(57)【要約】  本発明は、新規ピリミジン誘導体およびその医薬組成物、およびかかる化合物の製造方法を提供する。例えば、本発明のピリミジン誘導体は、未分化リンパ腫キナーゼ(ＡＬＫ)活性、ｃ−ｒｏｓ癌原遺伝子(ＲＯＳ)、インシュリン様増殖因子(ＩＧＦ−１Ｒ)、および／またはインスリン受容体(ＩｎｓＲ)またはそれらの組合せの阻害ｈに応答する状態の処置、軽減または予防に使用し得る。
2011516555.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(１)の化合物または(２)：
【化１】
2011516555.tif 000150
〔式中、
Ｒ１およびＲ２は独立してＨ、Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ３はハロ、Ｃ１−６アルキル、またはハロ置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ４はＨであるか；
あるいは、Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子と一体となってＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含む、所望により１〜２個のＲ１０基で置換されていてよい、５−６員環を形成してよく、そしてＲ１０はハロ、所望によりフェニルまたはＮＲ２で置換されていてよいＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニルであり；
Ｒ５、Ｒ６およびＲ８は独立してＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであり、この各々は所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基；ハロ、ニトロ、シアノ、ＣＲ(ＯＲ１７)Ｒ１７、ＯＲ１７、ＮＲ(Ｒ１７)、ＣＲ(Ｒ１７)ＮＲＲ１７、(ＣＲ２)ｑＹ、Ｃ(Ｏ)Ｏ０−１Ｒ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＣＲＲ１７−ＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳＲ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳ(Ｏ)１−２Ｒ１８、Ｓ(Ｏ)０−２Ｒ１８、(ＣＲ２)１−６ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、(ＣＲ２)１−６ＮＲ(ＣＲ２)ｑＣ(Ｏ)Ｒ１８、Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、またはＳ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７で置換されていてよく；ここで、Ｒ８は、縮合環の任意の位置に存在してよく；
Ｒ７はＳ(Ｏ)０−２Ｒ１９、Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ２０またはＣ(Ｏ)ＮＲ(Ｒ２０)であり；ここで、Ｒ１９およびＲ２０は独立してＣ１−６アルキル、ハロ置換Ｃ１−６アルキルまたはＣ３−７シクロアルキルであるか；またはＲ２０はＨであり；
各Ｒ９は独立して−Ｌ−ＣＲ(ＯＲ１７)−ＣｔＦ(２ｔ＋１)(式中、ｔは１−３である)；−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−ＣＲ(Ｒ１７)−ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−ＮＲ−(ＣＲ２)ｐ−ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−(ＣＲ２)ｑ−ＮＲ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ１８、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳ(Ｏ)１−２Ｒ１８、(ＣＲ２)ｐＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７または(ＣＲ２)ｐＮＲ−Ｌ−Ｃ(Ｏ)Ｒ１８、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２Ｒ１８、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７または式(ａ)、(ｂ)、(ｃ)または(ｄ)：
【化２】
2011516555.tif 000151
から選択される基であり；
ここで、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５およびＲ１６は独立してＨ、またはＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルから選択され、この各々は所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてよく；またはＲ１１およびＲ１２、Ｒ１２およびＲ１５、Ｒ１５およびＲ１６、Ｒ１３およびＲ１４、またはＲ１３およびＲ１５は、それらが結合している炭素および／または窒素原子と一体となって、所望によりＣ(Ｏ)、Ｎ、ＯおよびＳ(Ｏ)０−２から選択される３個までの原子または基を含んでよい３−７員の飽和、不飽和または部分的不飽和環を形成してよく；
Ｌは(ＣＲ２)１−４または結合であり；
Ｒ１７およびＲ１８は独立してＣ１−６アルキル、ハロ置換Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであるか；またはＲ１７はＨであり；
ＹはＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリール；または５−１０員ヘテロアリールまたは４−１０員ヘテロ環式環であり；この各々は所望により１−３個のＲ６基で置換されていてよく；
各ＲはＨまたはＣ１−６アルキルであり；
ｐは２−４であり；そして
ｑは０−４である。〕
の化合物、またはその生理学的に許容される塩。
【請求項２】
式(２Ａ)：
【化３】
2011516555.tif 000152
〔式中、
Ｒ３はハロであり；
Ｒ７はＳ(Ｏ)０−２Ｒ１９であり；
Ｒ８はメトキシ、エトキシまたはイソプロポキシであり；
Ｒ９は−Ｌ−ＣＲ(ＯＲ１７)−ＣｔＦ(２ｔ＋１)(式中、ｔは１−３である)；−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２Ｒ１８、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７または式(ａ)、(ｂ)、(ｃ)または(ｄ)：
【化４】
2011516555.tif 000153
から選択される基であり；
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｌおよびｐは請求項１で定義した通りである。〕
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式(３)：
【化５】
2011516555.tif 000154
〔式中、
Ｒ３はハロであり；
あるいは、Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子と一体となって１−３個のＮヘテロ原子を含む、所望により１−２個のＲ１０基で置換されていてよい５−６員環を形成してよく；
Ｒ５ａおよびＲ５ｂは独立してハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルコキシであり；
Ｒ７はＳ(Ｏ)０−２Ｒ１９；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１９は請求項１で定義した通りである。〕
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ５ａがメトキシまたはイソプロポキシであり；
Ｒ５ｂがまたはメチルであり；
Ｒ９が−Ｌ−ＣＲ(ＯＲ１７)−ＣｔＦ(２ｔ＋１)(式中、ｔは１−３である)；−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２Ｒ１８、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７または式(ａ)、(ｂ)、(ｃ)または(ｄ)：
【化６】
2011516555.tif 000155
から選択される基であり；
ここで、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｌおよびｐは請求項１で定義した通りである、
請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
式(３Ａ)、(３Ｂ)、(３Ｃ)または(３Ｄ)：
【化７】
2011516555.tif 000156
〔式中、
Ｒ５ａはメトキシまたはイソプロポキシであり；
Ｒ５ｂはメチルであり；
Ｒ１０ｂ、Ｒ１０ｅ、Ｒ１０ｆおよびＲ１０ｈは独立してＨまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｃ、Ｒ１０ｄおよびＲ７ｇは独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、ＮＲ２、または所望により置換されていてよいフェニルであり；そして
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ７、Ｒ９およびＲは請求項１で定義した通りである。〕
の化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ９が−Ｌ−ＣＲ(ＯＲ１７)−ＣｔＦ(２ｔ＋１)(式中、ｔは１−３である)；−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２Ｒ１８、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７または式(ａ)、(ｂ)、(ｃ)または(ｄ)：
【化８】
2011516555.tif 000157
から選択される基であり；
ここで、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｌおよびｐは請求項１で定義した通りであり；そして
Ｒ１７およびＲ１８は独立してＣ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであるか；またはＲ１７がＨである、
請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１およびＲ２がＨである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
次の群から選択される、請求項１に記載の化合物：
【表１】
2011516555.tif 000158
【表２】
2011516555.tif 000159
【表３】
2011516555.tif 000160
【表４】
2011516555.tif 000161
【表５】
2011516555.tif 000162
【表６】
2011516555.tif 000163
【表７】
2011516555.tif 000164
【表８】
2011516555.tif 000165
【請求項９】
式(４)または(５)：
【化９】
2011516555.tif 000166
〔式中、
ＺはＮＲ９ａまたはＯであり；
Ｒ１およびＲ２は独立してＨ、Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子と一体となって次のものから選択される環を形成し：
【化１０】
2011516555.tif 000167
Ｒ５ａおよびＲ５ｂは独立してハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルコキシであり；
Ｒ７はＳ(Ｏ)０−２Ｒ１９、Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ２０またはＣ(Ｏ)ＮＲ(Ｒ２０)であり；ここで、Ｒ１９およびＲ２０は独立してＣ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであるか；またはＲ２０はＨであり；
各Ｒ９ａは独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニル；−(ＣＲ２)ｐ−ＯＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ１７、−Ｃ(Ｏ)Ｏ−Ｒ１７または−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−ＮＲＲ１７であり；ここで、ＲおよびＲ１７は、ＮＲＲ１７のＮと一体となって所望によりＯまたはＳを含んでよい５−６員環を形成してよく；
Ｌは(ＣＲ２)１−４または結合であり；
Ｒ１７およびＲ１８は独立してベンジル、所望によりハロで置換されていてよいＣ１−６アルキル、または所望によりＣ１−６アルキルまたはハロで置換されていてよいＣ３−７シクロアルキルであるか；またはＲ１７はＨであり；
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２４、Ｒ２７およびＲ２９は独立してＨまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２３、Ｒ２５、Ｒ２６およびＲ２８は独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、ＮＲ２またはハロであり；
各ＲはＨまたはＣ１−６アルキルであり；
ｐは２−４である；
ただし、Ｒ２２およびＲ２３は両方ともＨではなく；Ｒ２４、Ｒ２５およびＲ２６は全てＨではなく；そしてＲ２７およびＲ２８は両方ともＨではない。〕
の化合物、またはその生理学的に許容される塩。
【請求項１０】
式(４)の化合物であり、そして次のものから成る群から選択される、請求項９に記載の化合物：
【表９】
2011516555.tif 000168
【表１０】
2011516555.tif 000169
【表１１】
2011516555.tif 000170
【表１２】
2011516555.tif 000171
【表１３】
2011516555.tif 000172
【表１４】
2011516555.tif 000173
【請求項１１】
化合物が式(５)であり、そしてＲ９ａがＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１２】
化合物が次のものから成る群から選択される、請求項１１に記載の化合物：
【表１５】
2011516555.tif 000174
【請求項１３】
治療的有効量の請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物および生理学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項１４】
Ｒｏｓ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩｎｓＲおよび未分化リンパ腫キナーゼから選択されるキナーゼを細胞中で阻害する方法であって、該細胞と有効量の請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬組成物を接触させることを含む、方法。
【請求項１５】
自己免疫性疾患、移植疾患、感染性疾患または細胞増殖性障害である、Ｒｏｓ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩｎｓＲおよび未分化リンパ腫キナーゼから選択されるキナーゼが仲介する状態の処置に、所望により第二の治療剤と組み合わせて使用するための医薬の製造のための、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物、またはその医薬組成物の使用。
【請求項１６】
多発性骨髄腫、神経芽腫、リンパ腫、白血病、黒色腫、肉腫、骨肉腫、滑膜肉腫、ユーイング肉腫、肝細胞腫、消化器間質腫瘍または乳房の固形腫瘍、腎臓、前立腺、結腸直腸、甲状腺、卵巣、膵臓、肺、子宮、呼吸器、脳、消化管、尿路、眼、肝臓、皮膚、頭頚部、甲状腺または副甲状腺である細胞増殖性障害の処置に、所望により第二の治療剤と組み合わせて使用するための医薬の製造のための、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物、またはその医薬組成物の使用。
【請求項１７】
第二の治療剤が化学療法剤である、請求項１５に記載の使用。
【請求項１８】
式(６)
【化１１】
2011516555.tif 000175
〔式中、
Ｗは１−３個の窒素原子を含む５−６員環であり；
Ｒ５は所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニル；ハロ、ニトロ、シアノ、ＣＲ(ＯＲ１７)Ｒ１７、ＯＲ１７、ＮＲ(Ｒ１７)、ＣＲ(Ｒ１７)ＮＲＲ１７、(ＣＲ２)ｑＹ、Ｃ(Ｏ)Ｏ０−１Ｒ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＣＲＲ１７−ＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳＲ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳ(Ｏ)１−２Ｒ１８、Ｓ(Ｏ)０−２Ｒ１８、(ＣＲ２)１−６ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、(ＣＲ２)１−６ＮＲ(ＣＲ２)ｑＣ(Ｏ)Ｒ１８、Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、またはＳ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７であり；
Ｒ１７およびＲ１８は独立して(ＣＲ２)ｑＹまたはＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであり、この各々は所望によりハロ、アミノ、アミド、ヒドロキシル、アルコキシ、シアノ、カルボキシルまたはＹで置換されていてよく；またはＲ１７はＨであり；
Ｒ１９はＣ１−６アルキルであり；
ＹはＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリール；または５−１０員ヘテロアリールまたは４−１０員ヘテロ環式環であり；この各々は所望により１−３個のＲ５基で置換されていてよく；
各ＲはＨまたはＣ１−６アルキルであり；
ｐは２−４であり；
ｑは０−４である。〕
の化合物の合成方法であって：
ａ)  式(６ａ)
【化１２】
2011516555.tif 000176
の化合物と式(６ｂ)
【化１３】
2011516555.tif 000177
の化合物またはその薬学的に許容される塩を、式(６ｃ)
【化１４】
2011516555.tif 000178
の中間体を形成させるのに十分な条件下で接触させ；
ｂ)  該式(６ｃ)の中間体と酸化剤を接触させて、式(６ｄ)；
【化１５】
2011516555.tif 000179
〔式中、Ｘ１およびＸ２は脱離基である。〕
の中間体を形成させ；そして
ｃ)  該式(６ｄ)の中間体と式(６ｅ)
【化１６】
2011516555.tif 000180
またはその薬学的に許容される塩を、式(６)の化合物またはその薬学的に許容される塩を形成させるのに十分な条件下で接触させることを含む、方法。
【請求項１９】
式(６)の化合物が式(６ｆ)、(６ｇ)、(６ｈ)または(６ｉ)：
【化１７】
2011516555.tif 000181
〔式中、
Ｒ５ａはメトキシまたはイソプロポキシであり；
Ｒ５ｂはメチルであり；
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ、Ｒ１０ｃ、Ｒ１０ｄ、Ｒ１０ｅ、Ｒ１０ｆ、Ｒ１０ｇおよびＲ１０ｈは独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、ＮＨ２、ハロ、または所望により置換されていてよいフェニルであり；そして
各Ｒ１９は請求項１８に定義した通りである。〕
の化合物である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
式(６ｅ)の化合物を、
ｉ)  式(７)
【化１８】
2011516555.tif 000182
の化合物とアルキル化剤を反応させて、式(８)
【化１９】
2011516555.tif 000183
の中間体を形成させ；
ii)  該式(８)を還元して式(６ｅ)の化合物を形成させ；
ここで、Ｒ５およびＲ１９は請求項１８で定義した通りである、
請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
アルキル化剤がｐ−トルエンスルホン酸メチルである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
式(８)の中間体を水素化により還元する、請求項２０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００８年４月７日出願の米国仮特許出願番号６１／０４３,１１１、および２００８年１１月１９日出願の米国仮特許出願番号６１／１１６,０２３の利益を請求し、この各々を、その全体を引用して本明細書に包含させる。
【０００２】
技術分野
本発明は、タンパク質キナーゼ阻害剤、より具体的に新規ピリミジン誘導体およびその医薬組成物、および医薬としてのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景技術
癌は、組織の異常増殖に起因する疾患である。ある種の癌は局所組織に侵入し、また離れた臓器に転移する能力を有する。この疾患は広範な臓器、組織および細胞型で発症し得る。それ故に、用語“癌”は多様な疾患群を意味する。
【０００４】
受容体チロシンキナーゼ類のインスリン受容体スーパーファミリーのメンバーである未分化リンパ腫キナーゼ(ＡＬＫ)は、造血および非造血腫瘍の腫瘍形成に関与している。完全長ＡＬＫ受容体タンパク質の異常発現が神経芽腫および神経膠芽腫で報告されている；そしてＡＬＫ融合タンパク質が未分化大細胞リンパ腫で形成されている。ＡＬＫ融合タンパク質の研究から、ＡＬＫ陽性悪性腫瘍患者に対する新規な治療的処置の可能性も広がっている。(Pulford et al., Cell. Mol. Life Sci. 61: 2939-2953 (2004))。
【０００５】
インシュリン様増殖因子(ＩＧＦ−１)シグナリングは、優勢な因子としてのＩＧＦ−１受容体(ＩＧＦ−１Ｒ)と共に癌と密接に関わっている。ＩＧＲ−１Ｒは腫瘍形質転換および悪性細胞生存に重要であるが、正常な細胞増殖には僅かに関与しているだけである。ＩＧＦ−１Ｒのターゲティングは、癌治療の将来有望な選択肢であることが示唆されている。(Larsson et al., Br. J. Cancer 92: 2097-2101 (2005))。
【０００６】
Ｖ−ｒｏｓトリＵＲ２肉腫ウイルス癌遺伝子ホモログ１であるＲＯＳ１(ＲＯＳとしても既知)は多様な腫瘍細胞株で高度に発現する。ＲＯＳ１は現在オーファン受容体チロシンキナーゼであり、そのキナーゼドメインは大部分ＡＬＫに関連する。ＲＯＳ１は多様な腫瘍細胞株に高度に発現する。遺伝子異常が原因のＲＯＳ１融合タンパク質は肺癌およびある種の神経膠芽腫細胞株で見つかっている(Rikova K. et al Cell 131: 1190 (2007); Sharma S. Et al Oncogene Res. 5: 91 (1989))。ＲＯＳ１の異常発現が神経膠腫で報告されている(Watkins D. et al Cancer Genet Cytogenet. 1994 72: 130 (1994))。ＲＯＳ１キナーゼ阻害剤は、ＲＯＳ１融合または異常発現または活性化により誘導される腫瘍の増殖を阻止できる可能性がある。
【０００７】
この技術分野での進歩にもかかわらず、癌処置および抗癌化合物に対する要求は未だ充たされていない。
【発明の概要】
【０００８】
発明の開示
本発明は、新規ピリミジン誘導体およびその医薬組成物、および医薬としてのそれらの使用に関する。
【０００９】
一局面において、本発明は式(１)または(２)：
【化１】
2011516555.tif 000003
〔式中、
Ｒ１およびＲ２は独立してＨ、Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ３はハロ、Ｃ１−６アルキル、またはハロ置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ４はＨであるか；
または、Ｒ３およびＲ４はそれらが結合している炭素原子と一体となってＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含む、所望により１〜２個のＲ１０基で置換されていてよい、５−６員環を形成してよく、そしてＲ１０はハロ、所望によりフェニルまたはＮＲ２で置換されていてよいＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニルであり；
Ｒ５、Ｒ６およびＲ８は独立して所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニル；ハロ、ニトロ、シアノ、ＣＲ(ＯＲ１７)Ｒ１７、ＯＲ１７、ＮＲ(Ｒ１７)、ＣＲ(Ｒ１７)ＮＲＲ１７、(ＣＲ２)ｑＹ、Ｃ(Ｏ)Ｏ０−１Ｒ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＣＲＲ１７−ＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳＲ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳ(Ｏ)１−２Ｒ１８、Ｓ(Ｏ)０−２Ｒ１８、(ＣＲ２)１−６ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、(ＣＲ２)１−６ＮＲ(ＣＲ２)ｑＣ(Ｏ)Ｒ１８、Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、またはＳ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７であり；ここで、Ｒ８は、縮合環の任意の位置に存在してよく；
Ｒ７はＳ(Ｏ)０−２Ｒ１９、Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ２０またはＣ(Ｏ)ＮＲ(Ｒ２０)であり；ここで、Ｒ１９およびＲ２０は独立してＣ１−６アルキル、ハロ置換Ｃ１−６アルキルまたはＣ３−７シクロアルキルであるか；またはＲ２０はＨであり；
各Ｒ９は独立して−Ｌ−ＣＲ(ＯＲ１７)−ＣｔＦ(２ｔ＋１)(式中、ｔは１−３である)；−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−ＣＲ(Ｒ１７)−ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−ＮＲ−(ＣＲ２)ｐ−ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−(ＣＲ２)ｑ−ＮＲ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ１８、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳ(Ｏ)１−２Ｒ１８、(ＣＲ２)ｐＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７または(ＣＲ２)ｐＮＲ−Ｌ−Ｃ(Ｏ)Ｒ１８、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２Ｒ１８、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７または式(ａ)、(ｂ)、(ｃ)または(ｄ)：
【化２】
2011516555.tif 000004
から選択される基であり；
ここで、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５およびＲ１６は独立してＨ、またはＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルから選択され、この各々は所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてよく；またはＲ１１とＲ１２、Ｒ１２とＲ１５、Ｒ１５とＲ１６、Ｒ１３とＲ１４、またはＲ１３とＲ１５は、それらが結合している炭素および／または窒素原子と一体となって、所望によりＣ(Ｏ)、Ｎ、ＯおよびＳ(Ｏ)０−２から選択される３個までの原子または基を含んでよい３−７員の飽和、不飽和または部分的不飽和環を形成してよく；
Ｌは(ＣＲ２)１−４または結合であり；
Ｒ１７およびＲ１８は独立してＣ１−６アルキル、ハロ置換Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであるか；またはＲ１７でありＨ；
ＹはＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリール；または５−１０員ヘテロアリールまたは４−１０員ヘテロ環式環であり；この各々は所望により１−３個のＲ６基で置換されていてよく；
各ＲはＨまたはＣ１−６アルキルであり；
ｐは２−４であり；そして
ｑは０−４である。〕
の化合物、またはその生理学的に許容される塩を提供する。
【００１０】
一つの態様において、本発明は、式(２Ａ)：
【化３】
2011516555.tif 000005
〔式中、
Ｒ３はハロであり；
Ｒ７はＳ(Ｏ)０−２Ｒ１９であり；
Ｒ８はメトキシ、エトキシまたはイソプロポキシであり；
Ｒ９は−Ｌ−ＣＲ(ＯＲ１７)−ＣｔＦ(２ｔ＋１)(式中、ｔは１−３である)；−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２Ｒ１８、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７または式(ａ)、(ｂ)、(ｃ)または(ｄ)：
【化４】
2011516555.tif 000006
から選択される基であり；
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｌおよびｐは式(１)または(２)で定義した通りである。〕
の化合物を提供する。
【００１１】
いくつかの例で、本発明は、式(３)：
【化５】
2011516555.tif 000007
〔式中、
Ｒ３はハロであるか；
または、Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子と一体となって１−３個のＮヘテロ原子を含む、所望により１−２個のＲ１０基で置換されていてよい５−６員環を形成してよく；
Ｒ５ａおよびＲ５ｂは独立してハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルコキシであり；
Ｒ７はＳ(Ｏ)０−２Ｒ１９であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１９は式(１)または(２)で定義した通りである。〕
の化合物を提供する。
【００１２】
上記式(３)の特定の態様において、Ｒ５ａはメトキシまたはイソプロポキシであり；
Ｒ５ｂはまたはメチルであり；
Ｒ９は−Ｌ−ＣＲ(ＯＲ１７)−ＣｔＦ(２ｔ＋１)(式中、ｔは１−３である)；−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２Ｒ１８、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７または式(ａ)、(ｂ)、(ｃ)または(ｄ)：
【化６】
2011516555.tif 000008
から選択される基であり；
ここで、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｌおよびｐは式(１)または(２)で定義した通りである。
【００１３】
他の特定の態様において、本発明は式(３Ａ)、(３Ｂ)、(３Ｃ)または(３Ｄ)：
【化７】
2011516555.tif 000009
〔式中、
Ｒ５ａはメトキシまたはイソプロポキシであり；
Ｒ５ｂはメチルであり；
Ｒ１０ｂ、Ｒ１０ｅ、Ｒ１０ｆおよびＲ１０ｈは独立してＨまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｃ、Ｒ１０ｄおよびＲ７ｇは独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、ＮＲ２、または所望により置換されていてよいフェニルであり；そして
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ７、Ｒ９およびＲは式(１)または(２)で定義した通りである。〕
の化合物を提供する。
【００１４】
上記式(３Ａ)、(３Ｂ)、(３Ｃ)または(３Ｄ)のいずれにおいても、Ｒ９は−Ｌ−ＣＲ(ＯＲ１７)−ＣｔＦ(２ｔ＋１)(式中、ｔは１−３である)；−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２Ｒ１８、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７または式(ａ)、(ｂ)、(ｃ)または(ｄ)：
【化８】
2011516555.tif 000010
から選択される基であり；
ここで、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｌおよびｐは上で定義した通りであり；そして
Ｒ１７およびＲ１８は独立してＣ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであるか；またはＲ１７はＨであることが可能である。
【００１５】
他の局面において、本発明は、式(４)または(５)：
【化９】
2011516555.tif 000011
〔式中、
ＺはＮＲ９ａまたはＯであり；
Ｒ１およびＲ２は独立してＨ、Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子と一体となって次のものから選択される環を形成し：
【化１０】
2011516555.tif 000012
Ｒ５ａおよびＲ５ｂは独立してハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルコキシであり；
Ｒ７はＳ(Ｏ)０−２Ｒ１９、Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ２０またはＣ(Ｏ)ＮＲ(Ｒ２０)であり；ここで、Ｒ１９およびＲ２０は独立してＣ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであるか；またはＲ２０はＨであり；
各Ｒ９ａは独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニル；−(ＣＲ２)ｐ−ＯＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ１７、−Ｃ(Ｏ)Ｏ−Ｒ１７または−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−ＮＲＲ１７であり；ここで、ＲおよびＲ１７は、ＮＲＲ１７のＮと一体となって、所望によりＯまたはＳを含んでよい５−６員環を形成し；
Ｌは(ＣＲ２)１−４または結合であり；
Ｒ１７およびＲ１８は独立してベンジル、所望によりハロで置換されていてよいＣ１−６アルキル、または所望によりＣ１−６アルキルまたはハロで置換されていてよいＣ３−７シクロアルキルであるか；またはＲ１７はＨであり；
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２４、Ｒ２７およびＲ２９は独立してＨまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２３、Ｒ２５、Ｒ２６およびＲ２８は独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、ＮＲ２またはハロであり；
各ＲはＨまたはＣ１−６アルキルであり；そして
ｐは２−４である；
ただし、Ｒ２２およびＲ２３は両方ともＨではなく；Ｒ２４、Ｒ２５およびＲ２６は全てがＨではなく；そしてＲ２７およびＲ２８は両方ともＨではない。〕
の化合物、またはその生理学的に許容される塩を提供する。
【００１６】
いくつかの例で、本発明は、Ｒ９ａがＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルである式(４)または(５)を提供する。
【００１７】
上記式(１)、(２)、(２Ａ)、(３)、(３Ａ)、(３Ｂ)、(３Ｃ)、(３Ｄ)、(４)または(５)のいずれにおいても、Ｒ１およびＲ２はＨであり得る。
【００１８】
さらに別の局面において、本発明は式(６)
【化１１】
2011516555.tif 000013
〔式中、
Ｗは１−３個の窒素原子を含む５−６員環であり；
Ｒ５は所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニル；ハロ、ニトロ、シアノ、ＣＲ(ＯＲ１７)Ｒ１７、ＯＲ１７、ＮＲ(Ｒ１７)、ＣＲ(Ｒ１７)ＮＲＲ１７、(ＣＲ２)ｑＹ、Ｃ(Ｏ)Ｏ０−１Ｒ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＣＲＲ１７−ＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳＲ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳ(Ｏ)１−２Ｒ１８、Ｓ(Ｏ)０−２Ｒ１８、(ＣＲ２)１−６ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、(ＣＲ２)１−６ＮＲ(ＣＲ２)ｑＣ(Ｏ)Ｒ１８、Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、またはＳ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７であり；
Ｒ１７およびＲ１８は独立して(ＣＲ２)ｑＹまたはＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであり、この各々は所望によりハロ、アミノ、アミド、ヒドロキシル、アルコキシ、シアノ、カルボキシルまたはＹで置換されていてよく；またはＲ１７はＨであり；
Ｒ１９はＣ１−６アルキルであり；
ＹはＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリール；または５−１０員ヘテロアリールまたは４−１０員ヘテロ環式環であり；この各々は所望により１−３個のＲ５基で置換されていてよく；
各ＲはＨまたはＣ１−６アルキルであり；
ｐは２−４であり；
ｑは０−４である。〕
を有する化合物または薬学的に許容される塩の製造方法であって：
ａ)  式(６ａ)
【化１２】
2011516555.tif 000014
の化合物と式(６ｂ)
【化１３】
2011516555.tif 000015
の化合物またはその薬学的に許容される塩を、式(６ｃ)
【化１４】
2011516555.tif 000016
の中間体を形成させるのに十分な条件下で接触させ；
ｂ)  該式(６ｃ)の中間体と酸化剤を接触させて、式(６ｄ)；
【化１５】
2011516555.tif 000017
〔式中、Ｘ１およびＸ２は脱離基である。〕
の中間体を形成させ；そして
ｃ)  該式(６ｄ)の中間体と式(６ｅ)
【化１６】
2011516555.tif 000018
またはその薬学的に許容される塩を、式(６)の化合物またはその薬学的に許容される塩を形成させるのに十分な条件下で接触させることを含む、方法を提供する。
【００１９】
一つの態様において、本発明は、式(６ｆ)、(６ｇ)、(６ｈ)または(６ｉ)：
【化１７】
2011516555.tif 000019
〔式中、
Ｒ５ａはメトキシまたはイソプロポキシであり；
Ｒ５ｂはメチルであり；
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ、Ｒ１０ｃ、Ｒ１０ｄ、Ｒ１０ｅ、Ｒ１０ｆ、Ｒ１０ｇおよびＲ１０ｈは独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、ＮＨ２、ハロ、または所望により置換されていてよいフェニルであり；そして
各Ｒ１９は上記式(６)で定義した通りである。〕
の化合物の合成方法を提供する。
【００２０】
本発明の方法で、該式(６ｅ)の化合物は：
ｉ)  式(７)
【化１８】
2011516555.tif 000020
の化合物とアルキル化剤を反応させて式(８)
【化１９】
2011516555.tif 000021
の中間体を形成させ；そして
ii)  該式(８)の化合物を還元して式(６ｅ)の化合物を形成させることにより合成でき；ここで、Ｒ５およびＲ１９は上記式(６)で定義した通りである。
【００２１】
いくつかの例で、アルキル化剤はｐ−トルエンスルホン酸メチルである。別の例で、アルキル化された式(６)の化合物を水素化により還元する。
【００２２】
さらに別の局面において、本発明は、式(１)、(２)、(２Ａ)、(３Ａ)、(３Ｂ)、(３Ｃ)、(３Ｄ)、(４)または(５)を有する化合物、および生理学的に許容される担体を含み、所望により抗増殖剤のような第二の治療剤と組み合わさった医薬組成物を提供する。
【００２３】
他の局面において、本発明は、細胞でのＲｏｓ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩｎｓＲおよび未分化リンパ腫キナーゼから選択されるキナーゼの阻害方法であって、細胞と有効量の式(１)、(２)、(２Ａ)、(３)、(３Ａ)、(３Ｂ)、(３Ｃ)、(３Ｄ)、(４)または(５)の化合物またはその医薬組成物を接触させることを含む、方法を提供する。
【００２４】
本発明はまた、Ｒｏｓ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩｎｓＲまたはＡＬＫの阻害に応答する状態を有する対象におけるかかる状の処置、軽減または予防方法であって、該対象に有効量の式(１)、(２)、(２Ａ)、(３Ａ)、(３Ｂ)、(３Ｃ)、(３Ｄ)、(４)または(５)を有する化合物、または薬学的に許容される塩またはその医薬組成物を、所望により第二の治療剤と組み合わせて投与することを含む、それにより該状態を処置する方法を提供する。あるいは、本発明は、Ｒｏｓ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩｎｓＲまたはＡＬＫが仲介する状態の処置用医薬の製造における、(１)、(２)、(２Ａ)、(３Ａ)、(３Ｂ)、(３Ｃ)、(３Ｄ)、(４)または(５)を有する化合物の使用を提供する。特定の態様において、本発明の化合物は、自己免疫性疾患、移植疾患、感染性疾患または細胞増殖性障害であるＲｏｓ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩｎｓＲまたはＡＬＫが仲介する状態の処置に、単独で、または第二の治療剤と組み合わせて使用してよい。
【００２５】
さらに、本発明は、細胞増殖性障害を有する対象の処置方法であって、該対象に有効量の(１)、(２)、(２Ａ)、(３Ａ)、(３Ｂ)、(３Ｃ)、(３Ｄ)、(４)または(５)を有する化合物、または薬学的に許容される塩またはその医薬組成物を、所望により第二の治療剤と組み合わせて投与することを含み、それにより該状態を処置する方法を提供する。あるいは、本発明は、細胞増殖性障害の処置用医薬の製造における、(１)、(２)、(２Ａ)、(３Ａ)、(３Ｂ)、(３Ｃ)、(３Ｄ)、(４)または(５)を有する化合物の使用を提供する。具体例において、本発明の化合物は、多発性骨髄腫、神経芽腫、リンパ腫、白血病、黒色腫、肉腫、骨肉腫、滑膜肉腫、ユーイング肉腫、肝細胞腫、消化器間質腫瘍または乳房、腎臓、前立腺、結腸直腸、甲状腺、卵巣、膵臓、肺、子宮、呼吸器、脳、消化管、尿路、眼、肝臓、皮膚、頭頚部、甲状腺または副甲状腺の固形腫瘍を含み、これに限定されない細胞増殖性障害の処置に、単独で、または化学療法剤と組み合わせて、使用してよい。
【００２６】
定義
“アルキル”は、ある部分および他の基、例えばハロ置換アルキルおよびアルコキシの構造要素を意味し、直鎖でも分枝鎖でもよい。ここで使用する所望により置換されていてよいアルキル、アルケニルまたはアルキニルは、所望によりハロゲン化されていてよく(例えば、ＣＦ３)、またはヘテロ原子、例えばＮＲ、ＯまたはＳで置換されているか置き換えられていてよい１個以上の炭素を有し得る(例えば、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、アルキルチオール類、チオアルコキシ、アルキルアミン類など)。
【００２７】
“アリール”は、炭素原子を含む単環式または縮合二環式芳香環を意味する。“アリーレン”は、アリール基由来の二価基を意味する。例えば、アリール基はフェニル、インデニル、インダニル、ナフチル、または１,２,３,４−テトラヒドロナフタレニルであってよく、それは、オルト、メタまたはパラ位を所望により置換されていてよい。
【００２８】
ここで使用する“ヘテロアリール”は、環員の１個以上がヘテロ原子である、上記アリールについて定義した通りのものである。ヘテロアリール類の例は、ピリジル、ピラジニル、インドリル、インダゾリル、キノキサリニル、キノリニル、ベンゾフラニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾ[１,３]ジオキソール、イミダゾリル、ベンゾ−イミダゾリル、ピリミジニル、フラニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、ベンゾトリアゾリル、テトラゾリル、ピラゾリル、チエニル、ピロリル、イソキノリニル、プリニル、チアゾリル、テトラジニル、ベンゾチアゾリル、オキサジアゾリル、ベンゾオキサジアゾリルなどを含み、これらに限定されない。
【００２９】
ここで使用する“炭素環式環”は、炭素原子を含む飽和または部分的不飽和の、単環式、縮合二環式または架橋多環式環を意味し、これは、所望により、例えば、＝Ｏで置換されていてよい。炭素環式環類の例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロプロピレン、シクロヘキサノンなどを含み、これらに限定されない。
【００３０】
ここで使用する“ヘテロ環式環”は、環炭素の１個以上がヘテロ原子である、上記炭素環式環について定義した通りのものである。例えば、ヘテロ環式環はＮ、Ｏ、Ｓ、−Ｎ＝、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)、−Ｓ(Ｏ)２−、または−ＮＲ−(ここで、Ｒは水素、Ｃ１−４アルキルまたは保護基であり得る)を含んでよい。ヘテロ環式環類の例は、を含み、モルホリノ、ピロリジニル、ピロリジニル−２−オン、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリジニロン、１,４−ジオキサ−８−アザ−スピロ[４.５]デク−８−イル、１,２,３,４−テトラヒドロキノリニルなどこれらに限定されない。ここで使用するヘテロ環式環は、二環式アミン類および二環式ジアミン類を含み得る。
【００３１】
ここで使用する、何らかの置換基(例えば、ＣＨ２)のＨ原子は、全ての適切な同位体、例えば、Ｈ、２Ｈおよび３Ｈを包含する。
【００３２】
ここで使用する脱離基は、結合電子を持ったまま安定な化学種によって置換される、原子(または原子団)である。典型的に、脱離基はアニオン(例えばＣｌ−)または中性分子(例えばＨ２Ｏ)である。適当な脱離基は、ハロゲン、アルコキシ基、アルキルチオ基、アリールオキシ基、トシル基およびアリールチオ基を含み、これらに限定されない。当業者は、本発明での使用に適当な他の脱離基を知っている。
【００３３】
ここで使用する、酸化剤は、酸素原子を移動させる化合物である。一般的酸化剤は、ペルクロレート類、クロレート、クロライト、ヒポクロライト、ヨウ素および他のハロゲン類、過酸化物、スルホキシド類、過硫酸、６価クロム化合物、例えばクロムおよびジクロム酸類および三酸化クロム、クロロクロム酸ピリジニウム(ＰＣＣ)、およびクロメート／ジクロメート化合物、ペルボレート類などを含み、これらに限定されない。当業者は、本発明での使用に適当な他の酸化剤を知っている。
【００３４】
ここで使用する、アルキル化剤は、アルキル基を移動する化合物であり、求核性アルキル化剤、求電子アルキル化剤、ラジカルアルキル化剤またはカービンアルキル化剤を包含する。
【００３５】
ここで使用する、水素化は、水素の付加をもたらす化学反応を意味する。水素化は、通常不飽和有機化合物の還元または飽和のために用いる。本反応は典型的に触媒、例えば白金グループ金属の存在下で行う；非触媒的水素化は高温で行う。
【００３６】
特に断らない限り、置換基が“所望により置換されていてよい”と見なされるとき、それは、該置換基が、例えば、所望によりハロゲン化アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルアミン、アルキルチオ、アルキニル、アミド、一置換および二置換アミノ基を含むアミノ、アリール、アリールオキシ、アリールチオ、カルボニル、炭素環式、シアノ、シクロアルキル、ハロゲン、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、ヘテロアリール、ヘテロ環式、ヒドロキシ、イソシアナート、イソチオシアナート、メルカプト、ニトロ、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｓ−スルホンアミド、Ｎ−スルホンアミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、ペルハロアルキル、ペルフルオロアルキル、シリル、スルホニル、チオカルボニル、チオシアナート、トリハロメタンスルホニル、およびそれらの保護された化合物から個々にそして独立して選択される、１個以上の基で置換されていてよいことを意味する。
【００３７】
ここで使用する用語“共投与”または“組合せ投与”などは、選択した複数治療剤の一患者への投与を包含することを意図し、複数薬剤が必ずしも同じ投与経路でまたは同時に投与されない処置レジメンを含むことを意図する。
【００３８】
ここで使用する用語“組合せ剤”は、複数活性成分の混合または組合せにより得られる製品を意味し、複数活性成分の固定されたおよび固定されていない組合せの両方を含む。用語“固定された組合せ”は、複数活性成分、例えば式(１)の化合物と併用剤を、両方とも患者に一つの物または投与量の形態で投与することを意味する。用語“固定されていない組合せ”は、複数活性成分、例えば式(１)の化合物と併用剤を、両方とも患者に同時に、一緒にまたは特定の時間制限なく連続的に投与し、ここで、かかる投与が患者体内でこれらの複数活性成分の治療的有効レベルを達成することを意味する。後者はまたカクテル療法、例えば３種以上の活性成分の投与にも適用される。
【００３９】
用語“治療的有効量”は、研究者、獣医師、医師または他の臨床家により探索されている、生物学的または医学的応答を細胞、組織、臓器、系、動物またはヒトで生じさせる化合物の量を意味する。
【００４０】
対象化合物の“投与”または“投与する”なる用語は、本発明の化合物およびそのプロドラッグを、処置を必要とする対象に提供することを意味する。
【００４１】
“化学療法剤”は、癌の処置に有用な化学化合物である。化学療法剤の例は、アルキル化剤、例えばチオテパおよびCYTOXAN(登録商標)シクロフォスファミド(cyclosphosphamide)；アルキルスルホネート類、例えばブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン類、例えばベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、およびドーパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレン(trietylene)ホスホラミド、トリエチレン(triethiylene)チオホスホラミドおよびトリメチロロメラミンを含むエチルエネミン類およびメチルアメラミン類；アセトゲニン類(特にブラタシンおよびブラタシノン)；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール(ドロナビノール、MARINOL(登録商標))；ベータ−ラパコン；ラパコール；コルヒチン類；ベツリン酸；カンプトテシン類(合成アナログトポテカン(HYCAMTIN(登録商標))、ＣＰＴ−１１(イリノテカン、CAMPTOSAR(登録商標))、アセチルカンプトテシン、スコポレチン(scopolectin)、および９−アミノカンプトテシンを含む)；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５(そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビセレシン合成アナログを含む)；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン類(特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８)；ドラスタチン；デュオカルマイシン(合成アナログ、ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む)；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；窒素マスタード類、例えばクロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア類、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン(ranimnustine)；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質(例えば、カリチアマイシン、特にカリチアマイシン・ガンマ１Ｉおよびカリチアマイシン・オメガＩ１(例えば、Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)参照)；ダインマイシンＡを含むダインマイシン；エスペラミシン類；ならびにネオカルチノスタチン・クロモフォアおよび関連クロモタンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア類)、アクラシノマイシン類、アクチノマイシン、アントラマイシン(authramycin)、アザセリン、ブレオマイシン類、カクチノマイシン、カルビシン(carabicin)、カミノマイシン(caminomycin)、カルジノフィリン、クロモマイシン類(chromomycinis)、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、アドリアマイシン(登録商標)ドキソルビシン(モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む)、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マーセロマイシン、マイトマイシン類、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン類、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン(potfiromycin)、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジ���スタチン、ゾルビシン；抗代謝物、例えばメトトレキサートおよび５−フルオロウラシル(５−ＦＵ)；葉酸アナログ、例えばデノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリンアナログ、例えばフルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎類、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充剤、例えばフォリン酸(frolinic acid)；アセグラトン； アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート(edatraxate)；デフォファミン；デメコルチン；ジアジコン；エルホミチン(elfomithine)；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシノイド類、例えばマイタンシンおよびアンサミトシン類；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール(mopidanmol)；ニトラクリン(nitraerine)；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ(登録商標)ポリサッカライド複合体(JHS Natural Products, Eugene, Oreg.)；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２,２’,２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテシン類(特にＴ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン)；ウレタン；ビンデシン(ELDISINE(登録商標)、FILDESIN(登録商標))；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド(“Ａｒａ−Ｃ”)；チオテパ；タキソイド類、例えば、タキソール(登録商標)パクリタキセル(Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.)、アブラキサンＴＭ  Cremophorフリー、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Ill.)、およびタキソテール(登録商標)ドセタキセル(doxetaxel)(Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France)；クロラムブシル(chloranbucil)；ゲムシタビン(GEMZAR(登録商標))；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ、例えばシスプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン(VELBAN（登録商標))；白金；エトポシド(ＶＰ−１６)；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン(ONCOVIN(登録商標))；オキサリプラチン；ロイコボリン(leucovovin)；ビノレルビン(NAVELBINE(登録商標))；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロン酸；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン(ＤＭＦＯ)；レチノイド類、例えばレチノイン酸；カペシタビン(XELODA(登録商標))；上記の全ての薬学的に許容される塩、酸または誘導体；ならびに上記の２種以上の組合せ、例えばシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの組合せ治療の略語であるＣＨＯＰ、および５−ＦＵおよびロイコボリ��(leucovovin)と組み合わせたオキサリプラチン(ELOXATINＴＭ)を用いた処置レジメンの略語であるＦＯＬＦＯＸを含む。
【００４２】
さらに、“化学療法剤”は、癌の増殖を促進するホルモンの作用を制御し、低下させ、遮断し、または阻止するように作用し、そしてしばしば全身性の、または身体全体の処置の形態である、抗ホルモン剤を含み得る。それらはホルモンそれ自体であってよい。例は、例えば、タモキシフェン(NOLVADEX(登録商標)タモキシフェンを含む)、EVISTA(登録商標)ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびFARESTON(登録商標)トレミフェンを含む、抗エストロゲン類および選択的エストロゲン受容体モジュレーター(ＳＥＲＭｓ)；抗プロゲステロン類；エストロゲン受容体下方制御剤(ＥＲＤｓ)；卵巣を抑制するまたは遮断するために機能する薬剤、例えば、黄体形成(leutinizing)ホルモン放出ホルモン(ＬＨＲＨ)アゴニスト、例えばLUPRON(登録商標)およびELIGARD(登録商標)酢酸リュープロリド、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリンおよびトリプトレリン(tripterelin)；他の抗アンドロゲン、例えばフルタミド、ニルタミドおよびビカルタミド；および副腎でのエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４(５)−イミダゾール類、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ(登録商標)酢酸メゲストロール、AROMASIN(登録商標)エキセメスタン、ホルメスタン(formestanie)、ファドロゾール、RIVISOR(登録商標)ボロゾール、フェマーラ(登録商標)レトロゾール、およびARIMIDEX(登録商標)アナストロゾールを含む。加えて、化学療法剤のかかる定義は、ビスホスホネート類、例えばクロドロネート(例えば、BONEFOS(登録商標)またはOSTAC(登録商標))、DIDROCAL(登録商標)エチドロネート、ＮＥ−５８０９５、ZOMETA(登録商標)ゾレドロン酸／ゾレドロネート、FOSAMAX(登録商標)アレンドロネート、AREDIA(登録商標)パミドロネート、SKELID(登録商標)チルドロネート、またはACTONEL(登録商標)リセドロネート；ならびにトロキサシタビン(１,３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ)；アンチセンスオリゴヌクレオチド類、特に異常(abherant)細胞増殖に関与するシグナリング経路の遺伝子発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、および上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦ−Ｒ)；ワクチン類、例えばTHERATOPE(登録商標)ワクチンおよび遺伝子治療ワクチン、例えば、ALLOVECTIN(登録商標)ワクチン、LEUVECTIN(登録商標)ワクチン、およびVAXID(登録商標)ワクチン；ルルトテカン(LURTOTECAN)(登録商標)トポイソメラーゼ１阻害剤；アバレリクス(登録商標)ｒｍＲＨ；ラパチニブジトシレート(ＥｒｂＢ−２およびＥＧＦＲデュアルチロシンキナーゼ小分子阻害剤、GW572016としても既知)；および上記の全ての薬学的に許容される塩、酸または誘導体を含む。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
発明を実施するための形態
本発明は、新規ピリミジン誘導体およびその医薬組成物、およびかかる化合物の使用方法を提供する。
【００４４】
一局面において、本発明は、式(１)または(２)：
【化２０】
2011516555.tif 000022
〔式中、
Ｒ１およびＲ２は独立してＨ、Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ３はハロ、Ｃ１−６アルキル、またはハロ置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ４はＨであるか；
あるいは、Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子と一体となってＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含む、所望により１〜２個のＲ１０基で置換されていてよい、５−６員環を形成してよく、Ｒ１０はハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、所望により置換されていてよいフェニルまたはＮＲ２であり；
Ｒ５、Ｒ６およびＲ８は独立して所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニル；ハロ、ニトロ、シアノ、ＣＲ(ＯＲ１７)Ｒ１７、ＯＲ１７、ＮＲ(Ｒ１７)、ＣＲ(Ｒ１７)ＮＲＲ１７、(ＣＲ２)ｑＹ、Ｃ(Ｏ)Ｏ０−１Ｒ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＣＲＲ１７−ＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳＲ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳ(Ｏ)１−２Ｒ１８、Ｓ(Ｏ)０−２Ｒ１８、(ＣＲ２)１−６ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、(ＣＲ２)１−６ＮＲ(ＣＲ２)ｑＣ(Ｏ)Ｒ１８、Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、またはＳ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７であり；ここで、Ｒ８は、縮合環の任意の位置に存在してよく；
Ｒ７はＳ(Ｏ)０−２Ｒ１９、Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ２０またはＣ(Ｏ)ＮＲ(Ｒ２０)であり；ここで、Ｒ１９およびＲ２０は独立してＣ１−６アルキル、ハロ置換Ｃ１−６アルキルまたはＣ３−７シクロアルキルであるか；またはＲ２０はＨであり；
各Ｒ９は独立して−Ｌ−ＣＲ(ＯＲ１７)−ＣｔＦ(２ｔ＋１)(式中、ｔは１−３である)；−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−ＣＲ(Ｒ１７)−ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−ＮＲ−(ＣＲ２)ｐ−ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−(ＣＲ２)ｑ−ＮＲ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ１８、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳ(Ｏ)１−２Ｒ１８、(ＣＲ２)ｐＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７または(ＣＲ２)ｐＮＲ−Ｌ−Ｃ(Ｏ)Ｒ１８、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２Ｒ１８、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７または式(ａ)、(ｂ)、(ｃ)または(ｄ)：
【化２１】
2011516555.tif 000023
から選択される基であり；
ここで、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５およびＲ１６は独立してＨ、またはＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルから選択され、この各々は所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてよく；またはＲ１１とＲ１２、Ｒ１２とＲ１５、Ｒ１５とＲ１６、Ｒ１３とＲ１４、またはＲ１３とＲ１５は、それらが結合している炭素および／または窒素原子と一体となって、所望によりＣ(Ｏ)、Ｎ、ＯおよびＳ(Ｏ)０−２から選択される３個までの原子または基を含んでよい３−７員の飽和、不飽和または部分的不飽和環を形成してよく；
Ｌは(ＣＲ２)１−４または結合であり；
Ｒ１７およびＲ１８は独立してＣ１−６アルキル、ハロ置換Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであるか；またはＲ１７はＨであり；
ＹはＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリール；または５−１０員ヘテロアリールまたは４−１０員ヘテロ環式環であり；この各々は所望により１−３個のＲ６基で置換されていてよく；
各ＲはＨまたはＣ１−６アルキルであり；
ｐは２−４であり；そして
ｑは０−４である。〕
の化合物、またはその生理学的に許容される塩を提供する。
【００４５】
一つの態様において、本発明は、式(２Ａ)：
【化２２】
2011516555.tif 000024
〔式中、
Ｒ３はハロであり；
Ｒ７はＳ(Ｏ)０−２Ｒ１９であり；
Ｒ８はメトキシ、エトキシまたはイソプロポキシであり；
Ｒ９は−Ｌ−ＣＲ(ＯＲ１７)−ＣｔＦ(２ｔ＋１)(式中、ｔは１−３である)；−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２Ｒ１８、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７または式(ａ)、(ｂ)、(ｃ)または(ｄ)：
【化２３】
2011516555.tif 000025
から選択される基であり；
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｌおよびｐは式(１)または(２)で定義した通りである。〕
の化合物を提供する。
【００４６】
いくつかの例で、本発明は、式(３)：
【化２４】
2011516555.tif 000026
〔式中、
Ｒ３はハロであるか；
あるいは、Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子と一体となって１−３個のＮヘテロ原子を含む、所望により１−２個のＲ１０基で置換されていてよい５−６員環を形成してよく；
Ｒ５ａおよびＲ５ｂは独立してハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルコキシであり；
Ｒ７はＳ(Ｏ)０−２Ｒ１９であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１９は式(１)または(２)で定義した通りである。〕
の化合物を提供する。
【００４７】
上記式(３)の特定の態様において、Ｒ５ａはメトキシまたはイソプロポキシであり；
Ｒ５ｂはまたはメチルであり；
Ｒ９は−Ｌ−ＣＲ(ＯＲ１７)−ＣｔＦ(２ｔ＋１)(式中、ｔは１−３である)；−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２Ｒ１８、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７または式(ａ)、(ｂ)、(ｃ)または(ｄ)：
【化２５】
2011516555.tif 000027
から選択される基であり；
ここで、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｌおよびｐは式(１)または(２)で定義した通りである。
【００４８】
他の特定の態様において、本発明は、式(３Ａ)、(３Ｂ)、(３Ｃ)または(３Ｄ)：
【化２６】
2011516555.tif 000028
〔式中、
Ｒ５ａはメトキシまたはイソプロポキシであり；
Ｒ５ｂはメチルであり；
Ｒ１０ｂ、Ｒ１０ｅ、Ｒ１０ｆおよびＲ１０ｈは独立してＨまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｃ、Ｒ１０ｄおよびＲ７ｇは独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、ＮＲ２、または所望により置換されていてよいフェニルであり；そして
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ７、Ｒ９およびＲは式(１)または(２)で定義した通りである。〕
の化合物を提供する。
【００４９】
上記式(３Ａ)、(３Ｂ)、(３Ｃ)または(３Ｄ)のいずれにおいても、Ｒ９は−Ｌ−ＣＲ(ＯＲ１７)−ＣｔＦ(２ｔ＋１)(式中、ｔは１−３である)；−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２Ｒ１８、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７または式(ａ)、(ｂ)、(ｃ)または(ｄ)：
【化２７】
2011516555.tif 000029
から選択される基であってよく；
ここで、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｌおよびｐは上で定義した通りであり；そして
Ｒ１７およびＲ１８は独立してＣ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであるか；またはＲ１７はＨである。
【００５０】
他の局面において、本発明は、(４)または(５)：
【化２８】
2011516555.tif 000030
〔式中、
ＺはＮＲ９ａまたはＯであり；
Ｒ１およびＲ２は独立してＨ、Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子と一体となって次のものから選択される環を形成し：
【化２９】
2011516555.tif 000031
Ｒ５ａおよびＲ５ｂは独立してハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルコキシであり；
Ｒ７はＳ(Ｏ)０−２Ｒ１９、Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ２０またはＣ(Ｏ)ＮＲ(Ｒ２０)であり；ここで、Ｒ１９およびＲ２０は独立してＣ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであるか；またはＲ２０はＨであり；
各Ｒ９ａは独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニル；−(ＣＲ２)ｐ−ＯＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ１７、−Ｃ(Ｏ)Ｏ−Ｒ１７または−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−ＮＲＲ１７であり；ここで、ＲおよびＲ１７は、ＮＲＲ１７のＮと一体となって所望によりＯまたはＳを含んでよい５−６員環を形成してよく；
Ｌは(ＣＲ２)１−４または結合であり；
Ｒ１７およびＲ１８は独立してベンジル、所望によりハロで置換されていてよいＣ１−６アルキル、または所望によりＣ１−６アルキルまたはハロで置換されていてよいＣ３−７シクロアルキルであるか；またはＲ１７はＨであり；
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２４、Ｒ２７およびＲ２９は独立してＨまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２３、Ｒ２５、Ｒ２６およびＲ２８は独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、ＮＲ２またはハロであり；
各ＲはＨまたはＣ１−６アルキルであり；
ｐは２−４である；
ただし、Ｒ２２およびＲ２３は両方ともＨではなく；Ｒ２４、Ｒ２５およびＲ２６は全てＨではなく；そしてＲ２７およびＲ２８は両方ともＨではない。〕
の化合物、またはその生理学的に許容される塩を提供する。
【００５１】
さらに別の局面において、本発明は、式(６)
【化３０】
2011516555.tif 000032
〔式中、
Ｗは１−３個の窒素原子を含む５−６員環であり；
Ｒ５はＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであり、この各々は所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基；ハロ、ニトロ、シアノ、ＣＲ(ＯＲ１７)Ｒ１７、ＯＲ１７、ＮＲ(Ｒ１７)、ＣＲ(Ｒ１７)ＮＲＲ１７、(ＣＲ２)ｑＹ、Ｃ(Ｏ)Ｏ０−１Ｒ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＣＲＲ１７−ＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳＲ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳ(Ｏ)１−２Ｒ１８、Ｓ(Ｏ)０−２Ｒ１８、(ＣＲ２)１−６ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、(ＣＲ２)１−６ＮＲ(ＣＲ２)ｑＣ(Ｏ)Ｒ１８、Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、またはＳ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７で置換されていてよく；
Ｒ１７およびＲ１８は独立して(ＣＲ２)ｑＹまたはＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであり、この各々は所望によりハロ、アミノ、アミド、ヒドロキシル、アルコキシ、シアノ、カルボキシルまたはＹで置換されていてよく；またはＲ１７はＨであり；
Ｒ１９はＣ１−６アルキルであり；
ＹはＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリール；または５−１０員ヘテロアリールまたは４−１０員ヘテロ環式環であり；この各々は所望により１−３個のＲ５基で置換されていてよく；
各ＲはＨまたはＣ１−６アルキルであり；
ｐは２−４であり；
ｑは０−４である。〕
を有する化合物またはその薬学的に許容される塩の製造方法であって：
ａ)  式(６ａ)
【化３１】
2011516555.tif 000033
の化合物と式(６ｂ)
【化３２】
2011516555.tif 000034
の化合物またはその薬学的に許容される塩を、式(６ｃ)
【化３３】
2011516555.tif 000035
の中間体を形成させるのに十分な条件下で接触させ；
ｂ)  該式(６ｃ)の中間体と酸化剤を接触させて、式(６ｄ)；
【化３４】
2011516555.tif 000036
〔式中、Ｘ１およびＸ２は脱離基である。〕
の中間体を形成させ；そして
ｃ)  該式(６ｄ)の中間体と式(６ｅ)
【化３５】
2011516555.tif 000037
またはその薬学的に許容される塩を、式(６)の化合物またはその薬学的に許容される塩を形成させるのに十分な条件下で接触させることを含む、方法を提供する。
【００５２】
一つの態様において、本発明は、式(６ｆ)、(６ｇ)、(６ｈ)または(６ｉ)：
【化３６】
2011516555.tif 000038
〔式中、
Ｒ５ａはメトキシまたはイソプロポキシであり；
Ｒ５ｂはメチルであり；
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ、Ｒ１０ｃ、Ｒ１０ｄ、Ｒ１０ｅ、Ｒ１０ｆ、Ｒ１０ｇおよびＲ１０ｈは独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、ＮＨ２、ハロ、または所望により置換されていてよいフェニルであり；そして
各Ｒ１９は上記式(６)で定義した通りである。〕
の化合物の合成方法を提供する。
【００５３】
さらに別の局面において、本発明は、式(９)または(１０)：
【化３７】
2011516555.tif 000039
〔式中、
Ｂ１は、１−３個のＲ７基で置換されているアリールであるか、または所望により１−３個のＲ７基で置換されていてよいヘテロアリールであり；
Ｂ２はアリールまたはヘテロアリールであり；
環Ｅは所望により二重結合を含んでよく；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３の一つはＯ、ＳＯ０−２、ＮＲ８またはＮＲ９であり、残りはＣＲ２であり；
Ｚ４はＮＲ８またはＮＲ９であり；
Ｒ１およびＲ２は独立してＨ、Ｃ(Ｏ)Ｒ１０、Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ３およびＲ４は独立してハロ、ＯＲ１７、ＮＲ(Ｒ１７)、ＳＲ１７；所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニル；Ｃ(Ｏ)Ｒ１７、ＮＣ(Ｏ)Ｒ１８、Ｃ(Ｏ)ＮＲＲ１７、Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、ＮＳ(Ｏ)２Ｒ１８、Ｓ(Ｏ)０−２Ｒ１８；または所望により置換されていてよいＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリール；またはＮ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５−１０員ヘテロアリールまたはヘテロ環式環であり；
あるいは、Ｒ３およびＲ４の一方はＨであるか、またはＲ３およびＲ４が、それらが結合している炭素原子と一体となって、所望により１−２個のＲ７基で置換されていてよく、そして所望によりＮ、ＯおよびＳから選択される１−３個のヘテロ原子を含んでよい９−１２員環を形成してよく；
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は独立してＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであり、この各々は所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基；ハロ、ニトロ、シアノ、ＣＲ(ＯＲ１７)Ｒ１７、ＯＲ１７、ＮＲ(Ｒ１７)、ＣＲ(Ｒ１７)ＮＲＲ１７、(ＣＲ２)ｑＹ、Ｃ(Ｏ)Ｏ０−１Ｒ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＣＲＲ１７−ＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳＲ１７、Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳ(Ｏ)１−２Ｒ１８、Ｓ(Ｏ)０−２Ｒ１８、(ＣＲ２)１−６ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、(ＣＲ２)１−６ＮＲ(ＣＲ２)ｑＣ(Ｏ)Ｒ１８、Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、またはＳ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７で置換されていてよく；ここで、Ｒ６は、縮合環の任意の位置に存在してよく；
Ｒ８はＨであるか、または所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてよいＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニル；ハロ、ニトロまたはシアノ；−ＣＲ(ＯＲ１７)Ｒ１７、−(ＣＲ２)ｐ−ＯＲ１７、(ＣＲ２)ｐ−ＮＲ(Ｒ１７)、−Ｌ−ＣＲ(Ｒ１７)ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｙ、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ１７、−(ＣＲ２)１−４−Ｃ(Ｏ)Ｏ−Ｒ１７または−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−ＮＲＲ１７であり；
Ｒ９は−Ｌ−ＣＲ(ＯＲ１７)−ＣｔＦ(２ｔ＋１)(式中、ｔは１−３である)；−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−ＣＲ(Ｒ１７)−ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−ＮＲ−(ＣＲ２)ｐ−ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)−(ＣＲ２)ｑ−ＮＲ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ１８、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳＲ１７、−Ｌ−Ｃ(Ｏ)ＮＲ(ＣＲ２)ｐＳ(Ｏ)１−２Ｒ１８、(ＣＲ２)ｐＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７または(ＣＲ２)ｐＮＲ−Ｌ−Ｃ(Ｏ)Ｒ１８、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２Ｒ１８、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲＲ１７、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＮＲ(Ｒ１７)、−Ｌ−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ(ＣＲ２)ｐＯＲ１７または式(ａ)、(ｂ)、(ｃ)または(ｄ)：
【化３８】
2011516555.tif 000040
から選択される基であり；
ここで、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５およびＲ１６は独立してＨ、またはＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルから選択され、この各々は所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてよく；またはＲ１１およびＲ１２、Ｒ１２およびＲ１５、Ｒ１５およびＲ１６、Ｒ１３およびＲ１４、またはＲ１３およびＲ１５は、それらが結合している炭素および／または窒素原子と一体となって、所望によりＣ(Ｏ)、Ｎ、ＯおよびＳ(Ｏ)０−２から選択される３個までの原子または基を含んでよい３−７員の飽和、不飽和または部分的不飽和環を形成してよく；
Ｌは(ＣＲ２)１−４または結合であり；
Ｒ１０、Ｒ１７およびＲ１８は独立して(ＣＲ２)ｑＹまたはＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであり、この各々は所望によりハロ、アミノ、アミド、ヒドロキシル、アルコキシ、シアノ、カルボキシルまたはＹで置換されていてよく；またはＲ１７はＨであり；
ＹはＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリール；または５−１０員ヘテロアリールまたは４−１０員ヘテロ環式環であり；この各々は所望により１−３個のＲ７基で置換されていてよく；
各ＲはＨまたはＣ１−６アルキルであり；
ｐは２−４であり；
ｑは０−４である；
ただし、Ｚ４およびＺ１、Ｚ２およびＺ３の１個は、Ｒ３およびＲ４の１個がハロ、ＯＲ１７、ＮＲ(Ｒ１７)、ＳＲ１７；所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであるとき；またはＲ３およびＲ４が一体となってフェニル、ピリジル、ピペリジル、または
【化３９】
2011516555.tif 000041
またはその互変異性体を形成するとき、ＮＲ９であり；そして
Ｂ１がヘテロアリールであるとき、Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子となって、環を形成する。〕
の化合物その薬学的に許容される塩を提供する。
【００５４】
上記式の各々において、全ての不斉炭素原子は(Ｒ)−、(Ｓ)−または(Ｒ,Ｓ)−立体配置で存在し得る。故に、本化合物は異性体混合物または純粋異性体、例えば、純粋鏡像体またはジアステレオマーとして存在し得る。本発明はさらに本発明の化合物の可能な互変異性体を包含する。
【００５５】
ここに記載する全ての式は、本化合物の標識されていない形態ならびに同位体標識された形態を示すことも意図する。同位体標識された化合物は、１個以上の原子が選択した原子質量または質量数を有する原子で置換されている以外、ここに示す式により示される構造を有する。本発明の化合物に包含できる同位体の例は、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、および塩素の同位体、例えば各々２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、１２５Ｉを含む。
【００５６】
本発明は、ここに定義する種々の同位体標識された化合物、例えば、放射性同位体、例えば３Ｈ、１３Ｃ、および１４Ｃが存在する化合物を含む。かかる同位体標識された化合物は薬剤または基質組織分布アッセイ、または患者の放射活性処置を含む、代謝試験(例えば、１４Ｃを用いて)、反応導体試験(例えば２Ｈまたは３Ｈを用いて)、検出または造影技術、例えば陽電子放出断層撮影(ＰＥＴ)または一光子放射断層撮影(ＳＰＥＣＴ)に有用である。他の例として、１８Ｆまたは標識化合物はＰＥＴまたはＳＰＥＣＴ試験に使用し得る。本発明の同位体は化合物の代謝運命を変えるおよび／または物理的特性、例えば疎水性などを僅かに変える可能性がある。同位体はまた効果および安全性を高め、バイオアベイラビリティおよび半減期を改善し、タンパク質結合を変え、生物分布を変え、複数活性代謝物の比を変えおよび／または反応性または毒性代謝物を減らす可能性も有し得る。同位体標識された本発明の化合物およびそのプロドラッグは、非同位体標識された試薬を容易に入手可能な同位体標識された試薬に変えることにより、一般にスキームまたは実施例に記載された方法および以下に記載する製造方法を実施することにより製造できる。
【００５７】
上記式の各々において、上記の通り、所望により置換されていてよい部分の各々はＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ３−６アルキニルで置換されていてよく、この各々は、所望によりハロゲン化されていてよく、または所望によりＮ、Ｓ、Ｏ、またはそれらの組合せ(例えば、ヒドロキシルＣ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシルＣ１−８アルキル)；ハロ、アミノ、アミジノ、Ｃ１−６アルコキシ；ヒドロキシル、メチレンジオキシ、カルボキシ；Ｃ１−８アルキルカルボニル；Ｃ１−８アルコキシカルボニル、カルバモイル、Ｃ１−８アルキルカルバモイル、スルファモイル、シアノ、オキソ、ニトロ、または所望により置換されていてよい炭素環式環、ヘテロ環式環、アリールまたはヘテロアリールで置き換えられたまたは置換された炭素を有してよい。
【００５８】
薬理学および有用性
本発明の化合物およびその薬学的に許容される塩はインビトロで無細胞キナーゼアッセイおよび細胞アッセイで試験したとき価値ある薬理学的特性を示し、それ故に医薬として有用である。
【００５９】
一局面において、(１)、(２)、(２Ａ)、(３Ａ)、(３Ｂ)、(３Ｃ)、(３Ｄ)、(４)または(５)の化合物は、未分化リンパ腫キナーゼ(ＡＬＫ)およびＮＰＭ−ＡＬＫの融合タンパク質のチロシンキナーゼ活性を阻害し得る。このタンパク質チロシンキナーゼは、ヌクレオフォスミン(ＮＰＭ)とＡＬＫの遺伝子融合によりもたらされ、ＡＬＫリガンド非依存的タンパク質チロシンキナーゼ活性を付与する。ＮＰＭ−ＡＬＫは、多数の造血および他のヒト細胞のシグナル伝達に重要な役割を有し、血液学的および新生物疾患、例えば未分化大細胞リンパ腫(ＡＬＣＬ)および非ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)、特にＡＬＫ＋ＮＨＬまたはAlkomas、炎症性筋線維芽細胞性腫瘍(ＩＭＴ)および神経芽腫を引き起こす。(Duyster et al. 2001 Oncogene 20, 5623-5637)。ＮＰＭ−ＡＬＫに加えて、他の遺伝子融合がヒト血液学的および新生物疾患で同定されている；例えば、ＴＰＭ３−ＡＬＫ(非筋肉トロポミオシンとＡＬＫの融合)。
【００６０】
ＡＬＫチロシンキナーゼ活性の阻害は、既知の方法を使用して、例えばJ. Wood et al. Cancer Res. 60, 2178-2189 (2000)に記載されたＶＥＧＦ−Ｒキナーゼアッセイに準じる、ＡＬＫの組み換えキナーゼドメインを使用して、証明し得る。一般に、ＧＳＴ−ＡＬＫタンパク質チロシンキナーゼを使用するインビトロ酵素アッセイは、フィルター結合アッセイとして９６ウェルプレートで、２０mM  トリスＨＣｌ、ｐＨ＝７.５、３mM  ＭｇＣｌ２、１０mM  ＭｎＣｌ２、１mM  ＤＴＴ、０.１μCi／アッセイ(＝３０μl)[γ−３３Ｐ]−ＡＴＰ、２μM  ＡＴＰ、３μg／mL  ポリ(Ｇｌｕ、Ｔｙｒ  ４：１)ポリ−ＥＹ(Sigma P-0275)、１％ＤＭＳＯ、２５ng  ＡＬＫ酵素中で行う。アッセイ物を、１０分間、環境温度でインキュベートする。５０μlの１２５mM  ＥＤＴＡの添加により反応を停止させ、反応混合物を、予めメタノールで浸し、Ｈ２Ｏで５分間再水和させたMAIP Multiscreenプレート(Millipore, Bedford, MA, USA)に移す。洗浄(０.５％Ｈ３ＰＯ４)後、プレートを液体シンチレーションで計数する。ＩＣ５０値を阻害パーセントの線形回帰分析により計算する。
【００６１】
(１)、(２)、(２Ａ)、(３Ａ)、(３Ｂ)、(３Ｃ)、(３Ｄ)、(４)または(５)の化合物は、ヒトＮＰＭ−ＡＬＫ過発現マウスＢａＦ３細胞(DSMZ Deutsche Sammiung von Mikroorganismen und Zelikulturen GmbH, Germany)の増殖を強力に阻害し得る。ＮＰＭ−ＡＬＫの発現を、ＢａＦ３細胞株を、ＮＰＭ−ＡＬＫをコードする発現ベクターpClneoTM(Promega Corp., Madison WI, USA)でトランスフェクトし、続いてＧ４１８耐性細胞を選択することにより達成し得る。非トランスフェクトＢａＦ３細胞は細胞生存をＩＬ−３に依存する。対照的に、ＮＰＭ−ＡＬＫ発現ＢａＦ３細胞(以後ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫと呼ぶ)は、ＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼを介して増殖性シグナルを得るため、ＩＬ−３の非存在下で増殖できる。ＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼの推定阻害剤は、それ故に増殖シグナルを無くし、抗増殖性活性を引き起こし得る。ＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼの推定阻害剤の抗増殖性活性は、しかしながらＮＰＭ−ＡＬＫ非依存的機構で増殖シグナルを提供するＩＬ−３の添加により打ち消される得る。ＦＬＴ３キナーゼを用いる類似の細胞系も記載されている(E Weisberg et al. Cancer Cell; 1, 433-443 (2002)参照)。
【００６２】
本発明の化合物の阻害活性を次の通り決定し得る。一般に、ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞(１５,０００／マイクロタイタープレートウェル)を、９６ウェルマイクロタイタープレートに移す。ジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)に溶解した試験化合物を、ＤＭＳＯの最終濃度が１％(ｖ／ｖ)を超えないような方法で、一連の濃度(希釈シリーズ)で添加する。添加後、プレートを２日間インキュベートし、その間に試験化合物無しのコントロールでは２回の細胞分裂サイクルが起こる。ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞の増殖を、YOPROTM染色[T Idziorek et al. J. Immunol. Methods; 185: 249-258 (1995)]の手段により測定する：２０mM  クエン酸ナトリウム、ｐＨ４.０、２６.８mM  塩化ナトリウム、０.４％ＮＰ４０、２０mM  ＥＤＴＡおよび２０mMを含む２５μlの溶解緩衝液を各ウェルに添加する。細胞溶解は６０分間、室温の間に完了し、ＤＮＡに結合したYOPROTMの総量を、Cytofluor II  ９６ウェルリーダー(PerSeptive Biosystems)で次の設定で決定する：励起(nm)４８５／２０および放出(nm)５３０／２５。
【００６３】
ＩＣ５０値を次の式を使用したコンピューター利用システムにより決定し得る：
ＩＣ５０＝[(ＡＢＳ試験−ＡＢＳ開始時)／(ＡＢＳコントロール−ＡＢＳ開始時)]×１００。
(ＡＢＳ＝吸収)
【００６４】
これらの実験でのＩＣ５０値は、阻害剤無しのコントロールを使用して得られるよりも５０％低い細胞計数をもたらす問題の試験化合物の濃度として示す。遊離形または薬学的に許容される塩形の本発明の化合物は、例えば、本明細書に記載するインビトロ試験で示される通り、価値ある薬理学的特性を示し得る。一般に、本発明の化合物は、１nMから１０μMのＩＣ５０値を有する。いくつかの例で、本発明の化合物は１nMから５μMの、より具体的に１nMから１μMＩＣ５０値を有する。他の例では、本発明の化合物は、１nM未満のまたは１０μMを超えるＩＣ５０値を有する。本発明の化合物は、１０μMでＡＬＫに対して５０％より大きい阻害パーセント、または他の態様で、約７０％より大きい阻害パーセントを示し得る。
【００６５】
本発明の化合物の抗増殖性作用は、ヒトＫＡＲＰＡＳ−２９９リンパ腫細胞株(DSMZ Deutsche Sammiung von Mikroorganismen und Zelikulturen GmbH, Braunschweig, Germany,WG Dirks et al. Int. J. Cancer 100, 49-56 (2002)に記載)で、ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞株について上記したのと同じ方法を使用してまた決定し得る。ある態様において、本発明の化合物は、約０.０１から１μMの範囲のＩＣ５０の阻害活性を示し得る。本発明の化合物のＡＬＫの自己リン酸化に対する作用は、ヒトＫＡＲＰＡＳ−２９９リンパ腫細胞株において、WG Dirks et al. Int. J. Cancer 100, 49-56 (2002)に記載する免疫ブロットの手段を用いて決定し得る。
【００６６】
他の局面において、本発明の化合物は、接着斑キナーゼ(ＦＡＫ)を阻害し得、ＦＡＫと関連するシグナルカスケードの機能不全が原因の状態の処置、例えば特定の腫瘍の処置に医薬として有用であり得る。内因性ＦＡＫシグナリングの阻害は運動性の低下をもたらし、ある例では細胞死を誘発する。他方で、外因性発現によるＦＡＫシグナリングの亢進は、細胞運動性を増加させる。加えて、ＦＡＫは侵襲性および転移性上皮性、間葉性、甲状腺および前立腺癌で過発現する。結果として、ＦＡＫ阻害剤は、抗腫瘍増殖および転移のための薬剤である可能性がある。本発明の化合物は、故に、新生物疾患、特に乳房腫瘍、腸(結腸および直腸)の癌、胃癌および卵巣および前立腺の癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝臓の癌、黒色腫、膀胱腫瘍および頭頚部の癌を有する脊椎動物およびより具体的に哺乳動物の予防および／または処置に有用であり得る。
【００６７】
ＦＡＫ阻害と免疫系の関係は、例えばG.A. van Seventer et al., Eur. J. Immunol. 2001, 31, 1417-1427に記載されている。それ故に、本発明の化合物は、例えば、免疫系障害、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、肥満細胞および／または好酸球が仲介する疾患または障害、例えば臓器または組織同種または異種移植片の急性または慢性拒絶、アテローム性動脈硬化症、血管傷害、例えば血管形成術による血管閉塞、再狭窄、高血圧、心不全、慢性閉塞性肺疾患、ＣＮＳ疾患、例えばアルツハイマー病または筋萎縮性側索硬化症；癌；感染性疾患、例えばＡＩＤＳ；敗血症性ショックまたは成人呼吸窮迫症候群、虚血／再潅流傷害、例えば心筋梗塞、卒中、腸虚血、腎不全または出血性ショック、または外傷性ショックを有する脊椎動物およびより具体的に哺乳動物の予防および／または処置に有用であり得る。
【００６８】
さらに別の局面において、本発明の化合物はゼータ鎖関連タンパク質７０(ＺＡＰ−７０)を阻害し得る。本発明の化合物のＺＡＰ−７０タンパク質チロシンキナーゼ相互作用は、例えば、水溶液中のヒトＺＡＰ−７０タンパク質チロシンキナーゼによるＬＡＴ−１１  (Ｔ細胞の活性化のためのリンカー)のリン酸化を阻止する能力により証明し得る。それ故に、本発明の化合物は、ＺＡＰ−７０阻害が役割を有する障害または疾患の予防または処置に有用であり得る。
【００６９】
本発明の化合物はまたインスリン様増殖因子受容体１(ＩＧＦ−１Ｒ)も阻害し得て、ＩＧＦ−１Ｒ仲介疾患の処置に有用であり得る。ＩＧＦ−１Ｒ仲介疾患の例は増殖性疾患、例えば腫瘍、例えば乳房、腎臓、前立腺、結腸直腸、甲状腺、卵巣、膵臓、神経、肺、子宮および胃腸腫瘍、ならびに骨肉腫および黒色腫を含み、これらに限定されない。本発明の化合物のＩＧＦ−１Ｒチロシンキナーゼ活性の阻害剤としての効果は、細胞性捕捉ＥＬＩＳＡにより証明され得る。このアッセイにおいて、本発明の化合物のＩＧＦ−１Ｒの(ＩＧＦ−１)誘発自己リン酸化に対する活性を決定する。
【００７０】
本発明の化合物はまた急性または慢性炎症性疾患または障害または自己免疫性疾患、例えばリウマチ性関節炎、骨関節症、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、糖尿病(Ｉ型およびII型)およびその合併症、呼吸器疾患、例えば喘息または炎症性肝臓傷害、炎症性糸球体傷害、免疫仲介障害の皮膚発現または病気、炎症性および過増殖性皮膚疾患(例えば乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、刺激性接触性皮膚炎およびさらなる湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎)、炎症性眼疾患、例えばシェーグレン症候群、角結膜炎またはブドウ膜炎、炎症性腸疾患、クローン病または潰瘍性大腸炎の処置および／または予防にも有用であり得る。
【００７１】
前記によって、本発明は以下を提供する：
(１)  医薬として使用するための本発明の化合物；
(２)  ＡＬＫ阻害剤、ＦＡＫ阻害剤、ＺＡＰ−７０阻害剤および／またはＩＧＦ−１Ｒ阻害剤として使用するための、例えば、前記の特定の適応症のいずれかに使用するための、本発明の化合物；
(３)  活性成分として本発明の化合物を１個以上の薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、例えば、前記の適応症のいずれかに使用するための医薬組成物；
(４)  処置を必要とする対象における前記の特定の適応症のいずれかの処置方法であって、有効量の本発明の化合物またはそれを含む医薬組成物を投与することを含む、方法；
(５)  ＡＬＫ、ＦＡＫ、ＺＡＰ−７０および／またはＩＧＦ−１Ｒ活性化が役割を有するまたは関与する疾患または状態の処置または予防用医薬の製造のための、本発明の化合物の使用；
(６)  治療的有効量の本発明の化合物および１個以上のさらなる医薬物質を、例えば同時にまたは連続して共投与することを含み、該さらなる医薬物質が前記の特定の適応症のいずれかに有用である、(４)の下に定義する方法；
(７)  治療的有効量の本発明の化合物および１個以上のさらなる医薬物質を含み、該さらなる医薬物質が前記の特定の適応症のいずれかに有用である、組合せ剤；
(８)  未分化リンパ腫キナーゼの阻害に応答する疾患の処置または予防用医薬の製造における、本発明の化合物の使用；
(９)  処置する疾患が未分化大細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、炎症性筋線維芽細胞性腫瘍、神経芽腫および新生物疾患から選択される、(８)に記載の使用；
(１０)  化合物または薬学的に許容される塩が実施例の化合物のいずれか一つである、(８)または(９)に記載の使用；
(１１)  未分化リンパ腫キナーゼの阻害に応答する疾患、特に未分化大細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、炎症性筋線維芽細胞性腫瘍、神経芽腫および新生物疾患から選択される疾患の処置方法であって、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。
【００７２】
投与および医薬組成物
一般に、本発明の化合物は、単独で、または他の異種以上の治療剤と組み合わせて、当分野で通常のおよび許容される方法のいずれかを使用して、治療的有効量で投与される。治療的有効量は疾患の重症度、対象の年齢および相対的健康状態、使用する化合物の効力および当業者に既知の他の因子によって、広範囲に変わり得る。例えば、新生物疾患および免疫系障害の処置のために、必要投与量は投与方法、処置する特定の状態および望む効果によても変わる。
【００７３】
一般に、満足いく結果が、約０.０１から約１００mg／kg体重、または特に、約０.０３から２.５mg／kg体重の１非投与量で漸進的に得られることが示される。大型哺乳動物、例えばヒトの指示される１日投与量は、約０.５mgから約２０００mg、またはより具体的に、約０.５mgから約１００mgの範囲であってよく、簡便には、例えば、１日４回までの分割投与でまたは遅延形態で投与する。経口投与用の適当な単位投与形態は、約１から５０mgの活性成分を含む。
【００７４】
本発明の化合物は、医薬組成物として任意の慣用的な経路で；例えば、経腸的、例えば、経口的に、例えば、錠剤またはカプセル剤の形で；非経腸的、例えば、注射可能溶液または懸濁液の形で；または局所的に、例えば、ローション剤、ゲル剤、軟膏剤またはクリーム剤の形で、または経鼻または坐薬形態で投与し得る。
【００７５】
遊離形または薬学的に許容される塩形態の本発明の化合物を、少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物は、慣用法で、混合、造粒、コーティング、溶解または凍結乾燥工程により製造し得る。例えば、本発明の化合物を少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物は、薬学的に許容される担体または希釈剤との慣用の混合により製造し得る。経口投与用の単位投与形態は、例えば、約０.１mgから約５００mgの活性成分を含む。
【００７６】
一つの態様において、医薬組成物は、活性成分の、懸濁液または分散液、例えば等張水溶液を含む溶液である。活性成分を単独でまたは担体、例えばマンニトールと共に含む凍結乾燥組成物の場合、分散液または懸濁液を使用前に調製できる。医薬組成物は滅菌してよくおよび／またはアジュバント、例えば防腐剤、安定化剤、湿潤剤または乳化剤、溶解促進剤、浸透圧調整用塩および／または緩衝剤を含み得る。適当な防腐剤は、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、または殺菌剤、例えばソルビン酸または安息香酸を含み、これらに限定されない。溶液または懸濁液は、さらに、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルピロリドン、ゼラチン類、または可溶化剤、例えばＴｗｅｅｎ  ８０(ポリオキシエチレン(２０)ソルビタンモノオレエート)を含み、これらに限定されない増粘剤を含み得る。
【００７７】
油中懸濁液は、油成分として注射目的で慣用的な天然、合成、または半合成油を含み得る。例は、酸成分として８〜２２個の炭素原子、またはある態様では１２〜２２個の炭素原子を有する長鎖脂肪酸を含む液体脂肪酸エステル類を含む。適当な液体脂肪酸エステル類は、ラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、アラキジン性(arachidic)酸、ベヘン酸または対応する不飽和酸類、例えばオレイン酸、エライジン酸、エルカ酸、ブラシジン酸およびリノール酸を含み、これらに限定されず、望むならば、抗酸化剤、例えばビタミンＥ、３−カロテンまたは３,５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ヒドロキシトルエンを含み得る。これらの脂肪酸エステル類のアルコール成分は６炭素原子を含み、一価または多価、例えば一、二または酸価アルコールであり得る。適当なアルコール成分は、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールまたはペンタノールまたはそれらの異性体；グリコールおよびグリセロールを含み、これらに限定されない。
【００７８】
多の適当な脂肪酸エステル類はエチルオレエート、イソプロピルミリステート、イソプロピルパルミテート、LABRAFIL(登録商標)M 2375、(ポリオキシエチレングリセロール)、LABRAFIL(登録商標)M 1944 CS(杏仁油のアルコール分解により製造した不飽和ポリグリコール化グリセライド類であり、グリセライド類およびポリエチレングリコールエステルを含む)、LABRASOLTM(ＴＣＭのアルコール分解により製造した飽和ポリグリコール化グリセライド類であり、グリセライド類およびポリエチレングリコールエステルを含む；全てGaKefosse, Franceから入手可能)、および／またはMIGLYOL(登録商標)812(鎖長Ｃ８からＣ１２の飽和脂肪酸類のトリグリセライド、Huels AG, Germany)、および植物油類、例えば綿実油、アーモンド油、オリーブ油、ヒマシ油、ゴマ油、ダイズ油、または落花生油を含み、これらに限定されない。
【００７９】
経口投与用医薬組成物は、例えば、活性成分と１種以上の固体担体を合わせ、望むならば、得られた混合物を造粒し、混合物または顆粒をさらなる賦形剤の包含により、錠剤または錠剤コアに加工することにより、得ることができる。
【００８０】
適当な担体類は、増量剤、例えば糖類、例えばラクトース、サッカロース、マンニトールまたはソルビトール、セルロース製剤、および／またはリン酸カルシウム類、例えばリン酸三カルシウムまたはリン酸水素カルシウム、およびまた結合剤、例えばデンプン類、例えばトウモロコシ、小麦、コメまたはジャガイモデンプン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、および／またはポリビニルピロリドン、および／または、望むなばら、崩壊剤、例えば上記デンプン類、カルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、アルギン酸またはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムを含み、これらに限定されない。さらなる賦形剤は、流動調整剤および滑剤、例えばケイ酸、タルク、ステアリン酸またはその塩、例えばステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸カルシウム、および／またはポリエチレングリコール、またはその誘導体を含む。
【００８１】
錠剤コアは、適当な、所望により腸溶性の、コーティングを、とりわけ、アラビアゴム(gum arable)、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよび／または二酸化チタンを含み得る濃縮糖溶液、または適当な有機溶媒または溶媒混合物中のコーティング溶液、または、腸溶性コーティングの製造のために、適当なセルロース製剤、例えば酢酸フタル酸セルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートの溶液の使用を通して、施してよい。染料または色素を錠剤または錠剤コーティングに、例えば同定目的でまたは活性成分の異なる量を示すために、添加してよい。
【００８２】
経口投与用医薬組成物はまたゼラチンを含む硬カプセル、またはゼラチンと可塑剤、例えばグリセロールまたはソルビトールを含む軟密閉カプセルも含み得る。硬カプセルは、例えば、増量剤、例えばコーンデンプン、結合剤、および／または流動促進剤、例えばタルクまたはステアリン酸マグネシウム、および所望により安定化剤と混合された、顆粒の形の活性成分を含み得る。軟カプセルにおいて、活性成分は適当な液体賦形剤、例えば脂肪油類、パラフィン油または液体ポリエチレングリコール類またはエチレンまたはプロピレングリコールの脂肪酸エステル類に溶解または懸濁され、それに、例えばポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルタイプの安定化剤および界面活性剤も添加してよい。
【００８３】
直腸投与に適当な医薬組成物は、例えば、活性成分と坐薬基剤の組合せを含む坐薬である。適当な坐薬基剤は、例えば、天然または合成トリグリセライド類、パラフィン炭化水素類、ポリエチレングリコール類または高級アルカノール類である。
【００８４】
非経腸投与に適当な医薬組成物は、水可溶性形態の例えば水可溶性塩形態の活性成分の水溶液、または増粘剤、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトールおよび／またはデキストラン、および、望むならば、安定化剤を含む水性注射用懸濁液を含み得る。活性成分は、所望により賦形剤と共に、凍結乾燥された形であってよく、適当な溶媒の添加により非経腸投与前に溶液に調製できる。例えば、非経腸投与に使用されるためのような溶液はまた輸液用溶液としても用いることができる。注射可能製剤の製造は、通常滅菌条件下で行われ、例えば、アンプルまたはバイアルへの充填、および容器の密封も同様である。
【００８５】
本発明の化合物は、唯一の活性成分として、または新生物疾患に対して有用なまたは免疫調節レジメンに有用な多の薬剤と共に投与してよい。例えば、本発明の化合物は、上記する種々の疾患に有効な医薬組成物、例えばシクロホスファミド、５−フルオロウラシル、フルダラビン、ゲムシタビン、シスプラスチン、カルボプラチン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド、イリノテカン、パクリタキセル、ドセタキセル、リツキサン、ドキソルビシン、ゲフィチニブ、またはイマチニブと；またはシクロスポリン類、ラパマイシン類、アスコマイシン類またはそれらの免疫抑制性アナログ、例えばシクロスポリンＡ、シクロスポリンＧ、ＦＫ−５０６、シロリムスまたはエベロリムス、コルチコステロイド、例えばプレドニゾン、シクロホスファミド、アザチオプレン、メトトレキサート、金塩類、スルファサラジン、抗マラリア剤、ブレキナール(brequinar)、レフルノミド、ミゾルビン、ミコフェノール酸、ミコフェノレート、モフェチル、１５−デオキシスペルグアリン、免疫抑制性モノクローナル抗体、例えば白血球受容体、例えばＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１５２、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩＣＯＳ、ＬＦＡ−１、ＶＬＡ−４またはそれらのリガンドに対するモノクローナル抗体、または他の免疫調節性化合物、例えばＣＴＬＡ４１ｇと組み合わせて本発明に従い使用し得る。
【００８６】
本発明はまた、ａ)ここに記載する遊離形または薬学的に許容される塩形態である本発明の化合物である第一剤、およびｂ)少なくとも１種の併用剤を含む組合せ剤、例えばキットも提供する。キットはその投与のための指示書を含み得る。
【００８７】
本発明の化合物の製造方法
本発明の化合物の製造のための一般的方法は以下の実施例に記載する。記載する反応において、反応性官能基、例えばヒドロキシ基、アミノ基、イミノ基、チオ基またはカルボキシ基は、これらが最終生成物に望まれるとき、それらの望まない反応への参加を避けるために保護してよい。慣用の保護基を標準的実務に従い使用できる(例えば、T.W. Greene and P. G. M. Wuts in “Protective Groups in Organic Chemistry”, John Wiley and Sons, 1991参照)。
【００８８】
いくつかの例で、式(１)の化合物は、スキーム１に記載する合成法に従い製造し得る：
【化４０】
2011516555.tif 000042
【００８９】
式(６)の化合物はまたスキーム２に記載する合成法に従い製造し得る。
【化４１】
2011516555.tif 000043
【００９０】
本発明の化合物は、その塩を含み、水和物の形でも得ることができ、またはその結晶は、例えば結晶化に使用した溶媒を含み得る(溶媒和物として存在)。塩は、通常遊離形の化合物に、例えば、適当な塩基性剤、例えばアルカリ金属炭酸塩類、アルカリ金属水素炭酸塩類、またはアルカリ金属水酸化物、例えば炭酸カリウムまたは水酸化ナトリウムで処理することにより変換できる。塩基付加塩形態の本発明の化合物は、対応する遊離酸に適当な酸(例えば、塩酸など)での処理により変換できる。遊離形の新規化合物と、中間体として、例えば、新規化合物の精製または同定に使用され得る塩を含むその塩の形の密接な関係から、遊離化合物についての記載は、適当である限り、対応する塩についても述べていると理解すべきである。
【００９１】
塩形成基を有する本発明の化合物の塩は、それ自体既知の方法で製造し得る。(１)、(２)、(２Ａ)、(３Ａ)、(３Ｂ)、(３Ｃ)、(３Ｄ)、(４)または(５)の化合物の酸付加塩は、故に、酸または適当なアニオン交換剤での処理により得ることができる。本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、例えば、酸付加塩として、有機または無機酸と共に、塩基性窒素原子を有する(１)、(２)、(２Ａ)、(３Ａ)、(３Ｂ)、(３Ｃ)、(３Ｄ)、(４)または(５)の化合物の化合物から形成され得る。
【００９２】
適当な無機酸類は、ハロゲン酸類、例えば塩酸、硫酸、またはリン酸を含み、これらに限定されない。適当な有機酸類は、カルボン酸、リン酸、スルホン酸またはスルファミン酸、例えば酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、グリコール酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アミノ酸類、例えばグルタミン酸またはアスパラギン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、メチルマレイン酸、シクロヘキサンカルボン酸、アダマンタンカルボン酸、安息香酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、フタル酸、フェニル酢酸、マンデル酸、桂皮酸、メタン−またはエタン−スルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、エタン−１,２−ジスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、１,５−ナフタレン−ジスルホン(disuifonic)酸、２−、３−または４−メチルベンゼンスルホン酸、メチル硫酸、エチル硫酸、ドデシル硫酸、Ｎシクロヘキシルスルファミン酸、Ｎ−メチル−、Ｎ−エチル−またはＮ−プロピル−スルファミン酸、または他の有機プロトン酸類、例えばアスコルビン酸を含み、これらに限定されない。単離または精製目的で、薬学的に許容されない塩、例えばピクリン酸塩または過塩素酸塩を使用することも可能である。治療使用のためには、薬学的に許容される塩または遊離化合物のみが用いられる(適当であれば薬学的製剤の形で)。
【００９３】
酸化されていない形態の本発明の化合物を、本発明の化合物のＮ−オキシドから、還元剤(例えば、硫黄、二酸化硫黄、トリフェニルホスフィン、リチウムボロハイドライド、水素化ホウ素ナトリウム、リントリクロライド、トリブロマイドなど)で適当な不活性有機溶媒(例えばアセトニトリル、エタノール、水性ジオキサンなど)中、０〜８０℃で処理することにより製造できる。
【００９４】
本発明の化合物のプロドラッグ誘導体は、当業者に既知の方法により製造できる(例えば、さらなる詳細は、Saulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985参照)。例えば、適当なプロドラッグは、誘導体化されていない本発明の化合物と適当なカルバミル化剤(例えば、１,１−アシルオキシアルキルカルバノクロリデート、パラ−ニトロフェニル炭酸など)を反応させることにより製造できる。
【００９５】
本発明の化合物の保護された誘導体は、当業者に既知の手段により製造できる。保護基の形成およびその除去に適用できる技術の詳細な記載は、T. W. Greene, “Protecting Groups in Organic Chemistry”, 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999.に見ることができる。
【００９６】
本発明の化合物は、その個々の立体異性体として、化合物のラセミ混合物と光学活性分割剤を反応させ、ジアステレオ異性化合物の対を形成させ、ジアステレオマーを分離し、光学的に純粋な鏡像体を回収することにより製造し得る。鏡像体の分割は、本発明の化合物の共有結合的ジアステレオマー誘導体、または開裂可能な複合体(例えば、結晶性ジアステレオマー塩)を使用して実施し得る。ジアステレオマーは異なる物理的特性(例えば、融点、沸点、溶解度、反応性など)を有し、これらの差異を利用して容易に分離し得る。ジアステレオマーは分別結晶、クロマトグラフィー、または溶解度の差異に基づく分離／分割技術により分離し得る。次いで、光学的に純粋な鏡像体を、分割剤と共に、ラセミ化をもたらさない何らかの実際的な手段により回収する。化合物の立体異性体のそのラセミ混合物からの分割に適用可能な技術のより詳細な記載は、Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, “Enantiomers, Racemates and Resolutions”, John Wiley And Sons, Inc., 1981に見ることができる。
【００９７】
要約すると、本発明の化合物は実施例に記載された方法により製造でき；そして
(ａ)  所望により本発明の化合物を薬学的に許容される塩に変換し；
(ｂ)  所望により本発明の化合物形態を非塩形態に変換し；
(ｃ)  所望により酸化されていない形態の本発明の化合物を薬学的に許容されるＮ−オキシドに変換し；
(ｄ)  所望によりＮ−オキシド形態の本発明の化合物をその非酸化形態に変換し；
(ｅ)  所望により本発明の化合物の個々の異性体を異性体混合物から分割し；
(ｆ)  所望により誘導体化されていない本発明の化合物を薬学的に許容されるプロドラッグ誘導体に変換し；そして
(ｇ)  所望により本発明の化合物のプロドラッグ誘導体を非誘導体化形態に変換する。
【００９８】
出発物質の製造が特に記載されていない限り、その化合物は既知であるか、または、当分野で既知のまたは以下の実施例に記載する方法に準じて製造できる。当業者は、上記の変換が本発明の化合物の製造方法の単なる例であり、他の既知の方法を同様に使用できることを認識する。本発明を、以下の、そして本発明の化合物の製造を例示する実施例によりさらに説明するが、限定しない。
【実施例】
【００９９】
中間体の製造
中間体１
２,４,６−トリクロロピリミジン−５−カルボアルデヒド
【化４２】
2011516555.tif 000044
バルビツール酸(５.０ｇ、３９.１mmol)を、撹拌しているＰＯＣｌ３(２３.５mL、２５２mmol)およびＤＭＦ(３mL、３８.８mmol)の溶液に室温で、窒素雰囲気雰囲気下添加した。混合物を１５時間還流し、次いで室温に冷却した。過剰のＰＯＣｌ３を真空で除去し、得られた粘性物質を注意深く破砕氷(１５０ｇ)に注いだ。薄褐色沈殿を濾過し、真空下で乾燥させて、２,４,６−トリクロロピリミジン−５−カルボアルデヒドを得た。
【０１００】
中間体２
２,４−ジクロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニルフェニルアミノ)ピリミジン−５−カルボアルデヒド
【化４３】
2011516555.tif 000045
撹拌している２,４,６−トリクロロピリミジン−５−カルボアルデヒド(５.０ｇ、２３.８mmol)のＤＣＭ(５０mL)溶液に、２−(イソプロピルスルホニル)アニリン(９.５ｇ、４７.６mmol)を０℃で、窒素雰囲気下添加した。反応混合物を徐々に室温まで温め、一夜撹拌した。固体を濾取し、濾液を真空で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ＤＣＭ／ＥｔＯＡＣ／ヘキサン：１５／１５／７０)で精製して、２,４−ジクロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−カルボアルデヒドを得た。MS (ES+): 374.0 (MH+)。
【０１０１】
中間体３
１−(２,４−ジクロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−イル)エタノール
【化４４】
2011516555.tif 000046
２,４−ジクロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−カルボアルデヒド(７９７mg、２.１４mmol)のＴＨＦ(１０mL)溶液に、メチルマグネシウムブロマイド(ジエチルエーテル中３.０Ｍ、６.４mL,１９.３mmol)を、−７８℃で、窒素雰囲気下、添加した。反応混合物を徐々に室温まで温め、一夜撹拌した。反応混合物を２０mLの飽和水性ＮＨ４Ｃｌに０℃で注ぎ、ＥｔＯＡｃ(３０mL×２)および塩水(１０mL×２)に分配した。回収した有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：３０／７０)で精製して、１−(２,４−ジクロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−イル)エタノールを得た。MS (ES+): 390.0 (MH+)。
【０１０２】
中間体４
１−(２,４−ジクロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−イル)エタノン
【化４５】
2011516555.tif 000047
１−(２,４−ジクロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−イル)エタノール(５８０mg、１.４９mmol)のＤＣＭ(３０mL)溶液に、ＰＤＣ(５６１mg、１.４９mmol)を添加した。反応混合物を室温で一夜撹拌した。反応混合物をシリカゲルのパッドを通して濾過し、パッドを１ＬのＤＣＭで洗浄した。濾液を真空で濃縮して、１−(２,４−ジクロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−イル)エタノンを薄黄色固体として得た。MS (ES+): 388.0 (MH+)。
【０１０３】
中間体５
Ｔｅｒｔ−ブチル４−(４−(５−アセチル−４−クロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−２−イルアミノ)−５−イソプロポキシ−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−カルボキシレート
【化４６】
2011516555.tif 000048
１−(２,４−ジクロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−イル)エタノン(１１３mg、０.２９mmol)のＥｔＯＨ(２mL)溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル−４−(４−アミノ−５−イソプロポキシ−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−カルボキシレート(２０３mg、０.５８mmol)を添加し、反応混合物を１３０℃で３０分間加熱した。反応物を真空で濃縮し、続いてシリカゲルクロマトグラフィー(ＥｔＯＡＣ／ヘキサン：３／７)で精製して、Ｔｅｒｔ−ブチル４−(４−(５−アセチル−４−クロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−２−イルアミノ)−５−イソプロポキシ−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−カルボキシレートを得た。MS (ES+): 700.3 (MH+)。
【０１０４】
最終化合物の製造
実施例１
１−(４−(４−(５−クロロ−４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−２−イルアミノ)−５−イソプロポキシ−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)−２−(ジメチルアミノ)エタノン(１)
【化４７】
2011516555.tif 000049
４−(５−イソプロポキシ−２−メチル−４−ニトロ−フェニル)−ピリジン
【化４８】
2011516555.tif 000050
４−ピリジンボロン酸(１４７mg、１.２０mmol、１.１当量)を、２：１ｖ／ｖ混合物のジオキサンおよびＨ２Ｏ(１５mL)に溶解し、Ｎ２を５分間通して泡立てた。トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(０)(１００mg、０.１０９mmol、０.１当量)、２−ジシクロヘキシルホスフィン−２’−６’−ジメトキシビフェニル(１１２mg、０.２７２mmol、０.２５当量)、１−クロロ−５−イソプロポキシ−２−メチル−４−ニトロ−ベンゼン(２５０mg、１.０９mmol、１.０当量)およびＫ３ＰＯ４(４６２mg、２.１８mmol、２.０当量)をＮ２ブランケット下に添加した。反応容器を密閉し、マイクロ波照射で１５０℃で２０分間加熱した。室温に冷却後、反応を酢酸エチルで希釈し、１Ｎ  水性ＮａＯＨ(２回)で洗浄した。有機層を、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、た。濃縮後、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサンから３０％酢酸エチルのヘキサン溶液への勾配)で精製して、４−(５−イソプロポキシ−２−メチル−４−ニトロ−フェニル)−ピリジンを褐色固体として得た：ESMS m/z 273.1 (M + H+)。
【０１０５】
４−(４−アミノ−５−イソプロポキシ−２−メチル−フェニル)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化４９】
2011516555.tif 000051
酢酸(３０mL)に溶解した前工程からの４−(５−イソプロポキシ−２−メチル−４−ニトロ−フェニル)−ピリジン(４３８mg、１.６１mmol)をＴＦＡ(０.２４mL、３.２２mmol)およびＰｔＯ２(１７６mg、４０％ｗ／ｗ)で処理した。反応混合物を、１気圧Ｈ２下、３６時間激しく撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を真空下濃縮した。得られた残留物を酢酸エチルで希釈し、１Ｎ  水性ＮａＯＨ(２回)で洗浄した。有機層を、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過した。濃縮後、粗生成物(３９１mg)を無水ＣＨ２Ｃｌ２(３０mL)に溶解した。ＴＥＡ(０.４４mL、３.１５、２当量)、続いてＢｏｃ２Ｏ(３４４mg、１.５７当量、１当量)を添加した。反応を室温で３０分間撹拌した。反応を真空下濃縮した。得られた残留物をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサンから３０％酢酸エチルのヘキサン溶液への勾配)で精製して、４−(４−アミノ−５−イソプロポキシ−２−メチル−フェニル)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを粘性泡状物として得た：ESMS m/z 293.1 (M-tBu+H)+。
【０１０６】
工程４および５：前工程からの４−(４−アミノ−５−イソプロポキシ−２−メチル−フェニル)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(１７０mg、０.４８８mmol)、(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イル)−[２−(プロパン−２−スルホニル)−フェニル]−アミン(１６９mg、０.４８８mmol、１当量)、キサントホス(２８mg、０.０４９mmol、０.１当量)、酢酸パラジウム(５.５mg、０.０２４mmol、０.０５当量)、およびＣｓ２ＣＯ３(４７７mg、１.４６mmol、３当量)を無水ＴＨＦ(６mL)に溶解した。Ｎ２を反応混合物を通して５分間泡立て、反応容器を密閉し、マイクロ波照射で１５０℃で２０分間加熱した。反応を濾過し、濾液を真空下濃縮した。濃縮後、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサンから３０％酢酸エチルのヘキサン溶液への勾配)で精製して、４−(４−｛５−クロロ−４−[２−(プロパン−２−スルホニル)−フェニルアミノ]−ピリミジン−２−イルアミノ｝−５−イソプロポキシ−２−メチル−フェニル)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを黄色薄膜として得た：ESMS m/z 658.3 (M + H+)。この生成物(１０５mg、０.１６０mmol)をＣＨ２Ｃｌ２(３mL)に溶解し、ＴＦＡ(３mL)で処理した。４５分後、反応を真空下濃縮した。Ｅｔ２Ｏ中１Ｎ  ＨＣｌ(５mL×２)を添加して、生成物のＨＣｌ塩を沈殿させた。溶媒を傾捨により除いた。得られた５−クロロ−Ｎ２−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−ピペリジン−４−イル−フェニル)−Ｎ４−[２−(プロパン−２−スルホニル)−フェニル]−ピリミジン−２,４−ジアミンを高真空下で乾燥させ、灰白色粉末を得た：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6 + trace D2O) δ 8.32 (s, 1H), 8.27 (d, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.67 (dd, 1H), 7.45 (dd, 1H), 7.42 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 4.56-4.48 (m, 1H), 3.49-3.32 (m, 3H), 3.10-2.91 (m, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.89-1.77 (m, 4H), 1.22 (d, 6H), 1.13 (d, 6H); ESMS m/z 558.1 (M + H+)。
【０１０７】
１−(４−(４−(５−クロロ−４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−２−イルアミノ)−５−イソプロポキシ−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)−２−(ジメチルアミノ)エタノン
【化５０】
2011516555.tif 000052
Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミンを５−クロロ−Ｎ２−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)ピリミジン−２,４−ジアミンに変えることにより、の方法で製造した。生成物を得た。MS (ES+): 643.28 (M+1)+。
実施例２
【０１０８】
(Ｓ)−(４−(４−(５−クロロ−４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−２−イルアミノ)−５−イソプロポキシ−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)(ピロリジン−２−イル)メタノン(７)
【化５１】
2011516555.tif 000053
実施例１の方法に従い、Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミンを５−クロロ−Ｎ２−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)ピリミジン−２,４−ジアミンに変え、２−(ジメチルアミノ)アセチルクロライドヒドロクロライドを(Ｓ)−ピロリジン−２−カルボニルクロライドヒドロクロライドに変えることにより製造した。生成物を得た。MS (ES+): 655.28 (M+1)。
【０１０９】
実施例３
(Ｓ)−(４−(４−(５−クロロ−４−(２−(ジフルオロメチルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−２−イルアミノ)−５−イソプロポキシ−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)(ピロリジン−２−イル)メタノン(８)
【化５２】
2011516555.tif 000054
２,５−ジクロロ−Ｎ−(２−(ジフルオロメチルスルホニル)フェニル)−ピリミジン−４−アミン
【化５３】
2011516555.tif 000055
２,４,５−トリクロロピリミジン(１mmol)および２−(ジフルオロメチルスルホニル)アニリン(１mmol)の１０mLのＤＭＦ溶液に、素化ナトリウム(２mmol)を０℃で添加した。反応混合物を室温に温めた後、５０℃で１時間撹拌した。後処理(work-up)およびフラッシュクロマトグラフィー(ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９：１)後、生成物を得た。MS (ES+): 353.96 (M+1)+。
【０１１０】
５−クロロ−Ｎ４−(２−(ジフルオロメチルスルホニル)フェニル)−Ｎ２−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)ピリミジン−２,４−ジアミン
【化５４】
2011516555.tif 000056
２,５−ジクロロ−Ｎ−(２−(ジフルオロメチルスルホニル)フェニル)−ピリミジン−４−アミン(０.５mmol)の１mLのイソプロパノール懸濁液に、２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)アニリン(０.５mmol)および４−メチルベンゼンスルホン酸(０.５mmol)を添加した。懸濁液を１５０℃で３時間撹拌した。後処理および分取ＨＰＬＣ後、生成物を得た。MS (ES+): 566.17 (M+1)+。
【０１１１】
(Ｓ)−(４−(４−(５−クロロ−４−(２−(ジフルオロメチルスルホニル)−フェニルアミノ)−ピリミジン−２−イルアミノ)−５−イソプロポキシ−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)(ピロリジン−２−イル)メタノン
実施例１の方法に従い、Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミンを５−クロロ−Ｎ４−(２−(ジフルオロメチルスルホニル)フェニル)−Ｎ２−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)ピリミジン−２,４−ジアミンに変え、そして２−(ジメチルアミノ)アセチルクロライドヒドロクロライドを(Ｓ)−ピロリジン−２−カルボニルクロライドヒドロクロライドに変えることにより、生成物を得た。MS (ES+):663.23 (M+1)+。
【０１１２】
１−(４−(４−(５−クロロ−４−(２−(ジフルオロメチルスルホニル)フェニルアミノ)−ピリミジン−２−イルアミノ)−５−イソプロポキシ−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)−２−(ジメチルアミノ)エタノン
【化５５】
2011516555.tif 000057
実施例１の方法に従い、Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミンを５−クロロ−Ｎ４−(２−(ジフルオロメチルスルホニル)フェニル)−Ｎ２−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)ピリミジン−２,４−ジアミンに変えることにより、生成物を得た。MS (ES+): 651.23 (M+1)+。
【０１１３】
実施例４
６−(５−クロロ−４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−２−イルアミノ)−２−(１−(２−(ジメチルアミノ)アセチル)ピペリジン−４−イル)−５−イソプロポキシイソインドリン−１−オン(９)
【化５６】
2011516555.tif 000058
２−クロロ−４−イソプロポキシ−５−ニトロ−安息香酸：
【化５７】
2011516555.tif 000059
２−クロロ−４−フルオロ−５−ニトロ−安息香酸(５.０ｇ、２２.８mmol)および炭酸セシウム(２９.７ｇ、９１.１mmol)の２−プロパノール(１００mL)の混合物を５０℃で一夜加熱した。溶媒を真空で除去し、１００mLの水を添加した。濃水性ＨＣｌを、この溶液に０℃でｐＨが２になるまで滴下した。形成した生成物の沈殿を濾過により単離し、水で洗浄し、真空で乾燥させて、２−クロロ−４−イソプロポキシ−５−ニトロ−安息香酸を得た。
【０１１４】
４−(２−クロロ−４−イソプロポキシ−５−ニトロ−ベンゾイルアミノ)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化５８】
2011516555.tif 000060
２−クロロ−４−イソプロポキシ−５−ニトロ−安息香酸(１０ｇ、３８.５mmol)のＤＣＭ(２００mL)およびＤＭＦ(１mL)中の溶液に、塩化チオニル(９.１７ｇ、７７mmol)をシリンジからゆっくり添加した。混合物を３時間撹拌し、濃縮乾固した。得られた白色固体、２−クロロ−４−イソプロポキシ−５−ニトロ−ベンゾイルクロライドを真空下乾燥させた。４−アミノ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(１.４４ｇ、７.２mmol)およびトリエチルアミン(３mL、２１.６mmol)のＤＣＭ(１００mL)中の混合物に、ＤＣＭ(１０mL)に溶解した２−クロロ−４−イソプロポキシ−５−ニトロ−ベンゾイルクロライド(２ｇ、７.２mmol)をシリンジからゆっくり添加した。混合物を室温で３時間撹拌し、濃縮した。得られた固体を酢酸エチルに溶解し、水および塩水各々で洗浄した。溶媒蒸発後、表題化合物を明黄色固体として得て、さらに精製せずに次工程に直接使用した。
【０１１５】
４−(４−イソプロポキシ−５−ニトロ−２−ビニル−ベンゾイルアミノ)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化５９】
2011516555.tif 000061
前工程で得た４−(２−クロロ−４−イソプロポキシ−５−ニトロ−ベンゾイルアミノ)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(７.２mmol)、ビニルボロン酸ジブチルエステル(１.７２ｇ、９.４mmol)および炭酸ナトリウム(５.３４ｇ、５０.４mmol)のＴＨＦ／Ｈ２Ｏ(１００／２５mL)中の混合物に、ジクロロビス(トリフェニルホスフィン(phospine))パラジウム(II)(４４２mg、５％mmol)を添加した。混合物をＮ２で３分間パージし、９０℃でＮ２下、一夜、コンデンサーを備えた丸底フラスコで加熱した。混合物を室温に冷却し、飽和水性塩化アンモニア溶液に注いだ。混合物を酢酸エチル(３×１００mL)で抽出し。有機抽出物を合わせ、塩水で洗浄し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(４０％酢酸エチルのヘキサン溶液)で精製して、４−(４−イソプロポキシ−５−ニトロ−２−ビニル−ベンゾイルアミノ)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを白色固体として得た。
【０１１６】
４−(５−イソプロポキシ−６−ニトロ−１−オキソ−１,３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化６０】
2011516555.tif 000062
前工程で得た４−(４−イソプロポキシ−５−ニトロ−２−ビニル−ベンゾイルアミノ)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(１.９ｇ、４.３８mmol)をＤＣＭ(１００mL)に溶解し、−７８℃に冷却した。Ｏ３(ｇ)を、溶液の色が青色／灰色に成るまで泡立てた。溶液を、次いでＮ２(ｇ)で、青色が消えるまで泡立てた。溶液を室温に温め、ＤＣＭ(１００mL)で予め膨張させたトリフェニルホスフィン樹脂(５ｇ)で処理した。３０分後、混合物を濾過し、濾液を濃縮し、得られた残留物をＤＣＭ／ＴＦＡ(１００mL／２５mL)に溶解した。この混合物にトリエチルシラン(４.６mL、１７.５mmol)を添加した。得られた混合物を室温で一夜撹拌した。反応混合物を濃縮し、ＤＣＭに再溶解し、ＤＣＭ溶液を１Ｎ  水性ＨＣｌ(３×２０mL)で洗浄した。合わせた水性層を濃水性ＮａＯＨでｐＨ＝１２まで処理した。水性層を酢酸エチル(３×３０mL)で抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。明黄色固体が有機溶媒の蒸発後に得られた。
【０１１７】
固体をメタノールおよびトリエチルアミン混合物(１００mL、９：１ｖ／ｖ)に溶解した。この混合物にジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート(６８０mg、３.１mmol)を添加した。５０℃で３０分間撹拌後、混合物を濃縮し、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(溶離剤：４０〜５０％酢酸エチルのヘキサン溶液)で精製して、４−(５−イソプロポキシ−６−ニトロ−１−オキソ−１,３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを白色固体として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.19 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 4.74 (q, 1H), 4.45-4.38 (m, 1H), 4.35 (s, 2H), 2.90-2.80 (m, 2H), 1.85-1.81 (m, 2H), 1.66-1.63 (m, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.42 (d, 6H)。
【０１１８】
６−(５−クロロ−４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−ピリミジン−２−イルアミノ)−５−イソプロポキシ−２−(ピペリジン−４−イル)イソインドリン−１−オン
【化６１】
2011516555.tif 000063
前工程からの４−(５−イソプロポキシ−６−ニトロ−１−オキソ−１,３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(８５０mg、２mmol)のメタノール溶液に、Ｐｄ／Ｃ(１０％炭素、１００mg)を添加した。混合物を１気圧の水素ガス下に水素化した。４時間後、混合物を濾過し、濃縮した。黄色固体として得られたアニリンをさらに精製せずに次工程に使用した。前工程からの粗生成物(２mmol)、(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イル)−[２−(プロパン−２−スルホニル)−フェニル]−アミン(７７０mg、２.２mmol)、炭酸セシウム(１.３ｇ、４mmol)、およびキサントホス(１１５mg、０.２mmol)のＴＨＦ(２０mL)中の混合物に、酢酸パラジウム(２２mg、５％mmol)をマイクロ波チューブ中で添加した。混合物をＮ２で３分間パージした。密閉チューブを１５０℃で２０分間、マイクロ波照射下に加熱した。混合物を冷却し、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(溶離剤：６５％酢酸エチルのヘキサン溶液)で精製して、黄色固体を得た。固体をＤＣＭ／ＴＦＡ(１／１、１０mL)で１時間処理し、続いて真空下濃縮した。分取ＲＰ  ＬＣ−ＭＳを使用した最終精製により、６−｛５−クロロ−４−[２−(プロパン−２−スルホニル)−フェニルアミノ]−ピリミジン−２−イルアミノ｝−５−イソプロポキシ−２−ピペリジン−４−イル−２,３−ジヒドロ−イソインドール−１−オンを白色固体として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.38 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.60-9.50 (br, 1H), 9.34-9.21 (br, 1H), 8.46 (d, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.91 (dd, 1H), 7.71 (m, 1H), 7.34 (t, 1H), 7.03 (s, 1H), 4.30 (m, 1H), 4.53 (m, 1H), 4.33 (s, 2H), 3.62 (m, 2H), 3.21-3.09 (m, 3H), 2.31-2.21 (m, 2H), 2.09-2.05 (m, 2H), 1.41 (d, 6H), 2.30 (d, 6H); ESMS m/z 599.2 (M + H+)。
【０１１９】
６−(５−クロロ−４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−２−イルアミノ)−２−(１−(２−(ジメチルアミノ)アセチル)ピペリジン−４−イル)−５−イソプロポキシイソインドリン−１−オン
６−(５−クロロ−４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−ピリミジン−２−イルアミノ)−５−イソプロポキシ−２−(ピペリジン−４−イル)イソインドリン−１−オン(２０mg、０.０３mmol)のＤＭＦ(１.０mL)溶液に、２−(ジメチルａｍｉｏｎ)アセチルクロライドヒドロクロライド(０.１７mmol、２６mg)およびトリエチルアミン(０.１８mmol、１８mg)を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、固体副産物を濾過により除いた。残った濾液を分取ＲＰ−ＨＰＬＣで精製して、６−(５−クロロ−４−(２−(イソプロピルスルホニル)−フェニルアミノ)ピリミジン−２−イルアミノ)−２−(１−(２−(ジメチルアミノ)アセチル)ピペリジン−４−イル)−５−イソプロポキシイソインドリン−１−オンを得た。
【０１２０】
実施例５
(Ｓ)−６−(５−クロロ−４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−２−イルアミノ)−５−イソプロポキシ−２−(１−(１−メチルピロリジン−２−カルボニル)ピペリジン−４−イル)イソインドリン−１−オン(１５)
【化６２】
2011516555.tif 000064
６−(５−クロロ−４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−ピリミジン−２−イルアミノ)−５−イソプロポキシ−２−(ピペリジン−４−イル)イソインドリン−１−オン(５２mg、０.０９mmol)のＤＭＦ(１.０mL)溶液に、(Ｓ)−１−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)ピロリジン−２−カルボン酸(１９mg、０.０９mmol)、ＨＡＴＵ(５０mg、０.１３０mmol)、およびＤＩＥＡ(０.１７４mmol、３０μL)を連続的に添加した。反応混合物を１時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃおよび水に分配した。有機抽出物を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、真空で濃縮した。粗生成物をＤＣＭ(１mL)およびＴＦＡ(１mL)の溶液中で１時間撹拌し、次いで真空で濃縮した。得られた粗生成物の１mLのＭｅＯＨおよび１mLのＴＨＦ中の溶液に、３滴のＡｃＯＨ、ホルムアルデヒド(３７重量％の水溶液、０.０９mmol、７mg)を添加した。１時間撹拌後、ナトリウムシアノボロハイドライド(０.１８mmol、１１mg)を添加し、反応混合物をさらに３０分間撹拌した。反応混合物を濾過し、得られた濾液を分取ＲＰ−ＨＰＬＣで精製して、(Ｓ)−６−(５−クロロ−４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−ピリミジン−２−イルアミノ)−５−イソプロポキシ−２−(１−(１−メチルピロリジン−２−カルボニル)ピペリジン−４−イル)イソインドリン−１−オンを得た。
【０１２１】
実施例６
２−(１−(アゼチジン−３−カルボニル)ピペリジン−４−イル)−６−(５−クロロ−４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−２−イルアミノ)−５−イソプロポキシイソインドリン−１−オン(１６)
【化６３】
2011516555.tif 000065
６−(５−クロロ−４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−ピリミジン−２−イルアミノ)−５−イソプロポキシ−２−(ピペリジン−４−イル)イソインドリン−１−オン(４１mg、０.０７mmol)のＤＭＦ(１.０mL)溶液に、１−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)アゼチジン−３−カルボン酸(１４mg、０.０７mmol)、ＨＡＴＵ(３９mg、０.１０４mmol)、およびＤＩＥＡ(０.１３８mmol、２４μL)を連続的に添加した。反応混合物を１時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃおよび水に分配した。有機抽出物を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、真空で濃縮した。粗生成物をＤＣＭ(１mL)およびＴＦＡ(１mL)の溶液中、室温で１時間撹拌した。得られた溶液を濃縮し、次いで分取ＲＰ−ＨＰＬＣで精製して、２−(１−(アゼチジン−３−カルボニル)ピペリジン−４−イル)−６−(５−クロロ−４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル−アミノ)ピリミジン−２−イルアミノ)−５−イソプロポキシイソインドリン−１−オンを得た。
【０１２２】
実施例７
２−(ジメチルアミノ)−１−(４−(５−イソプロポキシ−４−(４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−６−イルアミノ)−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)エタノン(２１)
【化６４】
2011516555.tif 000066
４−ヒドロキシル−６−メチルメルカプトピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン
【化６５】
2011516555.tif 000067
４−ヒドロキシ−６−メルカプト−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン(１４ｇ)を水酸化ナトリウム(１０ｇ)の水(３００mL)溶液に溶解した。溶液を５℃に冷却し、ヨウ化メチル(１２ｇ)と共に振盪した。１５−２０分後溶液を炭素処理(charcoaled)し、濾過し、酢酸で酸性化して、粗生成物を得た。酸中の再結晶により、所望の生成物を得た。MS (ES+): 183.0 (M+1)+。
【０１２３】
４−クロロ−６−メチルメルカプトピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン
【化６６】
2011516555.tif 000068
４０mLのリンオキシクロライドおよびジメチルアニリン(３mL)に、２.２ｇの粗４−ヒドロキシ−メチルメルカプトピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジンを添加した。溶液を３０−６０分間、全固体が溶解するまで還流した。過剰のリンを減圧下除去した。シロップ状残留物を激しく撹拌しながら氷と水の混合物に注いだ。１０分後、水溶液をエーテルで抽出した。エーテル溶液を冷水で洗浄し、水硫酸ナトリウムで乾燥させた。反応を濾過し、エーテルを加圧下に除去して、生成物を得た。211.0 (M+1)+。
【０１２４】
Ｎ−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−６−(メチルチオ)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４−アミン
【化６７】
2011516555.tif 000069
４−クロロ−６−メチルメルカプトピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン(１０mmol)および２−(Ｎ,Ｎ−ジメチルスルホニル)アニリン(１０mmol)の１００mLのイソプロパノール溶液を、還流で１時間撹拌した。室温に冷却後、トリエチルアミン(１２mmol)を反応混合物に添加し、次いで溶液を０.５時間加熱還流した。後処理およびフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン／ＥｔＯＡｃ４：１)後、生成物を得た。364.08 (M+1)+。
【０１２５】
Ｎ−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−６−(メチルスルホニル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４−アミン
【化６８】
2011516555.tif 000070
Ｎ−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−６−(メチルチオ)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４−アミン(１mmol)の１０mLの１,２−ジクロロ(dicholoro)エタン溶液に、ＭＣＰＢＡ(３mmol)を０℃で添加した。反応混合物を室温に温めた後、１時間撹拌し、生成物をフラッシュクロマトグラフィー(ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９：１)により得た。MS (ES+): 396.07 (M+1)+。
【０１２６】
Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミン
【化６９】
2011516555.tif 000071
Ｎ−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−６−(メチルスルホニル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４−アミン(０.５mmol)の１mLのイソプロパノール懸濁液に、２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)アニリン(０.５mmol)および４−メチルベンゼンスルホン酸(０.５mmol)を添加した。懸濁液を１５０℃で３時間撹拌した。分取ＨＰＬＣ後、最終生成物を得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.74-8.77 (d, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.92-7.96 (m, 2H), 7.65-7.70 (m, 1H), 7.27-7.33(m, 1H), 6.85(s, 1H), 4.60-4.67 (m. 1H), 3.71-3.74 (m, 2H), 3.25-3.32 (m, 1H), 2.78-2.97(m, 6H), 2.28-2.33 (m, 5H), 1.95-1.98 (m, 2H), 1.39-1.41(d, 6H), 1.33-1.35 (d, 6H); MS (ES+): 578.28 (M+1)+。
【０１２７】
２−(ジメチルアミノ)−１−(４−(５−イソプロポキシ−４−(４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−６−イルアミノ)−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)エタノン
【化７０】
2011516555.tif 000072
Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミン(５６mg)を３mLのジクロロメタンに溶解した。溶液を５℃に冷却し、２−(ジメチルアミノ)アセチルクロライドヒドロクロライド(２４mg)、続いてトリエチルアミン(１５mg)を溶液に添加した。溶液を室温で約３０分間撹拌した。分取ＬＣ−ＭＳ後、最終生成物が得られる。MS (ES+): 649.32 (M+1)+。
【０１２８】
適当な出発物質を使用して、上記実施例(中間体および最終化合物)に記載した方法を繰り返して、表１に同定する次の式Ｉの化合物が得られた。
【表１】
2011516555.tif 000073
【表２】
2011516555.tif 000074
【表３】
2011516555.tif 000075
【表４】
2011516555.tif 000076
【表５】
2011516555.tif 000077
【表６】
2011516555.tif 000078
【表７】
2011516555.tif 000079
【表８】
2011516555.tif 000080
【表９】
2011516555.tif 000081
【０１２９】
実施例８
２−ブロモ−１−(４−(５−イソプロポキシ−４−(４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−６−イルアミノ)−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)エタノン(２４)
【化７１】
2011516555.tif 000082
Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミン(５０mg、０.０８７mmol)のＣＨ２Ｃｌ２(３mL)中の混合物に、ブロモアセチルクロライド(１０uL、０.０９５mmol)を０℃で滴下した。溶媒を減圧下除去し、残留物をＥｔＯＡｃ／ヘキサン(０−１００％)の勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、表題化合物(２−ブロモ−１−(４−(５−イソプロポキシ−４−(４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−６−イルアミノ)−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)エタノン)を明黄色固体として得た。MS: m/z=698.2 (M + 1)。
【０１３０】
実施例９
１−(４−(５−イソプロポキシ−４−(４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−６−イルアミノ)−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)−２−(ピペリジン−１−イル)エタノン(２９)
【化７２】
2011516555.tif 000083
実施例８からの２−ブロモ−１−(４−(５−イソプロポキシ−４−(４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−６−イルアミノ)−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)エタノン(１０mg、０.０１４mmol)、およびピペリジン(３uL、０.０３１mmol)のＤＭＦ中の混合物をｒｔで一夜撹拌した。粗混合物を直接逆相ＨＰＬＣで精製して、１−(４−(５−イソプロポキシ−４−(４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−６−イルアミノ)−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)−２−(ピペリジン−１−イル)エタノンを得た。MS: m/z=703.4 (M + 1), 352.2 (M/2 + 1). 1 H-NMR (400 MHz, CD3OD): δ=8.39 (brs, 1H), 7.98 (dd, 1H, J=1.6, 8.0 Hz), 7.70 (t, 1H, J=7.6 Hz), 7.53-7.49 (m, 2H), 6.88 (s, 1H), 4.73-4.69 (m, 1H), 4.62 (sept, 1H, J=6.0 Hz), 4.31 (d, 1H, J=16.4 Hz), 4.22 (d, 1H, J=16.4 Hz), 3.85-3.82 (m, 1H), 3.60 (t, 2H, J=12.0 Hz), 3.41-3.25 (m, 2H), 3.11-3.00 (m, 3H), 2.90-2.84 (m, 1H), 2.79 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.99-1.85 (m, 7H), 1.80-1.54 (m, 3H), 1.27 (d, 6H, J=6.0 Hz), 1.24 (d, 6H, J=6.8 Hz)。
【０１３１】
実施例１０
Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミン(３３)
【化７３】
2011516555.tif 000084
ｔｅｒｔ−ブチル４−(４−(５−アセチル−４−クロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−２−イルアミノ)−５−イソプロポキシ−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−カルボキシレート(８１mg、０.１２mmol)のＥｔＯＨ(２mL)溶液に、ヒドラジンジクロライド(３６mg、０.３４mmol)および酢酸ナトリウム(４７mg、０.５７mmol)を連続的に添加し、反応混合物を８０℃で一夜加熱した。反応を室温に冷却し、真空で濃縮した。粗物質をＴＦＡ(２mL)のＤＣＭ(２mL)溶液に溶解し、反応を３０分間撹拌し、続いて濃縮し、ＲＰ−ＨＰＬＣで精製して、Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミンを得た。MS (ES+): 578.3 (MH+)。
【０１３２】
実施例１１
Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミン(３４)
【化７４】
2011516555.tif 000085
Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミン(３９mg、０.０６７mmol)の５.０mLのＭｅＯＨおよび５.０mLのＴＨＦ中の溶液に、１滴のＡｃＯＨおよびＨＣＨＯ[ＭｅＯＨおよびＴＨＦ中１Ｎ(ｖ／ｖ：１／１)、０.１２mmol、１２０μL]を連続的に添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、次いでＮａＢ(ＣＮ)Ｈ３(６.６mg、０.１２mmol)を添加し、反応混合物をさらに１時間撹拌した。飽和水性ＮＨ４Ｃｌを反応物に添加し、反応混合物を真空で濃縮した。粗物質をＥｔＯＡｃおよび塩水に分配した。有機抽出物を濃縮し、ＲＰ−ＨＰＬＣでの精製により、Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミンを得た。MS (ES+): 592.3 (MH+)。
【０１３３】
実施例１２
２−(４−(５−イソプロポキシ−４−(４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−６−イルアミノ)−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)アセトアミド(３５)
【化７５】
2011516555.tif 000086
Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミン(２０mg、０.０３５mmol)、２−ブロモアセトアミド(ＤＭＦ中０.１Ｎ、０.０３５mmol、０.３５mL)およびトリエチルアミン(ＤＭＦ中０.１Ｎ、０.１０５mmol、１.０５mL)の混合物を１００℃で１０分間加熱した。得られた反応混合物のＲＰ−ＨＰＬＣでの精製により、２−(４−(５−イソプロポキシ−４−(４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−６−イルアミノ)−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)アセトアミドを得た。MS (ES+): 635.3 (MH+)。
【０１３４】
実施例１３
２−(４−(５−イソプロポキシ−４−(４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−６−イルアミノ)−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)−Ｎ−メチルアセトアミド(３６)
【化７６】
2011516555.tif 000087
Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミン(２０mg、０.０３５mmol)、２−ブロモアセトアミド(ＤＭＦ中０.１Ｎ、０.０７０mmol、０.７０mL)およびトリエチルアミン(ＤＭＦ中１.０Ｎ、０.１０５mmol、０.１０５mL)の混合物を１００℃で１０分間加熱して。得られた反応混合物のＲＰ−ＨＰＬＣでの精製により、２−(４−(５−イソプロポキシ−４−(４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−６−イルアミノ)−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)−Ｎ−メチルアセトアミドを得た。MS (ES+): 649.3 (MH+)。
【０１３５】
実施例１４
２−(４−(５−イソプロポキシ−４−(４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−６−イルアミノ)−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)エタノール(３７)
【化７７】
2011516555.tif 000088
Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミン(２０mg、０.０３５mmol)、２−ブロモエタノール(ＤＭＦ中０.１Ｎ、０.０７０mmol、０.７０mL)およびトリエチルアミン(ＤＭＦ中０.１Ｎ、０.１８mmol、１.７５mL)の混合物を１００℃で１０分間加熱した。得られた反応混合物のＲＰ−ＨＰＬＣでの精製により、２−(４−(５−イソプロポキシ−４−(４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−６−イルアミノ)−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)エタノールを得た。MS (ES+): 622.3 (MH+)。
【０１３６】
実施例１５
Ｎ６−(２−イソプロポキシ−４−(１−(２−メトキシエチル)ピペリジン−４−イル)−５−メチルフェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミン(３８)
【化７８】
2011516555.tif 000089
Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミン(２６.６mg、０.０４６mmol)、１−ブロモ−２−メトキシエタン(ＤＭＦ中１.０Ｎ、０.４６mmol、０.４６mL)、およびトリエチルアミン(ＤＭＦ中１.０Ｎ、０.４６mmol、０.４６mL)の混合物を１００℃で１０分間加熱した。得られた反応混合物のＲＰ−ＨＰＬＣでの精製により、Ｎ６−(２−イソプロポキシ−４−(１−メトキシエチル)ピペリジン−４−イル)−５−メチルフェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミンを得た。MS (ES+): 636.3 (MH+)。
【０１３７】
実施例１６
２−(６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)フェニルアミノ)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)−Ｎ,Ｎ−ジメチルベンゼンスルホンアミド(３９)
【化７９】
2011516555.tif 000090
４−ヒドロキシ−３−メチル−６−メルカプトピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン
【化８０】
2011516555.tif 000091
この化合物を文献に記載された方法に従い製造した：J. med. Chem. 33: 2174-8 (1990)。
【０１３８】
４−ヒドロキシ−３−メチル−６−メチルメルカプトピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン
【化８１】
2011516555.tif 000092
４−ヒドロキシ−６−メルカプト−３−メチルピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン(１４ｇ)を１０ｇの水酸化ナトリウムの３００mlの水溶液に溶解した。溶液を５℃に冷却し、１２ｇのヨウ化メチルと振盪した。１５−２０分間後、溶液を炭素処理し、濾過し、酢酸で酸性化して、１２ｇの粗生成物を得た。酸性酸中での再結晶により、生成物を得た。MS (ES+): 197.0 (M+1)+。
【０１３９】
４−クロロ−３−メチル−６−メチルメルカプトピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン
【化８２】
2011516555.tif 000093
４０mLのリンオキシクロライドおよび３mLのジメチルアニリンに、２.２ｇの粗４−ヒドロキシ−３−メチル−６−メチルメルカプトピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジンを添加する。溶液を全固体が溶解したら３０−６０分間還流する。過剰のリンを減圧下除去した。残留物を激しく撹拌しながら氷水の混合物に注ぐ。１０分後、水溶液をエーテルで抽出した。エーテル溶液を冷水で洗浄し、水硫酸ナトリウムで乾燥させた。生成物を濾過およびエーテルの減圧下の除去後に得た。215.0 (M+1)+。
【０１４０】
Ｎ,Ｎ−ジメチル−２−(３−メチル−６−(メチルチオ)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)ベンゼンスルホンアミド
【化８３】
2011516555.tif 000094
４−クロロ−３−メチル−６−メチルメルカプトピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン(１０mmol)および２−(Ｎ,Ｎ−ジメチルスルホニル)アニリン(１０mmol)の１００mLのイソプロパノール溶液を１時間還流で撹拌した。室温に冷却後、トリエチルアミン(１２mmol)を反応混合物に添加し、次いで溶液を０.５時間加熱還流した。生成物を後処理およびフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン／ＥｔＯＡｃ４：１)後に得た。379.08 (M+1)+。
【０１４１】
Ｎ,Ｎ−ジメチル−２−(３−メチル−６−(メチルスルホニル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)ベンゼンスルホンアミド
【化８４】
2011516555.tif 000095
Ｎ−(２−(Ｎ,Ｎ−ジメチルスルホニル)フェニル)−３−メチル−６−(メチルチオ)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４−アミン(１mmol)の１０mLの１,２−ジクロロ(dicholoro)エタンの溶液に、ＭＣＰＢＡ(３mmol)を０℃で添加した。反応混合物を室温に温め、１時間撹拌した。後処理およびフラッシュクロマトグラフィー後、生成物を得た(ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ９：１)を得た。MS (ES+): 411.10 (M+1)+。
【０１４２】
２−(６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)フェニルアミノ)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)−Ｎ,Ｎ−ジメチルベンゼンスルホンアミド
【化８５】
2011516555.tif 000096
Ｎ−(２−(Ｎ,Ｎ−ジメチルスルホニル)フェニル)−３−メチル−６−(メチルスルホニル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４−アミン(０.５mmol)の１mLのイソプロパノール懸濁液に、２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)アニリン(０.５mmol)および４−メチルベンゼンスルホン酸(０.５mmol)を添加した。懸濁液を１５０℃で３時間撹拌した。生成物を後処理および分取ＨＰＬＣ後に得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.23-8.25 (d, 1H), 7.79-8.12 (m, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.42-7.46(m, 1H), 7.28-7.32 (m, 1H), 6.77(s, 1H), 4.51-4.54 (m. 1H), 3.57-3.62 (m, 2H), 3.16-3.23 (m, 1H), 2.60-2.83(m, 11H), 2.54 (s, 3H), 2.38-2.47 (m, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.86-1.95 (m, 2H), 1.25-1.27(d, 6H); MS (ES+): 593.18 (M+1)+。
【０１４３】
実施例１７
Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)フェニル)−３−メチル−Ｎ４−(２−(メチルスルホニル)フェニル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミン(４０)
【化８６】
2011516555.tif 000097
この化合物を、実施例１５の方法に従い、２−(Ｎ,Ｎ−ジメチルスルホニル)アニリンを２−(メチルスルホニル)アニリンに変えて製造した。
【０１４４】
実施例１８
２−(ジメチルアミノ)−１−(４−(５−イソプロポキシ−４−(４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−６−イルアミノ)−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)エタノン(４１)
【化８７】
2011516555.tif 000098
この化合物を、実施例１５の方法に従い、２−(Ｎ,Ｎ−ジメチルスルホニル)アニリンを２−(イソプロピルスルホニル)アニリンに変え、そして２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)アニリンを１−(４−(４−アミノ−５−イソプロポキシ−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)−２−(ジメチルアミノ)エタノンに変えて、製造した。
【０１４５】
実施例１９
Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−３,４,６−トリアミン(４２)
【化８８】
2011516555.tif 000099
２,４−ジクロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−カルボニトリル
【化８９】
2011516555.tif 000100
２,４,６−トリクロロピリミジン−５−カルボニトリル(１.０mmol)および２−(イソプロピルスルホニル)アニリン(１.０mmol)の５mLのＤＭＦ溶液に、水素化ナトリウム(２４mg)を添加した。懸濁液を３０℃で２時間撹拌した。生成物を後処理およびカラムクロマトグラフィー(９：１  ヘキサン：ＥｔＯＡｃ)後に得た。MS (ES+): 371.01 (M+1)+。
【０１４６】
４−クロロ−２−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)フェニルアミノ)−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−カルボニトリル
【化９０】
2011516555.tif 000101
２,４−ジクロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−カルボニトリル(０.５mmol)および２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)アニリン(０.５mmol)の３mLのイソプロパノール溶液に、４−メチルベンゼンスルホン酸(０.５mmol)を添加した。懸濁液を１２０℃で２時間撹拌した。生成物を後処理および分取ＨＰＬＣ後に得た。MS (ES+): 597.23 (M+1)+。
【０１４７】
Ｎ６−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−３,４,６−トリアミン(２０)
【化９１】
2011516555.tif 000102
４−クロロ−２−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)フェニルアミノ)−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−カルボニトリル(０.１mmol)の５mLのイソプロパノール溶液に、ヒドラジン無水物(０.３mmol)を添加した。溶液を１２０℃で３時間加熱した。生成物を後処理および分取ＨＰＬＣ後に得た。MS (ES+): 593.29 (M+1)+. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 8.01-8.03 (d, 1H), 7.83-7.86 (m, 1H), 7.31-7.43 (m, 3H), 6.91(s, 1H), 4.56-4.59 (m. 1H), 3.64-3.68 (m, 2H), 3.19-3.24 (m, 3H), 2.93(s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.02-2.07 (m, 4H), 1.17-1.32 (m, 12H); MS (ES+): 593.18 (M+1)+。
【０１４８】
実施例２０
Ｎ６−(２−イソプロポキシ−４−(１−(２−メトキシエチル)ピペリジン−４−イル)−５−メチルフェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミン(４３)
【化９２】
2011516555.tif 000103
(２,４−ジクロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−イル)(フェニル)メタノン
【化９３】
2011516555.tif 000104
２,４−ジクロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−カルボアルデヒド(１１２.３mg、０.３mmol)のＴＨＦ(１.０mL)溶液に、フェニルマグネシウムブロマイド(ジエチルエーテル中３.０Ｍ、１.０mL、３.０mmol)を０℃、アルゴン雰囲気下、添加した。添加後、反応混合物をゆっくり室温に温め、さらに一夜撹拌した。反応混合物に、次いで２.０mLの飽和水性ＮＨ４Ｃｌを０℃で添加し、ＥｔＯＡｃ(５０mL)に溶解し、Ｈ２Ｏ(１０mL)および塩水(１０mL)で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(溶離剤：ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液：０〜３３％)で精製して、(２,４−ジクロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−イル)(フェニル)メタノールを無色油状物として得た。MS (ES+): 452.0 (MH+)。
【０１４９】
(２,４−ジクロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−イル)(フェニル)メタノール(１１３.４mg、０.２５mmol)のＤＣＭ(１０mL)溶液に、ＰＤＣ(２３６mg、０.６３mmol)を添加した。反応混合物を室温で一夜撹拌した。得られた混合物を、次いでシリカゲルのパッドを通して濾過し、パッドを５％ＥｔＯＡｃのＤＣＭ溶液(２００mL)で洗浄した。濾液を真空で濃縮して、(２,４−ジクロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−イル)(フェニル)メタノンを無色油状物として得た。MS (ES+): 450.0 (MH+)。
【０１５０】
(４−クロロ−２−(２−イソプロポキシ−４−(１−(２−メトキシエチル)ピペリジン−４−イル)−５−メチルフェニルアミノ)−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−イル)(フェニル)メタノン
【化９４】
2011516555.tif 000105
１０mL  マイクロ波反応チューブに、(２,４−ジクロロ−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−イル)(フェニル)メタノン(２４.１mg、０.０５４８mmol)、２−イソプロポキシ−４−(１−(２−メトキシエチル)ピペリジン−４−イル)−５−メチルアニリン(１６.８mg、０.０５４８mmol)、２−プロパノール(４mL)およびヒューニッヒ塩基(３滴)を連続的に添加した。得られた混合物を１５０℃で２時間、マイクロ波機を使用して撹拌した。反応溶液を真空で濃縮して、粗(４−クロロ−２−(２−イソプロポキシ−４−(１−(２−メトキシエチル)ピペリジン−４−イル)−５−メチルフェニルアミノ)−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−イル)(フェニル)メタノンをわずかに黄色の粘性油状物として得た。MS (ES+): 720.30 (MH+)。
【０１５１】
Ｎ６−(２−イソプロポキシ−４−(１−(２−メトキシエチル)ピペリジン−４−イル)−５−メチルフェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミン
【化９５】
2011516555.tif 000106
１０mL  マイクロ波反応チューブに、(４−クロロ−２−(２−イソプロポキシ−４−(１−(２−メトキシエチル)ピペリジン−４−イル)−５−メチルフェニルアミノ)−６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)ピリミジン−５−イル)(フェニル)メタノン(０.０５４８mmol)、ＴＨＦ(４mL)およびＨ２ＮＮＨ２(０.４mL)を添加した。得られた混合物を１２０℃で３０分間、マイクロ波機を使用して撹拌した。反応溶液を真空で濃縮し、残留物を逆相ＨＰＬＣで精製して、Ｎ６−(２−イソプロポキシ−４−(１−(２−メトキシエチル)ピペリジン−４−イル)−５−メチルフェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６−ジアミンをわずかに黄色固体として得た。MS (ES+): 698.30 (MH+)。
【０１５２】
表２は、上記実施例に記載した方法に従い製造し得る化合物を記載する。
【表１０】
2011516555.tif 000107
【表１１】
2011516555.tif 000108
【表１２】
2011516555.tif 000109
【表１３】
2011516555.tif 000110
【表１４】
2011516555.tif 000111
【表１５】
2011516555.tif 000112
【表１６】
2011516555.tif 000113
【表１７】
2011516555.tif 000114
【表１８】
2011516555.tif 000115
【表１９】
2011516555.tif 000116
【表２０】
2011516555.tif 000117
【表２１】
2011516555.tif 000118
【表２２】
2011516555.tif 000119
【表２３】
2011516555.tif 000120
【表２４】
2011516555.tif 000121
【０１５３】
実施例２１
Ｎ２−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−５−メチル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２,４−ジアミン(６８)
【化９６】
2011516555.tif 000122
７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２,４−ジオール
【化９７】
2011516555.tif 000123
４０ｇ  ６−アミノピリミジン−２,４−ジオール(１)(３１５mmol)の１.０Ｌの水溶液に、５４.３ｇ  ＮａＯＡｃ(６６２mmol)および４８mLの２−クロロアセトアルデヒド(５０ｗｔ％のＨ２Ｏ溶液、３７８mmol)を添加した。得られた混合物を加熱還流し、３時間撹拌する。反応混合物を室温まで冷却し、続いて３００mLの２Ｎ  ＨＣｌのＨ２Ｏ溶液をゆっくり添加した。沈殿を濾過し、Ｈ２Ｏで洗浄し、５０℃で真空下で乾燥させて、表題化合物を得た。
【０１５４】
２,４−ジクロロ−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン
【化９８】
2011516555.tif 000124
１１.５ｇ(７６mmol)７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２,４−ジオール(２ａ)を４０mLのトルエンに溶解し、２１.３mLのＰＯＣｌ３(２２９mmol)を室温でゆっくり添加した。反応混合物を７０℃に加熱し、２６.５mLのＤＩＰＥＡ(１５３mmol)を、２時間にわたり、Ｎ２下で滴下した。反応温度を１０６℃に上げ、混合物を一夜撹拌した。室温に冷却後、反応混合物を２００mL  ＥｔＯＡｃおよび３００mL  水の混合物に注ぎ、次いでセライトを通して濾過した。水性層を３×２００mLのＥｔＯＡｃで抽出し、合わせた有機層を塩水で洗浄し、活性炭で脱色し、セライトを通して濾過し、濃縮して、表題化合物を得た。
【０１５５】
５−ブロモ−２,４−ジクロロ−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン
【化９９】
2011516555.tif 000125
９３５mg  ２,４−ジクロロ−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン(３ａ)(５.０mmol)の１００mLの１,４−ジオキサン溶液に、２５６μLのＢｒ２(５.０mmol)を０℃で１０分間にわたり添加した。３０分間、０℃で撹拌後、反応混合物を１５０mLのＥｔＯＡｃおよび１５０mLの飽和水性Ｎａ２ＳＯ３の混合物に注ぎ、次いでセライトを通して濾過した。水性相をＥｔＯＡｃ(３ｘ１００mL)で抽出し、合わせた有機層を塩水で洗浄し、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、表題化合物を得た。
【０１５６】
２,４−ジクロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン
【化１００】
2011516555.tif 000126
１.４ｇ  ５−ブロモ−２,４−ジクロロ−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン(４)(５.２mmol)を２００mLのＴＨＦに溶解した。−７８℃に冷却後、９.７５mLのＢｕＬｉ(ヘキサン中１.６Ｍ溶液、１５.６mmol)を３０分間にわたりゆっくり添加し、次いで３０分間、−７８℃で撹拌し、その後３９６uLのＭｅＩ(６.２４mmol)を反応混合物に１時間にわたり滴下した。反応混合物を−７８℃ででさらに１時間撹拌し、２０mLの飽和水性ＮＨ４Ｃｌ溶液をこの温度で添加することによりクエンチした。反応混合物を、次いで１００mLの飽和ＮａＨＣＯ３および１００mLのＥｔＯＡｃに分配した。有機層を分離し、水性層をＥｔＯＡｃ(３ｘ１００mL)で抽出する。合わせた有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、粗表題化合物を得て、それをさらに精製せずに使用した。
【０１５７】
２,４−ジクロロ−５−メチル−７−トシル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン
【化１０１】
2011516555.tif 000127
５０３mg  ２,４−ジクロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン(５)(２.５mmol)および５２３mg  ＴｓＣｌ(２.７５mmol)を２０mLのＤＭＦに溶解した。０℃に冷却後、２００mg  ＮａＨ(２.７５mmol)を、Ｎ２下ゆっくり添加した。反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、１０mLの１０％水性ＮＨ４Ｃｌをこの温度で添加することによりクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ(３ｘ５０mL)で抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、表題化合物を明黄色固体として得た。
【０１５８】
２−(イソプロピルチオ)アニリン
【化１０２】
2011516555.tif 000128
１９.９ｇ  ２−アミノベンゼンチオール(７)(１５９mmol)および１７.４mLの２−ヨードプロパン(１７５mmol)のＥｔＯＨ２００mL溶液に、２３.２ｇ  ＫＯＢｕ−ｔ(２０７mmol)を０℃でＮ２下ゆっくり添加した。反応混合物を室温に温め、２時間撹拌し、次いでセライトを通して濾過し、濃縮した。残留物を３００mLのＥｔＯＡｃに再溶解し、水、次いで塩水で洗浄し、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、表題化合物を明黄色油状物として得た。
【０１５９】
２−クロロ−Ｎ−(２−(イソプロピルチオ)フェニル)−５−メチル−７−トシル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−アミン
【化１０３】
2011516555.tif 000129
３５０mg  ２,４−ジクロロ−５−メチル−７−トシル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン(６)(１.０mmol)および２５５mg  ２−(イソプロピルチオ)アニリン(８)(１.５mmol)を１５mLのＤＭＦに溶解した。３３６mg  ＫＯＢｕ−ｔ(３.０mmol)を、次いでＮ２下にゆっくり添加した。２時間、環境温度で撹拌後、反応混合物を１００mLの水に注ぎ、ＥｔＯＡｃ(３ｘ１００mL)で抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、表題化合物を白色固体として得た。
【０１６０】
２−クロロ−Ｎ−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−５−メチル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−アミン
【化１０４】
2011516555.tif 000130
８６mg  ｍＣＰＢＡ(０.３８mmol)を、９４mg  ２−クロロ−Ｎ−(２−(イソプロピルチオ)フェニル)−５−メチル−７−トシル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−アミン(９)(０.１９mmol)の１０mLのＣＨＣｌ３溶液に室温でゆっくり添加した。２時間、環境温度で撹拌後、反応を５mLの飽和水性Ｎａ２ＳＯ３溶液の添加によりクエンチし、得られた２層を分離する。水性層をＣＨ２Ｃｌ２(３×１０mL)で抽出し、合わせた有機層を塩水で洗浄し、濃縮した。残留物を５mLのＭｅＯＨに再溶解し、この溶液に１.１mLのＮａＯＭｅ(ＭｅＯＨ中０.５Ｍ溶液、０.５５mmol)を添加した。混合物を５０℃に加熱し、３０分間撹拌した。室温に冷却後、溶媒を真空下で除去し、残留物を２０mLのＥｔＯＡｃに再溶解し、飽和水性ＮａＨＣＯ３溶液および塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、表題化合物を白色固体として得た。
【０１６１】
Ｎ２−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−５−メチル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２,４−ジアミン
【化１０５】
2011516555.tif 000131
３２mg  ＴｓＯＨ(０.１６５mmol)を、２０mg  Ｎ２−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−５−メチル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２,４−ジアミン(０.０５５mmol)および３１.３mg  ２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)アニリンＨＣｌ塩(０.１１mmol)の０.２mLの２−プロパノール溶液に添加した。反応混合物を１７０℃に加熱し、４０分間マイクロ波照射下に撹拌した。室温に冷却後、溶媒を真空下で除去し、残留物を１mLのＤＭＳＯに再溶解し、質量により引き金を引かれる(mass-triggered)ＨＰＬＣで精製して、表題化合物を得た。
【０１６２】
実施例２２
２−(４−(５−イソプロポキシ−４−(４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニルアミノ)−５−メチル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−イルアミノ)−２−メチルフェニル)ピペリジン−１−イル)アセトアミド(６９)
【化１０６】
2011516555.tif 000132
８２uLのＥｔ３Ｎ(０.６９mmol)を、４０mg  Ｎ２−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ４−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−５−メチル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２,４−ジアミン(１１)(０.０６９mmol)および２８.５mg  ２−ブロモアセトアミド(０.２０７mmol)の１mLのＤＭＦ溶液に添加した。反応混合物を１００℃に加熱し、１０分間、マイクロ波照射下に撹拌した。室温に冷却後、溶媒を真空下で除去し、残留物を１mLのＤＭＳＯに再溶解し、質量により引き金を引かれるＨＰＬＣで精製して、表題化合物を得た。
【０１６３】
表３は、上記実施例を、適当な出発物質を使用して繰り返して得ることができる化合物を記載する。
【表２５】
2011516555.tif 000133
【表２６】
2011516555.tif 000134
【表２７】
2011516555.tif 000135
【表２８】
2011516555.tif 000136
【表２９】
2011516555.tif 000137
【表３０】
2011516555.tif 000138
【０１６４】
実施例２３
Ｎ５−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ７−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３Ｈ−[１,２,３]トリアゾロ[４,５−ｄ]ピリミジン−５,７−ジアミン(実施例８２)
【化１０７】
2011516555.tif 000139
５−アミノ−１−(４−メトキシベンジル)−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−カルボキサミド。
【化１０８】
2011516555.tif 000140
１−(アジドメチル)−４−メトキシベンゼン(５ｇ)および２−シアノアセトアミド(５ｇ)の混合物を、ナトリウムエトキシド(１.６ｇのナトリウムの１００mLのエタノール溶液から製造)溶液に添加した。得られた混合物を２０時間還流した。それを室温に冷却し、溶媒を減圧下除去した。残った固体を水(２０mL)に溶解し、酢酸エチル(３×５０mL)で抽出した。抽出物を合わせ、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を除去し、残留物を熱水から結晶化して、所望の生成物５−アミノ−１−(４−メトキシベンジル)−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−カルボキサミドを得た。Ｃ１１Ｈ１３Ｎ５Ｏ２(ｍ／ｚ)のESMS計算値: 247.1；実測値(M + H+): 248.1
【０１６５】
３−(４−メトキシベンジル)−３Ｈ−[１,２,３]トリアゾロ[４,５−ｄ]ピリミジン−５,７−ジオール
【化１０９】
2011516555.tif 000141
５−アミノ−１−(４−メトキシベンジル)−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−カルボキサミド(０.９ｇ)およびジエチルカーボネート(１.２mL)のＴＨＦ(３０mL)溶液に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド(１.２ｇ)を添加した。混合物を窒素下６時間還流した。それを、次いで室温に冷却した。水(２０mL)を添加し、反応混合物を約２０mLに濃縮した。それを１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ６に中和し、濾過した。固体を回収し、水で洗浄し、空気乾燥して、所望の生成物を得た。1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 7.24 (d, 2H), 7.21 (m, 1H), 6.92 (d, 2H), 6.88 (m, 1H), 5.52 (s, 2H), 3.78 (s, 3H)ppm; C12H11N5O3(m/z)のESMS計算値: 273.0, 実測値(M + H+): 274.0。
【０１６６】
５,７−ジクロロ−３−(４−メトキシベンジル)−３Ｈ−[１,２,３]トリアゾロ[４,５−ｄ]ピリミジン
【化１１０】
2011516555.tif 000142
３−(４−メトキシベンジル)−３Ｈ−[１,２,３]トリアゾロ[４,５−ｄ]ピリミジン−５,７−ジオール(０.８ｇ)、リンオキシクロライド(３mL)およびコリジン(２.１mL)の混合物を１２０℃で３時間加熱し、室温に冷却した。氷水を添加し、混合物を酢酸エチル(３×１５mL)で抽出した。有機物を合わせ、水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧下除去し、粗５,７−ジクロロ−３−(４−メトキシベンジル)−３Ｈ−[１,２,３]トリアゾロ[４,５−ｄ]ピリミジンをさらに精製せずに次工程に直接使用した。
【０１６７】
５−クロロ−Ｎ−(２−(イソプロピルチオ)フェニル)−３−(４−メトキシベンジル)−３Ｈ−[１,２,３]トリアゾロ[４,５−ｄ]ピリミジン−７−アミン
【化１１１】
2011516555.tif 000143
５,７−ジクロロ−３−(４−メトキシベンジル)−３Ｈ−[１,２,３]トリアゾロ[４,５−ｄ]ピリミジン(０.０３ｇ)および２−(イソプロピルチオ)アニリン(０.１ｇ)のジオキサン(１０mL)溶液を、１００℃で１０時間加熱した。それを、次いで室温に冷却し、酢酸エチル(２０mL)を添加した。混合物を飽和重炭酸ナトリウム(１０mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下除去し、残った残留物をシリカゲルカラム(酢酸エチル：ヘキサン＝１：１０)で精製して、所望の生成物を得た。C21H21ClN6OS (m/z)のESMS計算値: 440.1; 実測値(M + H+): 441.1。
【０１６８】
５−クロロ−Ｎ−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３−(４−メトキシベンジル)−３Ｈ−[１,２,３]トリアゾロ[４,５−ｄ]ピリミジン−７−アミン
【化１１２】
2011516555.tif 000144
５−クロロ−Ｎ−(２−(イソプロピルチオ)フェニル)−３−(４−メトキシベンジル)−３Ｈ−[１,２,３]トリアゾロ[４,５−ｄ]ピリミジン−７−アミン(０.１ｇ)のジクロロメタン(２５mL)溶液に、３−クロロペルオキシ安息香酸(７７％、２３０mg)を添加した。混合物を室温で４時間撹拌した。ジクロロメタン(２０mL)を添加し、混合物を飽和重炭酸ナトリウム(１０mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下除去し、残った残留物をシリカゲルカラム(酢酸エチル：ヘキサン＝１：３)で精製して、純粋な所望の生成物を得た。1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 10.81 (s, 1H), 8.82 (d, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.82 (dd, 1H), 7.48 (dd, 1H), 7.42 (d, 2H), 6.92 (d, 2H), 5.82 (s, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.68 (m, 1H), 1.36 (d, 6H)ppm; C21H21ClN6O3S (m/z)のESMS計算値: 472.1, 実測値(M + H+): 472.2。
【０１６９】
Ｎ５−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ７−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３Ｈ−[１,２,３]トリアゾロ[４,５−ｄ]ピリミジン−５,７−ジアミン(実施例８７)
５−クロロ−Ｎ−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−３−(４−メトキシベンジル)−３Ｈ−[１,２,３]トリアゾロ[４,５−ｄ]ピリミジン−７−アミン(１０mg)および２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(ピペリジン−４−イル)アニリン(７mg)の２Ｍ  ＨＣｌ／ジオキサン(２mL)溶液を加圧チューブに密閉し、１１０℃で２日間加熱した。それを室温に冷却し、溶媒を減圧下除去した。残った残留物をトリフルオロ酢酸(２mL)に溶解し、８０℃で２時間加熱した。トリフルオロ酢酸を除去し、残った生成物を分取ＬＣ−ＭＳで精製して、所望の生成物を得た。1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 8.67 (d, 1H), 7.98 (m, 2H), 7.74 (t, 1H), 7.43 (t, 1H), 6.82 (s, 1H), 4.61 (m, 1H), 3.57 (m, 2H), 3.38 (m, 1H), 3.18-3.24 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.03 (m, 2H), 1.82-1.93 (m, 2H), 1.41 (d, 6H), 1.31 (d, 6H)ppm; C28H36N8O3S (m/z)のESMS計算値: 564.2 (M + H+), 実測値: 565.2。
【０１７０】
実施例２４
Ｎ２−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−７−メチル−７Ｈ−プリン−２,６−ジアミン(実施例８９)
【化１１３】
2011516555.tif 000145
２−クロロ−Ｎ−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−７−メチル−７Ｈ−プリン−６−アミン
【化１１４】
2011516555.tif 000146
ＭＣＰＢＡ(２.２当量)のスラリーを、２−クロロ−Ｎ−(２−(イソプロピルチオ)フェニル)−７−メチル−７Ｈ−プリン−６−アミン(１当量)のＣＨＣｌ３(２mL／mmol)溶液に室温で添加する。２時間、環境温度で撹拌後、本反応を５mLの飽和水性Ｎａ２ＳＯ３溶液の添加によりクエンチし、得られた２層を分離する。水性層をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、合わせた有機層を塩水で洗浄し、濃縮した。得られた残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーを使用して精製して、所望の生成物を白色固体として得た。
【０１７１】
Ｎ２−(２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)フェニル)−Ｎ６−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−７−メチル−７Ｈ−プリン−２,６−ジアミン
２−クロロ−Ｎ−(２−(イソプロピルスルホニル)フェニル)−７−メチル−７Ｈ−プリン−６−アミン(１当量)のイソプロパノール懸濁液に、２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)アニリン(１当量)および４−メチルベンゼンスルホン酸(１当量)を添加した。懸濁液を１５０℃で３時間撹拌し、室温に冷却し、溶媒を蒸発させた。残留物を分取ＨＰＬＣを使用して精製して、所望の生成物をガム状固体として得た。
【０１７２】
表４は、上記実施例を、適当な出発物質を使用して繰り返して得ることができる化合物を記載する。
【表３１】
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【表３２】
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【表３３】
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【０１７３】
アッセイ
本発明の化合物を、下記のアッセイならびに当分野で既知の他のアッセイを使用して、ＡＬＫを阻害する能力について評価し得る。
【０１７４】
Ｂａ／Ｆ３細胞株パネルおよび試薬
Ｂａ／Ｆ３はマウスＩＬ−３依存性プロＢリンパ腫細胞株である。親Ｂａ／Ｆ３細胞を使用して、ＴＥＬのアミノ末端部分(アミノ酸１−３７５)またはＢＣＲとの融合により活性化された個々のチロシンキナーゼでの安定なトランスダクションにより、増殖および生存をＩＬ−３非依存性としたサブラインのパネルである。Ｔｅｌ−チロシンキナーゼ(ＴＫ)融合物で形質転換されたＢａ／Ｆ３細胞株を得るために、親Ｂａ／Ｆ３細胞を、各キナーゼドメインを担持するレトロウイルスに感染させ、ピューロマイシン選択に付し、ＩＬ−３回収して、ＩＬ−３非依存性の、形質転換Ｂａ／Ｆ３細胞を得る。
【０１７５】
各形質転換Ｂａ／Ｆ３細胞を１０％ＦＢＳ(Hyclone Cat #SV30014.03, Logan, UT)、４.５ｇ／Ｌ  グルコース(Ｓigma #G5400, St.Louis, MO)、１.５ｇ／Ｌ  重炭酸ナトリウム(Biowhittaker #17-613E, Walkersville, MD)およびＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ(Gibco #10378-016, Carlsbad, CA)を補ったＲＰＭＩ−１６４０培地(Gibco Cat #11875093, Carlsbad, CA)で培養する。細胞を週に２回分ける。
【０１７６】
Ｂａ／Ｆ３細胞生存能阻害アッセイ
試験化合物の種々のＴｅｌ−ＴＫ形質転換Ｂａ／Ｆ３系に対する効力を次の通り試験する。対数増殖期ＢａＦ３  Ｔｅｌ−ＴＫ細胞を新鮮な培地で７５,０００細胞／mLに希釈し、３８４ウェルプレート(３７５０細胞／ウェル)に５０μL／ウェルでμFill液体ディスペンサー(BioTek, Winooski, VT, USA)を使用して播種する。デュプリケートプレートを各細胞株で用いる。試験および対照化合物をＤＭＳＯで連続的に希釈し、ポリプロピレン３８４ウェルプレートに配置する。５０nLの化合物を、ピン−トランスファーデバイスを使用してアッセイプレートに移す、プレートを３７℃(５％ＣＯ２)で４８時間インキュベートする。２５μL Bright-Glo(Promega, Madison, WI, USA)を添加し、蛍光をAnalyst GT (Perkin Elmer, Wellesley, MA)を使用して定量する。カスタム曲線適合ソフトウェアを使用して、阻害剤濃度の対数の関数としての細胞生存能のロジスティックフィットを得る。ＩＣ５０を、ＤＭＳＯ対照の５０％に細胞生存能を減少させるのに必要な化合物濃度として内挿する。ＩＬ−３(最終１ng／ml)の存在下に維持し、培養している親Ｂａ／Ｆ３細胞を、ＩＬ−３(最終１ng／ml)を含む新鮮な培地で７５,０００細胞／mLに希釈し、上記と同じ方法を続ける。
【０１７７】
Ｋａｐａｓ  ２９９細胞アッセイ
ルシフェラーゼ処理した(Luciferized)Karpas 299(Karpas299-Luc)を、ルシフェラーゼ遺伝子をコードするレトロウイルスに感染させ、１０％ＦＢＳ、１％Ｐ／Ｓ／Ｌ−Ｇｌｕを補ったＲＰＭＩ−１６４９培地で培養することにより産生する。１日目に、細胞を回収し、１５０,０００細胞／ml(細胞数をViCell(ＢＤ)を使用して計算)の密度で再懸濁する。細胞を希釈懸濁液から３８４ウェルアッセイプレートに５０μl体積でμFill(Bio-TEK)を使用して分配する。連続希釈化合物(ＤＭＳＯ中)を、５０nLピンヘッドを使用してプレートに移す。アッセイプレートを３７℃で４８時間インキュベートする。４日目に、２５μl／ウェルのBright-Glo試薬(Promega)をμFill(Bio-TEK)を使用して添加する。３０分以内に、ルシフェラーゼシグナルを、ルシフェラーゼ検出用のデフォルト設定のAnalyst GTを使用して測定する。
【０１７８】
酵素的ＨＴＲＦアッセイ
ＩＧＦ−１ＲおよびＩＮＳＲ(インスリン受容体)をUpstateから購入する。次の試薬を社内で製造する；１０×キナーゼ緩衝液(ＫＢ)(２００mM  トリス(ｐＨ７.０)、１００mM  ＭｇＣｌ２、３０mM  ＭｎＣｌ２、５０nM  ＮａＶＯ４)、１０mM  ＡＴＰ、１００mg／ml  ＢＳＡ、０.５Ｍ  ＥＤＴＡ、４Ｍ  ＫＦ。Perkin-ElmerからのProxiplate-384を計画したアッセイに使用する。基質(ビオチン−ポリ−ＧＴ(61GT0BLB)、Mab PT66-K、(61T66KLB)、ストレプトアビジン−ＸＬｅｎｔ(611SAXLB))を含む全ＨＴＲＦ試薬をCIS-US, Inc.から購入する。
【０１７９】
基質／ＡＴＰミックスをＡＴＰ(最終濃度、３μM)およびビオチニル化ポリ−ＧＴ(最終濃度、１０ng／μl)を１×ＫＢに添加することにより調製し、Proxiplate−３８４に５μl／ウェルでμFill(Bio-TEK)を使用して分配する。連続希釈化合物(ＤＭＳＯ中)を、５０nLピンヘッドを使用してプレートに移す。５μLの調製した酵素ミックス(酵素(最終濃度、５ng／μl)、ＢＳＡおよびＤＴＴと１×ＫＢ中で根号)をμFill(Bio-TEK)を使用して添加して、キナーゼ反応を開始させる。アッセイプレートを室温で２時間インキュベートする。検出ミックスをMab PT66-Kおよびストレプトアビジン−ＸＬｅｎｔの両方をＫＦ(最終濃度、１２５mM)、ＥＤＴＡ(最終濃度、５０mM)およびＢＳＡ(最終濃度、１００μｇ／ml)含有０.５×ＫＢ溶液に添加することにより調製する。反応終了時、１０μLの検出ミックスを添加し、３０分間、室温でインキュベートした後、測定する。ＨＴＲＦシグナルをAnalyst-GT(molecular dynamic)を使用して検出する。
【０１８０】
ＩＧＦ１−Ｓ３−５またはＩＮＳＲ−Ｓ３−５についてＲＥ１−ｐＧＬ３を使用したＵ２ＯＳ細胞でのレポーターアッセイ
Ｍｃ−Ｃｏｙ  １０％ＦＢＳ中に１０Ｍ細胞／T175 Flaskを播種し、４日間後培地を吸引し、新鮮培地を添加する。翌日(播種５日後)、細胞をトリプシン処理し、１回ＰＢＳで洗浄し、次いでＰ／Ｓ／Ｇを含むＭｃ−Ｃｏｙ培地４％脱脂血清に再懸濁する。細胞を計数し、４００,０００細胞／mlに希釈する。
【０１８１】
９５mlの細胞(４０００００細胞／ml(４０Ｍ))に対し、次のＤＮＡ／Ｆｕｇｅｎｅ６ミックスを調製する：血清なしの５ml  Ｍｃ−Ｃｏｙ培地；１２０μg  ＤＮＡミックス(２０μg  ＩＧＦ１Ｒ−Ｓ３−５またはＩＮＳＲ−Ｓ３−５＋１００μg  ＲＥ１−ｐＧＬ３)；および２４０μL  Ｆｕｇｅｎｅ６試薬。ＤＮＡ／Ｆｕｇｅｎｅ６ミックスを１５分間インキュベートし、それを４％脱脂血清中の細胞に添加する。３８４ウェルプレートで５０μL／ウェルに分配する。２２−２４時間後、５０nLの連続希釈化合物をピンヘッドを使用して分配する。３０分後、Ｍｃ−Ｃｏｙ  ４％脱脂血清に希釈した２μLの２６×ＩＧＦ１(または１００×インスリン)用量をμFillを使用して添加する。３０時間後、２５μL  １００％bright-gloを添加し、蛍光測定のためにAnalyst-GTで読み取る。
【０１８２】
ここに記載する実施例および態様は説明のみを目的とするものであり、それに照らした種々の改変および変化が当業者には示唆され、本明細書の精神および範囲内におよび添付の請求の範囲の範囲内に包含されることは理解されるべきである。ここに引用する全ての刊行物、特許および特許出願は、全ての目的のために引用によりここに包含させる。
【国際調査報告】
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