(57)【要約】誘導体化され易いオリゴ糖の２つ、複数、大部分の、または各位置において保護基を有するオリゴ糖について説明する。そのようなオリゴ糖のコレクション、ライブラリー、ならびにそのようなオリゴ糖を作製および使用する方法についても説明する。一態様では、本開示物は、二糖またはそれより大きいオリゴ糖を特徴とする。オリゴ糖は、予め選択された配列、例えば、誘導体化の予め選択されたパターンを有する糖構造の配列を有することができる。オリゴ糖は、誘導体化の予め選択された複雑なパターン、例えば、硫酸化もしくはアセチル化の予め選択された複雑なパターンを有するオリゴ糖構造の設計および合成を可能にする。
2011522805.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
二糖単位を含むオリゴ糖であって、ここで、各二糖単位内において硫酸化もしくはアセチル化され易い各位置が、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない第２の保護基のいずれかで保護され、
ここで、各二糖単位の各保護基の正体は、該二糖単位における他の任意の保護基の正体から独立しており、そして
ここで、各二糖単位の正体は、該オリゴ糖内の他の二糖単位の正体から独立している、オリゴ糖。
【請求項２】
前記オリゴ糖は、六糖、八糖、十糖、十二糖などである、請求項１に記載のオリゴ糖。
【請求項３】
例えば、誘導体化される場合、誘導体化の予め選択されたパターンを提供する保護基の予め選択されたパターンを有する、請求項１に記載のオリゴ糖。
【請求項４】
前記オリゴ糖は、予め選択された配列、例えば、誘導体化の予め選択されたパターンを有する配列構造を有する、請求項１に記載のオリゴ糖。
【請求項５】
前記オリゴ糖の２つ以上の位置が、誘導体化を可能にする保護基で保護される場合、誘導体化を可能にする該保護基は、誘導体化しようとする各位置において同じ保護基である、請求項１に記載のオリゴ糖。
【請求項６】
二糖の２つ以上の位置が、誘導体化を可能にしない保護基で保護される場合、誘導体化を可能にしない該保護基は、誘導体化しない各位置において同じ保護基である、請求項１に記載のオリゴ糖。
【請求項７】
二糖単位はウロン酸およびヘキソサミンである、請求項１に記載のオリゴ糖。
【請求項８】
単糖内において硫酸化もしくはアセチル化され易い各位置において保護基を有する、保護された単糖であって、
ここで、各位置における保護基は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない第２の保護基のいずれかであり、そして
ここで、各位置における保護基の正体は、糖構造中の他の任意の位置における保護基から独立している、
保護された単糖。
【請求項９】
前記単糖はウロン酸またはヘキソサミンである、請求項８に記載の単糖。
【請求項１０】
二糖内において誘導体化され易い各位置において保護基を有する、保護された二糖であって、
ここで、各位置における保護基は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない第２の保護基のいずれかであり、そして
例えば、各保護基の正体は、糖構造中の他の任意の位置における保護基から独立している、
保護された二糖。
【請求項１１】
二糖内において誘導体化され易い各位置において保護基を有する、保護された二糖であって、ここで、各位置における保護基は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない第２の保護基のいずれかであり、そして、例えば、ここで、該二糖は、誘導体化される場合、誘導体化の予め選択されたパターンを提供する、保護された二糖。
【請求項１２】
オリゴ糖を作製する方法であって：
第１の保護された糖構造を提供する工程であって、ここで、該糖は、単糖であるかまたはそれより大きく、そしてここで、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化され易い該糖構造における位置は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない保護基のいずれかで保護され、そしてここで、各位置における保護基の正体は、糖構造の他の任意の位置における保護基から独立している、工程；
第２の糖構造を提供する工程であって、ここで、該糖は、単糖であるかまたはそれより大きく、そして場合によりここで、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化され易い該糖構造における位置は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない保護基のいずれかで保護され、そしてここで、各位置における保護基の正体は、糖構造内の誘導体化され易い他の任意の位置における保護基から独立している、工程；ならびに
該第１の糖構造を該第２の糖構造に付着させて、それによって、予め選択された配列のオリゴ糖を作製する工程、
を含む、方法。
【請求項１３】
予め選択された配列のオリゴ糖を作製する方法であって：
誘導体化される場合、誘導体化の第１の予め選択されたパターンを有する糖構造を提供する第１の保護された糖構造を提供する工程であって、ここで、該糖は、単糖であるかまたはそれより大きく、そしてここで、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化され易い該糖構造におけるすべての位置は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない保護基のいずれかで保護される、工程；
誘導体化される場合、誘導体化の第２の予め選択されたパターンを有する糖構造を提供する第２の糖構造を提供する工程であって、ここで、該糖は、単糖であるかまたはそれより大きく、そしてここで、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化され易い該糖構造におけるすべての位置は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない保護基のいずれかで保護される、工程；ならびに
該第１の糖構造を該第２の糖構造に付着させて、それによって、予め選択された配列のオリゴ糖を作製する工程、
を含む、方法。
【請求項１４】
前記予め選択された配列は、誘導体化の予め選択されたパターン、例えば、硫酸化もしくはアセチル化の予め選択されたパターンを有する配列、例えば、誘導体化の第１のパターン、例えば、ウロン酸のＲ１位において誘導体化された硫酸を有する第１の糖構造、および誘導体化の第２のパターン、例えば、ヘキソサミンのＲ６位において硫酸を有する第２の糖構造を有する配列である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記第１の糖部分の２つ以上の位置が、誘導体化を可能にする保護基で保護される場合、誘導体化を可能にする該保護基は、各位置において同じ保護基である、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記第１の糖部分の２つ以上の位置が、誘導体化を可能にしない保護基で保護される場合、誘導体化を可能にしない該保護基は、各位置において同じ保護基である、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記第１および第２の糖構造は、単糖類、二糖類、四糖類、五糖類、六糖類などである、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記第１の構造は二糖であり、そして前記第２の構造は、単糖、二糖、三糖、四糖などから選択される、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１９】
前記予め選択された配列を有するオリゴ糖は、六糖、八糖、十糖、十二糖などである、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項２０】
誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化され易い保護基を脱保護して、保護されていない部分を形成させる工程をさらに含む、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項２１】
１つもしくは複数の前記脱保護された位置において、誘導部分、例えば、硫酸または酢酸を形成させる工程をさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記第１の糖構造は、ウロン酸、ヘキソサミン、またはウロン酸およびヘキソサミンの１つもしくは複数の組み合わせを含む、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項２３】
前記第１の糖構造は、Ｎ−アセチルガラクトサミン、グルクロン酸、またはＮ−アセチルガラクトサミンおよびグルクロン酸の１つもしくは複数の組み合わせを含む、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項２４】
請求項１２または１３に記載の方法によって作製されるオリゴ糖。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、米国特許法第１１９条に基づいて、２００８年５月３０日に出願された米国仮特許出願第６１／０５７，３５４号明細書（その全体が参考として援用される）の優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
ヘパリン、ヘパラン硫酸、コンドロチン（ｃｈｏｎｄｒｏｔｉｎ）硫酸、デルマタン硫酸およびヒアルロン酸のような多糖は、糖構造の複雑かつ異種の混合物である。それらの生物学的特性および治療用途には、この複雑性が影響している。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本開示物は、部分的に、オリゴ糖、例えば、予め選択された配列を有するオリゴ糖、ならびに実質的にオリゴ糖の同種または規定された混合物を提供するために使用することができる糖足場の発見に基づく。
【０００４】
従って、一態様では、本開示物は、二糖またはそれより大きいオリゴ糖を特徴とする。オリゴ糖は、予め選択された配列、例えば、誘導体化の予め選択されたパターンを有する糖構造の配列を有することができる。オリゴ糖は、誘導体化の予め選択された複雑なパターン、例えば、硫酸化もしくはアセチル化の予め選択された複雑なパターンを有するオリゴ糖構造の設計および合成を可能にする。いくつかの実施形態では、オリゴ糖は、異なる２つの保護基のみを有する。実施形態では、２つの保護基は、異なる反応性を有する。１つの保護基は、選択された条件下で、誘導体化基によって、第１の程度で、例えば、実質的に完全に置き換えられる。他の保護基は、同じ条件下で、相対的により少ない誘導体化を生じる、例えば、それは、実質的に誘導体化を生じない。オリゴ糖は、例えば、二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、八糖、九糖、十糖、十二糖、十四糖、十六糖、または十八糖であり得る。（本発明の糖類は、偶数または奇数の単糖サブユニットを有することができる。）
一実施形態では、本開示物は、複数の二糖単位を含むオリゴ糖を特徴とし、ここで、複数における二糖単位内において硫酸化もしくはアセチル化され易い１つ、２つ、複数、大部分のまたは各位置は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない第２の保護基のいずれかで保護され、ここで、各二糖単位の各保護基の正体は、二糖単位における他の任意の保護基の正体から独立しており、そしてここで、各二糖単位の正体は、オリゴ糖内の他の二糖単位の正体から独立している。
【０００５】
一実施形態では、複数のうち、あるいはオリゴ糖における少なくとも１つ、２つ、複数、大部分、少なくとも５０、６０、７０、８０、もしくは９０％、またはすべての二糖単位は、２つの保護基のうちの１つで保護された誘導体化され易い各（もしくは１つの）位置を有する。ある実施形態では、複数のうち、あるいはオリゴ糖における少なくとも１つ、２つ、複数、大部分、少なくとも５０、６０、７０、８０、もしくは９０％、またはすべての二糖単位は、２つの保護基のうちの１つで保護された誘導体化され易い各位置を有し、そしてさらなる実施形態では、複数のうちまたはオリゴ糖における各二糖は、両方の保護基のうちの少なくとも一方を（有する）含む。
【０００６】
一実施形態では、オリゴ糖内の１つもしくは複数の二糖単位は、誘導体化を可能にする保護基で保護され、そして誘導体化を可能にする保護基は、各位置において同じ保護基である。一実施形態では、１つもしくは複数の二糖単位は、誘導体化を可能にしない保護基で保護され、そして誘導体化を可能にしない保護基は、各位置において同じ保護基である。
【０００７】
一実施形態では、オリゴ糖のすべての二糖単位内において、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化され易い各位置は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない保護基のいずれかで保護される。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基で保護される各位置は、同じ保護基で保護され、そして誘導体化を可能にしない保護基で保護される各位置は、同じ保護基で保護される。
【０００８】
一実施形態では、保護基は、例えば、シリルエーテル、エチルエーテル、置換ベンジルエーテルおよびエステルのようなヒドロキシル保護基であり得る。いくつかの実施形態では、保護基は、例えば、カルバミン酸および置換カルバミン酸のようなアミン保護基であり得る。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基および誘導体化を可能にしない保護基がオルトゴナルな保護基である限り、誘導体化を可能にする保護基は、レブリノイル、ベンジル（Ｂｎ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、メトキシベンジル（ＭＰＭ）、アジド、アリルおよびシリルエーテル保護基（例えば、ｔＢＤＭＳまたはｔＢＤＰＳ）から選択され、そして誘導体化を可能にしない保護基は、レブリノイル、ベンジル、ベンゾイル、ＭＰＭ、アジド、アリルおよびシリルエーテル保護基（例えば、ｔＢＤＭＳまたはｔＢＤＰＳ）から選択される。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、ベンゾイルおよび／またはベンゾイルを含有する基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、ベンジル、ベンジルを含有する基および／またはアジドである。もう１つの実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、ベンジルおよび／またはベンジルを含有する基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、ベンゾイル、ベンゾイルを含有する基および／またはアジドである。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、レブリノイルであり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、ベンゾイル、ベンゾイルを含有する基および／またはアジドである。もう１つの実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、ベンゾイルおよび／またはベンゾイルを含有する基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、レブリノイルおよび／またはアジドである。
【０００９】
一実施形態では、１つもしくは複数の二糖単位は、ウロン酸（例えば、イズロン酸および／またはグルクロン酸）ならびにヘキソサミン（例えば、グルコサミンおよびガラクトサミン）である。一実施形態では、１つもしくは複数の二糖単位は、Ｎ−アセチルガラクトサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンならびにウロン酸（例えば、グルクロン酸および／またはイズロン酸）である。
【００１０】
一実施形態では、オリゴ糖は、以下の構造を有する二糖を含む：
【００１１】
【化１】
2011522805.tif 000003
ここで、Ｒ８は、アルキル基、例えば、エチル、メチル、プロピル、ブチル、ペンチルなどの基であり、そしてここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない第２の保護基のいずれかである。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基を有するオリゴ糖内の各位置において、保護基は、誘導体化を可能にする基を保護するための同じ保護基である。一実施形態では、誘導体化を可能にしない保護基を有するオリゴ糖内の各位置において、保護基は、誘導体化を可能にしない同じ保護基である。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基を有するオリゴ糖内の各位置において、保護基は同じ保護基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基を有するオリゴ糖内の各位置において、保護基は同じ保護基である。
【００１２】
一実施形態では、オリゴ糖は、以下を含む、例えば、本質的に以下からなる十糖である：
【００１３】
【化２】
2011522805.tif 000004
ここで、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４のそれぞれは、独立して、ＡまたはＢであり、そしてここで、
Ａは
【００１４】
【化３】
2011522805.tif 000005
であり、そしてＢは
【００１５】
【化４】
2011522805.tif 000006
であり、
そしてここで、ＡまたはＢのそれぞれの箇所についてＲ８は、アルキル基、例えば、エチル、メチル、プロピル、ブチル、ペンチルなどの基であり、そしてここで、ＡまたはＢのそれぞれの箇所についてＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない第２の保護基のいずれかから選択される保護基である。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基を有するオリゴ糖内の各位置において、保護基は同じ保護基である。一実施形態では、誘導体化を可能にしない保護基を有する十糖内の各位置において、保護基は同じ保護基である。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基を有する十糖内の各位置において、保護基は同じ保護基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基を有する十糖内の各位置において、保護基は同じ保護基である。実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のうちの１つもしくはそれ以上の選択は、第１の基Ａと第２の基Ａとの間、ＡとＢとの間、または第１のＢと第２のＢとの間で異なり得る。
【００１６】
一実施形態では、オリゴ糖は、以下を含む、例えば、本質的に以下からなる十糖である：
【００１７】
【化５】
2011522805.tif 000007
ここで、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７およびＸ８のそれぞれは、独立してＣまたはＤであり、そしてここで、
Ｃは：
【００１８】
【化６】
2011522805.tif 000008
であり、そしてＤは：
【００１９】
【化７】
2011522805.tif 000009
であり、
そしてここで、ＣまたはＤのそれぞれの箇所についてＲ８は、アルキル基、例えば、エチル、メチル、プロピル、ブチル、ペンチルなどの基であり、そしてここで、ＣまたはＤのそれぞれの箇所についてＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない第２の保護基のいずれかから選択される保護基である。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基を有するオリゴ糖内の各位置において、保護基は同じ保護基である。一実施形態では、誘導体化を可能にしない保護基を有する十糖内の各位置において、保護基は同じ保護基である。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基を有する十糖内の各位置において、保護基は同じ保護基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基を有する十糖内の各位置において、保護基は同じ保護基である。実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のうちの１つもしくはそれ以上の選択は、第１の基Ｃと第２の基Ｃとの間、ＣとＤとの間、または第１のＤと第２のＤとの間で異なり得る。
【００２０】
本開示物はまた、オリゴ糖、例えば、上記のオリゴ糖を特徴とし、ここで、誘導体化を可能にする保護基を有する上記の任意の位置において、硫酸基が存在し、そして残りの位置は、誘導体化を可能にしない保護基を有する。
【００２１】
本開示物はまた、オリゴ糖、例えば、上記のオリゴ糖を特徴とし、ここで、誘導体化を可能にしない保護基を有する上記の任意の位置において、１つ以上の水素が存在し、そして残りの位置は、誘導体化を可能にする保護基を有する。
【００２２】
一態様では、本開示物は、誘導体化され易い二糖の２つ、複数、大部分の、または各位置において保護基を有する二糖を特徴とする。任意の所定の位置における保護基は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない第２の保護基であり得る。本明細書において他で記載のように、これらは、予め選択された配列および／あるいは誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化のレベルまたはパターンを有するオリゴ糖、またはそのライブラリーを提供するのに有用である。
【００２３】
一実施形態では、開示物は、二糖内の硫酸化もしくはアセチル化され易い各位置において保護基を有する保護された二糖を特徴とし、ここで、各位置における保護基は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない第２の保護基のいずれかであり、そして例えば、各保護基の正体は、糖構造の他の任意の位置における保護基の正体から独立している。
【００２４】
一実施形態では、二糖は、例えば、誘導体化される場合、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化の予め選択されたパターンを提供する保護基の予め選択されたパターンを有する。
【００２５】
ある実施形態では、誘導体化され易い各位置は、２つの保護基のうちの１つで保護され、そして実施形態では、各基の少なくとも１つが、二糖に存在する。
【００２６】
一実施形態では、保護基は、例えば、シリルエーテル、エチルエーテル、置換ベンジルエーテルおよびエステルのようなヒドロキシル保護基であり得る。いくつかの実施形態では、保護基は、例えば、カルバミン酸および置換カルバミン酸のようなアミン保護基であり得る。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基および誘導体化を可能にしない保護基がオルトゴナルな保護基である限り、誘導体化を可能にする保護基は、レブリノイル、ベンジル（Ｂｎ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、メトキシベンジル（ＭＰＭ）、アジド、アリルおよびシリルエーテル保護基（例えば、ｔＢＤＭＳまたはｔＢＤＰＳ）から選択され、そして誘導体化を可能にしない保護基は、レブリノイル、ベンジル、ベンゾイル、ＭＰＭ、アジド、アリルおよびシリルエーテル保護基（例えば、ｔＢＤＭＳまたはｔＢＤＰＳ）から選択される。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、ベンゾイルおよび／またはベンゾイルを含有する基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、ベンジル、ベンジルを含有する基および／またはアジドである。もう１つの実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、ベンジルおよび／またはベンジルを含有する基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、ベンゾイル、ベンゾイルを含有する基および／またはアジドである。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、レブリノイルであり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、ベンゾイル、ベンゾイルを含有する基および／またはアジドである。もう１つの実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、ベンゾイルおよび／またはベンゾイルを含有する基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、レブリノイルおよび／またはアジドである。
【００２７】
一実施形態では、二糖は、ウロン酸（例えば、イズロン酸またはグルクロン酸）ならびにヘキソサミン（例えば、グルコサミン、ガラクトサミン）である。一実施形態では、二糖は、Ｎ−アセチルガラクトサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンならびにウロン酸（例えば、グルクロン酸および／またはイズロン酸）である。
【００２８】
一実施形態では、もう１つの糖構造との連結を形成することができる二糖内における少なくとも１つの位置が、保護基で保護される。二糖をもう１つの糖構造に付着させることに関係する二糖内の位置に存在することができる保護基の例には、例えば、エーテル、置換エーテル、シリルエーテル、アセタール、エステルなど由来の任意のオルトゴナルなヒドロキシル保護基であり得る。例示的な保護基として、レブリノイル、ベンゾイル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ｔＢＤＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ｔＢＤＰＳ）、２−ナフチル（２−ＮＡＰ）および９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
一実施形態では、二糖は、以下の構造Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶのうちの１つを有する：
【００３０】
【化８】
2011522805.tif 000010
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化を可能にしない第２の保護基のいずれかから選択される保護基であり、ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７のいずれかにおける保護基の正体は、他の位置のいずれかにおける保護基の正体から独立しており；そしてここで、Ｒ８は、水素またはアルキル基、例えば、エチル、メチル、プロピル、ブチル、ペンチルなどである。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、ベンジル、ベンジルを含有する基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、ベンゾイル、ベンゾイルを含有する基および／またはアジドである。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、ベンゾイルおよび／またはベンゾイルを含有する基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、ベンジル、ベンジルを含有する基および／またはアジドである。
【００３１】
一実施形態では、Ｒ３は、単糖をもう１つの糖構造に付着させることに関係する単糖内の位置に存在することができる保護基、例えば、上記の保護基、例えば、レブリノイルである。
【００３２】
一実施形態では、Ｒ４は、単糖をもう１つの糖構造に付着させることに関係する単糖内の位置に存在することができる保護基、例えば、上記の保護基、例えば、ベンゾイルまたは２Ｎａｐである。
【００３３】
一実施形態では、二糖は、表Ｉ、表ＩＩ、図６、図７、図１４または図１５に記載の二糖類のいずれか１つである。
【００３４】
二糖類は、より大きなオリゴ糖、例えば、三糖、四糖、五糖、六糖、八糖、十糖、十二糖、十四糖、十六糖、または十八糖に組み入れることができる。
【００３５】
もう１つの態様では、本開示物は、単糖内において誘導体化され易い２つ、複数、大部分の、または各位置において保護基を有する単糖を特徴とする。任意の所定の位置における保護基は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない第２の保護基であり得る。位置におけるそれぞれの各保護基の正体は、他の任意の位置における保護基から独立している。本明細書において他で記載のように、これらは、予め選択された配列および／あるいは誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化のレベルまたはパターンを有する二糖類もしくはより大きなオリゴ糖、またはそのライブラリーを提供するのに有用である。
【００３６】
ある実施形態では、誘導体化され易い各位置は、２つの保護基のうちの１つで保護され、そしてある実施形態では、各基の少なくとも１つが存在する。
【００３７】
一実施形態では、開示物は、硫酸化もしくはアセチル化され易い単糖内の各位置において保護基を有する保護された単糖を特徴とし、ここで、各位置における保護基は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない第２の保護基のいずれかであり、そして誘導体化され易い各位置における保護基の正体は、単糖構造において誘導体化され易い他の任意の位置における保護基の正体から独立している。
【００３８】
一実施形態では、保護基は、例えば、シリルエーテル、エチルエーテル、置換ベンジルエーテルおよびエステルのようなヒドロキシル保護基であり得る。いくつかの実施形態では、保護基は、例えば、カルバミン酸および置換カルバミン酸のようなアミン保護基であり得る。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基および誘導体化を可能にしない保護基がオルトゴナルな保護基である限り、誘導体化を可能にする保護基は、レブリノイル、ベンジル（Ｂｎ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、メトキシベンジル（ＭＰＭ）、アジド、アリルおよびシリルエーテル保護基（例えば、ｔＢＤＭＳまたはｔＢＤＰＳ）から選択され、そして誘導体化を可能にしない保護基は、レブリノイル、ベンジル、ベンゾイル、ＭＰＭ、アジド、アリルおよびシリルエーテル保護基（例えば、ｔＢＤＭＳまたはｔＢＤＰＳ）から選択される。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、ベンゾイルおよび／またはベンゾイルを含有する基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、ベンジル、ベンジルを含有する基および／またはアジドである。もう１つの実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、ベンジルおよび／またはベンジルを含有する基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、ベンゾイル、ベンゾイルを含有する基および／またはアジドである。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、レブリノイルであり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、ベンゾイル、ベンゾイルを含有する基および／またはアジドである。もう１つの実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、ベンゾイルおよび／またはベンゾイルを含有する基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、レブリノイルおよび／またはアジドである。
【００３９】
一実施形態では、単糖は、ウロン酸（例えば、イズロン酸および／またはグルクロン酸）あるいはヘキソサミン（例えば、グルコサミン、ガラクトサミン）である。一実施形態では、単糖は、Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｎ−アセチルグルコサミンあるいはウロン酸（例えば、グルクロン酸および／またはイズロン酸）である。
【００４０】
一実施形態では、もう１つの糖構造との連結を形成することができる単糖内における少なくとも１つの位置が、保護基で保護している。単糖をもう１つの糖構造に付着させることに関係する単糖内の位置に存在することができる保護基の例には、例えば、エーテル、置換エーテル、シリルエーテル、アセタール、エステルなど由来の任意のオルトゴナルなヒドロキシル保護基であり得る。例示的な保護基として、レブリノイル、ベンゾイル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ｔＢＤＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ｔＢＤＰＳ）、２−ナフタレンスルホニルＬ−アスパルチル−（２−フェネチル）アミド（２−ＮＡＰ）およびＦｍｏｃが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４１】
一実施形態では、単糖は、以下の構造のうちの１つを有する：
【００４２】
【化９】
2011522805.tif 000011
ここで、Ｒ８は、水素またはアルキル基、例えば、エチル、メチル、プロピル、ブチル、ペンチルなどであり；そしてここで、Ｒ１およびＲ２は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化を可能にしない第２の保護基のいずれかから選択される保護基であり、ここで、Ｒ１およびＲ２における保護基の正体は、他の位置における保護基から独立している。いくつかの実施形態では、Ｒ１およびＲ２は両方とも、誘導体化を可能にする保護基を有するか；Ｒ１およびＲ２は両方とも、誘導体化を可能にしない保護基を有するか、Ｒ１は、誘導体化を可能にする保護基を有し、Ｒ２は誘導体化を可能にしない保護基を有するか；またはＲ２は誘導体化を可能にする保護基を有し、そしてＲ１は誘導体化を可能にしない保護基を有する。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基はベンジルであり、そして誘導体化を可能にしない保護基はベンゾイルである。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基はベンゾイルであり、そして誘導体化を可能にしない保護基はベンジルである。
【００４３】
一実施形態では、Ｒ９は、単糖をもう１つの糖構造に付着させることができる単糖内の位置に存在することができる保護基、例えば、上記の保護基、例えば、レブリノイルまたはｔＢＤＭＳである。
【００４４】
一実施形態では、単糖は、以下の構造のうちの１つを有する：
【００４５】
【化１０】
2011522805.tif 000012
ここで、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化を可能にしない第２の保護基のいずれかから選択される保護基であり、ここで、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７における保護基の正体は、単糖の他の位置における保護基の正体から独立している。いくつかの実施形態では、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７はすべて、誘導体化を可能にする保護基を有するか；Ｒ５、Ｒ６およびＲ７はすべて誘導体化を可能にしない保護基を有するか、Ｒ５およびＲ６は誘導体化を可能にする保護基を有し、そしてＲ７は誘導体化を可能にしない保護基を有するか；Ｒ５は誘導体化を可能にする保護基を有し、そしてＲ６およびＲ７は誘導体化を可能にしない保護基を有するか；Ｒ５およびＲ７は誘導体化を可能にする保護基を有し、そしてＲ６は誘導体化を可能にしない保護基を有するか；Ｒ５およびＲ６は誘導体化を可能にしない保護基を有し、そしてＲ７は誘導体化を可能にする保護基を有するか；Ｒ５は誘導体化を可能にしない保護基を有し、そしてＲ６およびＲ７は誘導体化を可能にする保護基を有するか；Ｒ５およびＲ７は誘導体化を可能にしない保護基を有し、そしてＲ６は誘導体化を可能にする保護基を有する。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、ベンジルおよび／またはベンジルを含有する基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、ベンゾイル、ベンゾイルを含有する基および／またはアジドである。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、ベンゾイルおよび／またはベンジルを含有する基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、ベンジル、ベンジルを含有する基および／またはアジドである。
【００４６】
一実施形態では、Ｒ１０は、単糖をもう１つの糖構造に付着させることに関係する単糖内の位置に存在することができる保護基、例えば、上記の保護基、例えば、ベンゾイルまたは２Ｎａｐである。
【００４７】
一実施形態では、単糖は、図１〜５、１２または１３に示す単糖である。
【００４８】
もう１つの態様では、開示物は、二糖またはそれより大きいオリゴ糖、例えば、誘導体化の予め選択されたパターンを有する糖構造の配列を作製する方法を特徴とする。本方法の実施形態は、誘導体化の予め選択された複雑なパターン、例えば、硫酸化もしくはアセチル化の予め選択された複雑なパターンを有するオリゴ糖構造の設計および合成を可能にする。それぞれ、保護基の適切なパターンを有する糖構造またはサブユニットは、共に接続されて、誘導体化の予め選択されたパターンを有するより大きな糖構造の生成を可能にする。次いで、単一の誘導体化反応により、誘導体化の予め選択されたパターンを提供することができる。本方法の実施形態は、異なる２つの保護基のみを使用して、これを達成する。ある実施形態では、２つの保護基のそれぞれは、異なる反応性を有する。１つの保護基は、選択された条件下で、誘導体化基によって、第１の程度で、例えば、実質的に完全に置き換えられる。他の保護基は、同じ条件下で、相対的により少ない誘導体化を生じる、例えば、それは、実質的に誘導体化を生じない。実施形態は、異なるサブユニットまたは糖構造のライブラリーに依存する。ライブラリーは、２つの保護基の多様なパターンを有する複数のオリゴ糖構造を提供する。それ故、誘導体化時に、誘導体化の選択されたパターンを付与することができる保護基のパターンを有する第１のライブラリーメンバーを選択することができる。上記で言及したように、第１のライブラリーメンバーは、保護基の選択されたパターンを有する１つ以上の以後のライブラリーメンバーに接続され、そして保護基のパターンを提供するために選択される。上記で言及したように、単一の反応を使用して、より大きな糖全体を誘導体化し、誘導体化の予め選択されたパターンを有するオリゴ糖を提供することができる。オリゴ糖は、例えば、二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、八糖、十糖、十二糖、十四糖、十六糖、または十八糖であり得る。
【００４９】
本方法は以下の工程を含む：
第１の保護された糖構造を提供する工程であって、ここで、糖は、単糖であるかまたはそれより大きく、そしてここで、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化され易い糖構造における１つ、２つ、複数の、大部分のもしくはすべての位置は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない保護基のいずれかで保護され、そしてここで、各位置における保護基の正体は、糖構造の他の任意の位置における保護基から独立している工程；
第２の糖構造を提供する工程であって、ここで、糖は、単糖であるかまたはそれより大きく、そして場合により、ここで、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化され易い糖構造における１つ、２つ、複数の、大部分のもしくはすべての位置は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない保護基のいずれかで保護され、そしてここで、各位置における保護基の正体は、糖構造の他の任意の位置における保護基から独立している工程；ならびに
第１の糖構造を第２の糖構造に付着させて、それによって、予め選択された配列のオリゴ糖を作製する工程。
【００５０】
一実施形態では、少なくとも１つ、２つ、複数、大部分、少なくとも５０、６０、７０、８０、もしくは９０％、またはすべての保護された糖単位は、２つの保護基のうちの１つで保護された誘導体化され易い各（もしくは１つの）位置を有する。ある実施形態では、少なくとも１つ、２つ、複数、大部分、少なくとも５０、６０、７０、８０、もしくは９０％、またはすべての保護された糖単位は、２つの保護基のうちの１つで保護された誘導体化され易い各位置を有し、そしてさらなる実施形態では、各保護された糖（ｏｆ  ｔｈｅ）は、両方の保護基のうちの少なくとも一方を含む。
【００５１】
一実施形態では、本方法は、誘導体化の予め選択されたパターン、例えば、硫酸化もしくはアセチル化の予め選択されたパターンを有する配列、例えば、誘導体化の第１のパターン、例えば、ウロン酸のＲ１位において誘導体化された硫酸を有する第１の糖構造、および誘導体化の第２のパターン、例えば、ヘキソサミンのＲ６位において硫酸を有する第２の糖構造を有する配列を伴うオリゴ糖を含む。本方法は以下の工程を含む：
誘導体化される場合、誘導体化の第１の予め選択されたパターンを有する糖構造を提供する第１の保護された糖構造を提供する工程であって、ここで、糖は、単糖であるかまたはそれより大きく、そしてここで、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化され易い糖構造におけるすべての位置は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない保護基のいずれかで保護される工程；
誘導体化される場合、誘導体化の第２の予め選択されたパターンを有する糖構造を提供する第２の糖構造を提供する工程であって、ここで、糖は、単糖であるかまたはそれより大きく、そしてここで、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化され易い糖構造におけるすべての位置は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない保護基のいずれかで保護される工程；ならびに
第１の糖構造を第２の糖構造に付着させて、それによって、誘導体化の予め選択されたパターンを有する配列を伴うオリゴ糖を作製する工程。
【００５２】
一実施形態では、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化され易い第２の糖構造における位置は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない保護基のいずれかで保護され、そして、誘導体化され易い各位置における保護基の正体は、糖構造における誘導体化され易い他の任意の位置における保護基の正体から独立している。
【００５３】
一実施形態では、第１の糖構造における２つ以上の位置が、誘導体化を可能にする保護基で保護される場合、誘導体化を可能にする保護基は、各位置において同じ保護基であり、および／または第１の糖構造における２つ以上の位置が誘導体化を可能にしない保護基で保護される場合、誘導体化を可能にしない保護基は、各位置において同じ保護基である。
【００５４】
一実施形態では、第２の糖構造における２つ以上の位置が、誘導体化を可能にする保護基で保護される場合、誘導体化を可能にする保護基は、各位置において同じ保護基であり、および／または第２の糖構造における２つ以上の位置が誘導体化を可能にしない保護基で保護される場合、誘導体化を可能にしない保護基は、各位置において同じ保護基である。
【００５５】
一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基で保護されたオリゴ糖内のすべての位置において、保護基は、各位置において同じ保護基である。一実施形態では、誘導体化を可能にしない保護基で保護されたオリゴ糖内のすべての位置において、保護基は、各位置において同じ保護基である。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基で保護されたオリゴ糖内のすべての位置において、保護基は、各位置において同じ保護基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基で保護されたオリゴ糖内の各位置において、保護基は、各位置において同じ保護基である。
【００５６】
一実施形態では、保護基は、例えば、シリルエーテル、エチルエーテル、置換ベンジルエーテルおよびエステルのようなヒドロキシル保護基であり得る。いくつかの実施形態では、保護基は、例えば、カルバミン酸および置換カルバミン酸のようなアミン保護基であり得る。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基および誘導体化を可能にしない保護基がオルトゴナルな保護基である限り、誘導体化を可能にする保護基は、レブリノイル、ベンジル（Ｂｎ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、メトキシベンジル（ＭＰＭ）、アジド、アリルおよびシリルエーテル保護基（例えば、ｔＢＤＭＳまたはｔＢＤＰＳ）から選択され、そして誘導体化を可能にしない保護基は、レブリノイル、ベンジル、ベンゾイル、ＭＰＭ、アジド、アリルおよびシリルエーテル保護基（例えば、ｔＢＤＭＳまたはｔＢＤＰＳ）から選択される。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、ベンゾイルおよび／またはベンゾイルを含有する基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、ベンジル、ベンジルを含有する基および／またはアジドである。もう１つの実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、ベンジルおよび／またはベンジルを含有する基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、ベンゾイル、ベンゾイルを含有する基および／またはアジドである。一実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、レブリノイルであり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、ベンゾイル、ベンゾイルを含有する基および／またはアジドである。もう１つの実施形態では、誘導体化を可能にする保護基は、ベンゾイルおよび／またはベンゾイルを含有する基であり、そして誘導体化を可能にしない保護基は、レブリノイルおよび／またはアジドである。
【００５７】
一実施形態では、本方法は、第３の糖構造を提供する工程であって、ここで、第３の糖構造は、単糖またはそれより大きい；ならびに第３の糖構造を、第１および第２の糖構造から形成される糖構造に付着させる工程をさらに含む。一実施形態では、第３の糖構造は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化され易い糖構造のすべての位置において保護基を有し、ここで、保護基は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない保護基のいずれかであり、そして誘導体化され易い各位置における保護基の正体は、第１、第２もしくは第３の糖構造の誘導体化され易い他の任意の位置における保護基の正体から独立している。一実施形態では、本方法は、第４、第５、第６、第７などの糖構造を提供および付着させて、オリゴ糖を作製する工程をさらに含むことができる。第４、第５、第６、第７などの糖構造のいずれも、例えば、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化され易いすべての位置において、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない保護基のいずれかで保護された糖構造であり得、そして誘導体化され易い各位置における保護基の正体は、他の糖構造のいずれかにおける誘導体化され易い他の任意の位置における保護基の正体から独立している。
【００５８】
一実施形態では、糖構造（例えば、第１、第２、第３、第４などの糖構造）は、単糖、例えば、本明細書に記載の単糖、二糖、例えば、本明細書に記載の二糖、四糖、五糖、六糖、八糖、または十糖である。一実施形態では、第１の糖構造は、二糖、例えば、本明細書に記載の二糖であり、そして第２の糖構造は、単糖、二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖、および八糖から選択される。
【００５９】
一実施形態では、本方法は、第１の二糖構造、例えば、本明細書に記載の二糖を提供する工程；第２の二糖構造、例えば、本明細書に記載の二糖構造を第１の二糖構造に付着させて、第１の四糖構造を提供する工程；第３の二糖構造、例えば、本明細書に記載の二糖を提供する工程；第４の二糖構造、例えば、本明細書に記載の二糖構造を第３の二糖構造に付着させて、第２の四糖構造を提供する工程；第１の四糖構造を第２の四糖構造に付着させて、八糖構造を提供する工程；および第５の二糖構造、例えば、本明細書に記載の二糖構造を八糖構造に付着させ、それによって、十糖構造を提供する工程を含む。
【００６０】
一実施形態では、第１の糖構造を第２の糖構造に付着させる第１の糖構造内における少なくとも１つの位置が、保護基で保護される。一実施形態では、第２の糖構造を第１の糖構造に付着させる第２の糖構造内における少なくとも１つの位置が、保護基で保護される。一実施形態では、第３の糖構造が第２の糖構造に付着される場合、第２の糖構造は、第１の糖構造に付着する第２の糖構造内の位置において保護基および第３の糖構造に付着する第２の糖構造内の位置において保護基を有する。第２の糖構造が第３の糖構造に付着される場合、第３の糖構造は、好ましくは、第２の糖構造に付着する第３の糖構造内の位置において保護基を有する。一実施形態では、第４の糖構造が第３の糖構造に付着される場合、第３の糖構造は、第２の糖構造に付着する第３の糖構造内の位置において保護基および第４の糖構造に付着する第３の糖構造内の位置において保護基を有する。第３の糖構造が第４の糖構造に付着される場合、第４の糖構造は、好ましくは、第３の糖構造に付着する第４の糖構造内の位置において保護基を有する。好ましくは、記載の方法において使用されるすべての糖構造は、１つの糖構造をもう１つの糖構造に付着させる糖構造のすべての位置において保護基を有する。１つの糖構造をもう１つのものに付着させることに関係する糖構造内の位置に存在することができる保護基の例には、例えば、エーテル、置換エーテル、シリルエーテル、アセタール、エステルなど由来の任意のオルトゴナルなヒドロキシル保護基であり得る。例示的な保護基として、レブリノイル、ベンゾイル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ｔＢＤＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ｔＢＤＰＳ）、２−ナフタレンスルホニルＬ−アスパルチル−（２−フェネチル）アミド（２−ＮＡＰ）およびＦｍｏｃが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６１】
一実施形態では、第１の糖構造は、ウロン酸（例えば、グルクロン酸またはイズロン酸）、ヘキソサミン（例えば、グルコサミン）、あるいはウロン酸（例えば、グルクロン酸またはイズロン酸）、およびヘキソサミン（例えば、グルコサミン）の１つもしくは複数の組み合わせを含む。一実施形態では、オリゴ糖は、ウロン酸（例えば、グルクロン酸および／またはイズロン酸）ならびにヘキソサミン（例えば、グルコサミン）を含み、そして誘導体化され易い位置は、ヘパリンまたはヘパラン硫酸において硫酸化もしくはアセチル化され易い位置である。もう１つの実施形態では、第１の糖構造は、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ウロン酸（例えば、グルクロン酸またはイズロン酸）、あるいはＮ−アセチルガラクトサミンおよびウロン酸（例えば、グルクロン酸またはイズロン酸）の１つもしくは複数の組み合わせを含む。一実施形態では、オリゴ糖は、Ｎ−アセチルガラクトサミンおよびウロン酸（例えば、グルクロン酸またはイズロン酸）を含み、そして誘導体化され易い位置は、コンドロチン（ｃｈｏｎｄｒｏｔｉｎ）硫酸において硫酸化もしくはアセチル化され易い位置である。一実施形態では、オリゴ糖は、Ｎ−アセチルガラクトサミンおよびウロン酸（例えば、グルクロン酸またはイズロン酸）を含み、そして誘導体化され易い位置は、デルマタン硫酸において硫酸化もしくはアセチル化され易い位置である。一実施形態では、オリゴ糖は、Ｎ−アセチルグルコサミンおよびウロン酸（例えば、グルクロン酸またはイズロン酸）を含み、そして誘導体化され易い位置は、ヒアルロン酸において硫酸化もしくはアセチル化され易い位置である。
【００６２】
一実施形態では、糖構造、例えば、第１、第２、第３、第４などの糖構造は、単糖、二糖または本明細書に記載の二糖より大きなオリゴ糖である。
【００６３】
一実施形態では、本方法は、１つの糖構造をもう１つのものに付着させて、保護されていない１つもしくは複数の部分を形成させる１つもしくは複数の糖構造内における１つ以上の位置を脱保護させる工程をさらに含む。次いで、１つもしくは複数の脱保護部分を使用して、１つの糖構造をもう１つのものに付着させることができる。一実施形態では、触媒、例えば、ＴＭＳＯＴｆまたはＴＥＳＯＴｆを含む反応混合物を使用して、１つの糖構造、例えば、第１の糖構造は、もう１つの糖構造、例えば、第２の糖構造に付着される。
【００６４】
一実施形態では、作製されるオリゴ糖は、本明細書に記載のオリゴ糖である。
【００６５】
ある実施形態では、方法を反復して、オリゴ糖のコレクションまたはライブラリーを形成する。
【００６６】
一実施形態では、本方法は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする保護基を脱保護して、１つもしくは複数の保護されていない部分を形成する工程をさらに含む。本方法は、１つもしくは複数の脱保護された位置において、誘導部分、例えば、硫酸または酢酸を形成させる工程をさらに含むことができる。
【００６７】
一実施形態では、本方法は、誘導体化され難い保護基を脱保護して、１つもしくは複数の保護されていない部分を形成させる工程を含む。本方法は、誘導体化され難い１つもしくは複数の保護されていない位置において水素を付加する工程をさらに含むことができる。
【００６８】
ある実施形態では、方法を反復して、予め選択された配列を有するオリゴ糖のコレクションまたはライブラリーを形成する。
【００６９】
一態様では、本開示物は、以下の工程を含む、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化の規定されたレベルまたはパターンを有するオリゴ糖構造を作製する方法を特徴とする：
オリゴ糖構造、例えば、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化され易いオリゴ糖構造において、例えば、本明細書に記載のような誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする保護基、または誘導体化を可能にしない保護基のいずれかで保護された位置を有するオリゴ糖構造を提供する工程；
オリゴ糖において保護された位置のあるクラスを脱保護する工程、例えば、脱保護された部分を形成させるために、誘導体化を可能にする保護基を有するオリゴ糖における位置を脱保護する工程、ならびに脱保護された位置において、誘導体化された部分、例えば、硫酸部分および酢酸部分を形成させる工程。
【００７０】
一実施形態では、本方法は、以下の工程を含む：
オリゴ糖において保護された位置の以後の第２のクラスを脱保護する工程、例えば、脱保護された部分を形成させるために、誘導体化を可能にしない保護基を有するオリゴ糖における位置を脱保護する工程、ならびに脱保護された第２のクラスにおいて、水素部分を形成させる工程。
【００７１】
一実施形態では、方法を反復して、置換基、例えば、硫酸化、アセチル化のパターンの予め選択されたレベルを有するオリゴ糖のライブラリーを形成する。
【００７２】
脱保護は、時々、個別に言及するが、脱保護および誘導体化は、連続的または同時に生じ得ることが理解される。加えて、誘導体化された部分および水素部分を形成させることは、連続的または同時に生じ得ることが理解される。
【００７３】
一実施形態では、オリゴ糖は、本明細書に記載のオリゴ糖である。
【００７４】
一態様では、本開示物は、多様な保護基を有する二糖（多様に保護された糖）を特徴とする。二糖類は、より大きな構造、例えば、三糖、四糖、五糖、六糖、八糖、十糖、十二糖、十四糖、十六糖、または十八糖に組み入れることができる。これらは、例えば、予め選択された配列および／あるいは誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化のレベルまたはパターンを有するオリゴ糖、またはそのライブラリーを提供するのに有用である。
【００７５】
一実施形態では、二糖は、以下の構造Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶのうちの１つを有する：
【００７６】
【化１１】
2011522805.tif 000013
ここで、Ｒ８は、アルキル基、例えば、エチル、メチル、プロピル、ブチル、ペンチルなどの基であり、そしてここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のそれぞれは、相互に異なるか、またはＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のサブセットは、相互に異なる、例えば、これらの位置の３つ以上が相互に異なる。一実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、オルトゴナルな保護基であり、それ故、各保護基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、他の基を脱離することなく、いずれか１つを個別に脱離させることができるように選択されて、保護された位置ともう１つの部分との反応を可能にする、例えば、保護された部分における置換基、例えば、硫酸または酢酸の置き換えを生じる。例えば、Ｒ１、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７を脱離することなく、Ｒ２における保護基を脱離することができる。
【００７７】
一実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ６、およびＲ７のいずれかにおける保護基は、例えば、シリルエーテル、エチルエーテル、置換ベンジルエーテルおよびエステルのようなヒドロキシル保護基であり得る。いくつかの実施形態では、Ｒ５における保護基は、例えば、カルバミン酸および置換カルバミン酸のようなアミン保護基であり得る。一実施形態では、保護基の２つ、３つ、４つ以上がオルトゴナルな保護基である限り、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のいずれかにおける保護基は、レブリノイル、ベンジル（Ｂｎ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、メトキシベンジル（ＭＰＭ）、アジド、アリルおよびシリルエーテル保護基（例えば、ｔＢＤＭＳまたはｔＢＤＰＳ）から選択される。一実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、レブリノイル、ベンジル、ベンゾイル、ＭＰＭ、アジド、アリルおよびシリルエーテル保護基（例えば、ｔＢＤＭＳもしくはｔＢＤＰＳ）から選択される保護基であり、そしてＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、またはＲ７のいずれも同じ保護基ではない。
【００７８】
一実施形態では、Ｒ３およびＲ４は、例えば、ベンゾイルおよびＦｍｏｃから選択される保護基であり、そして例えば、Ｒ３およびＲ４は、同じ保護基ではない。
【００７９】
一実施形態では、保護基は次のとおりであり得る：Ｒ１はレブリノイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ３はベンゾイルであり、Ｒ４はＦｍｏｃであり、Ｒ５はアジドであり、Ｒ６はアリルであり、そしてＲ７はｔＢＤＰＳであるか；Ｒ１はレブリノイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ３はベンゾイルであり、Ｒ４はＦｍｏｃであり、Ｒ５はＮＨＣＢｚであり、Ｒ６はアリルであり、そしてＲ７はメトキシベンジルであるか；Ｒ１はベンゾイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ３はベンゾイルであり、Ｒ４はＦｍｏｃであり、Ｒ５はアジドであり、Ｒ６はアリルであり、そしてＲ７はｔＢＤＰＳであるか；Ｒ１はベンゾイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ３はベンゾイルであり、Ｒ４はＦｍｏｃであり、Ｒ５はＮＨＣＢｚであり、Ｒ６はアリルであり、そしてＲ７はメトキシベンジルであるか；Ｒ１はレブリノイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ３はベンゾイルであり、Ｒ４はｔＢＤＭＳであり、Ｒ５はアジドであり、Ｒ６はベンジルであり、そしてＲ７はメトキシベンジルであるか；またはＲ１はベンゾイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ３はレブリノイルであり、Ｒ４はｔＢＤＭＳであり、Ｒ５はアジドであり、Ｒ６はベンジルであり、そしてＲ７はメトキシベンジルである。
【００８０】
一実施形態では、二糖は、明細書に記載の保護された二糖であり、例えば、二糖は、表Ｉ、表ＩＩ、図６、図７、図１４または図１５に示す二糖である。
【００８１】
一態様では、本開示物は、本明細書に記載の多様に保護された二糖類から一部または全体が作製されたオリゴ糖を特徴とする。保護基のあるクラスによって保護される部分、例えば、Ｒ１を、例えば、硫酸部分、または１つもしくは複数の水素で誘導体化することができる。オリゴ糖は、三糖、四糖、五糖、六糖、八糖、十糖、十二糖、十四糖、十六糖、または十八糖であり得る。
【００８２】
一実施形態では、オリゴ糖は、以下の構造を有する二糖を含む：
【００８３】
【化１２】
2011522805.tif 000014
ここで、Ｒ８は、アルキル基、例えば、エチル、メチル、プロピル、ブチル、ペンチルなどの基であり、そしてここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のそれぞれは、相互に異なるか、またはＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のサブセットは、相互に異なる、例えば、これらの位置の３つ以上が相互に異なる。一実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、オルトゴナルな保護基であり、それ故、各保護基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、他の基を脱離することなく、いずれか１つを個別に脱離させることができるように選択されて、保護された位置ともう１つの部分との反応を可能にする、例えば、保護された部分における置換基、例えば、硫酸、酢酸または水素の置き換えを生じる。例えば、Ｒ１、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７を脱離することなく、Ｒ２における保護基を脱離することができる。
【００８４】
一実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ６、およびＲ７のいずれかにおける保護基は、例えば、シリルエーテル、エチルエーテル、置換ベンジルエーテルおよびエステルのようなヒドロキシル保護基であり得る。いくつかの実施形態では、Ｒ５における保護基は、例えば、カルバミン酸および置換カルバミン酸のようなアミン保護基であり得る。一実施形態では、保護基の２つ、３つ、４つ以上がオルトゴナルな保護基である限り、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のいずれかにおける保護基は、レブリノイル、ベンジル（Ｂｎ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、メトキシベンジル（ＭＰＭ）、アジド、アリルおよびシリルエーテル保護基（例えば、ｔＢＤＭＳまたはｔＢＤＰＳ）から選択される。一実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、レブリノイル、ベンジル、ベンゾイル、ＭＰＭ、アジド、アリルおよびシリルエーテル保護基（例えば、ｔＢＤＭＳもしくはｔＢＤＰＳ）から選択される保護基であり、そしてＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、またはＲ７のいずれも同じ保護基ではない。
【００８５】
一実施形態では、保護基は次のとおりであり得る：Ｒ１はレブリノイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ５はアジドであり、Ｒ６はアリルであり、そしてＲ７はｔＢＤＰＳであるか；Ｒ１はレブリノイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ５はＮＨＣＢｚであり、Ｒ６はアリルであり、そしてＲ７はメトキシベンジルであるか；Ｒ１はベンゾイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ５はアジドであり、Ｒ６はアリルであり、そしてＲ７はｔＢＤＰＳであるか；またはＲ１はベンゾイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ５はＮＨＣＢｚであり、Ｒ６はアリルであり、そしてＲ７はメトキシベンジルである。
【００８６】
一態様では、本開示物は、本明細書に記載の多様に保護された二糖類から一部または全体が作製された十糖を特徴とする。これらの十糖類は、一部に、生物活性をモジュレートすることができるサイズを有するため、興味深い。
【００８７】
一実施形態では、十糖は、以下を含む、例えば、本質的に以下からなる：
【００８８】
【化１３】
2011522805.tif 000015
ここで、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４のそれぞれは、独立して、ＡまたはＢであり、そしてここで、
Ａは、
【００８９】
【化１４】
2011522805.tif 000016
そしてＢは、
【００９０】
【化１５】
2011522805.tif 000017
であり、
そしてここで、ＡまたはＢのそれぞれの箇所についてＲ８は、アルキル基、例えば、エチル、メチル、プロピル、ブチル、ペンチルなどの基であり、そしてここで、ＡまたはＢのそれぞれの箇所についてのＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のそれぞれは、相互に異なるか、またはＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のサブセットは、相互に異なる、例えば、これらの位置の３つ以上が相互に異なる。一実施形態では、ＡまたはＢのそれぞれの箇所について、単一のＡまたはＢ内のＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、もしくはＲ７のいずれも、同じＡまたはＢ内のもう１つの保護基と同じではない。実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のうちの１つもしくはそれ以上の選択は、第１の基Ａと第２の基Ａとの間、ＡとＢとの間、または第１のＢと第２のＢとの間で異なり得る。
【００９１】
一実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ６、およびＲ７のいずれかにおける保護基は、例えば、シリルエーテル、エチルエーテル、置換ベンジルエーテルおよびエステルのようなヒドロキシル保護基であり得る。いくつかの実施形態では、Ｒ５における保護基は、例えば、カルバミン酸および置換カルバミン酸のようなアミン保護基であり得る。一実施形態では、保護基の２つ、３つ、４つ以上がオルトゴナルな保護基である限り、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のいずれかにおける保護基は、レブリノイル、ベンジル（Ｂｎ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、メトキシベンジル（ＭＰＭ）、アジド、アリルおよびシリルエーテル保護基（例えば、ｔＢＤＭＳまたはｔＢＤＰＳ）から選択される。一実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、レブリノイル、ベンジル、ベンゾイル、ＭＰＭ、アジド、アリルおよびシリルエーテル保護基（例えば、ｔＢＤＭＳもしくはｔＢＤＰＳ）から選択される保護基であり、そしてＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、またはＲ７のいずれも同じ保護基ではない。
【００９２】
一実施形態では、保護基は次のとおりであり得る：Ｒ１はレブリノイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ５はアジドであり、Ｒ６はアリルであり、そしてＲ７はｔＢＤＰＳであるか；Ｒ１はレブリノイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ５はＮＨＣＢｚであり、Ｒ６はアリルであり、そしてＲ７はメトキシベンジルであるか；Ｒ１はベンゾイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ５はアジドであり、Ｒ６はアリルであり、そしてＲ７はｔＢＤＰＳであるか；またはＲ１はベンゾイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ５はＮＨＣＢｚであり、Ｒ６はアリルであり、そしてＲ７はメトキシベンジルである。
【００９３】
一実施形態では、十糖は、以下を含む、例えば、本質的に以下からなる：
【００９４】
【化１６】
2011522805.tif 000018
ここで、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７およびＸ８のそれぞれは、独立してＣまたはＤであり、そしてここで、
Ｃは：
【００９５】
【化１７】
2011522805.tif 000019
であり、そしてＤは：
【００９６】
【化１８】
2011522805.tif 000020
であり、
そしてここで、ＣまたはＤのそれぞれの箇所についてＲ８は、アルキル基、例えば、エチル、メチル、プロピル、ブチル、ペンチルなどの基であり、そしてここで、ＣまたはＤのそれぞれの箇所についてのＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のそれぞれは、相互に異なるか、またはＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のサブセットは、相互に異なる、例えば、これらの位置の３つ以上が相互に異なる。一実施形態では、ＣまたはＤのそれぞれの箇所について、単一のＣまたはＤ内のＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、もしくはＲ７のいずれも、同じＣまたはＤ内のもう１つの保護基と同じではない。実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のうちの１つもしくはそれ以上の選択は、第１の基Ｃと第２の基Ｃとの間、ＣとＤとの間、または第１のＤと第２のＤとの間で異なり得る。
【００９７】
一実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ６のいずれか、ならびにＲ７おける保護基は、例えば、シリルエーテル、エチルエーテル、置換ベンジルエーテルおよびエステルのようなヒドロキシル保護基であり得る。いくつかの実施形態では、Ｒ５における保護基は、例えば、カルバミン酸および置換カルバミン酸のようなアミン保護基であり得る。一実施形態では、保護基の２つ、３つ、４つ以上がオルトゴナルな保護基である限り、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のいずれかにおける保護基は、レブリノイル、ベンジル（Ｂｎ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、メトキシベンジル（ＭＰＭ）、アジド、アリルおよびｔＢＤＰＳから選択される。一実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、レブリノイル、ベンジル、ベンゾイル、ＭＰＭ、アジド、アリルおよびｔＢＤＰＳから選択される保護基であり、そしてＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、またはＲ７のいずれも同じ保護基ではない。
【００９８】
一実施形態では、保護基は次のとおりであり得る：Ｒ１はレブリノイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ５はアジドであり、Ｒ６はアリルであり、そしてＲ７はｔＢＤＰＳであるか；Ｒ１はレブリノイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ５はＮＨＣＢｚであり、Ｒ６はアリルであり、そしてＲ７はメトキシベンジルであるか；Ｒ１はベンゾイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ５はアジドであり、Ｒ６はアリルであり、そしてＲ７はｔＢＤＰＳであるか；またはＲ１はベンゾイルであり、Ｒ２はベンジルであり、Ｒ５はＮＨＣＢｚであり、Ｒ６はアリルであり、そしてＲ７はメトキシベンジルである。
【００９９】
一態様では、本開示物は、四糖、例えば、図１６に示す四糖を特徴とする。
【０１００】
一態様では、本開示物は、六糖、例えば、図１７に示す六糖を特徴とする。
【０１０１】
一態様では、本開示物は、オリゴ糖、例えば、以下の構造を含む十糖を特徴とする：
【０１０２】
【化１９】
2011522805.tif 000021
一態様では、本開示物は、以下の構造を有する十糖を特徴とする：
【０１０３】
【化２０】
2011522805.tif 000022
もう１つの態様では、本開示物は、複数の十糖類を含む組成物を特徴とし、ここで、十糖類の少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％は、以下の構造を有する十糖類である：
【０１０４】
【化２１】
2011522805.tif 000023
一実施形態では、組成物中のすべての十糖類は、以下の構造を有する：
【０１０５】
【化２２】
2011522805.tif 000024
一態様では、本開示物は、多様に保護された単糖を特徴とする。単糖を使用して、より大きな糖構造を作製することができる。
【０１０６】
一実施形態では、単糖は、以下の構造を有する：
【０１０７】
【化２３】
2011522805.tif 000025
ここで、Ｒ８は、水素またはアルキル基、例えば、エチル、メチル、プロピル、ブチル、ペンチルなどであり、そしてここで、Ｒ１、Ｒ２基はオルトゴナルな保護基である。一実施形態では、Ｒ３は、保護基、例えば、ベンゾイルまたはＦｍｏｃから選択される保護基である。
【０１０８】
一実施形態では、Ｒ１およびＲ２における保護基がオルトゴナルな保護基である限り、Ｒ１およびＲ２のいずれかにおける保護基は、例えば、シリルエーテル、エチルエーテル、置換ベンジルエーテルおよびエステルのようなヒドロキシル保護基であり得る。一実施形態では、Ｒ１およびＲ２における保護基がオルトゴナルな保護基である限り、Ｒ１およびＲ２のいずれかにおける保護基は、レブリノイル、ベンジル（Ｂｎ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、メトキシベンジル（ＭＰＭ）、アリルおよびｔＢＤＰＳから選択される。
【０１０９】
一実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、および場合によりＲ３位における保護基は、グルコサミンのＣ１位の酸素に付着した；グルコサミンのＣ２位に付着した；グルコサミンのＣ３位の酸素に付着した；およびグルコサミンのＣ６位の酸素に付着した位置のうち１つ以上において保護基を有するグルコサミンの保護基とは異なる。
【０１１０】
一実施形態では、単糖は、以下の構造のうちの１つを有する：
【０１１１】
【化２４】
2011522805.tif 000026
一実施形態では、単糖は、以下の構造を有する：
【０１１２】
【化２５】
2011522805.tif 000027
ここで、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のそれぞれは、相互に異なるか、またはＲ５、Ｒ６、およびＲ７のサブセットは、相互に異なり、例えば、これらの位置の２つ以上は、相互に異なる。一実施形態では、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、オルトゴナルな保護基であり、それ故、各保護基Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、他の基を脱離することなく、いずれか１つを個別に脱離させることができるように選択されて、保護された位置ともう１つの部分との反応を可能にする、例えば、保護された部分における置換基、例えば、硫酸または酢酸の置き換えを生じる。例えば、Ｒ６、およびＲ７を脱離することなく、Ｒ５における保護基を脱離することができる。
【０１１３】
一実施形態では、Ｒ６およびＲ７のいずれかにおける保護基は、例えば、シリルエーテル、エチルエーテル、置換ベンジルエーテルおよびエステルのようなヒドロキシル保護基であり得る。いくつかの実施形態では、Ｒ５における保護基は、例えば、カルバミン酸および置換カルバミン酸のようなアミン保護基であり得る。一実施形態では、保護基の２つ以上がオルトゴナルな保護基である限り、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７のいずれかにおける保護基は、レブリノイル、ベンジル（Ｂｎ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、メトキシベンジル（ＭＰＭ）、アジド、アリルおよびシリルエーテル保護基（例えば、ｔＢＤＭＳまたはｔＢＤＰＳ）から選択される。一実施形態では、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、レブリノイル、ベンジル、ベンゾイル、ＭＰＭ、アジド、アリルおよびシリルエーテル保護基（例えば、ｔＢＤＭＳもしくはｔＢＤＰＳ）から選択される保護基であり、そしてＲ５、Ｒ６、またはＲ７のいずれも同じ保護基ではない。
【０１１４】
一実施形態では、Ｒ４は、例えば、ベンゾイルおよびＦｍｏｃから選択される保護基である。
【０１１５】
一実施形態では、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７および場合によりＲ４位における保護基は、ウロン酸のＣ２位の酸素に付着した；およびウロン酸のＣ３位の酸素に付着した位置のうち１つ以上において保護基を有するウロン酸の保護基とは異なる。
【０１１６】
一実施形態では、単糖は、以下の構造のうちの１つを有する：
【０１１７】
【化２６】
2011522805.tif 000028
一実施形態では、単糖は、図１〜５、１２および１３のいずれかに示す単糖である。
【０１１８】
もう１つの態様では、開示物は、二糖またはそれより大きいオリゴ糖、例えば、誘導体化の予め選択されたパターンを有する糖構造の配列を作製する方法を特徴とする。本方法の実施形態は、誘導体化の予め選択された複雑なパターン、例えば、硫酸化もしくはアセチル化の予め選択された複雑なパターンを有するオリゴ糖構造の設計および合成を可能にする。それぞれ、保護基の適切なパターンを有する糖構造またはサブユニットは、共に接続されて、誘導体化の予め選択されたパターンを有するより大きな糖構造の生成を可能にする。各糖構造は、多様に保護された糖構造、例えば、本明細書に記載の多様に保護された糖構造であり得る。ライブラリーは、保護基の多様なパターンを有する複数のオリゴ糖構造を提供する。それ故、特定の保護基の脱保護時に、置換基、例えば、硫酸、酢酸および水素の選択されたパターンを生じ得る保護基のパターンを有する第１のライブラリーメンバーを選択することができる。上記で言及したように、第１のライブラリーメンバーは、保護基の選択されたパターンを有する１つ以上の以後のライブラリーメンバーに接続され、そして保護基のパターンを提供するために選択される。上記で言及したように、脱保護反応を使用して、オリゴ糖内の特定の保護基を脱離し、そして保護された位置において置換基を付加することができる一方、オリゴ糖内の他の位置においてオルトゴナルな保護基を維持して、置換基、例えば、硫酸、酢酸または水素の予め選択されたパターンを提供する。オリゴ糖は、例えば、二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、八糖、十糖、十二糖、十四糖、十六糖、または十八糖であり得る。
【０１１９】
本方法は以下の工程を含む：
第１の多様に保護された糖構造を提供する工程であって、ここで、前記糖構造は、単糖またはそれより大きい工程；
第２の糖構造を提供する工程であって、ここで、前記第２の糖構造は、単糖であるかまたはそれより大きく、そして場合により、多様に保護された糖構造である工程；および
前記第１および第２の糖構造を付着させ、それによって、予め選択された配列のオリゴ糖を作製する工程。
【０１２０】
一実施形態では、本方法は、第３の糖構造を提供する工程であって、ここで、第３の糖構造は、単糖またはそれより大きい；ならびに第３の糖構造を、第１および第２の糖構造から形成される糖構造に付着させる工程をさらに含む。一実施形態では、第３の糖構造は、多様に保護された糖構造である。一実施形態では、本方法は、第４、第５、第６、第７などの糖構造を提供および付着させて、オリゴ糖を作製する工程をさらに含むことができる。第４、第５、第６、第７などの糖構造のいずれも、例えば、多様に保護された糖構造であり得る。
【０１２１】
一実施形態では、糖構造（例えば、第１、第２、第３、第４などの糖構造）は、単糖、二糖、四糖、五糖、六糖、八糖、または十糖である。一実施形態では、第１の糖構造は二糖であり、そして第２の糖構造は、単糖、二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖、および八糖から選択される。
【０１２２】
一実施形態では、糖構造（例えば、第１、第２、第３、第４などの糖構造）は、本明細書に記載の単糖または二糖、本明細書に記載の二糖である。
【０１２３】
一実施形態では、本方法は、二糖を作製することを含み、以下の工程を含む。
【０１２４】
本明細書に記載の第１の多様に保護された単糖および本明細書に記載の第２の多様に保護された単糖を提供する工程；ならびに
第１の単糖を第２の単糖に付着させて、それによって二糖を作製する工程。
【０１２５】
一実施形態では、本方法は、第１の二糖構造、例えば、本明細書に記載の多様に保護された二糖を提供する工程；第２の二糖構造、例えば、上記の多様に保護された二糖構造を第１の二糖構造に付着させて、第１の四糖構造を提供する工程；第３の二糖構造、例えば、本明細書に記載の多様に保護された二糖を提供する工程；第４の二糖構造、例えば、本明細書に記載の多様に保護された二糖構造を第３の二糖構造に付着させて、第２の四糖構造を提供する工程；第１の四糖構造を第２の四糖構造に付着させて、八糖構造を提供する工程；および第５の二糖構造、例えば、本明細書に記載の多様に保護された二糖構造を八糖構造に付着させ、それによって、十糖構造を提供する工程を含む。
【０１２６】
一実施形態では、本方法は、１つの糖構造をもう１つのものに付着させて、保護されていない１つもしくは複数の部分を形成させる１つもしくは複数の糖構造内における１つ以上の位置を脱保護させる工程をさらに含む。次いで、１つもしくは複数の脱保護部分を使用して、１つの糖構造をもう１つのものに付着させることができる。一実施形態では、触媒、例えば、ＴＭＳＯＴｆまたはＴＥＳＯＴｆを含む反応混合物を使用して、１つの糖構造、例えば、第１の糖構造は、もう１つの糖構造、例えば、第２の糖構造に付着される。
【０１２７】
一実施形態では、オリゴ糖は、本明細書に記載のオリゴ糖である。
【０１２８】
ある実施形態では、方法を反復して、オリゴ糖のコレクションまたはライブラリーを形成する。
【０１２９】
一実施形態では、本方法は、保護基を脱保護する一方、他の部位におけるオルトゴナルな保護基を維持して、１つもしくは複数の保護されていない部分を形成させる工程をさらに含む。本方法は、１つもしくは複数の脱保護された位置において、置換基、例えば、硫酸または酢酸を形成させる工程をさらに含むことができる。
【０１３０】
ある実施形態では、方法を反復して、予め選択された配列を有するオリゴ糖のコレクションまたはライブラリーを形成する。
【０１３１】
一態様では、本開示物は、以下の工程を含む、誘導体化、例えば、硫酸化の規定されたレベルまたはパターンを有するオリゴ糖構造を作製する方法を特徴とする：
多様に保護されたオリゴ糖構造、例えば、本明細書に記載の多様に保護されたオリゴ糖構造、および場合により、予め選択された配列のオリゴ糖構造を提供する工程；
オリゴ糖、例えば、本明細書に記載のオリゴ糖における保護された位置のあるクラスを脱保護して、保護されていない部分を形成させ、そして脱保護された位置において、置換基部分、例えば、硫酸部分または酢酸部分を形成させる工程。
【０１３２】
一実施形態では、本方法は、以下をさらに含む：
オリゴ糖、例えば、本明細書に記載のオリゴ糖における保護された位置の以後の第２のクラスを脱保護して、保護されていない部分の第２のクラスを形成させ、そして脱保護された位置の第２のクラスにおいて、置換基部分、例えば、硫酸部分、酢酸部分または水素部分を形成させる工程。
【０１３３】
一実施形態では、本方法は、以下をさらに含む：
オリゴ糖、例えば、本明細書に記載のオリゴ糖における保護された位置の以後の（例えば、第３もしくは第４の）クラスを脱保護して、保護されていない部分の以後のクラスを形成させ、そして脱保護された位置において、置換基部分、例えば、硫酸部分、酢酸部分の以後の部分を形成させる工程。
【０１３４】
ある実施形態では、方法を反復して、置換基、例えば、硫酸化、アセチル化のパターンの予め選択されたレベルを有するオリゴ糖のライブラリーを形成する。
【０１３５】
脱保護は、時々、個別に言及するが、脱保護および誘導体化は、連続的または同時に生じ得ることが理解される。
【０１３６】
一態様では、本開示物は、以下の工程を含む、多様に保護された単糖、例えば、本明細書に記載の多様に保護された単糖を作製する方法を特徴とする：
グルコースを提供する工程；
レブリノイル、アリル、ベンジル、ベンゾイル、アジド、ＮＨＣＢｚ、ｔＢＤＰＳ、ｔＢＤＭＳまたはメトキシベンジルから選択される第１の保護基を、グルコースのＣ３位に付着した酸素に付着し、グルコースからウロン酸を形成させる工程；
レブリノイル、アリル、ベンジル、アジド、ＮＨＣＢｚ、ｔＢＤＰＳ、ｔＢＤＭＳまたはメトキシベンジルから選択される第２の保護基を、ウロン酸のＣ２位に付着した酸素に付着させる工程であって、ここで、第１の保護基は、第２の保護基と異なる。
【０１３７】
一実施形態では、本方法は、以下の工程を含む：
グルコースを提供する工程；
ベンジル基を、グルコースのＣ３位に付着した酸素に付着させる工程；
グルコースからウロン酸を形成させる工程；および
レブリノイルまたはベンゾイルを、ウロン酸のＣ２位に付着した酸素に付着させて、それによって、単糖を作製する工程。
【０１３８】
一実施形態では、本方法は、図１、３、５または１３に記載の工程の１つ以上を含む。
【０１３９】
一態様では、本開示物は、以下の工程を含む、単糖、例えば、本明細書に記載の多様に保護された単糖を作製する方法を特徴とする：
グルコサミンを提供する工程；
レブリノイル、アリル、ベンジル、アジド、ベンゾイル、ＮＨＣＢｚ、ｔＢＤＰＳ、ｔＢＤＭＳまたはメトキシベンジルから選択される第１の保護基を、グルコサミンのＣ２位に付着させる工程；
レブリノイル、アリル、ベンジル、アジド、ベンゾイル、ＮＨＣＢｚ、ｔＢＤＰＳ、ｔＢＤＭＳまたはメトキシベンジルから選択される第２の保護基を、グルコサミンのＣ３位の酸素に付着させる工程；および
レブリノイル、アリル、ベンジル、アジド、ベンゾイル、ＮＨＣＢｚ、ｔＢＤＰＳ、ｔＢＤＭＳまたはメトキシベンジルから選択される第３の保護基を、グルコサミンのＣ６位の酸素に付着させる工程であって、ここで、第１、第２および第３の保護基は、すべて相互に異なり、それによって、単糖が作製される工程。
【０１４０】
一実施形態では、本方法は、以下の工程を含む：
グルコサミンを提供する工程；
Ｎ３を、グルコサミンのＣ２位に付着させる工程；
アリルを、グルコサミンのＣ３位の酸素に付着させる工程；および
ｔＢＤＰＳ、ｔＢＤＭＳ、またはＭＰＭを、グルコサミンのＣ６位の酸素に付着させて、それによって、単糖を作製する工程。
【０１４１】
一実施形態では、本方法は、図２、４または１２に記載の工程の１つ以上を含む。
【０１４２】
一態様では、本開示物は、本明細書に記載の糖構造、例えば、本明細書に記載の単糖、二糖またはより大きなオリゴ糖を含む組成物を特徴とする。一実施形態では、組成物は、希釈剤、賦形剤またはキャリアを含むことができる。一実施形態では、組成物は、乾燥または凍結乾燥される。
【０１４３】
一態様では、本開示物は、図１、２、３、４、５、または１２〜１８のいずれかに記載の化合物を特徴とする。
【０１４４】
一態様では、本開示物は、糖構造、例えば、本明細書に記載の糖構造、例えば、本明細書に記載の単糖、二糖もしくはより大きなオリゴ糖のコレクションまたはライブラリーを特徴とする。
【０１４５】
一態様では、本開示物は、本明細書に記載の１つ以上の糖構造、例えば、本明細書に記載の単糖、二糖またはより大きなオリゴ糖の調製物、例えば、実質的に精製された調製物、例えば、薬学的調製物を特徴とする。本明細書に記載の糖構造、例えば、本明細書に記載の単糖、二糖またはより大きなオリゴ糖の２つ以上を有する反応混合物もまた、本開示の範囲内にある。
【０１４６】
一態様では、本開示物は、複数の実質的に精製された調製物として提供されるオリゴ糖（単一でまたはコレクションもしくはライブラリーのいずれかとして）を特徴とする。ある実施形態では、各部分的に精製された調製物は、実質的な量の保護されたオリゴ糖を含まず、また、実質的な量の同じ長さの他の保護されたオリゴ糖も含まない。本明細書に記載のオリゴ糖の２つ以上を有する反応混合物もまた、本開示の範囲内にある。
【０１４７】
一態様では、本開示物は、以下の工程を含む、オリゴ糖、例えば、本明細書に記載のオリゴ糖を分析する方法を特徴とする：
試験オリゴ糖、例えば、誘導体化の予め決定されたレベルまたはパターンを有する本明細書に記載のオリゴ糖を提供する工程；
前記試験オリゴ糖の特性を決定し、それによって、オリゴ糖を分析する工程。
【０１４８】
一態様では、本開示物は、以下の工程を含む、標的タンパク質に結合するオリゴ糖、例えば、本明細書に記載のオリゴ糖を同定する方法を特徴とする：
試験オリゴ糖、誘導体化のパターンの予め決定されたレベルを有する試験オリゴ糖のコレクションまたはライブラリーを提供する工程；
オリゴ糖またはコレクションもしくはライブラリー由来のオリゴ糖の１つ以上が標的ポリペプチドに結合するかどうかを決定して、それによって、標的ポリペプチドに結合するオリゴ糖を同定する工程。
【０１４９】
一態様では、本開示物は：少なくとも１０レコードを含む有形の媒体上に配置されたデータベースを特徴とし、ここで、レコードは、本明細書において開示した糖構造を同定する識別子；および場合により、糖構造の生物学的または化学的特性を同定する識別子を含む。
【０１５０】
本開示物の態様はまた：クエリを入力するためのユーザインターフェース；クエリ結果を作成するためのプロセッサ；本明細書において開示した糖構造の配列、化学的または生物学的特性に基づくパラメータを選択するためのセレクタ；および上記のデータベースを含むシステムを含む。
【０１５１】
本発明は、定義された構造および／または特性を有するオリゴ糖構造、例えば、十糖の生成を可能にする。本発明は、オリゴ糖薬物および薬物候補、例えば、所望される生物学的特性、例えば、抗ＩＩａ因子活性、抗Ｘａ因子活性、抗血栓活性、抗炎症活性、抗血管新生活性、抗癌もしくは抗転移活性を有する薬物または薬物候補を提供する。オリゴ糖の調製物、例えば、オリゴ糖薬物の調製物は、最適化された異種性を有することができ、そして例えば、天然の供給源から調製されるオリゴ糖薬物より低い異種性であり得る。本発明はまた、オリゴ糖の生成に有用なライブラリーおよび他の構築物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０１５２】
【図１】図１は、誘導体化を可能にするかまたは誘導体化を可能にしない第１の保護基を有するイズロン酸（１０）、ならびに誘導体化を可能にする第１の保護基および誘導体化を可能にしない第２の保護基を有するイズロン酸（８）の合成を示す。
【図２−１】図２は、誘導体化を可能にするかまたは誘導体化を可能にしない第１の保護基を有するグルコサミン（１７、１８、２３および２４）、ならびに誘導体化を可能にする第１の保護基および誘導体化を可能にしない第２の保護基を有するグルコサミン（１５、１６、２１および２２）の合成を示す。
【図２−２】図２は、誘導体化を可能にするかまたは誘導体化を可能にしない第１の保護基を有するグルコサミン（１７、１８、２３および２４）、ならびに誘導体化を可能にする第１の保護基および誘導体化を可能にしない第２の保護基を有するグルコサミン（１５、１６、２１および２２）の合成を示す。
【図３】図３は、化合物２６のＣ−２においてＬｅｖおよび化合物２８のＣ−２においてＢｚのオルトゴナルな保護基を有する多様に保護されたイズロン酸の合成を示す。
【図４】図４は、化合物３６におけるｔＢＤＰＳおよび化合物３４におけるＭＰＭ；ならびに化合物３６におけるアジドおよび化合物３４におけるカルバミン酸ベンジルＮＨＣＢｚのオルトゴナルな保護基を有する多様に保護されたグルコサミンの合成を示す。
【図５】図５は、化合物４０のＣ−２においてＬｅｖおよび化合物４２のＣ−２においてＢｚのオルトゴナルな保護基を有する多様に保護されたグルクロン酸の合成を示す。
【図６】図６は、イズロン酸およびグルコサミンの多様に保護された単糖の様々な組み合わせによる様々な多様に保護された二糖類の合成を示す。
【図７】図７は、グルクロン酸およびグルコサミンの多様に保護された単糖の様々な組み合わせによる様々な多様に保護された二糖類の合成を示す。
【図８】図８は、予め選択された配列を有する多様に保護された十糖、および多様に保護された十糖内のイズロン酸のＣ−２において脱保護し、そして置換基を付加するための異なる条件を示す。
【図９】図９は、予め選択された配列を有する多様に保護された十糖、および多様に保護された十糖内のグルコサミン／およびイズロン酸残基のＣ−３において脱保護し、そして置換基を付加するための異なる条件を示す。
【図１０】図１０は、予め選択された配列を有する多様に保護された十糖、および多様に保護された十糖内のグルコサミン残基のＣ−６において脱保護し、そして置換基を付加するための異なる条件を示す。
【図１１】図１１は、予め選択された配列を有する多様に保護された十糖、および多様に保護された十糖内のグルコサミン残基のＣ−２において脱保護し、そして置換基を付加するための異なる条件を示す。
【図１２】図１２は、多様に保護されたグルコサミンシントンの合成を示す。
【図１３】図１３は、多様に保護されたイズロン酸シントンの合成を示す。
【図１４】図１４は、多様に保護された二糖の合成を示す。
【図１５】図１５は、多様に保護された二糖の合成を示す。
【図１６】図１６は、多様に保護された四糖の合成を示す。
【図１７−１】図１７は、多様に保護された六糖の合成を示す。
【図１７−２】図１７は、多様に保護された六糖の合成を示す。
【図１８】図１８は、一硫酸化二糖の合成を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１５３】
本開示物では、誘導体化され易いオリゴ糖内の位置における置換基、例えば、硫酸、酢酸、および水素の予め選択されたパターンを伴う配列を有するオリゴ糖を作製するための二糖またはそれより大きいオリゴ糖について説明する。これらのオリゴ糖類は、誘導体化の予め選択された複雑なパターン、例えば、硫酸化もしくはアセチル化の予め選択された複雑なパターンを有するオリゴ糖構造の設計および合成を可能にする。いくつかの実施形態では、オリゴ糖は、異なる２つもしくは３つの保護基のみを有する。保護基のうちの少なくとも２つは、異なる反応性を有する。１つの保護基は、選択された条件下で、誘導体化基によって、第１の程度で、例えば、実質的に完全に置き換えられる。他の保護基は、同じ条件下で、第２の程度、通常、相対的により少ない程度で置き換えられる、例えば、それは、実質的に誘導体化を生じない。
【０１５４】
他の実施形態では、二糖またはより大きなオリゴ糖のうちの二糖内において誘導体化され易い位置は、すべて相互に異なるか、または二糖内において誘導体化され易い位置のサブセットは、相互に異なり、例えば、これらの位置の３つ以上は、相互に異なる。一実施形態では、二糖内において誘導体化され易い位置は、オルトゴナルな保護基であり、それ故、各保護基は、他の基を脱離することなく、いずれか１つを個別に脱離させることができるように選択されて、保護された位置ともう１つの部分との反応を可能にする、例えば、保護された部分における置換基、例えば、硫酸、酢酸または水素の置き換えを生じる。これらのオリゴ糖は、オリゴ糖内の特定の位置における特定の置換基の置き換えを可能にする。
【０１５５】
また、本開示物では、例えば、誘導体化され易い位置において保護基を有するオリゴ糖構造を作製するために使用することができる単糖、本明細書に記載の糖構造、例えば、本明細書に記載の単糖、二糖またはそれより大きなオリゴ糖を作製する方法について説明する。糖構造、例えば、本明細書に記載の単糖、二糖またはそれより大きなオリゴ糖のコレクションおよびライブラリー、キット、反応混合物、ならびに組成物について、本明細書において説明する。さらに加えて、本明細書に記載のオリゴ糖を分析する方法を提供する。
【０１５６】
本明細書に記載の方法、化合物、および組成物は、２つの保護基を使用することがきるか、またはそれらによって作製することができる。２つの保護基は、所定の組の条件下で、実質的に異なる反応性（誘導体で置き換えられる能力）を有することができ、通常、有する。ほとんどの場合、一方の保護基は、選択された条件下で、他方より実質的に大きな程度で置き換えられる。実施形態では、他方の保護基は、第２の組の条件下で、実質的により大きな反応性を呈する。いくつかの実施形態では、一方の保護基は、選択された条件下で、実質的に完全に置き換えられ、そして他方の保護基は、それらの条件下では、実質的に反応しない（置き換えられない）。実施形態では、両方の基は、選択された条件下で、同じ程度か、またはより一般的には、異なる程度のいずれかで反応性を呈する。後者の関係は、例えば、ライブラリー、例えば、コンビナトリアルライブラリー、または不純な（ｉｎ  ｄｉｒｔｙ）合成を作製するのに有用である。
【０１５７】
本明細書において使用する用語「置換基」は、誘導体化され易い位置において天然でオリゴ糖と会合する任意の部分を指す。例えば、置換基は、硫酸、酢酸または水素である。
【０１５８】
誘導体化され易い位置には、その位置と会合する硫酸または酢酸を有することができる糖構造上の任意の位置が含まれる。１つの糖構造をもう１つのものに連結させることに関係する位置は、この用語に包含されない。
【０１５９】
用語「誘導体化」は、硫酸化およびアセチル化を含むが、水素化および糖構造の相互への連結を含まない。
【０１６０】
本明細書において使用する「コレクション」は、２つ以上かつ１０未満のメンバーを意味する。例えば、コレクションは、２、３、４、５、６、７、８もしくは９つの単糖またはオリゴ糖であり得る。
【０１６１】
本明細書において使用する用語「ライブラリー」は、１０以上のメンバーを指す。例えば、ライブラリーは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、５００、もしくは１，０００の単糖またはオリゴ糖を含むことができる。
【０１６２】
単糖の合成
本明細書では、誘導体化され易い単糖の各位置において保護基を有する単糖について説明する。これらは、例えば、予め選択された配列および／あるいは誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化のレベルまたはパターンを有する二糖類もしくはより大きなオリゴ糖、またはそのライブラリーを提供するのに有用である。
【０１６３】
いくつかの態様では、任意の所定の位置における保護基は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない第２の保護基であり得る。誘導体化され易い位置における各保護基の正体は、誘導体化され易い他の任意の位置における保護基から独立し得る。
【０１６４】
そのような単糖の例を、図１および２に示す。加えて、これらの単糖を合成する方法の例を、図１および２に示す。既知の方法を使用して、他の単糖、例えば、本明細書に記載の単糖を作製することができる。
【０１６５】
他の実施形態では、多様に保護された単糖について説明する。多様に保護された単糖は、オルトゴナルな保護基である単糖の各保護基または２を超える保護基を有する単糖を指し、それ故、各保護基、または保護基のサブセット（即ち、単糖内において２を超える保護基）は、他の基を脱離することなく、いずれか１つを個別に脱離させることができるように選択されて、保護された位置ともう１つの部分との反応を可能にする、例えば、保護された部分における置換基、例えば、硫酸、酢酸または水素の置き換えを生じる。
【０１６６】
多様に保護された単糖の例を、図３〜５、１２および１３に示す。既知の方法を使用して、他の単糖、例えば、本明細書に記載の他の単糖を作製することができる。
【０１６７】
二糖の合成
本開示物はまた、誘導体化され易い二糖の各位置において保護基を有する二糖類を提供する。任意の所定の位置における保護基は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない第２の保護基であり得る。これらの二糖類は、誘導体化され易い位置において保護基を有する単糖を相互に結合して、二糖を形成させることによって、作製することができる。一態様では、様々な組み合わせの保護された単糖、例えば、本明細書に記載の保護された単糖を作製して、保護された二糖類のコレクションまたはライブラリーを形成することができる。
【０１６８】
二糖、例えば、本明細書に記載の二糖は、１つの保護された単糖のもう１つの保護された単糖への標準的なＴＭＳＯＴｆ−仲介カップリングを使用して、作製することができる。例えば、ウロン酸トリクロロアセトイミデートドナーおよびグルコサミンアクセプターは、既知のＴＭＳＯＴｆ−カップリング技術を使用して、相互にカップリングすることができる。そのような技術については、Ｌｏｈｍａｎ  ｅｔ．ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６９（１２），４０８１−４０９３に記載されている。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、二糖は、異なる２つもしくは３つの保護基のみを有することができる。３つの保護基のうちの２つもしくは少なくとも２つは、異なる反応性を有する。１つの保護基は、選択された条件下で、誘導体化基によって、第１の程度で、例えば、実質的に完全に、または完全に置き換えられる。この保護基を、本明細書において、「誘導体化を可能にする保護基」と称する。他の保護基は、同じ条件下で、相対的により少ない誘導体化を生じる、例えば、それは、実質的に誘導体化を生じないまたは全く生じない。この保護基を、本明細書において、「誘導体化を可能にしない保護基」と称する。反応条件を変更する場合、１つの組の条件下での誘導体化を可能にする保護基は、もう１つの組の条件下での誘導体化を可能にしない保護基であり得ることに留意すべきである。
【０１７０】
保護基は、本明細書に記載の保護基のような既知の保護基から選択することができる。
【０１７１】
以下に示す表ＩおよびスキームＡは、誘導体化を可能にする保護基の様々な組み合わせ（例えば、ベンゾイルおよび／またはベンゾイルを含有する基）で保護された単糖と誘導体化を可能にしない保護基（例えば、ベンジルおよび／またはアジド）によって保護された単糖とをカップリングすることによって、生成することができる様々な二糖類を例示する。単糖を、表Ｉにおいて、ＡＡ、ＡＢおよびＢＢと称する。二糖類は、ヘキソサミン（グルコサミン）にカップリングされたウロン酸（イズロン酸）である。しかし、他の組み合わせ、例えば、グルクロン酸およびグルコサミンは、同じ方法論を使用して、生成することができることが理解されるべきである。例示される二糖類は、様々な組み合わせの単糖ＡＡ、ＡＢおよびＢＢである。ウロン酸では、Ａは、誘導体化を可能にするベンゾイル保護基であり、例えば、誘導体化される場合、ベンゾイルは、ＳＯ３−で置き換えられ、そしてＢは、誘導体化を可能にしないベンジル保護基であり、例えば、ベンジルは、水素で置き換えられる。グルコサミンでは、Ｒ６およびＲ７位において、Ａは、誘導体化を可能にするベンゾイル保護基を表し、例えば、誘導体化される場合、ベンゾイルは、ＳＯ３−で置き換えられ、そしてＢは、誘導体化を可能にしないベンジル保護基を表し、例えば、ベンジルは、水素で置き換えられる。グルコサミンのＲ５位では、Ａは、誘導体化を可能にする保護基としてベンゾイルを含有する基、ＮＨＣＢｚを表し、例えば、誘導体化される場合、ベンゾイルを含有する基は、ＮＨＳＯ３−で置き換えられ、そしてＢは、誘導体化を可能にしないアジド保護基を表し、例えば、アジドは、ＮＨ２で置き換えられる。
【０１７２】
【化２７】
2011522805.tif 000029
表Ｉは、誘導体化され易い単糖（グルクロン酸およびグルコサミン）内の位置において保護基を有する様々な組み合わせの二糖類を示す。二糖のコードは、Ｒ１−Ｒ７−Ｒ６−Ｒ５の順番で関連する置換基を示す。
【０１７３】
【表１】
2011522805.tif 000030
以下に示す表ＩＩおよびスキームＢは、誘導体化を可能にする保護基の様々な組み合わせ（例えば、ベンゾイルまたはベンゾイルを含有する基）で保護された単糖と誘導体化を可能にしない保護基（例えば、ベンジルまたはアジド）によって保護された単糖とをカップリングすることによって、生成することができるさらなる二糖類を例示する。単糖を、表ＩＩにおいて、ＡＡ、ＡＢおよびＢＢと称する。二糖類は、ウロン酸（イズロン酸）にカップリングされたヘキソサミン（グルコサミン）である。しかし、他の組み合わせ、例えば、グルクロン酸にカップリングされたグルコサミンは、同じ方法論を使用して、生成することができることが理解されるべきである。例示される二糖類は、様々な組み合わせの単糖ＡＡ、ＡＢおよびＢＢである。グルコサミンでは、位置Ｒ６およびＲ７において、Ａは、誘導体化を可能にするベンゾイル保護基を表し、例えば、誘導体化される場合、ベンゾイルは、ＳＯ３−で置き換えられ、そしてＢは、誘導体化を可能にしないベンジル保護基を表し、例えば、ベンジルは、水素で置き換えられる。グルコサミンのＲ５位では、Ａは、誘導体化を可能にする保護基としてベンゾイルを含有する基、ＮＨＣＢｚを表し、例えば、誘導体化される場合、ベンゾイルを含有する基は、ＮＨＳＯ３−で置き換えられ、そしてＢは、誘導体化を可能にしないアジド保護基を表し、例えば、アジドは、ＮＨ２で置き換えられる。ウロン酸では、Ａは、誘導体化を可能にするベンゾイル保護基であり、例えば、誘導体化される場合、ベンゾイルは、ＳＯ３−で置き換えられ、そしてＢは、誘導体化を可能にしないベンジル保護基であり、例えば、ベンジルは、水素で置き換えられる。
【０１７４】
【化２８】
2011522805.tif 000031
【０１７５】
【表２】
2011522805.tif 000032
本明細書において他で記載のように、これらの二糖類は、予め選択された配列および／あるいは誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化のレベルまたはパターンを有するオリゴ糖、またはそのライブラリーを提供するのに有用である。
【０１７６】
オリゴ糖の合成
本開示物は、予め選択された配列、例えば、誘導体化の予め選択されたパターンを有する糖構造の配列を有することができるオリゴ糖を特徴とする。オリゴ糖、例えば、本明細書に記載のオリゴ糖は、誘導体化の予め選択された複雑なパターン、例えば、硫酸化もしくはアセチル化の予め選択された複雑なパターンを有するオリゴ糖構造の設計および合成を可能にする。オリゴ糖は、例えば、二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、八糖、十糖、十二糖、十四糖、十六糖、または十八糖であり得る。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、オリゴ糖は、本明細書に記載の１つ以上の二糖を含む。好ましくは、オリゴ糖のすべての二糖単位は、誘導体化され易いすべての位置において保護基を有する二糖単位であり、例えば、オリゴ糖のすべての二糖類は、本明細書に記載の二糖である。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、オリゴ糖は、異なる２つもしくは３つの保護基のみを有する二糖または二糖類を含むことができる。二糖または二糖内の任意の所定の位置における保護基は、誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にする第１の保護基、または誘導体化、例えば、硫酸化もしくはアセチル化を可能にしない第２の保護基であり得る。オリゴ糖が本明細書に記載の２つ以上の二糖単位を含む場合、二糖内の任意の位置における保護基の正体は、オリゴ糖の他の任意の二糖における保護基の正体から独立している。二糖は、例えば、表Ｉ、表ＩＩ、図６、図７、図１４または図１５に示す二糖であり得る。
【０１７９】
保護基は、本明細書に記載の保護基のような既知の保護基から選択することができる。
【０１８０】
オリゴ糖は、単糖またはそれより大きい第１の糖構造、例えば、本明細書に記載の糖構造、例えば、本明細書に記載の二糖を提供する工程；第２の糖構造、例えば、本明細書に記載の糖構造、例えば、本明細書に記載の二糖を提供し、そして第１の糖構造を第２の糖構造に付着させる工程によって作製することができる。本方法はまた、第３、第４、第５、第６、第７などの糖構造を付着させて、オリゴ糖、例えば、予め選択された配列を有するオリゴ糖を作製する工程を含むことができる。一実施形態では、本方法は、第１の二糖構造、例えば、本明細書に記載の二糖を提供する工程；第２の二糖構造、例えば、本明細書に記載の二糖構造を第１の二糖構造に付着させて、第１の四糖構造を提供する工程；第３の二糖構造、例えば、本明細書に記載の二糖を提供する工程；第４の二糖構造、例えば、本明細書に記載の二糖構造を第３の二糖構造に付着させて、第２の四糖構造を提供する工程；第１の四糖構造を第２の四糖構造に付着させて、八糖構造を提供する工程；および第５の二糖構造、例えば、本明細書に記載の二糖構造を八糖構造に付着させ、それによって、十糖構造を提供する工程を含む。これは、オリゴ糖を作製することができる仕方の一例である。しかし、糖構造は、別の方法によって集成することもできる。例えば、第１の二糖構造を第２の二糖構造に付着させて、四糖を形成させることができる。第３の二糖を四糖に付着させて、六糖を提供することができる。第４の二糖を六糖に付着させて八糖を形成させることができ、そして第５の二糖を八糖に付着させて、十糖を形成させることができる。
【０１８１】
オリゴ糖を生成するための方法は、図１６および／または図１７に示す方法を含む。
【０１８２】
１つの保護された単糖のもう１つの保護された単糖への標準的なＴＭＳＯＴｆ−仲介カップリングを使用して、糖構造を相互に付着させることができる。例えば、ウロン酸トリクロロアセトイミデートドナーおよびグルコサミンアクセプターは、既知のＴＭＳＯＴｆ−カップリング技術を使用して、相互にカップリングすることができる。そのような技術については、Ｌｏｈｍａｎ  ｅｔ．ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６９（１２），４０８１−４０９３に記載されている。
【０１８３】
オリゴ糖、例えば、本明細書に記載のオリゴ糖を集成するために使用される糖構造は、もう１つの糖構造との連結を形成する糖構造内の位置において１つ以上の保護基を含むことができる。この位置は、脱保護することができ、そして例えば、ＴＭＳＯＴｆまたはＴＥＳＯＴｆ−カップリングを使用して、糖構造のこの位置を介して、糖構造を連結することができる。
【０１８４】
以下は、様々な糖構造を集成して、誘導体化の予め選択されたパターンを可能にする配列を有する保護されたオリゴ糖を調製する方法の一例である。この例では、上記の表Ｉ由来の二糖類１、２、３および４を使用する。しかし、二糖類の任意の組み合わせ、例えば、表Ｉまたは表ＩＩに示す二糖類の任意の組み合わせを使用して、オリゴ糖を作製することができることが理解される。表Ｉの二糖類１、２、３および４は、以下の構造を有する：
１．（表Ｉにおいて、ＡＡＡＢとも称される）
【０１８５】
【化２９】
2011522805.tif 000033
２．（表Ｉにおいて、ＡＡＡＡとも称される）
【０１８６】
【化３０】
2011522805.tif 000034
３．（表Ｉにおいて、ＢＡＡＢとも称される）
【０１８７】
【化３１】
2011522805.tif 000035
４．（表Ｉにおいて、ＢＡＡＡとも称される）
【０１８８】
【化３２】
2011522805.tif 000036
次いで、二糖類１、２、３および４を、様々な組み合わせで共に連結して、誘導体化のための異なるパターンを伴う配列を有するオリゴ糖を提供することができる。この概念を例示するために、４つの二糖類の異なる組み合わせである異なる３つの十糖類について説明する。二糖類は、Ｒ３位のレブリノイルおよびＲ４位のベンゾイルを脱保護し、そしてＬｏｈｍａｎ  ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００４，６９（１２），４０８１−４０９３に記載のＴＭＳＯＴｆ−カップリングを使用して、二糖構造を相互にカップリングすることによって、連結される。
【０１８９】
以下の構造構造（ｉ）は、次の二糖類：１−２−３−４−１の組み合わせである：
【０１９０】
【化３３】
2011522805.tif 000037
以下に示す構造（ｉｉ）は、次の二糖類２−３−４−１−２の組み合わせである：
【０１９１】
【化３４】
2011522805.tif 000038
以下に示す構造（ｉｉｉ）は、次の二糖類１−３−２−４−３の組み合わせである：
【０１９２】
【化３５】
2011522805.tif 000039
そのような方法を使用して、例えば、本明細書に記載の二糖類の任意の組み合わせ、例えば、表Ｉの二糖類１〜１６もしくは表ＩＩの二糖類１〜１６の任意の組み合わせを有する保護されたオリゴ糖のコレクションまたはライブラリーを提供することができる。次いで、オリゴ糖を、あるクラスの保護された位置、例えば、保護されていない部分を伴うオリゴ糖を提供するために、誘導体化、例えば、硫酸化を可能にする保護基を有し、そして置換基、例えば、誘導体部分、例えば、硫酸部分を形成する位置で、脱保護することができる。オリゴ糖の様々な位置においてあるクラスの脱保護された部分を有するオリゴ糖は、例えば、既知の技術を使用して、それらの位置において硫酸化することができる。例えば、オリゴ糖を、三酸化硫黄−ピリジン錯体（例えば、溶媒としてピリジンを伴う）で処置して、脱保護された部分を硫酸化することができる。例えば、上記に示す構造ｉ、ｉｉおよびｉｉｉの保護された十糖類を、ピリジンの存在下、三酸化硫黄−ピリジン錯体で処置して、以下の誘導体化されたオリゴ糖を提供することができる。実施例７は、概念の実験的証明として、二糖に対して従うそのような手順を示す。
【０１９３】
予め選択された配列を有するオリゴ糖を提供する他の例示的方法を、図８〜１１に記載する。これらの図に記載のオリゴ糖は、本開示物の実施形態である。
【実施例】
【０１９４】
実施例１．グルコサミンシントンの合成
グルコサミンシントンの合成を図１２に示す。
【０１９５】
図１２の化合物３０の合成
Ｏｒｇｕｅｉｒａ，Ｈ．Ａ．ｅｔ．ａｌ．Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２００３，９（１），１４０−６９により記載のように、化合物３０を、白色固体として、グルコサミン塩酸塩から得た。生成物を１Ｈ−ＮＭＲによって特徴付けた。
【０１９６】
図１２の化合物３１の合成
化合物３０（１４ｇ、０．０３１４ｍｏｌ）を、メタノール（１７５ｍｌ）に溶解し、そしてナトリウムメトキシド（ＭｅＯＨ中２５％、２．１ｍｌ）を添加し、そして反応物を１５分間、撹拌した。１５分後、反応混合物のｐＨが６に到達するまで、Ｄｏｗｅｘ−５０酸性樹脂を上記に添加した。続いて、Ｄｏｗｅｘ樹脂をろ過して除き、そして減圧下で溶媒を取り出して、褐色に着色した反応塊を得た。粗化合物をカラムクロマトグラフィーによって精製して、生成物として黄色の粘性オイル（１０ｇ、収率１００％）を得た。
【０１９７】
この黄色の粘性オイル（１０ｇ、０．０３１３ｍｏｌ）を、トルエンと共に共エバポレートし、最後に、乾燥アセトニトリル（１１０ｍｌ）に溶解した。ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．１８ｇ、０．０００９４ｍｏｌ）およびアニスアルデヒドジメチルアセタール（１１．４２ｇ、０．０６２７ｍｏｌ）を添加し、そして反応塊を、１晩、室温で撹拌した。終了時、トリエチルアミン（１．３５ｍｌ）を添加し、そして減圧下で溶媒を取り出した。溶離液として５％酢酸エチルを使用するシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製を行い、生成物として、淡黄色の粘性オイル（８．８ｇ、収率６５％）を得た。生成物を１Ｈ−ＮＭＲによって特徴付けた。
【０１９８】
図１２の化合物５２の合成
化合物３１（２７ｇ、０．０６１９ｍｏｌ）を、４Ａ°モレキュラーシーブ（４３ｇ）および臭化ベンジル（５３．４５ｇ、０．３０ｍｏｌ）を添加したＤＣＭ（２４０ｍｌ）に溶解し、そして反応物を、３０分間、室温で撹拌した。酸化銀（Ｉ）（４１．５ｇ、０．１７９ｍｏｌ）を添加し、そして反応物を、１８時間、暗所で撹拌した。次いで、セライトベッドを介して酸化銀（Ｉ）をろ過して除き、そして減圧下でろ過物を濃縮した。溶離液として５％酢酸エチルを使用するカラムクロマトグラフィーによって生成物の単離を行い、白色の固体（２０ｇ、収率６１．５％）を得た。生成物を１Ｈ−ＮＭＲによって特徴付けた。
【０１９９】
図１２の化合物５３の合成
４Ａ°モレキュラーシーブ（９．６ｇ）を含有する無水ＤＭＦ（２７０ｍｌ）中化合物５２（２０ｇ、０．０３７ｍｏｌ）およびシアノ水素化ホウ素ナトリウム（１１．８７ｇ、０．１８９ｍｏｌ）の混合物を、激しい撹拌下で、０℃に冷却した。無水ＤＭＦ（１４６ｍｌ）中トリフルオロ酢酸（ｔｒｉｆｌｕｒｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）（２６ｍｌ）の溶液を添加し、そして反応物を、さらに２時間、０℃で撹拌した。２時間後、反応塊を、室温で１８時間、撹拌した。終了時、トリエチルアミンで反応をクエンチし、次いで、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタンに溶解し、次いで、飽和重炭酸ナトリウムで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして分取ＨＰＬＣによる精製の前に、減圧下で濃縮した。収量：８ｇ（４０％）。生成物を１Ｈ−ＮＭＲによって特徴付けた。
【０２００】
実施例２．イズロン酸シントンの合成
イズロン酸シントンの合成を図１３に示す。
【０２０１】
図１３の化合物６の合成
Ｌｏｈｍａｎ，Ｇ．Ｊ．Ｓ．ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００３，６８（１９），７５５９−７５６１において詳述されているように、一連の化学変換を介して、ジアセトングルコース（化合物１）から化合物６を得た。
【０２０２】
図１３の化合物７の合成
化合物６（１４．０ｇ）をＤＣＭ（１００ｍｌ）に溶解し、そして０℃に冷却した。これに、レブリン酸（７．７ｇ）、ＤＩＰＣ（９．７ｍｌ）およびＤＭＡＰ（８．１ｇ）を、０℃で添加し、そして遮光した。反応物を室温で１晩、撹拌した。終了時、反応混合物を、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（１：１、２００ｍｌ）で希釈し、シリカプラグに通過させ、濃縮し、そしてヘキサン：ＥｔＯＡｃ系を使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーに供して、黄色のオイル（１２．５ｇ）を得た。生成物を、１Ｈ−ＮＭＲおよびＬＣ／ＭＳによって特徴付けた。
【０２０３】
先の工程由来の黄色のオイル（１２．５ｇ）をトリフルオロ酢酸（９０％水溶液、１００ｍｌ）に溶解し、そして１時間、撹拌した。溶媒を、減圧下およびトルエンとの共エバポレーションによって取り出した。ＴＦＡを取り出した後、反応混合物をＤＣＭ（５０ｍｌ）に溶解し、そしてイミダゾール（３．９ｇｍ）および塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（４．７５ｇ）を添加した。反応混合物を室温で１晩、撹拌した。次いで、反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水、１ＮのＨＣｌそして水で洗浄し、乾燥し、濃縮し、そしてヘキサン：ＥｔＯＡｃ溶媒系を使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーに供して、化合物７（９．１ｇ）を得た。生成物を、１Ｈ−ＮＭＲおよびＬＣ／ＭＳによって特徴付けた。
【０２０４】
図１３の化合物８の合成
化合物７（５．０ｇ）をＤＣＭ（１０ｍｌ）に溶解し、そして０℃に冷却し、そしてこれにピリジン（２．０ｍｌ）を０℃、窒素下で添加した。得られた溶液を、１０分間、撹拌し、そして塩化ベンゾイル（１．５ｍｌ）を添加した。次いで、反応混合物を、４８時間（７〜８℃で）、窒素下で撹拌した。次いで、反応混合物をＤＣＭ（５０ｍｌ）で希釈し、水、１ＮのＨＣｌ、１０％重炭酸ナトリウムそしてブライン溶液で洗浄した。これを乾燥し、濃縮し、そしてヘキサン：ＥｔＯＡｃ溶媒系を使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーに供して、純粋な化合物８（３．７ｇ）を得た。生成物を、１Ｈ−ＮＭＲおよびＬＣ／ＭＳによって特徴付けた。
【０２０５】
図１３の化合物２５の合成
化合物６（１２．０ｇｍ）をＤＣＭ（３５ｍｌ）に溶解し、そして０℃に冷却し、そしてこれにピリジン（７．２ｍｌ）を添加した。次いで、溶液を、１０分間、撹拌し、続いて、塩化ベンゾイル（５．５ｍｌ）を添加した。この反応混合物を、４８時間（７〜８℃で）、窒素下で撹拌した。終了時、反応混合物をＤＣＭ（５０ｍｌ）で希釈し、水、１ＮのＨＣｌ、１０％重炭酸ナトリウムそしてブライン溶液で洗浄した。有機層を乾燥し、濃縮し、そしてヘキサン：ＥｔＯＡｃ溶媒系を使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーに供して、化合物（１０．０ｇｍ）を得た。生成物を、１Ｈ−ＮＭＲおよびＬＣ／ＭＳによって特徴付けた。
【０２０６】
先の工程由来の化合物（９．０ｇｍ）をトリフルオロ酢酸（９０％水溶液、７２ｍｌ））に溶解し、そして１時間、撹拌した。溶媒を、減圧下、トルエンとの共エバポレーションによって取り出した。得られたオイルをＤＣＭ（５０ｍｌ）に溶解し、そしてイミダゾール（３．１ｇｍ）および塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（３．７５ｇｍ）を添加した。反応混合物を室温で１晩、撹拌した。終了時、反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水、１ＮのＨＣｌそして水で洗浄し、乾燥し、濃縮し、そしてヘキサン：ＥｔＯＡｃ溶媒系を使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーに供して、化合物２５（６．０ｇｍ）を得た。生成物を、１Ｈ−ＮＭＲおよびＬＣ／ＭＳによって特徴付けた。
【０２０７】
図１３の化合物２６の合成
化合物２５（６．０ｇｍ）をＤＣＭ（１００ｍｌ）に溶解し、そして０℃に冷却した。これに、レブリン酸（１．９ｍｌ）、ＤＩＰＣ（２．７ｍｌ）およびＤＭＡＰ（２．３ｇｍ）を、０℃で添加し、そして反応物を、１晩、室温、遮光下で撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ：ヘキサン（１：１、１００ｍｌ）で希釈し、そしてシリカプラグに通過させた。次いで、それを濃縮し、そしてヘキサン：ＥｔＯＡｃ系を使用するカラムクロマトグラフィーに供して、純粋な化合物２６（４．０ｇｍ）を得た。生成物を、１Ｈ−ＮＭＲおよびＬＣ／ＭＳによって特徴付けた。
【０２０８】
実施例３．図１４の二糖５４の合成
二糖５４の合成を図１４に示す。
【０２０９】
１．  図１４の二糖ドナー２７の作製
化合物２６（０．６２ｇ、０．１ｍｍｏｌ）を、新たに蒸留したＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、そして０℃に冷却した。これに、氷酢酸（１１０μＬ、２．０ｍｍｏｌ）、続いて、ＴＢＡＦ（ＴＨＦ中１．０Ｍ、２．０ｍＬ）を添加した。反応混合物を３０分間、０℃で撹拌し、次いで、２００ｍＬの酢酸エチルで希釈した。有機層をＮＨ４Ｃｌ、ＮａＨＣＯ３、ブライン、次いで水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、ろ過し、そして濃縮して、黄色のオイル（４６１ｍｇ）を得たが、次の工程ではさらなる精製を伴わずに使用した。
【０２１０】
得られた粗オイルを、高減圧下でトルエンと共に共エバポレートし、そして乾燥ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解した。溶液を０℃に冷却し、そしてトリクロロアセトニトリル（１．０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ（１４μＬ、０．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、２０分間、０℃で撹拌し、次いで、シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーカラムに注いで、純粋な化合物２７（４１５ｍｇ、収率６３％）を得た。化合物を１Ｈ−ＮＭＲによって特徴付けた。
【０２１１】
２．図１４の二糖５４の合成
トリクロロアセトイミデート（化合物２７、４１５ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）および化合物５３（３２０ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を合わせ、そして乾燥ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解した。４Ａモレキュラーシーブ（０．５ｇ）を添加し、そして混合物を室温で１５分間、撹拌した。トリフルオロメタンスルホン酸トリエチルシリル（６５μＬ、０．２５ｍｍｏｌ）を室温で添加した。３０分後、反応を、トリエチルアミンでクエンチし、低圧下で濃縮し、そして残渣を、シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーで精製して、「αおよびβ」二糖混合物（４０８ｍｇ、α：β＝６：１）を得た。カラムクロマトグラフィーによるさらなる精製によって、純粋なα二糖５４（３１０ｍｇ）を得た。化合物を、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、２Ｄ−ＮＭＲ（ＨＳＱＣ、ＣＯＳＹ、ＴＯＣＳＹ）およびＥＳＩ−ＭＳによって特徴付けた。
【０２１２】
実施例４．図１５の二糖５５の合成
二糖５５の合成を図１５に示す。
【０２１３】
１．図１５の二糖ドナー９の合成
化合物８（１．２ｇ）を、新たに蒸留したＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、そして０℃に冷却した。これに、氷酢酸（１１０μＬ、２．０ｍｍｏｌ）、続いて、ＴＨＦ（１．０ＭのＴＢＡＦ、１．９４ｍＬ）を添加した。反応混合物を１５分間撹拌し、次いで、２００ｍＬの酢酸エチルで希釈した。有機層を、ＮＨ４Ｃｌ、ＮａＨＣＯ３、ブライン、そして水で洗浄し、次いで、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、ろ過し、次いで、濃縮して、淡黄色のオイル（５６０ｍｇ）を得た。次の工程では、さらなる精製を伴わずに、この化合物を使用した。
【０２１４】
粗化合物を、乾燥ジクロロメタン（８ｍＬ）に溶解した。溶液を０℃に冷却し、そしてトリクロロアセトニトリル（１．０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ（１４μＬ、０．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、２０分間撹拌し、次いで、シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーカラムに注いで、化合物９（３２０ｍｇ、収率５１％）を得た。化合物を１Ｈ−ＮＭＲによって特徴付けた。
【０２１５】
２．図１５の二糖５５の合成
トリクロロアセトイミデート９（３２０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）および化合物５３（２４０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を合わせて、無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解した。４Ａモレキュラーシーブ（０．５ｇ）を添加し、そしてトリフルオロメタンスルホン酸トリエチルシリル（４０μＬ、０．２ｍｍｏｌ）を添加し、そして混合物を室温で１５分間、撹拌した。終了時、反応を、トリエチルアミンでクエンチし、低圧下で濃縮し、そして残渣を、シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーで精製して、「αおよびβ」二糖混合物（合計で３００ｍｇ、α：β＝５：１）を得た。カラムクロマトグラフィーによるさらなる精製によって、純粋なα型の二糖５５（２１０ｍｇ）を得た。化合物を、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、２Ｄ−ＮＭＲ（ＨＳＱＣ、ＣＯＳＹ、ＴＯＣＳＹ）およびＥＳＩ−ＭＳによって特徴付けた。
【０２１６】
実施例５．図１６の四糖５９の合成
四糖５９の合成を図１６に示す。
１．図１５の二糖アクセプター５６の合成
二糖５５（０．４１ｇ、０．４ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＭｅＯＨに溶解し、そしてＭｅＯＨ中１％ＮａＯＨの５ｍＬを０℃で添加し、続いて、反応混合物を、室温まで加温した。反応混合物を１時間撹拌し、そして酢酸（ＡｃＯＨ）を添加して、反応をクエンチした。反応混合物を濃縮し、そして残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、白色の固体として２３５ｍｇのアクセプター５６（収率７２％）を得た。化合物を１Ｈ−ＮＭＲによって特徴付けた。
【０２１７】
２．図１５の二糖ドナー５７の合成
二糖５４（７１０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）を、新たに蒸留したＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶解し、溶液を０℃に冷却し、そして酢酸（９２μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、ＴＢＡＦ（ＴＨＦ中１．０Ｍ、１．４ｍＬ）を添加した。反応混合物を、２０分間、撹拌を保持し、そして、１００ｍＬの酢酸エチルで希釈した。有機層を、ＮＨ４Ｃｌ、ＮａＨＣＯ３、ブライン、そして水で洗浄し、次いで、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。サンプルをろ過および濃縮して、黄色のオイル（６１０ｍｇ）を得た。
【０２１８】
そのようにして得られた粗オイルを、無水ジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解した。次いで、溶液を０℃に冷却し、そしてトリクロロアセトニトリル（０．７ｍＬ、７ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ（１０μＬ、０．０７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、２０分間撹拌し、次いで、シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーカラムに注いで、二糖５７（５０２ｍｇ、収率６８％）を精製した。化合物を１Ｈ−ＮＭＲによって特徴付けた。
【０２１９】
３．図１６の四糖５９の集成
トリクロロアセトイミデート５７（３０２ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）および二糖アクセプター５６（２３５ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を合わせて、無水トルエン（１５ｍＬ）に溶解した。４°Ａモレキュラーシーブ（１ｇ）およびトリフルオロメタンスルホン酸トリエチルシリル（２６μＬ、０．１２ｍｍｏｌ）を、−６０℃で添加した。反応混合物を１時間、撹拌した。次いで、反応をトリエチルアミンによってクエンチし、ろ過し、そして低圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、α−およびβ−四糖を得た。さらなる精製（シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー）により、純粋なα型の四糖５８（６５ｍｇ、収率１３％）を得た。化合物を、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、２Ｄ−ＮＭＲ（ＨＳＱＣ、ＣＯＳＹ、ＴＯＣＳＹ）およびＥＳＩ−ＭＳによって特徴付けた。
【０２２０】
四糖５８（６５ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）を、２ｍＬの乾燥ＣＨ２Ｃｌ２および０．５ｍＬの無水ピリジンの混合物に溶解した。これに、Ｌｅｖ２Ｏ（３９ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）および少量のＤＭＡＰを、室温で添加した。３０分後、反応混合物を５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、そして有機層を、冷ＮａＨＣＯ３、１％ＨＣｌ、そして水で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した後、溶液をろ過および濃縮した。残りの残渣を、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、所望の最終的な四糖５９（６０ｍｇ、収率８８％）を得た。化合物を、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、２Ｄ−ＮＭＲ（ＨＳＱＣ、ＣＯＳＹ、ＴＯＣＳＹ）およびＥＳＩ−ＭＳによって特徴付けた。
【０２２１】
実施例６．図１７の六糖６２の合成
六糖６０の合成を図１７に示す。
【０２２２】
１．図１７の四糖アクセプター６０の合成
四糖５８（０．１８ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を、５ｍＬのＭｅＯＨに溶解した。ＭｅＯＨ中１％ＮａＯＨの５ｍＬを０℃で添加し、続いて、反応混合物を、室温で、さらに４時間、撹拌し、その後、ＡｃＯＨの添加によって、反応をクエンチした。反応混合物を濃縮し、そして残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、６８ｍｇの白色の固体（四糖６０、収率４３％）を得た。化合物を１Ｈ−ＮＭＲによって特徴付けた。
【０２２３】
２．図１７の六糖６２の集成
トリクロロアセトイミデート二糖５７（４８ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）および四糖アクセプター６０（６８ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）を合わせて、乾燥トルエン（８ｍＬ）に溶解した。４°Ａモレキュラーシーブ（１００ｍｇ）およびトリフルオロメタンスルホン酸トリエチルシリル（４．１μＬ、０．０１１ｍｍｏｌ）を−６０℃で添加し、そして混合物を１時間、撹拌した。反応をトリエチルアミンによってクエンチし、混合物をろ過し、次いで、低圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、αおよびβ六糖類の混合物を得、そしてフラッシュクロマトグラフィーによるさらなる精製によって、純粋なα型六糖６１（１０ｍｇ、収率９％）を得た。化合物を、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、２Ｄ−ＮＭＲ（ＨＳＱＣ、ＣＯＳＹ、ＴＯＣＳＹ）およびＥＳＩ−ＭＳによって特徴付けた。
【０２２４】
六糖６１（１０ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ）を、２ｍＬの乾燥ＣＨ２Ｃｌ２および０．５ｍＬの無水ピリジンの混合物に溶解した。これに、Ｌｅｖ２Ｏ（４ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）および少量のＤＭＡＰを、室温で添加した。３０分後、反応混合物を２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、そして有機層を、冷ＮａＨＣＯ３、１％ＨＣｌ、そして水で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した後、混合物をろ過、濃縮し、次いで、残渣を、カラムクロマトグラフィーによって精製して、所望の最終的な六糖６２（８ｍｇ、収率７５％）を得た。化合物を、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、２Ｄ−ＮＭＲ（ＨＳＱＣ、ＣＯＳＹ、ＴＯＣＳＹ）およびＥＳＩ−ＭＳによって特徴付けた。
【０２２５】
実施例７．一硫酸化二糖６３の合成
一硫酸化二糖６３の合成を図１８に示す。
【０２２６】
二糖５４（０．１ｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）を、８ｍＬのＥｔＯＨ／トルエン（２／１ｖ／ｖ）に溶解し、そして酢酸ヒドラジン（９１ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を２時間、撹拌し、次いで、酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈した。有機層を水で洗浄し、ＮａＳＯ４で乾燥し、ろ過し、そしてエバポレーションを介して濃縮した。得られた残渣を、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーによって精製して、８８ｍｇ（粗収率９８％）のＣ−２ＯＨ化合物を得、次の工程において使用した。
【０２２７】
先の工程由来の粗化合物（４４ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）を、５ｍＬのピリジンに溶解し、そして三酸化硫黄−ピリジン錯体（ＳＯ３．Ｐｙ、２３ｍｇ、０．１４４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、４５℃で３時間、撹拌し、その後、ＭｅＯＨを添加して、反応をクエンチした。次いで、混合物を濃縮し、そして得られた残渣を、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーによって精製して、「ピリジン」塩としてＣ−２Ｏ−硫酸化合物を得た。乾燥したピリジニウム塩を、５ｍＬのＭｅＯＨに溶解し、次いで、１ｍＬのＮａＨＣＯ３（１０％水溶液）を添加した。次いで、反応混合物を濃縮して、粗ナトリウム塩生成物を得、これを、フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、「硫酸化ナトリウム塩」としての最終産物（化合物６３、４５ｍｇ、収率９４％）を得た。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【図１８】
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【国際調査報告】
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