(57)【要約】  トウサイカチ(Gleditsia sinensis Lam)の選択的アポトーシス抽出物が提供される。また、特定の細胞、特にヒトにおいてアポトーシスを誘導するために前記抽出物を使用する方法が提供される。さらにまた、アポトーシスの選択的誘導用の医薬を調製するためのトウサイカチの抽出物の使用が提供される。【選択図】図１Ａ、図１Ｂ、図１Ｃ、図１Ｄ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を有する患者を治療する方法であって、前記患者に有効な治療有効量のトウサイカチＧｌｅｄｉｔｓｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ  Ｌａｍの抽出物を投与することからなる、方法。
【請求項２】
前記トウサイカチの抽出物の治療有効量が、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記トウサイカチの抽出物の治療有効量が、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１０ｇである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記トウサイカチの抽出物の治療有効量が、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約１〜１００ｇである、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記ＥＲ陰性乳癌がエストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ＥＲ陰性乳癌がプロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ＥＲ陰性乳癌が三重陰性乳癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ＥＲ陰性乳癌が転移性である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記トウサイカチの抽出物が経口製剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記経口製剤が、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
治療有効量のトウサイカチの抽出物を含有する医薬組成物であって、前記治療有効量がエストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するのに有効である医薬組成物。
【請求項１２】
前記トウサイカチの抽出物の治療有効量が、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記トウサイカチの抽出物の治療有効量が、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１０ｇである、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記トウサイカチの抽出物の治療有効量が、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約１〜１００ｇである、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記ＥＲ陰性乳癌が、エストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記ＥＲ陰性乳癌が、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記ＥＲ陰性乳癌が三重陰性乳癌である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記ＥＲ陰性乳癌が転移性である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記トウサイカチの抽出物が経口製剤である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記経口製剤が、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
治療有効量のトウサイカチの抽出物を含有するエストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するための医薬。
【請求項２２】
前記トウサイカチの抽出物の治療有効量が、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである、請求項２１に記載の医薬。
【請求項２３】
前記トウサイカチの抽出物の治療有効量が、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１０ｇである、請求項２２に記載の医薬。
【請求項２４】
前記トウサイカチの抽出物の治療有効量が、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約１〜１００ｇである、請求項２２に記載の医薬。
【請求項２５】
前記癌がエストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である、請求項２１に記載の医薬。
【請求項２６】
前記ＥＲ陰性乳癌が三重陰性乳癌である、請求項２１に記載の医薬。
【請求項２７】
前記ＥＲ陰性乳癌がプロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である、請求項２１に記載の医薬。
【請求項２８】
前記ＥＲ陰性乳癌が転移性である、請求項２１に記載の医薬。
【請求項２９】
前記トウサイカチの抽出物が経口製剤である、請求項２１に記載の医薬。
【請求項３０】
前記経口製剤が、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である、請求項２９に記載の医薬。
【請求項３１】
エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するための医薬を製造するためのトウサイカチの抽出物の使用。
【請求項３２】
前記トウサイカチの抽出物の治療有効量が、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
前記トウサイカチの抽出物の治療有効量が、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１０ｇである、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
前記トウサイカチの抽出物の治療有効量が、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約１〜１００ｇである、請求項３２に記載の使用。
【請求項３５】
前記ＥＲ陰性乳癌がエストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である、請求項３１に記載の使用。
【請求項３６】
前記ＥＲ陰性乳癌が、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である、請求項３１に記載の使用。
【請求項３７】
前記ＥＲ陰性乳癌が三重陰性乳癌である、請求項３１に記載の使用。
【請求項３８】
前記ＥＲ陰性乳癌が転移性である、請求項３１に記載の使用。
【請求項３９】
前記トウサイカチの抽出物が経口製剤である、請求項３１に記載の使用。
【請求項４０】
前記経口製剤が、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である、請求項３９に記載の使用。
【請求項４１】
エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を有する患者を治療する方法であって、前記患者に有効な治療有効量のトウサイカチの抽出物を投与することからなる、方法。
【請求項４２】
前記トウサイカチの抽出物の治療有効量が、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記トウサイカチの抽出物が経口製剤である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＥＲを発現しない癌が、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４５】
治療有効量のトウサイカチの抽出物を含有する医薬組成物であって、前記治療有効量がエストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を治療するのに有効である医薬組成物。
【請求項４６】
前記トウサイカチの抽出物の治療有効量が、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである、請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
前記トウサイカチの抽出物が経口製剤である、請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
前記ＥＲを発現しない癌が、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
治療有効量のトウサイカチの抽出物を含有する、エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を治療するための医薬。
【請求項５０】
前記トウサイカチの抽出物の治療有効量が、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである、請求項４９に記載の医薬。
【請求項５１】
前記トウサイカチの抽出物が経口製剤である、請求項４９に記載の医薬。
【請求項５２】
前記ＥＲを発現しない癌が、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４９に記載の医薬。
【請求項５３】
エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を治療するための医薬を製造するための、トウサイカチの抽出物の使用。
【請求項５４】
前記トウサイカチの抽出物の治療有効量が、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである、請求項５３に記載の使用。
【請求項５５】
前記トウサイカチの抽出物が経口製剤である、請求項５３に記載の使用。
【請求項５６】
前記ＥＲを発現しない癌が、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項５３に記載の使用。
【請求項５７】
エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を有する患者を治療する方法であって、前記患者に治療有効量のオレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体を投与することからなる、方法。
【請求項５８】
前記オレアノール酸の治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記オレアノール酸の治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１０ｇである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記オレアノール酸の治療有効量が、１日当たり約１〜１００ｇである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記ＥＲ陰性乳癌がエストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６２】
前記ＥＲ陰性乳癌が、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＥＲ陰性乳癌が三重陰性乳癌である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６４】
前記ＥＲ陰性乳癌が転移性である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６５】
前記オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体が経口製剤である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６６】
前記経口製剤が、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
治療有効量のオレアノール酸を含有する医薬組成物であって、前記治療有効量がエストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するのに有効である医薬組成物。
【請求項６８】
前記オレアノール酸の治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである、請求項６７に記載の医薬組成物。
【請求項６９】
前記オレアノール酸の治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１０ｇである、請求項６８に記載の医薬組成物。
【請求項７０】
前記オレアノール酸の治療有効量が、１日当たり約１〜１００ｇである、請求項６８に記載の医薬組成物。
【請求項７１】
前記ＥＲ陰性乳癌がエストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である、請求項６７に記載の医薬組成物。
【請求項７２】
前記ＥＲ陰性乳癌が、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である、請求項６７に記載の医薬組成物。
【請求項７３】
前記ＥＲ陰性乳癌が三重陰性乳癌である、請求項６７に記載の医薬組成物。
【請求項７４】
前記癌が転移性である、請求項６７に記載の医薬組成物。
【請求項７５】
前記オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体が経口製剤である、請求項６７に記載の医薬組成物。
【請求項７６】
前記経口製剤が、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である、請求項７５に記載の医薬組成物。
【請求項７７】
治療有効量のオレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体を含有する、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するための医薬。
【請求項７８】
前記オレアノール酸の治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである、請求項７７に記載の医薬。
【請求項７９】
前記オレアノール酸の治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１０ｇである、請求項７８に記載の医薬。
【請求項８０】
前記オレアノール酸の治療有効量が、１日当たり約１〜１００ｇである、請求項７８に記載の医薬。
【請求項８１】
前記ＥＲ陰性乳癌がエストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である、請求項７７に記載の医薬。
【請求項８２】
前記ＥＲ陰性乳癌が三重陰性乳癌である、請求項７７に記載の医薬。
【請求項８３】
前記ＥＲ陰性乳癌が、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である、請求項７７に記載の医薬。
【請求項８４】
前記ＥＲ陰性乳癌が転移性である、請求項７７に記載の医薬。
【請求項８５】
前記オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体が経口製剤である、請求項７７に記載の医薬。
【請求項８６】
前記経口製剤が、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である、請求項８５に記載の医薬。
【請求項８７】
エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するための医薬を製造するための、治療有効量のオレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体を含有する組成物の使用。
【請求項８８】
前記オレアノール酸の治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである、請求項８７に記載の使用。
【請求項８９】
前記オレアノール酸の治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１０ｇである、請求項８８に記載の使用。
【請求項９０】
前記オレアノール酸の治療有効量が、１日当たり約１〜１００ｇである、請求項８８に記載の使用。
【請求項９１】
前記ＥＲ陰性乳癌がエストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である、請求項８７に記載の使用。
【請求項９２】
前記ＥＲ陰性乳癌が、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である、請求項８７に記載の使用。
【請求項９３】
前記ＥＲ陰性乳癌が三重陰性乳癌である、請求項８７に記載の使用。
【請求項９４】
前記ＥＲ陰性乳癌が転移性である、請求項８７に記載の使用。
【請求項９５】
前記オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体が経口製剤である、請求項８７に記載の使用。
【請求項９６】
前記経口製剤が、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である、請求項９５に記載の使用。
【請求項９７】
エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を発現しない癌を有する患者を治療する方法であって、前記患者に治療有効量のオレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体を投与することからなる、方法。
【請求項９８】
前記オレアノール酸の治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体が経口製剤である、請求項９７に記載の方法。
【請求項１００】
前記ＥＲを発現しない癌が、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０１】
治療有効量のオレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体を含有する医薬組成物であって、前記治療有効量がエストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を治療するのに有効である医薬組成物。
【請求項１０２】
前記オレアノール酸の治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである、請求項１０１に記載の医薬組成物。
【請求項１０３】
前記オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体が経口製剤である、請求項１０１に記載の医薬組成物。
【請求項１００】
前記ＥＲを発現しない癌が、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１０１に記載の医薬組成物。
【請求項１０５】
治療有効量のオレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体を含有する、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を発現しない癌を治療するための医薬。
【請求項１０６】
前記オレアノール酸の治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである、請求項１０５に記載の医薬。
【請求項１０７】
前記オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体が経口製剤である、請求項１０５に記載の医薬。
【請求項１０８】
前記ＥＲを発現しない癌が、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１０５に記載の医薬。
【請求項１０９】
治療有効量のオレアノール酸を含有し、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を発現しない癌を治療するための医薬を製造するための、オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体の使用。
【請求項１１０】
前記オレアノール酸の治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである、請求項１０９に記載の使用。
【請求項１１１】
前記オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体が経口製剤である、請求項１０９に記載の使用。
【請求項１１２】
前記ＥＲを発現しない癌が、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１０９に記載の使用。
【請求項１１３】
エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を有する患者を治療する方法であって、前記患者に治療有効量の少なくとも１種のサポニン又はその製薬学的に許容し得る塩を投与することからなり、前記サポニンがｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有する及び／又は生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊するものである、方法。
【請求項１１４】
前記サポニンが、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記サポニンがＡｋｔ阻害活性を有する、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１６】
前記サポニンが脂質ラフトを破壊する、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１７】
前記サポニンが、生体外でｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１８】
前記サポニンが、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有し且つ生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊する、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
前記サポニンの治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１２０】
前記サポニンの治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１０ｇである、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
前記サポニンの治療有効量が、１日当たり約１〜約１００ｇである、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２２】
前記ＥＲ陰性乳癌がエストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１２３】
前記ＥＲ陰性乳癌が、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１２４】
前記ＥＲ陰性乳癌が三重陰性乳癌である、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１２５】
前記ＥＲ陰性乳癌が転移性である、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１２６】
前記オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体が経口製剤である、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１２７】
前記経口製剤が、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
治療有効量の少なくとも１種のサポニン又はその製薬学的に許容し得る塩を含有する医薬組成物であって、前記サポニンがｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有する及び／又は生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊するものである医薬組成物。
【請求項１２９】
前記サポニンが、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３０】
前記サポニンがＡｋｔ阻害活性を有する、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３１】
前記サポニンが脂質ラフトを破壊する、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３２】
前記サポニンが、生体外でｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及びＡｋｔ阻害活性を有する、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３３】
前記サポニンが、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有し且つ生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊する、請求項１３８に記載の医薬組成物。
【請求項１３４】
前記サポニンの治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３５】
前記サポニンの治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１０ｇである、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３６】
前記サポニンの治療有効量が、１日当たり約１〜約１００ｇである、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３７】
前記ＥＲ陰性乳癌が、エストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３８】
前記ＥＲ陰性乳癌が、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１３９】
前記ＥＲ陰性乳癌が三重陰性乳癌である、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１４０】
前記癌が転移性である、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１４１】
前記オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体が経口製剤である、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項１４２】
前記経口製剤が、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である、請求項１４１に記載の医薬組成物。
【請求項１４３】
治療有効量のサポニン又はその製薬学的に許容し得る塩を含有する、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するための医薬であって、前記サポニンがｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有する及び／又は生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊するものである、医薬。
【請求項１４４】
前記サポニンが、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する、請求項１４３に記載の医薬。
【請求項１４５】
前記サポニンがＡｋｔ阻害活性を有する、請求項１４３に記載の医薬。
【請求項１４６】
前記サポニンが脂質ラフトを破壊する、請求項１４３に記載の医薬。
【請求項１４７】
前記サポニンが、生体外でｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及びＡｋｔ阻害活性を有する、請求項１４３に記載の医薬。
【請求項１４８】
前記サポニンが、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有し且つ生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊する、請求項１４３に記載の医薬。
【請求項１４９】
前記サポニンの治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである、請求項１４３に記載の医薬。
【請求項１５０】
前記サポニンの治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１０ｇである、請求項１４３に記載の医薬。
【請求項１５１】
前記サポニンの治療有効量が、１日当たり約１〜約１００ｇである、請求項１４３に記載の医薬。
【請求項１５２】
前記癌が、エストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である、請求項１４３に記載の医薬。
【請求項１５３】
前記ＥＲ陰性乳癌が三重陰性乳癌である、請求項１４３に記載の医薬。
【請求項１５４】
前記ＥＲ陰性乳癌が、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である、請求項１４３に記載の医薬。
【請求項１５５】
前記ＥＲ陰性乳癌が転移性である、請求項１４３に記載の医薬。
【請求項１５６】
前記サポニンあるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体が経口製剤である、請求項１４３に記載の医薬。
【請求項１５７】
前記経口製剤が、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である、請求項１５６に記載の医薬。
【請求項１５８】
エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するための医薬を製造するための治療有効量のサポニンの使用であって、前記サポニンがｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有する及び／又は生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊するものであるサポニンの使用。
【請求項１５９】
前記サポニンが、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する、請求項１５８に記載の使用。
【請求項１６０】
前記サポニンがＡｋｔ阻害活性を有する、請求項１５８に記載の使用。
【請求項１６１】
前記サポニンが脂質ラフトを破壊する、請求項１５８に記載の使用。
【請求項１６２】
前記サポニンが、生体外でｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及びＡｋｔ阻害活性を有する、請求項１５８に記載の使用。
【請求項１６３】
前記サポニンが、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有し且つ生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊する、請求項１６２に記載の使用。
【請求項１６４】
前記サポニンの治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである、請求項１５８に記載の使用。
【請求項１６５】
前記サポニンの治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１０ｇである、請求項１５８に記載の使用。
【請求項１６６】
前記のサポニンの治療有効量が、１日当たり約１〜約１００ｇである、請求項１６５に記載の使用。
【請求項１６７】
前記ＥＲ陰性乳癌が、エストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である、請求項１５８に記載の使用。
【請求項１６８】
前記ＥＲ陰性乳癌が、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である、請求項１５８に記載の使用。
【請求項１６９】
前記ＥＲ陰性乳癌が三重陰性乳癌である、請求項１５８に記載の使用。
【請求項１７０】
前記ＥＲ陰性乳癌が転移性である、請求項１５８に記載の使用。
【請求項１７１】
前記サポニンあるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体が経口製剤である、請求項１５８に記載の使用。
【請求項１７２】
前記経口製剤が、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である、請求項１７１に記載の使用。
【請求項１７３】
エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を有する患者を治療する方法であって、前記患者に治療有効量のサポニンを投与することからなり、前記サポニンがｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有する及び／又は生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊するものである、方法。
【請求項１７４】
前記サポニンが、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１７５】
前記サポニンがＡｋｔ阻害活性を有する、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１７６】
前記サポニンが脂質ラフトを破壊する、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１７７】
前記サポニンが、生体外でｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１７８】
前記サポニンが、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及びＡｋｔ阻害活性を有し且つ生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊する、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１７９】
前記サポニンの治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１８０】
前記サポニンあるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体が経口製剤である、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１８１】
前記ＥＲを発現しない癌が、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１８２】
治療有効量のサポニンを含有する医薬組成物であって、前記治療有効量がエストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を治療するのに有効であり且つ前記サポニンがｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有する及び／又は生体外で脂質ラフト（ＬＲ）破壊するものである医薬組成物。
【請求項１８３】
前記サポニンが、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する、請求項１８２に記載の医薬組成物。
【請求項１８４】
前記サポニンがＡｋｔ阻害活性を有する、請求項１８２に記載の医薬組成物。
【請求項１８５】
前記サポニンが脂質ラフトを破壊する、請求項１８２に記載の医薬組成物。
【請求項１８６】
前記サポニンが、生体外でｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する、請求項１８２に記載の医薬組成物。
【請求項１８７】
前記サポニンが、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及びＡｋｔ阻害活性を有し且つ生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊する、請求項１８６に記載の医薬組成物。
【請求項１８８】
前記サポニンの治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである、請求項１８２に記載の医薬組成物。
【請求項１８９】
前記サポニンあるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体が経口製剤である、請求項１８２に記載の医薬組成物。
【請求項１９０】
前記ＥＲを発現しない癌が、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１８２に記載の医薬組成物。
【請求項１９１】
治療有効量のサポニンを含有し、エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を治療するための医薬であって、前記サポニンがｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有する及び／又は生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊するものである、医薬。
【請求項１９２】
前記サポニンが、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する、請求項１９１に記載の医薬。
【請求項１９３】
前記サポニンがＡｋｔ阻害活性を有する、請求項１９１に記載の医薬。
【請求項１９４】
前記サポニンが脂質ラフトを破壊する、請求項１９１に記載の医薬。
【請求項１９５】
前記サポニンが、生体外でｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する、請求項１９１に記載の医薬。
【請求項１９６】
前記サポニンが、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及びＡｋｔ阻害活性を有し且つ生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊する、請求項１９５に記載の医薬。
【請求項１９７】
前記サポニンの治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである、請求項１９１に記載の医薬。
【請求項１９８】
前記サポニンあるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体が経口製剤である、請求項１９１に記載の医薬。
【請求項１９９】
前記ＥＲを発現しない癌が、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１９１に記載の医薬。
【請求項２００】
エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を治療するための医薬を製造するためのサポニンの使用であって、前記サポニンがｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有する及び／又は生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊するものである、サポニンの使用。
【請求項２０１】
前記サポニンが、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する、請求項２００に記載の使用。
【請求項２０２】
前記サポニンがＡｋｔ阻害活性を有する、請求項２００に記載の使用。
【請求項２０３】
前記サポニンが脂質ラフトを破壊する、請求項２００に記載の使用。
【請求項２０４】
前記サポニンが、生体外でｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する、請求項２００に記載の使用。
【請求項２０５】
前記サポニンが、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及びＡｋｔ阻害活性を有し且つ生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊する、請求項２０４に記載の使用。
【請求項２０６】
前記サポニンの治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである、請求項２００に記載の使用。
【請求項２０７】
前記サポニンあるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体が経口製剤である、請求項２００に記載の使用。
【請求項２０８】
前記ＥＲを発現しない癌が、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２００に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物抽出物組成物に関し、さらに詳しくはトウサイカチ（Gleditsia  sinensis Lam）に属する植物種の抽出物を含有する組成物に関する。また、本発明は、このような植物抽出物組成物を使用する方法及び調製する方法に関する。
（相互参照及び優先権主張）
【０００２】
本出願は、２００８年４月１１日付け出願の米国特許仮出願第６１／０４４，３９６号から米国特許法３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の下で優先権を主張し、前記米国特許仮出願は、その全体を参照することにより本明細書において援用される。
【背景技術】
【０００３】
癌細胞の特徴は、制御されていない増殖にある。確認されている制御されない増殖の原因の中で、見たところ重要な１つは、プログラムされた細胞死（アポトーシスとしても知られている）のプロセスに対する抵抗性である。アポトーシスは、多細胞生物が、制御されない細胞増殖を阻止するために及び病気になっている細胞、極めて有害になっている細胞又は必要がなくなっている細胞を除くために用いるプロセスである。アポトーシスのプロセスは、タンパク分解酵素及びＤＮＡエンドヌクレアーゼの共同作用によって細胞が内部から分解され、アポトーシス小体の形成をもたらし、次いでこれがスカベンジャー細胞によって取り除かれるという多段階カスケードを含む。現在までの研究により、細胞内分解の多くは、アスパラギン酸残基に隣接して開裂するタンパク分解酵素のファミリーであるカスパーゼの作用によって行われることが明らかにされている。
【０００４】
乳癌治療の最近の進歩にもかかわらず、現行の治療計画は、多くの場合、有害な（時には治療を制限する）副作用をもたらす。また、現行の治療は、転移性乳癌に対してはほとんど効果がない。早期スクリーニング及び治療は、多くの患者について予後を向上させることができるが、このようなスクリーニングは、一様ではなく、幾つかの癌は、日常的なスクリーニングでは初期の段階で検出できないほど早く増殖する。毒性が低いか、後期癌に対して活性であるか又はその両方である治療選択肢に対する要求が依然としてある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
１つの特に難治型の癌は、エストロゲン受容体陰性乳癌である。米国で乳癌について現在承認されている治療法は全て、エストロゲン受容体陽性癌に極めて有効である。乳癌は、エストロゲン受容体陰性組織で開始する可能性があるか、又は癌療法に対する適応反応としてエストロゲン受容体を発現しなくなる可能性がある。エストロゲン受容体陰性乳癌を有する患者について、選択肢はほとんどない。従って、乳癌がエストロゲン受容体陰性であるこれらの患者のための治療選択肢に対する要求がある。
【０００６】
エストロゲン受容体陰性癌の１つのサブクラスは、エストロゲン受容体（ＥＲ）に陰性であり且つプロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はヒト上皮増殖因子２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）の一方又は両方に陰性である乳癌である。ＥＲ陰性癌のこのサブクラスの特に難治性のサブセットは、いわゆる「三重陰性」乳癌−すなわち、ＥＲ、ＰＲ及びＨｅｒ２／ｎｅｕに陰性である乳癌である。三重陰性乳癌を有するこれらの患者について、治療選択肢は極めて限定される。従って、この群の患者の治療選択肢に対する現在の要求がある。
【０００７】
難治性の癌、特に乳癌は、あいにくありふれていてよく起こる。患者が癌について１つ又はそれ以上の治療レジメンを受けていると、その患者の癌に対する別の治療の選択肢は、さらに限定されてしまい、さらに害になる可能性がある。従って、癌についてすでに先立つ１つ又はそれ以上の治療ラウンドを受けているが、その癌が治療に反応しなかったか又は反応することをやめた患者のための選択肢に対する要求がある。
【０００８】
前記の要求及びその他の要求は、付属の特許請求の範囲及び図面を含め以下の開示においてさらに詳細に説明される本発明の実施形態によって取り扱われる。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の幾つかの実施形態は、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を有する患者を治療する方法であって、前記患者に有効な治療有効量のトウサイカチの抽出物を投与することからなる、方法を提供する。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１０ｇである。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約１〜１００ｇである。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、エストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、三重陰性乳癌である。幾つかの実施形態において、癌は、転移性である。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、経口製剤は、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である。
【００１０】
本発明の幾つかの実施形態は、治療有効量のトウサイカチの抽出物を含有する医薬組成物であって、前記治療有効量がエストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するのに有効である医薬組成物を提供する。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１０ｇである。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約１〜１００ｇである。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、エストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、三重陰性乳癌である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、転移性である。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、経口製剤は、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である。
【００１１】
本発明の幾つかの実施形態は、治療有効量のトウサイカチの抽出物を含有するエストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するための医薬を提供する。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１０ｇである。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約１〜１００ｇである。幾つかの実施形態において、癌は、エストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、三重陰性乳癌である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、転移性である。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、経口製剤は、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である。
【００１２】
本発明の幾つかの実施形態は、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するための医薬を製造するためのトウサイカチの抽出物の使用を提供する。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１０ｇである。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約１〜１００ｇである。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、エストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、三重陰性乳癌である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、転移性である。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、経口製剤は、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である。
【００１３】
本発明の幾つかの実施形態は、エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を有する患者を治療する方法であって、前記患者に有効な治療有効量のトウサイカチの抽出物を投与することからなる、方法を提供する。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、ＥＲを発現しない癌は、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００１４】
本発明の幾つかの実施形態は、治療有効量のトウサイカチの抽出物を含有する医薬組成物であって、前記治療有効量がエストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を治療するのに有効である医薬組成物を提供する。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、ＥＲを発現しない癌は、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００１５】
本発明の幾つかの実施形態は、治療有効量のトウサイカチの抽出物を含有する、エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を治療するための医薬を提供する。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、ＥＲを発現しない癌は、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００１６】
本発明の幾つかの実施形態は、エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を治療するための医薬を製造するための、トウサイカチの抽出物の使用を提供する。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、ＥＲを発現しない癌は、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００１７】
本発明の幾つかの実施形態は、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を有する患者を治療する方法であって、前記患者に治療有効量のオレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体を投与することからなる、方法を提供する。幾つかの実施形態において、オレアノール酸の治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、オレアノール酸の治療有効量が、１日当たり約０．００１〜約１０ｇである。幾つかの実施形態において、前記のオレアノール酸の治療有効量は、１日当たり約１〜１００ｇである。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、エストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、三重陰性乳癌である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、転移性である。幾つかの実施形態において、オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、経口製剤は、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である。
【００１８】
本発明の幾つかの実施形態は、治療有効量のオレアノール酸を含有する医薬組成物であって、前記治療有効量がエストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するのに有効である医薬組成物を提供する。幾つかの実施形態において、オレアノール酸の治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、オレアノール酸の治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１０ｇである。幾つかの実施形態において、オレアノール酸の治療有効量は、１日当たり約１〜１００ｇである。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、エストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、三重陰性乳癌である。幾つかの実施形態において、癌は、転移性である。幾つかの実施形態において、オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、経口製剤は、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である。
【００１９】
本発明の幾つかの実施形態は、治療有効量のオレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体を含有するエストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するための医薬を提供する。幾つかの実施形態において、オレアノール酸の治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、オレアノール酸の治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１０ｇである。幾つかの実施形態において、オレアノール酸の治療有効量は、１日当たり約１〜１００ｇである。幾つかの実施形態において、癌は、エストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、三重陰性乳癌である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、転移性である。幾つかの実施形態において、オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、経口製剤は、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である。
【００２０】
本発明の幾つかの実施形態は、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するための医薬を製造するための、治療有効量のオレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体を含有する組成物の使用を提供する。幾つかの実施形態において、オレアノール酸の治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、オレアノール酸の治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１０ｇである。幾つかの実施形態において、オレアノール酸の治療有効量は、１日当たり約１〜１００ｇである。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、エストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、三重陰性乳癌である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、転移性である。幾つかの実施形態において、オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、記経口製剤は、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である。
【００２１】
本発明の幾つかの実施形態は、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を発現しない癌を有する患者を治療する方法であって、前記患者に、治療有効量のオレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体を投与することからなる、方法を提供する。幾つかの実施形態において、オレアノール酸の治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、ＥＲを発現しない癌は、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００２２】
本発明の幾つかの実施形態は、治療有効量のオレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体を含有する医薬組成物であって、前記治療有効量がエストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を治療するのに有効である医薬組成物を提供する。幾つかの実施形態において、オレアノール酸の治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、レアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、ＥＲを発現しない癌は、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００２３】
本発明の幾つかの実施形態は、治療有効量のオレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体を含有する、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を発現しない癌を治療するための医薬を提供する。幾つかの実施形態において、オレアノール酸の治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、ＥＲを発現しない癌は、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００２４】
本発明の幾つかの実施形態は、治療有効量のオレアノール酸を含有し、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を発現しない癌を治療するための医薬を製造するための、オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体の使用を提供する。幾つかの実施形態において、オレアノール酸の治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、ＥＲを発現しない癌は、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００２５】
本発明の幾つかの実施形態は、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を有する患者を治療する方法であって、前記患者に治療有効量の少なくとも１種のサポニン又はその製薬学的に許容し得る塩を投与することからなり、前記サポニンがｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有する及び／又は生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊するものである、方法を提供する。幾つかの実施形態において、サポニンは、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、Ａｋｔ阻害活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、脂質ラフトを破壊する。幾つかの実施形態において、サポニンは、生体外でｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有し且つ生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊する。幾つかの実施形態において、サポニンの治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、サポニンの治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１０ｇである。幾つかの実施形態において、サポニンの治療有効量は、１日当たり約１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、エストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、三重陰性乳癌である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、転移性である。幾つかの実施形態において、オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、経口製剤は、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である。
【００２６】
本発明の幾つかの実施形態は、治療有効量の少なくとも１種のサポニン又はその製薬学的に許容し得る塩を含有する医薬組成物であって、前記サポニンがｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有する及び／又は生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊するものである医薬組成物を提供する。幾つかの実施形態において、サポニンは、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、Ａｋｔ阻害活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、脂質ラフトを破壊する。幾つかの実施形態において、サポニンは、生体外でｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及びＡｋｔ阻害活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２、及び／又はＡｋｔ阻害活性を有し且つ生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊する。幾つかの実施形態において、サポニンの治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、サポニンの治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１０ｇである。幾つかの実施形態において、サポニンの治療有効量は、１日当たり約１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、エストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、三重陰性乳癌である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、転移性である。幾つかの実施形態において、オレアノール酸あるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、経口製剤は、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である。
【００２７】
本発明の幾つかの実施形態は、治療有効量のサポニン又はその製薬学的に許容し得る塩を含有する、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するための医薬であって、前記サポニンがｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有する及び／又は生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊するものである医薬を提供する。幾つかの実施形態において、サポニンは、ＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、Ａｋｔ阻害活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、脂質ラフトを破壊する。幾つかの実施形態において、サポニンは、生体外でｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及びＡｋｔ阻害活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２、及び／又はＡｋｔ阻害活性を有し且つ生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊する。幾つかの実施形態において、サポニンの治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、サポニンの治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１０ｇである。幾つかの実施形態において、サポニンの治療有効量は、１日当たり約１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、エストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、三重陰性乳癌である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、転移性である。幾つかの実施形態において、サポニンあるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、経口製剤は、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である。
【００２８】
本発明の幾つかの実施形態は、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するための医薬であって、前記サポニンがｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有する及び／又は生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊するものである医薬を製造するための、治療有効量のサポニンの使用を提供する。幾つかの実施形態において、サポニンは、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、Ａｋｔ阻害活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、脂質ラフトを破壊する。幾つかの実施形態において、サポニンは、生体外でｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及びＡｋｔ阻害活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２、及び／又はＡｋｔ阻害活性を有し且つ生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊する。幾つかの実施形態において、サポニンの治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、サポニンの治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１０ｇである。幾つかの実施形態において、サポニンの治療有効量は、１日当たり約１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、エストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、三重陰性乳癌である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、転移性である。幾つかの実施形態において、サポニンあるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、経口製剤は、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である。
【００２９】
本発明の幾つかの実施形態は、エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を有する患者を治療する方法であって、前記患者に治療有効量のサポニンを投与することからなり、前記サポニンがｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２、及び／又はＡｋｔ阻害活性を有する及び／又は生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊するものである、方法を提供する。幾つかの実施形態において、サポニンは、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、Ａｋｔ阻害活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、脂質ラフトを破壊する。幾つかの実施形態において、サポニンは、生体外でｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、ＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及びＡｋｔ阻害活性を有し且つ生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊する。幾つかの実施形態において、サポニンの治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、サポニンあるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、ＥＲを発現しない癌は、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００３０】
本発明の幾つかの実施形態は、治療有効量のサポニンを含有する医薬組成物であって、前記治療有効量がエストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を治療するのに有効であり且つ前記サポニンがｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２、及び／又はＡｋｔ阻害活性を有する及び／又は生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊するものである医薬組成物を提供する。幾つかの実施形態において、サポニンは、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、Ａｋｔ阻害活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、脂質ラフトを破壊する。幾つかの実施形態において、サポニンは、生体外でｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及びＡｋｔ阻害活性を有し且つ生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊する。幾つかの実施形態において、サポニンの治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、サポニンあるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、ＥＲを発現しない癌は、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００３１】
本発明の幾つかの実施形態は、治療有効量のサポニンを含有する、エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を治療するための医薬であって、前記サポニンがｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有する及び／又は生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊するものである医薬を提供する。幾つかの実施形態において、サポニンは、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、Ａｋｔ阻害活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、脂質ラフトを破壊する。幾つかの実施形態において、サポニンは、生体外でｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２、及びＡｋｔ阻害活性を有し且つ生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊する。
【００３２】
サポニンの治療有効量が１日当たり約０．００１〜約１００ｇである、請求項１９１に記載の医薬。幾つかの実施形態において、サポニンあるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、ＥＲを発現しない癌は、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００３３】
本発明の幾つかの実施形態は、エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を治療するための医薬を製造するためのサポニンの使用であって、前記サポニンがｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及び／又はＡｋｔ阻害活性を有する及び／又は生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊するものであるサポニンの使用を提供する。幾つかの実施形態において、サポニンは、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、Ａｋｔ阻害活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、脂質ラフトを破壊する。幾つかの実施形態において、サポニンは、生体外でｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を有する。幾つかの実施形態において、サポニンは、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２、及びＡｋｔ阻害活性を有し且つ生体外で脂質ラフト（ＬＲ）を破壊する。幾つかの実施形態において、サポニンの治療有効量は、１日当たり約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、サポニンあるいはその製薬学的に許容し得る塩又は誘導体は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、ＥＲを発現しない癌は、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００３４】
本明細書に述べた全ての刊行物及び特許出願は、あたかもそれぞれ個々の刊行物又は特許出願が参照することにより援用されることが具体的に及び個々に示されているかのように同じ程度に参照することより本明細書において援用される。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
本発明の新規な特徴を、特に添付の特許請求の範囲に記載する。本発明の特徴及び利点のより良い理解は、本発明の原理が利用される例示的実施形態を示す以下の詳細な説明、及び以下の添付図面を参照することにより得られるであろう：
【００３６】
【図１Ａ−１Ｄ】トウサイカチ（ＢＮ１０７）の乾燥抽出物０．０９０ｍｇ／ｍＬを含有する組成物が、乳癌細胞株でアポトーシスを誘導するが、形質転換株及び正常細胞株ではアポトーシスを誘導しないことを表す。図１Ａは、アネキシンＶ−ＰＩ染色を表す。図１Ｂは、ＤＮＡ断片化を表す。図１Ｃは、シトクロムＣ遊離を表す。図１Ｄは、カスパーゼ３及び９の活性化を表す。特に明記しない場合には、ＨＳ５７８Ｔ細胞又はＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞は、ＢＮ１０７（トウサイカチの果実の固形抽出物９０μｇ／ｍＬ）で処理される。
【図２Ａ−２Ｃ】ＥＲαの発現がＢＮ１０７誘導アポトーシスを救済する（ｒｅｓｃｕｅ）ことを表す。図２Ａ：ＬａｃＺ又はＥｒａウイルスを感染させたＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞を、エストロゲン（１０ｎＭ）の存在下で、ＢＮ１０７で処理し、アネキシン／ＰＩ結合により分析した。２Ｂ：ＥＲα発現のウェスタン分析を表す。図２Ｃ：ＷＩＳＰ２発現、すなわちＥＲαの下流標的のリアルタイム１  ＲＴＰＣＲ分析を表す。
【図３】選択されたシグナル伝達経路及び細胞経路に関与するタンパク質の分析を現すウェスタンブロットである。Ｈｓ５７８Ｔ細胞及びＭＣＦ７細胞を、ＢＮ１０７で処理し、示された時間点で収穫する。
【図４】ＢＮ１０７がＥＲ乳癌細胞のミトコンドリア装置によりアポトーシスを誘導することを表し、以下の図Ａ〜Ｄにより評価される。図Ａは、種々の細胞株での生存細胞％（アネキシンＶ−、ＰＩ−）を表し、図Ｂは、ＪＣ−１染色により評価されるミトコンドリア膜内外電位を表し、図Ｃは、カスパーゼ３及び９の活性化を表し、図Ｄは、細胞質ゾル中に放出されるシトクロムＣを表すウェスタンブロットを表す。細胞をＢＮ１０７（７０μｇ／ｍｌ）で処理し、処理後１８時間（図Ａ）、６時間（図Ｂ）及び３時間（図Ｃ）で収穫した。
【図５】ＥＲα発現がＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をＢＮ１０７誘導アポトーシスから救済することを表す。図Ａは、ＬａｃＺ又はＥＲαウイルスを感染させたＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞でのＥＲα発現を示すウェスタンブロットである。図Ｂでは、細胞を、１０ｎＭエストロゲンの存在下で、ＢＮ１０７で１８時間処理し、アネキシン／ＰＩ結合を用いて分析した。グラフは、アネキシン−ＰＩ−（生存）細胞の割合（％）を表す。図Ｃでは、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、分化ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、トリコスタチンＡ（ＴｓＡ、５０ｎＭ）又はＤＭＳＯで２日間処理した。次いで、細胞をＢＮ１０７で処理し、図Ｂのようにアネキシン／ＰＩ結合を用いて分析した。
【図６】ＲＯＳの誘導又はＥＲ乳癌細胞内のｐ３８経路の活性化は、ＢＮ１０７によって誘導されたアポトーシスの主な原因ではないことを表す。図Ａでは、ＲＯＳ産生を、ＲＯＳ感受性プローブＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡを使用して測定した。グラフは、平均ＦＬ１蛍光を表す。図Ｂは、強力ＲＯＳスカベンジャー、すなわち１０ｍＭのＮＡＣ又は５０μＭのＢＨＴで予備処理し、次いで１８時間ＢＮ１０７処理したＨｓ５７８Ｔ細胞の生存細胞％を表す。図Ｃは、リン酸化されたｐ３８及びＥｒｋの量を示すウェスタンブロットである。図Ｄは、２０μＭのｐ３８アンタゴニストＳＢ２０２１９０で予備処理し、次いで１８時間ＢＮ１０７処理したＨｓ５７８Ｔ細胞の生存細胞％を表す。
【図７】ＬＳのコレステロール枯渇が、ＥＲ乳癌細胞におけるＢＮ１０７のアポトーシス促進作用に介在するメカニズムである可能性があることを表す。図Ａは、５０μＭイソプレノイド前駆物質ＦＯＨ又はＧＧＯＨで予備処理し、次いでＢＮ１０７で１８時間処理したＨｓ５７８Ｔ細胞の生存細胞％を表す。図７Ｂは、ＢＮ１０７で４時間処理したＭＤＡ−ＭＢ−２３１又はＭＣＦ７細胞から収集したスクロース密度画分のコレステロール含有量を表す。ＬＲ、すなわち脂質ラフト（画分３〜５）、非ＬＲ形質膜（画分６）。図７Ｃは、７０μｇ／ｍｌのＢＮ１０７、０．２ｍｇ／ｍｌのＢＺＬ１０１、又は５００ｎＭのタキソール単独で、あるいは５００μＭのコレステロール（ＣＨＬ）で１８時間処理したＨｓ５７８Ｔ細胞の生存細胞％を表す。
【図８】ＬＲタンパク質及びＬＲ介在ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２シグナル伝達が、ＢＮ１０７又はオレアノール酸処理によって妨害される（ｄｉｓｒｕｐｔｅｄ）ことを表す。図８Ａは、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞のカベオリン１（ＣＡＶ１）及びＣＤ４４（緑）の免疫蛍光染色を表す。図８Ｂは、ＧＭ−１のドットプロット分析を表す。ＬＲ、非ＬＲ形質膜、及び細胞質ゾル画分（図８Ｃ）、並びに全細胞溶解物（図８Ｄ）のウェスタン分析を表す。全細胞を、７０μｇ／ｍｌのＢＮ１０７又は１１０μＭのオレアノール酸（±５００μＭのＣＨＬ）で４時間処理した。画分を、画分から直接スポットする（図８Ｂ）か、又は同量のタンパク質を取り込ませるために沈降させた（図８Ｃ）。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
本明細書において、特にトウサイカチと呼ばれる植物の分類学上の種の抽出物を含有する医薬組成物が開示される。本明細書に開示される別の実施形態は、本明細書に記載の組成物を使用する選択的アポトーシス方法を提供する。本明細書に記載の選択的アポトーシス組成物は、異常分裂細胞、例えば癌細胞でアポトーシスを誘導し、同時に正常細胞の正常な細胞プロセスを妨害しない活性を有する。理論によって制限されることを望まないが、開示された医薬組成物の有効成分は、カスパーゼ経路によって作用して、アポトーシスのプロセスにより自己調節能を失っている細胞においてアポトーシスを誘導すると考えられる。このような有効成分（これらは、トウサイカチ、特にその果実から抽出される）は、癌細胞においてＡＫＴ（セリン／トレオニンプロテインキナーゼ）及びｍＴＯＲキナーゼの活性を阻害し、それによって癌性細胞においてアポトーシスを誘導するか又は修復する活性を示唆する。
【００３８】
トウサイカチの水性抽出物（水溶液１ｍＬ当たり乾燥固形抽出物０．５ｍｇ）による乳癌細胞の処理は、癌細胞株の多数において顕著な細胞死を誘導する。正常な乳房上皮細胞及び線維芽細胞は、トウサイカチ抽出物の細胞障害作用に耐性がある。トウサイカチ抽出物に感受性であった乳癌細胞は、アポトーシス細胞死を起こす（ＤＮＡ断片化、カスパーゼ活性化、ＰＡＲＰの切断及びアネキシンＶ染色によって確認される）。カスパーゼ３の他に、カスパーゼ４及び９（これらは、小胞体ストレスによって誘導されるアポトーシスに関連している）の活性化もまた、トウサイカチの水性抽出物０．０９０ｍｇ／ｍＬによって誘導されることが観察された。この溶液は、乳癌においてＡＫＴ及びｍＴＯＲキナーゼの急速な不活性化を誘導するが、非形質転換細胞では誘導しなかった。周知のアポトーシス促進特性及び抗増殖特性を有する幾つかの遺伝子の発現もまた、トウサイカチの水性抽出物によって誘導された。従って、本発明の態様は、多細胞生物、例えば哺乳動物、特にヒトの治療用のトウサイカチの抽出物の選択的アポトーシス促進作用を利用することにある。
トウサイカチの抽出物
【００３９】
前記の医薬組成物、医薬、医薬を製造するための使用（方法）及び癌、例えばＥＲ陰性乳癌を治療する方法に用いられる有効成分は、トウサイカチ又はそのアポトーシス活性成分の抽出物を含有する。幾つかの実施形態において、有効成分は、本質的にトウサイカチ又はそのアポトーシス活性成分のみからなる。幾つかの実施形態において、有効成分は、トウサイカチ又はそのアポトーシス活性成分のみからなる。
【００４０】
「抽出物」とは、植物部分を、抽出溶媒と、植物由来の１種又はそれ以上の化合物に適した条件下で接触させて植物物質から抽出溶媒に分配する際に得られる溶液、濃縮液又は残留物（乾燥抽出液）である。前記溶液は、次いで、場合により濃縮されて濃縮物又は残留物を形成する。
【００４１】
本発明に適した抽出媒体としては、水及びエチルアルコールが挙げられる。具体的には、水が抽出溶媒である場合には、精製水が適している。精製水としては、蒸留水、脱イオン水、注射用水、限外濾過水、及び精製された他の形態の水が挙げられる。本発明の幾つかの実施形態において用いられるエチルアルコールは、穀粒エタノール、特に未変性エタノール（例えば、場合により若干の水、例えば最大約１０％までの水を含有していてもよい純穀粒エタノール）である。幾つかの実施形態において、抽出溶媒は、水、エタノール又はこれらの混合物である。濃縮物又は残留物は、抽出液を濃縮する（例えば、蒸発させるか又は凍結乾燥する）ことによって調製してもよい。最初の抽出溶媒、濃縮物又は残留物の形態にかかわらず、これらの調製物のそれぞれは、本発明の目的の「抽出物」とみなされる。
【００４２】
本発明の植物抽出物の製造方法は、場合により、植物物質を、その表面積と容積との比を増大させ且つ抽出プロセスの効率を同時に高めるために最初に粉砕することからなる。植物物質を粉砕する方法は、粉砕、細断、混合、寸断、微粉砕、磨砕などを含む。
【００４３】
次いで、抽出媒体（溶媒）は、植物物質と、１種又はそれ以上の植物化学物質、特に選択的アポトーシス植物化学物質を生じさせるのに適した条件下で接触させ、植物物質から抽出溶媒に分配させる。（トウサイカチの抽出物のアポトーシス成分はアポトーシス植物化学物質、例えばオレアノール酸が挙げられる。）このような条件としては、幾つかの場合には、室温を超える温度までの抽出媒体の加熱、撹拌、接触時間などが挙げられる。典型的な抽出温度は、約５０℃から抽出溶媒の沸点までである。水が抽出溶媒である場合は、抽出温度は、一般的に室温から約１００℃までであり、約５０℃から約８０℃までの温度が特に適しており、約７５℃の温度が特に適している。抽出溶媒としてエタノールの場合には、抽出温度は、一般的に室温から約７８．５℃までであり、約５０℃から約７８℃までの温度が特に適しており、約７５℃の温度が特に適している。当業者には、一方の抽出効率と、他方の植物化学物質の安定性との間で適切な均衡が設けられるべきであることが認識されるであろう。
【００４４】
抽出媒体と植物物質が組み合わされると、これらは、場合により、植物物質から抽出媒体への選択的アポトーシス化合物の効率的な交換を確実にするために撹拌され、植物物質から抽出媒体への有用な量のアポトーシス植物化学物質を抽出するのに十分な時間を接触させておく。このような時間（例えば、約５分〜約１０時間、さらに詳しくは約１０分〜約５時間、特に約３０分〜約２時間）が経過した後に、アポトーシス植物化学物質を含有する抽出媒体は、植物物質から分離される。このような分離は、当該技術で認識されている方法で、例えば濾過、デカントなどによって達成される。
【００４５】
本発明の組成物としては、本明細書に記載の植物抽出物又は本明細書に記載の植物抽出物を含有する組成物が挙げられる。このような実施形態において、本明細書に記載の組成物は、場合により１種又はそれ以上の追加成分を含有していていもよい。このような追加成分は、不活性であってもよいし又は活性であってもよい。不活性成分としては、溶媒、賦形剤又は他の担体が挙げられる。活性成分としては、活性医薬成分（ＡＰＩ）、例えば本明細書に記載の植物抽出物と組み合わせて相乗活性を示す活性医薬成分が挙げられる。
トウサイカチ
【００４６】
前記トウサイカチ種は、中程度の速度で１２ｍまで育つ落葉樹である。その花は、雌雄同体であり、雄性器官及び雌性器官の両方を有し、昆虫によって受粉する。この植物は、窒素固定することが知られている。この植物は、軽質（砂質）土壌、中質（ローム質）土壌及び重質（粘土質）土壌を好み、水はけのよい土壌を必要とする。この植物は、酸性土壌及び中性（アルカリ性）土壌を好む。この植物は、日陰では育つことができない。この植物は、乾燥又は湿潤土壌を必要とし、干ばつに耐えることができる。この植物は、大気汚染に耐えることができる。樹木は、軽い枝葉を有する。これらは、春の終わり頃に葉を出し、初秋にその葉を落とす。
抽出物の調製
【００４７】
特定の実施形態において、果実が、木から収穫され、収穫後短期間内に抽出媒体と接触させられる。抽出媒体は、適当な液状溶媒、例えば酢酸エチル、水又はエタノールである。抽出媒体は、ある場合には酢酸エチル、水、エタノール又は別の比較的極性の液状溶媒である。ある場合には、抽出媒体は、希釈又は濃縮される。抽出媒体は、完全に濃縮されていてもよく、それによって抽出物は残留物（残留抽出物）の形態をとる。従って、抽出物は、場合により溶媒に溶解されていてもよい少なくとも１種又はそれ以上の植物由来の化合物（植物化学物質）であって、これらは、抽出媒体と植物又は植物部分を接触させる１つ又はそれ以上の工程によって抽出媒体中に取り出される化合物を含有する。濃縮抽出物又は残留抽出物は、再構成抽出物を形成するために、適当な希釈剤、例えば酢酸エチル、水及び／又はエタノールを加えることによって再構成されていてもよい。
【００４８】
幾つかの実施形態において、植物抽出物を含有する組成物は、純粋な抽出物又は分配抽出物（抽出物中の１種又はそれ以上の選択的アポトーシス活性化合物に富む抽出物を含む）及びこのような抽出物と１種又はそれ以上の追加成分の組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、前記組成物は、固体、半固体、液体、コロイドなどを含め種々の物理的形状の組成物を含む。組成物が医薬用途を目的とする場合には、追加成分は、製薬学的に許容できる。本発明の組成物が生体に関するものではないアッセイ又はその他の用途を目的とする場合には、添加成分（１つ又は複数）は製薬学的に許容できるものであってもよいし又は許容できないものであってもよい。
【００４９】
幾つかの実施形態において、純粋な抽出物は、１種又はそれ以上の有機溶媒と組み合わせてもよい。このような有機溶媒は、種々の極性をもつものであってもよい。幾つかの実施形態において、適当な溶媒は、酢酸エチル、アセトニトリル、ヘキサン類、（Ｃ１−Ｃ４）アルコール（例えば、メタノール、エタノール、ｉ−プロパノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、ｔ−ブタノール、ｓ−ブタノール、ｉ−ブタノールなど）、クロロホルム、アセトン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、石油エーテル、並びにその他の溶媒、例えば製薬学的に許容し得る溶媒及びヒトに使用するのに安全であると一般的にみなされている（ＧＲＡＳ）溶媒を包含する。
【００５０】
幾つかの実施形態において、前記組成物は、純粋な抽出物を含有するか、あるいは抽出物と１種又はそれ以上の追加溶媒との組み合わせを含有する。幾つかの実施形態において、抽出物は、分配されるか又はさらに精製された抽出物を包含する。分配又は精製は、クロマトグラフィーを含め種々の分離法を使用して行ってもよい。幾つかの実施形態において、抽出物は、抽出物中の活性薬剤をさらに濃縮するために、陰イオン交換クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、順相クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー又は排除クロマトグラフィーによって得られる精製又は分配抽出物である。幾つかの実施形態において、精製又は分配抽出物は、液体クロマトグラフィー、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）の１つ又はそれ以上の工程によって得られる。幾つかの実施形態において、高速液体クロマトグラフィーは、分取規模の高速液体クロマトグラフィーである。幾つかの実施形態において、ＨＰＬＣは、逆相クロマトグラフィー又はイオン交換クロマトグラフィーである。その他の分離の手段、例えば分液ロートあるいはその他の二相又は多相分離メカニズムでの分離を、抽出物を精製又は分配するのに使用してもよい。幾つかの実施形態において、精製又は分配抽出物は、１種又はそれ以上の追加の活性又は不活性成分、例えば溶媒、希釈剤などと組み合わせてもよい。幾つかの実施形態において、適当な溶媒は、酢酸エチル、アセトニトリル、ヘキサン類、（Ｃ１−Ｃ４）アルコール（例えば、メタノール、エタノール、ｉ−プロパノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、ｔ−ブタノール、ｓ−ブタノール、ｉ−ブタノールなど）、クロロホルム、アセトン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、石油エーテル、並びにその他の溶媒、例えば製薬学的に許容し得る溶媒及びヒトに使用するのに安全であると一般的にみなされている（ＧＲＡＳ）溶媒を包含し得る。
【００５１】
適当な追加成分としては、溶媒が挙げられる。溶媒は、製薬学的に許容し得る溶媒及び非製薬学的に許容し得る溶媒に細分化し得る。これに関連して、幾つかの製薬学的に許容し得る溶媒として注射用水（ＷＦＩ）が挙げられ、これは予め選択されたｐＨ又はｐＨ範囲、例えば約２〜約８、さらに具体的には約４．０〜約７．５、さらに詳しくは約４．９〜約７．２にｐＨ調整されていてもよい及び／又は緩衝されていてもよいことが理解されるべきであり。
【００５２】
製薬学的に許容し得る溶媒は、さらに、１種又はそれ以上の製薬学的に許容し得る酸、塩基、塩又はその他の化合物、例えば担体、賦形剤などを含有していてもよい。製薬学的に許容し得る酸としては、ＨＣｌ、Ｈ２ＳＯ４、Ｈ３ＰＯ４、安息香酸などが挙げられる。製薬学的に許容し得る塩基としては、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮａＨＣＯ３などが挙げられる。製薬学的に許容し得る塩としては、ＮａＣｌ、ＮａＢｒ、ＫＣｌなどが挙げられる。酸及び塩基は、特定の予め選択されたｐＨ、特別には約２〜８の範囲内のｐＨ、さらに特別には約５．０〜約７．２の範囲内のｐＨで、製薬学的に許容し得る溶液を緩衝するために適当な割合で加えてもよい。
医薬組成物
【００５３】
本発明は、治療有効量のトウサイカチの抽出物を含有する医薬組成物であって、前記治療有効量がエストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するのに有効である医薬組成物を提供する。本明細書に記載の幾つかの実施形態において、前記医薬組成物は、治療有効量のトウサイカチの抽出物を含有するエストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を治療するための医薬の形態である。本明細書に記載の他の実施形態は、治療有効量のトウサイカチの抽出物を含有する医薬組成物であって、前記治療有効量がエストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を治療するのに有効である医薬組成物を提供する。前記医薬組成物は、エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を治療するための医薬の形態である。トウサイカチの抽出物の治療有効量としては、癌の少なくとも１つの症状からの救済を提供する量、癌の大きさ及び／又は増殖速度を抑制する量が挙げられる。幾つかの実施形態において、前記医薬組成物又は医薬は、さらに１種又はそれ以上の賦形剤を含有する。幾つかの実施形態において、前記医薬組成物又は医薬は、１種又はそれ以上の賦形剤と、トウサイカチの抽出物のみから本質的になる。幾つかの実施形態において、前記医薬組成物又は医薬は、１種又はそれ以上の賦形剤と、トウサイカチの抽出物のみからなる。幾つかの実施形態において、前記医薬組成物又は医薬は、経口投与用の１種又はそれ以上の賦形剤と、トウサイカチの抽出物を含有してなるか、経口投与用の１種又はそれ以上の賦形剤と、トウサイカチの抽出物のみから本質的になるか、あるいは経口投与用の１種又はそれ以上の賦形剤と、トウサイカチの抽出物のみからなる。幾つかの実施形態において、前記医薬組成物はまた、ある量のタンパク質ｐ３８の阻害剤又はアンタゴニストを含む。幾つかの実施形態において、前記のある量のｐ３８と、前記のある量のトウサイカチの抽出物とは、一緒になって、癌の治療において相乗的である。幾つかの実施形態において、前記のある量のｐ３８量と、前記のある量のトウサイカチの抽出物とは、一緒になって、ＥＲ陰性乳癌の治療において相乗的である。幾つかの実施形態において、前記のある量のｐ３８と、前記のある量のトウサイカチの抽出物とは、一緒になって、ＰＲ陰性乳癌の治療において相乗的である。幾つかの実施形態において、前記のある量のｐ３８と、前記のある量のトウサイカチの抽出物とは、一緒になって、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ陰性乳癌の治療において相乗的である。幾つかの実施形態において、前記のある量のｐ３８と、前記のある量のトウサイカチの抽出物とは、一緒になって、三重陰性（ＥＲ、ＰＲ及びＨｅｒ２／ｎｅｕ陰性乳癌）に対して相乗的である。
【００５４】
幾つかの実施形態において、前記の医薬組成物又は医薬に用いられるトウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１０ｇであるか、乾燥重量で約０．０１〜約１０ｇであるか、乾燥重量約０．１〜約１０ｇであるか、又は乾燥重量で約１〜約１０ｇである。２４時間の時間枠内で投与し得るトウサイカチの抽出物の具体的な量としては、乾燥重量で約５０ｍｇ、乾燥重量で約１００ｍｇ、乾燥重量で約１５０ｍｇ、乾燥重量で約２５０ｍｇ、乾燥重量で約３００ｍｇ、乾燥重量で約４００ｍｇ、乾燥重量で約５００ｍｇ、乾燥重量で約６００ｍｇ、乾燥重量で約７００ｍｇ、乾燥重量で約８００ｍｇ、乾燥重量で約９００ｍｇ、乾燥重量で約１ｇ、乾燥重量で約２ｇ、乾燥重量で約３ｇ、乾燥重量で約４ｇ、乾燥重量で約５ｇ、乾燥重量で約６ｇ、乾燥重量で約７ｇ、乾燥重量で約８ｇ、乾燥重量で約９ｇ又は乾燥重量で約１０ｇが挙げられる。
【００５５】
幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約１〜１００ｇである。幾つかの実施形態において、前記治療有効量は、１日当たりトウサイカチの抽出物の乾燥重量で約１０〜約１００ｇ、乾燥重量で約２０〜約１００ｇ、乾燥重量で約３０〜約１００ｇ、乾燥重量で約１０〜約８０ｇ、乾燥重量で約２０〜約８０ｇ、乾燥重量で約３０〜約８０ｇ、乾燥重量で約１０〜約６０ｇ、乾燥重量で約２０〜約６０ｇ、乾燥重量で約３０〜約６０ｇ、乾燥重量で約１０〜約５０ｇ、又は乾燥重量で約２０〜約５０ｇである。２４時間の時間枠内で投与し得るトウサイカチの抽出物の具体的な量としては、乾燥重量で約１０ｇ、乾燥重量で約１５ｇ、乾燥重量で約２０ｇ、乾燥重量で約２５ｇ、乾燥重量で約３０ｇ、乾燥重量で約３５ｇ、乾燥重量で約４０ｇ、乾燥重量で約４５ｇ、乾燥重量で約５０ｇ、乾燥重量で約５５ｇ、乾燥重量で約６０ｇ、乾燥重量で約６５ｇ、乾燥重量で約７０ｇ、乾燥重量で約７５ｇ、乾燥重量で約８０ｇ、乾燥重量で約８５ｇ、乾燥重量で約９０ｇ、乾燥重量で約９５ｇ又は乾燥重量で約１００ｇが挙げられる。
【００５６】
前記の医薬組成物又は医薬は、トウサイカチの抽出物の他に、前記医薬組成物又は医薬の形態に応じて１種又はそれ以上の追加賦形剤を含有していてもよい。患者に投与するための幾つかの適当な形態としては、経口製剤及び非経口製剤が挙げられる。経口製剤としては、液状及び固形製剤が挙げられる。非経口製剤は、一般に液状である。適当な経口液は、一般に水又はその他の希釈剤及び１種又はそれ以上の追加賦形剤、例えば１種又はそれ以上の甘味剤、香味剤及び／又は風味マスキング剤を含有する。固形製剤としては、錠剤及びカプセル剤、並びに水又はその他の製薬学的に許容し得る希釈剤と組み合わせてもよい散剤及び錠剤が挙げられる。錠剤は、一般に、１種又はそれ以上の結合剤を含有し、また１種又はそれ以上の乾燥固形希釈剤、分散剤、崩壊剤、流動促進剤、被覆剤などを含有していてもよい。カプセル剤は、カプセルシェルそれ自体の他に、追加賦形剤、例えば分散剤、崩壊剤などを含有していてもよい。溶解用の散剤は、トウサイカチの乾燥抽出物の他に、１種又はそれ以上の香味剤、甘味剤及び／又は風味マスキング剤を含有していてもよい。あるいは、溶解用の散剤は、１つの容器（例えば、第一の小袋）にトウサイカチの乾燥抽出物（単独で又は１種又はそれ以上の賦形剤との混合物で）を有し且つ第二の容器（例えば、第二の小袋）に１種又はそれ以上の賦形剤を有するキットに包装することができる。トウサイカチの乾燥抽出物と賦形剤とに適した容器は、気密性、防水性、遮光性又はこれらの組み合わせで有り得る。
【００５７】
幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、経口製剤は、エリキシル剤、散剤、１種又はそれ以上の錠剤、あるいは１種又はそれ以上のカプセル剤である。幾つかの実施形態において、経口製剤は、場合により１種又はそれ以上の賦形剤、例えば香味剤、甘味剤、及び／又は風味マスキング剤との混合物での濃縮経口エリキシル剤である。幾つかの特定の実施形態において、単位用量は、１日用量であるか又は分割された１日用量である。１日用量は、単一の投与単位であってもよいし、又は２回、３回、４回又はそれ以上の投与単位の間で分割されていてもよい。幾つかの現在好ましい実施形態において、１日用量は、単一用量として、すなわち１日当たり１回（ｑ．ｄ．）として提供されてもよく、また１日用量は、単一の投与単位に含有される。幾つかの他の現在好ましい実施形態において、１日用量は、２つの別個の用量（ｂ．ｉ．ｄ．）として提供され、１日用量は、互いに都合よく接続され、共通の容器に密封されていてもよいし又は容易に区別できる１日投薬単位を形成するように互いに関連し得る別個の投薬単位に入れられる。現行の好ましい実施形態において、１日用量は、２つの別個の投薬単位の間に均一に分割されるが、他の実施形態においては、１日用量は、別個の投薬単位の間で均一に分割される必要はない。
【００５８】
本発明の医薬組成物及び医薬を用いて治療し得る具体的な癌としては、トウサイカチの抽出物がアポトーシスを誘導する癌が挙げられる。トウサイカチの抽出物によるアポトーシスの誘導に感受性であると認められている癌としては、エストロゲン受容体を発現しない癌、特にエストロゲン受容体α（ＥＲα）を発現しない癌が挙げられる。従って、治療有効量のトウサイカチの抽出物を用いて治療し得る幾つかの癌としては、エストロゲン受容体陰性乳癌、プロゲステロン陰性乳癌、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ陰性乳癌、ＥＲ、ＰＲ及びＨｅｒ２／ｎｅｕのうちの２つ又は３つ全部に陰性である乳癌が挙げられる。幾つかの実施形態において、ＥＲを発現しない癌、は、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００５９】
トウサイカチの抽出物は、前記のようにして溶液又は乾燥形態で調製し得る。溶液の形態では、トウサイカチの抽出物は、フレーバーティー（ｆｌａｖｏｒｅｄ  ｔｅａ）又はノンフレーバーティーの形態で投与されてもよい。従って、賦形剤は、幾つかの実施形態において、幾つかの調味料、例えば甘味剤（これは、前記抽出物の苦味を中和するために望ましいものであり得る）を包含する。溶液もまた、乾燥抽出物からティー又はエリキシルの形態で調製することができる。また、調味料、例えば甘味剤が望ましいものであり得る。風味マスキングが、医薬組成物の患者許容性を向上させるために用いてもよい。甘味剤は、を含む。
【００６０】
乾燥抽出物は、経口利用できる形態として、例えばカプセル、錠剤、カプレットなどとして製剤し得る。カプセルは、適当量の乾燥抽出物を１つ又はそれ以上のゼラチンカプセルシェルに測り取り、カプセルを組み立てることによって調製し得る。錠剤及びカプレットは、乾燥抽出物を、１種又はそれ以上の結合剤及び場合によっては１種又はそれ以上の崩壊剤と組み合わせることによって調製し得る。錠剤、カプレット、カプセルなどは、胃の不調を防止するために、例えば腸溶性コーティングで被覆されていてもよい。
【００６１】
前述の乾燥抽出物はまた、水又は他の適当な溶媒に溶解することができる散剤の形態に調製し、患者に投与することもできる。幾つかの実施形態において、この形態は、経口形態である。幾つかの具体例において、散剤は、あり得る。
【００６２】
乾燥抽出物又は濃縮抽出液は、１種又はそれ以上のゲル化剤と組み合わせ、ゲルカプセルに挿入してもよい。また、乾燥抽出物又は濃縮抽出液は、ゲル化剤及び場合によっては食用ゲルとして経口投与するための１種又はそれ以上の香味剤と組み合わせてもよく、又はノンフレーバー変種（ｖａｒｉａｎｔ）を、直腸坐薬ゲル又はゲルカプセルとして投与してもよい。
【００６３】
抽出物の単位用量は、剤形内に含まれる当量の乾燥抽出物によって特徴付けられる。例えば、幾つかの実施形態において、単位投薬量は、１ｍｇ〜約１０ｇの乾燥抽出物又はその均等物を含有し得る。幾つかの実施形態において、前記単位用量は、約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、約１ｍｇ〜約１００ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０００ｍｇ（１ｇ）、約１ｍｇ〜約１００００ｍｇ（１０ｇ）の乾燥抽出物又はその均等物を含有するであろう。幾つかの実施形態において、前記単位用量は、約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約１０ｍｇ〜約１０００ｍｇ又は約１０ｍｇ〜約１００００ｍｇの乾燥抽出物又はその均等物を含有する。幾つかの実施形態において、前記単位用量は、約１００ｍｇ〜約５０００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１００〜約１０００、約１００〜約８００ｍｇの乾燥抽出物又はその均等物を含有する。トウサイカチの乾燥抽出物の均等物は、トウサイカチの乾燥抽出物と同じ量のアポトーシス活性成分（ａｃｔｉｖｅ）を含有するトウサイカチの抽出物のある量の乾燥物、液体、ゲル又は他の混合物である。従って、トウサイカチの乾燥抽出物０．０９０ｍｇ／ｍＬを含有するティー（ｔｅａ）３０ｍＬは、１５ｍｇの乾燥トウサイカチＧｌｅｄｉｔｓｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓに相当する単位用量である。トウサイカチの乾燥抽出物、結合剤、充填剤、崩壊剤のそれぞれを１００ｍｇ含有する錠剤は、１００ｍｇの乾燥抽出物それ自体（ｎｅａｔ）に相当する。他の投薬量、例えば１日当たり乾燥重量で１０〜１００ｇの投薬量も、本明細書にさらに詳しく記載されるように意図される。
【００６４】
幾つかの実施形態において、前記医薬組成物は、ｐ３８  ＭＡＰキナーゼ阻害剤を含有する。幾つかの実施形態において、ｐ３８  ＭＡＰキナーゼ阻害剤は、ＳＢ２０３５８０、ＳＢ２０２１９０、ＳＢ２３９０６３、ＬＹ４７９７５４、ＡＲＲＹ−７９７、ＡＲＲＹ−６１４、ＬＰ−５９０、ＰＤ１６９３１６、ＶＸ−７０２、又はこれらの製薬学的に許容し得る塩又は組み合わせである。ｐ３８  ＭＡＰキナーゼ阻害剤は、分裂誘発ＭＡＰキナーゼを阻害する化合物であり、これは炎症反応に関与し且つアポトーシスに、潜在的に細胞をアポトーシスから保護するものとして関係している。
治療方法
【００６５】
本明細書に記載のトウサイカチの抽出物を含有する組成物は、エストロゲン受容体陰性（ＥＲ陰性）癌細胞、例えばＥＲ陰性乳癌細胞及び前立腺癌細胞においてアポトーシス活性を有する選択的トウサイカチを含む。従って、これらの組成物は、細胞の過剰増殖に特徴がある種々の疾患、例えば生物体、器官、組織又は細胞株において正常なアポトーシスプロセスの不全によって引き起こされる様々な疾患状態の治療において活性を有することが期待される。本明細書に記載の組成物を用いて治療できると想定される疾患の中に、癌、例えば以下に限定されないが、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、例えば軟組織の肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌又は子宮癌がある。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組成物は、固形腫瘍、例えば乳癌、肺癌、結腸癌、脳腫瘍、前立腺癌、胃癌、膵臓癌、卵巣癌、皮膚癌（黒色腫）、内分泌系癌、子宮癌、精巣癌及び膀胱癌の中から選択される１種又はそれ以上の癌と診断されている患者に投与される。
【００６６】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載のトウサイカチの抽出物を含有する組成物は、良性の増殖性疾患、例えば良性の前立腺肥大、乾癬又は再狭窄（例えば、移植ステントの再狭窄）を治療するのに有効である。
【００６７】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載のトウサイカチの抽出物を含有する１つ又はそれ以上の組成物は、異常な細胞増殖、例えば癌、固形腫瘍、良性過剰増殖性疾患などの治療に有用な別の薬剤と組み合わせてもよい。このような追加薬剤は、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗物質、挿入抗生物質、増殖因子阻害剤、細胞周期阻害剤、酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、生物学的反応調節剤、抗体、細胞障害性薬物、抗ホルモン及び抗アンドロゲンの中から選択し得る。他の追加薬剤としては、ｐ３８  ＭＡＰキナーゼ阻害剤、例えばＳＢ２０３５８０、ＳＢ２０２１９０、ＳＢ２３９０６３、ＬＹ４７９７５４、ＡＲＲＹ−７９７、ＡＲＲＹ−６１４、ＬＰ−５９０、ＰＤ１６９３１６、ＶＸ−７０２、あるいはこれらの製薬学的に許容し得る塩又は組み合わせが挙げられる。
【００６８】
トウサイカチの抽出物を含有する組成物の有効量は、本明細書に記載のように患者において治療効果を生じるのに有効な量である。幾つかの実施形態において、前記有効量は、患者において過剰増殖性細胞の１つ又はそれ以上の集団においてアポトーシスを誘導するのに十分な量である。幾つかの実施形態において、前記有効量は、生物体において過剰増殖性細胞疾患、例えば癌の１つ又はそれ以上の症状の軽減を生じるのに十分な量である。幾つかの実施形態において、前記有効量は、過剰増殖細胞疾患の進行を著しく遅らせるか、前記過剰増殖性疾患の部分的又は完全寛解を生じるか、前記過剰増殖細胞疾患の再発、広がり又は悪性増殖に対して部分的又は完全な予防を提供するのに十分な量である。幾つかの実施形態において、前記用量は、治療計画の成功に臨界的であり得る。トウサイカチの抽出物は、極めて無毒性であると思われるので、前記有効量は、以下で詳細に論じるように、乾燥抽出物、あるいはその溶液又はその他の製薬学的に許容し得る形態の均等物の１日当たり患者当たり約１ｍｇから約１００ｇまで変化させ得る。幾つかの実施形態において、前記有効量は、１日当たり患者当たり約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、約１ｍｇ〜約１００ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０００ｍｇ（１ｇ）、約１ｍｇ〜約１００００ｍｇ（１０ｇ）である。幾つかの実施形態において、前記有効量は、１日当たり患者当たり約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約１０ｍｇ〜約１０００ｍｇ又は約１０ｍｇ〜約１００００ｍｇである。幾つかの実施形態において、前記有効量は、１日当たり患者当たり約１００ｍｇ〜約５０００、約１００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１００〜約１０００、約１００〜約８００ｍｇである。幾つかの実施形態において、１日用量は、以下で詳細に論じるように、１日当たりトウサイカチの乾燥重量で約１０ｇ〜約１００ｇの範囲内である、
【００６９】
従って、本明細書に記載の本発明の幾つかの実施形態は、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌を有する患者を治療する方法であって、前記患者に有効な治療有効量のトウサイカチの抽出物を投与することからなる、方法を提供する。本明細書に記載の別の実施形態は、エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌を有する患者を治療する方法であって、前記患者に有効な治療有効量のトウサイカチの抽出物を投与することからなる、方法を提供する。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１００ｇである。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約０．００１〜約１０ｇである。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物の治療有効量は、１日当たり前記抽出物の乾燥重量で約１〜１００ｇである。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、エストロゲン受容体α（ＥＲα）陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、プロゲステロン受容体（ＰＲ）及び／又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ又は両方にも陰性である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、三重陰性乳癌である。幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、転移性である。幾つかの実施形態において、トウサイカチの抽出物は、経口製剤である。幾つかの実施形態において、経口製剤は、エリキシル剤、散剤、１つ又はそれ以上の錠剤、あるいは１つ又はそれ以上のカプセル剤である。幾つかの実施形態において、エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現しない癌は、骨癌、脳幹神経膠腫、乳癌、副腎皮質癌、肛門部癌、膀胱癌、内分泌系癌、食道癌、頭部又は頸部癌、腎臓癌、尿管癌、副甲状腺癌、陰茎癌、小腸癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵管癌、腎盂癌、膣癌、外陰癌、慢性又は急性白血病、結腸癌、皮膚又は眼内黒色腫、神経膠腫、ホジキン病、肺癌、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、卵巣癌、膵癌、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、骨髄軸腫瘍、胃癌、子宮癌、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００７０】
幾つかの実施形態において、治療日数は、非治療日数によって変化させてもよい。例えば、治療は、１日目に前記の有効量を用いて開始し得、３日目、５日目、７日目（又は８日目）、９日目、１１日目、１３日目などに有効量の投与が反復される。治療は、まる１週間１日に１回投与し、次いで１週間治療を休止し、次いで治療に少なくともさらに１週間投与し得る。トウサイカチの抽出物を用いた治療は、別の抗癌治療と交互に入れ替えてもよいし、又は癌治療の併用効果の利点を得るために別の抗癌治療と組み合わせてもよい。
【００７１】
さらなる癌治療としては、以下に限定されないが、固形腫瘍の全部又は一部の外科的切除、放射線治療、補助化学療法、抗炎症薬、鎮痛薬などが挙げられる。
既往療法
【００７２】
幾つかの実施形態において、本発明は、癌、特に１つ又はそれ以上の既往療法に反応しなかった癌の治療のために患者に治療有効量のトウサイカチの抽出物を投与することを提供する。癌の治療のための種々の療法が知られており、本明細書に記載の使用に先行すると考え得る。例えば、乳癌患者は、多くの場合、癌病変の外科的切除、例えば腫瘍切除（広範囲局所切除としても知られている）、又は乳房切除を受ける。ある場合には、リンパ節も切除される（根治的乳房切除術）。ある場合には、患者は、病変の外科的切除の代わりとして、又はより一般的には病変の外科的切除の補助として放射線療法を受けてもよい。ある場合には、患者は、外科的治療及び／又は放射線治療の代替又は補助として化学療法を受けてもよい。後日、腫瘍が隣接組織又はさらに遠位の組織まで広がっているか又は転移していることを見つけ出すためにのみ前記治療の１つ又はそれ以上を患者が受けることは一般的である。治療有効量のトウサイカチの抽出物を含有する医薬組成物を、癌病変の既往外科的切除、乳房の予防的切除又は部分切除、放射線治療及び／又は化学療法を受けている患者に投与することは、本発明の態様であるとみなされる。幾つかの実施形態において、処置された癌は、既往の外科手術、放射線治療及び／又は化学療法に対して難治性になっている。
【００７３】
先に使用される化学療法としては、１種又はそれ以上の化学療法剤を用いた化学療法が挙げられる。乳癌を治療するのに利用できる具体的な化学療法剤としては、細胞障害性薬物、例えばドキソルビシン、シクロホスファミド、メトトレキセート、パクリタキセル〔タキソール（登録商標）、アブラキサン（登録商標）〕、ドセタキセル、チオテパ、ミトキサントロン、ビンクリスチン、タモキシフェン、酢酸メゲストロール、アミノグルテチミド、フルオキシメステロン、ロイプロリド、ゴセレリン、プレドニゾン、又はこれらの組み合わせが挙げられる。
【００７４】
卵巣癌を治療するのに利用できる具体的な化学療法剤としては、シクロホスファミド、エトポシド、アルトレタミン、タモキシフェン、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００７５】
子宮頸癌を治療するのに利用できる具体的な化学療法剤としては、シスプラチン、カルボプラチン、ヒドロキシ尿素、イリノテカン、ブレオマイシン、ビンクリスチン、マイトマイシン、イホスファミド、フルオロウラシル、エトポシド、メトトレキセート、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００７６】
前立腺癌を治療するのに利用できる具体的な化学療法剤としては、ドキソルビシン、エストラムスチン、エトポシド、ミトキサントロン、ビンブラスチン、パクリタキセル、ドセタキセル、カルボプラチン、及びプレドニゾンが挙げられる。
【００７７】
膵癌を治療するのに利用できる具体的な化学療法剤としては、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、マイトマイシン、イホスファミド、ドキソルビシン、ストレプトゾシン、クロロゾトシン及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００７８】
利用できる具体的な化学療法剤としてはまた、ＶＧＦＲ及びＥＧＦＲ阻害剤、例えばゲフィニチブ、エルロチニブ、イマチニブ、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
特定の用語の定義
【００７９】
本明細書で使用される「方法」という用語は、所定の課題を達成するための作法、手段、技法及び手順、例えば以下に限定されないが、化学、薬理学、生物学、生化学、医学及びホメオパシー技術の熟練者によって公知の作法、手段、技法及び手順から知られているか又は容易に開発される作法、手段、技法及び手順を指す。
【００８０】
本明細書で使用される「活性を阻害する」という用語は、癌細胞の成長及び／又は増殖を、適切な位置で、すなわち、腫瘍形成の開始部位での成長及び増殖と、転移による増殖との両方を遅らせる、好ましくは停止させることを指す。活性を阻害するとは、癌性細胞を殺すことも包含し、実際に、それは本発明の最も好ましい実施形態である。
【００８１】
本明細書で使用される、「癌」という用語は、種々の型の悪性新生物を指し、その大部分は、ステッドマン医学辞典、第２５版（Ｈｅｎｓｙｌ  ｅｄ．１９９０）によって定義されているように、周囲組織を侵すことができ、種々の部位に転移し得る。本発明によって治療し得る癌の例としては、以下に限定されないが、脳腫瘍、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、腎癌、膀胱癌、乳癌、肺癌、口腔癌及び皮膚癌が挙げられる。本発明の現在好ましい実施形態において、治療される癌は、乳癌又は卵巣癌である。
【００８２】
本明細書で使用される、固形腫瘍癌細胞と本発明の抽出物と接触させるという文脈の「接触させる」という用語は、本発明の抽出物と標的癌細胞とを、前記細胞の活動に直接に又は間接に影響を及ぼすことができるような方法で一緒にすることを指す。本明細書で使用されるように、接触させるとは、生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で行われる手順、すなわち本発明の対象である癌性細胞を患者の体外で調査する手順を指す。患者の体外で存在する細胞は、細胞培養皿に保持するか又は増殖させることができる。生物体の体外の細胞について、種々の周知の貫膜担体法及び直接細胞顕微注射法を用いて又は用いずに本発明の抽出物を接触させる多数の方法が存在し、当業者には周知である。
【００８３】
「生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）」という用語は、生体内で、例えば生きているヒト又はその他の哺乳動物、例えばマウス又はラット内での接触又は処置を指す。
【００８４】
本明細書で使用される「抽出物」とは、トウサイカチ又はその選択された部分を、好ましくは水、アルコール又はこれらの組み合わせの中で抽出プロセスに供した後に、乾燥又は凍結乾燥形態で得られる可溶性固体の残留物を指す。
【００８５】
本明細書で使用される「ＢＮ１０７」とは、トウサイカチの抽出物を指す。
【００８６】
本明細書で使用される「治療する」、「治療すること」及び［治療」という用語は、固形腫瘍癌及び／又はその付随する症状を軽減するか又は抑止する方法を指す。特に、前記の用語は、単純に、癌に侵された個人の寿命を延ばすこと又は疾患の１つ又はそれ以上の症状を軽減することを意味する。
【００８７】
本明細書で使用される「投与する」、「投与すること」又は「投与」とは、治療又は処置される特定の癌の治療に適する方法で、患者に本発明の１つ又は複数の抽出物、あるいは本発明の１つ又は複数の抽出物を含有する医薬組成物を送達させることを指す。この用語は、自己投与及び医療専門家又は他の医療提供者による投与を包含する。
【００８８】
本明細書で使用される「哺乳動物」という用語は、その癌が自己由来の（すなわち、哺乳動物において自然に生じる）ものであろうと、外因性（すなわち、異種）起源のものであろうと、癌に侵される哺乳動物を指す。「哺乳動物」という用語は、ヒト、並びにネズミ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ及びその他の哺乳動物種を包含する。
【００８９】
「患者」とは、固形腫瘍癌に感受性の高等生物を指す。このような高等生物の例としては、限定されることなく、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、魚類及び爬虫類が挙げられる。具体例において、「患者」とは、ヒトを指す。特定の実施形態において、患者は、癌、例えば乳癌又は本明細書に記載のその他の癌を患うヒトである。幾つかの実施形態において、癌は、転移性癌、例えば転移性乳癌又は本明細書に記載のその他の転移性癌である。幾つかの実施形態において、患者は治療未験者である。幾つかの好ましい実施形態において、患者は、以前に癌の治療を受けている。幾つかの実施形態において、患者は、現在、癌のその他の治療を受けている。幾つかの実施形態において、患者は、以前に１つ又はそれ以上の癌療法で治療を受けているが、療法に反応しなかった。幾つかの実施形態において、患者は、以前に、１つ、２つ、３つ、４つ又はそれ以上、特に１〜４つの既往療法で治療を受けているが、これらの治療アプローチに反応しなかった。従って、本発明の「患者」の好ましいサブクラスは、乳癌の１〜４種類の既往療法で以前に治療を受けているが、これらに反応しなかった転移性乳癌を患う患者である。
【００９０】
本明細書で使用される「治療有効量」という用語は、患者の癌の少なくとも１つの症状を治療するのに有効なトウサイカチの抽出物の量を指す。特定の実施形態において、このような量の抽出物は、次のリスト：（１）腫瘍の大きさを減少させる、（２）腫瘍転移を阻止する（すなわち、ある程度まで遅らせる、好ましくは停止させる）、（３）腫瘍成長をある程度まで阻止する（すなわち、ある程度まで遅らせる、好ましくは停止させる）、及び／又は（４）癌に付随する１つ又はそれ以上の症状をある程度まで軽減する（又は好ましくは除く）、（５）腫瘍の成長を安定化させる、（６）疾患の進行までの時間を引き延ばす、及び／又は（７）全生存率を向上させることからの少なくとも１つの効果を有する。
【００９１】
本明細書で使用される「医薬組成物」とは、本明細書に記載の抽出物の１つ又はそれ以上と、他の化学成分、例えば生理学的に許容し得る担体及び賦形剤との混合物を指す。薬理学的組成物の目的は、患者に対する本発明の１つ又は複数の抽出物の投与を促進することにある。
【００９２】
本明細書で使用される「製薬学的に許容し得る」とは、参照された薬剤又は賦形剤が、一般に、医薬組成物に使用するのに許容できるとみなされることを意味する。
【００９３】
本明細書で使用される「生理学的に許容し得る担体」とは、生体に有意な刺激を引き起こさず且つ投与された組成物の生物学的活性及び特性を抑止しない担体又は希釈剤を指す。
【００９４】
本明細書で使用される「賦形剤」とは、本発明の抽出物の投与をさらに促進するために医薬組成物に加えられる不活性物質を指す。従って、「賦形剤」という用語は、具体的には、他の有効成分、例えば、特に他の化学療法成分、例えば、以下に限定されないが、トウサイカチ以外の植物種由来の成分を除外する。
【００９５】
本明細書で使用される「のみからなる」という語句は、文章の以下の部分に特定されていない任意の要素、工程又は成分を除外する。
【００９６】
本明細書で使用される「のみから本質的になる」という語句は、文章の以下の部分の範囲を、特定された物質又は工程並びに特許請求された発明の基本的及び新規な特徴に実質的に影響を及ぼさない物質又は工程に限定する。この場合には、抗癌活性を有することが知られている活性医薬成分は、特許請求された発明の基本的及び新規な特徴に実質的に影響を及ぼすとみなされ、これに対して鎮痛剤又は抗炎症剤は、特許請求された発明の基本的及び新規な特徴に実質的に影響を及ぼすとみなされない。
【００９７】
本明細書で使用される「１日当たり乾燥重量でのｇ」（さらには「ｇ乾燥重量」）という用語は、トウサイカチの抽出物に関して、トウサイカチ(Fructa Gleditsia sinensis Lam)のある量が抽出され、抽出媒体が例えば蒸発又は凍結乾燥によって除去された後の残留物の乾燥重量（ｇ）を意味する。
【００９８】
疾患、障害、症候群、状態又は症状の治療（及びその文法的変化  −  例えば、治療する、治療するために、治療しつつある、治療されたなど）は、臨床医がこのような治療を受ける被検体を確認し、この被検体に本発明の組成物を投与するという段階を含む。従って、治療は、本発明の選択的アポトーシス植物抽出物を被検体に投与することによって回復され、軽減され、改善され、除去され、治癒される可能性がある疾患、症候群、状態又は症状の診断を含む。治療はまた、疾患、障害、症候群、状態又は症状の同時回復、軽減、改善、除去又は治癒も含む。幾つかの実施形態において、治療とは、疾患、障害、症候群、状態又は症状の発症の防止又は遅延（すなわち、予防）、疾患、障害、症候群、状態又は症状の進行の防止又は遅延、及び／又は疾患、障害、症候群、状態又は症状の重症度の軽減を意味する。特に、新生物増殖の場合には、治療は、新生物増殖の軽減、及び逆転、停止又は遅延を含む。これに関して、治療はまた、寛解、例えば完全寛解及び部分寛解も含む。更年期症状の場合には、治療は、種々の症状の予防及び軽減を含む。
【００９９】
疾患、障害、症候群、状態又は症状の予防（及びその文法的変化）は、疾患、障害、症候群、状態又は症状を発症するリスクがある被検者を確認し、その被検体に前記の疾患、障害、症候群、状態又は症状の発症を未然に防ぐ又は遅らせる可能性のある十分な量の本明細書に記載の植物抽出物を投与することを含む。ある場合には、予防は、臨床医が、要求にかなう水準の医療を施し、ホルモン補充療法の必要があると考える閉経後の女性を確認し、その女性に本発明の植物抽出物を投与し、それによって１つ又はそれ以上の更年期症状を阻止するか又は遅らせることを含む。幾つかの実施形態において、骨粗鬆症の予防は、予防は、臨床医が、要求にかなう水準の医療を施し、骨粗鬆症を発症するリスクがあると考える閉経後の女性を確認し、その女性に本発明の植物抽出物を投与し、それによって骨量減少の開始を阻止するか又は遅らせることを含む。
【０１００】
軽減は、疾患、障害、症候群、状態又は症状の重症度、発生の回数及び／又は頻度の減少を含む。更年期症状の軽減には、ほてり、不眠症、失禁、うつ病などの頻度及び／又は重症度を減少させることを含む。
【実施例】
【０１０１】
本発明は、以下の例示的及び非限定的な実施例を参照してさらに十分に理解し得る。
【実施例１】
【０１０２】
実施例１：生体外試験
トウサイカチの果実の抽出物は、ミトコンドリアアポトーシス経路によって乳癌細胞に対して増殖阻止特性を発揮すると思われる。細胞内のエストロゲン受容体（ＥＲ）の不在は、トウサイカチの抽出物の感受性と相関する。乳癌株内へのＥＲα発現の導入は、トウサイカチのアポトーシス促進作用からの保護をもたらす。トウサイカチの抽出物で処理した感受性（ＥＲ−）株と非感受性（ＥＲ＋）株とを比較するトランスクリプトーム分析により、感受性の原因である得る遺伝子発現の異なるパターンが明らかにされた。
【０１０３】
トウサイカチの植物抽出物は、癌性細胞においてアポトーシスを選択的に誘導する。腫瘍及び非形質転換細胞株並びに細胞を、トウサイカチの果実の乾燥抽出物０．０９０ｍｇ／ｍＬ（９０μｇ／ｍＬ）を含有する溶液で処理した。トウサイカチの果実の乾燥抽出物０．０９０ｍｇ／ｍＬを含有する溶液はまた、本明細書ではＢＮ１０７ともいう。認めることができるように、図１Ａ〜１Ｄのグラフは、処理の２４時間後にアネキシンＶを結合した細胞の％を示す。
【０１０４】
ＥＲαは、ＢＮ１０７で誘導したアポトーシスにおいて役割を果たす。以下の表１−１において、細胞をＢＮ１０７で処理し、アネキシンＶ／ＰＩ結合の分析のために２４時間後に収穫した実験の結果である。３つの独立した実験を、各データポイントついて行った。
【表１】
2011516580.tif 000003
表１：細胞をＢＮ１０７で処理し、アネキシンＶ／ＰＩ結合の分析のために２４時間後に収穫した。示した概要は、３つの独立した実験の結果である。
【０１０５】
興味深いことに、ＥＲαの発現は、図２に示されるように、ＢＮ１０７で誘導したアポトーシスから細胞を救済する。特に、図２Ａは、ＬａｃＺ又はＥｒａウイルスを感染させたＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞を、エストロゲン（１０ｍＭ）の存在下で、ＢＮ１０７で処理し、アネキシンＶ／ＰＩ結合で分析した実験の結果を表す。ＢＮ１０７は、半分のＬａｃＺ細胞の下でまもなく細胞死を引き起こし、これに対してＥｒａ細胞では比較的少ない細胞死が認められた。図２Ｂに示されるように、ＬａｃＺ細胞はＥＲα陰性（ＥＲα−）であり、これに対してＥｒａ細胞はＥＲαタンパク質に陽性であった（ＥＲ＋）。図２Ｃに示されるように、ＷＩＳＰ２（ＥＲαの下流標的）の発現は、ＬａｃＺ細胞ではほぼ消失し、これに対してＥｒａ細胞は有意な量のＷＩＳＰ２を産生した。以下の表１−２は、ＢＮ１０７で処理したＢＮ１０７感受性（Ｈｓ５７８Ｔ）細胞及び非感受性（ＭＣＦ７）細胞を使用して作製されたマイクロアレイデータのＩｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＩＰＡ）を要約する。
【表２】
2011516580.tif 000004
表２：ＢＮ１０７で処理したＢＮ１０７感受性（Ｈｓ５７８Ｔ）細胞及び非感受性（ＭＣＦ７）細胞を使用して作製されたマイクロアレイデータのＩｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＩＰＡ）に基づいて、ＢＮ１０７処理によって誘導された細胞経路／シグナル伝達経路
【０１０６】
図３は、ＢＮ１０７で処理したＨｓ５７８Ｔ細胞及びＭＣＦ７細胞に関するタンパク質発現分析の結果を示す。Ｈｓ５７８Ｔ細胞及びＭＣＦ７細胞を、ＢＮ１０７で処理し、示された時間点で収穫した。
【０１０７】
生体外での実験は、ミトコンドリア介在アポトーシスがＢＮ１０７の増殖阻止効果に介在する主要な細胞経路であるらしいということを実証している。機能的エストロゲン受容体の存在は、乳癌細胞の感受性を、ＢＮ１０７誘導アポトーシスに対して小さくする。ＢＮ１０７に感受性の細胞は、死を促進する（ｐｒｏ−ｄｅａｔｈ）分子の発現を高め且つ生存促進（ｐｒｏ−ｓｕｒｖｉｖａｌ）／増殖経路を阻害することによって反応する。これに対して耐性細胞は、細胞を細胞周期停止に委ねることによって及び／又は細胞増殖に関与するタンパク質の活性を高めることによって反応する。従って、ＢＮ１０７、及び拡張によってトウサイカチの果実の抽出物は、一般的に、選択的アポトーシス活性を有すると結論が下される。従って、トウサイカチの果実の抽出物を含有する医薬組成物は、多細胞生物において、特にＥＲαを発現しない組織、例えばＥＲα陰性乳癌、前立腺癌などにおいてアポトーシス活性を有することが予期される。
【実施例２】
【０１０８】
実施例２：エストロゲン受容体陰性乳癌細胞に対するＢＮ１０７及びオレアノール酸の選択的アポトーシス促進作用は、脂質ラフト上のｍＴＯＲＣ１／ｍＴＯＲＣ２生存シグナル伝達の妨害によって介在される
【０１０９】
ホルモン法、標的化法又は化学療法は、その同族受容体の発現に大きく依存し、多くの場合、耐え難い毒性を伴う。エストロゲン受容体陰性（ＥＲ−）乳癌に対する有効で毒性の少ない療法が、緊急に必要とされる。本実施例は、ＥＲ−乳癌細胞に関して、選択的アポトーシス促進作用誘導ＢＮ１０７及びその成分サポニン、オレアノール酸（ＯＡ）に介在する潜在的メカニズムを調査する。
【０１１０】
一群の乳癌細胞株を調べ、ＥＲ−乳癌細胞株において最も顕著な細胞障害作用を観察した。アポトーシスは、ＢＮ１０７の細胞障害性に介在する主な細胞経路であると思われた。ＢＮ１０７に対する感受性は、ＥＲαの発現がＭＤＡ−ＭＢ−２３１において誘導された場合に著しく低下し、ＢＮ１０７誘導アポトーシスにおけるＥＲαの保護的役割を確認する。ＢＮ１０７、すなわちＯＡ誘導体に富む抽出物は、おそらくは形質膜脂質ラフト（ＬＲ）及びＬＲにより介在されるシグナル伝達を妨害したコレステロールに結合することによって、コレステロールホメオスタシスにおいて急速な変化を引き起こした。ＥＲ−細胞におけるＢＮ１０７又はＯＡ処理は、ＬＲ、すなわちｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２及びＡｋｔに関連する重要な生存シグナル伝達複合体の急速且つ特異的な再分配又は分解／置換／阻害をもたらした。ＢＮ１０７又はＯＡとコレステロールの同時投与は、アポトーシス促進作用を特異的に消失させ、妨害された生存シグナル伝達を元の状態に戻した。これは、これらのシグナル伝達複合体に存在するタンパク質構成成分の量を調節することによるｍＴＯＲＣ１／ｍＴＯＲＣ２／Ａｋｔ活性の同時阻害を実証する。
【０１１１】
治療選択肢の進歩が生存に好ましい影響をもたらしているにもかかわらず、現行のレジメンは、毒性副作用を招き、またエストロゲン受容体陰性（ＥＲ−）転移性乳癌に対してほとんど効果がない。現在、ＥＲ−／プロゲステロン受容体陰性（ＰＲ−）／ＨＥＲ２陰性（Ｈｅｒ２−）腫瘍を有する患者は、未だに腫瘍専門医のための治療的挑戦を提示している。従って、最小毒性の新規且つ有効な治療法が、この患者群に緊急に必要とされる。
【０１１２】
トウサイカチの果実又はそれから単離されたトウサイカチサポニン類の抗癌効果は、活性酸素種（ＲＯＳ）を誘導し、テロメラーゼ、ＣＯＸ２発現、ＶＥＧＦ分泌及びプロテアソーム活性を阻害するその能力に関連するであろう細胞障害性の誘導に寄与している。ＢＮ１０７は、１群のヒト乳癌株に対して抗増殖活性を示すことが明らかにされているトウサイカチＧ．ｓｉｎｅｎｓｉｓの水性抽出物である。トウサイカチＧ．ｓｉｎｅｎｓｉｓの抽出物は、オレアノール酸（ＯＡ）と類似の基本構造を有するトリテルペノイドサポニン類に富む。これらのサポニン類が、オリゴ糖鎖及びモノテルペン単位の存在及び位置に大きく依存する腫瘍細胞に対して特異的細胞障害性を示すことが明らかにされている。また、ＯＡ及びその合成誘導体が、培養及び動物モデルにおける種々様々な腫瘍細胞において強い抗腫瘍活性を誘導することが明らかにされている。
【０１１３】
トリテルペノイドサポニン類の生理活性は、通常、これらが形質膜コレステロールに複合する能力に関連する。現在、コレステロールが脂質ラフト（ＬＲ）（形質膜内の特殊なプラットフォーム）の機能に重要であること、並びにコレステロールを結合する及び／又は前記ラフトからコレステロールを抽出する薬剤が前記ラフト会合タンパク質の配置及び機能を変化させることが、十分に確立されている。ＬＲは、細胞表面受容体及びシグナル伝達分子が集中しており且つ細胞表面でシグナル伝達を空間的に組織する部位である。ＬＲは、ウイルス感染、エンドサイトーシス、コレステロール輸送、並びに細胞の増殖及び生存のような種々のプロセスに関与している。幾つかのタンパク質がＬＲ中に選択的に分配していることが明らかにされている。これらのタンパク質としては、グリコシルホスファチジルイノシトールアンカータンパク質、ミリストイル化又はパルミトイル化タンパク質（例えば、Ａｋｔ、フロチリン）、二重アセチル化タンパク質（例えば、Ｓｒｃ−ファミリーキナーゼ）、リン脂質結合タンパク質（例えば、アネキシン類）、及びコレステロール結合貫膜タンパク質（例えば、カベオリン類）が挙げられる。増殖及び生存に関与するタンパク質／タンパク質複合体の他の例もまた、ＬＲ中に分配することが明らかにされている。具体的には、受容体チロシンキナーゼ（すなわち、ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ）の約６０％が、ＬＲに局在する。また、ＬＲは、機能的タンパク質複合体の適切なアセンブリ用の「プラットフォーム」を提供することも明らかにされている。例えば、ｍＴＯＲ活性は、ＬＲ上にある複合体成分の存在に依存することが明らかにされている。
【０１１４】
ラパマイシン（ｍＴＯＲ）経路のＡｋｔ／哺乳類動物標的は、癌の多数の種類において異常に活性化される典型的な生存経路である。この経路は、細胞表面受容体から生じる増殖調節シグナル及び生存の伝達の中心である。増殖因子及びサイトカインは、ホスファチジルイノシトール−４，５−ビスホスフェート［ＰＩ（４，５）Ｐ２］をリン酸化してＡｋｔ及びホスホイノシチド依存性タンパク質キナーゼ１（ＰＤＫ１）のＰＨドメインに結合する［ＰＩ（１，４，５）Ｐ３］を生成し、これらを形質膜に補充するＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）によってＡｋｔを活性化する。膜内にあると、Ａｋｔは、Ｔｈｒ３０８ではＰＤＫ１によってリン酸化され及びＳｅｒ４７３ではｍＴＯＲＣ２によってリン酸化される。Ａｋｔが十分に活性化されると、Ａｋｔによるシグナル伝達は、ｍＴＯＲＣ１（タンパク質翻訳の主要調節因子）を含め基質の種々のアレイに伝播させることができる。Ａｋｔ活性化はまた、抗アポトーシス遺伝子、例えばＢｃｌ−ｘＬ及びＦＬＩＰを調節する。
【０１１５】
ｍＴＯＲは、環境ストレスに感受性の種々の細胞活動を調節するセリン／トレオニンキナーゼである。ｍＴＯＲそれ自体の活性化変異は確認されていないが、ｍＴＯＲ活性を調節する上流要素の調節解除は、癌において広く行われている。最近、ｍＴＯＲタンパク質複合体、ＲＩＣＴＯＲの成分が、肝細胞癌及び神経膠腫において過剰発現することが明らかにされている。細胞でのｍＴＯＲ調節の典型的なメカニズムは、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の活性化によるが、ｍＴＯＲは、多数のシグナル伝達経路から情報を受ける。哺乳動物細胞において、２種類のｍＴＯＲ／ＦＲＡＰ１含有複合体、すなわちｍＴＯＲ複合体１（ｍＴＯＲＣ１）及びｍＴＯＲ複合体２（ｍＴＯＲＣ２）が確認されている。ｍＴＯＲＣ１は、ｍＴＯＲ／ＦＲＡＰ１、ＲＡＰＴＯＲ及びｍＬＳＴ８からなる。ｍＬＳＴ８の機能は十分に解明されていないが、ＲＡＰＴＯＲは、ｍＴＯＲＣ１基質、例えばｐ７０Ｓ６Ｋ（リボソームｐ７０Ｓ６キナーゼ）及び４Ｅ−ＢＰ（真核生物開始因子４Ｅ結合タンパク質）（両方は、タンパク質翻訳の調節因子）を補充するための足場として機能する。ｍＴＯＲＣ２は、ｍＴＯＲ／ＦＲＡＰ１、ＲＩＣＴＯＲ、ｍＬＳＴ８、ｓｉｎ１及び最近確認されたｐｒｏｔｏｒを含有する。ＲＩＣＴＯＲ及びｓｉｎ１は、ｍＴＯＲＣ２の構造基礎を結合し、組み立てることによって互いを安定化させると思われる。活性化ｍＴＯＲＣ２は、アクチン骨格を調節し、Ｓｅｒ４７３においてＡｋｔをリン酸化し、これはＰＤＫ１介在リン酸化と共にＡｋｔの完全活性化を駆動する。ｍＴＯＲ／ＦＲＡＰ１ポリペプチド及びｍＴＯＲＣ１とｍＴＯＲＣ２との他の複合体成分がＬＲ上に存在し、ｍＴＯＲ／ＦＲＡＰ１ポリペプチドがｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２複合体の間で共有されることが提案されている。従って、ｍＴＯＲＣ２複合体が開裂すると（これは、ｍＴＯＲ／ＦＲＡＰ１ポリペプチドを解放する）、ｍＴＯＲＣ１活性が相互に増大する。
【０１１６】
逆に言えば、ｍＴＯＲＣ２成分がＬＲに補充されると、ＡｋｔがｍＴＯＲＣ２キナーゼ活性によって前記ラフトにおいて活性化される。
【０１１７】
ｍＴＯＲが細胞生存の節の調節因子であることを考慮に入れると、癌療法においてｍＴＯＲ活性に対する分子を開発するのに、大変な努力が注がれている。ｍＴＯＲ阻害剤、ラパマイシン及び誘導体〔ラパローグ（ｒａｐａｌｏｇ）〕が、ｍＴＯＲＣ１複合体を標的とするために開発されている・これに対して、最近の証拠がラパマイシンを用いた長期インキュベーションもまたｍＴＯＲＣ２の活性を低下させることを明らかにしているにもかかわらず、ｍＴＯＲＣ２はラパマイシンに比較的感受性である。ｍＴＯＲＣ１の妨害は、ＰＩ３Ｋ経路が構成的に活性である腫瘍細胞において顕著な抗腫瘍効果をもたらすことが予期される。実際に、幾つかのラパローグが、Ａｋｔ依存性前立腺癌、Ｎｅｕ／Ｅｒｂ２依存性乳癌又はＰＴＥＮ欠損腫瘍モデルにおいて見込みのある抗腫瘍活性を示している。また、幾つかのラパローグは、最近、転移性真性細胞癌の治療において顕著な活性を提供している。その他の固形腫瘍、例えば乳房腫瘍に対する活性は、目覚しいものではない。これらの感受性の相違の原因である分子メカニズムは、未だに明確に示されていない。ｍＴＯＲＣ１阻害が、経路再活性化：強力なＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ再活性化を招くことができる直接的ｍＴＯＲＣ１基質ｐ７０  Ｓ６キナーゼによって通常的に開始される負のフィードバックループの解除を招き得ることを示す証拠が存在する。さらにまた。ラパローグは、２つの上流Ａｋｔキナーゼのうちの１つであるｍＴＯＲＣ２を効率的に阻害することができない。要するに、これは、経路活性化及び再活性化は同時Ａｋｔ及びｍＴＯＲ阻害を招く（ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２の両方を標的とする）薬剤によって回避できることを示唆する。
【０１１８】
以下の実験は、ＬＲが介在する生存シグナル伝達を妨害することによって、ＥＲ−乳癌細胞での選択的アポトーシスの誘導に対するＢＮ１０７及びＯＡの作用のメカニズムを明らかにする。特に、ＢＮ１０７又はＯＡは、ＬＲ上に存在するｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２複合体の両方を選択的に分離させ、それによってｍＴＯＲ複合体成分及びその活性の置換／ダウンレギュレーションをもたらす。ｍＴＯＲＣ２活性の阻害は、さらに、ＥＲ−乳癌細胞においてＡｋｔシグナル伝達を選択的に不活性化させる。本発明者らが知る限りでは、これらの知見は、オレアノール酸が単一の薬剤としてＡｋｔ及びｍＴＯＲ（ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２）活性を同時に阻害するという最初の証拠を提供する。
【０１１９】
結果
ＢＮ１０７は、ＥＲ−乳癌細胞においてアポトーシスを選択的に誘導し、ＥＲαの発現の導入は、これらの細胞をＢＮ１０７から保護した。先の研究は、トウサイカチＧ．ｓｉｎｅｎｓｉｓのエタノール抽出物が、細胞障害性を誘導することにより多数の腫瘍細胞株に細胞障害性であることを明らかにしている。種々の起源由来の種々様々な固形腫瘍細胞株が、本明細書において分析される。サブコンフルエント（ｓｕｂ−ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）培養物を、７０μｇ／ｍｌのＢＮ１０７で１８時間処理し、細胞死を、アネキシンＶ／ＰＩ結合、次いでフローサイトメトリーにより分析した。図４Ａは、ＢＮ１０７に感受性であることが先に示されているＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞の〜５０％を死滅させる用量での生存細胞（アネキシンＶ−、ＰＩ−）の％を示す。ＢＮ１０７が種々の起源由来の腫瘍細胞株において細胞死を種々の程度まで誘導することは、明らかである。具体的には、乳房腫瘍細胞株において、該細胞は、ＢＮ１０７に対して広い範囲の感受性を示した。これらの実験は、細胞の遺伝子型特性と感受性との間の相関関係があるかどうかを調べることを目的とする。表２−１に示すように、ＥＲ発現を欠いている細胞は、ＢＮ１０７に対して高感受性であり、これに対して機能性ＥＲを含有する細胞は、この用量でＢＮ１０７に比較的非感受性であると思われる。ＥＲ−株においてＢＮ１０７によって誘導された細胞死は、アネキシンＶ結合、ミトコンドリア電位の消失、シトクロムＣの細胞質ゾル放出、カスパーゼ類の活性化、及びＤＮＡ断片化から明らかなように、主にミトコンドリア経路が介在するという性質においてアポトーシスであった。
【０１２０】
機能性ＥＲがＢＮ１０７誘導アポトーシスにおいて保護的役割を果たすことを確認するために、ＥＲα発現を、ＢＮ１０７に高感受性であり且つＥＲ発現には存在しない（ｎｕｌｌ）ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞に形質導入した。図５Ａは、形質導入後のＥＲαタンパク質の発現を表し、図２Ｃは、機能性ＥＲステータスを示すＷＩＳＰ２  ＲＮＡの発現、（ＥＲ反応遺伝子）を表す。ＥＲα形質導入細胞及びＬａｃＺ形質導入対照細胞を、ＢＮ１０７で１８時間処理し、アネキシンＶ  ＰＩ結合を用いて細胞死を分析した。図５Ｂは、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞でのＥＲα発現は、ＢＮ１０７誘導アポトーシスから細胞を著しく保護したことを表す。また、より多くの上皮マーカーを再発現するために間葉表現型を逆転させようとして、ＥＲ−ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、トリコスタチンＡ（ＴｓＡ）（分化誘導剤）で処理した。例えば、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞は、長期間の低用量ＴＳＡ処理に際し、ＥＲα、Ｅ−カドヘリン及びＣＤ２４を再発現し且つＣＤ４４、カベオリン及びビメンチンの発現をダウンレギュレートすることが明らかにされた。これらの遺伝子のＲＮＡ発現のレベルを、ＴｓＡで２日間処理したＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞において調べ、先の観察を確認した。次いで、これらのＴｓＡ分化ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、ＢＮ１０７で処理した。図２Ｃは、これらの細胞がＢＮ１０７に対してよりいっそう耐性を付与し、ＥＲαステータスがＢＮ１０７誘導アポトーシスに対して保護的役割を果たすという仮説と一致することを表す。
【０１２１】
ＢＮ１０７処理によって調節される主要な細胞経路  −  ＢＮ１０７によって誘導される活性酸素種（ＲＯＳ）産生又はｐ３８活性化は、アポトーシス促進作用に介在するを主要なメカニズムではないかもしれない。ＥＲ−乳癌細胞においてＢＮ１０のアポトーシス促進作用に介在する主要な根本メカニズムを調べるために、ＢＮ１０７で４時間処理したＨｓ５７８Ｔ（ＥＲ−、感受性）細胞及びＭＣＦ７（ＥＲ＋、非感受性）細胞について発現アレイ分析を行った（補足データ）。発現プロフィールを、Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓを使用して分析して総合的にＢＮ１０７誘導死の原因である可能な細胞経路を確認した。これらの２つの細胞株の間のＩＰＡ分析により、ＢＮ１０７に応答して遺伝子発現の異なるパターンが明らかにされた。具体的には、ＥＲ−乳癌細胞は、細胞死、酸化ストレス応答、ＭＡＰＫシグナル伝達、及びコレステロール合成／取り込み経路に関与する遺伝子をアップレギュレートすることによってＢＮ１０７に反応した。これに対してＥＲ＋乳癌細胞は、増殖受容体及び生存シグナル伝達に関与する比較的小さい一組の遺伝子を調節することによってＢＮ１０７に反応した。
【０１２２】
酸化ストレス応答がＢＮ１０７処理Ｈｓ５７８Ｔ細胞で示されたことから、ＲＯＳ産生が誘導されるか否か及びこれがＢＮ１０７による死の原因であり得るか否かを調べた。細胞透過性のＲＯＳ感受性プローブＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡを使用し、ＢＮ１０７が、２つの感受性乳癌細胞株Ｈｓ５７８Ｔ及びＭＤＡ−ＭＢ−２３１においてＲＯＳの顕著な蓄積を誘導することを明らかにした。これに対して、ＢＮ１０７は、ＭＣＦ７細胞に対して影響を及ぼさなかった（図６Ａ）。ＢＺＬ１０１は、強いＲＯＳ産生を誘導することがすでに明らかにされており、陽性対照として使用された。ＢＮ１０７が酸化ストレス応答を誘導することをさらに確認するために、Ｎｒｆ２（酸化ストレスに応答して核内に位置を変える重要な転写因子）の量を、ＢＮ１０７処理細胞において調べた。ウェスタンブロット分析により、ＢＮ１０７処理Ｈｓ５７８Ｔ細胞での核Ｎｒｆ２量の有意且つ持続した増加及びＭＣＦ７細胞での有意でなく且つ過渡的な増加が明らかにされた。しかし、ＲＯＳの著しい産生は、コメットアッセイ又はアビジン−ＦＩＴＣによる８−オキソグアニンについての染色によって測定されるように、広範囲にわたる酸化的ＤＮＡ損傷をもたらさなかった。また、細胞のＮ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）又はブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、すなわち２種類の強力なＲＯＳ捕捉剤とのプレインキュベーションは、ＢＮ１０７誘導アポトーシスから細胞を部分的に保護しただけであった（図６Ｂ）。これらの観察は、酸化ストレスはＢＮ１０７によって誘導された死の主な原因ではないことを示唆した。
【０１２３】
ＭＡＰＫシグナル伝達の変化を、ウェスタン分析により確認した。図６Ｃに示すように、ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｅｒｋの量は、Ｈｓ５７８Ｔ細胞及びＭＣＦ７細胞の両方において急速に誘導され、これに対してｐｈｏｓｐｈｏ−ｐ３８の量は、感受性Ｈｓ５７８Ｔ細胞において誘導されたのみであった。Ｈｓ５７８Ｔ細胞において特異的に高められたｐ３８の活性がＢＮ１０７誘導アポトーシスの原因であるか否かを調べるために、細胞を、特異的ｐ３８アンタゴニストＳＢ２０２１９と共にプレインキュベートし、その後にＢＮ１０７で処理した。図６Ｄに示すように、ｐ３８アンタゴニストとＢＮ１０７との同時処理が相乗性細胞障害性を生じたことから、ｐ３８活性化が生存メカニズムであると思われる。
【０１２４】
ＢＮ１０７によって誘導されたコレステロールの枯渇は、もしかするとそのアポトーシス促進作用の原因であるであろう。コレステロール合成／輸送遺伝子もまた、ＢＮ１０７処理ＥＲ−Ｈｓ５７８Ｔ細胞においてアップレギュレートされた遺伝子の中にあり、コレステロール又はコレステロール合成経路の中間体がＢＮ１０７のアポトーシス促進作用において役割を果たすことを示唆する。コレステロール合成経路は、細胞生存に不可欠な幾つかのシグナル伝達タンパク質、例えばＲＡＳ又はＲＡＳ関連タンパク質の機能に重要であるイソプレノイド前駆物質を提供する。これらのタンパク質のイソプレニル化は、これらの適切な膜の局在及び活性のために翻訳後修飾を提供する。具体的には、ファルネシルピロリン酸及びゲラニルゲラニルピロリン酸由来のファルネシル部分及びゲラニルゲラニル部分が、ＲＡＳ及びＲＡＳ関連タンパク質のＣ末端に共有結合される。これらのピロリン酸に対応するアルコール、ファルネソル（ＦＯＨ）及びゲラニルゲラニオール（ＧＧＯＨ）は、メバロン酸枯渇によって変化している細胞機能、すなわちコレステロール合成経路における基質を元の状態に戻す。従って、外から加えられたイソプレノイド前駆物質ＦＯＨ又はＧＧＯＨを有する細胞の提供は、ＢＮ１０７誘導細胞死から細胞を救済できると仮定された。図７Ａに示すように、Ｈｓ５７８Ｔ細胞のＦＯＨ又はＧＧＯＨとのプレインキュベーションは、ＢＮ１０７誘導アポトーシスから細胞を保護せず、イソプレノイド前駆物質の欠乏が死の根本的原因ではないことを示唆する。
【０１２５】
オレアナンサポニン類が、コレステロールと複合体を形成し、赤血球膜の外面からコレステロールを取り除くことができることが明らかにされている。全細胞コレステロールの量が測定され、処理の４時間後に減少があることが観察された（図７Ｂ）。全細胞コレステロールの著しい減少は、ＢＮ１０７のアポトーシス促進作用の原因であろうと仮定された。次に、ＥＲ−Ｈｓ５７８Ｔ細胞又はＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をコレステロール及びＢＮ１０７で同時処理し、処理の１８時間後に細胞死を分析した。図７Ｃは、コレステロールの添加は、ＢＮ１０７誘導死から細胞を完全に及び特異的に救済し、これに対してＢＺＬ１０１又はタキソールで誘導した死には影響を及ぼさなかったことを表す。ＬＤＬ及びＢＮ１０７の同時処理もまた、ＢＮ１０７のアポトーシス促進作用を完全に消滅させた。興味深いことに、ＢＮ１０７の処理後２時間での培地へのコレステロールの添加も、細胞を死から保護した。これらの観察は、コレステロール枯渇は、もしかするとＢＮ１０７のアポトーシス促進作用の原因となる主な根本メカニズムであるという仮説を確認した。
【０１２６】
脂質ラフトは、ＢＮ１０７によって破壊された：コレステロールは、ＬＲ（シグナル伝達、例えば細胞生存を組織化する形質膜内の特殊プラットフォーム）の機能にきわめて重要である。従って、ＢＮ１０７中に豊富に存在するオレアナンサポニン類を考慮に入れると、ＢＮ１０７が、ＬＲ介在生存シグナル伝達を順次妨害する膜コレステロールを取り除く／枯渇させると仮説を立てることが合理的である。ＬＲ中のコレステロール量を最初に測定した。また図７Ｂは、脂質ラフト領域のコレステロールの量もまた、ＢＮ１０７処理ＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞において枯渇し、細胞コレステロールの全体量の減少と一致したことを表す。次に、カベオリン及びＣＤ４４、すなわち２種類のＬＲ存在タンパク質の分布パターンを、免疫蛍光染色を使用して観察した。図８Ａは、ＢＮ１０７処理が、４時間以内に、これら２種類のＬＲ存在タンパク質の細胞内リソソーム様局在への急速な再分布を生じたことを表す。この観察は、生化学的細胞下分画アプローチを使用して得られたデータによって確認された。具体的には、ＢＮ１０７処理の４時間後に、細胞質ゾルカベオリンタンパク質の量が増大し且つ形質膜カベオリンタンパク質の量が相互に減少し、これに対してカベオリンタンパク質の全体量は、相変わらず変化しなかった。これらのデータは、膜ＬＲ及びＬＲ介在生存シグナル伝達がＢＮ１０７によって妨害されるであろうと仮説を立てることを促した。
【０１２７】
ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２成分は、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性の阻害をもたらす脂質ラフトから置換／分解された。脂質ラフト介在生存シグナル伝達がＢＮ１０７によって妨害されるか否かを調べるために、トリトン−Ｘ１００可溶化溶解液の超遠心分離により得られた脂質ドラフト画分を、スクロース濃度勾配を使用して分析した。脂質ラフト領域は、未処理細胞においてガングリオシドＧＭ−Ｉ（脂質ラフト領域用マーカー）に富む画分を用いて確認した。図８Ｂに示すように、ドットブロット分析によって測定されたＧＭ−Ｉの量は、ＢＮ１０７処理ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞のＬＲ画分において著しく減少し、それによってＢＮ１０７のラフトの破壊が確認された。コレステロール補充は、ＬＲ画分におけるＧＭＩの再出現によって明らかにされたラフト構造を再構成した。ＢＮ１０７耐性ＭＣＦ７細胞において、ＧＭ−Ｉの量は、変化がないと思われた。
【０１２８】
Ａｋｔ／ｍＴＯＲ（主な生存シグナル伝達経路）は、ＬＲ上で生じることに関与していることから、ＢＮ１０７及び同様にＯＡがＬＲ上のこれらの複合体のシグナル伝達を妨害すると仮定された。ＢＮ１０７又はＯＡ処理されたＨｓ５７８Ｔ又はＭＣＦ７溶解液のスクロース−密度−遠心分離により収集された画分を、透析し、濃縮した。ＬＲ（画分３〜５）画分、非ＬＲ形質膜（ｆ６）画分、及び細胞質ゾル（ｆ８）画分からの同じ量のタンパク質を、ウェスタンブロッティングにより分析した。最初に、ＲＡＰＴＯＲ、Ａｋｔ、４Ｅ−ＢＰ、ｐ７０Ｓ６キナーゼの量を、これらの採取画分において観察し、これらのキナーゼ全てが、ＬＲ画分に富むことが確認された（データは示さない）。次いで、ｐｈｏｓｐｈｏ−ｍＴＯＲ、ｔｏｔａｌ  ｍＴＯＲ、並びにｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２複合体パートナーＲＡＰＴＯＲ及びＲＩＣＴＯＲそれぞれを、ＢＮ１０７又はＯＡ処理したＨｓ５７８Ｔ細胞において測定した。全部が、処理の４時間後にＨｓ５７８ＴのＬＲ画分において著しく減少しており、ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２複合体の成分がこの領域から分離／置換されたことを示す。ｍＴＯＲ／ＦＲＡＰ１及びＲＡＰＴＯＲタンパク質の量は、ＢＮ１０７又はＯＡで処理されたＨｓ５７８Ｔ細胞から単離された脂質ラフト領域において減少していることから、ｍＴＯＲＣ１活性が阻害されたか否かという疑問が発せられた。ｍＴＯＲＣ１の活性を、その基質４Ｅ−ＢＰ及びｐ７０Ｓ６キナーゼのリン酸化を測定することによって調べ（図８Ｃ）、実際にｍＴＯＲＣ１活性が著しく阻害されたことを見出した。
【０１２９】
また、ｍＴＯＲ／ＦＲＡＰ１ポリペプチドの同じプールがｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２複合体の間で共有され且つｍＴＯＲＣ２複合体パートナーＲＩＣＴＯＲがＢＮ１０７又はＯＡ処理Ｈｓ５７８Ｔ細胞の脂質ラフトにおいて減少していることから、ｍＴＯＲＣ２活性も同様に阻害されるであろうと仮定された。ｍＴＯＲＣ２がＳｅｒ４７３においてＡｋｔをリン酸化する主なキナーゼであり且つＡｋｔシグナル伝達がＬＲ上で生じることに関与しているという最近の発見を考慮に入れると、Ｓｅｒ４７３リン酸化Ａｋｔの量を、ＬＲ画分においてｍＴＯＲＣ２活性についての読み取りとして分析した。図８Ｃにおいて、ＢＮ１０７又はＯＡ処理は、Ｓｅｒ４７３−リン酸化Ａｋｔの量を減少させるが、ＬＲ上のＡｋｔの全体量に影響を及ぼさないことが表される。これらのデータは、Ａｋｔの上流調節因子がＬＲにおいて破壊され、少ないｔｏｔａｌ  ｍＴＯＲ／ＦＲＡＰ１及びＲＩＣＴＯＲ成分を有することを示すｍＴＯＲＣ２複合体であるらしいということを示唆した。逆に言えば、外因性コレステロールの添加は、ＢＮ１０７又はＯＡによって妨害されたこれらのシグナル伝達事象を元の状態に戻した（図８Ｃ）。これらの変化のいずれも、耐性ＭＣＦ７細胞では観察されなかった（右側のパネル、図８Ｃ）。非ＬＲ形質膜領域を標識するトランスフェリン受容体（ＴＲ）及び細胞質ゾル画分を標識するＧＡＰＤＨの量は、ＢＮ１０７処理又はＯＡ処理によって両方の細胞株において影響を受けなかった。
【０１３０】
これらのシグナル伝達の変化がＬＲで生じたことを確認するために、実際に全細胞レベルに翻訳した。図８Ｄは、これらのシグナル伝達タンパク質の全体量を示す。脂質ラフト画分内に示されたデータと一致して、ｔｏｔａｌ  ｍＴＯＲ／ＦＲＡＰ１、ｐｈｏｓｐｈｏ−ｍＴＯＲ、ＲＡＰＴＯＲ、及びＲＩＣＴＯＲの量は、全てＢＮ１０７処理の１時間以内に減少し、４Ｅ−ＢＰ及びｐ７０Ｓ６キナーゼ、並びにＳｅｒ４７３−Ａｋｔそれぞれをリン酸化するために最小ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性をもたらした。翻訳後に対応するｍＲＮＡの量として生じたｍＴＯＲ／ＦＲＡＰ１、ＲＡＰＴＯＲ及びＲＩＣＴＯＲの全タンパク質量の減少は、感受性ＥＲ−Ｈｓ５７８Ｔ細胞においてＢＮ１０７又はＯＡ処理によって調節されなかった（データは示さない）。また、ＬＲの量に一致して、Ｓｅｒ−４７３リン酸化Ａｋｔが劇的に減少し、これに対して全細胞Ａｋｔの量は依然として変化がなかった。これらのデータは、全体として、ＬＲ及びＬＲ介在増殖／生存シグナル伝達が、ＢＮ１０７及びＯＡによって特異的に妨害されることを示した。これらの結果は、外因性コレステロールの添加がこれらの事象を逆転させると思われることから、おそらくはＬＲに対するこれらのコレステロール結合／除去効果によると思われる（図８Ｃ）。
【０１３１】
考察
進行型の乳癌の分子標的を確認することは、個別の療法の探求において画期的な出来事である。原発性腫瘍の遺伝子発現プロファイリングは、次の下位カテゴリー：ルミナール（ｌｕｍｉｎａｌ）Ａ、ルミナールＢ、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）及び基底細胞様（ｂａｓａｌ−ｌｉｋｅ）サブタイプをもたらしている。全ての乳癌の約１６％は、基底／間葉様（ｂａｓｅ／ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ−ｌｉｋｅ）であり、これらの腫瘍は、利用できる標的療法に反応しないし、患者は、多くの場合、診断の２年以内に死亡する。これらの腫瘍を区別するものは、ＥＲ又はＰＲを発現しないし、ＨＥＲ２も増殖させない、「三重陰性」乳癌と呼ばれる異なる多数の乳癌、すなわち基底／間葉様腫瘍が、あまり分化しないし、一般的により進行性であることである。三重陰性腫瘍を有する女性は、ＥＲ（タモキシフェン、アロマターゼ阻害剤）又はＨＥＲ２（トラスツズマブ）を標的とする治療にふさわしくない。その代わりに、彼女らは、限定された効果や多数の副作用を有する従来の化学療法で治療される。従って、これらの患者のための代替治療法を確認することが極めて重要である。この研究において、ＢＮ１０７及びその主要なオレアナンサポニン類、オレアノール酸は、間葉様ＥＲ−乳癌細胞を特異的に標的とし、これに対して、ＥＲ乳癌細胞、ＥＲ発現細胞は、これらの治療に感受性がないことが実証された。種々の乳癌株の公的に入手可能な発現プロフィールを、これらのＢＮ１０７に対する感受性に従ってクラスター形成させた場合には、多数のＥＲ下流標的の発現が、ＢＮ１０７に対する非感受性に関連することが認められた。ＢＮ１０７又はＯＡによって誘導されたアポトーシス促進作用は、Ｈｅｒ２又はＥＧＦＲステータスと相関関係を示さなかった（表２−１）。また、ＥＲステータスが、アデノウイルスを用いた強制発現又は脱アセチル化剤ＴｓＡを用いた誘導発現による機能性ＥＲを欠いている乳癌細胞において元の状態に戻されると、これらの細胞でのＢＮ１０７に対する感受性が著しく低下することが明らかにされた。全体として、これらの知見は、機能性ＥＲステータスがＢＮ１０７誘導アポトーシスにおいて保護的役割を果たすことを実証し且つ三重陰性乳癌患者集団のためのＢＮ１０７又はオレアナンサポニンに基づいた治療法を開発する可能性を示唆した。
【０１３２】
ＢＮ１０７によって誘発されるＥＲ−乳癌細胞に対する選択的アポトーシス促進作用に介在するメカニズムを解明するために、発現プロファイリング分析を行い、感受性（ＥＲ−）細胞株と非感受性（ＥＲ＋）細胞株の発現パターンを比較し、対比した。感受性株では、細胞死、酸化ストレス、ＭＡＰＫシグナル伝達、及びコレステロール合成／取り込み経路と一致した遺伝子発現パターンが確認された。実際に、酸化ストレスが誘導され、同時にＢＮ１０７誘導死にごく部分的に寄与したことが明らかにされた。確認された遺伝子のその他の顕著なクラスターは、ＭＡＰＫシグナル伝達経路の活性化であった。ｐ３８がＥＲ−感受性株においてＢＮ１０７処理に応答して選択的に活性化されることが、確認された。しかし、ｐ３８活性化を妨害するとＢＮ１０７処理により相乗的死を招くことから、ｐ３８活性化が生存メカニズムであると推測した。最後に、外因性コレステロール又はコレステロール均等物（すなわちＬＤＬ）を供給すると、細胞がＢＮ１０７及びＯＡによって誘導される死から特異的に及び完全に保護されることから、イソプレノイド前駆物質ではなく脂質ラフトコレステロールの枯渇が、ＢＮ１０７誘導アポトーシスの原因であるらしいということが明らかにされた。脂質ラフトの完全性は、まさにコレステロールの存在に依存する。コレステロール捕捉剤（メチル−β−シクロデキストリン、ＭβＣＤ）を用いた処理によるか、増加したステロールによるか、又はその新規合成を阻止することによる脂質ラフトからのコレステロールの減少は、ラフト会合タンパク質の減少及び細胞生存の低下をもたらす。
【０１３３】
さらに、ＢＮ１０７又はオレアノール酸誘導アポトーシスは、コレステロールに富むＬＲ上で生じるその生存シグナル伝達事象、すなわちＡｋｔ／ｍＴＯＲ経路を阻害する能力に基づいていることが明らかにされた。Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路の異常活性化は、多数の癌に存在し、悪性腫瘍細胞が増殖し、死のシグナル伝達を回避するか又は種々の療法に対して耐性になることを可能にすることが明らかにされている。多大な努力が、ｍＴＯＲ活性を標的とする治療薬を開発することに払われてきたにもかかわらず、ほとんどの臨床試験は、固形腫瘍癌に対して期待できる結果を示さなかった。これらのｍＴＯＲ阻害剤、すなわちラパマイシン及びその類似体の印象的でないデータは、特にｍＴＯＲＣ２活性を伴うｍＴＯＲ経路の調節に関する本発明者らの不完全な理解を指摘している。最近のデータは、Ａｋｔ上のＳｅｒ４７３をＰＤＫ１と共にリン酸化し、Ａｋｔの十分な活性化を促進する主要なキナーゼとしてｍＴＯＲＣ２活性に関係している。ラパマイシンは、長期インキュベーションがｍＴＯＲＣ２に対してあるレベルの阻害をもたらすのにもかかわらず、ｍＴＯＲＣ１に比べてｍＴＯＲＣ２に対して最小急性阻害作用を示した。ラパマイシンによるｍＴＯＲＣ１阻害は単独で、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の再活性化をもたらすことができる。逆に言えば、ｍＴＯＲＣ２活性単独の破壊はまた、ｍＴＯＲＣ１活性の上昇をもたらし得る。要するに、これらの観察は、経路活性化及び再活性化は、同時Ａｋｔ及びｍＴＯＲ阻害（ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２の両方を標的とする）をもたらす薬剤によって回避できることを示唆する。ここで、ＢＮ１０７及びＯＡが、ＥＲ−乳癌細胞のＬＲにおいてｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性を選択的に低下させ、これはおそらくはＡｋｔ活性の同時阻害をもたらすであろうということが報告される。しかし、コレステロール枯渇の結果としてＬＲにおける［ＰＩ（４，５）Ｐ２］の量の減少がＡｋｔ膜補充及びリン酸化の低下を招き得るという可能性は、除外することができない。
【０１３４】
ｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２活性の阻害は、脂質ラフト（ＬＲ）上のｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２複合体の形成の崩壊に基づくと思われる。これは、ＬＲ上に存在する複合体成分、すなわちｍＴＯＲ／ＦＲＡＰ１、ＲＡＰＴＯＲ及びＲＩＣＴＯＲの量が少ないことに起因するものであった。複合体の崩壊は、これらのタンパク質の分解をもたらすと思われる。その理由は、これらの全細胞量も同時に減少を示したからである。ｍＴＯＲ／ＦＲＡＰ、ＲＡＰＴＯＲ、及びＲＡＰＴＯＲの全タンパク質量の減少は、これらの定常状態ＲＮＡレベルのダウンレギュレーションの結果ではなかった（データは示さない）。しかし、ＢＮ１０７又はＯＡが転写後にこれらのタンパク質の量を特異的にダウンレギュレートし、ＬＲ上のｍＴＯＲＣ１及びｍＴＯＲＣ２の減少を招くという可能性を除外することができない。ファルネシルチオサリチル酸及びクルクミンが、ｍＴＯＲ／ＦＲＡＰ１−ＲＡＰＴＯＲ複合体を解離させることによってｍＴＯＲＣ１活性を阻害するであろうという報告はさておき、最も良く理解されるように、これは、ＬＲ上のｍＴＯＲＣ成分の量及び全細胞量を減少させる薬剤で細胞を処理することによってｍＴＯＲ複合体の活性を調節する可能性を実証する最初の報告である。
【０１３５】
コレステロールは、腫瘍の進行に関係している。実験的及び疫学的証拠は、コレステロールが癌の発生と進行において促進的役割を果たし得ることを示唆している。膜コレステロールの漸進的増加は、ラフトの拡大に寄与し、細胞シグナル伝達の発癌経路（例えば、Ａｋｔ）を増強し得ることが提案されている。これらの知見は、総合的に、ＬＲにおいてコレステロールホメオスタシスを妨害する薬剤、例えばＢＮ１０７及びＯＡが、腫瘍細胞生存シグナル伝達を妨害する新規アプローチに相当することを示唆している。
【０１３６】
ラフト破壊性化学薬品の可能な臨床応用に関連した主な関心事は、これらの薬剤がまた、ＬＲを非選択的に変化させ、心臓、肝臓、腎臓、膵臓などのような生命維持に必要な器官の細胞において機能を妨害し得ることである。この概念とは全く反対に、ＭβＣＤ誘導体は、非経口用途の水不溶性薬剤用の担体として広く使用されており、これらの化合物の低用量が最終的に著しい全身毒性を及ぼさないことを暗示する。トウサイカチサポニン類が、生体外で赤血球から形質膜コレステロールを取り除くことが明らかにされているにもかかわらず、抗腫瘍用量のＯＡが、動物において最小毒性を示すことが明らかにされている。また、異なる型のＬＲ類が、それらの生化学的組成、区画化及び機能において異なることが確認されていることに注目しなければならない。実際に、多数の研究が、細胞からのコレステロールの枯渇が、ＬＰの破壊や、バルク形質膜へのラフト構成成分の放出をもたらすことを明らかにしている。しかし、必ずしもＬＲの全部が、コレステロール枯渇に同じように感受性であるとは思われない。例えば、ＭβＣＤを用いた処理による腸細胞外植片からのコレステロールの枯渇は、微絨毛コレステロールの７０％を除去したが、ラフトマーカータンパク質、ガレクチン−４が低密度トリトンＸ−１００不溶性膜画分に局在する能力に影響を及ぼさなかった。同様に、Ｒａｊｅｎｄｒａｎらは、ジャーカット細胞やＵ９３７細胞において、数種のラフトタンパク質、例えばｌｃｋ、ｌｙｎ及びＬＡＴは、ＭβＣＤを用いた処理によってラフトから遊離されるが、フロチリン類は低密度界面活性剤耐性ドメインに留まることを明らかにした。これらの知見は、そのコレステロール依存性又はコレステロールとの相互作用の観点からＬＲ集団に異質性が存在することを示唆している。この概念と一致して、Ｏｓｔａｐｋｏｗｉｃｚらは、脂質ラフトがＥＲ＋（すなわちＭＣＦ７）乳癌細胞からより侵襲性の（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）乳癌に転移する間に有意な構造再構成を起こすことを明らかにした。従って、ＬＲ類の特定のサブセット又は組成物のみが、ＥＲ−乳癌細胞においてＢＮ１０７又はＯＡによって阻害されたＡｋｔ／ｍＴＯＲシグナル伝達を支持するということが可能である。しかし、どのようにＥＲαがＢＮ１０７誘導脂質ラフト破壊の保護及びアポトーシスに寄与するかは、全く知られておらず、調査中である。Ａｋｔ／ｍＴＯＲシグナル伝達に関連するラフト成分を選択的に標的とする薬剤の開発を促進するであろうＢＮ１０７／ＯＡと種々のＬＲ成分との間の特異的相互作用のさらに詳細な特定が、この段階で重要であると思われる。
【０１３７】
材料及び方法
試薬及び抗体
ＢＮ１０７は、トウサイカチＧｌｅｄｉｔｓｉａ  ｓｅｎｅｎｓｉｓ（Ｓｉｃｈｕａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｃｈｅｎｇｄｕ、Ｃｈｉｎａ  Ｃａｍｐｂｅｌｌ’ｓ  ｐａｐｅｒ）の粉砕果実の水性調製物である。手短に言えば、１０ｇの粉砕粉末を秤量し、１００ｍｌの蒸留水に加えた。この薬草混合物を一定に攪拌しながら沸騰させた。沸点に達したら、加熱を弱めて温度を７０℃に保ち、さらに４０分間煮た。次いで、この薬草混合物を、ホットプレートに取り、５０℃まで冷却し、その後に３０００ＲＰＭで、４℃で２０分間、遠心分離した。上清を新たな遠心管にデンカントし、さらに２０分間遠心分離した。この上清を分割し、後で使用するために−８０℃で保存した。上清１ｍｌを、収量を調べるために一夜凍結乾燥した（典型的収量５０〜５５ｍｇ／ｍｌ）。活性喪失がないことを保証するために、３ヶ月毎に新しいバッチを作製した。ＯＡはＤＭＳＯに溶解し、コレステロールは１００％エタノールに溶解した。
【０１３８】
全ての化学薬品は、特に明記しない限りはＳｉｇｍａ社から購入した。ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社から購入した。以下の抗体は、明記した以外はＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌ社から購入した。ｐｈｏｓｐｈｏ−ｍＴＯＲ、ｔｏｔａｌ  ｍＴＯＲ、ＲＩＣＴＯＲ、ＲＡＰＴＯＲ、ｐｈｏｓｐｈｏ−４ＥＢＰ、ｔｏｔａｌ  ４ＥＢＰ、ｐＳ６キナーゼ、ｔｏｔａｌ  Ｓ６キナーゼ、ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＫＴ、ｔｏｔａｌ  ＡＫＴ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ社）、Ｎｒｆ２（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ社）、カベオリン１（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）、ＴＢＰ（Ａｂｃａｍ社）、ＣＤ４４（Ｅｐｉｔｏｍｉｃｓ社）、ＥＲａ（  ）及びシトクロムＣ（Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ社）。ＧＭ−Ｉは、ＨＲＰ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）に複合させたＣＴサブユニットＢのサブユニットを使用することによって検出した。
【０１３９】
細胞培養及び処理
使用した細胞株は全て、ＡＴＣＣ社から購入した。細胞は、７０μｇ／ｍｌのＢＮ１０７（凍結乾燥重量に基づいて算出した）で処理した。用量は、処理後１８時間でＨｓ５７８Ｔ又はＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞の５０％を殺すそれぞれのバッチのＥＣ５０に基づいて決定される。前記細胞を、種々のアッセイについて示したように種々の時間点について１１０μＭ（Ｈｓ５７８ＴのＥＣ５０）又は１２５μＭ（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１のＥＣ５０）のＯＡで処理した。
【０１４０】
ＥＲα形質導入
６０％密集ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞に、０日目に４μｇ／ｍｌのポリブレンの存在下でＬａｃＺ又はＥＲαを発現するアデノウイルス粒子を用いて形質導入した。感染細胞（３００，０００個）を、トリプシン処理し、１日目の午前に、６ウエルプレートに、ウエル当たり１０ｎＭエストラジオールの存在下で移植した。これらの細胞の処理は、１日目の午後に開始し、１６時間継続した。
【０１４１】
細胞死／アポトーシスの測定
細胞の生存を、製造業者の取扱説明書（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）に従ってアネキシンＶ−ａｌｅｘａ  ４８８／ＰＩ結合細胞のＦＡＣＳ分析を使用して測定した。ミトコンドリア貫膜電位（ＭＴＰ）を、生存細胞においてＪＣ−１Ｉ色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を使用して測定し、フローサイトメトリーを使用して分析した。カスパーゼ３及び９活性を、ＦＩＴＣに複合させた特異的カスパーゼペプチド阻害剤（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社）を使用して測定し、次いでフローサイトメトリー分析により測定した。細胞質ゾルシトクロムＣの放出を、細胞質ゾルをミトコンドリア（Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ社）から分離することによって調べ、細胞質ゾル中に放出されたシトクロムＣを、免疫ブロット法を使用して明らかにした。
【０１４２】
ＲＯＳ細胞を、ＢＮ１０７又はＢＺＬ１０１（強力なＲＯＳ誘導剤）で１５分間処理し、その後にＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡを加えた。
【０１４３】
免疫染色
２０，０００個のＭＤＡＭＢ−２３１細胞を、０日目に８チャンバースライドの１つのウエルに移植した。この細胞を、７０μｇ／ｍｌのＢＮ１０７で４時間処理し、冷ＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒドで１０分間固定するか、又はメタノール：アセトン（１：１）で、−２０℃で５分間固定した。この細胞を、ＰＢＳ中で洗浄し、ＰＢＳ中２％ＢＳＡ中で１時間ブロックし、その後にＰＢＳ中２％ＢＳＡ中の抗カベオリン（１／１０００）又は抗ＣＤ４４（１：２５０）を４℃で一夜適用した。このチャンバースライドを、ＰＢＳで洗浄し、適当なＡｌｅｘａ  ４８８複合二次抗体と共に１時間インキュベートした。核を１μｇ／ｍｌのＨｏｅｃｈｓｔ  ３３２５８で５分間染色し、このスライドをＦｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ−Ｇ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ社）に取り付け、その後観察した。
【０１４４】
コレステロール含有量測定
全細胞コレステロール量を、細胞をＲＩＰＡ緩衝液に溶解することにより測定し、クロロホルムを使用して抽出した（３回）。脂質ラフト領域のコレステロール含有量を、スクロース又はＮｙｃｏｄｅｎｚ勾配を使用して細胞分画後に収集した画分のドットブロット分析によって測定されるように、ＧＭ−１を富化させた画分を使用することによって測定した（同様の結果を得る）。ＧＭ−１発現に陽性の画分を、クロロホルム抽出に供した（３回）。このプールした有機相を、乾燥し、真空に供した。Ａｍｐｌｅｘ  Ｒｅｄコレステロールアッセイキットを使用して、試料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）中のコレステロール及びコレステロールエステルの量を定量した。
【０１４５】
脂質ラフトの単離
Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）製のＮｙｃｏｄｅｎｚを使用する密度勾配遠心分離の変法を使用して、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００に可溶性の膜及びトリトンＸ−１００に不溶性の膜、並びに細胞骨格サブドメイン及び複合体を分別した。同じ容量の細胞ペレットを、２％トリトンＸ−１００と氷の上で１分間混合し、その後に同じ容量のＰＢＳで希釈することによって、細胞溶解液を調製した。得られた溶解液（タンパク質３〜４ｍｇ）を、氷上で５分間インキュベートし、同じ容量のＰＢＳ中３５％Ｎｙｃｏｄｅｎｚ［５´−（Ｎ−２，３−ジヒドロキシプロピルアセトアミド）−２，４，６−トリヨード−Ｎ，Ｎ−ビス（２，３−ジヒドロキシプロピル）−イソフタルアミド］でさらに希釈して、１７．５％のＮｙｃｏｄｅｎｚ最終濃度を得た。漸増濃度のＮｙｃｏｄｅｎｚ（３５％、２５％、２２．５％、２０％；１７．５％、１５％、１２％、８％及び４％中の溶解液）のアリコート０．５ｍＬを、Ｂｅｃｋｍａｎ社（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）１３×５１ｍｍポリアロマー管に、連続的に加えることによって密度段階的勾配を作製した。溶解液を、１７．５％Ｎｙｃｏｄｅｎｚに予め混合したＮｙｃｏｄｅｎｚ勾配の中間に置いた。管を、Ｂｅｃｋｍａｎ  ５５  Ｔｉローターにおいて４℃で、４６，０００ｒｐｍで１６時間遠心分離した。遠心分離後に、０．５ｍＬの複数の画分を、注意深く取り出し、小さなペレットを、０．５％ＳＤＳ及び１％トリトンＸ−１００を含有するＰＢＳに再懸濁した（画分１０）。合計１０個の画分及び対照インプット溶解液を、ウェスタンブロットによりタンパク質の分布について分析した。典型的には、ｌｉｇｈｔ脂質ラフトの成分を、最初の３〜５画分に分配し（ＧＭ−１で標識されるように）、非脂質ラフト細胞膜成分を画分６に分配した（受容体を移すことによって標識されるように）、可溶性細胞成分、例えば細胞質ゾルタンパク質（画分７及び８に残る）及び細胞骨格会合高密度画分を、画分９、１０に分配した。得られた画分を、ＰＢＳに透析して勾配糖類を除去し、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ  ４遠心分離フィルターデバイス（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用して濃縮し、その後にタンパク質定量した（ＢＣＡ試薬、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ社）。画分中のＧＭ１の発現を、セイヨウワサビペルオキシダーゼ複合コレラ毒素Ｂサブユニット（Ｉｎｖｒｔｒｏｇｃｎ社）及びドットブロット分析を使用して試験した。
【０１４６】
ウェスタンブロッティング
細胞をタンパク質ホスファターゼ及びプロテアーゼ阻害剤の存在下でＰＢＳに擦り取り、氷冷ＲＩＰＡ緩衝液を用いて溶解することによって得られた細胞抽出物を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上に、レーン当たり２５〜３０μｇ載せた。同じ量のタンパク質（２５μｇ）を、脂質ラフト画分から沈殿させ、３〜７％ＴＡゲル又は４〜１２％ビス−トリスゲル上に載せた。分離されたタンパク質を、ニトロセルロース膜（ｉＢｌｏｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）上に移し、製造業者の取扱説明書に従って特異抗体を用いてプローブするのに使用した。ブロットは、必要な場合には穏やかなストリッピング（Ｒｅｓｔｏｒｅ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社）の後に数回再使用した。セイヨウワサビペルオキシダーゼ及びＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｄｕｒａ  Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  Ｄｕｒａｔｉｏｎ基質に複合させた二次抗体を使用して、Ｋｏｄａｋイメージャーで画像を展開させた。
【表３】
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表３．ＥＲがない細胞は、ＢＮ１０７誘導アポトーシスによりいっそう感受性であり、これに対してＨｅｒ２ステータスは、ＢＮ１０７感受性と相関関係がないように思われる。細胞は、ＢＮ１０７で処理し、アネキシンＶ／ＰＩ結合の分析のために１８時間後に収穫した。示した概要は、３回の独立した実験の結果である。
【実施例３】
【０１４７】
実施例３：非盲検用量増加投与試験
トウサイカチの抽出物（治験薬）の安全性及び最大耐量（ＭＴＤ）を評価するために、以下のプロトコールを実施する。
【０１４８】
治験薬は、適当な大きさのゼラチンカプセルまたは水に溶解させ、トウサイカチの抽出物を１ｍｇ（１週目）、１０ｍｇ（２週目）、１００ｍｇ（３週目）又は１０００ｍｇ（４週目）含有する。（以下、トウサイカチの抽出物を、「治験薬」と呼び得る）。前記用量は、必要に応じて２個又はそれ以上のゼラチンカプセルに分割してもよく、および／または、場合によってはお茶として１日に１回もしくは２回、投与されてもよい。１８歳〜６０歳の標準的な健常ボランティアに、１週目については治験薬を１日当たり１ｍｇ投与し、２週目については治験薬を１日当たり１０ｍｇ投与し、３週目については治験薬を１日当たり１００ｍｇ投与し、４週目については治験薬を１日当たり１０００ｍｇ投与する。被検体は、何らかの有害事象の出現について監視される。いかなる時にも、被検体が現行の用量に耐えられないように見える場合には、担当医療スタッフがこのような不耐性に注目するであろう。最大耐量は、被検体のそれぞれが前記用量に耐える最大用量とみなされるか、又は被検体が不耐容を経験しない場合には、１日当たり治験薬１０００ｍｇとみなされる。
【実施例４】
【０１４９】
実施例４：用量漸増試験
トウサイカチの抽出物（治験薬）の安全性及び最大耐量（ＭＴＤ）を評価するために、より高い又はより厳密な投薬量範囲のトウサイカチの抽出物を、適当な患者集団、例えば確認できるＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ陰性乳癌及び／又は三重陰性乳癌を有する患者集団に投与する。選択された１人又はそれ以上の患者は、癌について以前の治療が失敗に終わったことを特徴とする。１つ又はそれ以上の追加用量範囲、例えば１００ｍｇ〜１０００ｇの間の用量、又は１０００ｍｇ〜１０ｇの間の用量、又は１０ｇ〜１０００ｇの間の用量を選択して、薬剤の治療指数及びその最大治療薬量を評価する。評価し得る投薬量は、トウサイカチの乾燥重量で５００ｍｇ、１０００ｍｇ、１０ｇ、２０ｇ、３０ｇ、４０ｇ、５０ｇ、６０ｇ、７５ｇ及び１００ｇを含む。
【０１５０】
本発明の好ましい実施形態を本明細書で示し、説明したが、このような実施形態が単なる例として提供されることは、当業者には明らかであろう。当業者は、本発明から逸脱することなく、多数の改変、変化及び置換を思い付くであろう。本発明の実施において本明細書に記載される本発明の実施形態の種々の代替を使用し得ることが、理解されるべきである。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義すること及びそれによってこれらの特許請求の範囲内の方法及び構造並びにこれらの均等物が保護されることが意図される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【国際調査報告】
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