(57)【要約】  本発明は、非タンパク性の化合物である新種の化合物を含有する安定な非経口の配合物、その配合物を製造するための方法及びその配合物を安定化させるための特定の化合物の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ分子及び、少なくとも１つの、糖若しくはポリオール又はそれらの混合物を含有し、凍結乾燥によって得られる、＋５℃〜＋４０℃の温度範囲で安定な固体医薬的配合物。
【請求項２】
前記キメラ分子がＢＩＭ２３Ａ７６０又はドーパミン誘導体であることを特徴とする請求項１に記載の配合物。
【請求項３】
前記安定な固体医薬的配合物中の糖が、キシリトール、マルトース、ラクトース、ガラクトース、マンニトール、ソルビトール、デキストラン及びトレハロース（ｔｈｒｅａｌｏｓｅ）又はそれらの混合物、好ましくはキシリトール、マンニトール又はトレハロースを包含する、単糖類若しくは二糖類又はポリオールから選択されることを特徴とする請求項１又は２に記載の配合物。
【請求項４】
請求項１に記載の医薬的配合物の製造方法であって：
（ａ）活性物質及び賦形剤を導入及び重量測定すること；
（ｂ）攪拌しながら又は窒素下でバブリングしながら水に化合物を溶解させること；
（ｃ）濾過すること；
（ｄ）バイアルに充填し、プレストッパーをすること；
（ｅ）予め凍結させる工程及び真空下で凍結乾燥させる工程；
（ｆ）真空状態を解除し、及び制御された雰囲気下で栓をすること；
を含む方法。
【請求項５】
工程（ｅ）の予め凍結させる温度が、不活性条件下で約−２０℃〜−５０℃、好ましくは約−２０℃〜−３０℃、より好ましくは約−２５℃〜−３０℃であることを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記真空状態の解除が、窒素でバブリングすることに特徴づけられる制御された雰囲気下で行われる請求項４又は５に記載の方法。
【請求項７】
キメラ分子、及び少なくとも１つの、糖若しくはポリオール又はそれらの混合物を含有し、任意で等張剤及び／又は緩衝剤を含有し、請求項４に記載の方法の工程（ａ）〜（ｄ）で得られる、＋５℃〜＋４０℃の温度範囲で安定な液体医薬的配合物。
【請求項８】
前記キメラ分子がＢＩＭ２３Ａ７６０又はドーパミン誘導体であることを特徴とする請求項７に記載の安定な液体医薬的配合物。
【請求項９】
等張剤がプロピレングリコール、グリセロール、塩化ナトリウム又は塩化カリウムから選択されることを特徴とする請求項７又は８に記載の安定な液体医薬的配合物。
【請求項１０】
前記糖が、キシリトール、マルトース、ラクトース、ガラクトース、マンニトール、ソルビトール、デキストラン及びトレハロース又はそれらの混合物、好ましくはトレハロース、キシリトール又はマンニトールを包含する単糖類若しくは二糖類又はポリオールから選択されることを特徴とする請求項７〜９のいずれか１項に記載の安定な液体医薬的配合物。
【請求項１１】
先端巨大症、脳下垂体腫瘍及び神経内分泌性の（特にカルチノイド）腫瘍に関連した症状等の慢性的な障害又は症状を治療及び／又は予防するための、請求項４〜６のいずれか１項に記載の方法で製造された凍結乾燥した配合物であるＢＩＭ２３Ａ７６０の使用。
【請求項１２】
先端巨大症、脳下垂体腫瘍及び神経内分泌性の（特にカルチノイド）腫瘍に関連した症状等の慢性的な障害又は病状を治療及び／又は予防するための、請求項４方法の工程（ａ）〜（ｄ）によって製造された液体配合物であるＢＩＭ２３Ａ７６０の使用。
【請求項１３】
前記で定義される発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非タンパク性の化合物である、新種の化合物の液体配合物及び凍結乾燥した配合物、その配合物を製造するための方法及びその配合物を安定化させるための特定の化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
よく知られているように、凍結乾燥法は、配合物中の医薬的活性物質の劣化、及び凍結乾燥した状態での安定性又は懸濁液若しくは溶液に戻した後での安定性に著しい影響を及ぼす。
【０００３】
また、液体配合物の場合、活性、効率及び活性物質の比率並びに長時間の液体の透明性を維持することは困難である。
【０００４】
先行文献では、凍結乾燥した及び液体の配合物を安定させるための様々なアプローチが議論されてきた。
【０００５】
例えば、非経口注入用の、凍結乾燥して調整された形態の医薬的組成物が、科学出版物「Stabilisation of Octastation, a somatostatin analogue. Preparation of freeze-dried products for parenteral injection」(H. Pourrat & Al, Biological and Pharmaceutical Bulletin, Vol. 18, No. 5, pp 766-771、The Pharmaceutical society of Japan)に記載されている。前記出版物では、グルタミン酸−グルタミン酸ナトリウムバッファを安定剤として添加した配合物が記載されており、発見された凍結乾燥方法は、下流の産業製品に適している。
【０００６】
医薬的配合物中のタンパク質については、糖を安定剤として使用することが知られている。国際特許出願ＷＯ００／５６３６５では、キャリア蛋白質に結合した多糖類及びトレハロースからなる抗原を含んだ組成物について報告している。
【０００７】
科学出版物「Efficacy of chimeric molecules directed towards multiple somatostatin and dopamine receptors on inhibition of GH and prolactin secretion from GH-secreting pituitary adenomas classified as partially responsive to somatostatin analog therapy」(P Jaquet & Al, European Journal of Endocrinology, Vol 153, Issue 1, pp 135-141)では、特定のレセプターにおいていろいろ異なる強化された活性を有する新規なドーパミン−ソマトスタチンキメラ分子の重要性が示されている。これらの種類の化合物は、オクトレオチド治療法に部分的にしか応答しないとされた患者から採取した腫瘍において、オクトレオチド又は単独のレセプターと相互作用するリガンドのいずれかよりも、ＧＨ（成長ホルモン）やＰＲＬ（プロラクチン）の著しく大きな抑制を一貫してもたらした。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第００／５６３６５号パンフレット
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】H. Pourrat & Al, Biological and Pharmaceutical Bulletin, Vol. 18, No. 5, pp 766-771、The Pharmaceutical society of Japan
【非特許文献２】P Jaquet & Al, European Journal of Endocrinology, Vol 153, Issue 1, pp 135-141
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明が解決しようとする課題は、特定の凍結乾燥方法及び／又は適切な賦形剤の選定によって、凍結乾燥状又は液状のこれらキメラ化合物を含有する、長期間安定した配合物を提供することにある。本発明は少なくとも２４ヶ月液状又は凍結乾燥状態で安定な組成物を提供し、さらにはそのような組成物を凍結乾燥するための方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明で用いる活性物質は、ドーパミンアゴニスト及び環状ペプチドのソマトスタチンアナログのＮ末端に共有結合する小分子成分の２つから構成されるキメラ分子であり、キメラ化合物として作用する。
【００１２】
具体的には、本発明は＋５℃〜＋４０℃の温度範囲で安定な配合物であり、非経口投与経由で投与するための、溶媒添加により液状に再構築されることができる配合物に関する。
【００１３】
更なる対象として、本発明は、＋５℃〜＋４０℃の温度範囲及び６０〜８５％ＲＨ（相対湿度）、好ましくは７５％ＲＨで安定な液体医薬的配合物を包含する。この液体配合物は、バイアル中又はシリンジ型の装置内ですぐ使用可能な（ready to use）配合物として保存することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は３、６、９、及び１８ヶ月間の種々の温度での保存性能に関して、ＢＩＭ２３Ａ７６０の活性物質の含有量（初期％）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
ここで本発明を記述するために用いられる様々な用語の意味及び範囲を示しかつ定義すべく、以下の定義を説明する。
【００１６】
ここで使用される用語「凍結乾燥した」、「凍結乾燥」は、溶液を凍結し、真空下で氷を蒸発させることによって、溶液から固体物質を分離する方法のことである。
ここで使用される用語「凍結乾燥物（ｌｙｏｐｈｉｌｉｓａｔｅ）」は、凍結乾燥を経た後の、それ自身又は異なる注入可能なバルキング剤を添加した薬剤物質のことである。
【００１７】
ここで使用される用語「バルキング剤」は、非還元性の糖又は多価アルコール(ポリオール)から成る物質のことである。
【００１８】
本発明で使用される用語「安定性」は、化学的及び物理的安定性のことである。
ここで使用される用語「注入溶液用の粉末」は、非経口のルートで投与するために、水の溶液に迅速に（即座に）戻され得る凍結乾燥物等の粉末から成る物質のことである。
ここで使用される用語「即時放出性配合物」(immediate release formulation)は、１日〜１週間の持続期間で活性物質を放出する配合物である。
【００１９】
本発明で使用される用語「アミノ酸」は、アルギニン、グリシン、リシン(lysine)、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、イソロイシン、ロイシン、アラニン、フェニルアラニン、トリプトファン、セリン、メチオニン、プロリンを含めたアミノ酸を表すがそれらに限定されるものではない。前記アミノ酸は単独でも又は組み合せて用いてもよい。
【００２０】
本明細書の文章中では、用語「医薬的に許容可能な」とは、哺乳類又はヒトにおいて生理学的に充分許容されるという意味である。
本発明中の「高濃度の」とは、通常０．１ｍｇ／ｍｌ〜２０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１バイアルにおいて１〜１０ｍｇの活性物質の含有量を意味する。
用語「緩衝等張溶液」及び「緩衝生理食塩水溶液」は、バッファに更に塩を含有する溶液のことである。
【００２１】
ここで使用される用語「注入用の水（water for injection: WFI）」は、濾過や当業者に知られた技術で得られる滅菌水を意味する。
【００２２】
液体配合物に使用されるＳｏｌｕｔｏｌ（登録商標）は、マクロゴール（商品名）１２ヒドロキシステアリン酸、注入溶液用の非イオン性溶解剤である。
【００２３】
本発明では、単糖類若しくは二糖類若しくはポリオール又はそれらの混合物等の糖を、配合物の安定性、及び液体又は凍結乾燥した調製物の保存安定性のために使用することが更なる対象である。
【００２４】
従って、単糖類、二糖類及びポリオールには、キシリトール、マルトース、ラクトース、ガラクトース、マンニトール、ソルビトール、デキストラン及びトレハロース(threalose)又はそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
マンニトール、キシリトール及びトレハロースが好ましく、トレハロースがさらに好ましい。
【００２５】
好ましい実施形態では、本発明の配合物、凍結乾燥した配合物及び／又は液体配合物は、配合物中１〜５０重量％の活性物質ＢＩＭ２３Ａ７６０（ＢＩＭ２３Ａ７６０は、Ｄｏｐ２−ＤＬｙｓ（Ｄｏｐ２）−ｃ（Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ）−Ｔｈｒ−ＮＨ2である）若しくは他のドーパミン誘導体又はそれらの塩、好ましくは配合物中１５〜３０重量％のＢＩＭ２３Ａ７６０若しくは他のドーパミン誘導体又はそれらの塩を含む。
【００２６】
本発明の凍結乾燥配合物によるポリオール、糖類、単糖類又は二糖類の量は、配合物の約５０〜９５重量％を含み、好ましくはポリオール、又は単糖類若しくは二糖類等の糖類の量が配合物に対して７０重量％〜８５重量％である。
【００２７】
本発明の液体配合物によるポリオール、糖類、単糖類又は二糖類の量は、配合物の約１〜１５重量％を含み、好ましくはポリオール、又は単糖類若しくは二糖類等の糖類の量が配合物に対して５重量％〜８重量％である。
【００２８】
配合物の好ましいｐＨ範囲は３．０〜７．０であり、ここで４．０〜６．０が特に好ましい。
【００２９】
組成物は、凍結乾燥した製品の状態が好ましく、溶媒の添加によって戻すことができる。前記溶媒は、等張溶液、緩衝等張溶液、緩衝生理食塩水溶液又は注入用の水でもよい。
【００３０】
上記に加えて、本発明の前記組成物は、アミノ酸又は、ホウ酸、リン酸、酢酸及びクエン酸並びに／又はそれらの塩を含む有機塩等の従来の緩衝剤を更に含んでもよい。
【００３１】
本明細書で公開する前記配合物には、等張剤も含めることができる。本発明による前記配合物の適切な等張剤として、０．１〜５％（ｗ／ｗ）の量、好ましくは０．９〜３％（ｗ／ｗ）の量の、プロピレングリコール、グリセロール、塩化ナトリウム、塩化カリウムが含まれる。
【００３２】
本発明による組成物に有用な活性物質の医薬的塩は、有機酸及び無機酸との酸付加塩によって生成することができる。酸付加塩化合物の例として；例えば塩酸、臭化水素及びヨウ化水素等のハロゲン化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、その他の無機酸の塩；例えばメタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸等の、アルキルスルホン酸やアリールスルホン酸等の有機スルホン酸の塩；並びに、例えば酢酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、安息香酸、フマル酸、シュウ酸、ステアリン酸、サリチル酸、アスコルビン酸又はパモ酸等の不溶性の塩等の有機カルボン酸塩及びそれに類するもの、が挙げられる。
【００３３】
活性物質がカルボキシル基を含有する場合、そのカルボキシル基は塩基と医薬的に許容可能な塩を形成する。そのような塩の例として、例えばナトリウム塩及びカリウム塩等のアルカリ金属塩；アンモニウム塩；例えばジイソプロピルアミン、ベンジルアミン、ジベンジルアミン、トリエタノールアミン、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎメチルモルホリン、ピリジン、ピペラジン、Ｎ−エチルピペリジン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン及びプロカイン等のアミンとの塩、その他の有機塩基との塩；又はアルギニン及びリシン等のアミノ酸の塩が挙げられる。
好ましいペプチド塩は、有機酸と共に形成される塩である。
【００３４】
本発明の対象として、ＢＩＭ２３Ａ７６０等のドーパミン誘導体の凍結乾燥した、及び液体の配合物を提供することであり、配合物の製造期間中及び／又はそれに引き続く保存期間中における向上した安定性を示す。従って、更なる対象として、本発明は方法も包含する。
【００３５】
本発明の化合物を製造する方法は、例示的な目的において示され、開示された本発明を限定するものとして、構成されるべきものではない。
【００３６】
液体又は凍結乾燥した配合物を製造するための本発明の方法は下記の通り行われることができる：
ａ）活性物質及び賦形剤の導入及び重量測定すること；
ｂ）攪拌しながら水に化合物を溶解させること；
ｃ）溶液のバブリングのために窒素を用いること；
ｄ）濾過すること；
ｅ）バイアルに充填し、プレストッパーをするか、溶液状で窒素下で栓をすること；
ｆ）真空下で凍結乾燥させる工程；
ｇ）真空状態を解除し、及び窒素下で栓をすること；
【００３７】
本発明に従い、医薬的配合物が適切に製造される：
−  活性薬剤及び賦形剤を適量導入し、
−  攪拌しながら溶解し、任意で前記活性物質及び賦形剤を溶解するために水を用い、前記水は、注入用の水、緩衝溶液又は等張溶液でもよい。予め決められた濃度の活性物質及び賦形剤を含有する前記溶液は、窒素でバブリングしてもよい。その後、前記溶液は、ＰＶＤＦ（ポリフッ化ビニリデン）膜フィルターで滅菌濾過してもよい。その後任意で滅菌バイアルに無菌的に充填してもよい。
−  保護された雰囲気を維持し、酸化を防止するために、任意で室温のもと、液状で窒素バブリングしながら、バイアルに栓をし、
−  更に工程は、室温でバイアルにプレストッパーをすることから成り、そして、予め凍結する工程を行ってもよい。前記予備凍結温度は、不活性条件下で約−２０℃〜−５０℃の範囲であり、好ましくは約−２０℃〜−３０℃であり、さらに好ましくは約−２５℃〜−３０℃である。
−  続いて前記溶液は、任意で窒素雰囲気下で又は当分野で知られた他の制御された雰囲気下で、凍結乾燥することができ、約１００〜４００マイクロバール、好ましくは約１５０〜３００マイクロバールの減圧で、約８〜１２時間、約−５０℃〜＋５℃の温度、好ましくは約−２５℃〜＋５℃の温度で一次乾燥する。
−  その後窒素下で減圧して、二次乾燥工程を行うことができる。前記減圧は、約４０〜１５０、好ましくは約６０〜１００マイクロバール、３〜５時間、そして約−５℃〜＋２５℃の温度、好ましくは約＋５℃〜＋１５℃の温度であってよい。
−  滅菌フィルターした窒素を用いて、当業者に知られた適切な方法で真空状態を解除し、その後、窒素下でバイアルに栓をし、クリンピング（ｃｒｉｍｐｉｎｇ）のために凍結乾燥機から取り出す。
【００３８】
本発明の方法による凍結乾燥した調製物は極めて容易に再溶解する。
【００３９】
本発明は更に、医薬的配合物が水性の生理学的環境に置かれた時に、即時放出性配合物（ＩＲＦ）、及び／又は１日〜１週間の期間にわたる活性物質の継続的放出を提供する。
【００４０】
本発明の特定の実施形態において、前記即時放出性配合物は注入可能なものである。この医薬的組成物は、皮下の、筋肉内の、静脈内の又は注入（infusion）ルート等の非経口的方法で用いられることができる。
【００４１】
更に好ましい実施形態として、本発明の前記医薬的配合物は、非経口ルートで投与される即時放出性配合物（ＩＲＦ）である。
【００４２】
そして、本発明によれば、前記非経口投与は、好ましくは毎日７日間繰り返す皮下投与であり、患者によっては数日又は数週間症状に応じて繰り返す治療、好ましくは継続的な治療でもよいが、これら投与方法に限定されない。
【００４３】
本発明の更なる対象として、医薬的配合物は放出の高度なコントロールを示し、それは、ゼロオーダーの曲線又は擬似のゼロオーダーの曲線（ゼロオーダーのキネティクス曲線とは、前記活性物質の放出が定率であることを意味する）で表され、その低いＣmax（Ｃmaxは、活性物質のプラズマ中の濃度において観察される最大ピークである)により、初期バーストのコントロールが示される。
【００４４】
本発明の目的はインビボ及びインビトロの試験及び、本発明で提供される安定性データによって達成される。
さらに、無菌調製物を得るために、放射性滅菌やオートクレーブ滅菌等の様々な技術を本発明で公開されている配合物に使用できる。
【００４５】
前述した活性物質は、先端巨大症、脳下垂体腫瘍及び神経内分泌性の（特にカルチノイド）腫瘍に関連した症状等の慢性的な障害又は症状を治療及び／又は予防するために使用することができる。
前記化合物は、兆候的な、非機能性脳下垂体腫瘍の長期治療のためにも必要とされる。
【実施例】
【００４６】
以下の実施例は、本発明を制限することなく、例示として寄与するものである。
【００４７】
実施例１
Ｄｏｐ２−ＤＬｙｓ（Ｄｏｐ２）−ｃ（Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ）−Ｔｈｒ−ＮＨ2に対応するＢＩＭ２３Ａ７６０の図及び式
ＢＩＭ２３Ａ７６０は粉末製品であり、ホワイト〜オフホワイト色である。
分子量：  〜１６９０ｄａ
式：Ｄｏｐ２−ＤＬｙｓ（Ｄｏｐ２）−ｃ（Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ）−Ｔｈｒ−ＮＨ2
分子構造 : Ｃ86Ｈ116Ｎ16Ｏ12Ｓ4
【化１】
2011516461.tif 000002
【００４８】
Ｄｏｐ２−ＤＬｙｓ（Ｄｏｐ２）−ｃ（Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ）−Ｔｈｒ−ＮＨ2の式中、Ｄｏｐ２は以下の式を意味する：
【化２】
2011516461.tif 000003
【００４９】
実施例２
配合物安定性−測定方法及び結果
安定性測定は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法で行った。ＨＰＬＣシステムは、検出システム２４８７  Ｄｕａｌ  λ  Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒで完了する、ＨＰＬＣ  Ｗａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２６９５である。使用したカラムは、Ｃ18、２５０×４．６ｍｍである。装置の条件に関する全ての詳細は、表６に記載した。溶出条件は表７に記載した。
【００５０】
２つの医薬的形状を並行して、安定性試験について、６ヶ月間、＋５℃及び＋２５℃／６０％ＲＨ（相対湿度）、並びに＋４０℃／７５％ＲＨで検証した。測定はＷＦＩ（注入用の水）中、凍結乾燥物（薬剤物質単独)、並びにマンニトール、グリシン及びトレハロース等の追加的なバルキング剤を添加した第二配合物を、（ｗｆｉ又はｗｆｉ溶媒の５％デキストロースにより）並行して行った。組成物及び安定性期間に関する時間を表１及び２に示す。
【００５１】
【表１】
2011516461.tif 000004
【００５２】
【表２】
2011516461.tif 000005
【００５３】
【表３】
2011516461.tif 000006
【００５４】
安定性の結果は表４及び５に示す。
【００５５】
【表４】
2011516461.tif 000007
【００５６】
【表５】
2011516461.tif 000008
【００５７】
希釈はマイクロピペットを用いて行った。
【００５８】
検証された液体配合物と比較して、トレハロース凍結乾燥配合物は＋５℃及び＋２５℃で、最初の３ヶ月間最も安定した形状であることを示す結果となった。＋５℃及び＋２５℃で６ヵ月後、物質（ケーキ）の外観、溶液の再構成、ｐＨ、クロマトグラフィプロファイル及びアッセイの観点から、トレハロースベースの凍結乾燥物が最も安定に存在した。凍結乾燥物及び液体配合物は±５℃で少なくとも２４ヶ月安定である。
【００５９】
トレハロースをベースとした凍結乾燥物では、長期間、活性薬剤の可溶化及び安定性が確保されている。マンニトール及びグリシンも、凍結乾燥し、＋２５℃又は＋４０℃で、３又は６ヶ月間保存された状態で検証した。
【００６０】
単糖類又は二糖類（キシリトール、マルトース、ラクトース、ガラクトース、デキストラン）について試験を行い、これら配合物中での化合物の安定性を検証した。
【００６１】
上記結果からやはり、トレハロースは、ＢＩＭ２３Ａ７６０の物理化学的安定性を確保し、向上させていた。トレハロースは、凍結乾燥した配合物中の活性薬剤を保護し、安定化させることを可能にする。
【００６２】
皮下投与用の分子ＢＩＭ２３Ａ７６０は、透明なバイアル中に注入溶液用の粉末として提供された。前記薬剤の最終製品は、注入用の水又はその５％デキストロース溶液のいずれかで水に戻した。
【００６３】
前記溶液（ＢＩＭ２３Ａ７６０、注入用水中）を、Ｔゼロ時、Ｔ１ヶ月時及びＴ３ヶ月時に、４０℃／相対湿度７５％で分析した。
【００６４】
安定性の結果については、表４及び５にまとめ、図１に表した。
【００６５】
Ｃ（初期％）は、Ｔゼロ時の含有量に対して、Ｔの時のパーセンテージで表した含有量を意味する。
【数１】
2011516461.tif 000009
【００６６】
Ｐ（％ａ／ａ）は、面積比のパーセンテージで表した溶液の純度を意味する：
【数２】
2011516461.tif 000010
【００６７】
試験的な安定性分析に用いるためのＨＰＬＣ法
本発明で開示する配合物中の活性物質の安定性を測定するための方法及び装置について、表６に開示する。
【００６８】
【表６】
2011516461.tif 000011
【００６９】
溶出プログラム、即ち配合物安定性の測定の為に用いる各溶離液（移動相）の比率を、表７に記載した。
【００７０】
【表７】
2011516461.tif 000012
【００７１】
濃度０．５ｍｇ／ｍｌのＢＩＭ２３Ａ７６０の標準溶液を、約１０ｍｇの活性物質ＢＩＭ２３Ａ７６０をフラスコガラス中で溶解して調製した。その後、ボルテックス（商品名）を用いて振とうさせながら２０ｍｌの０．１Ｎ酢酸を添加した。必要であれば、完全に溶解させるために、超音波バス中で更に溶解させた。ＢＩＭ２３Ａ７６０の粗（ｂｒｕｔ）重量は、以下の関係から計算した。
【数３】
2011516461.tif 000013
【００７２】
希釈はマイクロピペットを用いて行った。
【００７３】
検証された液体配合物と比較して、トレハロース凍結乾燥配合物は＋５℃及び＋２５℃で、最初の３ヶ月間最も安定した形状であることを示す結果となった。＋５℃及び＋２５℃で６ヵ月後、物質（ケーキ）の外観、溶液の再構成、ｐＨ、クロマトグラフィプロファイル及びアッセイの観点から、トレハロースベースの凍結乾燥物が最も安定に存在した。凍結乾燥物及び液体配合物は±５℃で少なくとも２４ヶ月安定である。
【００７４】
トレハロースをベースとした凍結乾燥物では、長期間、活性薬剤の可溶化及び安定性が確保されている。マンニトール及びグリシンも、凍結乾燥し、＋２５℃又は＋４０℃で、３又は６ヶ月間保存された状態を検証した。
【００７５】
上記結果からやはり、トレハロースはＢＩＭ２３Ａ７６０の物理化学的安定性を確保し、向上させていた。トレハロースは、凍結乾燥した配合物中の活性薬剤を保護し、安定化させることを可能にする。
【００７６】
皮下投与用の分子ＢＩＭ２３Ａ７６０は、透明なバイアル中に注入溶液用の粉末として提供された。前記薬剤の最終製品は、注入用の水又はその５％デキストロース溶液のいずれかで水に戻された。
【００７７】
実施例３
凍結乾燥した配合物の実施例
材料（用量）は下記の通り：
ＢＩＭ２３Ａ７６０  ｐｕｒ（純粋）（５．０ｍｇ）、トレハロース（１７．０ｍｇ）及び、窒素（窒素下でバイアルを封入した）
【００７８】
前記凍結乾燥物は、１１ｍｌのタイプＩガラスバイアル中で使用可能で、窒素下でグレーのクロロブチルストッパーで栓をされている。
【００７９】
必要とされる臨床上の投与量に従って、凍結乾燥物は、充分な量の注入用の水又はデキストロース５％（＝１ｍｌ）のいずれかで戻される。水に戻した分量は１ｍｌ〜１０ｍｌである。
【００８０】
実施例４
凍結乾燥した配合物を製造する方法
ＢＩＭ２３Ａ７６０凍結乾燥物５．０ｍｇは、活性薬剤及び成分を攪拌しながら注入用の水に溶解して製造した。この溶液は、窒素下でバブリングし、０．２２マイクロメートルＰＶＤＦ膜フィルターで濾過滅菌し、そして、滅菌バイアルに無菌的に充填した。理論的な充填量は、溶液１．０ｇ±３％であった。
【００８１】
充填されたバイアルをプレストッパーして、凍結乾燥機へ移した。凍結時間は、−２５℃で約３時間３０分であった。
【００８２】
一次乾燥は、１５０〜３００マイクロバールの窒素及び真空下で１０時間、−２５℃〜＋５℃で行った。
【００８３】
二次乾燥は、窒素下で行い、真空は６０〜１００マイクロバール、４時間３０分、＋５℃〜＋１５℃の温度に調整された。
【００８４】
栓をしたバイアルを自動的にクリンプした。そして、バイアルをワイプを一度だけ使用して外部を洗浄した。バルク製品は、１００％視覚的に検査して、シールされた容器に＋５℃±３℃で保存した。
【００８５】
方法のフローチャート
凍結乾燥の方法及び配合物の製造方法を表８に要約する。
【００８６】
【表８】
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【００８７】
実施例５
薬物速度論データ及び前記データを提供するために用いる方法
臨床前研究で用いられる液体配合物（ｗｆｉ中２％Ｓｏｌｕｔｏｌ配合物）に対する、Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙｓラットでの薬物速度論を評価するために、水に戻された凍結乾燥物は（及び１ｍｌのｗｆｉ）を、皮下ルートで動物に投与した。
【００８８】
２シリーズの希釈溶液を調製した。１シリーズ目は２％ｓｏｌｕｔｏｌを添加し、２番目はトレハロースを添加した。ＢＩＭ２３Ａ７６０について、０．１ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ及び１０ｍｇ／ｍｌと異なる希釈液を調製した。
【００８９】
異なる濃度で、Ｓｐｒａｇｕｅ−ＤａｗｌｅｙラットにおけるＢＩＭ２３Ａ７６０の単一皮下注射後の予備的な薬物速度論調査を表９に開示する。
【００９０】
【表９】
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【図１】
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【国際調査報告】
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