(57)【要約】  本発明は、治療を必要とするヒトにおいて癌を治療する方法に関し、その方法は、そのヒトからのサンプルにおいてニューロフィブロミン−２（ＮＦ２）遺伝子の遺伝子産物の検出可能な量の有無を判定すること、および遺伝子産物またはアイソフォーム１遺伝子産物が検出されない場合に、そのヒトに、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤またはその薬学上許容される塩の有効量を投与することを含んでなる。本発明はまた、治療を必要とするヒトにおいて癌を治療する方法に関し、その方法は、そのヒトからのサンプルにおいてＮＦ２遺伝子の機能的アイソフォーム１タンパク質またはその機能的断片の検出可能な量の有無を判定すること、および遺伝子産物またはアイソフォーム１遺伝子産物が検出されない場合に、そのヒトに、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤またはその薬学上許容される塩の有効量を投与することを含んでなる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療を必要とするヒトにおいて癌を治療する方法であって、該ヒトからのサンプルにおいてニューロフィブロミン−２（ＮＦ２）遺伝子の遺伝子産物の検出可能な量の有無を判定すること、および遺伝子産物またはアイソフォーム１遺伝子産物が検出されない場合に、該ヒトに、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤またはその薬学上許容される塩の有効量を投与することを含んでなる、方法。
【請求項２】
リン酸化されたＦＡＫ（ｐ−ＦＡＫ）を検出することをさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物が存在する場合に、ＮＦ２のアイソフォーム１遺伝子産物の機能喪失を検出することをさらに含んでなる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物の検出可能な量が存在し、ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物の機能喪失が検出される場合に、該ヒトに、ＦＡＫ阻害剤またはその薬学上許容される塩の有効量を投与することをさらに含んでなる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ＮＦ２遺伝子の遺伝子産物またはアイソフォーム１遺伝子産物の有無が免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いて判定される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＩＨＣが、ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物と結合するがＮＦ２遺伝子の他のアイソフォーム遺伝子産物と結合しない抗体を使用することを含んでなる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ＦＡＫ阻害剤による前記治療が無増悪生存（ＰＦＳ）期間の延長をもたらす、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＰＦＳ期間の延長が臨床的に意味がある、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ＰＦＳ期間の延長が統計的に有意である、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
前記サンプルが１種以上の腫瘍細胞を含んでなる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
ＮＦ２遺伝子の遺伝子産物がタンパク質またはその機能的断片である、請求項１〜１１に記載の方法。
【請求項１２】
治療を必要とするヒトにおいて癌を治療する方法であって、該ヒトからの腫瘍サンプルからマーリン（ｍｅｒｌｉｎ）またはその機能的断片の検出可能な量の有無を判定すること、およびマーリンまたはその機能的断片が検出されない場合に、該ヒトに、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学上許容される塩の有効量を投与することを含んでなる、方法。
【請求項１３】
治療を必要とするヒトにおいてマーリン陰性癌を治療する方法であって、該ヒトに、ＦＡＫ阻害剤またはその薬学上許容される塩の治療上有効な量を投与することを含んでなる、方法
【請求項１４】
前記ＦＡＫ阻害剤が２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学上許容される塩である、請求項１〜１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記癌がシュワン腫、髄膜腫、上衣腫、中皮腫、膠芽腫、黒色腫  甲状腺癌、膀胱癌、皮膚癌、胃癌、骨癌、腎癌、乳癌および腸癌からなる群から選択される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記癌が中皮腫である、請求項１７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は癌を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
接着斑キナーゼ（本明細書ではＦＡＫ）は、接着斑においてシグナル伝達機能および足場機能の両方を有する非受容体型タンパク質チロシンキナーゼである。ＦＡＫは、細胞接着、移動および生存の主要なレギュレーターである。従って、ＦＡＫ阻害は、複数の癌の治療への重要な手段を提供する。治療において、ＦＡＫ阻害剤に応答しない患者から応答する患者を同定することが重要であり、その結果、不応者には代替治療が提供され得る。
【図面の簡単な説明】
【０００３】
【図１】図１は、ウエスタンブロッティングによる様々な細胞株におけるＮＦ２の遺伝子産物（タンパク質）のウエスタンブロット検出についての画像を示す。図１Ａは複数のＮＦ２アイソフォームを示し、図１ＢにＮＦ２のアイソフォーム１だけを示している。
【図２】図２は、ヒト細胞株ＮＣＩ−Ｈ２０５２（ｍｅｒｌｉｎアイソフォーム１が検出されないＮＦ２変異株）およびヒト細胞株ＭＳＴＯ−２１１Ｈ（ｍｅｒｌｉｎアイソフォーム１が検出される野生型ＮＦ２）におけるＦＡＫ［図３Ａ］およびリン酸化されたＦＡＫ（ｐＦＡＫ）［図３Ｂ］のタンパク質レベルのウエスタンブロット検出についての画像を示す。
【図３】図３は、５種の中皮腫細胞株および１種の肺細胞株におけるＮＦ２のアイソフォーム１のタンパク質遺伝子産物（ｍｅｒｌｉｎアイソフォーム１）の免疫組織化学的検出についての画像を示す（ｍｅｒｌｉｎアイソフォーム１が検出されない細胞、左のパネル；ｍｅｒｌｉｎアイソフォーム１が検出される細胞、右のパネル）。
【図４】図４は、ｍｅｒｌｉｎアイソフォーム１の状態による、化合物Ａでの治療を受けた患者のカプラン・メイヤー法による無増悪生存期間を示すグラフである。
【図５】図５は、化合物Ａでの治療を受けた患者の治療期間についての棒グラフであり、このグラフにｍｅｒｌｉｎアイソフォーム１の状態を示している。
【図６】図６は、ＲＥＣＩＳＴ規準により判定した、化合物Ａでの治療を受けた患者の最良効果時における腫瘍測定値（治験責任医師による評価）の、ベースラインからの変化率についての棒グラフであり、このグラフにｍｅｒｌｉｎアイソフォーム１の状態を示している。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、治療を必要とするヒトにおいて癌を治療する方法に関し、その方法は、該ヒトからのサンプルにおいてニューロフィブロミン−２（ＮＦ２）遺伝子の遺伝子産物の検出可能な量の有無を判定すること、および遺伝子産物またはアイソフォーム１遺伝子産物が検出されない場合に、該ヒトに、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤またはその薬学上許容される塩の有効量を投与することを含んでなる。本発明はまた、治療を必要とするヒトにおいて癌を治療する方法に関し、その方法は、該ヒトからのサンプルにおいてＮＦ２遺伝子の機能的アイソフォーム１タンパク質またはその機能的断片の検出可能な量の有無を判定すること、および遺伝子産物またはアイソフォーム１遺伝子産物が検出されない場合に、該ヒトに、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤またはその薬学上許容される塩の有効量を投与することを含んでなる。
【発明の詳細な説明】
【０００５】
細胞外マトリックス（ＥＣＭ）は、体の組織および臓器の細胞構成のための状況と枠組みを提供する。組織のＥＣＭと細胞との間の相互作用は、発生、ホメオスタシス、細胞増殖および細胞生存の制御において重要な役割を有する。細胞とＥＣＭとの間の相互作用または細胞−細胞間相互作用の異常は、構造変化、細胞移動促進、浸潤および増殖性をもたらし、最終的にはヒト疾患発生に至る可能性がある。癌は、無秩序な細胞移動と増殖を伴うヒト疾患の典型的な例であり、浸潤性および転移性疾患へと進展する。
【０００６】
ＥＣＭとの細胞の相互作用は、ＥＣＭの成分による細胞受容体の関与を通じた細胞接着を必要とする。ＥＣＭ結合、またはより具体的には、膜貫通型インテグリンファミリーのタンパク質とのフィブロネクチン結合により、接着斑複合体（または焦点接触）と一般的に呼ばれるこのＥＣＭ−細胞界面でタンパク質の動的クラスターを形成する。これらの複合体はＥＣＭを細胞骨格と結びつける。この界面での、構造に関連しかつシグナル伝達する複合体の形成は、細胞にとって重要な調節的役割を有する。足場特性およびシグナル伝達特性を有する複数のタンパク質が接着斑に局在することは記載されている。非受容体型タンパク質チロシンキナーゼである接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）は、ＰＫＴ２またはタンパク質チロシンキナーゼ２としても知られており、接着斑においてシグナル伝達機能と足場機能の両方を有し、複雑な、細胞接着、移動および生存の中心的なレギュレーターとして示されている［１〜３］。
【０００７】
ＦＡＫは、インテグリン依存性細胞接着の制御を理解し、足場依存性細胞増殖、および腫瘍細胞の場合の、足場非依存性細胞増殖に対して洞察を得るために取り組んでいる研究者により単独で発見された［４、５］。他の研究者はｖ−ｓｒｃ癌遺伝子のトランスフォーメーション機構を理解するためにその基質を追求している。ＦＡＫが接着斑におけるｓｒｃの基質および結合相手として発見されることにより、足場非依存性細胞増殖およびアノイキスからの保護についての機構を理解するための最初の洞察が得られた［６、７］。その後、数多くの研究によってＦＡＫ発現レベルおよび／または活性化状態は癌発生および進行と関連づけられた。ＦＡＫの活性化は、リン酸化されたＦＡＫまたはｐｈｏｓｐｈｏｒ−ＦＡＫ（ｐＦＡＫ）のレベル、より具体的には、チロシン３９７（ｓｒｃの結合部位でもあるＦＡＫの自己リン酸化部位）がリン酸化されたｐＦＡＫの量により推定されることが多い。ｐＦＡＫレベルの高まりは癌の初期のより進行した段階、重要なことには、転移性疾患への移行と関係していた［３、８、９］。
【０００８】
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミド（以下、「化合物Ａ」）またはその薬学上許容される塩は、その薬学上許容される塩とともに、国際出願日２００９年１０月２７日の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６２１６３号（国際公開第ＷＯ２０１０／０６２５７８号、国際公開日２０１０年６月３日）に、特に癌の治療においてＦＡＫ活性の阻害剤として有用であることが開示および特許請求されており、この国際出願の開示は総て引用することにより本明細書の一部とされ、この国際出願における化合物Ａは実施例４１ａの化合物である。
【０００９】
ＦＡＫ活性の阻害剤として有用である他の化合物は、国際出願日２００８年３月１０日の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ／２００８００３２３５号（国際公開第ＷＯ２００８／１１５３６９号、国際公開日２００８年９月２５日）に記載されており、この国際出願の開示は総て引用することにより本明細書の一部とされる。
【００１０】
化合物Ａは、新規な癌治療としてヒトにおいて試験中である。ＦＡＫ阻害剤、例えば、化合物Ａに反応する可能性が高い遺伝子型および表現型を同定することが望ましい。
【００１１】
神経繊維腫症２型（ＮＦ２）は、ＮＦ２（ニューロフィブロミン−２またはマーリン（ｍｅｒｌｉｎ））遺伝子の遺伝性生殖細胞突然変異によって起こる遺伝性癌症候群である。ＮＦ２遺伝子は腫瘍サプレッサーであり、ＮＦ２症候群では腫瘍サプレッサー機能の異常または不在が認められる。ＮＦ２症候群は、シュワン腫、髄膜腫および上衣腫を含む神経系の腫瘍を発症する患者を特徴とする。腫瘍は、残りの対立遺伝子の体細胞での不活性化により発生する。ＮＦ２遺伝子の突然変異は大多数の散発性神経系腫瘍でも見出され、中枢神経系癌におけるこの腫瘍サプレッサーの重要性が強調される［１０］。さらに、ＮＦ２の同系接合型突然変異は、悪性中皮腫（５０％）、甲状腺（１７％）、膀胱（１１％）、皮膚（５％）、胃（５％）、骨（３％）、腎臓（２％）、乳房（２％）および腸（２％）を含む他の腫瘍タイプでも確認された［１１］。そして最後に、ＮＦ２遺伝子のタンパク質産物（マーリンと呼ばれることが多い）は、ＥｒｂＢ２とのｓｒｃの結合を調節し、ｓｒｃ−ＦＡＫ経路に影響を及ぼすことすることにより、グリア細胞増殖の重要なレギュレーターとして関係していた［１２］。これらの観察結果は、マーリンが膠芽腫に関与する可能性があることを示唆している。
【００１２】
ＮＦ２遺伝子のタンパク質産物は、最も一般的には、マーリンと呼ばれるが、ニューロフィブロミン−２タンパク質としても知られている。マーリンの複数のアイソフォームが記載されており、アイソフォーム１およびアイソフォーム２が最も一般的である［１３］。アイソフォーム１は、ＮＦ２の腫瘍サプレッサー活性を有することが報告されており、エキソン１６およびエキソン１７の選択的スプライシングにより異なるカルボキシル末端のタンパク質がもたらされることがアイソフォーム２と異なっている。多くの研究により、マーリンと相互作用する膜貫通タンパク質および細胞内タンパク質が確認され、一部のタンパク質は３つの分葉をもつアミノ末端の４．１、エズリン（Ｅｚｒｉｎ）、ラドキシン（Ｒａｄｉｘｉｎ）、モエシン（Ｍｏｅｓｉｎ）（ＦＥＲＭ）ドメインを含む保存されたドメインを介して相互作用した。これらの相互作用は、細胞骨格制御、細胞運動性および細胞浸潤に重要である。Ｍｅｒｌｉｎは、ＨＩＰＰＯシグナル伝達経路（哺乳類では保存されるがキイロショウジョウバエ(Drosophila melanogaster)ではまだ解明されていない経路）に近位のタンパク質とも相互作用する［１４］。ＨＩＰＰＯ経路は、細胞増殖、細胞生存および臓器サイズに関与する。これらの細胞活性のＨＩＰＰＯ経路制御は、マーリンが癌細胞増殖および進行に影響を及ぼすことを可能にする［１３］。
【００１３】
悪性中皮腫は高悪性度の致死性疾患であり、多くの場合、アスベストへの曝露と関連している［１５］。中皮腫の腫瘍は浸潤性が高いと特徴付けられており、症例のおよそ４０〜５０％において、ＮＦ２遺伝子は染色体２２ｑ１２での染色体改変により変異しているかまたは欠失している。ＮＦ２について欠失している中皮腫細胞におけるマーリンの強制発現は細胞移動性および浸潤性を阻害することが示された。Ｍｅｒｌｉｎ再発現は、ＦＡＫリン酸化を減少させ、ｓｒｃおよびｐ８５（ホスホイノシチド３−キナーゼの調節サブユニット）との結合を破壊することも示されている。これらの研究は、マーリンの不活性化はＦＡＫ活性化をもたらし、中皮腫発症の重要な段階であり得ることを示唆している［１６］。
【００１４】
本開示は、特定のＮＦ２変異癌細胞またはマーリン陰性癌細胞はそれらの野生型対応物よりもＦＡＫ阻害剤に対する感受性がずっと高いという発見に関するものである；従って、ＦＡＫ阻害剤の有効性は、それらのＮＦ２突然変異状態またはマーリンアイソフォーム１発現状態に基づいて、例えば、ＮＦ２の遺伝子産物、例えば、マーリンアイソフォーム１タンパク質、の有無に基づいて患者を前もって選択することにより改善することができる。
【００１５】
ＮＦ２遺伝子およびＮＦ２遺伝子突然変異
本開示は、癌を治療する方法に関し、その方法は、ＦＡＫ阻害剤またはその薬学上許容される塩の有効量を、薬学上許容される組成物で、１以上のＮＦ２突然変異を有する癌に罹患しているヒトに投与することを含む。本開示はまた、治療を必要とするヒトにおいて癌を治療する方法に関し、その方法は、治療を必要とするヒトに、ＦＡＫ阻害剤またはその薬学上許容される塩の有効量を投与することを含んでなり、この場合、該ヒトは、少なくとも１つのニューロフィブロミン２（ＮＦ２）突然変異、またはＮＦ２遺伝子の遺伝子産物、例えば、マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量の不在をもたらす任意の突然変異、またはＮＦ２遺伝子の機能的遺伝子産物、例えば、機能的マーリンアイソフォーム１タンパク質もしくはその断片の検出可能な量の不在をもたらす任意の突然変異を有する癌に罹患していると判定されたヒトである。少なくとも１つのニューロフィブロミン２（ＮＦ２）突然変異、またはＮＦ２遺伝子の遺伝子産物、例えば、マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量の不在をもたらす任意の突然変異、またはＮＦ２遺伝子の機能的遺伝子産物、例えば、機能的マーリンアイソフォーム１タンパク質もしくはその断片の検出可能な量の不在をもたらす任意の突然変異を有する癌に罹患しているヒトへのＦＡＫ阻害剤の投与は、そのような突然変異のないヒトと比べて、１以上の症状の増強をもたらす。
【００１６】
野生型ＮＦ２遺伝子（ＮＭ＿０００２６８および遺伝子ＩＤ：４７７１）の発現は、複数の遺伝子産物、すなわち、複数のアイソフォームの発現をもたらす。例えば、野生型ＮＦ２遺伝子の発現は、少なくとも、ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１およびアイソフォーム２の発現をもたらす。野生型ではないＮＦ２遺伝子の発現は、その遺伝子が１以上の突然変異を有するため、ＮＦ２遺伝子の１以上のアイソフォームの遺伝子産物の発現の欠如をもたらし得る。ある特定の実施形態では、ＮＦ２遺伝子における突然変異、すなわち、ＮＦ２突然変異は、１以上の遺伝子産物またはそれらの断片をもたらすが、それらはｍＲＮＡまたはタンパク質へと発現されない。ある特定の実施形態では、癌治療を必要とするヒトから得られたサンプルは、ＮＦ２突然変異を有する細胞を含み、この場合、その突然変異は検出可能なｍＲＮＡ転写物をもたらすが、それらはタンパク質へと翻訳されず、そのような突然変異は未熟な停止コドンをもたらす。他の実施形態では、ＮＦ２突然変異はｍＲＮＡおよび翻訳されたタンパク質の発現の欠如をもたらすが、例えば、これは、ＮＦ２突然変異が染色体欠損または他のＮＦ２遺伝子欠失によるものであったためである。他の実施形態では、ＮＦ２突然変異は、例えば、染色体欠損、ＮＦ２遺伝子欠失、または未熟停止コドンをもたらす突然変異のため、ＮＦ２のアイソフォーム１の、発現の欠如または検出可能な量の不在をもたらす。
【００１７】
さらなる実施形態では、ＮＦ２突然変異は、ＮＦ２遺伝子によって発現されるタンパク質の発現の欠如をもたらし、この場合、そのタンパク質は腫瘍サプレッサーアイソフォームである。別の実施形態では、発現されない腫瘍サプレッサーアイソフォームはＮＦ２のアイソフォーム１である。別の実施形態では、ＮＦ２遺伝子における突然変異は、ＮＦ２のアイソフォーム１遺伝子産物の発現の欠如をもたらす。さらなる実施形態では、変異ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１タンパク質遺伝子産物は発現されない。別の実施形態では、変異ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１タンパク質遺伝子産物は検出可能な量で存在しない。さらなる実施形態では、ＮＦ２のアイソフォーム１タンパク質遺伝子産物の機能的断片、すなわち、in vivoまたはin vitroで測定した場合に腫瘍サプレッサー活性を保持する断片は、検出可能な量で存在しない。
【００１８】
他の実施形態では、ＮＦ２遺伝子の遺伝子産物は発現され得る、すなわち、検出可能な量で存在し得るが、その遺伝子産物は機能を果たさない可能性がある。遺伝子産物の機能喪失は様々な方法で起こり得るが、それには突然変異が含まれる。従って、本発明はまた、治療を必要とするヒトにおいて癌を治療する方法に関し、その方法は、該ヒトからのサンプルにおいてＮＦ２遺伝子の機能的アイソフォーム１タンパク質またはその機能的断片の検出可能な量の有無を判定すること、および遺伝子産物またはアイソフォーム１遺伝子産物が検出されない場合に、該ヒトに、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤またはその薬学上許容される塩の有効量を投与することを含んでなる。
【００１９】
ヒトから得られた癌においてＮＦ２突然変異が検出される場合のいくつかの実施形態では、ＦＡＫ阻害剤が投与される。腫瘍サプレッサーアイソフォームの発現の欠如、例えば、ＮＦ２のアイソフォーム１の発現の欠如が存在する場合の本明細書における方法では、その方法は、癌を有するヒトに、ＦＡＫ阻害剤またはその薬学上許容される塩を投与することを含んでなる。一実施形態は、治療を必要とするヒトにおいて癌を治療する方法であり、その方法は、該癌においてＮＦ２遺伝子の１以上のアイソフォームの発現を検出すること、および腫瘍サプレッサーアイソフォームの検出可能な発現がなされない場合に、ＦＡＫ阻害剤またはその薬学上許容される塩の有効量を投与することを含んでなる。本明細書における別の実施形態は、治療を必要とするヒトにおいて癌を治療する方法であり、その方法は、該癌の１種以上の細胞のサンプルを得ること、該サンプルにおいてＮＦ２のアイソフォーム１の発現を検出すること、および該ＮＦ２アイソフォーム１が検出されない場合に、ＦＡＫ阻害剤またはその薬学上許容される塩の有効量を投与することを含んでなる。ＮＦ２のアイソフォーム１が検出されない場合のさらなる実施形態では、前記検出はＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１タンパク質遺伝子産物の検出である。本明細書におけるさらに別の実施形態は、治療を必要とするヒトにおいて癌を治療する方法であり、その方法は、該癌の１種以上の細胞のサンプルを得ること、該サンプルにおいてＮＦ２のアイソフォーム１および１つ以上の追加アイソフォームの有無を検出すること、およびアイソフォーム１が検出されない場合に、ＦＡＫ阻害剤またはその薬学上許容される塩の有効量を投与することを含んでなる。
【００２０】
他の実施形態では、野生型ＮＦ２のアイソフォーム１は、癌治療を必要とするヒトからの腫瘍またはそのサンプルにおいて発現される。さらなる実施形態では、野生型ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物が検出可能な量で存在する。さらに別の実施形態では、野生型ＮＦ２のアイソフォーム１の断片が検出可能な量で存在する。さらなる実施形態では、ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物の断片は機能的断片であり、この場合、ＮＦ２のアイソフォーム１遺伝子産物の断片はin vitroまたはin vivoあるいはその両方で腫瘍サプレッサー活性を保持する。ＮＦ２のアイソフォーム１遺伝子産物がタンパク質またはその機能的断片であり、そのアイソフォーム１タンパク質がヒトサンプルにおいて検出可能な量で存在する場合の特定実施形態では、該ヒトは、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学上許容される塩により治療され、前記方法は、前記癌のモニタリングの強化をさらに含む。ＮＦ２のアイソフォーム１遺伝子産物がタンパク質またはその機能的断片であり、そのアイソフォーム１タンパク質がヒトサンプルにおいて検出可能な量で存在する場合の特定実施形態では、該ヒトは、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドと他の抗癌剤との併用により治療され、前記方法は、前記癌のモニタリングの強化をさらに含む。
【００２１】
代替実施形態では、癌治療を必要とするヒトから得られたサンプルにおけるＮＦ２のアイソフォーム１遺伝子産物の検出可能な量の有無がバイオマーカーとして使用され、この場合、該サンプルにおけるＮＦ２のアイソフォーム１の検出可能な量の不在は、該ヒトがＦＡＫ阻害剤による治療に適していることを示す。さらなる実施形態では、癌治療を必要とするヒトから得られたサンプルにおけるＮＦ２のアイソフォーム１遺伝子産物の検出可能な量の有無がバイオマーカーとして使用され、この場合、該遺伝子産物はタンパク質であり、該サンプルにおけるニューロフィブロミン２アイソフォーム１タンパク質の検出可能な量の不在は、該ヒトがＦＡＫ阻害剤による治療に適していることを示す。さらなる実施形態では、癌治療を必要とするヒトから得られたサンプルにおけるＮＦ２のアイソフォーム１遺伝子産物、例えば、ニューロフィブロミン２アイソフォーム１タンパク質の検出可能な量の有無がバイオマーカーとして使用され、この場合、該サンプルにおけるニューロフィブロミン２アイソフォーム１タンパク質の検出可能な量の不在は、該ヒトがＦＡＫ阻害剤による治療に適していることを示し、この場合、該ＦＡＫ阻害剤は、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドであり、該癌治療は中皮腫に対するものである。
【００２２】
Ｍｅｒｌｉｎアイソフォーム１
ＮＦ２遺伝子のタンパク質遺伝子産物はマーリン（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ３５２４０）と呼ばれることが多く、ニューロフィブロミン−２としても知られている。従って、当業者ならば、マーリンアイソフォーム１タンパク質がニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質およびＮＦ２アイソフォーム１タンパク質と同じであることが分かるであろう。ＮＦ２のアイソフォーム１タンパク質遺伝子産物、またはマーリンアイソフォーム１タンパク質は、当技術分野において腫瘍サプレッサー機能を有することが知られている。マーリンアイソフォーム１タンパク質は、略して、マーリンと呼ばれることもある；マーリンがマーリンアイソフォーム１を意味するかまたは複数のアイソフォームを意味するかは文脈から明らかになるはずである。本明細書において、マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量が存在しない細胞（例えば、腫瘍細胞）は「マーリン陰性」と呼ばれる。本明細書において、癌は、その癌もしくは腫瘍において、またはその癌細胞の少なくとも一部、例えば、癌治療を必要とするヒトからのサンプルとして得られた癌細胞の一部において、マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量が存在しない場合には、「マーリン陰性癌」である。本明細書において、機能的マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量が存在しない細胞（例えば、腫瘍細胞）も同じようにマーリン陰性と呼ばれる。本明細書において、癌は、その癌もしくは腫瘍において、またはその癌細胞の少なくとも一部、例えば、癌治療を必要とするヒトからのサンプルとして得られた癌細胞の一部において、機能的マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量が存在しない場合も、マーリン陰性癌である。
【００２３】
マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量の不在は、上記のように、ＮＦ２遺伝子における突然変異によって起こり得る。マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量の不在は、異常な転写もしくは翻訳によって、または正常および異常な、様々な転写後もしくは翻訳後プロセスによって起こり得る。マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量の不在は、マーリンアイソフォーム１  ｍＲＮＡの転写に必要なプロモーターまたは他の調節配列における突然変異によって起こり得る。さらに、マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量の不在は、様々な後成的現象に起因しているかもしれない；例えば、マーリンアイソフォーム１タンパク質は後成的機構によって抑制され得る。マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量の不在は、ＮＦ２遺伝子ではないが、マーリン発現（例えば、マーリンアイソフォーム１  ｍＲＮＡまたはタンパク質発現）に必要な１種以上の他の遺伝子（限定されるものではないが、転写、スプライシング、翻訳またはタンパク質安定性に必要な因子を含む）における遺伝子修飾（限定されるものではないが、改変、突然変異、欠失、挿入などを含む）の結果かもしれない。
【００２４】
本明細書におけるいくつかの実施形態では、マーリンアイソフォーム１タンパク質が検出可能な量で存在するかもしれないが、そのマーリンアイソフォーム１タンパク質は機能を果たさない。機能的マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量の不在は、突然変異、異常な転写もしくは翻訳、または異常な転写後もしくは翻訳後プロセッシングなどの様々な理由で起こり得る。マーリンアイソフォーム１タンパク質の機能喪失を示す癌細胞は、マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量の不在を示す癌細胞と同じ表現型を示すであろう；この表現型は、そのような癌細胞を有するヒトにおいて、例えば、機能的マーリンアイソフォーム１タンパク質を有する癌に罹患しているヒトと比べて、本明細書において開示されるＦＡＫ阻害剤またはその薬学上許容される塩による治療改善を可能にするであろう。この表現型にｐＦＡＫ発現レベルの上昇も含まれることがある。
【００２５】
マーリンアイソフォーム１タンパク質の機能喪失の確認は、当業者の技術の範囲内であり、限定されるものではないが、マーリンタンパク質により下流シグナル伝達を測定することを含む。そのような下流シグナル伝達経路の１つは、転写因子ＹＡＰ／ＴＡＺを調節するＭＳＴ１／２キナーゼおよびＬＡＴＳ１／２キナーゼを含む古典的経路である。下流シグナル伝達の測定は、所望により、キナーゼ（例えば、ＭＳＴ１／２および／またはＬＡＴ１／２）の標的のリン酸化状態および／またはリン酸化レベル(phosophorylation level)を決定することを含む。下流シグナル伝達の測定は、所望により、ＹＡＰ／ＴＡＺ転写複合体の標的遺伝子の発現レベルを測定することを含む。マーリンが関与するキナーゼ経路の下流シグナル伝達の測定は当業者の技術の範囲内である。
【００２６】
本明細書における一実施形態は、治療を必要とするヒトにおいて癌を治療する方法であり、その方法は、該ヒトからの腫瘍サンプルからマーリンアイソフォーム１タンパク質またはその機能的断片の検出可能な量の有無を判定すること、およびマーリンアイソフォーム１タンパク質またはその機能的断片が検出されない場合に、該ヒトに、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学上許容される塩の有効量を投与することを含む。
【００２７】
別の実施形態は治療を必要とするヒトにおいてマーリン陰性癌を治療する方法であり、その方法は、該ヒトに、ＦＡＫ阻害剤の治療上有効な量を投与することを含む。ヒトにおいてマーリン陰性癌を治療する方法のさらなる実施形態では、ＦＡＫ阻害剤は、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学上許容される塩である。
【００２８】
別の実施形態では、癌治療を必要とするヒトから得られたサンプルにおけるマーリンアイソフォーム１タンパク質またはその機能的断片の検出可能な量の有無がバイオマーカーとして使用され、この場合、該サンプルにおけるマーリンアイソフォーム１タンパク質またはその機能的断片の検出可能な量の不在は、該ヒトがＦＡＫ阻害剤による治療に適していることを示す。さらなる実施形態では、癌治療を必要とするヒトから得られたサンプルにおけるマーリンアイソフォーム１タンパク質またはその機能的断片の検出可能な量の有無がバイオマーカーとして使用され、この場合、該サンプルにおけるマーリンアイソフォーム１タンパク質またはその機能的断片の検出可能な量の不在は、該ヒトがＦＡＫ阻害剤による治療に適していることを示し、この場合、該ＦＡＫ阻害剤は、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドであり、該癌治療は中皮腫に対するものである。
【００２９】
ｐＦＡＫ
リン酸化されたＦＡＫまたはｐＦＡＫは、１以上のＮＦ２突然変異を有する細胞、例えば、腫瘍細胞において過剰発現され得る。例えば、ｐＦＡＫは、ＮＦ２遺伝子において突然変異を有する一部の腫瘍細胞において過剰発現され、この場合、ＮＦ２遺伝子における突然変異はＦ２遺伝子のアイソフォーム１タンパク質遺伝子産物の発現の欠如をもたらす。従って、いくつかの実施形態では、ｐＦＡＫは、ニューロフィブロミン２アイソフォーム１タンパク質またはマーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量が存在しない腫瘍細胞ではより多量で存在する。（ニューロフィブロミン２アイソフォーム１タンパク質とは、マーリンアイソフォーム１タンパク質のものと同じアミノ酸配列を意味し、各々は、とりわけ、当技術分野で公知であり、本明細書において記載されるように、ＮＦ２アイソフォーム１タンパク質と呼ばれる）。
【００３０】
本明細書における癌治療方法の一実施形態では、その方法は、治療を必要とするヒトからのサンプルにおいてｐＦＡＫのレベルを決定すること、および対照サンプルと比べて、ｐＦＡＫのレベルの上昇が見出された場合に、該ヒトに、ＦＡＫ阻害剤またはその薬学上許容される塩の有効量を投与することを含んでなる。さらなる実施形態では、該対照サンプルは正常患者組織から準備される。別の実施形態では、該対照サンプルは、野生型ＮＦ２遺伝子を含んでなる細胞から準備される。さらに別の実施形態では、複数の対照サンプルが使用される。
【００３１】
本明細書における癌治療方法の別の実施形態では、ＮＦ２のアイソフォーム１の検出可能な量の有無が判定され、ｐＦＡＫのレベルが決定される。さらなる実施形態では、ｐＦＡＫの上昇およびＮＦ２のアイソフォーム１の検出可能な量の不在が認められる場合には、ＦＡＫ阻害剤またはその薬学上許容される塩が投与される。ｐＦＡＫレベルの決定を含んでなる癌治療方法のさらなる実施形態では、癌は中皮腫であり、ＦＡＫ阻害剤が投与される場合には、それは式ＩのＦＡＫ阻害剤、好適には、化合物Ａである。
【００３２】
遺伝子産物の検出可能な量の有無
ＮＦ２の遺伝子産物（例えば、アイソフォーム１）の有無の検出とは、遺伝子産物（例えば、ＮＦ２アイソフォーム１タンパク質、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質、またはマーリンアイソフォーム１タンパク質）がサンプルにおいて発現される可能性が高く、例えば、検出に用いられる任意の特定アッセイによりバックグラウンドノイズを上回るレベルで検出され得ることの確認を意味する。当業者ならば、遺伝子産物が発現されるかまたは存在することを示す陽性シグナルと低シグナルまたはバックグラウンドシグナルとの判別についてよく知っている。陽性シグナルからバックグラウンドまたはノイズを確認するために、陽性対照および陰性対照を実施することができる。例えば、「カットオフ」は、目的の遺伝子産物を発現しない陰性対照においてバックグラウンドノイズ（例えば、染色または他の測定シグナル）のレベルを決定することにより確認することができる。従って、遺伝子産物の存在とは、組織において、例えば、組織内の１種以上の細胞または細胞の一部において、その遺伝子産物がバックグラウンドレベルを上回って検出されることを意味し得る。逆に、遺伝子産物の不在とは、組織において、例えば、組織内の１種以上の細胞または細胞の一部において、その遺伝子産物がバックグラウンドレベルより上で測定不能であることを意味する。
【００３３】
タンパク質である遺伝子産物の検出可能な量の有無は、当技術分野で周知の様々な方法により達成することができる。これらの方法としては、限定されるものではないが、以下：質量分析、２Ｄ、電気泳動、ＨＰＬＣ、タンパク質配列決定および様々な免疫学的検出方法のうちの１つ以上が挙げられる。免疫学的検出方法としては、限定されるものではないが、免疫親和性アッセイ、免疫沈降アッセイ、免疫細胞化学アッセイ、ＥＬＩＳＡ、固相サンドイッチアッセイ、免疫ブロット法、ハイスループット免疫ブロット法、免疫組織化学またはこれらの技術の組合せが挙げられる。
【００３４】
免疫組織化学
好適には、本明細書における一実施形態では、ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物の検出可能な量の有無はタンパク質を検出することにより判定される。タンパク質が検出される場合のさらなる実施形態では、該タンパク質はニューロフィブロミン−２アイソフォーム１である。癌治療のさらなる実施形態では、この場合、タンパク質が検出され、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質の検出可能な量の有無は免疫組織化学（ＩＨＣ）により判定される。
【００３５】
ＩＨＣは、腫瘍生検材料などの組織サンプルにおいて、タンパク質を、該タンパク質に対して特異的な１以上の抗体を用いて検出する方法である。（この意味において、抗体が特異的に検出するタンパク質を抗原と呼ぶことが多い。）タンパク質との抗体の結合は染色および顕微鏡によって分析される。ＩＨＣは当技術分野で周知である。
【００３６】
一般には、組織サンプルを得たら、そのサンプルを迅速に保存し、細胞タンパク質および組織構造の破壊を防ぐ必要がある。多くの場合、保存前に組織を血液で灌流しまたは洗い流す。ＩＨＣ用の組織サンプルの準備も当技術分野で周知であり、準備には、限定されるものではないが、パラフィン包理、急速冷凍、ホルマリン固定およびホルムアルデヒド固定が含まれる。
【００３７】
準備した組織、例えば、パラフィン包理組織を、一般に、マイクロトームで４〜５μｍほどの薄さの薄片に切る。次に、これらの切片を、接着剤でコーティングされたガラススライド上に載せる。この接着剤は、一般的に、ガラススライドを３−アミノプロピルトリエトキシシラン（ＡＰＴＳ）またはポリ−Ｌ−リジンで表面処理することにより施される。あるいは、ゼラチン、卵アルブミンまたは市販の膠を含む他の好適な接着剤でスライドをコーティングしてもよい。スライド上に載せた後、それらの切片を乾燥させる。脱パラフィン化のために、パラフィン包理スライドを炉またはマイクロ波で乾燥させてよい。
【００３８】
凍結切片は、予冷したクリオスタットを用いて準備することができ、それらを接着性ガラススライドに載せる。これらの切片は、多くの場合、室温で一晩乾燥させ、予冷した（−２０℃）アセトンに浸漬することにより固定するが、検出対象の組織およびタンパク質に基づき、当業者の判断で乾燥工程を省いてよい。
【００３９】
サンプルにおけるタンパク質の有無の染色および検出の前に、組織サンプルを「脱マスキングし」、抗体がタンパク質へと接近できるようにする。このプロセスは、多くの場合、抗原回復と呼ばれ、当技術分野で公知の様々な手段、例えば、加熱手段または酵素的手段（トリプシン、ペプシンまたは他のプロテアーゼの使用を含む）によって達成することができる。
【００４０】
サンプル中のタンパク質と抗体との結合は、当技術分野で周知の様々な溶液またはバッファー中での抗体とのインキュベーションにより達成される。バッファーは、組織と抗体との非特異的結合を阻止するブロッキング剤を含んでいてよい；ブロッキングは、抗体との組織サンプルスライドのインキュベーションの前またはその間に達成することができる。その方法に使用される抗体の量は後に顕微鏡により分析されるシグナルのレベルに影響を及ぼし得るが、当業者ならば、例えば、抗体の希釈度を調べることにより、任意の特定ＩＨＣアッセイに使用する抗体の量が決定および最適化されることが分かるであろう。
【００４１】
一般には、ＩＨＣに使用される抗体はモノクローナルまたはポリクローナルであり得る。ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１の検出の場合、抗体は、他のアイソフォームが存在する可能性がある組織においてアイソフォーム１タンパク質の有無を検出することできるものでなければならない。そのため、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１特異的抗体を使用しなければならない。その特異的抗体は、多くの場合、モノクローナル抗体である；しかしながら、当業者ならば、サンプルにおけるＮＦ２のアイソフォーム１の有無の検出に好適なポリクローナル抗体調製物を特定することができる。好適には、本明細書における実施形態では、ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１タンパク質遺伝子産物の有無の検出は、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１に対するモノクローナル抗体とサンプルを接触させることを含み、この場合、そのような抗体はニューロフィブロミン−２アイソフォーム１と検出可能に結合することができるが、他のニューロフィブロミン−２アイソフォームと検出可能に結合しない。さらなる実施形態では、抗ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１モノクローナル抗体はアイソフォーム２タンパク質遺伝子産物ＮＦ２と検出可能に結合しない。別の実施形態では、抗体はポリクローナル抗体調製物であり、この場合、ポリクローナル抗体はニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質と結合することができるが、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム２タンパク質とは結合することができない。モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体はニューロフィブロミン−２アイソフォーム１と検出可能に結合するが、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム２とは検出可能に結合しない場合のさらなる実施形態では、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体は、アイソフォーム１以外の他のアイソフォームとも検出可能に結合しない。
【００４２】
タンパク質との抗体結合の検出は、当技術分野で周知の複数の方法、例えば、フルオロフォア(fluorofore)でタグ付けした抗体の免疫蛍光検出(immunoflourescent detection)または免疫ペルオキシダーゼ酵素とコンジュゲートした抗体の免疫ペルオキシダーゼ染色により達成することができる。当技術分野で周知の他の検出方法としては、発色検出、放射能、化学発光、ならびに他の生物学的および酵素的タグまたは標識が挙げられる。間接的な検出も採用することができ、有利であることがあり、例えば、ビオチン／アビジン系システムおよび他の二次検出系は当技術分野の知識および技術の範囲内である。
【００４３】
また、当業者ならば、対比染色を採用して、細胞または細胞コンパートメント、例えば、核を可視化することができる。
【００４４】
遺伝学的検出
また、ＮＦ２遺伝子突然変異は遺伝子レベルにおいても決定することもでき、単独でも、遺伝子産物、例えば、タンパク質の有無の判定と組み合わせてもよい。そのような遺伝学的検査は、限定されるものではないが、配列決定、ＲＴ−ＰＣＲ、およびｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、例えば、蛍光に基づくｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を含む当技術分野で周知の様々な手段によって達成することができる。
【００４５】
本開示による一実施形態では、治療を必要とするヒトにおいて癌を治療する方法は、該ヒトからのサンプルにおいてＮＦ２遺伝子における突然変異を検出すること、ＮＦ２遺伝子における該突然変異がＮＦ２のアイソフォーム１の発現の欠如をもたらすかどうかを判定すること、および該突然変異がＮＦ２のアイソフォーム１の発現の欠如をもたらす場合には、該ヒトに、ＦＡＫ阻害剤、例えば、本明細書における化合物Ａ、またはその薬学上許容される塩の治療上有効な量を投与することを含んでなる。さらなる実施形態では、ＮＦ２遺伝子における該突然変異がＮＦ２のアイソフォーム１の発現の欠如をもたらすかどうかの判定は、以下：配列決定、ＲＴ−ＰＣＲおよびＦＩＳＨから選択される方法を行うことを含んでなる。別の実施形態では、ＮＦ２遺伝子における該突然変異がＮＦ２のアイソフォーム１の発現の欠如をもたらすかどうかの判定は、以下：配列決定、ＲＴ−ＰＣＲおよびＦＩＳＨから選択される方法を行うことを含んでなる。配列決定、ＲＴ−ＰＣＲおよびＦＩＳＨは、当業者による、ＮＦ２遺伝子産物、特に、アイソフォーム１タンパク質の発現の欠如をもたらすと思われる染色体欠損またはＮＦ２遺伝子の他の欠失の確認を可能にするものである。配列決定およびＲＴ−ＰＣＲは、当業者による、未熟停止コドンをもたらし、ＮＦ２遺伝子産物、特に、アイソフォーム１タンパク質の発現の欠如をもたらすと思われる点突然変異、挿入または欠失の確認を可能にするものである。
【００４６】
本発明による他の実施形態では、患者が、特定の遺伝子においてＦＡＫ阻害剤に反応すると思われる特定の突然変異を有するかどうかの判定は、
ａ．被験者の腫瘍からの生体サンプルにおいて遺伝子型決定手法を行い、該患者がＮＦ２変異体の少なくとも１つのアイソフォームを有する腫瘍を有するかどうかを判定すること；
ｂ．該突然変異が検出されなかった場合の可能性と比べて、ＦＡＫ阻害剤、所望により、式ＩのＦＡＫ阻害剤、所望により、化合物Ａ、が投与されたときに、有効率の上昇、無増悪生存期間の延長または全生存期間の延長のうちの１以上を受ける可能性の増大と、該突然変異の検出を相関させること
を含んでなる。
【００４７】
ＦＡＫ阻害剤
癌、例えば、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質が検出され得ないマーリン陰性癌を治療するための、本明細書における方法のいずれにおいても、ＦＡＫ阻害剤は、式（Ｉ）：
【化１】
2014529359.tif 000002
［式中、
Ｒ１は、ハロ、ＣＦ３、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、イソプロペニル、（Ｃ２−Ｃ６−アルキレン）Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシまたはシアノであり；
Ｒ２において、ｐが０でない場合、各Ｒ２は、独立に、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３、メチル、メトキシ、ＣＨ２ＣＦ３、−（Ｘ）ｑ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−Ｒ４、−（Ｘ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン）ｑ−ＮＲ５−Ｃ（Ｏ）−Ｒ６、−（Ｘ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン）ｑ−（ＮＲ５）ｑ−ＳＯｘ−Ｒ７、−（Ｘ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン）ｑ−Ｙ−Ｎ（Ｒ８）２；５員〜６員のヘテロシクロアルキル−（Ｒ９）ｑ基または５員〜６員のヘテロアリール−（Ｒ１０）ｒ基であり；
Ｒ３は、独立に、Ｈ、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｒ４、Ｏ−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｒ４であるか、または、Ｒ３基は、Ｚとともに、場合によりメチル、Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−Ｒ４もしくはＣ３−Ｃ６−シクロアルキルで置換されていてもよい５員〜６員の環を形成し；
Ｒ４は、Ｈ、−（Ｑ）ｑ−Ｎ（Ｒ８）２、ＯＨ、ＳＨ、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６−チオアルキルまたは５員〜６員のヘテロシクロアルキル−（Ｒ９）ｑ基であり；
Ｒ５は、ＨまたはＣ１−Ｃ６−アルキルであり；
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシ、Ｎ（Ｒ８）２または５員〜６員のヘテロアリール−（Ｒ１０）ｒ基であり；
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、フェニル−（Ｒ９）ｑまたは５員〜６員のヘテロアリール−（Ｒ１０）ｒであり；
Ｒ８は、独立に、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ６−アルキルであるか、または、それらが結合している窒素原子とともに、５員もしくは６員のヘテロシクロアルキル基を形成し；
Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシ、−（Ｑ）ｑ−Ｎ（Ｒ８）２、−Ｑ−Ｃ１−Ｃ６−アルキル、−Ｃ１−Ｃ６アルキルＲ４または５員〜６員のヘテロシクロアルキルであり；
Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシまたは−Ｑ−Ｃ２−Ｃ６−アルキルであり；
Ｒ１１は、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３、−（Ｑ）ｑ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−Ｒ４、−Ｑ−Ｎ（Ｒ８）２、フェニル−（Ｒ５）ｓ、５員〜６員のヘテロシクロアルキル（Ｒ９）ｑ基または５員〜６員のヘテロアリール−（Ｒ１０）ｒ基であり；
Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３、ＯＨ、ＣＮ、ニトロ、ＣＯＯＨ、−ＣＯＯ−Ｃ１−Ｃ６−アルキル、−Ｙ−Ｎ（Ｒ８）２、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキル−Ｒ１４、−（Ｘ）ｑ−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｒ４、−（Ｘ−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン）ｑ−ＮＲ５−Ｃ（Ｏ）−Ｒ６、−（Ｘ−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン）ｑ−（ＮＲ５）ｑ−ＳＯｘ−Ｒ７、−（Ｘ−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン）ｑ−Ｙ−Ｎ（Ｒ８）２、ヘテロシクロアルキル−（Ｒ９）ｑ、ヘテロアリール−（Ｒ１０）ｒまたはフェニル−（Ｒ１５）ｓであり；
Ｒ１３は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｃ１−Ｃ６−アルキルもしくはＣ３−Ｃ６−シクロアルキルであり；またはＲ１２およびＲ１３は、それらが結合している炭素原子とともに、縮合した５員もしくは６員のカルボシクロアルキルもしくはヘテロシクロアルキル(heterocycloralkyl)基を形成し；
Ｒ１４は、独立に、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、−ＮＲ５−ＳＯ２−Ｒ７、−Ｙ−Ｎ（Ｒ８）２または−（Ｘ）ｑ−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｒ４であり；
Ｒ１５は、独立に、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはＣ１−Ｃ３−アルコキシであり；
ｐは、０、１、２または３であり；
ｑは、０または１であり；
ｒは、０、１または２であり；
ｓは、０、１、２または３であり；
ｘは、１または２であり；
Ｑは、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−または−ＳＯ２−であり；
Ｘは、ＮＲ５、Ｏ、Ｓ、−Ｓ（Ｏ）−または−ＳＯ２−であり；
Ｙは、結合、ＳＯ２またはＣ（Ｏ）であり；
Ｚは、ＮまたはＣＲ５である］
の化合物またはその塩であり得る。
【００４８】
本発明はまた、特定の癌、例えば、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質が検出できないマーリン陰性癌を治療する方法であって、ＦＡＫ阻害剤が式（Ｉ）の化合物であり、式中、ＱがＣ（Ｏ）であり、ＺがＮである、方法に関する。
【００４９】
本発明はまた、特定の癌、例えば、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質が検出できないマーリン陰性癌を治療する方法であって、ＦＡＫ阻害剤が式（Ｉ）の化合物であり、式中、Ｒ１がＣｌ、ＣＦ３またはＣＮである、方法に関する。
【００５０】
本発明はまた、特定の癌、例えば、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質が検出できないマーリン陰性癌を治療する方法であって、ＦＡＫ阻害剤が式（Ｉ）の化合物であり、式中、Ｒ２がＦである、方法に関する。
【００５１】
本発明はまた、特定の癌、例えば、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質が検出できないマーリン陰性癌を治療する方法であって、ＦＡＫ阻害剤が式（Ｉ）の化合物であり、式中、一方のＲ３はメチルであり、もう一方のＲ３はＨである、方法に関する。
【００５２】
本発明はまた、特定の癌、例えば、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質が検出され得ないマーリン陰性癌を治療する方法であって、ＦＡＫ阻害剤が式（Ｉ）の化合物であり、式中、一方のＲ３はメトキシであり、もう一方のＲ３はＨである、方法に関する。
【００５３】
本発明はまた、特定の癌、例えば、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質が検出できないマーリン陰性癌を治療する方法であって、ＦＡＫ阻害剤が式（Ｉ）の化合物であり、式中、Ｒ１１がＣ１−Ｃ６−アルキルである、方法に関する。
【００５４】
本発明はまた、特定の癌、例えば、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質が検出できないマーリン陰性癌を治療する方法であって、ＦＡＫ阻害剤が式（Ｉ）の化合物であり、式中、Ｒ１２がＣ１−Ｃ６−アルキル、ヒドロキシメチルまたはシクロプロピルである、方法に関する。
【００５５】
本発明はまた、特定の癌、例えば、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質が検出できないマーリン陰性癌を治療する方法であって、ＦＡＫ阻害剤が式（Ｉ）の化合物であり、式中、Ｒ１３がＨである、方法に関する。
【００５６】
本発明はまた、特定の癌、例えば、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質が検出できないマーリン陰性癌を治療する方法であって、ＦＡＫ阻害剤が式（Ｉ）の化合物であり、式中、ｐが０または１である、方法に関する。
【００５７】
本発明はまた、特定の癌、例えば、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質が検出できないマーリン陰性癌を治療する方法であって、ＦＡＫ阻害剤が２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学上許容される塩である、方法に関する。
【００５８】
本発明はまた、特定の癌、例えば、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質が検出され得ないマーリン陰性癌を治療する方法であって、ＦＡＫ阻害剤が２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミド塩酸塩である、方法に関する。
【００５９】
本発明はまた、特定の癌、例えば、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質が検出され得ないマーリン陰性癌を治療する方法であって、ＦＡＫ阻害剤が薬学上許容される組成物中の２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学上許容される塩である、方法に関する。
【００６０】
本発明はまた、特定の癌、例えば、ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質が検出できないマーリン陰性癌を治療する方法であって、ＷＯ２００８／１１５３６９に記載されている例示された化合物のいずれか１つを投与することを含み、該癌が少なくとも１つのＮＦ２突然変異を有する、方法に関する。
【００６１】
本発明の一実施形態は、癌にＮＦ２遺伝子の遺伝子産物の検出可能な量が存在しない場合の、ヒトにおける癌の治療のための式Ｉの化合物である。本発明の別の実施形態は、癌にＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１の検出可能な量が存在しない場合の、ヒトにおける癌の治療のための式Ｉの化合物である。本発明の別の実施形態は、癌にマーリンタンパク質の検出可能な量が存在しない場合の、ヒトにおける癌の治療のための式Ｉの化合物である。本発明のさらに別の実施形態は、癌にマーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量が存在しない場合の、ヒトにおける癌の治療のための式Ｉの化合物である。この段落における本発明のさらなる実施形態では、前記癌は中皮腫であり、式Ｉの化合物は本明細書において記載される化合物Ａである。
【００６２】
本発明は、該治療に適していると確認されたヒトにおける癌の治療のための医薬の製造におけるＦＡＫ阻害剤の使用に関し、その場合、該癌におけるＮＦ２のアイソフォーム１遺伝子産物（ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質またはマーリンアイソフォーム１タンパク質など）の検出可能な量の不在によって該ヒトは該治療に適していると確認される。本発明のさらなる実施形態は、ＦＡＫ阻害剤が化合物Ａであり、前記癌が中皮腫である場合の、前述の使用に関する。
【００６３】
本発明はまた、本明細書において記載されるＦＡＫ阻害剤に応答する癌を同定する方法に関する。一実施形態では、式ＩのＦＡＫ阻害剤に応答する癌を同定する方法は、該癌のサンプルにおいてＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物の有無を検出することを含んでなり、それによって、該サンプルにおいてＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物が検出されない場合に、式ＩのＦＡＫ阻害剤に応答する癌が同定される。別の実施形態では、式ＩのＦＡＫ阻害剤に応答する癌を同定する方法は：
ａ）治療を必要とするヒトから該癌のサンプルを得ること；
ｂ）該サンプルにおいてＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物の有無を検出すること；および
ｃ）該サンプルにおいてＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物が検出されない場合に、該癌が式ＩのＦＡＫ阻害剤の有効量により治療可能であることを決定すること
を含んでなる。
【００６４】
サンプル
本明細書において記載される方法では、ＮＦ２のアイソフォーム１遺伝子産物の検出可能な量の有無が、癌に対する治療を必要とするヒトからのサンプルを用いて判定される。本明細書において記載される他の方法では、機能的マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量の有無が、癌に対する治療を必要とするヒトからのサンプルを用いて判定される。該サンプルは、上および下により詳細に記載されるように、１種以上の疑わしい腫瘍細胞を含んでなり、例えば、腫瘍サンプルと呼ばれる。ある特定の実施形態では、該サンプルは疑わしい腫瘍細胞の生検材料である。ある特定の実施形態では、該サンプルは組織生検材料であり得る。他の実施形態では、該サンプルは、癌の検査かまたは腫瘍もしくは癌としての増殖状態を確認する他の手段に基づいて、癌性である、例えば、腫瘍であることが分かっている細胞の生検材料である。癌治療を必要とするヒトから得られ得る他のサンプルとしては、限定されるものではないが、一群のタンパク質、ヌクレオチド、細胞ブレブまたは成分、血清、細胞、血液、血液成分、例えば、循環腫瘍ＤＮＡ、尿および唾液が挙げられる。
【００６５】
例えば、ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物の検出可能な量の有無の判定のため、または機能的マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量の有無の判定のための、前記サンプルの取り扱い、保存および保管は、使用される特定のアッセイによって異なるであろう。例えば、本明細書において一般的に記載される、ＩＨＣのための処理は、ある特定の調製条件および保存条件が必要であるが、これらの条件は当技術分野で公知である。
【００６６】
癌
ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物、例えば、マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量が存在しない癌、または機能的マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量が存在しない癌を有するヒトは、本明細書におけるＦＡＫ阻害剤による治療に対する反応の改善を示す。ある特定の実施形態では、該癌は、シュワン腫、髄膜腫、上衣腫．中皮腫、膠芽腫、黒色腫  甲状腺癌、膀胱癌、皮膚癌、胃癌、骨癌、腎癌、乳癌および腸癌からなる群から選択される。他の実施形態では、該皮膚癌は黒色腫である。好適な実施形態では、該癌は中皮腫である。
【００６７】
キット
別の実施形態では、本発明は、癌、例えば、中皮腫の治療のためのキットを提供し、そのキットは、サンプルにおいてＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物の有無を検出するためのキットを含んでなり、そのキットは、（ａ）ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物、例えば、マーリンアイソフォーム１タンパク質またはニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質を検出する手段を含んでなる。別の実施形態では、ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物を検出する手段は、ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物と検出可能に結合する抗体であり、所望により、該アイソフォーム１遺伝子産物はマーリンアイソフォーム１タンパク質またはニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質である。さらなる実施形態では、ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１遺伝子産物（例えば、マーリンアイソフォーム１タンパク質）と検出可能に結合する抗体は、他の遺伝子産物アイソフォーム、例えば、ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム２遺伝子産物（例えば、マーリンアイソフォーム２タンパク質）と検出可能に結合しない。
【００６８】
定義
当技術分野において理解されている用語「野生型」とは、遺伝子修飾のない天然集団またはある特定の遺伝子座について二倍性の状態（２ｎ）において見られるポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列を意味する。患者がある遺伝子の３以上のコピーを有する場合の二倍体からの逸脱は「増幅」と考えられている。また、当技術分野において理解されているように、「変種」（ｖａｒｉａｎｔ）は、野生型ポリペプチドまたはポリヌクレオチドそれぞれにおいて見られる対応するアミノ酸または核酸と比べて、アミノ酸または核酸に対して少なくとも１つの修飾を有するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列を包含する。変種という用語には、一塩基変異多型（ＳＮＰ）（この場合、最も一般的に見られる（野生型）核酸鎖と比べて、核酸鎖の配列において一塩基対の違いがある）が包含される。本明細書において「遺伝子修飾」または「遺伝子修飾された」とは、限定されるものではないが、１または複数のＤＮＡ配列に対する１以上の塩基の任意の抑制、置換、増幅、欠失および／または挿入を意味する。また、本明細書において「遺伝子修飾された」とは、核酸またはアミノ酸それぞれの少なくとも１つの欠失、置換または抑制を有するポリペプチドまたはポリペプチドをコードする遺伝子を意味し得る。選択的スプライシング（または示差的スプライシング）は、遺伝子の転写により産生されたＲＮＡ（一次遺伝子転写物またはプレｍＲＮＡ）のエキソンがＲＮＡスプライシングの間に複数の方法により再連結されるプロセスである。生じた異なるｍＲＮＡは異なるタンパク質アイソフォームに翻訳され、従って、単一遺伝子が複数のタンパク質をコードし得る。スプライシング変種は、選択的スプライシングから生じる活性なｍＲＮＡである。
【００６９】
遺伝的変種および／またはＳＮＰは、既知の方法により同定することができる。例えば、野生型またはＳＮＰは、ＤＮＡ増幅および配列決定技術、ＤＮＡおよびＲＮＡ検出技術（限定されるものではないが、それぞれ、ノーザンブロットおよびサザンブロットを含む）ならびに／または様々なバイオチップおよびアレイ技術により同定することができる。ＷＴおよび変異ポリペプチドは、様々な技術により検出することができ、それらの技術としては、限定されるものではないが、免疫診断技術、例えば、ＥＬＩＳＡおよびウエスタンブロットが挙げられる。腫瘍細胞におけるＤＮＡ増幅は、定量的ＤＮＡ検出技術、例えば、ＰＣＲベースの方法により同定することができる。さらに、ＤＮＡ増幅を測定するために、マイクロアレイベースの方法を用いることもできる。これらの方法としては、マイクロアレイベースの比較ゲノムハイブリダイゼーション(Greshock, J., et al. 2004. Genome Res 14: 179-87.)およびＤＮＡ「ＳＮＰチップ」(Bignell, G. R., et al. 2004 Genome Res 14: 287-95)が挙げられる。
【００７０】
本明細書において、対立遺伝子または多型の検出方法は、限定されるものではないが、血清学的方法および遺伝学的方法を含む。検出される対立遺伝子または多型は個々の表現型への影響に機能的に関連し得るし、あるいはそれは機能的多型／対立遺伝子と連鎖不平衡状態にある対立遺伝子または多型であり得る。多型／対立遺伝子は被験者のゲノムＤＮＡにおいて明示されるが、当業者には明らかなように、この領域から転写または翻訳されたＲＮＡ、ｃＤＮＡまたはタンパク質配列からも検出可能であり得る。
【００７１】
周知の遺伝学として、同じ遺伝子について異なる起源から得られたヌクレオチドおよび関連アミノ酸配列は、付番方式および正確な順序の両方において異なることがある。そのような違いは、付番方式、遺伝子内での固有の配列変化、および／または配列決定の誤りに起因している可能性がある。従って、本明細書における番号による特定の多型性部位への言及は、それらを記載するために異なる付番／命名方式が用いられた場合でも遺伝子内での順序および位置において対応する多型性部位を含むことは当業者ならば分かるであろう。
【００７２】
本明細書において、少なくとも１つのポリペプチドまたは少なくとも１つのポリペプチドをコードする遺伝子における１または複数の遺伝子の多型対立遺伝子または突然変異についての被験者（またはＤＮＡもしくは他の生体サンプル）の「遺伝子型決定」とは、被験者（またはサンプル）においてどの変異形態、対立遺伝子形態または多型性形態（１または複数）の遺伝子（１または複数）または遺伝子発現産物（例えば、ｈｎＲＮＡ、ｍＲＮＡまたはタンパク質）が存在するかまたは存在しないかを検出することを意味する。そのような遺伝子から発現された関連ＲＮＡまたはタンパク質もまた、突然変異または多型バリエーションを検出するために用いられ得る。当技術分野で周知の通り、個体は特定の対立遺伝子についてのヘテロ接合体または同系接合体である。２つを超える対立遺伝子形態が存在し得ることから、３つを超える遺伝子型が存在する可能性がある。本明細書において、対立遺伝子は、可能性ある他の対立遺伝子変種が除外された場合に「検出され」得る；例えば、特定の核酸位置がアデニン（Ａ）でもチミン（Ｔ）でもシトシン（Ｃ）でもないことが判明している場合、その位置にグアニン（Ｇ）が存在する（すなわち、被験者においてＧが「検出され」またはＧと「診断される」）と結論づけることができる。配列バリエーションは、直接（例えば、配列決定により）または間接的に（例えば、制限断片長多型解析、または既知配列のプローブのハイブリダイゼーション検出、または参照鎖コンホメーション多型（reference strand conformation polymorphism）により）検出され得るし、あるいは他の公知の方法を用いることによっても検出され得る。
【００７３】
本明細書において、集団の「遺伝的サブセット」は、特定の遺伝子型または少なくとも１つの体細胞突然変異を有する腫瘍を有する集団のメンバーからなる。二対立遺伝子多型の場合、集団は３つのサブセット：対立遺伝子１についての同系接合体（１，１）、ヘテロ接合体（１，２）、および対立遺伝子２についての同系接合体（２，２）に分類される可能性がある。被験者の「集団」は、例えば、化合物Ａでの治療を受けている個体または癌を有する個体というように様々な基準を用いて定義され得る。場合によっては、集団の遺伝的サブセットは、別の遺伝的サブセットと比べて治療に対して高い反応可能性を有し得る。もう１つの例として、特定の遺伝子型を有する患者は、特定表現型応答の危険性の増加または危険性の減少を示すことがある。本明細書における方法のいくつかの実施形態では、ＮＦ２遺伝子の総てまたは一部が欠失している癌患者のサブセットは、化合物Ａによる治療に対してより良い応答を示す（例えば、これは、化合物Ａに反応する腫瘍においても欠失が認められるためであるが、この場合、腫瘍細胞、または腫瘍細胞の一部は、ＮＦ２遺伝子の総てまたは一部の欠失が原因でニューロフィブロミン−２アイソフォーム１の検出可能な量を含んでいない）。
【００７４】
本明細書において、遺伝子型決定に基づいて特定の表現型応答の「素因がある」または「リスクが高い」被験者は、１または複数の標的多型遺伝子座に異なる遺伝子型を有する個体よりもその表現型を示す可能性が高い。表現型応答が複対立遺伝子多型に基づいているか、または２つ以上の遺伝子の遺伝子型決定に基づいている場合には、考えられる複数の遺伝子型の間で相対的危険性が異なっている可能性がある。
【００７５】
本明細書において、治療に対する「応答」およびその文法上の変形は、限定されるものではないが、患者が薬剤を受けた後の患者の臨床症状の改善を包含する。応答とは、治療開始により患者の状態が悪化しないことも意味し得る。応答は、疾患または障害の特定の徴候の測定により定義することができる。癌に関しては、応答とは、限定されるものではないが、患者における腫瘍および／または腫瘍細胞のサイズまたは数の減少を意味し得る。また、応答は、他のエンドポイント、例えば、患者における前腫瘍性細胞数の減少もしくは減弱、または疾患進行がないこと（多くの場合、「安定」または「疾患の無増悪期間」と呼ばれる）によっても定義することができる。
【００７６】
本明細書における「遺伝学的検査」（遺伝学的スクリーニングとも呼ばれる）とは、被験者からの生体サンプルを、その被験者の遺伝子型を決定するために検査することを意味し；その被験者の遺伝子型が、特定の表現型を引き起こすかまたはそれに対する感受性を高める（あるいはその表現型を引き起こすまたはそれに対する感受性を高める１または複数の対立遺伝子と連鎖不平衡状態にある）対立遺伝子を含んでなるかどうかを判定するために使用され得る。
【００７７】
１以上の突然変異を検査するための生体サンプルは、癌または正常組織から選択され得るが、それらのサンプルには、限定されるものではないが、一群のタンパク質、ヌクレオチド、細胞ブレブまたは成分、血清、細胞、血液、血液成分、例えば、循環腫瘍ＤＮＡ、尿および唾液が含まれる。サンプルは組織生検材料であってよい。突然変異の検査は、当技術分野で公知でありかつ／または本明細書において記載されるいくつかの技術によって行われ得る。
【００７８】
遺伝子またはＰＣＲ産物あるいはその断片または一部を含む任意の核酸の配列は、当技術分野で公知の任意の方法（例えば、化学的配列決定または酵素的配列決定）により配列決定を行うことができる。ＤＮＡの「化学的配列決定」は、Maxam and Gilbert (1977)の方法(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74:560)などの方法を表す場合があり、その方法では、各塩基に特異的な反応を用いてＤＮＡが無作為に切断される。ＤＮＡの「酵素的配列決定」は、Sangerの方法(Sanger, et al., (1977) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74:5463)などの方法を表す場合がある。
【００７９】
配列決定技術を含む分子生物学、微生物学および組換えＤＮＡの従来技術は当業者の間では周知である。そのような技術は文献において十分に説明されている。例えば、Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第2版 (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.（本明細書では「Sambrook, et al., 1989」）; DNA Cloning: A Practical Approach, 第I巻および第II巻 (D. N. Glover編 1985); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait編 1984); Nucleic Acid Hybridization (B. D. Hames & S. J. Higgins編 (1985)); Transcription And Translation (B. D. Hames & S. J. Higgins, 編 (1984)); Animal Cell Culture (R. I. Freshney, 編 (1986)); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, (1986)); B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); F. M. Ausubel, et al. (編), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (1994)を参照。
【００８０】
ペプチド核酸（ＰＮＡ）親和性アッセイは従来のハイブリダイゼーションアッセイの派生的方法である(Nielsen et al., Science 254:1497-1500 (1991); Egholm et al., J. Am. Chem. Soc. 114:1895-1897 (1992); James et al., Protein Science 3:1347-1350 (1994))。ＰＮＡは、ワトソン−クリック塩基対形成ルールに従う構造ＤＮＡ模倣体であり、標準的なＤＮＡハイブリダイゼーションアッセイに用いられる。ＰＮＡはハイブリダイゼーションアッセイにおいてより高い特異性を示すが、これは、ＰＮＡ／ＤＮＡミスマッチがＤＮＡ／ＤＮＡミスマッチより不安定であり、相補ＰＮＡ／ＤＮＡ鎖は相補ＤＮＡ／ＤＮＡ鎖より強い結合を形成するためである。
【００８１】
遺伝的変種、多型および細胞遺伝学的変化（例えば、ＤＮＡ増幅および欠失）を検出するためにＤＮＡマイクロアレイが開発された(Taton et al., Science 289:1757-60, 2000； Lockhart et al., Nature 405:827-836 (2000); Gerhold et al., Trends in Biochemical Sciences 24:168-73 (1999); Wallace, R. W., Molecular Medicine Today 3:384-89 (1997); Blanchard and Hood, Nature Biotechnology 149:1649 (1996); (Greshock, J., et al. 2004. Genome Res 14: 179-87; Bignell, G. R., et al. 2004 Genome Res 14: 287-95).)。ＤＮＡマイクロアレイは高速ロボティクスによりガラスまたはナイロン基板上に製作され、ＤＮＡマイクロアレイには既知同定ＤＮＡ断片（「プローブ」）が含められる。ＤＮＡマイクロアレイは、従来の塩基対合ルールに基づいた既知ＤＮＡ断片および未知ＤＮＡ断片（「標的」）のマッチングに用いられる。
【００８２】
用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は互換的に用いられ、本明細書においてはポリペプチド配列の天然タンパク質、断片、ペプチドまたは類似体を意味する一般用語として用いられる。従って、天然タンパク質、断片および類似体はポリペプチド類の種類である。
【００８３】
ポリペプチド配列における突然変異に関連した用語「Ｘ＃Ｙ」は当技術分野で認められており、この場合、「＃」は、ポリペプチドのアミノ酸番号上での突然変異の位置を示し、「Ｘ」は、野生型アミノ酸配列中のその位置において見出されるアミノ酸を示し、「Ｙ」は、その位置にある変異アミノ酸を示す。例えば、Ｋ−ｒａｓポリペプチドに関する「Ｇ１２Ｓ」という表記は、野生型Ｋ−ｒａｓ配列のアミノ酸番号１２にグリシンが存在し、変異Ｋ−ｒａｓ配列ではグリシンがセリンで置換されていることを示す。
【００８４】
ポリペプチドまたはポリペプチドをコードする遺伝子における「少なくとも１つの突然変異」という用語またはその類似用語およびその文法上の変形は、１以上の対立遺伝子変種、スプライス変種、誘導体変種、置換変種、欠失変種および／または挿入変種、融合ポリペプチド、オーソログ、ならびに／または種間相同体を有するポリペプチドまたはポリペプチドをコードする遺伝子を意味する。例として、ＮＦ２の少なくとも１つの突然変異は、ポリペプチド（例えば、マーリンアイソフォーム１タンパク質）またはそのポリペプチドをコードする遺伝子の配列の一部または総てが存在しないかまたは細胞において産生されたマーリンアイソフォーム１タンパク質の少なくとも１つについてその細胞において発現されないＮＦ２を含む。例えば、ＮＦ２タンパク質遺伝子産物（マーリンアイソフォーム１タンパク質を含むマーリンタンパク質）は細胞により末端切断型で産生され得、その末端切断型の配列は末端切断体の配列に関して野生型であり得る。欠失とは、遺伝子または遺伝子によってコードされるタンパク質の総てまたは一部が存在しないことを意味し得る。さらに、細胞で発現されるまたは細胞によりコードされるタンパク質のいくつかは変異されていることがあるが、同じ細胞で産生された同じタンパク質の他のコピーは野生型であり得る。患者の癌が少なくとも１つの形態の特定突然変異を有する場合、一般にヒトの癌はその突然変異を有すると考えられる。さらに、本明細書において用いられるように、ＮＦ２突然変異は、欠失、部分的染色体欠損または染色体欠損によるものを含む、マーリンアイソフォーム、例えば、マーリンアイソフォーム１をコードする全遺伝子および遺伝子の一部の完全欠損を含む。あるいは、ＮＦ２突然変異は、ＮＦ２遺伝子の翻訳または転写に必要な任意の調節エレメントにおける突然変異または欠失を含み、結果として、その突然変異または欠失はＮＦ２遺伝子の転写または翻訳の欠如をもたらす。従って、ＮＦ２突然変異は、ＮＦ２遺伝子の翻訳または転写に必要な任意の調節エレメントにおける突然変異または欠失を含み、結果として、その突然変異または欠失は細胞、例えば、腫瘍細胞におけるアイソフォーム１の発現の欠如をもたらす。さらに、突然変異は、細胞におけるＮＦ２遺伝子産物、例えば、マーリンアイソフォーム１の発現を破壊し得る遺伝物質の任意の挿入を含む。
【００８５】
本明細書において「遺伝学的異常」とは、被験者の細胞の正常な天然核酸内容物と比べての、欠失、置換、付加、転座、増幅などを意味する。用語「変異ＮＦ２」とは、少なくとも１つの突然変異を有するＮＦ２遺伝子を意味する。特定の例示的なＮＦ２変異ポリペプチドとしては、限定されるものではないが、対立遺伝子変種、スプライス変種、誘導体変種、置換変種、欠失変種および／または挿入変種、融合ポリペプチド、オーソログ、ならびに種間相同体が挙げられる。ある特定の実施形態では、変異ＮＦ２ポリペプチドは、Ｃ末端またはＮ末端に追加の残基、例えば、限定されるものではないが、リーダー配列残基、標的残基、アミノ末端メチオニン残基、リジン残基、タグ残基および／または融合タンパク質残基を含む。
【００８６】
本明細書において言及される用語「ポリヌクレオチド」とは、少なくとも１０塩基長の、ヌクレオチド、すなわち、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのいずれかまたはいずれかのタイプの修飾型ヌクレオチドの多量体型を意味する。その用語は一本および二本鎖のＤＮＡを包含する。
【００８７】
本明細書において言及される用語「オリゴヌクレオチド」は、天然に存在するオリゴヌクレオチド結合および天然に存在しないオリゴヌクレオチド結合によりともに連結された天然ヌクレオチドおよび修飾ヌクレオチドを包含する。オリゴヌクレオチドは、一般的に、２００塩基以下の長さを含むポリヌクレオチドサブセットである。好ましくは、オリゴヌクレオチドは、１０〜６０塩基長、最も好ましくは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０〜４０塩基長である。オリゴヌクレオチドは、通常、例えば、プローブの場合、一本鎖であるが、オリゴヌクレオチドは、例えば、遺伝子変異体の構築用に、二本鎖であり得る。オリゴヌクレオチドは、センスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかであり得る。
【００８８】
オリゴヌクレオチドプローブ、またはプローブは、一般に、サイズが、約８ヌクレオチド長から数百ヌクレオチド長までに及ぶ核酸分子である。そのような分子は、一般に、サンプル中の標的核酸配列を、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でそのような標的核酸配列とハイブリダイズすることにより、同定するために用いられる。ハイブリダイゼーション条件は上に詳細に記載した。
【００８９】
ＰＣＲプライマーも核酸配列であるが、ＰＣＲプライマーは、一般に、長さがかなり短いオリゴヌクレオチドであり、ポリメラーゼ連鎖反応に用いられる。ＰＣＲプライマーおよびハイブリダイゼーションプローブは、当業者ならば、標的配列の配列情報を用いて、容易に開発および製造を行うことができる。（例えば、Sambrook et al.、前掲またはGlick et al.、前掲を参照）。
【００９０】
本明細書において、用語「増幅」およびその文法上の変形は、染色体組中に１以上の余分な遺伝子コピーが存在することを意味する。ある特定の実施形態では、Ｒａｓタンパク質をコードする遺伝子を細胞において増幅することができる。ＨＥＲ２遺伝子の増幅は特定のタイプの癌と相関していた。ＨＥＲ２遺伝子の増幅は、ヒト唾液腺および胃腫瘍由来細胞株、胃および結腸腺癌、ならびに乳腺腺癌において見出された。Semba et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:6497-6501 (1985); Yokota et al., Oncogene, 2:283-287 (1988); Zhou et al., Cancer Res., 47:6123-6125 (1987); King et al., Science, 229:974-976 (1985); Kraus et al., EMBO J., 6:605-610 (1987); van de Vijver et al., Mol. Cell. Biol., 7:2019-2023 (1987); Yamamoto et al., Nature, 319:230-234 (1986).
本明細書において、タンパク質またはポリペプチドについての「過剰発現され」および「過剰発現」およびその文法上の変形は、特定の細胞が生産する特定のタンパク質の数が正常細胞と比べて増加していることを意味する。例として、あるタンパク質は、非腫瘍細胞と比べて、腫瘍細胞により過剰発現され得る。さらに、ある変異タンパク質は、細胞において野生型タンパク質と比べて過剰発現され得る。当技術分野において理解されているように、細胞におけるポリペプチドの発現レベルは、アクチンなどのハウスキーピング遺伝子に対して正規化することができる。場合によっては、特定のポリペプチドは、非腫瘍細胞と比べて、腫瘍細胞において過少発現されることもある。
【００９１】
本明細書において、「少なくとも１つの遺伝子産物の発現に必要な核酸」とは、遺伝子の任意の部分をコードしかつ／または遺伝子産物をコードする核酸に作動可能に連結されるが必ずしもコード配列を含んでいない核酸配列を意味する。例として、少なくとも１つの遺伝子産物の発現に必要な核酸配列としては、限定されるものではないが、エンハンサー、プロモーター、調節配列、開始コドン、停止コドン、ポリアデニル化配列および／またはコード配列が含まれる。特定の細胞におけるポリペプチドの発現レベルは、限定されるものではないが、細胞ゲノムにおける様々な調節エレメントおよび／または非コード配列の突然変異、欠失および／または置換によってもたらされ得る。
【００９２】
本明細書において、「治療」とは、障害に関連する１以上の症状が有益に改変される任意の方法を意味する。従って、その用語は、障害の症状または副作用の治癒あるいは軽減または障害の進行の減速を包含する。治療はまた、例えば、未治療のヒトの無増悪生存期間と比べての、無増悪生存期間の延長も包含する。治療はまた、ＦＡＫ阻害剤による治療を受けた、マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量を有する腫瘍を有するヒトと比べての、ＦＡＫ阻害剤による治療を受けた、マーリンアイソフォーム１タンパク質の検出可能な量が存在しない腫瘍を有するヒトにおける無増悪生存期間の延長も包含する。本明細書における癌治療方法の特定実施形態では、治療は、１以上の症状において臨床的に有意な改善を得ることを意味し、その改善は、所望により、ＲＥＣＩＳＴ規準により測定することができる。他の実施形態では、治療は、１以上の症状において統計的に有意な改善を得ることを意味し、その改善は、所望により、ＲＥＣＩＳＴ規準により測定することができる。本明細書における癌治療方法の特定実施形態では、この場合、１以上の症状における改善がＲＥＣＩＳＴ規準により測定され、ＲＥＣＩＳＴ規準はＲＥＣＩＳＴ  １．１規準である。
【００９３】
本明細書において、用語「癌」、「新生物」および「腫瘍」は互換的に、単数形または複数形で用いられ、悪性転換を受けた細胞を意味し、悪性転換によりそれらの細胞は宿主生物にとって病的なものとなる。原発性癌細胞（すなわち、悪性転換部位近くから得られた細胞）は、確立された技術、特に、組織学的検査により非癌性細胞と容易に識別することができる。本明細書における癌細胞の定義には、原発性癌細胞だけでなく癌細胞原種由来の任意の細胞もまた包含される。これには、転移性癌細胞、ならびに癌細胞由来のin vitro培養物および細胞株も含まれる。固形腫瘍として通常現れる癌のタイプに関しては、「臨床的に検出可能な」腫瘍は、腫瘍塊に基づいて、例えば、ＣＡＴスキャン、ＭＲイメージング、Ｘ線、超音波または触診などの手法により、検出可能であり、かつ／または患者から得ることが可能なサンプルにおける１以上の癌特異的抗原の発現によって検出可能であるものである。腫瘍は、造血器腫瘍、例えば、血液細胞などの腫瘍であり得る。そのような腫瘍に基づく臨床症状の具体的な例としては、白血病、例えば、慢性骨髄性白血病または急性骨髄性白血病；骨髄腫、例えば、多発性骨髄腫；リンパ腫などが挙げられる。
【００９４】
当技術分野において理解されているように、用語「完全緩解」、「完全奏効」および「完全退縮」は、治療に応答した、癌の総ての検出可能な徴候および／または症状の消失を意味する。また、当技術分野において理解されているように、癌の検出可能な徴候または症状は、治療を受けている癌のタイプおよび病期に基づいて定義することができる。例として、ＨＣＣに罹患している被験者における治療に対する「完全奏効」は、Ｘ線またはＣＴスキャンを用いた観察で見える肝腫瘍が存在しないことと定義することができる。場合によっては、臨床的効果は、下に簡潔に記載するＲＥＣＩＳＴ  １．１規準(Eisenhauer EA, Therasse P, Bogaerts J, et al.  New response evaluation criteria in solid tumours: Revised RECIST guideline (version 1.1).  Eur J Cancer 2009;45:228-247)によって定義することができる：
【００９５】
ＲＥＣＩＳＴ  １．１規準
標的病変の評価
標的病変に対する効果の評価についての定義は次の通りである：
完全奏効（ＣＲ）：総ての標的病変の消失。総ての病的リンパ節は短径で＜１０ｍｍでなければならない。
部分奏効（ＰＲ）：ベースライン径和に比して、標的病変の径和が少なくとも３０％減少（例えば、ベースラインからの変化率）。
安定：ＰＲに相当する縮小がなく進行に相当する増大がない。
進行（ＰＤ）：治療開始から記録した最小の径和に比して、標的病変の径和が少なくとも２０％増加（例えば、最小値からの変化率、この場合、最小値は治療開始から記録した最小の径和と定義される）。さらに、径和が絶対値でも最小値から５ｍｍ増加していなければならない。
該当なし（ＮＡ）：ベースラインにおいて標的病変なし。
評価不能（ＮＥ）：５つの前の定義の１つに分類することができない。
【００９６】
非標的病変の評価
非標的病変に対する効果の評価についての定義は次の通りである：
完全奏効（ＣＲ）：総ての非標的病変の消失。ベースラインにおいて疾患部位として同定された総てのリンパ節が病的とみなされないサイズとならなければならない（例えば、短径＜１０ｍｍ）。
非ＣＲ／非ＰＤ：１つ以上の非標的病変の残存またはベースラインにおいて疾患部位として同定されたリンパ節の短径≧１０ｍｍ。
進行（ＰＤ）：既存の非標的病変の明らかな増悪。
該当なし（ＮＡ）：ベースラインにおいて非標的病変なし。
評価不能（ＮＥ）：４つの前の定義の１つに分類することができない。
【００９７】
新病変
疾患の増悪を示す新たな悪性腫瘍は明らかなものでなければならない。ベースラインにおいてスキャンしていない解剖学的部位で経過観察により同定された病変は新病変とみなされる。明確ではない新病変は追跡を続ける必要がある。治験責任医師の判断により次の定期検査まで治療は継続される。次の検査で新病変が明らかであるとみなされた場合、増悪と記録すべきである。
【００９８】
総合効果の評価
下の表は、ベースラインにおいて測定可能疾患を有する被験者に対する新病変出現の有無を含む標的病変および非標的病変の腫瘍応答の考えられる総ての組合せについての各時点での総合効果を示す。
【００９９】
【表１】
2014529359.tif 000003
【０１００】
ＲＥＣＩＳＴ  １．０規準
測定可能疾患および測定不能疾患の定義
測定可能疾患：少なくとも１つの測定可能病変の存在。
測定可能病変：少なくとも１方向で正確に測定することができる病変であり、最大径（ＬＤ）が以下である：
・従来技術（医学的写真［皮膚または口腔病変］、触診、単純Ｘ線、ＣＴまたはＭＲＩ）により≧２０ｍｍ、
または
・スパイラルＣＴスキャンにより≧１０ｍｍ。
測定不能病変：小さすぎて測定不能とみなされた病変を含む他の総ての病変（最大径は、従来技術の場合＜２０ｍｍまたはスパイラルＣＴスキャンの場合＜１０ｍｍ）であり、骨病変、軟膜疾患、腹水、胸水もしくは心嚢水、皮膚／肺のリンパ管炎、イメージング技術では確認および追跡されない腹部腫瘤、嚢胞性病変、または間接証拠でのみ（例えば、検査値により）報告されている疾患が含まれる。
【０１０１】
測定方法
従来のＣＴおよびＭＲＩ：病変サイズの最小値は再構成間隔の２倍する。画像が１０ｍｍ以上で連続して再構築される場合には、ベースライン病変の最小サイズは２０ｍｍであってよい。ＭＲＩが好ましく、使用する場合は、病変を、後の検査でも同じイメージング配列を用いて同じ解剖学的面で測定する必要がある。可能な限り、同じスキャナーを使用すべきである。
スパイラルＣＴ：画像が５ｍｍ間隔で連続して再構築される場合には、ベースライン病変の最小サイズは１０ｍｍであってよい。この明細事項は胸部、腹部および骨盤の腫瘍にも当てはまる。
胸部Ｘ線：胸部Ｘ線による病変は、それらが明確に定められ、肺実質(aerated lung)に囲まれている場合に、測定可能病変として認められる。しかしながら、ＭＲＩが好ましい。
臨床検査：臨床的に検出される病変は、それらが表在性（例えば、皮膚結節および触診可能なリンパ節）である場合にのみ、ＲＥＣＩＳＴ規準により測定可能であるとみなされる。皮膚病変の場合、カラー写真による記録（病変のサイズを予測するために視野内に定規と患者試験番号を含めたもの）が必要である。
【０１０２】
標的病変および非標的病変のベースライン記録
総ての関連臓器の代表とする全測定可能病変（各臓器につき最大５個の病変まで、合計１０個の病変）をベースラインにおいて標的病変として同定し、記録し、測定する必要がある。
【０１０３】
標的病変は、それらのサイズ（ＬＤを有する病変）および正確な反復測定（臨床的またはイメージング技術による）に対するそれらの適性に基づいて選択すべきである。
【０１０４】
総ての標的病変のＬＤの合計を計算し、ベースラインＬＤ和として記録する。ベースラインＬＤ和を客観的な腫瘍縮小効果の評価の規準として用いる。
【０１０５】
他の総ての病変（または疾患の部位）を非標的病変と同定すべきであり、また、ベースラインにおいて記録すべきである。これらの病変の測定は必要ではないが、それぞれの有無は経過観察を通して記すべきである。
【０１０６】
指標病変の記録には、評価日、病変部位の記載、寸法および病変の追跡に用いた診断検査の種類を含めるべきである。
【０１０７】
総ての測定は、定規またはカリパスを使用し、メートル法による表記で実施および記録すべきである。
【０１０８】
効果基準
疾患評価は、治療開始後６週間ごとに実施する必要がある。しかしながら、部分または完全奏効を受けた被験者は少なくとも２８日後に確定のための疾患評価を受けなければならない。評価は２８日後に近い（スケジュール調整可能な限り）、２８日以降の日に実施すべきである。
【０１０９】
標的病変に対する効果の評価についての定義は次の通りである：
標的病変の評価
完全奏効（ＣＲ）−総ての標的病変の消失。
部分奏効（ＰＲ）−ベースラインＬＤ和に比して、標的病変のＬＤ和が少なくとも３０％減少。
安定（ＳＤ）−治療開始以降の最小のＬＤ和に比して、ＰＲに相当する縮小がなく進行（ＰＤ）に相当する増大がない。治療開始から記録した最小のＬＤ和に比して、病変、または１つ以上の新病変の出現。
【０１１０】
非標的病変の評価
非標的病変に対する客観的な腫瘍縮小効果の判定に使用した規準の定義は次の通りである：
完全奏効−総ての非標的病変の消失。
不完全奏効／安定−１つ以上の非標的病変の残存。
進行−１つ以上の新病変の出現および／または既存の非標的病変の明らかな増悪。
【０１１１】
ＲＥＣＩＳＴに基づく効果についての総合効果の評価
総合効果は治療開始から疾患の増悪／再発が報告されるまで記録した最良効果である。一般的には、被験者の最良効果の割り当ては測定および確定基準の両方の実現によって決まる。
【０１１２】
下の表は、新病変出現の有無を含む標的病変および非標的病変の腫瘍縮小効果の考えられる総ての組合せについての最良総合効果の評価を示す。
【０１１３】
【表２】
2014529359.tif 000004
【０１１４】
組合せ
ＦＡＫ阻害剤、例えば、限定されるものではないが、化合物Ａが癌の治療のために投与される場合、本明細書において、用語「併用投与」およびその派生語は、本明細書において記載されるＦＡＫ阻害化合物と、化学療法および放射線治療を含め、癌の治療に有用であることが知られているさらなる有効成分の同時投与または任意の様式の個別逐次投与のいずれかを意味する。本明細書において、さらなる有効成分という用語には、癌に対する治療を必要とする患者に投与した際に有利な特性を示すことが知られている、または有利な特性を示すいずれの化合物または治療薬も含まれる。投与が同時でなければ、化合物は互いに近接した時点で投与される。さらに、これらの化合物を同じ投与形で投与するかどうかは問題ではなく、例えば、一方の化合物を局所投与し、他の化合物を経口投与してもよい。
【０１１５】
一般に、治療される感受性腫瘍に対して活性を有するいずれの抗新生物薬も、本発明の癌治療において併用投与することができる。このような薬剤の例は、Cancer Principles and Practice f Oncology by V.T. Devita and S. Hellman (編), 第6版(2001年2月15日), Lippincott Williams & Wilkins Publishersに見出すことができる。当業者ならば、関与する薬物および癌の特定の特徴に基づき、どの薬剤組合せが有用であるかを認識することができる。本発明で有用な一般的な抗新生物薬としては、限定されるものではないが、微小管阻害剤、例えば、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイド；白金配位錯体；アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード、オキサザホスホリン、アルキルスルホン酸、ニトロソ尿素およびトリアゼン；抗生物質、例えば、アントラサイクリン、アクチノマイシンおよびブレオマイシン；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えば、エピポドフィロトキシン；代謝拮抗物質、例えば、プリンおよびピリミジン類似体ならびに葉酸拮抗化合物；トポイソメラーゼＩ阻害剤、例えば、カンプトテシン；ホルモンおよびホルモン類似体；シグナル伝達経路阻害剤；非受容体型チロシンキナーゼ血管新生阻害剤；免疫治療薬；アポトーシス促進剤；および細胞周期シグナル伝達阻害剤が挙げられる。
【０１１６】
本ＦＡＫ阻害化合物と組み合わせて使用するための、または併用投与されるさらなる有効成分の例は、化学療法薬である。
【０１１７】
微小管阻害剤または有糸分裂阻害剤は、細胞周期のＭ期、すなわち有糸分裂期の間に腫瘍細胞の微小管に対して活性である細胞期特異的な薬剤である。微小管阻害剤の例としては、限定されるものではないが、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドが挙げられる。
【０１１８】
ジテルペノイドは、天然源に由来し、細胞周期のＧ２／Ｍ期に作用する細胞期特異的な抗癌剤である。ジテルペノイドは、微小管のβ−チューブリンサブユニットと結合することによりこのタンパク質を安定化させると考えられている。その後、タンパク質の分解が阻害され、有糸分裂が停止し、細胞死をたどると思われる。ジテルペノイドの例としては、限定されるものではないが、パクリタキセルおよびその類似体であるドセタキセルが挙げられる。
【０１１９】
パクリタキセル、５β，２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサ−ヒドロキシタキサ−１１−エン−９−オン４，１０−ジアセタート２−ベンゾアートの（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンゾイル−３−フェニルイソセリンとの１３−エステルは、タイヘイヨウイチイ(Taxus brevifolia)から単離された天然ジテルペン産物であり、注射液タキソール（商標）として市販されている。パクリタキセルは、タキサン系テルペン類のメンバーである。パクリタキセルは、１９７１年にWaniら(J. Am. Chem, Soc., 93:2325. 1971)によって初めて単離され、彼が化学法およびＸ線結晶学的方法によってその構造を同定した。その活性の１つの機構は、パクリタキセルの、チューブリンと結合し、それにより癌細胞増殖を阻害する能力に関連している。Schiff et al., Proc. Natl, Acad, Sci. USA, 77:1561-1565 (1980); Schiff et al., Nature, 277:665-667 (1979); Kumar, J. Biol, Chem, 256: 10435-10441 (1981)。いくつかのパクリタキセル誘導体の合成および抗癌活性に関する総説としては、D. G. I. Kingston et al., Studies in Organic Chemistry vol. 26, “New trends in Natural Products Chemistry 1986”, Attaur-Rahman, P.W. Le Quesne編(Elsevier, Amsterdam, 1986) pp 219-235を参照。
【０１２０】
パクリタキセルは、米国における難治性卵巣癌の治療における臨床使用(Markman et al., Yale Journal of Biology and Medicine, 64:583, 1991; McGuire et al., Ann. lntem, Med., 111:273,1989)および乳癌の治療(Holmes et al., J. Nat. Cancer Inst., 83:1797,1991)に承認されている。パクリタキセルは、皮膚における新生物(Einzig et. al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 20:46)および頭頸部癌(Forastire et. al., Sem. Oncol., 20:56, 1990)の治療のための有望な候補である。またこの化合物は、多発性嚢胞腎疾患(Woo et. al., Nature, 368:750. 1994)、肺癌およびマラリアの治療にも可能性を示している。パクリタキセルで患者を治療すると、閾値濃度（５０ｎＭ）を超える投与の期間に関連して(Kearns, C.M. et. al., Seminars in Oncology, 3(6) p.16-23, 1995)、骨髄抑制が起こる（複数の細胞系譜、Ignoff, R.J. et. al, Cancer Chemotherapy Pocket Guide, 1998）。
【０１２１】
ドセタキセル、（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−カルボキシ−３−フェニルイソセリン，Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルエステルの５β−２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサヒドロキシタキサ−１１−エン−９−オン４−アセタート２−ベンゾアートとの１３−エステルの三水和物は、注射液としてタキソテール（商標）として市販されている。ドセタキセルは、乳癌の治療に適応される。ドセタキセルは、ヨーロッパイチイの針葉から抽出された天然の前駆物質１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩを使用して製造された、パクリタキセル（参照のこと）の半合成誘導体である。ドセタキセルの用量制限毒性は好中球減少である。
【０１２２】
ビンカアルカロイドは、ニチニチソウ植物由来の細胞期特異的抗新生物薬である。ビンカアルカロイドは、チューブリンと特異的に結合することによって細胞周期のＭ期（有糸分裂）に作用する。その結果、結合されたチューブリン分子は、重合して微小管になることができない。有糸分裂は中期で停止し、細胞死をたどると考えられている。ビンカアルカロイドの例としては、限定されるものではないが、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビノレルビンが挙げられる。
【０１２３】
ビンブラスチン、ビンカロイコブラスチン硫酸塩は、注射液としてベルバン（商標）として市販されている。ビンブラスチンは、種々の固形腫瘍の第二選択療法として適応される可能性があるが、精巣癌、ならびにホジキン病、リンパ球性および組織球性リンパ腫を含む種々のリンパ腫の治療に主として適応されている。骨髄抑制がビンブラスチンの用量制限副作用である。
【０１２４】
ビンクリスチン、ビンカロイコブラスチンの２２−オキソ−硫酸塩は、注射液としてオンコビン（商標）として市販されている。ビンクリスチンは、急性白血病の治療に適応されており、ホジキンおよび非ホジキン悪性リンパ腫の治療計画の中でも使用が見出されている。脱毛および神経学的作用がビンクリスチンの最も一般的な副作用であり、程度は低いが、骨髄抑制(myelosupression)および胃腸粘膜炎作用が生じる。
【０１２５】
ビノレルビン酒石酸塩の注射液（ナベルビン（商標））として市販されているビノレルビン、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−Ｃ’−ノルビンカロイコブラスチン［Ｒ−（Ｒ＊，Ｒ＊）−２，３−ジヒドロキシブタン二酸（１：２）（塩）］は、半合成ビンカアルカロイドである。ビノレルビンは、単剤として、またはシスプラチンなどの他の化学療法薬と組み合わせて、種々の固形腫瘍、特に、非小細胞肺癌、進行性乳癌およびホルモン不応性前立腺癌の治療に適応されている。骨髄抑制がビノレルビンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１２６】
白金配位錯体は、非細胞期特異的抗癌剤であり、ＤＮＡと相互作用する。白金錯体は、腫瘍細胞に侵入し、アクア化を受け、ＤＮＡとの鎖内架橋および鎖間架橋を形成し、腫瘍に対して有害な生物学的作用を引き起こす。白金配位錯体の例としては、限定されるものではないが、シスプラチンおよびカルボプラチンが挙げられる。
【０１２７】
シスプラチン、ｃｉｓ−ジアンミンジクロロ白金は、注射液としてプラチノール（商標）として市販されている。シスプラチンは、主として転移性の精巣癌および卵巣癌ならびに進行性膀胱癌の治療に適応されている。シスプラチンの主な用量制限副作用は、腎毒性（水分補給と利尿により管理可能）、および耳毒性である。
【０１２８】
カルボプラチン、ジアンミン［１，１−シクロブタン−ジカルボキシラート（２−）−Ｏ，Ｏ’］白金は、注射液としてパラプラチン（商標）として市販されている。カルボプラチンは、主として進行性卵巣癌の第一選択および第二選択治療に適応されている。骨髄抑制がカルボプラチンの用量制限毒性である。
【０１２９】
アルキル化剤は、細胞周期非特異的抗癌剤(non-phase anti-cancer specific agents)であり、かつ、強力な求電子試薬である。一般に、アルキル化剤は、アルキル化によって、リン酸基、アミノ基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、およびイミダゾール基などのＤＮＡ分子の求核部分を介してＤＮＡと共有結合を形成する。このようなアルキル化によって核酸機能が破壊され細胞死に至る。アルキル化剤の例としては、限定されるものではないが、シクロホスファミド、メルファランおよびクロラムブシルなどのナイトロジェンマスタード；ブスルファンなどのアルキルスルホン酸；カルムスチンなどのニトロソ尿素；ならびにダカルバジンなどのトリアゼンが挙げられる。
【０１３０】
シクロホスファミド、２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］テトラヒドロ−２Ｈ−１，３，２−オキシアザホスホリン２−オキシド一水和物は、注射液または錠剤としてシトキサン（商標）として市販されている。シクロホスファミドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫および白血病の治療に適応されている。脱毛、悪心、嘔吐および白血球減少がシクロホスファミドの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１３１】
メルファラン、４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｌ−フェニルアラニンは、注射液または錠剤としてアルケラン（商標）として市販されている。メルファランは、多発性骨髄腫および切除不能な卵巣上皮癌の待期療法に適応されている。骨髄抑制がメルファランの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１３２】
クロラムブシル、４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］ベンゼンブタン酸は、リューケラン（商標）錠剤として市販されている。クロラムブシルは、慢性リンパ性白血病、ならびにリンパ肉腫、巨大濾胞性リンパ腫およびホジキン病などの悪性リンパ腫の待期療法に適応されている。骨髄抑制がクロラムブシルの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１３３】
ブスルファン、１，４−ブタンジオールジメタンスルホナートは、ミレラン（ＭＹＬＥＲＡＮ）（商標）錠剤として市販されている。ブスルファンは、慢性骨髄性白血病の待期療法に適応されている。骨髄抑制がブスルファンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１３４】
カルムスチン、１，３−［ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソ尿素は、ビーアイシーエヌユー（ＢｉＣＮＵ）（商標）として凍結乾燥物質の単一バイアルとして市販されている。カルムスチンは、脳腫瘍、多発性骨髄腫、ホジキン病および非ホジキンリンパ腫用に、単剤として、または他の薬剤と組み合わせて、待期療法に適応されている。遅発性骨髄抑制がカルムスチンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１３５】
ダカルバジン、５−（３，３−ジメチル−１−トリアゼノ）−イミダゾール−４−カルボキサミドは、単一バイアルとしてＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（商標）として市販されている。ダカルバジンは、転移性悪性黒色腫の治療、および他の薬剤と組み合わせてホジキン病の第二選択治療に適応されている。悪心、嘔吐、および食欲不振症がダカルバジンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１３６】
抗生物質系抗新生物薬は、細胞周期非特異的薬剤であり、ＤＮＡと結合するかまたはＤＮＡにインターカレートする。一般に、このような作用によって安定なＤＮＡ複合体かまたは鎖の切断が生じ、それにより核酸の通常機能が乱れ、細胞死に至る。抗生物質系抗新生物薬の例としては、限定されるものではないが、ダクチノマイシンなどのアクチノマイシン；ダウノルビシンおよびドキソルビシンなどのアントラサイクリン；ならびにブレオマイシンが挙げられる。
【０１３７】
ダクチノマイシンは、アクチノマイシンＤとしても知られ、注射液の形態でコスメゲン（商標）として市販されている。ダクチノマイシンは、ウィルムス腫瘍および横紋筋肉腫の治療に適応されている。悪心、嘔吐および食欲不振症がダクチノマイシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１３８】
ダウノルビシン、（８Ｓ−シス−）−８−アセチル−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−ｌｙｘｏ−ヘキソピラノシル）オキシ］−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、リポソーム注射液の形態でダウノキソーム（商標）として、または注射液としてセルビジン（商標）として市販されている。ダウノルビシンは、急性非リンパ球性白血病および進行性ＨＩＶ関連カポジ肉腫の治療における寛解導入に適応されている。骨髄抑制がダウノルビシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１３９】
ドキソルビシン、（８Ｓ，１０Ｓ）−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−ｌｙｘｏ−ヘキソピラノシル）オキシ］−８−グリコロイル，７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、注射液の形態としてルベックス（商標）またはアドリアマイシンＲＤＦ（商標）として市販されている。ドキソルビシンは、主として急性リンパ芽球性白血病および急性骨髄芽球性白血病の治療に適応されているが、いくつかの固形腫瘍およびリンパ腫の治療における有用成分でもある。骨髄抑制がドキソルビシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１４０】
ブレオマイシン、ストレプトミセス・ヴェルチシルス(Streptomyces verticillus)の株から単離された細胞傷害性グリコペプチド系抗生物質の混合物は、ブレノキサン（商標）として市販されている。ブレオマイシンは、単剤として、または他の薬剤と組み合わせて、扁平上皮癌、リンパ腫、および精巣癌の待期療法に適応されている。肺毒性および皮膚毒性がブレオマイシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１４１】
トポイソメラーゼＩＩ阻害剤としては、限定されるものではないが、エピポドフィロトキシンが挙げられる。
【０１４２】
エピポドフィロトキシンは、マンドレイク植物由来の細胞周期特異的抗新生物薬である。エピポドフィロトキシンは、一般に、トポイソメラーゼＩＩおよびＤＮＡと三元複合体を形成してＤＮＡ鎖の切断を引き起こすことによって、細胞周期のＳ期およびＧ２期において細胞に影響を及ぼす。この鎖切断が蓄積し、細胞死をたどる。エピポドフィロトキシンの例としては、限定されるものではないが、エトポシドおよびテニポシドが挙げられる。
【０１４３】
エトポシド、４’−デメチル−エピポドフィロトキシン９［４，６−０−（Ｒ）−エチリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、注射液またはカプセル剤としてベプシド（商標）として市販されており、一般にＶＰ−１６として知られている。エトポシドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、精巣癌および非小細胞肺癌の治療に適応されている。骨髄抑制がエトポシドの最も一般的な副作用である。白血球減少の発生率の方が、血小板減少よりも重大となる傾向がある。
【０１４４】
テニポシド、４’−デメチル−エピポドフィロトキシン９［４，６−０−（Ｒ）−テニリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、注射液としてブモン（商標）として市販されており、一般にＶＭ−２６として知られている。テニポシドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、小児における急性白血病の治療に適応されている。骨髄抑制がテニポシドの最も一般的な用量制限副作用である。テニポシドは、白血球減少および血小板減少の双方を誘導し得る。
【０１４５】
代謝拮抗性新生物薬は、ＤＮＡ合成を阻害することによって、またはプリンもしくはピリミジン塩基の合成を阻害し、それによりＤＮＡ合成を制限することによって細胞周期のＳ期（ＤＮＡ合成）に作用する、細胞期特異的抗新生物薬である。その結果、Ｓ期は進行せず、細胞死をたどる。代謝拮抗性抗新生物薬の例としては、限定されるものではないが、フルオロウラシル、メトトレキサート、シタラビン、メカプトプリン、チオグアニンおよびゲムシタビンが挙げられる。
【０１４６】
５−フルオロウラシル、５−フルオロ−２，４−（１Ｈ，３Ｈ）ピリミジンジオンは、フルオロウラシルとして市販されている。５−フルオロウラシルを投与すると、チミジル酸の合成が阻害され、またＲＮＡおよびＤＮＡの両方に組み込まれる。その結果は一般に細胞死である。５−フルオロウラシルは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、乳癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、および膵癌の治療に適応されている。骨髄抑制および粘膜炎が５−フルオロウラシルの用量制限副作用である。他のフルオロピリミジン類似体としては、５−フルオロデオキシウリジン（フロクスウリジン）および５−フルオロデオキシウリジン一リン酸が挙げられる。
【０１４７】
シタラビン、４−アミノ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−２（１Ｈ）−ピリミジノンは、シトサール−Ｕ（商標）として市販されており、一般にＡｒａ−Ｃとして知られている。シタラビンは、成長中のＤＮＡ鎖へのシタラビンの末端組み込みによってＤＮＡ鎖の伸長を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示すと考えられている。シタラビンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に適応されている。他のシチジン類似体としては、５−アザシチジンおよび２’，２’−ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）が挙げられる。シタラビンは、白血球減少、血小板減少および粘膜炎を誘発する。
【０１４８】
メルカプトプリン、１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオン一水和物は、ＰＵＲＩＮＥＴＨＯＬ（商標）として市販されている。メルカプトプリンは、現時点でまだ特定されていないメカニズムによってＤＮＡ合成を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示す。メルカプトプリンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に適応されている。骨髄抑制および胃腸粘膜炎が、高用量のメルカプトプリンで予想される副作用である。有用なメルカプトプリン類似体はアザチオプリンである。
【０１４９】
チオグアニン、２−アミノ−１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオンは、タブロイド（商標）として市販されている。チオグアニンは、現時点でまだ特定されていないメカニズムによってＤＮＡ合成を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示す。チオグアニンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に適応されている。白血球減少、血小板減少および貧血を含む骨髄抑制がチオグアニン投与の最も一般的な用量制限副作用である。しかしながら、胃腸副作用も起こり、用量制限となり得る。他のプリン類似体としては、ペントスタチン、エリスロヒドロキシノニルアデニン、フルダラビンリン酸エステルおよびクラドリビンが挙げられる。
【０１５０】
ゲムシタビン、２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロシチジン一塩酸塩（β−異性体）は、ゲムザール（商標）として市販されている。ゲムシタビンは、Ｓ期にて、またＧ１／Ｓ境界を通る細胞の進行を遮断することによって、細胞期特異性を示す。ゲムシタビンは、シスプラチンと組み合わせて局所進行性非小細胞肺癌の治療に適応され、また単独で局所進行性膵癌の治療に適応されている。白血球減少、血小板減少および貧血を含む骨髄抑制が、ゲムシタビン投与の最も一般的な用量制限副作用である。
【０１５１】
メトトレキサート、Ｎ−［４［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸は、メトトレキサートナトリウムとして市販されている。メトトレキサートは、プリンヌクレオチドおよびチミジル酸の合成に必要とされるジヒドロ葉酸レダクターゼの阻害を介して、ＤＮＡの合成、修復、および／または複製を阻害することによって、特にＳ期に細胞期作用を示す。メトトレキサートは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、絨毛癌、髄膜白血病、非ホジキンリンパ腫、ならびに乳癌、頭部癌、頸部癌、卵巣癌および膀胱癌の治療に適応されている。骨髄抑制（白血球減少、血小板減少および貧血）および粘膜炎が、メトトレキサート投与の予想される副作用である。
【０１５２】
カンプトテシンおよびカンプトテシン誘導体を含むカンプトテシン類は、トポイソメラーゼＩ阻害剤として入手可能または開発中である。カンプトテシン細胞傷害活性は、そのトポイソメラーゼＩ阻害活性に関連すると考えられている。カンプトテシンの例としては、限定されるものではないが、イリノテカン、トポテカン、および下記の７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０−カンプトテシンの種々の光学的形態が挙げられる。
【０１５３】
イリノテカンＨＣｌ、（４Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−９−［（４−ピペリジノピペリジノ）カルボニルオキシ］−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン塩酸塩は、注射液カンプトサール（商標）として市販されている。
【０１５４】
イリノテカンは、その活性代謝物ＳＮ−３８とともにトポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体と結合する、カンプトテシンの誘導体である。細胞傷害性は、トポイソメラーゼＩ：ＤＮＡ：イリンテカンまたはＳＮ−３８の三元複合体と複製酵素との相互作用により引き起こされる回復不能な二本鎖切断の結果として生じると考えられている。イリノテカンは、結腸または直腸の転移性癌の治療に適応されている。イリノテカンＨＣｌの用量制限副作用は、好中球減少を含む骨髄抑制、および下痢を含むＧＩ作用である。
【０１５５】
トポテカンＨＣｌ、（Ｓ）−１０−［（ジメチルアミノ）メチル］−４−エチル−４，９−ジヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４−（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン一塩酸塩は、注射液ハイカムチン（商標）として市販されている。トポテカンは、トポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体と結合して、ＤＮＡ分子のねじれ歪みに応答してトポイソメラーゼＩにより引き起こされる一本鎖切断の再連結を妨げるカンプトテシンの誘導体である。トポテカンは、転移性の卵巣癌および小細胞肺癌の第二選択治療に適応されている。トポテカンＨＣｌの用量制限副作用は、骨髄抑制、主に好中球減少である。
【０１５６】
また、現在開発中の、下式Ａ：
【化２】
2014529359.tif 000005
の、化学名「７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｒ，Ｓ）−カンプトテシン（ラセミ混合物）または「７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｒ）カンプトテシン（Ｒ鏡像異性体）または「７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｓ）−カンプトテシン（Ｓ鏡像異性体）で知られるラセミ混合物（Ｒ、Ｓ）型ならびにＲおよびＳ鏡像異性体を含むカンプトテシン誘導体も着目される。このような化合物ならびに関連化合物は、製造方法を含め、米国特許第６，０６３，９２３号；同第５，３４２，９４７号；同第５，５５９，２３５号；同第５，４９１，２３７号および１９９７年１１月２４日に出願された係属中の米国特許出願第０８／９７７，２１７号に記載されている。
【０１５７】
ホルモンおよびホルモン類似体は、ホルモンと癌の増殖および／または増殖の欠如との間に関係がある癌を治療するのに有用な化合物である。癌治療で有用なホルモンおよびホルモン類似体の例としては、限定されるものではないが、小児の悪性リンパ腫および急性白血病の治療に有用なプレドニゾンおよびプレドニゾロンなどの副腎皮質ステロイド；アミノグルテチミドおよび他のアロマターゼ阻害剤、例えば、副腎皮質癌およびエストロゲン受容体を含むホルモン依存性乳癌の治療に有用なアナストロゾール、レトラゾール(letrazole)、ボラゾール(vorazole)およびエキセメスタン；プロゲストリン(progestrins)、例えば、ホルモン依存性乳癌および子宮内膜癌の治療に有用な酢酸メゲストロール；エストロゲン、アンドロゲンおよび抗アンドロゲン、例えば、前立腺癌および良性前立腺肥大の治療に有用なフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、シプロテロン酢酸塩および５α−レダクターゼ、例えば、フィナステリドおよびデュタステライド；抗エストロゲン、例えば、ホルモン依存性乳癌および他の感受性癌の治療に有用なタモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェン、ならびに選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭＳ）、例えば、米国特許第５，６８１，８３５号、同第５，８７７，２１９号および同第６，２０７，７１６号に記載のもの；ならびに前立腺癌の治療のための黄体形成ホルモン（ＬＨ）および／または卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の放出を刺激するゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）およびその類似体、例えば、ＬＨＲＨ作動薬および拮抗薬、例えば、ゴセレリン酢酸塩およびルプロリド(luprolide)が挙げられる。
【０１５８】
レトロゾール（商品名フェマーラ）は、術後のホルモン反応性乳癌の治療のための経口非ステロイド系アロマターゼ阻害剤である。エストロゲンは、アロマターゼ酵素の活性を介したアンドロゲンの変換によって産生される。その後、エストロゲンはエストロゲン受容体と結合し、それにより、細胞を分裂させる。レトロゾールは、アロマターゼのシトクロムＰ４５０ユニットのヘムとの競合的可逆的結合により、アロマターゼによるエストロゲンの産生を妨げる。その作用は特異的であり、レトロゾールは、鉱質−またはコルチコステロイドの産生を減少させない。
【０１５９】
シグナル伝達経路阻害剤は、細胞内変化を引き起こす化学プロセスを遮断または阻害する阻害剤である。本明細書において、この変化は細胞増殖または分化である。本発明で有用なシグナル伝達阻害剤としては、受容体型チロシンキナーゼ、非受容体型チロシンキナーゼ阻害剤、ＳＨ２／ＳＨ３ドメイン遮断剤、セリン／トレオニンキナーゼ阻害剤、ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ阻害剤、ミオイノシトールシグナル伝達阻害剤およびＲａｓ癌遺伝子阻害剤が含まれる。
【０１６０】
いくつかのタンパク質チロシンキナーゼは、細胞増殖の調節に関与する様々なタンパク質の特定のチロシル残基のリン酸化を触媒する。このようなタンパク質チロシンキナーゼは、受容体型または非受容体型キナーゼとして大別することができる。
【０１６１】
受容体型チロシンキナーゼは、細胞外リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメインおよびチロシンキナーゼドメインを有する膜貫通タンパク質である。受容体型チロシンキナーゼは細胞増殖の調節に関与し、一般に増殖因子受容体と呼ばれている。例えば、過剰発現または突然変異による、これらのキナーゼの多くの不適当または無制御な活性化、すなわち、異常なキナーゼ増殖因子受容体活性は、無制御な細胞増殖をもたらすことが示されている。従って、このようなキナーゼの異常な活性は、悪性組織増殖と関連づけられている。結果として、このようなキナーゼの阻害剤は、癌治療法を提供し得る。増殖因子受容体としては、例えば、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦｒ）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦｒ）、ｅｒｂＢ２、ｅｒｂＢ４、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦｒ）、免疫グロブリン様ドメインおよび上皮増殖因子相同ドメインを含むチロシンキナーゼ（ＴＩＥ−２）、インスリン増殖因子−Ｉ（ＩＧＦＩ）受容体、マクロファージコロニー刺激因子（ｃｆｍｓ）、ＢＴＫ、ｃｋｉｔ、ｃｍｅｔ、繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）受容体、Ｔｒｋ受容体（ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢおよびＴｒｋＣ）、エフリン（ｅｐｈ）受容体ならびにＲＥＴ癌原遺伝子が挙げられる。増殖受容体のいくつかの阻害剤が開発中であり、リガンド拮抗薬、抗体、チロシンキナーゼ阻害剤およびアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。増殖因子受容体および増殖因子受容体機能を阻害する薬剤は、例えば、Kath, John C., Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(6):803-818；Shawver et al DDT Vol 2, No. 2 1997年2月；およびLofts, F. J et al, "Growth factor receptors as targets", New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, Workman, Paul and Kerr, David編, CRC press  1994, Londonに記載されている。
【０１６２】
増殖因子受容体キナーゼでないチロシンキナーゼは、非受容体型チロシンキナーゼと呼ばれる。抗癌剤の標的または潜在的標的となる、本発明で有用な非受容体型チロシンキナーゼには、ｃＳｒｃ、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｙｅｓ、Ｊａｋ、ｃＡｂｌ、ＦＡＫ（接着斑キナーゼ）、ブルトン型チロシンキナーゼおよびＢｃｒ−Ａｂｌが挙げられる。このような非受容体型キナーゼおよび非受容体型チロシンキナーゼ機能を阻害する薬剤は、Sinh, S. and Corey, S.J., (1999) Journal of Hematotherapy and Stem Cell Research 8 (5): 465-80；およびBolen, J.B., Brugge, J.S., (1997) Annual review of Immunology. 15: 371-404に記載されている。
【０１６３】
ＳＨ２／ＳＨ３ドメイン遮断剤は、ＰＩ３−Ｋ  ｐ８５サブユニット、Ｓｒｃファミリーキナーゼ、アダプター分子（Ｓｈｃ、Ｃｒｋ、Ｎｃｋ、Ｇｒｂ２）およびＲａｓ−ＧＡＰを含む様々な酵素またはアダプタータンパク質におけるＳＨ２またはＳＨ３ドメイン結合を乱す薬剤である。抗癌剤の標的としてのＳＨ２／ＳＨ３ドメインは、Smithgall, T.E. (1995), Journal of Pharmacological and Toxicological Methods 34(3) 125-32に述べられている。
【０１６４】
Ｒａｆキナーゼ（ｒａｆｋ）、マイトジェンまたは細胞外調節キナーゼ(Mitogen or Extracellular Regulated Kinase)（ＭＥＫ）および細胞外調節キナーゼ(Extracellular Regulated Kinase)（ＥＲＫ）の遮断剤を含むＭＡＰキナーゼカスケード遮断剤；ならびにＰＫＣ（アルファ、ベータ、ガンマ、イプシロン、ミュー、ラムダ、イオタ、ゼータ）の遮断剤を含むプロテインキナーゼＣファミリーメンバー遮断剤を含む、セリン／トレオニンキナーゼ阻害剤。ＩｋＢキナーゼファミリー（ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ）、ＰＫＢファミリーキナーゼ、ＡＫＴキナーゼファミリーメンバーおよびＴＧＦβ受容体キナーゼ。このようなセリン／トレオニンキナーゼおよびそれらの阻害剤は、Yamamoto, T., Taya, S., Kaibuchi, K., (1999), Journal of Biochemistry. 126 (5) 799-803; Brodt, P, Samani, A., and Navab, R. (2000), Biochemical Pharmacology, 60. 1101-1107; Massague, J., Weis-Garcia, F. (1996) Cancer Surveys. 27:41-64; Philip, P.A., and Harris, A.L. (1995), Cancer Treatment and Research. 78: 3-27, Lackey, K. et al Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, (10), 2000, 223-226; 米国特許第６，２６８，３９１号；およびMartinez-Iacaci, L., et al, Int. J. Cancer (2000), 88(1), 44-52に記載されている。
【０１６５】
ＰＩ３−キナーゼ、ＡＴＭ、ＤＮＡ−ＰＫおよびＫｕの遮断剤を含むホスファチジルイノシトール−３キナーゼ(Phosphotidyl inositol-3 Kinase)ファミリーメンバーの阻害剤もまた本発明において有用であり得る。このようなキナーゼは、Abraham, R.T. (1996), Current Opinion in Immunology. 8 (3) 412-8; Canman, C.E., Lim, D.S. (1998), Oncogene 17 (25) 3301-3308; Jackson, S.P. (1997), International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 29 (7):935-8;およびZhong, H. et al, Cancer res, (2000) 60(6), 1541-1545に記載されている。
【０１６６】
また、本発明では、ミオイノシトールシグナル伝達阻害剤、例えば、ホスホリパーゼＣ遮断剤およびミオイノシトール類似体も有用である。このようなシグナル伝達阻害剤は、Powis, G., and Kozikowski A., (1994) New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, Paul Workman and David Kerr編, CRC press 1994, Londonに記載されている。
【０１６７】
シグナル伝達経路阻害剤の別の群は、Ｒａｓ癌遺伝子の阻害剤である。このような阻害剤には、ファルネシルトランスフェラーゼ、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼおよびＣＡＡＸプロテアーゼの阻害剤ならびにアンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイムおよび免疫療法が含まれる。このような阻害剤は、野生型変異体ｒａｓを含む細胞においてｒａｓの活性化を阻止し、それにより抗増殖薬として作用することが示されている。Ｒａｓ癌遺伝子の阻害は、Scharovsky, O.G., Rozados, V.R., Gervasoni, S.I. Matar, P. (2000), Journal of Biomedical Science. 7(4) 292-8；Ashby, M.N. (1998), Current Opinion in Lipidology. 9 (2) 99-102；およびBennett, C.F. and Cowsert, L.M. BioChim. Biophys. Acta, (1999) 1489(1):19-30に記載されている。
【０１６８】
上述のように、受容体型キナーゼリガンド結合に対する抗体拮抗薬もまた、シグナル伝達阻害剤として機能し得る。この群のシグナル伝達経路阻害剤は、受容体型チロシンキナーゼの細胞外リガンド結合ドメインに対するヒト化抗体の使用を含む。例えば、Ｉｍｃｌｏｎｅ  Ｃ２２５  ＥＧＦＲ特異的抗体(Green, M.C. et al, Monoclonal Antibody Therapy for Solid Tumors, Cancer Treat. Rev., (2000), 26(4), 269-286参照)；ハーセプチン（商標）ｅｒｂＢ２抗体(Tyrosine Kinase Signalling in Breast cancer:erbB Family Receptor Tyrosine Kniases, Breast cancer Res., 2000, 2(3), 176-183参照)；ならびに２ＣＢ  ＶＥＧＦＲ２特異的抗体(Brekken, R.A. et al, Selective Inhibition of VEGFR2 Activity by a monoclonal Anti-VEGF antibody blocks tumor growth in mice, Cancer Res. (2000) 60, 5117-5124参照)。
【０１６９】
非受容体型キナーゼ血管新生阻害剤もまた、本発明において使用が見出され得る。血管新生関連ＶＥＧＦＲおよびＴＩＥ２の阻害剤は、シグナル伝達阻害剤について上述されている（両受容体とも、受容体型チロシンキナーゼである）。ｅｒｂＢ２およびＥＧＦＲの阻害剤は血管新生、主にＶＥＧＦ発現を阻害することが示されているので、血管新生は一般にｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲシグナル伝達と関連する。よって、ｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲ阻害剤と血管新生の阻害剤との組合せは理にかなっている。従って、非受容体型チロシンキナーゼ阻害剤は、本発明のＥＧＦＲ／ｅｒｂＢ２阻害剤と組み合わせて使用することができる。例えば、ＶＥＧＦＲ（受容体型チロシンキナーゼ）を認識しないが、リガンドと結合する抗ＶＥＧＦ抗体；血管新生を阻害するインテグリン（αｖβ３）の低分子阻害剤；エンドスタチンおよびアンジオスタチン（非ＲＴＫ）も、開示されたｅｒｂファミリー阻害剤との組合せにおいて有用であるとわかる(Bruns CJ et al (2000), Cancer Res., 60: 2926-2935; Schreiber AB, Winkler MEおよびDerynck R. (1986), Science, 232: 1250-1253；Yen L et al. (2000), Oncogene 19: 3460-3469を参照)。
【０１７０】
ヴォトリエント（商標）として市販されているパゾパニブは、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）である。パゾパニブは、塩酸塩として提供され、化学名は５−［［４−［（２，３−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−６−イル）メチルアミノ］−２−ピリミジニル］アミノ］−２−メチルベンゼンスルホンアミド一塩酸塩である。パゾポニブは、進行性腎細胞癌患者の治療に承認されている。
【０１７１】
アバスチン（商標）として市販されているベバシスマブは、ＶＥＧＦ−Ａを阻害するヒト化モノクローナル抗体である。アバスチン（商標）は、結腸直腸癌、肺癌、乳癌、腎癌および膠芽腫を含む様々な癌の治療に承認されている。
【０１７２】
ｍＴＯＲ阻害剤としては、限定されるものではないが、ラパマイシン（ＦＫ５０６）およびラパログ(rapalogs)、ＲＡＤ００１またはエベロリムス（アフィニトール）、ＣＣＩ−７７９またはテムシロリムス、ＡＰ２３５７３、ＡＺＤ８０５５、ＷＹＥ−３５４、ＷＹＥ−６００、ＷＹＥ−６８７およびＰｐ１２１が挙げられる。
【０１７３】
エベロリムスは、Novartis社によりアフィニトール（商標）として販売されており、シロリムスの４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）誘導体であり、ｍＴＯＲ（哺乳類ラパマイシン標的タンパク質(mammalian target of rapamycin)）阻害剤としてシロリムスと同様に働く。現在、臓器移植の拒絶反応を防ぐ免疫抑制薬および腎細胞癌の治療薬として使用されている。また、複数の癌で使用するためにエベロリムスおよび他のｍＴＯＲ阻害剤に対して多くの研究が行われている。エベロリムスは、下記化学構造（式ＩＩ）および化学名を有する：
【化３】
2014529359.tif 000006
ジヒドロキシ−１２−［（２Ｒ）−１−［（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）−４−（２−ヒドロキシエトキシ）−３−メトキシシクロヘキシル］プロパン−２−イル］−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３，２９，３５−ヘキサメチル−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−２，３，１０，１４，２０−ペントン。
【０１７４】
ベキサロテンは、タルグレチン（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ）（商標）として販売されており、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）を選択的に活性化するレチノイドのサブクラスのメンバーである。これらのレチノイド受容体は、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）のものとは異なる生物活性を有する。化学名は４−［１−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフタレニル）エテニル］安息香酸である。ベキサロテンは、少なくとも１種の他の薬剤では疾患が上手く治療できなかった人々において皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ、皮膚癌の一種）を治療するために使用される。
【０１７５】
ネクサバール（商標）として市場に出ているソラフェニブは、多標的キナーゼ阻害剤と呼ばれる薬剤クラスに分類される。その化学名は４−［４−［［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］カルバモイルアミノ］フェノキシ］−Ｎ−メチル−ピリジン−２−カルボキサミドである。ソラフェニブは、進行性腎細胞癌（腎臓で始まる癌の一種）を治療するために使用される。ソラフェニブはまた、切除不能な肝細胞癌（手術では治療できない肝臓癌の一種）を治療するためにも使用される。
【０１７６】
免疫療法計画に用いられる薬剤もまた、式（Ｉ）の化合物との組合せにおいて有用であり得る。ｅｒｂＢ２またはＥＧＦＲに対する免疫応答を生じさせるには、複数の免疫学的戦略が存在する。これらの戦略は一般に腫瘍ワクチン接種の範囲にある。免疫学的アプローチの有効性は、低分子阻害剤を用いたｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲシグナル伝達経路の組合せ阻害を通じて大きく増強され得る。ｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲに対する免疫学的／腫瘍ワクチンアプローチに関する考察は、Reilly RT  et al. (2000), Cancer Res. 60: 3569-3576；およびChen Y, Hu D, Eling DJ, Robbins J, and Kipps TJ. (1998), Cancer Res. 58: 1965-1971に見出せる。
【０１７７】
ｅｒｂＢ阻害剤の例としては、ラパチニブ、エルロチニブおよびゲフィチニブが挙げられる。ラパチニブ、Ｎ−（３−クロロ−４−｛［（３−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−６−［５−（｛［２−（メチルスルホニル）エチル］アミノ｝メチル）−２−フラニル］−４−キナゾリンアミン（式Ｉにより表され、図示の通りである）は、ＨＥＲ２陽性転移性乳癌の治療にカペシタビンとの併用において承認されている、強力な、経口用、低分子のｅｒｂＢ−１およびｅｒｂＢ−２（ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２）チロシンキナーゼの二重阻害剤である。
【化４】
2014529359.tif 000007
【０１７８】
式（Ｉ）の化合物の遊離塩基、ＨＣｌ塩およびジトシラート塩は、１９９９年７月１５日公開の第ＷＯ９９／３５１４６号；および２００２年１月１０日公開の第ＷＯ０２／０２５５２号に開示されている手順に従って製造することができる。
【０１７９】
エルロチニブ、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス｛［２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝−４−キナゾリンアミン（タルセバという商品名で市販されている）は、式ＩＩにより表され、図示の通りである：
【化５】
2014529359.tif 000008
【０１８０】
エルロチニブの遊離塩基およびＨＣｌ塩は、例えば、米国特許第５，７４７，４９８号、実施例２０に従って製造することができる。
ゲフィチニブ、４−キナゾリンアミン，Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−［３−４−モルホリン］プロポキシ］は、式ＩＩＩにより表され、図示の通りである：
【化６】
2014529359.tif 000009
【０１８１】
ゲフィチニブは、イレッサ（商標）（アストラゼネカ社）という商品名で市販されており、白金製剤を含む化学療法およびドセタキセル化学療法のどちらにも失敗した後の局所進行性または転移性非小細胞肺癌患者の治療のための単剤療法として適応されているｅｒｂＢ−１阻害剤である。ゲフィチニブの遊離塩基、ＨＣｌ塩および二ＨＣｌ塩は、１９９６年４月２３日に出願され、１９９６年１０月３１日に第ＷＯ９６／３３９８０号として公開された国際出願第ＰＣＴ／ＧＢ９６／００９６１号の手順に従って製造することができる。
【０１８２】
トラスツズマブ（ハーセプチン（商標））は、ＨＥＲ２受容体と結合するヒト化モノクローナル抗体である。その最初の適応症はＨＥＲ２陽性乳癌である。
【０１８３】
セツキシマブ（アービタックス（商標））は、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）を阻害するマウス・ヒトキメラ抗体である。
【０１８４】
ペルツズマブ（２Ｃ４とも呼ばれる、商品名オムニターグ（Ｏｍｎｉｔａｒｇ））はモノクローナル抗体である。「ＨＥＲ二量体化阻害剤」と呼ばれる薬剤系統に属するそのクラスの最初のもの。ペルツズマブは、ＨＥＲ２との結合により、ＨＥＲ２と他のＨＥＲ受容体との二量体化を阻害し、その結果として腫瘍増殖の低下がもたらされると仮定される。ペルツズマブは、２００１年１月４日公開の第ＷＯ０１／００２４５号に記載されている。
【０１８５】
リツキシマブは、リツキサン（商標）およびマブテラ（ＭＡＢＴＨＥＲＡ（商標））として販売されているキメラモノクローナル抗体である。リツキシマブは、Ｂ細胞上のＣＤ２０と結合し、細胞アポトーシスを引き起こす。リツキシマブは静脈内に投与され、関節リウマチおよびＢ細胞非ホジキンリンパ腫の治療に承認されている。
【０１８６】
オファツムマブは、アルゼラ（ＡＲＺＥＲＲＡ（商標））として販売されている完全ヒトモノクローナル抗体である。オファツムマブは、Ｂ細胞上のＣＤ２０と結合し、フルダラビン（フルダラ）およびアレムツズマブ（キャンパス）による治療に対して抵抗性の成人において慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ；白血球の癌の一種）を治療するために使用される。
【０１８７】
アポトーシス誘導療法で用いられる薬剤（例えば、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチド）もまた、本発明の組合せにおいて使用可能である。Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質のメンバーは、アポトーシスを阻止する。そのため、ｂｃｌ−２のアップレギュレーションは、化学的抵抗と関連づけられている。研究によれば、上皮増殖因子（ＥＧＦ）がｂｃｌ−２ファミリーの抗アポトーシスメンバー（すなわち、ｍｃｌ−１）を刺激することが示された。従って、腫瘍においてｂｃｌ−２の発現をダウンレギュレートするように設計された戦略は、臨床的利益が実証され、現在第ＩＩ／ＩＩＩ相治験の段階である（すなわち、Genta社のＧ３１３９  ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチド）。ｂｃｌ−２に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド戦略を用いるこのようなアポトーシス誘導戦略は、Water JS et al. (2000), J. Clin. Oncol. 18: 1812-1823；およびKitada S et al. (1994), Antisense Res. Dev. 4: 71-79に述べられている。
【０１８８】
細胞周期シグナル伝達阻害剤は、細胞周期の制御に関与する分子を阻害する。サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）と呼ばれるプロテインキナーゼファミリー、およびサイクリンと呼ばれるタンパク質ファミリーとのそれらの相互作用は、真核生物の細胞周期の進行を制御する。細胞周期の正常な進行には、異なるサイクリン／ＣＤＫ複合体の協調的活性化および不活性化が必要である。細胞周期シグナル伝達のいくつかの阻害剤が開発中である。例えば、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４およびＣＤＫ６を含むサイクリン依存性キナーゼ、およびそれらの阻害剤の例は、例えばRosania et al, Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(2):215-230に記載されている。
【０１８９】
一実施形態では、特許請求された発明の癌治療法は、前記ヒトからのサンプルにおいてニューロフィブロミン−２（ＮＦ２）遺伝子の遺伝子産物の検出可能な量の有無を判定すること、および遺伝子産物またはアイソフォーム１遺伝子産物が検出されない場合に、前記ヒトに、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤またはその薬学上許容される塩の有効量を投与すること、ならびに該ＦＡＫ阻害剤とともに少なくとも１種の抗新生物薬を併用投与することを含んでなる。例として、本発明は、治療を必要とするヒトにおいて癌を治療する方法を提供し、その方法は、該ヒトからの腫瘍サンプルからマーリンまたはその機能的断片の検出可能な量の有無を判定すること、およびマーリンまたはその機能的断片が検出されない場合に、該ヒトに、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学上許容される塩の有効量と、少なくとも１種の抗新生物薬、例えば、微小管阻害剤、白金配位錯体、アルキル化剤、抗生物質、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ホルモンおよびホルモン類似体、シグナル伝達経路阻害剤、非受容体型チロシンキナーゼ血管新生阻害剤、免疫治療薬、アポトーシス促進剤および細胞周期シグナル伝達阻害剤からなる群から選択されるものとを投与することを含んでなる。
【０１９０】
医薬組成物
式（Ｉ）の化合物、ならびにその薬学上許容される塩および溶媒和物を、化学原料として投与することが可能であるが、有効成分を医薬組成物として与えることも可能である。従って、本発明の実施形態は、治療上有効な量の化合物Ａと１種以上の薬学上許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物をさらに提供する。担体、希釈剤または賦形剤は、処方物の他の成分と適合性があり、その受容者に有害でないという意味において許容されるものでなくてはならない。本発明の別の態様に従って、化合物Ａを１種以上の薬学上許容される担体、希釈剤または賦形剤と混合することを含む、医薬製剤の製造のための方法も提供される。
【０１９１】
医薬製剤は、単位用量あたり所定量の有効成分を含む単位用量形態で与えることができる。このような単位は、治療する疾患、投与経路、患者の年齢、体重および状態によって、例えば、０．５ｍｇ〜３．５ｇ、好ましくは、１ｍｇ〜１５００ｍｇ、１日１〜３回、の式（Ｉ）の化合物を含んでよい。好ましい単位投与処方物は、本明細書において上に説明した、有効成分の１日量または部分用量、またはその適当な分割用量を含むものである。さらに、このような医薬製剤は、製薬分野において周知の方法のいずれによっても製造することができる。一実施形態では、ＦＡＫ阻害剤は約８０ｍｇ〜約１５００ｍｇの間で１日２回（ＢＩＤ）ヒトに投与される。別の実施形態では、ＦＡＫ阻害剤は約３００ｍｇ〜約１５００ｍｇの間で１日２回（ＢＩＤ）ヒトに投与される。別の実施形態では、ＦＡＫ阻害剤は約３００ｍｇ〜約１０００ｍｇの間で１日２回（ＢＩＤ）ヒトに投与される。別の実施形態では、ＦＡＫ阻害剤は５０、８０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１０５０、１１００、１１５０、１２００、１２５０、１３００、１３５０、１４００、１４５０または１５００ｍｇで１日２回（ＢＩＤ）ヒトに投与される。
【０１９２】
医薬製剤は、任意の適当な経路による、例えば、経口（口内もしくは舌下を含む）経路、直腸経路、鼻腔経路、局所（口内、舌下もしくは経皮を含む）経路、膣経路または非経口（皮下、筋肉内、静脈内もしくは皮内を含む）経路による投与に適合させることができる。このような処方物は、製薬分野において公知の任意の方法により、例えば、有効成分を担体または賦形剤と混合することにより製造することができる。
【０１９３】
経口投与に適した医薬製剤は、カプセル剤もしくは錠剤などの個別単位；散剤もしくは顆粒剤；水性もしくは非水性液中の溶液もしくは懸濁液；可食性フォーム剤もしくはホイップ剤；または水中油型液体エマルションもしくは油中水型液体エマルションとして与えることができる。
【０１９４】
例えば、錠剤またはカプセル剤の形態での経口投与では、有効薬物成分を、経口用の、毒性のない、薬学上許容される不活性担体、例えば、エタノール、グリセロール、水などと組み合わせることができる。粉末は、化合物を好適な微細径に粉砕し、同じように粉砕した医薬担体、例えば、可食性炭水化物（例えば、デンプンまたはマンニトール）と混合することにより調製される。香味剤、防腐剤、分散剤および着色剤も含んでいてよい。
【０１９５】
カプセル剤は、上記のように、粉末混合物を調製し、成形ゼラチン剤皮に充填することより作製される。充填作業の前に、コロイドシリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムまたは固体ポリエチレングリコールなどの流動促進剤および滑沢剤を粉末混合物に加えることができる。カプセルが摂取された時の医薬のアベイラビリティーを高めるために、寒天、炭酸カルシウムまたは炭酸ナトリウムなどの崩壊剤または可溶化剤も加えることができる。
【０１９６】
さらに、所望によりまたは必要に応じて、好適な結合剤、滑沢剤、崩壊剤および着色剤も混合物に組み込むことができる。好適な結合剤としては、デンプン、ゼラチン、天然糖（例えば、グルコースまたはβ−ラクトース）、トウモロコシ甘味剤、天然および合成ガム（例えば、アラビアガム、トラガカントガムまたはアルギン酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックスなどが挙げられる。これらの投与形に使用される滑沢剤としては、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。崩壊剤としては、限定されるものではないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが挙げられる。錠剤は、例えば、粉末混合物を調製し、造粒またはスラッギングを行い、滑沢剤および崩壊剤を加え、錠剤に圧縮することにより調剤される。粉末混合物は、適当に粉砕された化合物を、上記の希釈剤または基剤と、所望により、結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート(aliginate)、ゼラチンまたはポリビニルピロリドン）、溶解遅延剤（例えば、パラフィン）、吸収促進剤（例えば、第四級塩）および／または吸収剤（例えば、ベントナイト、カオリンまたはリン酸二カルシウム）とともに混合することにより調製される。粉末混合物は、結合剤（例えば、糖蜜、デンプンペースト、アラビアゴム粘液(acadia mucilage)またはセルロース系材料もしくはポリマー材料の溶液）で湿潤させ、篩を通して押し出すことにより造粒することができる。造粒に代わる方法として、粉末混合物を錠剤機に通してもよく、その結果として形成不完全なスラグを得、スラグは顆粒となる。顆粒は、錠剤成形ダイへの付着を防ぐために、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルクまたは鉱油の添加によって滑沢にすることができる。次に、滑沢になった混合物は錠剤に圧縮される。本発明の化合物は、自由流動性不活性担体と合わせ、造粒工程またはスラッギング工程を経ずに直接錠剤に圧縮することもできる。セラックのシーリング皮膜からなる透明または不透明な保護コーティング、糖またはポリマー材料のコーティング、ワックスの艶出しコーティングを提供することができる。異なる単位用量を識別するために、これらのコーティングに色素を添加することができる。
【０１９７】
液剤、シロップ剤およびエリキシル剤などの経口流体は、一定量が所定量の化合物を含有するように投与単位形態で調製することができる。シロップ剤は、適当に香味付けした水溶液に化合物を溶解させることにより調製することができ、一方、エリキシル剤は、非毒性アルコール含有媒体を使用することにより調製される。懸濁液は、非毒性媒体中に化合物を分散させることにより調剤することができる。可溶化剤および乳化剤（例えば、エトキシル化イソステアリルアルコールおよびポリオキシエチレンソルビトールエーテル）、防腐剤、香味添加剤（例えば、ペパーミント油）あるいは天然甘味剤またはサッカリンもしくは他の人工甘味剤なども加えることができる。
【０１９８】
必要に応じて、経口投与用の投与単位処方物をマイクロカプセル化することができる。放出を延長または持続させるために、例えば、粒状材料をポリマー、ワックスなどによりコーティングまたは包理することによるように、処方物を調製することもできる。
【０１９９】
投与単位形態は、リポソーム送達系、例えば、小型単層小胞、大型単層小胞および多層小胞の形態であってもよい。リポソームは、様々なリン脂質、例えば、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンから形成することができる。
【０２００】
当然のことながら、上に特記した成分の他、処方物には、該当する処方物のタイプを考慮して当技術分野で慣用される他の薬剤が含まれ得る。例えば、経口投与に好適な処方物には、香味剤が含まれ得る。
【０２０１】
式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩もしくは溶媒和物の治療上有効な量は、例えば、動物の齢および体重、治療を必要とする正確な病状およびその重篤度、処方物の性質、ならびに投与経路を含む複数の因子によって異なり、最終的には、担当の医師または獣医の判断による。しかしながら、癌性状態（例えば、本明細書に記載のもの）の治療のための、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の有効量は、一般的に、１日あたり受容者（哺乳類）の体重１ｋｇあたり０．１〜１００ｍｇの範囲であり、より一般的には、１日あたり体重１ｋｇあたり１〜５０ｍｇの範囲であろう。よって、７０ｋｇの成体哺乳類では、１日あたりの実際の量は通常７〜３５００ｍｇとなるが、この量を１日に１回の投与で与えてよいし、あるいは、より一般的には、１日あたりの総量が同じであるように、１日に複数回（例えば、２回、３回、４回、５回または６回）の部分用量で与えてもよい。本化合物の塩または溶媒和物の有効量は、式（Ｉ）の化合物そのものの有効量の比率として決定することができる。上述の他の疾患の治療に対しても同様の用量が適していると考えられる。
【０２０２】
本発明のこれらの態様による投与または処方される化合物の量は、例えば、患者の年齢および体重、治療を必要とする正確な病態、その病態の重篤度、併発病態、肝機能または腎機能、処方物の性質、ならびに投与経路を含む複数の因子によって異なる。最終的には、その量は、担当の医師の判断による。
【実施例】
【０２０３】
以下の実施例は単に例示を目的としており、本発明の範囲を限定するものではない。実施例において引用する各参考文献は総て引用することにより本明細書の一部とされる。
【０２０４】
実施例１：化合物Ａの製造
化合物Ａは、国際公開第ＷＯ２０１０／０６２５７８号の開示に従って、下に示す方法により製造することができる。
【０２０５】
化合物Ａの小規模製造
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミド
【化７】
2014529359.tif 000010
２−［（２，５−ジクロロ−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミド（７０ｍｇ、０．２２４ミリモル）、｛３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（７０ｍｇ、０．５０３ミリモル）および炭酸セシウム（２３０ｍｇ、０．７０６ミリモル）をマイクロ波管に入れた。反応混合物を窒素で１０分間脱気した。同時に、ＢＩＮＡＰ（５０ｍｇ、０．０８０ミリモル）および酢酸パラジウム（ＩＩ）（１０ｍｇ、０．０４５ミリモル）を加えた。反応混合物を、マイクロ波により１６０℃で４０分間加熱した。粗物質を、０．１％ギ酸を含有するＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏで溶出させる逆相ＨＰＬＣ（Ｇｉｌｓｏｎ）により精製し、標題化合物（１５ｍｇ、１５％）を得た；MS: M(C20H23ClN6O2) = 414.89, (M+H)+ = 415,416; 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 9.42 (br. s., 1 H) 8.71 (br. s., 1 H) 8.02 (s, 1 H) 7.54 (br. s., 1H) 7.06 (t, J=7.5 Hz, 1 H) 6.48 (s, 1 H) 6.32 (br. s., 1 H) 5.86 (s, 1 H) 4.47 (dt, J=13.4, 6.7 Hz, 1 H) 3.92 (s, 3 H) 2.26 (s, 3 H) 1.41 - 1.43 (d, J = 6.6 Hz, 2H)。
【０２０６】
化合物Ａの大規模製造
中間体１
２−［（２，５−ジクロロ−４−ピリジニル）アミノ］ベンゾニトリル
【化８】
2014529359.tif 000011
２，５−ジクロロ−４−ヨードピリジン（１００ｇ、３６５ミリモル）、２−アミノベンゾニトリル（４３．１ｇ、３６５ミリモル）および三リン酸カリウム（２３３ｇ、１０９５ミリモル）の１，４−ジオキサン（２．５Ｌ）溶液をＮ２流により脱気した。この溶液に、ＤＰＥＰｈｏｓ（１５．７３ｇ、２９．２ミリモル）および酢酸パラジウム（３．２８ｇ、１４．６０ミリモル）を加えた。反応混合物を還流させながら１８時間攪拌した。その溶液を０．５インチのセライトおよび０．２インチのシリカに通して濾過した。その溶液を蒸発させた。固体をジエチルエーテル中に懸濁し、濾過した。ジエチルエーテルを濃縮し、得られた固体を濾過した。２−［（２，５−ジクロロ−４−ピリジニル）アミノ］ベンゾニトリル（８０ｇ、２８８ミリモル、収率７９％）を橙色固体として単離した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.49 (s, 1 H) 7.50 (td, J=7.58, 1.01 Hz, 1 H) 7.56 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 7.80 (td, J=7.83, 1.77 Hz, 1 H) 7.95 (dd, J=7.83, 1.52 Hz, 1 H) 8.26 (s, 1 H) 9.05 (brs, 1 H); HPLC Rt=2.88分, MS (ESI): 263.9, 265.9 [M+H]+。
【０２０７】
中間体２
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］ベンゾニトリル
【化９】
2014529359.tif 000012
２−［（２，５−ジクロロ−４−ピリジニル）アミノ］ベンゾニトリル（１１０ｇ、３９６ミリモル）、３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（５５．１ｇ、３９６ミリモル）および炭酸セシウム（３８７ｇ、１１８７ミリモル）の１，４−ジオキサン（２．５Ｌ）溶液をＮ２流により脱気し、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）（１９．７１ｇ、３１．７ミリモル）、続いて、酢酸パラジウム（３．５５ｇ、１５．８３ミリモル）を加えた。反応混合物をＮ２下で一晩加熱還流した。反応混合物を濾過し、その液体を濃縮した。酢酸エチル（１５００ｍＬ）、続いて、１Ｍ  ＨＣｌ（１０００ｍＬ）を加えた。層に分けた。ＨＰＬＣにより生成物が観察されなくなるまで酢酸エチルを１Ｍ  ＨＣｌで洗浄した（合計１０００ｍＬ、１×）。ＨＣｌ相を合わせ、ＨＣＬ層において生成物ピークが比較的単一になるまで、酢酸エチル（３×１０００ｍＬ）で逆洗浄した。次に、ＨＣｌ層をＮａＯＨ（５０ｗ／ｗ、その後、１Ｍ）でｐｈ約４に塩基性化すると、濁った溶液が生じた。酢酸エチル（２０００ｍＬ）を加え、層を分離させた。酢酸エチルをブラインで洗浄し、蒸発させた。中和後−酢酸エチルの添加後−反応混合物を濾過し、何らかの生成物を得た。また、蒸発の間の生成物の単離は、母液から生じる白色固体の濾過により行うことができる。総ての固体および蒸発生成物を合わせた。２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］ベンゾニトリル（８０ｇ、２０７ミリモル、収率５２．４％）を黄色固体として単離した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.24 (d, J=6.57 Hz, 6 H) 2.08 (s, 3 H) 4.34 (quin, J=6.57 Hz, 1 H) 5.87 (s, 1 H) 5.97 (s, 1 H) 7.41 (td, J=7.58, 1.01 Hz, 1 H) 7.47 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 7.75 (td, J=7.83, 1.52 Hz, 1 H) 7.90 (dd, J=7.83, 1.52 Hz, 1 H) 7.94 (s, 1 H) 8.42 (d, J=17.43 Hz, 2 H); HPLC Rt=2.36分, MS (ESI): [M+H]+ = 367.1, 368.1。
【０２０８】
中間体３
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］安息香酸
【化１０】
2014529359.tif 000013
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］ベンゾニトリル（８０ｇ、２１８ミリモル）を１，４−ジオキサン（１．５Ｌ）に溶かし、１Ｍ  ＮａＯＨ（１５００ｍＬ、１５００ミリモル）を加えた。その懸濁液を一晩還流した。ＲＴに冷却した後、酢酸エチル（１Ｌ）を加え、層に分けた。水層を１Ｌの酢酸エチルで洗浄した。両有機層を合わせ、有機層中に生成物が観察されなくなるまで０．１Ｍ  ＮａＯＨ（１Ｌ）で逆洗浄した。その後、有機層を廃棄した。次に、合わせた水層を１Ｌの酢酸エチルで洗浄した。次に、水層を酢酸で酸性化した（非常にゆっくりとｐｈ約７にした）。固体を濾過し、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］安息香酸（６７ｇ、１６５ミリモル、収率７６％）を黄色固体として単離した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.28 (d, J=6.57 Hz, 6 H) 2.11 (s, 3 H) 4.41 (quin, J=6.57 Hz, 1 H) 5.96 (s, 1 H) 6.83 (s, 1 H) 7.09 (ddd, J=8.02, 5.12, 3.03 Hz, 1 H) 7.40 (1 H) 7.52 - 7.61 (m, 2 H) 7.91 - 8.16 (m, 2 H) 8.55 (s, 1 H) 10.17 (brs, 1 H) 13.64 (brs, 1 H); HPLC Rt = 2.35分, MS (ESI): [M+H]+ = 386.1。
【０２０９】
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミド
【化１１】
2014529359.tif 000014
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］安息香酸（６７ｇ、１７４ミリモル）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２９．３ｇ、１９１ミリモル）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（７００ｍＬ）溶液に、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド（３６．６ｇ、１９１ミリモル）を加え、その溶液を３０分間攪拌した。Ｏ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１５．９５ｇ、１９１ミリモル）を加え、その溶液をさらに１５分間攪拌し、０℃に冷却し、ジイソプロピルエトリアミン（９１ｍＬ、５２１ミリモル）を滴下した。反応混合物を室温で一晩攪拌した。水（４０００ｍＬ）を加え、溶液を酢酸（２０ｍＬ）で酸性化した。その溶液を２×２Ｌの酢酸エチルで抽出した。有機層を水（１Ｌ）、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミド（７４ｇ、１６４ミリモル、収率９４％、純度９２％）を黄色泡沫物質として単離した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.27 (d, J=6.57 Hz, 6 H) 2.10 (s, 3 H) 3.71 (s, 3 H) 4.39 (quin, J=6.51 Hz, 1 H) 5.93 (s, 1 H) 6.66 (s, 1 H) 7.08 - 7.19 (m, 1 H) 7.49 - 7.64 (m, 3 H) 7.98 (s, 1 H) 8.50 (s, 1 H) 9.50 (s, 1 H) 11.93 (s, 1 H); HPLC Rt=2.13分, MS (ESI): [M+H]+ = 415.1。
【０２１０】
実施例１生成物の精製
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミド（１７３．３ｇ、６３．５％ｗ／ｗ、２６５．２ミリモル）を酢酸エチル（３．５０Ｌ、２０容量）に溶かし、約５０℃に加熱した。この溶液に、Ｓｉ−チオール（官能性シリカゲル）（８７ｇ、５０％ローディング）を加えた。その混合物を約５０℃に１６〜２０時間保った。次に、Ｓｉ−チオールシリカゲルを濾去した。濾過ケーキを酢酸エチル（２×各２００ｍＬ）ですすぎ、濾液を合わせた。次に、合わせた濾液をｐＨ９．４の１Ｍギ酸アンモニウム水溶液（５×各１Ｌ）で洗浄し、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥させたＥｔＯＡＣを濾過し、揮散させ乾固し、黄色泡沫物質を得た。それを５０〜５５℃で約２時間乾燥させ、一定の重量１６０ｇとした。この物質を塩化メチレン（８００ｍＬ、５容量）でスラリーにし、加熱還流して溶液を得、濾過した。その溶液を２０〜２５℃に冷却した。冷却により生成物が結晶化した。約２時間後、濾過により生成物を集め、塩化メチレンですすいだ。白色固体を５０〜５５℃で１４〜１６時間乾燥させ、一定の重量とした。２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミド（８５．０ｇ、２０４．９ミリモル、全収率７７％）を白色固体として単離した。1H■NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.27 (d, J=6.57 Hz, 6 H) 2.10 (s, 3 H) 3.70 (s, 3 H) 4.39 (quin, J=6.57 Hz, 1 H) 5.92 (s, 1 H) 6.66 (s, 1 H) 7.02-7.24 (m, 1 H) 7.45-7.68 (m, 3 H) 7.98 (s, 1 H) 8.48 (s, 1 H) 9.49 (br. s, 1 H) 11.91 (s, 1 H)。C18 HPLC RT = 6.2分 (純度99.0%)。 MS (ESI): 415.0 [M+H]+。
【化１２】
2014529359.tif 000015
【０２１１】
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミド（総重量２３５．２ｇ、分析含量２２８．０ｇ、５４９．５ミリモル）を酢酸エチル（７．１Ｌ、３０容量）でスラリーにした。その混合物を約５０〜５５℃に加熱し、濁った溶液を得た。濁った溶液を濾過した。濾過した溶液に２．０Ｍ  ＨＣｌのジエチルエーテル溶液（２１０ｇ、２８１ｍＬ、１．０２当量）を１５〜２０分かけて加えた。ＨＣｌの添加により、白色スラリーが観察された。それを室温で約１６〜２０時間攪拌した。濾過により生成物を集め、酢酸エチル（２×各５００ｍＬ）ですすいだ。湿ったケーキを５０〜５５℃／＜５ｍｍＨｇで１６〜２０時間乾燥させ、一定の重量とした。２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミド、一塩酸塩、（２４５．９ｇ、５４４．７ミリモル、収率９６％）を白色固体として単離した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.32 (d, J=6.57 Hz, 6 H) 2.18 (s, 3 H) 3.70 (s, 3 H) 4.35-4.62 (m, 1 H) 6.12 (br. s, 1 H) 6.60 (br. s, 1 H) 7.19-7.41 (m, 1 H) 7.48-7.75 (m, 3 H) 8.09 (s, 1 H) 9.59-9.99 (m, 2 H) 11.98 (br. s, 1 H)。C18 HPLC RT = 6.1分 (純度99.6%)。MS (ESI): 414.8 [M+H]+。
【０２１２】
生物学的データ：
実施例２：ウエスタンブロットに使用した抗体
ウエスタンブロッティングのための標準的な手法を使用し、これらの研究についての具体的な抗体は：抗ＦＡＫ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ製品番号０５−５３７）、抗ｐＦＡＫ（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ製品番号４４−６２４Ｇ）、抗マーリン（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚカタログ番号２８２４７）、抗マーリンアイソフォーム１（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚカタログ番号３３２）であった。結果を図１に示す。
【０２１３】
実施例３：ヒト細胞株
これらの研究では、ＡＴＣＣから入手可能な５種のヒト中皮腫細胞株および２種の追加のヒト肺癌細胞株を使用した。細胞は、標準的な細胞培養条件下で、１０％ＦＢＳ、１％Ｌ−グルタミン、１％ピルビン酸ナトリウムを含有するＲＰＭＩ１６４０培地で増殖させた。中皮腫細胞株：ＮＣＩ−Ｈ２０５２、ＭＳＴＯ−２１１Ｈ、ＮＣＩ−Ｈ２８、ＮＣＩ−Ｈ２２６、ＮＣＩ−Ｈ２４５２および追加の肺系：Ａ５４９およびＳＷ−１５７３。さらに３種の中皮腫細胞株、Ｍｅｒｏ−４１、Ｍｅｒｏ−８２およびＭｅｒｏ−１４を同一条件下で増殖させた。
【０２１４】
実施例４：足場非依存性増殖−細胞死アッセイ
化合物Ａに対する細胞応答を足場非依存性細胞増殖アッセイにより評価した。このアッセイでは細胞増殖阻害の程度と細胞集団における純変化を定量した。アッセイは、３８４ウェルブラックプレート（透明底、未処理）（Ｇｒｅｉｎｅｒ製品番号７８１０９６）で実施した。アッセイの間に細胞がプレートに接着しないように非組織培養処理プレートまたは低接着プレートのいずれかを使用することが重要である。簡単に述べると、下記の通りにアッセイを実施した。
【０２１５】
１％（重量／体積）メチルセルロースストック溶液を、５ｇの滅菌メチルセルロース（Ｓｉｇｍａ製品番号Ｍ０５１２）を４９５ｍＬの細胞培養培地に溶解することにより調製した。ここでは、ガラス容器に入れ、オートクレーブ処理して滅菌しておいた冷却メチルセルロースに、１０％ＦＢＳ、１％Ｌ−グルタミン、１％ピルビン酸ナトリウムを含有するＲＰＭＩ１６４０培地を加えた。細胞が増殖に異なる細胞培養培地を必要とする場合には培地を置き換えてよい。溶解には、多くの場合、無菌状態を維持しながら４℃で激しく攪拌することにより１日かかった。
【０２１６】
細胞を３８４ウェルプレートに入れ、アッセイ条件は０．６５％メチルセルロース（終濃度）、各ウェルあたり１０００細胞、最終容量４８μＬとした。これは、培養物から回収し、増殖培地に再懸濁した細胞を、１％メチルセルロースで希釈することによって達成された（２．０８３３×１０４細胞／ｍＬに希釈する）。細胞は、均一に分布するように転倒させて混合し、気泡を消失させ、ポジティブディスプレイスメント方式のピペットでプレートウェルに４８μＬを入れた。プレートを３７℃の５％ＣＯ２を含有する細胞培養インキュベーターに入れた。
【０２１７】
３８４ウェルプレート内でＤＭＳＯによる化合物の連続希釈を行い、最初の列を２０μＬの化合物ストック溶液とし、他のプレートウェルに１０μＬのＤＭＳＯを入れて開始した。化合物のプレートウェルから１０μＬを、ＤＭＳＯが入っているプレートのウェルに移し、混合し、プレート間で１０μＬを移すことにより連続希釈を続けた。次に、このＤＭＳＯ希釈化合物の４μＬを、１０５μＬの適当な増殖培地が入っている新たな３８４ウェルプレートのウェルに加えた。この「化合物プレート」を使用して、細胞のメチルセルロース溶液が入っているアッセイプレートに投与した。
【０２１８】
アッセイを開始するために、「化合物プレート」の各ウェルから２μＬを、各ウェルに４８μＬの細胞メチルセルロース溶液が入っている「アッセイプレート」の個々のウェルに加えた。これらのアッセイプレートを細胞培養インキュベーターに６日間入れた。１つのプレートを無作為に選択し、化合物の添加時にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（ＣＴＧ）を用いて発光させ、ゼロ時（Ｔ０）のプレートを表した、すなわち、化合物添加時の細胞数を表した。
【０２１９】
第６日目に、アッセイを止め、プレートを発光させることとし、各プレートの底に黒色ステッカーを貼って光を遮断し、２５μＬのＣＴＧを加え、プレートを室温で２０分間インキュベートした。ＥｎＶｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）において発光プロトコールを用い、プレートをスキャニングした。
【０２２０】
結果をＴ０値に対する百分率として表し、化合物濃度に対してプロットした。総ての値に対して「無細胞」バックグラウンドの減算を行い、Ｔ０値を１００％に正規化し、化合物添加時の細胞数を表した。４−パラメーター曲線フィット式を用いて濃度応答曲線の当てはめを行い、増殖を５０％阻害した濃度（ｇＩＣ５０）を決定することにより細胞応答を決定した。ｇＩＣ５０値は増殖ウインドウ（Ｔ０〜ＤＭＳＯ対照の増殖の間）の中間点である。細胞集団の純変化の程度は、濃度応答曲線のフィットから決定されたＹｍｉｎ値（％）からＴ０値（１００％）を減算することにより決定されるＹｍｉｎ−Ｔ０値により定量した。
【０２２１】
実施例６：ＮＦ２腫瘍サプレッサー遺伝子（ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１タンパク質遺伝子産物（ニューロフィブロミン−２アイソフォーム１タンパク質、マーリンアイソフォーム１タンパク質とも呼ばれている））の発現
ＮＦ２遺伝子の腫瘍サプレッサーアイソフォームの発現を中皮腫細胞株において、全細胞溶解物のウエスタンブロッティングにより評価した。ＮＦ２遺伝子は、２つの主要な遺伝子産物、５９５個のアミノ酸からなるマーリンアイソフォーム１タンパク質および５９０個のアミノ酸からなるマーリンアイソフォーム２タンパク質を生成する。アイソフォーム１およびアイソフォーム２の両方を検出する抗体を使用し、分析した７種の細胞のうち４種において、推定分子量７５キロダルトン（ＫＤ）弱の２つの顕著なバンドが検出された（図１Ａ）。３種の細胞株、ＮＣＩ−Ｈ２２６、ＮＣＩ−Ｈ２０５２およびＳＷ１５７３には二重バンドの上方のものが存在せず、長い方の（移動性が低い方の）アイソフォーム１が発現されないことが示唆された。この見解についてはマーリンのアイソフォーム１を特異的に検出する抗体により確認された（図１Ｂ）。さらなる細胞株の分析の結果を表３に示す。
【０２２２】
実施例７：免疫組織化学
４種の中皮腫細胞株および１種の肺細胞株を免疫組織化学（ＩＨＣ）により評価し、図３に示す通りであった。マーリンアイソフォーム１のＩＨＣ染色パターンは、ウエスタンブロットで見られたものと同じであった（図１のウエスタンブロットを参照）。３種の細胞株（ＮＣＩ−Ｈ２２６、ＮＣＩ−Ｈ２０５２およびＳＷ−１５７３）はマーリンアイソフォーム１染色について陰性であり（左のパネル）、３種の細胞株（ＮＣＩ−Ｈ２８、ＮＣＩ−２４５２およびＭＳＴＯ−２１１Ｈ）はマーリンアイソフォーム１染色について陽性であった（右のパネル）。
【０２２３】
実施例８：細胞株における、ＮＦ２遺伝子を含むゲノムＤＮＡの評価およびＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１のｍＲＮＡ発現の評価
細胞株からゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）およびｍＲＮＡ（ｃＤＮＡ）を配列決定することによりＮＦ２遺伝子状態のさらなる確認を行った。遺伝子の発現形態であるｃＤＮＡの配列決定結果は、表１に示す通り、ｇＤＮＡと一致した。さらに、発現されたｍＲＮＡの配列決定によりアイソフォーム１およびアイソフォーム２の状態の独立した確認が可能であった。ｃＤＮＡおよびｇＤＮＡの両方の配列決定からの結果は、ウエスタンブロットおよびＩＨＣ分析からの結果と一致した。これらの異なる分析方法によりマーリン状態に関し、細胞株について同じ分類に至った。
【０２２４】
【表３】
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【０２２５】
実施例９：ＮＦ２変異細胞およびＮＦ２野生型細胞におけるＦＡＫおよびｐＦＡＫのレベルの比較
マーリンアイソフォーム１発現、ＦＡＫ発現、ＦＡＫリン酸化状態、およびＦＡＫ阻害に対する応答の関連性をさらに調査するため、評価のために２種の細胞株を選択した。ＮＦ２変異細胞株として、マーリンアイソフォーム１タンパク質の発現を欠くＮＣＩ−Ｈ２０５２を選択し、ＮＦ２野生型細胞株として、マーリンアイソフォーム１タンパク質の発現を示すＭＳＴＯ−２１１Ｈを選択した。メチルセルロース足場非依存性条件で増殖させた細胞から得た全細胞溶解物を用いたウエスタンブロットにより、ＦＡＫおよびｐＦＡＫ（Ｙ３９７）発現のレベルを特徴付け、図２に示す通りであった。ウエスタンブロットは、ＮＦ２変異細胞株において、ＮＦ２野生型株と比べて少し高いレベルの総ＦＡＫタンパク質を示す（図２Ａ）。より著しくは、ＮＣＩ−Ｈ２０５２  ＮＦ２変異細胞株において、ｐＦＡＫのレベルが、ＭＳＴＯ−２１１Ｈ  ＮＦ２野生型細胞株と比べて大きく上昇した（図２Ｂ）。タンパク質濃度により決定されるサンプルについて同じ量のタンパク質をゲルにロードした。抗アクチン抗体によるウエスタンブロットで検出されたアクチンの量（示していない）は、ブロッティング膜への同等の転写を実証した。上述のように、変異ＮＦ２を有する中皮腫細胞株において総ＦＡＫタンパク質レベルの小さな増加が見られたが、リン酸化された、恐らくは活性化されたと思われるＦＡＫのレベルはＮＦ２変異細胞株において実質的に増加した。
【０２２６】
実施例１０：ＦＡＫ阻害剤である化合物Ａによる細胞増殖阻害の評価
ＦＡＫ阻害剤である化合物Ａの増殖阻害活性を、足場非依存性メチルセルロースアッセイで増殖させた２種の中皮腫細胞株において評価し（表２）、これら２種の細胞株に追加の４種の細胞株を加えてさらに再試験した（表３）。
【０２２７】
最初の足場非依存性アッセイでは、両細胞株はｇＩＣ５０値により定量された増殖阻害応答を示したが、２種の細胞株の感受性には大きな違いが存在した（表２）。ＮＦ２変異株（すなわち、ＮＦ２遺伝子のアイソフォーム１タンパク質を発現せず、そのため、マーリン陰性と呼ばれる）であるＮＣＩ−Ｈ２０５２中皮腫細胞株は、増殖の５０％阻害を誘導するために、ＮＦ２野生型（ＮＦ２のアイソフォーム１タンパク質を発現し、マーリン陽性と呼ばれる）であるＭＳＴＯ−２１１Ｈ細胞のおよそ１９分の１の化合物と反応した。さらに、ＮＦ２野生型ＭＳＴＯ−２１１Ｈ細胞は、化合物Ａが最大濃度（約３０μＭ）で存在する場合でも、６日間のアッセイの間に細胞集団の増加を示した。これはＹｍｉｎ−Ｔ０値が３４３％（アッセイ開始時の１００％からの増加）であることから気づいた。それに対し、ＮＦ２変異細胞株であるＮＣＩ−Ｈ２０５２は、アッセイ終了時に開始時と同じ細胞数を有し、Ｙｍｉｎ−Ｔ０値は本質的に０（−３％）であった。細胞数に変化がないことは、化合物ＡがＮＦ２変異細胞株においてアッセイ期間中の細胞増殖および増殖を競合的に阻止することができたことを示唆する。
【０２２８】
【表４】
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【０２２９】
次の足場非依存性アッセイでは、ＮＦ２のアイソフォーム１タンパク質遺伝子産物（すなわち、マーリンアイソフォーム１タンパク質、または略してマーリンタンパク質）をウエスタンブロットにより決定した。５種総てのマーリン陰性細胞株は強力な増殖阻害を受けた（ｇＩＣ５０値＜２５０ｎＭ）が、マーリン陽性細胞株では５０％増殖阻害に約１０μＭの化合物Ａが必要であった。アッセイの間、マーリン陰性細胞株では細胞集団は増加しなかったが、一部の細胞株は純細胞死滅を示した（負のＹｍｉｎ−Ｔ０値）。［Ｙｍｉｎ−Ｔ０値０％はアッセイの間に細胞数の変化がないことを示すということに留意する。］マーリン陽性ＭＳＴＯ−２１１Ｈ細胞株は化合物Ａの存在下で正のＹｍｉｎ−Ｔ０値によって示されるように細胞集団の純増加を示した。これらの結果を表３に示す。
【０２３０】
【表５】
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【０２３１】
実施例１１：臨床試験デザイン
進行性固形腫瘍を有する患者における化合物Ａの最大耐量（ＭＴＤ）、安全性、忍容性、薬物動態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）および抗腫瘍活性を決定するために、複数パートからなる第Ｉ相試験を設計した。本試験のパート１では増量法を用いてＭＴＤを同定した。パート１は本明細書において記載している。パート２〜３は現在進行中である。パート２ではＭＴＤ以下の化合物Ａの安全性および忍容性をさらに調査し、パート３ではＭＴＤ以下の用量で化合物Ａの薬力学を評価する。パート４は、この要約の時点では患者発生に対して開始されていなかった。パート４では再発性多形性膠芽腫を有する患者において化合物Ａの安全性、忍容性、薬物動態および臨床活性を調査する。パート５は、この要約の時点では患者発生に対して開始されていなかった。パート５では数週間の投与を通して化合物Ａの薬物動態を調査する。中皮腫を有する患者は、本試験の、例えば、パート１に参加する資格があった。中皮腫を有する患者は、下のデータを収集した時点において、本試験のパート１〜３に参加する資格があった。
【０２３２】
組入れ／除外基準：進行性固形腫瘍を有する１８歳以上の患者で、組織学的または細胞学的に確定された固形腫瘍の診断が悪性腫瘍であり、その腫瘍が一般に認められている標準的療法に反応しなかったか、あるいはそれに対して標準的または治癒的療法が存在しない患者を適格とした。総ての患者がインフォームド・コンセントに署名した。患者には、経口薬を嚥下および保持し、妊娠の可能性がある男女の場合にはプロトコールで規定された避妊方法を厳守し、十分な臓器系機能を示し、プロトコールに規定された記録保存用腫瘍検体を提供する能力を有することが義務づけられた。本試験のパート２〜３では、ＦＡＫを過剰発現することが文献で報告されている腫瘍を有する患者で、それらの腫瘍が一般に認められている標準的療法に反応しないか、あるいはそれらに対して標準的または治癒的療法が存在しなかった患者を組み入れた。パート３での被験者には、生検に適している固形腫瘍を有することも義務づけられた。
【０２３３】
以前の療法から２８日または５半減期以内に最低１０日継続して試験中の抗癌剤を受けたか、あるいはこの３週間（以前マイトマイシンＣまたはニトロソ尿素(nitrosureas)を受けた場合は６週間）の間に化学療法を受けたか、あるいはこの４週間の間に大手術、放射線療法または免疫療法を受けた患者は除外した。薬物動態を妨げることが知られている活動性胃腸疾患を有するか、または以前に小腸切除を受けた患者は不適格であった。他の除外基準には、過去の抗癌療法によるグレード１を超える毒性が消失していない患者（脱毛症を除く）、ＱＴｃＦ間隔が男性の場合には４５０ｍｓｅｃ（女性の場合には４７０ｍｓｅｃ）を超える患者または先天性ＱＴ延長症候群の患者、急性冠動脈症候群の病歴のある患者、ニューヨーク心臓協会(the New York Heart Association)により定められたクラスＩＩ〜ＩＶ心不全の患者、症候性脳転移または未治療の脳転移の患者、中枢神経系の原発性悪性腫瘍（パート１〜３の場合）の患者、授乳中の女性患者、プロトコールで規定された食事由来物質または禁止薬剤の摂取を受けている患者、あるいは重篤かつ／もしくは不安定な既存の医学的状態、精神医学的状態、または被験者の安全性もしくはインフォームド・コンセントの取得を妨げ得る他の状態の患者が含まれた。
【０２３４】
安全性および有効性の評価：安全性を評価するための測定には、体重、心拍数、血圧、体温、臨床検査、１２−鉛  ＥＣＧ、ならびに神経学的および身体的診察が含まれた。有害事象は、本試験期間を通じてＣＴＣＡＥ  ｖ４．０（有害事象共通用語規準(Common Terminology Criteria for Adverse Events)（ＣＴＣＡＥ）バージョン４．０、米国保健福祉省(United States Department of Health and Human Services)、米国国立衛生研究所(National Institutes of Health)、米国国立癌研究所(National Cancer Institute)、２００９年５月）を用いて評価した。
【０２３５】
疾患評価は、スクリーニング時と投薬開始後６週間ごとに実施した。効果は、ＲＥＣＩＳＴバージョン１．１に従い、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、安定（ＳＤ）、または進行（ＰＤ）として報告した。
【０２３６】
実施例１２：本臨床試験に登録された患者の生検材料におけるＭｅｒｌｉｎ状態の免疫組織化学的判定：
現在の第Ｉ相中皮腫集団におけるマーリンの欠損が化合物Ａに対する応答の予測となるかどうかを判定するために、免疫組織化学（ＩＨＣ）によるスクリーニング時に採取した記録保存用組織（ＦＦＰＥ）においてマーリンレベルを評価し、その結果は無増悪生存期間（ＰＦＳ）中央値の臨床エンドポイントと相関があった。
【０２３７】
カスタムＩＨＣアッセイはMosaic laboratories, Incにより開発され、ウサギポリクローナル抗体（Santa Cruz Biotechnology, Inc、カタログ番号ＳＣ３３２）を使用し、１：１６００希釈を用いた。抗体シグナルをＥｎｖｉｓｉｏｎ＋ウサギＨＲＰ（ＤＡＫＯ）検出キットにより評価し、染色強度（グレード０〜３＋）を用いて、試験した臨床サンプルのマーリン状態を分類した（マーリン陽性＝野生型またはマーリン陰性＝マーリンの欠損）。
【０２３８】
判定の閾値である固定Ｈスコア(a fixed H-score)（１０または＞グレード２＋染色＝Ｍｅｒｌｉｎ陽性およびグレード２＋で＜１０＝Ｍｅｒｌｉｎ陰性）は、異なるマーリン発現を示す６種の細胞株（ＡＴＣＣから入手したＳＷ１５７３、ＮＣＩ−２０５２、ＮＣＩ−Ｈ２２６、ＮＣＩ−Ｈ２８、ＮＣＩ−２４５２およびＭＳＴＯ−２１１Ｈ）を含む中皮腫細胞株確認パネルを用いて得た。シグナルの細胞内局在性（すなわち、核、細胞質および細胞膜）を記録したが、閾値の決定には用いなかった。判定閾値は、アッセイの技術的検証の間に、アッセイの日間および日内変動に対応する精度および精密試験によってさらに最適化した。アッセイ検証に使用した同じ細胞株におけるマーリンの有無は、ウエスタンブロッティングとｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡのＳａｎｇｅｒ配列決定により独立に確認した。
【０２３９】
試験した細胞株におけるマーリンの欠損は３つの観察に起因した：ＮＣＩ−Ｈ２２６の開始コドンをコードするエキソン１の欠損、ＳＷ−１５７３のエキソン１〜４の欠損、およびＮＣＩ−２０５２のエキソン１１における停止コドン（Ａｒｇ  ３４１）の存在。臨床相関では、２９の利用可能な中皮腫サンプルのうち２４のサンプルを、カスタムＧＳＫ  ＮＦ２−１  ＩＨＣアッセイを使用し、マーリンについて試験した。マーリン状態はＰＦＳの中央値と相関があった（有効性解析を参照されたい）。得られた結果は、マーリンを、再発性中皮腫を有する患者における化合物Ａの臨床活性の潜在的予測バイオマーカーとして示している。
【０２４０】
統計分析：
人口統計学的、臨床検査的、疾患特性の分析には記述統計を用いた。無増悪生存期間は、カプラン・メイヤー法を用いて決定した。この方法は当技術分野で周知であり、Kaplan EL and Meier P, 1958), “Non-parametric estimation from Incomplete Observations JASA 53: 457-481およびLee ET, Statistical Methods for Survival Data Analysis, 第2版, John Wiley and Sons, New York, 1992に記載されており、これらの各文献は総て引用することにより本明細書の一部とされる。
【０２４１】
結果：
全患者および中皮腫患者集団の人口学的特性を表４に示す。
【０２４２】
【表６】
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【０２４３】
Ｍｅｒｌｉｎ状態の評価：患者から得られた生検材料サンプルのＩＨＣにより測定した場合（実施例１２に記載の通りである）、中皮腫を有する患者２９名のうち、１４名はマーリン陰性であり、９名はマーリン陽性であり、６名は不明であった。
【０２４４】
有効性解析：中皮腫を有する患者において、２６名は療法開始後放射線学的評価を受けた。放射線学的評価の前に３名の患者を本試験から排除した。治療に対する最良の効果として、１４名の患者はＳＤを示し、３名の患者は非ＣＲ／非ＰＤを示し、９名の患者はＰＤを示した。最良効果時における腫瘍量の、ベースラインからの変化率を図６に示す。ベースラインにおいて測定可能疾患を有し、ベースライン後スキャンを受けた患者だけをこのグラフに含めた。ＰＲまたはＣＲが得られた患者は存在しなかったが、中皮腫を有する数名の患者で少し効果が認められた（例えば、腫瘍の縮小であるがＰＲに要求されるレベルではなかった）。全無増悪生存期間（ＰＦＳ）の中央値は１７．７週間（９５％ＣＩ  ９．７、２４．１）であった。マーリン陰性被験者およびマーリン陽性被験者におけるＰＦＳの中央値はそれぞれ、２４．１（ｎ＝１４；９５％ＣＩ  ６．０，２９．３）および１１．４（ｎ＝９；９５％ＣＩ  ７．３、未確定）であった（図４）。各患者の治療期間を図５に示し、Ｍｅｒｌｉｎ陰性患者とＭｅｒｌｉｎ陽性患者を比較した。１４名のＭｅｒｌｉｎ陰性患者のうち７名が４ヶ月を超えて試験に残ったが、これに対し、Ｍｅｒｌｉｎ陽性患者では９名のうち３名であった。受けた用量をグラフの左側の欄に示す。
【０２４５】
本発明の好ましい実施形態を上記により示すが、本発明は本明細書に開示される厳密な説明に限定されるものではなく、以下の特許請求の範囲内に入る総ての修飾に対して権利が保持されると理解すべきである。
参照文献
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2014529359.tif 000021
【図４】
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【図５】
2014529359.tif 000023
【図６】
2014529359.tif 000024
【図１】
2014529359.tif 000025
【図２】
2014529359.tif 000026
【図３】
2014529359.tif 000027
【国際調査報告】
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