(57)【要約】  循環内皮細胞（ＣＥＣ）を含む組成物、システム及び方法が提供される。本明細書に記載される前記組成物は、ＣＥＣの分析を許容する形態の組成物を含む、単離したＣＥＣを用いる。本明細書中に記載される前記システムは、単離したＣＥＣ及び分析ツール又は分析ツールからのアウトプットを用いる。本明細書中に記載される前記方法は、医療従事者又はＣＥＣドナーへ、ＣＥＣドナーの心臓血管の健康に関係する情報を提供するための単離したＣＥＣ及び分析ツールの使用に関する。よって、本明細書中に記載される前記化合物、前記システム及び前記方法は転換（非単離ＣＥＣから単離ＣＥＣ、又は単離ＣＥＣから分析ＣＥＣ）及び機械（単離ツール及び分析ツール）の両方を含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
心血管障害を分析するためのシステムであって、該システムは、
（ａ）個体から得られた、循環内皮細胞（ＣＥＣ）及び循環非内皮細胞から選択された細胞を含む血液サンプルから単離したＣＥＣの一群、及び
（ｂ）ＣＥＣの一群中の単一のＣＥＣの形態的特徴を視覚化するために十分な倍率を有している顕微鏡、を含み、
ここで前記形態的特徴は、細胞領域、核領域、核領域に対する細胞領域の比、細胞形状、核形状、核数、循環内皮細胞数又はこれらの組み合わせから選択されるシステム。
【請求項２】
前記ＣＥＣの一群又は前記ＣＥＣの一群中の単一のＣＥＣの拡大された画像を取り込む及び保存するための電子メモリをさらに含むことを特徴とする、請求項１記載のシステム。
【請求項３】
コンピュータネットワークに随意に接続された、コンピュータ処理デバイスをさらに含むことを特徴とする、請求項１又は２に記載のシステム。
【請求項４】
前記循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の形態的特徴を分析するための、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含むことを特徴とする、請求項３記載のシステム。
【請求項５】
前記循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の前記形態的特徴を標準または対照と比較するための、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含むことを特徴とする、請求項３記載のシステム。
【請求項６】
前記血液サンプルから単離した前記循環内皮細胞の一群の濃度を決定するための、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含むことを特徴とする、請求項３記載のシステム。
【請求項７】
前記循環内皮細胞の一群の前記濃度を標準または対照の前記濃度と比較するための、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含むことを特徴とする、請求項６記載のシステム。
【請求項８】
前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離するための機械をさらに含むことを特徴とする、請求項１乃至７のいずれかに記載のシステム。
【請求項９】
循環内皮細胞に特異的に結合するラベル、循環内皮細胞に結合しないラベル又はその組み合わせをさらに含むことを特徴とする、請求項１乃至８のいずれかに記載のシステム。
【請求項１０】
ＣＤ１４６に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０５に特異的に結合するラベル、ＣＤ４５に特異的に結合するラベル、ＣＤ３４に特異的に結合するラベル、ＣＤ３１に特異的に結合するラベル、ＶＥＧＦ２に特異的に結合するラベル、ＣＤ１４４に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０６に特異的に結合するラベル又はその組み合わせをさらに含むことを特徴とする、請求項１乃至９のいずれかに記載のシステム。
【請求項１１】
抗−ＣＤ１４６抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体又はその組み合わせをさらに含むことを特徴とする、請求項１乃至１０のいずれかに記載のシステム。
【請求項１２】
前記抗体が標識化されていることを特徴とする、請求項１０記載のシステム。
【請求項１３】
前記抗体が蛍光部分又は磁気部分により標識化されていることを特徴とする、請求項１０記載のシステム。
【請求項１４】
前記個体又は前記個体を治療する医療専門家に、ＣＥＣの一群の前記形態的特徴についての分析結果を送信するための、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含むことを特徴とする、請求項３記載のシステム。
【請求項１５】
前記個体又は前記個体を治療する医療専門家に、診断結果及び予後診断結果を送信するための、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含むことを特徴とする、請求項１乃至１４のいずれかに記載のシステム。
【請求項１６】
前記心血管障害が、プラーク断裂、プラーク浸食、心臓の虚血、心臓に対する再かん流傷害、アテローム性動脈硬化またはその組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項１乃至１５のいずれかに記載のシステム。
【請求項１７】
前記心血管障害が、急性冠症候群であることを特徴とする、請求項１乃至１６のいずれかに記載のシステム。
【請求項１８】
前記心血管障害が、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）、非ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）、不安定狭心症またはその組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項１乃至１７のいずれかに記載のシステム。
【請求項１９】
前記心血管障害が虚血発作であることを特徴とする、請求項１乃至１８のいずれかに記載のシステム。
【請求項２０】
前記心血管障害がアテローム性動脈硬化であることを特徴とする、請求項１乃至１９のいずれかに記載のシステム。
【請求項２１】
治療を必要としている個体中の心血管障害を分析するための方法であって、該方法は、
（ａ）前記個体から得られた、循環内皮細胞（ＣＥＣ）及び循環非内皮細胞から選択された細胞を含む血液サンプルから単離された循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の拡大された画像を得る工程、及び
（ｂ）前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較する工程、
を含む方法。
【請求項２２】
前記循環内皮細胞の一群の２つの形態的特徴を比較する工程を含むことを特徴とする、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
前記循環内皮細胞の一群の３つの形態的特徴を比較する工程を含むことを特徴とする、請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
前記循環内皮細胞の一群の４つの形態的特徴を比較する工程を含むことを特徴とする、請求項２１記載の方法。
【請求項２５】
前記形態的特徴が細胞領域、核領域、核領域に対する細胞領域の比、細胞形状、核形状、核数、循環内皮細胞数又はその組み合わせであることを特徴とする、請求項２１乃至２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールが、前記形態的特徴を比較することを特徴とする、請求項２１乃至２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
前記比較に基づいて前記心血管障害に関して前記個体に診断又は予後の情報を提供する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２１乃至２６のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴が、
（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた前記対照又は標準から逸脱している場合、又は
（ｂ）現在又は過去に前記心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた前記対照又は標準と一致している場合、
心血管障害を持つ前記個体を診断する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２１乃至２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準と比較した、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の逸脱、又は
（ｂ）現在又は過去に前記心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準と比較した、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴との類似、
に基づいて前記個体の心血管障害の発症に対する感受性を予測する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２１乃至２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準に対する、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の逸脱、又は
（ｂ）現在又は過去に前記心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準との、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の類似、
に基づいて治療計画を処方する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２１乃至２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準に対する、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の逸脱、又は
（ｂ）現在又は過去に前記心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準との、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の類似、
に基づいて、前記個体に処方された又は投与された治療計画を変更する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２１乃至３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準に対する、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の逸脱、又は
（ｂ）現在又は過去に前記心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準との、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の類似、
に基づいた治療計画に対する個体の反応を予測する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２１乃至３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
前記逸脱が、細胞領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域よりも大きい前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項２７乃至３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
前記逸脱が、細胞領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項２７乃至３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
前記逸脱が、細胞領域の平均が約１００μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項２７乃至３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
前記逸脱が、核領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項２７乃至３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
前記逸脱が、核領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項２７乃至３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
前記逸脱が、核領域の平均が約４０μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項２７乃至３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
前記逸脱が、核領域に対する細胞領域の比の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域に対する細胞領域の比の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項２７乃至３２のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
前記逸脱が、核数の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核数の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項２７乃至３２のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
前記逸脱が、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも２つである、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項２７乃至３２のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
前記逸脱が、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも３つである、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項２７乃至３２のいずれかに記載の方法。
【請求項４３】
前記逸脱が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの細胞形状と比較して、異常な該細胞形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項２７乃至３２のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
前記逸脱が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの核形状と比較して、異常な該核形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項２７乃至３２のいずれかに記載の方法。
【請求項４５】
（ａ）前記血液サンプルから単離した前記循環内皮細胞の一群の前記濃度、及び
（ｂ）対照又は標準の前記濃度、
を比較する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２１乃至４４のいずれかに記載の方法。
【請求項４６】
前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離するために機械を使用する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２１乃至４５のいずれかに記載の方法。
【請求項４７】
循環内皮細胞に特異的に結合するラベル、循環内皮細胞に結合しないラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２１乃至４６のいずれかに記載の方法。
【請求項４８】
ＣＤ１４６に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０５に特異的に結合するラベル、ＣＤ４５に特異的に結合するラベル、ＣＤ３４に特異的に結合するラベル、ＣＤ３１に特異的に結合するラベル、ＶＥＧＦ２に特異的に結合するラベル、ＣＤ１４４に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０６に特異的に結合するラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２１乃至４７のいずれかに記載の方法。
【請求項４９】
抗−ＣＤ１４６抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２１乃至４８のいずれかに記載の方法。
【請求項５０】
前記抗体が標識化されていることを特徴とする、請求項４９記載の方法。
【請求項５１】
前記抗体が蛍光部分又は磁気部分により標識化されていることを特徴とする、請求項４９又は５０記載の方法。
【請求項５２】
前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離する工程は、
（ａ）磁気又は蛍光で標識化された抗−ＣＤ１４６抗体と前記血液サンプルを接触させる工程、及び
（ｂ）前記抗−ＣＤ１４６抗体が特異的に結合した前記細胞を単離し、ＣＤ１４６＋細胞の一群を作成する工程、
を含むことを特徴とする、請求項２１乃至５１のいずれかに記載の方法。
【請求項５３】
蛍光で標識化された、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体、ＤＡＰＩ又はその組み合わせに前記ＣＤ１４６＋細胞の一群を接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項５２記載の方法。
【請求項５４】
単離された循環内皮細胞の一群を作成するために、抗−ＣＤ４５抗体が特異的に結合したＣＤ１４６＋細胞を廃棄し、抗−ＣＤ４５抗体が結合しなかったＣＤ１４６＋細胞を保持する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項５２又は５３記載の方法。
【請求項５５】
前記心血管障害が、プラーク断裂、プラーク浸食、心臓の虚血、心臓に対する再かん流傷害、アテローム性動脈硬化またはその組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項２１乃至５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５６】
前記心血管障害が、急性冠症候群であることを特徴とする、請求項２１乃至５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５７】
前記心血管障害が、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）、非ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）、不安定狭心症またはその組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項２１乃至５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５８】
前記心血管障害が、虚血発作であることを特徴とする、請求項２１乃至５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５９】
前記個体が、心血管障害と診断されていることを特徴とする、請求項２１乃至５８のいずれかに記載の方法。
【請求項６０】
前記個体が、心血管障害である疑いがあることを特徴とする、請求項２１乃至５８のいずれかに記載の方法。
【請求項６１】
前記個体が、胸部の痛み又は不快感；胸部の痛みを伴う腕、首、顎、肩又は背中の痛み；吐き気；疲労；息切れ；発汗；めまい；特に身体の片側の顔、腕又は足のしびれ又は脱力；錯乱、会話又は理解の困難；歩行困難、片目又は両目に見ることに対する困難、めまい、バランス又は協調の欠如；原因不明の激しい頭痛；又はその組み合わせから選択される症状を示すことを特徴とする、請求項２１乃至５８のいずれかに記載の方法。
【請求項６２】
前記個体が、心血管障害の症状を示さないことを特徴とする、請求項２１乃至５８のいずれかに記載の方法。
【請求項６３】
治療を必要としている個体中の心血管障害を診断するための方法であって、該方法は、
（ａ）前記個体から得られた、循環内皮細胞（ＣＥＣ）及び循環非内皮細胞から選択された細胞を含む血液サンプルから単離された循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の拡大された画像を得る工程、
（ｂ）前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較する工程、及び
（ｃ）循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴が、（ｉ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準から逸脱している場合、又は（ｉｉ）現在又は過去に心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準と一致している場合、個体中の心血管障害の診断をする工程、
を含む方法。
【請求項６４】
前記循環内皮細胞の一群の２つの形態的特徴を比較する工程を含むことを特徴とする、請求項６３記載の方法。
【請求項６５】
前記循環内皮細胞の一群の３つの形態的特徴を比較する工程を含むことを特徴とする、請求項６３記載の方法。
【請求項６６】
前記循環内皮細胞の一群の４つの形態的特徴を比較する工程を含むことを特徴とする、請求項６３記載の方法。
【請求項６７】
前記形態的特徴が、細胞領域、核領域、核領域に対する細胞領域の比、細胞形状、核形状、核数、循環内皮細胞数又はその組み合わせであることを特徴とする、請求項６３乃至６６のいずれかに記載の方法。
【請求項６８】
コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールが、前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較することを特徴とする、請求項６３乃至６７のいずれかに記載の方法。
【請求項６９】
前記診断に基づいて治療計画を処方する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項６３乃至６８のいずれかに記載の方法。
【請求項７０】
前記診断に基づいて、前記個体に処方された又は投与された治療計画を変更する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項６３乃至６８のいずれかに記載の方法。
【請求項７１】
逸脱が、細胞領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項６３乃至７０のいずれかに記載の方法。
【請求項７２】
前記逸脱が、細胞領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項６３乃至７０のいずれかに記載の方法。
【請求項７３】
前記逸脱が、細胞領域の平均が約１００μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項６３乃至７０のいずれかに記載の方法。
【請求項７４】
前記逸脱が、核領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項６３乃至７０のいずれかに記載の方法。
【請求項７５】
前記逸脱が、核領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項６３乃至７０のいずれかに記載の方法。
【請求項７６】
前記逸脱が、核領域の平均が約４０μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項６３乃至７０のいずれかに記載の方法。
【請求項７７】
前記逸脱が、核領域に対する細胞領域の比の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域に対する細胞領域の比の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項６３乃至７０のいずれかに記載の方法。
【請求項７８】
前記逸脱が、核数の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核数の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項６３乃至７０のいずれかに記載の方法。
【請求項７９】
前記逸脱が、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも２つである、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項６３乃至７０のいずれかに記載の方法。
【請求項８０】
前記逸脱が、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも３つである、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項６３乃至７０のいずれかに記載の方法。
【請求項８１】
前記逸脱が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの細胞形状と比較して、異常な該細胞形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項６３乃至７０のいずれかに記載の方法。
【請求項８２】
前記逸脱が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの核形状と比較して、異常な該核形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項６３乃至７０のいずれかに記載の方法。
【請求項８３】
（ａ）前記血液サンプルから単離した前記循環内皮細胞の一群の前記濃度、及び
（ｂ）対照又は標準の前記濃度、
を比較する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項６３乃至８２のいずれかに記載の方法。
【請求項８４】
前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離するために機械を使用する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項６３乃至８３のいずれかに記載の方法。
【請求項８５】
循環内皮細胞に特異的に結合するラベル、循環内皮細胞に結合しないラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項６３乃至８４のいずれかに記載の方法。
【請求項８６】
ＣＤ１４６に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０５に特異的に結合するラベル、ＣＤ４５に特異的に結合するラベル、ＣＤ３４に特異的に結合するラベル、ＣＤ３１に特異的に結合するラベル、ＶＥＧＦ２に特異的に結合するラベル、ＣＤ１４４に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０６に特異的に結合するラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項６３乃至８５のいずれかに記載の方法。
【請求項８７】
抗−ＣＤ１４６抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項６３乃至８６のいずれかに記載の方法。
【請求項８８】
前記抗体が標識化されていることを特徴とする、請求項８７記載の方法。
【請求項８９】
前記抗体が蛍光部分又は磁気部分により標識化されていることを特徴とする、請求項８７又は８８記載の方法。
【請求項９０】
前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離する工程は、（ａ）磁気又は蛍光で標識化された抗−ＣＤ１４６抗体と前記血液サンプルを接触させる工程、及び（ｂ）前記抗−ＣＤ１４６抗体が特異的に結合した前記細胞を単離し、ＣＤ１４６＋細胞の一群を作成する工程、を含むことを特徴とする、請求項６３乃至８９のいずれかに記載の方法。
【請求項９１】
蛍光で標識化された、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体、ＤＡＰＩ又はその組み合わせに、前記ＣＤ１４６＋細胞の一群を接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項９０記載の方法。
【請求項９２】
単離された循環内皮細胞の一群を作成するために、抗−ＣＤ４５抗体が特異的に結合したＣＤ１４６＋細胞を廃棄し、抗−ＣＤ４５抗体が結合しなかったＣＤ１４６＋細胞を保持する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項９０又は９１記載の方法。
【請求項９３】
前記心血管障害が、プラーク断裂、プラーク浸食、心臓の虚血、心臓に対する再かん流傷害、アテローム性動脈硬化またはその組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項６３乃至９２のいずれかに記載の方法。
【請求項９４】
前記心血管障害が、急性冠症候群であることを特徴とする、請求項６３乃至９２のいずれかに記載の方法。
【請求項９５】
前記心血管障害が、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）、非ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）、不安定狭心症またはその組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項６３乃至９２のいずれかに記載の方法。
【請求項９６】
前記心血管障害が、虚血発作であることを特徴とする、請求項６３乃至９２のいずれかに記載の方法。
【請求項９７】
前記個体が、心血管障害と診断されていることを特徴とする、請求項６３乃至９６のいずれかに記載の方法。
【請求項９８】
前記個体が、心血管障害である疑いがあることを特徴とする、請求項６３乃至９６のいずれかに記載の方法。
【請求項９９】
前記個体が、胸部の痛み又は不快感；胸部の痛みを伴う腕、首、顎、肩又は背中の痛み；吐き気；疲労；息切れ；発汗；めまい；特に身体の片側の顔、腕又は足のしびれ又は脱力；錯乱、会話又は理解の困難；歩行困難、片目又は両目で見ることに対する困難、めまい、バランス又は協調の欠如；原因不明の激しい頭痛；又はその組み合わせから選択される症状を示すことを特徴とする、請求項６３乃至９６のいずれかに記載の方法。
【請求項１００】
前記個体が、心血管障害の症状を示さないことを特徴とする、請求項６３乃至９６のいずれかに記載の方法。
【請求項１０１】
個体の心血管障害の発症に対する感受性があるか否かを予測する方法であって、該方法は、
（ａ）前記個体から得られた、循環内皮細胞（ＣＥＣ）及び循環非内皮細胞から選択された細胞を含む血液サンプルから単離された循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の拡大された画像を得る工程、
（ｂ）前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較する工程、及び
（ｃ）循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の、（ｉ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準の前記形態的特徴からの逸脱、又は（ｉｉ）現在又は過去に心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準の前記形態的特徴との一致、に基づいて前記個体の心血管障害の発症に対する感受性があるか否かを予測する工程、
を含む方法。
【請求項１０２】
前記循環内皮細胞の一群の２つの形態的特徴を比較する工程を含むことを特徴とする、請求項１０１記載の方法。
【請求項１０３】
前記循環内皮細胞の一群の３つの形態的特徴を比較する工程を含むことを特徴とする、請求項１０１記載の方法。
【請求項１０４】
前記循環内皮細胞の一群の４つの形態的特徴を比較する工程を含むことを特徴とする、請求項１０１記載の方法。
【請求項１０５】
前記形態的特徴が、細胞領域、核領域、核領域に対する細胞領域の比、細胞形状、核形状、核数、循環内皮細胞数又はその組み合わせであることを特徴とする、請求項１０１乃至１０４のいずれかに記載の方法。
【請求項１０６】
コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールは、前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較することを特徴とする、請求項１０１乃至１０５のいずれかに記載の方法。
【請求項１０７】
前記診断に基づいて治療計画を処方する工程をさらに含む、請求項１０１乃至１０６のいずれかに記載の方法。
【請求項１０８】
前記診断に基づいて前記個体に処方された又は投与された治療計画を変更する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１０１乃至１０７のいずれかに記載の方法。
【請求項１０９】
逸脱が、細胞領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１０１乃至１０８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１０】
前記逸脱が、細胞領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１０１乃至１０８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１１】
前記逸脱が、細胞領域の平均が約１００μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１０１乃至１０８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１２】
前記逸脱が、核領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１０１乃至１０８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１３】
前記逸脱が、核領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１０１乃至１０８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１４】
前記逸脱が、核領域の平均が約４０μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１０１乃至１０８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１５】
前記逸脱が、核領域に対する細胞領域の比の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域に対する細胞領域の比の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１０１乃至１０８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１６】
前記逸脱が、核数の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核数の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１０１乃至１０８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１７】
前記逸脱が、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも２つである、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１０１乃至１０８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１８】
前記逸脱が、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも３つである、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１０１乃至１０８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１９】
前記逸脱が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの細胞形状と比較して、異常な該細胞形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１０１乃至１０８のいずれかに記載の方法。
【請求項１２０】
前記逸脱が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの核形状と比較して、異常な該核形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１０１乃至１０８のいずれかに記載の方法。
【請求項１２１】
（ａ）前記血液サンプルから単離した前記循環内皮細胞の一群の前記濃度、及び
（ｂ）対照又は標準の前記濃度を比較する工程、
をさらに含むことを特徴とする、請求項１０１乃至１２０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２２】
前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離するために機械を使用する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１０１乃至１２１のいずれかに記載の方法。
【請求項１２３】
循環内皮細胞に特異的に結合するラベル、循環内皮細胞に結合しないラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１０１乃至１２２のいずれかに記載の方法。
【請求項１２４】
ＣＤ１４６に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０５に特異的に結合するラベル、ＣＤ４５に特異的に結合するラベル、ＣＤ３４に特異的に結合するラベル、ＣＤ３１に特異的に結合するラベル、ＶＥＧＦ２に特異的に結合するラベル、ＣＤ１４４に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０６に特異的に結合するラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１０１乃至１２３のいずれかに記載の方法。
【請求項１２５】
抗−ＣＤ１４６抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１０１乃至１２４のいずれかに記載の方法。
【請求項１２６】
前記抗体が標識化されることを特徴とする、請求項１２５記載の方法。
【請求項１２７】
前記抗体が蛍光部分又は磁気部分により標識化されることを特徴とする、請求項１２５又は１２６記載の方法。
【請求項１２８】
前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離する工程は、
（ａ）磁気又は蛍光で標識化された抗−ＣＤ１４６抗体と前記血液サンプルを接触させる工程、及び
（ｂ）前記抗−ＣＤ１４６抗体が特異的に結合した前記細胞を単離し、ＣＤ１４６＋細胞の一群を作成する工程、
を含むことを特徴とする、請求項１０１乃至１２７のいずれかに記載の方法。
【請求項１２９】
幾蛍光で標識化された、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体、ＤＡＰＩ又はその組み合わせに前記ＣＤ１４６＋細胞の一群を接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１２８記載の方法。
【請求項１３０】
単離された循環内皮細胞の一群を作成するために、抗−ＣＤ４５抗体が特異的に結合したＣＤ１４６＋細胞を廃棄し、抗−ＣＤ４５抗体が結合しなかったＣＤ１４６＋細胞を保持する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１２８又は１２９記載の方法。
【請求項１３１】
前記心血管障害が、プラーク断裂、プラーク浸食、心臓の虚血、心臓に対する再かん流傷害、アテローム性動脈硬化またはその組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項１０１乃至１３０のいずれかに記載の方法。
【請求項１３２】
前記心血管障害が、急性冠症候群であることを特徴とする、請求項１０１乃至１３０のいずれかに記載の方法。
【請求項１３３】
前記心血管障害が、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）、非ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）、不安定狭心症またはその組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項１０１乃至１３０のいずれかに記載の方法。
【請求項１３４】
前記心血管障害が、虚血発作であることを特徴とする、請求項１０１乃至１３０のいずれかに記載の方法。
【請求項１３５】
前記個体が、心血管障害と診断されていることを特徴とする、請求項１０１乃至１３４のいずれかに記載の方法。
【請求項１３６】
前記個体が、心血管障害である疑いがあることを特徴とする、請求項１０１乃至１３４のいずれかに記載の方法。
【請求項１３７】
前記個体が、胸部の痛み又は不快感；胸部の痛みを伴う腕、首、顎、肩又は背中の痛み；吐き気；疲労；息切れ；発汗；めまい；特に身体の片側の顔、腕又は足のしびれ又は脱力；錯乱、会話又は理解の困難；歩行困難；片目又は両目で見ることに対する困難；めまい；バランス又は協調の欠如；原因不明の激しい頭痛；又はその組み合わせから選択される症状を示すことを特徴とする、請求項１０１乃至１３４のいずれかに記載の方法。
【請求項１３８】
前記個体が、心血管障害の症状を示さないことを特徴とする、請求項１０１乃至１３４のいずれかに記載の方法。
【請求項１３９】
心血管障害のための治療計画に対する個体の反応を予測する方法であって、該方法は、
（ａ）前記個体から得られた、循環内皮細胞（ＣＥＣ）及び循環非内皮細胞から選択された細胞を含む血液サンプルから単離された循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の拡大された画像を得る工程、
（ｂ）前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較する工程、及び
（ｃ）循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の、（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準の前記形態的特徴からの逸脱、又は（ｂ）現在又は過去に心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準の前記形態的特徴との一致、に基づいて、治療計画に対する前記個体の反応を予測する工程、
を含む方法。
【請求項１４０】
前記循環内皮細胞の一群の２つの形態的特徴を比較する工程を含むことを特徴とする、請求項１３９記載の方法。
【請求項１４１】
前記循環内皮細胞の一群の３つの形態的特徴を比較する工程を含むことを特徴とする、請求項１３９記載の方法。
【請求項１４２】
前記循環内皮細胞の一群の４つの形態的特徴を比較する工程を含むことを特徴とする、請求項１３９記載の方法。
【請求項１４３】
前記形態的特徴が、細胞領域、核領域、核領域に対する細胞領域の比、細胞形状、核形状、核数、循環内皮細胞数又はその組み合わせであることを特徴とする、請求項１３９乃至１４２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４４】
コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールは、前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較することを特徴とする、請求項１３９乃至１４３のいずれかに記載の方法。
【請求項１４５】
前記診断に基づいて治療計画を処方する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１３９乃至１４４のいずれかに記載の方法。
【請求項１４６】
前記診断に基づいて前記個体に処方された又は投与された治療計画を変更する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１３９乃至１４４のいずれかに記載の方法。
【請求項１４７】
逸脱が、細胞領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１３９乃至１４６のいずれかに記載の方法。
【請求項１４８】
前記逸脱が、細胞領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１３９乃至１４６のいずれかに記載の方法。
【請求項１４９】
前記逸脱が、細胞領域の平均が約１００μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１３９乃至１４６のいずれかに記載の方法。
【請求項１５０】
前記逸脱が、核領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１３９乃至１４６のいずれかに記載の方法。
【請求項１５１】
前記逸脱が、核領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１３９乃至１４６のいずれかに記載の方法。
【請求項１５２】
前記逸脱が、核領域の平均が約４０μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１３９乃至１４６のいずれかに記載の方法。
【請求項１５３】
前記逸脱が、核領域に対する細胞領域の比の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域に対する細胞領域の比の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１３９乃至１４６のいずれかに記載の方法。
【請求項１５４】
前記逸脱が、核数の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核数の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１３９乃至１４６のいずれかに記載の方法。
【請求項１５５】
前記逸脱が、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも２つである、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１３９乃至１４６のいずれかに記載の方法。
【請求項１５６】
前記逸脱が、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも３つである、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１３９乃至１４６のいずれかに記載の方法。
【請求項１５７】
前記逸脱が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの細胞形状と比較して、異常な該細胞形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１３９乃至１４６のいずれかに記載の方法。
【請求項１５８】
前記逸脱が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの核形状と比較して、異常な該核形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１３９乃至１４６のいずれかに記載の方法。
【請求項１５９】
（ａ）前記血液サンプルから単離した前記循環内皮細胞の一群の前記濃度、及び
（ｂ）対照又は標準の前記濃度、
を比較する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１３９乃至１５８のいずれかに記載の方法。
【請求項１６０】
前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離するために機械を使用する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１３９乃至１５９のいずれかに記載の方法。
【請求項１６１】
循環内皮細胞に特異的に結合するラベル、循環内皮細胞に結合しないラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１３９乃至１６０のいずれかに記載の方法。
【請求項１６２】
ＣＤ１４６に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０５に特異的に結合するラベル、ＣＤ４５に特異的に結合するラベル、ＣＤ３４に特異的に結合するラベル、ＣＤ３１に特異的に結合するラベル、ＶＥＧＦ２に特異的に結合するラベル、ＣＤ１４４に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０６に特異的に結合するラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１３９乃至１６０のいずれかに記載の方法。
【請求項１６３】
抗−ＣＤ１４６抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１３９乃至１６２のいずれかに記載の方法。
【請求項１６４】
前記抗体が標識化されることを特徴とする、請求項１６３記載の方法。
【請求項１６５】
前記抗体が蛍光部分又は磁気部分により標識化されることを特徴とする、請求項１６３又は１６４記載の方法。
【請求項１６６】
前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離する工程が、ＣＤ１４６＋細胞の一群を作成するため、
（ａ）磁気又は蛍光で標識化された抗−ＣＤ１４６抗体と前記血液サンプルを接触させる工程、及び
（ｂ）前記抗−ＣＤ１４６抗体が特異的に結合した前記細胞を単離する工程、
を含むことを特徴とする、請求項１３９乃至１６５のいずれかに記載の方法。
【請求項１６７】
蛍光で標識化された、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体、ＤＡＰＩ又はその組み合わせに前記ＣＤ１４６＋細胞の一群を接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１６６記載の方法。
【請求項１６８】
単離された循環内皮細胞の一群を作成するために、抗−ＣＤ４５抗体が特異的に結合したＣＤ１４６＋細胞を廃棄し、抗−ＣＤ４５抗体が結合しなかったＣＤ１４６＋細胞を保持する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１６６又は１６７記載の方法。
【請求項１６９】
前記心血管障害が、プラーク断裂、プラーク浸食、心臓の虚血、心臓に対する再かん流傷害、アテローム性動脈硬化またはその組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項１３９乃至１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１７０】
前記心血管障害が、急性冠症候群であることを特徴とする、請求項１３９乃至１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１７１】
前記心血管障害が、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）、非ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）、不安定狭心症またはその組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項１３９乃至１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１７２】
前記心血管障害が、虚血発作であることを特徴とする、請求項１３９乃至１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１７３】
前記個体が心血管障害と診断されていることを特徴とする、請求項１３９乃至１７２のいずれかに記載の方法。
【請求項１７４】
前記個体が、心血管障害である疑いがあることを特徴とする、請求項１３９乃至１７２のいずれかに記載の方法。
【請求項１７５】
前記個体が、胸部の痛み又は不快感；胸部の痛みを伴う腕、首、顎、肩又は背中の痛み；吐き気；疲労；息切れ；発汗；めまい；特に身体の片側の顔、腕又は足のしびれ又は脱力；錯乱、会話又は理解の困難；歩行困難、片目又は両目で見ることに対する困難、めまい、バランス又は協調の欠如；原因不明の激しい頭痛；又はその組み合わせから選択される症状を示すことを特徴とする、請求項１３９乃至１７２のいずれかに記載の方法。
【請求項１７６】
前記個体が、心血管障害の症状を示さないことを特徴とする、請求項１３９乃至１７２のいずれかに記載の方法。
【請求項１７７】
治療を必要としている個体に心血管障害のための治療計画を処方する方法であって、該方法は、
（ａ）前記個体から得られた、循環内皮細胞（ＣＥＣ）及び循環非内皮細胞から選択された細胞を含む血液サンプルから単離された循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の拡大された画像を得る工程、
（ｂ）前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較する工程、及び
（ｃ）循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の、（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準の前記形態的特徴からの逸脱、又は（ｂ）現在又は過去に心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準の前記形態的特徴との一致に基づいて、治療計画を処方する工程、
を含む方法。
【請求項１７８】
前記循環内皮細胞の一群の２つの形態的特徴を比較する工程を含むことを特徴とする、請求項１７７記載の方法。
【請求項１７９】
前記循環内皮細胞の一群の３つの形態的特徴を比較する工程を含むことを特徴とする、請求項１７７記載の方法。
【請求項１８０】
前記循環内皮細胞の一群の４つの形態的特徴を比較する工程を含むことを特徴とする、請求項１７７記載の方法。
【請求項１８１】
前記形態的特徴が、細胞領域、核領域、核領域に対する細胞領域の比、細胞形状、核形状、核数、循環内皮細胞数又はその組み合わせであることを特徴とする、請求項１７７乃至１８０のいずれかに記載の方法。
【請求項１８２】
コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールが、前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較することを特徴とする、請求項１７７乃至１８１のいずれかに記載の方法。
【請求項１８３】
逸脱が、細胞領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１７７乃至１８２のいずれかに記載の方法。
【請求項１８４】
前記逸脱が、細胞領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１７７乃至１８２のいずれかに記載の方法。
【請求項１８５】
前記逸脱が、細胞領域の平均が約１００μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１７７乃至１８２のいずれかに記載の方法。
【請求項１８６】
前記逸脱が、核領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１７７乃至１８２のいずれかに記載の方法。
【請求項１８７】
前記逸脱が、核領域の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１７７乃至１８２のいずれかに記載の方法。
【請求項１８８】
前記逸脱が、核領域の平均が約４０μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１７７乃至１８２のいずれかに記載の方法。
【請求項１８９】
前記逸脱が、核領域に対する細胞領域の比の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域に対する細胞領域の比の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１７７乃至１８２のいずれかに記載の方法。
【請求項１９０】
前記逸脱が、核数の平均が健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核数の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１７７乃至１８２のいずれかに記載の方法。
【請求項１９１】
前記逸脱が、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも２つである、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１７７乃至１８２のいずれかに記載の方法。
【請求項１９２】
前記逸脱が、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも３つである、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１７７乃至１８２のいずれかに記載の方法。
【請求項１９３】
前記逸脱が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの細胞形状と比較して、異常な該細胞形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１７７乃至１８２のいずれかに記載の方法。
【請求項１９４】
前記逸脱が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの核形状と比較して、異常な該核形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群であることを特徴とする、請求項１７７乃至１８２のいずれかに記載の方法。
【請求項１９５】
（ａ）前記血液サンプルから単離した前記循環内皮細胞の一群の前記濃度、及び
（ｂ）対照又は標準の前記濃度、
を比較する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１７７乃至１９４のいずれかに記載の方法。
【請求項１９６】
前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離するために機械を使用する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１７７乃至１９５のいずれかに記載の方法。
【請求項１９７】
循環内皮細胞に特異的に結合するラベル、循環内皮細胞に結合しないラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１７７乃至１９６のいずれかに記載の方法。
【請求項１９８】
ＣＤ１４６に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０５に特異的に結合するラベル、ＣＤ４５に特異的に結合するラベル、ＣＤ３４に特異的に結合するラベル、ＣＤ３１に特異的に結合するラベル、ＶＥＧＦ２に特異的に結合するラベル、ＣＤ１４４に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０６に特異的に結合するラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１７７乃至１９７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９９】
抗−ＣＤ１４６抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１７７乃至１９８のいずれかに記載の方法。
【請求項２００】
前記抗体が標識化されることを特徴とする、請求項１９９記載の方法。
【請求項２０１】
前記抗体が蛍光部分又は磁気部分により標識化されることを特徴とする、請求項１９９又は２００記載の方法。
【請求項２０２】
前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離する工程が、
（ａ）磁気又は蛍光で標識化された抗−ＣＤ１４６抗体と前記血液サンプルを接触させる工程、及び
（ｂ）前記抗−ＣＤ１４６抗体が特異的に結合した前記細胞を単離し、ＣＤ１４６＋細胞の一群を作成する工程、
を含むことを特徴とする、請求項１７７乃至２０１のいずれかに記載の方法。
【請求項２０３】
蛍光で標識化された、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体、ＤＡＰＩ又はその組み合わせに前記ＣＤ１４６＋細胞の一群を接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２０２記載の方法。
【請求項２０４】
単離された循環内皮細胞の一群を作成するために、抗−ＣＤ４５抗体が特異的に結合したＣＤ１４６＋細胞を廃棄し、抗−ＣＤ４５抗体が結合しなかったＣＤ１４６＋細胞を保持する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２０２又は２０３記載の方法。
【請求項２０５】
前記心血管障害が、プラーク断裂、プラーク浸食、心臓の虚血、心臓に対する再かん流傷害、アテローム性動脈硬化またはその組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項１７７乃至２０４のいずれかに記載の方法。
【請求項２０６】
前記心血管障害が、急性冠症候群であることを特徴とする、請求項１７７乃至２０４のいずれかに記載の方法。
【請求項２０７】
前記心血管障害が、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）、非ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）、不安定狭心症またはその組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項１７７乃至２０４のいずれかに記載の方法。
【請求項２０８】
前記心血管障害が、虚血発作であることを特徴とする、請求項１７７乃至２０４のいずれかに記載の方法。
【請求項２０９】
前記個体が、心血管障害と診断されていることを特徴とする、請求項１７７乃至２０８のいずれかに記載の方法。
【請求項２１０】
前記個体が心血管障害である疑いがあることを特徴とする、請求項１７７乃至２０８のいずれかに記載の方法。
【請求項２１１】
前記個体が、胸部の痛み又は不快感；胸部の痛みを伴う腕、首、顎、肩又は背中の痛み；吐き気；疲労；息切れ；発汗；めまい；特に身体の片側の顔、腕又は足のしびれ又は脱力；錯乱、会話又は理解の困難；歩行困難、片目又は両目で見ることに対する困難、めまい、バランス又は協調の欠如；原因不明の激しい頭痛；又はその組み合わせから選択される症状を示すことを特徴とする、請求項１７７乃至２０８のいずれかに記載の方法。
【請求項２１２】
前記個体が、心血管障害の症状を示さないことを特徴とする、請求項１７７乃至２０８のいずれかに記載の方法。
【請求項２１３】
単離した循環内皮細胞であって、該単離した循環内皮細胞は、
（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準から逸脱している、又は
（ｂ）現在又は過去に対象の心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準と類似している、
少なくとも1つの形態的特徴を含む、単離した循環内皮細胞。
【請求項２１４】
（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準から逸脱している、又は
（ｂ）現在又は過去に対象の心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準と類似している、
２つの形態的特徴を含むことを特徴とする、請求項２１３記載の単離した循環内皮細胞。
【請求項２１５】
（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準から逸脱している、又は
（ｂ）現在又は過去に対象の心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準と類似している、
３つの形態的特徴を含むことを特徴とする、請求項２１３記載の単離した循環内皮細胞。
【請求項２１６】
（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準から逸脱している、又は
（ｂ）現在又は過去に対象の心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準と類似している、
４つの形態的特徴を含むことを特徴とする、請求項２１３記載の単離した循環内皮細胞。
【請求項２１７】
逸脱が、定性的偏差、定量的偏差又はその組み合わせを含むことを特徴とする、請求項２１３乃至２１６のいずれかに記載の単離した循環内皮細胞。
【請求項２１８】
前記形態的特徴が、細胞領域、核領域、核領域に対する細胞領域の比、細胞形状、核形状、核数から選択されることを特徴とする、請求項２１３乃至２１７のいずれかに記載の単離した循環内皮細胞。
【請求項２１９】
前記単離された循環内皮細胞が２つの核を含むことを特徴とする、請求項２１３乃至２１８のいずれかに記載の単離した循環内皮細胞。
【請求項２２０】
前記単離された循環内皮細胞が３つの核を含むことを特徴とする、請求項２１３乃至２１９のいずれかに記載の単離した循環内皮細胞。
【請求項２２１】
前記単離された循環内皮細胞の前記核領域が、対照又は標準の前記核領域よりも少なくとも約３０％大きいことを特徴とする、請求項２１３乃至２２０のいずれかに記載の単離した循環内皮細胞。
【請求項２２２】
前記単離された循環内皮細胞の前記細胞領域が、対照又は標準の前記細胞領域よりも少なくとも約３０％大きいことを特徴とする、請求項２１３乃至２２１のいずれかに記載の単離した循環内皮細胞。
【請求項２２３】
前記単離された循環内皮細胞が、心血管障害であると診断された個体から単離したものであることを特徴とする、請求項２１３乃至２２２のいずれかに記載の単離した循環内皮細胞。
【請求項２２４】
前記単離された循環内皮細胞が、心血管障害である疑いがある個体から単離したものであることを特徴とする、請求項２１３乃至２２２のいずれかに記載の単離した循環内皮細胞。
【請求項２２５】
前記単離された循環内皮細胞が、心血管障害の症状を示さない個体から単離したものであることを特徴とする、請求項２１３乃至２２２のいずれかに記載の単離した循環内皮細胞。
【請求項２２６】
前記循環内皮細胞が、機械の使用により単離されたものであることを特徴とする、請求項２１３乃至２２５のいずれかに記載の単離した循環内皮細胞。
【請求項２２７】
前記循環内皮細胞が、
（ａ）磁気又は蛍光で標識化された抗−ＣＤ１４６抗体と前記血液サンプルを接触させる工程、及び
（ｂ）前記抗−ＣＤ１４６抗体が特異的に結合した前記細胞を単離し、ＣＤ１４６＋細胞の一群を作成する工程、
により単離されることを特徴とする、請求項２１３乃至２２６のいずれかに記載の単離した循環内皮細胞。
【請求項２２８】
蛍光で標識化された、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体、ＤＡＰＩ又はその組み合わせに前記ＣＤ１４６＋細胞の一群を接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２２７記載の工程をさらに含んでなることを特徴とする方法。
【請求項２２９】
単離された循環内皮細胞の一群を作成するために、抗−ＣＤ４５抗体が特異的に結合したＣＤ１４６＋細胞を廃棄し、抗−ＣＤ４５抗体が結合しなかったＣＤ１４６＋細胞を保持する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２２６又は２２７記載の工程をさらに含んでなることを特徴とする方法。
【請求項２３０】
結合した抗−ＣＤ１４６抗体、結合した抗−ＣＤ１０５抗体、結合した抗−ＣＤ３４抗体、結合した抗−ＣＤ３１抗体、結合した抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体、ＤＡＰＩ又はその組み合わせをさらに含むことを特徴とする、請求項２１３乃至２２６のいずれかに記載の単離した循環内皮細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
＜相互参照＞
本出願は、２０１１年７月７日に出願の米国仮特許出願第６１／５０５，４８１（発明の名称「心血管障害を分析する方法及びその用途」）の優先権を主張するものであり、その全体が引用によって本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
急性心筋梗塞（ＭＩ）及び虚血性脳梗塞は未だに世界的に主要な死因及び障害である。米国では毎年２５０万人以上が、新たな又は再発した心臓発作又は虚血性脳梗塞を経験する。現在、安定型冠動脈疾患（ＣＡＤ）は、機能的ストレステスト及び冠動脈硬化を通じて容易に診断される。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本明細書中には、特定の実施形態において、心血管障害を分析するためのシステムが開示されており、該システムは、（ａ）個体から得られた、循環内皮細胞（ＣＥＣ）及び循環非内皮細胞から選択された細胞を含む血液サンプルから単離したＣＥＣの一群、及び（ｂ）ＣＥＣの一群中の単一のＣＥＣの形態的特徴を視覚化するために十分な倍率を有している顕微鏡、を含み、ここで前記形態的特徴は、細胞領域、核領域、核領域に対する細胞領域の比、細胞形状、核形状、核数、循環内皮細胞数又はこれらの組み合わせから選択される。
幾つかの実施形態では、前記システムは前記ＣＥＣの一群又は前記ＣＥＣの一群中の単一のＣＥＣの拡大された画像を取り込む及び保存するための電子メモリをさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記システムはコンピュータネットワークに随意に接続された、コンピュータ処理デバイスをさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記システムは前記循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の形態的特徴を分析するための、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記システムは前記循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の前記形態的特徴を標準または対照と比較するための、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記システムは前記血液サンプルから単離した前記循環内皮細胞の一群の濃度を決定するための、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記システムは前記循環内皮細胞の一群の前記濃度を標準または対照の前記濃度と比較するための、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記システムは前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離するための機械をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記システムは循環内皮細胞に特異的に結合するラベル、循環内皮細胞に結合しないラベル又はその組み合わせをさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記システムはＣＤ１４６に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０５に特異的に結合するラベル、ＣＤ４５に特異的に結合するラベル、ＣＤ３４に特異的に結合するラベル、ＣＤ３１に特異的に結合するラベル、ＶＥＧＦ２に特異的に結合するラベル、ＣＤ１４４に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０６に特異的に結合するラベル又はその組み合わせをさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記システムは抗−ＣＤ１４６抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体又はその組み合わせをさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記抗体は標識化される。
幾つかの実施形態では、前記抗体は蛍光部分又は磁気部分により標識化される。
幾つかの実施形態では、前記システムは前記個体又は前記個体を治療する医療専門家に、ＣＥＣの一群の前記形態的特徴についての分析結果を送信するための、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記システムは前記個体又は前記個体を治療する医療専門家に、診断結果及び予後診断結果を送信するための、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、プラーク断裂、プラーク浸食、心臓の虚血、心臓に対する再かん流傷害、アテローム性動脈硬化またはその組み合わせから選択される。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、急性冠症候群である。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）、非ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）、不安定狭心症またはその組み合わせから選択される。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は虚血発作である。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害はアテローム性動脈硬化である。
【０００４】
本明細書中には、特定の実施形態において、治療を必要としている個体中の心血管障害を分析するための方法が開示されており、該方法は、（ａ）前記個体から得られた、循環内皮細胞（ＣＥＣ）及び循環非内皮細胞から選択された細胞を含む血液サンプルから単離された循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の拡大された画像を得る工程、及び（ｂ）前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較する工程、を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は前記循環内皮細胞の一群の２つの形態的特徴を比較する工程を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は前記循環内皮細胞の一群の３つの形態的特徴を比較する工程を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は前記循環内皮細胞の一群の４つの形態的特徴を比較する工程を含む。
幾つかの実施形態では、前記形態的特徴は細胞領域、核領域、核領域に対する細胞領域の比、細胞形状、核形状、核数、循環内皮細胞数又はその組み合わせである。
幾つかの実施形態では、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールは、前記形態的特徴を比較する。
幾つかの実施形態では、前記方法は、前記比較に基づいて前記心血管障害に関して前記個体に診断又は予後の情報を提供する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴が、（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた前記対照又は標準から逸脱している場合、又は（ｂ）現在又は過去に前記心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた前記対照又は標準と一致している場合、心血管障害を持つ前記個体を診断する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準と比較した、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の逸脱、又は（ｂ）現在又は過去に前記心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準と比較した、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の類似、に基づいて前記個体の心血管障害の発症に対する感受性を予測する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準に対する、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の逸脱、又は（ｂ）現在又は過去に前記心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準との、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の類似、に基づいて治療計画を処方する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準に対する、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の逸脱、又は（ｂ）現在又は過去に前記心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準との、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の類似、に基づいて、前記個体に処方された又は投与された治療計画を変更する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準に対する、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の逸脱、又は（ｂ）現在又は過去に前記心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準との、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の類似に基づいた治療計画に対する個体の反応を予測する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、細胞領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、細胞領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、細胞領域の平均が約１００μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域の平均が約４０μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域に対する細胞領域の比の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域に対する細胞領域の比の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核数の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核数の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも２つである、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも３つである、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの細胞形状と比較して、異常な細胞形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの核形状と比較して、異常な核形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記方法は（ａ）前記血液サンプルから単離した前記循環内皮細胞の一群の前記濃度及び（ｂ）対照又は標準の前記濃度を比較する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離するために機械を使用する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、循環内皮細胞に特異的に結合するラベル、循環内皮細胞に結合しないラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、ＣＤ１４６に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０５に特異的に結合するラベル、ＣＤ４５に特異的に結合するラベル、ＣＤ３４に特異的に結合するラベル、ＣＤ３１に特異的に結合するラベル、ＶＥＧＦ２に特異的に結合するラベル、ＣＤ１４４に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０６に特異的に結合するラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、抗−ＣＤ１４６抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記抗体は標識化される。
幾つかの実施形態では、前記抗体は蛍光部分又は磁気部分により標識化される。
幾つかの実施形態では、前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離する工程は、（ａ）磁気又は蛍光で標識化された抗−ＣＤ１４６抗体と前記血液サンプルを接触させる工程、及び（ｂ）前記抗−ＣＤ１４６抗体が特異的に結合した前記細胞を単離し、ＣＤ１４６＋細胞の一群を作成する工程、を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、蛍光で標識化された、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体、ＤＡＰＩ又はその組み合わせに前記ＣＤ１４６＋細胞の一群を接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、単離された循環内皮細胞の一群を作成するために、抗−ＣＤ４５抗体が特異的に結合したＣＤ１４６＋細胞を廃棄し、抗−ＣＤ４５抗体が結合しなかったＣＤ１４６＋細胞を保持する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、プラーク断裂、プラーク浸食、心臓の虚血、心臓に対する再かん流傷害、アテローム性動脈硬化またはその組み合わせから選択される。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、急性冠症候群である。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）、非ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）、不安定狭心症またはその組み合わせから選択される。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は虚血発作である。
幾つかの実施形態では、前記個体は心血管障害と診断されている。
幾つかの実施形態では、前記個体は心血管障害である疑いがある。
幾つかの実施形態では、前記個体は、胸部の痛み又は不快感；胸部の痛みを伴う腕、首、顎、肩又は背中の痛み；吐き気；疲労；息切れ；発汗；めまい；特に身体の片側の顔、腕又は足のしびれ又は脱力；錯乱、会話又は理解の困難；歩行困難、片目又は両目で見ることに対する困難、めまい、バランス又は協調の欠如；原因不明の激しい頭痛；又はその組み合わせから選択される症状を示す。
幾つかの実施形態では、前記個体は心血管障害の症状を示さない。
【０００５】
本明細書中には、特定の実施形態において、治療を必要としている個体中の心血管障害を診断するための方法が開示されており、該方法は、（ａ）前記個体から得られた、循環内皮細胞（ＣＥＣ）及び循環非内皮細胞から選択された細胞を含む血液サンプルから単離された循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の拡大された画像を得る工程、（ｂ）前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較する工程、及び（ｃ）循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴が、（ｉ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準から逸脱している場合、又は（ｉｉ）現在又は過去に心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準と一致している場合、個体中の心血管障害の診断をする工程、を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は前記循環内皮細胞の一群の２つの形態的特徴を比較する工程を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は前記循環内皮細胞の一群の３つの形態的特徴を比較する工程を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は前記循環内皮細胞の一群の４つの形態的特徴を比較する工程を含む。
幾つかの実施形態では、前記形態的特徴は細胞領域、核領域、核領域に対する細胞領域の比、細胞形状、核形状、核数、循環内皮細胞数又はその組み合わせである。
幾つかの実施形態では、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールは、前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較する。
幾つかの実施形態では、前記方法は、前記診断に基づいて治療計画を処方する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、前記診断に基づいて前記個体に処方された又は投与された治療計画を変更する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、逸脱は、細胞領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、細胞領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、細胞領域の平均が約１００μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域の平均が約４０μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域に対する細胞領域の比の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域に対する細胞領域の比の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核数の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核数の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも２つである、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも３つである、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの細胞形状と比較して、異常な該細胞形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの核形状と比較して、異常な該核形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記方法は（ａ）前記血液サンプルから単離した前記循環内皮細胞の一群の前記濃度及び（ｂ）対照又は標準の前記濃度を比較する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離するために機械を使用する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、循環内皮細胞に特異的に結合するラベル、循環内皮細胞に結合しないラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、ＣＤ１４６に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０５に特異的に結合するラベル、ＣＤ４５に特異的に結合するラベル、ＣＤ３４に特異的に結合するラベル、ＣＤ３１に特異的に結合するラベル、ＶＥＧＦ２に特異的に結合するラベル、ＣＤ１４４に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０６に特異的に結合するラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、抗−ＣＤ１４６抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記抗体は標識化される。
幾つかの実施形態では、前記抗体は蛍光部分又は磁気部分により標識化される。
幾つかの実施形態では、前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離する工程は、（ａ）磁気又は蛍光で標識化された抗−ＣＤ１４６抗体と前記血液サンプルを接触させる工程、及び（ｂ）前記抗−ＣＤ１４６抗体が特異的に結合した前記細胞を単離し、ＣＤ１４６＋細胞の一群を作成する工程、を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、蛍光で標識化された、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体、ＤＡＰＩ又はその組み合わせに前記ＣＤ１４６＋細胞の一群を接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、単離された循環内皮細胞の一群を作成するために、抗−ＣＤ４５抗体が特異的に結合したＣＤ１４６＋細胞を廃棄し、抗−ＣＤ４５抗体が結合しなかったＣＤ１４６＋細胞を保持する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、プラーク断裂、プラーク浸食、心臓の虚血、心臓に対する再かん流傷害、アテローム性動脈硬化またはその組み合わせから選択される。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、急性冠症候群である。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）、非ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）、不安定狭心症またはその組み合わせから選択される。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は虚血発作である。
幾つかの実施形態では、前記個体は心血管障害と診断されている。
幾つかの実施形態では、前記個体は心血管障害である疑いがある。
幾つかの実施形態では、前記個体は、胸部の痛み又は不快感；胸部の痛みを伴う腕、首、顎、肩又は背中の痛み；吐き気；疲労；息切れ；発汗；めまい；特に身体の片側の顔、腕又は足のしびれ又は脱力；錯乱、会話又は理解の困難；歩行困難、片目又は両目で見ることに対する困難、めまい、バランス又は協調の欠如；原因不明の激しい頭痛；又はその組み合わせから選択される症状を示す。
幾つかの実施形態では、前記個体は心血管障害の症状を示さない。
【０００６】
本明細書中には、特定の実施形態において、個体の心血管障害の発症に対する感受性があるか否かを予測する方法が開示されており、該方法は、（ａ）前記個体から得られた、循環内皮細胞（ＣＥＣ）及び循環非内皮細胞から選択された細胞を含む血液サンプルから単離された循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の拡大された画像を得る工程、（ｂ）前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較する工程、及び（ｃ）循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の、（ｉ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準の前記形態的特徴からの逸脱、又は（ｉｉ）現在又は過去に心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準の前記形態的特徴との類似、に基づいて心血管障害の発症に対して前記個体が感受性を有するか否かを予測する工程、を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は前記循環内皮細胞の一群の２つの形態的特徴を比較する工程を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は前記循環内皮細胞の一群の３つの形態的特徴を比較する工程を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は前記循環内皮細胞の一群の４つの形態的特徴を比較する工程を含む。
幾つかの実施形態では、前記形態的特徴は細胞領域、核領域、核領域に対する細胞領域の比、細胞形状、核形状、核数、循環内皮細胞数又はその組み合わせである。
幾つかの実施形態では、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールは、前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較する。
幾つかの実施形態では、前記方法は、前記診断に基づいて治療計画を処方する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、前記診断に基づいて前記個体に処方された又は投与された治療計画を変更する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、逸脱は、細胞領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、細胞領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、細胞領域の平均が約１００μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域の平均が約４０μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域に対する細胞領域の比の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域に対する細胞領域の比の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核数の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核数の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも２つである、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも３つである、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの細胞形状と比較して、異常な該細胞形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの核形状と比較して、異常な該核形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記方法は（ａ）前記血液サンプルから単離した前記循環内皮細胞の一群の前記濃度及び（ｂ）対照又は標準の前記濃度を比較する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離するために機械を使用する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、循環内皮細胞に特異的に結合するラベル、循環内皮細胞に結合しないラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、ＣＤ１４６に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０５に特異的に結合するラベル、ＣＤ４５に特異的に結合するラベル、ＣＤ３４に特異的に結合するラベル、ＣＤ３１に特異的に結合するラベル、ＶＥＧＦ２に特異的に結合するラベル、ＣＤ１４４に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０６に特異的に結合するラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、抗−ＣＤ１４６抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記抗体は標識化される。
幾つかの実施形態では、前記抗体は蛍光部分又は磁気部分により標識化される。
幾つかの実施形態では、前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離する工程は、（ａ）磁気又は蛍光で標識化された抗−ＣＤ１４６抗体と前記血液サンプルを接触させる工程、及び（ｂ）前記抗−ＣＤ１４６抗体が特異的に結合した前記細胞を単離し、ＣＤ１４６＋細胞の一群を作成する工程、を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、蛍光で標識化された、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体、ＤＡＰＩ又はその組み合わせに前記ＣＤ１４６＋細胞の一群を接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、単離された循環内皮細胞の一群を作成するために、抗−ＣＤ４５抗体が特異的に結合したＣＤ１４６＋細胞を廃棄し、抗−ＣＤ４５抗体が結合しなかったＣＤ１４６＋細胞を保持する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、プラーク断裂、プラーク浸食、心臓の虚血、心臓に対する再かん流傷害、アテローム性動脈硬化またはその組み合わせから選択される。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、急性冠症候群である。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）、非ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）、不安定狭心症またはその組み合わせから選択される。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は虚血発作である。
幾つかの実施形態では、前記個体は心血管障害と診断されている。
幾つかの実施形態では、前記個体は心血管障害である疑いがある。
幾つかの実施形態では、前記個体は、胸部の痛み又は不快感；胸部の痛みを伴う腕、首、顎、肩又は背中の痛み；吐き気；疲労；息切れ；発汗；めまい；特に身体の片側の顔、腕又は足のしびれ又は脱力；錯乱、会話又は理解の困難；歩行困難、片目又は両目で見ることに対する困難、めまい、バランス又は協調の欠如；原因不明の激しい頭痛；又はその組み合わせから選択される症状を示す。
幾つかの実施形態では、前記個体は心血管障害の症状を示さない。
【０００７】
本明細書中には、特定の実施形態において、心血管障害のための治療計画に対する個体の反応を予測する方法が開示されており、該方法は、（ａ）前記個体から得られた、循環内皮細胞（ＣＥＣ）及び循環非内皮細胞から選択された細胞を含む血液サンプルから単離された循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の拡大された画像を得る工程、（ｂ）前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較する工程、及び（ｃ）循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の、（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準の前記形態的特徴からの逸脱、又は（ｂ）現在又は過去に心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準の前記形態的特徴との類似、に基づいて、治療計画に対する前記個体の反応を予測する工程、を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は前記循環内皮細胞の一群の２つの形態的特徴を比較する工程を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は前記循環内皮細胞の一群の３つの形態的特徴を比較する工程を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は前記循環内皮細胞の一群の４つの形態的特徴を比較する工程を含む。
幾つかの実施形態では、前記形態的特徴は細胞領域、核領域、核領域に対する細胞領域の比、細胞形状、核形状、核数、循環内皮細胞数又はその組み合わせである。
幾つかの実施形態では、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールは、前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較する。
幾つかの実施形態では、前記方法は、前記診断に基づいて治療計画を処方する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、前記診断に基づいて前記個体に処方された又は投与された治療計画を変更する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、逸脱は、細胞領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、細胞領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、細胞領域の平均が約１００μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域の平均が約４０μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域に対する細胞領域の比の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域に対する細胞領域の比の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核数の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核数の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも２つである、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも３つである、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの細胞形状と比較して、異常な該細胞形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの核形状と比較して、異常な該核形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記方法は（ａ）前記血液サンプルから単離した前記循環内皮細胞の一群の前記濃度及び（ｂ）対照又は標準の前記濃度を比較する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離するために機械を使用する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、循環内皮細胞に特異的に結合するラベル、循環内皮細胞に結合しないラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、ＣＤ１４６に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０５に特異的に結合するラベル、ＣＤ４５に特異的に結合するラベル、ＣＤ３４に特異的に結合するラベル、ＣＤ３１に特異的に結合するラベル、ＶＥＧＦ２に特異的に結合するラベル、ＣＤ１４４に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０６に特異的に結合するラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、抗−ＣＤ１４６抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記抗体は標識化される。
幾つかの実施形態では、前記抗体は蛍光部分又は磁気部分により標識化される。
幾つかの実施形態では、前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離する工程は、（ａ）磁気又は蛍光で標識化された抗−ＣＤ１４６抗体と前記血液サンプルを接触させる工程、及び（ｂ）前記抗−ＣＤ１４６抗体が特異的に結合した前記細胞を単離し、ＣＤ１４６＋細胞の一群を作成する工程、を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、蛍光で標識化された、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体、ＤＡＰＩ又はその組み合わせに前記ＣＤ１４６＋細胞の一群を接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、単離された循環内皮細胞の一群を作成するために、抗−ＣＤ４５抗体が特異的に結合したＣＤ１４６＋細胞を廃棄し、抗−ＣＤ４５抗体が結合しなかったＣＤ１４６＋細胞を保持する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、プラーク断裂、プラーク浸食、心臓の虚血、心臓に対する再かん流傷害、アテローム性動脈硬化またはその組み合わせから選択される。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、急性冠症候群である。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）、非ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）、不安定狭心症またはその組み合わせから選択される。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は虚血発作である。
幾つかの実施形態では、前記個体は心血管障害と診断されている。
幾つかの実施形態では、前記個体は心血管障害である疑いがある。
幾つかの実施形態では、前記個体は、胸部の痛み又は不快感；胸部の痛みを伴う腕、首、顎、肩又は背中の痛み；吐き気；疲労；息切れ；発汗；めまい；特に身体の片側の顔、腕又は足のしびれ又は脱力；錯乱、会話又は理解の困難；歩行困難、片目又は両目で見ることに対する困難、めまい、バランス又は協調の欠如；原因不明の激しい頭痛；又はその組み合わせから選択される症状を示す。
幾つかの実施形態では、前記個体は心血管障害の症状を示さない。
【０００８】
本明細書中には、特定の実施形態において、治療を必要としている個体に心血管障害のための治療計画を処方する方法が開示されており、該方法は、（ａ）前記個体から得られた、循環内皮細胞（ＣＥＣ）及び循環非内皮細胞から選択された細胞を含む血液サンプルから単離された循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の拡大された画像を得る工程、（ｂ）前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較する工程、及び（ｃ）循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴の、（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準の前記形態的特徴からの逸脱、又は（ｂ）現在又は過去に心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準の前記形態的特徴との類似、に基づいて、治療計画を処方する工程、を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は前記循環内皮細胞の一群の２つの形態的特徴を比較する工程を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は前記循環内皮細胞の一群の３つの形態的特徴を比較する工程を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は前記循環内皮細胞の一群の４つの形態的特徴を比較する工程を含む。
幾つかの実施形態では、前記形態的特徴は細胞領域、核領域、核領域に対する細胞領域の比、細胞形状、核形状、核数、循環内皮細胞数又はその組み合わせである。
幾つかの実施形態では、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールは、前記拡大された画像において、前記循環内皮細胞の一群の前記形態的特徴と、対照又は標準の同様の形態的特徴を比較する。
幾つかの実施形態では、前記方法は、前記診断に基づいて治療計画を処方する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、前記診断に基づいて前記個体に処方された又は投与された治療計画を変更する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、逸脱は、細胞領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、細胞領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該細胞領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、細胞領域の平均が約１００μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域の平均よりも少なくとも約３０％大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域の平均が約４０μm2よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核領域に対する細胞領域の比の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核領域に対する細胞領域の比の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核数の平均が、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの該核数の平均よりも大きい、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも２つである、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、核数の平均が一つのＣＥＣにつき少なくとも３つである、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの細胞形状と比較して、異常な該細胞形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記逸脱は、健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準からのＣＥＣの核形状と比較して、異常な該核形状を持つ、前記循環内皮細胞の一群である。
幾つかの実施形態では、前記方法は（ａ）前記血液サンプルから単離した前記循環内皮細胞の一群の前記濃度及び（ｂ）対照又は標準の前記濃度を比較する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離するために機械を使用する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、循環内皮細胞に特異的に結合するラベル、循環内皮細胞に結合しないラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、ＣＤ１４６に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０５に特異的に結合するラベル、ＣＤ４５に特異的に結合するラベル、ＣＤ３４に特異的に結合するラベル、ＣＤ３１に特異的に結合するラベル、ＶＥＧＦ２に特異的に結合するラベル、ＣＤ１４４に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０６に特異的に結合するラベル又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、抗−ＣＤ１４６抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体又はその組み合わせを前記血液サンプルと接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記抗体は標識化される。
幾つかの実施形態では、前記抗体は蛍光部分又は磁気部分により標識化される。
幾つかの実施形態では、前記血液サンプルから前記循環内皮細胞の一群を単離する工程は、（ａ）磁気又は蛍光で標識化された抗−ＣＤ１４６抗体と前記血液サンプルを接触させる工程、及び（ｂ）前記抗−ＣＤ１４６抗体が特異的に結合した前記細胞を単離し、ＣＤ１４６＋細胞の一群を作成する工程、を含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、蛍光で標識化された、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体、ＤＡＰＩ又はその組み合わせに前記ＣＤ１４６＋細胞の一群を接触させる工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記方法は、単離された循環内皮細胞の一群を作成するために、抗−ＣＤ４５抗体が特異的に結合したＣＤ１４６＋細胞を廃棄し、抗−ＣＤ４５抗体が結合しなかったＣＤ１４６＋細胞を保持する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、プラーク断裂、プラーク浸食、心臓の虚血、心臓に対する再かん流傷害、アテローム性動脈硬化またはその組み合わせから選択される。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、急性冠症候群である。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）、非ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）、不安定狭心症またはその組み合わせから選択される。
幾つかの実施形態では、前記心血管障害は虚血発作である。
幾つかの実施形態では、前記個体は心血管障害と診断されている。
幾つかの実施形態では、前記個体は心血管障害である疑いがある。
幾つかの実施形態では、前記個体は、胸部の痛み又は不快感；胸部の痛みを伴う腕、首、顎、肩又は背中の痛み；吐き気；疲労；息切れ；発汗；めまい；特に身体の片側の顔、腕又は足のしびれ又は脱力；錯乱、会話又は理解の困難；歩行困難、片目又は両目で見ることに対する困難、めまい、バランス又は協調の欠如；原因不明の激しい頭痛；又はその組み合わせから選択される症状を示す。
幾つかの実施形態では、前記個体は心血管障害の症状を示さない。
【０００９】
本明細書中には、特定の実施形態において、循環内皮細胞（ＣＥＣ）を単離する工程が開示されており、該循環内皮細胞（ＣＥＣ）は、（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準から逸脱している、又は（ｂ）現在又は過去に対象の心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準と類似している、少なくとも1つの形態的特徴を含む。
幾つかの実施形態では、前記ＣＥＣは、（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準から逸脱している、又は（ｂ）現在又は過去に対象の心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準と類似している、２つの形態的特徴を含む。
幾つかの実施形態では、前記ＣＥＣは、（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準から逸脱している、又は（ｂ）現在又は過去に対象の心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準と類似している、３つの形態的特徴を含む。
幾つかの実施形態では、前記ＣＥＣは、（ａ）健康な個体又は健康な個体の一群から得られた対照又は標準から逸脱している、又は（ｂ）現在又は過去に対象の心血管障害を持っていた個体又はその個体の一群から得られた対照又は標準と類似している、４つの形態的特徴を含む。
幾つかの実施形態では、逸脱は、定性的偏差、定量的偏差又はその組み合わせを含む。
幾つかの実施形態では、前記形態的特徴は細胞領域、核領域、核領域に対する細胞領域の比、細胞形状、核形状、核数から選択される。
幾つかの実施形態では、単離された循環内皮細胞は２つの核を含む。
幾つかの実施形態では、前記単離された循環内皮細胞は３つの核を含む。
幾つかの実施形態では、前記単離された循環内皮細胞の前記核領域は、対照又は標準の前記核領域よりも少なくとも約３０％大きい。
幾つかの実施形態では、前記単離された循環内皮細胞の前記細胞領域は、対照又は標準の前記細胞領域よりも少なくとも約３０％大きい。
幾つかの実施形態では、前記単離された循環内皮細胞は、心血管障害であると診断された個体から単離したものである。
幾つかの実施形態では、前記単離された循環内皮細胞は、心血管障害である疑いがある個体から単離したものである。
幾つかの実施形態では、前記単離された循環内皮細胞は、心血管障害の症状を示さない個体から単離したものである。
幾つかの実施形態では、前記循環内皮細胞は、機械の使用により単離されたものである。
幾つかの実施形態では、前記循環内皮細胞は、（ａ）磁気又は蛍光で標識化された抗−ＣＤ１４６抗体と前記血液サンプルを接触させる工程、及び（ｂ）前記抗−ＣＤ１４６抗体が特異的に結合した前記細胞を単離し、ＣＤ１４６＋細胞の一群を作成する工程、により単離される。
幾つかの実施形態では、前記循環内皮細胞は、ＣＤ１４６＋細胞の一群を作成するため、（ａ）磁気又は蛍光で標識化された抗−ＣＤ１４６抗体と前記血液サンプルを接触させる工程、（ｂ）前記抗−ＣＤ１４６抗体が特異的に結合した前記細胞を単離する工程、及び（ｃ）蛍光で標識化された、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体、ＤＡＰＩ又はその組み合わせに前記ＣＤ１４６＋細胞の一群を接触させる工程、により単離される。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、ＳＴＥＭＩとＮＳＴＥＭＩの患者の例示的なＣＥＣのサイズ分析を提供する。（Ａ）各患者群（平均±ＳＤ）からの細胞に対する細胞領域（μｍ２）。Ｐ値：０．８８４２。（Ｂ）各患者群（平均±ＳＤ）からの細胞に対する核領域（μｍ２）。Ｐ値：０．７１１４。（Ｃ）各患者群（平均±ＳＤ）からの細胞に対する細胞領域と核領域との間の比率。Ｐ値：０．６１３１。（Ａ）−（Ｃ）に対する各バーの数字は、各群から分析された患者の数を表し；各対照個体からのすべてのＣＥＣおよび各ＭＩ患者から無作為に選択された５０−１００のＣＥＣが分析された。
【図２】図２は、健康な対照とＳＴＥＭＩの患者におけるＣＥＣの例示の計数を提供する。（Ａ）４４の連続する健康な対照と５０のＳＴＥＭＩの患者におけるＣＥＣの定量化。健康な対照におけるＣＥＣの中央値（ｍｅｄｉａｎ ｎｕｍｂｅｒ）は、２ＣＥＣ／ｍｌと５ＣＥＣ／ｍｌの、それぞれ、高四分位と低四分位を有する４ＣＥＣ／ｍｌであった。ＳＴＥＭＩの患者におけるＣＥＣの中央値は、１２ＣＥＣ／ｍｌと５１ＣＥＣ／ｍｌ（ｐ＝１．１ｘ１０−１０）の、それぞれ、高四分位と低四分位を有する１９であった。（Ｂ）受信者操作特性曲線（ＡＵＣ）の下の面積は、０．９５に等しかった。赤い点は、１６．５ＣＥＣ／ｍｌの分類閾値を表わし、これは、６０％の感受性および９８％の特異性に関係し；青は、９ＣＥＣ／ｍｌの分類閾値に等しく、９０％の感受性および９３％の特異性に関係し；および緑は、４．３ＣＥＣ／ｍｌの閾値に等しく、ＭＩの事例あるいは対照を正確に分類するために、９８％の感受性および６４％の特異性を有する。
【図３】図３は、心筋壊死のＣＥＣカウントと典型的なマーカーとの間の例示的な相関性を提供する。（Ａ）スピアマンの順位相関（ｒｈｏ）係数を使用して、ＭＩ患者におけるＣＥＣカウントは、最初の主要な血清心筋トロポニン値に対する相関性のために評価された。相関性の証拠は見られなかった（ｒｈｏ＝０．０２、ｐ＝０．９）。（Ｂ）ＣＥＣカウントと最初のＣＫ−ＭＢ値との間の相関性は示されなかった（ｒｈｏ＝０．０３、ｐ＝０．９）。
【図４】図４は、経時的なＣＥＣカウントの安定性の例を提供する。２か月の時間枠によって分けられた訪問での連続する２５の対照個体においてＣＥＣ測定を２回繰り返す。同じ個体で行われた測定は、灰色の線でつながれている。最初の訪問で測定されたＣＥＣカウントは、１ＣＥＣ／ｍｌから１６．７５ＣＥＣ／ｍｌまでの範囲であり、３．３８ＣＥＣ／ｍｌの中央値（ｍｅｄｉａｎ ｖａｌｕｅ）であった。第２の訪問では、同じ２４の個体で測定されたＣＥＣカウントは、１ＣＥＣ／ｍｌから１９．５ＣＥＣ／ｍｌまでの範囲であり、３．２５ＣＥＣ／ｍｌに等しい中央値であった。対のウィルコクソンの符号付き順位検定を使用して、２つの時間点でのＣＥＣカウント間の相違の証拠は見られなかった。
【図５】図５は、ＣｅｌｌＴｒａｃｋｓ Ａｎａｌｙｚｅｒ ＩＩ（登録商標）による例示的な画像分析およびＣＥＣの識別を提供する。（Ａ）ＣＴＡ ＩＩによるサンプルおよび画像の分析のために必要な工程。ＡｕｔｏＰｒｅｐで処理されたサンプルを包含しているＭａｇｎｅｓｔは、ＣＴＡ ＩＩに入れられる。ＣＴＡ ＩＩは、サンプルチャンバーの作用面全体のための４色の各々において画像を記録する。その後、ソフトウェアモジュールは、４μｍよりも大きく、ＤＡＰＩおよびＣＤ１０５−ＰＥの両方にとって陽性であるように見えるこれらの画像内の対象を選択する。これらの選択された候補ＣＥＣの画像は、訓練された検査員が、ＣＥＣとして識別し採点するための、あるいはＢで示されるように非ＣＥＣの細胞または関連した物質を捨てるための、一連のサムネイルのブラウザ画像として示される。（Ｂ）ＣＴＡ ＩＩによって潜在的な候補ＣＥＣとして検知され示された、対象のブラウザ画像。本例では、３つの対象が検査員に示される。サムネイル画像は、右から左に、未使用の（ＦＩＴＣ）チャネル、ＣＤ４５−ＡＰＣシグナル、ＤＡＰＩ染色された核、ＣＤ１０５−ＰＥ反応性、および最終的にＣＤ１０５−ＰＥ及びＤＡＰＩの染色の上塗りを示す。ＣＥＣとして採点されるために、細胞は、核を有し、ＣＤ１０５を発現し、細胞の形態を有し、またＣＤ４５に対して陰性でなければならない。最初の２つの対象は、これらの基準を満たし、ＣＥＣとして採点された（チェックされたボックス）。第３の対象は、ＣＤ４５陽性であったため、白血球と判断された（ボックスはチェックされず）。ソフトウェアモジュールは、チェックされたボックスを各サンプル内で自動的に作表し、結果は、４ｍＬの血液当たりのＣＥＣの数として表わされる。
【図６】図６は、（Ａ）の年齢が一致した対照、および（Ｂ）代表的なＳＴＥＭＩの患者（ＣＥＣ０３０４０）から単離した個々のＣＥＣの例示的な蛍光顕微鏡画像を提供する。ＣＥＣは、ＣＤ１０５（緑）およびＤＡＰＩ（紫）で、それぞれ、それらの細胞分画および核分画のためのマーカーとして標識される。ＣＥＣは、ＣＤ１０５およびＤＡＰＩの染色の共存に基づいて、これらの画像において識別され、結果的に緑の細胞体は紫の核に重なる。緑のＣＤ１０５染色と共存していない紫の核は、視野に共に存在する汚染している白血球である（ＣＤ４５のための陽性染色に基づいて（図示せず））。ＳＴＥＭＩ患者からのＣＥＣは、大きさと形状において不均質であり、それらの多くは、対照からのＣＥＣよりもはるかに大きく、複数の核を有する。画像倍率は、すべての画像に関して一定である。３つの年齢が一致した対照個体からのすべてのＣＥＣ画像が示され、６９のＣＥＣ画像が、この研究のＭＩ患者に対するＣＥＣ／ｍｌの中央範囲において、５８ＣＥＣ／ｍｌの血液を有するＳＴＥＭＩ患者のＣＥＣ０３０４０からの提示のために無作為に選択された。バー、２０μｍ。アステリスク、１つのＣＤ１０５染色された細胞体に関係する複数の核。
【図７】図７は、対照（年齢が一致し、健康であった）、血管（ｖａｓｃｕｌａｒ）、およびＭＩ（ＳＴＥＭＩとＮＳＴＥＭＩ）の患者のための例示的なＣＥＣのサイズ分析を提供する。（Ａ）各群（平均±ＳＤ）からの細胞に対する細胞領域（μｍ２）。Ｐ値：０．０１３３；（健康対年齢一致）；＜０．０００１（年齢一致対ＭＩ）；０．００３（血管対ＭＩ）。（Ｂ）各群（平均±ＳＤ）からの細胞に対する核領域（μｍ２）。Ｐ値：０．００６９（健康対年齢一致）；＜０．０００１（年齢一致対ＭＩ）；０．００５９（血管対ＭＩ）。（Ｃ）各群（平均±ＳＤ）からの細胞に対する細胞領域と核領域との間の比率。Ｐ値：０．４８４８；（健康対年齢一致）；＜０．０００１（年齢一致対ＭＩ）；０．００２１（血管対ＭＩ）。（Ａ）−（Ｃ）に対する各バーの数字は、各群から分析された患者の数を表わし；各対照個体からのすべてのＣＥＣおよび各ＭＩ患者から無作為に選択された５０−１００のＣＥＣが分析された。画像倍率は、すべての画像に関して一定である。バー、５μｍ。（Ｄ）典型的なＣＥＣ（すなわち、平均的な領域の大きさ）を例証する、対照（年齢が一致し、健康であった）およびＭＩ（ＳＴＥＩＭとＮＳＴＥＭＩ）の患者からのＣＥＣの代表的な画像、およびこれらの群からのＣＥＣの領域の大きさの変異の範囲。ＣＥＣは、細胞分画および核分画のためのマーカーとして、それぞれ、ＣＤ１０５（緑）およびＤＡＰＩ（紫）の染色と同定された。
【図８】図８は、対照、無作為の年齢が一致した群サンプル、血管、およびＭＩ（ＳＴＥＭＩとＮＳＴＥＭＩ）の患者からの複数の核を有するＣＥＣの数の例示的な分析を提供する。（Ａ）細胞分画および核分画を識別するための、それぞれ、ＣＤ１０５（緑）およびＤＡＰＩ（紫、白いアステリスク）によって染色されたＳＴＥＭＩ患者の群からの複数の核を有するＣＥＣの画像。ＣＤ１０５染色された細胞体当たりの核の数は、各画像の右上に明示される。画像倍率は、すべての画像に関して一定である。バー、１５μｍ。（Ｂ）各群（平均±ＳＤ）における複数の核（２つ以上の核／画像）を有するＣＥＣ画像のパーセント。各バーの数字は、分析された個体の数を表わす。（Ｃ）異なる群（平均±ＳＤ）に対する核／画像の数の分布。バーは、健康（白）および年齢が一致した（灰色）対照、血管（赤）、およびＭＩ（黒）の患者を示す。Ｐ値：０．２２９５；（健康対年齢一致）；０．０００８（年齢一致対ＭＩ）；０．０２３１（血管対ＭＩ）。
【図９】図９は、Ｃｅｌｌｔｒａｃｋｓ ａｎａｌｙｚｅｒ ＩＩによって取り込まれたＣＥＣの細胞体および核の検出および定量化のための自動化した画像処理の例を提供する。患者と対照からのＣｅｌｌｔｒａｃｋｓ ａｎａｌｙｚｅｒ ＩＩによって単離したＣＥＣは、ＤＮＡ量（ＤＡＰＩ）およびＣＤ１０５発現（ＣＤ−１０５−ＰＥ）のために固定され、染色された。概略図は、多くの核／画像の数および細胞領域および核領域の決定に使用される自動化した画像化プロセスに関係する工程を示す。取得後、ネイティブシグナルは、カスタムソフトウェアモジュールで処理され、細分化した画像を作成する（方法（Ｍｅｔｈｏｄ）を参照）。ＣＥＣに関係しない核は、ＤＡＰＩとＣＤ１０５のチャネルの２値マスクの比較によって除去された。細分化した画像チャネルのための領域は、フィルター処理した核および細胞の２値マスクから計算された。細分化したＤＡＰＩチャネル（ＣＥＣに関係する）における検出された対象の数が決定され、それは、あらゆる画像に対して核および細胞の領域を平均化するために使用された。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
重大な心血管系疾患（心筋梗塞（ＭＩ）および虚血性脳血管障害など）は、しばしば致命的である。あるいは、生存者がいたとしても、これらの疾患は、永続する、および生活の質を低下させる効果を有する（例えば部分的または完全な麻痺、失語、記憶喪失）。多くの重大な心血管系疾患は、動脈のプラーク断裂によって誘発される。多くの場合、切迫断裂の徴候がないか、あるいは、徴候は決定的でない。例えば、動脈損傷ではないが心筋壊死の特徴のある心筋トロポニンは、特異性を欠いており、心房細動、肺炎、敗血症、肺塞栓症および慢性腎疾患を含む、ＭＩと無関係な多くの疾病の上昇した徴候（ｓｉｇｎａｌ）を示し得る。さらに、特定のタイプの心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）では、心電図（ＥＣＧ）に対する変化はない。
【００１２】
重症の心血管系疾患に関係する深刻な危険およびそれらの予測不能な性質を考えると、動脈のプラーク断裂の危険がある個体をそれが臨床的に明らかになる前に識別する方法が必要とされている。さらに、これらの方法は、非侵襲性であり、容易に実行され（例えば、臨床現場において）、および解釈することが容易であるべきである。
【００１３】
本明細書には、特定の実施形態において、ＣＥＣを分析する工程を含む、臨床的に明らかになる前に動脈のプラーク断裂を予測する方法が開示される。
【００１４】
本明細書には、特定の実施形態において、治療を必要とする個体において、心血管障害を分析する方法が開示され、該方法は、（ａ）循環内皮細胞および循環非内皮細胞から選択される細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離した循環内皮細胞の一群の形態的特徴と；（ｂ）対照または標準の形態的特徴を比較する工程を含む。
【００１５】
さらに本明細書には、特定の実施形態において、治療を必要とする個体において、心血管障害を診断する方法が開示され、該方法は、（ａ）（ｉ）循環内皮細胞および循環非内皮細胞から選択される細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離した循環内皮細胞の一群の形態的特徴と；（ｉｉ）対照または標準の形態的特徴を比較する工程；および（ｂ）循環内皮細胞の一群の形態的特徴が、少なくとも所定量によって対照または標準から逸脱する場合に、個体を心血管障害と診断する工程を含む。
【００１６】
さらに、本明細書には、特定の実施形態において、個体が心血管障害を進行させやすいことを予測する方法が開示され、該方法は、（ａ）（ｉ）循環内皮細胞および循環非内皮細胞から選択される細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離した循環内皮細胞の一群の形態的特徴と；（ｉｉ）対照または標準の形態的特徴を比較する工程；および（ｂ）循環内皮細胞の一群の形態的特徴が、少なくとも所定量によって対照または標準から逸脱する場合に、個体が心血管障害を進行させやすいことを予測する工程を含む。
【００１７】
本明細書には、特定の実施形態において、心血管障害に関する治療計画に対する個体の反応を予測する方法が開示され、該方法は、（ａ）（ｉ）循環内皮細胞および循環非内皮細胞から選択される細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離した循環内皮細胞の一群の形態的特徴と；（ｉｉ）対照または標準の形態的特徴を比較する工程；および（ｂ）循環内皮細胞の一群の形態的特徴が、少なくとも所定量によって対照または標準から逸脱する場合に、個体が心血管障害に関する治療計画に対して反応することを予測する工程を含む。
【００１８】
本明細書には、特定の実施形態において、心血管障害を分析する方法が開示され、該方法は、（ａ）循環内皮細胞および循環非内皮細胞から選択される細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離したＣＥＣの形態的特徴を識別する工程；（ｂ）心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴が、心血管障害に関連する形態的特徴であることを決定する工程；および（ｃ）識別に基づいて心血管障害に関する診断的または予後の情報を提供する工程を含み；ここで、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣに関連する大きな細胞領域、対照または標準からのＣＥＣに関連する大きな核領域、対照または標準からのＣＥＣに関連する核領域に対する細胞領域の大きな比率、細胞形状、核形状、および１つを超える核の存在から選択される。
【００１９】
さらに本明細書には、特定の実施形態において、対照または標準の形態的特徴から逸脱する１つの形態的特徴を含む、単離した循環内皮細胞が開示される。また、本明細書には、単離したＣＥＣを含む組成物が開示される。
【００２０】
さらに本明細書には、特定の実施形態において、対照または標準の形態的特徴から逸脱する１つの形態的特徴を含む、単離した循環内皮細胞、および（ｉ）前述の形態的特徴の分析を可能にする分析ツール、あるいは（ｉｉ）医療従事者が前述の形態的特徴を分析することを可能にする分析ツールからのアウトプットを含む、システムが開示される。
【００２１】
＜特定の専門用語＞
用語「個体」、又は「被験体」は、交換可能に使用される。本明細書で使用されるように、それらは、任意の哺乳動物（すなわち系統学的分類の動物界：脊索動物門：脊椎動物亜門：哺乳類内の任意の目、科および属の種）を意味する。幾つかの実施形態において、哺乳動物は、ヒトである。幾つかの実施形態において、哺乳動物は、非ヒトである。用語はどれも、医療の専門家（例えば医者、正看護婦、実地看護婦、医師助手、看護助手、またはホスピス職員）の監督（例えば、持続的または断続的な）によって特徴付けられた状況を必要としない、またはその状況に限定されない。
【００２２】
用語「健康な個体」は、心血管障害のない個体を意味する。これは、個体が、あらゆる疾患、障害、または疾病を患っていない必要はない。
【００２３】
用語「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、および文法上の同義語は、本明細書に使用されるように、疾患又は疾病の症状を緩和、阻止するまたは低下させる、疾患又は疾病の症状の、重症度を低下または阻害する、発病を減少させる、予防的に処置する、再発を阻止する、予防する、発症を遅らせる、再発を遅らせる、疾患又は疾病の症状を軽減または改善する、症状の根底にある代謝の原因を改善する、疾患又は疾病を阻害する、例えば、疾患又は疾病の進行を阻止する、疾患又は疾病を和らげる、疾患又は疾病を退行させる、疾患又は疾病により生じる疾病を和らげる、あるいは疾患又は疾病の症状を止めることを含む。用語はさらに、治療効果を達成することを含む。治療効果は、処置されている根本的な障害の根絶又は寛解、及び／又は個体において改善が観察されるような、基礎疾患（ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）に関連する１つ以上の生理学的な症状の根絶又は寛解を意味する。
【００２４】
用語「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、「予防すること（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」または「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」、および本明細書に使用されるような他の文法上の同義語は、さらなる症状を予防する、症状の根底にある代謝の原因を予防する、疾患または疾病を阻害する、例えば、疾患または疾病の進行を阻止することを含み、予防法を含むように意図される。用語はさらに、予防効果を達成することを含む。予防効果に関して、組成物は、特定の疾患を進行させる危険性のある個体、疾患の１つ以上の生理学的な症状を報告する個体、あるいは疾患の再発の危険性のある個体に随意に投与される。
【００２５】
用語「投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）」、「投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」、「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」、などは、本明細書に使用されるように、生物作の所望部位に対する薬剤または組成物の送達を可能にするために使用され得る方法を指す。これらの方法、限定されないが、経口経路、十二指腸内の経路、非経口的注射（静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、血管内、あるいは注入を含む）、局所的および直腸内の投与を含む。本明細書に記載される薬剤および方法と随意に使用される投与技術は、例えば、議論されるように、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ， Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄ．； Ｐｅｒｇａｍｏｎ； ａｎｄ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ （ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ）， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａに含まれる。特定の実施形態では、本明細書に記載される薬剤および組成物は経口で投与される。
【００２６】
本明細書で使用されるように、用語「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」および「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二特異性抗体、多重特異性抗体、移植抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、合成抗体、キメラ抗体、ラクダ抗体（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、単鎖のＦｖｓ（ｓｃＦｖ）、単鎖の抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、ジスルフィド結合したＦｖｓ（ｓｄＦｖ）、細胞内抗体、および上述のいずれかの抗イディオタイプの（抗Ｉｄ）抗体および抗原結合フラグメントを指す。特に、抗体は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性なフラグメント、すなわち、抗原結合部位を包含する分子を含む。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスの分子である。用語「抗体」および免疫グロブリンは、最も広範囲の意味で交換可能に使用される。幾つかの実施形態において、抗体は、１つ以上の他のタンパク質またはペプチドとの抗体の共有結合または非共有結合との関連によって形成された、より大きな融合分子の一部である。
【００２７】
抗体または他の結合分子とタンパク質またはポリペプチドまたはエピトープとの間の相互作用を言及するときの句「特異的に結合する」は、典型的に、対象の標的に高親和性を有して認識する且つ検知可能に結合する抗体または他の結合分子を指す。好ましくは、指定された又は生理学的な条件下において、特定された抗体または結合分子は、特有のポリペプチド、タンパク質またはエピトープに結合するが、かなりの又は望ましくない量では、サンプルに存在する他の分子に結合しない。言いかえれば、特定された抗体または結合分子は、生標的の抗原及び／又はエピトープとは不必要に交差反応しない。さらに、幾つかの実施形態では、特異的に結合する抗体は、抗体の可変ドメインまたは定常ドメインを介して結合する。その可変ドメインを介して特異的に結合する抗体は、凝集されない、すなわち、モノマーである。様々な免疫学的アッセイのフォーマットが、特有のポリペプチドと免疫反応性であり、所望の特異性を有する抗体または他の結合分子を選択するために使用される。例えば、固相のＥＬＩＳＡ免疫学的アッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ、フローサイトメトリーおよびラジオイムノアッセイが、所望の免疫反応性および特異性を有するモノクローナル抗体を選択するために使用される。免疫反応性と特異性を測定する又は評価するために使用される免疫学的アッセイのフォーマットおよび条件の記載に関しては、Ｈａｒｌｏｗ， １９８８， ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ， Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （以下 "Ｈａｒｌｏｗ"）を参照。「選択的結合」、「選択性」などは、別の分子と比較して１つの分子と相互に作用する抗体の優先度（ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）を指す。好ましくは、抗体、特にモジュレーターとタンパク質との間の相互作用は、特異的且つ選択的の両方である。いくつかの実施形態では、小さな抗体が、他の望ましくない標的に結合することなく、２つの別々の、しかし類似した標的に「特異的に結合する」および「選択的に結合する」ように設計されることを留意されたい。
【００２８】
用語「心血管障害」は、心臓血管系の疾患、障害、または望まれない疾病を意味する。幾つかの実施形態では、心血管障害は、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、虚血性脳血管障害、プラーク断裂、プラーク浸食、心臓の虚血、心臓に対する再潅流傷害、血栓症、狭心症（例えば、安定したまたは不安定な狭心症）、ＳＴ部分上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）、非ＳＴ部分上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）、またはその組み合わせである。
【００２９】
用語「形態的特徴」は、細胞の形態及び／又は構造と関係する細胞の特徴を意味する。細胞の形態的特徴は、限定されないが、細胞形状、核形状、細胞領域、核領域、核領域に対する細胞領域の比率、および核の数を含む。
【００３０】
用語「循環内皮細胞」は、血管の壁から引き離され、血液中で循環内皮細胞を意味する。心腔の内表面に並ぶ（ｌｉｎｉｎｇ）内皮細胞は、心内膜細胞と呼ばれる。
【００３１】
用語「対照」または「標準」は、交換可能に使用される。心血管障害を有する個体から単離したＣＥＣに対する比較の平均のＣＥＣ標準が比較される。幾つかの実施形態では、対照は、ＣＥＣあるいは健康な個体から得られる複数のＣＥＣである。幾つかの実施形態では、対照は、ＣＥＣあるいは対象の心血管障害を有する又は有した個体から得られる複数のＣＥＣである。幾つかの実施形態において、対照は、ＣＥＣあるいは複数のＣＥＣである。幾つかの実施形態では、対照は、ＣＥＣあるいは複数のＣＥＣに関係する測定（例えば、細胞領域、細胞形状、核領域、核形状、核の数、または核領域に対する細胞領域の比率などの、ＣＥＣの形態的特徴；あるいは血液中のＣＥＣの濃度）である。幾つかの実施形態では、対照または標準は、複数の個体から得られた測定から派生した平均ＣＥＣ測定である。
【００３２】
用語「診断情報」は、疾患、障害、または疾病の同定を可能にする疾患、障害または疾病の特徴に関連する情報を意味する。幾つかの実施形態では、診断情報は、ＣＥＣまたは複数のＣＥＣの形態的特徴、または血液中のＣＥＣの濃度である。
【００３３】
用語「予後情報」は、今後の事象を予測することを可能にする情報を意味する。予後情報は、疾患、障害、または疾病の起こり得る結果を予測し得る。あるいは、予後情報は、疾患、障害、または疾病が処置にどのように反応するかを予測し得る。幾つかの実施形態では、予後情報は、ＣＥＣまたは複数のＣＥＣの形態的特徴、または血液中のＣＥＣの濃度である。
【００３４】
＜心血管障害とプラーク断裂＞
本明細書には、特定の実施形態で、治療を必要とする個体においてプラーク断裂を診断するまたは予測する方法が開示される。本明細書にはさらに、特定の実施形態で、治療を必要とする個体において心血管障害を分析する、診断する、または予測する方法が開示される。さらに、本明細書には、特定の実施形態で、心血管障害の治療計画に対する個体の反応を予測する方法が開示される。
【００３５】
個体には、心血管障害と診断される個体もいる。幾つかの実施形態において、個体は、心血管障害を有する疑いがある。幾つかの実施形態では、個体は、心血管障害の症状がない。
【００３６】
幾つかの実施形態において、個体は、以下から選択される症状を示す：胸痛または不快感；胸痛に付随する腕、首、顎、肩または背中の痛み；吐き気；疲労；息切れ；発汗；めまい；特に本体の片側上の、顔、腕または脚のしびれまたは衰弱；錯乱、発話困難、あるいは理解困難；片目または両目で見ることの困難；歩行困難、めまい、バランスまたは整合の喪失；未知の原因を有する重度の頭痛、またはそれらの任意の組み合わせ。
【００３７】
幾つかの実施形態では、心血管障害は、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、虚血性脳血管障害、プラーク断裂、プラーク浸食、心臓の虚血、心臓に対する再潅流傷害、血栓症、狭心症（例えば、安定したまたは不安定な狭心症）、ＳＴ部分上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）、非ＳＴ部分上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）、またはその組み合わせである。
【００３８】
本明細書で使用されるように、用語「アテローム性動脈硬化（ｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）」は、脂質の沈着および結果として生じる炎症および白血球反応が原因である動脈壁の硬化および厚化を指す。アテローム動脈硬化性プラークを未処置にしておくと、最終的に動脈の部分的または完全な閉塞につながりかねない。
【００３９】
用語、心筋梗塞および心臓発作は交換可能に使用される。本明細書で使用されるように、両方の用語は、心臓に対する血液供給の妨害を指す。心臓に対する血液供給の妨害は、しばしば、断裂したアテローム動脈硬化性プラークによる冠状動脈の閉塞に起因する。さらに、心筋梗塞は、しばしば、電気インパルスの伝導の遅れを結果的にもたらしかねない心筋組織の瘢痕化につながる。瘢痕化した組織と瘢痕化していない組織との間の伝導速度の差は、しばしば、心室細動または心室頻脈につながる。
【００４０】
本明細書で使用されるように、用語「虚血性脳血管障害」は、（部分的にまたは完全に）脳への血液供給（例えば虚血）の障害から結果として生じる脳機能の損失（例えば、脳組織の壊死）を指す。特定の例では、脳卒中は、（部分的にまたは完全に）プラーク断裂、血栓症または塞栓症から結果として生じる。
【００４１】
本明細書で使用されるように、用語「血栓症」は、凝血の形成を指す。凝血が静脈に生じるとき、これは静脈血栓症と呼ばれる。凝血が動脈に生じるとき、これは動脈血栓症と呼ばれる。凝血（あるいはその一部）が肺に運ばれると（すなわち、塞栓症）、肺塞栓症が進行しかねない。
【００４２】
本明細書で使用されるように、用語「狭心症」は、（例えば、アテローム動脈硬化性プラークの膨張後の血管または動脈の閉塞が原因の）心臓の虚血から結果として生じる重度の胸痛を指す。安定狭心症の胸部は、休息時に、症状が最小限または存在しない状態での活動（例えば、ランニング、ウォーキング）によって誘発された胸痛を指す。症状は、典型的に、活動の中止の数分後に軽減し、活動が再開すると再び始まる。不安定狭心症は、休息または睡眠中に進行し、通常＞１０分間続く胸痛を指す。関係する胸痛は、重度であり、新たに進行している。
【００４３】
本明細書で使用されるように、用語「ＳＴＥＭＩ」は、ＳＴ部分上昇型心筋梗塞（例えば、ＥＣＧに対するＳＴ部分上昇を結果的にもたらす心筋梗塞）を意味する。ＳＴＥＭＩは、しばしば、冠状動脈の完全な閉塞に起因する。結果として生じるＳＴ部分は、心筋のかなりの部分が損傷される又は死んでいることを示す。すべての心筋梗塞の約４５％は、ＳＴＥＭＩとして分類される。
【００４４】
本明細書で使用されるように、用語「ＮＳＴＥＭＩ」は、非ＳＴ部分上昇型心筋梗塞（例えば、ＥＣＧに対するＳＴ部分上昇を結果的にはもたらさない心筋梗塞）を意味する。ＮＳＴＥＭＩでは、冠状動脈は、単に部分的に閉塞され、したがって、心筋の一部のみが損傷される。
【００４５】
本明細書で使用されるように、用語「狭窄症」は、血管の狭窄を意味する。狭窄症は、しばしば、プラークの断裂および血栓の続く形成に対するアテローム動脈硬化性プラークの膨張に起因する。
【００４６】
本明細書で使用されるように、用語「虚血」は、血液供給での制限を意味する。虚血は、しばしば、（例えば、プラークの断裂後の血栓の形成が原因の）アテローム動脈硬化性プラークの膨張後の血管または動脈の閉塞を結果的にもたらす。
【００４７】
＜病理生物学＞
心臓は、循環系を有する動物に見られる筋原性の筋肉器官である。哺乳動物では、心臓の右側の拍動によって、結果的に脱酸素化した血液は、右心房を通って、肺へ移動し、肺では、二酸化炭素が取り除かれ、血液が酸化される。左側の拍動によって、酸化した血液は、動脈経由で、肺から心臓に移動し、その後、身体の残りの部分に分配される。
【００４８】
３つの主冠状動脈（左前下行枝（ＬＡＤ）、回旋枝（Ｃｉｒｃ）および右冠状動脈（ＲＣＡ））およびそれぞれの分枝は、各々、心臓の指定された部分に血液を供給する。ＬＡＤは、心臓の前面（前方）部分、および隔壁（左心室（ＬＶ）および右心室（ＲＶ）を分離する筋肉隔壁）に血液を提供する。Ｃｉｒｃは、ＬＶの背面（後方）部分に血液を提供する。ＲＣＡは、事例の９０％で、心室およびＲＶの下部（下方）に血液を提供する。他の１０％で、ＣｉｒｃはＬＶの下壁に向かった分枝に血液を送る。
【００４９】
時々、動脈を通る血流は、（例えば、冠状動脈閉塞が原因で）減少させられる。血流の一時的な減少は、胸部不快感をもたらしかねない。持続的な減少は、結果的に、永続的な筋損傷、心臓発作、または脳卒中をもたらしかねない。
【００５０】
アテローム性動脈硬化は、冠状動脈閉塞の最も一般的な原因である。アテローム性動脈硬化は、動脈壁の厚化を特徴とする。アテローム性動脈硬化は、しばしば、動脈壁における低密度リポタンパク質分子（ＬＤＬ）の蓄積で始まる。最終的に、ＬＤＬ分子は、フリーラジカル（例えば、ＲＯＳ）によって酸化される。動脈壁と接触した時、酸化したＬＤＬは動脈壁を損傷する。身体は、マクロファージとＴリンパ球でこの損傷を修復する試みによって反応する。これらの白血球は、エンドサイトーシスによって酸化した低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を飲み込む。酸化したＬＤＬは、泡末細胞に形質転換される白血球において蓄積する。泡末細胞は、その積み上がったまわりに蓄積し、最終的に断裂する。泡末細胞の断裂は、結果的に、動脈壁上へと戻る酸化したＬＤＬの沈着をもたらす。その後、これは、進行するプラークへのさらなる白血球の移動を引き起こす。最終的に、プラークのまわりの領域は炎症を起こす。これによって、筋細胞は、大きくなり、影響を受けた領域にわたって硬い覆い（ｈａｒｄ Ｃｏｖｅｒ）を形成する。この硬い覆いは、動脈の狭細をもたらし、血流を減少させ、血圧を増加させ得る。
【００５１】
アテローム性動脈硬化は、通常、「不安定」となったより薄い／弱い線維性被膜の部位で、プラークが断裂するまで、しばしば無症候性である。血流から柔軟なプラークを分離する線維性被膜が断裂すると、組織フラグメントが晒され放出される。これらの組織フラグメントは、血小板を活性化し、凝結を活性化するコラーゲンおよび組織因子を包含している。結果的に、プラークに重なる血栓が形成され、これはさらに血流を妨害する。血栓の形成が数時間以内に生じ得る。
【００５２】
プラークが心臓の上流にあり、不完全な閉塞があるとき、結果として生じる心臓への血流の減少は、結果的に重度で長引く胸痛（例えば、不安定狭心症）をもたらし得る。幾つかの実施形態では、心血管障害は不安定狭心症である。あるいは、完全な閉塞があるとき、心臓は酸素を奪われ、ＭＩが進行する。幾つかの実施形態では、心血管障害は心筋梗塞である。
【００５３】
断裂が脳の上流にあるとき、脳は酸素を必要とし、虚血性脳血管障害が進行する。幾つかの実施形態では、心血管障害は虚血発作である。
【００５４】
＜ＣＥＣ＞
内皮は、血管の内表面に並ぶ細胞の層であり、内腔における循環血液と血管壁の残りとの間で界面を形成する。内皮細胞は循環系全体に並ぶ。特定の例において、内皮細胞は、血管壁から引き離され、結果的に循環内皮細胞をもたらす。
【００５５】
循環内皮細胞は、健康な個体において見られる。
【００５６】
正常な内皮の完全性の欠如（したがって循環内皮細胞の存在）は、他の動脈の、非アテローム性動脈硬化の血管壁の断裂または亀裂の事象と同様に、アテローム動脈硬化性プラークの断裂に対する感受性のためのマーカーとして以前に識別された。したがって、幾つかの実施形態では、循環内皮細胞の存在は、プラーク断裂、または他の動脈の、非アテローム性動脈硬化の血管壁の断裂または亀裂の事象に対する感受性を示している。さらに、幾つかの実施形態では、健康な個体（あるいは所定の対照）で見られる濃度と比較した、循環内皮細胞の濃度の増加は、来たる（ｕｐｃｏｍｉｎｇ ｔｏ）、プラーク断裂、または他の動脈の、非アテローム性動脈硬化の血管壁の断裂または亀裂の事象を示している。
【００５７】
＜ＣＥＣの分析＞
心血管障害を有する個体（例えば、プラーク断裂、または他の動脈の、非アテローム性動脈硬化の血管壁の断裂または亀裂の事象の危険性のある又はそれを患う個体）からのＣＥＣは、健康な個体または所定の対照と比較したときの、形態学的パラメーター、すなわち、細胞領域および核領域、細胞／核領域の比率、および複数の核との関連性の測定可能な差を示す。
【００５８】
本明細書には、特定の実施形態において、治療を必要とする個体において心血管障害を分析する方法が開示され、該方法は、（ａ）循環内皮細胞および循環非内皮細胞から選択された細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離された循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の拡大された画像を得る工程；および（ｂ）拡大された画像において循環内皮細胞の一群の形態的特徴を、対照または標準の同じ形態的特徴と比較する工程を含む。本明細書には、特定の実施形態において、治療を必要とする個体において心血管障害を診断する方法が開示され、該方法は、（ａ）循環内皮細胞および循環非内皮細胞から選択された細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離された循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の拡大された画像を得る工程；（ｂ）拡大された画像において循環内皮細胞の一群の形態的特徴を、対照または標準の同じ形態的特徴と比較する工程；および（ｃ）循環内皮細胞の一群の形態的特徴が、（ｉ）健康な個体あるいは健康な個体の一群からの対照または標準から逸脱する、または（ｉｉ）心血管障害を有している又は有した、健康な個体あるいは健康な個体の一群からの対照または標準と一致する場合に、個体において心血管障害を診断する工程を含む。本明細書には、特定の実施形態において、個体が、心血管障害を進行させやすいかどうかを予測する方法が開示され、該方法は、（ａ）循環内皮細胞および循環非内皮細胞から選択された細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離された循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の拡大された画像を得る工程；（ｂ）拡大された画像において循環内皮細胞の一群の形態的特徴を、対照または標準の同じ形態的特徴と比較する工程；および（ｃ）（ｉ）健康な個体あるいは健康な個体の一群に由来する対照または標準からの循環内皮細胞の一群の形態的特徴の逸脱、または（ｉｉ）心血管障害を有している又は有した、循環内皮細胞の一群および個体または個体の一群に由来する対照または標準の形態的特徴の類似性に基づいて、心血管障害を進行する個体の感受性を予測する工程を含む。本明細書には、特定の実施形態において、心血管障害に関する治療計画に対する個体の反応を予測する方法が開示され、該方法は、（ａ）循環内皮細胞および循環非内皮細胞から選択された細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離された循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の拡大された画像を得る工程；（ｂ）拡大された画像において循環内皮細胞の一群の形態的特徴を、対照または標準の同じ形態的特徴と比較する工程；および（ｃ）（ｉ）健康な個体あるいは健康な個体の一群に由来する対照または標準からの循環内皮細胞の一群の形態的特徴の逸脱、または（ｉｉ）心血管障害を有している又は有した、循環内皮細胞の一群および個体または個体の一群に由来する対照または標準の形態的特徴の類似性に基づいて、治療計画に対する個体の反応を予測する工程を含む。本明細書には、特定の実施形態において、治療を必要とする個体に対して心血管障害に関する治療計画を処方する方法が開示され、該方法は、（ａ）循環内皮細胞および循環非内皮細胞から選択された細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離された循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の拡大された画像を得る工程；（ｂ）拡大された画像において循環内皮細胞の一群の形態的特徴を、対照または標準の同じ形態的特徴と比較する工程；および（ｃ）（ｉ）健康な個体あるいは健康な個体の一群に由来する対照または標準からの循環内皮細胞の一群の形態的特徴の逸脱、または（ｉｉ）心血管障害を有している又は有した、循環内皮細胞の一群および個体または個体の一群に由来する対照または標準の形態的特徴の類似性に基づいて、治療計画を処方する工程を含む。
【００５９】
幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、個体からのＣＥＣの少なくとも１つの形態的特徴を対照または標準と比較する工程を含む。幾つかの実施形態では、心血管障害を患う個体（例えば、プラーク断裂、または他の動脈の、非アテローム性動脈硬化の血管壁の断裂または亀裂の事象の危険性のある又はそれを患う個体）内でのＣＥＣは、異常な内皮の生態を示す別々の形態学的性質を有する。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、個体からのＣＥＣの少なくとも１つの形態的特徴を対照または標準と比較する工程を含む。幾つかの実施形態では、心血管障害を患う個体（例えば、プラーク断裂、または他の動脈の、非アテローム性動脈硬化の血管壁の断裂または亀裂の事象の危険性のある又はそれを患う個体）内でのＣＥＣは、動脈の内皮におけるより古い及び故により大きい細胞から生じる。幾つかの実施形態では、心血管障害を患う個体（例えば、プラーク断裂、または他の動脈の、非アテローム性動脈硬化の血管壁の断裂または亀裂の事象の危険性のある又はそれを患う個体）内でのＣＥＣは、プラーク断裂の間に、単独で、または多重細胞の群またはシートとして損傷した領域から放出される。幾つかの実施形態では、心血管障害を患う個体（例えば、プラーク断裂、または他の動脈の、非アテローム性動脈硬化の血管壁の断裂または亀裂の事象の危険性のある又はそれを患う個体）内でのＣＥＣは、異常に凝集された（例えば、循環を介してそれらの継代の間に凝集された）、損傷した細胞または妨害された細胞から生じる。幾つかの実施形態では、健康な個体におけるＣＥＣは、再構築する（ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ）または増殖する血管の領域からのより若い、および故により小さいＥＣのまれな放出から生じる。
【００６０】
幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、個体からのＣＥＣの少なくとも２つの形態的特徴を対照または標準と比較する工程を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、個体からのＣＥＣの少なくとも３つの形態的特徴を対照または標準と比較する工程を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、個体からのＣＥＣの少なくとも４つの形態的特徴を対照または標準と比較する工程を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、個体からのＣＥＣの少なくとも５つの形態的特徴を対照または標準と比較する工程を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、個体からのＣＥＣの少なくとも６つの形態的特徴を対照または標準と比較する工程を含む。
【００６１】
幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は：細胞領域；核領域；核領域に対する細胞領域の比率；細胞形状；核形状；核の数；またはそれらの組み合わせである。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、細胞領域である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、核領域である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、核領域に対する細胞領域の比率である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、細胞形状である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、核形状である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、核の数である。
【００６２】
幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は：対照または標準からのＣＥＣに対する大きな細胞領域；対照または標準からのＣＥＣに対する大きな核領域；あるいは対照または標準からのＣＥＣに関する核領域に対する細胞領域の大きな比率；またはそれらの組み合わせである。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣに対する大きな細胞領域である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣに対する大きな核領域である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣに関する核領域に対する細胞領域の大きな比率であり；またはそれらの組み合わせである。
【００６３】
心血管障害のない個体からのＣＥＣは、小さく、形状が細長い傾向がある。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣは、不均質である傾向があり、小さいものもあれば、大きいものもある。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣは、異常に形作られる傾向がある。さらに、幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの核は、通常より大きく、異常に形作られる傾向がある。
【００６４】
幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣの平均の細胞領域よりも、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％大きい細胞領域である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣの平均の細胞領域よりも約３０％と約５０％の間で大きい細胞領域である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣの平均の細胞領域よりも約３０％大きい細胞領域である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣの平均の細胞領域よりも約３５％大きい細胞領域である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣの平均の細胞領域よりも約４０％大きい細胞領域である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣの平均の細胞領域よりも約４５％大きい細胞領域である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣの平均の細胞領域よりも約５０％大きい細胞領域である。
【００６５】
心血管障害のない個体内でのＣＥＣの平均の細胞領域は、約１００ｍｍ２である。したがって、幾つかの実施形態では、心血管障害を示すＣＥＣの細胞領域は、約１００μｍ２、約１５０μｍ２、約２００μｍ２、約２１０μｍ２、約２２０μｍ２、約２３０μｍ２、約２４０μｍ２、約２５０μｍ２、約２６０μｍ２、約２７０μｍ２、約２８０μｍ２、約２９０μｍ２、または約３００μｍ２より大きい。幾つかの実施形態では、心血管障害を示すＣＥＣの細胞領域は、約１００μｍ２より大きい。幾つかの実施形態では、心血管障害を示すＣＥＣの細胞領域は、約１５０μｍ２より大きい。幾つかの実施形態では、心血管障害を示すＣＥＣの細胞領域は、約２００μｍ２より大きい。幾つかの実施形態では、心血管障害を示すＣＥＣの細胞領域は、約２００μｍ２である。幾つかの実施形態では、心血管障害を示すＣＥＣの細胞領域は、約２５０μｍ２より大きい。幾つかの実施形態では、心血管障害を示すＣＥＣの細胞領域は、約２５０μｍ２である。幾つかの実施形態では、心血管障害を示すＣＥＣの細胞領域は、約２５５μｍ２より大きい。幾つかの実施形態では、心血管障害を示すＣＥＣの細胞領域は、約２５５μｍ２である。幾つかの実施形態では、心血管障害を示すＣＥＣの細胞領域は、約２６０μｍ２より大きい。幾つかの実施形態では、心血管障害を示すＣＥＣの細胞領域は、約２６０μｍ２である。幾つかの実施形態では、心血管障害を示すＣＥＣの細胞領域は、約２６５μｍ２より大きい。幾つかの実施形態では、心血管障害を示すＣＥＣの細胞領域は、約２６５μｍ２である。幾つかの実施形態では、心血管障害を示すＣＥＣの細胞領域は、約２７０μｍ２である。
【００６６】
幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣの平均の細胞領域よりも、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％大きい核領域である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣの平均の細胞領域よりも、少なくとも３０％大きい核領域である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣの平均の細胞領域よりも、少なくとも３５％大きい核領域である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣの平均の細胞領域よりも、少なくとも４０％大きい核領域である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣの平均の細胞領域よりも、少なくとも４５％大きい核領域である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣの平均の細胞領域よりも、少なくとも５０％大きい核領域である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣの平均の細胞領域よりも、約３０％と約５０％の間で大きい核領域である。
【００６７】
心血管障害のない個体内でのＣＥＣの平均の細胞領域は、約３０と約４０ｍｍ２の間である。幾つかの実施形態では、核領域は、約３０μｍ２、約３１μｍ２、約３２μｍ２、約３３μｍ２、約３４μｍ２、約３５μｍ２、約３６μｍ２、約３７μｍ２、約３８μｍ２、約３９μｍ２、約４０μｍ２、約５０μｍ２、約６０μｍ２、約７０μｍ２、約８０μｍ２、約９０μｍ２、または約１００μｍ２より大きい。幾つかの実施形態では、核領域は、約３０μｍ２より大きい。幾つかの実施形態では、核領域は、約３５μｍ２より大きい。幾つかの実施形態では、核領域は、約３５μｍ２である。幾つかの実施形態では、核領域は、約４０μｍ２より大きい。幾つかの実施形態では、核領域は、約４０μｍ２である。幾つかの実施形態では、核領域は、約４５μｍ２より大きい。幾つかの実施形態では、核領域は、約４５μｍ２である。幾つかの実施形態では、核領域は、約５０μｍ２より大きい。幾つかの実施形態では、核領域は、約５０μｍ２である。幾つかの実施形態では、核領域は、約５５μｍ２より大きい。幾つかの実施形態では、核領域は、約５５μｍ２である。幾つかの実施形態では、核領域は、約６０μｍ２より大きい。幾つかの実施形態では、核領域は、約６０μｍ２である。幾つかの実施形態では、心血管障害を示すＣＥＣの核領域は、約６５μｍ２である。
【００６８】
心血管障害のない個体からのＣＥＣは、１つの細胞体に関係する２つの核を有し、これは、２つの付着した細胞のクラスター、または２つの核を有する１つの細胞を表わし得る。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣは、しばしば、１つの連続的な細胞体に関係するいくつかの核を包含している。これらの細胞体は、単一細胞または複数の細胞の凝集であってもよい。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、１つを超える核の存在である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、２つの核の存在である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、３つの核の存在である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、４つの核の存在である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、５つの核の存在である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、６つの核の存在である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、７つの核の存在である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、８つの核の存在である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、９つの核の存在である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、１０の核の存在である。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣの核の平均数よりも少なくとも１０％多い核の存在である。
【００６９】
幾つかの実施形態では、健康な個体間での、細胞および核の大きさ、比率、または複数の核の存在における統計的有意差はない。幾つかの実施形態では、ＳＴ部分上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）と非ＳＴ部分上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）のＣＥＣとの間に統計的有意差はない。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法はさらに、（ａ）血液サンプルから単離された循環内皮細胞の一群の濃度を；（ｂ）対照または標準の濃度と比較する工程を含む。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体内でのＣＥＣの濃度は、健康な個体または所定の対照において見られるＣＥＣの濃度よりも、少なくとも５０％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％または７００％大きい。幾つかの実施形態では、心血管障害を有する個体内でのＣＥＣの濃度は、健康な個体または所定の対照において見られるＣＥＣの濃度よりも、約２００％と約４００％の間で大きい。
【００７０】
幾つかの実施形態では、循環内皮細胞（あるいは、単一のＣＥＣ）の一群の形態的特徴の比較は、任意の適切な顕微鏡の使用によって得られた単離した循環内皮細胞の一群の拡大された画像（例えば、蛍光画像）を分析する工程を含む。幾つかの実施形態では、循環内皮細胞（あるいは、単一のＣＥＣ）の一群の形態的特徴の比較は、単離した循環内皮細胞の一群の拡大された蛍光画像を分析する工程を含む。幾つかの実施形態では、顕微鏡は、ＣＥＣの一群における単一のＣＥＣの形態的特徴を視覚化するのに十分な倍率を有する。
【００７１】
幾つかの実施形態では、ＣＥＣの拡大された画像は、顕微鏡に関係するコンピュータ処理デバイスの電子メモリに保存される。
【００７２】
幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、コンピュータ処理デバイスによって実行された、任意の適切なソフトウェアモジュールが、循環内皮細胞の少なくとも１つの形態的特徴を分析する工程を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、コンピュータ処理デバイスによって実行された、任意の適切なコンピュータソフトウェアモジュールが、循環内皮細胞の少なくとも１つの形態的特徴を、対照または標準と比較する工程を含み、ここで、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、細胞領域；核領域；核領域に対する細胞領域の比率；細胞形状；核形状；核の数；またはそれらの組み合わせであってもよい。幾つかの実施形態では、循環内皮細胞の一群の形態的特徴の比較は、コンピュータ処理デバイスによって実行された、任意の適切なソフトウェアモジュールが、循環内皮細胞の少なくとも１つの形態的特徴を分析する工程を含み、ここで、心血管障害を有する個体からのＣＥＣの形態的特徴は、対照または標準からのＣＥＣに対する大きな細胞領域；対照または標準からのＣＥＣに対する大きな核領域；あるいは対照または標準からのＣＥＣに関する核領域に対する細胞領域の大きな比率；またはそれらの組み合わせである。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、コンピュータ処理デバイスによって実行されたソフトウェアモジュールが、血液サンプルから単離した循環内皮細胞の一群の濃度を測定する工程を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、コンピュータ処理デバイスによって実行されたソフトウェアモジュールが、循環内皮細胞の一群の濃度を、対照または標準の濃度と比較する工程を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、コンピュータ処理デバイスによって実行されたソフトウェアモジュールが、個体または個体を処置する医療の専門家に、ＣＥＣの一群の形態的特徴の分析を送信する工程を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、コンピュータ処理デバイスによって実行されたソフトウェアモジュールが、個体または個体を処置する医療の専門家に、診断結果または予後結果を送信する工程を含む。
【００７３】
本明細書に開示される方法は、任意の適切なシステムによって実行される。幾つかの実施形態では、システムは、（ａ）内皮細胞（ＣＥＣ）および循環非内皮細胞から選択される細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離した循環ＣＥＣの一群；および（ｂ）ＣＥＣの一群における単一のＣＥＣの形態的特徴を視覚化するのに十分な倍率を有している顕微鏡を含み、ここで、形態的特徴は、細胞領域、核領域、核領域に対する細胞領域の比率、細胞形状、核形状、核の数、循環内皮細胞の数、またはそれらの組み合わせから選択される。幾つかの実施形態では、システムは、ＣＥＣの一群、またはＣＥＣの一群における単一のＣＥＣの拡大された画像を取り込む且つ保存するための電子メモリをさらに含む。幾つかの実施形態では、システムは、随意にコンピュータネットワークに接続される、ンピューター処理デバイスをさらに含む。幾つかの実施形態では、システムは、循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の形態的特徴を分析するための、コンピュータ処理デバイスによって実行されたソフトウェアモジュールをさらに含む。幾つかの実施形態では、システムは、循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の形態的特徴を標準または対照と比較するための、コンピュータ処理デバイスによって実行されたソフトウェアモジュールをさらに含む。
幾つかの実施形態では、システムは、血液サンプルから単離された循環内皮細胞の一群の濃度を測定するための、コンピュータ処理デバイスによって実行されたソフトウェアモジュールをさらに含む。幾つかの実施形態では、システムは、循環内皮細胞の一群の濃度を対照または標準の濃度と比較するための、コンピュータ処理デバイスによって実行されたソフトウェアモジュールをさらに含む。幾つかの実施形態では、システムは、個体または個体を処置する医療の専門家に、ＣＥＣの一群の形態的特徴の分析を送信するための、コンピュータ処理デバイスによって実行されたソフトウェアモジュールをさらに含む。幾つかの実施形態では、システムは、個体または個体を処置する医療の専門家に、診断結果または予後結果を送信するための、コンピュータ処理デバイスによって実行されたソフトウェアモジュールをさらに含む。
【００７４】
幾つかの実施形態では、システムは、血液サンプルから循環内皮細胞の一群を単離するための機械をさらに含む。幾つかの実施形態では、システムは、循環内皮細胞に特異的に結合するラベル、循環内皮細胞に結合しないラベル、またはその組み合わせをさらに含む。幾つかの実施形態では、システムは、ＣＤ１４６に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０５に特異的に結合するラベル、ＣＤ４５に特異的に結合するラベル、ＣＤ３４に特異的に結合するラベル、ＣＤ３１に特異的に結合するラベル、ＶＥＧＦ２に特異的に結合するラベル、ＣＤ１４４に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０６に特異的に結合する、あるいはそれらの組み合わせをさらに含む。幾つかの実施形態では、システムはさ、抗ＣＤ１４６抗体、抗ＣＤ１０５抗体、抗ＣＤ４５抗体、抗ＣＤ３４抗体、抗ＣＤ３１抗体、抗ＶＥＧＦ２抗体、抗ＣＤ１４４抗体、抗ＣＤ１０６抗体、またはそれらの組み合わせをさらに含む。幾つかの実施形態において、抗体は、標識化される。幾つかの実施形態では、抗体は、蛍光部分または磁気部分により標識化される。
【００７５】
＜ＣＥＣの単離＞
ＣＥＣを単離する現在の方法は、結果的に変異性をもたらす。この変異性は、主として高度に分岐した（ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ）ＣＥＣの単離方法およびＣＥＣの可変的な免疫表現型の定義の使用から生じる。
【００７６】
本明細書には、特定の実施形態において、治療を必要とする個体において心血管障害を分析する方法が開示され、該方法は、（ａ）循環内皮細胞（ＣＥＣ）および循環非内皮細胞から選択された細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離した循環内皮細胞の一群の拡大された画像を得る工程；および（ｂ）拡大された画像中の循環内皮細胞の一群の形態的特徴を対照または標準の同じ形態的特徴と比較する工程を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される方法は、ＣＥＣを単離する方法をさらに含む。幾つかの実施形態では、方法は、ポジティブおよびネガティブ選択の基準を使用して、ＣＥＣを単離する工程をさらに含む。
【００７７】
本明細書には、特定の実施形態において、治療を必要とする個体において心血管障害を診断する方法が開示され、該方法は、（ａ）循環内皮細胞（ＣＥＣ）および循環非内皮細胞から選択された細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離した循環内皮細胞の一群の拡大された画像を得る工程；（ｂ）拡大された画像中の循環内皮細胞の一群の形態的特徴を対照または標準の同じ形態的特徴と比較する工程；および（Ｃ）循環内皮細胞の一群の形態的特徴が、（ｉ）健康な個体あるいは健康な個体の一群からの対照または標準から逸脱する、または（ｉｉ）心血管障害を有している又は有した、個体あるいは個体の一群からの対照または標準と一致する場合に、個体において心血管障害を診断する工程を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される方法は、ＣＥＣを単離する方法をさらに含む。幾つかの実施形態では、方法は、ポジティブおよびネガティブ選択の基準を使用して、ＣＥＣを単離する工程をさらに含む。
【００７８】
本明細書には、特定の実施形態において、個体が心血管障害を進行させやすいかどうかを予測する方法が開示され、該方法は、（ａ）循環内皮細胞（ＣＥＣ）および循環非内皮細胞から選択された細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離した循環内皮細胞の一群の拡大された画像を得る工程；（ｂ）拡大された画像中の循環内皮細胞の一群の形態的特徴を対照または標準の同じ形態的特徴と比較する工程；および（ｃ）（ｉ）健康な個体あるいは健康な個体の一群に由来する対照または標準からの循環内皮細胞の一群の形態的特徴の逸脱、または（ｉｉ）心血管障害を有している又は有した、循環内皮細胞の一群および個体または個体の一群に由来する対照または標準の形態的特徴の類似性に基づいて、治療計画に対する個体の反応を予測する工程を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される方法は、ＣＥＣを単離する方法をさらに含む。幾つかの実施形態では、方法は、ポジティブおよびネガティブ選択の基準を使用して、ＣＥＣを単離する工程をさらに含む。
【００７９】
本明細書には、特定の実施形態において、心血管障害に関する治療計画に対する個体の反応を予測する方法が開示され、該方法は、（ａ）循環内皮細胞（ＣＥＣ）および循環非内皮細胞から選択された細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離した循環内皮細胞の一群の拡大された画像を得る工程；（ｂ）拡大された画像中の循環内皮細胞の一群の形態的特徴を対照または標準の同じ形態的特徴と比較する工程；および（ｃ）（ｉ）健康な個体あるいは健康な個体の一群に由来する対照または標準からの循環内皮細胞の一群の形態的特徴の逸脱、または（ｉｉ）心血管障害を有している又は有した、循環内皮細胞の一群および個体または個体の一群に由来する対照または標準の形態的特徴の類似性に基づいて、治療計画に対する個体の反応を予測する工程を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される方法は、ＣＥＣを単離する工程をさらに含む。幾つかの実施形態では、方法は、ポジティブおよびネガティブ選択の基準を使用して、ＣＥＣを単離する工程をさらに含む。
【００８０】
本明細書には、特定の実施形態において、治療を必要とする個体に心血管障害に対する治療計画を処方する方法が開示され、該方法は、（ａ）循環内皮細胞（ＣＥＣ）および循環非内皮細胞から選択された細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離した循環内皮細胞の一群の拡大された画像を得る工程；（ｂ）拡大された画像中の循環内皮細胞の一群の形態的特徴を対照または標準の同じ形態的特徴と比較する工程；および（ｃ）（ｉ）健康な個体あるいは健康な個体の一群に由来する対照または標準からの循環内皮細胞の一群の形態的特徴の逸脱、または（ｉｉ）心血管障害を有している又は有した、循環内皮細胞の一群および個体または個体の一群に由来する対照または標準の形態的特徴の類似性に基づいて、治療計画を処方する工程を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される方法は、ＣＥＣを単離する工程をさらに含む。幾つかの実施形態では、方法は、ポジティブおよびネガティブ選択の基準を使用して、ＣＥＣを単離する工程をさらに含む。
【００８１】
幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、血液サンプルを、循環内皮細胞に特異的に結合するラベル、循環内皮細胞に結合しないラベル、またはその組み合わせと接触させる工程をさらに含む。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、ラベルを有する血液サンプルを、ＣＤ１４６に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０５に特異的に結合するラベル、ＣＤ４５に特異的に結合するラベル、ＣＤ３４に特異的に結合するラベル、ＣＤ３１に特異的に結合するラベル、ＶＥＧＦ２に特異的に結合するラベル、ＣＤ１４４に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０６に特異的に結合する、あるいはそれらの組み合わせと接触させる工程をさらに含む。
【００８２】
幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、血液サンプルを、抗ＣＤ１４６抗体、抗ＣＤ１０５抗体、抗ＣＤ４５抗体、抗ＣＤ３４抗体、抗ＣＤ３１抗体、抗ＶＥＧＦ２抗体、抗ＣＤ１４４抗体、抗ＣＤ１０６抗体、またはそれらの組み合わせと接触させる工程をさらに含む。
【００８３】
幾つかの実施形態では、抗体は、任意の適切なラベルによって標識化される。幾つかの実施形態において、抗体は、蛍光部分によって標識化される。幾つかの実施形態において、抗体は、磁気部分によって標識化される。
【００８４】
幾つかの実施形態では、血液サンプルからの循環内皮細胞の一群の単離は、（ａ）血液サンプルを抗ＣＤ１４６抗体と接触させる工程；および（ｂ）抗ＣＤ１４６抗体が特異的に結合する細胞を単離し、ＣＤ１４６＋細胞の一群を作成する工程を含む。幾つかの実施形態では、血液サンプルからの循環内皮細胞の一群の単離は、（ａ）血液サンプルを抗ＣＤ１４６抗体と接触させる工程であって、抗体を磁気的に標識化する工程；および（ｂ）抗ＣＤ１４６抗体が特異的に結合する細胞を単離し、ＣＤ１４６＋細胞の一群を作成する工程を含む。幾つかの実施形態では、血液サンプルからの循環内皮細胞の一群の単離は、（ａ）血液サンプルを抗ＣＤ１４６抗体と接触させる工程であって、抗体を蛍光で標識化する工程；および（ｂ）抗ＣＤ１４６抗体が特異的に結合する細胞を単離し、ＣＤ１４６＋細胞の一群を作成する工程を含む。
【００８５】
幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＣＤ１４６＋細胞の一群を、抗ＣＤ４５抗体、抗ＣＤ１０５抗体、ＤＡＰＩ、またはそれらの組み合わせと接触させる工程をさらに含む。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＣＤ１４６＋細胞の一群を、標識化された抗ＣＤ４５抗体、標識化された抗ＣＤ１０５抗体、標識化された抗ＣＤ３４抗体、標識化された抗ＣＤ３１抗体、標識化された抗ＶＥＧＦＲ２抗体、標識化された抗ＣＤ−１４４抗体、標識化された抗ＣＤ１０６抗体、ＤＡＰＩ、またはそれらの組み合わせと接触させる工程をさらに含む。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＣＤ１４６＋細胞の一群を、磁気的に標識化された抗ＣＤ４５抗体、磁気的に標識化された抗ＣＤ１０５抗体、磁気的に標識化された抗ＣＤ３４抗体、磁気的に標識化された抗ＣＤ３１抗体、磁気的に標識化された抗ＶＥＧＦＲ２抗体、磁気的に標識化された抗ＣＤ−１４４抗体、磁気的に標識化された抗ＣＤ１０６抗体、ＤＡＰＩ、またはそれらの組み合わせと接触させる工程をさらに含む。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＣＤ１４６＋細胞の一群を、蛍光で標識化された抗ＣＤ４５抗体、蛍光で標識化された抗ＣＤ１０５抗体、蛍光で標識化された抗ＣＤ３４抗体、蛍光で標識化された抗ＣＤ３１抗体、蛍光で標識化された抗ＶＥＧＦＲ２抗体、蛍光で標識化された抗ＣＤ−１４４抗体、蛍光で標識化された抗ＣＤ１０６抗体、ＤＡＰＩ、またはそれらの組み合わせと接触させる工程をさらに含む。
【００８６】
幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、抗ＣＤ４５抗体に特異的に結合するＣＤ１４６＋細胞を捨て、単離した循環内皮細胞の一群を作成する工程をさらに含む。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、抗ＣＤ４５抗体に特異的に結合しないＣＤ１４６＋細胞を保持し、単離した循環内皮細胞の一群を作成する工程をさらに含む。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、抗ＣＤ４５抗体に特異的に結合するＣＤ１４６＋細胞を捨て、抗ＣＤ４５抗体に特異的に結合しないＣＤ１４６＋細胞を保持し、単離した循環内皮細胞の一群を作成する工程をさらに含む。
【００８７】
ＣＥＣの、例えば大きさ、電荷（ｃｈａｒｇｅ）、および密度の物理的性質に基づいて、ＣＥＣを単離する他の方法が使用されてもよい。大きさは、ろ過によって選択され得、密度は、Ｆｉｃｏｌｌ分離によって選択され得、電荷は、電気泳動または誘電泳動によって選択され得る。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される単離方法は、大きなサンプルボリュームの処理に付随し得る変異性を除去するか又は減少させる。幾つかの実施形態において、本明細書に開示される単離方法は、オペレーター間の変動を減少させることによって、よりよい再現性の結果を可能にする。
【００８８】
＜心血管障害の処置＞
本明細書には、特定の実施形態において、治療を必要とする個体において心血管障害を分析する方法が開示され、該方法は、（ａ）循環内皮細胞（ＣＥＣ）および循環非内皮細胞から選択された細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離した循環内皮細胞の一群の拡大された画像を得る工程；および（ｂ）拡大された画像中の循環内皮細胞の一群の形態的特徴を対照または標準の同じ形態的特徴と比較する工程を含む。幾つかの実施形態では、方法は、循環内皮細胞の一群の形態的特徴が、対照または標準から逸脱する量に基づいて、個体に対して治療計画を処方する工程をさらに含む。
【００８９】
本明細書には、特定の実施形態において、治療を必要とする個体において心血管障害を診断する方法が開示され、該方法は（ａ）循環内皮細胞（ＣＥＣ）および循環非内皮細胞から選択された細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離した循環内皮細胞の一群の拡大された画像を得る工程；（ｂ）拡大された画像中の循環内皮細胞の一群の形態的特徴を対照または標準の同じ形態的特徴と比較する工程；および（Ｃ）循環内皮細胞の一群の形態的特徴が、（ｉ）健康な個体あるいは健康な個体の一群からの対照または標準から逸脱する、または（ｉｉ）心血管障害を有している又は有した、個体あるいは個体の一群からの対照または標準と一致する場合に、個体において心血管障害を診断する工程を含む。幾つかの実施形態では、方法は、診断に基づいて個体に対して治療計画を処方する工程をさらに含む。
【００９０】
本明細書には、特定の実施形態において、個体が心血管障害を進行させやすいかどうかを予測する方法が開示され、該方法は、（ａ）循環内皮細胞（ＣＥＣ）および循環非内皮細胞から選択された細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離した循環内皮細胞の一群の拡大された画像を得る工程；（ｂ）拡大された画像中の循環内皮細胞の一群の形態的特徴を対照または標準の同じ形態的特徴と比較する工程；および（ｃ）（ｉ）健康な個体あるいは健康な個体の一群に由来する対照または標準からの循環内皮細胞の一群の形態的特徴の逸脱、または（ｉｉ）心血管障害を有している又は有した、循環内皮細胞の一群および個体または個体の一群に由来する対照または標準の形態的特徴の類似性に基づいて、治療計画に対する個体の反応を予測する工程を含む。幾つかの実施形態では、方法は、予測に基づいて個体に対して治療計画を処方する工程をさらに含む。
【００９１】
本明細書には、特定の実施形態において、心血管障害に関して治療計画に対する個体の反応を予測する方法が開示され、該方法は、（ａ）循環内皮細胞（ＣＥＣ）および循環非内皮細胞から選択された細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離した循環内皮細胞の一群の拡大された画像を得る工程；（ｂ）拡大された画像中の循環内皮細胞の一群の形態的特徴を対照または標準の同じ形態的特徴と比較する工程；および（ｃ）（ｉ）健康な個体あるいは健康な個体の一群に由来する対照または標準からの循環内皮細胞の一群の形態的特徴の逸脱、または（ｉｉ）心血管障害を有している又は有した、循環内皮細胞の一群および個体または個体の一群に由来する対照または標準の形態的特徴の類似性に基づいて、治療計画に対する個体の反応を予測する工程を含む。幾つかの実施形態では、方法は、個体に対して治療計画を処方する工程、または循環内皮細胞の一群の形態的特徴が対照または標準から逸脱する量に基づいて、個体に対する治療計画を変更する工程をさらに含む。
【００９２】
本明細書には、特定の実施形態において、治療を必要とする個体に心血管障害に対する治療計画を処方する方法が開示され、該方法は、（ａ）循環内皮細胞（ＣＥＣ）および循環非内皮細胞から選択された細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離した循環内皮細胞の一群の拡大された画像を得る工程；（ｂ）拡大された画像中の循環内皮細胞の一群の形態的特徴を対照または標準の同じ形態的特徴と比較する工程；および（ｃ）（ａ）健康な個体あるいは健康な個体の一群に由来する対照または標準からの循環内皮細胞の一群の形態的特徴の逸脱、または（ｂ）心血管障害を有している又は有した、循環内皮細胞の一群および個体または個体の一群に由来する対照または標準の形態的特徴の類似性に基づいて、治療計画を処方する工程を含む。
【００９３】
幾つかの実施形態では、治療計画は、薬物療法；外的動脈加圧強化法（ＥＥＣＰ）；
手術；またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、治療計画は、血管形成術；冠動脈バイパス手術；またはそれらの組み合わせである。
【００９４】
幾つかの実施形態において、治療計画は、薬物療法である。幾つかの実施形態では、治療計画は、ナイアシン；フィブラート；スタチン；アポリポ蛋白Ａ−１モジュレーター；ＡＣＡＴモジュレーター；ＣＥＴＰモジュレーター；糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａモジュレーター；Ｐ２Ｙ１２モジュレーター；Ｌｐ−ＰＬＡ２モジュレーター；又はそれらの組み合わせから選択される、薬物療法である。幾つかの実施形態では、治療計画は、アトルバスタチン；セリバスタチン；フルバスタチン；ロバスタチン；メバスタチン；ピタバスタチン；プラバスタチン；ロスバスタチン；シンバスタチン；シンバスタチンおよびエゼチミベ；ロバスタチンおよびナイアシン（徐放）；アトルバスタチンおよびベシル酸アムロジピン；シンバスタチンおよびナイアシン（徐放）；又はそれらの組み合わせから選択される、薬物療法である。
【００９５】
幾つかの実施形態では、治療計画は、ベザフィブラート；シプロフィブラート；クロフィブレート；ゲムフィブロジル；フェノフィブラート；又はそれらの組み合わせから選択される、薬物療法である。幾つかの実施形態では、治療計画は、ＤＦ４（Ａｃ−Ｄ−Ｗ−Ｆ−Ｋ−Ａ−Ｆ−Ｙ−Ｄ−Ｋ−Ｖ−ＡＥ−Ｋ−Ｆ−Ｋ−Ｅ−Ａ−Ｆ−ＮＨ２）；ＤＦ５；ＲＶＸ‐２０８（Ｒｅｓｖｅｒｌｏｇｉｘ）；又はそれらの組み合わせから選択される、薬物療法である。幾つかの実施形態では、治療計画は、アバシミベ；パクチミベ硫酸塩（ＣＳ−５０５）；ＣＩ−１０１１（２，６−ジイソプロピルフェニル［（２，４，６−トリイソプロピルフェニル）アセチル］スルファミン酸塩）；ＣＩ−９７６（２，２−ジメチル−Ｎ−（２，４，６−トリメトキシフェニル）ドデカンアミド）；ＶＵＬＭ１４５７（１−（２，６−ジイソプロピル−フェニル）−３−［４−（４’−ニトロフェニルチオ）フェニル］尿素）；ＣＩ−９７６（２，２−ジメチル−Ｎ−（２，４，６−トリメトキシフェニル）ドデカンアミド）；Ｅ−５３２４（ｎ−ブチル−Ｎ’−（２−（３−（５−エチル−４−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）プロポキシ）−６−メチルフェニル）尿素）；ＨＬ−００４（Ｎ−（２，６−ジイソプロピルフェニル）テトラデシルチオアセトアミド）；ＫＹ−４５５（Ｎ−（４，６−ジメチル１−ペンチルインドリン−７−イル）−２，２−ジメチルプロパンアミド）；ＦＹ−０８７（Ｎ−［２−［Ｎ’−ペンチル−（６，６−ジメチル−２，４−ヘプタジイニル）アミノ］エチル］−（２−メチル−１−ナフチル−チオ）アセトアミド）；ＭＣＣ−１４７（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ ＰＨａｒｍａ）；Ｆ １２５１１（（Ｓ）−２’，３’，５’−トリメチル−４’−ヒドロキシ−アルファ−ドデシルチオアセトアニリド）；ＳＭＰ−５００（Ｓｕｍｉｔｏｍｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ＣＬ ２７７０８２（２，４−ジフルオロ−フェニル−Ｎ［［４−（２，２−ジメチルプロピル）フェニル］メチル］−Ｎ−（ｈｅｐｔｈｙｌ）尿素）；Ｆ−１３９４（（１ｓ，２ｓ）−２−［３−（２，２−ジメチルプロピル）−３−ノニルウレイド］アミノシクロヘキサン−１−イル（３−［Ｎ−（２，２，５，５−テトラメチル−１，３−ジオキサン−４−カルボニル）アミノ］プロピオン酸塩）；ＣＰ−１１３８１８（Ｎ−（２，４−ビス（メチルチオ）−６−メチルピリジン−３−イル）−２−（ヘキシルチオ）デカン酸アミド）；ＹＭ−７５０；又はそれらの組み合わせから選択される、薬物療法である。幾つかの実施形態では、治療計画は、トルセトラピブ；アナセトラピブ（ａｎａｃｅｔｒａｐｉｄ）；ＪＴＴ−７０５（Ｊａｐａｎ Ｔｏｂａｃｃｏ／Ｒｏｃｈｅ）；又はそれらの組み合わせから選択される、薬物療法である。幾つかの実施形態では、治療計画は、アブシキシマブ；エプチフィバチド；チロフィバン；ロキシフィバン；バリアビリン（ｖａｒｉａｂｉｌｉｎ）；ＸＶ ４５９（Ｎ（３）−（２−（３−（４−フォルムアミジノフェニル（ｆｏｒｍａｍｉｄｉｎｏｐｈｅｎｙｌ））イソキサゾリン（ｉｓｏｘａｚｏｌｉｎ）−５−イル）アセチル）−Ｎ（２）−（１−ブチルオキシカルボニル）−２，３−ジアミノプロピオネート（ｄｉａｍｉｎｏｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ））；ＳＲ １２１５６６Ａ（３−［Ｎ−｛４−［４−（アミノイミノメチル）フェニル］−１，３−チアゾール−２−イル｝−Ｎ−（１−カルボキシメチルピぺリド（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒｉｄ）−４−イル）アミノールプロピオン酸，トリヒドロクロリド）；ＦＫ４１９（（Ｓ）−２−アセチルアミノ−３−［（Ｒ）−［１−［３−（ピペリジン−４−イル）プロピオニル］ピペリジン−３−イルカルボニル］アミノ］プロピオン酸三水酸基化合物）；又はそれらの組み合わせから選択される、薬物療法である。幾つかの実施形態では、治療計画は、クロピドグレル；プラスグレル；カングレロール；ＡＺＤ６１４０（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）ＭＲＳ ２３９５（２，２−ジメチル−プロピオン酸 ３−（２−クロロ−６−メチルアミノプリン−９−イル）−（２−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル）−プロピルエステル）；Ｂｘ ６６７（Ｂｅｒｌｅｘ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）；ＢＸ ０４８（Ｂｅｒｌｅｘ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）又はそれらの組み合わせから選択される、薬物療法である。幾つかの実施形態では、治療計画は、ダラプラディブ（ＳＢ ４８０８４８）；ＳＢ‐４３５４９５（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ＳＢ‐２２２６５７（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；
ＳＢ‐２５３５１４（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；又はそれらの組み合わせから選択される、薬物療法である。幾つかの実施形態では、治療計画は、Ａ−８１８３４（３−（３−（１，１−ジメチルエチルチオ−５−（キノリン−２−（イルメトキシ−１  −（４−クロロメチルフェニル）インドール−２−イル）−２，２−ジメチルプロピオンアルデヒド オキシム−Ｏ−２−酢酸；ＡＭＥ１０３（Ａｍｉｒａ）；ＡＭＥ８０３（Ａｍｉｒａ）；アトレロイトン；ＢＡＹ−ｘ−１００５（Ｒ）−（＋）−アルファ−シクロペンチル−４−（２−キノリニルメトキシ）−ベンゼン酢酸）；ＣＪ−１３６１０（４−（３−（４−（２−メチル−イミダゾール−ｌ−イル）−フェニルスルファニル）−フェニル）−テトラヒドロ−ピラン−４−カルボキシル酸アミド）；ＤＧ‐０３１（ＤｅＣｏｄｅ）；ＤＧ‐０５１（ＤｅＣｏｄｅ）；ＭＫ８８６（１−［（４−クロロフェニル）メチル］３−［（１，１−ジメチルエチル）チオ］−α，α−ジメチル−５−（１−メチルエチル）−１Ｈ−インドール−２−プロパン酸，ナトリウム塩）；ＭＫ５９１（３−（１−４［（４−クロロフェニル）メチル］−３−［（ｔ−ブチルチオ）−５−（（２−キノリル（ｑｕｉｎｏｌｙ））メトキシ）−１Ｈ−インドール−２］−，ジメチルプロパン酸（ｄｉｍｅｈｔｙｌｐｒｏｐａｎｏｉｃ ａｃｉｄ））；ＲＰ６４９６６（［４−［５−（３−フェニル−プロピル）チオフェン−２−イル］ブトキシ］酢酸）；ＳＡ６５４１（（Ｒ）−Ｓ−［［４−（ジメチルアミノ）フェニル］メチル］−Ｎ−（３−メルカプト−２メチル−１−オキソプロピル−Ｌ−システイン）；ＳＣ−５６９３８（エチル−１−［２−［４−（フェニルメチル）フェノキシ］エチル］−４ーピペリジン−カルボン酸塩）；ＶＩＡ−２２９１（Ｖｉａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ＷＹ−４７，２８８（２−［（１−ナフタレニルオキシ）メチル］キノリン）；ジレウトン；ＺＤ−２１３８（６−（３−フルオロ−５−（テトラヒドロ−４−メトキシ−２Ｈ−ピラン−４イル）フェノキシ）メチル）−ｌ−メチル−２（１Ｈ）−キノリノン）；又はそれらの組み合わせから選択される、薬物療法である。
【００９６】
幾つかの実施形態では、治療計画はＥＥＣＰである。ＥＥＣＰは、空気カフを脚の上に置くことを含む。空気カフは、心拍度数およびリズムをモニタリングし、個体の心電図に基づいて膨張し収縮するように設定される、遠隔測定モニターに接続される。空気カフは、心拡張期の初めに膨張し、心収縮期の初めに収縮するべきである。幾つかの実施形態では、治療計画は血管形成術である。血管形成術は、動脈へのバルーンカテーテルの挿入を含む。カテーテルは、アテローム動脈硬化性プラークの部位に位置付けられ、固定サイズまで膨張される。バルーンは血管を開くので、プラークを砕く。
【００９７】
幾つかの実施形態では、治療計画は、冠動脈バイパス手術である。冠動脈バイパス手術は、患者（あるいはドナー）からの動脈または静脈が、アテローム性動脈硬化の狭窄のある冠状動脈に移植される、外科手術である。
【実施例】
【００９８】
＜実施例１および２の材料と方法＞
＜患者の選択および検体収集＞
２０１０年１月から２０１１年２月の間に、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｃｏｕｎｔｙの４つの地域医療センターでＳＴＥＭＩを有して緊急処置室へ来る患者の血液を、ＣＥＣの特徴づけのために採取した。すべてのＳＴＥＭＩの血液サンプルを、動脈シースを介して、および診断上の冠状動脈造影または介入のためのカテーテルの挿入前に心臓カテーテルの検査室で得た。患者はすべて、２つの近接する胸部の誘導における少なくとも０．２ｍＶまたは近接する四肢の誘導における０．１ｍＶのＳＴ部分上昇を含む、ＳＴＥＭＩの基準を満たした。心筋虚血の陽性マーカー（ＣＫ−ＭＢまたはトロポニン）および閉塞性の冠動脈疾患の血管造影の証拠も必要であった。最初の心筋トロポニンおよびＣＫ−ＭＢ値を得て、９０分間の提示（ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）の間に記録した。続くＣＫ−ＭＢおよびトロポニン値は記録されなかった。
【００９９】
ＣＥＣのレベルおよび形態を、ＳＴＥＭＩの患者から得たものと比較する目的で、健康な対照を、Ｔｈｅ Ｓｃｒｉｐｐｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅでの正常な血液ドナープログラムから採用した。すべての健康な対照は、１８歳と３５歳の間であり、自己報告によって任意の慢性障害がないと考えられた。健康な無作為の年齢が一致したサンプルにおけるＣＥＣの確認のための血液を、静脈穿刺を介して得た。自己報告を介して任意の急性の疾患または症状の存在を否定した、年齢が一致した対照の無作為に選択したサンプルを、研究のＣＥＣ形態の分析の一部に含んだ。喫煙状態、肥満症、心血管障害の家族歴、または急性発熱疾患は、排他的な基準として使用しなかった。非ＳＴ部分上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）の患者と共に開かれた（ｏｐｅｎ）動脈内膜切除手術を最近受けた、既存の血管疾患の個体も、ＣＥＣの形態的特徴づけの唯一の目的のために採用した。ＮＳＴＥＭＩの一群におけるＭＩの基準は、ＭＩと一致する症状、高いレベルの心筋トロポニンとＣＫ−ＭＢによって測定されるような、心筋壊死の血清学的証拠、および閉塞性の冠動脈疾患の血管造影の証拠を含んだ。
【０１００】
事例および対照からのすべての血液を、７２時間までＣＥＣレベルを安定させると知られる軽度の細胞固定液（ｃｅｌｌｕｌａｒ ｆｉｘａｔｉｖｅ）を含有しているチューブに集めた。続いて、サンプルを、室温で維持し、収集の４８時間以内に処理するために配達便を介して中央の研究所に輸送した。治験審査委員会の認可をすべての採用する場（ｒｅｃｒｕｉｔｉｎｇ ｓｉｔｅｓ）から得て、すべての患者から同意書を得た。
【０１０１】
＜ＣＥＣの識別＞
簡潔に述べると、全血中のＣＥＣを、抗ＣＤ１４６抗体が結合した磁気ナノ粒子によって結合し、繰り返しの磁気のインキュベーションおよび自動化した洗浄によって集積した。ＣＤ１４６＋で集積した細胞を、ＣＤ１０５とＣＤ４５に対する蛍光抗体で染色し、磁気的に集積した及び蛍光抗体で標識化した細胞を、ＭａｇＮｅｓｔ（登録商標）のＣｅｌｌ Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ Ｄｅｖｉｃｅに入れた。図１のＡは、ＣｅｌｌＴｒａｃｋｓ Ａｎａｌｙｚｅｒ ＩＩ （ＣＴＡＩＩ）による、サンプルおよび画像の分析中の工程を示す。ＭａｇＮｅｓｔ（登録商標）の装置は、蛍光画像分析用に単層中で磁気で標識化した細胞を方向付けるために、２つの永久磁石間に位置付けした、使い捨てのサンプルカートリッジから成る。ＭａｇＮｅｓｔ（登録商標）を、４色の半自動化の蛍光顕微鏡である、ＣＴＡ ＩＩに入れる。その後、アナライザーは、４つの蛍光色の各々に関する画像を集めるカートリッジ表面全体をスキャンする。これは、各蛍光のチャネルに対して１８０の画像を記録する（１スキャン当たり７２０の画像）。ＣＴＡ ＩＩのソフトウェアは、各フレームを自動的に分析し、それらのＤＡＰＩおよびＣＤ１０５の蛍光に基づいて起こり得る候補ＣＥＣであったフレーム内のこれらの対象を識別する。候補ＣＥＣを、訓練されたオペレーターによるレビューと識別のために一連のサムネイルとして画像ギャラリーに入れる（補足の図２のＡ）。サムネイル画像は、右から左に、未使用の（ＦＩＴＣ）チャネル、ＣＤ４５−ＡＰＣシグナル、ＤＡＰＩ染色された核、ＣＤ１０５−ＰＥ反応性、および最終的にＣＤ１０５−ＰＥ及びＤＡＰＩ染色の上塗りを示す。ＦＩＴＣチャネルは、対象の追加のマーカーを有するＣＥＣ表現型に対して使用され得る。ＣＥＣとして採点されるために、細胞は、核を有し、ＣＤ１０５を表現し、細胞の形態を有し、ＣＤ４５に対して陰性でなければならなかった。補足の図２のＢは、ＣＴＡ ＩＩソフトウェアによって検査員に提示されるような３つの対象の例を示す。最初の２つの対象は、基準を満たし、オペレーターによってＣＥＣとして採点された（チェックされたボックス）。ＣＤ４５陽性であったため、３番目の対象を白血球と判断した（チェックされていないボックス）。ソフトウェアモジュールは、チェックされたボックスを各サンプル内で自動的に作表し、結果を４ｍＬの血液当たりのＣＥＣの数として表わした。
【０１０２】
＜ＣＥＣ形態分析＞
ＣＥＣの画像分析を、カスタマイズしたＭａｔｌａｂプログラムを使用して行った。データ分析を、ＭａｔｌａｂまたはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ｒｅｌｅａｓｅ ４．００）のいずれかを使用して行った。ＣｅｌｌＳｅａｒｃｈ（Ｖｅｒｉｄｅｘ）からの固定したＣＥＣの蛍光強度測定を、以下の４工程のプロセスで実行した：（１）単一のＣＥＣのカラー画像をクロッピングし、それらの個々のチャネル（ＣＤ１０５とＤＡＰＩ）へと分離し、その後、ｔｉｆとして保存する工程。（２）細胞体（ＣＤ１０５）および核（ＤＡＰＩ）を分割する工程。（３）分割した画像の領域を算出する工程。（４）単一細胞および核の領域を算出する工程。標準偏差、σ１およびσ２を有する２つのガウス変換を、各ＣＥＣ画像のＣＤ１０５とＤＡＰＩのチャネルに対して計算した。背景のピクセルを、単一モードの閾値（２８）を使用して取り除き、ＣＥＣの細胞体および核に対応する最終的な対象を、２つのガウス画像の閾値の差として測定した。ガウス変換で使用される一連のσ１とσ２を、目視検査によって最も正確なマスクをもたらすために選択した。各ＣＥＣ画像に対するＣＤ１０５チャネルの領域を、ＣＤ１０５の領域内で包含される核のマスクにおいて確認された核の数で割った。データ分析を、ＭａｔｌａｂまたはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍのいずれかを使用して行った。すべての統計的な比較を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにおいて一対のｔ検定（両側）を使用して行った。
【０１０３】
＜ＣＥＣカウントの統計分析＞
ＳＴＥＭＩの事例が対照と比較してＣＥＣのより高いカウントを示したかどうかを確かめるために、ノンパラメトリックのＢｅｈｒｅｎｓ−Ｆｉｓｈｅｒの問題に対する２つのサンプル試験を使用した。ＣＥＣの数と、ＭＢ、トロポニン、および年齢のレベルとの間の比例関係を測定するために、スピアマンの順位相関を使用した。患者を、観察されたＣＥＣカウントに基づいて、２つの群、ＳＴＥＭＩおよび対照に分類した、１０倍の交差検定でのロジスティク回帰を使用して、数理モデルを構築した。正確に分類された例の数および受信者動作特性（ＲＯＣ）の曲線下の面積を評価するために、Ｗｅｋａのソフトウェアで生じたこのモデルを使用した。図２のＢで示されるＲＯＣ曲線は、すべての利用可能なデータを使用した、ロジスティク回帰モデルに基づき（すなわち、交差検定がない）、Ｒの統計的な計算環境のＲＯＣＲパッケージを使用してもたらされた。ＲＯＣ曲線（ＡＵＣ）下の領域を、Ｒの統計的な計算環境においてＨｍｉｓｃパッケージのｓｏｍｅｒｓ２の機能を使用して計算した。
【０１０４】
＜実施例１：ＣＥＣレベルは、急性心筋梗塞における動脈損傷の症状を示す＞
ＣＥＣを、３つの基準：核に対する陽性染色、ＣＤ−１０５（ＥＣマーカー）に対する陽性染色、およびＣＤ−４５（白血球マーカー）に対する陰性染色、に基づいて明白に識別した（図１）。
【０１０５】
５０の連続するＳＴＥＭＩ患者（８２％が男性）が、ＣＥＣのレベルの確認のために先を見越して登録された。ＳＴＥＭＩ患者における中間のＣＥＣカウントは、１２ＣＥＣ／ｍｌと５１ＣＥＣ／ｍｌ（２．５−４６５のＣＥＣ／ｍｌの範囲）の、それぞれ、高四分位と低四分位を有する１９ＣＥＣ／ｍｌであった（表１、図２）。
【０１０６】
【表１】
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【０１０７】
中間値の年齢は、５８．５歳（３９−８０歳の範囲）であって、中間値の心筋トロポニンおよびＣＫ−ＭＢの値は、それぞれ、５．７ｎｇ／ｍｌおよび２７．９ｎｇ／ｍｌであった。
すべてのＳＴＥＭＩの事例における心筋トロポニンおよびＣＫ−ＭＢの値の四分位および範囲を、表１に示す。とりわけ、ＳＴＥＭＩの事例は、臨床的に許容な正常値（トロポニン＜０．１ｎｇ／ｍｌ；ＣＫ−ＭＢ＜３．０ｎｇ／ｍｌ）より対数比的な平均が高く、ＳＴＥＭＩの事例に対して期待される範囲内で適切なＣＫ−ＭＢおよびトロポニンのレベルを有した。重要なことに、これらの値は、この表現型に典型的に付随する深刻な心筋壊死を浮き彫りにしている。ＣＥＣカウントと初期の心筋内の酵素レベルとの間に相関性は観察されなかった（ρ＝０．０２、ＣＫ−ＭＢ；ρ＝−０．０３、トロポニン）（図３）。
【０１０８】
ＣＥＣの計数のための血液サンプルも、４４の連続する健康な対照から先を見越して得た。健康な対照の中間値の年齢は、３０歳（２２−３４の範囲）であった。ＣＥＣ／ｍＬの中央値は、３．８ＣＥＣ／ｍｌ（０．７５−１６．７５の範囲）であって、高四分位と低四分位の閾値は、それぞれ、２．２５ＣＥＣ／ｍｌおよび５．０６ＣＥＣ／ｍｌであった（表１、図２）。重要なことに、登録された最初の２４の健康な対照を、２か月でＣＥＣ数の繰り返しの測定のために戻した（図４）。とりわけ、ＣＥＣ／ｍｌの中間数は、第１と第２の訪問の間で変わらず、中間値は、第１と第２の訪問の間で、それぞれ、３．４ＣＥＣ／ｍｌおよび３．２５ＣＥＣ／ｍｌであった（Ｐ＝０．５）。これらのデータは、ＣＥＣレベルが、健康な個体において時間とともに安定したままである傾向があることを示唆する。さらに、健康な対照におけるＣＥＣカウントおよび年齢と、研究のＣＥＣ形態の一部のために含まれた、無作為の年齢が一致した一群のサンプルとの間に相関性はなかった（ρ＝−０．１２）（図５）。
【０１０９】
ＣＥＣカウントが、健康な対照と比較したときに、ＳＴＥＭＩの一群で劇的に高まることを、我々は観察した（図２（Ｐ＝１．１ｘ１０−１０））。ロジスティク回帰に基づいて分類するもの（ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒ）に関係する受信者動作特性（ＲＯＣ）の曲線は、０．９５のＲＯＣ曲線下の領域を実証した（１のＡＵＣは完全な分類を示し、０．５に等しいＡＵＣは無作為な選抜を示すであろう）（図２のＢ）。この分類するものは、ＭＩの事例または１０倍の交差検定での健康な対照として、すべての例の８６（９１．５％）（すなわち、ＳＴＥＭＩを有する５０の患者および４４の健康な対照に対するＣＥＣ／ｍｌカウント）を正確に分類することができた。例示目的で、１６．５ＣＥＣ／ｍｌの値は、６０％の感受性を有したが、ＳＴＥＭＩの診断において印象的な９８％の特異性を有した（図２のＢ）。あるいは、９ＣＥＣ／ｍｌの分類閾値では、関係する感受性は、９０％に等しく、一方で特異性はわずかに９３％まで下がった。要約すると、ＣＥＣカウントは、急性心筋梗塞の個体において、独立しており、動脈損傷の予測的バイオマーカーであるように見える。
【０１１０】
＜実施例２：ＭＩ患者からのＣＥＣは、異常に大きく、変形しており、しばしば、複数の核とともに現われる＞
８のＳＴＥＭＩの事例および１０の健康な対照からの単離したＣＥＣの蛍光画像の詳細な分析を行った。低範囲、中範囲、および高範囲のＣＥＣ数を有する、ＳＴＥＭＩの事例および健康な対照を、分析のために選択した（表２）。
【０１１１】
【表２】
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【０１１２】
さらなる対照の群も、研究のこの部分のために含まれ、その結果、ＳＴＥＭＩ ＣＥＣの形態的様相に由来する任意の結論が、現実の臨床的な群の文脈において出された。具体的に、我々のＳＴＥＭＩの患者群と年齢が一致した１０の連続する群の対照を選択した。さらに、開かれた血管手順を最近受けた、文書で証明された末梢動脈疾患を有する２人の患者を、血管疾患の対照群として含んだ。非ＳＴ部分上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）の２人の患者も、２つのＭＩ表現型（ＳＴＥＭＩ対ＮＳＴＥＭＩ）間で識別され得るＣＥＣ形態の任意の潜在的な差を評価するために含んだ。
【０１１３】
個々の蛍光のＣＥＣ画像の目視検査は、ＭＩ患者から単離したＣＥＣの形態が、対照からのＣＥＣの形と著しく異なることを明らかにした。図６は、代表的なＳＴＥＭＩ患者（ＣＥＣ０３０４０）から単離したＣＥＣと比較した、健康な対照と、年齢が一致した対照から単離した個々のＣＥＣを示す。対照からのＣＥＣは、比較的小さく、形状が細長い傾向があり、１つの細胞体に関係する２つの核を場合によって有し、これは、２つの付着した細胞のクラスター、または２つの核を有する１つの細胞を表わし得る（図６のＡ）。対照的に、ＳＴＥＭＩ患者からのＣＥＣは、様相がより不均質であり、多くの細胞は、明らかに大きく、ひどく変形しているが、一方で他の細胞はより小さい（図６のＢ）。ＳＴＥＭＩ患者からのＣＥＣの核も、対照個体からのＣＥＣの核と比較して、より大きく、異常な形状である傾向がある（図６のＢおよび図７のＤを参照）。このＳＴＥＭＩ患者からの最大のＣＥＣの画像の多くは、しばしば、一続きのＣＤ１０５染色された細胞体領域に関係するいくつかの核を含み、それ故、６つまでの核を有する多核のクラスターとして現われる（図６のＢ）（以下の図８も参照）。細胞間の境界がこれらの蛍光画像で明らかには区別されないため、これらが多細胞のクラスター、あるいは多核の個々の細胞であるかどうかを厳密に決定することは不可能である。
【０１１４】
ＣＥＣの個々の画像のための細胞領域および核領域を測定した（図５）。５０−１００の無作為に選択された画像におけるＣＥＣの形態を、各ＭＩ患者に対して分析し、対照患者からのすべてのＣＥＣ画像と比較した。これは、ＭＩ患者からのＣＥＣの平均の細胞領域が、健康な対照又は年齢が一致した対照のいずれかからのＣＥＣの平均の〜１００ｍｍ２の細胞領域よりも２．５倍大きな、〜２７０ｍｍ２であることを明らかにした（Ｐ＜０．０００１）（図７のＡ）。同様に、ＭＩ患者からのＣＥＣ核の平均領域は、健康な対照又は年齢が一致した対照からのＣＥＣ核に対する３０乃至４０ｍｍ２の領域よりも著しく大きい、〜６５ｍｍ２であった（Ｐ＜０．０００１）（図７のＢ）。対照では心臓の関連しない疾病に関する血管手術を受ける患者からのＣＥＣに対する形態的パラメーターは、対照とは著しく異なってはいなかった（図７のＡおよびＢ）。最終的に、細胞／核領域の比率は、対照群のいずれかからのＣＥＣと比較して、ＭＩ患者からのＣＥＣに関して〜１．５倍大きく、Ｐ＜０．０００１で有意水準であった。分析された対照およびＭＩ患者からの単一細胞のＣＥＣ画像に対する細胞および核の大きさの変異の範囲の代表的な例は、図７のＤで示される。
【０１１５】
年齢が一致した対照からのＣＥＣの細胞領域および核領域が、健康で、より若い対照からのＣＥＣの領域より大きい傾向があった一方で（図７のＡおよびＢ）、細胞／核領域の比率は、これらの２つの対照群間で異なってはいなかった（図７のＤ）。したがって、細胞領域および核領域は、健康な対照と比較して、年齢が一致した対照からのＣＥＣに対して比例して増加し、一方で、細胞領域は、ＭＩ患者からのＣＥＣに関する核領域に対して不相応に増加した。それ故、増加した細胞／核領域の比率は、ＭＩ患者に特異的な形態的異常であり、なぜなら、それが、健康な対照と比較して、年齢が一致した又は血管の対照患者のいずれにおいても観察されなかったからである。細胞領域および核領域の他に、細胞／核領域の比率のために分析されたＭＩの群を構成する、ＳＴＥＭＩとＮＳＴＥＭＩ ＣＥＣとの比較は、２つの群の間での有意差を示さなかった（図９）。
【０１１６】
ＭＩ患者および対照からのＣＥＣに対する、１つの核を有する単一細胞、または２つ以上の核を有する細胞として存在するＣＥＣのパーセントを測定した。（ＭＩ患者からの）複数の核を有する個々のＣＥＣ画像の例を、図８のＡで例証する。定量分析は、平均で、ＭＩ患者からのＣＥＣ画像の〜２５％が、２つ以上の核を包含することを明らかにし、これは、健康な対照又は年齢が一致した対照からのＣＥＣ画像の５−１０％と比較して、１画像当たりの核の数において数倍の増加である（Ｐ＝０．０００８）（図９のＢ）。複数の核を有するＣＥＣ画像のパーセントも、健康な対照または血管の群に対して年齢が一致した対照群において増加するように見えたが、この差は、これらの２つの群（Ｐ＝０．２２）（図９のＢ）におけるこのパラメーターの多様性が原因の統計的な有意性ではなかった。２乃至１０までの核を含むＣＥＣ画像の分布は、ＭＩ患者が、３つを超える核／画像を包含している唯一の群であることを実証する。対照的に、健康な患者、年齢が一致した患者、または血管の患者からのＣＥＣ画像の大部分は、２つおよび４つのＣＥＣ画像が、それぞれ、健康な対照及び年齢が一致した対照群から、３つの核を有したことを除いて、１つまたは２つの核のみを含んだ（図９のＣ）。対照およびＭＩ患者の両方におけるＣＥＣ画像の１０−１５％は、２つの核を包含し、これは、個々の二核の細胞（成熟した内皮の特性）を表わし得る。しかしながら、複数の（＞２）核を有するＭＩ患者からの個々のＣＥＣ画像の検査は、多くの場合、多小葉の形態を明らかにし、これは、これらの画像の少なくともいくつかが、互いに結合したいくつかのＣＥＣの群によるものであることを示唆している。以前の研究は、複数の核を示すＭＩ患者からのＣＥＣの画像が、多細胞のクラスターを構成し得ることも示した。
【０１１７】
＜実施例３：定期健診中の個体の分析＞
個体（３５歳）は、定期健診を受けている。個体は、心血管障害の徴候を示していない。血液サンプルを得る。個体の血液中のＣＥＣの濃度は、標準濃度より２００％高い。ＣＥＣを検査する。平均の細胞領域は、標準的な細胞領域よりも４０％大きい。平均の核領域は、標準的な核領域よりも４０％大きい。さらに、ＣＥＣのほとんどは異常な形状である。最終的に、ＣＥＣの４５％は多核である。個体が心血管障害を持つことを示す（ｆｌａｇｇｅｄ）。さらなる試験が行われ、個体は、アテローム性動脈硬化症と診断される。
【０１１８】
＜実施例４：不安定狭心症を示す個体の分析＞
個体（６５歳）は、胸痛を患う。個体は、胸痛が、５週間前に始まり、休んでいるか眠っているときに生じることを示す。個体は、胸痛が、なくなるまで３０分以上の間続く傾向があることをさらに示す。血液サンプルが得られる。個体の血液中のＣＥＣの濃度は、標準濃度より３５０％高い。ＣＥＣが検査される。平均の細胞領域は、標準的な細胞領域よりも５０％大きい。平均の核領域は、標準的な核領域よりも３０％大きい。さらに、ＣＥＣのほとんどは、異常な形状である。最終的に、ＣＥＣの４０％は多核である。個体が心血管障害を持つことを示す。さらなる試験が行われ、個体は、アテローム性動脈硬化症と診断され、心筋梗塞の高いリスクがある。個体は手術を受け、血管形成術が行われる。
【０１１９】
＜実施例５：狭心症を有する個体の分析＞
個体（４０歳）は、胸痛を患っている。個体は、胸痛が、１か月前に始まり、運動中に生じることを示す。個体は、胸痛が、運動の終了時に消える傾向があることをさらに示す。血液サンプルが得られる。個体の血液中のＣＥＣの濃度は、標準濃度より２００％高い。ＣＥＣが検査される。平均の細胞領域は、標準的な細胞領域より３０％大きい。平均の核領域は標準的な核領域より２０％大きい。さらに、ＣＥＣのほとんどは、異常な形状である。最終的に、ＣＥＣの１０％は多核である。個体が心血管障害を持つことを示す。さらなる試験が行われ、個体は、軽度のアテローム性動脈硬化症と診断される。ＣＥＣ分析に基づいて、個体は、スタチンの投与および低脂肪食に十分に反応すると予想される。スタチンを処方する。個体は、１か月後のフォローアップのために戻り、アテローム動脈硬化性プラークが減少する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年5月30日(2014.5.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体の循環内皮細胞を分析するためのシステムであって、該システムは、
（ａ）循環内皮細胞（ＣＥＣ）及び循環非内皮細胞を含む、個体から得られた血液サンプルから単離した、ＣＥＣの一群、及び
（ｂ）ＣＥＣの一群中の単一のＣＥＣの形態的特徴を視覚化するために十分な倍率を有している顕微鏡、を含み、
ここで前記形態的特徴は、細胞領域、核領域、核領域に対する細胞領域の比、細胞形状、核形状、核数、又はこれらの組み合わせであるシステム。
【請求項２】
ＣＥＣの一群又はＣＥＣの一群中の単一のＣＥＣの拡大された画像を取り込む及び保存する電子メモリをさらに含むことを特徴とする、請求項１記載のシステム。
【請求項３】
コンピュータネットワークに随意に接続された、コンピュータ処理デバイスをさらに含むことを特徴とする、請求項１記載のシステム。
【請求項４】
前記形態的特徴を分析し、前記形態的特徴の分析を作り出すソフトウェアモジュールをさらに含み、該ソフトウェアモジュールは、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されることを特徴とする、請求項３記載のシステム。
【請求項５】
循環内皮細胞（ＣＥＣ）の一群の前記形態的特徴を標準または対照と比較するソフトウェアモジュールをさらに含み、該ソフトウェアモジュールは、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されることを特徴とする、請求項３記載のシステム。
【請求項６】
前記血液サンプルから単離した循環内皮細胞の一群の濃度を決定するソフトウェアモジュールをさらに含み、該ソフトウェアモジュールは、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されることを特徴とする、請求項３記載のシステム。
【請求項７】
循環内皮細胞の一群の前記濃度を標準または対照の濃度と比較するソフトウェアモジュールをさらに含み、該ソフトウェアモジュールは、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されることを特徴とする、請求項６記載のシステム。
【請求項８】
前記血液サンプルから循環内皮細胞の一群を単離する機械をさらに含むことを特徴とする、請求項１乃至７のいずれかに記載のシステム。
【請求項９】
循環内皮細胞に特異的に結合するラベル、循環内皮細胞に結合しないラベル又はその組み合わせをさらに含むことを特徴とする、請求項１乃至８のいずれかに記載のシステム。
【請求項１０】
ＣＤ１４６に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０５に特異的に結合するラベル、ＣＤ４５に特異的に結合するラベル、ＣＤ３４に特異的に結合するラベル、ＣＤ３１に特異的に結合するラベル、ＶＥＧＦ２に特異的に結合するラベル、ＣＤ１４４に特異的に結合するラベル、ＣＤ１０６に特異的に結合するラベル又はその組み合わせをさらに含むことを特徴とする、請求項１乃至９のいずれかに記載のシステム。
【請求項１１】
抗−ＣＤ１４６抗体、抗−ＣＤ１０５抗体、抗−ＣＤ４５抗体、抗−ＣＤ３４抗体、抗−ＣＤ３１抗体、抗−ＶＥＧＦ２抗体、抗−ＣＤ１４４抗体、抗−ＣＤ１０６抗体又はその組み合わせをさらに含むことを特徴とする、請求項１乃至１０のいずれかに記載のシステム。
【請求項１２】
前記抗体が標識化されていることを特徴とする、請求項１１記載のシステム。
【請求項１３】
前記抗体が蛍光部分又は磁気部分により標識化されていることを特徴とする、請求項１１記載のシステム。
【請求項１４】
個体又は個体を治療する医療専門家に、ＣＥＣの一群の前記形態的特徴の分析を送信するソフトウェアモジュールをさらに含み、該ソフトウェアモジュールは、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されることを特徴とする、請求項３記載のシステム。
【請求項１５】
個体又は個体を治療する医療専門家に、ＣＥＣの一群の前記形態的特徴の分析に基づく心血管障害の診断または予後を送信するソフトウェアモジュールをさらに含み、該ソフトウェアモジュールは、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されることを特徴とする、請求項１乃至１４のいずれかに記載のシステム。
【請求項１６】
前記心血管障害が、プラーク断裂、プラーク浸食、心臓の虚血、心臓に対する再かん流傷害、アテローム性動脈硬化またはその組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項１５記載のシステム。
【請求項１７】
前記心血管障害が、急性冠症候群であることを特徴とする、請求項１５記載のシステム。
【請求項１８】
前記心血管障害が、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）、非ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）、不安定狭心症またはその組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項１５記載のシステム。
【請求項１９】
前記心血管障害が虚血発作であることを特徴とする、請求項１５記載のシステム。
【請求項２０】
前記心血管障害がアテローム性動脈硬化であることを特徴とする、請求項１５記載のシステム。
【国際調査報告】
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