(57)【要約】【課題】本発明は、プロアントシアニジン、特にＡ型のプロアントシアニジンの高い濃度によって、特に歯の治療及び予防、並びに口腔衛生の分野、またヒト及び動物の口腔咽頭のウイルス又は細菌感染の予防の分野に利用することができる多くの治療品質及び特性を有する、多様なガレノス形態又は他で提供される生成物を得ることを目的とした、ツルコケモモ（ヴァシニアム・マクロカーポン属及び／又はヴァシニアム・オクシコッカス属）の搾りかすから調製される抽出物を得る方法に関する。【解決手段】この抽出物及びその使用にも関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ツルコケモモの抽出物を得る方法であって、特に歯の治療及び予防、並びに口腔衛生の分野、またヒト及び動物の口腔咽頭のウイルス又は細菌感染の予防の分野に利用することができる抗菌性、抗ウイルス性及び抗接着特性を有し、変数が、使用される抽出及びアッセイ方法、並びに精製に付されるかに応じて、バニリン酸法では１％〜２０％超であり、Ｂａｓｅ  Ｓｍｉｔｈ法では５％〜５０％超である、特にＡ型のプロアントシアニジンを高い率で含むツルコケモモ搾りかすの抽出物を、漿果を圧搾し、次にそのようにして得た搾りかすに含有されるプロアントシアニジンを高温若しくは周囲温度の水溶液又は周囲温度の水アルコール溶液を使用して抽出し、この操作の後に既知の固液分離技術を続け、次に吸着樹脂に通して、望ましくない物質からアントシアニンとプロアントシアニジンを分離し、この同じプロアントシアニジンを真空乾燥、凍結乾燥、霧化又は噴霧化により溶出液から乾燥粉末形態で回収することにより、ツルコケモモ漿果（ヴァシニアム・マクロカーポン属及び／又はヴァシニアム・オクシコッカス属）から得る方法。
【請求項２】
変数が、使用される抽出及びアッセイ方法、並びに精製に付されるかに応じて、バニリン酸法では１％〜２０％超であり、Ｂａｓｅ  Ｓｍｉｔｈ法では５％〜５０％超である、特にＡ型のプロアントシアニジンを高い率で含むツルコケモモ搾りかすの抽出物が、粉砕ツルコケモモ搾りかすからプロアントシアニジンを水性抽出し、次に周囲温度又は５０〜７０℃の温度（理想の温度は６０℃）に加熱した水と５〜２０％の割合（理想の割合は１０％）で混合し、全体を２００〜５００ｒｐｍの一定速度で２〜８時間（理想の持続時間は５時間）連続して撹拌し、次にプロアントシアニジンを含有する水溶性物質を、粗濾過、２５００〜６５００ｒｐｍの回転速度（理想の速度は３５００ｒｐｍ）を有する水平流沈降タンクへの通過、遠心分離により不溶性物質から分離し、次に吸着樹脂に通して単離し、回収し、既知の適切な乾燥技術（真空乾燥、凍結乾燥、霧化又は噴霧化）により乾燥して粉末状固相を得ることによって得られることを特徴とする請求項１記載のツルコケモモの抽出物を得る方法。
【請求項３】
最終生成物における活性物質の率、したがってツルコケモモ搾りかすから抽出されるプロアントシアニジンの収率の増加が、遠心分離の後、吸着樹脂に通すことにより得られることを特徴とする請求項２記載のツルコケモモの抽出物を得る方法。
【請求項４】
変数が、使用される抽出及びアッセイ方法、並びに精製に付されるかに応じて、バニリン酸法では１％〜２０％超であり、Ｂａｓｅ  Ｓｍｉｔｈ法では５％〜５０％超である、特にＡ型のプロアントシアニジンを高い率で含むツルコケモモ搾りかすの抽出物が、粉砕ツルコケモモ搾りかすからプロアントシアニジンを水アルコール抽出し、２０〜８０％のエタノール（７０％が理想的な割合）を含有する水溶液と５〜２０％の割合（理想的な割合は１０％）で混合し、全体を２００〜５００ｒｐｍの一定速度により２〜８時間（持続時間の５時間が理想的）周囲温度で連続して撹拌し、次にプロアントシアニジンを含有する可溶性物質を、粗濾過、２５００〜６５００ｒｐｍの回転速度（３５００ｒｐｍが理想的な回転速度）を有する水平流沈降タンクへの通過、遠心分離により不溶性物質から分離し、次に吸着樹脂に通して単離し、回収し、既知の適切な乾燥技術（真空乾燥、凍結乾燥、霧化又は噴霧化）により乾燥して粉末状固相を得ることによって得られることを特徴とする請求項１記載のツルコケモモの抽出物を得る方法。
【請求項５】
最終生成物における活性物質の率、したがってツルコケモモ搾りかすから抽出されるプロアントシアニジンの収率の増加が、遠心分離の後、吸着樹脂に通すことにより得られることを特徴とする請求項４記載のツルコケモモの抽出物を得る方法。
【請求項６】
水溶液を使用すること又は水アルコール溶液を使用することにより得られる抽出物の収率が、初期乾燥物の量に対して１０％を超え、最終生成物における乾燥物の率が９０％を超え、好ましくは９４〜９７％含まれることを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
請求項１、２又は４記載のツルコケモモ搾りかすから得られ、変数が、使用される抽出及びアッセイ方法、並びに精製に付されるかに従い、バニリン酸法では１％〜２０％超であり、Ｂａｓｅ  Ｓｍｉｔｈ法では５％〜５０％超である、抗菌性、抗ウイルス性及び抗接着特性を有する特にＡ型のプロアントシアニジンを高い率で含み、ヒト及び動物において歯又は口腔咽頭の疾患の治療のために、医薬賦形剤に関連し、多様なガレノス又は他の形態により異なる濃度で予防的又は治癒的に使用することができることを特徴とするツルコケモモ抽出物。
【請求項８】
変数が、使用される抽出及びアッセイ方法、並びに精製に付されるかに従い、バニリン酸法では１％〜２０％超であり、Ｂａｓｅ  Ｓｍｉｔｈ法では５％〜５０％超である、特にＡ型のプロアントシアニジンを高い率で含有し、前記プロアントシアニジンが請求項１及び請求項２又は４記載の方法によりツルコケモモ搾りかすから抽出され、ヒト及び動物において歯又は口腔咽頭の疾患の予防的又は治療的処置のために、経口投与されて口腔又は口腔咽頭への放出及び溶解を可能にする任意の固体、液体又はペースト形態により、異なる濃度及びの多様なガレノス又は他の形態で含まれることを特徴とするツルコケモモ抽出物を含有する調製物。
【請求項９】
ツルコケモモ漿果（ヴァシニアム・マクロカーポン属及び／又はヴァシニアム・オクシコッカス属）を圧搾することにより得られ、抗菌性、抗ウイルス性及び抗接着特性を有し、変数が、使用される抽出及びアッセイ方法、並びに精製に付されるかに応じて、バニリン酸法では１％〜２０％超であり、Ｂａｓｅ  Ｓｍｉｔｈ法では５％〜５０％超である、特にＡ型のプロアントシアニジンを高い率で含み、経口投与されて口腔及び口腔咽頭への放出及び溶解を可能にする任意の固体、液体若しくはペースト形態又はゲル形態により、ゲル化剤、ガム、デキストリン、乳化剤、多糖類、グルコマンナン、ポリオール、カルボキシビニル樹脂のような医薬賦形剤と関連して異なる濃度で含まれうるツルコケモモ搾りかすの抽出物が、ヒト及び動物において錠剤、チューイングガムスティック、練り歯磨き、口内洗浄剤のような多様なガレノス又は他の形態で歯及び口腔咽頭の疾患の予防的又は治療的処置に使用されることを特徴とするツルコケモモ抽出物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特に歯の治療及び予防、並びに口腔衛生の分野、また口腔咽頭のウイルス又は細菌感染の予防の分野に利用することができる多くの治療品質及び特性を有する、多様なガレノス又は他の形態で提供される生成物を得ることを目的とした、クランベリー（ツルコケモモ）（ヴァシニアム・マクロカーポン属及び／又はヴァシニアム・オクシコッカス属）の搾りかすから調製される抽出物を得る方法に関する。この抽出物及びその使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
クランベリー(ツルコケモモ)の治療品質は長い間知られてきた。最初は、果汁における有機酸の存在に起因する強い酸性のために、誤って、主に軽度の尿路感染症の予防及び治療に使用された。現在は、その治療品質は、むしろ漿果の果汁及び果皮におけるポリフェノール、より詳細には、ＡＦＳＳＡ〔フランス食品安全局〕によると「尿路の壁への幾つかの大腸菌型病原性細菌の接着の低減を助ける」特性（したがって、抗接着効果）を有する、特にＡ型（Howell et al. 2005）のプロアントシアニジンに起因することが知られている。
【０００３】
この種類の調製物は、幾つかの場合において欠点を有する可能性があるので、現在まで用途が見出されることはほとんどなく、したがって、苦味と酸味の両方が同時にあり（ｐＨ２〜３）、かなり甘味を付けなければならないツルコケモモの果汁は、エナメル質の侵食及び虫歯の発生に寄与する可能性があるので、歯科予防又は治療にそのまま使用することができない。
【０００４】
本発明によると、多くの用途に使用可能でありうる基礎生成物を得る方法は、従来技術において存在していない。
【０００５】
特許文献１及び２は、頬側壁への病原性細菌の接着に対抗する調製物に関し、ヴァシニアム属もツルコケモモも抽出物の記載のために記述されていない。
【０００６】
特許文献３は、ポリフェノールが豊富であり、単糖を有さず、抗接着効果を有する、ツルコケモモから作製した調製物に関するが、抽出方法及び得られる原材料は本発明とかなり異なる。
【０００７】
特許文献４は、細菌に対して抗接着作用を有する、チューイングガムスティックの製造に使用されるツルコケモモに基づいた調製物を記載する。この場合、使用される原材料は、搾りかすではなく、透析による精製に付される濃縮ツルコケモモ果汁である。本出願では、原材料はツルコケモモ搾りかすの完全に脱水された抽出物であり、透析技術はその調製に使用されない。
【０００８】
特許文献５は、消化系障害を治療するためにヴァシニアムに基づいた調製物を使用する。ヴァシニアム・マクロカーポン種及びヴァシニアム・オクシコッカス種は使用されず、ヴァシニアム・ミルチラス、ヴァシニアム・ヴァイティス・イデア、サンブカス・ニグラ及びヴィティス・ビニフェラのみが引用されており、これらのうちプロアントシアニジンのＡ型を有するものはなく、Ｂ型のみである。使用されているツルコケモモ絞りかすは、果汁がなく、乾燥されて、調製物の中にそのまま含まれており、本発明では、この絞りかすから調製された抽出物が考慮される。
【０００９】
特許文献６は、植物の果実、葉、根又は茎から調製した、プロアントシアニジンが豊富なツルコケモモ抽出物に関する。請求されている生理学的作用様式は、消化管及び尿路の細胞への大腸菌の接着の抑制のみを記述するが、本発明は、大腸菌に特異的ではない作用に関する。関与する細菌は、とりわけ虫歯、歯肉炎、歯周炎の原因であるストレプトコッカス・ミュータンス、ポルフィロモナス・ジンジバリス及びフソバクテリウム・ヌクレアタムであり、幾つかのウイルスも関与している（Lipson et al 2007）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許第５００２７５９号明細書
【特許文献２】米国特許第５３６２４８０号明細書
【特許文献３】米国特許第５４７４７７４号明細書
【特許文献４】米国特許第００４８６１１Ａ１号公報
【特許文献５】米国特許第４８５７３２７Ａ１号公報
【特許文献６】ＷＯ９９／１２５４１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
これらの特許のうちで殺菌又は静菌作用を請求するものはない。
本発明の目的は、抗菌性、抗ウイルス性、抗酸化剤特性及び抗接着特性を有し、同時に、異なるガレノス又は他の形態で存在し、歯及び口腔咽頭の疾患の予防的又は治療的処置として使用される、特にＡ型のプロアントシアニジンを含む抽出物を容易に得るための、ツルコケモモ搾りかすを使用する新たな道筋を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
１つの実施態様において、生成方法は、従来の技術状態では使用されていない技術を使用し、それはツルコケモモ搾りかす抽出物を粉末形態で得ることを可能にし、その組成物は以前には知られておらず、通常得られるものよりも活性物質が豊富である。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明に係るツルコケモモ搾りかすを用いた場合の抗菌試験結果を表で示す図である。
【図２】Ｅｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  １を生成物濃度２ｍｇ／ｍｌの条件でそれぞれの菌について比較した写真である。
【図３】Ｅｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  １を生成物濃度５ｍｇ／ｍｌの条件でそれぞれの菌について比較した写真である。
【図４】Ｅｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  １を生成物濃度１０ｍｇ／ｍｌの条件でそれぞれの菌について比較した写真である。
【図５】Ｅｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  ２を生成物濃度５ｍｇ／ｍｌの条件でそれぞれの菌について比較した写真である。
【図６】Ｅｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  ２を生成物濃度１０ｍｇ／ｍｌの条件でそれぞれの菌について比較した写真である。
【図７】Ｅｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  １０を生成物濃度２ｍｇ／ｍｌの条件でそれぞれの菌について比較した写真である。
【図８】Ｅｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  １０を生成物濃度５ｍｇ／ｍｌの条件でそれぞれの菌について比較した写真である。
【図９】Ｅｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  １０を生成物濃度１０ｍｇ／ｍｌの条件でそれぞれの菌について比較した写真である。
【図１０】２種類の濃度のツルコケモモ搾りかすの抗接着効果を示す写真及び説明図である。
【図１１】２種類の濃度のツルコケモモ搾りかすの抗接着効果を示す写真及び説明図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
[ツルコケモモ搾りかすからプロアントシアニジンを得る]
本発明によると、ツルコケモモからプロアントシアニジンを全て抽出する提案される技術は、幾つかの工程を含む。第１工程は、ヴァシニアム・マクロカーポン及び／又はヴァシニアム・オクシコッカス漿果を圧搾してツルコケモモ搾りかすを得ることから構成され、このことは果汁に存在する大部分の炭水化物及び有機酸の除去を可能にし、したがって得られた調製物は、３．５〜４．５と異なるｐＨを有し、より良好に許容される。
【００１５】
使用されるツルコケモモ搾りかすは、３０％の平均固形分を有し、この比率は圧搾操作の際に適用された圧力に応じて２５〜３５％に変わりうる。分離漿果の形態となり、種はプロアントシアニジンを含有するので保存することができる。輸送及び保存が容易なように、この搾りかすは凍結される。
【００１６】
第２工程では、プロアントシアニジンは、水溶液又は水アルコール溶液を使用して抽出される。吸着樹脂カラムの抽出経路は、より良好にプロアントシアニジンを単離することができ、したがって抽出収率を増加することができる。
【００１７】
第1の場合：抽出は、周囲温度の水溶液を使用して又は予め５０〜７０℃に加熱しが水において実施される。最初に搾りかすを粉砕して固液交換表面、したがって抽出収率を増加し、使用される機器及び２ｍｍ未満の粒径によって１０〜２０％増加する。
【００１８】
抽出自体は、水に対して約５〜２０％の搾りかす濃度で実施することができ、理想的な割合は１０％である。
【００１９】
熱を用いて、水中で６０℃により処理する場合、撹拌機構を備えたタンクに１０％の割合で導入される搾りかすは、使用される羽根の種類に応じて２００〜５００ｒｐｍの一定撹拌速度に付される。抽出を２〜８時間続けることができるが、５時間の持続時間が、抽出物における活性物質の総濃度を損なう水溶性繊維の割合を増加しないので、最も適していることが経験によって示されている。５時間の終了時、懸濁液は、最終的に粗濾過及び２５００〜６５００ｒｐｍの速度範囲で稼働している水平流沈降タンクによる固液分離を受け、使用する機器により、最適な結果は３５００ｒｐｍで得られた。このプロトコールは水の温度が何度であっても当てはまる。
【００２０】
次に懸濁液の清澄化を、４０００〜８０００ｒｐｍの速度で実施した遠心分離により続ける。次の段階では、このようにして得られた液体抽出物を、活性物質が分解しないようにオーブンにおいて６０℃未満の温度で真空乾燥すること又は凍結乾燥すること又は粉末状固相を得るために霧化する若しくは噴霧化もすることのいずれかにより乾燥に付す。吸着樹脂に通した後に遠心分離が続くと、最終生成物においてより高い割合の活性物質が得られる。
【００２１】
本発明によると、そして使用される方法がどのようなものであっても、抽出収率は初期乾燥原材料の量に対して１０％を超える。
【００２２】
最終生成物における乾燥物の率は、９０％を超え、通常９４〜９７％である。プロアントシアニジン用量は、バニリン酸法又はＢａｔｈ  Ｓｍｉｔｈ法により達成することができ、両方とも良く知られている。
【００２３】
粉砕した後、得られた微細均質粉末は、淡紅紫色である。
【００２４】
第２の場合：この場合では、プロアントシアニジンは、エタノールの率が２０〜８０％に異なる水アルコール溶液を使用して、周囲温度で抽出される。最適条件は、７０％のエタノールで得られる。選択される操作条件は、前の場合とほぼ同一であり、ツルコケモモ搾りかすは１０％の割合で媒質に導入される。また、懸濁液の３〜５時間の撹拌時間が最も適しており、次にこの懸濁液を上記と同じ条件下でデカンテーションに付す。この段階で、生成物の品質の改善は、遠心分離、次に吸着樹脂に通すことにより得ることができる。このことは、より高い割合の活性物質を得ることを可能にするが、この場合アルコールは、「抽出物」を吸着樹脂に通す前に、完全に除去されなければならない。同様に、乾燥は、真空オーブンにより５５℃を超えない温度で実施されるか又は凍結乾燥により実施される。粉末状固相の達成を可能にするこれらの方法の変形も、懸濁液を霧化に付すことから構成される。
【００２５】
抽出収率も、初期乾燥物の約１０％が乾燥粉末である。
【００２６】
最終生成物における乾燥物の率は、９０％を超え、通常９４〜９７％である。
【００２７】
プロアントシアニジン用量も、バニリン酸法又はＢａｔｈ  Ｓｍｉｔｈ法により達成される。
【００２８】
粉砕した後、微細均質粉末は、淡紅紫色である。
【００２９】
［吸着樹脂を通すことによるプロアントシアニジン収率の改善］
原則：この操作は、正確に制御されたとき、抽出収率の増加を可能にする。これは、水により６０℃で又は水アルコール溶液によりツルコケモモ搾りかすを涸渇させた後に得られた液体抽出物に含有されている他の望ましくない物質から、アントラシアニンとプロアントシアニジンを分離することから構成される。粗濾過、デカンテーション、次に遠心分離による清澄化を受けた後、含有されている場合、アルコールを除去した後に液体抽出物に含有されているポリフェノールを、樹脂に吸着させ、残部を排除する。次に単に溶出させて活性物質を回収する。
【００３０】
使用される吸着カラムは、ＦＰＸ６６グラフト化二酸化ケイ素型吸着樹脂又は同等の特性を有する他の任意の樹脂が充填された、３1６Ｌ型ステンレススチール製である。樹脂を９６％エタノール浴で最低２４時間活性化する。次にアルコールが全て溶出するまで水ですすぐ。
【００３１】
活性物質の分離：この目的のために調製されたカラムは吸着樹脂のＢＶ容量（床容量）を含有する。液体ツルコケモモ抽出物のＢＶ容量を、カラムの底から２ＢＶ／時間の速度で流れに反して装填する。樹脂が吸い取る水を上部から除去する。同様に、直接溶出した非固定画分を回収する。液体抽出物のＢＶ容量が装填されると、水によるすすぎを今回はカラムの上部から２ＢＶ／時間の速度で実施する。樹脂に未吸着の化合物、特に非フェノール性物質及び糖を溶出するように設計されている。このすすぎを、溶出液の固形分が０．５％未満になるまで続け、これはおよそ水の３ＢＶ容量に相当する。
【００３２】
次に樹脂に吸着したポリフェノールの回収を、カラムの上部に２ＢＶ／時間の速度で導入した７５％エタノールにより実施する。ポリフェノール性化合物の回収は、溶出液から紫色が完全に消滅するまで続ける。
【００３３】
樹脂に吸着したポリフェノールを全て溶出するのに一般に必要な容量は、およそ２ＢＶである。この時点で、ポリフェノールの用量は、少なくとも初期乾燥物の量の２０％のオーダーであるポリフェノールが、全て溶出されたことを確実にすることが望ましい。
【００３４】
次に回収されたアルコール性溶出液を５５℃未満の温度で部分真空により濃縮し、同時に、この水アルコール媒質への定期的な水添加は、ポリフェノールの劣化の危険性を防止する。最終段階では、プロアントシアニジンは、１００％水性の媒質中にある。既に記述したように、次に生成物はオーブンによる部分真空下での乾燥又は好ましくは凍結乾燥による乾燥を受ける。霧化を受ける可能性もある。
【００３５】
この段階で、紫黒色の微細粉末は少なくとも２０％の総プロアントシアニジンを含有する。使用する抽出方法及びアッセイ方法に応じて、最終乾燥抽出物において得られる総プロアントシアニジン（ＰＡＣ）の率、すなわち平均純度は以下である：
−バニリン酸法：
●水性抽出では、乾燥物の１〜１０％ＰＡＣ、
●アルコール抽出では、乾燥物の１０〜２０％ＰＡＣ、
●樹脂通過後の抽出では、乾燥物の２０％超のＰＡＣ。
−Ｂａｔｈ  Ｓｍｉｔｈ法：
●水性抽出では、乾燥物の５〜２０％ＰＡＣ、
●アルコール抽出では、乾燥物の１０〜３０％ＰＡＣ、
●樹脂通過後の抽出では、乾燥物の４０％超、さらには５０％超のＰＡＣ。
【００３６】
［用途］
多様なｐＨで（したがって唾液において）可溶性であり、抗菌性、抗酸化剤特性及び抗接着特性を有する、特にＡ型のプロアントシアニジンが豊富なので、ツルコケモモ搾りかすの抽出物を、主に、ヒト及び動物において歯又は口腔咽頭の疾患に対して戦うために異なる濃度及びガレノス又は多様な他の形態で予防的又は治癒的に使用することができる。
【００３７】
最終生成物は微細粉砕、顆粒化又はカプセル化された、特に錠剤、口腔分散性錠剤、カプセル剤、アラビアゴム製錠剤の形態で提示されうる。調合剤に使用される大部分の賦形剤と適合することを考えると、この種類の調製物は、特に、問題なく、果実風味剤又は精油により風味付けすること、アスパルテーム、アセスルファム、ステビア・レバウディアナにより甘味付けすること、認可食品着色剤により着色することができる。同様に、ペクチン、ガム（キサンタン、アラビアゴム、ジェラン）、デキストリン、乳化剤、多糖類、グルコマンナン、ソルビトールのようなポリオール、キシリトール、マルチロール、ラクチロールのようなゲル化剤とも適合性があるので、例えば、ポリオール及びグリセリンを含有するチューイングガム錠剤に含めること、カルボキシビニル樹脂を含有するペースト又はゲルの形態の練り歯磨きに組み込むこと、グリセリン処理水に溶解して口内洗浄剤に組み込むこと、一般に、経口投与されて口腔及び口腔咽頭への放出及び溶解を可能にする任意の固体、液体又はペーストの形態であることができる。
【００３８】
口腔細菌に対するこれらのプロアントシアニジンの効果は、濃度がそれぞれ２ｍｇ／ｌ、５ｍｇ／ｌ及び１０ｍｇ／ｌの３種類のツルコケモモ抽出物により実施した抗菌試験及び接着試験により証明されており、本実験では、Ｅｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  １、Ｅｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  ２及びＥｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  １０と呼ばれ、これらの抽出物は、それぞれ１％、２％及び１０％に滴定したプロアントシアニジン固形物から調製され、このことは、例えば１％の固形分で調製されたＥｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  １シリーズは、３種類の抽出物をそれぞれ２ｍｇ／ｌ、５ｍｇ／ｌ及び１０ｍｇ／ｌの濃度で生じたことを意味する。
【００３９】
抗菌試験：
ツルコケモモ抽出物の効果をインビトロで評価することができる。生成物は、病原菌の数が少なくとも１／１０（ログ対対照）に減少する場合に静菌性を有すると考慮されるか又は細菌培養の完全な抑制の場合に殺菌性があると考慮される。
【００４０】
抽出物が、唾液媒質を再現した対照媒質と比較してインビトロで活性であると考慮される場合、インビボでも同じ活性を有すると予測され、口腔、咽頭及び消化系へのプロアントシアニジンの分散をもたらす唾液は、活性物質を粘膜細胞と接触させ、生物膜の形成を抑制することができると予測される。
【００４１】
結果：３つの抽出物は１０ｍｇ／ｍｌの濃度でストレプトコッカス・ミュータンスに対して静菌活性を有することが見出され、それは、これらがより高い濃度で殺菌活性を有すること（用量依存性効果）を示唆している。
【００４２】
抽出物Ｅｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  １０のみが、１０ｍｇ／ｍｌの濃度でポルフィロモナス・ジンジバリスに対して静菌活性を有する。
【００４３】
フソバクテリウム・ヌクレアタムは、１０ｍｇ／ｍｌの濃度の３つの抽出物に対して最も感受性のある細菌であり、Ｅｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  1及びＥｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  １０が殺菌活性を有し、一方、Ｅｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  ２が静菌活性を示す。
【００４４】
ラクトバチルス・ラムノサスの増殖は、いずれの抽出物によっても影響を受けず、このことは濃度と無関係である。
【００４５】
抗接着効果の確認：
細菌は、互いに接着して、虫歯、歯肉炎及び歯周病を引き起こす微生物が繁殖する生物膜を形成する能力を有する。
【００４６】
生物膜の完全な又は部分的抑制が生じる場合に肯定的な結果が生じると考慮され（０〜３のスコア）、最低の抑制が最高のスコアを得る。
【００４７】
３つの抽出物は、５ｍｇ／ｍｌの濃度でストレプトコッカス・ミュータンスの生物膜に対して効果を有し、同じことが、１０ｍｇ／ｍｌの濃度のＥｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  １及びＥｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  １０にも当てはまるが（スコア＝1）、Ｅｘｏｃｙａｎ  ｃｒａｎ  １は、他の抽出物よりも低い抑制活性（スコア＝３）を示したことが観察された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【手続補正書】
【提出日】平成22年7月9日(2010.7.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ツルコケモモの抽出物を得る方法であって、変数が、使用される抽出方法及び用量、並びに精製に付されるかに応じて決まる（バニリン酸法では２０％超であることができ、Ｂａｓｅ  Ｓｍｉｔｈ法では４０％超、さらには５０％超であることができる）特にＡ型のプロアントシアニジンを高い率で含むツルコケモモ搾りかすの抽出物を、漿果を圧搾し、次にそのようにして得た搾りかすに含有されるプロアントシアニジンを高温若しくは周囲温度の水溶液又は周囲温度の水アルコール溶液を使用して抽出し、この操作の後に既知の固液分離技術を続け、次にグラフト化二酸化ケイ素型吸着樹脂に通して、望ましくない物質からアントシアニンとプロアントシアニジンを分離し、この同じプロアントシアニジンを真空乾燥若しくは凍結乾燥又は霧化若しくは噴霧化により溶出液から乾燥粉末形態で回収することにより、ツルコケモモ漿果（ヴァシニアム・マクロカーポン属及び／又はヴァシニアム・オクシコッカス属）から得ることを特徴とする方法。
【請求項２】
変数が、使用される抽出方法及び用量、並びに精製に付されるかに応じて決まる（バニリン酸法では２０％超であることができ、Ｂａｓｅ  Ｓｍｉｔｈ方では４０％超、さらには５０％超であることができる）特にＡ型のプロアントシアニジンを高い率で含むツルコケモモ搾りかすの抽出物が、圧潰ツルコケモモ搾りかすからプロアントシアニに加熱した水と５〜２０％の割合で混合し、全体を２００〜５００ｒｐｍの一定速度で２〜８時間連続して撹拌し、次にプロアントシアニジンを含有する水溶性物質を、粗濾過、２５００〜６５００ｒｐｍの回転速度を有する水平流沈降タンクへの通過、遠心分離により不溶性物質から分離し、次にグラフト化二酸化ケイ素型吸着樹脂に通して単離し、回収し、既知の適切な乾燥技術（真空乾燥若しくは凍結乾燥又は霧化若しくは噴霧化）により乾燥して粉末状固相を得ることによって得られることを特徴とする請求項１記載のツルコケモモの抽出物を得る方法。
【請求項３】
変数が、使用される抽出方法及び用量、並びに精製に付されるかに応じて決まる（バニリン酸法では２０％超であることができ、Ｂａｓｅ  Ｓｍｉｔｈ法では４０％超、さらには５０％超であることができる）特にＡ型のプロアントシアニジンを高い率で含むツルコケモモ搾りかすの抽出物が、粉砕ツルコケモモ搾りかすからプロアントシアニジンを水アルコール抽出し、２０〜８０％のエタノールを含有する水溶液と５〜２０％の割合で混合し、全体を２００〜５００ｒｐｍの一定速度により２〜８時間周囲温度で連続して撹拌し、次にプロアントシアニジンを含有する可溶性物質を、粗濾過、２５００〜６５００ｒｐｍの回転速度を有する水平流沈降タンクへの通過、遠心分離により不溶性物質から分離し、次にグラフト化二酸化ケイ素型吸着樹脂に通して単離し、回収し、既知の適切な乾燥技術（真空乾燥若しくは凍結乾燥又は霧化若しくは噴霧化）により乾燥して粉末状固相を得ることによって得られることを特徴とする請求項１記載のツルコケモモの抽出物を得る方法。
【請求項４】
圧潰ツルコケモモ搾りかすからのプロアントシアニジンの水性抽出により得たツルコケモモ抽出物を、周囲温度又は理想の温度の６０℃に加熱した水と理想の割合の１０％で混合し、全体を２００〜５００ｒｐｍの一定速度で理想の持続時間の５時間連続して撹拌し、次にプロアントシアニジンを含有する水溶性物質を、粗濾過、理想の回転速度の３５００ｒｐｍを有する水平流沈降タンクへの通過、遠心分離により不溶性物質から分離し、次にグラフト化二酸化ケイ素型吸着樹脂に通して単離し、回収し、既知の適切な乾燥技術（真空乾燥若しくは凍結乾燥又は霧化若しくは噴霧化）により乾燥して粉末状固相を得ることによって得られることを特徴とする請求項２記載のツルコケモモの抽出物を得る方法。
【請求項５】
ツルコケモモ抽出物が、粉砕ツルコケモモ搾りかすからプロアントシアニジンを水アルコール抽出し、次に７０％のエタノールを理想的に含有する水溶液に理想の割合の１０％で混合し、全体を２００〜５００ｒｐｍの一定速度により周囲温度で理想の持続時間の５時間撹拌し、次にプロアントシアニジンを含有する可溶性物質を、粗濾過、理想の回転速度の３５００ｒｐｍを有する水平流沈降タンクへの通過、遠心分離により不溶性物質から分離し、次にグラフト化二酸化ケイ素型吸着樹脂に通して単離し、回収し、既知の適切な乾燥技術（真空乾燥若しくは凍結乾燥又は霧化若しくは噴霧化）により乾燥して粉末状固相を得ることによって得られることを特徴とする請求項３記載のツルコケモモの抽出物を得る方法。
【請求項６】
最終生成物における活性物質の率、したがってツルコケモモ搾りかすから抽出されるプロアントシアニジンの収率の増加が、遠心分離の後、グラフト化二酸化ケイ素型吸着樹脂に通すことにより得られることを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項記載のツルコケモモの抽出物を得る方法。
【請求項７】
グラフト化二酸化ケイ素型吸着樹脂に通した後、水溶液を使用して又は水アルコール溶液を使用して得られた抽出物の収率が、乾燥物の初期量に対して１０％を超え、最終生成物における乾燥物の率が９０％を超え、通常９４〜９７％であることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項記載のツルコケモモの抽出物を得る方法。
【請求項８】
請求項１、２又は３記載のツルコケモモ搾りかすから得られ、変数が、使用される抽出方法及び用量、並びに精製に付されるかに従う、特にＡ型のプロアントシアニジンを高い率で含み、抗菌性、抗ウイルス性及び抗接着特性を有し、ヒト及び動物において歯又は口腔咽頭の疾患の治療のために、医薬賦形剤に関連し、錠剤、チューイングガムスティック、練り歯磨き、口内洗浄剤のような多様なガレノス又は他の形態により異なる濃度で予防的又は治癒的に使用することができることを特徴とするツルコケモモ抽出物。
【請求項９】
請求項１、２又は３記載に従って得られ、変数が、使用される抽出方法及び用量、並びに精製に付されるかに従う、特にＡ型のプロアントシアニジンを高い率で含有し、抗菌性、抗ウイルス性及び抗接着特性を有するツルコケモモ搾りかすの抽出物が、ヒト及び動物において歯又は口腔咽頭の疾患の予防的又は治療的処置のために、経口投与されて口腔又は口腔咽頭レベルで放出及び溶解を可能にする任意の固体、液体又はペースト形態により、異なる濃度及びガレノス又は多様な他の形態で使用されることを特徴とするツルコケモモ抽出物を含有する調製物。
【国際調査報告】
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