(57)【要約】  チョウセンニンジンサポニン（Ｒｇ１＋Ｒｂ１）、グリシルリジン酸およびナツメｃＡＭＰを含む、うつおよび不安を治療するための医薬組成物または機能性食品。うつおよび不安を治療するための好ましい薬剤である従来のパロキセチンおよびジアゼパムと比較して、本発明が顕著な抗うつ有効性および抗不安有効性を有することが実験から示される。【選択図】図３
2011504884.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
チョウセンニンジンおよびカンゾウを含む、うつおよび不安症の治療のための医薬組成物。
【請求項２】
４〜６０重量部の前記チョウセンニンジンおよび２〜３０重量部の前記カンゾウを含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
１０〜２８重量部の前記チョウセンニンジンおよび５〜１４重量部の前記カンゾウを含む請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
少なくとも１つの医薬的に許容可能な担体および添加剤をさらに含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
錠剤、カプセル、粉末、丸剤、微粉、溶液、マイクロカプセル、懸濁液、エマルション、粒子、滴下薬およびロールから成る群から選択される剤形を有する請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
栄養食品およびサプリメントの１つとして製造された請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
チョウセンニンジン、カンゾウおよびナツメを含む、うつおよび不安症の治療のための医薬組成物。
【請求項８】
４〜６０重量部の前記チョウセンニンジン、２〜３０重量部の前記カンゾウおよび２〜４０重量部の前記ナツメを含む請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
１０〜２８重量部の前記チョウセンニンジン、５〜１４重量部の前記カンゾウおよび４〜１８重量部の前記ナツメを含む請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
少なくとも１つの医薬的に許容可能な担体および添加剤をさらに含む請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
錠剤、カプセル、粉末、丸剤、微粉、溶液、マイクロカプセル、懸濁液、エマルション、粒子、滴下薬およびロールから成る群から選択される剤形を有する請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
栄養食品およびサプリメントの１つとして製造された請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
以下を含む、うつおよび不安症の治療のための医薬組成物：
Ｒｇ１およびＲｂ１を有するジンセノサイド；および
グリシルリジン酸、グリチルレチン酸およびそれらの組み合わせから成る群から選択される１つであるグリチルリジン関連酸。
【請求項１４】
２〜２５重量部の前記Ｒｇ１および前記Ｒｂ１を有する前記ジンセノサイドおよび３〜４６重量部の前記グリチルリジン関連酸を含む請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
４〜１２重量部の前記Ｒｇ１および前記Ｒｂ１を有する前記ジンセノサイドおよび５〜１５重量部の前記グリチルリジン関連酸を含む請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１３に記載の医薬組成物であって、ここにおいて、前記ジンセノサイドは、ジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１を有するチョウセンニンジン抽出物であって、前記グリチルリジン関連酸は、前記グリシルリジン酸を有するカンゾウ抽出物である医薬組成物。
【請求項１７】
少なくとも１つの医薬的に許容可能な担体および添加剤をさらに含む請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
錠剤、カプセル、粉末、丸剤、微粉、溶液、マイクロカプセル、懸濁液、エマルション、粒子、滴下薬およびロールから成る群から選択される剤形を有する請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
栄養食品およびサプリメントの１つとして製造された請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
以下を含む、うつおよび不安症の治療のための医薬組成物：
Ｒｇ１およびＲｂ１を有するジンセノサイド；
グリシルリジン酸、グリチルレチン酸およびそれらの組み合わせから成る群から選択される１つであるグリチルリジン関連酸；および
ナツメサイクリックアデニル酸（ナツメｃＡＭＰ）。
【請求項２１】
２〜２５重量部の前記Ｒｇ１および前記Ｒｂ１を有する前記ジンセノサイド、３〜４６重量部の前記グリチルリジン関連酸および０．００２〜０．４重量部の前記ナツメｃＡＭＰを含む請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
４〜１２重量部の前記Ｒｇ１および前記Ｒｂ１を有する前記ジンセノサイド、５〜１５重量部の前記グリチルリジン関連酸および０．０１〜０．０８重量部の前記ナツメｃＡＭＰを含む請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
請求項２０に記載の医薬組成物であって、ここにおいて前記ジンセノサイドはジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１を有するチョウセンニンジン抽出物であって、前記グリチルリジン関連酸は前記グリシルリジン酸を有するカンゾウ抽出物であって、および前記ナツメｃＡＭＰは前記ナツメｃＡＭＰを有するナツメ抽出物である医薬組成物。
【請求項２４】
請求項２０に記載の医薬組成物であって、前記ナツメｃＡＭＰを含む原料が、まずナツメを抽出して第１の抽出物を取得し、その後前記第１の抽出物を精製することによって得られた第２の抽出物であり、前記第２の抽出物のナツメｃＡＭＰ濃度が前記第１の抽出物のそれよりも高い医薬組成物。
【請求項２５】
少なくとも１つの医薬的に許容可能な担体および添加剤をさらに含む請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
錠剤、カプセル、粉末、丸剤、微粉、溶液、マイクロカプセル、懸濁液、エマルション、粒子、滴下薬およびロールから成る群から選択される剤形を有する請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
栄養食品およびサプリメントの１つとして製造された請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
不安症を治療するための医薬組成物の製造方法であって、
前記医薬組成物は、ナツメサイクリックアデニル酸（ナツメｃＡＭＰ）を含み、
前記製造方法は、以下の工程を含む方法：
（ａ）ナツメを抽出し、第１の抽出物を得ること；および
（ｂ）前記第１の抽出物を精製し、第２の抽出物を得ること、
ここにおいて、前記第２の抽出物のナツメｃＡＭＰ濃度は、前記第１の抽出物のそれよりも高い。
【請求項２９】
前記工程（ｂ）が、アルデヒド基に結合したマクロ孔質樹脂によって前記第１の抽出物の前記ナツメｃＡＭＰをクロマトグラフに供することで行われる、請求項２８に記載の製造方法。
【請求項３０】
前記工程（ｂ）が、アルデヒド基に結合したＯＵ−２マクロ孔質樹脂によって前記第１の抽出物の前記ナツメｃＡＭＰをクロマトグラフに供することで行われる、請求項２９に記載の製造方法。
【請求項３１】
前記工程（ｂ）が、さらに、アルデヒド基に結合したＭＥ−２マクロ孔質樹脂によって前記第１の抽出物の前記ナツメｃＡＭＰをクロマトグラフに供することで行われる、請求項３０に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、うつおよび不安症の治療のための、ジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、グリシルリジン酸ならびにナツメサイクリックサイクリックアデニル酸（ナツメｃＡＭＰ）を含む原料から製造される医薬組成物または健康食品に関する。特に、本発明は、うつおよび不安症の治療のための医薬組成物または健康食品に関する；それは、明確な機能および成分、明白な治療効果、より小さな副作用および長期使用に対する高い安全性を有する。
【背景技術】
【０００２】
精神障害は脳機能障害によって引き起こされ、罹患した個人は、意識、考え、感情、振る舞い、意志および知能等に異常を示す。精神障害は、社会で最も重大な負担をもたらす１０の疾病の内４つを占めている。人々は現在、社会発展の過程において精神障害にますます多くの注意を払っている。医学界および社会全体は、精神障害を駆逐するための精神的な医薬を至急求めている。不安症およびうつは最も一般的な精神的な機能障害であり、抗不安薬および抗うつ薬は治療の主な方法である。
【０００３】
不安症は、主として不安な感情として表れる精神的な疾病である。主な特徴は、自立神経障害、筋硬直および運動障害等の症候群とともに脱走または不安、緊張型分裂病および恐れなどのような継続的な不安な感情である。ジーグムント・フロイトが神経衰弱から不安症を分けて以来、世界中の学者は不安症に関する大規模研究を開始し、大量のデータを蓄積した。現代の医学研究によれば、不安症の病因には、精神的な解剖、神経伝達物質／変調器受容体および神経内分泌系における欠陥などを含まれる。
【０００４】
現在の主流の抗不安薬はベンゾジアゼピンであり、そのメカニズムは、抑制性神経伝達物質ガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）の活性を調節して、病徴を低減および軽減することである。しかしながら、ベンゾジアゼピンは、不眠、アレルギー、筋肉痛、弱さ、吐き気、運動障害、視力障害、疲労、障害および妄想等を含む多くの副作用を有する。
【０００５】
うつは一般的な疾病である。世界保健機構（ＷＨＯ）は、「世界中のうつの発生率は約１１％である。現在、約３億４０００万人の精神的うつ病患者が世界に存在し、その数は増加している。」と公表している。調査により、うつは、今後２０年で、世界で第２の一般的な疾病になるまで増大するであろうことがわかっている。
【０００６】
現在の主流な抗うつ薬はプロザック、パキシルおよびゾロフト等であり、これらは、選択的セロトニン再吸収阻害剤（ＳＳＲＩ）、セロトニン−ノルエピネフリン再吸収阻害剤（ＳＮＲＩ）、およびノルエピネフリンおよびドーパミン再吸収阻害剤（ＮＤＲＩ）に属し、５−ヒドロキシトリプタミン（５−ＨＴ）、ノルエピネフリン（ＮＥ）およびドーパミン（ＤＡ）の取り込みを阻害する。これらの抗うつ薬の機能のメカニズムは、５−ＨＴのようなヒト神経伝達物質の量を増加させて、うつの病徴を緩和することである。しかしながら、市販される抗うつ薬は異なるレベルで副作用を有しており、例えば、自殺率の増大、頭痛、めまい（ｇｉｄｄｉｎｅｓｓ）、めまい（ｖｅｒｔｉｇｏ）、不眠、過眠症、耳鳴り、渇望、拒食、欲動、体重増加、血上昇圧、腹痛、逆流吐き気、嘔吐、消化不良、下痢、便秘、下肢痛、発疹、動揺、痙攣、多汗症、浮腫、性欲および性的無能力等である。
【０００７】
近年、プロザックなどのような抗うつ薬が重大な社会問題になっている。２００４年、アメリカの食品医薬品局（ＦＤＡ）はさらに、製薬会社に対して、製品ラベルにて明確に副作用を示すよう改訂し、市場における３２の主要な抗うつ薬の指示において注意することを命じ、これらの調合薬が子供および青年の自殺率を増加させるかもしれないことを内科医および看護婦に強調した。しかしながら、治療の状態にあり、治療を望む多くのうつ患者が、現在の抗うつ薬の多くの副作用に耐えることを不安に思い、または耐えることができないために、その治療を中止または拒絶している。現在の状況に照らして、長期的使用におけるより少ない副作用、高い安全性を示し、より顕著／強力な抗うつ品質および抗不安品質を示す新世代の医薬の検索が、製薬の世界全体の注目の中心になっている。
【０００８】
それ故、出願人は、先行技術が直面する上記の状況を解決することを試みた。
【発明の概要】
【０００９】
本発明の目的は、うつおよび不安症の現在利用可能な治療法の不足を克服するために医薬組成物または健康食品を提供することである。医薬組成物または健康食品は、うつおよび不安症の治療のための、ジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、グリシルリジン酸およびナツメｃＡＭＰを含む原料から製造される。特に、明確な機能および成分を提供する新規の技術的なスキーム、明白な治療効果、より少ない副作用および長期的な使用法のための高い安全性が提供される。
【００１０】
本発明の医薬の解決スキームは、うつおよび不安症の治療のための現代医療に関する病理学的および薬理学の理論に従って発明者によって努力された結果である。チョウセンニンジン、カンゾウおよびナツメを含む３つの原料を使用するスキームは、不安を治療する現代的医薬の病理学的および薬理学の理論にもとづいて研究されてきた。特に、それは、過去の医薬標的研究と、近年のポスト受容体機構の開発とを統合する。チョウセンニンジンからのジンセノサイドにはアデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）活性があり、ｃＡＭＰ合成を刺激し、および、ｃＡＭＰホスホジエステラーゼ（ＣＡＰＤ）阻害活性があり、ｃＡＭＰ分解を低減する；カンゾウからのグリシルリジン酸（およびグリチルレチン酸）はＣＡＰＤの強い阻害剤である。ジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１ならびにグリシルリジン酸は、組み合わせられ、まとめて使用された場合、生物内において、それぞれｃＡＭＰおよびプロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）の濃度および活性をさらに増大させる。ｃＡＭＰの濃度および活性の増大は、（１）ノルエピネフリンなどのような神経伝達物質の合成および放出を増加させ、（２）脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）の発現を増加させ、および（３）視床下部−脳下垂体−副腎（ＨＰＡ）軸の活動過多およびグルココルチコイドの分泌を抑制して、顕著な抗うつ機能を達成する。ＰＫＡの濃度および活性の増加は、ニューロンにおけるＧＡＢＡの阻害機能を拡大して、顕著な抗不安機能を達成することができる。さらに、外来的な加水分解できないｃＡＭＰであるナツメｃＡＭＰは、生物におけるｃＡＭＰの転移に関与し、酵素機能を装い、および生物におけるｃＡＭＰおよびＰＫＡの発現を増加させ、抗うつ機能および抗不安機能を達成することができる。それ故、ジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１はグリシルリジン酸およびナツメｃＡＭＰと組み合わせられる；これらの原料は、集団的に本発明の抗うつ効果および抗不安効果をさらに増大するように作用すると予想される。チョウセンニンジン、カンゾウおよびナツメは漢方にて一般に使用される医薬用原料および食物であり、数千年間滋養医学食に使用されている。この長い臨床および食事の歴史において、チョウセンニンジン、カンゾウおよびナツメの併用の安全性および効果は十分に証明されている。発明者の研究および実験結果は、これらの３つの医薬原料が単に通常煮出され、抽出されて抽出物が得られる場合、現代技術の主要な抗うつ薬および抗不安薬と比較して、その抽出物には有意な抗うつ効果および抗不安効果がないことを示す。しかしながら、これらの３つの医薬原料の抽出物をさらに精製して、この発明に記述されるように、ジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、グリシルリジン酸およびナツメｃＡＭＰを含む有効な成分などの濃度を増加させることで、顕著な抗うつ機能および抗不安機能を有する医薬組成物が得られる。実験結果から、うつおよび不安症の治療のための主流な医薬であるパロキセチンおよびジアゼパムと比較して、本発明にはそれぞれ有意な抗うつ効果および抗不安効果があることが示された。抽出および精製の後に３つの医薬原料に起因するデブリも収集され、動物実験にて試験した。デブリは微量のジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、グリシルリジン酸ならびにナツメｃＡＭＰを含むものの、動物実験において顕著な抗うつ機能および抗不安機能は示さなかった。重要なことに、チョウセンニンジン、カンゾウおよびナツメの摂取は、現代技術の主要な抗うつ薬および抗不安薬の副作用を生じさせなかった。患者は、副作用に関する心配を必要とせず、医薬の療法を常に中止または拒絶することがないだろう。それ故、発明者は、ジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、グリシルリジン酸ならびにナツメｃＡＭＰは、うつおよび不安症の治療のための医薬組成物または健康食品を製造するための原料であると提案する。特に、新規の技術的なスキームは、副作用なく、明確な機能および成分、長期的な使用法のための高い安全性を提供し、先行技術にて生じる欠点を実質的に改善する。
【００１１】
グリチルレチン酸はグリシルリジン酸より高い脂溶解性を有し、容易に脳血液関門を通って脳に入ることができる。グリシルリジン酸は、ほぼ１００％の効率で人体にてグリチルレチン酸に変換されるため、グリシルリジン酸によるＣＡＰＤの阻害は、身体におけるグリシルリジン酸からグリチルレチン酸への変換によって進行される。従って、グリシルリジン酸またはグリチルレチン酸は、本発明の医薬組成物を製造するための原料でありえる。
【００１２】
本発明の一側面によると、少なくとも１つのうつおよび不安症の治療のための医薬組成物が提供される。医薬組成物は次のものを含む：ジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１；グリシルリジン酸、グリチルレチン酸およびそれらの組み合わせから成る群から選択されるグリチルリジン関連酸；およびナツメｃＡＭＰ。
【００１３】
好ましくは、医薬組成物は、２〜２５重量部のジンセノサイド、３〜４６重量部のグリチルリジン関連酸（ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃａｌｌｙ  ｒｅｌａｔｅｄ  ａｃｉｄ）および０．００２〜０．４重量部のナツメｃＡＭＰを含む。
【００１４】
好ましくは、医薬組成物は、４〜１２重量部のジンセノサイド、５〜１５重量部のグリチルリジン関連酸および０．０１〜０．０８重量部のナツメｃＡＭＰを含む。
【００１５】
好ましくは、ジンセノサイドはチョウセンニンジンから抽出され、グリチルリジン関連酸はカンゾウから抽出され、およびナツメｃＡＭＰはナツメから抽出される。
【００１６】
好ましくは、ナツメは、第１のナツメｃＡＭＰ濃度を有する第１の抽出物を得るために抽出され、第１の抽出物は、さらに、第２のナツメｃＡＭＰ濃度を有する第２の抽出物を得るために抽出され、第２のナツメｃＡＭＰ濃度は第１のナツメｃＡＭＰ濃度より高く、および第２の抽出物は医薬組成物における原料である。
【００１７】
本発明の別の側面によると、少なくとも１つのうつおよび不安症の治療のための医薬組成物が提供される。医薬組成物は次のものを含む：ジンセノサイド；グリシルリジン酸、グリチルレチン酸およびそれらの組み合わせから成る群から選択される１つであるグリチルリジン関連酸。
【００１８】
好ましくは、ジンセノサイドはＲｇ１およびＲｂ１を含む。
【００１９】
好ましくは、医薬組成物は、２〜２５重量部のジンセノサイドおよび３〜４６重量部のグリチルリジン関連酸を含む。
【００２０】
好ましくは、医薬組成物は、４〜１２重量部のジンセノサイドおよび５〜１５重量部のグリチルリジン関連酸を含む。
【００２１】
本発明の別の側面によると、少なくとも１つのうつおよび不安症の治療のための医薬組成物が提供される。医薬組成物はチョウセンニンジン、カンゾウおよびナツメを含む。
【００２２】
好ましくは、医薬組成物は、４〜６０重量部のチョウセンニンジン、２〜３０重量部のカンゾウおよび２〜４０重量部のナツメを含む。
【００２３】
好ましくは、医薬組成物は、１０〜２８重量部のチョウセンニンジン、５〜１４重量部のカンゾウおよび４〜１８重量部のナツメを含む。
【００２４】
本発明の別の側面によると、少なくとも１つのうつおよび不安症の治療のための医薬組成物が提供される。医薬組成物はチョウセンニンジンおよびカンゾウを含む。
【００２５】
好ましくは、医薬組成物は４〜６０重量部のチョウセンニンジンおよび２〜３０重量部のカンゾウを含む。
【００２６】
好ましくは、医薬組成物は１０〜２８重量部のチョウセンニンジンおよび５〜１４重量部のカンゾウを含む。
【００２７】
好ましくは、医薬組成物はさらに少なくとも１つの医薬的に許容可能な担体および添加剤を含む。
【００２８】
好ましくは、医薬組成物は、錠剤、カプセル、粉末、ピル、ダスト、溶液、マイクロカプセル、懸濁剤、エマルション、粒子、滴下ピルおよびロールから成る群から選択される剤形を有する。
【００２９】
好ましくは、医薬組成物は、健康食品および栄養サプリメントの１つとして製造される。
【００３０】
本発明の別の側面によると、少なくとも１つのうつおよび不安症の治療のための医薬組成物のナツメｃＡＭＰの製造方法が提供される。製造方法は、次の工程を含む：（ａ）ナツメを抽出して、第１のナツメｃＡＭＰ濃度を有する第１の抽出物を得る；および（ｂ）第１の抽出物を精製して、第２のナツメｃＡＭＰ濃度を有する第２の抽出物を得る。第２のナツメｃＡＭＰ濃度は第１のナツメｃＡＭＰ濃度より高い。
【００３１】
好ましくは、工程（ｂ）はアルデヒド基に結合したマクロ孔質樹脂を用いた第１の抽出物のクロマトグラフィにより処理される。
【００３２】
好ましくは、工程（ｂ）は、さらに次の工程を含む：（ｂ１）アルデヒド基に結合したＯＵ−２マクロ孔質樹脂による第１の抽出物のクロマトグラフィ；および（ｂ２）アルデヒド基に結合したＭＥ−２マクロ孔質樹脂による第１の抽出物のクロマトグラフィ。
【００３３】
本発明の別の側面によると、ナツメｃＡＭＰを作製する方法が提供される。方法は、次の工程を含む：（ａ）ナツメを抽出して、第１の抽出物を得る；および、（ｂ）結合したアルデヒド基を有するマクロ孔質樹脂による第１の抽出物のクロマトグラフィ。
【００３４】
うつおよび不安症の治療のための本発明の明細書およびクレームにおいて記述された医薬組成物は、本発明の中核の内容を達成する。本発明が公表された後、当業者は、漢方に関する理論または現代の薬理学に関する理論に従って、上記の医薬と同一の効果／機能を有する薬草剤（オンジサポニン（ｏｎｊｉｓａｐｏｎｉｎ）、サイコサポニン（ｓａｉｋｏｓａｐｏｎｉｎ）およびカンゾウ・クマリン等）のその他の有効な成分について、通常の増加／減少を行うことができ、または置換することができる。この通常の増加／減少、同様の機構を有する薬草剤、その他の同一のＣＡＰＤ阻害剤、ＡＣ活性化剤または対応する有効成分の置換は、当業者の通常の技術的活動に属する。それ故、置換は本発明の保護する範囲にある。
【００３５】
本発明の上記の目的および利点は、以下の詳細な記述および添付図面を見ることで、当業者にとってより容易に明確となるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は、本発明の第１の好ましい実施態様に関する医薬組成物の製造方法を示すフローチャートである。
【図２】図２は、本発明の第２の好ましい実施態様に関する医薬組成物の製造方法を示すフローチャートである。
【図３】図３は、本発明の第３の好ましい実施態様に関する医薬組成物の製造方法を示すフローチャートである。
【図４】図４は、本発明の第４の好ましい実施態様に関する医薬組成物の製造方法を示すフローチャートである。
【図５】図５は、本発明の第５の好ましい実施態様に関する医薬組成物の製造方法を示すフローチャートである。
【図６】図６は、本発明の第６の好ましい実施態様に関する医薬組成物の製造方法を示すフローチャートである。
【発明の詳細な説明】
【００３７】
本発明は、現在、以下の実施態様に関連してより明確に記述されるだろう。本発明の好適な実施態様の以下の記述は、例証および記述のみの目的のためにここに示されることに留意される。それは、網羅または開示される正確な形態への限定との意図はない。
【００３８】
本発明の目的を遂行するために、本発明の技術的なスキームは特に以下のように提供される。
【００３９】
うつおよび不安症の治療のための医薬組成物が本発明にて開示され、医薬組成物はジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、グリシルリジン酸およびナツメｃＡＭＰの原料を含めることにより製造される。
【００４０】
例１：
うつおよび不安症の治療のための医薬組成物は、チョウセンニンジンおよびカンゾウを含む原料から製造される。
【００４１】
例２：
うつおよび不安症の治療のための医薬組成物は、４〜６０重量部のチョウセンニンジンおよび２〜３０重量部のカンゾウを含む原料から製造される。
【００４２】
例３：
うつおよび不安症の治療のための医薬組成物は、１０〜２８重量部のチョウセンニンジンおよび５〜１４重量部のカンゾウを含む原料から製造される。
【００４３】
例４：
うつおよび不安症の治療のための医薬組成物は、チョウセンニンジン、カンゾウおよびナツメを含む原料から製造される。
【００４４】
例５：
うつおよび不安症の治療のための医薬組成物は、４〜６０重量部のチョウセンニンジン、２〜３０重量部のカンゾウおよび２〜４０重量部のナツメを含む原料から製造される。
【００４５】
例６：
うつおよび不安症の治療のための医薬組成物は、１０〜２８重量部のチョウセンニンジン、５〜１４重量部のカンゾウおよび４〜１８重量部のナツメを含む原料から製造される。
【００４６】
例７：
うつおよび不安症の治療のための医薬組成物は、ジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、およびグリシルリジン酸（またはグリチルレチン酸）を含む原料から製造される。
【００４７】
例８：
本発明の医薬組成物は、合計で２〜２５重量部のジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１および３〜４６重量部のグリシルリジン酸（またはグリチルレチン酸）を含む原料から製造される。
【００４８】
例９：
本発明の医薬組成物は、合計で４〜１２重量部のジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１を含む原料および５〜１５重量部のグリシルリジン酸（またはグリチルレチン酸）から製造される。
【００４９】
例１０：
本発明の医薬組成物は、上記重量部のジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１を含むチョウセンニンジン抽出物、および上記重量部のグリシルリジン酸を含むカンゾウ抽出物を含む原料から製造される。
【００５０】
例１１：
本発明の医薬組成物は、ジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、グリシルリジン酸（またはグリチルレチン酸）およびナツメｃＡＭＰを含む原料から製造される。
【００５１】
例１２：
本発明の医薬組成物は、合計で２〜２５重量部のジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、３〜４６重量部のグリシルリジン酸（またはグリチルレチン酸）および０．００２〜０．４重量部のナツメｃＡＭＰを含む原料から製造される。
【００５２】
例１３：
本発明の医薬組成物は、合計で４〜１２重量部のジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、および５〜１５重量部のグリシルリジン酸（またはグリチルレチン酸）および０．０１〜０．０８重量部のナツメｃＡＭＰを含む原料から製造される。
【００５３】
例１４：
本発明の医薬組成物は、上記重量部のジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１を含むチョウセンニンジン抽出物、上記重量部のグリシルリジン酸を含むカンゾウ抽出物および上記重量部のナツメｃＡＭＰを含むナツメ抽出物を含む原料から製造される。
【００５４】
例１５：
本発明の医薬組成物が提供され、ここにおいて、ナツメｃＡＭＰを有する原料は以下に記載の第２の抽出物である。第１に、ナツメは第１の抽出物を得るために抽出され、その後、第１の抽出物は第２の抽出物を得るためにさらに抽出され、ここにおいて、第２の抽出物のナツメｃＡＭＰ濃度は第１の抽出物よりも高い。
【００５５】
例１６：
本発明の医薬組成物が提供され、ここにおいて、ナツメｃＡＭＰを含む原料の製造方法は、次の工程を含む：
（ａ）第１の抽出物を得るためにナツメを抽出すること；および
（ｂ）第２の抽出物を得るために第１の抽出物を抽出すること、および、第２の抽出物のナツメｃＡＭＰ濃度は第１の抽出物のそれよりも高い。
【００５６】
例１７：
上記の製造方法が提供され、ここにおいて、工程（ｂ）は、アルデヒド基に結合したマクロ孔質樹脂を使用する第１の抽出物のナツメｃＡＭＰのクロマトグラフィ、吸収および分離により行われる。
【００５７】
例１８：
上記の製造方法が提供され、ここにおいて、工程（ｂ）は、アルデヒド基に結合したＯＵ−２マクロ孔質樹脂を使用する第１の抽出物のナツメｃＡＭＰのクロマトグラフィ、吸収および分離により行われる。
【００５８】
例１９：
上記の製造方法が提供され、ここにおいて、工程（ｂ）は、さらに、アルデヒド基に結合したＭＥ−２マクロ孔質樹脂を使用する第１の抽出物のナツメｃＡＭＰのクロマトグラフィ、吸収および分離により行われる。
【００５９】
例２０：
本発明の医薬組成物は、医薬的に許容可能な担体、添加剤およびそれらの組み合わせを含み得る。
【００６０】
例２１：
本発明の医薬組成物は剤形として製造することができ、剤形は、錠剤、カプセル、粉末、ピル、ダスト、溶液、マイクロカプセル、懸濁剤、エマルション、粒子、滴下ピル、ロールおよび薬理学的経口医薬剤形から成る群から選択される。
【００６１】
例２２：
本発明の医薬組成物は、うつおよび不安症の治療のための医薬、健康食品および栄養サプリメントとして製造することができる。
【００６２】
本発明の目的を遂行するために、医薬組成物の製造方法は以下のように記述される。
【００６３】
方法１：
うつおよび不安症の治療のための本発明の医薬組成物は、４〜６０重量部のチョウセンニンジンおよび２〜３０重量部のカンゾウの原料から製造され、その原料は抽出および精製され、ジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１並びにグリシルリジン酸を有する抽出物が得られる。
【００６４】
方法２：
うつおよび不安症の治療のための本発明の医薬組成物は、１０〜２８重量部のチョウセンニンジンおよび５〜１４重量部のカンゾウを有する原料から製造され、その原料は抽出および精製され、ジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１ならびにグリシルリジン酸を有する抽出物が得られる。
【００６５】
方法３：
うつおよび不安症の治療のための本発明の医薬組成物は、４〜６０重量部のチョウセンニンジン、２〜３０重量部のカンゾウおよび２〜４０重量部のナツメを有する原料から製造され、その原料は抽出および精製され、ジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、グリシルリジン酸ならびにナツメｃＡＭＰを有する抽出物が得られる。
【００６６】
方法４：
うつおよび不安症の治療のための本発明の医薬組成物は、１０〜２８重量部のチョウセンニンジン、５〜１４重量部のカンゾウおよび４〜１８重量部のナツメを有する原料から製造され、その原料は抽出および精製され、ジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、グリシルリジン酸ならびにナツメｃＡＭＰを有する抽出物が得られる。
【００６７】
方法５：
うつおよび不安症の治療のための本発明の医薬組成物は、チョウセンニンジンから抽出および精製されたジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１を有し、およびカンゾウから抽出および精製されたグリシルリジン酸を有する抽出物の原料から、またはジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１ならびにグリシルリジン酸（またはグリチルレチン酸）を有する調製した原料から製造される。
【００６８】
方法６：
本発明の医薬組成物は、合計で２〜２５重量部のジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１ならびに３〜４６重量部のグリシルリジン酸（またはグリチルレチン酸）の原料から製造される。
【００６９】
方法７：
本発明の医薬組成物は、合計で４〜１２重量部のジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１ならびに５〜１５重量部のグリシルリジン酸（またはグリチルレチン酸）の原料から製造される。
【００７０】
方法８：
うつおよび不安症の治療のための本発明の医薬組成物は、チョウセンニンジンから抽出および精製されたジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、カンゾウから抽出および精製されたグリシルリジン酸ならびにナツメから抽出および精製されたナツメｃＡＭＰを有する抽出物の原料から、またはジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、グリシルリジン酸（またはグリチルレチン酸）ならびにナツメｃＡＭＰを有する抽出物の調製した原料から製造される。
【００７１】
方法９：
本発明の医薬組成物は、合計で２〜２５重量部のジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、３〜４６重量部のグリシルリジン酸（またはグリチルレチン酸）ならびに０．００２〜０．４重量部のナツメｃＡＭＰの原料から製造される。
【００７２】
方法１０：
本発明の医薬組成物は、合計で４〜１２重量部のジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、５〜１５重量部のグリシルリジン酸（またはグリチルレチン酸）および０．０１〜０．０８重量部のナツメｃＡＭＰの原料から製造される。
【００７３】
方法１１：
本発明の医薬組成物が提供されるが、ここにおいて、ナツメｃＡＭＰの原料を含む原料の製造方法は以下の工程を含む：
（ａ）ナツメを抽出し、第１の抽出物を得ること；および
（ｂ）前記第１の抽出物を精製して第２の抽出物を取得すること、ここにおいて前記第２の抽出物のナツメｃＡＭＰ濃度は前記第１の抽出物のそれよりも高い。
【００７４】
方法１２：
上記製造方法が提供され、ここにおいて、工程（ｂ）は、アルデヒド基に結合したマクロ孔質樹脂を使用する第１の抽出物のナツメｃＡＭＰのクロマトグラフィ、吸収および分離により行われる。
【００７５】
方法１３：
上記製造方法が提供され、ここにおいて、アルデヒド基に結合したＯＵ−２マクロ孔質樹脂を使用する第１の抽出物のナツメｃＡＭＰのクロマトグラフィ、吸収および分離により行われる。
【００７６】
方法１４：
上記製造方法が提供され、ここにおいて、アルデヒド基に結合したＭＥ−２マクロ孔質樹脂を使用する第１の抽出物のナツメｃＡＭＰのクロマトグラフィ、吸収および分離により行われる。
【００７７】
方法１５：
本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される担体、添加物およびそれらの混合物を含む。
【００７８】
方法１６：
本発明の医薬組成物は、剤形として製造されてよく、当該剤形は、錠剤、カプセル、粉末、丸剤、微粉、溶液、マイクロカプセル、懸濁液、エマルション、粒子、滴下薬、ロールおよび薬学的な経口剤形のうちのいずれか一から選択される。
【００７９】
方法１７：
本発明の医薬組成物は、Ｇｏｏｄ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  （ＧＭＰ）医薬基準および健康食品生産／製造基準の方法にしたがって、うつおよび不安症の治療のための薬剤、健康食品および栄養サプリメントとして製造されてよい。
【００８０】
［好ましい実施形態］
以下のとおり、図および好ましい実施形態を組み合わせることにより、本発明をさらに説明する。
【００８１】
実施形態１：
図１は、本発明の第１の好ましい実施形態に関する医薬組成物の製造方法を示すフローチャートを示す。図１では、２０ｋｇのチョウセンニンジン（１０１）を破砕した後、破砕したチョウセンニンジンを加熱して、７０％のエタノール溶液で抽出する。抽出したチョウセンニンジンを、カラム・クロマトグラフィにて分離および精製し、乾燥し、１２０ｇのジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１を有する０．８ｋｇのチョウセンニンジン抽出物を得る（１０２）。さらに、１０ｋｇのカンゾウ（１０３）を破砕した後、破砕したカンゾウを１２時間室温で浸す。浸したカンゾウを、煎出およびアルコール沈降により抽出し、濃縮しおよび乾燥し、２００ｇのグリシルリジン酸を有する２ｋｇのカンゾウ抽出物を得る（１０４）。その後、得られた１５０ｇのチョウセンニンジン抽出物および得られた２００ｇのカンゾウ抽出物を粉砕して混合し、本発明の３５０ｇの医薬組成物（２２．５ｇのジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、および２０ｇのグリシルリジン酸を含む）を得る（１０５）。
【００８２】
実施形態２
図２は、本発明の第２の好ましい実施形態に関する医薬組成物の製造方法を示すフローチャートを示す。図２では、９６％の純度を有する調製された３．９６ｇのグリチルレチン酸（２０２）および実施形態１にて得られた２００ｇのチョウセンニンジン抽出物（２０１）を破砕して混合した後、２０３．９６ｇの本発明の医薬組成物（３０ｇのジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、および３．８ｇのグリチルレチン酸を含む）を得る（２０３）。
【００８３】
実施形態３：
図３は、本発明の第３の好ましい実施形態に関する医薬組成物の製造方法を示すフローチャートを示す。図３では、９０％の純度を有する３．４ｇの調製したジンセノサイドＲｇ１（３０１）、９０％の純度を有する７．８ｇの調製したジンセノサイドＲｂ１（３０２）および９０％の純度を有する３６．８ｇのグリシルリジン酸（３０３）を破砕して混合した後、４８ｇの本発明の医薬組成物（１０ｇのジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、および３５ｇのグリシルリジン酸を含む）を得る（３０４）。
【００８４】
実施形態４：
図４は、本発明の第４の好ましい実施形態に関する医薬組成物の製造方法を示すフローチャートを示す。図４では、１０ｋｇのナツメ（４０１）を破砕して、室温で水に浸し、その後、浸したナツメを、煎出およびアルコール沈降によって抽出して、ナツメ抽出物を取得し、さらに、ＯＵ−２およびＭＥ−２のマクロ孔質樹脂にて連続的に吸収および分離し、乾燥する。０．３ｇのナツメｃＡＭＰを含む３０ｇのナツメ抽出物が得られ、本発明の医薬を製造するための原料とされる（４０２）。
【００８５】
その後、実施形態１にて得られた１５０ｇのチョウセンニンジン抽出物および２００ｇのカンゾウ抽出物を破砕して、３ｇの上記ナツメ抽出物と混合し、３５３ｇの本発明の医薬組成物（２２．５ｇのジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、２０ｇのグリシルリジン酸および０．０３ｇのナツメｃＡＭＰを含む）を得る（４０３）。
【００８６】
実施形態５：
図５は、本発明の第５の好ましい実施形態に関する医薬組成物の製造方法を示すフローチャートを示す。図５では、それぞれ実施形態１にて得られた１５０ｇのチョウセンニンジン抽出物（５０１）および２００ｇのカンゾウ抽出物（５０２）を破砕し、実施形態４にて得られた０．５ｇのナツメ抽出物（５０３）と混合した後、３５０．５ｇの本発明の医薬組成物（２２．５ｇのジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、２０ｇのグリシルリジン酸および０．００５ｇのナツメｃＡＭＰを含む）を得る（５０４）。
【００８７】
実施形態６：
図６は、本発明の第６の好ましい実施形態に関する医薬組成物の製造方法を示すフローチャートを示す。図６では、９０％の純度を有する６．８ｇの調製したジンセノサイドＲｇ１（６０１）、９０％の純度を有する１５．６ｇの調製したジンセノサイドＲｂ１（６０２）、９６％の純度を有する２６ｇのグリチルレチン酸（６０３）および実施形態４にて得られた１０ｇのナツメ抽出物（６０４）を破砕し混合した後、５８．４ｇの本発明の医薬組成物（２０ｇのジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、２５ｇのグリチルレチン酸および０．１ｇのナツメｃＡＭＰを含む）を得る（６０５）。
【００８８】
実験１：マウス尾つり下げ実験における実施形態１の影響
１．１  実験動物：ＩＣＲマウス（オス、体重２２．０±２ｇ、二代目（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ））は、首都医科大学実験動物科学部（北京）から提供される。
【００８９】
１．２  実験医薬：実施形態１の医薬はＢｅｉｊｉｎｇ  Ｗｏｎｎｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｌｔｄ．  Ｃｏ．から提供され、パロキセチン（パキシル）はＺｈｏｎｇ  Ｍｅｉ  Ｔｉａｎｊｉｎ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．の製品である。
【００９０】
１．３  実験装置：ストップウォッチ。
【００９１】
１．４  用量設計：１．高用量の実施形態１（８０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；２．中用量の実施形態１（４０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；および３．低用量の実施形態１（２０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）。
【００９２】
１．５  実験方法および結果：
１．５．１  群の分割および薬剤の投与：マウスを、それぞれの群に１０匹を含むようにランダムにグループ分けする。１．高用量の実施形態１（８０ｍｇ／ｋｇ、経口当たり（Ｐ．Ｏ．）、７日間投与）；２．中用量の実施形態１（４０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；３．低用量の実施形態１（２０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；４．パロキセチン（３ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；および５．生理食塩水（Ｐ．Ｏ．）。薬剤の最後の投与から１時間後、マウス尾つり下げ実験を開始する。
【００９３】
１．５．２  実験方法：  マウスの尾（尾の末端１ｃｍ）を木製小板上に対してプラットフォームより５ｃｍ高い位置で貼り付け、６分間吊るす。最後の５分間のマウスの非運動の時間を記録する。
【００９４】
１．５．３  統計計算：実験データを、
【数１】
2011504884.tif 000003
【００９５】
として表し、実験結果を、分散分析（ＡＮＯＶＡ）としてＳＰＳＳ  １１．５統計ソフトウェアにより計算する。
【００９６】
１．５．４  実験結果：  表１を参照されたい。
【表１】
2011504884.tif 000004
【００９７】
結論：上記実験によると、高および中用量の本発明の実施形態１およびパロキセチンのいずれも、生理食塩水群（コントロール）と有意に異なって、マウスの尾のつり下げ後の非運動の時間を減少させたことが分かる。したがって、本発明の実施形態１が抗実験的うつ機能を有すると推定できる。
【００９８】
実験２：Ｒｅｓｅｔｐｉｎｅ誘導型マウス体温低下実験における実施形態１の影響
２．１実験動物：ＩＣＲマウス（オス、体重２２．０±２ｇ、二代目）は、首都医科大学実験動物科学部（北京）から提供される。
【００９９】
２．２  実験医薬：実施形態１の医薬はＢｅｉｊｉｎｇ  Ｗｏｎｎｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｌｔｄ．  Ｃｏ．から提供され、パロキセチン（パキシル）はＺｈｏｎｇ  Ｍｅｉ  Ｔｉａｎｊｉｎ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．の製品であり、ＲｅｓｅｔｐｉｎｅはＧｕａｎｇｄｏｎｇ  ＢａｎｇＭｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ．の製品である。
【０１００】
２．３  実験装置：電子式温度計（モデル：ＧＭ２２２）およびストップウォッチ。
【０１０１】
２．４  用量設計：１．高用量の実施形態１（８０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；２．中用量の実施形態１（４０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；および３．低用量の実施形態１（２０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）。
【０１０２】
２．５  実験方法および結果：
２．５．１  群の分割および薬剤の投与：マウスを、それぞれの群に１０匹を含むようにランダムにグループ分けする。１．高用量の実施形態１（８０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；２．中用量の実施形態１（４０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；３．低用量の実施形態１（２０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；４．パロキセチン（３ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；および５．生理食塩水（Ｐ．Ｏ．）。
【０１０３】
２．５．２  実験方法：８日目において薬剤の最後の投与の１時間後に、マウスの肛門の温度を測定する。その後、体重の１キログラム当たり２ｍｇのＲｅｓｅｔｐｉｎｅを腹腔内の注射で投与する。Ｒｅｓｅｔｐｉｎｅの注射から４時間後、マウスの肛門温度を再び測定する。マウスの肛門に温度計を注入する深さおよび時間は、各々の温度測定において同一とする。
【０１０４】
２．５．３  統計計算：実験データを、
【数２】
2011504884.tif 000005
【０１０５】
として表し、実験結果を、ＡＮＯＶＡとしてＳＰＳＳ  １１．５統計ソフトウェアにより計算する。
【０１０６】
２．５．４  実験結果：表２を参照されたい。
【表２】
2011504884.tif 000006
【０１０７】
結論：上記実験によると、高、中および低用量の本発明の実施形態１並びにパロキセチンのいずれも、Ｒｅｓｅｔｐｉｎｅによって誘導される体温の低下を低減することがわかり、このことは、これらの抗実験的うつ機能は、モノアミン神経伝達物質の量に関連し、影響することを意味する。したがって、本発明の実施形態１が抗実験的うつ機能を有すると推定できる。
【０１０８】
実験３：マウス明暗遷移実験における実施形態１の影響
３．１  実験動物：Ｋｕｎｍｉｎｇ（ＫＭ）マウス（オス、体重２４〜２６ｇ、二代目）は、首都医科大学実験動物科学部（北京）から提供される。
【０１０９】
３．２  実験医薬：実施形態１の医薬はＢｅｉｊｉｎｇ  Ｗｏｎｎｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｌｔｄ．  Ｃｏ．から提供され、ジアゼパムはＴｉａｎｊｉｎ  Ｊｉｎｈｕｅｉ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．の製品である。
【０１１０】
３．３  実験装置：自製の明暗遷移チャンバー．
３．４  用量設計：１．高用量の実施形態１（８０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；２．中用量の実施形態１（４０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；および３．低用量の実施形態１（２０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）。
【０１１１】
３．５  実験方法および結果：
３．５．１  群の分割および薬剤の投与：マウスをランダムに５つの群に分ける。各々の群には１０匹のマウスが存在する。１．高用量の実施形態１（８０ｍｇ／ｋｇ）；２．中用量の実施形態１（４０ｍｇ／ｋｇ）；３．低用量の実施形態１（２０ｍｇ／ｋｇ）；４．ジアゼパム（２．５ｍｇ／ｋｇ）；および５．生理食塩水（生理食塩水（ＮＳ））。一日に一度、マウスの胃に薬剤を与え、マウスは連続的に７日間投与を受ける。投与の期間において、マウスは自由に摂食可能とし、実験は、８日目において薬剤の最後の投与の１時間後に開始する。
【０１１２】
３．５．２  実験方法：
マウス明暗遷移実験：暗チャンバーは明暗遷移チャンバー（４４ｃｍ×２１ｃｍ×２１ｃｍ）の３分の１を占め、上部は覆われている。明チャンバーは、その３分の２を占め、明るく照らされている。２つチャンバー間のドアはマウスの通行のために並べられている。試験の開始時、マウスは明チャンバーの中心に置かれる。マウスの背中は暗チャンバーに面するようにする。１０分以内にマウスが暗チャンバーに入り明チャンバーに戻る回数を決定し、その回数を薬剤の抗不安機能を評価するための指標とする。
【０１１３】
３．５．３  統計計算：実験データを、
【数３】
2011504884.tif 000007
【０１１４】
として表し、実験結果を、一元配置分散分析（ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）としてＳＰＳＳ  １１．５統計ソフトウェアにより計算する。
【０１１５】
３．５．４  実験結果：  表３を参照されたい。
【表３】
2011504884.tif 000008
【０１１６】
３．６  説明：本実験で採用する明暗遷移試験は、マウスが生来的に明るい光を嫌うこと、およびその新しい環境に対する自発的な探索行動に基づき構築される。ヒトにおける不安を治療するための臨床医薬（ジアゼパム）および実施形態１は、このモデルにおけるマウスの自発的な探索行動を増大させる機能の改善との間で優れた相関を有する。上記実験によると、本発明の高、中および低用量の実施形態１ならびにジアゼパムのいずれも、マウスが暗チャンバーから明チャンバーへと通過する回数を有意に増加させ、生理食塩水と比較して統計的な意味を有することを見出すことができる。当該実験結果により、実施形態１が抗不安効果を有することが明らかになった。
【０１１７】
３．７  結論：上記の実験結果によると、本発明の高、中および低用量の実施形態１ならびにジアゼパムのいずれも、マウスが暗チャンバーから明チャンバーへ通過する回数を増加させることを示す。当該結果は、実施形態１が抗不安効果を有することを示す。
【０１１８】
実験４：マウス尾つり下げ実験における実施形態２の影響
４．１  実験動物：  ＩＣＲマウス（オス、体重２２．０±２ｇ、二代目）は、首都医科大学実験動物科学部（北京）から提供される。
【０１１９】
４．２  実験医薬：実施形態２の医薬はＢｅｉｊｉｎｇ  Ｗｏｎｎｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｌｔｄ．  Ｃｏ．から提供され、パロキセチン（パキシル）はＺｈｏｎｇ  Ｍｅｉ  Ｔｉａｎｊｉｎ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．の製品である。
【０１２０】
４．３  実験装置：ストップウォッチ．
４．４  用量設計：１．高用量の実施形態２（８０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；２．中用量の実施形態２（４０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；および３．低用量の実施形態２（２０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）。
【０１２１】
４．５  実験方法および結果：
４．５．１  群の分割および薬剤の投与：マウスを、それぞれの群に１０匹を含むようにランダムにグループ分けする。１．高用量の実施形態２（８０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；２．中用量の実施形態２（４０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；３．低用量の実施形態２（２０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；４．パロキセチン（３ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；および５．生理食塩水（Ｐ．Ｏ．）。薬剤の最後の投与から１時間後、マウス尾つり下げ実験を開始する。
【０１２２】
４．５．２  実験方法：マウスの尾（尾の末端１ｃｍ）を木製小板上に対してプラットフォームより５ｃｍ高い位置で貼り付け、６分間吊るす。最後の５分間のマウスの非運動の時間を記録する。
【０１２３】
４．５．３  統計計算：実験データを、
【数４】
2011504884.tif 000009
【０１２４】
として表し、実験結果を、ＡＮＯＶＡとしてＳＰＳＳ  １１．５統計ソフトウェアにより計算する。
【０１２５】
４．５．４  実験結果：表４を参照されたい。
【表４】
2011504884.tif 000010
【０１２６】
結論：上記実験によると、中用量の本発明の実施形態２およびパロキセチンのいずれも、生理食塩水群（コントロール）と有意に異なって、マウスの尾のつり下げ後の非運動の時間を減少させることが分かる。したがって、本発明の実施形態２が抗実験的うつ機能を有すると推定できる。
【０１２７】
実験５：Ｒｅｓｅｔｐｉｎｅ誘導型マウス体温低下実験における実施形態２の影響
５．１  実験動物：ＩＣＲマウス（オス、体重２２．０±２ｇ、二代目）は、首都医科大学実験動物科学部（北京）から提供される。
【０１２８】
５．２  実験医薬：実施形態２の医薬はＢｅｉｊｉｎｇ  Ｗｏｎｎｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｌｔｄ．  Ｃｏ．から提供され、パロキセチン（パキシル）はＺｈｏｎｇ  Ｍｅｉ  Ｔｉａｎｊｉｎ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．の製品であり、ＲｅｓｅｔｐｉｎｅはＧｕａｎｇｄｏｎｇ  ＢａｎｇＭｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ．の製品である。
【０１２９】
５．３  実験装置：電子式温度計（モデル：ＧＭ２２２）およびストップウォッチ。
【０１３０】
５．４  用量設計：１．高用量の実施形態２（８０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；２．中用量の実施形態２（４０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；および３．低用量の実施形態２（２０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）。
【０１３１】
５．５  実験方法および結果：
５．５．１  群の分割および薬剤の投与：マウスを、それぞれの群に１０匹を含むようにランダムにグループ分けする。１．高用量の実施形態２（８０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；２．中用量の実施形態２（４０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；３．低用量の実施形態２（２０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；４．パロキセチン（３ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；および５．生理食塩水（Ｐ．Ｏ．）。
【０１３２】
５．５．２  実験方法：８日目において薬剤の最後の投与の１時間後に、マウスの肛門の温度を測定する。その後、体重１キログラム当たり２ｍｇのＲｅｓｅｔｐｉｎｅを腹腔内注射にて投与する。Ｒｅｓｅｔｐｉｎｅの注射から４時間後、マウスの肛門温度を再び測定する。マウスの肛門に温度計を注入する深さおよび時間は、各々の温度測定において同一とする。
【０１３３】
５．５．３  統計計算：実験データを、
【数５】
2011504884.tif 000011
【０１３４】
として表し、実験結果を、ＡＮＯＶＡとしてＳＰＳＳ  １１．５統計ソフトウェアにより計算する。
【０１３５】
５．５．４  実験結果：  表５を参照されたい。
【表５】
2011504884.tif 000012
【０１３６】
結論：上記実験によると、中用量の本発明の実施形態１およびパロキセチンは全て、Ｒｅｓｅｔｐｉｎｅによって誘導される体温の低下を低減することがわかり、このことは、これらの抗実験的うつ機能は、モノアミン神経伝達物質の量に関連し、影響することを意味する。したがって、本発明の実施形態２が抗実験的うつ機能を有すると推定できる。
【０１３７】
実験６：マウス尾つり下げ実験における実施形態３の影響
６．１  実験動物：ＩＣＲマウス（オス、体重２２．０±２ｇ、二代目）は、首都医科大学実験動物科学部（北京）から提供される。
【０１３８】
６．２  実験医薬：実施形態３の医薬はＢｅｉｊｉｎｇ  Ｗｏｎｎｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｌｔｄ．  Ｃｏ．から提供され、パロキセチン（パキシル）はＺｈｏｎｇ  Ｍｅｉ  Ｔｉａｎｊｉｎ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．の製品である。
【０１３９】
６．３  実験装置：ストップウォッチ．
６．４  用量設計：１．高用量の実施形態３（８０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；２．中用量の実施形態３（４０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；および３．低用量の実施形態３（２０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）。
【０１４０】
６．５  実験方法および結果：
６．５．１  群の分割および薬剤の投与：マウスを、それぞれの群に１０匹を含むようにランダムにグループ分けする。１．高用量の実施形態３（８０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；２．中用量の実施形態３（４０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；３．低用量の実施形態３（２０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；４．パロキセチン（３ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；および５．生理食塩水（Ｐ．Ｏ．）。薬剤の最後の投与から１時間後、マウス尾つり下げ実験を続行する。
【０１４１】
６．５．２  実験方法：マウスの尾（尾の末端１ｃｍ）を木製小板上に対してプラットフォームより５ｃｍ高い位置で貼り付け、６分間吊るす。最後の５分間のマウスの非運動の時間を記録する。
【０１４２】
６．５．３  統計計算：実験データを、
【数６】
2011504884.tif 000013
【０１４３】
として表し、実験結果を、ＡＮＯＶＡとしてＳＰＳＳ  １１．５統計ソフトウェアにより計算する。
【０１４４】
６．５．４  実験結果：表６を参照されたい。
【表６】
2011504884.tif 000014
【０１４５】
結論：上記実験によると、高および中用量の本発明の実施形態３およびパロキセチンのいずれも、生理食塩水群（コントロール）と有意に異なって、マウスの尾のつり下げ後の非運動の時間を減少させることが分かる。したがって、本発明の実施形態３が抗実験的うつ機能を有すると推定できる。
【０１４６】
実験７：Ｒｅｓｅｔｐｉｎｅ誘導型マウス体温低下実験における実施形態３の影響
７．１  実験動物：  ＩＣＲマウス（オス、体重２２．０±２ｇ、二代目）は、首都医科大学実験動物科学部（北京）から提供される。
【０１４７】
７．２  実験医薬：実施形態３の医薬はＢｅｉｊｉｎｇ  Ｗｏｎｎｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｌｔｄ．  Ｃｏ．から提供され、パロキセチン（パキシル）はＺｈｏｎｇ  Ｍｅｉ  Ｔｉａｎｊｉｎ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．の製品であり、ＲｅｓｅｔｐｉｎｅはＧｕａｎｇｄｏｎｇ  ＢａｎｇＭｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ．の製品である。
【０１４８】
７．３  実験装置：電子式温度計（モデル：ＧＭ２２２）およびストップウォッチ。
【０１４９】
７．４  用量設計：１．高用量の実施形態３（８０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；２．中用量の実施形態３（４０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；および３．低用量の実施形態３（２０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）。
【０１５０】
７．５  実験方法および結果：
７．５．１  群の分割および薬剤の投与：マウスを、それぞれの群に１０匹を含むようにランダムにグループ分けする。１．高用量の実施形態３（８０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；２．中用量の実施形態３（４０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；３．低用量の実施形態３（２０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；４．パロキセチン（３ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；および５．生理食塩水（Ｐ．Ｏ．）。
【０１５１】
７．５．２  実験方法：８日目における薬剤の最後の投与の１時間後に、マウスの肛門の温度を測定する。その後、体重１キログラム当たり２ｍｇのＲｅｓｅｔｐｉｎｅを腹腔内注射にて投与する。Ｒｅｓｅｔｐｉｎｅの注射から４時間後、マウスの肛門温度を再び測定する。マウスの肛門に温度計を注入する深さおよび時間は、各々の温度測定において同一とする。
【０１５２】
７．５．３  統計計算：実験データを、
【数７】
2011504884.tif 000015
【０１５３】
として表し、実験結果を、ＡＮＯＶＡとしてＳＰＳＳ  １１．５統計ソフトウェアにより計算する。
【０１５４】
７．５．４  実験結果：表７を参照されたい。
【表７】
2011504884.tif 000016
【０１５５】
結論：上記実験によると、高、中および低用量の本発明の実施形態３並びにパロキセチンのいずれも、Ｒｅｓｅｔｐｉｎｅによって誘導される体温の低下を低減することがわかり、このことは、これらの抗実験的うつ機能は、モノアミン神経伝達物質の量に関連し、影響することを意味する。したがって、本発明の実施形態３が抗実験的うつ機能を有すると推定できる。
【０１５６】
実験8：マウス嗅球傷害実験における実施形態４の影響
８．１  実験動物：
嗅球傷害モデル：Ｈｅａｌｔｈ  Ｗｉｓｔａｒオスラット（二代目、体重３３０±２０ｇ）は、Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｌｔｄ．  Ｃｏ．から購入する（品質証明番号：ＳＣＸＫ  （ＪＩＮＧ）  ２００２−２００３）。
【０１５７】
８．２  試薬および医薬：実施形態４の医薬はＢｅｉｊｉｎｇ  Ｗｏｎｎｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｌｔｄ．  Ｃｏ．から提供され（Ｌｏｔ：  ０６０３１３）、パロキセチンはＺｈｏｎｇ  Ｍｅｉ  Ｔｉａｎｊｉｎ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．の製品である（Ｌｏｔ：  ０４０５００１１）。上記医薬は、胃への給餌のために、０．５％のナトリウム・カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ−Ｎａ）とともに用意される。注射のためのベンジルペニシリン・ナトリウムは、Ｎｏｒｔｈ  Ｃｈｉｎａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｈｕａｓｈｅｎｇ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．の製品（Ｌｏｔ：Ｓ０５１１２０４）であり、ノルエピネフリン（ＮＥ）および５−ヒドロトリプタミン（５−ＨＴ）標準はＳｉｇｍａ  Ｃｏ．の製品である。その他の試薬は全て市販品である。
【０１５８】
８．３  装置：自製オープンフィールド活動ボックス、ステップスルーボックス、ラット定位装置、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、および１０−チューブγ放射線免疫加算器（ｍｏｄｅ：ＤＦＭ−９６）。
【０１５９】
８．４  実験方法：
８．４．１  群の分割および薬剤の投与：ラットをランダムに６つの群に分ける。１．偽治療群；２．モデル群（コントロール）；３．高用量の実施形態４（６０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；４．中用量の実施形態４（３０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；５．低用量の実施形態４（１５ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；および６．パロキセチン（２ｍｇ／ｋｇ／ｄ）。試験薬剤および陽性薬剤は、一日に一度の胃への供給のために０．５％のＣＭＣ−Ｎａとともに用意する。
【０１６０】
８．４．２  モデルの製造方法：抱水クロラールによってラットに麻酔をかける。麻酔後、ラットの泉門の正中線を、大泉門の１ｃｍ前から大泉門の１ｃｍ後ろまで切り、頭蓋骨を露出させる。２ｍｍの直径を有する頭蓋骨窓を、大泉門の８ｍｍ前から正中線の２側面の２ｍｍにて開ける。特別に作製した電気はんだごてを頭蓋骨に垂直に２秒間挿入し、嗅球を破壊する。止血スポンジを頭蓋骨窓に詰め、皮膚を縫合する。療法後、体重の１キログラム当たりの４０，０００ユニットのベンジルペニシリン・ナトリウムを４日間毎日腹腔内注射し、試験医薬を２４日間続けて投与する。
【０１６１】
８．５  観察指標：
８．５．１  オープンフィールド活動実験：オープンフィールド活動ボックス（１ｍ×１ｍ×０．４ｍ）を、水色の合板およびアルミニウム合金フレームによって構築する。ボックスの底を２５格子（各々の格子につき２０ｃｍ×２０ｃｍ）に分離し、周囲は周辺格子（１６格子）とし、他を中央格子（９格子）とする。ラットは中央格子の中心に置き、ラットの格子横断数（３爪を超えて隣接する格子を横断する数）およびラットの立ち上がり数（２つの前肢が１ｃｍを超えて地面を離れる）を３分間計算／観察する。
【０１６２】
８．５．２  受動的回避実験（ステップスルー試験）：ステップスルーボックスは明チャンバーおよび暗チャンバーによって形成され、マウスの出入りのために明チャンバーと暗チャンバーとの間はチャネルで繋がっている。暗チャンバーの仕切りは感電装置に接続されており、モバイルプレートがその間にセットされる。ラットが暗チャンバーに入った場合、ラットは電気的に衝撃を受ける。トレーニングの間、ラットは明チャンバーに置かれ、その後、５分間適応のために穴に戻る。その後、プレートが除去され、ラットをさらに５分間観察する。ラットが初めて入る時間を記録し（感電潜伏期間）、その時間は習得記録である。２４時間後、試験を繰り返す。プレートを除去し、暗チャンバーに５分間通電し、ラットが初めて暗チャンバーに入る時間を観察する。その時間は記憶記録である。
【０１６３】
８．６  統計計算：実験データを、
【数８】
2011504884.tif 000017
【０１６４】
として表し、実験結果を、ＡＮＯＶＡとしてＳＰＳＳ  １１．５統計ソフトウェアにより計算する。
【０１６５】
８．７  実験結果：
８．７．１  オープンフィールド活動実験の結果：表８を参照されたい。
【表８】
2011504884.tif 000018
【０１６６】
８．７．２  ステップスルー試験の結果：表９を参照されたい。
【表９】
2011504884.tif 000019
【０１６７】
結論：実験８の結果は、高用量の実施形態４は、嗅球傷害によって引き起こされるラットの水平および垂直運動の増大を明らかに改善することができ、中用量の実施形態４もまた、ラット嗅球傷害モデルによって引き起こされる垂直運動の増大に対して、改善する機能を明確に有することがわかる。さらに、高および中用量の実施形態４は、嗅球傷害によって引き起こされるラットの学習および記憶の減少に対して、明確に改善する効果を有する。
【０１６８】
実験９：予測不能長期刺激実験における実施形態４の影響
９．１  実験動物：
予測不能長期刺激モデル：Ｈｅａｌｔｈ  Ｗｉｓｔａｒオスラット（二代目、体重２４０〜２７０ｇ）は、Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｌｔｄ．  Ｃｏ．から購入する（品質証明番号：ＳＣＸＫ  （ＪＩＮＧ）  ２００２−２００３）。
【０１６９】
９．２  試薬および医薬：実施形態４の医薬はＢｅｉｊｉｎｇ  Ｗｏｎｎｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｌｔｄ．  Ｃｏ．から提供され（Ｌｏｔ：  ０６０３１３）、パロキセチンはＺｈｏｎｇ  Ｍｅｉ  Ｔｉａｎｊｉｎ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．の製品である（Ｌｏｔ：  ０４０５００１１）。上記医薬は、胃への給餌のために０．５％のナトリウム・カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ−Ｎａ）とともに用意される。注射のためのベンジルペニシリン・ナトリウムは、Ｎｏｒｔｈ  Ｃｈｉｎａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｈｕａｓｈｅｎｇ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．の製品（Ｌｏｔ：Ｓ０５１１２０４）であり、ノルエピネフリン（ＮＥ）および５−ヒドロトリプタミン（５−ＨＴ）標準はＳｉｇｍａ  Ｃｏ．の製品である。その他の試薬は全て市販品である。
【０１７０】
９．３  装置：自製オープンフィールド活動ボックス、ステップスルーボックス、ラット定位装置、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、および１０−チューブγ放射線免疫加算器（ｍｏｄｅ：ＤＦＭ−９６）。
【０１７１】
９．４  実験方法：
９．４．１  群の分割および薬剤の投与：ラットをランダムに６つの群に分ける。１．偽治療群；２．モデル群（コントロール）；３．高用量の実施形態４（６０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；４．中用量の実施形態４（３０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；５．低用量の実施形態４（１５ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；および６．パロキセチン（２ｍｇ／ｋｇ／ｄ）。試験薬剤および陽性薬剤は、一日に一度の胃への供給のために０．５％のＣＭＣ−Ｎａとともに用意する。
【０１７２】
９．４．２  モデルの製造方法：
予測不能長期刺激モデル：コントロール群のラットは通常通り給餌され、刺激は与えられない。その他の５群では、１匹のラットは各々のケージにて給餌され、ラットは２４日間の予測不能ストレス／刺激を受ける。これには、３回の２４時間の禁欲、３回の２４時間の禁飲水、３回の２４時間の湿性の就寝（２００ｍｌの水をラットのケージに添加する）、３回の一晩中の照明、３回の５分間４℃でのスイミング、３回の５分間の４５℃のオーブンによる加熱、３回の１分間のラットの尾を吊るすこと、および３回の３０分間の高速の水平振動を含む。１つの刺激は毎日任意に行なわれ、合わせて２４日間行われる。各々の刺激は連続的に行なうことはできない。医薬を、一日一度、全部で２４日、ラットの胃に与える。
【０１７３】
９．５  観察指標：
９．５．１  オープンフィールド活動実験：上記と同じ。
【０１７４】
９．５．２  受動的回避実験：上記と同じ。
【０１７５】
９．５．３  強制試験によるラットのスイミング：この実験は、薬剤の最後の投与の２日後に開始する。初日において、１５分間予め実験が行なわれる。ガラスタンクの温度は２５℃であり、水の深さは２５ｃｍである。２４時間後、正式の実験を開始する。薬剤の投与の１時間後、ラットをタンクに入れ、最後５分間のラットの非運動の時間を記録する。
【０１７６】
９．５．４  体重測定：それぞれの動物実験の前後の増加値を比較する。
【０１７７】
９．５．５  スクロース摂取量の試験：ラットのスクロース摂取量が比較される。各々の群におけるラットは、１時間１％のスクロースを飲む。飲んだ量は、刺激の前および刺激の３週間後に決定する。ラットを１４時間禁欲および禁水にさせた後、１％のスクロースをケージに置き、当初の飲料水と取り替える。ラットがスクロースを１時間飲んだ前後のボトル重量の差を測定して記録し、それぞれの時間のスクロース摂取量を算出する。各々の時間のスクロース摂取量の差を比較する。
【０１７８】
９．５．６  ＨＰＬＣ電気化学試験：ラット大脳皮質におけるノルエピネフリンおよび５−ヒドロトリプタミンの量を測定する。
【０１７９】
９．６  統計計算：実験データを、
【数９】
2011504884.tif 000020
【０１８０】
として表し、実験結果を、ＡＮＯＶＡとしてＳＰＳＳ  １１．５統計ソフトウェアにより計算する。
【０１８１】
９．７  実験結果：
９．７．１  スクロース摂取量試験：表１０を参照されたい。
【表１０】
2011504884.tif 000021
【０１８２】
９．７．２  ラット体重増大の結果：表１１を参照されたい。
【表１１】
2011504884.tif 000022
【０１８３】
９．７．３  強制によるラットスイミングの非運動の時間：表１２を参照されたい。
【表１２】
2011504884.tif 000023
【０１８４】
９．７．４  オープンフィールド活動実験の結果：表１３を参照されたい。
【表１３】
2011504884.tif 000024
【０１８５】
９．７．５  ラット受動的回避実験の結果：表１４を参照されたい。
【表１４】
2011504884.tif 000025
【０１８６】
９．７．６  ラット大脳皮質のＮＥおよび５−ＨＴ含有量の結果：表１５を参照されたい。
【表１５】
2011504884.tif 000026
【０１８７】
結論：実験９の結果は以下のように示される。中および低用量の実施形態４は、予測不能長期ストレス／刺激におけるスクロース摂取量減少および体重減少を明確に改善することができる。高、中および低用量の実施形態４はいずれも、強制試験によるラットのスイミングにおける非運動の時間を明確に増大させる。高用量の実施形態４は、予測不能長期ストレス／刺激によって引き起こされるラット水平および垂直運動の減少を明確に改善することができる。低用量の実施形態４は、さらに、予測不能長期ストレス／刺激によって引き起こされるラット垂直運動の減少に対して、明確に改善された機能を有する。低用量の実施形態４は、予測不能長期ストレス／刺激によって引き起こされるラット学習能力に対して、改善された機能を有する。高、中および低用量の実施形態４は何れも、ラット大脳皮質のＮＥおよび５ＨＴ含有量を明確に増大させる。
【０１８８】
実験１０：マウス明暗遷移実験における実施形態４の影響
１０．１  実験動物：Ｋｕｎｍｉｎｇ（ＫＭ）マウス（オス、体重２４〜２６ｇ、二代目）は首都医科大学実験動物科学部（北京）から提供される。
【０１８９】
１０．２  実験医薬：実施形態４の医薬はＢｅｉｊｉｎｇ  Ｗｏｎｎｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｌｔｄ．  Ｃｏ．から提供され、ジアゼパムはＴｉａｎｊｉｎ  Ｊｉｎｈｕｅｉ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．の製品である。
【０１９０】
１０．３  実験装置：自製明暗遷移ボックス。
【０１９１】
１０．４  用量設計：１．高用量の実施形態４（８０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；２．中用量の実施形態４（４０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；および３．低用量の実施形態４（２０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）。
【０１９２】
１０．５  実験方法および結果：
１０．５．１  群の分割および薬剤の投与：マウスは、各群１０匹となるように、５つの群にランダムに分ける。１．高用量の実施形態４（８０ｍｇ／ｋｇ）；２．中用量の実施形態４（４０ｍｇ／ｋｇ）；３．低用量の実施形態４（２０ｍｇ／ｋｇ）；４．ジアゼパム（２．５ｍｇ／ｋｇ）；および５．生理食塩水（生理食塩水（ＮＳ））。薬剤をマウスの胃に一日一度与え、７日間連続で投与する。投与の期間、マウスは自由に摂食させ、８日目において薬剤の最後の投与の１時間後に実験を開始する。
【０１９３】
１０．５．２  実験方法：
マウス明暗遷移実験：暗チャンバーは明暗遷移チャンバー（４４ｃｍ×２１ｃｍ×２１ｃｍ）の３分の１を占め、上部が覆われる。明チャンバーはその３分の２を占め、明るく照らされる。２つのチャンバー間のドアはマウスの通行のために配置される。実験の開始時において、マウスは明チャンバーの中心に置かれ、マウスの背中は暗チャンバーに向けられる。１０分以内にマウスが暗チャンバーに入り明チャンバーに戻る回数を決定し、その回数は、薬剤の抗不安機能を評価するための指標となる。
【０１９４】
１０．５．３  統計計算：実験データを、
【数１０】
2011504884.tif 000027
【０１９５】
として表し、実験結果を、一元配置分散分析としてＳＰＳＳ  １１．５統計ソフトウェアにより計算する。
【０１９６】
１０．５．４  実験結果：表１６を参照されたい。
【表１６】
2011504884.tif 000028
【０１９７】
１０．６  説明：本実験で採用する明暗遷移試験は、マウスが生来的に明るい光を嫌うこと、およびその新しい環境に対する自発的な探索行動に基づき構築される。ヒトにおける不安を治療するための臨床医薬（ジアゼパム）および実施形態４は、マウスモデルにおける自発的な探索行動を増大させる機能の改善との間で優れた相関を有する。上記実験によると、本発明の高、中および低用量の実施形態４ならびにジアゼパムのいずれも、マウスが暗チャンバーから明チャンバーへと通過する回数を有意に増加させ、生理食塩水と比較して統計的な意味を有することを見出すことができる。当該実験結果により、実施形態４が抗不安効果を有することが明らかになった。
【０１９８】
１０．７  結論：上記の実験結果によると、本発明の高、中および低用量の実施形態４ならびにジアゼパムのいずれも、マウスが暗チャンバーから明チャンバーへ通過する回数を有意に増加させることを示す。当該結果は、実施形態４が抗不安効果を有することを示す。
【０１９９】
実験１１：マウス尾つり下げ実験における実施形態５の影響
１１．１  実験医薬：実施形態５の医薬はＢｅｉｊｉｎｇ  Ｗｏｎｎｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｌｔｄ．  Ｃｏ．から提供され（パイロット誇張製品）、パロキセチンはＺｈｏｎｇ  Ｍｅｉ  Ｔｉａｎｊｉｎ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．の製品である（Ｌｏｔ：０５０７０３８４）。上記医薬は、胃への給餌のために、生理食塩水にて用意される。
【０２００】
１１．２  実験動物：ＩＣＲマウス（オス、体重２０．０±１ｇ、二代目）は、首都医科大学実験動物科学部（北京）から提供される。マウスの品質保証番号はＳＣＸＫ（ＪＩＮＧ）２００６−２００８である。
【０２０１】
１１．３  実験装置：ストップウォッチ。
【０２０２】
１１．４  方法：７０匹のマウスを、５つの群にランダムに分ける：生理食塩水（ＮＳ）群、パロキセチン（３ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、高用量の実施形態５（８０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、中用量の実施形態５（４０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、および低用量の実施形態５（２０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）。医薬を一日一度マウスの胃に与える。８日目において薬剤の最後の投与の１時間後に、マウスの尾（末端から１ｃｍ）をオープンボックスにおいて水平の支柱に貼り付ける。マウスは逆さにされ吊るされた状態となる。マウスの頭部は、オープンボックスの底から約１０ｃｍ離れており、マウスは６分間掛けられる。最後の５分のマウスの非運動の時間を記録する。
【０２０３】
１１．５  統計計算：実験データを、
【数１１】
2011504884.tif 000029
【０２０４】
として表し、実験結果を、一元配置分散分析としてＳＰＳＳ  １１．５統計ソフトウェアにより計算する。
【０２０５】
１１．６  実験結果：尾つり下げ実験におけるマウスの非運動の時間の結果：表１７を参照されたい。
【表１７】
2011504884.tif 000030
【０２０６】
結論：高、中および低用量の実施形態５並びに臨床的に有効な抗うつ薬であるパロキセチンの何れも、吊るされたマウスの尾の累積非運動の時間を明確に減少する。このことは、本発明の実施形態５が抗実験的うつ能力を有することを示す。
【０２０７】
実験１２：強制実験によるマウスのスイミングにおける実施形態５の影響
１２．１  実験医薬：実施形態５の医薬はＢｅｉｊｉｎｇ  Ｗｏｎｎｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｌｔｄ．  Ｃｏ．から提供され（パイロット誇張製品）、パロキセチンはＺｈｏｎｇ  Ｍｅｉ  Ｔｉａｎｊｉｎ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．の製品である（Ｌｏｔ：  ０５０７０３８４）。上記医薬は、胃への給餌のために生理食塩水にて用意される。
【０２０８】
１２．２  実験動物：ＩＣＲマウス（オス、体重２０．０±１ｇ、二代目）は首都医科大学実験動物科学部（北京）から入手される。マウスの品質保証番号はＳＣＸＫ  （ＪＩＮＧ）  ２００６−２００８である。
【０２０９】
１２．３  実験装置：ストップウォッチ。
【０２１０】
１２．４  実験方法：マウス群および薬剤投与はマウス尾つり下げ実験と同一である。各々の群における試験マウスは、薬剤投与の１時間後に実験を開始する。マウスは、実験の前および８日目に、１５分間泳ぐよう訓練する。２４時間後、実験を開始する。マウスを、１０ｃｍの水深、１４ｃｍの直径を有するガラスタンク中の２５℃の水に入れる。最後の５分間のマウスの累積非運動の時間を記録する。
【０２１１】
１２．５  統計計算：実験データを、
【数１２】
2011504884.tif 000031
【０２１２】
として表し、実験結果を、一元配置分散分析としてＳＰＳＳ  １１．５統計ソフトウェアにより計算する。
【０２１３】
１２．６  実験結果：強制によるマウスのスイミングの結果：表１８を参照されたい。
【表１８】
2011504884.tif 000032
【０２１４】
結論：研究結果は、高、中および低用量の実施形態５並びに臨床的に有効な抗うつ薬であるパロキセチンの何れも、強制試験によるマウスのスイミングの累積非運動の時間を明確に減少させることを示す。このことは、本発明の実施形態５が抗実験的うつ能力を有することを示す。
【０２１５】
実験１３：
実施形態１および実施形態４から抽出される９ｋｇの残るチョウセンニンジンデブリおよび７ｋｇの残るカンゾウデブリを回収し、乾燥し、粉砕しおよび十分混合して、微量のジンセノサイドＲｇ１およびＲｂ１、グリシルリジン酸並びにナツメｃＡＭＰを含むデブリ混合物を得る。マウス尾つり下げ実験における影響のコントロール実験を開始する。
【０２１６】
１３．１  実験動物：ＩＣＲマウス（オス、体重２２．０±２ｇ、二代目）は首都医科大学実験動物科学部（北京）から提供される。
【０２１７】
１３．２  実験医薬：デブリ混合物はＢｅｉｊｉｎｇ  Ｗｏｎｎｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｌｔｄ．  Ｃｏ．により提供され、パロキセチン（パキシル）はＺｈｏｎｇ  Ｍｅｉ  Ｔｉａｎｊｉｎ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．の製品である。
【０２１８】
１３．３  実験装置：ストップウォッチ．
１３．４  用量設計：１．高用量のデブリ混合物（１６０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；２．中用量のデブリ混合物（８０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；および３．低用量のデブリ混合物（４０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）。
【０２１９】
１３．５  実験方法および結果：
１３．５．１  群の分割および薬剤の投与：マウスを、それぞれの群に１０匹を含むようにランダムにグループ分けする。１．高用量のデブリ混合物（１６０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；２．中用量のデブリ混合物（８０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；３．低用量のデブリ混合物（４０ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；４．パロキセチン（３ｍｇ／ｋｇ、Ｐ．Ｏ．、７日間投与）；および５．生理食塩水（Ｐ．Ｏ．）。薬剤の最後の投与から１時間後、マウス尾つり下げ実験を続行する。
【０２２０】
１３．５．２  実験方法：マウスの尾（尾の末端１ｃｍ）を木製小板上に対してプラットフォームより５ｃｍ高い位置で貼り付け、６分間吊るす。最後の５分間のマウスの非運動の時間を記録する。
【０２２１】
１３．５．３  統計計算：実験データを、
【数１３】
2011504884.tif 000033
【０２２２】
として表し、実験結果を、ＡＮＯＶＡとしてＳＰＳＳ  １１．５統計ソフトウェアにより計算する。
【０２２３】
１３．５．４  実験結果：表１９を参照されたい。
【表１９】
2011504884.tif 000034
【０２２４】
結論：上記実験によると、高、中および低用量のデブリ混合物は尾が吊るされるマウスの非運動の時間を短くすることができるものの、これらの３つの群には生理食塩水（コントロール）に対して有意性がないことがわかる。したがって、抗実験的うつ機能のないデブリ混合物を推定することができる。
【０２２５】
産業上の有用性：
うつおよび不安症の治療のための本発明の医薬組成物の適用範囲は以下に存する：
１．開示されるうつおよび不安症の治療のための本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される添加物を含んでよい；
２．開示されるうつおよび不安症の治療のための本発明の医薬組成物は、既知の剤形、例えば、粉末、カプセル、錠剤などとして製造されてよい；および
３．開示されるうつおよび不安症の治療のための本発明の医薬組成物は、うつおよび不安症の治療のための健康食品として製造されてもよい。
【０２２６】
現在何が最も実用的かつ好ましい実施形態かという観点から、本発明について説明したが、当該開示される実施形態に限られる必要はないと解されるものとする。反対に、添付の特許請求の範囲の精神および範囲に含まれる種々の修正および同様の配置を含むものとし、これらは最も広範な範囲の解釈と一致し、前記修正および同様の構成のすべてを包含するものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【手続補正書】
【提出日】平成22年9月3日(2010.9.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含む、少なくとも１つのうつおよび不安症の治療のための医薬組成物：
ジンセノサイド；
グリシルリジン酸、グリチルレチン酸およびそれらの組み合わせから成る群から選択される１つであるグリチルリジン関連酸。
【請求項２】
請求項１に記載の医薬組成物であって、前記ジンセノサイドはＲｇ１およびＲｂ１を含み、前記医薬組成物は、２〜２５重量部の前記ジンセノサイドおよび３〜４６重量部の前記グリチルリジン関連酸、より好ましくは４〜１２重量部の前記ジンセノサイドおよび５〜１５重量部の前記グリチルリジン関連酸を含む医薬組成物。
【請求項３】
ナツメサイクリックアデニル酸（ナツメｃＡＭＰ）をさらに含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
請求項３に記載の医薬組成物；ここにおいて、
前記ナツメｃＡＭＰは、０．００２〜０．４重量部、より好ましくは０．０１〜０．０８重量部を含み、
前記ジンセノサイドはチョウセンニンジンから抽出され、前記グリチルリジン関連酸はカンゾウから抽出され、および前記ナツメｃＡＭＰはナツメから抽出され、前記ナツメは抽出されて第１のナツメｃＡＭＰ濃度を有する第１の抽出物が得られ、前記第１の抽出物はさらに抽出されて第２のナツメｃＡＭＰ濃度を有する第２の抽出物が得られ、前記第２のナツメｃＡＭＰ濃度は前記第１のナツメｃＡＭＰ濃度よりも高く、前記第２の抽出物は前記医薬組成物の原料である。
【請求項５】
チョウセンニンジンおよびカンゾウを含む、少なくとも１つのうつおよび不安症の治療のための医薬組成物。
【請求項６】
４〜６０重量部の前記チョウセンニンジンおよび２〜３０重量部の前記カンゾウを含み、且つ１０〜２８重量部の前記チョウセンニンジンおよび５〜１４重量部の前記カンゾウを含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ナツメをさらに含み、前記ナツメは２〜４０重量部、より好ましくは４〜１８重量部を含む請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
請求項１から５の何れか１項に記載の医薬組成物；
ここにおいて、前記医薬組成物は、
少なくとも１つの医薬的に許容可能な担体および添加剤をさらに含み；
錠剤、カプセル、粉末、丸剤、微粉、溶液、マイクロカプセル、懸濁液、エマルション、粒子、滴下薬およびロールから成る群から選択される剤形を有し；または
栄養食品およびサプリメントの１つとして製造される。
【請求項９】
以下の工程を含む、少なくとも１つの不安症を治療するための医薬組成物のナツメサイクリックアデニル酸（ナツメｃＡＭＰ）の製造方法：
（ａ）ナツメを抽出し、第１のナツメｃＡＭＰ濃度を有する第１の抽出物を得ること；および
（ｂ）前記第１の抽出物を精製し、第２のナツメｃＡＭＰ濃度を有する第２の抽出物を得ること、
ここにおいて、前記第２のナツメｃＡＭＰ濃度は前記第１のナツメｃＡＭＰ濃度よりも高い。
【請求項１０】
請求項１１に記載の製造方法；
ここにおいて、前記工程（ｂ）は、前記第１の抽出物を、アルデヒド基に結合したマクロ孔質樹脂によるクロマトグラフに供することで行われ、好ましくは前記工程（ｂ）は、以下の工程をさらに含む：
（ｂ１）アルデヒド基に結合したＯＵ−２マクロ孔質樹脂による前記第１の抽出物のクロマトグラフ；および
（ｂ２）アルデヒド基に結合したＭＥ−２マクロ孔質樹脂による前記第１の抽出物のクロマトグラフ。
【請求項１１】
以下の工程を含む、ナツメサイクリックアデニル酸（ナツメｃＡＭＰ）の製造方法：
（ａ）ナツメを抽出し、第１の抽出物を得ること；および
（ｂ）前記第１の抽出物を、結合したアルデヒド基を有するマクロ孔質樹脂によるクロマトグラフに供すること。
【国際調査報告】
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