(57)【要約】  本発明は、一般式（Ｉ）の化合物であって、式中、  Ｚ１はＳまたはＯ、好ましくはＳであり；−Ｚ２−は−ＮＲａ−、ＲａはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、好ましくはＲａはＨ；−Ｎ＝；−Ｏ−；−Ｓ−；−ＣＲｂ＝、ＲｂはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、好ましくはＨ；−ＣＨＲｃ−、ＲｃはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、あるいは−ＣＨ２−であり；好ましくは−Ｚ２−は−ＮＨ−あるいは−Ｎ＝であり；各Ｒ１およびＲ２は独立してＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆであり；好ましくはＲ１およびＲ２は共に、ＮおよびＺ２と、後に置換基を導入される複素環を形成し、ただし前記複素環はインドールではなく；Ｒ５はＨ、ＯＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルケニル、Ｃ１−４アルキニル、アミンであり、好ましくはＲ５はＮＨ２、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｉであり；より好ましくはＲ５はＨあるいはＣＨ３であり；さらに一層好ましくはＲ５はＣＨ３であり；各Ｒ８およびＲ９は独立してＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆであり；好ましくはＲ８およびＲ９は共に、５員環あるいは６員環を形成し、好ましくは５員環あるいは６員環の複素環を形成し、より好ましくは１，３−ジオキサシクロペンテンあるいは１，４−ジオキサンを形成し；各Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１０およびＲ１１は独立してＨ、ＯＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルケニル、Ｃ１−４アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉであり；好ましくはＨ，ＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｉであり；より好ましくはＨあるいはＣＨ３であり；さらに一層好ましくはＨである、化合物；ならびに、少なくとも一つの医薬的に許容される賦形剤を伴う、一般式（Ｉ）の化合物、あるいは、そのエステルまたは塩を含む医薬組成物；および、癌および血管新生の疾病の治療においてニューロピリン経路を阻害する目的でのそれらの使用に関する。【選択図】なし
2014515034.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2014515034.tif 000022
の化合物であって、
式中、
Ｚ１はＳまたはＯ、好ましくはＳであり；
−Ｚ２−は−ＮＲａ−、ＲａはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、好ましくはＲａはＨ；−Ｎ＝；−Ｏ−；−Ｓ−；−ＣＲｂ＝、ＲｂはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、好ましくはＨ；−ＣＨＲｃ−、ＲｃはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、あるいは−ＣＨ２−であり；好ましくは−Ｚ２−は−ＮＨ−あるいは−Ｎ＝であり；
各Ｒ１およびＲ２は独立してＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆであり；好ましくはＲ１およびＲ２は共に、ＮおよびＺ２と、後に置換基を導入される複素環を形成し、ただし前記複素環はインドールではなく；
Ｒ５はＨ、ＯＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルケニル、Ｃ１−４アルキニル、アミンであり、好ましくはＲ５はＮＨ２、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｉであり；より好ましくはＲ５はＨあるいはＣＨ３であり；さらに一層好ましくはＲ５はＣＨ３であり；
各Ｒ８およびＲ９は独立してＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆであり；好ましくはＲ８およびＲ９は共に、５員環あるいは６員環を形成し、好ましくは５員環あるいは６員環の複素環を形成し、より好ましくは１，３−ジオキサシクロペンテンあるいは１，４−ジオキサンを形成し；
各Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１０およびＲ１１は独立してＨ、ＯＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルケニル、Ｃ１−４アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉであり；好ましくはＨ，ＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｉであり；より好ましくはＨあるいはＣＨ３であり；さらに一層好ましくはＨである、化合物。
【請求項２】
前記式中、
Ｚ１はＳまたはＯ、好ましくはＳであり；
−Ｚ２−は−ＮＲａ−、ＲａはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、好ましくはＨ；−Ｎ＝；−Ｏ−；−Ｓ−；−ＣＲｂ＝、ＲｂはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、好ましくはＨ；−ＣＨＲｃ−、ＲｃはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、あるいは−ＣＨ２−であり、好ましくは−Ｚ２−は−ＮＨ−あるいは−Ｎ＝であり；
Ｒ１およびＲ２は共に、ＮおよびＺ２と、後に置換基を導入される複素環を形成し、ただし前記複素環はインドールではなく；
Ｒ５はＨあるいはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ８およびＲ９は共に、５員環あるいは６員環を形成し、好ましくは５員環あるいは６員環の複素環を形成し、より好ましくは１，３−ジオキサシクロペンテンあるいは１，４−ジオキサンを形成し；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１０およびＲ１１はＨあるいはＣ１−４アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
一般式（Ｉａ）：
【化２】
2014515034.tif 000023
を有し、
式中、
Ｒ５はＨあるいはＣＨ３であり；
Ｒ８およびＲ９は共に、１，３−ジオキサシクロペンテンあるいは１，４−ジオキサンを形成する、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｎ−[５−（１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）−２−メチルフェニル]−Ｎ´−（２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イルカルボニル）チオウレア
【化３】
2014515034.tif 000024
Ｎ−[３−（１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）フェニル]−Ｎ´−（２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イルカルボニル）チオウレア
【化４】
2014515034.tif 000025
および／または、
Ｎ−[３−（１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）フェニル]−Ｎ´−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルカルボニル）チオウレア
【化５】
2014515034.tif 000026
である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
少なくとも一つの医薬的に許容される賦形剤を伴う、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物、あるいは、それらの塩、エステルまたは混合物を含む医薬組成物。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物、あるいは、それらの塩、エステルまたは混合物、を含む薬剤。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物を製造する方法であって、
一般式（ＩＩ）：
【化６】
2014515034.tif 000027
の化合物であって、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｚ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は請求項１〜４のいずれか１項に記載された通りである化合物を、一般式（ＩＶ）：
【化７】
2014515034.tif 000028
の化合物と、還流溶媒中において反応させることで、一般式（Ｉ）の化合物を得る方法。
【請求項８】
前記一般式（ＩＶ）の化合物が、塩基存在下での、一般式（ＩＩＩ）：
【化８】
2014515034.tif 000029
の化合物と、（ｉ）ＳＯＣｌ２および（ｉｉ）ＮＨ４Ｚ１ＣＮとの反応により得られ、Ｚ１は請求項１に記載の通りである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ニューロピリン経路を阻害するための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
それを必要とする対象において癌の治療に使用するための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
腫瘍の成長を抑制する、および／または、前記対象の体内の癌性細胞の数ならびに発達を抑制する、および／または、転移の発生を抑制する目的で使用するための、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
前記癌が、細胞癌、腺癌、リンパ腫、芽細胞腫、ヘパトーマ、肉腫；例えば扁平上皮癌などの白血病；肺小細胞癌、肺非小細胞癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌を含む肺癌；腹膜癌；肝細胞癌；胃腸癌を含む胃癌；例えば膵癌などの膵臓癌；グリア芽細胞腫；神経芽細胞種；子宮頸癌、卵巣癌；肝臓癌；膀胱癌；ヘパトーマ；乳癌；例えば大腸腺癌などの大腸癌；例えば結腸直腸の細胞癌などの結腸直腸癌；子宮内膜あるいは子宮の細胞癌；唾液腺の細胞癌；骨肉腫；腎臓癌あるいは腎癌；肝臓癌；例えば前立腺の腺癌などの前立腺癌；外陰部癌；甲状腺癌；肝細胞癌、および頭部ならびに頸部の様々なタイプの癌；低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度瀰漫性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非分割細胞ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞白血病、慢性骨髄芽球性白血病を含むＢ細胞リンパ腫；および、移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、母斑病に関連した異常な血管増殖、例えば脳腫瘍に関連するような浮腫；およびメイグス症候群、のうちの一つである、請求項１０または１１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記対象が、癌と診断されている、および／または、腫瘍を除去する外科手術を受けたことがある、および／または、以前に抗癌治療を受けたことがある、および／または、同時に抗癌治療を受けている、および／または、抗癌治療を受ける予定であって、前記抗癌治療が化学療法および／または放射線療法である、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
それを必要とする対象において血管新生に関連する疾病、疾患、または状態の治療に使用するための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
新生血管形成、および／または、血管内皮細胞の接着、および／または、血管内皮細胞の増殖、発達あるいは分裂を抑制する目的で使用するための、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
前記血管新生に関連する疾病が、眼の疾病、腎臓および／または泌尿生殖器の管系の疾病、消化管の疾病、気道の疾病、骨組織または関節の疾病、皮膚病、自己免疫疾患、移植片に継続する状態、手術後の反応、過剰増殖あるいは肥大化、異常な創傷治癒、慢性炎症、循環器または血液の疾病あるいは感染症である、請求項１４あるいは１５に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌および／または血管新生に関連する疾病、疾患、または状態の治療および／または予防の分野に関する。本発明は特に、本明細書においてニューロピリン経路の阻害剤であることをここに示す特定の化学化合物、ならびに、特に癌および／または血管新生に関連する疾病、疾患、または状態の治療および／または予防におけるその医薬的使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ニューロピリンは２つのタイプのリガンドに対する共同受容体として作用する膜貫通型糖タンパク質であり、軸索誘導調節因子ファミリーであるセマホリンファミリー、ならびに血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）ファミリーの一員である。ニューロピリンは２つの形態、すなわちニューロピリン−１（ＮＲＰ−１）および２（ＮＲＰ−２）として存在する。ＮＲＰ−１とＮＲＰ−２はリガンドに対して、異なる親和性および特異性を示す。いずれのタンパク質も細胞外リガンドと高い親和力で結合し、リガンドを同じくする別の膜貫通型受容体（例えばＶＥＧＦに対するＶＥＧＦ−Ｒ２）と複合体を形成し、細胞内でのシグナル伝達を調節する共同受容体として機能し得る。
【０００３】
ＮＲＰ−１とＮＲＰ−２の高発現は特定の型の腫瘍における腫瘍の進行ならびに患者の予後と相関関係にあることが示されている。さらに、ニューロピリンは前立腺癌、乳癌、ならびに大腸癌などの数多くの疾病における腫瘍形成に寄与するようである（Ｅｌｌｉｓ  ＬＭ，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ，２００６，５（５）：１０９９−１０７）。ニューロピリンは癌細胞の増殖、生存および遊走においてＶＥＧＦならびにセマホリンの作用を媒介し得る。
【０００４】
したがって、ニューロピリンは癌に関連する疾病、疾患、または状態の予防および／または治療のための有望な標的であると考えられる。
【０００５】
さらに、ニューロピリンは、ＶＥＧＦ経路の一員として血管新生の過程に関与する。血管新生は、血管内皮細胞による新しい血管の形成における重要な過程である。この形成には、血管内皮細胞の（ｉ）遊走、（ｉｉ）成長、および（ｉｉｉ）分化の３つの異なる段階が関与する。この厳密に制御される現象に障害が起きると、組織および臓器が新生血管に浸潤されるなど、種々の疾病が引き起こされる可能性がある。
【０００６】
したがって、ニューロピリンの阻害剤は、血管新生の疾病、疾患、または状態の予防および／または治療に対しても有用であると考えられる
【０００７】
ニューロピリンを阻害する種々の方法が、当該分野において報告されている。例えば、国際公開第０３／０３５１００号はニューロピリンの発現あるいは活性を調節する因子について記載している。国際公開第２００７／０５６４７０号はＮＲＰ−１に対する抗体について記載している。米国特許第７，３３５，３５７号はニューロピリンの阻害剤として、タンパク質あるいはタンパク質の断片について、特にセマホリンコラプシンファミリーの一員について記載している。国際公開第２００９／０９９９５９号および国際公開第９９／５５８５５号は、ニューロピリン遺伝子の発現を調節するための、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドなどの核酸について記載している。ＪａｒｖｉｓらはＮＲＰ−１とＶＥＧＦ−Ａ間の相互作用を阻害するための特定の化学化合物  （例えばＥＧ００２２９などの化合物）について記載している（Ｊ．  ＭＥＤ．  Ｃｈｅｍ．  ２０１０，５３，２２１５−２６）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかし、本出願人の知る限りでは、ニューロピリンを阻害する小分子を含め、薬剤につながる可能性のある臨床試験も、現代医学の発展も見当たらない。
【０００９】
したがって、癌および／または血管新生に関連する疾病、疾患、または状態の予防および／または治療において、このような化合物は潜在的に大きな可能性を秘めているため、ニューロピリン経路を阻害する、例えば化学化合物などの小分子が未だに求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は一般式（Ｉ）：
【化１】
2014515034.tif 000003
の化学化合物であって、
式中、
Ｚ１はＳまたはＯ、好ましくはＳであり；
−Ｚ２−は−ＮＲａ−、ＲａはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、好ましくはＨ；−Ｎ＝；−Ｏ−；−Ｓ−；−ＣＲｂ＝、ＲｂはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、好ましくはＨ；−ＣＨＲｃ−、ＲｃはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、あるいは−ＣＨ２−であり；；好ましくは−Ｚ２−は−ＮＨ−あるいは−Ｎ＝であり；
各Ｒ１およびＲ２は独立してＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆであり；
好ましくはＲ１およびＲ２は共に、ＮおよびＺ２と、後に置換基を導入される複素環を形成し、より好ましくはアゾシン、３Ｈ−インドール、インダゾール、２−イミダゾリン、２−ピラゾリン、ベンゾチアゾール、プリン、ピリミジン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、ピラゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、イソキサゾール、キノリン、イソキノリン、キノキサリン、キナゾリン、１，８−ナフチリジン、ペリミジン、[１，１０]−フェナントロリン、フタラジン、プテリジン、トリアゾール、トリアジン、フラザン、６Ｈ−１，２，５−チアジアジン、１，３，４−チアジアゾール、テトラゾールの置換体、あるいはイミダゾールの置換体を形成し、さらに一層好ましくはベンズイミダゾールを形成し；
Ｒ５はＨ、ＯＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルケニル、Ｃ１−４アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｉであり；より好ましくはＲ５はＨあるいはＣＨ３であり；さらに一層好ましくはＲ５はＣＨ３であり；
各Ｒ８およびＲ９は独立してＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆであり；好ましくはＲ８およびＲ９は共に、５員環あるいは６員環を形成し、好ましくは５員環あるいは６員環の複素環を形成し、より好ましくは１，３−ジオキサシクロペンテンあるいは１，４−ジオキサンを形成し；
各Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１０およびＲ１１は独立してＨ、ＯＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルケニル、Ｃ１−４アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉであり；好ましくはＨ，ＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｉであり；より好ましくはＨあるいはＣＨ３であり；さらに一層好ましくはＨである、化学化合物に関する。
【００１１】
また、本発明は、少なくとも一つの医薬的に許容される賦形剤を伴う、一般式（Ｉ）の化合物、あるいは、そのエステルまたは塩を含む医薬組成物にも関する。
【００１２】
本出願人は、本発明の化合物およびニューロピリン阻害剤としてのそれらの重要性を見出した後、ヘッジホッグ経路を阻害する化学化合物に関する国際公開第２００９／１３０４２２号を知った。国際公開第２００９／１３０４２２号の実験は胚細胞系列についてのみ実施されている。これらの実験結果は、国際公開第２００９／１３０４２２号の化学化合物が胚細胞系列（脂肪細胞系列の胚性マウス細胞Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２およびヒト胎児腎細胞ＨＥＫ２９３）の分化を阻害することを示した。
【００１３】
国際公開第２００９／１３０４２２は号ＮＲＰ経路についてはいかなる教示も与えない。ニューロピリンが胚発生に関わる可能性はあるが、一般的にはニューロピリンは胎児の血管内皮細胞あるいは神経細胞の過程（血管形成および神経線維の誘導）にのみ強く影響すると認識されている。そして、国際公開第２００９／１３０４２２号は脂肪細胞および腎細胞系列の分化についての情報のみを供与している。
【００１４】
さらに、国際公開第２００９／１３０４２２号の化合物の、癌細胞あるいは血管内皮細胞ではない胚細胞の分化に対する作用は、これらの化合物が癌および／または血管新生に関連する疾病、疾患、または状態の予防および／または治療において有用であることを示すいかなる根拠にもならない。
【００１５】
本発明者は本明細書において、本発明の化学化合物がニューロピリンとＶＥＧＦ経路の構成因子との相互作用を阻害することを示す。理論に束縛されるものではないが、本発明者は、本発明の化学化合物がニューロピリン分子と物理的に相互作用し、関連するシグナル経路を遮断することで、例えば癌（固形腫瘍あるいは転移など）あるいは異常な血管新生に関連する疾病（アテローム動脈硬化症、増殖性網膜症、あるいは関節リウマチなど）などのニューロピリン経路に関連する疾病の予防および／または治療にとって有益な作用を与えることを示唆する。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】細胞接着、細胞生存および血管形成に対する本発明の化合物１、２および３のインビトロでの作用を示すグラフおよび写真の組み合わせを示す。（Ａ）ＨＵＶＥＣ細胞およびＭＤＡＭＢ−２３１細胞の接着および生存に対する本発明の化合物１の作用を示すグラフである。（Ｂ）ＨＵＶＥＣ細胞およびＭＤＡＭＢ−２３１細胞の接着および生存に対する本発明の化合物２の作用を示すグラフである。（Ｃ）ＨＵＶＥＣ細胞およびＭＤＡＭＢ−２３１細胞の接着および生存に対する本発明の化合物３の作用を示すグラフ。（Ｄ）血管形成に対する本発明の化合物１および２の作用を示す画像である。
【図２】ＨｅＬａ細胞に対する本発明の化合物１および２の細胞毒性に伴う阻害作用を示すグラフである。
【図３】本発明の化合物１のインビボでの作用を示すグラフの組み合わせを示す。（Ａ）体重に対する化合物１の作用を示す。（Ｂ）腫瘍の成長に対する化合物１の作用を示す。（Ｃ）マウスの生存に対する化合物１の作用を示すカプラン・マイヤー生存曲線である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
「対象」：ヒトを含む動物。本発明の意味においては、対象は患者、例えば医学的に注目されている、医学的治療を受けている、または受けたことがある、あるいは疾病の進行を監視されている、などの対象などである。
【００１８】
「疾病の治療」：標的となる病理的な疾患または状態を防ぐ、あるいは鈍化（減少）させることを目的とした、治療処置および予防的または防止的処置の両方を指す。したがって、疾病の治療は、臓器、組織あるいは細胞の機能不全に関連する疾病、疾患あるいは状態の少なくとも一つの有害作用あるいは病徴の発生を減少させる、緩和する、あるいは回避することに関するであろう。したがって、疾病の治療は、病徴の発生を防ぐ、あるいは回避することを指す表現である「疾病の予防」を含む。本発明においては、「予防」という用語は、病徴の再発あるいは疾病の再発の予防などの２次的予防を指してもよい。疾病が癌の場合、腫瘍の治療および／または除去後の転移の発生をも指してもよい。
【００１９】
「治療上有効な量」：疾病の予防；疾病あるいは状態の１以上の病徴の、進行、悪化、または変質の鈍化あるいは停止；疾病あるいは状態の病徴の緩和；疾病あるいは状態の治療や処置に、必要かつ十分な治療薬の量を指す。
【００２０】
「アルキル」：炭素原子が１〜１２個、好ましくは炭素原子が１〜６個である、あらゆる飽和直鎖炭化水素鎖あるいは飽和分枝炭化水素鎖を、より好ましくはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、およびｔｅｒｔ−ブチルを意味する。
【００２１】
「アルケニル」：炭素原子が２〜１２個、好ましくは炭素原子が２〜６個であり、少なくとも一つの二重結合を有する、あらゆる直鎖炭化水素鎖あるいは分枝炭化水素鎖を意味する。
【００２２】
「アルキニル」：炭素原子が２〜１２個、好ましくは炭素原子が２〜６個であり、少なくとも一つの三重結合を有する、あらゆる直鎖炭化水素鎖あるいは分枝炭化水素鎖を意味する。
【００２３】
「アミン」：アンモニアＮＨ３の１以上の水素原子を有機ラジカルに置換して生じる、あらゆる化合物を意味し、本発明において好ましくは、アミンという用語はＮＨ２あるいはＮＨＲを表し、Ｒはアルキル、好ましくはＣ１−４アルキルである。
【００２４】
「アリール」：フェニル基、ビフェニル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基、テトラヒドロナフチル基、インダニル基およびビナフチル基を引例とすることが可能な、１以上の芳香環（２つある場合はビアリールと呼ぶ）を有する、炭素原子が５〜２０個、好ましくは６〜１２個である単環系あるいは多環系を意味する。アリールという用語はまた、酸素、窒素、あるいは硫黄原子から選択される１以上のヘテロ原子を含むあらゆる芳香環も意味する。アリール基は、水酸基、１、２、３、４、５あるいは６個の炭素原子を含む直鎖アルキル基または分枝アルキル基、特にメチル基、プロピル基、ブチル基、アルコキシ基あるいはハロゲン原子、特に臭素、塩素およびヨウ素、の中から互いに独立して選択される１〜３個の置換基によって置換され得る。
【００２５】
「アルコキシ」：あらゆるＯ−アルキル基あるいはＯ−アリール基を指す。
【００２６】
「複素環」：Ｏ、Ｓ、Ｎの中から選択される１〜２個のヘテロ原子を含み、任意にアルキルで置換される、５員環あるいは６員環を意味する。
【００２７】
本発明は一般式（Ｉ）：
【化２】
2014515034.tif 000004
の化合物であって、
式中、
Ｚ１はＳまたはＯ、好ましくはＳであり；
−Ｚ２−は−ＮＲａ−、ＲａはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、好ましくはＨ；−Ｎ＝；−Ｏ−；−Ｓ−；−ＣＲｂ＝、ＲｂはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、好ましくはＨ；−ＣＨＲｃ−、ＲｃはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、あるいは−ＣＨ２−であり；、好ましくは−Ｚ２−は−ＮＨ−あるいは−Ｎ＝であり；
各Ｒ１およびＲ２は独立してＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆであり；好ましくはＲ１およびＲ２は共に、ＮおよびＺ２と、後に置換基を導入される複素環を形成し、より好ましくはアゾシン、３Ｈ−インドール、インダゾール、２−イミダゾリン、２−ピラゾリン、ベンゾチアゾール、プリン、ピリミジン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、ピラゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、イソキサゾール、キノリン、イソキノリン、キノキサリン、キナゾリン、１，８−ナフチリジン、ペリミジン、[１，１０]−フェナントロリン、フタラジン、プテリジン、トリアゾール、トリアジン、フラザン、６Ｈ−１，２，５−チアジアジン、１，３，４−チアジアゾール、テトラゾールの置換体、あるいはイミダゾールの置換体を形成し、さらに一層好ましくはベンズイミダゾールを形成し；
Ｒ５はＨ、ＯＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルケニル、Ｃ１−４アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉであり；好ましくはＲ５はＨ、ＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｉであり；より好ましくはＲ５はＨあるいはＣＨ３であり；さらに一層好ましくはＲ５はＣＨ３であり；
各Ｒ８およびＲ９は独立してＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆであり；好ましくはＲ８およびＲ９は共に、５員環あるいは６員環を形成し、好ましくは５員環あるいは６員環の複素環を形成し、より好ましくは１，３−ジオキサシクロペンテンあるいは１，４−ジオキサンを形成し；
各Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１０およびＲ１１は独立してＨ、ＯＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルケニル、Ｃ１−４アルキニル、アミン、好ましくはＮＨ２、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉであり；好ましくはＨ，ＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｉであり；より好ましくはＨあるいはＣＨ３であり；さらに一層好ましくはＨである、化合物に関する。
【００２８】
一実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、ＮおよびＺ２が形成する複素環はインドールではない。
【００２９】
本発明の一実施形態において、前記複素環はアゾシン、インダゾール、２−イミダゾリン、２−ピラゾリン、ベンゾチアゾール、プリン、ピリミジン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、ピラゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、イソキサゾール、キノリン、イソキノリン、キノキサリン、キナゾリン、１，８−ナフチリジン、ペリミジン、[１，１０]−フェナントロリン、フタラジン、プテリジン、トリアゾール、トリアジン、フラザン、６Ｈ−１，２，５−チアジアジン、１，３，４−チアジアゾール、テトラゾールの置換体、およびイミダゾールの置換体、からなる群から選択される化合物に関する。
【００３０】
本発明の一実施形態において、前記複素環はベンズイミダゾールである。
【００３１】
本発明の一実施形態において、−Ｚ２−は−ＮＲａ−、ＲａはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、好ましくはＨ；−Ｎ＝；−Ｏ−；−Ｓ−であり；、好ましくは−Ｚ２−は−ＮＨ−あるいは−Ｎ＝である。
【００３２】
一実施形態によれば、本発明の一般式（Ｉ）の化合物は、式中、
Ｚ１はＳまたはＯ、好ましくはＳであり；
−Ｚ２−は−ＮＲａ−、ＲａはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、好ましくはＨ；−Ｎ＝；−Ｏ−；−Ｓ−；−ＣＲｂ＝、ＲｂはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、好ましくはＨ；−ＣＨＲｃ−、ＲｃはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、あるいは−ＣＨ２−であり；、好ましくは−Ｚ２−は−ＮＨ−あるいは−Ｎ＝であり；
Ｒ  １およびＲ２は共に、ＮおよびＺ２と、後に置換基を導入される複素環を形成し、より好ましくはアゾシン、３Ｈ−インドール、インダゾール、２−イミダゾリン、２−ピラゾリン、ベンゾチアゾール、プリン、ピリミジン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、ピラゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、イソキサゾール、キノリン、イソキノリン、キノキサリン、キナゾリン、１，８−ナフチリジン、ペリミジン、[１，１０]−フェナントロリン、フタラジン、プテリジン、トリアゾール、トリアジン、フラザン、６Ｈ−１，２，５−チアジアジン、１，３，４−チアジアゾール、テトラゾールの置換体、あるいはイミダゾールの置換体を形成し、さらに一層好ましくはベンズイミダゾールを形成し；
Ｒ５はＨあるいはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ８およびＲ９は共に、５員環あるいは６員環を形成し、好ましくは５員環あるいは６員環の複素環を形成し、より好ましくは１，３−ジオキサシクロペンテンあるいは１，４−ジオキサンを形成し；
各Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１０およびＲ１１は独立してＨあるいはＣ１−４アルキルである、一般式（Ｉ）の化合物である。
【００３３】
一実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、ＮおよびＺ２が形成する複素環はインドールではない。
【００３４】
本発明の一実施形態において、前記複素環はアゾシン、インダゾール、２−イミダゾリン、２−ピラゾリン、ベンゾチアゾール、プリン、ピリミジン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、ピラゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、イソキサゾール、キノリン、イソキノリン、キノキサリン、キナゾリン、１，８−ナフチリジン、ペリミジン、[１，１０]−フェナントロリン、フタラジン、プテリジン、トリアゾール、トリアジン、フラザン、６Ｈ−１，２，５−チアジアジン、１，３，４−チアジアゾール、テトラゾールの置換体、およびイミダゾールの置換体、からなる群から選択される。
【００３５】
本発明の一実施形態において、前記複素環はベンズイミダゾールである。
【００３６】
本発明の一実施形態において、−Ｚ２−は−ＮＲａ−、ＲａはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、好ましくはＨ；−Ｎ＝；−Ｏ−；−Ｓ−であり；、好ましくは−Ｚ２−は−ＮＨ−あるいは−Ｎ＝である。
【００３７】
一実施形態によれば、本発明の一般式（Ｉ）の化合物は、式中、
Ｚ１はＳであり；
−Ｚ２−は−ＮＨ−あるいは−Ｎ＝あるいは−Ｓ−であり；
Ｒ１およびＲ２は共に、ＮおよびＺ２と、イミダゾールの置換体を形成し、より好ましくはベンズイミダゾールを形成し；
Ｒ５はＨあるいはＣＨ３あるいはＣ２Ｈ５であり；
Ｒ８およびＲ９は共に、５員環あるいは６員環を形成し、好ましくは５員環あるいは６員環の複素環を形成し、より好ましくは１，３−ジオキサシクロペンテンあるいは１，４−ジオキサンを形成し；
各Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１０およびＲ１１はＨである、一般式（Ｉ）の化合物である。
【００３８】
一実施形態によれば、本発明の一般式（Ｉ）の化合物は、一般式（Ｉａ）：
【化３】
2014515034.tif 000005
を有し、
式中、
Ｒ５はＨあるいはＣＨ３であり；
Ｒ８およびＲ９は共に、１，３−ジオキサシクロペンテンあるいは１，４−ジオキサンを形成する。
【００３９】
好ましくは、本発明の一般式（Ｉ）の化合物は、一般式（Ｉａ）を有し、式中、
Ｒ５はＨあるいはＣＨ３であり；
Ｒ８およびＲ９は共に、１，４−ジオキサンを形成する。
【００４０】
一般式（Ｉ）の好ましい化合物は：
Ｎ−[５−（１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）−２−メチルフェニル]−Ｎ´−（２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イルカルボニル）チオウレア（化合物１）
【化４】
2014515034.tif 000006
Ｎ−[３−（１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）フェニル]−Ｎ´−（２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イルカルボニル）チオウレア（化合物２）
【化５】
2014515034.tif 000007
Ｎ−[３−（１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）フェニル]−Ｎ´−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルカルボニル）チオウレア（化合物３）
【化６】
2014515034.tif 000008
を含む。
【００４１】
以下に、本発明の化合物１および２の化学的特性を示す。
【表１】
2014515034.tif 000009
【００４２】
また、本発明は、少なくとも一つの医薬的に許容される賦形剤と組み合わさった、上記の一般式（Ｉ）の化合物、あるいはそれらのエステルまたは塩を含む医薬組成物にも関する。
【００４３】
したがって本発明は、少なくとも一つの医薬的に許容される賦形剤を伴う、一般式（Ｉ）：
【化７】
2014515034.tif 000010
の化合物であって、
式中、
Ｚ１はＳまたはＯ、好ましくはＳであり；
−Ｚ２−は−ＮＲａ−、ＲａはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、好ましくはＨ；−Ｎ＝；−Ｏ−；−Ｓ−；−ＣＲｂ＝、ＲｂはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、好ましくはＨ；−ＣＨＲｃ−、ＲｃはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、あるいは−ＣＨ２−であり；、好ましくは−Ｚ２−は−ＮＨ−あるいは−Ｎ＝であり；
各Ｒ１およびＲ２は独立してＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆであり；好ましくはＲ１およびＲ２は共に、ＮおよびＺ２と、後に置換基を導入される複素環を形成し、より好ましくはアゾシン、３Ｈ−インドール、インダゾール、２−イミダゾリン、２−ピラゾリン、ベンゾチアゾール、プリン、ピリミジン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、ピラゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、イソキサゾール、キノリン、イソキノリン、キノキサリン、キナゾリン、１，８−ナフチリジン、ペリミジン、[１，１０]−フェナントロリン、フタラジン、プテリジン、トリアゾール、トリアジン、フラザン、６Ｈ−１，２，５−チアジアジン、１，３，４−チアジアゾール、テトラゾールの置換体、あるいはイミダゾールの置換体を形成し、さらに一層好ましくはベンズイミダゾールを形成し；
Ｒ５はＨ、ＯＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルケニル、Ｃ１−４アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉであり；好ましくはＲ５はＨ、ＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｉであり；より好ましくはＲ５はＨあるいはＣＨ３であり；さらに一層好ましくはＲ５はＣＨ３であり；
各Ｒ８およびＲ９は独立してＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆであり；好ましくはＲ８およびＲ９は共に、５員環あるいは６員環を形成し、好ましくは５員環あるいは６員環の複素環を形成し、より好ましくは１，３−ジオキサシクロペンテンあるいは１，４−ジオキサンを形成し；
各Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１０およびＲ１１は独立してＨ、ＯＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルケニル、Ｃ１−４アルキニル、アミン、好ましくはＮＨ２、ＮＯ２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉであり；好ましくはＨ，ＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｉであり；より好ましくはＨあるいはＣＨ３であり；さらに一層好ましくはＨである；
化合物、あるいは、そのエステルまたは塩を含む医薬組成物に関する。
【００４４】
一実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、ＮおよびＺ２が形成する複素環はインドールではない。
【００４５】
本発明の一実施形態において、前記複素環はアゾシン、インダゾール、２−イミダゾリン、２−ピラゾリン、ベンゾチアゾール、プリン、ピリミジン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、ピラゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、イソキサゾール、キノリン、イソキノリン、キノキサリン、キナゾリン、１，８−ナフチリジン、ペリミジン、[１，１０]−フェナントロリン、フタラジン、プテリジン、トリアゾール、トリアジン、フラザン、６Ｈ−１，２，５−チアジアジン、１，３，４−チアジアゾール、テトラゾールの置換体、およびイミダゾールの置換体、からなる群から選択される。
【００４６】
本発明の一実施形態において、前記複素環はベンズイミダゾールである。
【００４７】
本発明の一実施形態において、−Ｚ２−は−ＮＲａ−、ＲａはＨ、ＯＨ、アルキル、アルコキシ、アリール、アルケニル、アルキニル、アミン、好ましくはＨ；−Ｎ＝；−Ｏ−；−Ｓ−であり；、好ましくは−Ｚ２−は−ＮＨ−あるいは−Ｎ＝である。
【００４８】
一実施形態において、本発明の医薬組成物は、一般式（Ｉ）の化合物あるいはそのエステルまたは塩を複数含む。したがって、本発明の医薬組成物は、一般式（Ｉ）の化合物あるいはそのエステルまたは塩の混合物を含んでもよい。一実施形態において、本発明の組成物は、上記の化合物１および化合物２を含む。一実施形態において、本発明の組成物は、上記の化合物１および化合物３を含む。一実施形態において、本発明の組成物は、上記の化合物２および化合物３を含む。一実施形態において、本発明の組成物は、上記の化合物１、化合物２および化合物３を含む。
【００４９】
また、本発明は、上記の本発明の化合物を含む薬剤にも関する。
【００５０】
また、本発明は、上記の医薬組成物を含む薬剤にも関する。
【００５１】
また、本発明は、上記の化合物あるいは組成物の製造法であって、一般式（ＩＩ）
【化８】
2014515034.tif 000011
の化合物であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｚ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は上記の通りである化合物を、例えばアセトンなどの還流溶媒中において、一般式（ＩＶ）
【化９】
2014515034.tif 000012
の化合物と反応させることで一般式（Ｉ）の化合物を得る方法にも関する。
【００５２】
一実施形態において、一般式（ＩＶ）の化合物は、一般式（ＩＩＩ）
【化１０】
2014515034.tif 000013
の化合物を、例えばアセトンなどの還流溶媒中において、例えばＫ２ＣＯ３などの塩基の存在下で（ｉ）ＳＯＣｌ２および（ｉｉ）ＮＨ４Ｚ１ＣＮ（Ｚ１は上記の通りである）と反応させることにより得られる。
【００５３】
反応過程を下に示す。
【化１１】
2014515034.tif 000014
【００５４】
本発明の化合物１の合成における反応過程を下に示す。
【化１２】
2014515034.tif 000015
【００５５】
また、本発明は、ニューロピリン経路を阻害する上記の化合物または医薬組成物にも関する。
【００５６】
また、本発明は、ニューロピリン経路を阻害する必要のある対象においてそれを阻害する方法にも関する。この方法には、前記対象に治療上有効な量の一般式（Ｉ）の化合物あるいは一般式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物を投与することが含まれる。
【００５７】
また、本発明は、上記の医薬組成物あるいは一般式（Ｉ）の化合物などの、ニューロピリン経路の阻害剤にも関する。意外にも、本発明者は本発明の化合物がＶＥＧＦとＮＲＰ−１との結合を阻害することを示した（実施例を参照）。理論に束縛されるものではないが、本発明者は、本発明の化学化合物がニューロピリン分子と物理的に相互作用し、それにより関連するシグナル経路を遮断することを示唆する。
【００５８】
本発明は、治療が必要な対象の癌治療に用いられる一般式（Ｉ）の化合物に関する。
【００５９】
したがって、また、本発明は、治療が必要な対象の癌治療に用いられる、医薬的に許容される賦形剤を伴う、治療上有効な量の一般式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物にも関する。
【００６０】
本発明者は、意外にも、本発明の化合物が起源の異なる癌細胞系列に対して細胞毒性を示すこと（図１および２；表１）、および、それらの化合物が癌細胞の接着を阻害すること（図１Ａ〜１Ｃ）を示した。さらに、本発明者は、本発明の化合物がインビボで抗癌剤として有効であることを実証した（図３）。実際、本発明の化合物をマウスに投与すると、腫瘍の拡大が阻害され、その結果前記マウスの寿命が延長した。
【００６１】
一実施形態において、本発明の化合物または医薬組成物は腫瘍の成長を抑制するために使用することができる。一実施形態において、本発明の化合物または医薬組成物は、前記対象体内の癌性細胞の数や発達を抑制するために使用することができる。一実施形態において、本発明の化合物または医薬組成物は転移の発生を抑制するために使用することができる。
【００６２】
一実施形態によれば、癌は固形腫瘍、転移性癌、あるいは非転移性癌である。
【００６３】
一実施形態において、前記癌は、膀胱、血液、骨組織、骨髄、脳、乳房、子宮頚部、結腸、食道、眼および結膜下組織を含む眼窩、十二指腸、小腸、大腸、直腸、肛門、歯茎、頭部、腎臓、肝臓、肺、咽頭、頸部、卵巣、膵臓、前立腺、皮膚、胃、精巣、舌、あるいは子宮に発生し得る。
【００６４】
限定するものではないが、癌の例としては、細胞癌、腺癌、リンパ腫、芽細胞腫、ヘパトーマ、肉腫および白血病が含まれる。このような癌の、より特別な例としては、扁平上皮癌、肺癌（肺小細胞癌、肺非小細胞癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌を含む）、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌（胃腸癌を含む）、例えば膵癌などの膵臓癌、グリア芽細胞腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーマ、乳癌、例えば大腸腺癌（グレードＩＩの大腸腺癌を含む）などの大腸癌、例えば結腸直腸の細胞癌などの結腸直腸癌、子宮内膜あるいは子宮の細胞癌、唾液腺の細胞癌、腎臓癌あるいは腎癌、肝臓癌、例えば前立腺の腺癌などの前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、骨肉腫、神経芽細胞種、肝細胞癌、および頭部ならびに頸部の様々なタイプの癌が含まれ、同様に、Ｂ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度瀰漫性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非分割細胞ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；エイズ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含む）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；有毛細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；および移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）も含まれ、また母斑病に関連した異常な血管増殖、浮腫（脳腫瘍に関連するような）、およびメイグス症候群も含まれる。
【００６５】
一実施形態によれば、前記癌は、乳癌、子宮頸癌、膵癌、結腸直腸癌、例えばグレードＩＩの大腸腺癌などの大腸腺癌、骨肉腫、例えば前立腺の腺癌などの前立腺癌、グリア芽細胞腫あるいは神経芽細胞種である。
【００６６】
一実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物は注入され、好ましくは全身に注入される。全身注入に適当な製剤の例としては、限定されるものではないが、液体溶液または液体懸濁液、注入前に液体に溶解あるいは懸濁するのに適した固体形態が含まれる。全身注入の例としては、限定されるものではないが、静脈注入、皮下注入、筋肉注入、皮内注入および腹腔内注入、ならびに潅流が含まれる。
【００６７】
別の実施形態によれば、本発明の化合物あるいは組成物は、腫瘍内へ、あるいは病巣内へ注入される。
【００６８】
一実施形態によれば、注入時に本発明の化合物または医薬組成物は、無菌である。無菌の医薬組成物を得る方法は、限定されるものではないが、ＧＭＰ合成（ＧＭＰはＧｏｏｄ  ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  ｐｒａｃｔｉｃｅ、優良医薬品製造基準、を表す）を含む。
【００６９】
別の実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物は経口投与される。経口投与に適当な製剤の例としては、限定されるものではないが、固体形態、液体形態およびゲルが含まれる。経口投与に適当な固体形態の例としては、限定されるものではないが、丸薬、錠剤、カプセル、軟ゼラチンカプセル、硬ゼラチンカプセル、カプレット、圧縮錠剤、カシェ剤、オブラート、糖衣丸薬、糖衣錠、口腔分散／口腔分解錠剤、粉末、経口投与前に液体に溶解、あるいは懸濁するのに適した固体形態、および発泡錠が含まれる。経口投与に適当な液体形態の例としては、限定されるものではないが、溶解液、懸濁液、飲用に適した溶解液、エリキシル剤、密封されたアンプル、頓服水剤、飲薬、シロップ剤、および溶剤が含まれる。
【００７０】
別の実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物は局所投与される。局所投与は特に、皮膚癌の治療に有効なことがある。局所投与に適当な製剤の例としては、限定されるものではないが、例えば経皮パッチなどのパッチ、軟膏、ゲル、クリーム等が含まれる。
【００７１】
別の実施形態によれば、肺または気道における状態の治療のために、エアロゾルによって投与することも可能である。
【００７２】
別の投与経路の例としては、限定されるものではないが、鼻噴投与、口腔内投与、直腸投与、膣内投与、気管内投与、内視鏡による投与および経皮投与が含まれる。
【００７３】
一実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物は手術前、および／または手術後に投与される。
【００７４】
一実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物は、単位投与量ごとに包装される。単位投与量の例としては、限定されるものではないが、本発明の化合物あるいは組成物を含むバイアル、シリンジ、丸薬、カプレット、カプセル、錠剤、密封されたアンプルおよびパウチが含まれる。
【００７５】
本発明の医薬組成物において使用可能な医薬的に許容される賦形剤の例は、当業者にとって周知のものである。特定の賦形剤を選択する場合、投与経路および本発明の組成物の配合組成に左右される。
【００７６】
医薬的に許容される賦形剤の例としては、限定されるものではないが、水、生理食塩水、リンガー液、ブドウ糖溶液、およびエタノール、グルコース、スクロース、デキストラン、マンノース、マンニトール、ソルビトール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、リン酸塩、酢酸塩、ゼラチン、コラーゲン、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（商標）、植物油等の溶液が含まれる。
【００７７】
一実施形態において、本発明の化合物または医薬組成物を投与される対象はヒトを含む動物である。
【００７８】
本発明の第一の実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物を投与される対象は癌と診断されている。
【００７９】
本発明の第二の実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物を投与される対象は腫瘍を除去する外科手術を受けた対象である。
【００８０】
本発明の第三の実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物を投与される対象は、以前に抗癌治療を受けたことがある、あるいは同時に抗癌治療を受けている、あるいは抗癌治療を受ける予定である。抗癌治療の例としては、限定されるものではないが、化学療法および放射線療法が含まれる。
【００８１】
本発明の意味においては、これら３つの実施形態は非排他的であり、対象はこれらの実施形態の内の１つ、２つあるいは３つに関連してもよい。
【００８２】
一実施形態によれば、本発明の医薬組成物は、本発明の一般式（Ｉ）の化合物を、約０．１ｍｇ〜約５０ｇ含有する。
【００８３】
一実施形態によれば、本医薬組成物は、体重に対して１μｇ／ｋｇ〜１ｇ／ｋｇの範囲の量の、本発明の一般式（Ｉ）の化合物が対象に投与されるような医薬組成物である。
【００８４】
また、本発明は、それを必要とする対象における癌の治療方法であって、治療上有効な量の一般式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物の、対象への投与；あるいは治療上有効な量の一般式（Ｉ）の化合物の、対象への投与、を含む方法にも関する。
【００８５】
一実施形態によれば、本発明の方法は、本発明の化合物または医薬組成物の注入、好ましくは全身注入を含む。全身注入の例としては、限定されるものではないが、静脈注入、皮下注入、筋肉注入、皮内注入および腹腔内注入、ならびに潅流が含まれる。別の実施形態によれば、本発明の化合物あるいは組成物は、腫瘍内へ、あるいは病巣内へ注入される。
【００８６】
別の実施形態によれば、本発明の方法は、本発明の化合物または医薬組成物の経口投与を含む。別の実施形態によれば、本発明の方法は、本発明の化合物または医薬組成物の局所投与を含む。別の実施形態によれば、本発明の方法は、本発明の化合物または医薬組成物の、エアロゾルを用いた投与を含む。本発明の方法において使用され得る投与経路の別の例としては、限定されるものではないが、鼻噴投与、口腔内投与、直腸投与、膣内投与、気管内投与、内視鏡による投与および経皮投与が含まれる。
【００８７】
一実施形態によれば、本発明の方法は、本発明の化合物または医薬組成物の、手術前あるいは手術後の投与を含む。
【００８８】
一実施形態において、本発明の方法に関連する対象はヒトを含む動物である。
【００８９】
本発明の第一の実施形態によれば、本発明の方法に関連する対象は癌と診断されている。本発明の第二の実施形態によれば、本発明の方法に関連する対象は腫瘍を除去する外科手術を受けた対象である。
【００９０】
本発明の第三の実施形態によれば、本発明の方法に関連する対象は、以前に抗癌治療を受けたことがある、あるいは同時に抗癌治療を受ける、あるいは抗癌治療を受ける予定である。抗癌治療の例としては、限定されるものではないが、化学療法および放射線療法が含まれる。本発明の意味においては、これら３つの実施形態は非排他的であり、対象はこれらの実施形態の内の１つ、２つあるいは３つに関連してもよい。
【００９１】
したがって、また、本発明は、それを必要とする対象における、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態の治療用の、あるいはそれらの治療に使用される一般式（Ｉ）の化合物にも関する。
【００９２】
したがって、また、本発明は、それを必要とする対象における、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態の治療用の、医薬的に許容される賦形剤を伴う、治療上有効な量の一般式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物にも関する。
【００９３】
本発明において、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態はまた、血管新生の疾病、疾患、または状態とも呼ばれる。
【００９４】
本発明者は、ここに、本発明の化合物が新生血管の形成を阻害した証拠を提示する（図１Ｄ）。意外にも、本発明者はまた、本発明の化合物がＨＵＶＥＣ細胞（血管内皮細胞）の接着を阻害すること、および本発明の化合物がこれらの細胞に対して細胞毒性を示すこと、も示し（図１Ａ、１Ｂおよび１Ｃ）、これにより抗血管新生作用を証明した。
【００９５】
一実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物は、新生血管の形成を阻害するために使用される。別の実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物は、血管内皮細胞の接着を阻害するために使用される。別の実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物は、血管内皮細胞の増殖、発達あるいは分裂を阻害するために使用される。
【００９６】
一実施形態によれば、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態は腫瘍に関連する。実際、腫瘍の成長および転移は、血管新生と直接関連している。腫瘍は、（ｉ）腫瘍の成長に必要な栄養と酸素の供給を可能とする、および（ｉｉ）腫瘍にとって避難経路となる、新生血管の成長を刺激し、それにより血液循環を通じた転移細胞の伝播が促進され得る。したがって、一実施形態において、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態は、癌性腫瘍または非癌性腫瘍、あるいは腫瘍の転移である。癌および癌性腫瘍の例は上に列挙されている。非癌性腫瘍の例としては、限定されるものではないが、血管線維腫および血管腫が含まれる。
【００９７】
一実施形態によれば、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態は、眼の疾病、疾患、または状態である。
【００９８】
一実施形態において、血管新生に関連する眼の疾病、疾患、または状態は、網膜の、網膜辺縁の、および／または脈絡膜の新血管新生に関係する。このような血管新生の疾病の例としては、限定されるものではないが、ブドウ膜炎、脈絡膜炎、脈絡膜の脈管障害（ポリープ状脈絡膜血管症を含む）、過敏性網膜症、脈絡網膜炎、網脈絡膜炎、網膜血管腫症、網膜変性症、黄斑変性症、加齢黄斑変性症（湿性および乾性ＡＭＤを含むＡＭＤ）、網膜剥離、網膜血管新生、増殖性硝子体網膜症、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、中心性漿液性網脈絡膜症、糖尿病性網膜症（非増殖性および増殖性糖尿病性網膜症を含む）、後部体節の外傷、網膜血管の状態、網膜毛細血管拡張症、眼内炎、黄斑浮腫、放射線誘発網膜症、嚢胞状黄斑浮腫、黄斑ジストロフィー（卵黄様黄斑ジストロフィーを含む）、糖尿病性網膜症、網膜の炎症性の状態、虚血性の血管の疾病、鎌状赤血球貧血、鎌状赤血球網膜症、サルコイド、梅毒、弾性線維性仮性黄色腫、パジェット病、静脈閉塞症、動脈閉塞症、頸動脈閉塞性疾患、慢性ブドウ膜炎／硝子体炎、黄色斑眼底、マイコバクテリア感染症、ライム病、全身性エリテマトーデス、網膜に関連する全身の状態、イールズ病、ベーチェット病、網膜炎あるいは脈絡膜炎を引き起こす感染症、推定眼ヒストプラスマ症、ベスト病、近視、視窩、シュタルガルト病、毛様体扁平部炎、慢性網膜剥離、可粘稠度症候群、トキソプラズマ症、トキソカラ症、風疹、フォークト・小柳・原田症候群、多源性脈絡膜炎、網膜色素変性症、網膜分離症、外傷、増殖糖尿病網膜症、網膜静脈分枝閉塞症、網膜細動脈分枝閉塞症、頸動脈海綿洞瘻、鎌状異常ヘモグロビン症（ＳＳ異常ヘモグロビン症、ＳＣ異常ヘモグロビン症を含む）、非鎌状異常ヘモグロビン症（ＡＣ異常ヘモグロビン症、ＡＳ異常ヘモグロビン症を含む）、ＩＲＶＡＮ症候群（突発性網膜血管炎、動脈瘤、および視神経網膜炎に特徴づけられる網膜血管炎疾患）、網膜塞栓症、家族性滲出性硝子体網膜症、過粘稠度症候群（白血病、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、赤血球増加症あるいは骨髄増殖性疾患を含む）、大動脈弓症候群、イールズ病およびレーザー処置後の合併症、が含まれる。
【００９９】
一実施形態において、血管新生に関連する眼の疾病、疾患、または状態は、角膜血管新生に関連する。このような血管新生の疾病の例としては、限定されるものではないが、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、角膜移植後拒絶反応、血管新生緑内障および後水晶体線維増殖症、流行性角結膜炎、ビタミンＡ欠乏症、コンタクトレンズの過度な着用、アトピー性角膜炎、上輪部結膜炎、翼状片乾性角膜炎、シェーグレン症候群、しゅさ性座蒼、フリクテン症、梅毒、マイコバクテリア感染症、脂肪変性症、化学熱傷、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、単純ヘルペス感染症、帯状疱疹感染症、原虫感染症、カポジ肉腫、モーレン潰瘍、テリエン周辺変性症、周辺角質溶解、外傷、関節リウマチ、全身性狼瘡、多発動脈炎、ウェゲナーサルコイドーシス、強膜炎、スティーブンスジョンソン病、類天疱瘡放射状角膜切開、角膜移植片拒絶反応が含まれる。
【０１００】
一実施形態において、血管新生に関連する眼の疾病、疾患、または状態は、虹彩血管新生（隅角の血管新生）に関連する疾病、および糖尿病との関連の有無によらない全ての形態の増殖性硝子体網膜症を含む、血管結合組織や線維組織の異常な増殖によって引き起こされる疾病を含む群から選択される。
【０１０１】
一実施形態によれば、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態は、腎臓および／または泌尿生殖器の管系の疾病である。腎臓および／または泌尿生殖器の管系の血管新生の疾病の例としては、限定されるものではないが、糖尿病性腎症、子宮内膜症、溶血性尿毒症症候群、高血圧性腎硬化症、糸球体腎炎（メサンギウム増殖性糸球体腎炎を含む）などの炎症性の腎疾患、排卵および黄体形成の阻害、子宮における着床阻害および胚発生の阻害、およびネフローゼ症候群が含まれる。
【０１０２】
一実施形態によれば、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態は、消化管の疾病である。消化管の血管新生の疾病の例としては、限定されるものではないが、炎症性腸疾患が含まれる。
【０１０３】
一実施形態によれば、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態は、気道の疾病である。気道の血管新生の疾病の例としては、限定されるものではないが、サルコイド、サルコイドーシス、ウェゲナーサルコイドーシス、肺炎症および慢性喘息が含まれる。
【０１０４】
一実施形態によれば、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態は、皮膚病である。血管新生に関わる皮膚病の例としては、限定されるものではないが、乾癬、しゅさ性座蒼、カポジ肉腫、白血病、オスラー−ウェーバー症候群（オスラー−ウェーバー−ランデュ病）、類天疱瘡、弾性線維性仮性黄色腫、化膿性肉芽腫、強皮症、スティーブンスジョンソン病および梅毒が含まれる。
【０１０５】
一実施形態によれば、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態は、自己免疫疾患である。血管新生に関連する自己免疫疾患の例としては、限定されるものではないが、慢性喘息、クローン氏病、類天疱瘡、強皮症、シェーグレン症候群および全身性狼瘡が含まれる。
【０１０６】
一実施形態によれば、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態は、移植片にも継続する。臓器あるいは組織の移植後の血管新生に関連する反応の例としては、限定されるものではないが、移植された臓器あるいは組織の免疫拒絶（角膜移植片拒絶反応を含む）、角膜移植片新血管新生および移植後に発生する疾病が含まれる。
【０１０７】
一実施形態によれば、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態は、手術後の反応、過剰増殖あるいは肥大化である。このような疾病の例としては、限定されるものではないが、血管結合組織の異常な増殖、肥厚性瘢痕および手術後の肥大化が含まれる。
【０１０８】
一実施形態によれば、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態は、骨組織や関節の疾病である。血管新生に関連する骨組織や関節の疾病の例としては、限定されるものではないが、パジェット病、変形性関節症、出血性の関節、乾癬性関節炎、関節リウマチおよび偽関節骨折が含まれる。
【０１０９】
一実施形態によれば、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態は、異常な創傷治癒である。
【０１１０】
一実施形態によれば、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態は、慢性炎症である。
【０１１１】
一実施形態によれば、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態は、循環器の疾病あるいは血液の疾病である。血管新生に関連する循環器の疾病あるいは血液の疾病の例としては、限定されるものではないが、動脈の動脈硬化症、動静脈奇形、動脈閉塞症、粥状動脈硬化、頸動脈閉塞性疾患、脳腫瘍に関連する浮腫などの、望ましくない血管透過性によって特徴づけられる疾病および疾患、悪性腫瘍に関連する腹水症、過粘稠度症候群、心膜炎に関連するような心膜液貯留、ならびに胸水、多発動脈炎、子癇前症、血管の粘着および静脈閉塞症が含まれる。
【０１１２】
一実施形態によれば、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態は、感染症である。血管新生の疾患を引き起こす感染症の例としては、限定されるものではないが、細菌性感染症、細菌性潰瘍、真菌性感染症、真菌性潰瘍、単純ヘルペス感染症、帯状疱疹感染症、ライム病、ハンセン病以外のマイコバクテリア感染症、寄生虫症、原虫感染症、トキソプラズマ症およびウイルス感染症が含まれる。
【０１１３】
一実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物は、注入、経口投与、局所投与、移植、エアロゾルによって、あるいは鼻噴投与、口腔内投与、膣内投与、直腸投与、気管内投与、内視鏡による投与または経皮投与によって投与することができる。
【０１１４】
一実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物は注入される。注入に適当な製剤の例としては、限定されるものではないが、液体溶液または液体懸濁液、注入前に液体に溶解、あるいは懸濁するのに適した固体形態が含まれる。注入の例としては、限定されるものではないが、全身注入、静脈注入、眼球内注入、皮下注入、筋肉注入、皮内注入、腹腔内注入、腫瘍内および病巣内への注入、ならびに潅流が含まれる。一実施形態によれば、注入時に本発明の化合物または医薬組成物は、無菌である。無菌の医薬組成物を得る方法は、限定されるものではないが、ＧＭＰ合成（ＧＭＰはＧｏｏｄ  ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  ｐｒａｃｔｉｃｅ、優良医薬品製造基準、を表す）を含む。
【０１１５】
別の実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物は経口投与される。経口投与に適当な製剤の例としては、限定されるものではないが、固体形態、液体形態およびゲルが含まれる。経口投与に適当な固体形態の例としては、限定されるものではないが、丸薬、錠剤、カプセル、軟ゼラチンカプセル、硬ゼラチンカプセル、カプレット、圧縮錠剤、カシェ剤、オブラート、糖衣丸薬、糖衣錠、口腔分散／口腔分解錠剤、粉末、経口投与前に液体に溶解、あるいは懸濁するのに適した固体形態、および発泡錠が含まれる。経口投与に適当な液体形態の例としては、限定されるものではないが、溶解液、懸濁液、飲用に適した溶解液、エリキシル剤、密封されたアンプル、頓服水剤、飲薬、シロップ剤、および溶剤が含まれる。
【０１１６】
本発明の一実施形態において、疾病、疾患、または状態は、眼の疾病である。この実施形態において本発明の化合物または医薬組成物は、注入、例えば眼球内あるいは眼の周囲に注入することができる。本発明において「眼球内に注入される」とは、眼の内部に直接注入されることを意味し、眼の内部とは眼球内のいかなる領域をも意味し、また、限定されるものではないが、一般に、眼球内の機能（例えば視覚の機能）を持つ組織あるいは構造組織、または、眼球内部を部分的にあるいは完全に裏打ちする組織または細胞層を含む。このような領域の特定の例としては、前眼房、後眼房、硝子体腔、脈絡膜、斑、網膜、および後眼部領域あるいは後眼部位の血管を新生する、あるいは神経支配する血管ならびに神経が含まれる。本発明において「眼の周囲に注入される」とは、例えば眼球周囲への注入、眼球の背外側への注入、結膜下注入、テノン嚢下注入あるいは球後注入のような、眼球に隣接した組織に注入されることを意味する。眼球内あるいは眼の周囲への注入に適当な製剤の例としては、限定されるものではないが、溶液、乳濁液、または懸濁液が含まれる。この実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物はまた、局所的に投与されてもよい。眼への局所投与に適当な製剤の例としては、限定されるものではないが、軟膏および点眼剤が含まれる。この実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物はまた、眼球内へ移植されてもよい。眼球内への移植片の例としては、限定されるものではないが、眼内レンズが含まれる。
【０１１７】
別の実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物は、局所的に投与される。局所投与は、特に皮膚の状態の治療に有効なことがある。局所投与に適当な製剤の例としては、限定されるものではないが、例えば経皮パッチなどのパッチ、軟膏、点眼剤、ゲル、クリーム等が含まれる。
【０１１８】
別の実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物は、エアロゾルによって投与される。エアロゾルを用いた治療は、肺あるいは気道の状態の治療において特に興味深い。
【０１１９】
一実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物は、坐薬である。坐薬の使用は、泌尿生殖道および／または消化管の疾病の治療において特に興味深い。
【０１２０】
一実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物は、単位投与量ごとに包装される。単位投与量の例としては、限定されるものではないが、本発明の組成物を含むバイアル、シリンジ、丸薬、カプレット、カプセル、錠剤、密封されたアンプル、坐薬、およびパウチが含まれる。
【０１２１】
一実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物は手術前、および／または手術後に投与される。
【０１２２】
本発明の医薬組成物において使用可能な医薬的に許容される賦形剤の例は、当業者にとって周知のものである。特定の賦形剤を選択する場合、投与経路および本発明の組成物の配合組成に左右される。
【０１２３】
医薬的に許容される賦形剤の例としては、限定されるものではないが、水、生理食塩水、リンガー液、ブドウ糖溶液、およびエタノール、グルコース、スクロース、デキストラン、マンノース、マンニトール、ソルビトール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、リン酸塩、酢酸塩、ゼラチン、コラーゲン、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（商標）、植物油等の溶液が含まれる。
【０１２４】
一実施形態において、本発明の化合物または医薬組成物を投与される対象はヒトを含む動物である。
【０１２５】
本発明の一実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物を投与される対象は血管新生に関連する疾病、疾患、または状態であると診断されている。
【０１２６】
本発明の第二の実施形態によれば、本発明の化合物または医薬組成物を投与される対象は、以前に別の抗血管新生治療を受けたことがある、あるいは同時に別の抗血管新生治療を受ける、あるいは別の抗血管新生治療を受ける予定である。
【０１２７】
本発明の意味においては、これら２つの実施形態は非排他的であり、対象はこれらの実施形態の内の１つにのみ、あるいは２つに関連してもよい。
【０１２８】
一実施形態によれば、本発明の医薬組成物は、本発明の式（Ｉ）の化合物を、約０．１ｍｇ〜約５０ｇ含有する。
【０１２９】
一実施形態によれば、本医薬組成物は、体重に対して１μｇ／ｋｇ〜１ｇ／ｋｇの範囲の量の、本発明の式（Ｉ）の化合物が対象に投与されるような医薬組成物である。
【０１３０】
また、本発明は、それを必要とする対象における、血管新生に関連する疾病、疾患、または状態の治療方法であって、治療上有効な量の一般式（Ｉ）の化合物、あるいは治療上有効な量の一般式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物、の対象への投与を含む方法にも関する。
【０１３１】
一実施形態によれば、本発明の方法は、本発明の化合物または医薬組成物の、注入、経口投与、局所投与、鼻噴投与、口腔内投与、膣内投与、直腸投与、気管内投与、内視鏡による投与および経皮投与、あるいは移植片またはエアロゾルを用いた投与を含む。
【０１３２】
一実施形態において、本発明の方法に関連する対象はヒトを含む動物である。
【０１３３】
一実施形態によれば、本発明の方法に関連する対象は血管新生に関連する疾病、疾患、または状態であると診断されている。第二の実施形態によれば、本発明の方法に関連する対象は、以前に別の抗血管新生治療を受けたことがある、あるいは同時に別の抗血管新生治療を受ける、あるいは別の抗血管新生治療を受ける予定である。本発明の意味においては、これら２つの実施形態は非排他的であり、対象はこれらの実施形態の内の１つにのみ、あるいは２つに関連してもよい。
【０１３４】
一実施形態によれば、本発明の方法は、本発明の化合物または医薬組成物の、手術前あるいは手術後の投与を含む。
【実施例】
【０１３５】
〔実施例１〕本発明の化合物の合成
Ｎ−[５−（１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）−２−メチルフェニル]−Ｎ´−（２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イルカルボニル）チオウレア（本発明の化合物１）の合成
【化１３】
2014515034.tif 000016
１０ｍｌのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解した４−メチル−３−ニトロベンズアルデヒド（３．３４ｇ、２０．２ｍｍｏｌ、１当量）および硫酸水素ナトリウム（１１．５１ｇ、６０．６ｍｍｏｌ、３当量）を１時間還流した後、１０ｍｌのＤＭＦに溶解したｏ−フェニレンジアミン（２．１８ｇ、２０．２ｍｍｏｌ、１当量）を滴下し、その混合物をさらに３時間還流した。その溶解液を室温まで冷却し、氷水に注ぎ入れた。有機層を鹹水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、蒸発乾固した。不純物を除去するために、得られた残留物を粉砕し、濾過により固体を収集して、５（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−２−メチル−フェニルアミンを褐色粉末として得た（３．０４ｇ、収率６７％）。ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：２．１４（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）；５．０７（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）；７．１−７．６（ｍ、７Ｈ、Ｈ−Ａｒ）；１２．６５（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）。
【０１３６】
１，４−ベンゾジオキサン−６−カルボン酸（４．５ｇ、２５ｍｍｏｌ）を２５ｍｌの塩化チオニル中で３時間還流し、溶解液を蒸発乾固させて、１，４−ベンゾジオキシン−６−カルボニルクロリドを青白色の固体として４．９ｇ得た（収率１００％）。
【０１３７】
８ｍｌの乾燥アセトンに溶解したベンゾジオキシン−６−カルボニルクロリド（２．２ｇ、１０ｍｍｏｌ、１当量）およびチオシアン酸アンモニウム（０．８４ｇ、１０ｍｍｏｌ、１当量）を１時間還流した。その混合物を室温まで冷却し、１８ｍｌの乾燥アセトンに溶解した５（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−２−メチル−フェニルアミン（２．３４ｇ、１０ｍｍｏｌ、１当量）を加えた。その混合物をさらに１時間還流した後、その溶解液を冷却し、１００ｍｌの水を加えた。沈殿物を濾過により収集し、粗精製物をエタノール中で再結晶させて１の白色粉末を得た（０．８７０ｇ、収率６３％）。ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：２．３４（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）；４．３４（ｓ、４Ｈ、２×ＣＨ２Ｏ）；７．０−８．１（ｍ、１０Ｈ、Ｈ−Ａｒ）；８．３４（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）；１１．５４（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）；１２．４０（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）。ＭＳ（ＥＳＩ＋）：計算上の４４４として検出された４４５（ｍ＋Ｈ＋）。ＨＰＬＣ（Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８、４．６×２５０ｍｍ。Ａ：ＴＦＡを０．１％含むＨ２Ｏ、Ｂ：ＴＦＡを０．０９％含む７０％アセトニトリル、流速：１ｍｌ／ｍｉｎ）：Ｒｔ：１４．９分。
【０１３８】
Ｎ−[３−（１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）フェニル]−Ｎ´−（２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イルカルボニル）チオウレア（本発明の化合物２）の合成
【化１４】
2014515034.tif 000017
１０ｍｌのＤＭＦに溶解した３−ニトロベンズアルデヒド（２．９０ｇ、２６．５ｍｍｏｌ、１当量）および硫酸水素ナトリウム（１５．１０ｇ、７９．５ｍｍｏｌ、３当量）を１時間還流した後、１０ｍｌのＤＭＦに溶解したｏ−フェニレンジアミン（４．００ｇ、２６．５ｍｍｏｌ、１当量）を滴下し、その混合物をさらに３時間還流した。その溶解液を室温まで冷却し、氷水に注ぎ入れた。有機層を鹹水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、蒸発乾固した。不純物を除去するために、得られた残留物を粉砕し、濾過により固体を収集して、５（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−２−メチル−フェニルアミンを褐色粉末として得た（２．００ｇ、収率３９％）。ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：６．０７（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）；７．２−７．６（ｍ、８Ｈ、Ｈ−Ａｒ）；１２．６（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）。
【０１３９】
６ｍｌの乾燥アセトンに溶解したベンゾジオキシン−６−カルボニルクロリド（０．９７ｇ、４．４ｍｍｏｌ、１当量）およびチオシアン酸アンモニウム（０．３７ｇ、４．４ｍｍｏｌ、１当量）を１時間還流した。その混合物を室温まで冷却し、１５ｍｌの乾燥アセトンに溶解した５（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−２−メチル−フェニルアミン（０．・９６ｇ、４．４ｍｍｏｌ、１当量）を加えた。その混合物をさらに１時間還流した後、その溶解液を冷却し、１００ｍｌの水を加えた。沈殿物を濾過により収集し、粗精製物をエタノール中で再結晶させて２の白色粉末を得た（０．４６５ｇ、収率２７％）。ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：４．３３−４．３７（ｍ、４Ｈ、２×ＣＨ２Ｏ）；７．００−８．１２（ｍ、１１Ｈ、Ｈ−Ａｒ）；８．４１（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）；１１．５８（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）；１２．８６（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）。ＭＳ（ＥＳＩ＋）：計算上の４３０として検出された４３１（ｍ＋Ｈ＋）。ＨＰＬＣ（Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８、４．６×２５０ｍｍ。Ａ：ＴＦＡを０．１％含むＨ２Ｏ、Ｂ：ＴＦＡを０．０９％含む７０％アセトニトリル、流速：１ｍｌ／ｍｉｎ）：Ｒｔ：１３．８分。
【０１４０】
【表２】
2014515034.tif 000018
【０１４１】
〔実施例３〕生物学的実施例
方法
細胞培養
ＨＵＶＥＣ（Ｌｏｎｚａ、スイス、カタログＮｏ：Ｃ２５１７Ａ）は、２％のウシ胎児血清、ヒト線維芽細胞増殖因子−２（ｈＦＧＦＢ）、ヒト上皮細胞増殖因子−２（ｈＥＧＦ）、インスリン様増殖因子−１（Ｒ３−ＩＧＦ−１）、ヒドロコルチゾン、ゲンタマイシンおよびアンホテリシンＢ、ヘパリンおよびアスコルビン酸を含むキット（Ｌｏｎｚａ、フランス、カタログＮｏ：ＣＣ−４１７６）を追加したＥＢＭ（登録商標）−２（Ｌｏｎｚａ、フランス、カタログＮｏ：ＣＣ−３１６２）中で維持した。
【０１４２】
複数の癌細胞系列を使用した：乳癌細胞（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（ＡＴＴＣＣ（登録商標）番号  ＨＴＢ−２６（商標））、ＭＤＡ−ＭＢ−４３６（ＡＴＴＣＣ（登録商標）番号  ＨＴＢ−１３０（商標））、ＭＤＡ−ＭＢ−４３８、ＢＴ−４７４（ＡＴＴＣＣ（登録商標）番号  ＨＴＢ−２０（商標）））；子宮頸癌細胞（ＨｅＬａ（ＡＴＴＣＣ（登録商標）番号  ＣＣＬ−２（商標）））；大腸癌細胞（ＨＣＴ−１１６（ＡＴＴＣＣ（登録商標）番号  ＣＣＬ−２４７（商標））およびＨＴ−２９（ＡＴＴＣＣ（登録商標）番号  ＨＴＢ−３８（商標）））；骨肉腫細胞（Ｕ２ＯＳ（ＡＴＴＣＣ（登録商標）番号  ＨＴＢ−９６（商標）））；膵臓癌細胞（ＭＩＡ  ＰａＣａ−２（ＡＴＴＣＣ（登録商標）番号  ＣＲＬ−１４２０（商標））およびＰａｎｃ−１０．５（ＡＴＴＣＣ（登録商標）番号  ＣＲＬ−２５４７（商標）））；前立腺癌細胞（ＰＣ−３（ＡＴＴＣＣ（登録商標）番号  ＣＲＬ−１４３５（商標））およびＬＮＣａＰ（ＡＴＴＣＣ（登録商標）番号  ＣＲＬ−１７４０（商標）））；脳癌細胞（Ｕ８７グリア芽細胞腫（ＡＴＴＣＣ（登録商標）番号  ＨＴＢ−１４（商標））およびＳＨ−ＳＹＳＹ神経芽細胞腫（ＡＴＴＣＣ（登録商標）番号  ＣＲＬ−２２６６（商標）））。
【０１４３】
癌細胞系列は全て、１０％のウシ胎児血清（ＧＩＢＣＯ  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、フランス、カタログＮｏ：１０２７０−１０６）および１％のペニシリンＧ／ストレプトマイシン（ＧＩＢＣＯ  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、フランス、カタログＮｏ：１５１４０−１２２）により増強されたＤＭＥＭ  ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）（ＧＩＢＣＯ  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、フランス、カタログＮｏ：３１９６６０４７）中で培養して維持した。Ｐａｎｃ−１０．５細胞のみ、２ｍＭのＬ−グルタミン、１．５ｇ／Ｌの炭酸水素ナトリウム、４．５ｇ／Ｌのグルコース、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１０Ｕｎｉｔｓ／ｍｌのヒトインスリン、８５％のウシ胎児血清（ＳＶＦ）を追加したＲＰＭＩ１６４０培地（ＧＩＢＣＯ）中で培養した：１５％（培地５００ｍｌ中に７５ｍｌ）。
【０１４４】
細胞は亜集密細胞単層として生育させ、加湿大気下、３７℃、５％ＣＯ２の条件において７５ｃｍ２のフラスコ中で培養し、培地を２日ごとに交換した。２〜６回継代した細胞のみを実験に使用した。
【０１４５】
顕微鏡下で細胞を観察した後、古い培地を除去し、接着細胞をＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水、−Ｃａ２＋、−Ｍｇ２＋、Ｌｏｎｚａ、カタログＮｏ：１７−５１２Ｆ／１２）で穏やかに２回洗浄した。３ｍｌのトリプシン／ＥＤＴＡ（カルシウムイオンとマグネシウムイオンのキレーター）（Ｌｏｎｚａ）を用いて全ての細胞を剥離させ、３７℃で５分インキュベートした後、細胞が剥離して浮遊していることを確かめるために、顕微鏡により調べた。その後、トリプシンを不活化するために、３ｍｌのＴＮＳ（トリプシン中和液、Ｌｏｎｚａ、フランス、カタログＮｏ：ＣＣ−５００２）あるいは培養液を加え、その細胞浮遊液をファルコンチューブに移して、１４００ｒｐｍで７分間遠心分離した。上清を除去して、細胞ペレットを１０μｌの培養液に再懸濁した。この溶液５０μｌを２０μｌの等張液に移し、ｃｏｕｎｔ  ｃｅｌｌｕｌａｒ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）により細胞をカウントした。実験初日に２００μｌの細胞浮遊液（ＨＵＶＥＣ細胞は３．１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ、乳癌細胞についてはＭＤＡ−ＭＢ−２３１が１．１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ、ＭＤＡ−ＭＢ−４３６が１．１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ、ＭＤＡ−ＭＢ−４３８が１．１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ、ＢＴ−４７４が２．５．１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ；子宮頸癌細胞についてはＨｅＬａが５．０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ；大腸癌細胞についてはＨＣＴ−１１６が５．１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ、ＨＣＴ−２９が１．１．１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ；骨肉腫細胞についてはＵ２ＯＳが８．１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ；膵臓癌についてはＭＩＡ  ＰａＣａ−２が５．１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ、Ｐａｎｃ−１０．５が１．５．１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ；前立腺癌細胞についてはＰＣ−３が４．１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ、ＬＮＣａＰが２．１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ；脳癌細胞についてはＵ８７が５．１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ、ＳＨ−ＳＹＳＹが８．１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように）を９６ウェルプレートに蒔き、５％ＣＯ２の加湿大気下で３７℃で２４時間培養した。
実験開始から１日後に、本発明の化合物１あるいは２を、ウェルごとに濃度を増加させながら加え（０．１〜１０μＭ）、５％ＣＯ２の加湿大気下で３７℃で７２時間培養した。
【０１４６】
接着テスト
生物学的着色剤としてクリスタルバイオレット（ヘキサメチルパラロザニリンクロリド）を使用した。クリスタルバイオレットは生細胞に侵入し、プレート底部の接着した生細胞を暗紫色に染色し、可視化する。
【０１４７】
７２時間の培養後、５０ｍｌの３％パラホルムアルデヒドにより、室温で１５分間、接着細胞を固定した。培地と非接着細胞を除去し、接着細胞を１００ｍｌのＰＢＳ（＋Ｃａ２＋および＋Ｍｇ２＋）（Ｌｏｎｚａ）で大々的に洗浄した後、５０μｌの０．０４％クリスタルバイオレットで室温で３０分間染色した。細胞を１００μｌのＰＢＳで穏やかに３回洗浄し、１００μｌの２％Ｔｒｉｔｏｎにより１５分間透過処理をおこなった。マイクロプレートを撹拌して均質な溶液を得た後、Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｍａｎａｇｅｒ５．２により５８０ｎｍにおける吸光度を定量した。
【０１４８】
阻害率を、阻害率（％）＝１００−[（ＤＯサンプル／ＤＯコントロール）×１００]により算出した。
【０１４９】
増殖アッセイ
細胞増殖ＷＳＴ−１アッセイは、細胞の増殖と生存率を定量化する比色アッセイであり、培養液に加えられたテトラゾリウムの塩であるＷＳＴ−１が、生存細胞のミトコンドリアのコハク酸−テトラゾリウムレダクターゼによって酵素的に切断され、水溶性の有色のホルマザン色素となり４５０ｎｍにおける吸光度により検出されるという原理に基づいている。酵素活性の増大はホルマザン色素の形成量を増加させることとなり、これは培地中の、代謝が活発な細胞の数と直接相関する。
【０１５０】
７２時間の培養後、すなわち実験開始から４日目、試薬である１ｍｌのＷＳＴ−１（２００ｍｌのウェルに１０ｍｌのＷＳＴ−１）を加えた培地を１９ｍｌ調製した。９６マイクロプレートから培地を除去し、ＷＳＴ−１を溶解した培地を２００μｌずつ各ウェルに加えた。細胞を５％ＣＯ２の加湿大気下で３７℃で１時間３０分培養し、Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｍａｎａｇｅｒ５．２により４５０〜６５５ｎｍにおける吸光度を測定した。
【０１５１】
ＮＲＰ−１あるいはＶＥＧＦ−Ｒ１の相互作用に対するＶＥＧＦの阻害
９６ウェルマイクロプレート（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、フランス、カタログＮｏ：３５３０４６）の表面を、ＶＥＧＦ−Ｒ１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＫ、カタログＮｏ：３２１−ＦＬ−０５０／ＣＦ）を０．２μｇ／ｍｌ、あるいはＮＲＰ−１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＫ、カタログＮｏ：３８７０−Ｎ１−０２５）を２μｇ／ｍｌ含む１００μｌの１ｘＰＢＳ溶液（ｐＨ７．４、＋Ｃａ２＋および＋Ｍｇ２＋）（Ｌｏｎｚａ、フランス、カタログＮｏ：１７−５１３Ｆ／１２）で覆い、ＥＬＩＳＡ試験をおこなった。プレートを密封し、４℃で一晩インキュベートした。Ｔｗｅｅｎ２０（Ｓｉｇｍａ、フランス、カタログＮｏ：３４０７８）を０．５％（ｖ／ｖ）含む２００μｌの１ｘＰＢＳ（Ｂｕｆｆｅｒ  Ａ）で３回洗浄した後、ＢＳＡ（Ｅｕｒｏｂｉｏ、フランス、カタログＮｏ：ＧＡＵＢＳＡ０１−６５）を０．５％（ｗ／ｖ）含む２００μｌの１ｘＰＢＳを加えてプレートをブロッキングし、３７℃で２時間撹拌した。Ｂｕｆｆｅｒ  Ａで５回洗浄した後、特異的シグナル用に１０μＭの本発明の化合物を５０μｌずつ各ウェルに加え、非特異的シグナルおよび結合が最大となるシグナル用に５０μｌずつ各ウェルに加えて、振とうしながら３７℃で１時間インキュベートした。ｂｔＶＥＧＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＫ、カタログＮｏ：ＮＦＶＥＯ）の溶解液（ＮＲＰ−１／４μｇ／ｍｌヘパリン（Ｓｉｇｍａ、ＵＳＡ、カタログＮｏ：Ｈ３３９３−１０ＫＵ）に対しては２００μｇ／ｌ、ＶＥＧＦ−Ｒ１に対しては１００μｇ／ｌ）を５０μｌずつ各ウェルに加えた。プレートを密封し、振とうしながら３７℃で２時間インキュベートした。Ｂｕｆｆｅｒ  Ａで５回洗浄した後、Ｂｕｆｆｅｒ  Ａで８０００倍に希釈したＨＲＰ標識ストレプトアビジン（Ａｍｅｒｓｈａｍ、スイス、カタログＮｏ：ＲＰＮ４４０１）を各ウェルに１００μｌずつ加え、最後のインキュベーションをおこなった。遮光して３７℃で１時間振とうした後、プレートをＢｕｆｆｅｒ  Ａで５回洗浄し、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｐｉｃｏ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、ＵＳＡ、カタログＮｏ：３４０７８）を１００μｌ加えた。ＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）２１０１  Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、ＵＳＡ）により発光を定量し、Ｗａｌｌａｃ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  ｍａｎａｇｅｒソフトウェアによりデータを解析した。シグナルは相対光量単位（Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｌｉｇｈｔ  Ｕｎｉｔｓ：ＲＬＵ）として示される。非特異的結合は、受容体非存在下でマイクロプレートをコートした場合の測定シグナルにより規定される。特異的結合については、総結合量と非特異的結合量の差として算出した。阻害の割合を、以下の式により算出した。
阻害率（％）＝１００×（測定したシグナル−非特異的結合シグナル）／（阻害剤非存在下で得られた最大結合シグナル−受容体非存在下での非特異的結合シグナル）
【０１５２】
管形成アッセイ
Ｉ型コラーゲン（１ｍｇ／ｍｌ、ＢＤ）をＥＢＭ−２培地中で０．１Ｎ水酸化ナトリウム、０．１％炭酸水素塩および１０Ｘと混合し、ウェルに移すまで氷上で保持した。アッセイは９６ウェルプレートのフォーマットで用意され、各ウェルに７０μｌずつ溶液を加え、その後、３７℃で３０分間ゲル化させることで底部にコラーゲン層を形成させた。その後、ＨＵＶＥＣ細胞を８．１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるようにコラーゲン上に播種した。細胞単層形成後（１日）、同じ手順によりコラーゲン（２００μｌ／ｗｅｌｌ）の２層目を調製し、細胞層の上に静かに配置した。接着段階において本発明の化合物を細胞に加えた（５０％阻害濃度（ＩＣ５０）に相当する濃度）。３７℃で２４時間および４８時間インキュベーションをおこなった後、管形成を観察し、写真撮影をおこなった。
【０１５３】
インビボ試験
生後５〜６週間の雌のマウス（ＮＯＤ−ＳＣＩＤ）の右側腹部の１ヵ所にＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（５．１０６）を皮下注入した。腫瘍サイズに応じて各治療群（一群につき８匹）に振り分ける前に、腫瘍を１１０ｍｍ以下にまで成長させた（１９日間）。一つの群を賦形剤で（１２．５％クレモフォール／１２．５％エタノール／Ｈ２Ｏを投与した８匹）、一つの群を１０ｍｇ／ｋｇの本発明の化合物１で（化合物１＋１２．５％クレモフォール／１２．５％エタノール／Ｈ２Ｏを投与した８匹）、一つの群を５０ｍｇ／ｋｇの本発明の化合物１で（化合物１＋１２．５％クレモフォール／１２．５％エタノール／Ｈ２Ｏを投与した９匹）、処置した。全ての群は一週間のうち５日連続して毎日、経口胃管栄養法により本発明の化合物１を含む溶液を約１００μｌ与えられた。治療の毒性を評価するために、定期的にマウスの体重を計測し、腫瘍の成長を測定するために、キャリパー（幅×幅×長さ×Ｐｉ／６）を用いて腫瘍を計測した。調査の間、マウスの生存率を算定し、肺、脾臓および肝臓において、転移の進行を調べた。
【０１５４】
結果
本結果は、本発明の化合物１、２および３が血管内皮細胞系列（ＨＵＶＥＣ細胞）に対して培養時に細胞毒性を示すことを示した。さらに、これらの化合物はまた、ＨＵＶＥＣ細胞の接着を阻害した（図１Ａ、ＢおよびＣ）。したがって、本発明の化合物は抗血管新生作用を示すと仮定できた。この仮定を確認するために、培養時の血管内皮細胞による血管形成を評価するインビトロの実験をおこなった。図１Ｄは、本発明の化合物１および２が新しい血管の形成を効率よく阻害したことを示す。
【０１５５】
また、図１Ａ、ＢおよびＣは、本発明の化合物１、２および３はインビトロにおいて癌細胞に対して細胞毒性を示すこと、およびこれらの化合物は培養時の癌細胞の接着を阻害することを示した。本発明の化合物１および２の細胞毒性は、異なる癌細胞系列において確認された。化合物の作用についてはｗｓｔ−１細胞毒性試験により評価した（例として図２を参照）。結論として、本発明の化合物１および２は、以下の表１に示すように、その起源（乳癌、大腸癌、膵臓癌、子宮頸癌、前立腺癌あるいは脳癌または骨肉腫）に関わらず、試験した癌細胞系列全てに対して細胞毒性を示す。
【表３】
2014515034.tif 000019
【０１５６】
まとめると、これらの結果は、本発明の化合物１および２の、インビトロの癌細胞に対する作用を示した。
【０１５７】
さらに、これらの化合物の有望なインビボにおける抗癌作用を、マウスにおいてテストした。ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスに腫瘍を注入した後、本発明の化合物を摂食により与えた。
【０１５８】
その結果、体重に顕著な変化は見られず、５０ｍｇ／ｋｇならびに１０ｍｇ／ｋｇの投与量においては、本発明の化合物には毒性がないことが証明された（図３Ａ）。
【０１５９】
本発明の化合物１は腫瘍の発達を抑制した。実際、図３Ｂにおいて、１０ｍｇ／ｋｇあるいは５０ｍｇ／ｋｇの化合物１を与えたマウスでは、腫瘍のサイズがより小さいことが明らかである。
【０１６０】
さらに、３５日時点において、対照実験では５０％以下の生存率であったのに対し、本発明の化合物１を与えたマウスは、投与量が５０ｍｇ／ｋｇの場合には１００％、１０ｍｇ／ｋｇの場合には約７０％の生存率を示した（図３Ｃ）。
【０１６１】
まとめると、これらの結果は、本発明の化合物１の、インビボにおける抗癌作用を示した。
【０１６２】
本発明者らは本発明の化合物が、ＶＥＧＦとその受容体であるニューロピリン−１（ＮＲＰ−１、以下の表２を参照）との結合を阻害すること、および、より低い程度ではあるが、ＶＥＧＦとその受容体であるＶＥＧＦ−Ｒ１（以下の表３を参照）との結合を阻害すること、を示した。
【表４】
2014515034.tif 000020
【表５】
2014515034.tif 000021
【０１６３】
この結果により、本発明の化合物がＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−Ｒ１およびＮＲＰ−１を含む経路を阻害することで、抗血管新生作用および抗癌作用を発現することが示唆された。
【図１Ａ】
2014515034.tif 000030
【図１Ｂ】
2014515034.tif 000031
【図１Ｃ】
2014515034.tif 000032
【図１Ｄ】
2014515034.tif 000033
【図２】
2014515034.tif 000034
【図３Ａ】
2014515034.tif 000035
【図３Ｂ】
2014515034.tif 000036
【図３Ｃ】
2014515034.tif 000037
【国際調査報告】
2014515034.tif 000038
2014515034.tif 000039
2014515034.tif 000040
2014515034.tif 000041
2014515034.tif 000042
2014515034.tif 000043
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