(57)【要約】  本発明は、毛髪に結合する新規ポリアクリレートを基にした活性化合物含有粒子、および医薬、特に獣医用医薬製造のためのこれらの粒子の使用に関する。
2014523446.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）電荷を帯びていないポリアクリレート、および
ｂ）陽性の電荷を帯びた官能基を担持するカチオン性ポリアクリレートを含む、最大で１０μｍの粒径ｄ(ｖ,９０)を有する粒子：
ここで該粒子が、
ｃ）１以上の活性化合物を含み、および
ｄ）所望によりさらなるポリマー、助剤または添加剤を含んでいてもよい。
【請求項２】
０.１〜３μｍの粒径ｄ(ｖ,９０)を有する、請求項１記載の粒子。
【請求項３】
カチオン性ポリアクリレートｂ）が、四級化ジアルキルアミノアルキルメタクリレート共重合体である、請求項１または２記載の粒子。
【請求項４】
カチオン性ポリアクリレートｂ）が、(メチル, エチル)アクリレート、(メチル, エチル)メタクリレートおよびメタクリル酸のモノクロロメタン-四級化ジメチルアミノエチルエステル(商標名 Eudragit RS または Eudragit RLとして知られる)の共重合体である、請求項３記載の粒子。
【請求項５】
電荷を帯びていないポリアクリレートａ）が、ポリ(メチルメタクリレート)である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項６】
電荷を帯びていないポリアクリレートａ）：カチオン性ポリアクリレートｂ）の混合比が、５:９５(w/w)〜９５:５(w/w)、好ましくは７０:３０(w/w)〜９５:５(w/w)、特に好ましくは８０:２０(w/w)〜９０:１０(w/w)である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項７】
粒子質量を基準にして、０.１〜５０重量％、好ましくは１〜２０重量％、特に好ましくは５〜１５重量％の活性化合物を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項８】
電荷を帯びていないポリアクリレートが、１０００ g/mol〜１００００００ g/molまで、好ましくは２００００〜６０００００ g/mol、特に好ましくは５００００〜１５００００ g/molの重量平均分子量を有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項９】
全質量を基準にして、０.１〜５０重量％の１以上のさらなるポリマー、好ましくはポリスチレン粒子を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項１０】
１以上の可塑剤、界面活性剤、共溶媒を含んでおり、ミクロ粒子の全質量を基準にして、その合計が０.１〜４０重量％、好ましくは５〜３０重量％、特に好ましくは５〜２０重量％である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項１１】
活性化合物としてフルメトリンを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項１２】
活性化合物、忌避剤、好ましくはイカリジンまたはＮ,Ｎ−ジエチル-ｍ-トルアミドを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項１３】
以下の工程：
（ｉ）水と混和性であれば難混和性の溶媒または溶媒混合物(１)中で成分ａ）〜ｄ）の溶液を調製すること、
（ｉｉ）所望により添加剤および溶媒または溶媒混合物(１)を含む水相に、飽和まで該溶液(ｉ)を分散し、微細で安定なエマルジョンを、得ること、
（ｉｉｉ）溶媒または溶媒混合物(１)を、エマルジョン液滴から
−Ｉ）蒸発(溶媒蒸留プロセス)により除去し、水性懸濁液を得ること、または
−ＩＩ）噴霧乾燥により除去し、乾燥粉末を得ること、
を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の粒子の製造方法。
【請求項１４】
請求項１〜１２のいずれか一項記載の粒子を含む組成物。
【請求項１５】
動物に対する寄生虫を制御するための組成物を製造するための、請求項１〜１２のいずれか一項記載の粒子の使用。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、毛髪に結合する活性化合物を含有する新規ポリアクリレートを基にした粒子および医薬製造、特に獣医用医薬のためのこれらの粒子の使用に関する。
【０００２】
本明細書において、活性化合物なる用語は、標準の医薬的および殺虫剤的に活性な化合物、ならびに畜産において有益な作用剤のあらゆる形態を意味すると理解されるべきである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
活性化合物の外部適用は、獣医用医薬において好まれる投与形態であって、特に外部寄生虫に対する保護のための活性化合物、加えて処理される動物の挙動反応あるいは互いに影響を及ぼす動物の挙動反応を穏やかに調節する経皮的に有効な活性化合物および活性化合物の処方に使用される投与形態である。この目的のために、スポットオンまたはワイプオン製剤に使用されることが多く、この場合、活性化合物は、液体形態にて、あるいはスプレーとして、動物の毛または皮膚内または上に適用される。殆どの場合、かかる処方の作用持続時間は数日または数週間に限られており、忌避剤活性化合物の場合には、数時間に限られる場合もある。多くの場合には、該製剤の活性化合物または成分は、皮膚の炎症または広範囲の局所炎症をもたらし得る。従って、下記のような投与形態を提供することが有利である：
・より長期の作用持続時間を達成できる投与形態、
・たとえあったとしても、殆ど皮膚の炎症をもたらさない投与形態、
・製造が容易な投与形態、および
・動物の毛または動物の皮膚に関する機能または触覚特性に対して悪影響のない投与形態。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明において、処理される動物の皮膚または毛髪に適用し、かつ活性化合物を制御様式および徐放性様式で放出する投与形態を小さいサイズのカチオン性活性化合物を含むマイクロカプセルにて達成できることを見出した。
【背景技術】
【０００５】
毛髪または皮膚に適用される電荷を帯びていないミクロ粒子および電荷を帯びたミクロ粒子から活性化合物の遅延性放出は、化粧品またはスキンケア製品の適用分野において十分知られている。これらの適用分野において、ミクロ粒子それ自体が、毛髪特性に影響を及ぼすことも可能である。しかし、数日または数週間内という比較的長期的な適用は、これらの適用分野には記述されておらず、さらにこれらの適用の目的でもない。
【０００６】
医薬適用において、カチオン性ミクロ粒子中の活性化合物のカプセル化もまた知られ、記述されている。この分野では、四級化ジメチルアミノエチルメタクリレート共重合体(例えば、商標名 Eudragit(登録商標)RS, RLを有するEvonik Industriesのポリマー)が使用されることが多い。しかし、これらのミクロ粒子は、主に薬局では経口投与形態のために使用されており、また＞３０ μｍ〜１０００ μｍの範囲のサイズを有しており、動物の毛髪に適用するには大きすぎる。さらに、この製造のために記述される方法は、本発明の用途に好適なサイズ範囲を有するミクロ粒子を提供しない。ヘアケア製品および経皮治療システム双方における四級化ジメチルアミノエチルメタクリレートの使用は知られている。しかし、これらの場合、該ポリマーはミクロ粒子と組み合わせて使用されない。
【０００７】
活性化合物による皮膚の炎症を、基本的には、活性化合物を溶媒に溶解してスプレー形態にて動物の毛に適用することにより回避することができる。このような適用は、当業者には知られており、文献にも記載されている。しかし、一般的にこのような適用はいずれの長期的作用をも達成しない。
【０００８】
従来技術を、下記に選択例を用いてより詳細に記述する。しかし、記載した方法および技術は本発明の利点を達成できるものはない。
・毛髪に付着させるために十分に小さい、活性化合物の遅延放出のためのミクロ粒子、
・ミクロ粒子の表面をカチオン性ポリマーで被覆することによる、毛髪への長期的付着、
・毛髪の機能および触覚特性に対する負の影響を及ぼさない、および
・乳化プロセスによる簡便な製造。
【０００９】
四級化ジメチルアミノエチルメタクリレート共重合体タイプの水不溶性カチオン性ポリマーを、錠剤および顆粒を被覆する際のフィルム形成剤として使用して、ｐＨとは独立した様式において、錠剤の崩壊および活性化合物の放出を制御かつ遅延させる(Evonik Industries: Eudragit（登録商標） Application Guidelines, 10th Edition, Darmstadt, Germany; Evonik Industries AG, 2008)。
【００１０】
本発明の目的のために、四級化ジメチルアミノエチルメタクリレート共重合体は、好ましくはEvonik(2011)による商標名 Eudragit（登録商標）RS またはEudragit（登録商標） RLとして知られる水不溶性ポリマーの一群を意味すると理解される。これらは、低比率の四級化アンモニウム基を有するアクリル酸およびメタクリル酸の共重合体である(化合物名：１：２：０.１の共重合比を有するポリ(エチルアクリレート-コ-メチルメタクリレート-コ-トリメチルアンモニオエチルメタクリレートクロリド)、ＣＡＳ番号：３３４３４-２４-１、商標名 Eudragit（登録商標）RS,アンモニオメタクリレート共重合体タイプＢとしてPh. Eur.に記載される；および１：２：０.２の共重合比を有するポリ(エチルアクリレート-コ-メチルメタクリレート-コ-トリメチルアンモニオエチルメタクリレートクロリド)、ＣＡＳ番号：３３４３４-２４-１、商標名Eudragit（登録商標）RL, メタクリレート共重合体タイプＡとしてPh. Eur.に記述される)。それらを、水性分散系(Eudragit（登録商標）RS, RL 30D)として、または造粒剤(Eudragit（登録商標）RS, RL PO)として用いることができる:
【化１】
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“Eudragit（登録商標）RL, RS”タイプの共重合体の一般構造式
【００１１】
製造会社は、Eudragit（登録商標）タイプ RS, RLの平均分子量をＭｗ=３００００ g/mol (Eudragit（登録商標）RS)およびＭｗ=３１０００ g/mol (Eudragit（登録商標）RL)の重量平均値として記述している；ガラス遷移温度は、６５℃(Eudragit（登録商標）RS)および７０℃(Eudragit（登録商標）RL)と記述している(Evonik Industries:Eudragit Application Guidelines 10th Edition, Darmstadt, Germany:Evonik Industries AG, 2008)。
【００１２】
カチオン性ポリマーは、負に電荷を帯びた表面、例えば毛髪および皮膚に良く付着すること、そしてその上にフィルムを形成できることが知られている。この原理は、毛髪のセット用ローションおよびヘアケア製品に利用される。Eudragit（登録商標）はまたこの目的に使用される。ＥＰ１０９２４１７は、例えばフィルム形成ポリマーとして、シャンプー中に微細に分散した形態で組み込むことができるカチオン性Eudragit（登録商標）の使用を記述しており、強度増加および改善された保持力を毛髪に提供する。上記添加剤とは、毛髪-化粧用の活性化合物、例えばビタミンであって医薬活性化合物ではない。ＷＯ９７/４５０１２は、製剤中に外部寄生虫撲滅用活性化合物、特にピレスロイド類を含むフィルム形成カチオン性ポリマーの使用を記述しており、毛髪へのそのポリマーの親和性により、活性化合物が毛髪へ長期継続的に付着可能となる。カチオン性ポリマー、ポリクアテルニウムタイプ(polyquat 10,28,11)、カチオン性グアーガム誘導体およびEudragit RSもまた挙げられる。特定の製剤については、８日目の外部寄生虫駆除活性が記述されている。しかし、ＷＯ９７/４５０１２に記載したカチオン性ポリマーは、本発明の目的のためには好適なミクロ粒子を形成することができない。従って、本発明の活性化合物を含有するミクロ粒子を用いて達成され得るような、数週間の作用持続期間は実証されていない。Eudragit（登録商標）タイプのフィルム形成アクリレート共重合体もまた、真皮および経皮治療システムに使用される。ＪＰ０３-０７７８２０は、好適な溶媒、好ましくはエタノール中でこれらのポリマーの液体製剤の使用を説明しており、これはさらに抗菌または抗炎症剤を含有する。活性化合物として昆虫忌避剤も同様に言及されている。該製剤は、液体またはスプレーとして皮膚に適用される。ＷＯ０２/０６０４１７は、経皮治療システムのための接着剤または結合剤としてカチオン性メタクリレート共重合体を記載している。該製剤は、可塑剤および医薬上活性化合物を含有する。さらなる態様は、口腔粘膜または歯周ポケットの処置のための歯科用用途である。ＵＳ ５４３８０７６およびＥＰ ０４０４５５８は、抗菌活性化合物および可塑剤と共にアルコール性溶液中でのEudragit（登録商標）L、RL またはRSの使用を記述している。粘膜に付着するフィルムからの活性化合物の長期持続性放出が言及されている。唾液による排除が遅れるため、水中のポリマー材の低い溶解度は、もう一つの利点でもあるが、生物学的分解が依然として確保される。ＪＰ６３-１３０５４１は、抗菌活性化合物と共にEudragit（登録商標）および親水性ポリマー(セルロースエーテル,ＰＶＰ)を多価アルコールに溶解させて、該活性化合物が、カチオン性ポリマーを含まない製品と比較して、形成したフィルムからより長期的に放出されるという類似したプロセスを記述している。かかるシステムでの用語“長期持続性放出/適用”とは、常に数時間から数日の期間を指す。本発明を適用するのに必要な時間は、この方法では達成できない。
【００１３】
基本的に、毛髪または皮膚に付着するミクロ粒子は、粒子に含まれる活性化合物を比較的長い時間にわたり放出できる。しかし、毛髪へのミクロ粒子の比較的長期の付着を達成するための課題を解決する必要がある。毛髪は負の表面電荷を有するので、ａ）粒子をカチオン性とすること、ｂ)あるいは、負に電荷を帯びたミクロ粒子を毛髪に結合させるために毛髪にカチオン性コーティングを付すことによる、この様式にて付着性を促進することができる。
【００１４】
方法ｂ)は、ＷＯ０１/８７２４３に示されている。ここで記載されていることは、ヘアケア製品においてＰＴＦＥミクロ粒子の使用であり、この毛髪への付着は、カチオン性ポリマーを製品に加えることにより改善される。この文献は、カチオン化ジアルキルメタクリルアミドを言及している。これらのＰＴＦＥ粒子は、毛髪特性を改善する。類似した方法がＷＯ９７/３８６６７に用いられる。直径０.２-１μｍを有するポリスチレン、ＰＭＭＡおよび他のポリマーからなるミクロ粒子類が毛髪に適用される。この粒子のカチオン化は、マトリックスポリマーとして使用されるか、または該製剤に添加剤として混合されるカチオン性ポリマーまたはカチオン性界面活性剤を用いて行った。該粒子は、毛髪の艶を改善するために役立つ。しかし、数週間という長期の持続性付着は達成されておらず、記載もされていない。これらのシステムは、同様に活性化合物の適用には役立たない。
【００１５】
また、アニオン性ミクロ粒子は、カチオン性ポリマーで被覆され得る。ＵＳ ５７５３２６４には、水溶液中でアニオン性界面活性剤と共に活性化合物(シラミに対する忌避剤として作用する油、ビタミン)を含む油相のプレエマルジョンの製造、およびその後のｐＨ移行による酸性水溶液からのキトサンとのコアセルベーションによるポリマー被覆物の形成が記載されている。その後の架橋により、陽性電荷を帯びた非常に微細なミクロ粒子＜１０ μｍとなる。これらのミクロ粒子は、ヒトの毛髪に適用され得る。インビトロ試験において、一週間の忌避作用が実証されている。しかし、非カプセル化形態で適用されたエマルジョンと比べて、カプセル化エマルジョンのより長期の作用持続時間は実証されていない。ＵＳ ０１４２８２８は、活性化合物、昆虫忌避剤であるが好ましくは香料が、水性一次エマルジョンを形成し、その後の重縮合により、尿素/メラミンホルムアルデヒド樹脂のミクロ粒子に組み込まれ得ることを示す。別のものを挙げると、ゼラチンまたはポリアクリレートポリマーの複合体コアセルベートである。二次工程において、次いでこれらのミクロ粒子は、カチオン性ポリマーで被覆される。カチオン化スターチ、グアーガム、ポリシロキサンをこの目的に使用できるが、ポリエステルもまた言及されている。直径２〜１５μｍのこれらのカチオン化カプセルは、毛髪に適用され、内容物を放出し得る。非カチオン化カプセルと比較して、実質的により活性な活性化合物が、毛髪に適用されて、放出され得るということが実証されている。ＦＲ ２８０１８１１は、負に電荷を帯びた活性化合物を含むマイクロカプセルの電荷を、カチオン性ポリマー(ポリクアテルニウムタイプ)を適用することにより、即ちマイクロカプセルを負に電荷を帯びた布織物繊維または毛髪に適用することにより、変更するという同様の方法を記述している。しかし、これらの適用は、四級化ジメチルアミノエチルメタクリレート共重合体(Eudragit（登録商標）RS, RL)の使用を記述していない。
【００１６】
しかし、言及されたプロセスは、このカチオン性マイクロカプセルを製造するために幾つかの工程を必要としており、それらは簡易な工業製造にとって好適ではない。さらに、使用されるカチオン性ポリマーは水溶性であるべきである。Eudragit（登録商標）RS/RLは水不溶性であるため、本明細書に記載した技術には不適切である。
【００１７】
その他のプロセス開発の目的は、製造中にカチオン性表面電荷をマイクロカプセル自体に備えたマイクロカプセルを提供することである。ＷＯ０１/３５９３３は、コーティングポリマーと共にカプセル化される物質(例えば、ビタミン)が、部分的に水可溶性であるべき有機溶媒(大部分の場合には、酢酸エチル)に溶解される場合のマイクロカプセルの製品を記載している。好ましいコーティングポリマーはＰＭＭＡである。この溶液は、乳化剤を含む水相に分散され、有機溶媒で飽和されている。エマルジョンから、該溶媒を溶媒抽出により除去して、３〜３００μｍのサイズを有するミクロ粒子を形成させる。しかし、このマイクロカプセルは、いずれの電荷も担持しない。従って、この出願ＷＯ０１/３５９３３は、使用されるコーティングポリマーがEudragit（登録商標）RS POである場合とは別の第二工程において最初の粒子に適用されるプロセスを記載している。このようにして、該ミクロ粒子は、カチオン性表面電荷を備える。強調される利点は、この工程が溶媒としていずれの塩素化炭化水素も要しないことである。しかし、記載されたこの工程は大きな欠点を有する、即ち、溶媒抽出方法は大過剰の水相を必要とするという欠点を有する。従って、得られた分散物は、例えば、わずか０.２％または０.４％の固体を含みもので、濃縮または乾燥工程を必要とする。これに対して、本発明に記載した製造方法は、ワンポットプロセスが可能である。有機溶媒の除去後に、容器に充填または直接適用され得る分散物を形成するように、好適な場合にはさらなる製剤成分の添加後に、ポリマー相の体積比は、可変的に調整できる。ＷＯ０１/３５９３３のマイクロカプセルを、本発明に従って、皮膚または毛髪に適用できる；しかし、言及されたサイズを有するものは、毛髪への長期持続性の適用には不適切である。ＷＯ０１/３５９３３の例示には、直径が４０〜１００ μｍの粒径を記述している。髪のタイプに拠って５０〜１２０ μｍの直径を髪に用いると、かかる粒子は大き過ぎて、動物の毛髪への長期持続性の付着に対しては好適ではないことは明らかである。さらに、得られる粒子は、肉眼で見ることが出来き、このため動物の毛の外観を変える。これとは逆に、本発明の製造方法を用いると、０.１〜３μｍの範囲内の好適かつ好ましい粒径を容易に達成できる。さらに、このプレエマルジョンを形成するためには、外部の乳化剤が、外側の水相中に必要とされる。油相に溶解した物質は、自己乳化作用がない。
【００１８】
ＥＰ １４０７７５３およびＥＰ １４０７７５４は、ポリアクリルアミドおよびアクリル酸の共重合体が、水溶液中でメラミン-ホルムアルデヒド樹脂と共に分散される場合の方法を記載している。香油は、この溶液に組み込まれる。温度増加により、油滴周辺での重縮合が開始される。反応相中のカチオン性ポリマーの添加により、これはミクロ粒子の外側の層に組み込まれる。重縮合とカプセル壁材との化学的相溶性が必要であるということが明確に言及されている。次いで、これらのカチオン性ミクロ粒子は、衣類に適用されるか、または毛髪および皮膚に使用するためのシャンプーに導入され得る。一般的な方法では、ポリエステルは、カチオン性ポリマー群の例示として言及されている。しかし、Eudragit（登録商標）タイプは記載されていない。ＷＯ０２０６０３９９は、カチオン性ヘアケア製品またはカチオン性ポリマー（例えば、ポリエチレンイミン）が、活性化合物および疎水性マトリクスポリマーと共に溶融されることを記述している。この溶融物は、界面活性剤を含有する水溶液中で乳化され、冷却される。該カチオン性ミクロ粒子は、０.１〜０.５ μｍのサイズを有しており、シャンプーに組み込まれる。該粒子は毛髪に付着し、該成分は数時間にわたって放出される。これに対して、ＥＰ ０３６９７４１は、好ましくは１０〜４０ μｍの直径を有するカチオン化され多孔質のミクロ粒子であり、この孔は、毛髪ケア物質、日焼け止め剤、香油または昆虫忌避剤を吸収できる。５〜６５％程度の担持が記述されている。この陽性電荷は、ケラチン様物質上での吸着を促進する。この記載は、共重合体としてのメタクリレートの使用可能性について言及している。しかし、製造方法は複雑である。該懸濁液のポリマー化、孔構造を作成するための複数の洗浄工程、粒子表面のプロトネーションによるカチオン化、および活性化合物を担持することを含む、少なくとも４つの工程が必要である。さらに、該粒子は長い間毛髪に付着するということが実証されていない。
【００１９】
また、ＷＯ９８/２８３９９は、１０〜１５０ μｍの直径を有するポリマー粒子を生成するための好適な方法として懸濁液の重合化を記載しており、疎水性メタクリルエステルからなるポリマー粒子は、所望により他のモノマー、例えばスチレンと共重合される。共重合化のために、さらにカチオン性モノマー、好ましくはカチオン化(四級化)ジメチルアミノエチルメタクリレート(Eudragit（登録商標）の成分)および架橋モノマーから製造される。このようにして、該ミクロ粒子には、そのカチオン性表面電荷が付される。該懸濁液の重合化は、重合安定化剤の存在下で実施される。好ましいものは、ポリビニルアルコールまたはセルロースエステルを用いて提供される。その部分について、これらのヒドロキシル基含有ポリマーは、カチオン性モノマー単位を有していてもよい。該安定化剤は、粒子形成中に、該ミクロ粒子の壁内に組み込まれる。このようにして、該ミクロ粒子は、第四級アルキルアンモニウム単位およびヒドロキシル基からなる機能的表面を備える。ミクロ粒子中のこのポリマーの比率は、１〜２５％であってよい。この発明によれば、この官能化により、ケラチン様物質(ウール繊維)であっても繊維への付着が増強される。好ましくは、これら粒子は、次いで動的膨張プロセスにおいて活性化合物を担持する。殺虫剤、昆虫忌避剤、香料、フェロモンおよび他の活性化合物が言及される。しかし、別法として活性化合物は、重合化中に形成したミクロ粒子に組み込まれ得る。形成した分散物は、眼に見える集塊物がなく、数日間にわたって活性化合物を繊維上で放出する。しかし、この出願は、毛髪への適用を記載していない。いずれの場合においても、本目的のためには、粒子は大きすぎます。さらに、このプロセスは、追加の複雑な重合化工程および所望によりその後に活性化合物を担持させることを必要としております。また、数週間にわたる放出は実証されていない。この必要とされるフリーラジカル重合は、多くの活性化合物の安定性に対して負の影響を及ぼし得る。
【００２０】
一方、本発明の実施態様がより簡便な方法を示しており、活性化合物を担持するカチオン性の電荷を帯びた０.１〜１０ μｍ(好ましくは０.１〜３ μｍ)という好適な寸法のミクロ粒子を直接もたらすということは明らかである。さらに、該粒子は、Eudragit（登録商標）タイプの様々な割合を含み得る。
【００２１】
基本的に、四級化ジメチルアミノエチルメタクリレート共重合体(商品名 Eudragit（登録商標） RS, RL)の活性化合物含有ミクロ粒子を作成するための溶媒蒸留プロセスは、先行技術の一部であって、十分に記載されている。しかし、これらのプロセスは、活性化合物の徐放性放出を有する経口マイクロカプセルを開発するために適用および至適化されている。ここでは、活性化合物およびEudragit（登録商標）ポリマーは、有機溶媒に溶解されて、水相または油相中に分散される。該水相は、乳化剤、好ましくはポリビニルアルコールまたはアニオン性または非イオン性界面活性剤を含む。油相、例えばパラフィン油が使用される場合には、ステアレートから作られることが多い。減圧下での溶媒除去後−該溶媒シフトプロセスを用いることも可能である−該ミクロ粒子はこの分散液中に残っている。多くの場合には、このサイズは１０〜１０００ μｍの範囲内である。かかるプロセスの例示として、ＩＬ ７３５９７が挙げられうる。ここで使用される有機溶媒は、テトラヒドロフラン(ＴＨＦ)である。ＷＯ９２/０１４４３において、Eudragit（登録商標）S 100 およびEudragit（登録商標）RS 100は、好ましくは塩基性活性化合物と共に、溶媒として塩化メチレンに溶解され、好ましくはステアリン酸マグネシウムを含む無機油中に分散される。溶媒の蒸発後に、ミクロ粒子は分散系中で細かく分割される。該粒子は、０〜１５０ μｍの範囲のサイズを有し、＜５０ μｍ が好ましい。活性化合物の放出は遅延され、環境ｐＨとは殆ど独立している。Drug Development and Industrial Pharmacy 16(13), 2057-2075 (1990)は、ニフェジピン(nifedipine)が、どのようにポリマーEudragit（登録商標）RS および RLと共に塩化メチレンに溶解されるかについて記載している。ブレード攪拌器を用いて、この溶液は、水相(乳化剤ポリビニルアルコール)に分散され、溶媒が蒸発される。この粒径は、攪拌速度、ポリマーの比率、乳化剤の比率、油相の粘度などに依拠する。この主題に対して数多くの文献が存在する。Journal of Controlled Release, 16, 311-318 (1991)は、カプセル化した５-アミノサリチル酸(ＣＨ2Ｃｌ2相中の固体分散物)に対する水相中の乳化剤の効果を調べたものである。上記文献において、殆どの場合において、慣習の攪拌装置を使用して、エマルジョンを生成する。これらの出願および文献は、水相に溶解された乳化剤が、エマルジョン、即ちミクロ粒子を調製するために必要であることを述べている。
【００２２】
言及され得る包括的な文献からのさらなる例示は次のとおりである：
−ケトフェロンのｐＨ感受性および徐放性調製物としての、Eudragit（登録商標）RSおよびRL(アクリル樹脂)マイクロカプセル；Goto S. et al.；J. Microencpasulation 3(4), 1986, 293-304、
−ビーグル犬におけるケトフェロンを含有するEudragit（登録商標） RS、RLおよびS(アクリル樹脂)マイクロカプセルの徐放特性の評価；Goto S. et al., J. Microencapsulation 5(4), 1988, 343-360、
−Eudragit（登録商標） RL マイクロカプセルの新規製造方法；Satturwar P.M. et al., J. Microencapsulation 19(4), 2002, 407-413。
【００２３】
しかし、これら全ての方法は、毛髪に適用するには大きすぎるミクロ粒子を提供する。また、これらの文献は、これらの粒子が表面に長期間結合することを実証していない。さらに、該エマルジョンを調製するために、乳化剤は、外側の水相に必要とされる。Eudragit（登録商標）ポリマータイプの自己乳化効果は記載されておらず、上記プロセスでは有効とはならない。
【００２４】
活性化合物粒子を動物の毛髪に結合する全体として異なる法は、ＷＯ０９/０５６２８０に記載されている。ここでは機能抗体が用いられる。該ミクロ粒子は、カルボキシル基により表面上で官能化される。これらの基により、該抗体は、複数のプロセスにおいて該ミクロ粒子に化学的に結合される。これらの抗体は、様々な種類の毛髪に特異的に結合できる可変ドメインを有する。しかし、抗体を表面に化学的に結合するため、また適用に必要な期間中、官能性を維持するための要件により、このプロセスもまた複雑かつ費用が嵩むと考えられるものである。
【００２５】
本発明によれば、動物の毛髪上でのミクロ粒子の結合を媒介するための機能抗体は必要ではない。
【００２６】
そのため、列挙した方法および技術は、いずれも本発明の下記の利点を達成できるものはない：
−ａ）毛髪に付着後の活性化合物の遅延放出のためのミクロ粒子の生成、
−ｂ）ミクロ粒子の表面をカチオン性ポリマーで被覆することによる毛髪への長期持続性付着の提供、
−ｃ）毛髪特性に対して負の効果を及ぼさないような、十分に小さいミクロ粒子のサイズ、および
−ｄ）乳化プロセスによる該ミクロ粒子の簡便な調製。
【００２７】
従って、以下の複雑な要求プロファイルを満たすことができる医薬、好ましくは獣医用医薬における局所適用のための投与形態を開発することが本発明の目的である：
ａ）数日または数週間かけてゆっくりと活性化合物を放出できること、
ｂ）皮膚の炎症を実質的に避けることができること、
ｃ）毛または皮膚の機能特性および触覚特性に対して負の影響を及ぼさないこと、そして
ｄ）それと同時に、生成することが容易であること。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】水中の粒径分析、フラウンホーファー回析による評価。
【図２】粒子１２-ＰＭＭＡの走査電子顕微鏡像。
【図３】ＰＭＭＡ粒子からのフルメトリンの放出。
【図４】ＤＳＣ分析。
【図５】ＰＭＭＡ/ＰＳ ６０/４０。
【図６】酢酸エチルから調製したプラセボ粒子。
【図７】ＤＳＣ分析。
【図８】イカリジンを担持したＰＭＭＡ粒子。
【図９】ポリクアテルニウム−１１を含むエマルジョン。
【図１０】ポリクアテルニウム−１１を含む懸濁液。
【図１１】ポリクアテルニウム−２８を含むエマルジョン。
【図１２】ポリクアテルニウム−２８を含む懸濁液。
【図１３】ＰＭＭＡを含む不安定なエマルジョン(一体化液滴/相分離) 。
【図１４】超音波０分後の分散物の粒径分布。
【図１５】超音波１６分後の分散物の粒径分布。
【図１６】フィルム被覆された Eudragit（登録商標） RS 100 粒子のＳＥＭ画像。
【図１７】実験経過中の毛上でのフルメトリン含量の変化。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明によりこの目的を達成できる。本発明は下記に関する：
１．
ａ）電荷を帯びていないポリアクリレート、および
ｂ）陽性の電荷を帯びた官能基を担持するカチオン性ポリアクリレートを含む、最大で１０ μｍの粒径ｄ(ｖ,９０)を有する粒子：
ここで、該粒子が、
ｃ）１以上の活性化合物を含み、および
ｄ）所望により、ポリマー、助剤または添加剤をさらに含んでいてもよい。
２．０.１〜３ μｍの粒径ｄ(ｖ,９０)を有する項目１の粒子。
３．カチオン性ポリアクリレートｂ）が四級化ジアルキルアミノアルキルメタクリレート共重合体である、項目１または２の粒子。
４．カチオン性ポリアクリレートｂ）が、(メチル, エチル)アクリレート、(メチル, エチル)メタクリレートおよびメタクリル酸のモノクロロメタン-四級化ジメチルアミノエチルエステル(商標名 Eudragit RS またはEudragit RLとして知られる)の共重合体である、項目３の粒子。
５．電荷を帯びていないポリアクリレートａ）が、ポリ(メチルメタクリレート)である、前記項目のいずれか一つに記載の粒子。
６．電荷を帯びていないポリアクリレートａ）：カチオン性ポリアクリレートｂ）の混合比が、５：９５(w/w)〜９５：５(ｗ/ｗ)、好ましくは７０：３０(ｗ/ｗ)〜９５：５(ｗ/ｗ)、特に好ましくは８０：２０(ｗ/ｗ)〜９０：１０(ｗ/ｗ)である、前記項目のいずれか一つに記載の粒子。
７．粒子質量を基準にして、０.１〜５０重量％、好ましくは１〜２０重量％、特に好ましくは５〜１５重量％の活性化合物を含む、前記項目のいずれか一つに記載の粒子。
８．電荷を帯びていないポリアクリレートが、１０００ｇ/ｍｏｌ〜１００００００g/mol、好ましくは２００００〜６０００００ｇ/ｍｏｌまで、特に好ましくは５００００〜１５００００ｇ/ｍｏｌの重量平均分子量である、前記項目のいずれか一つに記載の粒子。
９．粒子全質量を基準にして、０.１〜５０重量％の１以上のさらなるポリマー、好ましくはポリスチレンを含む、前記項目のいずれか一つに記載の粒子。
１０．１以上の可塑剤、界面活性剤、共溶媒を含み、ミクロ粒子の全質量を基準にして、それらの合計が、０.１〜４０重量％、好ましくは５〜３０重量％、特に好ましくは５〜２０重量％である、前記項目のいずれか一つに記載の粒子。
１１．活性化合物として、フルメトリンを含む、前記項目のいずれか一つに記載の粒子。
１２．活性化合物として、忌避剤、好ましくはイカリジンまたはＮ,Ｎ-ジエチル-ｍ-トルアミドを含む、前記項目のいずれか一つに記載の粒子。
１３．活性化合物として、アリールピロリジン、好ましくはＮ-[[４-[３-(３,５-ジクロロフェニル)-３-(トリフルオロメチル)-１-ピロリジニル]-２-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル]プロペンアミド(CAS No.: 1221692-86-9)を含む、前記項目のいずれか一つに記載の粒子。
１４．以下の工程を含む、前記項目のいずれか一つに記載の粒子の製造方法：
（ｉ）水と混和性であれば難混和性の溶媒または溶媒混合物(１)中で、成分ａ）〜ｄ）の溶液を調製する工程、
（ｉｉ）所望により、添加剤および溶媒または溶媒混合物(１)を含む水相に、飽和まで該溶液（ｉ）を分散し、微細で、安定なエマルジョンを得る工程、
（ｉｉｉ）溶媒または溶媒混合物(１)を、エマルジョン液滴から
−Ｉ）蒸発(溶媒蒸留プロセス)により除去し、水性懸濁液を得る工程、または
−ＩＩ）噴霧乾燥により除去し、乾燥粉末を得る工程。
１５．項目１〜１３のいずれか一つに記載の粒子を含む、組成物。
１６．粒子が分散媒体中に分散されている、項１５の組成物。
１７．動物に対する寄生虫を制御するための組成物を製造するための、項目１〜１３のいずれか一つに記載の粒子の使用。
１８．動物に対する節足動物を忌避するための項１５または１６の組成物の使用。
１９．動物に対する寄生虫を制御するために使用するための、項１５または１６の組成物。
２０．動物に対する節足動物を忌避するための、項１５または１６の組成物。
【００３０】
本発明の粒子は、Malvern Mastersizer（登録商標）2000を用いるレーザー回析により測定した粒径ｄ(ｖ,９０)＜１０ μｍ、好ましくはｄ(ｖ,９０)＜５ μｍ、特に好ましくはｄ(ｖ,９０)＜３ μｍ を有する。好ましくは、本発明の粒子のサイズは、少なくともｄ(ｖ,９０)＞０.１ μｍ、特に好ましくはｄ(ｖ,９０)＞０.３ μｍ、特に好ましくはｄ(ｖ,９０)＞０.５ μｍである。別段の指示がない限り、全ての粒径は、レーザー回析(Malvern Mastersizer（登録商標） 2000)により測定したｄ(ｖ,９０)値である。ｄ(ｖ,９０)は、９０％の全粒子が、この値よりも小さいか、または等しい寸法である、容量を基準にした粒径分布を意味すると理解される。用語ｄ(ｖ,５０)、ｄ(ｖ,１０)などは、それに応じて理解されるべきである。該測定は、活性化合物粒子の屈折率が知られていないので、Mastersizer（登録商標）2000 機器(dispersing unit Hydro 2000G)を用いて、Malvern and the Fraunhofer 回析評価モードからレーザー回析方法により行われる。ここで、サンプル溶液の好適な量が、攪拌しながら、分散媒質(水または０.１％ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム水溶液)（２-３ ｍｌ）中に予め分散される。攪拌(３００ rpm)およびポンピング(９００ rpm)しながら、該分散物を、機器の分散ユニットに移送して測定する。この評価ソフトウェアは、ｄ(ｖ,０.５)、ｄ(ｖ,０.９)などの値として粒径を記載する。
【００３１】
電荷を帯びたポリアクリレートおよび電荷を帯びていないポリアクリレートは、埋包された活性化合物に対してマトリクスを形成する。
【００３２】
電荷を帯びていないポリマー−幾つかの文献および出願において、中性ポリマーとして言及される−または電荷を帯びていないポリアクリレートとは、一般的にはポリマーとして、特にポリアクリレートとして理解され、これはブレンステッドの酸/塩基の技術用語の意味において、水系においてプロトン化または脱プロトン化され得る任意の基を含有するものではない。さらに、それは、アニオン性またはカチオン性基を恒久的ではなく含む全てのポリマーおよび特異的ポリアクリレートをいい、そのため酸性または塩基性水溶液中ではその電荷状態を保持する。結果として、それらは水に不溶性であって、これは本発明の目的のために使用される電荷を帯びていないポリアクリレートのさらに重要な特性である。従って、それらから形成されたミクロ粒子は、水および動物の毛の微気候中でそのまま無傷で残っており、任意の測定可能な程度に膨潤性ではない。唯一この方法においてのみ、ミクロ粒子に含まれる活性化合物は、拡散により遅延および制御された様式で放出され得る。上記定義に対して、電荷を帯びていないポリアクリレートが、例えば、製造方法のために、非常に僅かな比率の電荷を帯びたプロトン付加可能またはプロトン付加不可能な基を含むかどうかは重要ではない。アクリルまたはメタクリルエステルの場合において、例えば、それらは僅かな比率の非エステル化カルボキシル基を含み得ることが可能である。これらは、ある種望ましくない「混成（contamination）」として見なされ、ポリアクリレートが本発明の目的のために「電荷を帯びていない」かどうかを評価する場合には、それらは考慮されない。本発明の目的のための電荷を帯びていないポリアクリレートは、アクリル酸エステル(ポリアクリレート、用語の狭い意味において)のポリマーのみならず、アクリル酸エステルの誘導体のポリマーでもある。このエステルは、好ましくはアルキルエステルであり、該アルキル基は、好ましくは１〜４個の炭素を含有する；特に好ましくは、メチルエステルを提供する。該誘導体は、特にアルキルポリ(アルキル)アクリレートであって、ここで該アルキルアクリル酸のアルキル置換基および互いに独立したエステルのアルキル基は、１〜４つの炭素原子を有するアルキルであってもよい；特に好ましいものは、各場合において、メチル基を示す。該アルキルポリ(アルキル)アクリレートは、特に好ましいものとして使用され、以下の一般式により示され得る：
【化２】
2014523446.tif 000004
（式中、Ｒ１＝アルキル、好ましくは１〜４個の炭素原子を有する、特に-ＣＨ３、
Ｒ２＝アルキル、好ましくは１〜４個の炭素原子を有する、特に-ＣＨ３）。
マトリクスについて特に非常に好ましい電荷を帯びていないポリアクリレートは、メチルポリメタクリレート(ポリ(メチルメタクリレート)、ＰＭＭＡ)である。
【００３３】
マトリクスのための電荷を帯びていないポリアクリレートとして、上記した電荷を帯びていないポリアクリレートの電荷を帯びていない共重合体または電荷を帯びていない様々なポリアクリレートの混合物を使用することができる。
【００３４】
マトリクスの電荷を帯びていないポリアクリレートの質量モル、例えばＰＭＭＡは、広い制限の中で変化し得る。Ｍｗ＝１０００ g/mol〜１００００００ ｇ/ｍｏｌ(平均重量)の分子量を使用することが好都合である。しかし、特に好ましいものは、２００００〜６０００００ g/molの平均分子量であり、次に特に好ましいものは５００００〜１５００００ g/molである。該ミクロ粒子のガラス遷移温度を低下するか、または(ｖ,９０)＜２ μｍの特に小さなミクロ粒子を生成するために(この目的を達成するために、分子量Ｍｗ＜１００００ g/molから作成されたものの使用が好ましい)、低分子量を有するポリアクリレートポリマーが、混合するのに特に好適である。既に上記したとおり、ミクロ粒子は、所望により、別の電荷を帯びていないアルキルポリアルキルアクリレートの割合を変えることも含みうる。
【００３５】
これに対して、アニオン性ポリマー、特にアニオン性ポリアクリレートは、本発明の目的のために使用されない。アニオン性ポリマーは、水性環境中でブレンステッドの酸という意味において脱プロトン化され得るおよび／または永久的に負に電荷を帯びた官能基を含有し得るポリマーを意味すると理解されるべきである。言及され得る特定の例は、Eudragit（登録商標）S タイプである。かかるポリマーは、それらが脆弱となるか、中性となるか、あるいはさらにミクロ粒子の陽性の表面電荷を陰性に変換するのは好適ではなく、これは陽性に電荷を帯びた毛髪表面へのミクロ粒子の付着を低下させる。
【００３６】
該カチオン性ポリアクリレートは、陽性に電荷を帯びた官能基を担持し、かつ好ましくは、用語の狭い意味ではポリアクリレート、ポリメタクリレートまたはそれらから得られる共重合体である。該エステルのアルキル基、好適にはアルキルアクリル酸のアルキル置換基は、互いのアルキルとは独立して１〜４個の炭素原子を有することを意味する；特に好ましいものは、各場合において、メチル基を提供する。陽性に電荷を帯びた基は、好ましくはエステル基を介して、該ポリアクリレート骨格に結合される。通常、アミノまたはアンモニウム基は、１〜４個の炭素原子を有するアルキル鎖、好ましくはエチレン鎖を介して、エステル基の酸素に結合される。陽性に電荷を帯びた基は、好ましくはトリアルキル化、およびプロトン付加またはテトラアルキル化されたアミノ基であり、該アルキル基は、互いに独立して、１〜４個の炭素原子、好ましくは１または２個の炭素原子を有する。特に好ましくは、商標名Eudragit（登録商標）RSまたはRL(manufacturer and distributioin：EVONIK Industries, as at 2011)を有するジメチルアミノエチルメタクリレート、(エチル,メチル)アクリレートおよび(エチル,メチル)メタクリレートのカチオン性水不溶性共重合体であり、ここで該第三級アミノ基は塩化メチルを用いて四級化される(CAS No. 33434-24-1；Eudragit（登録商標） RLおよびRSタイプのポリマーは、既に詳細に上記されている)。カチオン性ポリアクリレートは、好ましくは２００００〜４００００、好ましくは２５０００〜３５０００の重量平均分子量を有する。該カチオン性ポリアクリレートは、本発明の粒子の独立した成分(separate component)である；それは、マトリクスの電荷を帯びていないポリアクリレートと共重合化されない。
【００３７】
驚くべきことに、かかるカチオン性ポリマーは、該電荷を帯びていないポリアクリレートマトリクスポリマーと組み合わせて、達成される投与形態について複雑な４つ全ての要件ａ）〜ｄ）を可能とする特性プロファイルを提供する。このカチオン性ポリマー、特にEudragit（登録商標）RS、RLの使用により、水性製剤から、負に電荷を帯びた動物の毛髪に効率的に付着することができ、かつ乾燥後の毛の概観または触覚特性に負の影響を及ぼさないように十分に小さなカチオン性表面電荷を有する小さなミクロ粒子を、生成する単純な製造方法が可能となる。さらに、動物の毛髪に対する粒子の長期的な持続性付着もまた乾燥後に達成される。様々なポリマータイプ(マトリックスポリマーおよびカチオン性ポリアクリレート)の様々な割合を組み合わせることによって、粒径を改変すること、および該粒子からの活性化合物からの遅延性、連続性、および長期持続性を達成することが可能である。カチオン性ポリマーの比率は、ポリマーの比率を基準にして、広い制限内で、５〜９５重量％、好ましくは５〜３０重量％、しかし特に好ましくは１０〜２０重量％で変化し得る。
【００３８】
本発明の粒子は、マイクロカプセルとして言及され、その中に該活性化合物が貯蔵またはカプセル化される。粒子において、該活性化合物は、分子的に分散された形態または分散形態で懸濁される。従って、該ミクロ粒子は、活性化合物のリザーバーを形成する。該ポリマーマトリクスは、他のポリマーおよび添加剤を含み得る。本発明の別の特徴として、カチオン性ポリアクリレートおよびさらなる添加剤がマトリックスポリマーと混和性であるということを言及し得る。別の添加剤およびポリマーは、粒子のポリマーマトリクス内での相分離がないように選択されるべきである。該ミクロ粒子中の言及した添加剤、例えば別のポリマーまたは可塑剤の比率は、該粒子の全重量を基準として全量で４０％までである。
【００３９】
粒子の調製は、様々なプロセスによって実施し得る。本発明の粒子特性は、製造方法により修飾され得る。従って、該溶媒蒸留プロセスは、本発明のサイズおよび修飾された表面の粒子を得るための好ましいプロセスである。このプロセスの多くの記述が文献に存在する。本明細書では、該粒子の成分は、水と混和性でない有機溶媒に溶解され、該溶媒は、最初にエマルジョンが形成されるように−殆どの場合、乳化剤を活用して−水相に分散される。このエマルジョンを温めることにより、有機相を蒸発させて、溶解した成分の溶媒基材を除去した。好適な方法で温度を調整することにより、該溶媒をほぼ完全にミクロ粒子から除去できる。該エマルジョン液滴の固体は、ミクロ粒子の形態にて残存している。このようにして、該エマルジョンを懸濁液に変える。もし必要ならば、さらなる製剤成分を、この懸濁液に添加してもよい。ボトル詰めの後、得られる製剤を直接適用できる。このように、該製剤を、１工程(ワン・ポット法)で製造できる。該粒子を、その後の洗浄および濾過工程により精製および単離してもよい（用途に対して有利であるならば）。
【００４０】
本発明の場合において、粒子のカチオン性表面電荷は、後の適用のために必要とされる。これはカチオン性ポリアクリレートにより達成される。マトリックスポリマー、活性化合物および所望により添加剤と共に、該カチオン性ポリアクリレートを油相に溶解する。本発明において、水相に対する有機溶媒の体積比を、広い範囲内で変更してもよい。即ち、１０：９０〜５０：５０の体積比(有機溶媒：水相)が可能である。好ましいものとして、２０：８０〜４０：６０の有機相：水相の体積比を提供するが、これにより好適な分散条件−例えば、高性能分散装置および／または高圧ホモジナイザーを用いる場合−および様々なエネルギー入力を用いると、エマルジョンの液滴サイズ、即ち最終的なミクロ粒子のサイズを変更できる。該有機溶媒は、水相と貧混和性でなければならず、もし貧混和性であれば、水の沸点以下の温度で蒸発させねばならない。これらの要件は、特にハロゲン化炭化水素およびまた酢酸エチルを用いて達成され得る。本発明の目的のために、好ましいものは、ジクロロメタン、トリクロロメタンおよび酢酸エチルである。
【００４１】
本発明に従って、該カチオン性ポリアクリレートは、乳化剤として作用し得る。例えば、好ましく使用される水不溶性カチオン性のEudragit（登録商標）RL(RS)は、本発明の使用において、マトリックスポリマーとの相溶性に加えて、顕著に良好な乳化特性も示し、そのため特定の微細に分割された水中油型エマルジョン液滴を生成できる。従来技術に従うと、水中油型エマルジョンを生成するためには、好適な乳化剤は水相中で主に溶解性でなければならないので、この事は特に驚くべきことである。該溶媒の除去後、該活性化合物含有ミクロ粒子は、水性分散物の形態で存在している。該ミクロ粒子は、カチオン性表面電荷もまた有する。結果として、水性分散製剤として適用される該ミクロ粒子は、ここで動物毛髪の負に電荷を帯びた表面に好適に結合され得る。Eudragit（登録商標）RS, RL タイプの四級化ジメチルアミノエチルメタクリレート共重合体の特性は、特に毛髪への良好な付着をもたらして、水性製剤ベースを乾燥させた後にさらに長時間、ミクロ粒子が乾燥した動物の毛髪に付着することを確実とする。こうして、活性化合物と皮膚との直接的な接触が回避され、幾つかの活性化合物の皮膚の刺激作用が実効されない。さらに、この期間中、活性化合物は、遅延様式にてマイクロカプセルから放出される。ミクロ粒子の放出特性は、別の添加剤(例えば、可塑剤、他のポリマータイプの添加、マトリクスポリマー/Eudragit（登録商標）の割合)によってもさらに広い範囲で変更し得る。
【００４２】
使用される高性能分散装置は、例えば、IKA Werke GmbH & Co. KGのUltra Turrax（登録商標） T25であってもよい。通常の操作範囲は、本発明のミクロ粒子の製造中、１〜３分間の適用時間にて約１００００ rpmの回転数である。使用した高圧ホモジナイザーは、例えば、MicrofluidicsのタイプM110Yであってもよい。本発明の内容において、該ミクロ粒子は、標準として、５００バールの圧力(流圧)および２００〜１００ μｍ 孔サイズの相互作用チャンバーを用いて調製した。
【００４３】
さらに、本発明の粒子を製造するためのあまり好ましくないプロセスは、噴霧乾燥である。この目的を達成するために、エマルジョン蒸発方法の手順が採用され、溶解後に、粒子成分をエマルジョンに変える。後者は、２つの流体ノズルを用いて、噴霧化および乾燥されてもよい。
【００４４】
あまり好ましくないが、可能である、動的膨潤プロセスによる粒子の連続的担持である。この目的を達成するために、プラセボ粒子(即ち、いずれの活性化合物も含んでいない本発明の粒子)が、好適な溶媒に分散される。該溶媒は、活性化合物を溶解させ、かつ粒子を膨潤させるべきである。この膨張プロセスのため、および有機ポリマー相を支持する分布平衡の確立により開始したことから、活性化合物を粒子中に拡散することができる。該溶媒をゆっくりと除去することにより、粒子の膨潤は減少し、活性化合物は、該マイクロカプセル中に残る。
【００４５】
好ましいものは、外的に適用され得る活性化合物を用いる。言及され得る例は、殺虫剤、寄生虫駆除剤、ダニ駆除剤、殺菌剤、忌避剤、皮膚科学的に活性な化合物または行動改変作用の活性化合物の群からの活性化合物である。行動を改変するかかる活性化合物は、例えば、フェロモンまたは生殖行動と関連のある類似の匂い物質を包含する。
【００４６】
電荷を帯びた活性化合物にのみ好適なその他の系がある；しかし、本発明の粒子は、電荷を帯びていない活性化合物に好適である。そのため、電荷を帯びていない活性化合物を含む本発明の粒子は、本発明の一実施態様を示す。“電荷を帯びていない活性化合物” は、いずれの永久的に正または負に電荷を帯びた基も含まない、即ち中性であって、粒子中で中性の電荷を帯びていない形態で存在する活性化合物である。化合物がｐＨによって電荷を帯びた形態で存在し得るならば、“電荷を帯びていない活性化合物”とは、ｐＨ５〜９、特にｐＨ６〜８にて中性の電荷を帯びていない形態で優勢に存在するものであると考えられる。
【００４７】
基本的には、外部適用に好適であり、かつ当業者が思い付く全ての活性化合物を、本発明に従って使用することができる。従って、活性化合物および活性化合物群とは、単に例示として本明細書に言及したにすぎず、制限として考えるべきものではない。
【００４８】
好ましいものは、動物およびヒトへの外部寄生虫に対する活性化合物、特に殺虫および／または殺ダニ作用を有する活性化合物の使用を提供する。
【００４９】
言及され得る活性化合物の好ましい群は、ピレトリン類およびピレスロイド類であり、例えば次のものである：フェンバレラート[α-シアノ-３-フェノキシベンジル α(p-Ｃｌ-フェニル)イソバレラート、フルメトリン[(α-シアノ-４-フルオロ-３-フェノキシ)ベンジル ３-[２-(４-クロロフェニル)-２-クロロビニル]-２,２-ジメチルシクロプロパノエート]およびそのエナンチオマーおよび立体異性体、シフルトリン[(α-シアノ-４-フルオロ-３-フェノキシ)ベンジル ２,２,-ジメチル-３-(２,２-ジクロロビニル)シクロプロパンカルボキシレート]、ペルメトリン[３-フェノキシベンジルシス,トランス-３-(２,２-ジクロロビニル)-２,２-ジメチルシクロプロパンカルボキシレート]、シペルメトリン[α-シアノ-３-フェノキシベンジル ２,２-ジメチル-３-(２,２-ジクロロビニル)シクロプロパンカルボキシレート]、デルタメトリン[α-シアノ-３-フェノキシベンジル シス,トランス-３-(２,２,-ジブロモビニル)-２,２-ジメチルシクロプロパンカルボキシレート]、フルバリネート[２-シアノ-３-フェノキシベンジル ２-(２-クロロ-α,α,α-トリフルオロ-p-トルイド)-３-メチルブチレート]。好ましいものは、殺ダニ作用を有するピレスロイドの使用である。特に好ましいものは、α-シアノピレスロイド、特にα-シアノ-3-フェニルベンジルアルコールおよび4-フルオロ-α-シアノ-3-フェノキシベンジルアルコールのエステルである。これらの中から、シフルトリン、β-シフルトリンまたは特にフルメトリンが好ましい。
【００５０】
言及され得るさらなるα-シアノピレスロイドは、シフェノトリンである。ピレスロイド類は、若干異なる基本骨格を有しているがエトフェンプロックスをも包含する。
【００５１】
活性化合物の別の好ましい群は忌避剤である。忌避剤とは、通常、嗅覚を介して生物に検出される活性化合物であり、これは直接殺傷するのではなくこの生物を忌避させるものである。例えば、ピレスロイドは、忌避剤であり、殺虫または殺ダニ作用を有する。他の忌避剤は、実質的には、対応する殺虫または殺ダニ作用を有さない。有害または不快な昆虫、例えば蚊、ハエ、ノミまたはコナダニ、例えば動物およびヒト由来のダニまたはダニ類を忌避させる忌避剤を使用することが好ましい。忌避剤群の好ましい例示として、次のものを列挙し得る：ＤＥＥＴジエチレントルアミド)、イカリジン、エチルブチルアセチルアミノプロピオネート(IR3535, Merck)。局所的に適用される従来の市販製剤の作用持続時間は、多くの場合、数時間に限定される。
【００５２】
さらに、アリールピロリジンは、本発明のミクロ粒子にカプセル化され得る活性化合物のさらに好ましい群を形成する。ここで、特に言及するものを、Ｎ-[[４−[３−(３,５-ジクロロフェニル)-３-(トリフルオロメチル)-１-ピロリジニル]-２-(トリフルオロ-メチル)フェニル]メチル]プロペンアミド(CAS No.: 1221692-86-9)から作ることができる。
【００５３】
殺虫剤の群からは、外部寄生虫駆除対象の節足動物を制御する分野で使用されるもの、例えば、スピノシン、Ｎ-フェニルピラゾール、カルバメート、リン酸およびホスホン酸のエステル、成長阻害剤、幼若ホルモンおよびこれら互いの活性化合物の混合物が、好ましく使用されるものとして言及され得る。別の共力剤を加えることができる。本出願の目的のために、共力剤は、その一部として、所望の活性を持たないが、混合パートナーとして該活性化合物の活性を増加させる化合物を意味すると理解されるべきである。
【００５４】
言及され得るカルバメートは、フェニルおよびナフチルカルバメートである。
【００５５】
好ましいものとして言及され得るリン酸エステルは、一般名ホキシム、フェニトロチオン、ジクロルボス、トリクロルホンおよびメラチオンを有する化合物である。
【００５６】
本発明の言及される全ての活性化合物を、好適な場合には、立体異性体の混合物として、例えば、ジアステレオマーまたはラセミ化合物の混合物として、あるいは富化した、または実質的に純粋な立体異性体、例えばエナンチオマーとして用いてもよい。
【００５７】
もちろん、本発明の粒子において活性化合物の組み合わせを使用できる。
【００５８】
本発明の粒子において、活性化合物は、通常、各場合において、粒子の重量に基づいて０.１〜５０重量％、好ましくは１〜２０重量％、特に好ましくは５〜１５重量％の濃度で存在する。
【００５９】
ミクロ粒子中への活性化合物の導入のための前提条件は、該ポリマーマトリクスとの相溶性である。以下、ポリマーマトリクスは、マトリックスポリマーポリアクリレート(好ましくはＰＭＭＡ）およびカチオン性ポリアクリレート(好ましくはEudragit（登録商標）RL/RS)およびあらゆる所望により添加され得るさらなるポリマーの混合物を意味すると理解されるべきである。活性化合物が、分子的に分散された形態で、または少なくとも微粒子の非晶質形態（即ち、結晶ではない)に溶解された粒子で存在する場合、ミクロ粒子からの活性化合物の持続性放出にとって望ましい。特に好ましいものは、固溶体という意味において、マトリックスポリマーに活性化合物が分子的に分散された分布である。これは、ある場合において、基本的には、活性化合物およびポリマーマトリクスの熱力学的混和性という意味で互換的に提供される。かかる混和性に関する利点は、マトリクスから粒子表面への活性化合物の迅速な拡散が妨げられる(相分離の原理)という事実を構成する。該活性化合物の溶融ピークが、例えば、ＤＳＣ/ＤＴＡダイアグラムに見出されない場合には、分子的に分散された分布が提示され得る。別の方法は、Ｘ線回析による分析である。この方法において、この混和性は、回析ピークの非存在により識別される。しかし、本発明の目的のために、少なくとも存在し得る活性化合物の特定比率にて結晶がポリマーマトリクスに包含されており、これにより例えばこの放出速度をさらに改変し得ることを除外すべきではない。
【００６０】
しかし、本発明の目的のための活性化合物の使用は、熱力学的に安定な様式においてポリマーマトリクスと混和性である活性化合物に限定されない。本発明の活性化合物を含むミクロ粒子を製造するために、活性化合物とポリマーマトリクスとの分子混和性を増強させる当業者には既知の全てのプロセスを使用してもよい。液体の場合には、１以上の可溶化剤が、この目的のために使用され得る。これは、例えば、ミクロ粒子中の活性化合物あるいは他の成分の偏析(demixing)、相分離または結晶化を防止する、さらなるポリマー、可塑剤、共溶媒、湿潤剤(界面活性剤)あるいは別の活性化合物の添加により達成され得る。これらの物質の添加により、該ミクロ粒子からの活性化合物の放出挙動を調節することが可能である。一般的に、言及した低分子量添加剤の添加は、ガラス遷移温度を低下させて、マトリクス中の活性化合物の拡散速度を増加させ、所望により促進された放出が達成され得る。
【００６１】
所望により添加されるポリマーは、一般的に、マトリックスポリマーポリアクリレートおよびカチオン性ポリアクリレートおよびミクロ粒子に組み込まれる活性化合物と混和性である全てのポリマータイプである。好ましいものは、他のポリビニル樹脂、例えばポリビニルピロリドン、塩化ポリビニル、ポリビニルピロリドン/ポリ酢酸ビニル共重合体(商品名 Luviskol)、特にポリスチレンを用いて提供される。ポリマー性の−少なくとも部分的に疎水性の−炭化水素化合物の誘導体、例えば、セルロースエーテル、セルロースエステル、疎水化スターチは、ポリエチレングリコール(ポリオキシエチレン、マクロゴール、CAS No. 25322-68-3)もまた、ここに言及される。その割合は、ミクロ粒子の全量に基づいて５０重量％までであってもよい；好ましいものは、１０〜４０重量％にて提供される。
【００６２】
本発明のミクロ粒子は、可塑剤を含んでもよい。可塑剤として使用するために好適なものは、マトリックスポリマーと混和性かつ当業者にはよく知られる全ての医薬上許容し得る化合物であって、所望の効果、低いガラス遷移温度を有し、および／または活性化合物とマトリックスポリマーとの混和性を増加させるものである。このようにして、マイクロカプセルから活性化合物の放出速度を増加させることもできる。言及され得る例は次のものである：フタル酸およびテトラフタル酸エステル、クエン酸トリエチル、トリアセチン、レシチン、リン酸エステル、アジピン酸エステル、安息香酸ベンジル、クエン酸トリブチルアセチル、パルミチン酸アスコルビル、オレイン酸エチルおよび多価アルコール、例えばグリセロールおよびプロピレングリコール(ミグリコール)の脂肪酸エステル。好ましいものとして、安息香酸ベンジル、クエン酸トリブチルアセチル、クエン酸トリエチルの用用が挙げられる。該可塑剤は、通常、目的とするガラス遷移温度の低下および放出速度の増加を達成するために必要な量にて添加される。必要な量を、広い範囲で変化させてもよい；しかし、粒子全量を基準として４０重量％の上限が有用であることがわかる。使用される量は、好ましくは１０〜３０重量％の間で変化する。
【００６３】
本発明のミクロ粒子は、ポリマー材と混和性である医薬上許容し得る共溶媒を含み得て、これは可溶化剤としてもまた可塑剤としても作用するが、粒子相および分散媒質との間の活性化合物の分布係数に対する効果を有し得る。しかし、この目的のために使用され得る共溶媒の分布平衡は、乳化プロセス中に外部水相への分散を回避するために、ポリマー/活性化合物/溶媒相の側に優先的に存在すべきである。これらの共溶媒は、通常、ポリマーの比率を基準にして、好ましくは５〜２０重量％の比率で用いられる。医薬上許容し得る比較的長鎖のアルコール、例えばｎ-ブタノール、ベンジルアルコール、またはエステル、例えばトリアセチン、オレイン酸エチル、安息香酸ベンジルは、例えば、好適な共溶媒として言及され得る。上記した溶媒の混合物を共溶媒として使用することができる。もちろん、この目的のために使用され得るその他の共溶媒を用いることも可能である。特に好ましいものとして、安息香酸ベンジルを挙げる。
【００６４】
本発明のミクロ粒子は、ポリマー材と混和性の医薬上許容し得る表面活性化化合物(界面活性剤)もさらに含み得る、この界面活性剤は、同じように可溶化剤および可塑剤として作用し得るが、粒子相および分散媒質との間の活性化合物の分布係数に対する効果を有し得る。しかし、この目的のために使用され得る表面活性化化合物の分布平衡は、乳化プロセス中で外部水相中への拡散を避けるためにポリマー/活性化合物/溶媒相の側に優先的に存在すべきである。＜８のＨＬＢ値(グリフィン方法により決定される親水性-親油性のバランス値)を有する疎水性界面活性剤および湿潤剤を主に使用することができる。これらの界面活性剤および湿潤剤は、通常、ポリマーの比率を基準にして、好ましくは５〜２０重量％の比率で用いられる。好ましいものとして、非イオン性表面活性化化合物が挙げられる。言及され得る例は次のものである：脂肪アルキルポリエチレングリコールエーテル、アルキルフェノールポリエチレングリコールエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸グリセリド、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、低いエトキシル化度を有する各場合において、アルキルポリグリコシド、脂肪酸Ｎ-メチルグルカミド、疎水性ポリソルベート、ソルビタン脂肪酸エステル、レシチンおよびポリプロピレンオキシドの高い比率を有するポロキサマー。もちろん、所望の効果、低いガラス遷移温度を有し、および／または活性化合物とマトリックスポリマーとの混和性を増加させる当業者には既知の別の表面活性化化合物(界面活性剤)を用いることもできる。
【００６５】
該活性化合物が、分子分散形態でポリマー担体マトリクス中に好ましく存在していれば、それらはマトリクスからミクロ粒子周辺への拡散により放出され得る。この拡散は、動物に対する持続作用にとって決定的である。放出持続時間は、ミクロ粒子中の活性化合物の拡散速度を改変することにより達成され得る。また、本発明に従って、当業者には既知の全ての方法を用いることができる。上記セクションにおいて、マトリックスポリマーのガラス温度を低くする可塑剤、共溶媒、界面活性剤および他の添加剤の添加は既に言及されている。さらに、ここで言及される改変に関する特別な選択肢は、異なる分子量のポリマーの使用である。低分子量を有するポリマーの添加は、ガラス遷移温度を低くして、ポリマーマトリクス中の活性化合物の拡散速度、即ち放出速度を調節することができる(実施例４を参照されたい)。
【００６６】
もちろん、本発明のミクロ粒子は、マトリクス材と混和性であれば、カプセル化した化合物または他の活性化合物の安定性を増加させるか、またはミクロ粒子の稠度を改善する当業者には既知の全ての別の添加剤を含み得る。言及し得る例示は次のものである：抗酸化剤、保存剤、充填剤。
【００６７】
ミクロ粒子に導入するのに特に好適である抗酸化剤は、より疎水性の代表的なものである。言及し得る例示は次のものである：フェノール(トコフェロール、例えばビタミンＥ、例えば、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、胆汁酸エステル、例えば、オクチルおよび没食子酸ドデシルなど、パルミチン酸アスコルビル、および別の好適な有機酸エステル、メルカプト化合物、例えば、チオグリセリン、チオ乳酸エステル。上記した抗酸化剤は、抗酸化保護作用を確実とするのに十分なあらゆる濃度範囲で用いられる；慣習濃度範囲は、０.０１〜０.１重量％である。
【００６８】
疎水性が高い保存剤は、例えば次のものである：ベンジルアルコール、n-ブタノール、フェノール、クレゾール、クロロブタノール、パラ-ヒドロキシ安息香酸エステル、特にプロピルエステル。上記した保存剤を、細菌に対する保護作用を確実とするために全ての濃度範囲に使用できる；しかし、通常の濃度範囲は、０.０１〜５重量％である。
【００６９】
本発明のミクロ粒子は、通常、好適な投与形態(処方)に組み込まれる。それらは、粉末形態で適用できるが、好ましくは分散物、より正確には懸濁液として動物に適用できる。分散物のうち、好ましいものは水性分散物が挙げられる。既に記載した製造方法は、即時使用可能な水性分散物を、製剤に対する基材として提供する。品質保持期間、安定性および適用性に対して効果を有する当業者には既知である全ての医薬用助剤および添加剤を、この懸濁液に添加できる。もちろん、助剤および添加剤は分散媒質と相溶性であるべきである；即ち、好ましい水性分散媒質、助剤および添加剤の場合には、主に親水性、即ち水と混和性であるべきである。言及され得る助剤および添加剤は、例えば、分散剤、湿潤剤(界面活性剤)、展着剤、保存剤、抗酸化剤、ｐＨ調節剤、消泡剤である。増粘剤および質感付与成分を用いて、分散物製剤のレオロジー特性を要件に適合させることも可能である。混和性有機溶媒を外部相に添加することは、固定値に調整できる活性化合物の特定の比率が、既に分散物の外部相中に飽和した溶解形態で存在しており、そのため製剤適用直後に寄生虫に対して必要なノック・アウト効果を確保できるという意味において、活性化合物の放出プロファイルを調節するさらなる手段であり得る。
【００７０】
ミクロ粒子のための好適な分散媒は、一般的に、ミクロ粒子を溶解せず、ミクロ粒子由来の活性化合物を溶解しない、均質な溶媒および添加剤との溶媒混合物である。好ましいものは、水または水および水混和性溶媒の混合物を用いることであり、ここで水：水混和性溶媒の混合比は、該ミクロ粒子が溶解しないかまたは大きく膨張せず、かつ活性化合物が該ミクロ粒子から溶解しない限り、必要に応じて変更してもよい。該ミクロ粒子からの活性化合物の溶解を防止するために、該分散媒質は、飽和限界まで溶解した活性化合物を含み得る。水含有分散媒は、通常、水の少なくとも５０重量％、好ましくは７０〜９５重量％を含む。この分散媒質中のミクロ粒子の濃度は、広い範囲内で変化し得る。１〜３０重量％の粒子濃度は、好適であることが判っている。好ましいものは、１〜２０重量％、特に好ましくは５〜１５重量％で提供される。
【００７１】
分散剤として使用するための好適なものは、ミクロ粒子の表面にて吸収するか、または分散製剤中のミクロ粒子の均一な分布を促進する当業者には既知の全ての添加剤である：ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、セルロースエーテルおよびエステルおよび、またポロキサマー(ポリエチレングリコール/ポリプロピレングリコール/ポリエチレングリコールのスリー・ブロック共重合体)が、好ましいものとして言及される。言及した分散剤は、好ましくは０.０５〜３重量％の濃度範囲において用いられる。
【００７２】
湿潤剤および界面活性剤の群からの可能な添加剤は、８以上のＨＬＢ値を有する高い親水性、非イオン性およびカチオン性の代表的なもの、例えば、脂肪アルキルポリエチレングリコールエーテル、アルキルフェノールポリエチレングリコールエーテル、アルキルポリグリコシド、ポリエトキシル化脂肪酸グリセリド、ポリエトキシル化脂肪酸エステル、脂肪酸Ｎ-メチルグルカミド、ポリソルベート、ソルビタン脂肪酸エステル、ポロキサマー、ポリエトキシル化石油誘導体である。ポリエトキシル化ソルビタン脂肪酸エステルおよびポロキサマーが、好ましいものとして言及される。アニオン性界面活性剤は、ミクロ粒子の表面上で吸着し、かつカチオン性表面電荷を低減する。この理由のために、それらは、あまり好適ではない。分散剤および湿潤剤および界面活性剤の好適な使用濃度は、製剤中の粒子濃度および該ミクロ粒子の全表面により決定され、広い範囲内で変化し得る。ミセル形成湿潤剤および界面活性剤の濃度は、臨海ミセル形成濃度(cmc)を超えないように選択されるのが好ましい。
【００７３】
展着剤として使用するための好ましいものは、低濃度で、依然として分散剤および油系、例えばイソプロピルミリステート、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、アジピン酸エステル、トリグリセリドと混和性である水混和性化合物、例えば、非イオン性界面活性剤およびシリコン界面活性剤である。たびたび、０.０１〜１重量％の濃度範囲が、展着剤として好適であることがわかる。しかし、これらの濃度は、次のセクションに記載したものであるが、これらに限定すると理解されるべきではなく、助剤およびさらなる製剤成分によって変化してもよい。
【００７４】
保存剤は、液体製剤中に存在してもよい。そのカチオン性電荷のために４級アンモニウム化合物は、粒子の表面上で吸着時にその陽性電荷を低減しないので、特に好適である。塩化ベンザルコニウムおよび塩化セチルピリジニウムは、本明細書で言及され得る。使用され得るさらなる保存剤の例示は、以下に言及したものである：脂肪族アルコール、例えばベンジルアルコール、エタノール、ブタノール、フェノール、クレゾール、クロロブタノール、パラ-ヒドロキシ安息香酸エステル、特にメチルエステルおよびプロピルエステル、カルボン酸、例えば、ソルビン酸、安息香酸、乳酸、プロピオン酸の塩または遊離酸。保存剤は、医薬常法的および微生物学的に有効な量で添加される。使用される濃度範囲は、例えば、０.０１〜５重量％である。それらは、個別に、または共力剤と組み合わせて添加され得る。用いられる共力剤は、例えば次のものである：クエン酸、酒石酸、アルコルビン酸、またはエデト酸のナトリウム塩。
【００７５】
抗酸化剤の添加は、連続水相中に溶解した活性化合物または他の助剤が酸化に感受性ならば有用であり得る。使用され得る抗酸化剤は、例えば次のものである：亜硫酸塩(亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム)、有機硫化物(シスチン、システイン、シスタミン、メチオニン、チオグリセリン、チオグリコール酸、チオ乳酸)、フェノール、トコフェロール、例えばビタミンＥ、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、胆汁酸エステル、例えば、オクチルおよび没食子酸ドデシル、有機酸(アルコルビン酸、クエン酸、酒石酸、乳酸)およびその塩およびエステルである。抗酸化剤は、通常、０.０１〜１重量％の量で添加される。
【００７６】
増粘剤および質感付与成分は、無機増粘剤、例えばベントナイト、コロイドシリカ酸、ステアリン酸アルミニウム、および有機増粘剤、例えばセルロース誘導体、例えばメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースおよびその塩、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース 4000、ポリビニルアルコールおよびその重合体、ポリアクリル酸(カルボポール)、ポリアクリレート、例えばポリエチルおよびメタクリレート、微粒化セルロースおよびナトリウムカルボキシメチルセルロースの混合物、ポリマー炭化水素、例えば、キサンタンガム、アルギネート、アラビアガム、ポリペプチド、例えばゼラチン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、スターチ誘導体、メチルビニルエーテルおよび無水マレイン酸の共重合体である。これらの物質の混合物は、特に有利である。多くの場合には、０.０１〜５重量％の量は、必要な増粘効果を達成するために十分である。
【００７７】
ｐＨ調節剤は、医薬的に慣用な酸または塩基である。この塩基は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属ヒドロキシド(例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ)、塩基性塩、例えば、塩化アンモニウム、塩基性アミノ酸、例えば、アルギニン、コリン、メグルミン、エタノールアミン、あるいは緩衝液、例えば、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン、クエン酸緩衝液またはリン酸緩衝液を包含する。該酸は、例えば、塩酸、酢酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、コハク酸、アジピン酸、メタンスルホン酸、オクタン酸、リノレン酸、グルコノラクトン、および酸性アミノ酸、例えば、アスパラギン酸を包含する。
【００７８】
消泡剤は、好ましくはシリコン、例えば、ジメチコンまたはシメチコンを基にしたものである。ここで、高頻度で、非常に少量の０.００１〜０.０１重量％が有効である。
【００７９】
分散物の処方の水相において水混和性溶媒の使用が、例えば、活性化合物の飽和濃度を調整するために、必要な値に対する連続相において有用であろう。しかし、該添加剤は、注意深く選択されなければならず、溶媒および共溶媒はミクロ粒子の完全性を損ない、比較的大量の該活性化合物を該ミクロ粒子から溶解させるべきではないので、その濃度は制限されるべきである。水混和性溶媒が添加される場合、用いる量は、好ましくは５〜３０重量％である。好適な溶媒は、例えば次のものである：生理学的に許容し得る溶媒、例えばアルコール、例えば一水和物アルカノール(例えば、エタノールまたはｎ-ブタノール)、多価アルコール、例えばグリコール(例えば、エチレングリコール、プロピレングリコール、テトラグリコール/グリコフロール)、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリセリン；芳香族性置換アルコール、例えばベンジルアルコール、フェニルエタノール、フェノキシエタノール；エステル、例えば酢酸エチル、酢酸ブチル、エーテル、例えばアルキレングリコールアルキルエーテル(例えば、ジプロピレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル)；ケトン、例えばアセトン、メチルエチルケトン；グリセリンホルマール、ソルケトール(２,２-ジメチル-４-ヒドロキシメチル-１,３-ジオキソラン)、Ｎ-メチルピロリドン、２-ピロリドン、Ｎ,Ｎ-ジメチルアセトアミド、ジメチルイソソルバイト、ラウログリコール、プロピレンカーボネート、ジメチルホルムアミド、および上記した溶媒の混合物。
【００８０】
本発明の液体製剤を製造するために、好適な所望の成分の量を、例えば、従来の攪拌タンクまたは他の好適な装置を用いて互いに攪拌した。この成分にとって必要な場合には、この操作を、保護雰囲気下で実施するか、または酸素を排除する他の方法を用いて実施する。
【００８１】
その陽性表面電荷により、水性分散製剤として適用される本発明のミクロ粒子は、迅速かつ好ましく動物毛髪の負に電荷を帯びたその表面上で吸着し、本発明に従って使用されるカチオン性ポリアクリレートの特別な特性により、数日および数週間の間、動物の毛上にて付着し続ける。この全ての期間にわたり、活性化合物は、ミクロ粒子から放出され得る、即ち徐放期間にわたりその処置または保護作用を提示する。動物の毛上にミクロ粒子が付着するために、皮膚との直接接触が実質的に回避され、多くの活性化合物の皮膚炎症作用は効力を生じない。さらに、ミクロ粒子のサイズが小さいため、毛の視覚および触覚特性に否定的な影響を及ぼさない。本発明のさらなる利点は、あるいは、化学的に相溶不可能な活性化合物が一つの製剤中で一緒に合わせて適用されるように、様々な活性化合物を含むミクロ粒子を製剤に混合してもよい。
【００８２】
毛への粒子の適用は、水生懸濁液、例えばスプレーとして、スポットオン、プア・オン、ポンプスプレー、エアゾールスプレーまたはワイプオン製剤から行われる。ワイプオン製剤は−有利には好適なアプリケーターを用いる−、動物の毛上に広げられるか、または動物の毛に組み込まれる投与形態である。ここで、好ましいものは、プア・オンおよびワイプオン製剤またはポンプスプレー投与を提供する。ワイプオン適用が、特に好ましいものとして言及され得る。この目的を達成するために、該ミクロ粒子の活性化合物含量を用いて、必要な粒子の量が決定される。この必要な適用量は、ミクロ粒子懸濁液中の固体濃度を用いて計算される。より簡易な適用のために、界面活性剤(例えば、Tween 20, 0.01%)が、水性分散物に添加される。これにより、良好な毛の湿潤性となる。該製剤は、毛上に噴霧されるか、または塗布される。この目的を達成するために、好適なアプリケーターが用いられる。
【００８３】
本発明の製剤は、好ましくは、動物、好ましくは恒温動物、例えば、トリまたは特に哺乳動物への外用に好適である。これらは、家畜および有益な動物(useful animal)、および動物園の動物、実験動物、試験動物およびペットであってもよい。
【００８４】
有用かつ繁殖動物は、哺乳動物、例えば、ヤギ、ラクダ、水牛、ロバ、ウサギ、ダマジカ、トナカイ、毛皮のある動物、例えばミンク、チンチラ、ラクーン、特に、畜牛、ウマ、ヒツジ、ブタである。
【００８５】
実験動物および試験動物は、マウス、ラット、モルモット、ゴールデンハムスター、イヌおよびネコ包含する。
【００８６】
ペットは、イヌ、ネコおよびウマを包含する。
【００８７】
特に強調すべきは、ネコ、イヌまたはウマへの適用である。
【００８８】
本発明に従って、動物への適用は、ヒトへの適用を包含する。
【００８９】
適用は、予防的および治療的の双方でおこり得る。
【００９０】
最終的に、本発明の粒子およびそれらを含む組成物の使用範囲および有効範囲は、そこに含まれる一つの活性化合物またはそこに含まれる複数の活性化合物に依存する；各々活性範囲および用途は、基本的には当業者には良く知られている。本発明の粒子およびその製剤は、寄生虫、特に動物に対する外部寄生虫を制御するために使用されるのが好ましい。言及されうる寄生虫は、昆虫、例えば、ノミ、シラミ、蚊、ハエなど、ならびにコナダニ、例えば、マダニ類(ticks)およびその他のダニ類(mites)である。特に強調するものは、は、ノミおよびマダニ類への使用である。
【００９１】
以下の実施例は、本発明を説明するためにある：
【実施例】
【００９２】
実施例１
粒子を、エマルジョン蒸発プロセスを用いて製造する。該粒子の組成物は、下記表から理解される。
【００９３】
表１．供給材料
【表１】
2014523446.tif 000005
フルメトリン、PMMA(Terez（登録商標）PMMA 5003, Ter Hell Plastics GmbH, Mw = 94 000 g/mol)およびEudragit（登録商標） RS 100 (Mw＝〜30 000 g/mol; Evonik Industries AG)を、有機相(ジクロロメタン)に溶解した。Ultra Turrax（登録商標）(T25, IKA（登録商標） Werke GmbH & Co. KG)を用いて、該有機相を、ゆっくりと添加して(9500 rpm, 2分間)、水相に分散する。これを、高圧ホモジナイザー(Microfluidizer M110Y, microfluidics, 500 barの流圧にて)を用いてより強く均質化された安定なエマルジョンとする。マグネットスターラーを用いて穏やかに加熱(最大６０℃)して、該有機相を除去した。溶解した成分を硬化させて、粒子懸濁液を得る。次いで、これを攪拌セル(Millipore Solvent-resistant Stirred Cell, for 47 mm membranes, Cat No XFUF04701; Millipore GmbH)および好適なフィルター(Pall Ultipor N66/0.2 μｍ, Cat No. NRG047100; Pall Corporation)を用いて濾過し、その後水を用いる洗浄工程で精製した。次いで、該粒子を特徴分析した：
ａ）レーザー回析(Mastersizer（登録商標） 2000, Malvern Instruments Ltd.)および走査電子顕微鏡(Sirion 100T, FEI Company)による粒径分析。結果については、表２、図１および図２を参照されたい。
【００９４】
表２．粒径および分析的に決定した活性化合物含量
【表２】
2014523446.tif 000006
ｂ）活性化合物含量
活性化合物含量を、ＨＰＬＣ分析により決定した。これにより、粒子について１５.０％の活性化合物含量が示される。
【００９５】
ｃ）放出
製剤をイヌの毛に適用して、ここで該粒子が付着し、活性化合物を放出する。これらの特定の放出状態を、インビトロで再現することは困難である。従って、信頼できる再現性のある結果を得る放出モデルを選択したが、インビトロでの複雑な放出パラメーターを反映できないため、様々な製剤の比較のみを可能とする。７０/３０の割合のメタノール/水混合物が好適であることが判った。この放出媒質は粒子を溶解せず、膨張しない。
【００９６】
放出実験のために、該粒子を、室温で放出媒質（5 ml）に分散し、７日間にわたり振盪を続けた(段階７, 水平サンプルアレンジ；Multi Wrist（登録商標） Shaker, Lab-Line Instruments)。
【００９７】
該放出は、〜１０％の破裂効果と共に開始する。その後、活性化合物は、一定の様式で放出される。対数表現は、Ｒ2 = ０.９５５７の決定係数を有する直線を提供する。該放出曲線は、存在する約４５％の活性化合物が、７日後に(１６８時)に放出されることを示す(図３)。
【００９８】
ｄ）ガラス遷移温度
ＤＳＣ分析を用いて、該粒子の均一構造がいかなるものかを示すことができる。もし不均等性の場合には、複数の熱反応性が見られる。該粒子成分が十分に相溶性である場合に、ただ一つの吸熱反応が観察されるはずである。この場合には、ガラス遷移が存在する。さらに、乳化剤Eudragit（登録商標）RS 100 (第一曲線、Tg開始＝４１℃)および活性化合物(Ｔｇが測定可能ではないため示していない)は、プラセボ粒子(第三曲線、Tg開始＝９２℃)および純粋なポリマー(第二曲線、Tg開始＝１０５℃)(図４)と比較して、それらが該活性化合物担持粒子のガラス遷移(第四曲線、Tg開始＝６５℃)を低くするため、可塑剤であることが判った。
【００９９】
封をしていないアルミニウムるつぼ(DSC 822e, STARe SW 9.20, Mettler Toledo GmbH)(40 μl)を用いて、測定を行った。この目的を達成するために、該サンプルを、２０℃〜２００℃の１０ Ｋ/分 工程の温度で加熱した。同じようにして、該サンプルを、２００℃〜２０℃に冷却して、その後再度加熱した。
【０１００】
実施例２
最適化または修飾のためのさらなる選択肢は、用いたマトリックスポリマーの選択である。さらなるポリマーを、使用したＰＭＭＡに添加してもよい。従って、実施例１の製造方法を用いたが、ポリスチレン(ＭＷ＝〜265800 g/mol；PS 158, BASF)を、マトリックスポリマーに添加した。この様式において、ＰＭＭＡおよびポリスチレンの９０/１０、８０/２０あるいは６０/４０の混合物を製造できる(表３を参照する)。２つのポリマーの混和性を示すために、プラセボ粒子を製造した。これら製剤の一つは、活性化合物フルメトリンの添加を繰り返される。活性化合物は、いずれの問題もなく組み込まれる。
【０１０１】
表３．供給材料
【表３】
2014523446.tif 000007
【０１０２】
該製剤から得られる粒子を、そのサイズ分布およびガラス遷移温度について試験した。比較のために、純粋なポリマーのガラス遷移温度も測定した(表４)。
【０１０３】
表４．粒径およびガラス遷移温度
【表４】
2014523446.tif 000008
【０１０４】
図５は、混合物ＰＭＭＡ/ＰＳ ６０/４０を用いるプラセボ粒子の走査電子顕微鏡画像を示す。
【０１０５】
実施例３
該粒子の製造を、有機溶媒のジクロロメタンを別の溶媒により置換する以外、実施例１に記載の通りに実施した。この実施例において、該粒子の成分を溶解するために、酢酸エチルを使用した。活性化合物(ＡＣ)を含む製剤および含まない製剤についてのデータを、示した。
【０１０６】
表５．供給材料
【表５】
2014523446.tif 000009
【０１０７】
さらなる実験経過について、同じ方法を採用した；しかし、溶媒を蒸発するために、エマルジョンは、７５℃に加熱すべきである。該粒径分布を表６に示した。
【０１０８】
表６．粒径分布
【表６】
2014523446.tif 000010
走査電子顕微鏡画像を図６に示した。
【０１０９】
実施例４
該ミクロ粒子を、実施例１の製造方法を用いて製造した。該組成物を、表７に示した。使用したマトリックスポリマーは、様々な分子量(Ｍｗ＝２０００〜６０００００Ｄａ）のポリメチルメタクリレートである。また、活性化合物フルメトリンを、アリールピロリジン誘導体Ｎ-[[４-[３-(３,５-ジクロロフェニル)-３-(トリフルオロメチル)-１-ピロリジニル]-２-(トリフルオロ-メチル)フェニル]メチル]プロペンアミド(CAS No.: 1221692-86-9)により置換した。この活性化合物もまた、いずれの問題もなくミクロ粒子に組み込まれ得る。
【０１１０】
表７．供給材料
【表７】
2014523446.tif 000011
【０１１１】
表８は、得られる粒径分布およびガラス遷移温度を示す。
【０１１２】
表８．粒径分布およびガラス遷移温度
【表８】
2014523446.tif 000012
ＤＳＣ分析を、図７(実施例１に記載したとおりの方法)に示した。
【０１１３】
分子量の増加と共に、ガラス遷移温度の増加を観察した。
【０１１４】
実施例５
可塑剤を使用して、該粒子の特性を改変しうる。実施例１に記載したとおりに、この製造を行った。該可塑剤を、有機相に同時に溶解した。可塑剤の含量を増大させた製剤の組成を、以下の表に示した。この場合において、該可塑剤は安息香酸ベンジルであり、獣医用医薬における非経口注射製剤のための溶媒として使用され得る。
【０１１５】
表９．様々な可塑剤濃度を有する製剤の供給材料
【表９】
2014523446.tif 000013
該可塑剤を、様々な濃度で製剤に混合した。この様式において、ガラス遷移温度を変えることが出来る。可塑剤濃度に起因するガラス遷移温度を、粒径分布と同様に表１０に示した。
【０１１６】
表１０．粒径分布およびガラス遷移温度
【表１０】
2014523446.tif 000014
以下の物質は、同様に可塑剤として使用するために好適である：クエン酸トリブチルアセチル、クエン酸トリエチル、Hexamoll（登録商標）(BASF)。これらは、濃度増加に従いガラス遷移温度も低下する。
【０１１７】
実施例６
殺虫剤のカプセル化に加えて、忌避剤、例えば活性化合物イカリジンを封入することもできる。しかし、水中への活性化合物の溶解度を考慮せねばならない。従って、実施例１の方法を採用するが、さらに該水相を活性化合物で飽和した。該組成物を、以下の表に示した。
【０１１８】
表１１．供給材料
【表１１】
2014523446.tif 000015
【０１１９】
該粒子成分を有機相に溶解した。該水相を、活性化合物で飽和する。該有機相は、Ultra Turrax（登録商標）(9500 rpm, 2 分間)を用いて水相に分散される。該溶媒を、加熱(４５℃)およびマグネティックスターラーを用いる攪拌により除去し、次いで該粒子懸濁液を水で洗浄し、濾取して乾燥させた。該粒径分布を表１２に示した。
【０１２０】
表１２．粒径分布
【表１２】
2014523446.tif 000016
得られる粒子を、図８に示した。
【０１２１】
実施例７
さらなる忌避剤として、ＤＥＥＴ(Ｎ,Ｎ-ジエチル-ｍ-トルアミド)をカプセル化することができる。水中への活性化合物の溶解度を、カプセル化を確実に成功させるために考慮すべきである。この製造を、実施例６に記載したとおりに行い、またさらに該水相を飽和活性化合物で飽和した。該粒径分布を、表１３に示した。
【０１２２】
表１３．粒径分布
【表１３】
2014523446.tif 000017
【０１２３】
実施例８
有機相対水相の割合を変更して、有機相に有利に好適化した。即ち、非水相を基準にして同量のＰＭＭＡを用いて、得られる粒子の量を増加させることが可能である。粒子の製造を、実施例１として記載したとおりに実施した。様々なプラセボ製剤に加えて、ベラム粒子(verum particle)もまた製造した。個々の製剤の組成を、表１４に示した。
【０１２４】
表１４．供給材料
【表１４】
2014523446.tif 000018
該活性化合物含有製剤に対して、以下のサイズ分布が、該粒径について見られる(表１５)。
【０１２５】
表１５．粒径分布
【表１５】
2014523446.tif 000019
【０１２６】
実施例９(比較例)
ポリクアテルニウム−１１
ミクロ粒子を、実施例６の製造方法に従って製造した。共重合体 Eudragit（登録商標）RS 100の代わりに、水溶性カチオン性ポリマーポリクアテルニウム-１１(Gafquat（登録商標） 755N, ISP, Cas No.: 53633-54-8, ビニルピロリドンおよびジメチルアミノエチルメタクリレートの四級化共重合体, cf. WO97/45012)を使用した。
【化３】
2014523446.tif 000020
【０１２７】
"Gafquat（登録商標） 755N"タイプの共重合体についての一般構造式
【０１２８】
該組成を表１６に示した。
表１６．供給材料
【表１６】
2014523446.tif 000021
均一な粒径分布を有する安定なエマルジョンを製造することはできない。溶媒の蒸発後に、ポリマーは凝集体を形成し、いずれの分離したマイクロカプセルも同定できない。エマルジョンに対して作用させたミクロフルダイザー後に撮った光学顕微鏡写真を図９に示し、得られる懸濁液を図１０に示した。
【０１２９】
水不溶性Eudragit（登録商標）RS 100とは異なり、水溶性Gafquat（登録商標）755Nは、安定な懸濁液を製造するためには好適ではない。
【０１３０】
実施例１０(比較例)：
ポリクアテルニウム−２８
ミクロ粒子を、実施例６の製造方法に従って製造した。共重合体Eudragit（登録商標） RS 100の代わりに、水可溶性のカチオン性ポリマーポリクアテルニウム−２８(Gafquat（登録商標） HS-100, ISP, CAS No.: 131954-48-8,ビニルピロリドンおよびメタクリルアミドプロピルトリメチル塩化アンモニウムの共重合体、cf. WO97/45012)を使用した。
【化４】
2014523446.tif 000022
【０１３１】
"Gafquat（登録商標） HS-100"タイプの共重合体の一般構造式 
該組成を表１７に示した。
【０１３２】
表１７．供給材料
【表１７】
2014523446.tif 000023
【０１３３】
均一な粒径分布を有する安定なエマルジョンを製造することができない。溶媒の蒸発の後に、該ポリマーは凝集体を形成し、いずれも分離したマイクロカプセルを同定できなかった。エマルジョンに対して作用させたミクロフルダイザーの後に撮った光学顕微鏡写真を、図１１に示し、得られる懸濁液を図１２に示した。
【０１３４】
水不溶性Eudragit（登録商標）RS 100とは異なり、該水可溶性Gafquat（登録商標） HS 100は、安定な懸濁液を製造するために好適ではない。
【０１３５】
実施例１１(比較例)：
ＰＭＭＡのみを使用して、Eudragitを使用しない。
【０１３６】
該ミクロ粒子を、実施例６の製造方法により製造した。しかし、この実験は、共重合体 Eudragit（登録商標） RS 100を用いずに行った。該組成を表１８に示した。
【０１３７】
表１８．供給材料
【表１８】
2014523446.tif 000024
【０１３８】
安定なエマルジョンを製造することはできず、相分離があった。光学顕微鏡の写真を、図１３に示した。
【０１３９】
実施例１２(比較例):
Eudragit（登録商標） RS 100
Eudragit（登録商標） RS 100のみをポリマー相として使用した、しかし電荷を帯びていないポリマーＰＭＭＡではない。ミクロ粒子を、実施例６の方法により製造した。ポリマーＰＭＭＡの代わりに、Eudragit（登録商標） RS 100のみを使用した。該組成を表１９に示した。
【０１４０】
表１９．供給材料
【表１９】
2014523446.tif 000025
この場合において、ミクロ粒子を形成した；しかし、これらの大部分は、超音波による長期処理後であっても、もはや再度分散され得ない凝集物として分散物中に存在する。該粒径分布を、MalvernのMastersizer 3000を用いて測定した(評価：フラウンホーファー回折, ミクロ粒子の屈折率 1.59; 溶媒の屈折率 1.33, 100%で超音波処理)。
【０１４１】
該粒径分布を表２０に示した。
【０１４２】
表２０．粒径分布
【表２０】
2014523446.tif 000026
超音波処理しない分散物の粒径分布を図１４に示し、図１５は、１６分間の超音波処理による処置後の分散物の該粒径分布を示す。
【０１４３】
電子顕微鏡検査法画像において、分散物を乾燥させた後は、任意の個別粒子(図１６)を同定することがもはや出来ない。
【０１４４】
従って、主にカチオン性フィルム形成ポリマーEudragit（登録商標）RS 100を用いて調製した活性化合物含有ミクロ粒子分散物を、当面の目的を達成するための本発明の目的に使用できない。
【０１４５】
生物学的実施例
試験製剤(実施例１)を、インビボ実験にて試験した。この目的のために、各場合において、３匹のビーグルドッグを、製剤およびコントロール群として利用した。該ミクロ粒子を、水性分散物中のカプセル化活性化合物(66 mg)(30 ml)を含むスプレー製剤中で試験して、イヌに噴霧した。
【０１４６】
活性化合物を蛍光染料(Uvitex（登録商標） OB)に置換しただけのベラム粒子として、同一組成を有する蛍光粒子を、試験製剤に添加した。これらの蛍光粒子は、不活性であり、毛上での粒子のより迅速かつ簡便な可視化のためにのみ役立つ。従って、蛍光性顕微鏡により、毛上で依然として粒子であるかどうかを確認できる。
【０１４７】
実施したインビトロでの試験は、メスおよびオス両方の９匹のビーグルドッグを含む。この動物は、２１〜３０ヶ月齢であり、かつ８.８〜１５.５kgの重量であった。識別は、耳に刺青した番号により行った。このイヌは、何らの臨床的徴候を有さず健康であり、それらが試験中に継続される条件として用いた。試験製剤に対して何らかの予想外の反応があった場合、あるいは動物がその他いずれかの理由のために病気となった場合、試験から除外した。このイヌを、個別ケージ内で維持して、交差反応を回避する。固定したプロトコールに従って、各場合において、Rhipicephalus sanguiineus属(ブラウン・ドッグ・ダニ)の２５匹のメスおよび２５匹のオスのマダニ類をイヌに寄生させた。イヌにマダニが十分刺咬できるように、この目的のためにイヌを麻酔した。試験スケジュールを、以下の表に示した。
【０１４８】
表２１．動物試験におけるプロトコールのスケジュール
【表２１】
2014523446.tif 000027
【０１４９】
処置の２４時間前(試験日=SD-1)に、マダニ類をイヌに置いた。試験開始直前に(SD 0)、イヌの上に残存するマダニ類を計測し、その数を記録した。動物を、イヌに存在するマダニ類の数によって処置およびコントロール群にグループ分けをした。実験開始時に、実験開始条件が出来るだけ同一となるように、ほぼ同じ数のマダニ類が各グループに存在すべきである。処置群のイヌに、試験製剤を身体全体に均一に噴霧した。コントロール群は処置しない。安全性を理由として、適用２および４時間後に、健康状態についてイヌを試験した。イヌに依然として生存しているあらゆる生存マダニ類の計測および除去を、製剤適用４８時間後に行った。効果を、ＳＤ２、７、２３、５０、６３で確認した。試験日ＳＤ２、７、１４および４２に、毛のサンプル(約100 mg/サンプル)を、イヌから採取して、活性化合物フルメトリンについて分析学的に試験した。イヌに対するフルメトリン粒子の持続性に関する代表的報告を行えるように、毛のサンプルを、身体の様々な領域から採取した。個々の毛を、顕微鏡観察した。蛍光顕微鏡の下で、蛍光染料Uvitex（登録商標）OBを担持するプラセボ粒子を見ることができる。試験経過中、静電作用により毛に付着するイヌ毛髪上の粒子数も入る。該蛍光粒子のみが標識機能を有する。この表示においては、ベラム粒子を可視化できない。
【０１５０】
顕微鏡写真により、毛上の粒子の図解的提示および迅速かつ簡便な確認が可能となる。さらに、サンプルを分析的に処理した。この目的を達成するために、毛のサンプルを、アセトニトリル(5 ml)で被覆した。この方法において、活性化合物フルメトリンを一晩かけて毛上に残存している粒子から抽出した。アセトニトリルの一部を濾過して、ＨＰＬＣ分析により処理した。該結果を図１７に示した。
【０１５１】
イヌ上のマダニ類の数から、相乗平均および効力を下記のとおり計算した。
【０１５２】
【数１８】
2014523446.tif 000028
(方程式１)
【数１９】
2014523446.tif 000029
(方程式２)
Ｎ１   ベラム群におけるマダニ類の数の幾何学的平均
Ｎ２   コントロール群におけるマダニ類の数の幾何学的平均
【０１５３】
個々のイヌ(イヌのID=イヌの識別番号；耳の刺青の最後の４つの数字)に対して各試験日に計測したマダニ類の数を表２２に示した。
【０１５４】
表２２．動物試験の結果
【表２２】
2014523446.tif 000030
【０１５５】
ＳＤ０は、イヌに粒子製剤を用いて噴霧した日である。ＳＤ２に、イヌに残存しているマダニ類を計測した。試験のさらなる経過期間に、ダニによるイヌへのさらなる刺咬があり、マダニ類を４８時間後に計測した。イヌへの試験製剤のさらなる噴霧はしなかった。試験日の間で、効力における比較的高い変動は、使用した試験動物数および生物学的実験に関する既知の高い偏差により説明され得る。これにも拘わらず、表２２は、マダニ類に対する良好な活性がＳＤ５０まで見ることができることを明確に示している。ＳＤ５０と６３の間にのみ、顕著な活性低下があった。従って、本発明に従って実施例１の製剤を用いて、マダニ類に対する７週間の作用持続時間を達成することができる。
【０１５６】
図面一覧：
図１．水中の粒径分析、フラウンホーファー回析による評価
図２．粒子１２-ＰＭＭＡの走査電子顕微鏡像
図３．ＰＭＭＡ粒子からのフルメトリンの放出
図４．ＤＳＣ分析
図５．ＰＭＭＡ/ＰＳ ６０/４０
図６．酢酸エチルから調製したプラセボ粒子
図７．ＤＳＣ分析
図８．イカリジンを担持したＰＭＭＡ粒子
図９．ポリクアテルニウム−１１を含むエマルジョン
図１０．ポリクアテルニウム−１１を含む懸濁液
図１１．ポリクアテルニウム−２８を含むエマルジョン
図１２．ポリクアテルニウム−２８を含む懸濁液
図１３．ＰＭＭＡを含む不安定なエマルジョン(一体化液滴/相分離)
図１４．超音波０分後の分散物の粒径分布
図１５．超音波１６分後の分散物の粒径分布
図１６．フィルム被覆された Eudragit（登録商標） RS 100 粒子のＳＥＭ画像
図１７．実験経過中の毛上でのフルメトリン含量の変化
【図１】
2014523446.tif 000031
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2014523446.tif 000036
【図７】
2014523446.tif 000037
【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
2014523446.tif 000045
【図１６】
2014523446.tif 000046
【図１７】
2014523446.tif 000047
【国際調査報告】
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