(57)【要約】  本発明は、多量の降圧ペプチド、特に、ＩＰＰ、ＶＰＰおよびＬＰＰ、を産生することのできるラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）の新規株に関する。本発明は、トリペプチドＩＰＰ−ＶＰＰ−ＬＰＰの混合物とＬ．ヘルベティカスの株とを含有する発酵乳製品にも関する。本発明は、さらに、トリペプチドＩＰＰ、ＶＰＰおよびＬＰＰからなる特殊なペプチド混合物に関し、また、発酵製品またはペプチドの混合物の、食品製品、フードサプリメントまたは医薬組成物における、高血圧を下げるか、または予防するための使用に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトバチルス・ヘルベティカスＣＮＣＭ  Ｉ−３９９７、ラクトバチルス・ヘルベティカスＣＮＣＭ  Ｉ−３９９８およびラクトバチルス・ヘルベティカスＣＮＣＭ  Ｉ−３９９９から選択されるラクトバチルス・ヘルベティカスの乳酸菌株と、トリペプチドＩＰＰ、ＶＰＰ、およびＬＰＰの混合物とを含む発酵乳製品。
【請求項２】
トリペプチドＩＰＰ、ＶＰＰおよびＬＰＰの比率が約２：１：１〜１：１：１である、請求項１に記載の発酵乳製品。
【請求項３】
トリペプチドの総量が、約１０〜５０ｍｇ／ｌであり、好ましくは１５〜３０ｍｇ／ｌである、請求項１または２のいずれか一項に記載の発酵乳製品。
【請求項４】
そのままで使用されるか、または希釈、濃縮、精製もしくは乾燥され、好ましくは噴霧乾燥もしくは凍結乾燥される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の発酵乳製品。
【請求項５】
ビタミンＤをさらに含有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の発酵乳製品。
【請求項６】
ラクトバチルス・ヘルベティカスの株の発酵によって得ることのできる、トリペプチドＩＰＰ、ＶＰＰおよびＬＰＰの比率が約２：１：１〜１：１：１である、トリペプチドＩＰＰ、ＶＰＰおよびＬＰＰの混合物。
【請求項７】
前記ラクトバチルス・ヘルベティカスの株がラクトバチルス・ヘルベティカスＣＮＣＭ  Ｉ−３９９７、ラクトバチルス・ヘルベティカスＣＮＣＭ  Ｉ−３９９８またはラクトバチルス・ヘルベティカスＣＮＣＭ  Ｉ−３９９９である、請求項７に記載のトリペプチドＩＰＰ、ＶＰＰおよびＬＰＰの混合物。
【請求項８】
ビタミンＤをさらに含有する、請求項６または７に記載のトリペプチドの混合物。
【請求項９】
請求項６に記載の、トリペプチドＩＰＰ、ＶＰＰおよびＬＰＰの混合物、または請求項１〜５のいずれか一項に記載の発酵食品製品を含有する、食品製品または医薬製品。
【請求項１０】
前記食品製品が、任意の食品タイプ、ペットフード、またはフードサプリメントである、請求項９のいずれかに記載の食品製品または医薬製品。
【請求項１１】
ビタミンＤをさらに含有する、請求項９または１０に記載の食品製品または医薬製品。
【請求項１２】
フランスのＣＮＣＭに、２００８年６月１１日付で、ブダペスト条約の規定に従って寄託された、ラクトバチルス・ヘルベティカスＣＮＣＭ  Ｉ−３９９７、ラクトバチルス・ヘルベティカスＣＮＣＭ  Ｉ−３９９８およびラクトバチルス・ヘルベティカスＣＮＣＭ  Ｉ−３９９９である、ラクトバチルス・ヘルベティカスの新規株。
【請求項１３】
請求項１に記載の発酵乳製品、または請求項６に記載のトリペプチドの混合物、または請求項１２に記載の株の、抗高血圧特性を有する食品製品または医薬製品の製造のための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、多量の降圧ペプチド、特に、ＩＰＰ、ＶＰＰおよびＬＰＰ、を産生することのできるラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）の新規株に関する。本発明は、トリペプチドＩＰＰ−ＶＰＰ−ＬＰＰの混合物とＬ．ヘルベティカスの株とを含有する発酵乳製品にも関する。本発明は、さらに、トリペプチドＩＰＰ、ＶＰＰおよびＬＰＰからなる特殊なペプチド混合物に関し、また、発酵製品またはペプチドの混合物の、食品製品、フードサプリメントまたは医薬組成物における、高血圧を下げるか、または予防するための使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
高血圧（hypertension）または血圧上昇（high blood pressure）は、心血管疾患の主要な危険因子の１つであると考えられている。血圧を制御する機構の１つは、レニン−アンジオテンシン系である。これは、アンジオテンシンＩＩの形成を引き起こす反応のカスケードである。アンジオテンシンＩＩは、強力な血管収縮性効果を有し、それ故に、血圧上昇効果を有する。このカスケードにおいて鍵となる酵素の１つであるアンジオテンシンＩ変換酵素（ＡＣＥ）を阻害することによりアンジオテンシンＩＩの形成が減少し、それ故に、血圧低下効果が生じる。
【０００３】
長期にわたり酪農乳製品の代表的な乳酸菌スターターとして発酵乳を産生するために使用されてきたラクトバチルス・ヘルベティカス由来のプロテイナーゼで乳タンパク質を分解することにより、自然発症高血圧ラットにおいて顕著な抗高血圧性効果を有する、ＡＣＥ阻害活性を有するペプチドが産生された（Yamamoto, Akino, & Takano, 1994）。同一の効果がＬ．ヘルベティカスを含有する発酵乳で観察された（Nakamura,Yamamoto, Sakai, Okubo et al., 1995）。
【０００４】
実際に、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌ．ヘルベティカス）によって発酵させた乳が、例えばイソロイシル−プロリル−プロリン（Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、ＩＰＰ）およびバリル−プロリル−プロリン（Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、ＶＰＰ）などの低分子ペプチドを含有し、これらがアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）を阻害する、ということが現在示されている。
【０００５】
ある市販の発酵乳製品は、「軽度の高血圧者に適し」ているとのことが主張されているが、これは日本のカルピス食品工業株式会社によって製造された、ラクトバチルス・ヘルベティカスおよびサッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）によって発酵させたカルピス酸乳である。
【０００６】
別の市販の発酵乳製品は、フィンランドのValio社によって製造された、EVOLUS（商標）であり、これは、「血圧を低下させるのを助ける」最初の欧州における機能性食品であるとのことが主張されている。
【０００７】
いずれの発酵乳製品も、ラクトバチルス・ヘルベティカス株により発酵させたものである。これらの製品は、カゼインのタンパク質分解によって生じる、インビトロにおけるＡＣＥ阻害の原因である生理活性ペプチド（ＶＰＰおよびＩＰＰ）を含む。他の乳酸菌に比べ、Ｌ．ヘルベティカスは最も効率的なタンパク質分解性のラクトバチルス種の１つである。
【０００８】
しかしながら、それでも、容易に調製することができ、かつ摂取するのに適当な形態で消費者に提供することができる降圧ペプチドを特に多く産生するラクトバチルス・ヘルベティカスの代替乳酸菌株へのニーズがある。
【発明の概要】
【０００９】
よって、ラクトバチルス・ヘルベティカスとＩＰＰ−ＶＰＰ−ＬＰＰの混合物との発酵乳製品、または前記株によって得ることのできるＩＰＰ、ＶＰＰおよびＬＰＰの混合物、を提供することが本発明の目的である。前記ＩＰＰ−ＶＰＰ−ＬＰＰの混合物は、約２：１：１〜１：１：１の比率であることが好ましい。抗高血圧特性を有するかかるペプチドは、高血圧を下げるか、または予防するために、食品製品または医薬製品に添加してもよい。
【００１０】
ラクトバチルス・ヘルベティカスの新規乳酸菌株、すなわち、ＶＰＰ、ＩＰＰおよびＬＰＰからなるトリペプチドの混合物を産生することが可能な、ＮＣＣ  ９３５（ＣＮＣＭ  Ｉ−３９９７）、ＮＣＣ  １３２２（ＬＨ１１１）（ＣＮＣＭ  Ｉ−３９９８）およびＮＣＣ  １６４９（ＬＨ１５８）（ＣＮＣＭ  Ｉ−３９９９）、を提供することが本発明の別の目的である。さらに、これらは、商品アミールＳ（商標）に見られる濃度の２倍の濃度で提供することができる。
【００１１】
本発明によれば、上記の乳酸菌、ならびに／またはＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＰｒｏおよびＬｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏからなるトリペプチド混合物を含む発酵乳を含有する、食品、ペットフード組成物または栄養補助食品も提供される。ここで、前記混合物は約２：１：１〜１：１：１の比率であることが好ましい。最後の目的として、本発明は、かかる食品、ペットフードまたはフードサプリメントの、それらの抗高血圧特性のための使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、種々の市販の酪農製品中に存在するＶＰＰトリペプチドおよびＩＰＰトリペプチドの濃度、ならびに、ラクトバチルス・ヘルベティカスの種々の株を用いた発酵により乳中で生じたＶＰＰトリペプチドおよびＩＰＰトリペプチドの濃度を示す。
【図２】図２は、Ｌ．ヘルベティカスＬＨ５３、ＬＨ１１１、ＬＨ１５８、ＬＨ１５７による１８時間および２４時間の発酵後の、従来の希釈乳ベース（diluted milk base）中に存在する、ＶＰＰトリペプチドおよびＩＰＰトリペプチドの濃度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本明細書の文脈の中で、「含む」という語は、「他のものの中に、包含する」という意味に理解するものとする。「のみからなる」と解釈されることは意図していない。また、本明細書に記載されている「トリペプチドＶＰＰ、ＩＰＰおよびＬＰＰ」は、ＶＰＰ、ＩＰＰおよびＬＰＰ、ならびに、配列ＶＰＰ、ＩＰＰおよびＶＰＰを包含する３〜２５個のアミノ酸残基を含有するペプチド、およびこれらのペプチドの混合物、を包含する。
【００１４】
第一の目的によれば、ラクトバチルス・ヘルベティカスの乳酸菌株とＩＰＰ−ＶＰＰ−ＬＰＰの混合物とを含む発酵乳製品が関係する。
【００１５】
実際に、驚いたことに、Ｌ．ヘルベティカスのいくつかの株が、３つのトリペプチドＶＰＰ−ＩＰＰ−ＬＰＰの混合物を大量に、好ましくは発酵条件に応じて変動する約２：１：１〜１：１：１の比率で産生することができる、とのことが見出されている。
【００１６】
試験したすべての株のうち、Ｌ．ヘルベティカスＮＣＣ  ９３５（ＬＨ５３）、ＮＣＣ  １３２２（ＬＨ１１１）およびＮＣＣ  １６４９（ＬＨ１５８）は例として、ブダペスト条約に従い、パスツール研究所（フランス）のCollection Nationale de Culture de Micro-organisms（ＣＮＣＭ）に、２００８年６月１１日付で、それぞれ、受託番号ＣＮＣＭ  Ｉ−３９９７、ＣＮＣＭ  Ｉ−３９９８およびＣＮＣＭ  Ｉ−３９９９として寄託されている。
【００１７】
本発明に係る発酵乳製品は、上述した乳酸菌と共に、配列ＶＰＰ、ＩＰＰおよびＬＰＰを含有するタンパク質ベースの出発物質を含有する培地を発酵させることを含む方法によって作成することができる。好ましくは、出発物質として乳を使用する。
【００１８】
乳出発物質は、アミノ酸配列ＶＰＰ、ＩＰＰおよび／またはＬＰＰを含むタンパク質を含有しさえすれば、いかなる乳、脱脂乳であってもよい。また、例えば牛乳、ヤギ乳、ラクダ乳、馬乳などの動物乳を用いてもよい。
【００１９】
乳出発物質中の固形分の含有量は、特に限定されるものではないが、通常、５〜２０重量％である。乳出発物質は、水と、乳成分、例えば（脱脂）粉乳とを混合して調製した還元乳であってもよい。乳出発物質は、発酵を妨げるものでさえなければ、例えば炭水化物等の添加剤を含有してもよい。
【００２０】
乳出発物質の発酵は、培地としての乳出発物質が本発明のＬ．ヘルベティカスと共に播種される従来型の発酵槽中で行なってもよい。Ｌ．ヘルベティカスは、好ましくは十分な活性を有する前培養スターターの形で、発酵に加えてもよい。当該スターターの、初期の細胞数は、好ましくは約１０７〜１０９細胞／ｍｌである。培地に共に播種されるＬ．ヘルベティカスの量に対する限定は特にないが、好ましくは１〜５％、最も好ましくは２％のスターター株である。
【００２１】
Ｌ．ヘルベティカス種菌と乳出発物質とを包含する発酵槽中の当該物質は、均一な発酵培地を達成するために、従来の方法で混合されてもよい。
【００２２】
発酵は、有利には、２５〜５０℃、好ましくは３０〜４５℃で、６〜１００時間、好ましくは１５〜５０時間行なうことができる。最も好ましい実施形態では、発酵温度は３８〜４２℃であり、これは、この温度範囲において最も多い量のトリペプチドＶＰＰ、ＩＰＰおよびＬＰＰが形成されるためである。また、発酵の際のｐＨは、最多量のトリペプチドが産生されるよう調整されてもよい。
【００２３】
発酵乳中において本発明に従って産生されるトリペプチドの総量は、出発物質として使用される乳の供給源および至適化された処理条件に応じて変動してもよい。例えば、かかる量は、約１０〜５０ｍｇ／ｌの全トリペプチド、好ましくは１５〜３０ｍｇ／ｌが含まれていてもよい。また、希釈発酵乳飲料を調製するために通常行なわれる希釈によって、トリペプチドの総量が低下することは明らかである。従来の希釈乳飲料を調製する場合には、全トリペプチドの量は、最大で、約１０ｍｇ／Ｌの発酵乳飲料、好ましくは４〜８ｍｇ／Ｌであってよい。
【００２４】
８℃で１ヶ月間保存した際のトリペプチドの安定性を測定した。その結果は、保存後のトリペプチドの濃度が発酵の終了時点においてよりもわずかに低いのみであるとのことを示している。よって、このことから、ペプチドは８℃で保存した際には分解されないとのことが指し示される。
【００２５】
別の実施形態では、発酵乳、所望により低温殺菌した発酵乳に、発酵培地においてさらに増殖することのない本発明の微生物を追加することができる。例えば、当該製品は、加熱処理された、また、本発明の特徴を満たす製品を得るために、発酵させて加熱処理された製品において増殖することのできない微生物を加えた、ヨーグルトであってもよい。したがって、本発明の製品は、天然の、または例えばフルーツなどの追加の風味もしくは成分を有する、撹拌ヨーグルト（stirred yoghurt）または固化したヨーグルト（set yoghurt）であってもよい。また、本発明の製品は、保存安定性のあるフレッシュチーズであってもよい。
【００２６】
所望により、例えばプロバイオティックの細菌または酵母などの、他の微生物を発酵培地に加えてもよい。
【００２７】
発酵乳製品は、それ自体として使用されてもよく、または希釈されていてもよい。また、濃縮されていても、精製されていても、乾燥してあってもよく、好ましくは噴霧乾燥または凍結乾燥されている。発酵乳製品は例えばヨーグルト、酸性乳飲料またはチーズであってもよい。また、発酵乳は、食品製品中で食品成分として用いられてもよい。本発明の食品製品は、いかなる食品タイプ、ペットフードまたは栄養補助食品であってもよい。当業者は、共通の一般的知識に基づき、発酵乳または例えば上述の混合物ＩＰＰ−ＶＰＰ−ＬＰＰなどの発酵乳由来の生成物を一成分として適切な量で用いて、本発明の製品を作成することができる。このような食品製品の例として、焼き食品（baked goods）、栄養組成物、および酪農系食品（dairy type foods）、特に低脂肪の酪農製品、スナック、飲料、発酵酸乳を含有する食品、穀物ベースの製品等がある。
【００２８】
本発明の発酵乳製品または誘導された食品製品を低温殺菌または殺菌してもよい。
【００２９】
あるいは、例えば、本発明の製品は、例えばリンゴジュース、オレンジジュースまたは一般的なフルーツジュースなどの、シロップ、飲料、ジュースであってもよい。また、当該製品は、大豆ベースの製品または穀物ベースの製品であってもよい。例えば、豆乳または大豆飲料であってもよい。例えば、当該液体製品は、大豆ベースの、乳の代替品であってもよい。大豆ベースの製品はラクトース・フリーであってもよい。
【００３０】
それらは、発酵乳生成物に加えて、例えば香料、砂糖、フルーツ、ミネラル、ビタミン、安定剤、増粘剤等の、一般的な食品成分を、適切な量で含んでいてもよい。
【００３１】
好ましい実施形態では、さらなる活性成分を当該組成物に加えることができる。かかる成分は、好ましくはビタミンＤまたはビタミンＤ類似体である。本発明のトリペプチドの混合物と共にビタミンＤを追加することによって当該組成物の有効性が改善する。ビタミンＤの１日量ＤＶは、（成人について）約４００ＩＵである。
【００３２】
さらなる態様によれば、本発明は、有効量の、上述のＬ．ヘルベティカス株の発酵培地、および／または、好ましくは１：１：１（＋／−  １０％）の比率の、ＩＰＰ−ＶＰＰ−ＬＰＰのそれらの混合物を用いて、高血圧を予防または治療するための方法を提供する。有効量の本発明の食品は、通常、例えば、全トリペプチドの１日摂取量が、１日当たり少なくとも５．２ｍｇとなるようになっていてよい。例として、例えば、ＬＨ５３の発酵によって産生する３０ｍｇ／Ｌを超えるトリペプチドを用いれば、発酵希釈乳ベース（fermented diluted milk base）は、１５０ｍｌ中に１日用量を含有することができる。
【実施例】
【００３３】
以下、本発明の具体例を、さらなる例示として提示する。
【００３４】
実施例１：ＬＡＢ株のスクリーニング
この作業の目的は、乳発酵の際に、より多量の生理活性トリペプチドを生じ得る可能性を求めて、一連の乳酸菌（lactic acid bacteria：ＬＡＢ）株をスクリーニングすることであった。
【００３５】
一連の、ラクトバチルス・ヘルベティカス、ラクトバチルス・デルブルッキー亜種ブルガリカス（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）およびストレプトコッカス・サーモフィルス（Streptococcusthermophilus）の３０株を、それらの生理学的特徴に基づいて選択した。検討した第一の判定基準は酸性化力（acidification power：ＰＡ）であった。酸性化力（ＰＡ）は、２４時間で産生される酸の量である。この、大量の酸を産生する潜在力は、増殖挙動に、および乳における細菌によるタンパク質分解特性に、直接関連する。効率的なタンパク質分解システムはペプチドの放出に必須である。検討した第二の判定基準は株のペプチダーゼ活性であった。ペプチダーゼ活性は、ペプチドの産生および／または安定性への役割を果たし得る。
【００３６】
種々の株を、凍結乾燥ストックから、ＰＡ乳（９８〜１００℃で３５分間低温殺菌した、１０％脱脂粉乳）中で再活性化させた。次いで、ＰＡ乳を２％の各スターター株と共に播種し、４０℃でインキュベートした。各株について、発酵を凝固した時点で停止させ、４℃で保存した。次いで、発酵生成物を、ＶＰＰおよびＩＰＰの定量化のために、下記のように処理した。
【００３７】
トリペプチドＶＰＰおよびＩＰＰの、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）および質量分析（ＭＳ）による定量化
【００３８】
試料の調製
種々の発酵生成物を遠心分離により清澄化（凝固タンパク質の除去）し、清澄な上清を分注して−２０℃で保存した。清澄な上清の５００μｌずつを、ウルトラフリー−０．５ユニット（ミリポア社製、ＭＷカットオフ１０’０００Ｄａ）を用い、１２０００ｇでの２０分間の遠心分離によって、濾過した。この濾液を、固相抽出（ＳＰＥ）より前に、水中０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いた１：１の希釈によって酸性化した。カートリッジtC18 Sep-Pak Plus（マサチューセッツ州ミルフォードのウォーターズコーポレーション製）を、２ｍｌのアセトニトリル中０．１％ＴＦＡを用いて慣らし、次いで２ｍｌの水中０．１％ＴＦＡで平衡化した。希釈した濾液１ｍｌをＳＰＥカートリッジ上にアプライし、２ｍｌの水中０．１％ＴＦＡで洗浄した。
【００３９】
２ｍｌの水中７０％アセトニトリル、０．１％ＴＦＡを用いてペプチドの溶出を達成した。この溶出液をSpeedvac濃縮器中で完全に乾燥させ、さらに使用するまでは−２０℃で保存した。試料の前精製は、目的分析物と負に相互作用する化合物を除去するために必要であった。
【００４０】
液体クロマトグラフィー（ＬＣ）および質量分析（ＭＳ）による分析
乾燥させた試料を０．１％ＴＦＡ中で再溶解させ、超音波処理を１５分間行い、遠心分離を行った。初期発酵乳の１２．５μｌ相当量を、HyperCarbカラム（０．３２×１５０ｍｍ、５μｍ）、すなわち１００％多孔性グラファイトカーボンカラム（ペンシルベニア州ベルフォンテのサーモエレクトロン社製HyperCarbカラム）に注入した。このカラムを、Rheos 2000 pump（スイスのFlux Instruments社製）およびHTC PALオートサンプラー（スイスのCTC Analytics社製）からなるＨＰＬＣシステムに取り付けた。
【００４１】
カラムの出口はLCQ classicイオントラップＭＳ（ペンシルベニア州ベルフォンテのサーモエレクトロン社製）に直接連結した。溶媒Ａは、水中０．１％ＴＦＡからなり、また、溶媒Ｂは、水中８０％アセトニトリル、０．１％ＴＦＡであった。ペプチドの溶出は、流速５μｌ／分にて、１００％の溶媒Ａによる１０分間の均一溶媒（isocratic）洗浄、次いで、３０分間の０〜５０％のＢの直線勾配洗浄を含んでいた。カラムを、１００％のＢによる５分間の洗浄により再生し、次いで、次の注入の前に、１５分間、再平衡化した。
【００４２】
ＭＳシステムはユニット分解能でｍ／ｚ  ２５０−１６００からスキャンし、；キャピラリー電圧は４ｋＶに設定し、温度は１４０℃に設定した。システムの制御およびデータの分析は、Xcalibur 1.3で、ＭＳクロマトグラムから（ＶＰＰについてｍ／ｚ  ３１２．１、およびＩＰＰについてｍ／ｚ  ３２６．１の質量を抽出した）質量トレースのマニュアル統合（manual integration）を用いて行った。標準的なピーク（standard peaks）（３回分）を統合した面積を単一校正点（single calibration points）として用い、試料中の２つのトリペプチドの含有量を算出した。
【００４３】
ウルトラフリー−０．５ユニット（１００００Ｄａカットオフ）による試料の濾過を省略した場合には、ピーク形状およびピーク強度が大幅に減少し、両ペプチドの定量化を行うことができなかった（データ不掲載）。再現性のある結果および定量的な結果を得るためには、試料の丁寧な精製と適切なクロマトグラフィー条件とが重要であった。発酵生成物の複雑な混合物中での両ペプチドの測定には、ＭＳ検出の特異性が必要である。
【００４４】
結果
【００４５】
結果は、選択した株のほとんどで１ｍｇ／Ｌ未満のトリペプチドが産生されたとのことを示している（表１）。試験した種々の乳酸菌のうち、Ｌ．ヘルベティカスの数株のみが１ｍｇ／Ｌ以上を産生し、ＬＨ１１１についてはほぼ５ｍｇ／Ｌまでを産生した。株のタンパク質分解特性とトリペプチドの産生との間に直接的な相関関係はない。
【００４６】
表１：  Ｓ．サーモフィルス（ＳｆｉおよびＳ）、Ｌ．デルブルッキー亜種ブルガリカス（Ｙｌ、ＬｆｉおよびＬＤ）およびＬ．ヘルベティカス（ＬＨ）の種々の株によって産生されたＶＰＰ＋ＩＰＰの定量化。（ＰＡ：酸性化力（ＮＣＣバイオニューメリクス（NCC Bionumerics））；ｐｅｐ：低ペプチダーゼ活性〜高ペプチダーゼ活性を１〜４で表したもの；ｃｏａｇ：凝固時間を時間で表したもの；ＶＰＰ＋ＩＰＰ：生成物中の濃度をｍｇ／Ｌで表したもの；ｎｄ：未決定）
【００４７】
【表１】
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【００４８】
ＬＨ１５８に加え、多量のトリペプチドを産生する株（ＬＨ１１１、ＬＨ２５、ＬＨ５３およびＬＨ９２）は、乳を凝固するのに約８時間を要した。その後、これらの株を、同一の条件で、しかし、発酵時間を２４時間および４０時間へと増加させることによって、試験した。結果は、発酵時間の延長によるトリペプチドの産生への効果は種々のＬ．ヘルベティカスの株間で一様ではなかったとのことを示している（図１）。ＬＨ２５については、８時間と４０時間との間でわずかな増加が観察されたのみであったが、その一方で、ＬＨ５３は、８時間と２４時間との間に大量のトリペプチドを産生した。
【００４９】
放出されたトリペプチドの量の減少は概して２４時間と４０時間との間に観察された。
【００５０】
Ｌ．ヘルベティカスの３株は、多量の降圧トリペプチドを産生することが分かった。したがって、これらの株は、カルピス社製品（アミールＳ（商標））中に存在するトリペプチドの量のほぼ２倍を含有する酪農製品をもたらすことができるはずである。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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2011524744.tif 000007
2011524744.tif 000008
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