(57)【要約】  本発明は、がん疾患に罹患している患者の、ＨＥＲファミリーのメンバー（例えば、ＨＥＲ−１、ＨＥＲ−２、ＨＥＲ−３およびＨＥＲ−４）のシグナル伝達経路の阻害に基づく標的化された生物学的療法に対する感受性を、バイオマーカー６キナーゼもしくはその翻訳後修飾された形態またはＳ６キナーゼの活性化のバイオマーカーもしくはその翻訳後修飾された形態の発現を腫瘍において測定することによって、測定するための方法に関する。
2011510306.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
がん疾患に罹患している患者の、ＨＥＲ受容体ファミリーシグナル伝達経路の阻害に基づく生物学的療法に対する感受性を測定するための方法であり、当該患者の身体から採取された生物学的材料を用いて行われ、バイオマーカーＳ６キナーゼもしくはその翻訳後修飾された形態またはＳ６キナーゼ活性化バイオマーカーもしくはその翻訳後修飾された形態の発現が腫瘍において測定されることを特徴とする、方法。
【請求項２】
上記生物学的材料は、上記腫瘍もしくは他の組織の生検試料または体液である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
上記Ｓ６キナーゼ活性化のバイオマーカーは、リボソームタンパク質Ｓ６、タンパク質ｅＩＦ４ＢおよびＩＲＳ−１を含む群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
上記Ｓ６キナーゼは、Ｓ６キナーゼ１またはＳ６キナーゼ２である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
上記がん疾患は、ヒト起源または動物起源の悪性腫瘍または良性腫瘍であり、好ましくは、造血器腫瘍、上皮系起源、間葉系起源、および神経外胚葉系起源の腫瘍を含む群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
上記がん疾患は、悪性の、乳房、結腸直腸、肺、膵臓、頭頸部、脳、前立腺および皮膚の新生物を含む群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
上記生物学的療法は、ＨＥＲ受容体ファミリーシグナル伝達経路に特異的な、低分子阻害剤または高分子阻害剤の投与を包含している、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
上記発現の測定は、免疫分析法、免疫組織化学的方法、免疫細胞化学的方法、免疫蛍光法技術、酵素分析、放射測定分析、シンチグラフィー分析、陽電子放射トモグラフィー、化学発光分析、蛍光分析、免疫沈降技術および質量分析法の原理に基づく方法を含む群から選択される検出方法を用いて行われることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
〔技術分野〕
本発明は、がん疾患に罹患している患者の、ＨＥＲ受容体ファミリーシグナル伝達経路の阻害に基づく生物学的療法に対する感受性を測定するための方法に関する。
【０００２】
〔背景技術〕
悪性腫瘍の発生率および治療費の増加は、社会全体に対する直接の望ましくない影響を及ぼす深刻な医学的問題である。典型的な例は、乳房の悪性新生物であり、先進国で生活している女性において第２番目に頻度の高い悪性腫瘍である。ここ２５年間で、チェコ共和国において新たに報告された乳がんの数は、ほぼ２倍に増加した。２００４年に、新しい症例の絶対数が５６２８人、すなわち、女性１０００００人あたり１０７．４人の発生率であり、女性１０００００人あたり、４０．０６人の死亡数に達したことは、チェコ国立腫瘍学登録簿（Czech National Oncology Registry（ＮＯＲ））の最新の完全なデータからわかる（www.svod.cz）。患者のおよそ２０〜２５％において、乳房の上皮性悪性腫瘍は、ＨＥＲ−２受容体の過度の発現を示し、この発現は、通常、遺伝子の増幅に基づいて起こる（以下に、ＨＥＲ−２陽性上皮性悪性腫瘍として報告した）。これらの上皮性悪性腫瘍は、高度の攻撃性とその結果としての予後不良とを特徴としている。他方では、ＨＥＲ−２受容体を標的とした有力な治療方法が存在する。例えば、モノクローナル抗体トラスツヅマブであり、ＨＥＲ−２陽性の乳房の上皮性悪性腫瘍の患者のためのアジュバント治療および対症療法として現在適応されている。化学療法との組合せにおいて、この抗体は、アジュバント治療の場合は、病気の再発を顕著に低減し、結果として、治癒した患者の数を増加させる。また、播腫性の疾患を有する患者に対して投与された場合は、寿命を顕著に延長させる。
【０００３】
狭い範囲で選択されたＨＥＲ−２陽性の上皮性悪性腫瘍患者群に対してトラスツヅマブが投与されているにもかかわらず、臨床反応は、すなわち、腫瘍反応および持続期間の両方に応じて変化しやすい。一般に、それは、およそ４０％の症例において起こる。トラスツヅマブに対する疾患の抵抗性の原因は明確に究明されていない。ＨＥＲ−２受容体の損傷の結果、そのキナーゼ活性が失われるか、またはトラスツヅマブのモノクローナル抗体が結合できなくなるのかもしれない。ＨＥＲ−２受容体またはその調節因子の個々のシグナル伝達経路が変化したのかもしれない。ＨＥＲ遺伝子ファミリーの他のメンバーに対する治療法、例えば、セツキシマブ、ゲフィチニブまたはエルロチニブによるＨＥＲ−１受容体の阻害においても、標的化治療の合理的な適応の必要性の問題は、ＨＥＲ−２受容体における標的化治療に対する類推によって、同様の方法で解決される。これらの薬剤は、他の腫瘍疾患の治療に適応される。例えば、結腸直腸、頭頸部のＨＥＲ−１陽性の上皮性悪性腫瘍のために、セツキシマブが適応され、肺および膵臓の上皮性悪性腫瘍および他の適応症において、ゲフィチニブまたはエルロチニブが適応される。進展中の臨床研究の数の増加によって、古典的な細胞毒性治療では効果が十分ではない多くの臨床的な適応症において、ＨＥＲファミリーに対する阻害剤の高い有効性が実証される。それにもかかわらず、この標的化された治療でさえ、全ての患者が利益を得るわけではない。さらに、およそ半数を上回る患者の大部分の症例において、この治療は失敗する。ＨＥＲファミリーの個々のメンバーの高い相同性およびこれらのシグナル伝達経路の類似性に関して、効率性バイオマーカーが類似していると推測することができる。
【０００４】
〔発明の開示〕
本発明の目的は、がん疾患に罹患している患者の、ＨＥＲ受容体ファミリーシグナル伝達経路の阻害に基づく生物学的療法に対する感受性を測定するための方法であり、この方法は、患者の身体から採取された生物学的材料を用いて行われ、バイオマーカーＳ６キナーゼもしくはその翻訳後修飾された形態またはＳ６キナーゼ活性化バイオマーカーもしくはその翻訳後修飾された形態が、腫瘍において測定される。バイオマーカーＳ６キナーゼもしくはその翻訳後修飾された形態またはＳ６キナーゼ活性化バイオマーカーもしくはその翻訳後修飾された形態が腫瘍において発現しているときは、その腫瘍は、ＨＥＲ受容体ファミリーシグナル伝達経路の阻害に基づく生物学的療法に対して抵抗性である。反対に、バイオマーカーまたはその翻訳後修飾された形態が腫瘍において発現していないときは、その腫瘍は、上記の生物学的療法に対して感受性があり、患者は、肯定的な全体的予後を有することが見出された。
【０００５】
上記生物学的療法は、例えば、以下の細胞シグナル伝達に特異的な低分子阻害剤（通常、合成有機分子）または高分子（通常はタンパク質、一般的には抗体）の投与からなる：
ａ）低分子ＨＥＲ−２受容体阻害剤、例えば、ラパチニブ等
ｂ）ＨＥＲファミリーの他のタンパク質類似体（例えば、ＨＥＲ−１、ＨＥＲ−３、ＨＥＲ−４）の低分子阻害剤、例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ等
ｃ）高分子ＨＥＲ−２受容体阻害剤、例えば、トラスツヅマブ等
ｄ）ＨＥＲファミリーの他のタンパク質類似体（例えば、ＨＥＲ−１、ＨＥＲ−３、ＨＥＲ−４）の高分子阻害剤、例えば、セツキシマブまたはパニツムマブ等。
【０００６】
上記生物学的材料は、腫瘍もしくは他の組織の生検試料または体液であり、生物学的材料において、試験されるバイオマーカーの存在が測定され得ることが本発明の側面である。
【０００７】
好ましい実施形態において、Ｓ６キナーゼ活性化のバイオマーカーは、同時に制御されるタンパク質、例えば、限定されないが、リボソームタンパク質Ｓ６、タンパク質ｅＩＦ４ＢおよびＩＲＳ−１を含むグループから選択される。
【０００８】
上記がん疾患は、ヒトまたは動物起源の悪性腫瘍または良性腫瘍であり、好ましくは、造血器腫瘍、上皮系起源、間葉系起源および神経外肺葉系起源の腫瘍、すなわち、悪性の乳房、直腸結腸、肺、膵臓、頭頸部、脳、前立腺または皮膚の新生物を含む群から選択されることが本発明の側面である。
【０００９】
上記発現の測定は、免疫分析法、免疫組織化学的方法、免疫細胞化学的方法、免疫蛍光技術、酵素分析、放射測定分析、シンチグラフィー分析、陽電子放射分光法、化学発光分析、蛍光分析、免疫沈降技術および質量分析法の原理に基づく方法を含む群から選択される検出方法を用いて行われることが本発明の側面である。
【００１０】
Ｓ６キナーゼ１（ｐ７０  Ｓ６Ｋ、Ｓ６Ｋ１と同義語）は、Ｓ６Ｋタンパク質ファミリーに属するセリン／スレオニンキナーゼである（Jastrzebski K. at al., Growth Factors. 2007; 25 (4): 209-26, Mamane Y., et al., Oncogene. 2006; 25 (48): 6416-22, Manning B.M., J Cell Biol. 2004;167 (3):399-403.）。ヒトゲノムは、Ｓ６Ｋの２つの形態：Ｓ６Ｋ１およびＳ６Ｋ２（Ｓ６Ｋｂと同義語）をコードしている２つの異なる遺伝子を包含している。Ｓ６Ｋの両方の形態は、高度な配列相同性を示し、同じ生物学的機能を有する。Ｓ６Ｋ１タンパク質のｐ７０またはｐ８５の形態は、Ｓ６Ｋ１の翻訳後修飾に基づいて検出され得る。ｐ７０  Ｓ６Ｋ１（以下、Ｓ６Ｋｐ７０と称する）は、細胞質において見つけられる。一方で、ｐ８５  Ｓ６Ｋ１は核に現れる。同様に、Ｓ６Ｋ２タンパク質の２つの形態であるｐ５４およびｐ５６があり、これらの両方が、細胞の核に現れる。Ｓ６Ｋ１をコードしている遺伝子は、ＨＥＲ−２受容体遺伝子と同じく、第１７番染色体において見つけられる。この遺伝子を含む染色体領域の増幅とＳ６Ｋ１の過剰な発現とが、乳房の上皮性悪性腫瘍を含む多くの腫瘍細胞株において見つけられる。初期の乳房の上皮性悪性腫瘍において、Ｓ６Ｋ１は、症例の２０〜３６％において検出される；我々が用いたＨＥＲ−２陽性の上皮性悪性腫瘍では、ｐＳｅｒ２３５／２３６  Ｓ６Ｋ１の発現陽性が、６３％以下の腫瘍において起こる。疾患の増悪までの平均期間（無増悪生存期間、ＰＦＳ）が、陰性腫瘍においては１６．１ヶ月であり、細胞質において陽性の腫瘍または細胞質と核とで陽性の腫瘍においては６．３ヶ月／７．８ヶ月であり、陰性発現は、トラスツヅマブによるＨＥＲ−２の治療学的な阻害に対する良好な反応に関係していた。これらのデータは、Ｓ６Ｋ１の発現を示す腫瘍を有するほとんどすべての患者が、ＨＥＲ−２遺伝子の治療学的な阻害の利益をほとんど得ないことを示している。
【００１１】
Ｓ６Ｋ１は、分子のＣ−末端部、いわゆるＴ−ループキナーゼドメインにおいて、２つの異なる同一ではない触媒ドメインを含んでいる。Ｓ６Ｋ１の主な機能は、リボソームＳ６タンパク質およびｅＩＦ４Ｂタンパク質のリン酸化であり、その結果としてタンパク質合成を誘導する。最近の発見は、ＩＲＳ−１タンパク質を用いる糖代謝の制御において、Ｓ６Ｋ１も役割を担っていることを示している。Ｓ６Ｋ１の活性は、細胞増殖および細胞の生存の亢進に寄与する。Ｓ６Ｋ１の抗アポトーシス作用は、ＢＡＤタンパク質のリン酸化を介したＢｃｌ−２タンパク質の活性に対するＳ６Ｋの調節性の活性によってさらに増強される。
【００１２】
Ｓ６Ｋ１キナーゼは、シグナル伝達経路ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ（mammalian target of rapamycin：哺乳類ラパマイシン標的タンパク質）の一部であり、ｍＴＯＲからのシグナル伝達の主なエフェクターとして機能する。ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴシグナル伝達経路は、これらのリガンドによって増殖因子受容体が刺激された結果として活性化される。ＨＥＲ−２陽性の乳房の上皮性悪性腫瘍の場合は、すなわちＨＥＲ−２受容体によって活性化され、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ−３およびＩＧＦ−Ｒ受容体によっても活性化される。
【００１３】
ｍＴＯＲは、ＰＩ３ＫおよびＡＫＴキナーゼの作用によって活性化され、ｍＴＯＲ活性を制御する結節硬化症タンパク質ＴＳＣ１およびＴＳＣ２を負に阻害する。Ｓ６Ｋ１をリン酸化（活性化）するためのｍＴＯＲの能力は、３つのタンパク質：ラパマイシン感受性アダプタータンパク質、ｍＴＯＲ（レプター）、Ｇタンパク質β−サブユニット様タンパク質（ＧβＬ）および４０ｋＤａプロテインキナーゼＢのプロリンリッチ基質（ＰＲＡＳ４０）を含むタンパク質複合体の形成にさらに依存している。“ｍＴＯＲ複合体１”（ｍＴＯＲＣ１）として指定されたこの複合体は、その後、最小で２つのタンパク質残基においてＳ６Ｋ１をリン酸化する。すなわち、第３８９位におけるスレオニンのリン酸化は、Ｓ６Ｋ１がさらに機能するために必須であり、これによってＰＤＫ１キナーゼによるＳ６Ｋ１のさらなるアミノ酸残基のリン酸化を誘発する。
【００１４】
我々の結果は、標的化されたトラスツヅマブ療法または他のＨＥＲ−２受容体阻害剤による治療法に対して、タンパク質Ｓ６Ｋが、ＨＥＲ−２陽性の乳房の上皮性悪性腫瘍の有望な予測マーカーであることを示している。シグナル伝達経路の類似性に関して、Ｓ６Ｋは、ＨＥＲ受容体ファミリーのシグナル伝達経路の治療学的な阻害に対する反応の一般的な予測マーカーであるかもしれないと推定することができる。
【００１５】
明細書の全体において示されるデータとの関連において、悪性腫瘍の診断および治療法は、社会全体に対する直接の望ましくない影響を及ぼす深刻な医学的問題であると思われる。標的化された抗腫瘍療法は、一方で、上述した利点をしめすが、他方で、重大な経済的負担をもたらす。分子抗体に基づく標的化された抗腫瘍薬剤を使用する費用は、通常、患者１年あたり、合計１００万チェコクラウン貨幣を超える。ＨＥＲ受容体を標的とした抗腫瘍療法に対する反応の予測のためにＳ６Ｋの検出を使用することによって、ＨＥＲ阻害によって治療学的な利益を受ける可能性が最小である患者において、治療法の合理化、金融資産の節約、不必要なストレスの軽減をもたらすかもしれない。さらに、Ｓ６Ｋ陽性腫瘍を有する患者は、さらに効果的な他の治療法が提供されるかもしれない。
【００１６】
〔図の簡単な説明〕
図は、実施例１による、腫瘍における個々のバイオマーカーの発現を、光学顕微鏡を用いて免疫組織化学的に検出したそれぞれのバイオマーカーの例を示し、バイオマーカーの発現を有する乳房の腫瘍（陽性腫瘍）のマイクロ写真およびバイオマーカーの発現を有さない腫瘍（陰性腫瘍）のマイクロ写真を示す。無増悪生存期間時間、ＰＦＳによって評価されたトラスツヅマブの治療学的な有効性の長さとの関連において、関係しているバイオマーカーの（全てのまたは細胞区分：核、細胞質またはこれらの組合せにおける）発現の有意性についての生物静力学的評価の結果（ｙ軸における累積生存率およびｘ軸における数ヶ月にわたる期間）；および全生存、ＯＳ（ｙ軸における累積生存率およびｘ軸における数年にわたる期間）；ＭＳＴ＝平均生存期間（月／年）；実施例２による、ロング−ランク検定（long-rank test）によって評価された統計上の有意性のレベルが、図においてさらに示される。
【００１７】
図１：バイオマーカー：全てのＡｃｔ（全）キナーゼ；抗体：（１１Ｅ７）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
図２：バイオマーカー：ｐＳｅｒ４７３  Ａｃｔキナーゼ；抗体：（５８７Ｆ１１）マウスｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
図３：バイオマーカー：ｐＳｅｒ／Ｔｈｒ  Ａｃｔキナーゼ；抗体：基質、ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
図４：バイオマーカー：ｐＴｈｒ３０８  Ａｃｔキナーゼ；抗体：（２４４Ｆ９Ｈ２）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
図５：バイオマーカー：全てのＥＲＫ１／２キナーゼ；抗体：ｐ４４／４２  ＭＡＰウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
図６：バイオマーカー：ｐＥＲＫ１／２キナーゼ；抗体：ｐ４４／４２  ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）（２０Ｇ１１）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
図７：バイオマーカー：全てのＧＳＫ３βキナーゼ；抗体：（２７Ｃ１０）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
図８：バイオマーカー：ｐＳｅｒ９  ＧＳＫ３βキナーゼ；抗体：ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
図９：バイオマーカー：全てのｍＴＯＲキナーゼ；抗体：（７Ｃ１０）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
図１０：バイオマーカー：ｐＳｅｒ２４４８  ｍＴＯＲキナーゼ；抗体：（４９Ｆ９）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
図１１：バイオマーカー：全ての抗ＭＵＣ４タンパク質；抗体：（１Ｇ８）マウスｍＡｂ（ザイメッド、ＵＳＡ）
図１２：バイオマーカー：全てのＰＴＥＮタンパク質；抗体：（１３８Ｇ６）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
図１３：バイオマーカー：全てのＳ６Ｋタンパク質；抗体：Ｓ６リボソームタンパク質（５Ｇ１０）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
図１４：バイオマーカー：ｐＳｅｒ２３５／２３６  Ｓ６Ｋタンパク質；抗体：リン酸化−Ｓ６リボソームタンパク質（９１Ｂ２）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）。
【００１８】
〔本発明の実行の例〕
実施例１
バイオマーカー発現の免疫組織化学的測定
免疫組織化学的検出のために、種々の技術を用いて処理して薄く切断した生検材料、最も高い頻度ではパラフィン中に埋め込まれたホルマリン固定された組織、を用いてもよい。免疫組織化学的反応は、一次抗原と組織抗原との結合の視覚化を示している。使用した特定の方法に従って、場合によっては、二次抗体もしくは三次抗体の特異的な反応、または他のシグナル増幅系も続けて行う。使用される標識のタイプ、高い頻度では酵素標識、に応じて、抗原は、適切な色素原によって特異的な結合が起こる部位おいて可視化される。抗体と抗原との結合は、目に見える反応なしに進む。光学顕微鏡または蛍光顕微鏡の一般的な方法による標本の観察を可能にするために、抗原の局在およびそれに結合する分子の可視化のための、いわゆる色素原または蛍光色素を用いるべきである。ＦＩＴＣ（fluorescein-isothiocyanate：フルオレセイン−イソチオシアネート）は、免疫蛍光法において最も高い頻度で用いられる。免疫酵素反応において、抗体は、例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼといった酵素と連結することによって標識される。組織の状況における陽性構造の局在化のために、免疫組織化学法または免疫蛍光法において、例えば、ヘマトキシリンまたはヘキスト型の蛍光染料による切片の対比染色がしばしば用いられる。
【００１９】
組織を切断し、標準的な方法によって任意で脱パラフィン処理した後で、スライドあたり０．５ｍｌのブロッキング溶液（例えば、トリス緩衝食塩水  ｐＨ７．２〜７．４、ＴＢＳにおける３％無脂肪乳）中で、通常、室温で１時間にわたってインキュベートすることによって、非特異的な結合部位のブロッキングを行う。ブロッキング溶液を捨てた後で、ＴＢＳ中において、スライドを、簡単に２回（×２）すすぐ。適切に希釈した一次抗体を、ブロッキング溶液または製造業者によって推奨される他の適切な媒体のどちらかにおいて、１〜１０μｇ／ｍｌの濃度で、通常は適応した。スライドを、湿室において、室温で２時間にわたってインキュベートするか、冷蔵庫において一晩インキュベートした。その後、ＴＢＳ中で素早く２回（２×）すすぐことによって、一次抗体を洗い流し、その後、攪拌機においてわずかに動かしながら、ＴＢＳ中で試料を５分間に渡って３回（３×）インキュベートした。その後、適切に希釈した、例えばペルオキシダーゼによって標識された二次抗体を、通常は再びブロッキング溶液中で適応した。湿室において、室温で、１０〜６０分間にわたって試料をインキュベートした。その後、ＴＢＳ中で二次抗体を素早く２回（２×）洗い流し、その後、攪拌機においてわずかに混合しながら、ＴＢＳ中で５分間にわたって３回（３×）インキュベートした。最後に、新しく調製した基質色素原溶液、例えば、ペルオキシダーゼに基づく検出系を用いる場合に、ジアミノベンジジン（１０ｍｇ／ｍｌおよび０．３％過酸化水素水）の含有量を、１０〜２０分の期間に渡って、スライドにかけた。基質溶液を捨て、ＴＢＳ中で２回（２×）すすぐことによって反応を停止した。通常１分間にわたってヘマトキシリン溶液によって標本を対比染色し、水道水中ですすいだ。標本を脱水し、光学顕微鏡に搭載し、光学顕微鏡下で観察した。目的の集団における陽性細胞の割合、または抗原の細胞内の局在（例えば、核対細胞質陽性）を、半定量的に分析した。結果は、以下のように評価した：１．標的の集団において５〜１０％より少ない細胞が陽性である場合は、陰性、２．標的の集団において１０％より多く５０％より少ない細胞が陽性である場合は、わずかに陽性、３．標的の集団において５０％より多い細胞が陽性である場合は、強陽性。個々のバイオマーカー（全てのＡｃｔキナーゼ、ｐＳｅｒ４７３  Ａｃｔキナーゼ、ｐＳｅｒ／Ｔｈｒ  Ａｃｔキナーゼ、ｐＴｈｒ３０８Ａｃｔキナーゼ、全てのＥＲＫ１／２キナーゼ、ｐＴｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４  ＥＲＫ１／２キナーゼ、全てのＧＳＫ３βキナーゼ、ｐＳｅｒ９  ＧＳＫ３βキナーゼ、全てのｍＴＯＲキナーゼ、ｐＳｅｒ２４４８  ｍＴＯＲキナーゼ、ＭＵＣ４タンパク質、全てのＰＴＥＮタンパク質、全てのＳ６Ｋタンパク質、ｐＳｅｒ２３５／２３６  Ｓ６Ｋキナーゼ）に関する試験の結果を図１〜１４において示す。
【００２０】
実施例２
個々のバイオマーカーの生物静力学的評価
２００４年から２００７年の間に、我々は、チェコ共和国の厚生省の内部助成金機関によって支援された研究プロジェクト（ＮＲ８３３５）およびチェコ共和国の産業省の内部助成金機関によって支援された研究プロジェクト（ＭＰＯ１Ｈ−ＰＫ／４５）に従事した。その目的は、トラスツヅマブに対する耐性をもたらす機構を明らかにし、乳がんのための新しい診断ツールを開発することであった。これらのプロジェクトの枠組み内で、我々は、１４０人の女性において、初期のＨＥＲ−２陽性の乳房の上皮性悪性腫瘍におけるおよそ２０の異なるタンパク質の出現および活性を測定した。これらの患者の半分は、標的化生物学的治療、トラスツヅマブによって治療されていた。我々の結果は、測定されたタンパク質の内の１つ、すなわちＳ６キナーゼ１（Ｓ６Ｋ１）が、トラスツヅマブに対して耐性を有する疾患の強力な予測因子であることをはっきりと示している。さらに、Ｓ６キナーゼ１は、ＨＥＲ−２陽性の腫瘍の標本において、十分な頻度の陽性（浸透）を有するバイオマーカーであり、それゆえ、単一遺伝子の予測因子として用いられたとしても、高い精度でＨＥＲ−２阻害療法に対する反応を予測することができる。
【００２１】
個々のマーカーの臨床的な有意性の検証のための例として、トラスツヅマブによって処置された進行性のＨＥＲ−２陽性の乳がんの診断を有する女性患者群を用い、その腫瘍を、評価されたバイオマーカー（全てのＡｃｔキナーゼ、ｐＳｅｒ４７３  Ａｃｔキナーゼ、ｐＳｅｒ／Ｔｈｒ  Ａｃｔキナーゼ、ｐＴｈｒ３０８  Ａｃｔキナーゼ、全てのＥＲＫ１／２キナーゼ、ｐＴｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４  ＥＲＫ１／２キナーゼ、全てのＧＳＫ３βキナーゼ、ｐＳｅｒ９  ＧＳＫ３βキナーゼ、全てのｍＴＯＲキナーゼ、ｐＳｅｒ２４４８  ｍＴＯＲキナーゼ、ＭＵＣ４タンパク質、全てのＰＴＥＮタンパク質、全てのＳ６Ｋタンパク質、ｐＳｅｒ２３５／２３６  Ｓ６Ｋキナーゼ）に関して検討した。臨床的な変数として、無増悪生存期間（ＰＦＳ）および月／年における全生存（ＯＳ）を用いた。無増悪生存期間は、処置の開始から疾患の進行が確認されるまで、または患者と最後に接触した日までの期間として測定した。全生存は、診断から死亡または最後の接触までの期間である。生存曲線を、カプラン・マイヤー法（Kaplan,J Am Stat Assoc 1958）の手法によって作成した。無増悪生存期間および全生存に関連する危険因子を同定するために、単一変異分析（univariation analysis）を行った。生存曲線間の違いは、ログランク検定（Peto, J R Stat Soc 1972）の手法によって比較した。単一変異分析において、以下の因子を評価した：免疫組織化学的染色の陽性、疾患の進行に対する平均生存期間（ＭＳＴ）および患者の全生存（共に数ヶ月間にわたって）。個々のバイオマーカー（全てのＡｃｔキナーゼ、ｐＳｅｒ４７３  Ａｃｔキナーゼ、ｐＳｅｒ／Ｔｈｒ  Ａｃｔキナーゼ、ｐＴｈｒ３０８  Ａｃｔキナーゼ、全てのＥＲＫ１／２キナーゼ、ｐＴｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４  ＥＲＫ１／２キナーゼ、全てのＧＳＫ３βキナーゼ、ｐＳｅｒ９  ＧＳＫ３βキナーゼ、全てのｍＴＯＲキナーゼ、ｐＳｅｒ２４４８  ｍＴＯＲキナーゼ、ＭＵＣ４タンパク質、全てのＰＴＥＮタンパク質、全てのＳ６Ｋタンパク質、ｐＳｅｒ２３５／２３６  Ｓ６Ｋキナーゼ）に関する統計的な評価の結果を図１〜１４において示す。
【００２２】
〔産業上の利用可能性〕
本発明にかかる方法によって、ＨＥＲシグナル伝達経路の阻害剤による処置の必要を示すがん患者群から、治療がほぼ確実に有益となる患者のみを予想することが可能である。それゆえ、個人にあわせた治療法によって、治療費用の最適化がもたらされ、患者は、望まない毒性および生活の質の低下を示す効果の無い治療によって苦しめられることがない。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】バイオマーカー：全てのＡｃｔ（全）キナーゼ；抗体：（１１Ｅ７）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
【図２】バイオマーカー：ｐＳｅｒ４７３  Ａｃｔキナーゼ；抗体：（５８７Ｆ１１）マウスｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
【図３】バイオマーカー：ｐＳｅｒ／Ｔｈｒ  Ａｃｔキナーゼ；抗体：基質、ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
【図４】バイオマーカー：ｐＴｈｒ３０８  Ａｃｔキナーゼ；抗体：（２４４Ｆ９Ｈ２）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
【図５】バイオマーカー：全てのＥＲＫ１／２キナーゼ；抗体：ｐ４４／４２  ＭＡＰウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
【図６】バイオマーカー：ｐＥＲＫ１／２キナーゼ；抗体：ｐ４４／４２  ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）（２０Ｇ１１）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
【図７】バイオマーカー：全てのＧＳＫ３βキナーゼ；抗体：（２７Ｃ１０）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
【図８】バイオマーカー：ｐＳｅｒ９  ＧＳＫ３βキナーゼ；抗体：ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
【図９】バイオマーカー：全てのｍＴＯＲキナーゼ；抗体：（７Ｃ１０）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
【図１０】バイオマーカー：ｐＳｅｒ２４４８  ｍＴＯＲキナーゼ；抗体：（４９Ｆ９）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
【図１１】バイオマーカー：全ての抗ＭＵＣ４タンパク質；抗体：（１Ｇ８）マウスｍＡｂ（ザイメッド、ＵＳＡ）
【図１２】バイオマーカー：全てのＰＴＥＮタンパク質；抗体：（１３８Ｇ６）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
【図１３】バイオマーカー：全てのＳ６Ｋタンパク質；抗体：Ｓ６リボソームタンパク質（５Ｇ１０）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
【図１４】バイオマーカー：ｐＳｅｒ２３５／２３６  Ｓ６Ｋタンパク質；抗体：リン酸化−Ｓ６リボソームタンパク質（９１Ｂ２）ウサギｍＡｂ（セルシグナリング、ＵＳＡ）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【手続補正書】
【提出日】平成22年7月27日(2010.7.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
がん疾患に罹患している患者の、ＨＥＲ受容体ファミリーシグナル伝達経路の阻害に基づく生物学的療法に対する感受性を測定するための方法であり、当該患者の身体から採取された生物学的材料を用いて行われ、バイオマーカーリボソームタンパク質Ｓ６もしくはその翻訳後修飾された形態の発現が腫瘍において測定されることを特徴とする、方法。
【請求項２】
上記生物学的材料は、上記腫瘍もしくは他の組織の生検試料または体液である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
上記がん疾患は、ヒト起源または動物起源の悪性腫瘍または良性腫瘍であり、好ましくは、造血器腫瘍、上皮系起源、間葉系起源、および神経外胚葉系起源の腫瘍を含む群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
上記がん疾患は、悪性の、乳房、結腸直腸、肺、膵臓、頭頸部、脳、前立腺および皮膚の新生物を含む群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
上記生物学的療法は、ＨＥＲ受容体ファミリーシグナル伝達経路の特異的な、低分子阻害剤または高分子阻害剤の投与を包含している、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
上記発現の測定は、免疫分析法、免疫組織化学的方法、免疫細胞化学的方法、免疫蛍光法技術、酵素分析、放射測定分析、シンチグラフィー分析、陽電子放射トモグラフィー、化学発光分析、蛍光分析、免疫沈降技術および質量分析法の原理に基づく方法を含む群から選択される検出方法を用いて行われることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【国際調査報告】
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