(57)【要約】乳清脂質から誘導可能な二つ以上の天然遊離脂肪酸のブレンド、前記遊離脂肪酸は、酪酸（Ｃ４）；カプロン酸（Ｃ６）；カプリル酸（Ｃ８）；カプリン酸（Ｃ１０）；ラウリン酸（Ｃ１２）；ミリスチン酸（Ｃ１４）；パルミチン酸（Ｃ１６）；パルミトレイン酸５（Ｃ１６：１）；ステアリン酸（Ｃ１８）；オレイン酸（Ｃ１８：１）；リノール酸（Ｃ１８：２）；リノレン酸（Ｃ１８：３）；及びそれらのエステル化誘導体から選ばれる、及び前記遊離脂肪酸の乳化剤として乳タンパク質を含む抗菌性組成物であって、全脂質含有量の少なくとも３５％は、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸及びラウリン酸の一つ又は複数から選ばれる遊離脂肪酸で構成される抗菌性組成物。【選択図】図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
酪酸（Ｃ４）；カプロン酸（Ｃ６）；カプリル酸（Ｃ８）；カプリン酸（Ｃ１０）；ラウリン酸（Ｃ１２）；ミリスチン酸（Ｃ１４）；パルミチン酸（Ｃ１６）；パルミトレイン酸（Ｃ１６：１）；ステアリン酸（Ｃ１８）；オレイン酸（Ｃ１８：１）；リノール酸（Ｃ１８：２）；リノレン酸（Ｃ１８：３）；及びそれらのエステル化誘導体から選ばれる乳清脂質から誘導可能な二つ以上の天然遊離脂肪酸のブレンド、及び前記遊離脂肪酸の乳化剤としての乳タンパク質を含む抗菌性組成物であって、全脂質含有量の少なくとも３５％は、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸及びラウリン酸の一つ又は複数から選ばれる遊離脂肪酸で構成される、抗菌性組成物。
【請求項２】
全脂質含有量の少なくとも５０％が、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸及びラウリン酸の一つ又は複数から選ばれる遊離脂肪酸で構成される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ブレンドが、カプリル酸、カプリン酸及びラウリン酸の混合物を含む、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記遊離脂肪酸のブレンドの融点が、個々の遊離脂肪酸のいずれか一つの最も高い融点未満である、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記ブレンドの融点が４５℃未満である、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記ブレンドの融点が３７℃未満である、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
前記ブレンドの融点が１８℃未満である、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
カプリル酸：カプリン酸：ラウリン酸の比率が、約４０：３０：３０である、請求項３〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
少なくとも一部の遊離脂肪酸がエステル化されている、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
エステル化された遊離脂肪酸が、モノ−及び／又はジ−及び／又はトリ−グリセリド形である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
遊離脂肪酸：エステル化グリセリドの比率が約５０：５０である、請求項９又は１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物が水分散性である、請求項１〜１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
前記乳化剤が乳清タンパク質である、請求項１〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
前記乳化剤がアポリポタンパク質である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記乳化剤がカゼインである、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
前記乳化剤が約５〜４５重量％の濃度範囲で存在する、請求項１〜１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物のｐＨが約４．５〜５．０である、請求項１〜１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物及び担体を含む医薬製剤。
【請求項１９】
前記組成物が約０．５％〜１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲で存在する、請求項１８に記載の医薬製剤。
【請求項２０】
溶液、石鹸、ゲル、ペースト、軟膏、泡沫、スプレー、粉末、ペッサリー、包帯、錠剤又は食品の形態の請求項１８又は１９に記載の製剤。
【請求項２１】
カンジダ・アルビカンス感染の予防又は治療のための、請求項１８〜２０のいずれかに記載の製剤の使用。
【請求項２２】
前記製剤が、膣内クリーム又はゲル又はペッサリーの形態である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
非特異的細菌性膣炎の予防又は治療のための、請求項１８〜２０のいずれかに記載の製剤の使用。
【請求項２４】
前記製剤が、膣内クリーム又はゲル又はペッサリーの形態である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
皮膚感染の予防又は治療のための、請求項１８〜２０のいずれかに記載の製剤の使用。
【請求項２６】
前記製剤が局所適用に適切な形態である、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
火傷の治療のための、請求項１８〜２０のいずれかに記載の製剤の使用。
【請求項２８】
前記製剤が局所適用に適切な形態である、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
感染の予防又は治療のための、請求項１８〜２０のいずれかに記載の製剤の使用。
【請求項３０】
前記製剤が外科用包帯の形態である、請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
眼、鼻、口、腸又は性器への粘膜適用のための医薬品の形態の、請求項１８〜２０のいずれかに記載の製剤の使用。
【請求項３２】
性感染症の予防又は治療のための、請求項２６に記載の使用。
【請求項３３】
前記性感染症が、淋病、梅毒、クラミジア、ヘルペス及びＨＩＶの一つ又は複数である、請求項２７に記載の使用。
【請求項３４】
胃腸感染の予防又は治療のための、請求項１８〜２０のいずれかに記載の使用。
【請求項３５】
前記製剤が食品又は飲料の形態である、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
口腔疾患の予防又は治療のための、請求項１８〜２０のいずれかに記載の使用。
【請求項３７】
前記製剤が、練り歯磨き、チューインガム、洗口液又はその他の歯磨剤から選ばれる口腔ヘルスケア用製剤の形態である、請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物を含む健康補助食品。
【請求項３９】
前記組成物が約０．５％〜１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲で存在する、請求項３８に記載の健康補助食品。
【請求項４０】
乳タンパク質由来乳化剤と、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸及びリノレン酸の混合物とを含む健康補助食品。
【請求項４１】
前記健康補助食品が油の形態である、請求項３８〜４０のいずれかに記載の健康補助食品。
【請求項４２】
酪農乳を再構成するための、請求項３８〜４１のいずれかに記載の健康補助食品の使用。
【請求項４３】
前記酪農乳がスキムミルク又はバターミルクである、請求項４２に記載の使用。
【請求項４４】
前記再構成乳が２０％（ｗ／ｖ）以下の前記健康補助食品を含む、請求項４２又は４３に記載の使用。
【請求項４５】
前記再構成乳が１０％（ｗ／ｖ）以下の前記健康補助食品を含む、請求項４２〜４４のいずれかに記載の使用。
【請求項４６】
再構成が、ミルク中の天然のオリゴ糖、ミルクミネラル及びビタミンのレベルを増強する、請求項４２〜４４のいずれかに記載の使用。
【請求項４７】
請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物を含む再構成乳。
【請求項４８】
さらにオリゴ糖を含む、請求項４７に記載の再構成乳。
【請求項４９】
さらにミルクミネラルを含む、請求項４７又は４８に記載の再構成乳。
【請求項５０】
さらにビタミンを含む、請求項４７〜４９のいずれかに記載の再構成乳。
【請求項５１】
カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸及びオレイン酸から選ばれる少なくとも二つの異なる遊離脂肪酸の非水性混合物を含む消毒スプレー。
【請求項５２】
さらに有機溶媒の希釈剤を含む、請求項５１に記載のスプレー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、遊離脂肪酸のブレンド及びその使用に関する。特に、本発明は、抗菌性遊離脂肪酸のブレンドに関する。
【背景技術】
【０００２】
バター酸(butter acid)は遊離脂肪酸（カルボン酸）で、天然では通常アルコールエステルとして存在し、植物及び動物油脂の主成分を構成する。これらは従来、短鎖、中鎖又は長鎖炭素分子として分類され、一方の末端にカルボン酸（極性）基を、他端にメチル（非極性）基を有する。この極性が両親媒性に寄与し、カルボン酸末端は水溶性、メチル末端は脂溶性となる。親水性の酸末端にもかかわらず、ごく短鎖の酸（酪酸）を除いて、脂肪酸は一般的に水に不溶であるが、有機溶媒及び油に可溶である。
【０００３】
脂肪酸の炭素鎖は、単共有結合で連結され、炭素の全原子価が−ＣＨ２−の配座で水素によって占有されている場合、‘飽和’されている。炭素が二重結合によって連結されている場合、炭素の全原子価は占有されておらず、その炭素は不飽和と表現される。従って、脂肪は伝統的に飽和又は不飽和と表現される。
【０００４】
脂肪酸をその分子構造中の炭素の数、すなわちＣ数と、それに続けて分子中に含有される二重結合の数によって表現するのも慣習である。Ｃ１８：２はリノール酸で、１８個の炭素の鎖長と２個の二重結合、すなわち２個の不飽和Ｃ＝Ｃ結合を有する。飽和脂肪酸は、直鎖分子の傾向にあるため互いに密集している。不飽和脂肪は、二重結合のところで通常ねじれており、あまり密集せずに存在する。炭素鎖長が増加すると、脂肪の総体的分子量も増加し、総体的融点も高くなる。しかしながら、不飽和脂肪は例外で、それらの（通常）非線形的配座のために、それらはあまり密集せずに存在するので、かなり低い融点を有する。
【０００５】
植物及び動物油脂では、脂肪酸は、１、２又は３個の脂肪酸と結合できるグリセロール（三価アルコール）のようなアルコールとエステル結合し、モノ、ジ又はトリグリセリドとなっている。天然の場合、これらは通常、各アルコール基に異なる脂肪酸を有する混合トリグリセリドである。当然、任意のトリグリセリドの融点は、エステル化された脂肪酸の融点の特徴を反映することになり、油脂の総体的硬度は、従って、異なる脂肪酸の比率及びこれらが飽和であるか否かの特徴を反映することになる。トリグリセリドは、室温で液体であると油と言われ、固体であると脂肪と言われる。
【０００６】
哺乳動物の乳由来のバター脂は、植物又は野菜由来では見られない短〜中鎖酸を含む広範囲の脂肪酸を提供する。多少の種のばらつきはあるが、一般的に、酪酸（Ｃ４）、カプロン酸（Ｃ６）、カプリル酸（Ｃ８）、カプリン酸（Ｃ１０）、ラウリン酸（Ｃ１２）、ミリスチン酸（Ｃ１４）、パルミチン酸（Ｃ１６）、ステアリン酸（Ｃ１８）、オレイン酸（Ｃ１８：１）、リノール酸（Ｃ１８：２）、リノレン酸（Ｃ１８：３）及びいくつかの低濃度の高級酸で構成される。わずか三つの不飽和脂肪酸は、オレイン酸、リノール酸及びリノレン酸であること、そしてこれらが全体の約３０％以下を占めることは注目に値する。以下の表（表１）にウシのバター脂の脂肪酸含有量の典型的なプロフィールを示す。
【０００７】
【表１】
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【０００８】
脂肪含有量の６５％が飽和であるという事実にもかかわらず、バターは特に固い脂肪でもなく、３７℃の領域の温度で液化する。この理由の一部は、不飽和酸のほかに、短〜中鎖飽和酸（Ｃ：１０以下）がすべて３７℃未満の融点を有しており（短鎖長であるため）、これらが全脂肪含有量の１０％を占めるためである。
【０００９】
バター脂による高コレステロール血症への寄与は、主にミリスチン酸成分及び程度は少ないがパルミチン酸が原因である。ステアリン酸もいずれの短鎖酸（Ｃ：１２以下）も血清コレステロールの上昇に寄与しない（参考文献９）。それどころか、短鎖酸（Ｃ：４〜Ｃ：１２）は、それらの抗菌性及びそれらの容易に利用可能なエネルギー含量の点で著しい潜在的利益を有している。短鎖飽和遊離脂肪酸の吸収及び代謝の様式には長鎖酸と比べて違いがある。胃リパーゼによってトリグリセリドコアから放出された短鎖脂肪酸は腸細胞で吸収され、肝門静脈に乗って肝臓に直接輸送され、そこで当量の炭水化物の約２．５倍の熱量の即時及び強力なエネルギー源となる。長鎖酸は腸細胞でトリグリセリドとして再構築され、リンパ中のカイロミクロンとして脂肪組織に輸送される（参考文献８）。
【００１０】
天然では、ほとんどの脂肪酸はトリグリセリドとして存在する。トリグリセリドは脂肪又は油の脂質画分の主成分である。摂取すると、脂質はリパーゼ酵素によって分解され、グリセリドから遊離脂肪酸が放出される。加水分解のプロセスは前胃（唾液）リパーゼの作用から始まる。ほとんどの唾液リパーゼは乳脂質から短〜中鎖酸を優先的に放出すること、及びこれらの短〜中鎖酸はグラム陽性腸球菌及びグラム陰性大腸菌に対して強力な阻害特性を有していることが知られている（参考文献１＆２）。短鎖酸のほか、リノール酸及びリノレン酸も虫歯菌ストレプトコッカス・ミュータンス(Streptococcus mutans)に対して阻害効果を有していることが知られている（参考文献３）。遊離短鎖酸だけでなく脂肪酸のモノグリセリドも抗真菌活性を有していることが知られている（参考文献４）。エンベロープを持ったウィルスに対する殺ウィルス活性も報告されている（参考文献７）。
【００１１】
唾液リパーゼによる早期及び優先的な殺微生物性短鎖脂肪酸（Ｃ：４〜Ｃ：１２）の放出は、新生児動物の腸における保護機構を提供し、胃腸感染の予防に著しく貢献する。遊離脂肪酸は一般的に水性媒体に不溶性なので、それらの輸送及びバイオアベイラビリティはそれらの乳化に依存する。
【００１２】
ＷＯ０３／０１８０４９には、ヒト又は動物の上皮膜への潜在的病原菌の接着を阻害するための乳清アポタンパク質の使用が開示されている。アポタンパク質は、乳清リポタンパク質からブタの膵臓エキス由来のリパーゼによって酵素的に生じたものである。アポタンパク質は、通常結合されている非タンパク質物質（脂質／炭水化物／多糖／金属イオン）が除去された後に残る残存タンパク質‘骨格’である。アポタンパク質は通常、特定の非タンパク質複合体に大きい親和性を有している。アポリポタンパク質の場合、この親和性は、脂質、脂肪又は遊離脂肪酸の結合及び水性媒体中での輸送を容易にする極性及び非極性又は両親媒性部分に基づいている。
【００１３】
乳加工中、バターの製造は、機械的手段によって脂肪球の膜を引き裂き、バター脂肪球を融合させ、表面に浮上させて、そこでバターとして回収することを含む。残ったバターミルクは、酸性化して酸不溶性のカゼインタンパク質を沈殿させ、乳清タンパク質、乳糖ラクトース及び引き裂かれた脂肪球の膜成分を含む‘酸ホエー’にすることが多い。ホエータンパク質は、カゼイン及び脂肪の凝固にレンネットを使用するチーズ製造におけるカードからの流出液からも回収される。この‘スイートホエー’も脂肪球膜の成分を含有している。ホエータンパク質は、さらに加工して残存ラクトース及び脂質を除去した後、スプレー乾燥し、非タンパク質物質を最小化するように加工すると、ホエータンパク質コンセントレート（ＷＰＣ）又はホエータンパク質アイソレート（ＷＰＩ）を形成できる。
【００１４】
全乳は別として、商業的酪農業における‘一次的’製品はバターとチーズである。バターミルク及び酸カゼイン、ラクトース、ミネラル及び酸ホエーは、バター製造からの‘二次的’製品であり、一方、スイートホエー、ミネラル及びラクトースは、チーズ製造からの‘二次的’製品である。現代の酪農業においては、一次的及び二次的という用語は誤解を招くおそれがある。なぜならば、二次的‘副産物’が非常に重要な経済的貢献をしているからである。さらに、現代の酪農業は、ますます高度な技術的方法を利用して、伝統的製品の価値を変更及び増大している。一つのそのような変更は、酵素を使用してバター脂から遊離脂肪酸を生成させ、食品加工、風味良好なスナックの製造、及び調理済み食品に使用するためのチーズフレーバー（酵素処理チーズ、Enzyme Modified Cheese）を得るというものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】ＷＯ０３／０１８０４９
【発明の概要】
【００１６】
本発明は、酪酸（Ｃ４）；カプロン酸（Ｃ６）；カプリル酸（Ｃ８）；カプリン酸（Ｃ１０）；ラウリン酸（Ｃ１２）；ミリスチン酸（Ｃ１４）；パルミチン酸（Ｃ１６）；パルミトレイン酸（Ｃ１６：１）；ステアリン酸（Ｃ１８）；オレイン酸（Ｃ１８：１）；リノール酸（Ｃ１８：２）；リノレン酸（Ｃ１８：３）；及びそれらのエステル化誘導体から選ばれる乳清脂質から誘導可能な二つ又はそれを超えるの天然遊離脂肪酸のブレンド、及び前記遊離脂肪酸の乳化剤として乳タンパク質を含む抗菌性組成物であって、全脂質含有量の少なくとも３５％は、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸及びラウリン酸の一つ又は複数から選ばれる遊離脂肪酸で構成される抗菌性組成物を提供する。
【００１７】
全脂質含有量は、酪酸、カプロン酸、カプリン酸及びラウリン酸の一つ又は複数から選ばれる少なくとも５０％の遊離脂肪酸を含みうる。
前記組成物の全脂質含有量の残り部分は、Ｃ１４以上の非抗菌性遊離脂肪酸、非加水分解脂質成分、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドなど、又はそれらの組合せを含みうる。
【００１８】
前記ブレンドは、カプリル酸、カプリン酸及びラウリン酸の混合物を含みうる。
前記遊離脂肪酸のブレンドの融点は、個々の遊離脂肪酸のいずれか一つの最も高い融点未満でありうる。前記ブレンドの融点は４５℃未満、例えば３７℃未満、例えば１８℃未満でありうる。
【００１９】
カプリル酸：カプリン酸：ラウリン酸の比率は、約４０：３０：３０でありうる。
前記ブレンド中の遊離脂肪酸の少なくとも一部はエステル化されうる。エステル化された遊離脂肪酸は、モノ−及び／又はジ−及び／又はトリ−グリセリド形でありうる。遊離脂肪酸：エステル化グリセリドの比率は約５０：５０でありうる。
【００２０】
前記組成物は水分散性でありうる。
前記乳化剤は乳清タンパク質でありうる。例えば、前記乳化剤はアポリポタンパク質でありうる。あるいは、前記乳化剤はカゼインであってもよい。前記乳化剤は約５〜４５重量％の濃度範囲で存在しうる。
【００２１】
前記組成物のｐＨは約４．５〜５．０でありうる。
本発明はさらに、本明細書中に記載の組成物及び担体を含む医薬製剤も提供する。前記組成物は約０．５％〜１０％重量／体積の濃度範囲で存在しうる。
【００２２】
前記製剤は、溶液、石鹸、ゲル、ペースト、軟膏、泡沫、スプレー、粉末、ペッサリー、包帯、錠剤又は食品の形態でありうる。
本発明はさらに、カンジダ・アルビカンス(Candida albicans)感染の予防又は治療における製剤の使用も提供する。前記製剤は膣内クリーム又はゲル又はペッサリーの形態でありうる。本発明は、非特異的細菌性膣炎の予防又は治療における製剤の使用も提供する。前記製剤は膣内クリーム又はゲル又はペッサリーの形態でありうる。本発明はさらに、皮膚感染の予防又は治療における製剤の使用も提供する。前記製剤は局所適用に適切な形態でありうる。本発明は、火傷の治療における製剤の使用も提供する。前記製剤は局所適用に適切な形態でありうる。本発明はさらに、感染の予防又は治療における製剤の使用も提供する。前記製剤は外科用包帯の形態でありうる。前記製剤は、眼、鼻、口、腸、又は性器への粘膜適用のための、例えば淋病、梅毒、クラミジア、ヘルペス及びＨＩＶの一つ又は複数のような性感染症の予防又は治療に使用するための医薬品の形態でありうる。
【００２３】
本発明は、胃腸感染の予防又は治療における製剤の使用も提供する。前記製剤は食品又は飲料の形態でありうる。本発明はさらに、口腔疾患の予防又は治療における使用も提供する。前記製剤は、練り歯磨き、チューインガム、洗口液又はその他の歯磨剤から選ばれる口腔ヘルスケア用製剤の形態でありうる。
【００２４】
更なる側面において、本発明は、本明細書中に記載の組成物を含む健康補助食品を提供する。前記組成物は約０．５％〜１０％重量／体積の濃度範囲で存在しうる。本発明はまた、乳タンパク質由来乳化剤と、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸及びリノレン酸の混合物とを含む健康補助食品も提供する。前記健康補助食品は油の形態でありうる。
【００２５】
前記健康補助食品は、酪農乳(dairy milk)を再構成するのに使用できる。酪農乳はスキムミルク又はバターミルクでありうる。再構成乳は、２０％（ｗ／ｖ）以下の健康補助食品、例えば１０％（ｗ／ｖ）以下の健康補助食品を含みうる。本明細書中に記載の組成物を用いるミルクの再構成は、ミルク中の天然のオリゴ糖、ミルクミネラル及びビタミンのレベルを増強することができる。
【００２６】
本発明はさらに、本明細書中に記載の組成物を含む再構成乳も提供する。前記再構成乳はさらにオリゴ糖も含みうる。前記再構成乳はさらにミルクミネラルも含みうる。前記再構成乳はさらにビタミンも含みうる。
【００２７】
別の側面において、本発明は、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸及びオレイン酸から選ばれる少なくとも二つの異なる遊離脂肪酸の非水性混合物を含む消毒スプレーを提供する。前記スプレーはさらに有機溶媒の希釈剤を含みうる。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】図１は、新鮮な殺菌生クリームから様々な酵素を用いて得られた遊離脂肪酸の収量を示すグラフである。
【図２】図２は、酪酸の削減率（％）を示す水分配のグラフである。
【図３】図３は、洗浄加水分解バター脂の分別蒸留後の脂肪酸含有量を示すグラフである。
【図４】図４は、様々な脂肪酸に２分間暴露された黄色ブドウ球菌の接触生存率を示すグラフである。
【図５】図５は、カプリル酸の割合の増加に伴うパルミチン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸及びカプリン酸の融点降下を示すグラフである。
【図６】図６は、カプリル酸、カプリン酸、又はオレイン酸の濃度の増加に伴うラウリン酸の融点降下を示すグラフである。
【図７】図７は、オレイン酸の濃度の増加に伴うカプリル酸、カプリン酸又はラウリン酸の抗菌効力の低下を示すグラフである。
【図８】図８は、各種遊離脂肪酸エマルジョンに２分間暴露後のカンジダ・アルビカンスの接触生存率を示すグラフである。
【図９】図９は、腸管出血性大腸菌Ｏ１５７（ＥＨＥＣ）に対する牛枝肉用消毒剤としての遊離脂肪酸油の効果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
市販のリパーゼ酵素を用いてバター脂から遊離脂肪酸の組成物を生成させることは可能である。そのような酵素的加水分解は、酵素処理チーズの製造の基礎となっている。生成する遊離脂肪酸の比率及び組成は、酵素の種類、基質濃度及びその他の生理化学的条件、例えば温度及びｐＨに依存する。真菌リパーゼ及び食肉処理場で子ウシ、子ヤギ及び子ヒツジの舌下腺から抽出される天然の動物前胃（唾液）リパーゼは、フレーバー生成のためにチーズ産業で日常的に使用されている。特定のフレーバーは、酵素の選択及び短〜中鎖遊離脂肪酸の放出特性に影響される。酪酸（Ｃ４）は特に鼻を突く‘チーズ様’臭を有している。カプロン酸（Ｃ６）及びカプリル酸（Ｃ８）も臭気を発するが、より‘heady’である。一方、他の短鎖揮発性酸（プロピオン酸）も微生物作用を通じて間接的に発生し、これらすべてが地方色豊かなチーズフレーバーの国際的レパートリーに貢献している。
【００３０】
短〜中鎖酸（Ｃ４〜Ｃ１２）は、フレーバーにおけるそれらの使用は別にして、特に強力な抗菌効果を有している。しかしながら、この目的のためにそれらを医薬用途に使用することは、水性媒体中でそれらが不溶性であること及びさらに特にそれらが局所用途に望ましくない臭気を有することによって制限されている。唾液リパーゼの加水分解作用による短〜中鎖遊離脂肪酸の早期放出は、潜在的病原菌から新生児の腸を保護する‘母から与えられた’先天性の免疫能力の一部であると認識されている（参考文献１＆２）。
【００３１】
我々は、酵素加水分解されたバター脂のより多くの臭気含量を、その加水分解脂肪を数容量の水で洗浄又は‘カット’することによって、どのように削減できるかについて記載する。酪酸は水に比較的可溶なので、水性相に分配される。カプリル酸は水溶液に難溶であるが、カプリル酸の一部も同様に水性相に分配される。我々は、酪酸の存在は、酪酸が有機溶媒として作用してカプリル酸の溶解度を増大するので、カプリル酸の分配を可能にすることを見出した。
【００３２】
酵素反応は、基質の完全加水分解を達成するように推進することができる。これは、通常、酵素反応の生成物を結合させるか又は反応混合物から生成物を除去するかのいずれかによって行われる。酵素加水分解された脂肪酸混合物の分別蒸留は、より揮発性の短鎖遊離脂肪酸を除去するのに使用でき、及び／又は反応混合物中における胆汁酸又はホエータンパク質アイソレートのような乳化剤の存在は反応生成物を結合する役割を果たし、そうすることによって基質の完全加水分解が可能になる。
【００３３】
酵素加水分解による遊離脂肪酸の生成は比較的直接的であるが、加水分解された遊離脂肪酸と加水分解されていない脂質の比率は、高い抗菌効力を達成するのに極めて重要である。混合物中に過剰の非加水分解脂質が存在する場合、その非加水分解脂質は、それらの親油性のために、遊離脂肪酸を捕らえ込む（隔離する）シンクとして作用する。抗菌用途には高い遊離酸の比率を必要とするので、遊離酸の含有量は混合物の総脂質含有量の約３５％を上回るべきである。実施例４で、図６及び７を参照しながらさらに詳細に記載されるように、異なる融点を有する遊離脂肪酸を組み合わせると、個々の遊離脂肪酸成分のいずれか一つの融点より低い融点を有する組成物を製造することができる。この融点降下を使用すれば、遊離脂肪酸の抗菌性組成物を形成することができる。なぜならば、個々の遊離脂肪酸はそれらが液体形であるときにのみ抗菌効果を示すからである。低融点を有する個々の遊離脂肪酸は、高融点を有する酸の溶媒として働くので、低融点を有する遊離脂肪酸は抗菌性脂肪酸を隔離するように働くことができ、一定の比率を下回るとそれらを不活性にする。従って、隔離作用を克服するために、抗菌性遊離脂肪酸は組成物の総脂質含有量の少なくとも３５％を構成すべきである。
【００３４】
遊離脂肪酸は水に不溶性で、このことが抗菌剤としてのそれらの医薬的用途を制限している。我々は、遊離酸の組成物を水性ベースの溶液中で乳化することによって、増大した表面積を有する脂肪球が形成され、その結果増強された抗菌効果が得られることを示した。適切な乳化剤は乳タンパク質、例えば酪農ホエーからの乳清タンパク質又は乳清アポリポタンパク質である。
【００３５】
遊離脂肪酸の組成物は市販されており、食品製造におけるフレーバー用の‘バター酸’として販売及び使用されている。バター酸は、米国ＦＤＡにより食品用として安全食品認定（ＧＲＡＳ）の認可を得ている。
【００３６】
我々は、抗菌効果のために最適化されうるバター酸の製剤について記載する。遊離脂肪酸の組成物は、乳脂質の酵素加水分解によって、又は真空蒸発下での遊離脂肪酸の抽出及び濃縮によって製造できる。市販の遊離酸のブレンドを結集することもできる。遊離脂肪酸のブレンドを結集する場合、臭気の強い酪酸及びカプロン酸は、特に用途が局所的な抗菌目的の場合、除外するのが望ましいであろう。増強された抗菌効果のためには、抗菌性であることが知られている遊離脂肪酸の含有量をブレンド内で増加するのが望ましい。これらは低臭性のカプリル酸、カプリン酸、及びラウリン酸である。我々は、これら三つの脂肪酸（カプリル酸、カプリン酸及びラウリン酸）の混合物の融点は、組み合わされた個々の融点の産物であること、遊離脂肪酸のブレンドの総体的融点は、混合物内での遊離脂肪酸の比率を変えることによって調整できることを示した。
【００３７】
遊離脂肪酸ブレンドの総体的融点は、これらのブレンドの抗菌効力に極めて重要な影響を持つ。カプリル酸、カプリン酸及びラウリン酸のブレンドで、カプリン酸及びラウリン酸が主要であるブレンドは、カプリル酸が主要である同じ酸の混合物よりも高い融点を有する。そのようなブレンドの抗菌効果は、混合物の融点未満では数桁低下する。反対に、融点より上では数桁増幅する。
【００３８】
哺乳動物の体内温度は通常３７℃であるが、皮膚温度は１８℃〜２０℃ほどの低さになりうる。遊離脂肪酸の混合物が皮膚での抗菌効果を提供するために製剤化される場合、該遊離脂肪酸混合物の融点は約１８℃未満であるべきである。体内使用の場合、該混合物の融点はもっと高くてもよい（すなわち、該混合物は高比率の高融点酸を含むべきである）が、いずれにしても体内（胃腸）での抗菌効果が必要な場合３７℃を超えるべきでない。
【００３９】
遊離脂肪酸は苦い‘ペッパー様’のフレーバーを有しており、濃縮形では哺乳動物の組織に対して刺激性がある。遊離脂肪酸の不快な味及び刺激性は、乳化タンパク質の添加によって多少改善されうる。しかし、遊離脂肪酸は酸性のｐＨを有しているので、カゼインのような酸不溶性タンパク質及びカルシウム塩のようなその他の望ましい賦形剤と適合しない。天然では、脂肪酸はほとんどアルコールエステルの形態で存在する（乳バター脂では三価アルコールのグリセロールのエステルとして）。これらはほとんどいつも、各グリセロールに共有結合された三つの異なる脂肪酸を有する混合エステルである。望ましくない特徴である酸性度、味及び刺激性を取り除くために、混合物中の一部又はすべての遊離脂肪酸をモノ、ジ又はトリグリセリドのエステル形に戻すことが望ましいであろう。
【００４０】
グリセロール中での還流蒸留を用い、縮合反応を促進するために硫酸、無水硫酸ナトリウム又はその他の適切な乾燥剤の存在下で、遊離脂肪酸をグリセリドに再エステル化することは可能である。リパーゼ酵素は、グリセリドに対するそれらの加水分解活性のほかに、エステラーゼとしても作用するので、遊離脂肪酸とグリセロールの組合せからグリセリドを合成するのに使用することができる（参考文献５）。形成されるグリセリドの種類及び受けるエステル化の程度は、遊離脂肪酸対グリセロールの化学量論比；反応条件；及び溶媒の選択を変えることによって制御することができる。
【００４１】
個々の遊離脂肪酸のモノ、ジ−又はトリグリセリドエステルを構築し、これらを任意の所望比にブレンドすること、又は遊離脂肪酸の所望混合物を起点にして混合トリグリセリドエステルを形成することは可能である。
【００４２】
脂肪酸のグリセリドは、遊離脂肪酸に比べてずっと低い抗菌効力しか持たないが、摂取すると、前胃唾液リパーゼ及び腸内の膵リパーゼによって遊離酸に迅速に加水分解される。腸内抗菌効果が望ましい場合、例えば胃腸炎の予防及び／又は治療の場合、短〜中鎖脂肪酸のグリセリドの摂取は、レシピエントを遊離脂肪酸の望ましくない感覚刺激性にさらすことなく、腸管腔に遊離脂肪酸の局所化及び制御された送達をもたらすであろう。
【００４３】
我々は、市販のホエータンパク質アイソレート（乳清タンパク質）を用いて、選択された比率の遊離脂肪酸、それらの様々な組合せ及び比率のモノ、ジ−又はトリグリセリドを乳化するためのプロセスを記載する。安定剤、抗酸化剤、微量栄養素、フレーバー及び／又は香料を該エマルジョンと組み合わせて、摂取すると強力な抗菌特性を持つバルク中間体を提供することができる。
【００４４】
酪農乳は、ミルクカゼイン及びミルクミネラルの水性製剤中に分散された、乳糖、ラクトースを含んでも含まなくてもよい、調整された遊離脂肪酸及び／又はそれらのモノグリセリドブレンドのホエータンパク質エマルジョンを用いて再構築することができる。ホエータンパク質エマルジョン中の目的に沿って調整された再エステル化遊離脂肪酸及び／又は遊離脂肪酸を用いて、又はスキムミルク又はバターミルク中に油として遊離脂肪酸を分散又は乳化させることによって、酪農乳を再構築することも可能である。そのような製剤は、食品媒介病原菌からの増強されたＧＩ（胃腸）保護を提供するので、相当の商業的価値を有する。
【００４５】
一態様において、本発明は、乳脂質中に存在する天然の遊離脂肪酸から選ばれる遊離脂肪酸の組成物に関する。前記組成物は、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸及びリノレン酸から選ばれる二つ以上の遊離脂肪酸の組合せである。乳脂質は、好ましくは、ウシ、ヤギ又はヒツジ種のミルク由来であるが、任意の哺乳動物種由来であってもよい。
【００４６】
遊離脂肪酸は、乳脂質の酵素的又は化学的加水分解によって製造でき、部分水素化乳脂質の製剤として使用できる。又は、それらは粗加水分解物から真空下での分別蒸留によって抽出及び精製することもできる。遊離脂肪酸は商業的に入手することもできる。これらの起源は、コーン油、ヤシ油、パーム核油、ココナツキャノーラ油などの植物油の加水分解物に由来することもあるが、いずれにしても天然起源で、商業的にバター酸と言われる乳脂質中に天然に存在する脂肪酸に限られる。
【００４７】
遊離脂肪酸の組成物は、ブレンドの総体的融点が好ましくは通常の生理的温度である約３７℃未満になるように、及びいずれにしても約４５℃を超えないように、組合せ中の酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸及びラウリン酸の他の遊離脂肪酸に対する比率を高めることによって、増強された抗菌効果のために最適化することができる。
【００４８】
抗菌性遊離脂肪酸の組成物は、組成物の臭気発散性を最小化するために、好ましくはカプリル酸、カプリン酸及びラウリン酸に制限されうる。これに関して、酪酸及びカプロン酸は、粗加水分解物から水性分配、分別蒸留、又は市販ストック中からの除外によって除去されうる。
【００４９】
抗菌性遊離脂肪酸の組成物は、そのまま使用しても、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸及び又はリノレン酸又はそれらの誘導体から選ばれる一つ又は複数のその他の天然遊離脂肪酸と組み合わせて使用してもよい。抗菌効果のために結集する場合、抗菌性遊離脂肪酸（Ｃ４〜Ｃ１２遊離脂肪酸）又はそれらの誘導体の組成物は、好ましくは総遊離脂肪酸、遊離脂肪酸誘導体及び／又は非加水分解脂質成分の約８０％超を構成すべきである。いずれにしても抗菌性遊離脂肪酸又はそれらの誘導体は、組成物の総脂質又は脂質様物質の含有量の約３５％、好ましくは５０％、例えば８０％を下回るべきでない。
【００５０】
更なる態様において、選択された個々の遊離脂肪酸又はそれらの混合物は、酸還流縮合又は酵素的手法のいずれかによってグリセロールでエステル化し、モノ−、ジ−又はトリグリセリドにすることができる。これは、脂肪酸原料の組成及び濃度によって均一グリセリドのことも混合グリセリドのこともある。食品に入れるために抗菌性遊離脂肪酸の組合せを結集する場合、及び遊離酸の酸性度、刺激性及び又は味を低減することが望ましい場合、エステル化は好ましいが必須ではない。
【００５１】
遊離脂肪酸のブレンドからの混合トリグリセリドの再構築は、それらの抗菌効果とは別に又は抗菌効果と組み合わせて、医学用途における増強された有用性を有する調整された脂質の再構築を容易にする。主として短〜中鎖脂肪を基にした脂質は、肝門静脈を通って肝臓に直接輸送されるため、ずっと速い代謝エネルギー産生をもたらすであろう。同様に、ミリスチン酸又はパルミチン酸を含有しないような脂肪酸の選択から再構築された脂質は、血清コレステロールが高い傾向の人に、より受け入れられやすいだろう。
【００５２】
賦形剤を含む又は含まない抗菌性遊離脂肪酸及び／又はその誘導体の組成物は、食肉処理場における動物屠体上の潜在的病原菌のバイオバーデン(bio-burden)を削減するためのスプレー又は洗浄液として使用できる。同様の理由で収穫したての果物及び野菜にも使用できる。
【００５３】
抗菌効果及び又は栄養学的効果のために、加水分解脂質、遊離脂肪酸及び又はそれらの誘導体を乳化してそれらのバイオアベイラビリティを増大させることは、望ましいであろうが必須ではない。適切な乳化剤は、ミルク、乳タンパク質、ミルクカゼイン、乳清タンパク質、乳清アポタンパク質及び乳加工由来のミルクホエーなどである。
【００５４】
遊離脂肪酸の製剤は、従来の医薬品、医療機器、化粧品又は食事成分の形態で提供できる。食事成分として使用される場合、高熱量のような栄養学的効果及び又は腸における抗菌効果、又はその両方を達成するように製剤化されうる。
【００５５】
一態様において、抗菌性遊離脂肪酸、又はそれらのグリセリド及び／又は乳脂質の粗加水分解物の選択的組成物は、ホエータンパク質中に乳化され、皮膚、髪、及び爪の感染の局所治療及び／又は予防用の、軟膏、ローション、ゲル、クリーム、ペースト又はその他の医薬品の成分として使用される。
【００５６】
さらなる態様において、選択的抗菌性遊離脂肪酸のホエータンパク質エマルジョンは、口腔衛生用の練り歯磨き又は洗口液又は義歯接着剤もしくは固定剤の抗菌性成分として、及び虫歯、歯肉炎、歯周炎、鵞口瘡及びアフタ性潰瘍の治療及び／又は予防用の医薬品として使用される。
【００５７】
さらなる態様において、抗菌性遊離脂肪酸のホエータンパク質エマルジョンは、ゲル又はペッサリーに配合して酵母菌性膣炎及び非特異的細菌性膣炎などの膣感染症の予防及び／又は治療に、及び類似の形態で淋病、梅毒、クラミジア、ヘルペス及びＨＩＶなどの性感染症の予防のためのバリアとして使用できる。
【００５８】
抗菌性遊離脂肪酸のホエータンパク質エマルジョンは、病院及び患者ケア施設における抗生物質耐性菌の二次感染防止のために、石鹸、ハンドゲル及びウェット手拭きの成分として使用できる。また、抗生物質耐性菌の知られている無症候性キャリアの脱コロニー化にも使用できる。
【００５９】
遊離脂肪酸の抗菌性組成物は、熱処理されたホエータンパク質及びその他の賦形剤を用いて泡沫として乳化し、感染性下痢症、偽膜性大腸炎及びその他の腸感染症の予防及び／又は治療に適切な浣腸を製造することもできる。
【００６０】
本発明は以下の実施例からより明確に理解されるであろう。
【実施例】
【００６１】
方法
脂肪酸のガスクロマトグラフ分析
サンプルの脂質成分（遊離脂肪酸を含有する）を、元のサンプル中に存在するあらゆる非脂質物質から抽出した後、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）分析にかける。使用される方法はＤｅＪｏｎｇ及びＢａｄｉｎｇｓ（参考文献６）から適応する。サンプル（０．１〜０．５ｇ）を量り取り、１０ｍｌのエタノール、１．０ｍｌの２．５Ｍ硫酸、１５．０ｍｌの５０：５０ジエチルエーテル：ヘプタン及び１ｍｌの内部標準（すなわち、吉草酸（Ｃ５：０）、マルガリン酸（Ｃ７：０）及びウンデカン酸（Ｃ１１：０）、すべて１ｍｇ／ｍｌヘプタン中）を含有する溶液に加えた。該溶液をよく混合し、遠心分離して上清を回収した。脂質を含有する上相をパスツールピペットを用いて１ｇの無水硫酸ナトリウム（乾燥剤）入りビーカーに移した。
【００６２】
５００ｍｇ、３ｍｌの  Ｓｔｒａｔａアミノプロピルカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、英国チェシャー州マックルズフィールド）を用いて固相抽出（ＳＰＥ）を実施した。これらのＳＰＥカラムをまず２×１０ｍｌのヘプタンでコンディショニングした後、上記のビーカーからの脂質画分をカラムに加え、真空によって引いた。中性脂質は２×１０ｍｌのヘキサン：プロパノール（３：２ｖ／ｖ）のフラッシュを用いて溶出した。次に脂肪酸をＳＰＥカラムから５ｍｌのジエチルエーテル中２％ｖ／ｖギ酸を用いて溶出した。
【００６３】
個々の遊離脂肪酸（Ｃ４：０、Ｃ６：０、Ｃ８：０、Ｃ１０：０、Ｃ１２：０、Ｃ１４：０、Ｃ１６：０、Ｃ１８：０、Ｃ１８：１、Ｃ１８：２及びＣ１８：３）は、水素炎イオン化検出、Ｖａｒｉａｎ  １０７９    Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  キャピラリーインジェクター、Ｖａｒｉａｎ  ８４１０  液体オートサンプラー及びＶａｒｉａｎ  Ｓｔａｒ  オペレーティングソフトウェアを備えたＶａｒｉａｎ  ３８００  ガスクロマトグラフ（Ｖａｒｉａｎ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、米国カリフォルニア州ハーバーシティ）を用いてＧＣによって定量した。使用したカラムは、直接オンカラム注入付きのＣｈｒｏｍｐａｃｋ  ＷＣＯＴ  溶融石英キャピラリーカラムＣＰ  ＦＦＡＰ−ＣＢ、２５ｍ×内径３２ｍｍ、０．３ＤＦ（Ｖａｒｉａｎ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、米国カリフォルニア州ハーバーシティ）であった。インジェクター温度は６５℃（０．１分間保持）で、２００℃／分で２５０℃に上げ（１分間保持）、その後２００℃／分で６５℃に冷却した（２０分間保持）。フロー圧は８ｐｓｉに固定した。オーブン温度は６５℃（１．５分間保持）で、その後１０℃／分で２４０℃に加熱した。全運転時間は４４分であった。検出器温度は３００℃であった。全サンプルとも三重に分析した。
【００６４】
抗菌分析
二つの技術を日常的に使用して個々のサンプルの抗菌効果を評価し、効力を比較した。これらは増殖阻害アッセイ、接触生存率アッセイ及び最小阻止濃度（ＭＩＣ）のためのアッセイであった。いくつかの指標細菌も日常的に使用した。これらは、グラム陽性菌（ストレプトコッカス・ミュータンス(Streptococcus mutans)）、グラム陰性菌（ネズミチフス菌(Salmonella typhimurium)）及び酵母（カンジダ・アルビカンス(Candida albicans)）であった。試験細菌をＭｉｃｒｏＢａｎｋの抗凍結剤バイアル(cryoprotectant vial)（Ｐｒｏ−Ｌａｂ、カナダ・オンタリオ州）中に８０℃で保持し、適切な寒天上で培養した後、アッセイに使用するために液体培養物の接種を行った。細菌は、Ｂｒａｉｎ  Ｈｅａｒｔ  Ｉｎｆｕｓｉｏｎの寒天及びブロス（英国Ｏｘｏｉｄ社）上で増殖させ、酵母はＹＥＰＤ（英国Ｏｘｏｉｄ社製、１％Ｗ／Ｖ酵母エキス、１％Ｗ／Ｖペプトン、及び２％Ｗ／Ｖグルコース、必要な場合Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｉｃａｌ寒天１．８％Ｗ／Ｖ）上で増殖させた。
【００６５】
接触生存率アッセイ
このアッセイ手順を用いて、遊離脂肪酸及び／又はその誘導体を含有する製剤に所定期間暴露された標準化微生物集団の生存率（生残率）の減少を測定する。前記製剤は、治療的又は栄養的使用のための送達システムを構成しうるその他の活性又は非活性成分を含むことも含まないこともある。
【００６６】
手順は、適切な培地中で増殖した後期対数期の細菌又は酵母から調製された接種材料中のコロニー形成単位（ＣＦＵ）の数を計数し、これを、所定量の試験物質に所定時間暴露された後の同じ接種材料から得られたＣＦＵの数と比較することに基づいている。ＣＦＵの計数は、連続希釈及びプレートカウンティングの標準微生物学的手順によって達成される。この手順は、使用予定濃度のゲル、軟膏及びその他の粘稠及び不透明組成物の総体的抗菌効力の直接及び比較測定を可能にする。結果は、通常、接種材料と試験物質間のＣＦＵのログ数の減少として表される。
【００６７】
試験細菌又は酵母のストック培養物を寒天斜面及びプレート上に保持する。アッセイの前に、ブロス培養物を適切な液体培地中に調製し、適切な条件下でインキュベートして後期対数期の密度を達成する。培養物は遠心分離によって収穫し、そのものの上清の１０分の１の体積に再懸濁して１０倍の濃度を達成する。１０倍の接種材料を１グラム（又は１ｍｌ）の試験物質のサンプルに加え、よく混合し、しばらくの間インキュベートする。この時間は３０秒から数分間以上に延長されてもよい。暴露期間の終了時、９ｍｌの適切な（増殖を支持しない）希釈剤を各試験サンプルに加え、よく混合する。その後、１：１０の希釈を連続式に行い、各希釈の一部を無菌ペトリ皿に加える。適切な（増殖を支持する）寒天を４５℃で加え、これと希釈細胞の一部を振り廻すことによって混合する。固まったら、寒天プレートを適切な条件下で（好気的又は嫌気的）インキュベートし、個々のコロニーが見えたら、３０〜３００の可視コロニーを示す希釈点でそれらをカウントする。希釈係数を乗じたカウント数が試験又は対照サンプル中の生存細胞数の測定値である。
【００６８】
最小阻止濃度（ＭＩＣ）アッセイ
微生物に対する試験サンプルのＭＩＣは、標準の寒天希釈法を用いて実施した。試験法は、米国臨床検査標準委員会(National Committee for Clinical Laboratory Standard，ＮＣＣＬＳ)の文献Ｍ７−Ａ６−希釈抗菌薬感受性試験法(Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests)に基づく。
【００６９】
サンプルを水中で１：２〜１：２４に希釈し、さらに抗菌活性を１：２０〜１：２４０の濃度範囲にわたって評価できるように、溶融寒天培地で１０倍に希釈した。細菌用に使用された寒天培地は、細菌の良好な増殖に必要な場合５％のヤギ血液を補給されたミュラー・ヒントン(Mueller Hinton)寒天であった。酵母を含む真菌はサブロー(Sabouraud)・デキストロース培地上で増殖させた。微生物は、寒天培地のプレート上、３５℃±２℃で、適当な環境条件下、１６〜２４時間培養された。各培養物の生存性と純度をチェックした後、微生物を０．９％ｗ／ｖ生理食塩水中に、光学濃度が０．５のマクファーランド標準液(McFarland standard)になるように懸濁させた。次に、各微生物の懸濁液を、一連の試験物質希釈液を含有する寒天プレートに、マルチポイントイノキュレーター(multipoint inoculator)を用いて適用した。マルチポイントイノキュレーターは約０．３μＬの懸濁液をプレート表面にスポットとして送達する。これは、スポットあたり約１０４コロニー形成単位に相当する。接種材料の生存性と寒天培地の増殖促進能力を示すための対照として、試験物質を含有していない培地にも微生物を接種した。懸濁液のスポットを層流キャビネット内の寒天プレート内部で乾燥させ、該プレートを逆さにして、各微生物の増殖に適切な、すなわち好気的、微好気的又は嫌気的条件下のインキュベーターに入れた。
【００７０】
試験物質を含有していない対照プレート上で増殖が明らかに目視できるようになるまで約２４〜４８時間インキュベーションした後、プレートをインキュベーターから取り出した。増殖の遅い真菌の毛瘡白癬菌(Trichophyton mentagrophytes)及び紅色白癬菌(Trichophyton rubrum)の場合、プレートを８日間インキュベートした後評価した。インキュベートされたプレートは４℃で保管され、目視検査によって及びＭＩＣデータ記録用に構成された専用イメージ分析システムを用いて評価された。
【００７１】
接種スポットにおける増殖の有無を記録し、試験された各微生物に対してＬａｃｔｉＳＡＬのＭＩＣを決定した。抗菌物質のＭＩＣは、目に見える微生物増殖を完全に阻止する試験物質の最低濃度と定義される。これは接種スポット領域内の単一コロニー又は薄い曇りは無視して、眼で判断される。
【００７２】
実施例
実施例１−バター脂から遊離脂肪酸の脂肪分解的生成
酵素の選択
市販の六つの脂肪分解酵素製剤を本実施例に使用した。Ｌｉｐｏｍｏｄ  １８７（混合真菌由来）；Ｌｉｐｏｍｏｄ  ３３８（ペニシリウム・ロックフォルティ(Penicillium roqueforti)）；Ｌｉｐｏｍｏｄ  ６２１（カンジダ・シリンドリシア(Candida cylindricia)及びペニシリウム・ロックフォルティ）は、Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｔｓ  Ｌｔｄ（英国カーディフ）から入手した。Ｌｉｐａｓｅ  ＡＹ  ３０（カンジダ・ルゴサ(Candida rugosa)由来）及びＬｉｐａｓｅ  Ｒ（黒色アスペルギルス(Aspergillus niger)）は、Ａｍａｎｏ−Ｅｎｚｙｍｅ  Ｅｕｒｏｐｅ  Ｌｔｄ（英国チッピングノートン）から入手した。子ウシ前胃酵素はＲｅｎｃｏ（ニュージーランド）から入手した。手順はこれらの特定酵素に限定されず、最適収率を達成するために、その他の酵素、例えば、膵リパーゼのほかプロテアーゼ及びアルファ−アミラーゼも含有するＳｉｇｍａ（英国）の粗ブタパンクレアチン、並びにこれらの混合物を使用できる。
【００７３】
本実施例では新鮮な殺菌生クリームを基質として使用したが、酵素加水分解による遊離脂肪酸の供給源として、他のバター脂由来物、植物又は動物脂質も使用できる。クリームは５０％ｗ／ｗの乾燥物質を含有し、そのうちの４０％はバター脂である。各分解物に添加される酵素の量は、存在するバター脂の濃度との関連で見積もられた。例えば、特定の脂肪分解製剤の１％ｗ／ｗの投与量は、バター脂含有量の１％、例えば０．４ｇ／１００ｍｌクリームであった。
【００７４】
加水分解手順
加水分解反応は、１００ｍｌのクリームを入れた２５０ｍｌのエルレンマイヤーフラスコで三重に実施した。本実施例での加水分解温度は４５℃に設定されたが、プロセスは適切な収率を与える任意の温度で実施できる。フラスコ及び内容物をその温度にした後、酵素製剤を加えた。フラスコは処理中、１５０ｒｐｍのロータリーインキュベーター（Ｓｔｕａｒｔ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でインキュベートされた。サンプルを指定時間間隔で取り出し（約１０ｍｌ）、水浴中８５℃で１０分間熱処理して酵素を不活化した。次にこれらを方法の項で記載したようにＧＣによる脂肪酸分析にかけた。
【００７５】
図１に、各種の酵素により４５℃で８時間分解した後の脂肪酸プロフィールのまとめを示す（三つの分解物の平均）。抗菌性遊離脂肪酸は、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸及びラウリン酸（Ｃ：６〜Ｃ：１２）である。これらの最大収率は、Ａｍａｎｏ  ＡＹ、Ｌｉｐｏｍｏｄ  １８７及びＬｉｐｏｍｏｄ  ６２１による分解で観察され、最小収率はＡｍａｎｏ  Ｒを使用した場合に観察された。
【００７６】
実施例２−酵素加水分解されたバター脂からの短〜中鎖遊離脂肪酸の分離及び抗菌評価
水分配
酪酸は、最も臭気が強く、抗菌的観点からすると最も低活性であるが、遊離脂肪酸の中で最も水溶性でもあり、水分配によって分離できる（相分離）。上記実施例１のＡｍａｎｏ  ＡＹから得られた分解物を用いて、４容量の水を４０℃で加え、混合物を激しく撹拌して脂質成分を水中に分散させた後、室温で放置して分離（分配）させた。
【００７７】
水相をデカントし、４容量の水で２連続洗浄を実施した。図２に示すように、この方法で分解物から８０％の酪酸及び約１８％のカプロン酸、カプリル酸、カプリン酸及びラウリン酸（Ｃ：６〜Ｃ：１２）が除去された。
【００７８】
上記第三の洗浄（図２）からの洗浄バター脂の分別蒸留
分別蒸留の方法は当業者には周知である。その手順は、遊離脂肪酸などの揮発性物質の粗混合物を加熱することを含む。前記混合物は、その他の脂肪、油及び又は脂質、及び／又は水、有機溶媒などのその他の流体及び固体を含むことも含まないこともある。最も低い沸点を有する成分が混合物から最初に蒸発し、混合物の温度が上昇するに従って順に各高沸点の蒸発が続く。蒸発した揮発性物質は冷却コイル上で凝縮され、適切な受け器に回収される。加熱及び冷却の閉鎖系に対して真空ポンプを用いて最も適切に達成される様式で加熱混合物への圧力を減じることにより、すべての成分の沸点は一定量低下する。その量は、大気圧における沸点、真空の程度（トルートンの等式）及び共沸混合物として知られる揮発性物質とその他の溶媒との間の会合の程度による。高機能システムでは、蒸発カラムの最頂部の温度がモニターされており、必要成分が蒸発及び凝縮するときに凝縮物の回収が開始できるようになっている。
【００７９】
遊離脂肪酸を蒸留するための適切な装置は、スイスのＢｕｃｈｉから入手でき、Ｋｊｅｌｄａｈｌ  Ｋ−３５５水蒸気蒸留を含む。これは基本的に、揮発性物質の粗組成物を生蒸気でパージし、これを凝縮して揮発性の遊離脂肪酸と水の混合物を得るという方法である。脂肪酸は水中で不溶性なので、冷却され分離されたら混合物からデカントによって回収できる。
【００８０】
Ｂｕｃｈｉの、バキュームコントローラーＶ−８５５を備えたＲｏｔａｖａｐｏｒ  Ｒ−２１０のようなロータリーエバポレーターを用いると、蒸留に対してさらに大きい制御が達成できる。ロータリーエバポレーターは、回転する丸底フラスコ内の粗混合物を水浴中で一定温度に保つことができ、一方、閉鎖系に対して引かれる真空は低〜中真空、すなわち３，０００〜０．１パスカル（大気圧は１バール／１００，０００パスカル）に調整することができる。圧力が減少すると、各成分の沸点が低下し、共沸混合物が形成されなければ、それらは順次蒸発する。共沸混合物の形成は他の溶媒の添加によって防止できる。
【００８１】
洗浄バター脂の分別蒸留の例を図３に示す。
留出物中、酪酸は全体の９．８％で、洗浄バター脂の元の４．５％から増加した。抗菌グループ（Ｃ：６〜Ｃ：１２）は全留出物の８１％で、洗浄濃縮物の３２％から増加したが、長鎖脂肪酸（Ｃ：１４〜Ｃ：１８．１）は、９１％から８．５％に減少した。総体的濃度に関しては、洗浄濃縮物中の抗菌グループは、元の９９％で本質的に未変化であったが、残留物(retentate)は２６％（−３．８倍）及び留出物は２５１％（＋２．５倍）であった。
【００８２】
留出物中の遊離脂肪酸（Ｃ：４〜Ｃ：１２）の組成は：
酪酸          ９．８％
カプロン酸    ５％
カプリル酸    １０％
カプリン酸    ２４％
ラウリン酸    ３８％
であった。
【００８３】
抗菌評価
前記の最小阻止濃度（ＭＩＣ）法を用いて、濃縮物、洗浄濃縮物、残留物及び留出物の相対的抗菌効力を比較した。実際的には、留出物を溶融寒天と混合するのは、遊離脂肪酸が水に不溶性であるために困難であることが分かった。界面活性剤を使用して可溶性を促進することはほとんど無益であった。なぜならば、界面活性剤は遊離脂肪酸の抗菌効果を不活性化することが分かったからである。そこで、濃縮脂肪酸を溶融寒天に、寒天の凝固点のすぐ上の温度で激しく撹拌することによって分散させることが必要であった。抗菌効力は、抗菌グループの濃度に直接相関していることが予想されたが、驚くべきことにそうではなかった。
【００８４】
【表２】
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【００８５】
表３に示されているように、留出物は元の濃縮物より２．５倍以上濃縮されているにもかかわらず、１．３倍強力なだけであった。更なる評価によれば、元の濃縮物における乳清タンパク質の存在に関して説明のつかない差が示唆された。すなわち、これらは洗浄濃縮物へは部分的に持ち越されるが、留出物には存在しないのである。更なる研究で、遊離脂肪酸と元の生クリームのその他の脂質又は非脂質巨大分子との間に何らかの形態の相乗効果があることが明らかとなった。これについては以下の実施例で示す。
【００８６】
実施例３−抗菌性遊離脂肪酸と生クリームの脂質又は非脂質成分との組合せ
生クリームの非脂質成分は、乳清タンパク質、リポタンパク質、プロテオグリカン、オリゴ糖及び乳脂肪球膜の成分などである。遊離脂肪酸の濃縮物を乳清タンパク質の組成物（ホエー）で乳化することは比較的容易であること、及び以下に示すように、これらはかなり増幅された抗菌効果をもたらすことが分かった。説明によって縛られたくはないが、乳清成分は遊離脂肪酸の抗菌効果を次の理由で促進できるようである。その理由とは、乳清成分の一部は両親媒性なので、不溶性の脂肪酸を非常に増大した表面積を有する液滴で分散させることを容易にする、又はそれらは脂肪酸と抗菌細胞表面との間に架橋作用を有する、のいずれか又は両方である。
【００８７】
精製乳清の適切な供給源は精製ホエータンパク質アイソレート（ＷＰＩ）‘Ｐｒｏｖｏｎ  １９０’で、Ｇｌａｎｂｉａ  ＰＬＣ（アイルランド・キルケニー）から市販されている。
【００８８】
乳化法１
脱イオン水中ＷＰＩの２０％Ｗ／Ｖ分散物を一定の撹拌下で４〜６時間水和させる。ある量のポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ  ２０）、最も適切には０．２％Ｗ／Ｖ、を加え、１０分後、１０％Ｖ／Ｖの適切な塩、又は溶媒又はその他の浸透剤を一定の撹拌下でゆっくり加える。適切な浸透剤は、塩化ナトリウム、硫酸アンモニウム、リン酸ナトリウム、エタノール、メタノール、グリセリン又はラクトースでありうる。ポリソルベートは表面張力を下げるのに必要で、浸透剤はＷＰＩ溶液のオスモル濃度を上げ、それをその溶解限度に近づけるために必要である。３０分後、実施例２の留出物中に得られたような遊離脂肪酸の３０％Ｖ／Ｖ組成物を、高速ホモジナイザーによって作り出された渦流中に１滴ずつ加える。適切なホモジナイザーは、Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒａｘ  Ｍｏｄｅｌ  Ｔ１８（ＩＫＡ  Ｗｏｒｋｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ  ２８４０５，ＵＳＡ）であり、Ｓ１８Ｎ−１９Ｇ分散ツールを備え、６，０００〜８，０００ＲＰＭで運転される。手順は周囲温度（１８℃〜２２℃）で実施され、生成物は生クリームのそれに近似した稠度を有する白色エマルジョンである。
【００８９】
乳化法２
上で乳化法１として記載された方法は、周囲温度で液体の脂肪酸の組成物には最も適切である。周囲温度より高い融点を有する個別の脂肪酸又は組合せ（Ｃ：８より大きい飽和脂肪）のエマルジョンの製造が必要な場合、乳化プロセスは、個別の又は組み合わせた融点より高い温度で実施されなくてはならない。カプリン酸及びラウリン酸はそれぞれ３１．４℃及び４４℃の融点を有し、これらは４６℃で全成分と乳化される。ＷＰＩの２０％Ｗ／Ｖ懸濁液は５０℃を超える温度で変性し始めるので、この方法ではＷＰＩの濃度を１０％Ｗ／Ｖに下げる。
【００９０】
脱イオン水中Ｐｒｏｖｏｎ  １９０の１０％Ｗ／Ｖ懸濁液を周囲温度で一定の撹拌下、４〜６時間水和させる。方法１とは異なり、表面張力又はオスモル濃度の変更は必要ない。溶液を４６℃で平衡化する。１０％Ｗ／Ｖ（最終体積）のラウリン酸をそれが液化する４６℃で平衡化する。方法１に記載のＵｌｔｒａ  Ｔｕｒａｘのような適切なホモジナイザーを用いて、ホエータンパク質溶液に渦流を発生させ、ある体積の溶融ラウリン酸をこの渦流に迅速に一度に加える。ラウリン酸の添加後すぐに、ホエータンパク質とラウリン酸の合計体積に等しい体積の砕氷を加え、ホモジナイズして全液体を８℃未満に冷やす。生成物は生クリームのそれに近似した稠度を有する白色エマルジョンである。
【００９１】
上記の方法１を用いた実施例２の留出物からの遊離脂肪酸の乳化組成物は、そのままの遊離酸の約半分のＭＩＣ（効力２倍）を有していた。このエマルジョンは３０重量％の遊離酸を含有しているので、ＭＩＣアッセイの用量は、遊離酸と試験手順による乳化酸が等用量になるように、それに応じて調整されなければならない。
【００９２】
３０ｍｇ／ｍｌのＭＩＣを有するそのままの留出物と比べて、乳化留出物の観察されたＭＩＣは１５ｍｇ／ｍｌであった。これは４．５ｍｇ／ｍｌの遊離酸用量と等価なので、３．３倍して調整されなければならない。すなわち留出物の６．６倍の効力を有することになる。
【００９３】
実施例４−抗菌効力に影響を及ぼす遊離脂肪酸の組成物の物理的性質
実施例３に記載の乳化手順を用いて遊離脂肪酸の様々な組成物の抗菌特性を評価したところ、さらに三つの予期せぬ特徴が明らかになった。すなわち、
Ａ）遊離脂肪酸の乳化組成物は、それらの合同融点未満の温度ではほとんど又は全く抗菌効力を持たない。例えば、カプリン酸のエマルジョンは３１．４℃未満では抗菌効果を持たないが、それより高い温度、例えば生理的正常温度の３７℃では顕著な効果を持つ。
【００９４】
Ｂ）総体的比率によって、遊離脂肪酸の組成物は、最低融点を有する成分の融点よりも低い合同融点を有することがある。組成物の融点を降下する明らかな溶媒効果がある。
Ｃ）遊離脂肪酸の組成物がかなりの割合の非抗菌性遊離酸又は非加水分解脂質を含む場合、明らかな隔離効果がある。抗菌性脂肪酸の親油性のために、それらは残留脂質又は非抗菌性遊離酸に優先的に溶解される。それによって抗菌効果は重度に低減されるか又は失われる。
【００９５】
実施例２に記載の分別蒸留によって個々の抗菌性遊離脂肪酸を精製することは技術的に実行可能であるが、これらを市販のストックから‘バター酸’ブレンドの成分として得る方が好都合である。天然遊離脂肪酸の適切な供給元はＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．（米国ニュージャージー州）である。
【００９６】
上記の乳化法２を用いて、天然のカプリル酸、カプリン酸及びラウリン酸の別々のエマルジョンを製造した。実施例２の留出物のエマルジョンも方法２によって製造して、比較目的のために以下のアッセイで使用した。これらの‘個別’エマルジョン（及び留出物）はすべて４６℃で製造され、５％Ｗ／Ｖの個別酸を含有していた。これに対し、方法１によって製造されたエマルジョンは３０％Ｗ／Ｖを含有していた。
【００９７】
接触生存率アッセイ法を用いて、各エマルジョンの水中２％Ｗ／Ｖ懸濁液の抗菌効力を１８℃、３５℃及び４６℃で評価した。アッセイはガラス管の中で実施され、全試験成分は、接種前及び懸濁期間中（２分間）、水浴中で試験温度に平衡化された。接種材料は、Ｂｒａｉｎ  Ｈｅａｒｔ  Ｉｎｆｕｓｉｏｎ  Ｂｒｏｔｈ中で増殖された黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)の１８時間培養物である。ＣＦＵの減少を図４に示す。
【００９８】
図４には、１８℃から３５℃を通って４６℃までのアッセイ温度の変化は、ＣＦＵ（Ｎ＝３）がログ８である接種材料の生存性に何の顕著な影響も与えなかったことが示されている。カプリル酸（ＭＰ＝１６．７℃）のエマルジョンは試験した全温度で３ログの低下を示したが、カプリン酸及びラウリン酸は１８℃では何の影響も及ぼさず、カプリン酸は３５℃及び４６℃で３ログの低下を示し、ラウリン酸は４６℃でのみ有効であった。留出物は１６℃の融点を有しており、１８℃で２ログの低下、３５℃で３ログの低下、及び４６℃で４ログの低下を示した。結果は、脂肪酸は、それらの融点未満では、あったとしてもごくわずかな抗菌効果しか持たないことを示している。
【００９９】
脂肪酸の組合せと融点の降下
異なる融点の個々の脂肪酸を様々な比率で組み合わせることにより、組合せの融点に対する個々の成分の相対効果の実態を構築することが可能である。融点測定用の様々な市販装置があるが、これらの値は、５０マイクロリットルの体積の溶融組合せを９６穴マイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ  Ｎａｌｇｅｎｅ）のウェルに入れることによって測定することもできる。プレートを最も低い公知成分の融点未満に冷やし（ここでは全ウェルが固体）、該プレートを氷水浴（４℃）に浮かべて、サーモスタット制御のヒーターの助けを借りて徐々に温める。加熱速度は１℃／分以上にならないようにすべきである。注意深く観察することにより、ウェルが液体になる点は、不透明から透明に変化するために明白である。
【０１００】
図５に、カプリル酸（ＭＰ＝１６．７℃）の比率（Ｗ／Ｗ）の増加が、パルミチン酸（６３．５℃）、ミリスチン酸（５８．５℃）及びラウリン酸（４４℃）の融点に及ぼす影響を示す。
【０１０１】
関係は、一方の純粋な高融点実体と他方の純粋な低融点実体との間で直線になるであろうと予想された。驚くべきことに、関係は直線ではなく、さらに予期せぬ効果がある。これは、比較的近い融点を有する二つの脂肪酸で最も容易に実証される。この場合、カプリン酸とカプリル酸である。
【０１０２】
低融点のカプリル酸の比率が５０％から６０％を通って７０％に増加するに従って、組合せの融点は純カプリル酸の融点未満に下がる。正確な値は、
カプリン酸５０％：カプリル酸５０％    １５℃
カプリン酸４０％：カプリル酸６０％    １４℃
カプリン酸３０％：カプリル酸７０％    １２℃
カプリン酸２０％：カプリル酸８０％    １４℃
カプリン酸０％：カプリル酸１００％    １６℃
である。
【０１０３】
同様の効果が、ラウリン酸とカプリン酸の間の関係、及びカプリン酸：ラウリン酸が５０：５０混合物でカプリル酸の濃度が増加する間の関係においても明白である。これら二つは図６に示されている。ラウリン酸とカプリン酸の５０：５０混合物は２６℃の融点を有する。これはカプリン酸の融点３１．４℃よりほぼ５℃低い。カプリン酸の比率が６０％、７０％及び８０％に増大すると、融点は２７、２９及び３０℃に上昇する（カプリン酸の融点より４、２及び１℃低い）。
【０１０４】
混合物の複雑さが２個から３個の脂肪酸に増加した場合も類似の融点降下が検出可能である。図６に、ラウリン酸とカプリン酸が５０：５０混合物（融点２６℃）でカプリル酸の濃度が増加する場合の関係が示されている。最も低い融点１２℃は、５０％のカプリル酸と５０％のラウリン酸：カプリン酸（すなわちラウリン酸２５％、カプリン酸２５％）の濃度で検出できる。同じ値が６０％のカプリル酸でも存在し、７０％及び８０％のカプリル酸では１５℃に、１００％のカプリル酸では１６．７℃に上昇する。
【０１０５】
図６は、ラウリン酸及びカプリン酸の希釈剤としてのオレイン酸の使用も示している。オレイン酸は４℃の融点を有するＣ１８：１不飽和脂肪酸で、ラウリン酸及びカプリン酸の融点に対して顕著な効果を有するであろうことが予想された。この組合せでは最低融点の降下は明らかでなかったが、オレイン酸の濃度が５０％より高くなると、カプリン酸の融点に対して顕著な急激な効果がある。
【０１０６】
しかしながら、抗菌性脂肪酸の組合せにおける希釈剤としてのオレイン酸の価値は限定的である。なぜならば、オレイン酸はそれ自体で有意の抗菌効果を持たない上に、他の抗菌性脂肪酸をその中に隔離できる脂質の‘シンク’として作用するからである。
【０１０７】
図７に、カプリル酸：オレイン酸、カプリン酸：オレイン酸及びラウリン酸：オレイン酸でオレイン酸の濃度が変動するエマルジョンの抗菌効果を示す。エマルジョンは実施例３の方法２によって製造された。２分間の接触生存率アッセイ手順を用いて、各エマルジョンの水中２％Ｗ／Ｖの黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)に対する効力を評価した。試験は４５℃で実施した。結果は、三つの遊離脂肪酸（カプリル酸、カプリン酸及びラウリン酸）のそれぞれの効力は、オレイン酸の濃度が６０％Ｗ／Ｖを超えると、ひどく低下したことを示している。
【０１０８】
実施例５−遊離脂肪酸、又はそのグリセリド、又はその両方のエマルジョンの抗菌性製剤
前の実施例で示したように、乳脂質（トリグリセリド）中の脂肪酸を分解し、そして望ましくない成分を選択的に除去又は除外するためにこれらを分別することは可能である。特に、酪酸は酵素加水分解画分から分離されうる。又は、個々の遊離脂肪酸をバター酸の市販ストックから選択し、様々な比率で一緒にブレンドすることもできる。このことは、硬度（融点）、臭気（酪酸及びカプロン酸の低減）、フレーバー（低酪酸の維持）及び抗菌効果（Ｃ：６〜Ｃ：１２の比率＞５０％）といった様々な物理的及び化学的性質の操作を容易にする。
【０１０９】
また、個々の遊離脂肪酸の選択的ブレンドはホエータンパク質で乳化できることも前の実施例で示した。これらのエマルジョンは、主要乳タンパク質のカゼイン及びミルクミネラルの組成物を用いて酪農乳を再構築するのに使用することもできる。その場合、自由選択として、ラクトースを含めてもよいし又はそれを他のオリゴ糖、例えばポリオール又は長鎖多糖類（可溶性繊維）、又は代謝的に不活性な巨大分子、例えばポリエチレングリコール又はこれらの組合せと置換してもよく、ビタミン及び／又は抗酸化剤で強化することもしないこともある。あるいは、より単純に、それらは、スキムミルクを再構成するのに使用することもできる。
【０１１０】
もともと遊離脂肪酸は酸性のｐＨを有しているが、主要乳タンパク質であるカゼインは酸に不溶性のタンパク質として特徴付けられ、ｐＨ４．５未満で容易に沈殿する。遊離脂肪酸の組成物をカゼインの溶液に直接加えると、すぐに凝固する（凝乳になる）。従って、これら二つは不適合であると仮定するのは理にかなっている。実際、遊離脂肪酸をホエータンパク質中で乳化させると、それらは効果的にコンパートメント化され、それらの酸性ｐＨ効果が最小限に抑えられる。その結果、実施例３の方法１によって製造された濃縮エマルジョンの２０％Ｗ／Ｖまでの量であれば、カゼイン成分に何の悪影響もなしにスキムミルクに加えることができる。
【０１１１】
表４に、通常の酪農乳中の脂肪酸及びそれらの比率のリストと、増幅された抗菌効果を有し、ラウリン酸及びステアリン酸の含有量を増加させ、オレイン酸をわずかに減少させたおかげで通常の組成物に近い物理的特徴（硬度）も有する市販ストック由来の選択天然遊離脂肪酸の比率の一例とを示す。
【０１１２】
表４にリストされているような脂肪酸の組成物は、再構成乳に刺激的な味又は苦味を付与する。必要であれば、これは、これらの遊離酸を、Ｙａｎｇら（参考文献５）によって適切に記載された酵素的再エステル化法を用いて、モノ、ジ又はトリ−グリセリドに変換することによって改善することができる。アシルエステラーゼ酵素はリパーゼとしても作用するので、再エステル化の程度は脂肪酸とグリセロールの化学量論比に依存すること、また、混合グリセリドのタイプは、いずれの脂肪酸混合物でもモル比の特徴であり、重量パーセント比ではないことに注意すべきである。
【０１１３】
【表３】
2011505415.tif 000005
【０１１４】
再構成された抗菌性スキムミルク
オスモル濃度の調整に塩化ナトリウムを用い、実施例３の方法１によってホエータンパク質中のエマルジョンとして製造された場合、表４のカラム４の改正された遊離脂肪酸組成物は、元の乳脂の代わりにスキムミルクに加え、増強された抗菌効果を有する乳製品を達成することができる。
【０１１５】
Ｍａｒｖｅｌという商標名の市販粉末スキムミルクは、Ｐｒｅｍｉｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｏｄｓ（ＵＫ）Ｌｔｄ（英国リンカーンシャー州スポールディング）から入手できる。これを用いて、乳化遊離脂肪酸と、酸不溶性カゼインを含む他の乳成分との適合性を示すことができる。
【０１１６】
【表４】
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【０１１７】
実施例６−遊離脂肪酸又はグリセリド又はその両方の抗菌性エマルジョン
実施例４での詳細な検討に基づき、遊離脂肪酸の組成物は、市販ストックから構築でき、これらの比率は抗菌効果のために最適化できる。適切な抗菌性組成物の例を表５に示す。これは、１０℃の融点と、３：１の抗菌性脂肪酸対非抗菌性酸の比率を有する。
【０１１８】
【表５】
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【０１１９】
実施例３の方法１によってホエータンパク質で乳化した場合、該エマルジョンは、新鮮な生クリームに近似した硬度と、４．２〜４．８のｐＨを有する。方法の項に記載したＭＩＣ技術を用いると、該エマルジョンは、グラム陰性及び陽性菌、酵母及び真菌を含む広範囲の微生物種に対して強力な抗菌効果を提示することを示すことができる。このデータを表６に示す。抗生物質耐性黄色ブドウ球菌ＭＲＳＡを含め、ほとんどの微生物種は１：２４０（０．４％Ｗ／Ｖ）希釈液に感受性を有する。最大耐性種は、１：６０（１．６％Ｗ／Ｖ）のシュードモナス(Pseudomonas)及び１：１００（１％Ｗ／Ｖ）の大腸菌(E.coli)である。従って、０．５％Ｗ／Ｖ〜１０％Ｗ／Ｖ（これらの数値を含む）のエマルジョンを含有する抗菌性製剤は、望ましい抗菌効果を提供し、病原体、及び個人の正常免疫能力が何らかの理由で衰弱している場合には病原性となりうる又は病原性ではないが美容上の理由から望ましくないヒト及び動物組織の日和見コロナイザーに対して治療的及び予防的様式の両方で使用できる。
【０１２０】
【表６】
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【０１２１】
乳化遊離脂肪酸に基づく抗菌性製剤
本実施例に記載の抗菌性エマルジョンは、濃縮形又は水性製剤中０．５％Ｗ／Ｖ〜１０％Ｗ／Ｖの希釈液で使用できる。前記製剤は、賦形剤、湿潤剤、軟化剤、酸度調節剤、抗酸化剤、保存剤、香料及び／又は一緒に用いると増強効果を有するその他の抗菌物質、例えば消毒剤、防腐剤、抗生物質、抗真菌剤、抗原虫剤及び抗ウィルス剤を含むことも含まないこともある。
【０１２２】
抗菌性エマルジョンは、実施例３に記載したタイプのホモジナイザーの助けを借りて水性媒体中に分散されるべきである。分散されると、エマルジョンは時間経過とともに沈降する傾向にあるが、これはゲルを使用して媒体の粘度を増大することによって防止することができる。医薬製剤又は化粧剤に通常使用されている多くの従来型ポリマーがあり、これらは当業者には周知である。誘導体化セルロースポリマーが通常使用されており、これらは、米国Ｔｈｅ  Ｄｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙから入手できるカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピル及びヒドロキシエチルセルロースなどのメチル、エチル及びプロピル誘導体などであるが、これらに限定されない。一部の従来型賦形剤は遊離脂肪酸のエマルジョンと適合性がない。これらは、脂肪、脂質及び遊離脂肪酸に拮抗するほとんどの界面活性剤などである。脂肪酸の抗菌効果に最適なｐＨは４．５〜５．０の領域で、これは、たとえ正常の生理的ｐＨが７．０の領域にある場合でも、０．０１Ｍ〜０．１Ｍのクエン酸ナトリウムのような緩衝液を含めることにより、製剤の使用時に一時的に維持することができる。
【０１２３】
抗生物質を含む多数の従来型抗菌剤の効力及び効能は、主として標的微生物種によるこれらの化合物に対する耐性（又は部分耐性）発現のために、使用していると徐々に損なわれていく。これに関しては、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(Methicillin Resistant Staphylococcus aureus(ＭＲＳＡ))、バンコマイシン耐性腸球菌(Vancomycin Resistant Enterococcus faecalis(ＶＲＥＦ))及び多くのその他の院内感染の出現を含む多数の例があり、現代の医療業務における問題の主因となっている。
【０１２４】
その標的種に対して部分阻害効果を有する抗菌剤の例は、酵母のカンジダ・アルビカンス(Candida albicans)の感染の治療に通常使用されるアゾール化合物のクロトリマゾールである。クロトリマゾールの一つの店頭販売（ＯＴＣ）製剤は、Ｂａｙｅｒ  ＡＧ（ドイツ）社製のＣａｎｅｓｔａｎで、１％〜２％Ｗ／Ｖの抗真菌剤が配合されている。方法の項に記載されている接触生存率法を用いて、カンジダ・アルビカンスの新鮮な臨床分離株に対する１％Ｃａｎｅｓｔａｎクリームの抗菌効果を評価した。図８に、前記製剤は２分間にわたって生存率を１ログのオーダーで減少させ、遊離脂肪酸エマルジョンの１％水性分散物は生存率をそれ自体で３ログ減少させたが、０．２％Ｗ／Ｖ遊離脂肪酸エマルジョンをＣａｎｅｓｔａｎに添加すると、抗真菌効力を１から３ログに増大する影響を及ぼし、０．２％Ｗ／Ｖのエマルジョンはそれ自体で生存率を１ログ弱減少させることが示されている。
【０１２５】
遊離脂肪酸エマルジョンの単純なゲル製剤は、３％Ｗ／Ｖのカルボキシメチルセルロースポリマーを用い、これをまず５％Ｗ／ＶグリセリンＢＰで粉砕して構築することができる。８４ｍｌ（体積％）の０．１モルクエン酸ナトリウム（ｐＨ４．５）を４５℃に加熱し、これに５％Ｗ／Ｖのポリエチレングリコール９００を溶解する。これに１％Ｗ／Ｖフェノキシエタノールを加え、ホモジナイズすることによって分散させ、その後２％Ｗ／Ｖの遊離脂肪酸エマルジョンを加え、またホモジナイズして分散させる。次に、ポリエチレングリコール、フェノキシエタノール及び遊離脂肪酸エマルジョンの懸濁液を、グリセリン中の粉砕カルボキシメチルセルロースに加え、よく撹拌して分散させる。ゲルは完全に水和するのにおよそ６０分を必要とする。
【０１２６】
類似の方法を使用し、賦形剤の適合性に十分な配慮がなされるならば、遊離脂肪酸エマルジョンを配合した多様な医薬品が構築できる。例えば、ゲル、クリーム、ペースト、軟膏、ローション、泡沫、スプレー、坐剤、ペッサリー及び創傷包帯などであるが、これらに限定されない。これらは、皮膚、粘膜、眼、耳、鼻、口腔、歯、胃腸及び膣のヘルスケアにおける用途を有する。
【０１２７】
実施例７−遊離脂肪酸の非乳化組成物の抗菌用途
遊離脂肪酸のエマルジョンを栄養及びヘルスケア用途に使用することにはいくつかの望ましい理由があるが、濃縮形又は有機酸を含む有機溶媒中に希釈された非乳化油は、表面消毒、特に食品加工におけるバイオバーデンの削減に特定の用途を有する。一部の例外は、例えば帯状疱疹における緊急介入で、濃縮形の遊離脂肪酸は、一般的に日常のヘルスケア使用には攻撃的すぎる。
【０１２８】
食品加工において、特に食用動物が解体される食肉処理場では、腸内容物による新鮮屠体の汚染の可能性が大きい。そのような糞便は、しばしばサルモネラ種(Salmonella species)及び腸管出血性大腸菌(Enterohemorrhagic E.coli)Ｏ１５７（ＥＨＥＣ）によって汚染されている。そのような食品媒介病原菌は、商業的な食品加工においても家庭の台所においても大きな危険源である。ＥＨＥＣは５歳未満の小児では命に関わる可能性がある。遊離脂肪酸の抗菌性組成物は屠体処理における使用に特に適している。なぜならば、該組成物は本質的に食品グレードの‘バター酸’であり、解体したての及び精肉された牛肉、ブタ、ラム及び家禽、狩猟の獲物及び魚の表面全体にスプレーとして適用できるからである。
【０１２９】
表５に示された遊離脂肪酸組成物は油なので、新鮮な肉又は食品加工表面にスプレーして強力な消毒を達成することができる。同じ油は、オレイン酸及びラウリン酸の比率を比例的に（低融点を維持するために）削減することによって、その抗菌効果を増強するために有効にに変更されてもよい。同じく、該油は、抗菌効力を著しく喪失することなしに、濃乳酸又は他の有機酸で５０％まで希釈することもできる。
【０１３０】
牛枝肉の洗浄試験で、後期対数期の大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７（ＥＨＥＣ）培養物を感染させた新鮮牛肉の部分に遊離脂肪酸の油をスプレーした。細菌を牛肉の部分に３０分間接着させた後、スプレーを全試験部分に適用した。対照は蒸留水のみでスプレーした。６０分後、処理された牛肉の部分を浸軟し(macerated)、残留細菌について評価した。
【０１３１】
図９に、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７を用いた四つの別個の試験を図示する。水洗対照中の残留大腸菌は、１時間後、１平方インチあたり最大８ログの生存細胞数であった。処理部分は、浸軟から取り出した後、連続希釈及びプレートカウンティングで、生存細胞に４〜５（９９．９９％）ログの減少を示した。同様の結果が、サルモネラ種を含むその他の細菌についても得られた。
【０１３２】
本発明は、本明細書の上文に記載された態様に限定されず、構成及び詳細において変動しうる。
【０１３３】
【表７】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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