(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）［式中、Ｒ1〜Ｒ4は明細書に記載された意義と同義である。］の化合物、該化合物の製造方法および該化合物を含有する医薬に関する。本発明の化合物は、抗増殖および分化誘導活性を示し、したがって、ヒトまたは動物における癌等の疾患の治療に有用である。2011519966.tif 000039
2011519966.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2011519966.tif 000032
［式中、Ｒ1は水素；低級アルキル；シクロアルキル；ヘテロシクリル；アリールまたはヘテロアリールであり；そして
これら全ての基は非置換であってもよいし、
ハロゲン；
非置換のまたはハロゲンで１回もしくは複数回置換された低級アルキル；
低級アルコキシ；
シクロアルキル；
シアノ；
−ＮＲaＲb；
−ＯＣＦ3；または
−Ｓ(Ｏ)2−低級アルキル
で１回または複数回置換されていてもよく；
ここで、Ｒa／Ｒbは互いに独立して低級アルキルまたはシクロアルキルであり、あるいはそれらが結合している窒素原子と一緒になって４〜６員環のヘテロシクリルを形成していてもよく；
Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4は独立して
水素；
ハロゲン；
非置換のまたはヒドロキシで１回置換された低級アルキル；
低級アルコキシ；
ヒドロキシ；
ヘテロシクリル；
【化２】
2011519966.tif 000033
；または
−ＮＲＲ’
から選択され、
ここで、Ｒ／Ｒ’は互いに独立して水素；ヒドロキシで置換された低級アルキル；−Ｃ(Ｏ)−低級アルキル；または同一のもしくは異なる低級アルキルであり；そして
ｎは０，１または２であり；
あるいは
Ｒ2およびＲ3はそれらが結合している炭素原子と一緒になって４〜６員環のシクロアルキルを形成していてもよく、ここで、１個の炭素原子は窒素原子、酸素原子または硫黄原子で置換されていてもよい。］
の化合物またはその薬学的に活性な塩、ラセミ混合物、エナンチオマー、光学異性体もしくは互変異性体。
【請求項２】
Ｒ1が、それぞれが非置換であってもよいし、ハロゲン；非置換のまたはハロゲンで１回もしくは複数回置換された低級アルキル；低級アルコキシ；シクロアルキル；シアノ；ＮＲaＲb；−ＯＣＦ3；または−Ｓ(Ｏ)2−低級アルキルで１回または複数回置換されていてもよいフェニルまたはピリジニルであり；そして
残りの全ての置換基は請求項１と同義である、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
Ｒ1が、ハロゲン；低級アルキル；−ＣＦ3；シクロプロピル；シアノ；−ＯＣＦ3；または−Ｓ(Ｏ)2−低級アルキルから独立して選択された置換基で１回または２回置換されたフェニルであり；
Ｒ2が、水素；ヒドロキシ；メトキシ；ピペリジニル；ピロリジニル；または−ＮＲＲ’であり、ここで、Ｒ／Ｒ’は互いに独立して水素、ヒドロキシで置換された低級アルキル、−Ｃ(Ｏ)−低級アルキル、または同一のもしくは異なる低級アルキルであり；そして
Ｒ3，Ｒ4が水素であり；あるいは
Ｒ2およびＲ3が、それらが結合している炭素原子と一緒になって４〜６員環のシクロアルキルを形成していてもよく、ここで、１個の炭素原子は酸素原子で置換されていてもよい、請求項１または２記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
Ｒ1が、シクロアルキルまたはヘテロシクリルであり、そして
残りの全ての置換基が請求項１と同義である、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項５】
Ｒ1がシクロペンチル、シクロヘキシル、ピペリジニルまたはテトラヒドロピランであり；
Ｒ2がヒドロキシであり；そして
Ｒ3およびＲ4が水素である、請求項１または４記載の化合物。
【請求項６】
化合物が、
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-シクロプロピル-フェニルカルバモイル)-((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-クロロ-フェニルカルバモイル)-(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-ブロモ-フェニルカルバモイル)-((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-ブロモ-フェニルカルバモイル)-((R)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(1S,4S)-(4-ブロモ-フェニルカルバモイル)-2-オキサ-5-アザ-ビシクロ[2.2.1]ヘプタ-5-イル-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[((R)-3-ジメチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-(4-トリフルオロメチル-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-(4-トリフルオロメチル-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-(4-トリフルオロメチル-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-(4-イソプロピル-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-クロロ-フェニルカルバモイル)-((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-シアノ-フェニルカルバモイル)-((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-フルオロ-フェニルカルバモイル)-((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-(4-イソプロピル-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-シクロプロピル-フェニルカルバモイル)-(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-シアノ-フェニルカルバモイル)-(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-(4-フルオロ-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-ブロモ-フェニルカルバモイル)-(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(2-フルオロ-4-トリフルオロメチル-フェニルカルバモイル)-((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-(6-トリフルオロメチル-ピリジン-3-イルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-(4-トリフルオロメトキシ-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-3-｛4-[[3-(アセチル-メチル-アミノ)-ピロリジン-1-イル]-(4-トリフルオロメチル-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-N-(2-アミノ-フェニル)-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-(4-｛(4-ブロモ-フェニルカルバモイル)-[3-(1-ヒドロキシ-1-メチル-エチル)-ピロリジン-1-イル]-メチル｝-フェニル)-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-[4-((4-ブロモ-フェニルカルバモイル)-｛3-[エチル-(2-ヒドロキシ-エチル)-アミノ]-ピロリジン-1-イル｝-メチル)-フェニル]-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-ブロモ-フェニルカルバモイル)-(3-ピペリジン-1-イル-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；または
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-(4-メタンスルホニル-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド
である請求項１記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項７】
医薬として使用するための請求項１〜６のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】
請求項１〜６記載の化合物の少なくとも１種を薬学的に許容し得る補助剤とともに含む医薬組成物。
【請求項９】
癌、特に固形腫瘍および血液学的腫瘍の治療のための請求項１〜６のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
癌、特に固形腫瘍および血液学的腫瘍の治療のための医薬を製造するための、請求項１〜６のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１１】
請求項１記載の式（Ｉ）の化合物を製造する方法であって、
式：
【化３】
2011519966.tif 000034
の化合物を
式：
【化４】
2011519966.tif 000035
の化合物とＴＥＡおよびＤＣＭの存在下で反応させて、
式：
【化５】
2011519966.tif 000036
の化合物を生じさせ、これをＬｉＯＨおよびメタノールの存在下で反応させて、
式：
【化６】
2011519966.tif 000037
の化合物を生じさせ、これをＲ1ＮＨ2ならびにＰｙＢｒｏＰ、ＤＩＰＥＡおよびＤＣＭの存在下で反応させて、
式：
【化７】
2011519966.tif 000038
の化合物を生じさせ、これを塩酸およびメタノールの存在下で反応させて、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物を生じさせる、ここで、置換基Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は全て請求項１と同義である、前記方法。
【請求項１２】
明細書に実質的に記載された新規化合物、方法および使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な抗腫瘍物質および薬学的に許容し得るその塩、これらの新規化合物の製造方法ならびにそれらを含有する医薬に関する。本発明の化合物は、抗増殖および分化誘導活性を有しており、その結果として、腫瘍細胞の増殖阻害、アポトーシス誘導および浸潤阻害を生じさせる。また、本発明は、癌等の疾患の治療のための、および、対応する医薬の製造のための、上記化合物の使用に関する。
【０００２】
本発明の化合物は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の阻害物質であり、したがって、抗増殖および分化誘導活性を示し、その結果として、腫瘍細胞の増殖阻害、アポトーシス誘導および浸潤阻害を生じさせる。
【背景技術】
【０００３】
転写制御は、細胞分化、増殖およびアポトーシスにおける重要な事象である。一連の遺伝子の転写活性化は細胞の運命を決定し、この理由ゆえ、転写は様々な因子によって厳重に制御されている。転写制御メカニズムの１つには、ＤＮＡ三次構造の変化が含まれ、これは、転写因子がその標的ＤＮＡセグメントに接近する可能性を調節することによって転写に影響を与える。ヌクレオソームの完全性は、コアヒストンのアセチル化状態によって制御されている。低アセチル化状態では、ヌクレオソームは緊密に凝集しており、したがって、転写は許容されない。一方、コアヒストンのアセチル化によってヌクレオソームは緩み、その結果、転写が許容される。ヒストンのアセチル化状態は、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）およびヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の活性バランスによって制御されている。最近、ＨＤＡＣ阻害剤が、幾つかのタイプの癌細胞、例えば、結腸癌細胞、Ｔ細胞リンパ腫細胞および赤白血病細胞において増殖を停止させてアポトーシスを誘導させることが判明した。もしアポトーシスが癌の進行に関して重要な因子であるなら、ＨＤＡＣ阻害剤は、有効なアポトーシス誘導剤として、癌の治療のための有望な薬剤である（Koyama, Y., 等, Blood 96 (2000) 1490-1495）。
【０００４】
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）は、ヒストンおよび非ヒストンタンパク質性基質におけるリジン残基の脱アセチル化に関与する多タンパク質複合体の主要な酵素成分である。ＨＤＡＣは、酵母ＨＤＡＣであるＲｐｄ３、Ｈｄａ１およびＳｉｒ２に対する配列相同性に従って、３つの主要なクラスに分類することができる。Ｒｐｄ３に相同なクラスＩのＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ１，２，３および８）は、主に核内に局在しており、ほとんどの組織で発現しているようである。Ｈｄａ１に相同なクラスＩＩのＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ４，５，６，７，９，１０）は、様々な制御シグナルおよび細胞内状態に依存して、核と細胞質とを行き来できるとともに、組織特異的発現パターンを有する。これらのＨＤＡＣは、さらにクラスＩＩａ（ＨＤＡＣ４，５，７，９）およびクラスＩＩｂ（ＨＤＡＣ６，１０）に分類することができる。Ｓｉｒ２に相同なクラスＩＩＩのＨＤＡＣは、機構的にクラスＩおよびＩＩのＨＤＡＣとは区別されるＮＡＤ+依存性デアセチラーゼであり、標準的なＨＤＡＣ阻害剤、例えば、トリコスタチンＡ、トラポキシンＢまたはＳＮＤＸ−２７５によって阻害されない。このように、ＨＤＡＣは、配列類似性、細胞局在の傾向、組織発現パターンおよび酵素機構に基づいて３つのクラスに分類することができる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
クラスＩのＨＤＡＣは、特に、腫瘍細胞に対する抗増殖作用と緊密に関連している。例えば、ＨＤＡＣ１−３の薬理学的阻害は、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤ｐ２１の誘導およびそれに伴う細胞周期の停止を引き起こす。クラスＩＩａのＨＤＡＣは、ＨＤＡＣ３／ＳＭＲＴ／Ｎ−ＣｏＲ複合体およびＭＥＦ２と関連し、筋細胞遺伝子発現（Oncogene 2007, 26, 5450-5467に概説されている）および免疫応答（Biochemical Pharmacology 2007, 74, 465-476）の制御において重要な役割を有することが知られている。それらの特異的な抗増殖機能ゆえ、クラスＩのＨＤＡＣの選択的阻害は、より低い毒性で抗腫瘍効果を達成するために望ましいかもしれない。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の化合物は、クラスＩＩａのＨＤＡＣよりもクラスＩのＨＤＡＣに対して増大した効力および選択性を示す。この効力および選択性は、典型的には酵素選択性アッセイでは存在しない細胞中の関連多タンパク質複合体との関連においてＨＤＡＣサブタイプ活性を評価するレポーター遺伝子アッセイによって評価される。本発明の化合物は、クラスＩＩａのＨＤＡＣの阻害と関連する毒性を低減することができる細胞内選択性を有する。
【０００７】
ＷＯ２００７／１００６５７には、細胞分化誘導物質として、関連するが構造的に異なるｏ−フェニレンジアミン誘導体が記載されている。また、同一タイプの化合物がＷＯ２００７／０８７１３０の主題である。これらの出願に記載された化合物は、もっぱら、安息香酸の誘導体でモノアシル化されたｏ−フェニレン誘導体である。しかしながら、向上した治療特性、ほんの数例を挙げれば、増大した活性、減少した毒性、良好な溶解性および／または向上した薬物動態プロファイルを有する新規化合物の必要性は残ったままである。
【０００８】
モノアシル化ｏ−フェニレンジアミンは、対応するベンズイミダゾールの調製のための前駆物質として当技術分野で公知であり、そのような調製方法は、例えば、DE A 2 062 265; FR 2 167 954; Rastogi, R., and Sharma, S., Indian J. Chem., Sect. B, 21B (5) (1982) 485-487; Moll, R., 等, Z. Chem. 17 (1977) 133-134; および Hassan, H., 等, Indian J. Chem. 39B (2000) 764-768等に記載されている。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の化合物は、抗増殖および分化誘導活性を有し、その結果として、腫瘍細胞の増殖阻害、アポトーシス誘導および浸潤阻害を生じさせるＨＤＡＣ阻害物質であることが判明した。したがって、これらの化合物は、ヒトまたは動物における癌等の疾患の治療に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
（原文記載なし）
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、式（Ｉ）：
【化１】
2011519966.tif 000003
［式中、Ｒ1は水素；低級アルキル；シクロアルキル；ヘテロシクリル；アリールまたはヘテロアリールであり；そして
これら全ての基は非置換であってもよいし、
ハロゲン；
非置換のまたはハロゲンで１回もしくは複数回置換された低級アルキル；
低級アルコキシ；
シクロアルキル；
シアノ；
−ＮＲaＲb；
−ＯＣＦ3；または
−Ｓ(Ｏ)2−低級アルキル
で１回または複数回置換されていてもよく；
ここで、Ｒa／Ｒbは互いに独立して低級アルキルまたはシクロアルキルであり、あるいはそれらが結合している窒素原子と一緒になって４〜６員環のヘテロシクリルを形成していてもよく；
Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4は独立して
水素；
ハロゲン；
非置換のまたはヒドロキシで１回置換された低級アルキル；
低級アルコキシ；
ヒドロキシ；
ヘテロシクリル；
【化２】
2011519966.tif 000004
；または
−ＮＲＲ’
から選択され、
ここで、Ｒ／Ｒ’は互いに独立して水素；ヒドロキシで置換された低級アルキル；−Ｃ(Ｏ)−低級アルキル；または同一のもしくは異なる低級アルキルであり；そして
ｎは０，１または２であり；
あるいは
Ｒ2およびＲ3はそれらが結合している炭素原子と一緒になって４〜６員環のシクロアルキルを形成していてもよく、ここで、１個の炭素原子は窒素原子、酸素原子または硫黄原子で置換されていてもよい。］
の化合物およびその薬学的に活性な塩、ラセミ混合物、エナンチオマー、光学異性体または互変異性体に関する。
【００１２】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容し得る塩およびプロドラッグならびに医薬を製造するためのこれらの化合物の使用を包含する。
【００１３】
本明細書中の「低級アルキル」という用語は、１〜８個、好ましくは１〜６個、さらに好ましくは１〜４個の炭素原子を含有する直鎖状または分岐鎖状の飽和アルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１−ブチル、２−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル等が挙げられる。好ましい「Ｃ1−Ｃ8アルキル」基は、１、２または３個の炭素原子を有する。
【００１４】
本明細書中の「低級アルコキシ」という用語は、−Ｏ−アルキルという基を意味し、ここでの「アルキル」は上記と同義であり、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｉ−ブトキシ、２−ブトキシ、ｔ−ブトキシ等が挙げられる。好ましいアルコキシ基は１〜４個の炭素原子を有する基である。
【００１５】
本明細書中の「シクロアルキル」という用語は、融合していてもよいし単結合を介して結合していてもよい１個または２個の環からなる飽和環状炭化水素であって、３〜８個、好ましくは３〜６個の炭素原子を含有するものを意味する。そのような３〜８員環のシクロアルキル環の具体例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロオクチル、オクタヒドロ−インデン、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロヘキシル等が挙げられる。
【００１６】
本明細書中の「ヘテロシクリル」という用語は、上記に定義した３〜８員環の単環式または二環式のシクロアルキルであって、４個以下の炭素原子、好ましくは１、２または３個の炭素原子が酸素原子、窒素原子または硫黄原子で置換されているものを意味する。その具体例としては、特に限定されるわけではないが、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、２−オキサ−５−アザ−ビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、［１，４］オキサチアニル、アゼパニル、［１，４］ジアゼパニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、［1，２，３］トリアゾリジニル、イミダゾリジニル、チアゾリジニル、アゼチジニル等が挙げられる。
【００１７】
「アリール」という用語は、６〜１０個の炭素原子を含有するとともに、融合していてもよいし単結合を介して結合していてもよい１個または２個の環からなる芳香族または部分芳香族炭化水素を意味する。その具体例としては、フェニル、ビフェニル、インデニルまたはナフチルが挙げられる。
【００１８】
「ヘテロアリール」という用語は、５〜１０個の炭素原子を含有するとともに、融合していてもよいし単結合を介して結合していてもよい１個または２個の環からなる芳香族または部分芳香族炭化水素であって、４個以下、好ましくは１、２または３個の炭素原子が酸素原子、窒素原子または硫黄原子で置換され得るものを意味する。そのような芳香族複素環の具体例としては、特に限定されるわけではないが、ピロリル、チオフェニル、フラニル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、ピリジニル、ピラジニル、トリアジニル、テトラジニル、キノリニル、キノキサリニル、クロマニル、ベンゾイミダゾリル、インドリル、ベンゾ［ｂ］チオフェニル等が挙げられる。
【００１９】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。
【００２０】
本明細書中の「複数回置換される」という用語は、５回以下置換されること、好ましくは４回以下、最も好ましくは２または３回置換されることを意味する。
【００２１】
１または複数のキラル中心を有する一般式（Ｉ）の化合物は、ラセミ体または光学活性体のいずれかで存在し得る。ラセミ化合物は、公知の方法によってエナンチオマーに分離することができる。好ましくは、結晶化によって分離し得るジアステレオマー塩は、光学活性な酸、例えば、Ｄ−またはＬ−酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸またはカンファースルホン酸との反応によってラセミ混合物から形成される。
【００２２】
本発明の化合物は、それらの薬学的に許容し得る塩の形態で存在してもよい。「薬学的に許容し得る塩」とは、式（Ｉ）の化合物の生物学的有効性および特性を保持するとともに、毒性のない適当な有機もしくは無機酸または有機もしくは無機塩基から形成される標準的な酸付加塩または塩基付加塩を意味する。酸付加塩としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸等の無機酸から誘導されたもの、および、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸等の有機酸から誘導されたものが挙げられる。塩基付加塩としては、例えば、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、および水酸化テトラメチルアンモニウム等の水酸化第４級アンモニウムから誘導されたものが挙げられる。医薬化合物の塩への化学修飾は、薬剤師に周知の技術であり、化合物の物理的および化学的安定性、吸湿性、流動性ならびに溶解性を向上させることができる。例えば、Bastin R.J., 等, Organic Process Research & Development 2000, 4, 427-435; または in Ansel, H., 等, In: Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 6th ed. (1995), pp. 196 and 1456-1457 に記載されている。
【００２３】
本発明のある好ましい態様では、
Ｒ1が、それぞれが非置換であってもよいし、ハロゲン；非置換のまたはハロゲンで１回もしくは複数回置換された低級アルキル；低級アルコキシ；シクロアルキル；シアノ；ＮＲaＲb；−ＯＣＦ3；または−Ｓ(Ｏ)2−低級アルキルで１回または複数回置換されていてもよいフェニルまたはピリジニルであり；そして
残りの全ての置換基は上記と同義である、上記式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２４】
本発明の別の好ましい態様では、
Ｒ1が、ハロゲン；低級アルキル；−ＣＦ3；シクロプロピル；シアノ；−ＯＣＦ3；または−Ｓ(Ｏ)2−低級アルキルから独立して選択された置換基で１回または２回置換されたフェニルであり；
Ｒ2が、水素；ヒドロキシ；メトキシ；ピペリジニル；ピロリジニル；または−ＮＲＲ’であり、ここで、Ｒ／Ｒ’は互いに独立して水素、ヒドロキシで置換された低級アルキル、−Ｃ(Ｏ)−低級アルキル、または同一のもしくは異なる低級アルキルであり；そして
Ｒ3，Ｒ4が水素であり；あるいは
Ｒ2およびＲ3が、それらが結合している炭素原子と一緒になって４〜６員環のシクロアルキルを形成していてもよく、ここで、１個の炭素原子は酸素原子で置換されていてもよい、上記式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２５】
本発明のさらに別の好ましい態様では、
Ｒ1が、シクロアルキルまたはヘテロシクリルであり、そして
残りの全ての置換基が上記と同義である、上記式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明のさらに別の好ましい態様では、
Ｒ1がシクロペンチル、シクロヘキシル、ピペリジニルまたはテトラヒドロピランであり；
Ｒ2がヒドロキシであり；そして
Ｒ3およびＲ4が水素である、上記式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２６】
以下の具体的な化合物は、本発明の特に好ましい化合物である。
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-シクロプロピル-フェニルカルバモイル)-((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-クロロ-フェニルカルバモイル)-(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-ブロモ-フェニルカルバモイル)-((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-ブロモ-フェニルカルバモイル)-((R)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(1S,4S)-(4-ブロモ-フェニルカルバモイル)-2-オキサ-5-アザ-ビシクロ[2.2.1]ヘプタ-5-イル-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[((R)-3-ジメチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-(4-トリフルオロメチル-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-(4-トリフルオロメチル-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-(4-トリフルオロメチル-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-(4-イソプロピル-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-クロロ-フェニルカルバモイル)-((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-シアノ-フェニルカルバモイル)-((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-フルオロ-フェニルカルバモイル)-((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-(4-イソプロピル-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-シクロプロピル-フェニルカルバモイル)-(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-シアノ-フェニルカルバモイル)-(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-(4-フルオロ-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-ブロモ-フェニルカルバモイル)-(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(2-フルオロ-4-トリフルオロメチル-フェニルカルバモイル)-((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-(6-トリフルオロメチル-ピリジン-3-イルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-(4-トリフルオロメトキシ-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；
(E)-3-｛4-[[3-(アセチル-メチル-アミノ)-ピロリジン-1-イル]-(4-トリフルオロメチル-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-N-(2-アミノ-フェニル)-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-(4-｛(4-ブロモ-フェニルカルバモイル)-[3-(1-ヒドロキシ-1-メチル-エチル)-ピロリジン-1-イル]-メチル｝-フェニル)-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-[4-((4-ブロモ-フェニルカルバモイル)-｛3-[エチル-(2-ヒドロキシ-エチル)-アミノ]-ピロリジン-1-イル｝-メチル)-フェニル]-アクリルアミド；
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-ブロモ-フェニルカルバモイル)-(3-ピペリジン-1-イル-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド；および
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-(4-メタンスルホニル-フェニルカルバモイル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド。
本発明の化合物は、有用な薬学的特性、具体的には抗増殖剤または抗癌剤として、さらに具体的には固形腫瘍および血液学的腫瘍の治療のための薬剤として有用な薬学的特性を示す。
【００２７】
したがって、本発明の別の態様では、上記化合物の少なくとも１種を薬学的に許容し得る補助剤とともに含む医薬組成物が提供される。
【００２８】
本発明の別の態様では、医薬として使用するための上記化合物が提供される。
【００２９】
本発明のさらに別の態様では、癌、特に固形腫瘍および血液学的腫瘍、さらに具体的には白血病、リンパ腫、結腸癌、肝臓癌または胃癌の治療に使用するための上記化合物が提供される。
【００３０】
本発明のさらに別の態様では、癌、特に固形腫瘍および血液学的腫瘍の治療のための医薬を製造するための、上記化合物の少なくとも１種の使用が提供される。上記医薬、例えば、製剤形態の医薬は、経口的に、例えば、錠剤、コーティング錠剤、糖衣錠、硬および軟ゼラチンカプセル、液剤、乳剤または懸濁剤の形態で、投与することができる。また、投与は、経直腸的に、例えば、坐剤の形態で、または、非経口的に、例えば、注射液の形態でも行うことができる。
【００３１】
製剤は、本発明の化合物を薬学的に不活性な無機または有機の担体で処理することによって得ることができる。ラクトース、コーンスターチまたはその誘導体、タルク、ステアリン酸またはその塩等を、錠剤、コーティング錠剤、糖衣錠および硬ゼラチンカプセル用の担体として用いることができる。軟ゼラチンカプセル用の好適な担体としては、例えば、植物油、ろう、脂肪、半固体および液体ポリオール等が挙げられる。但し、軟ゼラチンカプセルの場合、活性物質の特性によって担体は通常必要とならない。液剤およびシロップ剤製造用の好適な担体としては、例えば、水、ポリオール、グリセロール、植物油等が挙げられる。坐剤用の好適な担体としては、例えば、天然または硬化油、ろう、脂肪、半固体または液体ポリオール等が挙げられる。
【００３２】
製剤はさらに、保存料、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色剤、香味料、浸透圧調整用の塩、緩衝液、マスキング剤または抗酸化剤を含有することができる。製剤はまた、その他の治療に有効な物質をさらに含有することができる。
【００３３】
投与量は、投与方法、種、年齢および／または個々の健康状態等の様々な因子に依存する。１日の投与量は約５−４００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１０−１００ｍｇ／ｋｇであり、１回で投与してもよいし、数回に分けて投与してもよい。
【００３４】
本発明の別の好ましい態様では、患者の癌を治療する方法であって、患者に本発明の化合物の少なくとも１種を投与することを含む方法が提供される。
【００３５】
本発明の化合物およびその出発物質は、それぞれ、以下の一般的反応スキーム１〜４に従って合成することができる。この反応スキーム１〜４において、全ての置換基、特にＲ1〜Ｒ4は、特に明記しない限り、上記と同義である。さらに、特に明記しない限り、全ての反応、反応条件、略語および記号は、有機化学分野の当業者に周知の意義と同義である。
【００３６】
したがって、本発明のさらに別の好ましい態様では、本発明の式（Ｉ）の化合物を製造する方法であって、反応相手および条件が以下の反応スキーム１に記載される通りである方法が提供される。
【００３７】
Ａ．ピロリジン−シンナミド合成のための一般的合成経路（スキーム１）
【化３】
2011519966.tif 000005
【００３８】
Ｂ．重要なビルディングブロックの合成経路
(2-アクリロイルアミノ-フェニル)-カルバミン酸 tert-ブチルエステルの合成（スキーム２）
【化４】
2011519966.tif 000006
【００３９】
(E)-｛2-[3-(4-ホルミル-フェニル)-アクリロイルアミノ]-フェニル｝-カルバミン酸 tert-ブチルエステルの合成（スキーム３）
【化５】
2011519966.tif 000007
【００４０】
(E)-｛4-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-フェニルカルバモイル)-ビニル]-フェニル｝-ヒドロキシ-酢酸メチルエステルの合成（スキーム４）
【化６】
2011519966.tif 000008
【００４１】
以下の実施例は、上記スキームに概要を示した一般的方法によって実施した。それらは、本発明の意義を明らかにするものであるが、本発明の意義を限定するものではない。
【実施例】
【００４２】
実施例１
【化７】
2011519966.tif 000009
(E)-｛4-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-フェニルカルバモイル)-ビニル]-フェニル｝-メタンスルホニルオキシ-酢酸メチルエステル
−５℃に冷却した、｛4-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-フェニルカルバモイル)-ビニル]-フェニル｝-ヒドロキシ-酢酸メチルエステル (9.00 g, 21.1 mmol) および トリエチルアミン (3.20 g, 31.6 mmol) のCH2Cl2 (135 mL) 溶液に、Ｎ2雰囲気下、メタンスルホニルクロリド (3.14 g, 27.4 mmol)を滴下して加えた。TLCに従い、出発物質が消費されるまで（約１時間）、反応物を０℃で攪拌した。水 (90 mL) および 塩水 (90 mL) で混合物を洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、減圧下でエバポレートし、淡黄色結晶 11.2 g (定量的収率) を得、これをさらに精製することなく使用した。
MS: calc'd 505 (MH+), exp 505 (MH+).
【００４３】
実施例２
【化８】
2011519966.tif 000010
(E)-｛4-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-フェニルカルバモイル)-ビニル]-フェニル｝-((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-酢酸メチルエステル
｛4-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-フェニルカルバモイル)-ビニル]-フェニル｝-メタンスルホニルオキシ-酢酸メチルエステル (1.26 g, 2.5 mmol) および Et3N (0.76 g, 7.5 mmol) の CH2Cl2 (15mL) 溶液に、(S)-3-ヒドロキシピロリジン (0.27 g, 3 mmol)を加えた。この混合物を室温で一晩攪拌し、次いで CH2Cl2 (50 mL) で希釈し、飽和NaHCO3水溶液、水および塩水で洗浄し、Na2SO4 で乾燥し、ろ過し、エバポレートし、黄色固形物を得、これをさらに精製することなく次の反応に直接使用した。
MS: calc'd 496 (MH+), exp 496 (MH+).
【００４４】
実施例３
【化９】
2011519966.tif 000011
(E)-｛4-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-フェニルカルバモイル)-ビニル]-フェニル｝-((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-酢酸
｛4-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-フェニルカルバモイル)-ビニル]-フェニル｝-(3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-酢酸メチルエステル (1.23 g, 2.5 mmol) の MeOH (30mL) 溶液に、LiOH (1 N, 10 mL) 水溶液を加えた。この混合物を室温で約５時間攪拌し、次いでエバポレートして大部分のMeOHを除去した。水層を濃HClで酸性化して pH 5-6 とした。酸性化した水層を酢酸エチルで抽出した(3 X 30 mL)。有機層を合わせ、塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過し、エバポレートし、黄色固形物 0.85 g (81%) を得た。
MS: calc'd 482 (MH+), exp 482 (MH+).
【００４５】
実施例４
【化１０】
2011519966.tif 000012
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-｛4-[(4-シクロプロピル-フェニルカルバモイル)-((S)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-メチル]-フェニル｝-アクリルアミド
｛4-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-フェニルカルバモイル)-ビニル]-フェニル｝-(3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)-酢酸 (200 mg, 0.42 mmol)、PyBroP (290 mg, 0.62 mmol) および DIPEA (162 mg, 1.26 mol) の CH2Cl2 (10 mL) 溶液に、4-シクロプロピル-フェニルアミン (100 mg, 0.75 mmol) を加えた。この混合物を室温で一晩攪拌し、次いで CH2Cl2 (20 mL) で希釈し、飽和 NaHCO3 水溶液、水および塩水で洗浄し、Na2SO4 で乾燥し、エバポレートし、黄色残渣を得た。塩酸メタノール溶液 (1.25 M, 5 mL) を残渣に加え、この混合物を約３時間攪拌し、次いで NaHCO3 を反応系に加えた。固形物のろ過後、粗製混合物を分取 HPLC で精製し、黄白色固形物 42.3 mg を得た。
MS: calc'd 497 (MH+), exp 497 (MH+). 1H NMR (d4-MeOD, 400MHz) 7.70 (m, 5H), 7.45 (m, 2H), 7.21 (m, 1H), 7.04 (m, 3H), 6.88 (m, 2H), 6.76 (m, 1H), 4.35 (m, 1H), 3.98 (s, 1H, エピマー A), 3.97 (s, 1H, エピマー B), 3.00 (m, 1H), 2.56-1.85 (m, 6H), 0.94 (m, 2H), 0.64 (m, 2H).
【００４６】
実施例５
【化１１】
2011519966.tif 000013
(E)-｛4-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-フェニルカルバモイル)-ビニル]-フェニル｝-(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-酢酸メチルエステル
｛4-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-フェニルカルバモイル)-ビニル]-フェニル｝-メタンスルホニルオキシ-酢酸メチルエステル (1.89 g, 3.75 mmol) および Et3N (1.46 g, 14.4 mmol) の CH2Cl2 (30 mL) 溶液に、(S)-3-ヒドロキシピロリジン (0.67 g, 4.5 mmol) を加えた。この混合物を室温で一晩攪拌し、次いで CH2Cl2 (50 mL) で希釈し、飽和 NaHCO3 水溶液、水および塩水で洗浄し、Na2SO4 で乾燥し、ろ過し、エバポレートし、黄色固形物を得、これをさらに精製することなく次の反応に直接使用した。
MS: calc'd 551 (MH+), exp 551 (MH+).
【００４７】
実施例６
【化１２】
2011519966.tif 000014
(E)-｛4-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-フェニルカルバモイル)-ビニル]-フェニル｝-(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-酢酸
｛4-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-フェニルカルバモイル)-ビニル]-フェニル｝-(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-酢酸メチルエステル (2.06 g, 3.75 mmol) の MeOH (30 mL) 溶液に、LiOH (1 N, 15 mL) 水溶液を加えた。この混合物を室温で約５時間攪拌し、次いでエバポレートして大部分の MeOH を除去した。水層を濃 HCL で酸性化して pH 5-6 とした。酸性化した水層を酢酸エチルで抽出した(3 X 30 mL)。有機層を合わせ、塩水で洗浄し、Na2SO4 で乾燥し、ろ過し、エバポレートし、黄色固形物 1.40 g (70%) を得た。
MS: calc'd 537 (MH+), exp 537 (MH+).
【００４８】
実施例７
【化１３】
2011519966.tif 000015
(E)-N-(2-アミノ-フェニル)-3-(4-｛(4-クロロ-フェニルカルバモイル)-[3-(1-エチル-プロピル)-ピロリジン-1-イル]-メチル｝-フェニル)-アクリルアミド
｛4-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-フェニルカルバモイル)-ビニル]-フェニル｝-(3-ジエチルアミノ-ピロリジン-1-イル)-酢酸 (200 mg, 0.37 mmol)、PyBroP (300 mg, 0.64 mmol) および DIPEA (162 mg, 1.26 mol) の CH2Cl2 (10 mL) 溶液に、4-クロロ-フェニルアミン (100 mg, 0.78 mmol) を加えた。この混合物を一晩攪拌し、次いで、CH2Cl2 (20 mL) で希釈し、飽和 NaHCO3 水溶液、水および塩水で洗浄し、Na2SO4 で乾燥し、エバポレートし、黄色残渣を得た。残渣に塩酸メタノール溶液 (1.25 N, 5 mL) を加え、混合物を約３時間攪拌し、次いで NaHCO3 を反応系に加えた。ろ過して固形物を除去した後、粗製混合物を分取 HPLC で精製し、黄白色固形物 25.5 mg を得た。
MS: calc'd 546 (MH+), exp 546 (MH+). 1H NMR (d4-MeOD, 400MHz) 7.61 (m, 7H), 7.32 (m, 2H), 7.22 (m, 1H), 7.06 (m, 1H), 6.88 (m, 2H), 6.76 (m, 1H), 3.99 (s, 1H), 3.45 (m, 1H), 2.68 (m, 6H), 2.50 (m, 2H), 2.09 (m, 1H), 1.85 (m, 1H), 1.06 (m, 6H).
【００４９】
以下の表１に示す化合物を、適当な出発物質を用いて、上記合成法と類似の方法により調製した。その次に示される表２は、表１の化合物に関するＮＭＲデータを示す。
【００５０】
【表１−１】
2011519966.tif 000016
【００５１】
【表１−２】
2011519966.tif 000017
【００５２】
【表１−３】
2011519966.tif 000018
【００５３】
【表１−４】
2011519966.tif 000019
【００５４】
【表１−５】
2011519966.tif 000020
【００５５】
【表２−１】
2011519966.tif 000021
【００５６】
【表２−２】
2011519966.tif 000022
【００５７】
【表２−３】
2011519966.tif 000023
【００５８】
【表２−４】
2011519966.tif 000024
【００５９】
【表２−５】
2011519966.tif 000025
【００６０】
【表２−６】
2011519966.tif 000026
【００６１】
実施例８
【化１４】
2011519966.tif 000027
(2-アミノ-フェニル)- カルバミン酸 tert-ブチルエステル
o-フェニレンジアミン (54.0 g, 0.500 mol) の THF (500 mL) 溶液に、(Boc)2O (109 g, 0.500 mol) の THF (150 mL) 溶液を滴下して加え、混合物を室温で一晩攪拌した。減圧下で濃縮した後、残渣を酢酸エチル／石油エーテル = 1/4 (v/v) (150 mL) で希釈し、沈殿物を回収した。母液を濃縮し、粗生成物を酢酸エチル／石油エーテル = 1/4 (v/v) で再結晶した。固形物を合わせ、減圧下、40℃で４時間乾燥した。灰色がかった白色の固形物 (80 g, 77%) を得た。
MS: calc’d 209 (MH+), exp 209 (MH+). 1H NMR (CDCl3, 400MHz)δ 7.25 (m, 1H), 7.00 (m, 1H), 6.77 (m, 2H), 6.29 (ブロード m, 1H), 3.60 (ブロード m, 2H), 1.51 (s, 9H).
【００６２】
実施例９
【化１５】
2011519966.tif 000028
(2-アクリロイルアミノ-フェニル)-カルバミン酸 tert-ブチルエステル
０℃のアクリル酸 (2.50 g, 34.7 mmol) ジクロロメタン (80 mL) 溶液に、N-メチル-モルホリン (4.73 g, 46.8 mmol) を加え、次いで、イソブチルクロロホルメート (6.37 g, 46.8mmol)を加えた。30分後、(2-アミノ-フェニル)-カルバミン酸 tert ブチルエステル (5.80 g, 27.8 mmol) の ジクロロメタン (50 mL) 溶液を30分以上かけて滴下しながら還流反応混合物に加えた。反応終了後 (２時間後)、反応混合物を室温まで冷却し、氷水に注ぎ、ジクロロメタンで抽出した (30 mL × 3)。有機層を水、希釈重炭酸ナトリウム溶液、0.1M HCl、水および塩水で順に洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗製固形物を酢酸エチル／石油エーテル = 1/4 (v/v) から再結晶し、目的の生成物を得た (2.5g, 34%)。
MS: calc’d 263 (MH+), exp 263 (MH+).
【００６３】
実施例１０
【化１６】
2011519966.tif 000029
(E)-｛2-[3-(4-ホルミル-フェニル)-アクリロイルアミノ]-フェニル｝-カルバミン酸 tert-ブチルエステル
(2-アクリロイルアミノ-フェニル)-カルバミン酸 tert-ブチルエステル (20.0 g, 76.3 mmol)、4-ブロモベンズアルデヒド (14.4 g, 77.8 mmol)、Pd2(dba)3 (0.56 g, 0.61 mmol)、トリ-o-トリルホスフィン (0.370 g, 1.22 mmol) および トリエチルアミン (42.1 mL, 0.300 mol) の混合物を含むDMF (300 mL) を、Ｎ2雰囲気下、100℃で５時間攪拌した。反応混合物を室温まで冷却し、飽和 NH4Cl 水溶液に注いだ。沈殿物をろ別し、水で洗浄し、減圧下、40℃で一晩乾燥した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、黄色固形物を得た (15.5 g, 56%)。
MS: calc'd 367 (MH+), exp 367 (MH+). 1H NMR (d6-DMSO, 400MHz)δ 10.0 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.98 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 7.87 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 7.68 (d, 1H, J = 16 Hz), 7.60 (m, 2H), 7.14 (m, 2H), 7.10 (d, 1H, J = 16 Hz), 1.46 (s, 9H).
【００６４】
実施例１１
【化１７】
2011519966.tif 000030
(E)-｛4-[2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-フェニルカルバモイル)-ビニル]-フェニル｝-ヒドロキシ-酢酸メチルエステル
(2-アクリロイルアミノ-フェニル)-カルバミン酸 tert-ブチルエステル (23 g, 87.7 mmol)、メチル-2-(4-ブロモフェニル)-2-ヒドロキシアセテート (25.6 g, 104.5 mmol)、トリ-o-トリル-ホスフィン (2.8 g, 9.2 mmol)、Et3N (35.8 g, 353.8 mmol) および Pd2(dba)3 (4.3 g, 4.7 mmol) の混合物を含む DMF (400 mL) を、Ｎ2雰囲気下、100℃で６時間加熱し、TLC でモニタリングした。室温まで冷却した後、混合物を飽和 NH4Cl 水溶液に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、Na2SO4 で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー (酢酸エチル/石油エーテル 1:2) で精製し、黄白色固形物を得た (22.4 g, 60%)。
MS: calc'd 427 (MH+), exp 427 (MH+). 1H NMR (d6-DMSO, 400MHz)δ 9.71 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.64 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 7.59 (d, 1H, J = 15.6 Hz), 7.57 (m, 1H), 7.48 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 7.14 (m, 2H), 6.92 (d, 1H, J = 15.6), 6.17 (d, 1H, J = 5.2 Hz), 5.21 (d, 1H, J = 4.8 Hz), 3.64 (s, 3H), 1.47 (s, 9H).
【００６５】
実施例１２
新規化合物によるＨＤＡＣ阻害：ＨｅＬａ抽出ＨＤＡＣ蛍光分析
新規化合物を、そのヒストンデアセチラーゼ阻害能に関し、ｉｎ ｖｉｔｒｏ脱アセチル化アッセイを用いて試験した。このアッセイにおける酵素の供給源は、ＨｅＬａ核抽出物とした。基質は、アセチル化リジン側鎖を含む市販製品で構成した（ＨｅＬａ抽出物および基質はともに BIOMOL Research Laboratories, Inc., Plymouth Meeting, PA から市販されている）。ＨｅＬａ核抽出物とのインキュベーションによって基質を脱アセチル化した後、展開剤に曝露し、脱アセチル化レベルに正比例するフルオロフォアを生成した。ＨｅＬａ核抽出物に対するＫｍでの基質濃度を用いて、３０μモル濃度の新規化合物の存在下、脱アセチル化アッセイを実施し、既知の参照ＨＤＡＣ阻害物質（ＳＮＤＸ−２７５）に対するパーセント酵素阻害を測定した。上記実施例および表に記載した本発明の化合物は、既知の参照化合物に対して約９５％〜１８０％の範囲のヒストンデアセチラーゼ阻害活性を示す。特定の代表的な化合物の阻害活性を表３に示す。
【００６６】
実施例１３
新規化合物によるｐ２１レポーター遺伝子誘導
本発明の新規化合物を、そのｐ２１遺伝子発現誘導能に関し、ｐ２１プロモーター−ルシフェラーゼ構築物をトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞を含むレポーター遺伝子アッセイを用いて試験した。ｐ２１プロモーターは、ＨＤＡＣに対するＳｐ１／Ｓｐ３結合部位を含むが、その上流のｐ５３結合部位は含んでいない。簡単に説明すると、トランスフェクションの前日に、ＨｅＬａ細胞を９６ウェル培養プレートに１１０００細胞／ウェルで播種し、５％ＣＯ2中、３７℃で一晩インキュベーションした。トランスフェクションのために、培養液を除去し、次のように予め調製しておいたトランスフェクション培養液１００μＬ／ウェルで置換した：血清不含ＤＭＥＭ ５μＬ、Ｆｕｇｅｎｅ６試薬 ０．１５μＬ、ｐ２１−ｌｕｃ ４０ｎｇ、ＧＦＰ １０ｎｇを穏やかに混合し、室温で３０分間インキュベーションした；次いで、ＤＭＥＭ ９８μＬ（１０％ＦＢＳ、１％ペニシリンおよびストレプトマイシン含有）をＤＮＡ：Ｆｕｇｅｎｅ６試薬複合体に加え、穏やかに混合した。細胞を５％ＣＯ2中、３７℃で２４時間インキュベーションした後、新しい培養液および試験化合物をウェルに加え、細胞を５％ＣＯ2中、３７℃で１５時間さらにインキュベーションした。８０μＬ／ウェルの細胞培養物溶解試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加えて細胞を溶解した。４８６ｎｍの励起波長および５２７ｎｍでの検出を用いたＧＦＰ検出のために、各溶解物５０μＬを採取した。次いで、ルミノメーター検出のために、ルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｅｍｇａ）１００μＬを細胞溶解物２０μＬのそれぞれに加えた。上記実施例および表に記載した本発明の化合物は、３μモル濃度において、既知のＨＤＡＣ阻害剤（ＳＮＤＸ−２７５）と比較して約２％〜３００％の範囲のｐ２１誘導活性を示す。特定の代表的な化合物の誘導活性を表３に示す。
【００６７】
実施例１４
新規化合物によるｇｄｆ１１レポーター遺伝子誘導
本発明の新規化合物を、そのｇｄｆ１１（増殖分化因子１１）遺伝子発現誘導能について、ｇｄｆ１１プロモーター−ルシフェラーゼ構築物をトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞を含むレポーター遺伝子アッセイを用いて試験した。ｇｄｆ１１プロモーターは、ＨＤＡＣ３によって負に調節されていることが報告されている（Mol. Cell. Bio. 2004, 24, 5106-5118）。簡単に説明すると、トランスフェクションの前日に、ＨｅＬａ細胞を９６ウェル培養プレートに１１０００細胞／ウェルで播種し、５％ＣＯ2中、３７℃で一晩インキュベーションした。トランスフェクションのために、培養液を除去し、次のように予め調製したトランスフェクション培養液１００μＬ／ウェルで置換した：血清不含ＤＭＥＭ ５μＬ、Ｆｕｇｅｎｅ６試薬 ０．１５μＬ、ｇｄｆ１１−ｌｕｃ ４０ｎｇ、ＧＦＰ １０ｎｇを穏やかに混合し、室温で３０分間インキュベーションした；次いで、ＤＭＥＭ（１０％ＦＢＳ、１％ペニシリンおよびストレプトマイシン）９８μＬをＤＮＡ：Ｆｕｇｅｎｅ６試薬複合体に加え、穏やかに混合した。細胞を５％ＣＯ2中、３７℃で２４時間インキュベーションした後、新しい培養液および試験化合物をウェルに加え、細胞を５％ＣＯ2中、３７℃で１５時間さらにインキュベーションした。細胞培養物溶解試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）８０μＬ／ウェルを加えて細胞を溶解した。４８６ｎｍの励起波長および５２７ｎｍでの検出を用いたＧＦＰ検出のために、各溶解物５０μＬを採取した。次いで、ルミノメーター検出のために、ルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）１００μＬを細胞溶解物２０μＬのそれぞれに加えた。上記実施例および表に記載した本発明の化合物は、３μモル濃度において、既知のＨＤＡＣ阻害剤（ＳＮＤＸ−２７５）と比較して約２％〜３００％の範囲のｇｄｆ１１誘導活性を示す。特定の代表的な化合物の誘導活性を表３に示す。
【００６８】
実施例１５
新規化合物によるｋｌｆ２レポーター遺伝子誘導
本発明の新規化合物を、そのｋｌｆ２遺伝子発現誘導能について、ｋｌｆ２プロモーター−ルシフェラーゼ構築物をトランスフェクトしたＡ２０４細胞を含むレポーター遺伝子アッセイを用いて試験した。ｋｌｆ２プロモーターは、ＨＤＡＣ３／クラスＩＩａＨＤＡＣ複合体に対するＭＥＦ２結合部位を含む。簡単に説明すると、トランスフェクションの前日に、Ａ２０４細胞を９６ウェル培養プレートに１１０００細胞／ウェルで播種し、５％ＣＯ2中、３７℃で一晩インキュベーションした。トランスフェクションのために、培養液を除去し、次のように予め調製しておいたトランスフェクション培養液１００μＬ／ウェルで置換した：血清不含ＤＭＥＭ ５μＬ、Ｆｕｇｅｎｅ６試薬 ０．１５μＬ、ｋｌｆ２−ｌｕｃ ４０ｎｇ、ＧＦＰ １０ｎｇを穏やかに混合し、室温で３０分間インキュベーションした；次いで、ＤＭＥＭ（１０％ＦＢＳ、１％ペニシリンおよびストレプトマイシン）９８μＬをＤＮＡ：Ｆｕｇｅｎｅ６試薬複合体に加え、穏やかに混合した。細胞を５％ＣＯ2中、３７℃で２４時間インキュベーションした後、新しい培養液および試験化合物をウェルに加え、細胞を５％ＣＯ2中、３７℃で１５時間さらにインキュベーションした。最後に、ＴＮＦα １０ｎｇ／ｍＬを加え、細胞をさらに４時間インキュベーションした。細胞培養物溶解試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）８０μＬ／ウェルを加えて細胞を溶解した。４８６ｎｍの励起波長および５２７ｎｍでの検出を用いたＧＦＰ検出のために、各溶解物５０μＬを採取した。次いで、ルミノメーター検出のために、ルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）１００μＬを細胞溶解物２０μＬのそれぞれに加えた。上記実施例および表に記載した本発明の化合物は、１０μモル濃度において、ｐ２１ 対 ｋｌｆ２が０．１〜２．９倍である分化誘導を示す。特定の代表的な化合物のｐ２１ 対 ｋｌｆ２選択性を表３に示す。
【００６９】
実施例１６
新規化合物の癌細胞株に対する抗増殖活性
本発明の新規化合物を、種々の癌細胞株の増殖阻害能について、以下のｉｎ ｖｉｔｒｏ増殖阻害アッセイを用いて試験した。
ＭＴＳアッセイ
細胞を９６ウェル培養プレートに播種し（細胞の種類に応じて異なる播種濃度で２００μＬ／ウェル）、５％ＣＯ2中、３７℃で一晩インキュベーションした。細胞に化合物希釈物を加えた後（ＤＭＳＯ濃度を０．５％未満に維持した）、細胞を５％ＣＯ2中、３７℃で７２時間インキュベーションした。製造者の指示に従ってＭＴＳ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加えることにより、増殖に対する効果を測定し、次いで、５％ＣＯ2中、３７℃で２時間インキュベーションし、最後に、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを用いて４９０ｎｍでの吸光度を記録した。
【００７０】
ＷＳＴアッセイ
展開剤としてＣＣＫ−８試薬（Ｄｏｊｉｎｄｏ）を用いた点およびプレートリーダーを４５０ｎｍの吸光度に設定した点を除き、ＭＴＳアッセイと同様である。
上記実施例および表に記載した本発明の化合物は、癌細胞株の増殖を阻害し、７２時間のＧＩ50値は、約２００ｎモル濃度から、１５μモル濃度を上回るまでの範囲であった。特定の代表的な化合物のＨＴ−２９結腸癌細胞に対するＧＩ50値を表３に示す。
【００７１】
【表３】
2011519966.tif 000031
【００７２】
表３は、本発明から選択された実施例に関する生物活性データである。ＨＤＡＣ（ＲＰ３０）は、３０μモル濃度におけるＳＮＤＸ−２７５と比較した相対的阻害能である。ｐ２１（ＲＰ３）は、３μモル濃度におけるＳＮＤＸ−２７５と比較した相対的誘導能である。ｐ２１／ｋｌｆ２（ＲＰ３）は、３μモル濃度におけるＳＮＤＸ−２７５（ｐ２１／ｋｌｆ２比は１．０と規定される）と比較した相対的選択性である。ｐ２１／ｋｌｆ２（ＲＰ１０）は、１０μモル濃度におけるＳＮＤＸ−２７５（ｐ２１／ｋｌｆ２比は１．０と規定される）と比較した相対的選択性である。
【国際調査報告】
2011519966.tif 000040
2011519966.tif 000041