(57)【要約】一般式（Ｉ）：2011521911.tif 000061           （Ｉ）を有するＣ型肝炎ウイルス阻害剤が開示される。該化合物を含む組成物、および該化合物を使用してＨＣＶを阻害する方法もまた開示される。
2011521911.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2011521911.tif 000055
（Ｉ）
［式中、
ｍは、１、２、または３であり；
Ｒ1は、ヒドロキシおよび−ＮＨＳＯ2Ｒ6から選択され；その中で、Ｒ6は、アルキル、アリール、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、および−ＮＲaＲbから選択され、該アルキル、該シクロアルキル、および該（シクロアルキル）アルキルのシクロアルキル部分は、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、アリールアルキル、アリールカルボニル、シアノ、シクロアルケニル、（シクロアルキル）アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、および（ＮＲeＲf）カルボニルから選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ2は、水素、アルケニル、アルキル、およびシクロアルキルから選択され、その中で、該アルケニル、該アルキル、および該シクロアルキルは、ハロで適宜置換されていてもよく；
Ｒ3は、アルケニル、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アルキル、アリールアルキル、カルボキシアルキル、シアノアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ハロアルコキシ、ハロアルキル、（ヘテロサイクリル）アルキル、ヒドロキシアルキル、（ＮＲcＲd）アルキル、および（ＮＲeＲf）カルボニルアルキルから選択され；
Ｒ4は、フェニル、並びに、窒素、酸素、および硫黄から選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な５または６員環から選択され；その中で、該環の各々は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルファニル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ4が置換された６員環である場合、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならず；
Ｒ5は、アルキルカルボニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクリルアルキル、ヘテロサイクリルアルキルカルボニル、ヘテロサイクリルカルボニル、および（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該アリール；該アリールアルキル、該アリールアルキルカルボニル、および該アリールカルボニルのアリール部分；該ヘテロサイクリル；並びに該ヘテロサイクリルアルキルおよび該ヘテロサイクリルアルキルカルボニルのヘテロサイクリル部分は、各々、１〜６個のＲ7基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ5がヘテロサイクリルである場合、該ヘテロサイクリルは、
【化２】
2011521911.tif 000056
以外であり；
Ｒ7は各々独立して、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シアノアルキル、シクロアルキル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロサイクリル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ，−ＮＲcＲd、（ＮＲcＲd）アルキル、（ＮＲcＲd）アルコキシ、（ＮＲeＲf）カルボニル、および（ＮＲeＲf）スルホニルから選択され；あるいは
２つの隣接Ｒ7基は、それらに結合する炭素原子と一緒になって、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１つまたは２つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な４〜７員環を形成し、その中で、該環は、アルコキシ、アルキル、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの基で適宜置換されていてもよく；
ＲaおよびＲbは独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルアルキルから選択されるか；あるいは、ＲaおよびＲbは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、４〜７員単環式ヘテロ環を形成し；
ＲcおよびＲdは独立して、水素、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリールアルキル、およびハロアルキルから選択され；
ＲeおよびＲfは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヘテロサイクリルから選択され；その中で、該アリール、該アリールアルキルのアリール部分、および該ヘテロサイクリルは、アルコキシ、アルキル、およびハロから独立して選択される１つまたは２つの置換基で適宜置換されていてもよく；並びに
ＲgおよびＲhは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルから選択されるか；あるいは、ＲgおよびＲhは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、単環式ヘテロ環を形成し、その中で、該単環式ヘテロ環は、フェニル環に適宜縮合して、二環式構造を形成してもよく；該単環式ヘテロ環および該二環式構造は、アルコキシ、アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよい］
の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ1が−ＮＨＳＯ2Ｒ6である、請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
ｍが、１または２であり；
Ｒ1が−ＮＨＳＯ2Ｒ6であり；その中で、Ｒ6は、アルキル、アリール、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、および−ＮＲaＲbから選択され、該アルキル、該シクロアルキル、および該（シクロアルキル）アルキルのシクロアルキル部分は、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、アリールアルキル、アリールカルボニル、シアノ、シクロアルケニル、（シクロアルキル）アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、および（ＮＲeＲf）カルボニルから選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ2が、アルケニル、アルキル、およびシクロアルキルから選択され、その中で、該アルケニル、該アルキル、および該シクロアルキルは、ハロで適宜置換されていてもよく；
Ｒ3が、アルケニルおよびアルキルから選択され；
Ｒ4が、フェニル、並びに、窒素、酸素、および硫黄から選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な５または６員環から選択され；その中で、該環の各々は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルファニル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ4が置換された６員環である場合、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならず；
Ｒ5が、アルキルカルボニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクリルアルキル、ヘテロサイクリルアルキルカルボニル、ヘテロサイクリルカルボニル、および（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該アリール；該アリールアルキル、該アリールアルキルカルボニル、および該アリールカルボニルのアリール部分；該ヘテロサイクリル；並びに該ヘテロサイクリルアルキルおよび該ヘテロサイクリルアルキルカルボニルのヘテロサイクリル部分は、各々、１〜６個のＲ7基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ5がヘテロサイクリルである場合、該ヘテロサイクリルは、
【化３】
2011521911.tif 000057
以外であり；
Ｒ7が各々独立して、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シアノアルキル、シクロアルキル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロサイクリル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ，−ＮＲcＲd、（ＮＲcＲd）アルキル、（ＮＲcＲd）アルコキシ、（ＮＲeＲf）カルボニル、および（ＮＲeＲf）スルホニルから選択され；あるいは
２つの隣接Ｒ7基が、それらに結合する炭素原子と一緒になって、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１つまたは２つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な４〜７員環を形成し、その中で、該環は、アルコキシ、アルキル、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの基で適宜置換されていてもよく；
ＲaおよびＲbが独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルアルキルから選択されるか；あるいは、ＲaおよびＲbが、それらに結合する窒素原子と一緒になって、４〜７員単環式ヘテロ環を形成し；
ＲcおよびＲdが独立して、水素、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリールアルキル、およびハロアルキルから選択され；
ＲeおよびＲfが独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヘテロサイクリルから選択され；その中で、該アリール、該アリールアルキルのアリール部分、および該ヘテロサイクリルは、アルコキシ、アルキル、およびハロから独立して選択される１つまたは２つの置換基で適宜置換されていてもよく；並びに
ＲgおよびＲhが独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルから選択されるか；あるいは、ＲgおよびＲhが、それらに結合する窒素原子と一緒になって、単環式ヘテロ環を形成し、その中で、該単環式ヘテロ環は、フェニル環に適宜縮合して、二環式構造を形成してもよく；該単環式ヘテロ環および該二環式構造は、アルコキシ、アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよい、請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒ6が無置換シクロアルキルである、請求項３の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項５】
ｍが１であり；
Ｒ1が−ＮＨＳＯ2Ｒ6であり；その中で、Ｒ6は無置換シクロアルキルであり；
Ｒ2がアルケニルであり；
Ｒ3がアルキルであり；
Ｒ4が、フェニル、並びに、窒素、酸素、および硫黄から選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な５または６員環から選択され；その中で、該環の各々は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ4が置換された６員環である場合、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならず；
Ｒ5が、ヘテロサイクリルおよび（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該ヘテロサイクリルは、１〜６個のＲ7基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ5は、
【化４】
2011521911.tif 000058
以外であり；
Ｒ7が各々独立して、アルコキシ、アリール、およびヘテロサイクリルから選択され；
ＲcおよびＲdが独立して、水素、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、およびアリールアルキルから選択され；
ＲeおよびＲfが独立して、水素、アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；並びに
ＲgおよびＲhが、それらに結合する窒素原子と一緒になって、フェニル環に縮合した単環式ヘテロ環を形成して、二環式構造を形成し；その中で、該二環式構造は、ハロ基で置換されている、請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項６】
Ｒ4が、１つの窒素原子を含む６員不飽和環であり、その中で、該環は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならない、請求項５の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項７】
Ｒ4が、１つの窒素原子および１つの硫黄原子を含む５員不飽和環であり、その中で、該環は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよい、請求項５の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項８】
【化５−１】
2011521911.tif 000059
【化５−２】
2011521911.tif 000060
から選択される化合物。
【請求項９】
請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩、並びに医薬的に許容される担体を含む組成物。
【請求項１０】
抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物をさらに含む、請求項９の組成物。
【請求項１１】
少なくとも１つの該別の化合物が、インターフェロンまたはリバビリンである、請求項１０の組成物。
【請求項１２】
該インターフェロンが、インターフェロンα２Ｂ、ペグ化インターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα２Ａ、およびリンパ芽球様インターフェロンτから選択される、請求項１１の組成物。
【請求項１３】
少なくとも１つの該別の化合物が、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン１２、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を亢進する化合物、干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、イミキモド、リバビリン、イノシン ５'−一リン酸脱水素酵素阻害剤、アマンタジン、およびリマンタジンから選択される、請求項１０の組成物。
【請求項１４】
少なくとも１つの該別の化合物が、ＨＣＶメタロプロテアーゼ、ＨＣＶセリンプロテアーゼ、ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ ＮＳ４Ｂタンパク質、ＨＣＶエントリー、ＨＣＶアセンブリー、ＨＣＶイグレス、ＨＣＶ ＮＳ５Ａタンパク質、およびＩＭＰＤＨから選択される標的の機能を阻害して、ＨＣＶ感染症の治療に有効である、請求項１０の組成物。
【請求項１５】
治療有効量の請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩を患者に投与することを特徴とする、患者におけるＨＣＶ感染症の治療方法。
【請求項１６】
請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩の、前、後、または同時に、抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物をさらに投与することを特徴とする、請求項１５の方法。
【請求項１７】
少なくとも１つの該別の化合物がインターフェロンまたはリバビリンである、請求項１６の方法。
【請求項１８】
該インターフェロンが、インターフェロンα２Ｂ、ペグ化インターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα２Ａ、およびリンパ芽球様インターフェロンτから選択される、請求項１７の方法。
【請求項１９】
少なくとも１つの該別の化合物が、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン１２、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を亢進する化合物、干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、イミキモド、リバビリン、イノシン ５'−一リン酸脱水素酵素阻害剤、アマンタジン、およびリマンタジンから選択される、請求項１６の方法。
【請求項２０】
少なくとも１つの該別の化合物が、ＨＣＶメタロプロテアーゼ、ＨＣＶセリンプロテアーゼ、ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ ＮＳ４Ｂタンパク質、ＨＣＶエントリー、ＨＣＶアセンブリー、ＨＣＶイグレス、ＨＣＶ ＮＳ５Ａタンパク質、およびＩＭＰＤＨから選択される標的の機能を阻害して、ＨＣＶ感染症の治療に有効である、請求項１６の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２００８年５月１５日に出願された米国仮出願第６１／０５３，４７７号の利益を主張する。
【０００２】
本開示は一般に、抗ウイルス性化合物を対象とし、さらに具体的にはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によりコードされる（本明細書において「セリンプロテアーゼ」とも称される）ＮＳ３プロテアーゼの機能を阻害する化合物、このような化合物を含む組成物、およびＮＳ３プロテアーゼの機能を阻害する方法を対象とする。
【０００３】
ＨＣＶは、主要なヒト病原体であり、世界中で１億７千万人が感染していると推定され、これはヒト免疫不全ウイルス１型の感染数の概ね５倍である。これらのＨＣＶ感染者のかなりの割合が肝硬変および肝細胞癌を含めた重篤な進行性肝疾患を発症させる。
【０００４】
現在、最も有効なＨＣＶ治療は、α−インターフェロンおよびリバビリンの組合せを用い、これは患者の４０％において持続的効果をもたらしている。ペグ化α−インターフェロンは、単独療法としては未修飾α−インターフェロンより優れていることを、最近の臨床結果は示している。しかし、ペグ化α−インターフェロンおよびリバビリンの組合せを伴う試験的な治療計画をもってしても、患者の大部分は、ウイルス量が持続的に減少することがない。したがって、ＨＣＶ感染症の治療のための有効な療法を開発する明確であり、まだ満たされていない必要性が存在する。
【０００５】
ＨＣＶは、プラス鎖ＲＮＡウイルスである。５’非翻訳領域における推定されるアミノ酸配列および広範な類似性の比較に基づいて、ＨＣＶは、フラビウイルス科ファミリーの独立した属として分類されてきた。フラビウイルス科ファミリーの全てのメンバーは、単一の中断されていないオープンリーディングフレームの翻訳を介して全て公知のウイルス特異的タンパク質をコードするプラス鎖ＲＮＡゲノムを含有するエンベロープに包まれたビリオンを有する。
【０００６】
ＨＣＶゲノムに亘ってヌクレオチドおよびコードされたアミノ酸配列内にかなりの多様性が見い出される。６つの主要な遺伝子型が特性決定され、５０を超える亜型が説明されてきた。ＨＣＶの主要な遺伝子型は世界的にその分布が異なっており、病原および治療における遺伝子型の影響の可能性についての多くの研究にも関わらず、ＨＣＶの遺伝的多様性の臨床的意義は依然として捕らえにくい。
【０００７】
一本鎖ＨＣＶ  ＲＮＡゲノムは、約９５００ヌクレオチドの長さであり、約３０００個のアミノ酸の単一の大きなポリタンパク質をコードする単一のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する。感染細胞において、このポリタンパク質は、細胞プロテアーゼおよびウイルスプロテアーゼによって複数の部位で切断され、構造タンパク質および非構造（ＮＳ）タンパク質を生成する。ＨＣＶの場合、成熟非構造タンパク質（ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ａ、およびＮＳ５Ｂ）の生成は、２種のウイルスプロテアーゼによってもたらされる。最初のものは、ＮＳ２−ＮＳ３接合部を切断し；第２のものは、ＮＳ３のＮ末端領域内に含有されるセリンプロテアーゼであり、ＮＳ３の下流、すなわち、ＮＳ３−ＮＳ４Ａ切断部位においてシスで、残りのＮＳ４Ａ−ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ−ＮＳ５Ａ、ＮＳ５Ａ−ＮＳ５Ｂ部位においてトランスでの両方における以降の切断の全てを仲介する。ＮＳ４Ａタンパク質は、複数の機能を果たしていると思われ、ＮＳ３プロテアーゼの補助因子として作用し、ＮＳ３および他のウイルスレプリカーゼ成分の膜局在性をおそらく補助している。ＮＳ３タンパク質のＮＳ４Ａとの複合体形成は、効率的なポリタンパク質の進行、部位の全てにおけるタンパク分解切断の増強に本質的である。ＮＳ３タンパク質はまた、ヌクレオシドトリホスファターゼおよびＲＮＡヘリカーゼ活性を示す。ＮＳ５Ｂは、ＨＣＶの複製に関与するＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼである。
【０００８】
本開示は、例えば、ＮＳ４Ａプロテアーゼと組み合わせて、ＮＳ３プロテアーゼの機能を阻害することができるペプチド化合物を提供する。さらに、本開示は、患者への併用療法の投与について記載し、それによって、ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼを阻害するのに効果的な本開示による化合物は、抗ＨＣＶ作用を有する１種または２種のさらなる化合物と共に投与することができる。
【０００９】
第１の態様において、本開示は、式（Ｉ）：
【化１】
2011521911.tif 000003
（Ｉ）
［式中、
ｍは、１、２、または３であり；
Ｒ1は、ヒドロキシおよび−ＮＨＳＯ2Ｒ6から選択され；その中で、Ｒ6は、アルキル、アリール、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、および−ＮＲaＲbから選択され、該アルキル、該シクロアルキル、および該（シクロアルキル）アルキルのシクロアルキル部分は、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、アリールアルキル、アリールカルボニル、シアノ、シクロアルケニル、（シクロアルキル）アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、および（ＮＲeＲf）カルボニルから選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ2は、水素、アルケニル、アルキル、およびシクロアルキルから選択され、その中で、該アルケニル、該アルキル、および該シクロアルキルは、ハロで適宜置換されていてもよく；
Ｒ3は、アルケニル、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アルキル、アリールアルキル、カルボキシアルキル、シアノアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ハロアルコキシ、ハロアルキル、（ヘテロサイクリル）アルキル、ヒドロキシアルキル、（ＮＲcＲd）アルキル、および（ＮＲeＲf）カルボニルアルキルから選択され；
Ｒ4は、フェニル、並びに、窒素、酸素、および硫黄から選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な５または６員環から選択され；その中で、該環の各々は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルファニル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ4が置換された６員環である場合、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならず；
Ｒ5は、アルキルカルボニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクリルアルキル、ヘテロサイクリルアルキルカルボニル、ヘテロサイクリルカルボニル、および（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該アリール；該アリールアルキル、該アリールアルキルカルボニル、および該アリールカルボニルのアリール部分；該ヘテロサイクリル；並びに該ヘテロサイクリルアルキルおよび該ヘテロサイクリルアルキルカルボニルのヘテロサイクリル部分は、各々、１〜６個のＲ7基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ5がヘテロサイクリルである場合、該ヘテロサイクリルは、
【化２】
2011521911.tif 000004
以外であり；
Ｒ7は各々独立して、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シアノアルキル、シクロアルキル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロサイクリル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ，−ＮＲcＲd、（ＮＲcＲd）アルキル、（ＮＲcＲd）アルコキシ、（ＮＲeＲf）カルボニル、および（ＮＲeＲf）スルホニルから選択され；あるいは
２つの隣接Ｒ7基は、それらに結合する炭素原子と一緒になって、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１つまたは２つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な４〜７員環を形成し、その中で、該環は、アルコキシ、アルキル、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの基で適宜置換されていてもよく；
ＲaおよびＲbは独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルアルキルから選択されるか；あるいは、ＲaおよびＲbは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、４〜７員単環式ヘテロ環を形成し；
ＲcおよびＲdは独立して、水素、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリールアルキル、およびハロアルキルから選択され；
ＲeおよびＲfは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヘテロサイクリルから選択され；その中で、該アリール、該アリールアルキルのアリール部分、および該ヘテロサイクリルは、アルコキシ、アルキル、およびハロから独立して選択される１つまたは２つの置換基で適宜置換されていてもよく；並びに
ＲgおよびＲhは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルから選択されるか；あるいは、ＲgおよびＲhは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、単環式ヘテロ環を形成し、その中で、該単環式ヘテロ環は、フェニル環に適宜縮合して、二環式構造を形成してもよく；該単環式ヘテロ環および該二環式構造は、アルコキシ、アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよい］
の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１０】
第１の態様の第１の実施形態において、本開示は、Ｒ1が−ＮＨＳＯ2Ｒ6である、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１１】
第１の態様の第２の実施形態において、本開示は、
ｍが、１または２であり；
Ｒ1が−ＮＨＳＯ2Ｒ6であり；その中で、Ｒ6は、アルキル、アリール、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、および−ＮＲaＲbから選択され、該アルキル、該シクロアルキル、および該（シクロアルキル）アルキルのシクロアルキル部分は、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、アリールアルキル、アリールカルボニル、シアノ、シクロアルケニル、（シクロアルキル）アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、および（ＮＲeＲf）カルボニルから選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ2が、アルケニル、アルキル、およびシクロアルキルから選択され、その中で、該アルケニル、該アルキル、および該シクロアルキルは、ハロで適宜置換されていてもよく；
Ｒ3が、アルケニルおよびアルキルから選択され；
Ｒ4が、フェニル、並びに、窒素、酸素、および硫黄から選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な５または６員環から選択され；その中で、該環の各々は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルファニル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ4が置換された６員環である場合、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならず；
Ｒ5が、アルキルカルボニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクリルアルキル、ヘテロサイクリルアルキルカルボニル、ヘテロサイクリルカルボニル、および（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該アリール；該アリールアルキル、該アリールアルキルカルボニル、および該アリールカルボニルのアリール部分；該ヘテロサイクリル；並びに該ヘテロサイクリルアルキルおよび該ヘテロサイクリルアルキルカルボニルのヘテロサイクリル部分は、各々、１〜６個のＲ7基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ5がヘテロサイクリルである場合、該ヘテロサイクリルは、
【化３】
2011521911.tif 000005
以外であり；
Ｒ7が各々独立して、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シアノアルキル、シクロアルキル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロサイクリル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ，−ＮＲcＲd、（ＮＲcＲd）アルキル、（ＮＲcＲd）アルコキシ、（ＮＲeＲf）カルボニル、および（ＮＲeＲf）スルホニルから選択され；あるいは
２つの隣接Ｒ7基が、それらに結合する炭素原子と一緒になって、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１つまたは２つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な４〜７員環を形成し、その中で、該環は、アルコキシ、アルキル、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの基で適宜置換されていてもよく；
ＲaおよびＲbが独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルアルキルから選択されるか；あるいは、ＲaおよびＲbが、それらに結合する窒素原子と一緒になって、４〜７員単環式ヘテロ環を形成し；
ＲcおよびＲdが独立して、水素、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリールアルキル、およびハロアルキルから選択され；
ＲeおよびＲfが独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヘテロサイクリルから選択され；その中で、該アリール、該アリールアルキルのアリール部分、および該ヘテロサイクリルは、アルコキシ、アルキル、およびハロから独立して選択される１つまたは２つの置換基で適宜置換されていてもよく；並びに
ＲgおよびＲhが独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルから選択されるか；あるいは、ＲgおよびＲhが、それらに結合する窒素原子と一緒になって、単環式ヘテロ環を形成し、その中で、該単環式ヘテロ環は、フェニル環に適宜縮合して、二環式構造を形成してもよく；該単環式ヘテロ環および該二環式構造は、アルコキシ、アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよい、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１２】
第１の態様の第３の実施形態において、本開示は、
ｍが、１または２であり；
Ｒ1が−ＮＨＳＯ2Ｒ6であり；その中で、Ｒ6は無置換シクロアルキルであり；
Ｒ2が、アルケニル、アルキル、およびシクロアルキルから選択され、その中で、該アルケニル、該アルキル、および該シクロアルキルは、ハロで適宜置換されていてもよく；
Ｒ3が、アルケニルおよびアルキルから選択され；
Ｒ4が、フェニル、並びに、窒素、酸素、および硫黄から選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な５または６員環から選択され；その中で、該環の各々は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルファニル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ4が置換された６員環である場合、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならず；
Ｒ5が、アルキルカルボニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクリルアルキル、ヘテロサイクリルアルキルカルボニル、ヘテロサイクリルカルボニル、および（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該アリール；該アリールアルキル、該アリールアルキルカルボニル、および該アリールカルボニルのアリール部分；該ヘテロサイクリル；並びに該ヘテロサイクリルアルキルおよび該ヘテロサイクリルアルキルカルボニルのヘテロサイクリル部分は、各々、１〜６個のＲ7基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ5がヘテロサイクリルである場合、該ヘテロサイクリルは、
【化４】
2011521911.tif 000006
以外であり；
Ｒ7が各々独立して、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シアノアルキル、シクロアルキル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロサイクリル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ，−ＮＲcＲd、（ＮＲcＲd）アルキル、（ＮＲcＲd）アルコキシ、（ＮＲeＲf）カルボニル、および（ＮＲeＲf）スルホニルから選択され；あるいは
２つの隣接Ｒ7基が、それらに結合する炭素原子と一緒になって、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１つまたは２つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な４〜７員環を形成し、その中で、該環は、アルコキシ、アルキル、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの基で適宜置換されていてもよく；
ＲaおよびＲbが独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルアルキルから選択されるか；あるいは、ＲaおよびＲbが、それらに結合する窒素原子と一緒になって、４〜７員単環式ヘテロ環を形成し；
ＲcおよびＲdが独立して、水素、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリールアルキル、およびハロアルキルから選択され；
ＲeおよびＲfが独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヘテロサイクリルから選択され；その中で、該アリール、該アリールアルキルのアリール部分、および該ヘテロサイクリルは、アルコキシ、アルキル、およびハロから独立して選択される１つまたは２つの置換基で適宜置換されていてもよく；並びに
ＲgおよびＲhが独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルから選択されるか；あるいは、ＲgおよびＲhが、それらに結合する窒素原子と一緒になって、単環式ヘテロ環を形成し、その中で、該単環式ヘテロ環は、フェニル環に適宜縮合して、二環式構造を形成してもよく；該単環式ヘテロ環および該二環式構造は、アルコキシ、アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよい、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１３】
第１の態様の第４の実施形態において、本開示は、
ｍが１であり；
Ｒ1が−ＮＨＳＯ2Ｒ6であり；その中で、Ｒ6は無置換シクロアルキルであり；
Ｒ2がアルケニルであり；
Ｒ3がアルキルであり；
Ｒ4が、フェニル、並びに、窒素、酸素、および硫黄から選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な５または６員環から選択され；その中で、該環の各々は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ4が置換された６員環である場合、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならず；
Ｒ5が、ヘテロサイクリルおよび（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該ヘテロサイクリルは、１〜６個のＲ6基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ5は、
【化５】
2011521911.tif 000007
以外であり；
Ｒ6が各々独立して、アルコキシ、アリール、およびヘテロサイクリルから選択され；
ＲcおよびＲdが独立して、水素、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、およびアリールアルキルから選択され；
ＲeおよびＲfが独立して、水素、アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；並びに
ＲgおよびＲhが、それらに結合する窒素原子と一緒になって、フェニル環に縮合した単環式ヘテロ環を形成して、二環式構造を形成し；その中で、該二環式構造は、ハロ基で置換されている、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１４】
第１の態様の第５の実施形態において、本開示は、
ｍが１であり；
Ｒ1が−ＮＨＳＯ2Ｒ6であり；その中で、Ｒ6は無置換シクロアルキルであり；
Ｒ2がアルケニルであり；
Ｒ3がアルキルであり；
Ｒ4が、１つの窒素原子を含む６員不飽和環であり、その中で、該環は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位でなければならず；
Ｒ5が、ヘテロサイクリルおよび（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該ヘテロサイクリルは、１〜６個のＲ6基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ5は、
【化６】
2011521911.tif 000008
以外であり；
Ｒ6が各々独立して、アルコキシ、アリール、およびヘテロサイクリルから選択され；
ＲcおよびＲdが独立して、水素、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、およびアリールアルキルから選択され；
ＲeおよびＲfが独立して、水素、アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；並びに
ＲgおよびＲhが、それらに結合する窒素原子と一緒になって、フェニル環に縮合した単環式ヘテロ環を形成して、二環式構造を形成し；その中で、該二環式構造は、ハロ基で置換されている、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１５】
第１の態様の第６の実施形態において、本開示は、
ｍが１であり；
Ｒ1が−ＮＨＳＯ2Ｒ6であり；その中で、Ｒ6は無置換シクロアルキルであり；
Ｒ2がアルケニルであり；
Ｒ3がアルキルであり；
Ｒ4が、１つの窒素原子および１つの硫黄原子を含む５員不飽和環であり、その中で、該環は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ5が、ヘテロサイクリルおよび（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該ヘテロサイクリルは、１〜６個のＲ6基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ5は、
【化７】
2011521911.tif 000009
以外であり；
Ｒ6が各々独立して、アルコキシ、アリール、およびヘテロサイクリルから選択され；
ＲcおよびＲdが独立して、水素、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、およびアリールアルキルから選択され；
ＲeおよびＲfが独立して、水素、アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；並びに
ＲgおよびＲhが、それらに結合する窒素原子と一緒になって、フェニル環に縮合した単環式ヘテロ環を形成して、二環式構造を形成し；その中で、該二環式構造は、ハロ基で置換されている、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１６】
第２の態様において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、並びに医薬的に許容される担体を含む組成物を提供する。第２の態様の第１の実施形態において、該組成物は、抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物をさらに含む。第２の態様の第２の実施形態において、少なくとも１つの該別の化合物は、インターフェロンまたはリバビリンである。第２の態様の第３の実施形態において、該インターフェロンは、インターフェロンα２Ｂ、ペグ化インターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα２Ａ、およびリンパ芽球様インターフェロンτから選択される。
【００１７】
第２の態様の第４の実施形態において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、医薬的に許容される担体、並びに抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物を含む組成物を提供し；その中で、少なくとも１つの該別の化合物は、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン１２、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を亢進する化合物、干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、イミキモド、リバビリン、イノシン ５'−一リン酸脱水素酵素阻害剤、アマンタジン、およびリマンタジンから選択される。
【００１８】
第２の態様の第５の実施形態において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、医薬的に許容される担体、並びに抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物を含む組成物を提供し；その中で、少なくとも１つの該別の化合物は、ＨＣＶメタロプロテアーゼ、ＨＣＶセリンプロテアーゼ、ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ ＮＳ４Ｂタンパク質、ＨＣＶエントリー、ＨＣＶアセンブリー、ＨＣＶイグレス、ＨＣＶ ＮＳ５Ａタンパク質、およびＩＭＰＤＨから選択される標的の機能を阻害して、ＨＣＶ感染症の治療に有効である。
【００１９】
第３の態様において、本開示は、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を患者に投与することを特徴とする、患者におけるＨＣＶ感染症の治療方法を提供する。第３の態様の第１の実施形態において、該方法は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩の、前、後、または同時に、抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物をさらに投与することを特徴とする。第３の態様の第２の実施形態において、少なくとも１つの該別の化合物は、インターフェロンまたはリバビリンである。第３の態様の第４の実施形態において、該インターフェロンは、インターフェロンα２Ｂ、ペグ化インターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα２Ａ、およびリンパ芽球様インターフェロンτから選択される。
【００２０】
第３の態様の第５の実施形態において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩の、前、後、または同時に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、並びに抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物を患者に投与することを特徴とする、患者におけるＨＣＶ感染症の治療方法を提供し、その中で、少なくとも１つの該別の化合物は、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン１２、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を亢進する化合物、干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、イミキモド、リバビリン、イノシン ５'−一リン酸脱水素酵素阻害剤、アマンタジン、およびリマンタジンから選択される。
【００２１】
第３の態様の第６の実施形態において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩の、前、後、または同時に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、並びに抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物を患者に投与することを特徴とする、患者におけるＨＣＶ感染症の治療方法を提供し、その中で、少なくとも１つの該別の化合物は、ＨＣＶメタロプロテアーゼ、ＨＣＶセリンプロテアーゼ、ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ ＮＳ４Ｂタンパク質、ＨＣＶエントリー、ＨＣＶアセンブリー、ＨＣＶイグレス、ＨＣＶ ＮＳ５Ａタンパク質、およびＩＭＰＤＨから選択される標的の機能を阻害して、ＨＣＶ感染症の治療に有効である。
【００２２】
第４の態様において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、抗ＨＣＶ活性を有する、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの別の化合物、並びに医薬的に許容される担体を含む組成物を提供する。第４の態様の第１の実施形態において、該組成物は、抗ＨＣＶ活性を有する３つまたは４つの別の化合物を含む。第４の態様の第２の実施形態において、該組成物は、抗ＨＣＶ活性を有する１つまたは２つの別の化合物を含む。
【００２３】
第５の態様において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩の、前、後、または同時に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、並びに、抗ＨＣＶ活性を有する、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの別の化合物を患者に投与することを特徴とする、患者におけるＨＣＶ感染症の治療方法を提供する。第１の態様の第１の実施形態において、該方法は、抗ＨＣＶ活性を有する３つまたは４つの別の化合物を投与することを特徴とする。第１の態様の第２の実施形態において、該方法は、抗ＨＣＶ活性を有する１つまたは２つの別の化合物を投与することを特徴とする。
【００２４】
本開示の他の態様には、本明細書に開示した実施形態の適当な組合せが含まれうる。
また他の態様および実施形態は、本明細書において提供する説明において見い出すことができる。
本明細書における本開示の説明は、化学結合の法則および原理と適合させて解釈するべきである。場合によっては、任意の所与の場所に置換基を配置するために水素原子を取り除くことが必要な場合がある。
【００２５】
本開示に包含される化合物は、医薬品として使用するために適切に安定的なものであることを理解すべきである。
分子における特定の位置でのいずれの置換基または可変記号(variable)の定義も、該分子における他の位置での定義から独立していることが意図される。
本明細書に引用される全ての特許、特許出願、および文献参照は、その全体が本明細書に引用される。不整合がある場合は、定義を含めた本開示を優先する。
【００２６】
本明細書で用いられる以下の用語は、指示された意味を有する：
本明細書で用いられる単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、特に断りがなければ、複数表示(plural reference)が含まれる。
特に断りがなければ、本開示のすべてのアリール、シクロアルキル、およびヘテロサイクリル基は、その各々の定義に記載したように置換されうる。例えば、アリールアルキル基のアリール部分は、用語「アリール」の定義に記載したように置換されうる。
【００２７】
いくつかの例において、いずれの特定の基における炭素原子の数は、該基の列挙の前に表示される。例えば、用語「Ｃ6アルキル」は、６つの炭素原子を含むアルキル基を示す。これらの記号表示が存在する場合、これらは本明細書に含まれるすべての他の定義に取って代わる。
本明細書で用いられる単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、特に断りがなければ、複数表示が含まれる。
【００２８】
「アルケニル」という用語は、本明細書で使用する場合、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を含有する２個から６個の炭素原子の直鎖または分岐鎖基を意味する。
「アルコキシ」という用語は、本明細書で使用する場合、酸素原子を介して親分子部分に結合しているアルキル基を意味する。
「アルコキシアルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のアルコキシ基で置換されているアルキル基を意味する。
【００２９】
「アルコキシカルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子部分に結合しているアルコキシ基を意味する。
本明細書で用いられる用語「アルコキシカルボニルアルキル」とは、１つ、２つ、または３つのアルコキシカルボニル基で置換されたアルキル基をいう。
本明細書で用いられる用語「アルキル」とは、１〜１０個の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素から誘導される基をいう。
【００３０】
本明細書で用いられる用語「アルキルカルボニル」とは、カルボニル基を通して親分子部分に結合したアルキル基をいう。
本明細書で用いられる用語「アルキルスルファニル」とは、硫黄原子を通して親分子部分に結合したアルキル基をいう。
【００３１】
「アリール」という用語は、本明細書で使用する場合、フェニル基、または環の１つもしくは両方がフェニル基である二環式縮合環構造を意味する。二環式縮合環構造は、４〜６員の芳香族または非芳香族炭素環に縮合されたフェニル基からなる。本開示のアリール基は、基中の任意の置換可能な炭素原子を介して親分子の部分に結合することができる。アリール基の代表例には、それだけに限らないが、インダニル、インデニル、ナフチル、フェニル、およびテトラヒドロナフチルが挙げられる。本開示のアリール基は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、カルボキシ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ニトロ、−ＮＲcＲd、（ＮＲcＲd）カルボニル、およびオキソから独立して選択される、１個、２個、３個、４個、または５個の置換基で適宜置換されていてもよい。
【００３２】
「アリールアルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のアリール基で置換されているアルキル基を意味する。
「アリールアルキルカルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子部分に結合したアリールアルキル基を意味する。
「アリールカルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子の部分に結合しているアリール基を意味する。
【００３３】
「カルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、−Ｃ（Ｏ）−を意味する。
「カルボキシ」という用語は、本明細書で使用する場合、−ＣＯ2Ｈを意味する。
「カルボキシアルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、１つ、２つ、または３つのカルボキシ基で置換されたアルキル基を意味する。
「シアノ」という用語は、本明細書で使用する場合、−ＣＮを意味する。
【００３４】
「シアノアルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のシアノ基で置換されているアルキル基を意味する。
「シクロアルケニル」という用語は、本明細書で使用する場合、３〜１４個の炭素原子と０個のヘテロ原子とを有する非芳香族で部分不飽和の単環式、二環式、または三環式環系を意味する。シクロアルケニル基の代表例には、それだけに限らないが、シクロヘキセニル、オクタヒドロナフタレニル、およびノルボルニレニルが挙げられる。
【００３５】
「シクロアルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、３〜１０個の炭素原子と０個のヘテロ原子とを有する飽和単環式または二環式炭化水素環構造を意味する。シクロアルキル基の代表例には、それだけに限らないが、シクロプロピル、シクロブチル、およびシクロペンチルが挙げられる。
「（シクロアルキル）アルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のシクロアルキル基で置換されているアルキル基を意味する。
【００３６】
「シクロアルキルオキシ」という用語は、本明細書で使用する場合、酸素原子を介して親分子の部分に結合しているシクロアルキル基を意味する。
「ハロ」および「ハロゲン」という用語は、本明細書で使用する場合、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩを意味する。
「ハロアルコキシ」という用語は、本明細書で使用する場合、酸素原子を介して親分子の部分に結合しているハロアルキル基を意味する。
「ハロアルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、１個、２個、３個、または４個のハロゲン原子で置換されているアルキル基を意味する。
【００３７】
「ヘテロサイクリル」という用語は、本明細書で使用する場合、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１個、２個、もしくは３個のヘテロ原子を含有する５員、６員、または７員環を意味する。５員環は、０から２個の二重結合を有し、６員および７員環は、０から３個の二重結合を有する。「ヘテロサイクリル」という用語にはまた、ヘテロサイクリル環が４〜６員の芳香族もしくは非芳香族炭素環に縮合している二環式基、または他の単環式ヘテロサイクリル基が含まれる。本開示のヘテロサイクリル基は、基中の炭素原子または窒素原子を介して親分子の部分に結合している場合がある。ヘテロサイクリル基の例には、それだけに限らないが、ベンゾチエニル、フリル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル、オキサゾリル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピロロピリジニル、ピロリル、チアゾリル、チエニル、およびチオモルホリニルが挙げられる。本開示のヘテロサイクリル基は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、カルボキシ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ニトロ、−ＮＲcＲd、（ＮＲcＲd）カルボニル、およびオキソから独立して選択される、１個、２個、３個、４個、または５個の置換基で適宜置換されていてもよい。
【００３８】
用語「ヘテロサイクリルアルキル」とは、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のヘテロサイクリル基で置換されているアルキル基をいう。
用語「ヘテロサイクリルアルキルカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子部分に結合したヘテロサイクリルアルキル基をいう。
【００３９】
用語「ヘテロサイクリルカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子部分に結合したヘテロサイクリル基をいう。
本明細書で用いられる用語「ヒドロキシ」とは、−ＯＨをいう。
本明細書で用いられる用語「ヒドロキシアルキル」とは、１つ、２つ、または３つのヒドロキシ基で置換されたアルキル基をいう。
本明細書で用いられる用語「ニトロ」とは、−ＮＯ2をいう。
【００４０】
本明細書で用いられる用語「−ＮＲaＲb」とは、窒素原子を通して親分子部分に結合した２つの基であるＲaおよびＲbをいう。ＲaおよびＲbは独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルアルキルから選択されるか；あるいはＲaおよびＲbは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、５または６員単環式ヘテロ環を形成する。
【００４１】
本明細書で用いられる用語「−ＮＲcＲd」とは、窒素原子を通して親分子部分に結合した２つの基であるＲcおよびＲdをいう。ＲcおよびＲdは独立して、水素、アルコキシカルボニル、アルキル、およびアルキルカルボニルから選択される。
本明細書で用いられる用語「（ＮＲcＲd）アルコキシ」とは、酸素原子を通して親分子部分に結合した（ＮＲcＲd）アルキル基をいう。
本明細書で用いられる用語「（ＮＲcＲd）アルキル」とは、１つ、２つ、または３つの−ＮＲcＲd基で置換されたアルキル基をいう。
【００４２】
本明細書で用いられる用語「（ＮＲcＲd）カルボニル」とは、カルボニル基を通して親分子部分に結合した−ＮＲcＲd基をいう。
本明細書で用いられる用語「−ＮＲeＲf」とは、窒素原子を通して親分子部分に結合した２つの基であるＲeおよびＲfをいう。ＲeおよびＲfは独立して、水素、アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択される。
本明細書で用いられる用語「（ＮＲeＲf）カルボニル」とは、カルボニル基を通して親分子部分に結合した−ＮＲeＲf基をいう。
【００４３】
本明細書で用いられる用語「（ＮＲeＲf）カルボニルアルキル」とは、アルキル基を通して親分子部分に結合した（ＮＲeＲf）カルボニル基をいう。
本明細書で用いられる用語「（ＮＲeＲf）スルホニル」とは、スルホニル基を通して親分子部分に結合した−ＮＲeＲf基をいう。
本明細書で用いられる用語「（ＮＲgＲh）カルボニル」とは、カルボニル基を通して親分子部分に結合した−ＮＲgＲh基をいう。
【００４４】
本明細書で用いられる用語「−ＮＲgＲh」とは、窒素原子を通して親分子部分に結合した２つの基であるＲgおよびＲhをいう。ＲgおよびＲhは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルから選択されるか；あるいは、ＲgおよびＲhは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、単環式ヘテロ環を形成し、その中で、該単環式ヘテロ環は、フェニル環に適宜縮合して、二環式構造を形成してもよく；該単環式ヘテロ環および該二環式構造は、アルコキシ、アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよい。
【００４５】
本明細書で用いられる用語「オキソ」とは、＝Ｏをいう。
「スルホニル」という用語は、本明細書で使用する場合、−ＳＯ2−を意味する。
「プロドラッグ」という用語は、本明細書で使用する場合、血液中の加水分解によって親化合物にインビボで急速に変換される化合物を表す。本開示のプロドラッグには、親分子上のヒドロキシ基のエステル、親分子上のカルボキシ基のエステル、および親分子上のアミンのアミドが挙げられる。
【００４６】
本開示の化合物は、医薬的に許容される塩として存在することができる。「医薬的に許容される塩」という用語は、本明細書で使用する場合、妥当な医学的判断の範囲内において、妥当な便益／リスク比に見合った過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なしに患者の組織と接触して使用するのに適切であり、それらの使用目的のために効果的である、水溶性もしくは油溶性もしくは分散性の本開示の化合物の塩または双性イオン形態を表す。塩は、化合物の最終単離および精製の間に、または別々に適切な塩基官能基を適切な酸と反応させることによって調製することができる。代表的な酸付加塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩；ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メシチレンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフチレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、リン酸塩、グルタミン酸塩、重炭酸塩、パラ−トルエンスルホン酸塩、およびウンデカン酸塩が挙げられる。医薬的に許容される付加塩を形成するために用いることができる酸の例には、無機酸（塩酸、臭化水素酸、硫酸、およびリン酸など）、ならびに有機酸（シュウ酸、マレイン酸、コハク酸、およびクエン酸など）が挙げられる。
【００４７】
塩基付加塩は、酸性基を、適切な塩基（金属カチオンの水酸化物、炭酸塩、または重炭酸塩など）と、あるいはアンモニアまたは有機第一級、第二級、もしくは第三級アミンと反応させることによって、化合物の最終単離および精製の間に調製することができる。医薬的に許容される塩のカチオンには、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、およびアルミニウム、ならびに無毒性の四級アミンカチオン（アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジエチルアミン、エチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、ジシクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルフェネチルアミン、およびＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンなど）が挙げられる。塩基付加塩の形成に有用な他の代表的な有機アミンには、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリジン、およびピペラジンが挙げられる。
【００４８】
本明細書で使用する場合、「抗ＨＣＶ作用」という用語は、化合物がＨＣＶウイルスの治療に効果的であることを意味する。
「本開示の化合物」という用語、および同等の表現は、式（Ｉ）の化合物、ならびにその医薬的に許容されるエナンチオマー、ジアステレオマー、および塩を包含することを意味する。同様に、中間体への言及は、文脈上許容される場合、それらの塩を包含することを意味する。
「患者」という用語は、ヒトおよび他の哺乳動物の両方を含む。
【００４９】
「医薬組成物」という用語は、投与方法および剤形の種類によって、少なくとも１種のさらなる医薬担体、すなわち、希釈剤、保存料、充填剤、流動性調整剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、香味剤、香料剤、抗菌剤、抗真菌剤、滑沢剤および予製剤などの補助剤、賦形剤またはビヒクルと組み合わせた本開示の化合物を含む組成物を意味する。例えばRemington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA (1999)において一覧表示された成分を使用することができる。
【００５０】
「医薬的に許容される」という言回しは本明細書において、過度の毒性、刺激作用、アレルギー反応、または妥当な危険性／受益性割合に比例した他の問題もしくは合併症を伴わずに、患者の組織と接触する使用に適した、正しい医療判断の範囲内である化合物、材料、組成物、および／または剤形を意味するために用いられる。
【００５１】
「治療有効量」という用語は、有意義な患者利益、例えば、ウイルス量の持続的減少を示すのに十分なそれぞれの活性物質の総量を意味する。単独で投与される個々の活性成分に適用する場合、この用語はその成分単独を意味する。組合せに適用する場合は、この用語は、組合せであれ、連続的であれ、または同時投与であれ、治療効果をもたらす活性成分の組み合わせた量を意味する。
【００５２】
「治療」および「治療する」という用語は、（ｉ）疾患、障害および／または状態にかかりやすい場合があるが、まだその診断を受けていない患者において、疾患、障害または状態が起こることを防止し；（ｉｉ）疾患、障害または状態を阻害、すなわち、その進行を止め；ならびに／あるいは（ｉｉｉ）疾患、障害または状態を軽減、すなわち、疾患、障害および／または状態の退行をもたらすことを意味する。
【００５３】
本開示の化合物の命名に使用する場合、記号Ｐ１’、Ｐ１、Ｐ２*、Ｐ３およびＰ４は、本明細書で使用する場合、天然ペプチド切断基質の結合に対する、結合しているプロテアーゼ阻害剤のアミノ酸残基の相対的位置を表示する。天然基質において、切断はＰ１とＰ１’との間で起こり、ここでノンプライム位置は、ペプチド天然切断部位のＣ末端から始まってＮ末端に向けて伸びているアミノ酸を表し；一方、プライム位置は、指定切断部位のＮ末端から始まり、Ｃ末端に向かって伸びる。例えば、Ｐ１’は、切断部位のＣ末端の右側末端から離れた第１の位置（すなわち、Ｎ末端第１位置）を示し；一方、Ｐ１はＣ末端切断部位の左側から番号付けを始め、Ｐ２はＣ末端からの第２の位置などである）。（Berger A. & Schechter I., Transactions of the Royal Society London series (1970), B257, 249-264を参照されたい］。
【００５４】
下図は、本開示の化合物についての記号表示を示す。
【化８】
2011521911.tif 000010
【００５５】
不斉中心は、本開示の化合物において存在する。例えば、化合物は、式
【化９】
2011521911.tif 000011
のＰ１シクロプロピル要素を含むことができ、式中、Ｃ1およびＣ2はそれぞれ、シクロプロピル環の１位および２位における不斉炭素原子を表す。
【化１０】
2011521911.tif 000012
【００５６】
本開示は、ＨＣＶプロテアーゼを阻害する能力を有する全ての立体化学的形態、またはその混合物を包含することを理解すべきである。
本開示の特定の化合物はまた、分離可能である場合がある異なる安定的な高次構造形態で存在することができる。非対称の単結合の周りの束縛回転に起因するねじれによる不斉は、例えば立体障害または環ひずみによって、異なる配座異性体の分離を可能にすることができる。本開示には、これらの化合物のそれぞれの配座異性体およびこれらの混合物が挙げられる。
【００５７】
本開示の特定の化合物は、双性イオン形態で存在する場合があり、本開示には、これらの化合物のそれぞれの双性イオン形態およびこれらの混合物が含まれる。
【００５８】
治療に使用するために、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、ならびにその医薬的に許容される塩を、原化学物質(raw chemical)として投与することが可能である場合、活性成分を医薬組成物として提示することが可能である。したがって、本開示は、治療有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩と、１種もしくは複数の医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物をさらに提供する。式（Ｉ）の化合物およびその医薬的に許容される塩は、上記の通りである。担体（複数可）、希釈剤（複数可）、または賦形剤（複数可）は、製剤の他の成分と適合性であり、そのレシピエントに対して有害ではないという意味で許容できるものでなければならない。本開示の他の態様によって、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を、１種もしくは複数の医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と混合する工程を含む、医薬製剤を調製するための方法もまた提供する。
【００５９】
医薬製剤は、単位用量当たり所定の量の活性成分を含有する単位用量形態で存在することができる。１日当たり約０．０１〜約２５０ミリグラム／キログラム（「ｍｇ／ｋｇ」）体重、好ましくは１日当たり約０．０５〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重の本開示の化合物の投与量レベルが、ＨＣＶ媒介疾患の予防および治療のための単独療法において典型的である。典型的には、本開示の医薬組成物は、１日当たり約１〜約５回、あるいは持続注入として投与される。このような投与は、長期治療または救急治療として使用することができる。単一の剤形を得るため担体物質と合わせることのできる活性成分の量は、治療される状態、状態の重篤度、投与回数、投与経路、用いる化合物の排せつ率、治療期間、ならびに患者の年齢、性別、体重、および状態によって変化する。好ましい単位製剤は、本明細書において上記のように、活性成分の１日用量もしくは部分用量、またはその適切な画分を含有する製剤である。一般に治療は、実質的に化合物の適量未満の少量の投与量で開始する。その後、この条件の下で最適な効果が得られるまで少しずつ投与量を増加させる。一般に化合物は、有害または害毒を及ぼす副作用をもたらさずに抗ウイルス的に効果的な結果を生じさせるであろう濃度レベルで投与することが最も望ましい。
【００６０】
本開示の組成物が、本開示の化合物と、１種または複数のさらなる治療剤または予防薬との組合せを含む場合、化合物およびさらなる薬剤の両方は通常、単独療法において通常投与される投与量の約１０〜１５０％、さらに好ましくは約１０〜８０％の投与量レベルで存在する。
【００６１】
医薬製剤は、任意の適切な経路による投与、例えば、経口（口腔または舌下を含めた）、直腸、経鼻、局所（口腔、舌下、または経皮を含めた）、経腟、あるいは非経口（皮下、皮内、筋内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、くも膜下腔内、病巣内、静脈内、または皮内注射もしくは注入を含めた）経路による投与に適合することができる。このような製剤は、薬学の技術分野において公知の任意の方法によって、例えば活性成分を担体（複数可）または賦形剤（複数可）と結合することによって調製することができる。
【００６２】
経口投与に適合された医薬製剤は、カプセル剤または錠剤；散剤または顆粒剤；水性もしくは非水性液体中の溶液剤または懸濁剤；食用の泡またはホイップ；あるいは水中油型液体乳剤または油中水型乳剤などの個別単位として提示することができる。
【００６３】
例えば、錠剤またはカプセル剤の形態における経口投与のために、活性薬物成分は、エタノール、グリセロール、水などの経口で無毒性の医薬的に許容される不活性担体と合わせることができる。散剤は、化合物を適切な微細なサイズに微粉砕し、食用炭水化物（例えば、デンプンまたはマンニトールなど）などの同様に微粉砕した医薬担体と混合することによって調製される。香味剤、保存剤、分散剤、および着色剤もまた存在することができる。
【００６４】
カプセル剤は、上記のように粉末混合物を調製し、ゼラチンの形成被覆に充填することによって作製される。コロイダルシリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、または固体ポリエチレングリコールなどの流動促進剤および滑沢剤を、充填操作の前に粉末混合物に加えることができる。カプセル剤を摂取する場合に薬物の有効性を向上させるために、寒天、炭酸カルシウム、または炭酸ナトリウムなどの崩壊剤または可溶化剤をまた加えることができる。
【００６５】
さらに、所望であるかまたは必要な場合、適切な結合剤、滑沢剤、崩壊剤、および着色剤もまた、混合物中に組み込むことができる。適切な結合剤には、デンプン、ゼラチン、天然糖（グルコースまたはβラクトースなど）、コーン甘味料、天然および合成のガム（アカシア、トラガカントまたはアルギン酸ナトリウムなど）、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコールなどが挙げられる。これらの剤形において使用される滑沢剤には、オレイン酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。崩壊剤には、これらだけに限らないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが挙げられる。錠剤は、例えば、粉末混合物を調製し、顆粒化またはスラッギングし、滑沢剤および崩壊剤を加え、錠剤に圧入することによって製剤される。粉末混合物は、適切に粉砕した化合物を、上記のような希釈剤または基剤と、および所望により、結合剤（カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、またはポリビニルピロリドンなど）、溶解遅延剤（パラフィンなど）、再吸収促進剤（第四級塩など）および／または吸収剤（ベントナイト、カオリン、またはリン酸二カルシウムなど）と混合することによって調製される。粉末混合物は、結合剤（シロップ、デンプン糊、アラビアゴム粘液、またはセルロース系材料もしくは高分子材料の溶液など）で湿らせ、強制的にスクリーンを通過させるによって顆粒化することができる。顆粒化に代わるものとして、粉末混合物を錠剤成形機にかけることができ、その結果は、顆粒剤へと割れる不完全に形成されたスラグとなる。顆粒剤は、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルク、または鉱油を添加することによって潤滑にされ、錠剤成形型に粘着することを防止することができる。次いで、潤滑混合物を錠剤に圧縮する。本開示の化合物はまた、易流動性の不活性担体と合わせ、顆粒化またはスラッギング工程を経ることなく直接錠剤に圧縮することができる。セラックのシーリングコートからなる透明または不透明な保護コーティング、糖または高分子材料のコーティング、およびワックスの光沢コーティングを提供することができる。これらのコーティングに染料を加えて、異なる単位用量を識別することができる。
【００６６】
溶液剤、シロップ剤、およびエリキシル剤などの経口流体は、一定量が所定の量の化合物を含有するように、投与単位形態で調製することができる。シロップ剤は、化合物を適切に香味付けした水溶液に溶解することによって調製することができ、一方エリキシル剤は、無毒性ビヒクルの使用によって調製される。可溶化剤および乳化剤（エトキシ化イソステアリルアルコールおよびポリオキシエチレンソルビトールエーテルなど）、保存剤、香味添加剤（ハッカ油または天然甘味料など）、またはサッカリンもしくは他の人工甘味料などもまた加えることができる。
【００６７】
適切な場合には、経口投与のための投与単位製剤は、マイクロカプセル化することができる。製剤はまた、例えば、粒子材料をポリマー、ワックス、または同種のものでコーティングするか、それらに包埋することによって、放出を延長または維持するように調製することができる。
【００６８】
式（Ｉ）の化合物、およびその医薬的に許容される塩はまた、小さな単膜小胞、大きな単膜小胞、および多重膜小胞などのリポソームデリバリーシステムの形態で投与することができる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンなどの種々のリン脂質から形成することができる。
【００６９】
式（Ｉ）の化合物およびその医薬的に許容される塩はまた、化合物分子が結合する個々の担体としてモノクローナル抗体を使用することによって送達することができる。化合物はまた、標的可能な薬物担体として可溶性ポリマーに結合することができる。このようなポリマーには、パリトイル残基(palitoyl residue)で置換されているポリビニルピロリドン、ピラン共重合体、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミドフェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルタミドフェノール、またはポリエチレンオキシドポリリシンを含むことができる。さらに、化合物は、薬物の制御放出を実現するのに有用な生分解性ポリマーの類（例えば、ポリ乳酸、ポリεカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマー）に結合することができる。
【００７０】
経皮的投与に適合された医薬製剤は、レシピエントの表皮と長時間密着し続けることを目的とする個別のパッチとして提示することができる。例えば、活性成分は、Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986)において概ね記載されているようにイオン泳動によってパッチから送達することができる。
【００７１】
局所投与に適合された医薬製剤は、軟膏剤、クリーム剤、懸濁剤、ローション剤、散剤、溶液剤、ペースト剤、ゲル剤、スプレー剤、エアゾール剤、または油剤として製剤することができる。
【００７２】
眼または他の外部組織、例えば口および皮膚の治療のために、製剤は、好ましくは局所軟膏剤またはクリーム剤として施用される。軟膏剤中に配合される場合、活性成分は、パラフィン軟膏基剤または水混和性軟膏基剤と共に用いることができる。あるいは、活性成分は、水中油型クリーム基剤または油中水型基剤と共にクリーム剤中に配合することができる。
【００７３】
眼への局所投与に適合された医薬製剤には、活性成分が適切な担体、特に水性溶媒に溶解または懸濁している点眼薬が挙げられる。
口内の局所投与に適合された医薬製剤には、ロゼンジ、香錠、および口内洗浄剤が挙げられる。
直腸投与に適合された医薬製剤は、坐薬としてまたは浣腸として提示することができる。
【００７４】
担体が固形物である経鼻投与に適合された医薬製剤には、鼻から吸い込む方法、すなわち、鼻の近くに保持した粉末容器から鼻腔を通した急速な吸入によって投与される、例えば２０〜５００ミクロンの範囲の粒径を有する粗粉末が挙げられる。鼻用スプレーまたは点鼻薬として投与するための、担体が液体である適切な製剤には、活性成分の水溶液または油溶液が挙げられる。
【００７５】
吸入による投与に適合された医薬製剤には、様々なタイプの定量加圧式エアロゾル、ネブライザー、または注入器によって生成することができる、微粒子の塵または霧が挙げられる。
膣投与に適合された医薬製剤は、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤、またはスプレー製剤として提示することができる。
【００７６】
非経口投与に適合された医薬製剤には、抗酸化剤、バッファー、制菌剤、ならびに製剤を対象とするレシピエントの血液と等張にする溶質；ならびに懸濁化剤および増粘剤を含む場合がある水性および非水性の無菌懸濁剤を含有してもよい、水性および非水性の滅菌注射液が挙げられる。製剤は、単位用量または複数用量の容器、例えば密封したアンプルおよびバイアル中に存在してもよく、注射のため使用直前に、無菌の液体担体、例えば水の添加だけを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）した状態で保存してもよい。無菌散剤、顆粒剤、および錠剤から即時調合注射液および懸濁剤を調製することができる。
【００７７】
特に上述した成分に加えて、製剤には、問題の製剤のタイプを考慮して当技術分野で常用の他の薬剤を含むことができ、例えば経口投与に適した薬剤には、香味剤が含まれる場合があることを理解すべきである。
【００７８】
下記の表１では、本開示の化合物と共に投与することができる化合物のいくつかの実例を一覧表示する。本開示の化合物は、一緒にもしくは別々に、または化合物を組成物に合わせることによって、併用療法において他の抗ＨＣＶ作用化合物と共に投与することができる。
表１
【表１】
2011521911.tif 000013
2011521911.tif 000014
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【００７９】
本開示の化合物はまた、実験用試薬として使用することができる。化合物は、ＨＣＶ疾患の機構の知識をさらに向上させるための、ウイルス複製アッセイの設計、動物アッセイ系の確認および構造生物学研究のための研究道具の提供において有益な場合がある。さらに、本開示の化合物は、例えば拮抗阻害によって、他の抗ウイルス性化合物の結合部位の確立または決定において有用である。
【００８０】
本開示の化合物はまた、物質のウイルス汚染を処理または予防し、したがって実験室、またはこのような物質（例えば、血液、組織、手術器具および手術着、実験器具および実験着、ならびに採血もしくは輸血の装置および材料）と接触する医療関係者もしくは患者のウイルス感染の危険性を減少させるために使用することができる。
本開示は、合成過程によって、あるいは人体もしくは動物体（インビボ）内で生じる過程またはインビトロで生じる過程を含めた代謝過程によって調製される場合、式（Ｉ）を有する化合物を包含することを意図する。
【００８１】
本願で用いられる略語、例えば、特に以下の実例となる反応式および実施例に用いられるものは、当業者によく知られている。用いられるいくつかの略語は以下の通りである：
ＯＡｃ：アセテート；
ｔ−Ｂｕ：ｔｅｒｔ−ブチル；
ＴＢＭＤＳＣｌ：ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド；
１，２−ＤＭＥ：１，２−ジメトキシエタン；
ＤＭＡ：Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド；
ｎ−ＢｕＬｉまたはｎ−ｂｕＬｉ：ｎ−ブチルリチウム；
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン；
Ｅｔ3Ｎ：トリエチルアミン；
ＴＢＭＥまたはＭＴＢＥ：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル；
ｒｔまたはＲＴ：室温または保持時間（文脈によって決まる）；
ＢｏｃまたはＢＯＣ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル；
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；
ＥｔＯＨ：エタノール；
ＭｅＣＮ：アセトニトリル；
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；
ｈ：時間；
ｄ：日；
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル；
ＣＤＩ：１，１'−カルボニルジイミダゾール；
ＤＢＵ：１，８−ジアザビシクロ［５.４.０］ウンデカ−７−エン；
ＤＣＭ：ジクロロメタン；
Ｅｔ2Ｏ：ジエチルエーテル；
ＨＡＴＵ：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチルウロニウムホスフェート；
ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン；
ＤＣＥ：１，２−ジクロロエタン；および
ＤＩＥＡまたはＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン。
【００８２】
本開示の化合物の合成に有用な出発物質は当業者には公知であり、容易に製造することができ、または市販されている。
【００８３】
以下に記載する下記の方法は、例示の目的のために提供するものであり、特許請求の範囲を制限することを意図しない。従来の保護基を使用して官能基を保護し、次いで保護基を除去して本開示の化合物を提供するようにこのような化合物を調製することが必要である場合があることが理解されるであろう。本開示による保護基の使用に関する詳細は、当業者には公知である。
【００８４】
式（Ｉ）の化合物の構築において、上記に概説され、以下に詳細が記載される一般的な方法の一つを用いて、Ｐ１｀末端は分子の中に組み込まれる。いくつかの例において、Ｐ１｀成分、すなわちシクロアルキルまたはアルキルスルホンアミドは、市販品として入手可能であり、あるいは対応するアルキルまたはシクロアルキルスルホニルクロリドから、該スルホニルクロリドをアンモニアで処理することによって製造されうる。あるいは、これらのスルホンアミド類は、以下に概説する一般的な方法を用いて合成されうる。市販品として入手可能な３−クロロプロピルスルホニルクロリド（１）は、例えばｔｅｒｔ−ブチルアミンで処理することによって、適当に保護したスルホンアミドに変換される。得られたスルホンアミド（２）は次いで、低温でＴＨＦのような溶媒中、ブチルリチウムのような塩基の２当量で処理することによって、対応するシクロアルキルスルホンアミドに変換される。生じたシクロアルキルスルホンアミドは、酸で処理することによって脱保護されて、目的の保護されていないシクロアルキルスルホンアミドを与えうる。
【化１１】
2011521911.tif 000021
【００８５】
置換シクロアルキルスルホンアミド類はまた、上記の手順を変更したものを用いて、式（Ｉ）の化合物に組み入れられうる。例えば、以下に示した中間体２を２当量の塩基、例えばブチルリチウムで処理してもよく、生じた反応混合物を求電子試薬、例えばヨウ化メチルで処理して、置換シクロアルキルスルホンアミド（３）を得てもよい。この中間体（３）をＮ末端で保護し、生じた化合物（４）を式（Ｉ）の化合物の製造における中間体として利用してもよい。
【化１２】
2011521911.tif 000022
【００８６】
式（Ｉ）の化合物を製造するのに用いられるＰ１｀中間体は、いくつかの場合において、スルファミド誘導体から誘導される。かかる場合において、該スルファミド中間体は、いくつかの合成経路によって、例えば、以下に概説される経路によって入手可能である。
【化１３】
2011521911.tif 000023
【００８７】
ＴＨＦのような溶媒中、−２０℃のような低温で維持しながら、水（例えば、１当量）をクロロスルホニルイソシアネート１（例えば、１当量）に加えることによって、スルファモイルクロリド（２）をインサイチューで製造してもよい。生じた溶液を次いで０℃に加温する。この溶液に、塩基、例えば無水トリエチルアミン（例えば、１当量）を加え、続いてアミン（例えば、１当量）を加える。反応混合物を次いで室温に加温し、濾過し、該濾液を濃縮して、目的のスルファミド類（３）を得る。
【００８８】
該スルファミド類は、いくつかの方法によって、例えば、以下に示される反応式に規定される合成経路に従うことによって、式（Ｉ）の化合物に組み入れられる。カルボン酸Ｐ１成分（１）をＣＤＩのような活性化剤で処理する。セパレートフラスコ(separate flask)において、強塩基を上記のスルファミド溶液に加え、生じた反応混合物を数時間撹拌し、その後、この反応混合物を該活性化カルボン酸を入れたフラスコに加えて、アシルスルファミド誘導体（２）を得る。中間体様化合物２は、本明細書に記載した式（Ｉ）の化合物に変換されうる。
【化１４】
2011521911.tif 000024
【００８９】
式（Ｉ）の化合物を生成する際に利用されるＰ１成分は、いくつかの場合、市販品として入手可能であるが、そうでなければ本明細書に記載される方法を用いて合成され、続いて本明細書に記載される方法を用いて式（Ｉ）の化合物に変換される。置換Ｐ１シクロプロピルアミノ酸は、以下の反応式に概説する一般的な方法に従って合成されうる。
【００９０】
市販品として入手可能、または容易に合成されたイミン（１）を、塩基の存在下、１，４−ジハロブテン（２）で処理することによって、イミン（３）が提供される。次いで化合物３の酸加水分解によって、主要生成物として、カルボキシル基に対してシン(syn)のアリル置換基を有する化合物４が提供される。化合物４のアミン部分はＢｏｃ基を用いて保護されて、完全に保護されたアミノ酸５を与えうる。この中間体はラセミ体であり、化合物５のエステル部分がプロテアーゼによって開裂されて対応するカルボン酸を得る酵素的方法により、分割されうる。いずれの特定の理論にも拘束されず、エナンチオマーの一つがその鏡像体よりも著しく大きな速度でその反応を受け、中間体であるラセミ体の速度論的分割をもたらすという点で、この反応が選択的であると信じられている。本明細書で列挙された例において、式（Ｉ）の化合物に組み込むためのより好ましい立体異性体は、（１Ｒ，２Ｓ）立体化学を提供する化合物５ａである。酵素の存在下、このエナンチオマーはエステル開裂を受けず、そのためこのエナンチオマー５ａは反応混合物から回収される。しかしながら、（１Ｓ，２Ｒ）立体化学を提供する、より好ましくないエナンチオマー５ｂは、エステル開裂、すなわち、加水分解を受けて、遊離の酸６を提供する。この反応が完了すると、エステル５ａは、慣用の方法、例えば水抽出法またはクロマトグラフィーによって、酸生成物６から分離されうる。
【化１５】
2011521911.tif 000025
【００９１】
社内(in-house)で製造したコアのジペプチドアミンと、市販品として入手可能なＮ−アリールアミノ酸断片との伝統的なペプチドカップリングによって、いくつかのアミノアリール生成物を合成した。Ｎ−アリールアミノ酸断片が市販品として入手可能でなかった場合、それを合成した。これらのＮ−アリールアミノ酸断片への合成経路には、これらに限らないが、以下が含まれる：
（１）十分に求電子的な芳香族またはヘテロ芳香族種の、アミノ酸エステルによる求核芳香族置換、続いて該生成物の脱エステル化：
【化１６】
2011521911.tif 000026
（２）ハロゲン化アリールの結合またはハロゲン化ヘテロアリールの結合へのホスフィンリガンド媒介Ｐｄ（０）挿入を伴うブッフバルト・ハートウィッグ型反応、続いてアミノ酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルによる置換、続いて該生成物の脱エステル化（Shen, Q.; Shekhar, S;  Stambuli, J. P.;  Hartwig, J. F.  Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44, 1371-1375.）：
【化１７】
2011521911.tif 000027
（３）ＣｕＩ媒介工程によって、ハロゲン化アリールまたはハロゲン化ヘテロアリールと遊離アミノ酸を反応させて、該アリールアミノ酸を直接得ることによるウルマン様縮合（Ma, D.;  Zhang, Y.;  Yao, J.;  Wu, S.;  Tao, F.  J. Am. Chem. Soc.  1998, 120, 12459-12467.）：
【化１８】
2011521911.tif 000028
（４）遊離アミノ酸のジアニオンの、ハロゲン化アリールまたはハロゲン化ヘテロアリール（典型的にはフッ化物）への求核付加（Saitton, S.;  Kihlberg, J.;  Luthman, K.  Tetrahedron 2004, 60, 6113-6120に類似）：
【化１９】
2011521911.tif 000029
【００９２】
いくつかの場合において、Ｐ３小領域の末端で遊離アミノ基を有する十分に構築された(assembled)コアのトリペプチドを用いた、該アリール環の直接的な求核芳香族置換によって、アミノアリール最終生成物の入手が達成されうる：
【化２０】
2011521911.tif 000030
【００９３】
これらの反応は、該芳香環が、事実上、比較的穏和な条件下（すなわち、最小限の加熱が必要）で置換を生じさせるのに十分求電子的である場合に限られる。
【００９４】
ラセミ体の（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステルの製造：
【化２１】
2011521911.tif 000031
段階１：
グリシンエチルエステル塩酸塩（３０４ｇ、２.１６モル）をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（１.６Ｌ）に懸濁した。ベンズアルデヒド（２３１ｇ、２.１６モル）および無水硫酸ナトリウム（１５５ｇ、１.０９モル）を加え、氷水浴を用いて混合液を０℃に冷却した。トリエチルアミン（４５５ｍＬ、３.２６モル）を３０分かけて滴下して加え、混合液を室温で４８時間撹拌した。次いで反応を、氷冷水（１Ｌ）を加えることによってクエンチし、有機層を分離した。水相をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（０.５Ｌ）で抽出し、有機相を合わせて、飽和ＮａＨＣＯ3水（１Ｌ）および食塩水（１Ｌ）の混合液で洗浄した。有機物をＭｇＳＯ4で乾燥し、減圧濃縮して、濃黄色油として、Ｎ−ベンジルイミン生成物（３９２.４ｇ）を得て、それを次の段階に直接用いた。
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 1.32 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 4.24 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.41 (d, J = 1.1 Hz, 2H), 7.39-7.47 (m, 3H), 7.78-7.81 (m, 2H), 8.31 (s, 1H).
【００９５】
段階２：
リチウム ｔｅｒｔ−ブトキシド（８４.１ｇ、１.０５ｍｏｌ）の乾燥トルエン懸濁溶液（１.２Ｌ）に、グリシンエチルエステルのＮ−ベンジルイミン(N-benzyl imine of glycine ethyl ester)（１００ｇ、０.５２６ｍｏｌ）およびｔｒａｎｓ−１，４−ジブロモ−２−ブテン（１０７ｇ、０.５００ｍｏｌ）の乾燥トルエン混合溶液（０.６Ｌ）を６０分かけて滴下して加えた。添加の完了後、水（１Ｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ、１Ｌ）を加えることによって深赤色の混合液をクエンチした。水相を分離し、ＴＢＭＥ（１Ｌ）で２回抽出した。有機相を合わせて、ＨＣｌ（１.０Ｍ、１Ｌ）を加え、混合液を室温で２時間撹拌した。有機相を分離し、水（０.８Ｌ）で抽出した。次いで水相を合わせて、塩（７００ｇ）で飽和させ、ＴＢＭＥ（１Ｌ）を加え、混合液を０℃に冷却した。次いでＮａＯＨ（１０.０Ｍ）を滴下して加えることによって、撹拌混合液をｐＨ＝１４まで塩基性にし、有機層を分離し、水相をＴＢＭＥ（２×５００ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせて、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、１Ｌの容積に濃縮した。遊離アミンのこの溶液に、Ｂｏｃ2Ｏまたは二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１３１ｇ、０.６００ｍｏｌ）を加え、混合液を室温で４日間撹拌した。追加の二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（５０ｇ、０.２３ｍｏｌ）を反応に加え、混合液を３時間還流し、次いで終夜室温に冷却した。反応混合物をＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、減圧濃縮して、粗物質（８０ｇ）を得た。この残渣をフラッシュクロマトグラフィ（２.５ｋｇのＳｉＯ2、１％〜２％ ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2で溶離）で精製して、黄色油として、ラセミ体のＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル（５７ｇ、５３％）を得て、それを冷蔵庫に静置すると凝固した：
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 1.26 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.46 (s, 9H), 1.43-1.49 (m, 1H), 1.76-1.82 (br m, 1H), 2.14 (q, J = 8.6 Hz, 1H), 4.18 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 5.12 (dd J = 10.3, 1.7 Hz, 1H), 5.25 (br s, 1H), 5.29 (dd, J = 17.6, 1.7 Hz, 1H), 5.77 (ddd, J = 17.6, 10.3, 8.9 Hz, 1H);  MS m/z 254.16 (M-1).
【００９６】
Ｎ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステルの分割
【化２２】
2011521911.tif 000032
分割Ａ
３９℃に保持し、３００ｒｐｍで撹拌し、１２Ｌのジャケット付き反応器内に収容したリン酸ナトリウムバッファーの水溶液（０．１Ｍ、４．２５リットル（「Ｌ」）、ｐＨ８）に、５１１グラムのＡｃａｌａｓｅ２．４Ｌ（約４２５ｍＬ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｉｎｃ．）を加えた。混合物の温度が３９℃に到達したときに、水中の５０％ＮａＯＨを加えることによってｐＨを８．０に調節した。次いで、ラセミのＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル（８５ｇ）のＤＭＳＯ（８５０ｍＬ）溶液を、４０分に亘って加えた。次いで、反応温度を４０℃に２４．５時間保持し、その間に混合物のｐＨを、水中の５０％ＮａＯＨを使用して１．５時間および１９．５時間時点で８．０に調節した。２４．５時間後、エステルのエナンチオ過剰率を９７．２％であると決定し、反応物を室温（２６℃）に冷却し、一晩撹拌し（１６時間）、その後エステルのエナンチオ過剰率は１００％であると決定した。次いで、反応混合物のｐＨを、５０％ＮａＯＨで８．５に調節し、このように得られた混合物を、ＭＴＢＥ（２×２Ｌ）で抽出した。次いで、合わせたＭＴＢＥ抽出物を５％ＮａＨＣＯ3（３×１００ｍＬ）、水（３×１００ｍＬ）で洗浄し、減圧蒸発させて、鏡像異性的に純粋なＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステルを淡黄色の固形物（４２．５５ｇ；純度：９７％＠２１０ｎｍ、酸は含有せず；１００％鏡像体過剰率（「ｅｅ」））として得た。
【００９７】
次いで、抽出工程からの水層を、５０％Ｈ2ＳＯ4でｐＨ２まで酸性化し、ＭＴＢＥ（２×２Ｌ）で抽出した。ＭＴＢＥ抽出物を水（３×１００ｍＬ）で洗浄し、蒸発させて、酸を淡黄色固形物（４２．７４ｇ；純度：９９％＠２１０ｎｍ、エステルを含有せず）として得た。
【表２】
2011521911.tif 000033
【表３】
2011521911.tif 000034
【００９８】
分割Ｂ
２４ウェルプレート（容量：１０ｍＬ／ウェル）のウェル中の１００ｍＭ Ｈｅｐｓ・Ｎａバッファー（ｐＨ＝８．５）（０．５ｍＬ）に、０．１ｍＬのＳａｖｉｎａｓｅ１６．０Ｌ（バチルス・クラウシイからのプロテアーゼ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｉｎｃ．）およびラセミのＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル（１０ｍｇ）のＤＭＳＯ（０．１ｍＬ）溶液を加えた。プレートを密封し、２５０ｒｐｍで４０℃にてインキュベートした。１８時間後、エステルのエナンチオ過剰率は、下記のように４４．３％であると決定した。０．１ｍＬの反応混合物を取り出し、１ｍＬエタノールとよく混合し；遠心分離後、１０マイクロリットル（「μｌ」）の上清をキラルＨＰＬＣで分析した。残りの反応混合物に、０．１ｍＬのＤＭＳＯを加え、プレートをさらに３日間２５０ｒｐｍで４０℃にてインキュベートし、その後４ｍＬのエタノールをウェルに加えた。遠心分離後、１０μｌの上清をキラルＨＰＬＣで分析し、エステルのエナンチオ過剰率を１００％であると決定した。
【００９９】
分割Ｃ
２４ウェルプレート（容量：１０ｍＬ／ウェル）のウェル中の１００ｍＭ Ｈｅｐｓ・Ｎａバッファー（ｐＨ＝８．５）０．５ｍＬに、０．１ｍｌのＥｓｐｅｒａｓｅ８．０Ｌ（バチルス・ハロデュランスからのプロテアーゼ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｉｎｃ．）およびラセミのＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル（１０ｍｇ）のＤＭＳＯ（０．１ｍＬ）溶液を加えた。プレートを密封し、２５０ｒｐｍで４０℃にてインキュベートした。１８時間後、エステルのエナンチオ過剰率は、下記のように３９．６％であると決定した。０．１ｍＬの反応混合物を取り出し、１ｍＬのエタノールとよく混合し；遠心分離後、１０μｌの上清を、キラルＨＰＬＣで分析した。残りの反応混合物に、０．１ｍＬのＤＭＳＯを加え、プレートをさらに３日間２５０ｒｐｍで４０℃にてインキュベートし、その後４ｍＬのエタノールをウェルに加えた。遠心分離後、１０μｌの上清をキラルＨＰＬＣで分析し、エステルのエナンチオ過剰率は１００％であると決定した。
【０１００】
試料分析を下記の方法によって行った。
１）試料の調製：約０．５ｍＬの反応混合物を、１０容量のＥｔＯＨとよく混合した。遠心分離後、１０μｌの上清をＨＰＬＣカラムに注入した。
２）変換の決定：
カラム：ＹＭＣ  ＯＤＳ  Ａ、４．６×５０ｍｍ、Ｓ−５μｍ
溶媒：Ａ＝１ｍＭ ＨＣｌの水溶液；Ｂ＝ＭｅＣＮ
グラジエント：１分間、３０％Ｂ；０．５分間、３０％〜４５％Ｂ；１．５分間、４５％Ｂ；０．５分間、４５％〜３０％Ｂ
流量：２ｍＬ／分
ＵＶ検出：２１０ｎｍ
保持時間：酸、１．２分；エステル、２．８分
３）エステルについてのエナンチオ過剰率の決定：
カラム：ＣＨＩＲＡＣＥＬ  ＯＤ−ＲＨ、４．６×１５０ｍｍ、Ｓ−５μｍ
移動相：ＭｅＣＮ／５０ｍＭ ＨＣｌの水溶液（６７／３３）
流量：０．７５ｍＬ／分
ＵＶ検出：２１０ｎｍ
保持時間：
酸としての（１Ｓ，２Ｒ）異性体：５．２分；
ラセミ体：１８．５分および２０．０分；
エステルとしての（１Ｒ，２Ｓ）異性体：１８．５分。
【０１０１】
シクロプロピルスルホンアミドの製造：
【化２３】
2011521911.tif 000035
【化２４】
2011521911.tif 000036
段階１：
ｔｅｒｔ−ブチルアミン（３.０ｍｏｌ、３１５ｍＬ）をＴＨＦ（２.５Ｌ）に溶解した。溶液を−２０℃に冷却した。３−クロロプロパンスルホニルクロリド（１.５ｍｏｌ、１８２ｍＬ）をゆっくりと加えた。反応混合液を室温に加温し、２４時間撹拌した。混合液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をＣＨ2Ｃｌ2（２.０Ｌ）に溶解した。生じた溶液を、１.０Ｍ ＨＣｌ（１.０Ｌ）、水（１.０Ｌ）、食塩水（１.０Ｌ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、減圧濃縮して、わずかに黄色の固形物を得て、それをヘキサンから結晶化して、白色固形物として、生成物（３１６.０ｇ、９９％）を得た。
1H NMR (CDCl3) δ 1.38 (s, 9 H), 2.30-2.27 (m, 2 H), 3.22 (t, J = 7.35 Hz, 2 H), 3.68 (t, J = 6.2 Hz, 2 H), 4.35 (b, 1 H).
【０１０２】
段階２：
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−（３−クロロ）プロピルスルホンアミド（２.１４ｇ、１０.０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（１００ｍＬ）に、−７８℃で、ｎ−ＢｕＬｉ（２.５Ｍ ヘキサン溶液、８.０ｍＬ、２０.０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液を１時間かけて室温に加温した。揮発物を減圧留去した。残渣をＥｔＯＡｃと水（各２００ｍＬ）の間で分液した。分離した有機相を食塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、減圧濃縮した。残渣をヘキサンから再結晶して、白色固形物として、目的の生成物（１.０ｇ、５６％）を得た。
1H NMR (CDCl3) δ 0.98-1.00 (m, 2 H), 1.18-1.19 (m, 2 H), 1.39 (s, 9 H), 2.48-2.51 (m, 1 H), 4.19 (b, 1 H).
【０１０３】
段階３：
シクロプロパンスルホン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド（１１０ｇ、０.６２ｍｍｏｌ）のＴＦＡ溶液（５００ｍＬ）を室温で１６時間撹拌した。揮発物を減圧留去した。残渣をＥｔＯＡｃ／ヘキサン（６０ｍＬ／２４０ｍＬ）から再結晶して、白色固形物として、目的の生成物（６８.５ｇ、９１％）を得た。
1H NMR (DMSO-d6) δ 0.84-0.88 (m, 2 H), 0.95-0.98 (m, 2 H), 2.41-2.58 (m, 1 H), 6.56 (b, 2 H).
【０１０４】
Ｐ１Ｐ１'の製造：
【化２５】
2011521911.tif 000037
段階１：
１（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２（Ｓ）−ビニル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステル（３.２８ｇ、１３.２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７ｍＬ）およびメタノール（７ｍＬ）溶液に、ＬｉＯＨ（１.２７ｇ、５３.０ｍｍｏｌ）の水懸濁溶液（１４ｍＬ）を加えた。混合液を室温で終夜撹拌した。混合液に、ＮａＯＨ（１.０Ｍ、１５ｍＬ）、水（２０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）を加えた。混合液を振とうし、相を分離し、有機相をＮａＯＨ（２０ｍＬ、０.５Ｍ）で再び抽出した。水相を合わせて、ｐＨ＝４までＨＣｌ（１.０Ｍ）で酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３×４０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせて、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）して、白色固形物として、標題の化合物（２.６２ｇ、８７％）を得た。
1H NMR:  (DMSO-d6) δ1.22-1.26 (m, 1H), 1.37 (s, 9H), 1.50-1.52 (m, 1H), 2.05 (q, J = 9 Hz, 1H), 5.04 (d, J = 10 Hz, 1H), 5.22 (d, J = 17 Hz, 1H), 5.64-5.71 (m, 1H), 7.18, 7.53 (s, NH (回転異性体), 12.4 (br s, 1H));  LC-MS MS m/z 228 (M+ +H).
【０１０５】
段階２：
段階１の生成物（２.６２ｇ、１１.５ｍｍｏｌ）およびＣＤＩ（２.４３ｇ、１５.０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（４０ｍＬ）を窒素下で５０分間加熱還流した。溶液を室温に冷却し、シクロプロピルスルホンアミド（１.８２ｇ、１５.０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（１０ｍＬ）にカニューレで移した。生じた溶液に、ＤＢＵ（２.４０ｍＬ、１６.１ｍｍｏｌ）を加え、２０時間撹拌し続けた。混合液をｐＨ＝１までＨＣｌ（１.０Ｍ）でクエンチし、ＴＨＦを減圧蒸発させた。懸濁液をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出し、有機抽出物を合わせて、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）した。ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（１：１）からの再結晶による精製によって、白色固形物として、標題の化合物（２.４ｇ）を得た。母液をバイオタージ４０Ｓカラム（９％ アセトンのＤＣＭ溶液で溶離）で精製して、第２バッチの標題の化合物（１.１ｇ）を得た。両方のバッチを合わせた（全収率９２％）。
1H NMR:  (DMSO-d6) δ 0.96-1.10 (m, 4H), 1.22 (dd, J = 5.5, 9.5 Hz, 1H), 1.39 (s, 9H), 1.70 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 2.19-2.24 (m, 1H), 2.90 (m, 1H), 5.08 (d, J = 10 Hz, 1H), 5.23 (d, J = 17 Hz, 1H), 5.45 (m, 1H), 6.85, 7.22 (s, NH (回転異性体));  LC-MS, MS m/z 331 (M+ +H).
【０１０６】
段階３：
段階２の生成物（３.５ｇ、１０.６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３５ｍＬ）およびＴＦＡ（３２ｍＬ）溶液を室温で１.５時間撹拌した。揮発物を減圧留去し、残渣を１.０Ｍ ＨＣｌのジエチルエーテル溶液（２０ｍＬ）に懸濁させ、減圧濃縮した。この手順を１回繰り返した。生じた混合物をペンタンでトリチュレートし、濾過して、吸湿性のオフホワイトの固形物として、標題の化合物（２.６０ｇ、９２％）を得た。
1H NMR (DMSO-d6) δ 1.01-1.15 (m, 4H), 1.69-1.73 (m, 1H), 1.99-2.02 (m, 1H), 2.38 (q, J = 9 Hz, 1H), 2.92-2.97 (m, 1H), 5.20 (d, J = 11 Hz, 1H), 5.33 (d, J = 17 Hz, 1H), 5.52-5.59 (m, 1H), 9.17 (br s, 3H);  LC-MS, MS m/z 231 (M+ +H).
【０１０７】
実施例１：化合物１Ａおよび１Ｂの製造
【化２６】
2011521911.tif 000038
【化２７】
2011521911.tif 000039
段階１.
６−フェニル−４−（チオフェン−２−イル）ピリジン−２（１Ｈ）−オン（１.０７ｍｇ、４.２３ｍｍｏｌ）（S. Wang et al., Synthesis 4, 487-490, 2003に従って製造）のオキシ塩化リン溶液（１５ｍＬ）を３日間還流するまで加熱した。過剰のオキシ塩化リンを減圧留去し、残渣を氷水でトリチュレートした。トリチュレートしたもの(triturant)をＮａＯＨ水で塩基性にし、生成物をＤＣＭ中に抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、セライトを通して濾過し、蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィで精製して、白色固形生成物（６２４ｍｇ、収率５４％）を得た。
1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.16 (dd, J=5.13, 3.7 Hz, 1H), 7.44-7.52 (m, 5H), 7.55 (dd, J=3.7, 1.1 Hz, 1H), 7.79 (d, J=1.5 Hz, 1H), 8.02 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 2H);   LC-MS , MS m/z 272 (M++H).
【０１０８】
【化２８】
2011521911.tif 000040
【化２９】
2011521911.tif 000041
【化３０】
2011521911.tif 000042
段階２.
ＢＯＣ−Ｈｙｐ−ＯＨ（２５４ｍｇ、１.１ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ溶液（５ｍＬ）に、カリウム ｔｅｒｔ−ブトキシド（２９５ｍｇ、２.５ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間撹拌した後、実施例１，段階１からのクロロピリジン生成物を加え、生じた混合液を室温で終夜撹拌した。反応混合液をＥｔＯＡｃとクエン酸水の間で分液した。有機相をＨ2Ｏおよび食塩水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4で乾燥し、減圧蒸発させた。粗混合物のＬＣ／ＭＳによって、生成物：クロロピリジン出発物質の２.５：１ 混合物が示された。粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ2、９０：１０ ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）で精製して、固形生成物（２７０ｍｇ、収率５８％）を得た。
1H NMR (CD3OD) δ 1.45 (s, 9H), 2.37-2.42 (m, 1H), 2.63 (q, J=13.9 Hz, 1H), 3.79 (d, J=11.9 Hz, 1H), 3.88 (d, J=12.2 Hz, 1H), 4.41-4.46 (m, 1H), 5.70 (br s, 1H), 6.92 (br s, 1H), 7.15 (d, J=3.4 Hz, 1H), 7.40 (t, J=6.1 Hz, 1H), 7.45 (q, J=6.7 Hz, 2H), 7.51 (d, J=4.0Hz, 1H), 7.65 (br s, 2H), 8.05 (d, J=7.0 Hz, 2H);  LC-MS , MS m/z 467 (M++H).
【０１０９】
段階３.
実施例１，段階２からの生成物（２６０ｍｇ、０.５６ｍｍｏｌ）を、Ｎ−メチルモルホリン（２８４ｍｇ、２.７９ｍｍｏｌ）， シクロプロパンスルホン酸（１−（Ｒ）−アミノ−２−（Ｓ）−ビニル−シクロプロパンカルボニル）−アミド ＨＣｌ塩（２０２ｍｇ、０.６１ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２７６ｍｇ、０.７３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（５ｍＬ）と混合した。室温で２時間撹拌した後、反応混合液をクエン酸水に注ぎ、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を重炭酸水、および食塩水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4で乾燥し、減圧蒸発させた。粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ2、１.５％ ＭｅＯＨのＤＣＭ溶液）で精製して、白色固形生成物（２５０ｍｇ、収率６６％）を得た。
NMR (CD3OD) δ 1.07 (q, J=7.1 Hz, 2H), 1.18 (dd, J=9.5, 4.3 Hz, 1H), 1.23-1.29 (m, 1H), 1.43 (q, J=6.1 Hz, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.88 (q, J=5.5 Hz, 1H), 2.25 (q, J=8.5 Hz, 1H), 2.30 (dd, J=9.5, 4.6 Hz, 1H), 2.51 (dd, J=13.5 Hz, 1H), 2.93-2.97 (m, 1H), 3.77 (d, J=11.9 Hz, 1H), 3.89 (dd, J=11.6, 4.1Hz, 1H), 4.32 (t, J=8.3 Hz, 1H), 5.12 (d, J=10.4 Hz, 1H), 5.31 (d, J=17.1 Hz, 1H), 5.76 (br s, 1H), 6.93 (s, 1H), 7.16 (t, J=4.3 Hz, 1H), 7.41 (t, J=6.9 Hz, 1H), 7.46 (t, J=7.5 Hz, 2H), 7.54 (d, J=4.9 Hz, 1H), 7.68 (br s, 2H), 8.06 (d, J=7.6 Hz, 2H);  LC-MS , MS m/z 678 (M++H).
【０１１０】
段階４.
実施例１，段階３の生成物（０.７０７ｇ、１.０４ｍｍｏｌ）の１：１ ＤＣＭ：ＤＣＥ溶液（２０ｍＬ）に、ＴＦＡ（１０ｍＬ）を加えた。室温で０.５時間撹拌した後、反応液を減圧濃縮した。生じた残渣をＤＣＥ（２０ｍＬ）に再溶解し、再濃縮した。生じた茶色粘性油を次いでＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解し、速く撹拌した１Ｎ ＨＣｌのＥｔ2Ｏ溶液（１００ｍＬ）に滴下して加えた。生じた沈澱であるオフホワイトの固形物（０.６６６ｇ、収率９８％）を減圧濾過によって得て、Ｅｔ2Ｏで洗浄した。
LC-MS, MS m/z 579 (M++H).
【０１１１】
段階５.
実施例１，段階４の生成物（２４０.０ｍｇ、０.３６８ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０.２７７ｇ、２.１４ｍｍｏｌ）および（＋／−）−２−（４，６−ジメチルピリジン−２−イルアミノ）−３−メチルブタン酸（０.１３５ｇ、０.６１０ｍｍｏｌ、Ｓｐｅｃｓから購入、カタログ番号ＡＰ−８３６／４１２２０３８２）のＤＣＭ混合溶液（４ｍＬ）に、ＨＡＴＵ（２１０.１ｍｇ、０.５５２ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で８時間撹拌した。反応をさらに完了へと進めるために、追加のＨＡＴＵ（０７０.０ｍｇ、０.１８４ｍｍｏｌ）、（＋／−）−２−（４，６−ジメチルピリジン−２−イルアミノ）−３−メチルブタン酸（０.１４１.０ｍｇ、０.０.１８４ｍｍｏｌ）を加え、生じた混合液をさらに８時間撹拌した。混合液を減圧濃縮し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に溶解し、１.０Ｍ ＨＣｌ水（２×５ｍＬ）で洗浄した。ＨＣｌ洗浄液を合わせて、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で逆抽出した。有機物を合わせて、１０％ ＮａＨＣＯ3水（５０ｍＬ）および食塩水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮した。逆相プレパラティブＨＰＬＣ（Ｓｕｎｆｉｒｅ 分取ＨＰＬＣカラム、溶媒Ａ＝０.１％ ＴＦＡを含むＨ2Ｏ、溶媒Ｂ＝０.１％ ＴＦＡを含むＭｅＯＨ、３０分 グラジエント：１５％Ａで開始し、１００％Ｂまで）で精製して、ＬＣＭＳによる同一のｍ／ｚを有する２つの生成物を得た。各生成物についてのＨＰＬＣ画分を合わせて、濃縮し、ＨＣｌ（１Ｎ）およびＭｅＯＨで処理し、次いで再濃縮し、減圧乾燥して、モノＨＣｌ塩生成物を得た。逆相プレパラティブＨＰＬＣによって溶離する第１の異性体を化合物１Ａ（９１.０ｍｇ、２８.９％）と標識し、溶離する第２の異性体を化合物１Ｂ（１６.９ｍｇ、５.４％）と標識した。
【０１１２】
化合物１Ａ：1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 1.01 (d, J=6.7 Hz, 3 H), 1.09 (d, J=6.7 Hz, 3 H), 1.11 - 1.17 (m, 2 H), 1.20 - 1.32 (m, 2 H), 1.44 - 1.49 (m, 1 H), 1.94 (dd, J=8.2, 5.5 Hz, 1 H), 2.18 - 2.24 (m, 3 H), 2.25 - 2.35 (m, 2 H), 2.34 - 2.38 (m, 3 H), 2.39 - 2.49 (m, 2 H), 2.63 (dd, J=13.4, 7.0 Hz, 1 H), 2.94 - 3.03 (m, 1 H), 4.15 - 4.28 (m, 2 H), 4.52 (d, J=7.6 Hz, 1 H), 4.58 - 4.65 (m, 1 H), 5.17 (d, J=10.4 Hz, 1 H), 5.36 (d, J=17.1 Hz, 1 H), 5.73 - 5.86 (m, 1 H), 6.00 (s, 1 H), 6.59 (s, 1 H), 6.75 (s, 1 H), 6.90 - 6.93 (m, 1 H), 7.17 - 7.23 (m, 1 H), 7.44 - 7.55 (m, 3 H), 7.56 - 7.62 (m, 1 H), 7.70 - 7.80 (m, 2 H), 8.15 (d, J=7.3 Hz, 2 H)LC-MS , MS m/z 783 (M++H).
化合物１Ｂ：1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 0.96 (d, J=6.4 Hz, 6 H), 1.00 - 1.14 (m, 4 H), 1.30 - 1.38 (m, 1 H), 1.39 - 1.45 (m, 1 H), 1.93 (dd, J=8.1, 5.3 Hz, 1 H), 2.03 - 2.15 (m, 1 H), 2.32 (q, J=8.7 Hz, 1 H), 2.40 - 2.42 (m, 3 H), 2.43 - 2.48 (m, 3 H), 2.58 - 2.67 (m, 1 H), 2.82 - 2.92 (m, 2 H), 4.19 - 4.28 (m, 1 H), 4.62 (dd, J=16.6, 7.2 Hz, 2 H), 5.17 (d, J=11.9 Hz, 1 H), 5.35 (d, J=17.1 Hz, 1 H), 5.73 - 5.83 (m, 1 H), 6.01 (s, 1 H), 6.69 (s, 1 H), 6.83 (s, 1 H), 6.96 (s, 1 H), 7.18 - 7.25 (m, 1 H), 7.43 - 7.55 (m, 3 H), 7.57 - 7.63 (m, 1 H), 7.72 - 7.77 (m, 1 H), 7.80 (s, 1 H), 8.15 (d, J=7.3 Hz, 2 H), 9.53 (s, 1 H);  LC-MS , MS m/z 783 (M++H).
【０１１３】
実施例２：化合物２の製造.
【化３１】
2011521911.tif 000043
【化３２】
2011521911.tif 000044
【化３３】
2011521911.tif 000045
【化３４】
2011521911.tif 000046
段階１.
実施例１，段階３の生成物と同じ手順で、実施例１，段階２の生成物の代わりにＢＯＣ−Ｈｙｐ−ＯＨから開始して、実施例２，段階１の生成物を製造した。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 1.09 (d, J=7.63 Hz, 2 H) 1.16 - 1.22 (m, 1 H) 1.25 - 1.32 (m, 1 H) 1.42 (dd, J=9.46, 5.49 Hz, 1 H) 1.47 (s, 1.7 H) 1.50 (s, 7.3 H) 1.88 (dd, J=8.09, 5.34 Hz, 1 H) 1.94 - 2.03 (m, 1 H) 2.13 (dd, J=12.97, 6.87 Hz, 1 H) 2.26 (q, J=8.85 Hz, 1 H) 2.97 (ddd, J=12.51, 8.09, 4.73 Hz, 1 H) 3.47 (d, J=11.60 Hz, 1 H) 3.56 - 3.62 (m, 1 H) 4.25 (dd, J=9.61, 6.87 Hz, 1 H) 4.42 (s, 1 H) 5.15 (d, J=10.38 Hz, 1 H) 5.34 (d, J=17.09 Hz, 1 H) 5.74 - 5.85 (m, 1 H);  LCMS, MS m/z = 442 (M-H)-.
【０１１４】
段階２.
実施例２，段階１からの生成物（１.０ｇ、２.２５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（２０ｍＬ）に、１，１'−カルボニルジイミダゾール（４３９ｍｇ、２.７１ｍｍｏｌ）を加えた。室温で３時間撹拌した後、４−フルオロイソインドリン（L. M. Blatt et al. PCT Int. Appl. (2005), 244 pp, WO 2005037214に見られる手順に従って製造）（６１７ｍｇ、４.５０ｍｍｏｌ）を加え、生じた混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合液をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、ＨＣｌ水（２×１０ｍＬ、１Ｎ）で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出した。有機層を合わせて、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、暗褐色粘性油に濃縮した。粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ2、９７：３および９５：５ ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）で精製して、灰色泡状固形物（１.３ｇ、収率９５％）を得た。
1H NMR (500 MHz, クロロホルム-D) δ ppm 1.29 - 1.37 (m, 2 H) 1.38 - 1.45 (m, 2 H) 1.47 (s, 9 H) 1.95 - 2.00 (m, 1 H) 2.07 - 2.14 (m, 1 H) 2.28 - 2.35 (m, 1 H) 2.37 - 2.46 (m, 1 H) 2.90 - 2.97 (m, 1 H) 3.65 (d, J=12.80 Hz, 1 H) 3.72 (d, J=12.50 Hz, 1 H) 4.26 (t, J=7.02 Hz, 1 H) 4.68 (d, J=9.46 Hz, 2 H) 4.77 (d, J=9.16 Hz, 2 H) 5.15 (d, J=10.38 Hz, 1 H) 5.29 (d, J=17.10 Hz, 1 H) 5.33 (s, 1 H) 5.73 - 5.84 (m, 1 H) 6.97 (t, J=8.70 Hz, 1 H) 7.01 (d, J=7.63 Hz, 1 H) 7.28 (dd, J=8.09, 2.90 Hz, 1 H) 10.00 (s, 1 H);  LC-MS , MS m/z 629 (M++Na).
【０１１５】
段階３.
実施例１，段階４の生成物の製造に記載したものと同じ手順で、実施例２，段階２の生成物から、収率９４％で、実施例２，段階３の生成物を製造した。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 1.05 - 1.11 (m, 1 H) 1.11 - 1.17 (m, 1 H) 1.18 - 1.23 (m, 1 H) 1.27 - 1.34 (m, 1 H) 1.40 (dd, J=9.61, 5.65 Hz, 1 H) 1.98 (dd, J=7.93, 5.80 Hz, 1 H) 2.27 - 2.33 (m, 1 H) 2.36 (q, J=8.80 Hz, 1 H) 2.75 (dd, J=14.34, 7.32 Hz, 1 H) 2.96 - 3.03 (m, 1 H) 3.65 - 3.75 (m, 2 H) 4.61 - 4.67 (m, 1 H) 4.78 (s, 2 H) 5.19 (d, J=10.38 Hz, 1 H) 5.36 (d, J=17.09 Hz, 1 H) 5.48 (s, 1 H) 5.64 - 5.73 (m, 1 H) 7.06 (t, J=8.70 Hz, 1 H) 7.17 (dd, J=16.17, 7.63 Hz, 1 H) 7.37 (q, J=7.63 Hz, 1 H);  LC-MS , MS m/z 507 (M++H).
【０１１６】
段階４.
実施例１，段階５の生成物の製造に記載したものと同じ手順で、実施例２，段階３の生成物から、収率２４.９％（化合物２Ａ）および収率８.４％（化合物２Ｂ）で、実施例２，段階４の生成物を製造した。
【０１１７】
化合物２Ａ：1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 1.03 (d, J=4.9 Hz, 3 H), 1.11 (d, J=5.5 Hz, 3 H), 1.13 - 1.20 (m, 2 H), 1.24 - 1.30 (m, 2 H), 1.45 (dd, J=9.5, 5.2 Hz, 1 H), 1.93 (dd, J=8.1, 5.3 Hz, 1 H), 2.23 - 2.32 (m, 2 H), 2.35 (s, 3 H), 2.48 (s, 3 H), 2.49 - 2.55 (m, 1 H), 2.94 - 3.03 (m, 1 H), 4.03 - 4.10 (m, 1 H), 4.20 (d, J=12.2 Hz, 1 H), 4.54 (t, J=7.6 Hz, 1 H), 4.62 (d, J=6.4 Hz, 1 H), 4.67 (s, 1 H), 4.71 - 4.78 (m, 4 H), 5.17 (d, J=10.1 Hz, 1 H), 5.35 (d, J=17.1 Hz, 1 H), 5.50 (d, J=3.7 Hz, 1 H), 5.75 - 5.86 (m, 1 H), 6.67 (s, 1 H), 6.86 (s, 1 H), 7.18 (d, J=7.6 Hz, 2 H), 7.32 - 7.41 (m, 1 H);  LC-MS , MS m/z 711 (M++H).
化合物２Ｂ：1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 1.03 - 1.13 (m, 8 H), 1.26 - 1.32 (m, 1 H), 1.38 - 1.42 (m, 1 H), 1.91 (dd, J=8.1, 5.3 Hz, 1 H), 2.20 - 2.36 (m, 4 H), 2.44 (s, 3 H), 2.49 (s, 3 H), 2.83 - 2.90 (m, 2 H), 2.91 - 2.99 (m, 1 H), 3.14 - 3.25 (m, 1 H), 4.11 - 4.18 (m, 2 H), 4.50 - 4.56 (m, 1 H), 4.65 - 4.69 (m, 1 H), 4.71 (s, 1 H), 4.77 (d, J=5.8 Hz, 4 H), 5.16 (d, J=11.6 Hz, 1 H), 5.35 (d, J=17.1 Hz, 1 H), 5.50 (s, 1 H), 5.70 - 5.81 (m, 1 H), 6.72 (s, 1 H), 6.85 (s, 1 H), 7.05 (d, J=9.2 Hz, 1 H), 7.14 (d, J=7.3 Hz, 1 H), 7.19 (d, J=7.9 Hz, 1 H), 7.33 - 7.41 (m, 1 H);  LC-MS , MS m/z 711 (M++H).
【０１１８】
実施例３：化合物３の製造.
【化３５】
2011521911.tif 000047
【化３６】
2011521911.tif 000048
段階１：
ｍ−アニシジン（３００ｇ、２.４４ｍｏｌ）およびベンゾイル酢酸エチル（２３４.２ｇ、１.２２ｍｏｌ）のトルエン溶液（２.０Ｌ）に、ＨＣｌ（４.０Ｎ ジオキサン溶液、１２.２ｍＬ、４８.８ｍｍｏｌ）を加えた。ディーン・スターク装置（約５６ｍＬの水溶液を集めた）を用いて、生じた溶液を６.５時間還流した。混合液を室温に冷却し、ＨＣｌ水（１０％、３×５００ｍＬ）、ＮａＯＨ水（１.０Ｎ、２×２００ｍＬ）、水（３×２００ｍＬ）で複数回分液し、有機層を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濾過し、減圧濃縮して、油性残渣（３２９.５ｇ）を得た。ディーン・スターク装置（約８５ｍＬの液体を集めた）を用いて、粗生成物を油浴（２８０℃）中で８０分間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、固形残渣をＣＨ2Ｃｌ2（４００ｍＬ）でトリチュレートし、生じた懸濁液を濾過し、濾過ケーキをさらなるＣＨ2Ｃｌ2（２×１５０ｍＬ）で洗浄した。生じた固形物を減圧乾燥（５０℃；１トル；１日）して、薄茶色固形物として、分析的に純粋な生成物（全部で６０.７ｇ、２０％）を得た。
1H NMR (DMSO-d6) δ 3.86 (s, 3H), 6.26 (s, 1H), 6.94 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.55-7.62 (m, 3H), 7.80-7.84 (m, 2H), 8.00 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 11.54 (s, 1H); 13C NMR (DMSO-d6) δ 55.38, 99.69, 107.07, 113.18, 119.22, 126.52, 127.17, 128.97, 130.34, 134.17, 142.27, 149.53, 161.92, 176.48.  LC-MS (MS m/z 252 (M++1).
【０１１９】
段階２：
段階１の生成物（２１.７ｇ、８６.４ｍｍｏｌ）をＰＯＣｌ3（２４０ｍＬ）に懸濁した。懸濁液を２時間還流した。ＰＯＣｌ3を減圧留去した後、残渣を酢酸エチル（１Ｌ）と冷たいＮａＯＨ水（１.０Ｎ ２００ｍＬ ＮａＯＨおよび２０ｍＬ １０.０Ｎ ＮａＯＨから生成）の間で分液し、１５分間撹拌した。有機層を水（２×２００ｍＬ）、食塩水（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧濃縮して、薄茶色固形物として、目的の生成物（２１.０ｇ、９０％）を得た。
1H NMR (DMSO-d6) δ 3.97 (s, 3H), 7.36 (dd, J = 9.2, 2.6 Hz, 1H), 7.49-7.59 (m, 4H), 8.08 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.26-8.30 (m, 2H); 13C NMR (DMSO-d6) δ 55.72, 108.00, 116.51, 119.52, 120.48, 124.74, 127.26, 128.81, 130.00, 137.58, 141.98, 150.20, 156.65, 161.30.  LC-MS ( MS m/z 270 (M++1).
【０１２０】
【化３７】
2011521911.tif 000049
段階１：
１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−ビニルシクロプロパンカルボキシレート（９.３９ｇ、３６.８ｍｍｏｌ）の（１Ｒ，２Ｓ）および（１Ｓ，２Ｒ）のラセミ混合物を、４Ｎ ＨＣｌ／ジオキサン（９０ｍＬ、３６０ｍｍｏｌ）に溶解し、室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮して、定量的収率で、目的の生成物（７ｇ、１００％）を得た。
1H NMR (CD3OD) δ 1.32 (t, J = 7.1, 3H), 1.72 (dd, J = 10.2, 6.6 Hz, 1H), 1.81 (dd, J = 8.3, 6.6 Hz, 1H), 2.38 (q, J = 8.3 Hz, 1H), 4.26-4.34 (m, 2H), 5.24 (dd, 10.3, 1.3 Hz, 1H) 5.40 (d, J = 17.2, 1H), 5.69-5.81 (m, 1H).
【０１２１】
【化３８】
2011521911.tif 000050
段階１：
Ｂｏｃ−４Ｒ−ヒドロキシプロリン（１６.４４ｇ、７１.１ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ懸濁溶液（２５０ｍＬ）に、ｔ−ＢｕＯＫ（１９.９３ｇ、１７７.６ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。生成した混合液を１.５時間撹拌し、次いで反応式１，段階２の生成物（２１.０２ｇ、７７.９ｍｍｏｌ）を３回に分けて１時間かけて加えた。反応液を１日中撹拌し、冷水（１.５Ｌ）に注ぎ、ジエチルエーテル（４×２００ｍＬ）で洗浄した。水溶液をｐＨ ４.６に酸性化し、濾過して、白色固形物を得て、減圧乾燥して、生成物（３２.５ｇ、９８％）を得た。
1H NMR (DMSO-d6) δ 1.32, 1.35 (２つのs (回転異性体) 9H), 2.30-2.42 (m, 1H), 2.62-2.73 (m, 1H), 3.76 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 4.33-4.40 (m, 1H), 5.55 (m, 1H), 7.15 (dd, J = 9.2, 2.6 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.42-7.56 (m, 4H), 7.94-7.99 (m, 1H), 8.25, 8.28 (2s, 2H), 12.53 (brs, 1H); LC-MS , MS m/z 465 (M++1).
【０１２２】
段階２Ａ：
段階１の生成物（１１.０ｇ、２３.７ｍｍｏｌ）、反応式２，段階１の生成物（５.４０ｇ、２８.２ｍｍｏｌ）、およびＮＭＭ（２０.８ｍＬ；１８.９ｍｍｏｌ）の５０％ ＣＨ2Ｃｌ2／ＴＨＦ溶液（５００ｍＬ）に、カップリング試薬のブロモトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｐｙｂｒｏｐ）（１６.０ｇ、３４.３ｍｍｏｌ）を３回に分けて０℃で１０分間加えた。溶液を室温で１日中撹拌し、次いでｐＨ ４.０緩衝液（４×５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ3水（１００ｍＬ）で洗浄し、水洗液(aqueous wash)を酢酸エチル（１５０ｍＬ）で抽出し、有機層をｐＨ ４.０緩衝液（５０ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ3水（５０ｍＬ）で逆洗浄した。有機溶液を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濾過し、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ2、５０％ 酢酸エチル／ヘキサンで溶離）で精製して、全部で７.５ｇの目的の生成物の（１Ｒ，２Ｓ）および（１Ｓ，２Ｒ）Ｐ１異性体の１：１ 混合物（全部で５０％）を得たか、あるいは、１５％〜６０％ 酢酸エチルのヘキサン溶液のグラジエントでゆっくり溶離して、高いＲｆで溶離した（１Ｒ，２Ｓ）Ｐ１異性体（３.５４ｇ、２５％）、および低いＲｆで溶離した（１Ｓ，２Ｒ）Ｐ１異性体（３.５４ｇ、２５％）を得た。
【０１２３】
（１Ｒ，２Ｓ）Ｐ１異性体についてのデータ：
1H NMR (CDCl3) δ 1.21 (t, J = 7 Hz, 3H), 1.43 (s, 9H), 1.47-1.57 (m, 1H), 1.88 (m, 1H), 2.05-2.19 (m, 1H), 2.39 (m, 1H), 2.88 (m, 1H), 3.71-3.98 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 4.04-4.24 (m, 2H), 4.55 (m, 1H), 5.13 (d, J = 10 Hz, 1H), 5.22-5.40 (m, 1H), 5.29 (d, J = 17 Hz, 1H), 5.69-5.81 (m, 1H), 7.02 (brs, 1H), 7.09 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7.41-7.52 (m, 4H), 7.95 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.03, 8.05 (2s, 2H); 13C NMR (CDCl3) δ: 14.22; 22.83, 28.25, 33.14, 33.58, 39.92, 51.84, 55.47, 58.32, 61.30, 75.86, 81.27, 98.14, 107.42, 115.00, 117.84, 118.27, 122.63, 123.03, 127.50, 128.72, 129.26, 133.39, 140.06, 151.23, 159.16, 160.34, 161.35, 169.78, 171.68.  LC-MS ( MS m/z 602 (M++1).
【０１２４】
（１Ｓ，２Ｒ）Ｐ１異性体についてのデータ：
1H NMR δ 1.25 (t, J = 7 Hz, 3H), 1.44 (s, 9H), 1.46-1.52 (m, 1H), 1.84 (m, 1H), 2.12-2.21 (m, 1H), 2.39 (m, 1H), 2.94 (m, 1H), 3.82 (m, 2H), 3.97 (s, 3H), 4.05-4.17 (m, 2H), 4.58 (m, 1H), 5.15 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.33 (d, J = 17 Hz, 1H), 5.30-5.43 (m, 1H), 5.72-5.85 (m, 1H), 7.05 (s, 1H), 7.13 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7.46-7.60 (m, 4H), 7.98 (d, J = 9, 1H), 8.06-8.10 (m, 2H).  LC-MS  MS m/z 602 (M++1).
【０１２５】
段階２Ｂ：
反応式２，段階１の生成物（７.５ｇ、３９.１ｍｍｏｌ）を、ジイソプロピルエチルアミン（３２.５ｍＬ、１８６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１５０ｍＬ）と混合した。生じた混合物に、ＨＯＢＴ水和物（６.８５ｇ、４４.７ｍｍｏｌ）および段階１からの生成物（１７.３ｇ、３７.３ｍｍｏｌ）を加え、続いてＨＢＴＵ（１６.９６ｇ、４４.７ｍｍｏｌ）を加えた。すぐにわずかな発熱が生じ、混合液を室温で終夜撹拌した。混合液を次いで減圧濃縮し、酢酸エチル（６００ｍＬ）に再溶解した。溶液を、水（２×２００ｍＬ）、次いで１０％ 炭酸水素ナトリウム水（２×２００ｍＬ）、次いで水（１５０ｍＬ）、最終に食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄した。有機物を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濾液をベージュ色のガラス状固形物に減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（ＳｉＯ2、６６％ ヘキサン／酢酸エチルで溶離）によって複数のバッチ（各７ｇ）で精製を行って、最初に溶離した異性体として、（１Ｒ，２Ｓ）Ｐ１異性体（全部で９.８６ｇ、収率４４.０％）を得て、続いて２番目に溶離した異性体として、（１Ｓ，２Ｒ）Ｐ１異性体（全部で１０.４３ｇ、収率４６.５％）を得た。合計１.９７ｇの混合した画分を回収して、２つのジアステレオマーへの全変換９９.３％を得た。
【０１２６】
（１Ｒ，２Ｓ）Ｐ１異性体についてのデータ：
1H NMR (メタノール-d4) δ 1.23 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.4 (s, 4H), 1.45 (s, 6H), 1.73 (dd, J = 7.9, 1.5 Hz, 0.4H), 1.79 (dd, J = 7.8, 2.4 Hz, 0.6H), 2.21 (q, J = 8.2 Hz, 1H), 2.44-2.49 (m, 1H), 2.66-2.72 (m, 0.4H), 2.73-2.78 (m, 0.6H), 3.93-3.95 (m, 2H), 3.96 (s, 3H), 4.10-4.17 (m, 2H), 4.44 (q, J = 7.8 Hz, 1H), 5.13 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 5.31 (d, J = 17.7Hz, 0.4H), 5.32 (d, J = 17.4 Hz, 0.6H), 5.49 (bs, 1H), 5.66-5.82 (m, 1H), 7.16 (dd, J = 9.2, 2.5 Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.42 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.48-7.55 (m, 3H), 8.02-8.05 (m, 3H);  LC-MS (MS m/z 602 (M++1).
【０１２７】
（１Ｓ，２Ｒ）Ｐ１異性体についてのデータ：
1H NMR (メタノール-d4) δ 1.23 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.40 (s, 3.5H), 1.43 (s, 6.5H), 1.8 (dd, J = 7.2, 5.3 Hz, 0.4H), 1.87 (dd, J = 7.8, 5.7 Hz, 0.6H), 2.16 (q, J = 8.9 Hz, 0.6H), 2.23 (q, J = 8.85 Hz, 0.4H), 2.42-2.50 (m, 1H), 2.67-2.82 (m, 1H), 3.87-3.95 (m, 2H), 3.96 (s, 3H), 4.07-4.19 (m, 3H), 4.41-4.47 (m, 1H), 5.09-5.13 (m, 1H), 5.30 (dd, J = 17.09, 0.92 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.70-5.77 (m, 1H), 7.15 (dd, J = 9.16, 2.44 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.41 (d, J = 2.14 Hz, 1H), 7.48-7.55 (m, 3H), 8.02-8.05 (m, 3H);  LC-MS ( MS m/z 602 (M++1).
【０１２８】
【化３９】
2011521911.tif 000051
段階１：
反応式３，段階２の（１Ｒ，２Ｓ）Ｐ１異性体（９.８６ｇ、１６.４ｍｍｏｌ）を、１Ｎ ＮａＯＨ（５０ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）およびメタノール（８０ｍＬ）混合溶液で１２時間処理した。水相のみが残存するまで、混合液を減圧濃縮した。水（１００ｍＬ）を加え、ｐＨ ３に達するまでＨＣｌ（１Ｎ）をゆっくりと加えた。混合液を次いで酢酸エチル（３×２００ｍＬ）で抽出し、有機抽出物を合わせて、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧濃縮して、白色粉末として、目的の生成物（９.２ｇ、収率９８％）を得た。
1H NMR (CD3OD) δ 1.41 (s, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.77 (dd, J = 7.9, 5.5 Hz, 1H), 2.16-2.21 (m, 1H), 2.44-2.51 (m, 1H), 2.74-2.79 (m, 1H), 3.93-3.96 (m, 2H), 3.98 (s, 3H), 4.44 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 5.11 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.30 (d, J = 17.1 Hz, 1H), 5.52 (s, 1H), 5.79-5.86 (m, 1H), 7.22 (dd, J = 9.16, 2.14 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.43 (d, J = 2.14 Hz, 1H), 7.54-7.60 (m, 3H), 8.04 (dd, J = 7.8, 1.4 Hz, 2H), 8.08 (d, J = 9.1 Hz, 1H);  LC-MS (MS m/z 574 (M++1).
【０１２９】
段階２：
段階１の生成物（７.５４ｇ、１３.１４ｍｍｏｌ）をＣＤＩ（３.１９ｇ、１９.７ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２.４１ｇ、１９.７ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ溶液と混合し、生じた混合物を４５分間還流するまで加熱した。わずかに不透明な混合液を室温に冷却し、それにシクロプロピルスルホンアミド（１.９１ｇ、１５.８ｇ）を加えた。ＤＢＵ（５.９ｍＬ、３９.４ｍｍｏｌ）を加えると、混合液は透明になった。茶色溶液を終夜撹拌した。混合液を次いで油に減圧濃縮し、酢酸エチル（５００ｍＬ）に再溶解した。溶液をｐＨ ４緩衝液（３×２００ｍＬ）で洗浄し、緩衝洗浄液を合わせて、酢酸エチル（２００ｍＬ）で逆抽出した。有機物を合わせて、食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧濃縮して、ベージュ色の固形物を得た。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（ＳｉＯ2、２５％ ヘキサン／酢酸エチルで溶離）で精製して、目的の生成物（５.８５ｇ、収率６６％）を得た。
1H NMR (CD3OD) δ 1.03-1.09 (m, 2H), 1.15-1.28 (m, 2H), 1.40-1.44 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.87 (dd, J = 8.1, 5.6 Hz, 1H), 2.21-2.27 (m, 1H), 2.36-2.42 (m, 1H), 2.65 (dd, J = 13.7, 6.7 Hz, 1H), 2.93-2.97 (m, 1H), 3.90-3.96 (m, 2H), 4.00 (s, 3H), 4.40 (dd, J = 9.5, 7.0 Hz, 1H), 5.12 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.31 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 5.64 (s, 1H), 5.73-5.80 (m, 1H), 7.30 (dd, J = 9.2, 2.1 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.61-7.63 (m, 3H), 8.04-8.05 (m, 2H), 8.15 (d, J = 9.5 Hz, 1H);  LC-MS (MS m/z 677 (M++1).
【０１３０】
段階３Ａ：
段階２の生成物（５.７８ｇ、８.５４ｍｍｏｌ）を、４.０Ｍ ＨＣｌの１，４−ジオキサン溶液（５０ｍＬ、２００ｍｍｏｌ）で終夜処理した。反応混合物を減圧濃縮し、数日間５０℃で真空オーブン中に置いた。ベージュ色の粉末として、目的の生成物（５.８５ｇ、定量的）を得た。
1H NMR (メタノール-d4) δ 1.03-1.18 (m, 3H), 1.26-1.30 (m, 1H), 1.36-1.40 (m, 2H), 1.95 (dd, J = 8.2, 5.8 Hz, 1H), 2.37 (q, J = 8.9 Hz, 1H), 2.51-2.57 (m, 1H), 2.94-2.98 (m, 1H), 3.09 (dd, J = 14.6, 7.3 Hz, 1H), 3.98 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 3.99 (s, 1H), 4.08 (s, 3H), 4.80 (dd, J = 10.7, 7.6 Hz, 1H), 5.15 (dd, J = 10.2, 1.4 Hz, 1H), 5.32 (dd, J = 17.1, 1.2 Hz, 1H), 5.61-5.69 (m, 1H), 5.99 (t, J = 3.7 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 9.3, 2.3 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.72-7.79 (m, 3H), 8.09 (dd, J = 7.0, 1.5 Hz, 2H), 8.53 (d, J = 9.2 Hz, 1H); LC-MS (MS m/z 577 (M++1).
【０１３１】
段階３Ｂ：
（２Ｓ，４Ｒ）−２−（（１Ｒ，２Ｓ）−１−（シクロプロピルスルホニルカルバモイル）−２−ビニルシクロプロピルカルバモイル）−４−（７−メトキシ−２−フェニルキノリン−４−イルオキシ）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル、段階２の生成物（３.０ｇ、４.４３ｍｍｏｌ）の１：１ ＤＣＭ（２５ｍＬ）／ＤＣＥ（２５.００ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（２５ｍＬ、３２４ｍｍｏｌ）を加えた。２５℃で０.５時間撹拌した後、生じた茶色反応混合物を茶色粘性油に濃縮し、それをＤＣＥ（５０ｍＬ）に再溶解し、再濃縮した。残渣をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、１Ｎ ＨＣｌのＥｔ2Ｏ溶液（５０ｍＬ、５０.０ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。生じた薄茶色沈澱を濾過し、１Ｎ ＨＣｌのＥｔ2Ｏ溶液（４０ｍＬ）で洗浄し、１時間５０℃の真空オーブン中で乾燥して、薄茶色固形物として、（２Ｓ，４Ｒ）−Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ）−１−（シクロプロピルスルホニルカルバモイル）−２−ビニルシクロプロピル）−４−（７−メトキシ−２−フェニルキノリン−４−イルオキシ）ピロリジン−２−カルボキシアミド，２ＨＣｌ塩（２.８ｇ、４.３１ｍｍｏｌ、収率９７％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲによって、生成物には約０.７５当量のテトラメチル尿素副生成物（一重線としての２.８３ｐｐｍでのシグナル）が含まれることが示されたが、この物質をさらに精製することなく次の段階に用いた。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 1.0 - 1.2 (m, 3H), 1.2 - 1.3 (m, 1H), 1.4 (dd, J = 9.5, 5.5 Hz, 2H), 1.9 (dd, J = 7.9, 5.8 Hz, 2H), 2.4 (q, J = 8.7 Hz, 1H), 2.5 - 2.6 (m, 1H), 2.9 - 2.9 (m, 1H), 3.1 (dd, J = 14.6, 7.3 Hz, 1H), 4.0 - 4.0 (m, 2H), 4.1 (s, 3H), 4.8 - 4.9 (m, 1H), 5.1 (dd, J = 10.4, 1.5 Hz, 1H), 5.3 (dd, J = 17.2, 1.4 Hz, 1H), 5.6 - 5.7 (m, 1H), 6.0 (s, 1H), 7.5 (dd, J = 9.3, 2.3 Hz, 1H), 7.6 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.7 (s, 1H), 7.7 - 7.8 (m, 3H), 8.1 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 8.6 (d, J = 9.2 Hz, 1H).  LC-MS, MS m/z 577.2 (M+ +H).
【０１３２】
段階４Ａ：
段階３Ａからの生成物（０.６７１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（１０ｍＬ）に、ＤＩＥＡ（５４２μＬ、３.３６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（３５４ｍｇ、１.０１ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（１２７ｍｇ、１.０１ｍｍｏｌ）、およびＢｏｃ−Ｌ−Ｔｌｅ−ＯＨ（１７３ｍｇ、０.８０５ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間撹拌した後、溶媒を濃縮し、生じた茶色粘性油をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ2、９５％ ＭｅＯＨのＤＣＭ溶液で溶離）で精製して、淡黄色泡（５２７ｍｇ、収率９９％）を得た。
LC-MS (MS m/z 790 (M++1)).
【０１３３】
段階４Ｂ：
（２Ｓ，４Ｒ）−Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ）−１−（シクロプロピルスルホニルカルバモイル）−２−ビニルシクロプロピル）−４−（７−メトキシ−２−フェニルキノリン−４−イルオキシ）ピロリジン−２−カルボキシアミド，２ＨＣｌ塩である段階３Ｂの生成物（１.２ｇ、１.８４７ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１.１２６ｍＬ、６.４７ｍｍｏｌ）およびＢｏｃ−Ｌ−Ｔｌｅ−ＯＨ（０.５１３ｇ、２.２１７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（１５ｍＬ）に、ＨＡＴＵ（１.０５４ｇ、２.７７ｍｍｏｌ）を加えた。生じた薄茶色反応混合物を室温で１３時間撹拌し、反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に再溶解し、ＨＣｌ水（１Ｎ、２５ｍＬ）で洗浄した。酸性の水層をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて、１０％ Ｎａ2ＣＯ3水（２０ｍＬ）、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濃縮した。生じた粘性茶色油をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ2、９５：５ ＤＣＭ：ＭｅＯＨで溶離）で精製して、薄茶色泡として、（Ｓ）−１−（（２Ｓ，４Ｒ）−２−（（１Ｒ，２Ｓ）−１−（シクロプロピルスルホニルカルバモイル）−２−ビニルシクロプロピルカルバモイル）−４−（７−メトキシ−２−フェニルキノリン−４−イルオキシ）ピロリジン−１−イル）−３，３−ジメチル−１−オキソブタン−２−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得て、それは次の段階に用いるのに十分な純度であった。しかしながら、ＮＭＲによる評価のための分析サンプルについて、以下のような溶媒系および条件を用いて、この生成物（８５ｍｇ）を逆相ＨＰＬＣでさらに精製した：溶媒Ａ＝Ｈ2Ｏ、溶媒Ｂ＝ＭｅＯＨ、両方とも０.１％ ＴＦＡを含む；５０％Ｂ〜１００％Ｂを２０分、１００％Ｂで４分保持。ＨＰＬＣ画分を合わせて、ＮａＯＨ水（１Ｎ）で中和し、大部分の水が残存するまで濃縮した。生じた白色クリーム状混合物をＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濃縮し、減圧乾燥して、分析的に純粋な白色粉末生成物を得た。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 0.9 - 1.0 (m, 2H), 1.0 (s, 9H), 1.1 - 1.2 (m, 1H), 1.2 - 1.2 (m, 3H), 1.3 (s, 9H), 1.4 - 1.4 (m, 1H), 1.9 (dd, J = 7.9, 5.5 Hz, 1H), 2.2 (q, J = 8.7 Hz, 1H), 2.3 - 2.3 (m, 1H), 2.6 (dd, J = 13.9, 6.9 Hz, 1H), 2.9 - 3.0 (m, 1H), 3.9 (s, 3H), 4.0 - 4.1 (m, 1H), 4.2 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 4.5 - 4.5 (m, 2H), 5.1 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.3 (d, J = 17.1 Hz, 1H), 5.5 (s, 1H), 5.7 - 5.8 (m, 1H), 6.6 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 7.1 (dd, J = 9.0, 1.7 Hz, 1H), 7.2 (s, 1H), 7.4 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.5 - 7.5 (m, 3H), 8.0 (t, J = 7.3 Hz, 3H).  13C NMR (126 MHz, MeOD) δ ppm 5.6, 5.8, 17.6, 22.6, 26.1, 27.6, 31.2, 34.7, 35.0, 35.2, 41.7, 42.8, 54.4, 55.1, 59.5, 59.9, 77.2, 79.5, 99.2, 106.4, 115.5, 117.6, 117.9, 118.4, 123.3, 128.0, 128.8, 129.7, 133.3, 140.1, 151.0, 151.1, 157.1, 160.2, 161.0, 162.3, 169.8, 172.5, 174.0.  LC-MS, MS m/z 790.30 (M+ +H).
【０１３４】
段階５Ａ：
段階４Ａからの生成物（９５０ｍｇ、１.２０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（７５ｍＬ）をＴＦＡ（２５ｍＬ）でゆっくりと処理して、激しいバブリングからのＣＯ2ガスを調節した。室温で１.５時間撹拌した後、溶媒を濃縮して、薄茶色スラリーを得て、Ｅｔ2Ｏを加えて、沈澱を行った。薄茶色生成物（１.１０ｇ、収率９９％）ビスＴＦＡ塩を減圧濾過によって得て、さらに精製することなく用いた。
LC-MS (MS m/z 690 (M++1)).
【０１３５】
段階５Ｂ：
（Ｓ）−１−（（２Ｓ，４Ｒ）−２−（（１Ｒ，２Ｓ）−１−（シクロプロピルスルホニルカルバモイル）−２−ビニルシクロプロピルカルバモイル）−４−（７−メトキシ−２−フェニルキノリン−４−イルオキシ）ピロリジン−１−イル）−３，３−ジメチル−１−オキソブタン−２−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルである段階４Ｂの生成物（１.００ｇ、１.２６６ｍｍｏｌ）の１：１ ＤＣＭ（５ｍＬ）およびＤＣＥ（５.００ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（５ｍＬ、６４.９ｍｍｏｌ）を加えた。２５℃で１５分間撹拌した後、反応混合物を濃縮した。生じた粘性茶色油をＤＣＭ（３ｍＬ）に再溶解し、それを勢いよく撹拌した１Ｎ ＨＣｌ（５０ｍＬ）のＥｔ2Ｏ溶液に滴下して加えた。生じた薄茶色沈澱を濾過し、Ｅｔ2Ｏ（２５ｍＬ）で洗浄し、５０℃の真空オーブン中で２時間乾燥して、薄茶色固形物として、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｓ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ）−１−（シクロプロピルスルホニルカルバモイル）−２−ビニルシクロプロピル）−４−（７−メトキシ−２−フェニルキノリン−４−イルオキシ）ピロリジン−２−カルボキシアミド，２ＨＣｌ塩（０.９０７ｇ、１.１８９ｍｍｏｌ、収率９４％）を得て、それは次の段階に使用するのに十分純粋であった。しかしながら、ＮＭＲによる評価のための分析サンプルについて、以下のような溶媒系および条件を用いて、生成物（８０ｍｇ）を逆相ＨＰＬＣでさらに精製した：溶媒Ａ＝Ｈ2Ｏ、溶媒Ｂ＝ＭｅＯＨ、両方とも０.１％ ＴＦＡを含む；５０％Ｂ〜１００％Ｂを２０分、１００％Ｂで４分保持。ＨＰＬＣ画分を合わせて、ＨＣｌ水（１Ｎ、３ｍＬ）で処理し、乾燥するまで濃縮し、減圧乾燥して、白色粉末として、ビスＨＣｌ塩生成物を得た。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 1.0 - 1.1 (m, 4H), 1.2 (s, 9H), 1.2 - 1.3 (m, 2H), 1.4 (s, 1H), 1.9 (s, 1H), 2.3 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 2.4 (s, 1H), 2.8 - 2.9 (m, 1H), 2.9 - 3.0 (m, 1H), 4.1 (s, 3H), 4.2 (s, 2H), 4.6 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.8 (s, 1H), 5.1 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.3 (d, J = 17.1 Hz, 1H), 5.6 - 5.7 (m, 1H), 5.9 (s, 1H), 7.5 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.6 - 7.7 (m, 2H), 7.7 - 7.8 (m, 3H), 8.1 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 8.5 (d, J = 8.5 Hz, 1H).  13C NMR (MeOD) δ ppm 5.0 (s), 5.8, 5.8, 22.4, 25.9, 31.3, 34.6, 34.9, 35.0, 41.8, 42.8, 54.7, 56.1, 59.5, 60.5, 80.4, 99.8, 101.5, 115.1, 117.9, 120.9, 125.8, 129.2, 129.8, 132.3, 132.9, 133.1, 142.7, 157.2, 165.6, 166.8, 168.2, 169.4, 173.2.  LC-MS, MS m/z 690.2 (M+ +H).
【０１３６】
段階６Ａ：
段階５Ａの生成物（０.１３２ｇ、０.１４３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（２ｍＬ）に、ポリビニルピリジン（ＰＶＰ）（０.０４６ｇ、０.４２９ｍｍｏｌ）およびＦｍｏｃ−イソチオシアネート（０.０４２ｇ、０.１５０ｍｍｏｌ）を加えた。生じた茶色溶液を室温で撹拌した。１６時間後、溶媒を除去し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ2、９５：５ ＤＣＭ：ＭｅＯＨで溶離）で精製して、薄茶色固形生成物（０.１２６ｍｇ、収率９１％）を得た。
【０１３７】
段階６Ｂ：
（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｓ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル）−Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ）−１−（シクロプロピルスルホニルカルバモイル）−２−ビニルシクロプロピル）−４−（７−メトキシ−２−フェニルキノリン−４−イルオキシ）ピロリジン−２−カルボキシアミド，２ＨＣｌである段階５Ｂの生成物（０.５００ｇ、０.６５６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０.３４３ｍＬ、１.９６７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（８ｍＬ）に、Ｆｍｏｃ−イソチオシアネート（０.２４０ｇ、０.８５２ｍｍｏｌ）を加えた。生じた茶色反応混合物を２５℃で１６時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に溶解し、ＨＣｌ水（０.１Ｎ、１０ｍＬ）で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、黄色固形粗生成物に濃縮し、それをフラッシュカラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ2、９５：５ ＤＣＭ：ＭｅＯＨで溶離）で精製して、明黄色固形物として、（２Ｓ，４Ｒ）−１−（（Ｓ）−２−（３−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）チオウレイド）−３，３−ジメチルブタノイル）−Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ）−１−（シクロプロピルスルホニルカルバモイル）−２−ビニルシクロプロピル）−４−（７−メトキシ−２−フェニルキノリン−４−イルオキシ）ピロリジン−２−カルボキシアミド（６１５.４ｍｇ、０.６３４ｍｍｏｌ、収率９７％）を得て、それは次の段階に使用するのに十分純粋であった。しかしながら、以下のような溶媒系および条件を用いて、生成物（４５ｍｇ）を逆相ＨＰＬＣでさらに精製した：溶媒Ａ＝Ｈ2Ｏ、溶媒Ｂ＝ＭｅＯＨ、両方とも０.１％ ＴＦＡを含む；５０％Ｂ〜１００％Ｂを２０分、１００％Ｂで４分保持。注：ＤＭＦ（２分の１ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１ｍＬ）を用いて、ＨＰＬＣサンプルを溶解して、ＨＰＬＣカラムにおけるサンプルの沈澱を防いだ。ＨＰＬＣ画分を合わせて、大部分の水が残存するまで濃縮した後、ＮａＯＨ水（１Ｎ）を加えて、白色クリーム状混合物を中和し、それを次いでＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濃縮して、白色粉末として、分析的に純粋なサンプルを得て、それをＬＣ／ＭＳおよびＮＭＲ分析に用いた。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 1.0 - 1.0 (m, 2H), 1.1 (s, 9H), 1.2 - 1.2 (m, 2H), 1.2 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 1.3 (s, 1H), 1.4 (dd, J = 9.3, 5.3 Hz, 1H), 1.9 (dd, J = 8.1, 5.6 Hz, 1H), 2.0 (s, 1H), 2.2 (q, J = 8.7 Hz, 1H), 2.4 - 2.4 (m, 1H), 2.7 (dd, J = 14.2, 6.9 Hz, 1H), 2.9 - 2.9 (m, 1H), 4.0 (s, 3H), 4.1 - 4.1 (m, 1H), 4.2 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 4.4 - 4.5 (m, 2H), 4.6 (dd, J = 10.7, 7.0 Hz, 1H), 4.8 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 5.0 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 5.1 (dd, J = 10.4, 1.2 Hz, 1H), 5.3 (dd, J = 17.2, 1.1 Hz, 1H), 5.6 - 5.7 (m, 1H), 5.8 (s, 1H), 7.3 - 7.3 (m, 3H), 7.4 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.4 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.5 (s, 1H), 7.6 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 7.6 - 7.7 (m, 3H), 7.8 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 8.0 (dd, J = 7.6, 1.8 Hz, 2H), 8.2 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 10.3 (d, J = 7.3 Hz, 1H).  13C NMR (MeOD) δ ppm 5.6,  5.6, 13.5, 22.0, 26.3, 31.2, 34.7, 34.8, 35.4, 42.0, 42.8, 47.0, 54.2, 55.8, 60.0, 60.5, 64.3, 64.4, 68.1, 79.8, 100.9, 101.3, 115.3, 117.7, 120.0, 120.2, 125.1, 125.2, 127.3, 128.0, 128.7, 129.6, 132.1, 133.2, 141.6, 143.6, 143.8, 144.7, 154.1, 157.9, 164.8, 165.5, 169.4, 170.6, 172.0, 174.1, 180.8, 180.9, 188.0.  LC-MS, MS m/z 971.18 (M+ +H).
【０１３８】
段階７：
段階６の生成物（０.３４２ｍｇ、０.３５２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（４ｍＬ）に、ピペリジン（０.８０５ｍＬ）を加えた。生じた茶色溶液の混合液を室温で終夜撹拌した。ロータリーエバポレーターを用いて、溶媒および過剰のピペリジンを減圧留去して、目的の生成物および等量の１−（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル）ピペリジン副生成物も得た。生じた粗生成物の混合物を、さらに精製することなく次の段階に用いた。
LC-MS, MS m/z 749 (M++H).
上記からの残渣（７７.３ｍｇ、０.０７６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（２ｍＬ）に、２−ブロモ−２−ブタノノン(butanonone)（２３.０ｍｇ、０.１５２ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間撹拌した後、反応混合物を濃縮し、生成物をカラムクロマトグラフィで精製して、化合物３を得た。
LC-MS, MS m/z 801.31 (M++ H).
【０１３９】
実施例４：化合物４の製造.
【化４０】
2011521911.tif 000052
化合物３の生成物の製造に記載したものと同じ手順であるが、２−ブロモ−２−ブタノノンブタノノンの代わりに１−ブロモピナコロンを用いて、化合物４を製造した。
LC-MS, MS m/z 829.38 (M++ H).
【０１４０】
実施例５：化合物５の製造.
【化４１】
2011521911.tif 000053
化合物３の製造に記載したものと同じ手順であるが、２−ブロモ−２−ブタノノンの代わりに１−ブロモ−１，１，１−トリフルオロプロパノンを用いて、化合物５を製造した。
LC-MS, MS m/z 841.28 (M++ H).
【０１４１】
生物学的研究
ＨＣＶ  ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体酵素アッセイおよび細胞ベースのＨＣＶレプリコンアッセイを本開示において用い、下記のように調製し、実施し、確認した。
【０１４２】
組換えＨＣＶ  ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の産生
ＢＭＳ株、Ｈ７７株またはＪ４Ｌ６Ｓ株由来のＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ複合体を、下記で説明するように産生した。これらの精製した組換えタンパク質を、均一系アッセイ（下記を参照されたい）において使用するために産生し、ＨＣＶ  ＮＳ３タンパク質分解活性の阻害において本開示の化合物がいかに有効であるかを示した。
【０１４３】
ＨＣＶ感染患者からの血清を、サンフランシスコ病院のＴ．Ｗｒｉｇｈｔ医師から得た。ＨＣＶゲノム（ＢＭＳ株）の設計された完全長ｃＤＮＡ（相補デオキシリボ核酸）鋳型を、血清ＲＮＡ（リボ核酸）の逆転写−ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）によって得たＤＮＡフラグメントから、他の遺伝子型１ａ株の間の相同性に基づいて選択したプライマーを使用して作製した。全ゲノム配列の決定から、Ｓｉｍｍｏｎｄｓらの分類によって、ＨＣＶ分離株に対して遺伝子型１ａを割り当てた（P Simmonds, KA Rose, S Graham, SW Chan, F McOmish, BC Dow, EA Follett, PL Yap and H Marsden, J. Clin. Microbiol., 31(6):1493-1503 (1993)を参照されたい）。非構造領域ＮＳ２−５Ｂのアミノ酸配列は、ＨＣＶ遺伝子型１ａ（Ｈ７７）に＞９７％同一であり、遺伝子型１ｂ（Ｊ４Ｌ６Ｓ）に８７％同一であることが示された。感染性クローンＨ７７（１ａ遺伝子型）およびＪ４Ｌ６Ｓ（１ｂ遺伝子型）は、Ｒ．Ｐｕｒｃｅｌｌ（ＮＩＨ）から得たが、配列はＧｅｎｂａｎｋにおいて公開されている（ＡＡＢ６７０３６、Yanagi,M., Purcell,R.H., Emerson,S.U. and Bukh,J. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94(16):8738-8743 (1997); AF054247を参照されたい、Yanagi,M., St Claire,M., Shapiro,M., Emerson,S.U., Purcell,R.H. and Bukh,J, Virology 244 (1), 161-172. (1998)を参照されたい）。
【０１４４】
Ｈ７７およびＪ４Ｌ６Ｓ株を組換えＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の産生のために使用した。これらの株について組換えＨＣＶ  ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体（アミノ酸１０２７〜１７１１）をコードするＤＮＡを、Ｐ．Ｇａｌｌｉｎａｒｉらによって記載されているように操作した（Gallinari P, Paolini C, Brennan D, Nardi C, Steinkuhler C, De Francesco R. Biochemistry. 38(17):5620-32, (1999)を参照されたい）。手短に言えば、３個のリシンの可溶化尾部を、ＮＳ４Ａコード領域の３’末端に添加した。ＮＳ４Ａ−ＮＳ４Ｂ切断部位のＰ１位中のシステイン（アミノ酸１７１１）をグリシンに変更し、リシンタグのタンパク質分解的切断を防止した。さらに、システインからセリンへの変異をアミノ酸位置１４５４でＰＣＲによって導入し、ＮＳ３ヘリカーゼドメインにおける自己分解による切断を防止した。Ｐ．Ｇａｌｌｉｎａｒｉらによって記載されたプロトコルに修正を加えて、変異ＤＮＡフラグメントをｐＥＴ２１ｂ細菌発現ベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ）中でクローン化し、ＮＳ３／４Ａ複合体を大腸菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で発現させた（Gallinari P, Brennan D, Nardi C, Brunetti M, Tomei L, Steinkuhler C, De Francesco R., J Virol. 72(8):6758-69 (1998)を参照されたい）。手短に言えば、ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体発現を、０．５ミリモル（ｍＭ）のイソプロピルβ−Ｄ−１−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）によって２０℃で２２時間（ｈ）誘導した。典型的な発酵（１リットル（Ｌ））によって、約１０グラム（ｇ）の湿細胞ペーストを得た。２５ｍＭのＮ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）（ｐＨ７．５）、２０％グリセロール、５００ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１マイクログラム／ミリリットル（「μｇ／ｍＬ」）のリゾチーム、５ｍＭの塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ2）、１μｇ／ｍｌのＤｎａｓｅＩ、５ｍＭのβ−メルカプトエタノール（βＭＥ）、プロテアーゼ阻害剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）非含有）（Ｒｏｃｈｅ）からなる溶解バッファー（１０ｍＬ／ｇ）中で細胞を再懸濁させ、ホモジナイズし、４℃で２０分（分）間インキュベートした。ホモジネートを超音波処理し、４℃にて２３５０００ｇで１時間（ｈ）超遠心分離することによって清澄にした。イミダゾールを１５ｍＭの最終濃度まで上清に加え、ｐＨを８．０に調節した。粗タンパク質抽出物を、バッファーＢ（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ８．０）、２０％グリセロール、５００ｍＭのＮａＣｌ、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１５ｍＭのイミダゾール、５ｍＭのβＭＥ）で予め平衡化させたニッケル−ニトリロ三酢酸（Ｎｉ−ＮＴＡ）カラムに添加した。試料を１ｍＬ／分の流量で添加した。カラムを１５カラム容量のバッファーＣ（０．２％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００以外はバッファーＢと同一）で洗浄した。タンパク質を５カラム容量のバッファーＤ（２００ｍＭのイミダゾール以外はバッファーＣと同一）で溶出した。
【０１４５】
ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体含有画分をプールし、バッファーＤ（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、２０％グリセロール、３００ｍＭのＮａＣｌ、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１０ｍＭβＭＥ）で予め平衡化した脱塩カラムＳｕｐｅｒｄｅｘ−Ｓ２００に添加した。試料を１ｍＬ／分の流量で添加した。ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体含有画分をプールし、約０．５ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。ＢＭＳ、Ｈ７７およびＪ４Ｌ６Ｓ株由来のＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析法によって９０％超であると判断した。酵素は、アッセイバッファーにおいて使用する前に、−８０℃で貯蔵し、氷上で解凍し、希釈した。
【０１４６】
ＨＣＶ  ＮＳ３／４Ａタンパク質分解活性をモニターするためのＦＲＥＴペプチドアッセイ
このインビトロアッセイの目的は、本開示の化合物による上記のようなＢＭＳ株、Ｈ７７株またはＪ４Ｌ６Ｓ株由来のＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ複合体の阻害を測定することであった。このアッセイは、ＨＣＶ  ＮＳ３タンパク質分解活性の阻害において本開示の化合物がいかに有効であるかを示した。
【０１４７】
ＨＣＶ  ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ活性をモニターするために、ＮＳ３／４Ａペプチド基質を使用した。基質は、Anal. Biochem. 240(2):60-67 (1996)においてＴａｌｉａｎｉらによって記載されたＲＥＴ  Ｓ１であった（共鳴エネルギー移動デプシペプチド基質；ＡｎａＳｐｅｃ、Ｉｎｃ．カタログ＃２２９９１）（ＦＲＥＴペプチド）。このペプチドの配列は、切断部位においてアミド結合ではなくエステル結合が存在すること以外は、ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼについてのＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ天然切断部位に大まかに基づいている。ペプチドはまた、ペプチドの一端近くに蛍光供与体ＥＤＡＮＳを、および他端の近くに容体ＤＡＢＣＹＬを含有する。ペプチドの蛍光は、供与体と受容体との間の分子間の共鳴エネルギー移動（ＲＥＴ）によってクエンチされるが、ＮＳ３プロテアーゼがペプチドを切断するにつれ、生成物がＲＥＴ消光から放出され、供与体の蛍光が明らかになる。
【０１４８】
ペプチド基質を、本開示の化合物の非存在下、または存在下で、３種の組換えＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の１種と共にインキュベートした。Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ  Ｓｅｒｉｅｓ４０００を使用して蛍光性反応生成物の形成をリアルタイムでモニターすることによって化合物の阻害作用を決定した。
【０１４９】
試薬は下記の通りであった。ＨＥＰＥＳおよびグリセロール（Ｕｌｔｒａｐｕｒｅ）は、ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬから入手した。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、Ｓｉｇｍａから入手した。β−メルカプトエタノールはＢｉｏ  Ｒａｄから入手した。
【０１５０】
アッセイバッファー：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）；０．１５ＭのＮａＣｌ；０．１％Ｔｒｉｔｏｎ；１５％グリセロール；１０ｍＭのβＭＥ。基質：２μＭの最終濃度（−２０℃で貯蔵したＤＭＳＯ中の２ｍＭのストック溶液から）。ＨＣＶ  ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ１ａ（１ｂ）型、２〜３ｎＭの最終濃度（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、２０％グリセロール、３００ｍＭのＮａＣｌ、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００、１０ｍＭβＭＥ中の５μＭのストック溶液から）。アッセイ限界に近づいた作用強度を有する化合物については、アッセイバッファーに５０μｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ）を加え、プロテアーゼの最終濃度を３００ｐＭに下げることによって、アッセイをより感応性にした。
【０１５１】
アッセイを、Ｆａｌｃｏｎの９６−ウェルのポリスチレンブラックプレート中で行った。各ウェルは、アッセイバッファー中のＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体２５μｌ、１０％ＤＭＳＯ／アッセイバッファー中の本開示の化合物５０μｌ、およびアッセイバッファー中の基質２５μｌを含有した。対照（化合物を含有せず）もまた、同一のアッセイプレート上で調製した。基質の添加によって酵素反応が開始する前に、酵素複合体を化合物または対照溶液と１分間混合した。アッセイプレートをＣｙｔｏｆｌｕｏｒ  Ｓｅｒｉｅｓ４０００（Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して直ちに読み取った。２５℃にて３４０ｎｍでの発光および４９０ｎｍでの励起を読み取るように装置を設定した。反応は一般に約１５分間続いた。
【０１５２】
下記の式で阻害率を計算した。
１００−［（δＦinh／δＦcon）×１００］
式中、δＦは曲線の線形範囲に亘る蛍光の変化である。非線形曲線の当てはめを阻害−濃度データに適用し、式ｙ＝Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ）））を使用してＥｘｃｅｌ  ＸＬｆｉｔソフトウェアの使用によって５０％有効濃度（ＩＣ50）を計算した。
【０１５３】
試験したすべての化合物は、１３５ｎＭ以下のＩＣ50で、ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の活性を阻害することが分かった。さらに、本開示の化合物は、一つより多くのタイプのＮＳ３／４Ａ複合体に対して試験され、該化合物は、１ａ株と比較して、１ｂ株に対してより強い効力を一様に示すが、類似する阻害特性を有することが分かった。
【０１５４】
特異性アッセイ
ＨＣＶ  ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の阻害における本開示の化合物のインビトロ選択性を示すために、他のセリンまたはシステインプロテアーゼと比較した、特異性アッセイを行った。
【０１５５】
本開示の化合物の、種々のセリンプロテアーゼに対する特異性を決定した。ヒト好中球エラスターゼ（ＨＮＥ）、ブタ膵エラスターゼ（ＰＰＥ）およびヒト膵臓キモトリプシンおよび１種のシステインプロテアーゼであるヒト肝臓カテプシンＢ。全ての場合において、セリンプロテアーゼアッセイをある程度修正して、従前（ＰＣＴ特許出願第ＷＯ００／０９５４３号）に記載されているように、それぞれの酵素に特異的な蛍光分析のアミノ−メチル−クマリン（ＡＭＣ）基質を使用した９６ウェルプレートフォーマットプロトコルを使用した。全ての酵素はＳｉｇｍａ、ＥＭＤｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入し、一方基質はＢａｃｈｅｍ、ＳｉｇｍａおよびＥＭＤｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。
【０１５６】
化合物濃度は、それらの作用強度によって１００〜０．４μＭで変化した。１０分間プレインキュベートした酵素−阻害剤に室温で基質を加え、ｃｙｔｏｆｌｕｏｒで測定して１５％変換まで加水分解することによって、酵素アッセイをそれぞれ開始した。
【０１５７】
各アッセイについての最終条件は下記の通りであった。
５０ｍＭのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ）（ｐＨ８）、０、５Ｍの硫酸ナトリウム（Ｎａ2ＳＯ4）、５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、３％ＤＭＳＯ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０、５μＭのＬＬＶＹ−ＡＭＣおよび１ｎＭのキモトリプシン。
５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、３％ＤＭＳＯ、０．０２％Ｔｗｅｅｎ−２０、５μＭのｓｕｃｃ−ＡＡＰＶ−ＡＭＣおよび２０ｎＭのＨＮＥまたは８ｎＭのＰＰＥ。
１００ｍＭのＮａＯＡＣ（酢酸ナトリウム）（ｐＨ５．５）、３％ＤＭＳＯ、１ｍＭのＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩）、５ｎＭのカテプシンＢ（酵素ストックは使用前に２０ｍＭのＴＣＥＰを含有するバッファー中で活性化させた）、およびＨ2Ｏで希釈した２μＭのＺ−ＦＲ−ＡＭＣ。
【０１５８】
阻害率は、式を使用して計算した。
［１−（（ＵＶinh−ＵＶblank）／（ＵＶctl−ＵＶblank））］×１００
非線形曲線の当てはめを阻害−濃度データに適用し、Ｅｘｃｅｌ  ＸＬｆｉｔソフトウェアを使用して５０％有効濃度（ＩＣ50）を計算した。
【０１５９】
ＨＣＶレプリコンの産生
ＨＣＶレプリコン全細胞系を、Lohmann V, Korner F, Koch J, Herian U, Theilmann L, Bartenschlager R., Science 285(5424):110-3 (1999)によって記載されているように確立した。この系によって、本発明者らは、ＨＣＶ  ＲＮＡ複製に対する本発明者らのＨＣＶプロテアーゼ化合物の効果を評価することができた。手短に言えば、Ｌｏｈｍａｎｎの論文に記載されているＨＣＶ株１ｂ配列（登録番号：ＡＪ２３８７９９）を使用して、ＨＣＶ  ｃＤＮＡをＯｐｅｒｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．（Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）によって合成し、次いで完全長レプリコンをプラスミドｐＧｅｍ９ｚｆ（＋）（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）中で標準的な分子生物学技術を使用して構築した。レプリコンは、（ｉ）キャプシドタンパク質の最初の１２個のアミノ酸に融合したＨＣＶ５’ＵＴＲ、（ｉｉ）ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子（ネオ）、（ｉｉｉ）脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）からのＩＲＥＳ、および（ｉｖ）ＨＣＶ  ＮＳ３からＮＳ５Ｂ遺伝子およびＨＣＶ３’ＵＴＲからなる。メーカーの説明書に従ってＴ７ＭｅｇａＳｃｒｉｐｔ転写キット（Ａｍｂｉｏｎ、Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ）を使用して、プラスミドＤＮＡをＳｃａＩで直線化し、ＲＮＡ転写物をインビトロで合成した。ｃＤＮＡのインビトロ転写物を、ヒト肝臓癌細胞系ＨＵＨ−７にトランスフェクトした。ＨＣＶレプリコンを恒常的に発現している細胞についての選択を、選択マーカーであるネオマイシン（Ｇ４１８）の存在下で行った。このように得られた細胞系を、プラス鎖およびマイナス鎖ＲＮＡ生成、ならびにタンパク質生成について経時で性質決定した。
【０１６０】
ＨＣＶレプリコンＦＲＥＴアッセイ
ＨＣＶレプリコンＦＲＥＴアッセイを、ＨＣＶウイルス複製に対する本開示において記載されている化合物の阻害作用をモニターするために開発した。ＨＣＶレプリコンを恒常的に発現しているＨＵＨ−７細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）（Ｓｉｇｍａ）および１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）を含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）中で増殖させた。細胞を、前夜に９６−ウェル組織培養無菌プレート中に（１．５×１０4細胞／ウェル）で播種した。化合物および化合物を含有しない対照を、希釈プレート中で４％ＦＣＳ、１：１００ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）、１：１００Ｌ−グルタミンおよび５％ＤＭＳＯを含有するＤＭＥＭ中で調製した（アッセイにおいて０．５％のＤＭＳＯ最終濃度）。化合物／ＤＭＳＯ混合物を細胞に添加し、３７℃で４日間インキュベートした。４日後、ＣＣ50読取りのためにアラマーブルー（Ｔｒｅｋ  Ｄｉａｇｎｏｔｓｔｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して最初に細胞毒性について細胞を評価した。細胞をインキュベートしている培地に１０分の１容量のアラマーブルーを加えることによって、化合物の毒性（ＣＣ50）を決定した。４ｈ後、Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ  Ｓｅｒｉｅｓ４０００（Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、各ウェルからの蛍光シグナルを、５３０ｎｍでの励起波長および５８０ｎｍでの発光波長で読み取った。次いで、プレートをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で完全にすすいだ（３度、１５０μｌ）。ＨＣＶプロテアーゼ基質、蒸溜水で１倍に希釈した５×細胞ルシフェラーゼ細胞培養溶解試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ  ＃Ｅ１５３Ａ）、１５０ｍＭの最終濃度まで加えたＮａＣｌ、１００％ＤＭＳＯ中の２ｍＭのストックから１０μＭの最終濃度まで希釈したＦＲＥＴペプチド基質（上記の酵素アッセイについて説明した通り）を含有する２５μｌの溶解アッセイ試薬で細胞を溶解した。次いで、プレートを、３４０ｎｍ励起／４９０ｎｍ発光、２１サイクルの自動モード、運動モードでのプレート読取りに設定してあるＣｙｔｏｆｌｕｏｒ４０００装置中に置いた。ＩＣ50決定について記載したように、ＥＣ50決定を行った。
【０１６１】
ＨＣＶレプリコンルシフェラーゼレポーターアッセイ
二次的アッセイとして、レプリコンＦＲＥＴアッセイからのＥＣ50決定を、レプリコンルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて確認した。レプリコンルシフェラーゼレポーターアッセイの利用は、Ｋｒｉｅｇｅｒらによって最初に記載された（Krieger N, Lohmann V, and Bartenschlager R, J. Virol. 75(10):4614-4624 (2001)）。本発明者らのＦＲＥＴアッセイについて記載したレプリコンコンストラクトを、Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ遺伝子のヒト化形態およびルシフェラーゼ遺伝子の３’末端に直接融合しているリンカー配列をコードするｃＤＮＡを挿入することによって改変した。この挿入物は、ネオマイシンマーカー遺伝子の直接上流のコア中に位置するＡｓｃ１制限部位を使用して、レプリコンコンストラクトに導入された。１１７９位での適応的変異（セリンからイソロイシン）もまた導入した（Blight KJ, Kolykhalov, AA, Rice, CM, Science 290(5498):1972-1974）。このＨＣＶレプリコンコンストラクトを恒常的に発現している安定的な細胞系を上記のように産生した。ルシフェラーゼレポーターアッセイを、下記のように修正してＨＣＶレプリコンＦＲＥＴアッセイのために説明したように設定した。３７℃／５％ＣＯ2のインキュベーター中で４日間後、Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｄｕａｌ−Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステムを使用して、Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ活性について細胞を分析した。培地（１００μｌ）を、細胞を含有する各ウェルから除去した。残りの５０μｌの培地に、５０μｌのＤｕａｌ−Ｇｌｏルシフェラーゼ試薬を加え、プレートを室温で１０ｍｉｎ〜２ｈ揺動させた。次いで、Ｄｕａｌ−Ｇｌｏ  Ｓｔｏｐ  ＆  Ｇｌｏ試薬（５０μｌ）を各ウェルに加え、プレートを室温でさらに１０ｍｉｎ〜２ｈ再び揺動させた。発光プログラムを使用してＰａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ  ＮＸＴ上でプレートを読み取った。
阻害率を下記の式を使用して計算した。
％対照＝    実験ウェル（＋化合物）における平均ルシフェラーゼシグナル    
ＤＭＳＯ対照ウェル（−化合物）における平均ルシフェラーゼシグナル
ＸＬｆｉｔを使用して値をグラフ化し、分析し、ＥＣ50値を得た。
【０１６２】
本開示の代表的な化合物を、ＨＣＶ酵素アッセイ、ＨＣＶレプリコン細胞アッセイおよび／またはいくつかの概説された特異性アッセイで評価した。例えば、化合物２Ａは、該酵素アッセイにおいて、ＮＳ３／４Ａ ＢＭＳ株に対して８.９ナノモーラー（ｎＭ）のＩＣ50を有することが分かった。公表されたＨ７７（１.４ｎＭのＩＣ50）およびＪ４Ｌ６Ｓ（１.２ｎＭのＩＣ50）株を用いて、類似する効力値を得た。レプリコンＦＲＥＴアッセイにおけるＥＣ50値は６９ｎＭであった。
【０１６３】
特異性アッセイにおいて、同化合物は、以下の活性を有することが分かった：ＨＬＥ ４.６μＭ；ＰＰＥ＞１００μＭ；キモトリプシン＝２.１μＭ；カテプシンＢ＞１００μＭ。これらの結果から、このファミリーの化合物がＮＳ３プロテアーゼに対して非常に特異的であり、これらのメンバーの多くはＨＣＶレプリコン複製を阻害することが示される。
【０１６４】
本開示の化合物を試験し、以下のように活性を有することが分かった：
ＩＣ50活性範囲（ＮＳ３／４Ａ ＢＭＳ株）：Ａは＞０.２μＭ；Ｂは０.０２〜０.２μＭ；Ｃは４〜２０ｎＭ。
ＥＣ50活性範囲（試験化合物について）：Ａは＞１μＭ；Ｂは０.１〜１μＭ；Ｃは１４〜１００ｎＭ。
表２
【表４】
2011521911.tif 000054
【０１６５】
本開示が前述の実施例に限定されず、その本質的な特性から逸脱することなく他の特定の形態で具体化されうることは、当業者にとって明らかであろう。したがって、実施例があらゆる点で例示的なものであり、限定するものではないと考えられ、前述の実施例に対してではなくむしろ添付の特許請求の範囲に対して参照がなされ、特許請求の範囲と同等の意味および範囲に含まれる全ての変更が、それゆえにその中に含まれるものと意図されるのが望ましい。
【手続補正書】
【提出日】平成23年1月28日(2011.1.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2011521911.tif 000062
（Ｉ）
［式中、
ｍは、１、２、または３であり；
Ｒ1は、ヒドロキシおよび−ＮＨＳＯ2Ｒ6から選択され；その中で、Ｒ6は、アルキル、アリール、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、および−ＮＲaＲbから選択され、該アルキル、該シクロアルキル、および該（シクロアルキル）アルキルのシクロアルキル部分は、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、アリールアルキル、アリールカルボニル、シアノ、シクロアルケニル、（シクロアルキル）アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、および（ＮＲeＲf）カルボニルから選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ2は、水素、アルケニル、アルキル、およびシクロアルキルから選択され、その中で、該アルケニル、該アルキル、および該シクロアルキルは、ハロで適宜置換されていてもよく；
Ｒ3は、アルケニル、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アルキル、アリールアルキル、カルボキシアルキル、シアノアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ハロアルコキシ、ハロアルキル、（ヘテロサイクリル）アルキル、ヒドロキシアルキル、（ＮＲcＲd）アルキル、および（ＮＲeＲf）カルボニルアルキルから選択され；
Ｒ4は、フェニル、並びに、窒素、酸素、および硫黄から選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な５または６員環から選択され；その中で、該環の各々は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルファニル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ4が置換された６員環である場合、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならず；
Ｒ5は、アルキルカルボニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクリルアルキル、ヘテロサイクリルアルキルカルボニル、ヘテロサイクリルカルボニル、および（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該アリール；該アリールアルキル、該アリールアルキルカルボニル、および該アリールカルボニルのアリール部分；該ヘテロサイクリル；並びに該ヘテロサイクリルアルキルおよび該ヘテロサイクリルアルキルカルボニルのヘテロサイクリル部分は、各々、１〜６個のＲ7基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ5がヘテロサイクリルである場合、該ヘテロサイクリルは、
【化２】
2011521911.tif 000063
以外であり；
Ｒ7は各々独立して、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シアノアルキル、シクロアルキル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロサイクリル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ，−ＮＲcＲd、（ＮＲcＲd）アルキル、（ＮＲcＲd）アルコキシ、（ＮＲeＲf）カルボニル、および（ＮＲeＲf）スルホニルから選択され；あるいは
２つの隣接Ｒ7基は、それらに結合する炭素原子と一緒になって、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１つまたは２つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な４〜７員環を形成し、その中で、該環は、アルコキシ、アルキル、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの基で適宜置換されていてもよく；
ＲaおよびＲbは独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルアルキルから選択されるか；あるいは、ＲaおよびＲbは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、４〜７員単環式ヘテロ環を形成し；
ＲcおよびＲdは独立して、水素、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリールアルキル、およびハロアルキルから選択され；
ＲeおよびＲfは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヘテロサイクリルから選択され；その中で、該アリール、該アリールアルキルのアリール部分、および該ヘテロサイクリルは、アルコキシ、アルキル、およびハロから独立して選択される１つまたは２つの置換基で適宜置換されていてもよく；並びに
ＲgおよびＲhは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルから選択されるか；あるいは、ＲgおよびＲhは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、単環式ヘテロ環を形成し、その中で、該単環式ヘテロ環は、フェニル環に適宜縮合して、二環式構造を形成してもよく；該単環式ヘテロ環および該二環式構造は、アルコキシ、アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよい］
の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ1が−ＮＨＳＯ2Ｒ6である、請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
ｍが、１または２であり；
Ｒ1が−ＮＨＳＯ2Ｒ6であり；その中で、Ｒ6は、アルキル、アリール、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、および−ＮＲaＲbから選択され、該アルキル、該シクロアルキル、および該（シクロアルキル）アルキルのシクロアルキル部分は、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、アリールアルキル、アリールカルボニル、シアノ、シクロアルケニル、（シクロアルキル）アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、および（ＮＲeＲf）カルボニルから選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ2が、アルケニル、アルキル、およびシクロアルキルから選択され、その中で、該アルケニル、該アルキル、および該シクロアルキルは、ハロで適宜置換されていてもよく；
Ｒ3が、アルケニルおよびアルキルから選択され；
Ｒ4が、フェニル、並びに、窒素、酸素、および硫黄から選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な５または６員環から選択され；その中で、該環の各々は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルファニル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ4が置換された６員環である場合、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならず；
Ｒ5が、アルキルカルボニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクリルアルキル、ヘテロサイクリルアルキルカルボニル、ヘテロサイクリルカルボニル、および（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該アリール；該アリールアルキル、該アリールアルキルカルボニル、および該アリールカルボニルのアリール部分；該ヘテロサイクリル；並びに該ヘテロサイクリルアルキルおよび該ヘテロサイクリルアルキルカルボニルのヘテロサイクリル部分は、各々、１〜６個のＲ7基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ5がヘテロサイクリルである場合、該ヘテロサイクリルは、
【化３】
2011521911.tif 000064
以外であり；
Ｒ7が各々独立して、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シアノアルキル、シクロアルキル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロサイクリル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ，−ＮＲcＲd、（ＮＲcＲd）アルキル、（ＮＲcＲd）アルコキシ、（ＮＲeＲf）カルボニル、および（ＮＲeＲf）スルホニルから選択され；あるいは
２つの隣接Ｒ7基が、それらに結合する炭素原子と一緒になって、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１つまたは２つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な４〜７員環を形成し、その中で、該環は、アルコキシ、アルキル、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの基で適宜置換されていてもよく；
ＲaおよびＲbが独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルアルキルから選択されるか；あるいは、ＲaおよびＲbが、それらに結合する窒素原子と一緒になって、４〜７員単環式ヘテロ環を形成し；
ＲcおよびＲdが独立して、水素、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリールアルキル、およびハロアルキルから選択され；
ＲeおよびＲfが独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヘテロサイクリルから選択され；その中で、該アリール、該アリールアルキルのアリール部分、および該ヘテロサイクリルは、アルコキシ、アルキル、およびハロから独立して選択される１つまたは２つの置換基で適宜置換されていてもよく；並びに
ＲgおよびＲhが独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルから選択されるか；あるいは、ＲgおよびＲhが、それらに結合する窒素原子と一緒になって、単環式ヘテロ環を形成し、その中で、該単環式ヘテロ環は、フェニル環に適宜縮合して、二環式構造を形成してもよく；該単環式ヘテロ環および該二環式構造は、アルコキシ、アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよい、請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒ6が無置換シクロアルキルである、請求項３の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項５】
ｍが１であり；
Ｒ1が−ＮＨＳＯ2Ｒ6であり；その中で、Ｒ6は無置換シクロアルキルであり；
Ｒ2がアルケニルであり；
Ｒ3がアルキルであり；
Ｒ4が、フェニル、並びに、窒素、酸素、および硫黄から選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な５または６員環から選択され；その中で、該環の各々は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ4が置換された６員環である場合、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならず；
Ｒ5が、ヘテロサイクリルおよび（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該ヘテロサイクリルは、１〜６個のＲ7基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ5は、
【化４】
2011521911.tif 000065
以外であり；
Ｒ7が各々独立して、アルコキシ、アリール、およびヘテロサイクリルから選択され；
ＲcおよびＲdが独立して、水素、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、およびアリールアルキルから選択され；
ＲeおよびＲfが独立して、水素、アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；並びに
ＲgおよびＲhが、それらに結合する窒素原子と一緒になって、フェニル環に縮合した単環式ヘテロ環を形成して、二環式構造を形成し；その中で、該二環式構造は、ハロ基で置換されている、請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項６】
Ｒ4が、１つの窒素原子を含む６員不飽和環であり、その中で、該環は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならない、請求項５の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項７】
Ｒ4が、１つの窒素原子および１つの硫黄原子を含む５員不飽和環であり、その中で、該環は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよい、請求項５の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項８】
【化５−１】
2011521911.tif 000066
【化５−２】
2011521911.tif 000067
から選択される化合物。
【請求項９】
請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩、並びに医薬的に許容される担体を含む組成物。
【請求項１０】
抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物をさらに含む、請求項９の組成物。
【請求項１１】
少なくとも１つの該別の化合物が、インターフェロンまたはリバビリンである、請求項１０の組成物。
【請求項１２】
該インターフェロンが、インターフェロンα２Ｂ、ペグ化インターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα２Ａ、およびリンパ芽球様インターフェロンτから選択される、請求項１１の組成物。
【請求項１３】
治療有効量の請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩を患者に投与することを特徴とする、患者におけるＨＣＶ感染症の治療方法。
【請求項１４】
請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩の、前、後、または同時に、抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物をさらに投与することを特徴とする、請求項１３の方法。
【請求項１５】
少なくとも１つの該別の化合物がインターフェロンまたはリバビリンである、請求項１４の方法。
【請求項１６】
該インターフェロンが、インターフェロンα２Ｂ、ペグ化インターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα２Ａ、およびリンパ芽球様インターフェロンτから選択される、請求項１５の方法。
【国際調査報告】
2011521911.tif 000068
2011521911.tif 000069
2011521911.tif 000070