(57)【要約】  各種チューブリシン（ｔｕｂｕｌｙｓｉｎ）を調製するためのプロセスが記載される。本発明のプロセスは、チューブリシンの混合物を調製するために、１つだけのチューブリシンをチューブリシンの混合物から調製するために、また、１つのチューブリシンを異なるチューブリシンに変換するために有用である。本明細書中に記載されるチューブリシンは、疾患および病原性細胞を含む疾患状態を治療することにおいて有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式の第１の化合物：
【化１】
2011500835.tif 000062
（式中、
ｎは１〜３であり；
Ｖは、Ｈ、ＯＲ２またはハロであり、かつ、Ｗは、Ｈ、ＯＲ２またはアルキルであり、式中、Ｒ２は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキルまたはＣ（Ｏ）Ｒ５から選択され、式中、Ｒ５は独立して、それぞれの場合に、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリールアルキルおよびアリールからなる群から選択され；ただし、Ｒ２は、ＶおよびＷがともにＯＲ２であるとき、Ｈではなく；あるいは、ＶおよびＷは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；
Ｚはアルキルであり、かつ、ＹはＯであり；あるいは、ＺはアルキルまたはＣ（Ｏ）Ｒ４であり、かつ、Ｙは存在せず、式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；
Ｒ１はＨであるか、あるいは、Ｒ１は、ハロ、ニトロ、カルボキシラートまたはその誘導体、シアノ、ヒドロキシル、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、フェノール保護基、プロドラッグ成分およびＯＲ６から選択される１〜３個の置換基を表し、式中、Ｒ６は、任意に置換されたアリール、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり；
ＲはＯＨまたは脱離基であるか、あるいは、Ｒはカルボン酸誘導体を形成し；かつ、
Ｒ１０はアルキルまたはアルケニル（これらのそれぞれが任意に置換される）である）
を、下記式の第２の化合物：
【化２】
2011500835.tif 000063
（式中、
ｎは１〜３であり；
Ｖは、Ｈ、ＯＲ２またはハロであり、かつ、Ｗは、Ｈ、ＯＲ２またはアルキルであり、式中、Ｒ２は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキルまたはＣ（Ｏ）Ｒ５から選択され、式中、Ｒ５は独立して、それぞれの場合に、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリールアルキルおよびアリールからなる群から選択され、ただし、Ｒ２は、ＶおよびＷがともにＯＲ２であるとき、Ｈではなく；あるいは、ＶおよびＷは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；
Ｘは、水素、Ｃ１〜４アルキル、アルケニル（これらのそれぞれが任意に置換される）、または、ＣＨ２ＱＲ９であり；式中、Ｑは、−Ｎ−、−Ｏ−または−Ｓ−であり；Ｒ９は、水素、Ｃ１〜４アルキル、アルケニル、アリールまたはＣ（Ｏ）Ｒ１０であり；かつ、Ｒ１０は、Ｃ１〜６アルキル、アルケニル、アリールまたはヘテロアリールであり、式中、ＸがＣ（Ｏ）Ｒ１０であるとき、前記第２の化合物におけるＲ１０は前記第１の化合物におけるＲ１０と異なり；
Ｚはアルキルであり、かつ、ＹはＯであり；あるいは、ＺはアルキルまたはＣ（Ｏ）Ｒ４であり、かつ、Ｙは存在せず、式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；
Ｒ１はＨであるか、あるいは、Ｒ１は、ハロ、ニトロ、カルボキシラートまたはその誘導体、シアノ、ヒドロキシル、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、フェノール保護基、プロドラッグ成分およびＯＲ６から選択される１〜３個の置換基を表し、式中、Ｒ６は、任意に置換されたアリール、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり；かつ、
ＲはＯＨまたは脱離基であるか、あるいは、Ｒはカルボン酸誘導体を形成する）
に変換するためのプロセスであって、
前記第１の化合物を実質的に無水の条件のもとで酸と混合する工程を含む、プロセス。
【請求項２】
下記式の複数の化合物：
【化３】
2011500835.tif 000064
（式中、
ｎは１〜３であり；
Ｖは、Ｈ、ＯＲ２またはハロであり、かつ、Ｗは、Ｈ、ＯＲ２またはアルキルであり、式中、Ｒ２は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキルまたはＣ（Ｏ）Ｒ５から選択され、式中、Ｒ５は独立して、それぞれの場合に、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリールアルキルおよびアリールからなる群から選択され、ただし、Ｒ２は、ＶおよびＷがともにＯＲ２であるとき、Ｈではなく；あるいは、ＶおよびＷは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；
Ｚはアルキルであり、かつ、ＹはＯであり；あるいは、ＺはアルキルまたはＣ（Ｏ）Ｒ４であり、かつ、Ｙは存在せず、式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；
Ｒ１はＨであるか、あるいは、Ｒ１は、ハロ、ニトロ、カルボキシラートまたはその誘導体、シアノ、ヒドロキシル、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、フェノール保護基、プロドラッグ成分およびＯＲ６から選択される１〜３個の置換基を表し、式中、Ｒ６は、任意に置換されたアリール、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり；
ＲはＯＨまたは脱離基であるか、あるいは、Ｒはカルボン酸誘導体を形成し；かつ、
Ｒ１０は独立して、それぞれの場合に、アルキルおよびアルケニル（これらのそれぞれが任意に置換される）からなる群から選択される）
を、実質的に下記式の１つの化合物：
【化４】
2011500835.tif 000065
（式中、
ｎは１〜３であり；
Ｖは、Ｈ、ＯＲ２またはハロであり、かつ、Ｗは、Ｈ、ＯＲ２またはアルキルであり、式中、Ｒ２は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキルまたはＣ（Ｏ）Ｒ５から選択され、式中、Ｒ５は独立して、それぞれの場合に、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリールアルキルおよびアリールからなる群から選択され、ただし、Ｒ２は、ＶおよびＷがともにＯＲ２であるとき、Ｈではなく；あるいは、ＶおよびＷは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；
Ｘは、水素、Ｃ１〜４アルキル、アルケニル（これらのそれぞれが任意に置換される）、または、ＣＨ２ＱＲ９であり、式中、Ｑは、−Ｎ−、−Ｏ−または−Ｓ−であり；Ｒ９は、水素、Ｃ１〜４アルキル、アルケニル、アリールまたはＣ（Ｏ）Ｒ１０であり、かつ、Ｒ１０は、Ｃ１〜６アルキル、アルケニル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｚはアルキルであり、かつ、ＹはＯであり；あるいは、ＺはアルキルまたはＣ（Ｏ）Ｒ４であり、かつ、Ｙは存在せず、式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；
Ｒ１はＨであるか、あるいは、Ｒ１は、ハロ、ニトロ、カルボキシラートまたはその誘導体、シアノ、ヒドロキシル、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、フェノール保護基、プロドラッグ成分およびＯＲ６から選択される１〜３個の置換基を表し、式中、Ｒ６は、任意に置換されたアリール、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり；かつ、
ＲはＯＨまたは脱離基であるか、あるいは、Ｒはカルボン酸誘導体を形成する）
に変換するためのプロセスであって、
前記第１の複数の化合物を、実質的に無水の条件のもとで酸と混合する工程を含む、プロセス。
【請求項３】
ｎ＝２およびＲ＝ＯＨである、請求項１または２に記載のプロセス。
【請求項４】
ＶがＨであり、かつ、ＷがＯＲ２である、請求項１または２に記載のプロセス。
【請求項５】
Ｙが存在せず、かつ、Ｚがアルキルである、請求項１または２に記載のプロセス。
【請求項６】
式Ｒ１０ＣＯ２Ｈの化合物を添加する工程をさらに含む、請求項３に記載のプロセス。
【請求項７】
式Ｒ９ＱＨの化合物またはそのアニオン
（式中、
Ｑは、−Ｎ−、−Ｏ−または−Ｓ−であり；Ｒ９は、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり、あるいは、Ｒ９は、Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、Ｓ（Ｏ）２Ｒ２０またはＰ（Ｏ）（ＯＲ２０）２であり；式中、Ｒ２０は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）からなる群から選択されるか、または、Ｒ２０は金属カチオンである）
を添加する工程をさらに含む、請求項３に記載のプロセス。
【請求項８】
式Ｒ２１ＣＮの化合物
（式中、Ｒ２１は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）である）
を添加する工程をさらに含む、請求項３に記載のプロセス。
【請求項９】
式Ｒ２２（ＴＭＳ）ＣＣＨ２の化合物
（式中、Ｒ２２は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）である）
を添加する工程をさらに含む、請求項３に記載のプロセス。
【請求項１０】
式Ｒ２３Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｒａの化合物
（式中、
Ｒ２３は、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり；
Ｒａは、Ｃ（Ｏ）Ｒ９、Ｃ（Ｏ）ＯＲ９またはＣＮであり；かつ、
Ｒ９は、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）からなる群から選択される）
を添加する工程をさらに含む、請求項３に記載のプロセス。
【請求項１１】
水を添加する工程をさらに含む、請求項３に記載のプロセス。
【請求項１２】
（ａ）水を添加することによって、ヒドロキシル化合物を形成する工程；および、
（ｂ）前記ヒドロキシル化合物を、ハロゲン化剤、スルホニル化剤、ホスホニル化剤またはリン酸化剤により処理する工程、をさらに含む、請求項３に記載のプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書中に記載される発明は、チューブリシン（ｔｕｂｕｌｙｓｉｎ）およびチューブリシンアナログ、ならびに、チューブリシンおよびチューブリシンアナログを調製するためのプロセスに関する。
【背景技術】
【０００２】
チューブリシン類は、チューブリン重合の強力な阻害剤の一群である。チューブリシンは、疾患およびがんのような病原性細胞を含む疾患状態を治療することにおいて有用である。一般に、チューブリシンは、下記の表に示されるように、Ｎ−メチルピペコリン酸（Ｍｅｐ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、チューブバリン（ｔｕｂｕｖａｌｉｎ）（Ｔｕｖ）と呼ばれる非天然アミノ酸、および、チューブチロシン（ｔｕｂｕｔｙｒｏｓｉｎｅ）（Ｔｕｔ、チロシンのアナログ）と呼ばれる非天然アミノ酸、または、チューブフェニルアラニン（ｔｕｂｕｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）（Ｔｕｐ、フェニルアラニンのアナログ）と呼ばれる非天然アミノ酸のどちらか、からなる線状テトラペプチドである：
【表１】
2011500835.tif 000002
マイコバクテリウム属細菌の２つの特定の細菌種が、発酵時にチューブリシンを高濃度で合成する。しかしながら、それぞれの細菌種が一般に、チューブリシン因子の混合物を合成し、また、その混合物は、そのようなマイコバクテリウム細菌種のそれぞれの間で異なる。例えば、１つの細菌種、アルカンギウム・ゲフィラ（Ａｒｃｈａｎｇｉｕｍ  ｇｅｐｈｙｒａ）は、主要な成分因子として、チューブリシンＡ、チューブリシンＢ、チューブリシンＣ、チューブリシンＧおよびチューブリシンＩを産生し、これらはそれぞれ、それぞれがＴｕｔ残基を含むことによって特定され得る。対照的に、別の細菌種であるアンギオコッカス・ディスシホルミス（Ａｎｇｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｉｓｃｉｆｏｒｍｉｓ）は、主要な成分因子として、チューブリシンＤ、チューブリシンＥ、チューブリシンＦおよびチューブリシンＨを産生し、これらはそれぞれ、Ｔｕｐ残基を含むことによって特定され得る。
【０００３】
このような細菌発酵は、チューブリシンの好都合な供給源である。しかしながら、マイコバクテリウム属細菌は、特定のチューブリシンのみ、および／または、チューブリシンの混合物を産生するので、そのようなチューブリシンを医学的使用および薬理学的使用のための所望される因子に相互変換するためのプロセスが求められている。加えて、医学的使用および薬理学的使用のための新規なチューブリシン、チューブリシンアナログおよびチューブリシン誘導体を調製するためのプロセスが求められている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
チューブリシンを調製するためのプロセスが、本明細書中に記載される。チューブリシンのアナログおよび誘導体もまた、本明細書中に記載される。１つの実施形態において、チューブリシンの混合物から、例えば、発酵または何らかの他のプロセスによって製造されるチューブリシンの混合物から、１つまたは複数のチューブリシンを、調製するためのプロセスが記載される。別の実施形態において、１つまたは複数のチューブリシンから、チューブリシンの混合物を調製するためのプロセスが本明細書中に記載される。別の実施形態において、１つのチューブリシンを別のチューブリシンに変換するためのプロセスが本明細書中に記載される。別の実施形態において、１つまたは複数のチューブリシンを、あるいは、チューブリシンの混合物を、１つまたは複数のチューブリシンアナログに、あるいは、チューブリシンアナログの混合物に変換するためのプロセスが、本明細書中に記載される。本明細書中で使用される場合、チューブリシンの用語は、天然に存在するチューブリシン、ならびに、本明細書中に記載されるチューブリシンのアナログおよび誘導体、または、本明細書中に記載されるプロセスから調製され得るチューブリシンのアナログおよび誘導体を、総称的および個々にその両方で示すことを理解されたい。
【０００５】
別の実施形態において、新規なチューブリシン、チューブリシンアナログおよびチューブリシン誘導体が、そのような新規なチューブリシン、チューブリシンアナログおよびチューブリシン誘導体を調製するためのプロセスと併せて本明細書中に記載される。１つの実施形態において、本発明のプロセスは、１つまたは複数のチューブリシンを酸により処理して、中間体を調製することを含む。別の実施形態において、本発明のプロセスは、続いて、中間体を試薬と反応させることによって、チューブリシンの混合物をチューブリシンの異なる混合物から調製する工程、または、１つだけのチューブリシンをチューブリシンの混合物から調製する工程、または、チューブリシンの混合物を１つだけのチューブリシンから調製する工程、または、１つだけのチューブリシンを異なるチューブリシンから調製する工程を含む。
【０００６】
本明細書中に記載されるプロセスの１つの実施形態において、そのような中間体は、下記の式（１ａ）、式（１ｂ）または式（１ｃ）の化合物である：
【化１】
2011500835.tif 000003
2011500835.tif 000004
2011500835.tif 000005
式中、Ｒ、Ｒ１、Ｓ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、ＹおよびＺは、それらの様々な実施形態、態様および変形例において、本明細書中下記で記載される通りである。
【０００７】
式（１ａ）、式（１ｂ）および式（１ｃ）の中間体化合物は、例えば、残留する酸の共役塩基との塩などの、塩を形成し得ることが理解される。加えて、例えば、式（１ａ）、式（１ｂ）および式（１ｃ）のイミニウム中間体などの、イミニウム中間体が、対応するアシルアミナールとの平衡状態にあり得、この時に、残留する酸の共役塩基がイミニウム中間体に付加していることが理解される。イミニウム中間体は、溶媒和物または水和物を形成することができ、これらはそれぞれ、イミニウム中間体との平衡状態にあり得ることが、さらに理解される。いずれの場合でも、理論によってとらわれることはないが、イミニウムが、塩、水和物、溶媒和物またはアシルアミナールの形態であるかどうかにかかわらず、求核剤（例えば、ＲＣＮ、ＲＸＨ、ならびに、それらの対応するアニオンおよび塩など）がイミニウム中間体と反応して、本明細書中に記載される化合物、例えば、下記の式（２ａ）、式（２ｂ）および式（２ｃ）の化合物などを、それぞれ調製することが考えられる：
【化２】
2011500835.tif 000006
2011500835.tif 000007
2011500835.tif 000008
式中、Ｒ、Ｒ１、Ｒ１０、Ｓ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、ＹおよびＺは、それらの様々な実施形態、態様および変形例において、本明細書中下記で記載される通りである。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
１つだけのチューブリシンを、または、チューブリシン化合物の混合物を、１つだけのチューブリシン化合物に、または、チューブリシン化合物の異なる混合物に変換するためのプロセスが本明細書中に記載される。１つの実施形態において、本明細書中に記載されるチューブリシンは一般に、下記式のテトラペプチド化合物およびその薬学的に許容可能な塩を示す：
【化３】
2011500835.tif 000009
式中、
ｎは１〜３であり；
Ｖは、Ｈ、ＯＲ２またはハロであり、かつ、Ｗは、Ｈ、ＯＲ２またはアルキルであり、式中、Ｒ２は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキルおよびＣ（Ｏ）Ｒ３から選択され、式中、Ｒ３は、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり；ただし、Ｒ２は、ＶおよびＷがともにＯＲ２であるとき、Ｈではなく；あるいは、ＶおよびＷは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；
Ｘ＝Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、アルケニル（これらのそれぞれが任意に置換される）、または、ＣＨ２ＱＲ９であり；式中、Ｑは、−Ｎ−、−Ｏ−または−Ｓ−であり；Ｒ９＝Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、アルケニル、アリールまたはＣ（Ｏ）Ｒ１０であり；Ｒ１０＝Ｃ１〜６アルキル、アルケニル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｚはアルキルであり、かつ、ＹはＯである；あるいは、ＺはアルキルまたはＣ（Ｏ）Ｒ４であり、かつ、Ｙは存在せず、式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；
Ｒ１はＨであるか、あるいは、Ｒ１は、ハロ、ニトロ、カルボキシラートまたはその誘導体、シアノ、ヒドロキシル、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、フェノール保護基、プロドラッグ成分およびＯＲ６から選択される１〜３個の置換基を表し、式中、Ｒ６は、任意に置換されたアリール、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり；かつ、
ＲはＯＨまたは脱離基であるか、あるいは、Ｒはカルボン酸誘導体を形成する。
【０００９】
１つの変形例において、Ｚがメチルである。別の変形例において、Ｒ１がＨである。別の変形例において、Ｒ１がＣ（４）においてＯＲ６であり、式中、Ｒ６は、Ｈ、アルキルまたはＣＯＲ７である。別の変形例において、ＶがＨであり、ＷがＯＣ（Ｏ）Ｒ３である。
【００１０】
例示的な脱離基には、ハロゲン化物、例えばトリフラートなどのスルホナート、例えばペンタフルオロフェノキシなどの任意に置換されたフェノキシ、および、エステル形成試薬またはアミド形成試薬（例えば、クロロギ酸イソブチル、ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＥＤＣ、ＰｙＢＯＰ、ＢＯＰおよびＢＯＰ−Ｃｌなど）から形成される中間体が含まれるが、これらに限定されない。
例示的なカルボン酸誘導体には、エステル、アミド、イミド、アシルヒドラジド、ニトリル、および、それらの任意に置換された態様が含まれるが、これらに限定されない。
【００１１】
別の実施形態において、下記一般式のチューブリシンおよびそれらの薬学的に許容可能な塩が記載される：
【化４】
2011500835.tif 000010
式中、
ｎは１〜３であり；
Ｖは、Ｈ、ＯＲ２またはハロであり、かつ、Ｗは、Ｈ、ＯＲ２またはアルキルであり、式中、Ｒ２は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキルおよびＣ（Ｏ）Ｒ３から選択され、式中、Ｒ３は、アルキル、アルケニルまたはアリールであり、ただし、Ｒ２は、ＶおよびＷがともにＯＲ２であるとき、Ｈではなく；あるいは、ＶおよびＷは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；
Ｘ＝Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、アルケニル（これらのそれぞれが任意に置換される）、または、ＣＨ２ＱＲ９であり；式中、Ｑは、−Ｎ−、−Ｏ−または−Ｓ−であり；Ｒ９＝Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、アルケニル、アリールまたはＣ（Ｏ）Ｒ１０であり；かつ、Ｒ１０＝Ｃ１〜６アルキル、アルケニル、アリールまたはヘテロアリールであり；
ＺはアルキルまたはＣ（Ｏ）Ｒ４であり、式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；
ＴはＨまたはＯＲ６であり、式中、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＯＲ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり、あるいは、Ｒ６はフェノール保護基またはプロドラッグ成分であり；
ＳおよびＵはそれぞれが独立して、Ｈ、ハロ、ニトロ、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルコキシおよびハロアルコキシからなる群から選択され；かつ、
ＲはＯＨまたは脱離基であるか、あるいは、Ｒはカルボン酸誘導体を形成する。
【００１２】
１つの実施形態において、天然のチューブリン、ならびに、その対応するアナログおよび誘導体が記載される。このような天然のチューブリンは一般に、Ｎ−メチルピペコリン酸（Ｍｅｐ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、チューブバリン（Ｔｕｖ）と呼ばれる非天然アミノ酸、および、チューブチロシン（Ｔｕｔ、チロシンのアナログ）と呼ばれる非天然アミノ酸、または、チューブフェニルアラニン（Ｔｕｐ、フェニルアラニンのアナログ）と呼ばれる非天然アミノ酸のどちらかからなる、線状テトラペプチドである。別の実施形態において、下記一般式の天然に存在するチューブリシン、そのアナログおよび誘導体、ならびに、それらの薬学的に許容可能な塩が記載される：
【化５】
2011500835.tif 000011
式中、Ｒ、Ｒ１およびＲ１０は、本明細書中における様々な実施形態において記載される通りである。
【００１３】
１つの実施形態において、第１のチューブリシンが、または、代替的にはチューブリシンの混合物が、式（１ａ）の中間体化合物を調製することによって、第２のチューブリシンに変換される。
式（１ａ）中、
ｎは１〜３であり；
Ｖは、Ｈ、ＯＲ２またはハロであり、かつ、Ｗは、Ｈ、ＯＲ２またはアルキルであり、式中、Ｒ２は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキルおよびＣ（Ｏ）Ｒ３から選択され、式中、Ｒ３は、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり；ただし、Ｒ２は、ＶおよびＷがともにＯＲ２であるとき、Ｈではなく；あるいは、ＶおよびＷは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；
Ｘ＝Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、アルケニル（これらのそれぞれが任意に置換される）、または、ＣＨ２ＱＲ９であり；式中、Ｑは、−Ｎ−、−Ｏ−または−Ｓ−であり；Ｒ９＝Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、アルケニル、アリールまたはＣ（Ｏ）Ｒ１０であり；Ｒ１０＝Ｃ１〜６アルキル、アルケニル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｚはアルキルであり、かつ、ＹはＯであり；あるいは、ＺはアルキルまたはＣ（Ｏ）Ｒ４であり、かつ、Ｙは存在せず、式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；
Ｒ１はＨであるか、あるいは、Ｒ１は、ハロ、ニトロ、カルボキシラートまたはその誘導体、シアノ、ヒドロキシル、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、フェノール保護基、プロドラッグ成分およびＯＲ６から選択される１〜３個の置換基を表し、式中、Ｒ６は、任意に置換されたアリール、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり；かつ、
ＲはＯＨまたは脱離基であるか、あるいは、Ｒはカルボン酸誘導体を形成する。
この中間体およびその薬学的に許容可能な塩、は、式（２ｂ）のチューブリシンまたは式（２ｂ）のチューブリシンの混合物を、実質的に無水の条件のもとで酸と混合することによって調製される：
【化６】
2011500835.tif 000012
式中、
ｎは１〜３であり；
Ｖは、Ｈ、ＯＲ２またはハロであり、かつ、Ｗは、Ｈ、ＯＲ２またはアルキルであり、式中、Ｒ２は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキルおよびＣ（Ｏ）Ｒ３から選択され、式中、Ｒ３は、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり；ただし、Ｒ２は、ＶおよびＷがともにＯＲ２であるとき、Ｈではなく；あるいは、ＶおよびＷは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；
Ｘ＝Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、アルケニル（これらのそれぞれが任意に置換される）、または、ＣＨ２ＱＲ９であり；式中、Ｑは、−Ｎ−、−Ｏ−または−Ｓ−であり；Ｒ９＝Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、アルケニル、アリールまたはＣ（Ｏ）Ｒ１０であり；Ｒ１０＝Ｃ１〜６アルキル、アルケニル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｚはアルキルであり、かつ、ＹはＯであり；あるいは、ＺはアルキルまたはＣ（Ｏ）Ｒ４であり、かつ、Ｙは存在せず、式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；
Ｒ１はＨであるか、あるいは、Ｒ１は、ハロ、ニトロ、カルボキシラートまたはその誘導体、シアノ、ヒドロキシル、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、フェノール保護基、プロドラッグ成分およびＯＲ６から選択される１〜３個の置換基を表し、式中、Ｒ６は、任意に置換されたアリール、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり；かつ、
ＲはＯＨまたは脱離基であるか、あるいは、Ｒはカルボン酸誘導体を形成する。
【００１４】
その後、式（１ａ）の中間体化合物は、式Ｒ１０ＣＯ２Ｈの化合物により処理される。ただし、式中、Ｒ１０は、式（２ａ）の第２の化合物を調製するために使用される第１のチューブリシンに存在するＲ１０と同じではない。
【００１５】
１つの変形例において、Ｚがメチルである。別の変形例において、Ｒ１がＨである。別の変形例において、Ｒ１がＣ（４）においてＯＲ６であり、式中、Ｒ６は、Ｈ、アルキルまたはＣＯＲ７である。別の変形例において、ＶがＨであり、ＷがＯＣ（Ｏ）Ｒ３である。別の変形例において、ＲがＯＨである。別の変形例において、Ｒはエステル誘導体を形成する。別の変形例において、Ｒはアミド誘導体を形成する。別の変形例において、Ｒは、例えばヒドラジンから形成される化合物などの、アシルヒドラジド誘導体を形成する。
【００１６】
別の実施形態において、第１のチューブリシンが、または、代替的にはチューブリシンの混合物が、式（１ｂ）の中間体化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）を調製することによって、第２のチューブリシンに変換される。
式（１ｂ）中、
Ｖは、Ｈ、ＯＲ２またはハロであり、かつ、Ｗは、Ｈ、ＯＲ２またはアルキルであり、式中、Ｒ２は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキルまたはＣＯＲ３から選択され、式中、Ｒ３は、アルキル、アルケニルまたはアリールであり、ただし、Ｒ２は、ＶおよびＷがともにＯＲ２であるとき、Ｈではなく；あるいは、ＶおよびＷは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；ＺはＣＨ３またはＣＯＲ４であり、かつ、Ｙは存在せず；あるいは、ＺはＣＨ３であり、かつ、ＹはＯであり、式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；ＴはＨまたはＯＲ６であり、式中、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＯＲ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり；かつ、ＳおよびＵは、それぞれが独立して、Ｈ、ハロ、ニトロ、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルコキシおよびハロアルコキシからなる群から選択される。
この中間体、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）は、下記の式（２ｂ）のチューブリシンまたは式（２ｂ）のチューブリシンの混合物を、実質的に無水の条件のもとで酸と混合することによって調製される：
【化７】
2011500835.tif 000013
式中、Ｒ１０は、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり；Ｖは、Ｈ、ＯＲ２またはハロであり、かつ、Ｗは、Ｈ、ＯＲ２またはアルキルであり、式中、Ｒ２は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキルまたはＣＯＲ３から選択され、式中、Ｒ３は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり、ただし、Ｒ２は、ＶおよびＷがともにＯＲ２であるとき、Ｈではなく；あるいは、ＶおよびＷは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；ＺはＣＨ３またはＣＯＲ４であり、かつ、Ｙは存在せず；あるいは、ＺはＣＨ３であり、かつ、ＹはＯであり；式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；ＴはＨまたはＯＲ６であり、式中、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＯＲ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり；かつ、ＳおよびＵは、それぞれが独立して、Ｈ、ハロ、ニトロ、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルコキシおよびハロアルコキシからなる群から選択される。
その後、式（１ｂ）の中間体化合物は、式Ｒ１０ＣＯ２Ｈの化合物（により処理される。ただし、式中、Ｒ１０は、式（２ｂ）の第２の化合物を調製するための第１のチューブリシンにおけるＲ１０と同じではない。
【００１７】
別の実施形態において、第１のチューブリシンが、または、チューブリシンの混合物が、式（１ｃ）の中間体化合物（式中、Ｔは、ＨまたはＯＨである）を調製することによって、第２のチューブリシンに変換される。この中間体、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）は、下記の式（２ｃ）のチューブリシンまたは式（２ｃ）のチューブリシンの混合物を、実質的に無水の条件のもとで酸と混合することによって調製される：
【化８】
2011500835.tif 000014
式中、Ｔは、ＨまたはＯＨであり、かつ、Ｒ１０は、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）である。その後、式（１ｃ）の中間体化合物は、式Ｒ１０ＣＯ２Ｈの化合物により処理される。ただし、式中、Ｒ１０は、式（２ｃ）の第２の化合物を調製するために使用される出発チューブリシンに存在するＲ１と同じではない。
【００１８】
前記実施形態のそれぞれにおいて、特定の形態では、それらの代わりに、チューブリシンが、１つだけのチューブリシンではなく、むしろ、チューブリシンの異なる混合物に変換され得ることが理解される。そのような実施形態において、１つだけの出発チューブリシンを、または、チューブリシンの出発混合物を、最初に、共通の中間体化合物に、あるいは、式（１ａ）、式（１ｂ）または式（１ｃ）の中間体化合物の混合物に変換することができ、その後、そのような中間体化合物は、カルボン酸の混合物と反応させられることによって、チューブリシンの所望される混合物が提供される。例えば、チューブリシンＢおよびチューブリシンＣの混合物、あるいは、それらの対応するアナログまたは誘導体の混合物が所望されるならば、１つだけの出発チューブリシン（例えば、チューブリシンＡ、あるいは、その対応するアナログまたは誘導体、など）を、または、代替的にはチューブリシンの混合物を、最初に、式（１ａ）、式（１ｂ）または式（１ｃ）の対応する化合物（この場合、ＴはＯＨである）に変換し、その後、チューブリシンＢおよびチューブリシンＣにおける適切な基にそれぞれ対応するカルボン酸（例えば、ブタン酸およびプロパン酸など）の混合物により、処理されることができる。第２の工程で使用されるカルボン酸の相対的な割合に基づいて、統計学的な混合物が生じ得ることが理解される。代替的には、速度論的要因および熱力学的要因が、第２の工程で得られるチューブリシンの最終的な割合に影響を及ぼす場合があり、従って、カルボン酸の比率に基づくチューブリシンの統計学的な混合物が生じないこともまた理解される。どちらの場合でも、カルボン酸混合物の相対比率の常法的最適化により、チューブリシンの所望される混合物が、式（１ａ）、式（１ｂ）および式（１ｃ）の共通する中間体からもたらされることが理解される。
【００１９】
別の実施形態において、式（１ｂ）の中間体化合物は、式Ｒ９ＱＨの化合物または式Ｒ９ＱＨの化合物から調製されるアニオンで処理されることによって、下記式の化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）を与えることができる：
【化９】
2011500835.tif 000015
式中、Ｑは、−Ｎ−、−Ｏ−または−Ｓ−であり；Ｒ９は、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり、あるいは、Ｒ９は、Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、Ｓ（Ｏ）２Ｒ２０またはＰ（Ｏ）（ＯＲ２０）２であり；式中、Ｒ２０は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）からなる群から選択され、または、Ｒ２０は金属カチオンであり；Ｖは、Ｈ、ＯＲ２またはハロであり、かつ、Ｗは、Ｈ、ＯＲ２またはアルキルであり、式中、Ｒ２は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキルまたはＣＯＲ３から選択され、式中、Ｒ３は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり；ただし、Ｒ２は、ＶおよびＷがともにＯＲ２であるとき、Ｈではなく；あるいは、ＶおよびＷは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；ＺはＣＨ３またはＣＯＲ４であり、かつ、Ｙは存在せず；あるいは、ＺはＣＨ３であり、かつ、ＹはＯであり；式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；ＴはＨまたはＯＲ６であり、式中、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＯＲ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり；かつ、ＳおよびＵは、それぞれが独立して、Ｈ、ハロ、ニトロ、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルコキシおよびハロアルコキシからなる群から選択される。
【００２０】
別の実施形態において、式（１ｃ）の中間体化合物は、式Ｒ９ＱＨの化合物またはそのアニオンで処理されることによって、下記式の化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）を与えることができる：
【化１０】
2011500835.tif 000016
式中、Ｑは、−Ｎ−、−Ｏ−または−Ｓ−であり；Ｒ９は、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり、あるいは、Ｒ９は、Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、Ｓ（Ｏ）２Ｒ２０またはＰ（Ｏ）（ＯＲ２０）２であり；式中、Ｒ２０は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）からなる群から選択され、または、Ｒ２０は金属カチオンであり；かつ、Ｔは、ＨまたはＯＨである。
【００２１】
式（２ａ）の対応する化合物が、式（１ａ）の対応する中間体およびＲ９ＱＨを通じて、同様に調製され得ることを理解されたい。
【００２２】
別の実施形態において、式（１ｂ）の中間体化合物は、ニトリル化合物Ｒ２１ＣＮで処理されることによって、下記式の化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）を与えることができる：
【化１１】
2011500835.tif 000017
式中、Ｒ２１は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり；Ｖは、Ｈ、ＯＲ２またはハロであり、かつ、Ｗは、Ｈ、ＯＲ２またはアルキルであり、式中、Ｒ２は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキルまたはＣＯＲ３から選択され、式中、Ｒ３は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり、ただし、Ｒ２は、ＶおよびＷがともにＯＲ２であるとき、Ｈではなく；あるいは、ＶおよびＷは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；ＺはＣＨ３またはＣＯＲ４であり、かつ、Ｙは存在せず；あるいは、ＺはＣＨ３であり、かつ、ＹはＯであり；式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；Ｔは、ＨまたはＯＲ６であり、式中、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＯＲ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり；かつ、ＳおよびＵは、それぞれが独立して、Ｈ、ハロ、ニトロ、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルコキシおよびハロアルコキシからなる群から選択される。
【００２３】
別の実施形態において、式（１ｃ）の中間体化合物は、ニトリル化合物Ｒ２１ＣＮで処理されることによって、下記式の化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）を与えることができる：
【化１２】
2011500835.tif 000018
式中、Ｒ２１は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり；かつ、Ｔは、ＨまたはＯＨである。
【００２４】
式（２ａ）の対応する化合物が、式（１ａ）の対応する中間体およびＲ２１ＣＮを通じて、同様に調製され得ることを理解されたい。
【００２５】
別の実施形態において、式（１ｂ）の中間体化合物は、式Ｒ２２（ＴＭＳ）ＣＣＨ２のアルケニルシランで処理されることによって、下記式の化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）を与えることができる：
【化１３】
2011500835.tif 000019
式中、Ｒ２２は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり；Ｖは、Ｈ、ＯＲ２またはハロであり、かつ、Ｗは、Ｈ、ＯＲ２またはアルキルであり、式中、Ｒ２は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキルまたはＣＯＲ３から選択され、式中、Ｒ３は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり、ただし、Ｒ２は、ＶおよびＷがともにＯＲ２であるとき、Ｈではなく；あるいは、ＶおよびＷは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；ＺはＣＨ３またはＣＯＲ４であり、かつ、Ｙは存在せず；あるいは、ＺはＣＨ３であり、かつ、ＹはＯであり；式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；Ｔは、ＨまたはＯＲ６であり、式中、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＯＲ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり；かつ、ＳおよびＵは、それぞれが独立して、Ｈ、ハロ、ニトロ、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルコキシおよびハロアルコキシからなる群から選択される。
【００２６】
別の実施形態において、式（１ｃ）の中間体化合物は、式Ｒ２２（ＴＭＳ）ＣＣＨ２のアルケニルシランで処理されることによって、下記式の化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）を与えることができる：
【化１４】
2011500835.tif 000020
式中、Ｒ２２は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり；かつ、Ｔは、ＨまたはＯＨである。
【００２７】
式（２ａ）の対応する化合物が、式（１ａ）の対応する中間体およびＲ２２（ＴＭＳ）ＣＣＨ２を通じて、同様に調製され得ることを理解されたい。
【００２８】
前記実施形態では、他のオレフィンが、反応の条件およびＲ２２の特性に依存して、異性化によって形成し得ることが理解される。例えば、Ｒ２２がアルキルであるとき、反応条件下において、末端またはω−オレフィンを形成することを含めて、二重結合が、アルケニル鎖に沿って他の炭素原子に移動し得ることが理解される。
【００２９】
別の実施形態において、式（１ｂ）の中間体化合物は、式Ｒ２３Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｒａの化合物で処理されることによって、下記式の化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）を与える：
【化１５】
2011500835.tif 000021
式中、Ｒ２３は、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり；Ｒａは、Ｃ（Ｏ）Ｒ９、Ｃ（Ｏ）ＯＲ９またはＣＮであり；Ｒ９は、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）からなる群から選択され；Ｖは、Ｈ、ＯＲ２またはハロであり、かつ、Ｗは、Ｈ、ＯＲ２またはアルキルであり、式中、Ｒ２は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキルまたはＣＯＲ３から選択され、式中、Ｒ３は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり、ただし、Ｒ２は、ＶおよびＷがともにＯＲ２であるとき、Ｈではなく；あるいは、ＶおよびＷは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；ＺはＣＨ３またはＣＯＲ４であり、かつ、Ｙは存在せず；あるいは、ＺはＣＨ３であり、かつ、ＹはＯであり；式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；Ｔは、ＨまたはＯＲ６であり、式中、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＯＲ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり；かつ、ＳおよびＵは、それぞれが独立して、Ｈ、ハロ、ニトロ、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルコキシおよびハロアルコキシからなる群から選択される。
【００３０】
別の実施形態において、式（１ｃ）の中間体化合物は、式Ｒ２３Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｒａの化合物で処理されることによって、下記式の化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）を与える：
【化１６】
2011500835.tif 000022
式中、Ｒ２３は、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり；Ｒａは、Ｃ（Ｏ）Ｒ９、Ｃ（Ｏ）ＯＲ９またはＣＮであり；Ｒ９は、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）からなる群から選択され；かつ、Ｔは、ＨまたはＯＨである。
【００３１】
式（２ａ）の対応する化合物が、式（１ａ）の対応する中間体およびＲ２３Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｒａを通じて、同様に調製され得ることを理解されたい。
【００３２】
別の実施形態において、式（１ｂ）の中間体化合物は、水で処理されることによって、下記式（３ｂ）の第２の中間体化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）を与える：
【化１７】
2011500835.tif 000023
式中、Ｖは、Ｈ、ＯＲ２またはハロであり、かつ、Ｗは、Ｈ、ＯＲ２またはアルキルであり、式中、Ｒ２は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキルまたはＣＯＲ３から選択され、式中、Ｒ３は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり、ただし、Ｒ２は、ＶおよびＷがともにＯＲ２であるとき、Ｈではなく；あるいは、ＶおよびＷは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；ＺはＣＨ３またはＣＯＲ４であり、かつ、Ｙは存在せず；あるいは、ＺはＣＨ３であり、かつ、ＹはＯであり；式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；Ｔは、ＨまたはＯＲ６であり、式中、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＯＲ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり；かつ、ＳおよびＵは、それぞれが独立して、Ｈ、ハロ、ニトロ、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルコキシおよびハロアルコキシからなる群から選択される。
【００３３】
別の実施形態において、式（１ｃ）の中間体化合物は、水で処理されることによって、下記式（３ｃ）の第２の中間体化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）を与える：
【化１８】
2011500835.tif 000024
式中、Ｔは、ＨまたはＯＨである。
【００３４】
式（３ａ）の対応する化合物が、式（１ａ）の対応する中間体および水を通じて、同様に調製され得ることを理解されたい。
【００３５】
別の実施形態において、式（３ｂ）の中間体化合物は、ハロゲン化試薬、スルホニル化試薬、ホスホニル化試薬またはリン酸化試薬で処理されることによって、下記式の化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）を与える：
【化１９】
2011500835.tif 000025
式中、Ｘ３は、ハロゲン、ＯＳ（Ｏ）２Ｒ２４、ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ２４）Ｒ２４またはＯＰ（Ｏ）（ＯＲ２４）２であり、式中、Ｒ２４は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）からなる群から選択されるか、または、Ｒ２４は金属カチオンであり；Ｖは、Ｈ、ＯＲ２またはハロであり、かつ、Ｗは、Ｈ、ＯＲ２またはアルキルであり、式中、Ｒ２は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキルまたはＣＯＲ３から選択され、式中、Ｒ３は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり、ただし、Ｒ２は、ＶおよびＷがともにＯＲ２であるとき、Ｈではなく；あるいは、ＶおよびＷは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；ＺはＣＨ３またはＣＯＲ４であり、かつ、Ｙは存在せず；あるいは、ＺはＣＨ３であり、かつ、ＹはＯであり；式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；Ｔは、ＨまたはＯＲ６であり、式中、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＯＲ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり；かつ、ＳおよびＵは、それぞれが独立して、Ｈ、ハロ、ニトロ、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルコキシおよびハロアルコキシからなる群から選択される。
【００３６】
別の実施形態において、式（３ｃ）の中間体化合物は、ハロゲン化試薬、スルホニル化試薬、ホスホニル化試薬またはリン酸化試薬で処理されることによって、下記式の化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）を与える：
【化２０】
2011500835.tif 000026
式中、Ｘ３は、ハロゲン、ＯＳ（Ｏ）２Ｒ２４、ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ２４）Ｒ２４またはＯＰ（Ｏ）（ＯＲ２４）２であり；式中、Ｒ２４は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）からなる群から選択されるか、または、Ｒ２４は金属カチオンであり；かつ、Ｔは、ＨまたはＯＨである。
【００３７】
式（３ａ）の対応する化合物が、式（１ａ）の対応する中間体と、ハロゲン化試薬、スルホニル化試薬、ホスホニル化試薬またはリン酸化試薬による処理とを通じて、同様に調製され得ることを理解されたい。
【００３８】
別の実施形態において、下記式（２ｄ）の化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）が記載される：
【化２１】
2011500835.tif 000027
式中、Ｒ１０は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり；かつ、Ｔは、ＨまたはＯＨである。この化合物をトリフルオロ酢酸で処理し、得られる混合物を減圧下で濃縮することによって、中間体イミニウム化合物を与える。このようなイミニウム化合物は、下記の式によって例示されるように、対応するトリフルオロアセタート塩化合物、ならびに、他の水和物および溶媒和物として、また、アシルアミナール化合物および他の付加化合物として、存在し得ることが理解される：
【化２２】
2011500835.tif 000028
そのような式の化合物を、または、本明細書中に記載され、式（２ｄ）の化合物をＴＦＡで処理することによって調製される他の対応する中間体を、アルコールと混合するによって、下記式の対応するＮ，Ｏ−アセタール化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）が得られる：
【化２３】
2011500835.tif 000029
式中、Ｒ９は、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり、あるいは、Ｒ９は、Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、Ｓ（Ｏ）２Ｒ２０またはＰ（Ｏ）（ＯＲ２０）２であり；式中、Ｒ２０は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）からなる群から選択されるか、あるいは、Ｒ２０は金属カチオンであり；かつ、Ｔは、ＨまたはＯＨである。
【００３９】
別の実施形態において、式（２ｄ）の化合物をトリフルオロ酢酸と混合し、得られる混合物を減圧下で濃縮し、その後に、濃縮された混合物をチオールと混合することによって、下記式のＮ，Ｓ−アセタール化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）が得られる：
【化２４】
2011500835.tif 000030
式中、Ｒ９は、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり、あるいは、Ｒ９は、Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、Ｓ（Ｏ）２Ｒ２０またはＰ（Ｏ）（ＯＲ２０）２であり；式中、Ｒ２０は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）からなる群から選択されるか、あるいは、Ｒ２０は金属カチオンであり；かつ、Ｔは、ＨまたはＯＨである。
【００４０】
別の実施形態において、式（２ｄ）の化合物をトリフルオロ酢酸と混合し、得られる混合物を減圧下で濃縮し、その後に、濃縮された混合物をニトリルと混合することによって、下記式の化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）が得られる：
【化２５】
2011500835.tif 000031
式中、Ｒ２１は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり；かつ、Ｔは、ＨまたはＯＨである。
【００４１】
別の実施形態において、式（２ｄ）の化合物をトリフルオロ酢酸と混合し、得られる混合物を減圧下で濃縮し、その後に、濃縮された混合物をＢｉｇｉｎｅｌｌｉ型反応においてケトンと混合することによって、下記式の化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）が得られる：
【化２６】
2011500835.tif 000032
式中、Ｒ２３は、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり；Ｒａは、Ｃ（Ｏ）Ｒ８、Ｃ（Ｏ）ＯＲ８またはＣＮであり；Ｒ８は、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）からなる群から選択され；かつ、Ｔは、ＨまたはＯＨである。
【００４２】
別の実施形態において、式（２ｄ）の化合物をトリフルオロ酢酸と混合し、得られる混合物を減圧下で濃縮し、その後に、濃縮された混合物をアルケニルシランと混合することによって、下記式の化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）が得られる：
【化２７】
2011500835.tif 000033
式中、Ｒ２２は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり；かつ、Ｔは、ＨまたはＯＨである。
【００４３】
別の実施形態において、式（２ｄ）の化合物をトリフルオロ酢酸と混合し、得られる混合物を減圧下で濃縮し、その後に、濃縮された混合物を水と混合することによって、下記式（３ｄ）の化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）が得られる：
【化２８】
2011500835.tif 000034
式（３ｄ）の化合物はまた、ＴがＯＨであるとき、ヒドロキシチューブリシンＤとして示されることがあり、または、ＴがＯＨであるとき、ヒドロキシチューブリシンＡとして示されることがある。
【００４４】
別の実施形態において、Ｎ−ヒドロキシメチルチューブリシンＡまたはＮ−ヒドロキシメチルチューブリシンＤは、ハロゲン化スルホニルおよび塩基で処理されることによって、下記式の化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）を与える：
【化２９】
2011500835.tif 000035
式中、Ｒ２４は、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）であり；かつ、Ｔは、ＨまたはＯＨである。
【００４５】
別の実施形態において、Ｎ−ヒドロキシメチルチューブリシンＡまたはＮ−ヒドロキシメチルチューブリシンＤは、トリフェニルホスフィンおよびイミダゾールの存在下で、臭素またはヨウ素で処理されることによって、下記式の化合物、または、その対応するカルボン酸誘導体（式中、ＲはＯＨ以外である）を与える：
【化３０】
2011500835.tif 000036
式中、Ｘ４はＢｒまたはＩであり；かつ、Ｔは、ＨまたはＯＨである。
【００４６】
別の実施形態において、下記式の、チューブリシンの共役化合物およびその薬学的に許容可能な塩が記載される：
【化３１】
2011500835.tif 000037
式中、ｎは１〜３であり；Ｔは、ＨまたはＯＲ６であり、式中、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＯＲ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり、あるいは、Ｒ６はフェノール保護基またはプロドラッグ成分であり；ＺはアルキルまたはＣ（Ｏ）Ｒ４であり、式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；かつ、ＲはＯＨまたは脱離基であり、あるいは、Ｒはカルボン酸誘導体を形成する。このような化合物の例示的な例およびこれらの調製が、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、５１、１５３０〜１５３３（２００８）に記載される（その開示は、参照によって本明細書中に組み込まれる）。そのような共役化合物は、前記式における任意のヘテロ原子において、対応する水素または他の基を取り除くことによって、形成され得ることが理解され、そのような共役化合物には、水素を、Ｒ＝ＯＨであるときにはＲから取り除くことによって形成される共役化合物、および、水素を、Ｔ＝ＯＨであるときにはＴから取り除くことによって形成される共役化合物などが含まれるが、これらに限定されない。本明細書中に記載される共役化合物は、米国特許出願公開第２００５／０００２９４２号（その開示は、参照によって本明細書中に組み込まれる）において一般的に記載されるような、スペーサーリンカーおよび／または脱離可能なリンカーを含むことができる。加えて、本明細書中に記載される共役化合物は、例えば、米国特許出願公開第２００５／０００２９４２号などにおいて一般的に記載されるように、共役化合物を病原性細胞集団に標的化するための標的化リガンド（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｌｉｇａｎｄ、これには、葉酸、ならびに、葉酸のアナログおよび誘導体が含まれるが、これらに限定されない）を含むことができる。
【００４７】
別の実施形態において、下記一般式のチューブリシンおよびその薬学的に許容可能な塩が記載される：
【化３２】
2011500835.tif 000038
式中、
ｎは１〜３であり；
Ｖは、Ｈ、ＯＲ２またはハロであり、かつ、Ｗは、Ｈ、ＯＲ２またはアルキルであり、式中、Ｒ２は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキルまたはＣＯＲ３から選択され、式中、Ｒ３は、アルキル、アルケニルまたはアリールであり、ただし、Ｒ２は、ＶおよびＷがともにＯＲ２であるとき、Ｈではなく；あるいは、ＶおよびＷは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；
Ｘ＝Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、アルケニル（これらのそれぞれが任意に置換される）、または、ＣＨ２ＱＲ９であり；式中、Ｑは、−Ｎ−、−Ｏ−または−Ｓ−であり；Ｒ９＝Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、アルケニル、アリールまたはＣ（Ｏ）Ｒ１０であり；かつ、Ｒ１０＝Ｃ１〜６アルキル、アルケニル、アリールまたはヘテロアリールであり；
ＺはＣＨ３またはＣＯＲ４あり、かつ、Ｙは存在せず；あるいは、ＺはＣＨ３であり、かつ、ＹはＯであり；式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；
ＴはＨまたはＯＲ６であり、式中、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＯＲ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり；
ＳおよびＵは、それぞれが独立して、Ｈ、ハロ、ニトロ、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルコキシおよびハロアルコキシからなる群から選択され；かつ、
Ｒは、ＯＨまたは脱離基であるか、あるいは、Ｒはカルボン酸誘導体を形成する。
さらなるチューブリシンが、米国特許出願公開第２００６／０１２８７５４号および同第２００５／０２３９７１３号に記載される（それらの開示は参照によって本明細書中に組み込まれる）。
【００４８】
別の実施形態において、下記式のチューブリシンおよびその薬学的に許容可能な塩が記載される：
【化３３】
2011500835.tif 000039
式中、ｎは１〜３であり；Ｔは、ＨまたはＯＲ６であり、式中、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、アリール、ＣＯＲ７、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２またはＳＯ３Ｒ８であり、式中、Ｒ７およびＲ８は独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択されるか、または、Ｒ８は金属カチオンであり、あるいは、Ｒ６はフェノール保護基またはプロドラッグ成分であり；ＺはアルキルまたはＣ（Ｏ）Ｒ４あり、式中、Ｒ４は、アルキル、ＣＦ３またはアリールであり；かつ、ＲはＯＨまたは脱離基であるか、あるいは、Ｒはカルボン酸誘導体を形成する。このような化合物の例示的な例およびそれらの調製が、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、５１、１５３０〜１５３３（２００８）に記載される（その開示は参照によって本明細書中に組み込まれる）。
【００４９】
別の実施形態において、下記式のチューブリシンおよびそれらの薬学的に許容可能な塩が記載される：
【化３４】
2011500835.tif 000040
式中、ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｚ、ＲおよびＲ１０は、本明細書中における様々な実施形態において記載される通りである。
【００５０】
別の実施形態において、下記式のチューブリシンおよびそれらの薬学的に許容可能な塩が記載される：
【化３５】
2011500835.tif 000041
式中、ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｚ、ＱＲ９およびＲは、本明細書中における様々な実施形態において記載される通りである。１つの変形例において、Ｑは、−Ｎ−、−Ｏ−または−Ｓ−であり；かつ、Ｒ９は、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）である。別の変形例において、ＱＲ９は一緒になって、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０またはＰ（Ｏ）（ＯＲ１０ａ）２を形成し、式中、Ｒ１０およびＯＲ１０ａは独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）からなる群から選択され、または、Ｒ１０ａは金属カチオンである。
【００５１】
別の実施形態において、下記式のチューブリシンおよびそれらの薬学的に許容可能な塩が記載される：
【化３６】
2011500835.tif 000042
式中、Ｒ１２は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）から選択される１つまたは複数の置換基を表し；かつ、ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、ＺおよびＲは、本明細書中における様々な実施形態において記載される通りである。他のオレフィンが、反応の条件およびＲ１の特性に依存して、異性化によって形成し得ることを理解されたい。例えば、Ｒ１がアルキルであるとき、反応条件下において、末端またはω−オレフィンを形成することを含めて、二重結合が、アルケニル鎖に沿って他の炭素原子に移動し得ることが理解される。
【００５２】
別の実施形態において、下記式のチューブリシンおよびそれらの薬学的に許容可能な塩が記載される：
【化３７】
2011500835.tif 000043
式中、Ｒ１３は、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０またはＣＮであり；かつ、ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｚ、ＲおよびＲ１０は、本明細書中における様々な実施形態において記載される通りであり、式中、Ｒ１０は独立して、それぞれの場合において選択される。
【００５３】
別の実施形態において、下記式のチューブリシンおよびそれらの薬学的に許容可能な塩が記載される：
【化３８】
2011500835.tif 000044
式中、ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、ＺおよびＲは、本明細書中における様々な実施形態において記載される通りである。
【００５４】
別の実施形態において、下記式のチューブリシンおよびそれらの薬学的に許容可能な塩が記載される：
【化３９】
2011500835.tif 000045
式中、Ｘ３は、ハロゲン、ＯＳ（Ｏ）２Ｒ１０、ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１０ａ）Ｒ１０またはＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１０ａ）２であり；式中、Ｒ１０およびＲ１０ａは独立して、それぞれの場合に、Ｈ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールおよびアリールアルキル（これらのそれぞれが任意に置換される）からなる群から選択され、または、Ｒ１０ａは金属カチオンであり；かつ、ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、ＺおよびＲは、本明細書中における様々な実施形態において記載される通りである。
【００５５】
本明細書中に記載される共役化合物を調製することにおいて有用である、さらなるチューブリシンが、Ｐｅｌｔｉｅｒら、「Ｔｈｅ  Ｔｏｔａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｕｂｕｌｙｓｉｎ  Ｄ（チューブリシンＤの全合成）」、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１２８：１６０１８〜１９（２００６）に記載される（その開示は参照によって本明細書中に組み込まれる）。
【００５６】
前記実施形態のそれぞれにおいて、１つの変形例では、様々な式の化合物が、示された不斉骨格炭素原子について、下記の絶対配置を有することが理解される：
【化４０】
2011500835.tif 000046
【００５７】
本明細書中に記載されるように、チューブリシン化合物は、チューブリン重合の阻害剤であり得るし、ＤＮＡアルキル化剤でもあり得る。従って、疾患およびがんのような病原性細胞を含む疾患状態を治療するための方法が、本明細書中に記載される。
【実施例】
【００５８】
一般的手順
チューブリシン混合物（２０ｍｇ、これは、チューブリシンＡ、チューブリシンＢ、チューブリシンＣ、チューブリシンＧ、チューブリシンＩおよびヒドロキシチューブリシンを含有する）を無水ジクロロメタン（ＤＣＭ、０．８０ｍＬ）に溶解した明るい褐色溶液に、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、０．２０ｍＬ）をシリンジにより加えた。室温およびアルゴン下で４０分間撹拌した後、溶液に、対応する求核剤（例えば、Ｈ２Ｏ、ＭｅＯＨ、１−プロパノール、エチレングリコール、３−メチルブタノール、１−プロパンチオール、２−スルファニルエタノール、１，２−エタンジチオール、酢酸、酪酸、ｔｒａｎｓ−４−クロロ−２−ブテン酸、ただしこれらに限定されない）を加え、０．２０ｍＬをすべてのチオールについては使用し、０．５０ｍＬをそれ以外のすべてについては使用した。溶液を減圧下、Ｂｕｃｈｉ  Ｒｏｔａｖａｐｏｒで濃縮し、オイルポンプによってさらに濃縮した。粗生成物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、１．０ｍＬ）に溶解し、調製用ＨＰＬＣによって精製して、生成物を白色の固体として得た。
【００５９】
一般的な調製用ＨＰＬＣパラメーター：カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＴｅｒｒａ  Ｐｒｅｐ  ＭＳ  Ｃ１８  １０μｍ、１９ｘ２５０ｍｍ；移動相Ａ：２．０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０；移動相Ｂ：アセトニトリル；方法：１０％Ｂから８０％Ｂまで３０分かけて、流速＝２６ｍＬ／分。
【００６０】
実施例。天然チューブリンの相互変換。
チューブリシンの混合物（１０５ｍｇ、チューブリシンＡ、チューブリシンＢ、チューブリシンＣ、チューブリシンＧ、チューブリシンＩおよびヒドロキシチューブリシンＡ）を乾燥ＤＣＭ（５．０ｍＬ）に溶解した明るい褐色溶液に、ＴＦＡ（１．０ｍＬ）を加え、得られた明るい緑褐色溶液を室温においてアルゴン下で５０分間撹拌した。ＬＣ−ＭＳは、このチューブリシン混合物がヒドロキシ−チューブリシンに変換されたことを示した。この溶液に酪酸（１０ｍＬ）を加え、溶液を最初にエバポレーションによって少量にまで濃縮して、ＴＦＡおよびＤＣＭを除き、その後、さらに真空下で約１時間にわたって濃縮して、粘稠性のオイルにした。ＨＰＬＣ分析では、ヒドロキシチューブリシン中間体がチューブリシンＢに完全に変換されたことが示された。粗生成物をＤＭＳＯ（１．２ｍＬ）に溶解し、２５ｍＬ／分での２０分かけた２５％Ｂから５０％Ｂへのグラジエント（Ａ：２．０ｍＭリン酸塩緩衝液、ｐＨ７．０；Ｂ：ＡＣＮ）を使用しながら、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＴｅｒｒａ  Ｐｒｅｐ  ＭＳ  Ｃ１８（１０μｍ）の１９ｘ２５０ｍｍカラムを用いる調製用ＨＰＬＣによって精製した。１１．５分から１３．５分までの分画物を集め、凍結乾燥して、７７ｍｇのチューブリシンＢおよび９．０ｍｇのリン酸ナトリウム塩を含有する、８６ｍｇの白色固体にした。相互変換をＨＰＬＣによって実験の始めから終わりまで追跡したところ、基準となる標準サンプルと比較することにより、チューブリシンＢのみへの変換が示された。チューブリンの他の混合物が同様に、１つだけのチューブリシンに変換され得ることを理解されたい。チューブリシンのこの混合物および他の混合物が、同様に、チューブリシンＢ以外の一つのチューブリシンに変換され得ることをさらに理解されたい。
【００６１】
実施例。天然チューブリンの相互変換。
前記実施例の条件を、（ａ）チューブリシンＡをチューブリシンＢに変換するために、（ｂ）チューブリシンＡをチューブリシンＩに変換するために、（ｃ）チューブリシンＡおよびチューブリシンＢの混合物をチューブリシンＢに変換するために、および、（ｄ）チューブリシンＡ、チューブリシンＢおよびチューブリシンＩの混合物をチューブリシンＢに変換するために、繰り返した。それぞれの場合において、チューブリシンＢの収率は９０％以上であった。実施例（ａ）〜実施例（ｄ）のそれぞれにおいて、対応するチューブリシンが、チューブリシンＢ以外の一つのチューブリシンに変換され得ることを理解されたい。チューブリシンＢが同様に、異なる一つのチューブリシンに変換され得ることをさらに理解されたい。いくつかの場合において、Ｎ−ヒドロキシメチル置換されたチューブリシンもまた単離された。驚くべきことに、このヘミアミナールは中性ｐＨで安定であり、遊離アミンおよびホルムアルデヒドに分解しないことが見出された。
【化４１】
2011500835.tif 000047
ヒドロキシチューブリシンＡの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、その構造と一致していた；ＭＳはｍ／ｚ＝７６０を有した。本実験で得られたチューブリシンＢの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、その構造と一致していた；ＭＳはｍ／ｚ＝８３０を有した。
【００６２】
実施例。メトキシチューブリシン（ＥＣ０３１３）。
【化４２】
2011500835.tif 000048
チューブリシンＢ（２１．０ｍｇ）を乾燥ＤＣＭ（０．８０ｍＬ）に溶解した溶液に、ＴＦＡ（０．２０ｍＬ）を加え、混合物を室温においてアルゴン下で１時間撹拌した。ＭｅＯＨ（１．０ｍＬ）を、撹拌している溶液に加え、１時間後に溶媒をエバポレーターで減圧留去した。残渣を、１０ｍＬ／分での２５分かけた２０％Ｂから５０％Ｂへのグラジエント（Ａ：１．０ｍＭリン酸塩緩衝液、ｐＨ７．０；Ｂ：ＡＣＮ）を使用ながら、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＴｅｒｒａ  Ｐｒｅｐ  ＭＳ  Ｃ１８（１０μｍ）の１９ｘ２５０ｍｍカラムを用いる調製用ＨＰＬＣによって精製した。１８．８分から２２．３分までの分画物を集め、凍結乾燥して、１５．５ｍｇの表題化合物および２．５ｍｇのリン酸ナトリウム塩を含有する、１８．０ｍｇの白色固体にした。本実験で得られたメトキシチューブリシンの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、その構造と一致していた；ＭＳはｍ／ｚ＝７７４を有した。
【００６３】
実施例。２−ヒドロキシエトキシチューブリシン（ＥＣ０３４６）。
【化４３】
2011500835.tif 000049
チューブリシンＢ（４．８ｍｇ）を乾燥ＤＣＭ（０．３０ｍＬ）に溶解した溶液に、ＴＦＡ（７５μＬ）を加え、混合物を室温においてアルゴン下で１時間撹拌した。エチレングリコール（０．３０ｍＬ）を、撹拌している溶液に加え、３０分後に溶媒をエバポレーターで減圧留去した。残渣を、２．５ｍＬ／分での２０分かけた１０％Ｂから８０％Ｂへのグラジエント（Ａ：１．０ｍＭリン酸塩緩衝液、ｐＨ７．０；Ｂ：ＡＣＮ）を使用しながら、Ｗａｔｅｒｓ  Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（１０μｍ）の４．６ｘ２５０ｍｍカラムを用いる調製用ＨＰＬＣによって精製した。６．３分から６．７分までの分画物を集め、凍結乾燥して、４．８ｍｇの表題化合物および０．１ｍｇのリン酸ナトリウム塩を含有する、４．９ｍｇの白色固体にした。本実験で得られた２−ヒドロキシエトキシチューブリシンの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、その構造と一致していた；ＭＳはｍ／ｚ＝８０４を有した。
【００６４】
実施例。２−メルカプトエチルチオチューブリシン（ＥＣ０３７４）。
【化４４】
2011500835.tif 000050
チューブリシンＢ（６．９ｍｇ）を乾燥ＤＣＭ（０．５４ｍＬ）に溶解した溶液に、ＴＦＡ（６０μＬ）を加え、混合物を室温においてアルゴン下で３０分間撹拌した。１，２−エタンジチオール（２．０μＬ）を、撹拌している溶液に加え、５時間後に溶媒をエバポレーターで減圧留去した。残渣を、２５ｍＬ／分での２０分かけた１０％Ｂから８０％Ｂへのグラジエント（Ａ：２．０ｍＭリン酸塩緩衝液、ｐＨ７．０；Ｂ：ＡＣＮ）を使用しながら、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＴｅｒｒａ  Ｐｒｅｐ  ＭＳ  Ｃ１８（１０μｍ）の１９ｘ２５０ｍｍカラムを用いる調製用ＨＰＬＣによって精製した。９．５分から１０．７分までの分画物を集め、凍結乾燥して、３．４ｍｇの表題化合物および４．３ｍｇのリン酸ナトリウム塩を含有する、７．７ｍｇの白色固体にした。本実験で得られた２−メルカプトエチルチオチューブリシンの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、その構造と一致していた；ＭＳはｍ／ｚ＝８３６を有した。
【００６５】
実施例。ｉｓｏ−ブチリルアミドチューブリシン（ＥＣ０５８５）
【化４５】
2011500835.tif 000051
因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｃ、因子Ｇ、因子Ｉおよびヒドロキシチューブリン（それぞれ、Ｒ＝Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３およびＨ）を含有するチューブリンの混合物を、１つだけのチューブリンに変換した。チューブリン混合物（２５ｍｇ）をイソバレロニトリル（１５０μＬ）に溶解した溶液に、ＴＦＡ（３０μＬ）、濃Ｈ２ＳＯ４（２０μＬ）およびイソバレロニトリル（１５０μＬ）を含有する溶液を加えた。室温で２２時間撹拌した後、２．０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝７．０、１５ｍＬ）を用いて反応を停止させ、精製のために調製用ＨＰＬＣに注入した。カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＴｅｒｒａ  Ｐｒｅｐ  ＭＳ  Ｃ１８（１０μｍ）、１９ｘ２５０ｍｍ；移動相Ａ：２．０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０；移動相Ｂ：アセトニトリル；方法：１０％Ｂから８０％Ｂまで３０分かけて、流速＝２６ｍＬ／分。１７．２２分から１８．３６分までの分画物を集め、凍結乾燥して、ＥＣ０５８５を白色の固体として得た（１６ｍｇ）。本実験で得られたｉｓｏ−ブチリルアミドチューブリシンの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、その構造と一致していた；ＭＳはｍ／ｚ＝８４３を有した。
【００６６】
実施例。Ｎ−ホモアリルチューブリシンＥＣ０５５０
【化４６】
2011500835.tif 000052
因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｃ、因子Ｇ、因子Ｉおよびヒドロキシチューブリン（それぞれ、Ｒ＝Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３およびＨ）を含有するチューブリンの混合物を、１つだけのチューブリンに変換した。チューブリン混合物（１９ｍｇ）を無水ＤＣＭ（０．６０ｍＬ）に溶解した溶液に、ＴＦＡ（０．１５ｍＬ）を室温で加えた。室温においてアルゴン下で４０分間撹拌した後、無水ＭｅＯＨ（０．５０ｍＬ）を用いて反応を停止させた。溶液を、Ｂｕｃｈｉ  Ｒｏｔａｖａｐｏｒで濃縮した後、引続きＢｕｃｈｉ  Ｒｏｔａｖａｐｏｒを使用して、無水ＭｅＯＨとの共沸（２回）および無水ＤＣＭとの共沸（２回）に供した。真空下に３０分間置いた後、再び無水ＭｅＯＨとの共沸および無水ＤＣＭとの共沸（２回）に供し、真空下にさらに１．５時間置いた。残渣を無水ＤＣＭ（０．７５ｍＬ）に溶解し、これにアリルトリメチルシラン（０．３０ｍＬ）を加え、氷浴で冷却し、これにＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ（０．２３ｍＬ）を加えた。反応混合物をアルゴン下、氷浴において３０分間撹拌し、その後、冷却を除いて、反応混合物を室温でさらに２時間５０分撹拌した。反応混合物を濃縮し、残渣を調製用ＨＰＬＣによって精製した。カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＴｅｒｒａ  Ｐｒｅｐ  ＭＳ  Ｃ１８（１０μｍ）、１９ｘ２５０ｍｍ；移動相Ａ：２．０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０；移動相Ｂ：アセトニトリル；方法：１５％Ｂから８０％Ｂまで３０分かけて、流速＝２６ｍＬ／分。１４．４１分から１５．１７分までの分画物を集め、凍結乾燥して、ＥＣ０５５０を白色の固体として得た（１０ｍｇ）。本実験で得られたＮ−ホモアリルチューブリシンの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、その構造と一致していた；ＭＳはｍ／ｚ＝７８４を有した。
【００６７】
実施例。チューブリシンＢヒドラジドＥＣ０３４７の合成。
【化４７】
2011500835.tif 000053
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、６．１μＬ）およびクロロギ酸イソブチル（３．０μＬ）を、チューブリシンＢ（０．１５ｍｇ）の無水ＥｔＯＡｃ（２．０ｍＬ）溶液に、−１５℃において、シリンジを用いて続けて加えた。アルゴン下において−１５℃で４５分間撹拌した後、反応混合物を−２０℃に冷却し、これに無水ヒドラジン（５．０μＬ）を加えた。反応混合物をアルゴン下において−２０℃で３時間撹拌し、１．０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０、１．０ｍＬ）を用いて反応を停止させた後、精製のために調製用ＨＰＬＣに注入した。カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＴｅｒｒａ  Ｐｒｅｐ  ＭＳ  Ｃ１８（１０μｍ）、１９ｘ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１．０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０；移動相Ｂ：アセトニトリル；方法：１０％Ｂから８０％Ｂまで２０分かけて、流速＝２５ｍＬ／分。１５．１４分から１５．５４分までの分画物を集め、凍結乾燥して、ＥＣ０３４７を白色の固体として得た（２．７ｍｇ）。本実験で得られたチューブリシンＢヒドラジドの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、その構造と一致していた；ＭＳはｍ／ｚ＝８４４を有した。
【００６８】
実施例。ＥＣ０３１１の合成。
【化４８】
2011500835.tif 000054
ＨＯＢｔ−Ａ（６８５ｍｇ、９１％）を無水ＤＣＭ（５．０ｍＬ）に懸濁した懸濁物に、ＤＩＰＥＡ（０．６０ｍＬ）を０℃で加え、アルゴン下で２分間撹拌し、これに無水ヒドラジン（０．１０ｍＬ）を加えた。反応混合物をアルゴン下において０℃で１０分間撹拌し、その後、室温でさらに３０分間撹拌し、ろ過し、ろ液をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製することによって、ＥＣ０３１１を、放置したときに固化した透明な粘稠性オイルとして得た（３７１ｍｇ）。
【００６９】
実施例。ＥＣ０３１２の合成。
【化４９】
2011500835.tif 000055
ＤＩＰＥＡ（３６μＬ）およびクロロギ酸イソブチル（１３μＬ）を、チューブリシンＢ（８２ｍｇ）の無水ＥｔＯＡｃ（２．０ｍＬ）溶液に、−１５℃において、シリンジを用いて続けて加えた。アルゴン下において−１５℃で４５分間撹拌した後、反応混合物に、ＥＣ０３１１の無水ＥｔＯＡｃ（１．０ｍＬ）溶液を加えた。得られた溶液をアルゴン下において−１５℃で１５分間撹拌し、その後、室温でさらに４５分間撹拌し、濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２％〜８％のＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製することによって、ＥＣ０３１２を白色の固体として得た（９８ｍｇ）。本実験で得られたＥＣ０３１２の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、その構造と一致していた；ＭＳはｍ／ｚ＝１０５７を有した。
【００７０】
実施例。下記の化合物群を、本明細書中に記載される手順に従って調製した。
【化５０】
2011500835.tif 000056
本実験で得られたＥＣ０５７５の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、その構造と一致していた；ＭＳはｍ／ｚ＝８６２を有した。
【００７１】
【化５１】
2011500835.tif 000057
本実験で得られたＥＣ０５６０の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、その構造と一致していた；ＭＳはｍ／ｚ＝８２０を有した。
【００７２】
【化５２】
2011500835.tif 000058
本実験で得られたＥＣ０３５６の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、その構造と一致していた；ＭＳはｍ／ｚ＝８１７を有した。
【００７３】
【化５３】
2011500835.tif 000059
本実験で得られたＥＣ０６１１の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、その構造と一致していた；ＭＳはｍ／ｚ＝８０２を有した。
【００７４】
【化５４】
2011500835.tif 000060
本実験で得られたＥＣ０６２３の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、その構造と一致していた；ＭＳはｍ／ｚ＝８１８を有した。
【００７５】
前記実施例は、本明細書中に記載されるプロセスを単に例示するだけであること、また、多くの常法的改変が、さらなるチューブリシン化合物、ならびに、それらのアナログおよび誘導体を調製するために行われ得ることが理解される。例えば、さらなるエーテル形成アルコールを使用することができ、このようなエーテル形成アルコールには、アルコール（例えば、エタノール、プロパノールおよびｓｅｃ−ブタノールなど）、ポリオール（例えば、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコールおよびグリセロールなど、それらのアルキル誘導体およびアシル誘導体を含む）、および、アミノアルコール（例えば、アミノエタノール、アミノプロパノールおよびポリアミノアルキルエタノールなど、それらのアルキル誘導体およびアシル誘導体を含む）などが含まれるが、これらに限定されない。同様に、さらなるチオール、カルボン酸、アミノ酸およびアミンなどを、式（１）および式（３）の中間体イミニウム化合物を捕捉するための求核剤として使用することができる。
【００７６】
方法の実施例。細胞ＤＮＡ合成の阻害。
本明細書中に記載される化合物は、葉酸受容体陽性ＫＢ細胞の成長を阻害する薬物の能力を予測するインビトロ細胞毒性アッセイを使用して評価される。ＫＢ細胞は、３７℃で７時間までの期間、少なくとも１００倍過剰の葉酸の非存在下または存在下、葉酸−薬用共役化合物の一連の濃度にわたってさらされる。その後、細胞は新鮮な培養培地により１回洗浄され、新鮮な培養培地において３７℃で７２時間インキュベーションされる。細胞生存性が、３Ｈ−チミジン取り込みアッセイを使用して評価される。
【００７７】
方法の実施例。インビトロでの濃度依存的な細胞毒性活性。
細胞を２４ウエルのＦａｌｃｏｎプレートに高密度に播種し、ほぼコンフルエントな単層を一晩で形成させた。試験品を加える３０分前に、使用済み培地をすべてのウエルから吸引し、新鮮な葉酸非含有ＲＰＭＩ（ＦＦＲＰＭＩ）で置き換えた。ただし、指定されたウエルは、１００μＭの葉酸を含有する培地を与えられたこと；および、（ＦＲ結合についての競合を可能にする）過剰な葉酸の存在下で生じる、細胞毒性活性は、ＦＲ特異的な送達に関連しなかった総活性の一部を意味するので、後者のウエルにおける細胞は、標的化特異性を求めるために使用されたことに留意すること。１０％の熱不活化されたウシ胎児血清を含有する１ｍＬの新鮮なＦＦＲＰＭＩを用いて１回洗浄した後、それぞれのウエルには、１００μＭの遊離葉酸（結合部位競合剤）の存在下または非存在下で、増大する濃度の試験品を含有する１ｍＬの培地が与えられた（サンプルあたり４つのウエル）。処理された細胞を３７℃で２時間パルス処理し、０．５ｍＬの培地を用いて４回洗浄し、その後、７０時間までの期間、１ｍＬの新鮮な培地において追跡した。使用済み培地をすべてのウエルから吸引し、５μＣｉ／ｍＬの３Ｈ−チミジンを含有する新鮮な培地で置き換えた。さらに２時間の３７℃でのインキュベーションの後、細胞を０．５ｍＬのＰＢＳを用いて３回洗浄し、その後、ウエルあたり０．５ｍＬの氷冷された５％トリフルオロ酢酸で処理した。１５分後、トリフルオロ酢酸を吸引し、細胞物を、０．５ｍＬの０．２５Ｎ水酸化ナトリウムを１５分間加えることによって可溶化した。それぞれの可溶化サンプル４５０μＬを、３ｍＬのＥｃｏｌｕｍｅシンチレーションカクテルを含有するシンチレーションバイアルに移し、その後、液体シンチレーションカウンターで計数した。最終的な結果が、処理されていないコントロールに対する、３Ｈ−チミジン取り込みの百分率として表される。
【００７８】
下記の表に示されるように、用量依存的な細胞毒性を測定することができ、また、ほとんどの場合において、ＩＣ５０値（新たに合成されたＤＮＡへの３Ｈ−チミジン取り込みを、５０％減少させるために要求される薬用共役化合物の濃度）は、低いナノモル濃度の範囲にある。さらに、これらの共役化合物の細胞毒性が、過剰な遊離葉酸の存在下では低下しており、このことは、観測された殺細胞効果が、葉酸受容体への結合によって媒介されたことを示している。
【表２】
2011500835.tif 000061
【００７９】
方法の実施例。腫瘍モデルおよび治療。
４週齢〜７週齢のマウス（Ｂａｌｂ／ｃ系統またはｎｕ／ｎｕ系統）を、Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｃ．（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）から購入する。通常の齧歯類用の餌は高濃度の葉酸（６ｍｇ／ｋｇ餌）を含有するので、これらの研究において使用されるマウスは、正常なヒト血清の範囲に近い血清葉酸濃度を達成するために、腫瘍移植前の１週間は葉酸非含有の規定食（Ｈａｒｌａｎ規定食＃ＴＤ００４３４）で飼育される。腫瘍細胞接種のために、１００μＬにおける１ｘ１０６個のＭ１０９細胞または１ｘ１０６個のＫＢ細胞が、背内側領域の皮下に注入される。腫瘍が、キャリパーを使用して、２日〜３日毎に直交する２方向で測定される。腫瘍の体積が、０．５ｘＬｘＷ２として計算された（式中、Ｌ＝最長軸の測定値（ｍｍ）、および、Ｗ＝Ｌに直交する軸の測定値（ｍｍ））。その後、殺細胞数の常用対数値（ｌｏｇ  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌ、ＬＣＫ）およびコントロールに対する治療された値（ｔｒｅａｔｅｄ  ｏｖｅｒ  ｃｏｎｔｒｏｌ、Ｔ／Ｃ）が、発表された手法に従って計算される（例えば、Ｌｅｅら、「ＢＭＳ−２４７５５０：ａ  ｎｏｖｅｌ  ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ  ａｎａｌｏｇ  ｗｉｔｈ  ａ  ｍｏｄｅ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ  ｂｕｔ  ｐｏｓｓｅｓｓｉｎｇ  ｓｕｐｅｒｉｏｒ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｉｃａｃｙ（ＢＭＳ−２４７５５０：作用様式がパクリタキセルに類似し、しかし、優れた抗腫瘍効力を有する新規なエポチロンアナログ）」、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、７：１４２９〜１４３７（２００１）；Ｒｏｓｅ、「Ｔａｘｏｌ−ｂａｓｅｄ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｓｔｕｄｉｅｓ（タキソールに基づく混合治療および他のインビボ前臨床での抗腫瘍研究）」、Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ  Ｍｏｎｏｇｒ、４７〜５３（１９９３）を参照のこと）。投薬溶液が、ＰＢＳにおいて毎日新たに調製され、マウスの側方尾静脈から投与される。重要なことであるが、ｓ．ｃ．腫瘍が体積において５０ｍｍ３〜１００ｍｍ３の間になったときに、投薬が開始される。
【００８０】
血液を心臓穿刺によって採取し、血清を、Ａｎｉ−Ｌｙｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）における、標準的な血液学的細胞パネルに加えた、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン、総タンパク質、ＡＳＴ−ＳＧＯＴ、ＡＬＴ−ＳＧＰＴの独立した分析にふすことによって、持続的な薬物毒性が評価される。加えて、ホルマリン固定処理された心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓、腸、骨格筋および骨（脛骨／腓骨）の組織病理学的評価が、Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ＡＲＵＰ；Ｓａｌｔ  Ｌａｋｅ  Ｃｉｔｙ、Ｕｔａｈ）において、委員会認定の病理学者によって行われる。
【００８１】
関連出願の相互参照。
本出願は、米国仮特許出願第６０／９８２，５９５号（２００７年１０月２５日出願）および米国仮特許出願第６１／０３６，１７６号（２００８年３月１３日出願）（それらの開示は本明細書により参照によって本明細書中に組み込まれる）の米国特許法第１１９条（ｅ）項による利益を主張する。
【国際調査報告】
2011500835.tif 000066