(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）の化合物、及び治療的有効量の化合物を投与することにより、被験者において記憶を改善させ、ｒｈｏキナーゼ１又は２を阻害し、ＰＩＭキナーゼを阻害し、又はＩＲＡＫ１キナーゼを阻害するための方法を提供する。
2011519972.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１８】
2011519972.tif 000020
（式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ、及びハロゲンからなる群より選択される員であり；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ４、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４）Ｒ４、−Ｎ（Ｒ４）−Ｃ（Ｏ）−Ｒ４、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ４、及び−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４からなる群より選択される員であり；
Ｒ３は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり；
各Ｒ４は、非依存的に、水素、Ｃ１−６アルキル、及びＣ３−８シクロアルキルからなる群より選択される員であり；及び
ｎは０、１、又は２である）
の化合物。
【請求項２】
請求項１記載の化合物
（式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−３アルキル、及びハロゲンからなる群より選択される員であり；
Ｒ２は、Ｃ１−３アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ４、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４）Ｒ４、−Ｎ（Ｒ４）−Ｃ（Ｏ）−Ｒ４、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ４、及び−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４からなる群より選択される員であり、
Ｒ３は、水素及びＣ１−３アルキルからなる群より選択される員であり；
各Ｒ４は、非依存的に、水素、Ｃ１−３アルキル、及びＣ３−８シクロアルキルからなる群より選択される員であり；及びｎは０、１、又は２である）。
【請求項３】
Ｒ２がＣ１−６アルキルである、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２がＣ１−６アルコキシである、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
【化１９】
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からなる群より選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン、
１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン、
１−（１−ヒドロキシ−８−アセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン、
１−（８−アセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン、
１−（１−メチル−８−カルボキサミド−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン、
１−（１−エチル−８−カルボキサミド−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン、
１−（８−アミノアセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン、
１−（８−アミノメチル−５イソキノリン−スルホニル）２−メチル−ピペラジン、及び
１−（１−メチル−８−トリフルオロメチル−５イソキノリン−スルホニル）２−メチル−ピペラジン
からなる群より選択される請求項１記載の化合物。
【請求項７】
治療的有効量の請求項１記載の化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む、被験者において記憶を改善するための方法。
【請求項８】
被験者においてｒｈｏキナーゼ１及び／又は２関連状態を処置するための方法であって、治療的有効量の請求項１記載の化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項９】
治療的有効量の請求項１記載の化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む、被験者においてＰＩＭキナーゼ関連状態を処置するための方法。
【請求項１０】
状態が、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＡＭＬ、又はＣＭＬ、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫からなる群より選択される、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
被験者においてＩＲＡＫ１キナーゼ関連状態を処置するための方法であって、治療的有効量の請求項１記載の化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項１２】
状態が、感染症、アテローム性動脈硬化症、敗血症、自己免疫疾患、及び癌からなる群より選択される、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
ＣＳＮＫ１Ｅ、ＣＳＮＫ１Ａ１Ｌ、ＣＳＮＫ１Ｄ、ＭＥＲＴＫ、ＳＬＫ、ＩＲＡＫ１、ＳＴＫ１０、ＭＡＰＫ１２、ＰＨＫＧ２、ＭＡＰＫ１１、ＭＥＴ、ＡＸＬ、ＳＴＫ３２Ｂ、ＡＵＲＫＣ、ＣＬＫ３、ＲＰＳ６ＫＡ６、ＰＤＧＦＲＢ、ＫＤＲ、ＣＤＫ２からなる群より選択されるキナーゼに関連する状態を被験者において処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療的有効量の式：
【化２０】
2011519972.tif 000022
の化合物を投与することを含む方法。
【請求項１４】
状態が、不安、抑うつ、双極性障害、単極性障害、及び外傷後ストレス障害からなる群より選択される、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
化合物が１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンである、請求項１３又は１４記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に関する情報
本願は、２００８年５月１２日に出願された米国仮出願第６１／０５２，６００号の優先利益を主張し、本明細書により、参照により本明細書において組み入れられる。
【０００２】
背景
ヒトの記憶は多遺伝子性の認知形質である。遺伝率の推定値〜５０%によって、天然の遺伝的変動がこの基本的な脳機能に重要な影響を有することが示唆される。最近の候補遺伝子関連試験によって、ヒトの記憶能力に対する有意な影響を伴ういくつかの遺伝的変異が同定されている。しかし、これらの試験での成功は既存の情報に依存し、それによって未認識の遺伝子及び分子的経路を同定するそれらの可能性が限定される。
【０００３】
高密度遺伝子型決定プラットホームの開発における最近の進歩によって、エピソード記憶及び長期記憶成績に関与する遺伝子の一部、特にＫＩＢＲＡ遺伝子の同定が可能になっている（Papassotiropoulos et al. Science 2006, 314, 475;WO 2007/120955）。しかし、依然として、悪化するエピソード記憶又は長期記憶に苦しむ被険者のために利用可能な処置はない。記憶刺激のためのシグナル伝達経路内の中心的タンパク質としてのＫＩＢＲＡの同定に基づき、ｒｈｏキナーゼ２（ＲＯＣＫ）阻害剤、特にファスジルの投与が学習及び記憶を増強できることが見い出された（Huentelman et al. Behavioral Neuroscience 2009, 123, 218;WO 2008/019395）。悪化するエピソード記憶又は長期記憶に苦しむ被険者に適した処置を実現するために、好ましくは、ＲＯＣＫに対する改善された及び／又はより選択的な阻害効果を伴う新たな化合物が必要とされる。そのような化合物は、学習及び記憶の増強に適する。
【０００４】
要約
一局面において、以下の式Ｉの化合物：
【化１】
2011519972.tif 000003
（式中、Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ、及びハロゲンからなる群より、好ましくは水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり；Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ４、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４）Ｒ４、−Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）−Ｒ４、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ４、及び−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４からなる群より選択される員であるのに対し、Ｒ２は、イソキノリン成分の位置６、７、又は８に、好ましくは位置８に局在化され；Ｒ３は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり；各Ｒ４は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、及びＣ３−８シクロアルキルからなる群より選択される員であり；及びｎは、０、１、又は２、好ましくは１又は２である）ならびにその塩、水和物、及び溶媒和物が提供される。
【０００５】
また、式Ｉの化合物を使用してＲＯＣＫを阻害するための方法が提供される。このように、式Ｉの化合物は、ＲＯＣＫ関連の状態及び疾患、例えば、クモ膜下出血に続く血管痙攣、狭心症（例、プリンツメタル型狭心症又は攣縮性狭心症）、脊髄損傷又は脳損傷に続く状態（例えば脳卒中、外傷性脳損傷など）、心不全に関連する疾患（例、血管抵抗及び狭窄に起因する）、心筋梗塞、肺動脈高血圧、本態性高血圧、アテローム性動脈硬化症及び大動脈硬直、ならびにレーノー現象などの末梢血管疾患、ならびにＲＯＣＫ阻害を必要とする勃起障害を伴う被険者を処置するために使用することができる。
【０００６】
さらに、被験者において学習及び記憶を改善する（精神疾患、例えば統合失調症などにおける認知障害を改善すること、認知症、例えばアルツハイマー病、ピック病、前頭側頭型痴呆、血管性認知症、クールー、クロイツフェルト−ヤコブ病、及びＡＩＤＳ／ＨＩＶ感染を原因とする認知症などを処置することを含む）、神経可塑性、健忘亜型−軽度認知障害、加齢に関連する記憶障害を改善する、及び／又はアルツハイマー病を処置するための方法を提供し、方法が、治療的有効量の式Ｉの化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む。
【０００７】
他の局面において、治療的有効量の式１の化合物を、それを必要とする患者に投与することによる、記憶を改善する又はｒｈｏキナーゼ１及び／又は２に関連する状態を処置するための方法を提供する。
【０００８】
別の局面において、被験者においてＰＩＭキナーゼに関連する状態を処置するための方法を提供し、方法が、治療的有効量の式Ｉの化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む。一部の実施態様において、状態は、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＡＭＬ、又はＣＭＬ、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫からなる群より選択される。
【０００９】
別の局面において、被験者においてＩＲＡＫ１キナーゼに関連する状態を処置するための方法を提供し、方法が、治療的有効量の式Ｉの化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む。一部の実施態様において、状態は、感染症、アテローム性動脈硬化症、敗血症、自己免疫疾患、及び癌からなる群より選択される。
【００１０】
他の目的、特徴、及び利点が、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。詳細な説明及び具体的な実施例は、例示のためだけに与えられる。なぜなら、本発明の精神及び範囲内での種々の変化及び改変が、この詳細な説明から当業者に明らかになるからである。さらに、実施例は、本発明の原理を実証し、そして、それが明らかに当業者に有用であろう全ての実施例への本発明の適用を具体的に例示することは期待できない。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの合成のためのスキーム。第一工程は、アミノアセチルアルデヒドジメチルアセタール（Ｈ２ＮＣＨ２ＣＨ（ＯＣＨ３）２）、エチルクロロホルメート（ＣｌＣＯ２Ｅｔ）、トリメチルリン酸（Ｐ（ＯＭｅ）３）、及び四塩化チタン（ＴｉＣｌ４）を加えることによるイソキノリン成分の生成を表す。次の工程は、硫酸及び発煙硫酸（ＳＯ３／Ｈ２ＳＯ４）を用いたスルホニル化である。最後の工程は、チオニルクロライド及びホモピペラジン（ＳＯＣｌ２／ホモピペラジン）を加えることによるホモピペラジン成分の付加である。
【図２】１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの合成のためのスキーム。最初の工程は、アミノアセチルアルデヒドジメチルアセタール（Ｈ２ＮＣＨ２ＣＨ（ＯＣＨ３）２）、エチルクロロホルメート（ＣｌＣＯ２Ｅｔ）、トリメチルリン酸（Ｐ（ＯＭｅ）３）、及び四塩化チタン（ＴｉＣｌ４）を加えることによるイソキノリン成分の生成を表す。次の工程は、過酸化水素及び酢酸（Ｈ２Ｏ２／ＡｃＯＨ）を用いたＮ−オキシドの生成である。次の工程は、ホスホリルクロライド（ＰＯＣｌ３）を用いたクロライド残基の導入である。次の工程は、硫酸及び発煙硫酸（ＳＯ３／Ｈ２ＳＯ４）を用いたスルホニル化である。最後の工程は、チオニルクロライド及びホモピペラジン（ＳＯＣｌ２／ホモピペラジン）を加えることによるホモピペラジン成分の付加である。
【図３】１−（１−ヒドロキシ−８−アセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（８−アセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの合成のためのスキーム。最初の工程は、ｎ−ブチルリチウム（ＢｕＬｉ）及びアセトアルデヒド（ＣＨ３ＣＨＯ）を加えることによるヒドロキシエチル残基の生成である。次の工程は、二クロム酸ナトリウム（Ｎａ２Ｃｒ２Ｏ７）を用いた酸化である。次の工程は、硫酸及び発煙硫酸（ＳＯ３／Ｈ２ＳＯ４）を用いたスルホニル化である。次の工程は、チオニルクロライド及びｆｍｏｃ−ホモピペラジン（ＳＯＣｌ２／ｆｍｏｃ−ホモピペラジン）を加えることによるｆｍｏｃ保護ホモピペラジン成分の付加である。次の工程は、過酸化水素及び酢酸（Ｈ２Ｏ２／酢酸）を用いたＮ−オキシドの生成である。最後の工程は、アセトアンヒドリド（acetanhydride）及び水酸化ナトリウム（Ａｃ２Ｏ／ＮａＯＨ）を用いたｆｍｏｃ基のヒドロキシル化及び開裂である。
【図４】１−（１−ヒドロキシ−７−アセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（７−アセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの合成のためのスキーム。最初の工程は、アミノアセチルアルデヒドジメチルアセタール（Ｈ２ＮＣＨ２ＣＨ（ＯＣＨ３）２）、エチルクロロホルメート（ＣｌＣＯ２Ｅｔ）、トリメチルリン酸（Ｐ（ＯＭｅ）３）、及び四塩化チタン（ＴｉＣｌ４）を加えることによるイソキノリン成分の生成を表す。次の工程は、ｎ−ブチルリチウム（ＢｕＬｉ）及びアセトアルデヒド（ＣＨ３ＣＨＯ）を加えることによるヒドロキシエチル残基の生成である。次の工程は、二クロム酸ナトリウム（Ｎａ２Ｃｒ２Ｏ７）を用いた酸化である。次の工程は、硫酸及び発煙硫酸（ＳＯ３／Ｈ２ＳＯ４）を用いたスルホニル化である。次の工程は、チオニルクロライド及びｆｍｏｃ−ホモピペラジン（ＳＯＣｌ２／ｆｍｏｃ−ホモピペラジン）を加えることによるｆｍｏｃ保護ホモピペラジン成分の付加である。次の工程は、過酸化水素及び酢酸（Ｈ２Ｏ２／酢酸）を用いたＮ−オキシドの生成である。最後の工程は、アセトアンヒドリド及び水酸化ナトリウム（Ａｃ２Ｏ／ＮａＯＨ）を用いたｆｍｏｃ基のヒドロキシル化及び開裂である。
【図５】１−（１−メチル−８−カルボキサミド−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（１−エチル−８−カルボキサミド−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの合成のためのスキーム。最初の工程は、過酸化ベンゾイル及びヨウ化アルキル（（ＰｈＣＯＯ）２／Alkyliodid）を用いたアルキル化である。次の工程は、ｎ−ブチルリチウム（ＢｕＬｉ）及び酸化炭素（ＣＯ２）を用いたカルボキシル化である。次の工程は、メタノール中のチオニルクロライド（ＳＯＣｌ２／ＭｅＯＨ）及びメタノール中のアンモニア（ＮＨ３）を加えることによるカルボキサミドの生成である。次の工程は、硫酸及び発煙硫酸（ＳＯ３／Ｈ２ＳＯ４）を用いたスルホニル化である。最後の工程は、チオニルクロライド及びホモピペラジン（ＳＯＣｌ２／ホモピペラジン）を加えることによるホモピペラジン成分の付加である。
【図６】１−（１−メチル−７−カルボキサミド−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（１−エチル−７−カルボキサミド−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの合成のためのスキーム。第一工程は、アミノアセチルアルデヒドジメチルアセタール（Ｈ２ＮＣＨ２ＣＨ（ＯＣＨ３）２）、エチルクロロホルメート（ＣｌＣＯ２Ｅｔ）、トリメチルリン酸（Ｐ（ＯＭｅ）３）、及び四塩化チタン（ＴｉＣｌ４）を加えることによるイソキノリン成分の生成を表す。次の工程は、過酸化ベンゾイル及びヨウ化アルキル（（ＰｈＣＯＯ）２／Alkyliodid）を用いたアルキル化である。次の工程は、ｎ−ブチルリチウム（ＢｕＬｉ）及び炭素酸化物（ＣＯ２）を用いたカルボキシル化である。次の工程は、メタノール中のチオニルクロライド（ＳＯＣｌ２／ＭｅＯＨ）及びメタノール中のアンモニア（ＮＨ３）を加えることによるカルボキサミドの生成である。次の工程は、硫酸及び発煙硫酸（ＳＯ３／Ｈ２ＳＯ４）を用いたスルホニル化である。最後の工程は、チオニルクロライド及びホモピペラジン（ＳＯＣｌ２／ホモピペラジン）を加えることによるホモピペラジン成分の付加である。
【図７】１−（８−アミノアセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの合成のためのスキーム。最初の工程は、チオシアン酸カリウム（ＫＳＣＮ）及び臭素（Ｂｒ２）を加えることによるチオシアネート基の導入である。次の工程は、塩酸（ＨＣｌ（ａｑ））及びエタノール（ＥｔＯＨ）を用いたケン化である。次の工程は、過マンガン酸カリウム（ＫＭｎＯ４）を用いた酸化である。次の工程は、アセトアンヒドリド（Ａｃ２Ｏ）を用いたアセチル化である。最後の工程は、チオニルクロライド及びホモピペラジン（ＳＯＣｌ２／ｆｍｏｃ−ホモピペラジン）を加えることによるホモピペラジン成分の共役である。
【図８】１−（６−アミノアセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの合成のためのスキーム。最初の工程は、硫酸及び発煙硫酸（ＳＯ３／Ｈ２ＳＯ４）を用いたスルホニル化である。次の工程は、アセトアンヒドリド（Ａｃ２Ｏ）を用いたアセチル化である。次の工程は、チオニルクロライド及びＮｂｏｃ−ホモピペラジン（ＳＯＣｌ２／Ｎｂｏｃ−ホモピペラジン）を加えることによるＮｂｏｃ保護ホモピペラジン成分の付加である。最後の工程は、ｂｏｃ基塩酸及びイソ−プロパノール（ＨＣｌ／ｉ−ＰｒＯＨ）の開裂である。
【図９】１−（７−アミノアセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの合成のためのスキーム。第一工程は、アミノアセチルアルデヒドジメチルアセタール（Ｈ２ＮＣＨ２ＣＨ（ＯＣＨ３）２）、エチルクロロホルメート（ＣｌＣＯ２Ｅｔ）、トリメチルリン酸（Ｐ（ＯＭｅ）３）、及び四塩化チタン（ＴｉＣｌ４）を加えることによるイソキノリン成分の生成を表す。次の工程は、硫酸及び発煙硫酸（ＳＯ３／Ｈ２ＳＯ４）を用いたスルホニル化である。次の工程は、チオニルクロライド及びＮｂｏｃ−ホモピペラジン（ＳＯＣｌ２／Ｎｂｏｃ−ホモピペラジン）を加えることによるＮｂｏｃ保護ホモピペラジン成分の付加である。次の工程は、銅、銅（Ｉ）ブロミド、及びアンモニアを用いたアミノ基の共役である（Ｃｕ／Ｃｕ（Ｉ）Ｂｒ／ＮＨ３）。次の工程は、アセトアンヒドリド（Ａｃ２Ｏ）を用いたアセチル化である。最後の工程は、ｂｏｃ基塩酸及びイソ−プロパノール（ＨＣｌ／ｉ−ＰｒＯＨ）の開裂である。
【図１０】１−（８−アミノメチル−５イソキノリン−スルホニル）２メチル−ピペラジンの合成のためのスキーム。最初の工程は、硫酸及び発煙硫酸（ＳＯ３／Ｈ２ＳＯ４）を用いたスルホニル化である。次の工程は、チオニルクロライド及びＮｂｏｃ−ホモピペラジン（ＳＯＣｌ２／Ｎｂｏｃ−ホモピペラジン）を加えることによるＮｂｏｃ保護ホモピペラジン成分の付加である。次の工程は、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（Ｐｄ（ｄｂａ）２），２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）及びメチルアミン（ＭｅＮＨ２）を用いたアミノ基の共役である。最後の工程は、ｂｏｃ基塩酸及びイソ−プロパノール（ＨＣｌ／ｉ−ＰｒＯＨ）の開裂である。
【図１１】１−（１−メチル−８−トリフロオロメチル−５イソキノリン−スルホニル）２メチル−ピペラジンの合成のためのスキーム。第一工程は、アミノアセチルアルデヒドジメチルアセタール（Ｈ２ＮＣＨ２ＣＨ（ＯＣＨ３）２）、エチルクロロホルメート（ＣｌＣＯ２Ｅｔ）、トリメチルリン酸（Ｐ（ＯＭｅ）３）、及び四塩化チタン（ＴｉＣｌ４）を加えることによるイソキノリン成分の生成を表す。次の工程は、ベンゾイルクロライド（ＰｈＣＯＣｌ）及びトリメチルシリルシアニド（ＴＭＳ−ＣＮ）を使用したのＲｅｉｓｓｅｒｔ化合物の合成である。次の工程は、水素化ナトリウム、ヨウ化メチル、及び水酸化ナトリウム（ＮａＨ、ＭｅＩ、ＮａＯＨ）を用いたメチル化である。次の工程は、硫酸及び発煙硫酸（ＳＯ３／Ｈ２ＳＯ４）を用いたスルホニル化である。次の工程は、チオニルクロライド及びＮｂｏｃ−ホモピペラジン（ＳＯＣｌ２／Ｎｂｏｃ−ホモピペラジン）を加えることによるＮｂｏｃ保護ホモピペラジン成分の付加である。最後の工程は、ｂｏｃ基塩酸及びイソ−プロパノール（ＨＣｌ／ｉ−ＰｒＯＨ）の開裂である。
【図１２】ＲＯＣＫ−酵素阻害の図式表示。個々のバーは、増加する最終濃度（０．１〜１００μM）の試験化合物（ｘ軸）を用いたインキュベーション後での残存ｒｏｃｋ酵素活性（ｙ軸）の量を示す。白色バー：賦形剤（偽）；黒色バー：ファスジル；濃い灰色：１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン、薄い灰色バー：１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン。
【図１３Ａ−１】AMBIT KinomeScanで測定された、コントロールとなったファスジルと比較した、選択されたキナーゼと１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン（「メチル−ファスジル」）ならびに１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン（「メトキシ−ファスジル」）の間の相互作用。濃度１０μMでその化合物に対する５０%超の結合親和性を伴うキナーゼを、黒色ボックスでマークを付けている。濃度１０μMでその化合物に対する５０%未満の結合親和性を伴うキナーゼを、灰色ボックスでマークを付けている。この表中には、ファスジル、１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン又は１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンのいずれかに対して５０%を上回る結合親和性を示すキナーゼだけを編集している。
【図１３Ａ−２】AMBIT KinomeScanで測定された、コントロールとなったファスジルと比較した、選択されたキナーゼと１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン（「メチル−ファスジル」）ならびに１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン（「メトキシ−ファスジル」）の間の相互作用。濃度１０μMでその化合物に対する５０%超の結合親和性を伴うキナーゼを、黒色ボックスでマークを付けている。濃度１０μMでその化合物に対する５０%未満の結合親和性を伴うキナーゼを、灰色ボックスでマークを付けている。この表中には、ファスジル、１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン又は１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンのいずれかに対して５０%を上回る結合親和性を示すキナーゼだけを編集している。
【図１３Ｂ】AMBIT KinomeScanで測定された、ファスジル、１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン又は１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンのいずれかに対する５０%未満の結合親和性を有するキナーゼのリスト。
【図１４】ＡＧＣファミリーのキナーゼに例証的なファスジル、１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの親和性。ＲＯＣＫ１及び２ならびにＰＫＡはこのファミリーに属する。階層的クラスタリングはそのキナーゼ間での関係を表す。コントロールと比較して５０%超の２つの試験化合物のいずれかの結合親和性を黒色で、５０%未満を灰色で描写する。
【図１５】神経突起伸長アッセイの棒グラフ表示。神経突起の長さにおける変化を、コントロールの%として示す（偽、溶媒）。２つの異なる濃度の試験化合物（１．５及び１５μM）を、一次海馬神経において、コントロールとなったファスジルならびに試験化合物１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン（「メチルファスジル」）及び１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン（「メトキシファスジル」）を用いて試験した。エラーバーはＳＥＭを示す。
【図１６Ａ】シータバースト刺激によるＬＴＰの誘導。傾き（最大ｆＥＰＳＰ振幅の３０〜７０%）を時間に対してプロットする。ＬＴＰをコントロール記録（矢印）の１５分後に誘導した。データ上のバーはＳＥＭを示す。
【図１６Ｂ】ＬＴＰ誘導に対する１０μMのファスジルの効果。平均傾き（最大ｆＥＰＳＰ振幅の３０〜７０%）を時間に対してプロットする。ＬＴＰをコントロール記録の３０分後に誘導した（矢印）。黒色線はファスジルの存在を示し、バーはＳＥＭを示す。斜線はコントロールでの平均ＬＴＰレベルを示す（１３０%、図１６Ａを参照のこと）。
【図１６Ｃ】ＬＴＰ誘導に対する１μMの１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの効果。傾き（最大ｆＥＰＳＰ振幅の３０〜７０%）を時間に対してプロットする。ＬＴＰを、ファスジル適用の開始から３０分後に誘導した（矢印）。黒色線は１μMの１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの存在を示し、データポイント上のバーはＳＥＭを示す。斜線はコントロールでの平均ＬＴＰレベルを示す（１３０%、図１６Ａを参照のこと）。
【図１６Ｄ】ＬＴＰ誘導に対する１０μMの１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの影響。傾き（最大ｆＥＰＳＰ振幅の３０〜７０%）を時間に対してプロットする。ＬＴＰを、ファスジル適用の開始から３０分後に誘導した（矢印）。黒色線は１μMの１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの存在を示し、データポイント上のバーはＳＥＭを示す。斜線はコントロールでの平均ＬＴＰレベルを示す（１３０%、図１６Ａを参照のこと）。
【図１６Ｅ】ＬＴＰ誘導に対する１００μMの１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの影響。傾き（最大ｆＥＰＳＰ振幅の３０〜７０%）を時間に対してプロットする。ＬＴＰを、ファスジル適用の開始から３０分後に誘導した（矢印）。黒色線は１μMの１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの存在を示し、データポイント上のバーはＳＥＭを示す。斜線はコントロールでの平均ＬＴＰレベルを示す（１３０%、図１６Ａを参照のこと）。
【図１６Ｆ】ＬＴＰ誘導に対する１μMの１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの効果。傾き（最大ｆＥＰＳＰ振幅の３０〜７０%）を時間に対してプロットする。ＬＴＰを、ファスジル適用の開始から３０分後に誘導した（矢印）。黒色線は１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの存在を示し、データポイント上のバーはＳＥＭを示す。斜線はコントロールでの平均ＬＴＰレベルを示す（１３０%、図１６Ａを参照のこと）。
【図１６Ｇ】ＬＴＰ誘導に対する１０μMの１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの影響。傾き（最大ｆＥＰＳＰ振幅の３０〜７０%）を時間に対してプロットする。ＬＴＰを、ファスジル適用の開始から３０分後に誘導した（矢印）。黒色線は１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの存在を示し、データポイント上のバーはＳＥＭを示す。斜線はコントロールでの平均ＬＴＰレベルを示す（１３０%、図１６Ａを参照のこと）。
【図１６Ｈ】ＬＴＰ誘導に対する１００μMの１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの影響。傾き（最大ｆＥＰＳＰ振幅の３０〜７０%）を時間に対してプロットする。ＬＴＰを、ファスジル適用の開始から３０分後に誘導した（矢印）。黒色線は１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの存在を示し、データポイント上のバーはＳＥＭを示す。斜線はコントロールでの平均ＬＴＰレベルを示す（１３０%、図１６Ａを参照のこと）。
【図１７】ＬＴＰデータのグラフ表示。平均傾き（最大ｆＥＰＳＰ振幅の３０〜７０%）を偽コントロールについてプロットする（黒色；Ａ）；１０μMのファスジル（濃い灰色；Ｂ）；１、１０＆１００μMの１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン（中間の灰色；Ｃ、Ｄ、Ｅ）；及び１、１０＆１００μMの１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン（薄い灰色；Ｆ、Ｇ、Ｈ）。バーはＳＤを示す。
【００１２】
詳細な説明
ＲＯＣＫ関連の状態及び疾患（例、クモ膜下出血に続く血管痙攣）を処置する方法のため、記憶及び学習を増強するため、神経可塑性を改善するため、及びアルツハイマー病を処置するための方法のためのＲＯＣＫ阻害剤として適した新たな化合物が提供される。
【００１３】
本明細書に記載される化合物は、アルツハイマー病の症状である記憶喪失を処置するために使用できるだけでなく、アルツハイマー病の原因を処置し、疾患の開始を遅らせる、又は、疾患の発生を予防するために使用することもできる。特定の作用理論に拘束されることなく、ＫＩＢＲＡ遺伝子経路が神経原線維変化の発生に関連すると考えられる。
【００１４】
恐らくは、記憶に関連する最も研究された２つのタンパク質は、ＰＫＣ及びサイクリックＡＭＰ応答エレメント結合タンパク質（ＣＲＥＢ）である。ＰＫＣファミリーメンバーは、いくつかの重要な脳領域におけるそれらの過剰発現、いくつかの種にわたる記憶プロセスにおけるそれらの関与、空間学習障害に相関するヒトにおける活性のそれらの加齢に関連する変化、及び最後に、ＰＫＣ阻害が学習及び記憶を損なうという証拠に起因する記憶において主張される役割を果たす（Micheau, J. & Riedel, G. Cell Mol Life Sci 55, 534-48 (1999); Pascale, A., et al. Mol Neurobiol 16, 49-62 (1998); Sun, M. K. & Alkon, D. L. Curr Drug Targets CNS Neurol Disord 4, 541-52 (2005); Birnbaum, S. G. et al. Science 306, 882-4 (2004); Etcheberrigaray, R. et al. Proc Natl Acad Sci USA 101, 11141-6 (2004); Ruiz-Canada, C. et al. Neuron 42, 567-80 (2004)）。記憶関連遺伝子としてＣＲＥＢの裏付けは、ウミウシ、アメフラシ（Aplysia）における長期促進、及びげっ歯類における増強、ＣＲＥＢ機能の誘導性破壊がマウスにおいて記憶を遮断するとの実証、及び記憶エンハンサーとしてＣＲＥＢ活性を変化させる化合物の探索におけるその定義された役割を含む（Josselyn, S. A. & Nguyen, P. V. Curr Drug Targets CNS Neurol Disord 4, 481-97 (2005); Carlezon, W. A., et al. Trends Neurosci 28, 436-45 (2005); Cooke, S. F. & Bliss, T. V. Curr Opin Investig Drugs 6, 25-34 (2005); Josselyn, S. A., Kida, S. & Silva, A. J. Neurobiol Learn Mem 82, 159-63 (2004); Martin, K. C. Neurobiol Learn Mem 78, 489-97 (2002); Lonze, B. E. & Ginty, D. D. Neuron 35, 605-23 (2002); Si, K., Lindquist, S. & Kandel, E. R Cell 115, 879-91 (2003); Chen, A. et al. Neuron 39, 655-69 (2003)）。また、ＨＴＲ２Ａ、ＢＤＮＦ、及びＰＫＡを含む、記憶における他のタンパク質の役割を裏付ける増大する遺伝学的証拠がある（Alonso, M. et al. Learn Mem 12, 504-10 (2005); Bramham, C. R. & Messaoudi, E. Prog Neurobiol 76, 99-125 (2005); Papassotiropoulos, A. et al. Neuroreport 16, 839-42 (2005); de Quervain, D.J. et al. Nat Neurosci 6, 1141-2 (2003); Reynolds, C. A., et al. Neurobiol Aging 27, 150-4 (2006); Arnsten, A. F., et al. Trends Mol Med 11, 121-8 (2005); Quevedo, J. et al. Behav Brain Res 154, 339-43 (2004)）。
【００１５】
ＫＩＢＲＡは、最近、酵母のツーハイブリッドスクリーンにおいて、dendrin（シナプス可塑性の推定モデュレーター）のヒトアイソフォームについての結合パートナーとして同定された（Kremerskothen, J. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 300, 862 (2003)）。切断形態は、海馬において発現されていたが、最初の２２３ａａを欠き、Ｃ２様ドメイン、グルタミン酸に富むストレッチ、及びタンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）ζ相互作用ドメインを含む（de Quervain, D.J. et al., Nat. Neurosci. 6, 1141 (2003)）。ＰＫＣ−ζは、記憶形成に及び長期増強の固定に関与する（Bookheimer, S. Y. et al., N. Engl. J. Med. 343, 450 (2000); Milner, B. Clin. Neurosurg. 19, 421 (1972)）。ＫＩＢＲＡのＣ２様ドメインは、シナプトタグミンのＣ２ドメインに類似しており、シナプス小胞エキソサイトーシスにおける主なＣａ２＋センサーとして機能すると考えられる（Freedman, M. L. et al., Nat. Genet. 36, 388 (2004); Schacter, D. L. & Tulving E. Memory systems (MIT Press, Cambridge, 1994)）。ＷＯ２００８／０１９３９５に記載されている記憶に関連するＫＩＢＲＡハプロタイプブロック及びＳＮＰは、切断ＫＩＢＲＡ内に位置付けられ、Ｃ２様ドメイン及びＰＫＣ−ζ相互作用ドメインの両方を含む。これらの知見をまとめると、ＫＩＢＲＡは正常なヒトの記憶成績において役割を果たすと思われる。
【００１６】
また、ＫＩＢＲＡが脳において高い発現を有し、そしてＣａ２＋を調節し、そしてＰＫＣ基質及びシナプスタンパク質であり、記憶における標的としてのＲｈｏＡ／ＲＯＣＫならびに記憶、学習、及び認知を増強するモデュレーターとしてのファスジルの同定を可能にするいくつかの他の遺伝学的知見がある（Huentelman et al. Behavioral Neuroscience 2009, 123, 218; WO 2008/019395）。ＣＬＳＴＮ２は、脳において高い発現を有し、Ｃａ２＋を調節し、そしてシナプスタンパク質である。ＣＡＭＴＡ１は、脳において高い発現を有し、Ｃａ２＋を調節し、そして転写調節因子である。ＳＥＭＡ５Ａは、発生中の脳において高い発現を有し、そして軸索ガイダンスに関与する。ＴＮＲは、脳において高い発現を有し、ＥＣＭに関与し、そしてシナプス維持において補助する。最後に、ＮＥＬＬ２も脳において高い発現を有し、神経増殖において補助し、そして増強されたＬＴＰ、しかし、損なわれたＨＰＦ媒介性の学習を示す。また、全ての遺伝子標的でのｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションが、マウス海馬における発現を示す。
【００１７】
正常な記憶機能ならびにアルツハイマーの認知衰退（及び可能性が高い他の健忘障害）におけるＲｈｏＡ／ＲＯＣＫ経路の重要性は強調し過ぎることはできない。多くの破壊的な障害が、主な臨床特徴として記憶喪失を含み、これらの障害の場合において、ＲｈｏＡ／ＲＯＣＫ経路はそれらの全体的な重症度、進行、又は病理における役割を果たしうる。記憶喪失の発症前での最小限の延長でさえ、これらの障害に苦しむ患者に有益であろう。
【００１８】
Ｒｈｏキナーゼ２（ＲＯＣＫ）はセリン／スレオニン特異的タンパク質キナーゼであり、ＧＴＰ結合ＲｈｏＡにより活性化される。それは、多くのシグナル伝達経路の重要なプレーヤーであり、平滑筋収縮、アクチン細胞骨格リモデリング、細胞運動、及びシナプスリモデリングを含む、種々の細胞機能を制御する。ＲＯＣＫはＲｈｏシグナル伝達を媒介し、アクチンフィラメントの集合及び収縮に寄与するいくつかの基質のリン酸化を通じてアクチン細胞骨格を再編成する。例えば、ＲＯＣＫは、Ｔｈｒ６９６でのミオシンホスファターゼ標的サブユニット１（ＭＹＰＴ１）の特異的リン酸化を通じてミオシンホスファターゼを不活化し、それは２０kDaのミオシン軽鎖（ＭＬＣ２０）のリン酸化含量の増加をもたらす。試験化合物のＲＯＣＫ阻害効果は、試験化合物を伴わないコントロールと比較し、試験化合物の存在において精製キナーゼ及びその基質をインキュベートすることにより分析することができる。リン酸化基質を、特異的抗体を用いて検出することができ、その量は化合物の阻害効果についての測定値である。
【００１９】
化合物がどのようにして目的の及び非目的のキナーゼの両方に結合するのかを決定するために、活性部位依存的な競合結合アッセイを、数百の公知のキナーゼを並行して用いて実施することができる（Fabian et al., Nat Biotechnol. 2005, 23, 329; Karaman et al., Nat Biotechnol. 2008, 26, 127）。そのような方法によってキナーゼ阻害剤の特異性の評価が可能になる。現在、ＲＯＣＫ阻害剤として公知の化合物（例えばファスジルなど）が、ＲＯＣＫだけではなく、細胞及び生体において重要な役割を果たすプロテインキナーゼＡなどの他のキナーゼも阻害する。したがって、タンパク質キナーゼＡ活性の阻害が重度の副作用を起こしうることが示唆される。従って、ＲＯＣＫ阻害剤を治療用薬剤として使用する観点から、疾患又は状態に関与するＲＯＣＫをより選択的に阻害するが、しかし、他のキナーゼの活性には実質的に影響を与えることができない化合物を開発することが望まれてきた。従って、一実施態様において、本発明は、より特異的なＲＯＣＫ阻害を示す化合物及びＲＯＣＫを選択的に阻害するためにそれらの化合物を使用するための方法を提供する。
【００２０】
記憶成績に対する化合物の投与の効果をインビボで測定するために、種々の公知の動物試験を使用することができる（例、Ｓａｃｋｔｏｒディスク試験、迅速な海馬依存的な取得及び持続的な海馬依存的な想起という実験的な利点を伴う能動的な場所回避の特別な形態）（Pastalkova et al., Science 2006, 313, 1141）。装置は、部屋環境に対して開かれているゆっくりと回転するプラットホームからなる。動物が所定のセクター中に走る時、プラットホームに電圧を加えることができる。回転によってショックゾーン中に動物が持ち込まれ、そして動物は、環境の非ショックエリアに能動的に移動することによりショックを回避することを迅速に学習する。
【００２１】
別の例において、モーリス水迷路を使用することができる。このインビボでの記憶試験が最初に開発され、遠位の迷路外の合図に対するその位置だけにより定義される空間中の場所を学習し、記憶し、そしてそこに行くラットの能力を試験した（Morris et al., J Neurosci Methods 1984, 11, 47）。
【００２２】
あるいは、放射状迷路を使用し、動物の記憶を試験することができる。それは、例えば、八角形に成形された中心プラットホームの周囲の８本の上昇アームからなる。動物は、迷路外の視覚的な合図を方向の目印として使用して迷路を通って進むことができる。４本のアームには報酬として小さな食物ペレットで無作為に餌が付けられており、４本には餌は付けられていない。動物が迷路を探索し、そして餌が付いたアームの位置を記憶することが可能になる。追跡試行において、餌が付いていないアームでの実行が参照記憶エラーとしてカウントされる：同じアームでのリエントリー、ならびに先に近寄った餌が付いたアームのリエントリーが、作業記憶エラーとしてカウントされる。有利には、放射状迷路を使用して、作業記憶ならびに空間記憶を同時に試験することができる。
【００２３】
さらなる公知の行動の動物試験、例えばＴ−迷路、オープンフィールド、又は物体認識を使用して、動物の記憶を評価することができる。そのようなインビボ試験は、特定の動物亜群、例えば高齢動物、疾患モデル動物などに適用することができ、そのような亜群内で記憶及び記憶増強効果を特に評価する。
【００２４】
古典的条件付けの形態は、恐怖条件付けである。それは、感情学習及び記憶を研究するためのモデルに属する。条件付けは、条件刺激（例、光）のペアリング又は無条件刺激（例、穏やかなショック）を伴う緊張を意味する。無条件刺激は単独で恐怖反応をもたらす。反復ペアリングのいくつかの試行後、動物は条件刺激単独に対しても恐怖反応を示す。これは条件反応と呼ばれる。上記の異なる刺激のペアリングも合図された恐怖条件付けとして公知であるのに対し、状況の恐怖条件付けは試験室自体に対する恐怖反応を記載する。合図された恐怖条件付けが扁桃体と呼ばれる脳構造に対して敏感であり、発生する状況反応は海馬に対してより敏感であると思われる。動物において、恐怖条件付けパラダイムならびに能動的及び受動的な回避パラダイムの両方を使用して、増強された学習を実証することができた。そのようなインビボ試験は、特定の動物亜群、例えば高齢動物、疾患モデル動物などに使用することができ、そのような亜群内で記憶及び記憶増強効果を特に評価する。
【００２５】
長期増強（ＬＴＰ）の効果はインビトロで測定することができ、そして、一般には、記憶成績に相関すると考えられる。求心性ニューロン又は神経細胞領域の刺激は、下流に位置付けられるニューロン又は神経細胞領域の膜電位をもたらす。そのような膜電位は、例えばシータバーストパラダイムを用いて求心性ニューロンを刺激した後、少なくとも数時間にわたり長期増強される。従って、ＬＴＰは細胞レベルでの記憶と見なされる。偽のインキュベートされたニューロンと比較し、試験化合物とインキュベートされたニューロンでの電気生理学的ＬＴＰ測定を使用し、記憶を増強する化合物の可能性を評価することができる（例、Cooke and Bliss, Brain, 2006, 129 (1659)を参照のこと。それは参照により本明細書により組み入れられる）。
【００２６】
記憶形成及び学習の基礎となるプロセスが、樹状突起又は脊椎の神経ネットワーク及び運動性の構造的な可塑性を含むという一般的な合意がある（例、Tada & Sheng, Curr Opin Neurobiol., 2006, 16, 95を参照のこと）。神経突起伸長は、Ｒｈｏ  ＧＴＰａｓｅ、そのメンバーＲｈｏ、Ｒａｃ、及びＣｄｃ４２を伴う小型ＧＴＰａｓｅのファミリーにより影響を受けることが公知である。Ｒｈｏ  ＧＴＰａｓｅはアクチン細胞骨格に対するそれらの効果について周知であり、従って、細胞運動性及びシナプス可塑性の重要なレギュレーターである。その活性型ＧＴＰ結合形態のＲｈｏがＲｈｏキナーゼ（ＲＯＣＫ）を活性化し、続いてミオシン軽鎖を活性化し、細胞骨格の再編成及び軸索成長の阻害をもたらす。ファスジルなどのＲＯＣＫ阻害剤が、未分化ＰＣ１２細胞において神経突起伸長を増加させることが観察された（Zhang et al., Cell Mol Biol Lett., 2006, 11, 12）。潜在的なＲＯＣＫ阻害能力を伴う試験化合物の効果を分析するために、その化合物を伴わないコントロールアッセイと比較し、試験化合物の存在において細胞培養中での一次海馬神経の神経突起長を測定することができる。長さの増加を測定する代わりに、複雑性の増加を決定することが可能である（Ｓｈｏｌｌ分析）。神経突起伸長を刺激する能力を示す化合物を、大脳の可塑性及び認知の増強を必要とする状態のために使用することができる。
【００２７】
家族型のアルツハイマー病（ＡＤ）及び前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）ならびに原因となる突然変異遺伝子の同定は、これらの疾患についてのトランスジェニック動物モデルの生成をもたらしている。ＡＤにおける重要なプレーヤーはアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）である。突然変異ＡＰＰを過剰発現するマウスは、ＡＤにおいて記憶障害を研究するために最も広く使用されるモデルである（Ashe, Learn Mem. 2001, 8, 301; Chapman et al., Trends Genet. 2001, 17, 254; Goetz & Ittner, Nat Rev Neurosci. 2008, 9, 532）。これらのマウスはアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の異なるバリアントを運び、そして経時的に記憶障害を発生する。なぜなら、それがＡＤ患者から顕著であるからである（例、いわゆるスウェーデン突然変異Ｔｇ２５７６を伴う動物（Hsiao et al., Science 1996, 274, 99)）。これらの動物モデルを利用して、インビボの疾患モデルにおけるその効力について潜在的な記憶増強化合物を試験することができる。
【００２８】
本発明の治療及び診断適用から利益を受けうる病理又は神経病理は、例えば、以下を含む：
【００２９】
中枢運動系の疾患で以下を含む：基底核に影響を与える変性状態（ハンチントン病、ウィルソン病、線条体黒質変性症、大脳皮質基底核変性症）、トゥレット症候群、パーキンソン病、進行性核上麻痺、進行性球麻痺、家族性痙性対麻痺、脊髄筋萎縮症、ＡＬＳ及びそのバリアント、歯状核赤核萎縮症、オリーブ橋小脳萎縮症、傍腫瘍性小脳変性症、ならびにドーパミン毒性；
【００３０】
感覚ニューロンに影響を与える疾患、例えばフリートライヒ失調症、糖尿病、末梢性ニューロパシー、及び網膜神経変性症；
【００３１】
辺縁系及び皮質系の疾患、例えば大脳アミロイドーシス、ピック萎縮症、及びレット症候群など；
【００３２】
複数の神経系及び／又は脳幹を含む神経変性病理で以下を含む：アルツハイマー病、ＡＩＤＳ関連認知症、リー病、びまん性レヴィー小体病、てんかん、多系統萎縮症、ギラン・バレー症候群、リポフスチン症などのリソソーム貯蔵障害、ダウン症の後期変性段階、アルパース病、ＣＮＳ変性症の結果としての眩暈；
【００３３】
発達遅滞及び学習障害に関連する病理、ならびにダウン症、ならびに酸化ストレスにより誘導される神経細胞死；
【００３４】
加齢及び慢性のアルコール又は薬物の乱用に起因する病理で、以下を含む：例えば、アルコール依存症では、青斑核、小脳、コリン作動性前脳基底核中のニューロンの変性；加齢では、認知障害及び運動障害を招く小脳ニューロン及び皮質ニューロンの変性；ならびに、慢性アンフェタミン乱用では、運動障害を招く基底核ニューロンの変性；
【００３５】
局所外傷に起因する病理学的変化、例えば脳卒中、局所虚血、血管不全、低酸素性虚血性脳症、高血糖症、低血糖症、閉鎖性頭部外傷、又は直接的外傷など；
【００３６】
治療用薬物及び処置の負の副作用として生じる病理（例、抗痙攣用量のＮＭＤＡクラスのグルタミン酸受容体のアンタゴニスト、化学療法、抗生物質などに応答した帯状回ニューロン及び嗅内皮質ニューロンの変性）；ならびに
【００３７】
学習障害、例えばＡＤＤ、ＡＤＨＤ、読字障害、書字障害、計算障害、統合運動障害、及び情報処理障害。
【００３８】
多くの疾患が本発明から利益を得るであろう。その病態生理はＲＯＣＫ１及び／又は２キナーゼに関連する。ＣＮＳにおけるＲＯＣＫの活性は、多くの神経機能、例えば神経突起伸長及び退縮など、また、神経アポトーシスに関連する。成人において、損傷後のＣＮＳ軸索再増殖は、ミエリン関連シグナル（例えばＮｏｇｏ、ＭＡＧなど）により阻害される。ＲＯＣＫがこの現象に関与する。結果的に、ＲＯＣＫ活性の阻害がこれらの阻害シグナルの克服時に役立ち、従って、脊髄損傷、脳損傷、又は脳卒中後の回復における軸索再配線のために有益である。また、ＲＯＣＫはアポトーシス経路に関与する。ＲＯＣＫの阻害は、従って、ＣＮＳ又はＰＮＳ（末梢神経系）における（アポトーシス）細胞死に関連する疾患に有益であるはずである。典型的な疾患は、脳卒中、脳損傷、脳出血、及び神経変性病（例えば筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、パーキンソン病、遺伝性運動失調症、ＣＮＳの遺伝性代謝障害など）である。
【００３９】
心臓血管系において、ＲＯＣＫが血管緊張の調節に対する顕著な活性を有する。また、平滑筋又は心筋アポトーシス経路における関与が認められた。結果的に、ＲＯＣＫ阻害は、調節解除された血管緊張又は血管抵抗又は血管コンプライアンスを伴う疾患に有用であるはずである。そのような疾患は、例えば、以下を含む：クモ膜下出血に続く血管痙攣、狭心症（好ましくは、プリンツメタル型狭心症又は攣縮性狭心症）、心不全に関連する疾患（例、血管抵抗及び狭窄に起因する）、心筋梗塞、肺動脈高血圧、本態性高血圧、アテローム性動脈硬化症及び大動脈硬直、ならびにレーノー現象などの末梢血管疾患、ならびに勃起障害。癌細胞の転移は細胞移動に依存しており、ＲｈｏファミリーメンバーＧＴＰａｓｅのＲｈｏ、Ｒａｃ、及びＣｄｃ４２により空間的ならびに時間的に調節される複雑なプロセスである。特に、ＲｈｏエフェクターＲＯＣＫ  Ｉ及びＩＩがこれらのプロセスに関与する。例えば、膜小疱形成は、ＲＯＣＫにより誘導されることが示されており、アメーバ様運動はＲｈｏとＲＯＣＫの間での相互作用に完全に依存している。従って、ＲＯＣＫの阻害は（転移性）癌（例、前立腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌、神経膠芽細胞腫、肉腫、とりわけメラノーマ）の処置に有益でありうる。
【００４０】
Ｉ．定義
記憶システムは広く４つの主な型：エピソード、意味、作業、及び手続に分類することができる（Hwang, D. Y. & Golby, A. J. Epilepsy Behav (2005); Yancey, S. W. & Phelps, E. A. J Clin Exp Neuropsychol 23, 32-48 (2001)）。エピソード記憶は、特定の場所及び時間で起きた経験について自叙伝的な情報を記録し、検索するシステムを指す。意味記憶システムは、場所及び時間に無関係な一般的な事実知識（例、アリゾナの首都）を保存する。作業記憶は情報の一時的な維持及び使用を含み、手続記憶は、自動的に、そして、典型的には、無意識に作動する学習技能の作用である。エピソード記憶、意味記憶、及び作業記憶は、本質的に明示的（絶対的）及び陳述的（説明的）であり、手続記憶は明示的又は暗示的のいずれかでありうるが、しかし、常に非陳述的である（Tulving, E. Oxford University Press, New York, 1983); Budson, A. E., Price, B. H. Encyclopedia of Life Sciences (Macmillan, Nature Publishing Group, London, 2001); Budson, A. E. & Price, B. H. N Engl J Med 352, 692-9 (2005); Hwang, D. Y. & Golby, A.J Epilepsy Behav 8, 115-26 (2006)）。
【００４１】
記憶を損なう正常な加齢状態及び疾患状態は、限定はされないが、例えば以下を含む：神経変性障害、頭部及び脳の外傷、遺伝的障害、感染性疾患、炎症性疾患、投薬、薬物及びアルコール障害、癌、代謝障害、精神遅滞、ならびに学習障害及び記憶障害、例えば加齢に関連する記憶喪失及び加齢に関連する記憶障害（ＡＡＭＩ）、アルツハイマー病、タウオパシー、ＰＴＳＤ（外傷後ストレス症候群）、軽度認知障害、ＡＬＳ、ハンチントン舞踏病、健忘症、Ｂ１欠乏症、統合失調症、抑うつ及び双極性障害、脳卒中、水頭症、クモ膜下出血、血管不全、脳腫瘍、てんかん、パーキンソン病、大脳微小血管症など（Meyer, R. C., et al. Ann N Y Acad Sci 854, 307-17 (1998); Barrett, A. M. Postgrad Med 117, 47-53 (2005); Petersen, R. C. J Intern Med 256, 183-94 (2004); Calkins, M. E., et al. Am J Psychiatry 162, 1963-6 (2005)）、鎮痛剤、化学療法（「chemobrain」）、酸素欠乏、（例、人工心肺装置、麻酔、又は溺水を原因とする）、認知症（血管、前頭側頭、レヴィー小体、意味、原発性進行性失語症、ピック）、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核変性症、橋本脳症、ＡＤＤ、ＡＤＨＤ、読字障害及び他の学習障害、ダウン症、脆弱Ｘ症候群、ターナー症候群、ならびに胎児性アルコール症候群。記憶障害は、また、外科的手技、特に心臓手術、及び大血管の外科手術の続発症として起こりうる。疾患に加えて、進行性の記憶喪失が、加齢プロセスの正常な副産物である。
【００４２】
軽度認知障害（ＭＣＩ）という用語を使用して、正常な認知機能と臨床的に起こりうるＡＤの発生の間の移行帯を指す（Winblad, B. et al. J Intern Med 256, 240-6 (2004)）。種々の基準を利用してＭＣＩが定義されてきたが、しかし、それらは本質的に２つの大きな主題を有する：（１）ＭＣＩが、特定の形態の測定可能な認知欠損症を伴う非認知症患者を指し、及び（２）これらの患者は、臨床的な認知症に進行する高いリスクを伴う臨床的な症候群を表す。
【００４３】
「学習及び／又は記憶を改善する」という表現は、学習及び記憶を示す少なくとも１つのパラメーターの改善又は増強を指す。改善又は増強は、少なくとも１０%、場合により、少なくとも約２０%、少なくとも約３０%、少なくとも約４０%、少なくとも約５０%、少なくとも約６０%、少なくとも約７０%、少なくとも約８０%、少なくとも約９０%、少なくとも約１００%、少なくとも約１５０%、少なくとも約２００%などのパラメーターの変化である。学習及び記憶の改善は、当技術分野において公知の任意の方法により測定することができる。例えば、学習及び記憶を改善する本明細書に記載する化合物は、モーリス水迷路を使用してスクリーニングすることができる（例、材料及び方法のセクションを参照のこと）。Gozes et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 427-432 (1996)、放射状迷路、物体認識、オープンフィールド、Ｓａｃｋｔｏｒディスクなども参照のこと。記憶及び学習は、当業者に周知である本明細書に記載する方法又は他の方法、例えば、ランド（Randt）記憶試験、ウエスクラー記憶尺度、フォワードデジタルスパン検査（Forward Digit Span test）、又はカリフォルニア言語学習検査を使用してスクリーニングすることもできる。
【００４４】
「空間学習」という用語は、自分の環境について学習することを指し、どの物体がどこにあるかについての知識を要求する。それは、また、環境における複数の合図（cue）の間の関係についての情報を学習し、使用することに関する。動物での空間学習は、動物が報酬の位置を学習し、位置を覚えるために空間的な合図を使用することが可能になることにより検査することができる。例えば、空間学習は、放射状迷路（即ち、どのアームが食物を有するかの学習）又はモーリス水迷路（即ち、どこにプラットホームがあるかの学習）を使用して検査することができる。これらの課題を実施するために、動物は、試験室からの合図（物体、においなどの位置）を使用する。ヒトにおいて、空間学習を検査することもできる。例えば、被験者に絵を描くように依頼することができ、そして次に絵を取り去る。被験者は次に記憶から同じ絵を描くように依頼される。被験者により描かれた後の絵は、被験者における空間学習の程度を反映する。
【００４５】
学習障害は、聞く、話す、読む、書く、推論する、又は数学的な能力の取得及び使用における有意な困難により現れる障害の異種群を指す一般的な用語である。学習障害は、ＡＤＤ、ＡＤＨＤ、読字障害、書字障害、計算障害、統合運動障害、及び情報処理障害を含む。
【００４６】
本明細書において使用する「投与する」は、被験者に対する、経口投与、坐剤としての投与、局所接触、非経口、静脈内、腹腔内、筋内、病巣内、経口、経鼻もしくは皮下投与、髄腔内投与、又は除放デバイス（例、ミニ浸透圧ポンプ）の移植を指す。
【００４７】
本明細書において使用する「アルキル」という用語は、示した炭素原子数を有する直線又は分岐、飽和脂肪族基を指す。例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキルは、限定はされないが、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、イソプロヒル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチルなどを含む。
【００４８】
本明細書において使用する「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素、及びヨウ素を指す。
【００４９】
本明細書において使用する「ヘテロ環」という用語は、５〜８の員環及び２つの窒素ヘテロ原子を有する環系を指す。例えば、本発明において有用なヘテロ環は、限定されないが、ピラゾリジン、イミダゾリジン、ピペラジン、及びホモピペラジンを含む。本発明のヘテロ環はＮ結合であり、環状ヘテロ原子の１つを介して結合されていることを意味する。
【００５０】
本明細書において使用する「水和物」という用語は、少なくとも１つの水分子と複合体を形成する化合物を指す。本発明の化合物は１〜１０の水分子と複合体を形成することができる。
【００５１】
本発明の特定の化合物は、非溶媒和形態ならびに溶媒和形態（水和形態を含む）で存在することができる。一般的に、溶媒和形態は非溶媒和形態と等価であり、本発明の範囲内に包含されることが意図される。本発明の特定の化合物が、複数の結晶又は非晶質の形態で存在しうる。一般的に、全ての物理的形態は、本発明により検討される使用について等価であり、本発明の範囲内であるように意図される。
【００５２】
本明細書において使用する「塩」という用語は、本発明の方法において使用される化合物の酸性又は塩基性の塩を指す。医薬的に許容可能な塩の例示的な例は、鉱酸（塩酸、臭化水素酸、リン酸など）塩、有機酸（酢酸、プロピオン酸、グルタミン酸、クエン酸など）塩、四級アンモニウム（ヨウ化メチル、ヨウ化エチルなど）塩である。医薬的に許容可能な塩は非毒性であることが理解される。適した医薬的に許容可能な塩に関する追加情報は、Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985において見出すことができ、それは参照により本明細書において組み入れられる。
【００５３】
本発明の酸性化合物の医薬的に許容可能な塩は、塩基と形成される塩、即ち、陽イオン塩、例えばアルカリ及びアルカリ土類金属塩、例えばナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど、ならびにアンモニウム塩、例えばアンモニウム、トリメチルアンモニウム、ジエチルアンモニウム、及びトリス（ヒドロキシメチル）メチルアンモニウム塩。
【００５４】
同様に、酸性付加塩、例えば鉱酸、有機カルボン酸、及び有機スルホン酸（例、塩酸、メタンスルホン酸、マレイン酸）なども、塩基性基、例えばピリジンなどが構造の一部を構成するという条件で可能である。
【００５５】
中性形態の化合物は、塩を塩基又は酸と接触させ、そして従来の方法において親化合物を単離することにより再生してよい。親形態の化合物は、特定の物理的性質（例えば極性溶媒中での溶解性など）において種々の塩形態とは異なるが、しかし、他の点では、塩は本発明の目的のための親形態の化合物と等価である。
【００５６】
本明細書において使用する「被験者」という用語は、動物、例えば哺乳動物など（限定はされないが、霊長類（例、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウスなどを含む）を指す。好ましくは、被験者はヒトである。
【００５７】
本明細書において使用する「治療的有効量」又は「治療的有効量又は用量」又は「治療的十分量又は用量」又は「有効又は十分な量又は用量」は、それが投与されるための治療効果を産生する用量を指す。厳密な用量は処置の目的に依存し、そして公知の技術を使用して当業者により確認可能であるであろう（例、Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols.1-3, 1992); Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); Pickar, Dosage Calculations (1999); and Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, 2003, Gennaro, Ed., Lippincott, Williams & Wilkinsを参照のこと）。感作細胞において、治療的有効用量は、しばしば、非感作細胞での従来の治療的有効用量より低くなりうる。
【００５８】
ＩＩ．使用方法
方法が、式Ｉの化合物、その塩、水和物、及び溶媒和物の投与により記憶及び学習を改善するために提供される。以下の実施例において示す通り、本発明の化合物を使用して、記憶を増強し、神経可塑性を改善し、及び／又はアルツハイマー病を処置する。化合物は、例えば、経口で、非経口で、又は経鼻で投与することができる。長期投与では、低用量を使用することができる。本発明の化合物を他の薬物との組み合わせで使用し、疾患状態を処置する、又は学習及び記憶を改善することができる。さらに、本発明の化合物は、特異的で強力なＲＯＣＫ阻害剤として使用することができる。従って、それらはＲＯＣＫ関連疾患（例、クモ膜下出血に続く血管痙攣）の処置に適している。
【００５９】
一局面において、本発明の化合物は、特に強力で高度に特異的なＲＯＣＫ阻害剤である。化合物は、また、特にＰＩＭキナーゼ及びＩＲＡＫ１キナーゼについて阻害効果を示す。
【００６０】
ＰＩＭキナーゼは高度に医療に関連する。ＰＩＭキナーゼ（Ｐｉｍ−１、−２、及び−３）は、癌に関与する多くのシグナル伝達経路における重要なレギュレーターであるＣＡＭＫ（カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼ関連）群に属する高度に保存されたセリン−スレオニンキナーゼである。Ｐｉｍ−１は、モロニーマウス白血病ウイルス誘導性のＴ細胞リンパ腫において高頻度なプロウイルス挿入部位としてｃ−ｍｙｃと共に初めて同定された。発現させた場合、ＰＩＭキナーゼは強い生存因子であり、細胞周期の進行、アポトーシスの阻害、及び他のシグナル伝達経路の調節を誘導することができる。全て３つのｐｉｍ遺伝子についてのノックアウトマウスが正常に発生し、しかし、実質的に全ての組織における細胞数の減少のため身体サイズの低下を示す。Ｐｉｍキナーゼは細胞増殖及び生存の両方に寄与し、このように腫瘍形成における選択的な利点を提供する。多くのタンパク質がＰｉｍキナーゼによりリン酸化される（例えば転写リプレッサー（ＨＰ１）、アクチベーター、例えばＮＦＡＴｃ１及びｃ−Ｍｙｂなど、コアクチベーター（ｐ１００）、ならびに細胞周期のレギュレーター、例えばｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１、Ｃｄｃ２５Ａホスファターゼ、及びキナーゼＣ−ＴＡＫ１／ＭＡＲＫ３／Ｐａｒ１Ａなど）。ＰＩＭ阻害剤は、従って、ＰＩＭキナーゼを発現する癌細胞において細胞死を誘導し、他の標的化された化学療法薬を用いた処置に対して癌細胞の感受性を促進することができる。ＲＯＣＫに対するその阻害効果の他、ＰＩＭキナーゼに対する特別な特異的阻害効果を示す本発明の化合物は、従って、単剤として、ならびに、他の薬剤との組み合わせで広い治療可能性を有する（例、当業者に公知の化学療法薬及び投与計画、例えばイマチニブメシラート、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロランブシル、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、アザチオプリン、メルカプトプリン、ドキソルビシン、エピルビシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、エトポシド、テニポシド、ポドフィロトキシン、パクリタキセル、イリノテカン、トポテカン、メルファラン、ブスルファン、カペシタビン、及びその組み合わせなど）。
【００６１】
ＰＩＭキナーゼは、多くの悪性腫瘍（前立腺癌、膵癌、乳癌、肺癌、メラノーマ、肝臓癌、胃腺癌、びまん性大細胞型リンパ腫、ならびにいくつかの型の白血病及び他の血液悪性腫瘍を含む）に寄与するため、ＰＩＭキナーゼ阻害は多数の悪性腫瘍の処置のために有用である。特に、ＰＩＭキナーゼ阻害は、白血病、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＡＭＬ、又はＣＭＬ、ならびにホジキン及び非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、ならびに骨髄増殖性疾患の処置に有用である（Amaravadi et al., J Clin Invest 2005, 115, 2618; Chiang et al., Int J Oral Maxillofac Surg. 2006, 35, 740; Dai et al. Acta Pharmacol Sin. 2005, 26, 364; Hu et al., J Clin Invest. 2009, 119, 362; Popivanova et al., Cancer Sci. 2007, 98, 321; Reiser-Erkan et al., Cancer Biol Ther. 2008, 7, 1352; Shah et al., Eu J Cancer 2008, 44, 2144; Tong et al., Bioorg Med Chem Lett. 2008, 18, 5206; Wang et al., J Vet Sci. 2001, 2, 167; Xia et al., J Med Chem. 2009, 52, 74; Zemskova et al., J Biol Chem. 2008, 283, 20635）。実際に、多くの臨床試験が、ＰＩＭキナーゼを標的とする化合物、例えばＳＧＩ−１７７６などを用いて開始されている。従って、ＰＩＭキナーゼに対する特別な特異的阻害効果を示す本発明の化合物は、新たな高度に魅力的で望ましい薬物候補である。特定の利点はＰａｎ−ＰＩＭ活性、及び指定の化合物の高い特異性である。
【００６２】
インターロイキン１受容体関連キナーゼ１（ＩＲＡＫ１）は、刺激時にインターロイキン１受容体（ＩＬ１Ｒ）と結合する推定セリン／スレオニンキナーゼである。この遺伝子は、転写因子ＮＦ−カッパＢのＩＬ１誘導性上方調節に部分的に関与する。ＩＲＡＫ遺伝子は、多様な疾患、例えば感染症、アテローム性動脈硬化症、敗血症、自己免疫疾患、及び癌などに関連する。ＩＲＡＫは、複数のシグナル伝達ネットワークならびに多様な組織及び細胞、例えば脂肪細胞、肝細胞、筋細胞、内皮細胞、及び上皮細胞に関与する。考えられるのは、これらの分子は、種々のヒトの炎症性疾患（ＭＳ、炎症性腸疾患、ライター病、及び関節リウマチなど）のための新たな治療戦略を設計するための特別な標的となる。証拠は、インターロイキン１受容体関連キナーゼ１（ＩＲＡＫ１）が、Ｔｏｌｌ様受容体経路（ＴＬＲ）において及び転写因子ＮＦ−カッパＢの調節において基本的な役割を果たすことを示唆する。ヒトのＩＲＡＫ遺伝子中の変異が、種々のヒトの炎症性疾患に関連することが見出されている。マウスにおけるＩＲＡＫ−１遺伝子の欠失によって、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）のリスクが減少する（Deng et al., J Immunol. 2003, 170, 2833）。さらに、ＩＲＡＫ−１タンパク質は、構成的に活性化／ＳＵＭＯ化（sumoylated）されており、ヒトのアテローム性動脈硬化症患者からの白血球中の細胞核に局在化することが示されている（Huang et al., J Biol Chem. 2004, 279, 51697）。さらに、ヒト集団ベースの試験によって、ＩＲＡＫ−１遺伝子中の遺伝的変異が、アテローム性動脈硬化症の重症度及び血清Ｃ反応性タンパク質レベルに相関することが示されている（Lakoski et al., Exp Mol Pathol. 2007, 82, 280）。
【００６３】
２つのＩＲＡＫ−１ハプロタイプがあり、そして稀なバリアントハプロタイプ（ヒト集団の〜１０%）が３つのエクソン単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）を含む。バリアントＩＲＡＫ−１遺伝子を持つヒトは、より高い血清ＣＲＰレベルを有する傾向があり、糖尿病及び高血圧のより高いリスクがある。ＩＲＡＫ−１遺伝子変異も敗血症のリスクに関連する。Arcaroliらは、稀なバリアントＩＲＡＫ−１ハプロタイプを伴う敗血症患者が、ショックの発生率の増加、機械的換気補助の長期必要性、及びより大きな６０日間死亡率を有することを実証した（Arcaroli et al., Am J Respir Crit Care Med. 2006, 173, 1335）。
【００６４】
インターロイキン受容体関連キナーゼＭ（ＩＲＡＫ−Ｍ）は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）シグナル伝達のＮＦ−カッパＢ媒介性の負のレギュレーターである。負のレギュレーターにおける機能的突然変異は、エンドトキシン耐性の低下及び炎症反応の増加を誘導しうる。ＴＬＲシグナル伝達経路の負の調節の障害は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の発生に部分的に関与しうる。ＩＲＡＫ阻害が有益でありうる重要な他の疾患は、脳卒中、脊髄損傷、脳外傷、ギラン・バレー症候群を含む。特に興味深いのは、自己免疫疾患、また、感染に関連する炎症状態である。
【００６５】
別の局面において、患者に治療的有効量の式：
【化２】
2011519972.tif 000004
の化合物を投与することによる、不安、抑うつ、双極性障害、単極性障害、及び外傷後ストレス障害について患者を処置するための方法が提供される。
【００６６】
一例において、化合物は１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンである。
【００６７】
他の局面において、ＣＳＮＫ１Ｅ、ＣＳＮＫ１Ａ１Ｌ、ＣＳＮＫ１Ｄ、ＭＥＲＴＫ、ＳＬＫ、ＩＲＡＫ１、ＳＴＫ１０、ＭＡＰＫ１２、ＰＨＫＧ２、ＭＡＰＫ１１、ＭＥＴ、ＡＸＬ、ＳＴＫ３２Ｂ、ＡＵＲＫＣ、ＣＬＫ３、ＲＰＳ６ＫＡ６、ＰＤＧＦＲＢ、ＫＤＲ、ＣＤＫ２からなる群より選択されるキナーゼに関連する状態を被験者において処置するための方法を提供し、方法は、それを必要とする患者に、治療的有効量の式：
【化３】
2011519972.tif 000005
の化合物を投与することを含む。
【００６８】
ＩＩＩ．化合物
本発明は式Ｉ：
【化４】
2011519972.tif 000006
（式中、Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ、及びハロゲンからなる群より選択される員である。一実施態様において、Ｒ１は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される）
の化合物を提供する。
【００６９】
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ４、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４）Ｒ４、−Ｎ（Ｒ４）−Ｃ（Ｏ）−Ｒ４、−Ｎ（Ｒ４）Ｒ４、及び−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４からなる群より選択される員であるのに対し、式中、Ｒ２は、イソキノリン成分の位置６、７、又は８、例えば位置８などに局在化される。
【００７０】
Ｒ３は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員である。
【００７１】
各Ｒ４は、非依存的に、水素、Ｃ１−６アルキル、及びＣ３−８シクロアルキルからなる群より選択される員である。
【００７２】
下付き文字ｎは、０、１、又は２、好ましくは１又は２である。
【００７３】
一部の実施態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、又はＲ４が、アルキル、アルコキシ、又はハロアルキル基であり、基はそれぞれＣ１−３アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、及びＣ１−３ハロアルキルより選択される。
【００７４】
式Ｉの化合物は、また、その塩、水和物、及び溶媒和物である。
【００７５】
一般的に、式Ｉの化合物、ならびにそれらの塩及び水和物は、十分に確立された方法論を使用して調製することができ、当業者の共通の知識に基づく。これらは、例えば、米国特許第４，６７８，７８３号及び第５，９４２，５０５号ならびに欧州特許第１８７，３７１号において記載されており、それらはその全体が参照により本明細書において組み入れられる。本発明の代表的な化合物についてのより具体的な方法論が、以下に詳細に提示されている。
【００７６】
一部の実施態様において、本発明の化合物は式Ｉであり、式中、Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ、及びハロゲン、例えば水素、ハロゲン、及びＣ１−６アルキルなどからなる群より選択される員であり、一部の実施態様において水素及びＣ１−６アルキルであり；Ｒ２はＣ１−６アルキルであるのに対し、Ｒ２は、イソキノリン成分の位置６、７、又は８、例えば位置８などに局在化され；Ｒ３は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であ；ならびに、ｎは０、１、又は２、例えば１又は２である。これらの実施態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、又はＲ４が、アルキル、アルコキシ、又はハロアルキル基であり、基はそれぞれＣ１−３アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、又はＣ１−３ハロアルキルである。
【００７７】
一実施態様において、化合物は式：
【化５】
2011519972.tif 000007
である。
【００７８】
例となる化合物は１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンである。化合物を合成するための例示的方法を図１に描写する。関連化合物を同様に調製することができる。
【００７９】
他の実施態様において、本発明の化合物は式Ｉであり、式中、Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ、及びハロゲンからなる群より、例えば水素、ハロゲン、及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり、例えば水素及びＣ１−６アルキルであり；Ｒ２はＣ１−６アルコキシであるのに対し、Ｒ２は、イソキノリン成分の位置６、７、又は８、例えば位置８などに局在化され；Ｒ３は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり；ならびに、ｎは０、１、又は２、例えば１又は２である。一部の実施態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、又はＲ４が、アルキル、アルコキシ、又はハロアルキル基であり、基はそれぞれＣ１−３アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、又はＣ１−３ハロアルキルである。そのような化合物は、特に強力で高度に特異的なＲＯＣＫ阻害剤である。従って、ＲＯＣＫ阻害剤としての化合物の使用方法も、本発明の実施態様である。ＲＯＣＫ阻害の他、この群の化合物は、特にＰＩＭキナーゼだけに、及びＩＲＡＫ１キナーゼに阻害効果を示す。従って、ＰＩＭキナーゼ及び／又はＩＲＡＫ１キナーゼとしての化合物の使用方法が、本発明のさらなる実施態様である。
【００８０】
一実施態様において、化合物は式：
【化６】
2011519972.tif 000008
又は式：
【化７】
2011519972.tif 000009
である。
【００８１】
本発明の化合物は、特に強力なＲＯＣＫ阻害剤である。また、本発明の化合物は、特異的にＰＩＭ及びＩＲＡＫ１キナーゼを阻害することができる。一部の実施態様において、従って、本発明の化合物を使用して、ＲＯＣＫもしくはＰＩＭキナーゼ又はＩＲＡＫ１キナーゼを阻害することができる。
【００８２】
別の例となる化合物は１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンである。化合物を合成する方法を図２に描写する。関連化合物を同様に調製することができる。１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンは、特に強力で高度に特異的なＲＯＣＫ阻害剤である。従って、ＲＯＣＫ阻害剤としてのこの化合物の使用方法も、本発明の実施態様である。ＲＯＣＫ阻害の他、この化合物は、特にＰＩＭキナーゼに、及びＩＲＡＫ１キナーゼに選択的な阻害効果を示す。従って、ＰＩＭキナーゼ及び／又はＩＲＡＫ１キナーゼの阻害剤としてのこの化合物の使用方法が、本発明のさらなる実施態様である。
【００８３】
一部の実施態様において、本発明の化合物は式Ｉであり、式中、Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ、及びハロゲンからなる群より、例えば水素、ハロゲン、及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり、例えば水素及びＣ１−６アルキルであり；Ｒ２は−Ｃ（Ｏ）−Ｒ４であり；式中、Ｒ４は、水素、Ｃ１−６アルキル、及びＣ３−８シクロアルキルからなる群より選択される員であり；及びそれに対し、Ｒ２は、イソキノリン成分の位置６、７、又は８、例えば位置８などに局在化され；Ｒ３は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり；ならびに、ｎは０、１、又は２、例えば１又は２である。一部の実施態様において、Ｒ１、Ｒ３、又はＲ４が、アルキル、アルコキシ、又はハロアルキル基であり、基はそれぞれＣ１−３アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、又はＣ１−３ハロアルキルである。
【００８４】
一実施態様において、化合物は式：
【化８】
2011519972.tif 000010
又は式：
【化９】
2011519972.tif 000011
である。
【００８５】
別の例となる化合物は、１−（１−ヒドロキシ−８−アセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン又は１−（８−アセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンである。化合物の例示的合成を図３に描写する。関連化合物を同様に調製することができる。
【００８６】
他の実施態様において、本発明の化合物は式Ｉであり、式中、Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ、及びハロゲンからなる群より、例えば水素、ハロゲン、及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり、例えば水素及びＣ１−６アルキルであり；Ｒ２は−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ４）Ｒ４であり；式中、Ｒ４は、水素、Ｃ１−６アルキル、及びＣ３−８シクロアルキルからなる群より選択される員であり；及びそれに対し、Ｒ２は、イソキノリン成分の位置６、７、又は８、例えば位置８などに局在化され；Ｒ３は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり；ならびに、ｎは０、１、又は２、例えば１又は２である。一部の実施態様において、Ｒ１、Ｒ３、又はＲ４が、アルキル、アルコキシ、又はハロアルキル基であり、基はそれぞれＣ１−３アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、又はＣ１−３ハロアルキルである。
【００８７】
一部の実施態様において、化合物は式：
【化１０】
2011519972.tif 000012
である。
【００８８】
別の例示的化合物は、１−（１−メチル−８−カルボキサミド−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン又は１−（１−エチル−８−カルボキサミド−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンである。例示的合成を図５に描写する。関連化合物を同様に調製することができる。
【００８９】
他の実施態様において、本発明の化合物は式Ｉであり、式中、Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ、及びハロゲンからなる群より、例えば水素、ハロゲン、及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり、例えば水素及びＣ１−６アルキルであり；Ｒ２は−Ｎ（Ｒ４）−Ｃ（Ｏ）−Ｒ４であり；式中、Ｒ４は、水素、Ｃ１−６アルキル、及びＣ３−８シクロアルキルからなる群より選択される員であり；及びそれに対し、Ｒ２は、イソキノリン成分の位置６、７、又は８、例えば位置８などに局在化され；Ｒ３は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり；ならびに、ｎは０、１、又は２、例えば１又は２である。ここで、例えば、Ｒ１、Ｒ３、又はＲ４が、アルキル、アルコキシ、又はハロアルキル基であり、基はそれぞれＣ１−３アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、又はＣ１−３ハロアルキルである。
【００９０】
一部の実施態様において、化合物は、式：
【化１１】
2011519972.tif 000013
又は式：
【化１２】
2011519972.tif 000014
である。
【００９１】
例となる合成経路を図７、図８、及び図９に描写する。関連化合物を同様に調製することができる。別の例示的化合物は、１−（８−アミノアセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンである。
【００９２】
一部の実施態様において、本発明の化合物は式Ｉであり、式中、Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ、及びハロゲンからなる群より、例えば水素、ハロゲン、及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり、例えば水素及びＣ１−６アルキルであり；Ｒ２は−Ｎ（Ｒ４）−Ｒ４であり；式中、Ｒ４は、水素、Ｃ１−６アルキル、及びＣ３−８シクロアルキルからなる群より選択される員であり；及びそれに対し、Ｒ２は、イソキノリン成分の位置６、７、又は８、例えば位置８などに局在化され；Ｒ３は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり；ならびに、ｎは０、１、又は２、例えば１又は２である。ここで、例えば、Ｒ１、Ｒ３、又はＲ４が、アルキル、アルコキシ、又はハロアルキル基であり、基はそれぞれＣ１−３アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、又はＣ１−３ハロアルキルである。
【００９３】
一部の実施態様において、化合物は、式：
【化１３】
2011519972.tif 000015
又は式：
【化１４】
2011519972.tif 000016
である。
【００９４】
例示的化合物は、１−（８−アミノメチル−５イソキノリン−スルホニル）２−メチル−ピペラジンである。１つの合成経路を図１０に描写する。関連化合物を同様に調製することができる。
【００９５】
他の実施態様において、本発明の化合物は式Ｉであり、式中、Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ、及びハロゲンからなる群より、例えば水素、ハロゲン、及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり、例えば水素及びＣ１−６アルキルであり；Ｒ２はハロゲン、好ましくは塩素であり；それに対し、Ｒ２は、イソキノリン成分の位置６、７、又は８、例えば位置８などに局在化され；Ｒ３は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり；ならびに、ｎは０、１、又は２、例えば１又は２である。ここで、例えば、Ｒ１、Ｒ３、又はＲ４が、アルキル、アルコキシ、又はハロアルキル基であり、基はそれぞれＣ１−３アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、又はＣ１−３ハロアルキルである。
【００９６】
一部の実施態様において、化合物は、式：
【化１５】
2011519972.tif 000017
又は式：
【化１６】
2011519972.tif 000018
である。
【００９７】
他の実施態様において、本発明の化合物は式Ｉであり、式中、Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ、及びハロゲンからなる群より、例えば水素、ハロゲン、及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり、例えば水素及びＣ１−６アルキルであり；Ｒ２はＣ１−６ハロアルキルであり；それに対し、Ｒ２は、イソキノリン成分の位置６、７、又は８、例えば位置８などに局在化され；Ｒ３は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり；ならびに、ｎは０、１、又は２、例えば１又は２である。ここで、例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、又はＲ４が、アルキル、アルコキシ、又はハロアルキル基であり、基はそれぞれＣ１−３アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、又はＣ１−３ハロアルキルである。
【００９８】
一部の実施態様において、化合物は式：
【化１７】
2011519972.tif 000019
である。
【００９９】
別の例示的化合物は、１−（１−メチル−８−トリフルオロメチル−５イソキノリン−スルホニル）２−メチル−ピペラジンである。例となる合成スキームを図１１に描写する。関連化合物を同様に調製することができる。
【０１００】
一部の実施態様において、本発明の化合物は式Ｉであり、式中、Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ、及びハロゲンからなる群より、例えば水素、ハロゲン、及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり、例えば水素及びＣ１−６アルキルであり；Ｒ２は−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり；式中、Ｒ４は、水素、Ｃ１−６アルキル、及びＣ３−８シクロアルキルからなる群より選択される員であり；及びそれに対し、Ｒ２は、イソキノリン成分の位置６、７、又は８、例えば位置８などに局在化され；Ｒ３は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選択される員であり；ならびに、ｎは０、１、又は２、好ましくは１又は２である。ここで、例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、又はＲ４が、アルキル、アルコキシ、又はハロアルキル基であり、基はそれぞれＣ１−３アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、又はＣ１−３ハロアルキルである。
【０１０１】
ＩＶ．記憶及び学習を改善するための製剤
本発明の化合物は、当業者に公知の種々の異なる方法で製剤化することができる。医薬的に許容可能な担体は、一部では、投与中の特別な組成物により、ならびに組成物を投与するために使用される特別な方法により決定する。それ故に、本発明の医薬的組成物の多種多様な適した製剤がある（例、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 20th ed., 2003、上記を参照のこと）。有効な製剤は、経口及び経鼻製剤、非経口投与のための製剤、及び除放を伴うように製剤化された組成物を含む。
【０１０２】
経口投与に適した製剤は以下からなる：（ａ）溶液、希釈剤（例えば水、生理食塩水、又はＰＥＧ４００など）中に懸濁させた有効量の本発明の化合物など；（ｂ）カプセル、小袋、デポー、又は錠剤、各々が、液体、固体、粒剤、又はゼラチンとして所定量の活性成分を含む；（ｃ）適切な液体中の懸濁剤；（ｄ）適した乳剤；及び（ｅ）貼付剤。医薬的な形態は、以下の１つ又は複数を含むことができる：ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、リン酸カルシウム、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、微結晶性セルロース、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸及び他の賦形剤、着色剤、増量剤、結合剤、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、防腐剤、香味剤、着色料、崩壊剤、ならびに医薬的に適合性がある担体。ロゼンジ形態は、香料中の活性成分（例、スクロース）、ならびに不活性基剤中の活性成分を含むパステル剤、例えば、活性成分に加えて、当技術分野において公知の担体を含むゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシア乳剤、ゲルなどを含むことができる。
【０１０３】
医薬的調製物は、好ましくは、単位用量の形態である。そのような形態において、調製物は、適量の活性成分を含む単位用量に細分される。単位用量の形態は包装された調製物、離散量の調製物を含むパッケージ、例えば小包錠剤、カプセル、及びバイアル又はアンプル中の粉末などでありうる。また、単位用量の形態は、カプセル、錠剤、カシェ剤、又はロゼンジ自体でありうる。又は、それは、適切な数の包装形態のこれらのいずれかでありうる。組成物は、所望の場合、他の適合性のある治療剤も含むことができる。好ましい医薬的調製物は、徐放性製剤において本発明の化合物を送達することができる。
【０１０４】
本発明において有用な医薬的調製物は、徐放性製剤も含む。一部の実施態様において、本発明において有用な徐放性製剤は、米国特許第６，６９９，５０８号に記載されており、米国特許第７，１２５，５６７号に従って調製することができ、両方の特許が参照により本明細書において組み入れられる。
【０１０５】
医薬的調製物は、典型的には、哺乳動物（ヒト及び非ヒト哺乳動物を含む）に送達される。本方法を使用して処置される非ヒト哺乳動物は、家庭用家畜（即ち、イヌ、ネコ、マウス、げっ歯類、及びウサギ）及び農業用動物（ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ）を含む。
【０１０６】
本発明の方法を実行する際、医薬的組成物を単独で、又は他の治療用もしくは診断用薬剤との組み合わせで使用することができる。
【０１０７】
Ｖ．記憶及び学習を改善するための投与
本発明の化合物は、必要な頻度（１時間１回、１日１回、週１回、又は月１回を含む）で投与することができる。本発明の医薬的方法において利用される化合物は、１日に約０．０００１mg/kg〜約１０００mg/kgの初回投与量で投与される。１日用量の範囲、約０．０１mg/kg〜約５００mg/kg、又は約０．１mg/kg〜約２００mg/kg、又は約１mg/kg〜約１００mg/kg、又は約１０mg/kg〜約５０mg/kgを使用することができる。投与量は、しかし、患者の必要条件、処置中の状態の重症度、及び用いている化合物に応じて変動しうる。例えば、投与量は、特定の患者において診断された疾患の型及び病期を考慮して経験的に決定することができる。患者に投与する用量は、本発明に関連して、患者において経時的に有益な治療反応をもたらすのに十分であるべきである。用量のサイズは、また、特定の患者における特定の化合物の投与に伴う任意の有害な副作用の存在、性質、及び程度により決定されるであろう。特定の状況での適当な投与量の決定は、開業医の技能内である。一般的に、処置は、化合物の最適用量未満である、より少ない投与量を用いて開始する。その後、投与量を、状況下での最適な効果に達するまで、少しの増分だけ増加させる。利便性のために、１日の全投与量を、所望の場合、分割し、その日の間に部分で投与してよい。用量を、処置する医師が決定する通りに、毎日、又は隔日で与えることができる。用量を、定期的に又は継続的により長期間（数週、数ヶ月、又は数年）にわたり、例えば皮下カプセル、小袋又はデポー、移植マイクロポンプの使用を通じて、又は貼付剤を介して与えることもできる。
【０１０８】
医薬的組成物は、患者に、種々の方法（局所、非経口、静脈内、皮内、皮下、筋内、結腸内、直腸内、又は腹腔内を含む）で投与することができる。好ましくは、医薬的組成物は、非経口、局所、静脈内、筋内、皮下、経口、又は経鼻、例えば吸入を介して投与する。
【０１０９】
本発明の方法を実行する際、医薬的組成物を単独で、又は他の治療用もしくは診断用薬剤との組み合わせで使用することができる。本発明の組み合わせプロトコルにおいて使用される追加薬物は、別々に投与することができる、又は、組み合わせプロトコルにおいて使用される１つ又は複数の薬物を一緒に、例えば混和剤中で投与することができる。１つ又は複数の薬物が別々に投与される場合、各薬物の投与の時期及びスケジュールは変動しうる。他の治療用又は診断用の薬剤を、本発明の化合物と同じ時間に、別々に、又は異なる時間に投与することができる。
【０１１０】
ＶＩ．実施例
実施例１：１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの調製
【０１１１】
１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンを図１に従って製造した。２０gの２−メチルベンズアルデヒド及び１７．５gのアミノアセトアルデヒドジメチルアセタールを２００mlのトルエン中に溶解させ、そして３時間、還流冷却器を使用して沸騰させた。溶媒を除去し、残留物を１２０mlの乾燥ＴＨＦ中に溶解した。１５．９mlのエチルクロロホルメートを液滴として０℃で加え、続いて５分間０℃で撹拌した。周囲温度に温めた後、１９．６mlの亜リン酸トリメチルを液滴として加え、続いて一晩撹拌した。溶媒を蒸留除去し、残留物をトルエンで２回濃縮し、残りのリン酸トリメチルを除去した。油状の残留物を、アルゴン雰囲気下で、２００mlの乾燥ジクロロメタン中に溶解させた。続いて、１１０mlの四塩化チタンを注意深く加えた。溶液を、還流冷却器を使用して一晩沸騰させ、続いて氷中に注意深く注いだ。ｐＨ値を、１０%水酸化ナトリウム溶液を使用して８に調整した。水相を５００mlのジクロロメタンで３回抽出し、合わせた有機相を水及び飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、続いて、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮し、黄色の油である１１．８gの８−メチル−イソキノリンを産生した。収量は１１．８gの８−メチル−５イソキノリンであり、黄色の油である。
【０１１２】
７．３gの８−メチル−５イソキノリンを５０mlの氷冷硫酸中に溶解させ、続いてさらに冷却しながら５０mlの発煙硫酸を加えた。３時間８０℃で撹拌後、溶液を氷水に注ぎ、沈殿物をろ過し、エチルエーテル中に懸濁し、再びろ過し、エーテルで洗浄し、真空乾燥させ、７．４gの８−メチル−５イソキノリン−スルホン酸をもたらし、それは茶色の固体である。
【０１１３】
１gの８−メチル−５イソキノリン−スルホン酸を１０mlのチオニルクロライド中に懸濁した。０．１mlのＤＭＦを加えた後、溶液を５時間、還流冷却器を使用して加熱した。溶媒を真空下で除去し、油状の残留物をジクロロメタンで２回濃縮した。固体残留物を１０mlのジクロロメタン中に懸濁し、ろ過し、ジクロロメタンで洗浄し、３５４mgの黄色の固形を産生した。固体物質を１０mlの冷水中に懸濁し、ｐＨ値を飽和炭酸水素ナトリウム溶液でｐＨ６−７に調整した。５mlのジクロロメタンでの抽出後、有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させて、５mlのジクロロメタン中の３５２mgのホモピペラジンの溶液に液滴として０℃で加えた。０℃で１時間及び周囲温度で３時間の撹拌後、溶液を１０mlの水で２回洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濃縮した。結果として生じた油をクロマトグラフィーにより精製し、水−アセトン混合液中で沈殿させた。これは、固体物質として２４０mgの１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンをもたらした。
【０１１４】
実施例２：１−（１−クロロ−８−メトキシ５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの調製
【０１１５】
１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンを図１に従って製造した。１８．５gの２−メトキシベンズアルデヒド及び１４gのアミノアセチルアルデヒドジメチルアセタールを１８０mlのトルエン中に溶解させ、水分離器を使用して３時間加熱した。溶媒を除去し、残留物を１０５mlの乾燥ＴＨＦ中に溶解した。１０．３mlのエチルクロロホルメートを−１０℃で液滴として加えた。２０．６mlの亜リン酸トリメチルを周囲温度で加えた。２０時間の撹拌後、溶媒を蒸留除去し、残留物を５０mlのトルエンで３回濃縮した。油状の残留物を、アルゴン雰囲気下で、１８０mlの乾燥ジクロロメタン中に溶解させた。９０mlの四塩化チタンを注意深く加え、溶液を、還流冷却器を使用して２４時間加熱した。溶液を、７００gの氷及び３４０mlの濃縮アンモニア溶液上に注いだ。沈殿物をろ過し、１リットルのジクロロメタンで抽出した。抽出物及びろ液を合わせて、１N塩酸で３回抽出した。合わせた水相を１００mlのジクロロメタンで洗浄し、ｐｈ値を濃縮アンモニア溶液で１０に調整した。水相を、３５０mlのジクロロメタンで３回抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、溶媒を除去し、茶色の油である１４．５gの８−メトキシ−イソキノリンをもたらした。
【０１１６】
１２gの油を５０mlの酢酸中に溶解させ、１２mlの３０%  Ｈ２Ｏ２溶液を液滴として加えた。７０℃で３時間の撹拌後、さらに１２mlの３０%  Ｈ２Ｏ２溶液を加え、さらに９時間、７０℃で撹拌した。周囲温度で１５０mlの飽和炭酸ナトリウム溶液を加えた。水相を２５０mlのジクロロメタンで３回抽出し、合わせた有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を除去し、残留物をクロマトグラフィーにより精製し、８．５gの８−メトキシ−イソキノリン−Ｎ−オキシドを産生させ、それは黄色の固体である。
【０１１７】
３．８gの８−メトキシ−イソキノリン−Ｎ−オキシドを、アルゴン雰囲気下で、５７mlのホスホリルクロライド中に溶解させ、還流冷却器を使用して３時間加熱した。溶剤を真空下で蒸留除去し、残留物を冷飽和炭酸ナトリウム溶液中に溶解させた。水相を１００mlのジクロロメタンで３回抽出し、合わせた有機相を５０mlの水で洗浄し、続いて硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶剤を除去し、残留物をクロマトグラフィーにより精製し、１．１gの１−クロロ−８−メトキシ−イソキノリンを産生させた。
【０１１８】
８００mgの１−クロロ−８−メトキシ−イソキノリンを５mlの氷冷硫酸中に溶解させ、続いてさらに冷却しながら液滴として５mlの発煙硫酸を加えた。２時間１００℃で撹拌後、溶液を氷水に注ぎ、沈殿物をろ過し、冷水で洗浄し、真空乾燥させ、１gの１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホン酸をもたらし、それは茶色の固体である。
【０１１９】
１．３５gの１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホン酸を１０mlのチオニルクロライド中に懸濁した。０．１mlのＤＭＦを加えた後、溶液を２時間、還流冷却器を使用して加熱し、一晩撹拌した。溶媒を真空下で除去し、油状の残留物をジクロロメタンで２回濃縮した。残留物を１０mlのジクロロメタン中に懸濁し、ろ過し、そしてジクロロメタンで洗浄した。結果として生じた６１８mgの黄色の産物を１０mlの冷水中に懸濁し、そしてｐＨ値を飽和炭酸水素ナトリウム溶液でｐＨ７に調整した。５mlのジクロロメタンでの抽出後、有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させて、５mlのジクロロメタン中の５０８mgのホモピペラジンの溶液に液滴として０℃で加えた。０℃で２時間及び周囲温度で３時間の撹拌後、溶液を２０mlの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させて、濃縮した。残留物をクロマトグラフィーにより精製し、ジクロロメタン及びアセトンの５０mlの１：１混合物中に再懸濁した。４℃で一晩インキュベートした後、沈殿物をろ過し、真空乾燥した。これは、固体として１４７mgの１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンをもたらした。
【０１２０】
実施例３：１−（１−ヒドロキシ−８−アセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（８−アセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの調製
【０１２１】
１−（１−ヒドロキシ−８−アセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（８−アセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンを図３に示す合成方法に従って製造する。
【０１２２】
実施例４：１−（１−ヒドロキシ−７−アセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（７−アセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの調製
【０１２３】
１−（１−ヒドロキシ−７−アセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（７−アセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンを図４に示す合成方法に従って製造する。
【０１２４】
実施例５：１−（１−メチル−８−カルボキサミド−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（１−エチル−８−カルボキサミド−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの調製
【０１２５】
１−（１−メチル−８−カルボキサミド−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（１−エチル−８−カルボキサミド−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンを図５に示す合成方法に従って製造する。
【０１２６】
実施例６：１−（１−メチル−７−カルボキサミド−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（１−エチル−７−カルボキサミド−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの調製
【０１２７】
１−（１−メチル−７−カルボキサミド−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（１−エチル−７−カルボキサミド−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンを図６に示す合成方法に従って製造する。
【０１２８】
実施例７：１−（８−アミノアセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの調製
【０１２９】
１−（８−アミノアセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンを図７に示す合成方法に従って製造する。
【０１３０】
実施例８：１−（６−アミノアセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの調製
【０１３１】
１−（６−アミノアセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンを図８に示す合成方法に従って製造する。
【０１３２】
実施例９：１−（７−アミノアセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの調製
【０１３３】
１−（７−アミノアセチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンを図９に示す合成方法に従って製造する。
【０１３４】
実施例１０：１−（８−アミノメチル−５イソキノリン−スルホニル）２−メチル−ピペラジンの調製
【０１３５】
１−（８−アミノメチル−５イソキノリン−スルホニル）２−メチル−ピペラジンを図１０に示す合成方法に従って製造する。
【０１３６】
実施例１１：１−（１−メチル−８−トリフルオロメチル−５イソキノリン−スルホニル）２−メチル−ピペラジンの調製
【０１３７】
１−（１−メチル−８−トリフルオロメチル−５イソキノリン−スルホニル）２−メチル−ピペラジンを図１１に示す合成方法に従って製造する。
【０１３８】
実施例１２：ファスジル誘導体を用いたＲＯＣＫ阻害
【０１３９】
ｒｈｏキナーゼ２（ＲＯＣＫ）に対する試験化合物の阻害効果を、以下の製造者の指示に従って、組換え活性型ｒｈｏキナーゼ２（Upstate, Lake Placid, NY, USA）及びＲＯＣＫアッセイキット（Cell Biolabs Inc., San Diego, CA, USA）を使用して分析した。組換えｒｈｏキナーゼ２を、試験化合物の存在において、キナーゼ基質を含むキナーゼ反応バッファー中に溶解した。試験化合物を最終濃度０．１〜１００μMで加えた。試験化合物を伴わないアッセイをコントロールとした。ファスジルをＲＯＣＫ阻害のポジティブコントロールとした。アッセイを３０℃で３０〜６０分間インキュベートし、続いて、５０%の反応−容積の０．５M  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）を加えることにより停止させた。洗浄工程後、リン酸化キナーゼ基質を、特異的な抗ホスホＭＹＰＴ１（Ｔｈｒ６９６）抗体及びＨＲＰ抱合二次抗体を使用して定量化した。
【０１４０】
図１２は、ファスジル（ポジティブコントロール）又は化合物１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン（「メチル−ファスジル」）又は１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン（「メトキシ−ファスジル」）の存在に依存した、測定されたｒｈｏキナーゼ２活性を示す。試験化合物、特に１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンは、対応する濃度のファスジルと比較し、増強されたＲＯＣＫ阻害を示す。
【０１４１】
実施例１３：キナーゼ特異性分析
【０１４２】
固定化された活性部位指向リガンドと競合する試験化合物の能力を定量的に測定する競合結合アッセイに基づき、多様なキナーゼについて並行して試験化合物の競合効果をスキャンすることが可能である（KinomeScan, Ambit, San Diego, CA, USA; Fabian et al., Nat Biotechnol. 2005, 23, 329）。この分析に基づき、試験化合物の阻害特異性を評価することが可能である。アッセイを、公知のＲＯＣＫ阻害剤ファスジル（各１０μM濃度）と比較し、化合物１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンを用いて実施した。アッセイの結果として、試験化合物とのインキュベーションに起因する試験での４００を超えるキナーゼの各々についての活性部位指向リガンドの競合のパーセンテージを得る。５０%を上回る競合が有意と見なされ、特定のキナーゼの阻害を示した。
【０１４３】
図１３Ａに示す通り、１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンは、ファスジルよりもずっと特異的なＲＯＣＫ阻害剤である。それと比較し、１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンは、より広いキナーゼ相互作用スペクトルを有し、ファスジルのそれと同程度であり、しかし、ファスジルよりもＲＯＣＫ２に対してずっと強い親和性を伴う。これは、この型のキナーゼについての大幅に高い阻害活性と等価である。図１３Ｂにはファスジルにより又は１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンにより及び１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンにより阻害されないキナーゼを列挙しているのに対し、この分析における５０%を上回る競合を阻害的と見なす。
【０１４４】
このアッセイによって、低下した副作用を示すことが期待される非常に特異的なＲＯＣＫ阻害剤としての１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンが明らかになる。そのＲＯＣＫ阻害の他、１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンは、ＰＩＭキナーゼ及びＩＲＡＫ１についてだけ主な阻害効果を示す。図１４は、ＲＯＣＫ関連キナーゼに焦点を当てた、ファスジル、１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンについてのキナーゼ活性部位結合の比較を示す。階層的クラスタリングは種々のキナーゼ間での関係についての測定を表す。
【０１４５】
実施例１４：神経突起伸長の分析
【０１４６】
神経突起伸長に対する試験化合物の効果をインビトロで評価することができる。胚性（Ｅ１８）ラットから調製された海馬一次ニューロンを、Ｂ２７、ｂＦＧＦ、ペニシリン／ストレプトマイシン、Ｌ−グルタミンが強化されたNeurobasal培地（Invitrogen）中で培養した。神経突起伸長アッセイのために、培地を条件培地と１：１の比率で混合する。神経突起を、軸索マーカー神経フィラメント−光に対する抗体を使用して免疫細胞化学的に染色した。写真を４０倍の倍率（Olympus IX81）で取得し、集合させ、個々のニューロン全体の分析を可能にした。試験化合物１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンを、ネガティブコントロールとした水の添加と比較し、培地に最終濃度１．５μM又は１５μMでプレーティングから１時間後に加えた。対応する濃度のファスジルをポジティブコントロールとした。２日間の培養後、細胞を固定した。写真及び神経突起の追跡を盲検で実施した。図１５は、ネガティブコントロールと比較し、及びファスジルと比較し、１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン（「メチル−ファスジル」）の神経突起伸長の促進活性を示す。１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンは、優れた神経突起伸長の促進活性を示す。１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）（「メトキシ−ファスジル」）ホモピペラジンは、神経突起伸長を有意に促進しなかった。
【０１４７】
実施例１５：インビトロＬＴＰ分析
【０１４８】
長期増強（ＬＴＰ）は、記憶機能の評価のためのインビトロモデルである。従って、それによって、記憶増強の可能性について、試験化合物、例えば、本発明の化合物、例えば、１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの分析が可能になる。実験は、３〜４週齢のウィスターラットからの海馬切片で行った。ラットを、事前の麻酔なしで断頭により屠殺した。脳を直ぐに除去し、以下を含む氷冷人工脳脊髄液（ＡＣＳＦ）中に浸した：ＮａＣｌ（１２４mM）、ＫＣｌ（５mM）、Ｎａ２ＨＰＯ４（１．２mM）、ＮａＨＣＯ３（２６mM）、ＣａＣｌ２（２mM）、ＭｇＳＯ４（２mM）、及びグルコース（１０mM）。それを継続的にカルボゲン（９５%  Ｏ２、５%  ＣＯ２）で泡立てた。切片を次にビブラトームを使用して４００μm厚に切り、記録を開始する前に少なくとも１時間室温のＡＣＳＦ中でインキュベートした。使用した全ての化合物をＡＣＳＦ中で必要な濃度に希釈し、記録の日に１００mM原液から新たに調製した。化合物の適当な可溶性を確実にするために、原液を、ＤＭＳＯを用いて作製した。記録のために、切片を、４つの脳切片の同時記録を可能にする４チャネルスライスチェンバー（Synchroslice, Lohmann Research Equipment）に移した。各スライスを、別々のサブマージ型スライスチェンバー中に置いた。それを、温度制御された（３４℃）ＡＣＳＦ又はＡＣＳＦを用いて速度２ml/分で持続的に灌流した。カメラシステムによる視覚制御下で、双極刺激電極（Rhoades）をＳｃｈａｆｆｅｒ側枝中に置き、持続時間２００μs及び振幅２００μAの単一の二相電気刺激を０．０５Hzで適用した。白金／タングステン電極を、次に、視覚制御下で、記録されたｆＥＰＳＰの安定した振幅に達するまで、ＣＡ１樹状突起中に下げた。少なくとも１０分間の記録期間後、刺激振幅とｆＥＰＳＰ振幅の間の入出力関係が各切片について別々に達成された。記録のために、刺激振幅を各切片について個別に選び、結果として生じたｆＥＰＳＰがＩＯ曲線からの最高振幅の５０%を示すようにした。ＬＴＰを誘導するために、１０のシータバーストを適用した。各バーストが、１０msの刺激間間隔で、持続時間２００ms及び振幅６００μAの４つの二相刺激からなった。バースト間の間隔は２００msである。各記録サイクルを１５分の期間で開始し、それにおいて電気刺激を０．０５Hzで適用し、ｆＥＰＳＰ振幅の安定性を確実にした。次に、試験化合物を３０分の期間洗浄し、その間に刺激を０．０５Hzで持続し、ｆＥＰＳＰｓを持続的に記録した。シータバースト刺激によるＬＴＰ誘導は、洗浄から３０分後に開始した。記録を、ＬＴＰ誘導後、少なくとも６０分間、ＬＴＰ誘導後３０分間持続し、化合物を洗浄除去した。同時に記録された全ての切片を同じ時間スケジュールを用いて処置した。記録されたデータから、誘発ｆＥＰＳＰの振幅を、記録ソフトウェア（Synchroslice data acquisition and analysis, LRE）により、ベースライン及びプロットオンラインに関して、シナプス後シグナルの負ピークとして自動的に計算した。全ての記録されたシグナルを、後のオフライン分析のために、特にｆＥＰＳＰ負の傾き計算のためにデジタルで記録した。保存された単掃引から、傾きを、最高ｆＥＰＳＰ振幅の３０%〜７０%の間で計算した。異なる切片から得られたデータの比較を可能にするために、ｆＥＰＳＰの傾きを、コントロール値（１００%）に対して正規化した。
【０１４９】
適用物質により誘導される効果を、スチューデントｔ検定又はマンホイットニー順位和検定のいずれかを使用して統計的有意性について試験した。ｐ＜０．０５である場合、有意性を仮定した。各実験条件での測定を６回繰り返した。結果を、ｎ＝５の切片からの平均値及び標準偏差（ＳＤ）として与える。１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンの効果を、偽インキュベート切片（ネガティブコントロールとして）及びファスジルインキュベート切片（ポジティブコントロールとして）との比較で分析した。１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン及び１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンを３つの濃度（１μM、１０μM、及び１００μM）で試験し、１０μMのファスジルと比較した。記録の結果を図１６に示す（Ａ．ネガティブコントロール；Ｂ：１０μMファスジル；Ｃ：１μMの１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン；Ｄ：１０μMの１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン；Ｅ：１００μMの１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン；Ｆ：１μMの１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン）；Ｇ：１０μMの１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン）；Ｈ：１００μMの１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジン）。１μMの１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンは、ファスジルと比較し、明らかに優れたＬＴＰ刺激効果を示す（図１７）。１０μM濃度で、ＬＴＰ誘導は変わらないが、しかし、維持は損なわれると思われる。これは、この濃度での非所望のキナーゼ及び／又は経路の活性化に起因しうる。１００μMでは、ＬＴＰ誘導は完全に遮断される。物質の除去時、シナプス活性の明らかなリバウンドがある。ＬＴＰ機構自体は低濃度時に誘導されると思われるが、しかし、高濃度に起因する未知の二次効果により、ＬＴＰがマスクされると仮定することができる。除去時、膜電位は迅速に変化し、それは観察された補償効果をもたらす。１μM濃度の１−（８−メチル−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンによってＬＴＰが遮断されるが、しかし、最高濃度（１００μM）では、ＬＴＰ誘導の能力は回復される。１−（１−クロロ−８−メトキシ−５イソキノリン−スルホニル）ホモピペラジンは、ＬＴＰの有意な増強を示し、従って、記憶増強のための優れた候補である。
【０１５０】
実施例１６：インビボでの記憶評価
【０１５１】
ラットは、加齢に関連する認知障害の前臨床評価のための標準的な試験システムの１つである。浸透圧ミニポンプを介した試験化合物の持続的な皮下投与によって、安定した血漿中濃度が保証され、従って、長期適用に最善である。加齢に関連する記憶障害を研究するパラダイムを有するために、１７月齢のラットを使用する。あるいは、トランスジェニック認知症モデル動物（例、アルツハイマー病）を使用する。動物をそれらの処置に従って群に割り当て、１群はコントロールとして賦形剤だけを受ける。１５〜２０の動物の群サイズによって、研究された群の数に依存し、適当な統計的検出力が提供される。２群の比較のために、ｔ検定統計が使用され、２を上回る群の比較のために、複数の試験について補正されたＡＮＯＶＡが適用される。Ｐ値０．０５を統計的に有意と見なす。実験は盲検方法で実施し、コンピューター生成プローブの無作為化及びプローブ標識、実験の終了までの処置の識別に対する全ての実験の盲検化、及び実験条件からのデータ分析の分離を含む。動物を、試験の開始から１週間前に順化させる。試行中ならびに明暗期間中に食物と水への適切なアクセスが可能になるように特別に注意する。試験を開始する１日前、試験化合物又は賦形剤を含む浸透圧ミニポンプを移植する。本発明の化合物を、アッセイにより、それらのインビボでの記憶増強能力について試験する。特に適したインビボでのアッセイを以下に詳細に記載する。
【０１５２】
放射状迷路：外科手術から１日後、ラットを放射状迷路において４日間にわたり馴化させる。馴化段階後、動物を、小さな食物ペレットで無作為に餌が付けられた４本のアーム及び餌が付けられていない４本のアームを使用し、１４日間にわたり放射状迷路において試験する。餌が付けられていないアームでの実行が参照記憶エラーとしてカウントされる。同じアームでのリエントリー、ならびに先に近寄った餌が付いたアームのリエントリーが、作業記憶エラーとしてカウントされる。全ての餌が付いたアームにエントリーがあった場合、又は、タイムリミット４８０秒に達した場合に実行を終了した。
【０１５３】
Ｓａｃｋｔｏｒディスク：試験を訓化試行で開始し、それにおいて、動物を、ショックなしで１０分間にわたり装置に暴露する。この後に連続的な訓練試行が続き、それにおいて、動物がショックゾーン中に走るたびに、動物は電気ショックを受ける。訓練は、８回の１０分間訓練試行からなり、それらのホームケージ中での１０分間の休憩間隔により分けられる。動物を、次に、２４時間後に、単一のプローブ試行において試験する。プローブ試行によって、動物の装置中への配置とショックゾーン中への最初のエントリーの間の時間における増加により、長期保存された空間情報の保持を測定する。また、短期及び長期保存情報の両方の保持を、ショックゾーン中で過ごした時間の減少（それは、単一の訓練セッション後、迅速に表わされる）により試験する。
【０１５４】
モーリス水迷路（ＭＷＭ）：１日目、可視的プラットホーム試験を実施する。迷路外合図がカーテンにより隠され、プラットホームがＭＷＭの最初の四分円において可視的マークで配置される。動物を反対の四分円に配置し、それが最長時間６０秒でプラットホームを見つけるまで泳いだ。それがプラットホームに達した場合、それを水から取り出し、そのケージ中で各試行間の３０秒間休憩させた。４回の試行を、４つの四分円の各々に位置付けた可視的プラットホームを用いて実行する。これは、動物の感覚運動及び動機付け特徴についてのパラメーター、プラットホームに達するための反応時間、プラットホームに達するための速度及び移動距離を提供する。
【０１５５】
２日目に動物を訓練する。可視的な迷路外合図を伴うプールにおいて、それは壁の近くの４つの無作為に順序付けられたスタート位置の１つに配置される。動物は、固定位置のサブマージ型プラットホームに泳ぐことが想定される。それが６０秒以内にプラットホームを見つけられない場合、それは６０秒間にわたりプラットホーム上に配置される。それが６０秒以内にプラットホームを見つける場合、それはそこに６０秒間にわたり滞在することが可能になる。スタート位置は各試行後に変化する。動物は訓練され、１日当たり少なくとも４回の試行で隠されたプラットホームを見つける。動物は、それが１５秒以内にプラットホームに達するために要するのと同じ日数にわたり訓練される。これは、学習能力及び運動成績についてのパラメーター、回避反応時間、泳ぐスピード、及び泳ぐ距離を提供する。訓練セッション後、プローブ試行が行われる。プラットホームを取り出し、動物を、プラットホームの正式な位置付けとは反対の四分円のプール中に配置し、そして動物を６０秒間泳がせ、プールから取り出す。これは、ＭＷＭの四分円中での時間のパーセントに関するパラメーター、想定されるプラットホーム位置の横断回数、泳いだ時間、泳いだ経路長、壁に並行した水泳、壁との接触回数、及び泳ぐスピードを提供する。
【０１５６】
実施例１７：癌処置のためのＰＩＭ阻害の効力の試験
【０１５７】
ＰＩＭキナーゼ活性を、インビトロで、当技術分野において標準的な方法を使用して評価することができる。インビトロアッセイは、例えば、商業的に入手可能である（例、CellsignalからのHTScan（登録商標）Pim-1 Kinase Assay Kit #7573、又はAbnovaからのPim-1 Kinase Assay/Inhibitor Screening Kit）。典型的には、プレートを、タンパク質キナーゼの標的に対応するタンパク質又はペプチド基質を用いてコーティングし、それは、Ｐｉｍ−１により効率的にリン酸化できるスレオニン残基を含む。検出抗体は、リン酸化形態のスレオニンだけを特異的に検出し、呈色反応により検出される。あるいは、放射線方法を使用することができ（例えば、ガンマ位置に３２Ｐを伴うＡＴＰの使用による）、そして標的ペプチドのリン酸化を高感度スクリーン（例、Fuji phosphoimager）への暴露によりモニターすることができる。キナーゼ阻害の特異性を、結合アッセイにおける多数のキナーゼに対するスクリーンによりアッセイすることができる（例、Fabian, M. A. et al. A small molecule-kinase interaction map for clinical kinase inhibitors. Nat. Biotechnol. 23, 329-336 (2005); Karaman, M. W. et al. A quantitative analysis of kinase inhibitor selectivity. Nat. Biotechnol. 26, 127-132 (2008)、それらは参照により本明細書により組み入れられる）。細胞培養におけるＰＩＭ阻害剤の効力を、不死化癌細胞株（例、ＨｅＬａ細胞株及び多くの他の細胞株）の増殖に対する効果として試験することができる。増殖を、細胞密度を経時的に顕微鏡下でカウントするか、又は、多くの生化学的アッセイにより測定することができる。細胞の侵入及び拡散を軟寒天試験において、再び多数の癌細胞株を使用して評価することができる。癌細胞におけるアポトーシスの誘導を、カスパーゼ３発現をアッセイすることにより試験することができる（例、Promega Caspase-glowアッセイによる）。インビボで、抗癌活性を、癌細胞株を動物に移植し（例、免疫抑制後）、そしてそれらの腫瘍の増殖を、例えば、レポーター遺伝子（例えばルシフェラーゼなど）によりモニターすること、及び生命単一光子撮像ボックス（life single photon imaging box）を使用したバイオイメージング、又は磁気共鳴画像（ＭＲＩ）もしくはマイクロＣＴなどの放射線アッセイにより試験することができる。腫瘍の容積もそれらの動物において死後に評価することができる。典型的には、実験は２群の動物において行い、１群はプラセボを受け、そして１群は薬物を受ける。サンプルサイズは、典型的には、１群当たり２０匹である。それらの動物において、寿命及び死亡率もモニターすることができ、そして臨床的に意味のあるエンドポイントを提供する。典型的には、広範囲の濃度及び適用モードをインビボで試験し、最適な用量範囲を見出す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ−１】
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【図１３Ａ−２】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１６Ｄ】
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【図１６Ｅ】
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【図１６Ｆ】
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【図１６Ｇ】
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【図１６Ｈ】
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【図１７】
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【国際調査報告】
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