(57)【要約】本明細書において記載される研究は、一実施形態において、膵臓ベータ細胞の増殖または複製を、その必要のある被験体において増大させる方法であって、肝細胞癌関連タンパク質ＴＤ２６（ＴＤ２６）のレベルまたは活性を増加させる、有効量の作用物質を該被験体に投与し、それによって、膵臓ベータ細胞の増殖または複製を増大させるステップを含む、方法を提供する。そのような作用物質は、たとえば、前記被験体において、活性なＴＤ２６のレベルを増加させることによってまたは該被験体において、ＴＤ２６の機能的な活性を増加させることによって機能し得る。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
膵臓ベータ細胞の増殖を、その必要のある被験体において増大させる方法であって、肝細胞癌関連タンパク質ＴＤ２６（ＴＤ２６）のレベルまたは活性を増加させる、有効量の作用物質を該被験体に投与し、それによって、膵臓ベータ細胞の増殖を増大させるステップを含む、方法。
【請求項２】
被験体における、内因性インスリンのレベルの低下と関連する障害を処置するまたは予防するための方法であって、肝細胞癌関連タンパク質ＴＤ２６（ＴＤ２６）のレベルまたは活性を増加させる、有効量の作用物質を該被験体に投与し、それによって、該被験体において、膵臓ベータ細胞の増殖を増大させ、かつ内因性インスリンの該レベルを増加させるステップを含む、方法。
【請求項３】
被験体における、内因性インスリンに対する抵抗性と関連する障害を処置するまたは予防するための方法であって、肝細胞癌関連タンパク質ＴＤ２６（ＴＤ２６）のレベルまたは活性を増加させる、有効量の作用物質を該被験体に投与し、それによって、該被験体において、膵臓ベータ細胞の増殖を増大させ、かつ内因性インスリンの該レベルを増加させるステップを含む、方法。
【請求項４】
被験体における膵臓ベータ細胞の増殖を増大させるまたは被験体における糖尿病を処置するもしくは予防するための方法であって、肝細胞癌関連タンパク質ＴＤ２６（ＴＤ２６）もしくはその機能的な部分またはＴＤ２６をコードする核酸もしくはその機能的な部分である、有効量の作用物質を該被験体に投与し、それによって、該被験体における内因性インスリンの該レベルを増加させるステップを含む、方法。
【請求項５】
前記作用物質が、前記被験体における内因性ＴＤ２６の該レベルまたは活性を増加させる、請求項１、２、または３のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記作用物質が、ＴＤ２６の発現を増加させる、請求項１、２、または３のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記作用物質が、ＴＤ２６の分泌を増加させる、請求項１、２、または３のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記作用物質が、ＴＤ２６タンパク質またはその機能的な部分である、請求項１、２、３、または４のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記機能的な部分が、ＴＤ２６の完全なアミノ酸配列と天然のシグナルペプチド配列とを含まない、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記機能的な部分が、ＴＤ２６の１つ以上の機能的なまたはインタクトなドメインを欠くペプチドを含む、請求項８または９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記機能的な部分が、ＴＤ２６の機能的なまたはインタクトなＬＰＬドメインを欠くペプチドを含む、請求項８、９、または１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記機能的な部分が、ＴＤ２６の機能的なまたはインタクトなＣＣＤドメインを欠くペプチドを含む、請求項８、９、１０、または１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記機能的な部分が、ＴＤ２６の機能的なまたはインタクトなＩＶＳを欠くペプチドを含む、請求項８、９、１０、１１、または１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記機能的な部分が、配列番号１のアミノ酸２２〜７６のペプチド、配列番号１のアミノ酸４８〜７６のペプチド、および配列番号１のアミノ酸７７〜１３５のペプチドからなる群から選択されるペプチドを含む、請求項８または９のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記作用物質が、ＴＤ２６タンパク質またはＴＤ２６の機能的な部分をコードする核酸である、請求項１、２、３、または４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記核酸が、ＴＤ２６の前記完全なアミノ酸配列と天然のシグナルペプチドとを含まない、前記ＴＤ２６タンパク質の機能的な部分をコードする、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記核酸が、ＴＤ２６の１つ以上の機能的なまたはインタクトなドメインを欠く、前記ＴＤ２６タンパク質の機能的な部分をコードする、請求項１５または１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記核酸が、ＴＤ２６の機能的なまたはインタクトなＬＰＬドメインを欠く、前記ＴＤ２６タンパク質の機能的な部分をコードする、請求項１５、１６、または１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記核酸が、ＴＤ２６の機能的なまたはインタクトなＣＣＤドメインを欠く、前記ＴＤ２６タンパク質の機能的な部分をコードする、請求項１５、１６、１７、または１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
前記核酸が、ＴＤ２６の機能的なまたはインタクトなＩＶＳを欠く、前記ＴＤ２６タンパク質の機能的な部分をコードする、請求項１５、１６、１７、１８、または１９のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記機能的な部分が、配列番号１のアミノ酸２２〜７６のペプチド、配列番号１のアミノ酸４８〜７６のペプチド、および配列番号１のアミノ酸７７〜１３５のペプチドからなる群から選択されるペプチドをコードする核酸を含む、請求項１５または１６のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
前記ＴＤ２６タンパク質が、シグナル配列を欠く、請求項８または１５のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
前記機能的な部分が、ＴＤ２６タンパク質のコイルドコイルドメインを含む、請求項８、１５、または２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
前記ＴＤ２６タンパク質が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、または配列番号４のすべてまたは部分を含む、請求項８、１５、２２、または２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
前記ＴＤ２６タンパク質が、１つ以上の天然に存在するアミノ酸変異を含む、請求項８または１５のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
前記ＴＤ２６タンパク質が、配列番号１、配列番号１のアミノ酸２２〜１９８、配列番号２、または配列番号３に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項８または１５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
前記核酸が、配列番号１４または配列番号１５のすべてまたは部分を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項２８】
前記核酸が、１つ以上の一塩基多型を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項２９】
前記核酸が、配列番号１４または配列番号１５に対して少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項３０】
前記作用物質が、インスリン受容体アンタゴニストである、請求項１、２、または３のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
前記作用物質が、Ｓ６６１、Ｓ６６１の機能的な部分、Ｓ９６１、Ｓ９６１の機能的な部分、ＲＢ５３７、およびＲＢ５３７の機能的な部分からなる群から選択される、請求項１、２、３、または３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
前記作用物質が、ベータ細胞増殖を引き起こすのに十分な用量で前記被験体に投与され、かつＳ９６１、Ｓ９６１の機能的な部分、Ｓ６６１、およびＳ６６１の機能的な部分からなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記作用物質が、ベータ細胞増殖を引き起こすのに十分な用量で前記被験体に投与され、かつ配列番号１６、配列番号１６の機能的な部分、配列番号１７、および配列番号１７の機能的な部分からなる群から選択される、請求項１、２、３、または３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
前記作用物質が、配列番号１６に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するペプチドおよび配列番号１７に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するペプチドからなる群から選択されるペプチドである、請求項１、２、３、または１８のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
前記障害が、糖尿病、メタボリックシンドローム、グルコース不耐性、および肥満からなる群から選択される、請求項２または３のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
前記障害が、Ｉ型糖尿病またはＩＩ型糖尿病である、請求項２または３のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
前記糖尿病が、１型糖尿病または２型糖尿病である、請求項４に記載の方法。
【請求項３８】
ベータ細胞の増殖を増大させることが、前記被験体においてベータ細胞量の増加を引き起こす、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
膵臓ベータ細胞の増殖を、その必要のある被験体において増大させる方法であって、有効量のインスリン受容体アンタゴニストを、該被験体に投与するステップを含む、方法。
【請求項４０】
膵臓ベータ細胞の増殖を、その必要のある被験体において増大させるインスリン受容体アンタゴニストの使用。
【請求項４１】
膵臓ベータ細胞の増殖を、その必要のある被験体において増大させる医薬の製造のためのインスリン受容体アンタゴニストの使用。
【請求項４２】
糖尿病の処置のための、請求項３９、４０、または４１のいずれかに記載の使用。
【請求項４３】
膵臓ベータ細胞の増殖を増大させることができる候補作用物質を同定する方法であって、該候補作用物質が、前記インスリン受容体に拮抗する能力を評価するステップを含む、方法。
【請求項４４】
膵臓ベータ細胞の増殖を増大させる候補治療剤を同定する方法であって、適した細胞を試験作用物質と接触させるステップおよび
ＴＤ２６のレベルまたは活性に対する、該試験作用物質の効果を決定するステップを含み、
ＴＤ２６レベルまたは活性を増加させる試験作用物質が、膵臓ベータ細胞の増殖を増大させる候補治療剤である、方法。
【請求項４５】
内因性インスリンのレベルの低下と関連する障害の処置のための候補治療剤を同定する方法であって、
適した細胞を試験作用物質と接触させるステップおよび
ＴＤ２６のレベルまたは活性に対する、該試験作用物質の効果を決定するステップを含み、
ＴＤ２６レベルまたは活性を増加させる試験作用物質が、内因性インスリンのレベルの低下と関連する障害の処置のための候補治療剤である、方法。
【請求項４６】
内因性インスリンに対する抵抗性と関連する障害を処置するまたは予防するための候補治療剤を同定する方法であって、
適した細胞を試験作用物質と接触させるステップおよび
ＴＤ２６のレベルまたは活性に対する、該試験作用物質の効果を決定するステップを含み、
ＴＤ２６レベルまたは活性を増加させる試験作用物質が、内因性インスリンに対する抵抗性と関連する障害を処置するまたは予防するための候補治療剤である、方法。
【請求項４７】
ＴＤ２６のレベルまたは活性に対する前記試験作用物質の効果を決定するステップが、ＴＤ２６の遺伝子発現レベルに対する、該試験作用物質の効果を決定することによって評価される、請求項４４、４５、または４６のいずれかに記載の方法。
【請求項４８】
膵臓ベータ細胞の増殖を、その必要のある被験体において増大させるのに使用するための、肝細胞癌関連タンパク質ＴＤ２６（ＴＤ２６）のレベルまたは活性を増加させる作用物質。
【請求項４９】
被験体における内因性インスリンのレベルの低下と関連する障害を処置するまたは予防するのに使用するための、肝細胞癌関連タンパク質ＴＤ２６（ＴＤ２６）のレベルまたは活性を増加させる作用物質。
【請求項５０】
被験体における内因性インスリンに対する抵抗性と関連する障害を処置するまたは予防するのに使用するための、肝細胞癌関連タンパク質ＴＤ２６（ＴＤ２６）のレベルまたは活性を増加させる作用物質。
【請求項５１】
ベータ細胞増殖を増大させるのにまたは糖尿病、特に１型もしくは２型糖尿病を処置するもしくは予防するのに使用するための、ＴＤ２６タンパク質もしくはその機能的な部分またはＴＤ２６タンパク質もしくはＴＤ２６の機能的な部分をコードする核酸である作用物質。
【請求項５２】
前記作用物質が、ＴＤ２６タンパク質またはその機能的な部分を含む、請求項４８、４９、５０、または５１のいずれかに記載の作用物質。
【請求項５３】
前記作用物質が、ＴＤ２６タンパク質またはその機能的な部分をコードする核酸である、請求項４８、４９、５０、または５１のいずれかに記載の作用物質。
【請求項５４】
前記ＴＤ２６タンパク質が、シグナル配列を欠く、請求項５２または５３のいずれかに記載の作用物質。
【請求項５５】
前記機能的な部分が、ＴＤ２６タンパク質のコイルドコイルドメインを含む、請求項５２、５３、または５４のいずれかに記載の作用物質。
【請求項５６】
前記ＴＤ２６タンパク質が、配列番号１、配列番号１のアミノ酸２２〜１９８、配列番号２、配列番号３、または配列番号４のすべてまたは部分を含む、請求項５２、５３、５４、または５５のいずれかに記載の作用物質。
【請求項５７】
前記ＴＤ２６タンパク質が、１つ以上の天然に存在するアミノ酸変異を含む、請求項５２または５３のいずれかに記載の作用物質。
【請求項５８】
前記ＴＤ２６タンパク質が、配列番号１、配列番号１のアミノ酸２２〜１９８、配列番号２、または配列番号３に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５２または５３のいずれかに記載の作用物質。
【請求項５９】
前記核酸が、配列番号１４または配列番号１５のすべてまたは部分を含む、請求項５３に記載の作用物質。
【請求項６０】
前記核酸が、１つ以上の一塩基多型を含む、請求項５３に記載の作用物質。
【請求項６１】
前記核酸が、配列番号１４または配列番号１５に対して少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む、請求項５３に記載の作用物質。
【請求項６２】
前記作用物質が、インスリン受容体アンタゴニストである、請求項４８、４９、または５０のいずれかに記載の作用物質。
【請求項６３】
前記作用物質が、Ｓ６６１、Ｓ６６１の機能的な部分、Ｓ９６１、Ｓ９６１の機能的な部分、ＲＢ５３７、およびＲＢ５３７の機能的な部分からなる群から選択される、請求項４８、４９、５０、または６２のいずれかに記載の作用物質。
【請求項６４】
前記作用物質が、ベータ細胞の増殖を引き起こす用量で前記被験体に投与され、かつＳ９６１、Ｓ９６１の機能的な部分、Ｓ６６１、およびＳ６６１の機能的な部分からなる群から選択される、請求項６３に記載の作用物質。
【請求項６５】
前記作用物質が、ベータ細胞の増殖を引き起こす用量で前記被験体に投与され、かつ配列番号１６、配列番号１６の機能的な部分、配列番号１７、および配列番号１７の機能的な部分からなる群から選択される、請求項４８、４９、５０、６２、または６３のいずれかに記載の作用物質。
【請求項６６】
前記作用物質が、配列番号１６に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するペプチドおよび配列番号１７に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有するペプチドからなる群から選択されるペプチドである、請求項４８、４９、５０、６２、または６３のいずれかに記載の作用物質。
【請求項６７】
膵臓ベータ細胞の増殖を増大させる医薬の製造のためのまたは内因性インスリンのレベルの低下と関連する障害を処置するもしくは予防するためのまたは被験体における、内因性インスリンに対する抵抗性と関連する障害を処置するもしくは予防するためまたは１型もしくは２型糖尿病を処置するための、ＴＤ２６タンパク質もしくはその機能的な部分またはＴＤ２６タンパク質もしくはその機能的な部分をコードする核酸の使用。
【請求項６８】
膵臓ベータ細胞の増殖を増大させる医薬の製造のためのＳ９６１またはその機能的な部分の使用であって、好ましくは、ＴＤ２６のレベルまたは活性を増加させることによって、好ましくは、血中グルコースレベルを著しく増加させないまたは一過性にのみ増加させる、使用。
【請求項６９】
膵臓ベータ細胞の増殖を増大させる医薬の製造のためのＳ６６１またはその機能的な部分の使用であって、好ましくは、ＴＤ２６のレベルまたは活性を増加させることによって、好ましくは、血中グルコースレベルを著しく増加させないまたは一過性にのみ増加させる、使用。
【請求項７０】
膵臓ベータ細胞の増殖を増大させるＲＢ５３７またはその機能的な部分の使用であって、好ましくは、ＴＤ２６のレベルまたは活性を増加させることによって、好ましくは、血中グルコースレベルを著しく増加させないまたは一過性にのみ増加させる、使用。
【請求項７１】
試験個体におけるＴＤ２６関連障害を診断する方法であって、
該試験個体から得られるサンプルにおけるＴＤ２６レベルを決定するステップを含み、正常個体におけるＴＤ２６レベルと比較して、該試験個体において増加しているまたは減少しているＴＤ２６レベルが、ＴＤ２６関連障害を示す、方法。
【請求項７２】
個体におけるＴＤ２６関連障害を診断する方法であって、
該個体からのサンプルにおけるＴＤ２６レベルを検出するステップを含み、該個体における以前のＴＤ２６レベルと比較して増加しているまたは減少しているＴＤ２６レベルが、ＴＤ２６関連障害を示す、方法。
【請求項７３】
前記ＴＤ２６レベルが、減少しており、前記ＴＤ２６関連障害が、ベータ細胞増殖の減少、内因性インスリンのレベルの低下、および内因性インスリンに対する感受性の低下のうちの１つ以上によって特徴付けられる、請求項７１または７２のいずれかに記載の方法。
【請求項７４】
前記ＴＤ２６レベルが、減少しており、前記ＴＤ−２６関連障害が、１型または２型糖尿病である、請求項７１〜７３のいずれかに記載の方法。
【請求項７５】
ベータ細胞増殖を増大させる、Ｓ９６１核酸配列またはアミノ酸配列の機能的な部分からなる作用物質を含む組成物。
【請求項７６】
ベータ細胞増殖を増大させる、Ｓ６６１核酸配列またはアミノ酸配列の機能的な部分からなる作用物質を含む組成物。
【請求項７７】
ベータ細胞増殖を増大させる、ＲＢ５３７核酸配列またはアミノ酸配列の機能的な部分からなる作用物質を含む組成物。
【請求項７８】
そのシグナルペプチドを欠くＴＤ２６の完全なアミノ酸配列を含まず、かつベータ細胞増殖を増大させる、ＴＤ２６核酸配列またはアミノ酸配列の機能的な部分からなる作用物質を含む組成物。
【請求項７９】
ＴＤ２６ペプチドの機能的な部分または該機能的な部分をコードする核酸を含む組成物であって、該機能的な部分が、ベータ細胞増殖を増大させることができる、組成物。
【請求項８０】
前記機能的な部分が、ＴＤ２６の天然のシグナルペプチド配列とＴＤ２６の完全なアミノ酸配列もしくはヌクレオチド配列とを含まない、または該機能的な部分が、そのシグナルペプチドを欠くＴＤ２６の完全なアミノ酸配列と、そのシグナルペプチドを欠くＴＤ２６の完全なアミノ酸配列をコードする核酸とを含まない、請求項７９に記載の組成物。
【請求項８１】
前記機能的な部分が、ＴＤ２６の１つ以上の機能的なもしくはインタクトなドメインを欠くペプチドまたは該ペプチドをコードする核酸を含む、請求項７９または８０のいずれかに記載の組成物。
【請求項８２】
前記機能的な部分が、ＴＤ２６の機能的なもしくはインタクトなＬＰＬドメインを欠くペプチドまたは該ペプチドをコードする核酸を含む、請求項７９、８０、または８１のいずれかに記載の組成物。
【請求項８３】
前記機能的な部分が、ＴＤ２６の機能的なもしくはインタクトなＣＣＤドメインを欠くペプチドまたは該ペプチドをコードする核酸を含む、請求項７９、８０、８１、または８２のいずれかに記載の組成物。
【請求項８４】
前記機能的な部分が、ＴＤ２６の機能的なもしくはインタクトなＩＶＳを欠くペプチドまたは該ペプチドをコードする核酸を含む、請求項７９、８０、８１、８２、または８３のいずれかに記載の組成物。
【請求項８５】
前記機能的な部分が、配列番号１のアミノ酸２２〜７６のペプチド、配列番号１のアミノ酸４８〜７６のペプチド、および配列番号１のアミノ酸７７〜１３５のペプチドからなる群から選択されるペプチドまたは該ペプチドのいずれかをコードする核酸を含む、請求項７９に記載の組成物。
【請求項８６】
ＴＤ２６ポリペプチドの１つ以上の機能的なドメインを含む組成物であって、ＴＤ２６ポリペプチドの該１つ以上の機能的なドメインが、ベータ細胞増殖を増大させる、組成物。
【請求項８７】
ＴＤ２６ポリペプチドの１つ以上の機能的なドメインをコードする１つ以上の核酸を含む組成物であって、ＴＤ２６の該１つ以上の機能的なドメインが、ベータ細胞増殖を増大させる、組成物。
【請求項８８】
配列番号１のアミノ酸２２〜７６のペプチド、配列番号１のアミノ酸４８〜７６のペプチド、配列番号１のアミノ酸７７〜１３５のペプチド、およびその組み合わせからなる群から選択される、ベータ細胞の増殖を増大させるペプチドまたは該ペプチドのいずれかをコードする核酸を含む組成物。ベータ細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２０１１年６月１０日に出願された米国仮特許出願第６１／４９５，８６８号、および２０１２年３月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６１３，８５６号の利益を主張し、この米国仮特許出願の教示は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
政府支援
本発明は、国立衛生研究所により授与されたＤＫ０９０７８１の下、政府支援により成された。合衆国政府は、本発明に一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ベータ細胞（β−細胞）は、血液中のグルコースのレベルをコントロールするホルモンであるインスリンを生成し、かつ分泌するランゲルハンス島に位置する膵臓細胞の一種である。ベータ細胞は、貯蔵インスリンを放出することによって、血中グルコースの急激な上昇に対して迅速に応答することができ、同時に、将来の必要のためにさらなるインスリンを産生する。ベータ細胞の機能障害および／または数の減少は、糖尿病、肥満、および他の障害を含む代謝性疾患に関係する。
【０００４】
糖尿病は、複数の原因因子から誘導される疾患であり、空腹状態における血漿グルコースのレベルの上昇（高血糖症）によって特徴付けられる。真性糖尿病には２つの主な形態がある：（１）インスリン依存性または１型糖尿病（別名若年性糖尿病）および（２）非インスリン依存性またはＩＩ型糖尿病（別名ＮＩＤＤＭ）。
【０００５】
１型糖尿病は、典型的に、ランゲルハンス島の自己免疫性の破壊の結果としての、膵臓ベータ細胞の損失から結果として生じるインスリン欠乏によって引き起こされる。したがって、１型糖尿病に罹患している患者において、膵島細胞によって産生されるインスリンの量は低すぎ、血中グルコースレベルの上昇（高血糖症）をもたらす。１型糖尿病を有する患者は、一般に、生涯にわたるインスリン処置を必要とするが、インスリンの頻繁な毎日の注射によってでさえ、血中グルコースレベルを適切にコントロールするのは困難である。免疫系媒介性の島破壊を低下させることができる処置が開発されているが、ヒトベータ細胞の再生が比較的遅いために、そのような処置のみでは、糖尿病の状態を改善するための十分な手段とならない。これらの療法は、しかしながら、ベータ細胞再生を刺激することができる治療剤（複数可）と好都合に組み合わせることができる。
【０００６】
２型糖尿病の患者において、肝細胞および筋細胞は、正常な血中インスリンレベルに対して応答するそれらの正常な能力を失い（インスリン抵抗性）、高血中グルコースレベルがもたらされる。そのうえ、ＩＩ型糖尿病の患者は、ベータ細胞機能の機能障害およびベータ細胞アポトーシスの増加を示し、次第に、総ベータ細胞量における低下を引き起こす。最終的に、外因性インスリンの投与が、２型糖尿病患者において必要になる。
【０００７】
糖尿病を処置する従来の方法は、１型糖尿病の場合には、流体およびインスリンの投与ならびにＩＩ型糖尿病では様々な血糖降下剤の投与を含んだ。あいにく、知られている血糖降下剤の多くは、望ましくない副作用および毒性を示す。したがって、１型および２型糖尿病の両方について、治療方法および製剤における使用のための、ベータ細胞増殖を刺激することができる作用物質の開発の必要がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明の要旨
本明細書において記載される研究は、一実施形態において、その必要のある被験体において、膵臓ベータ細胞の増殖または複製を増加させる方法であって、肝細胞癌関連タンパク質ＴＤ２６（ＴＤ２６）のレベルまたは活性を増加させる、有効量の作用物質を該被験体に投与し、それによって、膵臓ベータ細胞の増殖または複製を増加させるステップを含む、方法を提供する。そのような作用物質は、たとえば、被験体において、活性なＴＤ２６のレベルを増加させることによって、または被験体において、ＴＤ２６の機能的な活性を増加させることによって機能することができる。
【０００９】
一実施形態において、被験体における、内因性インスリンのレベルの低下と関連する障害を処置するまたは予防するための方法であって、肝細胞癌関連タンパク質ＴＤ２６（ＴＤ２６）のレベルまたは活性を増加させる、有効量の作用物質を該被験体に投与し、それによって、該被験体において、膵臓ベータ細胞の増殖を増大させ、かつ内因性インスリンのレベルを増加させるステップを含む、方法が、本明細書において記載される。一実施形態において、作用物質が、ＴＤ２６タンパク質もしくはその機能的な部分またはＴＤ２６もしくはその機能的な部分をコードするヌクレオチド配列である。
【００１０】
被験体における、内因性インスリンに対する抵抗性と関連する障害を処置するまたは予防するための方法であって、肝細胞癌関連タンパク質ＴＤ２６（ＴＤ２６）のレベルまたは活性を増加させる、有効量の作用物質を該被験体に投与し、それによって、該被験体において、膵臓ベータ細胞の増殖を増大させ、かつ内因性インスリンのレベルを増加させるステップを含む、方法もまた、記載される。一実施形態において、作用物質が、ＴＤ２６タンパク質もしくはその機能的な部分またはＴＤ２６もしくはその機能的な部分をコードするヌクレオチド配列である。
【００１１】
特定の実施形態において、投与される作用物質が、前記被験体における、内因性ＴＤ２６のレベルを増加させる。一態様において、作用物質が、ＴＤ２６の発現を増加させる。他の態様において、作用物質が、ＴＤ２６の分泌を増加させる。さらに他の態様において、作用物質が、ＴＤ２６の安定性を増加させるまたはその分解を防止するもしくは他の場合には遅らせる。本発明が、被験体において、ＴＤ２６のレベルまたはＴＤ２６の半減期を増加させることができる任意の作用物質を企図することが十分に理解されるべきである。
【００１２】
ある実施形態において、作用物質が、ＴＤ２６タンパク質またはその機能的な部分（たとえば、コイルドコイルドメインまたは天然のシグナル配列を欠くＴＤ２６タンパク質）である。ある実施形態において、ＴＤ２６タンパク質が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、または配列番号４を含む。いくつかの実施形態において、機能的な部分が、たとえば、全ＴＤ２６アミノ酸配列未満であり、天然のシグナル配列を欠き、かつ配列番号１のアミノ酸２２〜７６、４８〜７６、または７７〜１３５のアミノ酸配列を含むポリペプチドとすることができる。
【００１３】
他の実施形態において、作用物質が、ＴＤ２６タンパク質またはＴＤ２６の機能的な部分をコードする核酸である。ある実施形態において、核酸が、配列番号１４または配列番号１５のすべてまたは部分を含む。
【００１４】
他の実施形態において、作用物質が、インスリン受容体アンタゴニストである。たとえば、作用物質は、Ｓ６６１、Ｓ６６１の機能的な部分、Ｓ９６１、Ｓ９６１の機能的な部分、ＲＢ５３７、およびＲＢ５３７の機能的な部分からなる群から選択することができる。ある態様において、作用物質が、配列番号１６のすべてまたは機能的な部分を含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、インスリン受容体アンタゴニストが、好ましくは、血中グルコースレベルの増加をほとんどもしくはまったく引き起こさないまたは血中グルコースレベルの一過性の増加のみを引き起こす用量で投与される。用量が、血中グルコースレベルの増加を引き起こす状況では、それは、血中グルコースレベルに対処するためのさらなる治療剤と共に使用されてもよい。非限定的な例として、インスリン受容体アンタゴニストは、いくつかの実例において、約１０μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満（たとえば約９μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、約８μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、約７μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、約６μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、約５μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、約４μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、約３μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、約２μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、約１μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、約０．９０μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、約０．８０μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、約０．７０μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、約０．６０μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、約０．５０μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、約０．４０μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、約０．３０μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、約０．２０μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、約０．１０μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満）の用量で、前記被験体に投与されてもよい。特定の実施形態において、インスリン受容体アンタゴニストが、約１μＭｏｌ／Ｋｇ／週の用量で、前記被験体に投与される。
【００１６】
いくつかの記載される実施形態において、障害が、糖尿病（たとえばＩ型糖尿病またはＩＩ型糖尿病）、メタボリックシンドローム、グルコース不耐性、および肥満からなる群から選択される。
【００１７】
内因性インスリンのレベルの低下と関連する障害の処置のための候補治療剤（たとえばインスリン受容体アンタゴニスト）を同定する方法であって、適した細胞を試験作用物質と接触させるステップ、およびＴＤ２６のレベルまたは活性に対する、該試験作用物質の効果を決定するステップを含み、ＴＤ２６レベルまたは活性を増加させる試験作用物質が、内因性インスリンのレベルの低下と関連する障害の処置のための候補治療剤である、方法もまた、開示される。いくつかの態様において、ＴＤ２６のレベルまたは活性に対する前記試験作用物質の効果が、ＴＤ２６レベルまたは活性を増加させることが知られている治療剤の効果に対して該試験作用物質の効果を比較することによって評価される。たとえば、本明細書において記載される研究によって同定されるそのような１つの治療剤は、Ｓ９６１である。いくつかの態様において、ＴＤ２６のレベルまたは活性に対する前記試験作用物質の効果が、ＴＤ２６の遺伝子発現レベルに対する、該試験作用物質の効果を決定することによって評価される。
【００１８】
他の態様において、１つ以上のインスリン受容体アンタゴニストを投与することによってベータ細胞複製または増殖を増大させる方法が、本発明によって企図される。適したアンタゴニストは、たとえば、インスリンがインスリン受容体と相互作用する能力に干渉してもよい、またはインスリンの生物学的効果を中和してもよい。インスリン受容体アンタゴニストは、たとえば、ＴＤ２６のレベルまたは活性を増加させ得、好ましくは、血中グルコースレベルを著しく増加させないまたは一過性にのみ増加させる。いくつかの実施形態において、１つ以上のインスリン受容体アンタゴニストを投与することによって糖尿病を処置する方法が、本明細書において記載される。
【００１９】
本発明の態様がすべて、本明細書において記載される他の態様と組み合わせ可能であり、単に簡潔さのために、すべての可能な組み合わせおよび並べ換えが、網羅的に列挙されるとは限らないことが理解される。特に定義されない限り、本明細書において使用される技術用語および科学用語はすべて、本発明が属する当技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書において記載されるものに類似するまたはそれと等価である方法および材料が、本発明の実施において使用することができるが、適した方法および材料は、説明的な目的のために下記に記載される。本明細書において言及される刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献はすべて、それらの全体が参照によって明確に組み込まれる。矛盾する場合、本明細書が、定義を含めて、優先する（ｃｏｎｔｒｏｌ）。本明細書において記載される材料、方法、および実施例は、単に説明的なものにすぎず、限定的となるように意図されない。本発明の他の特徴および利点は、以下の詳述される記載および特許請求の範囲から明らかであり、また、それによって包含される。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１Ａ〜１Ｄは、インスリン受容体アンタゴニストＳ９６１が、ベータ細胞複製を誘導することを示す図である。図１Ａは、対照による１０日間の処置を示し、図１Ｂは、Ｓ９６１による１０日間の処置を示す（青色の、細胞核についてのマーカーとしてのＤＡＰＩ、緑色の、ベータ細胞についてのマーカーとしての抗インスリン抗体染色、ならびに赤色の、増殖細胞の核を標識する抗Ｋｉ６７（複製および細胞増殖のマーカー）を使用する三重免疫蛍光染色）。白色の矢印は、複製ベータ細胞を示す。図１Ｃは、Ｓ９６１の用量を増加させて（０．１２５μΜｏｌ／Ｋｇ／週〜１μΜｏｌ／Ｋｇ／週）７日間処置した後のＫｉ６７＋／インスリン＋％を示す棒グラフである。図１Ｄは、Ｓ９６１の用量を増加させて（０．１２５μΜｏｌ／Ｋｇ／週〜１μΜｏｌ／Ｋｇ／週）７日間処置した後のベータ細胞面積／膵臓面積の有意な増加を示す棒グラフである。これらの実験における対照は、Ｓ９６１を有していないビヒクルである。Ｋｉ６７＋／インスリン＋パーセンテージおよびベータ細胞面積／膵臓面積を数えるために、膵臓全体を、凍結切片にし、免疫染色し、ＭｅｔａｍｏｒｐｈおよびＰｈｏｔｏｓｈｏｐなどの標準的なグラフ分析ツールを、定量化のために使用した。
【図２Ａ】図２Ａ〜２Ｆは、インスリン受容体アンタゴニストＳ９６１によって誘導される遺伝子ＴＤ２６が、肝臓において高度に発現され、分泌タンパク質であることを示す図である。図２Ａは、Ｓ９６１による７日間の処置後の肝組織の遺伝子発現マイクロアレイ分析を示す。対角線に近い遺伝子は、処置および未処置肝臓において、類似する発現値を示す。「３倍」と標識された、薄い赤色の線の間の領域の外側のドットは、処置条件下で有意にアップレギュレートまたはダウンレギュレートした遺伝子を示す。黒色の矢印によって示される、アップレギュレートした遺伝子のうちの１つは、ＥＧ６２４２１９（ＴＤ２６のマウスオルソログ）である。図２Ｂは、７日間、インスリン受容体アンタゴニストＳ９６１により処置されたマウスにおけるＴＤ２６  ｍＲＮＡの相対的な発現を示す。ＴＤ２６発現は、Ｓ９６１処置に際して肝臓および脂肪において増加する。図２Ｃは、ＴＤ２６のマウスオルソログについての、予測されるエクソン構造を示す。図２Ｄは、コンセンサス配列（配列番号４）と共に、マウスおよびラットのオルソログとのＴＤ２６タンパク質の配列のアライメントを示す（ヒト（ホモサピエンス、配列番号１）、マウス（ハツカネズミ、配列番号２）、およびラット（ドブネズミ、配列番号３））。推定上のシグナルペプチドは、Ｎ−末端に含まれる。図２Ｅは、Ｍｙｃタグ付きＥＧ６２４２１９（ＴＤ２６のマウスオルソログ）およびＴＤ２６が、Ｈｅｐａｌ−６細胞（マウス肝癌細胞）において発現されることを示す。Ｈｅｐａｌ−６細胞は、Ｍｙｃ−タグに融合した、ＴＤ２６についての遺伝子を持つプラスミドによりトランスフェクトした。細胞は、ｍｙｃ抗体により染色した。図２Ｆは、２９３Ｔ細胞において、ｍｙｃタグ付きマウスＥＧ６２４２１９（マウスＴＤ２６タンパク質）およびｍｙｃタグ付きＴＤ２６は、４８時間後に上清へと分泌されることを示すウェスタンブロットであり、ＴＤ２６のマウスオルソログおよびヒトＴＤ２６の両方が、分泌タンパク質であることを示す。
【図２Ｂ】図２Ａ〜２Ｆは、インスリン受容体アンタゴニストＳ９６１によって誘導される遺伝子ＴＤ２６が、肝臓において高度に発現され、分泌タンパク質であることを示す図である。図２Ａは、Ｓ９６１による７日間の処置後の肝組織の遺伝子発現マイクロアレイ分析を示す。対角線に近い遺伝子は、処置および未処置肝臓において、類似する発現値を示す。「３倍」と標識された、薄い赤色の線の間の領域の外側のドットは、処置条件下で有意にアップレギュレートまたはダウンレギュレートした遺伝子を示す。黒色の矢印によって示される、アップレギュレートした遺伝子のうちの１つは、ＥＧ６２４２１９（ＴＤ２６のマウスオルソログ）である。図２Ｂは、７日間、インスリン受容体アンタゴニストＳ９６１により処置されたマウスにおけるＴＤ２６  ｍＲＮＡの相対的な発現を示す。ＴＤ２６発現は、Ｓ９６１処置に際して肝臓および脂肪において増加する。図２Ｃは、ＴＤ２６のマウスオルソログについての、予測されるエクソン構造を示す。図２Ｄは、コンセンサス配列（配列番号４）と共に、マウスおよびラットのオルソログとのＴＤ２６タンパク質の配列のアライメントを示す（ヒト（ホモサピエンス、配列番号１）、マウス（ハツカネズミ、配列番号２）、およびラット（ドブネズミ、配列番号３））。推定上のシグナルペプチドは、Ｎ−末端に含まれる。図２Ｅは、Ｍｙｃタグ付きＥＧ６２４２１９（ＴＤ２６のマウスオルソログ）およびＴＤ２６が、Ｈｅｐａｌ−６細胞（マウス肝癌細胞）において発現されることを示す。Ｈｅｐａｌ−６細胞は、Ｍｙｃ−タグに融合した、ＴＤ２６についての遺伝子を持つプラスミドによりトランスフェクトした。細胞は、ｍｙｃ抗体により染色した。図２Ｆは、２９３Ｔ細胞において、ｍｙｃタグ付きマウスＥＧ６２４２１９（マウスＴＤ２６タンパク質）およびｍｙｃタグ付きＴＤ２６は、４８時間後に上清へと分泌されることを示すウェスタンブロットであり、ＴＤ２６のマウスオルソログおよびヒトＴＤ２６の両方が、分泌タンパク質であることを示す。
【図２Ｃ】図２Ａ〜２Ｆは、インスリン受容体アンタゴニストＳ９６１によって誘導される遺伝子ＴＤ２６が、肝臓において高度に発現され、分泌タンパク質であることを示す図である。図２Ａは、Ｓ９６１による７日間の処置後の肝組織の遺伝子発現マイクロアレイ分析を示す。対角線に近い遺伝子は、処置および未処置肝臓において、類似する発現値を示す。「３倍」と標識された、薄い赤色の線の間の領域の外側のドットは、処置条件下で有意にアップレギュレートまたはダウンレギュレートした遺伝子を示す。黒色の矢印によって示される、アップレギュレートした遺伝子のうちの１つは、ＥＧ６２４２１９（ＴＤ２６のマウスオルソログ）である。図２Ｂは、７日間、インスリン受容体アンタゴニストＳ９６１により処置されたマウスにおけるＴＤ２６  ｍＲＮＡの相対的な発現を示す。ＴＤ２６発現は、Ｓ９６１処置に際して肝臓および脂肪において増加する。図２Ｃは、ＴＤ２６のマウスオルソログについての、予測されるエクソン構造を示す。図２Ｄは、コンセンサス配列（配列番号４）と共に、マウスおよびラットのオルソログとのＴＤ２６タンパク質の配列のアライメントを示す（ヒト（ホモサピエンス、配列番号１）、マウス（ハツカネズミ、配列番号２）、およびラット（ドブネズミ、配列番号３））。推定上のシグナルペプチドは、Ｎ−末端に含まれる。図２Ｅは、Ｍｙｃタグ付きＥＧ６２４２１９（ＴＤ２６のマウスオルソログ）およびＴＤ２６が、Ｈｅｐａｌ−６細胞（マウス肝癌細胞）において発現されることを示す。Ｈｅｐａｌ−６細胞は、Ｍｙｃ−タグに融合した、ＴＤ２６についての遺伝子を持つプラスミドによりトランスフェクトした。細胞は、ｍｙｃ抗体により染色した。図２Ｆは、２９３Ｔ細胞において、ｍｙｃタグ付きマウスＥＧ６２４２１９（マウスＴＤ２６タンパク質）およびｍｙｃタグ付きＴＤ２６は、４８時間後に上清へと分泌されることを示すウェスタンブロットであり、ＴＤ２６のマウスオルソログおよびヒトＴＤ２６の両方が、分泌タンパク質であることを示す。
【図２Ｄ】図２Ａ〜２Ｆは、インスリン受容体アンタゴニストＳ９６１によって誘導される遺伝子ＴＤ２６が、肝臓において高度に発現され、分泌タンパク質であることを示す図である。図２Ａは、Ｓ９６１による７日間の処置後の肝組織の遺伝子発現マイクロアレイ分析を示す。対角線に近い遺伝子は、処置および未処置肝臓において、類似する発現値を示す。「３倍」と標識された、薄い赤色の線の間の領域の外側のドットは、処置条件下で有意にアップレギュレートまたはダウンレギュレートした遺伝子を示す。黒色の矢印によって示される、アップレギュレートした遺伝子のうちの１つは、ＥＧ６２４２１９（ＴＤ２６のマウスオルソログ）である。図２Ｂは、７日間、インスリン受容体アンタゴニストＳ９６１により処置されたマウスにおけるＴＤ２６  ｍＲＮＡの相対的な発現を示す。ＴＤ２６発現は、Ｓ９６１処置に際して肝臓および脂肪において増加する。図２Ｃは、ＴＤ２６のマウスオルソログについての、予測されるエクソン構造を示す。図２Ｄは、コンセンサス配列（配列番号４）と共に、マウスおよびラットのオルソログとのＴＤ２６タンパク質の配列のアライメントを示す（ヒト（ホモサピエンス、配列番号１）、マウス（ハツカネズミ、配列番号２）、およびラット（ドブネズミ、配列番号３））。推定上のシグナルペプチドは、Ｎ−末端に含まれる。図２Ｅは、Ｍｙｃタグ付きＥＧ６２４２１９（ＴＤ２６のマウスオルソログ）およびＴＤ２６が、Ｈｅｐａｌ−６細胞（マウス肝癌細胞）において発現されることを示す。Ｈｅｐａｌ−６細胞は、Ｍｙｃ−タグに融合した、ＴＤ２６についての遺伝子を持つプラスミドによりトランスフェクトした。細胞は、ｍｙｃ抗体により染色した。図２Ｆは、２９３Ｔ細胞において、ｍｙｃタグ付きマウスＥＧ６２４２１９（マウスＴＤ２６タンパク質）およびｍｙｃタグ付きＴＤ２６は、４８時間後に上清へと分泌されることを示すウェスタンブロットであり、ＴＤ２６のマウスオルソログおよびヒトＴＤ２６の両方が、分泌タンパク質であることを示す。
【図２Ｅ】図２Ａ〜２Ｆは、インスリン受容体アンタゴニストＳ９６１によって誘導される遺伝子ＴＤ２６が、肝臓において高度に発現され、分泌タンパク質であることを示す図である。図２Ａは、Ｓ９６１による７日間の処置後の肝組織の遺伝子発現マイクロアレイ分析を示す。対角線に近い遺伝子は、処置および未処置肝臓において、類似する発現値を示す。「３倍」と標識された、薄い赤色の線の間の領域の外側のドットは、処置条件下で有意にアップレギュレートまたはダウンレギュレートした遺伝子を示す。黒色の矢印によって示される、アップレギュレートした遺伝子のうちの１つは、ＥＧ６２４２１９（ＴＤ２６のマウスオルソログ）である。図２Ｂは、７日間、インスリン受容体アンタゴニストＳ９６１により処置されたマウスにおけるＴＤ２６  ｍＲＮＡの相対的な発現を示す。ＴＤ２６発現は、Ｓ９６１処置に際して肝臓および脂肪において増加する。図２Ｃは、ＴＤ２６のマウスオルソログについての、予測されるエクソン構造を示す。図２Ｄは、コンセンサス配列（配列番号４）と共に、マウスおよびラットのオルソログとのＴＤ２６タンパク質の配列のアライメントを示す（ヒト（ホモサピエンス、配列番号１）、マウス（ハツカネズミ、配列番号２）、およびラット（ドブネズミ、配列番号３））。推定上のシグナルペプチドは、Ｎ−末端に含まれる。図２Ｅは、Ｍｙｃタグ付きＥＧ６２４２１９（ＴＤ２６のマウスオルソログ）およびＴＤ２６が、Ｈｅｐａｌ−６細胞（マウス肝癌細胞）において発現されることを示す。Ｈｅｐａｌ−６細胞は、Ｍｙｃ−タグに融合した、ＴＤ２６についての遺伝子を持つプラスミドによりトランスフェクトした。細胞は、ｍｙｃ抗体により染色した。図２Ｆは、２９３Ｔ細胞において、ｍｙｃタグ付きマウスＥＧ６２４２１９（マウスＴＤ２６タンパク質）およびｍｙｃタグ付きＴＤ２６は、４８時間後に上清へと分泌されることを示すウェスタンブロットであり、ＴＤ２６のマウスオルソログおよびヒトＴＤ２６の両方が、分泌タンパク質であることを示す。
【図２Ｆ】図２Ａ〜２Ｆは、インスリン受容体アンタゴニストＳ９６１によって誘導される遺伝子ＴＤ２６が、肝臓において高度に発現され、分泌タンパク質であることを示す図である。図２Ａは、Ｓ９６１による７日間の処置後の肝組織の遺伝子発現マイクロアレイ分析を示す。対角線に近い遺伝子は、処置および未処置肝臓において、類似する発現値を示す。「３倍」と標識された、薄い赤色の線の間の領域の外側のドットは、処置条件下で有意にアップレギュレートまたはダウンレギュレートした遺伝子を示す。黒色の矢印によって示される、アップレギュレートした遺伝子のうちの１つは、ＥＧ６２４２１９（ＴＤ２６のマウスオルソログ）である。図２Ｂは、７日間、インスリン受容体アンタゴニストＳ９６１により処置されたマウスにおけるＴＤ２６  ｍＲＮＡの相対的な発現を示す。ＴＤ２６発現は、Ｓ９６１処置に際して肝臓および脂肪において増加する。図２Ｃは、ＴＤ２６のマウスオルソログについての、予測されるエクソン構造を示す。図２Ｄは、コンセンサス配列（配列番号４）と共に、マウスおよびラットのオルソログとのＴＤ２６タンパク質の配列のアライメントを示す（ヒト（ホモサピエンス、配列番号１）、マウス（ハツカネズミ、配列番号２）、およびラット（ドブネズミ、配列番号３））。推定上のシグナルペプチドは、Ｎ−末端に含まれる。図２Ｅは、Ｍｙｃタグ付きＥＧ６２４２１９（ＴＤ２６のマウスオルソログ）およびＴＤ２６が、Ｈｅｐａｌ−６細胞（マウス肝癌細胞）において発現されることを示す。Ｈｅｐａｌ−６細胞は、Ｍｙｃ−タグに融合した、ＴＤ２６についての遺伝子を持つプラスミドによりトランスフェクトした。細胞は、ｍｙｃ抗体により染色した。図２Ｆは、２９３Ｔ細胞において、ｍｙｃタグ付きマウスＥＧ６２４２１９（マウスＴＤ２６タンパク質）およびｍｙｃタグ付きＴＤ２６は、４８時間後に上清へと分泌されることを示すウェスタンブロットであり、ＴＤ２６のマウスオルソログおよびヒトＴＤ２６の両方が、分泌タンパク質であることを示す。
【図３Ａ】図３Ａおよび３Ｂは、高度で特異的な遺伝子発現を示す、ＢｉｏＧＰＳオンラインデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｏｇｐｓ．ｇｎｆ．ｏｒｇ）からの組織マイクロアレイデータに基づくヒト（図３Ａ）およびマウス（図３Ｂ）組織におけるＴＤ２６の発現を示す図である。図３Ａは、ヒト肝臓において高い発現を示し、図３Ｂは、マウス褐色脂肪組織における、肝臓および膵臓において高い発現を示す。
【図３Ｂ】図３Ａおよび３Ｂは、高度で特異的な遺伝子発現を示す、ＢｉｏＧＰＳオンラインデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｏｇｐｓ．ｇｎｆ．ｏｒｇ）からの組織マイクロアレイデータに基づくヒト（図３Ａ）およびマウス（図３Ｂ）組織におけるＴＤ２６の発現を示す図である。図３Ａは、ヒト肝臓において高い発現を示し、図３Ｂは、マウス褐色脂肪組織における、肝臓および膵臓において高い発現を示す。
【図４】図４Ａ〜４Ｃは、１日目の尾静脈への注射を介してのＥＧ６２４２１９（マウスＴＤ２６オルソログ）ＤＮＡのインビボ投与が、ベータ細胞複製を増加させることを示す図である。図４Ａ（対照（緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）））および４Ｂ（ＥＧ６２４２１９）は、９日目の結果を示す；Ｋｉ６７は、複製のマーカーである。インスリンについての緑色の染色は、膵外分泌部内で作られた（ｎｅｓｔ）島を示す。島における赤色のドットは、複製ベータ細胞を示す。図４Ｃは、ＥＧ６２４２１９と比較した、対照（ＧＦＰ）でのＫｉ６７＋／インスリン＋％を示す棒グラフである。ＥＧ６２４２１９注射動物は、対照注射動物と比較して、ベータ細胞複製の２６倍の増加を実証した（すなわち、ＥＧ６２４２１９注射動物についての平均５．７６％対対照注射動物についての０．２２％）。
【図５】図５は、マウス（ハツカネズミ）、イヌ（カニス  ファミリアリス）、ニワトリ（ガッルス  ガッルス）、カエル（クセノプス（シルラナ（Ｓｉｌｕｒａｎａ））トロピカリス）、ゼブラフィッシュ（ゼブラ  ダニオ）、オポッサム（モルデルフィス  ドメスティカ）、サル（アカゲザル）、およびヒト（ホモサピエンス）を含む様々な種におけるＴＤ２６についての予測される配列相同性を示す。この分析から、ＴＤ２６がニワトリ、カエル、または魚において見出されないように、ＴＤ２６は、哺乳動物に特異的な遺伝子であるようである。
【図６】図６は、ヒトアンジオポエチン関連タンパク質３前駆物質（「Ｓｂｊｃｔ」）との、ヒトＴＤ２６（「クエリ（ｑｕｅｒｙ）」、予測されるシグナル配列の部分を含む）の配列相同性を示す図である。ＴＤ２６（配列番号５）は、アンジオポエチン関連３前駆物質（配列番号６）に対して２２％の同一性および４９％の相同性を示す。
【図７】図７は、ハツカネズミアンジオポエチン関連タンパク質３前駆物質（「Ｓｂｊｃｔ」、配列番号８）との、マウスＴＤ２６オルソログ（「クエリ」、ＥＧ６２４２１９；配列番号７、予測されるシグナル配列の部分を含む）の配列相同性を示す図である。
【図８−１】図８は、アンジオポエチン関連タンパク質３前駆物質（ホモサピエンス；「ａｎｇｐｔｌ−３  Ｈｓ」と呼ばれる）（配列番号９）、アンジオポエチン関連タンパク質３前駆物質（ハツカネズミ；「ａｎｇｐｔｌ−３Ｍｍ」と呼ばれる）（配列番号１０）、アンジオポエチン関連タンパク質４前駆物質（ホモサピエンス；「ａｎｇｐｔｌ−４  Ｈｓ」と呼ばれる）（配列番号１１）、アンジオポエチン関連タンパク質４前駆物質（ハツカネズミ；「ａｎｇｐｔｌ−４  Ｍｍ」と呼ばれる）（配列番号１２）、ＴＤ２６オルソログ（ハツカネズミ；ＥＧ６２４２１９）（配列番号２）、およびヒトＴＤ２６（配列番号１）の配列相同性を示す図である。
【図８−２】図８は、アンジオポエチン関連タンパク質３前駆物質（ホモサピエンス；「ａｎｇｐｔｌ−３  Ｈｓ」と呼ばれる）（配列番号９）、アンジオポエチン関連タンパク質３前駆物質（ハツカネズミ；「ａｎｇｐｔｌ−３Ｍｍ」と呼ばれる）（配列番号１０）、アンジオポエチン関連タンパク質４前駆物質（ホモサピエンス；「ａｎｇｐｔｌ−４  Ｈｓ」と呼ばれる）（配列番号１１）、アンジオポエチン関連タンパク質４前駆物質（ハツカネズミ；「ａｎｇｐｔｌ−４  Ｍｍ」と呼ばれる）（配列番号１２）、ＴＤ２６オルソログ（ハツカネズミ；ＥＧ６２４２１９）（配列番号２）、およびヒトＴＤ２６（配列番号１）の配列相同性を示す図である。
【図８−３】図８は、アンジオポエチン関連タンパク質３前駆物質（ホモサピエンス；「ａｎｇｐｔｌ−３  Ｈｓ」と呼ばれる）（配列番号９）、アンジオポエチン関連タンパク質３前駆物質（ハツカネズミ；「ａｎｇｐｔｌ−３Ｍｍ」と呼ばれる）（配列番号１０）、アンジオポエチン関連タンパク質４前駆物質（ホモサピエンス；「ａｎｇｐｔｌ−４  Ｈｓ」と呼ばれる）（配列番号１１）、アンジオポエチン関連タンパク質４前駆物質（ハツカネズミ；「ａｎｇｐｔｌ−４  Ｍｍ」と呼ばれる）（配列番号１２）、ＴＤ２６オルソログ（ハツカネズミ；ＥＧ６２４２１９）（配列番号２）、およびヒトＴＤ２６（配列番号１）の配列相同性を示す図である。
【図８−４】図８は、アンジオポエチン関連タンパク質３前駆物質（ホモサピエンス；「ａｎｇｐｔｌ−３  Ｈｓ」と呼ばれる）（配列番号９）、アンジオポエチン関連タンパク質３前駆物質（ハツカネズミ；「ａｎｇｐｔｌ−３  Ｍｍ」と呼ばれる）（配列番号１０）、アンジオポエチン関連タンパク質４前駆物質（ホモサピエンス；「ａｎｇｐｔｌ−４  Ｈｓ」と呼ばれる）（配列番号１１）、アンジオポエチン関連タンパク質４前駆物質（ハツカネズミ；「ａｎｇｐｔｌ−４  Ｍｍ」と呼ばれる）（配列番号１２）、ＴＤ２６オルソログ（ハツカネズミ；ＥＧ６２４２１９）（配列番号２）、およびヒトＴＤ２６（配列番号１）の配列相同性を示す図である。
【図９】図９は、マウスおよびヒトＴＤ２６タンパク質の両方が、シグナル配列を有することが予測されることを示す図である。
【図１０】図１０は、ヒトＴＤ２６が、コイルドコイル構造を有することが予測されることを示す図である。
【図１１】図１１は、ベータ細胞複製が、血中グルコースレベルに実質的に影響を与えることなく、Ｓ９６１の投与に際して増加することを示す、Ｓ９６１の様々な濃度の投与後の時間の関数としての血中グルコースレベル（ｍｇ／ｄＬ）を示すグラフである。
【図１２】図１２は、正常マウスの膵臓におけるＳ６６１の投薬の繰り返しの後のベータ細胞複製を示す棒グラフである。複製の増加は、ビヒクルの率と比較した増加倍数として示される。複製は、免疫組織化学的検査によって分析した。これらの実験における対照は、Ｓ６６１を有していないビヒクルである。
【図１３】図１３は、正常マウスにおけるＳ６６１の投薬の繰り返しの後のベータ細胞複製を示す棒グラフである。Ｓ６６１処置によるベータ細胞複製の増加は、複製のパーセンテージとして示す。複製は、フローサイトメトリによって分析した。これらの実験における対照は、Ｓ６６１を有していないビヒクルである（＊＊＊  ｐ＜０．００１；スチューデントのｔ検定）。
【図１４−１】図１４Ａ〜１４Ｃは、Ｓ６６１のインビボ投与が、食事誘発性の肥満（ＤＩＯ）マウスにおいてベータ細胞複製を増加させることを示す図である。図１４（Ａ）は、食事誘発性の肥満を有するマウスにおける膵臓におけるＳ６６１の投薬の繰り返しの後のベータ細胞の複製の増加を示し、図１４（Ｂ）は、非ベータ細胞の複製を示す。Ｓ６６１処置によるベータ細胞複製の増加を、複製パーセントとして示し、非ベータ細胞複製に対する効果はなかった。図１４（Ｃ）は、Ｓ６６１処置が、総膵臓面積と比べた、島面積における増加を引き起こしたことを実証する。免疫組織化学的検査は、複製および島面積を分析するために実行した（＊  ｐ＜０．０５；＊＊  ｐ＜０．０１；スチューデントのｔ検定）。
【図１４−２】図１４Ａ〜１４Ｃは、Ｓ６６１のインビボ投与が、食事誘発性の肥満（ＤＩＯ）マウスにおいてベータ細胞複製を増加させることを示す図である。図１４（Ａ）は、食事誘発性の肥満を有するマウスにおける膵臓におけるＳ６６１の投薬の繰り返しの後のベータ細胞の複製の増加を示し、図１４（Ｂ）は、非ベータ細胞の複製を示す。Ｓ６６１処置によるベータ細胞複製の増加を、複製パーセントとして示し、非ベータ細胞複製に対する効果はなかった。図１４（Ｃ）は、Ｓ６６１処置が、総膵臓面積と比べた、島面積における増加を引き起こしたことを実証する。免疫組織化学的検査は、複製および島面積を分析するために実行した（＊  ｐ＜０．０５；＊＊  ｐ＜０．０１；スチューデントのｔ検定）。
【図１５】図１５は、尾静脈への注射を介しての、マウスＴＤ２６ポリペプチド断片をコードするプラスミドの、インビボ投与によるベータ細胞複製の誘導を示す図である。これらの実験における対照は、ＧＦＰコードプラスミドとした。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
発明の詳細な説明
本明細書において記載される本発明の実施形態は、肝細胞癌関連タンパク質ＴＤ２６（本明細書において「ＴＤ２６」と呼ばれる）が膵臓ベータ細胞増殖を誘導するという観察およびインスリン受容体アンタゴニストＳ９６１もまた、低用量で膵臓ベータ細胞増殖を誘導するという観察から生じるものである。ベータ細胞機能および細胞量を調整し、かつ特に、それらを増加させ、それによって、インスリン分泌を増加させる能力は、たとえば糖尿病の処置のための様式を提供する。したがって、本明細書において記載される研究は、膵臓ベータ細胞増殖、血清インスリンレベル、脂肪酸のレベル、および血中グルコースレベルを調整するための方法ならびに糖尿病、肥満、およびメタボリックシンドロームを含む障害を処置するおよび／または予防するための方法を提供する。
【００２２】
本明細書において使用される場合、用語「ベータ細胞」、「β−細胞」、または「膵臓β−細胞」は、初代膵臓β−細胞、脱分化細胞から、たとえば人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）から誘導される膵臓β様細胞、または他の起源の細胞（たとえば肝細胞、線維芽細胞、もしくは膵外分泌細胞（ｅｘｏｃｒｉｎｅ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃｅｌｌ））から直接再プログラムされた膵臓β様細胞を含む。一実施形態において、β−細胞が、不死化細胞系ではない（すなわち、β−細胞が、培養において無限に増殖しない）。一実施形態において、β−細胞が、形質転換細胞ではない（すなわち、β−細胞が、ほんの２例を挙げると、軟寒天中での成長または接触阻害の非存在などの形質転換特性を示さない）。
【００２３】
本明細書において使用される場合、用語「内因性膵臓ベータ細胞」、その代わりに、「初代膵臓ベータ細胞」は、哺乳動物の膵臓のインスリン産生細胞または哺乳動物の膵臓ベータ細胞（ベータ細胞）表現型の細胞を指す。膵臓ベータ細胞の表現型は、当業者によってよく知られており、たとえば、グルコースレベルの増加に応じたインスリンの分泌、ｃ−ペプチド、ＰＤＸ−１ポリペプチド、およびＧｌｕｔ２などのマーカーの発現ならびに必ずしもではないが、インビボにおいて、膵臓における島において組織化され、典型的に、直径約９〜１５μｍの小さな紡錘体様の細胞を有するような、独特な形態学的な形質を含む。内因性膵臓ベータ細胞は、ランゲルハンス島において見出すことができる。本発明の方法において、初代膵臓ベータ細胞は、ランゲルハンス島の一部としてインビトロにおいて接触させることができる。
【００２４】
本明細書において使用される場合、用語「インスリン産生細胞」は、構成的な方式または誘導性の方式で、インスリンを合成する（すなわち、インスリン遺伝子を転写し、プロインスリンｍＲＮＡを翻訳し、プロインスリンｍＲＮＡをインスリンタンパク質に変える）、発現する（すなわち、インスリン遺伝子が持つ、表現型の形質を表す）、または分泌する（細胞外空間へとインスリンを放出する）、その用語が本明細書において記載されるとおりの初代ベータ細胞、ならびにその用語が本明細書において記載されるとおりの膵臓ベータ様細胞を含む。
【００２５】
一態様において、方法が、ＴＤ２６タンパク質レベルまたは活性を調整する化合物または作用物質と細胞を接触させるステップまたはそれを被験体に投与するステップを含む。用語「タンパク質レベルまたは活性を調整する」は、タンパク質レベル、活性、または機能のアップレギュレーション（活性化もしくは増加性の活性）またはダウンレギュレーション（阻害）を指す。一実施形態において、調整が、タンパク質の活性を直接増加させるまたは阻害することによって、すなわち、タンパク質との直接的な物理的相互作用を介して行われる。一実施形態において、タンパク質の活性が、たとえば、タンパク質活性の上流のエフェクタを活性化するまたは阻害することによって、シグナル伝達において、間接的に調整される。
【００２６】
特定の態様において、望ましい化合物または作用物質が、ＴＤ２６のレベルまたは活性（たとえば、発現および／または分泌を増加させることによって）を増加させる。適した化合物／作用物質は、化合物ならびに化合物の混合物、たとえば、小さな有機分子または無機分子；サッカリド；オリゴ糖；多糖；生体高分子、たとえばペプチド、タンパク質、ならびにペプチドアナログおよび誘導体；ペプチド模倣物；核酸；核酸アナログおよび誘導体；細菌、植物、真菌、または動物細胞または組織などの生体物質から作製される抽出物；天然に存在するまたは合成組成物；ペプチド；アプタマー；ならびに抗体またはその断片を含むが、これらに限定されない。化合物／作用物質は、核酸ＲＮＡまたはＤＮＡとすることができ、一本鎖であっても二本鎖であってもよい。例となる核酸化合物は、タンパク質活性化因子または阻害因子（たとえば転写活性化因子または阻害因子）をコードする核酸、オリゴヌクレオチド、核酸類似体（たとえばペプチド核酸（ＰＮＡ）、偽相補的（ｐｓｅｕｄｏ−ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ）ＰＮＡ（ｐｃ−ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）など）、アンチセンス分子、リボザイム、小さな阻害性核酸配列または活性化核酸配列（たとえばＲＮＡｉ、ｓｈＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡｉ（ｍＲＮＡｉ）、アンチセンスオリゴヌクレオチドなど）を含むが、これらに限定されない。タンパク質および／またはペプチド作用物質は、遺伝子発現またはタンパク質活性を調整する任意のタンパク質とすることができる。非限定的な例は、変異タンパク質（ｍｕｔａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）；治療用タンパク質および切断型タンパク質を含み、たとえば、タンパク質は、標的細胞において、通常存在しないまたはより低いレベルで発現される。タンパク質はまた、遺伝子操作されたタンパク質、ペプチド、合成ペプチド、組換えタンパク質、キメラタンパク質、抗体（たとえば、インスリンおよびインスリン受容体の間の相互作用に干渉し、かつＴＤ２６のレベルまたは活性を増加させ、ベータ細胞複製の増加が結果として生ずる抗体）、ミディボディ（ｍｉｄｉｂｏｄｙ）、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、ヒト化タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、修飾タンパク質、ならびにその断片から選択することができる。遺伝子の発現を増加させるまたは遺伝子によってコードされるタンパク質のレベルもしくは活性を増加させる化合物または作用物質はまた、活性化因子または活性化化合物としても知られている。遺伝子の発現を減少させるまたは遺伝子によってコードされるタンパク質のレベルもしくは活性を減少させる化合物または作用物質はまた、阻害剤または阻害化合物としても知られている。
【００２７】
ある実施形態において、ＴＤ２６レベルまたは活性を増加させる作用物質は、ＴＤ２６タンパク質またはポリペプチド（ヒトＴＤ２６およびその相同体の両方ならびに非ヒト種、たとえばマウス由来のオルソロガスポリペプチドおよびタンパク質）ならびにその機能的断片；ＴＤ２６タンパク質およびポリペプチドおよびその機能的断片をコードする核酸分子；ならびにインスリン受容体アンタゴニストを含むが、これらに限定されない。
【００２８】
本発明の方法は、任意のインスリン受容体アンタゴニストの使用を企図する。たとえば、インスリン受容体アンタゴニストは、インスリンがインスリン受容体と相互作用する能力に干渉する作用物質、およびインスリンの生物学的効果を中和することができ、好ましくは、血中グルコースレベルを著しく増加させないまたは一過性にのみ増加させる作用物質であり得る。当業者は、適したインスリン受容体アンタゴニストが、インスリンシグナル伝達に干渉し、かつベータ細胞複製を増加させることができるものであることを理解する。いくつかの実施形態において、そのようなインスリン受容体アンタゴニストが、ＴＤ２６のレベルまたは活性を増加させ、好ましくは、血中グルコースレベルを著しく増加させないまたは一過性にのみ増加させる。適したインスリン受容体アンタゴニストは、ＴＤ２６のレベルまたは活性を増加させることができ、かつベータ細胞複製を増加させることができ、好ましくは、個体に投与した場合に、血中グルコースレベルにおいて著しい非一過性の増加を伴わない、上記に記載される適した化合物／作用物質のいずれかを含むが、これらに限定されないことが理解されたい。
【００２９】
いくつかの態様において、ベータ細胞複製を増加させるインスリン受容体アンタゴニストは、タンパク質またはペプチドとすることができる。いくつかの実施形態において、タンパク質またはペプチドインスリン受容体アンタゴニストが、ＴＤ２６のレベルまたは活性を増加させる。本発明のペプチドインスリン受容体アンタゴニストは、それらのペプチド形態においてまたはペプチドをコードする核酸として投与することができ、また、所望の生物学的活性を有するペプチドを生成するようにインビボにおいて翻訳することができることが、当業者によって理解される。
【００３０】
いくつかの態様において、ペプチドインスリン受容体アンタゴニストが、第１の機能的な部分、第２の機能的な部分、ならびに好ましくは、可撓性および／または溶解性について操作されたその間のリンカーを含む。
【００３１】
第１および第２の機能的な部分は、たとえば、インスリン受容体に対するインスリンの親和性よりも大きなまたはそれに等しい、インスリン受容体に対する親和性を示すアミノ酸配列（たとえば親和性を最適化した部位）を含むことができる。
【００３２】
いくつかの実施形態において、第１の機能的な部分が、配列番号１８のアミノ酸配列を有するペプチドを含む。いくつかの実施形態において、第１の機能的な部分が、配列番号１８に対して少なくとも８０％同一であり、所望の生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有するペプチドを含む。
【００３３】
いくつかの実施形態において、リンカーが、可撓性のリンカーを含む。いくつかの実施形態において、リンカーが、可溶性のリンカーを含む。いくつかの実施形態において、リンカーが、アミノ酸リンカーを含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸リンカーが、１つ以上のアミノ酸残基を有する。他の実施形態において、アミノ酸リンカーが、７つまでのアミノ酸残基を有する。いくつかの実施形態において、リンカーが、１つ以上のグリシン残基および１つ以上のセリン残基を含む。いくつかの実施形態において、リンカーが、１つ以上のＧＧＳリピート（たとえばＧＧＳ、ＧＧＳＧＧＳ、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳなど）を含む。一実施形態において、可撓性リンカーが、配列番号１９を含む。ある実施形態において、可撓性リンカーが、Ｓｃｈａｅｆｆｅｒら（その全体が参照によって本明細書において組み込まれるＳｃｈａｅｆｆｅｒら、ＰＮＡＳ  １００（８）：４４３５−４４３９（２００３））において記載されるような、エチレングリコールベースのリンカーを含む。一実施形態において、リンカーが、トリエチレングリコールベースのリンカーを含む。
【００３４】
いくつかの実施形態において、第２の機能的な部分が、配列番号２０のアミノ酸配列を有するペプチドを含む。いくつかの実施形態において、第２の機能的な部分が、配列番号２０に対して少なくとも８０％同一であり、所望の生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有するペプチドを含む。いくつかの実施形態において、第２の機能的な部分が、アミノ酸配列ＳＬＥＥＥＷＡＱＩＱＣＥＶＷＧＲＧＣＰＳＹ（配列番号２３）を有するペプチドを含む。いくつかの実施形態において、第２の機能的な部分が、配列番号２３に対して少なくとも８０％同一であり、所望の生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有するペプチドを含む。いくつかの実施形態において、第２の機能的な部分が、アミノ酸配列Ｌ−Ｘａａ−Ｘａａ−ＥＷＡ−Ｘａａ−Ｘａａ−ＱＣＥＶ−Ｘａａ−ＧＲＧＣＰＳ（配列番号２４）を有するペプチドであって、Ｘａａが、任意のアミノ酸であるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、第２の機能的な部分が、配列番号２４に対して少なくとも８０％同一であり、所望の生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有するペプチドを含む。
【００３５】
いくつかの実施形態において、ベータ細胞複製を増加させるペプチドインスリン受容体アンタゴニストが、ペプチドＳ９６１（酸性のＣ−末端を有する配列番号１６）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドＳ９６１が、ＴＤ２６のレベルまたは活性を増加させ、好ましくは、血中グルコースレベルを著しく増加させないまたは一過性にのみ増加させる。
【００３６】
いくつかの態様において、ペプチドＳ９６１（もしくはその機能的な部分）またはペプチドＳ９６１をコードする核酸が、変異配列（ｖａｒｉａｎｔ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）を含む。変異配列は、１つ以上の配列変異（ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ）を含むことができる、ただし、そのような変異が、ベータ細胞複製を増加させる効果を排除しないことを条件とする。いくつかの実施形態において、配列変異が、保存的変異を含む。好ましい実施形態において、本発明のＳ９６１ペプチドをコードする核酸が、Ｓ９６１をコードする核酸に対して少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。
【００３７】
いくつかの実施形態において、本発明のＳ９６１ペプチドが、Ｓ９６１ペプチドに対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、前記Ｓ９６１ペプチドが、配列番号１６に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、前記ペプチドが、配列番号１８に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、前記ペプチドが、配列番号２３に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、前記ペプチドが、順番に、Ｎ−末端からＣ−末端に、酸性のＣ−末端を有して、配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２３に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００３８】
いくつかの実施形態において、ベータ細胞複製を増加させるペプチドインスリン受容体アンタゴニストが、ペプチドＳ６６１（アミドＣ−末端を有する配列番号１６）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドＳ６６１が、ＴＤ２６のレベルまたは活性を増加させ、好ましくは、血中グルコースレベルを著しく増加させないまたは一過性にのみ増加させる。いくつかの態様において、ペプチドＳ６６１（もしくはその機能的な部分）またはペプチドＳ６６１をコードする核酸が、変異配列を含む、ただし、そのような変異が、ベータ細胞複製を増加させる効果を排除しないことを条件とする。いくつかの実施形態において、配列変異が、保存的変異を含む。好ましい実施形態において、本発明のＳ６６１ペプチドをコードする核酸が、Ｓ６６１をコードする核酸に対して少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。
【００３９】
いくつかの実施形態において、本発明のＳ６６１ペプチドが、Ｓ６６１ペプチドに対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、前記Ｓ６６１ペプチドが、配列番号１６に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、前記ペプチドが、配列番号１８に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、前記ペプチドが、配列番号２３に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、前記ペプチドが、順番に、Ｎ−末端からＣ−末端に、アミドＣ−末端を有して、配列番号１８、１９、および２３に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００４０】
いくつかの実施形態において、ベータ細胞複製を増加させるペプチドインスリン受容体アンタゴニストが、ペプチドＲＢ５３７（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドＲＢ５３７が、ＴＤ２６のレベルまたは活性を増加させ、好ましくは、血中グルコースレベルを著しく増加させないまたは一過性にのみ増加させる。いくつかの態様において、ペプチドＲＢ５３７（もしくはその機能的な部分）またはペプチドＲＢ５３７をコードする核酸が、変異配列を含む、ただし、そのような変異が、ベータ細胞複製を増加させる効果を排除しないことを条件とする。いくつかの実施形態において、配列変異が、保存的変異を含む。好ましい実施形態において、本発明のＲＢ５３７ペプチドをコードする核酸が、ＲＢ５３７をコードする核酸に対して少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。
【００４１】
いくつかの実施形態において、本発明のＲＢ５３７ペプチドが、ＲＢ５３７ペプチドに対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、前記ＲＢ５３７ペプチドが、配列番号１７に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、前記ＲＢ５３７ペプチドが、配列番号１８に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、前記ＲＢ５３７ペプチドが、配列番号２０に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、前記ＲＢ５３７ペプチドが、Ｎ−末端からＣ−末端に、配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００４２】
いくつかの実施形態において、ベータ細胞複製を増加させるインスリン受容体アンタゴニストが、抗体を含む。いくつかの実施形態において、ベータ細胞複製を増加させるインスリン受容体アンタゴニストが、インスリン受容体に結合する抗体を含む。いくつかの実施形態において、インスリン受容体アンタゴニスト抗体が、ＴＤ２６のレベルまたは活性を増加させ、好ましくは、血中グルコースレベルを著しく増加させないまたは一過性にのみ増加させる。本明細書において使用される場合、「抗体」は、最も広い意味で使用され、完全にアセンブルされた抗体、四量体抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）（たとえば二重特異性抗体）、抗原に結合することができる抗体断片（たとえばＦａｂ’、Ｆ’（ａｂ）２、Ｆｖ、単鎖抗体、ダイアボディ）、およびそれらが所望の生物学的活性を示す限り、上記のいずれかを含む組換えペプチドを含む。「免疫グロブリン」または「四量体抗体」は、それぞれが可変領域および定常領域を含む２つの重鎖および２つの軽鎖からなる四量体糖タンパク質である。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術またはインタクトな抗体の酵素的もしくは化学的切断によって生成してもよい。抗体断片または抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、ＣＤＲ移植抗体、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体断片、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、ミニボディ、線状抗体；キレート組換え抗体、トリボディ（ｔｒｉｂｏｄｙ）またはバイボディ（ｂｉｂｏｄｙ）、イントラボディ、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）、小モジュラー免疫医薬（ｓｍａｌｌ  ｍｏｄｕｌａｒ  ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）（ＳＭＩＰ）、抗原結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質、ラクダ化抗体（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、ＶＨＨ含有抗体またはその変異体（ｖａｒｉａｎｔ）もしくは誘導体、および抗体が所望の生物学的活性を保持する限り、１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲ配列などの、ポリペプチドに対して特異的な抗原結合性を付与するのに十分である、免疫グロブリンの少なくとも１つの部分を含有するポリペプチドを含む。「抗体変異体」は、自然抗体可変領域ドメインの可変領域において、少なくとも１つのアミノ酸置換、欠失、または挿入を含有する抗体ポリペプチド配列を指す。変異体は、未修飾抗体に対して実質的に相同であってもよい、または実質的に同一であってもよい。「キメラ抗体」は、典型的に異なる種に起源を持つ２つの異なる抗体から誘導される配列を含有する抗体を指す（たとえば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照されたい）。最も典型的には、キメラ抗体は、ヒトおよびげっ歯動物の抗体断片、一般に、ヒト定常領域およびマウス可変領域を含む。
【００４３】
本発明における使用に適し得るインスリン受容体アンタゴニストの例は、いくつかの実施形態において、所望の生物学的活性を示す、文献（たとえばＲｏｔｈら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．１９８３  Ｏｃｔ  ２５；２５８（２０）：１２０９４−７；Ｍｏｒｇａｎら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．１９８６  Ｊａｎ；８３（２）：３２８−３２；Ｔａｙｌｏｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．１９８７  ２月１５日；２４２（１）：１２３−９；Ｎａｇｙら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．１９９０  １月；１２６（１）：４５−５２；およびＦｕｊｉｔａら、Ａｃｔａ  Ｄｉａｂｅｔｏｌ．２００２  １２月；３９（４）：２２１−７参照）において報告される抗インスリン受容体抗体を含み得る。いくつかの実施形態において、抗インスリン受容体抗体が、ＴＤ２６のレベルまたは活性を増加させ得、好ましくは、血中グルコースレベルを著しく増加させないまたは一過性にのみ増加させる。
【００４４】
いくつかの実施形態において、本発明が、本発明の抗体およびペプチドをコードするポリヌクレオチドを企図する。本発明はまた、そのようなポリヌクレオチドを含むベクター、そのようなポリヌクレオチドまたはベクターを含む宿主細胞、ならびに本発明の抗体およびポリペプチドを生成する方法であって、適した条件下で培養媒体にそのような宿主細胞を成長させるステップおよび必要に応じて、宿主細胞または培養培地から、コードされた抗体またはポリペプチドを単離するステップ、必要に応じて、その後、抗体またはポリペプチドをさらに精製するステップを含む方法をも企図する。抗体単離および精製方法は、当業者のレベルの範囲内に十分にある。
【００４５】
ある実施形態において、ベータ細胞複製を増加させることができるインスリン受容体アンタゴニストが、たとえば、低分子量有機分子などの化合物を含む。いくつかの実施形態において、化合物が、ＴＤ２６のレベルまたは活性を増加させる。
【００４６】
用語「増加した」、「増加させる」、「増強する」、または「活性化する」は、すべて、一般に、有意な量の増加を意味するために本明細書において使用する。本発明のこのおよび他の態様のいくつかの実施形態において、ＴＤ２６タンパク質のレベルまたは活性が、対照に比べて、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１倍、少なくとも１．１倍、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、またはそれより多く増加する。本発明のこのおよび他の態様のいくつかの実施形態において、タンパク質活性の活性化因子が、５００ｎＭ未満のもしくはそれに等しい、２５０ｎＭ未満のもしくはそれに等しい、１００ｎＭ未満のもしくはそれに等しい、５０ｎＭ未満のもしくはそれに等しい、１０ｎＭ未満のもしくはそれに等しい、１ｎＭ未満のもしくはそれに等しい、０．１ｎＭ未満のもしくはそれに等しい、０．０１ｎＭ未満のもしくはそれに等しい、または０．００１ｎＭ未満のもしくはそれに等しいＥＣ５０を有する。タンパク質活性は、当業者によく知られている手段によって測定することができ、状況に依存して、異なる方法またはアッセイによって測定されてもよい。
【００４７】
他の態様において、望ましい化合物または作用物質が、ＴＤ２６のレベルまたは活性（たとえば、発現および／または分泌を減少させることによって）を減少させる。ＴＤ２６の発現および／または分泌を減少させることは、たとえば、インスリノーマなどの、ＴＤ２６レベルまたは活性の増加によって悪化し得る、過度のインスリンレベルによって特徴付けられる障害を処置するのに望ましくてもよい。
【００４８】
用語「減少させる」、「低下した」「低下」、「減少」、または「阻害する」は、すべて、一般に、有意な量の減少を意味するために本明細書において使用される。本発明のこのおよび他の態様のいくつかの実施形態において、遺伝子によってコードされるタンパク質のレベルまたは活性が、対照に比べて、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または１００％（たとえば、活性の完全な損失）、阻害されるまたは下がる。本発明のこのおよび他の態様のいくつかの実施形態において、阻害剤が、５００ｎＭ未満のもしくはそれに等しい、２５０ｎＭ未満のもしくはそれに等しい、１００ｎＭ未満のもしくはそれに等しい、５０ｎＭ未満のもしくはそれに等しい、１０ｎＭ未満のもしくはそれに等しい、１ｎＭ未満のもしくはそれに等しい、０．１ｎＭ未満のもしくはそれに等しい、０．０１ｎＭ未満のもしくはそれに等しい、または０．００１ｎＭ未満のもしくはそれに等しいＩＣ５０を有する。ＴＤ２６レベルまたは活性を減少させる化合物は、たとえば、抗ＴＤ２６抗体、ＴＤ２６を標的にするアンチセンス分子、およびＴＤ２６を標的にするｓｉＲＮＡ分子を含む。
【００４９】
本発明における使用に適したＴＤ２６タンパク質およびポリペプチドは、たとえば、ヒトＴＤ２６タンパク質およびポリペプチドを含む。ヒトＴＤ２６タンパク質配列は、受入番号ＮＰ＿０６１１５７．３としてＧＥＮＢＡＮＫ（商標）に寄託されている。ヒトＴＤ２６タンパク質のアミノ酸配列は、
【００５０】
【化１】
2014523871.tif 000003
（配列番号１；予測されるシグナル配列に下線を引く）である。
【００５１】
したがって、いくつかの実施形態において、本明細書において記載される方法が、配列番号１のポリペプチドまたはその断片、たとえば機能的な部分（またはポリペプチドもしくは断片をコードする核酸）と細胞もしくは培養培地を接触させるステップまたはそれを被験体に投与するステップを含む。本明細書において使用される場合、ＴＤ２６の機能的な部分または断片は、たとえば、哺乳動物に対する投与に際してまたは試験動物において、ベータ細胞複製を増加させるものである。適した断片は、たとえば、天然のシグナル配列を欠く配列番号１のポリペプチドおよびコイルドコイルドメイン（ＣＣＤ）を含む配列番号１のポリペプチド部分を含む。
【００５２】
ある実施態様において、インビボにおいて、ＴＤ２６のレベルもしくは活性を増加させるおよび／またはベータ細胞複製を増加させるのに有用なＴＤ２６ポリペプチドまたはタンパク質の機能的な部分が、１つ以上のドメイン（たとえば配列番号１に関して）を欠く。
【００５３】
いくつかの実施形態において、ＴＤ２６の機能的な部分が、ＬＰＬドメインを欠く。いくつかの実施形態において、ＴＤ２６の機能的な部分が、１つ以上のＣＣＤを欠く（たとえば、第１および／または第２のＣＣＤを欠く）。ある態様において、ポリペプチドが、ドメイン全体を欠いていてもよく、他の態様において、ポリペプチドが、インタクトな（完全な）ドメインを欠いていてもよい（すなわち、ドメインの部分を含有してもよい）。ある態様において、ポリペプチドが、機能的なドメイン（たとえば、機能的なＬＰＬドメインまたは機能的なＣＣＤ）を欠いていてもよい。
【００５４】
その代わりに、インビボにおいて、ＴＤ２６のレベルもしくは活性および／またはベータ細胞複製を増加させるのに有用なＴＤ２６ポリペプチドまたはタンパク質の機能的な部分が、ＴＤ２６タンパク質の１つ以上のドメイン（たとえばインタクトなドメインまたは機能的なドメイン）を含む。いくつかの実施形態において、ＴＤ２６の機能的な部分が、ＬＰＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＴＤ２６の機能的な部分が、１つ以上のＣＣＤ（たとえば、第１のＣＣＤおよび／または第２のＣＣＤ）を含む。ある実施形態において、ＴＤ２６の機能的な部分が、ＴＤ２６の第１および第２のＣＣＤの間に、いくつかまたはすべてのアミノ酸配列（「介在配列」または”ＩＶＳ”）を含む。
【００５５】
ある実施形態において、ＴＤ２６の機能的な部分が、ＴＤ２６の天然のシグナル配列とＴＤ２６の完全なアミノ酸配列もしくはヌクレオチド配列とを含まない、あるいは該機能的な部分が、そのシグナルペプチドを欠くＴＤ２６の完全なアミノ酸配列と、そのシグナルペプチドを欠くＴＤ２６の完全なアミノ酸配列をコードする核酸とを含まない。多くの分泌タンパク質において、シグナル配列は、切断され、最終タンパク質のポリペプチド配列の一部とならないことが理解される。
【００５６】
一実施形態において、インビボにおいて、ベータ細胞複製を増加させるのに有用なＴＤ２６ポリペプチドまたはタンパク質の機能的な部分が、配列番号１のポリペプチドのアミノ酸２２〜７６のペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ＴＤ２６ポリペプチドまたはタンパク質の機能的な部分が、１つ以上の保存的アミノ酸置換を含む、配列番号１のポリペプチドのアミノ酸２２〜７６のペプチドを含む、ただし、ペプチドが、ベータ細胞複製を増加させる能力を保持することを条件とする。
【００５７】
一実施形態において、インビボにおいて、ベータ細胞複製を増加させるのに有用なＴＤ２６ポリペプチドまたはタンパク質の機能的な部分が、ＬＰＬドメインを含むが、ＣＣＤ１、ＩＶＳ、およびＣＣＤ２を欠く。一実施形態において、インビボにおいて、ベータ細胞複製を増加させるのに有用なＴＤ２６ポリペプチドまたはタンパク質の機能的な部分が、予測されるＬＰＬドメインを含むが、予測されるＣＣＤ１、予測されるＩＶＳ、および予測されるＣＣＤ２を欠く。
【００５８】
一実施形態において、インビボにおいて、ベータ細胞複製を増加させるのに有用なＴＤ２６ポリペプチドまたはタンパク質の機能的な部分が、配列番号１のポリペプチドのアミノ酸４８〜７６のペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ＴＤ２６ポリペプチドまたはタンパク質の機能的な部分が、１つ以上の保存的アミノ酸置換を含む、配列番号１のポリペプチドのアミノ酸４８〜７６のペプチドを含む、ただし、ペプチドが、ベータ細胞複製を増加させる能力を保持することを条件とする。
【００５９】
一実施形態において、インビボにおいて、ベータ細胞複製を増加させるのに有用なＴＤ２６ポリペプチドまたはタンパク質の機能的な部分が、インタクトなＬＰＬドメインならびにＣＣＤ１、ＩＶＳ、およびＣＣＤ２を欠く。一実施形態において、インビボにおいて、ベータ細胞複製を増加させるのに有用なＴＤ２６ポリペプチドまたはタンパク質の機能的な部分が、インタクトなＬＰＬドメイン、ＣＣＤ１、ＩＶＳ、およびＣＣＤ２を欠く配列番号１のアミノ酸を含む。一実施形態において、インビボにおいて、ベータ細胞複製を増加させるのに有用なＴＤ２６ポリペプチドまたはタンパク質の機能的な部分が、インタクトな予測されるＬＰＬドメインならびに予測されるＣＣＤ１、予測されるＩＶＳ、および予測されるＣＣＤ２を欠く。
【００６０】
一実施形態において、インビボにおいて、ベータ細胞複製を増加させるのに有用なＴＤ２６ポリペプチドまたはタンパク質の機能的な部分が、配列番号１のポリペプチドのアミノ酸７７〜１３５のペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ＴＤ２６ポリペプチドまたはタンパク質の機能的な部分が、１つ以上の保存的アミノ酸置換を含む、配列番号１のポリペプチドのアミノ酸７７〜１３５のペプチドを含む、ただし、ペプチドが、ベータ細胞複製を増加させる能力を保持することを条件とする。
【００６１】
一実施形態において、インビボにおいて、ベータ細胞複製を増加させるのに有用なＴＤ２６ポリペプチドまたはタンパク質の機能的な部分が、ＣＣＤ１を含むが、ＣＣＤ２、ＩＶＳ、およびＬＰＬドメインを欠く。一実施形態において、インビボにおいて、ベータ細胞複製を増加させるのに有用なＴＤ２６ポリペプチドまたはタンパク質の機能的な部分が、予測されるＣＣＤ１を含むが、予測されるＣＣＤ２、予測されるＩＶＳ、および予測されるＬＰＬドメインを欠く。
【００６２】
当業者は、配列番号１に関して上記に記載されるＴＤ２６の機能的な部分の記載が、説明的なものにすぎないことを理解する。たとえば、そのような記載は、同様に、配列番号２〜４に適用される。
【００６３】
ある実施形態において、配列番号１の機能的なポリペプチドが、たとえば、ヒト成長ホルモンシグナルペプチドなどのポリペプチドの分泌を指示することができる配列とシグナル配列で置き換えられるタンパク質配列を含む。他の実施形態において、本発明における使用に適したポリペプチドおよびタンパク質が、配列番号２、配列番号３、および配列番号４のポリペプチドならびにその機能的断片を含む。他の適したポリペプチドおよびタンパク質は、ヒトＴＤ２６のアミノ酸配列と比較することによって同定して、ヒトＴＤ２６と有意な配列同一性または相同性を共有するポリペプチドおよびタンパク質を同定することができる。同一性または相同性は、全タンパク質もしくはポリペプチドにわたって存在し得る、またはタンパク質もしくはポリペプチドの特定のドメインにわたってのみまたは主としてタンパク質もしくはポリペプチドの特定のドメインにわたって（たとえば、ＣＣＤドメインもしくは他の機能的なドメインにわたって）存在し得る。そのような配列比較を行うためのコンピュータ化アルゴリズムは、当技術分野において知られており、例示的な方法は、本明細書において記載される研究において使用されている。たとえば、アミノ酸配列（および核酸配列）相同性についてのコンピュータアルゴリズム分析は、たとえばＢＬＡＳＴ、ＤＯＭＡＩＮ、ＢＥＡＵＴＹ（ＢＬＡＳＴ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｕｔｉｌｉｔｙ）、ＧＥＮＰＥＰＴ、およびＴＲＥＭＢＬパッケージなどの、任意の数の入手可能なソフトウェアパッケージの利用を含んでいてもよい。
【００６４】
有用な核酸分子およびそれらのコードポリペプチドは、それぞれの遺伝子の核酸（たとえば遺伝子、プレ（ｐｒｅ）−ｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ）またはタンパク質のすべての形態、（核酸またはタンパク質に対して適用可能な場合）（１）本明細書において記載されるポリペプチドに対して、好ましくは、少なくとも約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、またはそれより多くのアミノ酸の領域にわたって、約８０％よりも高いアミノ酸配列同一性または約８５％よりも高い、約９０％よりも高い、約９１％よりも高い、約９２％よりも高い、約９３％よりも高い、約９４％よりも高い、約９５％よりも高い、約９６％よりも高い、約９７％よりも高い、約９８％よりも高い、もしくは約９９％よりも高い、またはそれより高いアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有する；（２）参照アミノ酸配列、その免疫原性断片、およびその保存的修飾変異体を含む免疫原に対して得られる抗体、たとえばポリクローナル抗体に特異的に結合する；（３）参照アミノ酸配列およびその保存的修飾変異体をコードする核酸に対してストリンジェントハイブリダイゼーション条件下で特異的にハイブリダイズする；（４）本明細書において記載される参照ヌクレオチド配列に対して、好ましくは、少なくとも約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、１００、２００、またそれより多くのヌクレオチドの領域にわたって、約８０％よりも高い、好ましくは、約８５％よりも高い、９０％よりも高い、９５％よりも高い、９６％よりも高い、９７％よりも高い、９８％よりも高い、９９％よりも高い、またはそれより高いヌクレオチド配列同一性を有する核酸配列を有する、それらの多型変異体、対立遺伝子、変異体（ｍｕｔａｎｔ）、および種間相同体を指す。いくつかの実施形態において、参照ヌクレオチド配列が、シグナル配列をコードする部分を欠く。
【００６５】
いくつかの態様において、ＴＤ２６核酸（すなわちＴＤ２６ポリペプチドまたはその機能的な部分をコードする核酸）またはＴＤ２６タンパク質配列が、変異配列を含む。変異配列は、１つ以上の天然に存在する配列変異を含むことができる。天然に存在する配列変異の非限定的な例は、下記の表１において同定される、１つ以上の一塩基多型またはアミノ酸変異を含む。したがって、本発明のＴＤ２６配列は、天然に存在する（および天然に存在しない）変異を含むことができる、ただし、そのような変異が、ＴＤ２６配列のベータ細胞増殖効果を排除しないことを条件とする。いくつかの実施形態において、配列変異が、保存的変異を含む。好ましい実施形態において、本発明のＴＤ２６タンパク質をコードする核酸が、ＴＤ２６核酸に対して少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、前記核酸が、配列番号１４に対して少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、前記核酸が、配列番号１５に対して少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、前記核酸が、１つ以上の天然に存在する一塩基多型を含む。
【００６６】
いくつかの実施形態において、本発明のＴＤ２６タンパク質が、ＴＤ２６タンパク質に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本発明のＴＤ２６タンパク質が、ＴＤ２６タンパク質の分泌部分（すなわちシグナル配列以外の部分）に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、前記タンパク質が、配列番号１に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、前記タンパク質が、配列番号２に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、前記タンパク質が、配列番号３に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、前記タンパク質が、配列番号４に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、前記タンパク質配列が、１つ以上の天然に存在するアミノ酸変異を含む。
【００６７】
【表１】
2014523871.tif 000004
核酸またはポリペプチド配列は、典型的に、霊長動物、たとえばヒト；げっ歯動物、たとえばラット、マウス、ハムスタ；ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、または任意の哺乳動物を含むが、これらに限定されない哺乳動物由来のものとする。これらの参照される核酸またはタンパク質の切断型形態は、その定義において含まれる。
【００６８】
用語「ポリペプチド」は、一実施形態において、タンパク質を、他の実施形態において、タンパク質断片（複数可）を、または他の実施形態において、一連のアミノ酸を指す。一実施形態において、「ペプチド」または「ポリペプチド」に対する参照が、天然のペプチド（分解産物、合成的に合成されたペプチド、または組換えペプチドのいずれか）ならびにたとえば、身体中にありながらもペプチドをより安定にするまたは細胞へとより貫通することができるようにする改変を有し得る、ペプチドアナログであるペプトイドおよびセミペプトイド（ｓｅｍｉｐｅｐｔｏｉｄ）などの、ペプチド模倣物（典型的に、合成的に合成されたペプチド）を含むことを意味する。そのような改変は、Ｎ−末端改変、Ｃ−末端改変、またはペプチド結合改変を含むが、これらに限定されず、主鎖改変および残基改変を含むが、これらに限定されない。ペプチド模倣化合物を調製するための方法は、当技術分野において知られており、たとえば、Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ、Ｃ．Ａ．Ｒａｍｓｄｅｎ  Ｇｄ．、１７．２章、Ｆ．Ｃｈｏｐｌｉｎ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ（１９９２）において明示される。
【００６９】
本明細書において記載される他の実施形態において、本発明の方法が、ＴＤ２６タンパク質およびポリペプチドをコードするまたはその機能的断片をコードする１つ以上の核酸分子の投与を含む。ヒトＴＤ２６ポリペプチドをコードする核酸分子は、ＮＣＢＩ参照配列ＮＭ＿０１８６８７．６の下で寄託されており、下記に示される。
【００７０】
【化２】
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マウスＥＧ６２４２１９ポリペプチドをコードする核酸分子は、ＮＣＢＩ参照配列ＮＭ＿００１０８０９４０．１の下で寄託されており、下記に示される。
【００７１】
【化３】
2014523871.tif 000006
遺伝子コードの縮重のために、等価なポリペプチドをコードする他のヌクレオチド配列は、同定するまたは合成することができ、これらのヌクレオチド配列は、本発明の範囲内にあることが理解される。さらに、当業者は、ＴＤ２６ポリペプチドの望ましい部分をコードする、ヌクレオチド配列の部分を容易に決定することができる。たとえば、当業者は、対応するＴＤ２６ポリペプチドのＣＣＤドメインをコードする配列番号１４の部分を同定することができる。
【００７２】
細胞への外因性ＤＮＡの投与および取込み（すなわち、遺伝子形質導入またはトランスフェクション）を含む、本明細書において記載される方法において、共通して使用される遺伝子導入方法は、当業者に知られている。核酸は、裸のＤＮＡの形態とすることができるまたは核酸は、細胞に核酸を送達するために利用されるベクター、たとえばレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レンチウイルスベクター、シュードタイプレトロウイルスベクターにおけるものとすることができる。ベクターは、アデノウイルスのベクター（Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｌａｖａｌ、Ｑｕｅｂｅｃ、Ｃａｎａｄａ）などの、市販の調製物とすることができる。本明細書において記載されるように、本発明はまた、核酸作用物質を含むベクターをも提供し、そのどちらも、薬学的に許容され得るキャリヤにおけるものとすることができる。そのような核酸およびベクターは、本発明の方法に従って被験体を処置するための遺伝子療法プロトコールにおいて使用することができる。
【００７３】
その代わりに、本発明の核酸は、リポソームで、細胞に投与することができる。１つの例として、送達は、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ，Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、Ｍｄ．）、ＳＵＰＥＲＦＥＣＴ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．Ｈｉｌｄｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、およびＴＲＡＮＳＦＥＣＴＡＭ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）などの市販のリポソーム調製物、ならびに当技術分野において標準的な手順に従って開発された他のリポソームを介することができる。さらに、本発明の核酸またはベクターは、これについての技術がＧｅｎｅｔｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）から入手可能であるエレクトロポレーションによって、ならびにＳＯＮＯＰＯＲＡＴＩＯＮ機（ＩｍａＲｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．、Ｔｕｃｓｏｎ、Ａｒｉｚ．）の手段によってインビボにおいて送達することができる。細胞は、外因性核酸を取込み、かつ発現することができる任意の細胞とすることができ、該細胞は、インビボにおいてまたはエクスビボにおいて（たとえば培養媒体に）存在してもよい。
【００７４】
エクスビボの方法が用いられる場合、細胞または組織は、当技術分野においてよく知られている標準的なプロトコールに従って、摘出し、身体の外部で維持することができる。本発明の核酸は、たとえばウイルス媒介性の遺伝子送達、リン酸カルシウム媒介性の遺伝子送達、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、またはプロテオリポソームなどの、任意の遺伝子導入メカニズムを介して細胞へと導入することができる。その後、形質導入された細胞は、注入することができる（たとえば薬学的に許容され得るキャリヤ中で）、または細胞もしくは組織型についての標準的な方法によって被験体に移植し戻すことができる。標準的な方法は、被験体への様々な細胞の移植または注入について公知である。
【００７５】
エクスビボの療法については、ベクターは、患者から採取され、その同じ患者に自家移植して戻すためにクローン増殖させた幹細胞に導入することができる。トランスフェクションによるおよびリポソーム注射による送達は、当技術分野においてよく知られている方法を使用して実現されてもよい。
【００７６】
ある実施形態において、本発明のＴＤ２６ポリペプチドをコードする核酸が、インビトロにおける転写によって生成する合成改変ｍＲＮＡを含む。たとえば、そのようなｍＲＮＡは、たとえば、５’から３’に、５’グアニンキャップ、翻訳開始のための強力なＫｏｚａｋ配列を含有する５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリＡテイルにより終結するアルファ−グロビン３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含むことができる。インビボにおけるｍＲＮＡの続く翻訳のための哺乳動物細胞の中へのそのような合成改変ｍＲＮＡのサイトゾル送達は、エレクトロポレーションによってまたはエンドサイトーシスによる取込みを増強するために、改変ｍＲＮＡと、カチオンビヒクルとで複合体を形成させることによって達成することができる（Ｓｃｈｌａｅｇｅｒら、Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ．７（５）：６１８−６３０（２０１０））。
【００７７】
核酸またはベクターの投与のモードは、処置されている疾患および標的にされている組織に従って、予測可能に変更することができる。核酸またはベクターは、静脈内投与が典型的に好ましいが、経口で、非経口で（たとえば静脈内に）、筋肉内注射によって、腹腔内注射によって、経皮的に、体外で、または局所的に、などによって投与されてもよい。必要とされる核酸またはベクターの厳密な量は、被験体の種、年齢、体重、および全身状態、処置されている障害の重症度、使用される特定の核酸もしくはベクター、または投与のそのモード、などに依存して被験体ごとに変更される。
【００７８】
本発明の核酸またはベクターの非経口投与は、使用される場合、一般に、注射によって特徴付けられる。注射剤は、液体の液剤もしくは懸濁剤のいずれか、注射前に液体状態である液剤もしくは懸濁剤に適している固体形態としてまたはエマルションとして、従来の形態で調製することができる。非経口投与のためのより最近修正されたアプローチは、一定の投薬量が維持されるように、緩慢放出性（ｓｌｏｗ  ｒｅｌｅａｓｅ）または徐放性システムの使用を含む。
【００７９】
他の実施形態において、ベータ細胞複製を増加させる方法が、１つ以上のインスリン受容体アンタゴニストの投与によって達成することができる。本発明は、たとえば、インスリンがインスリン受容体と相互作用する能力に干渉することによっておよびインスリンの生物学的効果を中和することによって、ベータ細胞複製を増加させるインスリン受容体アンタゴニストの使用を企図する。本発明はまた、インスリンがインスリン受容体に結合する能力に干渉することができるインスリン受容体アンタゴニストおよびインスリンの生物学的効果を中和することができる任意の作用物質の使用をも企図する。いくつかの実施形態において、インスリン受容体アンタゴニストが、ＴＤ２６のレベルまたは活性を増加させることができ、好ましくは、血中グルコースレベルを著しく増加させないまたは一過性にのみ増加させる。インスリン受容体アンタゴニストは、Ｓ６６１、Ｓ９６１、またはＲＢ５３７などのペプチドアンタゴニストを含む。Ｓ６６１、Ｓ９６１、およびＲＢ５３７は、インスリン受容体に結合するが、インスリンがもたらすシグナルを伝達しない、インスリンのペプチドミメティック（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｅｔｉｃ）である（たとえば、その全体が参照によって本明細書において組み込まれるＷＯ２００７０３９６０６を参照されたい）。
【００８０】
Ｓ６６１およびＳ９６１は、アミノ酸配列
【００８１】
【化４】
2014523871.tif 000007
を共有する４３アミノ酸ペプチドである。Ｓ６６１のＣ−末端は、アミドであるのに対して、Ｓ９６１のＣ−末端は、酸である。ＲＢ５３７は、アミノ酸配列：
【００８２】
【化５】
2014523871.tif 000008
を有する。ある実施形態において、ＲＢ５３７の機能的な部分が、アミノ酸配列ＷＬＤＱＥＷＡＷＶＱＣＥＶＹＧＲＧＣＰＳ（配列番号２０）を有する、親和性を最適化した第２のペプチドに、６アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１９）を介して連結した、アミノ酸配列ＧＳＬＤＥＳＦＹＤＷＦＥＲＱＬＧ（配列番号１８）を有する少なくとも１つの、親和性を最適化した第１のペプチドを含む。そのような実施形態において、ＲＢ５３７の機能的な部分が、Ｎ−末端の、第１のペプチドが側面に位置する（ｆｌａｎｋｉｎｇ）エピトープタグ（たとえばＦＬＡＧ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）（配列番号２１））、およびＣ−末端の、第２のペプチドが側面に位置するエピトープＥ−Ｔａｇ（ＧＡＰＶＰＹＰＤＰＬＥＰＲ）（配列番号２２）をさらに含むことができる。
【００８３】
以前の報告は、肥満のラットに対するペプチドインスリン受容体アンタゴニストＳ６６１の投与に際して、血中グルコースレベルにおける著しい増加が観察されたことを実証した（Ｓｃｈａｅｆｆｅｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．３７６（２）：３８０−３８３（２００８））。対照的に、本明細書において記載される研究は、低用量で、Ｓ９６１が、哺乳動物において血中グルコースレベルを増加させないことを実証する。しかしながら、Ｓ９６１の用量を増加させると、血中グルコースレベルは、増加し、動物は、高血糖症になる（図１１）。本明細書において記載される研究は、低用量のペプチドＳ９６１で、ＴＤ２６発現が誘導され（図２Ｂを参照されたい）、ベータ細胞複製が増加する（図１Ｃおよび１Ｄを参照されたい）ことを示す。本明細書において使用される場合、低用量のＳ９６１は、典型的に、１μＭｏｌ／Ｋｇ／週未満、好ましくは、０．１２５μＭｏｌ／Ｋｇ／週〜０．５μＭｏｌ／Ｋｇ／週である。しかしながら、用量の増加が、特に抗高血糖症作用物質と共に利用される場合に、同様に有用であり得ることが、理解される。
【００８４】
さらに、本明細書において記載される研究は、ペプチドＳ６６１の投与に際して、ベータ細胞複製が、正常な個体（図１２および１３を参照されたい）においてならびにヒト２型糖尿病のモデル（図１４Ａを参照されたい）において増加することを示す。本明細書において記載される研究はまた、ペプチドＳ６６１の投与に際して、島面積が、総膵臓面積に関して増加することをも示す（図１４Ｃ）。
【００８５】
インスリン受容体アンタゴニストは、単独療法または他の薬学的作用物質（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｇｅｎｔ）との併用療法として投与されてもよい。たとえば、それらは、糖尿病および／または肥満および／またはメタボリックシンドロームの処置または予防に適した他の薬学的作用物質と一緒に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、併用療法は、インスリン受容体アンタゴニストおよびさらなる作用物質の共投与を含む。本明細書において使用される場合、用語「共投与」は、被験体への２つ以上の生物活性物質の投与を指す。共投与は、同時または逐次とすることができる。２つ以上の生物活性物質は、単一の組成物または個別の組成物の一部とすることができる。いくつかの実施形態において、本発明の併用療法が、１つ以上の血中グルコース降下剤またはベータ細胞に対して有益な作用物質との、インスリン受容体アンタゴニストの共投与を含む。これらの作用物質は、メトホルミンもしくは他のビグアナイド、ＤＰＰ４阻害剤、スルホニル尿素もしくはメグリチニド（Ｍｅｔｉｇｌｉｔｉｎｉｄｅｓ）、ＳＧＬＴ２阻害剤、グルコキナーゼ活性化因子、チアゾリジンジオン、ＰＰＡＲデルタアゴニスト、非活性化ＰＰＡＲガンマモデュレータ、Ｇｌｐ−１アナログ、ＧＩＰアナログ、Ｇｌｐ−１受容体アゴニスト、混合Ｇｌｐ−１／ＧＩＰ受容体アゴニスト、ＦＧＦ２１、アゴニストＦＧＦＲモノクローナル抗体、オキシントモジュリンアナログ、ＩＡＰＰアナログ、レプチンもしくはレプチンアナログ、アディポネクチンもしくはアディポネクチンアナログ、インスリンもしくはインスリンアナログ、プロトンポンプ阻害剤もしくはガストリン受容体アゴニスト、Ｒｅｇファミリータンパク質／Ｒｅｇファミリータンパク質由来ペプチド、またはアルファ−グルコシダーゼ阻害剤を含むが、これらに限定されない。さらに、それらは、免疫抑制性のまたは免疫調節性の活性を有する薬学的作用物質、たとえば抗体、ポリペプチド、および／またはペプチド性もしくは非ペプチド性低分子量物質と一緒に投与されてもよい。
【００８６】
ＴＤ２６レベルまたは活性を減少させる化合物は、たとえば、ＴＤ２６抗体もしくはその断片またはＴＤ２６ポリペプチドをコードする核酸に対して相補的な核酸（たとえばアンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、またはｓｉＲＮＡ）を含む。適した抗体の生成は、当技術分野においてよく知られており、たとえば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８８において記載されるような方法を含んでいてもよい。
【００８７】
「ｓｉＲＮＡ」は、標的ｍＲＮＡの翻訳を妨げる二本鎖ＲＮＡ分子である。ＤＮＡが鋳型であり、それからｓｉＲＮＡが転写される技術を含む、細胞にｓｉＲＮＡを導入する標準的な技術が、使用される。ｓｉＲＮＡは、センスＴＤ２６核酸配列、アンチセンスＴＤ２６核酸配列、またはその両方を含む。必要に応じて、ｓｉＲＮＡは、単一の転写物が、標的遺伝子、たとえばヘアピン由来のセンス配列および相補的なアンチセンス配列の両方を有するように構築される。
【００８８】
標的細胞におけるＴＤ２６転写物に対するｓｉＲＮＡの結合は、細胞によるＴＤ２６産生の低下をもたらす。オリゴヌクレオチドの長さは、典型的に、少なくとも約１０ヌクレオチドであり、天然に存在するＴＤ２６転写物と同じくらいの長さであってもよい。好ましくは、オリゴヌクレオチドは、長さが１９〜２５ヌクレオチドである。最も好ましくは、オリゴヌクレオチドは、長さが７５、５０、および２５ヌクレオチド未満である。
【００８９】
記載される方法における使用のための、本明細書において記載される作用物質（本明細書において「活性化合物」とも呼ばれる）は、投与に適した薬学的組成物に組み込むことができる。そのような組成物は、典型的に、作用物質および薬学的に許容され得るキャリヤを含む。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容され得るキャリヤ」は、医薬投与と適合性の任意のおよびすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、ならびに等張剤および吸収遅延剤などを含むように意図される。適したキャリヤは、参照によって本明細書において組み込まれる、当分野における標準的な参考書であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版において記載される。そのようなキャリヤまたは希釈剤の好ましい例は、水、食塩水、フィンガー溶液、デキストロース溶液、および５％ヒト血清アルブミンを含むが、これらに限定されない。リポソームおよび不揮発性油などの非水性ビヒクルもまた、使用することができる。薬学的に活性な物質のためのそのような媒体および作用物質の使用は、当技術分野においてよく知られている。任意の従来の媒体または作用物質が活性化合物と不適合性である場合を除いて、組成物におけるその使用が、企図される。補足の活性化合物もまた、組成物に組み込むことができる。
【００９０】
ＴＤ２６核酸およびポリペプチドならびにそのエフェクタ／モデュレータは、単独療法としてまたは他の薬学的作用物質との併用療法として投与されてもよい。たとえば、それらは、糖尿病および／または肥満および／またはメタボリックシンドロームの処置または予防に適した他の薬学的作用物質と一緒に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、併用療法が、ＴＤ２６およびさらなる作用物質の共投与を含む。本明細書において使用される場合、用語「共投与」は、被験体への２つ以上の生物活性物質の投与を指す。共投与は、同時または逐次とすることができる。２つ以上の生物活性物質は、単一の組成物または個別の組成物の一部とすることができる。いくつかの実施形態において、本発明の併用療法が、１つ以上の血中グルコース降下剤またはベータ細胞に対して有益な作用物質との、ＴＤ２６ポリペプチドの共投与を含む。これらの作用物質は、メトホルミンもしくは他のビグアナイド、ＤＰＰ４阻害剤、スルホニル尿素もしくはメグリチニド、ＳＧＬＴ２阻害剤、グルコキナーゼ活性化因子、チアゾリジンジオン、ＰＰＡＲデルタアゴニスト、非活性化ＰＰＡＲガンマモデュレータ、Ｇｌｐ−１アナログ、ＧＩＰアナログ、Ｇｌｐ−１受容体アゴニスト、混合Ｇｌｐ−１／ＧＩＰ受容体アゴニスト、ＦＧＦ２１、アゴニストＦＧＦＲモノクローナル抗体、オキシントモジュリンアナログ、ＩＡＰＰアナログ、レプチンもしくはレプチンアナログ、アディポネクチンもしくはアディポネクチンアナログ、インスリンもしくはインスリンアナログ、プロトンポンプ阻害剤もしくはガストリン受容体アゴニスト、Ｒｅｇファミリータンパク質／Ｒｅｇファミリータンパク質由来ペプチド、またはアルファ−グルコシダーゼ阻害剤を含むが、これらに限定されない。さらに、それらは、免疫抑制性の活性を有する薬学的作用物質、たとえば抗体、ポリペプチド、および／またはペプチド性もしくは非ペプチド性低分子量物質と一緒に投与されてもよい。
【００９１】
本発明の薬学的組成物は、投与のその意図される経路と適合性となるように製剤化される。投与の経路の例は、非経口、たとえば静脈内、皮内、皮下、経口（たとえば吸入）、経皮（局所）、経粘膜、および直腸投与を含む。非経口、皮内、または皮下適用のために使用される液剤または懸濁剤は、以下の構成成分を含むことができる：注射用水、食塩溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒などの滅菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；アセテート、シトレート、またはホスフェートなどのバッファー、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張性の調節のための作用物質。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの、酸または塩基により調節することができる。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチックから作製されるアンプル、使い捨ての注射器、または複数用量のバイアルに封入することができる。
【００９２】
注射用の使用に適した薬学的組成物は、滅菌注射用溶液または分散液の即時調製のための滅菌水溶液（水溶性である場合）または分散液および滅菌粉末を含む。静脈内投与については、適したキャリヤは、生理的食塩水、静菌性の水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ）、またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含む。すべての場合において、組成物は、滅菌であるべきであり、容易な注射性（ｓｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度まで液体であるべきである。それは、製造および保存の条件下で安定であるべきであり、細菌および真菌などの微生物の混入作用に対して保護されるべきである。キャリヤは、たとえば水、エタノール、ポリオール（たとえばグリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、ならびにその適した混合物を含有する溶媒または分散媒とすることができる。適切な流動性は、たとえば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合には、必要とされる粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、たとえばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、およびチメロサールなどによって実現することができる。多くの場合において、組成物において、等張剤、たとえば糖またはマンニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、ソルビトールなどの多価アルコール、および塩化ナトリウムを含むことは好ましい。注射用の組成物の長期間の吸収は、吸収を遅延させる作用物質、たとえばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物に含むことによって、もたらすことができる。
【００９３】
滅菌注射用溶液は、必要に応じて、上記に列挙される成分のうちの１つまたはその組み合わせと共に、適切な溶媒に、必要とされる量で、活性化合物を組み込み、その後、ろ過滅菌（ｆｉｌｔｅｒｅｄ  ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ）することによって、調製することができる。一般に、分散液は、塩基性分散媒および上記に列挙されるものからの必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクルに、活性化合物を組み込むことによって調製する。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合には、調製の方法は、活性成分および任意のさらなる所望の成分の、あらかじめ滅菌ろ過したその溶液からの粉末を生成する真空乾燥および凍結乾燥である。
【００９４】
経口組成物は、一般に、不活性希釈剤または食用のキャリヤを含む。それらは、ゼラチンカプセルに封入することができるまたは錠剤へと圧縮することができる。経口治療投与の目的のために、活性化合物は、賦形剤と共に組み込み、錠剤、トローチ、またはカプセルの形態で使用することができる。経口組成物はまた、口腔洗浄薬としての使用のために、流体キャリヤを使用して調製することができ、液体キャリヤ中の化合物は、経口的に適用し、シューという音をたて（ｓｗｉｓｈ）、吐き出すまたはえん下する。薬学的に適合性の結合剤および／または補助材料は、組成物の一部として含むことができる。錠剤、丸剤、カプセル、およびトローチなどは、類似する性質の以下の成分または化合物のいずれかを含有することができる：微晶質セルロース、トラガカントゴム、もしくはゼラチンなどのバインダー；デンプンもしくはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、もしくはコーンスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムもしくはＳｔｅｒｏｔｅｓなどの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの滑剤；スクロースもしくはサッカリンなどの甘味剤；またはペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジ香味などの香味料。
【００９５】
吸入による投与については、化合物は、適した噴射剤、たとえば二酸化炭素などのガスを含有する加圧容器もしくはディスペンサまたはネブライザからのエアロゾル噴霧剤の形態で送達される。
【００９６】
全身投与はまた、経粘膜または経皮手段によるものとすることができる。経粘膜または経皮投与については、透過する障壁に適切な浸透剤は、製剤に使用される。そのような浸透剤は、当技術分野において一般に知られており、たとえば、経粘膜投与のために、洗浄剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、鼻噴霧剤または坐剤の使用を通して達成することができる。経皮投与については、活性化合物は、当技術分野において一般に知られている軟膏剤（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、塗布剤（ｓａｌｖｅ）、ゲル剤、またはクリーム剤へと製剤化される。
【００９７】
化合物はまた、坐剤（たとえば、カカオ脂および他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤と共に）または直腸送達のための保持浣腸剤の形態で調製することができる。
【００９８】
一実施形態において、活性化合物が、移植片およびマイクロカプセル化した送達系を含む制御放出製剤などの、身体からの急速な排除から化合物を防御するキャリヤと共に調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの、生分解性で生体適合性のポリマーを、使用することができる。そのような製剤の調製のための方法は、当業者に明らかである。材料はまた、Ａｌｚａ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から商業的に得ることができる。リポソーム懸濁液はまた、薬学的に許容され得るキャリヤとしても使用することができる。これらは、たとえば、参照によって本明細書に完全に組み込まれる米国特許第４，５２２，８１１号明細書において記載されるように、当業者に知られている方法に従って調製することができる。
【００９９】
投与の容易さおよび投薬量の均一性のために投薬単位形態で経口または非経口組成物を製剤化することはとりわけ有利である。本明細書において使用される投薬単位形態は、処置されるべき被験体への単一の投薬に適した物理的に個別の単位を指し、それぞれの単位は、必要とされる薬学的キャリヤと関連して、所望の治療効果をもたらすように計算された所定の量の活性化合物を含有する。本発明の投薬単位形態についての規格は、活性化合物の特有の形質および実現されるべき特定の治療効果によって決定され、それらに直接、依存する。本明細書において記載される薬学的組成物および作用物質は、投与のための指示と一緒に、容器、パック、またはディスペンサに含むことができる。
【０１００】
本発明は、膵臓ベータ細胞変性、異常なインスリン産生および／または血中グルコースレベルと関連する障害の（もしくはそれに感受性の）危険性があるまたはその障害を有する被験体を処置する予防および治療方法の両方を提供する。本明細書において使用される場合、用語「膵臓ベータ細胞変性」は、ベータ細胞機能（特にインスリン産生および／または分泌）の損失、ベータ細胞機能不全、ならびにベータ細胞の壊死またはアポトーシスなどのベータ細胞の死を意味するように意図される。
【０１０１】
本明細書において使用される場合、用語「処置」は、疾患、疾患の症状、もしくは疾患に対する素因を治癒する、直す、軽減する、緩和する、変化させる、治す、回復させる、改善する、もしくは影響を与える目的での、該疾患、疾患の症状、もしくは疾患に対する素因を有する患者への治療剤の適用もしくは投与、または該患者由来の単離組織もしくは細胞系への治療剤の適用もしくは投与として定義される。したがって、処置することは、抑制すること、阻害すること、予防すること、処置すること、またはその組み合わせを含んでいてもよい。処置することは、とりわけ、進行が持続するまでの時間を延長させること、寛解を促進すること、寛解を誘導すること、寛解を増大させること、回復を速めること、代替の治療薬の効力を増大することもしくは代替の治療薬に対する抵抗性を減少させること、またはその組み合わせを指す。「抑制すること」または「阻害すること」は、とりわけ、症状の発症を遅延させること、疾患への再発を予防すること、再発エピソードの数もしくは頻度を減少させること、症状のエピソードの間の潜伏時間を増加させること、症状の重症度を低下させること、急性エピソードの重症度を低下させること、症状の数を低下させること、疾患関連の症状の発生を低下させること、症状の潜伏時間を低下させること、症状を回復させること、二次的な症状を低下させること、二次感染を低下させること、患者の生存を延ばすこと、またはその組み合わせを指す。一実施形態において、症状が、原発性であるが、他の実施形態において、症状が、二次的である。「原発性」は、障害、たとえば糖尿病の直接的な結果である症状を指すが、二次的は、原発性の原因から誘導されるまたはその結果として生ずる症状を指す。症状は、疾患または病的な状態のあらゆる出現であってもよい。
【０１０２】
本明細書において記載されるように、膵臓ベータ細胞量は、組織または細胞におけるＴＤ２６レベルまたは活性を増加させる化合物（たとえばＴＤ２６タンパク質）を、動物（たとえばヒト）に投与することによって増加させることができる。本明細書において使用される場合、「ベータ細胞増殖」および「ベータ細胞複製」という用語は、区別なく使用される。ベータ細胞量の増加は、ベータ細胞の増殖もしくは複製の増加、ベータ細胞系列への前駆細胞の分化の増強、および／またはベータ細胞代謝回転もしくは死の減少を介して生じる。β−細胞量における増加は、処置の開始前のβ−細胞量と比較して、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５０％、７０％、８０％、９０％、１倍、２倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、またはそれより多い。
【０１０３】
本明細書において使用される場合、「β−細胞複製の増加」は、β−細胞が、より速い速度でおよび／またはより頻繁に複製することを意味する。本発明のこのおよび他の態様のいくつかの実施形態において、β−細胞複製が、未処置対照に比べて、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５０％、７０％、８０％、９０％、１倍、１．１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、またはそれより多く増加する。β−細胞複製の％または増加倍数は、対照に比べて、本明細書において記載される化合物による処置の間にまたは処置の後に、複製β−細胞の数を測定することによって、決定することができる。複製の増加はまた、それぞれの処置および未処置対照における細胞の総数に対する複製細胞の比に基づくものとすることができる。いくつかの実施形態において、処置および未処置対照における細胞の総数が、複製頻度を決定するために使用される。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、「β−細胞複製の増加」がまた、β−細胞へのβ−細胞前駆体の分化による、β−細胞数の増加をも含む。代替の実施形態において、「β−細胞複製の増加」が、β−細胞へのβ−細胞前駆体の分化による、β−細胞数の増加を含まない。
【０１０５】
本発明のエクスビボにおける方法については、β−細胞複製の増加は、細胞複製を測定するための、当技術分野において知られている任意の方法によってモニターすることができる。たとえば、β−細胞複製は、少なくとも１つの細胞複製マーカー、たとえばＫｉ−６７またはＰＨ３の発現を測定することによって決定することができる。非限定的な例は、有糸分裂に特異的なイベントである、ヒストンＨ３のセリン１０におけるリン酸化（Ｈ３−Ｐ）をモニターすることによって、有糸分裂指数を測定する定量的免疫蛍光アッセイである（Ａｊｉｒｏら、Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：１３１９７−２０１．１９９６；Ｇｏｔｏら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７４：２５５４３−９、１９９９）。β−細胞複製の増加はまた、処置対未処置対照におけるβ−細胞の総数の増加に基づくものとすることができる。いくつかの実例において、β−細胞複製の増加は、処置および未処置対照についての全細胞に対するβ−細胞の比に基づくものとすることができる。β−細胞複製は、Ｋｉ−６７および／またはＰＨ３ならびにＰＤＸ−１を共発現する細胞の数をモニターすることによって測定することができる。
【０１０６】
本発明のインビボにおける方法については、β−細胞複製の増加は、血中インスリンレベルを測定することによって間接的に評価することができる。理論によって束縛されることを望むものではないが、血中インスリンレベルは、被験体におけるβ−細胞の数、たとえばβ−細胞量の間接的な尺度である。そのため、処置の開始前および後の血中インスリンレベルは、処置の開始前および後の被験体におけるβ−細胞の数についての相対的な尺度を間接的に提供することができる。被験体におけるβ−細胞量はまた、被験体における空腹時血中グルコース濃度を測定することによって決定することができる。ヒトにおけるβ−細胞量および空腹時血中グルコース濃度の間の曲線関係は、Ｒｉｔｚｅｌら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ（２００６），２９：７１７−７１８において開示され、この内容は、それらの全体が参照によって本明細書において組み込まれる。その代わりに、β−細胞による、ＶＭＡＴ２に特異的に結合する放射リガンド［１１Ｃ］ＤＴＢＺ（ジヒドロテトラベナジン）のインビボにおける取込みは、ポジトロン断層撮影（Ｐ．Ｅ．Ｔ．）スキャニングによって測定することができる。この放射リガンドは、健康な対照被験体と比較して、双極性の病気および統合失調症を有する患者における脳のＰ．Ｅ．Ｔスキャニングを評価する臨床試験においてヒト被験体において以前に使用された。米国特許出願公開第２００９／０２０２４２８号明細書は、１型糖尿病における膵内分泌部β−細胞量を画像化するためのＤＴＢＺの使用を記載し、この内容は、理論全体が参照によって本明細書において組み込まれる。
【０１０７】
インビボにおけるβ−細胞量を評価するための方法はまた、たとえば
【０１０８】
【化６】
2014523871.tif 000009
においても記載され、これらの内容は、それらの全体が参照によって本明細書において組み込まれる。
【０１０９】
インビボにおける方法については、治療有効量の本明細書において記載される化合物は、被験体に投与することができる。被験体に化合物を投与する方法は、当技術分野において知られており、当業者に容易に入手可能である。そのような経路の例は、非経口、経腸、および局所投与を含む。非経口投与は、通常、注射によるものであり、限定を伴うことなく、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、脳室内、包内（ｉｎｔｒａｃａｐｓｕｌａｒ）、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下（ｓｕｂ  ｃａｐｓｕｌａｒ）、クモ膜下、脊髄内、脳脊髄内（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏ  ｓｐｉｎａｌ）、および胸骨内（ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａｌ）注射および注入を含む。投与は、当業者によって必要であると決定されるように、全身投与または局部的なものとすることができる。
【０１１０】
細胞増殖（たとえばベータ細胞増殖）は、当技術分野においてよく知られており、本明細書において例証される任意の数の方法を介して、たとえば、トリチウムチミジンなどの標識された基質の取込みの測定を介して、決定されてもよい。組織および細胞は、本発明の作用物質および組成物と直接、接触させてもよい、または当技術分野において十分に記載される方法を通して、間接的に曝露させてもよい。たとえば、細胞は、インビトロにおいて培養培地で成長させることができ、培地は、本明細書において記載されるポリペプチド、核酸、ベクター、または他の作用物質が補充される。一実施形態において、接触させている細胞が、初代培養物である。一実施形態において、「初代培養物」が、組織から分離離される多くの異なる細胞型の相互作用を可能にする混合細胞集団を示す。他の実施形態において、初代培養物が、組織から単離される精製細胞集団であってもよい。一実施形態において、初代培養物が、特定の集団について富化されてもよい。一実施形態において、富化が、たとえば、特定の細胞表面マーカーを発現するまたは他の実施形態において、特定のマーカーの細胞表面発現を欠く細胞集団についての、たとえば蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）などの、当技術分野においてよく知られている手段を介しての細胞選別を含んでいてもよい。
【０１１１】
その代わりに、細胞を接触させることは、被験体への投与の任意の経路、たとえば、被験体への、本発明のポリペプチド、ペプチド、核酸、ベクター、または組成物の経口または非経口投与を含んでいてもよく、投与が、身体内の特定の部位内で、これらの材料に対するインビボにおける細胞の曝露をもたらす。いくつかの実施形態において、方法は、たとえばエクスビボの細胞療法などの、被験体に接触細胞を投与するステップを含む。いくつかの実施形態において、被験体に投与する細胞が、被験体に関して自己由来のものであるまたは他の実施形態において同種異系である。
【０１１２】
本明細書においてさらに記載されるように、血中インスリン濃度は、ＴＤ２６レベルまたは活性を増加させる作用物質を被験体に投与することによって増加する。さらに、血中グルコースレベルは、ＴＤ２６レベルまたは活性を増加させる化合物を被験体に投与することによって減少させることができる。好ましくは、血中グルコースレベルは、正常なレベルまで、すなわち、疾患を有していない健康な個体の血中グルコースレベルまで減少する。
【０１１３】
ある実施形態において、被験体が、ヒト被験体または患者である。特定の実施形態において、被験体が、異常なインスリン産生もしくは応答性または異常な血中グルコースレベルと関連する障害に罹患しているまたはその発症に感受性である。障害は、糖尿病（たとえばＩ型もしくはＩＩ型）、妊娠糖尿病、糖尿病前症、肥満、高血糖症、グルコース不耐性、インスリン抵抗性、高インスリン血症、メタボリックシンドローム、または症候群Ｘを含むが、これらに限定されない。用語「糖尿病」は、哺乳動物被験体の疾患を指し、一過性の１型ＮＩＤＤＭ、１型ＩＤＤＭ、一過性の２型ＩＤＤＭ、２型ＮＩＤＤＭ、または他の実施形態においてＭＯＤＹを含む。
【０１１４】
そのような障害に罹患しているまたはその危険性がある被験体は、当技術分野において知られている方法によって同定される。たとえば、糖尿病は、当技術分野により認識される診断およびたとえばＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎからの処置勧告によって診断することができる。肥満は、たとえば、ボディマス指数によって診断する。ボディマス指数（ＢＭＩ）を測定する（ｋｇ／ｍ２（またはｌｂ／ｉｎ２×７０４．５））。その代わりに、ウエスト周囲（脂肪分布を見積もる）、ウエスト対ヒップ比（脂肪分布を見積もる）、皮下脂肪の厚さ（いくつかの部位で測定した場合、脂肪分布を見積もる）、または生体インピーダンス（ｂｉｏｉｍｐｅｄａｎｃｅ）（脂肪がない塊（ｌｅａｎ  ｍａｓｓ）が、脂肪の塊よりもよく電流を伝える（すなわち、脂肪の塊は電流を妨害する）という原理に基づく、脂肪％を見積もる）が、測定される。正常、過体重、または肥満の個体についてのパラメータは、以下のとおりである：低体重：ＢＭＩ＜１８．５；正常：ＢＭＩ  １８．５〜２４．９；過体重：ＢＭＩ＝２５〜２９．９。過体重の個体は、男性については＞９４ｃｍまたは女性については＞８０ｃｍのウエスト周囲ならびに男性において＞０．９５および女性において＞０．８０のウエスト対ヒップ比を有するとして特徴付けられる。肥満の個体は、身長に対する「正常」体重よりも２０％超である３０〜３４．９のＢＭＩを有し、女性については＞３０％および男性については２５％の体脂肪率を有し、かつ男性については＞１０２ｃｍ（４０インチ）または女性については８８ｃｍ（３５インチ）のウエスト周囲を有するとして特徴付けられる。重度または病的肥満を有する個体は、＞３５のＢＭＩを有するとして特徴付けられる。
【０１１５】
処置の効力は、障害を診断するための任意の知られている方法と関連して決定される。障害の１つ以上の症状の軽減は、化合物が臨床上の利点を付与することを示す。上記に記載される治療方法のいずれも、たとえば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ウサギ、サル、および最も好ましくはヒトなどの哺乳動物を含む、任意の適した被験体に適用されてもよい。
【０１１６】
疾患または障害の「処置」、「予防」、または「回復」によって、そのような疾患または障害の発症を遅延させるまたは予防すること、そのような疾患または障害と関連する状態の進行、悪化、または進行もしくは重症度の増悪を逆転させる、軽減する、回復させる、阻害する、遅らせる、または止めることを意味する。一実施形態において、疾患または障害の症状が、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％、軽減される。他の実施形態において、患者の状態が、その状態に罹患していない正常なヒトに近くなるまたはそれと等しくなるように、症状が、軽減される。
【０１１７】
糖尿病の処置は、標準的な医学的方法によって決定される。糖尿病処置の目標は、糖レベルを、できる限り安全に、正常近くまで下げることである。共通して、所定の目標は、食事前に１デシリットル当たり８０〜１２０ミリグラム（ｍｇ／ｄｌ）および就寝のときに１００〜１４０ｍｇ／ｄｌである。処置目標はまた、ＨｂＡｌｃレベルによって定義されてもよい。特定の医師は、患者が低血糖反応をどれくらい頻繁に有するかなどの、他の要因に依存して、患者について異なる目標を設定し得る。有用な医学的試験は、血糖レベルを決定するための患者の血液および尿に対する試験、グリコシル化ヘモグロビンレベルについての試験（ＨｂＡｌｃ；過去２〜３か月にわたる平均血中グルコースレベルの尺度、正常範囲は４〜６％である）、コレステロールおよび脂肪レベルについての試験、ならびに尿蛋白レベルについての試験を含む。そのような試験は、当業者に知られている標準的な試験である（たとえばＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，２０１１を参照されたい）。処置プログラムの成功はまた、目の疾患、腎疾患、または神経疾患などの、糖尿病に関する合併症を有する患者が、該プログラムにおいてより少ないということによって決定することができる。
【０１１８】
本明細書において記載される方法は、障害の重症度における低下または障害の１つ以上の症状の軽減をもたらし得る。糖尿病の症状は、たとえば、空腹時血中グルコースレベルの上昇、１４０／９０ｍｍ／Ｈｇ以上の血圧；３５ｍｇ／ｄＬ以下の高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）または２５０ｍｇ／ｄＬ（ｍｇ／ｄＬ＝１デシリットルの血液当たりのミリグラム）以上のトリグリセリドなどの異常な血中脂質レベルを含む。糖尿病の他の症状は、たとえば、頻繁な排尿、過度の口渇、極度の空腹、普通でない体重減少、疲労の増加、過敏性、またはかすみ目（ｂｌｕｒｒｙ  ｖｉｓｉｏｎ）を含む。
【０１１９】
被験体における糖尿病の発症を遅延させることは、糖尿病の少なくとも１つの症状、たとえば高血糖症、低インスリン血症、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、失明、記憶喪失、腎不全、心臓血管系疾患（冠動脈疾患、末梢動脈疾患、脳血管疾患、アテローム性動脈硬化症、および高血圧を含む）、ニューロパチー、自律神経機能不全、高血糖高浸透圧性昏睡、またはその組み合わせの発症を、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも１か月間、少なくとも２か月間、少なくとも６か月間、少なくとも１年間、少なくとも２年間、少なくとも５年間、少なくとも１０年間、少なくとも２０年間、少なくとも３０年間、少なくとも４０年間、またはそれより長く遅延させることを指し、被験体の全生涯を含むことができる。
【０１２０】
本発明はまた、内因性インスリンのレベルの低下と、またはインスリン抵抗性と関連する障害の処置のための候補治療剤を同定する方法であって、適した細胞を試験作用物質と接触させるステップおよびＴＤ２６のレベルまたは活性に対する、該試験作用物質の効果を決定するステップを含み、ＴＤ２６レベルまたは活性を増加させる試験作用物質が、内因性インスリンのレベルの低下と関連する障害の処置のための候補治療剤である、方法をも提供する。ある実施態様において、本発明は、内因性インスリンのレベルの低下と関連する障害の処置のための候補治療剤を同定する方法であって、適した細胞を試験作用物質と接触させるステップおよびＴＤ２６のレベルまたは活性に対する、該試験作用物質の効果を決定するステップを含み、ＴＤ２６レベルまたは活性を増加させる試験作用物質が、内因性インスリンのレベルの低下と関連する障害の処置のための候補治療剤である、方法を提供する。ある実施形態において、本発明は、内因性インスリンに対する抵抗性と関連する障害を処置するまたは予防するための候補治療剤を同定する方法であって、適した細胞を試験作用物質と接触させるステップおよび
ＴＤ２６のレベルまたは活性に対する、該試験作用物質の効果を決定するステップを含み、ＴＤ２６レベルまたは活性を増加させる試験作用物質が、内因性インスリンに対する抵抗性と関連する障害を処置するまたは予防するための候補治療剤である、方法を提供する。いくつかの態様において、ＴＤ２６のレベルまたは活性に対する前記試験作用物質の効果が、ＴＤ２６の遺伝子発現レベルに対する、該試験作用物質の効果を決定することによって評価される。たとえば、遺伝子発現は、ＰＣＲおよびマイクロアレイ分析を含む、当技術分野において知られている様々な方法を使用して評価することができる。候補治療剤は、所望される場合に、特定の機能的効果に対して適合させたさらなる方法を使用してさらに評価することができる。
【０１２１】
本発明はまた、個体におけるＴＤ２６関連障害を診断する方法であって、ＴＤ２６関連障害に罹患している疑いのある個体から得られるサンプルにおけるＴＤ２６レベルを決定するステップを含む方法をも企図する。
【０１２２】
個体から得られるサンプルにおけるＴＤ２６レベルの決定は、個体におけるＴＤ２６関連障害を管理する方法を決定するために使用することができる。たとえば、ＴＤ２６レベルの低下または減少が、ベータ細胞増殖の減少、内因性インスリン産生の低下、および／または内因性インスリンに対する抵抗性、たとえば糖尿病と関連するので、医療従事者は、個体の処置に関する決定を支援するための、ＴＤ２６レベルに関する情報を使用することができる。
【０１２３】
ＴＤ２６関連の状態を示すＴＤ２６のレベルは、ＴＤ２６関連障害がないことが知られている個体からのサンプルにおけるＴＤ２６レベルよりも、ＴＤ２６関連障害を有することが知られている個体からのサンプルに存在するレベルが低いと定義することができる。ＴＤ２６のレベルは、ＴＤ２６関連障害を有する個体からのサンプルにおいて、たとえば、少なくとも１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２．０倍、２．１倍、２．２倍、２．３倍、２．４倍、２．５倍、２．６倍、２．７倍、２．８倍、２．９倍、３．０倍、３．１倍、３．２倍、３．３倍、３．４倍、３．５倍、３．６倍、３．７倍、３．８倍、３．９倍、４．０倍、４．１倍、４．２倍、４．３倍、４．４倍、４．５倍、４．６倍、４．７倍、４．８倍、４．９倍、５．０倍、５．１倍、５．２倍、５．３倍、５．４倍、５．５倍、５．６倍、５．７倍、５．８倍、５．９倍、６．０倍、１０倍、１５倍、２０倍、５０倍、または１００倍低くてもよい。
【０１２４】
ＴＤ２６タンパク質は、多くの十分に認識される免疫学的結合アッセイのいずれかを使用して、サンプルにおいて検出されるおよび／または定量化される（たとえば米国特許第４，３６６，２４１号明細書；同第４，３７６，１１０号明細書；同第４，５１７，２８８号明細書；および同第４，８３７，１６８号明細書を参照されたい）。一般的なイムノアッセイの概説については、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３７巻：Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ａｓａｉ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９３）；Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  第７版、Ｓｔｉｔｅｓ  ＆  Ｔｅｒｒ編（１９９１）もまた、参照されたい。
【０１２５】
いくつかの実施形態において、サンプル中のＴＤ２６タンパク質はまた、免疫ブロット（ウェスタンブロット）分析を使用して、検出し、定量化することができる。イムノブロッティングは、一般に、分子量に基づいてゲル電気泳動によってサンプルタンパク質を分離すること、分離されたタンパク質を、適した固体支持体（ニトロセルロースフィルタ、ナイロンフィルタ、または誘導体化ナイロンフィルタなど）に移動させること、およびＴＤ２６タンパク質に特異的に結合する抗体と共にサンプルをインキュベートすることを含む。抗ＴＤ２６抗体は、固体支持体においてＴＤ２６に特異的に結合する。これらの抗体は、直接標識されてもよい、またはその代わりに、抗ＴＤ２６抗体に特異的に結合する標識抗体（たとえば標識ヒツジ抗マウス抗体）を使用して、続いて検出されてもよい。
【０１２６】
いくつかの実施形態において、測定したＴＤ２６タンパク質レベルが、対照サンプルについて測定されたまたは知られているレベル（たとえば、正常で健康な個体について知られているもしくは測定されたレベルまたは同じ個体について異なる時間で決定される「ベースライン／参照」レベルのいずれか）よりも高いまたはより少ない場合、ＴＤ２６の定量的アッセイが、ポジティブな結果、たとえば、ＴＤ２６レベルの上昇または減少を示すと見なされる。特に好ましい実施形態において、サンプルおよび「対照」の間の差異が、統計的に有意である場合（たとえば、８５％またはそれよりも高い、好ましくは９０％またはそれよりも高い、より好ましくは９５％またはそれよりも高い、最も好ましくは９８％またはそれよりも高い信頼水準で）、アッセイが、ポジティブな結果を示すと見なされる。
【０１２７】
ある実施形態において、試験個体におけるＴＤ２６関連障害を診断する方法が、
該試験個体から得られるサンプルにおけるＴＤ２６レベルを決定するステップを含み、ここで、正常個体におけるＴＤ２６レベルと比較して、該試験個体において減少しているＴＤ２６レベルが、ＴＤ２６関連障害を示す。
【０１２８】
ある実施形態において、個体におけるＴＤ２６関連障害を診断する方法が、該個体からのサンプルにおけるＴＤ２６レベルを検出するステップを含み、ここで、該個体における以前のＴＤ２６レベルと比較して減少しているＴＤ２６レベルが、ＴＤ２６関連障害を示す。
【０１２９】
いくつかの態様において、前記ＴＤ−２６関連障害が、ベータ細胞増殖の減少、内因性インスリンのレベルの低下、および内因性インスリンに対する感受性の低下のうちの１つ以上によって特徴付けられる。いくつかの態様において、該ＴＤ−２６関連障害が、１型または２型糖尿病である。
【０１３０】
単数の用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明確に別のことを示さない限り、複数の参照を含む。同様に、語「または」は、文脈が明確に別のことを示さない限り、「および」を含むことが意図される。核酸またはポリペプチドについて示される、すべての塩基サイズまたはアミノ酸サイズおよびすべての分子量または分子質量の値は、近似であり、説明のために提供されることがさらに理解されたい。本明細書において記載されるものに類似するまたはそれと等価である方法および材料は、本開示の実施において使用することができるが、適した方法および材料は、下記に記載する。
【実施例】
【０１３１】
実施例１：ベータ細胞複製に関与する遺伝子の同定
本明細書において記載されるように、哺乳動物へのインスリン受容体アンタゴニストＳ９６１の低用量の投与は、ベータ細胞複製の増加をもたらす（図１）。Ｓ９６１の注射の後に、肝臓、筋肉、および脂肪が炭水化物の保存および代謝に関与するので、これらの組織における遺伝子発現を分析した。この分析の結果として特に興味深かったのは、マウス遺伝子ＥＧ６２４２１９であった。
【０１３２】
実施例２：ＴＤ２６の配列決定および特徴付け
タンパク質配列データベースの検索から、マウスＥＧ６２４２１９に対するヒトオルソログの名称が、肝細胞癌関連タンパク質ＴＤ２６であることを明らかにした。図２は、マウス遺伝子ＥＧ６２４２１９およびヒトＴＤ２６についての配列情報を示す。配列が、シグナルペプチドを予測し、ＴＤ２６が分泌タンパク質であることを示すことに留意されたい。転写アレイを使用してｍＲＮＡの存在量を測定する実験からの、公的に入手可能なデータベースの検索の結果を、図３に示す。ヒトサンプルにおけるＴＤ２６の異常に特異的な発現に留意されたい。
【０１３３】
実施例３：注射したマウスにおけるＴＤ２６についての機能試験
マウスに、ＥＧ６２４２１９タンパク質をコードするｃＤＮＡの発現を駆動する強力なプロモータを含有するプラスミドＤＮＡを、尾静脈を介して注射した。マウスにおけるＤＮＡの尾静脈注射により、肝細胞でのＤＮＡの発現が引き起こされる（Ｒｏｓｓｍａｎｉｔｈら、ＤＮＡ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２１（１１）：８４７−８５３（２００２））。肝臓での発現は、ＧＦＰをコードするＤＮＡの注射の後に、肝臓において緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を示す対照により確認した。マウスの尾静脈へのＥＧ６２４２１９をコードするＤＮＡを注射する結果を、図４に示す。ＧＦＰ対照ではなくＥＧ６２４２１９をコードするＤＮＡの注射は、ベータ細胞の鋭くかつ有意な複製を引き起こす。ＥＧ６２４３１９は、他の脊椎動物ではなく、哺乳動物、たとえばヒト、ラット、およびマウスにおいて見出されるオルソログを有する遺伝子であるようである（図５）。予備的な配列分析は、ひな鳥（ｃｈｉｃｋ）、カエル、魚、および他の非哺乳動物種におけるＴＤ２６オルソログについての証拠を提供できない。
【０１３４】
実施例４：オルソログの同定
「Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ」（ＮＣＢＩ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）のホモサピエンス参照タンパク質配列のデータベース（データベース名：ｇｐ／９６０６．９５５８  ／ｈｓ＿ｒｅｆｐ）を、プローブとしてＮＰ＿０６１１５７．３および標準的なパラメータを使用し、ｂｌａｓｔｐプログラム（バージョン２．２．２５＋；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０））を使用して、ＴＤ２６に対する可能性のあるオルソログについて検索した。より遠縁の配列の検出を可能にするために、Ｅ値カットオフのみを１．０まで上げた。検索により、わずかな有意性で、唯一のヒット（プローブそれ自体を除いて）として、ＮＰ＿０５５３１０．１、アンジオポエチン関連タンパク質３前駆物質［ホモサピエンス］（Ａｎｇｐｔｌ３）を同定した（期待値（Ｅｘｐｅｃｔ）＝５ｅ−０６、同一残基率（Ｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓ）＝４０／１８２（２２％）、図６）。並行して、ハツカネズミ参照タンパク質配列データベース（データベース名：ｇｐ／１００９０．９５５９／ｍｍ＿ｒｅｆｐ）を、同じｂｌａｓｔプログラムおよびパラメータならびにプローブとしてＮＰ＿００１０７４４０９．１（マウスＴＤ２６オルソログタンパク質配列）を使用して、検索した。この検索により、唯一の有意なヒットとして、ＮＰ＿０３８９４１、アンジオポエチン関連タンパク質３前駆物質［ハツカネズミ］が返された（Ｅｘｐｅｃｔ＝３ｅ−０９、Ｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓ＝４８／１９５（２５％）、図７）。そのうえ、ＮＰ＿０６５６０６．２、アンジオポエチン関連タンパク質４［ハツカネズミ］（Ａｎｇｐｔｌ４）について返された有意でないヒットがあった（Ｅｘｐｅｃｔ＝０．３６、ｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓ＝３４／１０４（３３％）。ホモサピエンスおよびハツカネズミのＴＤ２６、Ａｎｇｐｔｌ３、およびＡｎｇｐｔｌ４タンパク質配列の複数のアライメントは、「ｃｌｕｓｔａｌｗ２」プログラム（Ｌａｒｋｉｎら、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２３：２９４７−２９４８（２００７））を使用して調製し、手動で最適化した（図８）。全体として、６つの配列の間の配列保存は、低い。図８において示されるように、３７〜５７位の範囲の、保存がより高度な単一の領域がある。この領域は、リポタンパク質リパーゼの結合および阻害に関与する、Ａｎｇｐｔｌ３およびＡｎｇｐｔｌ４における領域とオーバーラップする（Ｌｅｅら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８４（２０）：１３７３５−４５（５月１５日，２００９））。この領域内のＡｎｇｐｔｌ４の３つのアミノ酸残基は、リポタンパク質リパーゼとの相互作用およびその阻害にとって不可欠であることが示された（Ｙａｕら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８４（１８）：１１９４２−５２（５月１日，２００９））。ヒトおよびマウスＴＤ２６における対応するアミノ酸残基は、ヒトＡｎｇｐｔｌ４におけるものと同一である（図８における４８、５２、および５５位）。
【０１３５】
全体的に低い配列類似性の背景での、Ａｎｇｐｔｌ３およびＡｎｇｐｔｌ４の機能的に重要な領域に対するＴＤ２６の類似性は、機能的な関係を示す、タンパク質における他の構造的な特徴があるかどうかという調査を促した。Ａｎｇｐｔｌ３およびＡｎｇｐｔｌ４の両方は、Ｎ−末端シグナルペプチド、Ｎ−末端コイルドコイルドメイン（ＣＣＤ）、短いリンカー、およびＣ−末端フィブリノーゲン様ドメイン（ＦＬＤ）を有する分泌タンパク質である。リンカーは、プロタンパク質コンバターゼによって切断することができ、個別の断片としてＣＣＤおよびＦＬＤが循環へと放出される。完全長ＡｎｇｐｔｌおよびそれらのＣＣＤは、二量体またはオリゴマーを形成し、ＦＬＤは、単量体として循環する（Ｍｉｉｄａ  ＆  Ｈｉｒａｙａｍａ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｌｉｐｉｄｏｌ．２１（１）：７０−７５（２月  ２０１０））。
【０１３６】
ＴＤ２６が分泌タンパク質に必要なシグナルペプチドを有する可能性があるかどうかを決定するために、配列は、シグナルペプチド予測プログラムＳｉｇｎａｌＰを使用して評価した（Ｅｍａｎｕｅｌｓｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ２：９５３−９７１（２００７））。ＳｉｇｎａｌＰによって用いられる両方のアルゴリズムは、ヒトおよびマウスＴＤ２６の両方が、シグナルペプチドを有することを明白に予測する（図９）。ＴＤ２６およびＡｎｇｐｔｌ３の間の類似性は、図６におけるｂｌａｓｔアウトプットにおいて示されるように、ＴＤ２６のアミノ酸残基２０〜末端およびＡｎｇｐｔｌ３における２８〜２０８位に及び、Ａｎｇｐｔｌ３のＣＣＤをカバーする。ＴＤ２６におけるこの領域がまたコイルドコイル構造をも有するかを検査するために、ＴＤ２６の配列は、Ｓｗｉｓｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓのウェブサービスであるコイルドコイル予測プログラム「Ｃｏｉｌｓ」（Ｌｕｐａｓ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２６６：５１３−５２５（１９９６））により分析した。ヒトＴＤ２６についての結果を図１０に示す。７９〜１４０位および１６５〜１９４位の範囲の、コイルドコイル構造の２つの可能性のある領域がある。予測は、第１の領域について明白でないが、第２の領域について決定的である。全体として、予測される構造は、Ａｎｇｐｔｌ３および４のＣＣＤに強く類似する（Ｍｉｉｄａ  ＆  Ｈｉｒａｙａｍａ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｌｉｐｉｄｏｌ．２１（１）：７０−７５（２月、２０１０））。
【０１３７】
要約すると、配列分析は、ＴＤ２６が、Ａｎｇｐｔｌ３およびＡｎｇｐｔｌ４のＣＣＤ断片においてこれまでに同定された構造的な特徴をすべて示す分泌タンパク質であることを示す。両方のタンパク質およびとりわけそれらのＣＣＤ断片は、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）のインヒビターとして作用し、トリグリセリドに富んだリポタンパク質およびＨＤＬ代謝に影響を与えることが示された（Ｌｉ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｌｉｐｉｄｏｌ．１７（２）：１５２−１５６（４月  ２００６））。ＬＰＬ活性の阻害に関与するＡｎｇｐｔｌ３およびＡｎｇｐｔｌ４のアミノ酸残基が、ＴＤ２６において保存されているので、ＴＤ２６もまた、ＬＰＬおよびトリグリセリド代謝の調節において役割を果たすと仮定することは合理的である。
【０１３８】
実施例５：β−細胞複製に対するＳ６６１のインビボにおける効果
本明細書において記載される研究の過程の間に、調査は、４日間処置した正常およびＤＩＯ（食事誘発性の肥満）マウスにおいて、ベータ細胞複製に対するＳ６６１のインビボにおける効果を決定するために実行した。
【０１３９】
正常マウスにおける効果
研究において、Ｓ６６１は、４日間の期間、以下の用量、１ｍｇ／ｋｇ体重；０．５ｍｇ／ｋｇ体重；０．２５ｍｇ／ｋｇ体重、または０．１２５ｍｇ／ｋｇ体重で、３回毎日、Ｃ５７Ｂ１／６マウスに対してビヒクル中で皮下に投与した。並行して、ＢｒｄＵを、同じ期間、１００ｍｇ／ｋｇの用量で毎日１回投与した。５日目に、膵臓を摘出し、ＰＦＡで固定した。パラフィン包埋切片は、インスリン、ＤＡＰＩ、およびＢｒｄＵについて染色した。複製ベータ細胞におけるＢｒｄＵの組み込みは、Ｚｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｉｍａｇｅｒ  Ｚ２で生成した画像に自動化スクリプトを使用して分析した。正常マウスにおけるＳ６６１による処置は、ベータ細胞複製の有意な増加をもたらす（図１２）。たとえば、図１２は、ビヒクルのみと比較して、Ｓ６６１処置が、β−細胞複製の２倍（０．１２５ｍｇ／ｋｇのＳ６６１の日用量、３回）〜５倍（１ｍｇ／ｋｇのＳ６６１の日用量、３回）の増加をもたらしたことを示す。これらのデータは、Ｓ６６１の低用量が用量依存性の方式でベータ細胞複製を有意に増加させることを示唆する。
【０１４０】
他の研究において、Ｓ６６１は、４日間の期間、１ｍｇ／ｋｇ体重の毎日１回の注射として、Ｃ５７Ｂ１／６マウスに対してビヒクル中で皮下に投与した。並行して、ＢｒｄＵを、同じ期間、１００ｍｇ／ｋｇの用量で毎日１回投与した。５日目に、膵臓を摘出し、ベータ細胞の複製を、フローサイトメトリによって測定した。正常マウスにおけるＳ６６１による処置は、ベータ細胞複製の有意な増加をもたらす（図１３）。たとえば、図１３は、Ｓ６６１処置が、ビヒクルのみと比較して、ベータ細胞複製のパーセンテージにおける約５倍の増加をもたらしたことを示す。
【０１４１】
ＤＩＯマウス（食事誘発性の肥満）における効果
Ｃ５７Ｂ１／６マウスに、１７週間の間、高脂肪食を与えた。Ｓ６６１は、４日間の期間、１ｍｇ／ｋｇ体重または０．１２５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で３回、ＤＩＯマウスに対してビヒクル中で皮下に投与した。並行して、ＢｒｄＵを、同じ期間、１００ｍｇ／ｋｇの用量で毎日１回投与した。５日目に、膵臓を摘出し、ＰＦＡで固定した。パラフィン包埋切片は、インスリン、ＤＡＰＩ、およびＢｒｄＵについて染色した。複製細胞におけるＢｒｄＵの組み込みは、Ｚｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｉｍａｇｅｒ  Ｚ２で生成した画像に自動化スクリプトを使用して分析した。ＤＩＯマウスにおけるＳ６６１による処置は、ベータ細胞複製の量の増加をもたらし、非ベータ細胞複製を増加させない（図１４Ａおよび図１４Ｂ）。ＤＩＯマウスにおけるＳ６６１による処置はまた、総膵臓面積と比べた、島面積の増加をもたらす（図１４Ｃ）。
【０１４２】
実施例６：β−細胞複製に対するＴＤ２６のインビボにおける効果
本明細書において記載される研究の過程の間に、調査は、ベータ細胞複製に対する、ＴＤ２６ポリペプチドの部分のインビボにおける効果を決定するために実行した。マウスＴＤ２６ポリペプチドの欠失変異体（図１５）は、それぞれ、該ポリペプチドおよび分泌を促進するためのＮ−末端ＩｇＫシグナルペプチドをコードするｃＤＮＡの発現を駆動する強力なプロモータを含有する発現ベクターにクローニングした。Ｎ−末端ＩｇＫシグナルペプチドが分泌欠失変異体に存在しないことは、当業者によって十分に理解されるはずである。プラスミドは、８週齢のオスインプリンティング制御領域（ｉｍｐｒｉｎｔｉｎｇ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｒｅｇｉｏｎ）（ＩＣＲ）マウスへと尾静脈を介して注射した。Ｋｉ６７は、複製についてのマーカーとして使用した。対照は、ＧＦＰをコードするプラスミドとし、ベータ細胞複製率は、６日後に分析した。図１５において示されるように、ＴＤ２６タンパク質の部分は、ベータ細胞複製を誘導することができた。
【０１４３】
本発明は、その詳細な説明と共に記載されたが、上述の記載は、添付の特許請求の範囲の範囲によって定義される本発明の範囲を例証するものであり、限定するものではないことが意図される。他の態様、利点、および変更は、以下の特許請求の範囲の範囲内にある。
【０１４４】
配列：
配列番号１−ヒトＴＤ２６アミノ酸配列（予測されるシグナル配列を含む）；ＧＥＮＢＡＮＫ（商標）受入番号ＮＰ＿０６１１５７．３
配列番号２−マウスＴＤ２６オルソログ（ＥＧ６２４２１９）アミノ酸配列（予測されるシグナル配列を含む）
配列番号３−ラットＴＤ２６オルソログアミノ酸配列（予測されるシグナル配列を含む）
配列番号４−ヒト／マウス／ラットＴＤ２６アミノ酸コンセンサス配列
配列番号５−ヒトＴＤ２６アミノ酸配列（予測されるシグナル配列の部分を含む）
配列番号６−ヒトアンジオポエチン関連タンパク質３前駆物質アミノ酸配列
配列番号７−マウスＴＤ２６オルソログ（ＥＧ６２４２１９）アミノ酸配列（予測されるシグナル配列の部分を含む）
配列番号８−マウスアンジオポエチン関連タンパク質３前駆物質アミノ酸配列
配列番号９−ヒトアンジオポエチン関連タンパク質３前駆物質アミノ酸配列（配列番号６と比較して、さらなる予測されるシグナル配列を含む）
配列番号１０−マウスアンジオポエチン関連タンパク質３前駆物質アミノ酸配列（配列番号８と比較して、さらなる予測されるシグナル配列を含む）
配列番号１１−ヒトアンジオポエチン関連タンパク質４前駆物質アミノ酸配列
配列番号１２−マウスアンジオポエチン関連タンパク質４前駆物質アミノ酸配列
配列番号１３−意図的に省略
配列番号１４−ヒトＴＤ２６核酸配列（ＮＣＢＩ  Ｒｅｆ  ＮＭ＿０１８６８７．６）
配列番号１５−マウスＴＤ２６オルソログ核酸配列（ＮＣＢＩ  Ｒｅｆ  ＮＭ＿００１０８０９４０．１）
配列番号１６−Ｓ６６１／Ｓ９６１アミノ酸配列
配列番号１７−ＲＢ５３７アミノ酸配列
配列番号１８−ＲＢ５３７／Ｓ６６１／Ｓ９６１アミノ酸配列の親和性を最適化した部分
配列番号１９−リンカーアミノ酸配列
配列番号２０−ＲＢ５３７アミノ酸配列の親和性を最適化した部分
配列番号２１−ＦＬＡＧタグアミノ酸配列
配列番号２２−Ｅタグアミノ酸配列
配列番号２３−Ｓ６６１／Ｓ９６１アミノ酸配列の親和性を最適化した部分
配列番号２４−ＲＢ５３７およびＳ６６１／Ｓ９６１のアミノ酸配列の親和性を最適化した部分についてのコンセンサス配列
【図２Ｅ】
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【図９】
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【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｆ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図８−３】
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【図８−４】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４−１】
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【図１４−２】
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【図１５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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