(57)【要約】  本開示は、治療有効量の、少なくとも１つのスクレロスチンアンタゴニスト、例えば抗体１、２、３、４または５などの抗スクレロスチン抗体用いるスクレロスチン発現がん、例えば扁平上皮がん（ＳＣＣ）、例えば上部気道消化管、食道または肺のＳＣＣを治療するための方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
扁平上皮がん（ＳＣＣ）を有する患者に治療有効量のスクレロスチンアンタゴニストを投与するステップを含む扁平上皮がんを治療する方法。
【請求項２】
必要とする患者において扁平上皮がん（ＳＣＣ）を治療するのに使用するためのスクレロスチンのアンタゴニスト。
【請求項３】
必要とする患者において扁平上皮がん（ＳＣＣ）を治療するための薬物の製造のためのスクレロスチンのアンタゴニストの使用。
【請求項４】
ａ．ＳＣＣを有する患者から生物学的検査試料を得るステップ、および
ｂ．前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がスクレロスチンアンタゴニストでの前記ＳＣＣの治療に応答する可能性の増大を示すステップ
を含む、スクレロスチンアンタゴニストでの治療にＳＣＣを有する患者が応答する可能性を予測する方法。
【請求項５】
ＳＣＣを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がスクレロスチンアンタゴニストでの前記ＳＣＣの治療に応答する可能性の増大を示すステップを含む、スクレロスチンアンタゴニストでの治療にＳＣＣを有する患者が応答する可能性を予測する方法。
【請求項６】
ａ．患者から生物学的検査試料を得るステップ、および
ｂ．前記患者由来の前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者が前記ＳＣＣを発症する可能性の増大を示すステップ
を含む、患者がＳＣＣを発症する可能性を予測する方法。
【請求項７】
患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者が前記ＳＣＣを発症する可能性の増大を示すステップを含む、患者がＳＣＣを発症する可能性を予測する方法。
【請求項８】
ａ．患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップ、および
ｂ．前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量より多い場合に、前記患者にスクレロスチンアンタゴニストを選択的に投与するステップ
を含む、患者におけるＳＣＣを治療する方法。
【請求項９】
投与のステップより前に前記患者由来の生物学的対照試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップをさらに含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ａ．生物学的検査試料をＳＣＣを有する患者から得る、
ｂ．前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイする、および
ｃ．前記患者由来の前記生物学的検査試料が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較してより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、前記患者に治療有効量の前記スクレロスチンアンタゴニストを選択的に投与する
ことを特徴とする、ＳＣＣを治療するのに使用するためのスクレロスチンアンタゴニスト。
【請求項１１】
ａ．ＳＣＣを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイする、および
ｂ．前記患者由来の前記生物学的検査試料が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較してより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、治療有効量の前記スクレロスチンアンタゴニストを前記ＳＣＣ患者に選択的に投与する
ことを特徴とする、ＳＣＣを治療するのに使用するためのスクレロスチンアンタゴニスト。
【請求項１２】
スクレロスチン発現の量が、スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも１つのプローブの使用によって決定される、請求項４から１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記少なくとも１つのプローブが、スクレロスチン核酸またはスクレロスチンポリペプチドを検出する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記少なくとも１つのプローブが抗スクレロスチン抗体である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記生物学的対照試料をＳＣＣを発症していないことが判っている対照患者から得る、請求項４から１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記生物学的対照試料が、ＳＣＣを有していない前記患者の組織由来である、請求項４から１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
前記生物学的対照試料を、前記患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部から得る、請求項４から１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記生物学的対照試料を、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔から得る、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記生物学的対照試料を、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連（oral commissure）、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝（oral sulcus）、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭（nasopharnyx）、中咽頭（orpharynx）または副鼻腔から得る、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記生物学的検査試料を、患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部から得る、請求項４から１９のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記生物学的検査試料を、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔から得る、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記生物学的検査試料を、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔から得る、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ａ．治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト、
ｂ．任意選択で、前記スクレロスチンアンタゴニストをＳＣＣを有する患者に投与するための手段、
ｃ．任意選択で、白金、タキサン、ＥＧＦＲ−ｉ、セツキシマブ、５−ＦＵ、アントラサイクリンおよびビンフルニンからなる群から選択される少なくとも１つの追加的薬剤、ならびに
ｄ．前記患者に前記スクレロスチンアンタゴニストを投与するための説明書
を含む、ＳＣＣを有する患者を治療するのに使用するためのキット。
【請求項２４】
ａ．治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト、
ｂ．ＳＣＣを有する患者由来の生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量を検出できる少なくとも１つのプローブ、
ｃ．任意選択で、前記患者に前記スクレロスチンアンタゴニストを投与するための手段、および
ｄ．対照検査試料におけるスクレロスチン発現の量と比較して前記患者由来の前記生物学的検査試料がより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、前記患者に前記スクレロスチンアンタゴニストを選択的に投与するための説明書
を含む、ＳＣＣを有する患者を治療するのに使用するためのキット。
【請求項２５】
ａ．スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも１つのプローブ、および
ｂ．ＳＣＣを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするためにプローブを用いるステップのための説明書であって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記スクレロスチンアンタゴニストでの前記ＳＣＣの治療に前記患者が応答する可能性の増大を示す説明書、
を含む、ＳＣＣを有する患者がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答する可能性を予測するのに使用するためのキット。
【請求項２６】
前記少なくとも１つのプローブが、スクレロスチン核酸またはスクレロスチンポリペプチドを検出する、請求項２３から２５のいずれかに記載のキット。
【請求項２７】
前記少なくとも１つのプローブが抗スクレロスチン抗体である、請求項２６に記載のキット。
【請求項２８】
前記ＳＣＣが、前記患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部において生じる、前記請求項のいずれかに記載の方法、使用またはキット。
【請求項２９】
前記ＳＣＣが、上部気道消化管、食道、尿路または肺において生じる、請求項２８に記載の方法、使用またはキット。
【請求項３０】
前記ＳＣＣが、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔において生じる、請求項２９に記載の方法、使用またはキット。
【請求項３１】
前記ＳＣＣが、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔において生じる、請求項３０に記載の方法、使用またはキット。
【請求項３２】
前記スクレロスチンアンタゴニストが、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片である、前記請求項のいずれかに記載の方法、使用またはキット。
【請求項３３】
前記抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片が、
ａ．表面プラズモン共鳴法もしくはバイオセンサー系によって１０ｎＭ未満として決定されるＫＤでヒトスクレロスチンに結合する、
ｂ．スクレロスチンの存在下でのＨＥＫ２９３細胞株における細胞に基づくＷｎｔシグナル伝達アッセイで１μＭ未満と測定されるＩＣ５０を有する、
ｃ．スクレロスチンの存在下でのＭＣ３Ｔ３細胞におけるＢＭＰ２誘導石灰化アッセイで１μＭ未満と測定されるＩＣ５０を有する、
ｄ．ＬＲＰ６／スクレロスチンＥＬＩＳＡで１μＭ未満と測定されるＩＣ５０を有する、および／または
ｅ．スクレロスチン存在下でのＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞株におけるＢＭＰ６  Ｓｍａｄ１リン酸化アッセイで１μＭ未満と測定されるＩＣ５０を有する、
請求項３２に記載の方法、使用またはキット。
【請求項３４】
前記抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片が、
ａ．配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
ｂ．配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
ｃ．配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または
ｄ．配列番号４に記載のアミノ酸配列の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片
からなる群から選択される、請求項３２または３３に記載の方法、使用またはキット。
【請求項３５】
配列番号４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲが、配列番号６、配列番号７および配列番号８に記載されている、請求項３４に記載の方法、使用またはキット。
【請求項３６】
配列番号５に記載のアミノ酸配列の前記３つのＣＤＲが、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１に記載されている、請求項３４または３５に記載の方法、使用またはキット。
【請求項３７】
前記抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片が、
ａ．配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
ｂ．配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
ｃ．配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または
ｄ．配列番号１４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲおよび配列番号１５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片
からなる群から選択される、請求項３２または３３に記載の方法、使用またはキット。
【請求項３８】
配列番号１４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲが、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８に記載されている、請求項３７に記載の方法、使用またはキット。
【請求項３９】
配列番号１５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲが、配列番号１９、配列番号２０および配列番号２１に記載されている、請求項３７または３８に記載の方法、使用またはキット。
【請求項４０】
前記抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片が、
ａ．配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
ｂ．配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
ｃ．配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または
ｄ．配列番号２４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲおよび配列番号２５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片
からなる群から選択される、請求項３２または３３に記載の方法、使用またはキット。
【請求項４１】
配列番号２４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲが、配列番号２６、配列番号２７および配列番号２８に記載されている、請求項４０に記載の方法、使用またはキット。
【請求項４２】
配列番号２５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲが、配列番号２９、配列番号３０および配列番号３１に記載されている、請求項４０または４１に記載の方法、使用またはキット。
【請求項４３】
前記抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片が、
ａ．配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
ｂ．配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
ｃ．配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または
ｄ．配列番号３４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲおよび配列番号３５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片
からなる群から選択される、請求項３２または３３に記載の方法、使用またはキット。
【請求項４４】
配列番号３４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲが、配列番号３６、配列番号３７および配列番号３８に記載されている、請求項４３に記載の方法、使用またはキット。
【請求項４５】
配列番号３５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲが、配列番号３９、配列番号４０および配列番号４１に記載されている、請求項４３または４４に記載の方法、使用またはキット。
【請求項４６】
前記抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片が、
ａ．配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
ｂ．配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
ｃ．配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または
ｄ．配列番号４４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲおよび配列番号４５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片
からなる群から選択される、請求項３２または３３に記載の方法、使用またはキット。
【請求項４７】
配列番号４４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲが、配列番号４６、配列番号４７および配列番号４８に記載されている、請求項４６に記載の方法、使用またはキット。
【請求項４８】
配列番号４５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲが、配列番号４９、配列番号５０および配列番号５１に記載されている、請求項４６または４７に記載の方法、使用またはキット。
【請求項４９】
前記抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片が、抗スクレロスチン抗体である、請求項３２から４７のいずれか一項に記載の方法、使用またはキット。
【請求項５０】
前記抗スクレロスチン抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である、請求項４９に記載の方法、使用またはキット。
【請求項５１】
前記抗スクレロスチン抗体が、モノクローナル抗スクレロスチン抗体またはヒト組換え抗スクレロスチン抗体である、請求項４９から５０のいずれか一項に記載の方法、使用またはキット。
【請求項５２】
前記抗スクレロスチン抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４アイソタイプである、請求項４９から５１のいずれか一項に記載の方法、使用またはキット。
【請求項５３】
前記抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片が、抗体の抗原結合断片である、請求項３２から４８のいずれか一項に記載の方法、使用またはキット。
【請求項５４】
前記抗原結合断片が、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、ＦｃまたはＦｄ断片を含む、請求項５３に記載の方法、使用またはキット。
【請求項５５】
前記スクレロスチンアンタゴニストが、白金、タキサン、ＥＧＦＲ−ｉ、セツキシマブ、５−ＦＵ、アントラサイクリンおよびビンフルニンからなる群から選択される少なくとも１つの追加的薬剤と共に投与される、前記請求項のいずれかに記載の方法、使用またはキット。
【請求項５６】
ａ．スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも１つのプローブ、および
ｂ．患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするためにプローブを用いることのための説明書であって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者が前記ＳＣＣを発症する可能性の増大を示す説明書、
を含む、患者がＳＣＣを発症する可能性を予測するのに使用するためのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、本明細書に参照によりその全体が組み込まれる２０１１年４月２９日出願の米国仮特許出願第６１／４８０６７９号の優先権を主張する。
【０００２】
本開示は、スクレロスチンの発現、分泌、シグナル伝達および／または機能を拮抗することによって、扁平上皮がん（ＳＣＣ）、例えば肺のＳＣＣを治療するための方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
肺がんは、肺がん患者の大部分の主な死因となる遠隔臓器への転移を伴って、世界中の女性および男性におけるがん死の主な原因である。InamuraおよびIshikawa(2010)Clin.Exp.Metastasis 27:389-97。肺がんは、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）型または非ＳＣＬＣ（ＮＳＣＬＣ）型のいずれかに分類される。ＮＳＣＬＣは、腺がん、扁平上皮がん（ＳＣＣ）および大細胞がん（ＬＣＣ）に細分される。ＳＣＣは、全肺がんの約３０％を占め、喫煙と最も強く関連する肺がんである。白金ベースのダブレット化学療法は、進行性ＮＳＣＬＣ患者を治療するための第一選択療法でありつづけている。G.Selvaggi(2009)Oncology 23:13。しかし、組織学とＮＳＣＬＣ治療結果との相互関係を検討したほとんどのデータは、近年承認された治療選択肢が腺がんと比較してＳＣＣを有する患者ではあまり良くないことを示している（例えばベバシズマブおよびペメトレキセドの表示は非扁平上皮細胞ＮＳＣＬＣを有する患者に限定されている）。Langer(2010)J.Clin.Oncology 28:5311-5320。扁平上皮形態のＮＳＣＬＣを治療するためにベバシズマブまたはソラフェニブを用いることに関連して安全性に関する顕著な危険性もある。Langerら(2010)上記。
【０００４】
ＳＣＣは、扁平上皮の悪性腫瘍であることから、肺以外の臓器および組織（すなわち扁平上皮を有する臓器）、例えば頭部もしくは頸部、肺、皮膚、口唇、口、食道、膀胱、前立腺、膣または子宮頸部に生じる。ＳＣＣは、皮膚がんの２番目に高頻度の種類であり、頭部または頸部のがんの９０％はＳＣＣ型のものである。ＳＣＣの種々の分類がある、例えばアデノイド扁平上皮がん（偽腺様扁平上皮がん）、明細胞扁平上皮がん（例えば皮膚の明細胞がん）、紡錘細胞扁平上皮がん、印環細胞扁平上皮がん、類基底扁平上皮がん（例えば胸腺、肛門、外陰部、膣、子宮頸部および気道消化管（例えば喉頭、咽頭、扁桃腺、舌、副鼻腔、結膜、鼻、耳、顎下領域、食道など）において生じる）、疣状がん、ケラトアカントーマ。ＳＣＣの種類（生じた臓器、侵襲性または非侵襲性など）に応じて治療は、外科的切除、化学外科、局所的薬物療法、放射線治療ならびに電気乾燥法および掻爬を含む。非肺ＳＣＣに対するこれらの治療法の病的状態および不快感は過酷である場合がある。
【０００５】
（他のＮＳＣＬＣと比較して）肺のＳＣＣを有する患者についてのあまり好ましくない治療および安全性の結果を考慮すると、肺のＳＣＣに対処するための新規化学療法剤に対する必要性がある。さらに、非肺ＳＣＣの（例えば皮膚、食道ならびに頭部および頸部がんの）罹患率および現在利用可能な療法による不快感により、非肺ＳＣＣを治療するために用いられうる新規治療剤を設計する必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
正常組織対腫瘍範囲におけるＳＯＳＴ  ｍＲＮＡ発現／遺伝子増幅を評価する生物情報学的分析が実施された。この分析は、ヒト患者試料だけでなくがん細胞株および腫瘍モデルにも及んだ。顕著な染色体増幅／欠落は観察されなかったが、扁平上皮亜型の腫瘍サブセット、特に肺、食道および上部気道消化管のがんにおいて著しい過発現が見出された。本発明者らの機能的研究は、３つのＳＣＣ細胞モデル（原発腫瘍モデル２つおよび細胞株１つ）において抗スクレロスチン抗体を検査することを含んでいた。これらの研究により、本発明者らは、スクレロスチンを高発現しているＳＣＣの原発腫瘍モデルに抗体１が静脈内に導入された場合に腫瘍増殖を６０％阻害したことを示す。
【０００７】
これらの発見は、スクレロスチンが肺の発達、維持または形態において認められた役割を有さない骨同化タンパク質であることを考慮すると驚くべきことである。スクレロスチンは、ＢＭＰ（骨形態タンパク質）に結合し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＢＭＰアンタゴニストとして作用する分泌タンパク質として最初は同定された（Winklerら(2003)EMBO J.22(23):6267-76）。ＳＯＳＴ遺伝子によってコードされるスクレロスチンが、ＬＲＰ５／ＬＲＰ６への結合によって直接的にまたは別の機構を介して間接的にのいずれかで古典的Ｗｎｔシグナル伝達の負の制御因子としとして作用することはいまや理解されている（例えばオンラインで２０１０年７月１日に発表されたMasonおよびWilliams(2010)J.Osteoporos ID No.460120、Winklerら(2005)J.Biol.Chem.28;280(4):2498-502を参照されたい）。この機能の結果として、スクレロスチンは、ヒトおよびマウスにおける骨形成の強力な負の制御因子であり、スクレロスチンの欠失は高い骨形成をもたらし、硬結性骨化症およびバン・ブッヘム病を生じる（Balemansら(2001)Hum Mol Genet.10(5):537-43、Brunkowら(2001)Am.J.Hum.Genet.68(3):577-89、Lootsら(2005)Genome Res. 15(7):928-35）。異常なＷｎｔシグナル伝達は、いくつかのがんの発症に関与している一方で、本出願の出願前にはスクレロスチンがＳＣＣの病態に関与している証拠はなかった（例えばTennisら(2007)J.Thoracic Oncology 2:889-892、Geryk-HallおよびHughes(2009)Curr.Oncol.Rep.11:446-53、Niemannら(2007)Cancer Res.67:2916-21）。近年の刊行物Huら（October 2011）PLoS One 10:e25807は、本明細書で報告される結果を確認している。Huらは、Ｗｎｔ経路構成成分がＳＣＣ試料において差次的に発現されていること（つまり、非古典的Ｗｎｔ  ＰＣＰシグナル伝達カスケードの増強を伴ったＷｎｔ経路の古典的分岐点の阻害）を示している。特にHuらは、ＳＯＳＴ過発現がＳＣＣ試料において強化されることを報告しており、本発明者らの発見を確認している。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
したがって、本明細書で開示されるのは、扁平上皮がん（ＳＣＣ）を有する患者（例えばヒト）に治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト（例えば抗体１、２、３、４もしくは５などの抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片）を投与するステップを含む扁平上皮がん（ＳＣＣ）を治療する方法である。同様に本明細書で開示されるのは、必要とする患者において扁平上皮がん（ＳＣＣ）（例えば肺、尿路、上部気道消化管のＳＣＣ）を治療するのに使用するためのスクレロスチンのアンタゴニストである。同様に本明細書で開示されるのは、必要とする患者において扁平上皮がん（ＳＣＣ）を治療する薬剤の製造のためのスクレロスチンのアンタゴニストの使用である。
【０００９】
追加的に本明細書で開示されるのは、ａ）ＳＣＣを有する患者から生物学的検査試料を得るステップ、およびｂ）前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がスクレロスチンアンタゴニストでの前記ＳＣＣの治療に応答する可能性の増大を示すステップを含む、ＳＣＣを有する患者がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答する可能性を予測する方法である。
【００１０】
追加的に本明細書で開示されるのは、ＳＣＣを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がスクレロスチンアンタゴニストでの前記ＳＣＣの治療に応答する可能性の増大を示すステップを含む、ＳＣＣを有する患者がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答する可能性を予測する方法である。
【００１１】
追加的に本明細書で開示されるのは、ａ）患者から生物学的検査試料を得るステップ、およびｂ）前記患者由来の前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がＳＣＣを発症する可能性の増大を示すステップ、を含む、患者がＳＣＣを発症する可能性を予測する方法である。
【００１２】
追加的に本明細書で開示されるのは、患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がＳＣＣを発症する可能性の増大を示すステップを含む、患者がＳＣＣを発症する可能性を予測する方法である。
【００１３】
追加的に本明細書で開示されるのは、ａ）患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップ、およびｂ）前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量より多い場合に、前記患者にスクレロスチンアンタゴニストを選択的に投与するステップを含む、患者においてＳＣＣを治療する方法である。いくつかの実施形態ではこれらの方法は、投与のステップより前に前記患者由来の生物学的対照試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップをさらに含む。
【００１４】
追加的に本明細書で開示されるのは、ａ）生物学的検査試料をＳＣＣを有する患者から得る、ｂ）前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイする、およびｃ）前記患者由来の前記生物学的検査試料が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較してより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、前記患者に治療有効量のスクレロスチンアンタゴニストを選択的に投与することを特徴とする、ＳＣＣを治療するのに使用するためのスクレロスチンアンタゴニストである。
【００１５】
追加的に本明細書で開示されるのは、ａ）ＳＣＣを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイする、およびｂ）前記患者由来の前記生物学的検査試料が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較してより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、前記患者に治療有効量のスクレロスチンアンタゴニストを選択的に投与することを特徴とする、ＳＣＣを治療するのに使用するためのスクレロスチンアンタゴニストである。
【００１６】
追加的に本明細書で開示されるのは、ａ）治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト、ｂ）任意選択で、前記スクレロスチンアンタゴニストを患者に投与するための手段、ｃ）任意選択で、白金、タキサン、ＥＧＦＲ−ｉ、セツキシマブ、５−ＦＵ、アントラサイクリンおよびビンフルニンからなる群から選択される少なくとも１つの追加的薬剤、ならびにｄ）前記患者に前記スクレロスチンアンタゴニストを投与するための説明書を含む、ＳＣＣを有する患者を治療するのに使用するためのキットである。
【００１７】
追加的に本明細書で開示されるのは、ａ）治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト、ｂ）ＳＣＣを有する患者由来の生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量を検出できる少なくとも１つのプローブ、ｃ）任意選択で、前記患者に前記スクレロスチンアンタゴニストを投与するための手段、ならびにｄ）対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較して前記患者由来の前記生物学的検査試料がより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、前記患者に前記スクレロスチンアンタゴニストを選択的に投与するための説明書を含む、ＳＣＣを有する患者を治療するのに使用するためのキットである。
【００１８】
追加的に本明細書で開示されるのは、ａ）スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも１つのプローブ、およびｂ）ＳＣＣを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするためにプローブを用いるステップのための説明書であって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、スクレロスチンアンタゴニストでのＳＣＣの治療に前記患者が応答する可能性の増大を示す説明書を含む、ＳＣＣを有する患者がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答する可能性を予測するのに使用するためのキットである。
【００１９】
追加的に本明細書で開示されるのは、ａ）スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも１つのプローブ、およびｂ）患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするためにプローブを用いるステップのための説明書であって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がＳＣＣを発症する可能性の増大を示す説明書を含む、患者がＳＣＣを発症する可能性を予測するのに使用するためのキットである。
【００２０】
本開示の方法、使用、キットおよび組成物のさらなる実施形態は、発明の詳細な説明および特許請求の範囲において見出されうる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】定量的ＰＣＲ分析によって測定された腫瘍細胞株のパネルおよび原発異種移植片試料におけるＳＯＳＴ  ｍＲＮＡ発現を示すグラフである。
【図２】抗ＳＯＳＴ抗体でのウエスタンブロッティングによって測定された腫瘍細胞株のパネルおよび原発異種移植片試料におけるＳＯＳＴタンパク質発現を示すグラフである。
【図３Ａ】原発性ヒト肺腫瘍異種移植片モデルＨＬＵＸ１７２６における抗体１の活性を示すグラフである。
【図３Ｂ】原発性ヒト肺腫瘍異種移植片モデルＨＬＵＸ１７２６における抗体１の活性を示すグラフである。
【図４】ＨＬＵＸ１７２６異種移植片モデルにおけるｐＬＲＰ６発現への抗体１の効果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本開示は、不適当なおよび／または過剰なスクレロスチン活性によって調節される腫瘍およびがん（そのようながんは本明細書において「スクレロスチン発現がん」または「スクレロスチン発現腫瘍」と称される）においてスクレロスチンの発現、シグナル伝達、分泌および／または機能を阻害することによって腫瘍増殖に影響を与える（例えば遅延させる、体積を減少させる、逆行させる、改善させるなど）方法を提供する。
【００２３】
したがって、本明細書で提供されるのは、とりわけ、必要とする患者（例えばヒト）においてスクレロスチン発現がん、例えばＳＣＣ（例えば肺のＳＣＣ）を治療する方法であって、前記患者に治療有効量の、少なくとも１つのスクレロスチンアンタゴニスト（例えば抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片、例えば抗体１、２、３、４または５）を投与するステップを含む方法である。同様に本明細書で開示されるのは、必要とする患者においてスクレロスチン発現がん、例えばＳＣＣ（例えば肺のＳＣＣ）を治療するのに使用するためのスクレロスチンのアンタゴニストである。さらに本明細書で開示されるのは、必要とする患者においてスクレロスチン発現がん、例えばＳＣＣ（例えば肺のＳＣＣ）を治療するための薬剤の製造のためのスクレロスチンのアンタゴニストの使用である。好ましい実施形態では、スクレロスチン発現がんはＳＣＣである。
【００２４】
追加的に本明細書で開示されるのは、ａ）患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップ、およびｂ）前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量より多い場合に、前記患者にスクレロスチンアンタゴニストを投与するステップを含む、患者におけるＳＣＣを治療する方法である。いくつかの実施形態ではこれらの方法は、投与するステップより前に前記患者由来の生物学的対照試料をスクレロスチンの発現の量についてアッセイするステップをさらに含む。
【００２５】
追加的に本明細書で開示されるのは、ａ）生物学的検査試料をＳＣＣを有する患者から得る、ｂ）前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイする、およびｃ）前記患者由来の前記生物学的検査試料が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較してより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、治療有効量の前記スクレロスチンアンタゴニストを前記患者に投与することを特徴とする、ＳＣＣを治療するのに使用するためのスクレロスチンアンタゴニストである。
【００２６】
追加的に本明細書で開示されるのは、ａ）ＳＣＣを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイする、およびｂ）前記患者由来の前記生物学的検査試料が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較してより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、治療有効量の前記スクレロスチンアンタゴニストを前記ＳＣＣ患者に投与することを特徴とする、ＳＣＣを治療するのに使用するためのスクレロスチンアンタゴニストである。
【００２７】
本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、スクレロスチン発現の量は、スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも１つのプローブの使用によって測定される。本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、少なくとも１つのプローブは、スクレロスチン核酸またはスクレロスチンポリペプチドを検出する。本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、少なくとも１つのプローブは抗スクレロスチン抗体である。本明細書で用いられる「扁平上皮がん」および「ＳＣＣ」は、肺のＳＣＣおよび非肺ＳＣＣの両方を含む。ＳＣＣは、扁平上皮を有する任意の臓器、例えば肺、胆管、骨、子宮頸部、子宮内膜、眼、生殖器、大腸、食道、卵巣、唾液腺、皮膚、胃、胸腺、上部気道消化管、尿路、膀胱、前立腺、陰茎、子宮頸部、膣、外陰部などにおいて生じうる。肺のＳＣＣは、肺に生じる扁平上皮のがんである。非肺ＳＣＣは、肺以外の臓器または組織において生じる扁平上皮のがんである。本開示の方法、キットおよび使用のいくつかの実施形態では、患者は肺のＳＣＣを有する。本開示の方法、キットおよび使用のいくつかの実施形態では患者は、非肺ＳＣＣを有する。
【００２８】
本開示の方法、使用またはキットのいくつかの実施形態では、ＳＣＣは、患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部に生じる。本開示の方法、使用またはキットのいくつかの実施形態では、ＳＣＣは上部気道消化管、食道、尿路または肺に生じる。本開示の方法、使用またはキットのいくつかの実施形態ではＳＣＣは、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔に生じる。本開示の方法、使用またはキットのいくつかの実施形態ではＳＣＣは、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連（oral commissure）、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝（oral sulcus）、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭（nasopharnyx）、中咽頭（orpharynx）または副鼻腔に生じる。
【００２９】
本明細書において用いる「上部気道消化管」に生じるＳＣＣは、気道または消化管の上部において見出されるＳＣＣを意味する。とりわけそれは、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔において生じるＳＣＣを含む。上部気道消化管のＳＣＣは、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔に生じるＳＣＣを含む。
【００３０】
本明細書において用いる「頭部または頸部」は、口唇、口腔、鼻腔、副鼻腔、咽頭および喉頭を含む上部気道消化管内の生物学的に類似するがんの群を意味する。頭部のおよび頸部のがんは、鼻腔、副鼻腔、口腔（例えば内唇、舌口腔底、歯肉、硬口蓋）、上咽頭、中咽頭（例えば軟口蓋、舌根、扁桃腺）、舌咽頭（梨状窩、後咽頭壁、輪状後部）および喉頭（例えば声門、声門上、声門下のがん）の腫瘍を含む。頭部および頸部がんは、上部気道消化管のがんと実質的な重複を有する。便宜上臨床医は、これらの種類のがんを集合的に「頭部および頸部」がんと一般的に称する。混乱を減らすために本開示は、語句「頭部および頸部」よりも「頭部または頸部」を用いる。したがって頭部または頸部がんを有する患者は、例えば眼窩のがんまたは喉頭のがんを有する場合があるが、眼窩のがんおよび喉頭のがんの両方を有する必要はない。本開示の方法および使用のいくつかの実施形態では、患者は頭部または頸部のＳＣＣを有する。本明細書において用いる「スクレロスチン」は、ヒトスクレロスチン、配列番号１に記載のアミノ酸配列を意味することが意図される。
【００３１】
ＳＣＣ（例えば上部気道消化管、食道、尿路または肺のＳＣＣ）を有する、ＳＣＣを有すると疑われるまたは将来ＳＣＣを発症すると疑われる患者は、本開示のスクレロスチンアンタゴニストでの治療が必要であると考えられる。用語「治療」、「治療する（treating）」または「治療する（treat）」は、がんを罹患している危険があるまたはがんを罹患すると疑われる患者および病気であるまたはがんもしくは医学的状態を罹患していると診断されている患者の治療を含み、予防的または防止的治療の両方および治癒的治療または疾患修飾治療を意味し、臨床的再発の抑制を含む。治療は、ＳＣＣを有する対象にまたは最終的にＳＣＣを罹患する可能性がある対象に、ＳＣＣの１つもしくは複数の症状または再発ＳＣＣを予防する、治癒させる、発症を遅延させる、重症度を低下させるもしくは回復させるためにまたはそのような治療が無い場合に期待されるものを越えて対象の生存を延長するために投与されうる。治療は、ＳＣＣを有する対象に腫瘍体積を減少させるためまたは腫瘍増殖を遅延させるために投与されうる。
【００３２】
本明細書において用いられる語句「治療への応答」は、具体的な療法の投与に続く所与の障害の徴候および症状の改善、例えばスクレロスチンアンタゴニスト（例えばスクレロスチン阻害ポリヌクレオチド、スクレロスチン阻害ポリペプチド、拮抗性抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片および拮抗性小分子）の投与に続く腫瘍体積の減少、腫瘍増殖の遅延などを意味する。
【００３３】
本明細書において用いられる「治療有効量」は、患者（ヒト患者など）への単回または複数回用量の投与において、障害（例えばＳＣＣ）の少なくとも１つの症状をもしくは障害の再発を治療する、予防する、その発症を予防する、治癒させる、遅延させる、その重症度を低下させる、回復させることまたはそのような治療が無い場合に予測されるものを越えて対象の生存を延長するために有効であるスクレロスチンアンタゴニスト（例えばスクレロスチン阻害ポリヌクレオチド、スクレロスチン阻害ポリペプチド、拮抗性抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片および拮抗性小分子、例えばその内容全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ０９０４７３５６における開示に記載の抗体１）の量を意味する。単独で投与される個々の活性成分（例えば抗スクレロスチン抗体）に適用する場合、用語はその成分だけを意味する。組合せに適用する場合用語は、組合せで、連続的にまたは同時に投与されるかにかかわらず治療効果をもたらす活性成分の組み合わされた量を意味する。
【００３４】
本明細書で用いられる用語「患者」は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。用語「非ヒト動物」は全ての脊椎動物、例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などの哺乳動物および非哺乳動物を含む。本開示のいくつかの実施形態では、患者はヒトである。
【００３５】
本明細書で用いられる用語「生物学的試料」は、患者由来で同定、診断、予測またはモニタリングの目的のために用いられうる試料を意味する。本開示の方法、使用またはキットにおける使用のための好ましい検査および対照試料は、患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部由来の組織を含む。当業者は、いくつかの検査試料が分画または精製手順（例えば全血からのＤＮＡの単離）後により容易に分析されることを認識するであろう。したがって「生物学的試料」は、例えば患者試料から抽出されたＤＮＡ、ＲＮＡおよびタンパク質の使用を含む。
【００３６】
本明細書で用いられる語句「生物学的検査試料」は、対象の患者から得られる生物学的試料を意味する。
【００３７】
本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部から得る。本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔から得る。本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔から得る。
【００３８】
本明細書で用いられる語句「生物学的対照試料」は、標準的供給源から得られる生物学的試料を意味する。本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料はＳＣＣを発症していないことが知られている対照患者から得られる。本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料はＳＣＣを有さない検査患者の組織由来である。いくつかの実施形態では対照試料は参照基準（例えばＳＣＣを発症していないことが判っている患者におけるスクレロスチンまたはＳＯＳＴの発現の平均レベル）であってもよい。
【００３９】
本明細書で用いられる語句「ＳＣＣを発症していないことが判っている患者」は、ＳＣＣを罹患していないと既に判定されている患者（例えばヒト患者）を意味する。本開示の方法、使用および組成物のいくつかの実施形態では、患者はＳＣＣを発症していないことが判っている者である。本開示の方法、使用および組成物のいくつかの実施形態では、試料（例えば生物学的対照試料）は、ＳＣＣを発症していないことが判っている患者由来である。
【００４０】
本明細書で用いられる語句「ＳＣＣを有さない患者の組織由来」は、ＳＣＣを罹患していないと判定されている患者から採取された生物学的試料を意味する。これらの供給源由来の試料は、本開示の方法で生物学的対照試料として用いられうる。本開示の方法、使用および組成物のいくつかの実施形態では、試料（例えば生物学的対照試料）は、ＳＣＣを有さない患者の組織由来である。
【００４１】
本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部から得られる。本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔から得られる。本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔から得られる。
【００４２】
用語「アッセイする」は、検査するおよび／または測定することを意味して用いられる。語句「生物学的試料をアッセイする」などは、試料が所与の物質の存在または非存在のいずれかについて検査されうることを意味して用いられる。物質の存在が１つの可能性を示し、物質の不在が異なる可能性を示す状況において、そのような物質の存在または不在のいずれかが治療決定を導くために用いられうることは理解される。
【００４３】
本明細書で用いられる語句「スクレロスチン発現の量」は、試料中のＳＯＳＴ遺伝子の産物のレベル（例えばスクレロスチン核酸の発現のレベルまたはスクレロスチンポリペプチドの発現のレベル）を意味する。本明細書で用いられる語句「スクレロスチン発現の量の増加」は、スクレロスチンの発現レベルの意味のある増加、例えば統計学的に有意な増加を意味する。
【００４４】
本明細書で用いられる「ＳＯＳＴ遺伝子の産物」は、スクレロスチン核酸産物（例えばｍＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ＲＮＡの断片など）およびスクレロスチンポリペプチド産物（例えばＳＯＳＴ遺伝子によってコードされるポリペプチド、ＳＯＳＴ遺伝子によってコードされるポリペプチドの断片など）を含む。本明細書で用いられる「スクレロスチンポリペプチド」は、ＳＯＳＴ遺伝子（例えばヒトＳＯＳＴ遺伝子）によってコードされるポリペプチドを意味する。本明細書で用いられる「スクレロスチン核酸」は、ＳＯＳＴ遺伝子およびその断片の任意のＲＮＡ産物ならびにＳＯＳＴ遺伝子およびその断片の任意のＲＮＡ産物から産生されるｃＤＮＡを意味する。本開示の方法、使用および組成物のいくつかの実施形態では試料中のスクレロスチン発現の量は、ＳＯＳＴ遺伝子の産物について試料をアッセイするステップによって決定される。本開示の方法、使用および組成物のさらなる実施形態では、試料中のスクレロスチン発現の量はスクレロスチン核酸について試料をアッセイするステップによって決定される。本開示の方法、使用および組成物のさらなる実施形態では試料中のスクレロスチン発現の量は、スクレロスチンポリペプチドについて試料をアッセイするステップによって決定される。
【００４５】
本明細書で用いられる用語「より多い」は、意味のある方法、例えば統計的有意差でより多い量を意味する。
【００４６】
本明細書で用いられる「予測する」は、ＳＣＣを有する個体がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答するもしくはより好都合に応答する可能性または患者が最終的にＳＣＣを発症する可能性を医療従事者が決定できるようにする情報を本明細書に記載の方法が提供することを示す。それは、１００％の正確さを有して応答を予測する能力を意味しない。むしろ当業者は、それが確率の増大を意味することを理解するであろう。
【００４７】
本明細書で用いられる「可能性（likelihood）」および「可能性がある（likely）」は、ある事象がどの程度生じるかの尺度である。それは「確率（probability）」と互換的に用いられる場合がある。可能性は、推測を越えるが確実には満たない確率を意味する。したがって事象は、常識、訓練または経験を用いて良識のある人物が所与の状況で事象がほぼ確実であると結論する場合に可能性がある。いくつかの実施形態では、可能性が確認された時点で患者は、スクレロスチンアンタゴニストで治療される（もしくは治療が継続されるもしくは用量を増加させて治療が進行する）場合があるまたは患者は、スクレロスチンアンタゴニストで治療されない（もしくは治療が継続されないもしくは用量を低下させて治療が進行する）場合がある。本明細書で用いられる語句「患者がＳＣＣを発症する可能性」は、患者がＳＣＣを患う確率を意味する。
【００４８】
語句「増大した可能性」は、事象が生じる確率の増大を意味する。例えば本明細書に記載の方法は、患者がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答する可能性の増大またはスクレロスチンアンタゴニストでの治療により良く応答する可能性の増大を示すかどうかの予測を可能にする。
【００４９】
語句「減少した可能性」は、事象が生じる確率の減少を意味する。例えば本明細書の方法は、患者がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答する可能性の減少またはスクレロスチンアンタゴニストでの治療により良く応答する可能性の減少を示すかどうかの予測を可能にする。
【００５０】
用語「プローブ」は、別の物質（例えばスクレロスチンに関連する物質）を特異的に検出するために有用な任意の物質を意味する。プローブは、スクレロスチン核酸（例えばｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ）に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドまたはコンジュゲートしたオリゴヌクレオチドである場合がある。「コンジュゲートしたオリゴヌクレオチド」は、発色団または、受容体分子に高度に特異的であるリガンド（例えば抗原）を含有する分子（例えば抗原に特異的な抗体）に共有結合したオリゴヌクレオチドを意味する。プローブは、（別のプライマーと共に）スクレロスチン核酸の特定の領域を増幅するためのＰＣＲプライマーであってもよい。さらにプローブは、スクレロスチンポリペプチドを（すなわち、抗原またはスクレロスチンのエピトープに結合することによって）特異的に認識する抗体であってもよい。本開示の方法、使用および組成物のいくつかの実施形態では、プローブはスクレロスチン核酸を検出する。本開示の方法、使用および組成物のいくつかの実施形態では、プローブはスクレロスチンポリペプチドを検出する。本開示の方法、使用および組成物のさらなる実施形態では、プローブは抗スクレロスチン抗体、例えば表１に記載の抗体、例えば抗体１、２、３、４または５である。
【００５１】
用語「できる」は、所与の結果を達成する能力を意味して用いられ、例えば、特定の物質の存在を検出できるプローブは、プローブが特定の物質を検出する能力があることを意味する。
【００５２】
本明細書で用いられる語句「スクレロスチンの存在を検出できる」は、所与の試料中のスクレロスチン核酸またはスクレロスチンポリペプチドの存在（または不在）に関する情報を提供するプローブの能力を意味する。
【００５３】
本明細書で用いられる用語「得る（obtain）」、「得た」および「得る（obtaining）」は、入手すること、例えば任意の方法によって所有権を獲得することを意味する。
【００５４】
患者を参照して本明細書で用いられる「選択する」および「選択される」は、具体的な患者が予め決定された基準、例えば患者がＳＯＳＴまたはスクレロスチンの存在または特定のレベルを有する、（例えば生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量より多い場合）を有することに基づいて（によって）患者のより大きな群から特異的に選ばれることを意味して用いられる。同様に「ＳＣＣを有する患者を選択的に治療する」は、具体的な患者が予め決定された基準、例えば患者がＳＯＳＴまたはスクレロスチンの存在または特定のレベルを有する（例えば生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量より多い場合）を有することに基づいて（によって）患者のより大きな群から特異的に選ばれるＳＣＣ患者に治療を提供することを意味する。同様に「選択的に投与する」は、具体的な患者が予め決定された基準（例えば具体的な遺伝的または他の生物学的マーカー）を有することに基づいて（によって）患者のより大きな群から特異的に選ばれるＳＣＣ患者に薬を投与することを意味する。選択する、選択的に治療するおよび選択的に投与することによって、ＳＣＣを有することだけに基づいて標準的治療計画を与えられるよりも患者の生態に基づいてＳＣＣに対する個別化された療法を患者が与えられることが意味される。
【００５５】
スクレロスチンアンタゴニスト
本方法、キットおよび使用は、ＳＣＣ（例えば頭部もしくは頸部、尿路、食道または肺のＳＣＣ）の治療のためにスクレロスチンアンタゴニスト（例えば少なくとも１つのスクレロスチンアンタゴニスト、例えば１つのスクレロスチンアンタゴニスト）を用いる。スクレロスチンアンタゴニストは、例えばマウスおよびヒトスクレロスチン阻害ポリヌクレオチド（すなわち、直接的または間接的のいずれかでスクレロスチンレベルおよび／または活性を低下させるポリヌクレオチド、例えばアンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、アプタマー）、スクレロスチン阻害ポリペプチド（すなわち、直接的または間接的のいずれかでスクレロスチンレベルおよび／または活性を低下させるポリペプチド、例えばＢＭＰおよび／またはＬＲＰ相互作用ドメインを含有する可溶性断片などのスクレロスチンの断片ならびにその融合タンパク質）、拮抗性抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片（すなわち、全長スクレロスチンおよび／またはスクレロスチン断片に結合する拮抗性抗体およびその抗原結合断片を含む直接的または間接的のいずれかでスクレロスチン活性および／または発現を低下させる抗体または抗原結合抗体断片）、ならびに拮抗性小分子（例えばｓｉＲＮＡ、アプタマーならびに無機および／または有機の小分子または化合物）を含み、スクレロスチン活性、シグナル伝達、発現および／または分泌を抑制するために用いられうるならびに、スクレロスチン活性、発現および／または分泌の増加に関連してＳＣＣ（例えば上部気道消化管、尿路、食道もしくは肺のＳＣＣ）を診断する、経過を見通す、モニタリングする、治療する、回復させるおよび／または予防するために用いられうる。
【００５６】
好ましい実施形態では、本開示の使用および方法における使用のためのスクレロスチンアンタゴニストは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片である。抗体は、エピトープ（例えばスクレロスチンに見出されるエピトープ）に特異的に結合および認識する免疫グロブリン遺伝子またはその部分由来のフレームワーク領域を含むポリペプチドである。本明細書で用いられる用語「抗体」は、全抗体および任意の抗原結合断片またはその一本鎖を含む。全「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変（ＶＨ）領域および重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３からなる。各軽鎖は、軽鎖可変（ＶＬ）領域および軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬからなる。ＶＬおよびＶＨ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域内に散在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分されうる。各ＶＬおよびＶＨは、アミノ末端からカルボキシ末端へ次の順番：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置される３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる。重鎖のＣＤＲは、本明細書でＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３と称される。軽鎖のＣＤＲは、本明細書でＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３と称される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原上のエピトープと相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えばエフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を調節できる。
【００５７】
用語「抗体」は、単一ドメインン抗体、マキシボディー（maxibodies）、ナノ抗体（nanobodies）、ペプチボディー（Amgen）、ミニ抗体、イントラボディー（intrabodies）、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、ｖ−ＮＡＲおよびｂｉｓ−ｓｃＦｖを含む（例えばHollinger & Hudson,Nature Biotechnology,23,9,1126-1136(2005)を参照されたい）。抗体の抗原結合断片は、ＩＩＩ型フィブロネクチン（Ｆｎ３）などのポリペプチドに基づくスキャホールドに移植されうる（フィブロネクチンポリペプチドモノボディーを記載している米国特許第６，７０３，１９９号を参照されたい）。本開示の方法における使用のための抗体およびその抗原結合断片の種々種類の詳細は、ＷＯ０９０４７３５６において見出されうる。
【００５８】
「抗体」の定義内に同様に含まれるのは、一本鎖抗体である。Ｆｖ断片の２つのドメインＶＬおよびＶＨは別々の遺伝子にコードされているが、それらをＶＬおよびＶＨ領域の対が一価の分子（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として周知、例えばBirdら、1988 Science 242:423-426およびHustonら、1988 Proc.Natl.Acad.Sci.85:5879-5883を参照されたい）を形成する単一のタンパク質鎖とすることができる合成リンカーによって組換え法を用いてそれらは結合されうる。そのような一本鎖抗体が用語抗体の「抗原結合領域」内に包含されることも意図される。一本鎖抗体は、抗体可変領域を単独で、または次のポリペプチド成分、ヒンジ領域、抗体分子のＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインの全てまたは部分との組合せでも含みうる。
【００５９】
「抗体」の定義に同様に含まれるのは、抗体の抗原結合断片である。抗体の抗原結合機能が全長抗体の断片によって実施されうることが示されている。したがって「抗原結合断片」は、抗原（例えばスクレロスチンの抗原）に特異的に結合する能力を保持している抗体の１つまたは複数の断片を意味する。抗原結合断片は、これだけに限らないが、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）ならびにＶＬまたはＶＨドメインのいずれかを含む断片を含む。例は、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド結合によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一腕のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Wardら、Nature 341:544-546,1989、Muyldermansら、TIBS 24:230-235,2001）、ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。「抗体」の定義内に同様に含まれるのは、可変領域ならびにヒンジ領域ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインの任意の組合せである。抗原結合断片は、相補的軽鎖ポリペプチドと共に抗原結合領域の対を形成する縦列Ｆｖセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）の対を含む一本鎖分子に組み込まれうる（Zapataら、Protein Eng.8(10):1057-1062(1995)および米国特許第５，６４１，８７０号）。抗体断片は、当業者に周知の従来技術を用いて得られ、断片は全抗体と同じ方法で抗原結合能力についてスクリーニングされる。
【００６０】
抗体が種々の翻訳後修飾を受ける場合があることは、当業者に理解される。これらの修飾の種類および程度は、タンパク質を発現するために用いられる宿主細胞株および培養条件にしばしば依存する。そのような修飾は、グリコシル化、メチオニン酸化、ジケトピペリジン形成、アスパラギン酸異性化およびアスパラギン脱アミドにおける変種を含みうる。高頻度の修飾は、カルボキシペプチダーゼの作用によるカルボキシ末端塩基性残基（リシンまたはアルギニンなど）の欠損である（Harris,RJ.Journal of Chromatography 705:129-134,1995に記載のとおり）。下の表１は、カルボキシ末端リシンを保持しているまたは放棄する場合がある本開示の使用、方法およびキットにおける使用のための抗体を示す。
【００６１】
抗体定常領域は、種々のアイソタイプのものであってよい。「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によって提供される抗体のクラス（例えばＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ４またはＩｇＧ２など））を意味する。本開示の方法および使用のいくつかの実施形態では、スクレロスチンアンタゴニストは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４またはＩｇＧ２アイソタイプの抗スクレロスチン抗体である。
【００６２】
本明細書で用いられる用語「モノクローナル抗体」は、単一分子組成の抗体分子の調製物由来の抗体分子を意味する。したがってモノクローナル抗体は、具体的なエピトープに対して単一の結合特異性および親和性を示す。本開示の方法および使用のいくつかの実施形態では、スクレロスチンアンタゴニストは、モノクローナル抗スクレロスチン抗体である。
【００６３】
本開示のキメラまたはヒト化抗体は、本明細書に記載の抗体および抗体断片の配列（例えば表１を参照されたい）を用いる当技術分野において認識される技術を用いて調製されうる。重鎖および軽鎖免疫グロブリンをコードしているＤＮＡは、目的のマウス融合細胞から得ることができ、標準的分子生物学技術を用いて非マウス（例えばヒト）免疫グロブリン配列を含有するように操作されうる。例えばキメラ抗体を作製するためにマウス可変領域は、当技術分野において周知の方法（例えばCabillyらへの米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）を用いてヒト定常領域に連結されうる。ヒト化抗体を作製するためにマウスＣＤＲ領域は、当技術分野において周知の方法を用いてヒトフレームワークに挿入されうる。例えばWinterへの米国特許第５，２２５，５３９号およびQueenらへの米国特許第５，５３０，１０１号、第５，５８５，０８９号、第５，６９３，７６２号および第６，１８０，３７０号を参照されたい。本開示の方法および使用のいくつかの実施形態では、スクレロスチンアンタゴニストはキメラまたはヒト化抗スクレロスチン抗体である。
【００６４】
本明細書で用いられる用語「ヒト抗体」は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域の両方がヒト由来の配列由来である可変領域を有する抗体を含むことが意図される。さらに抗体が定常領域を含有する場合、定常領域もそのようなヒト配列（例えばヒト生殖系列配列もしくはヒト生殖系列配列の変異バージョンまたはKnappikら（2000.J Mol Biol 296,57-86）に記載のヒトフレームワーク配列分析由来の定常フレームワーク配列を含有する抗体）由来である。本開示の方法における使用のためのヒト抗体は、ヒト配列によってコードされていないアミノ酸残基を含みうる（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏランダムもしくは部位特異的な変異誘発によってまたはｉｎ  ｖｉｖｏ体細胞変異によって導入された変異）。しかし、本明細書で用いられる用語「ヒト抗体」は、マウスなどの別の哺乳動物種生殖系列由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を含むことを意図せず、これらは代わりに「キメラ」抗体および／または「ヒト化」ヒト化抗体と称される。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用のいくつかの実施形態では、スクレロスチンアンタゴニストはヒト抗体である。
【００６５】
用語「ヒトモノクローナル抗体」は、単一の結合特性を示し、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト配列由来である可変領域を有する抗体を意味する。一実施形態ではヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する遺伝子導入非ヒト動物（例えば遺伝子導入マウス）から得られるＢ細胞を含む融合細胞によって産生される。そのような動物は、企業Ｍｅｄａｒｅｘ  ａｎｄ  Ｋｉｒｎから入手可能である。別の実施形態ではヒトモノクローナル抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子を有する遺伝子導入マウスによって産生される。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用のいくつかの実施形態では、スクレロスチンアンタゴニストはヒトモノクローナル抗体である。
【００６６】
本明細書で用いられる用語「組換えヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリン遺伝子についての遺伝子導入もしくは染色体導入である動物（例えばマウス）またはそれから調製される融合細胞から単離される抗体、ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から（例えば形質移入体から）単離される抗体、組換えのコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗体および、ヒト免疫グロブリン遺伝子の全体または部分の配列から他のＤＮＡ配列へのスプライシングに関する任意の他の手段によって調製、発現、作製または単離される抗体などの、組換え手段によって調製、発現、作製または単離される全てのヒト抗体を含む。そのような組換えヒト抗体は、フレームワークおよびＣＤＲ領域がヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来である可変領域を有する。しかし特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ変異誘発（またはヒトＩｇ配列についての遺伝子導入の動物が用いられる場合はｉｎ  ｖｉｖｏ体細胞変異誘発）に供されることができ、したがって組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来するおよび関するがｉｎ  ｖｉｖｏヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然では存在しない場合がある配列である。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用のいくつかの実施形態では、スクレロスチンアンタゴニストは組換えヒト抗体である。
【００６７】
本明細書で用いられる「スクレロスチンポリペプチドに特異的に結合する」抗体は、スクレロスチンポリペプチドに約１×１０−８Ｍ以下、約１×１０−９Ｍ以下または約１×１０−１０Ｍ以下のＫＤで結合する抗体を意味すると意図される。「スクレロスチン以外の抗原と交差反応する」抗体（または同様のもの）は、抗原に約０．５×１０−８Ｍ以下、約５×１０−９Ｍ以下または約２×１０−９Ｍ以下のＫＤで結合する抗体を意味すると意図される。「特定の抗原と交差反応しない」抗体（または同様のもの）は、特定の抗原に約１．５×１０−８Ｍ以上のＫＤでまたは約５×１０−８Ｍから約１０×１０−８Ｍの間のまたは約１×１０−７Ｍ以上のＫＤで結合する抗体を意味すると意図される。特定の抗原と交差反応しない抗体は、標準的結合アッセイにおいて特定の抗原に対する顕著な結合の欠失を示す。本開示の方法および使用の特定の実施形態では、抗スクレロスチン抗体はスクレロスチンに特異的に結合する。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用の特定の実施形態では、抗スクレロスチン抗体はスクレロスチンに特異的に結合し、スクレロスチン以外の抗原に交差反応しない。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用の特定の実施形態では、抗スクレロスチン抗体はスクレロスチンに特異的に結合し、ダン（Dan）またはグレムリン（Gremlin）に交差反応しない。
【００６８】
本開示の方法、組成物、使用およびキットのいくつかの実施形態では、抗スクレロスチン抗体はスクレロスチンへの結合に関して抗体１、２、３、４または５と競合する。競合する抗体は、典型的には同じエピトープを認識する。したがって例えば本開示の方法、組成物、使用およびキットのいくつかの実施形態では、抗スクレロスチン抗体は、抗体１、２、３、４または５によって結合されるのと同じエピトープに結合する。抗体１、２、３、４および５によって結合されるスクレロスチンエピトープは、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれるＵＳ７７５８８５８、ＵＳ７３８１４０９、ＵＳ７５７８９９９、ＷＯ０５００３１５８、ＷＯ０６１１９０６２、ＷＯ０６１１９１０７、ＷＯ０８１１５７３２およびＵＳ７７４４８７４に例えば記載されている。
【００６９】
数値ｘに関連する用語「約」は、例えば＋／−１０％を意味する。
【００７０】
数値に関連して本明細書で用いられる「有意」は統計的有意を意味する。
【００７１】
本明細書で用いられる「細胞に基づくＷｎｔシグナル伝達アッセイ」は、細胞（例えばＨＥＫ２９３）に基づくスーパートップフラッシュ（super top flash）（ＳＴＦ）アッセイを意味することが意図される。そのようなアッセイは、ＷＯ０９０４７３５６により詳細に記載されている。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用の特定の実施形態では、スクレロスチンの存在下でＨＥＫ２９３細胞株における細胞に基づくＷｎｔシグナル伝達アッセイにおける測定で抗体は約１μＭ未満、好ましくは約１００ｎＭ未満およびより好ましくは約２０ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。
【００７２】
一実施形態では、本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用における使用のための抗スクレロスチン抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ骨石灰化のスクレロスチン阻害を逆行させる能力を有する。関連する実施形態ではそれらは、Ｗｎｔ−１調節シグナル伝達経路のスクレロスチン阻害を逆行させる能力を有する。別の関連する実施形態では、それらはスクレロスチンＬＲＰ６結合を破壊し、スクレロスチンが高用量でＢＭＰ誘導Ｓｍａｄ１リン酸化に有する阻害効果を遮断できる。
【００７３】
スクレロスチンは、ＨＥＫ２９３細胞においてＳＴＦ（スーパートップフラッシュ、基準Ｗｎｔシグナル伝達レポーター読み取り）のＷｎｔ１調節活性化を阻害する。いくつかの実施形態では本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用における使用のための抗体は、高度に再現性のある方法でＷｎｔシグナル伝達レポーター読み取りを回復させる。
【００７４】
非造骨性細胞でのＷｎｔシグナル伝達レポーターアッセイにおけるスクレロスチン作用への本開示による抗体の観察された阻害効果は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのスクレロスチン阻害による骨形成応答の誘導に変換されることが示されている。実際に老齢げっ歯類でのｉｎ  ｖｉｖｏ実験は、本開示による抗体が強い骨同化作用を促進することを示す。骨量増加は、非常に高い同化量の副甲状腺ホルモン（陽性対照として用いられた）での連日間歇治療での効果レベルに達した。したがって、別の実施形態により、本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用における使用のための抗体は、低ｐＭ範囲（好ましくは約１００ｐＭ以下、好ましくは約５０ｐＭ以下、好ましくは約１０ｐＭ以下、より好ましくは約１ｐＭ以下）でスクレロスチンに対する親和性を有し、約１０ｎＭ付近のＩＣ５０でｗｎｔシグナル伝達へのスクレロスチンの影響を阻害する。
【００７５】
本明細書で用いられる「ＢＭＰ２誘導石灰化アッセイ」は、細胞に基づくアッセイにおいて（例えばＭＣ３Ｔ３細胞において）スクレロスチンの存在下でＢＭＰ２誘導石灰化の回復を測定するアッセイを意味することが意図される。そのようなアッセイはＷＯ０９０４７３５６により詳細に記載されている。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用の特定の実施形態では抗体は、スクレロスチンの存在下でＭＣ３Ｔ３細胞でのＢＭＰ２誘導石灰化アッセイにおける測定で約１μＭ未満、好ましくは約５００ｎＭ未満およびより好ましくは約２００ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。
【００７６】
本明細書で用いられる「Ｓｍａｄ１リン酸化アッセイ」は、細胞に基づくアッセイにおいて（例えばＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞において）スクレロスチンの存在下でＢＭＰ６誘導Ｓｍａｄ１リン酸化の回復を測定するアッセイを意味することが意図される。そのようなアッセイはＷＯ０９０４７３５６により詳細に記載されている。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用の特定の実施形態では抗体は、スクレロスチンの存在下でＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞株でのＢＭＰ６  Ｓｍａｄ１リン酸化アッセイにおける測定で約１μＭ未満、好ましくは約５００ｎＭ未満、好ましくは約２００ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。
【００７７】
本明細書で用いられる「ＬＲＰ６／スクレロスチンＥＬＩＳＡ」は、スクレロスチンとＬＲＰ−６との相互作用を測定するために用いられるＥＬＩＳＡアッセイを意味することが意図される。そのようなアッセイはＷＯ０９０４７３５６により詳細に記載されている。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用の特定の実施形態では抗体は、ＬＲＰ６／スクレロスチンＥＬＩＳＡにおける測定で約１μＭ未満、好ましくは約１００ｎＭ未満、より好ましくは約１０ｎＭ未満（例えば約６ｎＭ）、より好ましくは約５ｎＭ未満、より好ましくは約３ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。本開示の方法および使用の特定の実施形態では抗体は、ＬＲＰ６／スクレロスチンＥＬＩＳＡにおいて約５．８ｎＭ、約６．０ｎＭ、約６．５ｎＭ、約７．０ｎＭ、約９．６ｎＭ、約１０．６ｎＭ、約１２．１ｎＭまたは約１９．４ｎＭのＩＣ５０を有する。
【００７８】
当技術分野において周知の方法および本明細書に記載により決定される、１つまたは複数のスクレロスチン機能特性（例えば上に記載のとおり、生化学的、免疫化学的、細胞性、生理的または他の生物学的活性など、例えばＢＭＰ−２誘導石灰化）を「阻害」する抗体は、抗体の非存在下で（または無関係な特異性の対照抗体が存在する場合に）観察されるものと比較した特定の活性における統計的に有意な減少と関連することは理解される。スクレロスチン活性を阻害する抗体は、測定されるパラメーターの少なくとも１０％、少なくとも５０％、８０％または９０％の統計的に有意な減少などの効果を及ぼし、特定の実施形態では本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用において用いられる抗体は、スクレロスチン機能活性を９５％、９８％または９９％より大きく阻害できる。
【００７９】
本明細書で用いられる用語「Ｋａｓｓｏｃ」または「Ｋａ」は、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度を意味することが意図され、一方、本明細書で用いられる用語「Ｋｄｉｓ」または「ＫＤ」は、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を意味することが意図される。本明細書で用いられる用語「ＫＤ」は、ＫｄのＫａに対する比（すなわちＫｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される解離速度を意味することが意図される。抗体についてのＫＤ値は当技術分野において確立された方法を用いて決定されうる。抗体のＫＤを決定するための方法は、表面プラズモン共鳴法を用いることによる、またはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）系、ＫｉｎＥｘＡに基づく系、Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｅ（ＢｉｏＶｅｒｉｓ）、溶液平衡滴定、受容体結合阻害効力アッセイなどのバイオセンサー系を用いることによる。これらのアッセイはＷＯ０９０４７３５６、ＷＯ０６１１９１０７およびＵＳ７７４４８７４に詳細に記載されている。
【００８０】
本明細書で用いられる「親和性」は、単一抗原部位での抗体と抗原との間の相互作用の強さを意味する。各抗原部位において抗体「腕」の可変領域は、弱い非共有結合力を通じて抗原と多数の部位で相互作用し、相互作用が多いほど親和性は強くなる。
【００８１】
本明細書で用いられる「結合力」は、抗体−抗原複合体の全体的安定性または強さの有益な測定値を意味する。それは、３つの主な因子：抗体親和性、抗原および抗体の両方の結合価ならびに相互作用部分の構造的配置によって調節される。最終的にはこれらの因子が、正確な抗原エピトープに具体的な抗体が結合する可能性である抗体の特異性を定義する。
【００８２】
本明細書で用いられるＩｇＧ抗体についての「高親和性」は、標的抗原に対して約１０−８Ｍ以下、約１０−９Ｍ以下または約１０−１０Ｍ以下のＫＤを有する抗体を意味する。しかし「高親和性」結合は他の抗体アイソタイプについて変化する場合がある。例えばＩｇＭアイソタイプについての「高親和性」結合は、約１０−７Ｍ以下または約１０−８Ｍ以下のＫＤを有する抗体を意味する。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用のいくつかの実施形態では、スクレロスチンアンタゴニストは、高親和性抗スクレロスチン抗体である。
【００８３】
いくつかの実施形態では本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用における使用のための抗体は、表面プラズモン共鳴法による測定で約１０ｎＭ、約１ｎＭ未満、約１００ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満または約２５ｐＭ未満、例えば約１５〜２５ｐＭ、例えば約２１ｐＭ＋／−４ｐＭのＫＤを有する。いくつかの実施形態では本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用における使用のための抗体は、ＷＯ０６１１９１０７の実施例１０に記載のとおりＫｉｎＥｘＡに基づく測定実験における測定で約０．５から約１０ｐＭ、例えば約０．６ｐＭ、約１ｐＭ、約３ｐＭ、約４ｐＭまたは約６ｐＭのＫＤを有する。いくつかの実施形態では本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用における使用のための抗体は、ＵＳ７７４４８７４の実施例３に記載のとおりＫｉｎＥｘＡに基づく測定実験における測定で約０．２から約２．５ｐＭ、例えば約０．３ｐＭ、約０．６ｐＭ、約２．２ｐＭのＫＤを有する。
【００８４】
種々のスクレロスチンアンタゴニスト（例えば抗スクレロスチン抗体）は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ０９０４７３５６、ＷＯ２０００／３２７７３、ＷＯ２００６１０２０７０、ＵＳ２００８０２２７１３８、ＵＳ２０１０００２８３３５、ＵＳ２００３０２２９０４１、ＷＯ２００５００３１５８、ＷＯ２００９０３９１７５、ＷＯ２００９０７９４７１、ＷＯ０３１０６６５７、ＷＯ２００６１１９０６２、ＷＯ０８１１５７３２、ＷＯ２００５／０１４６５０、ＷＯ２００５／００３１５８、ＷＯ２００６／１１９１０７、ＷＯ２００８／０６１０１３、ＷＯ２００８／１３３７２２、ＷＯ２００８／１１５７３２、ＵＳ７５９２４２９、ＵＳ７８７９３２２、ＵＳ７７４４８７４において開示されている。これらの参考文献において開示される任意の（またはいくつかの）スクレロスチンアンタゴニストは、本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用において用いられうる。本開示の方法および使用において用いられうるさらなる抗スクレロスチン抗体は、ＡＭＧ１６７およびＡＭＧ７８５（Ａｍｇｅｎ）（例えばPadhiら(2011)J.Bone Miner.Res.26:19-26を参照されたい）として周知のものならびにOminskyら(2010)J.Bone Min. Res (Epub Dec.2)、Liら(2010)J.Bone Miner.Res.25:2371-80、Liら(2009)J.Bone Miner Res.24:578-88、Ominskyら(2010)J. Bone Miner Res.25:948-59において見出されるものを含む。いくつかの実施形態では本開示の方法および使用における使用のための抗スクレロスチン抗体は、ＷＯ２００６／１１９０６２、ＷＯ２００５０１４６５０またはＷＯ２００５００３１５８またはＷＯ０９０４７３５６に記載のスクレロスチンのエピトープに結合する。
【００８５】
本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用における使用のための好ましい抗スクレロスチン抗体およびその抗原結合断片は、ＷＯ０９０４７３５６（ＵＳ７８７９３２２に相当）、ＷＯ０６１１９１０７（ＵＳ７８７２１０６およびＵＳ７５９２４２９に相当）ならびにＷＯ０８１１５７３２（ＵＳ７７４４８７４に相当）において見出され、例えば、
【００８６】
【表１】
2014515759.tif 000002
2014515759.tif 000003
【００８７】
本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用において用いられる抗体がスクレロスチンに結合できることおよび抗原結合特異性が主にＣＤＲ１、２および３領域によって与えられることを考慮すると、各抗体は他の抗スクレロスチン抗体を作製するためにＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含有するが、ＶＨ  ＣＤＲ１、２および３配列ならびにＶＬ  ＣＤＲ１、２および３配列は「混合および対応」されるうる（つまり異なる抗体由来のＣＤＲが混合および対応されうる）。そのような「混合および対応」された抗体のスクレロスチン結合は、ＷＯ２００９／０４７３５６に記載の結合アッセイを用いて検査されうる。ＶＨ  ＣＤＲ配列が混合および対応される場合、具体的なＶＨ配列由来のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３配列は、構造的に類似のＣＤＲ配列（複数可）で置き換えられるべきである。同様にＶＬ  ＣＤＲ配列が混合および対応される場合、具体的なＶＬ配列由来のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／またはＬＣＤＲ３配列は、構造的に類似のＣＤＲ配列（複数可）で置き換えられるべきである。新規ＶＨおよびＶＬ配列が、１つまたは複数のＶＨおよび／またはＶＬ  ＣＤＲ領域配列を、本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用において用いられうるモノクローナル抗体に関して本明細書に示す（例えば表１）ＣＤＲ配列由来の構造的に類似の配列で置換することによって作製されうることは当業者に容易に明らかである。
【００８８】
本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用での使用のために特に好ましい抗体は、ＷＯ０９０４７３５６（その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載の抗スクレロスチン抗体である。一実施形態では本開示の方法および使用における使用のための抗スクレロスチン抗体は、ＷＯ０９０４７３５６において見出され、本明細書において「抗体１」と称される（表１を参照されたい）。抗体１は、アミノ酸配列番号４を含むＶＨドメインおよびアミノ酸配列番号５を含むＶＬドメインを有する。本開示において有用な他の抗スクレロスチン抗体は、抗体１由来の１個または複数個（１、２、３、４、５または６個）のＣＤＲを含みうる。重鎖中のＣＤＲは、配列番号６〜８である。軽鎖中のＣＤＲは、配列番号９〜１１である。抗体１ＶＨ  ＣＤＲは、ＶＨフレームワーク領域（例えばＶＨヒトフレームワーク領域）と共に発現される場合があり、抗体１  ＶＬ  ＣＤＲは、ＶＬフレームワーク領域（例えばＶＬヒトフレームワーク領域）と共に発現される場合があり、抗体１  ＶＨおよびＶＬ  ＣＤＲは、ＶＨおよびＶＬフレームワーク領域（例えばＶＨおよびＶＬヒトフレームワーク領域）と共に発現される場合があり（例えばヒトまたはヒト化）、ならびに抗体１可変ドメインは配列番号２および３として発現されうる。
【００８９】
本明細書で開示されるのは、不適当なおよび／または過剰なスクレロスチン活性によって調節される腫瘍およびがんにおいてスクレロスチン発現および／または機能を阻害することによって腫瘍増殖に影響を与える（例えば遅延させる、体積を低下させる、逆行させる、改善させるなど）ための方法、使用およびキットである。好ましい実施形態では不適当なおよび／または過剰なスクレロスチン活性によって調節されるがんは、ＳＣＣである。
【００９０】
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、スクレロスチンアンタゴニストは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片は、表面プラズモン共鳴法またはバイオセンサー系による測定で１０ｎＭ未満のＫＤでヒトスクレロスチンに結合する、スクレロスチンの存在下でＨＥＫ２９３細胞株での細胞に基づくＷｎｔシグナル伝達アッセイにおける測定で１μＭ未満のＩＣ５０を有する、スクレロスチン存在下でＭＣ３Ｔ３細胞でのＢＭＰ２誘導石灰化アッセイにおける測定で１μＭ未満のＩＣ５０を有する、ＬＲＰ６／スクレロスチンＥＬＩＳＡでの測定で１μＭ未満のＩＣ５０を有する、および／またはスクレロスチン存在下でＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞株でのＢＭＰ６  Ｓｍａｄ１リン酸化アッセイにおける測定で１μＭ未満のＩＣ５０を有する。
【００９１】
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または配列番号４に記載のアミノ酸配列の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、からなる群から選択される。
【００９２】
さらなる実施形態では配列番号４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲは、配列番号６、配列番号７および配列番号８に記載されている。さらなる実施形態では配列番号５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲは、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１に記載されている。
【００９３】
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または配列番号１４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲおよび配列番号１５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、からなる群から選択される。
【００９４】
さらなる実施形態では配列番号１４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲは、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８に記載されている。さらなる実施形態では配列番号１５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲは、配列番号１９、配列番号２０および配列番号２１に記載されている。
【００９５】
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または配列番号２４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲおよび配列番号２５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、からなる群から選択される。
【００９６】
さらなる実施形態では配列番号２４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲは、配列番号２６、配列番号２７および配列番号２８に記載されている。さらなる実施形態では配列番号２５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲは、配列番号２９、配列番号３０および配列番号３１に記載されている。
【００９７】
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または配列番号３４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲおよび配列番号３５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、からなる群から選択される。
【００９８】
さらなる実施形態では配列番号３４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲは、配列番号３６、配列番号３７および配列番号３８に記載されている。さらなる実施形態では配列番号３５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲは、配列番号３９、配列番号４０および配列番号４１に記載されている。
【００９９】
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または配列番号４４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲおよび配列番号４５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片からなる群から選択される。
【０１００】
さらなる実施形態では配列番号４４に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲは、配列番号４６、配列番号４７および配列番号４８に記載されている。さらなる実施形態では配列番号４５に記載のアミノ酸配列の３つのＣＤＲは、配列番号４９、配列番号５０および配列番号５１に記載されている。
【０１０１】
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片は、抗スクレロスチン抗体である。本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。上の方法および使用のいくつかでは、抗スクレロスチン抗体はモノクローナル抗スクレロスチン抗体またはヒト組換え抗スクレロスチン抗体である。本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４アイソタイプのものである。
【０１０２】
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片は、抗体の抗原結合断片である。本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗原結合断片は、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、ＦｃまたはＦｄ断片を含む。
【０１０３】
医薬組成物
本開示の治療方法または使用の実施において、治療有効量の少なくとも１つのスクレロスチンアンタゴニスト（例えば抗スクレロスチン抗体）をＳＣＣ（例えば上部気道消化管、尿路、食道または肺のＳＣＣ）を有する患者、例えば哺乳動物（例えばヒト）に投与する。
【０１０４】
スクレロスチンアンタゴニスト（例えば、抗体１、２、３、４または５などの抗スクレロスチン抗体）は、本開示の方法および使用により単独でまたは他の薬剤（例えば１つまたは複数の追加的薬剤）および療法との組合せ（例えば追加的化学療法剤および化学療法計画との組合せで、または追加的スクレロスチンアンタゴニストとの組合せでなど）で投与されうる。１つまたは複数の薬剤と同時投与される場合、スクレロスチンアンタゴニスト（例えば抗スクレロスチン抗体）は、他の薬剤と同時に、または連続的にのいずれかで投与されうる。連続的に投与される場合、担当医は、他の薬剤との組合せで投与するスクレロスチンアンタゴニスト（例えば抗スクレロスチン抗体）の適切な順序を決定する。本開示のスクレロスチンアンタゴニストとの組合せでの使用のための追加的薬剤は、例えば、白金、タキサン、ＥＧＦＲ−ｉ（ＥＧＦＲ変異化ＬＣ）、セツキシマブ（ＥＧＦＲ増幅ＬＣ）、放射線／白金組合せ、放射線／セツキシマブ組合せ、５−ＦＵ、アントラサイクリン、ビンフルニン、ＲＥＯＬＹＳＩＮ（登録商標）、カルボプラチン、パクリタキセル、ベバシツマブ、ゲフィチニブ、カペシタビン、エルロチニブ、ペメトレキセド、ソラフェニブ、モテサニブ、セジラニブ、エトポシド、デクスラゾキサン、Ｇ−ＣＳＦ、ＰＥＧ−フィルグラスチン、メスナ、ロイコボリン、ミファムルチド、エンドスター、エベロリムス、ソラフェニブ、ビスホスホネート（例えばゾレドロン酸）、フィギツムマブ、セツキシマブ、シロリムス、ラパマイシン、Ａｆｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標）、テムシロリムス、インターフェロンアルファ（２ａまたは２ｂ、ペグ化および非ペグ化形態を含む、）、パミドロネート、チオテパ、レキシンＧ、Ｌ−ＭＴＰ−ＰＥ、グルカルピダーゼ、サルグラモスチム、ベバシズマブ、Ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂ、ドセタキセル、５−フルオロウラシル、ロスバスタチン、トキソテール、アザシチジン、スリンダク、ＡＰＩ３１５１０、ＺＤ１８３９、リバビリン、セレコキシブ、Ｐａｚｏｐａｎｉｂ（ＧＷ７８６０３４）、ＡＲＱ５１０、パニツムマブ、ロミデプシン、ゲムシチビン、ＯｎｃｏＬａｒ、ペメトレキセド、トラベクテジン、ＬＹ２５２３３５５、ＶＭ４−０３７、ＭＬＮ８２３７、ジロートン、モテキサフィンガドリニウム、メトトレキサート、シスプラチン、トラスツズマブ、ドキソルビシン、イホスファミド、ＶＥＧＦ受容体阻害物質（ＡＺＤ２１７１）、シクロホスファミド、ビンクリスチン、トポテクタン、ＩＧＦ受容体アンタゴニスト（例えば１９Ｄ１２［ＳＣＨ  ７１７４５４］）、ＭＥＫ１／２阻害物質（例えばＡＺＤ６２４４）、プロテオソーム阻害物質（例えばボルテゾミブ）、ＢＣＬ−２阻害物質（例えばＡＢＴ−２６３）、オーロラＡキナーゼ阻害物質（例えばＭＬＮ８２３７）、ヒストン脱アセチル化酵素阻害物質（例えばボリノスタット）、ＥＧＦＲおよびＥＲＢＢ２の阻害物質（例えばラピチニブ）、スニチニブ、リポソーマルムラミルトリペプチドホスファチジルエタノールアミン（Ｌ−ＭＴＰ−ＰＥ）、イホスファミドおよびこれらの組合せを含む。
【０１０５】
治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト（例えば抗スクレロスチン抗体）を経口で投与する場合、結合剤は錠剤、カプセル、粉剤、液剤またはエリキシル剤の形態である。錠剤形態で投与される場合、本開示の医薬組成物は、ゼラチンなどの固形担体またはアジュバントを追加的に含有できる。液剤形態で投与される場合、水、石油、ピーナッツ油（ピーナッツアレルギーに関する注意を喚起する）、鉱物油、大豆油もしくはゴマ油などの動物もしくは植物由来の油または合成油などの液体担体を添加しうる。医薬組成物の液体形態は、生理食塩水、ブドウ糖もしくは他の糖類溶液、またはエチレングリコール、プロピレングリコールもしくはポリエチレングリコールなどのグリコールなどの成分をさらに含みうる。
【０１０６】
治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト（例えば抗スクレロスチン抗体）を静脈内、皮膚または皮下注射によって投与する場合、スクレロスチンアンタゴニストは発熱物質不含有で非経口に許容される溶液の形態である。静脈内、皮膚または皮下注射のための医薬組成物は、スクレロスチンアンタゴニストに加えて塩化ナトリウム、リンゲル、ブドウ糖、ブドウ糖および塩化ナトリウム、乳酸リンゲルまたは当技術分野において周知の他のビヒクルなどの等張ビヒクルを含有しうる。
【０１０７】
本開示の方法における使用のための医薬組成物は、従来法で製造されうる。一実施形態では医薬組成物は、好ましくは凍結乾燥形態で提供される。迅速な投与のために、好適な水性担体、例えば注射用滅菌水または滅菌緩衝生理食塩水に溶解させる。ボーラス注入よりも点滴による投与のためのより多量の溶液を作製することが望ましいと考えられる場合、製剤時にヒト血清アルブミンまたは患者自身のヘパリン処置血液を食塩水に加えることが有利である場合がある。そのような生理学的に不活性なタンパク質の過剰な存在は、輸液溶液と共に用いられる容器およびチューブの壁への吸着による抗体の損失を予防する。アルブミンが用いられる場合好適な濃度は、重量で生理食塩水の約０．５から約４．５％である。他の製剤は液体製剤または凍結乾燥製剤を含む。
【０１０８】
適切な用量は、当然ながら、例えば用いられる具体的なスクレロスチンアンタゴニスト、宿主、投与の様式ならびに治療される状態の性質および重症度、ならびに患者が受けた先行する治療の性質に応じて変化する。最終的には担当医が個々の対象を治療するためのスクレロスチンアンタゴニストの量を決定する。いくつかの実施形態では担当医は、スクレロスチンアンタゴニストの低用量を投与し、対象の応答を観察する場合もある。他の実施形態では、対象に投与されるスクレロスチンアンタゴニストの初期用量（複数可）は高く、次いで再発の徴候が生じるまで漸減しうる。対象に最適な治療効果が得られるまでスクレロスチンアンタゴニストのより高用量を投与することができ、一般的にはその時点では用量はさらには増量しない。
【０１０９】
スクレロスチンアンタゴニストは、非経口、静脈内（例えば前腕前部または他の末梢静脈に）、筋肉内または皮下に好都合に投与される。本開示の医薬組成物を用いる静脈内（ｉ．ｖ．）療法の期間は、治療される疾患の重症度ならびに個々の患者の状態および個別の応答に応じて変化する。同様に考慮されるのは、本開示の医薬組成物を用いる皮下（ｓ．ｃ．）療法である。担当医は、本開示の医薬組成物を用いるｉ．ｖまたはｓ．ｃ．療法の適切な期間および治療投与の時期を決定する。
【０１１０】
満足のいく結果（治療、予防、症状の発症の遅延など）は、体重１キログラムあたり約０．０５ｍｇから約３０ｍｇ、通例では体重１キログラムあたり約０．１ｍｇから約２０ｍｇの用量で得られると一般に示される。投与の頻度は、約１日１回から約３カ月ごとに１回までの範囲内、例えば約２週間ごとに１回から約１２週間ごとに１回、例えば４から８週間ごとに１回でありうる。投与頻度は、とりわけ治療計画の局面に依存する。いくつかの実施形態では抗スクレロスチン抗体用量は、約１ｍｇ／ｋｇから約５００ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇから約４００ｍｇ／ｋｇ、または約１００ｍｇ／ｋｇから約３５０ｍｇ／ｋｇ、または約２００ｍｇ／ｋｇから約３００ｍｇ／ｋｇでありうる。
【０１１１】
一般に抗体は複数回投与される。単回投与間の間隔は、例えば１週間ごと、１カ月ごと、３カ月ごと、または１年ごとであってもよい。間隔は、患者における標的抗原に対する抗体の血中レベルを測定することによって示される不定期であってもよい。いくつかの方法では用量は、約１から約１０００μｇ／ｍｌおよびいくつかの方法では約２５から３００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度を達成するために調節される。
【０１１２】
代替的に抗体は、徐放性放出製剤として投与される場合があり、その場合は低頻度投与が必要である。用量および頻度は患者における抗体の半減期に応じて変化する。一般にヒト抗体は最も長い半減期を示し、ヒト化抗体、キメラ抗体および非ヒト抗体が続く。ペグ化技術は、抗体半減期を増加させるために用いられうる。投与の用量および頻度は、治療が予防的であるかまたは治療的であるかどうかに応じて変化する場合がある。予防的適用の場合、比較的低い用量が比較的低頻度の間隔で長期間にわたって投与される。いくらかの患者は彼らの生涯にわたって治療を受け続ける。治療的適用の場合、比較的高い用量が比較的短い間隔で疾患の進行が低下するもしくは終結するまでまたは患者が疾患の症状の部分的もしくは完全な回復を示すまで時には必要とされる。その後、患者は予防的計画を投与されうる。
【０１１３】
本開示の医薬組成物における活性成分の実際の用量レベルは、具体的な患者、組成物および投与様式について（患者に毒性となることなく）望ましい治療応答を達成するために有効である活性成分の量を得るために変更される場合がある。選択された用量レベルは、用いられる本開示の具体的な組成物もしくはそのエステル、塩、アミドの活性、投与の経路、投与の時期、用いられる具体的な化合物の排出速度、治療期間、用いられる具体的な組成物との組合せで用いられる他の薬、化合物および／または物質、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、全身状態および先行する医療歴ならびに医学分野において十分に周知の因子を含む種々の薬物動態的因子に依存する。
【０１１４】
いくつかの抗スクレロスチン抗体、例えば抗体１、２、３、４または５について、用量は約５ｍｇ／ｋｇから約３００ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇから約２００ｍｇ／ｋｇ、または約２０ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ、または約３０ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇであってよい。好ましい実施形態では抗スクレロスチン抗体、例えば抗体１は、約２０ｍｇ／ｋｇで投与されうる。いくつかの実施形態では抗スクレロスチン抗体、例えば抗体１、２、３、４または５は、約０．１、約０．３、約１、約３、約５もしくは約１０ｍｇ／ｋｇで皮下に、または約１もしくは約５ｍｇ／ｋｇで静脈内に投与される。いくつかの実施形態では抗スクレロスチン抗体、、例えば抗体１、２、３、４または５は、毎日、１週間に２回、毎週、隔週、１カ月ごと、隔月、年４回、６カ月ごとまたは１年ごとに投与される。いくつかの実施形態では、抗スクレロスチン抗体は、例えば抗体１、２、３、４または５は、単回で（すなわち１回だけ）または複数回投与される。
【０１１５】
「ｍｇ／ｋｇ」は、治療される患者の体重１ｋｇあたりの薬ｍｇを意味する。
【０１１６】
一実施形態では１年間にわたって患者に与えられる抗スクレロスチン抗体の総用量は、約５００ｍｇから約５０，０００ｍｇまたは約１０００ｍｇから約１０，０００ｍｇである場合がある。
【０１１７】
いくつかの方法、医薬組成物、キットおよび使用では、２つ以上の抗スクレロスチン抗体、例えば同じまたは異なる結合特異性を有する（例えば同じエピトープに結合するが異なる結合親和性を有するまたは異なるエピトープに結合する）が同時にまたは連続的に（追加的薬剤を含んでまたは含まずに）投与され、そのような場合、投与される各抗体の用量は示された範囲内にある。
【０１１８】
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、スクレロスチンアンタゴニストは、白金、タキサン、ＥＧＦＲ−ｉ（ＥＧＦＲ変異ＬＣ）、セツキシマブ（ＥＧＦＲ増幅ＬＣ）、５−ＦＵ、アントラサイクリンおよびビンフルニンからなる群から選択される少なくとも１つの追加的薬剤（例えば化学療法剤）と共に投与される。
【０１１９】
診断方法
本開示は、扁平上皮亜型の腫瘍のサブセット、特に肺、食道および上部気道消化管のがんにおけるスクレロスチンの著しい過発現の発見に部分的に基づく。そのようにスクレロスチン発現の量（例えばスクレロスチンタンパク質、スクレロスチンｍＲＮＡレベル）は、ＳＣＣの発症についてのマーカーとしておよびＳＣＣ患者がスクレロスチンアンタゴニスト（例えば抗体１、２、３、４もしくは５などの抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片）での治療に好都合に応答する可能性のマーカーとして用いられうる。
【０１２０】
したがって本明細書で開示されるのは、ａ）ＳＣＣを有する患者から生物学的検査試料を得るステップ、およびｂ）前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がスクレロスチンアンタゴニストでの前記ＳＣＣの治療に応答する可能性の増大を示すステップを含む、スクレロスチンアンタゴニストでの治療にＳＣＣを有する患者が応答する可能性を予測する方法である。
【０１２１】
追加的に本明細書で開示されるのは、ＳＣＣを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がスクレロスチンアンタゴニストでの前記ＳＣＣの治療に応答する可能性の増大を示すステップを含む、ＳＣＣを有する患者がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答する可能性を予測する方法である。
【０１２２】
追加的に本明細書で開示されるのは、ａ）患者から生物学的検査試料を得るステップ、およびｂ）前記患者由来の前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がＳＣＣを発症する可能性の増大を示すステップを含む、患者がＳＣＣを発症する可能性を予測する方法である。
【０１２３】
追加的に本明細書で開示されるのは、患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がＳＣＣを発症する可能性の増大を示すステップを含む、患者がＳＣＣを発症する可能性を予測する方法である。
【０１２４】
本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、スクレロスチン発現の量は、スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも１つのプローブの使用によって測定される。本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、少なくとも１つのプローブは、スクレロスチン核酸またはスクレロスチンポリペプチドを検出する。本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、少なくとも１つのプローブは、抗スクレロスチン抗体である。
【０１２５】
本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、生物学的対照試料はＳＣＣを発症していないことが判っている対照患者から得られる。本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、生物学的対照試料はＳＣＣを有さない患者の組織由来である。
【０１２６】
本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部から得る。本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔から得る。本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔から得る。
【０１２７】
本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部から得る。本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔から得る。本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔から得る。
【０１２８】
本開示の予測方法のいくつかの実施形態ではＳＣＣは、患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部に生じる。本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、ＳＣＣは上部気道消化管、食道、尿路または肺に生じる。本開示の予測方法のいくつかの実施形態ではＳＣＣは、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔に生じる。予測方法のいくつかの実施形態ではＳＣＣは、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔に生じる。
【０１２９】
キットおよび製造品
本明細書で開示されるのは、ＳＣＣ（例えば上部気道消化管、尿路、食道もしくは肺のＳＣＣ）を治療するおよび／またはＳＣＣを有する患者がスクレロスチンでの治療に応答する可能性を予測するおよび／または患者がＳＣＣを発症する可能性を予測するために有用なキット（すなわち製造品）でもある。そのようなキットは、少なくとも１つのスクレロスチンアンタゴニスト（例えば抗スクレロスチン抗体、例えば、抗体１、２、３、４もしくは５、好ましくは抗体１）または少なくとも１つのスクレロスチンアンタゴニスト（例えば抗スクレロスチン抗体、例えば抗体１）を含む医薬組成物を含みうる。そのようなキットは、スクレロスチアンタゴニストを投与するための手段（例えばシリンジ、自動注入装置または充填型ペン）および使用のための説明書を含んでもよい。これらのキットは、ＳＣＣ（例えば上部気道消化管、尿路、食道または肺のＳＣＣ）を治療するための、封入されたスクレロスチアンタゴニスト（複数可）（例えば抗スクレロスチン抗体、例えば抗体１、２、３、４もしくは５、好ましくは抗体１）との組合せでの送達のための追加的治療剤を含有してもよい。
【０１３０】
したがって、本明細書で提供されるのは、ａ）治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト、ｂ）任意選択で、前記スクレロスチンアンタゴニストをＳＣＣを有する患者に投与するための手段、ｃ）任意選択で、白金、タキサン、ＥＧＦＲ−ｉ、セツキシマブ、５−ＦＵ、アントラサイクリンおよびビンフルニンからなる群から選択される少なくとも１つの追加的薬剤、ならびにｄ）前記患者に前記スクレロスチンアンタゴニストを投与するための説明書を含む、ＳＣＣを有する患者を治療するのに使用するためのキットである。
【０１３１】
追加的に本明細書で開示されるのは、ａ）治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト、ｂ）ＳＣＣを有する患者由来の生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量を検出できる少なくとも１つのプローブ、ｃ）任意選択で、前記患者に前記スクレロスチンアンタゴニストを投与するための手段、ならびにｄ）対照検査試料におけるスクレロスチン発現の量と比較して前記患者由来の前記生物学的検査試料がより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、前記患者にスクレロスチンアンタゴニストを投与するための説明書を含む、ＳＣＣを有する患者を治療するのに使用するためのキットである。
【０１３２】
追加的に本明細書で開示されるのは、ａ）スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも１つのプローブ、およびｂ）ＳＣＣを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするためにプローブを用いるステップのための説明書であって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、スクレロスチンアンタゴニストでのＳＣＣの治療に前記患者が応答する可能性の増大を示す説明書を含む、ＳＣＣを有する患者がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答する可能性を予測するのに使用するためのキットである。
【０１３３】
追加的に本明細書で開示されるのは、ａ）スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも１つのプローブ、およびｂ）患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするためにプローブを用いるステップのための説明書であって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がＳＣＣを発症する可能性の増大を示す説明書を含む、患者がＳＣＣを発症する可能性を予測するのに使用するためのキットである。
【０１３４】
本開示のキットのいくつかの実施形態では、スクレロスチン発現の量は、スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも１つのプローブの使用によって測定される。本開示のキットのいくつかの実施形態では、少なくとも１つのプローブは、スクレロスチン核酸またはスクレロスチンポリペプチドを検出する。本開示のキットのいくつかの実施形態では、少なくとも１つのプローブは、抗スクレロスチン抗体である。
【０１３５】
本開示のキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は、ＳＣＣを発症していないことが判っている対照患者から得る。本開示のキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料はＳＣＣを有さない患者の組織由来である。
【０１３６】
本開示のキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は、患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部から得る。本開示のキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔から得る。本開示のキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔から得る。
【０１３７】
本開示のキットのいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は、患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部から得る。本開示のキットのいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔から得る。本開示のキットのいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔から得る。
【０１３８】
本開示のキットのいくつかの実施形態では、少なくとも１つのプローブは、スクレロスチン核酸またはスクレロスチンポリペプチドを検出する。本開示のキットのいくつかの実施形態では、少なくとも１つのプローブは、抗スクレロスチン抗体である。
【０１３９】
本開示のキットのいくつかの実施形態ではＳＣＣは、患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部に生じる。本開示の方法キットのいくつかの実施形態では、ＳＣＣは上部気道消化管、食道、尿路または肺に生じる。本開示のキットのいくつかの実施形態ではＳＣＣは、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔に生じる。本開示のキットのいくつかの実施形態ではＳＣＣは、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔に生じる。
【０１４０】
全ての特許、公開された特許出願、刊行物、参考文献および本開示において参照される他の資料は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
実施例
【実施例１】
【０１４１】
発現データ生成および統合
発現データは、Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ＮＣＢＩ  ＧＥＯ、ＥＢＩ  ＡｒｒａｙＥｘｐｒｅｓｓおよび追加的供給源からのＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｕ１３３ｐｌｕｓ２データを統合するＯｎｃＥｘｐｒｅｓｓデータベースを用いて生成および分析された。全ての試料についてのデータを全ての試料にわたって一貫した方法でＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ＭＡＳ５アルゴリズムに供した。試料を１５０の２％トリム平均に標準化した。試料アノテーションを、原発部位および組織像についてのアノテーションの階層的レベルを含むＣＯＳＭＩＣオントロジーに確認するために行った。
【０１４２】
原発ヒト腫瘍異種移植片から得られたデータは、次の方法で生成された、腫瘍標本は、１時間未満の虚血時間で外科的切除の際に患者から１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ中に回収した。壊死性組織を含まない１５〜３０ｍｍ３の断片をイソフルラン麻酔下の６〜８週齢メスヌードマウスの肩甲骨間の脂肪パッドの皮下へ移植した。マウスは、特定の病原体を含まない動物舎で維持し、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅプロトコールおよび規則に従って扱った。異種移植片は、移植の２から８カ月後に移植部位に出現した。次に、妥当で安定した増殖速度が達成されるまで腫瘍が７００〜８００ｍｍ３に達した時点でそれらをマウスからマウスに移植した。５０％ＦＢＳおよび１０％ＤＭＳＯを補充したＲＰＭＩ中の凍結保存物をマウスにおける連続継代の際に生成し、異種移植片モデルの良好な確立を確実にするために検査した。
【０１４３】
患者および各継代時の異種移植片由来の３０〜５０ｍｇ断片を遺伝子発現プロファイリング、コピー数および変異の分析のために急速凍結した。良好に移植された各異種移植片モデルの断片１５０ｍｇも回収し、組織学的分析に供した。確立された腫瘍異種移植片モデルを４回継代後にｉｎ  ｖｉｖｏ研究のためにさらに用いた。遺伝子発現プロファイリングのために全ＲＮＡをアフィニティーレジン（ＱＩＡＧＥＮ  ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ；ＱＩＡＧＥＮ  ＡＧ）を用いて単離した。ＲＮＡ完全性および純度をＢｉｏａｎａｌｙｚｅｒ  ２１００（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）のＲＮＡ  ６０００  Ｎａｎｏ  ＬａｂＣｈｉｐ  ｓｙｓｔｅｍで評価した。
【実施例２】
【０１４４】
ＳＯＳＴの発現分析
データをＳＯＳＴ（ｐｒｏｂｅ  ｓｅｔ  ２２３８６９＿ａｔ）に関するＯｎｃｅｘｐｒｅｓｓから抽出し、以下の分類に分けた、
次の「原発部位」のヒト扁平上皮がん原発腫瘍（「組織学的亜型１」＝「扁平上皮がん」によって定義される）
・肺扁平上皮がん
・食道扁平上皮がん
・上部気道消化管扁平上皮がん
・尿路扁平上皮がん
【０１４５】
上部気道消化管（原発部位）群で表されるのは、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔由来の試料であり（亜型１）、さらなる亜型（亜型２）は、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔において見出される。
ヒト非扁平上皮原発腫瘍
・全ての原発部位での全ての入手可能なヒト非扁平上皮原発腫瘍
正常ヒト組織
・肺
・食道
・上部気道消化管
・尿路
マウスで継代した原発ヒト腫瘍異種移植片
・肺扁平上皮がん
・全ての非扁平上皮腫瘍
他の扁平細胞異種移植片原発部位は１つより多い試料を入手できなかった。
これらの分類にわたるＳＯＳＴの発現を表２に要約する。
【０１４６】
【表２】
2014515759.tif 000004
【０１４７】
扁平上皮がん（ＳＣＣ）における潜在的標的としてのＳＯＳＴの好適性を評価するために、上記分類１〜４のそれぞれにおけるＳＯＳＴの発現を分類５に対して、および対応原発部位の分類６〜９に対しても算出した。統計的有意差を等分散的両側ｔ検定を用いて対数変換発現値について評価した、ｐ値＜０．０５を有意とした。結果を倍数変化として表３に要約する。
【０１４８】
【表３】
2014515759.tif 000005
【実施例３】
【０１４９】
発現研究からの結論
１）扁平上皮腫瘍の４つの原発部位（肺、食道、上部気道消化管、尿路）それぞれについて、ＳＯＳＴ発現は非扁平上皮腫瘍よりも有意に高い。
２）扁平上皮原発腫瘍（肺、食道、上部気道消化管、尿路）の４つの原発部位の内３つについて、ＳＯＳＴ発現はそれぞれの正常組織よりも有意に高い。尿路扁平上皮がんは、正常尿路組織よりも６．８倍高いＳＯＳＴ発現を有するが、この結果はおそらく小さな試料サイズのため有意ではない。
３）肺原発扁平上皮がん異種移植片モデル（１つより多い試料が入手可能である唯一の扁平上皮異種移植片モデル）は、検査された回収物における全ての他の原発異種移植片モデルに対して高度に（および有意に）上昇したＳＯＳＴ発現を示す。これは、ヒト原発（非異種移植片）腫瘍における発見を確認し、扁平上皮肺腫瘍におけるＷｎｔ特徴（ＳＯＳＴ上方制御を含む）を記載する近年の文献報告と一致する（Huら、2011,PLoS One,6(10),e25807）。
【実施例４】
【０１５０】
ヒト腫瘍細胞株のパネルおよび原発腫瘍異種移植片試料におけるＳＯＳＴ発現の評価
ＳＯＳＴの発現をｍＲＮＡおよびタンパク質レベルの両方について細胞株のパネルおよびヒト原発異種移植片試料において評価した。
【０１５１】
ｍＲＮＡ分析については、全ＲＮＡをＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、ｃａｔａｌｏｇ＃７４１０６）を用いて単離し、Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、ｃａｔａｌｏｇ＃４３６８８１３）を用いてｃＤＮＡに転換した。２Ｘ  ＴａｑＭａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ、Ｈｕｍａｎ  Ｂ２Ｍ（ベーター−２−ミクログロブリン）Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ＣｏｎｔｒｏｌおよびＨｕｍａｎ  Ｓｃｌｅｒｏｓｔｉｎ  ｐｒｉｍｅｒ／ｐｒｏｂｅ  ｓｅｔｓ（それぞれＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ｃａｔａｌｏｇ＃４３０４４３７、４３１０８８６Ｅ、Ｈｓ０１０７２８０１＿ｍ１）を含むＱＰＣＲ反応物１０μｌあたりｃＤＮＡ  ３μｌを用いた。リアルタイムＰＣＲを温度プロファイル：９５℃で１０分間、９５℃で１５秒間／６０℃で１分間を４０サイクルでＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ７９００ＨＴ  Ｆａｓｔ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍにおいて実行した。次の方程式：
ΔＣＴ＝ＣＴ（Ｂ２Ｍ）−ＣＴ（ＳＯＳＴ）  相対発現＝２−ΔＣＴ
を用いて内在性Ｂ２Ｍ対照と比較したｍＲＮＡ発現を決定するために閾値サイクル数を用いた。
【０１５２】
結果を図１に示し、ヒト原発肺異種移植片ＨＬＵＸ１７９５およびＨＬＵＸ１７２６が測定した他の異種移植片および細胞株と比較して最も高い（４〜６倍高い）ＳＯＳＴ  ｍＲＮＡ発現を有することを示唆している。
【０１５３】
スクレロスチン（ＳＯＳＴ）タンパク質発現をウエスタンブロッティングによって評価した。凍結原発腫瘍異種移植片または細胞株を、プロテアーゼおよびホスファターゼの阻害剤（それぞれＲｏｃｈｅ  ｃａｔａｌｏｇ＃１１８３６１５３００１および４９０６８３７００１）を補充したＲＩＰＡ細胞溶解／タンパク質抽出緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、０．２５％デオキシコール酸）で処置した。溶解物を遠心分離で沈殿させ、清澄化抽出物を回収し、ＢＣＡ  ＥＬＩＳＡ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ｃａｔａｌｏｇ＃２３２２７）によって定量した。総タンパク質３０μｇを還元剤ジチオスレイトールと合わせ、５分間、８５℃で熱変性させ、１５ウエル、４〜１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲルにロードし、ＭＥＳ緩衝液中で５５分間、２００Ｖで分離し、０．２μｍニトロセルロース膜に１０％メタノール中で１．５時間、４０Ｖで移行させた（それぞれＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ｃａｔａｌｏｇ＃１５５０８０１３、＃ＮＰ０３２３ＢＯＸ、ＮＰ０００２、ＬＣ２０００）。膜を１時間、室温でＯｄｙｓｓｅｙ  Ｂｕｆｆｅｒ（ＬｉＣｏｒ、ｃａｔａｌｏｇ＃９２７−４００００）でブロックし、ＨＲＰコンジュゲート二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ｃａｔａｌｏｇ＃７０５−０３６−１４７、１１１−０３６−０４５）との１時間、室温でのインキュベーションの前にＨｕｍａｎ  ＳＯＳＴ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｐｕｒｉｆｉｅｄ  Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ  Ａｂ、Ｇｏａｔ  ＩｇＧ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ｃａｔａｌｏｇ＃ＡＦ１４０６）でまたはＲａｂｂｉｔ  ａｎｔｉ−Ａｃｔｉｎ（Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ｃａｔａｌｏｇ＃Ａ３００−４８５Ａ）で一晩４℃で探索した。次いで膜をＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｐｉｃｏ  ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｐｉｅｒｃｅ、ｃａｔａｌｏｇ＃３４０７８）中でインキュベートし、フィルムに暴露した（アクチン、１０秒間暴露；ＳＯＳＴ、５分間）。
【０１５４】
結果を図２に表し、タンパク質発現が細胞株ＬＣ１ｓｑＳＦにおいて、ならびにヒト肺原発腫瘍異種移植片ＨＬＵＸ１７２６、ＨＬＵＸ１６４４、ＨＬＵＸ１３６７およびヒト食道原発腫瘍異種移植片ＨＥＳＸ２５３０において観察されたことを示す。
【実施例５】
【０１５５】
抗ＳＯＳＴ抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ活性の決定
抗ＳＯＳＴ抗体、抗体１の抗腫瘍活性をＨＬＵＸ１７２６原発ヒト腫瘍異種移植片モデルにおいて評価した。１００％マトリゲル１００μｌ中のＨＬＵＸ１７２６腫瘍スラリーをメスヌードマウスへ皮下（ｓ．ｃ．）で移植した。腫瘍が１００〜２００ｍｍ３に達した時点で、ＨＬＵＸ１７２６腫瘍を保持しているマウス（各群あたりｎ＝６）をビヒクルＩｇＧまたは抗体１（１００ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．、ｑｗまたは２０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．２ｑｗ）で処置した。腫瘍増殖を１週間に２回デジタルノギスを用いて記録した。抗体１で処置した腫瘍は、対照腫瘍と比較して低下した増殖を示し（Ｔ／Ｃ：４０％、図３Ａ）、抗体１処理群と対照群との間の体重における差異によって明らかなとおり処置は十分に許容された（図３Ｂ）。
【０１５６】
ＨＬＵＸ１７２６腫瘍におけるＷｎｔシグナル伝達への抗ＳＯＳＴ抗体、抗体１の効果を測定するために、ＨＬＵＸ１７２６腫瘍を移植されたマウスに単回用量２０または１００ｍｇ／ｋｇの抗体をｉ．ｖ．投与し、ウエスタンブロットによるリン酸化ＬＲＰ６（ｐＬＲＰ６）評価のために試料を７および２４時間で採取した。試料は、効能研究の完了後、抗体１の最終投与の７および２４時間後にも採取した。ウエスタンブロッティングについては、全細胞および原発ヒト腫瘍異種移植片溶解物をＲＩＰＡ緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１％ＮＰ−４０、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、０．１％  ＳＤＳ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ）中に調製した。溶解物をタンパク質濃度について標準化し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、ニトロセルロース膜に移行させ、全ＬＲＰ６（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ｃａｔａｌｏｇ＃３３９５）を添加対照として用いて抗ｐＬＲＰ６抗体（ウサギ抗ｐＳ１４９０、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ｃａｔａｌｏｇ＃２５６８）で探索した。結果は図４に示し、抗腫瘍効能研究の最後の最終投与の７もしくは２４時間後（上パネル）または抗体の単回投与後（下パネル）に回収されたいずれの場合でも抗体１処置試料においてさらに安定したＬＲＰ６のリン酸化を示す。
【０１５７】
付加的に抗体１の抗腫瘍効果を、ＨＬＵＸ１６４４およびＬＣ１ｓｑｓｆモデルにおいて上に記載したのと同様の条件下で評価した。しかし顕著な抗腫瘍活性は、これらのモデルにおいて観察されなかった。ＳＯＳＴタンパク質発現のレベルは、ＨＬＵＸ１７２６モデルと比較してＨＬＵＸ１６４４モデルにおいて低く（図２）、このモデルにおける抗体１の効果の欠如を説明できる。付加的に、ＨＬＵＸ１７２６モデルと比較してＬＣ１ｓｑｓｆ細胞はＳＯＳＴタンパク質の同様のレベルを発現したが（図２）、これは原発腫瘍モデルというよりも細胞株であり、効果の欠如は発生経路について以前報告されたようにプラスチック上での増殖に続く経路依存性における変化を反映する可能性があることは注目に値する（例えば、Yauchら、2008,Nature,455,406を参照されたい）。
【０１５８】
さらなる研究において抗体１、２、３および４をＨＬＵＸ１７２６モデルにおいて評価した。簡潔には、１００％マトリゲル１００μｌ中のＨＬＵＸ１７２６腫瘍スラリーをメスヌードマウスに皮下（ｓ．ｃ．）で移植した。腫瘍が１００〜２００ｍｍ３に達した時点で、ＨＬＵＸ１７２６腫瘍を保持しているマウス（各群あたりｎ＝６）をビヒクルＩｇＧまたは抗体１、２、３もしくは４で処置した。しかし、抗体２、３および４の凝集のために、全ての抗体は以前の研究と同じｉ．ｖ．ではなく１００ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．ｑｗで投与する必要があった。腫瘍増殖は１週間に２回デジタルノギスを用いて記録した。これらの条件下で抗体１での処置は６４％のＴ／Ｃをもたらし、Ｔ／Ｃ＞９０％が抗体２、３または４で観察された。
【図１】
2014515759.tif 000006
【図２】
2014515759.tif 000007
【図３Ａ】
2014515759.tif 000008
【図３Ｂ】
2014515759.tif 000009
【図４】
2014515759.tif 000010
【配列表】
2014515759000001.app
【国際調査報告】
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