(57)【要約】  Ｙ２２０Ｃ突然変異を保有するｐ５３タンパク質の安定化において使用するための、式（Ｉ）：    【化１】2011519908.tif 000056の化合物（式中、ＸはＣＲＸ及びＮから選択され、ＲＮ１はＨ、及びＳＨ又はハロによって置換されていてもよいＣ１〜４アルキルから選択され、ＲＧ１はＨ及びＳＨから選択され、ＲＣ２はＨ及び必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキルから選択され、ＲＣ３はＨ及び必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキルから選択され、ＲＸはＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択され、ＲＣ４は（ｉ）必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ３〜１２ヘテロシクリル、（ｉｉ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＮ５ＲＮ６（式中、ＲＮ５及びＲＮ６は独立してＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択されるか、又はＲＮ５及びＲＮ６と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成する）、（ｉｉｉ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＯ１（式中、ＲＯ１はＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）、（ｉｖ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨＳＯ２ＲＳ１（式中、ＲＳ１はＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）、（ｖ）ＯＣ（＝Ｏ）ＲＣ８（式中、ＲＣ８はＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）、（ｖｉ）ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲＮ７ＲＮ８（式中、ＲＮ７及びＲＮ８は独立してＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択されるか、又はＲＮ７及びＲＮ８と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成する）、並びに（ｖｉｉ）Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ  Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ２、ＣＨＣ（ＣＮ）２、ＣＨＣ（ＣＮ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２及びカルボキシから選択され、ＲＣ５はＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択され、又はＲＣ４及びＲＣ５が、それらが結合する炭素原子と共に、５個若しくは６個の環原子を含有する必要に応じて置換された式：    【化２】2011519908.tif 000057（式中、ＱはＯ、Ｎ又はＣＲＱ１＝ＣＲＱ２（式中、ＲＱ１及びＲＱ２は独立してＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択される）を表す）の芳香環を形成し、ＲＣ６はＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択され、ＲＣ７は必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ３〜１２ヘテロシクリル、ＮＨＣ（＝Ｏ）ＲＣ９、ＣＨ２ＮＲＮ２ＲＮ３及びＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨＲＮ４（式中、ＲＣ９は必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、ＲＮ２及びＲＮ３は独立してＩＩ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択されるるか、又はＲＮ２及びＲＮ３と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成し、ＲＮ４は必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）から選択され、ＲＣ４及びＲＣ５が結合していない場合、ＲＣ３をさらにＯＲ０２（式中、ＲＯ２はＣ１〜４アルキル基である）及びＣ（＝Ｏ）ＯＲＯ３（式中、ＲＯ３はＣ１〜４アルキル基である）から選択することができ、ＲＣ２をさらにハロから選択することができる）。【選択図】なし
2011519908.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｐ５３がＹ２２０Ｃ突然変異を保有している病変又は腫瘍を有する被験体を治療する方法において使用するための、式（Ｉ）：
【化１】
2011519908.tif 000053
の化合物
（式中、ＸはＣＲＸ及びＮから選択され、
ＲＮ１はＨ、及びＳＨ又はハロによって置換されていてもよいＣ１〜４アルキルから選択され、
ＲＣ１はＨ及びＳＨから選択され、
ＲＣ２はＨ及び必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキルから選択され、
ＲＣ３はＨ及び必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキルから選択され、
ＲＸはＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択され、
ＲＣ４は
（ｉ）必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ３〜１２ヘテロシクリル、
（ｉｉ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＮ５ＲＮ６（式中、ＲＮ５及びＲＮ６は独立してＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択されるか、又はＲＮ５及びＲＮ６と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成する）、
（ｉｉｉ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＯ１（式中、ＲＯ１はＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）、
（ｉｖ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨＳＯ２ＲＳ１（式中、ＲＳ１はＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）、
（ｖ）ＯＣ（＝Ｏ）ＲＣ８（式中、ＲＣ８はＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）、
（ｖｉ）ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲＮ７ＲＮ８（式中、ＲＮ７及びＲＮ８は独立してＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択されるか、又はＲＮ７及びＲＮ８と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成する）、並びに
（ｖｉｉ）Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ２、ＣＨＣ（ＣＮ）２、ＣＨＣ（ＣＮ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２及びカルボキシから選択され、
ＲＣ５はＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択され、
又はＲＣ４及びＲＣ５が、それらが結合する炭素原子と共に、５個若しくは６個の環原子を含有する必要に応じて置換された式：
【化２】
2011519908.tif 000054
（式中、ＱはＯ、Ｎ又はＣＲＱ１＝ＣＲＱ２（式中、ＲＱ１及びＲＱ２は独立してＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択される）を表す）の芳香環を形成し、
ＲＣ６はＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択され、
ＲＣ７は必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ３〜１２ヘテロシクリル、ＮＨＣ（＝Ｏ）ＲＣ９、ＣＨ２ＮＲＮ２ＲＮ３及びＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨＲＮ４（式中、ＲＣ９は必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、ＲＮ２及びＲＮ３は独立してＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択されるか、又はＲＮ２及びＲＮ３と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成し、ＲＮ４は必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）から選択され、
ＲＣ４及びＲＣ５が結合していない場合、ＲＣ３をさらにＯＲＯ２（式中、ＲＯ２はＣ１〜４アルキル基である）及びＣ（＝Ｏ）ＯＲＯ３（式中、ＲＯ３はＣ１〜４アルキル基である）から選択することができ、ＲＣ２をさらにハロから選択することができる）。
【請求項２】
ＲＮ１がＨ、エチル、プロピル及びシクロプロピルから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＲＣ１がＨである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ＲＣ２がＨである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
ＲＣ２が必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキルであり、該必要に応じた置換基がＣ１〜７アルキル、Ｃ３〜７ヘテロシクリル、Ｃ５〜７アリール、ハロ、ヒドロキシ、エーテル、ニトロ、シアノ、アシル、カルボキシ、エステル、アミド、アミノ、アシルアミド、ウレイド、アシルオキシ及びチオールから選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＲＣ３がＨである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ＲＣ３が必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキルであり、該必要に応じた置換基がＣ１〜７アルキル、Ｃ３〜７ヘテロシクリル、Ｃ５〜７アリール、ハロ、ヒドロキシ、エーテル、ニトロ、シアノ、アシル、カルボキシ、エステル、アミド、アミノ、アシルアミド、ウレイド、アシルオキシ及びチオールから選択され得る、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＲＸがＨである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ＲＣ４が必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ３〜１２ヘテロシクリルであり、ＲＣ５がＨである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ＲＣ４がＣ（＝Ｏ）ＮＲＮ５ＲＮ６であり、ＲＣ５がＨである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
ＲＮ５がＨ及びＣ１〜４アルキルから選択され、ＲＮ６がＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜４アルキル（該必要に応じた置換基はヒドロキシ、アミノ及びＣ５〜９アリールから選択される）及び必要に応じて置換されたＣ５〜６ヘテロシクリル（該必要に応じた置換基はＣ１〜４アルキルである）から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ＲＮ５及びＲＮ６と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたピペリジニル又はピペラジニルを形成し、該必要に応じた置換基がＣ１〜７アルキル、ヒドロキシ、Ｃ５〜７ヘテロシクリル、Ｃ５〜７アリール、アミノ及びアシルから選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
ＲＣ４がＣ（＝Ｏ）ＯＲＯ１であり、ＲＣ５がＨである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ＲＯ１が必要に応じて置換されたＣ１〜４アルキルであり、該必要に応じた置換基がエーテル、オキシウレイド、Ｃ５〜６アリール及びアミドから選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ＲＣ４がＣ（＝Ｏ）ＮＨＮＨＳＯ２ＲＳ１であり、ＲＣ５がＨである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
ＲＳ１が必要に応じて置換されたＣ５〜６アリール基であり、該必要に応じた置換基がアルコキシ、エーテル及びＣ１〜７アルキルから選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ＲＣ４がＯＣ（＝Ｏ）ＮＲＮ７ＲＮ８であり、ＲＣ５がＨである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ＲＮ７がＨであり、ＲＮ８が必要に応じて置換されたＣ５〜６アリールであり、該必要に応じた置換基がハロから選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ＲＣ４がＯＣ（＝Ｏ）ＲＣ８であり、ＲＣ５がＨである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
ＲＣ８が必要に応じて置換されたＣ５〜７ヘテロシクリルである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
ＲＣ４がＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ２、ＣＨＣ（ＣＮ）２、ＣＨＣ（ＣＮ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２及びカルボキシから選択され、ＲＣ５がＨである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ＲＣ４及びＲＣ５が、それらが結合する炭素原子と共に、５個若しくは６個の環原子を含有する必要に応じて置換された式：
【化３】
2011519908.tif 000055
（式中、ＱはＣＲＱ１＝ＣＲＱ２（式中、ＲＱ１はＨ及びＯＨから選択され、ＲＱ２はＨである）であり、
ＲＣ６はＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択され、
ＲＣ７は必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ３〜１２ヘテロシクリル、ＮＨＣ（＝Ｏ）ＲＣ９、ＣＨ２ＮＲＮ２ＲＮ３及びＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨＲＮ４から選択される）の芳香環を形成する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
ＲＣ６がＨである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ＲＣ７が必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ３〜１２ヘテロシクリルである、請求項２２又は２３に記載の方法。
【請求項２５】
ＲＣ７がＮＨＣ（＝Ｏ）ＲＣ９（式中、ＲＣ９は必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）である、請求項２２又は２３に記載の方法。
【請求項２６】
ＲＣ９が必要に応じて置換されたＣ１〜４アルキル基であり、該必要に応じた置換基がアシルオキシ、Ｃ５〜７アリール、アミノ、チオエステル及びＣ３〜７ヘテロシクリルから選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ＲＣ９が必要に応じて置換されたＣ５〜６アリール基であり、該必要に応じた置換基がＣ１〜７アルキル、Ｃ３〜７ヘテロシクリル、Ｃ５〜７アリール、ハロ、ヒドロキシ、エーテル、ニトロ、シアノ、アシル、カルボキシ、エステル、アミド、アミノ、アシルアミド、ウレイド、アシルオキシ及びチオールから選択され得る、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
ＲＣ７がＣＨ２ＮＲＮ２ＲＮ３（式中、ＲＮ２及びＲＮ３は独立してＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択されるか、又はＲＮ２及びＲＮ３と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成する）である、請求項２２又は２３に記載の方法。
【請求項２９】
ＲＣ７がＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨＲＮ４（式中、ＲＮ４は必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）である、請求項２２又は２３に記載の方法。
【請求項３０】
ｐ５３がＹ２２０Ｃ突然変異を保有している細胞を処理する方法であって、該細胞と、請求項１〜２９のいずれか一項において規定される式（Ｉ）の化合物とを接触させることを含む、方法。
【請求項３１】
ｐ５３がＹ２２０Ｃ突然変異を保有している病変又は腫瘍を有する被験体を治療する方法であって、該被験体に請求項１〜２９のいずれか一項において規定される式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項３２】
Ｙ２２０Ｃ突然変異を保有するｐ５３タンパク質を安定化する方法であって、該ｐ５３を、請求項１〜２９のいずれか一項において規定される式（Ｉ）の化合物と接触させることを含む、方法。
【請求項３３】
Ｙ２２０Ｃ突然変異を保有するｐ５３に対する分子の結合を決定する方法であって、該分子を、請求項１〜２９のいずれか一項において規定される式（Ｉ）の化合物と競合させて前記ｐ５３と接触させること、及び前記化合物のいずれか一方の結合又は変位を測定することを含む、方法。
【請求項３４】
前記化合物の一方又は両方が、、放射標識、発色団、フルオロフォア等の標識、又は磁気共鳴法を用いた競合ベースの１９Ｆ−スクリーニングのためにフッ素官能基を保有する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
請求項１〜２９のいずれか一項において規定される式（Ｉ）の化合物を、薬学的に許容される担体と共に含む医薬組成物。
【請求項３６】
治療方法において使用するための、請求項１〜２９のいずれか一項において規定される式（Ｉ）の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｐ５３タンパク質分子に結合する能力を有する化合物、及びかかる化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
腫瘍抑制タンパク質ｐ５３は、細胞周期を制御し、癌の発生の予防において重要な役割を果たす３９３個のアミノ酸から成る転写因子である。ｐ５３は、紫外線照射、低酸素状態及びＤＮＡ損傷等の細胞ストレスに応答して、Ｇ１及びＧ２細胞周期停止並びにアポトーシスと関連する多数の遺伝子の転写を誘導する（参照文献１〜参照文献３）。約５０％のヒト癌において、ｐ５３遺伝子におけるミスセンス突然変異の結果としてｐ５３が不活性化されている（参照文献４、参照文献５）。
【０００３】
ｐ５３の多機能性は、その構造の複雑さに反映されている。ｐ５３四量体の各々の鎖は、幾つかのドメインから構成される。明確に規定されたＤＮＡ結合ドメイン及び四量体化ドメイン、並びに非常に流動的な、ほとんど構造化されていない領域が存在する（参照文献６〜参照文献１１）。大抵のｐ５３癌突然変異は、このタンパク質のＤＮＡ結合コアドメインに位置する（参照文献４）。このドメインは、その同族ＤＮＡとの複合体においてはＸ線結晶学によって構造的に特徴づけられており（参照文献６）、その溶液中の遊離形態においてはＮＭＲによって構造的に特徴づけられている（参照文献１２）。このドメインは、ＤＮＡ結合表面の基本骨格となる、中央の２つの逆平行βシートのβサンドイッチから成る。ＤＮＡ結合表面は、亜鉛イオン及びループ−シート−ヘリックスモチーフによって安定化される２つのβターンループ（Ｌ２及びＬ３）から構成される。これらの構造要素は共に、正荷電アミノ酸に富む伸長ＤＮＡ結合表面を形成し、様々なｐ５３応答エレメントと特異的に接触する。ヒト癌において最も頻繁に突然変異する６つのアミノ酸残基は、ＤＮＡ結合表面内又はその近くに位置する（www-p53.iarc.frのｐ５３突然変異データベースのリリース（release）Ｒ１０を参照されたい）（参照文献４）。これらの残基は、ＤＮＡに直接接触するか、又はＤＮＡ結合表面の構造的完全性の維持に一定の役割を果たすかによって、「接触」（Ａｒｇ２４８、Ａｒｇ２７３）又は「構造」（Ａｒｇ１７５、Ｇｌｙ２４５、Ａｒｇ２４９、Ａｒｇ２８２）残基として分類される（参照文献６）。
【０００４】
しかしながら、癌関連突然変異はＤＮＡ結合表面に限定されず、このタンパク質のβサンドイッチ領域においても見られる。ＤＮＡ結合表面以外の最も一般的な突然変異はＹ２２０Ｃである。Ｙ２２０Ｃは、β鎖Ｓ７とＳ８とを接続するターンの始まりにあるβサンドイッチの末端部に位置する。Ｔｙｒ２２０のベンゼン部分は、βサンドイッチの疎水性コアの一部を形成し、一方でヒドロキシル基は溶媒の方を向いている。
【０００５】
体温でわずかにしか安定でないｐ５３が、非常に動的で本質的に不安定なものへと進化したという証拠が増えている（参照文献１２）。
【０００６】
「Ｔ−ｐ５３Ｃ」と称される、ｐ５３の熱安定性の機能的合成変異体が使用されてきた。この変異体は置換Ｍ１３３Ｌ、Ｖ２０３Ａ、Ｎ２３９Ｙ及びＮ２６８Ｄを有する。それ以外は本質的に野生型の特徴を有するこの変異体は、Ｘ線結晶学によるそれらの構造の決定を可能にする形態のｐ５３の様々な既知の発癌突然変異を保有するベクターとして使用されてきた。
【０００７】
Ｙ２２０Ｃ突然変異を有するＴ−ｐ５３Ｃの構造が記載されている（参照文献１３）。２２０位のチロシンと共に、Ｔｙｒ−２２０のベンゼン部分はβサンドイッチの疎水性コアの一部を形成し、一方でヒドロキシル基は溶媒の方を向いている。システインが存在する突然変異体においては、突然変異は規定の位置に水分子で満たされた溶媒が接近可能な亀裂を生じさせるが、コアドメインの全体構造は無傷なままである。突然変異時の構造変化は、Ｔ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃにおいて野生型に既存の２つの幾らか浅い表面亀裂を連結し、突然変異部位がその最深部である、長く広がった裂け目を形成する。βサンドイッチのコア中に位置する、隣接する疎水性側鎖の位置は大きく移動することはない。しかしながら、この突然変異は、疎水性相互作用の喪失及びこれらの疎水性コア残基の最適以下の（suboptimal）パッキングをもたらす。しかし、構造全体を通して０．９Åを超えるＣα変位はない。
【発明の概要】
【０００８】
本発明者らは、インドール、カルバゾール又は関連の骨格を含有する多数の化合物がＴ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃに結合し、その融解温度を上昇させるようタンパク質を安定化することを発見した。
【０００９】
したがって一態様では、本発明は、Ｙ２２０Ｃ突然変異を保有するｐ５３タンパク質を安定化する方法であって、ｐ５３を、式（Ｉ）：
【００１０】
【化１】
2011519908.tif 000003
【００１１】
の化合物（並びにその異性体、塩、溶媒和物、保護形態及びプロドラッグ）と接触させることを含む、方法を提供する
（式中、ＸはＣＲＸ及びＮから選択され、
ＲＮ１はＨ、及びＳＨ又はハロによって置換されていてもよいＣ１〜４アルキルから選択され、
ＲＣ１はＨ及びＳＨから選択され、
ＲＣ２はＨ及び必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキルから選択され、
ＲＣ３はＨ及び必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキルから選択され、
ＲＸはＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択され、
ＲＣ４は
（ｉ）必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ３〜１２ヘテロシクリル、
（ｉｉ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＮ５ＲＮ６（式中、ＲＮ５及びＲＮ６は独立してＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択されるか、又はＲＮ５及びＲＮ６と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成する）、
（ｉｉｉ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＯ１（式中、ＲＯ１はＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）、
（ｉｖ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨＳＯ２ＲＳ１（式中、ＲＳ１はＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）、
（ｖ）ＯＣ（＝Ｏ）ＲＣ８（式中、ＲＣ８はＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）、
（ｖｉ）ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲＮ７ＲＮ８（式中、ＲＮ７及びＲＮ８は独立してＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択されるか、又はＲＮ７及びＲＮ８と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成する）、並びに
（ｖｉｉ）Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ２、ＣＨＣ（ＣＮ）２、ＣＨＣ（ＣＮ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２及びカルボキシから選択され、
ＲＣ５はＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択され、
又はＲＣ４及びＲＣ５が、それらが結合する炭素原子と共に、５個若しくは６個の環原子を含有する必要に応じて置換された式：
【００１２】
【化２】
2011519908.tif 000004
【００１３】
（式中、ＱはＯ、Ｎ又はＣＲＱ１＝ＣＲＱ２（式中、ＲＱ１及びＲＱ２は独立してＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択される）を表す）の芳香環を形成し、
ＲＣ６はＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択され、
ＲＣ７は必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ３〜１２ヘテロシクリル、ＮＨＣ（＝Ｏ）ＲＣ９、ＣＨ２ＮＲＮ２ＲＮ３及びＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨＲＮ４（式中、ＲＣ９は必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、ＲＮ２及びＲＮ３は独立してＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択されるか、又はＲＮ２及びＲＮ３と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成し、ＲＮ４は必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）から選択され、
ＲＣ４及びＲＣ５が結合していない場合、ＲＣ３をさらにＯＲＯ２（式中、ＲＯ２はＣ１〜４アルキル基である）及びＣ（＝Ｏ）ＯＲＯ３（式中、ＲＯ３はＣ１〜４アルキル基である）から選択することができ、ＲＣ２をさらにハロから選択することができる）。
【００１４】
別の態様では、本発明は、ｐ５３がＹ２２０Ｃ突然変異を保有している細胞を処理する方法であって、該細胞を式（Ｉ）の化合物と接触させることを含む、方法を提供する。
【００１５】
上記態様は、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで実行することができる。
【００１６】
別の態様では、本発明は、ｐ５３がＹ２２０Ｃ突然変異を保有している病変又は腫瘍を有する被験体を治療する方法であって、該被験体に式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、方法を提供する。
【００１７】
別の態様では、本発明は、ｐ５３がＹ２２０Ｃ突然変異を保有している病変又は腫瘍を有する被験体を治療する方法において使用するための式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００１８】
本発明は、Ｙ２２０Ｃ突然変異を保有するｐ５３に対する分子の結合を決定する方法であって、該分子を、式（Ｉ）の化合物と競合させて該ｐ５３と接触させること、及び該化合物のいずれか一方の結合又は変位を測定することを含む、方法をさらに提供する。本発明のこの態様では、化合物の一方又は両方が、、放射標識、発色団、フルオロフォア等の標識、又は磁気共鳴法を用いた競合ベースの１９Ｆ−スクリーニングのためにフッ素官能基を保有し得る。
【００１９】
本発明の別の態様は、式（Ｉ）の化合物を、薬学的に許容される担体と共に含む医薬組成物を提供する。
【００２０】
本発明の別の態様は、治療方法において使用するための式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００２１】
本発明のさらなる態様は、式（Ｉ）の範囲内の新規の化合物に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本発明の化合物ＰＫ０８３との複合体における、Ｔ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃの結晶構造を様々に表した図である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
定義
アルキル：本明細書中で使用される場合、「アルキル」という用語は、（特に指定のない限り）１個〜２０個の炭素原子を有する炭化水素化合物の炭素原子から水素原子を分離する（removing）ことによって得られる、脂肪族であっても又は脂環式であってもよく、飽和であっても又は不飽和（例えば部分不飽和、完全不飽和）であってもよい一価の部分に関する。したがって、「アルキル」という用語は、下記で論考されるアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル（cycloalkyenyl）、シクロアルキニル（cylcoalkynyl）等のサブクラスを含む。
【００２４】
アルキル基との関連においては、接頭辞（例えばＣ１〜４、Ｃ１〜７、Ｃ２〜７、Ｃ３〜７等）は、炭素原子数又は炭素原子数の範囲を表す。例えば、「Ｃ１〜４アルキル」という用語は、本明細書中で使用される場合、１個〜４個の炭素原子を有するアルキル基に関する。アルキル基の群の例としては、Ｃ１〜４アルキル（「低級アルキル」）及びＣ１〜７アルキルが挙げられる。最初の接頭辞は他の限定によって変化し得ることに留意されたい。例えば、不飽和アルキル基については、最初の接頭辞は少なくとも２でなくてはならず、環状アルキル基については、最初の接頭辞は少なくとも３でなくてはならない等である。
【００２５】
（非置換）飽和アルキル基の例としては、メチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、プロピル（Ｃ３）、ブチル（Ｃ４）、ペンチル（Ｃ５）、ヘキシル（Ｃ６）、ヘプチル（Ｃ７）、オクチル（Ｃ８）、ノニル（Ｃ９）、デシル（Ｃ１０）、ウンデシル（Ｃ１１）及びドデシル（Ｃ１２）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２６】
（非置換）飽和直鎖アルキル基の例としては、メチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、ｎ−プロピル（Ｃ３）、ｎ−ブチル（Ｃ４）、ｎ−ペンチル（アミル）（Ｃ５）、ｎ−ヘキシル（Ｃ６）及びｎ−ヘプチル（Ｃ７）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】
（非置換）飽和分岐アルキル基の例としては、イソプロピル（Ｃ３）、イソブチル（Ｃ４）、ｓｅｃ−ブチル（Ｃ４）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ４）、イソペンチル（Ｃ５）及びネオペンチル（Ｃ５）が挙げられる。
【００２８】
アルケニル：本明細書中で使用される場合、「アルケニル」という用語は、１つ又は複数の炭素−炭素二重結合を有するアルキル基に関する。アルケニル基の群の例としては、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜７アルケニル及びＣ２〜１２アルケニルが挙げられる。
【００２９】
（非置換）不飽和アルケニル基の例としては、エテニル（ビニル、−ＣＨ＝ＣＨ２）、１−プロペニル（−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３）、２−プロペニル（アリル、−ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ２）、イソプロペニル（１−メチルビニル、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２）、ブテニル（Ｃ４）、ペンテニル（Ｃ５）及びへキセニル（Ｃ６）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３０】
アルキニル：本明細書中で使用される場合、「アルキニル」という用語は、１つ又は複数の炭素−炭素三重結合を有するアルキル基に関する。アルキニル基の群の例としては、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ２〜７アルキニル及びＣ２〜１２アルキニルが挙げられる。
【００３１】
（非置換）不飽和アルキニル基の例としては、エチニル（ethynyl）（エチニル（ethinyl）、−Ｃ≡ＣＨ）及び２−プロピニル（プロパルギル、−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３２】
シクロアルキル：本明細書中で使用される場合、「シクロアルキル」という用語は、シクリル（cyclyl）基でもあるアルキル基、すなわち炭素環式化合物の炭素環（飽和であっても又は不飽和（例えば部分不飽和、完全不飽和）であってもよい）の脂環式環原子から水素原子を分離することによって得られる、３個〜７個の環原子を含む（特に指定のない限り）３個〜７個の炭素原子を有する一価の部分に関する。したがって、「シクロアルキル」という用語は、シクロアルケニル及びシクロアルキニルのようなサブクラスを含む。好ましくは、各々の環は３個〜７個の環原子を有する。シクロアルキル基の群の例としては、Ｃ３〜７シクロアルキル及びＣ３〜１２シクロアルキルが挙げられる。
【００３３】
シクロアルキル基の例としては、
飽和単環式炭化水素化合物：
シクロプロパン（Ｃ３）、シクロブタン（Ｃ４）、シクロペンタン（Ｃ５）、シクロへキサン（Ｃ６）、シクロヘプタン（Ｃ７）、メチルシクロプロパン（Ｃ４）、ジメチルシクロプロパン（Ｃ５）、メチルシクロブタン（Ｃ５）、ジメチルシクロブタン（Ｃ６）、メチルシクロペンタン（Ｃ６）、ジメチルシクロペンタン（Ｃ７）、メチルシクロへキサン（Ｃ７）、ジメチルシクロへキサン（Ｃ８）及びメンタン（Ｃ１０）、
不飽和単環式炭化水素化合物：
シクロプロペン（Ｃ３）、シクロブテン（Ｃ４）、シクロペンテン（Ｃ５）、シクロヘキセン（Ｃ６）、メチルシクロプロペン（Ｃ４）、ジメチルシクロプロペン（Ｃ５）、メチルシクロブテン（Ｃ５）、ジメチルシクロブテン（Ｃ６）、メチルシクロペンテン（Ｃ６）、ジメチルシクロペンテン（Ｃ７）、メチルシクロヘキセン（Ｃ７）及びジメチルシクロヘキセン（Ｃ８）、
飽和多環式炭化水素化合物：
ツジャン（Ｃ１０）、カラン（Ｃ１０）、ピナン（Ｃ１０）、ボルナン（Ｃ１０）、ノルカラン（Ｃ７）、ノルピナン（Ｃ７）、ノルボルナン（Ｃ７）、アダマンタン（Ｃ１０）及びデカリン（デカヒドロナフタレン）（Ｃ１０）、並びに
不飽和多環式炭化水素化合物：
カンフェン（Ｃ１０）、リモネン（Ｃ１０）及びピネン（Ｃ１０）から誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３４】
ヘテロシクリル：本明細書中で使用される場合、「ヘテロシクリル」という用語は、複素環式化合物の環原子から水素原子を分離することによって得られる、（特に指定のない限り）３個〜７個の環原子を有する（そのうち１個〜４個が環ヘテロ原子である）一価の部分に関する。好ましくは、各々の環は３個〜７個の環原子を有し、そのうち１個〜４個が環ヘテロ原子である。
【００３５】
この関連においては、接頭辞（例えばＣ３〜７、Ｃ５〜６等）は、炭素原子か又はヘテロ原子かを問わず、環原子数又は環原子数の範囲を表す。例えば、「Ｃ５〜６ヘテロシクリル」という用語は、本明細書中で使用される場合、５個又は６個の環原子を有するヘテロシクリル基に関する。ヘテロシクリル基の群の例としては、Ｃ３〜７ヘテロシクリル、Ｃ５〜７ヘテロシクリル及びＣ５〜６ヘテロシクリルが挙げられる。
【００３６】
単環式ヘテロシクリル基の例としては、
Ｎ１：アジリジン（Ｃ３）、アゼチジン（Ｃ４）、ピロリジン（テトラヒドロピロール）（Ｃ５）、ピロリン（例えば３−ピロリン、２，５−ジヒドロピロール）（Ｃ５）、２Ｈ−ピロール又は３Ｈ−ピロール（イソピロール、イソアゾール）（Ｃ５）、ピペリジン（Ｃ６）、ジヒドロピリジン（Ｃ６）、テトラヒドロピリジン（Ｃ６）、アゼピン（Ｃ７）、
Ｏ１：オキシラン（Ｃ３）、オキセタン（Ｃ４）、オキソラン（テトラヒドロフラン）（Ｃ５）、オキソール（ジヒドロフラン）（Ｃ５）、オキサン（テトラヒドロピラン）（Ｃ６）、ジヒドロピラン（Ｃ６）、ピラン（Ｃ６）、オキセピン（Ｃ７）、
Ｓ１：チイラン（Ｃ３）、チエタン（Ｃ４）、チオラン（テトラヒドロチオフェン）（Ｃ５）、チアン（テトラヒドロチオピラン）（Ｃ６）、チエパン（Ｃ７）、
Ｏ２：ジオキソラン（Ｃ５）、ジオキサン（Ｃ６）及びジオキセパン（Ｃ７）、
Ｏ３：トリオキサン（Ｃ６）、
Ｎ２：イミダゾリジン（Ｃ５）、ピラゾリジン（ジアゾリジン）（Ｃ５）、イミダゾリン（Ｃ５）、ピラゾリン（ジヒドロピラゾール）（Ｃ５）、ピペラジン（Ｃ６）、
Ｎ１Ｏ１：テトラヒドロオキサゾール（Ｃ５）、ジヒドロオキサゾール（Ｃ５）、テトラヒドロイソオキサゾール（Ｃ５）、ジヒドロイソオキサゾール（Ｃ５）、モルホリン（Ｃ６）、テトラヒドロオキサジン（Ｃ６）、ジヒドロオキサジン（Ｃ６）、オキサジン（Ｃ６）、
Ｎ１Ｓ１：チアゾリン（Ｃ５）、チアゾリジン（Ｃ５）、チオモルホリン（Ｃ６）、
Ｎ２Ｏ１：オキサジアジン（Ｃ６）、
Ｏ１Ｓ１：オキサチオール（Ｃ５）及びオキサチアン（チオキサン）（Ｃ６）、並びに
Ｎ１Ｏ１Ｓ１：オキサチアジン（Ｃ６）から誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３７】
置換（非芳香族）単環式ヘテロシクリル基の例としては、環状の糖類、例えばアラビノフラノース、リキソフラノース、リボフラノース及びキシロフラノース（xylofuranse）等のフラノース（Ｃ５）、並びにアロピラノース、アルトロピラノース、グルコピラノース、マンノピラノース、グロピラノース、イドピラノース、ガラクトピラノース及びタロピラノース等のピラノース（Ｃ６）から誘導されるものが挙げられる。
【００３８】
Ｎ含有ヘテロシクリル：本明細書中で使用される場合、「Ｎ含有ヘテロシクリル」という用語は、窒素環原子を含有する複素環式化合物の環原子から水素原子を分離することによって得られる、（特に指定のない限り）３個〜７個の環原子を有する（そのうち１個〜４個が環ヘテロ原子である）一価の部分に関する。好ましくは、各々の環は３個〜７個の環原子を有し、そのうち１個〜４個が環ヘテロ原子である。例は上記に提示している。
【００３９】
Ｃ５〜２０アリール：本明細書中で使用される場合、「Ｃ５〜２０アリール」という用語は、Ｃ５〜２０芳香族化合物（１つの環又は２つ以上の環（例えば縮合した）を有し、５個〜２０個の環原子を有し、環（複数可）の少なくとも１つが芳香環である）の芳香環原子から水素原子を分離することによって得られる一価の部分に関する。好ましくは、各々の環は５個〜７個の環原子を有する。
【００４０】
環原子は「カルボアリール基」のように全て炭素原子であってもよいが、その場合でも、基が便宜上「Ｃ５〜２０カルボアリール」基と称される場合もある。
【００４１】
環ヘテロ原子を有しないＣ５〜２０アリール基（すなわちＣ５〜２０カルボアリール基）の例としては、ベンゼン（すなわちフェニル）（Ｃ６）、ナフタレン（Ｃ１０）、アントラセン（Ｃ１４）、フェナントレン（Ｃ１４）及びピレン（Ｃ１６）から誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４２】
代替的には、環原子は、「ヘテロアリール基」のように、１つ又は複数のヘテロ原子（酸素、窒素及び硫黄を含むが、これらに限定されない）を含み得る。この場合、基が便宜上「Ｃ５〜２０ヘテロアリール」基と称される場合もあり、「Ｃ５〜２０」は炭素原子か又はヘテロ原子かを問わず、環原子を表す。好ましくは、各々の環は５個〜７個の環原子を有し、そのうち０個〜４個が環ヘテロ原子である。
【００４３】
Ｃ５〜２０ヘテロアリール基の例としては、フラン（オキソール）、チオフェン（チオール）、ピロール（アゾール）、イミダゾール（１，３−ジアゾール）、ピラゾール（１，２−ジアゾール）、トリアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサジアゾール、テトラゾール及びオキサトリアゾールから誘導されるＣ５ヘテロアリール基、並びにイソオキサジン、ピリジン（アジン）、ピリダジン（１，２−ジアジン）、ピリミジン（１，３−ジアジン、例えばシトシン、チミン、ウラシル）、ピラジン（１，４−ジアジン）及びトリアジンから誘導されるＣ６ヘテロアリール基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４４】
ヘテロアリール基は炭素原子又はヘテロ環原子を介して結合していてもよい。
【００４５】
縮合環を含むＣ５〜２０ヘテロアリール基の例としては、ベンゾフラン、イソべンゾフラン、ベンゾチオフェン、インドール、イソインドールから誘導されるＣ９ヘテロアリール基、キノリン、イソキノリン、ベンゾジアジン、ピリドピリジン（pyridopyridine）から誘導されるＣ１０ヘテロアリール基、アクリジン及びキサンテンから誘導されるＣ１４ヘテロアリール基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４６】
上記のアルキル基、ヘテロシクリル基及びアリール基は、単独であるか又は別の置換基の一部であるかを問わず、それ自体が、それ自体及び下記に挙げるさらなる置換基から選択される１つ又は複数の基によって必要に応じて置換されていてもよい。
【００４７】
ハロ：−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ及び−Ｉ。
【００４８】
ヒドロキシ：−ＯＨ。
【００４９】
エーテル：−ＯＲ（Ｒはエーテル置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基（Ｃ１〜７アルコキシ基とも称される）、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基（Ｃ３〜２０ヘテロシクリルオキシ基とも称される）又はＣ５〜２０アリール基（Ｃ５〜２０アリールオキシ基とも称される）、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。
【００５０】
ニトロ：−ＮＯ２。
【００５１】
シアノ（ニトリル、カルボニトリル）：−ＣＮ。
【００５２】
アシル（ケト）：−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ（Ｒはアシル置換基、例えばＨ、Ｃ１〜７アルキル基（Ｃ１〜７アルキルアシル若しくはＣ１〜７アルカノイルとも称される）、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基（Ｃ３〜２０ヘテロシクリルアシルとも称される）又はＣ５〜２０アリール基（Ｃ５〜２０アリールアシルとも称される）、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。アシル基の例としては、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３（アセチル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３（プロピオニル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）３（ブチリル）及び−Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ（ベンゾイル、フェノン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５３】
カルボキシ（カルボン酸）：−ＣＯＯＨ。
【００５４】
エステル（カルボキシレート、カルボン酸エステル、オキシカルボニル）：−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ（Ｒはエステル置換基、例えばＣ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基（Ｃ１〜７アルキルエステル）である）。エステル基の例としては、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３及び−Ｃ（＝Ｏ）ＯＰｈが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５５】
アミド（カルバモイル、カルバミル、アミノカルボニル、カルボキサミド）：−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１Ｒ２（Ｒ１及びＲ２は独立して、アミノ基に関して規定されたようなアミノ置換基である）。アミド基の例としては、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ３及び−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、並びにＲ１及びＲ２が、それらが結合する窒素原子と共に、例えばピペリジノカルボニル、モルホリノカルボニル、チオモルホリノカルボニル及びピペラジニルカルボニルにおいて見られるような複素環式構造を形成するアミド基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５６】
アミノ：−ＮＲ１Ｒ２（Ｒ１及びＲ２は独立してアミノ置換基、例えば水素、Ｃ１〜７アルキル基（Ｃ１〜７アルキルアミノ若しくはジＣ１〜７アルキルアミノとも称される）、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基若しくはＣ５〜２０アリール基、好ましくはＨ若しくはＣ１〜７アルキル基であるか、又は「環状」アミノ基の場合、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合する窒素原子と共に、４個〜８個の環原子を有する複素環式環を形成する）。アミノ基の例としては、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−ＮＨＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２及び−ＮＨＰｈが挙げられるが、これらに限定されない。環状アミノ基の例としては、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジノ、ピペラジニル、パーヒドロジアゼピニル、モルホリノ及びチオモルホリノが挙げられるが、これらに限定されない。環状アミノ基はその環上で、本明細書中で規定された置換基のいずれか、例えばカルボキシ、カルボキシレート及びアミドによって置換されていてもよい。
【００５７】
アシルアミド（アシルアミノ）：−ＮＲ１Ｃ（＝Ｏ）Ｒ２（Ｒ１はアミド置換基、例えば水素、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＨ又はＣ１〜７アルキル基、最も好ましくはＨであり、Ｒ２はアシル置換基、例えばＣ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。アシルアミド基の例としては、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ３、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３及び−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｐｈが挙げられるが、これらに限定されない。Ｒ１及びＲ２は共に、例えばスクシンイミジル、マレイミジル及びフタルイミジル：
【００５８】
【化３】
2011519908.tif 000005
【００５９】
において見られるような環状構造を形成し得る。
【００６０】
ウレイド：−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＲ２Ｒ３（Ｒ２及びＲ３は独立して、アミノ基に関して規定されたようなアミノ置換基であり、Ｒ１はウレイド置換基、例えば水素、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基又はＣ５〜２０アリール基、好ましくは水素又はＣ１〜７アルキル基である）。ウレイド基の例としては、−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＮＨＣＯＮＨＭｅ、−ＮＨＣＯＮＨＥｔ、−ＮＨＣＯＮＭｅ２、−ＮＨＣＯＮＥｔ２、−ＮＭｅＣＯＮＨ２、−ＮＭｅＣＯＮＨＭｅ、−ＮＭｅＣＯＮＨＥｔ、−ＮＭｅＣＯＮＭｅ２、−ＮＭｅＣＯＮＥｔ２及び−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨＰｈが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６１】
アシルオキシ（逆エステル（reverse ester））：−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ（Ｒはアシルオキシ置換基、例えばＣ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。アシルオキシ基の例としては、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ３（アセトキシ）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）３、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｐｈ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｃ６Ｈ４Ｆ及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｐｈが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６２】
チオール：−ＳＨ。
【００６３】
チオエーテル（スルフィド）：−ＳＲ（Ｒはチオエーテル置換基、例えばＣ１〜７アルキル基（Ｃ１〜７アルキルチオ基とも称される）、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。Ｃ１〜７アルキルチオ基の例としては、−ＳＣＨ３及び−ＳＣＨ２ＣＨ３が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６４】
スルホキシド（スルフィニル）：−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ（Ｒはスルホキシド置換基、例えばＣ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。スルホキシド基の例としては、−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ３及び−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６５】
スルホニル（スルホン）：−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（Ｒはスルホン置換基、例えばＣ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。スルホン基の例としては、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ３（メタンスルホニル、メシル）、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＦ３、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ３及び４−メチルフェニルスルホニル（トシル）が挙げられるが、これらに限定されない。スルホン置換基は、場合によっては上記で規定されたようなアミノ基であってもよい。これらの基は「アミノスルホニル」基と称され得る。
【００６６】
チオアミド（チオカルバミル）：−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ１Ｒ２（Ｒ１及びＲ２は独立して、アミノ基に関して規定されたようなアミノ置換基である）。アミド基の例としては、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ３、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（ＣＨ３）２及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ２ＣＨ３が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６７】
スルホンアミノ：−ＮＲ１Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（Ｒ１はアミノ基に関して規定されたようなアミノ置換基であり、Ｒはスルホンアミノ置換基、例えばＣ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。スルホンアミノ基の例としては、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２ＣＨ３、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２Ｐｈ及び−Ｎ（ＣＨ３）Ｓ（＝Ｏ）２Ｃ６Ｈ５が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６８】
シロキシ（シリルエーテル）：−ＯＳｉＲ３（ＲはＨ又はＣ１〜７アルキル基である）。シリルオキシ基の例としては、−ＯＳｉＨ３、−ＯＳｉＨ２（ＣＨ３）、−ＯＳｉＨ（ＣＨ３）２、−ＯＳｉ（ＣＨ３）３、−ＯＳｉ（Ｅｔ）３、−ＯＳｉ（ｉＰｒ）３、−ＯＳｉ（ｔＢｕ）（ＣＨ３）２及び−ＯＳｉ（ｔＢｕ）３が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６９】
上述したように、上記で挙げた置換基、例えばＣ１〜７アルキル、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル及びＣ５〜２０アリールを形成する基は、それ自体が置換されていてもよい。したがって、上記定義は置換された置換基を包含する。
異性体、塩、溶媒和物、保護形態及びプロドラッグ
或る特定の化合物は、シス型及びトランス型；Ｅ型及びＺ型；ｃ型、ｔ型及びｒ型；エンド型及びエキソ型；Ｒ型、Ｓ型及びメソ型；Ｄ型及びＬ型；ｄ型及びｌ型；（＋）型及び（−）型；ケト型、エノール型及びエノレート型；シン型及びアンチ型；シンクリナル型及びアンチクリナル型；α型及びβ型；アキシアル型及びエカトリアル型；舟型、いす型、ねじれ型、エンベロープ型及び半いす型；並びにそれらの組み合わせを含む（がこれらに限定されない）１つ又は複数の特定の幾何異性体型、光学異性体型、鏡像異性体型、ジアステレオマー（diasteriomeric）型、エピマー型、立体異性体型、互変異性型、立体配座型又はアノマー型（以下、「異性体」（又は「異性体形態」）と総称される）で存在し得る。
【００７０】
化合物が結晶形態である場合、化合物は多数の異なる多形形態（polymorphic forms）で存在し得る。
【００７１】
本明細書中で使用される場合、互変異性型に関して下記で論考される場合を除いて、「異性体」という用語から、構造（structural (or constitutional)）異性体（すなわち空間内での原子の位置だけでなく、原子間の結合が異なる異性体）が明確に除外されることに留意されたい。例えば、メトキシ基−ＯＣＨ３への言及は、その構造異性体であるヒドロキシメチル基−ＣＨ２ＯＨへの言及とは解釈されない。同様に、オルト−クロロフェニルへの言及は、その構造異性体であるメタ−クロロフェニルへの言及とは解釈されない。しかしながら、或る構造群への言及は、その群の範囲内の構造異性体（structurally isomeric）形態を含み得る（例えば、Ｃ１〜７アルキルはｎ−プロピル及びイソプロピルを含み、ブチルはｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル及びｔｅｒｔ−ブチルを含み、メトキシフェニルはオルト−メトキシフェニル、メタ−メトキシフェニル及びパラ−メトキシフェニルを含む）。
【００７２】
上記の除外は、例えば、以下の互変異性対：ケト／エノール、イミン／エナミン、アミド／イミノアルコール、アミジン／アミジン、ニトロソ／オキシム、チオケトン／エンチオール（enethiol）、Ｎ−ニトロソ／ヒドロキシアゾ（hyroxyazo）、及びニトロ／アシニトロにおいて見られるような互変異性型、例えばケト型、エノール型及びエノレート型には関連しない。
【００７３】
「異性体」という用語には、１つ又は複数の同位体置換を有する化合物が明確に含まれることに留意されたい。例えば、Ｈは１Ｈ、２Ｈ（Ｄ）及び３Ｈ（Ｔ）を含む任意の同位体形態であってもよく、Ｃは１２Ｃ、１３Ｃ及び１４Ｃを含む任意の同位体形態であってもよく、Ｏは１６Ｏ及び１８Ｏを含む任意の同位体形態であってもよい等である。
【００７４】
特に指定のない限り、特定の化合物への言及は、その（完全な又は部分的な）ラセミ混合物及び他の混合物を含む、全てのかかる異性体形態を含む。かかる異性体形態の調製方法（例えば不斉合成）及び分離方法（例えば分別結晶及びクロマトグラフ手段）は、当該技術分野で既知であるか、又は本明細書中で教示される方法若しくは既知の方法を、既知の様式で応用することによって容易に得られる。
【００７５】
特に指定のない限り、特定の化合物への言及は、例えば下記で論考されるようなそのイオン形態及び塩形態も含む。
【００７６】
特に指定のない限り、特定の化合物への言及は、例えば下記で論考されるようなその溶媒和物も含む。
【００７７】
特に指定のない限り、特定の化合物への言及は、例えば下記で論考されるようなそのプロドラッグも含む。
【００７８】
特に指定のない限り、特定の化合物への言及は、例えば下記で論考されるようなその保護形態も含む。
【００７９】
特に指定のない限り、特定の化合物への言及は、例えば下記で論考されるようなその種々の多形形態も含む。
【００８０】
活性化合物の対応する塩、例えば薬学的に許容される塩を調製する、精製する及び／又は取り扱うのが好都合であるか又は望ましい場合がある。薬学的に許容される塩の例は、Berge, et al., "Pharmaceutically Acceptable Salts", J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977)において論考されている。
【００８１】
例えば、化合物が陰イオン性であるか、又は陰イオン性であり得る官能基（例えば、−ＣＯＯＨは−ＣＯＯ−であり得る）を有する場合、塩は好適な陽イオンによって形成され得る。好適な無機陽イオンの例としては、Ｎａ＋及びＫ＋等のアルカリ金属イオン、Ｃａ２＋及びＭｇ２＋等のアルカリ土類陽イオン、並びにＡｌ３＋等の他の陽イオンが挙げられるが、これらに限定されない。好適な有機陽イオンの例としては、アンモニウムイオン（すなわちＮＨ４＋）及び置換アンモニウムイオン（例えばＮＨ３Ｒ＋、ＮＨ２Ｒ２＋、ＮＨＲ３＋、ＮＲ４＋）が挙げられるが、これらに限定されない。幾つかの好適な置換アンモニウムイオンの例は、エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、及びトロメタミン、並びにリシン及びアルギニン等のアミノ酸から誘導されるものである。一般的な第四級アンモニウムイオンの一例はＮ（ＣＨ３）４＋である。
【００８２】
化合物が陽イオン性であるか、又は陽イオン性であり得る官能基（例えば、−ＮＨ２は−ＮＨ３＋であり得る）を有する場合、塩は好適な陰イオンによって形成され得る。好適な無機陰イオンの例としては、以下の無機酸：塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン酸及び亜リン酸から誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない。好適な有機陰イオンの例としては、以下の有機酸：酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール（gycolic）酸、ステアリン酸、パルミチン酸、乳酸、リンゴ酸、パモ酸、酒石酸、クエン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、安息香酸、桂皮酸、ピルビン酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセチルオキシ安息香（acetyoxybenzoic）酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、吉草酸及びグルコン酸から誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない。好適な高分子陰イオンの例としては、以下の高分子酸：タンニン酸、カルボキシメチルセルロースから誘導されるものが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８３】
活性化合物の対応する溶媒和物を調製する、精製する及び／又は取り扱うのが好都合であるか又は望ましい場合がある。「溶媒和物」という用語は、本明細書中では、従来の意味で、溶質（例えば活性化合物、活性化合物の塩）と溶媒との複合体を指すために使用される。溶媒が水である場合、溶媒和物は便宜上、水和物、例えば一水和物、二水和物、三水和物等と称され得る。
【００８４】
活性化合物を化学的に保護された形態で調製する、精製する及び／又は取り扱うのが好都合であるか又は望ましい場合がある。「化学的に保護された形態」という用語は、本明細書中で使用される場合、１つ又は複数の反応性官能基が望ましくない化学反応から保護されている、すなわち保護（protected or protecting）基（マスキング（masked or masiking）基又はブロック（blocked or blocking）基としても知られる）の形態である化合物に関する。反応性官能基を保護することによって、他の保護されていない反応性官能基が関与する反応を、保護基に影響を与えることなく行うことができる。保護基は、通常は後続工程において、分子の残りの部分に実質的に影響を与えることなく除去することができる。例えば、"Protective Groups in Organic Synthesis" (T. Green and P. Wuts; 3rd Edition; John Wiley and Sons, 1999)を参照されたい。
【００８５】
例えば、ヒドロキシ基はエーテル（−ＯＲ）又はエステル（−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ）、例えばｔ−ブチルエーテル；ベンジル、ベンズヒドリル（ジフェニルメチル）、又はトリチル（トリフェニルメチル）エーテル；トリメチルシリル又はｔ−ブチルジメチルシリルエーテル；又はアセチルエステル（−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ３、−ＯＡｃ）として保護され得る。
【００８６】
例えば、アルデヒド基又はケトン基は、それぞれアセタール又はケタールとして保護され得るが、ここでカルボニル基（＞Ｃ＝Ｏ）は、例えば第一級アルコールとの反応によってジエーテル（＞Ｃ（ＯＲ）２）へと変換される。アルデヒド基又はケトン基は、酸の存在下で大過剰の水を用いた加水分解によって容易に再生される。
【００８７】
例えば、アミン基は、例えばアミド又はウレタン、例えばメチルアミド（−ＮＨＣＯ−ＣＨ３）、ベンジルオキシアミド（−ＮＨＣＯ−ＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５、−ＮＨ−Ｃｂｚ）、ｔ−ブトキシアミド（−ＮＨＣＯ−ＯＣ（ＣＨ３）３、−ＮＨ−Ｂｏｃ）、２−ビフェニル−２−プロポキシアミド（−ＮＨＣＯ−ＯＣ（ＣＨ３）２Ｃ６Ｈ４Ｃ６Ｈ５、−ＮＨ−Ｂｐｏｃ）、９−フルオレニルメトキシアミド（−ＮＨ−Ｆｍｏｃ）、６−ニトロベラトリルオキシアミド（−ＮＨ−Ｎｖｏｃ）、２−トリメチルシリルエチルオキシアミド（−ＮＨ−Ｔｅｏｃ）、２，２，２−トリクロロエチルオキシアミド（−ＮＨ−Ｔｒｏｃ）、アリルオキシアミド（−ＮＨ−Ａｌｌｏｃ）、２（−フェニルスルホニル）エチルオキシアミド（−ＮＨ−Ｐｓｅｃ）、又は好適な場合にはＮ−オキシド（＞ＮＯ・）として保護され得る。
【００８８】
例えば、カルボン酸基はエステル、例えばＣ１〜７アルキルエステル（例えばメチルエステル、ｔ−ブチルエステル）、Ｃ１〜７ハロアルキルエステル（例えばＣ１〜７トリハロアルキルエステル）、トリＣ１〜７アルキルシリル−Ｃ１〜７アルキルエステル、若しくはＣ５〜２０アリール−Ｃ１〜７アルキルエステル（例えばベンジルエステル、ニトロベンジルエステル）、又はアミド、例えばメチルアミドとして保護され得る。
【００８９】
例えば、チオール基はチオエーテル（−ＳＲ）、例えばベンジルチオエーテル、アセトアミドメチルエーテル（−Ｓ−ＣＨ２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ３）として保護され得る。
【００９０】
活性化合物をプロドラッグの形態で調製する、精製する及び／又は取り扱うのが好都合であるか又は望ましい場合がある。「プロドラッグ」という用語は、本明細書中で使用される場合、（例えばｉｎ  ｖｉｖｏで）代謝されると所望の活性化合物を生じる化合物に関する。典型的には、プロドラッグは不活性であるか、又は活性化合物よりも活性が低いが、有利な取扱特性、投与特性又は代謝特性をもたらし得る。
【００９１】
例えば、幾つかのプロドラッグは活性化合物のエステル（例えば生理学的に許容される、代謝的に不安定な（metabolically labile）エステル）である。代謝中にエステル基（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ）が切断されて活性薬物を生じる。かかるエステルは、例えば親化合物中の任意のカルボン酸基（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ）のエステル化（適切な場合には、事前に親化合物中に存在する任意の他の反応性基を保護し、続いて必要に応じて脱保護する）によって形成することができる。かかる代謝的に不安定なエステルの例としては、ＲがＣ１〜２０アルキル（例えば−Ｍｅ、−Ｅｔ）、Ｃ１〜７アミノアルキル（例えばアミノエチル、２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エチル、２−（４−モルホリノ）エチル）並びにアシルオキシ−Ｃ１〜７アルキル（例えばアシルオキシメチル、アシルオキシエチル、例えばピバロイルオキシメチル、アセトキシメチル、１−アセトキシエチル、１−（１−メトキシ−１−メチル）エチル−カルボニルオキシエチル（carbonxyloxyethyl）、１−（ベンゾイルオキシ）エチル、イソプロポキシ−カルボニルオキシメチル、１−イソプロポキシ−カルボニルオキシエチル、シクロヘキシル−カルボニルオキシメチル、１−シクロヘキシル−カルボニルオキシエチル、シクロヘキシルオキシ−カルボニルオキシメチル、１−シクロヘキシルオキシ−カルボニルオキシエチル、（４−テトラヒドロピラニルオキシ）カルボニルオキシメチル、１−（４−テトラヒドロピラニルオキシ）カルボニルオキシエチル、（４−テトラヒドロピラニル）カルボニルオキシメチル及び１−（４−テトラヒドロピラニル）カルボニルオキシエチル）であるものが挙げられる。
【００９２】
さらに好適なプロドラッグ形態としては、ホスホン酸塩及びグリコール酸塩が挙げられる。特に、ヒドロキシ基（−ＯＨ）を、クロロジベンジルホスファイトと反応させた後、水素化して、ホスホン酸基−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２を形成することによってホスホン酸プロドラッグとすることができる。かかる基は代謝中にホスファターゼ（phosphotase）酵素によって取り除かれ、ヒドロキシ基を有する活性薬物が生じ得る。
【００９３】
また、幾つかのプロドラッグは酵素によって活性化され、活性化合物、又はさらなる化学反応を受けて活性化合物を生じる化合物を生じる。例えば、プロドラッグは糖誘導体若しくは他のグリコシド抱合体（conjugate）であっても、又はアミノ酸エステル誘導体であってもよい。
さらなる実施形態
ＲＮ１
幾つかの実施形態では、ＲＮ１はＨ及び非置換Ｃ１〜４アルキルから選択される。特に、ＲＮ１はＨ、エチル及びプロピル（例えばイソプロピル）から選択され得る。他の実施形態では、ＲＮ１はメチル及びシクロプロピルから選択され得る。
ＲＣ１
幾つかの実施形態では、ＲＣ１はＨである。
ＲＣ２
幾つかの実施形態では、ＲＣ２はＨである。
【００９４】
他の実施形態では、ＲＣ２は必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキルであり、ここで必要に応じた置換基はＣ１〜７アルキル、Ｃ３〜７ヘテロシクリル、Ｃ５〜７アリール、ハロ、ヒドロキシ、エーテル、ニトロ、シアノ、アシル、カルボキシ、エステル、アミド、アミノ、アシルアミド、ウレイド、アシルオキシ及びチオールから選択され得る。
【００９５】
ＲＣ２がハロである場合、ハロはブロモであり得る。
ＲＣ３
幾つかの実施形態では、ＲＣ３はＨである。
【００９６】
他の実施形態では、ＲＣ３は必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキルであり、ここで必要に応じた置換基はＣ１〜７アルキル、Ｃ３〜７ヘテロシクリル、Ｃ５〜７アリール、ハロ、ヒドロキシ、エーテル、ニトロ、シアノ、アシル、カルボキシ、エステル、アミド、アミノ、アシルアミド、ウレイド、アシルオキシ及びチオールから選択され得る。
【００９７】
ＲＣ３がＯＲＯ２である場合、ＲＯ２はメチル基であり得る。
【００９８】
ＲＸ
幾つかの実施形態では、ＲＸはＨである。
ＲＣ４及びＲＣ５
幾つかの実施形態では、ＲＣ４は必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ３〜１２ヘテロシクリルであり、ＲＣ５はＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択される。これらの実施形態の幾つかにおいては、ＲＣ５はＨである。
【００９９】
これらの実施形態では、ＲＣ４は窒素環原子又は炭素環原子を介して結合していてもよい。ＲＣ４が炭素原子を介して結合している場合、ＲＣ４は単環式、二環式又は三環式であり得る。ＲＣ４が単環式である場合、ＲＣ４は５員環又は６員環、例えばピロリジン、ピペリジン、ピペラジンであり得る。特に注目される基はピロリン−２，５−ジオンをベースとし、その窒素環原子は、例えばＣ５〜６アリール基（例えば４−ヒドロキシフェニル）によって置換されていてもよい。ＲＣ４が三環式である場合、ＲＣ４はヘキサヒドロ−２，５ａ−ジアザ−シクロペンタ［ｃ］ペンタレン−１−オンであり得る。
【０１００】
他の実施形態では、ＲＣ４はＣ（＝Ｏ）ＮＲＮ５ＲＮ６であり、ＲＣ５はＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択される。これらの実施形態の幾つかにおいては、ＲＣ５はＨである。ＲＮ５及びＲＮ６は独立してＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択され得るか、又はＲＮ５及びＲＮ６と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成する。これらの実施形態の幾つかにおいては、ＲＮ５はＨ及びＣ１〜４アルキル（例えばメチル、エチル、プロピル）から選択され、ＲＮ６はＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜４アルキル（例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル）から選択され、ここで必要に応じた置換基はヒドロキシ、アミノ（例えばジメチルアミノ）及びＣ５〜９アリール（例えばフェニル、インドリル）、並びに必要に応じて置換されたＣ５〜６ヘテロシクリル（例えばピペリジニル）（必要に応じた置換基としてはＣ１〜４アルキル（例えばメチル）を挙げることができる）から選択され得る。これらの実施形態の他のものにおいては、ＲＮ５及びＲＮ６と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基（ピペリジニル及びピペラジニルであり得る）を形成するが、これは１つ又は複数（例えば２つ）の必要に応じた置換基であってもよい。必要に応じた置換基はＣ１〜７アルキル（例えばメチル、ヒドロキシエチル）、ヒドロキシ、Ｃ５〜７ヘテロシクリル（例えばモルホリノ、ヒドロキシピペリジニル、ピペリジニル、ヒドロキシエチルピペラジニル（hyroxyethylpiperazinyl）、ピペラジニル）、Ｃ５〜７アリール（例えばトリアゾリル、フェニル）、アミノ（ピリジルエチル−、メチル−アミノ）及びアシル（例えばチオフェニルカルボニル）から選択され得る。
【０１０１】
他の実施形態では、ＲＣ４はＣ（＝Ｏ）ＯＲＯ１であり、ＲＣ５はＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択される。これらの実施形態の幾つかにおいては、ＲＣ５はＨである。ＲＯ１は必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、好ましくは必要に応じて置換されたＣ１〜４アルキル、例えば必要に応じて置換されたメチル及びエチルであり得る。必要に応じた置換基はエーテル、オキシウレイド（−ＣＯＮ（Ｒ１）ＣＯＮＲ２Ｒ３）、Ｃ５〜６アリール及びアミドから選択され得る。アルキルの必要に応じた置換基がエーテルである場合、これはＣ５〜６アリールオキシ、例えば、フェノキシであり得る。アリールオキシ基自体が、例えばアシル（例えばメチルカルボニル）基によってさらに置換されていてもよい。アルキルの必要に応じた置換基（substitutent）がオキシウレイドである場合、ウレイド置換基（Ｒ１）はＨであり、アミノ置換基（Ｒ２、Ｒ３）はＨと、Ｈ及びＣ１〜７アルキル（例えばメチル、エチル、エチレニル、シクロペンチル）から選択される基とであり得る。アルキルの必要に応じた置換基がＣ５〜６アリールである場合、これは１つ又は複数の窒素環原子を含有するＣ６アリール基（例えばピリジン、ピラジン、トリアジン）であり得る。Ｃ５〜６アリール基自体が、例えばアミノ基（例えばＮＨ２、ＮＭｅ２）によって置換されていてもよい。アルキルの必要に応じた置換基がアミドである場合、アミノ置換基はＣ１〜７アルキル基（例えばＣＨ２ＣＦ３）又はＣ５〜６アリール基、例えばオキサゾリル等のＣ５アリール基であり得る。
【０１０２】
他の実施形態では、ＲＣ４はＣ（＝Ｏ）ＮＨＮＨＳＯ２ＲＳ１であり、ＲＣ５はＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択される。これらの実施形態の幾つかにおいては、ＲＣ５はＨである。ＲＳ１は必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリール基、より好ましくは必要に応じて置換されたＣ５〜６アリール基、例えばフェニルであり得る。必要に応じた置換基としては、アルコキシ（例えばＯＣＦ３）、エーテル（例えばＣ（＝Ｏ）ＯＭｅ）及びＣ１〜７アルキル（例えばＣＦ３）を挙げることができる。
【０１０３】
他の実施形態では、ＲＣ４はＯＣ（＝Ｏ）ＮＲＮ７ＲＮ８であり、ＲＣ５はＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択される。これらの実施形態の幾つかにおいては、ＲＣ５はＨである。ＲＮ７はＨであり得る。ＲＮ８は必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリール、例えばＣ５〜６アリール（フェニル等）であり得る。必要に応じた置換基としてはハロ（例えばＣｌ）を挙げることができる。
【０１０４】
他の実施形態では、ＲＣ４はＯＣ（＝Ｏ）ＲＣ８であり、ＲＣ５はＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択される。これらの実施形態の幾つかにおいては、ＲＣ５はＨである。ＲＣ８は必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル（例えば２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシニル）であり得る。
【０１０５】
他の実施形態では、ＲＣ４はＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ２、ＣＨＣ（ＣＮ）２、ＣＨＣ（ＣＮ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２及びカルボキシから選択され、ＲＣ５はＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択される。これらの実施形態の幾つかにおいては、ＲＣ５はＨである。
【０１０６】
他の実施形態では、ＲＣ４及びＲＣ５は、それらが結合する炭素原子と共に、５個又は６個の環原子を含有する必要に応じて置換された式：
【０１０７】
【化４】
2011519908.tif 000006
【０１０８】
（式中、ＱはＯ、Ｎ又はＣＲＱ１＝ＣＲＱ２（式中、ＲＱ１及びＲＱ２は独立してＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択される）を表し、
ＲＣ６はＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択され、
ＲＣ７は必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ３〜１２ヘテロシクリル、ＮＨＣ（＝Ｏ）ＲＣ９、ＣＨ２ＮＲＮ２ＲＮ３及びＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨＲＮ４から選択される）の芳香環を形成する。
【０１０９】
このため、芳香環はベンゼン、フラン又はピロールであり得る。
【０１１０】
幾つかの実施形態では、ＲＣ６はＨである。
【０１１１】
幾つかの実施形態では、ＲＣ７は必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ３〜１２ヘテロシクリルである。これらの実施形態では、ＲＣ７は窒素環原子又は炭素環原子を介して結合していてもよい。ＲＣ７が炭素原子を介して結合している場合、ＲＣ７は単環式、二環式又は三環式であり得る。ＲＣ７が単環式である場合、ＲＣ７は５員環又は６員環、例えばピロリジン、ピペリジン、ピペラジンであり得る。特に注目される基はピロリン−２，５−ジオンをベースとし、その窒素環原子は、例えばＣ５〜６アリール基（例えば４−ヒドロキシフェニル）によって置換されていてもよい。ＲＣ７が三環式である場合、ＲＣ７はヘキサヒドロ−２，５ａ−ジアザ−シクロペンタ［ｃ］ペンタレン−１−オンであり得る。
【０１１２】
他の実施形態では、ＲＣ７はＮＨＣ（＝Ｏ）ＲＣ９（式中、ＲＣ９は必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）である。ＲＣ９は、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択され得る。
【０１１３】
これらの実施形態の幾つかにおいては、ＲＣ９はＣ１〜７アルキル基、特にＣ１〜４アルキル基（例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル）である。必要に応じた置換基はＣ１〜７アルキル、Ｃ３〜７ヘテロシクリル、Ｃ５〜７アリール、ハロ、ヒドロキシ、エーテル、ニトロ、シアノ、アシル、カルボキシ、エステル、アミド、アミノ、アシルアミド、ウレイド、アシルオキシ、チオエステル及びチオールから選択され得る。特に、必要に応じた置換基はアシルオキシ、Ｃ５〜７アリール、アミノ、チオエステル及びＣ３〜７ヘテロシクリルから選択される。ＲＣ９置換基がアシルオキシである場合、アシルオキシ置換基はＣ５〜６ヘテロシクリル（例えばピロリジノン）及びＣ５〜６アリール（例えばフェニル、フラニル）から選択され得るが、ここでＣ５〜６アリール基はＣ５〜６アリール（例えばテトラゾリル）、アシルアミド（例えばシアノメチルアシルアミノ）、ニトロ及びエステル（例えばメチルエステル）から選択される１つ又は複数の置換基（例えば２つの置換基）を有していてもよい。Ｃ５〜６アリール基のさらに可能性のある置換基としては、スルホンアミドが挙げられる。ＲＣ９置換基（subsituent）がアシルオキシである場合、アシルオキシ置換基は、例えばエステル、アシルアミド又はＣ５〜６アリールによってそれ自体が置換されていてもよいＣ１〜４アルキル（例えばメチル、エチレニル）からも選択され得る。ＲＣ９置換基がＣ５〜７アリールである場合、これは例えばアミノスルホニル基（例えばアミノ基がモルホリノであるもの）を有し得るＣ５ヘテロアリール基（例えばチオフェニル）であっても、又はＣ６アリール基（例えばピリミジノン）であってもよい。ＲＣ９置換基がアミノである場合、アミノ置換基は独立してＣ１〜４アルキル（例えばメチル、エチル、イソプロピル）から選択され得る。アミノ置換基（susbtituents）の一方又は両方が、それ自体が例えばアミド（例えば−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２）によって置換されていてもよい。
【０１１４】
代替的には、アミノ基は環状、例えばモルホリノ又はピペラジニル（それ自体がＮ−置換基、例えばアミドメチル（例えば−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２）を有していてもよい）であり得る。ＲＣ９置換基がチオエステルである場合、エステル置換基はＣ５アリール（例えばチアジアゾール（thiadazole））又はＣ６アリール（例えばピリミジノン）であり得るが、これらの基はアミノ（例えば−ＮＨ２）置換基を有していてもよい。ＲＣ９置換基がＣ３〜７ヘテロシクリルである場合、これはジオキソイミダゾリジニル（dioxo-imidzaolininyl）であり得る。
【０１１５】
これらの実施形態の他のものにおいては、ＲＣ９はＣ５〜２０アリール基、特にＣ５〜６アリール基、例えばフェニルである。必要に応じた置換基はＣ１〜７アルキル、Ｃ３〜７ヘテロシクリル、Ｃ５〜７アリール、ハロ、ヒドロキシ、エーテル、ニトロ、シアノ、アシル、カルボキシ、エステル、アミド、アミノ、アシルアミド、ウレイド、アシルオキシ及びチオールから選択され得る。幾つかの実施形態では、（例えばアミド（例えば−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２）によって）それ自体がさらに置換されていてもよい単一の必要に応じた置換基、例えばエーテル（例えばメトキシ）が存在する。
【０１１６】
これらの実施形態の他のものにおいては、ＲＣ９はＣ３〜２０ヘテロシクリル基、特にＣ４〜６ヘテロシクリル基、例えば５，６−ジヒドロ−［１，４］ジオキシニルである。
【０１１７】
他の実施形態では、ＲＣ７はＣＨ２ＮＲＮ２ＲＮ３（式中、ＲＮ２及びＲＮ３は独立してＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択されるか、又はＲＮ２及びＲＮ３と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成する）である。
【０１１８】
幾つかの実施形態では、ＲＮ２はＨ及びＣ１〜４アルキル（例えばメチル、エチル、プロピル、シクロプロピル、プロペニル）から選択され、ＲＮ３は必要に応じて置換されたＣ１〜４アルキル（例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル）から選択されるが、ここで必要に応じた置換基はヒドロキシ、アミノ（例えばジメチルアミノ、エトキシアミノ）及びＣ５〜９アリール（例えばフェニル、インドリル）、並びに必要に応じて置換されたＣ５〜６ヘテロシクリル（例えばピペリジニル）（必要に応じた置換基としてはＣ１〜４アルキル（例えばメチル）を挙げることができる）から選択され得る。
【０１１９】
他の実施形態では、ＲＮ２及びＲＮ３と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成する。これらの実施形態の幾つかにおいては、Ｎ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基は、１つ又は複数（例えば２つ）の必要に応じた置換基を有していてもよいピペリジニル及びピペラジニルであり得る。必要に応じた置換基はＣ１〜７アルキル（例えばメチル、ヒドロキシエチル）、ヒドロキシ、Ｃ５〜７ヘテロシクリル（例えばモルホリノ、ヒドロキシピペリジニル、ピペリジニル、ヒドロキシエチルピペラジニル、ピペラジニル、イミダゾリノニル）、Ｃ５〜７アリール（例えばトリアゾリル、フェニル）、アミノ（ピリジルエチル−、メチル−アミノ）及びアシル（例えばチオフェニルカルボニル）から選択され得る。必要に応じた置換基はスルホニルからも選択され得るが、この場合スルホン置換基はＣ５〜７アリール基（例えばフェニル）であり得る。必要に応じた置換基（subsitituent）がＣ１〜７アルキル基（例えばメチル）である場合、これは例えばフェニル等のＣ５〜７アリール基によって置換されていてもよい。これらの実施形態の他のものにおいては、Ｎ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基はホモピペリジニル及びホモピペラジニルであり得るが、これらは論考されたピペリジニル（piperdinyl）基及びピペラジニル基と同様の形で置換されていてもよい。
【０１２０】
さらなる実施形態では、ＲＣ７はＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨＲＮ４（式中、ＲＮ４は必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル（例えばＣ１〜４アルキル）、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル（例えばＣ５〜７ヘテロシクリル）及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリール（例えばＣ５〜７アリール）から選択される）である。これらの基の必要に応じた置換基はＣ１〜７アルキル、Ｃ３〜７ヘテロシクリル、Ｃ５〜７アリール、ハロ、ヒドロキシ、エーテル、ニトロ、シアノ、アシル、カルボキシ、エステル、アミド、アミノ、アシルアミド、ウレイド、アシルオキシ、アミノスルホニル及びチオールから選択され得る。これらの実施形態の幾つかにおいては、ＲＮ４は必要に応じて置換されたＣ５〜６アリール基（フェニル等）であり、アミノスルホニル（例えばジメチルアミノスルホニル）及びＣ１〜４アルキル置換基（例えばメチル）を有していてもよい。これらの実施形態の他のものにおいては、ＲＮ４は非置換であってもよいＣ１〜４アルキル基（例えばエチル）である。
【０１２１】
幾つかの実施形態では、ＱはＣＲＱ１＝ＣＲＱ２（式中、ＲＱ１はＨ及びＯＨから選択され、ＲＱ２はＨである）である。
或る特定の実施形態の組み合わせ
或る特定の実施形態の組み合わせにおいては、本発明の化合物は式Ｉ’：
【０１２２】
【化５】
2011519908.tif 000007
【０１２３】
の化合物である
（式中、ＸはＣＲＸ及びＮから選択され、
ＲＮ１はＨ、及びＳＨによって置換されていてもよいＣ１〜４アルキルから選択され、
ＲＣ１はＨ及びＳＨから選択され、
ＲＣ２はＨ及び必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキルから選択され、
ＲＣ３はＨ及び必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキルから選択され、
ＲＸはＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択され、
ＲＣ４は必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ３〜１２ヘテロシクリル、及びＣ（＝Ｏ）ＮＲＮ５ＲＮ６（式中、ＲＮ５及びＲＮ６は独立してＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択されるか、又はＲＮ５及びＲＮ６と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成する）から選択され、
ＲＣ５はＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択され、
又はＲＣ４及びＲＣ５が、それらが結合する炭素原子と共に、５個若しくは６個の環原子を含有する必要に応じて置換された式：
【０１２４】
【化６】
2011519908.tif 000008
【０１２５】
（式中、ＱはＯ、Ｎ又はＣＲＱ１＝ＣＲＱ２（式中、ＲＱ１及びＲＱ２は独立してＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択される）を表す）の芳香環を形成し、
ＲＣ６はＨ、ＯＨ及びＮＨ２から選択され、
ＲＣ７は必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ３〜１２ヘテロシクリル、ＮＨＣ（＝Ｏ）ＲＣ９、ＣＨ２ＮＲＮ２ＲＮ３及びＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨＲＮ４（式中、ＲＣ９は必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、ＲＮ２及びＲＮ３は独立してＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択されるか、又はＲＮ２及びＲＮ３と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成し、ＲＮ４は必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）から選択される）。
【０１２６】
或る特定の実施形態の組み合わせにおいては、本発明の化合物は式（Ｉａ）：
【０１２７】
【化７】
2011519908.tif 000009
【０１２８】
の化合物（並びにその異性体、塩、溶媒和物、保護形態及びプロドラッグ）である
（式中、ＲＮ１はＨ及びＣ１〜４アルキルから選択され、
ＲＱ１はＨ及びＯＨから選択され、
ＲＣ７はＮＨＣ（＝Ｏ）ＲＣ９、ＣＨ２ＮＲＮ２ＲＮ３及びＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨＲＮ４（式中、ＲＣ９は必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、ＲＮ２及びＲＮ３は独立してＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択されるか、又はＲＮ２及びＲＮ３と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成し、ＲＮ４は必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）から選択される）。
【０１２９】
別の或る特定の実施形態の組み合わせにおいては、本発明の化合物は式（Ｉｂ）：
【０１３０】
【化８】
2011519908.tif 000010
【０１３１】
の化合物（並びにその異性体、塩、溶媒和物、保護形態及びプロドラッグ）である
（式中、ＲＮ１はＨ及びＣ１〜４アルキルから選択され、
ＲＣ４は必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ３〜１２ヘテロシクリルである）。
【０１３２】
別の或る特定の実施形態の組み合わせにおいては、本発明の化合物は式（Ｉｃ）：
【０１３３】
【化９】
2011519908.tif 000011
【０１３４】
の化合物（並びにその異性体、塩、溶媒和物、保護形態及びプロドラッグ）である
（式中、ＲＮ１はＨ及びＣ１〜４アルキルから選択され、
ＲＣ４は
（ｉ）必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ３〜１２ヘテロシクリル、
（ｉｉ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＮ５ＲＮ６（式中、ＲＮ５及びＲＮ６は独立してＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択されるか、又はＲＮ５及びＲＮ６と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成する）、
（ｉｉｉ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＯ１（式中、ＲＯ１はＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）、
（ｉｖ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨＳＯ２ＲＳ１（式中、ＲＳ１はＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）、
（ｖ）ＯＣ（＝Ｏ）ＲＣ８（式中、ＲＣ８はＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択される）、
（ｖｉ）ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲＮ７ＲＮ８（式中、ＲＮ７及びＲＮ８は独立してＨ、必要に応じて置換されたＣ１〜７アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル及び必要に応じて置換されたＣ５〜２０アリールから選択されるか、又はＲＮ７及びＲＮ８と、それらが結合する窒素原子とが、必要に応じて置換されたＮ含有Ｃ５〜７ヘテロシクリル基を形成する）、並びに
（ｖｉｉ）Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ２、ＣＨＣ（ＣＮ）２、ＣＨＣ（ＣＮ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２及びカルボキシから選択される）。
【０１３５】
上記に示したＲＣ４、ＲＣ７及びＲＱ１に関して上記に示した実施形態は、上記化合物にも適用される。
【０１３６】
これらの例の化合物は本発明の特定の実施形態である。
略語
便宜上、多くの化学的部分を、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、ｎ−プロピル（ｎＰｒ）、イソプロピル（ｉＰｒ）、ｎ−ブチル（ｎＢｕ）、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔＢｕ）、ｎ−ヘキシル（ｎＨｅｘ）、シクロヘキシル（ｃＨｅｘ）、フェニル（Ｐｈ）、ビフェニル（ｂｉＰｈ）、ベンジル（Ｂｎ）、ナフチル（ｎａｐｈ）、メトキシ（ＭｅＯ）、エトキシ（ＥｔＯ）、ベンゾイル（Ｂｚ）及びアセチル（Ａｃ）を含む（これらに限定されない）既知の略称を用いて表す。
【０１３７】
便宜上、多くの化合物（chemical compounds）を、メタノール（ＭｅＯＨ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、イソプロパノール（ｉ−ＰｒＯＨ）、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、エーテル又はジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）、酢酸（ＡｃＯＨ）、ジクロロメタン（塩化メチレン、ＤＣＭ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む（これらに限定されない）既知の略称を用いて表す。
合成
本発明の化合物は市販されているか、又は容易に合成することができる。
本発明の方法
ｐ５３タンパク質
本発明では、Ｙ２２０Ｃ突然変異を保有するｐ５３タンパク質は、野生型の哺乳動物、特にヒトのタンパク質、又はその安定化した変種（version）であり得る。配列番号１（ＡＡＣ１２９７１）は野生型のヒトｐ５３配列である。ヒトｐ５３の使用が好ましい。
【０１３８】
ｐ５３タンパク質はＤＮＡ結合ドメインを含む切断されたｐ５３であってもよい。かかるドメインは概して、ヒト配列の残基９５〜２８９に対応する領域を含む。
【０１３９】
かかるドメインの例は、Joerger et al（参照文献１３）に見られ、例えばヒト配列の残基９４〜３１２に対応する領域又はその切断型（９４〜２９３等）である。
【０１４０】
概して、本発明の方法が、ｐ５３をｉｎ  ｖｉｔｒｏ又は他のモデル系において提供するもののような方法に関する場合、本発明は上記のように完全長ｐ５３タンパク質又は切断ｐ５３タンパク質を使用することができ、１つ又は複数の安定化した変化、例えばＴ−ｐ５３Ｃにおいて見られる１つ又は複数の置換を含んでいてもよい。病変又は腫瘍の治療に関連する本発明の方法に関しては、ｐ５３はそれが存在する細胞に対して固有である。概して、それが存在する細胞に対して固有のｐ５３は、配列番号１の残基２２０に相当する位置での置換を除けば野生型のｐ５３配列に一致する。しかしながら、タンパク質が１つ又は複数の他の突然変異を含むことも可能である。
ｐ５３を安定化する方法
一態様では、本発明は、Ｙ２２０Ｃ突然変異を保有するｐ５３タンパク質を安定化する方法であって、ｐ５３を式（Ｉ）の化合物と接触させることを含む、方法を提供する。かかる方法は例えば、付随の実施例において説明されるような遠心分離分析（analytical centrifugation）又は示差走査熱量測定によってｉｎ  ｖｉｔｒｏで実施することができる。
【０１４１】
「ｐ５３を安定化する」とは、Ｙ２２０Ｃ突然変異を有するｐ５３タンパク質の融解温度を上昇させること、及び／又はかかるタンパク質の半減期を延長することを意味する。
【０１４２】
本発明の方法は、例えばヒト細胞等の哺乳動物の細胞培養物中の、Ｙ２２０Ｃ突然変異を保有するｐ５３を発現する細胞に対しても実施することができる。非ヒト哺乳動物細胞の場合、固有のｐ５３タンパク質に加えて、又はその代わりにヒトｐ５３  Ｙ２２０Ｃタンパク質を発現するように細胞を遺伝子操作してもよい。培養物中の細胞は、例えばヒト若しくは非ヒト哺乳動物被験体の腫瘍、又は細胞株から誘導される初代細胞であり得る。
【０１４３】
一態様では、上記の方法は、細胞におけるｐ５３機能の回復又は改善における式（Ｉ）の化合物の有効性を求めるために、Ｙ２２０Ｃｐ５３タンパク質を有するか、又は有する疑いがあるヒト病変又は腫瘍の初代細胞株又は試料に対して実施することができる。例えば、かかる改善又は回復は、細胞培養物におけるアポトーシス速度が、式（Ｉ）の化合物で処理していない同じ細胞の培養物と比較して増大することを特徴とし得る。
【０１４４】
さらなる態様では、細胞株又は試料に対して実施される上記の本発明の方法がｐ５３機能の改善又は回復をもたらす場合、本発明は、試料を得た被験体に式（Ｉ）の化合物を投与する工程をさらに含み得る。
【０１４５】
「病変」とは、細胞の非癌性増殖、例えば良性又は前癌性の増殖等を意味する。「腫瘍」とは、制御されない細胞分裂が、少なくとも一部はＹ２２０Ｃ突然変異の存在に起因するｐ５３機能の喪失の結果として起こる任意の細胞の癌性増殖を意味する。場合によっては、この突然変異は、細胞中に存在する他の遺伝子に対する１つ又は複数の他の突然変異（癌性細胞の増殖及び拡散に影響を及ぼす）と共に存在する。
【０１４６】
幾つかの態様では、本発明の化合物は、ｐ５３  Ｙ２２０Ｃ突然変異を有する病変又は腫瘍を治療するためにヒト等の哺乳動物被験体に投与され得る。概して、本発明は、ｐ５３機能を改善又は回復するよう有効量の式（Ｉ）の化合物を被験体に投与することを含む。
【０１４７】
本発明をヒトｐ５３  Ｙ２２０Ｃ細胞株が存在する非ヒト動物に対して実施し得ることも想定される。この細胞株は異種移植細胞株であってもよく、又は非ヒト動物が、そのｐ５３遺伝子をヒトＹ２２０Ｃｐ５３遺伝子で置き換えたトランスジェニック非ヒト哺乳動物であってもよい。必要に応じて、遺伝子を、例えば一時的に（すなわち発生の或る特定の時点で）、細胞特異的に又は誘導されることによって（例えばテトラサイクリン誘導性プロモータ）活性化可能なプロモータに連結してもよい。
【０１４８】
非ヒト哺乳動物は齧歯類であり得る。齧歯類としては、ラット、マウス、モルモット、チンチラ、及び実験室研究において使用される同程度の大きさの他の小齧歯類が挙げられる。
【０１４９】
本発明は、任意の或る特定の細胞型にではなく、ｐ５３機能がＹ２２０Ｃ突然変異の存在によって損なわれている任意の病変又は腫瘍によって限定される。かかる突然変異は、例えば白血病、リンパ腫、骨髄腫、プラスマ細胞腫等、及び固形腫瘍に見ることができる。固形腫瘍の例としては、大腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、腎細胞癌、肝癌、子宮頚癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、黒色腫、神経芽細胞腫及び網膜芽細胞腫が挙げられるが、これらに限定されない。
投与
活性化合物又は活性化合物を含む医薬組成物は、全身投与／末梢投与又は所望の作用部位での投与に関わらず、経口投与（例えば服用（ingestion）による）；局所投与（例えば経皮投与、鼻腔内投与、眼投与、口腔投与及び舌下投与を含む）；経肺投与（例えば、例えば口又は鼻を経た、例えばエアロゾルを用いた吸入療法又は吹送療法による）；直腸投与；膣内投与；非経口投与、例えば皮下投与、皮内投与、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、心臓内投与、髄腔内投与、脊髄内投与、嚢内（intracapsular）投与、嚢下投与、眼窩内投与、腹腔内投与、気管内投与、表皮下投与、関節内投与、くも膜下投与及び胸骨内（intrasternal）投与を含む注射による投与；デポー剤の植え込み（例えば皮下又は筋肉内への）を含む（これらに限定されない）任意の好都合な投与経路によって被験体に投与することができる。
【０１５０】
被験体は真核生物、動物、脊椎動物、哺乳動物、齧歯類（例えばモルモット、ハムスター、ラット、マウス）、ネズミ科（例えばマウス）、イヌ科（例えばイヌ）、ネコ科（例えばネコ）、ウマ科（例えばウマ）、霊長類、サル目（simian）（例えばサル（monkey）又は類人猿（ape））、サル（例えばマーモセット、ヒヒ）、類人猿（例えばゴリラ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル）又はヒトであり得る。
製剤
活性化合物を単独で投与することは可能であるが、少なくとも１つの上記で規定された活性化合物を、１つ又は複数の薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤、希釈剤、充填剤、緩衝剤、安定化剤、保存剤、滑沢剤又は当業者に既知の他の材料、及び必要に応じて他の治療薬又は予防薬と共に含む医薬組成物（例えば製剤）として与えるのが好ましい。
【０１５１】
したがって、本発明は、上記で規定された医薬組成物、並びに少なくとも１つの上記で規定された活性化合物を、１つ又は複数の薬学的に許容される担体、賦形剤、緩衝剤、アジュバント、安定化剤又は本明細書中に記載される他の材料と共に混合することを含む、医薬組成物を製造する方法をさらに提供する。
【０１５２】
本明細書中で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、正しい医学的判断の範囲内で、過度の毒性、炎症、アレルギー反応又は他の症状（problem）又は合併症なしに、妥当なリスク・ベネフィット比に応じて被験体（例えばヒト）の組織と接触させて使用するのに好適な化合物、材料、組成物及び／又は投与形態に関する。担体、賦形剤等は各々、製剤の他の成分と相溶性であるという意味でも「許容される」でなくてはならない。
【０１５３】
好適な担体、希釈剤、賦形剤等は、標準的な薬学のテキスト中に見ることができる。例えば、"Handbook of Pharmaceutical Additives", 2nd Edition (eds. M. Ash and I. Ash), 2001 (Synapse Information Resources, Inc., Endicott, New   York, USA)、"Remington's Pharmaceutical Sciences", 20th edition, pub. Lippincott, Williams & Wilkins, 2000、及び"Handbook of Pharmaceutical Excipients", 2nd edition, 1994を参照されたい。
【０１５４】
製剤は単位投与形態で都合よく与えることができ、薬学の分野で既知の任意の方法によって調製することができる。かかる方法は活性化合物を、１つ又は複数の副成分を構成する担体と混合する工程を含む。概して、製剤は、活性化合物を液体担体若しくは微粉化した固体担体、又はその両方と均一かつ密接に混合し、その後必要に応じて生成物を成形することによって調製される。
【０１５５】
製剤は液体、液剤、懸濁液、エマルション、エリキシル剤、シロップ剤、錠剤、ロゼンジ（losenges）、顆粒剤、散剤、カプセル剤、カシェ剤、丸剤、アンプル剤、坐剤、ペッサリー、軟膏剤、ジェル、ペースト、クリーム、スプレー、ミスト、フォーム、ローション剤、オイル、ボーラス、舐剤又はエアロゾル剤の形態であり得る。
【０１５６】
経口投与（例えば服用による）に好適な製剤は、各々が所定量の活性化合物を含有するカプセル剤、カシェ剤若しくは錠剤等の個別の単位、散剤若しくは顆粒剤、水性液体又は非水性液体中の液剤若しくは懸濁液、又は水中油型液体エマルション若しくは油中水型液体エマルション、ボーラス、舐剤、又はペーストとして与えることができる。
【０１５７】
錠剤は、必要に応じて１つ又は複数の副成分と共に、従来の手段、例えば圧縮又は成型することによって製造することができる。圧縮錠剤は、必要に応じて１つ又は複数の結合剤（例えばポビドン、ゼラチン、アラビアゴム、ソルビトール、トラガカント、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、充填剤又は希釈剤（例えばラクトース、微結晶性セルロース、リン酸水素カルシウム）、滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ）、崩壊剤（例えばデンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤又は分散剤又は湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）、及び保存剤（例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル、ソルビン酸）と混合した、易流動性の状態（粉末又は顆粒等）の活性化合物を好適な機械において圧縮することによって製造することができる。成型錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末化合物を、好適な機械において成型することによって製造することができる。錠剤は必要に応じてコーティング又は分割してもよく、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースを、所望の放出プロファイルをもたらすために様々な割合で用いることで、活性化合物の持続放出又は制御放出をもたらすように調剤してもよい。錠剤は必要に応じて、胃以外の消化管の一部での放出をもたらす腸溶コーティングを備えていてもよい。
【０１５８】
局所投与（例えば経皮投与、鼻腔内投与、眼投与、口腔投与及び舌下投与）に好適な製剤は、軟膏剤、クリーム、懸濁液、ローション剤、散剤、液剤、ペースト（past）、ジェル、スプレー、エアロゾル剤又はオイルとして調剤することができる。代替的には、製剤は、活性化合物及び必要に応じて１つ又は複数の賦形剤若しくは希釈剤を含浸させたパッチ又はドレッシング剤（dressing）（包帯若しくは絆創膏等）を含み得る。
【０１５９】
口腔内での局所投与に好適な製剤としては、風味付けした基剤（basis）（通常はスクロース及びアラビアゴム又はトラガカント）中に活性化合物を含むロゼンジ、不活性基剤（ゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアラビアゴム）中に活性化合物を含むトローチ（pastilles）、並びに好適な液体担体中に活性化合物を含む洗口液が挙げられる。
【０１６０】
眼への局所投与に好適な製剤としては、活性化合物が好適な担体、特に活性化合物用の水性溶媒中に溶解又は懸濁されている点眼薬も挙げられる。
【０１６１】
経鼻投与に好適な製剤（担体が固体である）としては、鼻から吸い込む形で、すなわち鼻に近づけた粉末の容器からの鼻腔を介した急速吸入によって投与される、例えば約２０ミクロン〜約５００ミクロンの範囲内の粒径を有する粗粉末が挙げられる。例えば鼻腔用スプレー、点鼻薬としての投与、又は噴霧器によるエアロゾル投与による投与に好適な製剤（担体が液体である）としては、活性化合物の水性溶液又は油性溶液が挙げられる。
【０１６２】
吸入による投与に好適な製剤としては、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン（dichoro-tetrafluoroethane）、炭酸ガス又は他の好適なガス等の好適な噴射剤を用いる、加圧パックからのエアロゾルスプレーとして与えられるものが挙げられる。
【０１６３】
皮膚を介した局所投与に好適な製剤としては、軟膏剤、クリーム及びエマルションが挙げられる。軟膏剤に調剤する場合、活性化合物は必要に応じて、パラフィン系軟膏基剤又は水混和性軟膏基剤のいずれかと共に使用され得る。代替的には、活性化合物は水中油型クリーム基剤と共にクリームに調剤してもよい。必要に応じて、クリーム基剤の水相は例えば、多価アルコール、すなわち２つ以上のヒドロキシル基を有するアルコール（プロピレングリコール、ブタン−１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール及びポリエチレングリコール並びにそれらの混合物等）を少なくとも約３０％（ｗ／ｗ）含んでいてもよい。局所製剤は、皮膚又は他の患部を介した活性化合物の吸収又は浸透を促進する化合物を含み得るのが望ましい。かかる皮膚浸透促進剤としては、ジメチルスルホキシド及び関連類似体が挙げられる。
【０１６４】
局所エマルションとして調剤する場合、油性相は必要に応じて、乳化剤（別名、エマルジェント（emulgent）として知られる）のみを含んでいても、又は少なくとも１つの乳化剤と、脂肪若しくは油、又は脂肪及び油の両方との混合物を含んでいてもよい。好ましくは、親水性乳化剤は安定化剤として働く親油性乳化剤と共に含まれる。油及び脂肪の両方を含むのも好ましい。乳化剤（複数可）は安定化剤（複数可）と共に又はそれなしで、いわゆる乳化ろうを構成し、ろうは油及び／又は脂肪と共に、クリーム製剤の油性分散相を形成するいわゆる乳化軟膏基剤を構成する。
【０１６５】
好適なエマルジェント及びエマルション安定化剤としては、Ｔｗｅｅｎ  ６０、Ｓｐａｎ  ８０、セトステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、モノステアリン酸グリセリン及びラウリル硫酸ナトリウムが挙げられる。製剤に好適な油又は脂肪の選択は、医薬エマルション製剤に使用されることが多い大抵の油における活性化合物の溶解度は非常に低い場合があるため、所望のコスメティック（cosmetic）特性を達成するという点に基づく。したがって、クリームは、チューブ又は他の容器からの漏れを避けるのに好適な粘稠度を有し、べとつかず、着色せず、水で落とせる製品であるのが好ましい。直鎖又は分岐鎖、一塩基性又は二塩基性のアルキルエステル、例えばジイソアジペート（di-isoadipate）、ステアリン酸イソセチル、ヤシ脂肪酸のプロピレングリコールジエステル、ミリスチン酸イソプロピル、オレイン酸デシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、パルミチン酸２−エチルヘキシル、又はＣｒｏｄａｍｏｌ  ＣＡＰとして知られる分岐鎖エステルの混合物等を使用することができ、最後の３つが好ましいエステルである。これらは所要の特性に応じて単独で使用しても、又は組み合わせて使用してもよい。代替的には、白色軟パラフィン及び／又は流動パラフィン等の高融点脂質、又は他の鉱油を使用してもよい。
【０１６６】
直腸投与に好適な製剤は、例えばココアバター又はサリチレートを含む好適な基剤を伴う坐剤として与えられ得る。
【０１６７】
膣内投与に好適な製剤は、活性化合物に加えて、当該技術分野で適切であると知られる担体を含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ジェル、ペースト、フォーム又はスプレー製剤として与えられ得る。
【０１６８】
非経口投与（例えば皮膚注射、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射及び皮内注射を含む注射による）に好適な製剤としては、酸化防止剤、緩衝剤、保存剤、安定化剤、静菌剤、及び製剤を対象とする受容者の血液と等張にする溶質を含有し得る水性及び非水性の等張、パイロジェンフリーの滅菌注射液；並びに懸濁剤及び増粘剤、並びに化合物を血液成分又は１つ又は複数の器官に標的付けるように設計されたリポソーム又は他の微粒子系を含み得る、水性及び非水性の滅菌懸濁液が挙げられる。かかる製剤において使用される好適な等張媒体の例としては、塩化ナトリウム注射液、リンガー溶液又は乳酸加リンガー注射液が挙げられる。典型的には、溶液中の活性化合物の濃度は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、例えば約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１μｇ／ｍｌである。製剤は、単回投与又は複数回投与（multi-dose）用の密閉容器、例えばアンプル及びバイアルに入れて与えても、使用の直前に滅菌液体担体、例えば注射用蒸留水を添加するだけで済むフリーズドライ（freeze-dried）（凍結乾燥（lyophilised））状態で保管してもよい。即時注射液及び懸濁液は滅菌した粉末、顆粒及び錠剤から調製することができる。製剤は、活性化合物を血液成分又は１つ又は複数の器官に標的付けるように設計されたリポソーム又は他の微粒子系の形態であってもよい。
用量
活性化合物及び活性化合物を含む組成物の適切な用量は、患者毎に変わり得ることを理解されよう。最適用量の決定は概して、治療効果のレベルと本発明の治療の任意のリスク又は有害な副作用との釣り合いを取ることを含む。選択される用量レベルは、特定の化合物の活性、投与経路、投与時間、化合物の排泄率、治療期間、併用される他の薬物、化合物及び／又は材料、並びに患者の年齢、性別、体重、状態、全身の健康（general health）及び既往歴を含む（これらに限定されない）様々な因子に依存する。化合物の量及び投与経路は、最終的に医師の判断により決定されるが、用量は一般に、危険な又は有害な副作用を実質的に引き起こすことなく、所望の効果を達成する局所濃度を作用部位で達成するものである。
【０１６９】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与は、治療の全過程にわたって単回投与で、連続的又は断続的に（例えば適切な間隔での分割投与で）達成することができる。最も効果的な投与手段及び用量を決定する方法は当業者に既知であり、治療法に使用される製剤、治療法の目的、処理される標的細胞及び治療される被験体によって異なる。単回投与又は複数回投与は、治療を行う医師によって選択される服用レベル及びパターンで行うことができる。
【０１７０】
式（Ｉ）の化合物は、他の抗癌剤と併用して投与してもよい。投与は同時投与、個別投与又は連続投与であり得る。「同時」投与とは、式（Ｉ）の化合物及び第２の抗癌剤を、被験体に同じ投与経路によって単回で投与することを意味する。
【０１７１】
「個別」投与とは、式（Ｉ）の化合物及び第２の抗癌剤を、被験体に同時に行われる２つの異なる投与経路によって投与することを意味する。これは例えば、一方の薬剤が点滴によって投与され、他方が点滴中に経口で与えられる場合に行われ得る。
【０１７２】
「連続」投与とは、２つの薬剤を異なる時点で投与することを意味するが、但し、第２の薬剤を投与する時点で、先に投与された薬剤の活性は被験体中に存在し、維持されている。例えば、被験体中の腫瘍細胞に損傷を与えるように別の抗癌剤を先に投与し、続いて式（Ｉ）の化合物をｐ５３機能がもたらされ、アポトーシスが誘導されるように投与することができる。概して、連続投与（dose）は、２つの薬剤の２つ目を第１の薬剤の４８時間以内、好ましくは２４時間以内、例えば１２時間、６時間、４時間、２時間又は１時間以内に投与するよう行われる。
【０１７３】
被験体に投与する式（Ｉ）の化合物の量は最終的に、治療される被験体及び疾患の性質によって決まる。
【０１７４】
第２の薬剤は、治療される疾患に関して望ましい特性を有する任意の既知の薬剤であり得る。かかる薬剤としては、Ｔａｘｏｌ（登録商標）、Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）等のタキソイド、又は他の化学療法剤、例えばシスプラチン（及び他のプラチンインターカレート化合物）、エトポシド及びリン酸エトポシド、ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、ＣＣＮＵ、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、イホスファミド等が挙げられる。薬剤は生物剤、例えばインターフェロン（ＩＦＮ）−γ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α、ＴＮＦ−β及び同様のサイトカイン等（これらに限定されない）の腫瘍増殖を阻害するタンパク質、又はアンジオスタチン及びエンドスタチン等の抗血管新生因子、又は可溶型の血管新生因子受容体（可溶性ＶＧＦ／ＶＥＧＦ受容体を含む（これらに限定されない））等のＦＧＦ若しくはＶＥＧＦの阻害剤であってもよい。
【０１７５】
本発明を以下の実施例によって説明する。
【実施例】
【０１７６】
実験手順
タンパク質の発現及び精製
結晶学的実験については、Ｔ−ｐ５３Ｃの残基９４〜３１２をコードするＤＮＡである、ヒトｐ５３コアドメイン突然変異体Ｍ１３３Ｌ／Ｖ２０３Ａ／Ｎ２３９Ｙ／Ｎ２６８Ｄを、ＮｄｅＩ制限部位及びＥｃｏＲＩ制限部位を用いて、ｐＲＳＥＴ（Ａ）ベクターからｐＥＴ−２４ａ（＋）ベクター（Novagen）のポリリンカー領域へとサブクローニングした（１３）。Ｙ２２０Ｃのさらなる点突然変異を、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ部位特異的突然変異誘発キット（Stratagene）を用いて導入し、「構築物１」を得た。この突然変異体を、大腸菌（Escherichia coli）ＢＬ２１（ＤＥ３）又はＣ４１（ＤＥ３）（球状タンパク質及び膜タンパク質の可溶性発現の改善のために選択したＢＬ２１の派生株）において発現させた（参照文献Ａ１）。
【０１７７】
他の全ての実験については、Ｔ−ｐ５３Ｃの残基９４〜３１２をコードするＤＮＡを、ＢａｍＨＩ制限部位及びＥｃｏＲＩ制限部位を用いて、改良型ｐＥＴ−２４ａ（＋）ベクターに挿入した。Ｎ末端６ｘ−Ｈｉｓタグ及びＣ末端ＴＥＶプロテアーゼ切断部位ＥＮＬＹＦＱＧ（ＧＳ）（参照文献Ａ３）と融合させた、バチルス・ステアロサーモフィルス（B. stearothermophilus）のジヒドロリポイルアセチルトランスフェラーゼドメイン（リポイルドメイン、ＥＣ  ２．１．１２、（参照文献Ａ２））のアミノ酸１〜８５をコードする配列を、ｐＥＴ−２４ａ（＋）のＮｄｅＩ部位とＢａｍＨＩ部位との間に挿入し、この改良型ベクターを作製した。Ｙ２２０Ｃのさらなる点突然変異を、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ部位特異的突然変異誘発キット（Stratagene）を用いて導入し、「構築物２」を得た。
【０１７８】
精製プラスミドＤＮＡのシークエンシングをLark Technologies, Inc.（Essex）に委託した。どちらの鎖も標準のＴ７プロモータプライマー及びＴ７ターミネータプライマーを用いてシークエンシングされた。どちらの構築物（１及び２）も正しいＤＮＡ配列を有することが確認された。
【０１７９】
全てのベクターを、冷凍保存コンピテント大腸菌細胞（ＢＬ２１（ＤＥ３）又はＣ４１（ＤＥ３））に熱パルス形質転換した。形質転換したばかりのＢＬ２１／Ｃ４１細胞を、３７℃で１２時間〜１６時間ＴＹＥ／Ｋａｎ／Ｇｌｕ寒天プレート上で増殖させた。その後、細胞コロニーを、５０μｇ／ｍｌのカナマイシン（最終濃度）を含有する１０ｍｌ〜１０００ｍｌ（発現培地の総量によって決まる）の２×ＴＹ培地に移した。このスターター培養物を、３７℃、２５０ｒｐｍでおよそ３時間、又は６００ｎｍでの光学密度（ＯＤ６００）が約０．５に達するまでインキュベートした。次いで、培養物を、最終濃度５０μｇ／ｍｌのカナマイシン（抗生物質耐性に応じて異なる）を添加した、０．８Ｌの２×ＴＹ培地又はＭ９最小培地（ＮＭＲ研究用の１５Ｎ及び／又は１３Ｃ同位体標識ｐ５３の発現のため）を含有する２Ｌ容フラスコに対する接種材料として使用した。スターター培養物の１０００倍希釈物を、発現培養物を接種するのに使用した。培養物を３７℃、２５０ｒｐｍでＯＤ６００が０．６〜０．９に達するまでインキュベートした。温度を１８℃に下げ、発現培養物に１００μＭ  ＺｎＳＯ４を添加し、１ｍＭイソプロピルβ−Ｄ−チオガラクトシド（ＩＰＴＧ）を用いて発現を誘導し、１８℃の誘導温度、２５０ｒｐｍで１４時間〜１８時間増殖させた。細胞を、４℃に冷却したＳｏｒｖａｌｌ  ＲＣ  ３Ｂ  Ｐｌｕｓローターにおける４５００ｒｐｍで３０分間の遠心分離によって採取した。タンパク質精製をすぐに行わない場合は、細胞ペレットを液体窒素中で急速冷凍し、−２０℃で保管した。
【０１８０】
１５Ｎ又は１３Ｃ／１５Ｎ標識タンパク質の発現については、２×ＴＹの代わりにＭ９最小培地を以下の処方に従って使用した：１２．８ｇのＮａ２ＨＰＯ４（無水）、３．０ｇのＮａＨ２ＰＯ４、０．５ｇのＮａＣｌ、２ｍｌの１Ｍ  ＭｇＳＯ４、２ｍｌのＳｏｌｕｔｉｏｎ  Ｑ、１．０ｇの１５ＮＨ４Ｃｌ、３０ｍｌの６ｇ／ｌグルコース溶液又は３０ｍｌの４ｇ／ｌ  １３Ｃ−グルコース溶液及び１０ｍｌのビタミンミックス。「Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｑ」は、１０００ｍｌのＨ２Ｏ中、５ｇのＦｅＣｌ２・４Ｈ２Ｏ、１８４ｍｇのＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、６４ｍｇのＨ３ＢＯ３、１８ｍｇのＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、４ｍｇのＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、３４０ｍｇのＺｎＣｌ２、６０５ｍｇのＮａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ、４０ｍｇのＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ、８ｍｌの５Ｍ  ＨＣｌから成る。「ビタミンミックス」は、１００ｍｌの１×Ｍ９塩溶液中、５０ｍｇのチアミン、１０ｍｇのｄ−ビオチン、１０ｍｇの塩化コリン、１０ｍｇの葉酸、１０ｍｇのナイアシンアミド、１０ｍｇのＤ−パントテン酸、１０ｍｇのピリドキサール、１ｍｇのリボフラビンから成る。
【０１８１】
精製クロマトグラフィーを、Ｂｉｏｃａｄ  Ｖｉｓｉｏｎシステム及びＡＫＴＡシステムを用いて行った。全てのバッファーは使用前に０．２２μｍフィルタを用いて濾過した。
「構築物１」を以下のプロトコルを用いて精製した：
採取した細胞ペレットをまず、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．２）、５ｍＭ  ＤＴＴ、１錠／５０ｍｌの「Ｃｏｍｐｌｅｔｅ」ＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤、並びに少量のＤＮアーゼ及びＲＮアーゼから成る溶解バッファー中に再懸濁し、ホモジナイズした。これは常に氷上に置いていた。元の細胞培養物１Ｌ当たり２５ｍｌの溶解バッファーを使用した。細胞をＥｍｕｌｓｉｆｌｅｘ  Ｃ５高圧ホモジナイザー（Glen Creston）を用いて破砕した。溶解物を、４℃に冷却したＳｏｒｖａｌｌ  ＳＳ３４ローターにおいて１７０００ｒｐｍで４０分間遠心分離した。上清を０．２２μｍ  Ｓｔｅｒｉｃｕｐ（商標）ディスポーザブル真空フィルタ装置（Millipore）を用いて濾過した。これを次いで２５ｍＭ  ＮａＰｉ（ｐＨ７．５）＋５ｍＭ  ＤＴＴで予め平衡化したＰｏｒｏｓ  ２０ＨＱ陽イオン交換カラムに充填し、０−１ＭのＮａＣｌ勾配で２０カラム体積にわたって溶出させた。プールした画分を予冷した２５ｍＭ  ＮａＰｉ（ｐＨ７．５）＋５ｍＭ  ＤＴＴで１０倍に希釈し、塩濃度を５０ｍＭ未満とした。これを次いでＨｅｐａｒｉｎ  ＨＰカラムにロードし、１０ＣＶの洗浄後、ＮａＣｌ濃度を２段階で４００ｍＭ（５ＣＶ）及び１Ｍ（５ＣＶ）まで増加させることによって溶出させた。最終精製工程を、２５ｍＭ  ＮａＰｉ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ及び５ｍＭ  ＤＴＴから成るバッファーで平衡化したＳｕｐｅｒｄｅｘ（登録商標）７５  ２６／６０  Ｐｒｅｐ  Ｇｒａｄｅ  ＨｉＬｏａｄカラム（Amersham）を用いて行った。画分をプールし、４℃に予冷したＭｅｇａｆｕｇｅ  ２Ｒ（Heraeus）卓上遠心分離機において、分画分子量１００００のＣｅｎｔｒｉｐｒｅｐ遠心濃縮装置（Ｕｌｔｒａｃｅｌ  ＹＭ−１０）を用いて濃縮した。タンパク質の純度をＳＤＳ  ＰＡＧＥによって判定したが、純度は９５％超であった。試料を液体窒素中で急速冷凍し、−８０℃で保管した。
「構築物２」を以下のプロトコルを用いて精製した：
採取した細胞ペレットをまず、５０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４／Ｎａ２ＨＰＯ４バッファー（ＮａＰｉ）（ｐＨ８．０）、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  イミダゾール、５ｍＭ  ＴＣＥＰ、１錠／５０ｍｌの「Ｃｏｍｐｌｅｔｅ」ＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤、並びに少量のＤＮアーゼ及びＲＮアーゼから成る溶解バッファー中に再懸濁し、ホモジナイズした。これは常に氷上に置いていた。元の細胞培養物１Ｌ当たり２５ｍｌの溶解バッファーを使用した。細胞をＥｍｕｌｓｉｆｌｅｘ  Ｃ５高圧ホモジナイザー（Glen Creston）を用いて破砕した。溶解物を、４℃に冷却したＳｏｒｖａｌｌ  ＳＳ３４ローターにおいて１７０００ｒｐｍで４０分間遠心分離した。上清を０．２２μｍ  Ｓｔｅｒｉｃｕｐ（商標）ディスポーザブル真空フィルタ装置（Millipore）を用いて濾過した。これを次いで５０ｍＭ  ＮａＰｉ（ｐＨ８．０）、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  イミダゾール、５ｍＭ  ＴＣＥＰで予め平衡化した４×５ｍｌ  ＨｉｓＴｒａｐ（商標）ＦＦ粗Ｎｉカラムにロードし、１０−２５０ｍＭのイミダゾール勾配で６カラム体積にわたって溶出させた。タンパク質発現の収率に応じて、溶解物を少量ずつロードするか、及び／又はフロースルーをＴ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃの大部分が回収されるまで再ロードした。プールした画分を、発現タンパク質から６×ＨＩＳ＋リポイル部を、ＥＮＬＹＦＱとＧＧＳとの間のＴＥＶ認識部位で切ることによって切断するタバコエッチウイルスプロテアーゼ（ＴＥＶ）で４℃で一晩消化させた。切断の程度をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析及びＳＤＳ−ＰＡＧＥによってモニタリングした。切断の完了後、溶液を予冷した２５ｍＭ  ＮａＰｉ（ｐＨ７．５）、５ｍＭ  ＤＴＴで１０倍に希釈し、塩濃度を３０ｍＭ未満とした。これを次いでＨｅｐａｒｉｎ  ＨＰカラムにロードし、１０ＣＶの洗浄後、ＮａＣｌ濃度を、６ＣＶを４００ｍＭまでの勾配で増加させ、その後２段階で１Ｍ（５ＣＶ）及び２Ｍ（５ＣＶ）まで増加させることによって溶出させた。タンパク質の純度をＳＤＳ  ＰＡＧＥによって判定した。純度が９５％超である場合、タンパク質を直接２５ｍＭ  ＮａＰｉ（ｐＨ７．２）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＤＴＴに対して６時間〜８時間透析し、これを透析バッファーを交換した後少なくとも１回繰り返した。純度が９５％未満のタンパク質画分を、最終精製工程として、２５ｍＭ  ＮａＰｉ（ｐＨ７．２）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ及び５ｍＭ  ＤＴＴから成るバッファーで平衡化したＳｕｐｅｒｄｅｘ（登録商標）７５  ２６／６０  Ｐｒｅｐ  Ｇｒａｄｅ  ＨｉＬｏａｄカラム（Amersham）を用いたゲル濾過に供した。画分をプールし、４℃に予冷したＭｅｇａｆｕｇｅ  ２Ｒ（Heraeus）卓上遠心分離機において、分画分子量１００００のＣｅｎｔｒｉｐｒｅｐ遠心濃縮装置（Ｕｌｔｒａｃｅｌ  ＹＭ−１０）を用いて濃縮した。タンパク質の純度をＳＤＳ  ＰＡＧＥによって判定したが、純度は９５％超であった。試料を液体窒素中で急速冷凍し、−８０℃で保管した。
【０１８２】
タンパク質濃度を、Gill and von Hippel（参照文献Ａ４）によって記載されるように分光光度法により測定した。Ｔ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃの２８０ｎｍでのモル吸光係数（ε２８０）をそのアミノ酸配列から算出したが、ε２８０＝１６５９０ｃｍ−１Ｍ−１であった。
試料調製及び１Ｈ／１５Ｎ−ＨＳＱＣを用いたＮＭＲスクリーニング
Ｔ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃの均一に１５Ｎ標識したコアドメインを発現させ、上記のプロトコルに従って精製した。低分子量化合物をｄ６−ＤＭＳＯ中に溶解し、１０ｍＭ原液を作製した。化合物混合物を化学シフトマッピングによってスクリーニングするために、各１０μｌの４つの異なる化合物を混ぜ合わせ、この混合物２５μｌを２５μｌのＤ２Ｏ及び５００μｌの７０μＭ  Ｔ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃ（２５ｍＭ  ＮａＰｉ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ及び５ｍＭ  ＤＴＴ中、ｐＨ７．２）に添加した。各々の化合物の最終濃度は、ｄ６−ＤＭＳＯ濃度４．５％（ｖ／ｖ）で１１４μＭであった。ＮＭＲ試料は調製した直後に（freshly prepared）、ＮＭＲチューブを低圧下で（チューブを軽くタッピングしながら）ポンピングし、アルゴンガス流を用いて大気圧に戻すサイクルを繰り返すことによって脱気した後、アルゴン下で密閉しておいた。これは試料の安定性を維持するために行った。
【０１８３】
１Ｈ／１５Ｎ  ＨＳＱＣスペクトルは、１Ｈ／１３Ｃ／１５Ｎ三重共鳴反転（inverse）低温５ｍｍプローブを用いたBrukerのＡｖａｎｃｅ  ＩＩ＋７００分光計及びＡｖａｎｃｅ８００分光計（Bruker）で、以下のパラメータ：１６スキャン、ｔ１における複合ポイント数（complex points）１２８、リサイクル時間（recycle time）０．９５秒、及びｔ２における総ポイント数１０２４を用いて２９３Ｋで得た。BrukerのＴｏｐＳｐｉｎ  ２．０ソフトウェアを用いて、ｔ１における複合ポイント数を前方複素線形予測によって２倍にし、シフト二乗サインベル窓関数を両方の次元に適用した後、ゼロ充填及びフーリエ変換を行った。１Ｈ周波数次元においては２．０Ｈｚ／ポイント、１５Ｎ周波数次元においては４．７Ｈｚ／ポイントのデジタル分解能を使用した。スペクトルをＳｐａｒｋｙ  ３．１１３（Ａ５）を用いて分析した。化学シフトは、加重平均（average weighted）１Ｈ／１５Ｎ化学シフト差（Δδ（１Ｈ／１５Ｎ）＝｜Δδ（１Ｈ）｜＋｜Δδ１５Ｎ｜）／５）が０．０４ｐｐｍを超える場合に有意であると見なした（Hajduk et al., 1997）。独自の（in-house）スクリプトを使用して、化学シフト差を分析し、それらをＰＤＢタンパク質構造上にマッピングした。
【０１８４】
結合が検出された場合、個々の化合物の４つの別個の試料（各々２２７μＭの最終濃度で存在する）をスクリーニングすることによってデコンボリューションを遂行した。
【０１８５】
或る特定の化合物については、異なる濃度のアレイを使用し、飽和結合方程式（Δδ＝ｃ＋ａ＊［Ｌ］／（ＫＤ＋［Ｌ］））を関連のシフトするピークの濃度依存化学シフト変化に当てはめることによって、ＫＤ値（ＫＤ  ＮＭＲ）を導いた。
キャピラリーＤＳＣを用いた熱変性研究
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を用いてＴ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃに対するリガンドの安定化効果を調べた。可逆２状態システムについては、融解温度Ｔｍは、折り畳まれた状態と折り畳まれていない状態とが等しく存在する転移温度である。しかしながら、ｐ５３は温度上昇とともに可逆的に変性しないため、観測されたＴｍは真の融解温度ではなく見かけの融解温度（Ｔｍａｐｐ）であり、派生データは加熱速度に応じて半定量的である。
【０１８６】
ＤＳＣ実験を、有効セル容量が約１２５μｌのMicrocalのＶＰキャピラリーＤＳＣ機器（Microcal，Amherst，MA）を用いて行った。タンパク質試料を、２５ｍＭ  ＮａＰｉ（ｐＨ７．２）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＤＴＴにバッファー交換した。測定における試料及び参照セル又は試料セルと、ベースラインスキャンにおける両方のセルとの間の違いがタンパク質の存在のみとなるように、このバッファー＋各濃度のリガンド／ＤＭＳＯをベースラインスキャンに使用した。最終濃度２０μＭのＴ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃを使用した。２．５バールの圧力（窒素）をセルに加えた。１０℃〜８５℃の温度を２５０℃／時間の速度、４秒間のデータの取り込み時間間隔（filtering period）で、フィードバックゲイン／モードを中に設定してスキャンした。データをＯＲＩＧＩＮソフトウェア（Microcal）で分析した。
蛍光を用いた熱変性研究
これは古典的手順（例えば参照文献Ａ６）を適用して行った。熱変性（Thermal unfolding）を、２７０Ｋ／時間で、２５ｍＭ  ＮａＰｉ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ及び５ｍＭ  ＤＴＴ（ｐＨ７．２）中、１０μＭのタンパク質濃度で、Ｒｏｔｏｒ−ｇｅｎｅ  ６０００（Corbett Life Science）を用いて、色素Ｓｙｐｒｏオレンジ（５×）の結合によりモニタリングした。
分析超遠心（ＡＵＣ）によるＴ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃへの小分子の結合の測定
分析超遠心は、重力下での分子の分布を研究するものである。平衡沈降実験では、溶質はセルの底部に集まり、濃度勾配が形成される。この勾配の傾斜度（steepness）は、溶質の分子量に依存し、分子が重いほど勾配が急になる。小分子は５００Ｄａ程度の分子量を有するものであり、ｐ５３コアドメインは２４．５ｋＤａの巨大タンパク質分子である。選択された実験条件下では、小分子は非常に浅く、事実上無視することのできる勾配を形成するが、ｐ５３は非常に明確な沈降プロファイルを示す。小分子がｐ５３に結合する場合、小分子はｐ５３の沈降プロファイルを呈する。小分子の分散を、シグナルがタンパク質の吸光度（例えば３１０ｎｍ、３４０ｎｍ及び３８０ｎｍ）によって影響されないよう、３００ｎｍ超の波長での吸光度によりモニタリングすることによって（この方法を成功させるにはリガンドはこのスペクトル範囲で光を吸収する必要がある）、小分子がタンパク質に結合しているかを決定することが可能であり、多くの場合、解離定数を測定することが可能である。この方法はタンパク質によるリガンドの完全な結合を必要としないため、弱い（１０μＭ〜１ｍＭ）解離定数を測定するのに特に適している。この方法はタンパク質濃度が解離定数にほぼ等しい場合に最も効果的である。データ分析の詳細な説明については参照文献（参照文献Ａ７）を参照されたい。
【０１８７】
平衡沈降実験は、Ｔｉ−５０ローター及び６セクターセルを用いたBeckmanのＸＬ−Ｉ超遠心機で、３００００ｒｐｍ及び４００００ｒｐｍの速度、１０℃で行った。最大で２１個の試料を同時に分析した。バッファー条件は２５ｍＭ  ＮａＰｉ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＤＴＴであった。試料は、選択された波長の１つ及び１００μＭのＴ−ｐ５３−Ｙ２２０Ｃで吸光度が０．３〜０．５であり、１５μＭ〜４０μＭの濃度でリガンドを含有していた。
時間依存蛍光研究
アンフォールディング速度解析を、Friedler et al.（参照文献Ａ８）に記載されるように５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．２）、１ｍＭ  トリス−２−カルボキシエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）中３７℃で、Ｃａｒｙ  Ｅｃｌｉｐｓｅ蛍光分光光度計（付属の（supplied）Ｃａｒｙソフトウェアによって制御される）を用いて、２８０ｎｍでの励起に対する３４０ｎｍでのトリプトファンの発光に従って行った。
化合物
試験した化合物は、Asinexから入手したＰＫ３９０〜ＰＫ３９２、並びにInterBioScreenから入手したＰＫ４０２、ＰＫ４０７及びＰＫ４０８以外は、全てENAMINE Ltd.（23 Alexandra Matrosova Street，01103 KIEV，Ukraine）から入手した。
結果
以下の表は、キャピラリーＤＳＣを用いた熱変性研究の結果を示すが、ΔＴｍとは２５０μＭの試験化合物を添加した際のＴｍの上昇分である。与えられたダネット有意性検定（Ｐ）値は、Ｔｍの変化が有意でない確率の計算値である。
【０１８８】
【化１０】
2011519908.tif 000012
【０１８９】
【表１−１】
2011519908.tif 000013
【０１９０】
【表１−２】
2011519908.tif 000014
【０１９１】
【表１−３】
2011519908.tif 000015
【０１９２】
【表１−４】
2011519908.tif 000016
【０１９３】
【化１１】
2011519908.tif 000017
【０１９４】
【表２】
2011519908.tif 000018
【０１９５】
【化１２】
2011519908.tif 000019
【０１９６】
【表３】
2011519908.tif 000020
【０１９７】
１Ｈ／１５Ｎ−ＨＳＱＣ
化合物ＰＫ０５９：
【０１９８】
【化１３】
2011519908.tif 000021
【０１９９】
【表４】
2011519908.tif 000022
【０２００】
ＡＵＣ
【０２０１】
【表５】
2011519908.tif 000023
【０２０２】
熱安定化及び変性速度
示差走査熱量測定から、ＰＫ０８３がＴ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃを濃度依存的に安定化することが観察された。Ｔ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃは不可逆的に変性し、その見かけのＴｍは加熱速度に応じて変化する。非常に急速な加熱では、この不可逆的プロセスが平衡よりも遅いため、測定されたＴｍはその真の値に近似となる。Ｔｍは２．５ｍＭ  ＰＫ０８３によって３１６Ｋから２℃近く上昇し、データは単純結合によって安定化に関して予想される方程式に適合し、ＫＤ近似値は３１６Ｋ〜３１８Ｋで１４０±７３μＭである。
【０２０３】
Ｔ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃの３１０Ｋ（３７℃）での変性速度を、ＰＫ０８３に対する単純結合モデルに適合させた。リガンドの非存在では、タンパク質は３．８分の半減期を有していた。これはＰＫ０８３の飽和濃度では１５．７分に増大した。
Ｘ線結晶学方法
非対称単位中の分子が２つである空間群Ｐ２１２１２１のＴ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃの結晶を、以前に記載された条件下（参照文献Ｂ１）でシッティングドロップ蒸気拡散法によって２１℃で成長させた。ＰＫ０８３を、ＰｈｉＫａｎ０８３の濃度を２時間にわたって増加させ、低温バッファー（１９％ポリエチレングリコール４０００、２０％グリセロール、１００ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．２）、１５０ｍＭ  ＫＣｌ）の段階的添加によって、Ｔ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃの結晶中に浸漬させた。最終濃度が１０ｍＭに達した後、浸漬をさらに３０分間継続し、その後結晶を液体窒素中で急速冷凍した。１．５Å分解能に設定したＸ線データは、Diamond Light SourceにてビームラインＩ０４上で１００Ｋで収集した。データ処理はＭｏｓｆｌｍ（参照文献Ｂ２）及びＳｃａｌａ（参照文献Ｂ３）を用いて行った。構造解析（solution）及びリファインメントをＣＮＳ（参照文献Ｂ４）を用いて行った。開始モデルとして遊離Ｔ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃ（ＰＤＢエントリー：２Ｊ１Ｘ）の構造を用いた初回の剛体リファインメントの後、複合体の構造を、ＣＮＳによるリファインメントの反復サイクル及びＭＡＩＮによる手動モデル構築（参照文献Ｂ５）によってリファインメントした。水分子を、ＣＮＳ及び手動モデル構築内において実行される水ピック（water pick）オプションを用いて構造に付加した。リファインメントのこの段階では、ＰＫ０８３は鎖Ｂのモデルに組み込まれており、構造をさらにリファインメントした（選択された側鎖の代替的立体配座の取り込みを含む）。鎖Ａ中のキャビティについては、鎖Ｂと同じ結合様式であるが、低占有率で結合するＰＫ０８３、及び非結合状態の水分子ネットワーク（配位結合（coordinates）は最終モデルに含まれない）に起因する密度の有意差が観察された。データ収集及びリファインメントの統計値は表１中に示す。
【０２０４】
ＰＫ０８３との複合体におけるＴ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃの結晶構造を図１に示す。図１Ａは、ＰＫ０８３との複合体におけるＴ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃ（鎖Ｂ）の全体的なリボン構造の図である。ＰＫ０８３はその分子表面との棒モデルとして緑色で示される。ＰＫ０８３は、該タンパク質の既知の機能性界面から離れたタンパク質表面上の突然変異によって誘導された亀裂と結合する。２つの代替的立体配座をとる突然変異部位でのＣｙｓ２２０の側鎖は橙色で強調している。図１Ｂは、３．０σで等高線を示した（contoured）、Ｔ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃの鎖Ｂに結合したＰＫ０８３の｜ＦＯ−ＦＣ｜シミュレーテッドアニーリングオミットマップである。図１Ｃは、ＰｈｉＫａｎ０８３結合部位の立体図である。リガンドから５Åの距離内の選択されたｐ５３残基は、灰色の棒モデルで示される。タンパク質表面は半透明の灰色で強調される。図１Ｄは、Ｔ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃの、その遊離形態（ＰＤＢコード：２Ｊ１Ｘ  鎖Ｂ；緑色）及びＰＫ０８３結合形態（黄色）における重ね合わせであり、リガンド結合の際の小さな構造変化を示す。ＰＫ０８３は灰色の棒モデルとして示される。小さな赤色の球は、リガンド結合の際に変位するリガンド非結合（ligand-free）構造中の水分子を示す。
【０２０５】
中央のカルバゾール部分は亀裂中にほとんど埋もれており、９−エチル基が疎水性ポケットの最深部を占める（図１Ｃ）。結合には疎水性パッキング相互作用が大きく寄与するようである。エチル基は、２つの代替的立体配座をとる突然変異残基Ｃｙｓ２２０のスルフヒドリル基、及び多数の疎水性側鎖（Ｐｈｅ１０９、Ｌｅｕ１４５、Ｖａｌ １４７及びＬｅｕ２５７）に密着しており、それによりリガンドをポケットに繋ぎ止める。平面カルバゾール環系は、結合亀裂の片側のＰｒｏ２２２及びＰｒｏ２２３、並びに反対側のＶａｌ １４７及びＰｒｏ １５１の疎水性側鎖間に挟まれる。環窒素は、野生型構造中のチロシン残基のヒドロキシル基の位置に隣接する（１．０Å距離）。Ｎ−メチルメタンアミン部分は、Ａｓｐ２２８の主鎖カルボニルと水素結合を形成する（２．８Å距離）。突然変異体へのリガンド結合の際には非常に小さな構造変化しか起こらない。ＰｈｉＫａｎ０８３から５Å範囲内の残基（残基１０９、１４５〜１４７、１５０、１５１、２２０〜２２３、２２８〜２３０及び２５７）を重ね合わせると、二乗平均平方根偏差は０．３Åとなる（全原子）。最も有意な変化がＴｈｒ１５０の側鎖で観察されたが、これは結合時に最大で１．４Å変位し、それによりポケットの入り口を広げる（図１Ｄ）。
【０２０６】
【表６】
2011519908.tif 000024
【０２０７】
さらなる結果
インドール誘導体１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド：
【０２０８】
【化１４】
2011519908.tif 000025
【０２０９】
及びＮ−（９−エチル−９Ｈ−カルバゾール−３−イル）−２，２，２−トリフルオロ−アセトアミド：
【０２１０】
【化１５】
2011519908.tif 000026
【０２１１】
は、Ｔ−ｐ５３Ｃ−Ｙ２２０Ｃに結合することがＮＭＲ分光法によって示され、その融解温度を上昇させることが示されている。
【０２１２】
蛍光を用いたさらなる熱変性研究を、上記に記載される以下の化合物に対して行い、下記表に提示される結果を得た。記載される場合、Ｓ．Ｅ．は計算標準誤差である。
【０２１３】
【表７】
2011519908.tif 000027
【０２１４】
蛍光を用いた熱変性研究を以下の化合物に対して行い、下記表に提示される結果を得た。記載される場合、Ｓ．Ｅ．は計算標準誤差である。
【０２１５】
【化１６】
2011519908.tif 000028
【０２１６】
【表８−１】
2011519908.tif 000029
【０２１７】
【表８−２】
2011519908.tif 000030
【０２１８】
【表８−３】
2011519908.tif 000031
【０２１９】
【表８−４】
2011519908.tif 000032
【０２２０】
【化１７】
2011519908.tif 000033
【０２２１】
【表９】
2011519908.tif 000034
【０２２２】
【化１８】
2011519908.tif 000035
【０２２３】
【表１０】
2011519908.tif 000036
【０２２４】
【表１１】
2011519908.tif 000037
【０２２５】
【化１９】
2011519908.tif 000038
【０２２６】
【表１２−１】
2011519908.tif 000039
【０２２７】
【表１２−２】
2011519908.tif 000040
【０２２８】
【表１２−３】
2011519908.tif 000041
【０２２９】
【化２０】
2011519908.tif 000042
【０２３０】
【表１３−１】
2011519908.tif 000043
【０２３１】
【表１３−２】
2011519908.tif 000044
【０２３２】
【表１３−３】
2011519908.tif 000045
【０２３３】
【化２１】
2011519908.tif 000046
【０２３４】
【表１４】
2011519908.tif 000047
【０２３５】
【表１５−１】
2011519908.tif 000048
【０２３６】
【表１５−２】
2011519908.tif 000049
【０２３７】
或る特定の化合物の結合を測定するさらなる研究を上記のＮＭＲ技法を用いて行ったが、幾つかの化合物は修正値を得るためにさらに試験した。結果を下記に提示する。
【０２３８】
【表１６】
2011519908.tif 000050
【０２３９】
【表１７−１】
2011519908.tif 000051
【０２４０】
【表１７−２】
2011519908.tif 000052
【図１】
2011519908.tif 000058
【配列表】
2011519908000001.app
【国際調査報告】
2011519908.tif 000059
2011519908.tif 000060
2011519908.tif 000061