(57)【要約】  本発明は、選択されたムスカリン受容体アンタゴニストである第一活性成分およびホスホジエステラーゼ阻害剤、ケモカイン受容体機能のモジュレーター、キナーゼ機能の阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、ステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニスト、非ステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニストおよびプリン受容体アンタゴニストから選択される第二活性成分を含む、、慢性閉塞性肺疾患および喘息のような呼吸器疾患の処置に使用するための、医薬品、キットまたは組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)
から選択されるスカリンアンタゴニストである第一活性成分と、
ｉ) ホスホジエステラーゼ阻害剤、
ii) ケモカイン受容体機能のモジュレーター
iii) キナーゼ機能の阻害剤、
iv) プロテアーゼ阻害剤、
ｖ) ステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニスト、
vi) 非ステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニスト、および
vii) プリン受容体アンタゴニスト
から選択される第二活性成分を含む、医薬品。
【請求項２】
第一活性成分がブロマイド塩であるムスカリンアンタゴニストである、請求項１に記載の医薬品。
【請求項３】
第二活性成分がＣＣＲ１アンタゴニストである、請求項１または２に記載の医薬品。
【請求項４】
第二活性成分が：
Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド；
Ｎ−{５−クロロ−２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド；
２−{２−クロロ−５−{[(２Ｓ)−３−(５−クロロ−１’Ｈ,３Ｈ−スピロ[１−ベンゾフラン−２,４’−ピペリジン]−１’−イル)−２−ヒドロキシプロピル]オキシ}−４−[(メチルアミノ)カルボニル]フェノキシ}−２−メチルプロパン酸；
またはその薬学的に許容される塩から選択されるＣＣＲ１アンタゴニストである、請求項３に記載の医薬品。
【請求項５】
第二活性成分がＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドまたはその薬学的に許容される塩である、請求項４に記載の医薬品。
【請求項６】
第二活性成分がＮ−{５−クロロ−２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドまたはその薬学的に許容される塩である、請求項４に記載の医薬品。
【請求項７】
第二活性成分が２−{２−クロロ−５−{[(２Ｓ)−３−(５−クロロ−１’Ｈ,３Ｈ−スピロ[１−ベンゾフラン−２,４’−ピペリジン]−１’−イル)−２−ヒドロキシプロピル]オキシ}−４−[(メチルアミノ)カルボニル]フェノキシ}−２−メチルプロパン酸またはその薬学的に許容される塩である、請求項４に記載の医薬品。
【請求項８】
第二活性成分がステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニストである、請求項１または２に記載の医薬品。
【請求項９】
呼吸器疾患の処置用医薬の製造における、請求項１〜８のいずれかに記載の医薬品の使用。
【請求項１０】
呼吸器疾患が慢性閉塞性肺疾患である、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
呼吸器疾患の処置方法であって：
(ａ)一定(治療有効)量の本発明のムスカリンアンタゴニストである第一活性成分；および
(ｂ)一定(治療有効)量の請求項１に定義する第二活性成分；
を、それらを必要とする患者に同時に、連続的にまたは別々に投与することを含む、方法。
【請求項１２】
請求項１または２に定義するムスカリン受容体アンタゴニストである第一活性成分の製剤と、請求項１に定義する第二活性成分、および場合によりそれを必要とする患者へのこれらの製剤の同時の、連続的なまたは別々の投与に関する指示を含む、キット。
【請求項１３】
請求項１または２に定義するムスカリン受容体アンタゴニストである第一活性成分および請求項１に定義する第二活性成分を、混合して含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、呼吸器疾患、特に慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)および喘息の処置に有用な複数薬学的活性物質の組合せ剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
肺の本来的機能は、その脆弱な構造の、汚染物質、微生物、アレルゲン、および発癌物質を含む環境への多大な暴露を必要とする。ライフスタイルの選択と遺伝的素因の相互作用によって形成される宿主因子がこの暴露への応答に影響する。肺の損傷または感染は、広範囲の呼吸器系疾患(または呼吸器疾患)を発症させ得る。多くのこれらの疾患は、大衆保健上極めて重要である。呼吸器疾患は、急性肺傷害、急性呼吸器窮迫症候群(ＡＲＤＳ)、職業性肺疾患、肺癌、結核、線維症、塵肺、肺炎、気腫、慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)および喘息を含む。
【０００３】
最も一般的な呼吸器疾患の一つは喘息である。喘息は、一般に間欠的な呼吸気流閉塞が原因の臨床症状を伴う気道の炎症性障害として定義される。それは発作性の喘鳴、呼吸困難および咳により臨床的に特徴付けられる。それは、有病率および重症度が上昇しているように見える、慢性機能障害性の疾患である。先進国における子供の１５％および成人の５％が喘息に罹病していると推計される。故に、治療は、通常の生活が可能となり、同時に基礎疾患である炎症の処置の基礎をもたらすような症状の抑制を目的とすべきである。
【０００４】
ＣＯＰＤは、正常な呼吸を阻害し得る広汎な肺疾患群に用いられる病名である。現在の臨床ガイドラインは、ＣＯＰＤを、完全に可逆性ではない気道空気流制限によって特徴付けられる疾病状態と定義している。気道空気流制限は、通常進行性で、かつ有害粒子またはガスに対する肺の異常炎症性応答と関係する。このような粒子およびガスに対する最重要寄与源は、少なくとも西側諸国ではタバコの煙である。ＣＯＰＤ患者は咳、息切れ、および痰の過剰分泌を含む種々の症状を呈し、このような症状は、好中球、マクロファージ、および上皮細胞を含む多くの細胞群の機能障害に由来する。ＣＯＰＤに含まれる２つの最も重要な症状は慢性気管支炎および肺気腫である。
【０００５】
慢性気管支炎は、気管支の長期にわたる炎症であり、後者は粘膜形成の増大およびその他の変化をもたらす。患者の症状は、咳および痰の喀出である。慢性気管支炎は、より頻繁で重篤な呼吸器感染、気管支の狭窄および閉塞、呼吸困難および呼吸不能に至り得る。
【０００６】
肺気腫は、肺胞および／または小気管支の末端に影響する慢性肺疾患である。肺はその弾力性を失い、そのために、肺の当該領域は拡張する。当該拡張領域は古い空気を滞留させ、それを新鮮な空気と効率的に交換しない。その結果呼吸困難をもたらし、そして血中への酸素の供給不足を生じる。肺気腫患者の主症状は息切れである。
【０００７】
呼吸器疾患の処置に使用される治療剤はムスカリンアンタゴニストを含む。ムスカリン受容体は、５種のファミリーメンバーＭ１、Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４およびＭ５を有するＧタンパク質共役受容体(ＧＰＣＲ)ファミリーである。この５種のムスカリンサブタイプの中で、３種(Ｍ１、Ｍ２およびＭ３)がヒト肺組織に対する生理学的作用を発揮することが知られている。副交感神経は、ヒト気道における反射性気管支収縮の主経路であり、ムスカリン受容体に対してアセチルコリンを送達することにより気道緊張を媒介する。気道緊張は、喘息および慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)のような呼吸器障害を有する患者で上昇しており、この理由により、ムスカリン受容体アンタゴニストは気道疾患への使用のために開発されている。診療においてはしばしば抗コリン剤と呼ばれるムスカリン受容体アンタゴニストは、ＣＯＰＤを有する個体の第一選択薬として広く受容れられており、その使用は文献に広範にレビューされている(例えばLee et al, Current Opinion in Pharmacology 2001,1, 223-229参照)。
【０００８】
ムスカリンアンタゴニストでの処置は重要な利益をもたらしているが、しばしばこれらの薬剤の効果は満足とはほど遠い。さらに、呼吸器疾患、例えば喘息およびＣＯＰＤの複雑さの点から、何らかの一つのメディエーターがそれだけでこの疾患を十分に治療できる可能性はなさそうである。それ故に呼吸器疾患、例えばＣＯＰＤおよび喘息に対する新規治療、特に疾患修飾能を有する治療への医学的な切迫した要求がある。
【発明の概要】
【０００９】
本発明は：
(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)
から選択されるムスカリンアンタゴニストである第一活性成分と、
ｉ) ホスホジエステラーゼ阻害剤、
ii) ケモカイン受容体機能のモジュレーター、
iii) キナーゼ機能の阻害剤、
iv) プロテアーゼ阻害剤、
ｖ) ステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニスト、
vi) 非ステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニスト、および
vii) プリン受容体アンタゴニスト
から選択される第二活性成分を組み合わせて含む、医薬品を提供する。
【００１０】
本発明に従うムスカリンアンタゴニストを上に特定した第二活性成分と組み合わせて呼吸器疾患の処置に使用したとき、有益な効果が観察され得る。有益な効果は、２種の活性成分を同時に(一医薬製剤としてまたは別の製剤を介していずれか)、または別の医薬製剤を介して連続的にまたは別々に投与したときに観察され得る。
【００１１】
本発明の医薬品は、例えば、第一および第二活性成分を混合して含む医薬組成物であり得る。あるいは、本医薬品は、例えば、第一活性成分の製剤および第二活性成分の製剤と、場合により、それを必要とする患者へのこれらの製剤の同時の、連続的なまたは別々の投与に関する指示を含むキットであり得る。
【００１２】
本発明の組合せ剤の第一活性成分は：
(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ；
(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)
から選択されるムスカリンアンタゴニストである。
【００１３】
本発明のムスカリンアンタゴニストは、Ｍ３受容体に高い効力を示す同時係属出願ＰＣＴ／ＧＢ２００８／０００５１９(ＷＯ２００８／０９９１８６)に記載した新規化合物群の中から選択される。ムスカリンアンタゴニストの名称は、実施例に記載した構造式、およびカーン・インゴルド・プレローグシステムに従う立体異性に基づき、MDL Information Systems Inc.により提供されるBeilstein Autonom 2000 naming packageにより作成したＩＵＰＡＣ名である。例えば、名称(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンは次の構造から作成された：
【化１】
2011530586.tif 000002
【００１４】
本発明のムスカリンアンタゴニストは、４級窒素原子上の正荷電と結合するアニオンＸを含む。本アニオンＸは、任意の一価または多価(例えば二価)酸の薬学的に許容されるアニオンであり得る。本発明の一態様においてＸは、鉱酸のアニオン、例えばクロライド、ブロマイド、アイオダイド、スルフェート、ナイトレートまたはホスフェート；または適当な有機酸のアニオン、例えばトルエンスルホネート(トシレート)、エジシレート(エタン−１,２−ジスルホネート)、イセチオネート(２−ヒドロキシエチルスルホネート)、ラクテート、オレアート(oleic)、マレアート((Ｚ)−３−カルボキシ−アクリレート)、スクシネート(３−カルボキシ−プロピオネート)、マレート((Ｓ)−３−カルボキシ−２−ヒドロキシ−プロピオネート)、ｐ−アセトアミドベンゾエート、アセテート、マレアート、フマレート、シトレート、オキサレート、スクシネート、タートレート、メタンスルホネート、ｐ−トルエンスルホネート、ベンゼンスルホネート、ナパジシレート(ナフタレン−１,５−ジスルホネート)(例えばヘミナパジシレート)、２,５−ジクロロベンゼンスルホネート、(キシナホエート)１−ヒドロキシ−２−ナフトエートまたは１−ヒドロキシナフタレン−２−スルホネートであり得る。
【００１５】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは臭化物塩の形である。
【００１６】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストは
(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイド；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライド；
(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイド；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネート；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンベンゼンスルホネート；
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライド；および
(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイド
から選択される。
【００１７】
本発明の第二活性成分は
ｉ) ホスホジエステラーゼ阻害剤、
ii) ケモカイン受容体機能のモジュレーター、
iii) キナーゼ機能の阻害剤、
iv) プロテアーゼ阻害剤、
ｖ) ステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニスト、
vi) 非ステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニスト、および
vii) プリン受容体アンタゴニスト
から選択される。
【００１８】
本発明の一態様において、第二活性成分はホスホジエステラーゼ阻害剤である。この態様に従い使用し得るホスホジエステラーゼ阻害剤の、例えばアイソフォームＰＤＥ４Ｄの阻害剤、ＰＤＥ３阻害剤およびＰＤＥ５阻害剤を含む。例は化合物：
(Ｚ)−３−(３,５−ジクロロ−４−ピリジル)−２−[４−(２−インダニルオキシ−５−メトキシ−２−ピリジル]プロペンニトリル、
Ｎ−[９−アミノ−４−オキソ−１−フェニル−３,４,６,７−テトラヒドロピロロ[３,２,１−ｊｋ][１,４]ベンゾジアゼピン−３(Ｒ)−イル]ピリジン−３−カルボキサミド(ＣＩ−１０４４)、
３−(ベンジルオキシ)−１−(４−フルオロベンジル)−Ｎ−[３−(メチルスルホニル)フェニル]−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド、
(１Ｓ−ｅｘｏ)−５−[３−(ビシクロ[２.２.１]ヘプト−２−イルオキシ)−４−メトキシフェニル]テトラヒドロ−２(１Ｈ)−ピリミジノン(アチゾラム)、
Ｎ−(３,５,ジクロロ−４−ピリジニル)−２−[１−(４−フルオロベンジル)−５−ヒドロキシ−１Ｈ−インドール−３−イル]−２−オキソアセトアミド(ＡＷＤ−１２−２８１)、
β−[３−(シクロペンチルオキシ)−４−メトキシフェニル]−１,３−ジヒドロ−１,３−ジオキソ−２Ｈ−イソインドール−２−プロパンアミド(ＣＤＣ−８０１)、
Ｎ−[９−メチル−４−オキソ−１−フェニル−３,４,６,７−テトラヒドロピロロ[３,２,１−ｊｋ][１,４]ベンゾジアゼピン−３(Ｒ)−イル]ピリジン−４−カルボキサミド(ＣＩ−１０１８)、
ｃｉｓ−[４−シアノ−４−(３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシフェニル)シクロヘキサン−１−カルボン酸(シロミラスト)、
８−アミノ−１,３−ビス(シクロプロピルメチル)キサンチン(シパムフィリン(cipamfylline))、
Ｎ−(２,５−ジクロロ−３−ピリジニル)−８−メトキシ−５−キノリンカルボキサミド(Ｄ−４４１８)、
５−(３,５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシベンジリデン)−２−イミノチアゾリジン−４−オン(Darbufelone)、
２−メチル−１−[２−(１−メチルエチル)ピラゾロ[１,５−ａ]ピリジン−３−イル]−１−プロパノン(イブジラスト)、
２−(２,４−ジクロロフェニルカルボニル)−３−ウレイドベンゾフラン−６−イルメタンスルホネート(リリミラスト(Lirimilast))、
(−)−(Ｒ)−５−(４−メトキシ−３−プロポキシフェニル)−５−メチルオキサゾリジン−２−オン(メソプラム(mesopram))、
(−)−ｃｉｓ−９−エトキシ−８−メトキシ−２−メチル−１,２,３,４,４ａ,１０ｂ−ヘキサヒドロ−６−(４−ジイソプロピルアミノカルボニルフェニル)−ベンゾ[ｃ][１,６]ナフチリジン(プマフェントリン(Pumafentrine))、
３−(シクロプロピルメトキシ)−Ｎ−(３,５−ジクロロ−４−ピリジル)−４−(ジフルオロメトキシ)ベンズアミド(ロフルミラスト)、
ロフルミラストのＮ−オキシド、
５,６−ジエトキシベンゾ[ｂ]チオフェン−２−カルボン酸(Tibenelast)、
２,３,６,７−テトラヒドロ−２−(メシチルイミノ)−９,１０−ジメトキシ−３−メチル−４Ｈ−ピリミド[６,１−ａ]イソキノリン−４−オン(trequinsin)および
３−[[３−(シクロペンチルオキシ)−４−メトキシフェニル]−メチル]−Ｎ−エチル−８−(１−メチルエチル)−３Ｈ−プリン−６−アミン(Ｖ−１１２９４Ａ)
を含む。
【００１９】
本発明の一態様において第二活性成分はケモカイン受容体機能のモジュレーターである。この態様で使用し得るケモカイン受容体機能のモジュレーターの例は、ＣＣＲ３受容体アンタゴニスト、ＣＣＲ４受容体アンタゴニスト、ＣＣＲ５受容体アンタゴニストおよびＣＣＲ８受容体アンタゴニストを含む。
【００２０】
本発明の一態様において第二活性成分はＣＣＲ１受容体アンタゴニストである。
【００２１】
本発明の一態様において、第二活性成分は：
Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド；
Ｎ−{５−クロロ−２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド；
２−{２−クロロ−５−{[(２Ｓ)−３−(５−クロロ−１’Ｈ,３Ｈ−スピロ[１−ベンゾフラン−２,４’−ピペリジン]−１’−イル)−２−ヒドロキシプロピル]オキシ}−４−[(メチルアミノ)カルボニル]フェノキシ}−２−メチルプロパン酸；
またはその薬学的に許容される塩
から選択される、ＣＣＲ１受容体アンタゴニストである。
【００２２】
本発明の他の態様において、第二活性成分はＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドまたはＮ−{５−クロロ−２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドの塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、アスコルビン酸塩、安息香酸塩、フマル酸塩、ヘミフマル酸塩、フロ酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、キシナホ酸塩、メタンスルホン酸塩またはｐ−トルエンスルホン酸塩である。
【００２３】
本発明の他の態様において、第二活性成分がＰＣＴ／ＳＥ２００６／０００９２０、ＰＣＴ／ＳＥ２００６／０００９２１およびＰＣＴ／ＳＥ２００６／０００９２２(ＷＯ２００７／０１５６６６、ＷＯ２００７／０１５６６７およびＷＯ２００７／０１５６６８)に記載の通りのＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドの安息香酸塩、フロ酸塩またはヘミフマル酸塩である。
【００２４】
本発明の他の態様において、第二活性成分がＮ−{５−クロロ−２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドのヘミフマル酸塩、フロ酸塩、安息香酸塩、２−フルオロ安息香酸塩または２,６−ジフルオロ安息香酸塩である。
【００２５】
本発明の一態様において第二活性成分が２−{２−クロロ−５−{[(２Ｓ)−３−(５−クロロ−１’Ｈ,３Ｈ−スピロ[１−ベンゾフラン−２,４’−ピペリジン]−１’−イル)−２−ヒドロキシプロピル]オキシ}−４−[(メチルアミノ)カルボニル]フェノキシ}−２−メチルプロパン酸またはその薬学的に許容される塩である。２−{２−クロロ−５−{[(２Ｓ)−３−(５−クロロ−１’Ｈ,３Ｈ−スピロ[１−ベンゾフラン−２,４’−ピペリジン]−１’−イル)−２−ヒドロキシプロピル]オキシ}−４−[(メチルアミノ)カルボニル]フェノキシ}−２−メチルプロパン酸は、ＰＣＴ／ＳＥ２００７／０００６９４(ＷＯ２００８／０１０７６５)記載の方法に従い、または準じて製造し得る。
【００２６】
本発明の一態様において第二活性成分がＮ−{５−クロロ−２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドまたはその薬学的に許容される塩である。Ｎ−{５−クロロ−２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドは、記載の方法に従い、または準じて製造し得るＷＯ２００７／０１５６６４。
【００２７】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分がＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えば安息香酸塩、ヘミフマル酸塩またはフロ酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドである。この態様の他の面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンベンゼンスルホネートである。
【００２８】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分がＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えば安息香酸塩、ヘミフマル酸塩またはフロ酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドである。この態様の他の面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネートである。
【００２９】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分がＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えば安息香酸塩、ヘミフマル酸塩またはフロ酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００３０】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分がＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えば安息香酸塩、ヘミフマル酸塩またはフロ酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００３１】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分がＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えば安息香酸塩、ヘミフマル酸塩またはフロ酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００３２】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分がＮ−{５−クロロ−２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えば安息香酸塩、ヘミフマル酸塩またはフロ酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドである。この態様の他の面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンベンゼンスルホネートである。
【００３３】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分がＮ−{５−クロロ−２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えば安息香酸塩、ヘミフマル酸塩またはフロ酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドである。この態様の他の面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネートである。
【００３４】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分がＮ−{５−クロロ−２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えば安息香酸塩、ヘミフマル酸塩またはフロ酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００３５】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分がＮ−{５−クロロ−２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えば安息香酸塩、ヘミフマル酸塩またはフロ酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００３６】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分がＮ−{５−クロロ−２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドまたはその薬学的に許容される塩(例えば安息香酸塩、ヘミフマル酸塩またはフロ酸塩)である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００３７】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分が２−{２−クロロ−５−{[(２Ｓ)−３−(５−クロロ−１’Ｈ,３Ｈ−スピロ[１−ベンゾフラン−２,４’−ピペリジン]−１’−イル)−２−ヒドロキシプロピル]オキシ}−４−[(メチルアミノ)カルボニル]フェノキシ}−２−メチルプロパン酸またはその薬学的に許容される塩である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドである。この態様の他の面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンベンゼンスルホネートである。
【００３８】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分が２−{２−クロロ−５−{[(２Ｓ)−３−(５−クロロ−１’Ｈ,３Ｈ−スピロ[１−ベンゾフラン−２,４’−ピペリジン]−１’−イル)−２−ヒドロキシプロピル]オキシ}−４−[(メチルアミノ)カルボニル]フェノキシ}−２−メチルプロパン酸またはその薬学的に許容される塩である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドである。この態様の他の面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネートである。
【００３９】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分が２−{２−クロロ−５−{[(２Ｓ)−３−(５−クロロ−１’Ｈ,３Ｈ−スピロ[１−ベンゾフラン−２,４’−ピペリジン]−１’−イル)−２−ヒドロキシプロピル]オキシ}−４−[(メチルアミノ)カルボニル]フェノキシ}−２−メチルプロパン酸またはその薬学的に許容される塩である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００４０】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分が２−{２−クロロ−５−{[(２Ｓ)−３−(５−クロロ−１’Ｈ,３Ｈ−スピロ[１−ベンゾフラン−２,４’−ピペリジン]−１’−イル)−２−ヒドロキシプロピル]オキシ}−４−[(メチルアミノ)カルボニル]フェノキシ}−２−メチルプロパン酸またはその薬学的に許容される塩である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００４１】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分が２−{２−クロロ−５−{[(２Ｓ)−３−(５−クロロ−１’Ｈ,３Ｈ−スピロ[１−ベンゾフラン−２,４’−ピペリジン]−１’−イル)−２−ヒドロキシプロピル]オキシ}−４−[(メチルアミノ)カルボニル]フェノキシ}−２−メチルプロパン酸またはその薬学的に許容される塩である。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００４２】
本発明の一態様において第二活性成分がキナーゼ機能の阻害剤である。この態様において使用し得るキナーゼ機能の阻害剤の例は、ｐ３８キナーゼ阻害剤およびＩＫＫ阻害剤を含む。
【００４３】
本発明の一態様において第二活性成分がプロテアーゼ阻害剤である。この態様において使用し得るプロテアーゼ阻害剤の例は、好中球エラスターゼの阻害剤またはＭＭＰ１２の阻害剤を含む。
【００４４】
本発明の一態様において第二活性成分がステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニストである。この態様において使用し得るステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニストの例は、ブデソニド、フルチカゾン(例えばプロピオン酸エステルとして)、モメタゾン(例えばフロ酸エステルとして)、ベクロメタゾン(例えば１７−プロピオン酸エステルまたは１７,２１−ジプロピオン酸エステルとして)、シクレソニド、ロテプレドノール(例えばエタボネートとして)、エチプレドノール(例えばジクロロアセテートとして)、トリアムシノロン(例えばアセトニドとして)、フルニソリド、ゾチカゾン(zoticasone)、フルモキソニド(flumoxonide)、ロフレポニド、ブチキソコート(例えばプロピオン酸エステルとして)、プレドニゾロン、プレドニゾン、チプレダン(tipredane)、ステロイドエステル類、例えば６α,９α−ジフルオロ−１７α−[(２−フラニルカルボニル)オキシ]−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソ−アンドロスタ−１,４−ジエン−１７β−カルボチオチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、６α,９α−ジフルオロ−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソ−１７α−プロピオニルオキシ−アンドロスタ−１,４−ジエン−１７β−カルボチオチオ酸Ｓ−(２−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イル)エステルおよび６α,９α−ジフルオロ−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−１７α−[(４−メチル−１,３−チアゾール−５−カルボニル)オキシ]−３−オキソ−アンドロスタ−１,４−ジエン−１７β−カルボチオチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、ＤＥ４１２９５３５に従うステロイドエステル類、ＷＯ２００２／００６７９、ＷＯ２００５／０４１９８０に従うステロイド、またはステロイドGSK 870086、GSK 685698およびGSK 799943を含む。
【００４５】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分がブデソニドである。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドである。この態様の他の面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンベンゼンスルホネートである。
【００４６】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分がブデソニドである。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドである。この態様の他の面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネートである。
【００４７】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分がブデソニドである。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００４８】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分がブデソニドである。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００４９】
本発明の一態様において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンＸ(ここで、Ｘは一価または多価酸の薬学的に許容されるアニオンである)であり、そして第二活性成分がブデソニドである。この態様の一面において、ムスカリン受容体アンタゴニストが(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイドである。
【００５０】
本発明の一態様において第二活性成分が非ステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニストである。この態様で使用し得る非ステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニストのモジュレーターの例は、選択的非ステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニストを含む。非ステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニストは、例えばＷＯ２００６／０４６９１６およびＵＳ６３２３１９９に開示されている。
【００５１】
本発明の一態様において第二活性成分がプリン受容体アンタゴニスト、例えばＰ２Ｘ７受容体アンタゴニストである。Ｐ２Ｘ７受容体アンタゴニストの例は、ＷＯ００／６１５６９、ＷＯ０１／４４１７０、ＷＯ０１／９４３３８、ＷＯ０３／０４１７０７、ＷＯ０３／０８０５７９、ＷＯ０４／１０６３０５、ＷＯ０５／００９９６８、ＷＯ０６／０２５７８４およびＷＯ０６／０５９９４５に記載されている。
【００５２】
本発明の組合せ剤は、呼吸器疾患の処置に有益な治療効果を提供し得る。かかる可能性のある効果の例は、次の１個以上のパラメータの改善を含む：肺への炎症性細胞流入の軽減、軽度および重度増悪、ＦＥＶ１(一秒量)、肺活量(ＶＣ)、最大呼気流量(ＰＥＦ)、症状スコアおよびクオリティ・オブ・ライフ。
【００５３】
本発明のムスカリンアンタゴニスト(第一活性成分)および第二活性成分を呼吸器疾患を処置するために同時に、連続的にまたは別々に投与し得る。連続投与により、これらの複数活性成分を、任意の順番で、一方の直後に他方を投与することを意味する。それらを別々に投与しても望む効果をなお有し得るが、この方法で投与するとき、一般に４時間以上は離れないで、より好都合には２時間以上離れないで、より好都合には３０分間以上離れないで、そして最も好都合には１０分間以上離れないで投与する。
【００５４】
本発明のこれらの複数活性成分を経口または非経腸(例えば静脈内、皮下、筋肉内または関節内)投与により慣用の全身投与形態、例えば錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、水性または油性溶液または懸濁液、エマルジョンおよび滅菌注射可能水性または油性溶液または懸濁液で投与してよい。これらの複数活性成分をまた局所的に(肺および／または気道に)溶液、懸濁液、エアロゾル剤および乾燥粉末製剤の形で投与してよい。これらの投与形態は、通常、例えば、アジュバント、担体、結合剤、滑剤、希釈剤、安定化剤、乾燥剤、乳化剤、粘性調節剤、界面活性剤、防腐剤、香味剤および着色剤から選択され得る１種以上の薬学的に許容される成分を含む。当業者には理解される通り、これらの複数活性成分を投与する最も好適な方法は多くの因子による。
【００５５】
本発明の一態様において、これらの複数活性成分を別々の医薬製剤により投与してよい。それ故、一面において、本発明は、本発明のムスカリンアンタゴニストである第一活性成分の製剤、および第二活性成分の製剤、および場合によりそれを必要とする患者へのこれらの製剤の同時の、連続的なまたは別々の投与のための指示を含むキットを提供する。
【００５６】
他の態様において、これらの複数活性成分は一医薬組成物により投与してよい。それ故、本発明は、さらに、本発明のムスカリンアンタゴニストである第一活性成分、および第二活性成分を混合して含む、医薬組成物を提供する。
【００５７】
本発明の医薬組成物は、ムスカリンアンタゴニスト(第一活性成分)と第二活性成分および薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体を混合することにより製造し得る。それ故、本発明のさらなる面において、本発明のムスカリンアンタゴニストと第二活性成分および薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体を混合することを含む、医薬組成物の製造方法が提供される。
【００５８】
本発明に従い投与される各活性成分の治療用量は、用いる特定の活性成分、活性成分を投与する方式、および処置する状態または障害により変わることは理解されよう。
【００５９】
本発明の一態様において、本発明のムスカリンアンタゴニスト(第一活性成分)を吸入により投与する。吸入により投与するとき、本発明のムスカリンアンタゴニストの投与量は、一般に、０.１マイクログラム(μg)〜５０００μg、０.１〜１０００μg、０.１〜５００μg、０.１〜１００μg、０.１〜５０μg、０.１〜５μg、５〜５０００μg、５〜１０００μg、５〜５００μg、５〜１００μg、５〜５０μg、５〜１０μg、１０〜５０００μg、１０〜１０００μg、１０〜５００μg、１０〜１００μg、１０〜５０μg、２０〜５０００μg、２０〜１０００μg、２０〜５００μg、２０〜１００μg、２０〜５０μg、５０〜５０００μg、５０〜１０００μg、５０〜５００μg、５０〜１００μg、１００〜５０００μg、１００〜１０００μgまたは１００〜５００μgの範囲である。この投与量を、一般に、１日１〜４回、好都合には１日１回または２回、および最も好都合には１日１回で投与する。
【００６０】
本発明の一態様において、本発明の第二活性成分を好都合には吸入により投与し得る。吸入により投与するとき、第二活性成分の投与量は、０.１〜５０μg、０.１〜４０μg、０.１〜３０μg、０.１〜２０μg、０.１〜１０μg、５〜１０μg、５〜５０μg、５〜４０μg、５〜３０μg、５〜２０μg、５〜１０μg、１０〜５０μg、１０〜４０μg、１０〜３０μg、または１０〜２０μgの範囲である。この投与量を、一般に、１日１〜４回、好都合には１日１回または２回、および最も好都合には１日１回で投与する。
【００６１】
本発明の他の態様において、第二活性成分を経口で投与する。第二活性成分の経口東男は、例えば、他の活性成分(複数もある)を吸入により投与する医薬品またはキットを使用し得る。経口で東男するとき、第二活性成分の投与量が５〜１０００ミリグラム(mg)、５〜８００mg、５〜６００mg、５〜５００mg、５〜４００mg、５〜３００mg、５〜２００mg、５〜１００mg、５〜５０mg、２０〜１０００mg、２０〜８００mg、２０〜６００mg、２０〜５００mg、２０〜４００mg、２０〜３００mg、２０〜２００mg、２０〜１００mg、２０〜５０mg、５０〜１０００mg、５０〜８００mg、５０〜６００mg、５０〜５００mg、５０〜４００mg、５０〜３００mg、５０〜２００mg、５０〜１００mg、１００〜１０００mg、１００〜８００mg、１００〜６００mg、１００〜５００mg、１００〜４００mg、１００〜３００mg、または１００〜２００mgであるときに満足いく結果が一般に得られる。この投与量を、一般に、１日１〜４回、好都合には１日１回または２回、および最も好都合には１日１回で投与する。
【００６２】
一態様において、本発明は、各活性成分が吸入投与用に製剤された、上で定義した、ムスカリンアンタゴニストである第一活性成分、および第二活性成分を組み合わせて含む医薬品を提供する。
【００６３】
本発明の他の態様において、ムスカリンアンタゴニストである第一活性成分を経口投与用に製剤してよく、そして上で定義した第二活性成分(複数もある)を吸入投与用に製剤してよい。
【００６４】
本発明のさらに別の態様において、ムスカリンアンタゴニストである第一活性成分を吸入投与用に製剤してよく、そして上で定義した第二活性成分(複数もある)を経口投与用に製剤してよい。
【００６５】
本発明のさらに別の態様において、ムスカリンアンタゴニストである第一活性成分、および上で定義した第二活性成分(複数もある)は、各々経口投与用に製剤されている。
【００６６】
一態様において複数活性成分の医薬製剤を同時に投与してよい。
【００６７】
一態様において複数活性成分の異なる医薬製剤を連続的に投与してよい。
【００６８】
一態様において複数活性成分の異なる医薬製剤を別々に投与してよい。
【００６９】
本発明のこれらの複数活性成分は、好都合には吸入により(例えば肺および／または気道に局所的に)、溶液、懸濁液、エアロゾルおよび乾燥粉末製剤の形で投与される。例えば定量噴霧式吸入器を、適当な噴射剤に分散されており、そしてさらなる賦形剤、例えばエタノール、界面活性剤、滑剤または安定化剤を伴うかまたは伴わない、これらの複数活性成分の投与に使用できる。適当な噴射剤は炭化水素、クロロフルオロカーボンおよびヒドロフルオロアルカン(例えばヘプタフルオロアルカン)噴射剤、または任意のかかる噴射剤の混合物を含む。好ましい噴射剤はＰ１３４ａおよびＰ２２７であり、これらの各々は単独でまたは他の噴射剤および／または界面活性剤および／または他の賦形剤と共に使用し得る。噴霧水性懸濁液または、好ましくは、溶液も、適当なｐＨおよび／または張性調節剤と共にまたは伴わずに、単位投与または多回投与量のいずれかとして使用し得る。
【００７０】
これらの複数活性成分の乾燥粉末および加圧ＨＦＡエアロゾルを経口または経鼻吸入により投与し得る。吸入用に、本化合物は望ましくは微粉化されている。微粉化化合物は、好ましくは１０μm未満の質量中央直径を有し、噴射剤混合物に分散剤、例えばＣ８−Ｃ２０脂肪酸またはその塩(例えば、オレイック酸)、胆汁酸塩、リン脂質、アルキルサッカライド、過フッ素化またはポリエトキシル化界面活性剤、または他の薬学的に許容される分散剤の助けを借りて懸濁され得る。
【００７１】
一つの可能性は、微粉化した本発明の化合物と担体物質、例えば、モノ−、ジ−またはポリサッカライド、糖アルコール、または他のポリオールの混合である。適当な担体は類、例えば、ラクトース、グルコース、ラフィノース、メレジトース、ラクチトール、マルチトール、トレハロース、スクロース、マンニトール；およびデンプンである。あるいは微粉化化合物を他の物質でコーティングしてよい。粉末混合物をまた、各々所望用量の活性化合物を含む硬ゼラチンカプセルに分配してよい。
【００７２】
他の可能性は、微粉化した粉末を、吸入過程の間に崩壊する球体に加工することである。この球体化粉末を、多投与量吸入器、例えば、投与ユニットが所望量を定量し、それがその後患者により吸入されるTurbuhaler(登録商標)として既知のもの薬剤貯蔵部に充填し得る。この系で、活性成分は、担体物質を伴いまたは伴わず、患者に送達される。
【００７３】
本発明の組合せ剤は、呼吸器−管障害、例えば慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)、全てのタイプの慢性気管支炎(それに伴う呼吸困難を含む)、喘息(アレルギー性および非アレルギー性；‘喘鳴幼児症候群(wheezy-infant syndrome)’、成人／急性呼吸窮迫症候群(ＡＲＤＳ)、慢性呼吸器閉塞、気管支機能亢進、肺線維症、肺気腫、およびアレルギー性鼻炎、他の薬物治療、特に他の吸入薬物治療の結果の気道反応性亢進の増悪または塵肺(例えばアルミニウム肺症、炭粉沈着症、石綿肺症、石肺症、ダチョウ塵肺症、鉄沈着症、珪肺症、タバコ症および綿肺症)の処置または予防に有用である。
【００７４】
乾燥粉末吸入器は、これらの複数活性成分を、単独でまたは薬学的に許容される担体と共に、後者の場合、微粉化粉末または秩序混合物として投与するために使用し得る。乾燥粉末吸入器は一投与量または多回投与量であってよく、乾燥粉末または粉末含有カプセルを利用してよい。
【００７５】
定量吸入器、ネブライザーおよび乾燥粉末吸入器は既知であり、種々のかかる装置が利用可能である。
【００７６】
本発明は、さらに、治療において同時に、連続的にまたは別々に使用するための本発明の医薬品、キットまたは医薬組成物を提供する。
【００７７】
本発明は、さらに、呼吸器疾患、特に慢性閉塞性肺疾患または喘息の処置用医薬の製造における、本発明の医薬品、キットまたは医薬組成物の使用を提供する。
【００７８】
本発明はさらに、呼吸器疾患、特に慢性閉塞性肺疾患または喘息処置に使用する医薬の製造における、本発明の医薬品、キットまたは医薬組成物の使用を提供する。
【００７９】
本発明は、なおさらに呼吸器疾患の処置方法であって：
(ａ)一定(治療有効)量の本発明のムスカリンアンタゴニストである第一活性成分；および
(ｂ)一定(治療有効)量の本発明の第二活性成分；
を、それらを必要とする患者に同時に、連続的にまたは別々に投与することを含む、方法を提供する。
【００８０】
本明細書の文脈で、用語“治療”はまた、異なる具体的指示がない限り、“予防”も含む。用語“治療的”および“治療的に”もこれに従い解釈すべきである。予防は、当該疾患または状態の前のエピソードに罹患したか、または、他の方法でリスクが増加していると見なされるヒトの処置に特に関連すると期待される。特定の疾患または状態を発症するリスクのあるヒトは、一般に、該疾患または状態の家族歴を有するか、または、遺伝子試験またはスクリーニングで該疾患または状態の発症に特に感受性であることが同定されているヒトを含む。
【００８１】
用語“疾患”は、他に定義しない限り、用語“状態”および“障害”と同様の意味を有し、本明細書および特許請求の範囲で交換可能に使用されている。
用語“医薬”および“活性成分”は、本発明の組合せ剤を構成する化合物、例えばムスカリンアンタゴニストまたはＣＣＲ１アンタゴニストを意味する。
【００８２】
本発明の医薬品、キットまたは組成物は場合により第三活性成分を含んでよく、該第三活性成分は呼吸器疾患の処置に適切な物質である。
【００８３】
本発明に包含し得る第三の活性成分は、第二活性成分として上に上げたもの(すなわちホスホジエステラーゼ阻害剤、ケモカイン受容体機能のモジュレーター、キナーゼ機能の阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、ステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニスト、非ステロイド性グルココルチコイド受容体アゴニストまたはプリン受容体アンタゴニスト)であり、それらは第二活性成分として使用されていない態様において、第三活性成分として使用し得ることは認識される。
【００８４】
本発明の一態様において、第三活性成分がβ２−アドレナリン受容体アゴニストである。β２−アドレナリン受容体アゴニストは、β２受容体を使用し、気管支拡張剤として作用できる全ての化合物または物質であり得る。本発明に包含し得るβ２−アドレナリン受容体アゴニストの例は、フォルモテロールを含む。フォルモテロールの化学名はＮ−[２−ヒドロキシ−５−[(１)−１−ヒドロキシ−２−[[(１)−２−(４−メトキシフェニル)−１−メチルエチル]アミノ]エチル]フェニル]−ホルムアミドである。フォルモテロールの製造は、例えば、ＷＯ９２／０５１４７に記載されている。この態様の一面において、β２−アドレナリン受容体アゴニストはフマル酸フォルモテロールである。本発明は、フォルモテロールの全ての光学異性体およびラセミ体を含むその混合物の使用を包含することは理解されよう。それ故に、例えば、用語フォルモテロールは、Ｎ−[２−ヒドロキシ−５−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシ−２−[[(１Ｒ)−２−(４−メトキシフェニル)−１−メチルエチル]アミノ]エチル]フェニル]−ホルムアミド、Ｎ−[２−ヒドロキシ−５−[(１Ｓ)−１−ヒドロキシ−２−[[(１Ｓ)−２−(４−メトキシフェニル)−１−メチルエチル]アミノ]エチル]フェニル]−ホルムアミドおよびラセミ体を含むかかる鏡像体の混合物を包含する。
【００８５】
本発明の別の態様において、医薬品、キットまたは医薬組成物はβ２−アドレナリン受容体アゴニストを含まない。
【００８６】
本発明を以下の非限定的実施例により説明する。実施例において、次の図面が示される：
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】ムスカリンアンタゴニスト(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン；ベンゼンスルホネート(実施例２)のＸ線粉末回折パターンである。
【図２】ムスカリンアンタゴニスト(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライド(実施例３)のＸ線粉末回折パターンである。
【図３】ムスカリンアンタゴニスト(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネート(実施例４)のＸ線粉末回折パターンである。
【図４】ムスカリンアンタゴニスト(Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイド(実施例５)のＸ線粉末回折パターンである。
【図５】ムスカリンアンタゴニスト(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイド(実施例７)のＸ線粉末回折パターンである。
【図６】ムスカリンアンタゴニスト(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネート(実施例８)のＸ線粉末回折パターンである
【発明を実施するための形態】
【００８８】
ムスカリンアンタゴニストの製造
本発明のムスカリンアンタゴニストは次の通り製造し得る。ここに記載した別の塩は、ここに記載する方法に準じた方法を使用して通常の化学により製造し得る。
【００８９】
ムスカリンアンタゴニストの製造に関する一般的実験詳細
特に断らない限り、次の一般的条件をムスカリンアンタゴニストの製造に使用した。
全ての反応を特に断らない限り窒素の雰囲気下に行った。ＮＭＲスペクトルを、４００MHzで操作する５mm逆検出三重共鳴プローブを用いるVarian Unity Inova 400分光計または４００MHzで操作する５mm逆検出三重共鳴ＴＸＩプローブを用いるBruker Avance DRX 400分光計または３００MHzで操作する標準５mmデュアル周波数プローブを用いるBruker Avance DPX 300分光計で得た。シフトは、テトラメチルシランに対するppmで示す。生成物をカラムクロマトグラフィーで精製するとき、‘フラッシュシリカ’は、クロマトグラフィー用シリカゲル、０.０３５〜０.０７０mm(２２０〜４４０メッシュ)(例えばFluka silica gel 60)、および１０p.s.i.までの窒素圧を適用した加速カラム溶出または半自動化CombiFlash(登録商標)Companion精製系の使用によるまたは減圧下Biotage(登録商標)Isolute Flash Si IIカートリッジの手動溶出またはBiotage(登録商標)SP1半自動化系の使用を意味する。全ての溶媒および市販試薬は受領したまま使用した。ＳＣＸクロマトグラフィーをBiotage(登録商標)Isolute SCXまたはSCX-2予充填カートリッジを使用して行った。
【００９０】
引用される液体クロマトグラフィー質量分析(ＬＣＭＳ)法を以下に記載する：
方法１
Ｃ１８逆相カラム(５μm粒子系の１００×３.０mm  Higgins Clipeus)を用いるWaters Micromass ZQ2000、Ａ：水＋０.１％ギ酸；Ｂ：アセトニトリル＋０.１％ギ酸で溶出。勾配：
【表１】
2011530586.tif 000003
検出  −  ＭＳ、ＥＬＳ、ＵＶ(インラインＵＶディテクターでのＭＳのために１００μlスプリット)  ＭＳイオン化方法−  エレクトロスプレー(陽イオン)
【００９１】
方法２
Ｃ１８逆相カラム(３０×４.６mm  Phenomenex Luna  ３μm粒子系)を用いるWaters Platform LC四重極質量分光計、Ａ：水＋０.１％ギ酸；Ｂ：アセトニトリル＋０.１％ギ酸で溶出。勾配：
【表２】
2011530586.tif 000004
検出  −  ＭＳ、ＥＬＳ、ＵＶ(インラインＵＶディテクターでのＭＳのために２００μlスプリット)  ＭＳイオン化方法−  エレクトロスプレー(陽および陰イオン)。
【００９２】
実験部分で使用する略語：ＡＩＢＮ＝２,２’−アゾビス(２−メチルプロピオニトリル)；ＤＣＭ＝ジクロロメタン；ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド；ＩＭＳ＝工業料メチル化アルコール；ＬＣＭＳ＝液体クロマトグラフィー−質量分析；ＮＢＳ＝Ｎ−ブロモスクシンイミド；ＲＴ＝室温；Ｒｔ＝保持時間；ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸；ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン；ＳＣＸ＝強カチオン交換クロマトグラフィー。
【００９３】
実施例２の結晶形の分析について：
示差走査熱量測定(ＤＳＣ)を、Mettler Toledo TS0801ROサンプルロボットおよび自動化サンプルカルーセルを備えたMettler Toledo DSC823eで行った。サンプルを４０μl  アルミニウムパンに調製し、サンプルの蓋をロボットにより自動的に穿孔し、３０〜２５０℃で１０℃／分で分析を行った。典型的に、１−３mgのサンプルを分析に使用し、分析を５０ml 分−１の乾燥窒素パージ下に行った。装置を保証されたインジウムを使用してエネルギーおよび温度について較正した。
【００９４】
熱重量分析(ＴＧＡ)を、TS0801 ROサンプルロボットおよび自動化サンプルカルーセルを備えたMettler Toledo thermogravimetric analyser(TGA851e)で行った。各パンの蓋を分析前に手動で穿孔し、３０〜４００℃で１０℃／分で行った。典型的に、１−３mgのサンプルを分析に使用した。６０ml 分−１の窒素パージを分析中サンプル上に維持した。装置を温度について較正した。
【００９５】
粉末Ｘ線回折(ＰＸＲＤ)を、Bruker AXS C2 GADDS回折計で、Ｃｕ  Ｋａ放射(４０kV、４０mA)、自動化ＸＹＺステージ、自動サンプル位置調整のためのレーザービデオ顕微鏡およびHiStar二次元領域検出器を使用して回収した。Ｘ線光学は、０.３mmのピンホールコリメーターと組み合わせた一ゲーベル多層膜鏡から成った。ビーム分岐、すなわちサンプル上へのＸ線ビームの有効サイズは約４mmであった。θ−θ連続走査モードを、３.２°〜４２.７°の有効な２θ範囲をもたらすサンプル対ディテクター距離間で用いた。典型的にサンプルをＸ線ビームに１２０秒間曝した。サンプを、磨かずに受け取ったジア量を使用して平板切片として製造した。約１−２mgのサンプルを平らな表面を得るためにスライドガラスに軽く押しつけた。
【００９６】
動的蒸気収着(ＤＶＳ)分析を、Surface Measurementシステム(ＳＭＳ)DVS-Intrinsic moisture sorption analyserを使用して行った。装置をSMS Analysis Suiteソフトウェア(DVS-Intrinsic Control v1.0.0.30)により制御した。データの解析を、DVS Standard Analysis Suite (v6.0.0.7)と共にMicrosoft Excel 2007を使用して行った。サンプル温度を２５℃に維持し、サンプル湿度を、２００ml 分−１の合計流速で湿および乾燥窒素流を混合することにより得た。相対湿度は、サンプル近くに位置する較正済Rotronicプローブ(ダイナミック・レンジ１−１００％相対湿度(ＲＨ))を使用して測定した。％ＲＨの関数としてのサンプルの重量変化を常に微量天秤によりモニターした(精度±０.００５mg)。典型的にＰＸＲＤは分析前に行うべきである。続いて２０mgのサンプルを焼結(tared)ステンレススチールメッシュバスケットに環境条件下で入れた。サンプルを４０％ＲＨおよび２５℃(典型的室条件)で載せるか、載せず、サンプルを、表１に示すパラメータを使用する２サイクルにわたる段階的ＤＶＳレジメンに付した。ＤＶＳ等温線をこのデータから計算し、最終ＰＸＲＤを固体状態形態の変化を確認するための分析後に行った。
【００９７】
【表３】
2011530586.tif 000005
【００９８】
実施例３、４、５、７および８の結晶形態の分析について：
Ｘ線粉末回折(ＸＲＰＤ)  −  PANalytical X'Pert機で２θ−θ配置で、またはPANalytical CubiX PRO機で、φ−φ配置で、０.０２°増分あたり１００秒間暴露で、２°〜４０°  ２φの走査範囲にわたり行った。Ｘ線を、４５kVおよび４０mAで操作する銅長高精度焦点チューブで発生させた。銅Ｘ線の波長は１.５４１８Åであった。データを、〜２mgの化合物が入ったゼロ・バックグラウンド・ホルダー上で集めた。ホルダーはシリコンの一結晶から成り、それは、非回折平面に沿って切断し、その後磨いて光学的に平に仕上げた。この表面上へのＸ線投射は、Bragg消光により打ち消された。
【００９９】
示差走査熱量測定(ＤＳＣ)サーモグラムを、アルミニウムパンおよび穿孔した蓋と共に、TA Q1000示差走査熱量計を使用して測定した。サンプル重量は０.５〜５mgの間で変化した。本工程は、窒素ガス流(５０ml／分)下で、１０℃／分で一定速度で温度を上昇させて、２５〜３００℃の試験温度で行った。
【０１００】
熱重量蒸気吸着(ＴＧＡ)サーモグラムを、白金パンと共にTA Q500 Thermogravimetric Analyserを使用して分析した。サンプル重量は１〜５mgの間で変化した。本工程は、窒素ガス流(６０ml／分)下で、１０℃／分で一定速度で温度を上昇させて、室温〜３００℃の試験温度で行った。
【０１０１】
重量蒸気収着(ＧＶＳ)プロファイルをSurface Measurements Systems Dynamic Vapour Sorption DVS-1またはDVS Advantage装置を使用して測定した。固体サンプル約１−５mgをガラス容器に入れ、サンプル重量をデュアルサイクル工程法の間記録した(１０％ＲＨ段階の４０〜９０〜０〜９０〜０％相対湿度(ＲＨ))。
【０１０２】
中間体１  −  (Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン
【化２】
2011530586.tif 000006
(Ｒ)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン−３−オール(１.２５ｇ)、ＣｕＩ(９３.１mg)、１,１０−フェナントロリン(１７６mg)、Ｃｓ２ＣＯ３(３.１９ｇ)および３−フルオロ−ヨード−ベンゼン(１.１１ｇ)のトルエン(２.５mL)溶液を１００℃で２０時間加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルで希釈し、セライトを通して濾過した。不溶性物質を数回酢酸エチルで洗浄した。濾液を５％硫酸銅溶液、水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で蒸発させた。ＳＣＸによる精製により、(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン(４９０mg、４５％)を褐色油状物として得た。ＬＣＭＳ(方法２、Ｒｔ  ２.０９分)。ＭＨ＋＝２２２。
【０１０３】
中間体２−３を(Ｒ)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン−３−オールおよび適当なアリールアイオダイドから中間体１について記載する方法に準じて製造した。中間体２−３のデータ：
【表４】
2011530586.tif 000007
【０１０４】
中間体４  −  (Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン
【化３】
2011530586.tif 000008
(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタンを３−フルオロチオフェノールから次の通り製造した：３−フルオロチオフェノール(５ｇ)のＤＭＦ(５ml)溶液を、ＮａＨ(１.５６ｇの鉱油中６０％分散)のＤＭＦ(４０mL)懸濁液に室温で添加した。３０分間後、メタンスルホン酸(Ｓ)−(１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクト−３−イル)エステル(５.３ｇ)(J. Med. Chem., 1992, 35, 2392-2406)のＤＭＦ(５mL)を混合物に滴下し、反応混合物を７０℃で一夜加熱した。反応混合物を酢酸エチルおよび１Ｎ  ＮａＯＨ溶液に分配した。層を分離し、水性相を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で蒸発させた。ＳＣＸクロマトグラフィーによる精製により、(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン(４.５ｇ、７３％)を得た。中間体４のデータ：NMR (300 MHz, MeOD): 7.33 (1 H, td, J = 8.04, 6.01 Hz), 7.22-7.13 (2 H, m), 7.01-6.93 (1 H, m), 3.81-3.70 (1 H, m), 3.58-3.48 (1 H, m), 3.14-2.91 (2H, m), 2.92-2.77 (2 H, m), 2.26-2.15 (1 H, m), 2.01-1.77 (4 H, m), 1.70-1.58 (1 H, m)。
【０１０５】
中間体Ａ  −  (Ｒ)−(５−クロロメチル−イソキサゾール−３−イル)−シクロヘキシル−フェニル−メタノール
【化４】
2011530586.tif 000009
表題化合物を(Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−酢酸から次の通り得た：
工程１：１,１’−カルボニルジイミダゾール(２５.０ｇ、１５４mmol)を、撹拌している(Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−酢酸(３０.０ｇ、１２８mmol)の乾燥ＴＨＦ(６００mL)懸濁液に添加した。９０分間、室温で撹拌後、水素化ホウ素ナトリウム(１１.６ｇ、３０７mmol)を１時間にわたり少しずつ添加した。反応混合物を室温で一夜撹拌した。反応を水(１００mL)の添加によりクエンチし、ＤＣＭで抽出した。合わせた有機相を乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で蒸発させて、粗固体を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(０−５％メタノールのＤＣＭ溶液で溶出)での精製により、(Ｒ)−１−シクロヘキシル−１−フェニル−エタン−１,２−ジオール(２０.７ｇ、７３％)を得た。１H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.41-7.33 (4 H, m), 7.28-7.24 (1 H, m), 3.99 (1 H, d), 3.83 (1 H, d), 2.68 (1 H, br s), 1.86-1.80 (1 H, m), 1.78-1.64 (3 H, m), 1.63-1.57 (1 H, m), 1.47-1.41 (1 H, m), 1.27-0.94 (5 H, m)。
【０１０６】
工程２：塩化オキサリル(１５.５mL、２０１mmol)の乾燥ＤＣＭ(９００mL)溶液を−７８℃に窒素雰囲気下に冷却した。ＤＭＳＯ(２８.５mL、４０１mmol)のＤＣＭ(２５mL)溶液を滴下し、混合物を−７８℃で１０分間撹拌した。(Ｒ)−１−シクロヘキシル−１−フェニル−エタン−１,２−ジオール(２９.５ｇ、１３４mmol)のＤＣＭ(２５０mL)溶液を１時間にわたり滴下し、濃いスラリーを得た。内部温度を−４５℃にした。トリエチルアミン(９２.８mL、６６９mmol)を滴下し、添加完了後混合物を室温に温めた。混合物を１Ｎ塩酸(５００mL×２)、水(５００mL)および塩水(５００mL)で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、蒸発させて、オレンジ色油状物を得た。これをＩＭＳ(３２０mL)に溶解し、予め形成したヒドロキシルアミンヒドロクロライド(１４.０ｇ、２０１mmol)および炭酸ナトリウム(２１.３ｇ、２０１mmol)の水(２１０mL)溶液に少しずつ添加した。得られたエマルジョンを室温で一夜撹拌し、ＤＣＭおよび水に分配した。有機層を水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィー(０−１５％ＥｔＯＡｃのシクロヘキサン溶液で溶出)での精製により、(Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−アセトアルデヒドオキシム(２５.９ｇ、８３％)を得た。１H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.76 (1 H, s), 7.44-7.41 (2 H, m), 7.37-7.33 (2 H, m), 7.27-7.23 (1 H, m), 7.22 (1 H, br s), 3.34 (1 H, s), 1.90-1.60 (5 H, m), 1.37-1.05 (6 H, m)。
【０１０７】
工程３：(Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−アセトアルデヒドオキシム(８ｇ、３４mmol)および２,６−ルチジン(１０mL、８６mmol)のＤＣＭ(１５０mL)溶液を氷浴で冷却した。トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート(１５.６mL、８６mmol)を滴下した。混合物を１０分間、０℃で撹拌し、室温に３０分間温めた。反応を水(５０mL)の添加によりクエンチした。有機相を層分離カートリッジを通して単離し、真空で蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィー(１０−２０％ＥｔＯＡｃのシクロヘキサン溶液で溶出)での精製により、モノおよびビスＴＭＳ保護された化合物の混合物を得た。これをメタノールに溶解し、室温に一夜静置し、真空で蒸発させて、(Ｒ)−シクロヘキシル−フェニル−トリメチルシラニルオキシ−アセトアルデヒドオキシム(１０ｇ、９６％)を得た。１H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.62 (1 H, s), 7.32-7.28 (4 H, m), 7.26-7.21 (1 H, m), 7.11 (1 H, s), 1.93-1.85 (2 H, m), 1.76-1.71 (1 H, m), 1.68-1.56 (2 H, m), 1.49-1.42 (1 H, m), 1.27-0.78 (5 H, m), 0.11 (9 H, m)。
【０１０８】
工程４：(Ｒ)−シクロヘキシル−フェニル−トリメチルシラニルオキシ−アセトアルデヒドオキシム(６ｇ、１９.６mmol)の溶液を乾燥ＤＣＭ(４００mL)に形成し、−７８℃に冷却した。照明を抑えながら、次亜塩素酸ｔｅｒｔ−ブチル(４.３ｇ、３９.３mmol)のＤＣＭ(１０mL)溶液を滴下した。２時間、−７８℃の後、トリエチルアミン(４.１mL、２９.４mmol)のＤＣＭ(１０mL)溶液を滴下した。さらに１０分間、−７８℃の後、混合物を０℃に温めた。この時点で、プロパルギルクロライド(１４.４mL、１９６mmol)を添加し、混合物を室温に一夜温めた。混合物を塩水(２００mL)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィー(０−１０％ＥｔＯＡｃのシクロヘキサン溶液で溶出)での精製により、粗５−クロロメチル−３−((Ｒ)−シクロヘキシル−フェニル−トリメチルシラニルオキシ−メチル)−イソオキサゾールを得た。これをＴＨＦ(１００mL)に再溶解し、氷浴で冷却し、テトラブチルアンモニウムフルオライド(１９.６mLのＴＨＦ中１Ｍ)溶液を滴下した。この混合物を３０分間、０℃撹拌し、酢酸エチルおよび水に分配した。有機相を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、真空で蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィー(０−２０％ＥｔＯＡｃのシクロヘキサン溶液で溶出)での精製により、表題化合物を白色固体として得た(３.５ｇ、５８％)。 １H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.51 (2 H, m), 7.32 (2 H, m), 7.25-7.21 (1 H, m), 6.29 (1 H, s), 4.52 (2 H, s), 2.80 (1 H, s), 2.34-2.28 (1 H, m), 1.81-1.76 (1 H, m), 1.72-1.62 (3 H, m), 1.36-1.02 (6 H, m)。
【０１０９】
中間体Ｂ  −  (Ｒ)−(５−ブロモメチル−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イル)−シクロヘキシル−フェニル−メタノール
【化５】
2011530586.tif 000010
工程１：(Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−酢酸ヒドラジド
(Ｒ)−シクロヘキシルマンデル酸(２.３４ｇ)をＤＣＭ(２０mL)に溶解し、１,１’−カルボニルジイミダゾール(１.９５ｇ)で処理し、室温で１時間撹拌した。反応混合物をヒドラジン一水和物(１.０mL)で処理し、さらに３０分間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、１Ｎ  ＮａＯＨ溶液および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で蒸発させて、表題化合物を白色固体として得た(２.０ｇ、８１％)。ＬＣＭＳ(方法２、２.７３分)。ＭＨ＋＝２４９。
【０１１０】
工程２：クロロ−酢酸Ｎ’−((Ｒ)−２−シクロヘキシル−２−ヒドロキシ−２−フェニル−アセチル)−ヒドラジド
前記化合物(１.０ｇ)をＤＣＭ(２０mL)に溶解し、０℃でジイソプロピルエチルアミン(０.８３mL)およびクロロアセチルクロライド(０.３９ml)で処理した。室温に温め、１０分間撹拌後、反応混合物をＤＣＭで希釈し、水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で蒸発させて、所望の化合物(１.１ｇ、７３％)を白色固体として得た。ＬＣＭＳ(方法２、３.２０分)。ＭＨ＋＝３２５。
【０１１１】
工程３：(Ｒ)−(５−クロロメチル−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イル)−シクロヘキシル−フェニル−メタノール
前記化合物(１７０mg)、トシルクロライド(９６mg)および１,２,２,６,６−ペンタメチルピペリジン(１７５mg)のＤＣＭ(２mL)溶液を室温で一夜撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、ｗＮａＨＣＯ３溶液(２回)、塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で蒸発させた。カラムクロマトグラフィー(シリカ、０−１００％シクロヘキサン／酢酸エチル)での精製により、表題化合物を白色固体として得た(１０５mg、６３％)。表題化合物のデータ：ＬＣＭＳ(方法２、３.７９分)。ＭＨ＋＝３０７。
【０１１２】
工程４：前記化合物(４.６６ｇ)およびリチウムブロマイド(６.６ｇ)のアセトン(２００ml)溶液を一夜還流した。反応混合物を冷却し、真空蒸発させ、水および酢酸エチルに分配した。有機相を分離し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で蒸発させた。得られた固体をアセトン(２００ml)に再溶解し、リチウムブロマイド(６.６ｇ)で処理し、一夜加熱還流した。反応混合物を冷却し、真空で濃縮し、水および酢酸エチルに分配した。有機相を分離し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で蒸発させて、表題化合物を得た(４.６５ｇ、８４％)。表題化合物のデータ：ＬＣＭＳ(方法２、３.９０分)。ＭＨ＋＝３５３。１H NMR δ (ppm) (CHCl３-d): 7.60-7.53 (2 H, m), 7.41-7.25 (3 H, m), 4.49 (2 H, s), 3.28 (1 H, s), 2.33 (1 H, s), 1.85-1.73 (1 H, m), 1.68 (3 H, s), 1.44-1.09 (6 H, m)。
【０１１３】
中間体Ｃ  −  (５−ブロモメチル−イソキサゾール−３−イル)−ジフェニル−メタノール
【化６】
2011530586.tif 000011
表題化合物をメチル５−メチルイソオキサゾール−３−カルボキシレートから次の通り得た：
工程１。フェニルマグネシウムブロマイド(エーテル中３Ｍ溶液；１００mL)をメチル５−メチルイソオキサゾール−３−カルボキシレート(２０.２ｇ)の無水ＴＨＦ(３００mL)溶液に、−１０℃で窒素雰囲気下に滴下した。反応混合物を−１０℃で５分間撹拌し、ＲＴに温め、１８時間静置した。反応混合物を冷１Ｍ  ＨＣｌ(３００mL)に注ぎ、エーテルで抽出した。合わせた有機抽出物をＮａＨＣＯ３、水、および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で蒸発させて、(５−メチル−イソキサゾール−３−イル)−ジフェニル−メタノール(３７.２１ｇ、９８％)を蝋状固体として得た。１H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.39-7.25 (m, 10 H), 5.84 (s, 1 H), 3.69 (s, 1 H), 2.38 (s, 3 H)。
【０１１４】
工程２。乾燥１,２−ＤＣＥ(５００mL)をアルゴンで１５分間パージした。(５−メチル−イソキサゾール−３−イル)−ジフェニル−メタノール(３７.９ｇ)を、窒素下、撹拌品柄添加し、ＮＢＳ(２８.０ｇ)およびＡＩＢＮ(４.７ｇ)を添加した。反応混合物を８０℃で１時間撹拌した。さらにＮＢＳ(２８.０ｇ)およびＡＩＢＮ(４.７ｇ)を反応混合物に添加し、撹拌を８０℃で３時間続けた。反応混合物をＲＴに冷却し、１Ｍ  ＨＣｌ(５００mL)に注ぎ、エーテルで抽出した。合わせた有機抽出物をＮａＨＣＯ３、水、および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で蒸発させた。１０−１００％シクロヘキサン−ＤＣＭで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーでの精製により、表題化合物(２６.０ｇ、５２％)を、少量の未変化出発物質、および二臭素化および三臭素化不純物を含む薄黄色固体として得た。表題化合物のデータ：１H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.38-7.23 (m, 10 H), 6.18 (s, 1 H), 4.35 (s, 2 H), 3.63 (s, 1 H)。
【実施例】
【０１１５】
実施例１  −  (Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライド
【化７】
2011530586.tif 000012
(Ｒ)−(５−クロロメチル−イソキサゾール−３−イル)−シクロヘキシル−フェニル−メタノール(中間体Ａ)(１.７４ｇ)および(Ｒ)−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン(中間体２)(１.２６ｇ)をアセトニトリル(２５mL)中で混合し、５０℃で１時間加熱した。得られた白色固体を濾過により回収し、酢酸エチルおよびエーテルで洗浄し、真空で乾燥させて、表題化合物(２.９ｇ)を得た。これを沸騰しているアセトニトリル(１２５ml)に溶解し、撹拌しながらゆっくり室温に冷却した。得られた結晶を濾過により回収し、真空で乾燥させて、表題化合物(２.４ｇ、８１％)を得た。実施例１のデータ：１H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.51-7.46 (m, 2 H), 7.32 (t, 2 H), 7.25-7.12 (m, 3 H), 7.02-6.95 (m, 2 H), 6.79 (s, 1 H), 5.90 (s, 1 H), 4.88 (s, 1 H), 4.77 (s, 2 H), 3.91 (dd, 1 H), 3.54-3.34 (m, 5 H), 2.39 (s, 1 H), 2.24-2.09 (m, 2 H), 2.06-1.97 (m, 1 H), 1.94-1.80 (m, 2 H), 1.68 (d, 1 H), 1.58 (d, 3 H), 1.28-1.13 (m, 3 H), 1.10-0.98 (m, 3 H)。ＬＣＭＳ(方法１、８.６８分)。Ｍ＋＝４９１。
【０１１６】
実施例２  −  (Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンベンゼンスルホネート
【化８】
2011530586.tif 000013
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン；クロライド(実施例１)(２.０ｇ)をＤＣＭ(２０ml)に溶解し、ベンゼンスルホン酸ナトリウム(３.４ｇ)の水(２０ml)溶液中、徹底的に撹拌した。有機層を分離し、再びベンゼンスルホン酸ナトリウム(３.４ｇ)の水(２０ml)溶液中で徹底的に撹拌した。有機層を乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で蒸発させて、表題化合物を白色泡状物として得た。これを沸騰しているプロパン−２−オール(４８ml)に溶解した。熱溶液を濾過し、濾液を撹拌しながらゆっくり室温に冷却した。２時間後、混合物を０℃に冷却し、結晶を濾過により回収し、真空乾燥させた。表題化合物(２.１ｇ)を８５％収率で得た。１H NMR δ (ppm)(DMSO-d６): 7.62-7.58 (2 H, m), 7.52-7.47 (2 H, m), 7.35-7.26 (5 H, m), 7.26-7.13 (3 H, m), 7.02-6.95 (2 H, m), 6.80 (1 H, s), 5.89 (1 H, s), 4.88 (1 H, s), 4.75 (2 H, s), 3.91 (1 H, dd, J = 13.17, 8.11 Hz), 3.58-3.35 (5 H, m), 2.40 (1 H, s), 2.25-1.95 (3 H, m), 1.96-1.80 (2 H, m), 1.69 (1 H, d, J = 10.55 Hz), 1.63-1.52 (3 H, m), 1.29-0.96 (6 H, m)。ＬＣＭＳ(方法１、８.７３分)。Ｍ＋＝４９１。
【０１１７】
結晶性物質のサンプルをＤＳＣ、ＴＧＡ、ＰＸＲＤおよびＤＶＳにより分析した。
融点をＤＳＣで１０℃／分で決定し、１７８℃(±１℃)で開始する鋭い吸熱事象を有することが判明した。融解前の重量損失はＴＧＡにより無視できた。ＰＸＲＤ分析は、サンプルが極めて結晶性であることを示した(図１参照)。ＤＶＳ分析は、８０％ＲＨ(±０.１％)で０.２％(％ｗ／ｗ)の質量増加を生じた。
【０１１８】
実施例３  −  (Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライド
【化９】
2011530586.tif 000014
(Ｒ)−(５−クロロメチル−イソキサゾール−３−イル)−シクロヘキシル−フェニル−メタノール(中間体Ａ)(３.００ｇ)および(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン(中間体１)(２.１７ｇ)をアセトニトリル(６０mL)中で混合し、５０℃で２時間加熱した。反応混合物を真空蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィー(１−１５％メタノールのＤＣＭ溶液で溶出)で精製して、表題化合物を白色泡状物として得た。これを沸騰しているアセトニトリル(５００ml)に溶解し、室温にゆっくり冷却した。得られた白色結晶を濾過により回収し、真空で乾燥させて、表題化合物を得た(３.９ｇ、７５％)。１H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.49 (dd, 2 H), 7.40-7.29 (m, 3 H), 7.25-7.20 (m, 1 H), 6.93-6.79 (m, 4 H), 5.90 (s, 1 H), 4.96 (s, 1 H), 4.77 (s, 2 H), 3.95 (dd, 1 H), 3.49 (d, 4 H), 2.43 (s, 1 H), 2.26-2.10 (m, 2 H), 2.07-1.98 (m, 1 H), 1.95-1.82 (m, 2 H), 1.69 (d, 1 H), 1.59 (s, 4 H), 1.28-1.14 (m, 3 H), 1.10-0.98 (m, 3 H)。ＬＣＭＳ(方法１、８.７０分)。Ｍ＋＝４９１。
【０１１９】
結晶性物質のサンプルをＤＳＣ、ＸＲＰＤおよびＧＶＳにより分析した。
融点をＤＳＣにより決定し、約１３４℃(±２℃)で開始する広い吸熱事象(融解)開始が葉名した。ＸＲＰＤ分析はサンプルが結晶性であることを示した(図２)参照。ＧＶＳ分析は、第一サイクルで約５％および第二サイクルで６.５％の質量増加を生じた。
【０１２０】
実施例４  −  (Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネート
【化１０】
2011530586.tif 000015
(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン；クロライド(実施例３)(３.２ｇ)の温ＤＣＭ(５０ml)およびメタノール(０.５ml)溶液を徹底的に撹拌し、アンモニウムイセチオネート(５ｇ)の水(２０ml)で処理した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、０℃に冷却し、０.５時間撹拌した。得られた白色沈殿を濾過により回収し、水およびエーテルで洗浄し、真空乾燥させた。沈殿を沸騰しているアセトニトリル(１７２ml)に溶解した。得られた溶液を熱い間に濾過し、撹拌しながらゆっくり室温に冷却した。２時間後、得られた白色結晶を濾過により回収し、真空で乾燥させて、表題化合物を得た(３.０７ｇ、８２％)。１H NMR δ (ppm)(DMSO-d６): 7.47-7.42 (2 H, m), 7.35-7.25 (3 H, m), 7.21-7.13 (1 H, m), 6.81 (4 H, d, J = 43.75 Hz), 5.84 (1 H, s), 4.92 (1 H, s), 4.70 (2 H, s), 4.40 (1 H, t, J = 5.72 Hz), 3.90 (1 H, dd, J = 13.18, 8.10 Hz), 3.58 (2 H, td, J = 6.74, 5.72 Hz), 3.48-3.29 (5 H, m), 2.56 (2 H, t, J = 6.74 Hz), 2.39 (1 H, s), 2.21-2.04 (2 H, m), 2.03-1.94 (1 H, m), 1.93-1.77 (2 H, m), 1.64 (1 H, d, J = 10.36 Hz), 1.54 (3 H, d, J = 9.07 Hz), 1.24-1.10 (3 H, m), 1.10-0.93 (3 H, m)。ＬＣＭＳ(方法１、８.７２分)。Ｍ＋＝４９１。
【０１２１】
結晶性物質のサンプルをＤＳＣ、ＸＲＰＤおよびＧＶＳにより分析した。
融点をＤＳＣにより決定し、約２１４℃(±２℃)で開始する鋭い融解を有することが判明した。ＸＲＰＤ分析はサンプルが結晶性であることを示した(図３参照)。ＧＶＳ分析は８０％ＲＨで質量増加を生じなかった。
【０１２２】
実施例５  −  (Ｒ)−１−[５−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イルメチル]−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイド
【化１１】
2011530586.tif 000016
(Ｒ)−(５−ブロモメチル−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イル)−シクロヘキシル−フェニル−メタノール(中間体Ｂ)(２.９３ｇ)および(Ｒ)−３−(４−フルオロ−フェノキシ)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン(中間体２)(１.８ｇ)のアセトニトリル(６０ml)溶液を５０℃で一夜加熱した。反応混合物を真空蒸発させ、エーテルで摩砕して、表題化合物(４.７ｇ)を得て、それを沸騰している酢酸エチルから再結晶した。１H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.44-7.39 (m, 2 H), 7.34-7.21 (m, 3 H), 7.16-7.09 (m, 2 H), 6.97-6.90 (m, 2 H), 6.39 (s, 1 H), 4.92 (s, 2 H), 4.82 (s, 1 H), 3.97-3.87 (m, 1 H), 3.59-3.37 (m, 5 H), 2.38 (s, 1 H), 2.22 (t, 1 H), 2.11 (s, 1 H), 2.00 (s, 1 H), 1.84 (s, 2 H), 1.66 (s, 2 H), 1.57 (t, 2 H), 1.32 (d, 1 H), 1.23-1.00 (m, 3 H), 1.03-0.88 (m, 2 H)。ＬＣＭＳ(方法１、８.２９分)。Ｍ＋＝４９２。
【０１２３】
結晶性物質のサンプルをＤＳＣ、ＸＲＰＤおよびＧＶＳにより分析した。
融点をＤＳＣにより決定し、二重吸熱事象が観察された。融解開始は約１６９℃(±２℃)と概算された。ＸＲＰＤ分析はサンプルが結晶性であることを示した(図４参照)。ＧＶＳ分析は、８０％ＲＨで約０.８％の質量増加を生じた。
【０１２４】
実施例６  −  (Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイド
【化１２】
2011530586.tif 000017
(５−ブロモメチル−イソキサゾール−３−イル)−ジフェニル−メタノール(中間体Ｃ)(１.１ｇの約４０％純度サンプル)および(Ｒ)−３−(３−フルオロ−フェニルスルファニル)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン(中間体４)(２１８mg)のアセトニトリル(１０ml)を室温で１時間撹拌した。得られた沈殿を濾過により回収し、真空乾燥させた。これを沸騰しているアセトニトリル(１３０ml)に溶解し、熱い間に濾過し、撹拌しながら室温にゆっくり冷却した。得られた結晶を濾過により回収し、真空で乾燥させて、表題化合物を得た(３１２mg、５１％)。１H NMR δ (ppm)(400 MHz, CH３OH-d４): 7.40-7.22 (13 H, m), 7.09-7.03 (1 H, m), 6.83 (1 H, s), 4.71 (2 H, s), 4.07-3.98 (2 H, m), 3.69-3.38 (5 H, m), 2.50-2.39 (1 H, m), 2.29-2.25 (1 H, m), 2.24-2.14 (1 H, m), 2.18-1.93 (2 H, m)。ＬＣＭＳ(方法１、８.３６分)。Ｍ＋＝５０１.１９。
【０１２５】
実施例７  −  (Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−[３−(ヒドロキシ−ジフェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンブロマイド
【化１３】
2011530586.tif 000018
(５−ブロモメチル−イソキサゾール−３−イル)−ジフェニル−メタノール(中間体Ｃ)(４.７ｇの約６７％純度サンプル)および(Ｒ)−３−(３−フルオロ−４−メチル−フェノキシ)−１−アザ−ビシクロ[２.２.２]オクタン(中間体３)(２ｇ)のアセトニトリル(５０ml)溶液を５０℃で１.５時間撹拌した。反応混合物を冷却し、固体を濾過により回収し、酢酸エチルおよびエーテルで洗浄し、真空で乾燥させて、表題化合物を得た(４.３６ｇ、８８％)。これを沸騰しているプロパン−２−オール(７６０ml)に濾過し、熱い間に濾過し、撹拌しながら室温にゆっくり冷却した。得られた結晶を濾過により回収し、真空で乾燥させて、表題化合物を得た(３.７２ｇ)。 １H NMR δ (ppm)(400 MHz, CH３OH-d４): 7.39-7.26 (10 H, m), 7.16 (1 H, t, J = 8.63 Hz), 6.84 (1 H, s), 6.75-6.66 (2 H, m), 4.93-4.87 (1 H, m), 4.79-4.70 (2 H, m), 4.03-3.95 (1 H, m), 3.67-3.48 (5 H, m), 2.56-2.52 (1 H, m), 2.40-2.31 (1 H, m), 2.20-2.11 (4 H, m), 2.10-1.93 (2 H, m)。ＬＣＭＳ(方法１、８.３７分)。Ｍ＋＝４９９.２０。
【０１２６】
結晶性物質のサンプルをＤＳＣ、ＸＲＰＤおよびＧＶＳにより分析した。
融点をＤＳＣにより決定し、約２４２℃(±２℃)で開始する鋭い融解が判明した。ＸＲＰＤ分析はサンプルが結晶性であることを示した(図５参照)。ＧＶＳ分析は、８０％ＲＨで約０.１％の質量増加を生じた。
【０１２７】
実施例８  −  (Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネート
オーバーヘッドスターラーを備えた５Ｌフラスコ中の撹拌している(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロ(Cyco)ヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライド１(１５５.８３ｇ)およびＤＣＭ(２３８０mL)の懸濁液に、ＭｅＯＨ(２３.８mL)を一度に添加した。数分撹拌後、溶液が形成された。撹拌している塩化物塩の溶液に、イセチオン酸アンモニウム塩(６１.６０ｇ)の水(９４５mL)溶液を５分間にわたり添加した。得られた二相反応混合物を激しく撹拌し、数分後、(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネートの種晶を少し添加した。さらに３５分間の撹拌後に少し添加した。固体形成の痕跡がフラスコ側面に観察された。室温で２.５時間撹拌し、高密度沈殿が形成し始めた。少量の反応混合物の顕微鏡下の試験は、結晶性物質を示した。撹拌している反応混合物を氷浴で冷却した内部温度４℃で３５分間)。固体は、さらに顆粒状になった。固体を濾過により回収し、冷水(４００−６０mLずつ全量３.１Ｌ)、続いてエーテル(５×５００mL)。で洗浄した。それを空気中で吸引乾燥し、真空で４０℃で一夜、そしてさらに６時間乾燥させて、生成物を白色結晶性固体(１５２.４８ｇ)として得た。ＬＣ−ＭＳ(方法２)：Ｒｔ  ８.９１分、ｍ／ｚ  ４９１  [Ｍ]＋。純度＞９９％。
【０１２８】
生成物(１５２.４８ｇ)を撹拌しながら、還流しているＩＭＳ(２.８Ｌ)に溶解し、熱溶液を濾過した。この溶液を熱いまま維持し、１０Ｌ加熱ジャケット付リアクターで撹拌し、一方残った物質(１５１.６４ｇ)を還流しているＩＭＳ(２.８Ｌ)に溶解し、熱いまま濾過した。２溶液を１０Ｌ加熱ジャケット付リアクターで合わせ、撹拌し、還流した。少量の物質が析出し始め、それ故にさらにＩＭＳ(３５０mL)を溶液が形成されるまで添加した。撹拌している溶液(撹拌速度８８−８９rpm)を徐々に冷却した[約１時間にわたり７８℃(還流温度)から７６.５℃(内部温度)、続いて４.５時間にわたり７６.５−２０℃(内部温度)、そして、２０℃で一夜撹拌]。種晶を撹拌している溶液に７７℃、６９℃および５９℃で添加した。固体物質がリアクターの底に析出し始めた。混合物をさらに冷却するにつれその後数分間でさらなる結晶化が観察された。一夜撹拌後固体を濾過により回収し、冷ＩＭＳ(〜３００ml)で洗浄し、空気中で吸引により(２.５時間)、続いて真空で４０℃で一夜乾燥させて、結晶性(Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタン２−ヒドロキシ−エタンスルホネート(２７４.４８ｇ)を得た。
【０１２９】
ＬＣ−ＭＳ(方法２)：Ｒｔ  ８.８４分、ｍ／ｚ  ４９１[Ｍ]＋。純度＞９９％。１  (Ｒ)−１−[３−((Ｒ)−シクロ(Cyco)ヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル)−イソキサゾール−５−イルメチル]−３−(３−フルオロ−フェノキシ)−１−アゾニア−ビシクロ[２.２.２]オクタンクロライドの製造は実施例３およびＷＯ２００８／０９９１８６に記載されている。
【０１３０】
結晶性物質のサンプルをＸＲＰＤ、ＧＶＳおよびＤＳＣにより分析した。ＤＳＣにより決定した融点は、２１３℃(開始)(±２℃)であることが判明した。ＧＶＳ決定により、８０％ＲＨ(±０.３％)で０.１５％の重量増加となった。ＸＲＰＤスペクトルを図６に示す。
【０１３１】
ムスカリンアンタゴニストの生物学的活性
ムスカリンアンタゴニストの化合物の阻害効果を、ムスカリン受容体放射性リガンド結合アッセイにより測定した。
組み換えヒトＭ３受容体をＣＨＯ−Ｋ１細胞で発現させた。細胞膜を調製し、[３Ｈ]−Ｎ−メチルスコポラミン([３Ｈ]−ＮＭＳ)と化合物の結合をシンチレーション近接アッセイ(ＳＰＡ)で評価した。インキュベーション時間は１６時間、環境温度で、１％(ｖ／ｖ)ＤＭＳＯ存在下であった。アッセイを白色９６ウェル透明底ＮＢＳプレート(Corning)で行った。アッセイ前に、Ｍ３受容体含有ＣＨＯ細胞膜をＳＰＡ  ＷＧＡ(小麦胚芽アグルチニン)ビーズ(GE Healthcare)にコーティングした。非特異的結合を１μMアトロピン存在下で決定した。
【０１３２】
放射活性をMicrobetaシンチレーションカウンター(PerkinElmer)で２分間／ウェル読み取り時間の３Ｈプロトコルを使用して測定した。[３Ｈ]−ＮＭＳ結合の化合物による阻害を、典型的に０.０３nM〜１μMの濃度範囲を使用して決定し、プレートについてプレート特異的放射性リガンド結合に対する阻害パーセントとして示した。化合物による[３Ｈ]−ＮＭＳ結合の濃度依存的阻害をｐＩＣ５０として示した。
【０１３３】
試験した全ての化合物は、Ｍ３結合アッセイで５nM未満の効力(Ｋｉ値)を有する。特に、Ｍ３結合アッセイで実施例１は０.８０nMのＫｉを示し、実施例３は０.６６nMのＫｉを示し、実施例５は０.７０nMのＫｉを示し、実施例６は０.１５nMのＫｉを示し、そして実施例７は０.４０nMのＫｉを示す。
【０１３４】
組合せ実験のプロトコル
１. メタコリンで予め収縮させたモルモットからの単離気管環に対する化合物活性の評価
次のプロトコルを使用して、ＣＣＲ１アンタゴニストと組み合わせた本発明のムスカリンＭ３受容体アンタゴニストの効果を評価し得る。
次のプロトコルを使用して、ブデソニドと組み合わせた本発明のムスカリンＭ３受容体アンタゴニストの効果を評価し得る。
【０１３５】
雄アルビノDunkin Hartleyモルモット(３００−３５０ｇ)を頸椎脱臼により殺し、気管を摘出する。付着結合組織を除去し、気管を輪断片に切断する(２−３mm幅)。これらを組成(mM)：ＮａＣｌ  １１７.５６、ＫＣＩ  ５.３６、ＮａＨ２Ｐ０４  １.１５、ＭｇＳ０４  １.１８、グルコース  １１.１０、ＮａＨＣＯ３  ２５.００およびＣａＣＩ２  ２.５５の修飾Krebs溶液を含む１０mL臓器浴に懸濁する。これを３７℃に維持し、連続的にＯ２中５％ＣＯ２を通気し、インドメタシン(２.８μM)、コルチコステロン(１０μM)、アスコルベート(１mM)、ＣＧＰ２０７１２Ａ(１μM)およびフェントラミン(３μM)をKrebs溶液に添加する：インドメタシンは、シクロオキシゲナーゼ生成物合成による平滑筋緊張を阻止するため、コルチコステロンは取り込み２工程を阻止するため、アスコルベートはカテコラミン酸化を阻止するため、そしてＣＧＰ２０７１２Ａおよびフェントラミンは、それぞれβ１−およびα−アドレナリン受容体活性の何らかの複雑な作用を避けるため。気管輪を２個のステンレススチールフックの間に吊り下げ、そのフックの一方は等尺性力変換器に結合され、他方は臓器浴の固定支持体に結合している。等尺性力の変化を記録する。
【０１３６】
アセチル−β−メチルコリンクロライド(メタコリン)、インドメタシン、コルチコステロン−２１−アセテート、フェントラミンヒドロクロライド、アスコルビン酸、およびＣＧＰ２０７１２ＡメタンスルフェートはSigma chemical companyから得られ得る。インドメタシンを１０％ｗ／ｖ  Ｎａ２ＣＯ３に、コルチコステロン２１−アセテートはエタノールに、そして他の化合物をＤＭＳＯに溶解してよい。ムスカリンアンタゴニストおよびブデソニドを、組織添加前にKrebsで希釈してよく、浴中のＤＭＳＯの濃度は＜０.１％であり得る。
【０１３７】
各実験の開始時、１.０ｇ.ｗｔ.の力を組織に負荷し、これを定常になるまで３０分間平衡器官にわたり元に戻す。組織を１μMのムスカリンアゴニストであるメタコリンに暴露して、組織生存能を評価する。組織を浸かっているKrebs溶液を３回変えることにより洗浄する。３０分間後、組織を再び１μM  メタコリンで前収縮させる。収縮がプラトーに達したら、１００nM  ブデソニド、１０nMのムスカリンアンタゴニストまたはそれらの組合せを浸かっている媒体に添加し、６０分間静置する。
【０１３８】
データをADInstruments Chart5 for windows softwareを使用して回収し、生じた緊張をメタコリン添加前およびその応答がプラトーに達した後に測定する。ムスカリンアンタゴニストおよび／またはブデソニドに対する応答を、添加後１０分間隔で測定する。全ての応答は、メタコリン誘発収縮の阻害パーセントとして示す。
【０１３９】
２. ＬＰＳ攻撃ラットにおける炎症細胞流入
次のプロトコルを使用して、ＣＣＲ１アンタゴニストと組み合わせた本発明のムスカリンＭ３受容体アンタゴニストの効果を評価し得る。
【０１４０】
本発明のＣＣＲ１受容体アンタゴニストおよびムスカリンアンタゴニスト、およびそれらの組合せの、炎症細胞流入に対する効果を、リポポリサッカライド(ＬＰＳ)で気管支内(ｉ.ｔ.)攻撃したラットの気管支肺胞洗浄(ＢＡＬ)液中の総細胞数に対する効果をモニターすることによりアッセイできる[処置群あたりＮ＝１０匹のラット]。
【０１４１】
方法論
ＬＰＳ点滴：ラットをEfraneで麻酔し、仰臥位で、頭を上にして、３０°に傾斜させた板に置く。ＬＰＳ(Lipopolysaccharide B.E.coli 026:B6)(２.５μg／ml)を食塩水(０.９％ＮａＣｌ)に溶解し、それをまたは食塩水のみ(陰性対照)を、２００μｌの体積でに改変金属カニューレを使用してｉ.ｔ.投与する。ラットは意識が回復するまでその場所に置く。
【０１４２】
溶液の調製：ＣＣＲ１アンタゴニストを０.９％ＮａＣｌ溶液に０.００１〜０.１００mgの最終濃度まで溶解する。ムスカリンアンタゴニストを、０.００１〜１.０mg／mlの適当な最終濃度まで０.９％ＮａＣｌ溶液に溶解する。
ＣＣＲ１アンタゴニスト、ムスカリンアンタゴニストまたはそれらの混合物を、ＣＣＲ１アンタゴニストをムスカリンアンタゴニスト懸濁液に溶解し、００１〜０.１００  ＣＣＲ１アンタゴニスト／mlおよび００１〜１.０mg  ムスカリンアンタゴニスト／mlの最終濃度を得る。
【０１４３】
処置：動物に、ムスカリンアンタゴニスト／ＣＣＲ１アンタゴニスト(０.００２／００１〜０.１００mg／kg)、またはムスカリンアンタゴニスト(００１〜１.０mg／kg)のみ、またはＣＣＲ１アンタゴニスト(００１〜０.１００mg／kg)のみ、または食塩水(陰性および陽性対照動物)の溶液(１ml／kg)を気管支内に点滴した。処置を軽い麻酔(Efrane)下に行い、溶液が肺に到達することを確実にした。薬物をＬＰＳ点滴３０分前に投与した。
【０１４４】
終了：ＬＰＳ攻撃４時間後、ラットにペントバルビタール(６０mg／ml、Apoteksbolaget, Sweden)およびＰＢＳ(１：１)の混合物(０.３ml)を１−２分間腹腔内注射した。
【０１４５】
気管支肺胞洗浄：終了後、ＢＡＬをＰＢＳで２回行った。ＢＡＬ液を遠心分離し、細胞ペレットをＰＢＳに再懸濁した。ＢＡＬ細胞中の総細胞数をSYSMEX cell counterで計測する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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