(57)【要約】  本発明は、ニコチンを特異的に結合する組換えにより作成されたヒト・モノクローナル抗体及びそれをコードする核酸に関する。更に本発明は、ニコチン中毒の治療における当該抗体の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ニコチンを特異的に結合するモノクローナル抗体であって、前記モノクローナル抗体はヒト・モノクローナル抗体であり、
（ａ）前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、
（ｉ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、配列番号１のペプチドから成るＨＣ  ＣＤＲ１；
（ｉｉ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、配列番号２のペプチドから成るＨＣ  ＣＤＲ２；及び
（ｉｉｉ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、配列番号３及び４の何れか一つのペプチド、好ましくは配列番号３のペプチドから成るＨＣ  ＣＤＲ３を含み；且つ
（ｂ）前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、
（ｉ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、配列番号５、６及び７の何れか一つのペプチド、好ましくは配列番号５のペプチドから成るＬＣ  ＣＤＲ１；
（ｉｉ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、配列番号８のペプチドから成るＬＣ  ＣＤＲ２；
（ｉｉｉ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、配列番号９及び１０の何れか一つのペプチド、好ましくは配列番号９のペプチドから成るＬＣ  ＣＤＲ３を含む、モノクローム抗体。
【請求項２】
（ａ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号２４、２８、３３及び３９の何れか一つのペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号２４のペプチドから成り；
（ｂ）前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号２６、３１、３５、３７及び４１の何れか一つのペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号２６のペプチドから成る、請求項１に記載のモノクローム抗体。
【請求項３】
（ａ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７が配列番号２４のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号２６のペプチドから成るか；
（ｂ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７が配列番号２８のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号３１のペプチドから成るか；
（ｃ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７が配列番号３３のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号３５のペプチドから成るか；
（ｄ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７が配列番号２８のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号３７のペプチドから成るか；又は
（ｅ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７が配列番号３９のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号４１のペプチドから成り；
好ましくは前記ＨＣＶＲの位置７から１１７が配列番号２４のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号２６のペプチドから成る、請求項１又は２に記載のモノクローム抗体。
【請求項４】
前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのガンマ２重鎖及び少なくとも一つのラムダ軽鎖を含み、
（ａ）前記ガンマ２重鎖は配列番号７３のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、前記ラムダ軽鎖は配列番号７４のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成るか；
（ｂ）前記ガンマ２重鎖は、配列番号７５のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、前記ラムダ軽鎖は配列番号７６のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成るか；
（ｃ）前記ガンマ２重鎖は、配列番号７７のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、前記ラムダ軽鎖は配列番号７８のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成るか；
（ｄ）前記ガンマ２重鎖は、配列番号７５のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、前記ラムダ軽鎖は配列番号７９のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成るか；または
（ｅ）前記ガンマ２重鎖は、配列番号８０のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、前記ラムダ軽鎖は配列番号８１のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り；
好ましくは前記ガンマ２重鎖は、配列番号７３のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、前記ラムダ軽鎖は配列番号７４のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る、請求項１から３の何れか一項に記載のモノクローム抗体。
【請求項５】
前記モノクローナル抗体がＩｇＧ２である、請求項１から４の何れか一項に記載のモノクローム抗体。
【請求項６】
前記モノクローナル抗体は、(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを特異的に結合する、請求項１から５の何れか一項に記載のモノクローム抗体。
【請求項７】
前記モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを特異的に結合し、前記(S)-(-)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から１００ｎＭであり、前記(R)-(+)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から１００ｎＭであり、
好ましくは前記(S)-(-)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から７０ｎＭであり、前記(R)-(+)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から５０ｎＭであり、
更に好ましくは、前記(S)-(-)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から１０ｎＭであり、前記(R)-(+)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から１０ｎＭである、請求項１から６の何れか一項に記載のモノクローム抗体。
【請求項８】
モノクローナル抗体のＨＣＶＲであって、前記モノクローナル抗体はヒト・モノクローナル抗体であり、前記モノクローム抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを特異的に結合し、
好ましくは前記(S)-(-)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から１００ｎＭであり、前記(R)-(+)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から１００ｎＭであり、
更に好ましくは前記(S)-(-)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から７０ｎＭであり、前記(R)-(+)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から５０ｎＭ、更に好ましくは１から２０ｎＭ、再度更に好ましくは１から１０ｎＭであり；且つ
前記ＨＣＶＲは、
（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、配列番号１のペプチドから成るＨＣ  ＣＤＲ１；
（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、配列番号２のペプチドから成るＨＣ  ＣＤＲ２；
及び
（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、配列番号３及び４の何れか一つのペプチド、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号３のペプチドから成るＨＣ  ＣＤＲ３を含む、モノクローナル抗体のＨＣＶＲ。
【請求項９】
前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号２４、２８、３３及び３９の何れか一つのペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号２４のペプチドから成る、請求項８に記載のＨＣＶＲ。
【請求項１０】
モノクローナル抗体のＬＣＶＲであって、前記モノクローナル抗体はヒト・モノクローナル抗体であり、前記モノクローム抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを特異的に結合し、
好ましくは前記(S)-(-)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から１００ｎＭであり、前記(R)-(+)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から１００ｎＭであり、
更に好ましくは前記(S)-(-)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から７０ｎＭであり、前記(R)-(+)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から５０ｎＭ、更に好ましくは１から２０ｎＭ、再度更に好ましくは１から１０ｎＭであり；且つ
前記ＬＣＶＲは、
（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、配列番号５、６及び７の何れか一つのペプチド、好ましくは配列番号５のペプチドから成るＬＣ  ＣＤＲ１；
（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成るＬＣ  ＣＤＲ２；及び
（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、配列番号９及び１０の何れか一つのペプチド、好ましくは配列番号９のペプチドから成るＬＣ  ＣＤＲ３を含む、モノクローナル抗体のＬＣＶＲ。
【請求項１１】
前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号２６、３１、３５、３７及び４１の何れか一つのペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号２６のペプチドから成る、請求項１０に記載のＬＣＶＲ。
【請求項１２】
モノクローム抗体であって、前記モノクローナル抗体はヒト・モノクローナル抗体であり、前記モノクローム抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを特異的に結合し、
前記(S)-(-)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から１００ｎＭであり、前記(R)-(+)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から１００ｎＭであり、
更に好ましくは前記(S)-(-)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から７０ｎＭであり、前記(R)-(+)-ニコチンへの前記モノクローム抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から５０ｎＭ、更に好ましくは１から２０ｎＭ、再度更に好ましくは１から１０ｎＭである、モノクローム抗体。
【請求項１３】
（ａ）前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、
（ｉ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、配列番号１のペプチドから成るＨＣ  ＣＤＲ１；
（ｉｉ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、配列番号２のペプチドから成るＨＣ  ＣＤＲ２；及び
（ｉｉｉ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、配列番号３及び４の何れか一つのペプチド、好ましくは配列番号３のペプチドから成るＨＣ  ＣＤＲ３を含み；且つ
（ｂ）前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、
（ｉ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、配列番号５、６及び７の何れか一つのペプチド、好ましくは配列番号５のペプチドから成るＬＣ  ＣＤＲ１；
（ｉｉ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、配列番号８のペプチドから成るＬＣ  ＣＤＲ２；
（ｉｉｉ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、配列番号９及び１０の何れか一つのペプチド、好ましくは配列番号９の何れか一つのペプチドから成るＬＣ  ＣＤＲ３を含む、請求項１２に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１４】
（ａ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号２４、２８、３３及び３９の何れか一つのペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号２４のペプチドから成り；且つ、
（ｂ）前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号２６、３１、３５、３７及び４１の何れか一つのペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号２６のペプチドから成る、請求項１２または１３に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１５】
（ａ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号２４のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号２６のペプチドから成るか；
（ｂ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号２８のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号３１のペプチドから成るか；
（ｃ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号３３のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号３５のペプチドから成るか；
（ｄ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号２８のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号３７のペプチドから成るか；
または
（ｅ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号３９のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号４１のペプチドから成り；
好ましくは、前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号２４のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号２６のペプチドから成る、請求項１２から１４の何れか一項に記載のモノクローム抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は組換えにより産生されたヒト・モノクローナル抗体であって、ニコチンと特異的に結合し、血液からの脳内へのニコチンの通過を妨げることができる抗体に関する。更に、本発明は、好ましくはヒトの、受動免疫化のための当該抗体の使用、及びヒトのニコチン中毒の治療のための当該抗体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
Bjercke et al. 1986 (J Immunol Methods, Vol. 90(2) pp. 203-13)は、(S)-(-)-ニコチンに対する立体特異的モノクローナル抗体を開示する。Bjercke et al. 1986のモノクローナル抗ニコチン抗体は、ハイブリドーマ技術によって産生されているので、マウス細胞に由来するものであった。Bjercke et al. 1986は、ニコチンのためのＥＬＩＳＡベースのアッセイの開発における当該モノクローナル抗体の使用を更に記載する。
【０００３】
Isomura et al. 2001 (J. Org. Chem. Vol. 66 pp. 4115-4121) は、天然に存在する(S)-ニコチン、(S)-及び(R)-ノルニコチン、及び高い光学純度を有する代謝産物(S)-コチニンに特異的な抗体の作成についてのハプテンの調整を記載する。著者は、モノクローナル抗体を含む抗ニコチン抗体のための予備的データを報告している。Isomura et al. 2001 のモノクローナル抗体は、マウスから得られたものであり、１．６ｘ１０-７Ｍから３．４ｘ１０-７Ｍのニコチン結合性のＫｄ値を呈する。
【０００４】
Keyler et al. 2005 (Drug Metab Dispos, Vol. 33(7) pp. 1056-61)は、ニコチンに対するモノクローナル抗体によるラットの受動免疫化を記載する。著者は、とりわけ、受動免疫化に応じて脳へのニコチンの分配が減少することを見いだした。また、Keyler et al. 2005のモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術によって産生された。
【０００５】
Pentel et al. 2006 (J Pharmacol Exp Ther, Vol. 317(2) pp. 660-6)は、とりわけ、Kepler et al. 2005によって記載された抗体であるモノクローナル抗体Ｎｉｃ３１１によるラットの受動免疫化を研究し、これによって特に脳に対するニコチンの急性及び慢性の分配における、この抗体による受動免疫化の異なる影響を研究した。従来技術において、ニコチン特異的抗体によるヒトの受動免疫化がニコチン中毒の治療において役立つ可能性があり、禁煙の間の支えとなりうることが示唆された。しかしながら、Ｎｉｃ３１１に関して、Pentel et al. 2006は、更に治療用モノクローナル抗体は臨床で使用するために、それ自体の免疫原性を弱めるためにヒト化される必要があると結論づけている。
【０００６】
従来技術において周知のニコチンに対するモノクローナル抗体は、非ヒト源に由来するものであり、従って、ヒトにおける、それらの強い免疫原性のために、及びその結果として安全上の懸念のために、治療において役に立たない。
【発明の開示】
【０００７】
本発明は、ニコチンを特異的に結合するヒト・モノクローナル抗体を提供し、好ましくは前記モノクローナル抗体は、完全にヒト抗体である。通常は及び好ましくは、本願明細書において開示されるモノクローナル抗体は、ヒトにおいて免疫原性でなく、そのためヒトの受動免疫化に適している。さらに、驚くべきことに、本発明のモノクローナル抗体が(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンに特異的に結合性することが見いだされた。(S)-(-)-ニコチンと同様に、ニコチンの(R)-(+)-立体異性体も植物のタバコに存在する。更に、それは、喫煙の間、焼却プロセスによって形成されて、中枢神経系において、(S)-(-)-ニコチンと質的に類似した活性を有する(Hukkanen J. et al., 2005, Pharmacol. Rev. 57, 79-115)。
【０００８】
本発明のモノクローナル抗体は、PCT/EP2007/061570において開示される手順に従ってクローンをつくられた：（１）ヒト被検体のニコチン特異的なＢ細胞が選択され；（２）これらの細胞のＶＨ及びＶＬ領域は、アルファウイルス・ライブラリーにクローニングされ；（３）ｓｃＦｖ抗体の細胞表面提示は、哺乳動物細胞において実施され；（４）ニコチン特異的なｓｃＦｖ抗体を提示する細胞が選択され；（５）これらのｓｃＦｖ抗体のＶＨ及びＶＬ領域はクローンを作られ、及び（６）特異的にニコチンを結合するモノクローナル抗体は、異なる形態、例えばｓｃＦｖ−Ｆｃ融合として、又はヒトＩｇＧ２として、好ましくは完全なヒトＩｇＧ２として発現された。この手順を適用すると、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合またはＩｇＧ２として発現される場合に、ナノモル範囲または低いナノモル範囲のＫｄ値によってニコチンを結合した７つの独立な抗体クローンが得られた。
【０００９】
したがって、一態様において、本発明は、特異的にニコチンを結合しているモノクローナル抗体に関するものであって、前記モノクローナル抗体はヒト・モノクローナル抗体であり、好ましくは前記ヒト・モノクローナル抗体は完全なヒト・モノクローナル抗体である。
【００１０】
これらのクローンは配列決定され、ニコチンについての特異性を与えているヒトＣＤＲは同定された。驚くべきことに、これらの抗体のいくつかは、同じＣＤＲを異なる組合せで共有することがわかった（参照、表１）。
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【００１１】
更なる態様において、本発明は、ニコチンに特異的に結合するモノクローナル抗体であって、好ましくは前記モノクローナル抗体はヒト・モノクローナル抗体であり、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つの重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含んでなり、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１、１１及び１７の何れか一つのペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は前記ＨＣＶＲのフレームワーク内でＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２、１２及び１８の何れか一つのペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は前記ＨＣＶＲのフレームワーク内でＣＤＲ２位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ２；および／または（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号３、４、１３及び１９の何れか一つのペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は前記ＨＣＶＲのフレームワーク内でＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含んで成るモノクローナル抗体に関する。
【００１２】
更なる態様において、本発明は、ニコチンに特異的に結合しているモノクローナル抗体であって、好ましくは前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であり、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つの軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号５、６、７、１４及び２０の何れか一つのペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り；好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８、１５及び２１の何れか一つのペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は前記ＬＣＶＲのフレームワーク内でＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；および／または（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号９、１０、１６及び２２の何れか一つのペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内でＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含んで成るモノクローナル抗体に関する。更なる態様において、本発明は、ニコチンに特異的に結合しているモノクローナル抗体であって、好ましくは前記モノクローナル抗体はヒト・モノクローナル抗体であり、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＨＣＶＲを含んでなり、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１、１１及び１７の何れか一つのペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は前記ＨＣＶＲのフレームワーク内でＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２、１２及び１８の何れか一つのペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は前記ＨＣＶＲのフレームワーク内でＣＤＲ２位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ２；および／または（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号３、４、１３及び１９の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は前記ＨＣＶＲのフレームワーク内でＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含んで成るモノクローム抗体であって、および／または、好ましくは前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含んで成り、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号５、６、７、１４及び２０の何れか一つのペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り；好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８、１５及び２１の何れか一つのペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は前記ＬＣＶＲのフレームワーク内でＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；および／または（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列���号９、１０、１６及び２２の何れか一つのペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は前記ＬＣＶＲのフレームワーク内でＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含んで成るモノクローナル抗体に関する。
【００１３】
通常は及び好ましくは、前記モノクローナル抗体は、組換えにより産生される。本発明のモノクローナル抗体は、任意の天然に存在するか又は合成の形態で発現されることができる。好ましい実施形態において、前記モノクローナル抗体は、ＩｇＧ、好ましくはＩｇＧ２である。
【００１４】
更なる態様において、本発明はモノクローナル抗体のＨＣＶＲであって、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、前記モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンに特異的に結合するものであり、前記ＨＣＶＲは（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成る１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成る１つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号３及び４の何れか一つのペプチドから成る１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含むＨＣＶＲに関する。
【００１５】
更なる態様において、本発明はモノクローナル抗体のＬＣＶＲであって、前記モノクローナル抗体は、ヒトモノクローナル抗体であって、前記モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンに特異的に結合し、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号５、６及び７の何れか一つのペプチドから成る１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドからなる１つのＬＣ  ＣＤＲ２；（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号９及び１０の何れか一つのペプチドから成る１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含むＬＣＶＲに関する。
【００１６】
更なる態様において、本発明は、モノクローナル抗体であって、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であり、モノクローナル抗体が(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを特異的に結合するものであって、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から１００ｎＭであり；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から１００ｎＭであるモノクローム抗体に関する。好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から７０ｎＭであり、好ましくは１から４０ｎＭであり、より好ましくは１から１０ｎＭであり、更に好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から７０ｎＭ、好ましくは１から５０ｎＭ、更に好ましくは１から４０ｎＭ、より更に好ましくは１から２０ｎＭであり、より更に好ましくは１から１０ｎＭであり、更に好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定される。非常に好適な実施態様において、前記モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から７０ｎＭ、好ましくは１から４０ｎＭ、更に好ましくは１から１０ｎＭであり、更に好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され、前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から２０ｎＭ、更に好ましくは１から１０ｎＭであり、更に好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定される。再度、好適な実施態様において、前記モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンに結合しており、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から１０ｎＭであり、更に好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から１０ｎＭであり、更に好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定される。好ましくは、前記モノクローナル抗体はヒト・モノクローナル抗体であり、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＨＣＶＲを含んで成り、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、配列番号１、１１及び１７の何れか一つのペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り、非常に好ましくは配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内のＣＤＲ１位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、配列番号２、１２及び１８の何れか一つのペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り、非常に好ましくは配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内のＣＤＲ２位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ２；および／または（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号３、４、１３及び１９の何れか一つのペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り、非常に好ましくは配列番号３のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内のＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含んでなり；および／または、好ましくは、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＬＣＶＲを含んでおり、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号５、６、７、１４及び２０の何れか一つのペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り；非常に好ましくは、配列番号５のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内のＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、配列番号８、１５及び２１の何れか一つのペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り；非常に好ましくは配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内のＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；および／または（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号９、１０、１６及び２２の何れか一つのペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り、非常に好ましくは配列番号９のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内のＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【００１７】
非常に好適な更なる実施態様において、本発明はモノクローナル抗体であって、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、前記モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から１０ｎＭであり、前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１から１０ｎＭであり、好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＨＣＶＲを含んでなり、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１には配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は前記ＨＣＶＲのフレームワーク内でＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２には配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は前記ＨＣＶＲのフレームワーク内でＣＤＲ２位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３には配列番号３のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は前記ＨＣＶＲのフレームワーク内でＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＬＣＶＲを含んでなり、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号５のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は前記ＬＣＶＲのフレームワーク内のＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は前記ＬＣＶＲのフレームワーク内のＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号９のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は前記ＬＣＶＲのフレームワーク内のＣＤＲ３位置に位置しており、好ましくは、前記ＨＣＶＲの位置７から１１７が配列番号２４のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は、配列番号２６のペプチドから成る１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む、モノクローム抗体に関する。
【００１８】
更なる態様において、本発明は、本発明の可変領域、本発明のモノクローナル抗体またはその個々の鎖をコードする核酸分子に関連する。
【００１９】
更なる態様において、本発明は、本発明の少なくとも一つの核酸分子を含んで成る発現ベクターに関する。
【００２０】
更なる態様において、本発明は、本発明の少なくとも一つの核酸分子または本発明の少なくとも一つの発現ベクターを含む宿主細胞に関する。
【００２１】
本発明のモノクローナル抗体は、好ましくはヒトの受動免疫化及びニコチン中毒の治療に役立つ。したがって、更なる態様で、本発明は、本発明の少なくとも一つのモノクローナル抗体を含む医薬組成物に関する。
【００２２】
更なる態様において、本発明は受動免疫化の方法であって、本発明のモノクローナル抗体の有効量または本発明の医薬品組成物の有効量を患者に投与することを含む方法に関する。
【００２３】
更なる態様において、本発明は、ニコチン中毒を治療する方法であって、本発明のモノクローナル抗体の有効量または本発明の医薬品組成物の有効量を患者に投与することを含む方法に関する。
【００２４】
更なる態様において、本発明は、好ましくはヒトの、受動免疫化における、本発明のモノクローム抗体又は本発明の医薬組成物の使用に関する。
【００２５】
更なる態様において、本発明は、好ましくはヒトの、ニコチン中毒の治療における、本発明のモノクローナル抗体又は本発明の医薬品組成物に関する。
【００２６】
更なる態様において、本発明は、好ましくはニコチンに対する受動免疫化のための医薬の製造における、本発明のモノクローナル抗体の使用に関する。
【００２７】
更なる態様において、本発明は、好ましくはヒトの、ニコチン中毒の治療のための医薬の製造における、本発明のモノクローナル抗体の使用に関する。
【００２８】
本発明の更なる態様は、ニコチンの定量的および／または定性的な検出の方法における、好ましくは血液試料及び最も好ましくはＥＬＩＳＡにおける、本発明の抗体による使用である。
【００２９】
本願明細書において開示される全ての実施態様及び技術的特徴は、本発明の全態様及び任意の可能な組合せに関する。
【００３０】
（発明の詳細な説明）
「抗体」：本願明細書で使用する場合、「抗体」なる用語は分子、好ましくは、抗原に特異的に結合可能であるタンパク質であって、通常は及び好ましくは前記抗原の抗原決定基またはエピトープ、若しくはハプテンを結合することによる。好ましくは、抗体なる用語は、少なくとも一つの可変領域含んで成る抗原またはハプテン結合分子に関連し、好ましくは前記分子は少なくとも１つのＨＣＶＲおよび／または少なくとも一つのＬＣＶＲを含む。更に好ましくは、抗体なる用語は、少なくとも１つ、好ましくは正確に２つの抗原結合部位を含んで成る、抗原またはハプテンを結合分子に関連し、前記抗原結合部位の各々は、１つのＨＣＶＲ及び１つのＬＣＶＲによって形成される。さらにまた、抗体なる用語は、完全な抗体、好ましくはＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤクラスのもの、より好ましくは、ＩｇＧクラスのもの、最も好ましくはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４のもの、及びその抗原結合断片にを指す。好ましい実施態様において、前記完全な抗体は、κ又はλ軽鎖を含む。また、「抗体」なる用語は、抗原又はハプテン結合抗体断片、好ましくはタンパク分解性断片及びそれらのリコンビナント・アナログであって、最も好ましくはＦａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２、及びＦｖを指す。更に、「抗体」なる用語は、少なくとも１つ、好ましくは２つの可変領域を含むタンパク質を含んでなり、更に好ましくは、前記タンパク質は、正確に１つのＨＣＶＲと正確に１つのＬＣＶＲを含む。好ましい実施態様において、「抗体」なる用語は、一本鎖抗体、好ましくはｓｃＦｖに関連する。したがって、好適な抗体は、一本鎖抗体、好ましくはｓｄＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖｓ及び、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）又は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む断片である。本発明において、「抗体」なる用語は、好ましくは、単一のポリペプチドからなる組換えタンパク質を含む組換え抗体を指し、前記ポリペプチドは、少なくとも１つ、好ましくは正確に１つの可変領域を含む。本発明において、組換え抗体は、機能的構成、例えば、たとえばリンカー領域、シグナルペプチドまたは疎水性リーダー配列、検出タグおよび／または精製タグ（例えばＦｃ）を更に含むことが出来る。
【００３１】
「Ｆｖ」：「Ｆｖ」なる用語は、抗原またはハプテンを結合することができる抗体で最も小さいタンパク分解性断片及び前記断片のリコンビナント・アナログを指す。
【００３２】
「一本鎖抗体」：一本鎖抗体は、単一のポリペプチドからなる抗体である。好適な一本鎖抗体は、少なくとも１つ、好ましくは正確に１つのＶＲを含むポリペプチドから成り、好ましくは前記ＶＲは、ＨＣＶＲである。より好適な単鎖抗体は、少なくとも１つ、好ましくは正確に１つのＨＣＶＲ及び少なくとも１つ、好ましくは正確に１つのＬＣＶＲを含むポリペプチドから成る。更により好適な単鎖抗体は、正確に１つのＨＣＶＲと正確に１つのＬＣＶＲを含む。大部分の好適な単鎖抗体は、ｓｃＦｖであり、前記ｓｃＦｖは、正確に１つのＨＣＶＲ及び正確に１つのＬＣＶＲを含んで成る単一のポリペプチドから成り、前記ＨＣＶＲと前記ＬＣＶＲはリンカー領域によって互いに連結され、好ましくは前記リンカー領域は、少なくとも１５、好ましくは１５から２０アミノ酸から成る(Bird et al. (1988) Science, 242(4877): 423-426)。更なる好適な一本鎖抗体はｓｃＦｖであり、前記ｓｃＦｖはコード領域によってコードされ、前記コード領域は、５’から３’方向で、（１）κまたはλ軽鎖から  軽鎖フレームワーク（ＬＣ  ＦＲ）１、相補性決定領域（ＬＣ  ＣＤＲ）１、ＬＣ  ＦＲ２、ＬＣ  ＣＤＲ  ２、ＬＣ  ＦＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ３及びＬＣ  ＦＲ４からなる軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；（２）フレキシブルリンカー（Ｌ）、及び（３）フレームワーク（ＨＣ  ＦＲ）１、相補的決定領域（ＨＣ  ＣＤＲ）１、ＨＣ  ＦＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＦＲ３、ＨＣ  ＣＤＲ３及びＨＣ  ＦＲ４からなる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の順番で含む。あるいは、一本鎖抗体は、ｓｃＦｖであり、前記ｓｃＦｖは、コード領域によってコードされ、前記コード領域は、５’から３’方向で、（１）フレームワーク（ＨＣ  ＦＲ）１、相補的決定領域（ＨＣ  ＣＤＲ）１、ＨＣ  ＦＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＦＲ３、ＨＣ  ＣＤＲ３及びＨＣ  ＦＲ４からなる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；（２）フレキシブルリンカー（Ｌ）、及び（３）κまたはλ軽鎖から  軽鎖フレームワーク（ＬＣ  ＦＲ）１、相補性決定領域（ＬＣ  ＣＤＲ）１、ＬＣ  ＦＲ２、ＬＣ  ＣＤＲ２、ＬＣ  ＦＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ３及びＬＣ  ＦＲ４からなる軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の順番で含む。
【００３３】
「ダイアボディ」：「ダイアボディ」なる用語は、２つのポリペプチド鎖、好ましくは２つの同一のポリペプチド鎖を含む抗体を指し、各ポリペプチド鎖はＨＣＶＲとＬＣＶＲとを含み、前記ＨＣＶＲと前記ＬＣＶＲはリンカー領域によって互いに連結され、好ましくは前記リンカー領域は、多くても１０のアミノ酸を含む(Huston et al. (1988), PNAS 85(16): 587958-83; Holliger et al. (1993), PNAS 90(14): 6444-6448, Hollinger & Hudson, 2005, Nature Biotechnology 23(9): 1126-1136; Arndt et al. (2004) FEBS Letters 578(3): 257-261)。ダイアボディの好適なリンカー領域は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０アミノ酸を含む。
【００３４】
「ヒト抗体」：本願明細書で使用する場合は、「ヒト抗体」なる用語は、好ましくは、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列又はその断片を本質的に有するリコンビナント抗体を指し、ヒト免疫グロブリン・ライブラリから分離される抗体を含む。本発明において、「ヒト抗体」は、天然ヒト抗体の配列と比較して制限された数のアミノ酸置換を含んでもよい。このようなアミノ酸置換は、たとえば、クローニング手順によって生じることがありえる。しかしながら、本発明のヒト抗体のこのようなアミノ酸置換の数は、好ましくは最小化される。好ましくは、ヒト抗体のアミノ酸配列は、天然ヒト抗体のそれに対し、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、また更に好ましくは９７％、更により好ましくは９８％、更により好ましくは９９％及び最も好ましくは１００％同一性である。より好ましくは、ヒト抗体のアミノ酸配列は、興味の抗原又はハプテンに特異的に結合する天然ヒト抗体のそれに対し、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％、更により好ましくは少なくとも９６％、更により好ましくは９７％、更により好ましくは９８％、更により好ましくは９９％及び最も好ましくは１００％の同一性である。より好ましくは、ヒト抗体のアミノ酸配列は、ニコチン、好ましくは(s)-(-)-ニコチン及び／又は(R)-(+)-ニコチンに対し特異的に結合する天然ヒト抗体のそれに対し、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％、更により好ましくは少なくとも９６％、更により好ましくは９７％、更により好ましくは９８％、更により好ましくは９９％及び最も好ましくは１００％の同一性である。
【００３５】
好適な組換えヒト抗体は、天然ヒト抗体と、多くても２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１つのアミノ酸において異なる。非常に好ましくは、リコンビナント・ヒト抗体及び天然ヒト抗体のアミノ酸配列の相違は、分子クローニングの手段によって除去され、したがって、最も好ましくは、組換えヒト抗体及び天然ヒト抗体のアミノ酸配列とは同一である。また、当該抗体は「完全なヒト抗体」と呼ばれる。どのように完全なヒト抗体をヒト抗体ライブラリーから選択されるヒト抗体から得ることができるかに関する具体的な例は、実施例６に提供する。通常は及び好ましくは、完全なヒト抗体は、ヒトで免疫原性でない。
【００３６】
好適なヒト抗体は、（ａ）少なくとも１つ、好ましくは１つのＨＣＶＲ、（ｂ）少なくとも１つ、好ましくは１つのＨＣＣＲ、（ｃ）少なくとも１つ、好ましくは１つのＬＣＶＲ、及び（ｄ）少なくとも１つ、好ましくは１つのＬＣＣＲを含み、前記少なくとも１つのＨＣＶＲ、及び／又は少なくとも１つのＨＣＣＲ、及び／又は前記少なくとも１つのＬＣＶＲ、及び／又は前記少なくとも１つのＬＣＣＲは、天然ヒト領域に対して、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％、更により好ましくは少なくとも９６％、再度より好ましくは９７％、再度更により好ましくは９８％、再度更により好ましくは９９％、最も好ましくは１００％の同一性である。
【００３７】
ヒト免疫グロブリンを含むイムノグロブリンの定常領域にさまざまなアロタイプが存在すること、すなわち前記定常領域のアミノ酸配列は、１集団の個体間である程度異なることが解っている。ヒト免疫グロブリンの定常領域のアロタイプは非常によく研究されており、配列情報は、Immuno Genetics Information System (http://imgt.cines.fr/)を含むさまざまな源から当業者が容易に入手できる。１つのイムノグロブリンの定常領域の異なるアロタイプが本発明の目的において、交換可能であることは理解される。たとえば、本発明のモノクローナル抗体のガンマ２重鎖は、ヒトγ２ＨＣＣＲの任意の既存のアロタイプを含むことができる。
【００３８】
「モノクローナル抗体」：本願明細書で使用する場合、「モノクローナル抗体」なる用語は、たった一つの抗体種、すなわち同一のアミノ酸配列を有する抗体だけを含む抗体集団に関連する。
【００３９】
「定常領域（ＣＲ）」：「定常領域」なる用語は、抗体の軽鎖定常領域（ＬＣＣＲ）または重鎖定常領域（ＨＣＣＲ）を指す。通常は又は好ましくは、前記ＣＲは、ジスルフィド安定化ループ構造によって特徴づけられる１から４の免疫グロブリン・ドメインを含む。好適なＣＲは、イムノグロブリン、好ましくはヒト免疫グロブリンのＣＲであり、更に好ましくは前記イムノグロブリン、好ましくは前記ヒト免疫グロブリンは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ及びＩｇＤからなる群から選択される。非常に好適なＣＲは、例えば免疫遺伝学情報システム(http://imgt.cines.fr/)を含む公的なデータベースから入手できるアミノ酸配列を含むか又はそれから成るヒトＣＲである。
【００４０】
軽鎖定常領域（ＬＣＣＲ）：ＬＣＣＲ、より詳しくはカッパＬＣＣＲまたはラムダＬＣＣＲは、通常は天然抗体の天然カッパ又はラムダ軽鎖のＣ末端半分を表す。ＬＣＣＲは、通常、１つの免疫グロブリンドメインを表す約１１０のアミノ酸を含む。
【００４１】
重鎖定常領域（ＨＣＣＲ）：重鎖の定常領域は、抗体の重鎖の約４分の３以上を含んでおり、そのＣ末端にある。通常は、ＨＣＣＲは、３又は４つの免疫グロブリンドメインを含む。好適なＨＣＣＲは、ガンマＨＣＣＲ、アルファＨＣＣＲ、イプシロンＨＣＣＲ、ｍｙＨＣＣＲ及びデルタＨＣＣＲから選択される。非常に好ましいのは、ガンマＨＣＣＲであり、好ましくは前記ガンマＨＣＣＲは、ガンマ１  ＨＣＣＲ、ガンマ２  ＨＣＣＲ、ガンマ３  ＨＣＣＲ及びガンマ４  ＨＣＣＲから選択され、最も好ましくは、前記ガンマＨＣＣＲはガンマ２ＨＣＣＲである。
【００４２】
「可変領域（ＶＲ）」：抗体の可変領域または可変ドメインを、より特異的には重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）又は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を指す。通常は又は好ましくは、ＶＲは、単一の免疫グロブリンドメインを含む。好適なＶＲは、好ましくはヒト免疫グロブリンのイムノグロブリンのＶＲであり、更に好ましくは前記イムノグロブリン、好ましくは前記ヒト免疫グロブリンは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ及びＩｇＤからなる群から選択される。さまざまな種のＶＲは、従来技術で周知である。好適なＶＲは、ヒトＶＲであり、前記ヒトＶＲのフレームワークは、任意のヒトＶＲ配列のフレームワークと、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは９０％、再度より好ましくは９５％、最も好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。好適なＶＲは、ヒトＶＲであり、前記ヒトＶＲのフレームワークは、好適なデータベースから入手可能な任意のヒトＶＲ配列、最も好ましくは免疫遺伝学情報システム(http://imgt.cines.fr/)から入手可能な任意のヒトＶＲ配列のフレームワークと、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは９０％、再度より好ましくは９５％、最も好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。
【００４３】
各ＶＲは、抗体の結合特性を決定し、いわゆるフレームワークに埋め込まれているいわゆる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。通常は又は好ましくは、ＶＲは、フレームワーク（ＦＲ１−４）に埋め込まれた３つのＣＤＲ、好ましくはＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。したがって、好ましい実施態様において、ＶＲは、Ｎ末端からＣ末端まで以下の順序で以下の要素を含む：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４。
【００４４】
通常、ＶＲは、ポリペプチドを含むか又は好ましくはそれから成り、前記ポリペプチドは、たとえばＤ及びＪ遺伝子セグメント（ＨＣＶＲ）またはＪ遺伝子セグメント（ＬＣＶＲ）のような更なる遺伝子セグメントと組み合わせたＶ遺伝子セグメントのファミリーのメンバーの生産物である。
【００４５】
「軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）」：軽鎖可変領域は、再編成された核酸分子によってコード化されており、カッパＬＣＶＲ又はラムダＬＣＶＲである。ヒト・カッパＬＣＶＲはポリペプチドを含み、前記ポリペプチドは、ヒト・カッパＶ遺伝子セグメントのファミリー１から７のメンバーの生産物である。本発明において、好適なカッパＬＣＶＲはヒト・カッパＬＣＶＲであり、好ましくはPCT/EP2007/061570の配列番号５３から５６として開示されたオリゴヌクレオチドの何れか１つと、PCT/EP2007/061570の配列番号４９から５２として開示されたオリゴヌクレオチドの何れか１つとのプライマーの組合せを使用して、更に好ましくはPCT/EP2007/061570の実施例３に記載されているＰＣＲ条件によって、ヒトＢ細胞から増幅出来るＤＮＡによってコードされるヒト・カッパＬＣＶＲである。
【００４６】
ヒト・ラムダＬＣＶＲはポリペプチドを含み、前記ポリペプチドは、ヒト・ラムダＶ遺伝子セグメントのファミリ１から１１のメンバーの産生物である。本発明において、好適なラムダＬＣＶＲは、ヒト・ラムダＬＣＶＲであり、好ましくはPCT/EP2007/061570の配列番号５７から６５の何れか１つと、PCT/EP2007/061570の配列番号６６から６８の何れか１つとのプライマーの組合せを使用して、更に好ましくはPCT/EP2007/061570の実施例３に記載されているＰＣＲ条件によって、ヒトＢ細胞から増幅出来るＤＮＡによってコードされるヒト・ラムダＬＣＶＲである。
【００４７】
通常は又は好ましくは、ＬＣＶＲは３つのＬＣ  ＣＤＲ、好ましくはＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３を含み、軽鎖フレームワーク（ＬＣ  ＦＲ１−４）に埋め込まれている。したがって、好ましい実施態様において、ＬＣＶＲは、Ｎ末端からＣ末端まで以下の順序で以下の要素を含む：
ＬＣ  ＦＲ１−ＬＣ  ＣＤＲ１−ＬＣ  ＦＲ２−ＬＣ  ＣＤＲ２−ＬＣ  ＦＲ３−ＬＣ  ＣＤＲ３−ＬＣ  ＦＲ４。
【００４８】
「重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）」：重鎖可変領域は、再配置された核酸分子によってコードされる。ヒトＨＣＶＲは、ポリペプチドを含み、前記ポリペプチドは、ヒト・ラムダＶ遺伝子セグメントのファミリ１から７のメンバーの生産物である。本発明において、好適なＨＣＶＲは、ヒトＨＣＶＲであり、好ましくはPCT/EP2007/061570の配列番号４２から４７の何れか１つと、PCT/EP2007/061570の配列番号４８の何れか１つとのプライマーの組合せを使用して、更に好ましくはPCT/EP2007/061570の実施例３に記載されているＰＣＲ条件によって、ヒトＢ細胞から増幅出来るＤＮＡによってコードされるヒトＨＣＶＲである。
【００４９】
通常は又は好ましくは、ＨＣＶＲは３つのＨＣ  ＣＤＲ、好ましくはＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２とＨＣ  ＣＤＲ３を含み、重鎖フレームワーク（ＨＣ  ＦＲ１−４）に埋め込まれている。したがって、好ましい実施態様において、ＨＣＶＲは、Ｎ末端からＣ末端まで以下の順序で以下の要素を含む：
ＨＣ  ＦＲ１−ＨＣ  ＣＤＲ１−ＨＣ  ＦＲ２−ＨＣ  ＣＤＲ２−ＨＣ  ＦＲ３−ＨＣ  ＣＤＲ３−ＨＣ  ＦＲ４。
【００５０】
「ＣＤＲ」：抗体のＨＣＶＲ及びＬＣＶＲの、それぞれの相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３は、従来技術において通常知られている方法によって同定されることができる。本出願の目的において、ＣＤＲ及びＦＲ境界は、Scavinger et al. 1999 (Exp Clin Immunogenet., Vol. 16 pp. 234-240)によって、又はLefranc et al. 2003 (Developmental and Comparative Immunology Vol. 27 pp. 55-77)によって定められる。
【００５１】
「抗原」：本明細書において、「抗原」なる用語は、抗体によって結合される分子を指す。抗原は、免疫系によっておよび／または体液性の免疫応答によって認識され、一以上のエピトープ、好ましくはＢ細胞エピトープまたは抗原決定基を有することができる。
【００５２】
「ハプテン」：「ハプテン」なる用語は、通常、化学化合物を指し、前記化合物は、単独で動物の免疫応答を誘発することはできないが、前記化合物が担体に、好ましくは担体タンパク質に結合している場合、前記化合物は動物の免疫応答を誘発することができる。
本発明において、「ハプテン」はニコチンを指す。
【００５３】
「ニコチン」：「ニコチン」なる用語は、本願明細書で使用する場合、好ましくは(S)-(-)-ニコチン又は(R)-(+)ニコチン、又はその任意の混合物を指す。最も好ましくは、ニコチンは(S)-(-)-ニコチンを指す。
【００５４】
「特異的結合性」：抗体の特異性は、抗原またはハプテンを特異的に結合する抗体の能力に関する。抗体と抗原／ハプテン（親和性）との間のこの相互作用の特異性は、結合定数によって、または反対に解離定数（Ｋｄ）によって特徴づけられる。多価相互作用の抗原／ハプテンに対する抗体の見かけの親和性は、抗体の構造及び抗原／ハプテンの構造によって、及び実際のアッセイ条件によって決まることは理解される。多面相互作用の抗原／ハプテンに対する抗体の見かけの親和性は、結合活性のための一価の相互作用におけるものよりも、かなり高くてもよい。したがって、親和性は、好ましくは一価の相互作用を支持する条件下で決定される。Ｋｄは、従来技術において知られている方法によって決定することができる。抗体及び抗原／ハプテンとの所与の組合せのＫｄは、好ましくはＥＬＩＳＡによって測定され、固定された抗原／ハプテンの一定量は、精製された抗体、好ましくは一価抗体、たとえばｓｃＦｖまたはＦａｂ断片の既知濃度の希釈系列と接触させられる。次に、Ｋｄは、半分最大限の結合性が観察される抗体の濃度として決定される。
好ましい実施態様において、Ｋｄは、好ましくは実施例７に記載の条件下で、平衡透析によって決定される。あるいは、抗体と抗原／ハプテンの一価の相互作用のＫｄは、Ｂｉａｃｏｒｅ解析によって、オン速度（ｋｏｎ）とオフ速度（ｋｏｆｆ）の比率として測定される。Ｋｄの低い値は、より高い値に比べ、抗原／ハプテンに対する抗体に特異的な抗体の結合性を示す。本出願において、好ましくは上記の通り測定された解離定数（Ｋｄ）、より好ましくは一価の相互作用において測定された解離定数（Ｋｄ）が多くても１ｍＭ（＜＝１０-３Ｍ）、好ましくは多くても１μＭ（＜＝１０-６Ｍ）、最も好ましくは多くても１ｎＭ（＜＝１０-９Ｍ）である場合、抗体は「抗原／ハプテン」を特異的に結合すると考えられる。非常に好ましくは、抗体は、１００ｎＭ未満（「低いナノモル範囲」）のＫｄで、抗原／ハプテンを結合できるものであり、更に好ましくは、Ｋｄは、一価の相互作用において決定される。更なる好適な抗体は、１から１０００ｎＭ、より好ましくは５から８００ｎＭ、更により好ましくは５から９０ｎＭ、最も好ましくは５から５０ｎＭのＫｄで抗原／ハプテンを結合できるものであり、更に好ましくは、Ｋｄは、一価の相互作用において決定される。
【００５５】
「同等」：本出願において、上記値は多くとも１０、好ましくは多くとも９、より好ましくは８、更により好ましくは７、更により好ましくは６、更により好ましくは５、更により好ましくは４、更により好ましくは３、更により好ましくは２、更により好ましくは１．５のファクターによって異なる場合、モノクローナル抗体と物質の２つの解離定数（Ｋｄ）の値は「同等」であると見なされる。非常に好ましい実施態様において、それらが５未満のファクターによって異なる場合、２つのＫｄ値は等しいと見なされる。
【００５６】
「有効量」：本発明のモノクローナル抗体又は本発明の医薬組成物は、通常、必要な時間及び投与で、所望の治療的結果を達成するために必要な量を指し、好ましくは前記結果は、好ましくはヒトにおいて、および／または、最後に、禁煙において、脳へのニコチン侵入を防止するか、減少するか又は遅くすることであり、及び／又は最終的には禁煙である。ヒトの治療に関して、「有効量」は、通常は、前記モノクローナル抗体の１ｍｇから１０００ｍｇ、好ましくは１０ｍｇから５００ｍｇ、より好ましくは１０ｍｇから３００ｍｇ、更により好ましくは５０ｍｇから２００ｍｇ及び最も好ましくは約１００ｍｇの量を指す。
【００５７】
「タグ」：「タグ」なる用語、好ましくは精製または検出タグは、第２のポリペプチドの精製又は検出のために提供される第２のポリペプチドに取り付けられてもよいポリペプチド・セグメントを指し、基質に対する第２のポリペプチドの付加にための部位を提供する。原則として、抗体または他の特異的結合剤が入手可能な任意のペプチドまたはタンパク質が親和性タグとして用いられることができる。タグは、ヘムアグルチニン・タグ、ｍｙｃタグ、ポリヒスチジン・タグ、プロテインＡ、グルタチオンＳトランスフェラーゼ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ親和性タグ、サブスタンスＰ、ＦＬＡＧペプチド、ストレプトアビジン結合ペプチドまたは他の抗原エピトープまたは結合性ドメイン（US06686168から大部分は得られる）を含む。
【００５８】
興味がある抗原またはハプテンを特異的に結合しているｓｃＦｖの同定、単離及びクローニングのためのライブラリ・ベースのスクリーニング法は、ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０６１５７０において開示される。特に、前記方法は、ヒトｓｃＦｖの同定、単離及びクローニング、及びＦａｂ断片及び完全なＩｇＧを含む完全なヒト抗体の次世代を可能にする。上記技術を適用して、特異的にニコチンを結合しているヒト・モノクローナル抗体は、同定され、クローンをつくられた。
【００５９】
一態様において、本発明は、ニコチンを特異的に結合するモノクローナル抗体を提供し、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であり、好ましくは前記ニコチンは、(S)-(-)-ニコチン及び  (R)-(+)-ニコチンから、最も好ましくは前記ニコチンは(S)-(-)-ニコチンから選択され、更に好ましくは前記ヒト・モノクローナル抗体は、完全にヒトモノクローナル抗体である。
【００６０】
好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを特異的に結合する。
【００６１】
一実施態様において、前記モノクローナル抗体は、１から１０００ｎＭ、より好ましくは１から８００ｎＭ、更により好ましくは１から１００ｎＭ、最も好ましくは５から９０ｎＭの解離定数Ｋｄによって、ニコチン、好ましくは(S)-(-)-ニコチンを結合し、更に好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定される。別の好ましいは実施態様では、Ｋｄは、一価の相互作用において、最も好ましくは実施例７に基本的に記載の通りのアッセイにおいて決定される。
【００６２】
別の好ましい実施態様では、前記モノクローナル抗体は、(S)-(-)-ニコチン及び  (R)-(+)-ニコチンを特異的に結合し、(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、１から１００ｎＭであり；(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、１から１００ｎＭである。
【００６３】
より好ましい実施態様では、前記モノクローナル抗体は、(S)-(-)-ニコチン及び  (R)-(+)-ニコチンを結合し、(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、０．１から１００ｎＭであり、好ましくは０．１から７０ｎＭであり、更に好ましくは０．１から５０ｎＭであり、再度更に好ましくは０．１から４０ｎＭであり、再度更に好ましくは０．１から２０ｎＭであり、更により好ましくは０．１から１０ｎＭであり、更に好ましくは１から１０ｎＭであり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、０．１から１００ｎＭであり、好ましくは０．１から７０ｎＭであり、更に好ましくは０．１から５０ｎＭであり、再度更に好ましくは０．１から４０ｎＭであり、再度更に好ましくは０．１から２０ｎＭであり、更により好ましくは０．１から１０ｎＭであり、更に好ましくは１から１０ｎＭであり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定される。また非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、０．１から４０ｎＭであり、更に好ましくは０．１から１０ｎＭであり、また更に好ましくは１から１０ｎＭであり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され、(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、０．１から５０ｎＭであり、更に好ましくは０．１から２０ｎＭであり、また更に好ましくは１から１０ｎＭであり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定される。再度別の非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、(S)-(-)ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、０．１から１０ｎＭであり、好ましくは１から１０ｎＭであり、好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、０．１から１０ｎＭであり、好ましくは１から１０ｎＭであり、好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定される。
【００６４】
更なる好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、(S)-(-)ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、１から１０００ｎＭであり、好ましくは１から８００ｎＭであり、また更に好ましくは１から１００ｎＭであり、再度更に好ましくは１から７０ｎＭであり、再度更に好ましくは１から５０ｎＭであり、再度更に好ましくは１から４０ｎＭであり、再度更に好ましくは１から２０ｎＭであり、また更に好ましくは１から１０ｎＭであり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、１から１０００ｎＭであり、好ましくは１から８００ｎＭであり、また更に好ましくは１から１００ｎＭであり、再度更に好ましくは１から７０ｎＭであり、再度更に好ましくは１から５０ｎＭであり、再度更に好ましくは１から４０ｎＭであり、再度更に好ましくは１から２０ｎＭであり、また更に好ましくは１から１０ｎＭであり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定される。非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、(S)-(-)ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、１から１００ｎＭであり、好ましくは１から７０ｎＭであり、再度更に好ましくは１から４０ｎＭであり、再度更に好ましくは１から１０ｎＭであり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、１から１００ｎＭであり、好ましくは１から７０ｎＭであり、再度更に好ましくは１から５０ｎＭであり、再度更に好ましくは１から４０ｎＭであり、再度更に好ましくは１から２０ｎＭであり、更に好ましくは１から１０ｎＭであり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定される。また非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、(S)-(-)ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、１から７０ｎＭであり、好ましくは１から４０ｎＭであり、更に好ましくは１から１０ｎＭであり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、１から５０ｎＭであり、好ましくは１から２０ｎＭであり、更に好ましくは１から１０ｎＭであり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定される。再度また非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、(S)-(-)ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、１から１０ｎＭであり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、１から１０��Ｍであり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定される。
【００６５】
更なる好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、１００ｎＭ未満、好ましくは７０ｎＭ未満、更に好ましくは５０ｎＭ未満、再度更に好ましくは４０ｎＭ未満、再度更に好ましくは２０ｎＭ未満、及び再度更に好ましくは１０ｎＭ未満であり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、１００ｎＭ未満、好ましくは７０ｎＭ未満、更に好ましくは５０ｎＭ未満、再度更に好ましくは４０ｎＭ未満、再度更に好ましくは２０ｎＭ未満、及び再度更に好ましくは１０ｎＭ未満であり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定される。非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、７０ｎＭ未満、好ましくは４０ｎＭ未満、更に好ましくは１０ｎＭ未満であり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、５０ｎＭ未満、好ましくは２０ｎＭ未満、更に好ましくは１０ｎＭ未満であり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定される。また非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１０ｎＭ未満であり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、２０ｎＭ未満、好ましくは１０ｎＭ未満であり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定される。再度また非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、(S)-(-)ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１０ｎＭ未満であり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１０ｎＭ未満であり、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定される。
【００６６】
更に好ましい実施態様において、本発明はモノクローナル抗体に関し、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であり、前記モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄと同等であり、好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定される。
【００６７】
他の好ましい実施態様において、本発明はモノクローナル抗体に関し、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であり、前記モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄよりも２から５倍高く、好ましくは約２倍高く、最も好ましくは２倍高く、好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定される。
【００６８】
更なる好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、好ましくはヒトにおいて、脳へのニコチン進入を防止するか、減少するか又は遅くすることが可能である。更なる好ましい実施態様において、基本的に実施例８に説明した条件下でアッセイされる場合、前記モノクローナル抗体は、脳へのニコチン侵入を、好ましくは少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％  ６０％、７０％、８０％、または９０％減らすことができる。最も好ましくは、基本的に実施例８に説明した条件下でアッセイされる場合、前記モノクローナル抗体は脳へのニコチン侵入を少なくとも６０％減らすことができる。
【００６９】
更なる好ましい実施態様において、前記患者に、好ましくは前記ヒトに投与された場合、前記モノクローナル抗体は、患者の、好ましくはヒトの脳へのニコチン侵入するか、減少するか又は遅くすることができるものであり、好ましくは前記モノクローナル抗体は、前記患者に、好ましくは前記ヒトに、１ｍｇから１０００ｍｇ、好ましくは１０ｍｇから５００ｍｇ、より好ましくは１０ｍｇから３００ｍｇ、なおより好ましくは５０ｍｇから２００ｍｇ及び最も好ましくは約１００ｍｇの量が投与される。
【００７０】
抗体の特異性は、主に前記抗体の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列によっておよび／または前記抗体の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲによって決定される。本発明は、モノクローナル抗体のＨＣＶＲのＣＤＲ（ＨＣ  ＣＤＲ）及びＬＣＶＲのＣＤＲ（ＬＣ  ＣＤＲ）を開示し、前記モノクローナル抗体は、ニコチンを特異的に結合できる。したがって、好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＨＣＶＲを含んでなり、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１、１１及び１７の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は前記ＨＣＶＲのフレームワーク内のＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２、１２及び１８の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は前記ＨＣＶＲのフレームワーク内のＣＤＲ２位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ２；および／または（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号３、４、１３及び１９の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は前記ＨＣＶＲのフレームワーク内のＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含む。
【００７１】
更なる好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含んでなり前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号５、６、７、１４及び２０の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り；好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内のＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８、１５及び２１の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は前記ＬＣＶＲのフレームワーク内のＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；および／または（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号９、１０、１６及び２２の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は前記ＬＣＶＲのフレームワーク内のＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【００７２】
驚くべきことに、ナノモル値域のＫｄでニコチンに結合可能ないくつかのモノクローナル抗体、特にＦ０１８、Ｆ０６３、Ｊ００４、Ｊ０４２及びＮ０４９は、同一のＨＣ  ＣＤＲおよび／またはＬＣ  ＣＤＲを異なる組合せで共有する（参照、表１）。さらにまた、驚くべきことに、抗体Ｆ０１８、Ｆ０６３、Ｊ００４、Ｊ０４２及びＮ０４９の重鎖及び軽鎖可変領域が互いに非常に密接に関連しており、わずかなアミノ酸位置だけが異なることがかわった。
【００７３】
したがって、非常に好ましい実施態様では、（ａ）前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、配列番号１のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り；（ｂ）前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、配列番号２のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り；及び（ｃ）前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、配列番号３及び４の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、好ましくは、（ａ）前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号５、６及び７の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り；（ｂ）前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、配列番号８のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り；及び（ｃ）前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、配列番号９及び１０の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。
【００７４】
好ましい実施形態において、前記ＨＣＶＲは、フレームワークを含み、前記フレームワークは、ＪＨ遺伝子セグメントと組合わせた、Ｖ遺伝子セグメントのＶＨファミリー、好ましくはＶ遺伝子セグメントのＶＨ４ファミリーのメンバーの産生物である。
【００７５】
非常に好ましい実施態様において、（ａ）前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、配列番号１のペプチドから成り；（ｂ）前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り；及び（ｃ）前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号３のペプチドから成る。
【００７６】
更に非常に好ましい実施態様において、（ａ）前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、配列番号１のペプチドから成り；（ｂ）前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り；及び（ｃ）前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号４のペプチドから成る。
【００７７】
ある実施態様において、前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は、配列番号２４、２８、３３及び３９の何れか一つのペプチドから成る。別の実施態様において、前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は、配列番号２３、２７、３２、２９及び３８の何れか一つの核酸によってコードされる。
【００７８】
本発明の抗体は、完全ヒト抗体と、クローニング・アーティファクトが原因でＶＲのあるアミノ酸位置において異なってもよく、通常は、これらの位置は、可変領域のＮおよび／またはＣ末端の近くに位置する。好ましくは、これらのアーティファクトは、完全ヒト抗体を得るために、抗体から取り除かれる。それでも前記クローニング・アーティファクトを含んでいる抗体からの完全ヒトモノクローナル抗体の生成のための方法は、実施例６において例示される。類似したアプローチは、本願明細書において開示される全てのＨＣＶＲとＬＣＶＲに適用される。たとえば、完全ヒトＨＣＶＲを得るために、本発明のＨＣＶＲの位置１から６は、配列番号５０と交換される。したがって、好ましい実施態様において、前記ＨＣＶＲの位置１から６は、配列番号５０から成る。
【００７９】
更なる実施態様において、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号５、６及び７の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り；（ｂ）前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、配列番号８のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り；及び（ｃ）前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、配列番号９及び１０の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。更なる実施態様において、前記ＬＣＶＲは、フレームワークを含んで成り、前記フレームワークは、Ｊラムダ遺伝子セグメントと組合わせた、Ｖ遺伝子セグメントのＶラムダファミリー、好ましくはＶ遺伝子セグメントのＶラムダ１ファミリーのメンバーの産生物である。好ましい実施態様において、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号５のペプチドから成り；（ｂ）前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り；及び（ｃ）前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号９のペプチドから成る。
【００８０】
更に好ましい実施態様において、（ａ）前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号６のペプチドから成り；（ｂ）前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り；及び（ｃ）前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成る。更に好ましい実施態様において、（ａ）前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号７のペプチドから成り；（ｂ）前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り；及び（ｃ）前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成る。更なる好ましい実施態様において、（ａ）前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号５のペプチドから成り；（ｂ）前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り；及び（ｃ）前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成る。
【００８１】
非常に好ましい実施態様において、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は、配列番号２６、３１、３５、３７及び４１の何れか一つのペプチドから成る。更に非常に好ましい実施態様において、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は、配列番号２５、３０、３４、３６及び４０の何れか一つの核酸によってコードされる。更に好ましい実施態様において、前記ＬＣＶＲの位置１から４は、配列番号５１から成る。更に好ましい実施態様において、前記ＬＣＶＲの位置１０８から１１０は、配列番号５３から成る。
【００８２】
更に非常に好ましい実施態様において、（ａ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号２４のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は、配列番号２６のペプチドから成るか；（ｂ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号２８のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号３１のペプチドから成るか；（ｃ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号３３のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号３５のペプチドから成るか；（ｄ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号２８のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は、配列番号３７のペプチドから成るか；または（ｅ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号３９のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は、配列番号４１のペプチドから成る。
【００８３】
再度、更に非常に好ましい実施態様において、（ａ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は、配列番号２４のペプチドから成り、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号２６のペプチドから成る。別の好ましい実施態様において、ニコチンに特異的に結合する前記ヒト・モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＨＣＶＲ及び少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は、配列番号２４、２８、３３及び３９の位置７から１１７、好ましくは配列番号２４の位置７から１１７に対して、少なくとも８０％、好ましくは８５％、より好ましくは９０％、再度より好ましくは９５％、更により好ましくは９６％、また更に好ましくは９７％、再度また好ましくは９８％、再度またより好ましくは９９％及び最も好ましくは１００％同一性であり、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は、配列番号２６、３１、３５、３７及び４１の位置５から１０７、好ましくは配列番号２６の位置５から１０７に対して、少なくとも８０％、好ましくは８５％、より好ましくは９０％、再度より好ましくは９５％、更により好ましくは９６％、また更に好ましくは９７％、再度また好ましくは９８％、再度またより好ましくは９９％及び最も好ましくは１００％同一性である。
【００８４】
ペプチドまたはポリペプチドのアミノ酸配列が他と、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％の同一性があるアミノ酸配列を有するどうかは、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラムのような公知のコンピュータ・プログラムを使用して従来通り決定することができる。
【００８５】
別の好ましい実施態様において、ニコチンに特異的に結合する前記ヒト・モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＨＣＶＲ及び少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は、配列番号２４、２８、３３及び３９の位置７から１１７、好ましくは配列番号２４の位置７から１１７に対して、少なくとも８０％、好ましくは８５％、より好ましくは９０％、再度より好ましくは９５％、更により好ましくは９６％、また更に好ましくは９７％、再度また好ましくは９８％、再度またより好ましくは９９％及び最も好ましくは１００％同一性であり、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は、配列番号２６、３１、３５、３７及び４１の位置５から１０７、好ましくは配列番号２６の位置５から１０７に対して、少なくとも８０％、好ましくは８５％、より好ましくは９０％、再度より好ましくは９５％、更により好ましくは９６％、また更に好ましくは９７％、再度また好ましくは９８％、再度またより好ましくは９９％及び最も好ましくは１００％同一性であり、前記ＨＣＶＲは（ｉ）配列番号１のペプチドからなる１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２のペプチドからなる１つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）配列番号３のペプチドからなる１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＶＲは（ｉ）配列番号５のペプチドからなる１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号８のペプチドからなる１つのＬＣ  ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号９のペプチドからなる１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【００８６】
更に非常に好ましい実施態様において、（ａ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は、配列番号２３の核酸によってコードされ、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は、配列番号２５の核酸によってコードされるか；（ｂ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号２７の核酸によってコードされ、且つ前記ＬＣＶＲの位置５ｋら１０７は配列番号３０の核酸によってコードされるか；（ｃ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号３２の核酸によってコードされ、且つ前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号３４の核酸によってコードされるか；（ｄ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号２９の核酸によってコードされ、且つ前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号３６の核酸によってコード化されるか；または（ｅ）前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は配列番号３８の核酸によってコードされ、且つ前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は配列番号４０の核酸によってコードされる。
【００８７】
本発明の抗体は、一本鎖抗体の形態で産生されることができる。したがって、更に非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、配列番号６０、６２、６４、６６及び６８の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。更に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、一本鎖抗体であり、好ましくは前記一本鎖抗体は、配列番号６０、６２、６４、６６及び６８の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。更に非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体はペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、前記ペプチドは、配列番号５９、６１、６３、６５及び６７の何れか一つの核酸によってコードされる。
【００８８】
更に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体はＩｇＧとして、好ましくはＩｇＧ２として発現される。したがって、更に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのガンマ２重鎖を含み、好ましくは前記ガンマ２重鎖は、配列番号７３、７５、７７及び８０の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。更に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのラムダ軽鎖を含み、好ましくは前記ラムダ軽鎖は、配列番号７４、７６、７８、７９及び８１の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。
【００８９】
非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのガンマ２重鎖及び少なくとも一つのラムダ軽鎖を含み、（ａ）前記ガンマ２重鎖は、配列番号７３のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、且つ前記ラムダ軽鎖は配列番号７４のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成るか；（ｂ）前記ガンマ２重鎖は、配列番号７５のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、且つ前記ラムダ軽鎖は配列番号７６のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成るか；（ｃ）前記ガンマ２重鎖は、配列番号７７のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、且つ前記ラムダ軽鎖は配列番号７８のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成るか；（ｄ）前記ガンマ２重鎖は、配列番号７５のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、且つ前記ラムダ軽鎖は配列番号７９のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成るか；または（ｅ）前記ガンマ２重鎖は、配列番号８０のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、且つ前記ラムダ軽鎖は配列番号８１のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。
【００９０】
更に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、軽鎖定常領域（ＬＣＣＲ）を含み、好ましくは前記ＬＣＣＲは、ラムダＬＣＣＲである。
【００９１】
別の実施態様において、（ａ）前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、配列番号１１のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り；（ｂ）前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、配列番号１２のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り；及び（ｃ）前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、配列番号１３のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＨＣＶＲは、フレームワークを含み、前記フレームワークは、ＪＨ遺伝子セグメントと組合わせた、Ｖ遺伝子セグメントのＶＨファミリー、好ましくはＶ遺伝子セグメントのＶＨ４ファミリーのメンバーの産生物である。
【００９２】
好ましい実施態様において、（ａ）前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、配列番号１１のペプチドから成り；（ｂ）前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号１２のペプチドから成り；及び（ｃ）前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号１３のペプチドから成る。
【００９３】
更に好ましい実施態様において、前記ＨＣＶＲの位置７から１２１は、配列番号４３のペプチドから成る。更に好ましい実施態様において、前記ＨＣＶＲの位置７から１２１は、配列番号４２の核酸によってコードされる。
【００９４】
更に好ましい実施態様において、前記ＨＣＶＲの位置１から６は、配列番号５０から成る。更に好ましい実施態様において、（ａ）前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号１４のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、（ｂ）前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、配列番号１５のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り；及び（ｃ）前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、配列番号１６のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＬＣＶＲは、フレームワークを含み、更に好ましくは前記フレームワークは、Ｊカッパ遺伝子セグメント組合わせた、Ｖ遺伝子セグメントのＶカッパ・ファミリー、好ましくはＶ遺伝子ゼグメントのＶカッパ３ファミリーのメンバーの産生物である。
【００９５】
更に好ましい実施態様において、（ａ）前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号１４のペプチドから成り；（ｂ）前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号１５のペプチドから成り；及び（ｃ）前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１６のペプチドから成る。
更に好ましい実施態様において、前記ＬＣＶＲの位置５から１０４は配列番号４５のペプチドから成る。更に好ましい実施態様において、前記ＬＣＶＲの位置５から１０４は、配列番号４４の核酸によってコードされる。更に好ましい実施態様において、前記ＬＣＶＲの１から４は、配列番号５２から成る。更に好ましい実施態様において、前記ＬＣＶＲの位置１０５から１０７は、配列番号５４から成る。
【００９６】
非常に好ましい実施態様において、前記ＨＣＶＲの位置７から１２１は配列番号４３のペプチドから成り、且つ前記ＬＣＶＲの位置５から１０４は配列番号４５のペプチドから成る。更に非常に好ましい実施態様において、前記ＨＣＶＲの位置７から１２１は配列番号４２の核酸によってコードされ、前記ＬＣＶＲの位置５から１０４は配列番号４４の核酸によってコードされる。
【００９７】
更に非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、配列番号７０のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。更に非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は一本鎖抗体であり、前記一本鎖抗体は、配列番号７０のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。更なるまさしく好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、ペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、前記ペプチドは、配列番号６９の核酸によってコードされる。
【００９８】
更に非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのガンマ２重鎖を含み、前記ガンマ２重鎖は、配列番号８２のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。更に非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのカッパ軽鎖を含み、前記カッパ軽鎖は、配列番号８３のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。更に非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのガンマ２重鎖及び少なくとも一つのカッパ軽鎖を含み、前記ガンマ２重鎖は配列番号８２のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、前記カッパ軽鎖は配列番号８３のペプチドを含むか又は好ましくはそれから成る。
【００９９】
更に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、軽鎖定常領域（ＬＣＣＲ）を含み、好ましくは前記ＬＣＣＲは、カッパＬＣＣＲである。
【０１００】
更なる実施態様において、（ａ）前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、配列番号１７のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り；（ｂ）前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、配列番号１８のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り；及び（ｃ）前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、配列番号１９のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＨＣＶＲは、フレームワークを含み、前記フレームワークは、ＪＨ遺伝子セグメント組合わせた、Ｖ遺伝子セグメントのＶＨファミリー、好ましくはＶ遺伝子ゼグメントのＶＨ４ファミリーのメンバーの産生物である。
【０１０１】
好ましい実施態様において、（ａ）前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、配列番号１７のペプチドから成り；（ｂ）前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号１８のペプチドから成り；及び（ｃ）前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号１９のペプチドから成る。非常に好ましい実施態様において、前記ＨＣＶＲの位置７から１２１は、配列番号４７のペプチドから成る。更に非常に好ましい実施態様において、前記ＨＣＶＲの位置７から１２１は、配列番号４６の核酸によってコードされる。更に好ましい実施態様において、前記ＨＣＶＲの位置１から６は、配列番号５０から成る。
【０１０２】
更なる実施態様において、（ａ）前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号２０のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り；（ｂ）前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、配列番号２１のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り；及び（ｃ）前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、配列番号２２のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、好ましくは前記ＬＣＶＲはフレームワークを含み、前記フレームワークは、Ｊラムダ遺伝子セグメント組合わせた、Ｖ遺伝子セグメントのＶラムダ・ファミリー、好ましくはＶ遺伝子ゼグメントのＶラムダ１ファミリーのメンバーの産生物である。
【０１０３】
好ましい実施態様において、（ａ）前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号２０のペプチドから成り；（ｂ）前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号２１のペプチドから成り、及び（ｃ）前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号２２のペプチドから成る。更に好ましい実施態様位置において、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は、配列番号４９のペプチドから成る。更に好ましい実施態様において、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は、配列番号４８の核酸によってコードされる。好ましい実施態様において、前記ＬＣＶＲの位置１から４は、配列番号５１から成る。好ましい実施態様において、前記ＬＣＶＲの位置１０８から１１０は、配列番号５３から成る。
【０１０４】
非常に好ましい実施態様において、前記ＨＣＶＲの位置７から１２１は配列番号４７からなり、且つ前記ＬＣＶＲの位置５から１０７のペプチドは配列番号４９のペプチドから成る。
【０１０５】
非常に好ましい実施態様において、前記ＨＣＶＲの位置７から１２１は、配列番号４６の核酸によってコードされ、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は、配列番号４８の核酸によってコードされる。
【０１０６】
好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、配列番号７２のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。更に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、一本鎖抗体であり、前記一本鎖抗体は、配列番号７２のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、ペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、前記ペプチドは、配列番号７１の核酸によってコードされる。
【０１０７】
更なる好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのガンマ２重鎖を含み、好ましくは前記ガンマ２重鎖は、配列番号８４のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。
【０１０８】
更に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのラムダ軽鎖を含み、前記ラムダ軽鎖は、配列番号８５のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。
【０１０９】
非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのガンマ２重鎖及び少なくとも一つのラムダ軽鎖を含み、前記ガンマ２重鎖は、配列番号８４のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、前記ラムダ軽鎖は配列番号８５のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。
【０１１０】
更なる好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、軽鎖定常領域（ＬＣＣＲ）を含み、好ましくは前記ＬＣＣＲは、ラムダＬＣＣＲである。
【０１１１】
本発明のモノクローナル抗体は、天然に存在するか又は合成形態において、組換えにより産生することか出来る。したがって、以下の実施態様は、本発明の全ての態様と実施態様に明確に関連する。ある実施態様において、前記モノクローナル抗体は、組換え抗体である。好ましい実施態様において、本発明のモノクローナル抗体は、以下からなるグループから選択される抗体である：（ａ）一本鎖抗体（好ましくはｓｃＦｖ）；（ｂ）Ｆａｂ断片；（ｃ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｄ）ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合体；（ｅ）ＩｇＧ１；（ｆ）ＩｇＧ２；（ｇ）ＩｇＧ３；（ｈ）ＩｇＧ４；（ｉ）ＩｇＡ；（ｊ）ＩｇＥ；（ｋ）ＩｇＭ；（ｌ）ＩｇＤ；及び（ｍ）ダイアボディ。
【０１１２】
好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、正確に１つのＨＣＶＲおよび／または正確に１つのＬＣＶＲを含むかまたは好ましくはそれから成る。
【０１１３】
更なる好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、重鎖定常領域（ＨＣＣＲ）を含み、好ましくは前記ＨＣＣＲは、（ａ）ガンマＨＣＣＲ、（ｂ）アルファＨＣＣＲ、（ｃ）イプシロンＨＣＣＲ、（ｄ）ｍｙＨＣＣＲ、及び（ｅ）デルタＨＣＣＲから選択され、更に、好ましくは前記ＨＣＣＲ、好ましくは前記ガンマＨＣＣＲ、アルファＨＣＣＲ、イプシロンＨＣＣＲ、ｍｙＨＣＣＲおよび／またはデルタＨＣＣＲは、ヒトＨＣＣＲである。また更なる好ましい実施態様において、前記ＨＣＣＲはガンマＨＣＣＲであり、好ましくは前記ガンマＨＣＣＲは、（ａ）ガンマ１ＨＣＣＲ、（ｂ）ガンマ２ＨＣＣＲ；（ｄ）ガンマ３ＨＣＣＲ；及び（ｃ）ガンマ４ＨＣＣＲから選択され；好ましくは前記ガンマＨＣＣＲはガンマ２ＨＣＣＲである。
【０１１４】
更に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、軽鎖定常領域（ＬＣＣＲ）を含み、好ましくは前記ＬＣＣＲは、（ａ）ラムダＬＣＣＲ及び（ｂ）カッパＬＣＣＲから選択され、更に好ましくは前記ＬＣＣＲ、最も好ましくは前記ラムダＬＣＣＲおよび／または前記カッパＬＣＣＲは、ヒトＬＣＣＲである。
【０１１５】
好ましくは、本発明のモノクローナル抗体は、ＩｇＧ２、最も好ましくは完全なヒトＩｇＧ２である。したがって、好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、前記ガンマ２重鎖の、２つ、好ましくは正確に２つを含み、更に好ましくは前記２つは、好ましくは前記正確に２つの前記ガンマ２重鎖は同一である。更に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、２つ、好ましくは正確に２つの軽鎖を含み、好ましくは前記軽鎖は、（ａ）ラムダ軽鎖及び（ｂ）カッパ軽鎖から選択され；なお更に好ましくは前記２つの、好ましくは前記正確に２つの前記軽鎖は同一である。好ましくは、前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、配列番号１、１１及び１７の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、非常に好ましくは配列番号１のペプチドから成り、且つ好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２、１２及び１８の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、非常に好ましくは配列番号２のペプチドから成り、且つ好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ２；および／または（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号３、４、１３及び１９の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、非常に好ましくは配列番号３のペプチドから成り、且つ好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；および／または、好ましくは、前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号５、６、７、１４及び２０の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り；非常に好ましくは、配列番号５のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、配列番号８、１５及び２１の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、非常に好ましくは配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；および／または（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号９、１０、１６及び２２の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、非常に好ましくは配列番号９のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１１６】
非常に好ましい更なる実施態様において、本発明は、モノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であり、前記モノクローナル抗体が(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し；前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号３のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号５のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号９のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１１７】
非常に好ましい更なる実施態様において、本発明は、モノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体が(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンに結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、０．１から１０ｎＭ、好ましくは１から１０ｎＭであり；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、０．１から１０ｎＭ、好ましくは１から１０ｎＭであり、好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号３のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号５のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号９のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１１８】
非常に好ましい更なる実施態様において、本発明は、モノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、前記モノクローナル抗体が(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し；前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、０．１から１０ｎＭ、好ましくは１から１０ｎＭであり；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、０．１から１０ｎＭ、好ましくは１から１０ｎＭであり、好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記モノクローナル抗体は、ガンマ２重鎖及びラムダ軽鎖を含み、前記ガンマ２重鎖は、配列番号７３のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、前記ラムダ軽鎖は配列番号７４のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。
【０１１９】
他の好ましい実施形態において、本発明は、モノクローナル抗体に関するものであり、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であり、前記モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し；前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローム抗体の前記結合と同等、好ましくはそれより２から５倍高く、最も好ましくは約２倍高く、最も好ましくは２倍高く、好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号３のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号５のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号９のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１２０】
好ましくは、前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、配列番号１、１１及び１７の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、非常に好ましくは配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２、１２及び１８の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、非常に好ましくは配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ２；および／または（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号３、４、１３及び１９の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、非常に好ましくは配列番号３のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；および／または、好ましくは、前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、配列番号５、６、７、１４及び２０の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り；非常に好ましくは、配列番号５のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する  １つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、配列番号８、１５及び２１の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、非常に好ましくは配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する  １つのＬＣ  ＣＤＲ２；および／または（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号９、１０、１６及び２２の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、非常に好ましくは配列番号９のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１２１】
再度また非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１０ｎＭより低く、更に好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは１０ｎＭより低く、更に好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、そこにおいて、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号３のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；及び前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号５のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する  １つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号９のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１２２】
非常に好ましい更なる実施態様において、本発明は、モノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号４のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；及び前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号６のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１２３】
非常に好ましい更なる実施態様において、本発明は、モノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であり、モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンと結合しており、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、１０から１００ｎＭ、好ましくは２５から７５ｎＭ、最も好ましくは２５から３５ｎＭであり；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは、０．１から１０ｎＭ、好ましくは１から１０ｎＭであり、好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号４のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；及び前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号６のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１２４】
非常に好ましい更なる実施態様において、本発明は、モノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体が結合性(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンに結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、１０から１００ｎＭ、好ましくは２５から７５ｎＭ、最も好ましくは２５から３５ｎＭであり；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、０．１から１０ｎＭ、好ましくは１から１０ｎＭであり、好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記モノクローナル抗体は、ガンマ２重鎖及びラムダ軽鎖を含み、前記ガンマ２重鎖は、配列番号７５のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、前記ラムダ軽鎖は配列番号７６のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。他の好ましい実施態様において、本発明はモノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体が(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローム抗体の前記結合と同じであり、好ましくはそれより２から７倍高く、好ましくは約５倍高く、最も好ましくは５倍高く、好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号４のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；及び前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号６のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する  １つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１２５】
再度依然として非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は、(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは４０ｎＭより低く、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、１０ｎＭより低く、更に好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号４のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３；前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号６のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する  １つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１２６】
非常に好ましい更なる実施態様において、本発明は、モノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号４のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；及び前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号７のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する  １つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１２７】
非常に好ましい更なる実施態様において、本発明は、モノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、１０から１００ｎＭ、好ましくは２５から７５ｎＭであり、前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、１から２０ｎＭ、好ましくは１０から１５ｎＭであり、好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号４のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；及び前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号７のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１２８】
非常に好ましい更なる実施態様において、本発明は、モノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは、１０から１００ｎＭ、好ましくは２５から７５ｎＭであり；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは、１から２０ｎＭ、好ましくは１０から１５ｎＭであり、好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記モノクローナル抗体は、ガンマ２重鎖及びラムダ軽鎖を含み、前記ガンマ２重鎖は、配列番号７７のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、前記ラムダ軽鎖が配列番号７８のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。他の好ましい実施態様において、本発明は、モノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、そしてモノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローム抗体の前記結合と同じ、好ましくはそれより２から７倍高く、より好ましくは約５倍高く、最も好ましくは５倍高く、好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形式の前記モノクローナル抗体を使用して決定され、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号４のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；及び前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号７のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１２９】
再度依然として非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは、７５ｎＭより低く、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは、１５ｎＭより低く、更に好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号４のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；及び前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号７のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１３０】
非常に好ましい更なる実施態様において、本発明は、モノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号４のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；及び前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号５のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１３１】
非常に好ましい更なる実施態様において、本発明は、モノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは、２０から６０ｎＭ、好ましくは３０から５０ｎＭであり；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは、０．１から１０ｎＭ、好ましくは１から１０ｎＭであり、好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号４のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；及び前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号５のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する  １つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する  １つのＬＣ  ＣＤＲ３Ｂを含む。
【０１３２】
非常に好ましい更なる実施態様において、本発明は、モノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは、２０から６０ｎＭ、好ましくは３０から５０ｎＭであり；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは、０．１から１０ｎＭ、好ましくは１から１０ｎＭであり、好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記モノクローナル抗体は、ガンマ２重鎖及びラムダ軽鎖を含み、前記ガンマ２重鎖は、配列番号７５のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、前記ラムダ軽鎖は配列番号７９のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。他の好ましい実施態様において、本発明はモノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合の解離定数Ｋｄは、前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合と等しい、好ましくは２から７倍高く、より好ましくは約４倍高く、最も好ましくは４倍高く、好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号４のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；及び前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号５のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する  １つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び
（ｃ）  １つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１３３】
再度依然として非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは６０ｎＭより低く、更に好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは１０ｎＭより低く、更に好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号４のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；及び前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号５のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１３４】
非常に好ましい更なる実施態様において、本発明は、モノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、て好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号４のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；
及び前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号６のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１３５】
非常に好ましい更なる実施態様において、本発明は、モノクローナル抗体に関しており、
前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは、２０から８０ｎＭ、好ましくは３０から７５ｎＭであり；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは、０．１から１５ｎＭ、好ましくは１から１２ｎＭであり、好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号３のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；及び前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号６のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する  １つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１３６】
非常に好ましい更なる実施態様において、本発明はモノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体が(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは、２０から８０ｎＭ、好ましくは３０から７５ｎＭであり、前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは、０．１から１５ｎＭ、好ましくは１から１２ｎＭであり、好ましくは、Ｋｄは、ＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記モノクローナル抗体は、ガンマ２重鎖及びラムダ軽鎖を含み、前記ガンマ２重鎖は、配列番号８０のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成り、前記ラムダ軽鎖は配列番号８１のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る。他の好ましい実施態様において、本発明はモノクローナル抗体に関しており、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは、前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローム抗体の前記結合と等しい、好ましくはそれより２から７倍高く、より好ましくは約３倍高く、最も好ましくは３倍高く、好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号４のペプチドかな成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；及び前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号６のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１３７】
再度依然として非常に好ましい実施態様において、前記モノクローナル抗体は(S)-(-)-ニコチン及び  (R)-(+)-ニコチンを結合し、前記(S)-(-)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは８０ｎＭより低く、更に好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され；前記(R)-(+)-ニコチンに対する前記モノクローナル抗体の前記結合性の解離定数Ｋｄは１５ｎＭより低く、更に好ましくは、ＫｄはＩｇＧ２形態の前記モノクローナル抗体を使用して決定され、前記モノクローナル抗体は少なくとも一つのＨＣＶＲを含み、前記ＨＣＶＲは、（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ１は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ２は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する  １つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号４のペプチドから成り、好ましくは前記ＨＣ  ＣＤＲ３は、前記ＨＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含み；及び前記モノクローナル抗体は、少なくとも一つのＬＣＶＲを含み、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号６のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ１は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ１位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ２は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ２位置に位置する  １つのＬＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号１０のペプチドから成り、好ましくは前記ＬＣ  ＣＤＲ３は、前記ＬＣＶＲのフレームワーク内で、ＣＤＲ３位置に位置する１つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１３８】
ニコチンに特異的に結合する第１の抗体のＨＣＶＲを使用すること、適切なソースから対応するＬＣＶＲを選択すること、第２の抗体を作成することであって、前記第２の抗体は前記第１の抗体と選択されたＬＣＶＲの前記ＨＣＶＲを含み、前記第２の抗体は前記第１の抗体と同じ特異性によりニコチンを結合できることは、同業者の技術の範囲内であるとは理解される。更に、類似した方法で、第１の抗体のＬＣＶＲは、適切なソースから対応するＨＣＶＲを選択するために用いることができることは当業者には自明である。ＬＣＶＲおよび／またはＨＣＶＲの増幅のための適切なソースは、たとえば、ナイーヴ・ヒトＢ細胞由来のｃＤＮＡ、ニコチン−担体コンジュゲートにより免疫化されたヒト被検体のＢ細胞由来のｃＤＮＡ、完全に合成であるライブラリー（例えばMorphosysのHuCALライブラリー）である。これらの方法はKang AS et al. (Proc Natl Acad Sci USA 88, 11120-11123, 1991), Marks JDet al. (Biotechnology (N Y) 10, 779-783, 1992), 及びJespers et al. (Biotechnology (N Y) 12, 899-903, 1994)に詳細に記載されている。
【０１３９】
したがって、本発明の更なる態様は、モノクローナル抗体のＨＣＶＲでって、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体は特異的に(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンに結合し、前記ＨＣＶＲは（ａ）１つのＨＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１は配列番号１のペプチドから成る１つのＨＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＨＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ２は配列番号２のペプチドから成る１つのＨＣ  ＣＤＲ２；及び（ｃ）１つのＨＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＨＣ  ＣＤＲ３は配列番号３及び４の何れか一つのペプチドから成る１つのＨＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０１４０】
好ましい実施態様において、前記ＨＣＶＲの位置７から１１７は、配列番号２４、２８、３３及び３９の何れか一つのペプチドから成る。
【０１４１】
本発明の更なる態様は、モノクローナル抗体のＬＣＶＲであって、前記モノクローナル抗体は、ヒト・モノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体は特異的に(S)-(-)-ニコチン及び(R)-(+)-ニコチンに結合し、前記ＬＣＶＲは、（ａ）１つのＬＣ  ＣＤＲ１であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ１は配列番号５、６及び７の何れか一つのペプチドからなる１つのＬＣ  ＣＤＲ１；（ｂ）１つのＬＣ  ＣＤＲ２であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ２は配列番号８のペプチドから成る１つのＬＣ  ＣＤＲ２；（ｃ）１つのＬＣ  ＣＤＲ３であって、前記ＬＣ  ＣＤＲ３は配列番号９及び１０の何れか一つのペプチドから成る  １つのＬＣ  ＣＤＲ３を含む。好ましい実施態様において、前記ＬＣＶＲの位置５から１０７は、配列番号２６、３１、３５、３７及び４１の何れか一つのペプチドから成る。更なる態様において、本発明は、本発明の可変領域、本発明のモノクローナル抗体又はその個々の鎖をコードする核酸分子に関連する。好ましい実施態様において、前記核酸分子は、以下から選択されるペプチドをコードする：（ａ）本発明のＨＣＶＲ、好ましくは前記ＨＣＶＲは、配列番号２４、２８、３３、３９、４３及び４７の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る；（ｂ）本発明のＬＣＶＲ、好ましくは前記ＬＣＶＲは、配列番号２６、３１、３５、３７、４１、４５及び４９の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る；（ｃ）本発明の一本鎖抗体、好ましくは前記一本鎖抗体は、配列番号６０、６２、６４、６６、６８、７０及び７２の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る；（ｄ）本発明のガンマ２重鎖、好ましくはガンマ２重鎖は配列番号７３、７５、７７、８０、８２及び８４の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る；（ｅ）本発明のラムダ軽鎖、好ましくは前記ラムダ軽鎖は、配列番号７４、７６、７８、７９、８１及び８５の何れか一つのペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る、（ｆ）本発明のカッパ軽鎖、好ましくは前記カッパ軽鎖は、配列番号８３のペプチドを含むかまたは好ましくはそれから成る；及び（ｇ）本発明のモノクローナル抗体。
【０１４２】
更なる好ましい実施態様において、前記核酸分子は、配列番号２３、２７、２９、３２、３８、４２及び４６の何れか一つのヌクレオチド配列；および／または配列番号２５、３０、３４、３６、４０、４４及び４８の何れか一つのヌクレオチド配列；および／または配列番号５９、６１、６３、６５、６７、６９及び７１の何れか一つのヌクレオチド配列を含むか又はそれから成る。
【０１４３】
更なる態様において、本発明は、本発明の少なくとも一つの核酸分子を含む発現ベクターに関する。本発明のモノクローナル抗体の発現に適している発現ベクターは、例えばＰＣＴ／ＥＰ２００７／０６１５７０において開示される。
【０１４４】
更なる態様において、本発明は、本発明の少なくとも一つの核酸分子または少なくとも一つの発現ベクターを含む宿主細胞に関しており、好ましくは前記宿主細胞は、バクテリア細胞または真核細胞である。好ましい実施態様において、前記宿主細胞は、（ａ）イースト細胞；（ｂ）  昆虫細胞；及び（ｃ）  哺乳類の細胞から選択される真核細胞であって、好ましくは前記哺乳類の細胞は、ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞、ＣＨＯ細胞及びＣＯＳ細胞から選択される。非常に好ましくは、前記哺乳動物細胞は、ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞である。本発明のモノクローナル抗体は、患者への投与に適している組成物に組み込まれることができる。
【０１４５】
したがって、更なる態様において、本発明は、本発明の少なくとも一つのモノクローナル抗体を含む医薬組成物に関しており、更に好ましくは、前記医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体、希釈液または賦形剤を含む。薬学的に許容可能な担体、希釈液及び賦形剤は、例えばRemington, The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, Gennaro (ed.), Mack publishing Co., Easton, PA, 1995に開示されている。本発明の医薬組成物は、単回投与により又は複数回投与により、投与される。
【０１４６】
好ましい実施態様において、前記医薬組成物は、少なくとも一つの更なる抗体から更に成り、好ましくは前記少なくとも一つの更なる抗体は、ニコチンを特異的に結合する。
【０１４７】
本発明のモノクローナル抗体は、受動免疫化において、好ましくはヒトにおいて、更に好ましくはニコチンに対して使用することができる。従って、本発明のモノクローナル抗体は、ニコチン中毒の治療に役立つ。更なる態様において、本発明は、好ましくはニコチンに対する、受動免疫化の方法であって、前記方法は、本発明のモノクローナル抗体の有効量または本発明の医薬組成物の有効量を患者に投与することを含む方法に関する。本発明のモノクローナル抗体および／または医薬組成物は、好ましくは患者に、好ましくはヒトに、経口投与、静脈内投与、腹膜内投与、皮下投与、肺投与、経皮投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、口内投与、舌下投与及び坐薬投与から選択される標準投与技術を使用して投与される。
【０１４８】
更なる態様において、本発明は、ニコチン中毒を治療する方法であって、本発明のモノクローナル抗体または本発明の医薬組成物の有効量の有効量を患者に投与することを含む方法であって、好ましくは前記患者はヒトであり、更に好ましくは前記患者はニコチン中毒である、方法に関する。
【０１４９】
更なる態様において、本発明は、好ましくはニコチンに対して、好ましくはヒトにおいて、受動免疫化に使用するための、本発明のモノクローナル抗体または本発明の医薬組成物に関するものであり、更に好ましくは前記モノクローナル抗体は、前記ヒトに投与される。
【０１５０】
更なる態様において、本発明は、好ましくはヒトにおいて、ニコチン中毒の治療に使用される、本発明のモノクローナル抗体または本発明の医薬組成物に関する。
【０１５１】
更なる態様において、好ましくはニコチンに対して、本発明は、受動免疫化のための医薬の製造における、本発明のモノクローナル抗体の使用に関する。
【０１５２】
更なる態様において、本発明は、好ましくはニコチンに対する、受動免疫化に使用される、本発明のモノクローナル抗体に関する。
【０１５３】
更なる態様において、本発明は、好ましくはヒトにおいて、ニコチン中毒の治療のための医薬の製造における、本発明のモノクローナル抗体の使用に関する。
【０１５４】
更なる態様において、本発明は、好ましくはヒトの、ニコチン中毒を治療する方法に使用される、本発明のモノクローナル抗体に関する。
【０１５５】
本発明の更なる態様は、好ましくは血液サンプルでの及び最も好ましくはＥＬＩＳＡによる、ニコチンの定量的および／または定性的な検出方法における、本発明の抗体の使用である。
【０１５６】
本発明の全ての態様が本願明細書において開示される任意のモノクローナル抗体に関することは理解される。
【図面の簡単な説明】
【０１５７】
【図１】ＩｇＧ２−Ｆ０１８の特異性。トリチウム−標識化(-)-ニコチン（５６ｎＭ）のＩｇＧ２−Ｆ０１８（５０ｎＭ）の結合を、非標識化(-)-ニコチン、(-)-コチニン又はアセチルコチンの濃度増加の存在下で平衡透析により測定した。独立した２つの実験の平均は、標準偏差と共に与えられる。
【実施例】
【０１５８】
（実施例１）
哺乳類細胞提示によるニコチン特異的一本鎖抗体の同定
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、BD VacutainerTM CPTTMチューブ方法(BD Bioscience)を使用して、Ｑβ−ニコチン・ワクチン接種を受けたボランティアの３２ｍｌのヘパリン添加血液から分離された。ＰＢＭＣは、Ａｌｅｘａ６４７ｎｍ標識化Ｑβ（３μｇ／ｍｌ）及びマウスγグロブリン（１０ｕｇ／ｍｌ；Jackson ImmunoResearch）によってプレインキュベーションされて、次に以下のように染色された：（１）Ａｌｅｘａ−４８８ｎｍ標識化Ｑβ特異的マウスｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）及びＡｌｅｘａ−４８８ｎｍ標識化ニコチン特異的マウスｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）を組合せたＱβ−ニコチン（１μｇ／ｍｌ）、（２）ＰＥ標識化マウス抗ヒトＩｇＭ（１：５０希釈；BD Biosciences Pharmingen）、マウス抗ヒトＩｇＤ（１：１００希釈；BD Biosciences Pharmingen）、マウス抗ヒトＣＤ１４（１：５０希釈；BD Biosciences Pharmingen）及びマウス抗ヒトＣＤ３（１：５０希釈；BD Biosciences Pharmingen）抗体；及び（４）ＰＥ−ＴｅｘａｓＲｅｄ標識化マウス抗ヒトＣＤ１９抗体（Caltag Laboratories）。染色後、細胞は洗浄及びろ過され、４４３ニコチン特異的Ｂ細胞（ＦＬ１陽性、ＦＬ２陰性、ＦＬ３陽性、ＦＬ４陰性）はFACSVantage SEフロー・サイトメーター（ベクトンディキンソン）にソートされた。
【０１５９】
記載（一般的なシンドビス・ベースのスクリーニングについてはWO1999/025876A1及びに抗体スクリーニングにおけるその適用についてはPCT/EP2007/061570を参照）に従って、抗原特異的Ｂ細胞は基本的にシンドビス・ベースのｓｃＦｖ細胞表面提示ライブラリーの構築のために使われた。ニコチン特異的ｓｃＦｖ抗体を提示する細胞は、ＲＮａｓｅ−特異的ウサギ・ポリクローナル抗体（２．５μｇ／ｍｌ；Abcam）及びＦＩＴＣ標識化ロバ抗ウサギＩｇＧ抗体（１．５μｇ／ｍｌ；Jackson ImmunoResearch）と組合わせたＲＮａｓｅ−ニコチンを使用して分離された。各細胞は、５０％融合性ＢＨＫフィーダ細胞を含んでいる２４ウェル・プレートのウェルにソートされた。ウイルスの広がりに応じて（ソーティング２日後）、感染された細胞は、ニコチン特異的ｓｃＦｖ抗体をコードするウイルス・クローンを同定するために、ニコチン結合性についてＦＡＣ解析によって試験された。
【０１６０】
（実施例２）
ニコチン特異的抗体の遺伝子レスキュー、ＥＬＩＳＡスクリーニング及び配列決定
記載（出願PCT/EP2007/061570を参照）に従って、推定のニコチン−特異的抗体をコードするＢＨＫ細胞の上澄み（それぞれ、モノクローナル組換えシンドビスウイルスを含む）はＲＴ−ＰＣＲにかけられた。結果として生じるＰＣＲ産物（それぞれ、ｓｃＦｖコード領域を含む）は制限エンドヌクレアーゼＳｆｉ１によって消化され、ＣＭＶプロモータのコントロール下でＣ末端ヒトＦｃ−γ１ドメインに融合したｃＦｖタンパク質の発現を可能にする発現ベクターｐＣＥＰ−ＳＰ−Ｓｆｉ−Ｆｃにクローニングされた（出願PCT/EP2007/061570において配列番号３７として開示されている）。
【０１６１】
ＥＬＩＳＡ解析のために、各クローンは、製造業者の推奨に従ってLipofectamin 2000（インビトロゲン）を用いて、２４ウェルのプレート様式のＨＥＫ−２９３Ｔの細胞にトランスフェクションした。トランスフェクションの２−３日後に、一時的に発現されたｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質を含んでいる上澄みは収集された。ニコチン特異的な結合性について調べるために、ＥＬＩＳＡプレートは、４μｇ／ｍｌの濃度のニコチン−コンジュゲートしたＲＮＡｓｅのリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）溶液により、４℃でオーバーナイトで被覆した。平行して、ｓｃＦｖ−Ｆｃ発現レベルは、サンドイッチＥＬＩＳＡによって監視された。このために、同一セットのプレートは、２．５μｇ／ｍｌ濃度のＦｃγ−特異的、ヤギ抗−ヒトＦ（ａｂ’）２抗体（Jackson ImmunoResearch Laboratories 109-006-098）で被覆した。プレートは、それから洗浄バッファー（ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ）によって洗浄され、３％のＢＳＡの洗浄バッファーにより室温で２時間ブロックされた。プレートは次に再度洗浄され、細胞培養上清の１／１０希釈から始まる３倍の連続希釈によってインキュベートされた。全希釈は、洗浄バッファー中でされた。プレートは、２時間室温でインキュベートされ、それから洗浄バッファーによって十分に洗われた。結合したｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質は、次にＨＲＰＯ標識化Ｆｃγ−特異的、ヤギ抗−ヒトＩｇＧ抗体（Jackson ImmunoResearch Laboratories 109-035-098）による１時間のインキュベーションによって検出された。洗浄バッファーによる十分な洗浄後、プレートは５〜１０分間のＯＰＤ溶液（１つのＯＰＤ錠剤、２５ｍｌのＯＰＤバッファー及び８μｌの３０％Ｈ２Ｏ２）によって発現させられ、反応は５％のＨ２ＳＯ４溶液により停止された。プレートは、次にＥＬＩＳＡリーダー（Biorad Benchmark）でＯＤ４５０ｎｍで読みとられた。
【０１６２】
記載（出願PCT/EP2007/061570を参照）されているように、ニコチン特異的なｓｃＦｖ抗体をコードしているＥＬＩＳＡ−陽性クローン（クローンＦ０１８、Ｆ０６３、Ｊ００４、Ｊ０４２、Ｎ０４９、Ｉ０２２及びＮ０３８を含む）は配列決定された（表２を参照）。
2011504893.tif 000003
【０１６３】
これらの中で、全ての重鎖可変領域は、ＶＨ４ファミリー配列（配列番号２４、２８、３３、３９、４３及び４７）を含んでいた。軽鎖可変領域は、Ｖκ３配列（配列番号４５）を含むＩ０２２を除いて、Ｖλ１ファミリー配列（配列番号２６、３１、３５、３７、４１及び４９）を含んでいた。有意に、抗体Ｆ０１８、Ｆ０６３、Ｊ００４、Ｊ０４２及びＮ０４９の重鎖及び軽鎖可変領域は、互いに非常に密接に関連しており、わずかなアミノ酸位置しか違いが無かった。クローンＦ０６３及びＪ０４２の重鎖可変領域は、同一だった（配列番号２８）。ニコチンを結合している抗体の可変領域に含まれる核酸配列及びアミノ酸配列について概要は、表３に提供される。
2011504893.tif 000004
【０１６４】
（実施例３）
ニコチン特異的ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質の発現と精製
ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質のラージスケールの発現は、ＨＥＫ−２９３Ｔの細胞においてされた。トランスフェクションの１日前に、５×１０６の２９３Ｔ細胞は、発現される各タンパク質について１０ｃｍの組織培養プレート上に塗布された。細胞は、次に、Lipofectamin Plus（インビトロゲン）を使用して、製造業者の推奨に従って、それぞれのｓｃＦｖ−Ｆｃ融合コンストラクトによってトランスフェクションされ、１日インキュベートされ、１μｇ／ｍｌのピューロマイシンの存在下で１つの１４ｃｍのシャーレーに再度塗布した。選択の３日後、ピューロマイシン−耐性細胞は、３枚のポリ‐Ｌ‐リジン被覆１４ｃｍプレートに移されて、密集するまで増殖させた。次に、培地を無血清培地と交換し、それぞれのｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質を含んでいる上澄みは、３日ごとに収集して、０．２２μＭのＭｉｌｌｅｘＧＶ滅菌フィルター（ミリポア）によりろ過した。
【０１６５】
各ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質ごとに、連続回収物はプールされ、プロテインＡ−セファロース・カラムにかけられた。カラムは、１０カラム体積のリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）により洗浄され、結合したタンパク質は０．１ＭのグリシンｐＨ３．６によって溶出させられた。１ｍｌの分画は、中和のための０．１ｍｌの１ＭのトリスｐＨ７．５を含むチューブに収集された。タンパク質を含有する分画は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析されて、プールされた。バッファーは、１０’０００  ＭＷＣＯ  Ｓｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ピアス）を使用した透析によって、ＰＢＳと交換された。次に、ＰＢＳの精製されたタンパク質は、０．２２μＭのＭｉｌｌｅｘ  ＧＶ滅菌フィルター（ミリポア）でろ過されて、等分された。実験用のストックは４℃で保存し、一方で長期保存用のアリコートは液体窒素で急速冷凍されて、−８０℃に保存した。
【０１６６】
（実施例４）
阻害ＥＬＩＳＡによるニコチン特異的結合性の検証
抗体のありうるリンカー特異性を除外するために、遊離したニコチンに対する結合性を、阻害ＥＬＩＳＡによって確認した。したがって、ＥＬＩＳＡプレートは、濃度４μｇ／ｍｌのニコチンーコンジュゲート化ＲＮＡｓｅのリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）溶液により、４℃で一晩被膜した。次に、プレートは洗浄バッファー（ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ）によって洗浄され、３％ＢＳＡの洗浄バッファーにより室温で２時間ブロックされた。次に、プレートは再び洗浄されて、遊離したニコチンの増加する濃度（０．１から１００μＭ）の存在下又は不存在下で、濃度１００ｎｇ／ｍｌの濃度の精製されたｓｃＦｖ−Ｆ０１８、ｓｃＦｖ−Ｆ０６３、ｓｃＦｖ−Ｉ０２２、ｓｃＦｖ−Ｊ００４、ｓｃＦｖ−Ｎ０３８及びｓｃＦｖ−Ｎ０４９と共にインキュベートされた。プレートは、２時間室温でインキュベートされて、次に洗浄バッファーによって十分に洗われた。次に、結合したｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質は、ＨＲＰＯ標識化、Ｆｃγ−特異的、ヤギ抗−ヒト抗体（Jackson ImmunoResearch Laboratories 109-035-098）と共にインキュベートすることによって検出した。洗浄バッファーによる十分な洗浄後、プレートは５〜１０分間、ＯＰＤ溶液（１つのＯＰＤ錠剤、２５ｍｌのＯＰＤバッファー及び８μｌの３０％Ｈ２Ｏ２）によって発現させられ、反応は５％のＨ２ＳＯ４溶液で停止された。次に、プレートは、ＥＬＩＳＡリーダー（Biorad Benchmark）においてＯＤ４５０ｎｍで読みとられた。固定されたニコチンに対する各抗体の結合性は、遊離したニコチンによって、低いマイクロモル濃度の範囲のＩＣ５０値で、効率的に阻害された。
【０１６７】
（実施例５）
ヒト・ニコチン特異ＩｇＧ２の構築、発現及び精製
ｓｃＦｖ−Ｆ０１８、ｓｃＦｖ−Ｆ０６３、ｓｃＦｖ−Ｉ０２２、ｓｃＦｖ−Ｊ００４、ｓｃＦｖ−Ｊ０４２、ｓｃＦｖ−Ｎ０３８及びｓｃＦｖ−Ｎ０４９のセグメントをコードする重鎖及び軽鎖可変領域は、可変領域特異的なトランスファー・プライマ（出願ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０６１５７０の配列番号９２から１０３として、開示されている）を使用するＰＣＲによって増幅された。たとえば、抗体Ｆ０１８の軽鎖可変領域をコードしているＤＮＡは、プライマーＶＬ−Ｓａｃ１−Ｆ４（５’−ＣＡＧ  ＧＣＧ  ＧＣＣ  ＧＡＧ  ＡＴＣ  ＧＡＧ  ＣＴＣ  ＡＣＴ  ＣＡＧ  Ｃ−３’）及びＶＬ−ＥｃｏＲ５−Ｂ１（５’−ＡＣＣ  ＧＣＣ  ＧＡＧ  ＧＡＴ  ＡＴＣ  ＣＡＧ  ＣＴＧ  ＧＧＴ−３’）を使用して増幅された。重鎖可変領域をコードしているＤＮＡは、プライマーＶＨ−ＸｈｏＩ−Ｆ（５’−ＳＡＧ  ＧＴＧ  ＣＡＧ  ＣＴＧ  ＣＴＣ  ＧＡＧ  ＴＣＫ  ＧＧ−３’）及びＶＨ−ＡｐａＩ−Ｂ（５’−ＧＣＣ  ＡＣＴ  ＡＧＴ  ＧＡＣ  ＣＧＡ  ＴＧＧ  ＧＣＣ−３’）によって増幅された。他の軽鎖及び重鎖可変領域をコードしているＤＮＡはそれに応じて増幅された。
【０１６８】
結果として生じるλまたはκ軽鎖可変領域ＰＣＲ産物は、制限酵素ＳａｃＩ及びＥｃｏＲ５によって消化され、アガロースゲル電気泳動によって精製され、それぞれＳａｃＩ−ＥｃｏＲ５消化されたｐＣＭＶ−ＬＣ−λまたはｐＣＭＶ−ＬＣ−κ（出願PCT/EP2007/061570の配列番号１１０及び７１として開示されている）にライゲーションされた。結果として生じるベクターは、シグナルペプチドを含む完全ヒト軽鎖の発現を可能にする、例えばＦ０１８λ軽鎖（配列番号５６）。同様に、重鎖可変領域ＰＣＲ産物は、制限酵素ＸｈｏＩ及びＡｐａＩにより消化され、ゲル精製され、ＸｈｏＩ−ＡｐａＩ消化されたｐＣＭＶ−ＨＣ−γ２（出願PCT/EP2007/061570の配列番号７８として開示されている）にライゲーションされた。結果として生じるベクターは、シグナルペプチドを含む完全ヒトγ２重鎖の発現を可能にする、例えばＦ０１８γ２重鎖（配列番号５５）。
【０１６９】
対応するｐＣＭＶ−ＨＣ−γ２発現コンストラクトによる、各々のｐＣＭＶ−ＬＣ−λ又は−κの発現コンストラクトの共発現は、原則として完全なＩｇＧ２の産生を可能にする。しかしながら、収量を増加させ、抗体のラージスケールでの作成を容易にするために、重鎖及び軽鎖コード領域は、最初に、シングルのＥＢＮＡベース発現ベクター、ｐＣＢ１５（出願PCT/EP2007/061570の配列番号１０４として開示されている）中に組み込まれる。例えば、完全なＩｇＧ２として抗体Ｆ０１８を発現するために、γ２重鎖コード領域は、制限酵素ＡｓｃＩ及びＰａｃＩによる消化によりｐＣＭＶ−Ｆ０１８−ＨＣ−γ２から切除され、結果として生じる１４０３ｂｐ断片はアガロースゲル電気泳動により精製され、次にＡｓｃ１−Ｐａｃ１消化されたｐＣＢ１５にライゲーションされ、ｐＣＢ１５−Ｆ０１８−ＨＣ−γ２を生じる。次に、Ｆ０１８λ軽鎖コード領域は、Ｎｈｅ１及びＰｍｅ１による消化によって、ｐＣＭＶ−Ｆ０１８−ＬＣ−λから切除され、結果として生じた７２３ｂｐ断片はゲル精製され、Ｎｈｅ１−Ｐｍｅ１消化されたｐＣＢ１５−Ｆ０１８−ＨＣ−γ２にライげーションされ、次に完全なＩｇＧ発現ベクターｐＣＢ１５−Ｆ０１８−ＩｇＧ２λを生じる。完全なＩｇＧの発現は、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質についての記載に正確に従って（実施例２）、ＨＥＫ−２９３Ｔの細胞においてされた。
【０１７０】
（実施例６）
完全ヒト・ニコチン特異的ＩｇＧ２の構築、発現及び精製
実施例４に説明したように構築されたｐＣＢ１５発現ベクターは、主にヒトである完全なＩｇＧ２分子の合成を目的とする。しかしながら、完全ヒト抗体と比較して、２つのマイナーな相違が依然としてある。第１に、重鎖または軽鎖シグナルペプチドの配列は、発現ベクターによってコードされて、通常は問題の可変領域の天然シグナルペプチドに対応しない。第２に、重鎖または軽鎖可変領域の側面に位置しているアミノ酸位置は、例えば制限サイトの存在のために、ベクターによって前もって決められる。したがって、完全ヒトｍＡｂを生成するために、これらの相違は、各々の重鎖と軽鎖発現ベクターのために修正されることを必要とする。たとえば、天然シグナルペプチド（配列番号５７）を含む、完全ヒトＦ０１８γ２重鎖を目的とするベクターは以下のように作成された。Ｆ０１８重鎖可変領域は、初めに、プライマーＦ０１８−ＨＣ−ｆｈ−Ｆ１（５’−ＴＴＣ  ＣＴＣ  ＣＴＧ  ＴＴＧ  ＧＴＧ  ＧＣＡ  ＧＣＡ  ＣＣＣ  ＡＧＧ  ＴＧＧ  ＧＴＧ  ＣＴＧ  ＴＣＣ  ＣＡＧ  ＣＴＧ  ＣＡＡ  ＣＴＧ  ＣＡＧ  ＴＣ−３’）及びＦ０１８−ＨＣ−ｆｈ−Ｂ１（５’−ＧＡＣ  ＣＧＡ  ＴＧＧ  ＧＣＣ  ＣＴＴ  ＧＧＴ  ＧＧＡ  ＡＧＣ−３’）を使用して、プラスミドｐＣＭＶ−Ｆ０１８−ＨＣ−γ２からＰＣＲによって増幅された。次に、結果として生じたＰＣＲ産物は、プライマーＦ０１８−ＨＣ−ｆｈ−Ｆ２（５’−ＧＡＧ  ＧＧＣ  ＧＣＧ  ＣＣＡ  ＣＣＡ  ＴＧＡ  ＡＧＣ  ＡＣＣ  ＴＧＴ  ＧＧＴ  ＴＣＴ  ＴＣＣ  ＴＣＣ  ＴＧＴ  ＴＧＧ  ＴＧＧ  ＣＡＧ  Ｃ−３’）及びＦ０１８−ＨＣ−ｆｈ−Ｂ１を使用して、更に増幅された。最終的なＰＣＲ産物は制限酵素Ａｓｃ１及びＡｐａ１によって消化されて、アガロースゲル電気泳動によって精製されて、Ａｓｃ１−Ａｐａ１消化されたｐＣＭＶ−ＨＣ−γ２にライげーションされ、プラスミドｐＣＭＶ−ｆｈＦ０１８−ＨＣ−γ２を生じた。
【０１７１】
同様に、天然シグナルペプチドを含む、完全ヒトＦ０１８λ軽鎖（配列番号５８）  の発現を目的とするベクターは、以下の通りに生成した。第１に、Ｆ０１８軽鎖可変領域は、プライマーＦ０１８−ＬＣ−ｆｈ−Ｆ１（５’−ＣＣＴ  ＣＣＴ  ＣＡＣ  ＣＣＴ  ＣＣＴ  ＣＡＣ  ＴＣＡ  ＣＴＧ  ＣＧＣ  ＣＧＧ  ＧＴＣ  ＣＴＧ  ＧＧＣ  ＣＣＡ  ＧＴＣ  ＴＧＴ  ＧＣＴ  ＣＡＣ−３’）及びＦ０１８−ＬＣ−ｆｈ−Ｂ１（５’−ＧＧＧ  ＣＴＧ  ＡＣＣ  ＴＡＧ  ＣＡＣ  ＧＧＴ  ＣＡＧ  ＣＴＧ  ＧＧＴ  ＧＣＣ−３’）を使用して、ｐＣＭＶ−Ｆ０１８−ＬＣ−λからＰＣＲによって増幅した。平行して、λ軽鎖は、プライマーＦ０１８−ＬＣ−ｆｈ−Ｆ３（５’−ＧＧＣ  ＡＣＣ  ＣＡＧ  ＣＴＧ  ＡＣＣ  ＧＴＧ  ＣＴＡ  ＧＧＴ  ＣＡＧ  ＣＣＣ−３’）及びＴ７（５’−ＴＡＡ  ＴＡＣ  ＧＡＣ  ＴＣＡ  ＣＴＡ  ＴＡＧ  ＧＧ−３’）を使用して増幅した。第２に、結果として生じるＰＣＲ産物は、プライマーＦ０１８−ＬＣ−ｆｈ−Ｆ２（５’−ＧＡＧ  ＧＣＴ  ＡＧＣ  ＧＣＣ  ＡＣＣ  ＡＴＧ  ＧＣＣ  ＧＧＣ  ＴＴＣ  ＣＣＣ  ＣＴＣ  ＣＴＣ  ＣＴＣ  ＡＣＣ  ＣＴＣ  ＣＴＣ  ＡＣＴ  Ｃ−３’）及びＴ７を用いたＰＣＲによってアセンブルされた。最終的なＰＣＲ産物は制限酵素Ｎｈｅ１及びＰｍｅ１によって消化されて、アガロースゲル電気泳動によって精製されて、Ｎｈｅ１−Ｐｍｅ１消化されたｐＣＭＶ−ＬＣ−κにライげーションされ、プラスミドｐＣＭＶ−ｆｈＦ０１８−ＬＣ−λを生じた。
【０１７２】
完全ヒトｍＡｂ  Ｆ０１８の発現を目的とするベクターｐＣＢ１５−ｆｈＦ０１８−ＩｇＧ２λは、実施例４に記載のクローニング・ストラテジーを用いて、ｐＣＢ１５に重鎖と軽鎖コード領域の連続したクローニングによって構築された。完全ヒトｍＡｂｓ  Ｆ０６３、Ｉ０２２、Ｊ００４、Ｊ０４２、Ｎ０３８及びＮ０４９の発現を目的とする発現ベクターは、同様の方法で構築される。
【０１７３】
（実施例７）
平衡透析による親和性の測定
(S)-(-)-ニコチンに対する抗体の親和性は、DispoEquilibriumDialyzer(Harvard Biosciences)を使用する平衡透析によって測定された。透析装置の２つのチャンバーは、メンブレン（１０’０００Ｄａカットオフ）によって分離された。１つのチャンバーは、精製されたｓｃＦｖ−ＦｃまたはＩｇＧ２を、それぞれＰＢＳ／２％のＢＳＡ中に５．４μｇ／ｍｌまたは７．５μｇ／ｍｌの濃度で充填されたが、他のチャンバーは抗体を含まなかった。３から４４４ｎＭの範囲のトリチウム標識化(S)-(-)-ニコチン（アマシャム）が用いられた。平衡透析を４８−７２時間続けた。チャンバーの両側からのアリコートは取り出され、放射能がシンチレーションカウンターで測定された。抗体結合(S)-(-)-ニコチンに対応する放射能は、抗体を含んでいるチャンバーから抗体を含んでいないチャンバーについて測定された放射能を減算することによって算出された。遊離の(S)-(-)-ニコチン濃度は、抗体を含んでいないチャンバーについて測定された放射能から決定された。平衡解離定数（Ｋｄ）は、遊離の(S)-(-)-ニコチン濃度の関数として測定された結合した放射能に対してワンサイト結合モデルをフィットさせたものから導き出した。ニコチン特異的抗体のほとんどは、低いナノモル範囲のＫｄ値で遊離の(S)-(-)-ニコチンを結合した（表４）。ＩｇＧ２抗体は、ｓｃＦｖ−Ｆｃと同等の親和性を有しており、Ｋｄ値は約２倍未満の違いであった。ＩｇＧ２−Ｆ０１８は、解離定数７ｎＭを有しており、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−Ｆ０１８について測定されたものより約２倍低く、他のＩｇＧ２のＫｄより少なくとも４倍低い。(S)-(-)-ニコチンに対するポリクローナル抗体の親和性は、３０−７０ｎＭの範囲にあり、すなわちクローンＦ０１８の親和性よりかなり低いことは注目に値する（Maurer P. et al., 2005, Eur. J. Immunol. 35, 2031-2040)。
2011504893.tif 000005
【０１７４】
(-)-コチニン及びアセチルコリンに対するｍＡｂ  ＩｇＧ２−Ｆ０１８の交差反応性は、上記のように平衡透析チャンバーにおいて、これらの化合物の１０倍連続希釈（１ｎＭから１００μＭ）を、５６ｎＭのトリチウム標識化(S)-(=)-ニコチンと共にインキュベートすることによって測定された（図１）。期待どおり、非標識化(-)-ニコチンは、トリチウム標識化(S)-(-)-ニコチンに容易に置き換えられた。対照的に、ニコチンに構造的に無関係であるがニコチン性アセチルコリン・レセプターの同じ結合性ポケットに結合するアセチルコリン(Celie P.H. et al., 2004, Neuron 41, 907-914)は、４０００倍のモル過剰でさえ(S)-(-)-ニコチン結合性を妨げなかった。同様に、(S)-(-)-ニコチンの主要な代謝産物であり、喫煙者の血液中にニコチンに対して１０−２０倍のモル過剰で存在する(-)-コチニンは、ＩｇＧ２−Ｆ０１８に対する結合を(S)-(-)-ニコチンと効果的に競争しなかった。観察されたＩＣ５０に基づいて、ＩｇＧ２−Ｆ０１８は(-)-コチニンを、(S)-(-)-ニコチンより約１０００倍弱い強さで、結合すると推定することができる。従って、喫煙者の血液における、モル過剰の(-)-コチニンの存在は、ＩｇＧ２−Ｆ０１８の治療的有効性を妨げる可能性は低い。
【０１７５】
次に、ニコチンの(R)-(+)-異性体に対する、ｍＡｂｓ  ＩｇＧ２−Ｆ０１８、−Ｆ０６３、−Ｊ００４、−Ｊ０４２及び−Ｎ０４９  の親和性を決定した。この立体異性体は、植物のタバコに存在する。加えて、それは、喫煙の間、焼却プロセスによって形成されることがあり、中枢神経系において(S)-(-)-ニコチンと質的に類似した活性を有する(Hukkanen J. et al., 2005, Pharmacol. Rev. 57, 79-115)。したがって、各抗体に対するトリチウム標識化(S)-(-)-ニコチンの固定濃度（Ｆ０１８：５６ｎＭ；  Ｆ０６３、Ｊ００４、Ｊ０４２、Ｎ０４９：１１１ｎＭ）の結合性は、非標識化(R)-(+)-ニコチンの増加する濃度の存在化で平衡透析により測定された。平衡解離定数（Ｋｄ）は、(R)-(+)ニコチン濃度の関数として、測定された結合した放射能に対して、ワンサイト競合モデルをフィットさせたものから導きだした。驚くべきことに、(R)-(+)-ニコチンは、各抗体に対する結合性についての(S)-(-)-ニコチンとの競合において、(S)-(-)-ニコチンのＫｄ値より約２から５倍低いＫｄ値を有しており、高効率であった（表５）。
2011504893.tif 000006
【０１７６】
（実施例８）
マウスの脳及び血漿のニコチン分布の評価
５から６匹の雌のＢａｌｂ／ｃマウスのグループは、各組換えヒトＩｇＧ２モノクローナル抗体の０．１から３ｍｇを、ｉ．ｐ．（腹腔内）に注入された。１日後に、脳へのニコチン侵入の阻害は、尾静脈における、トリチウム標識化(S)-(-)-ニコチン（アマシャム）（３７５、７５０または１５００ｎｇ）の静脈内注入によって解析された。マウスはＣＯ２窒息によって５分後に殺され、血液及び脳は収集された。血清及び脳のニコチン濃度は、存在する放射能から算出された。脳ニコチン濃度は、脳の血液含量について修正された（３μｌ／１００ｍｇ）。脳へのニコチン取り込みのパーセント減少は、コントロールＩｇＧを注射されたマウスの脳で見いだされるニコチン濃度と比較して算出された。試験された全てのニコチン特異的抗体について、脳に対するニコチン分布の減少が観察された。大部分の抗体については、マウスにつき０．５ｍｇの量で観察された減少は、概して４０％以上であった。これらの実験条件下で最も強力なｍＡｂはＦ０１８であった。それは６０％より大きい値で、脳へのニコチンの侵入を一貫して減らした（表６及び７）。
2011504893.tif 000007
2011504893.tif 000008
【０１７７】
（実施例９）
相補的軽鎖可変領域（「鎖シャフリング」）を同定するための抗ニコチン抗体Ｆ０１８の重鎖可変領域の使用
本実施例で使用した全てのプライマーの核酸配列は、明細書中に示さないが、Phage Display - A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001, Protocol 9.2に同一の名称で記載されている。
【０１７８】
抗体Ｆ０１８の重鎖可変領域をコードしているＤＮＡ配列は、プライマーＨＳＣＶＨ３５−ＦＬ及びＨＳＣ−Ｆ０１８−Ｂ（５’−ＣＣＴ  ＧＧＣ  ＣＧＧ  ＣＣＴ  ＧＧＣ  ＣＡＣ  ＴＡＧ  ＴＧＡ  ＣＣＧ  ＡＴＧ  ＧＧＣ  ＣＣＴ  ＴＧＧ  ＴＧＧ  ＡＡＧ  Ｃ−３’、配列番号８６）を使用して、ｓｃＦｖ−Ｆ０１８配列を含んでいるＤＮＡ分子から、ＰＣＲによって増幅される（配列番号５９）。ヒトκ軽鎖可変領域をコードしているＤＮＡ配列のライブラリーは、ニコチン−担体コンジュゲートによって免疫化されたヒト被験者由来Ｂ細胞のｃＤＮＡから、４つのセンスプライマーＨＳＣＫ１−Ｆ、ＨＳＣＫ２４−Ｆ、ＨＳＣＫ３−Ｆ及びＨＳＣＫ５−Ｆの等モル混合物、加えて４つのアンチセンスプライマーＨＳＣＪＫ１４ｏ−Ｂ、ＨＳＣＪＫ２ｏ−Ｂ、ＨＳＣＪＫ３ｏ−Ｂ及びＨＳＣＪＫ５ｏ−Ｂの等モル混合物を使用して、ＰＣＲによって増幅される。ヒトλ軽鎖可変領域をコードしているＤＮＡ配列のライブラリーは、ニコチン−担体コンジュゲートによって免疫化されたヒト被験者由来Ｂ細胞のｃＤＮＡから、９つのセンスプライマーＨＳＣＬａｍ１ａ、ＨＳＣＬａｍ１ｂ、ＨＳＣＬａｍ２、ＨＳＣＬａｍ３、ＨＳＣＬａｍ４、ＨＳＣＬａｍ６、ＨＳＣＬａｍ７８、ＨＳＣＬａｍ９及びＨＳＣＬａｍ１０の等モル混合物、加えて３つのアンチセンスプライマーＨＳＣＪＬａｍ１２３６、ＨＳＣＪＬａｍ４及びＨＳＣＪＬａｍ５７の等モル混合物を使用して、ＰＣＲによって増幅される。
【０１７９】
相補的軽鎖可変領域の選択のために、ｓｃＦｖコード領域は、プライマーＲＳＣ−Ｆ及びＲＳＣ−Ｂを使用して、ＶκライブラリーＰＣＲ産物又はＶλライブラリーＰＣＲ産物のどちらかによるＦ０１８  ＶＨ  ＰＣＲ産物のＰＣＲ重なり伸長によってアセンブルされた。結果として生じる〜７５０−８００ｂｐ  ＰＣＲ産物は、ニコチン−特異的抗体Ｆ０１８の５’軽鎖可変領域ライブラリー（κかλ）及び３’重鎖可変領域をコードしており、１８アミノ酸のフレキシブル・リンカーに結合され、２つのＳｆｉＩ制限サイトに隣接している。実施例１に基本的に記載されているように、ｓｃＦｖ−κ及び−λライブラリー断片が等モル比でプールされて、制限エンドヌクレアーゼＳｆｉＩによって消化されて、シンドビス・ベースのｓｃＦｖ細胞表面提示によるスクリーニングのためのベクターｐＤｅｌ−ＳＰ−ＴＭにクローニングされる。あるいは、ＳｆｉＩ消化されたｓｃＦｖライブラリー断片は、ＳｆｉＩ消化されたｐＣｏｍｂ３Ｈにクローニングされる(Rader C, Barbas CF 3rd., 1997, Curr Opin Biotechnol. 8, 503-508)。次に、抗体は発現されられて、記載されている手順に従ってファージディスプレイを使用して、固定化ＲＮＡｓｅ−ニコチン・コンジュゲート対する結合性について選択される(Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001)。
【０１８０】
Sequence Listing
SEQ ID NO:1 HCDR1-F018/F063/J004/J042/N049
GGSI
SEQ ID NO:2 HCDR2-F018/F063/J004/J042/N049
IYSSGST
SEQ ID NO:3 HCDR3-F018
VAWFGDLLSLKGVEL
SEQ ID NO:4 HCDR3-F063/J004/J042/N049
VVWFGDLLSLKGVEL
SEQ ID NO:5 LCDR1-F018/J042
SSNIGSNY
SEQ ID NO:6 LCDR1-F063/N049
SSNIGSKN
SEQ ID NO:7 LCDR1-J004
SSNIGSSY
SEQ ID NO:8 LCDR2-F018/F063/J004/J042/N049
RNN
SEQ ID NO:9 LCDR3-F018
AAWDDSLSAWV
SEQ ID NO:10 LCDR3-F063/J004/J042/N049
AAWDDSLSGWV
SEQ ID NO:11 HCDR1-I022
GGSISSTSYY
SEQ ID NO:12 HCDR2-I022
ISYSGST
SEQ ID NO:13 HCDR3-I022
ARILWFGEYLGDY
SEQ ID NO:14 LCDR1-I022
QSVSNY
SEQ ID NO:15 LCDR2-I022
GAS
SEQ ID NO:16 LCDR3-I022
QQYYSTPWT
SEQ ID NO:17 HCDR1-N038
GYSISSGYY
SEQ ID NO:18 HCDR2-N038
SNHSGST
SEQ ID NO:19 HCDR3-N038
AREAGYSSSWYFDY
SEQ ID NO:20 LCDR1-N038
SSNIGNNY
SEQ ID NO:21 LCDR2-N038
DNN
SEQ ID NO:22 LCDR3-N038
GTWDSSLSAWV
SEQ ID NO:23 VH-F018 (aa7-117 of 117, NA)
TCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTCTAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCACATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGTGGCGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTGAAGGGGGTTGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO:24 VH-F018 (aa7-117 of 117, AA)
SGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTTSVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVAWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:25 VL-F018 (aa5-107 of 110, NA)
ACTCAGCCACCTTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATTATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGCACCCAGCTG
SEQ ID NO:26 VL-F018 (aa5-107 of 110, AA)
TQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSAWVFGGGTQL
SEQ ID NO:27 VH-F063 (aa7-117 of 117, NA)
TCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTCTAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGTGGTGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTGAAGGGGGTCGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO:28 VH-F063-J042 (aa7-117 of 117, AA)
SGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:29 VH-J042 (aa7-117 of 117, NA)
TCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTCTAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGTGGTGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTGAAGGGGGTTGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO:30 VL-F063 (aa5-107 of 110, NA)
ACTCAGCCACCCTCAGTGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCGTCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCTAACATCGGAAGTAAAAATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCAGCGGAGGCACCAAGGTG
SEQ ID NO:31 VL-F063 (aa5-107 of 110, AA)
TQPPSVSGTPGQRVTVSCSGSSSNIGSKNVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFSGGTKV
SEQ ID NO:32 VH-J004 (aa7-117 of 117, NA)
TCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCACACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTCTAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGTGGTGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTGAAGGGGGTTGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO:33 VH-J004 (aa7-117 of 117, AA)
SGPGLVKPSETLSHTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:34 VL-J004 (aa5-107 of 110, NA)
ACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAGTTATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGCACCGAGCTG
SEQ ID NO:35 VL-J004 (aa5-107 of 110, AA)
TQPPSVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSSYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTEL
SEQ ID NO:36 VL-J042 (aa5-107 of 110, NA)
ACCCAGGAGCCCTCAGTGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATTATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGCCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTG
SEQ ID NO:37 VL-J042 (aa5-107 of 110, AA)
TQEPSVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGAPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKL
SEQ ID NO:38 VH-N049 (aa7-117 of 117, NA)
TCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGTTCCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTCTAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCGAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGTGGTGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTGAAGGGGGTTGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO:39 VH-N049 (aa7-117 of 117, AA)
SGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSENQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:40 VL-N049 (aa5-107 of 110, NA)
ACTCAGCCACCCACAGTGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAAAAATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGCACCAAGGTG
SEQ ID NO:41 VL-N049 (aa5-107 of 110, AA)
TQPPTVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSKNVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKV
SEQ ID NO:42 VH-I022 (aa7-121 of 121, NA)
TCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTACTAGTTACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTCTTATAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGACCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGGATACTATGGTTCGGAGAGTACCTAGGGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO:43 VH-I022 (aa7-121 of 121, AA)
SGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLTSVTAADTAVYYCARILWFGEYLGDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:44 VL-I022 (aa5-104 of 107, NA)
ACCCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAACTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATCACTGTCAGCAATATTATAGTACTCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAAGTG
SEQ ID NO:45 VL-I022 (aa5-104 of 107, AA)
TQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYHCQQYYSTPWTFGQGTKV
SEQ ID NO:46 VH-N038 (aa7-121 of 121, NA)
TCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCAGCAGTGGTTACTACTGGGGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTAGCAATCATAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAGGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAATTCTCCCTGAAGGTGAACTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCCGTTTATTACTGTGCGAGAGAGGCGGGGTATAGCAGCAGCTGGTACTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO:47 VH-N038 (aa7-121 of 121, AA)
SGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGSSNHSGSTYYNPSLRSRVTISVDTSKNQFSLKVNSVTAADTAVYYCAREAGYSSSWYFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:48 VL-N038 (aa5-107 of 110, NA)
ACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACATGGGATAGCAGCCTGAGTGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCCAGCTG
SEQ ID NO:49 VL-N038 (aa5-107 of 110, AA)
TQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAWVFGGGTQL
SEQ ID NO:50 VH (aa1-6, preferred sequence for all, AA)
QX1QLQX2, wherein X1 is selected from V and L, and wherein X2 is selected from E and Q
SEQ ID NO:51 VL (aa1-4, preferred sequence for F018, F063, J004, J042, N049, N038, AA)
QSVL
SEQ ID NO:52 VL (aa1-4, preferred sequence for I022, AA)
EIVX1, wherein X1 is selected from L and M
SEQ ID NO:53 VL (aa108-110, preferred sequence for F018, F063, J004, J042, N049, N038, AA)
TVL
SEQ ID NO:54 VL (aa105-107, preferred sequence for I022, AA)
X1IK, wherein A1 is selected from D and E
SEQ ID NO:55 F018 gamma 2 heavy chain (with flanking sequence and signal peptide)
MDWTWRILFLVAAATGAHSQMQLLESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTTSVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVAWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:56 F018 lambda light chain (with flanking sequences and signal peptide)
MAWALLLLTLLTQGTGSWAQSELTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSAWVFGGGTQLDILGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO:57 fully human F018 gamma 2 heavy chain (with flanking sequence and signal peptide)
MKHLWFFLLLVAAPRWVLSQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTTSVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVAWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:58 fully human F018 lambda light chain (with flanking sequences and signal peptide)
MAGFPLLLTLLTHCAGSWAQSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSAWVFGGGTQLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO:59 scFv-F018 Sfi1-fragment (NA)
NGGCCCAGGCGGCCGAGCTCGTGCTGACTCAGCCACCTTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATTATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGCACCCAGCTGACCGTCCTCGGTGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGGGAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTCTAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCACATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGTGGCGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTGAAGGGGGTTGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCGGTCACTAGTGGCCAGGCCGGCCN
SEQ ID NO:60 scFv-F018 Sfi1-fragment (AA)
XAELVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSAWVFGGGTQLTVLGGGSSRSSSSGGGGSGGGGEVQLVQSGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTTSVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVAWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSVTSGQA
SEQ ID NO:61 scFv-F063 Sfi1-fragment (NA)
NGGCCCAGGCGGCCGAGCTCGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCGTCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCTAACATCGGAAGTAAAAATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCAGCGGAGGCACCAAGGTGACCGTCCTAGGTGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGGGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTCTAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGTGGTGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTGAAGGGGGTCGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCGGTCACTAGTGGCCAGGCCGGCCN
SEQ ID NO:62 scFv-F063 Sfi1-fragment (AA)
XAELVLTQPPSVSGTPGQRVTVSCSGSSSNIGSKNVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFSGGTKVTVLGGGSSRSSSSGGGGSGGGGEVQLVESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSVTSGQA
SEQ ID NO:63 scFv-J004 Sfi1-fragment (NA)
NGGCCCAGGCGGCCGGGCTCGTGGTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAGTTATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGCACCGAGCTGACCGTCCTCGGTGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGGGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCACACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTCTAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGTGGTGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTGAAGGGGGTTGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCGGTCACTAGTGGCCAGGCCGGCCN
SEQ ID NO:64 scFv-J004 Sfi1-fragment (AA)
XAGLVVTQPPSVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSSYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTELTVLGGGSSRSSSSGGGGSGGGGEVQLVESGPGLVKPSETLSHTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSVTSGQA
SEQ ID NO:65 scFv-J042 Sfi1-fragment (NA)
NGGCCCAGGCGGCCGAGCACGTGGTGACCCAGGAGCCCTCAGTGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATTATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGCCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGCGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGGCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTCTAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGTGGTGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTGAAGGGGGTTGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCGGTCACTAGTGGCCAGGCCGGCCN
SEQ ID NO:66 scFv-J042 Sfi1-fragment (AA)
XAEHVVTQEPSVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGAPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKLTVLGGGSSRSSSSGGGGSGGGGQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSVTSGQA
SEQ ID NO:67 scFv-N049 Sfi1-fragment (NA)
NGGCCCAGGCGGCCGAGCTCGTGCTGACTCAGCCACCCACAGTGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAAAAATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGCACCAAGGTGACCGTCCTAGGTGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGGCAGATCACCTTGAAGGAGTCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGTTCCATCTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTCTAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCGAGAACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGTGGTGTGGTTCGGGGACTTATTATCGTTGAAGGGGGTTGAATTGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCGGTCACTAGTGGCCAGGCCGGCCN
SEQ ID NO:68 scFv-N049 Sfi1-fragment (AA)
XAELVLTQPPTVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSKNVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKVTVLGGGSSRSSSSGGGGSGGGGQITLKESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSENQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSVTSGQA
SEQ ID NO:69 scFv-I022 Sfi1-fragment (NA)
NGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCACATGACCCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAACTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATCACTGTCAGCAATATTATAGTACTCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAAGTGGATATCAAAGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGGCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTACTAGTTACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTCTTATAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGACCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGGATACTATGGTTCGGAGAGTACCTAGGGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCACTAGTGGCCAGGCCGGCCN
SEQ ID NO:70 scFv-I022 Sfi1-fragment (AA)
XAELHMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYHCQQYYSTPWTFGQGTKVDIKGGSSRSSSSGGGGSGGGGQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLTSVTAADTAVYYCARILWFGEYLGDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVTSGQA
SEQ ID NO:71 scFv-N038 Sfi1-fragment (NA)
NGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCTGGTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACATGGGATAGCAGCCTGAGTGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCCAGCTGACCGTCCTCGGCGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGAGAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCAGCAGTGGTTACTACTGGGGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTAGCAATCATAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAGGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAATTCTCCCTGAAGGTGAACTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCCGTTTATTACTGTGCGAGAGAGGCGGGGTATAGCAGCAGCTGGTACTTTGACTACTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCACTAGTGGCCAGGCCGGCCN
SEQ ID NO:72 scFv-N038 Sfi1-fragment (AA)
XAELLVTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAWVFGGGTQLTVLGGGSSRSSSSGGGGSGGGGEVQLVQSGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGSSNHSGSTYYNPSLRSRVTISVDTSKNQFSLKVNSVTAADTAVYYCAREAGYSSSWYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVTSGQA
SEQ ID NO:73 fully human F018 gamma 2 heavy chain
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTTSVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVAWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:74 fully human F018 lambda light chain
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSAWVFGGGTQLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO:75 fully human F063 and J042 gamma 2 heavy chain
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:76 fully human F063 lambda light chain
QSVLTQPPSVSGTPGQRVTVSCSGSSSNIGSKNVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFSGGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO:77: fully human J004 gamma 2 heavy chain
QLQLQESGPGLVKPSETLSHTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:78 fully human J004 lambda light chain
QSVLTQPPSVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSSYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTELTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO:79 fully human J042 lambda light chain
QSVLTQEPSVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGAPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO:80 fully human N049 gamma 2 heavy chain
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIWGWIRQPPGKGLEWIGSIYSSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSENQFSLRLSSVTAADTAVYYCVVWFGDLLSLKGVELWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:81 fully human N049 lambda light chain
QSVLTQPPTVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSKNVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO:82 fully human I022 gamma 2 heavy chain
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSTSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLTSVTAADTAVYYCARILWFGEYLGDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:83 fully human I022 kappa light chain
EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYHCQQYYSTPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:84 fully human N038 gamma 2 heavy chain
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGSSNHSGSTYYNPSLRSRVTISVDTSKNQFSLKVNSVTAADTAVYYCAREAGYSSSWYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:85 fully human N038 lambda light chain
QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAWVFGGGTQLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO:86 HSC-F018-B
CCTGGCCGGCCTGGCCACTAGTGACCGATGGGCCCTTGGTGGAAGC
【図１】
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【配列表】
2011504893000001.xml
【国際調査報告】
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