(57)【要約】  本発明は、特に皮膚の老化を制御する製品に関連する、化粧品の分野に関する。本発明は特に、スターアップルの水性果実抽出物を含む化粧品組成物に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
スターアップル(Chrysophyllum cainito)の水性果実抽出物を含む化粧品組成物。
【請求項２】
前記果実抽出物がスターアップルの果実の果皮及び果肉の抽出物を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記抽出物が少なくとも：
乾燥果実をボウル内で粉砕する工程、
前記果実を覆うように水（室温）を添加する工程、
少なくとも２４時間浸漬する工程、
一次濾過する工程を含む方法によって得られる、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物の全重量に対して０．１％〜１０％（乾物重量比）のスターアップル抽出物、好ましくは前記組成物の全重量に対して０．１重量％〜５重量％（乾物重量比）のスターアップル抽出物を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
皮膚軟化剤、着色剤、被膜形成剤、界面活性剤、香料、防腐剤、乳化剤、油、グリコール、ＵＶフィルタ及びビタミン等の１つ又は複数の配合剤又は添加剤をさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
【請求項６】
ジェル、クリーム、ローション、オイル、ミルク又はスプレーの形態である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
【請求項７】
皮膚の老化及び／又は皮膚の老化の兆候の出現を予防する、遅らせる、又は食い止めるのに使用される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記皮膚の老化の兆候がしわ、小じわ、皮膚のたるみ、皮膚繊維の弾力性の喪失、皮膚の萎縮、皮膚の菲薄化、並びにくすんだ及び／又は輝きのない皮膚から選択されることを特徴とする、請求項５に記載の組成物。
【請求項９】
タンパク質抗糖化剤として使用される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
乳房下垂を予防する、及び／又は遅らせる、及び／又は矯正するのに使用される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スターアップル（Chrysophyllum cainito）の果実抽出物を含む化粧品組成物に関する。本発明は、皮膚（例えば乳房の皮膚外層）の老化及び／又は皮膚の老化の兆候の出現を予防する、遅らせる、又は食い止めるためのこの組成物の使用にも関する。特に、この組成物はタンパク質の糖化を阻害することによって皮膚細胞の機能性を保護するものである。
【背景技術】
【０００２】
糖化とは、アミノ酸残基（例えばリジン）、特にタンパク質のアミノ酸残基のアミン基とメイラード反応に従って反応し、シッフ塩基を形成する単糖（グルコース又はリボース）が関与する非酵素的プロセスである。シッフ塩基は、いわゆるアマドリ分子内転位の後、一連の反応によって、例えばペントシジンタイプの（特に分子内の）架橋をもたらし得る。
【０００３】
この現象は糖化産物の出現を特徴とし、その含量は年齢に応じて規則的に増加する。糖化産物は、例えばピラリン、カルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）、ペントシジン、クロスリン、Ｎε−（カルボキシエチル）リジン（ＣＥＬ）、グリオキサール−リジン二量体、メチルグリオキサール−リジン二量体、３ＤＧ−ＡＲＧイミダゾロン、バースパーリジン（versperlysines）Ａ、バースパーリジンＢ、バースパーリジンＣ、スレオシジン（threosidine）又は進行性グリコシル化の最終産物（すなわちＡＧＥ：終末糖化産物）である。
【０００４】
タンパク質の糖化はしたがって、皮膚、特にその真皮構成成分に関して、主としてコラーゲン繊維との関連でよく知られている普遍的な現象である。コラーゲンの糖化は実際に年齢とともに規則的に増加し、皮膚における糖化産物の含量の規則的な増加を引き起こす。
【０００５】
ＡＧＥは構造の不均一な群を構成するが、リジンのカルボキシメチル付加物（ＣＭＬ）がｉｎ  ｖｉｖｏで最も広く存在している。ＣＭＬは他のＡＧＥと共に、内因性老化プロセスの際に蓄積し、皮膚及び血管壁等の組織における硬化及び弾力性の喪失を引き起こす。
【０００６】
ＡＧＥは主にタンパク質と細胞外グルコースとの反応によって生じると長らく考えられてきた。しかしながら、最近の研究では、グルコースの自動酸化によって生じるジカルボニル化合物からのＡＧＥの細胞内形成がこの細胞外形成をはるかに上回ることが示されている（非特許文献１）。これらのジカルボニル化合物はグリオキサール、メチルグリオキサール及び３−デオキシグルコソンであり、還元酵素の基質である。グリオキサール及びメチルグリオキサールはグリオキサラーゼ系によって無毒化される。細胞内ＡＧＥは酸化ストレスを誘導し、ＮＦ−κＢ及びヘムオキシゲナーゼを活性化して、脂質過酸化物を生成させる。
【０００７】
最近の研究（非特許文献２）により、ヒト皮膚線維芽細胞におけるＣＭＬ（カルボキシメチルリジン）の形成の主要標的として、中間径フィラメントタンパク質であるビメンチンが同定された。中間径フィラメントは、アクチンマイクロフィラメント及び微小管に加えて細胞骨格の主要な構造要素の１つである。全ての中間径フィラメントタンパク質は共通した二次構造を有し、約３１０アミノ酸の中心のらせんドメインと、その側面に位置する様々な大きさの非αらせんドメインとから成る。ビメンチンは細胞運動性、走化性移動及び瘢痕形成といった多数の重要な細胞機能に必要とされる。ビメンチンの修飾は核周辺凝集体へのビメンチンの再分配につながる。ビメンチン修飾の生物学的影響が中間径フィラメント系の構造的破壊によって引き起こされる線維芽細胞の収縮能の喪失を伴い、最終的に老化プロセスを加速することが明らかである。
【０００８】
したがって、タンパク質の非酵素的糖化は皮膚コラーゲンの変化の主因を示している。タンパク質の糖化の重要な結果の１つはフリーラジカルの生成である。実際に、タンパク質は糖化の影響を受けると酸素と反応し、スーパーオキシドタイプのラジカルの形成を引き起こす。スーパーオキシドラジカルはタンパク質の分解を開始して、膜構造を変化させ、最終的に細胞外マトリックス及びその全ての構成成分を崩壊させることが可能である。
【０００９】
したがって、タンパク質の糖化を中断させることが可能な活性物質を含有する化粧品組成物は、皮膚の老化を食い止めることができる。しわの出現及び皮膚の緊張性の低下は、真皮、なかでもその機械的性質の老化を反映している。
【００１０】
特に、女性においては、乳房の皮膚外層が特に老化に敏感である。実際には、乳房は胸筋を覆う一対の器官である。乳腺は脂肪小葉と、乳腺の最深部に位置する約２０個の腺小葉とから構成される。脂肪小葉は乳房にその柔らかさ及びその形状を与える。腺小葉は、乳管によって乳管洞（乳頭で開口する）へと運ばれる乳汁を分泌する役割がある。排出管は結合組織の外郭構造によって囲まれ、支持される。乳頭及び乳輪は乳房の固定点（point of fixation）であるが、乳腺を支持する主要な手段は皮膚である。皮膚はクーパー靱帯によって乳腺の浅筋膜につながれている。胸筋は形状を変化させることも、又は乳房を再構築することもない。
【００１１】
年齢、ホルモンの影響、体重の変動だけでなく、日光への曝露、ブラジャーを着けないこと等によって、皮膚の弾性繊維が破損し、クーパー靱帯が伸びる場合がある。皮膚はその緊張性を失い、乳房が垂れる。この現象は下垂と呼ばれている。乳房の下垂は乳腺の移動及びたるみ、並びに皮膚外層の過度の拡張を反映する。したがって、乳房の老化を予防するには、タンパク質を糖化から保護することによってこの皮膚外層に作用することが必要である。
【００１２】
出願人は、驚くべきことに、スターアップルの抽出物がタンパク質の糖化を阻害することを実証した。スターアップルは大アンティル諸島を原産とするアカテツ科の樹木である。その丸い果実を半分に切ると、８個又は９個の腕を有する星型の小室中の４個〜１０個の扁平な種子を取り囲む白みがかった又は紫色のゼラチン状の果肉が現れる。この甘い果肉は種類にもよるが概して液状である。
【００１３】
特許文献１には、酵素的に加水分解すると化粧品に使用可能な青酸グリコシドを生じるアカテツ科の種子の抽出物が記載されている。特許文献２には、アカテツ科の種子から脂質を得る方法が記載されている。特許文献３には、炎症及びカユミ等の乾燥肌に関連する問題を予防することが可能な保湿性（hydrating activity）を有する、アカテツ科の植物の抽出物を含有する化粧料組成物が記載されている。非特許文献３には、スターアップルの果実中の抗酸化物質、特にアントシアンの存在の同定が記載されている。非特許文献４には、スターアップルの果実中の抗酸化物質、特にポリフェノールの存在の同定が記載されている。非特許文献５には、化粧用老化防止製品中の抗酸化物質、より具体的にはポリフェノールの利点が記載されている。本発明のスターアップル抽出物は、果実全体、すなわち果実の種子、果肉及び果皮の水性抽出物であり、化学組成が従来技術の抽出物とは異なるという点で従来技術の抽出物とは異なる。さらに、タンパク質の糖化、特に乳房下垂に対するスターアップル抽出物の効果を開示又は示唆する文献はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】国際公開第２００６／００９４１８号
【特許文献２】国際公開第２００６／００９４１７号
【特許文献３】特開２００１−１２２７３２号
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Shinohara, M et al. (1998) J. Clin. Investig. 101, 1142-1147
【非特許文献２】Thomas Kueper et al. J. Biol. Chem., Vol. 282, Issue 32, 23427-23436, August 10, 2007
【非特許文献３】L. Einbond et al., Food Chemistry, 84, 2004, 23-28
【非特許文献４】Xiao-Dong Luo et al., J. Agric. Food Chem. 2002, 50, 1379-1382
【非特許文献５】Choi et al., "Cosmeceuticals" Seminars in Cutaneous Medicine and Surgery, W.B. Saunders, Philadelphia, 25 (3), 2006, 163-168
【発明の概要】
【００１６】
本発明の化粧品組成物は、スターアップルの水性果実抽出物を含有する。有利には、この抽出物は、スターアップルの果実の果皮及び果肉の抽出物を含む。好ましくは、前記抽出物は、少なくとも：
乾燥果実をボウル内で粉砕する工程、
前記果実を覆うように水（室温）を添加する工程、
少なくとも２４時間浸漬する工程、
一次濾過する工程を含む方法によって得られる乾燥抽出物である。
【００１７】
この乾燥抽出物は有利には、以下のプロトコルに従って得られる：
（ｉ）スターアップルの果実の水性抽出：
乾燥果実をボウル内で粉砕する
果実を覆うように水（室温）を添加する
ゆっくりと攪拌する
少なくとも２４時間浸漬する
一次濾過する
（ｉｉ）濃縮：
乾物含量を測定する
濃縮器（低温、低圧）を通す
（ｉｉｉ）マルトデキストリンの添加、及び滅菌（sterilization）
（ｉｉｉｉ）乾燥及び除菌（debacterialization）：
スプレー塔において濃縮物を噴霧化する
得られる粉末をふるいにかけ、パッケージングする
除菌のためにイオン化処理する。
【００１８】
本発明による組成物に使用されるスターアップルの乾燥抽出物は、特徴的な匂いを有するベージュ色の粉末である。該抽出物は、以下の分析特性を有する：
溶解度＝水中に１０％
含水率≦１０％
ｐＨ＝５〜７
粒径（granulometry）≦５００ミクロン
全糖分＝２０％〜５０％／乾物量
ポリフェノール（カテキンとして表される）＝０．１％〜１％／乾物量。
【００１９】
本発明による化粧品組成物は、前記組成物の全重量に対して０．１％〜１０％（乾物重量比）のスターアップル抽出物を含むのが好ましい。有利には、組成物は、前記組成物の全重量に対して０．１重量％〜５重量％（乾物重量比）のスターアップル抽出物を含む。
【００２０】
本発明による組成物は、化粧品組成物及び皮膚用組成物における既知の従来の用途を有する１つ又は複数の配合剤又は添加剤をさらに含んでいてもよい。それらの非限定的な例として、皮膚軟化剤、着色剤、被膜形成剤、界面活性剤、香料、防腐剤、乳化剤、油、グリコール、ビタミンＥ等のビタミン、ＵＶフィルタ等が挙げられる。当業者であれば、化粧品の分野における知識を基に、本発明の組成物に添加すべき配合剤の種類及び所望の性質に応じた量を理解するだろう。
【００２１】
本発明による組成物は、顔及び体に適用すること以外の製剤学的な（galenic）制限なしに、化粧品学及び皮膚科学の分野における当業者に既知の任意の形態であり得る。有利には、本発明による組成物はジェル、クリーム、ローション、オイル、ミルク、スプレー等の形態である。
【００２２】
本発明による化粧品組成物は、皮膚の老化及び／又は皮膚の老化の兆候の出現を予防する、遅らせる、又は食い止めるのに使用することができる。「皮膚の老化の兆候」とは、しわ、小じわ、皮膚のたるみ、皮膚繊維の弾力性の喪失、皮膚の萎縮、皮膚の菲薄化、並びにくすんだ及び／又は輝きのない皮膚を意味する。
【００２３】
本発明による化粧品組成物は、タンパク質抗糖化剤として使用することができる。
【００２４】
本発明による化粧品組成物は、乳房下垂を予防する、及び／又は遅らせる、及び／又は矯正するのに使用することができる。
【００２５】
本発明は、少なくとも１つのスターアップルの水性抽出物及び化粧品基剤を含む上記の組成物を皮膚に適用することを含む、化粧品処理する方法にさらに関する。この方法は、皮膚の老化及び／又は皮膚の老化の兆候の出現を予防する、遅らせる、又は食い止める、乳房下垂を予防する、及び／又は遅らせる、及び／又は矯正する、並びに皮膚のタンパク質糖化を予防又は処置することを意図する。
【００２６】
上記組成物を、数日〜数ヶ月の期間で、１日に１回又は複数回（原則として１日に１回〜５回）適用することが推奨される。適用は顔及び乳房、腹部といった特に老化の影響を受けやすい体の領域に限局されたものであっても、全身に対するものであってもよい。適用は皮膚のマッサージを伴うものであるのが好ましい。
【００２７】
以下の実施例は、一方でスターアップル抽出物によるタンパク質糖化の阻害の評価に関し、他方で本発明による組成物に関する。
【００２８】
実施例では以下の図面を参照する。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】培養培地中に存在する活性物質（グリオキサール単独又はグリオキサールと糖化阻害剤との組み合わせ）に応じた蛍光強度の測定を示す図である。
【図２】培養培地中に存在する活性物質（グリオキサールと糖化阻害剤との組み合わせ）に応じた、非処理対照と比較した糖化の阻害率を示す図である。
【図３】２００倍の倍率での線維芽細胞の蛍光顕微鏡写真である。
【図４】図３の顕微鏡写真を４００倍の倍率で拡大した図である。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
［実施例］
Ｉ．スターアップル抽出物によるタンパク質糖化の阻害の評価
Ａ．材料及び方法
１）方法
ヒト真皮線維芽細胞の培養物中で、グリオキサールによって誘導されるＣＭＬ（リジンのカルボキシメチル付加物）に対するスターアップル抽出物の阻害活性、及びＣＭＬ形成の標的であるビメンチンに対するその保護効果を評価することが課題である。
【００３１】
正常成人ヒト線維芽細胞を、直径６０ｍｍのペトリ皿に置いたカバーガラス上、３７℃及び５％ＣＯ２で、１枚のカバーガラス当たり３００００個の細胞という割合で培養した。培養培地は、１０％ウシ胎仔血清及びペニシリン／ストレプトマイシン（５０μｇ／ｍｌ）を添加したＤＭＥＭ培地（ダルベッコ変法イーグル培地）とする。線維芽細胞を、２００μＭのグリオキサール（グルコースに由来する）を添加した上記の培地中で７日間インキュベートした。このようにして設定した培養はｉｎ  ｖｉｔｒｏ糖化の関連モデルとなる。
２）材料
試験した作製物は以下の通りである：
対照（グリオキサールを含まない）
非処理対照
アミノグアニジン１０ｍＭ（陽性参照）
０．１％のスターアップル抽出物
０．２５％のスターアップル抽出物
０．５％のスターアップル抽出物。
【００３２】
糖化阻害効果を明らかにするために、スターアップル抽出物をグリオキサールと同時に添加する。実験を有効にするために、既知の阻害剤であるアミノグアニジンを陽性参照として使用する。グリオキサールを含まない培地単独の対照を加える。
【００３３】
インキュベーションの終了時（Ｄ７）に、各々の細胞叢をリンスし、−２０℃でメタノールで固定し、続けて免疫蛍光によるビメンチン又はＣＭＬの検出を行う。
３）免疫標識
細胞をＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で洗い、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で１０分間透過化処理した。非特異部位を、２％ウシ血清アルブミン（２％ＢＳＡ−ＰＢＳ）の溶液を用いて室温で１０分間飽和させる。次いで、細胞を１％ＢＳＡ中の一次抗体（ビメンチンを検出する一次抗体（１００倍希釈）又はＣＭＬを検出する一次抗体（５０倍希釈））と共に１時間インキュベートした。インキュベーションの後、細胞をＰＢＳで洗い、次いで一次抗体に対する、蛍光色素ＦＩＴＣ（フルオレセイン−５−イソチオシアネート）又はＴＲＩＴＣ（テトラメチルローダミンイソチオシアネート）と結合した特異的二次抗体を含有する１％ＢＳＡの溶液と共に１時間インキュベートした。測定を行う前に、ＰＢＳで４回リンスする。
【００３４】
カバーガラスをスライドガラスに載せてから、蛍光顕微鏡（株式会社ニコンのＥｃｌｉｐｓｅ  ５０ｉ）を用いて検査する。細胞集団の幾つかの領域を撮影する。顕微鏡写真をLuciaの画像解析ソフトウェアを用いて解析する。ＦＩＴＣ蛍光画像によってビメンチンの局在化領域が示される。ＴＲＩＴＣ蛍光画像によってＣＭＬの局在化領域が示される。ＤＡＰＩ蛍光画像によって細胞核、したがって１視野当たりの細胞数が示される（図１〜図４を参照されたい）。
Ｂ．結果
１）ＣＭＬの形成
ＣＭＬの標識強度を、「非処理対照」及び３つの濃度のスターアップル抽出物という条件に関する１０枚の顕微鏡写真について観察した。
【００３５】
この蛍光強度は１枚の顕微鏡写真当たりの細胞数に関して示す。
【００３６】
陽性参照である「アミノグアニジン処理」という条件については、実験を有効にするには４枚の顕微鏡写真で十分であった。ＣＭＬの生成を完全に阻害したアミノグアニジンでは、標識強度は全く見られない。
【００３７】
分散分析（Ａｎｏｖａ）を用いて、集団間の平均値の差を調べる。この方法では、複数の集団について測定された平均値の差が有意であるか否かを決定するために、分散の測定値を使用する。
【００３８】
陽性参照であるアミノグアニジンは、リジンのカルボキシメチル付加物の形成を完全に阻害し、本発明の実験を有効にする。
【００３９】
これらの実験条件下では、スターアップル抽出物はＣＭＬ形成の用量依存的な阻害を示す。ｉｎ  ｖｉｔｒｏで使用される０．５％という最適用量では、スターアップル抽出物は糖化を引き起こす付加物の形成をほぼ完全に阻害する。
２）ＣＭＬの形成
これらの実験条件下では、ヒト真皮線維芽細胞をグリオキサールで処理することによってビメンチンが修飾され、核周辺凝集体への中間径フィラメントの再分配が生じる（矢印を参照されたい）。
【００４０】
０．５％の濃度で使用したスターアップル抽出物は、ビメンチンに対するグリオキサールの効果を阻害する。
Ｃ．結論
スターアップル抽出物は、グリオキサール等のジカルボニル化合物（リジン又はＣＭＬのカルボキシメチル付加物を形成することによってこの中間径フィラメントの構造的修飾を誘導する）に対してビメンチンを保護する効果を有する。
【００４１】
ビメンチンの糖化の阻害は細胞老化プロセスを遅らせ、真皮線維芽細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏでその運動性及び収縮能（瘢痕形成プロセスに重要である）を維持することを可能にする。
ＩＩ．配合例
百分率は、組成物の全重量に対する重量百分率である。
【００４２】
【表１】
2011528701.tif 000002
【００４３】
【表２】
2011528701.tif 000003
【００４４】
【表３】
2011528701.tif 000004
【００４５】
【表４】
2011528701.tif 000005
【図１】
2011528701.tif 000006
【図２】
2011528701.tif 000007
【図３】
2011528701.tif 000008
【図４】
2011528701.tif 000009
【国際調査報告】
2011528701.tif 000010
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