(57)【要約】  本発明は、バイオポリマー及び含水性生物学的ゲルでコーティングされ、そしてその後少なくとも一つの乾燥剤を用いてコーティングされる基質を含む組成物、及び製造方法に関する。得られる組成物は、触れる程度に乾燥しており、低い水分活性を有し、そして少なくとも１か月間、周囲温度での貯蔵において、生物材料を安定化する。
2011502504.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）基質；
（ｂ）前記基質の表面を少なくとも部分的にコーティングする、少なくとも一つのガム系バイオポリマー；及び生物材料の含水濃縮物を含む第一コーティング；並びに
（ｃ）前記第一コーティングの表面を少なくとも部分的にコーティングする、少なくとも一つの乾燥剤を含む第二コーティング
を含む組成物。
【請求項２】
前記第二コーティング、又はそれ以降のコーティングの表面を少なくとも部分的にコーティングする、少なくとも一つのさらなるコーティングを含み、前記さらなるコーティング（単数又は複数）が、少なくとも一つの乾燥剤を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
少なくとも１か月間２０℃〜３０℃で貯蔵されるとき、生物学的生存率において２ ｌｏｇ以下の減少が生じる程度に十分安定である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
０．５未満の水分活性を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
触れる程度まで乾燥している、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記バイオポリマーガムが、５０００〜５０００００００の分子量を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記バイオポリマーガムが：寒天、アルギン酸塩、カッシア、ダマール、ペクチン、ベータ−グルカン、グルコマンナン、マスチック、チクル、サイリウム、スプルースガム、キサンタンガム、ジェランガム、アカシアガム、グアーガム、ローカストビーンガム、カラギーナン、アラビアガム、カラヤガム、ガティガム（ｇｈａｔｔｉ  ｇｕｍ）、トラガカントガム、コンニャクガム、タラガム、及びそれらの組み合わせから選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物中のバイオポリマー（単数又は複数）の濃度が、約１重量％〜１０重量％である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記生物材料が：微生物、生物細胞、生物細胞の一部分若しくは複数の部分、弱毒化された微生物、胞子、菌糸を含む菌糸体、酵素、ホルモン、タンパク質及びそれらの組み合わせから選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記生物材料が：セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）属、キサントモナス（Ｘａｎｔｈａｍｏｎａｓ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）属、ビューベリア（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ）属、メタリジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）属、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）（エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ））属、エルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）属、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属、及びそれらの組み合わせから選択され得る、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記生物材料が、プロバイオティック細菌又は真菌である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記基質材料が：食用材料、粘土、バイオポリマー・ビーズ、及びそれらの組み合わせから選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記乾燥剤（単数又は複数）が、粉末化粘土又は粉末化炭水化物材料から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記乾燥剤（単数又は複数）が：セライト、タルク、ベントナイト、ゼオライト、米粉、ポテトスターチ、コーンスターチ、ラクトース、ショ糖、グルコース、マンニトール、ソルビトール、炭酸カルシウム、二酸化ケイ素、リン酸カルシウム、セルロース、ポリエチレングリコール、及びそれらの組み合わせを含む群から選択される乾燥粉末材料である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
少なくとも一つの油も含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記油が食用油である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記油が植物油である、請求項１５又は１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記油が：オリーブ油、キャノーラ油、ヒマワリ種子油、加水分解油、及びそれらの組み合わせから選択される、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
トコフェロール、アスコルビン酸、及びそれらの組み合わせから選択される、少なくとも一つの抗酸化剤も含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
少なくとも一つの界面活性剤化合物も含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物を含む食品。
【請求項２２】
十分に乾燥され、そして周囲温度で貯蔵される、請求項２１に記載の食品。
【請求項２３】
請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物を含む栄養補助製品。
【請求項２４】
請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物を含む食品成分。
【請求項２５】
安定化された生物材料及び基質を含む組成物を、以下のステップ：
（ａ）十分に乾燥及び粉末化された少なくとも一つのバイオポリマーと、生物材料の含水濃縮物とを混合してゲルを形成し；
（ｂ）第一コーティングとして、ステップ（ａ）において形成されたゲルを、前記基質材料表面の少なくとも一部へとコーティングしてゲルコーティングされた基質を形成し（「第一コーティング」）；そして
（ｃ）前記第一コーティングを、少なくとも一つの乾燥剤を用いて少なくとも部分的にコーティングすること（「第二コーティング」）
によって製造する方法。
【請求項２６】
前記第二コーティングが、少なくとも一つのさらなるコーティングでコーティングされ、前記さらなるコーティング（単数又は複数）が、少なくとも一つの乾燥剤を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ステップ（ｃ）後の組成物が、少なくとも１か月間、２０℃〜３０℃で貯蔵されるとき、生物学的生存率において２ ｌｏｇ以下の減少が生じる程度に十分安定である、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ステップ（ｃ）後の組成物が密閉環境中に置かれる、請求項２５〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記ステップ（ｃ）後の組成物が０．５未満の水分活性を有する、請求項２５〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ステップ（ｃ）後の組成物が触れる程度まで乾燥している、請求項２５〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記バイオポリマーガムが、５０００〜５０００００００の分子量を有する、請求項２５〜３０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３２】
前記ステップ（ａ）において使用されるバイオポリマーガムが：寒天、アルギン酸塩、カッシア、ダマール、ペクチン、ベータ−グルカン、グルコマンナン、マスチック、チクル、サイリウム、スプルースガム、キサンタンガム、ジェランガム、アカシアガム、グアーガム、ローカストビーンガム、カラギーナン、アラビアガム、カラヤガム、ガティガム、トラガカントガム、コンニャクガム、タラガム、及びそれらの組み合わせから選択される、請求項２５〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記ステップ（ｃ）後の組成物中のバイオポリマー（単数又は複数）濃度が、約１〜１０重量％である、請求項２５〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記ステップ（ａ）において使用される生物材料が：微生物、生物細胞、生物細胞の一部分若しくは複数の部分、弱毒化された微生物、胞子、菌糸を含む菌糸体、酵素、ホルモン、タンパク質及びそれらの組み合わせから選択される、請求項２５〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記生物材料が：セラチア属、キサントモナス属、シュードモナス属、リゾビウム属、ビューベリア属、メタリジウム属、ビフィドバクテリウム属、ラクトバチルス属、ストレプトコッカス（エンテロコッカス）属、エルシニア属、トリコデルマ属、及びそれらの組み合わせから選択され得る、請求項２５〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記生物材料が、プロバイオティック細菌又は真菌である、請求項２５〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記ステップ（ａ）において製造されたゲル混合物が、ステップ（ｂ）を開始する前に、周囲温度で、約５〜６０分間静置される、請求項２５〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記ステップ（ｂ）において形成される第一コーティングが、前記基質上で、３ｍｍ未満のほぼ一定の厚さである、請求項２５〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記ステップ（ｃ）において使用される基質材料が：種子、粘土顆粒、小粒、ペットビスケット、食品、例えば果実、野菜、殻果、米、及び乾燥処理された食品、例えばクラッカー、シリアル、穀類、並びにそれらの組み合わせから選択される、請求項２５〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記ステップ（ｃ）において使用される乾燥剤（単数または複数）が、１ｍｍ未満の粒子サイズを有する微細乾燥粉末である、請求項２５〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記乾燥剤（単数又は複数）が：セライト、タルク、ベントナイト、ゼオライト、米粉、ポテトスターチ、コーンスターチ、ラクトース、ショ糖、グルコース、マンニトール、ソルビトール、炭酸カルシウム、二酸化ケイ素、リン酸カルシウム、セルロース、ポリエチレングリコール、及びそれらの組み合わせを含む群から選択される乾燥粉末材料である、請求項２５〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
使用される前記乾燥剤（単数又は複数）の量が、１部のバイオポリマーに対して、１〜５部の乾燥剤（単数又は複数）の範囲である、請求項２５〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記組成物が、少なくとも一つの油も含む、請求項２５〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記油が食用油である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記油が植物油である、請求項４３又は４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記油が：オリーブ油、キャノーラ油、ヒマワリ種子油、加水分解油、及びそれらの組み合わせから選択される、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
ステップ（ａ）において混合されるバイオポリマーと油との比が、重量比で１：１０〜１０：１の範囲内である、請求項４３〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
ステップ（ａ）において少なくとも一つの抗酸化剤物質の添加を同様に含み、ここで前記抗酸化剤物質が：トコフェロール、アスコルビン酸、及びそれらの組み合わせから選択される、請求項２５〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
少なくとも一つの界面活性剤化合物の添加を同様に含む、請求項２５〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
周囲温度で行われる、請求項２５〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
請求項２５〜５０のいずれか一項に記載の方法によって製造される製品。
【請求項５２】
請求項２５〜５０のいずれか一項に記載の方法によって製造される組成物を含む食品。
【請求項５３】
十分に乾燥され、そして周囲温度で貯蔵される、請求項５２に記載の食品。
【請求項５４】
請求項２５〜５０のいずれか一項に記載の方法によって製造される組成物を含む栄養補助製品。
【請求項５５】
請求項２５〜５０のいずれか一項に記載の方法によって製造される組成物を含む食品成分。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
対応出願の陳述
本出願は、ニュージーランド出願第５６０５７４号に関して提出された仮明細書に基づき、そしてその全体の内容は、本明細書において参照により援用される。
【０００２】
技術分野
本出願は、薬剤の安定化法及び製品に関する。より具体的には、本発明は、生物材料を安定化するための、及び送達準備のできた製品を製造するための代替的方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景技術
生物材料の工業的又は農業的適用に関する既知の問題は、それらが使用されるまで、又は乾燥前のように当該材料を安定化するために必要とされる期間の間、生存状態若しくは安定状態にある、当該材料の維持である。多くの生物材料は、貯蔵している間において生存状態で維持され得ず、特にそれらは、冷蔵下において維持されない、又は維持され得ない。
【０００４】
本明細書の目的のために、用語「生物材料」は、限定されないが、任意の又は全ての以下のものを含むために使用される：微生物、生物細胞、生物細胞の一部分若しくは複数の部分、弱毒化された微生物、胞子、菌糸を含む菌糸体、室温で不安定な医薬化合物、酵素、ホルモン、タンパク質及びそれらの組み合わせ。以下の議論の目的のために、具体的な言及は、細菌に対してなされており、しかし上で記載されたように、限定的に見られるべきではない。
【０００５】
現在、生物材料としての細菌製品は、当該製品が使用されるときまで市販で使用される数の生存を確保するために、高濃度の細菌の産生を必要とする。用語「貯蔵期間（ｓｈｅｌｆ  ｌｉｆｅ）」は、処理後における貯蔵期間のことであるが、原材料を用いて出発し、処理段階を通じて維持される、細菌の生存を保証する必要性が認められるべきである。生存率（ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）を維持するために、処理前の間、処理の間、及び処理後の間の冷却（「コールド・チェーン（ｃｏｌｄ  ｃｈａｉｎ）」）を使用して、並びに／又は凍結乾燥を使用して、限定された温度でこれは達成された。さらに、幾つかの微生物製品は、接種用量の送達のみを必要とするが、他のもの（例えばバイオ殺虫剤（ｂｉｏ−ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ））に関しては、より高い最少用量濃度の送達が有効量の送達のために必須である。
【０００６】
この貯蔵期間の問題を克服するために、多くの異なる製剤及び培地が提案され、使用され、及び開示された。幾つかの製剤は、貯蔵マトリックスである「バイオポリマー」のための基本的活性成分の選択を強調し、一方で他のものは、このマトリックスの製造方法、又は当該生物薬剤（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｇｅｎｔ）の、当該マトリックスへの導入、及び任意のこれらの段階が行われる条件を開示する。
【０００７】
薬剤を安定化するための一つの方法は、当該薬剤（単数又は複数）を、多糖の担体、例えばワックス、デンプン、又はガムと混合することである。この方法は、当該薬剤（単数又は複数）の安定性について処理し得るが、発明者は、それが必ずしも分散の問題を処理し得ず、そして均質な結果を形成し得ないことを発見した。
【０００８】
国際公開第０２／１５７０２号として刊行され、参照により本明細書に援用される、出願人の先の特許出願は、安定なバイオマトリックスゲルを製造する方法を記載しているが、これは安定化された薬剤を提供するときに有用であるが、ゲルは必ずしも好ましい送達機構ではない。当該出願はまた、当該ゲルを５ｍｍの厚さの層へと展着し、その後乾燥させることについて記載している。発明者の経験から、この厚さが、乾燥を遅くし、そして当該乾燥ゲルが再度水和され、そして使用前に激しく攪拌される場合における送達のために主に好適である。特に溶解が比較的速やかに起こる必要があるときに、より緩やかな混合は、完全に水和され、そして当該薬剤を溶液中へと均質化するために十分ではない。
【０００９】
国際公開第０２／１５７０３号として刊行された、出願人によるさらなる特許出願は、国際公開第０２／１５７０２号の方法の拡張を記述しており、そしてそれにより、当該バイオマトリックスゲルは、粉末化された不活性粘土とさらに混合され、生地（ｄｏｕｇｈ）を形成する。当該生地は、顆粒又はペレットへと形成され、その後乾燥され得ると記載されている。より厚い顆粒及び／又はペレットが、薄膜よりも乾燥が遅く、そして乾燥された生地が再度水和され、かつ激しく攪拌される送達のために主に好適である場合において、同様の乾燥の問題が生じ得る。特に溶解が比較的早く生じる必要がある時に、より緩やかな混合形態は、完全な再度の水和のために、及び当該薬剤を溶液へと均質化するために不十分であり得る。本出願において部分的に取り組まれている一つの問題は、ビヒクル、例えば種（ｓｅｅｄ）を用いる直接的な薬剤の送達である。一つの例は、乾燥された生地が再度水和され、その後種が当該溶液へと浸され、そして地面へと植えられる場合に提供される。しかし、この方法の不利な点は、さらなる労力を必要とする、植え付け前の再度の水和ステップを行う必要性を含み、及び当該生物材料が一旦水和された後に分解される機会を含むことである。この水和及び浸漬ステップを必要とすることなく、使用可能である当該種又は他のビヒクルを有することは、理想的には有用である。
【００１０】
国際公開第０２／１５７０３号に開示された方法はまた、必要とされる労力（及び処理コスト）を増大させ、そして結果的に所望ではない乾燥を含む。
【００１１】
貯蔵安定性が重要であることは、当業者によって理解されているはずである。その後の使用の準備のできた、及びその後の使用が容易である安定化された生物材料を提供する必要性がまた、重要である。最少の製造及び処理費用で、所望の適用における使用の準備ができた形態で、薬剤が安定化され、かつ調製されることが好適である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
先の問題に取り組むこと、又は公衆に有用な選択肢を少なくとも提供することが本発明の目的である。
【００１３】
本明細書において引用された全ての特許又は特許出願を含む全ての参考文献は、参照により本明細書に援用される。任意の参考文献が先行技術を構成するという承認はなされない。参考文献の説明は、その筆者が主張することが記載されており、出願人は、引用文献の正確性及び適切性に異議を申し立てる権利を保持する。多くの先行技術文献が本明細書において言及されているが、この参考文献は、ニュージーランド又は任意の他の国における、当技術分野の一般常識の一部を形成するという承認を構成しないということが明らかに理解されるだろう。
【００１４】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」は、変化する域内において、排他的意味又は包括的意味のいずれかであり得ると理解される。本明細書の目的のために、そして別途記載されない限り、用語「含む」は包括的意味を有し、すなわち、それが直接的に言及する列挙された構成成分のみならず、他の具体的ではない構成成分又は要素を含む意味としてとらえられるだろう。この原理はまた、用語「含まれる（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」が、方法又は手順における一つ以上のステップに関連して使用されるときに、同様に使用されるだろう。本発明のさらなる概要及び利点は、例のみで与えられる次の記載から明らかとなるであろう。
【００１５】
本発明のさらなる態様は、例としてのみ与えられる以下の記載から、及び以下の図を参照として明らかとなるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、処理のフローダイヤグラムを示す。
【図２】図２は、２５℃における、経時的な製剤１〜３の生存率を示すグラフを示す。
【図３】図３は、２５℃における、経時的な製剤４〜６の生存率を示すグラフを示す。
【図４】図４は、２５℃における、経時的な製剤７〜８の生存率を示すグラフを示す。
【図５】図５は、２０℃における、経時的な製剤４〜６の生存率を示すグラフを示す。
【図６】図６は、２０℃における、経時的な製剤７の生存率を示すグラフを示す。
【図７】図７は、２０℃における、経時的な製剤９の生存率を示すグラフを示す。
【図８】図８は、２０℃における、経時的な製剤１０の生存率を示すグラフを示す。
【図９】図９は、２５℃における、経時的な製剤１３の生存率を示すグラフを示す。
【図１０】図１０は、３０℃における、経時的な製剤１４の生存率を示すグラフを示す。
【図１１】図１１は、３０℃における、経時的な製剤１５の生存率を示すグラフを示す。
【図１２】図１２は、３０℃における、経時的な製剤１６の生存率を示すグラフを示す。
【図１３】図１３は、乾燥剤とバイオポリマーとの異なる比率が試験される場合での、３０℃における、ラクトバチルス製剤の生存率を示すグラフを示す。製剤は、以下のように標識される；「６＜♯１＞＜♯２＞４」、ここで♯１は、「ｎ」又は「ｙ」であり、そしてそれは当該製剤が空気乾燥されたか否かを意味し、そして♯２は、２％又は４％のバイオポリマー濃度のことである。製剤ごとの各カラムは、１か月の間隔を意味する。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
発明の開示
本発明の一つの態様にしたがって：
（ａ）基質；
（ｂ）前記基質の表面を少なくとも部分的にコーティングする、少なくとも一つのガム（ｇｕｍ）系バイオポリマー；及び生物材料の含水（ａｑｕｅｏｕｓ）濃縮物を含む第一コーティング；並びに
（ｃ）前記第一コーティングを少なくとも部分的にコーティングする、少なくとも一つの乾燥剤を含む第二コーティング
を含む組成物が提供される。
【００１８】
本発明のさらなる態様にしたがって、安定化された生物材料及び基質を含む組成物を、以下のステップ：
（ａ）十分に乾燥及び粉末化された少なくとも一つのバイオポリマーと、生物材料の含水濃縮物とを混合してゲルを形成し；
（ｂ）第一コーティングとして、ステップ（ａ）で形成されたゲルを、前記基質材料表面の少なくとも一部へとコーティングしてゲルコーティングされた基質を形成し（「第一コーティング」）；そして
（ｃ）前記第一コーティングを、少なくとも一つの乾燥剤を用いて少なくとも部分的にコーティングすること（「第二コーティング」）
によって製造する方法が提供される。
【００１９】
本発明のさらなる態様にしたがって、実質的に上に記載された組成物を含む食品が提供される。
【００２０】
好ましくは、当該食品は十分に乾燥され、そして周囲温度で貯蔵され得る。
【００２１】
本発明のさらなる態様にしたがって、実質的に上で記載されたような組成物を含む、栄養補助製品（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔ）が提供される。
【００２２】
本発明のさらなる態様にしたがって、実質的に上で記載されたような組成物を含む、食品成分が提供される。
【００２３】
本発明は、基質及び生物材料が一つの組成物中に存在する、使用の準備がなされている、二重コーティングされた基質に広範囲に関する。初期の生物材料は新鮮であり、そして含水状態であり、そして前記手順は、生物材料周辺における環境の水分活性を減らし、それにより、長期間貯蔵されたときにおける所望の程度の安定性／生存率を提供する。本発明において、これは、先行技術における乾燥法よりもむしろ、乾燥剤を使用して達成される。先行技術の方法を超える優れた安定性を有する組成物に加えて、本発明はまた、単純であって、そして最少の処理ステップ及び装置を必要とする処理にとって容易である。
【００２４】
選択された実施形態において、当該組成物及び方法は、より前の層上における、少なくとも一つのさらなる層の添加を含み得、ここで前記さらなる層は、少なくとも一つの乾燥剤を含む。
【００２５】
本明細書の目的のために、用語「安定な」又はその文法的変化形は、当該組成物が少なくとも１か月間２０℃で貯蔵されたとき、２ ｌｏｇ未満の生物生存率（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）の減少のことである。好ましくは、この安定性の測定は、酸素が環境中に存在し得るが、密閉された当該環境中で貯蔵されるときの組成物に関する。さらなる実施形態において、生存率の減少は、１ ｌｏｇ以下の減少である。
【００２６】
より好ましくは、観測される当該安定性は、３か月超の期間のものであり得る。一つの実施形態において、生物材料は、２０℃で貯蔵されたときに７か月超安定である。
【００２７】
好ましくは、第二コーティングは、第一コーティングの水分活性を減少させるために作用し得る。
【００２８】
好ましくは、ステップ（ｃ）後の組成物は、０．７未満の水分活性を有し得る。より好ましくは、水分活性は０．５未満である。さらなる実施形態において、水分活性は０．４未満であり得る。
【００２９】
好ましくは、ステップ（ｃ）後の組成物は、触れる程度まで乾燥され得る。
【００３０】
好ましくは、ステップ（ｂ）における第一コーティングを形成するために使用されるゲルは、疑塑性非ニュートン系流体（ｎｏｎ−Ｎｅｗｔｏｎｉａｎ  ｐｓｅｕｄｏｐｌａｓｔｉｃ  ｆｌｕｉｄ）であり得る。より好ましくは、ゲルはまた、チキソトロピックな特性を有する。
【００３１】
好ましくは、ステップ（ａ）におけるバイオポリマーガムは、５０００〜５０００００００の分子量を有することによって特徴付けられ得る。バイオポリマーガムは、酵素分解に対して抵抗性を有することによって、並びにせん断、熱及びＵＶによる分解に対して抵抗性を有することによって特徴付けられ得る。好ましい実施形態において、組成物中に混合されたとき、当該ガムは産生されるゲルに疑塑性特性を付与する。
【００３２】
より具体的には、バイオポリマーガムは、以下から選択され得る：寒天、アルギン酸塩、カッシア、ダマール、ペクチン、ベータ−グルカン、グルコマンナン、マスチック、チクル、サイリウム、スプルースガム、キサンタンガム、ジェランガム、アカシアガム、グアーガム、ローカストビーンガム、カラギーナン、アラビアガム、カラヤガム、ガティガム（ｇｈａｔｔｉ  ｇｕｍ）、トラガカントガム、コンニャクガム、タラガム、及びそれらの組み合わせ。
【００３３】
好ましい実施形態において、ガムは、キサンタンガム、ジェランガム、ローカストビーンガム、及びそれらの組み合わせであり得る。
【００３４】
好ましい実施形態において、ステップ（ｃ）後における、組成物中のバイオポリマー（単数又は複数）濃度は、約１重量％〜１０重量％のバイオポリマーガムであり得る。より好ましい実施形態において、当該範囲は２％〜６％であり得る。さらにより好ましい実施形態において、当該範囲は３％〜５％であり得る。
【００３５】
好ましくは、バイオポリマーガムは、混合前のステップ（ａ）において、直径約２ｍｍ未満の粒子サイズを有し得る。一つの実施形態において、限定されるものとして見られるべきではないが、粒子サイズは、約２０メッシュであり得、又は８５０μｍ未満であり得る。
【００３６】
好ましくは、生物材料は、それが細胞組織と相互作用を有するように生物活性であり得る。
【００３７】
好ましくは、ステップ（ａ）において使用される生物材料は：微生物、生物細胞、生物細胞の一部分若しくは複数の部分、弱毒化された微生物、胞子、菌糸を含む菌糸体、酵素、ホルモン、タンパク質及びそれらの組み合わせであり得る。
【００３８】
さらなる実施形態において、生物材料は、一つ以上の医薬化合物、例えば周囲温度で不安定なホルモンであり得る。
【００３９】
好ましくは、最初に提供される生物材料は、含水濃縮物であり得る。一つの実施形態において、生物材料は、本発明の方法を開始してから２４時間以内に産生される培地又は濃縮物であって、新鮮であり得る。当該濃縮物は、あらかじめ乾燥されておらず、又は本発明の方法において安定化が開始される前に処理されない。
【００４０】
好ましくは、含水濃縮物は、水又は他の液体である残存含有物と共に、約５重量％〜９９．９重量％の濃度範囲での生物材料を含み得る。
【００４１】
一つの実施形態において、生物材料は、グラム陰性細菌であり得る。
【００４２】
他の実施形態において、生物材料は、グラム陽性細菌であり得る。
【００４３】
他の実施形態において、生物材料は、偏性嫌気性細菌であり得る。
【００４４】
選択された実施形態において、生物材料は、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）属、キサントモナス（Ｘａｎｔｈａｍｏｎａｓ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）属、ビューベリア（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ）属、メタリジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）属、エルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）属、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属、及びそれらの組み合わせから選択され得る。
【００４５】
他の実施形態において、生物材料は、プロバイオティック細菌又は真菌であり得る。本明細書の目的のために、用語「プロバイオティック」は、宿主の健康に有益な影響を与える酵母のような、生存細菌及び真菌のことである。
【００４６】
プロバイオティック細菌は、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属、カーノバクテリウム（Ｃａｒｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属又はビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属するものを含む。
【００４７】
プロバイオティクスとして使用されるビフィドバクテリウム属は、ビフィドバクテリウム・アドレスセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｉｍａｌｉｓ）、ビフィドバクテリウム・サーモフィルム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ブレベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒｅｖｅ）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ）、及びビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌａｃｔｉｓ）を含む。プロバイオティクスとして使用されるビフィドバクテリウム属の特定の株は、ビフィドバクテリウム・ブレベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒｅｖｅ）株ヤクルト（Ｙａｋｕｌｔ）、ビフィドバクテリウム・ブレベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒｅｖｅ）Ｒ０７０、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌａｃｔｉｓ）Ｂｂ１２、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）Ｒ０２３、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｉｆｉｄｕｍ）Ｒ０７１、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ）Ｒ０３３、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）ＢＢ５３６、及びビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）ＳＢＴ−２９２８を含む。
【００４８】
プロバイオティクスとして使用されるラクトバチルス属は、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・セロビオサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｌｌｏｂｉｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・クリスパタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）、ラクトバチルス・カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバチルスＧＧ（ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）又はラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）亜種ラムノサス）、ラクトバチルス・ガッセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）及びラクトバチルス・サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｕｓ）を含む。ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）２９９ｖ株は、サワードウ由来である。ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）自体はヒト由来である。ラクトバチルスの他のプロバイオティック株は、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）ＢＧ２ＦＯ４、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）ＩＮＴ−９、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＳＴ３１、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＬＡ１、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）ＮＣＦＢ１７４８、ラクトバチルス・カゼイ・シロタ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ  Ｓｈｉｒｏｔａ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）ＮＣＦＭ、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）ＤＤＳ−１、ラクトバチルス・デルブレッキイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）亜種デルブレッキイ、ラクトバチルス・デルブレッキイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）亜種ブルガリクス（ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）タイプ２０３８、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）ＳＢＴ−２０６２、ラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス・サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒ���ｕｓ）ＵＣＣ１１８、及びラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ）亜種パラカゼイＦ１９である。
【００４９】
プロバイオティクスとして使用される、又は開発されているラクトコッカス属は、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）亜種クレモリス（ｃｒｅｍｏｒｉｓ）（ストレプトコッカス・クレモリス）、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）亜種ラクティスＮＣＤＯ７１２、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）亜種ラクティスＮＩＡＩ５２７、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）亜種ラクティスＮＩＡＩ１０６１、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）亜種ラクティス・バイオバラエティ・ジアセチラクティス（ｂｉｏｖａｒ  ｄｉａｃｅｔｙｌａｃｔｉｓ）ＮＩＡＩ８Ｗ、及びラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）亜種ラクティス・バイオバラエティ・ジアセチラクティスＡＴＣＣ１３６７５を含む。
【００５０】
ストレプトコッカス・サーモフィルス（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）は、グラム陽性通性嫌気性細菌である。それは、非運動性、非胞子形成性、及びホモ発酵性（ｈｏｍｏｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｖｅ）であって、チトクロム−、オキシダーゼ−、及びカタラーゼ−陰性生物である。ストレプトコッカス・サーモフィルスは、ビリダンス群（ｖｉｒｉｄａｎｓ  ｇｒｏｕｐ）のアルファ−溶血性種である。それはまた、乳酸菌（ＬＡＢ）として分類される。ストレプトコッカス・サーモフィルスは、ミルク及び乳製品中に見られる。それはプロバイオティックであり、そしてヨーグルト中で使用される。ストレプトコッカス・サリバリウス（ｓａｌｉｖａｒｕｓ）亜種サーモフィルス・タイプ１１３１は、プロバイオティック株である。
【００５１】
エンテロコッカス属はグラム陽性であり、ストレプトコッカス科の通性嫌気性球菌である。それらは卵形であり、そして対で、又は短い鎖で生じる。エンテロコッカスはカタラーゼ陰性であり、非胞子形成性であり、そして通常非運動性である。エンテロコッカス属は、ヒト及び動物の腸内細菌叢（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ）の一部である。エンテロコッカス・ファシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）ＳＦ６８は、下痢性疾患の処置において使用されているプロバイオティック株である。
【００５２】
主要なプロバイオティック酵母は、サッカロマイセス・ブラウディ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）であり得る。サッカロマイセス・ブラウディはまた、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）・ハンセン（Ｈａｎｓｅｎ）ＣＢＳ５２９６、及びＳ．ブラウディとして知られる。Ｓ．ブラウディは通常、非病原性酵母である。Ｓ．ブラウディは、抗生物質の使用に付随して、下痢を処理するために使用される。
【００５３】
好ましくは、乾燥原材料における細菌又は真菌の初期の細胞濃度は、１ｇあたり１０5個〜１０12個の細胞の範囲内であり得る。
【００５４】
一つの実施形態において、組成物中の生物材料は、１ｇあたり１０7個〜１０10個の細胞濃度である細菌細胞であり得る。
【００５５】
他の実施形態において、組成物中における生物材料は、１０3個〜１０9ｃｆｕ／ｇの範囲内の胞子濃度である真菌の胞子であり得る。
【００５６】
さらなる他の実施形態において、組成物中の生物材料は、１リットルあたり８〜３３グラムの濃縮物である、体積あたりの質量を有する、真菌の菌糸体であり得る。
【００５７】
一つの好ましい実施形態において、ステップ（ａ）において製造されたゲル混合物は、ステップ（ｂ）を開始する前に、周囲温度（５℃〜５０℃）で、約５〜６０分、好ましくは１５〜２０分静置され得る。さらなる混合は、静置後に完了され得る。発明者は、この静置ステップによって、ゲルが厚くされ、そして粘性を増大させ得ることを発見した。静置時間はまた、所望の厚さ又は疑塑性の発達を、及び第一コーティングの形成に有用であるチキソトロピック特性の発達さえも助ける。
【００５８】
好ましくは、ステップ（ｂ）において形成される第一コーティングは、基質の少なくとも一部において、３ｍｍ未満のほぼ一定の厚さであり得る。一つの実施形態において、コーティングは、当該基質をコーティングするために、当該基質をゲルへと浸漬するステップ、そして必要ならば、当該ゲル中へ当該基質を穏やかに混合するステップによって完了され得る。
【００５９】
一つの実施形態において、基質は、約０．５ｍｍ〜５０ｍｍの範囲内の直径を有する、おおよそ卵型の又は球形状の固体又は半固体物であり得る。ディスク、チップ、フレーク、又は棒を含む、他の形状の基質はまた、本発明の範囲から逸脱することなく使用され得る。
【００６０】
好ましくは、当該基質は、食用の及び／又は生物分解性の固体又は半固体であり得る。
【００６１】
一つの実施形態において、当該基質材料は、食用材料、例えば：種子、小粒、ペットビスケット、果実、野菜、殻果、米、及び乾燥処理された食品、例えばクラッカー、シリアル、穀類、パスタ、米などであり得る。
【００６２】
さらなる実施形態において、基質は粘土顆粒であり得る。一つの実施形態において、粘土顆粒はケイ酸塩鉱物であり得る。好ましくは、土の顆粒は、アルミノケイ酸塩鉱物であり得る。一つの例は、アルミノケイ酸塩鉱物であるゼオライトの使用であり得る。
【００６３】
さらなる実施形態において、基質は、バイオポリマー・ビーズであり得る。バイオポリマー・ビーズの例は、オリヒドロキシアルカノエート・ビーズ及びアガロース・ビーズを含む。
【００６４】
上の混合物はまた、本発明の範囲から逸脱することなく使用され得る。
【００６５】
好ましくは、乾燥剤（単数又は複数）は、ゲルの水分活性を減少させるために使用され得る。これは、生物材料の安定化を助けるのみならず、コーティングされた基質の「厚み」を減少させることによって、最終生産物の扱いをより容易とすることを助ける。水分活性を減少させるために、乾燥剤（単数又は複数）が、ゲルコーティングから水溶液を吸収するものと理解される。コーティング及び吸収後においても、当該薬剤（単数又は複数）は、それらの乾燥特性のために、触れる程度に乾燥されたままである。
【００６６】
好ましい実施形態において、乾燥剤（単数又は複数）は、以下を含む群から選択され得る：セライト、タルク、ベントナイト、ゼオライト、米粉、ポテトスターチ、コーンスターチ、ラクトース、ショ糖、グルコース、マンニトール、ソルビトール、炭酸カルシウム、二酸化ケイ素、リン酸カルシウム、セルロース、ポリエチレングリコール、及びそれらの組み合わせ。上のリストは、例として提供されること、及び一般的に当技術分野における乾燥剤が、最終適用に依存して添加され得ること、例えば食品への適用は、食品に対して安全な薬剤を必要とすることは、当業者によって認識されるはずである。
【００６７】
好ましくは、乾燥剤は、１ｍｍ未満、より好ましくは１００μｍ未満の粒子サイズを有する微細粉末であり得る。
【００６８】
好ましくは、使用される乾燥剤（単数又は複数）の量は、バイオポリマー１部（ｐａｒｔ）に対して１〜５部の乾燥剤（単数又は複数）の範囲であり得る。一つの好ましい実施形態において、当該比率は、約１部のバイオポリマーに対して２部の乾燥剤である。
【００６９】
一つの実施形態において、乾燥剤（単数又は複数）は、乾燥剤（単数又は複数）の初期の水分活性を減少させるために、上の処理における使用前にあらかじめ乾燥され得る。好ましくは、あらかじめ乾燥された乾燥剤の水分活性は、約０．１であり得る。
【００７０】
本発明者は、いったん乾燥剤が添加されると、基質上に生じる二重コーティングが低い水分活性を有することを発見した。実際、この水分活性は、少なくとも０．７未満であり得、そしてより好ましくは、約０．４未満であり得る。これが、非常に低い水分活性であり得、したがって当該方法が、別途の乾燥ステップを行う必要なく、微生物材料にとって非常に安定な環境を提供することが認識されるはずである。
【００７１】
一つの実施形態において、安定化された生物材料及び基質はまた、少なくとも一つの油を含み得る。好ましくは、使用される場合、当該油は、本方法のステップ（ａ）の間であって、生物材料の添加前に添加され得る。油は、混合物の均質性を支援することが本発明者によって発見され、そして当該油は、凝集、局部的非混合を防止し、並びに分散を改善した。
【００７２】
一つの実施形態において、油は食用油であり得る。
【００７３】
好ましい油は、植物系油であり得る。又は油は、海産系油、例えば魚系又は海藻系油であり得る。油の組み合わせがまた使用され得る。
【００７４】
好ましい実施形態において、使用される油は、高レベルの抗酸化剤を有し得る。限定されないが、例えば冷圧搾バージン油（ｃｏｌｄ  ｐｒｅｓｓｅｄ  ｖｉｒｇｉｎ  ｏｉｌ）である。
【００７５】
より具体的には、油は：オリーブ油、キャノーラ油、ヒマワリ種子油、加水分解油（ｈｙｄｌｙｚｅｄ  ｏｉｌ）及びそれらの組み合わせから選択され得る。
【００７６】
一つの好ましい実施形態において、油はオリーブ油であり得、しかし、本発明の範囲から逸脱することなく、他の油が、同様の化学的かつ物理学的特性を有して使用され得ることが認められる。
【００７７】
好ましくは、ステップ（ａ）において混合されるバイオポリマーと油との比は、重量比で１：１０〜１０：１の範囲内であり得る。より好ましい実施形態において、乾燥生物材料と油との比は、１：１〜１：４であり得る。さらにより好ましい実施形態において、当該比は、約１：１であり得る。
【００７８】
一つの実施形態において、安定化された生物材料及び基質はまた、少なくとも一つの抗酸化剤物質を含み得る。好ましくは、使用されるときに、抗酸化剤は、当該方法のステップ（ａ）の間で添加され得る。好ましい抗酸化剤物質は：トコフェロール、アスコルビン酸、及びそれらの組み合わせを含む。
【００７９】
一つの実施形態において、安定化された生物材料及び基質はまた、少なくとも一つの界面活性剤化合物を含み得る。一つの実施形態において、界面活性剤は、生物材料と混合されて、未加工の含水生物濃縮物を形成し得る。一つの実施形態において、界面活性剤は、親水性部位を有し得る。一つの好ましい実施形態において、界面活性剤はＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（商標）であり得る。この界面活性剤が、組成物中に存在する油と共に、又は共にではなく使用され得ることに留意すること。
【００８０】
好ましくは、用語「周囲の（ａｍｂｉｅｎｔ）」は、通常の室内温度、湿度及び気圧のことである。より具体的には、この用語は、約１０℃〜５０℃の、より好ましくは１５〜２５℃の範囲にある温度のことであり、０％〜７０％の、より好ましくは４０〜８０％の相対湿度のことであり、そして標準気圧のことである。
【００８１】
好ましくは、製造される当該組成物は、密閉環境下で貯蔵され得る。例として、当該組成物は、バッグ中又は密閉されたポリスチレン容器中に貯蔵され得る。これは、湿気又は酸化的分解による攻撃から、当該組成物を保護することを助ける。
【００８２】
発明者によって発見された利点は、当該組成物が真空密閉される必要がないことである。従来法とは異なり、密閉化に先立つ、容器からの酸素の除去は必須ではなく、そして生存率に対してほとんど影響がない。
【００８３】
好ましくは上の方法は、周囲条件下で完了され得る。理解され得るように、当該手順は、従来法とは異なり、特別な温度、湿度又は不活性雰囲気下で完了される必要がないため、これは重要な利点である。例として、効率性がパーセンテージであって、処理前及び処理後の生存細胞レベル間を測定して求められる場合、優れた処理効率性を発明者は見出した。
【００８４】
使用のために、コーティングされた基質は、単純に環境中へと置かれ得る。例えば、農業における適用において、コーティングされた種子は土壌中へと植えられ、そして当該種子を取り巻く水性環境がコーティング層を破壊して、生物学的薬剤、例えば抗真菌剤を周囲環境へと放出する。別の例において、基質は穀物、例えばプロバイオティック微生物でコーティングされるブラン・フレークであり得る。摂取時において、腸内における水性環境によって、当該コーティングが破壊され、腸内へとプロバイオティック剤が放出される。
【００８５】
遅くかつエネルギーを大量に使用する、空気乾燥、噴霧乾燥、又は凍結乾燥のような物理学的乾燥方法を使用することを避けることができるので、上の方法及び製品は、大量スケールの処理に好適であるというのが本発明者の経験である。反対に、本発明の方法及び製品は、乾燥剤（単数又は複数）を添加することによる「化学的」乾燥ステップを使用する。
【００８６】
さらに、理想的には当該製品は、大量流通に適している。それが基質を含めて送達の準備ができている形態であり、そして適用に先立つ任意の特別な処理、例えば再度の水和及び／又は混合を必要としない。先行技術の方法は、送達が大量スケールである場合には、必要とされる過剰の労力及び取扱い、並びに生存する生物材料を失う危険性のために特に不適である、適用前における再度の水和ステップを必要とする傾向にある。
【００８７】
上の記載から、以下のものを含む、先行技術を超えるかなりの利点を提供する方法、及びコーティングされた基質生産物が提供されることが認識されるべきである：
・生物材料を安定化し、貯蔵し、そして後日利用する能力；
・一つの製品中の生物材料及び基質の両方を送達する能力；
・生物材料及び基質の適用前における、任意の過剰の取扱いステップ、例えば再度の水和を完了させる必要性の排除；
・生物材料を物理的に乾燥させる必要性の排除；
・非常に低い残余の水分活性、それゆえの高い安定性環境；
・大量の安定化微生物材料を製造及び出荷するためのより実用的な方法。
【実施例】
【００８８】
本発明を行うための最良の形態
本発明の生産物を製造するための最も好ましい方法、及びこれらの生産物の使用をこれから記載する。
【００８９】
実施例１
本発明の製品の一般的製造法を、図１を参照にして記載する。
【００９０】
粗い顆粒状混合物１０を形成するために、乾燥し、かつ粉末化されたガム（バイオポリマー）を、油と室温で最初に混合した。
【００９１】
生物材料の含水系濃縮物１１を調製し、そしてこれをガムと油との混合物１０と混合してゲル１２を形成した。
【００９２】
場合により、当該ゲル１２を５〜６０分間静置した。
【００９３】
ゲル１２を用いて、一つの選択肢として基質１３をゲル１２へと浸すことによって、基質１３上に第一コーティングを形成させ、第一コーティングがなされた基質１４を形成した。
【００９４】
その後、第二コーティング１６を第一コーティングがなされた基質１４に加えて二重コーティングされた基質１５を形成した。
【００９５】
理解される通り、油又は他の薬剤は、上の一般的方法において添加されなかった。本発明者は、この基本的処理が生物材料を安定化させるために十分であり得ることを見出した。油及び他の物質は、場合により添加され得、そしてこれらはさらに以下で説明される。
【００９６】
実施例２
本発明の組成物を製造するための種々の組み合わせである以下の表１において、種々の製剤がここに記載される：
【００９７】
【表１】
2011502504.tif 000003
【００９８】
実施例３
製剤２を製造するために、詳細な手順をこれから説明する（そして、製剤１及び３を製造するためにその変法が使用される）：
（ａ）リゾビウム・レグミノサルム・バイオバラエティ・トリフォリ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｒｕｍ  ｂｉｏｖａｒ  ｔｒｉｆｏｌｉｉ）（ＣＣ２７５ｅ）を、修飾酵母麦芽抽出物ブロスを使用して産生し、その後濃縮物を形成するためにさらに処理した。
（ｂ）３グラムのキサンタンガム、１グラムのグアーガム、及び１グラムのローカストビーンガムを共に混合した。
（ｃ）０．５グラムのサラダ油及び食用油をその後に当該ガム混合物へ加えた。
（ｄ）ステップ（ｃ）からの混合物をその後にステップ（ａ）の濃縮物と共に合わせてゲルを形成した。
（ｅ）２グラムのゲルをコーティングして、４４グラムの白クローバーの種子（Ｈｕｉａ種）上にコーティングし、種子表面上に一定のコーティングを得た（「第一コーティング」）。
（ｆ）第二コーティングである４グラムのタルク（乾燥剤）を、第一コーティングがなされた種子へと加え、それにより単一の二重コーティングされた流動性種子を得た。
（ｇ）コーティングされた種子を気体移動可能な厚いバッグ（厚さ１２０μｍ）に詰め、そして貯蔵した。
【００９９】
製剤１においてはキサンタンガム及びローカストビーンガムのみを使用して、そして製剤３においてはキサンタンガムのみを使用することを除き、同一の手順を、製剤１及び３のために使用した。
【０１００】
実施例４
製剤５を製造するために、詳細な方法をこれから説明する（そして、製剤４を製造するためにその変法が使用される）：
（ａ）ラクトバチルス・アシドフィルスの凍結細胞を市販の供給元から得、そして密閉された容器中−８０℃で保持した。
（ｂ）０．２５グラムのローカストビーンガム及び０．２５グラムのグアーガムを０．５グラムのエキストラ・バージン・オリーブ油と混合した。
（ｃ）１１．５ｍｌのＬ．アシドフィルス濃縮物をステップ（ｂ）の混合物へ添加し、ゲルを形成した。
（ｄ）１５μｌの抗酸化剤（トコフェロールを混合）を、ステップ（ｃ）のゲルへと添加した。
（ｅ）１．６グラムのゲルを、あらかじめ乾燥したブラン（８０℃で２４時間乾燥された基質）上にコーティングし（第一コーティング）、そして当該ゲル及びブランを混合してブラン上に一定のコーティングをなした。
（ｆ）１．６グラムのあらかじめ乾燥された米粉（８０℃で２４時間乾燥）をその後添加し、そして第一コーティング上へと混合した（第二コーティングとなる）。
（ｇ）５グラムの試料を金属箔の袋（ｆｏｉｌ  ｓａｃｈｅｔ）中に入れ、そして貯蔵した。
【０１０１】
製剤化後に測定された水分活性はａw０．４７９であった。
【０１０２】
キサンタンガムをローカストビーンガム及びグアーガムに加えて使用したことを除いて、製剤４を、製剤５と同一の方法を使用して製造した。
【０１０３】
実施例５
製剤６を製造するために、詳細な方法をこれから説明する：
（ａ）ラクトバチルス・アシドフィルスの凍結細胞を市販の供給元から得、そして密閉された容器中−８０℃で保持した。
（ｂ）０．５グラムのキサンタンガムを０．５グラムのキャノーラ油と混合した。
（ｃ）１１．５ｍｌの解凍されたＬ．アシドフィルス濃縮物をステップ（ｂ）の混合物へ添加し、混合してゲルを形成した。
（ｄ）１５μｌの抗酸化剤（トコフェロールを混合）を、当該ゲルへと添加した。
（ｅ）１．６グラムの当該ゲルをあらかじめ乾燥したブラン（８０℃で２４時間乾燥された基質）上にコーティングし（第一コーティング）、そして当該ゲル及びブランを混合してブラン上に一定のコーティングをなした。
（ｆ）１．６グラムのあらかじめ乾燥された米粉（８０℃で２４時間乾燥）をその後添加し、そして第一コーティング上へと混合した（第二コーティングとなる）。
（ｇ）５グラムの試料を金属箔の袋中に入れ、そして貯蔵した。
【０１０４】
製剤化後に測定された水分活性はａw０．５２５であった。
【０１０５】
実施例６
製剤７を製造するために、詳細な方法をこれから説明する：
（ａ）ビフィドバクテリウム・ラクティスの凍結細胞を市販の供給元から得、そして密閉された容器中−８０℃で保持した。
（ｂ）０．２０８グラムのキサンタンガム、０．２０８グラムのローカストビーンガム、及び０．２０８グラムのグアーガムを０．６２５グラムのエキストラバージンオリーブ油と混合した。
（ｃ）０．０１２５グラムのアスコルビン酸（抗酸化剤として作用）をステップ（ｂ）の混合物へ添加した。
（ｄ）１１．２５ｍｌのＢ．ラクティス希釈濃縮物（０．１５％のバクトペクトン（Ｂａｃｔｏｐｅｐｔｏｎｅ）で希釈）をステップ（ｃ）の混合物へその後添加し、ゲルを形成した。
（ｅ）１．６グラムの当該ゲルをあらかじめ乾燥したブラン（８０℃で２４時間乾燥された基質）上にコーティングし（第一コーティング）、そして当該ゲル及びブランを混合してブラン上に一定のコーティングをなした。
（ｆ）１．６グラムのあらかじめ乾燥された米粉及びポテトスターチ（Ｐａｃｅｌｌｉ  ＢＣ）（いずれも混合前に８０℃にて２４時間乾燥）をその後１：１の比で混合した。当該粉末及びスターチ混合物をその後第一コーティング上へとコーティングした（第二コーティングとなる）。
（ｇ）５グラムの試料を金属箔の袋中に入れ、そして貯蔵した。
【０１０６】
製剤化後に測定された水分活性はａw０．４１１であった。
【０１０７】
実施例７
製剤８を製造するために、詳細な方法をこれから説明する：
（ａ）ビフィドバクテリウム・ラクティスの凍結細胞を市販の供給元から得、そして密閉された容器中−８０℃で保持した。
（ｂ）０．２０８グラムのキサンタンガム、０．２０８グラムのローカストビーンガム、及び０．２０８グラムのグアーガムを０．６２５グラムのエキストラバージンオリーブ油と混合した。
（ｃ）０．０１２５グラムのアスコルビン酸（抗酸化剤として作用）をステップ（ｂ）の混合物へ添加した。
（ｄ）１１．２５ｍｌのＢ．ラクティス希釈濃縮物（０．１５％のバクトペクトンで希釈）をステップ（ｃ）の混合物へ添加し、そしてゲルを形成した。
（ｅ）１．６グラムの当該ゲルをあらかじめ乾燥したブラン（８０℃で２４時間乾燥された基質）上にコーティングし（第一コーティング）、そして当該ゲル及びブランを混合してブラン上に一定のコーティングをなした。
（ｆ）１．６グラムのあらかじめ乾燥された米粉及びポテトスターチ（Ｐａｃｅｌｌｉ  ＢＣ）（いずれも混合前に８０℃にて２４時間乾燥）をその後１：１の比で混合した。当該粉末及びスターチ混合物をその後第一コーティング上へとコーティングした（第二コーティングとなる）。
（ｇ）５グラムの試料を金属箔の袋中に入れ、そして貯蔵した。
【０１０８】
製剤化後に測定された水分活性はａw０．４１１であった。
【０１０９】
実施例８
製剤９を製造するために、詳細な方法をこれから説明する：
（ａ）セラチア・エントモフィラ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｅｎｔｏｍｏｐｈｉｌａ）細菌を市販の供給元から得、そしてブロスを形成した。
（ｂ）１５グラムのキサンタンガムを１５グラムのサラダ油及び食用油と混合した。
（ｃ）ステップ（ａ）からの２３０ｍｌのブロスをステップ（ｂ）の混合物へと添加し、そして激しく混合してゲルを形成した。
（ｄ）当該ゲルを６５０グラムのゼオライト顆粒（２〜４μｍサイズ）上にコーティングし、そして混合して当該ゼオライト上に一定のコーティングを形成した（第一コーティング）。
（ｅ）５０グラムのベントナイト及びタルクを１：１で混合し、その後第一コーティング上へコーティングした。（第二コーティングとなる）。
（ｆ）さらに５０グラムのタルクをその後添加し、ゼオライトの単一の流動性粒子とした。
【０１１０】
製剤化後に測定された水分活性はａw０．９８９であった。
【０１１１】
基質を、製剤１１においてはニンジンの種子へと、そして製剤１２においてはタマネギの種子へと変更したことを除いて、製剤１１及び１２を、製剤９と同一の方法を使用して製造した。
【０１１２】
実施例９
製剤１０を製造するために、詳細な方法をこれから説明する：
（ａ）Ｂ．バシアーナ（ｂａｓｓｉａｎｉａ）の胞子を市販の供給元から得、そして使用するまで４℃で貯蔵した。
（ｂ）４グラムのキサンタンガムを１５８グラムの蒸留水と混合した。
（ｃ）２８グラムの胞子をその後、１６３グラムの０．０５％トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００分散剤と混合し、そしてポリトロン（ｐｏｌｙｔｒｏｎ）を使用して均質化した。
（ｄ）ステップ（ｂ）のキサンタン懸濁液をその後、ステップ（ｃ）の胞子懸濁液と混合して均質なゲルを形成した。
（ｅ）当該ゲルをその後、８４５グラムのゼオライト顆粒（２〜４μｍサイズ）上にコーティングし（第一コーティング）、そしてゲル及びゼオライトを混合して一定のコーティングを形成した。
（ｆ）６５グラムのベントナイト及びタルクを１：１で混合し、その後第一コーティング上へ添加してコーティングした。（第二コーティングとなる）。
（ｇ）タルクのみを使用して、２つのさらなるコーティングを完了した。
（ｈ）試料をその後、気体移動可能な厚いバッグ（厚さ８０μｍ）に詰め、そして貯蔵した。
【０１１３】
さらなる実施形態において、必須ではないが、油はステップ（ｂ）において同様に添加され得る。
【０１１４】
実施例１０
製剤１３及び１４を製造するために、詳細な方法をこれから説明する：
（ａ）０．２グラムのローカストビーンガム及び０．２グラムのグアーガムを量り取り、そして混合してガム混合物を形成した。
（ｂ）当該ガム混合物へ、０．４グラムのオリーブ油を添加し、そして混合した。
（ｃ）当該ガム混合物及びオリーブ油混合物へ、調製された細胞濃縮物を最終容量１０ｍｌとなるように添加した。
（ｄ）次に、１２μＬのビタミンＥを添加して、この時点でゲルを製造した。
（ｅ）８０℃で２４時間乾燥された７０グラムのブラン上に、２．８グラムのゲルを、緩やかに混合しながらコーティングした。
（ｆ）コーティングされたブランへ、８０℃で２４時間乾燥された２．８グラムの米粉をコーティングし、そして緩やかに混合しながら分散させた。
【０１１５】
実施例１１
製剤１５及び１６を製造するために、詳細な方法をこれから説明する：
（ａ）０．４グラムのキサンタンガムを量り取った。
（ｂ）当該ガムへ、０．４グラムのオリーブ油を添加し、そして混合した。
（ｃ）当該ガム及びオリーブ油混合物へ、調製された細胞濃縮物を最終容量１０ｍｌとなるように添加した。
（ｄ）次に、１２μＬのビタミンＥを添加して、この時点でゲルを製造した。
（ｅ）８０℃で２４時間乾燥された７０グラムのブラン上に、２．８グラムのゲルを、緩やかに混合しながらコーティングした。
（ｆ）コーティングされたブランへ、８０℃で２４時間乾燥された２．８グラムの米粉をコーティングし、そして緩やかに混合しながら分散させた。
【０１１６】
実施例１２
２５℃よりも微かに高い温度で、短期間で二重コーティングされた基質の安定性をここに示す。
【０１１７】
個々の安定性試験において、貯蔵期間を一か月間隔で測定し、そして生存率を測定するための標準的な手順を使用して試験した。
【０１１８】
図２は、２５℃で時間をかけて貯蔵された場合における製剤１、２及び３の生存率を示す。示されるように、生存率の減少は、３か月間の貯蔵期間を通じて、２ ｌｏｇ未満の減少であった。
【０１１９】
図３は、２５℃で時間をかけて貯蔵された場合における製剤４、５及び６の生存率を示す。示されるように、生存率の減少はまた、３か月間の貯蔵期間を通じて、２ ｌｏｇ未満の減少であった。
【０１２０】
図４は、２５℃で時間をかけて貯蔵された場合における製剤７及び８の生存率を示す。示されるように、生存率の減少はまた、３か月間の貯蔵期間を通じて、２ ｌｏｇ未満の減少であった。
【０１２１】
実施例１３
長期間の生存が、２０℃の貯蔵を使用して発明者によって完了されるさらなる試験に基づいて、ここに示される。回収された試料は、実施例１２と同様の標準的手順を使用して試験された。
【０１２２】
図５は、２０℃で６か月まで貯蔵された場合における、製剤４、５、及び６の生存率を示す。通常、生存率の減少は、１ ｌｏｇ未満の減少であり、２ ｌｏｇ超とはならなかった。
【０１２３】
図６は、２０℃で６か月間貯蔵された場合における、製剤７の生存率を示す。上の通り、生存率の減少は、１ ｌｏｇ未満の減少であり、２ ｌｏｇ超とはならなかった。
【０１２４】
図７は、２０℃で６か月間貯蔵された場合における、製剤９の生存率を示す。上の通り、本実施例において、生存率は、１ ｌｏｇ以内の減少で維持された。
【０１２５】
図８は、２０℃で７か月間貯蔵された場合における、製剤１０の生存率を示す。この場合において、生存率はまた、１ ｌｏｇ超減少しなかった。
【０１２６】
実施例１４
長期間の生存が、２５℃の貯蔵を使用して発明者によって完了されるさらなる試験に基づいて、ここに示される。回収された試料は、実施例１２と同様の標準的手順を使用して試験された。
【０１２７】
図９は、２５℃で１か月までの間貯蔵された場合における、製剤１３の生存率を示す。通常、生存率の減少は、１ ｌｏｇ未満の減少であった。
【０１２８】
図１０は、３０℃で２か月までの間貯蔵された場合における、製剤１４の生存率を示す。通常、生存率の減少は、１ ｌｏｇ未満の減少であった。
【０１２９】
図１１は、３０℃で２か月までの間貯蔵された場合における、製剤１５の生存率を示す。通常、生存率の減少は、１ ｌｏｇ未満の減少であった。
【０１３０】
図１２は、３０℃で２か月までの間貯蔵された場合における、製剤１６の生存率を示す。通常、生存率の減少は、１ ｌｏｇ未満の減少であった。
【０１３１】
実施例１５
本実施例において、乾燥剤とバイオポリマーとの比が安定性において影響を与えることを示すための実験を説明する。
【０１３２】
当該実験は、以下のステップによって、異なる乾燥剤とバイオポリマーとの混合物を含む種々の製剤を調製することによって完了された：
（ａ）新たに回収されたラクトバチルス・アシドフィルス細胞を、０．１５％バクトペプトン（ｐＨ７．２）を用いて１：１に希釈して混合し；
（ｂ）０．２ｇのローカストビーンガム及び０．２ｇのグアーガム、又は０．４ｇのローカストビーンガム、又は０．４ｇのグアーガムを別々に量り取った。
（ｃ）０．４ｇ又は０．８ｇのいずれかのオリーブ油をステップ（ｂ）のバイオポリマー混合物へと添加し、そして混合した。
（ｄ）ステップ（ｃ）のバイオポリマー及びオリーブ油混合物を、ステップ（ａ）の調製された細胞濃縮物へ、最終容量が１０ｍＬとなるように添加した。
（ｅ）１２μＬのビタミンＥをステップ（ｄ）の混合物へと添加した。
（ｆ）７０グラムのブランフレークを、十分な量のステップ（ｅ）の混合物を用いて、緩やかに混合しながらコーティングした。
（ｇ）２．８グラムの米粉を添加し、そしてこれを緩やかに混合しながら分散させた。
（ｈ）３０℃にて飽和ＭｇＣｌ2溶液上で６日間貯蔵された後、生じるステップ（ｇ）の製品を真空密閉した金属箔中に詰めた。
【０１３３】
試薬をその後、３０℃で貯蔵し、そしてｔ＝０、及び１か月後におけるｃｆｕ／ｇ及び水分活性を測定した。
【０１３４】
図１３に示されるように、バイオポリマー量が増大するにつれて（そして乾燥剤の量が減少するにつれて）、生じる製剤の安定性は減少する。
【０１３５】
実施例１６
本実施例は、ブランフレーク上にコーティングされた、安定化されたプロバイオティック培養物を製造するための方法を説明する。
【０１３６】
当該方法は以下のステップに関する：
（ａ）新たに回収された細胞を、０．１５％バクトペプトン（ｐＨ７．２）を用いて１：１に希釈して混合し；
（ｂ）０．２ｇのローカストビーンガム及び０．２ｇのグアーガムを別々に量り取り、そして両方のガムを合わせた。
（ｃ）０．４ｇのオリーブ油をステップ（ｂ）のガム混合物へと添加した。
（ｄ）ステップ（ｃ）のガム及びオリーブ油混合物を、ステップ（ａ）の調製された細胞濃縮物へ、最終容量が１０ｍＬとなるように添加した。
（ｅ）１２μＬのビタミンＥをステップ（ｄ）の混合物へと添加した。
（ｆ）７０グラムのブランフレークへ、ステップ（ｅ）の十分な量の混合物を添加し、当該ブランを均質にコーティングした。
（ｇ）ステップ（ｆ）から産生された、コーティングされたブランを、２．８グラムの米粉と混合した。
【０１３７】
実施例１７
本実施例は、本発明の安定化されたプロバイオティック組成物を使用する、２つのさらなる生産物混合物について説明する。
【０１３８】
【表２】
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【０１３９】
上の実施例から、非常に長い期間（７か月間以上）貯蔵されるように、生物材料を安定化する方法及び生産物が提供されることが理解されるはずである。生物材料が基質と共に組み込まれるため、生じる製品は、種々の適用における使用、例えば食品及び農業における使用に対する準備がなされており、余分な取扱いステップを行う必要が排除されている。
【０１４０】
本発明の態様は、例としてのみ記載されており、そして修飾及び付加が、添付の特許請求の範囲に定義されている本発明の範囲から逸脱することなく、本発明においてなされ得ることは理解されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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