(57)【要約】  少なくとも１つの対称な面と、１つの対称軸と、少なくとも３つの脚と、少なくとも３つの真っ直ぐなコネクタと、を含み、コネクタが、サポートの対称軸に対して垂直な平面を規定し、コネクタが、対称軸でまたはその周りで、互いに接続され、各々の脚がコネクタに接続され、各々の脚が、コネクタにより規定された平面に対して垂直であり、全ての脚が、コネクタにより規定された平面の同じ側にある、クロマトグラフィーカラムサポートの使用方法を、ここに記載する。
2014508924.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
クロマトグラフィーカラム内のクロマトグラフィー材料を支持するためのクロマトグラフィーカラムサポートの使用であって、
クロマトグラフィーカラムサポートが、ステンレス鋼、シリコーン、ポリテトラフルオロエチレンまたはガラスからなり、
−少なくとも１つの対称な面と、
−  １つの対称軸と、
−  少なくとも３つの脚と、
−  少なくとも３つの真っ直ぐなコネクタと、
を含み、
コネクタが、サポートの対称軸に対して垂直な平面を規定し、
コネクタが、対称軸でまたはその周りで互いに接続され、
各々の脚がコネクタに接続され、
各々の脚が、コネクタにより規定された平面に対して垂直であり、
全ての脚が、コネクタにより規定された平面の同じ側にある、クロマトグラフィーカラムサポートの使用。
【請求項２】
脚が板状であり、コネクタ及び脚が、それぞれ脚の上側端部がコネクタであるユニットを形成することを特徴とする、請求項１記載のクロマトグラフィーカラムサポートの使用。
【請求項３】
脚が穴の開いた板状であることを特徴とする、請求項１または２記載のクロマトグラフィーカラムサポートの使用。
【請求項４】
サポートが、対称軸に対して互いに異なる半径を有する１以上の円環状脚を含むことを特徴とする、請求項１から３の何れか1項記載のクロマトグラフィーカラムサポートの使用。
【請求項５】
サポートの脚により規定されたセクションの間の横方向の流れが可能なことを特徴とする、請求項１から４の何れか1項記載のクロマトグラフィーカラムサポートの使用。
【請求項６】
−少なくとも１つの対称な面と、
−  １つの対称軸と、
−  少なくとも３つの脚と、
−  少なくとも３つの真っ直ぐなコネクタと、
を含み、
コネクタが、サポートの対称軸に対して垂直な平面を規定し、
コネクタが、対称軸で互いに接続され、
各々の脚がコネクタに接続され、
各々の脚が、コネクタにより規定された平面に対して垂直であり、
全ての脚が、コネクタにより規定された平面の同じ側にある、
クロマトグラフィーカラムサポート。
【請求項７】
脚が板状であり、コネクタ及び脚が、それぞれ脚の上側端部がコネクタであるユニットを形成することを特徴とする、請求項６記載のクロマトグラフィーカラムサポート。
【請求項８】
脚が穴の開いた板状であることを特徴とする、請求項６または７記載のクロマトグラフィーカラムサポート。
【請求項９】
サポートが、対称軸に対して互いに異なる半径を有する１以上の円環状脚を含むことを特徴とする、請求項６から８の何れか1項記載のサポート。
【請求項１０】
サポートの脚により規定されたセクションの間の横方向の流れが可能なことを特徴とする、請求項６から９の何れか1項記載のサポート。
【請求項１１】
３つの脚と１つのコネクタを含み、コネクタはＹ形状であり、脚は棒状であることを特徴とする、請求項６から１０の何れか1項記載のサポート。
【請求項１２】
少なくとも４つで最大１６個の脚を含み、４つのコネクタを含むことを特徴とする、請求項６から１０の何れか1項記載のサポート。
【請求項１３】
サポートが、コネクタよりも多い数の脚を含むことを特徴とする、請求項６から１０の何れか1項記載のクロマトグラフィーカラムサポート。
【請求項１４】
サポートが、
ｉ）対称軸で互いに接続された板形状の４つの第1の脚、
ｉｉ）対称軸で互いに接続されず、４つの第1の脚にも接続されない4つの第２の脚、及び
ｉｉｉ）４つの第１の脚及び第２の脚の各々に接続されるが互いに接続されず、対称軸に対して互いに異なる半径を有する３つの円環状脚
からなることを特徴とする、請求項６から１０の何れか1項記載のクロマトグラフィーカラムサポート。
【請求項１５】
−  クロマトグラフィーカラムと
−  少なくとも１つの移動可能なフリットと、
−  少なくとも１つの請求項６から１４の何れか1項記載のサポートと、
を含み、
移動可能なフリット及びクロマトグラフィーカラムサポートがクロマトグラフィーカラムの内側に位置し、
クロマトグラフィーカラムが、側面から見て垂直方向に置かれたとき、移動可能なフリットがクロマトグラフィーカラムサポートの上側にある、装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
移動可能なフリットをクロマトグラフィーカラムサポート内の所望の位置に位置付けることが可能なクロマトグラフィーカラムサポートを本願に記載する。サポートは、複数の脚と、移動可能なフリットに対して、カラムの全直径にかけてサポートを提供する脚の上端に接続された複数のコネクタとを含む。
【背景技術】
【０００２】
大型の予備的なクロマトグラフィプロセスの設計は、大変複雑で、主に“クロマトグラフィー的”でない多くの要素を含む可能性がある。これらの要素は、カラムの充填方法、流体力学的圧力低下及び流れの分配を含む。これらは、結局、プロセスの経済に影響する。
【０００３】
Stickel, J.J. and Fotopoulos, A. (Biotechnol.Prog.17(2001) 755-751)が、試験室規模及び生産規模における圧縮可能なクロマトグラフィー媒体の充填されたベッドに関する圧力と流れの関係を報告している。
【０００４】
EP 0 005 708に記載されているように、技術規模のジェルの濾過カラムにおいて、結果としてキャパシティの減少につながるジェルを満たすときの詰め過ぎの問題が、クロマトグラフィーカラムの壁に平行な方向のクロマトグラフィーカラムの内側の分離壁の配置によって回避できる。
【０００５】
EP 0 176 891には、カラム充填物を安定させるため追加サポートエレメントを含む高圧クロマトグラフィーカラムが記載されている。
【０００６】
US 3,398,512には、クロマトグラフィー的なカラムが記載されている。ここで記載されたクロマトグラフィー装置は、ガス入口、ガス出口、ガス入口及びガス出口を相互に連結し、個体で粒子状の充填材料を閉じ込める少なくとも１つのカラム壁と、持続した歪みが生じた後、部材の外形を真っ直ぐにするまたは再生することにより、部材外形の歪を防ぎ抑制する手段とを含む。
【０００７】
US 5,770,061では、液体の流れは浸透できるが、充填材料を保持する板を備えたクロマトグラフィーカラムを提供することにより、充填材料は、重ね合わされた幾つかの層に分割され、これにより、充填材料の全高さにわたって、圧力差を減少させることができる（GB 1,203,439, US 3,539,505参照)。カラム内に配置され、カラムの垂直軸の方向を有する様々な壁により、大型カラムの不利な点を解消させることが試みられている。これらの壁は、カラムを小さな断面の幾つかの平行なセクションに分割し、これらのセクションは、充填ベッド中、または概ね全ベッド中に連続的に延びている（EP 0 005 708, US 5,124, 133, US 3,298,527参照)。
【０００８】
WO91/014490には、スラリコンプレッサにより、液体クロマトグラフィーカラムにおける均質な吸収ベッド充填の獲得を促進し、これにより、カラムの効率を改善し、得られた結果の正確性を増すことが記載されている。
【０００９】
US 6,440,301では、標準サイズであって、試験用に構成された硝子容器を、クロマトグラフィーカラムとして用いることを促進する装置が提案されている。中央開口を規定し、更に、Ｏリングのようなガスケットによって係合された円環状の減じられた溝の直径を規定するステンレスマトリックスホルダーも記載されている。
【００１０】
US 3,374,606には、クロマトグラフィーカラム内の充填ベッドまたは分離材料内の任意の順番または位置に配置され得るシーブプレートを含み、これにより、カラムを一連の分離ゾーンに分離する、クロマトグラフィー的な分離のための方法及び装置が記載されている。
【００１１】
US 5,770,061には、軽く、自己で支持可能であり、カラム内での設置が容易な内部構造を、カラム内に配置することにより、大型の分離カラムの容量及び分離結果が著しく改善され得ることが記載されている。更に詳細には、充填材料空間が、垂直方向で少なくとも２つのゾーンを含み、これらのゾーンの間では、垂直流れを妨げる手段が存在せず、これらのゾーンは、実質的に垂直な壁を用いて分離セクションに分離されており、ゾーンは、最上ゾーンの壁の最上端が、カラムの稼働状態において材料を充填するカラムの上側表面の下にあるような寸法を有する。
【００１２】
US 4,351,621には、更に、組み合わせ用コネクタが記載されている。EP 1 606 615には、高速クロマトグラフィーカラム流れ分配装置が記載されている。JP 2008-241 624には、クロマトグラフィーカラムに使用する液体導入ユニットが記載されている。JP 62-042051には、クロマトグラフィー装置が記載されている。
【００１３】
［発明の開示］
本願記載の１つの実施態様は、
−  少なくとも１つの対称な面と、
−  １つの対称軸と、
−  少なくとも３つの脚と、
−  少なくとも３つの真っ直ぐなコネクタと、
を含み、
コネクタが、サポートの対称軸に対して垂直な平面を規定し、
コネクタが、対称軸、または対称軸の周りの円弧で互いに接続され、
各々の脚がコネクタに接続され、
各々の脚が、コネクタにより形成された平面に対して垂直であり、
全ての脚が、コネクタで形成された平面の同じ側にある、
クロマトグラフィーカラムサポートである。
【００１４】
脚の１つの実施形態は、複数の穴を含む板である。更なる実施形態では、サポートが、３つの脚と１つのコネクタとを含み、コネクタはＹ形状である。更なる１つの実施形態では、サポートが、少なくとも４つ、最大１６個の脚を含み、４つのコネクタを含む。
【００１５】
１つの実施形態では、少なくともコネクタの１つと脚の１つとが、１つのユニットとして結合されている。１つの実施形態では、コネクタの各々が、１つのユニットとして脚に結合されている。
【００１６】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムサポートが、コネクタよりも多い数の脚を含む。
【００１７】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムサポートが、
−  各々がコネクタとともに１つのユニットを形成する少なくとも３つの脚と、
−  コネクタとともに１つのユニットを形成しない少なくとも３つの脚と、
−  対称軸の周りの円環状の少なくとも１つの脚と、
を含む。
【００１８】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムサポートが１つの物体である。
【００１９】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムサポートが複数の物体を含む。
【００２０】
１つの実施形態では、コネクタが、８．０ｍｍより小さい幅を有する。
【００２１】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムサポートが、１２．５ｃｍより小さい直径を有する。
【００２２】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムサポートが、ステンレス鋼、シリコーン、ポリテトラフルオロエチレンまたはガラスからなる（作られる）。
【００２３】
本願記載のその他の実施態様は、
−  クロマトグラフィーカラムと
−  少なくとも１つの移動可能なフリットと、
−  少なくとも１つの本願記載のサポートと、
を含み、
移動可能なフリット及びクロマトグラフィーカラムサポートがクロマトグラフィーカラムの内側に位置し、
クロマトグラフィーカラムが、側面から見て垂直方向に置かれたとき、移動可能なフリットがクロマトグラフィーカラムサポートの上側にある。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】本願記載のサポートの例示的な実施形態であり、上図には、全領域の形状であって、各々９０度の角度で立つ４つの脚を有するエレメントを示し、下図には、６つの脚を有するエレメントを示す。
【図２】本願記載のサポートの例示的な実施形態であり、上図には、脚の領域に長めの開口を含む４つの脚を備えたエレメントを示し、中図には、丸穴を備えて交差するネットワークを提供するエレメントを示し、下図には、クロマトグラフィーカラムの内部に３つの脚を有するエレメントを示す。
【図３】本願記載の幾つかの異なるサポート及び幾つかのクロマトグラフィーカラムセパレータを含むクロマトグラフィーカラムの枠組みを示す。
【図４】DEAE-Sepharoseクロマトグラフィーのフローダイアグラムを示し、左の曲線は、本願記載のサポートを備えないカラムのものを示し、右の曲線は、本願記載のサポートを備えるカラムのものを示す。
【図５】HA-Ultrogelクロマトグラフィーのフローダイアグラムを示し、左の曲線は、本願記載のサポートを備えないカラムのものを示し、右の曲線は、本願記載のサポートを備えるカラムのものを示す。
【図６】クロマトグラフィーカラムセパレータを例示的に示し、ａ）では、フリット（１）及びフリット（２）を含むシングルフリットを備えたセパレータを示し、ｂ）では、上側フリット（１）、下側フリット（３）、上側フィッティング（２）及び下側フィッティング（４）を備えるセパレータを示し、ｃ）では、２つの軸対称断面領域（５及び６）を含むセパレータのガイドリングの垂直断面が示され、各々の軸対称断面領域は、ｉ）ガイドリングの外側から内側へ傾斜した傾斜構造、及びｉ）フリットを取り付けるため、ガイドリングの内側へ向けた開口を備えた切り欠き（８）を有することを示す。
【図７】再生時の圧力値対本願記載のサポートを含まないクロマトグラフィーカラムのサイクル数のグラフである。
【図８】再生時の圧力値対本願記載のサポートを含むクロマトグラフィーカラムのサイクル数のグラフである。
【００２５】
［発明の詳細な説明］
本願記載のクロマトグラフィーカラムサポートは、
−  １つの対称軸と、
−  対称軸に対して垂直な少なくとも１つの対称な面と、
−  対称な面に対して垂直な少なくとも３つの脚と、
−  少なくとも３つの真っ直ぐなコネクタと、
を含み、
コネクタが、サポートの対称軸に対して垂直な平面を規定し、
コネクタが、対称軸またはその周りで互いに接続され、
各々の脚がコネクタに接続され、
各々の脚が、コネクタにより規定された平面に対して垂直であり、
全ての脚が、コネクタにより規定された平面の同じ側にあり、
コネクタにより規定された平面が硬くないようになっている。
【００２６】
クロマトグラフィーカラムサポートの上に置かれる移動可能なフリット、及び装置が設置されたクロマトグラフィーカラムの間の接触インタフェイスは、支持された移動可能なフリットの特性に干渉しないであろうことがわかる。
【００２７】
クロマトグラフィーカラムサポートの構造において、サポートがクロマトグラフィー材料の中に置かれて、よって、クロマトグラフィー材料に囲まれることになるという事実を考慮しなければならないことがわかる。従って、クロマトグラフィーカラムサポートが、カラムに充填するプロセスの間のクロマトグラフィー材料を極力乱さないようにするように構成される。更に、クロマトグラフィー分離プロセスの間に、クロマトグラフィー材料の中を流れる移動相の乱れを最小限に抑えるように構成される。
【００２８】
本願記載のクロマトグラフィーカラムサポートは、（例えば、鋳型に鋳込み材料を鋳込むことにより）一体で作ることもできるし、（例えば、ねじ止めや接着で、複数の部材を接合することにより）複数の部材で作ることもできる。
【００２９】
本願記載のクロマトグラフィーカラムサポートは、クロマトグラフィーカラムに固定されない。はじめにカラムから切り離すような必要なく、カラムから取り外すことができる。
【００３０】
本願記載のクロマトグラフィーカラムサポートは、充填物内のクロマトグラフィーカラム充填物を支持する。一方、クロマトグラフィーカラムだけでなく、クロマトグラフィーカラムサポート内の上部及び／または底部板も、外側からクロマトグラフィーカラム充填物を支持する。本願記載のクロマトグラフィーカラムサポートは、クロマトグラフィーカラム充填物の中のフレームワークを形成する。このフレームワークは、充填物の内側から、クロマトグラフィー材料の充填物の安定性及び均一性を支持する。一方、一般的なクロマトグラフィーカラムサポートは、クロマトグラフィー材料を外側だけから支持する。
【００３１】
従って、本願記載のクロマトグラフィーカラムサポートを含むクロマトグラフィーカラムは、本願記載のクロマトグラフィーカラムサポートを含まない従来のクロマトグラフィーカラムにおけるクロマトグラフィーカラム充填物に比べて、安定性を改善した。
【００３２】
“１つの脚と１つのコネクタとが１つのユニットとして結合される”という用語は、脚がコネクタと同じ長さを有して、対称軸またはその周りで、他の脚／コネクタと接合されるので、更なるコネクタの存在を陳腐化することを意味する。
【００３３】
液体カラムクロマトグラフィ精製法において、クロマトグラフィー材料がカラムハウジング（クロマトグラフィーカラム）内に位置し、これは“静止相”として意味する。静止相が、適用される溶液内の物質／プロペプチドと相互作用できるようにするため、静止相は、“移動相”により囲まれているかまたは埋め込まれている。“移動相”の用語は、液体、例えば、静止相が適用された液体カラムクロマトグラフィ精製法で用いられる緩衝化した水溶性の溶液、水と有機溶媒との混合物、または有機溶媒を意味する。
【００３４】
他のクロマトグラフィー法もポリペプチドの回収や精製に確立されて広く普及しており、例えば、微生物たんぱく質（例えば、プロテインＡまたはプロテインＧ親和性クロマトグラフィー）を用いる親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、陽イオン交換（カルボキシメチル樹脂）、陰イオン交換（アミノエチル樹脂）、及び混合様式イオン交換）、チオフェノール吸着（例えば、ベータメルカプトエタノール及び他のＳＨリガンドを用いる）、疎水性相互作用または芳香族吸着クロマトグラフィー（例えば、フェニル−セファロース、アザ-アレノフィリック樹脂、またはｍ-アミノフェニルボロン酸を用いる）、金属キレート親和性クロマトグラフィー（例えば、Ni(II)-及びCu(II)-親和性材料を用いる）、サイズ排除クロマトグラフィー、並びに電気泳動法（ゲル電気泳動、 キャピラリー電気泳動など）がある（例えば、Vijayalakshmi, M.A., Appl. Biochem. Biotech. 75 (1998) 93-102参照）。
【００３５】
天然ポリペプチドのカラムクロマトグラフィ分離または精製において、通常、クロマトグラフィー材料及び移動相を含むクロマトグラフィーカラムを適用する。移動相に圧力をかけることによって、移動相は、強制的に、クロマトグラフィーカラムを通り、これに伴って、クロマトグラフィー材料を通ることになる。移動相が仲介して、圧力はクロマトグラフィー材料にも適用され、これにより、クロマトグラフィーカラムの入口からクロマトグラフィーカラムの出口までの間で圧力降下が生じる。クロマトグラフィーカラムの出口で、圧力は外部の大気圧まで降下する。よって、クロマトグラフィーカラムのクロマトグラフィー材料の上側部分まで、最大圧力が印加される。
【００３６】
印加する圧力は、通常、一方で、クロマトグラフィー材料の粒子の大きさによるとともに、クロマトグラフィーカラム中の定常流が生じたときの移動相の粘度によるが、一定圧力ではない。一般的に、クロマトグラフィー材料の粒子の大きさが小さくなると、圧力は増大する。クロマトグラフィー材料中を定常流速で流れる場合において、例えば、クロマトグラフィー材料の再生または清浄中の移動相の粘度が変化すると、クロマトグラフィー材料に適用する圧力が結果として変化する。一般的に、クロマトグラフィー材料は、圧力不感性材料ではなく、例えば、圧縮できて、圧縮後、膨張する。従って、適用する圧力が増加すると、クロマトグラフィー材料は圧縮されて、クロマトグライカラム内のクロマトグラフィー材料の高さ、例えば、ベッド高さは減じられる。適用する圧力が減じられる場合も同様に、クロマトグラフィー材料は、再び膨張し、クロマトグラフィーカラム内のクロマトグラフィー材料の高さは、最大で圧力をかける前の高さまで増加する。このクロマトグラフィー材料の圧縮及び膨張は、クロマトグラフィー材料全体の巨視的なプロセス、及びクロマトグラフィー材料の個々の部分の微視的なプロセスで同時におこる。このような圧縮−膨張サイクルの数が増えると、クロマトグラフィー材料は、より小さな粒子に分解される。クロマトグラフィー材料の粒子の大きさが小さくなるにつれて、クロマトグラフィー材料の充填物はより小型になり、これにより同時に、クロマトグラフィーカラム中、例えばクロマトグラフィー材料中を流れる液相の定常流れを維持するために、圧力が増加する。これにより、結果として、クロマトグラフィー材料の粒子の分解が更に起こり、再びこれにより、圧力が増加するということが繰り返される。
【００３７】
一般的に、クロマトグラフィーカラム分離は、最大圧力まで行うことができる。圧力上限に達したとき、クラマトグラフィカラム充填物は、完全に取り替えなければならない。
【００３８】
本願記載のクロマトグラフィーカラムサポートは、多くの利点を提供する。
【００３９】
本願記載のサポートはカラム内で移動か可能であり、例えば、カラムの軸に沿って任意の場所に設置可能である。よって、サポートの高さ、及びそれに伴うクロマトグラフィーカラムの対応する水平セクションの高さは変更可能であり、サポートとともに使用するクロマトグラフィー材料の特性に応じて調整できる。更に、サポートがカラム内を移動可能なので、クロマトグラフィーカラムの内壁を損傷することを防げる。
【００４０】
本願記載のカラムクロマトグラフィーとして使用できる任意の材料、例えば、テフロン（ポリテトラフルオロエチレン）、ステンレス鋼、シリコーンまたはガラスからなる（作られる）ことができる。１つの実施形態では、本願記載のクロマトグラフィーカラムサポートは、ポリテトラフルオロエチレン、ステンレス鋼、シリコーンまたはガラスで作ることができる。このことにより、クロマトグラフィー材料（カラム充填物）だけでなく、分離する物質にも干渉せず、影響を与えることがない挿入サポートを提供できる。１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムサポートは、クラマトグラフィ挿入材料からなる（作られる）。
【００４１】
本願記載のサポートは、クロマトグラフィサポートに固定されないので、サポートは、容易な方法で、カラムに適用され、取り外しもできる。更に、サポートがカラムから取り外し可能なので、容易に効果的に清掃、清浄することができる。１つの実施形態では、本願記載の装置内のクロマトグラフィーカラムサポートは、クロマトグラフィーカラム内に位置するが、クロマトグラフィーカラムの内壁に固定するものではない。
【００４２】
更に、本願記載のサポートを伴えば、既存のクロマトグラフィーカラムに、柔軟な一般的に適用可能なかたちで追加できる。これにより、既存のクロマトグラフィーカラムの適用性を拡大するために求められるコストを削減する。
【００４３】
本願記載のサポートは、直径及び高さで多くの異なるバリエーションを提供でき、これにより、多数の異なるクロマトグラフィーカラムに適用可能である。しかし、カラムに充填する間、及び／またはカラムを使用する間の何れかにおいて、カラムの内側に自由な可動性を確保するため、本願記載のクロマトグラフィーカラムサポートの直径は、常に、クロマトグラフィーカラムの内径よりも小さい。
【００４４】
もし、サポートの脚が板形状の場合、クロマトグラフィー材料の更なる安定効果を与えることができる。この実施形態では、脚及びコネクタが１つのユニットを形成し、よって、クロマトグラフィサポートが、対称軸、またはその周りで互いに接続された少なくとも３つの脚を含む。
【００４５】
一般的に、本願記載のサポートは、移動可能なフリットと組み合わせて使用できる。この実施形態では、サポートは、カラム内部のクロマトグラフィー材料全体を安定させる効果を提供する。
【００４６】
サポートを適用する前に、クロマトグラフィー材料の均一な充填が効果を与えているので、本願記載のサポートは充填プロセスを改善する。カラム（シングルユースのカラム）を使用した後、または（マルチユースのカラムにおいて）クロマトグラフィー材料を交換しなければならないとき、あたかもカラムが本願記載のサポートを含んでいないかのように、容易にサポートをクロマトグラフィー材料から取り外すことができる。本願記載のサポートを伴う充填プロセスを、それぞれのクロマトグラフィーカラムの水平セクションに既に導入させておくこともできる。
【００４７】
本願記載のサポートは、クロマトグラフィーカラムを改造することなく、その中のクロマトグラフィー材料に内部構造やサポートを与える任意のクロマトグラフィーカラムとともに使用できる。
【００４８】
よって、本願記載の態様は、クロマトグラフィーカラム内のクロマトグラフィー材料を支持する任意のクロマトグラフィーサポートの使用である。
【００４９】
１つの実施形態では、サポートは、ステンレス鋼、シリコーン、ポリテトラフルオロエチレンまたはガラスからなる（作る）ことができる。
【００５０】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムが、
−  少なくとも１つの対称な面と、
−  １つの対称軸と、
−  少なくとも３つの脚と、
−  少なくとも３つの真っ直ぐなコネクタと、
を含み、
コネクタが、サポートの対称軸に対して垂直な平面を規定し、
コネクタが、対称軸でまたはその周りで、互いに接続され、
各々の脚がコネクタに接続され、
各々の脚が、コネクタにより規定された平面に対して垂直であり、
全ての脚が、コネクタで規定された平面の同じ側にある。
【００５１】
１つの実施形態では、脚が板状であり、コネクタ及び脚が、それぞれ脚の上側端部がコネクタであるユニットを形成する。
【００５２】
１つの実施形態では、脚が穴の開いた板状である。
【００５３】
１つの実施形態では、サポートが、対称軸に対して互いに異なる半径を有する１以上の円環状脚を含む。
【００５４】
１つの実施形態では、サポートの脚により規定されたセクションの間の横方向の流れが可能である。
【００５５】
有利なことには、特に不活性な材料からなる（作られる）とき、更に固有の対称な構造を有する。
【００５６】
サポートの開放構造、例えば、クロマトグラフィーカラムの内部壁との恒久的な固定をしないことにより、カラム内部の他のコンパートメントと非常に近接したコンパートメントを導入することなく、クロマトグラフィー材料を内部構造に提供する。開放構造により、（ｉ）より均質な形で、クロマトグラフィー材料の充填を得ることができ、（ｉｉ）充填物内部の引力の形成を防ぐことができ、（ｉｉｉ）クロマトグラフィーカラムの全断面において、流れと質量の移動を確保でき、（ｉｖ）容易な充填及び取り出しプロセスを可能にする。よって、本願の１つの実施態様は、クロマトグラフィーカラム内のクロマトグラフィー材料に内部構造を提供するための本願記載のクロマトグラフィーサポートの使用である。
【００５７】
更に、クロマトグラフィー材料の間、上側または下側で不支持領域がなく、支持された充填領域をカラムの下部から上部まで位置させることができる。
【００５８】
更に、本願記載のサポート及び移動可能なフリットの組み合わせにより提供される水平セクションの各々を、個々に充填することができ、これにより、底部から上部までのクロマトグラフィーカラムの充填を可能にする。更に、各水平セクションで、異なるクロマトグラフィー材料を導入することができ、よって、所謂ハイブリッドクロマトグラフィのための手段を提供することができる。
【００５９】
移動可能なフリットとの組み合わせで、本願記載のサポートは、クロマトグラフィーカラムの中のクロマトグラフィー材料の水平方向の支持だけでなく、垂直方向の支持も提供する。よって、本願記載の１つの実施態様は、クロマトグラフィーカラム内部のクロマトグラフィー材料の垂直及び水平方向の支持を提供する本願記載のクロマトグラフィーカラムサポートの使用である。従って、本願記載のサポートは、現状使用しているクロマトグラフィーカラムをより柔軟に使用する手段を提供し、同時に、新しいサポートを追加するだけなので、この柔軟性に関するコストを抑制する。
【００６０】
図１の上部において、平面（全領域）の形状の４つの脚を有するサポートの１つの実施形態が示されている。本実施形態では、脚とコネクタが１つのユニットとして組み合わされ、サポートは、更なるコネクタを含まない。脚の上端が、コネクタに対応する。脚の面は、互いに及び脚の上端（例えば、コネクタ）により規定された平面に対して９０度の角度をなす。サポート及び脚の外部領域の直径（例えば、カラムの方向であり、上端／コネクタにより規定される平面に垂直な端部である脚の外側端部）は、任意のカラム直径に適用できるので、摩擦無く、カラムの内面を損傷することなく、サポートを任意のカラムに取り付け、取り外すことができる。本願記載のサポートの高さは可変であり、特定の適用に合わせられる。サポートの底領域は、サポートが設置されるベースに適合できる。ほとんどの場合、ベースはフリットである。ベースはサポートを支持し、カラム壁を含むことなくサポートの重量を支える。クロマトグラフィーカラムサポートの上部領域は、ベースとして、移動可能なカラムフリット（移動可能なクロマトグラフィーカラムセパレータ）に適合するか、またはカラムの上部アダプタが設置されるかというようにして形成される。従って、完全な充填が本願記載のサポートによって安定化される。よって、本願記載の１つの態様は、クロマトグラフィーカラムの充填物を安定化させる、本願記載のサポートの使用である。もし、移動可能なカラムセパレータを用いる場合には、代替的に、最大で、最大カラム長さに達するまで、形状の異なるその他のサポートをセパレータ上に設置することができる。しかし、クロマトグラフィーカラム充填物の一部に、本願記載のサポートを備えることもできる。
【００６１】
図１の下側において、本願記載のサポートの１つの実施形態を示す。このサポートは、各々が対称に分割された平面の形状の６つの脚を含む。本実施形態において、６つの脚の各々の上端には、それにより脚が１つのユニットを形成する６つのコネクタを表わす。脚は、サポートの対称軸の周りに円弧上に互いに接合されている。予想されるカラムの内部の圧力及び要求される機能によって、脚の数が定まる。これらは、用いられるクロマトグラフィー媒体やプロセス条件による。
【００６２】
図２の上側において、本願記載のサポートの１つの実施形態を示す。本実施形態では、脚は平面形状で、各々の脚の上端により表されるコネクタにより、１つのユニットを形成する。本実施形態の特徴部分は、サポートの脚の平面の長穴状の開口である。この形状は、クロマトグラフィー材料のための改良されたサポートを提供し、特に柔らかいジェルに適している。よって、本願記載の１つの態様は、本実施形態のクロマトグラフィーカラムサポートを、柔らかいクラマトグラフィージェルの安定化のために用いることである。この理論にとらわれる必要はないが、クロマトグラフィー材料は、狭い空間内で、クロマトグラフィー材料は、より多くの支持／接触領域を見出すことができる。荷重や圧力がサポートによって吸収され、減少した形で、コラム充填物の下側の層へ伝えられる。よって、本願記載の１つの態様は、本願記載のクロマトグラフィーカラムサポートを、クロマトグラフィーカラム充填物の内部の圧力を吸収するために用いることである。本実施形態の更なる特徴部分は、交差ネットワークを得ることである。つまり、サポートの脚により形成された個々のセクションの間の横方向の流れが可能になる。よって、本願記載のサポートの１つの実施形態では、サポートの脚及びサポートの対称軸により規定された個々のセクションの間の横方向の流れを可能である。これにより、改善された質量の移動及び改善されたコラムの性能を提供できる。コラムライフの間におけるパケットの均質性も、不変に維持できる。出現する張力は、コラムベッド内でより良好に拡散し、部分的に干渉するだけである。
【００６３】
図２の中央において、本願記載のサポートの１つの特定の実施形態を示す。本実施形態では、脚は、穴の開いた板形状である。本実施形態でも、コネクタの各々が、個々の脚と１つのユニットを形成している。本実施形態では、脚の幾つかが、サポートの対称軸で互いに接続されている。本実施形態では、サポートは、対称軸やその周りで互いに接続することのない更なる脚を含む。このサポートは、サポートの脚の平面の内側の穴が、交差ネットワークを提供する事実の点で特徴がある。本実施形態では、脚が穴の開いた板からなる。本実施形態では、サポートは、更に、サポートの対称軸に対して異なる半径を有する、少なくとも２つの、特に３つの環状脚（及び円弧状コネクタ）を含む。よって、１つの実施形態では、最初の番号の脚（コネクタ）は、サポートの対称軸で互いに接続され、全ての脚（コネクタ）は、サポートの環状脚(円弧状コネクタ)により互いに接続される。１つの実施形態では、サポートは３つの環状脚(円弧状コネクタ)を含み、それにより、最初の環状脚（円弧状コネクタ）は、サポートの対称軸に対して、サポートの全直径の１／６の半径を有し、２番目の環状脚（円弧状コネクタ）は、サポートの全直径の１／３の半径を有し、３番目の環状脚（円弧状コネクタ）は、サポートの全直径の１／２の半径を有する。全ての脚は、更なる円弧上コネクタで互いに接続される。本実施形態の空き領域および壁空間の関係は、上記で述べた実施形態と異なる。この場合、より多くのセクションがここに充填するための結果となり、これはより大きな直径にとって有利である。よって、本願記載の１つの態様は、大きな直径のクロマトグラフィーカラムのカラム充填を安定化させるため、脚として、円環脚及び穴の開いた板を含むコネクタを用いることである。“大きな直径のクロマトグラフィーカラム”とは、１５ｃｍ以上の内径を有するクロマトグラフィーカラムであることを意味する。
【００６４】
図２の下側において、本願記載のサポートの１つの例示的な実施形態を示す。ここでサポートは、クロマトグラフィーカラムの内側に示される。カラムは、本願記載のサポートと、その上に設置される移動可能なクロマトグラフィーカラムフリットとを含む。これらのエレメントは柔軟性があり、カラム壁に、他のカラム部材に、または互いに、恒久的に接続されるものではない。本実施形態では、サポートは、ロッドの形状の３つの脚と、サポートの対称軸で互いに接続される３つのコネクタとを含む。
【００６５】
図３では、本願記載の幾つかの異なるサポートを備えた例示的なクロマトグラフィーカラムが示される。カラムは、更に、多くの移動可能なクロマトグラフィーカラムセパレータを含む。カラム壁は、移動する間にクロマトグラフィーカラムに沿って滑る移動可能なサポート及びカラムセパレータのためのガイドを提供するだけである。カラム壁は、修正する必要が無い。どのエレメントも、恒久的に、カラム壁に接続または固定されるものではない。このようなカラムは、サポート及びセパレータの対から形成される個々の水平セクションにおいて、異なるクロマトグラフィー材料を充填することもできる。よって、本願記載の１つの態様は、クロマトグラフィーカラムにおける水平セクションを規定する、本願記載のサポート及び移動可能なフリットの使用である。使用した全てのエレメントの部材は、毎回、非常に簡単に変更することができる。カラムからの充填物の除去は、従来の方法で実行できる。使用したサポート及び移動可能なクロマトグラフィーカラムセパレータを、カラム充填物とともに、カラムから外すだけでよい。全ての使用した機器部品は、個々に独立して、洗浄し、一部を交換することができる。
【００６６】
図４には、DEAE-Sepharoseクロマトグラフィー材料を含むクロマトグラフィーカラムの圧力フローダイアグラムを示す。左の曲線は、従来の方法で詰められたカラム中のDEAE-Sepharoseクロマトグラフィー材料の典型的な挙動を示す。右側の曲線は、本願記載の２つのサポート及び２つのクロマトグラフィーカラムセパレータを備えたカラムの挙動を示す。従来の方法で詰められたカラムの最大流量は、本願記載のサポートを含むカラムで達成した最大流量の半分より小さいことがわかる（５５ｌ／ｈに対して２４ｌ／ｈ）。典型的なプロセスフローを表わす２２ｌ／ｈの流れ領域で、３倍の減圧（１．５バールから０．５バール）が行われたことがわかる。本願記載のサポートを有さないカラムの詳細は、DEAE-Sepharoseの４ｌのスラリーを用いて、ベッド高さが２４ｃｍであり、使用溶離剤が０．０００５モルのＫＣＩ溶液（導電率５ｍＳ）である。本願記載のサポートを含むカラムの詳細は、使用したサポートの高さが８ｃｍで、使用しセパレータの強度が５ｍｍで、３つの区画に分配されたDEAE -Sepharoseの４ｌのスラリーを用いて、ベッド高さが２４ｃｍで、使用溶離剤が０．０００５モルのＫＣＩ溶液（導電率５ｍＳ）である。
【００６７】
図５には、HA-Ultrogelクロマトグラフィー材料を含むクロマトグラフィーカラムの圧力フローダイアグラムを示す。左の曲線は、従来の方法で詰められたカラム中のHA-Ultrogelクロマトグラフィー材料の典型的な挙動を示す。右側の曲線は、本願記載の２つのサポート及び２つの移動可能なクロマトグラフィーカラムセパレータを含むカラムの挙動を示す。従来の方法で詰められたカラムの最大流量は、本願記載のサポートを含むカラムで達成した最大流量より小さいことがわかる（１５ｌ／ｈに対して８ｌ／ｈ）。本願記載のサポートを有さないカラムの詳細は、DE HA-Ultrogelの４ｌのスラリーを用いて、ベッド高さが２４ｃｍであり、使用溶離剤が０．０００５モルのＫＣＩ溶液（導電率５ｍＳ）である。本願記載のサポートを含むカラムの詳細は、使用したサポートの高さが８ｃｍで、使用しセパレータの強度が５ｍｍで、３つの区画に分配されたHA-Ultrogelの４ｌのスラリーを用いて、ベッド高さが２４ｃｍで、使用溶離剤が０．０００５モルのＫＣＩ溶液（導電率５ｍＳ）である。
【００６８】
従って、本願記載のその他の態様は、
クロマトグラフィーカラムと、
少なくとも１つの移動可能なクロマトグラフィーカラムセパレータと、
少なくとも１つの本願記載のサポートと、
を含む。
【００６９】
１つの実施形態では、装置は、２つのクロマトグラフィーカラムセパレータと、２つの本願記載のサポートとを含む。その他の実施形態では、装置は、３つのクロマトグラフィーカラムセパレータと、３つの本願記載のサポートとを含む。その他の実施形態では、セパレータ及びサポートは、ともに、クロマトグラフィーカラムの内径より小さな外径を有する。その他の実施形態では、サポート及びセパレータの直径は、クロマトグラフィーカラムの内径の９０〜９９％である。本願記載で上述のサポートの全ての実施形態は、本願記載の装置に含まれるサポートの実施形態でもある。本願記載の装置に含まれるセパレータの特定の実施形態は、下記に述べられる。
【００７０】
１つのクロマトグラフィーカラムセパレータの存在により、クロマトグラフィーカラムが、上側クロマトグラフィーカラムと下側クロマトグラフィーカラムとに分割される。セパレータは、クロマトグラフィーカラム内で様々な位置が取れる。このような“移動可能性”は、ガイドリングで提供される。よって、セパレータはカラム内を垂直にスライドでき、セパレータは、クロマトグラフィー材料の中に埋め込まれる。
【００７１】
ガイドリング及びその中に置かれたフリントからなるクロマトグラフィーカラムセパレータは、クロマトグラフィ分離プロセスに干渉することはない。セパレータは、例えば、最大稼働圧力に達したとき、全てのクロマトグラフィーカラム充填物を取り替えることなく、クロマトグラフィー材料の一部分のみを交換することを許容できる。つまり、クロマトグラフィーカラムセパレータは、下側クロマトグラフィーカラム室内のクロマトグラフィー材料に干渉することなく、上側クロマトグラフィーカラム室内のクロマトグラフィー材料を交換できる。セパレータは、一方で、特定の部分のクロマトグラフィーカラムの全クロマトグラフィー材料を分割することができ、他方で、充填された下側クロマトグラフィーカラム室内のクロマトグラフィー材料が、上側クロマトグラフィーカラム室内のクロマトグラフィー材料の除去により乱されることを防ぐので、クロマトグラフィー材料の部分的な除去が可能である。従って、最大圧力変化に曝されておらず、よって損傷を受けていないクロマトグラフィー材料の少なくとも一部分を、分離効率に悪影響を及ぼすことなく、更に使用することができる。クロマトグラフィー材料の一部分を保持することにより、優れたコスト削減を実現できる。
【００７２】
クロマトグラフィーカラムセパレータは、任意の不活性材料からなる（作られる）フリットが取り付けられたガイドリングを含む。“不活性材料”は、クロマトグラフィ分離プロセスに干渉しない材料であり、例えば、本願記載の１以上のクロマトグラフィーカラムセパレータを含むクロマトグラフィーカラムが、他の同一の条件におけるクロマトグラフィーカラムセパレータを含まないクロマトグラフィーカラムと共に得られたクロマトグラムと同一であることである。このような不活性材料は、例えば、金属、特にステンレス鋼、シリコーン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリテトラフルオロエチレン、焼結金属またはそれらの組合せであり、特に、ポリテトラフルオロエチレンがコーティングされたステンレス鋼である。
【００７３】
図６には、クロマトグラフィーカラムセパレータを例示的に示す。図６ａ）では、フリット（１）及びフリット（２）を含むシングルフリットのセパレータが描かれている。図６ｂ）では、上側フリット（３）、下側フリット（４）及びフィッティング（２）を備えるセパレータが示される。図６ｃ）では、２つの軸対称断面領域５）及び６）を含むセパレータのガイドリングの垂直断面が示され、各々の軸対称断面領域は、ａ）ガイドリングの外側から内側へ傾斜した傾斜構造、及びｂ）フリットを取り付けるため、ガイドリングの内側へ向けた開口を有する切り欠き（８）を有する。
【００７４】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムセパレータは、ガイドリング、及びガイドリングの中に載置されたフリットを備える。
【００７５】
ガイドリングの１つの実施形態では、円環形状であり、液状のクロマトグラフィーカラム内で用いる。その他の実施形態では、ガイドリングは、２つの軸対称断面領域５）及び６）を含む垂直断面を有し、各々の軸対称断面領域が、
ａ）ガイドリングの外側から内側へ傾斜した傾斜構造、及び
ｂ）フリットを取り付けるため、ガイドリングの内側へ向けた開口を有する切り欠き（８）
を有する。
【００７６】
１つの実施形態では、切り欠きは矩形切り欠きである。更なる実施形態では、各々の断面領域が三角の形状を有し、最長の辺（７）は、切り欠き（８）の直径の少なくとも１．５倍の長さを有する。更なる実施形態では、リングが、ゴム、プラスチック、シリコーン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリエチレンまたはポリプロピレンからなる（作られる）。
【００７７】
１つの実施形態では、フリットは、
ａ）シングルフィット、または
ｂ）上側フィット及び下側フィットを備えた２フィット
である。
【００７８】
その他の実施形態では、ａ）フリットが１〜２０μｍの孔径を有する、またはｂ）各々のフリットが、個々に１〜２０μｍの孔径を有し、これにより、上側のフリットの孔径が、下側のフリットの孔径より小さくなっている。その他の実施形態では、フリットは、金属、シリコーン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリテトラフルオロエチレン、焼結金属またはそれらの組合せからなる（作られる）。更なる実施形態では、セパレータは、全てがセパレータの片側に取り付けられた距離ホルダを含む。
【００７９】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムセパレータは、
ａ）セパレータが、クロマトグラフィーカラムセクションを上側クロマトグラフィーカラム室及び下側クロマトグラフィーカラム室に分割し、
ｂ）セパレータが、クロマトグラフィーカラムの内壁に沿ってスライドすることにより、クロマトグラフィーカラム内で様々な位置を取れる。
【００８０】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムセパレータは、１つのフリットを含み、その他の実施形態では、セパレータは、上側フリット及び下側フリットを含む。更なる実施形態では、クロマトグラフィーカラムセパレータ、上側フィットまたは下側フィットは、１〜２０μｍの孔径を有し、これにより、上側のフリットの孔径が、下側のフリットの孔径より小さくなっている。その他の実施形態では、フリットは、金属、シリコーン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリテトラフルオロエチレン、焼結金属またはそれらの組合せからなる（作られる）。
【００８１】
フィティングまたはガイドリングは、フリットを受け入れられる矩形の切り欠きを有する限り、任意の形状を有することができる断面形状を備えた円環形状を有する。例えば、１つの実施形態では、フィティングの断面形状が、最大内角の三角形のコーナーにおいて、フリットを受け入れることができる矩形の切り欠きを有する三角形状を有する。更なる実施形態では、フィッティングまたはガイドリングは、三角形状の断面形状を有するか、または三角形状の断面領域を提供し、矩形三角のその他の実施形態では、フリットは、９０度の内角の三角形のコーナーに取り付けられる。その他の実施形態では、ガイドリングの断面領域が、平行な辺の短い辺でフリットを受け入れる矩形の切り欠きを備えた傾斜した形状を有する。１つの実施形態では、フィッティングが矩形の形状を有し、その他の実施形態では、９０度。９０度、８０度及び１００度の内角を備えた四角形である。１つの実施形態では、三角形の上側の辺または底部の辺で、内角が８０度及び１００度である。１つの実施形態では、ガイドリングの最も長い辺が、セパレータの外側端部であり、セパレータがクロマトグラフィーカラムに取り付けられたとき、クロマトグラフィーカラム壁に接触する。その他の実施形態では、最も長い辺が垂直方向を向く。更なる実施形態では、フィッティングまたはガイドリングの断面領域は、短い辺の１つにフリントを受け入れ、または正方形の場合には辺の１つにフリントを受け入れる切り欠きを備えた、内角９０度の矩形形状を有する。切り欠きの辺は、セパレータまたは同様にクロマトグラフィーカラムの中心に向けたフィッティングの辺であり、言い換えれば、切り欠きは、移動相における流れ方向に平行であり、フリットの外径より小さな径を有するフィッティングまたはガイドリングの辺にある。ガイドリングは、液体相で、クロマトグラフィー材料粒子がフィリットのそばのセパレータを通過することを防ぐ場合を除き、外部圧力をかけてクロマトグラフィー材料を圧縮及び膨張させる間において、クロマトグラフィーカラム中で、傾き、及びそれに伴うセパレータ全体のストールを防ぐ機能を有する。セパレータは、クロマトグラフィーカラムに詰められたクロマトグラフィー材料の内部に位置する。セパレータは、クロマトグラフィーカラムの内壁をスライドできるので、自由に動くことができ、確実にカラムの中に位置することができる。このことは、クロマトグラフィーカラムの充填時や、セパレータをクロマトグラフィーカラムから取り除くときに役立つ。１つの実施形態では、ガイドリングの垂直断面領域が、ガイドリングが傾斜した構造を有する三角形または台形の形状を有し、ガイドリングの外側から内側に傾斜し、つまり、ガイドリングは、それぞれ、外側端部の方が、内側端部または切り欠き部よりも高くなっている。１つの実施形態では、ガイドリングの外側端部で、切り欠きの高さの少なくとも１．５倍の高さを有する。その他の実施形態では、ガイドリングの外側端部は、切り欠きの高さよりも、少なくとも１．５倍、２倍、３倍、または３倍より大きな高さを有する。
【００８２】
もし、セパレータが上側フリット及び下側フリットを含む場合、１つの実施形態では、フィッティングまたはガイドリングが、シングルフィッティングまたはリングであり、その他の実施形態では、フィッティングまたはガイドリングが、上側フィッティングまたはリング、及び下側フィッティングまたはリングからなる。後者の場合、２つのフィッティングまたはリングは、１つの実施形態において、上側フィッティングまたはリングの下側、及び下側フィッティングまたはリングの上側を含み、これにより、接触側が平坦になり、例えば、切り欠きや溝を有さない。また、上側フリットの下側、及び下側フリットの線に沿う場合には、例えば、上側フィッティングの下側及び上側フィッティングの下側がオフセットのない単一表面を形成し、同様に、下側フィッティングの上側及び下側フィッティングの上側がオフセットのない単一表面を形成し、これにより、両平面が平行になる。
【００８３】
一般的に、フィッティング、ガイドリング、上側フィッティングまたは下側フィッティングの最小内径は、フリットの外形よりも小さく、例えば、フィッティングやガイドリングは、クロマトグラフィーカラムの中心に向けて、フリットの外側周囲部を越えて延びている。
【００８４】
サポート及び／または埋め込まれたクロマトグラフィーカラムセパレータを伴って、クロマトグラフィーカラムにクロマトグラフィー材料を充填することにより、２つの充填相に分割することができる。一般的な手順で、クロマトグラフィー材料の最初の部分をカラムの中に充填することにより、充填を開始することができる。その後、サポート及びクロマトグラフィーカラムセパレータが、クロマトグラフィー材料の最初の部分の中またはその上に位置付けることができる。最後に、一般的な手順で、クロマトグラフィー材料の２番目の部分を、カラムの中であって、セパレータの上に充填することができる。
この充填方法は、底部から上部への充填である。一方、サポート及びセパレータを含まないカラムが、それらの間でより高い充填圧力を要しながら、上部から充填される。よって、本願記載のクロマトグラフィーカラムサポートは、もし、１つのサポート及び１つのセパレータを用いる場合には、２つの一連のステップにより、もし、２以上のサポート及びセパレータを用いる場合には、３つ以上の一連のステップにより、クロマトグラフィーカラムに充填する方法を提供する。サポート及びセパレータを用いて、カラムは、上側室及び下側室（１つのサポート及び１つのセパレータ）、または下側室、中央室、上側室（２つのサポート及び２つのセパレータ）に分割でき、各々の室は、減じられたクラマトグラフィ材料ベッド高さを有するクロマトグラフィーカラムと同等である。クロマトグラフィーカラムをより小さな室に分割することにより、（１つの室の中のクロマトグラフィー材料の）体積と（室の）面積との比を変更でき、例えば、低めたりできて、クロマトグラフィー材料の充填の安定性を増大できる。
【００８５】
以下の実施例及び数値は、本発明、及び付加されたクレームに示された真の請求範囲を理解するために提供される。本発明の精神から外れることなく、示された手順において、変更をすることができると理解される。
【００８６】
本願記載の態様及び実施形態
本願記載の１つの態様は、
−  少なくとも１つの対称な面と、
−  １つの対称軸と、
−  少なくとも３つの脚と、
−  少なくとも３つの真っ直ぐなコネクタと、
を含み、
コネクタが、サポートの対称軸に対して垂直な平面を規定し、
コネクタが、対称軸でまたはその周りで互いに接続され、
各々の脚がコネクタに接続され、
各々の脚が、コネクタにより規定された平面に対して垂直であり、
全ての脚が、コネクタにより規定された平面の同じ側にある、クロマトグラフィーカラムサポートである。
【００８７】
本願記載の１つの態様は、
−  １つの対称軸と、
−  少なくとも１つの対象軸に対して垂直な対称な面と、
−  少なくとも３つの対象軸に対して垂直な脚と、
−  少なくとも３つの真っ直ぐなコネクタと、
を含み、
コネクタが、サポートの対称軸に対して垂直な平面を規定し、
コネクタが、対称軸またはその周りで互いに接続され、
各々の脚がコネクタに接続され、
各々の脚が、コネクタにより規定された平面に対して垂直であり、
全ての脚が、コネクタにより規定された平面の同じ側にあり、
コネクタで規定された面が固くない、
クロマトグラフィーカラムサポートである。
【００８８】
１つの実施形態では、コネクタが板状である。
【００８９】
１つ実施形態では、脚が板状で、コネクタが各々の板の上側端部である。
【００９０】
１つの実施形態では、すくなくとも１つのコネクタ及び脚の１つが１つのユニットを形成し、脚が板状で、コネクタが板の上側端部である。
【００９１】
１つ実施形態では、各々のコネクタが個別の脚と共に１つのユニットを形成する。
【００９２】
１つ実施形態では、各々のコネクタが、脚を備えた１つのユニットを形成する。本実施形態では、各々の脚が、コネクタを備えた１つのユニットを形成し、よって、クロマトグラフィーカラムサポートは、対象軸またはその周りで互いに接続されたユニットを含む。
【００９３】
１つの実施形態では、幾つかの脚が対称軸またはその周りで互いに接続されている。
【００９４】
１つの実施形態では、板が穴の開いた板状である。
【００９５】
１つの実施形態では、サポートが、対称軸またはその周りで互いに接続されていない更なる脚を含む。
【００９６】
１つの実施形態では、サポートが、対称軸に対して互いに異なる半径を有する１以上の脚を含む。
【００９７】
１つの実施形態では、サポートの脚で規定されたセクション及び対称軸の間の横方向の流れが可能である。
【００９８】
１つの実施形態では、サポートが３つの脚と１つのコネクタとを含み、コネクタがＹ型形状であり、脚はロッドの形状である。
【００９９】
１つの実施形態では、サポートが、ロッドの形状の３つの脚とＹ型形状のコネクタとからなる。
【０１００】
１つの実施形態では、サポートが、ロッドの形状の４つの脚とＸ型形状のコネクタとからなる。
【０１０１】
１つの実施形態では、サポートが、対称軸またはその周りで互いに接続された板状の４つの脚からなる。
【０１０２】
１つの実施形態では、サポートが、ロッドの形状の６つの脚とＸ型形状のコネクタとからなる。
【０１０３】
１つの実施形態では、サポートが、対称軸またはその周りで互いに接続された板状の６つの脚からなる。
【０１０４】
１つの実施形態では、  サポートが、
ｉ）対称軸でまたはその周りで互いに接続された板形状の４つの第1の脚、
ｉｉ）対称軸で互いに接続されず、４つの第1の脚にも接続されない4つの第２の脚、及び
ｉｉｉ）４つの第１の脚及び第２の脚の各々に接続されるが互いに接続されず、対称軸に対して互いに異なる半径を有する３つの円環状脚
からなる。
【０１０５】
１つの実施形態では、板が穴の開いた板状である。
【０１０６】
１つの実施形態では、サポートが、少なくとも４つの脚と最大で１６の脚とを含み、４つのコネクタを含む。
【０１０７】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムサポートが、コネクタより多い脚を含む。
【０１０８】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムサポートが、
−  各々がコネクタを備えたユニットを形成する少なくとも３つの脚と、
−  コネクタを備えたユニットを形成しない少なくとも３つの脚と、
−  対称軸の周りの円環状脚である少なくと１つの脚と、
を含む。
【０１０９】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムサポートが、１つの部材である。
【０１１０】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムサポートが、複数の部材を含む。
【０１１１】
１つの実施形態では、コネクタが８．０ｍｍ未満の幅を有する。
【０１１２】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムサポートが、１２．５ｃｍ未満の直径を有する。
【０１１３】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムサポートが、クロマトグラフィー的な挿入材料からなる（作られる）。
【０１１４】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムサポートが、ステンレス鋼、シリコーン、ポリテトラフルオロエチレンまたはガラスからなる（作られる）。
【０１１５】
１つの実施形態では、装置が
−  クロマトグラフィーカラムと
−  少なくとも１つの移動可能なフリットと、
−  少なくとも１つの本願記載のサポートと、
を含み、
移動可能なフリット及びクロマトグラフィーカラムサポートがクロマトグラフィーカラムの内側に位置し、
クロマトグラフィーカラムが、側面から見て垂直方向に置かれたとき、移動可能なフリットがクロマトグラフィーカラムサポートの上側にある。
【０１１６】
１つの実施形態では、クロマトグラフィーカラムサポートがクロマトグラフィーカラムの中を自由に移動できる。
【０１１７】
１つの実施形態では、本願記載の装置内のクロマトグラフィーカラムサポートが、クロマトグラフィーカラム内にあるが、クロマトグラフィーカラムの内壁に固定されていない。
【０１１８】
本願記載の１つの態様では、クロマトグラフィーカラム充填物の充填物の中からの安定化のために、クロマトグラフィーカラムサポートを用いることである。
【０１１９】
本願記載の１つの態様では、クロマトグラフィーカラム充填物の充填物の中から支持するために、クロマトグラフィーカラムサポートを用いることである。
【０１２０】
本願記載の１つの態様では、クロマトグラフィーカラム内のクロマトグラフィーカラム充填物に内部構造物を提供するために、クロマトグラフィーカラムサポートを用いることである。
【０１２１】
本願記載の１つの態様では、クロマトグラフィーカラム内のクロマトグラフィーカラム充填物に、垂直及び水平方向の支持を提供するために、クロマトグラフィーカラムサポートを用いることである。
【０１２２】
本願記載の１つの態様では、クロマトグラフィーカラムのを安定化するために、本願記載のサポートを用いることである。
【０１２３】
本願記載の１つの態様では、柔らかいクロマトグラフィージェルを安定化するために、脚及びコネクタの組み合わせとしての穴の開いた板、または長穴状の開口を含む脚としての板を含むクロマトグラフィーカラムサポートを用いることである。
【０１２４】
本願記載の１つの態様は、クロマトグラフィーカラム充填物の中の圧力を吸収するために、クロマトグラフィーカラムサポートを用いることである。
【０１２５】
本願記載の１つの態様は、大きな直径のカラム充填物を安定化するため、本願記載のサポート及び脚としての穴の開いた板を用いることである。
【０１２６】
本願記載の１つの態様は、クロマトグラフィーカラム内の水平セクションを規定する本願記載のサポート及び移動可能なフリットを用いることである。
【０１２７】
［実施例］
（実施例１）
本願記載のサポートを含むクロマトグラフィーカラムの充填
本願記載の柔軟なベッドサポートエレメントを備えたカラムの充填工程の間に、クロマトグラフィー媒体を均一に挿入し分配することが大変重要である。均一な充填を達成するには、２つの可能性がある。最初の方法は、最初に、柔軟なベッドサポートエレメントをカラムに置き、その後、スラリーを挿入する。この場合、スラリーを均一にカラムに入れなければならない。その他の可能性は、最初にスラリーをカラムに入れ、カラム内でそれを均一化し、その後、ベッドサポートエレメントを直接カラム内のスラリーの中に導入する。処理をしている間に、均一なカラムベッドが、エレメントを形成し囲い込む。特定の処理時間経過後、中間カラムフリットがベッドサポートエレメントに置かれるか、またはカラムがアダプタでロックされる。もし、中間カラムフリットが用いられる場合、その他の柔軟なベッドサポートエレメントが上部に置かれ、次のカラムコンパートメントの充填が開始される。プロセスは、カラムの全高さまで充填されるまで繰り返される。
【０１２８】
（実施例２）
本願記載のサポートを含まない従来のクロマトグラフィーカラムを用いたクロマトグラフィー分離−クロマトグラフィー材料の使用におけるサイクル数及び圧力特性
ここでは、従来のように充填されたＨＰＬＣカラムのライフサイクルを示す。図７から明らかなように、充填直後の圧力は、約４０バールである。４０番目の再生サイクルの後では、約７０バールまで増加する。
【０１２９】
充填の詳細：
カラム直径：  ３０ｃｍ
カラムタイプ：  ベッドサポートエレメント及び中間カラムフィットを伴わない動的圧縮
ベッド高さ：  約４０ｃｍ
使用したクロマトグラフィー材料：  Ｖｙｄａｃ  Ｃ４
流量：  １６２  ｌ／ｈ
再生時の圧力値及びサイクル数を図７に示す。
【０１３０】
（実施例３）
本願記載のサポートを含む従来のクロマトグラフィーカラムを用いたクロマトグラフィー分離−クロマトグラフィー材料の使用におけるサイクル数及び圧力特性
ここでは、本願記載のサポート及び中間カラムフリットを備えたＨＰＬＣカラムを示す。実施例２のカラムと比較して、充填後、より低い初期圧力が得られることがわかる。全てにおいて、使用サイクルの全体において、より安定した圧力の経過が得られる。カラムを再充填する必要なく、最大９８サイクル回数を達成することもできる。本願記載のサポートを備えない中間カラムフリットは、大変低い値で圧縮可能なＨＰＬＣ媒体において、ベッドサポート機能を満たす。
【０１３１】
充填の詳細：
カラム直径：  １５ｃｍ
カラムタイプ：  中間カラムフィットを伴う動的圧縮
ベッド高さ：  約４０ｃｍ
使用したクロマトグラフィー材料：  Ｖｙｄａｃ  Ｃ４
流量：  ３５ｌ／ｈ
再生時の圧力値及びサイクル数を図８に示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図６ａ）】
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【図６ｂ）】
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【図６ｃ）】
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【図４】
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【図５】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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