(57)【要約】【課題】本発明は、ＩＬ−１０受容体アルファ（ＩＬ−１０Ｒα）抗体及びその部分配列、ヒト及びヒト化ＩＬ−１０受容体アルファ（ＩＬ−１０Ｒα）抗体及びその部分配列、単離及び精製ＩＬ−１０受容体アルファ（ＩＬ−１０Ｒα）抗体及びその部分配列、ＩＬ−１０受容体アルファ（ＩＬ−１０Ｒα）抗体及びその部分配列を含む組成物、並びにＩＬ−１０受容体アルファ（ＩＬ−１０Ｒα）抗体及びその部分配列を用いる方法に関する。【解決手段】本発明は、例えば、病原体感染、病原体再活性化を処置するために、又はワクチン接種又は免疫付与のために、ＩＬ−１０受容体アルファ（ＩＬ−１０Ｒα）抗体又は部分配列を投与することを例えば含む、病原体感染、病原体再活性化を処置する方法、及び病原体感染に対してワクチン接種又は免疫付与する方法をとりわけ含む。
2011524741.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合し、かつＩＬ−１０受容体アルファタンパク質への１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体、又は配列番号２９、３１および３３のいずれか１の重鎖可変領域配列並びに配列番号３０、３２および３４のいずれか１の軽鎖可変領域配列を含む抗体の結合を減少、阻害又は競合するヒト若しくはヒト化抗体又はその部分配列。
【請求項２】
ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合し、かつＩＬ−１０受容体アルファタンパク質への１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体、又は配列番号２９、３１および３３のいずれか１の重鎖可変領域配列並びに配列番号３０、３２および３４のいずれか１の軽鎖可変領域配列を含む抗体の結合を減少、阻害又は競合する単離若しくは精製抗体又はその部分配列。
【請求項３】
ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合し、かつＩＬ−１０受容体アルファタンパク質への３Ｆ９、ＳＰＭ４６６、又は３７６０７抗体の結合を検出可能に減少、阻害又は競合しない単離若しくは精製抗体又はその部分配列。
【請求項４】
ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合し、かつ３Ｆ９、ＳＰＭ４６６、又は３７６０７抗体が結合するエピトープと異なるエピトープに結合する抗体又はその部分配列。
【請求項５】
ヒトＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合し、かつチンパンジーＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合し、かつＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性を修飾する単離若しくは精製抗体又はその部分配列。
【請求項６】
ヒトＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合し、かつチンパンジーＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合し、かつマカクＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合し、かつＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性を修飾する単離若しくは精製抗体又はその部分配列。
【請求項７】
前記抗体又はその部分配列が、ＩＬ−１０の存在下で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＬＰＳによって処理された、ヒト、チンパンジー又はマカクＰＢＭＣによるＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−１β又はＩＦＮ−ガンマ発現又は分泌を上昇させる請求項５又は６に記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体又はその部分配列が、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質への１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体、又は配列番号２９、３１および３３のいずれか１の重鎖可変領域配列並びに配列番号３０、３２および３４のいずれか１の軽鎖可変領域配列を含む抗体の結合の約５０％未満を減少、又は阻害する請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体又はその部分配列が、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質への１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体、又は配列番号２９、３１および３３のいずれか１の重鎖可変領域配列、及び配列番号３０、３２および３４のいずれかの軽鎖可変領域配列を含む抗体の結合の約５０％以上を減少、又は阻害する請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１０】
前記抗体又はその部分配列が、立体構造エピトープに結合又はそれを認識し、直線状エピトープに結合又はそれを認識しない請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１１】
前記抗体又はその部分配列が、ＩＬ−１０Ｒα変異体Ｒ２１２Ｅ（配列番号６９）に対する１３６Ｄ２９、３Ｆ９、ＳＰＭ４６６又は３７６０７の結合よりも高い親和性でＩＬ−１０Ｒα変異体Ｒ２１２Ｅ（配列番号６９）に結合する請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１２】
ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質への前記抗体又はその部分配列の結合親和性、ＫＤが、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質への１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体、又は配列番号２９、３１および３３のいずれか１の重鎖可変領域配列並びに配列番号３０、３２および３４のいずれか１の軽鎖可変領域配列を含む抗体の結合親和性、ＫＤの約１〜１０００倍以内である請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１３】
ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質への前記抗体又はその部分配列の結合親和性、ＫＤが、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質への１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体、又は配列番号２９、３１および３３のいずれか１の重鎖可変領域配列並びに配列番号３０、３２および３４のいずれか１の軽鎖可変領域配列を含む抗体の結合親和性、ＫＤよりも高いか、低い請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１４】
前記抗体又は部分配列が、配列番号２９、３１又は３３として示したいずれか１の重鎖可変領域配列と少なくとも８０％一致する配列と、配列番号３０、３２又は３４として示したいずれか１の軽鎖可変領域配列と少なくとも８０％一致する配列とを含むＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合する単離若しくは精製抗体又はその部分配列。
【請求項１５】
前記抗体又は部分配列が、配列番号２９、３１および３３として示したいずれか１の重鎖可変領域配列と少なくとも８５％一致する配列と、配列番号３０、３２および３４として示したいずれか１の軽鎖可変領域配列と少なくとも８５％一致する配列とを含む請求項１４に記載の単離若しくは精製抗体又はその部分配列。
【請求項１６】
前記抗体又は部分配列が、配列番号２９、３１および３３として示したいずれ１の重鎖可変領域配列と少なくとも９０％一致する配列と、配列番号３０、３２および３４として示したいずれか１の軽鎖可変領域配列と少なくとも９０％一致する配列とを含む請求項１４に記載の単離若しくは精製抗体又はその部分配列。
【請求項１７】
配列番号２９、３１および３３のいずれか１に少なくとも８０％一致する重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２および３４のいずれか１に少なくとも８０％一致する軽鎖可変領域配列とを含むＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合する一本鎖抗体。
【請求項１８】
前記抗体又は部分配列が、配列番号２９、３１および３３として示したいずれか１の重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２および３４として示したいずれか１の軽鎖可変領域配列とを含み、前記抗体又はその部分配列が、配列番号２９、３１および３３、並びに配列番号３０、３２および３４の１つ以上のアミノ酸付加、欠失又は置換を有するＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合する単離若しくは精製抗体又はその部分配列。
【請求項１９】
前記抗体又は部分配列が、配列番号２９、３１又は３３として示したいずれか１の重鎖可変領域配列と少なくとも８０％一致する配列と、配列番号３０、３２および３４として示したいずれか１の軽鎖可変領域配列と少なくとも８０％一致する配列とを含む請求項１８に記載の単離若しくは精製抗体又はその部分配列。
【請求項２０】
前記置換が、同類又は非同類アミノ酸置換である請求項１８に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項２１】
前記置換が、相補性決定領域（ＣＤＲ）又はフレームワーク領域（ＦＲ）内に位置する請求項１８に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項２２】
前記置換が、ＣＤＲ又はＦＲの外側に位置する請求項１８に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項２３】
ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質への前記抗体又はその部分配列の結合が、ｉｎ  ｖｉｖｏ、又はｉｎ  ｖｉｔｒｏ、又は溶液中で細胞上に発現したＩＬ−１０受容体アルファタンパク質へのＩＬ−１０結合によって減少又は阻害される請求項１〜６、１３、１７及び１８のいずれか１に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項２４】
前記抗体又はその部分配列が、ＩＬ−１０シグナル伝達活性を減少又は阻害する請求項１〜６、１３、１７及び１８のいずれか１に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項２５】
ＩＬ−１０シグナル伝達活性の減少又は阻害が、１３６Ｄ２９、３Ｆ９、ＳＰＭ４６６又は３７６０７抗体のいずれか１によるＩＬ−１０シグナル伝達活性の減少又は阻害よりも高い請求項２４に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項２６】
前記抗体又はその部分配列が、ＩＬ−１０の存在下で、ＰＢＭＣ又はＮＫＴ細胞によるＴＮＦ−アルファ又はＩＦＮ−ガンマ発現を上昇又は誘発し、ＩＬ−１０の存在下でＨＬＡ−ＤＲ  ＭＨＣクラスＩＩ分子の発現を少なくとも部分的に修復し、又はＳＴＡＴ３のＩＬ−１０誘発リン酸化を阻害若しくは減少する請求項１〜６、１３、１７及び１８のいずれか１に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項２７】
前記抗体又はその部分配列が、リポ多糖類（ＬＰＳ）によって処理したヒトＰＢＭＣによりＴＮＦアルファ発現又は分泌のＩＬ−１０阻害を逆転又は阻害する請求項１〜６、１３、１７及び１８のいずれか１に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項２８】
前記抗体又はその部分配列が、炎症性又は適応的免疫応答、又はサイトカイン若しくはケモカインの産生を誘発、促進、刺激又は上昇させる請求項１〜６、１３、１７及び１８のいずれか１に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項２９】
前記炎症性免疫応答が、ＣＤ４＋若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞又はＮＫＴ細胞増殖、ＩＬ−２、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、又はＴＮＦ−アルファ、マクロファージ又は樹状細胞活性のＣＤ４＋若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞又はＮＫＴ細胞産生、又はＣＤ４＋若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞細胞毒性の１つ以上を含む請求項２８に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項３０】
前記サイトカインが、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８およびＧＭ−ＣＳＦの１つ以上を含む請求項２８に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項３１】
前記ケモカインが、ＭＣＰｌ、ＭＣＰ５、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−８、ＩＰ−１０およびＭＩＰ−２の１つ以上を含む請求項２８に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項３２】
前記ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質が、哺乳類ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質である請求項１〜６、１３、１７及び１８のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項３３】
前記ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質が、霊長類ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質である請求項３２に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項３４】
前記ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質が、ヒト、チンパンジー又はマカクＩＬ−１０受容体アルファタンパク質である請求項３２に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項３５】
前記抗体又はその部分配列が、チンパンジー及びマカクＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に結合する請求項１〜６、１３、１７及び１８のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項３６】
前記抗体又はその部分配列が、配列番号２若しくは配列番号８として示したＩＬ−１０受容体アルファタンパク質、又は配列番号４、配列番号６若しくは配列番号１０のＩＬ−１０受容体アルファタンパク質細胞外ドメインに結合する請求項１〜６、１３、１７及び１８のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項３７】
抗体アイソタイプが、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ又はＩｇＥアイソタイプを含む請求項１から６、１３、１７及び１８のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項３８】
ＩｇＧ、又はＩｇＡアイソタイプが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４並びにＩｇＡ１及びＩｇＡ２から選択される請求項３７に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項３９】
前記抗体部分配列が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、軽鎖可変領域ＶＬ、重鎖可変領域ＶＨ、三重特異性（Ｆａｂ３）、二重特異性（Ｆａｂ２）、ダイアボディ（（ＶＬ−ＶＨ）２又は（ＶＨ−ＶＬ）２）、トリアボディ（三価）、テトラボディ（四価）、ミニボディ（（ｓｃＦｖ−ＣＨ３）２）、二重特異性一本鎖Ｆｖ（Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ）、ＩｇＧデルタＣＨ２、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、（ｓｃＦｖ）２−Ｆｃ及びＩｇＧ４ＰＥから選択される請求項１から６、１３、１７及び１８のいずれか１項に記載の抗体部分配列。
【請求項４０】
前記抗体が、配列番号２９、３１および３３のいずれか１と一致する少なくとも８０のアミノ酸を有する重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２および３４のいずれか１と一致する少なくとも８０のアミノ酸を有する軽鎖可変領域配列とを含む請求項１〜６、１３、１７及び１８のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項４１】
前記抗体が、配列番号２９、３１および３３のいずれか１と一致する少なくとも９０のアミノ酸を有する重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２および３４のいずれか１と一致する少なくとも９０のアミノ酸を有する軽鎖可変領域配列とを含む請求項１〜６、１３、１７及び１８のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項４２】
前記抗体は、霊長類化、ヒト化、又はヒトである請求項１〜６、１３、１７及び１８のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項４３】
配列番号２９、３１および３３のいずれか１の内部に重鎖ＣＤＲ、又は配列番号３０、３２および３４のいずれか１の内部に軽鎖ＣＤＲを含むＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合する抗体又はその部分配列。
【請求項４４】
配列番号２９、３１および３３のいずれか１の内部に重鎖ＣＤＲと、配列番号３０、３２および３４のいずれか１の内部に軽鎖ＣＤＲとを含むＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合する抗体又はその部分配列。
【請求項４５】
配列番号２９、３１および３３のいずれか１つの内部に全ての重鎖ＣＤＲと、配列番号３０、３２および３４のいずれか１つの内部に全ての軽鎖ＣＤＲとを含むＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合する抗体又はその部分配列。
【請求項４６】
前記重鎖ＣＤＲが、ＳＹＳＭＮ、ＹＩＳＴＧＳＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧ；ＥＮＹＹＧＳＧＳＹＥＤＹＦＤＹ；ＹＩＳＴＲＳＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧ；ＥＬＳＭＨ；ＧＦＤＰＤＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ；及びＧＧＹＹＧＰＶＧＭＤＶから選択される１である請求項４４〜４６のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項４７】
前記軽鎖ＣＤＲが、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ；ＤＡＳＮＲＡＴ；ＱＱＲＳＮＷＰＩＦＴ；ＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＡ；ＡＡＳＳＬＱＳ；及びＱＱＹＮＳＹＰＬＴから選択される１である請求項４４から４６のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項４８】
抗体又はその部分配列が、ＣＤＲｌ（ＳＹＳＭＮ）、ＣＤＲ２（ＹＩＳＴＧＳＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲ３（ＥＮＹＹＧＳＧＳＹＥＤＹＦＤＹ）を有する重鎖可変領域配列と、ＣＤＲｌ（ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ）、ＣＤＲ２（ＤＡＳＮＲＡＴ）、ＣＤＲ３（ＱＱＲＳＮＷＰＩＦＴ）を有する軽鎖可変領域配列と、ＣＤＲｌ（ＳＹＳＭＮ）、ＣＤＲ２（ＹＩＳＴＲＳＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲ３（ＥＮＹＹＧＳＧＳＹＥＤＹＦＤＹ）を有する重鎖可変領域配列と、ＣＤＲｌ（ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ）、ＣＤＲ２（ＤＡＳＮＲＡＴ）、ＣＤＲ３（ＱＱＲＳＮＷＰＩＦＴ）を有する軽鎖可変領域配列と、ＣＤＲｌ（ＥＬＳＭＨ）、ＣＤＲ２（ＧＦＤＰＤＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ）、ＣＤＲ３（ＧＧＹＹＧＰＶＧＭＤＶ）を有する重鎖可変領域配列と、ＣＤＲｌ（ＲＡＳＱＧＩＳＰＷＬＡ）、ＣＤＲ２（ＡＡＳＳＬＱＳ）、ＣＤＲ３（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）を有する軽鎖可変領域配列とのいずれか１を含むＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合する抗体又はその部分配列。
【請求項４９】
前記抗体が、ハイブリドーマ細胞、ＣＨＯ細胞株又はＨＥＫ２９３Ｆ細胞から産生される請求項１〜６、１３、１７、１８、４４〜４６および４８のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項５０】
前記抗体が、抗体マルチマーを含む請求項１〜６、１３、１７、１８、４４〜４６および４８のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項５１】
１つ以上の異種ドメインを更に含む請求項１〜６、１３、１７、１８、４４〜４６および４８のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列。
【請求項５２】
前記異種ドメインが、ラベル又はタグを含む請求項５１に記載の抗体又は部分配列。
【請求項５３】
前記異種ドメインが、アミノ酸配列含む請求項５１に記載の抗体又は部分配列。
【請求項５４】
配列番号２９、３１又は３３で示される重鎖可変領域配列。
【請求項５５】
配列番号３０、３２又は３４で示される軽鎖可変領域配列。
【請求項５６】
請求項１〜６、１３、１７、１８、４４〜４６および４８のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列の重鎖又は軽鎖可変領域配列をコードする核酸。
【請求項５７】
抗体の定常領域配列をコードする核酸を更に含む請求項５６に記載の核酸。
【請求項５８】
発現制御要素を更に含む請求項５６に記載の核酸。
【請求項５９】
請求項１〜６、１３、１７、１８、４４〜４６および４８のいずれか１項に記載の抗体又は部分配列をコードする核酸を含むベクター。
【請求項６０】
請求項１〜６、１３、１７、１８、４４〜４６および４８のいずれか１項に記載の抗体又は部分配列を発現する宿主細胞。
【請求項６１】
請求項１〜６、１３、１７、１８、４４〜４６および４８のいずれか１項に記載の抗体又は部分配列をコードする核酸で形質転換した宿主細胞。
【請求項６２】
請求項１〜６、１３、１７、１８、４４〜４６および４８のいずれか１項に記載の抗体又は部分配列の重鎖又は軽鎖可変領域配列を発現又は産生する非ヒト動物。
【請求項６３】
請求項１〜６、１３、１７、１８、４４〜４６および４８のいずれか１項に記載の抗体又は部分配列を発現又は産生する非ヒト動物。
【請求項６４】
前記抗体が、ヒト免疫グロブリンラムダ又はカッパ軽鎖をコードする遺伝子座から発現される請求項６３に記載の非ヒト動物。
【請求項６５】
前記非ヒト動物が、ヒト免疫グロブリン核酸配列を含有する動物を含む請求項６３に記載の非ヒト動物。
【請求項６６】
前記非ヒト動物が、トランスクロモソミック動物を含む請求項６３に記載の非ヒト動物。
【請求項６７】
前記非ヒト動物が、哺乳類を含む請求項６３に記載の非ヒト動物。
【請求項６８】
前記非ヒト動物が、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ブタ又はウマを含む請求項６３に記載の非ヒト動物。
【請求項６９】
請求項１〜６、１３、１７、１８、４４〜４６および４８のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列を発現する植物。
【請求項７０】
請求項１〜６、１３、１７、１８、４４〜４６および４８のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列と、医薬的に許容し得る賦形剤又は担体とを含む医薬組成物。
【請求項７１】
請求項１〜６、１３、１７、１８、４４〜４６および４８のいずれか１項に記載の少なくとも２つの抗体又はその部分配列を含む組成物。
【請求項７２】
請求項１〜６、１３、１７、１８、４４〜４６および４８のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列、病原体抗原又はそのエピトープ、生若しくは弱毒化病原体、又は病原体抗原若しくはそのエピトープをコードする核酸、又は免疫刺激剤若しくは化合物を含む組成物。
【請求項７３】
（２００８年４月８日に寄託番号ＰＴＡ−９１３１で寄託されたハイブリドーマにより産生された）１３６Ｃ５、（２００８年４月８日に寄託番号ＰＴＡ−９１３２で寄託されたハイブリドーマにより産生された）１３６Ｃ８、又は（２００８年４月８日に寄託番号ＰＴＡ−９１３３で寄託されたハイブリドーマにより産生された）１３６Ｄ２９抗体又はその機能的配列。
【請求項７４】
請求項１〜６、１３、１７、１８、４４〜４６、４８および７３のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列を含むキット。
【請求項７５】
患者を処置するために十分な、請求項１〜６、１３、１７、１８、４４〜４６、４８および７３のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列の量を、必要とする患者に投与することを含む病原体感染の患者を処置する方法。
【請求項７６】
病原体抗原又はそのエピトープ、生若しくは弱毒化病原体、又は病原体抗原若しくはそのエピトープをコードする核酸と、病原体感染、潜伏からの再活性化に対する保護を患者に提供するために十分な、請求項１〜６、１３、１７、１８、４４〜４６、４８および７３のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列の量とを、必要とする患者に投与することを含む病原体感染、潜伏からの再活性化に対する保護を患者に提供する方法。
【請求項７７】
前記病原体感染が、慢性又は急性である請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
前記病原体感染が、潜伏感染である請求項７５に記載の方法。
【請求項７９】
前記患者が、哺乳類である請求項７５又は７６に記載の方法。
【請求項８０】
前記患者が、ヒトである請求項７５又は７６に記載の方法。
【請求項８１】
前記病原体が、ウイルス、細菌、寄生生物又は真菌を含む請求項７５又は７６に記載の方法。
【請求項８２】
前記ウイルスが、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、フラビウイルス、乳頭腫ウイルス（ＰＶ）、ポリオーマウイルス、ラブドウイルス、ミクソウイルス、アレナウイルス、コロナウイルス、アデノウイルス、レオウイルス、ピコルナウイルス、トガウイルス、ブニヤウイルス、パルボウイルス又はレトロウイルスを含む請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記ポックスウイルスが、ワクシニアウイルス、伝染性軟属腫、大痘瘡又は小痘瘡天然痘ウイルス、牛痘、ラクダ痘、羊痘又はサル痘を含む請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記ヘルペスウイルスが、アルファ−ヘルペスウイルス、ベータ−ヘルペスウイルス、ガンマ−ヘルペスウイルス、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ／ＨＨＶ−３）、ヒトヘルペスウイルス１、２、４、５、６、７又は８型（ＨＨＶ−８、カポジ肉腫会合ウイルス）を含む請求項８２に記載の方法。
【請求項８５】
前記肝炎ウイルスが、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ又はＧ型肝炎を含む請求項８２に記載の方法。
【請求項８６】
前記免疫不全ウイルスが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）を含む請求項８２に記載の方法。
【請求項８７】
前記ＨＩＶが、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２又はＨＩＶ−３を含む請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記フラビウイルスが、Ｃ型肝炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、並びに日本脳炎又は西ナイルウイルスを含む請求項８２に記載の方法。
【請求項８９】
前記乳頭腫ウイルスが、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）を含む請求項８２に記載の方法。
【請求項９０】
前記ヒト乳頭腫ウイルスが、ＨＰＶ株１、６、１１、１６、１８、３０、３１、４２、４３、４４、４５、５１、５２又は５４を含む請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記ポリオーマウイルスが、ＢＫウイルス（ＢＫＶ）又はＪＣウイルス（ＪＣＶ）を含む請求項８２に記載の方法。
【請求項９２】
前記ラブドウイルスが、狂犬病ウイルス又はベシクロウイルスを含む請求項８２に記載の方法。
【請求項９３】
前記ミクソウイルスが、パラミクソウイルス又はオルトミクソウイルスを含む請求項８２に記載の方法。
【請求項９４】
前記パラミクソウイルスが、麻疹、おたふく風邪、肺炎ウイルス又は呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）を含む請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記オルトミクソウイルスが、インフルエンザウイルスを含む請求項９３に記載の方法。
【請求項９６】
前記インフルエンザウイルスが、Ａ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、又はＣ型インフルエンザを含む請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記アレナウイルスが、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、フニンウイルス、ラッサ熱ウイルス、グアナリトウイルス、サビアウイルス又はマチュポウイルスを含む請求項８２に記載の方法。
【請求項９８】
前記コロナウイルスが、風邪又は重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）を引き起こすウイルスを含む請求項８２に記載の方法。
【請求項９９】
前記アデノウイルスが、気管支、肺、胃、腸（胃腸炎）、眼（結膜炎）、膀胱（膀胱炎）又は皮膚のウイルス感染を含む請求項８２に記載の方法。
【請求項１００】
前記レオウイルスが、ロタウイルス、サイポウイルス又はオルビウイルスを含む請求項８２に記載の方法。
【請求項１０１】
前記ピコルナウイルスが、ライノウイルス、アフトウイルス、ヘパトウイルス、エンテロウイルス、コクサッキーＢウイルス又はカルジオウイルスを含む請求項８２に記載の方法。
【請求項１０２】
前記ライノウイルスが、風邪を引き起こす請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記トガウイルスが、アルファウイルス、シンドビス（ｓｉｎｄｂｕｓ）ウイルス又は風疹ウイルスを含む請求項８２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記ブニヤウイルスが、ハンタウイルス、フレボウイルス又はナイロウイルスを含む請求項８２に記載の方法。
【請求項１０５】
前記レトロウイルスには、アルファ、ベータ、デルタ、ガンマ、イプシロン、レンチウイルス、スプマウイルス又はヒトＴ細胞白血病ウイルスを含む請求項８２に記載の方法。
【請求項１０６】
前記レンチウイルスが、免疫不全ウイルスを含む請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
前記免疫不全ウイルスが、ウシ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ又は霊長類ウイルスを含む請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記ヒトＴ細胞白血病ウイルスが、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１及び２型（ＨＴＬＶ−１及びＨＴＬＶ−２）を含む請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０９】
前記細菌が、マイコバクテリア、リステリア菌、ヘリコバクター、ボルデテラ、連鎖球菌、サルモネラ又はクラミジアを含む請求項７５又は７６に記載の方法。
【請求項１１０】
前記寄生生物が、原生動物又は線虫を含む請求項７５又は７６に記載の方法。
【請求項１１１】
前記原生動物が、トキソプラズマ原虫、リーシュマニア、変形体又はクルーズトリパノソーマを含む請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
前記線虫が、マンソン住血吸虫又は蠕虫を含む請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１３】
前記真菌が、カンジダアルビカンスを含む請求項７５又は７６に記載の方法。
【請求項１１４】
前記処置が、病原体感染又は病変から保護し、病原体感染又は病変に対する感受性を低下、減少、若しくは制限し、病原体数又は力価を低下、減少、阻害、抑制、制限若しくは制御し、病原体増殖又は複製を低下、減少、阻害、抑制、制限若しくは制御し、病原体タンパク質の量を低下、減少、阻害、抑制、制限若しくは制御し、又は病原体核酸の量を低下、減少、阻害、抑制、制限若しくは制御するために十分である請求項７５又は７６に記載の方法。
【請求項１１５】
前記処置が、病原体に対する免疫反応を上昇、促進、強化、誘発、増加又は刺激するために十分である請求項７５又は７６に記載の方法。
【請求項１１６】
前記処置が、病原体排除又は除去を上昇、促進、強化、誘発、増加若しくは刺激し、潜伏からの再活性化を低下、減少、阻害、抑制、制限若しくは制御し、又は他の患者への病原体伝達を低下、減少、阻害、抑制、制限若しくは制御するために十分である請求項７５又は７６に記載の方法。
【請求項１１７】
前記処置が、病原体感染又は潜伏からの病原体再活性化によって引き起こされる、又はそれと関連する１つ以上の有害な症状、障害、疾患、病変又は疾病、又は合併症を低下、減少、阻害、抑制、制限、制御、又は改善するために十分である請求項７５又は７６に記載の方法。
【請求項１１８】
前記抗体又はその部分配列が、病原体に対する患者の曝露又は感染の前、実質的に同時、又は後に投与される請求項７５又は７６に記載の方法。
【請求項１１９】
前記抗体又はその部分配列が、病原体感染又は潜伏からの病原体再活性化によって引き起こされる、又はそれと関連する病原体感染、病変又は有害な症状、障害、疾患、疾病、又は合併症の前、実質的に同時、又は後に投与される請求項７５又は７６に記載の方法。
【請求項１２０】
患者における免疫細胞の数又は活性化を上昇させるために十分な、請求項１から６、１３、１７、１８、４４から４６、４８および７３のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列の量を、患者に投与することを含む病原体感染を伴うか、又は病原体感染の危険を冒して、患者における免疫細胞の数又は活性化を上昇させる方法。
【請求項１２１】
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、樹状細胞（ＤＣ）、マクロファージ、好中球、好酸球、又はマスト細胞を含む請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
ＩＬ−１２が、樹状細胞（ＤＣ）又はマクロファージによって産生される請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記免疫細胞が、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ＋又はＣＤ１１ｃ＋細胞の１つ以上を含む請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２４】
患者における抗病原体ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞応答を上昇又は誘発するために十分な、請求項１から６、１３、１７、１８、４４から４６、４８および７３のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列の量を、患者に投与することを含む病原体感染を伴うか、又は病原体感染の危険を冒して、患者における抗病原体ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞応答を上昇又は誘発する方法。
【請求項１２５】
患者においてＴｈ１サイトカイン産生を上昇させるために十分な、請求項１から６、１３、１７、１８、４４から４６、４８および７３のいずれか１項に記載の抗体又はその部分配列の量を、患者に投与することを含むＴｈ１又はＴｈ２サイトカイン産生を上昇させる必要がある患者においてＴｈ１又はＴｈ２サイトカイン産生を上昇させる方法。
【請求項１２６】
前記患者が、病原体感染を有するか、又は有する危険がある請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
前記サイトカインが、インターフェロン（ＩＦＮ）ガンマ、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８又はＧＭ−ＣＳＦを含む請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２８】
ＩＦＮガンマが、病原体感染を含む病原体に特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞によって産生される請求項１２７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インターロイキン１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体及び使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン１０（ＩＬ−１０）又はサイトカイン合成阻害因子（ＣＳＩＦ）は、病原体に対する免疫応答の後期で樹状細胞（ＤＣ）、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マスト細胞及びケラチノサイトから分泌され、かつ造血細胞に強力な抗炎症作用及び免疫抑制作用を及ぼす（非特許文献１）。ＩＬ−１０は、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−４及びＧＭ−ＣＳＦを含む多くのサイトカイン産生を阻害できる（非特許文献２、非特許文献１）。それは、単球でのＭＨＣクラスＩＩ、ＩＣＡＭ−１、ＣＤ８０及びＣＤ８６の発現を下方制御もでき、それ故にＡＰＣ単球のＴ細胞活性化能力を減少させ（非特許文献３、非特許文献２、非特許文献４）、他方でＣＤ１４発現及びＬＰＳへの応答も増加させる（非特許文献５）。ＩＬ−１０は、ＤＣ成熟及びＩＬ−１２産生を阻害し（非特許文献６）、それ故にそのＴｈ１応答を誘発する能力を抑制する。更に、ＩＬ−１０は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の発生を促進する（非特許文献４）。
【０００３】
その実質的免疫抑制活性を考慮すると、ＩＬ−１０の異常な発現は、多くの慢性又は進行性感染症の発症機序にかかわっているとみなされてきた。単球及びマクロファージは、主要なＩＬ−１０産生源であり、かつ細胞内病原体は通常、感染部位でマクロファージを標的にする（非特許文献７）。過剰なＩＬ−１０が通常、適応Ｔｈ１応答をプライミング及び持続することにおいてＡＰＣ機能障害をもたらし、それ故に抗病原体免疫応答の有効性を低下させる、広範囲な証拠がある。マウスモデルに基づくと、先天性及び適応的免疫応答は両方とも、それぞれｉｎ  ｖｉｖｏでのＩＬ−１０の実験的枯渇又は上昇によって強化又は損なわれる。これらの事象は、リステリア菌（非特許文献８）、肺炎連鎖球菌、黄色ブドウ球菌、トリ型結核菌、カンジダアルビカンス、大形リーシュマニア（非特許文献４、非特許文献９）、及びリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）（非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献１２、非特許文献１３、非特許文献１４、非特許文献１５）のような細胞内病原体それぞれのクリアランスの増大又は減少に反映される。
【０００４】
ヒトにおいて、ＩＬ−１０値の上昇は、内臓リーシュマニア及びマイコバクテリアのような細胞内病原体によって引き起こされる多数の慢性又は進行性感染症と相関している。その上、抗ＩＬ−１０モノクローナル抗体が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで感染者由来の病原体特異的Ｔ細胞の応答を回復できることが報告されており（非特許文献４）、ＩＬ−１０がこれらの慢性病においてＴ細胞非応答又はアネルギーを媒介することが示唆されている。血清中のＩＬ−１０値の上昇は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）（非特許文献１６）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）（非特許文献１７）、ＨＩＶ（非特許文献７）、及びサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（非特許文献７）を含む幾つかの慢性ウイルス感染症とも関連してきた。ＩＬ−１０は、免疫応答を回避するためにウイルスが利用する１つの戦略である。マクロファージに感染させ、かつ細胞ＩＬ−１０産生を誘発するウイルスもある一方で、ＣＭＶ及びエプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）のように、ＩＬ−１０ホモログ（ｖＩＬ−１０）をコードするウイルスもある（非特許文献１８、非特許文献４）。持続性ウイルス感染がＩＬ−１０の分泌増加を引き起こす正確な分子メカニズムは、特定されていない。しかしながら、ＩＬ−１０値の上昇は、炎症応答の局所及び／又は全身抑制をもたらす。ＨＢＶ及びＨＣＶ慢性的感染者において、ＩＬ−１０値増加は、Ｔ細胞活性の減退につながり、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのウイルス抗原の存在下で、増殖の喪失及びサイトカイン産生によって裏付けられる。更に、ＨＣＶ患者におけるこの表現型は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで抗ＩＬ−１０Ｒ抗体によって逆転しうる（非特許文献１９、非特許文献２０）。ＩＬ−１０中和に対する類似の応答が、ＨＩＶ感染者由来のＰＢＭＣによりｉｎ  ｖｉｔｒｏで観察された（非特許文献２１、非特許文献２２）。
【０００５】
ＩＬ−１０は、細胞ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）に結合することによって、その免疫抑制活性を媒介する。ＩＬ−１０Ｒは、クラスＩＩサイトカイン受容体ファミリーのメンバーである２つのサブユニット、ＩＬ−１０Ｒα（ＩＬ−１０Ｒアルファ又はＩＬ−１０Ｒ１、ＣＤ２１０）及びＩＬ−１０Ｒβ（ＩＬ−１０Ｒベータ、ＩＬ−１０Ｒ２）からなる（非特許文献２、非特許文献４）。理論に拘束されることを望まないが、ヘテロ二量体ＩＬ−１０ＲへのＩＬ−１０の結合は、受容体会合Ｊａｋ１及びＴｙｋ２タンパク質チロシンキナーゼの活性化、並びにその後のシグナル伝達兼転写活性化因子３（ＳＴＡＴ３）及びＳＴＡＴ１のＤＮＡ結合のチロシンリン酸化及び活性化をもたらす。このシグナル経路は、最終的に炎症性サイトカイン産生の抑制、Ｔ細胞、樹状細胞及びマクロファージ活性化の負の調節、並びに他の免疫抑制効果をもたらす。
【０００６】
ＩＬ−１０Ｒαは、リガンド結合サブユニットであり、高い親和性をもって（Ｋｄ約３５〜２００ｐＭ）、ＩＬ−１０と結合する。ヒトＩＬ−１０Ｒαは、５７８のアミノ酸を含み、分子の大きさが９０〜１１０ｋＤａであり、かつマウスＩＬ−１０Ｒαと６０％の相同性を有する。ＩＬ−１０Ｒαは、一般的に細胞当たり数百のみのレベルであるが、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、単球及びマクロファージのような造血細胞によって最初に発現される（非特許文献２）。Ｔ細胞上のＩＬ−１０Ｒα発現は、活性化により下方制御され、一方、活性化すると単球上で上方制御される。これはＩＬ−１０が免疫応答の開始後にこれらの細胞の機能を阻害するという考えと一致している（非特許文献４）。このことは、未感作ＣＤ４  Ｔ細胞が、活性化される間に、ＩＬ−１０によって標的とされ、かつ記憶Ｔ細胞がこのサイトカインに関してむしろ非感受性であるように見えるという観察の裏付けもする。ＩＬ−１０Ｒα発現は、構造的であるというよりもむしろ大抵は誘導されるものであるが、ＬＰＳ処理線維芽細胞のような、非造血細胞上でも観察された。
【０００７】
ＩＬ−１０Ｒβは、ＩＬ−１０結合親和性にほとんど寄与せず、かつそれは、シグナル伝達のためのＩＬ−１０Ｒのアクセサリーサブユニットである（非特許文献２）。ＩＬ−１０Ｒβは、ＩＬ−２２（非特許文献２３）、ＩＬ−２８及びＩＬ−２９を含む複数のサイトカイン受容体複合体の一部である。ヒトＩＬ−１０Ｒβは、３２５のアミノ酸を含み、かつマウスホモログと約６９％の同一性を有する。ＩＬ−１０の存在下で、ＩＬ−１０Ｒαは、ＩＬ−１０Ｒβと会合し、２つの各サブユニットからなる四量体のＩＬ−１０Ｒ複合体を形成し、それはシグナル伝達に必要とされる。それ故に、ＩＬ−１０Ｒβノックアウトマウスは、ＩＬ−１０ノックアウト動物と同様、慢性の重度の腸炎を発現させる。ＩＬ−１０Ｒαの細胞型で制限された発現と対照的に、ＩＬ−１０Ｒβは、検査された大部分の細胞及び組織で構造的に発現される。ＩＬ−１０Ｒαと異なり、免疫細胞中のＩＬ−１０Ｒβ発現は、活性化により変化するとは判明しなかった。それ故に、ＩＬ−１０Ｒα発現を上方制御するいかなる刺激も、細胞をＩＬ−１０に応答するようにするために十分である。
【０００８】
ヒトＩＬ−１０及びヒトＩＬ−１０Ｒαの結合部位は、マッピングされ、かつ不連続であることが示された。１つの抗ＩＬ−１０Ｒαモノクローナル中和抗体（＃ＭＡＢ２７４、クローン３７６０７、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）は、ＩＬ−１０／ＩＬ−１０Ｒ結合領域の幾つかと重複する不連続エピトープを認識することが判明し（非特許文献２４）、ＩＬ−１０Ｒの天然の立体構造が、中和抗体の生成に重要であり得ることを示唆している。市販の抗ＩＬ−１０Ｒαモノクローナル中和抗体は、あらゆる既知の細胞及びウイルスＩＬ−１０活性を遮断する（非特許文献４）。抗ＩＬ−１０Ｒβモノクローナル中和抗体も、ＩＬ−１０Ｒβを使用して他の受容体複合体を介し、おそらく追加の効果を伴ってＩＬ−１０応答を無効にできる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｒｅｄｐａｔｈら、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ５５：５３１（２００１）
【非特許文献２】Ｄｏｎｎｅｌｌｙら、Ｊ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ  １９：５６３（１９９９）
【非特許文献３】Ｏ’Ｆａｒｒｅｌｌら、Ｅｍｂｏ  Ｊ  １７：１００６（１９９８）
【非特許文献４】Ｍｏｏｒｅら、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９：６８３（２００１）
【非特許文献５】Ｒａｈｉｍｉら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７４：７８２３（２００５）
【非特許文献６】Ｂｒｏｓｓａｒｔら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６０：４４８５（２０００）
【非特許文献７】Ｒｅｄｐａｔｈら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ９：８６（２００１）
【非特許文献８】Ｃａｓｔｒｏら、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９２：  １５２９（２０００）
【非特許文献９】Ｍｕｒｒａｙ、Ａｃｔａ  Ｔｒｏｐ  ９３：２９５（２００５）
【非特許文献１０】Ｂｒｏｏｋｓら、Ｎａｔ  Ｍｅｄ  １２：  １３０１（２００６）
【非特許文献１１】Ｅｊｒｎａｅｓら、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０３：２４６１（２００６）
【非特許文献１２】Ｅｊｒｎａｅｓら、Ｃｌｉｎ  Ｄｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３：３３７（２００６）
【非特許文献１３】Ｂｒｏｏｋｓら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １７８（２００７）
【非特許文献１４】Ｅｊｒｎａｅｓら、Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  Ｒｅｖ  ６：２６７（２００７）
【非特許文献１５】Ｂｒｏｏｋｓら、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０５：５３３（２００８）
【非特許文献１６】Ｇｅｎｇ，Ｌ．ら、Ｊ  Ｖｉｒａｌ  Ｈｅｐａｔ  １３：７２５（２００６）
【非特許文献１７】Ｖｉｃａｒｉら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ  ２０２：２２３（２００４）
【非特許文献１８】Ｌｉｕら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５８：６０４（１９９７）
【非特許文献１９】Ｒｉｇｏｐｏｕｌｏｕら、ＡＡＳＬＤ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ：３０４Ａ（２０００）
【非特許文献２０】Ｒｉｇｏｐｏｕｌｏｕら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ４２：１０２８（２００５）
【非特許文献２１】Ｃｌｅｒｉｃｉら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ９３：７６８（１９９４）
【非特許文献２２】Ｂｒｏｃｋｍａｎら、Ｂｌｏｏｄ（２００９）
【非特許文献２３】Ａｓａｄｕｌｌａｈら、Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  Ｉｎｆｌａｍｍ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ３：１８５（２００４）
【非特許文献２４】Ｒｅｉｎｅｋｅら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ  ７：９５１（１９９８）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
インターロイキン１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体及び使用方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、少なくとも部分的に抗ヒトインターロイキン−１０受容体アルファ（ＩＬ１０Ｒα）抗体の生成に基づく。本明細書に開示される抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体は、ヒトＩＬ−１０Ｒαに特異的に結合する。特に、例えば、１３６Ｃ５（２００８年４月８日に寄託番号ＰＴＡ−９１３１、ＡＴＣＣ  １０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０−２２０９で寄託された抗体産生ハイブリドーマ）、１３６Ｃ８（２００８年４月８日に寄託番号ＰＴＡ−９１３２、ＡＴＣＣ  １０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０−２２０９で寄託された抗体産生ハイブリドーマ）、及び１３６Ｄ２９（２００８年４月８日に寄託番号ＰＴＡ−９１３３、ＡＴＣＣ  １０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０−２２０９で寄託された抗体産生ハイブリドーマ）と表される典型的なＩＬ−１０Ｒαモノクローナル抗体は、ＩＬ−１０Ｒ発現単球及びリンパ球に結合する。典型的なＩＬ−１０Ｒαモノクローナル抗体は、ヒトＩＬ−１０Ｒαが安定してトランスフェクトされた細胞株であるＥＬ４−ｈＩＬ−１０Ｒα、及びＣＨＯ−ｈＩＬ−１０Ｒαにも結合するが、トランスフェクトされていない親細胞株には結合しない。更に、抗体は、先に結合したヒトＩＬ−１０によって内因性ＩＬ−１０Ｒαに結合することを妨げられる。ＩＬ−１０Ｒα抗体と、リポ多糖類及びＩＬ−１０によって処理されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をインキュベートすると、ＬＰＳ誘発ＴＮＦ−α分泌の外因性及び内因性両方のＩＬ−１０阻害が中和される（すなわち阻害、減少、拮抗、予防又は遮断する）（すなわち、ヒトＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性を調節する）。
【００１２】
典型的なＩＬ−１０Ｒα抗体は、クロスブロッキング（ｃｒｏｓｓ−ｂｌｏｃｋｉｎｇ）試験によって特定されたようにＩＬ−１０Ｒα上の２つの「エピトープ」、ヒトＩＬ−１０Ｒα一塩基多型（ＳＮＰ）変異体結合、及びマカクＩＬ−１０Ｒαとの交差反応性を認識する。２つの典型的な抗体、すなわち１３６Ｃ５及び１３６Ｃ８は、全ての既知のＩＬ−１０ＲαＳＮＰ変異体（例えば、配列番号６、６３、６５、６７、６９及び７１）に結合する。全ての典型的なＩＬ−１０Ｒα抗体は、チンパンジーＩＬ−１０Ｒα（例えば、配列番号６）に結合し、かつＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性を阻害し、かつそれ故にチンパンジーＩＬ−１０Ｒα活性を機能的に調節する（すなわちＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性を調節する）。２つの典型的なＩＬ−１０Ｒα抗体、すなわち１３６Ｃ５及び１３６Ｃ８は、チンパンジーＩＬ−１０Ｒα及びサイノモルガス（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ）マカクＩＬ−１０Ｒα（配列番号８及び１０）に結合し、かつＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性を阻害し、かつそれ故にチンパンジーＩＬ−１０Ｒα及びサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒα活性を機能的に調節する（すなわちＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性を調節する）。市販の抗体３Ｆ９（＃３０８８０６、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＳＰＭ４６６（＃Ｅ８５７４、Ｓｐｒｉｎｇ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及び３７６０７（＃ＭＡＢ２７４、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）と比較して、本明細書に記載されたＩＬ−１０Ｒα抗体は、チンパンジー及びマカクの両方のＩＬ−１０Ｒα活性を機能的に調節し、かつ全ての既知のＩＬ−１０Ｒα細胞外ＳＮＰ変異体（例えば、配列番号６、６３、６５、６７、６９及び７１）を認識する能力において独特である。
【００１３】
本発明によれば、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質（ＩＬ−１０Ｒα）に特異的に結合する抗体及びその部分配列（ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）が提供される。一実施態様において、抗体又はその部分配列は、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合し、かつＩＬ−１０受容体アルファタンパク質への１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体の結合を減少、阻害又は競合する。もう一つの実施態様において、抗体又はその部分配列は、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合し、かつＩＬ−１０受容体アルファタンパク質への、配列番号２９、３１および３３のいずれか１の重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２および３４のいずれか１の軽鎖可変領域配列とを含む抗体又はその部分配列の結合を減少、阻害又は競合する。更なる実施態様において、抗体又はその部分配列は、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合し、かつＩＬ−１０受容体アルファタンパク質への、３Ｆ９、ＳＰＭ４６６又は３７６０７抗体の結合を検出可能に減少、阻害、又は競合しない。追加の実施態様において、抗体又はその部分配列は、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合し、かつ３Ｆ９、ＳＰＭ４６６又は３７６０７抗体が結合するエピトープと異なるエピトープに結合する。なおも更なる実施態様において、抗体又はその部分配列は、（例えばＩＬ−１０Ｒαの）立体構造エピトープに結合又は認識し、かつ（例えばＩＬ−１０Ｒαの）直線状エピトープに結合又は認識しない。
【００１４】
本発明によれば、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質（ＩＬ−１０Ｒα）に特異的に結合し、かつＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性を調節する抗体及びその部分配列も提供される。一実施態様において、抗体又はその部分配列は、ＩＬ−１０Ｒαに特異的に結合し、かつＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性を減少、阻害、低下、抑制又は制限する。特定の形態において、抗体又はその部分配列は、ヒトＩＬ−１０Ｒα及びチンパンジー又はサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαに特異的に結合し、かつＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性を減少、阻害、低下、抑制、又は制限する。更に特定の形態において、抗体又はその部分配列は、ヒトＩＬ−１０Ｒα、チンパンジーＩＬ−１０Ｒα、及びサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαに特異的に結合し、かつＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性を減少、阻害、低下、抑制又は制限する。典型的なＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性には、ＬＰＳで処理された末梢血単核細胞ＰＢＭＣによるＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−１β又はＩＦＮ−ガンマ発現又は分泌を減少、低下、又は抑制することを含む。特に、（例えば、ヒト、チンパンジー又はマカク）ＰＢＭＣによるＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−１β又はＩＦＮ−ガンマ発現又は分泌は、ＰＢＭＣが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＬＰＳにより処理された時、上昇する−ＩＬ−１０の添加は、ＬＰＳで処理された（例えば、ヒト、チンパンジー又はマカク）ＰＢＭＣによるＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−１β又はＩＦＮ−ガンマ発現又は分泌を減少、低下又は抑制する。それ故に、ＰＢＭＣによるＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−１β又はＩＦＮ−ガンマ発現又は分泌のＩＬ−１０による抑制、阻害又は減少を逆転又は制限する本発明の抗体又はその部分配列は、次にｉｎ  ｖｉｔｒｏでＬＰＳにより処理された（例えば、ヒト、チンパンジー又はマカク）ＰＢＭＣによるＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−１β又はＩＦＮ−ガンマ発現又は分泌を上昇、刺激又は誘発する。かかる抗体及びその部分配列は、ＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達を機能的に調節すると考えられる。追加の典型的なＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性には、抗原α−ガラクトシルセラミドによって刺激されるヒトナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞株によるＴＮＦ−アルファ又はＩＦＮ−ガンマ発現又は分泌を減少、低下又は抑制することを含む。特に、ＮＫＴ細胞によるＴＮＦ−アルファ又はＩＦＮ−ガンマ発現又は分泌は、合成α−ガラクトシルセラミドであるＫＲＮ７００によりｉｎ  ｖｉｔｒｏで処理された時、上昇する−ＩＬ−１０の添加は、ＫＲＮ７０００によるＮＫＴ細胞によるＴＮＦ−アルファ又はＩＦＮ−ガンマ発現又は分泌を減少、低下又は抑制する（Ｋａｗａｎｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７８：１６２６（１９９７）；Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｓ  ７：２５９（１９９５））。それ故に、ＮＫＴ細胞によるＴＮＦ−アルファ又はＩＦＮ−ガンマの発現又は分泌の、ＩＬ−１０による抑制、阻害又は減少を逆転又は制限する本発明の抗体又はその部分配列は、次に、ＫＲＮ７０００によってｉｎ  ｖｉｔｒｏで処理されたＮＫＴ細胞によるＴＮＦ−ア��ファ又はＩＦＮ−ガンマ発現又は分泌を上昇、刺激又は誘発する。かかる抗体及びその部分配列は、ＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達を機能的に調節すると考えられる。
【００１５】
ＩＬ−１０受容体アルファ（ＩＬ−１０Ｒアルファ）抗体及びその（モノクローナル又はポリクローナル）部分配列は、ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）に結合する。抗体には、哺乳類、霊長類化、ヒト化及び完全ヒト抗体を含む。抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＤのようないずれかのクラス及びそのいずれか１のサブクラスに属する、モノクローナル（単一のモノクローナル、又は２つ以上のモノクローナルのプール）又はポリクローナル免疫グロブリンであってもよい。ＩｇＧの典型的なサブクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４である。
【００１６】
ＩＬ−１０Ｒ抗体の具体的な非限定的例には、１３６Ｃ５（２００８年４月８日に寄託番号ＰＴＡ−９１３１、ＡＴＣＣ  １０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０−２２０９で寄託された抗体産生ハイブリドーマ）、１３６Ｃ８（２００８年４月８日に寄託番号ＰＴＡ−９１３２、ＡＴＣＣ  １０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０−２２０９で寄託された抗体産生ハイブリドーマ）、及び１３６Ｄ２９（２００８年４月８日に寄託番号ＰＴＡ−９１３３、ＡＴＣＣ  １０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０−２２０９で寄託された抗体産生ハイブリドーマ）として本明細書に示す抗体、その部分配列及び変異体を含む。ＩＬ−１０抗体の具体的な非限定的例には、配列番号２９、３１及び３３、並びに配列番号３０、３２及び３４のような、本明細書において実施例２に示すような１３６Ｃ５、１３６Ｃ８及び１３６Ｄ２９の各々の重鎖及び軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する抗体を含む。
【００１７】
ＩＬ−１０Ｒα抗体には、ヒトＩＬ−１０Ｒα、チンパンジーＩＬ−１０Ｒα、及びサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαのような１つ以上の種のタイプのＩＬ−１０Ｒαに特異的に結合する抗体も含む。典型的な本発明の抗体には、ヒトＩＬ−１０Ｒα、並びにチンパンジーＩＬ−１０Ｒα及び／又はマカクＩＬ−１０Ｒαに結合するＩＬ−１０Ｒα抗体を含む。対照的に、ヒトＩＬ−１０Ｒαに結合する市販の抗体、３７６０７は、チンパンジーＩＬ−１０Ｒα又はマカクＩＬ−１０Ｒαに検出可能に結合しない。
【００１８】
ＩＬ−１０Ｒα抗体には、１つ以上のヒトＩＬ−１０ＲαＳＮＰ変異体に特異的に結合する抗体を更に含む。特定の実施態様において、抗体又はその部分配列は、配列番号６、６３、６５、６７、６９又は７１として示される１つ以上のＩＬ−１０Ｒα変異体に特異的に結合する。更に特定の実施態様において、抗体又はその部分配列は、配列番号６、６３、６５、６７、６９及び７１として示されるＩＬ−１０Ｒα変異体への１３６Ｄ２９、３Ｆ９、ＳＰＭ４６６又は３７６０７抗体の結合よりも高い親和性によって、配列番号６、６３、６５、６７、６９又は７１として示される１つ以上のＩＬ−１０Ｒα変異体に特異的に結合する。
【００１９】
ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体部分配列（抗体断片）には、少なくとも部分的なＩＬ−１０Ｒ結合を示す、機能的部分配列を含む。かかる「機能的」部分配列又は断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、軽鎖可変領域ＶＬ、重鎖可変領域ＶＨ、三重特異性（ｔｒｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）（Ｆａｂ３）、二重特異性（Ｆａｂ２）、ダイアボディ（（ＶＬ−ＶＨ）２又は（ＶＨ−ＶＬ）２）、トリアボディ（三価）、テトラボディ（四価）、ミニボディ（（ｓｃＦｖ−ＣＨ３）２）、二重特異性一本鎖Ｆｖ（Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ）、ＩｇＧデルタＣＨ２、ｓｃＦｖ−Ｆｃ及び（ｓｃＦｖ）２−Ｆｃを含むが、それらに限定されない。機能的断片及び部分配列には、重鎖又は軽鎖可変領域配列の１つ以上のＣＤＲ（例えば、フランキングフレームワーク領域ＦＲを任意に含む、重鎖及び軽鎖可変領域ＣＤＲの各々の１、２又は３つ全部）を含む、重鎖若しくは軽鎖可変領域、又は完全長抗体重鎖若しくは軽鎖の全部又は一部も含む。種々の形態において、完全長抗体重鎖若しくは軽鎖、又は重鎖若しくは軽鎖可変領域の機能的断片又は部分配列は、約２０〜３０、３０〜５０、５０〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、２００〜２５０、２５０〜３００、３００〜４００、又は４００〜５００のアミノ酸残基の長さを有する。
【００２０】
ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体変異体には、少なくとも部分的なＩＬ−１０Ｒ結合を示す、機能的変異体を含む。種々の実施態様において、抗体変異体には、本明細書において１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９として示される抗体定常若しくは可変領域配列、又は１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９の重鎖若しくは軽鎖可変領域配列、例えば、配列番号２９、３１若しくは３３、又は配列番号３０、３２若しくは３４の１つ以上のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む。
【００２１】
本発明によれば、（慢性又は急性）病原体感染患者を処置する方法も提供される。一実施態様において、方法は、病原体感染患者を処置するために十分な、ＩＬ−１０受容体アルファ（ＩＬ−１０Ｒアルファ）抗体又はその部分配列の量を、必要とする患者に投与することを含む。
【００２２】
本発明によれば、例えば、患者を病原体感染から保護する（例えば、患者に病原体感染に対する何らかの保護を提供する）か、患者において病原体感染の確率を低下又は減少させるか、病原体感染に対する患者の感受性を低下又は減少させるか、又は患者において病原体感染を阻害又は防止するために、（慢性又は急性）病原体感染に対して患者にワクチン接種をし、かつ免疫を付与する方法を含む予防方法も提供される。一実施態様において、方法は、（慢性又は急性）病原体感染に対して患者にワクチン接種をするか、又は免疫を付与するために十分な、病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えば、エピトープ）をコードする核酸の投与の前、実質的に同時期、又は後に、ＩＬ−１０受容体アルファ（ＩＬ−１０Ｒアルファ）抗体又はその部分配列の量を患者に投与することを含む。
【００２３】
種々の形態において、方法は、患者を病原体感染から保護する（例えば、患者に病原体感染に対する何らかの保護を提供する）か、患者において病原体感染の確率を低下又は減少させるか、病原体感染に対する患者の感受性を低下又は減少させるか、又は患者において病原体感染を阻害又は防止するか、又は病原体再活性化を低下、減少、阻害若しくは防止するために十分である。
【００２４】
本発明の方法は、ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体又はその部分配列を種々の時期に、かつ種々の量で投与することを含む。特定の実施態様において、ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体又はその部分配列は、病原体の接触、曝露、又は感染の前、実質的に同時期、又は後に投与される。他の実施態様において、ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体又はその部分配列は、病原体への患者の曝露、接触、又は（慢性若しくは急性）感染の前、実質的に同時期、又は後に投与される。追加の実施態様において、ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体又はその部分配列は、病原体感染、病原体（例えば、炎症）に関連又は病原体により引き起こされる症状の発展、病原体複製若しくは増殖、又は潜伏からの病原体再活性化の前、実質的に同時期、又は後に投与される。更なる実施態様において、ＩＬ−１０受容体アルファ（ＩＬ−１０Ｒアルファ）抗体又はその部分配列、及び病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えば、エピトープ）をコードする核酸は、病原体感染、病原体（例えば、炎症）に関連又は病原体により引き起こされる症状の発展、病原体複製若しくは増殖、又は潜伏からの病原体再活性化の前、実質的に同時期、又は後にワクチン接種又は免疫付与を行うために、患者に併用組成物として投与されるか、又は同時又は連続的のように別個に投与される。
【００２５】
処理、又はワクチン接種若しくは免疫付与される病原体には、ＩＬ−１０受容体抗体又はその部分配列に応答し得るいかなる病原体も含む。種々の実施態様において、病原体は、ウイルス、細菌、寄生生物又は真菌である。
【００２６】
典型的なウイルスには、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、フラビウイルス、乳頭腫ウイルス（ＰＶ）、ポリオーマウイルス、ラブドウイルス、ミクソウイルス、アレナウイルス、コロナウイルス、アデノウイルス、レオウイルス、ピコルナウイルス、トガウイルス、ブニヤウイルス、パルボウイルス又はレトロウイルスを含む。
【００２７】
ポックスウイルスには、ワクシニアウイルス、伝染性軟属腫、大痘瘡天然痘ウイルス、小痘瘡天然痘ウイルス、牛痘、ラクダ痘、羊痘、サル痘を含む。ヘルペスウイルスには、アルファ−ヘルペスウイルス、ベータ−ヘルペスウイルス、ガンマ−ヘルペスウイルス、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ／ＨＨＶ−３）、ヒトヘルペスウイルス１、２、４、５、６、７及び８型（ＨＨＶ−８、カポジ肉腫会合ウイルス）を含む。肝炎ウイルスには、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ及びＧ型肝炎を含む。免疫不全ウイルスには、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２及びＨＩＶ−３のようなヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）を含む。フラビウイルスには、Ｃ型肝炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、並びに日本脳炎及び西ナイルウイルスを含む。乳頭腫ウイルスには、ＨＰＶ株１、６、１、１６、１８、３０、３１、４２、４３、４４、４５、５１、５２及び５４のようなヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）を含む。ポリオーマウイルスには、ＢＫウイルス（ＢＫＶ）及びＪＣウイルス（ＪＣＶ）を含む。ラブドウイルスには、狂犬病ウイルス及びベシクロウイルスを含む。ミクソウイルスには、パラミクソウイルス（例えば、麻疹、おたふく風邪、肺炎ウイルス及び呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ））及びオルトミクソウイルス（例えばＡ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、及びＣ型インフルエンザのようなインフルエンザウイルス）を含む。アレナウイルスには、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、フニンウイルス、ラッサ熱ウイルス、グアナリトウイルス、サビアウイルス及びマチュポウイルスを含む。コロナウイルスには、風邪及び重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）を引き起こすウイルスを含む。アデノウイルスには、気管支、肺、胃、腸（胃腸炎）、眼（結膜炎）、膀胱（膀胱炎）及び皮膚のウイルス感染を含む。レオウイルスには、ロタウイルス、サイポウイルス及びオルビウイルスを含む。ピコルナウイルスには、（例えば風邪を引き起こす）ライノウイルス、アフトウイルス、ヘパトウイルス、エンテロウイルス、コクサッキーＢウイルス及びカルジオウイルスを含む。トガウイルスには、アルファウイルス、シンドビス（ｓｉｎｄｂｕｓ）ウイルス及び風疹ウイルスを含む。ブニヤウイルスには、ハンタウイルス、フレボウイルス及びナイロウイルスを含む。レトロウイルスには、アルファ、ベータ、デルタ、ガンマ、イプシロン、レンチウイルス、スプマウイルス、及びヒトＴ細胞白血病ウイルス１及び２型（ＨＴＬＶ−１及びＨＴＬＶ−２）のようなヒトＴ細胞白血病ウイルスが含まれる。レンチウイルスには、ウシ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ及び霊長類ウイルスのような免疫不全ウイルスを含む。
【００２８】
典型的な細菌には、マイコバクテリア（例えば、結核及び非定型抗酸菌）、リステリア菌、ヘリコバクター、ボルデテラ、連鎖球菌、サルモネラ及びクラミジアを含む。典型的な寄生生物には、原生動物及び線虫を含む。典型的な原生動物には、トキソプラズマ原虫、リーシュマニア、変形体又はクルーズトリパノソーマを含む。典型的な線虫には、マンソン住血吸虫又はヘリグモソモイデスポリギルスを含む。典型的な真菌には、カンジダアルビカンスを含む。
【００２９】
本発明により有用な病原体抗原は、いずれかの抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えば、エピトープ）をコードする核酸であり得る。特定の非限定的タイプの病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又は病原体抗原の全部又は一部をコードする核酸には、ウイルス、細菌、寄生生物、及び真菌抗原を含む。かかる抗原は、本明細書に示されるか、又は当業者に既知のいずれかの病原体に由来してもよく、かつ炎症性又は適応的免疫応答、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、樹状細胞（ＤＣ）、マクロファージ、好中球、好酸球、マスト細胞、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋細胞、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ＋又はＣＤ１１ｃ＋細胞）の数若しくは活性化、抗病原体ＣＤ４＋若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞応答、Ｔｈ１サイトカインの産生、又はＴ細胞媒介免疫応答を上昇、刺激、強化、促進、増加又は誘発する抗原を含んでもよい。
【００３０】
追加の種々の方法の実施態様において、抗体又はその部分配列、及び異なる抗体のような第２活性（ｓｅｃｏｎｄ  ａｃｔｉｖｅ）、作用剤又は薬剤が患者に１回以上併用として投与される（例えば、ＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列が、患者に他の抗体、作用剤又は薬剤と共に併用組成物として投与される）。更なる種々の方法の実施態様において、抗体又はその部分配列、及び異なる抗体のような第２活性、作用剤又は薬剤が患者に１回以上連続的に投与される（例えば、ＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列及び作用剤又は薬剤が、別個に患者へ順々に投与される）。追加の方法の実施態様には、例えば第２活性、例えばＩ型インターフェロン、トール受容体リガンド、ＯＸ４０、４−１ＢＢのようなＴ細胞共刺激分子、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｉ、ＰＤ−Ｌｌ、ＣＤ１６０及びＬＡＧ３に結合する抗体のような阻害受容体又はリガンドのアンタゴニストを含む。
【００３１】
本発明の方法は、病原体感染を伴うか、又は病原体感染の危険を冒して、患者における免疫細胞の数又は活性化を上昇させることも含む。一実施態様において、方法は、患者における免疫細胞の数又は活性化を上昇させるために十分な、ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体又はその部分配列の量を患者に投与することを含む。もう一つの実施態様において、方法は、患者における免疫細胞の数又は活性化を上昇させるために十分な、ＩＬ−１０受容体アルファ（ＩＬ−１０Ｒアルファ）抗体又はその部分配列の量を患者に投与し、かつ病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えば、エピトープ）をコードする核酸を投与することを含む。特定の形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、マクロファージ、好中球、好酸球、マスト細胞、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋細胞、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ＋又はＣＤ１１ｃ＋細胞である。
【００３２】
本発明の方法は、とりわけ、病原体感染を伴うか、又は病原体感染の危険を冒して、患者における抗病原体ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞応答を上昇又は誘発することを更に含む。一実施態様において、方法は、患者における増殖、サイトカイン分泌又は細胞毒性、又はケモカイン発現若しくは産生を含む、抗病原体ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞応答を上昇又は誘発するために十分な、ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体又はその部分配列の量を、必要とする患者に投与することを含む。もう一つの実施態様において、方法は、患者における増殖、サイトカイン分泌又は細胞毒性、又はケモカイン発現若しくは産生を含む、抗病原体ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞応答を上昇又は誘発するために十分な、ＩＬ−１０受容体アルファ（ＩＬ−１０Ｒアルファ）抗体又はその部分配列の量を患者に投与し、かつ病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えば、エピトープ）をコードする核酸を投与することを含む。
【００３３】
本発明の方法は、とりわけＴｈ１サイトカイン（例えば、インターフェロンガンマ、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−２、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ等）又はケモカイン（例えば、ＭＣＰ１、ＭＣＰ５、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−８、ＩＰ−１０、ＭＩＰ−２等）の産生を上昇させることを追加として含む。一実施態様において、方法は、患者におけるＴｈ１サイトカイン（例えば、インターフェロンガンマ、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−２、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ等）又はケモカイン（例えば、ＭＣＰ１、ＭＣＰ５、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−８、ＩＰ−１０、ＭＩＰ−２等）の産生を上昇させるために十分な、ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体又はその部分配列の量を、必要とする患者に投与することを含む。もう一つの実施態様において、方法は、患者におけるＴｈ１サイトカイン（例えば、インターフェロンガンマ、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−２、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ等）又はケモカイン（例えば、ＭＣＰ１、ＭＣＰ５、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−８、ＩＰ−１０、ＭＩＰ−２等）の産生を上昇させるために十分な、ＩＬ−１０受容体アルファ（ＩＬ−１０Ｒアルファ）抗体又はその部分配列の量を患者に投与し、かつ病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えば、エピトープ）をコードする核酸を投与することを含む。
【００３４】
本発明の方法は、とりわけ患者に治療効果又は有益な効果を提供する方法を含む。種々の非限定的実施態様において、方法は、病原体数又は力価を低下、減少、阻害、抑制、制御若しくは制限するか、病原体増殖又は複製を低下、減少、阻害、抑制、防止、制御若しくは制限するか、病原体タンパク質の量を低下、減少、阻害、抑制、防止、制御若しくは制限するか、又は病原体核酸の量を低下、減少、阻害、抑制、防止、制御若しくは制限する。追加の実施態様において、方法は、病原体排除又は除去を、上昇、刺激、強化、促進、増加若しくは誘発し、病原体に対する免疫応答を上昇、誘発、強化、増加、促進若しくは刺激し、病原体病変を低下、減少、阻害、抑制、防止、制御若しくは制限し、病原体数又は力価の上昇を低下、減少、阻害、抑制、防止、制御若しくは制限し、病原体増殖若しくは複製、病原体タンパク質又は病原体核酸の上昇を低下、減少、阻害、抑制、防止、制御若しくは制限する。更なる実施態様において、方法は、潜伏からの病原体再活性化を低下、減少、阻害、抑制、防止、制御若しくは制限するか、又は宿主への病原体伝達（例えば、感染患者から非感染患者又は感受性患者への病原体伝達）を低下、減少、阻害、抑制、防止、制御若しくは制限する。更に追加の実施態様において、方法は、病原体感染、潜伏からの再活性化又は病変と関連した、又はそれにより引き起こされる１つ以上の有害な（例えば、物理的又は生理的）症状、障害、疾患、疾病又は合併症を低下、減少、阻害、抑制、防止、制御、制限、又は改善する。なおも更なる実施態様において、方法は、病原体感染、潜伏からの再活性化又は病変に対する保護を患者に提供するか、又は病原体感染、潜伏からの再活性化又は病変に対する患者の感受性又は確率を低下、減少、阻害若しくは制限する。
【００３５】
種々の追加の非限定的実施態様において、病原体感染、増殖若しくは発症機序、又は潜伏からの再活性化は、低下、減少、阻害、制限、遅延若しくは防止されるか、又は方法は、慢性又は急性病原体感染、増殖若しくは複製、病変、又は潜伏からの再活性化によって引き起こされる又はそれと関連した１つ以上の有害な（例えば、物理的又は生理的）症状、障害、疾患、疾病又は合併症を低下、減少、阻害、抑制、防止、制御若しくは制限する。追加の種々の非限定的実施態様において、方法は、慢性又は急性病原体感染、増殖若しくは複製、病変、又は潜伏からの再活性化によって引き起こされる又はそれと関連した１つ以上の有害な症状、障害、疾患、疾病又は合併症の発症、進行、頻度、持続期間、重症度、確率又は感受性を減少、低下、阻害、遅延又は防止する。更なる種々の非限定的実施態様において、方法は、病原体感染、潜伏からの再活性化若しくは発症機序、又は慢性又は急性病原体感染、増殖若しくは複製、病変、又は潜伏からの再活性化によって引き起こされる又はそれと関連した１つ以上の有害な症状、障害、疾患、疾病又は合併症からの患者の回復を加速、容易化、強化、増加、又は早める。なおも追加の種々の非限定的実施態様において、方法は、病原体感染、増殖、複製、発症機序、又は慢性又は急性病原体感染、増殖若しくは複製、病変、又は潜伏からの再活性化によって引き起こされる又はそれと関連した有害な症状、障害、疾患、疾病又は合併症を安定させるか、又は感染宿主から非感染宿主への病原体伝達を低下、減少、阻害、抑制、防止、制限若しくは制御する。
【００３６】
本発明は、ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体又はその部分配列を含むキットも提供する。かかるキットは、病原体抗原、生又は弱毒化病原体を任意に含み、かつ病原体感染に対して患者を（予防又は治療的）処置、ワクチン接種又は免疫付与するか、又は病原体感染、増殖、再活性化若しくは発症機序を有するか、有する危険性のある患者を（予防又は治療的）処置する命令を更に任意に含む。キット中に封入する、典型的な非限定的ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体又はその部分配列には、本明細書に示すような（ポリクローナル又はモノクローナル）抗体を含む。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】ヒト抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体を用いたフローサイトメトリー解析を示す。全ヒトＰＢＭＣは、可溶性ヒトＩＬ−１０Ｒαタンパク質の存在下（陰影付きヒストグラム）又は不存在下（塗り潰した（ｆｉｌｌｅｄ）ヒストグラム）でビオチン化抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体により染色した。抗体の結合は、ストレプトアビジン−ＰＥによって検出した。白抜きヒストグラムは、アイソタイプ対照抗体による染色を示す。リンパ球（図１Ａ）及び単球（図１Ｂ）ゲートは、前方及び側方散乱プロフィールに基づき設定された。
【図２】ヒトＩＬ−１０Ｒαの抗ヒトＩＬ−１０Ｒ抗体の相対的結合親和性を示す。図２Ａ）コーティングされたヒトＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃに結合する抗ＩＬ−１０Ｒα抗体の滴定。結合は、抗ヒトカッパ−ＨＲＰ、抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ、又は抗ラットＩｇＧ−ＨＲＰにより検出した。これらのデータは、ＫＤ及びＢＭＡＸ（表３及び５）を決定するために使用した。図２Ｂ）ヒト抗ヒトＩＬ−１０Ｒαモノクローナル抗体によるＢ細胞株ＲＰＭＩ−８２２６の表面上のヒトＩＬ−１０Ｒαへの結合。ＲＰＭＩ−８２２６細胞は、抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体によって種々の濃度で標識化し、かつ抗ヒトＩｇＧ−ＰＥにより検出した。市販のラット抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体３Ｆ９は、抗ラットＩｇＧ−ＰＥによって検出した。幾何平均蛍光強度（ｇｅｏ  ｍｅａｎ）データを示す。
【図３】ヒトＩＬ−１０Ｒαへの抗ヒトＩＬ−１０Ｒα細胞の結合が、ＩＬ−１０受容体へのヒトＩＬ−１０の事前結合によって遮断されることを示すデータを示す。ＲＰＭＩ−８２２６細胞は、ヒトＩＬ−１０ビオチンによって、続いて抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体によって染色し、かつ抗体の結合は、抗ヒトＩｇＧ−ＰＥ又は抗ラットＩｇＧ−ＰＥによって検出した。図３Ａ）塗り潰したヒストグラムは、ＩＬ−１０の不存在下での抗体の最大結合を表し、白抜きヒストグラムは、ヒトＩＬ−１０の存在下である。図３Ｂ）最大ＩＬ−１０結合（黒塗り（ｃｌｏｓｅｄ）ヒストグラム）は、抗ＩＬ−１０（白抜きヒストグラム）によって阻害された。陰影付きヒストグラムは、負の対照のタンパク質の結合を表す。ＩＬ−１０の結合は、ストレプトアビジン−ＦＩＴＣによって検出した。
【図４】３つのヒト抗体が、ＩＬ−１０Ｒαへの結合競合に基づき２つのグループに分割できることを示すデータを示す。個別の抗体は、９６ウェルプレートのウェル中でコーティングした。ビオチン化ｈＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃは、可溶性抗ＩＬ−１０Ｒα抗体によりプレインキュベートし、次にコーティングされたウェルに添加した。コーティングされた抗体へのｈＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃの結合は、ストレプトアビジン−ＨＲＰによって検出した。阻害率（ｙ軸）は、次式（１００−（ＯＤ調査試料／ＯＤ最大結合試料））×１００を使用して決定した。
【図５】ＩＬ−１０の中和が、ヒトＰＢＭＣによるＴＮＦ−α分泌を強化することを示すデータを示す。図５Ａ）ＬＰＳ処理は、ヒトＰＢＭＣによるＴＮＦ−α分泌を誘発し（白抜きの円）、ＩＬ−１０は、ＴＮＦ−α分泌を遮断した（灰色の円）。抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体の添加は、用量依存的にＴＮＦ−α分泌を上昇させた。パネルは、６人のドナーでの１０回の調査を表す。図５Ｂ）市販の抗体と比較したヒト抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体１３６Ｃ８の有効性。抗体１３６Ｃ８は、ＴＮＦ−αのＩＬ−１０遮断を、市販のＩＬ−１０Ｒα抗体３Ｆ９及び３７６０７よりも確実に中和した。
【図６】非ヒト霊長類ＩＬ−１０Ｒαとの交差反応性を示すデータを示す。ヒト（図６Ａ）、チンパンジー（図６Ｂ）、及びサイノモルガスマカク（図６Ｃ）のＰＢＭＣを、組換えヒトＩＬ−１０Ｒαの不存在下（塗り潰し）若しくは存在下（陰影付き）で抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体によって、又はアイソタイプ対照抗体（白抜きヒストグラム）によって染色した。ヒストグラムは、前方及び側方散乱特性に基づくリンパ球ゲート中の細胞上でのＩＬ−１０Ｒαの染色を表す。単球上での染色は、同様であった。
【図７】ＥＬＩＳＡによって決定される、チンパンジーＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃ（図７Ａ）及びサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃ（図７Ｂ）に関する抗ヒトＩＬ−１０Ｒ抗体の相対的結合親和性を示すデータを示す。コーティングされたチンパンジー又はサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃへの抗ＩＬ−１０Ｒα抗体結合の滴定。結合は、抗ヒトカッパ−ＨＲＰ、抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ、又は抗ラットＩｇＧ−ＨＲＰにより検出された。異なる抗ラットＩｇＧ  ＨＲＰ及び抗マウスＩｇＧ抗体は、パネルＡ及びＢでデータを生成するために使用された。これらの二次抗体の性質は、結果に影響を及ぼすことがあり、かつ異なる最大結合（ＢＭＡＸ）に繋がることがある。これらの調査のＢＭＡＸは、表５に記載する。
【図８】抗ＩＬ−１０Ｒα抗体が、チンパンジーＩＬ−１０Ｒαと交差反応することを示すデータを示す。チンパンジーＰＢＭＣによるＴＮＦ−α分泌のＬＰＳ誘発は、ヒトＩＬ−１０によって阻害された。抗ＩＬ−１０Ｒαの添加は、ＴＮＦ−α分泌のＩＬ−１０による抑制を中和した。この調査は、２匹の異なるドナーにより２回繰り返された。
【図９】ＩＬ−１０Ｒα抗体のサブセットが、サイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαと機能的に交差反応することを示すデータを示す。サイノモルガスＰＢＭＣによるＴＮＦ−αのＬＰＳ誘発（白抜きの円）は、ヒトＩＬ−１０（灰色の円）によって阻害された。１３６Ｃ５及び１３６Ｃ８の添加は、ＩＬ−１０を中和し、かつＴＮＦ−α分泌を強化し、他方で１３６Ｄ２９、３Ｆ９、ＳＰＭ４６６、及び３７６０７は、ＩＬ−１０による抑制を検出可能に遮断しなかった。図９Ａ及びＢは、２つの異なる動物の結果を表す。同様の結果が、５匹の異なるドナーで観察された。
【図１０】ＩＬ−１０によって処理されたヒトＮＫＴ細胞株からの抗原誘発サイトカイン分泌を回復させる抗ＩＬ−１０Ｒα抗体の能力を証明するデータを示す。ＩＦＮ−γ（図１０Ａ）及びＴＮＦ−α（図１０Ｂ）のＫＲＮ７０００（Ａｇのみ、ｘ記号）による誘発は、ヒトＩＬ−１０（灰色の円）によって阻害された。１３６Ｃ５、１３６Ｃ８、１３６Ｄ２９及び３Ｆ９の添加は、ＩＬ−１０を中和し、かつＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−α分泌を用量依存的に回復させた。データは、２つのヒトＮＫＴ細胞株による応答を表す。
【図１１】ヒト抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体の追加のアンタゴニスト活性及びアンタゴニスト活性の欠如を示す。図１１Ａ．ヒトＰＢＭＣ（黒一色の棒）上のＨＬＡ−ＤＲ発現は、ＩＬ−１０（灰色一色の棒）による処理によって低下した。抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体は、ＩＬ−１０で処理されたＰＢＭＣ上のＨＬＡ−ＤＲ発現を回復させた。発現レベルは、幾何平均蛍光強度として表される。図１１Ｂ〜Ｃ．ＳＴＡＴ３は、ＩＬ−１０による処理後に、ヒトＰＢＭＣ中でリン酸化された。図１１Ｂ．左側及び中央パネル。１３６Ｃ８又は陰性対照抗体とのＩＬ−１０の存在下でのインキュベーションは、用量依存的にＳＴＡＴ３リン酸化を防止した。用量は、３、１．５、０．７５、及び０．３８μｇ／ｍｌであった。右側パネル。３μｇ／ｍｌの１３６Ｃ８、３７６０７又はＳＰＭ４６６とのＩＬ−１０の存在下でのインキュベーションは、異なるレベルのＳＴＡＴ３リン酸化の阻害を示す。図１１Ｃ．１３６Ｃ８による架橋抗体、抗ｈＩｇＧ１の存在下、かつＩＬ−１０の不存在下でのインキュベーションは、ＳＴＡＴ３リン酸化を誘導しなかった。
【図１２】抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体、１３６Ｃ８（▲）、１３６Ｄ２９（◆）、３Ｆ９（■）、３７６０７（＊）及びＳＰＭ４６６（□、最後のパネルのみ）の、ＩＬ−１０自体（図１２Ａ）、又はヒトＩＬ−１０Ｒαの一塩基多型変異体、すなわち図１２ＢはＬ６１Ｉ、図１２ＣはＶｌ１３Ｉ、図１２ＤはＳ１５９Ｇ、図１２ＥはＲ２１２Ｅ、図１２ＦはＶ２３３Ｍ、及び図１２ＧはＲ２１２Ｅへの結合を示す。
【図１３】サイトメガロウイルスＩＬ−１０に対する抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体の中和活性を証明するデータを示す。１３６Ｃ５、１３６Ｃ８、１３６Ｄ２９、３Ｆ９、ＳＰＭ４６６、又は３７６０７の、ＬＰＳ＋ＣＭＶ  ＩＬ−１０で処理されたヒトＰＢＭＣへの添加は、２人の異なる健常なドナーのＴＮＦ−α産生を回復させた。図１３Ａ及びＢは、２人のドナーからのデータである。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
本発明は、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質（ＩＬ−１０Ｒα）に特異的に結合する抗体及びその部分配列に少なくとも部分的に基づく。ヒトモノクローナル抗体を含む本発明の抗体及び部分配列は、処置、検出及び診断方法において有用である。例えば、本発明の抗体及び部分配列は、（慢性又は急性）病原体感染で患者を処置する方法において有用である。かかる処置方法には、患者において病原体感染の確率を低下又は減少させるか、病原体感染に対する患者の感受性を低下又は減少させるか、又は患者において病原体感染を阻害又は防止し、かつ一方の患者から他方の患者への病原体伝達を低下、減少、阻害又は抑制するために、例えば、患者を病原体感染で処置する方法、及び患者を病原体感染から保護する（例えば、病原体感染に対する保護を患者に提供する）方法を含む、（病原体感染後の）治療及び（病原体感染前の）予防方法を含む。
【００３９】
本発明によれば、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質（ＩＬ−１０Ｒα）に特異的に結合する抗体及びその部分配列が提供される。一実施態様において、抗体又はその部分配列は、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合し、かつＩＬ−１０受容体アルファタンパク質への１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体の結合を減少、阻害又は競合する。もう一つの実施態様において、抗体又はその部分配列は、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合し、かつＩＬ−１０受容体アルファタンパク質への、配列番号２９、３１又は３３のいずれかの重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２又は３４のいずれかの軽鎖可変領域配列とを含む抗体又はその部分配列の結合を減少、阻害、又は競合する。更なる実施態様において、抗体又はその部分配列は、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合し、かつＩＬ−１０受容体アルファタンパク質への、３Ｆ９、ＳＰＭ４６６又は３７６０７抗体の結合を検出可能に減少、阻害又は競合しない。
【００４０】
本発明によれば、１つ以上の種のタイプのＩＬ−１０Ｒαに特異的に結合する抗体及びその部分配列が提供される。一実施態様において、抗体又はその部分配列は、ヒトＩＬ−１０Ｒαに特異的に結合し、かつ任意にチンパンジーＩＬ−１０Ｒαにも結合するか、又はサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαに結合する。もう一つの実施態様において、抗体又はその部分配列は、ヒトＩＬ−１０Ｒαに特異的に結合し、かつチンパンジーＩＬ−１０Ｒαに結合するか、又はサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαに結合する。更なる実施態様において、抗体又はその部分配列は、ヒトＩＬ−１０Ｒα、チンパンジーＩＬ−１０Ｒα及びサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαに特異的に結合する。
【００４１】
更なる実施態様において、抗体及びその部分配列は、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質（ＩＬ−１０Ｒα）に特異的に結合し、かつＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性を調節する。一形態において、抗体又はその部分配列は、ＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性を減少、阻害、低下、抑制、又は制限する。もう一つの形態において、抗体又はその部分配列は、３Ｆ９、ＳＰＭ４６６又は３７６０７抗体のいずれかによるＩＬ−１０シグナル伝達活性の減少又は阻害よりも高いＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性を減少、阻害、低下、抑制又は制限する。
【００４２】
更なる形態において、抗体又はその部分配列は、ヒト、チンパンジー又はサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαに特異的に結合し、かつヒト、チンパンジー又はサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαの活性（例えば、ＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達）を減少、阻害、低下、抑制、又は制限する。なおも更なる特定の形態において、抗体又はその部分配列は、ヒトＩＬ−１０Ｒα、並びにチンパンジーＩＬ−１０Ｒα及びサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαの一方又は両方に特異的に結合し、かつヒト、チンパンジー又はサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαの活性（例えば、ＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達）を減少、阻害、低下、抑制、又は制限する。もう一つの実施態様において、本発明の抗体又はその部分配列は、ＰＢＭＣによるＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−１β又はＩＦＮガンマ発現又は分泌のＩＬ−１０による抑制、阻害又は減少を逆転又は制限し、ＩＬ−１０の存在下でｉｎ  ｖｉｔｒｏでＬＰＳにより処理されたＰＢＭＣ（例えば、ヒト、チンパンジー又はマカク）によるＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−１β又はＩＦＮガンマ発現又は分泌の上昇に反映される。更にもう一つの実施態様において、本発明の抗体又はその部分配列は、ＩＬ−１０の存在下でＮＫＴ細胞によるＴＮＦ−アルファ又はＩＦＮ−ガンマ発現を上昇又は誘発し、かつ抗原ＫＲＮ７０００は、ＩＬ−１０の存在下でＨＬＡ−ＤＲ  ＭＨＣクラスＩＩ分子の発現を少なくとも部分的に回復させるか、又はＩＬ−１０が誘発するＳＴＡＴ３のリン酸化を阻害又は減少させる。特定の形態において、本発明の抗体又はその部分配列は、３Ｆ９、ＳＰＭ４６６又は３７６０７抗体のいずれかのような他の基準抗体よりも、ＩＬ−１０の存在下でＰＢＭＣ又はＮＫＴ細胞によるＴＮＦ−アルファ又はＩＦＮ−ガンマ発現を上昇又は誘発するか、ＩＬ−１０の存在下でＨＬＡ−ＤＲ  ＭＨＣクラスＩＩ分子の発現を回復させるか、又はＳＴＡＴ３のＩＬ−１０誘発リン酸化を阻害又は減少させる。
【００４３】
追加の実施態様において、抗体又はその部分配列は、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質に特異的に結合し、かつ３Ｆ９、ＳＰＭ４６６又は３７６０７抗体が結合するエピトープとは異なるエピトープに結合する。特定の形態において、抗体及びその部分配列は、ＩＬ−１０Ｒへの基準抗体の結合を５０％未満、約５０％以上、例えば、５０〜７０％、又は約７０％以上、減少又は阻害できる。
【００４４】
本発明によれば、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質（ＩＬ−１０Ｒα）に特異的に結合し、かつ１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体の重鎖若しくは軽鎖可変領域配列、又は配列番号２９、３１又は３３のいずれかの重鎖可変領域配列、若しくは配列番号３０、３２又は３４のいずれかの軽鎖可変領域配列に配列一致を示す抗体及びその部分配列も提供される。一実施態様において、ＩＬ−１０Ｒαに特異的に結合する抗体又はその部分配列には、配列番号２９、３１又は３３として示されるいずれかの重鎖可変領域配列に少なくとも６０％以上（例えば、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％等）一致する配列と、配列番号３０、３２又は３４として示されるいずれかの軽鎖可変領域配列に少なくとも６０％以上（例えば、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％等）一致する配列とを含む。
【００４５】
もう一つの実施態様において、ＩＬ−１０Ｒαに特異的に結合する抗体又はその部分配列には、配列番号２９、３１又は３３として示されるいずれかの重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２又は３４として示されるいずれかの軽鎖可変領域配列とを含み、抗体又は部分配列は、配列番号２９、３１若しくは３３、又は配列番号３０、３２若しくは３４の１つ以上のアミノ酸付加、欠失又は置換を有する。特定の形態において、配列は、配列番号２９、３１若しくは３３として示されるいずれかの重鎖可変領域配列、又は配列番号３０、３２若しくは３４として示されるいずれかの軽鎖可変領域配列と少なくとも８０％以上、例えば、８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、９５〜１００％一致する。更なる形態において、ＩＬ−１０Ｒαに特異的に結合する抗体は、配列番号２９、３１若しくは３３として示される重鎖可変領域配列、又は配列番号３０、３２若しくは３４として示される軽鎖可変領域配列のいずれか１つを含むか、又はいずれか１つから成る。特定の形態において、抗体及びその部分配列は、ＩＬ−１０Ｒへの基準抗体の結合を約５０％以上、例えば、７０％以上減少又は阻害できる。
【００４６】
「抗体」なる語は、重鎖及び軽鎖可変ドメイン、それぞれＶＨ及びＶＬを介して他の分子（抗原）に結合するタンパク質を指す。抗体には、２つの重鎖及び２つの軽鎖配列を含む完全長抗体を含む。抗体は、カッパ又はラムダ軽鎖配列を、自然発生抗体のように完全長、その混合（すなわち、カッパ及びラムダ鎖配列の融合）、及びその部分配列／断片で有することができる。自然発生抗体分子は、２つのカッパ又は２つのラムダ軽鎖を有する。
【００４７】
抗体には、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤのようないずれかのクラス及びそのいずれかのサブクラスに属する、モノクローナル又はポリクローナル免疫グロブリン分子を含む。ＩｇＧの典型的なサブクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４である。「モノクローナル」抗体は、いずれかの真核、原核又はファージクローンを含む単一クローンに基づく、単一クローンから得られた、又は単一クローンに由来する抗体を指す。それ故に「モノクローナル」抗体は、それが産生された方法によってではなく、構造によって定義される。
【００４８】
ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体又はその部分配列は、「ＩＬ−１０Ｒ抗体」、「抗ＩＬ−１０Ｒ」及び「抗ＩＬ−１０Ｒ抗体」とも呼ぶことができるが、ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）に特異的に結合するポリクローナル又はモノクローナル抗体を指す。「結合」又は「結合する」なる語は、抗体に関して使用される場合、抗体又はその部分配列が、抗原上の対応するエピトープ（抗原決定基）と分子レベルで相互作用することを意味する。従って、抗体は、ＩＬ−１０Ｒ上に存在する配列又は抗原エピトープの全部又は一部に特異的に結合する。特異的結合は、ＩＬ−１０Ｒ中に存在するエピトープに対して選択的なものである。抗体及びその部分配列は、ＩＬ−１０Ｒアルファ若しくはベータサブユニット、又はＩＬ−１０Ｒのアルファ及びベータサブユニットの両方を含むエピトープへの特異的又は選択的結合を含む。特異的及び選択的結合は、当技術分野で既知のアッセイ（例えば、免疫沈降、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット法）を使用して非特異的結合と区別できる。
【００４９】
エピトープは、概して短いアミノ酸配列、例えば、約５〜１５アミノ酸という長さである。エピトープは、連続的であっても、非連続であってもよい。非連続なアミノ酸配列からなるエピトープは、タンパク質の折り畳みにより生じる。例えば、エピトープは、互いに連続しないが、タンパク質の折り畳みによりエピトープを形成する、５アミノ酸配列及び８アミノ酸配列のような非連続アミノ酸配列を含むことができる。エピトープを同定するための技術は当業者に既知であり、かつ抗体を結合するための重複オリゴペプチドをスクリーニングすること（例えば、米国特許第４，７０８，８７１号）、エピトープマッピング用に市販されているファージディスプレイペプチドライブラリーキット（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ）を含む。エピトープは、エピトープの長さのペプチド配列を用いて、当該ペプチド配列と結合する抗体が得られる動物に免疫し、付与する時に、推測によっても同定でき、かつＢＥＰＩＴＯＰＥのようなコンピュータプログラムを使用して予測できる（Ｏｄｏｒｉｃｏら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．１６：２０（２００３））。
【００５０】
ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体及びその部分配列は、溶液中又は固相で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、又はｉｎ  ｖｉｖｏ、又はｉｎ  ｓｉｔｕで細胞上のＩＬ−１０Ｒに結合する。ＩＬ−１０Ｒは、ｉｎ  ｖｉｖｏの１つ以上の細胞上のようにｉｎ  ｖｉｖｏで、初代細胞分離株、経代細胞（ｐａｓｓａｇｅｄ  ｃｅｌｌｓ）、培養細胞、不死化細胞のようにｉｎ  ｖｉｔｒｏで、またｅｘ  ｖｉｖｏ細胞中でも存在できる。細胞によって発現される野生型ＩＬ−１０Ｒに結合する抗体は、概してＩＬ−１０Ｒ細胞外ドメインに結合する（例えば、配列番号３参照）。ＩＬ−１０Ｒを発現できる特異的な細胞の限定されない類型には、活性化及び他のＴ細胞（例えば、未感作、エフェクター、メモリ又は制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞）及び非Ｔ細胞を含む。非Ｔ細胞の例には、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、顆粒球（好中球）、好酸球、単球、マクロファージ、マスト細胞及び樹状細胞（ＤＣ）を含む。ＩＬ−１０Ｒを本来発現しない細胞は、例えば、ＩＬ−１０Ｒをコードする核酸で細胞をトランスフェクト又は形質転換することにより、ＩＬ−１０Ｒを発現させることができる。ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体及びその部分配列は、ＩＬ−１０Ｒを発現又は産生する１つ以上のトランスフェクト又は形質転換された細胞に結合できる。
【００５１】
ＩＬ−１０は、必ずしもではないが、ＩＬ−１０Ｒへの抗体の結合を減少、低下又は阻害しうる。幾つかの実施態様において、ＩＬ−１０Ｒへの抗体又はその部分配列の結合は、ＩＬ−１０ＲへのＩＬ−１０の結合によって減少、低下又は阻害される。他の実施態様において、ＩＬ−１０Ｒへの抗体又はその部分配列の結合は、ＩＬ−１０ＲへのＩＬ−１０の結合によって検出可能に遮断、防止、減少、低下又は阻害されない。
【００５２】
ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体及びその部分配列は、哺乳類（例えば、チンパンジー、マカク及びヒトのような霊長類）型のＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）を含むＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）に結合する。ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体及びその部分配列は、ヒトＩＬ−１０Ｒのような霊長類ＩＬ−１０Ｒに結合することがあるが、チンパンジーＩＬ−１０Ｒ、又はマカクＩＬ−１０Ｒに検出可能に結合しないことがある。ＩＬ−１０受容体アルファ鎖（ＩＬ−１０Ｒα）の限定されない例は、配列番号２として示されるヒト配列である。
【００５３】
配列番号２
2011524741.tif 000003
【００５４】
「単離された」なる語は、組成物（例えば、抗体、部分配列、改変されたもの、それをコードする核酸等）の修飾語として使用される場合、該組成物が、人為的に作られたか、又はその自然に生じたｉｎ  ｖｉｖｏの環境から完全に、又は少なくとも部分的に分離されることを意味する。一般的に、単離された組成物は、それらが通常天然に会合している１つ以上の物質、例えば、１つ以上のタンパク質、核酸、脂質、炭水化物、細胞膜を実質的に有さない。「単離された」なる語は、融合／キメラ、マルチマー／オリゴマー、修飾体（例えば、リン酸化、グリコシル化、脂質化）、又は誘導体、又は人為的に産出された宿主細胞中で発現される形状のような、組成物の代替的な物理的形状を排除しない。
【００５５】
「単離された」組成物（例えば、抗体）は、概して天然に会合している物質の大部分又は全部を有さない場合、「実質的に純粋である」か、又は「精製されている」こともある。従って、同様に実質的に純粋であるか、又は精製されている、単離された抗体は、例えば、抗体ライブラリの抗体、又はゲノム若しくはｃＤＮＡライブラリ中の核酸のような、数百万の他の配列中で存在するポリペプチド又はポリヌクレオチドを含まない。「実質的に純粋である」か、又は「精製されている」組成物は、１つ以上の他の分子と組み合わせることができる。従って、「実質的に純粋である」か、又は「精製される」は、ＩＬ−１０Ｒ抗体又は部分配列と、他の抗体、作用物質、薬剤又は治療との組み合わせのような、組成物の組み合わせを排除しない。
【００５６】
抗体には、哺乳類、霊長類化、ヒト化、完全ヒト抗体及びキメラを含む。哺乳類抗体は、トランスジェニック若しくは非トランスジェニック哺乳類、又は非哺乳類細胞（細菌、酵母、昆虫細胞）、動物又は植物のような、哺乳類抗体を産出するように改変された非哺乳類生物によって産出される抗体である。
【００５７】
「ヒト」なる語は、抗体に関して使用される場合、抗体のアミノ酸配列が、完全にヒトアミノ酸配列、すなわちヒト重鎖及びヒト軽鎖可変並びにヒト定常領域であることを意味する。従って、全てのアミノ酸は、ヒトアミノ酸であるか、又はヒト抗体中に存在する。非ヒト抗体である抗体は、非ヒトアミノ酸残基を、ヒト抗体中に存在するアミノ酸残基と置換することにより完全ヒト抗体にできる。ヒト抗体中に存在するアミノ酸残基、ＣＤＲ領域マップ及びヒト抗体コンセンサス残基は、当該技術分野で既知である（例えば、Ｋａｂａｔ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第４版、ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ（１９８７）参照）。２２の既知ヒトＶＨＩＩＩ配列を対象にした調査に基づいたヒトＶＨサブグループＩＩＩのコンセンサス配列、及び３０の既知ヒトカッパＩ配列を対象にした調査に基づいたヒトＶＬカッパ鎖サブグループＩのコンセンサス配列は、Ｐａｄｌａｎ  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１６９（１９９４）、及びＰａｄｌａｎ  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９（１９９１）に記載されている。それ故に、ヒト抗体には、１つ以上のアミノ酸残基がいずれかの他のヒト抗体中に存在する１つ以上のアミノ酸と置換される抗体を含む。
【００５８】
「ヒト化」なる語は、抗体に関して使用される場合、抗体のアミノ酸配列が受容体ヒト免疫グロブリン分子中で所望の抗原と特異的に結合する１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）の非ヒトアミノ酸残基（例えば、マウス、ラット、ヤギ、ウサギ等）と、Ｆｖフレームワーク領域（ＦＲ）中に、ＣＤＲにフランキングするアミノ酸残基である１つ以上のヒトアミノ酸残基とを有するということを意味する。かかる抗体は、概して減少した免疫原性を有し、それ故に、１つ以上のＣＤＲがそれから得られたか、又はそれに基づいた非ヒト親抗体と比較してヒトにおいて長い半減期を有する。
【００５９】
「霊長類化」という抗体は、受容体ヒト免疫グロブリン分子及びフレームワーク領域のアミノ酸残基が、いずれのヒト残基でもありうるのに加えて、いずれの霊長類アミノ酸残基（例えば、サル、テナガザル、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、マカク）でもあり得ることを除き、「ヒト化」である。免疫グロブリンのヒトＦＲ残基は、対応する非ヒト残基と置き換えられる。それ故に、ＣＤＲ又はヒトフレームワーク領域中の残基は、例えば抗原親和性又は特異性を変化させる、一般的には改善するために、ドナー抗体の非ヒトＣＤＲ又はフレームワーク領域の対応する残基と置換されうる。ヒト化抗体は、ヒト抗体にもドナーのＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見出されない残基を含み得る。例えば、ヒト抗体又はドナー非ヒト抗体には見出されない特定位置でのＦＲ置換は、その位置でヒト抗体の結合親和性又は特異性を改善すると予測できる。分子モデリングに基づく抗体フレームワーク及びＣＤＲ置換は、当該技術分野では周知であり、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するためのＣＤＲとフレームワーク残基の相互作用のモデリング、及び特定位置での異常フレームワーク残基を同定するための配列比較による（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号、及びＲｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３（１９８８）参照）。
【００６０】
「キメラ」なる語及びその文法上の変形は、抗体に関して使用される場合、抗体のアミノ酸配列が、２つ以上の異なる種に由来する、それから得られる若しくは単離される、又はそれに基づく１つ以上の部分を含有することを意味する。例えば、抗体の一部分はヒト（例えば、定常領域）であってもよく、かつ抗体の他の部分は非ヒト（例えば、マウス重鎖又はマウス軽鎖可変領域）であってもよい。従って、キメラ抗体の例は、抗体の異なる部分が異なる種起源のものである抗体である。キメラ抗体は、ヒト化又は霊長類化抗体とは異なり、抗体のいずれかの領域にも異なる種の配列を有し得る。
【００６１】
本発明のＩＬ−１０Ｒ抗体及び部分配列は、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９の重鎖若しくは軽鎖の定常若しくは可変領域配列、又は配列番号２９、３１若しくは３３のいずれかの重鎖可変領域配列、又は配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの軽鎖可変領域配列に対し少なくとも部分的な配列の同一性を有するものを含む。かかる抗体及びその部分配列の同一性の％は、僅か６０％であってもよいか、又はそれより高くてもよい（例えば、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％等）。同一性の％は、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９の重鎖若しくは軽鎖の定常若しくは可変領域配列、又は配列番号２９、３１若しくは３３のいずれかの重鎖可変領域配列、又は配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの軽鎖可変領域配列の配列全長に及ぶことができる。特定の形態において、同一性を有する配列の長さは、５つ以上の隣接アミノ酸、例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０等の隣接アミノ酸である。追加の特定の形態において、同一性を有する配列の長さは、２０以上の隣接アミノ酸、例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５等の隣接アミノ酸である。更なる特定の形態において、同一性を有する配列の長さは、３５以上の隣接アミノ酸、例えば、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４５、４７、４８、４９、５０等の隣接アミノ酸である。なおも更なる特定の形態において、同一性を有する配列の長さは、５０以上の隣接アミノ酸、例えば、５０〜５５、５５〜６０、６０〜６５、６５〜７０、７０〜７５、７５〜８０、８０〜８５、８５〜９０、９０〜９５、９５〜１００、１００〜１１０等の隣接アミノ酸である。
【００６２】
「同一性」なる語及びその文法上の変形は、２つ以上の参照される実体が同じであることを意味する。従って、重鎖又は軽鎖の可変領域配列のような２つの抗体配列が同一である場合、同じアミノ酸配列を有する。同一性は、配列のある定義された区域（領域又はドメイン）にわたっていてもよい。相同性又は同一性の「区域、領域又はドメイン」は、２つ以上の参照される実体が相同性を有するか、又は同じであることを意味する。
【００６３】
２つの配列間の同一性の程度は、当該技術分野で既知のコンピュータプログラム及び数学的アルゴリズムを使用して確かめることができる。配列同一性（相同性）を計算するかかるアルゴリズムでは、一般に、比較領域又は区域にわたる配列ギャップとミスマッチを計上する。例えば、ＢＬＡＳＴ（例えば、ＢＬＡＳＴ２．０）検索アルゴリズム（例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３（１９９０）、ＮＣＢＩを通じて公的に入手可能、を参照）は、以下のような典型的な検索パラメーターを有する：Ｍｉｓｍａｔｃｈ  −２；ｇａｐ  ｏｐｅｎ  ５；ｇａｐ  ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  ２。ポリペプチド配列比較では、ＢＬＡＳＴＰアルゴリズムは、概してＰＡＭ１００、ＰＡＭ２５０、ＢＬＯＳＵＭ６２又はＢＬＯＳＵＭ５０．ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２及びＦＡＳＴＡ３）のようなスコアリングマトリクスと組み合わせて使用され、かつＳＳＥＡＲＣＨ配列比較プログラムも同一性の程度を定量するために使用される（Ｐｅａｒｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８５：２４４４（１９８８）；Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．１３２：１８５（２０００）；及びＳｍｉｔｈら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５（１９８１））。Ｄｅｌａｕｎａｙに基づく位相マッピングを使用してタンパク質構造的類似性を定量するためのプログラムも開発された（Ｂｏｓｔｉｃｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．３０４：３２０（２００３））。
【００６４】
本発明によれば、ＩＬ−１０Ｒアルファタンパク質を特異的に結合し、かつ１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体の重鎖又は軽鎖の可変領域配列の１、２若しくは３つ全部のＣＤＲ、配列番号２９、３１又は３３のいずれかの重鎖可変領域配列の１、２若しくは３つ全部のＣＤＲ、又は配列番号３０、３２又は３４のいずれかの軽鎖可変領域配列の１、２若しくは３つ全部のＣＤＲを含む抗体又はその部分配列が提供される。典型的な重鎖可変領域ＣＤＲ配列（配列番号４９〜５５）は、次の通りである：ＳＹＳＭＮ；ＹＩＳＴＧＳＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧ；ＥＮＹＹＧＳＧＳＹＥＤＹＦＤＹ；ＹＩＳＴＲＳＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧ；ＥＬＳＭＨ；ＧＦＤＰＤＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ；及びＧＧＹＹＧＰＶＧＭＤＶ。典型的な軽鎖可変領域ＣＤＲ配列（配列番号５６〜６１）は、次の通りである：ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ；ＤＡＳＮＲＡＴ；ＱＱＲＳＮＷＰＩＦＴ；ＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＡ；ＡＡＳＳＬＱＳ；及びＱＱＹＮＳＹＰＬＴ。特定の形態において、ＩＬ−１０Ｒアルファタンパク質を特異的に結合する抗体又は部分配列は、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９の重鎖可変領域の３つ全部のＣＤＲ、又は配列番号２９、３１又は３３のいずれか、及び１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９の軽鎖可変領域の３つ全部のＣＤＲ、又は配列番号３０、３２又は３４のいずれかを含む。例えば、ＣＤＲ１（ＳＹＳＭＮ）、ＣＤＲ２（ＹＩＳＴＧＳＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧ）及び／又はＣＤＲ３（ＥＮＹＹＧＳＧＳＹＥＤＹＦＤＹ）を有する重鎖可変領域配列、及びＣＤＲ１（ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ）、ＣＤＲ２（ＤＡＳＮＲＡＴ）、及び／又はＣＤＲ３（ＱＱＲＳＮＷＰＩＦＴ）を有する軽鎖可変領域配列；ＣＤＲ１（ＳＹＳＭＮ）、ＣＤＲ２（ＹＩＳＴＲＳＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧ）、及び／又はＣＤＲ３（ＥＮＹＹＧＳＧＳＹＥＤＹＦＤＹ）を有する重鎖可変領域配列、及びＣＤＲ１（ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ）、ＣＤＲ２（ＤＡＳＮＲＡＴ）、及び／又はＣＤＲ３（ＱＱＲＳＮＷＰＩＦＴ）を有する軽鎖可変領域配列；並びにＣＤＲ１（ＥＬＳＭＨ）、ＣＤＲ２（ＧＦＤＰＤＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ）、及び／又はＣＤＲ３（ＧＧＹＹＧＰＶＧＭＤＶ）を有する重鎖可変領域配列、及びＣＤＲ１（ＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＡ）、ＣＤＲ２（ＡＡＳＳＬＱＳ）、及び／又はＣＤＲ３（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）を有する軽鎖可変領域配列のいずれかである。
【００６５】
ＩＬ−１０Ｒ抗体及び機能的断片は、基準抗体（例えば、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８若しくは１３６Ｄ２９、又は配列番号２９、３１若しくは３３のいずれかの重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの軽鎖可変領域配列とを含む抗体又はその部分配列）と実質的に同じ、それより高い又は低い相対活性又は機能を有し得る。例えば、ＩＬ−１０Ｒ抗体は、基準抗体（例えば、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８若しくは１３６Ｄ２９、又は配列番号２９、３１若しくは３３のいずれかの重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの軽鎖可変領域配列とを含む抗体又はその部分配列）と実質的に同じ、それより高い又は低い、ＩＬ−１０Ｒに対する相対結合親和性又はアビディティーを有し得る。ＩＬ−１０Ｒに対する測定可能な結合親和性を有するかかる抗体は、ＩＬ−１０Ｒに対する基準抗体（例えば、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８若しくは１３６Ｄ２９、又は配列番号２９、３１若しくは３３のいずれかの重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの軽鎖可変領域配列とを含む抗体又はその部分配列）の結合と競合する。それ故に、ＩＬ−１０Ｒ抗体及び機能的断片は、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体、又は配列番号２９、３１若しくは３３のいずれかの重鎖可変領域配列と配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの軽鎖可変領域配列とを含む抗体又はその部分配列のいずれかと、ＩＬ−１０Ｒへの結合に関して競合するものを含み、かつ基準抗体（例えば、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８若しくは１３６Ｄ２９、又は配列番号２９、３１若しくは３３のいずれかの重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの軽鎖可変領域配列とを含む抗体又はその部分配列）と比較して、実質的に同じ、それより高い又は低い、ＩＬ−１０Ｒへの結合に関する相対結合親和性又はアビディティーを有する。
【００６６】
ＩＬ−１０Ｒ抗体及び機能的断片は、基準抗体（例えば、ＩＬ−１０Ｒへの結合に関して１３６Ｃ５、１３６Ｃ８若しくは１３６Ｄ２９、又は配列番号２９、３１若しくは３３のいずれかの重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの軽鎖可変領域配列とを含む抗体又はその部分配列の２〜５、５〜１０、１０〜１００、１００〜１０００又は１０００〜１０，０００倍以内の結合親和性、ＫＤ）よりも、ＩＬ−１０Ｒへの結合に関して２〜５、５〜１０、１０〜１００、１００〜１０００又は１０００〜１０，０００倍よりも高い又は低い結合親和性、ＫＤを、又はかかる値以内、若しくはそれを包含するいずれかの数値若しくは範囲を有し得る。一実施態様において、抗体及びその機能的は、ＩＬ−１０Ｒへの結合に関して基準抗体（例えば、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８若しくは１３６Ｄ２９、又は配列番号２９、３１若しくは３３のいずれかの重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの軽鎖可変領域配列とを含む抗体又はその部分配列）の約１〜１０００倍（高い又は低い）以内の結合親和性、ＫＤを有する。
【００６７】
ＩＬ−１０Ｒ抗体及び機能的断片は、ＩＬ−１０Ｒへの結合に関して基準抗体と実質的に同じ結合親和性、ＫＤを有し得る。特定の実施態様において、ＩＬ−１０Ｒ抗体は、ＩＬ−１０Ｒへの結合に関して１３６Ｃ５、１３６Ｃ８若しくは１３６Ｄ２９、又は配列番号２９、３１若しくは３３のいずれかの重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの軽鎖可変領域配列とを含む抗体又はその部分配列と実質的に同じＩＬ−１０Ｒに対する結合親和性、ＫＤ又はアビディティーを有する。
【００６８】
「実質的に同じ」なる語は、抗原に関する抗体又は機能的断片の結合親和性又はアビディティーに関して使用される場合、結合が抗原（例えば、ＩＬ−１０Ｒ）に関する基準抗体の結合親和性の１００倍（高い又は低い）以内であることを意味する。結合親和性は、会合（Ｋａ）及び解離（ＫＤ又はＫｄ）速度によって決定できる。平衡親和性定数、ＫはＫａ／Ｋｄ比である。会合（Ｋａ）及び解離（ＫＤ又はＫｄ）速度は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して測定できる（Ｒｉｃｈ及びＭｙｓｚｋａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１１：５４（２０００）；Ｅｎｇｌｅｂｉｅｎｎｅ、Ａｎａｌｙｓｔ．１２３：１５９９（１９９８））。結合速度のリアルタイム検出及びモニタリングに関する装置及び方法は既知であり、かつ市販されている（ＢｉａＣｏｒｅ  ２０００、Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ、Ｕｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ；及びＭａｌｍｑｖｉｓｔ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２７：３３５（１９９９））。従って、例えば、ＩＬ−１０Ｒへの基準抗体の結合が、１０−９ＭのＫＤを有するならば、基準抗体と実質的に同じ結合親和性を有する抗体は、ＩＬ−１０Ｒへの結合に関して、１０−７ＭからＫＤ１０−１１Ｍの範囲内のＫＤを有する。
【００６９】
ＩＬ−１０Ｒ抗体及び機能的断片は、ＩＬ−１０Ｒへの結合に関して、約ＫＤ１０−２Ｍから約ＫＤ１０−１５Ｍ以内、又は約ＫＤ１０−６Ｍから約ＫＤ１０−１２Ｍ以内の結合親和性、ＫＤを有し得る。特定の実施態様において、ＩＬ−１０Ｒへの結合に関する結合親和性、ＫＤは、５×１０−２Ｍ、１０−２Ｍ、５×１０−３Ｍ、１０−３Ｍ、５×１０−４Ｍ、１０−４Ｍ、５×１０−５Ｍ、１０−５Ｍ、５×１０−６Ｍ、１０−６Ｍ、５×１０−７Ｍ、１０−７Ｍ、５×１０−８Ｍ、１０−８Ｍ、５×１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、１０−１２Ｍ、５×１０−１３Ｍ、１０−１３Ｍ、５×１０−１４Ｍ、１０−１４Ｍ、５×１０−１５Ｍ、及び１０−１５Ｍ未満である。
【００７０】
本発明によれば、改変体、かつ変異体を含む抗体及び部分配列が提供される。本明細書で使用されるような、「改変」又は「変異体」なる語及びその文法上の変形は、抗体又はその部分配列が、基準抗体又はその部分配列（例えば、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８若しくは１３６Ｄ２９抗体、又は配列番号２９、３１若しくは３３のいずれかの重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの軽鎖可変領域配列とを含む抗体又はその部分配列）から逸脱することを意味する。改変体、かつ変異体の抗体及びその部分配列は、基準抗体よりも高い又は低い活性若しくは機能、又は基準抗体と異なる活性若しくは機能を有することがあるが、基準抗体（例えば、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８若しくは１３６Ｄ２９抗体、又は配列番号２９、３１若しくは３３のいずれかの重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの軽鎖可変領域配列とを含む抗体又はその部分配列）の部分的活性又は機能を少なくとも保持する。
【００７１】
改変の限定されない例には、抗体の定常又は可変領域配列の１つ以上のアミノ酸置換（例えば、１〜３、３〜５、５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５又はそれ以上の残基）、付加（例えば、挿入）、及び欠失（例えば、部分配列又は断片）を含む。特定の実施態様において、改変体、又は変異体の抗体は、非改変抗体の機能又は活性の少なくとも一部、例えば、結合親和性（例えば、ＫＤ又はＫｄ）、又はｉｎ  ｖｉｔｒｏＩＬ−１０Ｒ若しくはＩＬ−１０Ｒを発現する細胞への結合特異性、ＩＬ−１０Ｒのアンタゴニスト活性のような活性、又はＩＬ−１０／ＩＬ−１０Ｒのシグナル経路を保持する。かかる改変体及び変異体は、ＩＬ−１０又はＩＬ−１０Ｒの活性若しくは機能、又はＩＬ−１０／ＩＬ−１０Ｒのシグナル経路を減少、低下、阻害、抑制、制限、防止又は無効にするために、基準抗体又はその部分配列の機能又は活性より低い、同じ、又は高いが、少なくともその一部、例えば、ＩＬ−１０Ｒへの結合を有することができる。
【００７２】
置換の具体的かつ限定されない例には、同類及び非同類アミノ酸置換を含む。置換は、抗体の定常領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）又はフレームワーク領域（ＦＲ）内部又は外部であってもよい。特定の実施態様において、重鎖又は軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３）又はＦＲは、１〜８、１〜５、１〜３、又はそれ以下（例えば、１又は２）のアミノ酸置換を有する。追加の実施態様において、可変領域配列内の置換は、ＣＤＲ内部ではない。もう一つの実施態様において、可変領域配列内の置換は、ＦＲ内部ではない。アミノ酸置換の特定の、かつ限定されない例は、定常領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）又はフレームワーク領域（ＦＲ）内部又は外部の同類置換、例えば、定常領域の１つ以上のアミノ酸残基、又は１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体のいずれかの重鎖又は軽鎖可変領域配列、又は配列番号２９、３１又は３３のいずれかの重鎖可変領域配列、若しくは配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの軽鎖可変領域配列の置換である。
【００７３】
「同類置換」は、生物学的に、化学的に又は構造的に類似した残基による１つのアミノ酸の置換である。生物学的に類似したとは、置換が生物活性を破壊しないことを意味する。構造的に類似したとは、アミノ酸がアラニン、グリシン及びセリンのように同様の長さ、又は同様のサイズの側鎖を有することを意味する。化学的類似性とは、残基が同じ電荷を有する、又は双方が親水性又は疎水性であることを意味する。特定の例には、イソロイシン、バリン、ロイシン又はメチオニンのような一方の疎水性残基を他方と置換すること、あるいは一方の極性残基を他方と置換すること、例えば、アルギニンのリジンとの置換、グルタミン酸のアスパラギン酸との置換、又はグルタミンのアスパラギンとの置換、セリンのトレオニンとの置換を含む。
【００７４】
超可変領域中の相補性決定領域（ＣＤＲ）及びフレームワーク領域（ＦＲ）のような抗原結合に寄与する構造的決定要因は、当該技術分野で既知である。Ｄ及びＪ領域のような付加的領域の位置も既知である。フランキングＦＲ配列を有することのある、１つ以上のＣＤＲ配列を含む抗体及びその部分配列は、本明細書に例示されるような重鎖及び軽鎖の配列を含む抗体の少なくとも部分的な機能又は活性、例えば、結合親和性（例えば、ＫＤ）、アビディティー又はＩＬ−１０Ｒへの結合特異性若しくは選択性を保持するように、本明細書に例示されるような重鎖又は軽鎖の可変領域配列との十分な配列同一性を概して有する。
【００７５】
ＣＤＲ内部又は外部の重鎖又は軽鎖可変領域中の１つ又は若干のアミノ酸置換（例えば、２、３、４又は５）は、許容される可能性が高い。超可変領域中の多数のアミノ酸の非同類置換は、結合活性、特異性又は抗体機能若しくは活性に影響を及ぼす可能性が高い。相補性決定領域（ＣＤＲ）及びフレームワーク領域（ＦＲ）中の特定の置換の効果を予測するために、領域変異性解析が、使用できる（Ｓｈａｐｉｒｏら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：２５９（１９９９））。要するに、配列比較は、ＩｇイントロンＤＮＡ内に位置するジ及びトリヌクレオチド配列の間の変異性階層を示し、それにより多少突然変異の起きやすい領域が予測される。抗体認識ドメイン、及びそれ故にリガンド結合に関与するアミノ酸の性質を同定するために、定量的構造活性相関（ＱＳＡＲ）が使用できる。置換（突然変異）の効果を予測するために、ＯＳＡＲに基づく予測モデルが、次に使用できる。例えば、その抗原と相互作用する抗体の会合及び解離速度に対する突然変異の影響は、両方の運動定数（Ｋａ及びＫｄ）の定量的予測モデルを構築するために使用され、それは次に抗体に対する他の突然変異の影響を予測するために使用できる（Ｄｅ  Ｇｅｎｓｔら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７７：２９８９７（２００２））。それ故に、当業者は、かかる解析を使用して、非置換抗体又は部分配列の少なくとも部分的な活性又は機能を保持する抗体又は部分配列をもたらす可能性が高い抗体及び部分配列のアミノ酸置換を予測できる。
【００７６】
付加は、抗体へのいずれかのタイプの分子の共有又は非共有結合であり得る。抗体付加の具体例には、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、ホルミル化、ユビキチン化、及び保護（ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ／ｂｌｏｃｋｉｎｇ）基による誘導体化、並びに多数の化学修飾のいずれかを含む。付加の追加の具体的かつ限定されない例は、もう一つのアミノ酸配列である。特定の実施態様において、付加は、融合（キメラ）配列、基準の天然（野生型）配列中に通常存在しない１つ以上の分子が、その配列に共有的に結合したものを有するアミノ酸配列である。特定の例は、多特異的抗体のように、抗体マルチマーを産生するようなもう一つの抗体のアミノ酸配列である。
【００７７】
アミノ酸付加を有する改変抗体のもう一つの特定の例は、抗体に別個の又は相補的機能を与える、第２の異種配列、すなわち異種機能ドメインが結合された（共有又は非共有結合）ものである。異種機能ドメインは、アミノ酸残基に限定されない。従って、異種機能ドメインは、種々の異なるタイプの小型又は大型機能的成分のいずれから成ることもできる。かかる成分は、核酸、ペプチド、炭水化物、脂質又は低分子有機化合物、例えば、薬物（例えば、抗ウイルス剤）、金属（金、銀）、放射性同位体を含む。例えば、抗原の精製又は検出を容易にするために、Ｔ７又はポリヒスチジンのようなタグが、抗体に結合できる。従って他の実施態様において、本発明は、抗体及び異種ドメインを提供し、ドメインは、抗体に別個の機能、すなわち異種機能ドメインを与える。
【００７８】
２つの実体が別個の機能又は活性を少なくとも部分的に維持するように、アミノ酸又はペプチドミメティック（ｐｅｐｔｉｄｉｍｉｍｅｔｉｃ）配列のようなリンカーを、抗体配列と、付加（例えば、異種機能ドメイン）との間に挿入できる。リンカーは、いずれかのドメインを促進、又は相互作用し得る、可塑性立体構造、秩序二次構造の形成不能性又は疎水性若しくは荷電性を含む１つ以上の特性を有することができる。可塑性タンパク質領域に概して見出されるアミノ酸には、Ｇｌｙ、Ａｓｎ及びＳｅｒを含む。Ｔｈｒ及びＡｌａのような他の中性に近いアミノ酸も、リンカー配列中に使用できる。リンカー配列の長さは、融合タンパク質の機能又は活性に著しく影響を及ぼさずに変動し得る（例えば、米国特許第６，０８７，３２９号参照）。リンカーには、化学的部分及び接合剤（ｃｏｎｊｕｇａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）、例えば、スルホ−スクシンイミジル誘導体（スルホ−ＳＭＣＣ、スルホ−ＳＭＰＢ）、スベリン酸ジスクシンイミジル（ＤＳＳ）、グルタル酸ジスクシンイミジル（ＤＳＧ）及び酒石酸ジスクシンイミジル（ＤＳＴ）を更に含む。
【００７９】
付加の追加の限定されない例は、検出可能な標識である。従って、もう一つの実施態様において、本発明は、検出可能に標識を付されたＩＬ−１０Ｒ抗体及びその部分配列を提供する。検出可能な標識の具体例には、蛍光体、発色団、放射性同位体（例えば、Ｓ３５、Ｐ３２、Ｉ１２５）、高電子密度試薬、酵素、リガンド及び受容体を含む。酵素は、概してその活性によって検出される。例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼは、３，３−’，５，５−’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）のような基質を、定量化可能な、青色色素に変換するその能力によって通常検出される。リガンドは、アビジン又はストレプトアビジンと結合しうるビオチンや、プロテインＡと結合しうるＩｇＧのような他の分子に結合できる。
【００８０】
付加のもう一つの限定されない例は、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体のいずれかの配列中、又は配列番号２９、３１若しくは３３のいずれかの重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの軽鎖可変領域配列とを含む抗体へのアミノ酸の挿入である。挿入は、ＣＤＲ又はＦＲ内部又は外部で、重鎖又は軽鎖の可変領域配列のような定常又は可変領域中で起こり得る。ＣＤＲ３のようなＣＤＲ中の挿入は、抗体親和性成熟中に自然に起こる。それ故に本発明の抗体及びその部分配列の、ＣＤＲ３のようなＣＤＲ中のアミノ酸挿入は、ＩＬ−１０Ｒ結合親和性を破壊する必要がない。特定の実施態様において、挿入は、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体のいずれか、又は配列番号２９、３１若しくは３３のいずれかの重鎖可変領域配列と、配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの軽鎖可変領域配列とを含む抗体への１つ以上のアミノ酸残基のものである。
【００８１】
改変及び変異体の追加の具体的かつ限定されない例には、抗体部分配列及び断片を含む。「機能的部分配列」及び「機能的断片」なる語は、抗体を指す場合、完全長又は天然抗体としての１つ以上の機能又は活性の少なくとも一部、例えば、ＩＬ−１０Ｒへの結合のようなＩＬ−１０Ｒ抗体の機能又は活性を保持する部分を意味する。従って、例えば、ＩＬ−１０Ｒに結合する抗体部分配列若しくは断片、又はＩＬ−１０Ｒの断片は、機能的部分配列と考えられる。抗体部分配列又は断片は、非改変又は基準完全長、天然又は無傷の抗体の機能又は活性の少なくとも一部を保持する。部分配列又は断片は、完全長天然抗体よりも低い、同じ又は高い親和性若しくはアビディティー、完全長天然抗体よりも低い、同じ又は高い結合特異性、又は完全長天然抗体よりも低い、同じ又は高い１つ以上の活性若しくは機能、例えば、ＩＬ−１０Ｒ抗体の機能又は活性を有する。
【００８２】
典型的な部分配列及び断片には、完全長ＩＬ−１０Ｒ抗体よりも少なくとも１つ少ないアミノ酸を有する抗体のような、ＩＬ−１０Ｒに結合する抗体部分配列及び断片を含む（例えば、ＩＬ−１０Ｒに結合する２つの重鎖及び２つの軽鎖を有するＩＬ−１０Ｒ抗体のアミノ又はカルボキシ末端からの１つ以上の内部又は末端アミノ酸欠失）。一本鎖抗体を含む抗体部分配列及び断片には、重鎖又は軽鎖の可変領域配列（例えば、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体のいずれか、又は配列番号２９、３１又は３３のいずれかの重鎖可変領域配列、若しくは配列番号３０、３２又は３４のいずれかの軽鎖可変領域配列中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３が、例である）の全部又は一部を、単独又は以下の：ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインの１つ以上の全部又は一部と組み合わせて含むことができる。完全長抗体の非限定的な代表的断片及び部分配列には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＬ、ＶＨ、三重特異性（Ｆａｂ３）、二重特異性（Ｆａｂ２）、ダイアボディ（（ＶＬ−ＶＨ）２又は（ＶＨ−ＶＬ）２）、トリアボディ（三価）、テトラボディ（四価）、ミニボディ（（ｓｃＦｖ−ＣＨ３）２）、二重特異性一本鎖Ｆｖ（Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ）、ＩｇＧデルタＣＨ２、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、（ｓｃＦｖ）２−Ｆｃ及びＩｇＧ４ＰＥを含むが、それらに限定されない。
【００８３】
抗体部分配列及び断片は、組み合わせることができる。例えば、ＶＬ又はＶＨ部分配列は、リンカー配列によって結合でき、それによりＶＬ−ＶＨキメラを形成する。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）部分配列の組み合わせは、リンカー配列によって結合でき、それによりｓｃＦｖ−ｓｃＦｖキメラを形成する。抗体部分配列及び断片は、一本鎖抗体又は可変領域を単独で、又は他の抗体部分配列の全部又は一部と組み合わせて含む。
【００８４】
機能的断片及び部分配列は、任意にフランキングＦＲを有する又は有さない、重鎖又は軽鎖可変領域配列の１、２又は３つのＣＤＲを含む、重鎖若しくは軽鎖可変領域、又は完全長抗体重鎖若しくは軽鎖の全部又は一部も含む。種々の形態において、完全長抗体重鎖若しくは軽鎖、又は重鎖若しくは軽鎖可変領域の機能的断片又は部分配列は、約２０〜３０、３０〜５０、５０〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、２００〜２５０、２５０〜３００、３００〜４００、又は４００〜５００のアミノ酸残基の長さを有する。
【００８５】
改変のもう一つの特定の限定されない例は、抗体が、例えば、重鎖定常領域の置換により異なるアイソタイプ又はサブクラスを有するように変更される場合である。Ｉｇサブクラスの変更は、機能又は活性（例えば、抗ＩＬ−１０Ｒ活性）に変化又は改善をもたらし得る。従って改変には、抗体からアミノ酸配列の小型及び大型領域を欠失することと、欠失領域を他のアミノ酸配列と置換することと（アミノ酸配列が、欠失領域よりも長いにせよ、短いにせよ）を含む。
【００８６】
改変ポリペプチドには、Ｌ−アミノ酸（及びそれらの混合物）と置換された１つ以上のＤ−アミノ酸、構造的及び機能的類似体、例えば、合成又は非天然アミノ酸又はアミノ酸類似体を有するペプチドミメティクス及び誘導化体も含む。改変には、環状構造、例えば、分子のアミノ及びカルボキシ末端間の末端間アミド結合又は分子内又は分子間ジスルフィド結合を含む。ポリペプチドは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏで改変でき、例えば、糖残基、リン酸基、ユビキチン、脂肪酸、脂質等を例えば含むように、翻訳後に修飾される。
【００８７】
ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体及びその部分配列は、ＩＬ−１０又はＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）シグナル経路のアンタゴニストとして機能する抗体又はその部分配列を含む。「アンタゴニスト」なる語及びその文法上の変形は、ＩＬ−１０及びＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）に関して使用される場合、ＩＬ−１０、ＩＬ−１０Ｒ、又はＩＬ−１０若しくはＩＬ−１０Ｒシグナル伝達活性若しくはシグナル経路の活性又は機能を直接又は間接的に減少、低下、阻害、抑制、防止、制限、遮断、又は無効にする抗体又はその部分配列である。かかる本発明の抗体及びその部分配列は、ＩＬ−１０又はＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）シグナル伝達活性又はシグナル経路の活性又は機能を検出可能に減少、低下、阻害、抑制、防止、制限、遮断、又は無効にする。従って、ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体又はその部分配列のアンタゴニストは、例えば、ＩＬ−１０のＩＬ−１０Ｒへの結合、ＩＬ−１０若しくはＩＬ−１０Ｒが媒介するシグナル伝達又は発現、又はＩＬ−１０若しくはＩＬ−１０Ｒが媒介する又はＩＬ−１０若しくはＩＬ−１０Ｒが調節しうる細胞応答、又は本明細書に記載されたような他のＩＬ−１０若しくはＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）の活性若しくは機能、又はさもなければ当業者が知らされるようなものを含むことができる、１つ以上のＩＬ−１０又はＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）の活性又は機能を検出可能に減少、低下、阻害、抑制、防止、制限、遮断、又は無効にする。ＩＬ−１０の存在下で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＬＰＳにより処理されたＰＢＭＣ（例えば、ヒト、チンパンジー又はマカク）によるＴＮＦ−アルファ発現又は分泌を測定し、かつＰＢＭＣによるＴＮＦ−アルファ発現又は分泌の上昇を決定するような、ＩＬ−１０、ＩＬ−１０Ｒ、又はＩＬ−１０若しくはＩＬ−１０Ｒシグナル伝達活性若しくはシグナル経路の活性又は機能を測定する種々のアッセイは、本明細書に開示され、かつ当業者には既知である。
【００８８】
更なる実施態様において、抗体及びその部分配列は、ＩＬ−１０受容体アルファタンパク質（ＩＬ−１０Ｒα）に特異的に結合し、かつＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性を調節する。一形態において、抗体又はその部分配列は、ＩＬ−１０Ｒ／ＩＬ−１０シグナル伝達活性を減少、阻害、低下、抑制又は制限する。更なる形態において、抗体又はその部分配列は、ヒト、チンパンジー又はサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαに特異的に結合し、かつヒト、チンパンジー又はサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαの活性（例えば、ＩＬ−１０／ＩＬ−１０Ｒシグナル伝達）を減少、阻害、低下、抑制又は制限する。なおも更なる特定の形態において、抗体又はその部分配列は、ヒトＩＬ−１０Ｒα、並びにチンパンジーＩＬ−１０Ｒα及びサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαの一方又は両方に特異的に結合し、かつヒト、チンパンジー又はサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαの活性（例えば、ＩＬ−１０／ＩＬ−１０Ｒシグナル伝達）を減少、阻害、低下、抑制又は制限する。
【００８９】
ＩＬ−１０及びＩＬ−１０Ｒ活性及び機能の種々の非限定的な例は、本発明の抗体又はその部分配列と接触する場合：サイトカイン（例えば、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ等）又はケモカイン（例えば、ＭＣＰ１、ＭＣＰ５、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−８、ＩＰ−１０、ＭＩＰ−２等）の炎症性（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＴＮＦ−アルファ）又は適応的免疫応答、産生又は発現を刺激、誘発、上昇、強化、増加又は促進し、抗原提示細胞による抗病原体サイトカイン若しくはケモカイン、又はＭＨＣクラスＩＩ若しくは共刺激分子（例えば、ＯＸ４０Ｌ）の発現を刺激、誘発、上昇、強化、増加又は促進し、ＣＤ４若しくはＣＤ８Ｔ細胞エフェクター応答、又はＣＤ４若しくはＣＤ８Ｔ細胞の増殖、分化、又は発現を刺激、誘発、上昇、強化、増加又は促進し、マクロファージ活性化又は増殖を刺激、誘発、上昇、強化、増加又は促進し、Ｊａｋ／Ｓｔａｔ経路遺伝子、ＭＡＰＫ又はｐ３８経路の発現又は活性を減少、低下、阻害又は抑制し、かつ病原体増殖、複製、病変、病原体によって引き起こされる又はそれと関連した有害な症状、潜伏からの病原体再活性化、一方の患者から他方の患者への病原体伝達を減少、低下、阻害、抑制、制御又は制限することをもたらし得る。従って、本明細書に開示された、又は当業者に既知のＩＬ−１０及びＩＬ−１０Ｒ活性又は機能を減少、低下、抑制、阻害、防止、制限、遮断又は無効にするＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列は、例えば、細胞増殖、膨張又は活性化（例えば、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、樹状細胞、好中球、好酸球、単球、又はマクロファージ）、細胞生存又はアポトーシス（例えば、未感作、活性化、エフェクター、又はメモリＴ細胞のようなリンパ球）サイトカイン及びインターフェロン発現又は産生（ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏ）、病原体に対する炎症性又は適応的免疫応答、抗アポトーシス又はプロアポトーシスタンパク質発現又は産生（例えば、Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｂｃｌ−２、Ｂａｄ又はＢｉｍ）を誘発、上昇、促進強化、増加、又は刺激すること、及び病原体感染、潜伏からの再活性化、一方の患者から他方の患者への病原体伝達と関連した又はそれによって引き起こされる１つ以上の障害、疾病、疾患、生理的状態、病変又は有害な症状若しくは合併症の治療、阻害、減少、低下、防止、制御、制限又は改善することをもたらし得る。
【００９０】
本発明は、本明細書に示すように任意に単離若しくは精製できる重鎖及び軽鎖可変領域配列も提供する。特定の実施態様において、重鎖又は軽鎖可変領域配列は、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体のいずれかの重若しくは軽配列、配列番号２９、３１若しくは３３のいずれかの重鎖可変領域配列、又は配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの軽鎖可変領域配列と同一の配列である。かかる重鎖及び軽鎖配列には、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体、配列番号２９、３１若しくは３３、又は配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの置換、付加及び欠失のような変異体、並びに１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体、配列番号２９、３１若しくは３３、又は配列番号３０、３２若しくは３４の重鎖及び軽鎖可変領域配列に対する１００％未満の同一性（例えば、配列番号２９、３１若しくは３３として示されるいずれかの重鎖可変領域配列に６０％以上、例えば、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％等同一、又は配列番号３０、３２若しくは３４として示されるいずれかの軽鎖可変領域配列に６０％以上、例えば、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％等同一）を有する配列を含む。
【００９１】
ポリクローナル及びモノクローナル抗体の作製方法は、当該技術分野で既知である。例えば、ＩＬ−１０Ｒ又はその免疫原性断片は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）又はオボアルブミン（例えば、ＢＳＡ）のような担体と任意に結合するか、又はフロイント完全又は不完全アジュバントのようなアジュバントと混合され、かつ動物に免疫を付与するために使用される。ハイブリドーマ技術を使用して、ＩＬ−１０Ｒに応答する免疫動物由来の脾細胞を単離し、かつ骨髄腫細胞と融合させることができる。ハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体は、ＩＬ−１０Ｒ又はその免疫原性断片との反応性に関してスクリーニングできる。ハイブリドーマ、組換え及びファージディスプレイ方法は、当該技術分野で既知である（例えば、米国特許第４，９０２，６１４号、第４，５４３，４３９号、及び第４，４１１，９９３号参照；同様にＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ：Ａ  Ｎｅｗ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｅｓ、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、  Ｋｅｎｎｅｔｔ、ＭｃＫｅａｒｎ、及びＢｅｃｈｔｏｌ（編）、１９８０、及びＨａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、第２版  １９８８も参照）。
【００９２】
免疫付与し得る動物には、霊長類、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、又はモルモットを含む。初回及び任意の後続免疫付与は、静脈内、腹腔内、筋肉内、又は皮下経路を介してもよい。その上、免疫応答を上昇させるために、抗原を、オボアルブミン又はキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、チログロブリン及び破傷風トキソイドのような他のタンパク質と結合できるか、又はフロイント完全又は不完全アジュバントのようなアジュバントと混合できる。初回及び任意の後続免疫付与は、腹腔内、筋肉内、眼球内、又は皮下経路を介してもよい。後続免疫付与は、抗原の同じ又は異なる濃度であってもよく、かつ規則又は不規則な間隔であってもよい。
【００９３】
動物には、ヒト抗体を産生するために使用できる、ヒト免疫グロブリンラムダ又はカッパ軽鎖のようなヒト遺伝子座を含むように遺伝子改変された哺乳類を含む。１つ以上のヒト免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニック（例えば、トランスクロモソミック）動物は、例えば、米国特許第５，９３９，５９８号、国際公開第０２／４３４７８号、及び国際公開第０２／０９２８１２号に記載されている。ヒトトランスクロモソミックマウス（ＫＭ  ｍｉｃｅ（商標））は、例えば、国際公開第０２／４３４７８号、国際公開第０２／０９２８１２号、及びＩｓｈｉｄａら、ＩＢＣ’ｓ  １１ｔｈ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、Ａｂｓｔｒａｃｔ（２０００））に記載されている。かかる動物には、例えば、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ヒツジ、雌ウシ、ブタ及びウマを含む。
【００９４】
ヒト化抗体は、例えば、ＣＤＲ移植（欧州特許出願公開第２３９，４００号明細書、国際公開第９１／０９９６７号、米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号、及び第５，５８５，０８９号）、ベニヤリング又は表面付け替え（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（ＥＰ５９２，１０６、ＥＰ５１９，５９６、Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９（１９９１）、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７：８０５（１９９４）、Ｒｏｇｕｓｋａ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：９６９（１９９４））、及び鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）を含む当該技術分野で既知の技術を使用して産生できる。ヒト化抗体を産生するために、ヒトコンセンサス配列（Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１６９（１９９４）、及びＰａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９（１９９１））が以前、使用された（Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３））。ヒトポリクローナル抗体及びヒトモノクローナル抗体を作製する追加の方法が記載されている（例えば、Ｋｕｒｏｉｗａら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：８８９（２００２）、国際公開第９８／２４８９３号、国際公開第９２／０１０４７号、国際公開第９６／３４０９６号、国際公開第９６／３３７３５号；米国特許第５，４１３，９２３号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、第５，６６１，０１６号、第５，５４５，８０６号、第５，８１４，３１８号、第５，８８５，７９３号、第５，９１６，７７１号、及び第５，９３９，５９８号参照）。
【００９５】
キメラ抗体を作製する方法は当該技術分野で既知である（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２（１９８５）、Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４（１９８６）、Ｇｉｌｌｉｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１（１９８９）、並びに米国特許第５，８０７，７１５号、第４，８１６，５６７号、及び第４，８１６，３９７号）。一方の種の抗体由来の可変ドメインが他方の種の可変ドメインと置換されるキメラ抗体が、例えば、Ｍｕｎｒｏ、Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：５９７（１９８４）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６０４（１９８４）、Ｓｈａｒｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３０９：３６４（１９８４）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１（１９８４）、Ｂｏｕｌｉａｎｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６４３（１９８４）、Ｃａｐｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３７：５２５（１９８９）、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３９：６８（１９８９）に記載されている。
【００９６】
抗体の発生に適したＩＬ−１０Ｒタンパク質は、種々の標準的タンパク質精製又は組換え発現技術のいずれかによって産生できる。免疫応答の発生に適したＩＬ−１０Ｒの形状には、免疫原性断片のようなＩＬ−１０Ｒ部分配列を含む。ＩＬ−１０Ｒの追加の形態には、ＩＬ−１０Ｒ発現細胞、ＩＬ−１０Ｒ含有製剤又は細胞抽出物若しくは分画、部分的に精製されたＩＬ−１０Ｒを含む。例えば、ＩＬ−１０Ｒ配列は、固相合成のような、標準的ペプチド合成技術によって産生できる。タンパク質の一部は、発現又は合成されたタンパク質の精製を容易にするために、Ｔ７タグ又はポリヒスチジン配列のようなアミノ酸配列を含み得る。タンパク質は、細胞中で発現でき、かつ精製できる。タンパク質は、組換え方法により、更に大型のタンパク質（例えば、融合又はキメラ）の一部として発現され得る。
【００９７】
抗体方法においてその上、用いることができる適切な技術には、ＩＬ−１０Ｒに基づくアフィニティ精製、非変性ゲル精製、ＨＰＬＣ若しくはＲＰ−ＨＰＬＣ、サイズ排除、プロテインＡカラム上の精製、又はこれらの技術のいずれかの組み合わせを含む。抗体アイソタイプは、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して決定でき、例えば、ヒトＩｇは、マウスＩｇ吸収抗ヒトＩｇを使用して同定できる。
【００９８】
改変体を含むポリペプチド配列は、細胞発現又はｉｎ  ｖｉｔｒｏ翻訳を介する組換えＤＮＡ技術を使用して製造できる。改変体を含むポリペプチド配列は、当該技術分野で既知の方法、例えば、自動ペプチド合成装置（例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ参照）を使用し、化学合成によっても産生できる。
【００９９】
抗体部分配列及び断片は、抗体のタンパク質分解性の加水分解、例えば、抗体全体のペプシン又はパパイン消化により調製できる。ペプシンによる酵素的切断によって産生された抗体部分配列及び断片は、Ｆ（ａｂ’）２と示される５Ｓ断片を提供する。この断片は、チオール還元剤を使用してさらに切断でき、３．５Ｓ  Ｆａｂ’一価断片を産生できる。あるいは、ペプシンを使用した酵素的切断は、２つの一価Ｆａｂ’断片と、Ｆｃ断片とを直接産生する（例えば、米国特許第４，０３６，９４５号及び第４，３３１，６４７号、並びにＥｄｅｌｍａｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｙｍｏｌ．１：４２２（１９６７）参照）。一価軽鎖−重鎖断片を形成するための重鎖の分離、断片の更なる切断、又は他の酵素的若しくは化学的方法のような、他の抗体切断方法も使用できる。
【０１００】
本発明は、ＩＬ−１０Ｒ抗体及びその部分配列の重鎖及び軽鎖可変領域配列をコードし、任意に定常領域を更にコードする核酸も提供する。一実施態様において、核酸は、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８若しくは１３６Ｄ２９抗体のいずれかの重鎖可変領域配列、又は配列番号２９、３１若しくは３３として示される重鎖可変領域配列と少なくとも６０％以上（例えば、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％等）同一の配列をコードする。もう一つの実施態様において、核酸は、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８若しくは１３６Ｄ２９抗体のいずれかの軽鎖可変領域配列、又は配列番号３０、３２若しくは３４として示される軽鎖可変領域配列と少なくとも６０％以上（例えば、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％等）同一の配列をコードする。追加の実施態様において、核酸は、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗体、配列番号２９、３１若しくは３３、又は配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの重鎖又は軽鎖可変領域配列、又は定常領域の１つ以上のアミノ酸付加（挿入）、欠失又は置換を有する配列をコードする。特定の形態において、核酸は、抗体の定常領域をコードする（例えば、霊長類又はヒトのような哺乳類定常領域）。
【０１０１】
「核酸」及び「ポリヌクレオチド」等の語は、リン酸エステル結合又は同等物によって結合された少なくとも２つ以上のリボ−又はデオキシ−リボ核酸塩基対（ヌクレオチド）を指す。核酸には、ポリヌクレオチド及びポリヌクレオシドを含む。核酸には、一本鎖、二本鎖若しくは三本鎖、環状又は線状分子を含む。典型的な核酸には、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノム核酸、自然発生及び例えば合成核酸のような非自然発生核酸を含むが、それらに限定されない。
【０１０２】
核酸は、種々の長さを有し得る。核酸の長さは、概して長さ約２０のヌクレオチドから２０Ｋｂ、又はかかる長さ以内の、又はそれを包含するいずれかの数値若しくは範囲、１０のヌクレオチドから１０Ｋｂ、１から５Ｋｂ以下、１０００から約５００以下のヌクレオチドに及ぶ。ヌクレオチドはまた、短くてもよく、例えば長さ１００から約５００のヌクレオチド、又は約１２から２５、２５から５０、５０から１００、１００から２５０、又は約２５０から５００のヌクレオチド、又はかかる長さ以内の、又はそれを包含するいずれかの数値若しくは範囲若しくは値であってもよい。特定の形態において、核酸配列は、約１０〜２０、２０〜３０、３０〜５０、５０〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、２００〜２５０、２５０〜３００、３００〜４００、４００〜５００、５００〜１０００、１０００〜２０００のヌクレオチドの長さ、又はかかる長さ以内の、又はそれを包含するいずれかの数値若しくは範囲若しくは値を有する。短いポリヌクレオチドは、一般に、「オリゴヌクレオチド」又は一本鎖若しくは二本鎖ＤＮＡの「プローブ」と呼ばれる。しかしながら、かかるオリゴヌクレオチドの長さの上限はない。
【０１０３】
本発明は同様に、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８若しくは１３６Ｄ２９抗体、配列番号２９、３１若しくは３３、又は配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの重鎖又は軽鎖可変領域配列をコードする配列の全部又は一部に相補的である核酸配列、及び１３６Ｃ５、１３６Ｃ８若しくは１３６Ｄ２９抗体、配列番号２９、３１若しくは３３、又は配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの重鎖又は軽鎖可変領域配列の全部又は一部に特異的にハイブリダイズする核酸配列、又はその相補若しくはアンチセンス配列を提供する。
【０１０４】
「相補的」又は「アンチセンス」なる語は、特異的ＤＮＡ又はＲＮＡ配列に結合可能なポリヌクレオチド又はペプチド核酸を指す。アンチセンスには、ＲＮＡ転写又はＤＮＡを結合する一本鎖、二本鎖、三本鎖以上のＲＮＡ及びＤＮＡポリヌクレオチド又はペプチド核酸（ＰＮＡ）を含む。特定の例には、センスＲＮＡに結合するＲＮＡ及びＤＮＡアンチセンスを含む。例えば、一本鎖核酸は、一本鎖核酸は、細胞（例えば、ｍＲＮＡ）由来のグリコーゲンの代謝、異化、除去又は分解に関与するタンパク質転写を標的とできる。アンチセンス分子は、概してセンス鎖に９５〜１００％相補的であるが、「部分的に」相補的であってもよく、幾つかのヌクレオチドのみが、（１００％未満相補的、例えば、９５％、９０％、８０％、７０％、かつ時にはそれ以下）、又はかかる百分率値以内の、又はそれを包含するいずれかの数値若しくは範囲で、センス分子に結合する。
【０１０５】
「ハイブリダイズする」なる語及びその文法上の変形は、核酸配列間の結合を指す。ハイブリダイズする配列は、一般的に基準抗体又は部分配列のアミノ酸配列をコードする核酸に約５０％以上、相補的である（例えば、抗体重鎖又は軽鎖可変領域配列）。ハイブリダイズする配列間のハイブリダイゼーション領域は、概して少なくとも約１２〜１５のヌクレオチド、１５〜２０のヌクレオチド、２０〜３０のヌクレオチド、３０〜５０のヌクレオチド、５０〜１００のヌクレオチド、１００〜２００のヌクレオチド若しくはそれ以上であるか、又はかかる長さ以内の、又はそれを包含するいずれかの数値若しくは範囲である。
【０１０６】
核酸配列には、ヌクレオチド及びヌクレオシド置換、付加及び欠失、並びに誘導体化された形態及び（例えば、組換えポリペプチドをコードする）融合／キメラ配列を更に含む。例えば、遺伝コードの縮重により、核酸には、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８若しくは１３６Ｄ２９抗体、配列番号２９、３１若しくは３３、又は配列番号３０、３２若しくは３４のいずれかの配列、及びその部分配列、並びにその変異体及び改変体（例えば、置換、付加、挿入及び欠失）をコードする核酸に対して縮重した配列及び部分配列を含む。
【０１０７】
核酸は、種々の標準的クローニング技術及び化学合成技術を使用して産生できる。技術には、抗体コード配列へのアニーリング可能なプライマー（例えば、縮重プライマー混合物）を使用する、ゲノムＤＮＡ又はｃＤＮＡ標的による核酸増幅、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を含むが、それに限定されない。核酸は、化学合成（例えば、固相ホスホラミダイト合成）又は遺伝子からの転写によっても産生できる。産生された配列は、次にｉｎ  ｖｉｔｒｏで翻訳されるか、又はプラスミドにクローニングされ、かつ増殖させられ、かつ次に細胞（例えば、動物又は植物中の酵母又は細菌、真核又は哺乳類細胞のような宿主細胞）中で発現することができる。
【０１０８】
核酸は、核酸の発現が、「発現制御要素」によって影響を受ける、又は調整される核酸構成体に挿入できる。「発現制御要素」は、操作可能に結合された核酸配列の発現を調整する、又は影響を与える核酸配列要素を指す。発現制御配列には、必要に応じてプロモーター、エンハンサー、転写ターミネーター、遺伝子サイレンサー、タンパク質コード遺伝子の前の開始コドン（例えば、ＡＴＧ）等を含む。
【０１０９】
核酸配列に操作可能に結合された発現制御要素は、核酸配列の転写と、必要に応じて翻訳とを制御する。発現制御要素には、誘導可能な（すなわち、活性化に外部シグナルを必要とする）、又は抑制解除可能な（すなわち転写を停止させるシグナルを必要とする；シグナルがもはや存在しない場合、転写は、活性化又は「抑制解除」される）、又は細胞型又は組織に特異的である（すなわち、組織特異的制御要素）、転写を構造的に活性化する要素を含む。
【０１１０】
核酸は、宿主細胞への増殖、及びその後の遺伝子操作のためにプラスミドに挿入できる。プラスミドは、宿主細胞中で増殖しうる核酸であり、宿主細胞中でＩＬ−１０Ｒ結合抗体、その部分配列又は抗原（例えばＩＬ−１０Ｒアルファ又はベータ鎖）をコードする核酸の発現を駆動するために、プラスミドは、任意に発現制御要素を含むことがある。ベクターは、本明細書においてプラスミドの同義語として使用され、かつ宿主細胞中での発現のために発現制御要素を同様に含むことがある（例えば、発現ベクター）。プラスミド及びベクターは、一般的に細胞における増殖のための複製起源とプロモーターを少なくとも含有する。それ故にプラスミド及びベクターは、ＩＬ−１０Ｒ結合抗体及び部分配列、並びに抗体定常、重鎖及び軽鎖可変領域、並びに抗原（例えばＩＬ−１０Ｒ）の遺伝子操作及び発現に有用である。従って、ＩＬ−１０Ｒ結合抗体及びその部分配列、並びに抗体定常、重鎖及び軽鎖可変領域をコードする、又はそれらに相補的な核酸を含むベクターが、提供される。
【０１１１】
ＩＬ−１０Ｒ抗体重鎖及び軽鎖、又はその部分配列の可変領域をコードする、又は完全長ＩＬ−１０Ｒ抗体重鎖及び軽鎖、又はその部分配列をコードする核酸は、合成によって若しくは組換え法を使用して産生できるか、又はハイブリドーマのような細胞から単離できる。単離した核酸は、適切な発現ベクターに挿入でき、かつ組換えＩＬ−１０Ｒ抗体、重鎖及び軽鎖又はその部分配列の産生のために培養しうる、適切な宿主細胞（例えば、ＣＨＯ、植物及び他の細胞）に導入することができる。
【０１１２】
本発明によれば、本発明のＩＬ−１０Ｒ抗体及び部分配列をコードする核酸を発現する、又は核酸によって形質転換される宿主細胞が提供される。宿主細胞には、細菌、真菌（酵母）、植物、昆虫、及び動物（例えば、霊長類及びヒトを含む哺乳類、ＣＨＯ細胞及びハイブリドーマ）細胞のような原核及び真核細胞を含むが、それらに限定されない。例えば、組換えバクテリオファージ核酸、プラスミド核酸又はコスミド核酸発現ベクターで形質転換された細菌、組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母、組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ、タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染した又は組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系、組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系、及び組換えウイルス発現ベクター（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス）に感染した動物細胞系、又は安定した発現のために設計された形質転換動物細胞系である。
【０１１３】
細胞は、初代細胞分離株、細胞培養（例えば、継代、株化又は不死化細胞株）、若しくは複数の細胞の一部、あるいは組織若しくは器官のようなｅｘ  ｖｉｖｏ又は患者内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）であってもよい。特定の実施態様において、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞、ハイブリドーマ細胞、又はＨＥＫ２９３Ｆ細胞である。
【０１１４】
「形質転換された」又は「トランスフェクトされた」なる語は、細胞（例えば、宿主細胞）又は生物に関して使用される場合、外因性分子、例えば、タンパク質又は核酸（例えば、導入遺伝子）の細胞への取り込み後の細胞における遺伝子変化を意味する。従って、「トランスフェクトされた」又は「形質転換された」細胞は、外因性分子が人為的に、例えば、組換えＤＮＡ技術により導入された細胞、又はその後代である。
【０１１５】
核酸又はタンパク質は、細胞及びその後代において安定的に又は一時的にトランスフェクト又は形質転換（発現）できる。細胞が増殖でき、かつ導入したタンパク質が発現できるか、又は核酸が転写できる。複製中に起こる突然変異があり得るので、トランスフェクト又は形質転換細胞の後代は、親細胞と同一ではないことがある。
【０１１６】
標的細胞（例えば、宿主細胞）へのタンパク質及び核酸の導入は、浸透圧ショック法（例えば、リン酸カルシウム）、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合等のような当該技術分野で既知の方法によってもなしうる。核酸及びポリペプチドを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、及びｉｎ  ｖｉｖｏで導入することは、他の技術を使用しても達成できる。例えば、ポリエステル、ポリアミン酸、ヒドロゲル、ポリビニルピロリドン、エチレン−酢酸ビニル、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、硫酸プロタミン、又はラクチド／グリコリド共重合体、ポリラクチド／グリコリド共重合体、又はエチレン酢酸ビニル共重合体のような重合物質である。核酸は、コアセルベーション技術、又は界面重合によって、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース若しくはゼラチン−マイクロカプセル、又はポリ（メチルメタクロレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｒｏｌａｔｅ））マイクロカプセルの使用により、調製されたマイクロカプセル中に、あるいはコロイド系中に封入できる。コロイド分散系には、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、並びに水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル、及びリポソームを含む脂質をベースとする系を含む。
【０１１７】
細胞に種々の組成物を導入するリポソームは、当該技術分野で既知であり、かつ例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、リポフェクチン及びＤＯＴＡＰを含む（例えば、米国特許第４，８４４，９０４号、第５，０００，９５９号、第４，８６３，７４０号、及び第４，９７５，２８２号、並びにＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍｄ）。遺伝子治療に有用なピペラジンベースの両親媒性（ａｍｐｈｉｌｉｃ）カチオン性脂質も既知である（例えば、米国特許第５，８６１，３９７号参照）。カチオン性脂質系も既知である（例えば、米国特許第５，４５９，１２７号参照）。本明細書において、リポソームのような重合物質、マイクロカプセル及びコロイド分散系は、集合的に「小胞」と呼ばれる。従って、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、及びｅｘ  ｖｉｖｏでの細胞、組織又は器官へのウイルス及び非ウイルスベクター手段の送達が含まれる。
【０１１８】
本発明は、非病原体免疫応答を低下、減少、阻害、防止、遮断又は抑制することにおけるＩＬ−１０／ＩＬ−１０Ｒシグナル伝達の役割にも、少なくとも部分的に基づく。特に、病原体への曝露、若しくは接触、病原体の感染、又は潜伏病原体感染の再活性化中のＩＬ−１０シグナル伝達は、病原体に対する免疫応答を低下、減少、阻害、防止、遮断又は抑制するように見える。従って、ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体又はその部分配列によるＩＬ−１０又はＩＬ−１０Ｒシグナル伝達の低下、阻害、減少、防止、抑制又は遮断は、ＩＬ−１０又はＩＬ−１０Ｒシグナル伝達を低下、減少、阻害、防止、遮断又は抑制するために使用でき、それにより病原体感染の治療処置又は予防（防止）処置を提供する。それ故に、ＩＬ−１０ＲにＩＬ−１０Ｒ抗体を結合することは、病原体への炎症性又は適応的応答のような免疫応答を強化、促進、刺激、増加、誘発、又は上昇させ、病原体複製又は増殖を低下、減少、阻害、抑制、防止、制限又は制御し、病原体感染、又は潜伏からの再活性化と関連した、又はそれによって引き起こされる１つ以上の病変又は有害な症状を改善し（例えば、防止、低下、減少、阻害、抑制、制御又は制限し）、病原体排除又は除去を強化、促進、刺激、増加、誘発、又は上昇させるか、又は一方の患者から他方の患者（例えば、感受性宿主）への病原体伝達を低下、減少、阻害、抑制、制御又は制限する。
【０１１９】
本発明によれば、（慢性又は急性）病原体感染患者を処置する方法が提供される。一実施態様において、方法は、（慢性又は急性）病原体感染患者を処置するために十分な、本発明のＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列の量を患者に投与することを含む。もう一つの実施態様において、方法は、病原体感染患者を処置するために十分な、ＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列、及び病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えばエピトープ）をコードする核酸の量を患者に投与することを含む。
【０１２０】
病原体は概して、有害な症状、病変、疾患、合併症又は患者における望ましくない効果を引き起こす、又はそれに関連する微生物である。病原体の非限定的な例には、ウイルス、細菌、寄生生物又は真菌を含む。
【０１２１】
ウイルスの特定の非限定的例には、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、フラビウイルス、乳頭腫ウイルス（ＰＶ）、ポリオーマウイルス、ラブドウイルス、ミクソウイルス、アレナウイルス、コロナウイルス、アデノウイルス、レオウイルス、ピコルナウイルス、トガウイルス、ブニヤウイルス、パルボウイルス及びレトロウイルスを含む。
【０１２２】
ポックスウイルスの非限定的例には、ワクシニアウイルス、伝染性軟属腫、大痘瘡又は小痘瘡天然痘ウイルス、牛痘、ラクダ痘、羊痘、サル痘を含む。
【０１２３】
ヘルペスウイルスの非限定的例には、アルファ−ヘルペスウイルス、ベータ−ヘルペスウイルス、ガンマ−ヘルペスウイルス、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ／ＨＨＶ−３）、並びにヒトヘルペスウイルス１、２、４、５、６、７及び８型（ＨＨＶ−８、カポジ肉腫会合ウイルス）を含む。
【０１２４】
肝炎ウイルスの非限定的例には、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ及びＧ型肝炎を含む。
【０１２５】
免疫不全ウイルスの非限定的例には、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２及びＨＩＶ−３のようなヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）を含む。
【０１２６】
フラビウイルスの非限定的例には、Ｃ型肝炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、並びに日本脳炎及び西ナイルウイルスを含む。
【０１２７】
乳頭腫ウイルスの非限定的例には、ＨＰＶ株１、６、１１、１６、１８、３０、３１、４２、４３、４４、４５、５１、５２及び５４のようなヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）を含む。
【０１２８】
ポリオーマウイルスの非限定的例には、ＢＫウイルス（ＢＫＶ）及びＪＣウイルス（ＪＣＶ）を含む。
【０１２９】
ラブドウイルスの非限定的例には、狂犬病ウイルス及びベシクロウイルスを含む。
【０１３０】
ミクソウイルスの非限定的例には、パラミクソウイルス及びオルトミクソウイルスを含む。パラミクソウイルスの非限定的例には、麻疹、おたふく風邪、肺炎ウイルス及び呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）を含む。
【０１３１】
オルトミクソウイルスの非限定的例には、Ａ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、及びＣ型インフルエンザのようなインフルエンザウイルスを含む。
【０１３２】
アレナウイルスの非限定的例には、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、フニンウイルス、ラッサ熱ウイルス、グアナリトウイルス、サビアウイルス及びマチュポウイルスを含む。
【０１３３】
コロナウイルスの非限定的例には、風邪及び重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）を引き起こすウイルスを含む。
【０１３４】
アデノウイルスの非限定的例には、気管支、肺、胃、腸（胃腸炎）、眼（結膜炎）、膀胱（膀胱炎）及び皮膚のウイルス感染を含む。
【０１３５】
レオウイルスの非限定的例には、ロタウイルス、サイポウイルス及びオルビウイルスを含む。
【０１３６】
ピコルナウイルスの非限定的例には、ライノウイルス、アフトウイルス、ヘパトウイルス、エンテロウイルス、コクサッキーＢウイルス及びカルジオウイルスを含む。ライノウイルスは、風邪を引き起こし得る。
【０１３７】
トガウイルスの非限定的例には、アルファウイルス、シンドビスウイルス及び風疹ウイルスを含む。
【０１３８】
ブニヤウイルスの非限定的例には、ハンタウイルス、フレボウイルス及びナイロウイルスを含む。
【０１３９】
レトロウイルスの非限定的例には、アルファ、ベータ、デルタ、ガンマ、イプシロン、レンチウイルス、スプマウイルス、及びヒトＴ細胞白血病ウイルスを含む。
【０１４０】
レンチウイルスの非限定的例には、免疫不全ウイルス（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ及び霊長類ウイルス）のような免疫不全ウイルスを含む。
【０１４１】
ヒトＴ細胞白血病ウイルスの非限定的例には、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１及び２型（ＨＴＬＶ−１及びＨＴＬＶ−２）を含む。
【０１４２】
細菌の非限定的例には、マイコバクテリア（例えば、結核及び非定型抗酸菌）、リステリア菌、ヘリコバクター、ボルデテラ、連鎖球菌、サルモネラ及びクラミジアを含む。
【０１４３】
寄生生物の非限定的例には、原生動物及び線虫を含む。原生動物の非限定的例には、トキソプラズマ原虫、リーシュマニア、変形体又はクルーズトリパノソーマを含む。線虫の非限定的例には、マンソン住血吸虫又はヘリグモソモイデスポリギルスを含む。
【０１４４】
真菌の非限定的例には、カンジダアルビカンスを含む。
【０１４５】
本発明によれば、病原体感染の患者、例えば、病原体感染の危険のある患者を処置する治療及び予防的方法が、更に提供される。かかる方法には、病原体感染を有するか、又は有する危険のある患者を治療的又は予防的に処置する（ワクチン接種又は免疫付与）ために、ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体又はその部分配列を投与することを含む。かかる方法は、感染を処置できるか、又は病原体感染からの保護（例えば、予防的保護）を患者に提供できる。一実施態様において、方法は、（慢性又は急性）病原体感染に対する保護を患者に提供するために十分な、ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体又はその部分配列の量を必要とする患者に投与することを含む。病原体抗原（例えば、タンパク質又はそのエピトープ）、生若しくは弱毒化病原体、不活性化病原体、病原体抽出物、いずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えば、エピトープ）をコードする核酸は、本発明の方法において有用である。従って、もう一つの実施態様において、方法は、（慢性又は急性）病原体感染に対して患者にワクチン接種又は免疫付与するために十分な、ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体又はその部分配列の量と、病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又は病原体抗原の全部又は一部（例えば、エピトープ）をコードする核酸の量とを必要とする患者に投与することを含む。ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体又はその部分配列は、患者に対して病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又は病原体抗原若しくは抗原の一部（例えば、エピトープ）をコードする核酸との併用組成物として投与できるか、又は病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又は病原体抗原若しくは抗原の一部（例えば、エピトープ）をコードする核酸の投与と同時に、又は連続的に（前若しくは後に）別個に投与できる。
【０１４６】
本発明により有用な病原体抗原（例えば、タンパク質又はそのエピトープ）は、いずれかの抗原（例えば、病原体抽出物）、生又は弱毒化病原体（例えば、不活性化病原体）であってもよい。病原体抗原（例えば、タンパク質又はそのエピトープ）は、核酸によってコードされ得る。核酸は、いずれかのタンパク質又はタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えば、エピトープ）をコードし得る。
【０１４７】
病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又は病原体抗原若しくは抗原の一部（例えば、エピトープ）をコードする核酸の特定の非限定的例は、ウイルス、細菌、寄生生物、若しくは真菌抗原、生若しくは弱毒化ウイルス、細菌、寄生生物、若しくは真菌、又はウイルス、細菌、寄生生物若しくは真菌抗原、若しくはウイルス、細菌、寄生生物若しくは真菌抗原の一部（例えば、エピトープ）をコードする核酸である。かかる抗原は、本明細書に示した、又は当業者に既知であるいずれかの病原体由来であり、かつ炎症性又は適応的免疫応答、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、マスト細胞、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋細胞、Ｂ２２０＋細胞、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ＋又はＣＤ１１ｃ＋細胞）の数若しくは活性化、抗病原体ＣＤ４＋若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞応答、Ｔｈ１サイトカインの産生、Ｔ細胞媒介免疫応答等を上昇、刺激、強化、促進、増加又は誘発する抗原を含む。
【０１４８】
非限定的なウイルス抗原には、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、フラビウイルス、乳頭腫ウイルス（ＰＶ）、ポリオーマウイルス、ラブドウイルス、ミクソウイルス、アレナウイルス、コロナウイルス、アデノウイルス、レオウイルス、ピコルナウイルス、トガウイルス、ブニヤウイルス、パルボウイルス及びレトロウイルス抗原を含む。
【０１４９】
ポックスウイルスウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスには、ワクシニアウイルス（例えば、Ｂ８Ｒ、Ｌ４Ｒ、Ｈ３Ｌ、Ｅ９Ｌ、Ｆ１５Ｌ、Ｊ４Ｒ、Ｂ５Ｒ、Ｉ１Ｌ、Ａ３Ｌ、Ａ８Ｒ、Ａ２３Ｒ、Ｂ２Ｒ、及び他のポックスウイルス抗原）、伝染性軟属腫、大痘瘡又は小痘瘡天然痘ウイルス、牛痘、ラクダ痘、羊痘、又はサル痘抗原を含む。
【０１５０】
ヘルペスウイルスウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスには、アルファ−ヘルペスウイルス、ベータ−ヘルペスウイルス、ガンマ−ヘルペスウイルス、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ／ＨＨＶ−３）、又はヒトヘルペスウイルス１、２、４、５、６、７若しくは８型（ＨＨＶ−８、カポジ肉腫会合ウイルス）抗原を含む。
【０１５１】
肝炎ウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスには、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ又はＧ型肝炎抗原を含む。
【０１５２】
免疫不全ウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスには、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原を含む。ＨＩＶウイルス抗原、又は弱毒化ウイルスの非限定的な例には、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２又はＨＩＶ−３抗原を含む。
【０１５３】
フラビウイルスウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスには、Ｃ型肝炎ウイルス（例えば、コア、Ｅ１、Ｅ２、ｐ７、ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４、ＮＳ５又は他のウイルス抗原）、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、日本脳炎又は西ナイルウイルス抗原を含む。
【０１５４】
乳頭腫ウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスには、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）抗原を含む。ヒト乳頭腫ウイルス抗原、生又は弱毒化ウイルスの非限定的な例には、ＨＰＶ株１、６、１１、１６、１８、３０、３１、４２、４３、４４、４５、５１、５２又は５４抗原を含む。
【０１５５】
ポリオーマウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスには、ＢＫウイルス（ＢＫＶ）又はＪＣウイルス（ＪＣＶ）抗原を含む。
【０１５６】
ラブドウイルスウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスには、狂犬病ウイルス又はベシクロウイルス抗原を含む。
【０１５７】
ミクソウイルスウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスには、パラミクソウイルス又はオルトミクソウイルス抗原を含む。パラミクソウイルスウイルス抗原、生又は弱毒化ウイルスの非限定的例には、麻疹、おたふく風邪、肺炎ウイルス又は呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原を含む。オルトミクソウイルスウイルス抗原、生又は弱毒化ウイルスの非限定的例には、インフルエンザウイルス抗原を含む。
【０１５８】
インフルエンザウイルスウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスには、Ａ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、又はＣ型インフルエンザ抗原を含む。
【０１５９】
アレナウイルスウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスには、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、フニンウイルス、ラッサ熱ウイルス、グアナリトウイルス、サビアウイルス又はマチュポウイルス抗原を含む。
【０１６０】
コロナウイルスウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスには、風邪又は重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）を引き起こすウイルスの抗原を含む。
【０１６１】
レオウイルスウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスには、ロタウイルス、サイポウイルス又はオルビウイルス抗原を含む。
【０１６２】
ピコルナウイルスウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスには、ライノウイルス、アフトウイルス、ヘパトウイルス、エンテロウイルス、コクサッキーＢウイルス、又はカルジオウイルス抗原を含む。
【０１６３】
トガウイルスウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスには、アルファウイルス、シンドビスウイルス又は風疹ウイルス抗原を含む。
【０１６４】
ブニヤウイルスウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスには、ハンタウイルス、フレボウイルス又はナイロウイルス抗原を含む。
【０１６５】
レトロウイルスウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスには、アルファ、ベータ、デルタ、ガンマ、イプシロン、レンチウイルス、スプマウイルス、又はヒトＴ細胞白血病ウイルス抗原を含む。レンチウイルスウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスの非限定的な例には、免疫不全ウイルス抗原を含む。免疫不全ウイルス抗原、生又は弱毒化ウイルスの非限定的な例には、ウシ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ又は霊長類ウイルス抗原を含む。ヒトＴ細胞白血病ウイルス抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化ウイルスの非限定的な例には、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１又は２型（ＨＴＬＶ−１及びＨＴＬＶ−２）抗原を含む。
【０１６６】
細菌抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化細菌には、マイコバクテリア、リステリア菌、ヘリコバクター、ボルデテラ、連鎖球菌、サルモネラ又はクラミジア抗原を含む。
【０１６７】
寄生生物抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化寄生生物には、原生動物又は線虫抗原を含む。典型的な原生動物抗原には、トキソプラズマ原虫、リーシュマニア、変形体又はクルーズトリパノソーマ抗原を含む。
【０１６８】
線虫病原体抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化線虫には、マンソン住血吸虫又は蠕虫抗原を含む。
【０１６９】
真菌病原体抗原（又は抗原の全部若しくは一部をコードする核酸）、生若しくは弱毒化真菌には、カンジダアルビカンス抗原を含む。
【０１７０】
追加の種々の方法の実施態様において、抗体又はその部分配列、及び免疫調節分子の活性を調節するために免疫調節分子に結合する抗体（アゴニスト又はアンタゴニスト）、又は病原体抗原、病原体核酸に結合する抗体のような第２活性、作用剤又は薬剤が患者に１回以上併用として投与される（例えば、ＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列が、患者に他の抗体、作用剤又は薬剤のような第２活性と共に併用組成物として投与される）。更なる種々の方法の実施態様において、ＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列、及び異なる抗体のような第２活性、作用剤又は薬剤が患者に１回以上連続的に投与される（例えば、ＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列及び作用剤又は薬剤が、別個に患者へ順々に投与される）。追加の方法の実施態様には、例えば第２活性、例えばＩ型インターフェロン、トール受容体リガンド、Ｔ細胞共刺激分子、例えばＯＸ４０、４−１ＢＢ、これら又は他の共刺激分子へのアンタゴニスト、及びＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｉ、ＰＤ−Ｌｌ、ＣＤ１６０及びＬＡＧ３に結合する抗体のような阻害受容体又はリガンドのアンタゴニストを含む。
【０１７１】
特定の方法の実施態様において、病原体感染又は潜伏からの再活性化と関連した、又はそれによって引き起こされる１つ以上の障害、疾病、生理的状態、病変及び症状は、ＩＬ−１０Ｒ結合抗体又はその部分配列による処置又は治療に対応する。特定の方法の実施態様において、処置方法は、病原体数又は力価を減少、低下、抑制、制限、制御若しくは阻害するか、病原体増殖又は複製を減少、低下、抑制、制限、制御若しくは阻害するか、病原体タンパク質の量を減少、低下、抑制、制限、制御若しくは阻害するか、又は病原体核酸の量を減少、低下、抑制、制限、制御若しくは阻害する。追加の特定の方法の実施態様において、処置方法は、病原体に対する免疫応答を上昇、誘発、強化、増加、促進若しくは刺激し、病原体排除又は除去を、上昇、誘発、強化、増加、促進若しくは刺激し、潜伏からの病原体再活性化（例えば、潜伏からの肝炎又はヘルペスウイルスの再活性化）を低下、減少、阻害、抑制、制限若しくは制御するか、又は他の患者への伝達（例えば、感染宿主から非感染宿主への病原体伝達）を低下、減少、阻害、抑制、防止、制御若しくは制限するために十分な、ＩＬ−１０Ｒ結合抗体又はその部分配列の量を含む。更なる特定の方法の実施態様において、処置方法は、病原体感染若しくは病変、又は潜伏からの再活性化から患者を保護するか、又は病原体感染若しくは病変に対する感受性を減少、低下、制限、制御又は阻害するために十分な、ＩＬ−１０Ｒ結合抗体又はその部分配列の量を含む。
【０１７２】
本発明の方法には、いずれかの治療的又は有益な効果をもたらす処置方法を含む。種々の方法の実施態様において、病原体感染、増殖又は発症機序は、減少、低下、阻害、制限、遅延若しくは防止されるか、又は方法は、慢性又は急性病原体感染、増殖若しくは複製、病変、又は潜伏からの再活性化によって引き起こされる又はそれと関連した１つ以上の有害な（例えば物理的）症状、障害、疾患、疾病又は合併症を低下、減少、阻害、抑制、防止、制御若しくは制限する。追加の種々の特定の実施態様において、処置方法は、慢性又は急性病原体感染、増殖若しくは複製、病変、又は潜伏からの再活性化によって引き起こされる又はそれと関連した１つ以上の有害な症状、障害、疾患、疾病又は合併症の発症、進行、頻度、持続期間、重症度、確率又は感受性を減少、低下、阻害、遅延又は防止することを含む。更なる種々の特定の実施態様において、処置方法は、病原体感染、潜伏からの再活性化若しくは発症機序、又は慢性又は急性病原体感染、増殖若しくは複製、病変、又は潜伏からの再活性化によって引き起こされる又はそれと関連した１つ以上の有害な症状、障害、疾患、疾病又は合併症からの患者の回復を加速、容易化、強化、増加、又は早めることを含む。なおも追加の種々の実施態様において、処置方法は、感染、増殖、複製、発症機序、又は慢性又は急性病原体感染、増殖若しくは複製、病変、又は潜伏からの再活性化によって引き起こされる又はそれと関連した有害な症状、障害、疾患、疾病又は合併症を安定させるか、又は感染宿主から非感染宿主への病原体伝達を低下、減少、阻害、抑制、制限若しくは制御することを含む。
【０１７３】
処置の治療的又は有益な効果は、それ故に、特定の患者に提供される客観的又は主観的な、測定可能、又は検出可能な改善又は利益である。治療的又は有益な効果は、慢性又は急性病原体感染、増殖若しくは複製、病変、又は潜伏からの再活性化によって引き起こされる又はそれと関連した、全部又はいずれか特定の有害な症状、障害、疾患、疾病又は合併症の完全な除去であり得るが、必ずしもその必要はない。従って、満足できる臨床的エンドポイントは、慢性又は急性病原体感染、増殖若しくは複製、病変、又は潜伏からの再活性化によって引き起こされる又はそれと関連した、有害な症状、障害、疾患、疾病又は合併症において漸進的な改善若しくは部分的減少、又は慢性又は急性病原体感染、病原体数、力価、増殖若しくは複製、病原体タンパク質若しくは核酸、又は病原体病変若しくは潜伏からの再活性化によって引き起こされる又はそれと関連した、１つ以上の有害な症状、障害、疾患、疾病又は合併症の悪化又は進行の阻害、低下、減少、抑制、防止、制限若しくは制御が短期間又は長期間（数時間、数日、数週間、数ヶ月等）にわたってある時に達成される。
【０１７４】
治療的又は有益な効果には、病原体感染又は発症機序を有する又は有する危険のある患者を処置するために使用される他の薬剤又は他の作用剤（例えば、小分子、タンパク質、抗体）のような第２活性の必要性、投与頻度又は量を減少又は除去することも含む。例えば、補助療法の量を減少すること、例えば病原体感染若しくは潜伏からの再活性化の処置、又はワクチン接種若しくは免疫付与プロトコルを減少又は低下させることは、有益な効果と考えられる。その上、病原体感染、又は潜伏からの再活性化からの患者の保護を提供するために、患者のワクチン接種又は免疫付与のために使用される病原体抗原の量を減少又は低下させることは、有益な効果と考えられる。
【０１７５】
ウイルス、細菌、寄生生物及び真菌のような病原体感染に関連した有害な症状、状態、副作用、病変及び合併症は、当業者に知られている。従って、当業者は、治療的又は有益な効果、及び治効を確認する種々の臨床的徴候を知ることとなる。
【０１７６】
ポックスウイルス（ワクシニアウイルス）感染及び発症機序に関連した有害な症状及び合併症には、例えば、発熱、疲労、頭痛、背痛、倦怠感、発疹（斑点状丘疹、水疱疹又は膿疱疹）又は傷害、せん妄、嘔吐、下痢、過剰な出血を含む。大痘瘡及び小痘瘡天然痘ウイルス、サル痘、牛痘、伝染性軟属腫、及びラクダ痘を含むポックスウイルス感染又は発症機序の他の症状は、当技術分野で知られており、かつ本発明による処置が提供される。
【０１７７】
ヘルペスウイルス感染及び発症機序に関連した有害な症状及び合併症には、例えば、皮膚の発赤、水疱、膿疱、こぶ、皮膚再生による治癒、病変部の疼痛、ほてり又は痒み、リンパ腺の腫れ、頭痛、筋肉痛、発熱、排尿時のほてり感、腰痛、水痘（例えば、水疱瘡）を含む。ヘルペスウイルス感染又は発症機序の他の症状は、当技術分野で知られており、かつ本発明による処置が提供される。
【０１７８】
肝炎感染及び発症機序に関連した有害な症状及び合併症には、例えば、腹痛、黄疸、インフルエンザ様疾患、吐き気、嘔吐、下痢、食欲不振、体重減少、関節痛、疲労、皮膚の痒み、肝硬変、肝不全及び肝細胞癌を含む。肝炎感染又は発症機序の他の症状は、当技術分野で知られており、かつ本発明による処置が提供される。
【０１７９】
免疫不全ウイルス（例えば、ＨＩＶ）感染及び発症機序に関連した有害な症状及び合併症には、例えば、痙攣性腹痛、吐き気、嘔吐、下痢、リンパ節腫大、発熱、頭痛、筋肉痛又は疼痛、皮膚発疹、咽喉炎、体重減少、Ｔ細胞（ＣＤ４＋）喪失、＋）、酵母、細菌感染のような日和見感染症の頻度上昇を含む。免疫不全ウイルス感染又は発症機序の他の症状は、当技術分野で知られており、かつ本発明による処置が提供される。
【０１８０】
フラビウイルス（例えば、西ナイルウイルス）感染及び発症機序に関連した有害な症状及び合併症には、例えば、急性熱性疾患、倦怠感、頭痛、顔面紅潮、及び下痢を含む。フラビウイルス感染又は発症機序の他の症状は、当技術分野で知られており、かつ本発明による処置が提供される。
【０１８１】
乳頭腫ウイルス（ＰＰＶ）感染及び発症機序に関連した有害な症状及び合併症には、例えば、いぼ（例えば、生殖器いぼ）を含む。乳頭腫ウイルス感染又は発症機序の他の症状は、当技術分野で知られており、かつ本発明による処置が提供される。
【０１８２】
細菌感染に関連した有害な症状及び合併症には、例えば、炎症、腫れ、発熱、倦怠感、疲労、筋肉痛、うずき、膿汁（ｐｕｓｓ）、吹き出物（ｄｉｓｃｈａｒｇｅ）、発赤又は痛み、咳、喘鳴、腫れ、鼻づまり、鼻漏れ又は鼻汁をとりわけ含む。かかる有害な症状又は状態は、例えば皮膚、生殖器系（例えば、膣、子宮頸部、子宮、卵管）や尿管、粘膜（例えば、口）、神経系、消化器系、心肺系（肺又は心臓組織）、筋肉又は骨、腎臓、肝臓、のような種々の細胞、組織又は器官に影響を及ぼし得る。
【０１８３】
結核菌感染に関連した有害な症状及び合併症には、例えば、変色又は血痰を生じ得る３週間以上続く咳、体重減少、疲労、発熱、寝汗、悪寒、食欲不振及び胸膜炎を含む。非定型マイコバクテリア感染に関連した有害な症状及び合併症には、例えば、膿瘍、敗血症性関節炎、骨髄炎（骨感染症）を含む。高い頻度でエイズ患者に影響を与えるトリ型結核菌の症状には、肺疾患を含む。ミコバクテリウムマリーヌムの症状は、皮膚感染症、及びプール肉芽腫である。ミコバクテリウムウルセランスの症状には、皮膚感染症を含む。ミコバクテリウムカンサシの症状には、肺疾患を含む。
【０１８４】
リステリア菌に関して、有害な症状には、発熱、筋肉痛、吐き気又は下痢のような胃腸症状、頭痛、斜頸、錯乱状態、平衡感覚喪失、又は痙攣を含む。妊婦は、軽度の、インフルエンザ様疾患を経験することがあるが、妊娠中は、流産、死産、早産又は新生児の感染に至らせ得る。
【０１８５】
ヘリコバクターピロリに関して、有害な症状には、胸焼け、腫脹、吐き気、腹痛、胃炎（胃の炎症）、及び胃又は十二指腸潰瘍を含む。
【０１８６】
百日咳を引き起こす百日咳菌及びパラ百日咳菌の症状に関連した有害な症状及び合併症には、発作性咳、百日咳、及び嘔吐、夜間の咳及び接触既往歴を含む。
【０１８７】
連鎖球菌性咽頭炎を引き起こす化膿連鎖球菌に関連した有害な症状及び合併症には、発熱、疼痛、発赤、喉又は扁桃腺の腫れを含む。
【０１８８】
サルモネラに関連した有害な症状及び合併症には、吐き気、嘔吐、下痢、発熱及び腹痛を含む。
【０１８９】
クラミジアに関して、感染した女性の４分の３及び感染した男性の半分は、明らかな症状を有さない。クラミジアに関連した有害な症状及び合併症が現れる時、膣分泌物異常又は排尿時のほてり感を含む。子宮頸部から卵管への感染が広がった後、なおも兆候又は症状がないことがあるが、下腹部痛、腰痛、吐き気、発熱、性交時の疼痛、及び月経中間期の出血があり得る。合併症が発現するまで、症状は明らかでないことがある。
【０１９０】
トキソプラズマ原虫に関連した有害な症状及び合併症は、エネルギー欠乏、頭痛、疲労、食欲不振又は悪寒のように、単核球症の軽症の場合に似ている。
【０１９１】
皮膚リーシュマニアに関連した有害な症状及び合併症には、時間がたつにつれ、サイズ及び外観が変化することがあり、かつかさぶたで覆われることがある皮膚の腫れ物を含む。腫れ物は、無痛又は有痛性であり得る。肥大した腺が、腫れ物付近にあり得る（例えば、腫れ物が腕又は手にあるならば、腕の下）。内臓リーシュマニアに関連した有害な症状及び合併症には、発熱、体重減少、拡大した脾臓又は肝臓、腫れた腺、低赤血球数（貧血）、低白血球数、又は低血小板数のような低血球数を含む。
【０１９２】
マラリアを引き起こし得る変形体に関連した有害な症状及び合併症には、悪寒戦慄、高熱、発汗、疲労、頭痛、めまい、吐き気、嘔吐、腹痛、乾性咳、筋肉又は関節の痛み、背痛及び脳マラリア死を含む。
【０１９３】
シャーガス病を引き起こすクルーズトリパノソーマに関連した有害な症状及び合併症には、急性期では、概して炎症、腫れ又はシャーガス症瘤腫（ｃｈａｇｏｍａ）、並びに発熱、肝脾腫大症、リンパ節肥大及び心筋炎洞頻拍及び心肥大の、並びに中間期又は慢性期では、心臓、食道及び結腸のような内臓、並びに末梢神経系の傷害、かつ重症の場合には心不全を含む。
【０１９４】
住血吸虫症を引き起こし得るマンソン住血吸虫に関連した有害な症状及び合併症には、疥癬又は他のタイプの発疹に似た、感染後の初期発疹で、２〜１０週間後に発熱、うずき、咳、下痢、または腺肥大を含む症状が続くものを含む。片山熱、並びに発熱、倦怠感、重度の掻痒性（蕁麻疹）発疹に関連した薄い一時的なこぶの発生、肝臓及び脾臓肥大、及び気管支痙攣も、感染から発現することがあり、未治療のままであれば、腸住血吸虫症が続き、結腸閉塞及び失血に至らせ得る肉芽腫性反応と呼ばれる免疫系応答に至らせる。卵子も、肝臓に留まるようになることがあり、肝臓を通じた高血圧、脾臓肥大、腹部内の流体蓄積、及び裂け、かつおびただしい出血をし得る食道又は消化管中の拡張又は膨張区域（食道静脈瘤）に至らせる。
【０１９５】
真菌感染に関連した有害な症状及び合併症には、例えばカンジダアルビカンスに関して、不快感、腫れ、かゆみ、ほてり、粘膜組織周辺の発疹又は水膨れ、膣排泄物、膣炎、骨盤痛、痙攣及び／又は月経不順、月経前緊張、前立腺炎、尿意逼迫又は頻尿、排尿時のほてり、疲労、倦怠感、喉の乾き又は咽喉炎、咳、気管支炎、口又は舌内の発疹又は水膨れ、口内感染症／鵝口瘡、舌の白色被覆物、便中粘液、直腸の痒み、筋力低下又は筋肉痛、鼻づまり又は鼻漏れ、鼻の痒み、副鼻腔炎、関節内の疼痛及び腫れ、並びに口内炎を含む。
【０１９６】
病原体感染に関連した、又はそれによって引き起こされる追加の有害な症状、状態、合併症、障害、疾病、病変及び疾患は、当然に病原体の特定のタイプ、段階、特定の罹患者等によって決まる。病原体感染に関連した、又はそれによって引き起こされる具体的な有害な症状、状態、合併症、障害、疾病、病変及び疾患は、当業者に知られている。
【０１９７】
本発明の方法及び組成物には、ＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列の量を、病原体感染又は潜伏からの再活性を有する又は危険のある患者に投与することを含む。特定の形態において、患者に、ＩＬ−１０Ｒ抗体又は部分配列を単独で、又は病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えば、エピトープ）をコードする核酸と組み合わせて投与し、それにより免疫細胞（例えば、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、マスト細胞、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋細胞、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋細胞等）の数又は活性化を上昇させる。もう一つの特定の形態において、患者に、ＩＬ−１０Ｒ抗体又は部分配列を単独で、又は病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えば、エピトープ）をコードする核酸と組み合わせて、病原体感染に対する患者のワクチン接種又は免疫付与の前、実質的に同時、又は後に投与し、かつ患者が急性若しくは慢性病原体、又は潜伏からの再活性化による接触、曝露又は感染の前、実質的に同時、又は後に投与される。
【０１９８】
本発明の方法及び組成物には、病原体感染又は潜伏からの再活性を有する又は危険のある患者において抗病原体ＣＤ８＋又はＣ４＋Ｔ細胞応答を上昇、刺激、促進、強化、増加又は誘発することも含む。一実施態様において、方法は、患者において抗病原体ＣＤ８＋又はＣ４＋Ｔ細胞応答を上昇、刺激、促進、強化、増加又は誘発するために十分な、ＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列の量を患者に投与することを含む。もう一つの実施態様において、方法は、患者において抗病原体ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞応答を上昇、刺激、促進、強化、増加又は誘発するために十分な、ＩＬ−１０受容体アルファ（ＩＬ−１０Ｒアルファ）抗体又はその部分配列の量を患者に投与すること、及び病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えば、エピトープ）をコードする核酸を投与することを含む。
【０１９９】
本発明の方法は、とりわけＴｈ１サイトカイン（例えば、インターフェロンガンマ、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−２、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ等）の産生を上昇させることを追加として含む。一実施態様において、方法は、患者におけるＴｈ１サイトカイン（例えば、インターフェロンガンマ、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−２、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ等）の産生を上昇させるために十分な、ＩＬ−１０受容体（ＩＬ−１０Ｒ）抗体又はその部分配列の量を、必要とする患者に投与することを含む。もう一つの実施態様において、方法は、患者におけるＴｈ１サイトカイン（例えば、インターフェロンガンマ、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−２、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ等）の産生を上昇させるために十分な、ＩＬ−１０受容体アルファ（ＩＬ−１０Ｒアルファ）抗体又はその部分配列の量を患者に投与し、かつ病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えばエピトープ）をコードする核酸を投与することを含む。
【０２００】
本発明の方法及び組成物は、患者への病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えばエピトープ）をコードする核酸の接触前、実質的に同時、又は投与後に、患者へＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列を投与することを更に含む。患者には、病原体抗原の接触前、慢性病原体による接触、曝露又は感染と実質的に同時、又は後に、ＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列を単独で、又は病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えばエピトープ）をコードする核酸と組み合わせて投与できる。それ故に、ＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列は、病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えばエピトープ）をコードする核酸と組み合わせて、又は別個に患者に投与でき、すなわちＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列、及び抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えばエピトープ）をコードする核酸が、患者に連続的に投与され、すなわちＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列が投与され、続いて病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えばエピトープ）をコードする核酸が、投与される。
【０２０１】
本発明の方法及び組成物は、患者へのＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列の、病原体による接触、曝露又は感染前の投与と、患者が、急性又は慢性病原体によって接触、曝露、又は感染する前、実質的に同時、又は後の投与と、潜伏からの病原体再活性化の前、実質的に同時、又は後の投与とを含む。本発明の方法及び組成物は、病原体抗原又は潜伏からの再活性化によって引き起こされる又はそれと関連した病変又は有害な症状、障害、疾患又は疾病の前、実質的に同時、又は後の、患者へのＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列の投与も含む。病原体に感染した患者は、急性感染を有するか、又は数日、数ヶ月又は数年の期間にわたって慢性的に感染することがあるか、又は慢性的に感染し、長期にわたり比較的無症状であり得るが、潜伏からの再活性化の急性の出来事に苦しむことがある。
【０２０２】
本発明の組成物（例えば、抗体又はその部分配列）及び方法は、所望の治療的、有益な、追加的、相乗的、又は相補的活性又は効果を有する、いずれかの組成物、作用剤、薬剤、処置又は他の治療レジメン又はプロトコルと組み合わせることができる。典型的な処置又は治療には、第２活性、例えば抗病原体化合物、作用剤又は薬剤、並びに有効性を補助、促進、刺激又は強化する作用剤を含む。かかる抗病原体薬剤、作用剤、処置及び治療は、本発明のいずれかの他の方法、例えば病原体感染又は潜伏からの再活性化で患者を処置する治療方法、又は病原体感染での患者の予防的治療方法の前、実質的に同時、又は後に投与又は実施できる。
【０２０３】
組み合わせ方法の実施態様には、例えば第２活性、例えば抗病原体薬、例えばプロテアーゼ阻害剤、逆転写阻害酵素剤、ウイルス融合阻害剤、及びウイルス侵入阻害剤、病原体タンパク質、生若しくは弱毒化タンパク質、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えばエピトープ）をコードする核酸への抗体、免疫刺激剤等の抗体を含み、かつ病原体感染に適した他の化合物、作用剤、処置又は治療レジメンとの接触、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏの投与、ワクチン接種又は免疫付与を含む。
【０２０４】
抗ウイルス剤の具体的な非限定的例には、ＡＫ６０２、ＡＭＤ０７０、ＡＰＶ、ＡＴＶ、ＡＴＺ、ＡＶＸ７５４、ＡＺＴ、アバカビル、アシクロビル、アデフォビルジピボキシル、アドリアマイシン、アゲネラーゼ（Ａｇｅｎｅｒａｓｅ）、アルデスロイキン、アロブジン、アムビゾーム、アムドキソビル、アムホシン（Ａｍｐｈｏｃｉｎ）、アムホテック（Ａｍｐｈｏｔｅｃ）、アンホテリシンＢ、アンプリゲン（Ａｍｐｌｉｇｅｎ）、アンプレナビル、アンドロダーム、アンドロゲル、アプティバス（Ａｐｔｉｖｕｓ）、アタザナビル、アジスロマイシン、ＢＭＳ−４８８０４３、バクトリム、バラクルード、バイアキシン（Ｂｉａｘｉｎ）、バッファーゲル（ＢｕｆｆｅｒＧｅｌ）、Ｃ３１Ｇ、ＣＤ４−ＩｇＧ２、ＣＰＶ、ＣＳ、カラノライド（Ｃａｌａｎｏｌｉｄｅ）Ａ、カプラビリン、カルボポール（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）９７４Ｐ、カラゲナン、キャラガード（Ｃａｒｒａｇｕａｒｄ）、硫酸セルロース、シドフィビル（Ｃｉｄｏｆｉｖｉｒ）、クラリスロマイシン、コンビビル、コペガス、コトリモキサゾール、クリキシバン、シアノビリン（Ｃｙａｎｏｖｉｒｉｎ）Ｎ、シトベン（Ｃｙｔｏｖｅｎｅ）、ＤＡＰＤ、ＤＬＶ、ＤＰＣ８１７、ＤＳ、デラビルジン、デポ−テストステロン、デキストラン硫酸、ジダノシン、ジフルカン、ドキシル、ドキソルビシン、ドロナビノール、デュオフィルム、ＥＦＶ、エファビレンツ、エルブシタビン（Ｅｌｖｕｃｉｔａｂｉｎｅ）、エムトリシタビン、エムトリバ、エンフュービルタイド、エンテカビル、エピビル、エポエチンアルファ、エポジェン、エプジコム、エトポフォス（リン酸塩）、エトポシド、エトラビリン、フルコナゾール、フォートベイス、ホスアンプレナビル、ファンギゾン、フューゼオン（Ｆｕｚｅｏｎ）、ＧＳＫ−８７３，１４０（アプラビロック）、ＧＷ４３３９０８、ガンマー−Ｐ（Ｇａｍｍａｒ−Ｐ）、ガンシクロビル、成長ホルモン、ヒト成長ホルモン、ＨＥＣ、ヘプセラ、ハイビッド、ヒドロキシエチルセルロース、ＩＤＶ、ＩＧＩＶ、イミキモドクリーム、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、ＩＮＨ、免疫グロブリン、インジナビル、インターフェロンアルファ−２、インターフェロンアルファ−２ｂ、イントロンＡ（２ｂ）、インビラーゼ、イソニアジド、イトラコナゾール、ＫＰ−１４６１、カレトラ、Ｌ−０００８７０８１０、ＬＰＶ／ＲＴＶ、ラミブジン、レクシヴァ、マリノル、メゲース、メゲストロール、マイコブチン、ＮＦＶ、ＮＶＰ、ナフタレン２−スルホン酸重合体、ネブペント（Ｎｅｂｕｐｅｎｔ）、ネルフィナビル、ニュートレキシン（Ｎｅｕｔｒｅｘｉｎ）、ネビラピン、ニューフィル、ノービア、ニドラジド（Ｎｙｄｒａｚｉｄ）、オクルーザル、オンキソール（Ｏｎｘｏｌ）、オセルタミビル、ＰＡ−４５７、ＰＭＰＡ、ＰＲＯ２０００、ＰＲＯ５４２、パクリタキセル、パキセン（Ｐａｘｅｎｅ）、ペガシス（２ａ）、ペンタミジン、ペプチドＴ、プレコナリル、ポドフィロックス、ポドフィリン、ポリ（Ｔ）−ポリ（Ｃ１２Ｕ）、ポリ−Ｌ−乳酸、ポリガムＳ／Ｄ、プロクリット、プロロイキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）、ＲＣＶ、ＲＴＶ、ＲＶＴ、ラシビール（Ｒａｃｉｖｉｒ）、レベトール（Ｒｒｅｂｅｔｏｌ）、レスクリプター、レトロビル、リバーセット（Ｒｅｖｅｒｓｅｔ）、レイアタッツ、リバビリン、リファブチン、リファジン、リファンピン、リマクタン、リトナビル、ロフェロン−Ａ（２ａ）、ＳＣＨ−Ｃ、ＳＣＨ−Ｄ（ビクリビロック）、ＳＱＶ、サキナビル、サビー（Ｓａｖｖｙ）、スクルプトラ（Ｓｃｕｌｐｔｒａ）、セプトラ、セロスティム、ソマトロピン、スポラノックス、スタブジン、スルファメトキサゾール、サスタノン（Ｓｕｓｔａｎｏｎ）、サスティバ、Ｔ−２０、ＴＤＦ、ＴＨＣ、ＴＭＣ１１４、ＴＭＣ１２５、ＴＮＸ−３５５、タキソール、テノホビル、フマル酸テノホビルジソプロキシル、テストステロン、チプラナビル、トポサール（Ｔｏｐｏｓａｒ）、トランスバーサル（ＴｒａｎｓＶｅｒ−Ｓａｌ）、トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）、トリメトプリム、トリメトレキサート、トリジビル、ツルバダ、ＵＣ−７８１、ＵＫ−４２７，８５７（マラビロック）、ユーシャーセル、バルサイト（Ｖａｌｃｙｔｅ）、バルガンシクロビル、バルプロ酸、ベプシド、ビクリビロック、ヴァイデックス、ビラセプト、ビラノール（Ｖｉｒａｎｏｌ）、ビラミューン、ビラゾール（Ｖｉｒａｚｏｌｅ）、ビリアード、ビトラサート（Ｖｉｔｒａｓｅｒｔ）、ＺＤＶ、ザルシタビン、ゼリット、ザイアジェン、ジドブジン、ジスロマックス、ゾビラックス、Ｄ４Ｔ、ｄｄＣ、β−ＬＦｄｄＣ、Ｐ−ＬＦｄ４Ｃ、ＤＤＩ、ｆ−ＡＰＶ、３ＴＣ、５−ＦＵ及びヒトエリスロポイエチン（ＥＰＯ）を含む。
【０２０５】
抗菌薬の具体的な非限定的例には、抗生物質を含む。抗生物質は、第１、第２、第３、第４、第５又はその後の世代であってもよい。抗生物質には、例えばアミノグリコシド（例えば、ゲンタマイシン、カナマイシン、ストレプトマイシン等）、カルバペネム（例えば、シラスタチン）、セファロスポリン（例えば、セファレキシン、セフォキシチン、セフジニル、セファピム（ｃｅｆａｐｉｍｅ）等）、糖ペプチド（例えば、バンコマイシン）、マクロライド（エリスロマイシン）、モンバクタム（ｍｏｎｂａｃｔａｍｓ）（例えば、アズトレオナム）、ペニシリン（例えば、アンピシリン、アモキシシリン（ａｍｏｐｘｉｃｉｌｌｉｎ）、オキサシリン等）、キノロン（例えば、シプロフロキサシン）、スルファノミド（ｓｕｌｆａｎｏｍｉｄｅｓ）（例えば、マフェニド、スルファサラジン等）、テトラサイクリン（例えば、ドキシサイクリン、テトラシクロン等）、及びその他、例えばクロラムフェニコール、リファンピシン等を含む。
【０２０６】
抗寄生虫剤の具体的な非限定的例には、アルベンダゾール、メベンダゾール、チアベンダゾール、メトロニダゾール、ニタゾキサニド、ニクロサミド、オキサムニキン、プラジカンテル、ピランテル、及びパモ酸ピランテルを含む。
【０２０７】
抗真菌剤の具体的な非限定的例には、クロトリマゾール、エコナゾール、フェンチコナゾール、ミコナゾール、スルコナゾール、チオコナゾール、アンホテリシン、ニスタチンテルビナフィン、イトラコナゾール、フルコナゾール、ケトコナゾール及びグリセルフルビンを含む。
【０２０８】
本発明は、本発明の方法が、いずれかの化合物、作用剤、薬剤、治療レジメン、処置プロトコル、方法、治療薬又は組成物、例えば本明細書に示された、又は当技術分野で既知である抗病原体又は免疫刺激、強化、若しくは増加プロトコル、又は病原体ワクチン接種若しくは免疫付与（例えば、予防）と組み合わせて使用される組み合わせを提供する。化合物、作用剤、薬剤、治療レジメン、処置プロトコル、方法、治療薬又は組成物は、ＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列、病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えばエピトープ）をコードする核酸の患者への投与の前、実質的に同時、又は後に投与又は実行できる。それ故に、組み合わせの実施態様の具体的な非限定的例には、前述の又は当業者に既知の他の化合物、作用剤、薬剤、治療レジメン、処置プロトコル、方法、治療薬又は組成物を含む。
【０２０９】
アセトミノフェン、イブプロフェン、ナプロキセン、インドメタシン、ピロキシカム、ケトプロフェン及びピランカルボン酸（ロヂン）のような、ステロイド及び非ステロイド性抗炎症薬のような処置。更なる追加の典型的な処置には、病原体タンパク質、病原体核酸、病原体抗原に結合する抗体、ＶＩＧのような受動的免疫グロブリン療法を含む。
【０２１０】
本発明の方法は同様に、他の化合物、作用剤、薬剤、治療レジメン、処置プロトコル、方法、又は治療薬の必要性又は使用の減少をもたらす方法をとりわけ含む。例えば、病原体感染、潜伏からの再活性化、ワクチン接種又は免疫付与に関して、本発明の方法は、所与の患者において、頻度の低下した、若しくは減少した用量、又は抗病原体処置又は治療の廃止が生じるならば、本発明が治療的有用性を有する。従って、本発明によれば、病原体感染、潜伏からの再活性化、又はワクチン接種若しくは免疫付与のための処置又は治療の必要性又は使用を減少させる方法が提供される。
【０２１１】
病原体感染又は発症機序の処置又はワクチン接種又は免疫付与の利益を提供する治療的又は予防的方法のような、望ましい結果がある本発明の方法において、ＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列は、単独又は互いに組み合わせて、又は病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えばエピトープ）をコードする核酸のような他の組成物又は方法と組み合わせて、十分な又は有効な量で投与できる。本明細書で使用されるような、「十分な量（ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ  ａｍｏｕｎｔ）」又は「有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」又は「十分な量（ａｍｏｕｎｔ  ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ）」又は「有効量（ａｍｏｕｎｔ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ）」は、単一又は複数の用量で、単独又は１つ以上の他の化合物、処置、治療レジメン、又は作用剤（例えば薬剤）と組み合わせて、所与の患者において長期間又は短期間の検出可能又は測定可能な改善、又はいずれかの程度の又はいずれかの時間若しくは期間で（例えば、数分、数時間、数日、数ヶ月、数年、又は治療期間）、所与の患者へのいずれかの客観的若しくは主観的な利益を提供する量を指す。
【０２１２】
十分な量又は有効量は、単一投与で提供できるが、必ずしもその必要はなく、かつＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列単独によって、病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えばエピトープ）をコードする核酸を含む併用組成物又は方法で達成できるが、必ずしもその必要はない。その上、十分な量又は有効量は、単一又は複数の用量で、２回目又は追加の投与又は投与量なしに与えられるならば、所与の患者に検出可能又は測定可能な患者の改善又は利益を提供するために、かかる用量を超える追加の用量、量若しくは期間、又は追加の抗原、化合物、薬剤、作用剤、処置又は治療レジメンが、含まれ得るので、十分又は有効である必要がない。
【０２１３】
十分な量又は有効量は、処置される患者一人一人、又は所与のグループ若しくは集団で処置される大部分の患者において、治療的又は予防的に有効である必要がない。十分な量又は有効量は、特定の患者における十分性又は有効性を意味し、患者のグループ又は一般集団を意味しない。かかる方法に関して典型であるように、様々な患者が、処置に対する種々の応答を示す。
【０２１４】
「患者」なる語は、動物、概して非ヒト霊長類（サル、テナガザル、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、マカク）、家畜（犬及び猫）、飼育動物（ニワトリ及びカモのような家禽、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ）、実験動物（マウス、ラット、ウサギ、モルモット）及びヒトのような哺乳動物を指す。患者には、動物疾病モデル、例えば当技術分野で既知の病原体感染及び潜伏からの再活性化のマウス及び他の動物モデルを含む。
【０２１５】
処置に適した患者には、病原体感染若しくは発症機序、又は潜伏からの再活性化を有する、又は有する危険のあるものを含む。それ故に、標的患者には、症状の発症、進行、頻度、持続期間のタイプ、タイミング及び程度にかかわらず、病原体に曝露若しくは接触した、又は進行中の感染を有し、かつ病原体感染又は発症機序によって引き起こされる又はそれと関連した１つ以上の有害な症状を発現した患者、又は慢性的に感染し、かつ明らかな有害な症状を示さないことがあるが、潜伏からの病原体再活性化の危険がある患者を含む。
【０２１６】
標的患者には、病原体曝露、接触、感染又は発症機序の危険があるか、又は病原体感染又は発生機序を有する若しくは発現する危険があるものも含む。それ故に本発明の方法は、病原体曝露、接触、感染又は発症機序の危険があるが、まだ病原体に曝露又は接触していない患者の処置に適用できる。それ故に予防方法が含まれる。予防のための標的患者は、本明細書に示し、かつ当技術分野で知られているような病原体曝露、接触、感染又は発症機序の上昇した危険（確率又は感受性）があり得る。かかる患者は、かかる危険のために、処置を必要とすると考えられる。
【０２１７】
予防のための標的患者は、上昇した危険にある必要はないが、病原体感染に対して患者にワクチン接種又は免疫付与することが望ましい一般集団に由来してもよく、例えば病原体に対するワクチン接種又は免疫付与が望ましい、乳児又は幼児のような小児にＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列と、適切な抗原とを投与できる。もう一つの非限定的な例において、具体的に病原体への曝露又は接触の危険にないが、それにもかかわらず、麻疹若しくは流行性耳下腺炎ウイルス、又は乳頭腫ウイルスのような病原体感染に対して保護することを望む患者に、ＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列と、適切な抗原とを投与できる。かかる患者も、処置の必要があると考えられる。
【０２１８】
処置に適した、危険にある患者には、病原体感染を有する他の患者に曝露された、又は病原体感染を有するもう一人の患者に曝露されてきた患者も含む（例えば、一方の患者から他方の患者への伝達による病原体感染の危険にある）。それ故に、処置に適した患者には、病原体感染を有し得る、又は病原体感染の危険がある他のヒトへ曝露された、又は曝露の危険があるヒト患者を含む。処置に適した、危険にある患者には、病原体感染又は発症機序の危険が、病原体感染性若しくは細胞指向性の変化、環境要因又は免疫感受性により上昇した患者も含む（例えば、免疫抑制、免疫不全、又はＨＩＶ陽性患者）。かかる患者も、かかる危険のために、処置の必要があると考えられる。
【０２１９】
「予防」及びその文法上の変形は、患者への接触、投与又はｉｎ  ｖｉｖｏ送達が、病原体との接触又は露出又は感染の前である方法を意味する。ある種の状況において、患者が病原体に接触又は曝露されたことが知られないことがあるが、患者への投与又はｉｎ  ｖｉｖｏ送達が、病原体感染又は発症機序（又は病原体によって引き起こされる又はそれと関連した有害な関連症状、状態、合併症等）の兆候の前に実行できる。例えば、患者は、病原体抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えばエピトープ）をコードする核酸により免疫付与又はワクチン接種され、かつＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列を投与され得る。かかる場合において、方法は、病原体感染又は発症機序に対する確率若しくは感受性、又は病原体感染、発症機序若しくは潜伏からの再活性化と関連した、又はそれによって引き起こされる、又はそれと関連した有害な症状、状態若しくは合併症を廃止、防止、阻害、抑制、制限、低下又は減少させることができる。
【０２２０】
急性又は慢性（持続性）感染の処置は、感染中のいかなる時点であってもよい。慢性感染は、潜在性であっても、なくてもよい。潜在性であると考えられない慢性（持続性）感染の非限定的な例は、Ｂ及びＣ型肝炎ウイルスである。かかる非潜在的慢性感染において、病原体は、低いレベルで増殖又は複製をし続け、かつ有害な事象を誘発し続けるが、例えば、病原体によって産生されるＩＬ−１０又はＩＬ−１０類似体による免疫抑制又は抑圧のために排除を回避する。潜伏とは、ウイルス産生又は症状がなく、病原体検出が困難である感染の鎮静期を指す。潜伏からの再活性化とは、免疫抑制、ストレス等のような事象が引き金となる、病原体の再活性化及びその後の増殖を指す。潜在性になり得る感染の例は、初期急性感染が免疫系によって制御された後、潜伏性持続的感染になる、急性ヘルペスウイルス感染である。
【０２２１】
本発明の方法は、いかなる投与又は送達方法によっても、又はいかなる経路、全身、局所及び局部投与又は送達によっても実施できる。典型的な投与及び送達経路には、静脈内（ｉ．ｖ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）、動脈内、筋肉内、非経口、皮下、胸膜内、局所、真皮、皮内、経皮、経粘膜、頭蓋内、髄腔内、直腸、経口（消化器）、粘膜、吸入、呼吸、鼻腔内、挿管、肺内、肺内滴下、口腔、舌下、血管内、クモ膜下腔内、腔内、イオン導入、眼球内、眼、視覚性（ｏｐｔｉｃａｌ）、腺内、臓器内、リンパ内を含む。
【０２２２】
ＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列は、組み合わせとして（例えば、抗原、生若しくは弱毒化病原体、又はいずれかのタンパク質若しくはタンパク性病原体抗原の全部又は一部（例えばエピトープ）をコードする核酸と共に）、又は方法により同時又は連続して（連続的に）別個に、単一又は複数用量として、例えば毎時、毎日、毎週、毎月、若しくは毎年又は約１〜１０週間に１回以上、又は例えば病原体と関連した、又はそれによって引き起こされる病原体感染、病変、又は有害な症状、状態又は合併症と関連した、又はそれによって引き起こされる１つ以上の症状又は合併症の発症、進行、重症度、頻度、持続期間の減少を達成するために適切である限り、投与できる。従って、方法は、１時間、１日、１週、１ヶ月、又は１年あたり１回以上（例えば、１〜１０、１〜５又は１〜３回）実施できる。当業者は、何時投与を遅延又は中止することが適当であるか、知っているであろう。非限定的な処方計画は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０又はそれ以上の週に、１週あたり１〜７回、かつかかる範囲内のいずれかの数値又は範囲又は値である。
【０２２３】
用量は、最新の現行のプロトコルに基づき、動物疾病モデルを使用し、又は任意にヒト臨床試験において実験に基づき決定できる。初期の調査用量は、体重約３０グラムのマウスに関する本明細書に示す動物調査に基づくことができ、かつＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列の量が、投与され、有効であると決定された。典型的な非限定的量（用量）は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲、及びかかる範囲内のいずれかの数値又は範囲又は値である。より高い又は低い量（用量）、例えば０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ及びかかる範囲内のいずれかの数値又は範囲又は値を投与できる。用量は、患者の質量に応じて調整でき、かつ一般的に１時間、１日、１週、１ヶ月又は毎年２、３、４回又はそれ以上、約１〜１０ｕｇ／ｋｇ、１０〜２５ｕｇ／ｋｇ、２５〜５０ｕｇ／ｋｇ、５０〜１００ｕｇ／ｋｇ、１００〜５００ｕｇ／ｋｇ、５００〜１，０００ｕｇ／ｋｇ、１〜５ｍｇ／ｋｇ、５〜１０ｍｇ／ｋｇ、１０〜２０ｍｇ／ｋｇ、２０〜５０ｍｇ／ｋｇ、５０〜１００ｍｇ／ｋｇ、１００〜２５０ｍｇ／ｋｇ、２５０〜５００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上の範囲内にある。典型的な範囲は、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、０〜２５ｍｇ／ｋｇ、又は１．０〜１０ｍｇ／ｋｇ、又はかかる範囲内のいずれかの数値又は範囲又は値である。
【０２２４】
用量は、変動させることができ、かつ処置が予防的か、又は治療的か、症状、状態、病変又は合併症の発症、進行、重症度、頻度、持続期間確率又は感受性、病原体感染又は発症機序のタイプ、処置が向けられる潜伏からの再活性化又はワクチン接種若しくは免疫付与、所望の臨床的エンドポイント、前又は同時処置、患者の全体的な健康、年齢、性別、種族又は免疫適格性、及び当業者が評価する他の要因によって決まる。当業者は、治療的又は予防的利益を提供するために十分な量を提供するために必要とされる投与量及びタイミングに影響を及ぼし得る要因を認識するであろう。
【０２２５】
概して、治療処置のためにＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列は、可及的速やかに、概して患者が病原体に曝露又は接触した後、１〜２、２〜４、４〜１２、１２〜２４、又は２４〜７２時間以内に、又は病原体感染若しくは潜伏からの再活性化と関連した、又はそれによって引き起こされる１つ以上の有害な症状、状態、病変、合併症等の発症又は発現の後、１〜２、２〜４、４〜１２、１２〜２４、又は２４〜４８時間以内に投与される。ワクチン接種又は免疫付与に関連した予防的処置に関して、ＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列、及び抗原、生若しくは弱毒化病原体、又は病原体抗原をコードする核酸は、病原体への曝露、接触又は感染の前に、又は病原体への曝露、接触又は感染前、少なくとも１〜２、２〜４、４〜１２、１２〜２４、２４〜４８又は４８〜７２時間以内に、０〜４週間、例えば２〜３週間の期間、投与できる。潜伏からの再活性化を有するか、又はその危険のある患者における潜伏性病原体感染のような慢性感染に関して、ＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列は、いずれかの適切な時点で投与される。
【０２２６】
投与量、数、頻度又は持続期間は、患者の状態によって示されるように比例的に上昇又は減少できる。例えば、患者が、病原体感染を有するか、患者が、病原体に曝露、接触若しくは感染したか、又は病原体接触、曝露若しくは感染の危険があるだけか、患者が、潜伏からの再活性化に苦しんでいるか、又はその危険があるか、又は患者が、ワクチン接種若しくは免疫付与の対象者であるか、又はワクチン接種若しくは免疫付与がなされるか。投与量、数、頻度又は持続期間は、処置又は治療のいずれかの有害な副作用、合併症、又は他の危険要因によって示されるように比例的に上昇又は減少できる。
【０２２７】
ＩＬ−１０Ｒ抗体及びその部分配列は、任意に抗原、生若しくは弱毒化病原体、又は病原体抗原をコードする核酸と組み合わせて、医薬組成物、例えば医薬的に許容し得る担体又は賦形剤中に組み込める。かかる医薬組成物は、とりわけｉｎ  ｖｉｖｏ又はｅｘ  ｖｉｖｏでの患者への投与に有用である。
【０２２８】
本明細書で使用するような「医薬的に許容し得る」及び「生理的に許容し得る」なる語は、１つ以上の投与、ｉｎ  ｖｉｖｏ送達又は接触経路に適した、生物学的に許容し得る製剤形態、気体、液体若しくは固体の、又はその混合物を意味する。かかる製剤形態には、医薬的投与又はｉｎ  ｖｉｖｏ接触若しくは送達に適合する、溶媒（水性又は非水性）、溶液（水性又は非水性）、エマルジョン（例えば、水中油又は油中水）、懸濁液、シロップ、エリキシル、分散媒及び懸濁媒体、コーティング、等張及び吸収促進又は遅延剤を含む。水性及び非水性溶媒、溶液及び懸濁液には、懸濁化剤及び増粘剤を含むことができる。かかる医薬的に許容し得る担体には、錠剤（コーティング有り又は無し）、カプセル（硬又は軟）、マイクロビーズ、粉末、顆粒及び結晶を含む。補助的活性化合物（例えば、防腐剤、抗細菌剤、抗ウイルス剤及び抗真菌剤）も組成物に組み込むことができる。
【０２２９】
医薬組成物は、特定の投与経路と適合するように形成できる。従って、医薬組成物には、種々の経路による投与に適した担体、希釈剤、又は賦形剤を含む。組成物を、任意に形成できる接触又はｉｎ  ｖｉｖｏ送達用の典型的な投与経路には、吸入、呼吸、鼻腔内、挿管、肺内滴下、経口、口腔、肺内、皮内、局所、真皮、非経口、舌下、皮下、血管内、クモ膜下腔内、関節内、腔内、経皮、イオン導入、眼球内、眼、視覚性、静脈内（ｉ．ｖ．）、筋肉内、腺内、臓器内、リンパ内を含む。
【０２３０】
非経口投与に適した製剤形態は、活性化合物の水溶液及び非水溶液、懸濁液、又はエマルジョンを含み、この製剤は、概して滅菌であり、かつ意図される受容者の血液と等張であり得る。非限定的な説明に役立つ例には、水、生理食塩水、デキストロース、果糖、エタノール、動物、植物、又は合成油である。
【０２３１】
経粘膜又は経皮投与（例えば、局所接触）に関して、浸透剤が医薬組成物に含まれ得る。浸透剤は、当技術分野で既知であり、かつ例えば経粘膜投与に関して、洗浄剤、胆汁酸塩、及びフシジン酸誘導体を含む。経皮投与に関して、活性成分は、当技術分野で一般的に知られているように、エアロゾル、スプレー、軟膏、膏薬、ゲル又はクリームに形成できる。皮膚接触に関して、医薬組成物には、概して軟膏、クリーム、ローション、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾル又は油を含む。使用できる担体には、ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、アルコール、経皮促進剤、及びそれらの組み合わせを含む。
【０２３２】
共溶媒及びアジュバントが、製剤形態に添加され得る。共溶媒の非限定的な例には、水酸基又は他の極性基、例えばイソプロピルアルコールのようなアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリコールエーテルのようなグリコール、グリセロール、ポリオキシエチレンアルコール、及びポリオキシエチレン脂肪酸エステルを含有する。アジュバントには、例えば大豆レシチン及びオレイン酸のような界面活性剤、トリオレイン酸ソルビタンのようなソルビタンエステル、及びポリビニルピロリドンを含む。
【０２３３】
補助的化合物（例えば、抗細菌剤、抗ウイルス剤及び抗真菌剤のような殺生物剤及びバイオスタット（ｂｉｏｓｔａｔｓ）を含む、防腐剤、酸化防止剤、抗微生物剤）も組成物に組み込むことができる。それ故に医薬組成物には、防腐剤、酸化防止剤及び抗微生物剤を含むことができる。
【０２３４】
防腐剤は、微生物成長を阻害、又は成分の安定性を高めるために使用でき、それにより医薬製剤形態の保存期間を長引かせる。適切な防腐剤は、当技術分野で知られており、かつ例えばＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、塩化ベンザルコニウム又は安息香酸又は安息香酸ナトリウムのような安息香酸塩を含む。酸化防止剤には、例えばアスコルビン酸、ビタミンＡ、ビタミンＥ、トコフェロール、及び同様のビタミン又はプロビタミンを含む。
【０２３５】
抗微生物剤又は化合物は、病原又は非病原微生物の成長、感染性、複製、増殖、再生による汚染を直接又は間接的に阻害、減少、遅延、停止、廃止、抑止、抑制又は防止する。抗微生物剤のクラスには、抗細菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤及び抗寄生虫剤を含む。抗微生物剤には、微生物の成長、感染性、複製、増殖、再生による汚染を殺す若しくは破壊する（−ｃｉｄａｌ）又は阻害する（−ｓｔａｔｉｃ）作用剤及び化合物を含む。
【０２３６】
典型的な抗細菌剤（抗生物質）には、ペニシリン（例えば、ペニシリンＧ、アンピシリン、メチシリン、オキサシリン、及びアモキシシリン）、セファロスポリン（例えば、セファドロキシル、セフォラニド、セフォタキシム、及びセフトリアキソン）、テトラサイクリン（例えば、ドキシサイクリン、クロルテトラサイクリン、ミノサイクリン、及びテトラサイクリン）、アミノグリコシド（例えば、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ストレプトマイシン、ネチルマイシン、パロモマイシン、及びトブラマイシン）、マクロライド（例えば、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、及びエリスロマイシン）、フルオロキノロン（例えば、シプロフロキサシン、ロメフロキサシン、及びノルフロキサシン）、並びにクロラムフェニコール、クリンダマイシン、シクロセリン、イソニアジド、リファンピン、バンコマイシン、アズトレオナム、クラブラン酸、イミペネム、ポリミキシン、バシトラシン、アンホテリシン及びナイスタチンを含む他の抗生物質を含む。
【０２３７】
抗ウイルス剤の特定の非限定的クラスには、逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、チミジンキナーゼ阻害剤、糖又は糖タンパク質合成阻害剤、構造タンパク質合成阻害剤、ヌクレオシド類似体、及びウイルス成熟阻害剤を含む。抗ウイルス剤の具体的な非限定的例には、ネビラピン、デラビルジン、エファビレンツ、サキナビル、リトナビル、インジナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、ジドブジン（ＡＺＴ）、スタブジン（ｄ４Ｔ）、ラルニブジン（３ＴＣ）、ジダノシン（ＤＤＩ）、ザルシタビン（ｄｄＣ）、アバカビル、アシクロビル、ペンシクロビル、リバビリン、バラシクロビル、ガンシクロビル、１，−Ｄ−リボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３カルボキサミド、９−＞２−ヒドロキシエトキシメチルグアニン、アダマンタンアミン、５−ヨード−２’−デオキシウリジン、トリフルオロチミジン、インターフェロン及びアデニンアラビノシドを含む。
【０２３８】
本発明の組成物及び方法に適した医薬製剤形態及び送達系は、当技術分野で既知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（２００３）第２０版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）第１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ（１９９６）第１２版、Ｍｅｒｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ、Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ、ＮＪ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｓｏｌｉｄ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ（１９９３）、Ｔｅｃｈｎｏｎｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｉｎｃ．、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ、Ｐａ．、Ａｎｓｅｌ及びＳｔｏｋｌｏｓａ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（２００１）第１１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ、及びＰｏｚｎａｎｓｋｙら、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９８０）、Ｒ．Ｌ．Ｊｕｌｉａｎｏ，ｅｄ．、Ｏｘｆｏｒｄ、Ｎ．Ｙ．、２５３〜３１５頁参照）。
【０２３９】
ＩＬ−１０Ｒ抗体及びその部分配列は、活性又は不活性等であれ、いずれかの補助剤、複方、組成物と共に、投与を簡易にし、かつ投与量を均一にするために単位剤形（カプセル、錠剤、トローチ、カシェ剤、薬用ドロップ）に包装できる。本明細書で使用されるような「単位剤形」は、治療する患者の単一投与量として適した、物理的に離散した単位を指し、各単位は、１以上の用量で投与された時に所望の効果（例えば、予防又は治療効果）を生成するように計算された、医薬担体（賦形剤、希釈剤、ビヒクル又は充填剤）と任意に関連して、所定量の活性成分を含有する。単位剤形は、組成物を凍結乾燥又は減圧下凍結乾燥状態で含むことができる、例えばアンプル、バイアルも含み、例えば滅菌液体担体が、投与又はｉｎ  ｖｉｖｏ送達前に添加できる。単位剤形は例えば、液体組成物を内部に入れたアンプル及びバイアルをその上含む。個々の単位剤形は、複数用量キット又は容器中に含むことができる。医薬製剤形態は、投与を簡易にし、かつ投与量を均一にするために単一又は複数の単位剤形中に包装できる。
【０２４０】
本発明は、適切な包装材料に包装された病原体抗原、生又は弱毒化病原体、併用組成物及びその医薬製剤形態を任意に有するＩＬ−１０Ｒ抗体及びその部分配列を含むキットを提供する。キットは、構成要素の記載及び内部の構成要素のｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、又はｅｘ  ｖｉｖｏでの使用説明書を含むラベル又は添付文書を概して含む。キットは、かかる構成要素、例えばＩＬ−１０Ｒ抗体又はその部分配列、及び任意に病原体抗原、生又は弱毒化病原体のコレクションを、単独（個別の容器又はパック）又は組み合わせて（例えば、混合物）含有するか、又は他の化合物、作用剤、薬剤又は組成物を含有できる。
【０２４１】
「包装材料」なる語は、キットの構成要素を収納する物理的構造を指す。包装材料は、構成要素を滅菌で維持でき、かかる目的で一般に使用される材料（例えば、紙、波形繊維、ガラス、プラスチック、ホイル、アンプル、バイアル、管等）で製造できる。
【０２４２】
本発明のキットは、ラベル又は添付文書を含むことができる。ラベル又は添付文書は、「印刷物」を含み、例えば紙若しくはボール紙であるか、又は別個、若しくは構成要素、キット若しくは包装材料（例えば、箱）に貼付されるか、又はキット構成要素を含有するアンプル、管、若しくはバイアルに取り付けられる。ラベル又は添付文書は、コンピューター可読媒体、例えばディスク（例えば、フロッピーディスケット、ハードディスク、フラッシュメモリ）、光ディスク、例えばＣＤ−又はＤＶＤ−ＲＯＭ／ＲＡＭ、ＤＶＤ、ＭＰ３、磁気テープ、又は電気記憶媒体、例えばＲＡＭ及びＲＯＭ、又はこれらのハイブリッド、例えば磁気／光学記憶媒体、フラッシュメディア若しくはメモリタイプカードをその上含むことができる。
【０２４３】
ラベル又は添付文書は、内部の１つ以上の構成要素の識別情報、作用機序、薬物動態及び薬力学を含む活性成分の投薬量、臨床薬理作用を含むことができる。ラベル又は添付文書は、製造業者の情報、ロット番号、製造業者の所在地及び日付を識別する情報を含むことができる。
【０２４４】
ラベル又は添付文書は、キット構成用度が使用できる状態、障害又は疾病（例えば、ウイルス感染、ワクチン接種又は免疫付与）に関する情報を含むことができる。ラベル又は添付文書は、方法又は処置プロトコル又は治療レジメンにおいて１つ以上のキット構成要素を使用するための臨床医又は患者への指示を含むことができる。指示には、投与量、頻度又は期間、及び本明細書に記載された方法、処置プロトコル又は予防若しくは治療レジメンのいずれかを実施するための指示を含むことができる。典型的な指示には、病原体感染又は病変を処置する指示、及び病原体感染、病変、又は潜伏からの再活性化に対する保護を患者に提供するための指示を含む。
【０２４５】
ラベル又は添付文書は、予防又は治療的利益のような、構成要素が提供できるいずれかの利益に関する情報を含むことができる。ラベル又は添付文書は、特定の組成物を使用することが妥当でない状況に関する患者又は臨床医への警告のような、起こり得る有害な副作用、合併症又は反応に関する情報を含むことができる。有害な副作用又は合併症は、組成物と不適合であり得る１種以上の他の薬剤を患者が服用したか、これから若しくは現在服用するか、又は組成物と不適合であろう他の処置プロトコル又は治療レジメンを患者が受けたか、これから若しくは現在受ける時にも起こることがあり、それ故に指示は、かかる禁忌に関する情報を含むことができる。
【０２４６】
別段の定義がない場合、本明細書で使用される全ての技術及び科学用語は、本発明が属する分野で通常の技能を有する者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本発明の実施又は試験において、本明細書に記載されたものと類似する又は同等の方法及び材料を使用できるが、適切な方法及び材料が本明細書に記載される。
【０２４７】
本明細書で引用される全ての出願、公報、特許及び他の参考文献、ＧｅｎＢａｎｋの引用及びＡＴＣＣの引用は、全体が参照により組み込まれる。抵触する場合、定義を含む本明細書が、支配する。
【０２４８】
本明細書で使用されるような、単数形「ａ」、「ａｎｄ」及び「ｔｈｅ」は、文脈に明確な別段の指示がない限り、複数の言及を含む。従って、例えば「ＩＬ−１０抗体」又は「病原体」の言及は、複数の抗体又は病原体を含み、かつ「ＩＬ−１０活性又は機能」又は「ＩＬ−１０Ｒ活性又は機能」のような「活性又は機能」の言及は、ＩＬ−１０／ＩＬ−１０Ｒシグナル経路又は活性のいずれかの構成要素のいずれかの活性又は機能、その他を含む、１つ以上のＩＬ−１０Ｒ活性又は機能の言及を含み得る。
【０２４９】
本明細書で使用されるような、全ての数値又は範囲には、文脈に明確な別段の指示がない限り、かかる範囲内の値の端数及び整数と、かかる範囲内の整数の端数とを含む。従って、例示すると、百分率の範囲９０〜１００％のような数字域の言及は、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９５％、９７％等、並びに９１．１％、９１．２％、９１．３％、９１．４％、９１．５％等、９２．１％、９２．２％、９２．３％、９２．４％、９２．５％等、その他を含む。それ故に、１〜５倍の範囲の言及は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０倍等、並びに１．１、１．２、１．３、１．４、１．５倍等、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５倍等、その他を含む。
【０２５０】
本発明は、多数の実施態様及び形態を記載するために、肯定的言葉遣いをして、本明細書に一般的に開示される。本発明は、物質又は材料、方法ステップ及び条件、プロトコル、手順、アッセイ又は解析のような、特定の対象が、全部又は部分的に除外された実施態様も具体的に含む。例えば、本発明の幾つかの実施態様又は形態において、抗体又は他の材料及び方法ステップが、除外されている。本発明の幾つかの実施態様及び形態において、例えばＩＬ−１０Ｒ抗体又は病原体抗原が、除外されている。従って本発明は、含まれないものに関して一般的に本明細書で表現されていないが、それにもかかわらず、組成物（例えば、抗体又は病原体抗原）又は方法ステップを明確に除外する実施態様及び形態が、本発明に開示され、かつ含まれる。
【０２５１】
本発明の多数の実施態様が記載された。それにもかかわらず、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく種々の修正がなされ得ることが理解されよう。従って、以下の実施例は、請求項に記載された発明の範囲を例示することが意図されるが、限定はしていない。
【実施例】
【０２５２】
（実施例１）
本実施例には、種々の材料及び方法の記載を含む。
【０２５３】
ヒトＩＬ−１０Ｒαのクローニング：ｐＣＭＶ  ｓｐｏｒｔ６（受託番号ＢＥ２７２９２２）中の完全長ＩＬ−１０Ｒα  ＭＧＣクローンを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）から購入し、かつ完全長ＩＬ−１０Ｒαオープンリーディングフレームは、ＭＧＣクローンからポリメラーゼ連鎖反応［プライマー：ｈＩＬ−１０Ｒａ  Ｆ４８  ＥｃｏＲＩ及びｈＩＬ−１０Ｒａ  Ｒ１８５７  ＮｏｔＩ（表１）］によりサブクローニングした。増幅産物は、ＥｃｏＲＩ及びＮｏｔＩ制限酵素で消化させ、かつ予めＥｃｏＲＩ及びＮｏｔＩによって消化させたｐＣＤＮＡ３．１（＋）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）にサブクローニングした。ヒトＩＬ−１０Ｒα細胞外ドメインをコードする配列は、ポリメラーゼ連鎖反応［プライマー：ｈＩＬ−１０Ｒ  Ｆｏｒｗａｒｄ及びｈＩＬ−１０Ｒ  Ｒｅｖｅｒｓｅ（表１）］によってｐＣＭＶ  ｓｐｏｒｔ６ベクターから増幅した。増幅産物は、プライマー中に含まれたＥｃｏＲＩ及びＢｇｌＩＩ制限酵素で消化させ、かつヒトＩｇＧ１  Ｆｃ配列を、ＢｇｌＩＩ及びＮｏｔＩ制限酵素を使用してｐＶ１１３９２．ｆｃベクターから切除した。ｓｈＩＬ−１０Ｒα（ＥｃｏＲＩ−ＢｇｌＩＩ）及びｈＦｃ（ＢｇｌＩＩ―ＮｏｔＩ）断片は、予めＥｃｏＲＩ及びＮｏｔＩによって消化させたｐｃＤＮＡ３．１（＋）発現ベクターにサブクローニングし、ｈＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃ発現ベクターを生成した。
【０２５４】
開始コドン（ＡＴＧ）からＩＬ−１０Ｒα終止コドン（下線）までの完全長ヒトＩＬ−１０Ｒαのヌクレオチド配列：配列番号１
【０２５５】
2011524741.tif 000004
【０２５６】
開始Ｍｅｔから末端アミノ酸までの完全長ヒトＩＬ−１０Ｒαのアミノ酸配列：配列番号２
【０２５７】
2011524741.tif 000005
【０２５８】
開始コドン（ＡＴＧ）からヒトＩＬ−１０Ｒα細胞外ドメインを含み、ヒトＦｃ配列の末端（下線）までのヒトＩＬ−１０Ｒα：ヒトＩｇＧ１融合タンパク質のヌクレオチド配列：配列番号３
【０２５９】
2011524741.tif 000006
【０２６０】
ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分（下線）に融合したヒトＩＬ−１０Ｒα細胞外ドメインのアミノ酸配列：配列番号４
【０２６１】
2011524741.tif 000007
【０２６２】
チンパンジーＩＬ−１０Ｒαのクローニング：チンパンジーＩＬ−１０Ｒαの細胞外領域の予測アミノ酸配列には、ＩＬ−１０Ｒαのヒトアミノ酸配列との２つのアミノ酸の相違を含む：アミノ酸位置９２でヒスチジンの代わりにアルギニン、及びアミノ酸位置２２４でイソロイシンの代わりにバニリン（受託番号ＮＣ＿００６４７８．２）。位置２２４（Ｖ２２４Ｉ）でのアミノ酸変化は、ヒトＩＬ−１０Ｒα配列中で認識される一塩基多型（ＳＮＰ）である。ヒトＩＬ−１０ＲαのＤＮＡ配列は、ポリメラーゼ連鎖反応［プライマー  ｈＩＬ−１０Ｒ  Ｆｏｒｗａｒｄ、ｈＩＬ−１０Ｒａ  ＮｏｔＩ  Ｒ１８５７、ＩＬ−１０Ｒ−ａ２７５ｇ−Ｆ、ＩＬ−１０Ｒ−ａ２７５ｇ−Ｒ、ＩＬ−１０Ｒ−ａ６７０ｇ−Ｆ、及びＩＬ−１０Ｒ−ａ６７０ｇ−Ｒ（表１）］を使用して、アミノ酸Ｈｉｓ９２［ヌクレオチド２７５（アデニン）は、グアニン（Ａ２７５Ｇ）に変えた］及びアミノ酸Ｖａｌ２２４［ヌクレオチド６７０（アデニン）は、グアニン（Ａ６７０Ｇ）に変えた］のコドン内で変異させた。増幅産物は、Ｚｅｒｏ  Ｂｌｕｎｔ  ＴＯＰＯ  ＰＣＲクローニングキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）を使用して、ベクターｐＣＲ−ＢｌｕｎｔＩＩ−Ｔｏｐｏ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）にクローニングした。次に、クローンの配列を決定し、かつ設計した突然変異を含むことを確認した。修飾完全長ヒトＩＬ−１０Ｒα（ｃＩＬ−１０Ｒα−ＦＬと称する）をコードする修飾配列は、予めＥｃｏＲＩ及びＮｏｔＩによって消化させた哺乳類発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）にサブクローニングした。
【０２６３】
ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に融合したチンパンジーＩＬ−１０Ｒαの細胞外領域からなる融合タンパク質をコードする構成体は、次のように構成した。アミノ酸Ｍｅｔ１からＡｓｐ２３５までのチンパンジー修飾ヒトＩＬ−１０Ｒα（ｃＩＬ−１０Ｒａ−ＥＸ）の細胞ガイドメインをコードするＤＮＡ配列は、テンプレートとしてｃＩＬ−１０Ｒα−ＦＬを使用してポリメラーゼ連鎖反応によって増幅した。ＢａｍＨＩの制限部位を、３’プライマーに組み込み、かつＡｓｐ２３５のコドンの直後に配置した。ポリメラーゼ連鎖反応を実行した［プライマー  ｈＩＬ−１０Ｒａ  Ｆｏｒｗａｒｄ、ｈＩＬ−１０Ｒａ  Ｒｅｖｅｒｓｅ（表１）］。増幅産物は、ＥｃｏＲＩ及びＢａｍＨＩによって消化させた。ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分は、制限酵素（５’末端でＢｇｌＩＩ、及び３’末端でＮｏｔＩ）によりヒトＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃ発現ベクターコンストラクトから切除した。ｃＩＬ−１０Ｒα−ＥＸ及びヒトＩｇＧ１  Ｆｃは、予めＥｃｏＲＩ及びＮｏｔＩによって消化させた哺乳類発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）にサブクローニングした。
【０２６４】
開始コドン（ＡＴＧ）からチンパンジーＩＬ−１０Ｒα細胞外ドメインを含みヒトＦｃ配列（下線）の末端へのチンパンジーＩＬ−１０Ｒα：ヒトＩｇＧ１融合タンパク質のヌクレオチド配列：配列番号５
【０２６５】
2011524741.tif 000008
【０２６６】
ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分（下線）に融合したチンパンジーＩＬ−１０Ｒα−細胞外ドメインのアミノ酸配列、ヒトＳＮＰに対応するアミノ酸は、太字である：配列番号６
【０２６７】
2011524741.tif 000009
【０２６８】
サイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαのクローニング：完全長サイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαは、１ｎｇ／ｍｌのホルボールミリスチン酸（ＰＭＡ）（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）及び５００ｎｇ／ｍｌのイオノマイシン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）によって４１時間、活性化させた精製サイノモルガスＴ細胞からクローニングした。Ｔ細胞は、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ（Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）のＰａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｋｉｔを使用し、かつ製造業者の指示に従って末梢血単核細胞から精製した。ＲＮＡは、ＲＮＡｅａｓｙキット（ＱＩＡＧＥＮ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して２×１０６の細胞から単離し、かつ第１の鎖ｃＤＮＡは、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）を使用して逆転写によって作製した。アカゲザルＩＬ−１０Ｒα（受託番号ＸＭ＿００１０９２３７６）の予測配列は、サイノモルガスＩＬ−１０Ｒαの増幅のためのプライマーを設計するために当初使用したが、しかしながらこのプライマーセットによる増幅は、失敗した。予測配列の解析で、フォワードプライマー結合配列を中断させた、スプライス部位での計算間違いが、示唆された。それ故にチンパンジー配列及びアカゲザルＩＬ−１０Ｒαリバースプライマー［ｃｈＩＬ−１０ＲａＦ１及びｒｈＩＬ−１０Ｒａ＿Ｒ２０９８（表１）］から設計したフォワードプライマーを使用した。増幅産物は、Ｚｅｒｏ  Ｂｌｕｎｔ（登録商標）ＴＯＰＯ（登録商標）ＰＣＲクローニングキットを使用して、ｐＣＲ（登録商標）−ＢｌｕｎｔＩＩ−ＴＯＰＯ（登録商標）中に置き、かつ配列を決定した。完全長ｃｙＩＬ−１０Ｒαは次に、ポリメラーゼ連鎖反応［プライマー  ｈＩＬ−１０Ｒａ  Ｆｏｒｗａｒｄ、Ｍ１３Ｒ（表１）］を使用して増幅し、かつ予めＥｃｏＲＩで消化させたｐｃＤＮＡ３．１（＋）にサブクローニングした。コンストラクトは、制限消化産物及び配列決定により確認した。
【０２６９】
開始コドン（ＡＴＧ）からサイノモルガスＩＬ−１０Ｒα終止コドン配列（下線）までのサイノモルガスＩＬ−１０Ｒα完全長タンパク質のヌクレオチド配列：配列番号７
【０２７０】
2011524741.tif 000010
【０２７１】
開始Ｍｅｔから末端アミノ酸までのサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒα完全長タンパク質のアミノ酸配列：配列番号８
【０２７２】
2011524741.tif 000011
【０２７３】
ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分（ｃｙＩＬ−１０Ｒα）に融合したサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒα細胞外領域を発現するコンストラクトは、ｈＩＬ−１０Ｒα：ｈＦＣ融合コンストラクトを作製するために記載したものと同じ方法を使用して製造した。
【０２７４】
開始コドン（ＡＴＧ）からサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒα細胞外ドメインを含みヒトＦｃ配列（下線）の末端までのサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒα：ヒトＩｇＧ１融合タンパク質のヌクレオチド配列：配列番号９
【０２７５】
2011524741.tif 000012
【０２７６】
ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分（下線）に融合したサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒα細胞外ドメインのアミノ酸配列：配列番号１０
【０２７７】
2011524741.tif 000013
【０２７８】
各々は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃと融合したｈＩＬ−１０Ｒα（単一のペプチドを含む場合、アミノ酸１−２３５をコードする７０５のヌクレオチド）の細胞外ドメインの５つの既知の一塩基多型（ＳＮＰ）変異体の１つを発現する、ヒトＩＬ−１０Ｒａ  ＳＮＰ変異体のクローニング：５つの哺乳類発現ベクターを作製した。ＳＮＰ変異体は、Ｌ６１Ｖ、Ｖ１１３Ｉ、Ｓ１５９Ｇ、Ｒ２１２Ｅ及びＶ２３３Ｍと示した。ここで１番目の文字は、コンセンサスアミノ酸を意味し、番号は、ｈＩＬ−１０Ｒαの開始メチオニンから数えた時のアミノ酸番号を意味し、かつ２番目の文字は、突然変異後のＳＮＰのアミノ酸を意味する。コンストラクトは、ベクター、及びその産生したタンパク質が、ＳＮＰ突然変異の部位以外で、ｈＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃベクター及びタンパク質と同一であるように設計した。一般的に、Ｌ６１Ｖ、Ｖ１１３Ｉ、Ｓ１５９Ｇ及びＲ２１２Ｅの突然変異は、二段階ＰＣＲ反応において実行し、続いて完全発現コンストラクトのクローニングを行った。該クローニングは、ｈＩＬ−１０Ｒα：ｈＦＣ融合コンストラクトと同じ方法を使用して実行した。
【０２７９】
特に、Ｌ６１Ｖは、突然変異のための固有のプライマー（表１）と同じ技術を使用して生成したＶ１１３Ｉ、Ｓ１５９Ｇ及びＲ２１２Ｅの例として使用する。ｈＩＬ−１０ＲαをコードするｃＤＮＡを、２つの別個のＰＣＲ反応のテンプレートとして使用した：Ｒｘｎ１（プライマー  ｈＩＬ１０Ｒ  Ｆｏｒｗａｒｄ、ＩＬ１０Ｒａ−Ｒ−Ｌ６１Ｖ）は、開始ＡＴＧからＳＮＰ部位の１３ヌクレオチド３’までのＮ末端ｃＤＮＡを増幅し、Ｒｘｎ２（プライマー  ＩＬ１０Ｒａ−Ｆ−Ｌ６１Ｖ、ｈＩＬ１０Ｒ  Ｒｅｖｅｒｓｅ）は、ＳＮＰ部位の１３ヌクレオチド５’からｈＩＬ−１０Ｒα（ヌクレオチド７０５）のＡｓｐ２３５までを増幅した。プライマー「ｈＩＬ１０Ｒ  Ｆｏｒｗａｒｄ」は、開始メチオニンの直前のセンス鎖のＥｃｏＲＩ５’の制限酵素認識部位を付加し、かつプライマー「ｈＩＬ１０Ｒ  Ｒｅｖｅｒｓｅ」は、Ａｓｐ２３５の直後のセンス鎖の３’末端でＢｇ１ＩＩの制限酵素認識部位を付加する。プライマー「ＩＬ１０Ｒａ−Ｆ−Ｌ６１Ｖ」及び「ＩＬ１０Ｒａ−Ｒ−Ｌ６１Ｖ」は、互いに１００％相補性であり、かつプライマー中心近傍でのＳＮＰ変異体へのコンセンサスアミノ酸の変換に関与するヌクレオチド突然変異を含む。ＰＣＲ産物は、ゲル電気泳動によって精製し、かつプライマーを含まない標準ＰＣＲ  ｍｉｘにほぼ等モル比で添加した。各ＰＣＲ産物の相補領域Ｒｘｎ１及びＲｘｎ２が、他方の反応産物の逆鎖を「プライミング」し、センス及びアンチセンス鎖のｈＩＬ−１０Ｒα細胞外ドメインの完全長への延長を可能にするように、ＰＣＲ温度サイクルの３つのサイクルを実行した。この反応は、プライマー「ｈＩＬ１０Ｒ  Ｆｏｒｗａｒｄ」及び「ｈＩＬ１０Ｒ  Ｒｅｖｅｒｓｅ」による第２ＰＣＲ反応のテンプレートとして使用した。増幅産物は、プライマーに含まれたＥｃｏＲＩ及びＢｇｌＩＩ制限酵素によって消化させ、かつヒトＩｇＧ１  Ｆｃ配列を、ＢｇｌＩＩ及びＮｏｔＩ制限酵素を使用してｐＶ１１３９２．ｆｃベクターから切除した。ｓｈＩＬ−１０Ｒα（ＥｃｏＲＩ−ＢｇｌＩＩ）及びｈＦｃ（ＢｇｌＩＩ−ＮｏｔＩ）断片は、予めＥｃｏＲＩ及びＮｏｔＩによって消化させたｐｃＤＮＡ３．１（＋）発現ベクターにサブクローニングし、ｈＩＬ−１０Ｒα−Ｌ６１Ｖ−ｈＦｃ発現ベクターを生成した。
【０２８０】
ＳＮＰ変異体Ｖ１１３Ｉ、Ｓ１５９Ｇ及びＲ２１２Ｅの構築は、全部が共通のプライマー「ｈＩＬ１０Ｒ  Ｆｏｒｗａｒｄ」及び「ｈＩＬ１０Ｒ  Ｒｅｖｅｒｓｅ」を使用した。ＳＮＰヌクレオチド突然変異を含む独特のプライマー（表１）は：Ｖ１１３Ｉ（ＩＬ１０Ｒａ−Ｆ−Ｖ１１３Ｉ、ＩＬ１０Ｒａ−Ｒ−Ｖ１１３Ｉ）、Ｓ１５９Ｇ（ＩＬ１０Ｒａ−Ｆ−Ｓ１５９Ｇ、ＩＬ１０Ｒａ−Ｒ−Ｓ１５９Ｇ）及びＲ２１２Ｅ（ＩＬ１０Ｒａ−Ｆ−Ｒ２１２Ｅ、ＩＬ１０Ｒａ−Ｒ−Ｒ２１２Ｅ）である。
【０２８１】
ｈＩＬ−１０Ｒα変異体Ｖ２３３Ｍの構築は、単一のＰＣＲステップ（プライマー「ｈＩＬ１０Ｒ  Ｆｏｒｗａｒｄ」、「ｈＩＬ１０＿Ｖ２３３Ｍ＿Ｒ」）によって行われ、その後にｈＩＬ−１０Ｒα：ｈＦＣベクターの構築に関して記載されたものと同一の制限クローニング方法が続いた。プライマー「ｈＩＬ１０＿Ｖ２３３Ｍ＿Ｒ」は、ＳＮＰ突然変異と、ｈＦｃへの融合のためのＢｇｌＩＩ制限部位とを含む。各構成体は、ＤＮＡ配列決定により確認した。
【０２８２】
開始コドン（ＡＴＧ）からヒトＩＬ−１０Ｒα細胞外ドメインを含み、ヒトＦｃ配列（下線）の末端までのヒトＩＬ−１０Ｒα：ヒトＩｇＧ１融合タンパク質のＳＮＰ変異体Ｌ６１Ｖ（コドン太字）のヌクレオチド配列：配列番号６２
【０２８３】
2011524741.tif 000014
【０２８４】
ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分（下線）に融合したヒトＩＬ−１０Ｒα細胞外ドメインのＳＮＰ変異体Ｌ６１Ｖ（アミノ酸太字）のアミノ酸配列：配列番号６３
【０２８５】
2011524741.tif 000015
【０２８６】
開始コドン（ＡＴＧ）からヒトＩＬ−１０Ｒα細胞外ドメインを含み、ヒトＦｃ配列（下線）の末端までのヒトＩＬ−１０Ｒα：ヒトＩｇＧ１融合タンパク質のＳＮＰ変異体Ｖ１１３Ｉ（コドン太字）のヌクレオチド配列：配列番号６４
【０２８７】
2011524741.tif 000016
【０２８８】
ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分（下線）に融合したヒトＩＬ−１０Ｒα細胞外ドメインのＳＮＰ変異体Ｖ１１３Ｉ（アミノ酸太字）のアミノ酸配列：配列番号６５
【０２８９】
2011524741.tif 000017
【０２９０】
開始コドン（ＡＴＧ）からヒトＩＬ−１０Ｒα細胞外ドメインを含み、ヒトＦｃ配列（下線）の末端までのヒトＩＬ−１０Ｒα：ヒトＩｇＧ１融合タンパク質のＳＮＰ変異体Ｓ１５９Ｇ（コドン太字）のヌクレオチド配列：配列番号６６
【０２９１】
2011524741.tif 000018
【０２９２】
ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分（下線）に融合したヒトＩＬ−１０Ｒα細胞外ドメインのＳＮＰ変異体Ｓ１５９Ｇ（アミノ酸太字）のアミノ酸配列：配列番号６７
【０２９３】
2011524741.tif 000019
【０２９４】
開始コドン（ＡＴＧ）からヒトＩＬ−１０Ｒα細胞外ドメインを含み、ヒトＦｃ配列（下線）の末端までのヒトＩＬ−１０Ｒα：ヒトＩｇＧ１融合タンパク質のＳＮＰ変異体Ｒ２１２Ｅ（コドン太字）のヌクレオチド配列：配列番号６８
【０２９５】
2011524741.tif 000020
【０２９６】
ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分（下線）に融合したヒトＩＬ−１０Ｒα細胞外ドメインのＳＮＰ変異体Ｒ２１２Ｅ（アミノ酸太字）のアミノ酸配列：配列番号６９
【０２９７】
2011524741.tif 000021
【０２９８】
開始コドン（ＡＴＧ）からヒトＩＬ−１０Ｒα細胞外ドメインを含み、ヒトＦｃ配列（下線）の末端までのヒトＩＬ−１０Ｒα：ヒトＩｇＧ１融合タンパク質のＳＮＰ変異体Ｖ２３３Ｍ（コドン太字）のヌクレオチド配列：配列番号７０
【０２９９】
2011524741.tif 000022
【０３００】
ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分（下線）に融合したヒトＩＬ−１０Ｒα細胞外ドメインのＳＮＰ変異体Ｖ２３３Ｍ（アミノ酸太字）のアミノ酸配列：配列番号７１
【０３０１】
2011524741.tif 000023
【０３０２】
【表１】
2011524741.tif 000024
【０３０３】
タンパク質発現：タンパク質は、２９３ｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）を製造業者の指示に従って使用し、トランスフェクトした、Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ  ２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）中で一時的発現により発現した。
【０３０４】
安定系統の発生：完全長ヒト及びチンパンジーＩＬ−１０Ｒα  ｐＣＤＮＡ３．１発現ベクターは、ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）を製造業者の指示に従って使用し、ＥＬ−４（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−３９）に個別にトランスフェクトした。ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）を使用して安定したトランスフェクタントを選択した。ＣＨＯ−Ｋ１（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−６１）ヒトＩＬ−１０Ｒα安定トランスフェクタントを、Ａｍａｘａ  ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒシステム（Ａｍａｘａ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を製造業者の指示に従って使用し、生成した。全てのケースで、選択下の２週間後に、高レベルのＩＬ−１０Ｒαを発現する細胞を、ＩＬ−１０Ｒα抗体による染色に基いて、ＦＡＣＳ  Ａｒｉａ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）を使用して選び出した。
【０３０５】
マウス：ヒト免疫グロブリン領域をコードするヒト染色体断片を包含するヒトトランスクロモソミックＫＭ  ｍｉｃｅ（商標）［国際公開第０２／４３４７８号、国際公開第０２／０９２８１２号、Ｉｓｈｉｄａ及びＬｏｎｂｅｒｇ、ＩＢＣ’ｓ  １１ｔｈ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、Ａｂｓｔｒａｃｔ（２０００）、及びＫａｔａｏｋａ，Ｓ．ＩＢＣ’ｓ  １３ｔｈ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、Ａｂｓｔｒａｃｔ（２００２））を、Ｋｉｒｉｎ  Ｐｈａｒｍａ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ．から入手した。ヒト抗体を産生する技術の概説はＬｏｎｂｅｒｇ及びＨｕｓｚａｒに記載されている［Ｉｎｔ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３：６５（１９９５）］。内因性免疫グロブリンを発現しない１つ以上のヒト免疫グロブリン遺伝子（カッパ又はラムダ）を有するトランスジェニック動物が、例えば米国特許第５，９３９，５９８号に記載されている。ヒト抗体及びヒトモノクローナル抗体を産生する追加の方法が、記載されている（例えば、国際公開第９８／２４８９３号、国際公開第９２／０１０４７号、国際公開第９６／３４０９６号、国際公開第９６／３３７３５号、米国特許第５，４１３，９２３号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，５６９，８２５号、第５，６６１，０１６号、第５，５４５，８０６号、第５，８１４，３１８号、第５，８８５，７９３号、第５，９１６，７７１号及び第５，９３９，５９８号参照）。ヒト免疫グロブリン遺伝子を担持するウシ、トランスクロモソミック（ＴＣ）ウシの開発が、例えばＩｓｈｉｄａ及びＬｏｎｂｅｒｇ［ＩＢＣ’ｓ  １１ｔｈ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、Ａｂｓｔｒａｃｔ（２０００）］に記載されている。
【０３０６】
免疫付与：可溶性ヒトＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃ組換えタンパク質を、等量のＲＩＢＩアジュバント（Ｃｏｒｉｘａ、Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ）と１：１で混合し、エマルジョンを調製した。マウスは、２０μｇの可溶性ｈＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃ組換えタンパク質で腹腔内に免疫付与し、かつ３回の追加免疫付与に対して２週間間隔でＲＩＢＩアジュバント（Ｃｏｒｉｘａ）と１：１で混合した２０μｇのタンパク質により腹腔内に追加免役付与をした。融合の３日前に、アジュバントなしの２０μｇの可溶性ｈＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃの最終腹腔内注射を与えた。第２グループのマウスは、同様の方法で免疫付与したが、４回の追加免疫付与に対して１週間間隔で追加免疫付与をした。
【０３０７】
ハイブリドーマ産生：モノクローナル抗体産生のため、血清中に最高の抗ヒトＩＬ−１０Ｒα  ＩｇＧ特異的抗体力価を有するマウスを選択した。ヒト抗ヒトＩＬ−１０Ｒα  ＩｇＧ抗体は、フローサイトメトリー解析によって確認した。脾臓を摘出し、かつ単細胞懸濁液を、１００％ポリエチレングリコール（Ｒｏｃｈｅ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）により５：１比で骨髄腫細胞株（ＳＰ２／Ｏ−Ａｇ１４）（ＡＴＣＣ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）と融合した。融合物は、９６ウェル平底プレートに最適密度で平板培養し、かつ１０％ＣＯ２、３７℃のインキュベーター内で、ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅｎｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉａ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃｏｒｐ．）中で１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｏｇｄｅｎ、ＵＴ）、１００ｍｇ／Ｌピルビン酸ナトリウム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃｏｒｐ．）、４．５ｇ／Ｌ  Ｄ−グルコース（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃｏｒｐ．）、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｓｉｇｍａ）、１００Ｕ／ｍｌペニシリン（Ｓｉｇｍａ）、１００μｇ／ｍｌ硫酸ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ）、５５μＭ  ２−メルカプトエタノール（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃｏｒｐ．）、ＨＡＴサプリメント（Ｓｉｇｍａ）、及び５ｎｇ／ｍｌヒトＩＬ−６（Ｋｉｒｉｎ  Ｐｈａｒｍａ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、Ｔａｋａｓａｋｉ、Ｊａｐａｎ）により培養した。２つの融合からの約２０００ウェルを、ヒトＩｇＧ含有ヒトＩＬ−１０Ｒα特異的抗体に関してＥＬＩＳＡによりスクリーニングした。ヒト抗ヒトＩＬ−１０Ｒα  ＩｇＧ抗体は、フローサイトメトリー解析により確認した。陽性のウェルを拡張し、２回の限界希釈クローニングに供し、モノクローナル抗体を得た。
【０３０８】
抗体及びタンパク質精製：抗体精製のため、ハイブリドーマを２リットルローラーボトル中で、ボトルあたり３００〜３５０ミリリットルでハイブリドーマ−ＳＦＭ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃｏｒｐ．）により培養した。可溶性ｈＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃ、チンパンジーＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃ及びサイノモルガスＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃ組換えタンパク質を、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＨＥＫ２９３Ｆ細胞中で製造業者のプロトコル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃｏｒｐ．）に従って、一時的発現によって生成した。ヒトモノクローナル抗体及びＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃ組換えタンパク質を、ＨｉＴｒａｐ  ＭＡｂ  Ｓｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ樹脂（Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用して培地から精製した。上清容量が１Ｌを超える場合、馴化培地は、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ接線流濾過システム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｓｔｅｄｉｍ、Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して最初に濃縮した。馴化培地は、０．２２μｍの真空フィルターユニット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）により濾過し、培地中の標的タンパク質の量に適したサイズのタンパク質Ａカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に流し入れた。カラムは、６カラム容量のＰＢＳにより徹底的に洗浄し、かつ結合タンパク質は、適切なバッファー（抗体に対して０．１Ｍ  Ｇｌｙ−ＨＣｌ、ｐＨ３．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、又は組換え融合タンパク質に対して氷冷した５０ｍＭ  クエン酸塩／クエン酸Ｎａ、ｐＨ３．５、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ）により溶出した。溶出分画は、直ちに１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０で中和した。２８０ｎｍで高い吸収度を有する分画をプールし、かつ遠心式濃縮器（Ｖｉｖａｓｐｉｎ、１０，０００ＭＷＣＯ：Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）で濃縮した。次に濃縮試料を１２ｍＬ又は３０ｍＬのＳｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ透析カセット（３，５００ＭＷＣＯ：Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）に流し入れ、４Ｌ  ＰＢＳ、ｐＨ７．４（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）に対して透析した。透析後、タンパク質は、０．２２μｍの注射器フィルターを使用して濾過滅菌し、その濃度をローリー法により決定した。発熱物質含量は、Ｅｎｄｏｓａｆｅ  Ｐｏｒｔａｂｌｅ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍユニット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、Ｃｈａｒｌｅｓｔｏｎ、ＳＣ）を使用して、高感度Ｌｉｍｕｌｕｓ  Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ  Ｌｙｓａｔｅ（ＬＡＬ）試験カートリッジにより定量的に決定した。試験結果が０．０５ＥＵ／ｍｇ未満ならば（アッセイの検出限界）、試料は、エンドトキシン陰性と考えられた。
【０３０９】
ヒトＩｇＧ定量ＥＬＩＳＡ：上清及び精製ストック中に存在するヒト抗体の量を決定するために次のプロトコルを使用した。ヤギ抗ヒトＦｃγ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）を９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ、Ｄｅｎｍａｒｋ）に、炭酸バッファー（ｐＨ９．４）中で、０．５μｇ／ウェルで１時間、３７℃でコーティングした。プレートは次に、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ）により３０分間遮断し、その後プレートへの試料添加を行った。標準曲線は、全ヒトＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ）又は精製ヒトＩｇＧ１若しくはＩｇＧ４（Ｋｉｒｉｎ  Ｐｈａｒｍａ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．）を使用して作製した。プレートを１時間、３７℃でインキュベートし、ＰＢＳ／１％ＢＳＡ／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（Ｓｉｇｍａ）で洗浄し、かつ結合抗体を、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）と抱合したヤギ抗ヒトＦｃγ特異的抗体により１時間、３７℃で検出した。ＴＭＢ基質（Ｓｉｇｍａ）を１０分間添加し、Ｈ２ＳＯ４（ＬａｂＣｈｅｍ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ）により反応を停止させた。光学密度（ＯＤ）をマイクロプレートリーダー上で４５０ｎｍにて測定し、かつ抗体濃度計算は、ＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を使用して算定した。
【０３１０】
ＩＬ−１０Ｒα特異的抗体検出ＥＬＩＳＡ：ハイブリドーマによる抗体力価、特異性、及び産生をＥＬＩＳＡにより決定した。要約すると、９６ウェル平底Ｍａｘｉｓｏｒｂプレートを５０μｌのｈＩＬ−１０Ｒα（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）で、炭酸バッファー（ｐＨ９．４）中１μｇ／ｍｌにて、一晩４℃で又は３７℃で１時間コーティングした。ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０により３回洗浄した後、プレートを、ＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋブロッキングバッファーによりＴＢＳ（Ｐｉｅｒｃｅ）中で３０分間、室温で遮断した。血清、上清、又は精製抗体をブロッキングバッファー中で希釈し、ウェルに加え、プレートを１時間、室温でインキュベートした。プレートを、ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０により３回洗浄し、かつペルオキシダーゼ抱合ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃγ特異的）、抗ラットＩｇＧ、又は抗マウスＩｇＧ検出抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）を１：５０００希釈で添加した。複数ロットの抗ラット及び抗マウスＩｇＧ抗体は、異なるアッセイで使用した。これらの二次抗体は、３Ｆ９、ＳＰＭ４６６及び３７６０７への可変結合を証明した。室温での１時間のインキュベーション後、プレートを洗浄し、ＴＭＢ（Ｓｉｇｍａ）基質を添加し、室温で５〜１０分間インキュベートした。Ｈ２ＳＯ４（ＬａｂＣｈｅｍ）により反応を停止させ、光学密度をマイクロプレートリーダーにより４５０ｎｍで測定した。コーティング抗原として可溶性ヒト、チンパンジー及びサイノモルガスＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃ組換えタンパク質を使用する第２ＥＬＩＳＡプロトコルも用いた。このアッセイにおいて、特異的ヒトＩｇＧの結合を、ペルオキシダーゼ標識ヒツジ抗ヒトカッパ抗体（Ｔｈｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＵＫ）により検出した。
【０３１１】
フローサイトメトリー：抗体力価、特異性、及び相対的結合親和性を、ヒトＩＬ−１０Ｒα安定ＣＨＯ−Ｋ１トランスフェクタント、ＥＬ−４トランスフェクタント、ＲＰＭＩ−８２２６細胞（ＡＴＣＣ、ＣＣＬ−１５５）又はヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用してフローサイトメトリー解析により決定した。細胞を染色バッファー：ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ＋０．０１％ＮａＮ３＋１０ｍＭ  ＥＤＴＡ中で１回洗浄し、その後２０μｇ／ｍｌウサギＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）により遮断し、血清、上清、精製抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体、又はアイソタイプ対照抗体中に５０μｌの最終容量で再懸濁した。細胞は、氷上で抗体により２０分間インキュベートし、染色バッファー中で２回洗浄し、その後抗ヒトＩｇＧ二次抗体に２０分間再懸濁させた。２つの異なる抗体を使用した。ヤギ抗ヒトＩｇＧビオチン（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）又は抗ヒトＩｇＧ  ＰＥ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）である。ビオチン化抗体を使用した場合は、抗体結合を、ストレプトアビジン−フィコエリトリン（ＳＡ−ＰＥ）による２０分間の標識付けにより検出した。ラット及びマウス抗ｈＩＬ−１０Ｒα抗体の結合は、複数のソース（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、及びＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）からのビオチン化又はＰＥ抱合抗ラット又は抗マウス抗体により検出した。細胞は次に、１回洗浄し、かつ１％パラホルムアルデヒドにより１０分間固定した。最終洗浄後、細胞を染色バッファー中で再懸濁し、かつＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）を使用して試料を得、Ｃｅｌｌｑｕｅｓｔ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）又はＦｌｏｗ  Ｊｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｃａｒｌｏｓ、ＣＡ）ソフトウェアを使用してデータを解析した。
【０３１２】
ＩＬ−１０ブロッキングアッセイ：抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体が細胞表面上の受容体へのＩＬ−１０の結合により遮断されたか決定するために、フローサイトメトリープロトコルを使用した。フローサイトメトリー解析において、ＲＰＭＩ−８２２６細胞を洗浄し、染色バッファー中に再懸濁し、かつ次にビオチン化ヒトＩＬ−１０又は負の対照のタンパク質（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により３０分間氷上でインキュベートした。抗ＩＬ−１０Ｒα抗体を、次に追加の３０分間、細胞に添加した。細胞を洗浄し、かつＰＥ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ）に抱合した抗ヒトＩｇＧにより３０分間インキュベートした。もう１回洗浄した後、細胞を１％パラホルムアルデヒドにより固定し、かつＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒ上で解析した。抗体結合中の折り畳み減少は、次式：折り畳み減少＝ＩＬ−１０不存在下での幾何平均蛍光強度／ＩＬ−１０存在下での幾何平均蛍光強度結合で、幾何平均蛍光強度を使用して決定した。
【０３１３】
抗ＩＬ−１０Ｒα抗体競合ＥＬＩＳＡ：抗体がヒトＩＬ−１０Ｒαの同じ「エピトープ」に結合するか決定するために、ＥＬＩＳＡプロトコルを使用した。ここで９６ウェル平底ＥＬＩＳＡプレートを、ヒト抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体１３６Ｃ５、１３６Ｃ８、１３６Ｄ２９、マウス抗ヒトＩＬ−１０Ｒα  ３７６０７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）又はラット抗ヒトＩＬ−１０Ｒα  ３Ｆ９（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）により炭酸バッファー中、２μｇ／ｍｌにて、１時間、３７℃でコーティングした。プレートを洗浄し、次にＰＢＳ／１％ＢＳＡ／Ｔｗｅｅｎ２０で遮断した。可溶性抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体を、ビオチン化組換えヒトＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃ融合タンパク質で３０分間、室温でプレインキュベートした。ｉｎ−ｈｏｕｓｅで生成したヒトＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃ融合タンパク質は、ＮＨＳ−ＰＥＯ４―ビオチン標識キット（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を製造業者の指示に従って使用してビオチン化した。抗体−ＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃ−ビオチンの組み合わせを、プレートに加え、かつ１時間、３７℃でインキュベートした。３回洗浄した後、結合したＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃ−ビオチンを、ストレプトアビジン−セイヨウワサビペルオキシダーゼ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ）により検出した。ＥＬＩＳＡは、上記のように完結した。阻害率は、各試料のＯＤを使用して次式：阻害率＝１００−［（実験試料ＯＤ／最大結合ＯＤ）＊１００］で決定した。
【０３１４】
ヒトＩＬ−１０Ｒα配列に由来するペプチドへの抗体結合を検出する方法：受容体のＩＬ−１０結合部位に含まれるべき、Ｒｅｉｎｅｋｅらが報告した（Ｒｅｉｎｅｋｅら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ  ７：９５１（１９９８））、ヒトＩＬ−１０Ｒαの細胞外ドメインに由来するペプチドへの抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体の結合を検出するために、複数の方法を使用した。次のアミド合成ペプチドを検査した：Ａｃ−ＹＨＳＮＧＹＲＡＲＶＲＡ−ＮＨ２、Ａｃ−ＴＶＴＮＴＲＦＳＶＤ−ＮＨ２、ＡＣ−ＳＩＦＳＨＦＲＥＹＥ−ＮＨ２、Ａｃ−ＧＮＦＴＦＴＨＫＫＶ−ＮＨ２、Ａｃ−ＳＶＡＳＲＳＮＫＧＭ−ＮＨ２（配列番号８１〜８５）。その上、次のビオチン化ペプチドを検査した：ビオチン−ＳＧＳＴＬＤＬＹＨＳＮＧＹＲＡＲＶＲＡＶＤＧ−ＮＨ２、ビオチン−ＳＧＳＴＹＳＩＦＳＨＦＲＥＹＥＩＡＩＲＫＶ−ＮＨ２（配列番号８６〜８７）。アミドペプチドは、Ａ＆Ａ  Ｌａｂｓ，ＬＬＣ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）で合成し、かつビオチン化ペプチドは、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）で、両方とも＞９５％純度で合成し、かつＤＭＳＯ中、２０ｍｇ／ｍｌにて再構成した。１つのアッセイデザインにおいて、ペプチドは、製造業者の指示に従って調製したニトロセルロース膜又はＰＶＤＦ膜に、ＰＢＳ中、５μｇ／スポットでスポットした。膜は、標準ウェスタンブロット法を使用して（例えば、Ｔｏｗｂｉｎら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ７６：４３５０（１９７９））、抗ＩＬ−１０Ｒα抗体でインキュベートした。天然ヒトＩＬ−１０Ｒａ：ｈＦｃ及び熱変性ヒトＩＬ−１０Ｒａ：ｈＦｃを、対照として膜に１μｇ／スポットで同様にスポットした。負の対照には、無関連ペプチド及びアイソタイプ対照を含んだ。１３６Ｃ５、１３６Ｃ８、１３６Ｄ２９、３Ｆ９及び３７６０７は、天然ヒトＩＬ−１０Ｒａ：ｈＦｃのみに結合した。いずれの抗体もスポットした変性タンパク質又はヒトＩＬ−１０Ｒａ細胞外ドメインに由来するペプチドのいずれか又は無関連ペプチドに結合しなかった。
【０３１５】
ＩＬ−１０Ｒα由来ペプチドへの抗ＩＬ−１０Ｒα抗体の結合を検出するために、複数のＥＬＩＳＡ法を同様に用いた。ビオチン化ＩＬ−１０Ｒα由来ペプチド（配列番号８６〜８７）を、ＴＢＳ／ＢＳＡ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０中で１μｇ／ｍｌに希釈し、かつエクストラビジン（Ｅｘｔｒａｖｉｄｉｎ）又はニュートラビジン（Ｎｅｕｔｒａｖｉｄｉｎ）でプレコーティングしたＥＬＩＳＡプレート（Ｐｉｅｒｃｅ）に２時間、室温で加えた。ＴＢＳ／ＢＳＡ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０により３回洗浄した後。精製抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体を、ＴＢＳ／ＢＳＡ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０中で希釈し、かつウェルに加えた。プレートを１時間、室温でインキュベートした。プレートを、３回、ＴＢＳ／ＢＳＡ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄し、かつペルオキシダーゼ抱合ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃγ特異的）、抗ラットＩｇＧ、又は抗マウスＩｇＧ検出抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）を添加した。室温での１時間のインキュベーション後、プレートを洗浄し、ＴＭＢ（Ｓｉｇｍａ）基質を添加し、室温で５〜１０分間インキュベートした。Ｈ２ＳＯ４（ＬａｂＣｈｅｍ）により反応を停止させ、光学密度は、マイクロプレートリーダーを使用して４５０ｎｍで測定した。一次抗体のないバックグラウンドを超えるウェルのＯＤ読み取りは、ペプチドへの抗体結合を示す。１３６Ｃ５、１３６Ｃ８、１３６Ｄ２９、３Ｆ９又は３７６０７は、このアッセイシステムにおいてＩＬ−１０Ｒα由来ペプチドのいずれにも結合しなかった。抗体は、正の対照のビオチン化組換えヒトＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃタンパク質を結合したのみであった。第２ＥＬＩＳＡにおいて、コーティングしたヒトＩＬ−１０Ｒαへの結合から、抗ＩＬ−１０Ｒα抗体を遮断する能力に関して、ＩＬ−１０Ｒαアミドペプチド（配列番号８１〜８５）を検査した。ペプチドは、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８、１３６Ｄ２９、３Ｆ９又は３７６０７により２００μｇ／ｍｌペプチド：０．１μｇ／ｍｌ抗体で３０分間、プレインキュベートした。次にペプチド抗体混合物をＩＬ−１０ＲαコーティングしたＥＬＩＳＡプレートに加えた。抗体結合を、種特異抗ＩｇＧ−ＨＲＰ二次抗体により検出した。いずれのＩＬ−１０Ｒα由来ペプチドも、コーティングしたＩＬ−１０Ｒαタンパク質への抗ＩＬ−１０Ｒα抗体の結合を減少させなかった。これらのデータは、本明細書に記載した抗体が、配列番号８１〜８７に記載した配列の直線状エピトープを結合しないことを証明している。ここに記載した条件を使用すると、以前Ｒｅｉｎｅｋｅら（Ｒｅｉｎｅｋｅら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ  ７：９５１（１９９８））が報告した３７０６０７の結合を確認できなかった。
【０３１６】
全血からのヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の精製：Ｓｃｒｉｐｐｓ  Ｇｒｅｅｎ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）での正常血液ドナープログラムにより１８〜５０歳の健康なドナーから全血を採取した。凝固を防ぐために、ヘパリンを加えた。人種、民族性、又は性別は指定しなかった。血液をＰＢＳで希釈し、その後Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐｌａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を下に敷いた。単核細胞を血清及び血小板から、１８００ＲＰＭの遠心分離によりブレーキをかけずに分離した。ＰＢＭＣを含有する界面を収集し、ＰＢＳにより２回洗浄した。
【０３１７】
ＴＮＦ−α強化アッセイ：ヒト、チンパンジー又はサイノモルガス末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、９６ウェル平底プレート中にウェル当たり４×１０５で、１０ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ）、及び３ｎｇ／ｍｌ（ヒト、チンパンジー）及び５ｎｇ／ｍｌ（サイノモルガス）の組換えヒトＩＬ−１０（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、並びに２００μｌの最終容量中で種々の濃度の抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体を使用し、又は使用せずに、プレーティングした。１％ヒトＡＢ血清（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、Ｓｏｌｏｎ、ＯＨ）を追加したＡＩＭ−Ｖ培地（Ｉｎｖｉｇｒｏｇｅｎ）を、培地として使用し、かつ細胞は２０時間及び４８時間、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。各時点からの試料を、−２０℃のフリーザー中に解析するまで保存した。ヒトＰＢＭＣ組換えサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）による幾つかの実験において、ＬＰＳ誘発ＴＮＦ−αを抑制するために、ＩＬ−１０（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、１０ｎｇ／ｍｌで使用した。
【０３１８】
ＮＫＴ細胞アッセイ：Ｒｏｇｅｒｓら（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ  ２８５：１９７（２００４））に記載の通り、α−ガラクトシルセラミド（ＫＲＮ７００、Ｋｉｒｉｎ  Ｐｈａｒｍａ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌｔｄ．（Ｋａｗａｎｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７８：１６２６（１９９７）、Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｓ  ７：５２９（１９９５））に特異的なヒトナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞株を生成し、ウェル当たり２×１０５細胞で、１×１０６全同種異系ＰＢＭＣ及び１００ｎｇ／ｍｌ  ＫＲＮ７０００により、抗ＩＬ−１０Ｒα抗体又は対照抗体の存在下、又は不存在下で、プレーティングした。１時間、３７℃でのインキュベーション後、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１０をウェルに加え、かつ細胞を、４８〜７２時間、３７℃で、５％ＣＯ２により培養した。４８及び７２時間で上清を除去し、かつサイトカイン産生を測定するために、サイトカイン特異的ＥＬＩＳＡを使用した。
【０３１９】
ＨＬＡ−ＤＲ発現の検出：１０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−１０の添加前の３０分間、１０μｇ／ｍｌの抗ＩＬ−１０Ｒα抗体により、ヒトＰＢＭＣを、１×１０６／ｍｌでインキュベートした。培地は、５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１％Ｌ−グルタミン、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、１％ＨＥＰＥＳ、及び０．１％β−メルカプトエタノールを追加した、ＲＰＭＩ−１６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）であった。５％ＣＯ２による３７℃での一晩のインキュベーション後、細胞は、標準方法を使用して、抗ＨＬＡ―ＤＲ−ＰＥ（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ、Ｍａｒｓｅｉｌｌｅｓ、Ｆｒａｎｃｅ）により標識を付された。ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒでのフローサイトメトリー解析により染色を検出した。Ｃｅｌｌ  Ｑｕｅｓｔ又はＦｌｏｗ  Ｊｏソフトウェアを使用して、平均蛍光強度（ＭＦＩ）を決定した。
【０３２０】
ＳＴＡＴ３リン酸化の検出：ヒトＰＢＭＣは、ＲＰＭＩ−１６４０培地中で１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、１％Ｌ−グルタミン、１％ＨＥＰＥＳを含有する培地中で１×１０７／ｍｌに希釈した。３７℃で１５分間、３ｕｇ／ｍｌから始めて、滴定した抗ＩＬ−１０Ｒα又は対照抗体の存在下、又は不存在下で、１０ｎｇ／ｍｌでＩＬ−１０により細胞を処理した。未処理細胞も対照として含めた。ＩＬ−１０の不存在下で０，１５又は３０分間、抗体を架橋させるために、試料の断片を、抗ＩＬ−１０Ｒαと、ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）により処理した。試料を氷に移動させることにより刺激を停止させた。次にＮＰ−４０溶解バッファー：１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ  ｐＨ８．０、１％ＮＰ−４０（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、１Ｘプロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）を使用してｄＨ２Ｏ中に細胞を溶解させ、かつ均質化した。タンパク質標準としてウシガンマグロブリン（Ｐｉｅｒｃｅ）及びＢｉｏＲａｄのローリー試薬液によるローリー法を使用して、タンパク質濃度を決定した。おおよそ１５ｕｇの溶解物試料を４〜２０％トリスグリシンＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に流し込み、ＰＶＤＦ膜（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に移動させ、かつ抗ホスホＳＴＡＴ３及び抗ＳＴＡＴ３（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｎｖｅｒｓ、ＭＡ）により調査した。標準ウェスタンブロッティングのプロトコルを使用して、抗ウサギＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）及びＥＣＬ試薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）により、抗体結合を検出した。
【０３２１】
サイトカインＥＬＩＳＡ：ここで９６ウェル平底ＥＬＩＳＡプレートを、炭酸バッファーにおいて、それぞれ２μｇ／ｍｌ又は１μｇ／ｍｌで抗ヒトＴＮＦ−α（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）又は抗ＩＦＮ−γ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）により一晩、コーティングした。翌日、プレートをＥＬＩＳＡ洗浄バッファー（１×ＰＢＳと、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）中で３回洗浄した。プレートを、ドライブロッティングし、かつ２５０μｌのブロッキングバッファー（１×ＰＢＳと、１％ＢＳＡ）により３０分間室温でインキュベートした。試料を解凍し、かつ５０μｌを、組換えヒトＴＮＦ−α（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）又は組換えヒトＩＦＮ−γ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）標準希釈物と共に９６ウェルプレートに加え、同じものを２つ作製した（ｉｎ  ｄｕｐｌｉｃａｔｅ）。３回洗浄した後、それぞれ１ｕｇ／ｍｌ又は０．５μｇ／ｍｌのビオチン化抗ヒトＴＮＦ−α又は抗ヒトＩＦＮ−γ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を１時間ＲＴでインキュベートした。プレートを３回洗浄し、かつ次に１：２０００のストレプトアビジン−セイヨウワサビペルオキシダーゼ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ）を３０分間ウェルに加えた。３回の洗浄後、１００μｌ  ＴＭＢ基質を３〜１０分間加えた。５０μｌ  Ｈ２ＳＯ４により反応を停止させ、かつ４５０ｎｍでプレートを直ちに読み取った。Ｓｏｆｔｍａｘ  Ｐｒｏソフトウェアを使用して、標準曲線に基づき、分泌したサイトカインの量を計算するために、実験試料の光学密度（ＯＤ）を使用した。
【０３２２】
（実施例２）
本実施例には、ＩＬ−１０Ｒαに結合する典型的な抗体の記載を含む。
【０３２３】
ヒト抗ＩＬ−１０Ｒα抗体遺伝子の単離：それぞれ１３６Ｃ５（ＩｇＧ１）、１３６Ｃ８（ＩｇＧ２）又は１３６Ｄ２９（ＩｇＧ４）抗体を産生する培養ハイブリドーマ細胞（１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９）を遠心分離により収集した。ＲＮｅａｓｙ  ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ  Ｉｎｃ．、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を製造業者の指示に従い使用して、これらの細胞から全ＲＮＡを精製した。全ハイブリドーマ細胞ＲＮＡの免疫グロブリン遺伝子の可変領域をコードするｃＤＮＡのクローニングにはＳＭＡＲＴ  ＲＡＣＥ  ｃＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ．、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）及び逆転写酵素ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）を使用した。簡潔には、第１鎖ｃＤＮＡは、２μｇのＲＮＡから逆転写酵素により調製した。このｃＤＮＡをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）のテンプレートとして使用して、重鎖及び軽鎖の可変領域と定常領域の一部（それぞれ「ＨＶ」及び「ＬＶ」）を増幅した。増幅した配列にはリーダー配列も含めた。反応物は次の通りであった：１Ｕ  ＫＯＤ  Ｈｏｔ  Ｓｔａｒｔ  ＤＮＡ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（ＥＭＤ、Ｎｏｖａｇｅｎ  Ｂｒａｎｄ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）、０．２μＭ  ３’  Ｐｒｉｍｅｒ［重鎖の場合：ＩｇＧ１ｐ、軽鎖の場合：ｈｋ５（表１）、５’末端にＩＸ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｐｒｉｍｅｒ  Ｍｉｘ  Ａ（ＵＭＰ  ｐｒｉｍｅｒ  Ｍｉｘ  Ａは、ＳＭＡＲＴ  ＲＡＣＥ  Ｋｉｔに含まれる）、２００μＭ  ｄＮＴＰ  ｍｉｘ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ＫＯＤ  Ｈｏｔ  Ｓｔａｒｔ  Ｂｕｆｆｅｒ（最終濃度は、１×である）、及びｃＤＮＡテンプレート。温度サイクリングプログラムは、１サイクルの９４℃×４分：３５サイクルの：９４℃×３０秒、５５℃×３０秒、６８℃×１．５分であり、その後に７２℃×７分の伸張が続いた。
【０３２４】
増幅したＤＮＡ断片は、アガロースゲル電気泳動により収集し、ＱＩＡｑｕｉｃｋ  Ｇｅｌ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、Ｇｅｒｍａｎｙ）により精製した。ＨＶ及びＬＶの精製ＤＮＡ断片を、Ｚｅｒｏ  Ｂｌｕｎｔ  ＴＯＰＯ  ＰＣＲ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｋｉｔを使用してＰＣＲ  ＢｌｕｎｔＩＩ−ＴＯＰＯベクターに組み込み、各構成体プラスミドを大腸菌に形質転換した後、クローニングした。構成体プラスミド中の各インサート（ＨＶ及びＬＶ）のヌクレオチド配列を、特定のプライマー（Ｍ１３Ｆ、Ｍ１３Ｒ、表１）を使用して解析した。ＨＶ及びＬＶから得られた配列に基づき、１３６Ｃ５  ＶＨ（１３６Ｃ５Ｈ＿Ｆ、１３６Ｃ５Ｈ＿Ｒ）及びＶＬ（１３６Ｃ５Ｈ＿Ｒ、１２ｋｌリバースＢｓｉＷＩ）、１３６Ｃ８  ＶＨ（１３６Ｃ８Ｈ＿Ｆ、１３６Ｃ５Ｈ）及びＶＬ（１３６Ｃ５Ｋ１＿Ｆ、１２ｋｌリバースＢｓｉＷＩ）、又は１３６Ｄ２９  ＶＨ（１３６Ｄ２９Ｈ＿Ｆ、１４ｈｌリバースＮｈｅｌ）及びＶＬ＃１（１３６Ｃ５Ｋ１＿Ｆ、１３６Ｄ２９Ｋ１＿Ｒ）、及びＶＬ＃２（１３６Ｄ２９Ｋ２＿Ｆ、１３６Ｄ２９Ｋ１＿Ｒ）を増幅するように、オリゴヌクレオチドプライマー（表２）を設計した。
【０３２５】
ＫＭ  ｍｉｃｅ（商標）の性質のために、複数のカッパ鎖遺伝子を再配列でき、かつ単一のＢ細胞中に発現させることができる。これが、１３６Ｄ２９ハイブリドーマのケースであった。２つのカッパ鎖遺伝子を、クローニングした。単一の重鎖と対になった２つの潜在的カッパ鎖を有する組換え抗体を生成し、かつ正しい軽鎖遺伝子、１３６Ｄ２９軽鎖＃２を正しいカッパ鎖として同定し、かつ１３６Ｄ２９重鎖と対にし、ヒトＩＬ−１０Ｒα特異性を有する抗体を得た。
【０３２６】
Ｋａｂａｔ法を使用してＣＤＲを定義した。ＢＬＡＳＴ（ＮＣＢＩウェブサイト、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｇｂｌａｓｔ／）によりＣＤＲ−１及びＣＤＲ−２を自動的に同定し、かつ次のＫａｂａｔの法則を使用して手動解析によりＣＤＲ−３を同定した。ＣＤＲ−Ｈ３は、長さ３〜２５のアミノ酸であり、ＣＤＲ−Ｈ２の後の正確に３３残基から始まり、かつ先行するアミノ酸は、常にシステインで、その後に２つのアミノ酸が続き、概して配列は、システイン−アラニン−アルギニンであり、ＣＤＲ−Ｈ３の末端には、常に配列トリプトファン、グリシン、いずれかのアミノ酸、グリシンが続く。ＣＤＲ−Ｌ３は、長さ７〜１１の残基であり、常にシステインである、ＣＤＲ−Ｌ２の末端の後の３３残基から常に始まり、ＣＤＲ−Ｌ３の末端には、フェニルアラニン−グリシン−いずれかのアミノ酸−グリシンが常に続く。１３６Ｃ５、１３６Ｃ８及び１３６Ｄ２９のＶＨ及びＶＬ  ＣＤＲ１及びＣＤＲ２配列は、ＮＣＢＩ  Ｉｇ  ＢＬＡＳＴを使用して、ヒトＶＨ及びＶＬ遺伝子のゲノム配列と比較した。ヒト抗ヒトＩＬ−１０Ｒα  ＶＨ及びＶＬと、生殖細胞系アミノ酸配列との間のアミノ酸配列の変化を同定し、下記配列中に書き留めた。ＣＤＲ３配列は、ＶＨの場合に可変、多様性及び接合遺伝子セグメントから、かつＶＬに関して可変及び接合遺伝子セグメントから生じる。それ故に、この領域は挿入及び欠失を起こしやすく、かつ生殖細胞系配列と比較できない。
【０３２７】
１３６Ｃ５重鎖可変領域（ＶＨ）のｃＤＮＡのヌクレオチド配列（開始コドン（ＡＴＧ）から可変領域の末端まで）。ＣＤＲ配列は、太字の文字列である。配列番号２３
【０３２８】
2011524741.tif 000025
【０３２９】
１３６Ｃ５軽鎖可変領域（ＶＬ）のｃＤＮＡのヌクレオチド配列（開始コドン（ＡＴＧ）から可変領域の末端まで）。ＣＤＲ配列は、太字の文字列である。配列番号２４
【０３３０】
2011524741.tif 000026
【０３３１】
１３６Ｃ８重鎖可変領域（ＶＨ）のｃＤＮＡのヌクレオチド配列［開始コドン（ＡＴＧ）から可変領域の末端まで］。ＣＤＲ配列は、太字の文字列である。配列番号２５
【０３３２】
2011524741.tif 000027
【０３３３】
１３６Ｃ８軽鎖可変領域（ＶＬ）のｃＤＮＡのヌクレオチド配列［開始コドン（ＡＴＧ）から可変領域の末端まで］。ＣＤＲ配列は、太字の文字列である。配列番号２６
【０３３４】
2011524741.tif 000028
【０３３５】
１３６Ｄ２９重鎖可変領域（ＶＨ）のｃＤＮＡのヌクレオチド配列［開始コドン（ＡＴＧ）から可変領域の末端まで］。ＣＤＲ配列は、太字の文字列である。配列番号２７
【０３３６】
2011524741.tif 000029
【０３３７】
１３６Ｄ２９軽鎖＃２可変領域（ＶＬ２）のｃＤＮＡのヌクレオチド配列［開始コドン（ＡＴＧ）から可変領域の末端まで］。ＣＤＲ配列は、太字の文字列である。配列番号２８
【０３３８】
2011524741.tif 000030
【０３３９】
１３６Ｃ５重鎖可変領域（ＶＨ）のｃＤＮＡのアミノ酸配列［リーダー配列（斜字）及び可変領域。］ＣＤＲ配列は、太字の文字列であり、かつ生殖細胞系配列からの変化には下線を引いた。配列番号２９
【０３４０】
2011524741.tif 000031
【０３４１】
１３６Ｃ５カッパ軽鎖可変領域（ＶＬ）のｃＤＮＡのアミノ酸配列［リーダー配列（斜字）及び可変領域。］ＣＤＲ配列は、太字の文字列であり、かつ生殖細胞系配列からの変化には下線を引いた。配列番号３０
【０３４２】
2011524741.tif 000032
【０３４３】
１３６Ｃ８重鎖可変領域（ＶＨ）のｃＤＮＡのアミノ酸配列［リーダー配列（斜字）及び可変領域。］ＣＤＲ配列は、太字の文字列であり、かつ生殖細胞系配列からの変化には下線を引いた。配列番号３１
【０３４４】
2011524741.tif 000033
【０３４５】
１３６Ｃ８カッパ軽鎖可変領域（ＶＬ）のｃＤＮＡのアミノ酸配列［リーダー配列（太字）及び可変領域。］ＣＤＲ配列は、太字の文字列であり、かつ生殖細胞系配列からの変化には下線を引いた。配列番号３２
【０３４６】
2011524741.tif 000034
【０３４７】
１３６Ｄ２９重鎖可変領域（ＶＨ）のｃＤＮＡのアミノ酸配列［リーダー配列（太字）及び可変領域。］ＣＤＲ配列は、太字の文字列であり、かつ生殖細胞系配列からの変化には下線を引いた。配列番号３３
【０３４８】
2011524741.tif 000035
【０３４９】
１３６Ｄ２９カッパ軽鎖＃２可変領域（ＶＬ２）のｃＤＮＡのアミノ酸配列［リーダー配列（太字）及び可変領域。］ＣＤＲ配列は、太字の文字列であり、かつ生殖細胞系配列からの変化には下線を引いた。配列番号３４
【０３５０】
2011524741.tif 000036
【０３５１】
１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９  ＶＨ及びＶＬを、ＩｇＧ４ＰＥ発現ベクターにクローニングした。簡潔には、５’−ＳａｌＩ及び３’−ＮｈｅＩ制限酵素認識部位を含有するオリゴヌクレオチドプライマーは、ＰＣＲにより重鎖（ＶＨ）の可変領域を増幅するように設計した。ＰＣＲは、テンプレートとしてｐＴｏｐｏＣ５ＶＨ  ｍｉｎｉｐｒｅｐ  ＤＮＡ、プライマー（表２）として１３６Ｃ５Ｈ＿Ｆ及び１３６Ｃ５Ｈ＿Ｒを使用して、ＫＯＤ  Ｈｏｔ  Ｓｔａｒｔ  ＤＮＡ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅにより実行した。ＮｈｅＩ及びＳａｌＩによるＰＣＲ産物の消化後、４２４ｂｐ断片を、ＮｈｅＩ及びＳａｌＩ（８．９キロベースＤＮＡ断片）により前消化させたＩｇＧ４ＰＥ発現ベクターｐＮ５ＫＧ４ＰＥ−Ｌａｒｋ（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、米国特許第６，００１，３５８号）にサブクローニングした。制限消化産物により重鎖（ＶＨ）の可変領域の存在を解析し、かつＤＮＡ配列決定により確認した。
【０３５２】
第２ステップとして、次のように、Ｎ５ＫＧ４ＰＥ  Ｌａｒｋ−ＶＨベクターにＶＬを挿入した：２つのＤＮＡ制限酵素、ＢｇｌＩＩ及びＢｓｉＷＩによりＤＮＡベクターを消化させた。９．１ｋｂ  ＤＮＡ断片を単離した。重鎖構成体と同様に、ＶＬのＰＣＲのプライマーセットは、５’ＢｇｌＩＩ及び３’ＢｓｉＷｉの認識部位を含有するように設計した。これらのプライマー（表２）、１３６Ｃ５Ｋ１＿Ｆ及び１２ｋｌリバースＢｓｉＷＩを使用し、ｐＴｏｐｏＣ５ＶＬ  ｍｉｎｉｐｒｅｐ  ｐｌａｓｍｉｄ  ＤＮＡからＶＬを増幅した。ＰＣＲ産物を、ＢｇｌＩＩ及びＢｓｉＷＩにより消化させ、かつアガロースゲル電気泳動及びゲル精製により単離した。Ｃ５ＶＬを含有するこの断片は、Ｔ４  ＤＮＡリガーゼにより調製した９．１ｋｂベクターにライゲーションし、かつＴｏｐ１０細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を形質転換するために使用した。陽性大腸菌形質転換細胞を選択した。この発現ベクター、ｐＮ５ＫＧ４ＰＥ１３６Ｃ５を精製し、かつＣ５ＶＬ及びＣ５ＶＨ領域両方の存在を制限解析により確認した。
【０３５３】
組換え１３６Ｃ５Ｇ４ＰＥ及び１３６Ｄ２９Ｇ４ＰＥ抗体を生成するためのベクター作製を、同じ方法により実行した。結果として生じたベクター、ｐＮ５ＫＧ４ＰＥ１３６Ｃ８及びｐＮ５ＫＧ４ＰＥ１３６Ｄ２９ｋｌ、及びｐＮ５ＫＧ４ＰＥ１３６Ｄ２９ｋ２を制限酵素消化産物及び配列決定により確認した。
【０３５４】
これらの組換え抗体は、セリン２２８をプロリン（Ｓ２２８Ｐ）と置き換えたヒトＩｇＧ４アイソタイプの変異体である。ＩｇＧ４のこのＦｃ領域の変化は、ｈＩｇＧ４に関して観察された不均質を減少させ、かつ血中半減期を延長する（Ａｎｇａｌら、Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３０：１０５（１９９３））。ロイシン２３５をグルタミン酸（Ｌ２３５Ｅ）と置き換える第２の突然変異は、残留ＦｃＲ結合及び相補的結合活性を除去する（Ａｌｅｇｒｅら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８：３４６１（１９９２））。両方の突然変異を有する結果として生じた抗体を、ＩｇＧ４ＰＥと称する。ｈＩｇＧ４アミノ酸のナンバリングは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版（１９９１）に由来する。
【０３５５】
【表２】
2011524741.tif 000037
【０３５６】
２９３Ｆ細胞からの組換えヒト抗ｈＩＬ−１０Ｒα抗体の産生：３７℃で８％ＣＯ２加湿インキュベーターにおいて約１２０ｒｐｍ／ｍｉｎで震盪させながら、２９３Ｆ細胞の懸濁培養を、Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ  ２９３発現培地中で維持した。組換え抗体の一時的発現として、３×１０７  ２９３Ｆ細胞を、２９３−ｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃｏｒｐ）を製造業者の指示に従って使用して、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８又は１３６Ｄ２９抗ｈＩＬ−１０Ｒα抗体の組換えＩｇＧ４ＰＥバージョンをコードする、３０μｇの各プラスミドにより、トランスフェクトした。トランスフェクタントは、通常成長条件下で７日間、３０ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ  ２９３発現培地における懸濁液中で増殖することができた。増殖培地を採取し、かつ３００×ｇの速度で遠心分離により細胞を除去し、続いて０．２２μｍフィルタによる濾過を行った。この非精製材料中に存在する抗体濃度は、ｈＩｇＧ定量ＥＬＩＳＡにより決定し、かつｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイに使用され、サブクラススイッチ抗体の機能特性を評価する。
【０３５７】
（実施例３）
本実施例には、ＩＬ−１０Ｒαに結合するヒトモノクローナル抗体の特徴付けの記載を含む。
【０３５８】
ＲＩＢＩ中で可溶性組換えｈＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃによりＫＭ  ｍｉｃｅ（商標）に免疫を付与した。マウスの数匹は、ヒトＩｇＧＩＬ−１０Ｒα特異的力価の範囲で抗ヒトＩＬ−１０Ｒα特異性抗体を引き起こした。最高応答者からの脾細胞を骨髄腫細胞と融合して、ヒト抗ヒトＩＬ−１０Ｒα産生ハイブリドーマを発生させた。抗ＩＬ−１０Ｒα抗体の産生は、ＥＬＩＳＡ及びフローサイトメトリーの両方によりそれぞれ組換え可溶性ｈＩＬ−１０Ｒα及びＣＨＯ−ｈＩＬ−１０Ｒαトランスフェクタントを使用して決定した。陽性ハイブリドーマを制限希釈によりクローニングして、モノクローナルハイブリドーマを得た。ヒトＩＬ−１０Ｒαに対する相対結合親和性、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで受容体に結合するヒトＩＬ−１０により遮断される能力、互いの競合、非ヒト霊長類ＩＬ−１０Ｒαとの交差反応性、及びｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＩＬ−１０の中和に関して、３つのヒト抗体を更に特徴付けした。これらの抗体も、市販された抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体、３Ｆ９（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＳＰＭ４６６（Ｓｐｒｉｎｇ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及び３７６０７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）と比較した。
【０３５９】
【表３】
2011524741.tif 000038
【０３６０】
抗体１３６Ｃ５、１３６Ｃ８及び１３６Ｄ２９は全て、ヒト末梢血中に見出される単球及びリンパ球上で発現されるヒトＩＬ−１０Ｒαに特異的に結合した。結合は、可溶性ヒトＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃによるプレインキュベーションによって阻害できた（図１）。これらヒト抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体は、飽和可能であり、かつ各抗体のＫＤ及び最大結合（ＢＭＡＸ）は、ＥＬＩＳＡプレート上にコーティングした組換えヒトＩＬ−１０Ｒαに結合するために必要である抗体の量を滴定することにより決定した（図２Ａ及び表３）。ヒトＢ細胞株ＲＰＭＩ−８２２６及びフローサイトメトリーに基づくアッセイを使用して、これらの結果を確認した（図２Ｂ）。この細胞株への３７６０７の結合は、アイソタイプ対照染色の上で辛うじて検出可能である。１３６Ｃ５、１３６Ｃ８、１３６Ｄ２９及び３Ｆ９の相対結合親和性は、互いに著しく異ならず、全てが、ＥＬＩＳＡ中で３７６０７よりも約３倍高い相対結合親和性を示した。第３の市販の抗体、ＳＰＭ４６６の結合は、両方のアッセイにおいて、３Ｆ９に非常に類似している。ＫＤ値は、半値結合（ＥＣ５０）の有効濃度と等しく、かつＥＬＩＳＡ中のＳ字形用量反応の非線形回帰解析、及び次の式を使用するフローサイトメトリーアッセイによって決定した。Ｙ＝ボトム＋（トップ−ボトム）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＥＣ５０−Ｘ））。Ｘは濃度の対数である。Ｙは、応答である。Ｙは、ボトムで開始し、かつＳ字形によりトップに行く（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ４  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）。ＢＭＡＸは、個別の抗体に関して観察された最高ＯＤ又は幾何平均蛍光強度（ｇｅｏ  ｍｅａｎ）である。最大結合は、抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体を検出するために使用する二次活性のソース及びロットに応じて可変であり得る。
【０３６１】
ＲＰＭＩ−８２２６細胞により発現するＩＬ−１０Ｒに結合する組換えＩＬ−１０は、抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体の結合を減少させる（図３Ａ）。抗体結合の減少は、全ての検査した抗体に関して同様であった。図３Ｂは、ＲＰＭＩ−８２２６細胞へのＩＬ−１０の結合を例示する。ＩＬ−１０による結合中の折り畳み減少（表３）はＩＬ−１０不存在下の抗体結合のｇｅｏ  ｍｅａｎを、ＩＬ−１０存在下のｇｅｏ  ｍｅａｎで割ることによって決定した。これらのデータは、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８、１３６Ｄ２９及び３Ｆ９が、ＩＬ−１０結合部位内の配列を認識することを示している。飽和量のＩＬ−１０を使用しなかったので、ＩＬ−１０による抗体結合の遮断は、完全でなかった。
【０３６２】
幾つかの一塩基多型（ＳＮＰ）は、ヒトＩＬ−１０Ｒαの細胞外ドメインで同定された（Ｇａｓｃｈｅら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７０：５５７８（２００３））。ヒトＩＬ−１０Ｒαのアミノ酸配列に変化をもたらすＳＮＰは、抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体の結合に影響を及ぼす可能性を有する。この可能性は、アミノ酸の変化をもたらす各細胞外ヒトＩＬ−１０Ｒα  ＳＮＰ変異体（配列番号６３、６４、６５、６７、６９、７２）の組換えＦｃ融合タンパク質を生成し、かつＥＬＩＳＡによりＩＬ−１０及び抗ＩＬ−１０Ｒα抗体への結合を検査することによって評価した（図１２）。変異体Ｓ１５９Ｇ（配列番号６７）へのＩＬ−１０結合は、以前報告されたように（Ｇａｓｃｈｅら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７０：５５７８（２００３））、減少した。全変異体への１３６Ｃ５、１３６Ｃ８、１３６Ｄ２９、３Ｆ９、及びＳＰＭ４６６の結合は、コンセンサスヒトタンパク質への結合と同様、３７６０７よりも高い。１３６Ｃ８は、ＩＬ−１０Ｒα変異体Ｒ２１２Ｅ（配列番号６９）に対する１３６Ｄ２９、３Ｆ９、ＳＰＭ４６６及び３７６０７結合よりも著しく良好なＩＬ−１０Ｒα変異体Ｒ２１２Ｅ（配列番号６９）に対する結合を示す。これらの結果は、他の記載した抗体と比較した、抗体１３６Ｃ８の独特な結合を証明し、かつ１３６Ｃ８のような、Ｒ２１２Ｅに結合する抗体の治療上の使用が更に広い集団をカバーすることを証明している。Ｌ６１Ｉ（配列番号６３）及びＶ２３３Ｍ（配列番号７１）変異体への個別の抗体結合は、検査した全ての抗体に関して、コンセンサスヒトＩＬ−１０Ｒαへの結合と同様である。Ｖ１１３Ｉ（配列番号６５）及びＩ２２４Ｖ（チンパンジー）（配列番号６）への３Ｆ９結合は、１３６Ｃ８及び１３６Ｄ２９と比較して減少している。これらの変化は、これらのデータが３Ｆ９の結合を検出するために様々なロットの抗ラットＩｇＧを使用した図７Ａと異なるので、様々なアッセイ中で３Ｆ９を検出するために使用した様々な二次抗ラット抗体の性質に起因する。
【０３６３】
（実施例４）
本実施例には、クロスブロック試験の記載を含む。
【０３６４】
どれほど多くの抗体反応性又はエピトープがこのパネルの抗体により認識されるを決定する手段として、抗体が可溶性ヒトＩＬ−１０Ｒαへの結合に関して互いに競合するかを決定するために、抗体をＥＬＩＳＡにより評価した。互いの結合を完全に（＞７０％、グループＩ）、部分的に（＞５０％〜＜７０％、グループＩＩ）、又は僅かに（＜５０％、グループＩＩＩ）阻害する抗体の能力によって、３つのエピトープグループ（グループＩ、ＩＩ及びＩＩＩ）を同定した（図４、表４）。この基準を使用すると、１３６Ｃ５及び１３６Ｃ８は、同じグループ（Ｉ）にある。１３６Ｄ２９は、１３６Ｃ５及び１３６Ｃ８に密接に関係するが、１３６Ｄ２９の結合が他の抗体によって僅かに影響を受けるのみであることにおいて異なる（グループＩＩ）。市販の抗体３Ｆ９は、第３のエピトープに結合する（グループＩＩＩ）。この方法によるＳＰＭ４６６のエピトープグループへの割り当ては、困難である。他の抗体を遮断するその能力は、部分的に遮断する３Ｆ９に類似するが、ＳＰＭ４６６結合は、全ての他の抗体によって阻害される。１３６Ｃ５、１３６Ｃ８及び１３６Ｄ２９による遮断は、立体障害に起因するかもしれない。抗体３７６０７のエピトープグループへの割り当ては、その明らかに低い親和性により困難である。ＩＬ−１０Ｒαへの抗体３７６０７の結合は、ここで検査した全ての抗体により完全に遮断されるが、３７６０７は、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８、１３６Ｄ２９及び３Ｆ９抗体の結合に部分的又は僅かにのみ影響を与えた。ＳＰＭ４６６の完全な遮断は、共有又は重複エピトープを示唆している。
【０３６５】
エピトープは、この実験的アプローチにおいて抗体結合に影響を及ぼし得る唯一のパラメーターではなく、ｈＩＬ−１０Ｒαに対する抗体の親和性及び結合活性が、結合に対していかに抗体が互いに競合するか、ということに影響を及ぼす。この一例は、３７６０７が、ヒトＩＬ−１０Ｒに対して比較的低い結合親和性を有することであり（図２及び表３）、このアッセイにおいて３７６０７は、ヒト抗ヒトＩＬ−１０Ｒ抗体によって著しく阻害されるが、それにもかかわらずヒト抗ＩＬ−１０Ｒα抗体の結合に部分的又は僅かにのみ影響を及ぼすだけである。その上、近接又は重複配列への抗体の結合に起因する立体障害も競合に繋がり、このことは、ＩｇＧ４のようなある種のアイソタイプが他のものよりも柔軟であるので、抗体の部分配列によっても影響を及ぼされ得る。ＩＬ−１０Ｒαタンパク質のＩＬ−１０結合部位は、マッピングされた（Ｒｅｉｎｅｋｅら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ  ７：９５１（１９９８））。論文において、Ｒｅｉｎｅｋｅらは、三次元ＩＬ−１０結合部位を形成し、かつ３７６０７抗体が２〜５のペプチドに結合する、５つの非隣接ペプチドから、ＩＬ−１０Ｒα上のＩＬ−１０結合部位が構成されることを記載している。Ｒｅｉｎｅｋｅらが記載したように、ここに記載されたヒト抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体が、３７６０７によって認識される２つのペプチドの一方のみに結合するならば、我々のアッセイにおいて３７６０７の結合を減少させるであろう。このモデルは、抗体が互いに競合し得るが、まさしく同じ結合部位を共有しないことを示唆している。Ｒｅｉｎｅｋｅらが記載したＩＬ−１０ＲαのＩＬ−１０結合部位に重複するペプチドへの３７６０７及び１３６Ｃ８の結合を検査するために、我々はＥＬＩＳＡ及びドットブロット法を使用した。我々が用いた方法では、ＩＬ−１０Ｒαの報告されたＩＬ−１０結合部位を含むペプチド（配列番号８１〜８７）のいずれかに対する市販の抗体３７６０７の結合に関するＲｅｉｎｅｋｅのデータを確認できなかった。我々は、これらのペプチドへの１３６Ｃ５、１３６Ｃ８、１３６Ｄ２９又は３Ｆ９の結合も検出しなかった。更に、我々のデータは、ドットブロット及びウェスタンブロット解析により証明されたように、これらの抗体が天然タンパク質のみを認識し、還元又は変性ＩＬ−１０Ｒαを認識しないことを証明している。これらの結果は、本明細書に開示した典型的な抗体１３６Ｃ５、１３６Ｃ８及び１３６Ｄ２９が、立体構造エピトープを認識し、直線状エピトープを認識しないことを証明している。
【０３６６】
【表４】
2011524741.tif 000039
【０３６７】
（実施例５）
本実施例には、ヒト抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ機能解析の記載を含む。
【０３６８】
抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ中和活性を研究するために、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、リポ多糖類（ＬＰＳ）で処理して、ＴＮＦ−αの分泌を誘発した。組換えヒトＩＬ−１０の添加は、ＴＮＦ−α分泌を遮断する。培養物への抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体の添加が、ＴＮＦ−α分泌を修復又は強化するのであれば、抗体は、ＩＬ−１０中和活性を有すると考えられる。このことは、ヒト及び市販の抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体に関して観察された（図５）。２０（図５）及び４８時間の時点で、１３６Ｃ５、１３６Ｃ８、１３６Ｄ２９、３Ｆ９及びＳＰＭ４６６（図示せず）は全て、同様の用量反応によりＬＰＳ及びＩＬ−１０で処理したＰＢＭＣからのＴＮＦ−α分泌を強化した。マウス抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体３７６０７は、効果が低かったが、なおもＩＬ−１０を中和した（すなわち、阻害、減少、拮抗、防止又は遮断した）。ＬＰＳで処理したＰＢＭＣも、ＩＬ−１０を産生し、かつ４８時間にこの量の内因性ＩＬ−１０は、ＴＮＦ−α分泌を減少させる。抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体は、内因性ＩＬ−１０の存在下、かつ外因性ＩＬ−１０の存在下でＴＮＦ−α分泌を効果的に強化した。ＰＢＭＣのＬＰＳ処理も、ＩＬ−１０の添加によって抑制されるＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−６及びＩＬ−１βの産生を誘発した。１３６Ｃ５、１３６Ｃ８、１３６Ｄ２９、３Ｆ９、ＳＰＭ４６６及び３７６０７によるＩＬ−１０の中和（すなわち、阻害、減少、拮抗、防止又は遮断）は、ＴＮＦ−αの修復に関して観察されたものと同様の有効性で、ＬＰＳ処理ＰＢＭＣからＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−６及びＩＬ−１βの産生を修復した。これらの結果は、外因性ＩＬ−１０の存在下でＩＮＦＮ−γ分泌及びＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１βの産生を強化する、本発明の抗体の能力を証明し、その結果は、免疫応答を上昇させた。
【０３６９】
ＩＬ−１０は、活性化Ｔ細胞によるサイトカイン産生を減少させる免疫抑制剤として記載された（ｄｅ  Ｗａａｌ  Ｍａｌｅｆｙｔら、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７４：１２０９（１９９１）、Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｏら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４６：３４４４（１９９１）、Ｍａｔｓｕｄａら、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８０：２３７１（１９９４））。ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞は、ＣＤ５６及びＣＤ１６１のようなＮＫセルマーカーを発現するＴ細胞のサブセットである。末梢血中の約１０〜２５％のヒトＴ細胞は、ＮＫ細胞マーカーを発現する（Ｌａｎｉｅｒら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５３：２４１７（１９９４）、Ｋｒｏｎｅｎｂｅｒｇ、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３：８７７（２００５））。ＮＫＴ細胞集団中に、Ｔ細胞受容体のＶα２４鎖を発現する、非常に小さい細胞のサブセット、０．０１〜０．５％が存在する。これらの不変ＮＫＴ細胞は、合成糖脂質、α−ガラクトシルセラミドにより活性化され、かつその存在下で膨張する（Ｋｉｒｉｎ  Ｂｒｅｗｅｒｙ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．（Ｋａｗａｎｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７８：１６２６（１９９７）、Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｓ  ７：２５９（１９９５））により最初に発見されたＫＲＮ７０００としても知られている）。抗原提示細胞上で発現されるＣＤ１ｄに結合したＫＲＮ７０００を有するヒトＮＫＴ細胞株の刺激は、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４及びＩＬ−５のような大量のサイトカイン分泌をもたらし、かつＫＲＮ７０００を提示する標的細胞に対して細胞毒性を誘発する。ＩＬ−１０は、これら不変ＮＫＴ細胞からのサイトカイン分泌を阻害する。
【０３７０】
Ｒｏｇｅｒｓら（Ｒｏｇｅｒｓら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ  ２８５：１９７（２００４））が以前記載したＮＫＴ細胞株を使用して、ＩＬ−１０のこの機能を中和するヒトＩＬ−１０Ｒαの能力を研究した。ＩＬ−１０の存在下、又は不存在下で抗原ＫＲＮ７０００及び同種異系ＰＢＭＣよりＮＫＴ細胞株を刺激した。抗原刺激は、２４及び４８時間でＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの分泌をもたらし、かつＩＬ−１０により阻害された。１３６Ｃ５、１３６Ｃ８、１３６Ｄ９、及び３Ｆ９は、全てこれらサイトカインの分泌を用量依存的に修復した（図１０）。ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−５の分泌も、ヒト抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体によるＩＬ−１０の中和によって修復された。これらのデータは、ヒト抗体１３６Ｃ８が他の抗体と比較して高い中和（すなわち、阻害、減少、拮抗、防止又は遮断）活性を有することを示している。サイトカイン分泌の修復又は強化は、ＬＰＳのようなトール様受容体（ＴＬＲ）リガンドによって誘発されたにせよ、抗体刺激によって誘発されたにせよ、慢性ウイルス感染のような適切な生理的設定において有益である免疫応答の上昇に繋がる。
【０３７１】
サイトカイン分泌の抑制に加えて、ＩＬ−１０は、ＭＨＣクラスＩＩ及び共刺激分子の下方制御を誘発する（ｄｅ  Ｗａａｌ  Ｍａｌｅｆｙｔら、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７４：１２０９（１９９１）、ｄｅ  Ｗａａｌ  Ｍａｌｅｆｙｔら、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７４：９１５（１９９１））。ＩＬ−１０の存在下での抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体によるヒトＰＢＭＣの処理は、ＨＬＡ−ＤＲ  ＭＨＣクラスＩＩ分子の発現を部分的に修復した（図１１Ａ）。従って、これらの抗体は、ＩＬ−１０抑制抗原提示細胞の抗原提示を修復又は強化し得る。抗体単独によるＰＢＭＣの処理は、ＨＬＡ−ＤＲ発現のレベルに効果がなく、抗体は、性質がアゴニスト的でないことを示している。
【０３７２】
ＩＬ−１０Ｒを介したシグナル伝達は、ＳＴＡＴ３の活性化をもたらし、それはチロシン７０５のリン酸化を検出することによって測定できる（ｐｈｏｓｐｈｏＳＴＡＴ３）（Ｏ’Ｆａｒｒｅｌｌら、Ｅｍｂｏ  Ｊ  １７：１００６（１９９８）、Ｏ’Ｆａｒｅｌｌら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４：４６０７（２０００）、Ｒａｈｉｍｉら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７４：７８２３（２００５））。ＩＬ−１０によって刺激したヒトＰＢＭＣからの溶解物のウェスタンブロット解析により、ＳＴＡＴ３の活性化が確認された。抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体による処理は、ＳＴＡＴ３のＩＬ−１０誘発リン酸化を用量依存的に遮断し（図１１Ｂ、左パネル）、かつ１３６Ｃ８によるＩＬ−１０阻害は、３７６０７又はＳＰＭ４６６による阻害よりも、検査した最高用量、３μｇ／ｍｌで高かった（右パネル）。これらのデータは、ヒト抗体１３６Ｃ８が他の抗体と比較して高い中和（すなわち、阻害、減少、拮抗、防止又は遮断）活性を有することを示している。抗ヒトＩｇＧ抗体と架橋させた時でも、抗体のみでは、ＳＴＡＴ３活性を誘発しなかった（図１１Ｃ）。これらのデータは、抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体が、ＴＮＦ−α及びＩＦＮ−γ誘発、ＨＬＡ−ＤＲ発現及びＳＴＡＴ３活性化を含む、ＩＬ−１０の多面発現効果の多くを中和（すなわち、阻害、減少、拮抗、防止又は遮断）できることを証明している。外因的に添加したＩＬ−１０の不存在下で、抗体は、その中和活性を保持し、かつＩＬ−１０Ｒへの結合にもかかわらず、かつＩＬ−１０ＲへのＩＬ−１０結合に由来するシグナル経路を誘発しない。
【０３７３】
（実施例６）
本実施例には、非ヒトＩＬ−１０Ｒαとの交差反応性の記載を含む。  
【０３７４】
一次末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）上の齧歯類、チンパンジー及びサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαに結合する抗体の能力を評価することにより、ヒト抗ヒトＩＬ−１０Ｒαモノクローナル抗体の結合特異性に関する追加の情報を得た。ヒト又は市販の抗ヒトＩＬ−１０Ｒαモノクローナル抗体は、マウス又はラット脾細胞上のＩＬ−１０Ｒαに結合しなかった。１３６Ｃ５、１３６Ｃ８、１３６Ｄ２９、及び３Ｆ９は、チンパンジー及びサイノモルガスマカクリンパ球（図６）及び単球の表面上でＩＬ−１０Ｒαに結合した。結合は、組換え可溶性ヒトＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃによるプレインキュベーションによって阻害でき、抗体の特異的交差反応性を証明している。ヒト、チンパンジー及びサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαへの３７６０７の結合は、アイソタイプ対照染色の上で辛うじて検出可能である。可溶性チンパンジーＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃへの１３６Ｃ５、１３６Ｃ８、１３６Ｄ２９、３Ｆ９及び３７６０７の結合は、ＥＬＩＳＡで検査し、かつ全ての抗体に関してヒトＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃへの結合と同様であることが発見された（図７Ａ及び表５）。サイノモルガスマカク組換えＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃへの結合は、ヒト及びチンパンジーＩＬ−１０Ｒαへのこの抗体の結合と比較した、１３６Ｄ２９及び３７６０７の結合減少を確認した（図７Ｂ及び表５）。フローサイトメトリーデータと対照的に、ＳＰＭ４６６及び３Ｆ９は、サイノモルガスＩＬ−１０Ｒα：ｈＦｃの可溶性組換え形状に良好に結合し、可溶性かつ表面発現ＩＬ−１０Ｒαの立体構造の間の相違を示し、かつ以前に記載された抗体と比較して、本明細書に開示されたヒト抗ヒトＩＬ−１０Ｒα抗体の独自性を更に確認している。
【０３７５】
【表５】
2011524741.tif 000040
【０３７６】
抗体結合は、機能的交差反応性を確実にしない。抗体は、チンパンジー（図８）又はサイノモルガス（図９）ＰＢＭＣ及び組換えヒトＩＬ−１０を使用して、ＴＮＦ−α強化アッセイ中で検査した。ヒトＩＬ−１０は、チンパンジー及びサイノモルガス両方のＰＢＭＣからのＬＰＳ誘発ＴＮＦ−α分泌を阻害した。１３６Ｃ５、１３６Ｃ８、１３６Ｄ２９及び３Ｆ９は、チンパンジーＴＮＦ−α分泌に対するヒトＩＬ−１０の効果を中和（すなわち、阻害、減少、拮抗、防止又は遮断）した。これらのデータは、チンパンジーＩＬ−１０Ｒαとの抗ヒトＩＬ−１０Ｒαモノクローナル抗体の機能的交差反応性を証明している。このアッセイにおいて、３７６０７及びＳＰＭ４６６抗体は、評価しなかった。サイノモルガスＩＬ−１０Ｒαと機能的に交差反応する抗体の能力において、相違が観察された（図９Ａ〜Ｂ）。ヒト抗ヒトＩＬ−１０Ｒαモノクローナル抗体１３６Ｃ５及び１３６Ｃ８のみが、サイノモルガスＰＢＭＣに対するヒトＩＬ−１０の効果を中和した。対照的に、１３６Ｄ２９、３Ｆ９、ＳＰＭ４６６及び３７６０７抗体は、ＴＮＦ−α分泌を著しく強化しなかった。これらの結果は、１３６Ｃ５及び１３６Ｃ８がサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒαを機能的に中和（すなわち、１つ以上の機能を阻害、減少、拮抗、防止又は遮断）し、他方で１３６Ｄ２９、３Ｆ９、及び３７６０７がサイノモルガスマカクＩＬ−１０Ｒα応答を中和しないことを証明する。このことは、１３６Ｃ５及び１３６Ｃ８が他の抗体と異なるグループ（Ｉ）にあり、かつこれらの抗体の独特な特性を明瞭に示し、グループ（Ａ）と指定される独特な結合グループにそれらを置く、競合ＥＬＩＳＡによって実行したエピトープマッピングと一致している（表４）。この結合の相違は、サイノモルガスマカクにおいて実行するｉｎ  ｖｉｖｏ前臨床安全性及び有効性研究を可能にし、抗ＩＬ−１０Ｒα抗体の臨床的開発に役立つ。
【０３７７】
ウイルスＩＬ−１０抑制の遮断。ヒト及びマウスサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）は、ＩＬ−１０Ｒα及び抑制免疫応答を結合することが可能な、ＩＬ−１０の相同体をコードする（Ｒｅｄｐａｔｈら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６２：６７０１（１９９９）、Ｊｏｎｅｓら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９９：９４０４（２００２）、Ｓｐｅｎｃｅｒら、Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７６：１２８５（２００２）、Ｃｈａｎｇら、Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７８：８７２０（２００４））。ＩＬ−１０Ｒα抗体は、２人のドナーから単離させたＰＢＭＣからのＬＰＳ誘発ＴＮＦ−α分泌の組換えＣＭＶ  ＩＬ−１０による抑制を中和する能力に関して検査した（図１３Ａ〜Ｂ）。全ての抗体研究は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＣＭＶ  ＩＬ−１０の抑制活性を中和した。ＣＭＶ  ＩＬ−１０を中和する本発明の抗体の能力は、抗体が、潜伏又は急性ＣＭＶ感染を処置する療法として使用できることを示している。
【０３７８】
本出願は、２００８年５月２７日に出願された米国出願第６１／０５６２９９号の優先権を主張し、かつ全体が、参照により明示的に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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