(57)【要約】  本発明はインスリン分泌ペプチド結合体を含む肥満関連疾患治療用組成物に係り、より詳しくはインスリン分泌ペプチドを非ペプチド性リンカーを通じてキャリア物質と相互に共有結合させてなる結合体を含む肥満関連疾患治療用組成物、及びこれを用いて肥満関連疾患を治療する方法に関する。特に、本発明による肥満関連疾患治療用組成物は、飲食物摂取抑制効力及びその持続性を画期的に向上させて体重及び体脂肪を減少させる効果が卓越して肥満関連疾患を治療するのに非常に効果的である。
2011505355.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インスリン分泌ペプチド及び兔疫グロブリンＦｃ領域がＳＭＣＣ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ４−（Ｎ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏ−ｍｅｔｈｙｌ）ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）、ＳＦＢ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ４−ｆｏｒｍｙｌｂｅｎｚｏａｔｅ）、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルピロリドン、エチレングリコールとプロピレングリコールの共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、ポリサッカリド、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、ＰＬＡ（ポリ乳酸、ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ）及びＰＬＧＡ（ポリ乳酸−グリコール酸、ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ−ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ）などの生分解性高分子、脂質重合体、キチン類、ヒアルロン酸及びこれらの組合せよりなる群から選ばれる非ペプチド性リンカーを通じて連結されてなることを特徴とする、インスリン分泌ペプチド結合体を含む肥満関連疾患治療用組成物。
【請求項２】
前記インスリン分泌ペプチドは、ＧＬＰ−１、エキセンジン−３、エキセンジン−４またはこれらのアゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ）、誘導体（ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）、断片（ｆｒａｇｍｅｎｔ）、変異体（ｖａｒｉａｎｔ）及びこれらの組合せよりなる群から選択されるものであることを特徴とする、請求項１に記載の肥満関連疾患治療用組成物。
【請求項３】
前記誘導体は、天然型インスリン分泌ペプチドのＮ−末端アミン基の置換（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、欠損（ｄｅｌｅｔｉｏｎ）、及び変性（ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）から選択されたいずれか１方法によって製造され、インスリン分泌ペプチド、これらの断片及びこれらの変異体よりなる群から選択されるものであることを特徴とする、請求項２に記載の肥満関連疾患治療用組成物。
【請求項４】
前記誘導体はエキセンジン−４の誘導体であり、エキセンジン−４のＮ−末端アミン基が除去されたエキセンジン−４誘導体、エキセンジン−４のＮ−末端アミン基がヒドロキシル基で置換されたエキセンジン−４誘導体、エキセンジン−４のＮ−末端アミン基がジメチル基で変性されたエキセンジン−４誘導体、エキセンジン−４の一番目アミノ酸（ヒスチジン）のアルファ炭素を除去（ｄｅｌｅｔｉｏｎ）したエキセンジン−４誘導体、エキセンジン−４の１２番目アミノ酸（ｌｙｓｉｎｅ）がセリンで置換されたエキセンジン−４誘導体、及びエキセンジン−４の１２番目アミノ酸（ｌｙｓｉｎｅ）がアルギニンで置換されたエキセンジン−４誘導体よりなる群から選ばれるものであることを特徴とする、請求項３に記載の肥満関連疾患治療用組成物。
【請求項５】
下記化学式１のインスリン分泌ペプチド結合体を含むことを特徴とする、肥満関連疾患治療用組成物：
Ｒ1−Ｘ−Ｒ2−Ｌ−Ｆ・・・＜化学式１＞
ここで、Ｒ1はデス−アミノ−ヒスチジル、ジメチル−ヒスチジル、ベータ−ヒドロキシイミダゾプロピオニル、４−イミダゾアセチル及びベータ−カルボキシイミダゾプロピオニルよりなる群から選ばれ、
Ｒ2は−ＮＨ2、−ＯＨ及び−Ｌｙｓよりなる群から選ばれ、
ＸはＧｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｙ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｚ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｙ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｚ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ及びＳｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｙ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｚ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒよりなる群から選ばれ、
ＹはＬｙｓ、Ｓｅｒ及びＡｒｇよりなる群から選ばれ、
ＺはＬｙｓ、Ｓｅｒ及びＡｒｇよりなる群から選ばれ、
Ｌは非ペプチドリンカーであり、
Ｆは兔疫グロブリンＦｃである。
【請求項６】
前記Ｌは、ＳＭＣＣ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ４−（Ｎ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏ−ｍｅｔｈｙｌ）ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）、ＳＦＢ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ４−ｆｏｒｍｙｌｂｅｎｚｏａｔｅ）、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルピロリドン、エチレングリコールとプロピレングリコールの共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、ポリサッカリド、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、ＰＬＡ（ポリ乳酸、ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ）及びＰＬＧＡ（ポリ乳酸−グリコール酸、ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ−ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ）のような生分解性高分子、脂質重合体、キチン類、ヒアルロン酸及びこれらの組合せよりなる群から選ばれる非ペプチド性リンカーであることを特徴とする、請求項５に記載の肥満関連疾患治療用組成物。
【請求項７】
前記Ｌはポリエチルレングリコールであることを特徴とする、請求項６に記載の肥満関連疾患治療用組成物。
【請求項８】
前記Ｒ1は、４−イミダゾアセチル、ＹはＬｙｓまたはＳｅｒ、ＺはＬｙｓ、Ｒ2は−ＮＨ2であることを特徴とする、請求項５に記載の肥満関連疾患治療用組成物。
【請求項９】
前記肥満関連疾患は、肥満、脂質異常症、インスリン耐性症侯群、肥満関連胃食道逆流性疾患、脂肪肝炎、心血管疾患及び代謝症侯群よりなる群から選ばれる疾患であることを特徴とする、請求項１に記載の肥満関連疾患治療用組成物。
【請求項１０】
インスリン分泌ペプチド及び兔疫グロブリンＦｃ領域がＳＭＣＣ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ４−（Ｎ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏ−ｍｅｔｈｙｌ）ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）、ＳＦＢ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ４−ｆｏｒｍｙｌｂｅｎｚｏａｔｅ）、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルピロリドン、エチレングリコールとプロピレングリコールの共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、ポリサッカリド、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、ＰＬＡ（ポリ乳酸、ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃａｃｉｄ）及びＰＬＧＡ（ポリ乳酸−グリコール酸、ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ−ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ）のような生分解性高分子、脂質重合体、キチン類、ヒアルロン酸及びこれらの組合せよりなる群から選ばれる非ペプチド性リンカーを通じて連結されたことを特徴とする、インスリン分泌ペプチド結合体を含む飲食物摂取抑制用組成物。
【請求項１１】
前記インスリン分泌ペプチドは、ＧＬＰ−１、エキセンジン−３、エキセンジン−４またはこれらのアゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ）、誘導体（ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）、断片（ｆｒａｇｍｅｎｔ）、変異体（ｖａｒｉａｎｔ）及びこれらの組合せよりなる群から選択されるものであることを特徴とする、請求項１０に記載の飲食物摂取抑制用組成物。
【請求項１２】
前記誘導体は、天然型インスリン分泌ペプチドのＮ−末端アミン基の置換（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、欠損（ｄｅｌｅｔｉｏｎ）、及び修飾（ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）から選択されたいずれか一方法によって製造され、インスリン分泌ペプチド、これらの断片及びこれらの変異体よりなる群から選択されるものであることを特徴とする、請求項１１に記載の飲食物摂取抑制用組成物。
【請求項１３】
前記誘導体はエキセンジン−４の誘導体であり、エキセンジン−４のＮ−末端アミン基が除去されたエキセンジン−４誘導体、エキセンジン−４のＮ−末端アミン基がヒドロキシル基で置換されたエキセンジン−４誘導体、エキセンジン−４のＮ−末端アミン基がジメチル基で変性されたエキセンジン−４誘導体、エキセンジン−４の一番目アミノ酸（ヒスチジン）のアルファ炭素を除去（ｄｅｌｅｔｉｏｎ）したエキセンジン−４誘導体、エキセンジン−４の１２番目アミノ酸（ｌｙｓｉｎｅ）がセリンで置換されたエキセンジン−４誘導体、及びエキセンジン−４の１２番目アミノ酸（ｌｙｓｉｎｅ）がアルギニンで置換されたエキセンジン−４誘導体よりなる群から選ばれるものであることを特徴とする、請求項１２に記載の飲食物摂取抑制用組成物。
【請求項１４】
下記化学式１のインスリン分泌ペプチド結合体を含むことを特徴とする、飲食物摂取抑制用組成物：
Ｒ1−Ｘ−Ｒ2−Ｌ−Ｆ・・・＜化学式１＞
ここで、Ｒ1、Ｘ、Ｒ2、Ｌ及びＦは請求項５での定義と同一である。
【請求項１５】
インスリン分泌ペプチド及び兔疫グロブリンＦｃ領域がＳＭＣＣ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ４−（Ｎ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏ−ｍｅｔｈｙｌ）ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）、ＳＦＢ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ４−ｆｏｒｍｙｌｂｅｎｚｏａｔｅ）、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルピロリドン、エチレングリコールとプロピレングリコールの共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、ポリサッカリド、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、ＰＬＡ（ポリ乳酸、ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ）及びＰＬＧＡ（ポリ乳酸−グリコール酸、ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ−ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ）のような生分解性高分子、脂質重合体、キチン類、ヒアルロン酸及びこれらの組合せよりなる群から選ばれる非ペプチド性リンカーを通じて連結されたことを特徴とする、インスリン分泌ペプチド結合体を含む体脂肪または血漿コレステロール減少用組成物。
【請求項１６】
前記インスリン分泌ペプチドは、ＧＬＰ−１、エキセンジン−３、エキセンジン−４またはこれらのアゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ）、誘導体（ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）、断片（ｆｒａｇｍｅｎｔ）、変異体（ｖａｒｉａｎｔ）及びこれらの組合せよりなる群から選択されるものであることを特徴とする、請求項１５に記載の体脂肪または血漿コレステロール減少用組成物。
【請求項１７】
前記誘導体は、天然型インスリン分泌ペプチドのＮ−末端アミン基の置換（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、欠損（ｄｅｌｅｔｉｏｎ）、及び変性（ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）から選択されたいずれか一方法によって製造され、インスリン分泌ペプチド、これらの断片及びこれらの変異体よりなる群から選択されるものであることを特徴とする、請求項１６に記載の体脂肪または血漿コレステロール減少用組成物。
【請求項１８】
前記誘導体はエキセンジン−４の誘導体であり、エキセンジン−４のＮ−末端アミン基が除去されたエキセンジン−４誘導体、エキセンジン−４のＮ−末端アミン基がヒドロキシル基で置換されたエキセンジン−４誘導体、エキセンジン−４のＮ−末端アミン基がジメチル基で変性されたエキセンジン−４誘導体、エキセンジン−４の一番目アミノ酸（ヒスチジン）のアルファ炭素を除去（ｄｅｌｅｔｉｏｎ）したエキセンジン−４誘導体、エキセンジン−４の１２番目アミノ酸（ｌｙｓｉｎｅ）がセリンで置換されたエキセンジン−４誘導体、及びエキセンジン−４の１２番目アミノ酸（ｌｙｓｉｎｅ）がアルギニンで置換されたエキセンジン−４誘導体よりなる群から選ばれるものであることを特徴とする、請求項１７に記載の体脂肪または血漿コレステロール減少用組成物。
【請求項１９】
下記化学式１のインスリン分泌ペプチド結合体を含むことを特徴とする、体脂肪または血漿コレステロール減少用組成物：
Ｒ1−Ｘ−Ｒ2−Ｌ−Ｆ・・・＜化学式１＞
ここで、Ｒ1、Ｘ、Ｒ2、Ｌ及びＦは請求項５での定義と同一である。
【請求項２０】
請求項１の組成物を、ＧＬＰ−１及びその誘導体、アミリン（ａｍｙｌｉｎｅ）、ＰＹＹ（ペプチドＹＹ）、レプチン（ｌｅｐｔｉｎ）、コレサイトカイニン（ＣＣＫ）、オキシントモジュリン（ｏｘｙｎｔｏｍｏｄｕｌｉｎ）、グレニンアンタゴニスト（ｇｈｒｅｌｉｎ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）、ＮＰＹアンタゴニスト、リモナバント（ｒｉｍｏｎａｂａｎｔ）、シブトラミン（ｓｉｂｕｔｒａｍｉｎｅ）、及びオリスタト（ｏｒｌｉｓｔａｔ）の食欲抑制活性、エネルギー代謝促進活性、脂肪分解抑制活性、胃内容排出遅延活性、タンパク質チロシンホスファターゼ（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ、ＰＴＰ）１ｂ抑制活性、及びＤＰＰＩＶ抑制活性を示す物質よりなる群から選ばれた物質と併用して肥満関連疾患を治療するために薬剤学的組成物。
【請求項２１】
請求項１〜９及び請求項２０のいずれか１項の組成物を使用して肥満関連疾患を治療する方法。
【請求項２２】
前記肥満関連疾患は、肥満、脂質異常症、インスリン耐性症侯群、肥満関連胃食道逆流性疾患、脂肪肝炎、心血管疾患及び代謝症侯群よりなる群から選ばれる疾患であることを特徴とする、請求項２１に記載の肥満関連疾患治療方法。
【請求項２３】
請求項１０〜１４のいずれか１項の組成物を使用して飲食物摂取を抑制する方法。
【請求項２４】
請求項１５〜１９のいずれか１項の組成物を使用して血漿コレステロールを減少させる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はインスリン分泌ペプチド結合体を含む肥満関連疾患治療用組成物に係り、より詳しくはインスリン分泌ペプチドを非ペプチド性リンカーを介してキャリア物質と相互に共有結合させてなる結合体を含む肥満関連疾患治療用組成物及びこれを用いて肥満関連疾患を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満はエネルギーバルランス調節機能の異常あるいは過栄養（ｈｙｐｅｒｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）によって脂肪組職が過多に蓄積して各種疾病の罹患率と死亡率を高める晩成疾患である。肥満及びこれに関連した疾病はアメリカ及び全世界的に共通的で非常に深刻な公衆保健問題であり、肥満患者はアメリカで去る７年間２２．９％から３０．６％に増加した。アメリカの疾病管理及び予防センター（Ｕ．Ｓ． ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）の支社である国際健康栄養調査（ＮＨＡＮＥＳ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ Ｓｕｒｖｅｙ）の１９９９年から２００２年までの報告書によると、アメリカ人２０歳以上の大人２９．８％が過体重、３０．４％は肥満、そして４．９％は深刻な肥満であると報告している（Ｈｅｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， ＪＡＭＡ ２００４；２９１：２８４７−５０）。このような現象はアメリカだけの問題ではなく徐々に食生活及び生活環境が西洋化している多くの国々で現れており、現在肥満人口は全世界的に２億５，０００万人に達し、来る２０２５年に至ると約３億人以上になると予測している。肥満は、肥満そのものが持つ問題点だけでなく、高血圧、脂質異常症及び心血関係疾患や糖尿のような疾病の原因として作用することができ、肥満患者の約８０％以上が前記のような疾病を一緒に持っており（Ｍａｎｔｚｏｒｏｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ ２０００；８５：４０００−２）、毎年３００，０００人程度が肥満によって死亡すると報告されている（Ａｌｌｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ＪＡＭＡ １９９９；２８２：１５３０−８）。体重１ｋｇの増加は心血管疾患危険度を３．１％、糖尿危険度を４．５〜９％増加させ、約１１％体重の減少は前記のような疾患による死亡率を２５％減少させると知られているので、肥満の効果的な治療方法が緊急に要求されている（Ａｒｂｅｅｎｙ ｅｔ ａｌ．， Ｏｂｅｓ Ｒｅｓ ２００４；１２：１１９１−６）。１８９３年、肥満を治療するために、ノルアドレナリンとアドレナリンの熱発生促進作用を利用した甲状腺ホルモン剤が使用されたことがあったが、これらの薬剤は脂肪組職を減らすのに効果を現すよりは除骨除脂肪量（ｌｅａｎ ｔｉｓｓｕｅ ｍａｓｓ）の消失を加速化して負の窒素バランス（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｂａｌａｎｃｅ）をもたらして心臓毒性などの副作用を引き起こし、現在甲状腺機能低下症がある場合にだけ制限して使用している。１９３０年代からは主に食欲抑制作用があるアンフェタミン（ａｍｐｈｅｔａｍｉｎｅ）が使用されたが、薬物依存性があるため、長期間にわたる投与が許されなく、薬物依存性がないフェンテルミン（ｐｈｅｎｔｅｒｍｉｎｅ）、ジエチルプロピオン（ｄｉｅｔｈｙｌｐｒｏｐｉｏｎ）、フェンフルラミン（ｆｅｎｆｌｕｒａｍｉｎｅ）などが開発されて肥満患者に使用されたが、大部分の治療剤が心臓疾患、高血圧、不整脈、肺高血圧症、記憶力障害のような精神疾患を引き起こすため、使用が禁止されている。現在、肥満治療剤の開発戦略は中枢性アドレナリン受容体を興奮させるかセロトニン再吸収を抑制させる食欲抑制剤、ア���レナリン性ベータ３効能剤である熱発生促進剤、リパーゼ（Ｌｉｐａｓｅ）の活性を阻害する消化抑制剤、そしてレプチン（Ｌｅｐｔｉｎ）、ＰＹＹのようなホルモン調節剤である（Ｄｕｎｓｔａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ２００６；５：９１９−９３１）。このうち、リパーゼ阻害剤であるオリスタト（ｏｒｌｉｓｔａｔ）とセロトニン再吸収を抑制して食欲抑制効果を引き起こすシブトラミン（ｓｉｂｕｔｒａｍｉｎｅ）の２種の薬物だけがＦＤＡの承認を受けて処方されているが、脂肪便、頭痛及び血圧上昇などの副作用を引き起こすため、いまだ安全性と効能を同時に持っている薬物を開発するのが易しくないことが現実である。
【０００３】
ＧＬＰ−１は飲食物摂取に刺激されて小腸から分泌するホルモンで、一般的にインスリン生合成及び分泌を促進してグルカゴン分泌を抑制して血糖を調節する機能が知られており、さらにネズミに投与するとき、飲食物摂取抑制と体重減少効果があることが報告され（Ｍｅｅｒａｎ ｅｔ ａｌ．、 Ｅｎｄｏｒｉｎｏｌｏｇｙ １９９９；１４０：２４４−５０）、このような効果は正常状態と肥満状態で共に現れることが確認され、肥満治療剤としての可能性を示した。しかし、ＧＬＰ−１は血中に存在するタンパク質分解酵素中の一つであるジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＶ、ＤＰＰＩＶ）によって易しく分解されるため、その効力が非常に制限される欠点がある。一方、エキセンジン（Ｅｘｅｎｄｉｎ）はアメリカのアリゾナ州やメキシコで発見されるアメリカドクトカゲ（Ｇｉｌａ−ｍｏｎｓｔｅｒ）の唾で発見されるペプチドであって、ＧＬＰ−１のような作用を奏するがＤＰＰＩＶによって分解されない特徴があるので糖尿及び肥満治療剤としての可能性を示し、現在一日２回注射する糖尿治療剤として常用化された。アメリカ特許第６９５６０２６号、同第６９８９３６６号及び同第７１１５５６９号には、エキセンジン及びエキセンジン誘導体を利用した飲食物摂取抑制方法に関する内容が開示されている。しかし、エキセンジンによる飲食物摂取抑制効力はどのくらい立証されたが、その持続性が投与後最大６時間程度しか維持されないことが分かり、肥満のような晩成疾患の場合、一日に多数回の注射で投与することは患者に大きな負担になるに違いない。また、前記特許に開示されたエキセンジン誘導体は、誘導体別に効力、容量依存性（ｄｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｙ）、薬効持続性（ｄｕｒａｔｉｏｎ）などが互いに異なることが分かり、天然型エキセンジンより優越な飲食物摂取抑制効力を示す誘導体はない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
したがって、本発明者はインスリン分泌ペプチドの血中半減期の増加及び生体内活性の維持を同時に極大化することができる方法で兔疫グロブリンＦｃ領域、非ペプチド性リンカー及びインスリン分泌ペプチドを共有結合で相互に連結させる製造方法を使用して、結合体の飲食物摂取抑制効力及びその持続性を画期的に増加させることを確認し、特にインスリン分泌ペプチドの中でエキセンジン−４及びエキセンジン−４のＮ−末端のアミン基を除去したデス−アミノ−ヒスチジルエキセンジン−４、エキセンジン−４のＮ−末端アミン基をヒドロキシル基で置換したベータ−ヒドロキシ−イミダゾ−プロピオニルエキセンジン−４、エキセンジン−４のＮ−末端アミン基を二つのメチル基で修飾したジメチル−ヒスチジルエキセンジン−４、及びエキセンジン−４の一番目アミノ酸であるヒスチジンのアルファ炭素を除去したイミダゾ−アセチル−エキセンジン−４などの結合体の飲食物摂取抑制効力及び持続性が画期的に増加することを確認して本発明を完成した。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の目的は、インスリン分泌ペプチドを非ペプチド性リンカーを介してキャリア物質と相互に共有結合させてなる結合体(Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ)を含む、肥満関連疾患治療用、飲食物摂取抑制用及び体脂肪減少用組成物を提供することである。
【０００６】
本発明の他の目的は、前記結合体を含む組成物を利用して肥満関連疾患を治療し、飲食物摂取を抑制するとともに体脂肪を減少させる方法を提供することである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明が提供するインスリン分泌ペプチド結合体を含む組成物は、天然型インスリン分泌ペプチドに比べて優れた飲食物摂取抑制及びこれによる体脂肪減少及び肥満関連疾患治療活性を現すので、肥満関連疾患の治療効果を極大化させるのに有用である。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１はｏｂ／ｏｂマウスにおいて体重減少効力を示すグラフである。
【図２】図２はｏｂ／ｏｂマウスにおいて体脂肪の変化を示すグラフである。
【図３】図３はＤＩＯ動物モデルにおいて体重減少効力を示すグラフである。
【図４】図４はＺＤＦラットにおいて脂肪減少効力を示すグラフである。
【図５】図５はＺＤＦレッドにおいて飲食物摂取減少効力を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
一面によれば、本発明は、インスリン分泌ペプチドを非ペプチド性リンカーを介してキャリア物質と相互に共有結合させてなる結合体を含む肥満関連疾患治療用、飲食物摂取抑制用または体脂肪減少用組成物に関する。
【００１０】
本発明で使用される用語"肥満関連疾患"は食べ過ぎ、飲みすぎ及び過食症、高血圧、糖尿、増加した血漿インスリン濃度、インスリン耐性、脂質異常症、代謝症侯群、インスリン耐性症侯群、肥満関胃食道逆流、動脈硬化症、高コレステロール血症、高尿酸血症、腰痛、心臓肥大及び左心室肥大、リポジストロフィ、非アルコール性脂肪性肝炎、心血管疾患、多嚢胞性卵巣症候群よりなる群から選ばれることができ、このような肥満関連疾患の治療対象は体重を減らそうとする欲求がある対象も含まれる。
【００１１】
本発明で使用される用語"インスリン分泌ペプチド"はインスリン分泌機能を保有したペプチドを意味し、このようなペプチドは膵膓ベータ細胞のインスリンの合成及び発現を刺激する。このようなペプチドはインスリンの前駆物質（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）、アゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ）、誘導体（ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）、断片（ｆｒａｇｍｅｎｔ）及び変異体（ｖａｒｉａｎｔ）などを含み、好ましくはＧＬＰ（ｇｌｕｃａｇｏｎ ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ）−１、エキセンジン−３、及びエキセンジン−４、またはこれらの誘導体などである。
【００１２】
本発明のインスリン分泌ペプチド誘導体は、インスリン分泌ペプチドのＮ−末端残基のヒスチジン残基の化学的変性誘導体あるいはＮ−末端ヒスチジン残基のアミノ基を化学的に変化させた誘導体である。また、ここで、エキセンジン−４またはエキセンジン−３の誘導体は天然型のエキセンジン−４またはエキセンジン−３の一つ以上のアミノ酸が置換、欠失及び／または付加されたものであるか、一つ以上のアミノ酸残基が、例えばアルキル化、アシル化、エステル化形成またはアミド形成などによって化学的に変形されたペプチドを指称し、天然型の活性を持ったものを言う。このようなエキセンジン−３またはエキセンジン−４の誘導体の例は、これらに制限されるものではないが、エキセンジン−４のＣ−末端を一部欠損するか非天然型アミノ酸であるノルロイシン（Ｎｏｒｌｅｕｃｉｎｅ）で置換したエキセンジン変異体に関するＷＯ９７／４６５８４、ペンチルグリシン（ｐｅｎｔｙｌｇｌｙｃｉｎｅ）、ホモプロリン（ｈｏｍｏｐｒｏｌｉｎｅ）、ｔ−ブチルグリシン（ｔｅｒｔｂｕｔｙｌｇｌｙｃｉｎｅ）のような非天然型アミノ酸を含むエキセンジンのアミノ酸を置換した変異体に関するＷＯ９９／０７４０４、エキセンジン４のＣ−末端アミノ酸残基の一部を切断して天然型より短いアミノ酸配列で構成されたエキセンジン変異体と他のアミノ酸で置換したエキセンジン変異体に関するＵＳ２００８／０１１９３９０などに開示されており、これら文献は参考文献として本発明の範囲に組み込まれる。より好ましくは、前記インスリン分泌ペプチドはエキセンジン−４またはこれらの誘導体である。
【００１３】
具体的に、本発明のインスリン分泌ペプチド誘導体は、インスリン分泌ペプチドのＮ−末端アミノ基が除去された誘導体（Ｄｅｓａｍｉｎｏ−ｈｉｓｔｉｄｙｌ−誘導体）、アミノ基をヒドロキシル基で置換した誘導体（ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｉｍｉｄａｚｏｐｒｏｐｉｏｎｙｌ−誘導体）、アミノ基に２個のメチル（ｍｅｔｈｙｌ）残基で変性された誘導体（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−ｈｉｓｔｉｄｙｌ−誘導体）、Ｎ−末端のアミノ基をカルボキシル基で置換した誘導体（ｂｅｔａ−ｃａｒｂｏｘｙｉｍｉｄａｚｏｐｒｏｐｉｏｎｙｌ−誘導体）またはＮ−末端ヒスチジン残基のアルファカーボンを削除してイミダゾアセチル（ｉｍｉｄａｚｏａｃｅｔｙｌ）基のみを残してアミノ基の正電荷（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｈａｒｇｅ）を除去した誘導体（Ｉｍｉｄａｚｏａｃｅｔｙｌ−誘導体）などが含まれることができ、さらにその他の形態のＮ−末端アミノ基変異誘導体が本発明の範疇に属する。
【００１４】
本発明において、インスリン分泌ペプチド誘導体はより好ましくはエキセンジン−４のＮ−末端アミノ基またはアミノ酸残基を化学的に変異させた誘導体であり、さらに好ましくはエキセンジン−４のアミノ末端の一番目アミノ酸であるヒスチジン残基のアルファカーボンに存在するアルファアミノ基またはアルファカーボンを置換または除去したエキセンジン−４誘導体であり、さらに好ましくは下記の＜ａ＞〜＜ｅ＞に示すような、Ｎ−末端アミノ基を除去したデスアミノ−ヒスチジル−エキセンジン−４（Ｄｅｓａｍｉｎｏ−ｈｉｓｔｉｄｙｌ−ｅｘｅｎｄｉｎ−４、ＤＡ−エキセンジン−４）、ヒドロキシル基またはカルボキシル基で置換したベータ−ヒドロキシイミダゾプロピオニル−エキセンジン−４（ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｉｍｉｄａｚｏｐｒｏｐｉｏｎｙｌ−ｅｘｅｎｄｉｎ−４、ＨＹ−エキセンジン−４）、ベータ−カルボキシイミダゾプロピオニル−エキセンジン−４（ｂｅｔａ−ｃａｒｂｏｘｙｉｍｉｄａｚｏｐｒｏｐｉｏｎｙｌ−ｅｘｅｎｄｉｎ−４、ＣＸ−エキセンジン−４）、２個のメチル残基で変性したジメチル−ヒスチジル−エキセンジン−４（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−ｈｉｓｔｉｄｙｌ−ｅｘｅｎｄｉｎ−４、ＤＭ−エキセンジン−４）、またはアミノ末端ヒスチジン残基のアルファカーボンを除去したイミダゾアセチル−エキセンジン−４（Ｉｍｉｄａｚｏａｃｅｔｙｌ−ｅｘｅｎｄｉｎ−４、ＣＡ−エキセンジン−４）である。
【００１５】
【化１】
2011505355.tif 000003
【００１６】
本発明に使用可能なキャリア物質は非ペプチド性リンカーによってインスリン分泌ペプチドに結合されて前記ペプチドの血中持続性を増大させる物質で、兔疫グロブリンＦｃ領域、血清アルブミン（Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ）、トランスフェリン（ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ）、コラーゲン及びコラーゲン断片、フィブロネクチン（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）及びその断片、そしてＰＥＧよりなる群から選ばれることができ、好ましくは兔疫グロブリンＦｃ領域である。本発明において、"兔疫グロブリンＦｃ領域"は、兔疫グロブリンの重鎖と軽鎖可変領域、重鎖不変領域１（ＣH１）と軽鎖不変領域（ＣL１）を除いた、重鎖不変領域２（ＣH２）及び重鎖不変領域３（ＣH３）部分を意味し、重鎖不変領域にヒンジ（ｈｉｎｇｅ）部分を含むこともある。
【００１７】
また、本発明の兔疫グロブリンＦｃ領域は天然型と実質的に同等以上の効果を持つ限り、免疫グロブリンンの重鎖と軽鎖可変領域のみを除き、一部または全体重鎖不変領域１（ＣH１）及び／または軽鎖不変領域１（ＣL１）を含む拡張したＦｃ領域であることができる。また、ＣH２及び／またはＣH３にあたるかなり長い一部アミノ酸配列が除去された領域であり得る。すなわち、本発明の兔疫グロブリンＦｃ領域は、１）ＣH１ドメイン、ＣH２ドメイン、ＣH３ドメイン及びＣH４ドメイン、２）ＣH１ドメイン及びＣH２ドメイン、３）ＣH１ドメイン及びＣH３ドメイン、４）ＣH２ドメイン及びＣH３ドメイン、５）１個または２個の以上のドメインと兔疫グロブリンヒンジ領域（またはヒンジ領域の一部）との組合せ、６）重鎖不変領域の各ドメインと軽鎖不変領域の二量体であることができる。また、本発明の兔疫グロブリンＦｃ領域は天然型アミノ酸配列だけはなくその配列誘導体（ｍｕｔａｎｔ）を含む。アミノ酸配列誘導体とは、天然アミノ酸配列の一つ以上のアミノ酸残基が結実、挿入、非保存的または保存的置換またはこれらの組合せによって異なる配列を持つことを意味する。例えば、ＩｇＧ Ｆｃの場合、結合に重要であると知られた２１４〜２３８、２９７〜２９９、３１８〜３２２または３２７〜３３１番のアミノ酸残基が変形のために適当な部位として利用できる。また、二硫化結合を形成することができる部位が除去されるか、天然型ＦｃにおいてＮ−末端のいくつかのアミノ酸が除去されるかあるいは天然型ＦｃのＮ−末端にメチオニン残基が付加されることもできるなど、多様な種類の誘導体が可能である。また、エフェクター機能を無くすために、補体結合部位、たとえばＣ１ｑ結合部位が除去されることもでき、ＡＤＣＣ（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）部位が除去されることもできる。このような兔疫グロブリンＦｃ領域の配列誘導体を製造する技術は国際特許公開第ＷＯ９７／３４６３１号、国際特許公開第９６／３２４７８号などに開示されている。分子の活性を全体的に変更させないタンパク質及びペプチドにおけるアミノ酸交換は技術的に知られている（Ｈ． Ｎｅｕｒａｔｈ， Ｒ． Ｌ． Ｈｉｌｌ， Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， ＮｅｗＹｏｒｋ， １９７９）。最も通常的に起こる交換は、アミノ酸残基Ａｌａ／Ｓｅｒ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ｔｈｙ／Ｐｈｅ、Ａｌａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｌｅｕ／Ｖａｌ、Ａｌａ／Ｇｌｕ及びＡｓｐ／Ｇｌｙ間の交換である。場合によっては、リン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）、硫化（ｓｕｌｆａｔｉｏｎ）、アクリル化（ａｃｒｙｌａｔｉｏｎ）、グリコシル化（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）、メチル化（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）、ファルネシル化（ｆａｒｎｅｓｙｌａｔｉｏｎ）、アセチル化（ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ）及びアミド化（ａｍｉｄａｔｉｏｎ）などで修飾（ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）されることもできる。前述したＦｃ誘導体は本発明のＦｃ領域と同一の生���学的活性を示すが、Ｆｃ領域の熱、ｐＨなどに対する構造的安全性を増大させた誘導体である。また、このようなＦｃ領域は、人間だけでなく、牛、山羊、豚、マウス、ウサギ、ハムスター、ラット及びモルモットなどの動物の生体内から分離した天然型から得られることもでき、形質転換された動物細胞または微生物から得られた組み換え型またはその誘導体であることもある。ここで、天然型から獲得する方法は、全体兔疫グロブリンを人間または動物の生体から分離した後、タンパク質分解酵素を処理して得ることであることができる。パパインを処理する場合にはＦａｂ及びＦｃに切断し、ペプシンを処理する場合にはｐＦ'ｃ及びＦ（ａｂ）2に切断する。これをサイズ排除クロマトグラフィー（ｓｉｚｅ−ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）などによってＦｃまたはｐＦ'ｃを分離することができる。好ましくは、人間来由のＦｃ領域を微生物から収得した組み換え型兔疫グロブリンＦｃ領域である。また、兔疫グロブリンＦｃ領域は天然型糖鎖、天然型に比べて増加した糖鎖、天然型に比べて減少した糖鎖または糖鎖が除去された形態であることができる。このような兔疫グロブリンＦｃ糖鎖の増減または除去には、化学的方法、酵素学的方法及び微生物を利用した遺伝工学的方法のような通常の方法が利用できる。ここで、Ｆｃから糖鎖が除去された兔疫グロブリンＦｃ領域は補体（ｃ１ｑ）の結合力が著しく低下し、抗体−依存性細胞毒性または補体−依存性細胞毒性が減少または除去されるので、生体内で不必要な免疫反応を誘発しない。この点から、薬物のキャリアとしての元の目的と一層符合する形態は糖鎖が除去されるか非糖鎖化された兔疫グロブリンＦｃ領域であるといえる。本発明において、糖鎖の除去（Ｄｅｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）は酵素で糖を除去したＦｃ領域をいい、非糖鎖化（Ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）は原核生物、好ましくは大膓菌によって生産して糖鎖化されなかったＦｃ領域を意味する。一方、兔疫グロブリンＦｃ領域は人間または牛、山羊、豚、マウス、ウサギ、ハムスター、ラット及びモルモットなどの動物から由来することができ、好ましくは人間から由来する。また、兔疫グロブリンＦｃ領域はＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭから来由するかあるいはこれらの組合せ（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）またはこれらの混成（ｈｙｂｒｉｄ）によるＦｃ領域であることができる。好ましくは、人間血液に最も豊かなＩｇＧまたはＩｇＭから来由し、最も好ましくはリガンド結合タンパク質の半減期を向上させるもので、公知のＩｇＧから来由する。一方、本発明において、組合せ（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）とは、二量体または単量体を形成するとき、同一起源単鎖兔疫グロブリンＦｃ領域を暗号化するポリペプチドが他の起源の単鎖ポリペプチドと結合を形成することを意味する。すなわち、ＩｇＧ Ｆｃ、ＩｇＡ Ｆｃ、ＩｇＭ Ｆｃ、ＩｇＤ Ｆｃ及びＩｇＥ Ｆｃ断片よりなる群から選ばれる２個以上の断片から二量体または単量体の製造が可能である。本発明において、"ハイブリッド（ｈｙｂｒｉｄ）"とは、単鎖の兔疫グロブリンＦｃ領域内に２個以上の相異なる起源の兔疫グロブリンＦｃ断片にあたる配列が存在することを意味する用語��ある。本発明の場合、多くの形態のハイブリッドが可能である。すなわち、ＩｇＧ Ｆｃ、ＩｇＭ Ｆｃ、ＩｇＡ Ｆｃ、ＩｇＥ Ｆｃ及びＩｇＤ ＦｃのＣH１、ＣH２、ＣH３及びＣH４よりなる群から１個ないし４個のドメインでなるドメインのハイブリッドが可能であり、ヒンジを含むことができる。一方、ＩｇＧもＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４のサブクラスに分けることができ、本発明ではこれらの組合せまたはこれらの混成化も可能である。好ましくは、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４サブクラスであり、最も好ましくは補体依存的毒性（ＣＤＣ、Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）のようなエフェクター機能（ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ）がほとんどないＩｇＧ４のＦｃ領域である。すなわち、最も好ましい本発明に使用される薬物のキャリア用兔疫グロブリンＦｃ領域は、人間ＩｇＧ４来由の非糖鎖化されたＦｃ領域である。人間来由のＦｃ領域は人間生体で抗原として作用してこれに対する新しい抗体を生成するなどの好ましくない免疫反応を引き起こすことができる非人間来由のＦｃ領域に比べて好ましい。
【００１８】
本発明の組成物に含まれる結合体においては、インスリン分泌ペプチドがキャリア物質と非ペプチド性リンカーを介して連結される。用語"非ペプチド性リンカー"は繰り返し単位のない単一化合物であるか繰り返し単位が２個以上結合された生体適合性重合体を意味する。本発明で使用される非ペプチドリンカーはその化学的構造は重要ではなく、インスリン分泌ペプチドとキャリア物質を相互に共有結合で連結する連結体としての機能を一次に行うもので、よって両末端にペプチド／キャリア物質と結合することができる反応基があって二つのペプチド／キャリア物質を共有結合させることができる反応基が存在する化合物であることを特徴とし、両末端反応基は同一であるか異なることができる。前記非ペプチド性リンカーの両末端反応基は互いに同一であるか違うことができる。例えば、一方の末端にはマレイミド基を、他方の末端にはアルデヒド基、プロピオンアルデヒド基、またはブチルアルデヒド基を持つことができる。前記非ペプチド性リンカーの両末端反応基は、反応アルデヒド基、プロピオンアルデヒド基、ブチルアルデヒド基、マレイミド（ｍａｌｅｉｍｉｄｅ）基及びスクシンイミド（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）誘導体よりなる群から選ばれることが好ましい。ここで、スクシンイミド誘導体としては、スクシンイミジルプロピオネート、ヒドロキシスクシンイミジル、スクシンイミジルカルボキシメチルまたはスクシンイミジルカーボネートが利用できる。特に、前記非ペプチド性リンカーは両末端に反応アルデヒド基の反応基を持つ場合、非特異的反応を最小化し、非ペプチド性重合体の両末端で生理活性ポリペプチド及び兔疫グロブリンとそれぞれ結合するのに効果的である。アルデヒド結合による還元性アルキル化によって生成された最終産物はアミド結合で連結されたものより遥かに安定的である。アルデヒド反応基は低ｐＨでＮ−末端に選択的に反応し、高ｐＨ、例えばｐＨ９．０の条件ではリシン残基と共有結合を形成することができる。両末端にヒドロキシ反応基を持つポリエチレングリコールを非ペプチド性重合体として用いる場合は、公知の化学反応によって前記ヒドロキシル基を前記多様な反応基に活性化するか、商業的に入手可能な変形した反応基を持つポリエチレングリコールを利用して本発明のインスリン分泌ペプチド結合体を製造することができる。本発明に使用可能な非ペプチド性重合体はこれに制限されるものではないが、例えばペプチドのアミン（ａｍｉｎｅ）基とスルフィドリル（ｓｕｌｆｙｄｒｙｌ）基に共有結合可能なＳＭＣＣ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ４−（Ｎ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏ−ｍｅｔｈｙｌ）ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）、ＳＦＢ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ４−ｆｏｒｍｙｌｂｅｎｚｏａｔｅ）などが使用可能であり、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルピロリドン、エチレングリコールとプロピレングリコールの共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、ポリサッカリド、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、ＰＬＡ（ポリ乳酸、ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ）及びＰＬＧＡ（ポリ乳酸−グリコール酸、ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ−ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ）のような生分解性高分子、脂質重合体、キチン類、ヒアルロン酸及びこれらの組合せでなることができ、好ましくはポリエチルレングリコールである。当該分野にもう知られたこれらの誘導体及び当該分野の技術水準で容易に製造することができる誘導体も本発明の範囲に属する。
【００１９】
このように、インスリン分泌ペプチドとキャリア物質が非ペプチド性リンカーによって相互に共有結合されて製造される本発明による肥満関連疾患治療用組成物に含まれる結合体の好適な例は国際公開番号第ＷＯ０８／０８２２７４号に開示されており、これは下記化学式１のように表現される。
【００２０】
＜化学式１＞
Ｒ1−Ｘ−Ｒ2−Ｌ−Ｆ
ここで、Ｒ1はデス−アミノ−ヒスチジル、ジメチル−ヒスチジル、ベータ−ヒドロキシイミダゾプロピオニル、４−イミダゾアセチル及びベータ−カルボキシイミダゾプロピオニルよりなる群から選ばれ、
Ｒ2は−ＮＨ2、−ＯＨ及び−Ｌｙｓよりなる群から選ばれ、
ＸはＧｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｙ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｚ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｙ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｚ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、及びＳｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｙ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｚ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒよりなる群から選ばれ、
ＹはＬｙｓ、Ｓｅｒ及びＡｒｇよりなる群から選ばれ、
ＺはＬｙｓ、Ｓｅｒ及びＡｒｇよりなる群から選ばれ、
Ｌは非ペプチドリンカーであり、
Ｆは兔疫グロブリンＦｃである。
【００２１】
また、本発明の結合体を含む薬剤学的組成物は薬剤学的に許容可能な担体を含むことができる。薬剤学的に許容される担体は、経口投与の場合、結合剤、滑剤、分解剤、賦形剤、可溶化剤、分散剤、安定化剤、懸濁化剤、色素及び香料などを使用することができ、注射剤の場合は、緩衝剤、保存剤、鎮痛剤、可溶化剤、等張剤及び安定化剤などを混合して使用することができ、局所投与用の場合は、基剤、賦形剤、滑剤及び保存剤などを使用することができる。本発明の薬剤学的組成物の剤形は前述したような薬剤学的に許容される担体と混合して多様に製造できる。例えば、経口投与の場合には、錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル剤、サスペンション、シロップ及びウェハーなどの形態に製造することができ、注射剤の場合は、単位投薬アンプルまたは多数回投薬形態に製造することができる。その外に、溶液、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル及び持続性錠剤などに剤形化可能である。一方、製剤処方に適した担体、賦形剤及び希釈剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリトリトール、マンニトール、澱粉、アカシアゴム、アルギネート、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウムまたは鉱物油などが使用できる。また、充填剤、抗凝固剤、滑剤、湿潤剤、香料及び防腐剤などをさらに含むことができる。また、本発明の薬剤学的組成物の投与量は、治療すべき疾患、投与経路、患者の年齢、性別及び体重及び疾患の重症度などの多くの関連因子によって決定される。本発明の組成物は生体内持続性及び力価に優れるので、本発明の組成物を含む薬剤学的製剤の投与回数及び頻度を著しく減少させることができる。
【００２２】
本発明の組成物に含まれるインスリン分泌ペプチド結合体は、天然型インスリン分泌ペプチドよりずっと少ない容量で持続的な飲食物摂取抑制効果を奏し、このような食欲抑制は肥満及び急性冠症侯群のような関連疾患の治療に有用に使用できる。また、このような飲食物摂取抑制（すなわち、食欲抑制）効果によってコレステロールあるいは脂肪細胞のような体脂肪を減少させるのに有用に使用できる。一般に、肥満及び関連疾患治療の際、体脂肪の減少は必要であるが、除骨除脂肪の減少、つまりタンパク質の減少は好ましくない。除骨除脂肪量は身の筋肉、生命維持器官、骨、連結組職及び他の非脂肪組職で構成されているため、除骨除脂肪量の減少は人間の健康に有害であると信じられた。したがって、本発明による組成物の食欲抑制によって体重が減少するとき、除骨除脂肪でない脂肪細胞のような体脂肪の減少は肥満関連疾患の治療の際に重要な要素として作用することができる。
【００２３】
ＧＬＰ−１、アミリン（ａｍｙｌｉｎ）、ＣＣＫ及びエキセンジンなどのインスリン分泌ペプチドは、食欲抑制作用時間が投与後１時間ないし６時間で、その効力時間が制限されているため、晩成疾患と知られた肥満及びその関連疾患を治療するためには非常に頻繁に繰り返し投与しなければならないが、本発明の組成物に含まれたインスリン分泌ペプチド結合体は少ない容量の投与でその持続時間を一週間以上維持して治療学的効能が極大化した。
【００２４】
さらに他の面によれば、本発明は前記組成物を利用して肥満関連疾患を治療する方法、飲食物摂取を抑制する方法及び体脂肪を減少させる方法に関する。具体的に、本発明による方法は、前記組成物を治療学的に許容可能な量で投与する段階を含むことができる。
【００２５】
本発明において、"投与"は、いずれかの適切な方法で患者に所定の物質を導入することを意味し、前記結合体が含まれた組成物の投与経路は薬物が目的組職に到逹することができる限り、一般的な経路を通じて投与できる。腹腔内投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経皮投与、経口投与、局所投与、鼻腔内投与、肺内投与及び直腸内投与などが含まれると思われるが、これに制限されない。しかし、経口投与の際、ペプチドは消化されるため、経口用組成物は活性薬剤をコートするか胃での分解から保護されるように剤形化することが好ましい。好ましくは、注射剤形で投与可能である。また、活性物質を標的細胞に移動させることができる任意の装置によって組成物を投与することができる。この際、前記組成物の治療学的に許容可能な量は前述した多様な要素によって決定可能である。
【００２６】
本発明のさらに他の面いよれば、本発明はインスリン分泌ペプチド結合体を単独であるいは一つ以上の抗肥満活性物質と併用して肥満関連疾患を治療することができる薬剤学的組成物を提供する。インスリン分泌ペプチド結合体と併用して本発明の肥満関連疾患治療用薬剤学的組成物を構成することができる物質は、ＧＬＰ−１及びその誘導体（Ｐａｔｒｉｃｉａ．， Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ２００７；１８：２４０−２４５）、アミリン（ａｍｙｌｉｎｅ）、ＰＹＹ（ペプチドＹＹ）（Ｌｙｎｎ ｅｔａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２００７；１７：１９１６−１９１９）、レプチン（ｌｅｐｔｉｎ）、コレサイトカイニン（ｃｈｏｌｅｃｙｔｏｋｉｎｉｎ、ＣＣＫ）、オキシントモジュリン（ｏｘｙｎｔｏｍｏｄｕｌｉｎ）、グレニンアンタゴニスト（ｇｈｒｅｌｉｎ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）、ＮＰＹアンタゴニスト（Ｅｌｅｎａ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ， Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ＆ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｄｉｓｅａｓｅ ２００８；１８：１５８−１６８）、Ｓａｒｉｋａ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅｓ ２００６；４０：３７５−４０１）、リモナバント（ｒｉｍｏｎａｂａｎｔ）、シブトラミン（ｓｉｂｕｔｒａｍｉｎｅ）、及びオリスタト（ｏｒｌｉｓｔａｔ）（Ａｌａｎ Ｄｏｖｅ．， Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２００１；１９：２５−２８）の食欲抑制活性、エネルギー代謝促進活性、脂肪分解抑制活性、胃内容排出遅延活性、タンパク質チロシンホスファターゼ（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ、ＰＴＰ）１ｂ抑制活性及びＤＰＰＩＶ抑制活性を示す物質を含むが、これに限定されない。
【実施例】
【００２７】
＜発明の様態＞
以下、下記の実施例によって本発明がより明らかに理解可能であろう。ただ、下記の実施例は本発明を例示するためのもので、本発明の範囲を限定するものではない。
【００２８】
［実施例１］インスリン分泌ペプチド結合体（ＣＡ−Ｅｘｅｎｄｉｎ）の製造
３．４ＫＰｒｏｐｉｏｎＡＬＤ（２）ＰＥＧ（プロピオンアルデヒド基を２個持っているＰＥＧ、ＩＤＢ Ｉｎｃ．，大韓民国）をイミダゾアセチルエキセンジン−４（Ｉｍｉｄａｚｏ−ａｃｅｔｙｌ Ｅｘｅｎｄｉｎ−４）（Ｂａｃｈｅｍ，スイス）のリシン残基にペギル化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）させるために、ペプチドとＰＥＧのモル比１：１５、ペプチドの濃度を５ｍｇ／ｍｌにして、４℃で夜通し反応させた。この際、反応はｐＨ７．５の緩衝液内で行われ、還元剤である２０ｍＭ ＳＣＢ（ＮａＣＮＢＨ3）を添加して反応させた。反応液はＳＯＵＲＣＥ Ｓ（ＸＫ１６ｍｌ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を下記のような条件でモノペギル化エキセンジン及び異性体を分離した。
【００２９】
Ｃｏｌｕｍｎ：ＳＯＵＲＣＥ Ｓ（ＸＫ １６ｍｌ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）
流速：２．０ｍｌ／分
勾配：Ａ ０→１００％４５分Ｂ（Ａ：２０ｍＭクエン酸 ｐＨ３．０、Ｂ：Ａ＋０．５Ｍ ＫＣｌ）
前記分離したモノペギル化されたＣＡ−Ｅｘｅｎｄｉｎ−４を免疫グロブリンＦｃとカップリングさせた。ペプチドと免疫グロブリンＦｃのモル比を１：４にし、全体タンパク質濃度を５０ｍｇ／ｍｌにし、４℃で１６時間反応した。反応液は１００ｍＭ Ｋ−Ｐ（ｐＨ６．０）であり、還元剤である２０ｍＭ ＳＣＢを添加した。カップリング（Ｃｏｕｐｌｉｎｇ）反応後、ＳＯＵＲＣＥ Ｐｈｅ １６ｍｌとＳＯＵＲＣＥ Ｑ １６ｍｌを利用した２段階精製法を実施した。
【００３０】
Ｃｏｌｕｍｎ：ＳＯＵＲＣＥ Ｐｈｅ（ＨＲ１６ｍｌ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）
流速：２．０ｍｌ／分
勾配：Ｂ １００→０％ ３０分 Ｂ（Ａ：２０ｍＭ トリス ｐＨ７．５、Ｂ：Ａ＋１．５Ｍ ＮａＣｌ）
Ｃｏｌｕｍｎ：ＳＯＵＲＣＥ Ｑ（ＸＫ１６ｍｌ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）
流速：２．０ｍｌ／分
勾配：Ａ ０→２５％ ６０分 Ｂ（Ａ：２０ｍＭ トリス ｐＨ７．５、Ｂ：Ａ＋１Ｍ ＮａＣｌ）
【００３１】
［実施例２］ｏｂ／ｏｂネズミでのインスリン分泌ペプチド結合体の体重減少効果
代表的な肥満モデル動物の一つであるｏｂ／ｏｂネズミ（Ｃ５７ＢＬ／６ＪＨａｍＳｌｃ−ｏｂ／ｂｏ、雌８−９週齢）を４群（群当たり５匹ずつ）に分けた後、ビークルとＢｙｅｔｔａ（Ａｍｙｌｉｎ−Ｌｉｌｙ、ｅｘｅｎｄｉｎ−４、４５μｇ／ｋｇ、毎日皮下投与）及び前記実施例１で製造したインスリン分泌ペプチド結合体（４５μｇまたは１００μｇ／ｋｇ、週当り１回皮下投与）などを投与した後、２８日間体重の変化を観察し、投与が終わった後、コレステロール、遊離脂肪酸など、脂肪代謝に係わる物質の血中濃度を測定し、試験が完了した後、動物を解剖し、肝と脂肪組職の重量を測定した。このようなｏｂ／ｏｂネズミにおいてインスリン分泌ペプチド結合体の体重減少効果を表１に示した。
【００３２】
【表１】
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【００３３】
表１と図１及び図２から分かるように、Ｂｙｅｔｔａに比べてインスリン分泌ペプチド結合体は１／７容量で体重減少効果及びコレステロール含量減少効果が優れ、その効果は容量依存的であることが分かる。そして、その効力の持続性も毎日投与したエキセンジン−４に比べ、一週に１回投与したインスリン分泌ペプチド結合体の効力がより優れることが分かる。
【００３４】
［実施例３］ＤＩＯネズミでのインスリン分泌ペプチド結合体の体重減少効果
代表的な肥満モデル動物の一つであるＤＩＯ（ｄｉｅｔ ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｂｅｓｉｔｙ）ネズミ（Ｃ５７ＢＬ／６ＮＣｒｊＢｇｉ、雄２５週齢）を５群（群当たり５匹）に分けた後、ビークルとＢｙｅｔｔａ（１００μｇ／ｋｇ、毎日皮下投与）及び前記実施例１で製造したインスリン分泌ペプチド結合体（２０、５０、１００μｇ／ｋｇ、１週当り１回皮下投与）などを投与した後、２週間体重の変化を観察した。この際、ＤＩＯネズミでのインスリン分泌ペプチド結合体の体重減少効果を表２に示した。
【００３５】
【表２】
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【００３６】
表２及び図３から分かるように、Ｂｙｅｔｔａに比べ、インスリン分泌ペプチド結合体は１／１７．５容量で体重減少効果が優れ、その効果は容量依存的であることが分かる。そして、その効力の持続性においても、毎日投与したエキセンジン−４に比べて一週に１回投与したインスリン分泌ペプチド結合体の効力がもっと優れることが分かる。
【００３７】
［実施例４］ＺＤＦ（Ｚｕｃｋｅｒ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｆａｔ）ラットでのインスリン分泌ペプチド結合体の体重減少効果
糖尿実験の際、一般的に最も多く使用され、ｄｂ／ｄｂネズミと類似の特性を示すＺＤＦラット（ＺＤＦ／Ｇｍｉ−ｆａ／ｆａ、雄７週齢）を５群（群当たり５匹）に分けた後、ビークルとＢｙｅｔｔａ（１００μｇ／ｋｇ、毎日皮下投与）及び前記実施例１で製造したインスリン分泌ペプチド結合体（２０、５０、１００μｇ／ｋｇ、１週当り１回皮下投与）などを投与した後、８週間体重の変化と飼料摂取量を観察し、投与が終わった後、コレステロールなど、脂肪代謝に係わる物質の血中濃度を測定し、試験が完了した後、動物を解剖して脂肪組職の重量を測定した。このようなＺＤＦラットでのインスリン分泌ペプチド結合体の体重減少効果を表３に示した。
【００３８】
【表３】
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【００３９】
表３と図４及び図５から分かるように、Ｂｙｅｔｔａに比べ、インスリン分泌ペプチド結合体は１／３５容量で体重減少効果及び体脂肪含量減少効果そして飲食物摂取抑制効力がずっと優れ、その効果は容量依存的であることが分かる。そして、その効力の持続性においても、毎日投与したエキセンジン−４に比べて一週に１回投与したインスリン分泌ペプチド結合体の効力がもっと優れることが分かる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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