(57)【要約】【課題】複数の生物学的試料溶液から溶液に含まれたそれぞれの目標物質を分離するために、磁性粒子を用いて、磁性粒子と可逆的に結合されるターゲット物質を分離する。【解決手段】複数のピペットが分離可能に少なくとも２列で装着され、装着された複数のピペットにそれぞれターゲット物質を含む生物学的試料を吸入及び吐出させるためのピペットブロック；ピペットブロックを支持する固定胴体；ピペットブロックに装着された各列のピペットに磁場を印加及び解除するための磁場印加部；ピペットブロックを上下方向に移動させるピペットブロック上下移動手段；ピペットブロックを前後方向に移動させるピペットブロック前後移動手段；を含む自動精製装置を提供する。【選択図】図３
2011516075.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
磁性粒子を用いて複数の生物学的試料から磁性粒子と可逆的に結合されるターゲット物質を分離する装置において、
複数のピペットが分離可能に少なくとも２列で装着され、前記装着された複数のピペットにそれぞれターゲット物質を含む生物学的試料を吸入及び吐出させるためのピペットブロック；
前記ピペットブロックを支持する固定胴体；
前記ピペットブロックに装着された各列のピペットに磁場を印加及び解除するための磁場印加部；
前記ピペットブロックを上下方向に移動させるピペットブロック上下移動手段；及び、
前記ピペットブロックを前後方向に移動させるピペットブロック前後移動手段；
を含むことを特徴とする自動精製装置。
【請求項２】
前記ピペットブロックは、
複数個のピストンが２列に設けられたピストン固定板；
前記ピストン固定板を上下に移動させるピストン移動手段；
前記複数個のピストンの上下移動を案内するピストン案内孔が形成されたピストン案内部；及び、
２列で配列された複数個のピペットの内周面と係合するように前記ピストン案内部の下に２列で配列され、前記各々のピストン案内孔にそれぞれ連通される複数個の連結孔が形成されたピペット装着部；
を含むことを特徴とする請求項１に記載の自動精製装置。
【請求項３】
前記ピペット装着部の外周面には、前記ピペット装着部がピペットの内周面と係合するように密着リングが設けられていることを特徴とする請求項２に記載の自動精製装置。
【請求項４】
前記ピペットブロックは、
前記ピストン案内部の下端部を支持するピストン案内部支持板；
前記ピストン案内部支持板の上面に突設されて前記ピストン固定板の上下移動を案内する案内ロッド；及び、
前記ピストン固定板の下面に接触して下方に連動することによって前記ピペット装着部に装着された複数個のピペットを分離させるピペット分離部；
を含むことを特徴とする請求項２に記載の自動精製装置。
【請求項５】
前記ピペット分離部は、
前記ピストン案内部の上部に位置し前記複数個のピストンが貫通した上部脱着板；
前記ピストン案内部支持板の下部に位置し前記複数個のピペット装着部が貫通し下方に移動することによって前記ピペット装着部に装着された複数個のピペットの上端部を下方に押圧して分離させる下部脱着板；
前記上部脱着板と下部脱着板とが一定距離を保持するように連結する上下連結ロッド；
前記下部脱着板の上面に突設されて前記ピストン案内部支持板に形成された貫通孔を通じて前記ピストン案内部支持板の上部に突出した突出ロッド；及び、
下端部が前記ピストン案内部支持板の上面に支持され上端部が前記突出ロッドの上端部に支持されて、前記下部脱着板が前記ピストン案内部支持板に密着するように所定の弾性力を加えるスプリング；
を含むことを特徴とする請求項４に記載の自動精製装置。
【請求項６】
前記ピストン移動手段は、
ピストン調節モータが搭載され前記案内ロッドによって支持されるピストン調節モータ支持板；及び、
前記ピストン調節モータによって上下に移動し、下端部が前記ピストン固定板に連結されたピストン調節スクリュー；
を含むことを特徴とする請求項２に記載の自動精製装置。
【請求項７】
前記磁場印加部は、
前記ピペットブロックに装着された第１列のピペットに磁場を印加するための磁石が装着された第１列磁石装着部；
前記ピペットブロックに装着された第２列のピペットに磁場を印加するための磁石が装着された第２列磁石装着部；
前記第１列磁石装着部に装着された磁石と前記ピペットブロックに装着された第１列のピペットとの間の距離を調節するための第１列磁石装着部移動手段；及び、
前記第２列磁石装着部に装着された磁石と前記ピペットブロックに装着された第２列のピペットとの間の距離を調節するための第２列磁石装着部移動手段；
を含み、
前記第１列磁石装着部及び第１列磁石装着部移動手段によって前記第１列のピペットのそれぞれに加えられる磁場の強さ及び印加時間は、前記第２列磁石装着部及び第２列磁石装着部移動手段によって前記第２列のピペットのそれぞれに加えられる磁場の強さ及び印加時間と同一であることを特徴とする請求項１乃至請求項６のいずれかに記載の自動精製装置。
【請求項８】
前記第１列磁石装着部は、前記第１列磁石装着部移動手段によって前記第１列ピペットの中で互いに隣り合ったピペットとピペットとの間に位置させられて磁石が装着された第１列中間板と、前記第１列磁石装着部移動手段によって第１列ピペットの中で側端に位置するピペットの外側に位置させられて磁石が装着された第１列エンド板とを含み、
前記第２列磁石装着部は、前記第２列磁石装着部移動手段によって前記第２列ピペットの中で互いに隣り合ったピペットとピペットとの間に位置させられて磁石が装着された第２列中間板と、前記第２列磁石装着部移動手段によって第１列ピペットの中で側端に位置するピペットの外側に位置させられて磁石が装着された第１列エンド板とを含むことを特徴とする請求項７に記載の自動精製装置。
【請求項９】
前記第１列中間板及び第１列エンド板にはそれぞれ磁石が装着されるように前記第１列ピペットの列方向と平行な方向に貫通孔が形成され、
前記第２列中間板及び第２列エンド板にはそれぞれ磁石が装着されるように前記第２列ピペットの列方向と平行な方向に貫通孔が形成されていることを特徴とする請求項８に記載の自動精製装置。
【請求項１０】
前記第１列磁石装着部移動手段は前記ピペットブロックに連結されて磁石装着部モータによって回転する第１列ギアと、前記第１ギアが回転することによって回転する第１列回転軸とを含み、
前記第２列磁石装着部移動手段は前記ピペットブロックに連結され前記第１列ギアと噛み合わせて前記第１列ギアが回転することによって反対方向に回転する第２列ギアと、前記第２列ギアが回転することによって回転する第２列回転軸とを含み、
前記第１列磁石装着部は前記第１列回転軸に放射方向に連結され、前記第２列磁石装着部は前記第２列回転軸に放射方向に連結されていることを特徴とする請求項７乃至請求項９のいずれかに記載の自動精製装置。
【請求項１１】
前記ピペットブロックは前記固定胴体に上下で移動可能に設けられ、
前記ピペットブロック上下移動手段は、前記固定胴体に設けられる上下移動モータと、前記上下移動モータによって回転することにより前記ピペットブロックに固定された固定ナットを上下移動させる上下移動スクリューとを含み、
前記ピペットブロック前後移動手段は、前記固定胴体を前後に移動可能に支持する前後支持ロッドと、前記固定胴体を前後方向に移動させるように所定部位が前記固定胴体に取り付けられた前後移動ベルトとを含むことを特徴とする請求項１乃至請求項６のいずれかに記載の自動精製装置。
【請求項１２】
前記固定胴体の下部に位置するベースプレートを含み、
前記ベースプレートには、マルチウェルプレートキット、前記ピペットブロックに装着される複数のピペットが２列に挿着収容されるピペットラック、精製された試料を保管するための複数の試料保管用チューブが２列に挿着収容される試料保管用チューブラック、及び、前記ピペットブラックに装着された複数のピペットから捨てられる廃液を収容するための廃液筒が搭載されていることを特徴とする請求項１に記載のことを特徴とする自動精製装置。
【請求項１３】
前記ベースプレートには、２列に挿着収容される複数の高温反応用チューブを加熱するための高温反応ブロックが搭載されていることを特徴とする請求項１２に記載の自動精製装置。
【請求項１４】
前記ピペットブロック、固定胴体、ピペットブロック上下移動手段、前記ピペットブロック前後移動手段及びベースプレートが収容されるケーシングを含み、
前記ケーシング内部には滅菌のための紫外線ランプまたはオゾン発生器が設けられていることを特徴とする請求項１２に記載の自動精製装置。
【請求項１５】
請求項１乃至請求項６のいずれかに記載の自動精製装置に使用されるマルチウェルプレートキットであって、
隣り合った２列のウェルからなる複数個の単位ウェルと、前記複数個の単位ウェルの上端部を密封するフィルムとを含み、
前記単位ウェルのうち少なくとも一つを除いた残りの単位ウェルにはターゲット物質の分離のための複数の溶液が収容されつつ、同一な単位ウェルには同一な溶液が収容されることを特徴とするマルチウェルプレートキット。
【請求項１６】
前記密封された一つの単位ウェルに収容される溶液が磁性粒子が分散された水分散液である場合、前記水分散液に分散された磁性粒子はシリカでコーティングされた球形の磁性粒子であることを特徴とする請求項１５に記載のマルチウェルプレートキット。
【請求項１７】
請求項１に記載の自動精製装置を用いた生物学的試料からヘキサンを抽出する方法であって、
前記ピペットを用いて生物学的試料をマルチウェルプレートキットのウェルに注入された細胞溶解溶液と混合する段階；
前記ピペットを用いて前記細胞溶解溶液と混合された前記試料をマルチウェルプレートキットのウェルに注入された結合溶液と混合する段階；
前記ピペットを用いて前記結合溶液と混合された混合物をマルチウェルプレートキットのウェルに注入された磁性粒子の水分散液と混合する段階；
前記結合溶液と混合された混合物が前記ピペットに吸入された状態において、前記混合物が前記ピペットから排出されるように前記ピペットに排出圧力を加え、同時に前記結合溶液と混合された混合物のうち前記磁性粒子の水分散液の磁性粒子及び前記磁性粒子に付着された付着物は前記排出圧力によって排出されず前記ピペットの内部に残留されるように前記ピペットに磁場を印加する段階；
前記磁場を解除して前記磁性粒子及び前記磁性粒子に付着された付着物をマルチウェルプレートキットのウェルに注入されたアルコールを含有した洗滌溶液と混合して前記磁性粒子からヘキサンを除外した不純物を除去する段階；
前記洗滌溶液と混合された混合物が前記ピペットに吸入された状態において、前記混合物がピペットから排出されるように前記ピペットに排出圧力を加え、同時に前記洗滌溶液と混合された混合物のうちヘキサンが付着された前記磁性粒子は前記排出圧力によって排出されずピペット内部に残留されるように前記ピペットに磁場を印加する段階；
前記磁場を解除してヘキサンが付着された前記磁性粒子を高温反応凸状の高温反応用チューブに注入して前記磁性粒子に残留された洗滌溶液のうちのアルコールを除去する段階；
前記ピペットを用いてマルチウェルプレートキットのウェルに注入されたヘキサン溶出溶液と前記高温反応用チューブに注入された前記磁性粒子を混合して前記ヘキサンを分離させる段階；及び、
前記磁性粒子から分離されたヘキサンが含まれたヘキサン溶出溶液と磁性粒子が前記ピペットに吸入された状態において、ヘキサンが含まれたヘキサン溶出溶液が前記ピペットから排出されるように前記ピペットに排出圧力を加え、同時に前記磁性粒子は前記排出圧力によって排出されず前記ピペット内部に残留されるように前記ピペットに磁場を印加する段階；
を含むことを特徴とする生物学的試料からヘキサンを抽出する方法。
【請求項１８】
請求項１３に記載の自動精製装置を用いた生物学的試料からヘキサンを抽出する方法であって、
前記ピペットを用いて前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルに注入された生物学的試料を前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルに注入された細胞溶解溶液と混合する段階；
前記ピペットを用いて前記細胞溶解溶液及び細胞溶解が進まれた前記生物学的試料を前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルに注入された結合溶液と混合する段階；
前記ピペットを用いて前記結合溶液と混合された混合物を前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルに注入された磁性粒子の水分散液と混合する段階；
前記結合溶液と混合された混合物が前記ピペットに吸入されて前記廃液筒の上部に位置した状態において、前記ピストンの下部移動によって前記結合溶液と混合された混合物が前記ピペットから排出されるように前記ピペットに排出圧力を加え、同時に前記結合溶液と混合された混合物のうち前記磁性粒子の水分散液の磁性粒子及び前記磁性粒子に付着された付着物は前記排出圧力によって排出されず前記ピペットの内部に残留されるように前記磁石装着部を用いて前記ピペットに磁場を印加する段階；
前記磁場を解除して前記磁性粒子及び前記磁性粒子に付着された付着物をマルチウェルプレートキットの単位ウェルに注入されたアルコールを含有した洗滌溶液と混合して前記磁性粒子からヘキサンを除外した不純物を除去する段階；
前記洗滌溶液と混合された混合物が前記ピペットに吸入されて前記廃液筒の上部に位置した状態において、前記ピストンの下部移動によって前記洗滌溶液と混合された混合物が前記ピペットから排出されるように前記ピペットに排出圧力を加え、同時に前記洗滌溶液と混合された混合物のうちヘキサンが付着された前記磁性粒子は前記排出圧力によって排出されず前記ピペットの内部に残留されるように前記磁石装着部を用いて前記ピペットに磁場を印加する段階；
前記磁場を解除してヘキサンが付着された前記磁性粒子を高温反応用チューブに注入して前記磁性粒子に残留された洗滌溶液のうちのアルコールを除去する段階；
前記ピペットを用いて前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルに注入されたヘキサン溶出溶液と前記高温反応用チューブに注入された前記磁性粒子を混合して前記ヘキサンを分離させる段階；及び、
前記磁性粒子から分離されたヘキサンが含まれたヘキサン溶出溶液と磁性粒子が前記ピペットに吸入されて前記試料保管用チューブの上部に位置した状態において、前記ピストンの下部移動によって前記磁性粒子から分離されたヘキサンが含まれたヘキサン溶出溶液が前記ピペットから排出されるように前記ピペットに排出圧力を加え、同時に前記磁性粒子は前記排出圧力によって排出されず前記ピペットの内部に残留されるように前記磁石装着部を用いて前記ピペットに磁場を印加する段階；
を含むことを特徴とする生物学的試料からヘキサンを抽出する方法。
【請求項１９】
前記磁性粒子に残留された洗滌溶液中のアルコールを除去する段階は、
前記磁性粒子が前記ピペットに捕集された状態において、前記磁性粒子が前記高温反応用チューブに容易に注入されるように前記ピストンの上部移動によって前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルに注入されたアルコールを前記ピペットに吸入する段階；及び、
前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルから前記ピペットに吸入されたアルコールをヘキサンが付着された前記磁性粒子と共に前記高温反応用チューブに注入する段階；
を含むことを特徴とする請求項１８に記載の生物学的試料からヘキサンを抽出する方法。
【請求項２０】
前記磁性粒子に残留された洗滌溶液中のアルコールを除去する段階はヘキサンが付着された前記磁性粒子及び前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルから前記ピペットに吸入されたアルコールが前記高温反応用チューブに注入された状態において、前記高温反応ブロックを加熱したりまたは前記ピストンの上下移動によって前記高温反応用チューブに空気を流入及び流出させたりこれらを同時に行なう段階を含むことを特徴とする請求項１９に記載の生物学的試料からヘキサンを抽出する方法。
【請求項２１】
前記生物学的試料を前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルに注入された結合溶液と混合する段階の前に前記生物学的試料の細胞溶解が容易に進まれるように前記ピペットを用いて前記細胞溶解溶液と混合された生物学的試料を前記高温反応用チューブに注入する段階を含むことを特徴とする請求項１７乃至請求項２０のいずれかに記載の生物学的試料からヘキサンを抽出する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は複数の生物学的試料溶液から溶液に含まれているそれぞれの目標物質を分離するために磁性粒子を用いて、磁性粒子と可逆的に結合されるターゲット物質を分離する自動精製装置及び自動精製装置に使用されるマルチウェルプレートキットに関するものである。
【０００２】
また、本発明は前記した自動精製装置を用いて生物学的試料からヘキサンを抽出する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
生物学的試料からヘキサン、蛋白質などを分離する方法は多様な方法が開発されてきた。沈殿法、液状抽出法、電気泳動、クロマトグラフィなどが伝統的に多く使用されてきて、このような操作をより簡単にするために固状抽出法が開発されてきた。この固状抽出法は選択性を有する固体を用いたりまたは高度の選択性を有するリガンドを固体上につけて製造された固体粒子を用いる方法である。この方法は先ずターゲット物質が選択的に付着される溶液に生物学的試料を溶解した後、ターゲット物質を固体上に付着させて固体を溶液から分離させ、固体上に残っている残余液体を洗滌して他の不純物を除去した後、望ましいターゲット物質が落ちる溶液で再び離し出す原理である。個状抽出法はカラムに固体粒子を充填したりフィルタ用膜をカラムに充填して使用してきた。この場合、付着容量を増やすために広い表面積を有する微細な粒子や試料が少ない場合にフィルタ形態の膜を使用する。しかし、このような微細粒子で充填したりフィルタ形態の膜を使用すれば微細な空隙間に溶液が非常に徐々に流れる問題点があった。従って、溶液を速く流すために遠心分離機を用いて重力値を増やしたり加圧または真空をかけて圧力差を与える方式を使用している。しかし、遠心分離を用いる方法は自動化をするには難しい面がたくさんある。加圧や真空をかける方法は比較的簡単に自動化することができるが、複数の試料を扱う場合、試料間の溶液の流れ速度の差異によって試料間の差異が生じる問題点がある。
【０００４】
このような問題を解決するために表面積の広い微細な磁性粒子を用いれば、溶液のサスペンションの状態において早く生化学物質を付着させ、磁場を加えてターゲット物質が付着された磁性粒子を凝集させた後、溶液を除去して与えられるため簡単に分離することができて１９７０年代から技術が開発されてきた（ＵＳＰ  ３，９７０，５１８  ＵＳＰ３，９８５，６４９）。この方式は簡単に自動化することができて磁性粒子を使用しターゲット物質を分離する多様な装備が開発されてきた。
【０００５】
このように磁性粒子を用いて生化学的混合液からターゲット物質を分離する方法は、進行順序から見れば大きく付着段階、溶液除去及び洗滌段階、ターゲット物質の脱着段階の３段階で分けられる。自動化のためにはこのような段階を行なう具体的な操作方法を行なわなければならない。このような段階は複雑にみえるが、磁性粒子の形態として分けてみれば２つの操作で圧縮される。先ず、磁性粒子を均一に溶液にサスペンションをさせる操作ともう一つは溶液にサスペンションされた磁性粒子を凝集させる操作で帰結される。
【０００６】
それでは、磁性粒子を溶液に均一にサスペンションする操作方法は如何なる方法が使用されるのか。通常的に溶液を含んでいる容器を強く振って過流を作ってくれる方法が使用される。もう一つの方法としては溶液をロッドの手段でかき混ぜて過流を形成する方法があり、最後に溶液を繰り返して吐出、吸入して過流を形成する方法がある。
【０００７】
溶液にサスペンションされた磁性粒子を凝集させる操作としては基本的に磁場を加えることである。このような磁場は永久磁石によるものと電磁石による方法がある。通常的に永久磁石は電磁石とは異なって熱が出なくても強力な磁場を加えられるという長所がある。しかし、永久磁石は電磁石のように磁束をＯｎ／Ｏｆｆスイッチングすることができないため、磁性粒子溶液と磁石との間を物理的に移動させてスイッチングをしなければならないという点から自動化に不利な点がある。
【０００８】
磁場を加える位置に応じて磁性粒子が凝集される位置が変わるが、このような磁性粒子の凝集位置は溶液を効率的に除去するに重要であるため、このような位置に関する技術が開発されている。磁性粒子を用いた分離装置は主に抗原抗体反応を用いた診断検査装備とヘキサン抽出装備にたくさん応用して開発された。９６ウェル（well）プレートに磁性粒子を底に凝集させ再びサスペンションさせる方法がパスツールサノフィダイアノスチック社から開発された（ＵＳＰ５５５８８３９）。この方法は底にある溶液を完全に除去するためには底の磁性粒子も損失が生じる問題があった。このような問題を解決するために磁石を容器の側面に位置させ磁石や容器を回転させてサスペンションをさせ停止させると、壁面に磁性粒子を凝集させることができる方法が開発された（ＷＯ９６／２６０１１）。日立では一定な磁場と交互にする磁場を用いて凝集とサスペンションができるシステムを開発した（ＵＳＰ５７７０４６１）。この方法は一定な磁場で磁性粒子をチューブの壁面につけて凝集させ洗滌し、交互にする磁場を用いてサスペンションさせる方法である。アマシャム（Amersham International plc）社では容器と垂直方向にドーナツ形態の磁石を移動させ磁場をスイッチングするシステムを開発して（ＵＳＰ  ５８９７７８３）チューブの内壁に円形で磁性粒子を凝集させる方法を開発した。このような方法は全てが反応容器の中に磁性粒子を凝集させ溶液を除去し新しい溶液を入れて再びサスペンションさせる方法に関するものである。
【０００９】
このような方法に対比して溶液が込められている反応容器間を磁性粒子を移動させサスペンションし再び移動させる方法がラブシステム（Labsystem）社によって開発された。このシステムは釣竿のようにそれぞれ上下運動ができるロッドとロッドケースから構成される。ロッドの下端に永久磁石が設けられており、ロッドケースは磁力が透過されるプラスチックでロッドを溶液と接触されないように密封している（ＵＳＰ６０４０１９２）。作動方式は磁石ロッドが抜けている状態でロッドケースを磁性粒子が入っている反応溶液に入れて上下運動を行い磁性粒子をサスペンションさせて反応をさせた後、磁石ロッドをロッドケースの最後まで押し入れて磁石ロッドの磁場によって磁性粒子が磁石ロッドケースの表面に凝集するようにすれば所望のターゲット物質が付着された磁性粒子を磁石ロッドとロッドケースを共に次の溶液に移動させることができる。移動した後に磁石ロッドをロッドケースから抜けて磁場を除去した後、ロッドケースを上下に運動させると凝集された磁性粒子を新しい溶液にサスペンションされる方法である。同じ方式の自動ヘキサン抽出機が（株）バイオネックス社から開発された（韓国特許１０−０４８３６８４）。これは前記のＵＳＰ  ６０４０１９２特許と同じ方式で磁性粒子を多様な磁石ロッドが入ったロッドケースにつけて他溶液に移動サスペンションさせヘキサンを抽出する方式である。しかし、ラムシステム社の技術やバイオネックス社の技術は全てが１列からなる試料を処理するものになっており、複数の試料を処理するには限界がある。従って、９６ウェルプレートに込まれている試料のような複数の試料を処理するための自動抽出装備としてコアバイオシステムで２次元アレイからなるロッドとロッドケースを使用する技術が開発された（韓国特許１０−０７２００４４）。前記の３つの技術はそれぞれの溶液を一定位置に設けて選択的付着と洗滌過程を経て最終的に最後の溶液でターゲット物質を磁性粒子から分離させて望む物質を分離する方法である。それでカートリッジにある最後の溶液から試料を望む保管容器に再び移すという煩わしさがある。また、ロッドケースにターゲット物質を付着して移動するため、初期セットするときに表面が汚染にならないように注意しなければならなく、それぞれのロッドケースと溶液カートリッジを一つずつ一々セットするに煩わしい面がある。
【００１０】
最も柔軟性に優れた方法としては磁性粒子と溶液を全て望むことで移動させることができる方法である。ラブシステム社では米国特許５，６４７，９９４（優先日１９９３年６月２１日）からのように一回用ピペット形態を用いた磁性粒子を分離する様々な方法について記述している。この方法は米国特許５，７０２，９５０や米国特許６，１８７，２７０のようにピペットに磁性粒子を凝集させる方法に関する先行技術である。ここで、ピペットに磁場を加える方法で提示されたものはピペットの外部につまりドーナツ形態の磁石にピペットが貫通するように設けて磁石を上下に移動させて磁場をスイッチングしたり又は固定されたドーナツ形態の磁石とピペットとの間に磁場を遮断する金属を移動させて磁場をスイッチングする方法が提示されている。なお、米国特許５，６４７，９９４ではピペットの中央に溶液と接触されないようにロッドケースに保護する磁石ロッドを上下に移動させて磁場をスイッチングして磁性粒子を分散／収集することを最初に提示している。これは同じ会社で登録した米国特許６，０４０，１９２の基本になる先行技術である。米国特許５，７０２，９５０は磁性粒子を含んである１番目の溶液から磁性粒子を分離する方法と磁性粒子を２番目の溶液に伝達する方法に対する請求項１とこれのための手段として請求項２を主に請求範囲として扱っている。請求項１は先ず分離チャンバーを提供することであって、分離チャンバーと定義した管形は直列にジェットチャネルに連結されていて、ジェットチャネルは管の端の流れ出入口と定義され分離チャンバーより小さい直径を有するもの；磁場を提供する磁石要素を提供するもの；分離チャンバーの中に流れ出入口を介してジェットチャネルを通じて１番目溶液を吸入するもの；磁性要素を分離チャンバーの外側が隣り合った第１位置と分離チャンバーの中の第２位置に整列するもの；第１位置と磁性要素の収集表面に整列したとき、第２位置に整列したとき、磁性要素の磁場の影響下で磁性粒子が１番目の溶液から分離チャンバーの内側の一箇所に収集するように磁性要素を活性化させるもの；磁性要素を活性化させた後、ジェットチャネルを介して流れ出入口に１番目の溶液を除去する段階；１番目の溶液を除去した後にジェットチャネルを介して流れ出入口に２番目の溶液を引き込まれる段階；２番目の溶液を引き込まれた後、第１位置と磁性要素の収集表面に整列したとき、第２位置に整列したとき、磁性要素の磁場の影響下で磁性粒子がそれ以上分離チャンバーの内側の一箇所に保持しないように磁性要素を不活性化させる段階から構成されている。このような段階を行う分離手段の請求項２は管形の請求範囲としている。構成要素は一つの管形であって直列にジェットチャネルに連結されていて、ジェットチャネルは管の端の流れ出入口と定義され、分離チャンバーより小さい直径を有するもの；磁性要素として第１位置は分離壁の外側に隣り合った所であり、第２位置は分離チャンバーの範囲内にあるものであって第１位置にあるときは磁場の影響で磁性粒子を収集することができる位置であり、第２位置にある場合は磁性粒子をそれ以上取っておけないもので整列になったもの；管形はシリンダー形の分離チャンバーと直列に連結された２番目の部分であるが、分離チャンバーはジェットチャネルと離れており、シリンダーチャネルは移動可能なピストンが装着されて分離チャンバーで液体を吸い上げて押し出せる構造からなるもので構成されている。プレシーズンシステムサイエンス社では磁性粒子を用いた免疫化学分析機に用いられる磁性物質を着脱の方法で米国特許５，７０２，９５０（優先日１９９４年６月１４日）で提示している。この技術を用いた分析機は米国特許６，２３１，８１４から分離出願された。この方法もピペットに磁性粒子をつける方法であって、基本的に原理は米国特許５，６４７，９９４と同じである。異なる点は磁石をピペットの一方向でつけたり離したりしてチップの一側方向の磁場を制御する方法である。この特許の請求項は磁性物質を引きつけて放す調節方法であって次の段階から構成される。容器から磁性粒子を含んでいる液体を吸入又は排出できる液体入口を含む液体吸入ラインを有しているピペット手段と、ピペット手段の液体吸入ラインの外部表面に合わせて付着が可能である磁石胴体、または磁石胴体を提供するもの；ピペット手段が引きつけて放す調節をすることにおいて磁性物質の含有溶液を吸入し、保持するものと磁石の磁場によって液体吸入ラインにある磁性物質をピペット手段の内側壁に引きつけて保持するものと反対に磁石による磁場を妨げることにより溶液吸入ラインの溶液内にある磁性物質を放す、それで磁性物質と溶液が共に溶液吸入口の外に出る方法である。
【００１１】
ロシュダイアノスチック社では一回用チップに永久磁石を接近させて磁性粒子を付着し磁性粒子を凝集させて溶液から分離する方法を提示した（ＵＳＰ  ６，１８７，２７０）。この装備はポンプに連結されたピペット、磁石、そしてピペットを磁石側や反対側に移送するための手段、又は磁石をピペット側と反対方向に移送するように構成されている。米国特許６，１８７，２７０は前記発明と類似した発明であって、主要請求範囲は液体内のマイクロ磁性粒子を分離する手段として次のようなものから構成された。請求項１は液体内のマイクロ磁性粒子を分離する手段であって、マイクロ磁性粒子を含有している液体を内部に有しているピペットとしてピペットの長手方向に回転が可能であるもの；ピペットに連結されているポンプ；ピペットの外部に磁場を加えて位置することができてマイクロ磁性粒子をピペットの内部壁面につけられる磁石；ピペットと磁石が相互間の方向に少なくとも何れか一つが動くようになっている移動手段である。請求項２では液体内のマイクロ磁性粒子を分離する手段であって、マイクロ磁性粒子を含有している液体を内部に有しているピペット；ピペットに連結されているポンプ；ピペットの外部に磁場を加えて位置することができてマイクロ磁性粒子をピペットの内部壁面につけられる磁石；ピペットと磁石が相互間の方向に少なくとも何れか一つが動くようになっている移動手段である。但し、この際、磁石はピペットの長手方向に動くようになっているものであって、請求項１のピペットの回転がない代わりに移動手段が磁石が長手方向に動くことを特徴とすることを請求している。３番目の独立項も移動手段が磁石とピペットが相対的に動いてマイクロ磁性粒子を凝集離脱させることを提示している。
【００１２】
このような構造は全て一回用ピペットを用いてチップの内部にマイクロ磁性粒子をつけて溶液と分離し他の溶液に懸濁させることができる方法を提示しているが、複数の試料を簡単でありながら速く処理するには限界点を有している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は複数の生物学的試料から望む物質を磁性粒子を用いて簡単で速く分離する自動精製装備に関するものである。磁性粒子を用いて生物学的試料を処理する装備は様々な製品と技術が開発されてきたが、複雑な構造によって装備が大部分大きな外形サイズを有していて、装備の価格も高価であり、使用することにおいて複雑な問題点があった。特に、磁性ナノ粒子を用いた自動精製装備に使用される消耗品は一試料当たり一つの溶液ブロックと精製用ピペットを使用しなければならないため、消耗品の価格が高価である問題点があり、複数の試料を処理するときに一々装備に各種消耗品を設けなければならないため、セットすることに長時間がかかり、なお、精製が終わった後に精製されたヘキサンを精製ブロックから保管容器に移すという不便な点があって手動でヘキサンを精製することに比べて大きな長所がなかった。従って、開発された装備が広く補給されず大部分の実験室で相変わらず遠心分離機などを用いて手動でヘキサンを精製していてヘキサン精製の再現性に劣り、まだ実験室でヘキサンなどを精製するに高級人力が長時間を費やすという問題点がある。本発明ではこのような問題点を解決するために、磁性粒子を含む各種溶液が入っている一つのマルチウェルブロックでキットを構成して速くて簡単に試薬を装着することができ、自動化装備のサイズを小さくしながらも複数の試料を処理することができるように２列で装着される複数個のピペットを使用し、対称的に回転して各列のピペットに同一な時間に同一なサイズの磁場を加えるようにしてピペット挿入から試料保管容器に最終産物を分注するまでの全過程を自動化させることにより速くて使用が簡単でありながら経済的に使用することができるマルチウェルプレートキットと自動精製装置を提供しようとすることである。
【００１４】
また、本発明はヘキサン溶出過程においてアルコールがヘキサンと共に溶出されることにより重合酵素連鎖反応やリアルタイム重合酵素連鎖反応、シーケンシング反応などに使用される酵素と直接又は間接的な反応を起こしてこれら酵素の性能低下、敏感度低下などの問題点を起こすことを防止することができるヘキサン抽出方法を提供しようとする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明は磁性粒子を用いて複数の生物学的試料から磁性粒子と可逆的に結合されるターゲット物質を分離する装置において、複数のピペットが分離可能に少なくとも２列で装着され、前記装着された複数のピペットにそれぞれターゲット物質を含む生物学的試料を吸入及び吐出させるためのピペットブロック；前記ピペットブロックを支持する固定胴体；前記ピペットブロックに装着された各列のピペットに磁場を印加及び解除するための磁場印加部；前記ピペットブロックを上下方向に移動させるピペットブロック上下移動手段；前記ピペットブロックを前後方向に移動させるピペットブロック前後移動手段；を含むことを特徴とする自動精製装置に関するものである。
【００１６】
本発明において、 前記ピペットブロックは、複数個のピストンが２列で付着するピストン固定板；前記ピストン固定板を上下に移動させるピストン移動手段；前記複数個のピストンの上下移動を案内するピストン案内孔が形成されるピストン案内部；２列で配列された複数個のピペットの内周面と係合するように前記ピストン案内部の下に２列で配列され、前記各々のピストン案内孔にそれぞれ連通される複数個の連結孔が形成されるピペット装着部；とが含まれる。また、前記ピペット装着部の外周面には、前記ピペット装着部がピペットの内周面と係合するように密着リングが設けられている。
【００１７】
本発明において、前記ピペットブロックは、前記ピストン案内部の下端部を支持するピストン案内部支持板；前記ピストン案内部支持板の上面に突設されて前記ピストン固定板の上下移動を案内する案内ロッド；前記ピストン固定板の下面に接触されて下方に連動することによって前記ピペット装着部に装着された複数個のピペットを分離させるピペット分離部；とが含まれるが、前記ピペット分離部は、前記ピストン案内部の上部に位置し前記複数個のピストンが貫通される上部脱着板；前記ピストン案内部支持板の下部に位置し前記複数個のピペット装着部が貫通され下方に移動することによって前記ピペット装着部に装着された複数個のピペットの上端部を下方に押圧して分離させる下部脱着板；前記上部脱着板と下部脱着板とが一定距離を保持するように連結する上下連結ロッド；前記下部脱着板の上面に突設されて前記ピストン案内部支持板に形成された貫通孔を通じて前記ピストン案内部支持板の上部に突出される突出ロッド；下端部が前記ピストン案内部支持板の上面に支持され上端部が前記突出ロッドの上端部に支持されて前記下部脱着板が前記ピストン案内部支持板に密着するように所定の弾性力を加えるスプリング；とが含まれる。
【００１８】
本発明において、前記ピストン移動手段は、ピストン調節モータが搭載され前記案内ロッドによって支持されるピストン調節モータ支持板；前記ピストン調節モータによって上下に移動し、下端部が前記ピストン固定板に連結されるピストン調節スクリュー；とが含まれるが、前記磁場印加部は、前記ピペットブロックに装着された第１列のピペットに磁場を印加するための磁石が装着される第１列磁石装着部；前記ピペットブロックに装着された第２列のピペットに磁場を印加するための磁石が装着される第２列磁石装着部；前記第１列磁石装着部に装着された磁石と前記ピペットブロックに装着された第１列のピペットとの間の距離を調節するための第１列磁石装着部移動手段；前記第２列磁石装着部に装着された磁石と前記ピペットブロックに装着された第２列のピペットとの間の距離を調節するための第２列磁石装着部移動手段；を含み、前記第１列磁石装着部及び第１列磁石装着部移動手段によって前記第１列のピペットのそれぞれに加えられる磁場の強さ及び時間は前記第２列磁石装着部及び第２列磁石装着部移動手段によって前記第２列のピペットのそれぞれに加えられる磁場の強さ及び時間と同一であり得る。
【００１９】
本発明において、前記第１列磁石装着部は前記第１列磁石装着部移動手段によって前記第１列ピペットの中、互いに隣り合ったピペット（pipette）とピペットとの間に位置し磁石が装着される第１列中間板、及び前記第１列磁石装着部移動手段によって第１列ピペットの中、側端に位置するピペットの外側に位置し磁石が装着される第１列エンド板を含み、前記第２列磁石装着部は前記第２列磁石装着部移動手段によって前記第２列ピペットの中、互いに隣り合ったピペットとピペットとの間に位置し磁石が装着される第２列中間板、及び前記第２列磁石装着部移動手段によって第１列ピペットの中、側端に位置するピペットの外側に位置し磁石が装着される第１列エンド板とが含まれ、前記第１列中間板及び第１列エンド板にはそれぞれ磁石が装着されるように前記第１列ピペットの列方向と平行な方向で貫通孔が形成され、前記第２列中間板及び第２列エンド板にはそれぞれ磁石が装着されるように前記第２列ピペットの列方向と平行な方向で貫通孔が形成される。
【００２０】
本発明において、前記第１列磁石装着部移動手段は前記ピペットブロックに連結されて磁石装着部モータによって回転する第１列ギアと、前記第１ギアが回転することによって回転する第１列回転軸を含み、前記第２列磁石装着部移動手段は前記ピペットブロックに連結され前記第１列ギアと噛み合わせて前記第１列ギアが回転することによって反対方向に回転する第２列ギアと、前記第２列ギアが回転することによって回転する第２列回転軸を含み、前記第１列磁石装着部は前記第１列回転軸に放射方向に連結されて回転し、前記第２列磁石装着部は前記第２列回転軸に放射方向に連結されて回転することができる。
【００２１】
本発明において、前記ピペットブロックは前記固定胴体に上下で移動可能に設けられ、前記ピペットブロック上下移動手段は前記固定胴体に設けられる上下移動モータと、前記上下移動モータによって回転することにより前記ピペットブロックに固定された固定ナットを上下移動させる上下移動スクリューを含み、前記ピペットブロック前後移動手段は前記固定胴体が前後で移動可能に支持する前後支持ロッドと、前記固定胴体を前後方向に移動させるように所定部位が前記固定胴体に付着される前後移動ベルトが含まれ、前記固定胴体の下部に位置するベースプレートを含み、前記ベースプレートにはマルチウェルプレートキット、前記ピペットブロックに装着される複数のピペットが２列に挿着収容されるピペットラック、精製された試料を保管するための複数の試料保管用チューブが２列に挿着収容される試料保管用チューブラック及び前記ピペットブラックに装着された複数のピペットから捨てられる廃液を収容するための廃液筒が搭載され、前記ベースプレートには２列に挿着収容される複数の高温反応用チューブを加熱するための高温反応ブロックが搭載され、また前記ピペットブロック、固定胴体、ピペットブロック上下移動手段、前記ピペットブロック前後移動手段及びベースプレートが収容されるケーシングを含み、前記ケーシング内部には滅菌のための紫外線ランプまたはオゾン発生器が設けられる。
【００２２】
一方、本発明は前記何れかの１項の自動精製装置の分離に使用されるマルチウェルプレートキットであって、隣り合った２列のウェルからなる複数個の単位ウェルと、前記複数個の単位ウェルの上端部を密封するフィルムを含み、前記単位ウェルのうち少なくとも一つを除いた残り単位ウェルにはターゲット物質の分離のための溶液が収容されるが、前記同一な単位ウェルには同一な溶液が収容されることを特徴とするマルチウェルプレートキットに関するものであるが、前記密封された一つの単位ウェルに収容される溶液が磁性粒子が分散された水分散液である場合、前記水分散液に分散された磁性粒子はシリカでコーティングされた球形の磁性粒子であり得る。
【００２３】
一方、本発明は前記自動精製装置を用いた生物学的試料からヘキサンを抽出する方法であって、前記ピペットを用いて生物学的試料をマルチウェルプレートキットのウェルに注入された細胞溶解溶液と混合する段階；前記ピペットを用いて前記細胞溶解溶液と混合された前記試料をマルチウェルプレートキットのウェルに注入された結合溶液と混合する段階；前記ピペットを用いて前記結合溶液と混合された混合物をマルチウェルプレートキットのウェルに注入された磁性粒子の水分散液と混合する段階；前記結合溶液と混合された混合物が前記ピペットに吸入された状態において、前記混合物が前記ピペットから排出されるように前記ピペットに排出圧力を加え、同時に前記結合溶液と混合された混合物のうち前記磁性粒子の水分散液の磁性粒子及び前記磁性粒子に付着された付着物は前記排出圧力によって排出されず前記ピペットの内部に残留されるように前記ピペットに磁場を印加する段階；前記磁場を解除して前記磁性粒子及び前記磁性粒子に付着された付着物をマルチウェルプレートキットのウェルに注入されたアルコールを含有した洗滌溶液と混合して前記磁性粒子からヘキサンを除外した不純物を除去する段階；前記洗滌溶液と混合された混合物が前記ピペットに吸入された状態において、前記混合物がピペットから排出されるように前記ピペットに排出圧力を加え、同時に前記洗滌溶液と混合された混合物のうちヘキサンが付着された前記磁性粒子は前記排出圧力によって排出されずピペット内部に残留されるように前記ピペットに磁場を印加する段階；前記磁場を解除してヘキサンが付着された前記磁性粒子を高温反応凸状の高温反応用チューブに注入して前記磁性粒子に残留された洗滌溶液のうちのアルコールを除去する段階；前記ピペットを用いてマルチウェルプレートキットのウェルに注入されたヘキサン溶出溶液と前記高温反応用チューブに注入された前記磁性粒子を混合して前記ヘキサンを分離させる段階；前記磁性粒子から分離されたヘキサンが含まれたヘキサン溶出溶液と磁性粒子が前記ピペットに吸入された状態において、ヘキサンが含まれたヘキサン溶出溶液が前記ピペットから排出されるように前記ピペットに排出圧力を加え、同時に前記磁性粒子は前記排出圧力によって排出されず前記ピペット内部に残留されるように前記ピペットに磁場を印加する段階；を含むことを特徴とする生物学的試料からヘキサンを抽出する方法に関するものである。
【００２４】
一方、本発明は前記自動精製装置を用いた生物学的試料からヘキサンを抽出する方法であって、前記ピペットを用いて前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルに注入された生物学的試料を前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルに注入された細胞溶解溶液と混合する段階；前記ピペットを用いて前記細胞溶解溶液及び細胞溶解が進まれた前記生物学的試料を前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルに注入された結合溶液と混合する段階；前記ピペットを用いて前記結合溶液と混合された混合物を前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルに注入された磁性粒子の水分散液と混合する段階；前記結合溶液と混合された混合物が前記ピペットに吸入されて前記廃液筒の上部に位置した状態において、前記ピストンの下部移動によって前記結合溶液と混合された混合物が前記ピペットから排出されるように前記ピペットに排出圧力を加え、同時に前記結合溶液と混合された混合物のうち前記磁性粒子の水分散液の磁性粒子及び前記磁性粒子に付着された付着物は前記排出圧力によって排出されず前記ピペットの内部に残留されるように前記磁石装着部を用いて前記ピペットに磁場を印加する段階；前記磁場を解除して前記磁性粒子及び前記磁性粒子に付着された付着物をマルチウェルプレートキットの単位ウェルに注入されたアルコールを含有した洗滌溶液と混合して前記磁性粒子からヘキサンを除外した不純物を除去する段階；前記洗滌溶液と混合された混合物が前記ピペットに吸入されて前記廃液筒の上部に位置した状態において、前記ピストンの下部移動によって前記洗滌溶液と混合された混合物が前記ピペットから排出されるように前記ピペットに排出圧力を加え、同時に前記洗滌溶液と混合された混合物のうちヘキサンが付着された前記磁性粒子は前記排出圧力によって排出されず前記ピペットの内部に残留されるように前記磁石装着部を用いて前記ピペットに磁場を印加する段階；前記磁場を解除してヘキサンが付着された前記磁性粒子を高温反応用チューブに注入して前記磁性粒子に残留された洗滌溶液のうちのアルコールを除去する段階；前記ピペットを用いて前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルに注入されたヘキサン溶出溶液と前記高温反応用チューブに注入された前記磁性粒子を混合して前記ヘキサンを分離させる段階；前記磁性粒子から分離されたヘキサンが含まれたヘキサン溶出溶液と磁性粒子が前記ピペットに吸入されて前記試料保管用チューブの上部に位置した状態において、前記ピストンの下部移動によって前記磁性粒子から分離されたヘキサンが含まれたヘキサン溶出溶液が前記ピペットから排出されるように前記ピペットに排出圧力を加え、同時に前記磁性粒子は前記排出圧力によって排出されず前記ピペットの内部に残留されるように前記磁石装着部を用いて前記ピペットに磁場を印加する段階；を含むことを特徴とする生物学的試料からヘキサンを抽出する方法に関するものである。
【００２５】
本発明において、前記磁性粒子に残留された洗滌溶液中のアルコールを除去する段階は、前記磁性粒子が前記ピペットに捕集された状態において、前記磁性粒子が前記高温反応用チューブに容易に注入されるように前記ピストンの上部移動によって前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルに注入されたアルコールを前記ピペットに吸入する段階；前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルから前記ピペットに吸入されたアルコールをヘキサンが付着された前記磁性粒子と共に前記高温反応用チューブに注入する段階；とが含まれるが、前記磁性粒子に残留された洗滌溶液中のアルコールを除去する段階はヘキサンが付着された前記磁性粒子及び前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルから前記ピペットに吸入されたアルコールが前記高温反応用チューブに注入された状態において、前記高温反応ブロックを加熱したりまたは前記ピストンの上下移動によって前記高温反応用チューブに空気を流入及び流出させたりこれらを同時に行なう段階を含み、前記生物学的試料を前記マルチウェルプレートキットの単位ウェルに注入された結合溶液と混合する段階の前に前記生物学的試料の細胞溶解が容易に進まれるように前記ピペットを用いて前記細胞溶解溶液と混合された生物学的試料を前記高温反応用チューブに注入する段階を含む。
【発明の効果】
【００２６】
本発明は磁性粒子を用いて、磁性粒子と可逆的に結合されるターゲット物質を分離するための装備であって、複数の生物学的試料を処理するに少なくとも２列で構成された複数個のピペットを使用することにより１列からなる既存の装備に比べて小さいサイズの装備として２倍の数の試料を全自動で処理することができる。
【００２７】
本発明は９６ウェルプレートのようなマルチウェルプレートを使用して試料及び試薬の装着が簡単で早くなされるという長所がある。
【００２８】
本発明のピペットは４つの各機能に最適化されたものを使用して多様な容量の試料から速く磁性粒子を分離し分散させることができて速く自動精製をすることができる。
【００２９】
本発明はピペットの装着と離脱が自動になり、使用後に汚染されたピペットを高温反応チューブラックに挿着して共に廃棄することにより、使用者が病原菌に接触することを防止し、装備内部に殺菌装置を設けて衛生的に病原性試料を扱うことができるという長所がある。
【００３０】
本発明は生物学的試料や臨床試料を処理するとき、生物学的用クリーンベンチで９６ウェルプレートの上部に付着されたフィルムを最小限の孔をチップで直接あけて試料を注入して直ちに装着するため、試料と空気との接触が最少化されて汚染を防止することができる。
【００３１】
本発明は磁石装着部によって磁石をピペットの両側に近接して位置させることによりピペットに印加される磁場の強度をさらに大きくした。従って、磁石装着部による磁場の印加時にヘキサンが結合された磁性粒子がピペットの内面の片側のみに付着されることなくピペットの内面の周りに均一に分散及び付着されて効率的に捕集されるから、磁性粒子と結合されたヘキサンが損失されず高純度で分離可能になる長所がある。
【００３２】
磁性粒子に残存するアルコールがヘキサン溶出溶液を用いたヘキサン溶出過程においてヘキサンと共に溶出されると、重合酵素連鎖反応やリアルタイム重合酵素連鎖反応、シーケンシング反応などに使用される酵素と直接又は間接的な反応を起こしてこれら酵素の性能低下、敏感度低下などの要因で作用するようになる。本発明は磁性粒子に微量残存したり残存する可能性のある洗滌溶液中のアルコールをヘキサン溶出溶液を用いたヘキサン溶出過程の前に完全に除去することができる長所がある。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】実施例１の主要部の概略図である。
【図２】実施例１の主要部の概略図である。
【図３】ケーシングが一部除去された実施例１の概略図である。
【図４】実施例１のベースプレートの斜視図である。
【図５】実施例１のベースプレートの使用状態図である。
【図６】図５の高温反応用チューブの装着図である。
【図７】実施例１のベースプレートがケーシングに引き入られる状態図である。
【図８】実施例１のマルチウェルプレートキットの斜視図である。
【図９】実施例１を用いて血液からＤＮＡ抽出結果を示す図面である。
【図１０】実施例１を用いて血液から抽出されたＤＮＡを用いた重合酵素連鎖反応の結果を示した図面である。
【図１１】実施例２の主要部の概略図である。
【図１２】実施例２の主要部の概略図である。
【図１３】実施例２の主要部の概略図である。
【図１４】実施例４の流れ図である。
【図１５】リアルタイムの重合酵素連鎖反応の実験液に各濃度別にエチルアルコールを混合した後、行なったリアルタイムの重合酵素連鎖反応のグラフである。
【図１６】実施例４の実験方法によって抽出したＤＮＡ（＃１、＃２、＃３）を用いてリアルタイムの重合酵素反応させることを示したグラフである。
【符号の説明】
【００３４】
１００：ピペットブロック
２００：固定胴体
３００：ケーシング
４００：ベースプレート
【発明を実施するための形態】
【００３５】
以下図面を参照して、本発明の一実施例について詳細に説明する。
【００３６】
＜実施例１＞
【００３７】
実施例１は本発明による自動精製装置、つまり磁性粒子を用いて複数の生物学的試料から磁性粒子と可逆的に結合されるターゲット物質を分離する装置に関するものである。図１及び図２は実施例１の主要部の概略図を、図３はケーシングが一部除去された実施例１の概略図を、図４は実施例１のベースプレートの斜視図を、図５は実施例１のベースプレートの使用状態図を、図６は図５の高温反応用チューブの装着図を、図７は実施例１のベースプレートがケーシングに引き込まれる状態図を、図８は実施例１のマルチウェルプレートキットの斜視図を、図９は実施例１を用いて血液からＤＮＡ抽出した結果図を、図１０は実施例１を用いて血液から抽出されたＤＮＡを用いた重合酵素連鎖反応の結果図を示す。
【００３８】
実施例１はピペットブロック１００、固定胴体２００、磁場印加部（図面符号未付与）、ピペットブロック上下移動手段（図面符号未付与）、ピペットブロック前後移動手段（図面符号未付与）、ケーシング３００、ベースプレート４００を含む。
【００３９】
図１を参照すれば、ピペットブロック１００はピストン固定板１１０を有する。図２及び図３を共に参照すれば、ピストン固定板１１０の下面には複数個のピストン１２０が２列で付着される。複数個のピストン１２０は第１列ピストン１２１（図２参照）及び第１列ピストン１２１（図２参照）と同一な数の第２列ピストン１２２（図３参照）からなる。例えば、第１列ピストン１２１（図２参照）及び第２列ピストン１２２（図３参照）はそれぞれ８または１２であり得る。
【００４０】
図１乃至図３を参照すれば、ピペットブロック１００はピストン案内部１３０を有する。ピストン案内部１３０には複数個のピストン１２０の上下移動を案内するピストン案内孔１３１、１３２が形成される。ピストン案内孔１３１、１３２はピストン案内部１３０の上端部から下端部の近部まで形成される。
【００４１】
図２を参照すれば、ピストン案内部１３０の下端にはピペット装着部１３３、１３４が２列で突設される。ピペット装着部１３３、１３４にはピストン案内孔１３１、１３２に連通される連結孔１３３−１、１３４−１が形成されるが、連結孔１３３−１、１３４−１はピペット装着部１３３、１３４の下端部から上部に向かって形成される。一方、ピペット装着部１３３、１３４はピストン案内部１３０が下方に移動することによってピペット装着部１３３、１３４の下部に２列で配列された複数個のピペット１４１、１４２の内周面の上端に密着されて嵌められる。ピペット装着部１３３、１３４の外周面には密着リング（engagement rings）１３３−２、１３４−２が嵌められるが、これによってピペット装着部１３３、１３４がピペット１４１、１４２の内周面の上端に密着されて嵌められる。ピペット装着部１３３、１３４は複数個のピペット１４１、１４２が挿着された場合、相互同一な高さまで挿着するように同一な形状で形成される。これに従って後述する磁場印加部によって複数個のピペット１４１、１４２の相互対応する部位に同一なサイズの磁力が作用できるようにする。
【００４２】
図１及び図２を参照すれば、ピストン案内部１３０の下端部はピストン案内部支持板１５０に固定支持される。図２を参照すれば、ピストン案内部支持板１５０にはピペット装着部１３３、１３４が下部に貫通するように貫通孔（図面符号未付与）が形成される。
【００４３】
図１を参照すれば、ピペットブロック１００のピストン案内部支持板１５０には固定ナット１５２が固定付着される。一方、固定ナット１５２には上下移動スクリュー２３３が相対回転可能に締結される。
【００４４】
図３を参照すれば、上下移動スクリュー２３３の上側端は固定胴体２００に連結されるが、固定胴体２００に対して相対回転可能であるが、上下移動は不可であるように連結される。図３を参照すれば、固定胴体２００には上下移動モータ２３１が設けられ、上下移動モータ２３１には上下移動ベルト２３２が連結される。上下移動ベルト２３２が移送されることにより上下移動スクリュー２３３が回転し、次いでピストン案内部支持板１５０が固定胴体２００の上下に移動する。上下移動ベルト２３２はタイミングベルトであり得る。
【００４５】
図１を参照すれば、ピペットブロック１００は案内ロッド１６０を有する。案内ロッド１６０はピストン案内部支持板１５０の上面に突設される。案内ロッド１６０はピストン固定板１１０に嵌められ、ピストン固定板１１０の上下移動を案内する。ピストン固定板１１０にはピストン固定板１１０の上下移動を案内するための案内ガイド１１２が固定連結される。
【００４６】
図１を参照すれば、案内ロッド１６０の上端にはピストン調節モータ支持板１７１が設けられる。ピストン調節モータ支持板１７１にはピストン調節モータ１７２が搭載され、ピストン調節モータ１７２にはピストン調節スクリュー１７３が回転して上下移動可能に連結される。ピストン調節スクリュー１７３の下側端はピストン固定板１１０に相対回転可能であるが、上下移動不可であるように連結される。
【００４７】
図１を参照すれば、ピストン案内部１３０の上部には上部脱着板１８１が設けられる。上部脱着板１８１には複数個のピストン１２０が貫通するように貫通孔（図示せず）が形成される。
【００４８】
図２を参照すれば、ピストン案内部支持板１５０の下部には下部脱着板１８２が設けられる。下部脱着板１８２には複数個のピペット装着部１３３、１３４が貫通する貫通孔（図面符号未付与）が形成される。ピペット装着部１３３、１３４が貫通される貫通孔（図面符号未付与）は複数個のピペット装着部１３３、１３４は通過させるが、前記ピペット装着部に装着された複数個のピペット１４１、１４２は通過させないサイズを有するように形成される。従って、下部脱着板１８２の下方に移動することによってピペット装着部に装着された複数個のピペット１４１、１４２の上端部を下方に押圧して複数個のピペット１４１、１４２を分離させることができる。上部脱着板１８１と下部脱着板１８２は連結ロッド１８３によって上下一定距離を保持するように相互連結される。一方、連結ロッド１８３の設置のためにピストン案内部１３０には貫通孔（図面符号未付与）が形成される。
【００４９】
図１を参照すれば、下部脱着板１８２の上面には突出ロッド１８４が突設される。突出ロッド１８４はピストン案内部支持板１５０に形成される貫通孔（図示せず）を介してピストン案内部支持板１５０の上部に突出される。突出ロッド１８４にはスプリング１８５が挿着されるが、スプリング１８５は下端部がピストン案内部支持板１５０の上面に弾持され上端部が突出ロッド１８４の上端部に弾持される。従って、下部脱着板１８２がピストン案内部支持板１５０に密着に所定の弾性力を加えるようになる。図２を共に参照すれば、ピストン固定板１１０が下方に移動して上部脱着板１８１を押圧する場合、前記押圧力がスプリング１８５の弾性力より大きくなれば下部脱着板１８２が下方に移動して複数個のピペット１４１、１４２を分離させるようになる。
【００５０】
即ち、ピペット装着部１３３、１３４が下方に移動することにより複数のピペット１４１、１４２がピペット装着部１３３、１３４に挿着され、下部脱着板１８２が下方に移動することにより前記装着された複数のピペット１４１、１４２がピペット装着部１３３、１３４から分離される。また、ピストン１２０が上下に移動することにより前記装着された複数のピペット１４１、１４２にそれぞれターゲット物質を含む生物学的試料が吸入及び吐出される。
【００５１】
図２を参照すれば、ピペット装着部１３３、１３４に挿着される複数個のピペット１４１、１４２は４つの主要機能を行なう構造から構成されるピペット１４１とピペット１４２は同一であるからピペット１４２について説明する。ピペット１４２の下端の錐部１４２ａは後述するマルチウェルプレートキット４２０、４２０’のフィルム（図示せず）に孔を容易にあける目的で尖って形成される。溶液通路１４２ｂはマルチウェルプレートキット４２０のウェル４２１Ａ、４２１Ｂ、４２１Ｃ、４２１Ｄ、４２１Ｅ、４２１Ｆの底まで至るように長く形成し、また滞留する液を最少化するためにできれば細く形成した。磁性粒子収集部１４２ｃは外部から磁石を近接させたとき、磁気力によって下方に流れる液体中の磁性粒子がその内壁に十分付着できるように構成される。磁性粒子収集部１４２ｃの内径が大きければ磁石に隣り合った内壁側の磁性粒子は磁力によって捕集可能であるが、それと向かい合う内壁側の磁性粒子は捕集されなく下方に流れるようになる。従って、磁性粒子収集部１４２ｃは磁石に隣り合った内壁の反対側の内壁部位を通過する磁性粒子も捕集できる半径を有するように形成される。一方、溶液貯蔵部１４２ｄは隣り合う９６ウェルプレートキットで相互隣接した列のウェル間の間隔である９ｎｍ以内で最大限たくさんの容量を入れるように内径と長さを調節した。
【００５２】
図１及び図２を参照すれば、磁場印加部（図面符号未付与）はピペットブロック１００に装着された各列のピペット１４１、１４２に磁場を印加及び解除するための装置である。磁場印加部（図面符号未付与）は第１列磁石装着部１９１、磁石装着部モータ１９１Ｍ、第１列ギア１９１Ｇ、第１列回転軸１９１Ｓ、第２列磁石装着部１９２、第２列ギア１９２Ｇ、第２列回転軸１９２Ｓを含む。
【００５３】
図１及び図２を参照すれば、第１列磁石装着部１９１には第１列のピペット装着部１３３に装着された第１列のピペット１４１に磁場を印加するための磁石１９１−１が装着される。特に、図１を参照すれば、磁石１９１−１は第１列のピペット１４１に対応する数ほど装着できる。
【００５４】
図１及び図２を参照すれば、第１列ギア１９１Ｇはピストン案内部支持板１５０に連結されて磁石装着部モータ１９１Ｍによって回転する。第１列回転軸１９１Ｓは第１列ギア１９１Ｇに連結されて第１列ギア１９１Ｇが回転することにより回転する。一方、第１列磁石装着部１９１は第１列回転軸１９１Ｓに放射方法に連結されて第１列回転軸１９１Ｓが回転することにより磁石１９１−１と第１列のピペット１４１との間の距離が調節される。磁石１９１−１と第１列のピペット１４１間の距離が離れることにより第１列のピペット１４１に印加した磁場が解除される。従って、磁石装着部モータ１９１Ｍ、第１列ギア１９１Ｇ及び第１列回転軸１９１Ｓは第１列磁石装着部１９１を移動させる移動手段である。
【００５５】
図２を参照すれば、第２列磁石装着部１９２には第２列のピペット装着部１３４に装着された第２列のピペット１４２に磁場を印加するための磁石１９２−１が装着される。図面には図示されてないが、磁石１９２−１は第２列のピペット１４２に対応する数ほど装着できる。
【００５６】
図２を参照すれば、第２列ギア１９２Ｇは第１列ギア１９１Ｇと噛み合せて第１列ギア１９１Ｇが回転することにより回転する。第２列回転軸１９２Ｓは第２列ギア１９２Ｇに連結されて第２列ギア１９２Ｇが回転することにより回転する。一方、第２列磁石装着部１９２は第２列回転軸１９２Ｓに放射方向に連結されて第２列回転軸１９２Ｓが回転することにより磁石１９２−１と第２列のピペット１４２間の距離が調節される。磁石１９２−１と第２列のピペット１４２間の距離が離れることにより第２列のピペット１４２に印加した磁場が解除される。従って、第２列ギア１９２Ｇ及び第２列回転軸１９２Ｓは第２列磁石装着部１９２を移動させる移動手段である。
【００５７】
一方、実施例１の場合、前記第１列磁石装着部１９１、第１列ギア１９１Ｇ、第１列回転軸１９１Ｓによって前記第１列のピペット１４１のそれぞれに加える磁場の強さ及び時間は第２列磁石装着部１９２、第２列ギア１９２Ｇ、第２列回転軸１９２Ｓによって前記第２列のピペット１４２のそれぞれに加える磁場の強さ及び時間と同一である。従って、第１列ギア１９１Ｇと第２列ギア１９２Ｇは同一であり、第１列回転軸１９１Ｓと第２列回転軸１９２Ｓは相互対称であり、第１列磁石装着部１９１と第２列磁石装着部１９２は相互同一である。従って、同一な磁場を形成する第１列磁石装着部１９１と第２列磁石装着部１９２は相互対称的に回転する。一方、磁石１９１−１、１９２−１はディスク形の永久磁石であるが、望ましくはネオジウム、サマリウム／コバルト、アリコなど超強力磁石である。
【００５８】
一方、実施例１の場合、第１列ギア１９１Ｇの代わりに第２列ギア１９２Ｇが磁石装着部モータ１９１Ｍによって駆動される。
【００５９】
図３及び図７を参照すれば、ケーシング３００の固定胴体２００には前後移動支持ロッド３１０が前後方向に設けられる。
【００６０】
図３を参照すれば、前後移動支持ロッド３１０には前後移動スライダー２４１が挿着されるが、前後移動スライダー２４１は固定胴体２００に固定連結される。ケーシング３００には前後移動モータ３２０が装着される。前後移動モータ３２０には前後移動ベルト３３０が連結して移送されるが、移動ベルト３３０は所定部位が固定胴体２００に付着される。従って、移動ベルト３３０が移送されることにより前後固定胴体２００が前後移動支持ロッド３１０に沿って前後に移動する。
【００６１】
図３を参照すれば、前後移動支持ロッド１３０の向い側には固定胴体２００の他側を支持してその前後移動を案内するためのもう一つの前後案内ガイダー３１１が設けられる。
【００６２】
図３を参照すれば、固定胴体２００の下部にはベースプレート４００が位置する。図４を参照すれば、ベースプレート４００の下端部にはケーシング３００に摺動するようにスライドレール４１０が設けられる。
【００６３】
図４及び図５を参照すれば、ベースプレート４００にはマルチウェルプレートキット４２０、４２０’、ピペットブロック１００に装着される複数のピペット１４０が２列で挿着収容されるピペットラック４３０、精製された試料を保管するための複数の試料保管用チューブ４４２が２列で挿着収容される試料保管用チューブラック４４０、ピペットブロック１００に装着された複数のピペット１４０から捨てられる廃液を収容するための廃液筒４５０が搭載される。一方、ベースプレート４００には２列で挿着収容される複数の高温反応用チューブ４６２を加熱するための高温反応ブロック４６０が搭載される。図６を参照すれば、高温反応用チューブ４６２は高温反応用チューブラック４６４を介して高温反応ブロック４６０に挿着される。高温反応用チューブラック４６４は実験者が手で容易に把持するために熱伝達率が低いプラスチック製品であり得る。図面符号４６０−１はヒーターを、４６０−２は電源部を、４６０−３は一定温度を保持するための温度遮断部を示す。
【００６４】
図３を参照すれば、ケーシング３００の内部には滅菌のための紫外線ランプ３４０またはオゾン発生器（図示せず）などの滅菌装置が備えられる。
【００６５】
図８にはベースプレート４００に搭載されてケーシング３００に収容され、ピペットブロック１００の下部に位置するマルチウェルプレートキット４２０が図示されている。
【００６６】
図８を参照すれば、マルチウェルプレートキット４２０は隣り合って２列をなす複数個のウェル４２１Ａ、４２１Ｂ、４２１Ｃ、４２１Ｄ、４２１Ｅ、４２１Ｆからなる複数個の単位ウェルＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆと、前記複数個の単位ウェルＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆの上端部を密封するフィルム（図示せず）を含む。即ち、マルチウェルプレートキット４２０は９６ウェルプレートキットであり得る。一方、マルチウェルプレートキット４２０は図８に図示されたものとは異なって単位ウェルが１列からなるものであり得る。単位ウェルＡは細胞溶解及び蛋白質分解またはＲＮＡ分解のための蛋白質分解酵素、ＲＮＡ分解酵素または試料前処理に必要な緩衝液が注入して密封される。単位ウェルＢは前記生物学的試料を溶解させる細胞溶解溶液が注入して密封され、単位ウェルＣは結合溶液が注入して密封され、単位ウェルＤは磁性粒子が分散された水分溶液が注入して密封され、単位ウェルＥは洗滌溶液が注入して密封され、単位ウェルＦは溶出溶液が注入して密封される。つまり、単位ウェルのうち、少なくとも一つを除いた残りの単位ウェルには試料を精製するための溶液が収容されるが、同一な単位ウェルには同一な溶液が収容される。
【００６７】
一方、前記密封された一つの単位ウェルに収容される溶液が磁性粒子が分散された水分散液である場合、前記水分散液に分散された磁性粒子はシリカでコーティングされた球形の磁性粒子であり得る。
【００６８】
以下、前記した実施例１の作動について説明する。
【００６９】
図４及び図５を参照すれば、マルチウェルプレートキット４２０、４２０’の９６ウェルプレートキットはベースプレート４００の上面に形成された溝（図面符号未付与）に装着して使用される。ベースプレート４００の下端にはスライドレール４１０が装着されていて取っ手４０１を用いて図７に図示されたようにベースプレート４００をケーシング３００の外に引き出した後、必要なものを装着する。図４及び図５を参照すれば、実施例１を稼動させるためにはベースプレート４００に生成された固有の溝（図面符号未付与）にウェルプレートキット４２０、４２０’、廃液筒４５０などをそれぞれ載せればよい。このように準備する過程を詳しく説明すると、先ず実施例１を稼動させるためにはターゲット物質が含まれた生物学的試料の個数を定めなければならない。実施例１は１つから最大１６個の試料を弾力的に精製することができる。実施例１の特殊な例として図５は１６個の試料を準備する過程を見せている。マルチウェルプレートキット４２０の９６ウェルプレートキットは磁性粒子と各種溶液を有していて、また使用時に生物学的試料を注入して装着するプレートとして機能するため、先ず必要な生物学的試料の数ほどをピペットチップを用いて９６ウェルプレートキットの単位ウェルＡを密封したフィルムをあけて、必要なそれぞれの生物学的試料をそれぞれのウェル４２１Ａに一つずつ注入する。これが準備されると、この９６ウェルプレートキットをベースプレート４００に装着し、次いで残りの他の溶液が込まれているもう一つの９６ウェルプレートキットをベースプレート４００に装着する。精製過程から出る廃液を集めるためには廃液筒４５０を装着する。高温反応処理の必要時に高温反応をさせることができる高温反応ブロック４６０で反応をさせる。図６に図示されたように高温反応用チューブ４６２を必要な数ほど高温反応用チューブラック４６４に装着し、このラックを高温反応ブロック４６０に挿入する。この際、加温反応が必要でない場合は高温反応用チューブ４６２と高温反応用チューブラック４６４を装着していない。複数個のピペット１４０を装着するときは９６ウェルプレートキットに入れた試料の位置を確認し、試料が注入した位置と同じ位置になるようにピペット１４０をピペットラック４３０に挿した後、図３のように装着する。精製された試料保管用チューブ４４２も同じ数ほど試料保管用チューブラック４４０に挿した後、装着される。この際、試料保管用チューブ４４２はＰＣＲ用８ストリップチューブのような９６ウェルプレートキットに使用される標準フォームを使用する（図５では１６個の試料の全てを装着することを示している）。１６個未満の一部分のウェルのみを使用するようになるときにはピペット１４０と試料保管用チューブ４４２と高温反応用チューブ４６２の位置を全て同一にすることが重要である。これのためにそれぞれのラックのピペットラック４３０、試料保管用チューブラック４４０、そして高温反応用チューブラック４６４を並べて同じ位置にそれぞれのピペット１４０、試料保管用チューブ４４２、高温反応用チューブ４６２を挿したことが望ましい。
【００７０】
以上の装着が終わると、装着されたベースプレート４００を押してストッパー４０３によってそれ以上引き込まれない位置まで整列させてケーシング３００のドア３５０を閉めてタッチスクリーン３６０を操作して自動精製を行なう。約３０分内外に自動精製が終わると、ドア３５０をあけてベースプレート４００を引き出して精製されたヘキサンが入っている試料保管用チューブラック４４０を出して精製された試料を先ず回収して使用したピペットと高温反応用チューブラック４６４を出して試料保管用チューブ４４２の蓋を閉めた後、直ちに必要な実験に使用することもでき、−２０度の冷凍庫に保管することもできる。ヘキサン抽出に使用した全ての９６ウェルプレートキットとピペット、廃液筒などはベースプレート４００から出して捨てた後、ベースプレート４００を押してストッパー４０３によってそれ以上引き込まれない位置まで移動させた後、ドアを閉めて紫外線ランプ３４０を用いた機器内部の殺菌を行なう。９６ウェルプレートキットは１６個ウェルを全て使用した場合は除去し、使用しないウェルが残っている場合は後に再び使用する。
【００７１】
このような使用者の準備及び後処理の過程を除いた精製過程は自動精製装備に備えられた自動化機構とコンピュータ回路によって動作されることができる。このような動作を行なうために２列で配列された複数個のピペット１４０はピペットブロック１００のピペット装着部１３３、１３４に自動に挿されて運営される。
【００７２】
一方、ピペットブロック１００の上下運動は上下移動スクリュー２３３によって行い、前後運動は前後移動ベルト３３０によって行なわれる。上下移動スクリュー２３３と前後移動ベルト３３０によって望む位置で作業を行なうことができる。
【００７３】
＜実験例＞
【００７４】
実施例１を用いた染色体ＤＮＡの抽出
【００７５】
１）染色体ＤＮＡ抽出のためのキットの製作
【００７６】
染色体ＤＮＡ抽出キットを製作するために９６ウェルプレートキットの単位ウェルＢからＥまで予め製造した試薬を使用量に適当に分注する。染色体ＤＮＡの抽出のための単位ウェルの試薬組成は次の通りである。９６ウェルプレートキットの単位ウェルＢには全血内細胞の溶解のための緩衝溶液として１Ｍ乃至８Ｍのグアニジンヒドロクロライド、１０ｍＭ乃至１００ｍＭのトリスヒドロクロライド、１０ｍＭ乃至５００ｍＭの塩化ナトリウム、１％乃至５０％の界面活性剤（トリトンＸ−１００、ツウィン−２０、ツウィン−８０、ＮＰ−４０など）、全体ｐＨは４．０乃至７．０から構成された細胞溶解溶液を入れる。単位ウェルＣには染色体ＤＮＡと磁性粒子間の結合力を高めるためのアルコール（イソプロピルアルコール、エチルアルコール）を入れ、単位ウェルＤには磁性粒子が分散された磁性粒子水分散液を入れる。単位ウェルＥには磁性粒子とＤＮＡの結合力は保持したまま不純物のみを選択的に除去するための１Ｍ乃至８Ｍのグアニジンヒドロクロライド、１０ｍＭ乃至１００ｍＭのトリスヒドロクロライド、１０ｍＭ乃至５００ｍＭの塩化ナトリウム、１０％乃至９０％のアルコール（イソプロピルアルオール、エチルアルコール）から構成される洗滌溶液を入れる。単位ウェルＦには磁性粒子からＤＮＡを溶出させて純粋なＤＮＡを獲得するために１ｍＭ乃至５０ｍＭのトリスヒドロクロライド、ｐＨは８．０乃至９．０から構成されたヘキサン溶出溶液を入れる。
【００７７】
２）全血から染色体ＤＮＡの抽出
【００７８】
前記から準備されたＤＮＡ抽出用キットの単位ウェルＡに全血２００μｌを分注した後、ＤＮＡ抽出キット、廃液筒、加温反応用チューブが挿されたラック、ピペットが挿されたラック、試料保管用チューブが挿されたラックを自動精製装備内の各位置に装着した後、予めセットされた全血からＤＮＡを抽出する方法を選んでヘキサン抽出を自動に進む。
【００７９】
予めセットされた全血からＤＮＡを抽出する方法にはＤＮＡ抽出に必要であるあらゆる過程、ピペットの上下移動及び磁性粒子の運搬のための磁石の移動、各マルチプレートに込まれている溶液の運搬のためのピペットの移動を含めて各マルチプレートに込まれている溶液の種類及び量、廃液を捨てる位置及び捨てる量、加温反応をさせるチューブの位置及び時間、全てのヘキサン精製が完了された後、自動にＵＶランプの殺菌が進められるプロセスなどを含めている。
【００８０】
３）抽出された染色体ＤＮＡの確認
【００８１】
抽出された染色体ＤＮＡの収率、濃度及び純度はＵＶ−吸光光度計を用いて測定する。先ず、滅菌された３次蒸留水を用いて２６０ｎｍ、２８０ｎｍ、３２０ｎｍにおけるベースラインを測定した後、抽出されたＤＮＡの各波長の吸光度を測定する。測定された吸光度の値を用いて次の計算式によって収率、濃度及び純度を計算する。
【００８２】
抽出されたＤＮＡの濃度＝（２６０ｎｍの吸光度−３２０ｎｍの吸光度）５０希釈倍数
抽出されたＤＮＡの収率＝抽出されたＤＮＡの濃度溶出溶液の体積
抽出されたＤＮＡの純度＝（２６０ｎｍの吸光度−３２０ｎｍの吸光度）／（２８０ｎｍの吸光度−３２０ｎｍの吸光度）
【００８３】
前記計算式に従って抽出されたＤＮＡの濃度及び収率、純度を計算した結果を下記のテーブルに示した。総１６個の試料から分離した染色体ＤＮＡの平均濃度は３６ｎｇ／μｌであり、平均収率は３．６ｎｇであり、平均純度は１．９５で非常に高い水準のＤＮＡが分離されたことを見せている。
【００８４】
【表１】
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【００８５】
抽出されたＤＮＡ１００ｎｇを定量して１％のアガロースゲルで電気泳動してその状態を確認した。図９を参照すれば、レーンＭはバイオニア社のサイズマーカ（Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｄ−１０４０）であり、レーン１から１６は抽出された各々のＤＮＡをみせる。その結果、全血から染色体ＤＮＡを抽出する過程中、分解されたり他の不純物（ＲＮＡなど）が混ぜていないことが確認できた。
【００８６】
また、抽出されたＤＮＡ１０ｎｇを定量してＧＡＰＤＨ遺伝子部位を増幅することができる重合酵素連鎖反応（ＰＣＲ）用プライマーと共にバイオニア社のＡｃｃｕＰｏｗｅｒＰＣＲ  Ｐｒｅｍｉｘを用いて次のような条件でＧＡＰＤＨ遺伝子部位を増幅した。ＤＮＡ変性のために９４度１分、各プライマーの標的部位の付着のために６０度１分、相補筋の合成を通じた二重筋ＤＮＡの製造のために７２度３分の過程を４０回繰り返して行った。重合酵素連鎖反応を終えた後、重合酵素連鎖反応物のうち５μｌを１％のアガロースゲルで電気泳動して増幅された重合酵素連鎖反応物のサイズを確認することにより、抽出されたＤＮＡが他の実験に十分使用できるということを証明した。図１０を参照すれば、レーンＭはバイオニア社のサイズマーカ（Ｃａｔ．  Ｎｏ．  Ｄ−１０４０）であり、レーン１から１６は各抽出されたＤＮＡを鋳型にした重合酵素連鎖反応産物として正確に全てが同じサイズを増幅した。
【００８７】
＜実施例２＞
【００８８】
実施例２は本発明による自動精製装置、即ち磁性粒子を用いて複数の生物学的試料から磁性粒子と可逆的に結合されるターゲット物質を分離するもう一つの装置に関するものである。図１１乃至図１３は実施例２の主要部の概略図を示す。
【００８９】
図１１乃至図１３を参照すれば、磁場印加部（図面符号未付与）は第１列磁石装着部１９１、第１列ギア１９１Ｇ、第１列回転軸１９１Ｓ、第２列磁石装着部１９２、磁石装着部モータ１９２Ｍ、第２列ギア１９２Ｇ、第２列回転軸１９２Ｓを含む。
【００９０】
図１１及び図１２を参照すれば、第２列磁石装着部１９２は第２列回転アーム１９２−２、第２列板設置台１９２−３を含む。
【００９１】
図１１及び図１２を参照すれば、第２列回転アーム１９２−２は第２列回転軸１９２Ｓに放射方向に固定連結される。第２列板設置台１９２−３は第２列回転アーム１９２−２の端部に第２列回転軸１９２Sと平行に固定設けられる。
【００９２】
図１１及び図１２を参照すれば、第２列板設置台１９２−３には第２列中間板１９２−４Ｍ及び第２列エンド板１９２−４Ｅが同一な間隔を保持しながらそれぞれ設けられる。第２列中間板１９２−４Ｍは第２列回転軸１９２Ｓが回転することにより第２列ピペット１４２のうち相互隣り合ったピペットとピペットの間に位置する。第２列中間板１９２−４Ｍには磁石１９２−１が装着されるように第２列ピペット１４２の列方向と平行な方向に貫通孔が形成される。第２列エンド板１９２−４Ｅは第２列回転軸１９２Ｓが回転することにより第２列ピペット１４２のうち側端に位置するピペットの外側に位置する。第２列エンド板１９２−４Ｅには磁石１９２−１が装着されるように第２列ピペット１４２の列方向と平行な方向に貫通孔が形成される。第２列中間板１９２−４Ｍに形成された貫通孔と第２列エンド板１９２−４Ｅに形成された貫通孔は同一直線上に位置する。
【００９３】
図１１及び図１２を参照すれば、第２列ギア１９２Ｇは磁石装着部モータ１９２Ｍによって回転する。第２列回転軸１９２Ｓは第２列ギア１９２Ｇに連結されて第２列ギア１９２Ｇが回転することによって回転する。一方、第２列磁石装着部１９２は第２列回転軸１９２Ｓに放射方向に連結されて第２列回転軸１９２Ｓが回転することにより磁石１９２−１と第２列のピペット１４２間の距離が調節される。磁石１９２−１と第２列ピペット１４２間の距離が離れることにより第２列のピペット１４２に印加された磁場が解除される。従って、磁石装着部モータ１９２Ｍ、第２列ギア１９２Ｇ及び第２列回転軸１９２Ｓは第２列磁石装着部１９２を移動させる移動手段である。
【００９４】
図１１及び図１２を参照すれば、第１列磁石装着部１９１は第１列回転アーム１９１−２、第１列板設置台１９１−３を含む。
【００９５】
図１１及び図１２を参照すれば、第１列回転アーム１９１−２は第１列回転軸１９１Ｓに放射方向に固定連結される。第１列板設置台１９１−３は第１列回転アーム１９１−２の端部に第１列回転軸１９１Ｓと平行に固定設けられる。
【００９６】
図１１及び図１２を参照すれば、第１列板設置台１９１−３には第１列中間板１９１−４Ｍ及び第１列エンド板１９１−４Ｅが同一な間隔を保持しながらそれぞれ設けられる。第１列中間板１９１−４Ｍは第１列回転軸１９１Ｓが回転することにより第１列ピペット１４１のうち相互隣り合ったピペットとピペットの間に位置する。第１列中間板１９１−４Ｍには磁石１９１−１が装着されるように第１列ピペット１４１の列方向と平行な方向に貫通孔が形成される。第１列エンド板１９１−４Ｅは第１列回転軸１９１Ｓが回転することにより第１列ピペット１４１のうち側端に位置するピペットの外側に位置する。第１列エンド板１９１−４Ｅには磁石１９１−１が装着されるように第１列ピペット１４１の列方向と平行な方向に貫通孔が形成される。第１列中間板１９１−４Ｍに形成された貫通孔と第１列エンド板１９１−４Ｅに形成された貫通孔は同一直線上に位置する。
【００９７】
図１１及び図１２を参照すれば、第１列ギア１９１Ｇは第２列ギア１９２Ｇと噛み合わせて第２列ギア１９２Ｇが回転することによって回転する。第１列回転軸１９１Ｓは第１列ギア１９１Ｇに連結されて第１列ギア１９１Ｇが回転することによって回転する。一方、第１列磁石装着部１９１は第１列回転軸１９１Ｓに放射方向に連結されて第１列回転軸１９１Ｓが回転することにより磁石１９１−１と第１列のピペット１４１間の距離が調節される。磁石１９１−１と第１列ピペット１４１間の距離が離れることにより第１列のピペット１４１に印加された磁場が解除される。従って、第１列ギア１９１Ｇ及び第１列回転軸１９１Ｓは第１列磁石装着部１９１を移動させる移動手段である。
【００９８】
一方、実施例２の場合、第２列ギア１９２Ｇの代わりに第１列ギア１９１Ｇが磁石装着部モータ１９２Ｍによって駆動される。
【００９９】
図１２を参照すれば、一つのピペット１４１、１４２の両側に磁石がそれぞれ位置する場合、効率的にターゲット物質であるヘキサンが結合された磁性粒子を損失することなくピペット１４１、１４２の内部に捕集することができるようになる。ピペット１４１、１４２の片側のみに磁石が位置する場合はターゲット物質であるヘキサンが結合された磁性粒子がピペット１４１、１４２の内面の片側のみに集中的に付着及び捕集される。このような場合、後続段階において磁場印加部及びピストン１２０を用いてピペット１４１、１４２に吸入された混合物のうちヘキサンが結合された磁性粒子を除いた混合物を廃液筒４５０に排出させたりする場合に固まっている磁性粒子が損失される可能性がある。
【０１００】
図１２を参照すれば、磁石装着部１９１、１９２によって磁石１９１−１、１９２−１をピペット１４１、１４２の両側に近接して位置させることによりピペット１４１、１４２に印加される磁場の強度をさらに大きくした。従って、磁石装着部１９１、１９２による磁場の印加時にヘキサンが結合された磁性粒子がピペット１４１、１４２の内面の片側のみに付着されることなくピペット１４１、１４２の内面の周りに均一に分散及び付着されて効率的に捕集されるから、磁性粒子と結合されたヘキサンは損失されることなく高純度で分離可能となる。つまり、ヘキサンの収率が高くなる。実施例２の磁石装着部１９１、１９２には第１列ピペット１４１と第２列ピペット１４２を構成するそれぞれのピペット両側に磁場を印加するための磁石１９１−１、１９２−１が装着される。
【０１０１】
その他の事項は実施例１から説明したところに準じる。
【０１０２】
＜実施例３＞
【０１０３】
実施例３は実施例１または実施例２の自動精製装置に使用されるマルチウェルプレートキットに関するものである。これに対する説明は実施例１で記述したところと同じであるため、その説明を省略する。
【０１０４】
＜実施例４＞
【０１０５】
実施例４は実施例１または実施例２の自動精製装置を用いた生物学的試料からヘキサンを抽出する方法に関するものである。
【０１０６】
図１４は実施例４の流れ図を示す。
【０１０７】
図１４を参照すれば、実施例４は準備段階Ｓ１０を有する。
【０１０８】
図５を参照すれば、準備段階Ｓ１０では二つのマルチウェルプレートキット４２０、４２０’、ピペットブロック１００に装着される複数のピペット１４０が２列で挿着収容されるピペットラック４３０、精製された試料を保管するための複数の試料保管用チューブ４４２が２列で挿着収容される試料保管用チューブラック４４０、ピペットブロック１００に装着された複数のピペット１４０から捨てられる廃液を収容するための廃液筒４５０及び２列で挿着収容される複数の高温反応用チューブ４６２を加熱するための高温反応ブロック４６０がベースプレート４００に搭載される。図７を参照すれば、前記ベースプレート４００はケーシング３００に実装される。
【０１０９】
図１４を参照すれば、実施例４は細胞溶解溶液との混合段階Ｓ１１を有する。
【０１１０】
図８を参照すれば、混合段階Ｓ１１ではピペット１４１、１４２（図２参照）を用いてマルチウェルプレートキット４２０の単位ウェルＡに注入された生物学的試料をマルチウェルプレートキット４２０の単位ウェルＢに注入された細胞溶解溶液に混合するようになる。
【０１１１】
図１４を参照すれば、実施例４は酵素反応活性化段階Ｓ１２を有する。
【０１１２】
図５を参照すれば、酵素反応活性化段階Ｓ１２では前記生物学的試料の細胞溶解が容易に進めるようにピペット１４１、１４２（図２参照）を用いて前記細胞溶解溶液と混合された生物学的試料を高温反応用チューブ４６２に注入するようになる。マルチウェルプレートキット４２０（図８参照）の単位ウェルＡには生物学的試料によって細胞溶解及び蛋白質分解のための酵素が注入して密封される。高温反応用チューブ４６２で前記酵素による反応が活性化されて前記生物学的試料の細胞が速い時間内に完全に溶解される。
【０１１３】
図１４を参照すれば、実施例４は結合溶液との混合段階Ｓ１３を有する。
【０１１４】
図８を参照すれば、結合溶液との混合段階Ｓ１３ではピペット１４１、１４２（図２参照）を用いて前記細胞溶解溶液及び細胞溶解が進められた前記生物学的試料をマルチウェルプレートキット４２０の単位ウェルＣに注入された結合溶液に混合するようになる。つまり、結合溶液との混合段階Ｓ１３では酵素反応が進められた高温反応用チューブ４６２（図５参照）内の混合物がマルチウェルプレートキット４２０の単位ウェルＣに注入される。前記結合溶液はヘキサンと磁性粒子間の結合力を高めるためのアルコール（イソプロピルアルコール、エチルアルコール）であり得る。
【０１１５】
図１４を参照すれば、実施例４は水分散液との混合段階Ｓ１４を有する。
【０１１６】
図８を参照すれば、水分散液との混合段階Ｓ１４ではピペット１４１、１４２（図２参照）を用いて前記結合溶液と混合された混合物をマルチウェルプレートキット４２０の単位ウェルＤに注入された磁性粒子水分散液に混合するようになる。これによってターゲットヘキサンが磁性粒子の表面に付着される。
【０１１７】
図１４を参照すれば、実施例４は第１排出段階Ｓ１５を有する。
【０１１８】
図８を参照すれば、第１排出段階Ｓ１５では前記結合溶液と混合された混合物がピペット１４１、１４２（図２参照）に吸入されて廃液筒４５０（図５参照）の上部に位置するようになる。図２を参照すれば、次いでピストン１２０の下部移動によって前記結合溶液と混合された混合物がピペット１４１、１４２から廃液筒４５０に排出するようにピペット１４１、１４２に第１排出圧力を加え、同時に前記結合溶液と混合された混合物の中、前記磁性粒子水分散液の磁性粒子及び前記磁性粒子に付着された付着物は第１排出圧力によってピペット１４１、１４２から排出されなく、ピペット１４１、１４２の内部に残留するように磁石装着部１９１、１９２を用いてピペット１４１、１４２に磁場を印加するようになる。従って、第１排出段階Ｓ１５では前記結合溶液と混合された混合物の中、前記磁性粒子水分散液の磁性粒子及び前記磁性粒子に付着された付着物を除いた混合物が廃液筒４５０に排出される。
【０１１９】
図１４を参照すれば、実施例４は第１除去段階Ｓ１６を有する。
【０１２０】
図５を参照すれば、第１除去段階Ｓ１６では前記磁場を解除し、ピペット１４１、１４２（図２参照）を用いて前記磁性粒子及び前記磁性粒子に付着された付着物をマルチウェルプレートキット４２０の単位ウェルＥに注入された洗滌溶液と混合して高温反応用チューブ４６２又はマルチウェルプレートキット４２０の単位ウェルＨ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、及びＬの何れか一箇所で数回にかけて洗滌するようになる。前記洗滌溶液は前記磁性粒子とヘキサンの結合力は保持したまま前記磁性粒子に付着された不純物のみを選択的に除去するためのものであって、１Ｍ乃至８Ｍのグアニジンヒドロクロライド、１０乃至１００ｍＭのトリスヒドロクロライド、１０ｍＭ乃至５００ｍＭの塩化ナトリウム及び１０％乃至９０％のアルコール（イソプロピルアルコール、エチルアルコール）を含めて構成される。従って、第１除去段階Ｓ１６では前記磁性粒子からヘキサンを除いた不純物が除去される。
【０１２１】
図１４を参照すれば、実施例４は第２排出段階Ｓ１７を有する。
【０１２２】
図５を参照すれば、第２排出段階Ｓ１７では前記洗滌溶液と混合された混合物がピペット１４１、１４２（図２参照）に吸入されて廃液筒４５０の上部に位置するようになる。図２を参照すれば、次いでピストン１２０の下部移動によって前記洗滌溶液と混合された混合物がピペット１４１、１４２から廃液筒４５０に排出するようにピペット１４１、１４２に第２排出圧力を加え、同時に前記洗滌溶液と混合された混合物の中、前記磁性粒子、前記磁性粒子に付着されたヘキサンは第２排出圧力によってピペット１４１、１４２から排出されなく、ピペット１４１、１４２の内部に残留するように磁石装着部１９１、１９２を用いてピペット１４１、１４２に磁場を印加するようになる。従って、第２排出段階Ｓ１７では前記洗滌溶液と混合された混合物の中、前記磁性粒子、前記磁性粒子に付着されたヘキサンを除いた混合物が廃液筒４５０に排出される。
【０１２３】
図１４を参照すれば、実施例４は第２除去段階Ｓ１８を有する。第２除去段階Ｓ１８では洗滌過程によって前記磁性粒子に残留したり残留される可能性のある洗滌用液中のアルコールが除去できるようになる。
【０１２４】
図５を参照すれば、第２除去段階Ｓ１８では前記磁場を解除し、ピペット１４１、１４２（図２参照）を用いて前記磁性粒子、前記磁性粒子に付着されたヘキサンを高温反応用チューブ４６２に注入するようになる。この場合、前記磁性粒子に残留されている洗滌溶液中のアルコールは高温反応用チューブ４６２で加熱されて気化されることにより前記磁性粒子から除去される。一方、第２除去段階Ｓ１８はピペットへの吸入段階Ｓ１８−１、高温反応用チューブへの注入段階Ｓ１８−２、及び空気流出入段階Ｓ１８−３を含む。
【０１２５】
図２を参照すれば、ピペットへの吸入段階Ｓ１８−１では前記磁性粒子がピペット１４１、１４２に捕集された状態でピストン１２１、１２２の上部移動によってマルチウェルプレートキット４２０’（図５参照）の単位ウェルＧ（図５参照）に注入されたアルコールをピペット１４１、１４２に吸入するようになる。ピペットへの吸入段階Ｓ１８−１は前記磁性粒子、前記磁性粒子に付着されたヘキサンが前記単位ウェルＧ（図５参照）に注入されたアルコールと混合されて高温反応用チューブ４６２（図５参照）に容易に注入するようにするためである。
【０１２６】
図５を参照すれば、高温反応用チューブへの注入段階Ｓ１８−２ではピペットへの吸入段階Ｓ１８−１から吸入されたアルコールを前記磁性粒子、前記磁性粒子に付着されたヘキサン及び前記磁性粒子に残留された洗滌溶液中のアルコールと共に高温反応用チューブ４６２（図５参照）に注入するようになる。
【０１２７】
図２を参照すれば、空気流出入段階Ｓ１８−３では前記磁性粒子、前記磁性粒子に付着されたヘキサン、前記磁性粒子に残留された洗滌溶液中のアルコール及びピペットへの吸入段階Ｓ１８−１から吸入されたアルコールが高温反応用チューブ４６２（図５参照）に注入された状態で、ピストン１２１、１２２の上下移動によって高温反応用チューブ４６２（図５参照）に空気を流入及び流出させるようになる。高温反応用チューブ４６２（図５参照）に空気を流入及び流出させたり高温反応ブロックを加熱させたり又はこれらを同時に行うことにより前記磁性粒子に残留された洗滌溶液中のアルコール及びピペットへの吸入段階Ｓ１８−１から吸入されたアルコールが高温反応用チューブ４６２（図５参照）から完璧に除去されることができる。
【０１２８】
図１４を参照すれば、実施例４はヘキサン分離段階Ｓ１９を有する。
【０１２９】
図５を参照すれば、ヘキサン分離段階Ｓ１９ではピペット１４１、１４２（図２参照）を用いてマルチウェルプレートキット４２０（図８参照）の単位ウェルＦに注入されたヘキサン溶出溶液を高温反応用チューブ４６２に注入するようになる。これによって高温反応用チューブ４６２内で前記磁性粒子から前記ヘキサンが分離される。
【０１３０】
図１４を参照すれば、実施例４はヘキサン収集段階Ｓ２０を有する。
【０１３１】
図５を参照すれば、ヘキサン収集段階Ｓ２０では前記磁性粒子から分離されたヘキサンが含まれたヘキサン溶出溶液と磁性粒子がピペット１４１、１４２（図２参照）に吸入されて試料保管用チューブ４４２の上部に位置するようになる。図２を参照すれば、次いでピストン１２０の下部移動によって前記磁性粒子から分離されたヘキサンが含まれたヘキサン溶出溶液と磁性粒子がピペット１４１、１４２から試料保管用チューブ４４２に排出されるようにピペット１４１、１４２に第３排出圧力を加え、同時に前記磁性粒子から分離されたヘキサンが含まれたヘキサン溶出溶液と磁性粒子の中、前記磁性粒子は第３排出圧力によってピペット１４１、１４２から排出されなく、ピペット１４１、１４２の内部に残留されるように磁石装着部１９１、１９２を用いてピペット１４１、１４２に磁場を印加するようになる。従って、ヘキサン収集段階Ｓ２０では前記磁性粒子から分離されたヘキサンが含まれたヘキサン溶出溶液と磁性粒子中、前記磁性粒子を除いた磁性粒子から分離されたヘキサンが含まれたヘキサン溶出溶液が試料保管用チューブ４４２に収集される。つまり、試料保管用チューブ４４２にはヘキサンが含まれたヘキサン溶出溶液が収集される。
【０１３２】
一方、磁性粒子を用いて生物学的試料からヘキサンを分離精製する場合、磁性粒子に結合されたヘキサンの他の不純物はヘキサン溶出溶液を用いたヘキサン分離段階Ｓ１９の前に必ず除去しなければならない。このために磁性粒子に結合された不純物を除去する目的で、第１除去段階Ｓ１６では１０乃至９０％のアルコールを含む洗滌溶液を使用して磁性粒子を洗滌するようになる。
【０１３３】
しかし、洗滌溶液に含まれているアルコールは第１除去段階Ｓ１６の後に磁性粒子に微量残存するようになる。磁性粒子に残存するアルコールがヘキサン溶出溶液を用いたヘキサン溶出過程においてヘキサンと共に溶出されると、重合酵素連鎖反応やリアルタイム重合酵素連鎖反応、シーケンシング反応などに使用される酵素と直接又は間接的な反応を起こしてこれらの酵素の性能低下、敏感度低下などの要因で作用するようになる。従って、磁性粒子に微量残存する洗滌溶液中のアルコールはヘキサン溶出溶液を用いたヘキサン溶出過程の前に必ず完璧に除去しなければならない。従って、実施例４では第２除去段階Ｓ１８で磁性粒子に残存する洗滌溶液中のアルコールを除去するようになる。
【０１３４】
＜実験例＞
【０１３５】
一般正常人の全血２００μｌからバイオニア社のＧｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｋ−３０３２）を用いて染色体ＤＮＡを抽出した。製品に同封されている使用説明書に従って実験を行い、最終ヘキサン溶出ボリュームは５０μｌにした。また、前記から使用したものと同一な検体、同一な量を用いて前記実施例４から言及した実験方法に従って染色体ＤＮＡを抽出した。ヘキサン抽出が終わった後、各４つの検体に対して人のＧＡＰＤＨ遺伝子を増幅及び定量することができるように考案されたプライマーとプローブセット、そしてこれらの増幅をリアルタイムで測定することができるように製作されたバイオニア社のリアルタイム重合酵素連鎖反応用キット（ＡｃｃｕＰｏｗｅｒＤｕａｌｓｔａｒ（登録商標）  ｑＰＣＲ  Ｐｒｅｍｉｘ，  Ｋ−６１００）とリアルタイム遺伝子定量増幅装置（Ｅｘｉｃｙｃｌｅｒ（登録商標）  ９６  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｂｌｏｃｋ，  Ａ−２０６０）を用いて遺伝子を増幅した。
【０１３６】
図１５はリアルタイム重合酵素連鎖反応の実験液に各濃度別にエチルアルコールを混合した後に行なったリアルタイム重合酵素連鎖反応グラフである。
【０１３７】
図１５を参照すれば、全体積の０.２％に該するアルオールをリアルタイム重合酵素連鎖反応の実験液に入れる場合、リアルタイム重合酵素連鎖反応の蛍光値が落ち始め、２％を超える場合は全く実験結果を確認することができないことがわかった。
【０１３８】
図１６は実施例４の実験方法に従って抽出したＤＮＡ（＃１、＃２、＃３）を用いてリアルタイム重合酵素反応させたことを示したグラフである。コントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）は市中で販売中である染色体ＤＮＡ抽出キット（Ｂｉｏｎｅｅｒ，  Ｋ−３ｏ３２）を用いて同一な検体、同一な量から抽出したＤＮＡを用いたリアルタイム重合酵素反応の結果であり、（−）コントロールは前記コントロール実験で鋳型ＤＮＡの代わりに滅菌された３次蒸留水を入れた結果であり、ブランク（Ｂｌａｎｋ）は滅菌された蒸留水のみを入れて反応させた結果である。図１６に図示されたように実施例４による場合、ＤＮＡが純粋に分離されたことが確認できた。
【産業上の利用可能性】
【０１３９】
本発明は磁性粒子を用いて生物学的試料からヘキサン、蛋白質などを自動に分離することができるため、遺伝子工学分野、医療産業分野などに広く用いられることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【国際調査報告】
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