(57)【要約】  本発明は、可変基が明細書において定義される通りである、式（Ｉ）2011516522.tif 000127によるピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体、またはこの薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物に関する。本発明は、１つまたは複数の前記ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イルアミン誘導体を含む医薬組成物、および治療における、例えば、ＰＫＣθ媒介障害の治療におけるそれらの使用にも関する。
2011516522.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2011516522.tif 000124
（式中、
Ｒ１は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルキルオキシおよびＣ３−６シクロアルキルオキシから独立して選択される１つもしくは複数の置換基で場合によって置換されているＣ６−１０アリールであり、前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルキルオキシおよびＣ３−６シクロアルキルオキシは、１つもしくは複数のハロゲンで場合によって置換されている、または
Ｒ１は、Ｃ３−８シクロアルキルである、または
Ｒ１は、−Ｃ１−３アルキル−Ｚであり、Ｚは、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択される１−２個のヘテロ原子を含むＣ３−８シクロアルキル、Ｃ６−１２アリールもしくは５−１０員のヘテロアリール環系であり、前記Ｃ６−１０アリールおよび５−１０員のヘテロアリール環系は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルキルオキシおよびＣ３−６シクロアルキルオキシから独立して選択される１つもしくは複数の置換基で場合によって置換され、前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルキルオキシおよびＣ３−６シクロアルキルオキシは、１つもしくは複数のハロゲンで場合によって置換され、
Ｒ２は、−Ｃ２−７アルキル−ＮＲ５Ｒ６である、または
Ｒ２は、−Ｃ０−４アルキル−Ｙであり、Ｙは、Ｏ、ＳおよびＮ（Ｒ７）ｐから独立して選択される１つもしくは２つのヘテロ原子部分を含む４−８員の飽和もしくは不飽和の複素環系であり、前記複素環系は、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキルもしくはＣ１−６アルキルオキシで場合によって置換されている、または
Ｒ２は、−ＮＲ８Ｒ９もしくは−ＣＨ２ＮＲ８Ｒ９で置換されている−Ｃ０−２アルキルＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｒ３は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリールもしくはＣ６−１０アリールＣ１−３アルキルであり、前記Ｃ６−１０アリールおよびＣ６−１０アリールＣ１−３アルキルは、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ３−６シクロアルキルオキシ、−ＮＨＣＯＲ１０、−ＮＨＳ（Ｏ）ｑＲ１１、−ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、−Ｓ（Ｏ）ｒＲ１４Ｒ１５および−ＮＨＣＯＮＲ１６Ｒ１７から独立して選択される１つもしくは複数の置換基で場合によって置換され、前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルキルオキシおよびＣ３−６シクロアルキルオキシは、１つもしくは複数のハロゲンで場合によって置換され、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、ＣＮまたはハロゲンであり、
Ｒ５−Ｒ９は、ＨおよびＣ１−４アルキルから独立して選択され、
Ｒ１０およびＲ１１は、独立してＣ１−４アルキルであり、
Ｒ１２およびＲ１３は、ＨおよびＣ１−４アルキルから独立して選択され、
Ｒ１４−Ｒ１７は、独立してＣ１−４アルキルであり、
ｐは、０または１であり、
ｑおよびｒは、独立して１または２である。）
によるピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル誘導体、またはこの薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ１が、−ＣＨ２Ｚであり、Ｚが、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルキルオキシおよびＣ３−６シクロアルキルオキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基で場合によって置換されているフェニルであり、前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルキルオキシおよびＣ３−６シクロアルキルオキシが、１つまたは複数のハロゲンで場合によって置換されている、請求項１に記載のピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体。
【請求項３】
Ｒ１が、−ＣＨ２Ｚであり、Ｚが、クロロ、ブロモ、フルオロ、メチル、ヒドロキシおよびメトキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基で場合によって置換されているフェニルである、請求項２に記載の２−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体。
【請求項４】
Ｒ１が、−ＣＨ２Ｚであり、Ｚが、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択される１−２個のヘテロ原子を含み、クロロ、フルオロ、ブロモ、メチル、ヒドロキシおよびメトキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基で場合によって置換されている、５−１０員のヘテロアリール環系である、請求項１に記載のピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体。
【請求項５】
Ｒ２が、−ＣＨ２Ｙであり、Ｙが、Ｏ、ＳおよびＮ（Ｒ７）ｐから独立して選択される１つまたは２つのヘテロ原子部分を含む４−８員の飽和もしくは不飽和の複素環系であり、前記複素環系が、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６アルキルオキシで場合によって置換されている、請求項１から４のいずれか一項に記載のピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体。
【請求項６】
Ｒ２が、−ＣＨ２Ｙであり、Ｙが、ピペリジニル、モルホリニルまたはピロリジニルである、請求項５に記載のピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体。
【請求項７】
Ｒ３が、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルおよびＣ１−６アルキルオキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基で場合によって置換されているＣ６−１０アリールであり、前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルおよびＣ１−６アルキルオキシが、１つまたは複数のハロゲンで場合によって置換されている、請求項１から６のいずれか一項に記載のピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル誘導体。
【請求項８】
Ｒ３が、クロロ、フルオロ、メチル、ヒドロキシおよびメトキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基で場合によって置換されているＣ６−１０アリールである、請求項７に記載のピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体。
【請求項９】
Ｒ４が、Ｈ、メチル、フルオロ、クロロ、ブロモまたはニトリルである、請求項１から８のいずれか一項に記載のピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体。
【請求項１０】
【化２】
2011516522.tif 000125
2011516522.tif 000126
から選択されるピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体、またはこの薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物。
【請求項１１】
治療において用いるための、請求項１から１０のいずれか一項に記載のピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体。
【請求項１２】
請求項１から１０のいずれか一項に記載のピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体を、１つまたは複数の薬学的に許容できる助剤と混合して含む医薬組成物。
【請求項１３】
ＰＫＣθ媒介障害の治療において用いるための、請求項１から１０のいずれか一項に記載のピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体。
【請求項１４】
自己免疫疾患または炎症性疾患の治療において用いるための、請求項１３に記載のピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体、これらの化合物を含む医薬組成物、および治療におけるそれらの使用、特に、ＰＫＣ−シータ（ＰＫＣθ）媒介障害の治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
セリン／スレオニンキナーゼのタンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）ファミリーのメンバーは、細胞分化の調節および多様な細胞型の増殖において重要な役割を果たす。ＰＫＣファミリーの１０種の哺乳類上のメンバーは、α、β、γ、δ、ε、ζ、η、θ、μおよびγと識別および命名されている。ＰＫＣθの構造は、ＰＫＣδ、εおよびηを含む、Ｃａ２＋と無関係である新規なＰＫＣのサブファミリーのメンバーと最も強い相同性を示す。ＰＫＣθは、ＰＫＣδと最も強い関連性がある。
【０００３】
ＰＫＣθは、主に、リンパ組織および骨格筋で発現される。ＰＫＣθは、ＴＣＲに媒介されるＴ細胞活性化に必須であるが、ＴＣＲに依存した胸腺細胞の発生中には必須でないことが示されている。ＰＫＣθは、これがＴ細胞活性化の中核でＴＣＲとともに局在化する、抗原特異的なＴ細胞およびＡＰＣの間の細胞接触部位に転位置するが、他のＰＫＣアイソフォームはそうではない。ＰＫＣθは、ＦａｓＬプロモーター−レポーター遺伝子を選択的に活性化し、内在性ＦａｓＬのｍＲＮＡまたは細胞表面発現を上方制御したが、α、εまたはζのアイソエンザイムはそうではない。一方、ＰＫＣθおよびεは、Ｆａｓ誘導アポトーシスから細胞を保護することにより、Ｔ細胞の生存を促進し、この保護効果は、ｐ９０Ｒｓｋに依存したＢＡＤのリン酸化を促進することにより媒介された。このように、ＰＫＣθは、Ｔ細胞のアポトーシスにおいて、調節上の二重の役割を果たすと思われる。
【０００４】
Ｔ細胞におけるＰＫＣθの選択的発現、および成熟Ｔ細胞の活性化におけるその重要な役割は、ＰＫＣθ阻害剤が、Ｔリンパ球により媒介される障害または疾患、例えば、リウマチ性関節炎およびエリテマトーデス等の自己免疫疾患ならびに喘息等および炎症性腸疾患の炎症性疾患の治療または予防に有用であることを証明している。
【０００５】
ＰＫＣθは、移植および自己免疫疾患における免疫抑制のための薬物標的として認定されている（Ｉｓａｋｏｖ他（２００２年）Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２０、７６１−７９４頁）。ＰＣＴ公開ＷＯ２００４／０４３３８６は、ＰＫＣθを、移植拒絶および多発性硬化症の治療のための標的として認定している。ＰＫＣθは、炎症性腸疾患（Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（２００５年）、３１３（３）、９６２−９８２頁）、喘息（ＷＯ２００５０６２９１８）および狼瘡（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ＆  Ａｌｌｅｒｇｙ（２００５年）、４（３）、２９５−２９８頁）における役割も果たす。
【０００６】
さらに、ＰＫＣθは、胃腸間質性腫瘍において多く発現され（Ｂｌａｙ，Ｐ．他（２００４年）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１０、１２、Ｐｔ．１）、ＰＫＣθが、胃腸癌の治療のための分子標的であることが示唆されている（Ｗｉｅｄｍａｎｎ，Ｍ．他（２００５年）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ５（３）、１７１頁）。このように、小分子のＰＫＣ−シータ阻害剤は、胃腸癌の治療に有用であり得る。
【０００７】
ＰＫＣθ欠損マウス中で行われた実験は、ＰＫＣθの不活性化が、インスリンシグナル伝達および骨格筋中のグルコース輸送の、脂肪に誘導される欠陥を阻止するという結論を導き出した（Ｋｉｍ  Ｊ．他、２００４年、Ｔｈｅ  Ｊ．ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  １１４（６）、８２３頁）。このデータは、ＰＫＣθが、２型糖尿病の治療のために有望な治療上の標的であることを示唆しているので、小分子のＰＫＣθ阻害剤は、このような疾患を治療するのに有用であり得る。
【０００８】
したがって、ＰＫＣθ阻害剤は、リウマチ性関節炎およびエリテマトーデス等の自己免疫疾患、ならびに喘息および炎症性腸疾患等の炎症性疾患を含むＴ細胞媒介疾患の治療において有用である。さらに、ＰＫＣθ阻害剤は、胃腸癌および糖尿病の治療において有用である。
【０００９】
ＰＫＣθ阻害剤として作用する、様々な構造クラスの化合物が知られている。例えば、Ｃｙｗｉｎおよび共同研究者は、最近、２，４−ジアミノ−５−ニトロピリミジンを、強力で選択的なＰＫＣシータ阻害剤として記載した（Ｂｉｏ−ｏｒｇａｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１７、２００７年、２２５−２３０頁）。ＷＯ２００５０６６１３９は、ＰＫＣシータが役割を果たす炎症性障害を治療するのに有用な２−（アミノ置換）−４−アリールピリミジンを記載している。さらに、ＷＯ２００７０３８５１９は、ＰＫＣシータを阻害するチエノ［２，３−Ｂ］ピリジン−５−カルボニトリルを記載している。
【００１０】
ＷＯ２００７０４７２０７は、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質阻害剤およびヒト白血球阻害剤であることが示されたインドール誘導体に関する。ＷＯ２００５０４４１８１は、エーベルソンチロシンキナーゼ阻害剤であることが示されたアザ二環式化合物に関する。ＷＯ２００１４９６８８は、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤として有用であることが示されたプリンおよびアザ−デアザ類似体に関する。ＷＯ２００４４３３９４は、免疫学的特性を有する置換された窒素複素環誘導体に関する。これらの文献のいずれも、ＰＫＣθ阻害特性を有する化合物を教示または示唆していない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】国際公開第２００４／０４３３８６号
【特許文献２】国際公開第２００５／０６２９１８号
【特許文献３】国際公開第２００５／０６６１３９号
【特許文献４】国際公開第２００７／０３８５１９号
【特許文献５】国際公開第２００７／０４７２０７号
【特許文献６】国際公開第２００５／０４４１８１号
【特許文献７】国際公開第２００１／４９６８８号
【特許文献８】国際公開第２００４／４３３９４号
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｉｓａｋｏｖ他（２００２年）Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２０、７６１−７９４頁
【非特許文献２】Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（２００５年）、３１３（３）、９６２−９８２頁
【非特許文献３】Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ＆  Ａｌｌｅｒｇｙ（２００５年）、４（３）、２９５−２９８頁
【非特許文献４】Ｂｌａｙ，Ｐ．他（２００４年）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１０、１２、Ｐｔ．１
【非特許文献５】Ｗｉｅｄｍａｎｎ，Ｍ．他（２００５年）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ５（３）、１７１頁
【非特許文献６】Ｋｉｍ  Ｊ．他、２００４年、Ｔｈｅ  Ｊ．ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  １１４（６）、８２３頁
【非特許文献７】Ｂｉｏ−ｏｒｇａｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１７、２００７年、２２５−２３０頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
第１の態様において、本発明は、式Ｉ
【００１４】
【化１】
2011516522.tif 000003
（式中、
Ｒ１は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルキルオキシおよびＣ３−６シクロアルキルオキシから独立して選択される１つもしくは複数の置換基で場合によって置換されているＣ６−１０アリールであり、前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルキルオキシおよびＣ３−６シクロアルキルオキシは、１つもしくは複数のハロゲンで場合によって置換されている、または
Ｒ１は、Ｃ３−８シクロアルキルである、または
Ｒ１は、−Ｃ１−３アルキル−Ｚであり、Ｚは、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択される１−２個のヘテロ原子を含むＣ３−８シクロアルキル、Ｃ６−１２アリールもしくは５−１０員のヘテロアリール環系であり、前記Ｃ６−１０アリールおよび５−１０員のヘテロアリール環系は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルキルオキシおよびＣ３−６シクロアルキルオキシから独立して選択される１つもしくは複数の置換基で場合によって置換され、前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルキルオキシおよびＣ３−６シクロアルキルオキシは、１つもしくは複数のハロゲンで場合によって置換され、
Ｒ２は、−Ｃ２−７アルキル−ＮＲ５Ｒ６である、または
Ｒ２は、−Ｃ０−４アルキル−Ｙであり、Ｙは、Ｏ、ＳおよびＮ（Ｒ７）ｐから独立して選択される１つもしくは２つのヘテロ原子部分を含む４−８員の飽和もしくは不飽和の複素環系であり、前記複素環系は、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキルもしくはＣ１−６アルキルオキシで場合によって置換されている、または
Ｒ２は、−ＮＲ８Ｒ９もしくは−ＣＨ２ＮＲ８Ｒ９で置換されている−Ｃ０−２アルキルＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｒ３は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリールもしくはＣ６−１０アリールＣ１−３アルキルであり、前記Ｃ６−１０アリールおよびＣ６−１０アリールＣ１−３アルキルは、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ３−６シクロアルキルオキシ、−ＮＨＣＯＲ１０、−ＮＨＳ（Ｏ）ｑＲ１１、−ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、−Ｓ（Ｏ）ｒＲ１４Ｒ１５および−ＮＨＣＯＮＲ１６Ｒ１７から独立して選択される１つもしくは複数の置換基で場合によって置換され、前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルキルオキシおよびＣ３−６シクロアルキルオキシは、１つもしくは複数のハロゲンで場合によって置換され、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、ＣＮまたはハロゲンであり、
Ｒ５−Ｒ９は、ＨおよびＣ１−４アルキルから独立して選択され、
Ｒ１０およびＲ１１は、独立してＣ１−４アルキルであり、
Ｒ１２およびＲ１３は、ＨおよびＣ１−４アルキルから独立して選択され、
Ｒ１４−Ｒ１７は、独立してＣ１−４アルキルであり、
ｐは、０または１であり、
ｑおよびｒは、独立して１または２である。）
によるピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体、またはこの薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物に関する。
【００１５】
本明細書において用いられるＣ１−６アルキルの用語は、１−６個の炭素原子を有する分岐または非分岐のアルキル基を表す。このような基の例は、メチル、エチル、イソプロピル、第三級ブチルおよびイソペンチルである。同様に、Ｃ１−４アルキルの用語は、１−４個の炭素原子を有する分岐または非分岐のアルキル基を表す。
【００１６】
本明細書において用いられるＣ１−３アルキル−Ｚの用語は、Ｚが、すでに定義した意味を有する、Ｚ基で置換されているＣ１−３アルキル基を表す。このような基の例は、シクロヘキシルメチル、（４−クロロフェニル）エチルおよび（２−クロロチエン−３−イル）メチルである。
【００１７】
同様に、本明細書において用いられるＣ２−７アルキル−ＮＲ５Ｒ６の用語は、Ｒ５およびＲ６が、すでに定義した意味を有する、式ＮＲ５Ｒ６のアミン基で置換されているＣ２−７アルキル基を表す。このような基の例は、−（ＣＨ２）３−Ｎ（ＣＨ３）２および−（ＣＨ２）５−Ｎ（ＣＨ３）２である。
【００１８】
本明細書において用いられる−Ｃ０−４アルキル−Ｙの用語は、Ｙが、すでに定義した意味を有する、Ｙ基で置換されているＣ１−４アルキル基、またはアルキル連結基を含まないＹ基自体を表す。このような基の例は、（ピリジン２−イル）メチルおよび（ピペリジン−３−イル）メチルである。
【００１９】
本明細書において用いられるＣ３−８シクロアルキルの用語は、３−８個の炭素原子を有する分岐または非分岐の環状アルキル基を表す。このような基の例は、シクロプロピル、シクロペンチルおよび２−メチルシクロヘキシルである。同様に、本明細書において用いられるＣ３−６シクロアルキルの用語は、３−６個の炭素原子を有する分岐または非分岐の環状アルキル基を表す。このような基の例は、シクロプロピル、シクロペンチルおよび２−メチルシクロペンチルである。
【００２０】
本明細書において用いられる−Ｃ０−２アルキル−Ｃ３−６シクロアルキルの用語は、Ｃ３−６シクロアルキルで置換されているＣ１−２アルキル基、またはアルキル連結基を含まないＣ３−６シクロアルキル基自体を表す。このような基の例は、シクロペンチルメチルおよびシクロヘキシルエチルである。
【００２１】
本明細書において用いられるＣ１−６アルキルオキシの用語は、１−６個の炭素原子を有する分岐または非分岐のアルキルオキシ基を表す。このような基の例は、メトキシ、エトキシ、イソプロピルオキシおよび第三級ブチルオキシである。
【００２２】
本明細書において用いられるＣ３−６シクロアルキルオキシの用語は、３−６個の炭素原子を有する分岐または非分岐の環状アルキルオキシ基を表す。このような基の例は、シクロプロピルオキシ、シクロペンチルオキシおよび２−メチルシクロペンチルオキシである。
【００２３】
本明細書において用いられるＣ６−１０アリールの用語は、６−１０個の炭素原子を有し、１つの環または一緒に融合した２つの環を含み、これらの少なくとも１つが芳香族でなければならない芳香族基を表す。このような基の例には、単環式および融合した二環式の芳香族基の両方、例えばフェニルおよびナフチルが挙げられる。
【００２４】
本明細書において用いられるＣ６−１０アリールＣ１−３アルキルの用語は、Ｃ６−１０アリール基で置換されているＣ１−３アルキル基を表す。このような基の例は、ベンジルおよびフェネチルである。
【００２５】
本明細書において用いられる、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択される１−２個のヘテロ原子を含む５から１０員のヘテロアリール環系は、単環式および融合した二環式の系の両方を包含する。上記の基の例は、フラン、ピロール、チオフェン、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、ピリジン、ピリミジン、インドール、インダゾールおよびベンズチオフェンである。
【００２６】
Ｒ７およびｐがすでに定義した意味を有する、Ｏ、ＳおよびＮ（Ｒ７）ｐから独立して選択される１または２個のヘテロ原子部分を含む４から８員の飽和または不飽和のヘテロ環系の例は、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、ピリジンピペリジンモルホリンおよびピペラジンである。
【００２７】
本明細書において用いられる溶媒和物の用語は、溶媒および溶質（本発明において、式Ｉの化合物）により形成される、可変的な化学量論の錯体を指す。このような溶媒は、溶質の生物活性を妨害しないものであり得る。適切な溶媒の例には、水、エタノールおよび酢酸が挙げられる。
【００２８】
本発明の一実施形態において、Ｒ１は、ハロゲン、ヒドロキシ、−ＯＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３およびＣ１−４アルキルから独立して選択される１つまたは複数の置換基で場合によって置換されているフェニルである。本発明のさらなる実施形態において、Ｒ１は、クロロ、フルオロ、メチル、ヒドロキシおよびメトキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基で場合によって置換されているフェニルである。
【００２９】
本発明の別の実施形態において、Ｒ１は、−Ｃ１−３アルキル−Ｚであり、Ｚは、ハロゲン、ヒドロキシ、−ＯＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３およびＣ１−４アルキルから独立して選択される１つまたは複数の置換基で場合によって置換されているフェニルである。本発明のさらなる実施形態において、Ｒ１は、−Ｃ１−３アルキル−Ｚであり、Ｚは、クロロ、フルオロ、メチル、ヒドロキシおよびメトキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基で場合によって置換されているフェニルである。
【００３０】
本発明の別の実施形態において、Ｒ１は、−ＣＨ２−Ｚであり、Ｚは、ハロゲン、ヒドロキシ、−ＯＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３およびＣ１−４アルキルから独立して選択される１つまたは複数の置換基で場合によって置換されているフェニルである。本発明のさらなる実施形態において、Ｒ１は、−ＣＨ２−Ｚであり、Ｚは、クロロ、フルオロ、メチル、ヒドロキシおよびメトキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基で場合によって置換されているフェニルである。
【００３１】
本発明の別の実施形態において、Ｒ１は、Ｃ３−８シクロアルキルである。
【００３２】
本発明の別の実施形態において、Ｒ１は、−Ｃ１−３アルキル−Ｚであり、Ｚは、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択される１−２個のヘテロ原子を含む５−１０員のヘテロアリール環系であり、前記５−１０員のヘテロアリール環系は、ハロゲン、ヒドロキシ、−ＯＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３およびＣ１−４アルキルから独立して選択される１つまたは２つの置換基で場合によって置換されている。本発明のさらなる実施形態において、Ｒ１は、−Ｃ１−３アルキル−Ｚであり、Ｚは、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択される１−２個のヘテロ原子を含む５−１０員のヘテロアリール環系であり、前記５−１０員のヘテロアリール環系は、クロロ、フルオロ、メチル、ヒドロキシおよびメトキシから独立して選択される１つまたは２つの置換基で場合によって置換されている。
【００３３】
本発明の別の実施形態において、Ｒ１は、−ＣＨ２−Ｚであり、Ｚは、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択される１−２個のヘテロ原子を含む５−１０員のヘテロアリール環系であり、前記５−１０員のヘテロアリール環系は、ハロゲン、ヒドロキシ、−ＯＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３およびＣ１−４アルキルから独立して選択される１つまたは２つの置換基で場合によって置換されている。本発明のさらなる実施形態において、Ｒ１は、−ＣＨ２−Ｚであり、Ｚは、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択される１−２個のヘテロ原子を含む５−１０員のヘテロアリール環系であり、前記５−１０員のヘテロアリール環系は、クロロ、フルオロ、メチル、ヒドロキシおよびメトキシから独立して選択される１つまたは２つの置換基で場合によって置換されている。
【００３４】
本発明の別の実施形態において、Ｒ１は、−ＣＨ２−Ｚであり、Ｚは、ハロゲン、ヒドロキシ、−ＯＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３およびＣ１−４アルキルから独立して選択される１つまたは複数の置換基で場合によって置換されているチエニルである。本発明のさらなる実施形態において、Ｒ１は、−ＣＨ２−Ｚであり、Ｚは、クロロ、フルオロ、メチル、ヒドロキシおよびメトキシから独立して選択される１つまたは２つの置換基で場合によって置換されているチエニルである。
【００３５】
本発明の別の実施形態において、Ｒ２は、−Ｃ２−７アルキル−ＮＲ５Ｒ６である。本発明のさらなる実施形態において、Ｒ２は、−（ＣＨ２）２−ＮＲ５Ｒ６である。
【００３６】
本発明の別の実施形態において、Ｒ２は、−Ｃ０−４アルキル−Ｙであり、Ｙは、Ｏ、ＳおよびＮ（Ｒ７）ｐから独立して選択される１つまたは２つのヘテロ原子部分を含む４−８員の飽和または不飽和の複素環であり、前記複素環は、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６アルキルオキシで場合によって置換されている。
【００３７】
本発明の別の実施形態において、Ｒ２は、−ＣＨ２−Ｙであり、Ｙは、Ｏ、ＳおよびＮ（Ｒ７）ｐから独立して選択される１つもしくは２つのヘテロ原子部分を含む４−８員の飽和または不飽和の複素環であり、前記複素環は、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６アルキルオキシで場合によって置換されている。別の実施形態において、Ｒ２は、Ｙが、ピペリジニル、モルホリニルまたはピロリジニルである−ＣＨ２−Ｙである。
【００３８】
本発明の別の実施形態において、Ｒ２は、Ｒ８およびＲ９がすでに定義した意味を有する、−ＮＲ８Ｒ９または−Ｃ１−２アルキルＮＲ８Ｒ９で置換されている−Ｃ０−２アルキルＣ３−６シクロアルキルである。本発明のさらなる実施形態において、Ｒ２は、Ｒ８およびＲ９がすでに定義した意味を有する、−ＮＲ８Ｒ９で置換されている−ＣＨ２Ｃ３−６シクロアルキルである。
【００３９】
本発明の別の実施形態において、Ｒ２は、
【００４０】
【化２】
2011516522.tif 000004
から選択される基である。
【００４１】
本発明のさらなる実施形態において、Ｒ２は、
【００４２】
【化３】
2011516522.tif 000005
から選択される基である。
【００４３】
本発明の別の実施形態において、Ｒ３は、ハロゲン、ヒドロキシ、−ＯＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３  ＣＮおよびＣ１−４アルキルから独立して選択される１つまたは複数の置換基で場合によって置換されているフェニルである。本発明のさらなる実施形態において、Ｒ３は、クロロ、フルオロ、メチル、ヒドロキシおよびメトキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基で場合によって置換されているフェニルである。
【００４４】
本発明のさらなる実施形態において、Ｒ３は、ハロゲン、ヒドロキシ、−ＯＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３  ＣＮおよびＣ１−４アルキルから独立して選択される１つまたは複数の置換基で場合によって置換されている−ＣＨ２−フェニルである。本発明のさらなる実施形態において、Ｒ３は、クロロ、フルオロ、メチル、ヒドロキシおよびメトキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基で場合によって置換されている−ＣＨ２−フェニルである。
【００４５】
本発明の別の実施形態において、Ｒ４は、Ｈまたはメチルである。
【００４６】
別の実施形態において、Ｒ４はハロゲンである。さらなる実施形態において、Ｒ４は、フルオロまたはクロロである。
【００４７】
別の実施形態において、Ｒ４はニトリルである。
【００４８】
本発明の別の実施形態において、Ｒ５は、Ｈまたはメチルである。
【００４９】
本発明の別の実施形態において、Ｒ６は、Ｈまたはメチルである。
【００５０】
本発明の別の実施形態において、Ｒ７は、Ｈまたはメチルである。
【００５１】
本発明の別の実施形態において、Ｒ８は、Ｈまたはメチルである。
【００５２】
本発明の別の実施形態において、Ｒ９は、Ｈまたはメチルである。
【００５３】
本発明の別の実施形態において、ｐは０である。本発明の別の実施形態において、ｐは１である。
【００５４】
本発明の別の実施形態において、ｑは１である。本発明の別の実施形態において、ｑは２である。
【００５５】
本発明の別の実施形態において、ｒは１である。本発明の別の実施形態において、ｒは２である。
【００５６】
本発明の別の実施形態は、一般式ＶＩ
【００５７】
【化４】
2011516522.tif 000006
（式中、
Ｒ１’は、１つまたは複数のクロロ、ブロモ、フルオロ、メチル、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ２は、
【００５８】
【化５】
2011516522.tif 000007
であり、
Ｒ３’は、クロロ、フルオロ、メチル、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ４は、Ｈ、メチル、ＣＮまたはハロゲンである。）
を有するピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体、またはこの薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物である。
【００５９】
本発明の別の実施形態は、
【００６０】
【化６】
2011516522.tif 000008
2011516522.tif 000009
から選択されるピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体、またはこの薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物である。
【００６１】
本発明のピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体は、有機化学の技術分野において周知の方法により調製され得る。例えば、Ｊ．Ｍａｒｃｈ、「Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」第４版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓを参照されたい。合成手順の間において、いずれかの関係する分子における感受性または反応性の基を保護することが、必要であるおよび／または望ましいことがある。これは、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｔｓ「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」第２版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９１年に記載のもののような従来の保護基により達成される。保護基は、当技術分野において周知の方法を用いた簡便な次の段階において、場合によって除去される。
【００６２】
Ｒ１−Ｒ４がすでに定義した意味を有する、式Ｉのピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体は、スキームＩに示した一般的な合成経路により調製され得る。
【００６３】
【化７】
2011516522.tif 000010
【００６４】
適切な塩基および溶媒、例えばテトラヒドロフラン中のジイソプロピルエチルアミンの存在下において、２，４−ジクロロ−５−ヨードピリミジン（ＩＩ）を、適切に官能化されたアミンＲ２ＮＨ２で処理することにより、付加体ＩＩＩを生成する。次いで、これを、適切なパラジウム触媒系および溶媒、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中のジイソプロピルエチルアミンの存在下におけるテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）およびヨウ化銅の存在下において、適切に置換されたアセチレン（ＩＶ）と反応させた後に、カリウム第三級ブトキシドで処理して、所望のピロロピリミジンＶへの環化を果たすことができる。最終的に、適切な塩基および溶媒、例えばテトラヒドロフラン中のジイソプロピルエチルアミンの存在下において、ピロロピリミジンＶを、適切に官能化されたアミンＲ１ＮＨ２で処理することにより、ピロロピリミジン−２−アミンＩを生成する。
【００６５】
アミンＲ１ＮＨ２およびＲ２ＮＨ２は市販されている、またはこれらは熟練した有機化学者に周知の方法を用いて容易に調製され得る。例えば、Ｒ１がＺＣＨ２であり、Ｚがすでに定義した意味を有するアミンＲ１ＮＨ２は、市販されている、または適切なハロゲン化アルキルＺＣＨ２ＣｌもしくはＺＣＨ２Ｂｒを保護されたアミンと反応させた後に、保護基を除去することにより容易に調製され得る。例えば、ＺＣＨ２ＮＨ２の形態の化合物は、式ＺＣＨ２Ｂｒの前駆体をアジ化ナトリウムと反応させた後に、適切な還元剤、例えば水素化リチウムアルミニウムで還元することにより容易に調製され得る。同様に、Ｒ２が（ＣＨ２）３ＮＲ５Ｒ６であり、Ｒ５およびＲ６がすでに定義した意味を有するアミンＲ２ＮＨ２は市販されている、またはこれらは、例えば、３−ブロモプロピルフタルイミドをアミンＮＨＲ５Ｒ６と反応させた後に、フタルイミドの保護基を、例えばエタノール中のヒドラジン水和物で除去することにより容易に調製され得る。
【００６６】
置換アセチレン（ＩＶ）も、熟練した有機化学者に周知の方法により容易に調製され得る。例えば、Ｒ４がＨであり、Ｒ３がアリール（Ａｒ）であるアセチレンは、適切な塩基および溶媒、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中のトリエチルアミンの存在下において、適切なパラジウム触媒、例えばビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリドにより、トリメチルシリルアセチレンを、Ｘがトリフレート等の適切な脱離基であるＡｒＸと反応させることにより調製され得る。Ｃ１−４アルキルとしてＲ４を有するアセチレンは、熟練した有機化学者に周知の標準的なアルキル化反応により、例えば、Ｒ３がアリールであり、Ｒ４がＨであるアセチレンを、塩基、例えばｎ−ブチルリチウムで処理した後に、適切な溶媒、例えばテトラヒドロフラン中で、ハロゲン化アルキル、例えばヨウ化メチルと反応させることにより、Ｒ４がＨであるアセチレンから容易に調製され得る。
【００６７】
アセチレンを形成するため、またはアセチレンをヨードピリミジンと結合させるためのパラジウム触媒および条件は、熟練した有機化学者に周知であり、例えば、Ｅｉ−ｉｃｈｉ  Ｎｅｇｉｓｈｉ（編者）、Ａｒｍｉｎ  ｄｅ  Ｍｅｉｊｅｒｅ（共同編者）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｏｐａｌｌａｄｉｕｍ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、２００２年を参照されたい。
【００６８】
Ｒ１が（置換）ベンジルである、式Ｉのピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体は、ベンジル基を除去することにより、例えば、塩化メチレン中のジクロロジシアノキノンで処理した後に、生成した遊離アミノ基をさらに官能化することにより、さらに処理され得る。例えば、遊離アミノ基は、還元的アルキル化により、例えば、適切な溶媒、例えばエタノール中のナトリウムトリアセトキシボロハイドライドの存在下において、適切なアルデヒドと反応することにより官能化され得る。
【００６９】
本発明は、この範囲内に、例えば立体配置異性または幾何異性のために生じた、本発明によるピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体のすべての立体異性の形態も含む。このような立体異性の形態は、鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ｃｉｓおよびｔｒａｎｓの異性体等である。例えば、Ｒ２が（ピペリジン−３−イル）メチルである場合において、２種の鏡像異性体の混合物が存在する。式Ｉの複素環式誘導体の個々の立体異性体、またはこれらの塩もしくは溶媒和物の場合において、本発明は、他の立体異性体を実質的に含まない、すなわち、５％未満、好ましくは２％未満、特に１％未満で伴う、前述の立体異性体を含む。任意の比率の立体異性体の混合物、例えば、実質的に等量の２種の鏡像異性体を含むラセミ混合物も、本発明の範囲内に含まれる。
【００７０】
キラル化合物について、純粋な立体異性体が得られる不斉合成法、例えば、キラル誘導による合成、キラル中間体から出発する合成、エナンチオ選択性の酵素的な変換、キラル媒体によるクロマトグラフィーを用いた立体異性体の分離は、当技術分野において周知である。このような方法は、Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ  Ｉｎ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ（Ａ．Ｎ．Ｃｏｌｌｉｎｓ、Ｇ．Ｎ．ＳｈｅｌｄｒａｋｅおよびＪ．Ｃｒｏｓｂｙ編、１９９２年、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ）に記載されている。同様に、幾何異性体の合成方法も、当技術分野において周知である。
【００７１】
遊離塩基としての形態の、本発明のピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体は、反応混合物から薬学的に許容できる塩として単離される。これらの塩は、有機または無機の酸、例えば、塩化水素、臭化水素、ヨウ化水素、硫酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、マレイン酸、マロン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸およびアスコルビン酸による前記遊離塩基の処理によっても得られる。
【００７２】
本発明のピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体は、非晶質の形としても存在する。多様な結晶形も可能である。すべてのこれらの物理的な形態は、本発明の範囲内に含まれる。
【００７３】
溶媒和物の調製は、一般に知られている。このように、例えば、Ｍ．Ｃａｉｒａ他、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉ．、９３（３）、６０１−６１１頁（２００４年）は、酢酸エチル中および水からの抗真菌性フルコナゾールの溶媒和物の調製を記載している。溶媒和物、半溶媒和物および水和物等の同様の調製は、Ｅ．Ｃ．ｖａｎ  Ｔｏｎｄｅｒ他、ＡＡＰＳ  ＰｈａｒｍＳｃｉＴｅｃｈ．、５（１）、ａｒｔｉｃｌｅ  １２（２００４年）およびＡ．Ｌ．Ｂｉｎｇｈａｍ他、Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．、６０３−６０４頁（２００１年）により記載されている。一般的な非限定的な工程は、発明の化合物を、所望の量の所望の溶媒（有機物もしくは水またはこれらの混合物）中に、周囲温度より高い温度で溶解することと、結晶を形成するのに十分な速度で溶液を冷却して、次いでその結晶を標準的な方法により単離することとを含む。例えばＩ．Ｒ．分光法等の分析技術は、溶媒和物（または水和物）として、結晶中に溶媒（または水）が存在することを示している。
【００７４】
本発明は、１つまたは複数の原子が、天然において通常見出される原子質量または質量数と異なる原子質量または質量数を有する原子により置き換えられていることを除けば、本明細書において列挙されるものと一致する、本発明の同位体標識された化合物も包含する。本発明の化合物に組み込まれ得る同位体の例には、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆおよび３６Ｃｌ等の水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素および塩素の同位体が挙げられる。
【００７５】
式Ｉの特定の同位体標識された化合物（例えば、３Ｈおよび１４Ｃで標識されたもの）は、化合物および／または基質の組織分布検定において有用である。トリチウム（すなわち、３Ｈ）化したおよび炭素−１４（すなわち、１４Ｃ）の同位体は、これらの調製の容易さおよび検出性のために、特に好ましい。さらに、重水素（すなわち、２Ｈ）等のより重い同位体による置換は、より高い代謝安定性（例えば、インビボの半減期の増大、または必要投与量の低減）に起因する特定の治療上の利点をもたらすことができるので、いくつかの状況において好ましいことがある。同位体標識された式（Ｉの化合物は、同位体標識されていない試薬の代わりに、適切な同位体標識された試薬を用いることによる、以下にスキームおよび／または実施例において開示されるものに類似した手順に従うことにより、一般に調製され得る。
【００７６】
さらなる態様において、本発明のピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体、ならびにこれらの薬学的に許容できる塩および溶媒和物は、治療において有用である。したがって、本発明のピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体は、ＰＫＣθ媒介障害の治療に有用である。特に、ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体は、関節炎（リウマチ性関節炎、乾癬性関節炎または変形性関節炎等）、移植拒絶（臓器移植、緊急移植または異種移植もしくは（熱傷の治療において用いられるような）同種移植等）、臓器移植、心筋梗塞、脳卒中または他の原因の間にこうむる虚血傷害または再灌流傷害等の虚血傷害または再灌流傷害からの保護、移植寛容誘導、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む炎症性腸疾患、狼瘡（全身性エリテマトーデス）、移植片対宿主疾患、接触過敏症、遅延型過敏およびグルテン過敏性腸症（セリアック病）を含むＴ細胞媒介過敏性疾患、１型糖尿病、乾癬、接触性皮膚炎（ツタウルシに起因するものを含む）、橋本甲状腺炎、シェーグレン症候群、グレーブス病等の自己免疫性甲状腺機能亢進症、アジソン病（副腎の自己免疫疾患）、多腺性自己免疫疾患（多腺性自己免疫症候群としても知られる）、自己免疫性脱毛症、悪性貧血、白斑症、自己免疫性下垂体機能低下症、ギラン−バレー症候群、他の自己免疫疾患、ＰＫＣシータが活性化または過剰発現される癌、またはＰＫＣシータキナーゼ活性が腫瘍の成長もしくは生存を促進するまたは化学療法の薬剤もしくは放射線に対する耐性をもたらす癌、糸球体腎炎、血清病、蕁麻疹、呼吸アレルギー（喘息、花粉症、アレルギー性鼻炎）または皮膚アレルギー等のアレルギー疾患、硬皮症、菌状息肉腫、急性炎症反応（急性呼吸促迫症候群および虚血／再灌流傷害等）、皮膚筋炎、円形脱毛症、慢性光線性皮膚炎、湿疹、ベーチェット病、掌蹠膿疱症、壊疽性膿皮症、セザリー症候群、アトピー性皮膚炎、全身性硬化症、モルフェア、ＩＩ型糖尿病、インスリン抵抗性、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性神経障害、糖尿病患者の循環器疾病の治療に有用である。
【００７７】
本発明は、有効量の、本発明によるピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体、またはこの薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物を投与することを含む、抑うつまたはいずれかの前述の障害に苦しむもしくは苦しみがちな、ヒトを含む哺乳類の治療方法をさらに含む。有効量または治療有効量は、上記の疾患を抑制し、したがって、所望の治療上、寛解性、抑制性または予防上の効果をもたらすのに有効な、本発明の化合物または組成物の量を意味する。
【００７８】
本明細書において、治療上の効果を達成するために必要な、本発明のピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体、またはこの薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物（活性成分とも呼ばれる）の量は、当然、特定の化合物、投与経路、レシピエントの年齢および状態、ならびに治療される特定の障害または疾患により変化する。
【００７９】
上述の障害のいずれかに対する適切な一日量は、１日あたり、レシピエント（例えば、ヒト）の体重１キログラムあたり０．００１から５０ｍｇの範囲内、好ましくは、１日あたり、体重１キログラムあたり０．０１から２０ｍｇの範囲内である。所望の用量は、その日を通して、適切な間隔で投与される複数の分割用量として表され得る。
【００８０】
活性成分が単独で投与されることも可能であるが、これを医薬組成物として与えることが好ましい。したがって、本発明は、Ｇｅｎｎａｒｏ他、Ｒｅｍｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ、２０００年（特にｐａｒｔ  ５、ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇを参照されたい。）に記載のもの等の１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤と混合した、本発明によるピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体を含む医薬組成物も提供する。「許容できる」の用語は、組成物の他の成分に適合し、そのレシピエントに有害でないことを意味する。適切な賦形剤は、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、第２版、Ａ．  ＷａｄｅおよびＰ．Ｊ．Ｗｅｌｌｅｒ編、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、ワシントン、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ、ロンドン、１９９４年に記載されている。組成物には、経口、経鼻、局所（頬側、舌下および経皮を含む）、非経口（皮下、静脈内および筋肉内を含む）または直腸内の投与に適したものが挙げられる。
【００８１】
本発明によるピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミン誘導体の混合物、および１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤は、錠剤等の固体用量単位に圧縮され得る、またはカプセルもしくは坐薬に加工され得る。薬学的に適切な液体により、この化合物は、溶液、懸濁液、乳液の形態の注射製剤として、またはスプレー、例えば経鼻もしくは頬側のスプレーとしても適用され得る。用量単位、例えば錠剤を作製するために、増量剤、着色剤およびポリマーバインダー等の従来の添加剤の使用が考慮される。一般に、任意の薬学的に許容できる添加剤が用いられ得る。本発明の化合物は、移植片、パッチ、ゲル、または即時のおよび／もしくは持続的な放出のための任意の他の製剤の中における使用にも適している。
【００８２】
医薬組成物を調製および投与できる適切な増量剤には、適切な量で用いられるラクトース、澱粉、セルロースおよびこれらの誘導体等、またはこれらの混合物が挙げられる。非経口投与のために、プロピレングリコールまたはブチレングリコール等の薬学的に許容できる分散剤および／または湿潤剤を含有する水性懸濁液、等張生理食塩溶液および無菌注射可能溶液が用いられ得る。
【００８３】
本発明は、上述のような医薬組成物に適した包装材料と組み合わせた上記の組成物をさらに含み、上記の包装材料は、上述のような使用のための組成物の使用についての指示を含む。
【発明を実施するための形態】
【実施例】
【００８４】
本発明は、この範囲を限定することを意図しない以下の実施例によりさらに例示される。別に示されなければ、パーセントは、成分と組成物の全重量とにより与えられる重量パーセントであり、温度は℃であり、または周囲温度であり、圧力は、大気圧または大気圧付近である。市販の試薬は、さらに精製することなく用いた。すべての構造は、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｏｆｔ  ＣｈｅｍＤｒａｗ  Ｕｌｔｒａ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ９．０．７．における「Ｃｏｎｖｅｒｔ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｔｏ  Ｎａｍｅ」の機能を用いて命名した。
【００８５】
略語
アセトニトリル（ＡＣＮ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、１，２−ジカルボニトリル−４，５−ジクロロ−３，６，ジオキソ−１，４−シクロヘキサジエン（ＤＤＱ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、時間（ｈ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）、メチル（Ｍｅ）、分（ｍｉｎ．）、質量分析−エレクトロスプレーイオン化ＭＳ（ＥＳＩ）、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ）、終夜（ｏ．ｎ．）、反応混合物（ｒ．ｍ．）、室温（ｒ．ｔ．）、飽和（ｓａｔｄ．）、シリカ（ＳｉＯ２）、溶液（ｓｏｌ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、トリフレート（Ｔｆ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、超高速液体クロマトグラフィー−質量分析（ＵＰＬＣ−ＭＳ）および紫外線（ＵＶ）。
【００８６】
ＭＳ（ＥＳＩ）スペクトルを、フローインジェクションを用い、陽イオンおよび陰イオンのモードを交替させつつ、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＡＰＩ−１６５のシングル四重極ＭＳを用いて得た。質量の範囲は、１２０−２０００Ｄａであり、ステップレート０．２Ｄａで走査され、キャピラリーの電圧を５０００Ｖに設定した。窒素ガスを噴霧のために用いた。
【００８７】
ＬＣ−ＭＳスペクトルを、Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ、ＲＰ−１８ｅ、４．６×１００ｍｍ、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８、３．５μｍ、４．６×２０ｍｍカラムをもつＷａｔｅｒｓ  ＬＣ−ＭＳ質量分析計を用いて得た。３．６０分で１００％（ＴＦＡ０．０５％を含むＣＨ３ＣＮ／水−１／９）から１００％（ＴＦＡ０．０５％を含むＣＨ３ＣＮ／水−９／１）に、次いで１００％（ＴＦＡ０．０５％を含むＣＨ３ＣＮ／水−９／１）の均一濃度で０．０５分の後に、０．３５分で１００％（ＴＦＡ０．０５％を含むＣＨ３ＣＮ／水−１／９）に、最後に１００％（ＴＦＡ０．０５％を含むＣＨ３ＣＮ／水−１／９）の均一濃度で２．００分の勾配で、６分の標準運転時間を用いた。ＰＤＡ型（２００−３２０ｎｍ）の検出器をＵＶ検出のために用い、質量検出をＺＱ検出器により行った。
【００８８】
ＵＰＬＣ−ＭＳデータを、ＢＥＨ  Ｃ１８  １、７μｍ、２．１×１００ｍｍ、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８、３．５μｍ、４．６×２０ｍｍカラムをもつＷａｔｅｒ  ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ｓｙｓｔｅｍを用いて得た。３．００分で水１００％（ＴＦＡ０．０３５％を含む）から水中ＣＨ３ＣＮ６０％（ＴＦＡ０．０３５％を含む）に、次いで０．２０分でＣＨ３ＣＮ１００％（ＴＦＡ０．０３５％を含む）に、これをＣＨ３ＣＮ１００％（ＴＦＡ０．０３５％を含む）の均一濃度で０．４９分間保持し、最後に０．０１分で水１００％（ＴＦＡ０．０３５％を含む）への勾配で、３．７０分の標準運転時間を用いた。ＰＤＡ型（２００−３２０ｎｍ）の検出器をＵＶ検出のために用い、質量検出をＳＱＤ検出器により行った。
【００８９】
【化８】
2011516522.tif 000011
【００９０】
実施例１．１  （Ｒ）−６−（２−クロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【００９１】
（１．１．１）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−５−ヨードピリミジン−４−イルアミノ）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【００９２】
【化９】
2011516522.tif 000012
２，４−ジクロロ−５−ヨードピリミジン（３．５ｇ、１２．７３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）中攪拌溶液に、（３Ｓ）−アミノメチル−１−ピペコリン酸−（１，１−ジメチル）エチルエステル（３．０ｇ、１４ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（２．８８ｍＬ、１６．５５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）中溶液を−７０℃で滴下した。反応混合物を、終夜、室温まで温めた。次いで、この反応混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから３０％ＥｔＯＡｃに）により精製し、表題の化合物を、収率３８％（２．１９ｇ、４．８４ｍｍｏｌ）で白色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．０４ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４５３。
【００９３】
（１．１．２）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−５−（（２−クロロフェニル）エチニル）ピリミジン−４−イルアミノ）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【００９４】
【化１０】
2011516522.tif 000013
窒素気流を、化合物１．１．１（３００ｍｇ、０．６６３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（６ｍＬ）中攪拌溶液に室温で通した。次いで、１−クロロ−２−エチニルベンゼン（１３６ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．２３ｍＬ、１．３３ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（３．８ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）を添加し、反応混合物を週末の間にわたり室温で攪拌した。次いで、この反応混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、水（２回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてトルエン／ＥｔＯＡｃ、１００％トルエンから８％ＥｔＯＡｃに）により精製し、表題の化合物を、収率７８％（２４０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）でわずかに黄色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．８２ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４６１。
【００９５】
（１．１．３）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−６−（２−クロロフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【００９６】
【化１１】
2011516522.tif 000014
化合物１．１．２（１９７ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）のジオキサン（１５ｍＬ）中攪拌溶液に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（９６ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を室温で添加した。次いで、反応混合物を４０℃に加熱し、終夜攪拌した。次いで、この反応混合物を、ＤＣＭで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（１回）、水（１回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから３０％ＥｔＯＡｃに）により精製し、表題の化合物を、収率５２％（１０３ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）でわずかに黄色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．４８ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４６１。
【００９７】
（１．１．４）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２−クロロフェニル）−２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【００９８】
【化１２】
2011516522.tif 000015
化合物１．１．３（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を、ＤＩＥＡ（１ｍＬ）および３，４−ジフルオロベンジルアミン（１ｍＬ）の混合物中に溶解した。次いで、反応混合物を、マイクロ波の中において１４０℃で３．５ｈ、さらに１５０℃で４ｈ加熱した。次いで、この反応混合物を、ＤＣＭで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（３回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから２５％ＥｔＯＡｃに）により精製し、表題の化合物を、収率７０％（８７ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）で無色の油として得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク３．９９ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５６８。
【００９９】
（１．１）（Ｒ）−６−（２−クロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０１００】
【化１３】
2011516522.tif 000016
化合物１．１．４（８７ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）中攪拌溶液に、トリフルオロ酢酸（０．６０ｍＬ、７．６６ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を２ｈ攪拌し、次いで真空下で濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡを含む０−５０％ＡＣＮ、移動相として）により精製した。生成物の分画を合わせ、真空下で濃縮し、水／ＡＣＮから凍結乾燥し、表題の化合物のＴＦＡ塩を、収率６２％（５５ｍｇ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク２．９５ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４６８。
【０１０１】
実施例１．２  （Ｒ）−４−（（６−（２−クロロフェニル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イルアミノ）メチル）フェノール。
【０１０２】
（１．２．１）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２−クロロフェニル）−２−（４−ヒドロキシベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１０３】
【化１４】
2011516522.tif 000017
化合物１．１．３（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（０．５ｍＬ）中溶液に、４−ヒドロキシベンジルアミン（５３４ｍｇ、４．３ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（７６μＬ、０．４４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、マイクロ波の中において１５０℃で４時間加熱した。次いで、この反応混合物を、ＤＣＭで希釈し、ＮＨ４Ｃｌ溶液（２回）、水（２回）および鹹水で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、５０％ＥｔＯＡｃ）により精製し、表題の化合物を、収率６６％（７９ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）で固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク３．６７ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５４８。
【０１０４】
（１．２）（Ｒ）−４−（（６−（２−クロロフェニル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イルアミノ）メチル）フェノール。
【０１０５】
【化１５】
2011516522.tif 000018
化合物１．２．１（７９ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）中攪拌溶液に、ＴＦＡ（０．５ｍＬ）を添加した。反応混合物を、室温で３０分間攪拌し、次いで真空下で濃縮した。粗生成物を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡを含む０−５０％ＡＣＮ、移動相として）により精製した。生成物の分画を、濃縮および凍結乾燥して、表題の化合物のＴＦＡ塩を、収率３３％（３１ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク２．７２ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４４８。
【０１０６】
実施例１．３  （Ｒ）−３−（（６−（２−クロロフェニル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イルアミノ）メチル）フェノール。
【０１０７】
（１．３．１）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２−クロロフェニル）−２−（３−ヒドロキシベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１０８】
【化１６】
2011516522.tif 000019
３−ヒドロキシベンジルアミンを、４−ヒドロキシベンジルアミンの代わりに用いたこと以外は、化合物１．２．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝４５％（５０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク３．６４ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５４８。
【０１０９】
（１．３）（Ｒ）−３−（（６−（２−クロロフェニル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イルアミノ）メチル）フェノール。
【０１１０】
【化１７】
2011516522.tif 000020
化合物１．３．１を、化合物１．２．１の代わりに用いたこと以外は、化合物１．２を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝６０％（３１ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク２．６９ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４４８。
【０１１１】
実施例１．４（Ｒ）−４−（（６−（２−クロロフェニル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イルアミノ）メチル）−２−フルオロフェノール。
【０１１２】
（１．４．１）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２−クロロフェニル）−２−（３−フルオロ−４−メトキシベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１１３】
【化１８】
2011516522.tif 000021
３−フルオロ−４−メトキシベンジルアミンを、４−ヒドロキシベンジルアミンの代わりに用いたこと以外は、化合物１．２．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝５６％（６６ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク３．８８ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５８０。
【０１１４】
（１．４）（Ｒ）−４−（（６−（２−クロロフェニル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル−アミノ）メチル）−２−フルオロフェノール。
【０１１５】
【化１９】
2011516522.tif 000022
化合物１．４．１（６６ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍＬ）中溶液に、三フッ化ホウ素−硫化メチル錯体（３６μｌ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、室温で４時間攪拌した。次いで、この反応混合物を、真空下で濃縮し、粗生成物を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡを含む０−５０％ＡＣＮ、移動相として）により精製した。生成物の分画を、濃縮および凍結乾燥して、表題の化合物のＴＦＡ塩を、収率２６％（１７ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク２．７１ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４６６。
【０１１６】
【化２０】
2011516522.tif 000023
【０１１７】
実施例２．１  （Ｒ）−３−（（６−（２，６−ジクロロフェニル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イルアミノ）メチル）フェノール。
【０１１８】
（２．１．１）２，６−ジクロロフェニルトリフルオロメタンスルホネート
【０１１９】
【化２１】
2011516522.tif 000024
２，６−ジクロロフェノール（２０ｇ、１２３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２５０ｍＬ）中溶液に、ピリジン（１５．８５ｍＬ、１９６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０℃に冷却し、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（２９．６ｍＬ、１６０ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物を室温に温め、終夜攪拌した。この混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で中和した。層を分離した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗残留物にヘプタンを添加した。この混合物を攪拌し、沈殿が生じ、これを濾過した。濾液を真空下で濃縮した。表題の化合物を、定量的な収率で得た。
【０１２０】
（２．１．２）［（２，６−ジクロロフェニル）エチニル］トリメチルシラン
【０１２１】
【化２２】
2011516522.tif 000025
トリメチルシリルアセチレン（２７．１ｍＬ、１９１ｍｍｏｌ）、化合物（２．１．１）（２７．５ｇ、１２７ｍｍｏｌ）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（１．７８ｇ、２．５４ｍｍｏｌ）のトリエチルアミン（９５ｍＬ）およびＤＭＦ（４７５ｍＬ）中溶液を、１２０℃に加熱し、終夜攪拌した。混合物を、ｒｔに冷却し、真空下で濃縮した。残留物をヘプタン（６００ｍＬ）中に溶解し、３０分間攪拌した。この混合物を、水（６００ｍＬ２回）および鹹水（６００ｍＬ１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相として１００％ヘプタン）により精製した。表題の化合物を、収率６８％（２１ｇ、８６ｍｍｏｌ）で黄色の油として得た。
【０１２２】
（２．１．３）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−６−（２，６−ジクロロフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１２３】
【化２３】
2011516522.tif 000026
化合物（１．１．１）（２．３ｇ、５．０８ｍｍｏｌ）および化合物（２．１．２）（１．４８ｇ、６．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２５ｍＬ）中溶液に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８５５ｍｇ、７．６２ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２９４ｍｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）を添加して、褐色溶液を得た。反応混合物を５０℃に加熱し、終夜攪拌した。この反応混合物を、水／ＥｔＯＡｃ混合物（１／１）に注いだ。層を分離し、有機層を、水（３回）、鹹水（１回）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから５０％ＥｔＯＡｃに）により精製した。表題の化合物を、収率２０％（５１１ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）で黄色の油として得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．５５ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］：４９５。
【０１２４】
（２．１．４）（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２，６−ジクロロフェニル）−２−（３−ヒドロキシベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１２５】
【化２４】
2011516522.tif 000027
化合物（２．１．３）（１００ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（０．５ｍＬ）中溶液に、３−ヒドロキシベンジルアミン（１２０ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（３５１ｕＬ、２．０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、マイクロ波の中において１５０℃で４時間攪拌し、次いで、ＤＣＭで希釈し、ＮＨ４Ｃｌ溶液（２回）の後に水（２回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、５０％ＥｔＯＡｃ）により精製した。表題の化合物を、収率７８％（９２ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）で黄色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク３．６４ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５８２。
【０１２６】
（２．１）（Ｒ）３−｛［６−（２，６−ジクロロ−フェニル）−７−ピペリジン−３−イルメチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イルアミノ］−メチル｝−フェノール。
【０１２７】
【化２５】
2011516522.tif 000028
化合物（２．１．４）（９２ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（０．５ｍＬ）を添加し、反応混合物を、室温で３０分間攪拌した。この反応混合物を真空下で濃縮し、粗生成物を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡを含む０−５０％ＡＣＮ、移動相として）により精製した。生成物の分画を、濃縮および凍結乾燥して、表題の化合物のＴＦＡ塩を、収率７０％（６６ｍｇ）で得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク１．６４ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４８２。
【０１２８】
実施例２．２  （Ｒ）−６−（２，６−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０１２９】
（２．２．１）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２，６−ジクロロフェニル）−２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１３０】
【化２６】
2011516522.tif 000029
３，４−ジフルオロベンジルアミンを、３−ヒドロキシベンジルアミンの代わりに用いたこと以外は、化合物２．１．４を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝４３％（３５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク３．９１ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝６０２。
【０１３１】
（２．２）（Ｒ）−６−（２，６−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０１３２】
【化２７】
2011516522.tif 000030
化合物２．２．１を、化合物２．１．４の代わりに用いたこと以外は、化合物２．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝４４％（１８ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク２．９６ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５０２。
【０１３３】
実施例２．３  （Ｒ）−４−（（６−（２，６−ジクロロフェニル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イルアミノ）メチル）フェノール。
【０１３４】
（２．３．１）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２，６−ジクロロフェニル）−２−（４−ヒドロキシベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１３５】
【化２８】
2011516522.tif 000031
４−メトキシベンジルアミンを、３−ヒドロキシベンジルアミンの代わりに用いたこと以外は、化合物２．１．４を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝８５％（１００ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク３．６８ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５８２。
【０１３６】
（２．３）（Ｒ）−４−（（６−（２，６−ジクロロフェニル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イルアミノ）メチル）フェノール。
【０１３７】
【化２９】
2011516522.tif 000032
化合物２．３．１を、化合物２．１．４の代わりに用いたこと以外は、化合物２．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝１６％（１６ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク２．６６ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４８２。
【０１３８】
実施例２．４  （Ｒ）−６−（２，６−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０１３９】
（２．４．１）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２，６−ジクロロフェニル）−２−（３−フルオロ−４−メトキシベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１４０】
【化３０】
2011516522.tif 000033
３−フルオロ−４−メトキシベンジルアミンを、３−ヒドロキシベンジルアミンの代わりに用いたこと以外は、化合物２．１．４を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝約１００％（１１９ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク３．９０ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝６１４。
【０１４１】
（２．４）（Ｒ）−６−（２，６−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０１４２】
【化３１】
2011516522.tif 000034
化合物２．４．１を、化合物２．１．４の代わりに用いたこと以外は、化合物２．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝３３％（２０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク１．９５ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５１４。
【０１４３】
実施例２．５  （Ｒ）−６−（２，６−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３−フルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０１４４】
（２．５．１）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２，６−ジクロロフェニル）−２−（３−フルオロベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１４５】
【化３２】
2011516522.tif 000035
３−フルオロベンジルアミンを、３−ヒドロキシベンジルアミンの代わりに用いたこと以外は、化合物（２．１．４）を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝６１％（７２ｍｇ、０．１２３ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．００ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５８４。
【０１４６】
（２．５）（Ｒ）−６−（２，６−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３−フルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０１４７】
【化３３】
2011516522.tif 000036
化合物（２．５．１）を、化合物（２．１．４）の代わりに用いたこと以外は、化合物２．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝３６％（３２ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク２．０１ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４８４。
【０１４８】
実施例２．６  （Ｒ）−Ｎ−ベンジル−６−（２，６−ジクロロフェニル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン
【０１４９】
（２．６．１）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−（ベンジルアミノ）−６−（２，６−ジクロロフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１５０】
【化３４】
2011516522.tif 000037
ベンジルアミンを、３−ヒドロキシベンジルアミンの代わりに用いたこと以外は、化合物（２．１．４）を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝８４％（４５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：質量［Ｍ＋Ｈ］＝５６６。
【０１５１】
（２．６）（Ｒ）−Ｎ−ベンジル−６−（２，６−ジクロロフェニル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０１５２】
【化３５】
2011516522.tif 000038
化合物（２．６．１）を、化合物（２．１．４）の代わりに用いたこと以外は、化合物２．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝３８％（１４ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク２．１４ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４６６。
【０１５３】
【化３６】
2011516522.tif 000039
【０１５４】
実施例３．１  （Ｒ）−６−（２−クロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−５−メチル−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０１５５】
（３．１．１）１−クロロ−２−（プロプ−１−イニル）ベンゼン。
【０１５６】
【化３７】
2011516522.tif 000040
１−クロロ−２−エチニルベンゼン（０．５９ｇ、４．３２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）中攪拌溶液に、ｎ−ブチルリチウム１．６Ｍのヘキサン中溶液（３．２４ｍＬ、５．１８ｍｍｏｌ）を−７０℃で滴下した。添加後、反応混合物を、−７０℃で１５分間攪拌した。次いで、ヨードメタン（０．５４ｍＬ、８．６４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液を滴下した。この反応混合物を、終夜、室温まで温めた。次いで、この反応混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した後に、表題の化合物を、収率９８％（０．６４ｇ、４．２５ｍｍｏｌ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ＵＶピーク３．９６ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝応答なし。
【０１５７】
（３．１．２）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−６−（２−クロロフェニル）−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１５８】
【化３８】
2011516522.tif 000041
窒素気流を、化合物（１．１．１）（５００ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（８ｍＬ）中攪拌溶液に室温で通した。次いで、化合物（３．１．１）（２５０ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１２．４ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（２１７ｍｇ、２．２１ｍｍｏｌ）および塩化リチウム（４７ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１１０℃に加熱し、終夜攪拌した。この反応混合物を、さらに室温で４日間攪拌し、次いで、ＥｔＯＡｃで希釈し、水（２回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから２０％ＥｔＯＡｃに）により精製し、表題の化合物を、収率２０％（１０６ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）で無色の油として得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．５９ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４７５。
【０１５９】
（３．１．３）（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２−クロロフェニル）−２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１６０】
【化３９】
2011516522.tif 000042
化合物（３．１．２）（１０６ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を、ＤＩＥＡ（０．１ｍＬ）および３，４−ジフルオロベンジルアミン（０．８ｍＬ）の混合物中に溶解した。次いで、反応混合物を、マイクロ波の中において１６０℃で４ｈ加熱した。次いで、この反応混合物を、ＤＣＭで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから３０％ＥｔＯＡｃに）により精製し、表題の化合物を、収率４４％（５７ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）で無色の油として得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．０８ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５８２。
【０１６１】
（３．１）（Ｒ）−６−（２−クロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−５−メチル−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０１６２】
【化４０】
2011516522.tif 000043
化合物（３．１．３）（５７ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を室温で添加した。次いで、反応混合物を、真空下で濃縮し、粗生成物を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡを含む０−５０％ＡＣＮ、移動相として）により精製した。生成物の分画を、真空下で濃縮し、凍結乾燥して、表題の化合物のＴＦＡ塩を、収率２２％（１２ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク３．０１ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４８２。
【０１６３】
実施例３．２  （Ｒ）−６−（２，６−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−５−メチル−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０１６４】
（３．２．１）１，３−ジクロロ−２−（プロプ−１−イニル）ベンゼン。
【０１６５】
【化４１】
2011516522.tif 000044
化合物（２．１．２）（０．９７ｇ、３．９９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）中攪拌溶液に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．５４ｇ、４．７９ｍｍｏｌ）を−７０℃で添加した。添加後、反応混合物を、−７０℃で４５分間攪拌した。次いで、ヨードメタン（０．５０ｍＬ、７．９８ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物を、室温まで温めた。４ｈ３０’攪拌後、この反応混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン）により精製した後に、表題の化合物を、収率６６％（０．４９ｇ、２．６５ｍｍｏｌ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ＵＶピーク４．１８ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝応答なし。
【０１６６】
（３．２．２）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−６−（２，６−ジクロロフェニル）−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１６７】
【化４２】
2011516522.tif 000045
化合物３．２．１を、化合物３．１．１の代わりに用いたこと以外は、化合物３．１．２を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝８％（３６ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．７１ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５０９。
【０１６８】
（３．２．３）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２，６−ジクロロフェニル）−２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１６９】
【化４３】
2011516522.tif 000046
化合物３．２．２を、化合物３．１．２の代わりに用いたこと以外は、化合物３．１．３を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝１００％（３８ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．１８ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝６１６。
【０１７０】
（３．２）（Ｒ）−６−（２，６−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−５−メチル−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０１７１】
【化４４】
2011516522.tif 000047
化合物３．２．３を、化合物３．１．３の代わりに用いたこと以外は、化合物３．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝１７％（７ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク２．２４ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５１６。
【０１７２】
実施例３．３  （Ｒ）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−５−メチル−６−フェニル−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０１７３】
（３．３．１）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−５−メチル−６−フェニル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１７４】
【化４５】
2011516522.tif 000048
市販の１−フェニル−１−プロピンを、化合物３．１．１の代わりに用いたこと以外は、化合物３．１．２を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝２６％（５０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．５０ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４４１。
【０１７５】
（３．３．２）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−５−メチル−６−フェニル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１７６】
【化４６】
2011516522.tif 000049
化合物３．３．１を、化合物３．１．２の代わりに用いたこと以外は、化合物３．１．３を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝２５％（１５ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．０８ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５４８。
【０１７７】
（３．３）（Ｒ）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−５−メチル−６−フェニル−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０１７８】
【化４７】
2011516522.tif 000050
化合物３．３．２を、化合物３．１．３の代わりに用いたこと以外は、化合物３．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝８６％（１３ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク２．９１ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４４８。
【０１７９】
【化４８】
2011516522.tif 000051
【０１８０】
実施例４．１  （Ｓ）−６−（２−クロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０１８１】
（４．１．１）（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（５−ブロモ−２−クロロピリミジン−４−イルアミノ）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１８２】
【化４９】
2011516522.tif 000052
５−ブロモ−２，４−ジクロロピリミジン（０．２５ｇ、１．０９７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８ｍＬ）中攪拌溶液に、（３Ｒ）−３−（アミノメチル）−１−（ｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン（３．０ｇ、１４ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．２４８ｍＬ、１．４２６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）中溶液を−７０℃で滴下した。反応混合物を、−７０℃で攪拌し、次いで、終夜、室温まで温めた。この反応混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（１回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、ＥｔＯＡｃ１０％から５０％に）により精製し、表題の化合物を、収率９７％（０．４３ｇ、１．０６７ｍｍｏｌ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．０３ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４０５。
【０１８３】
（４．１．２）（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−５−（（２−クロロフェニル）エチニル）ピリミジン−４−イルアミノ）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１８４】
【化５０】
2011516522.tif 000053
窒素気流を、化合物（４．１．１）（２２５ｍｇ、０．５５５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）中攪拌溶液に室温で通した。次いで、１−クロロ−２−エチニルベンゼン（１０６ｍｇ、０．７７６ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．１９ｍＬ、１．１０９ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（７．４ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（６４．１ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、終夜、５０℃で攪拌した。次いで、この反応混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、ＮＨ４Ｃｌ溶液（１回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから５０％ＥｔＯＡｃに）により精製し、表題の化合物を、収率４７％（１２０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）で得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：質量［Ｍ＋Ｈ］＝４６１。
【０１８５】
（４．１．３）（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−６−（２−クロロフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１８６】
【化５１】
2011516522.tif 000054
化合物（４．１．２）（１２０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（２ｍＬ）中溶液を、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（５８ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（１ｍＬ）中攪拌懸濁液に室温で添加した。次いで、反応混合物を、終夜、室温で攪拌した。次いで、この反応混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、水（１回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから４０％ＥｔＯＡｃに）により精製して、表題の化合物を、収率２３％（２８ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）で得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：質量［Ｍ＋Ｈ］＝４６１。
【０１８７】
（４．１．４）（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２−クロロフェニル）−２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０１８８】
【化５２】
2011516522.tif 000055
３，４−ジフルオロベンジルアミン（０．３６ｍＬ、３．０３ｍｍｏｌ）を、化合物（４．１．３）（２８ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）に添加し、反応混合物を、終夜、１４０℃で攪拌した。次いで、この反応混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（１回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから５０％ＥｔＯＡｃに）により精製し、表題の化合物を、収率６９％（２４ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）で得た。
【０１８９】
（４．１）（Ｓ）−６−（２−クロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０１９０】
【化５３】
2011516522.tif 000056
化合物４．１．４（２４ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（０．６ｍＬ）中攪拌溶液に、ＴＦＡ（０．６ｍＬ）を添加した。反応混合物を、室温で１ｈ攪拌し、次いで、真空下で濃縮した。粗生成物を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡを含む０−５０％ＡＣＮ、移動相として）により精製した。生成物の分画を、濃縮および凍結乾燥して、表題の化合物のＴＦＡ塩を、収率３２％（８ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）で得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク１．９８ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４６８。
【０１９１】
実施例４．２  （Ｒ）−６−（２−クロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピロリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０１９２】
（４．２．１）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（５−ブロモ−２−クロロピリミジン−４−イルアミノ）メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート。
【０１９３】
【化５４】
2011516522.tif 000057
（３Ｓ）−（アミノメチル）−１−（ｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジンを、（３Ｒ）−（アミノメチル）−１−（ｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジンの代わりに用いたこと以外は、化合物４．１．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝７７％（０．３３グラム、０．８５ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク３．８２ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝３９１、３９３。
【０１９４】
（４．２．２）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−５−（（２−クロロフェニル）エチニル）ピリミジン−４−イルアミノ）メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート。
【０１９５】
【化５５】
2011516522.tif 000058
化合物４．２．１を、化合物４．１．１の代わりに用いたこと以外は、化合物４．１．２を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝４０％（７８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．６９ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４４７。
【０１９６】
（４．２．３）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−６−（２−クロロフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート。
【０１９７】
【化５６】
2011516522.tif 000059
化合物４．２．２を、化合物４．１．２の代わりに用いたこと以外は、化合物４．１．３を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝２６％（２１ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：質量［Ｍ＋Ｈ］＝４４７。
【０１９８】
（４．２．４）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２−クロロフェニル）−２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート。
【０１９９】
【化５７】
2011516522.tif 000060
化合物４．２．３を、化合物４．１．３の代わりに用いたこと以外は、化合物４．１．４を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝８８％（２２ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：質量［Ｍ＋Ｈ］＝５５４。
【０２００】
（４．２）（Ｒ）−６−（２−クロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピロリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０２０１】
【化５８】
2011516522.tif 000061
化合物４．２．４を、化合物４．１．４の代わりに用いたこと以外は、化合物４．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝６４％（１５ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク１．９１ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４５４。
【０２０２】
実施例４．３  （Ｓ）−６−（２−クロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピロリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０２０３】
（４．３．１）（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（５−ブロモ−２−クロロピリミジン−４−イルアミノ）メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート。
【０２０４】
【化５９】
2011516522.tif 000062
（３Ｒ）−（アミノメチル）−１−（ｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジンを、（３Ｒ）−（アミノメチル）−１−（ｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジンの代わりに用いたこと以外は、化合物４．１．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝９１％（０．３９グラム、１．００ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク３．８０ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝３９１、３９３。
【０２０５】
（４．３．２）（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−５−（（２−クロロフェニル）エチニル）ピリミジン−４−イルアミノ）メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート。
【０２０６】
【化６０】
2011516522.tif 000063
化合物４．３．１を、化合物４．１．１の代わりに用いたこと以外は、化合物４．１．２を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝２０％（４６ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：質量［Ｍ＋Ｈ］＝４４７。
【０２０７】
（４．３．３）（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−６−（２−クロロフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート。
【０２０８】
【化６１】
2011516522.tif 000064
化合物４．３．２を、化合物４．１．２の代わりに用いたこと以外は、化合物４．１．３を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝２１％（１０ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：質量［Ｍ＋Ｈ］＝４４７。
【０２０９】
（４．３．４）（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２−クロロフェニル）−２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピロリジン−１−カルボキシレート。
【０２１０】
【化６２】
2011516522.tif 000065
化合物４．３．３を、化合物４．１．３の代わりに用いたこと以外は、化合物４．１．３を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝６５％（８ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：質量［Ｍ＋Ｈ］＝５５４。
【０２１１】
（４．３）（Ｓ）−６−（２−クロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピロリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０２１２】
【化６３】
2011516522.tif 000066
化合物４．３．４を、化合物４．１．４の代わりに用いたこと以外は、化合物４．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝７１％（６ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク１．８９ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４５４。
【０２１３】
実施例４．４  ６−（２−クロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（モルホリン−２−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０２１４】
（４．４．１）ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（（５−ブロモ−２−クロロピリミジン−４−イルアミノ）メチル）モルホリン−４−カルボキシレート。
【０２１５】
【化６４】
2011516522.tif 000067
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（アミノメチル）モルホリン−４−カルボキシレートを、（３Ｒ）−（アミノメチル）−１−（ｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジンの代わりに用いたこと以外は、化合物４．１．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝８８％（０．３９グラム、０．９７ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク３．７０ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４０７、４０９。
【０２１６】
（４．４．２）ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（（２−クロロ−５−（（２−クロロフェニル）エチニル）ピリミジン−４−イルアミノ）メチル）モルホリン−４−カルボキシレート。
【０２１７】
【化６５】
2011516522.tif 000068
化合物４．４．１を、化合物４．１．１の代わりに用いたこと以外は、化合物４．１．２を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝４４％（０．１０グラム、０．２２ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．７０ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４６３。
【０２１８】
（４．４．３）ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（（２−クロロ−６−（２−クロロフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）モルホリン−４−カルボキシレート。
【０２１９】
【化６６】
2011516522.tif 000069
化合物４．４．２を、化合物４．１．２の代わりに用いたこと以外は、化合物４．１．３を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝２９％（２９ｍｇ、０．０６２ｍｍｏｌ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：質量［Ｍ＋Ｈ］＝４６３。
【０２２０】
（４．４．４）ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（（６−（２−クロロフェニル）−２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）モルホリン−４−カルボキシレート。
【０２２１】
【化６７】
2011516522.tif 000070
化合物４．４．３を、化合物４．１．３の代わりに用いたこと以外は、化合物４．１．４を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝９７％（３４ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：質量［Ｍ＋Ｈ］＝５７０。
【０２２２】
（４．４）６−（２−クロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（モルホリン−２−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０２２３】
【化６８】
2011516522.tif 000071
化合物４．４．４を、化合物４．１．４の代わりに用いたこと以外は、化合物４．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝６４％（２２ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク１．９４ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４７０。
【０２２４】
【化６９】
2011516522.tif 000072
【０２２５】
実施例５．１  （Ｒ）−６−（２−クロロ−４−メチルフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０２２６】
（５．１．１）２−クロロ−４−メチルフェニルトリフルオロメタンスルホネート
【０２２７】
【化７０】
2011516522.tif 000073
２−クロロ−４−メチルフェノール（０．８３ｍＬ、７．０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中溶液に、ピリジン（０．９１ｍＬ、１１．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０℃に冷却し、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（１．５４ｍＬ、９．１ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物を、室温に温め、終夜攪拌した。この混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で中和した。層を分離し、有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。残留物を、トルエンで共蒸発させて、表題の化合物を、定量的な収率で得た。
【０２２８】
（５．１．２）［（２−クロロ−４−メチルフェニル）エチニル］トリメチルシラン
【０２２９】
【化７１】
2011516522.tif 000074
トリメチルシリルアセチレン（１．４６ｍＬ、１０．３ｍｍｏｌ）、化合物（５．１．１）（１．８８ｇ、６．８５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１５８ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）のトリエチルアミン（４．７７ｍＬ、３４．２ｍｍｏｌ）およびＮＭＰ（３０ｍＬ）中溶液を、１２０℃に加熱し、終夜攪拌した。この混合物を、ｒｔに冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、水（１回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン）により精製し、表題の化合物を、収率１９％（０．２８ｇ、１．２８ｍｍｏｌ）で得た。
【０２３０】
（５．１．３）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−６−（２−クロロ−４−メチルフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０２３１】
【化７２】
2011516522.tif 000075
窒素を、化合物（１．１．１）（０．１５ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）および化合物（５．１．２）（８９ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液に通した。カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（５５．８ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１９ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、マイクロ波の中において１００℃で１ｈ加熱した。この反応混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、水（１回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから４０％ＥｔＯＡｃに）により精製した。表題の化合物を、収率４５％（７１ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）で得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：質量［Ｍ＋Ｈ］＝４７５。
【０２３２】
（５．１．４）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２−クロロ−４−メチルフェニル）−２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０２３３】
【化７３】
2011516522.tif 000076
化合物（５．１．３）（７１ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（０．７ｍＬ）中溶液に、３，４−ジフルオロベンジルアミン（０．１８ｍＬ、１．４９ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（５２ｕＬ、０．３０ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を、マイクロ波の中において１５０℃で４時間加熱した。次いで、この反応混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、ＮＨ４Ｃｌ溶液（１回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから５０％ＥｔＯＡｃに）により精製した。表題の化合物を、収率４４％（３８ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）で得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：質量［Ｍ＋Ｈ］＝５８２。
【０２３４】
（５．１）（Ｒ）−６−（２−クロロ−４−メチルフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０２３５】
【化７４】
2011516522.tif 000077
化合物（５．１．４）（３８ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）中攪拌溶液に、ＴＦＡ（１．０ｍＬ）を添加した。反応混合物を、室温で１ｈ攪拌し、次いで、真空下で濃縮した。粗生成物を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡを含む０−５０％ＡＣＮ、移動相として）により精製した。生成物の分画を、濃縮および凍結乾燥して、表題の化合物のＴＦＡ塩を、収率６９％（２７ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）で得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：質量［Ｍ＋Ｈ］＝４８２。
【０２３６】
実施例５．２  （Ｒ）−６−（２−クロロ−４−メトキシフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０２３７】
（５．２．１）２−クロロ−４−メトキシフェニルトリフルオロメタンスルホネート
【０２３８】
【化７５】
2011516522.tif 000078
２−クロロ−４−メトキシフェノールを、２−クロロ−４−メチルフェノールの代わりに用いたこと以外は、化合物５．１．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝９７％（１．７５グラム、５．９３ｍｍｏｌ）。
【０２３９】
（５．２．２）［（２−クロロ−４−メトキシフェニル）エチニル］トリメチルシラン
【０２４０】
【化７６】
2011516522.tif 000079
窒素を、化合物（５．２．１）（０．６５グラム、２．２４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３．１２ｍＬ、２２．４ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（１１ｍＬ）中溶液に通した。トリメチルシリルアセチレン（１．５９ｍＬ、１１．２ｍｍｏｌ）およびビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（３１ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、１２０℃に加熱し、終夜攪拌した。この混合物を、ｒｔに冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、水（１回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン）により精製し、表題の化合物を、収率４３％（０．２３ｇ、０．９６ｍｍｏｌ）で得た。
【０２４１】
（５．２．３）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−６−（２−クロロ−４−メトキシフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０２４２】
【化７７】
2011516522.tif 000080
窒素を、化合物（１．１．１）（０．１５ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）および化合物（５．２．２）（９５ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（２ｍＬ）中溶液に通した。カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（５５．８ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１９ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、マイクロ波の中において１００℃で３ｈ加熱した。追加量の化合物（５．２．２）（２０ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（５ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、マイクロ波の中において１００℃で１ｈ加熱した。この反応混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、水（１回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから４０％ＥｔＯＡｃに）により精製した。表題の化合物を、収率４５％（７１ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）で得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：質量［Ｍ＋Ｈ］＝４９１。
【０２４３】
（５．２．４）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２−クロロ−４−メトキシフェニル）−２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０２４４】
【化７８】
2011516522.tif 000081
化合物５．２．３を、化合物５．１．３の代わりに用いたこと以外は、化合物５．１．４を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝６８％（４９ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：質量［Ｍ＋Ｈ］＝５９８。
【０２４５】
（５．２）（Ｒ）−６−（２−クロロ−４−メトキシフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０２４６】
【化７９】
2011516522.tif 000082
化合物５．２．４を、化合物５．１．４の代わりに用いたこと以外は、化合物５．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝７１％（１５ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク２．２２ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４９８。
【０２４７】
実施例５．３  （Ｒ）−３−クロロ−４−（２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）フェノール。
【０２４８】
【化８０】
2011516522.tif 000083
化合物５．３（３０ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）中攪拌溶液に、三フッ化ホウ素−硫化メチル錯体（８ｕＬ）を添加した。反応混合物を、室温で終夜攪拌した。追加量の三フッ化ホウ素−硫化メチル錯体を添加し、この反応混合物を４ｈ還流した。三臭化ホウ素（４０ｕＬ、０．４２ｍｍｏｌ）を添加し、この反応混合物を、室温で４ｈ攪拌した。次いで、この反応混合物を、真空下で濃縮し、粗生成物を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡを含む０−４０％ＡＣＮ、移動相として）により精製した。生成物の分画を、濃縮および凍結乾燥して、表題の化合物のＴＦＡ塩を、収率７２％（２２ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）で得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク１．９６ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４８４。
【０２４９】
実施例５．４  （Ｒ）−６−（２，４−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０２５０】
（５．４．１）２，４−ジクロロフェニルトリフルオロメタンスルホネート
【０２５１】
【化８１】
2011516522.tif 000084
２，４−ジクロロフェノールを、２−クロロ−４−メチルフェノールの代わりに用いたこと以外は、化合物５．１．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝９７％（１．７５グラム、５．９３ｍｍｏｌ）。
【０２５２】
（５．４．２）［（２，４−ジクロロフェニル）エチニル］トリメチルシラン
【０２５３】
【化８２】
2011516522.tif 000085
化合物５．４．１を、化合物５．２．１の代わりに用いたこと以外は、化合物５．２．２を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝３６％（０．５２グラム、２．１４ｍｍｏｌ）。
【０２５４】
（５．４．３）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−６−（２，４−ジクロロフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０２５５】
【化８３】
2011516522.tif 000086
化合物５．４．２を、化合物５．１．２の代わりに用いたこと以外は、化合物５．１．３を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝５１％（８３ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）。
【０２５６】
（５．４．４）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０２５７】
【化８４】
2011516522.tif 000087
化合物５．４．３を、化合物５．１．３の代わりに用いたこと以外は、化合物５．１．４を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝５４％（５４ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：質量［Ｍ＋Ｈ］＝６０２。
【０２５８】
（５．４）（Ｒ）−６−（２，４−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ−［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０２５９】
【化８５】
2011516522.tif 000088
化合物５．４．４を、化合物５．１．４の代わりに用いたこと以外は、化合物５．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝６８％（３８ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク２．３６ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５０２。
【０２６０】
実施例５．５  （Ｒ）−６−（２，６−ジクロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０２６１】
（５．５．１）２，６−ジクロロ−４−フルオロフェニルトリフルオロメタンスルホネート。
【０２６２】
【化８６】
2011516522.tif 000089
２，６−ジクロロ−４−フルオロフェノールを、２−クロロ−４−メチルフェノールの代わりに用いたこと以外は、化合物（５．１．１）を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝９４％（１．３３グラム、４．２５ｍｍｏｌ）。
【０２６３】
（５．５．２）［（２，６−ジクロロ−４−フルオロフェニル）エチニル］トリメチルシラン
【０２６４】
【化８７】
2011516522.tif 000090
化合物（５．５．１）を、化合物（５．２．１）の代わりに用いたこと以外は、化合物（５．２．２）を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝５２％（０．３８グラム、１．４６ｍｍｏｌ）。
【０２６５】
（５．５．３）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−６−（２，６−ジクロロ−４−フルオロフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート
【０２６６】
【化８８】
2011516522.tif 000091
化合物（５．５．２）を、化合物（５．１．２）の代わりに用いたこと以外は、化合物（５．１．３）を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝３４％（６２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク５．０１ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５１３。
【０２６７】
（５．５．４）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２，６−ジクロロ−４−フルオロフェニル）−２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート
【０２６８】
【化８９】
2011516522.tif 000092
化合物（５．５．３）を、化合物（５．１．３）の代わりに用いたこと以外は、化合物（５．１．４）を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝２５％（２２ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．２６ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝６２０。
【０２６９】
（５．５）（Ｒ）−６−（２，６−ジクロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０２７０】
【化９０】
2011516522.tif 000093
化合物（５．５．４）を、化合物（５．１．４）の代わりに用いたこと以外は、化合物５．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝１４％（５ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク２．７１ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５２０
【０２７１】
【化９１】
2011516522.tif 000094
【０２７２】
実施例６．１  （Ｒ）−２−クロロ−４−（（６−（２，６−ジクロロフェニル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イルアミノ）メチル）フェノール。
【０２７３】
（６．１．１）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２，６−ジクロロフェニル）−２−（３，４−ジメトキシベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０２７４】
【化９２】
2011516522.tif 000095
化合物（２．１．３）（１１０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を、３，４−ジメトキシベンジルアミン（１．０ｍＬ、６．６３ｍｍｏｌ）中に溶解し、次いで、この溶液を、マイクロ波の中において１４０℃で２時間加熱した。次いで、反応混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、ＮＨ４Ｃｌ溶液（１回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、６／４）により精製した。表題の化合物を、収率９１％（１２６ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク３．８２ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝６２６。
【０２７５】
（６．１．２）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−アミノ−６−（２，６−ジクロロフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０２７６】
【化９３】
2011516522.tif 000096
化合物（６．１．１）（１２６ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１．０ｍＬ）中に溶解した。この溶液に、１，２−ジカルボニトリル−４，５−ジクロロ−３，６，ジオキソ−１，４−シクロヘキサジエン（４５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、室温で１時間攪拌し、次いで、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９．５：０．５）により精製し、表題を、収率４８％（４６ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク２．６７ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝４７６。
【０２７７】
（６．１．３）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−（３−クロロ−４−ヒドロキシベンジルアミノ）−６−（２，６−ジクロロフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０２７８】
【化９４】
2011516522.tif 000097
化合物（６．１．２）（４６ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１ｍＬ）中に溶解し、３−クロロ−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（３０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）およびナトリウムトリアセトキシボロハイドライド（６１ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を、ＴＦＡで酸性化し（ｐＨ＝５に）、１００℃で終夜攪拌した。翌日、この反応混合物を、室温に冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＨＣＯ３溶液（１回）およびＨ２Ｏ（３回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ２４：１）により精製し、表題の化合物を、収率５０％（３０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク３．８５ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝６１６。
【０２７９】
（６．１）（Ｒ）−２−クロロ−４−（（６−（２，６−ジクロロフェニル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イルアミノ）メチル）フェノール。
【０２８０】
【化９５】
2011516522.tif 000098
化合物（６．１．３）（３０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）中攪拌溶液に、トリフルオロ酢酸（０．３５ｍＬ、４．７１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を、室温で２ｈ攪拌し、次いで真空下で濃縮した。粗生成物を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡを含む０−２０％ＡＣＮ、移動相として）により精製した。生成物の分画を合わせ、真空下で濃縮し、水／ＡＣＮから凍結乾燥した。表題の化合物のＴＦＡ塩を、収率３３％（１０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク２．８１ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５１６。
【０２８１】
実施例６．２  （Ｒ）−４−（（６−（２，６−ジクロロフェニル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イルアミノ）メチル）−２−フルオロフェノール
【０２８２】
（６．２．１）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２，６−ジクロロフェニル）−２−（３−フルオロ−４−ヒドロキシベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０２８３】
【化９６】
2011516522.tif 000099
３−フルオロ−４−ヒドロキシベンズアルデヒドを、３−クロロ−４−ヒドロキシベンズアルデヒドの代わりに用いたこと以外は、化合物（６．１．３）を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝２３％（３３ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：質量［Ｍ＋Ｈ］＝６００。
【０２８４】
（６．２）（Ｒ）−４−（（６−（２，６−ジクロロフェニル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イルアミノ）メチル）−２−フルオロフェノール。
【０２８５】
【化９７】
2011516522.tif 000100
化合物（６．２．１）を、化合物（６．１．３）の代わりに用いたこと以外は、化合物６．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝５３％（１８ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク２．０５ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５００。
【０２８６】
【化９８】
2011516522.tif 000101
【０２８７】
実施例７．１  （Ｒ）−６−（２，６−ジクロロフェニル）−２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボニトリル
【０２８８】
（７．１．１）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（５−ブロモ−２−クロロ−６−（２，６−ジクロロフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０２８９】
【化９９】
2011516522.tif 000102
室温で、Ｎ−ブロモスクシンイミド（８６ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を、（２．１．３）（２１９ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液に添加した。反応混合物を、終夜攪拌し、次いで、ＥｔＯＡｃで希釈し、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液とともに激しく攪拌した。有機層を水層から分離し、再度、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液とともに攪拌した。次いで、有機層を、ＮａＨＣＯ３溶液（１回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから３０％ＥｔＯＡｃに）により精製して、表題の化合物を、収率９１％（２３０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク５．２０ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］：５７３。
【０２９０】
（７．１．２）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（５−ブロモ−６−（２，６−ジクロロフェニル）−２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０２９１】
【化１００】
2011516522.tif 000103
化合物（７．１．１）（２３０ｍｇ、０．４００ｍｍｏｌ）の３，４−ジフルオロベンジルアミン（１．２１ｇ、１ｍＬ、８．４５ｍｍｏｌ）中溶液を、マイクロ波の中において１４０℃で２ｈ加熱した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、１ＭのＨＣｌ水溶液（２回）および鹹水（２回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから４０％ＥｔＯＡｃに）により精製して、表題の化合物を、収率７２％（１９５ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．５３ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］：６８０。
【０２９２】
（７．１）（Ｒ）−６−（２，６−ジクロロフェニル）−２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボニトリル。
【０２９３】
【化１０１】
2011516522.tif 000104
化合物（７．１．２）（５０ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（１．２ｍＬ）中溶液に、シアン化銅（Ｉ）（１４ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、マイクロ波の中において１４０℃で３ｈ加熱した後に、１５０℃で２．５ｈ加熱した。次いで、この反応混合物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９／１）で希釈し、ＮＨ４ＯＨ水溶液（１回）、鹹水（２回）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、真空下で濃縮した。粗生成物を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡを含む０−５０％ＡＣＮ、移動相として）により精製した。生成物の分画を、ＮａＨＣＯ３水溶液で中和し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９／１）で、一旦、抽出し、鹹水（１回）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、真空下で濃縮し、ＥｔＯＨ／水の混合物中に溶解し、最後に凍結乾燥して、表題の化合物を、収率１２％（５ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク３．４６ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］：５２７。
【０２９４】
実施例７．２  （Ｒ）−６−（２，６−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−５−フルオロ−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０２９５】
（７．２．１）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２−クロロ−６−（２，６−ジクロロフェニル）−５−フルオロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０２９６】
【化１０２】
2011516522.tif 000105
化合物（２．１．３）（５９ｍｇ、０．１１９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１ｍＬ）中溶液に、１−クロロメチル−４−フルオロ−１，４−ジアゾニアビシクロ［２．２．２］オクタンビス（テトラフルオロボレート）（５５ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を、６日間攪拌した。この反応混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、水（２回）、鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空下で濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから３０％ＥｔＯＡｃに）により精製して、表題の化合物を、収率６５％（４０ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク５．０５ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］：５１３。
【０２９７】
（７．２．２）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（６−（２，６−ジクロロフェニル）−２−（３，４−ジフルオロベンジルアミノ）−５−フルオロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
【０２９８】
【化１０３】
2011516522.tif 000106
化合物（７．２．１）を、化合物（７．１．１）の代わりに用いたこと以外は、化合物（７．１．２）を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率＝４１％（２０ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．４３ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］：６２０。
【０２９９】
（７．２）（Ｒ）−６−（２，６−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−５−フルオロ−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０３００】
【化１０４】
2011516522.tif 000107
化合物（７．２．２）（２０ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ、１３．４６ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を２ｈ攪拌した。次いで、この反応混合物を、真空下で濃縮し、粗生成物を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡを含む０−５０％ＡＣＮ、移動相として）により精製した。ＡＣＮ／水からの凍結乾燥後に、表題の化合物をＴＦＡ塩として、収率７１％（１４．６ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）で得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク２．６４ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５２０。
【０３０１】
実施例７．３  （Ｒ）−５−ブロモ−６−（２，６−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０３０２】
（７．３）（Ｒ）−５−ブロモ−６−（２，６−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（ピペリジン−３−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０３０３】
【化１０５】
2011516522.tif 000108
化合物（７．１．２）（３６ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（０．２９ｍＬ、３．９６ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を、１ｈ攪拌した。この反応混合物を、真空下で濃縮し、粗生成物を、ＤＣＭ中に溶解した後に、ＮａＨＣＯ３水溶液で中和した。有機層を、ＤＣＭ／水の分離フィルターにより水層から分離し、真空下で濃縮した。生成物を、ＡＣＮ／水から凍結乾燥して、表題の化合物を、収率８４％（２６ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）で得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク０．９２ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５８０。
【０３０４】
【化１０６】
2011516522.tif 000109
【０３０５】
実施例８．１  ６−（２，６−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（チオモルホリン−２−イル−メチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０３０６】
（８．１．１）Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−クロロ−５−ヨードピリミジン−４−アミン。
【０３０７】
【化１０７】
2011516522.tif 000110
２，４−ジクロロ−５−ヨードピリミジン（１０ｇ、３６．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）およびＤＩＥＡ（５．１７ｇ、６．９７ｍＬ、４０．０ｍｍｏｌ）中溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルアミン（２．８５ｇ、４．０９ｍＬ、３８．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）中溶液を滴下した。反応を、還流のために加熱し、週末の間にわたり還流温度で攪拌した。反応混合物を、室温に冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、Ｎａ２ＣＯ３溶液（２回）および鹹水（１回）で洗浄した。有機層を、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、真空下で濃縮して、粗生成物を得て、これを、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから２０％ＥｔＯＡｃに）により精製して、表題の化合物を、収率５２％（５．８４ｇ、１８．７ｍｍｏｌ）で得た。
【０３０８】
（８．１．２）１，３−ジクロロ−２−エチニルベンゼン。
【０３０９】
【化１０８】
2011516522.tif 000111
化合物（２．１．２）（９．２８ｇ、３８．２ｍｍｏｌ）のメタノール（６０ｍＬ）中溶液に、炭酸カリウム（０．７４ｇ、５．３４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、室温で終夜攪拌した。この反応混合物を、真空下で濃縮して、粗生成物を得た。これを、ＤＣＭ中に溶解し、有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、次いで、真空下で濃縮した。残留物を、ヘプタン／ＤＣＭ  ９：１から結晶化し、この結晶を濾過して、表題の化合物を、収率５７％（３．７ｇ、２１．６３ｍｍｏｌ）で得た。
【０３１０】
（８．１．３）Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−クロロ−５−（（２，６−ジクロロフェニル）エチニル）ピリミジン−４−アミン。
【０３１１】
【化１０９】
2011516522.tif 000112
窒素気流を、化合物（８．１．１）（２．０６ｇ、６．６１ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（４５ｍＬ）中溶液に通して、１０分間バブリングした。次いで、化合物（８．１．２）（１．３６ｇ、７．９３ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（０．０３１ｇ、０．１６５ｍｍｏｌ）、次いでＤＩＥＡ（１．２８ｇ、１．６４ｍＬ、９．９２ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．３８ｇ、０．３３１ｍｍｏｌ）を、室温で添加した。反応混合物を、８０℃に２ｈ加熱して、次いで室温に冷却した。水を添加し、この反応混合物を、室温で終夜攪拌した。この反応混合物を、多量の水に投入し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を、水（２回）、鹹水（１回）で洗浄し、水層を合わせ、ＥｔＯＡｃ（２回）で抽出した。すべての有機層を合わせ、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、乾燥するまで蒸発させた。粗生成物を、ＤＣＭに投入し、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから２０％ＥｔＯＡｃに）により精製して、表題の化合物を、定量的な収率で得た（２．５ｇ、７．０５ｍｍｏｌ）。ＬＣ−ＭＳ：ピーク５．５７ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］：３５４。
【０３１２】
（８．１．４）７−ｔｅｒｔ−ブチル−２−クロロ−６−（２，６−ジクロロフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン。
【０３１３】
【化１１０】
2011516522.tif 000113
化合物（８．１．３）（２．５ｇ、７．０５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２００ｍＬ）中攪拌懸濁液に、炭酸セシウム（５．０５ｇ、１５．５１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、還流温度で終夜攪拌した。この反応混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ／水に投入した。層を分離し、有機層を、鹹水（１回）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、乾燥するまで蒸発させた。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから２０％ＥｔＯＡｃに）により精製して、表題の化合物を、収率７２％（１．８ｇ、５．０８ｍｍｏｌ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．９７ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］：３５４。
【０３１４】
（８．１．５）２−クロロ−６−（２，６−ジクロロフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン。
【０３１５】
【化１１１】
2011516522.tif 000114
化合物（８．１．４）（２．４４ｇ、６．８８ｍｍｏｌ）を、濃Ｈ２ＳＯ４（１０ｍＬ）中に溶解し、室温で終夜攪拌した。次いで、反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液中で注意深く抑制して、次いでＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を、鹹水（１回）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、乾燥するまで蒸発させた。粗生成物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ９／１に投入し、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから５０％ＥｔＯＡｃに）により精製して、表題の化合物を、収率６９％（１．４３ｇ、４．７７ｍｍｏｌ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．１２ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］：２９８。
【０３１６】
（８．１．６）ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（ヒドロキシメチル）チオモルホリン−４−カルボキシレート。
【０３１７】
【化１１２】
2011516522.tif 000115
チオモルホリン−２，４−ジカルボン酸４−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．２０ｇ、０．８０９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１５ｍＬ）中に懸濁させ、４℃に冷却した。次いで、リチウムアルミニウムハイドライド（９２ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ）を、小分けして添加した。反応混合物を、終夜、室温まで温めた。翌日、この反応を、飽和Ｎａ２ＳＯ４溶液（２ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（２２ｍＬ）を添加することにより抑制した。この反応混合物を、終夜攪拌し、ジカライトを通して濾過した。濾液を、乾燥するまで蒸発させ、粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから４０％ＥｔＯＡｃに）により精製して、表題の化合物を、収率４８％（９１ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）で得た。
【０３１８】
（８．１．７）ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（（２−クロロ−６−（２，６−ジクロロフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）メチル）チオモルホリン−４−カルボキシレート。
【０３１９】
【化１１３】
2011516522.tif 000116
化合物（８．１．５）（６５ｍｇ、０．２１８ｍｍｏｌ）および化合物（８．１．６）（９１ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８ｍＬ）中溶液に、ＤＩＥＡ（８４ｍｇ、０．１１４ｍＬ、０．６５３ｍｍｏｌ）、ＰＰｈ３（１４３ｍｇ、０．５４４ｍｍｏｌ）およびＤＩＡＤ（０．５４４ｍｍｏｌ、０．１０８ｍｌ、１１０ｍｇ）を室温で添加した。反応混合物を、室温で終夜攪拌した。翌日、ＥｔＯＡｃを、この反応混合物に添加し、次いで、これを、水（２回）、鹹水（１回）で抽出し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、乾燥するまで蒸発させた。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから５０％ＥｔＯＡｃに）により精製して、表題の化合物を、収率９０％（１０１ｍｇ、０．１９７ｍｍｏｌ）で得た。ＬＣ−ＭＳ：ピーク４．８０ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］：５１３。
【０３２０】
（８．１）６−（２，６−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７−（チオモルホリン−２−イルメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０３２１】
【化１１４】
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化合物（８．１．６）（１０１ｍｇ、０．１９７ｍｍｏｌ）の３，４−ジフルオロベンジルアミン（２ｍＬ、２．４２ｇ、１６．９１ｍｍｏｌ）中溶液を、マイクロ波の中において１４０℃で２ｈ加熱した。次いで、反応混合物を、ＥｔＯＡｃに投入し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（１回）、水（２回）および鹹水（１回）で抽出した。水層を合わせ、ＥｔＯＡｃ（１回）で再度抽出した。有機層を合わせ、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、乾燥するまで蒸発させた。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、移動相としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００％ヘプタンから５０％ＥｔＯＡｃに）により精製し、所望の中間生成物１０５ｍｇ（収率８６％）を得た。この生成物を、ＤＣＭ（３ｍＬ）中に溶解し、室温でＴＦＡ（０．５ｍＬ、７６８ｍｇ、６．７３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、室温で終夜攪拌し、翌日、この反応混合物を、ＤＣＭに投入し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。有機層を、ＤＣＭ／水の分離フィルターにより水層から分離し、真空下で濃縮した。粗生成物を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡを含む０−５０％ＡＣＮ、移動相として）により精製した。純粋な分画を、ＤＣＭに投入し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。有機層を、ＤＣＭ／水の分離フィルターにより水層から分離し、真空下で濃縮した。生成物を、ジオキサン／水中に溶解し、凍結乾燥して、表題の化合物を、収率９８％（８６ｍｇ、０．１６５ｍｍｏｌ）で得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク２．２５ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５２０。
【０３２２】
実施例８．２  ７−（アゼパン−４−イル）−６−（２，６−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０３２３】
（８．２．１）ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−クロロ−６−（２，６−ジクロロフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）アゼパン−１−カルボキシレート。
【０３２４】
【化１１５】
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その４−ヒドロキシアゼパン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを、化合物（８．１．６）の代わりに用いたこと以外は、化合物（８．１．７）を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。ＬＣ−ＭＳ：ピーク３．６１ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］：４９５。
【０３２５】
（８．２）７−（アゼパン−４−イル）−６−（２，６−ジクロロフェニル）−Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン。
【０３２６】
【化１１６】
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その化合物（８．２．１）を、化合物（８．１．７）の代わりに用いたこと以外は、化合物８．１を調製するための上述した手順に類似した手順を用いた。収率は４４％（１９ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）である。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ピーク２．４６ｍｉｎ．、質量［Ｍ＋Ｈ］＝５０２。
【０３２７】
実施例９  検定方法
ＰＫＣシータキナーゼ活性の抑制を、リン化学物質固定化金属結合検定（ＩＭＡＰ）を用いて測定した。ＩＭＡＰは、リン酸化されたペプチド基質の親和性の捕捉に基づく均一な蛍光偏光（ＦＰ）の検定である。ＩＭＡＰは、三価の金属錯体により誘導体化されるいわゆるＩＭＡＰナノ粒子に、タンパク質キナーゼによるリン酸化により結合するフルオレセイン標識ペプチド基質を用いる。このような結合は、ペプチドの分子運動速度に変化を引き起こし、基質ペプチドに結合したフルオレセイン標識について観測されるＦＰ値の増加につながる。この検定において、ＰＫＣシータは、フルオレセイン標識ペプチド基質を直接的にリン酸化する。
【０３２８】
酵素、基質およびＡＴＰを、すべてのステップにおいて、キナーゼ反応緩衝剤（１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０、０．０５％のＮａＮ３  ｐＨ７．２、１ｍＭのＤＴＴ）で希釈する。３８４ウェルプレート中におけるこの検定のキナーゼ反応ステップにおける最終的な体積は、２０μｌである。括弧内に示す濃度は、最終的な濃度である。まず、化合物またはＤＭＳＯ（１％）を、ウェルに添加する。その後、ペプチド基質（偽基質ＬＨＱＲＲＧＳＩＫＱＡＫＶＨＨＶＫ−ＦＬ、Ｎｅｏｓｙｓｔｅｍ、５０ｎＭ）およびＡＴＰ（１０μＭ）を添加した後に、ＰＫＣシータ酵素（ヒスチジンタグ付きヒト組換え活性ＰＫＣシータ、８２ｋＤａ、自家精製、１０ｎｇ／ｍｌ）を添加し、混合物を、暗所において３０℃で６０分間インキュベーションする。次いで、ＩＭＡＰ漸進的結合緩衝剤（１００％  １倍  緩衝剤Ａ、１：４００  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｒｅａｇｅｎｔ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を添加した後に、暗所において室温で６０分間インキュベーションステップを行う。最後に、ＦＰ信号を読む。
【０３２９】
【表１】
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【国際調査報告】
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