬＩＳＡを使用して）同定することと、阻害剤によって制限される残基のフットプリントを決定するためにペプチドを配列比較することとを伴い、フットプリントは重複ペプチドに共通の残基を含んでなる。本発明によれば、ペプチド結合スキャンまたはＰＥＰＳＣＡＮによって同定されるフットプリントは、配列番号２０６の位置２２６〜２３０に相当する、ＹＬＤＦＱの少なくとも１つの残基を含んでなってもよい。フットプリントは、ＹＬＤＦＱの１、２、３、４個のまたは全ての残基を含んでなってもよい。本発明による阻害剤はまた、例えば、本明細書に記載されるペプチド結合スキャンまたはＰＥＰＳＣＡＮ法による判定で、配列番号２０６の位置２２６〜２３０に相当する、１つまたは複数の、好ましくは全ての残基ＹＬＤＦＱを含んでなる、配列番号２０６の（例えば１５残基の）ペプチド断片に結合してもよい。したがって本発明の阻害剤は、配列番号２０６の１５個の連続残基のアミノ酸配列を有するペプチドに結合してもよく、１５個の残基順序は、配列番号２０６の位置２２６〜２３０で、ＹＬＤＦＱの少なくとも１つの残基を含んでなり、またはそれと少なくとも部分的に重複する。結合を判定する適切なペプチド結合スキャン法の詳細は、本明細書の他の箇所で詳細に提示される。当該技術分野で周知であり、抗体が結合する残基の判定、および／またはペプチド結合スキャン（例えばＰＥＰＳＣＡＮ）結果の確認に使用し得るその他の方法としては、部位特異的変異誘発、水素重水素交換、質量分析法、ＮＭＲ、およびＸ線結晶構造解析が挙げられる。
【０１３３】
さらに、例えばＢＩＡｃｏｒｅを使用する表面プラズモン共鳴によって、ヒトＧＭ−ＣＳＦＲαへの結合動態および親和力を測定してもよい。本発明で使用するための阻害剤は、常態では、５ｎＭ未満、より好ましくは４、３、２または１ｎＭ未満のＫＤを有する。好ましくは、ＫＤは、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２または０．１５ｎＭ未満である。
【０１３４】
典型的に、本発明によって使用するための阻害剤は、より詳細に下で考察されるように、例えば全抗体または抗体断片などの抗体分子を含んでなる結合メンバーである。好ましくは抗体分子は、ヒト抗体分子である。典型的に、抗体は、全抗体であり、好ましくはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはより好ましくはＩｇＧ４である。
【０１３５】
阻害剤は、常態では抗体ＶＨおよび／またはＶＬドメインを含んでなる。結合メンバーのＶＨドメインおよびＶＬドメインもまた、本発明の一部として提供される。ＶＨおよびＶＬドメインのそれぞれの中に、相補性決定領域（「ＣＤＲ」）、およびフレームワーク領域（「ＦＲ」）がある。ＶＨドメインはＨＣＤＲの組を含んでなり、ＶＬドメインはＬＣＤＲの組を含んでなる。
【０１３６】
抗体分子は、典型的に、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、フレームワークとを含んでなる抗体ＶＨドメインを含んでなる。それは代案として、またはそれに加えて、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、フレームワークとを含んでなる抗体ＶＬドメインを含んでなってもよい。したがってＨＣＤＲの組はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を意味し、ＬＣＤＲの組は、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を意味する。特に断りのない限り、「ＣＤＲの組」は、ＨＣＤＲおよびＬＣＤＲを含む。
【０１３７】
ＶＨまたはＶＬドメインフレームワークは、ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の構造でＣＤＲが散在する、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４の４つのフレームワーク領域を含んでなる。
【０１３８】
本発明による抗体ＶＨおよびＶＬドメイン、ＦＲ、およびＣＤＲの例は、本開示の一部を構成する添付の配列表に列挙される。
【０１３９】
国際公開第２００７／１１０６３１号パンフレットは、現在はマブリリムマブとして知られている抗体をはじめとする、抗体分子およびその他の阻害剤を記載し、それは、（全て親抗体３に由来する）抗体１、抗体２、および抗体４〜２０と称される最適化抗体パネルの１つとして単離された。これらの抗体分子の配列は、添付の配列表に示される。
【０１４０】
マブリリムマブは、アミノ酸配列が配列番号５２によって記載される（配列番号５１によってコードされる）ＶＨドメインと、アミノ酸配列が配列番号２１８によって記載される（配列番号２１７によってコードされる）ＶＬドメインを含んでなる、ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ＶＨドメインは重鎖ＣＤＲを含んでなり、その中でＨＣＤＲ１は配列番号５３であり、ＨＣＤＲ２は配列番号５４であり、ＨＣＤＲ３は配列番号５５である。ＶＬドメインは軽鎖ＣＤＲを含んでなり、その中でＬＣＤＲ１は配列番号５８であり、ＬＣＤＲ２は配列番号５９であり、ＬＣＤＲ３は配列番号６０である。フレームワーク領域の配列は添付の配列表に示され、関連付けられたキーで列挙されるように、ＶＨ  ＦＲ１配列番号２５１、ＶＨ  ＦＲ２配列番号２５２、ＶＨ  ＦＲ３配列番号２５３；  ＶＨ  ＦＲ４配列番号２５４；ＶＬ  ＦＲ１配列番号２５５、ＶＬ  ＦＲ２配列番号２５６、ＶＬ  ＦＲ３配列番号２５７、およびＶＬ  ＦＲ４配列番号２５８である。
【０１４１】
本発明の好ましい実施形態では、阻害剤はマブリリムマブであり、または例えばマブリリムマブのＶＨおよびＶＬドメインを含んでなる、マブリリムマブの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる抗体分子である。本明細書に記載される変異体をはじめとする、マブリリムマブの変異体を使用してもよい。
【０１４２】
国際公開第２００７／１１０６３１号パンフレットにより詳細に記載されるように、ＶＨおよびＶＬドメインのＣＤＲ内の特定の残基は、受容体結合および中和効力にとって特に重要である。ＣＤＲは、結合メンバーの結合および特異性を定める主要原因であるので、本明細書の他の箇所でより詳細に記載されるように、本明細書で定義されるような適切な残基を有する１つまたは複数のＣＤＲを使用して、例えば抗体ＶＨおよび／またはＶＬドメインフレームワーク、または非抗体タンパク質スキャフォールなどのあらゆる適切なフレームワーク内に組み込んでもよい。例えば、抗体の１つまたは複数のＣＤＲまたはＣＤＲの組をフレームワーク（例えばヒトフレームワーク）中にグラフトして、抗体分子または異なる抗体分子群を提供してもよい。例えば、抗体分子は、本明細書で開示されるようなＣＤＲと、ヒト生殖細胞系遺伝子断片配列のフレームワーク領域とを含んでなってもよい。抗体は、フレームワーク内の１つまたは複数の残基が、最も類似したヒト生殖細胞系フレームワークの同等の位置の残基と一致するように変更される生殖系列化が施されてもよい、フレームワーク内のＣＤＲの組と共に提供されてもよい。したがって、抗体フレームワーク領域は、好ましくは生殖細胞系および／またはヒト系である。
【０１４３】
国際公開第２００７／１１０６３１号パンフレットに記載されるように、以下の位置が、抗原結合に寄与するとして同定された：ＶＬドメイン中のＫａｂａｔ残基２７Ａ、２７Ｂ、２７Ｃ、３２、５１、５２、５３、９０、９２、および９６、ＶＨドメイン中のＫａｂａｔ残基１７、３４、５４、５７、９５、９７、９９および１００Ｂ。本発明の好ましい実施形態では、これらのＫａｂａｔ残基の１つまたは複数は、その配列が添付の配列表で開示される、１、２、および４〜２０と番号付けされた、抗体クローンの１つまたは複数の位置に存在するＫａｂａｔ残基である。様々な実施形態で、残基は、抗体３中の位置に存在する残基と同一であっても、または異なってもよい。
【０１４４】
ＣＤＲ中の４個の残基の位置、Ｈ９７、Ｈ１００Ｂ、Ｌ９０、およびＬ９２（Ｋａｂａｔ番号付与）は、受容体結合に特に強力な影響を及ぼすことが分かった。好ましくは、ＶＨ  ＣＤＲ３のＨ９７は、Ｓである。この位置のセリン残基は、全ての１６０クローン中で観察され、したがって抗原認識のための重要な残基に相当する。
【０１４５】
好ましくは、ＶＨ  ＣＤＲ３は、以下の残基の１つまたは複数を含んでなる：
Ｋａｂａｔ残基Ｈ９５におけるＶ、Ｎ、ＡまたはＬ、最も好ましくはＶ；
Ｋａｂａｔ残基Ｈ９９におけるＳ、Ｆ、Ｈ、Ｐ、ＴまたはＷ、最も好ましくはＳ；
Ｋａｂａｔ残基Ｈ１００ＢにおけるＡ、Ｔ、Ｐ、Ｓ、ＶまたはＨ、最も好ましくはＡまたはＴ。
【０１４６】
好ましくは、ＶＨ  ＣＤＲ１中のＫａｂａｔ残基Ｈ３４はＩである。好ましくは、ＶＨ  ＣＤＲ２は、Ｋａｂａｔ残基Ｈ５４におけるＥ、および／またはＫａｂａｔ残基Ｈ５７におけるＩを含んでなる。
【０１４７】
抗体ＶＨドメインでは、ＶＨドメインフレームワーク中のＫａｂａｔ残基Ｈ１７は、好ましくはＳである。Ｋａｂａｔ残基Ｈ９４は、好ましくはＩまたはその保存的置換（例えばＬ、Ｖ、ＡまたはＭ）である。常態では、Ｈ９４はＩである。
【０１４８】
好ましくは、ＶＬ  ＣＤＲ３は、以下の残基の１つまたは複数を含んでなる：
Ｋａｂａｔ残基Ｌ９０におけるＳ、ＴまたはＭ、最も好ましくはＳまたはＴ；
Ｋａｂａｔ残基Ｌ９２におけるＤ、Ｅ、Ｑ、Ｓ、ＭまたはＴ、最も好ましくはＤまたはＥ；
Ｋａｂａｔ残基Ｌ９６におけるＡ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＭまたはＶ、最も好ましくはＳ、Ｐ、ＩまたはＶ、特にＳ。
【０１４９】
ＶＬ  ＣＤＲ３中のＫａｂａｔ残基Ｌ９５Ａは、好ましくはＳである。
【０１５０】
好ましくは、ＶＬ  ＣＤＲ１は、以下の残基の１つまたは複数を含んでなる：
Ｋａｂａｔ残基２７ＡにおけるＳ；
Ｋａｂａｔ残基２７ＢにおけるＮ；
Ｋａｂａｔ残基２７ＣにおけるＩ；
Ｋａｂａｔ残基３２におけるＤ。
【０１５１】
好ましくは、ＶＬ  ＣＤＲ２は、以下の残基の１つまたは複数を含んでなる：
Ｋａｂａｔ残基５１におけるＮ；
Ｋａｂａｔ残基５２におけるＮ；
Ｋａｂａｔ残基５３におけるＫ。
【０１５２】
本発明（ｉｎｖｅｎｔｉｎｏ）の好ましい実施形態で使用される阻害剤は、ＶＨおよびＶＬ  ＣＤＲから選択される１つまたは複数のＣＤＲ、すなわち配列表に示される抗体１、２または４〜２０のいずれかのＶＨ  ＣＤＲ１、２および／または３および／またはＶＬ  ＣＤＲ１、２および／または３を含んでなる、結合メンバーである。好ましい実施形態では、本発明の結合メンバーは、以下の抗体分子のいずれかのＶＨ  ＣＤＲ３を含んでなる：抗体１（配列番号５）；抗体２（配列番号１５）；抗体３（配列番号２５）；抗体４（配列番号３５）；抗体５（配列番号４５）；抗体６（配列番号５５）；抗体７（配列番号６５）；抗体８（配列番号７５）；抗体９（配列番号８５）；抗体１０（配列番号９５）；抗体１１（配列番号１０５）；抗体１２（配列番号１１５）；抗体１３（配列番号１２５）；抗体１４（配列番号１３５）；抗体１５（配列番号１４５）；抗体１６（配列番号１５５）；抗体１７（配列番号１６５）；抗体１８（配列番号１７５）；抗体１９（配列番号１８５）；抗体２０（配列番号１９５）。好ましくは、結合メンバーは、配列番号３または配列番号１７３のＶＨ  ＣＤＲ１および／または配列番号４のＶＨ  ＣＤＲ２をさらに含んでなる。好ましくは、配列番号１７５のＶＨ  ＣＤＲ３を含んでなる結合メンバーは、配列番号１７３のＶＨ  ＣＤＲ１を含んでなるが、代案としては配列番号３のＶＨ  ＣＤＲ１を含んでなってもよい。
【０１５３】
好ましくは、結合メンバーは、以下の抗体の１つのＶＨ  ＣＤＲの組を含んでなる：抗体１（配列番号３〜５）；抗体２（配列番号１３〜１５）；抗体３（配列番号２３〜２５）；抗体４（配列番号３３〜３５）；抗体５（配列番号４３〜４５）；抗体６（配列番号５３〜５５）；抗体７（配列番号６３〜６５）；抗体８（配列番号７３〜７５）；抗体９（配列番号８３〜８５）；抗体１０（配列番号９３〜９５）；抗体１１（配列番号１０３〜１０５）；抗体１２（配列番号１１３〜１１５）；抗体１３（配列番号１２３〜１２５）；抗体１４（配列番号１３３〜１３５）；抗体１５（配列番号１４３〜１４５）；抗体１６（配列番号１５３〜１５５）；抗体１７（配列番号１６３〜１６５）；抗体１８（配列番号１７３〜１７５）；抗体１９（配列番号１８３〜１８５）；抗体２０（配列番号１９３〜１９５）。任意選択的に、それはまた、これらの抗体の１つのＶＬ  ＣＤＲの組を含んでなり、ＶＬ  ＣＤＲは、ＶＨ  ＣＤＲと同じまたは異なる抗体からのものであってもよい。一般には、ＶＨドメインをＶＬドメインと対合させて、抗体抗原結合部位を提供するが、いくつかの実施形態では、ＶＨまたはＶＬドメインのみを使用して、抗原に結合させてもよい。軽鎖乱交雑は当該技術分野で確立されており、したがってＶＨおよびＶＬドメインは、本明細書で開示されるのと同じクローンからのものでなくてもよい。
【０１５４】
結合メンバーは、開示されるＨおよび／またはＬ  ＣＤＲの組の中に、例えば１０個以下の例えば１、２、３、４または５個の置換などの、１つまたは複数の置換がある、抗体１〜２０のいずれかのＨおよび／またはＬ  ＣＤＲの組を含んでなってもよい。好ましい置換は、ＶＬドメイン中のＫａｂａｔ残基２７Ａ、２７Ｂ、２７Ｃ、３２、５１、５２、５３、９０、９２、および９６と、ＶＨドメイン中のＫａｂａｔ残基３４、５４、５７、９５、９７、９９、および１００Ｂ以外のＫａｂａｔ残基にある。置換がこれらの位置にある場合、置換は、好ましくは、本明細書でその位置の好ましい残基として示される残基である。
【０１５５】
好ましい実施形態では、本発明の結合メンバーは、例えば重鎖ＶＨ１またはＶＨ３ファミリーからのヒト生殖細胞系フレームワークなどのヒト生殖細胞系フレームワーク中に、ＨＣＤＲの組を含んでなるＶＨドメインを有する、単離ヒト抗体分子である。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体分子は、ヒト生殖細胞系フレームワークＶＨ１  ＤＰ５またはＶＨ３  ＤＰ４７中にＨＣＤＲの組を含んでなる、ＶＨドメインを有する。したがって、ＶＨドメインフレームワーク領域は、ヒト生殖細胞系遺伝子断片ＶＨ１  ＤＰ５またはＶＨ３  ＤＰ４７のフレームワーク領域を含んでなってもよい。ＶＨ  ＦＲ１のアミノ酸配列は、配列番号２５１であってもよい。ＶＨ  ＦＲ２のアミノ酸配列は、配列番号２５２であってもよい。ＶＨ  ＦＲ３のアミノ酸配列は、配列番号２５３であってもよい。ＶＨ  ＦＲ４のアミノ酸配列は、配列番号２５４であってもよい。
【０１５６】
常態では結合メンバーはまた、好ましくは、例えば軽鎖Ｖｌａｍｂｄａ  １またはＶｌａｍｂｄａ  ６ファミリーからのヒト生殖細胞系フレームワークなどのヒト生殖細胞系フレームワーク中に、ＬＣＤＲの組を含んでなるＶＬドメインも有する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体分子は、ヒト生殖細胞系フレームワークＶＬａｍｂｄａ  １  ＤＰＬ８またはＶＬａｍｂｄａ  １  ＤＰＬ３またはＶＬａｍｂｄａ  ６＿６ａ中にＬＣＤＲの組を含んでなる、ＶＬドメインを有する。したがって、ＶＬドメインフレームワークは、ヒト生殖細胞系遺伝子断片ＶＬａｍｂｄａ  １  ＤＰＬ８、ＶＬａｍｂｄａ  １  ＤＰＬ３またはＶＬａｍｂｄａ  ６＿６ａのフレームワーク領域を含んでなってもよい。ＶＬドメインＦＲ４は、ヒト生殖細胞系遺伝子断片ＪＬ２のフレームワーク領域を含んでなってもよい。ＶＬ  ＦＲ１のアミノ酸配列は、配列番号２５５であってもよい。ＶＬ  ＦＲ２のアミノ酸配列は、配列番号２５６であってもよい。ＶＬ  ＦＲ３のアミノ酸配列は、２５７であってもよい。ＶＬ  ＦＲ４のアミノ酸配列は、配列番号２５８であってもよい。
【０１５７】
非生殖系列化抗体は、生殖系列化抗体と比較して、同一ＣＤＲを有するが、異なるフレームワークを有する。
【０１５８】
配列表に記載される、ＶＨおよびＶＬドメインおよびＣＤＲの変異体は、配列の改変または変異とスクリーニングの手段によって得られ得て、ＧＭ−ＣＳＦＲαのための結合メンバー中で用い得る。構造／特性活性関係性に多変量データ解析技術を適用する計算機化学の指標に従って［１９］、統計的回帰、パターン認識、および分類などの周知の数学的技術を使用して、抗体の定量的活性特性関係を誘導し得る［２０、２１、２２、２３、２４、２５］。抗体の特性は、抗体配列、機能および三次元の構造の経験的および理論的モデル（例えば期待できる接触残基の分析または計算された物理化学的特性）から誘導され得て、これらの特性は、単独でそして組み合わせて考察し得る。
【０１５９】
ＶＨドメインおよびＶＬドメインから構成される抗体抗原結合部位は、軽鎖可変領域（ＶＬ）からの３つ、重鎖可変領域（ＶＨ）からの３つの６つのポリペプチドのループによって形成される。既知の原子構造の解析は、抗体の配列と抗体結合部位の三次元構造との関係性を解明している［２６、２７］。これらの関係性は、結合部位ループが、ＶＨドメイン中の第３の領域（ループ）を除いて、少数の主鎖立体構造の１つであるカノニカル構造を有することを暗示する。特定のループ中で成形されるカノニカル構造は、そのサイズと、ループおよびフレームワーク領域双方の中の主要部位における、特定残基の存在によって定まることが示されている［２６、２７］。
【０１６０】
この配列構造関係性の研究は、配列は知られているが三次元構造は未知の抗体において、そのＣＤＲループ中で三次元構造を維持し、ひいては結合を維持するのに重要な残基を予測するために使用し得る。これらの予測は、予測をリード最適化実験からの結果と比較することで、裏付け得る。構造的アプローチでは、あらゆる自由に利用できる、またはＷＡＭ［２９］などの市販される、パッケージを使用して、抗体分子からモデルを作成し得る［２８］。次にＩｎｓｉｇｈｔ  ＩＩ（Ａｃｃｅｌｅｒｙｓ，Ｉｎｃ．）またはＤｅｅｐ  Ｖｉｅｗ［３０］などのタンパク質視覚化および解析ソフトウェアパッケージを使用して、ＣＤＲ中の各位置における可能な置換を評価してもよい。次にこの情報を使用して、活性に対して、最小のまたは有益な効果を有することが期待できる、置換を行ってもよい。
【０１６１】
ＣＤＲ、抗体ＶＨまたはＶＬドメイン、および結合メンバーのアミノ酸配列内の置換に要求される技術は、一般に当該技術分野で利用できる。変異配列は、活性に対して、最小のまたは有益な効果を有することが予測されてもされなくてもよい置換によって生成してもよく、ＧＭ−ＣＳＦＲαと結合し、および／またはそれを中和する能力について、および／またはあらゆるその他の所望の特性について、試験される。
【０１６２】
考察されるように、その配列が本明細書で具体的に開示される、ＶＨおよびＶＬドメインのいずれかの可変領域アミノ酸配列変異を本発明に従って用いてもよい。特定の変異は、約２０個未満の改変、約１５未満の改変、約１０未満の改変または約５未満の改変であってもよく、恐らく５、４、３、２または１である、１つまたは複数のアミノ酸配列改変（アミノ酸残基の付加、欠失、置換および／または挿入）を含んでもよい。改変は、１つまたは複数のフレームワーク領域および／または１つまたは複数のＣＤＲ中にあってもよい。
【０１６３】
好ましくは改変は、機能喪失をもたらさず、したがってこのように改変されたアミノ酸配列を含んでなる結合メンバーは、好ましくはＧＭ−ＣＳＦＲαに結合し、および／またはそれを中和する能力を保つ。より好ましくは、それは、例えば本明細書に記載されるアッセイによる測定で、その中に改変がない結合メンバーと同じ定量的結合および／または中和能力を保つ。最も好ましくは、このように改変されたアミノ酸配列を含んでなる結合メンバーは、その中に改変がない結合メンバーと比較して、ＧＭ−ＣＳＦＲαに結合し／またはそれを中和する改善された能力を有する。
【０１６４】
改変は、非天然または非標準アミノ酸による１つまたは複数のアミノ酸残基の置換、１つまたは複数のアミノ酸残基の非天然または非標準形態への修飾、または１つまたは複数の非天然または非標準アミノ酸の配列中への挿入を含んでなってもよい。本発明の配列中の改変の好ましい数および位置は、本明細書の他の箇所に記載される。天然アミノ酸としては、それらの標準一文字コードによって、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｐ、Ｆ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｙ、Ｃ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｄ、Ｅと識別される、２０個の「標準」Ｌーアミノ酸が挙げられる。非標準アミノ酸としては、ポリペプチド主鎖に組み込まれてもよい、または既存のアミノ酸残基の改変から得られる、あらゆるその他の残基が挙げられる。非標準アミノ酸は、天然または非天然であってもよい。４−ヒドロキシプロリン、５−ヒドロキシリジン、３−メチルヒスチジン、Ｎ−アセチルセリンなどのいくつかの天然非標準アミノ酸は、当該技術分野で公知である［３１］。それらのＮ−α位置で誘導体化されたアミノ酸残基は、アミノ酸配列のＮ末端のみに位置する。常態では本発明では、アミノ酸はＬ−アミノ酸であるが、いくつかの実施形態ではそれはＤーアミノ酸であってもよい。したがって改変は、Ｌーアミノ酸のＤ−アミノ酸への修飾、またはそのＤ−アミノ酸による置換を含んでなってもよい。アミノ酸のメチル化、アセチル化および／またはリン酸化形態もまた知られており、本発明のアミノ酸は、このような改変を受けてもよい。
【０１６５】
本発明の抗体ドメインおよび結合メンバー中のアミノ酸配列は、上記の非天然または非標準アミノ酸を含んでなってもよい。いくつかの実施形態では、非標準アミノ酸（例えばＤ−アミノ酸）が、合成中にアミノ酸配列に組み込まれてもよい一方で、別の実施形態では、非標準アミノ酸は、アミノ酸配列の合成後、「オリジナル」標準アミノ酸に、修飾または置換によって導入されてもよい。
【０１６６】
非標準および／または非天然アミノ酸の使用は、構造的および機能的多様性を増大させ、したがって本発明の結合メンバー中で、所望のＧＭ−ＣＳＦＲα結合および中和特性を達成する可能性を増大させ得る。さらに、動物に投与された後のＬ−アミノ酸を有するポリペプチドの生体内分解のために、Ｄ−アミノ酸および類似体は、標準Ｌ−アミノ酸と比較して、より良い薬物動態プロファイルを有することが示されている。
【０１６７】
上述のように、本明細書で実質的に提示されるＣＤＲアミノ酸配列は、好ましくはヒト抗体可変領域中のＣＤＲとして保有され、またはその実質的部分である。本明細書で実質的に提示されるＨＣＤＲ３配列は、本発明の好ましい実施形態に相当し、これらのそれぞれが、ヒト重鎖可変領域中のＨＣＤＲ３として保有され、またはその実質的部分であることが好ましい。
【０１６８】
本発明で用いられる可変ドメインは、あらゆる生殖細胞系または再構成型ヒト可変領域から得られ、またはそれから誘導されてもよく、または既知のヒト可変ドメインのコンセンサスまたは実際の配列に基づく、合成可変領域であってもよい。本発明のＣＤＲの配列（例えばＣＤＲ３）は、組換えＤＮＡ技術を使用して、ＣＤＲ（例えばＣＤＲ３）を欠く可変ドメインのレパートリーに導入されてもよい。
【０１６９】
例えば、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）［３２］は、その中で、可変領域中の５’末端方向のまたはそれに隣接するコンセンサスプライマーが、ヒトＶＨ遺伝子の第３のフレームワーク領域に対するコンセンサスプライマーと併せて使用されて、ＣＤＲ３を欠くＶＨ可変ドメインのレパートリーを提供する、抗体可変ドメインのレパートリーを生成する方法を説明する。Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．は、このレパートリーが、特定の抗体ＣＤＲ３とどのように組み合わされてもよいかをさらに説明する。類似技術を使用して、ＣＤＲ３を欠くＶＨまたはＶＬドメインのレパートリーと共に、本発明のＣＤＲ３由来配列をシャッフルし、シャッフルされた完全なＶＨまたはＶＬドメインを同族のＶＬまたはＶＨドメインと組み合わせて、本発明の結合メンバーを提供してもよい。次に国際公開第９２／０１０４７号パンフレット、または参考文献［３３］をはじめとする後続の膨大な量の文献のいずれかのファージディスプレイシステムなどの適切な宿主系内においてレパートリーを提示して、適切な結合メンバーを選択してもよい。レパートリーは、例えば１０６〜１０８または１０１０のメンバーなど、１０４以上の個々のメンバーからなってもよい。その他の適切な宿主系としては、酵母ディスプレイ、細菌ディスプレイ、Ｔ７ディスプレイ、ウイルスディスプレイ、細胞ディスプレイ、リボソームディスプレイ、および共有結合ディスプレイが挙げられる。類似シャフリングまたはコンビナトリアル技術もまた、Ｓｔｅｍｍｅｒ（１９９４）［３４］によって開示され、β−ラクタマーゼ遺伝子との関連で技術が説明されるが、アプローチは、抗体を生成するのに使用してもよいとされている。
【０１７０】
本発明のＣＤＲ由来配列を保有する新規ＶＨまたはＶＬ領域を生成するさらなる代案は、１つまたは複数の選択されたＶＨおよび／またはＶＬ遺伝子のランダム変異誘発を使用して、可変領域全体内に変異を作り出すことである。このような技術は、誤りがちなＰＣＲを使用したＧｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）［３５］によって説明される。好ましい実施形態では、ＨＣＤＲおよび／またはＬＣＤＲの組の中で、１つまたは２つのアミノ酸が置換される。使用してもよい別の方法は、ＶＨまたはＶＬ遺伝子のＣＤＲ領域に変異誘発を引き起こすことである［３６、３７］。
【０１７１】
本発明のさらなる態様は、ＧＭ−ＣＳＦＲα抗原の抗体抗原結合部位を得る方法を提供し、方法は、本明細書で提示されるＶＨドメインのアミノ酸配列中の１つまたは複数のアミノ酸の付加、欠失、置換または挿入の手段によって、ＶＨドメインのアミノ酸配列変異体であるＶＨドメインを提供し、このように提供されたＶＨドメインを１つまたは複数のＶＬドメインと任意選択的に組み合わせて、ＶＨドメインまたはＶＨ／ＶＬ組み合わせまたは組み合わせ群を試験して、任意選択的に１つまたは複数の好ましい特性、好ましくはＧＭ−ＣＳＦＲα活性を中和する能力がある、ＧＭ−ＣＳＦＲα抗原の結合メンバーまたは抗体抗原結合部位を同定することを含んでなる。前記ＶＬドメインは、本明細書で実質的に提示されるアミノ酸配列を有してもよい。
【０１７２】
その中で、本明細書で開示されるＶＬドメインの１つまたは複数の配列変異体が、１つまたは複数のＶＨドメインと組み合わされる、類似方法を用いてもよい。
【０１７３】
免疫グロブリン可変領域のかなりの部分は、それらの介在性フレームワーク領域と共に、少なくとも３つのＣＤＲ領域を含んでなるであろう。好ましくは、部分はまた、第１のおよび第４のフレームワーク領域のいずれかまたは双方の少なくとも約５０％を含み、５０％は第１のフレームワーク領域のＣ末端５０％、および第４のフレームワーク領域のＮ末端５０％である。可変領域のかなりの部分のＮ末端またはＣ末端の追加的な残基は、常態では天然可変領域に結合しないものであってもよい。例えば、組換えＤＮＡ技術によって作成される本発明の結合メンバーの構築は、クローニングまたはその他の操作段階を容易にするために導入されたリンカーによってコードされる、ＮまたはＣ末端残基の導入をもたらしてもよい。その他の操作ステップには、抗体定常領域、その他の可変ドメイン（例えば二機能性抗体の生成における）または検出可能／機能標識をはじめとする、さらなるタンパク質配列に、本発明の可変ドメインを連結する、リンカー導入が含まれる。
【０１７４】
本発明の好ましい態様では、１対のＶＨおよびＶＬドメインを含んでなる結合メンバーが好ましいが、ＶＨまたはＶＬドメイン配列のいずれかに基づく単一結合ドメインが、本発明のさらなる態様を形成する。単一免疫グロブリンドメイン、特にＶＨドメインは、標的抗原と結合できることが知られている。例えば、本明細書の他の箇所にあるｄＡｂの考察を参照されたい。
【０１７５】
本発明の結合メンバーは、例えば抗体３、または抗体１、２または４〜２０のいずれかなどの本明細書で開示されるあらゆる結合メンバーと、ＧＭ−ＣＳＦＲαへの結合について競合してもよい。したがって結合メンバーは、抗体１、２または４〜２０のいずれかのＶＨドメインおよびＶＬドメインを含んでなる抗体分子と、ＧＭ−ＣＳＦＲαとの結合について競合してもよい。結合メンバー間の競合は、例えば、１つまたは複数のその他の非標識結合メンバーの存在下で検出し得るレポーター分子で１つの結合メンバーを標識付けして、同一エピトープまたは重複エピトープに結合する結合メンバーを同定できるようにすることで、容易に生体外アッセイしてもよい。
【０１７６】
競合は、例えばＥＬＩＳＡを使用して判定してもよく、その中では、例えばＧＭ−ＣＳＦＲαの細胞外ドメイン、または細胞外ドメインのペプチドがプレートに固定化されて、１つまたは複数のその他の非標識結合メンバーと共に、第１の標識結合メンバーがプレートに添加される。標識結合メンバーと競合する非標識結合メンバーの存在は、標識結合メンバーによって放出されるシグナルの低下によって観察される。同様に、表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、結合メンバーの競合を判定してもよい。
【０１７７】
競合に関する試験では、特に対象エピトープまたは結合領域を含み、またはそれから本質的になるペプチドである、抗原のペプチド断片を用いてもよい。いずれかの末端に、エピトープまたは標的配列と、１つまたは複数のアミノ酸とを有するペプチドを使用してもよい。本発明による結合メンバーは、抗原に対するそれらの結合が、所与の配列がある、またはそれを含む、ペプチドにより阻害されるようであってもよい。
【０１７８】
ペプチドに結合する結合メンバーは、例えばペプチドでのパニングによって、ファージディスプレイライブラリーから単離されてもよい。
【０１７９】
阻害剤が、抗体分子またはその他のポリペプチドである場合、それは例えば生体外組換え宿主細胞中の発現ベクターなどのコード核酸からの発現によって、生成されてもよい。適切な方法および細胞は、国際公開第２００７／１１０６３１号パンフレットに記載される。コード核酸の例は、添付の配列表に提供される。
【０１８０】
結合メンバー
これは、互いに結合する１対の分子のメンバーを記述する。結合対のメンバーは、天然由来であっても、または完全にまたは部分的に合成的に製造されてもよい。対の分子の一方のメンバーは、対の分子の他方のメンバーの特定の空間的および極性機構に結合し、したがってそれと相補的である、その表面の領域、または窩洞を有する。結合対のタイプの例は、抗原−抗体、ビオチン−アビジン、ホルモン−ホルモン受容体、受容体−リガンド、酵素−基質である。本発明は、抗原−抗体タイプの反応に関わる。
【０１８１】
結合メンバーは、常態では、抗原結合部位を有する分子を含んでなる。例えば、結合メンバーは、抗原結合部位を含んでなる抗体分子または非抗体タンパク質であってもよい。抗原結合部位は、フィブロネクチンまたはチトクロームＢなどの非抗体タンパク質スキャフォールド上のＣＤＲの配置によって［３９、４０、４１］、またはタンパク質スキャフォールド内のループのアミノ酸残基をランダム化または変異させて、所望の標的との結合もたらすことによって、提供されてもよい。タンパク質中に新規結合部位を作り出すためのスキャフォールドは、詳細にレビューされている［４１］。抗体模倣体のためのタンパク質スキャフォールドは、国際公開第００３４７８４号パンフレットで開示され、その中で発明者らは、少なくとも１つの無作為化ループを有するフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインを含むタンパク質（抗体模倣体）を記載する。その中に例えばＨＣＤＲの組などの１つまたは複数のＣＤＲがグラフトされた、適切なスキャフォールドは、免疫グロブリン遺伝子スーパーファミリーのあらゆるドメインメンバーによって提供されてもよい。スキャフォールドは、ヒトまたは非ヒトタンパク質であってもよい。
【０１８２】
非抗体タンパク質スキャフォールドの利点は、それが、少なくともいくつかの抗体分子よりも小さく、および／または製造がより容易である、スキャフォールド分子中に抗原結合部位を提供してもよいことである。結合メンバーの小さなサイズは、細胞に入り込む、組織に深く浸透する、またはその他の構造内の標的に到達する、または標的抗原のタンパク質内窩洞に結合する能力などの有用な生理学的特性をもたらしてもよい。
【０１８３】
非抗体タンパク質スキャフォールド中の抗原結合部位の使用は、参考文献［３８］でレビューされる。典型的なのは、安定主鎖と、１つまたは複数の可変ループとを有するタンパク質であり、その中では、ループまたはループ群のアミノ酸配列が、特異的にまたは無作為に変異して、標的抗原結合を有する抗原結合部位をもたらす。このようなタンパク質としては、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）からのプロテインＡのＩｇＧ−結合ドメイン、トランスフェリン、テトラネクチン、フィブロネクチン（例えば１０番目のフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン）、およびリポカリンが挙げられる。その他のアプローチとしては、分子内ジスルフィド結合を有する小型タンパク質であるサイクロチドベースの合成「Ｍｉｃｒｏｂｏｄｉｅｓ」（Ｓｅｌｅｃｏｒｅ  ＧｍｂＨ）が挙げられる。
【０１８４】
抗体配列および／または抗原結合部位に加えて、本発明による結合メンバーは、例えば折り畳みドメインなどのペプチドまたはポリペプチドを形成する、または抗原結合能力に加えて別の機能特性を分子に与える、その他のアミノ酸を含んでなってもよい。本発明の結合メンバーは、検出可能な標識を保有してもよく、または（例えばペプチジル結合またはリンカーを介して）、毒素または標的部分または酵素に共役してもよい。例えば、結合メンバーは、（例えば酵素ドメイン中に）触媒部位ならびに抗原結合部位を含んでなってもよく、その中では抗原結合部位が抗原に結合し、したがって触媒部位が抗原の標的になる。触媒部位は、例えば切断によって抗原の生物学的機能を阻害してもよい。
【０１８５】
言及されたように、ＣＤＲは、フィブロネクチンまたはチトクロームＢなどのスキャフォールドによって保有され得るが［３９、４０、４１］、本発明のＣＤＲまたはＣＤＲの組を保有するための構造は、一般に抗体重鎖または軽鎖配列またはその実質的部分であり、その中では、ＣＤＲまたはＣＤＲの組が、再構成型免疫グロブリン遺伝子によってコードされる天然ＶＨおよびＶＬ抗体可変ドメインのＣＤＲまたはＣＤＲの組に対応する位置に位置する。免疫グロブリン可変ドメインの構造および位置は、Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．，１９８７［５７］、および現在インターネットで利用できるそのアップデート（ｈｔｔｐ：／／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕまたは任意の検索エンジンを使用して「Ｋａｂａｔ」を検索）を参照して、判定してもよい。
【０１８６】
本発明の結合メンバーは、抗体定常領域またはその部分、好ましくはヒト抗体定常領域またはその部分を含んでなってもよい。例えばＶＬドメインは、そのＣ末端で、ヒトＣκまたはＣλ鎖、好ましくはＣλ鎖をはじめとする、抗体軽鎖定常領域に付着してもよい。同様に、ＶＨドメインベースの結合メンバーは、そのＣ末端で、例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、およびＩｇＭなどのあらゆる抗体アイソタイプに由来して、特にＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４である、アイソタイプサブクラスのいずれかである、免疫グロブリン重鎖の全部または一部（例えばＣＨ１ドメイン）に付着してもよい。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４が好ましい。補体に結合せず、エフェクター機能を生じないことから、ＩｇＧ４が好ましい。これらの特性を有して、可変領域を安定化するあらゆる合成またはその他の定常領域変異体もまた、本発明の実施形態で使用するのに好ましい。
【０１８７】
本発明の結合メンバーは、検出可能標識または機能標識で標識されてもよい。検出可能標識としては、抗体画像診断の技術分野で公知の従来の化学を使用して、本発明の抗体に付着されてもよい、１３１Ｉまたは９９Ｔｃなどの放射性標識が挙げられる。標識としては、西洋ワサビペルオキシダーゼなどの酵素標識もまた挙げられる。標識としては、例えば標識アビジンなどの特異的同族検出可能部分への結合によって検出されてもよい、ビオチンなどの化学的部分がさらに挙げられる。したがって本発明の結合メンバーまたは抗体分子は、任意選択的にペプチドなどのリンカーを介して連結する、結合メンバーと標識とを含んでなる複合体の形態であり得る。結合メンバーは、例えば酵素（例えばペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ）、またはビオチン、蛍光色素、緑色蛍光タンパク質をはじめとするが、これに限定されるものではない、蛍光標識と共役させ得る。さらに標識は、シュードモナス菌体外毒素（ＰＥまたは細胞毒性断片またはその変異体）、ジフテリア毒素（細胞毒性断片またはその変異体）、ボツリヌス毒素ＡからＦ、リシンまたはその細胞毒性断片、アブリンまたはその細胞毒性断片、サポリンまたはその細胞毒性断片、アメリカヤマゴボウ抗ウイルス毒素またはその細胞毒性断片、およびブリオジン１またはその細胞毒性断片の群から選択される毒素部分などの毒素部分を含んでなってもよい。結合メンバーは抗体分子を含んでなり、標識結合メンバーは免疫複合体と称されてもよい。
【０１８８】
抗体分子
これは、天然、または部分的にまたは完全に合成的に製造されたかどうかに関わりなく、免疫グロブリンを記述する。用語はまた、抗体抗原結合部位を含んでなるあらゆるポリペプチドまたはタンパク質を包含する。抗体抗原結合部位を含んでなる抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄＡｂ、Ｆｄなどの分子；および二機能性抗体である。
【０１８９】
モノクローナルおよびその他の抗体を採用して、組換えＤＮＡ技術の技法を使用して、オリジナル抗体の特異性を保つ、その他の抗体またはキメラ分子を作成することが可能である。このような技術は、抗体の免疫グロブリン可変領域、またはＣＤＲをコードするＤＮＡを、異なる免疫グロブリンの定常領域、または定常領域とフレームワーク領域に導入することを伴ってもよい。例えば、欧州特許出願公開第Ａ−１８４１８７号明細書、英国特許出願公開第２１８８６３８Ａ号明細書または欧州特許出願公開第Ａ−２３９４００号明細書、および後続の膨大な量の文献を参照されたい。抗体を産生するハイブリドーマまたはその他の細胞は、生成する抗体の標的結合を変化させてもさせなくてもよい、遺伝子変異またはその他の変化を受けてもよい。
【０１９０】
抗体は、いくつかの方法で改変させ得るので、「抗体分子」という用語は、抗体抗原結合部位を有する、あらゆる結合メンバーまたは物質を包含すると解釈されるべきである。したがってこの用語は、天然、または完全にまたは部分的に合成されたかどうかに関わりなく、抗体抗原結合部位を含んでなるあらゆるポリペプチドをはじめとする、抗体断片と誘導体を包含する。したがって別のポリペプチドに融合した、抗体抗原結合部位または同等物を含んでなるキメラ分子も包含される。クローニングおよびキメラ抗体発現は、欧州特許出願公開第Ａ−０１２０６９４号明細書および欧州特許出願公開第Ａ−０１２５０２３号明細書、および後続の膨大な量の文献に記載される。
【０１９１】
抗体工学技術分野で利用できるさらなる技術は、ヒトおよびヒト化抗体の単離を可能にした。ヒトおよびヒト化抗体が本発明の好ましい実施形態であり、あらゆる適切な方法を使用して生成してもよい。例えば、ヒトハイブリドーマを作成し得る［４２］。結合メンバーを作成する別の確立された技術であるファージディスプレイが、参考文献［４２］および国際公開第９２／０１０４７号パンフレットなどの多数の文献で詳述されている（下でさらに考察される）。マウス免疫系のその他の構成要素をそのままにしながら、その中でマウス抗体遺伝子が不活性化されて、ヒト抗体遺伝子で機能的に置換されている遺伝子組換えマウスを、ヒト抗体を単離するために使用し得る［４３］。ヒト化抗体は、例えば国際公開第９１／０９９６７号パンフレット、米国特許第５，５８５，０８９号明細書、欧州特許第５９２１０６号明細書、米国特許第５６５，３３２号明細書、および国際公開第９３／１７１０５号パンフレットで開示されるものなどの当該技術分野で公知の技術を使用して生成し得る。さらに、国際公開第２００４／００６９５５号パンフレットは、非ヒト抗体可変領域ＣＤＲ配列のカノニカルＣＤＲ構造タイプを、例えば生殖細胞系抗体遺伝子断片などのヒト抗体配列ライブラリーからの対応するＣＤＲのカノニカルＣＤＲ構造タイプと比較することで、ヒト抗体遺伝子からの可変領域フレームワーク配列を選択することに基づいて、抗体をヒト化する方法を記載する。非ヒトＣＤＲと類似したカノニカルＣＤＲ構造タイプを有するヒト抗体可変領域は、それからヒトフレームワーク配列が選択される、ヒト抗体配列のサブセットメンバーを形成する。サブセットメンバーは、ヒトおよび非ヒトＣＤＲ配列間のアミノ酸類似性によって、さらに格付けされてもよい。国際公開第２００４／００６９５５号パンフレットの方法では、最高位のヒト配列が選択され、選択されたサブセットメンバーヒトフレームワークを使用して、ヒトＣＤＲ配列を非ヒトＣＤＲ対応物で機能的に置き換えるキメラ抗体を構築するためのフレームワーク配列を提供し、それによって非ヒトおよびヒト抗体間のフレームワーク配列を比較する必要なしに、高親和性かつ低免疫原性のヒト化抗体が提供される。方法に従って作成されたキメラ抗体もまた、開示される。
【０１９２】
合成抗体分子は、オリゴヌクレオチド合成によって作成され、適切な発現ベクター内で組み立てられた、遺伝子からの発現によって作成されてもよい［４４、４５］。
【０１９３】
全抗体の断片が、抗原結合機能を果たし得ることが示されている。結合断片の例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなるＦａｂ断片；（ｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｉｉ）単一抗体のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｉｖ）ＶＨまたはＶＬドメインからなるｄＡｂ断片［４６、４７、４８］；（ｖ）単離されたＣＤＲ領域；（ｖｉ）２つの結合したＦａｂ断片を含んでなる二価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片、（ｖｉｉ）２つのドメインが結合して抗原結合部位を形成できるようにするペプチドリンカーによって、ＶＨドメインおよびＶＬドメインが結合する、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）［４９、５０］；（ｖｉｉｉ）二重特異性一本鎖Ｆｖ二量体（ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５号明細書）、および（ｉｘ）遺伝子融合によって構築された多価または多特異性断片である「二機能性抗体」（国際公開第９４／１３８０４号パンフレット；［５１］）である。Ｆｖ、ｓｃＦｖまたは二重特異性抗体分子は、ＶＨおよびＶＬドメインを連結するジスルフィド架橋の組み込みによって、安定化されてもよい［５２］。ＣＨ３ドメインに連結するｓｃＦｖを含んでなるミニ抗体もまた、作成されてもよい［５３］。
【０１９４】
ｄＡｂ（ドメイン抗体）は、抗体の小型単量体抗原結合断片、すなわち抗体重鎖または軽鎖の可変領域である［４８］。ＶＨ  ｄＡｂは、ラクダ科動物（例えばラクダ、ラマ）中で自然発生し、標的抗原でラクダ科動物を免疫化して、抗原特異的Ｂ細胞を単離し、個々のＢ細胞からのｄＡｂ遺伝子を直接クローニングすることで、生成されてもよい。ｄＡｂはまた、細胞培養中で生産可能である。それらの小さなサイズ、良好な溶解度、および温度安定性によって、それらは特に生理学的に有用であり、選択および親和性の成熟に適する。本発明の結合メンバーは、実質的に本明細書で示されるようなＶＨまたはＶＬドメイン、または実質的に本明細書で示されるようなＣＤＲの組を含んでなるＶＨまたはＶＬドメインを含んでなる、ｄＡｂであってもよい。「実質的に示されるような」とは、本発明の妥当なＣＤＲまたはＶＨまたはＶＬドメインが、本明細書でそれに配列が提示される特定領域と同一であり、またはそれとの類似性が高いことを意味する。「類似性が高い」とは、ＣＤＲおよび／またはＶＨまたはＶＬドメイン中に、１〜５、好ましく１〜３または１または２、または３または４などの１〜４個のアミノ酸置換があってもよいことが意図される。
【０１９５】
二重特異性抗体が使用される場合、これらは多様な方法で製造し得る従来の二重特異性抗体であってもよく［５４］、例えば化学的に雑種ハイブリドーマまたはから作成され、または上述の二重特異性抗体断片のいずれかであってもよい。二重特異性抗体の例としては、その中で異なる特異性がある２つの抗体の結合ドメインを使用して、短い可撓性ペプチドを介して直接結合し得る、ＢｉＴＥ（商標）技術によるものが挙げられる。これは、短い単一ポリペプチド鎖上で２つの抗体を組み合わせる。二機能性抗体およびｓｃＦｖは、可変ドメインのみを使用して、Ｆｃ領域なしで構築して、抗イディオタイプ反応の影響を潜在的に低下させ得る。
【０１９６】
二重特異性全抗体とは対照的に、二重特異性二機能性抗体はまた、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中で容易に構築して発現させ得ることから、特に有用であってもよい。適切な結合特異性がある二機能性抗体（および抗体断片などの多数のその他のポリペプチド）は、ライブラリーからのファージディスプレイ（国際公開第９４／１３８０４号パンフレット）を使用して、容易に選択し得る。例えばＧＭ−ＣＳＦＲαに対する二重特異性抗体の片方の腕が一定に保たれるべきである場合、もう一方の腕が変動して、適切な標的結合の抗体が選択される、ライブラリーを作成し得る。二重特異性全抗体は、ノブ・イン・ホール工学によって作成してもよい［５５］。
【０１９７】
抗原結合部位
これは、標的抗原の全部または一部と結合して、それに相補的な分子の部分を記述する。抗体分子中では、それは抗体抗原結合部位と称され、標的抗原の全部または一部に結合し、それと相補的な抗体の一部を含んでなる。抗原が大型である場合、抗体は抗原の特定部分のみに結合してもよく、その部分はエピトープと称される。抗体抗原結合部位は、１つまたは複数の抗体可変ドメインによって提供されてもよい。好ましくは、抗体抗原結合部位は、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含んでなる。
【０１９８】
Ｋａｂａｔ番号付与
本明細書の抗体配の残基は、一般に、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９７１［５６］で定義されるＫａｂａｔ番号付与を使用して言及される。参考文献［５７、５８］もまた参照されたい。
【０１９９】
ＧＭ−ＣＳＦＲαおよびＧＭ−ＣＳＦ
ＧＭ−ＣＳＦＲαは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子の受容体のα鎖である。完全長配列のヒトＧＭ−ＣＳＦＲαは、受入番号Ｓ０６９４５（ｇｉ：１０６３５５）の下に寄託され［５９］、本明細書で配列番号２０２として提示される。ヒトＧＭ−ＣＳＦＲαの成熟形態、すなわちシグナルペプチドが切断されている形態は、本明細書で配列番号２０６として示される。文脈によって別段指示されない限り、本明細書におけるＧＭ−ＣＳＦＲαへの言及は、ヒトまたは非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）ＧＭ−ＣＳＦＲα、常態ではヒトＧＭ−ＣＳＦＲαを指す。ＧＭ−ＣＳＦＲαは、天然ＧＭ−ＣＳＦＲαまたは組換えＧＭ−ＣＳＦＲαであってもよい。
【０２００】
ヒトＧＭ−ＣＳＦ受容体αの２９８個のアミノ酸の細胞外ドメインは、アミノ酸配列番号２０５を有する。
【０２０１】
文脈によって別段指示されない限り、本明細書におけるＧＭ−ＣＳＦへの言及は、ヒトまたは非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）ＧＭ−ＣＳＦ、常態ではヒトＧＭ−ＣＳＦを指す。
【０２０２】
ＧＭ−ＣＳＦは、常態では成熟ＧＭ−ＣＳＦ受容体α鎖（配列番号２０６）の細胞外ドメイン（配列番号２０５）に結合する。本明細書の他の箇所に記載されるように、この結合は本発明の結合メンバーによって阻害される。
【０２０３】
ＧＭ−ＣＳＦＲαの天然スプライス変異体が同定されており、例えば参考文献［６０および６１］を参照されたい。細胞外ドメインは、これらのスプライス変異体中で、高度に保存されている。本発明の結合メンバーは、１つまたは複数のＧＭ−ＣＳＦＲαのスプライス変異体に結合してもしなくてもよく、ＧＭ−ＣＳＦの１つまたは複数のＧＭ−ＣＳＦＲαのスプライス変異体への結合を阻害してもしなくてもよい。
【０２０４】
バイオセンサー分析を使用した結合親和性データ
表面プラズモン共鳴を使用して結合親和性を測定する方法は、既知である。抗体分子のＫＤ測定の詳細については、例えば国際公開第２００７／１１０６３１号パンフレットを参照されたい。ＡＢＩＡｃｏｒｅ  ２０００システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ）を使用して、組換え受容体との相互作用の動態学パラメータを評価してもよい。バイオセンサーは、表面プラズモン共鳴の光学効果を使用して、検体分子と、デキストランマトリックスに共有結合的に付着するリガンド分子との相互作用に起因する、表面密度の変化を調べる。典型的には、自由溶液中の検体化学種を結合リガンド上に通過させ、あらゆる結合は、局所性ＳＰＲシグナル増大として検出される。これに洗浄期間が続き、その間にＳＰＲシグナルの低下として検体化学種の解離が見られ、その後リガンドからあらゆる残留検体を揮散させて、いくつかの異なる検体濃度で手順を繰り返す。実験中には一連の対照が通常用いられて、結合リガンドの絶対結合能力または動態プロファイルのどちらもが、顕著に変化しないことを確実にする。独自仕様のｈｅｐｅｓ緩衝液生理食塩水（ＨＢＳ−ＥＰ）が、典型的に、検体サンプルの主要希釈剤および解離相溶媒として使用される。実験データを共鳴単位（ＳＰＲシグナルに直接対応する）で、経時的に記録する。共鳴単位は、結合検体のサイズと量に正比例する。次にＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアパッケージを使用して、解離相（解離速度単位ｓ−１）および結合相（結合速度単位Ｍ−１ｓ−１）に速度定数を割り当て得る。次にこれらの数値は、結合および解離親和定数の計算を可能にする。
【０２０５】
国際公開第２００７／１１０６３１号パンフレットに記載されるように、ＩｇＧ４の親和力は、その中でＩｇＧ４がアミンプロテインＡ表面に非共有結合的に捕捉される、単一アッセイを使用して推定し得る。次に組換え精製標識ＧＭ−ＣＳＦ受容体細胞外ドメインの１００〜６．２５ｎＭの一連の希釈液を、順次ＩｇＧ４の上に通過させた。濃度（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）および予測された非翻訳後修飾成熟ポリペプチド質量（３９．７ｋＤａ）を使用して、受容体のモル濃度を計算した。２つの別個のデータセットのそれぞれを、同一形式で分析した。対照セル補正データには、Ｒｍａｘ値をグローバルに設定して、結合および解離速度の同時グローバル計算に設定した、１：１ラングミュアモデルを使用してフィッティングを行った。各サイクル中のＩｇＧ４捕捉レベルを評価して、捕捉された量が、実験中に安定したままであることを確実にした。さらにＩｇＧ４の解離速度を評価して、基線変動について補正が必要であるかどうかを判定した。しかしどちらのプロテインＡ相互作用も十分に再現可能であり、安定していることが立証された。データの妥当性は、それぞれ＜２および＞１００でなければならない、計算されたχ２およびＴ値（パラメータ値／オフセット）によって制約された。
【０２０６】
単離
阻害剤または結合メンバー、例えば抗体分子は、一般に単離形態である。単離されたポリペプチド結合メンバーは、天然環境内で、またはこのような調製品が生体外または生体内で実施される組換えＤＮＡ技術による場合は、その中でそれらが調製される環境（例えば細胞培養物）内で、それらと共に見られる、その他のポリペプチドまたは核酸などの、それらが天然に結合している物質を含まずまたは実質的に含まない。治療で使用される場合、阻害剤は、薬学的に許容可能な担体または希釈剤と共に混合される。抗体分子などのポリペプチド結合メンバーは、自然に、あるいは異種真核生物細胞系（例えばＣＨＯまたはＮＳ０（ＥＣＡＣＣ  ８５１１０５０３））細胞によって、グリコシル化されていてもよく、または（例えば原核細胞中の発現によって生成される場合）それらはグリコシル化されていなくてもよい。
【０２０７】
配合および投与
抗ＧＭ−ＣＳＦＲα製剤は、経口的に（例えばナノボディ）、注射（例えば、皮下、静脈内、動脈内、関節内に、腹腔内または筋肉内）によって、吸入によって、膀胱内経路（膀胱内点滴）によって、または局所的に（例えば眼内、鼻腔内、直腸、創傷内、皮膚上）投与してもよい。治療薬は、パルス点滴によって、特に阻害剤用量を漸減させて、投与してもよい。投与経路は、治療薬の物理化学的特性によって、疾患に特別の配慮をして、または効能最適化または副作用最小化の要求事項によって、決定し得る。抗ＧＭ−ＣＳＦＲα治療は、診療所における使用に限定されないことが想定される。したがって無針器具を使用する皮下注射もまた、好ましい。皮下投与のためには、阻害剤は、通常１ｍｌの体積で投与される。したがって皮下投与のために、１ｍｌの個々の体積中の所望の用量の製剤が提供されてもよい。
【０２０８】
組成物は、治療される病状に応じて、単独で、またはその他の治療と組み合わせて、同時または逐次のいずれかで、投与されてもよい。常態では、別個の組成物中で異なる治療薬が提供されるが、場合によっては複合製剤を使用してもよい。特に抗ＧＭ−ＣＳＦＲα結合メンバーと１つまたは複数のその他の薬剤との組み合わせの併用療法を使用して、顕著な相乗効果を提供してもよい。本発明による阻害剤は、ＮＳＡＩＤ（例えばジクロフェナクまたはセレコキシブなどのｃｏｘ阻害剤、およびその他の同様のｃｏｘ２阻害剤）と、コルチコステロイド（例えば経口および／または非経口プレドニゾン）と、例えばヒュミラ（アダリムマブ）、メトトレキサート、アラバ、エンブレル（エタネルセプト）、レミケード（インフリキシマブ）、キネレット（アナキンラ）、リツキサン（リツキシマブ）、オレンシア（アバタセプト）、金塩、例えば抗マラリア剤（例えばクロロキン、ヒドロキシクロロキン）等の抗マラリア剤、スルファサラジン、ｄ−ペニシラミン、シクロスポリンＡ、シクロホスファミド、アザチオプリン、レフルノミド、セルトリズマブペゴル（シムジア（登録商標））、トシリズマブ（ｔｏｃｌｉｚｕｍａｂ）およびゴリムマブ（シンポニー（登録商標））などのＤＭＡＲＤとの１つまたは複数と組み合わせて、またはそれに追加して、提供されてもよい。
【０２０９】
本発明によると、提供される組成物は、個人に投与されてもよい。投与は、好ましくは「治療有効量」であり、これは患者に便益を示すのに十分である。このような便益は、少なくとも１つの症状の少なくとも改善であってもよい。実際の投与量、および投与速度と経時変化は、治療されるものの性質と重症度に左右される。治療の処方、例えば用量などの決定は、一般開業医、およびその他の医者の任務の範囲内であり、治療される疾患の症状の重症度および／または進行に左右されてもよい。抗体の適切な用量は、当該技術分野で周知である［６２、６３］。投与される薬剤タイプにふさわしいように、本明細書で、または医師のための医薬品便覧（２００３年）で示される特定の投与量を使用してもよい。本発明の阻害剤の治療有効量または適切な用量は、動物モデルにおいて、生体外活性と生体内活性を比較することで判定し得る。マウスおよびその他の試験動物における有効投与量のヒトへの外挿法は、既知である。正確な用量は、抗体が診断用または治療用であるかどうか、治療領域の大きさと位置、抗体の正確な性質（例えば全抗体、断片または二重特異性抗体）、抗体に付着するあらゆる検出可能な標識またはその他の分子の性質をはじめとする、いくつかの要素に左右される。
【０２１０】
典型的な抗体用量は、１０〜１５０ｍｇ、５０〜１５０ｍｇ、８０〜１４０ｍｇまたは９０〜１１０ｍｇの範囲、または最も好ましくは１００ｍｇである。これらの用量は、１ｍｌの体積中の皮下投与のために提供されてもよい。これは成人患者の単回治療のための用量であり、それは小児および乳児のために比例的に調節してもよく、またその他の抗体形式のために分子量に比例して調節してもよい。用量および配合は、代案の投与経路のために調節し得る。例えば最高１０ｍｇ／ｋｇでのマブリリムマブの静脈内投与が、記載されている［７］。
【０２１１】
治療は、医師の自由裁量で毎日、週２回、毎週または毎月間隔で繰り返してもよい。好ましい治療計画では、阻害剤は１４日間間隔で投与される。臨床上の便益を維持しまたはさらに改善するために、および／または患者のＨＡＱ−ＤＩスコアの低下を維持しまたはさらに改善するために、治療を継続する必要があることもある。好ましくは、治療持続期間は、少なくとも８５日間であり、無期限に継続してもよい。
【０２１２】
本明細書で示されるデータは、本発明による阻害剤で治療された患者が、阻害剤の投与後に、長期間にわたり、ＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下などの臨床上の便益をはじめとする治療効果からの恩恵を被り続けてもよいことをさらに示す。臨床上の便益は、阻害剤投与に続いて、例えば少なくとも３回の阻害剤の常用量の投与に続いて、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月、または少なくとも３ヶ月期間にわたり、同一水準の、または場合によっては、より低いがなおも有意水準の便益で維持されてもよい。したがっていくつかの実施形態では、必要である場合、本発明の方法は、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月、または少なくとも３ヶ月期間にわたり、患者に治療効果を提供し続けながら、１回または複数回の治療休止を含んでもよい。
【０２１３】
治療薬が外科手術と組み合わされる場合、治療薬は、外科手術の前、および／または後に投与されてもよい。治療薬は、任意選択的に、外科治療の解剖学的部位に投与または直接塗布される。
【０２１４】
阻害剤は、結合メンバーに加えて少なくとも１つの構成要素を含んでなってもよい医薬組成物の形態で通常、投与される。したがって本発明によって使用される医薬組成物は、活性成分に加えて、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、緩衝液、安定剤または当業者に良く知られているその他の材料を含んでなってもよい。このような材料は無毒であるべきで、活性成分の有効性に干渉してはならない。担体またはその他の材料の正確な性質は、経口であってもよく、または例えば静脈内などの注射であってもよい、投与経路に左右される。経口投与のための医薬組成物は、錠剤、カプセル、粉末、液体または半固体形態であってもよい。錠剤は、ゼラチンなどの固体担体またはアジュバントを含んでなってもよい。液体医薬組成物は、一般に、水、鉱油、動物または植物油、鉱物油または合成油などの液体担体を含んでなる。生理学的食塩溶液、デキストロース、またはその他の糖類溶液、またはエチレングリコール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコールが包含されてもよい。静脈内注射、または苦痛部位への注射のためには、活性成分は、発熱物質を含まず、適切なｐＨ、等張性、および安定性を有する、非経口的に許容可能な水溶液の形態である。当業者は、例えば、塩化ナトリウム注射、リンゲル注射、乳酸加リンゲル注射などの等張ビヒクルを使用して、適切な溶液を十分に調製できる。必要に応じて、保存料、安定剤、緩衝液、抗酸化剤および／またはその他の添加剤が含まれてもよい。本発明の結合メンバーは、分子の物理化学的特性と送達経路に応じて、液体、半固体または固体形態で調合されてもよい。配合物は、例えば糖類、アミノ酸、および界面活性剤などの賦形剤、または賦形剤の組み合わせを含んでもよい。液体配合物は、広範囲に及ぶ抗体濃度とｐＨを含んでもよい。固体配合物は、例えば凍結乾燥、噴霧乾燥、または超臨界流体技術による乾燥によって製造されてもよい。抗ＧＭ−ＣＳＦＲα製剤は、意図される送達経路に左右され：例えば、肺送達のための製剤は、吸入に際して肺深部内への浸透を確実にする物理特性がある粒子からなってもよく；局所製剤は、薬剤が作用部位に常在する時間を延長させる、粘度調整剤を含んでもよい。特定の実施形態では、結合メンバーは、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達系をはじめとする放出制御製剤などの、迅速な放出から結合メンバーを保護する担体と共に調製されてもよい。酢酸ビニルエチレン、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーを使用し得る。このような製剤を調製する多数の方法が、当業者に知られている。例えばＲｏｂｉｎｓｏｎ，１９７８［６４］を参照されたい。
【０２１５】
ＤＡＳ２８−ＣＲＰ
臨床上の便益は、例えば１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下、および／または２．６未満へのＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下などのＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下に基づいて、判定してもよい。
【０２１６】
ＤＡＳ２８−ＣＲＰは、以前述べられたようにして判定し得る［１２］、［１３］。Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．［１３］によって説明されるように、ＤＡＳ２８は、２８個の圧痛および腫脹関節数、総体的な健康（ＧＨ；０＝最良、１００＝最悪の１００ｍｍ全身視覚的評価スケール（ＶＡＳ）を使用する患者による疾患活動性評価）に加えて、急性期反応物質レベル（ＥＳＲ（ｍｍ／ｈ）またはＣＲＰ（ｍｇ／リットル）のいずれか）を検討する。ＤＡＳ２８値は、以下のように計算される：
ＤＡＳ２８−ＣＲＰ＝０．５６＊√（ＴＪＣ２８）＋０．２８＊√（ＳＪＣ２８）＋０．０１４＊ＧＨ＋０．３６＊ｌｎ（ＣＲＰ＋１）＋０．９６；
式中、ＴＪＣ＝圧痛関節数、およびＳＪＣ＝腫脹関節数である。
【０２１７】
ＡＣＲ基準
臨床上の便益は、ＡＣＲ基準に基づいて断定してもよい。ＲＡ患者は、例えば無治療（例えば治療前基線）またはプラセボでの治療と比較して、ＡＣＲ２０（２０パーセント改善）で得点し得る。典型的に、患者の基線値と比較して改善を測定することが都合良い。ＡＣＲ２０基準は、圧痛（有痛性）関節数および腫脹関節数双方の２０％改善に加えて、少なくとも３〜５個の追加的な測定値の２０％改善を含んでもよい：
１．患者による視覚的アナログ尺度での疼痛評価（ＶＡＳ）、
２．患者による疾患活動性の全体的評価（ＶＡＳ）、
３．医師による疾患活動性の全体的評価（ＶＡＳ）、
４．健康評価質問票（ＨＡＱ）で測定される患者による機能障害自己評価、および
５．急性期反応物質、ＣＲＰまたはＥＳＲ。
【０２１８】
１９８０年に導入されたＨＡＱは、患者中心の成果評価［６５］のモデルを表わすためにデザインされた、最初の患者報告成果の手段の１つであった。
【０２１９】
ＡＣＲ５０および７０は、同様に定義される。好ましくは、患者には、少なくともＡＣＲ２０、好ましくは少なくともＡＣＲ３０、より好ましくは少なくともＡＣＲ５０、なおもより好ましくは少なくともＡＣＲ７０、最も好ましくは少なくともＡＣＲ７５以上のスコアを達成するのに効果的な量の本発明のＣＤ２０抗体が投与される。
【０２２０】
健康評価質問票を用いた機能障害指数（ＨＡＱ−ＤＩ）
ＨＡＱ−ＤＩは、患者の報告する身体障害の標準化された測定値であり、日々の活動を実行する能力に関する患者の報告を判定する。ＨＡＱおよびＨＡＱ−ＤＩの詳細な情報は、公開されている［６５］。
【実施例】
【０２２１】
臨床試験
研究デザイン概要
２３９人のヨーロッパ人被験者と、５１人の日本人被験者の計５１６人の被験者をスクリーニングし、引き続いて４つのコホートに無作為化した。これらの内、２８４人はＩＴＴ集団に含まれた。全てのコホートは、基線および疾患特性の観点から均衡していた。
【０２２２】
第ＩＩ相  無作為化二重盲検対照試験
被験者数  ２８４人（ＩＴＴ集団）
活性：プラセボ  ２：１
コホート  １０ｍｇ、３０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ
処置  中等度から極度に活動性のＲＡがある成人患者において、マブリリムマブを安定用量メトトレキサートに添加した。
【０２２３】
第ＩＩ相無作為化二重盲検対照複数漸増用量試験を実施して、ＲＡがある被験者におけるマブリリムマブの効能、安全性、および耐容性を評価した。試験は、ＲＡおける臨床転帰、投与量と安全性および効能間の相関、およびマブリリムマブの薬物動態と免疫原性をはじめとする、いくつかの要素の評価を可能にした。
【０２２４】
少なくとも中等度に活動性のＲＡがある被験者は、８５日間の投薬期間にわたり、メトトレキサートと組み合わせて、皮下投与されるマブリリムマブを複数回投与され、またはメトトレキサートのみを投与され、マブリリムマブまたはプラセボは１４日間毎に投与された。安定用量のメトトレキサートは、≧５ｍｇ／週の葉酸補給と共に維持された。被験者はまた、さらに１２週間の追跡調査期間にわたりモニターされた。
【０２２５】
被験者は、安定用量の非ステロイド性抗炎症薬および経口コルチコステロイド（≦１０ｍｇ／日のプレドニゾロンまたは同等物）の投与を許された。
【０２２６】
標的集団は、メトトレキサート（ｍｅｔｈｏｔｒａｘａｔｅ）での治療にもかかわらず、少なくとも３ヶ月の持続期間にわたり、１９８７年ＡＣＲ分類基準［１８］によって定義されるＲＡがある１８〜８０才の女性または男性であり、スクリーニングおよび基線においてＤＡＳ２８≧３．２によって規定される中等度から重度の疾患活性があり、スクリーニングに先だって少なくとも１２週間にわたり、≧５ｍｇ／週の葉酸補給と共に７．５〜２５ｍｇ／週でメトトレキサートを投与され、スクリーニングに先だってメトトレキサートが安定用量で少なくとも４週間維持され、リウマチ因子および／または抗ＣＣＰＩｇＧ抗体について陽性であった。
【０２２７】
ＧＭ−ＣＳＦ経路の阻害が、肺胞マクロファージ機能を抑制し得る可能なリスクのため［６６］、追加的な肺検査を追加して、肺機能を綿密にモニターした。
【０２２８】
効能評価は、基線で、および処置期間中２週間毎に実施した。試験の主要評価項目は、１２週目における、プラセボと対比した、基線からの１．２のＤＡＳ２８−ＣＲＰ改善［１３］を達成した、合算したマブリリムマブ処置被験者の比率であった。奏効率を計算し、レスポンダーは、基線ＤＡＳ２８−ＣＲＰから１．２を超える低下を示す被験者として定義された。
【０２２９】
二次有効性評価項目は、ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、およびＡＣＲ７０奏効、寛解率（ＤＡＳ２８−ＣＲＰ＜２．６）、およびＤＡＳ−２８−ＣＲＰ  ＥＵＬＡＲ奏効基準であった。追加的な評価は、寛解開始までの時間、基線からの１．２ポイントの改善、腫脹および圧痛関節数、および急性期反応物質（ＣＲＰおよびＥＳＲ）測定を包含した。健康評価質問票を用いた機能障害指数（ＨＡＱ−ＤＩ）をはじめとする、患者が報告する成果もまた評価された［６７］。
【０２３０】
統計学的方法
サンプルサイズ計算は、主要有効性評価項目（１２週目におけるＤＡＳ２８−ＣＲＰの１．２ポイントの変化）に基づいた。１０％のプラセボ奏効率、１５％の脱落率、０．０５の両側第一種の過誤、および２：１（活性：プラセボ）の無作為化比率が想定されて、両側フィッシャーの正確確率検定に基づく分析のために、奏効率における２０％の差を検出する８６％の検出力がある、２１６人の被験者の総サンプルサイズが提供された。２６４人の被験者の全体的計画サンプルサイズを与えるために、日本のコホートでは、さらに４８人の被験者が必要だった。
【０２３１】
主要評価項目、ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、およびＡＣＲ７０をはじめとする全ての奏効率は、フィッシャーの正確確率検定を使用して分析した。ＤＡＳ２８スコアにおける基線からの変化は、基線ＤＡＳ２８の共変量と共に混合モデル反復測定分析を用いて分析した。Ｃｏｃｈｒａｎ−Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌ検定を使用して、ＤＡＳ２８欧州リウマチ学会（ＥＵＬＡＲ）奏効基準を分析した。ＤＡＳ２８の改善は、下で示されるＥＵＬＡＲ奏効基準を使用して分類された。
【０２３２】
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非パラメトリックログランク検定を使用して、時間−対−奏効開始を分析した。
【０２３３】
全ての効能分析は、包括解析（ＩＴＴ）集団からのデータを使用して実施した。感度分析は、パー・プロトコル（ＰＰ）集団を使用して実施した。各分析を実施して、合算したプラセボと合算したマブリリムマブ群とを比較し、合算したプラセボ群と、各マブリリムマブ用量コホートとの比較がそれに続いた。安全性データの解析は、いずれかの用量の治験薬を投与された全被験者として定義される安全性解析集団で実施した。
【０２３４】
主要評価項目ならびにその他のレスポンダー分析のために、研究処置を中止した、バックグラウンドメトトレキサート用量を変更した、またはその他のＲＡ薬剤を投与された被験者には、非レスポンダー代入を使用した。その他の欠損データ点は、最終観測値延長法を使用して代入した。基線解析からのＤＡＳ２８変化には、代入は適用しなかった。
【０２３５】
ヨーロッパの臨床試験結果
基線特性
【表１】
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【表２】
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【０２３６】
結果の概要と結論
結果：１２週目には、プラセボ群の３４．７％に対して、５５．７％のマブリリムマブ処置被験者がＤＡＳ２８−ＣＲＰ奏効を達成した（ｐ＝０．００３）。個々のコホート中では、それぞれ４１．０％（１０ｍｇ；ｐ＝０．５４３）、６１．０％（３０ｍｇ；ｐ＝０．０１１）、５３．８％（５０ｍｇ；ｐ＝０．０７１）、および６６．７％（１００ｍｇ；ｐ＝０．００１）の被験者がレスポンダーであった。速い奏効開始は、早くも２週間で観察され、差は２９日目には有意になった（ｐ＝０．０１７）。１００ｍｇ用量は、プラセボと比較して、ＤＡＳ２８−ＣＲＰ寛解（２３．１％対６．７％、ｐ＝０．０１６）、米国リウマチ学会（ＡＣＲ）奏効基準の全てのカテゴリー（ＡＣＲ２０：６９．２％対４０．０％、ｐ＝０．００５；ＡＣＲ５０：３０．８％対１２．０％、ｐ＝０．０２１；ＡＣＲ７０：１７．９％対４．０％、ｐ＝０．０３０）、および健康評価質問票を用いた機能障害指数（ＨＡＱ−ＤＩ）（−０．４８対改善対−０．２５、ｐ＝０．００５）に有意な改善を与えた。マブリリムマブは、急性期反応物質（ＣＲＰおよびＥＳＲ）の抑制でなく正常化と関連していた。有害事象は、一般に軽度または中等度の強度であった。顕著な過敏性反応、重篤なまたは日和見感染または肺パラメータ変化は報告されなかった。マブリリムマブによる処置は、いかなる特定の安全性リスクとも関連していなかった。
【０２３７】
結論：マブリリムマブは、特に高用量コホートで、迅速かつ著明な奏効開始を示した。効能は、許容できる安全性プロファイルで１２週間にわたり維持され、さらなる臨床開発を支持した。
【０２３８】
効能
各処置群において、奏効率は、例えば１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下の達成、またはＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０またはＡＣＲ７０達成などの規定の基準を満たす被験者の百分率として判定した。
【０２３９】
奏効率は、各処置群について、８５日間の処置期間にわたる、＞１．２のＤＡＳ２８−ＣＲＰ改善によって判定した（図１、図２、図３）。全体的には、３０ｍｇ、５０ｍｇ、および１００ｍｇ用量コホート中のマブリリムマブを投与された６０．５％の被験者は、１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ改善（すなわち低下）を示した。１００ｍｇ用量コホートでは、この数値は６６．７％であった。これらの奏効率は、対応する対照（プラセボ）コホートの３０．４％の奏効率と比較された。これらの数値は、マブリリムマブを投与されなかった被験者と比較して、マブリリムマブによる処置が、１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下を示した被験者の比率をほぼ倍にしたことを示唆する。１００ｍｇマブリリムマブ投与群は、全体的に最大の奏効率で、最も迅速な奏効もまた示した。各被験者の奏効開始までの時間は図４に示され、カプラン・マイヤー法を使用してプロットに示される値を計算した。図５は、８５日目におけるＤＡＳ２８−ＣＲＰの実験による分布プロットである。
【０２４０】
マブリリムマブ（合算した全ての用量、ｎ＝１５８）による処置は、１２週目において、基線からＤＡＳ２８−ＣＲＰスコアの１．２ポイント低下を達成した患者のプラセボ（ｎ＝７５）よりも有意により高い比率と関係していた（５５．７％に対してプラセボ投与被験者では３４．７％；ｐ＝０．００３）。個々の１０、３０、５０、および１００ｍｇコホート中のレスポンダーの比率は、それぞれ４１．０％（ｐ＝０．５４３）、６１．０％（ｐ＝０．０１１）、５３．８％（ｐ＝０．０７１）、および６６．７％（ｐ＝０．００１）であった。１０ｍｇ用量および対応するプラセボを分析から除去した場合、６０．５％のマブリリムマブ処置被験者が奏効基準を達成したのに対し、プラセボでは３０．４％であった（ｐ＜０．００１）。ＤＡＳ２８−ＣＲＰスコアにおける基線からの補正平均変化に関して、プラセボと比較した５０ｍｇおよび１００ｍｇコホートの有意差（それぞれｐ＝０．０１３およびｐ＝０．００４）もまた、早くも２週目に実証された。
【表３】
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【０２４１】
各処置群について、スクリーニング時、および１、１５、２９、４３、５７、７１、および８５日目に、ＤＡＳ２８−ＣＲＰ寛解（＜２．６）奏効率が測定された（図６、表３ｂ）。全体的に、１００ｍｇマブリリムマブ投与群は、７１日目および８５日目までに、最大奏効率を示した。寛解開始までの時間は、図７に示される。
【０２４２】
我々は、全てのコホートにおいて、ＤＡＳ２８−ＣＲＰの経時的な寛解の増大を観察した。ＤＡＳ２８−ＣＲＰ寛解の開始までの時間の分析からは、マブリリムマブコホートとプラセボ間の明らかな差が早くも４週目に示され、プラセボ（６．７％）および１００ｍｇマブリリムマブコホート間の寛解率の有意差（２３．１％；ｐ＝０．０１６）は週１２週目に示された。さらに、１２週目には、マブリリムマブを投与された３１％の被験者（１０ｍｇ＝２６％；３０ｍｇ＝３２％；５０ｍｇ＝３３％；１００ｍｇ＝３１％）が、プラセボの２０％と比較して、低い疾患活動性（ＤＡＳ２８−ＣＲＰ＜３．２）を有した（ｐ＝０．１１５）。
【表４】
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【０２４３】
ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、およびＡＣＲ７０で評価された奏効率（％）を各処置群について判定した（図８、図９、図１０、図１１）。ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、およびＡＣＲ７０を達成した被験者の比率は、１００ｍｇマブリリムマブ処置群で最大であった。１００ｍｇマブリリムマブ投与群は、測定された全ての時点において、ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、およびＡＣＲ７０による判定で、最大の奏効率を示した。図１２は、８５日目における、実験によるＡＣＲｎ分布プロットである。
【０２４４】
１２週目には、プラセボと比べて、より高いＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、およびＡＣＲ７０奏効率がマブリリムマブで観察された。全体的には、最大奏効率は、プラセボ（ＡＣＲ２０＝４１．０％；ＡＣＲ５０＝１２．０％；ＡＣＲ７０＝４．０）と比較して、１００ｍｇ用量（ＡＣＲ２０＝６９．２％、ｐ＝０．００５；ＡＣＲ５０＝３０．８％、ｐ＝０．０２１；ＡＣＲ７０＝１７．９％、ｐ＝０．０３０）で観察された。プラセボとマブリリムマブ１００ｍｇ（２０．０％対５３．８％、ｐ＜０．００１）間のＡＣＲ２０奏効率の差は、４週目に初めて観察された。マブリリムマブを投与された被験者のより大きな割合が、プラセボと比較して、中等度のまたは良好な奏効を示した（６７．７％対５０．７％；ｐ＝０．０２５）。中等度の（４６．２％）または良好なレスポンダー（３０．８％）の最高の比率は、１００ｍｇ群内に見られた。
【表５】
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【表６】
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【表７】
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【０２４５】
図１３は、各処置群について、８５日間の処置期間にわたり測定された、基線からの腫脹関節数変化（平均値＋／−ＳＥ）を示す。
【０２４６】
図１４は、各処置群について、８５日間の処置期間にわたり測定された、基線からの圧痛関節数変化（平均値＋／−ＳＥ）を示す。
【０２４７】
図１５は、各処置群について、スクリーニング時および８５日間の処置期間にわたる、疾患活動性（ＣＭ）評価によって表わされる、医師による全体的評価（平均値＋／−ＳＥ）を示す。
【０２４８】
図１６は、各処置群について、スクリーニング時および８５日間の処置期間にわたる、疾患活動性（ＭＭ）評価によって表わされる、患者による全体的評価（平均値＋／−ＳＥ）を示す。
【０２４９】
図１７は、各処置群について、スクリーニング時および８５日間の処置期間にわたる、患者による疼痛評価（平均値＋／−ＳＥ）を示す。
【０２５０】
我々は、早くも６週目に、５０ｍｇ用量のマブリリムマブではＨＡＱ−ＤＩの改善に向かう傾向、１００ｍｇ用量では、プラセボの−０．１９に対して−０．３６の変化の統計的に有意な改善を見た（ｐ＝０．０４１）。ＨＡＱ−ＤＩスコアは、マブリリムマブ１００ｍｇコホートでさらに改善され、プラセボの−０．２５と比較して１２週目には、−０．４８に達した（ｐ＝０．００５）。図１８ａは、各処置群について、８５日間の処置期間にわたる、基線からのＨＡＱ−ＤＩ変化（平均値＋／−）ＳＥ）を示す。
【表８】
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【０２５１】
我々は、２週目からＣＲＰ（ｐ＝０．００４）およびＥＳＲ（ｐ＝０．００５）について、４週目から腫脹関節数（ｐ＝０．００２）および圧痛関節数（ｐ＝０．０１１）について、プラセボと比較して、マブリリムマブ（合算した全ての用量）による有意な改善もまた観察した。図１９は、各処置群について、スクリーニング時および８５日間の処置期間にわたり測定された、ＣＲＰ濃度（ｍｇ／ｌ、幾何平均）を示す。図２０は、各処置群について、スクリーニング時および８５日間の処置期間にわたり測定された、赤血球沈降分離速度（ＥＳＲ）（ＭＭ／ＨＲ、幾何平均）を示す。
【表９】
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【０２５２】
安全性
全ての患者は、治験全体を通じて、重篤有害事象（ＳＡＥ）をはじめとする有害事象（ＡＥ）についてモニターされた。
【０２５３】
肺機能（ＦＥＶ１、ＦＶＣ、ＤＬＣＯ）検査および呼吸困難スコアを評価して、肺胞マクロファージ機能および肺サーファクタント恒常性の変化の可能性に起因する、あらゆる呼吸関連有害事象がモニターされた［６８］。その他の安全性評価は、有害事象（ＡＥ）と重篤有害事象（ＳＡＥ）の発生、血清化学検査、血液学、妊娠可能女性に対する妊娠試験、および尿検査を含んだ。抗薬剤抗体は、研究処置期間中の５、７、および９週目、そして経過観察期間全体を通じて毎週評価した。
【０２５４】
１２週間の処置期間にわたり、プラセボを投与された２６人（３２．９％）の被験者、およびいずれかの用量のマブリリムマブを投与された７３人（４５．６％）の被験者がＡＥを経験した。最も頻繁に報告されたＡＥは、一酸化炭素の肺拡散能力（ＤＬＣＯ）の低下であったが、これらの事象は、独立した呼吸器科医によるさらなる調査によって、臨床的な意義を持つと結論付けられなかった。鼻咽頭炎および上方気道感染（軽度〜中等度の重症度）が、次点の最も一般的な事象であった。ほとんどのＡＥは軽度または中等度であり、３人の被験者のみが安全性の理由で脱落した。プラセボを投与された１人の被験者は、ＲＡ悪化のために脱落した。２人の被験者は、プロトコルが規定するＤＬＣＯ変化のために投薬を中断した。臨床的な意義を持つ、または持続性の肺機能変化の事例はなかった。
【０２５５】
処置関連ＡＥは、プラセボを投与された１０／７９人（１２．７％）の被験者と、マブリリムマブを投与された２７／１６０人（１６．９％）の被験者に出現した。治験中の死亡はなく、マブリリムマブ用量と、いかなるＡＥの発生頻度または重篤性との相関もなかった。
【０２５６】
ＳＡＥは、プラセボ群の１人（１．３％）の被験者（ＲＡ悪化、上述）と、マブリリムマブを投与された３人（１．９％）の被験者（１０ｍｇコホート中の２人［５．１％］、１例の椎間板障害および１例の自然流産；および３０ｍｇコホート中の１人［２．４％］、上腕骨骨折）で報告された。我々は、いずれのＳＡＥも治験薬とは無関係であることを見出し、重篤な感染症または侵襲は観察されなかった。
【０２５７】
処置期間中に、アナフィラキシーまたは重篤な注射部位反応（局所性または全身性）の事例は報告されず、５０ｍｇコホート中の１人（２．５％）の被験者のみが過敏性を経験した。プラセボを含めた全ての処置群にわたり、抗薬剤抗体が検出された。マブリリムマブの効能、安全性または耐容性に対する、抗薬剤抗体の影響は観察されなかった。
【表１０】
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【表１１】
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【表１２】
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【０２５８】
迅速な作用開始および効能の維持
本明細書で報告される臨床試験では、マブリリムマブ処置は８５日目に終了した。最高（１００ｍｇ）用量では、２３．１％の被験者がＤＡＳ２８−ＣＲＰ＜２．６を達成し（プラセボ：６．７％）、１７．９％がＡＣＲ７０奏効を示した（プラセボ：４．０％）。プラセボと活性群の間の隔たりは、早くも４週目にＤＡＳ２８−ＣＲＰ＜２．６について観察され、迅速な作用開始が示唆された。
【０２５９】
８５日間の処置期間終了後の患者のモニタリングは、最後のマブリリムマブ投与に続いて、長期にわたり臨床的奏効が維持されたことを示し、ＤＡＳ２８−ＣＲＰ＜２．６および／またはＡＣＲ７０奏効を達成した被験者数は、１２週めになおも上昇しており、ピーク効能が達成されていなかったかもしれないことが示唆され、マブリリムマブ処置法の有益な効果が、最短でも数週間にわたり持続することが示唆された。
【０２６０】
図２１は、各処置来院時と、１６９日目までの追跡来院時に記録された、マブリリムマブで処置された患者およびプラセボ群の平均ＤＡＳ２８−ＣＲＰを示す。図２２は、１６９日目までの来院あたりの奏効率を示す。奏効は、基線からの少なくとも１．２のＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下として定義される。これらのデータは、ＤＡＳ２８−ＣＲＰに対するマブリリムマブの効果が、処置の終了する８５日目を超えて長時間にわたることを示す。
【０２６１】
持続性のＡＣＲ２０奏効はまた、８５日目の処置終了後も観察された（図２３）。
【０２６２】
患者はまた、８５日目における処置終了の後でさえも、それらの基線値と比較して、ＨＡＱ−ＤＩスコアの有意な低下を維持した。これは１００ｍｇ処置群で、特に顕著であった。（図２４）。
【０２６３】
日本の臨床試験結果
同一臨床試験プロトコルに従って、より小さな被験者群で、日本において追加的なサブ研究を実施した。５１人の患者をスクリーニングして、引き続いて４つのコホートに無作為化した。
【０２６４】
主要評価項目は高度に有意であり、ヨーロッパと日本の間で一貫性があった。１２週目に、１００ｍｇマブリリムマブで処置された７５．０％の被験者が、＞１．２のＤＡＳ２８−ＣＲＰ改善を達成し、プラセボを投与された２３．５％の被験者と比較して、差は５１．５％（ＣＩ８．２、７７．０）；ｐ＝０．０２８であった。
【０２６５】
全ての患者は、試験全体を通じて、重篤有害事象（ＳＡＥ）をはじめとする有害事象（ＡＥ）についてモニターされた。日本における安全性データは、ヨーロッパのデータと一致した。
【０２６６】
合算したヨーロッパおよび日本の臨床試験結果
ヨーロッパおよび日本の臨床試験からのデータを合算して分析した。
【０２６７】
基線特性
【表１３】
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【０２６８】
結果の概要と結論
ヨーロッパと日本のコホート間の基線特性は、日本のより低い平均体重（１４ｋｇ）、日本ではメトトレキサートのより低い用量が投与されたこと（日本の中央値＝１０ｍｇ／週；ヨーロッパの中央値＝１３．８ｍｇ／週）、およびより低い疾患活動性が観察されたこと以外は、概して同様であった。主要評価項目は高度に有意であり、ヨーロッパと日本の間で一貫性があった。有害事象は、一般に軽度または中等度の強度であった。顕著な過敏性反応、重篤なまたは日和見感染または肺パラメータ変化は報告されなかった。マブリリムマブによる処置は、いかなる特定の安全性リスクとも関連していなかった。
【０２６９】
結果：１２週目には、プラセボ群の３２．６％に対して、５４．２％のマブリリムマブ処置被験者（合わせた全ての用量）がＤＡＳ２８−ＣＲＰ奏効を達成した（ｐ＝０．００１）。個々のコホートでは、それぞれ３７．５％（１０ｍｇ；ｐ＝０．５７８）、６３．３％（３０ｍｇ；ｐ＝＜０．００１）、４７．９％（５０ｍｇ；ｐ＝０．０９９）、および６８．１％（１００ｍｇ；ｐ＝＜０．００１）の被験者がレスポンダーであった。早くも２週目に、この時点で観察されたプラセボとの有意差（ｐ＝０．０２２）がある、迅速な奏効開始が観察された。１００ｍｇ用量は、１２目週にプラセボと比較して、ＤＡＳ２８−ＣＲＰ（＜２．６）寛解（２３．４％対７．６％、ｐ＝０．０１５）、ＡＣＲ２０およびＡＣＲ５０（ＡＣＲ２０：７０．２％対３７．０％、ｐ＜０．００１；ＡＣＲ５０：３４．０％対１２．０％、ｐ＝０．００８；ＡＣＲ７０：１４．９％対５．４％、ｐ＝０．１０６）、および健康評価質問票を用いた機能障害指数（ＨＡＱ−ＤＩ）（−０．５２平均改善対−０．２４、ｐ＜０．００１）に有意な改善を与えた。
【０２７０】
結論：マブリリムマブは、特に高用量コホートで、迅速かつ著明な臨床的奏効開始を示した。効能は、許容できる安全性プロファイルで１２週間にわたり維持され、さらなる臨床開発を支持した。
【０２７１】
効能
ヨーロッパの臨床試験と同じく、各処置群において、奏効率は、例えば１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下の達成、またはＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０またはＡＣＲ７０達成などの規定の基準を満たす被験者の百分率として判定した。
【０２７２】
奏効率は、８５日間の処置期間にわたり、各処置群で＞１．２のＤＡＳ２８−ＣＲＰ改善によって判定した。全体的には、３０ｍｇ、５０ｍｇ、および１００ｍｇ用量コホート中のマブリリムマブを投与された５９．７％の被験者は、１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ改善（すなわち低下）を示した。１００ｍｇ用量コホートでは、この数値は６８．１％であった。これらの奏効率は、対応する対照（プラセボ）コホートの３０％未満の奏効率と比較された。これらの数値は、マブリリムマブを投与されなかった被験者と比較して、マブリリムマブによる処置が、１．２を超えるＤＡＳ２８−ＣＲＰ低下を示した被験者の比率をほぼ倍にしたことを示唆する。１００ｍｇマブリリムマブ投与群は、全体的に最大の奏効率で、最も迅速な奏効もまた示した。
【０２７３】
マブリリムマブ（合算した全ての用量、ｎ＝１９２）による処置は、１２週目において、基線からＤＡＳ２８−ＣＲＰスコアの１．２ポイント低下を達成した患者のプラセボ（ｎ＝９２）よりも有意により高い比率と関係していた（５４．２％に対してプラセボ投与被験者では３２．６％；ｐ＝０．００１）。個々の１０、３０、５０、および１００ｍｇコホート中のレスポンダーの比率は、それぞれ３７．５％（ｐ＝０．５７８）、６３．３％（ｐ＝０．００１）、４７．９％（ｐ＝０．０９９）、および６８．１％（ｐ＝０．００１）であった。ＤＡＳ２８−ＣＲＰスコアにおける基線からの補正平均変化に関して、プラセボと比較した５０ｍｇおよび１００ｍｇコホートの有意差（それぞれｐ＝０．０２１およびｐ＜０．００１）もまた、早くも２週目に実証された。
【表１４】
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【表１５】
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【０２７４】
各処置群について、スクリーニング時、および１、１５、２９、４３、５７、７１、および８５日目に、ＤＡＳ２８−ＣＲＰ寛解（＜２．６）奏効率が測定された（表１５）。全体的に、１００ｍｇマブリリムマブ投与群は、７１日目および８５日目までに、最大奏効率を示した。
【０２７５】
我々は、全てのコホートにおいて、ＤＡＳ２８−ＣＲＰの経時的な寛解の増大を観察した。ＤＡＳ２８−ＣＲＰ寛解の開始までの時間の分析からは、マブリリムマブコホートとプラセボ間の明らかな差が早くも４週目に示され、プラセボ（７．６％）および１００ｍｇマブリリムマブコホート間の寛解率の有意差（２３．４％；ｐ＝０．０１５）は週１２週目に示された。
【０２７６】
ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、およびＡＣＲ７０で評価された奏効率（％）を各処置群について判定した。ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、およびＡＣＲ７０を達成した被験者の比率は、この場合も１００ｍｇマブリリムマブ処置群で最大であることが示された。１００ｍｇマブリリムマブ投与群は、測定された全ての時点で、ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、およびＡＣＲ７０による判定で最大の奏効率を示した。１２週目には、プラセボと比べて、マブリリムマブでより高いＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、およびＡＣＲ７０奏効率が観察された。全体的には、最大奏効率は、プラセボ（ＡＣＲ２０＝３７．０％；ＡＣＲ５０＝１２．０％；ＡＣＲ７０＝５．４）と比較して、１００ｍｇ用量（ＡＣＲ２０＝７０．２％、ｐ＝＜０．００１；ＡＣＲ５０＝３４．０％、ｐ＝０．００３；ＡＣＲ７０＝１４．９％、ｐ＝０．１０６）で観察された。プラセボとマブリリムマブ１００ｍｇ（１５．２％対２９．８％、ｐ＝０．０４８）間のＡＣＲ２０奏効率の差は、２週目に初めて観察された。
【表１６】
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【表１７】
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【表１８】
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【表１９】
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【０２７７】
効能結論：合算した日本およびヨーロッパのデータは、マブリリムマブが、特に１００ｍｇ用量コホートで、迅速かつ著明な奏効開始を示したことを裏付ける。いかなる重大な安全性の問題も確認されず、マブリリムマブが良好な安全性および耐容性プロファイルを有することが示唆された。１００ｍｇ投薬群では、全ての主要および二次評価項目で改善が見られた。迅速な作用開始が観察されて、８５日目における処置の停止後も維持された。
【０２７８】
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２３  Ｗｉｔｔｅｎ，  Ｉａｎ  Ｈ．    ＆  Ｆｒａｎｋ，  Ｅｉｂｅ．    Ｄａｔａ  Ｍｉｎｉｎｇ：  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｍａｃｈｉｎｅ  Ｌｅａｒｎｉｎｇ  Ｔｏｏｌｓ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｊａｖａ  Ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｓ．    Ｍｏｒｇａｎ  Ｋａｕｆｍａｎｎ；  （Ｏｃｔｏｂｅｒ  １１，  １９９９），  ＩＳＢＮ：  １５５８６０５５２５
２４  Ｄｅｎｉｓｏｎ  Ｄａｖｉｄ  Ｇ．    Ｔ．  （Ｅｄｉｔｏｒ），  Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ  Ｃ．    Ｈｏｌｍｅｓ，  Ｂａｎｉ  Ｋ．    
２５  Ｇｈｏｓｅ，  Ａｒｕｐ  Ｋ．    ＆  Ｖｉｓｗａｎａｄｈａｎ，  Ｖｅｌｌａｒｋａｄ  Ｎ．．    Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，  Ｔｏｏｌｓ，  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．    ＩＳＢＮ：  ０−８２４７−０４８７−８
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４８  Ｈｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ  （２００３）  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２１，  ４８４−４９０
４９  Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２４２，  ４２３−４２６，  １９８８；
５０  Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ，  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，  ８５，  ５８７９−５８８３，  １９８８
５１  Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０  ６４４４−６４４８，  １９９３
５２  Ｒｅｉｔｅｒ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，  １４，  １２３９−１２４５，  １９９６
５３  Ｈｕ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ５６，  ３０５５−３０６１，  １９９６．
５４  Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，  Ｐ．  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ  Ｇ．  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ４，  ４４６−４４９  １９９３
５５  Ｒｉｄｇｅｗａｙ，  Ｊ．  Ｂ．  Ｂ．  ｅｔ  ａｌ，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，  ９，  ６１６−６２１，  １９９６
５６  Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．  １９７１  Ｄｅｃ  ３１；１９０：３８２−９３．
５７  Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．  ４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．  ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ．  １９８７
５８  Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  ５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．  ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  ＮＩＨ，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ．
５９  Ｇｅａｒｉｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．  ＥＭＢＯ  Ｊ．  ８  （１２）：  ３６６７−３６７６  （１９８９）  
６０  Ｃｒｏｓｉｅｒ，  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ  ８８：７７４４−７７４８  １９９１
６１  Ｒａｉｎｅｓ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ  ８８：８２０３−８２０７  １９９１
６２  Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ  Ｊ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ４７：  ６５９−６６４
６３  Ｂａｇｓｈａｗｅ  Ｋ．Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ａｎｔｉｂｏｄｙ，  Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ４：  ９１５−９２２
６４  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  Ｊ．  Ｒ．  ｅｄ．，  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９７８
６５  Ｂｒｕｃｅ  ＆  Ｆｒｉｅｓ，  Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  ２３（ｓｕｐｐｌ．  ３９）：  Ｓ１４−Ｓ１８  ２００５
６６  Ｔｒａｐｎｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２１：  ５１４−５２１  ２００９
６７  Ｆｒｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ２３：  １３７−１４５  １９８０
６８  Ｋｉｔａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １９０：８７５−８８０  １９９９
【０２７９】
配列表見出し
添付の配列表では、親クローンと、最適化されたパネルからの１９個を含んでなる２０個の抗体クローンについて、核酸およびアミノ酸配列が列挙される。抗体は、Ａｂ１〜Ａｂ２０で番号付けされる。親クローンは、配列番号２１〜３０および配列番号２１１〜２１２によって表わされる抗体３である。
【０２８０】
以下の一覧は、指示される分子の配列がその中で示される、配列番号を番号によって同定する：
（ｎｔ＝ヌクレオチド配列；ａａ＝アミノ酸配列）
１  抗体０１  ＶＨ  ｎｔ
２  抗体０１  ＶＨ  ａａ
３  抗体０１  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
４  抗体０１  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
５  抗体０１  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
６  抗体０１  ＶＬ  ｎｔ
７  抗体０１  ＶＬ  ａａ
８  抗体０１  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
９  抗体０１  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
１０  抗体０１  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
１１  抗体０２  ＶＨ  ｎｔ
１２  抗体０２  ＶＨ  ａａ
１３  抗体０２  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
１４  抗体０２  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
１５  抗体０２  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
１６  抗体０２  ＶＬ  ｎｔ
１７  抗体０２  ＶＬ  ａａ
１８  抗体０２  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
１９  抗体０２  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
２０  抗体０２  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
２１  抗体０３  ＶＨ  ｎｔ
２２  抗体０３  ＶＨ  ａａ
２３  抗体０３  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
２４  抗体０３  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
２５  抗体０３  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
２６  抗体０３  ＶＬ  ｎｔ
２７  抗体０３  ＶＬ  ａａ
２８  抗体０３  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
２９  抗体０３  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
３０  抗体０３  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
３１  抗体０４  ＶＨ  ｎｔ
３２  抗体０４  ＶＨ  ａａ
３３  抗体０４  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
３４  抗体０４  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
３５  抗体０４  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
３６  抗体０４  ＶＬ  ｎｔ
３７  抗体０４  ＶＬ  ａａ
３８  抗体０４  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
３９  抗体０４  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
４０  抗体０４  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
４１  抗体０５  ＶＨ  ｎｔ
４２  抗体０５  ＶＨ  ａａ
４３  抗体０５  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
４４  抗体０５  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
４５  抗体０５  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
４６  抗体０５  ＶＬ  ｎｔ
４７  抗体０５  ＶＬ  ａａ
４８  抗体０５  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
４９  抗体０５  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
５０  抗体０５  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
５１  抗体０６  ＶＨ  ｎｔ
５２  抗体０６  ＶＨ  ａａ
５３  抗体０６  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
５４  抗体０６  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
５５  抗体０６  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
５６  抗体０６  ＶＬ  ｎｔ
５７  抗体０６  ＶＬ  ａａ
５８  抗体０６  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
５９  抗体０６  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
６０  抗体０６  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
６１  抗体０７  ＶＨ  ｎｔ
６２  抗体０７  ＶＨ  ａａ
６３  抗体０７  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
６４  抗体０７  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
６５  抗体０７  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
６６  抗体０７  ＶＬ  ｎｔ
６７  抗体０７  ＶＬ  ａａ
６８  抗体０７  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
６９  抗体０７  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
７０  抗体０７  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
７１  抗体０８  ＶＨ  ｎｔ
７２  抗体０８  ＶＨ  ａａ
７３  抗体０８  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
７４  抗体０８  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
７５  抗体０８  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
７６  抗体０８  ＶＬ  ｎｔ
７７  抗体０８  ＶＬ  ａａ
７８  抗体０８  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
７９  抗体０８  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
８０  抗体０８  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
８１  抗体０９  ＶＨ  ｎｔ
８２  抗体０９  ＶＨ  ａａ
８３  抗体０９  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
８４  抗体０９  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
８５  抗体０９  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
８６  抗体０９  ＶＬ  ｎｔ
８７  抗体０９  ＶＬ  ａａ
８８  抗体０９  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
８９  抗体０９  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
９０  抗体０９  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
９１  抗体１０  ＶＨ  ｎｔ
９２  抗体１０  ＶＨ  ａａ
９３  抗体１０  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
９４  抗体１０  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
９５  抗体１０  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
９６  抗体１０  ＶＬ  ｎｔ
９７  抗体１０  ＶＬ  ａａ
９８  抗体１０  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
９９  抗体１０  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
１００  抗体１０  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
１０１  抗体１１  ＶＨ  ｎｔ
１０２  抗体１１  ＶＨ  ａａ
１０３  抗体１１  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
１０４  抗体１１  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
１０５  抗体１１  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
１０６  抗体１１  ＶＬ  ｎｔ
１０７  抗体１１  ＶＬ  ａａ
１０８  抗体１１  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
１０９  抗体１１  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
１１０  抗体１１  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
１１１  抗体１２  ＶＨ  ｎｔ
１１２  抗体１２  ＶＨ  ａａ
１１３  抗体１２  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
１１４  抗体１２  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
１１５  抗体１２  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
１１６  抗体１２  ＶＬ  ｎｔ
１１７  抗体１２  ＶＬ  ａａ
１１８  抗体１２  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
１１９  抗体１２  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
１２０  抗体１２  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
１２１  抗体１３  ＶＨ  ｎｔ
１２２  抗体１３  ＶＨ  ａａ
１２３  抗体１３  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
１２４  抗体１３  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
１２５  抗体１３  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
１２６  抗体１３  ＶＬ  ｎｔ
１２７  抗体１３  ＶＬ  ａａ
１２８  抗体１３  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
１２９  抗体１３  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
１３０  抗体１３  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
１３１  抗体１４  ＶＨ  ｎｔ
１３２  抗体１４  ＶＨ  ａａ
１３３  抗体１４  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
１３４  抗体１４  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
１３５  抗体１４  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
１３６  抗体１４  ＶＬ  ｎｔ
１３７  抗体１４  ＶＬ  ａａ
１３８  抗体１４  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
１３９  抗体１４  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
１４０  抗体１４  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
１４１  抗体１５  ＶＨ  ｎｔ
１４２  抗体１５  ＶＨ  ａａ
１４３  抗体１５  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
１４４  抗体１５  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
１４５  抗体１５  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
１４６  抗体１５  ＶＬ  ｎｔ
１４７  抗体１５  ＶＬ  ａａ
１４８  抗体１５  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
１４９  抗体１５  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
１５０  抗体１５  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
１５１  抗体１６  ＶＨ  ｎｔ
１５２  抗体１６  ＶＨ  ａａ
１５３  抗体１６  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
１５４  抗体１６  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
１５５  抗体１６  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
１５６  抗体１６  ＶＬ  ｎｔ
１５７  抗体１６  ＶＬ  ａａ
１５８  抗体１６  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
１５９  抗体１６  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
１６０  抗体１６  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
１６１  抗体１７  ＶＨ  ｎｔ
１６２  抗体１７  ＶＨ  ａａ
１６３  抗体１７  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
１６４  抗体１７  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
１６５  抗体１７  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
１６６  抗体１７  ＶＬ  ｎｔ
１６７  抗体１７  ＶＬ  ａａ
１６８  抗体１７  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
１６９  抗体１７  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
１７０  抗体１７  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
１７１  抗体１８  ＶＨ  ｎｔ
１７２  抗体１８  ＶＨ  ａａ
１７３  抗体１８  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
１７４  抗体１８  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
１７５  抗体１８  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
１７６  抗体１８  ＶＬ  ｎｔ
１７７  抗体１８  ＶＬ  ａａ
１７８  抗体１８  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
１７９  抗体１８  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
１８０  抗体１８  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
１８１  抗体１９  ＶＨ  ｎｔ
１８２  抗体１９  ＶＨ  ａａ
１８３  抗体１９  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
１８４  抗体１９  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
１８５  抗体１９  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
１８６  抗体１９  ＶＬ  ｎｔ
１８７  抗体１９  ＶＬ  ａａ
１８８  抗体１９  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
１８９  抗体１９  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
１９０  抗体１９  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
１９１  抗体２０  ＶＨ  ｎｔ
１９２  抗体２０  ＶＨ  ａａ
１９３  抗体２０  ＶＨ  ＣＤＲ１  ａａ
１９４  抗体２０  ＶＨ  ＣＤＲ２  ａａ
１９５  抗体２０  ＶＨ  ＣＤＲ３  ａａ
１９６  抗体２０  ＶＬ  ｎｔ
１９７  抗体２０  ＶＬ  ａａ
１９８  抗体２０  ＶＬ  ＣＤＲ１  ａａ
１９９  抗体２０  ＶＬ  ＣＤＲ２  ａａ
２００  抗体２０  ＶＬ  ＣＤＲ３  ａａ
２０１  ＧＭ−ＣＳＦＲα直鎖残基配列
２０２  ヒトＧＭ−ＣＳＦＲαの完全長アミノ酸配列
２０３  ヒトＧＭ−ＣＳＦＲα細胞外ドメインのＦＬＡＧ標識
２０４  ＦＬＡＧペプチド
２０５  ヒトＧＭ−ＣＳＦＲα細胞外ドメインのアミノ酸配列
２０６  成熟ＧＭ−ＣＳＦＲα
２０７  抗体１  ＶＬ  ｎｔ
２０８  抗体１  ＶＬ  ａａ
２０９  抗体２  ＶＬ  ｎｔ
２１０  抗体２  ＶＬ  ａａ
２１１  抗体３  ＶＬ  ｎｔ
２１２  抗体３  ＶＬ  ａａ
２１３  抗体４  ＶＬ  ｎｔ
２１４  抗体４  ＶＬ  ａａ
２１５  抗体５  ＶＬ  ｎｔ
２１６  抗体５  ＶＬ  ａａ
２１７  抗体６  ＶＬ  ｎｔ
２１８  抗体６  ＶＬ  ａａ
２１９  抗体７  ＶＬ  ｎｔ
２２０  抗体７  ＶＬ  ａａ
２２１  抗体８  ＶＬ  ｎｔ
２２２  抗体８  ＶＬ  ａａ
２２３  抗体９  ＶＬ  ｎｔ
２２４  抗体９  ＶＬ  ａａ
２２５  抗体１０  ＶＬ  ｎｔ
２２６  抗体１０  ＶＬ  ａａ
２２７  抗体１１  ＶＬ  ｎｔ
２２８  抗体１１  ＶＬ  ａａ
２２９  抗体１２  ＶＬ  ｎｔ
２３０  抗体１２  ＶＬ  ａａ
２３１  抗体１３  ＶＬ  ｎｔ
２３２  抗体１３  ＶＬ  ａａ
２３３  抗体１４  ＶＬ  ｎｔ
２３４  抗体１４  ＶＬ  ａａ
２３５  抗体１５  ＶＬ  ｎｔ
２３６  抗体１５  ＶＬ  ａａ
２３７  抗体１６  ＶＬ  ｎｔ
２３８  抗体１６  ＶＬ  ａａ
２３９  抗体１７  ＶＬ  ｎｔ
２４０  抗体１７  ＶＬ  ａａ
２４１  抗体１８  ＶＬ  ｎｔ
２４２  抗体１８  ＶＬ  ａａ
２４３  抗体１９  ＶＬ  ｎｔ
２４４  抗体１９  ＶＬ  ａａ
２４５  抗体２０  ＶＬ  ｎｔ
２４６  抗体２０  ＶＬ  ａａ
２４７  抗体６  ＶＨ  ｎｔ
２４８  抗体６  ＶＨ  ａａ
２４９  抗体６  ＶＬ  ｎｔ
２５０  抗体６  ＶＬ  ａａ
２５１  ＶＨ  ＦＲ１  ａａ
２５２  ＶＨ  ＦＲ２  ａａ
２５３  ＶＨ  ＦＲ３  ａａ
２５４  ＶＨ  ＦＲ４  ａａ
２５５  ＶＬ  ＦＲ１  ａａ
２５６  ＶＬ  ＦＲ２  ａａ
２５７  ＶＬ  ＦＲ３  ａａ
２５８  ＶＬ  ＦＲ４  ａａ
【０２８１】
抗体１〜２０のＶＬドメインヌクレオチド配列は、配列番号６、１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４６、１５６、１６６、１７６、１８６、および１９６の３’末端に示されるｇｃｇコドンを含まない。同様に、ＶＬドメインアミノ酸配列は、それぞれ配列番号７、１７、２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、１５７、１６７、１７７、１８７、および１９７中のＣ末端Ａｌａ残基（残基１１３）を含まない。Ａｌａ１１３残基および対応するｇｃｇコドンは、抗体１〜２０の中で発現しない。生殖細胞系遺伝子断片、特にＪＬ２との、書面による配列比較は、Ａｌａ残基と対応するｇｃｇコドンが、ＶＬドメインの一部を構成しないことを示唆する。
【０２８２】
位置１１２のＧｌｙ残基は、発現されたｓｃＦｖおよびＩｇＧ配列中に存在した。しかしこの残基は、ＶＬドメインのフレームワーク４領域を構成する、例えばＪＬ２などのヒト生殖細胞系ｊ断片配列中に存在しない。Ｇｌｙ残基は、ＶＬドメインの一部と見なされない。
【０２８３】
ＩｇＧの軽鎖を発現するために、ＶＬドメインをコードする第１のエクソンと、ＣＬドメインをコードする第２のエクソンと、第１のエクソンおよび第２のエクソンを隔てるイントロンとを含んでなる、抗体軽鎖をコードするヌクレオチド配列が提供された。正常な状況下では、イントロンは、細胞ｍＲＮＡプロセッシング機構によってスプライシングで切り出され、第１のエクソンの３’末端が第２のエクソンの５’末端に連結される。したがって前記ヌクレオチド配列を有するＤＮＡがＲＮＡとして発現された場合、第１および第２のエクソンは共にスプライスされた。スプライスされたＲＮＡの翻訳からは、ＶＬおよびＣＬドメインを含んでなるポリペプチドが生じる。スプライシング後、位置１１２のＧｌｙは、ＶＬドメインフレームワーク４配列の最後の塩基（ｇ）と、ＣＬドメインの最初の２つの塩基（ｇｔ）とによってコードされる。
【０２８４】
抗体１〜２０のＶＬドメイン配列は、上述の配列番号１８６〜２４６である。ＶＬドメインヌクレオチド配列は、最後のコドンとしてｃｔａで終わり、Ｌｅｕが、対応するＶＬドメインアミノ酸配列中の最後のアミノ酸残基である。
【０２８５】
配列番号５１、５２、５６、５７、２１６、および２１７に示される生殖系列化ＶＨおよびＶＬドメイン配列に加えて、抗体６の非生殖系列化ＶＨおよびＶＬドメイン配列が、配列番号２４７〜２５０に示される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８ａ】
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【図１８ｂ】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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