(57)【要約】本発明は、癌の早期治療を目的とする医薬品を調製するための、ＣＤ１５１タンパク質に結合し、かつ腫瘍の成長を阻害することができる、少なくとも一つの抗体またはその機能的断片の一つの使用を目的とするものである。本発明は、ＣＤ１５１タンパク質に結合および／またはその転移促進活性を阻害することができる少なくとも一つの抗ＣＤ１５１抗体またはその機能的断片のうちの一つを活性成分として含む癌の治療用組成物であって、前記抗体がＣＲＬ−２６９６という番号でＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマにより分泌された抗体で構成されている組成物も目的とするものである。【選択図】図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌の早期治療のための原発腫瘍の成長阻害を目的とする医薬品の調製のための、ＣＲＬ−２６９６という番号でＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマによって分泌されるモノクローナル抗体またはその機能的断片の一つの使用方法。
【請求項２】
前記抗体が５０−６モノクローナル抗体であることを特徴とする、請求項１に記載の使用方法。
【請求項３】
前記モノクローナル抗体がＣＤ１５１タンパク質に特異的に結合する能力を有することを特徴とする、請求項１または２に記載の使用方法。
【請求項４】
前記抗体が、腫瘍細胞の内部における前記ＣＤ１５１タンパク質の転移促進活性を阻害する能力を有することを特徴とする、請求項３に記載の使用方法。
【請求項５】
前記癌が、結腸癌、肺癌、前立腺癌または膵臓癌で構成されることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一つに記載の使用方法。
【請求項６】
ＣＲＬ−２６９６という番号でＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマにより分泌される少なくとも一つのモノクローナル抗体またはその機能的断片のうちの一つを活性成分として含むことを特徴とする、癌の早期治療用の組成物。
【請求項７】
前記モノクローナル抗体が５０−６抗体で構成されることを特徴とする、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
少なくとも一つの薬学的に許容できる媒介物を含むことを特徴とする、請求項６または７のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項９】
同時使用、別々の使用または時間間隔をあけた使用を目的とした組合せ製品として、少なくとも一つの細胞傷害剤／細胞増殖抑制剤および／または細胞毒素および／または放射性元素をさらに含むことを特徴とする、請求項６〜８のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項１０】
さらに少なくとも一つの第二の抗腫瘍抗体を含むことを特徴とする、請求項６〜９のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項１１】
癌の早期治療を目的とする医薬品の調製のための、請求項６〜１０のいずれか一つに記載の組成物の使用方法。
【請求項１２】
前記癌が、結腸癌、肺癌、前立腺癌および膵臓癌の中から選択されることを特徴とする、請求項１１に記載の使用方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍の成長を阻害することが可能な抗ＣＤ１５１抗体の新規な使用に関するものであり、前記抗体は、特にマウス由来モノクローナル抗体、キメラ抗体およびヒト化抗体である。特定の態様によると、本発明はこれらの抗体またはそれらの機能的断片の、癌、特に原発腫瘍の早期治療のための医薬品としての使用を目的とするものである。つまり、本発明は、例えば抗体および／もしくは抗癌剤と会合した状態のまたは毒素と結合した上述の抗体を含む製品および／または組成物、ならびに、いくつかの癌の予防および／または治療のためのそれらの使用を含むものである。
【背景技術】
【０００２】
ＰＥＴＡ−３またはＳＦＡ−１とも呼ばれるＣＤ１５１は、テトラスパニンファミリーに属する膜タンパク質である（Ｂｏｕｃｈｅｉｘ  ｅｔ  Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ，  ２００１，  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．  ５８，  １１８９−１２０５  ；  Ｈｅｍｌｅｒ，  ２００１，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  １５５，  １１０３−１１０７）。ヒトにおいては、ＣＤ１５１は２５３個のアミノ酸を有し、４つの膜断片ならびに細胞外ループとも呼ばれる２つの細胞外ドメインＥＣ１（アミノ酸１８個、配列［４０〜５７］）およびＥＣ２（アミノ酸１０９個、配列［１１３〜２２１］）を備えている。しかしながら、ヌクレオチド配列レベルでは、ＣＤ１５１についての二つの変異体、すなわち、一方はそれぞれ３９５位および４０９位にあるヌクレオチドＡおよびＣを含むもの［Ｆｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ｂｌｏｏｄ  ８６（４），  １３４８−１３５５］、そしてもう一方は同じ位置でヌクレオチドＡおよびＣの代わりにヌクレオチドＧおよびＴを含むもの［Ｈａｓｅｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６，  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ７０（５），  ３２５８−３２６３］がこれまでに同定されているという点に留意すべきである。このため、ペプチド配列のレベルの突然変異、すなわち、それぞれ１３２位および１３７位にある残基Ｋ（Ｌｙｓ）およびＰ（Ｐｒｏ）から、残基Ｒ（Ａｒｇ）およびＳ（Ｓｅｒ）への突然変異を観察することができる［Ｆｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ｂｌｏｏｄ  ８６（４），  １３４８−１３５５  ／  Ｈａｓｅｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６，  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ７０（５），  ３２５８−３２６３］。
【０００３】
ＣＤ１５１は、例えば肺癌［Ｔｏｋｕｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ７，  ４１０９−４１１４］、結腸癌［Ｈａｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ８９，  １５８−１６７］、前立腺癌［Ａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｐｒｅｖ．  １３，  １７１７−１７２１］、または膵臓癌［Ｇｅｓｉｅｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １１，  ２８４０−２８５２］などの数多くの癌において過剰発現している。
【０００４】
ＣＤ１５１を発現しないノックアウトマウス、抗ＣＤ１５１抗体、および様々な細胞型におけるＣＤ１５１の機能性と発現性をインビトロで遮断するためのｓｉＲＮＡの使用により、細胞接着（Ｎｉｓｈｉｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０２，  １９３９−１９４４  ；  Ｗｉｎｔｅｒｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６，  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｅｌｌ  １７，  ２７０７−２７２１）、細胞運動性（Ｋｏｈｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ９７，  ３３６−３４３）、細胞移動（Ｙａｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｅｌｌ  ９，  ２７５１−２７６５  ；  Ｔｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５９，  ３８１２−３８２０  ；  Ｐｅｎａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００，  Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  １１４，  １１２６−１１３５  ；  Ｋｌｏｓｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  ３３６，  ４０８−４１６）、細胞侵入（Ｋｏｈｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ９７，  ３３６−３４３  ；  Ｓｈｉｏｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５，  Ｌａｂ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ８５，  １４８９−１５０６  ；  Ｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２８１，  ２４２７９−２４２９２）および血管形成（Ｙａｎｅｚ−Ｍｏ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  １４１，  ７９１−８０４  ；  Ｓｉｎｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．  １１２，  ８３３−８４４  ；  Ｔａｋｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６，  Ｂｌｏｏｄ）などの、癌に関連する複数の現象にＣＤ１５１が関与することを示すことができた。
【０００５】
テトラスパニンの注目すべき特性の一つは、互いに会合し、かつ他の数多くの表面分子に会合して、構造化された高分子複合体を形成する能力を有するという点にある。これらの複合体の内部で、各テトラスパニンは、このように、第一の複合体を形成する一つまたは複数の表面分子に特異的に会合しており、該第一の複合体はテトラスパニンおよびパートナー分子で構成される。テトラスパニンは、原形質膜の特定のミクロドメインを組織することができ、その内部で、機能的に結合され得るその分子パートナーを補充すると考えられる。テトラスパニンが関与する相互作用全体は、「テトラスパニンネットワーク」または「テトラスパニンウェブ」と命名された。
【０００６】
ＣＤ１５１は、細胞の表面で様々な膜タンパク質と相互作用する。いくつかの洗浄剤の作用に対し耐性をもつ非常に安定した複合体が、ラミニンの受容体であるインテグリンで、そしてより詳細には、ラミニン５を好ましいリガンドとするインテグリンα３β１またはα６β４で、特に明らかにされた（Ｙａｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｅｌｌ  ９，  ２７５１−２７６５  ；  Ｌａｍｍｅｒｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １００，  ７６１６−７６２１）。この会合には、インテグリンおよびＣＤ１５１の細胞外ドメインが関与している。ＥＣ２ループ内に局在化しているＣＤ１５１のＱＲＤ配列［１９４〜１９６］は、この部位の突然変異が一部のインテグリンとの相互作用の喪失を引き起こすため、この会合において非常に重要である（Ｋａｚａｒｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  １５８，  １２９９−１３０９）。一方、機能的三元複合体ＣＤ１５１／インテグリンα６β４／ｃ−Ｍｅｔ（ＨＧＦの受容体）が腫瘍細胞内で明らかにされた（Ｋｌｏｓｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  ３３６，  ４０８−４１６）。ＲＮＡ干渉で細胞を処理することによるＣＤ１５１の発現の阻害は、ＨＧＦにより誘発される細胞の成長および移動の阻害を引き起こす。
【０００７】
テトラスパニンネットワークの形成に必要な、同一細胞内でのＣＤ１５１と他のテトラスパニンとの相互作用は、ＥＣ２のループの欠失によりＣＤ１５１と他のテトラスパニンの会合が破られないことが示されたことから、ＣＤ１５１の膜領域および細胞質領域に左右されると考えられる（Ｂｅｒｄｉｔｃｈｅｖｓｋｉ，  ２００１，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．  １１４，  ４１４３−４１５１）。
【０００８】
ＣＤ１５１は、例えばＰＩ４−キナーゼとの会合を介したホスホイノシチド経路（Ｙａｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｅｌｌ  ９，  ２７５１−２７６５）、ＦＡＫ、Ｓｒｃ、ｐ３８−ＭＡＰＫおよびＪＮＫのリン酸化反応（Ｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６）、ＰＫＣによるインテグリンのリン酸化反応（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７６，  ２５００５−２５０１３）、ＲｈｏファミリーのＧＴＰアーゼの活性化（Ｓｈｉｇｅｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  １６３，  １６５−１７６）を介した、ｃ−Ｊｕｎのシグナル伝達経路などの、様々なシグナル伝達経路の調節により、細胞の接着、移動および侵入の現象を調節することができる。
【０００９】
細胞間の同種親和性タイプの相互作用も同様に、細胞の運動性およびメタロプロテイナーゼＭＭＰ−９の発現を増加させる原因である（Ｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６）。これらのＣＤ１５１−ＣＤ１５１細胞間の相互作用は、ＦＡＫ、Ｓｒｃ、ｐ３８−ＭＡＰＫおよびＪＮＫのリン酸化反応を介したｃ−Ｊｕｎの活性化を引き起こす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
これまで、ＣＤ１５１タンパク質の意義にも関わらず、生成されたのはモノクローナル抗体５０−６およびＳＦＡ１．２Ｂ４という二つの治療用抗体である。これら２つの抗体は、匹敵する活性を有する。これらは実際、動物モデルにおいてインビボでの転移形成を阻害するが、インビボでの腫瘍の成長に対する効果は、一切明らかにされていない。
【００１１】
ＣＤ１５１に対するモノクローナル抗体５０−６（アイソタイプＩｇＧ１）は、マウスにおいて、ＨＥｐ−３ヒト扁平上皮癌細胞でのサブトラクティブな免疫化により生成された（Ｔｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５９，  ３８１２−３８２０）。
【００１２】
５０−６抗体は、ＣＤ１５１およびＨＥｐ−３細胞を過剰発現するためにトランスフェクトされたＨｅＬａヒト子宮頸癌細胞の移動、ならびにｂＦＧＦ（ｂａｓｉｃ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ：塩基性線維芽細胞成長因子）により誘導された絨毛尿膜の血管新成モデルにおける血管形成をインビトロで阻害することができる。該抗体は、ニワトリ胚の２つのモデルにおいて、ＨＥｐ−３細胞の接種により誘発される転移をインビボで阻害する（Ｔｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５９，  ３８１２−３８２０）。これらのモデルにおいては、５０−６抗体の阻害活性は、肺抽出物内でｈｕＰＡ（ｈｕｍａｎ  ｕｒｏｋｉｎａｓｅ−ｔｙｐｅ  ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ：ヒトウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子）タンパク質の活性を測ることにより判定される。著者らによると、この測定量は、肺の中のヒト細胞の存在を反映するものである。測定後、５０−６抗体によって誘発された転移（ニワトリ胚の肺におけるＨＥｐ−３細胞の拡散）の減少は、対照抗体と比較して、細胞の接種後に抗体が注入される、いわゆる「自然転移」モデルにおいて７４％、そして、細胞および抗体が同時に接種される、いわゆる「実験転移」モデルにおいて５７％と推定される。著書らによると、インビボで観察された５０−６抗体の抗腫瘍特性は、この抗体がＨＥｐ−３細胞のインビトロでの増殖に対していかなる効果も示さなかったことから、細胞増殖抑制効果または細胞傷害効果に関連するとは考えられない。
【００１３】
５０−６抗体を産生するハイブリドーマは、ＣＲＬ−２６９６という番号でＡＴＣＣより入手可能である（当初５０−６［ＰＴＡ−２２７］という番号で寄託されたハイブリドーマ）。
【００１４】
抗ＣＤ１５１モノクローナル抗体ＳＦＡ１．２Ｂ４（アイソタイプＩｇＧ１）は、ヒトＣＤ１５１遺伝子でトランスフェクトされたＮ１Ｈ３Ｔ３細胞を用いて腹腔内経路で免疫化した後に、マウスにおいて生成された（Ｈａｓｅｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６，  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ７０，  ３２５８−３２６３）。ＳＦＡ１．２Ｂ４抗体は、インビトロで、様々なヒト腫瘍系の細胞の侵入および運動性を阻害することができる（Ｋｏｈｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ９７，  ３３６−３４３）。該抗体は、インビボで、ＣＤ１５１を過剰発現させるためにトランスフェクトされた結腸癌系ＲＰＭＩ１４７８８および線維内腫系ＨＴ１０８０により誘発される肺転移を阻害する（Ｋｏｈｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ９７，  ３３６−３４３）。
【００１５】
他の抗ＣＤ１５１マウス抗体は、例えば１４Ａ２Ｈ１モノクローナル抗体（Ａｓｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｈａｅｍａｔｏｌ．  ７９，  ２６３−２７０  ；  Ｒｏｂｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｈａｅｍａｔｏｌ．  ８９，  ８５３−８６０）、ＴＳ１５１およびＴＳ１５１Ｒモノクローナル抗体（Ｓｅｒｒｕ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｊ．  ３４０，  １０３−１１１  ；  Ｇｅａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ  ５８，  １４１−１５３  ；  Ｃｈａｒｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７６，  １４３２９−１４３３７  ；  Ｃｈｏｍｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６，  Ｅｘｐ．  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．  ３１２，  ９８３−９８５）などのように、文献中にすでに記述されている。これらの様々な抗体についてはインビボでの抗腫瘍活性は全く記述されていない。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
第一の態様によると、本発明は、癌の早期治療を目的とする原発腫瘍の成長の阻害を目的とする医薬品を調製するために、ＣＲＬ−２６９６という番号でＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマによって分泌されるモノクローナル抗体またはその機能的断片の一つを使用することを目的とする。より詳細には、前記抗体は、５０−６モノクローナル抗体である。本発明のさらに一つの態様によると、その使用が本発明の対象となっている抗体は、ＣＤ１５１タンパク質に特異的なものである。
【００１７】
前記５０−６抗体について公知であることに反して出願人は、この抗体が腫瘍の成長の阻害活性、特に原発腫瘍の成長の阻害活性を示すことを始めて明らかにした。したがって本発明は、あらゆる期待に反し、癌を早期に治療することを目的とした医薬組成物の調製のためにこの抗体を使用することを目的とするものである。
【００１８】
「早期治療」または「早期に治療する」とは、転移過程がひとたび確立された時点で生じる後期段階とは反対に、転移が出現する前に腫瘍の成長過程を早期段階で阻害する治療を意味すると理解すべきである。非制限的な例として、原発腫瘍のレベルで、すなわち転移過程より前に腫瘍細胞の増殖を阻害することが考えられる。
【００１９】
複数の実験研究により、サプレッサーとして、または転移プロモーターとして作用することによる、転移形成におけるテトラスパニンの重大な役割が示された。かくして、ＣＤ９、ＣＤ６３またはＣＤ８２などのテトラスパニンのトランスフェクションは、癌系の転移の可能性を低減させる。これに対して、ＣＤ１５１およびＣｏ−０２９テトラスパニンの発現は、逆の効果を生じさせると思われる。したがってこれら２つテトラスパニンは、転移のプロモーターである。これらの結果は、複数の癌（乳癌、肺癌、食道癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、結腸癌、前立腺癌、黒色腫など）において、転移がある場合にＣＤ９およびＣＤ８２の発現度が原発腫瘍よりも低いこと、およびそれらの発現の減少により、より低い生存率が予想されることを実証した、様々な臨床研究と一貫性を有するものである。肺癌においては、ＣＤ９およびＣＤ８２の発現の複合的な減少は、これら二つの抗原のうちの一つだけの発現が低減した場合よりもさらに大きい転移可能性と相関するとされた。
【００２０】
ＣＤ１５１の過剰発現が、肺癌、結腸癌および前立腺癌などの一部の癌の攻撃性と関連し、予後不良の要因とみなされ得るということが、複数の遡及的研究により示されてきた（Ｔｏｋｕｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ７，  ４１０９−４１１４  ；  Ｈａｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ８９，  １５８−１６７  ；  Ａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｐｒｅｖ．  １３，  １７１７−  １７２１）。これらのケースにおいて、生存率の平均は、腫瘍がＣＤ１５１を発現しない患者に比べ、腫瘍がＣＤ１５１を発現する患者において実際低くなる。
【００２１】
対応する遺伝子のトランスフェクションにより誘発される、様々なヒト腫瘍系（ＨｅＬａ、ＲＰＭＩ１４７８８、Ａ１７２、ＨＴ１０８０）におけるＣＤ１５１の過剰発現は、トランスフェクションを受けた細胞の運動性、移動および侵入の増加を引き起こす（Ｔｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５９，  ３８１２−３８２０  ；  Ｋｏｈｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ９７，３３６−３４３）。これらの現象は、抗−ＣＤ１５１抗体の存在により阻害される。
【００２２】
別の態様によると、本発明に係る抗体の機能的断片は、例えば断片Ｆｖ、ｓｃＦｖ（ｓｃは一本鎖を意味する）、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ−Ｆｃまたは二重特異性抗体、あるいはポリ（エチレン）グリコールなどのポリ（アルキレン）グリコールの付加といった化学的修飾（「ペグ化」）（Ｆｖ−ＰＥＧ、ｓｃＦｖ−ＰＥＧ、Ｆａｂ−ＰＥＧ、Ｆ（ａｂ’）２−ＰＥＧまたはＦａｂ’−ＰＥＧと呼ばれるペグ化された断片）（「ＰＥＧ」とは英語の専門用語にしたがったＰｏｌｙ（Ｅｔｈｙｌｅｎｅ）Ｇｌｙｃｏｌの略である）によって、またはリポソーム、ミクロスフェアもしくはＰＬＧＡ内への取込みによって、その半減期が延長されているはずのあらゆる断片で構成されており、前記断片は、一般的にそれらが由来する抗体の活性を、たとえ部分的にであっても発揮する能力を有する。
【００２３】
好ましくは、前記機能的断片は、それらが由来する抗体の重鎖または軽鎖の可変領域の部分的配列で構成されるかまたはそれを含むものであり、前記部分的配列は、それが由来する抗体と同じ結合特異性、および、好ましくはそれが由来する抗体の親和性の少なくとも１／１００以上、より好ましくは少なくとも１／１０以上の、充分な親和性を保持するのに充分なものである。
【００２４】
このような機能的断片は、それが由来する抗体の配列の連続するアミノ酸を最低５個、好ましくは１０、１５、２５、５０および１００個含むものである。
【００２５】
好ましくは、これらの機能的断片は、それらが由来する抗体と同じ固定特異性を一般的に有する、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、または二重特異性抗体のタイプの断片である。本発明によると、本発明の抗体断片は、ペプシンもしくはパパインなどの酵素による消化などの方法および／または化学的還元によるジスルフィド架橋の切断により、前述のとおりの抗体から得ることができる。これとは別に、本発明に含まれる抗体断片は、同じく当業者にとって周知の遺伝子組換え技術により、さらには例えばＡｐｐｌｉｅｄ社により供給されるもののような自動ペプチド合成装置を用いたペプチド合成などにより得ることができる。
【００２６】
本発明の一つの態様によると、使用される抗体は、マウスモノクローナル抗体で構成される。
【００２７】
本発明に係る抗体には、同様に、キメラ抗体またはヒト化抗体も含まれる。
【００２８】
キメラ抗体というのは、所与の種の抗体に由来する天然の可変領域（軽鎖および重鎖）を含む抗体であって、前記所与の種と異なる種の抗体の軽鎖および重鎖の定常領域と会合した状態の抗体を意味する。
【００２９】
本発明にしたがって使用されるキメラ型の抗体またはその断片は、遺伝子組換え技術を利用して調製することができる。例えば、キメラ抗体は、プロモーターと、本発明に係る非ヒト、特にマウスのモノクローナル抗体の可変領域をコードする配列と、ヒト抗体の定常領域をコードする配列とを含む組換えＤＮＡをクローニングすることによって実現することができる。このような組換え遺伝子によりコードされる本発明のキメラ抗体は、例えばマウス−ヒトキメラであり、この抗体の特異性は、マウスＤＮＡに由来する可変領域により判定され、そのアイソタイプは、ヒトＤＮＡに由来する定常領域により判定される。キメラ抗体の調製方法については、例えば、Ｖｅｒｈｏｅｙｎ  ｅｔ  ａｌ．  （ＢｉｏＥｓｓａｙｓ，  ８：７４，  １９８８）の文書を参照することができる。
【００３０】
ヒト化抗体とは、非ヒト由来の抗体に由来するＣＤＲ領域を含み、抗体分子の他の部分が一つ（または複数）のヒト抗体に由来する抗体を意味する。さらに、（ＦＲと呼ばれる）骨格のセグメントのいくつかの残基を、結合親和性を保つために修飾することができる（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３２１：５２２−５２５，  １９８６  ；  Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２３９：１５３４−１５３６，  １９８８  ；  Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３３２：３２３−３２７，  １９８８）。
【００３１】
ヒト化抗体またはその機能的断片は、当業者にとって公知の技術（例えばＳｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎ．  １５０：２８４４−２８５７，  １９９２  ；  Ｍｏｕｎｔａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｇｅｎｅｔ．  Ｅｎｇ．  Ｒｅｖ．，  １０：１−１４２，  １９９２  ；  ｏｕ  Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  １０：１６９−１７５，  １９９２の文書中に記述されているもの）により調製することができる。これらのようなヒト化抗体は、インビボでの予防的および／または治療的処置方法における使用に好ましい。他のヒト化技術も同様に、欧州特許第０  ４５１  ２６１号明細書、欧州特許第０  ６８２  ０４０号明細書、欧州特許第０  ９３９  １２７号明細書、欧州特許第０  ５６６  ６４７号明細書、さらにはまた米国特許第５，５３０，１０１号明細書、米国特許第６，１８０，３７０号明細書、米国特許第５，５８５，０８９号明細書および米国特許第５，６９３，７６１号明細書といった特許の目的となっている、ＰＤＬにより記載された「ＣＤＲ  Ｇｒａｆｔｉｎｇ」技術といったように、当業者にとっては公知である。米国特許第５，６３９，６４１号明細書さらには第６，０５４，２９７号明細書、第５，８８６，１５２号明細書および第５，８７７，２９３号明細書も挙げることができる。
【００３２】
より詳細には、出願人は、いかなる理論とも関連することは望まないものの、癌治療の枠内での抗ＣＤ１５１抗体の使用が、血管形成の阻害だけではなく、特にＣＤ１５１の転移促進活性の阻害に有利であると示している。実際、これまでに知られていたこと、つまり血管形成、移動および侵入に対する５０−６抗体の効果とは異なり、本発明に係る使用は、転移過程、特に細胞接着、細胞移動および／または細胞侵入の過程の阻害だけではなく、明白な直接的帰結として転移形成の阻害を伴う、原発腫瘍の腫瘍成長の現象さえも対象としている。
【００３３】
上述の通り、ＣＤ１５１タンパク質は、テトラスパニンファミリーの一部を成し、そのため、細胞外ループとも呼ばれる２つの細胞外ドメインＥＣ１（アミノ酸１８個、配列［４０〜５７］）およびＥＣ２（アミノ酸１０９個、配列［１１３〜２２１］）を含む。
【００３４】
本発明によると、使用される抗体は、細胞外ドメインに位置する少なくとも一つのエピトープに結合することができる。好ましくは、前記抗体は、ＥＣ１および／またはＥＣ２ループのところに固定されるものである。
【００３５】
より詳細には、本発明の好ましい実施形態によると、ＣＤ１５１タンパク質のアミノ酸４０〜５７および１１３〜２２１にそれぞれ対応する細胞外ループ１（ＥＣ１）および／または２（ＥＣ２）、好ましくはＥＣ２に含まれるエピトープに結合することができる、少なくとも一つの抗ＣＤ１５１抗体またはそれらの機能的断片の一つの使用について記載されている。
【００３６】
ＥＣ１ループ［４０〜５７］は１８個のアミノ酸を含み、２００２．２Ｄａの理論的質量を示す。
【００３７】
ループＥＣ２［１１３〜２２１］は、Ｎ−グリコシル化部位（Ａｓｎ１５９残基）、および３つのジスルフィド架橋を形成する６個のシステイン残基を有する。テトラスパニン、特にＣＤ１５１のＥＣ２ループの構造モデルが、ＣＤ８１テトラスパニンのＥＣ２ループの三次元構造を元に提案された（Ｓｅｉｇｎｅｕｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７６，  ４００５５−４００６４）。このモデルによると、テトラスパニンは、３つのαへリックス構造から成る、相対的に保存された共通のフレームワーク、および特異的可変ドメインを有する。ＣＤ１５１については、このフレームワークは、領域［１１３〜１５７］および［２０９〜２２１］、ならびに領域［１５８〜２０８］の可変ドメインで構成されると思われる。
【００３８】
ＥＣ２ループの可変ドメインは、より詳細には、インテグリンファミリーのタンパク質とＣＤ１５１の特異的な相互作用に関与すると思われる。部位特異的突然変異生成の実験が、インテグリンα３β１またはα６β４などのいくつかのラミニンインテグリン受容体とＣＤ１５１の会合における、領域［１９３〜２０８］、そしてより精確にはトリペプチドＱＲＤ［１９４〜１９６］、および１９２位のシステイン残基の重要性を特に示した（Ｋａｚａｒｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  １５８，  １２９９−１３０９）。
【００３９】
「モノクローナル抗体」とは、ほぼ均質な抗体群に由来する抗体と理解すべきである。より詳細には、抗体群の個々の抗体は、ごくわずかな割合で見出すことのできる、自然に発生し得るいくつかの偶発的な突然変異を除いては同一である。換言すると、モノクローナル抗体は、単一の細胞クローン（例えばハイブリドーマ、均質な抗体をコードするＤＮＡ分子でトランスフェクトされた真核生物宿主細胞、均質な抗体をコードするＤＮＡ分子でトランスフェクトされた原核生物宿主細胞など）の増殖の結果もたらされ、一般的に唯一であり、そして同じであるクラスおよびサブクラスの重鎖ならびに単一のタイプの軽鎖を特徴とする、均質な抗体で構成される。モノクローナル抗体はきわめて特異的であり、唯一の抗原に対するものである。その上、様々な決定基またはエピトープに対する様々な抗体を古典的に含むポリクローナル抗体調製物とは異なり、各々のモノクローナル抗体は抗原の唯一のエピトープに対するものである。
【００４０】
好ましくは、癌治療の枠内における抗ＣＤ１５１抗体の使用は、この同じＣＤ１５１受容体を過剰発現する癌において特に正当化されるものである。
【００４１】
このような癌は、結腸癌［Ｈａｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ８９  （２００３）  ：１５８−１６７］、肺癌、好ましくは小細胞肺癌でない肺癌［Ｔｏｋｕｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ７  （２００１）  ：４１０９−４１１４］、前立腺癌［Ａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  １３  （２００４）  ：１７］および膵臓癌［Ｇｅｓｉｅｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １１  ［２００５）  ：２８４０−２８５２］で構成される。
【００４２】
したがって本発明は、癌の治療のための以上で記述された通りの抗体の使用を特許請求するものであり、前記癌は、好ましくは結腸癌、肺癌、前立腺癌または膵臓癌で構成される。
【００４３】
本発明は、好ましくは薬学的に許容できる賦形剤および／または媒介物が添加された抗体またはその誘導化合物または機能的断片のうちの一つで構成された化合物を活性成分として含む医薬組成物にも関するものである。
【００４４】
より詳細には、本発明は、さらに少なくとも一つの薬学的に許容できる媒介物を含む医薬組成物の調製のための本発明に係る抗体の使用を目的とするものである。
【００４５】
本明細書において、薬学的に許容できる媒介物とは、二次反応を引き起こさず、例えば一つまたは複数の活性化合物の投与を容易にし、生物内における活性化合物の寿命および／またはその効能を増大させ、溶液中におけるその溶解度を増大させ、さらにはその保存性を改善することのできる、医薬組成物に入る一つの化合物または複数の化合物の組合せを指す。これらの薬学的に許容できる媒介物は、当業者にとって周知であり、選択された一つまたは複数の活性化合物の性質および投与様式に応じて当業者により適合される。
【００４６】
好ましくは、これらの化合物は、全身経路、特に静脈内経路によって、筋内経路、皮内経路、腹腔内経路、もしくは皮下経路によって、または経口経路によって投与されるものである。より好ましくは、本発明に係る抗体を含む組成物は、時間間隔をあけて複数回で投与される。
【００４７】
これらの化合物の最適な投与様式、薬量および製剤形態は、例えば患者の年齢または体重、その全体的な状態の重症度、治療に対する寛容度、および確認された副作用のような、患者に適合された治療の確立において一般的に考慮される基準にしたがって決定されてよい。
【００４８】
本発明によると、ＣＲＬ−２６９６という番号でＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマにより分泌される少なくとも一つのモノクローナル抗体またはその機能的断片のうちの一つを活性成分として含むことを特徴とする、癌の治療用組成物が記載されている。
【００４９】
より詳細には、少なくとも一つの抗ＣＤ１５１抗体またはその機能的断片のうちの一つを含む組成物が記載されており、前記モノクローナル抗体は５０−６抗体で構成されている。
【００５０】
文献より、ＣＤ１５１タンパク質が、癌、特に結腸癌［Ｈａｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ８９  （２００３）：  １５８−１６７］、小細胞肺癌でない肺癌［Ｔｏｋｕｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ７  （２００１）：  ４１０９−４１１４］、前立腺癌［Ａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  １３  （２００４）：  １７１７−１７２１］および膵臓癌［Ｇｅｓｉｅｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １１  （２００５）：  ２８４０−２８５２］において過剰発現されるということが判明している。
【００５１】
当然のことながら、上述のリストは、例示を目的として示されたものにすぎず、あらゆる癌が、ＣＤ１５１タンパク質を過剰発現し、したがって本発明にしたがって治療できるものとして理解されるべきである。本発明のもう一つの補足的な実施形態は、同時使用、別々の使用または時間間隔をあけた使用を目的とした組合せ製品として細胞傷害剤／細胞増殖抑制剤をさらに含む、上述の通りの組成物からなる。
【００５２】
したがって、本発明は、同時使用、別々の使用または時間間隔をあけた使用を目的とした組合せ製品として、少なくとも一つの細胞傷害剤／細胞増殖抑制剤および／または細胞毒および／または放射性元素をさらに含むことを特徴とする、上述の通りの組成物にも関するものである。
【００５３】
「同時使用」とは、唯一であり、そして同じである医薬形態に含まれた、本発明に係る組成物の二つの化合物の投与を意味する。
【００５４】
「別々の使用」とは、異なる医薬形態に含まれた、本発明に係る組成物の二つの化合物の同時投与を意味する。
【００５５】
「時間間隔をあけた使用」とは、異なる医薬形態に各々含まれた、本発明に係る組成物の二の化合物の連続的投与を意味する。
【００５６】
一般的に、本発明に係る組成物は、癌治療の効能を著しく増大させる。換言すると、本発明に係る抗体の治療効果は、細胞傷害剤の投与により予期せぬ形で高められる。本発明に係る組成物によって次に生じる主要な利点は、より少ない活性成分の有効な用量を使用できるという点にあり、これにより副作用、特に細胞傷害剤の効果が現れる危険性を回避または低減することができる。その上、本発明に係るこの組成物は、見越される治療効果をより迅速に達成できるようにすると思われる。
【００５７】
「抗癌治療剤」または「細胞傷害剤」とは、患者に投与された時に患者の癌を治療するかまたはその成長を予防する物質として理解すべきである。かかる作用物質の非限定的な例として、「アルキル化」剤、代謝拮抗物質、抗腫瘍性抗生物質、有糸分裂阻害剤、クロマチン機能阻害剤、血管形成阻害剤、抗エストロゲン剤、抗アンドロゲン剤または免疫調節剤に言及することができる。
【００５８】
このような作用物質は例えば、ＶＩＤＡＬの、癌腫学および血液学に関連づけされた化合物に関するページの「細胞傷害剤」の欄に引用されており、この文献に参照により援用されているこれらの細胞傷害性化合物は、本明細書で好ましい細胞傷害剤として引用される。
【００５９】
「アルキル化剤」とは、細胞の内部で、あらゆる分子、好ましくは核酸（例えばＤＮＡ）と共有結合するか、またはこれをアルキル化することのできる、あらゆる物質を意味する。このようなアルキル化剤の例として、ナイトロジェンマスタード、例えばメクロレタミン、クロラムブシル、メルファラン、塩酸塩、ピポブロマン、プレドニムスチン、リン酸二ナトリウムもしくはエストラムスチン；オキサザホスホリン、例えばシクロホスファミド、アルトレタミン、トロホスファミド、スルホフォスファミドもしくはイホスファミド；アジリジンもしくはエチレンイミン、例えばチオテパ、トリエチルアミンもしくはアルテトラミン；ニトロソウレア、例えばカルムスチン、ストレプトゾシン、フォテムスチンもしくはロムスチン；スルホン酸アルキル、例えばブスルファン、トレオスルファンもしくはインプロスルファン；トリアゼン、例えばダカルバジン；またはさらにプラチナ錯体、例えばシスプラチン、オキサリプラチンもしくはカルボプラチンを挙げることができる。
【００６０】
「代謝拮抗物質」とは、一般的にはＤＮＡ合成である或る種の活性と干渉することにより細胞の成長および／または代謝を遮断する物質を意味する。代謝拮抗物質の例として、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、５−フルオロデオキシウリジン、カペシタビン、シタラビン、フルダラビン、シトシンアラビノシド、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、６−チオグアニン（６−ＴＧ）、クロロデゾキシアデノシン、５−アザシチジン、ゲムシタビン、クラドリビン、デオキシコホルマイシンおよびペントスタチンに言及することができる。
【００６１】
「抗腫瘍性抗生物質」とは、ＤＮＡ、ＲＮＡおよび／またはタンパク質の合成を予防または阻害することのできる化合物を意味する。このような抗腫瘍性抗生物質の例として、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、バルルビシン、ミトキサントロン、ダクチノマイシン、ミトラマイシン、プリカマイシン、ミトマイシンＣ、ブレオマイシンおよびプロカルバジンが含まれる。
【００６２】
「有糸分裂阻害剤」は、細胞周期および有系分裂の正常な進行を防止する。一般的に、微小管阻害剤またはパクリタキセルおよびドセタキセルなどの「タキソイド」は、有系分裂を阻害することができる。ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビンなどのビンカアルカロイドも同じく有系分裂を阻害することができる。
【００６３】
「クロマチン機能阻害剤」または「トポイソメラーゼ阻害剤」は、トポイソメラーゼＩおよびＩＩなどの、クロマチンをモデリングするタンパク質の正常な機能を阻害する物質を意味する。このような阻害物質の例として、トポイソメラーゼＩに対してはカンプトテシンおよびその誘導体、例えばイリノテカンまたはトポテカンが、そしてトポイソメラーゼＩＩに対してはエトポシド、リン酸エチポシドおよびテニポシドが含まれる。
【００６４】
「血管形成阻害剤」とは、血管の成長を阻害するあらゆる薬物、化合物、物質または作用物質を意味する。血管形成阻害剤の例として、限定的な意味なく、ラゾキシン、マリマスタット、バチマスタット、プリノマスタット、タノマスタット、イロマスタット、ＣＧＳ−２７０２３Ａ、ハロフギノン、ＣＯＬ−３、ネオバスタット、ＢＭＳ−２７５２９１、サリドマイド、ＣＤＣ５０１、ＤＭＸＡＡ、Ｌ−６５１５８２、スクアラミン、エンドスタチン、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、インターフェロン−アルファ、ＥＭＤ１２１９７４、インターロイキン−１２、ＩＭ８６２、アンジオスタチンおよびビタキシンが含まれる。
【００６５】
「抗エストロゲン剤」または「抗エストロゲン作用物質」とは、エストロゲンの作用を低減、拮抗または阻害するあらゆる物質を意味する。このような作用物質の例として、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、イオドキシフェン、アナストロゾール、レトロゾールおよびエキセメスタンがある。
【００６６】
「抗アンドロゲン剤」または「抗アンドロゲン作用物質」とは、アンドロゲンの作用を削減、拮抗または阻害するあらゆる物質を意味する。抗アンドロゲン剤の例として、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、スプリロノラクトン、酢酸シプロテロン、フィナステリドおよびシミチジンがある。
【００６７】
免疫調節剤は、免疫系を刺激する物質である。このような免疫調節剤の例として、インターフェロン、インターロイキン、例えばアルデスロイキン、ＯＣＴ−４３、デニロイキンジフリトクスもしくはインターロイキン−２、腫瘍壊死因子、例えばタソネルミン、または他のタイプの免疫調節剤、例えばレンチナン、シゾフィラン、ロキニメックス、ピドチモド、ペガデマーゼ、チモペンチン、ポリＩ：Ｃ、もしくはレバミゾールと５−フルオロウラシルとの組合せが含まれる。
【００６８】
さらなる詳細については、当業者は、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｆｒａｎｃａｉｓｅ  ｄｅｓ  Ｅｎｓｅｉｇｎａｎｔｓ  ｄｅ  Ｃｈｉｍｉｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｑｕｅ編の「ｔｒａｉｔｅ  ｄｅ  ｃｈｉｍｉｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｑｕｅ，  Ｖｏｌ．  ６，  Ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔｓ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｕｘ  ｅｔ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｄａｎｓ  ｌｅ  ｔｒａｉｔｅｍｅｎｔ  ｄｅｓ  ｃａｎｃｅｒｓ，  ｅｄｉｔｉｏｎ  ＴＥＣ  ＆  ＤＯＣ，  ２００３」という題の概説書を参照することができる。
【００６９】
特に好ましい実施形態においては、本発明に係る組合せ製品としての前記組成物は、同時使用のために前記細胞傷害剤が前記抗体に化学的に結合していることを特徴とする。
【００７０】
特に好ましい実施形態においては、本発明に係る前記組成物は、前記細胞傷害剤／細胞増殖抑制剤が、紡錘体の阻害剤または安定剤、好ましくはビノレルビンおよび／またはビンフルニンおよび／またはビンクリスチンの中から選択されることを特徴とする。
【００７１】
前記細胞傷害剤と本発明に係る前記抗体の間の結合を容易にするために、特に、ポリエチレングリコールなどのポリ（アルキレン）グリコール、さらにはアミノ酸のような、スペーサ分子を結合される二つの化合物の間に導入すること、または他の実施形態では、本発明に係る前記抗体と反応することができる機能が導入されているはずの前記細胞傷害剤の活性誘導体を使用することができる。これらの結合技術は、当業者にとって周知であり、本明細書では詳述しない。
【００７２】
本発明は、別の態様においては、前記抗体の少なくとも一つ、またはそれから誘導された化合物もしくは機能的断片のうちの一つが、細胞毒素および／または放射性元素と共役していることを特徴とする組成物に関するものである。
【００７３】
好ましくは、前記細胞毒素または前記放射性元素は、腫瘍細胞の成長または増殖を妨げること、特に前記腫瘍細胞を完全に不活性化することができる。
【００７４】
さらに好ましくは、前記細胞毒素は、腸内細菌毒素、特にシュードモナス属の外毒素Ａである。
【００７５】
療法に用いられる抗体に優先的に共役する放射性元素（または放射性同位体）は、ガンマ線を発する放射性同位体、そして好ましくはヨウ素１３１、イットリウム９０、金１９９、パラジウム１００、銅６７、ビスマス２１７およびアンチモン２１１である。ベータ線およびアルファ線を発する放射性同位体も同様に療法に使用することができる。
【００７６】
本発明に係る少なくとも一つの抗体またはその機能的断片の一つに共役する毒素または放射性元素とは、結合分子を導入するかまたはせずに、特に二つの化合物の間の共有結合によって、前記毒素または前記放射性元素を前記少なくとも一つの抗体に結合することのできるあらゆる手段を意味する。
【００７７】
共役した複数の要素の全部または一部分の化学的（共有）結合、静電結合または非共有結合を可能にする作用物質として、特にベンゾキノン、カルボジイミド、そしてより詳細には、ＥＤＣ（１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］−カルボジイミドヒドロクロリド）、ジマレイミド、ジチオビス−ニトロ安息香酸（ＤＴＮＢ）、Ｎ−スクシンイミジルＳ−アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）、紫外線（Ｕ．Ｖ．）と反応する一つまたは複数のフェニルアシド基を有する一つまたは複数の基を有する「架橋」剤と呼ばれる作用物質、そして特に好ましくはＮ−［−４−（アジドサリチルアミノ）ブチル］−３’−（２’−ピリジルジチオ）−プロピオンアミド（ＡＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミド−イル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）および６−ヒドラジノ−ニコチンアミド（ＨＹＮＩＣ）に言及することができる。
【００７８】
特に放射性元素のための他の結合形態は、二官能性イオンキレート剤の使用から成っていてよい。
【００７９】
これらのキレート剤の中でも、金属、特に放射性金属および免疫グロブリンを結合させるために開発されたＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）またはＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）に由来するキレートに言及することができる。かくして、ＤＴＰＡおよびその誘導体は、リガンド−金属錯体の安定性および剛性を増大させるような形で、炭素鎖上で様々な基により置換され得る（Ｋｒｅｊｃａｒｅｋ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７７）；  Ｂｒｅｃｈｂｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）；  Ｇａｎｓｏｗ  （１９９１）；米国特許第４，８３１，１７５号明細書）。
【００８０】
例えば、その遊離形態か、または金属イオンを伴う錯体の形態で医学および生物学において長い間きわめて広く利用されてきたＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）およびその誘導体は、金属イオンと安定したキレート化合物を形成し、癌療法における放射性免疫複合体の開発のための抗体などの治療上または診断上有利なタンパク質に結合されるという傑出した特徴を示す（Ｍｅａｓｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８４）；  Ｇａｎｓｏｗ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０））。
【００８１】
本発明は、少なくとも一つの第二の抗腫瘍抗体をさらに含むことを特徴とする、本発明に係る抗体を含む組成物に関するものでもある。
【００８２】
本発明は、さらに、医薬品の調製のための本発明に係る組成物の使用を含むものである。
【００８３】
したがって本発明は、より詳細には、癌の治療を目的とする医薬品の調製のための、以上で記載された通りの組成物の使用を目的とするものである。予防および／または治療が可能な癌の中でも、結腸癌、肺癌、前立腺癌または膵臓癌が好ましい。
【００８４】
本発明の目的は、ＣＤ１５１受容体を発現または過剰発現する細胞に対する生物学的に活性な化合物の特異的ターゲティングを目的とする医薬品の調製のための、本発明に係る抗体の使用にもある。
【００８５】
ここでいう生物学的に活性な化合物とは、細胞の活性、特にその成長、その増殖、遺伝子の転写または翻訳を調節、特に阻害する能力をもつあらゆる化合物を意味する。
【００８６】
本発明の他の特徴および利点は、以下に説明する図面および実施例と共に、後続の記載の中で明らかになるものである。
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】前立腺癌の異種移植モデルにおける５０−６抗体のインビボでの抗腫瘍活性を示す図である。スイスヌードマウス（ｎ＝６）に、ＰＣ３細胞を皮下経路で移植した。細胞移植から五日後に、腹腔内経路で、テスト対象の抗体をマウス一頭あたり２ｍｇという攻撃用量でマウスに投与し、その後この抗体を一週間に二回、マウス一頭あたり１ｍｇの用量で投与する。腫瘍体積をπ／６×長さ×幅×厚みという式で評価し、結果を統計的に評価するためにマン・ホイットニー試験を行う。
【００８８】
【図２】肺癌の同所性モデルにおけるインビボでのＴＳ１５１抗体の抗腫瘍活性の評価を示す図である。免疫抑制されたマウス（ｎ＝１０）に、１・１０６個のＡ５４９細胞を胸膜腔内経路で移植する。移植から七日後に、ＴＳ１５１抗体２ｍｇという攻撃用量で腹腔内経路でマウスを処置し、その後、マウス一頭あたり１ｍｇの抗体用量で５週間にわたり、一週間に二回処置する。対照ロットは、同じ投与スキームにしたがって、ＰＢＳの注入を受ける。
【００８９】
【図３】ウェスタンブロット法による５０−６抗体の特異性評価を示す図である。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動の後、ゲルをクマシーブルーで着色する（Ａ）か、またはニトロセルロース膜上にタンパク質を移してウェスタンブロット法を実施した（Ｂ）。この場合、次に転写膜を５０−６抗体（１μｇ／ｍｌ）と共にインキュベートし、その後、ペルオキシダーゼに結合した抗マウスＩｇウサギポリクローナル抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）と共にインキュベートしてから、化学発光により視覚化した。
【実施例】
【００９０】
実施例１；ヌードマウスの皮下に移植されたＰＣ３腫瘍のインビボでの成長に対する５０−６抗体の効果
【００９１】
免疫組織化学により前立腺癌の腫瘍組織におけるＣＤ１５１の過剰発現が観察されたことから、ＰＣ３前立腺癌細胞の異種移植片に対する抗ＣＤ１５１  ５０−６抗体の評価が考慮された。ＰＣ３系は、ＡＴＣＣを供給源とし、Ｆ１２Ｋ＋１０％ＳＶＦ＋Ｌ−グルタミン培地で培養された、アントロゲン非依存性の前立腺系である。評価のため、スイスヌードマウスの右脇腹に５・１０６個のＰＣ３細胞を移植する。移植から五日後に、動物を腫瘍体積に基づいて無作為化し、匹敵する２つの群に振り分ける。選択された移植済み動物の腫瘍体積は、治療の０日目において４１ｍｍ３と４７ｍｍ３の間に含まれる（体積はπ／６×長さ×幅×厚みという式で計算される）。このとき動物には、腹腔内経路で、テスト対象の精製抗体またはＰＢＳ（対照群）を投与する。抗体用量および注入頻度は以下の通りである：攻撃用量は、用量あたり２ｍｇの抗体；維持用量は、用量あたり１ｍｇ、一週間に２回。
【００９２】
図１に提示された結果は、スイスヌードマウスにおいて皮下位置で５０−６抗体が、移植したＰＣ３腫瘍の成長を有意な形で阻害することを示している。統計的な分析は、この腫瘍の成長の阻害が、処置１０日目以降、対照群と比較して有意なものであることを示している（ｐ≦０．０１）。
【００９３】
実施例２：肺癌の同所性モデルにおける５０−６抗体の抗腫瘍活性の評価
【００９４】
ＡＴＣＣを供給源とするＡ５４９細胞を、グルタミン１０ｍＭ、１０％のＳＶＦのＦ１２Ｋ培地で通常通り培養する。これらの細胞を、指数増殖期となるように移植の２日前に分裂させる。移植のために、７週間免疫抑制されたマウスに、麻酔してから、胸膜腔内経路でＡ５４９細胞を１・１０６個投与する。原発腫瘍は急速に成長し、４日間で、縦隔、肺および横隔膜を含む、注入部位に隣接する構造に広がる。この疾病をより良く模倣するため、処置は、細胞の移植後７日目に初めて腹腔内経路で開始される。マウス一頭あたり２ｍｇの攻撃用量を注入した後、５０−６抗体を５週間の間、一週間に２回、マウス一頭あたり１ｍｇの用量で投与する。先に実施された実験から、ＩｇＧ１対照アイソタイプの投与が動物の生存率に全く影響を及ぼさなかったことがわかっているため、ＰＢＳを受けたマウス群を対照として導入する。
【００９５】
このモデルの評価パラメータは、動物の生存率であり、抗腫瘍活性は、Ｔ／Ｃ％＝処置動物の生存率の中央値／対照群の動物の生存率の中央値×１００の計算により表される。１２５％以上のＴ／Ｃ％が、製品の活性の証拠となることが立証された。
【００９６】
図２は、１２７％というＴ／Ｃ％計算値で５０−６抗体の抗腫瘍活性を示す（Ｐ＜０．００１）。この結果により、５０−６抗体の抗転移活性が確認される。
【００９７】
実施例３：５０−６抗体の特異性
【００９８】
５０−６抗体の特異性をウェスタンブロット法で評価した。組換えタンパク質ＥＣ２  ＣＤ１５１（５μｇ）を４〜１２％のアクリルアミドゲル（ＢｉｏＲａｄ）上に被着させた。電気泳動（非還元性条件）の後、タンパク質をニトロセルロース膜上に移した。転写膜を次に、精製５０−６抗体（１μｇ／ｍｌ）と共にインキュベートし、その後、ペルオキシダーゼに結合した抗マウスＩｇウサギポリクローナル抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）と共にインキュベートしてから、化学発光により視覚化した。
【００９９】
ＣＤ１５１のＥＣ２ループを、大腸菌のペリプラズム内で溶解可能な形で発現させるため、ｐＥＴ２２ｂベクター内でクローニングした。生成したタンパク質は、ヒトＣＤ１５１のペプチド配列のアミノ酸１３０〜２２１を有しており、これに、精製を容易にするため、Ｃ末端位でＰｏｌｙ−Ｈｉｓ尾部を付加した。組換えＥＣ２タンパク質を、ＨＰキレート化セファロース支持体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に固定化された金属に対するアフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）により精製した。
【０１００】
図３は、ウェスタンブロット法により、抗ＣＤ１５１  ５０−６抗体がＥＣ２ループを特異的に認識することを示している。還元性条件でのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の後にウェスタンブロット法が実施された場合、記憶の喪失が確認されることから、この抗体は、立体構造認識性の抗体である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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