(57)【要約】  本発明は、黄体形成ホルモン、卵胞刺激ホルモン、エストラジオールおよびテストステロンから選択される１種または複数のホルモンのレベルを抑制するためにヒトの治療に使用される、式（Ｉ）を有するグリシントランスポーター１阻害剤2011502974.tif 000007（式中、Ｘは、Ｈ、ハロゲン、メチル、メトキシ、トリフルオロメチルおよびトリフルオロメトキシから選択される１−３個の置換基であり、Ｙは、Ｈ、メチルおよびハロゲンから選択される１−３個の置換基である。）または薬学的に許容されるその塩に関する。本発明はさらに、避妊レジメンの一部としてまたは性行動亢進の治療としての、そのようなグリシントランスポーター１阻害剤に関する。
2011502974.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
黄体形成ホルモン、卵胞刺激ホルモン、エストラジオールおよびテストステロンから選択される１種または複数のホルモンのレベルを抑制するためにヒトの治療に使用される、式Ｉを有するグリシントランスポーター１阻害剤
【化１】
2011502974.tif 000005
（式中、
Ｘは、Ｈ、ハロゲン、メチル、メトキシ、トリフルオロメチルおよびトリフルオロメトキシから選択される１−３個の置換基であり、
Ｙは、Ｈ、メチルおよびハロゲンから選択される１−３個の置換基である。）
または薬学的に許容されるその塩。
【請求項２】
ホルモンが黄体形成ホルモンである、請求項１に記載のグリシントランスポーター１阻害剤。
【請求項３】
ホルモンが卵胞刺激ホルモンである、請求項１に記載のグリシントランスポーター１阻害剤。
【請求項４】
ホルモンがエストラジオールである、請求項１に記載のグリシントランスポーター１阻害剤。
【請求項５】
ホルモンがテストステロンである、請求項１に記載のグリシントランスポーター１阻害剤。
【請求項６】
避妊レジメンの一部としての、請求項１から５のいずれか一項に記載のグリシントランスポーター１阻害剤。
【請求項７】
治療が性行動亢進のためである、請求項１から５のいずれか一項に記載のグリシントランスポーター１阻害剤。
【請求項８】
Ｎ−メチル−Ｎ−［［（１Ｒ，２Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−メトキシ−１−フェニル−２−ナフタレニル］メチルグリシンまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項１から７のいずれか一項に記載のグリシントランスポーター１阻害剤。
【請求項９】
有効量の、式Ｉのグリシントランスポーター１阻害剤
【化２】
2011502974.tif 000006
（式中、
Ｘは、Ｈ、ハロゲン、メチル、メトキシ、トリフルオロメチルおよびトリフルオロメトキシから選択される１−３個の置換基であり、
Ｙは、Ｈ、メチルおよびハロゲンから選択される１−３個の置換基である。）
または薬学的に許容されるその塩を、その必要がある対象に投与するステップを含む、ヒトの黄体形成ホルモン、卵胞刺激ホルモン、エストラジオールおよびテストステロンの１種または複数を抑制する方法。
【請求項１０】
避妊方法である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
対象が女性である、請求項１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトにおけるホルモン抑制に使用される、グリシントランスポーター１阻害剤に関する。より詳細には、本発明は、黄体形成ホルモン、卵胞刺激ホルモン、エストラジオールおよびテストステロンから選択される１種または複数のホルモンのレベルを抑制するための、ヒトの治療に使用されるグリシントランスポーター１阻害剤に関する。本発明はさらに、有害なレベルにある黄体形成ホルモン、卵胞刺激ホルモン、エストラジオールおよびテストステロンから選択される１種または複数のホルモンに関連した疾患または障害を持つヒトの治療または予防に使用されるグリシントランスポーター１阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
黄体形成ホルモン（ＬＨ）は、脳下垂体前葉によって分泌された小糖タンパク質ホルモンである。ＬＨは、排卵の制御において、また卵巣および精巣によるホルモンの合成および分泌の制御において、重要な役割を演ずる。卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）は、哺乳動物の脳下垂体前葉にも見出される性腺刺激糖タンパク質ホルモンである。このホルモンは、卵巣顆粒膜細胞および精巣セルトリ細胞を刺激し、卵巣においてグラーフ卵胞の成熟を誘発し、精巣において胚芽細胞の発生を促進させる。下垂体前葉内のＬＨによる刺激に応答して、テストステロンは、精巣の間質（ライディッヒ）細胞によって生成される。ＬＨおよびＦＳＨは一緒に、卵巣顆粒膜細胞におけるエストラジオール生成を刺激する。したがって、ＬＨ、ＦＳＨ、エストラジオールおよびテストステロンはヒトの性機能において重要な役割を演ずる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
経口避妊薬は、それらが４０年以上も前に導入されて以来、女性の受胎能の調節において広範な用途が見出された。利用可能な療法は、時間が経つにつれて、新しいエストロゲンおよびプロゲスタゲンの発見、プロゲスタゲン限定レジームの開発および低エストロゲン含量の併用プロゲスタゲン／エストロゲンレジームの導入と変化してきた。経口避妊薬に、初期の療法に比べて改善された安全性プロファイルを与えるというこれらの進歩にも関わらず、望ましくない副作用が依然として続いている。特に、エストロゲン成分によって引き起こされる有害な代謝作用および可能性ある新生物作用が、もたらされる可能性がある。したがって、新しい経口避妊薬療法、特に、安全であると同時に有効な非ステロイド系および非ホルモン系避妊薬が依然として求められている。最近の調査に関しては、Ｃｕｒｒｅｎｔ．Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓｉｇｎ、２００６年、１２（３０）、３９１５−２８頁を参照されたい。
【０００４】
性行動亢進または強迫的性行動は、依然として、やはりさらなる治療レジームを必要とする障害である。抗うつ薬またはナルトレキソンは、性的強迫観念を伴うことが多い不安またはうつ病を低減させるのに使用されてきた。したがって、安全であると共に有効な、性行動亢進のさらなる療法が求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
第１の態様において、本発明は、ＬＨ、ＦＳＨ、エストラジオールおよびテストステロンから選択される１種または複数のホルモンのレベルを抑制するためにヒトの治療に使用される、式Ｉを有するグリシントランスポーター１（ＧｌｙＴ１）阻害剤
【０００６】
【化１】
2011502974.tif 000003
（式中、
Ｘは、Ｈ、ハロゲン、メチル、メトキシ、トリフルオロメチルおよびトリフルオロメトキシから選択される１−３個の置換基であり、
Ｙは、Ｈ、メチルおよびハロゲンから選択される１−３個の置換基である。）
または薬学的に許容されるその塩を提供する。したがって、本発明は、式Ｉを有するＧｌｙＴ１阻害剤（式中、ＸおよびＹは、先に定義された意味を有する。）の有効量を、その必要がある対象に投与するステップを含む、ヒトにおけるＬＨ、ＦＳＨ、エストラジオールおよびテストステロンの１種または複数の抑制の方法を提供する。
【０００７】
本明細書で使用されるハロゲンという用語は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を表す。
【０００８】
本発明の一実施形態は、ＬＨのレベルを低下させるためにヒトの治療に使用される、式Ｉを有するＧｌｙＴ１阻害剤（式中、ＸおよびＹは、先に定義された意味を有する。）である。
【０００９】
本発明のその他の実施形態は、ＦＳＨのレベルを低下させるためにヒトの治療に使用される、式Ｉを有するＧｌｙＴ１阻害剤（式中、ＸおよびＹは、先に定義された意味を有する。）である。
【００１０】
本発明のその他の実施形態は、エストラジオールのレベルを低下させるためにヒトの治療に使用される、式Ｉを有するＧｌｙＴ１阻害剤（式中、ＸおよびＹは、先に定義された意味を有する。）である。
【００１１】
本発明のその他の実施形態は、テストステロンのレベルを低下させるためにヒトの治療に使用される、式Ｉを有するＧｌｙＴ１阻害剤（式中、ＸおよびＹは、先に定義された意味を有する。）である。
【００１２】
本発明のその他の態様において、ＬＨ、ＦＳＨ、エストラジオールおよびテストステロンから選択される１種または複数のホルモンのレベルを抑制するための、ヒトの治療に使用される式Ｉを有するＧｌｙＴ１阻害剤（式中、ＸおよびＹは、先に定義された意味を有する。）は、避妊レジメンの一部を形成する。本発明のその他の実施形態において、避妊レジメンは、男性の避妊のためのものである。本発明のその他の実施形態において、避妊レジメンは、女性の避妊のためのものである。
【００１３】
本発明のその他の態様において、式Ｉを有するＧｌｙＴ１阻害剤（式中、ＸおよびＹは、先に定義された意味を有する。）は、ヒトの性行動亢進の治療において有用であり、前記治療では、ＬＨ、ＦＳＨ、エストラジオールおよびテストステロンから選択される１種または複数のホルモンのレベル抑制が行われる。
【００１４】
本発明のその他の態様において、式Ｉを有するＧｌｙＴ１阻害剤（式中、ＸおよびＹは、先に定義された意味を有する。）は、ヒトの攻撃性の治療に有用であり、前記治療では、ＬＨ、ＦＳＨ、エストラジオールおよびテストステロンから選択される１種または複数のホルモンのレベルの抑制が行われる。
【００１５】
本発明のその他の態様において、式Ｉを有するＧｌｙＴ１阻害剤（式中、ＸおよびＹは、先に定義された意味を有する。）は、多毛症、過剰な皮脂生成、乳癌、良性乳房疾患、良性卵巣疾患、多嚢胞卵巣、不妊治療における制御された卵巣刺激での内在性ＬＨサージ、過剰なアンドロゲンに関連した流産、良性前立腺肥大、前立腺癌、子宮内膜症または子宮筋腫、子宮平滑筋腫、子宮平滑筋肉腫、高アンドロゲン症、過少月経および脱毛症から選択される疾患または障害を持つヒトの治療に有用であり、前記治療では、ＬＨ、ＦＳＨ、エストラジオール、およびテストステロンから選択される１種または複数のホルモンのレベルの抑制が行われる。
【００１６】
シナプス前神経終末または隣接するグリア細胞への、グリシントランスポーター（ＧｌｙＴ）タンパク質を介したグリシンの再取込みは、グリシンのシナプス後作用を終結することができ、また細胞外グリシンレベルを基本的な値に戻すことができる、有効なメカニズムを構成する。今日では、２つの公知のタイプのグリシントランスポータータンパク質、グリアトランスポーター（タイプ１）、ＧｌｙＴ１およびグリシン神経トランスポーター（タイプ２）、ＧｌｙＴ２がある。ＧｌｙＴ１は、シナプス間隙からのグリシンの除去を触媒し、ＧｌｙＴ２は、シナプス小胞へのグリシンの再取込みおよび再投入に必要とされる（Ｇｏｍｅｚａら、２００３年；Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｄｅｖｅｌ  ６（５）：６７５−８２頁）。
【００１７】
グリシントランスポータータンパク質の阻害剤として働く、多くの異なる構造クラスの化合物が、当技術分野で公知である。ＧｌｙＴ１またはＧｌｙＴ２の選択的阻害剤である化合物も、公知である。選択的なＧｌｙＴ１阻害剤として作用する化合物の例を示す最近の概説について、Ｌ．Ｇ．Ｈａｒｓｉｎｇ  Ｊｒ．ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２００６年、１３、１０１７−４４頁およびＳ．Ｍ．Ｌｅｃｈｎｅｒ、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２００６年、６（１）、７５−７８頁を参照されたい。既に、そのようなＧｌｙＴ１阻害剤は、統合失調症、うつ病、痴呆症およびその他の形の認知障害、痙縮を伴う神経変性疾患または筋肉活動亢進、筋クローヌスおよび癲癇などの障害の治療に用途を見出したことが示唆された。
【００１８】
式Ｉを有するＧｌｙＴ１阻害剤を調製するための方法は
【００１９】
【化２】
2011502974.tif 000004
（式中、ＸおよびＹは、先に定義された意味を有する。）、国際公開第００／０７９７８号に記載されている。
【００２０】
本発明は、その範囲内に、例えば立体配置異性または幾何異性により得られる式ＩのＧｌｙＴ１阻害剤（式中、ＸおよびＹは、先に定義された意味を有する。）の全ての立体異性体の使用も含む。そのような立体異性体は、鏡像異性体、ジアステレオ異性体、シスおよびトランス異性体などである。式Ｉの化合物の個々の鏡像異性体またはその塩の場合、本発明は、その他の鏡像異性体を実質的に含まない、即ち５％未満、好ましくは２％未満、特に１％未満のその他の鏡像異性体と結び付けられた、前述の立体異性体の使用を含む。任意の割合にある立体異性体の混合物の使用、例えば実質的に等量の２種の鏡像異性体を含むラセミ混合物の使用も、本発明の範囲内に含まれる。
【００２１】
本発明のその他の実施形態において、ＧｌｙＴ１阻害剤は、ＬＨ、ＦＳＨ、エストラジオールおよびテストステロンから選択される１種または複数のホルモンのレベルを抑制するのにヒトの治療で使用するために：
Ｎ−メチル−Ｎ−［（１Ｒ，２Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−メチル−１−フェニル−２−ナフタレニル］メチルグリシン；
Ｎ−メチル−Ｎ−［（１Ｒ，２Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−メトキシ−１−フェニル−２−ナフタレニル］メチルグリシン；
Ｎ−メチル−Ｎ−［（１Ｒ，２Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−エチル−１−フェニル−２−ナフタレニル］メチルグリシン；
Ｎ−メチル−Ｎ−［（１Ｒ，２Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−エトキシ−１−フェニル−２−ナフタレニル］メチルグリシン；
Ｎ−メチル−Ｎ−［（１Ｒ，２Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−トリフルオロメチル−ｌ−フェニル−２−ナフタレニル］メチルグリシンおよび
Ｎ−メチル−Ｎ−［（１Ｒ，２Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−トリフルオロメトキシ−１−フェニル−２−ナフタレニル］メチルグリシン
または薬学的に許容されるこれらの塩から選択される。
【００２２】
本発明のその他の実施形態において、ＧｌｙＴ１阻害剤は、公知の避妊薬と併用することができる。この併用には、エストロゲンまたはプロゲスタゲンまたはアンドロゲン副作用の負荷がより低い避妊手段を提供するという利点がある。したがって本発明のその他の実施形態は、ＬＨ、ＦＳＨ、エストラジオールおよびテストステロンから選択される１種または複数のホルモンのレベルを抑制するためにヒトの治療に使用される、式Ｉを有するＧｌｙＴ１阻害剤（式中、ＸおよびＹは、先に定義された意味を有する。）であり、前記ＧｌｙＴ１阻害剤は、他の活性成分としてエストロゲンを含む避妊レジメンの一部を形成するものである。
【００２３】
本発明のさらにその他の実施形態は、ＬＨ、ＦＳＨ、エストラジオールおよびテストステロンから選択される１種または複数のホルモンのレベルを抑制するためにヒトの治療に使用される、式Ｉを有するＧｌｙＴ１阻害剤（式中、ＸおよびＹは、先に定義された意味を有する。）であり、前記ＧｌｙＴ１阻害剤は、他の活性成分としてプロゲスタゲンを含む避妊レジメンの一部を形成するものである。
【００２４】
本発明のさらにその他の実施形態は、ＬＨ、ＦＳＨ、エストラジオールおよびテストステロンから選択される１種または複数のホルモンのレベルを抑制するためにヒトの治療で使用される、式Ｉを有するＧｌｙＴ１阻害剤（式中、ＸおよびＹは、先に定義された意味を有する。）であり、前記ＧｌｙＴ１阻害剤は、他の活性成分としてアンドロゲンを含む避妊レジメンの一部を形成するものである。
【００２５】
特許請求の範囲に記載され、また本明細書に記述されるように使用される、医薬品組成物は、薬学の分野における標準的な技法に従って調製することができる。化合物は、体重ｋｇ当たり０．００１−５０ｍｇ、好ましくは体重ｋｇ当たり０．０１−２０ｍｇの投薬量で、ヒトに使用することができ、その最適な投薬量は、投与経路、所望の作用持続時間、処方タイプ（持続放出対即時放出）、患者のタイプ、必要とされる化合物のタイプ、化合物の効力および治療されるレシピエントのその他の物理的特徴、例えばその他の疾患との同時罹患率や肝臓代謝能などの因子に応じて決定することができる。
【００２６】
選択的輸送阻害およびそのような生物学的作用をどのように決定するかという方法は、グリシンの生化学における公知の技法に従って決定することができる。特定の方法が、以下の実施例に記述され、これに基づいて、少なくとも６．０、または好ましくは６．５、またはさらにより良好には７．０の基準ｐＩＣ５０値を、グリシントランスポートタイプ１阻害剤という用語の意味を明確にするために導き出すことができる。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、その範囲を限定するものではない以下の実施例によって例示される。
【実施例１】
【００２８】
ヒトＧｌｙＴ−１ｂトランスポーターを不均質に発現するＣＨＯ細胞におけるグリシンの取込みを決定するための方法
Ａ：クローニング：ｃＤＮＡを、Ｋｉｍ，Ｋ．−Ｍ．ら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９４年、４５、６０８−６１７頁に記載されている方法に従って、ＰＣＲにより生成した。配列は、ＡＬＦ  ＤＮＡ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｒ（商標）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を使用してジデオキシ配列決定により確認し、発現構成体ｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングした。
【００２９】
Ｂ：トランスフェクション：ＣＨＯ細胞へのｈＧｌｙＴ−１ｂのトランスフェクションを、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら、（１９８９年）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹによって記述される標準的なリン酸カルシウム技法を使用して行った。
【００３０】
Ｃ：選択：安定にトランスフェクトされた細胞を、１ｍｇ・ｃｍ−３のＧｅｎｅｔｉｃｉｎを含有する成長培地中で、１週間にわたり選択した。個々のクローンを、さらなる分析用に採取し、以下に記述されるようにポジティブクローンを通常通り継代した。
【００３１】
Ｄ：培養条件：ｈＧｌｙＴ−１ｂ遺伝子を安定に発現する細胞を、Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ（０．５ｍｇ・ｃｍ−３、Ｇｉｂｃｏ）を含有するＧｌｕｔａｍａｘ−１（Ｇｉｂｃｏ）を含んだＤＭＥＭ−ＮＵＴ．ＭＩＸ．Ｆ１２中で、５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で培養し、１０％Ｆｅｔａｌｃｌｏｎｅ  ＩＩ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を補った。維持培養を、標準的な８０ｃｍ２の換気式フラスコ（２×１０−６ｍフィルタ、Ｎｕｎｃ）内で実施し、細胞を、集密化するまでトリプシン処理（Ｓｉｇｍａ）によって継代培養した。
【００３２】
Ｅ：アッセイ手順：再取込み研究用の細胞を、Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎが存在しない状態で９８ウェルプレートに播き（ウェル当たり１７０００細胞）、使用前に４８時間培養した。グリシン輸送を測定するため、細胞を、予め３７℃に温めたハンクスバランス塩溶液（ＨＢＳＳ）で２回洗浄し、過剰な流体を除去し、その後、０．２００ｃｍ３のＨＢＳＳに溶解させた試験化合物を添加した。プレートを３７℃で５分間インキュベートし、その後、［３Ｈ］グリシン（０．０５０ｃｍ３、１５０×１０−６Ｍ、２４８Ｂｑ・ｎｍｏｌ−１、ＮＥＮ）を添加し、インキュベーションをさら１０分間継続した。取込みを、氷冷ＨＢＳＳで細胞を洗浄することによって終了させ、その後、過剰な流体を除去し、０．２００ｃｍ３のシンチレーションカクテルを各ウェルに添加した。プレートを接着フィルムで密封し、サンプルが均質になったことが確実になるまで振盪させ、その後、プレートカウンタでシンチレーションカウントを行った。
【００３３】
Ｆ：データ分析：データは、活性化合物に関するｐＩＣ５０値を生成するために、標準的な曲線当て嵌め手順を使用して分析した（ここでｐＩＣ５０は、取込みの５０％阻害を引き起こす試験化合物の濃度の負の対数である。）。
【００３４】
Ｇ：結果：
この記述においてグリシントランスポートタイプ１阻害剤であることを意味する化合物のｐＩＣ５０値は、少なくとも６．０の値のｐＩＣ５０値を有するものである。
【実施例２】
【００３５】
男性対象へのＮ−メチル−Ｎ−［［（１Ｒ，２Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−メトキシ−１−フェニル−２−ナフタレニル］メチルグリシン塩酸塩（化合物１）の投与によりＬＨ、ＦＳＨおよびテストステロンを抑制する方法
実験１
化合物１を用いた二重盲検交差プラセボ対照単回漸増経口投与試験を、健康な男性ボランティアに実施して、その耐容性、安全性、薬物動態および薬力学的プロファイルを評価した。
【００３６】
試験設計
これは、１６名の対象に関する二重盲検プラセボ対照単回漸増経口投与研究であった。各対象に、４つの投与群の１つを割り当て、四方向交差設計において化合物１およびプラセボの単回経口用量を３回続けて与えた。対象は、良好な身体的および精神的健康を有する、年齢１８−４５才、肥満指数１８−２８ｋｇ／ｍｇ２の男性ボランティアであった。
【００３７】
治療
この試験では、凍結乾燥した化合物１のケーク（バッチＮｏ．ＣＶ  １９５およびＰＷ  ０３７）を、注射用に水で戻し、経口投与用にゼラチン／マンニトールで５０ｍＬ溶液に希釈した。この試験で使用される化合物１の用量レベルは：
群１：０．５、１および２ｍｇ  化合物１
群２：２、３および５ｍｇ
群３：５、８および１２ｍｇ
群４：１２、２０および３０ｍｇ
【００３８】
血液サンプリング
ＬＨ、ＦＳＨおよびテストステロン分析用の血清サンプルを、以下の時点で、即ち：投与前、および投与後１、２、３、４、６、８および１２時間で、採取した。血清血液を−４０℃で保存した。
【００３９】
生物学的分析方法
ＬＨおよびＦＳＨを、ＤＥＬＦＩＡアッセイを使用して測定した。ＤＥＬＦＩＡ  ＬＨおよびＤＥＬＦＩＡ  ＦＳＨアッセイは、直接サンドイッチ技法をベースにした固相二部位フルオロ免疫アッセイである。テストステロンは、ＤＥＬＦＩＡテストステロンアッセイ：ユーロピウム標識テストステロンとサンプルテストステロンとの間の競合をベースにした固相フルオロイムノアッセイを使用して測定した。化合物１に対するアッセイの特異性は、血清ｍＬ当たり化合物１  ５０ｎｇの濃度レベルで試験をし、その結果、テストキットの免疫応答に対する化合物１の影響はないことが証明された。
【００４０】
統計的方法
治療の効果は、０−４時間および０−最終評価時間における効果曲線下の面積（ＡＵＥ）を計算することによって特徴付けられた。ＡＵＥは、プロトコル時間を使用した線形台形規則を用いて計算した。プレ値はｔ＝０時間に設定した。ＡＵＥを、対応するタイムスパンで割ることにより、加重平均応答が得られた。全ての測定値を、対象および治療の要因と、共変量としてのプレ値とを用いた分散分析を使用して分析した。用量群に対する線形対比は、小さい順に割り当てられた用量群を用いて計算した。
【００４１】
結果：
統計的に有意な治療効果は、投与後０から１２時間のＬＨレベルで見出された（即ち、ＬＨレベルの低下）。ＦＳＨおよびテストステロンの両方は、０−１２時間にわたり、用量の増加と共に著しい線形低下を示すＬＨ濃度よりも遅く応答した。
【００４２】
実験２
健康な男性ボランティアにおける化合物１の視覚効果を剽悍する単回投与二重盲検プラセボ対照無作為交差試験
試験設計：
この試験は、２４名の健康な男性対象に単回経口用量の化合物１およびプラセボを３回投与する、二重盲検プラセボ対照四期交差研究であった。各対象に、化合物１の治療を小さい順に無作為化し、各治療期間は、少なくとも３日間の休薬期間によって切り離された。対象は、良好な身体的および精神的健康状態にある、年齢１８−４５才、肥満指数１８−２８ｋｇ／ｍ２の男性のボランティアであった。
【００４３】
治療：
凍結乾燥した化合物１のケーク（バッチＮｏ  ＣＷ１２２）を、脱イオン水ＢＰで戻し、その後、経口投与用にゼラチン／マンニトールで５０ｍＬ溶液に希釈した。この試験で使用した化合物１の用量レベルは、５ｍｇ、１３ｍｇおよび２０ｍｇであった。
【００４４】
血液サンプリング：
ＬＨ、ＦＳＨおよびテストステロン分析用の血清サンプルを、以下の時点で、即ち：投与前と、投与後２０分、４５分、１時間１０分、１時間３５分、２時間、２時間２５分、２時間５０分、３時間１５分、４時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間および２４時間で採取した。血清を−４０℃で保存した。
【００４５】
生物学的分析方法：
ＬＨおよびＦＳＨを、ＤＥＬＦＩＡアッセイを使用して測定した。ＤＥＬＦＩＡ  ＬＨおよびＤＥＬＦＩＡ  ＦＳＨアッセイは、直接サンドイッチ技法をベースにした固相二部位フルオロ免疫アッセイである。テストステロンは、ＤＥＬＦＩＡテストステロンアッセイ：ユーロピウム標識テストステロンとサンプルテストステロンとの間の競合をベースにした固相フルオロイムノアッセイを使用して測定した。化合物１に対するアッセイの特異性は、血清ｍＬ当たり化合物１  ５０ｎｇの濃度レベルで試験をし、その結果、テストキットの免疫応答に対する化合物１の影響はないことが証明された。
【００４６】
統計的方法
血清ＦＳＨ、ＬＨおよびテストステロン濃度に関する記述統計を、絶対値としておよびベースラインのパーセンテージとして共に計算した。さらに、以下のパラメータ：Ｃｍｉｎ、ｔｍｉｎ、Ｃｍｅａｎ，０−２４を計算し、ＣｍｉｎおよびＣｍｅａｎ，０−２４の両方を、絶対値でおよびベースラインのパーセンテージとして表した。形式統計分析は、これらのＰＤパラメータに関して行わなかった。記述統計のみを、用量によって計算した。さらに、治療に対するＰＤパラメータのサマリープロットを作成した。
【００４７】
結果：
ＬＨおよびテストステロンの濃度は、化合物１の治療後に低下し、この低下は、化合物１の用量が増加するにつれて大きくなった。最大のＬＨ低下は、投与後約４時間に達せられ、テストステロンに対する効果はいくらか遅いようである。ＦＳＨ濃度に対する化合物１の効果は、はっきりと見ることができない。ＦＳＨ、ＬＨおよびテストステロンに関して調節されたＣｍｉｎ値は、活性用量の増加と共に低下することを示す。調節されたＣｍｅａｎは、化合物１の治療の効果を検出する感受性が低く、その低下はより少なく、あまり一貫していない。
【００４８】
実験３
単回、多回および多回漸投与後の化合物１の安全性、耐容性、薬物動態および薬力学的性質を評価するための、健康な男性ボランティアにおける化合物１を用いたＩ相二重盲検プラセボ対照並行群多回経口投与および多回漸増投与研究
試験設計：
この試験は、単回中心二重盲検プラセボ対照並行群設計であった。合計４０名の対象を、対象８名ずつの５つの群に無作為化し；各群の中で６名の対象に多回経口用量の化合物１を与え、２名の対象にプラセボを与えた。対象は、良好な身体的および精神的健康状態にある、年齢１８−４５才および肥満指数１８−２８ｋｇ／ｍ２の男性ボランティアであった。
【００４９】
治療：
凍結乾燥した化合物１のケーク（バッチＮｏ．ＣＷ  １８６）を、１０ｍＬバイアルに供給した（１０ｍＬバイアル中、５０ｍｇ活性部分）。凍結乾燥したケークを滅菌脱イオン水Ｂ．Ｐ．で戻し、その後、滅菌脱イオン水で５０ｍＬの用量体積まで希釈した。化合物１を、以下のスケジュールに従い経口溶液（５０ｍＬ）として投与した。
群１：１日目に４ｍｇの化合物１を単回投与、その後、４から１３日目に４ｍｇの化合物１を１日１回投与
群２：１日目に８ｍｇの化合物１を単回投与、その後、４から１３日目に８ｍｇの化合物１を１日１回投与
群３：１日目に１６ｍｇの化合物１を単回投与、その後、４から１３日目に１６ｍｇの化合物１を１日１回投与
群４：１日目に１２ｍｇの化合物１を単回投与、４から１２日目に１２ｍｇの化合物１を１日２回投与、その後、１３日目に１６ｍｇの化合物１を単回投与
群５では、用量滴定を使用した。この群では、ＬＨ、ＦＳＨおよびテストステロンのサンプルを採取しなかった。
【００５０】
血液サンプル：
ＬＨ、ＦＳＨおよびテストステロン分析用の血清サンプルを、以下の時点で、即ち：１、３、６、８、１０および１３日目：投与前、投与後２、６および１２時間；１５日目：投与後４８時間で採取した（１３日目の投与に対する時点を除く１５日目に採取されたサンプル）。血清を−４０℃で保存した。血液サンプルは、群５に関して採取しなかった。
【００５１】
生物学的分析方法：
ＬＨおよびＦＳＨを、ＤＥＬＦＩＡアッセイを使用して測定した。ＤＥＬＦＩＡ  ＬＨおよびＤＥＬＦＩＡ  ＦＳＨアッセイは、直接サンドイッチ技法をベースにした固相二部位フルオロ免疫アッセイである。テストステロンは、ＤＥＬＦＩＡテストステロンアッセイ；ユーロピウム標識テストステロンとサンプルテストステロンとの間の競合をベースにした固相フルオロイムノアッセイを使用して測定した。化合物１に対するアッセイの特異性は、血清ｍＬ当たり化合物１  ５０ｎｇの濃度レベルで試験をし、その結果、テストキットの免疫応答に対する化合物１の影響はないことが証明された。
【００５２】
統計的方法：
形式統計分析はなかった。血清ＬＨ、ＦＳＨおよびテストステロン濃度を、各用量群および時点ごとに列挙し、まとめた。さらに、ベースライン（１日目、投与前）からの変化を列挙しまとめた。時間に対するベースラインからの変化の平均プロットを、用量群によって生成した。
【００５３】
結果：
平均ＦＳＨおよびＬＨ値は投与後に低下し、低下の大きさは、一般に化合物１を１６ｍｇ投与した後に最大であった。ＦＳＨ値の最大低下は、投与後約６から１２時間で見られ、ＬＨの最大低下は投与後２時間で生じた。テストステロンのレベルは、投与してから、投与後６−１２時間まで急峻に降下し、その後、レベルは、全ての処理後に再びほぼベースラインレベルまで上昇した。これは少なくとも１つには、テストステロンの概日リズムに起因するが、この低下の大きさは一般に、化合物１の投与後に大きくなり、最大低下は１６ｍｇ  ｑ．ｄ．および１２ｍｇ  ｂ．ｉ．ｄの群である。ＦＳＨ、ＬＨおよびテストステロンの場合、ベースラインからの低下は、ほとんどの治療群に関して１３日目と１日目とで類似していた。
【００５４】
実験４
単回経口投与後の脳脊髄液および血漿におけるグリシン作動性応答を評価する、健康な男性ボランティアにおける化合物１を用いたＩ相二重盲検並行群プラセボ対照交差薬力学的研究
試験設計：
この試験は、それぞれ対象が５名である３つの並行群に無作為化された１５名の対象における、二重盲検プラセボ対照並行群試験であった。対象に、無作為交差設計に従い単回用量を２回与えた。少なくとも３日の間隔を、薬物投与間においた。対象は、良好な身体的および精神的健康状態にある、年齢１８−４５才および肥満指数１８−２８ｋｇ／ｍ２の男性ボランティアであった。
【００５５】
投薬：
凍結乾燥した化合物１のケーク（バッチＮｏ  ＣＷ１２２）を滅菌水で戻し、その後さらに、経口投与用にオレンジジュースで全体積２００ｍＬに希釈した。使用した用量レベルは下記の通りであった：
群１：８ｍｇの化合物１およびグリシン
群２：１６ｍｇの化合物１およびプラセボ
群３：８ｍｇの化合物１および４ｍｇの化合物１
【００５６】
血液サンプリング：
ＬＨ、ＦＳＨおよびテストステロン分析用の血清サンプルを、以下の時点で、即ち：投与前と、投与後１、２、３、４、６および１２時間で採取した。血清を−４０℃で保存した。
【００５７】
生物学的分析方法：
ＬＨおよびＦＳＨを、ＤＥＬＦＩＡアッセイを使用して測定した。ＤＥＬＦＩＡ  ＬＨおよびＤＥＬＦＩＡ  ＦＳＨアッセイは、直接サンドイッチ技法をベースにした固相二部位フルオロ免疫アッセイである。テストステロンは、ＤＥＬＦＩＡテストステロンアッセイ；ユーロピウム標識テストステロンとサンプルテストステロンとの間の競合をベースにした固相フルオロイムノアッセイを使用して測定した。化合物１に対するアッセイの特異性は、血清ｍＬ当たり化合物１  ５０ｎｇの濃度レベルで試験し、その結果、テストキットの免疫応答に対する化合物１の影響はないことが証明された。
【００５８】
結果：
ＬＨおよびテストステロンは、化合物１の治療の後、ある程度まで抑制された。ＦＳＨに対する影響は存在しなかった。
【国際調査報告】
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