(57)【要約】化合物、該化合物を含む製剤組成物、ならびにその製造方法および使用が開示される。化合物は、トリフェニルメタン類似体である。化合物および組成物は、広範な種々の癌、例えば薬剤耐性癌、炎症、変性および血管性疾患、例えば種々の眼性疾患、ならびに寄生生物感染を治療する、および／または予防するために用いられ得る。代表的トリフェニルメタン類似体としては、種々の染料、ホルモン、糖、ペプチド、オリゴヌクレオチド、アミノ酸、ヌクレオチド、ヌクレオシドおよびポリオールのトリフェニルメタン類似体が挙げられる。化合物は、ｔＮＯＸ発現、ＲＯＳの作用、および／またはＨＩＦ２の産生を抑制することにより機能すると考えられる。したがって、該化合物は、種々の癌およびその他の疾患のための新規の治療薬である。
2011507971.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｔＮＯＸを発現する癌細胞を有する哺乳類において癌を治療する方法であって、ｔ治療的有意量のＮＯＸ発現を抑制するのに十分な量のトリアリールメタン治療薬を含む組成物の治療的有効量を前記哺乳類に投与することを含み、それにより腫瘍の成長が少なくとも部分的に阻害される方法。
【請求項２】
前記哺乳類がヒトである請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記癌が、血管腫、黒色腫、直腸癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、小細胞肺癌、結腸癌、慢性リンパ球性癌、有毛細胞白血病、食道癌、前立腺癌、乳癌、骨髄腫およびリンパ腫からなる群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記癌が転移癌である請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記ヒトが、トリアリールメタン治療薬の投与前に抗癌療法を受けたために免疫抑制される請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記癌がｔＮＯＸを発現する細胞を有する固形腫瘍の形態で症状発現される請求項１記載の方法。
【請求項７】
前記腫瘍が、上皮組織、リンパ組織、結合組織、骨または中枢神経系の腫瘍である請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記化合物が、非経口的に、経口的に、または腫瘍に直接投与される、請求項１記載の方法。
【請求項９】
化合物が、埋め込み装置を介して投与される請求項１記載の方法。
【請求項１０】
投与が徐放性処方物を用いて提供される請求項１記載の方法。
【請求項１１】
化合物が、以下の式：
【化１】
2011507971.tif 000036
（式中、Ｊは、２つのアリール環の間の直接結合、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲまたは（ＣＲ２）ｎを表し、
ｎ＝０〜４、
Ｅは、ＣＨ、本明細書中で定義されるような置換基Ｚに結合されるＣ、またはＮであり、
Ｒ＝Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキル、
Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテル、
Ｙ＝Ｏ、ＳまたはＮＲ２（ここで、アミンは、任意に、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルアリールまたはアリールアルキル部分を介してオルト位置で環に連結し戻され得る）、
Ｚ＝任意置換基、アリール環に結合される単環式環、あるいはベンゼン環またはシクロヘキサジエン環に結合される第二アリールまたはへテロアリール環、
ここで、前記アリールまたはへテロアリール環は、任意の遊離位置で、Ｈまたは本明細書中で定義されるような置換基Ｚで置換され得るし、
Ｚにより定義される置換基は、Ｃ１−６アルキル、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”（ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキルである）からなる群から選択される）
ならびに式２および３におけるヘテロアリール環を含む式４に対する対応物のうちの１つを有する、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
Ｘが、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールおよびチオールエーテルからなる群から選択される、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
化合物が次式：
【化２】
2011507971.tif 000037
（式中、Ｚ、ＸおよびＪは、請求項１１において定義されるとおりであり、
Ｔは、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−、ＮＲ、Ｏ、Ｓ、（−ＣＲ２）ｎ、（−ＣＲ２）ｎ−ＮＲ−、（−ＣＲ２）ｎ−Ｏ−および（−ＣＲ２）ｎ−Ｓ−からなる群から選択され、そして
Ｕは、−Ｃ（Ｏ）−、ＮＲ、Ｓ、Ｏおよび（−ＣＲ２）ｎからなる群から選択される）
を有する請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
ＵおよびＴ置換基を含む三環式環が以下の：
【化３】
2011507971.tif 000038
【化４】
2011507971.tif 000039
【化５】
2011507971.tif 000040
（式中、Ｘ、ＺおよびＲは請求項１１において定義される通りである）
からなる群から選択される請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
ＵおよびＴ置換基を含む三環式環が、以下の：
【化６】
2011507971.tif 000041
からなる群から選択される請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
化合物が、次式：
【化７】
2011507971.tif 000042
【化８】
2011507971.tif 000043
（式中、Ｘ、Ｚ、ＪおよびＲは請求項１１において定義される通りである）
を有する請求項１１記載の方法。
【請求項１７】
化合物が、次式：
【化９】
2011507971.tif 000044
【化１０】
2011507971.tif 000045
（式中、Ｘ、Ｚ、ＪおよびＲは請求項１１において定義される通りである）
を有する請求項１１記載の方法。
【請求項１８】
眼性障害を治療するための方法であって、眼性障害を治療するために十分な量のトリアリールメタン含有化合物を哺乳類に投与することを含む方法。
【請求項１９】
トリアリールメタン含有化合物の量が治療的有意量のＮＡＤＰＨオキシダーゼを抑制するのに十分である請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
前記哺乳類がヒトである請求項１８記載の方法。
【請求項２１】
前記眼性障害が、湿性または乾性加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、緑内障、新生血管性緑内障、網膜血管炎、ブドウ膜炎、例えば後部ブドウ膜炎、結膜炎、緑内障に派生する網膜炎、上強膜炎、強膜炎、視神経炎、球後視神経炎、白内障、眼手術後眼性炎症、物理的眼外傷に起因する眼性炎症、眼性アレルギーおよびドライアイからなる群から選択される請求項１８記載の方法。
【請求項２２】
前記眼性障害が、緑内障および白内障からなる群から選択される請求項１８記載の方法。
【請求項２３】
前記化合物が、点眼薬または眼に直接投与するための他の適切な局所処方物により投与される請求項１８記載の方法。
【請求項２４】
前記化合物が、結膜下注射、眼周囲注射または硝子体内注射により投与される請求項１８記載の方法。
【請求項２５】
前記化合物が、外科的移植により投与される請求項１８記載の方法。
【請求項２６】
前記化合物が、全身投与によってまたはイオン導入によって投与される請求項１８記載の方法。
【請求項２７】
前記投与が徐放性処方物を用いて提供される請求項１８記載の方法。
【請求項２８】
化合物が、以下の式：
【化１１】
2011507971.tif 000046
（式中、Ｊは、２つのアリール環の間の直接結合、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲまたは（ＣＲ２）ｎを表し、
ｎ＝０〜４、
Ｅは、ＣＨ、本明細書中で定義されるような置換基Ｚに結合されるＣ、またはＮであり、
Ｒ＝Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキル、
Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテル、
Ｙ＝Ｏ、ＳまたはＮＲ２（ここで、アミンは、任意に、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルアリールまたはアリールアルキル部分を介してオルト位置で環に連結し戻され得る）、
ここで、前記アリールまたはへテロアリール環は、任意の遊離位置で、Ｈまたは本明細書中で定義されるような置換基Ｚで置換され得るし、
Ｚは、水素、Ｃ１−６アルキル、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ” からなる群から選択され、ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキルであり、ここで、前記アリールまたはへテロアリール環は、任意の遊離位置で、Ｚで置換され得る）
ならびに式２および３におけるヘテロアリールを含む式４に対する対応物のうちの１つを有する、請求項１８記載の方法。
【請求項２９】
化合物が次式：
【化１２】
2011507971.tif 000047
（式中、    Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテル、
Ｘ’は、Ｏ、Ｓ、ＮＲまたはＮＲ２＋（ここで、アミンは、任意に、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルアリールまたはアリールアルキル部分を介してオルト位置で環に連結し戻され得る）、
Ｚは、水素、Ｃ１−６アルキル、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”からなる群から選択され、ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキルであり、ここで、前記アリールまたはへテロアリール環は、任意の遊離位置で、Ｚで置換され得る、
Ｔは、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−、ＮＲ、Ｏ、Ｓ、（−ＣＲ２）ｎ、（−ＣＲ２）ｎ−ＮＲ−、（−ＣＲ２）ｎ−Ｏ−および（−ＣＲ２）ｎ−Ｓ−からなる群から選択され、そして
Ｕは、−Ｃ（Ｏ）−、ＮＲ、Ｓ、Ｏおよび（−ＣＲ２）ｎからなる群から選択される）を有する請求項１８に記載の方法。
【請求項３０】
ＵおよびＴ置換基を含む三環式環が以下の：
【化１３】
2011507971.tif 000048
【化１４】
2011507971.tif 000049
【化１５】
2011507971.tif 000050
（式中、Ｘ、ＺおよびＲは請求項２８において定義される通りである）
からなる群から選択される請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
ＵおよびＴ置換基を含む三環式環が、以下の：
【化１６】
2011507971.tif 000051
からなる群から選択される請求項２９記載の方法。
【請求項３２】
化合物が、次式：
【化１７】
2011507971.tif 000052
（式中、Ｘ、Ｚ、ＪおよびＲは請求項２８において定義される通りである）
を有する、請求項２１記載の方法。
【請求項３３】
化合物が、次式：
【化１８】
2011507971.tif 000053
【化１９】
2011507971.tif 000054
（式中、Ｘ、Ｚ、ＪおよびＲは請求項２８において定義される通りである）
を有する、請求項１８記載の方法。
【請求項３４】
次式：
【化２０】
2011507971.tif 000055
（式中、Ｊは、２つのアリール環の間の直接結合、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲまたは（ＣＲ２）ｎを表し、
ｎ＝０〜４、
Ｅは、ＣＨ、本明細書中で定義されるような置換基Ｚに結合されるＣ、またはＮであり、
Ｒ＝Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキル、
Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテル、好ましくはアミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールおよびチオールエーテルから選択され、
Ｙ＝Ｏ、ＳまたはＮＲ２（ここで、アミンは、任意に、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルアリールまたはアリールアルキル部分を介してオルト位置で環に連結し戻され得る）、
Ｚ＝任意置換基、アリール環に結合される単環式環、あるいはベンゼン環またはシクロヘキサジエン環に結合される第二アリールまたはへテロアリール環、
ここで、前記アリールまたはへテロアリール環は、任意の遊離位置で、Ｈまたは本明細書中で定義されるような置換基Ｚで置換され得るし、
Ｚにより定義される置換基は、Ｃ１−６アルキル、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”（ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキルである）からなる群から選択され、
Ｘ’は、Ｏ、Ｓ、ＮＲまたはＮＲ２＋であり、
Ｔは、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−、ＮＲ、Ｏ、Ｓ、（−ＣＲ２）ｎ、（−ＣＲ２）ｎ−ＮＲ−、（−ＣＲ２）ｎ−Ｏ−および（−ＣＲ２）ｎ−Ｓ−からなる群から選択され、そして
Ｕは、−Ｃ（Ｏ）−、ＮＲ、Ｓ、Ｏおよび（−ＣＲ２）ｎからなる群から選択される）
を有する化合物。
【請求項３５】
ＵおよびＴ置換基を含む三環式環が、以下の：
【化２１】
2011507971.tif 000056
【化２２】
2011507971.tif 000057
【化２３】
2011507971.tif 000058
（式中、Ｘ、ＺおよびＲは請求項３４において定義される通りである）
からなる群から選択される、請求項３４記載の化合物。
【請求項３６】
化合物が、次式：
【化２４】
2011507971.tif 000059
（式中、Ｘ、Ｚ、ＪおよびＲは請求項３４において定義される通りである）
を有する、請求項３４記載の化合物。
【請求項３７】
化合物が、次式：
【化２５】
2011507971.tif 000060
（式中、Ｘ、Ｚ、ＪおよびＲは請求項３４において定義される通りである）
を有する、請求項３４記載の化合物。
【請求項３８】
哺乳類における寄生生物感染を治療する方法であって、疾患の治療に十分な量のトリアリールメタン治療薬を含む化合物の治療的有効量を哺乳類に投与することを含む方法。
【請求項３９】
トリフェニルメタン治療薬の量が治療的有意量のＮＡＤＰＨオキシダーゼを抑制するのに十分である請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
前記哺乳類がヒトである請求項３８記載の方法。
【請求項４１】
寄生生物感染が、マラリア、トリパノソーマ症およびリーシュマニア症からなる群から選択される請求項３８記載の方法。
【請求項４２】
前記投与が徐放性処方物を用いて提供される請求項３８記載の方法。
【請求項４３】
化合物が、以下の式：
【化２６】
2011507971.tif 000061
（式中、Ｊは、２つのアリール環の間の直接結合、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲまたは（ＣＲ２）ｎを表し、
ｎ＝０〜４、
Ｅは、ＣＨ、本明細書中で定義されるような置換基Ｚに結合されるＣ、またはＮであり、
Ｒ＝Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキル、
Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテル、そして好ましくはアミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールおよびチオールエーテルから選択され、
Ｙ＝Ｏ、ＳまたはＮＲ２（ここで、アミンは、任意に、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルアリールまたはアリールアルキル部分を介してオルト位置で環に連結し戻され得る）、
Ｚ＝任意置換基、アリール環に結合される単環式環、あるいはベンゼン環またはシクロヘキサジエン環に結合される第二アリールまたはへテロアリール環、
ここで、前記アリールまたはへテロアリール環は、任意の遊離位置で、Ｈまたは本明細書中で定義されるような置換基Ｚで置換され得るし、
Ｚにより定義される置換基は、Ｃ１−６アルキル、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”（ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキルである）からなる群から選択される）
ならびに式２および３におけるヘテロアリールを含む式４に対する対応物のうちの１つを有する請求項３８記載の方法。
【請求項４４】
化合物が次式：
【化２７】
2011507971.tif 000062
（式中、Ｚ、ＸおよびＪは請求項３４において定義される通りであり、
Ｘ’は、Ｏ、Ｓ、ＮＲまたはＮＲ２＋であり、
Ｔは、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−、ＮＲ、Ｏ、Ｓ、（−ＣＲ２）ｎ、（−ＣＲ２）ｎ−ＮＲ−、（−ＣＲ２）ｎ−Ｏ−および（−ＣＲ２）ｎ−Ｓ−からなる群から選択され、そして
Ｕは、−Ｃ（Ｏ）−、ＮＲ、Ｓ、Ｏおよび（−ＣＲ２）ｎからなる群から選択される）を有する請求項４３記載の方法。
【請求項４５】
ＵおよびＴ置換基を含む三環式環が以下の：
【化２８】
2011507971.tif 000063
【化２９】
2011507971.tif 000064
【化３０】
2011507971.tif 000065
（式中、Ｘ、ＺおよびＲは請求項４４において定義される通りである）
からなる群から選択される、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
化合物が、次式：
【化３１】
2011507971.tif 000066
【化３２】
2011507971.tif 000067
（式中、Ｘ、Ｚ、ＪおよびＲは請求項４４において定義される通りである）
を有する、請求項４４記載の方法。
【請求項４７】
次式：
【化３３】
2011507971.tif 000068
（式中、Ｊは、２つのアリール環の間の直接結合、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲまたは（ＣＲ２）ｎを表し、
ｎ＝０〜４、
Ｅは、ＣＨ、本明細書中で定義されるような置換基Ｚに結合されるＣ、またはＮであり、
Ｒ＝Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキル、
Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテル、好ましくはアミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールおよびチオールエーテルから選択され、
Ｙ＝Ｏ、ＳまたはＮＲ２（ここで、アミンは、任意に、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルアリールまたはアリールアルキル部分を介してオルト位置で環に連結し戻され得る）、
Ｚ＝任意置換基、アリール環に結合される単環式環、あるいはベンゼン環またはシクロヘキサジエン環に結合される第二アリールまたはへテロアリール環、
ここで、前記アリールまたはへテロアリール環は、任意の遊離位置で、Ｈまたは本明細書中で定義されるような置換基Ｚで置換され得るし、
Ｚにより定義される置換基は、Ｃ１−６アルキル、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”（ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキルである）からなる群から選択され、
Ｘ’は、Ｏ、Ｓ、ＮＲまたはＮＲ２＋であり、
Ｔは、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−、ＮＲ、Ｏ、Ｓ、（−ＣＲ２）ｎ、（−ＣＲ２）ｎ−ＮＲ−、（−ＣＲ２）ｎ−Ｏ−および（−ＣＲ２）ｎ−Ｓ−からなる群から選択され、そして
Ｕは、−Ｃ（Ｏ）−、ＮＲ、Ｓ、Ｏおよび（−ＣＲ２）ｎからなる群から選択される）
を有する化合物。
【請求項４８】
ＵおよびＴ置換基を含む三環式環が以下の：
【化３４】
2011507971.tif 000069
【化３５】
2011507971.tif 000070
【化３６】
2011507971.tif 000071
（式中、Ｘ、ＺおよびＲは請求項４において定義される通りである）
からなる群から選択される、請求項４７記載の化合物。
【請求項４９】
ＵおよびＴ置換基を含む三環式環が以下の：
【化３７】
2011507971.tif 000072
（式中、Ｘ、ＺおよびＲは請求項４７において定義される通りである）
からなる群から選択される、請求項４７記載の化合物。
【請求項５０】
化合物が、次式：
【化３８】
2011507971.tif 000073
【化３９】
2011507971.tif 000074
【化４０】
2011507971.tif 000075
【化４１】
2011507971.tif 000076
【化４２】
2011507971.tif 000077
【化４３】
2011507971.tif 000078
【化４４】
2011507971.tif 000079
【化４５】
2011507971.tif 000080
【化４６】
2011507971.tif 000081
（式中、ＪおよびＸは請求項４７において定義される通りである）
を有する、請求項４７記載の化合物。
【請求項５１】
化合物が、次式：
【化４７】
2011507971.tif 000082
【化４８】
2011507971.tif 000083
【化４９】
2011507971.tif 000084
【化５０】
2011507971.tif 000085
（式中、ＪおよびＸは請求項４７において定義される通りである）
を有する、請求項４０記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の引照）
本出願は、米国特許仮出願第６１／００９，７４５号（２００７年１２月３１日出願）および米国特許出願第６１／０９０，０２７号（２００８年８月１９日出願）の利益を主張する。前記出願の全ての開示内容は各々、全ての目的のために、参照により本明細書中で援用される
【０００２】
（本発明における政府の権利）
この出願に開示される本発明のいくつかの態様は、米国政府、国立衛生研究所助成金Ｎｏ．ＡＲ０２０３０により支援された。したがって、米国政府は、本発明において一定の権利を有する。
【０００３】
本発明は、原発性および転移性癌ならびに他の増殖性障害の治療のための新規の方法および組成物に関する。これらの方法および組成物は、トリアリールメタンを用いる。これらの化合物および該化合物を含む製剤組成物は、ヒトにおける原発性および転移性癌を治療するために特に有用である。本発明は、治療用化合物または組成物の種々の投与方式も包含する。
【０００４】
本発明は、国立衛生研究所により授与された助成金番号ＡＲ０２０３０下での政府支援でなされた。政府は本発明において一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００５】
癌は、所定の正常組織由来の異常細胞の数の増大、これらの異常細胞による隣接組織の侵襲、そして所属リンパ節への、ならびに遠位部位（転移）への悪性細胞のリンパまたは血液媒介性拡散により、主に特徴づけられる。癌は、小さな前新生物性変化で開始する多段階プロセスであり、ある条件下では新生物形成に進行し得る。悪性内皮性腫瘍は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）およびその主要分裂促進因子受容体である血管内皮細胞増殖因子受容体２を含めた自己分泌ループの設定で生じる。
【０００６】
活性酸素種（ＲＯＳ）は、癌における増殖および血管新生の媒介物質であると考えられる。ＲＯＳ増大は、しばしば、細胞増殖、例えばＲａｓ形質転換細胞および増殖因子で処置される細胞と相関する。非形質転換細胞は増殖因子／サイトカインと応答し、ＲＯＳの産生調節を伴うが、一方、培養中の腫瘍細胞はしばしばＨ２Ｏ２を過剰産生する。
【０００７】
ＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼ（Ｎｏｘ）は、ヒドロキノン（ＮＡＤＨ）オキシダーゼおよびタンパク質ジスルフィド−チオール交換活性を有する細胞表面タンパク質である。概して、ほとんどの形態の酵素が、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨを等しく効率的に利用し得る。Ｎｏｘ１〜５、二重オキシダーゼ１および２（Ｄｕｏｘ１および２）を含めた多数の形態のＮＯｘ、ならびにｐ２２（ｐｈｏｘ）、ｐ４７（ｐｈｏｘ）および小Ｇタンパク質Ｒａｃ１が存在する。
【０００８】
Ｎｏｘは、ある種の癌におけるＲＯＳのレベル増大を説明すると考えられる。活性酸素を生成するＮｏｘ酵素は血管新生スイッチに関与し、Ｎｏｘ阻害薬は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのａｎｇ−２産生と、ｉｎ  ｖｉｖｏでのｂＥｎｄ．３腫瘍増殖に及ぼす作用を有する。ａｎｇ−２産生は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのｂＥｎｄ．３血管腫増殖をほぼ消滅させるＮｏｘ酵素阻害薬を用いて、薬理学的に抑制され得る。したがって、ａｎｇ−２産生を標的にするシグナル伝達遮断は、ｉｎ  ｖｉｖｏでヒト血管腫を治療するために有用であり得る（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  ａｄｖａｎｃｅ  ｏｎｌｉｎｅ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，  １  Ｊｕｎｅ  ２００６；  ｄｏｉ：  １０．１０３８／ｓｊ．ｊｉｄ．５７００４１３）。
【０００９】
特定のＮｏｘ酵素に関しては、前立腺癌細胞株中へのＮｏｘ１のトランスフェクションは腫瘍増殖を劇的に増強し（Ａｒｂｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．：  ＰＮＡＳ  ９９：  ７１５−７２０，  ２００１）、そして前立腺腫瘍はＨ２Ｏ２レベル増大を示す、ということが示されている。さらに、前立腺腫瘍は、Ｎｏｘ１および過酸化水素のレベル増大を示すことが、近年見出された（Ｌｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｓｔａｔｅ．  ２００５  Ｆｅｂ  １；  ６２（２）：  ２００−７）。Ｎｏｘ１依存性スーパーオキシド産生は、結腸腺癌細胞移動を制御することも示されている（Ｓａｄｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ．  １７８３（１）：  ２３−３３  （Ｊａｎ  ２００８））。Ｓａｄｏｋは、Ｎｏｘ１抑制または下方調節がスーパーオキシド産生ならびにα２β１インテグリン膜利用能の低減をもたらす、ということを示した。したがって、前立腺癌におけるＮｏｘタンパク質レベルとＲＯＳとの間に相関が認められ、Ｎｏｘ１／Ｈ２Ｏ２の増大は腫瘍形成能増大と相関する。
【００１０】
Ｎｏｘ４は、癌細胞、例えば膵臓癌細胞におけるアポトーシスの抑制に関与する、と考えられる（Ｖａｑｕｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２００４  Ａｕｇ  １３；  ２７９（３３）：  ３４６４３−５４）。Ｖａｑｕｅｒｏは、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼ（おそらくはＮｏｘ４）により産生される増殖因子誘導性ＲＯＳがアポトーシスから膵臓癌細胞を防御し、そしてＮｏｘ４アンチセンスオリゴヌクレオチドによるトランスフェクションが、ある種の膵臓細胞（すなわち、ＭＩＡ  ＰａＣａ−２およびＰＡＮＣ−１細胞）におけるＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼ活性およびＲＯＳ産生を抑制し、これらの細胞におけるアポトーシスを刺激する、と示唆した。
【００１１】
ＰＩ３Ｋ（ホスホイノシトール−３−キナーゼ）の下流のシグナル伝達分子であるＡｋｔは、ＲＯＳ生成酵素Ｎｏｘ４の発現を誘導することが知られている。Ａｋｔ過剰発現が放射状増殖から垂直増殖に細胞を形質転換させるのに十分であったか否かを試験するために、一試験はＡｋｔを放射増殖ＷＭ３５黒色腫中に導入した。Ａｋｔの過剰発現は、ＶＥＧＦの上方調節、スーパーオキシドＲＯＳの産生増大、ならびにより顕著な解糖的代謝への切り替えをもたらした。Ａｋｔを過剰発現するＷＭ３５細胞の皮下移植はｉｎ  ｖｉｖｏで急速に増殖する腫瘍を生じたが、一方、ベクター対照細胞は腫瘍を形成しなかった（Ａｒｂｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  ２００６，  Ｊｕｎｅ  １，  １６７４１５０７）。このデータは、Ａｋｔの抑制がＮｏｘ４の下流産生を抑制し、これが次にスーパーオキシド生成を抑制して、したがって黒色腫を治療する、という前提を支持する。
【００１２】
Ｄｕｏｘ１および２は、気道内皮細胞における主要Ｎｏｘ種であり、気道における活性酸素種産生のための主な供給源の１つであると考えられる（Ｌｕｘｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２００８  Ｆｅｂ  １５；  ６８（４）：  １０３７−４５）。したがって、これらの酵素の抑制は、ヒト肺癌を治療するのに有用であり得る。
【００１３】
Ｎｏｘを２つの部類に分けられると特徴づけている著者もいる。１つはホルモン非感受性および薬剤応答性（すなわち、キニン部位阻害薬、例えばカプサイシンまたは抗腫瘍スルホニル尿素ＬＹ１８１９８４による）であり、「ｔＮｏｘ」と呼ばれ、これは、癌細胞に特異的である。他方は、非形質転換細胞の原形質膜と関連した薬剤不感性構成形態であり、「ＣＮｏｘ」と呼ばれる（Ｋｅｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．  ２６；  ４０（２５）：  ７３５１−４  （２００１）；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．  Ｊｕｎ  ２０；  １５３９（３）：  １９２−２０４  （２００１））。
【００１４】
癌細胞は、薬剤応答性ならびにホルモンおよび増殖因子不感性（ｔＮｏｘ）と薬剤抑制ならびにホルモンおよび増殖因子依存性（ＣＮｏｘ）活性の両方を示し、一方、非形質転換細胞は薬剤不感性ホルモンおよび薬剤応答性ＣＮｏｘのみを示す。癌細胞のｔＮｏｘと同様に、ＣＮｏｘはＮＡＤＨを酸化し得るが、しかしホルモンおよび増殖因子により調整される活性を有する。したがって、ｔＮｏｘの阻害薬（上記のＮｏｘ酵素のうちの１つ以上、例えばＮｏｘ４を含むと考えられる）は癌を治療するのに有用であろう、と理論づけている著者もいる。
【００１５】
癌を治療するほかに、Ｎｏｘ阻害薬は、活性酸素種が関与している多数の他の炎症性、変性および血管性疾患に対する治療効果を提供することも予期される。
【００１６】
例えば、Ｎｏｘは、網膜血管炎症ならびに血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）および網膜新血管新生における虚血誘導性増大において一役を有することが報告されている（Ａｌ−Ｓｈａｂｒａｗｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  Ｖｉｓ．  Ｓｃｉ．  （２００８））。内毒素血症およびストレプトゾトシン誘導性糖尿病のモデルにおいて野生型マウス、Ｎｏｘ２を欠くマウス、ならびにＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害薬アポシニンで処置されたマウスを用いて実施された試験は、ＩＣＡＭ−１発現および白血球停滞における内毒素血症および糖尿病誘導性増大の両方がＮｏｘ２の枯渇により有意に抑制される、ということを示した。アポシニン治療は、ＩＣＡＭ−１の糖尿病誘導性増大、白血球停滞および血液網膜関門の崩壊を防止するに際してＮｏｘ２の枯渇と同じくらい有効であったが、これは、Ｎｏｘ２が主に糖尿病性網膜症のこれら早期徴候に関与する、ということを示唆する。
【００１７】
ＲＯＳ上昇は網膜色素上皮におけるアポトーシス性細胞損失を開始し、酸化防止剤がそれを抑制する（Ｇｌｏｔｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ，  ２００６  ＩＯＶＳ，  ４７：  ４６１４−４６２３）。これは、乾性加齢性黄斑変性の発症に一役を果たす、と考えられる。同様に、酸化防止剤の使用は、ＡＭＤで大型ドルーゼンを有する患者における新血管新生への進行を低減することが示されてきた（Ｃｏｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｈｅｗ，  ２００７，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １８（３）：  ２２０−２２３）。
【００１８】
ＮＡＤＰ＋レダクターゼは、レチンアルデヒドおよびレチノイン酸の濃度を下げ、これが順次レチンアルデヒド誘導性細胞死から細胞を防御する（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２８２（４９）  ３５６２１−８  （２００７））。拡大解釈すれば、ＮＡＤＰＨオキシダーゼの抑制は、ＮＡＤＰ＋レダクターゼの割合を増大させるのと同じ効果を有し得るし、レチンアルデヒドまたはレチノイン酸により媒介される網膜変性に有益な効果がある。
【００１９】
ＮＡＤＰＨオキシダーゼの特異的抑制は、未熟児網膜症のモデルにおいて血管新生を低減することが示されている（Ａｌ−Ｓｈａｂｒａｗａｙ  ｅｔ  ａｌ，  ２００５，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．  １６７（２）：  ５９９−６０７およびＳａｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ，  ２００７，  Ｍｏｌ．  Ｖｉｓｉｏｎ，  １３：  ８４０−８５３）。さらに、ＲＯＳ上昇は糖尿病動物で観察されており、その上昇はＶＥＧＦ活性増大と相関する。同様に、酸化的ストレスは、糖尿病性網膜症の発症における有意の因子であると考えられる（Ｋｏｗｌｕｒｕ  ａｎｄ  Ｃｈａｎ，  ２００７，  Ｅｘｐｔ．  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｓ．，  Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ４３６０３）。
【００２０】
ＲＯＳは、緑内障の発症において２つの別個の作用を有し得る。第一に、ＲＯＳ増大は、小柱網の細胞質増大（ならびにそれにより眼内圧増大）を引き起こす（Ｓａｃｃａ  ｅｔ  ａｌ，  ２００７，  Ｅｘｐ．  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  ８４（３）：  ３８９−３９９）。経時的に増大される活性酸素種は、視野欠損の解剖学的基礎である網膜神経節細胞のアポトーシスを増大し得るし、そしてそれを刺激すると考えられる（Ｔｅｚｅｌ，  ２００６，  Ｐｒｏｇ．  Ｒｅｔｉｎ．  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  ２５（５）：  ４９０−５１３）。
【００２１】
非眼性皮膚組織において、花粉からのＮＡＤＰＨオキシダーゼはアレルギー性応答を永続させることが示されている。ＮＡＤＰＨオキシダーゼの抑制は、肥満細胞脱顆粒を低減し、アレルギー性眼疾患に有用であり得る（Ｎｉｓｈｉｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ，  ２００７，  ＢＢＲＣ，  ３６２（２）：  ５０４−５０９）。
【００２２】
ＮＡＤＰＨオキシダーゼの抑制が上記の眼疾患のいくつかにおいて治療効果を提供するという直接的実験的証拠が欠けているが、しかしＮＡＤＰＨオキシダーゼ抑制は細胞性酸化還元平衡を変更すると予測され、したがって間接的手段により種々の症状において治療効果を有し得る。
【００２３】
ＮＡＤＰＨオキシダーゼが角膜上皮および間質細胞中で構成的に発現される、という観察に基づいて、ＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害薬は、ドライアイの治療のために有効でもあり得る（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ，  ２００６，  ＩＯＶＳ，  ４７：  ８５３−８６３）。著者は、スーパーオキシド陰イオンの産生が角膜の炎症に一役を果たし得る、ということを示唆している。
【００２４】
炎症性障害における特定のＮｏｘ酵素の役割に関して、Ｎｏｘ２含有ＮＡＤＰＨオキシダーゼおよびＡｋｔ活性化は、アンギオテンシンＩＩ誘導性心筋細胞肥大において重要な役割を果たすと考えられる（Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ２６：  １８０−１９１，  ２００６）。
【００２５】
したがって、Ｎｏｘは、いくつかの癌および炎症性障害におけるＲＯＳのレベル増大に関与すると考えられるし、適切な阻害薬による治療はこのような癌および炎症性障害を治療するのに有用であり得る。
【００２６】
慣用的化学療法薬の非選択性により一般的に引き起こされる副作用を有さない癌の治療が依然として必要とされている。さらに、活性酸素種が関与している炎症性、変性および血管性疾患のための付加的治療を有することも依然として必要とされている。本発明は、このような化合物、組成物および方法を提供する。
【発明の概要】
【００２７】
化合物、該化合物を含む製剤組成物、ならびにその製造方法および使用が開示される。化合物は、トリアリールメタン化合物、例えばトリフェニルメタン類似体であり、これは、ルイス酸、例えばオキシ塩化リンまたは塩化チオニルの存在下で、例えばジアリールケトン、例えばミヒラーケトンを芳香族またはへテロ芳香族化合物、例えばフェノールまたはアニリンと反応させることにより形成され得る。典型的には、求電子性付加は、フェノールまたはアニリン化合物中のヒドロキシまたはアミノ基に対してオルトまたはパラ位置で、あるいはニトロまたはカルボキシ基に対してメタ位置で起こり、その後、脱水されて、トリフェニルメタン化合物を形成する。
【００２８】
代表的化合物としては、ステロイドおよびステロイド前駆体、例えばコレステロール、プロゲステロン、テストステロンまたはエストロゲン；染料、例えばインディゴ、クリシンおよびイミプラミン；ベンゾフェノン、ヌクレオシド、例えばウラシル、チミジン、アデニン、シトシンおよびグアニン、芳香族アミノ酸、例えばフェニルアラニン；葉酸ならびに種々の三環式化合物、例えば種々の三環式染料および三環式抗うつ薬のトリフェニルメタン類似体が挙げられる。
【００２９】
特定の代表的化合物としては、以下のものが挙げられる：
［ＴＰＭ１］ＦＷ＝５０２．７１ｇ／ｍｏｌエチルカルバゾール
［ＴＰＭ２］ＦＷ＝５８８．８７ｇ／ｍｏｌイミプラミン
［ＴＰＭ３］ＦＷ＝４５５．４６ｇ／ｍｏｌモスボール
［ＴＰＭ４］ＦＷ＝４３２．６０ｇ／ｍｏｌバニリン
［ＴＰＭ５］ＦＷ＝５１２．６９ｇ／ｍｏｌトリプトファン
［ＴＰＭ６］ＦＷ＝４００．６０ｇ／ｍｏｌメチルブリリアントグリーン
［ＴＰＭ７］ＦＷ＝６７２．８６ｇ／ｍｏｌＰｏｐｏｐブリリアントグリーン
［ＴＰＭ８］ＦＷ＝５０２．６５ｇ／ｍｏｌカフェイン染料
［ＴＰＭ９］ＦＷ＝５２１．７６ｇ／ｍｏｌプロトンスポンジ染料
［ＴＰＭ１０］ＦＷ＝６６２．９５ｇ／ｍｏｌＤＤＴブラック
【００３０】
これらのトリアリールメタン含有化合物の合成、特性化および抗腫瘍能評価も開示される。
【００３１】
ある種のトリフェニルメタン上のイミニウム基が、例えばシアノ水素化ホウ素ナトリウムで還元されるプロドラッグ形態の化合物も開示される。このような一化合物は、還元形態のゲンチアナバイオレット（トリス（ジメチルアミノフェニル）メタン）である。プロドラッグは、親化合物に容易に再酸化されて、薬剤それ自体を上回る種々の利点を提供し得る。例えば、プロドラッグ形態は、余り着色されず、より親油性である（イミニウム塩がアミンに還元されるため）。化合物は、親薬剤より容易に細胞に取り込まれ得るし、ｉｎ  ｖｉｖｏで低刺激性であり得る。高レベルのスーパーオキシド／過酸化水素を有する腫瘍／血管中では、プロドラッグは細胞内でトリフェニルメタン染料に容易に酸化され得る。
【００３２】
いくつかの実施形態では、還元化合物（プロドラッグ）は１つ以上の遊離アミン基を有し、これは、塩化ジクロロアセチルと反応して、１つ以上のトリクロロアセチルアミド基を作り得る。加水分解時に、プロドラッグはｉｎ  ｖｉｖｏで加水分解して、ジクロロ酢酸塩（「ＤＣＡ」）およびトリフェニルメタン化合物を形成するが、これらはともに癌を治療するのに有用である。
【００３３】
特定の理論に縛られることなく考えると、化合物は、以下の機序のうちの１つ以上により機能する：
ａ）全ての形態のＮｏｘを抑制すること、
ｂ）Ｎｏｘ１〜５を特異的に抑制すること、
ｃ）Ｎｏｘ２および／またはＮｏｘ４（後者は正常細胞より癌細胞中で一般的である）を特異的に抑制すること、
ｄ）正常細胞より癌細胞中で一般的であるＮｏｘ酵素（本明細書中では、以後、ｔＮｏｘと呼ぶ）を抑制すること、
ｅ）ＲＯＳを抑制すること、
ｆ）スーパーオキシド掃去剤、例えば掃去剤酵素系カタラーゼ、スーパーオキシドジスムターゼＩ（Ｚｎ２＋／Ｃｕ２＋  ＳＯＤ）およびＩＩ（ＭＮ−ＳＯＤ）、ならびにグルタチオンペルオキシダーゼを助成すること、そして
Ｇ２／Ｍ細胞周期停止を誘導すること。
【００３４】
化合物がＲＯＳを抑制し得る証拠は、本明細書中では作業例で実証されるが、それらは、化合物がスーパーオキシドジスムターゼに付加される場合、それらはスーパーオキシドジスムターゼのスペクトルを変更し、そして遊離ラジカルに転化されると思われるということを電子スピン共鳴スペクトルが実証する、ということを示す。
【００３５】
上記のように、癌細胞を殺害するための機序は、ＣＮｏｘに有意に作用することなくｔＮｏｘの抑制を伴って、それにより、特に転移腫瘍において、細胞増殖を有効に抑制し得るし、あるいは癌細胞中で一般的であるＮｏｘ４のようなＮｏｘ酵素のいずれかの抑制を伴い得る。すなわち、いくつかの実施形態では、Ｎｏｘは、正常細胞を上回って癌細胞中で選択的に発現されるものであり、そして他の実施形態では、Ｎｏｘは、正常細胞中よりも癌細胞中で高濃度で発現されるものである。他の実施形態では、化合物は、活性酸素種（「ＲＯＳ」）の作用を抑制することにより、および／または低酸素誘導因子（ＨＩＦ２）（活性酸素のために血管新生を駆動する）の産生を抑制することにより、機能する。
【００３６】
１つ以上のこれらの化合物による治療は、健常細胞を殺害することなく、癌細胞を選択的に殺害し、したがって選択的抗癌療法を提供し得る。最も重要なことは、これらの化合物が、転移するようになった癌細胞に対して強力である点である。
【００３７】
ＷＭ３５ＰＫＢ（Ａｋｔを過剰発現する安定ＷＭ３５細胞）からのデータは、例えば、欠陥ミトコンドリアにより産生される活性酸素を直接的に掃去することにより、Ｎｏｘ非依存的方法で活性酸素を該化合物が抑制し得る、ということを示唆する。
【００３８】
ＲＯＳおよび／またはＨＩＦ２を抑制することにより、活性酸素種が関連づけられてきた種々の炎症性、変性および血管性疾患が治療され得る。
【００３９】
別の実施形態では、化合物は、寄生生物感染、例えばマラリア、トリパノソーマ症およびリーシュマニア症、具体的には、例えばシャーガス病および睡眠病を治療するのにも有効である。
【００４０】
製剤組成物は、有効量の本明細書中に記載される化合物を、製薬上許容可能な担体または賦形剤とともに含む。有効量で用いられる場合、化合物は、広範な種々の癌、特に転移癌を予防する、および／または治療するための治療薬として作用し得るし、この役割において安全且つ有効であると考えられる。治療されおよび／または予防され得る代表的癌としては、黒色腫、白血病、非小細胞肺癌、結腸癌、中枢神経系（ＣＮＳ）癌、腎臓癌、卵巣癌、乳癌および前立腺癌が挙げられる。付加的製剤組成物は、活性酸素種が関連付けられてきた炎症性、変性および血管性疾患、具体的には例えば眼性疾患の治療のために有用であり得る。
【００４１】
本発明の前記のおよび他の態様は、以下で記述される詳細な説明および実施例で詳細に説明される。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】可溶性ｔｉｅ−２受容体によるａｎｇ−２シグナル伝達の抑制がｉｎ  ｖｉｖｏでのｂＥｎｄ．３増殖を抑制することを示す写真およびグラフを包含する。上パネルは、対照Ｆｃ処置腫瘍（左）およびｔｉｅ−２／Ｆｃ処置血管腫（右）を有するマウスを示す。下パネルは、ｔｉｅ−２／Ｆｃで処置されたマウスにおける血管腫容積が対照マウスとは有意に異なることを示す（Ｐ＜０．０５）。３匹のマウスを各群に用い、誤差バーは平均の標準誤差を表す。
【図２】ブリリアントグリーン（ＢＧ、４−［（４−ジメチルアミノフェニル）−フェニル−メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−アニリン）およびゲンチアナバイオレット（ＧＶ、ヘキサメチルパラロザニリンクロリド）が、Ｃｏｓ−ｐｈｏｘおよびＨＥＫ２９３Ｎｏｘ４−１１細胞において、用量依存的方法で、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）産生とともに、（ａ）Ｎｏｘ２（Ｃｏｓ−ｐｈｏｘ）、ならびに（ｂ）Ｎｏｘ４活性を抑制することを示すグラフである。
【図３】ｉｎ  ｖｉｖｏでのｂＥｎｄ．３血管腫に及ぼすブリリアントグリーンおよびゲンチアナバイオレットの作用を示す写真およびグラフである。上の写真（図３ａ）は、３群の各々における平均腫瘍負荷を表わし、腫瘍容積（ｍｍ３）はグラフで示されている。図３ｂにおいて、誤差バーは平均の標準誤差を表す。
【図４】経時的（時間）に寄生生物数／ｍＬにより測定した場合の、リーシュマニア・アマゾネンシスを処置するに際しての、トリフェニルメタン化合物、ＴＰＭ１の有効性を示すグラフである。グラフは、０．１、１．０、１０および５０ｍｃＭの濃度での結果を示す。
【図５】経時的（時間）に寄生生物数／ｍＬにより測定した場合の、リーシュマニア・アマゾネンシスを処置するに際しての、トリフェニルメタン化合物、ＴＰＭ２の有効性を示すグラフである。グラフは、０．１、１．０、１０および５０ｍｃＭの濃度での結果を示す。
【図６】経時的（時間）に寄生生物数／ｍＬにより測定した場合の、リーシュマニア・アマゾネンシスを処置するに際しての、トリフェニルメタン化合物ＴＰＭ３の有効性を示すグラフである。グラフは、０．１、１．０、１０および５０ｍｃＭの濃度での結果を示す。
【図７】経時的（時間）に寄生生物数／ｍＬにより測定した場合の、リーシュマニア・アマゾネンシスを処置するに際しての、トリフェニルメタン化合物、ＴＰＭ５の有効性を示すグラフである。グラフは、０．１、１．０、１０および５０ｍｃＭの濃度での結果を示す。
【図８】経時的（時間）に寄生生物数／ｍＬにより測定した場合の、リーシュマニア・アマゾネンシスを処置するに際しての、エタノールの有効性を示すグラフである。
【図９】経時的に寄生生物数／ｍＬにより測定した場合（化合物への曝露後４８時間に採取したデータ）の、リーシュマニア・アマゾネンシスを処置するに際しての、化合物、ＴＰＭ１の有効性を示すグラフである。グラフは、０．０５、０．１、１および５ｍｃＭの濃度での、対照としてエタノールを用いての結果を示す。
【図１０】経時的に寄生生物数／ｍＬにより測定した場合（化合物への曝露後４８時間に採取したデータ）の、リーシュマニア・アマゾネンシスを処置するに際しての、化合物、ＴＰＭ２の有効性を示すグラフである。グラフは、０．０５、０．１、１および５ｍｃＭの濃度での、対照としてエタノールを用いての結果を示す。
【図１１】経時的に寄生生物数／ｍＬにより測定した場合（化合物への曝露後４８時間に採取したデータ）の、リーシュマニア・アマゾネンシスを処置するに際しての、化合物、ＴＰＭ６の有効性を示すグラフである。グラフは、０．０５、０．１、１および５ｍｃＭの濃度での、対照としてエタノールを用いての結果を示す。
【図１２】経時的に寄生生物数／ｍＬにより測定した場合（化合物への曝露後４８時間に採取したデータ）の、リーシュマニア・アマゾネンシスを処置するに際しての、化合物、ＴＰＭ７のそれぞれの有効性を示すグラフである。グラフは、０．０５、０．１、１および５ｍｃＭの濃度での、対照としてエタノールを用いての結果を示す。
【図１３】経時的に寄生生物数／ｍＬにより測定した場合（化合物への曝露後４８時間に採取したデータ）の、リーシュマニア・アマゾネンシスを処置するに際しての、化合物、ＴＰＭ９のそれぞれの有効性を示すグラフである。グラフは、０．０５、０．１、１および５ｍｃＭの濃度での、対照としてエタノールを用いての結果を示す。
【図１４】経時的に寄生生物数／ｍＬにより測定した場合（化合物への曝露後４８時間に採取したデータ）の、リーシュマニア・アマゾネンシスを処置するに際しての、化合物、ＴＰＭ１０の有効性を示すグラフである。グラフは、０．０５、０．１、１および５ｍｃＭの濃度での、対照としてエタノールを用いての結果を示す。
【図１５】経時的に寄生生物数／ｍＬにより測定した場合（化合物に寄生生物を曝露後４８時間に測定されたデータ）の、リーシュマニア・アマゾネンシスを処置するに際しての、化合物  ＴＰＭ６の有効性を示すグラフである。グラフは、０．００１、０．００５、０．０１および０．０５ｍｃＭの濃度での、対照としてエタノールを用いての結果を示す。
【図１６】ゲンチアナバイオレットのＥＳＲスペクトルである。
【図１７】ＤＴＴブラックのＥＳＲスペクトルである。
【図１８】イミプラミンブルーのＥＳＲスペクトルである。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
化合物、該化合物を含む製剤組成物ならびにその製造方法および使用が開示される。
【００４４】
以下の定義は、本明細書中に記載されるような本発明の境界線を理解するのに有用である。
【００４５】
本明細書中で用いる場合、「アルキル」は、Ｃ１〜Ｃ８、好ましくはＣ１〜Ｃ５を含む直鎖または分枝鎖飽和炭化水素ラジカル、例えばメチル、エチルまたはイソプロピルを指し；「置換アルキル」は、１つ以上の置換基、例えばヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アリール、ヘテロシクロ、ハロ、アミノ、カルボキシル、カルバミル、シアノ等をさらに保有するアルキルラジカルを指し；「アルケニル」は、Ｃ１〜Ｃ８、好ましくはＣ１〜Ｃ５を含み、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖または分枝鎖飽和炭化水素ラジカルを指し；「置換アルケニル」は、上記のような１つ以上の置換基をさらに保有するアルケニルラジカルを指し；「シクロアルキル」は、３〜８個の炭素原子、好ましくは３〜６個の炭素原子を含有する飽和または不飽和の非芳香族環式環含有ラジカルを指し；「置換シクロアルキル」は、上記のような１つ以上の置換基をさらに保有するシクロアルキルラジカルを指し；「アミノ」という用語は、０、１または２つのアルキル基を保有するアミン基を指し、例としては、３〜８個の炭素の環サイズを有する環状アミンを指し；「アリール」は、６〜１０個の炭素原子を有する芳香族ラジカルを指し；「置換アリール」は、上記のような１つ以上の置換基をさらに保有するアリールラジカルを指し；「アルキルアリール」は、アルキル置換アリールラジカルを指し；「置換アルキルアリール」は、上記のような１つ以上の置換基をさらに保有するアルキルアリールラジカルを指し；「アリールアルキル」は、アリール置換アルキルラジカルを指し；「置換アリールアルキル」は、上記のような１つ以上の置換基をさらに保有するアリールアルキルラジカルを指し；「ヘテロシクリル」は、環構造の一部として１つ以上の異種原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ）を含有し、２〜７個の炭素原子を環中に有する飽和または不飽和環状ラジカルを指し；「置換へテロシクリル」は、上記のような１つ以上の置換基をさらに保有するヘテロシクリルラジカルを指す。
Ｉ．化合物
【００４６】
化合物は、トリアリールメタン化合物、あるいはこれらの化合物のプロドラッグまたは代謝産物、ならびにその製薬上許容可能な塩である。トリアリールメタン化合物は、典型的には、一端で２つのアリールまたはへテロアリール環に、他端でシクロヘキサジエン環に連結される第一の炭素−炭素二重結合（「第一環外二重結合」を形成する）を包含し、これは、典型的にはイミンまたはケトン基の形態で、第二環外二重結合を任意に包含する。２つのアリールまたはへテロアリール環は、例えばアルキレン架橋、例えばメチレン架橋であり得る架橋、あるいは異種原子、または環の間の直接連結により、連結され得る。
【００４７】
シクロヘキサジエン中の第二環外二重結合は、第一環外二重結合に対して「オルト」または「パラ」位置であり得る。
【００４８】
一実施形態では、化合物は、一般的に、以下で提供される式：
【化１】
2011507971.tif 000003
【００４９】
（式中、Ｊは、２つのアリール環の間の直接結合、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲまたは（ＣＲ２）ｎを表し、
ｎ＝０〜４、一実施形態では、１〜４であり、
Ｅは、ＣＨ、本明細書中で定義されるような置換基Ｚに結合されるＣ、またはＮであり、
Ｒ＝Ｈ、あるいは置換または非置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキル、
Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテルであり、好ましくは、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールおよびチオールエーテルから選択され、
Ｙ＝Ｏ、ＳまたはＮＲ２（ここで、アミンは、任意に、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルアリールまたはアリールアルキル部分を介してオルト位置で環に連結し戻され得る）、
Ｚ＝任意置換基（例えば、ハロ、ヒドロキシル、チオール、エステル、アミド、カルボキシ、スルホキシ、ニトリル、アジド、アルキル、アルケニル、アルキニル、ニトロ、アミノ、アリール、ヘテロアリール、ホスホネート、フルベン等）、
Ｚは、アリール環に結合される単環式環、あるいはベンゼン環またはシクロヘキサジエン環に結合される第二アリールまたはヘテロアリール環でもあり得るが、
ここで、前記アリールまたはヘテロアリール環は、任意の遊離位置で、Ｈまたは本明細書中で定義されるような置換基Ｚで置換され得る）、
のうちの１つ、ならびに式２および３におけるヘテロアリールを含む式４に対する対応物の範囲に入る。
【００５０】
代表的置換基Ｚとしては、Ｃ１−６アルキル（シクロアルキルを含む）、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”（ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキル（例えば、ベンジル）である）が挙げられる。
【００５１】
Ｚが、アリール環に結合される単環式環、あるいはベンゼン環またはシクロヘキサジエン環に結合される第二アリールまたはへテロアリール環である化合物の具体例を以下に示す：
【化２】
2011507971.tif 000004
【００５２】
（式中、Ｚ、ＸおよびＪは、上記と同様であり、
Ｘ’は、Ｏ、Ｓ、ＮＲまたはＮＲ２＋であり、
Ｔは、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−、ＮＲ、Ｏ、Ｓ、（−ＣＲ２）ｎ、（−ＣＲ２）ｎ−ＮＲ−、（−ＣＲ２）ｎ−Ｏ−および（−ＣＲ２）ｎ−Ｓ−からなる群から選択され、そして
Ｕは、−Ｃ（Ｏ）−、ＮＲ、Ｓ、Ｏおよび（−ＣＲ２）ｎからなる群から選択される）。
【００５３】
代表的三環式環（すなわち、上記のＵおよびＴ置換基を含む）としては、以下のものが挙げられる：
【化３】
2011507971.tif 000005
【化４】
2011507971.tif 000006
【化５】
2011507971.tif 000007
【化６】
2011507971.tif 000008
【００５４】
これらの化合物は、三環式抗うつ薬およびトリフェニルメタン染料であるか、またはそれらと類似している。上記化合物の全てにおける芳香族環は、任意に、１つ以上の上記のような置換基Ｚで官能化され得る。
【００５５】
上記のアリール環は、典型的には、主に、求電子性芳香族置換反応に関する慣用的規則に従って指図される位置で、他のアリール環と結合される。すなわち、電子供与置換基、例えばアルキル、アリール、アルキルアリール、アリールアルキル、ヒドロキシ、エーテルおよびアミンを有する環は、その置換基に対してオルトまたはパラ位置で置換される傾向があり、電子求引性置換基、例えばニトロまたはカルボキシを有する環は、その置換基に対してメタ位置で置換される傾向がある。これらの化合物の位置異性体は、分離され得るか、あるいは所望により、組合せて用いられ得る。
【００５６】
一実施形態では、化合物は式１のものと類似しているが、但し、シクロヘキサジエン部分における酸素または窒素原子との環外二重結合は存在しない。この実施形態に関する代表的化合物を以下に示すが、種々の変数に対する定義は式１に関して上記されたものと同じである：
【化７】
2011507971.tif 000009
【化８】
2011507971.tif 000010
【化９】
2011507971.tif 000011
【化１０】
2011507971.tif 000012
【化１１】
2011507971.tif 000013
【００５７】
（式中、Ｘ、ＺおよびＲは上記と同様である）。
【００５８】
化合物は、種々の程度のエナンチオマー過剰率で起こり得るし、ラセミ混合物は既知のキラル分離技法を用いて精製され得る。
【００５９】
化合物は、遊離塩基形態で、または塩形態（例えば、製薬上許容可能な塩）であり得る。適切な製薬上許容可能な塩の例としては、無機酸付加塩、例えば硫酸塩、リン酸塩および硝酸塩；有機酸付加塩、例えば酢酸塩、ガラクタル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、乳酸塩、グリコール酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびアスコルビン酸塩；酸性アミノ酸との塩、例えばアスパラギン酸塩およびグルタミン酸塩；アルカリ金属塩、例えばナトリウムおよびカリウム；アルカリ土類金属塩、例えばマグネシウムおよびカルシウム；アンモニウム塩、有機塩基性塩、例えばトリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、ジシクロヘキシルアミンおよびＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン；ならびに塩基性アミノ酸、例えばリシンおよびアルギニンとの塩が挙げられる。塩は、いくつかの場合、水和物またはエタノール溶媒和物であり得る。塩の化学量論は、構成成分の性質に伴って変わる。
【００６０】
以下のアリール／へテロアリール環は、式１におけるアリール環のうちの１つとして、本明細書中に記載される化合物中に存在し得る。
【化１２】
2011507971.tif 000014
【００６１】
代表的化合物としては、以下のものが挙げられる：
【化１３】
2011507971.tif 000015
【化１４】
2011507971.tif 000016
【化１５】
2011507971.tif 000017
【化１６】
2011507971.tif 000018
【化１７】
2011507971.tif 000019
【化１８】
2011507971.tif 000020
【化１９】
2011507971.tif 000021
【化２０】
2011507971.tif 000022
【化２１】
2011507971.tif 000023
【化２２】
2011507971.tif 000024
【化２３】
2011507971.tif 000025
【化２４】
2011507971.tif 000026
【化２５】
2011507971.tif 000027
【化２６】
2011507971.tif 000028
【００６２】
（式中、ＪおよびＸは、上記と同様である）。
【００６３】
互変異性型の化合物も、本発明の範囲内である。例えば、以下に示される化合物は、両方の互変異性型で存在し得る：
【化２７】
2011507971.tif 000029
【００６４】
プロドラッグ形態の化合物
いくつかの実施形態では、還元化合物（プロドラッグ）は、１つ以上の遊離アミン基を有し、これは、塩化ジクロロアセチルと反応して１つ以上のトリクロロアセチルアミド基を作り得る。加水分解時に、プロドラッグはｉｎ  ｖｉｖｏで加水分解して、ジクロロ酢酸塩（「ＤＣＡ」）およびトリフェニルメタン化合物を形成し、これはともに癌を治療するのに有用である。すなわち、ＤＣＡは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ癌細胞株およびラットモデルに関して試験され、そして、ミトコンドリア機能を回復し、したがってアポトーシスを回復して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで癌細胞を殺害し、ラットにおける腫瘍を縮小することが見出された（Ｂｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １１（１）：  ３７−５１  （２００７）参照）。
【００６５】
例えば、プロドラッグは、第四級アンモニウム基と還元剤、例えばシアノ水素化ホウ素ナトリウムを反応させてアミンを形成することにより、調製され得る。アミンは、特に、活性酸素種を産生する癌細胞中に取り込まれる場合、ｉｎ  ｖｉｖｏで再酸化され得る。
【００６６】
上記のように、アミン基は、アミド基に転化され、これは、加水分解時に、アミンを生じ、これは酸化されて活性化合物を形成し得る。アミド基がトリクロロアセチルアミド基である場合、加水分解はトリクロロ酢酸塩も産生し、これは、活性化合物とは異なる経路により癌と闘い得る（したがって、単一プロドラッグからｉｎ  ｓｉｔｕ薬剤カクテルを形成する）。アミンおよび酸、または酸ハロゲン化物／無水物からアミドを形成するための条件は、当業者によく知られており、ここで繰り返して述べる必要はない。
ＩＩ．化合物の製造方法
【００６７】
いくつかの実施形態では、化合物は、ルイス酸あるいはオキシ塩化リンまたは塩化チオニルの存在下で、ジアリールケトンをフェノールまたはアニリン化合物と反応させることにより調製され得る。このアプローチを用いて、多数のトリフェニルメタンが、容易に入手可能なジアルキルケトンおよびフェノールまたはアニリン出発物質から製造され得る。反応は、アニリンまたはフェノールのオルトまたはパラ位置へのジアリールケトン中のケトン分子の求電子性付加により進行し、その後、脱水されて、トリフェニルメタンを形成する。
【００６８】
以下で考察されるように、ジアリールケトンを調製するために日常的化学反応が用いられ得る。
ジアリールケトンの生成方法
【００６９】
フェノールまたはアニリンを用いたカップリング段階に用いられるジアリールケトンは、ミヒラーズケトンのように商業的に入手可能であり得るか、あるいは既知の化学または既知の化学の変法を用いて調製され得る。理想的には、アリール環は、求電子性芳香族置換反応を助長する（すなわち、ヒドロキシ、エーテル、チオール、チオールエーテルおよびアミンのような電子供与置換基を含む）方法で官能化される。
【００７０】
Ｙｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，  Ｖｏｌｕｍｅ  ４２，  Ｉｓｓｕｅ  ２，  Ｐａｇｅｓ  １７５−１７７  （８  Ｊａｎｕａｒｙ  ２００１）は、固相上での３成分スティルカップリング反応を用いて、広範な種々の官能基を保有するジアリールケトンを調製することを開示する。反応は、一酸化炭素の存在下でポリマー結合有機スズ化合物およびアリールハロゲン化物を用いることを包含する。
【００７１】
Ｓｉｌｂｅｓｔｒｉらは、溶媒としてのクロロベンゼン中での塩化アロイルとのトリメチルアリールスズの無触媒反応による、良好な収率（４０〜７８％）での、一連のジアリールケトンの合成を開示する（Ｓｉｌｂｅｓｔｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｖｏｌｕｍｅ  ６９１，  Ｉｓｓｕｅ  ８，  Ｐａｇｅｓ  １５２０−１５２４  （１  Ａｐｒｉｌ  ２００６））。これらの反応は、完全に位置選択的であり、芳香族環中に存在する置換基の配向力の影響下で通常は利用可能でないジアリールケトンの合成を可能にする。さらにまた、反応条件は、酸感受性分子に適用されるのに十分に低刺激性である。
Ｄｕｐｌａｉｓら（Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｖｏｌｕｍｅ  ４３，  Ｉｓｓｕｅ  ２２，  Ｐａｇｅｓ  ２９６８−２９７０  （Ｍａｙ  ２００４））は、シアン化アロイルの鉄触媒性アリール化によるジアリールケトンの効率的合成を開示する。
【００７２】
Ｅｎｑｕｉｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｏｒｇ．  Ｌｅｔｔ．，  ５（２５），  ４８７５−４８７８，  ２００３．  １０．１０２１／ｏ１０３６０９１ｘ  Ｓ１５２３−７０６０（０３）０６０９１−７  （Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２０，  ２００３）は、マイクロ波照射下でのコバルトカルボニル媒介性合成を用いたジアリールケトンの超高速合成を開示する。
【００７３】
Ｅｎｑｕｉｓｔ合成は、金属活性化、ｉｎ  ｓｉｔｕ一酸化炭素送達およびマイクロ波加熱の利点を組合せて、６〜１０秒でベンゾフェノンを効率的に合成した。これらの超高速カルボニル化反応は、ジコバルトオクタカルボニルの存在下で、ヨウ化アリールの瞬間加熱により空気中で起こる。したがって、適切に官能化されたヨウ化アリールを用いて、所望のジアリールケトンを迅速に調製し得る。
【００７４】
これらの反応は何れも、本明細書中に記載されるジアリールケトンを調製するために用いられ得る。
トリアリールメタン生成
【００７５】
合成の例を、スキームＩに示す（ここで、星印は、求電子性芳香族付加が起こるアニリンおよびフェノール上のそれぞれのオルトおよびパラ位置を示し、ＸおよびＪに関する値は、式１〜４に関して上記されたものである）：
【化２８】
2011507971.tif 000030
【００７６】
式１〜４は種々のアリールおよびへテロアリール環を示し、これらの式は、環が付加的環でさらに官能化され得る（ナフチルの場合のように直接的カップリングにより、またはビフェニルおよびその他のビアリール環の場合のように共有結合により）という可能性を含むと定義される。
【００７７】
ジアリールケトン、フェノールおよびアニリンの一部であり得る代表的アリールおよびへテロアリール環を以下に提示する（環は適切なアリールケトン、ヒドロキシまたはアミン官能化を含むという条件で）：
【化２９】
2011507971.tif 000031
【００７８】
（式中、アリール／へテロアリール環のいずれかが、本明細書中に記載されるような１つ以上の置換基で置換され得る）。
ジアリールケトン、フェノールおよびアニリンの官能化
【００７９】
本明細書中に記載される化合物を製造するために用いられるジアリールケトン、フェノールおよびアニリンは、市販されているか、あるいは市販の出発物質から調製され得る。市販されていないものは、所望される特定の部分および特定の置換に関連した種々の合成方法により製造され得る。合成方法の変法は、有機合成技術分野の当業者には容易に明らかになる。
【００８０】
トリアリールメタンを調製するための出発物質として用いられるアリールまたはへテロアリール環上の、トリアリールメタン枠組み中の他の位置での他の置換基の組込みは、容易に実現され得る、と当業者は容易に理解する。さらにまた、トリアリールメタンが調製された後に、種々の置換基が付加され得る。このような置換基は、それら自体における且つそれら自体の有用な特性を提供し得るし、あるいはさらなる合成的精密化のための手段として役立ち得る。
【００８１】
置換基は、典型的には、上記のように、フェノールまたはアニリンとの反応の前にジアリールに、あるいはジアリールケトンの調製前にアリール環に付加され得る。但し、このような置換は、ジアリールケトンおよびフェノールまたはアニリンをカップリングする（すなわち、ルイス酸条件）ことによるトリアリールメタン合成を存続すべきであるか、あるいはトリアリールメタン合成が完了した後に付加されるべきである。
【００８２】
例えば、アリール環は、特定のハロゲンによって変わる種々の既知の手法を用いてハロゲン化され得る。適切な試薬の例としては、濃ＨＢｒ中の臭素／水、塩化チオニル、ｐｙｒ−ＩＣＩ、フッ素およびアンバーリストＡが挙げられる。アリール環のジアゾ化位置に置換基を保有する多数の他の類似体が、ジアゾニウム塩中間体を介して、対応するアニリン化合物から合成され得る。ジアゾニウム塩中間体は、既知の化学、例えば無機酸の存在下での亜硝酸ナトリウムによる芳香族アミン、例えばアニリンの処理を用いて調製され得る。
【００８３】
ジアゾニウム塩はアニリンから形成され、アニリンは、順次、ニトロベンゼンから調製され得る（そして、類似のアミン置換へテロアリール環はニトロ置換へテロアリール環から調製され得る）。ニトロ誘導体は、典型的には酸の存在下で、亜硝酸塩との反応により、アミン化合物に還元され得る。他の置換類似体は、ヒドロキシ、アルコキシ、フルオロ、クロロ、ヨード、シアノおよびメルカプト（これらに限定されない）を含めて、当業者に知られた一般技法を用いて、ジアゾニウム塩中間体から産生され得る。例えば、ヒドロキシ−トリフェニルメタン類似体は、ジアゾニウム塩中間体を水と反応させて、その結果生じたヒドロキシル基を保護し、シクロペンタジエニル陰イオンを形成し、それを適切なアルデヒドまたはケトンと反応させることにより調製され得る。同様に、アルコキシトリフェニルメタン類似体は、ジアゾニウム塩をアルコールと反応させることにより製造され得る。ジアゾニウム塩は、当業者に知られているように、シアノまたはハロ化合物を合成するためにも用いられ得る。メルカプト置換は、Ｈｏｆｆｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ３６：  ９５３  （１９９３）に記載された技法を用いて得られる。そのようにして生成されたメルカプタンは、ついで、水素化ナトリウムと適切なアルキル臭化物との反応によりアルキルチオ置換基に転化され得る。その後の酸化は、次に、スルホンを提供する。前記の化合物のアシルアミド類似体は、有機合成技術分野の当業者に既知の技法を用いて、対応するアミノ化合物を適切な酸無水物または酸塩化物と反応させることにより調製され得る。
【００８４】
ヒドロキシ置換類似体は、適切な酸、酸塩化物または酸無水物との反応により、対応するアルカノイルオキシ置換化合物を調製するために用いられ得る。同様に、ヒドロキシ化合物は、電子欠損型芳香族環での芳香族求核置換によるアリールオキシおよびヘテロアリールオキシの両方の前駆体である。このような化学は、有機合成技術分野の当業者によく知られている。エーテル誘導体は、アルキルハロゲン化物および適切な塩基によるアルキル化により、または光延化学反応（この場合、トリアルキル−またはトリアリールホスフィンおよびジエチルアゾジカルボキシレートが典型的には用いられる）により、ヒドロキシ化合物からも調製され得る。典型的光延条件に関しては、Ｈｕｇｈｅｓ，  Ｏｒｇ．  Ｒｅａｃｔ．  （Ｎ．Ｙ．）  ４２：  ３３５  （１９９２）およびＨｕｇｈｅｓ，  Ｏｒｇ．  Ｐｒｅｐ．  Ｐｒｏｃｅｄ．  Ｉｎｔ．  ２８：  １２７  （１９９６）を参照されたい。
【００８５】
シアノ置換類似体は、加水分解されて、対応するカルボキサミド置換化合物を生じ得る。さらに、加水分解は、対応するカルボン酸置換類似体の形成を生じ得る。水素化アルミニウムリチウムによるシアノ置換類似体の還元は、対応するアミノメチル類似体を生じる。アシル置換類似体は、有機合成技術分野の当業者に知られた技法を用いて、適切なアルキルリチウムとの反応により、対応するカルボン酸置換類似体から調製され得る。
【００８６】
カルボン酸置換類似体は、適切なアルコールおよび酸触媒との反応により、対応するエステルに転化され得る。エステル基を有する化合物は、水素化ホウ素ナトリウムまたは水素化アルミニウムリチウムで還元されて、対応するヒドロキシメチル置換類似体を生じ得る。これらの類似体は、次いで、慣用的技法を用いて、水素化ナトリウムおよび適切なアルキルハロゲン化物との反応により、エーテル部分を保有する化合物に転化され得る。代替的には、ヒドロキシメチル置換類似体は、塩化トシルと反応させて、対応するトシルオキシメチル類似体を提供し、これは、塩化チオニルおよび適切なアルキルアミンによる逐次処理により、対応するアルキルアミノアシル類似体に転化され得る。これらのアミドのあるものは、容易に求核アシル置換を受けて、ケトンを生じることが知られている。
【００８７】
ヒドロキシ置換類似体は、Ｎ−アルキル−またはＮ−アリールイソシアネートとの反応により、Ｎ−アルキル−またはＮ−アリールカルバモイルオキシ置換化合物を調製するために用いられ得る。アミノ置換類似体は、有機合成技術分野の当業者に知られた技法を用いて、それぞれ、アルキルクロロホルメートエステルおよびＮ−アルキル−またはＮ−アリールイソシアネートとの反応により、アルコキシカルボキサミド置換化合物および尿素誘導体を調製するために用いられ得る。
【００８８】
同様に、ベンゼン環（ならびにピリジン、ピリミジン、ピラジンおよびその他のヘテロアリール環）は、既知の化学反応、例えば上記の反応を用いて、置換され得る。例えば、ニトロベンゼン上のニトロ基は、亜硝酸ナトリウムと反応してジアゾニウム塩を形成し、そしてジアゾニウム塩は上記のように操作されて、ベンゼン環上に種々の置換基を形成し得る。
イミプラミンブルーの合成
【００８９】
本明細書中に記載される実施例のいくつかで試験された新規の一化合物は、「イミプラミンブルー」と名付けられた。イミプラミンブルーは、次式を有する：
【００９０】
【化３０】
2011507971.tif 000032
【００９１】
イミプラミンブルーは、以下に示すように、イミプラミンを、ミヒラーズケトンおよびオキシ塩化リン（ＰＯＣｌ３）のような酸と反応させることにより、合成され得る。
【００９２】
【化３１】
2011507971.tif 000033
【００９３】
本明細書中に記載される他の化合物は、同様の合成方法を用いて調製され得る。
ＩＩＩ．製剤組成物
【００９４】
本明細書中に記載される化合物は、製剤組成物中に組み入れられ、症状または障害に感受性のある被験者においてこのような症状または障害を予防するために、および／または症状または障害に罹患している被験者を治療するために用いられ得る。本明細書中に記載される製剤組成物は、本明細書中に記載されるトリフェニルメタン類似体、および／またはその製薬上許容可能な塩のうちの１つ以上を包含する。光学的に活性な化合物が、ラセミ混合物として、純エナンチオマーとして、または種々のエナンチオマー純度の化合物として、用いられ得る。
【００９５】
化合物が投与される方法は、変わり得る。組成物は、好ましくは、経口的に投与される（例えば、溶媒、例えば水性または非水性液内の、あるいは固体担体内の、液体形態で）。経口投与のための好ましい組成物としては、ピル、錠剤、カプセル、カプレット、シロップおよび溶液、例えば硬質ゼラチンカプセルおよび徐放カプセルが挙げられる。組成物は、単位剤形で、あるいは多数回つまりサブユニット用量で処方され得る。好ましい組成物は、液体または半固体形態である。液体の製薬的に不活性な担体、例えば水または他の製薬的に適合性の液体または半固体を含む組成物が用いられ得る。このような液体および半固体の使用は、当業者によく知られている。
【００９６】
組成物は、注射により、すなわち、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、動脈内、クモ膜下腔内、硝子体内、結膜下、眼周囲および脳室内に投与され得る。静脈内投与は、注射の好ましい方法である。注射のための適切な担体は当業者によく知られており、例としては、５％デキストロース溶液、生理食塩水およびリン酸緩衝生理食塩水が挙げられる。化合物は、注入または注射としても投与され得る（製薬上許容可能な液体または液体の混合物中の懸濁液として、または乳濁液として）。
【００９７】
処方物は、他の手段、例えば直腸投与を用いても投与され得る。直腸投与のために有用な処方物、例えば坐薬は、当業者によく知られている。化合物は、吸入により（例えば、鼻に、あるいは米国特許第４，９２２，９０１号（Ｂｒｏｏｋｓ等）（この開示内容は参照により本明細書中で援用される）に記述された型の送達用品を用いて、エアロゾルの形態で）；局所的に（例えば、ローションの形態で）；あるいは経皮的に（例えば、経皮パッチを用いて、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  ａｎｄ  Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから市販されている技法を用いて）も投与され得る。バルク活性化学物質の形態で化合物を投与することは可能であるが、効率的且つ効果的投与のための製剤組成物または処方物の形態で各化合物を提示するのが好ましい。
【００９８】
化合物は、薬剤送達装置、例えばナノ粒子、マイクロ粒子、マイクロカプセル等の中に組み入れられ得る。代表的マイクロ粒子／ナノ粒子としては、シクロデキストリン、例えばペギル化シクロデキストリン、リポソーム、例えば小単層小胞、ならびに増殖中の腫瘍周囲の毛管床に収容するよう設計されたサイズのリポソームが挙げられる。適切な薬剤送達装置は、例えば、Ｈｅｉｄｅｌ  ＪＤ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｈｕｍａｎ  ｐｒｉｍａｔｅｓ  ｏｆ  ｅｓｃａｌａｔｉｎｇ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｄｏｓｅｓ  ｏｆ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ  ｓｕｂｕｎｉｔ  Ｍ２  ｓｉＲＮＡ，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．  ２００７  Ａｐｒ  ３：  １０４（１４）：  ５７１５−２１；Ｗｏｎｇｍｅｋｉａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｂｙ  ｃｏ−ｇｒｉｎｄｉｎｇ  ｗｉｔｈ  ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ：  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ａｎｄ  ｆａｃｔｏｒｓ  ａｆｆｅｃｔｉｎｇ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ，  Ｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ  （Ｔｏｋｙｏ）．  ２００７  Ｍａｒ；  ５５（３）：  ３５９−６３；Ｂａｒｔｌｅｔｔ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｓ，  Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔａｒｇｅｔｅｄ，  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ．  ２００７  Ｍａｒ−Ａｐｒ；  １８（２）：  ４５６−６８；Ｖｉｌｌａｌｏｎｇａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍｐｅｒｏｍｅｔｒｉｃ  ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ｆｏｒ  ｘａｎｔｈｉｎｅ  ｗｉｔｈ  ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ，  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  （Ｃａｍｂ）．  ２００７  Ｍａｒ  ７；（９）：  ９４２−４；Ｄｅｆａｙｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｅｓ：  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，  Ａｎｎ  Ｐｈａｒｍ  Ｆｒ．  ２００７  Ｊａｎ；  ６５（１）：  ３３−４９；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｏｌｉｇｏ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｏ）−ｂｅｔａ−Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｇｏｌｄ  Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ  ａｓ  ａ  ＤＮＡ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ；Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍ．  ２００７  Ｍａｒ−Ａｐｒ；  ４（２）：  １８９−９８；Ｘｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｙ−ｊｕｎｃｔｉｏｎ  ｐｏｌｙａｎｉｌｉｎｅ  ｎａｎｏｒｏｄｓ  ａｎｄ  ｎａｎｏｔｕｂｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｓｅｌｆ−ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｏｆ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，  Ｊ  Ｎａｎｏｓｃｉ  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．，  ２００６  Ｄｅｃ；  ６（１２）：  ３９５０−４；ならびにＮｉｊｈｕｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｏｏｍ−���ｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ｓｉｎｇｌｅ−ｅｌｅｃｔｒｏｎ  ｔｕｎｎｅｌｉｎｇ  ｉｎ  ｄｅｎｄｒｉｍｅｒ−ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  ｇｏｌｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ａｎｃｈｏｒｅｄ  ａｔ  ａ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐｒｉｎｔｂｏａｒｄ，  Ｓｍａｌｌ．  ２００６  Ｄｅｃ；  ２（１２）：  １４２２−６に記載されている。
【００９９】
このような化合物の投与方法の例は、当業者には明らかである。これらの処方物の有用性は、用いられる特定の組成物、ならびに治療を受けている特定の被験者に依っている。これらの処方物は、油性、水性であるか乳化され得る液体担体を含有するか、あるいは投与方式に適したある種の溶媒を含有し得る。
【０１００】
化合物は温血動物（例えば、哺乳類、例えばマウス、ラット、ネコ、ウサギ、イヌ、ブタ、ウシまたはサル）に、断続的に、あるいは漸次、継続的、定期的、または制御された比率で投与され得るが、しかし有益には、ヒトに投与される。さらに、製剤処方物が投与される１日のうちの時間および１日当たりの回数は、変わり得る。
【０１０１】
好ましくは、癌細胞がある領域と活性成分が相互作用するよう、組成物は投与される。本明細書中に記載される化合物は、これらの癌を治療するのに非常に強力である。
【０１０２】
ある環境では、本明細書中に記載される化合物は、特定の癌を予防または治療するよう意図された他の化合物とともに、製剤組成物の一部として用いられ得る（すなわち、併用療法）。有効量の本明細書中に記載される化合物のほかに、製剤組成物は、添加剤またはアジュバントとして、種々の他の構成成分も含み得る。
タンパク質との複合体形成
【０１０３】
本明細書中に記載される化合物は、ペプチドおよびタンパク質、例えばアルブミン、トランスフェリン、ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ等と複合体を形成され得る。これらの複合体は、製造が容易で、非複合体化合物より毒性が低い傾向がある。
【０１０４】
投与される場合、トリフェニルメタンは高度にタンパク質結合されている、と考えられる。この結合を利用することにより、新規の送達形態を作り出し得るが、この場合、トリフェニルメタンの水溶液は、漏出性血管を標的にし得る特異的タンパク質（すなわち、アルブミン）、あるいは腫瘍またはその血管系を標的にするタンパク質（ＶＥＧＦ、トランスフェリン、７型コラーゲン、インスリン様増殖因子、ＰＤＧＦ等）とともにインキュベートされ得る。一旦、トリフェニルメタンがタンパク質との複合体を形成すると、それは、例えば静脈内、筋肉内および／または皮下的に注入され、タンパク質複合体は受容体と結合して、取り込まれ、そしてトリフェニルメタンが標的細胞中に放出される。
併用療法
【０１０５】
併用療法は、（ａ）本明細書中に記載されるようなトリフェニルメタン類似体、本明細書中に記載される少なくとも１つの付加的医薬品、および製薬上許容可能な賦形剤、希釈剤または担体を含む単一製剤組成物；あるいは（ｂ）（ｉ）本明細書中に記載されるようなトリフェニルメタン類似体および製薬上許容可能な賦形剤、希釈剤または担体を含む第一の組成物、ならびに（ｉｉ）少なくとも１つの本明細書中に記載される付加的医薬品および製薬上許容可能な賦形剤、希釈剤または担体を含む第二の組成物からなる２つの別個の製剤組成物として投与され得る。製剤組成物は、同時に、または逐次的に任意の順序で、投与され得る。
【０１０６】
癌を治療または予防するのに用いる場合、本明細書中に記載されるトリフェニルメタン類似体は、一体成形製剤組成物の一部として、少なくとも１つの他の化学療法薬と一緒に投与され得る。代替的には、トリフェニルメタン類似体は、他の抗癌化学療法薬とは別に投与され得る。この実施形態では、トリフェニルメタン類似体および少なくとも１つの他の抗癌化学療法薬は実質的に同時に投与され、すなわち、化合物は、同一時間に、または化合物が一定の時間、血中で治療レベルに達している限り、一方の後に他方が、投与される。
【０１０７】
併用療法は、本明細書中に記載されるようなトリフェニルメタン類似体、あるいは本明細書中に記載される化合物の製薬上許容可能な塩またはプロドラッグを、理想的には異なる機序により機能するもの（すなわち、ＶＥＧＦ阻害薬、アルキル化剤等）である少なくとも１つの抗癌化学療法薬と組合せて投与することを包含する。
【０１０８】
併用療法のために用いられ得る既知の抗癌薬の例としては、アルキル化剤、例えばブスルファン、シスプラチン、マイトマイシンＣおよびカルボプラチン；抗有糸分裂剤、例えばコルヒチン、ビンブラスチン、パクリタキセルおよびドセタキセル；トポＩ阻害剤、例えばカンプトテシンおよびトポテカン；トポＩＩ阻害剤、例えばドキソルビシンおよびエトポシド；ＲＮＡ／ＤＮＡ抗代謝物質、例えば５−アザシチジン、５−フルオロウラシルおよびメトトレキセート；ＤＮＡ抗代謝物質、例えば５−フルオロ−２’−デオキシ−ウリジン、アラ−Ｃ、ヒドロキシ尿素およびチオグアニン；ならびに抗体、例えばヘルセプチン（登録商標）およびリツキサン（登録商標）が挙げられるが、これらに限定されない。併用療法のために用いられ得る他の既知の抗癌薬としては、三酸化砒素、ゲムシタビン、メルファラン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イフォスファミド、ビンクリスチン、ミトグアゾン、エピルビシン、アクラルビシン、ブレオマイシン、ミトキサントロン、エリプチニウム、フルダラビン、オクトレオチド、レチノイン酸、タモキシフェンおよびアラノシンが挙げられる。トリフェニルメタン類似体とともに併用療法に用いられ得る抗癌化合物の他のクラスは、以下に記載される。
【０１０９】
トリフェニルメタン類似体は、アポトーシスの誘導により前立腺癌細胞の増殖を抑制し得るα−１−アドレナリン受容体アンタゴニスト、例えば、ドキサゾシン、テラゾシンおよびタムスロシンと併用され得る（Ｋｙｐｒｉａｎｏｕ，  Ｎ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６０：  ４５５０−４５５５，  （２０００））。
【０１１０】
σ−２受容体は、種々の腫瘍細胞型中で高密度に発現され（Ｖｉｌｎｅｒ，  Ｂ．  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５５：  ４０８−４１３  （１９９５））、σ−２受容体アゴニスト、例えばＣＢ−６４Ｄ、ＣＢ−１８４およびハロペリドールは、乳房腫瘍細胞株において新規のアポトーシス経路を活性化し、抗新生物薬を増強する（Ｋｙｐｒｉａｎｏｕ，  Ｎ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６２：  ３１３−３２２  （２００２））。したがって、トリフェニルメタン類似体は、少なくとも１つの既知のσ−２受容体アゴニストまたは上記作用物質の製薬上許容可能な塩と併用され得る。
【０１１１】
トリフェニルメタン類似体は、ロバスタチン、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬および酪酸塩と併用され得るし、マウスのルイス肺癌モデルにおけるアポトーシスの誘導物質は、抗腫瘍作用を増強し得る（Ｇｉｅｒｍａｓｚ，  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ９７：  ７４６−７５０  （２００２））。併用療法のために用いられ得る既知のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬の例としては、ロバスタチン、シムバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチンおよびセリバスタチン、ならびにその製薬上許容可能な塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１２】
ある種のＨＩＶプロテアーゼ阻害薬、例えばインジナビルまたはサキナビルは、強力な抗血管新生活性を有し、カポジ肉腫の退縮を促す（Ｓｇａｄａｒｉ，  Ｃ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．  ８：  ２２５−２３２  （２００２））。したがって（これらの化合物のトリフェニルメタン類似体を形成するほかに）、トリフェニルメタン類似体は、ＨＩＶプロテアーゼ阻害薬または上記作用物質の製薬上許容可能な塩と併用され得る。代表的ＨＩＶプロテアーゼ阻害薬としては、アンプレナビル、アバカビル、ＣＧＰ−７３５４７、ＣＧＰ−６１７５５、ＤＭＰ−４５０、インジナビル、ネルフィナビル、チプラナビル、リトナビル、サキナビル、ＡＢＴ−３７８、ＡＧ１７７６およびＢＭＳ−２３２，６３２が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１３】
合成レチノイド、例えばフェンレチニド（Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）レチナミド、４ＨＰＲ）は、小細胞肺癌細胞株において、他の化学療法薬、例えばシスプラチン、エトポシドまたはパクリタキセルと組合せて、良好な活性を有し得る（Ｋａｌｅｍｋｅｒｉａｎ，  Ｇ．Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ４３：  １４５−１５０  （１９９９））。４ＨＰＲは、膀胱癌細胞株において、γ放射線と組合せて良好な活性を有することも報告された（Ｚｏｕ，  Ｃ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｏｎｃｏｌ．  １３：  １０３７−１０４１  （１９９８））。代表的レチノイドおよび合成レチノイドとしては、ベキサロテン、トレチノイン、１３−シス−レチノイン酸、９−シス−レチノイン酸、α−ジフルオロメチルオルニチン、ＩＬＸ２３−７５５３、フェンレチニドおよびＮ−４−カルボキシフェニルレチナミドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１４】
プロテアソーム阻害薬、例えばラクタシスチンは、ｉｎ  ｖｉｖｏで、そして腫瘍細胞中でｉｎ  ｖｉｔｒｏで、例えば慣用的化学療法薬に耐性であるものにおいて、抗腫瘍活性を発揮する。ＮＦ−κＢ転写活性を抑制することにより、プロテアソーム阻害薬は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの血管新生および転移も防止し、さらに、アポトーシスに対する癌細胞の感受性を増大する（Ａｌｍｏｎｄ，  Ｊ．  Ｂ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  １６：  ４３３−４４３  （２００２））。代表的プロテアソーム阻害薬としては、ラクタシスチン、ＭＧ−１３２およびＰＳ−３４１が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１５】
チロシンキナーゼ阻害薬、例えばＳＴＩ５７１（メシル酸イマチニブ、グリーベック（登録商標））は、他の抗白血病薬、例えばエトポシドと組合せて強力な相乗作用を有する（Ｌｉｕ，  Ｗ．Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ８６：  １４７２−１４７８  （２００２））。代表的チロシンキナーゼ阻害薬としては、グリーベック（登録商標）、ＺＤ１８３９（イレッサ（登録商標））、ＳＨ２６８、ゲニステイン、ＣＥＰ２５６３、ＳＵ６６６８、ＳＵ１１２４８およびＥＭＤ１２１９７４が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１６】
プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害薬、例えばファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害薬Ｒ１１５７７７は、ヒト乳癌に対する抗腫瘍活性を保有する（Ｋｅｌｌａｎｄ，  Ｌ．Ｒ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ７：  ３５４４−３５５０  （２００１））。ヒト癌細胞株中でのタンパク質ファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬ＳＣＨ６６３３６およびシスプラチンの相乗作用も報告されている（Ａｄｊｅｉ  Ａ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ．  Ｒｅｓ．  ７：  １４３８−１４４５  （２００１））。プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害薬、例えばファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害薬、Ｉ型ゲラニルゲラニル−タンパク質トランスフェラーゼ（ＧＧＰＴアーゼ−Ｉ）およびＩＩ型ゲラニルゲラニルタンパク質トランスフェラーゼの阻害薬、または上記作用物質の製薬上許容可能な塩は、本明細書中に記載されるトリフェニルメタン類似体と組合せて用いられ得る。既知のプレニルタンパク質トランスフェラーゼ阻害薬の例としては、Ｒ１１５７７７、ＳＣＨ６６３３６、Ｌ−７７８，１２３、ＢＡＬ９６１１およびＴＡＮ−１８１３が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１７】
サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）阻害薬、例えばフラボピリドールは、ヒト結腸癌細胞中で、他の抗癌薬、例えばＣＰＴ−１１、ＤＮＡトポイソメラーゼＩ阻害薬と組合せて強力な、しばしば相乗的な作用を有する（Ｍｏｔｗａｎｉ，  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ７：  ４２０９−４２１９，  （２００１））。代表的サイクリン依存性キナーゼ阻害薬としては、フラボピリドール、ＵＣＮ−０１、ロスコビチンおよびオロモウシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１８】
ある種のＣＯＸ−２阻害薬は、血管新生を遮断し、固形腫瘍転移を抑制し、移植消化管癌細胞の増殖を遅くすることが知られている（Ｂｌａｎｋｅ，  Ｃ．Ｄ．，  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  （Ｈｕｎｔｉｎｇ）  １６  （Ｎｏ．４  Ｓｕｐｐｌ．３）：  １７−２１  （２００２））。代表的ＣＯＸ−２阻害薬としては、セレコキシブ、バルデコキシブおよびロフェコキシブが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１９】
ＩκＢ−αリン酸化阻害薬、例えばＢＡＹ−１１−７０８２（ＩκＢ−αリン酸化の不可逆的阻害薬）も、アポトーシスを誘導し、あるいはアポトーシス誘導時に他の作用物質の有効性を増強することが知られている。これらの阻害薬も、本明細書中に記載される化合物と組合せて用いられ得る。
【０１２０】
上記の化合物のいずれもが、トリフェニルメタン類似体との併用療法に用いられ得る。加えて、これらの化合物の多くは、本明細書中に記載される化学作用を用いた化合物に関するケトン、アルデヒド、ヒドロキシル、チオールおよび／またはアミン官能基の反応により、トリフェニルメタン類似体に転化され得る。これらの化合物のトリフェニルメタン類似体は、本発明の範囲内である。
【０１２１】
さらに、トリフェニルメタン類似体は、治療的に有用な抗体、例えばヘルセプチン（登録商標）またはリツキサン（登録商標）、増殖因子、例えばＤＧＦ、ＮＧＦ；サイトカイン、例えばＩＬ−２、ＩＬ−４、あるいは細胞表面に結合する任意の分子との共役により、腫瘍部位に対して向けられ得る。抗体および他の分子は、本明細書中に記載される化合物を、その標的に送達し、それを有効な抗癌薬にする。生物複合体も、治療的に有用な抗体、例えばヘルセプチン（登録商標）またはリツキサン（登録商標）の抗癌作用を増強し得る。
【０１２２】
化合物は、外科手術の前および／または後に化合物を投与することにより外科的腫瘍除去と連係して、そして放射線療法の前、最中および／または後に化合物を投与することにより放射線療法と連係しても用いられ得る。
【０１２３】
化合物の適切な用量は、患者が罹患する障害の症候の発生を防止するのに、または障害のいくつかの症候を治療するのに有効な量である。「有効量」、「治療的量」または「有効用量」とは、所望の薬理学的または治療的効果を引き出し、したがって障害の有効な予防または治療をもたらすのに十分な量を意味する。
【０１２４】
癌を治療する場合、トリフェニルメタン類似体の有効量は、腫瘍（単数または複数）の増殖を抑制するのに十分な量であり、理想的には、腫瘍を縮小するのに、さらに理想的には腫瘍を破壊するのに十分な量である。癌は、予防的方法で、本明細書中に記載される化合物を投与することにより、初期に、または再発を、防止され得る。好ましくは、有効量は、所望の結果を得るのに十分であるが、しかしかなりの副作用を引き起こすには不十分である。
【０１２５】
有効用量は、患者の症状、癌の重症度、ならびに製剤組成物が投与される方法のような因子によって、変わり得る。化合物の有効量は、もちろん、患者によって異なるが、概して、所望の治療効果が生じ始める量を包含するが、有意の副作用が観察される量より低い。
【０１２６】
化合物は、本明細書中に記載される方法に従って有効量で用いられる場合、ある種の癌細胞に対して選択的であるが、正常細胞には有意に作用しない。
【０１２７】
ヒト患者に関しては、典型的化合物の有効用量は、一般的には、少なくとも約１μｇ／２４時間／患者、しばしば少なくとも約１０μｇ／２４時間／患者、頻繁に少なくとも約２５μｇ／２４時間／患者の量で、化合物を投与することを要する。有効用量は、一般的には、約５００μｇ／２４時間／患者を越えないし、しばしば約４００μｇ／２４時間／患者を超えないし、頻繁に約３００μｇ／２４時間／患者を超えない。さらに、有効用量の投与は、患者の血漿内の化合物の濃度が普通は５００ｎｇ／ｍＬを超えない、そして頻繁に１００ｎｇ／ｍＬを超えないような投与である。
ＩＶ．化合物および／または製剤組成物の使用方法
【０１２８】
本明細書中に記載される化合物、ならびに当該化合物を含む製剤組成物は、癌を治療するために用いられ得る。癌は、Ｎｏｘ酵素のうちの１つが高濃度で存在する（すなわち、Ｎｏｘ１、Ｎｏｘ４等）もの、または癌増殖がＲＯＳにより媒介されるものを包含する。
【０１２９】
治療され得る代表的障害としては、新生物、例えば血管腫、ならびに悪性腫瘍、例えば血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）およびその主要分裂促進受容体血管内皮増殖因子受容体２を包含する自己分泌ループの設定で生じるものが挙げられる。代表的悪性腫瘍としては、悪性内皮系腫瘍、例えば黒色腫が挙げられる。
【０１３０】
代表的悪性腫瘍としては、悪性内皮系腫瘍、例えば黒色腫が挙げられる。治療され得るさらなる癌としては、ヒト肉腫および癌腫、例えば繊維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭管腫瘍、脳室上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、例えば形質細胞白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性および赤白血病）；慢性白血病（慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ性白血病）；ならびに真性赤血球増加症、リンパ腫（ホジキン病および非ホジキン病）、例えば、ＮＦ−ＫＢ突然変異体およびベルケード耐性リンパ腫細胞、多発性骨髄腫、ＰＩ３キナーゼ欠損性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症および重鎖疾患、ならびにこれらの癌の悪性形態が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、化合物は、リンパ芽細胞腫およびＥＢＶ陽性細胞を包含する検定に用いられ得る。
【０１３１】
一実施形態では、癌は、黒色腫、直腸癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、小細胞肺癌、結腸癌、慢性リンパ性癌、有毛細胞白血病、食道癌、前立腺癌、乳癌、骨髄腫またはリンパ腫である。これらの癌は、癌に罹患している患者の血清中に存在する循環レベルのｔＮｏｘ（Ｎｏｘ４または他のＮｏｘ酵素を包含し得る）を有すると考えられる（例えば米国特許第号５，６０５，８１０参照（この記載内容は参照により本明細書中で援用される））。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、患者はすでに癌を有しており、癌のための治療を受けており、腫瘍転移を有する場合もそうでない場合もある（すなわち、二次癌）。
【０１３３】
他の実施形態では、化合物は、低酸素症誘導性因子ＨＩＦ２ａ発現の抑制時に活性であり、この活性は、標準化学放射線療法に耐性である腫瘍の治療の助けとなる。低酸素症誘導性因子ＨＩＦ２α（ＨＩＦα）は、低酸素ストレスに曝露された細胞の血管新生に、ならびに嫌気性代謝に関連したタンパク質をコードする種々の遺伝子の発現を調節する（Ｋｏｕｋｏｕｒａｋｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｒａｄｉａｔ  Ｏｎｃｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｐｈｙｓ．  ２００２  Ａｕｇ  １；  ５３（５）：  １１９２−２０２）。ＨＩＦ２ａ過剰発現は、高微小血管密度（それぞれｐ＝０．０２）と、およびＶＥＧＦ発現（ｐ＝０．００５）と有意に関連づけられ、そしてＶＥＧＦ／ＫＤＲ活性化腫瘍血管系はＨＩＦ２ａ過剰発現腫瘍においてより高頻度である（ｐ＝０．０２）。高ＨＩＦ２ａレベルは、化学放射線治療に対する不完全応答に関連づけられており（それぞれｐ＝０．０２）、ＨＩＦ２ａの過剰発現は、局所的攻撃的行動、血管新生の強化、およびカルボプラチン化学放射線治療に対する耐性に関連する。
【０１３４】
イミプラミンブルーは、ＨＩＦ２ａ発現モデルにおいて評価され、ＨＩＦ２ａ発現の約９０％を抑制することが示された。この発現モデルでは、ＷＭ３５ＰＫＢ細胞は、５μモルの試験化合物に２４時間曝露される。この期間の終了時に、細胞はＲＮＡのために採取され、これは次に、ｃＤＮＡに逆転写されて、ＨＩＦ２ａメッセージのレベルが定量的ＲＴ−ＰＣＲを用いて定量され、そしてハウスキーピングＲＮＡメッセージに関して補正される。この検定を用いて実証されるように、これらの化合物は、直接的ＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害薬として、ならびに欠陥ミトコンドリアまたは他の細胞性工程により産生されるスーパーオキシドを吸収するスーパーオキシド掃去剤として作用し得る。
【０１３５】
癌は、腫瘍、例えば上皮組織、リンパ組織、結合組織、骨または中枢神経系の腫瘍の形態で症状発現され得る。
【０１３６】
化合物は、前記の型の癌の管理において、現行療法と組合せる補助療法としても用いられ得る。このような状況では、正常細胞型に及ぼす作用を最小限にしながら、癌細胞、例えば薬剤耐性癌細胞に及ぼす作用を最適化する方法で活性成分を投与することが好ましい。これは主に化合物それ自体の行動に基づいて成し遂げられるが、一方、これは、標的化薬剤送達により、および／または有意の副作用を達成するのに必要とされる閾値投与量に従うことなく所望の作用が得られるよう、投与量を調整することによっても、成し遂げられ得る。
Ｎｏｘ２およびＮｏｘ４受容体により媒介される特定の障害
【０１３７】
Ｎｏｘ２およびＮｏｘ４は、ＮＡＤＰＨオキシダーゼである。Ｎｏｘ２は、ｐｈｏｘ  ｐ４７ｐｈｏｘ、ｐ２２ｐｈｏｘおよびｐ２１ｒａｃ、ならびにｐ６７ｐｈｏｘを包含する、シトクロムｂ５５８として知られている多タンパク質複合体の一部として存在する。ｒａｃは、ｒａｃ１または２であり得る。Ｎｏｘ４は、これらのタンパク質と複合体形成する必要はない。
【０１３８】
Ｎｏｘ２は、好中球、マクロファージおよびリンパ球中で高度に発現され、好中球、マクロファージおよびリンパ球を伴う炎症および新生物形成プロセス、すなわち白血病およびリンパ腫における活性酸素駆動性ＮＦｋＢを媒介し得る。
【０１３９】
Ｎｏｘ４は、広範に分布されたＮＡＤＰＨオキシダーゼであり、これは、多数の悪性疾患、すなわち、黒色腫、膵臓癌等において高度に発現され、ＮＦｋＢを駆動する活性酸素を発生し、これが次に、抗アポトーシス遺伝子、例えばｂｃｌ２およびｍｃｌ−１を活性化して、放射線および化学療法に対する耐性を生じる。
【０１４０】
スーパーオキシドの遮断はＮＦｋＢの発現低減を生じ、放射線および化学療法に対して悪性疾患を感受性にすることが提示される。
【０１４１】
過剰量の活性酸素により特性化される障害は、治療され得る障害と予防され得る障害に分類され得るし、その患者の免疫系は本明細書中に記載される化合物の投与後により活性になる（すなわち、免疫強化）。以下の障害が、本明細書中に記載される化合物を用いて治療され得る：
ａ）新生物性血管腫、黒色腫、肺癌、乳癌、結腸癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、脳腫瘍、例えば多形性神経膠芽細胞腫、肉腫、頭部および頚部癌、肝細胞癌、鼻咽頭癌、子宮頸癌および前癌状態、血液学的悪性疾患、例えば多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、急性および慢性白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、例えばびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）
ｂ）炎症性障害−乾癬、アトピー性皮膚炎（湿疹）、喘息、関節炎（例えば、リウマチ性、乾癬性）、炎症性腸疾患（例えば、クローン病および潰瘍性結腸炎）、狼瘡、多発性硬化症、シェーグレン病、胃炎および悪性貧血、スプルー、サルコイドーシス、白斑、円形脱毛、強皮症、繊維性障害、肝硬変、冠動脈疾患、アテローム硬化症、筋炎、心筋炎
ｃ）変性疾患−黄斑変性、アルツハイマー病、パーキンソン病、レービー小体型認知症、プリオン媒介性障害、肺気腫、白内障、皮膚の光老化、翼状片、骨粗鬆症、男性型脱毛症、高血圧症、卒中
Ｄ）感染性疾患−細菌、例えばブドウ球菌、すなわちＭＲＳＡ、ウイルス（すなわち、ヘルペス、ＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＰＶおよびインフルエンザ）、ならびに真菌（すなわち、カンジダ）。
骨粗鬆症の治療
【０１４２】
本明細書中に記載される化合物は、骨粗鬆症を治療するためにも用いられ得る。サイトカインＲＡＮＫＬ（ＮＦ−κＢリガンドの受容体活性剤）は、破骨細胞を活性化することにより骨粗鬆症を引き起こす。化合物は、核因子κＢ活性化経路の調整を通して、アポトーシスを強化し、破骨細胞形成を抑制し、侵襲を抑制することにより、ＲＡＮＫＬ活性を抑制する（例えばＭｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２００６  Ｓｅｐ；  ４（９）：  ６２１−３３参照）。
炎症性障害の治療
【０１４３】
本明細書中に記載される化合物は、炎症性障害を治療するかまたは予防するのに有用である。活性酸素は、炎症性障害、例えば関節リウマチ、喘息、乾癬、湿疹、狼瘡、強皮症、ある種の心疾患、例えばアテローム硬化症および冠動脈疾患等においてＮＦｋＢを駆動する。化合物が活性酸素種の産生を抑制するのに有効であるため、それらは炎症性障害に対して活性である。
【０１４４】
化合物は、ある種の炎症性シグナルも抑制し、これらのシグナルを抑制することにより、炎症性関節炎のような炎症性障害を軽減し得る。
【０１４５】
関節リウマチ（ＲＡ）は、最も一般的な全身性自己免疫疾患と考えられるが、他の障害、例えば甲状腺機能低下症、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）等も、本明細書中に記載される化合物を用いて治療され得る。多数の症状、例えば関節リウマチ、心疾患および癌が、慢性炎症、ならびにＴＮＦ−αおよびＩＬ−６のレベル上昇に関連づけられる。多数の消化管障害、例えばクローン病、過敏性腸症候群および炎症性腸症候群（これらに限定されない）が、炎症により引き起こされ、これらの障害も、本明細書中に記載される化合物を用いて治療され、および／または予防され得る。
【０１４６】
世界の人口の＞９０％においてメモリーＢ細胞の一部に潜在的に感染するエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）の再活性化のために、関節リウマチと慢性炎症との間に示唆される関連が認められる。ウイルス性病因に関与するＥＢＶコード化タンパク質の中で、かなりの注意が潜在性膜タンパク質１（ＬＭＰ１）に集中してきた。ＥＢＶ形質転換細胞中でタンパク質として発現される９つのＥＢＶ遺伝子のうち、ＬＭＰ１は最も良く特性化されており、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで細胞を形質転換し得る唯一のＥＢＶコード化遺伝子産物であって、リンパ球増殖性変化および悪性疾患に関する可能性を生じる。Ｂ細胞リンパ腫およびその他の悪性疾患の病因におけるその確立された役割のほかに、ＥＢＶ感染は、種々のヒト自己免疫疾患、例えばＲＡおよびＳＬＥの悪化と結びつけられ得る。
【０１４７】
マウスコラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）モデル（Ｍｙｅｒｓ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６１：１８６１−１８７８  （１９９７））は、関節リウマチとの多数の病理学的および免疫学的類似点を有しており、慢性炎症性症状を治療するための化合物の治療能力を評価するための安定した予測可能なモデルを提供する。このモデルは、例えば、これらの障害を治療しおよび／または予防する本明細書中に記載される化合物の能力を評価するために用いられ得る。
【０１４８】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの本明細書中に記載される化合物によるマウスＢ細胞株の処理は、ＣＤ４０およびＬＭＰ１媒介性ＮＦｋＢおよびＡＰ−１活性化における同時用量依存性低減を伴って初代マウスＢ細胞で観察されるサイトカインプロフィールを反復することが示され得る。用量依存的方法でＣＤ４０およびＬＭＰ１媒介性ＮＦｋＢおよびＡＰ−１活性化を低減する化合物は、慢性炎症および付加的病態をもたらすサイトカインを抑制することにより、潜在的に免疫応答の認識相ならびに作動相の両方で、抗炎症特性を有すると期待される。
眼性障害の治療
【０１４９】
化合物は、炎症性構成成分を伴う眼障害、例えば湿性および乾性加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、緑内障、新生血管性緑内障、網膜血管炎、ブドウ膜炎、例えば後部ブドウ膜炎、結膜炎、緑内障に派生する網膜炎、上強膜炎、強膜炎、視神経炎、球後視神経炎、眼球手術後の眼性炎症、物理的眼外傷による眼性炎症、白内障、眼アレルギー、およびドライアイを治療するのに用いるためにも適している。
【０１５０】
ブルセラ症のような寄生生物により引き起こされる種々の眼性侵襲も存在する。これらの化合物は寄生生物を殺害するため、それらは、普通に生じるブドウ膜炎にも取り組み得る。例えば、トキソカラ属感染は、失明を引き起こし得る眼疾患である眼幼虫移行症（ＯＬＭ）を引き起こし得る。ＯＬＭは、顕微鏡的虫が眼に入った場合に起こる；それは網膜の炎症および瘢痕形成を引き起こし得る。嚢虫症は、有鉤嚢虫による異なる身体器官の寄生生物感染である。マラリアおよびリーシュマニア症の眼症状発現は、十分に実証された且つ部位切迫性の症状である。これらのおよびその他の眼寄生生物感染は、本明細書中に記載される化合物を用いて治療され得る。
【０１５１】
眼送達のための一般的方法としては、局所投与（点眼薬、あるいは眼に直接投与するための他の適切な局所的処方物）、結膜下注射、目周囲注射、硝子体内注射、外科手術的埋込み物、ならびに全身経路が挙げられる。
【０１５２】
特に、経口および静脈内投与経路が用いられると全身性毒性が重大である場合、硝子体内注射、眼周囲注射、および徐放性埋込み物を用いて、眼組織中の薬剤の治療レベルを達成し得る。点眼薬は、眼の外表面または眼の前面の組織に影響を及ぼす症状を治療するのに有用であり、そしていくつかの処方物は、網膜疾患の治療のために眼の背部に浸透し得る。
【０１５３】
ある種の障害は眼の背部の組織に影響を及ぼし、この場合、治療は送達が困難である。これらの実施形態では、イオン導入療法を用いて、本明細書中に記載される化合物を眼の背部に送達し得る。例えば、眼イオン導入系であるＯｃｕＰｈｏｒ（商標）は、薬剤を安全且つ非侵襲的に眼の背部に送達し得る（Ｉｏｍｅｄ）。イオン導入療法は、身体組織中におよび組織を通してイオン化薬剤を輸送するために小電流を用いる。眼の組織に害を及ぼし得るので、高すぎる電流密度を用いないよう注意しなければならない。
【０１５４】
イオン導入療法は、典型的には、薬剤アプリケーター、分散電極および電子イオン導入用量制御装置を用いることを包含する。薬剤アプリケーターは、伝導素子、例えば銀−塩化銀を含有する小型シリコーンシェルであり得る。ヒドロゲルパッドは、薬剤処方物を吸収し得る。小さな曲げ易いワイヤが、伝導素子と用量制御装置を連結し得る。薬剤パッドは、使用直前に薬剤溶液で水和され、アプリケーターが下瞼の下の眼の強膜上に置かれる。処置の間、瞼がアプリケーターをその場に保持する。薬剤の投与用量および速度は、電子制御装置をプログラミングし、設定することにより制御され得る。
神経変性障害の治療および／または神経保護の提供
【０１５５】
活性酸素種は、炎症および神経変性も誘導する。これらの種の抑制は、神経保護、例えば虚血性脳損傷、例えば卒中の後の、あるいは鈍的外傷から引き起こされるさらなる損害からの防御、ならびに神経変性障害、例えば網膜変性、アルツハイマー病、老年性認知症、初老期認知症、パーキンソン病、脆弱Ｘ症候群、結節性硬化症、ハンチントン舞踏病、多発性硬化症等の治療または予防にもなり得る。
【０１５６】
活性酸素種は発作も駆動し、当該化合物は同様に発作を改善し得る。
血管性障害の治療
【０１５７】
ＲＯＳが関与している血管性疾患、例えば勃起不全および片頭痛も、ＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害薬に応答し得る。本明細書中に記載される化合物は、これらの血管性疾患を治療するために用いられ得る。
【０１５８】
アテローム硬化症は、ＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害薬で治療されることが知られている血管性障害の１つである（例えば米国特許第５，７６３，４９６号参照）。したがって、化合物は、アテローム硬化症を予防する、および／またはアテローム硬化性プラークの発症を抑制するために用いられ得る。
寄生生物感染の治療
【０１５９】
本明細書中に記載される化合物のあるものは、寄生生物性のある種の感染を治療するかまたは予防するために用いられ得る。治療され得る寄生生物感染には、マラリア、トリパノソーマ症およびリーシュマニア症が挙げられる。
【０１６０】
マラリアは、プラスモディウム属の寄生原生動物により引き起こされる。プラスモディウム属には４つの種、すなわち、プラスモディウム・ファルシパルム、プラスモディウム・ビバックス、プラスモディウム・オバレおよびプラスモディウム・マラリアが存在する。プラスモディウム・ファルシパルムは、最も広範で且つ危険な、そして未だ治療されていない種であり、致命的大脳マラリアを引き起こし得る。
【０１６１】
リーシュマニア症は、リーシュマニア属に属する寄生原生動物により引き起こされる疾患である。当該疾患は、ある種のサシチョウバエ、例えば新世界のルツゾミア属および旧世界のフレボトムス属のハエに噛まれることにより伝染される。
【０１６２】
リーシュマニア症には４つの主な形態がある。内臓リーシュマニア症は、最も重篤な形態であり、治療されなければ致命的になる恐れがある。皮膚リーシュマニア症は、最も一般的な形態であり、噛まれた部位に爛れを生じる。爛れは２〜３ヶ月〜１年で治癒して、不快な外見の瘢痕を残し得るが、他の３つの形態のいずれかにも進行し得る。びまん性皮膚リーシュマニア症は、ハンセン病に似た広範な皮膚病変を生じ、治療が特に難しい一形態である。粘膜皮膚リーシュマニア症は、皮膚潰瘍で始まって、これが広がり、鼻および口に対する組織損傷を引き起こす。
【０１６３】
トリパノソーマ症は、トリパノソーマと呼ばれる寄生生物により引き起こされる障害であり、眠り病として一般に知られている。寄生生物は、ツェツェバエに噛まれることにより、ヒトに伝染される。２つの異なる寄生生物により引き起こされる２つの形態のアフリカ眠り病がある。トリパノソーマ・ブルセイ・ガンビエンスは、数年間継続する慢性感染を引き起こし、西および中央アフリカで主に見出される。トリパノソーマ・ブルセイ・ローデシエンスは、数週間継続する急性疾病を引き起こし、東および南アフリカで主に見出される。治療されなければ、トリパノソーマ症は、激しい苦痛を引き起こして、最終的には死に至る。
【０１６４】
本明細書中に記載される化合物のあるものは、これらの障害のうちの１つ以上を治療するのに有効である。
【０１６５】
以下の実施例は、本発明を例証するために提示されるものであり、本発明を限定するものと解釈されるべきではない。これらの実施例において、部およびパーセンテージは全て、別記しない限り重量に基づいている。反応収率は、モルパーセンテージで報告される。
【実施例】
【０１６６】
以下の実施例は、本発明を例証するために提示されるものであり、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。これらの実施例において、部およびパーセンテージは全て、別記しない限り重量に基づいている。反応収率は、モルパーセンテージで報告される。
実施例１：ＮＡＤＨオキシダーゼの分光分析的検定
【０１６７】
ＮＡＤＨオキシダーゼ活性は、２５ｍＭのトリス−Ｍｅｓ緩衝液（ｐＨ７．２）、１ｍＭのＫＣＮおよび１５０μＭのＮＡＤＨを含有する反応混合物中で、３７℃で、３４０ｎｍで測定したＮＡＤＨの消失として確定され得る。活性は、例えば、各々５分間隔で２回に亘って、撹拌し、継続的に記録しながら、日立Ｕ３２１０分光測定装置を用いて測定され得る。６．２２のミリモルの消散係数を用いて、特異的活性を確定し得る。
実施例２：細胞増殖の測定
【０１６８】
ＢＡＬＢ／ｃｆ  Ｃ３Ｈマウスから生じるマウス乳腺腫瘍亜集団系統４Ｔ１は、５％ウシ胎仔血清、５％新生仔ウシ血清、１ｍＭの混合非必須アミノ酸、２ｍＭのＬ−グルタミン、ペニシリン（１００単位／ｍｌ）およびストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を補足したダルベッコ変法イーグル培地であるＤＭＥ−１０中で増殖され得る（Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８７，  Ｂｒｉｔ．  Ｊ．  Ｃａｎ．  ５６：  ５６１−５６９およびＭｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０，  Ｉｎｖａｓｉｏｎ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  １０：  １０１−１１２）。
実施例３：アンギオポイエチン−２の薬理学的遮断はマウスにおけるモデル血管腫に対して有効である
【０１６９】
新生児期の血管腫は、小児における最も一般的な新生物である。血管腫は血管新生の古典的例であるが、血管腫に関与する血管新生因子は十分に理解されているわけではない。悪性内皮系腫瘍は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）ならびにその主要分裂促進受容体血管内皮増殖因子受容体２を包含する自己分泌ループの設定で生じる。
【０１７０】
新生児期の血管腫は、それらが通常は退縮し、あるいは薬理学的手段により退縮するよう誘導され得るという点で、悪性内皮系腫瘍とは異なり、このことは、血管腫における血管新生が悪性内皮系腫瘍とは基本的に異なる、ということを示唆する。
【０１７１】
この実施例におけるデータは、新生児期のヒト血管腫における、ならびに血管腫のネズミモデルｂＥｎｄ．３細胞を用いた、内皮ｔｉｅ−２受容体の構成的活性化を実証する。ｂＥｎｄ．３血管腫は、アンギオポイエチン−２（ａｎｇ−２）およびその受容体ｔｉｅ−２の両方をｉｎ  ｖｉｖｏで産生する。可溶性ｔｉｅ−２受容体によるｔｉｅ−２シグナル伝達の抑制は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのｂＥｎｄ．３血管腫増殖を低減する。ｔｉｅ−２遮断の効率は、ｔｉｅ−２活性化またはａｎｇ−２がｉｎ  ｖｉｖｏ増殖に必要とされ得る、ということを示唆する。
【０１７２】
この組織を取り扱うために、ｔｉｅ−２欠損ｂＥｎｄ．３血管腫細胞を用いた。意外にも、これらの細胞は、ｉｎ  ｖｉｖｏ増殖で十分に熟達した。われわれの実験室および他の実験室からの従来の試験は、血管新生スイッチにおける活性酸素発生性ｎｏｘ酵素に関与しており、そこで、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのａｎｇ−２産生に関して、ならびにｉｎ  ｖｉｖｏでのｂＥｎｄ．３腫瘍増殖に関して、ｎｏｘ阻害薬の作用を評価した。ａｎｇ−２産生はｎｏｘ酵素の新規阻害薬を用いて薬理学的に抑制され、この処置は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのｂＥｎｄ．３血管腫増殖をほぼ終わらせた。したがって、ａｎｇ−２産生を標的にするシグナル伝達遮断は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのヒト血管腫の治療に有用であり得る。
【０１７３】
この実施例全体を通して、以下の略語を用いる：
Ａｎｇ：アンギオポイエチン；
ＤＰＩ：ジフェニルヨードニウム；
ＶＥＧＦ：血管内皮増殖因子；
序論
【０１７４】
血管腫は、新生児期および小児期の最も一般的な腫瘍であり、小児科医および皮膚科医への不釣合いな数の来診を説明する（Ｃｈｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３）。組織学的には、血管腫は、種々の直径の血管腔を取り囲む内皮細胞の集団で構成される。血管腫の自然発達は、腫瘍の急速増殖および内皮細胞分裂により特徴づけられる増殖期で開始し、その後、内皮アポトーシスおよび腫瘍サイズ縮小により特徴づけられ、最後に退縮段階で終わる退縮期（ｉｎｖｏｌｕｔｉｎｇｓｔａｇｅ）に進み、この間に、元の腫瘍は結合組織瘢痕に取って代わられる（Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４）。これらの腫瘍は通常は自発的に消散するが、大型腫瘍は圧縮により生きている器官の機能を弱め得るし、高拍出量心不全さえも引き起こし得る（Ｄｒｏｌｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９）。
【０１７５】
種々の研究が血管腫のクローン性を確立しており、増殖因子は血管腫の病因に一役を果たし得ること示唆している（Ｂｏｙｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２００１；Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）。内皮細胞による血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の自己分泌産生が血管肉腫への悪性形質転換を生じる、ということをわれわれの実験室は前に示した（Ａｒｂｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００；ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）。したがって、内皮化学誘因物質および生存因子として作用する別の因子が血管腫における自己分泌増殖に関与する、とわれわれは仮定した。ここで、ｔｉｅ−２受容体がヒト血管腫において構成的にリン酸化され、血管腫形成における原因因子として、ｔｉｅ−２の構成的活性化またはアンギオポイエチン−２（ａｎｇ−２）の産生調節解除に関与する、ということをわれわれは実証する。血管腫の病因におけるこれらの作用物質の機能的役割を解明するために、血管腫のネズミモデルｂＥｎｄ．３細胞（Ｂａｕｔｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８７；Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９）をわれわれは用いて、これらの細胞がｔｉｅ−２およびそのリガンドａｎｇ−２の両方を発現する、ということを見出した。可溶性受容体を用いたｔｉｅ−２の機能的遮断はｉｎ  ｖｉｖｏでのｂＥｎｄ．３血管腫の増殖を抑制する、ということもわれわれは実証する。意外にも、ｔｉｅ−２欠損内皮細胞はｉｎ  ｖｉｖｏで血管腫も開始することが可能で、血管腫の潜在的原因として異常なａｎｇ−２産生に関与する。ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（還元形態）オキシダーゼ（Ｎｏｘ）遺伝子は、前に、血管新生スイッチに連結されており、ａｎｇ−２を調節することが知られている（Ａｒｂｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２；Ｋｒｉｋｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２）。小干渉ＲＮＡを用いてａｎｇ−２を安定的に抑制することがわれわれは出来なかったので、Ｎｏｘ遺伝子の遮断によるａｎｇ−２産生の新規の阻害薬を発見した。これらの阻害薬は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのｂＥｎｄ．３血管腫増殖をほぼ終わらせる。したがって、Ｎｏｘ抑制によるａｎｇ−２の中和は新生児期の血管腫に対する有効な療法であり得る、ということをわれわれのデータは示唆する。
結果
ｔｉｅ−２およびａｎｇ−２はｉｎ  ｖｉｖｏでのｂＥｎｄ．３血管腫において高度に発現される。
【０１７６】
ｂＥｎｄ．３血管腫がｔｉｅ−２およびａｎｇを包含する潜在的自己分泌ループを示すか否かを確定するために、マウスにおける病変のｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションをわれわれは実施した。ｂＥｎｄ．３血管腫はａｎｇ−２およびｔｉｅ−２の両方の発現を示す、ということをわれわれは見出した。血管内皮増殖因子受容体１および２は、活性内皮リモデリングと一致して、高レベルで発現され、そして少量のＶＥＧＦ  ｍＲＮＡが観察された。ＶＥＧＦに関する対照センスプローブの使用は、ハイブリダイゼーションを明示しなかった。ａｎｇ−１に関する有意のハイブリダイゼーションは観察されなかった（データは示されていない）。
可溶性受容体を用いたａｎｇ−２の抑制はｉｎ  ｖｉｖｏでのｂＥｎｄ．３増殖を抑制する
【０１７７】
その受容体ｔｉｅ−２の遮断によるａｎｇ−２発現の抑制がｉｎ  ｖｉｖｏでの血管腫形成に必要とされるか否かを確定するために、可溶性ｔｉｅ−２／ＦｃをコードするアデノウイルスまたはＦｃ断片単独をコードするアデノウイルスを用いて、注射の２４時間前に、ｂＥｎｄ．３細胞を感染させた。この処置は、対照アデノウイルス処置と比較して、腫瘍容積の約６６％減を生じた（図１）。各群において用いた３動物の何れにおいても、感染の結果として毒性は観察されなかった。ａｎｇ−２に関するレンチウイルス小干渉ＲＮＡを用いて感染ｂＥｎｄ．３細胞を安定的に生成する試みは、おそらくは、長期増殖のためのａｎｇ−２／ｔｉｅ−２シグナル伝達に関する要件のために、不成功であった。
ｔｉｅ−２は血管腫のｉｎ  ｖｉｖｏ増殖に必要とされない
【０１７８】
ｔｉｅ−２受容体の機能的遮断がｉｎ  ｖｉｖｏでの血管腫形成を有意に低減しないと仮定して、これが減損されたａｎｇ−２シグナル伝達またはｔｉｅ−２抑制の結果であるか否かを確定したいとわれわれは考えた。ｔｉｅ−２欠損マウス由来のポリオーマ発現内皮細胞をヌードマウスに注射して、対照と比較した結果、腫瘍容積または組織学治験に有意差は認められなかった。ａｎｇ−２に対する小干渉ＲＮＡを発現するｂＥｎｄ．３クローンを生成する努力は、おそらくは重度の増殖欠点のために、不首尾に終わった。
トリアリールメタン染料はｎｏｘ活性を抑制する
【０１７９】
特異的Ｎｏｘ阻害薬であるジフェニルヨードニウム（ＤＰＩ）との化学的類似性を有するため、トリアリールメタン染料を、ｎｏｘ酵素に対する活性に関して検査した。さらに、ブリリアントグリーンおよびゲンチアナバイオレットは動物およびヒト曝露の長い歴史を有しており、ゲンチアナバイオレットはヒトへの使用に関して食品医薬品局に認可されている。ブリリアントグリーンおよびゲンチアナバイオレットは、用量依存的方法で内皮細胞中で発現されることが知られているｎｏｘ酵素種であるＮｏｘ２およびＮｏｘ４を抑制した（図２ａおよびｂ）。
【０１８０】
図２ａおよび２ｂに示したように、異なる濃度のビヒクル対照ＢＧまたはＧＶで細胞を処理した；Ｃｏｓ−ｐｈｏｘ細胞を、さらに、非刺激のままにし、あるいはホルボール１２−ミリステート１３−アセテートで刺激した。３７℃で１時間インキュベーション後、反応を停止させて、ホモバニリン酸検定を用いてＨ２Ｏ２産生を測定した。Ｈ２Ｏ２の産生を抑制するこれらの薬剤の能力は、非処置対照（１００％）と比較したパーセンテージとして示される。Ｃｏｘ−ｐｈｏｘ細胞は、ＢＧまたはＧＶを付加した場合もしなかった場合も、ホルボール１２−ミリステート１３−アセテート刺激なしにＨ２Ｏ２を産生しなかった（示されていない）。最適Ｎｏｘ２活性は、ホルボール１２−ミリステート１３−アセテート刺激を要するが、一方、Ｎｏｘ４活性は構成的である。
ＤＰＩおよびトリフェニルメタン染料、例えばブリリアントグリーンおよびゲンチアナバイオレットはｉｎ  ｖｉｔｒｏでａｎｇ−２を抑制する
【０１８１】
ＤＰＩ、ブリリアントグリーンおよびゲンチアナバイオレットは全てＮｏｘ遺伝子を抑制するため、それらがａｎｇ−２ｍＲＮＡ発現に同様の作用を及ぼすか否かを調べたいとわれわれは考えた。ｂＥｎｄ．３細胞を、ＤＰＩあるいは種々の濃度のブリリアントグリーンまたはゲンチアナバイオレットで６．５時間処置した結果、定量的逆転写ＰＣＲは、３つの処置群全てにおいて、ａｎｇ−２発現における統計学的に有意な低減を明示した。
【０１８２】
１０μＭのＤＰＩによる処置は、対照と比較して、ａｎｇ−２発現の８０％低減を生じた（データは示されていない）が、一方、ブリリアントグリーンによる処置は、ａｎｇ−２産生に及ぼす顕著な用量依存的作用を有し、ａｎｇ−２ｍＲＮＡを検出不可能にさせるには０．７５μＭ濃度で十分であった（図２ａ）。ゲンチアナバイオレットは、対照と比較して、１および５μＭの濃度でａｎｇ−２発現を増大したが、より高い濃度は、ａｎｇ−２ｍＲＮＡを有効に７０〜９０％抑制した（図２ｂ）。
【０１８３】
（ａ）ブリリアントグリーンおよび（ｂ）ゲンチアナバイオレットによるｂＥｎｄ．３細胞の処置は、ａｎｇ−２  ｍＲＮＡのレベルを低減する（１８Ｓ  ＲＮＡに関して補正）。示されているバーは、三重反復実験の平均を表し、誤差バーは平均の標準誤差を示す。
ブリリアントグリーンおよびゲンチアナバイオレットはｉｎ  ｖｉｖｏでの血管腫形成を抑制する
【０１８４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのａｎｇ−２形成を抑制する化合物がｉｎ  ｖｉｖｏでの血管腫形成を改善するか否かを確定するために、９匹のヌードマウスに皮下的に１００万個のｂＥｎｄ．３細胞を注射した。ビヒクル対照、ブリリアントグリーンまたはゲンチアナバイオレットによる血管腫の病変内処置は、対照と比較して、それぞれブリリアントグリーンおよびゲンチアナバイオレット群の両方において、腫瘍サイズの９５．７％および９２．６％の低減および腫瘍進行停止を生じた（図３ａおよび３ｂ）。処置の結果として、ヌードマウスのいずれにおいても、局所的毒性も全身毒性も観察されなかった。
【０１８５】
各処置条件に関して、３匹のマウスに１，０００，０００個のｂＥｎｄ．３細胞を注射し、９日目および１４日目に、ビヒクル対照、ブリリアントグリーンまたはゲンチアンナバイオレット（写真の左から右に）の病変内注射を施した。対照動物における腫瘍負荷に次いで、２０日目に動物を安楽死させた。結果を図３ａおよび３ｂに示す。
考察
【０１８６】
血管腫は、小児期の最も一般的な皮膚血管病変であり、１歳の乳児の５％に存在する。それらは、大型サイズに増殖し、生命維持に必要な構造の圧迫または高拍出量心不全を生じ得る。大型血管腫の処置は、ステロイドまたはαＩＦＮの非常に長い経過を要し、これは、内皮アポトーシスまたは外科手術を誘導する。これらの処置は、増殖遅延、感染および不可逆的神経疾患を含めた高レベルの罹患率に関連する（Ｂａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８）。有意数のこれらの血管腫は処置に応答せず、死を引き起こす（Ｐａｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８３；Ｍｕｌｌｉｋｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８２；Ｂｌｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８；Ｅｎｊｏｌｒａｓ，  １９９８；Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＩＩＩ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）。したがって、ヒトにおける血管腫のための新規の療法が必要とされる。
【０１８７】
血管腫形成に必要とされる増殖因子は、完全に解明されてはいない。血管肉腫がＶＥＧＦを発現し、ＶＥＧＦの過剰発現が血管肉腫の発症をもたらす、ということをわれわれは前に示した（Ａｒｂｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）。血管腫は、ＶＥＧＦタンパク質を発現するがＶＥＧＦ  ＲＮＡをほとんど発現せず、そして、ＶＥＧＦタンパク質は周囲細胞中に、例えば皮膚の上に重なるように生じ得る（Ｃｅｒｉｍｅｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３）。同様に、細菌のバルトネラ・バシリホルミスの内皮感染により引き起こされる血管腫様症状であるペルーいぼ病はｉｎ  ｖｉｖｏでのａｎｇ−２の高レベル発現を示すということ、そして感染はｉｎ  ｖｉｔｒｏでのａｎｇ−２の誘導を生じるが、一方、ＶＥＧＦ発現は上に重なる表皮に限定されるということを、われわれは近年実証した（Ｃｅｒｉｍｅｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３）。ｔｉｅ−２発現も口腔血管腫で実証されているが、その機能的役割は不明である（Ｓａｔｏ，  ２００２）。
【０１８８】
したがって、他の受容体チロシンキナーゼは新生児期の血管腫の病因において重要であり得る、とわれわれは仮定した。血管腫は、それらが、進行性増殖および転移を引き起こすというよりむしろ、退縮するという点で、血管肉腫とは生物学的に異なる。
【０１８９】
血管腫のネズミモデル、例えばわれわれが用いたｂＥｎｄ．３モデルは、ポリオーマウイルスまたはポリオーマ中型Ｔ抗原による新生児内皮細胞の感染を介して存在する。これらのモデルは、それらが活発な有糸分裂というよりむしろ宿主内皮細胞の動員により増殖し、そしてそれらがネズミＳＶＲ細胞のようには転移しないという点で、血管肉腫とは異なる（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９；Ａｒｂｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７）。この試験において、ｔｉｅ−２がヒト血管腫組織においてｉｎ  ｖｉｖｏで活性化される、ということをわれわれは示しているが、これは生理学的役割を示唆する。ｂＥｎｄ．３由来血管腫細胞、例えばヒト血管腫は、ＶＥＧＦの少々の寄与も伴って、ａｎｇ−２およびｔｉｅ−２を産生する、ということも、われわれが初めて実証する（図２および３）。
【０１９０】
ノックアウトが子宮内での致死的血管異常を引き起こすので、ａｎｇ−１および−２はともに、マウスにおける生存度のために必要とされる（Ｓｕｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６；Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７）。各々は、結合し、ｔｉｅ−２受容体を活性化して、ホスホイノシトール−３キナーゼの活性化のような下流事象をもたらし（Ｓｕｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）、両ペプチドはＶＥＧＦの存在下で血管新生を促進することが示されている。しかしながら、それらはｉｎ  ｖｉｖｏで反対作用を有する。ａｎｇ−１のトランスジェニック過剰発現は、非透過性血管をもたらすが、ａｎｇ−２発現は漏出性血管をもたらす（Ｓｕｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８；Ｔｈｕｒｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９）。Ｍｇ−１は、間質細胞により優先的に発現され、一方、ａｎｇ−２は腫瘍細胞（Ｔａｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９）、そして、われわれがこの試験で実証するように、血管腫モデル細胞により高度に発現される。腫瘍細胞におけるａｎｇ−１の過剰発現は、血管成熟増大ならびにｉｎ  ｖｉｖｏ増殖低減を生じる（Ｈａｗｉｇｈｏｒｓｔ  ｅｔ  ａｌ．  ２００２；Ｓｔｏｅｌｔｚｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２）。したがって、増殖性血管性病変、例えば血管腫の病因においてａｎｇ−１が顕著な役割を果たすとは考えにくい。
【０１９１】
われわれの結果は、幼児期の血管腫のための新規の療法を示唆し、ポリオーマ誘導性血管腫（宿主内皮細胞または内皮前駆体細胞の動員により血管腫を誘導することが知られている）と、ヒト血管腫との間の類似性を実証する（Ｗｈｉｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８５；Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９；Ｄａｈｌ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８）。ａｎｇ−１および−２の両方をアンタゴナイズする可溶性受容体は、ａｎｇ−２のリモデリング作用だけでなく、ａｎｇ−１の抗アポトーシス作用も抑制するという利益を有し得る。ｔｉｅ−２欠損内皮細胞を用いるわれわれの研究は、ｔｉｅ−２の構成的活性化というよりむしろａｎｇ−２の異所性発現が血管腫形成のために必要とされる、ということを示唆する。ｔｉｅ−２における構成的に活性な突然変異は、血管形成異常において見い出されているが、血管腫では見出されず、ｔｉｅ−２におけるこれらの活性化突然変異はホスホイノシトール−３キナーゼと関連する（Ｖｉｋｋｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）。ｔｉｅ−２の天然突然変異も、おそらくはアポトーシスの防止により、不死化内皮細胞中に導入される場合、形質転換していることが示されている。これは、年齢に伴ってアポトーシスを受けるヒト血管腫に存在する内皮細胞とは異なる。これらの知見は、構成的ｔｉｅ−２活性化というよりむしろａｎｇ−２の異所性産生がｉｎ  ｖｉｖｏでの血管腫増殖のために必要とされる、というわれわれの仮説を支持する。興味深いことに、血管形成異常関連ｔｉｅ−２対立遺伝子の不死化内皮細胞中への導入は、悪性形質転換をもたらす（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４）。われわれの結果は、血管腫のｉｎ  ｖｉｖｏ増殖が、ｔｉｅ−２よりむしろａｎｇ−２に依っているという点で異なっており、血管腫と血管形成異常との間の基本的生物学的差を反映し得る。ａｎｇ−２に対する小干渉ＲＮＡを発現するｂＥｎｄ．３クローンを生成する試みは成功しなかったが、これは、おそらくは、血管腫増殖に対するａｎｇ−２の要件を反映している。
【０１９２】
活性酸素が血管新生を誘導すること、そしてＮｏｘ遺伝子の遮断が血管新生低減を引き起こすことを、われわれは以前に示している（Ａｒｂｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２）。この観察に基づいて、ａｎｇ−２発現を下方調節するＤＰＩ（既知のＮｏｘ阻害薬）の能力を、われわれは調べた。ＤＰＩは、多芳香族環に直接結合される陽イオンを形成するので、トリフェニルメタン染料ファミリーと構造的に類似している。トリフェニルメタン染料、例えばゲンチアナバイオレットおよびブリリアントグリーンは、ヒトおよび獣医学的使用の長い歴史を有する。ＤＰＩと同様に、ゲンチアナバイオレットおよびブリリアントグリーンはｉｎ  ｖｉｔｒｏでａｎｇ−２の発現を低減し、そしてこの活性と一致して、ｉｎ  ｖｉｖｏでｂＥｎｄ．３血管腫の増殖を低減する、ということをわれわれは実証する。Ｎｏｘ遺伝子の阻害薬は、血管腫の治療において療法的有用性を有し得る。
材料および方法
細胞
【０１９３】
ｂＥｎｄ．３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ２２９９）を、アメリカ培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，  Ｍａｎａｓｓａｓ，  ＶＡ）から入手し、１０％ウシ胎仔血清、Ｌ−グルタミン（１４ｍｌ／ｌ）、組換えマウスＶＥＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＭＮ）および抗生物質／抗真菌剤（１４ｍｌ／ｌ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を補足したＤＭＥＭ（４，５００ｍｇのグルコース／ｌ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）中で培養した。ＨＥＫ２９３−Ｎｏｘ４−１１細胞およびＣＯＳ−ｐｈｏｘ細胞は、以前に記載されている（Ｐｒｉｃｅ，  ２００２；Ｍａｒｔｙｎ，  ２００６）。
ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション
【０１９４】
ホルマリン固定、パラフィン包埋組織の４ｍｍ切片に関して、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションを実施した。ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの詳細は、以前に報告されている（Ａｒｂｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００；ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）。キシレンおよび段階的アルコール；０．２ＭのＨＣｌ；リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）中の３ｍｇ／ｍｌのプロテイナーゼＫ／０．２％グリシン／４％パラホルムアルデヒドを有するトリス／ＥＤＴＡ；１／２００（容積／容積）の無水酢酸を含有する０．１Ｍのトリエタノールアミン；ならびに２×標準クエン酸ナトリウムに、スライドを通した。スライドを、以下の混合物中で、３５Ｓ標識リボプローブで５０℃で一晩ハイブリダイズした：０．３ＭのＮａＣｌ／０．０１μＭのトリス（ｐＨ７．６）／５ｍＭのＥＤＴＡ／０．０２％（重量／容積）フィコール／０．０２％（重量／容積）ポリビニルピロリドン／０．０２％（重量／容積）ＢＳＡ分画Ｖ／５０％ホルムアミド、１０％硫酸デキストラン／０．１ｍｇ／ｍｌの酵母ｔＲＮＡ／０．０１μＭのジチオトレイトール。ハイブリダイゼーション後洗浄液は、２×標準クエン酸ナトリウム／５０％ホルムアミド／１０ｍＭのジチオトレイトール（５０℃）、４×標準クエン酸ナトリウム／１０ｍＭのトリス、１ｍＭのＥＤＴＡ（３７℃で２０ｍｇ／ｍｌのリボヌクレアーゼを有する）；および２×標準クエン酸ナトリウム／５０％ホルムアミド／１０ｍＭのＥＤＴＡ（６５℃）、ならびに２×標準クエン酸ナトリウム。０．３Ｍの酢酸アンモニウムを含有する段階的アルコールを通してスライドを脱水し、乾燥して、コダックＮＴＢ２乳濁液（Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，  ＮＹ）で被覆し、暗所で４℃で２週間保存した。乳濁液をコダックＤ１９現像液で現像し、スライドをヘマトキシリンで対比染色した。マウスＶＰＦ／ＶＥＧＦに関する３５Ｓ標識一本鎖アンチセンスおよびセンスＲＮＡプローブ、ａｎｇ−１、−２およびｔｉｅ−２  ｍＲＮＡ、ならびにマウスＶＰＦ／ＶＥＧＦ受容体、血管内皮増殖因子受容体１および２  ｍＲＮＡは、以前に記載されている（Ａｒｂｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００；ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）。
アデノウイルス感染およびｉｎ  ｖｉｖｏ腫瘍形成試験
【０１９５】
ｔｉｅ−２Ｆｃ融合構築物をアデノウイルス・カセット中に入れて、以前に記載されたようにウイルスを調製した（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）。ｂＥｎｄ．３細胞を、感染多重度５で、ｔｉｅ−２  ＦｃまたはＦｃ対照アデノウイルスに感染させた。感染２４時間後に、１００万個の細胞を、処置群当たりヌードマウス３匹に皮下注射した。マウスを腫瘍の発症に関してモニタリングし、注射後１ヶ月目に殺した。毒性の証拠は、感染の結果として観察されなかった。ｔｉｅ−２ノックアウトｂＥｎｄ．３細胞対野生型ｂＥｎｄ．３細胞を用いた実験のために、１００万個の細胞を上記と同様に皮下注射した。
ＲＯＳ産生の確定
【０１９６】
前に記載された（Ｍａｒｔｙｎ，  ２００６）ように、ホモバニリン酸検定を用いてＨ２Ｏ２放出を測定した。要するに、１．５〜１．７５×１０５細胞／ウェルで、１２ウェルプレートに植えつけた。翌日、細胞をハンクス平衡塩溶液で１回洗浄し、次に、１ｍｌの培地中のゲンチアナバイオレット（１０〜２０μＭ）またはブリリアントグリーン（０．５〜１．０μＭ）とともに、１５分間、予備インキュベートした。次に、細胞をハンクス平衡塩溶液で１回洗浄した。ゲンチアナバイオレットまたはブリリアントグリーンを、前処理と同一濃度で、０．５ｍｌのホモバニリン酸検定溶液（Ｃａ２＋およびＭｇ２＋を有するハンクス平衡塩溶液中の１００μＭのホモバニリン酸検定、４Ｕ／ｍｌのホースラディッシュペルオキシダーゼ）に付加し、３７℃で１時間、細胞とともにインキュベートした。Ｃｏｓ−ｐｈｏｘ細胞を、さらに、０．４μｇ／ｍｌのホルボール１２−ミリステート１３−アセテートで刺激した。７５μｌのホモバニリン酸検定停止緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水中の０．１Ｍのグリシン／０．１ＭのＮａＯＨ（ｐＨ１２）および２５ｍＭのＥＤＴＡ）を付加することにより、反応を停止した。３２０ｎｍの励起および４４０ｎｍの発光スペクトルで、ＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  ＨＴ（ＢｉｏＴｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．，  Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，  Ｖｅｒｍｏｎｔ，  ＣＡ）で、蛍光を読み取った。
ビヒクル対照、ブリリアントグリーンまたはゲンチアナバイオレットで処理したｂＥｎｄ．３細胞中のａｎｇ−２に関する定量的逆転写−ＰＣＲ
【０１９７】
ｂＥｎｄ．３細胞を６つのＴ−７５フラスコ中に等しく植えつけて、２４時間後、エタノール中の０、１、５、１０、１５および２０μＭの濃度のゲンチアナバイオレット（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，  ｎｏ．  Ｇ２０３９）で、６．５時間処理した。ＲＮＡを抽出し、ＴＲＩ試薬（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｔ９４２４）を用いて精製し、分光分析装置（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ＵＶ／ＶＩＳ，  Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，  ＭＡ）を用いて測定した。ＲＮＡ（１μｇ）をＤＮアーゼ増幅のために用いて（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ｎｏ．  １８０６８−０１５，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ）、その後、逆転写−ＰＣＲのために一本鎖合成した（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ，  ｎｏ．  １２３７１−０１９）。９６ウェル光学反応プレート（ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ，  ｎｏ．  １２８，  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，  ＣＡ）を、逆転写−ＰＣＲ反応のために用いた。２．５μｌの鋳型（架橋水中で１：１０に希釈済み）の測定値を各ウェルで用いて、実験を三重反復で実施した。ａｎｇ−ｐｔ２（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｔａｑｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙ，  Ｍｍ００５４５８２２＿ｍｌ）および１８Ｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｔａｑｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙ，  Ｈｓ９９９９９９０  １＿ｓｌ）プライマーを、架橋分子等級水（Ｃｅｌｌｇｒｏ，  Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ，  Ｉｎｃ．，  Ｈｅｒｎｄｏｎ，  ＶＡ）およびマスター混合物（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，  ＴａｑＭａｎ  Ｆａｓｔ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ  （２ｘ））とともに用いた。９６ウェルプレートに関する絶対定量のために７９００Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ読取機で、反応を実行した。Ｃ値をΔΔＣｔ法により解析し、平均の標準誤差を算定した（図３ｂ）。同一プロトコールを、ブリリアントグリーン（Ｓｉｇｍａ，  ｎｏ．  Ｂ６７５６）による処理に関して用いたが、但し、用いた濃度は、０、０．１、０．２５、０．５および０．７５μＭであった（図３ａ）。
ｉｎ  ｖｉｖｏでのビヒクル対照、ブリリアントグリーンまたはゲンチアナバイオレットによる処理
【０１９８】
各処理条件に関して、マウス３匹に１００万個のｂＥｎｄ．３細胞を皮下注射し、腫瘍発症に関してモニタリングした。９日目に、腫瘍を９匹の動物全てで測定したが、処置開始前の腫瘍容積に有意差は認められなかった。次に、９および１４日目に、各マウスに、０．３３ｍｌのビヒクル対照、ブリリアントグリーン（５ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｌのエタノールおよび９００μｌのイントラリピッド中に溶解）またはゲンチアナバイオレット（５ｍｇ／ｋｇ、１００μｌのエタノールおよび９００μｌのイントラリピッド中に溶解）の病変内注射を施した。注射後に毒性は認められなかった。対照動物における腫瘍負荷に次いで、２０日目に動物を安楽死させた。写真は、３群の各々における平均腫瘍負荷を表わし（図３ａ）、腫瘍容積（ｍｍ３）をグラフに示す（図３ｂ）。誤差バーは、平均の標準誤差を表わす。
実施例４：寄生虫血症の治療に際してのトリアリールメタンの分析
【０１９９】
一連のｉｎ  ｖｉｖｏ実験を実施して、寄生生物、例えばトリパノソーマを治療するトリアリールメタン、特にイミプラミンの能力を評価した。多数の（しかし全てではない）トリパノソーマ（寄生生物の一種）の血流中形態は、単に、呼吸のためのトリパノソーマ代替オキシダーゼ（ＴＡＯ）に依っている。したがって、ＴＡＯを抑制し得る本明細書中に記載される化合物は、寄生生物を有効に殺し得る。
【０２００】
ゲンチアナバイオレットは、シャガス病のための殺トリパノソーマ剤として用いられてきた。本明細書中に提示されたデータは、ゲンチアナバイオレット、その類似体、ならびに本明細書中に記載される他の化合物を用いて、トリパノソーマ・ブルセイ・オキシダーゼを抑制することも可能である、ということを示す。
【０２０１】
一研究では、寄生生物はトリパノソーマ・ブルセイである。マウスに寄生生物（５，０００個の寄生生物／マウス）を注射し、そしてマウスに寄生生物を注射した日から開始して、イミプラミンブルー（１ｍｇ／マウス／日）を注射（皮下）した。血中の寄生虫血症レベルを、各翌日に計数した。
【０２０２】
結果は、対照およびイミプラミン処理マウスの両方が寄生生物負荷のため、４日目に死亡した、ということを示した。しかしながら、寄生生物数／血液１ｍｌは、イミプラミン処置マウスにおいてわずかに低かった。
【０２０３】
イミプラミンブルー（１００μｇのイミプラミンブルー）のＩＶ投与により、実験を反復した。寄生生物（トリパノソーマ・ブルセイ）は血中および組織液中で増殖し、如何なる細胞中にも進入しないため、ＩＶ投与は寄生生物を有効に標的にし得る、と考えられた。この処置は、マウスモデルにおける寄生虫血症の７０％低減を生じた。しかしながら、１ｍｇＩＶの投与量は、マウスを殺した。したがって、治療濃度域（この場合、寄生虫血症の治療は、望ましくない毒性作用を伴わずに実行され得る）を見出すことが重要である。この治療濃度域は、約１５０〜２５０μｇの範囲である。
【０２０４】
イミプラミンブルーおよびエチルカルバゾールブルーも、５００ｎｍでトリパノソーマ毒性に対する良好な細胞毒性を示した。これらのおよび他の化合物を、生きている細胞において試験した。
【０２０５】
血流形態のトリパノソーマ・ブルセイの１００万個の細胞を用いて、実験を実行した。異なる化合物（５０および１００μモルの濃度で）を用いた一晩に亘る処理後、細胞を計数し、対照とともにプロットした。全細胞が、ゲンチアナバイオレットおよびブリリアントグリーンで死亡した。
【０２０６】
結果を以下に示す：
ゲンチアナバイオレット（ＧＢ）に関するＩＣ５０値＜２０ｎＭ；ブリリアントグリーン（ＢＧ）およびカルバゾールブルー（ＣＢ）＜５０ｎＭ；エチルカルバゾールブルー（ＥＣＢ）およびイミプラミン（ＩＰ）５０＜１００ｎＭ。
実施例５：トリアリールメタンを用いたマラリアの治療
【０２０７】
イミプラミンのトリアリールメタン類似体であるイミプラミンブルーは、化学療法増感剤であり、マラリアの治療に有用である。イミプラミンブルー、ならびに本明細書中に記載される他のトリアリールメタンも、ＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害薬活性を有し、これらの化合物のいくつかは、トリパノソーマおよびリーシュマニアに対する活性を示している。特定の理論に縛られることなく考えると、これらの化合物は、プラスモディウム属ＮＡＤＰＨオキシダーゼの化学療法増感および抑制により、マラリアに対する二重活性を有する。
【０２０８】
クロロキン感受性および多薬剤耐性プラスモディウム・ファルシパルムの両方を用いて、マラリアモデルで化合物を試験した。マラリアモデルは、ＪＡＣ  Ａｄｖａｎｃｅ  Ａｃｃｅｓｓ  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｏｎｌｉｎｅ  ｏｎ  Ｊｕｌｙ  ３０，  ２００８，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，  ｄｏｉ：  １０．１０９３／ｊａｃ／ｄｋｎ３１５（この記載内容は参照により本明細書中で援用される）で公表されたものと同じであり、データを以下の表に要約する。
【０２０９】
要するに、検定は、化合物に対するクロロキン感受性および多薬剤耐性プラスモディウム・ファルシパルムの両方を曝露することを包含する。最高濃度の化合物への曝露の１時間後、化合物を除去し、全段階のプラスモディウム・ファルシパルムの増殖を観察した。次に、増殖段階における低減を、未処理対照寄生生物と比較した。任意段階特異的作用が、いずれかの濃度で認められた。寄生生物を種々の濃度の種々の化合物に曝露した場合、全ての寄生生物段階の強い抑制（１０％増殖として本明細書中で定義される）の存在を評価した。
【表１】
2011507971.tif 000034
【０２１０】
データは、この検定における活性トリフェニルメタンがカルバゾールブルーおよびメチルブリリアントグリーンであることを示す。不活性なものは、ＤＤＴおよびクリシンブラックである。
実施例６：リーシュマニア症の治療
【０２１１】
他の実施例で考察される他の寄生生物性疾患のほかに、リーシュマニア症モデルにおいても化合物を試験した。
【０２１２】
ＴＰＭ１（エチルカルバゾールブルー）は、今までに試験された化合物のリーシュマニアに及ぼす最良の活性を有する。予備データは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏプロマスチゴートに対する活性を示した。
【０２１３】
トリアリールメタン（ＴＰＭ、トリフェニルメタンを表す）のための溶媒として水を用いて、実験を開始した。しかしながら、水は有効な溶媒でなく、そこで、エタノールを代用した。エタノールはリーシュマニアに対して有毒であり、そこで、ＴＰＭ群で提示したより高いエタノール濃度で対照群を試験した。実験の結果を、図４〜８に示す。
【０２１４】
図４〜７の各々は、エタノール中の５０、１０、１および０．１ｍｃＭ（マイクロモル）のＴＰＭ（１、２、３および５）を示す５または６群、ならびに２つの対照群：エタノール５％（５０ｍｃＭ）および陽性対照を有する。
【０２１５】
試験した化合物の全てが活性を有することが判明したが、しかし、エタノールも活性であった。したがって、別個の実験を実施して、付加化合物なしで、エタノールがどれだけ有毒であるかを確定した。５、１および０．１％の濃度のエタノールを用いた。図８は、エタノール単独の作用を示す。
【０２１６】
低濃度（０．１％エタノール）では、毒性は最初の４８時間には観察されなかった。したがって、エタノール中の最後の２つの濃度（１および０．１ｍｃＭ）のＴＰＭを用いた最初の実験（この場合、エタノールの濃度は０．１および０．０１％であった）で得られた結果は、許容され得る（最初の４つのグラフ上の暗青色および桃色の線）。したがって、ＴＰＭ１およびＴＰＭ２はこれらの濃度で活性を示したが、一方、ＴＰＭ３およびＴＰＭ５は示さなかった。
【０２１７】
これらのデータを確証するために、１、０．５、０．１および０．０５ｍｃＭでＴＰＭ１（エチルカルバゾールブルー）およびＴＰＭ２を用いて（この場合、エタノールは非毒性濃度で存在した）、別の実験を実施した。４８時間後にのみ、寄生生物の数を計数した。さらにまた、０．１％でのエタノール対照を用いた。結果を、図９〜１０に示す。
【０２１８】
この新規の実験を用いて、ＴＰＭ１（エチルカルバゾールブルー）は０．５および１ｍｃＭで（この場合、増殖抑制はそれぞれ８０および９０％）、ＴＰＭ２は１ｍｃＭで（この場合、増殖抑制は７２％）、有意の活性を有する、ということが判明した。ＩＣ５０は、ＴＰＭ１に関しては約０．３ｍｃＭ、ＴＰＭ２に関しては０．６ｍｃＭであった。
【０２１９】
Ｈｉｌｌｓ等（１８）、ならびにＨｕｂｅｒとＫｏｅｌｌａ（１９）により記載された方法により、ＩＣ５０を算定した。要するに、濃度Ｘ１（および全てのより低い濃度）での寄生生物密度Ｙ１が対照Ｙ０で見出される密度の半分より多いように、そして濃度Ｘ２（および全てのより高い濃度）での寄生生物密度Ｙ２がＹ０の半分未満であるように、２つの濃度Ｘ１およびＸ２を見出すことを、Ｈｉｌｌｓは提案した。次に、Ｘ１およびＸ２間の線形外挿により、ＩＣ５０が判明した：
ｌｏｇ（ＩＣ５０）＝ｌｏｇ（Ｘ１）＋［（Ｙ１−Ｙ０／２）／（Ｙ１−Ｙ２）］［ｌｏｇ（Ｘ２）−ｌｏｇ（Ｘ１）］。
【０２２０】
化合物ＴＰＭ６（ＭＷ＝４００．６０）、ＴＰＭ７（ＭＷ＝６７２．８６）、ＴＰＭ９（ＭＷ＝５２１．７６）およびＴＰＭ１０（ＭＷ＝６６２．９５）を、同一方法で評価した。各処理群において、最大１％のエタノールを用いて、それらを試験した。同一濃度（１％）で、エタノール対照も評価した。
【０２２１】
処理群を、以下に示す：
ＴＰＭ６およびＴＰＭ７：５、１、０．５および０．１ｍｃＭ
ＴＰＭ９：２、１、０．５および０．１ｍｃＭ
ＴＰＭ１０：４、１、０．５および０．１ｍｃＭ。
【０２２２】
化合物を２５ｍＬのエタノール中に溶解し、各化合物はエタノール中の異なるモル重量および溶解度を有するため、各化合物の最高濃度は各群で異なった。化合物は、許容された最大のエタノール（すなわち、２５ｍＬ）中に可溶性でなければならなかった。
【０２２３】
ＴＰＭ６および９は、有望な結果を示した。データを、図１１〜１５に示す。図に示したように、最も活性な化合物はＴＰＭ６（メチルブリリアントグリーン）であり、一方、次に最も活性な構成成分はＴＰＭ１（エチルカルバゾールブルー）およびＴＰＭ９（プロトンスポンジ）である。
【０２２４】
予備データは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏプロマスチゴート（トリパノソーマ原虫の鞭毛虫段階）に対する活性を示した。
【０２２５】
データは、以下の事項を示す：
・ＴＰＭ６（メチルブリリアントグリーン）は、０．１、０．５、１および５ｍｃＭで有意の活性を有する（ｐ＜０．００１）（この場合、増殖抑制はそれぞれ９８、９８、１００および１００％であった）。
・ＴＰＭ７は、１ｍｃＭで有意の活性を有する（ｐ＜０．０５）（この場合、増殖抑制は１４．５％であった）。
・ＴＰＭ９は、０．１、０．５、１および２ｍｃＭで有意の活性を有する（ｐ＜０．００１）（この場合、増殖抑制はそれぞれ２４．５、８０、９６および９６．５％であった）。ＩＣ５０は約０．２ｍｃＭであった。
・ＴＰＭ１０は、１および４ｍｃＭで有意の活性を有する（それぞれ、ｐ＜０．０１および０．００１％）（この場合、増殖抑制はそれぞれ１３．５および３２％であった）。
【０２２６】
ＴＰＭ６、ＴＰＭ７およびＴＰＭ１０と同様に、５０％以下および５０％までの増殖抑制値を有さなかった化合物に関して、この方法で、ＩＣ５０は算定できなかった。
【０２２７】
これらの実験の全ての結果を、以下の表に要約する。
【表２】
2011507971.tif 000035
【０２２８】
ＴＰＭ６（ＭＷ＝４００．６０）のＩＣ５０を算定するために、再度、同一の方法に従って、試験した。
【０２２９】
処理群は、０．０５、０．０１．０．００５および０．００１ｍｃＭの投与量でのＴＰＭ６であった。データは、以下の事項を示した：
・ＴＰＭ６は、０．０１および０．０５ｍｃＭで有意の活性を有する（ｐ＜０．００１％）（この場合、増殖抑制はそれぞれ４１および５９％であった）。ＩＣ５０は約０．０２ｍｃＭであった。
実施例７：骨髄腫細胞においてアポトーシスおよび細胞周期停止を誘導するためのイミプラミンブルーの使用−ｐ５３依存性経路中に介在
【０２３０】
背景：
三環式抗うつ薬であるイミプラミン、クロミプラミンおよびシタロプラムは、神経形成を誘導し（１）、そして癌細胞においてアポトーシスを誘導することも知られている（２）。しかしながら、種々の細胞内シグナル伝達経路、ならびにおそらくは癌治療におけるこれらの化合物の臨床的有用性におけるこれらの薬剤の治療効果の基礎を成す分子機序は、十分に探求されているわけではない。イミプラミンブルーは、ＣＤＫ阻害薬ｐ２１発現と増殖の遮断からのニューロン前駆細胞のその後の放出を抑制することが近年示された（３）。イミプラミンブルー処理は、培養Ｃ６ラット神経膠腫細胞における広範なＤＮＡ損傷を誘導し（４）、細胞増殖抑制を誘導する（５）。
【０２３１】
目的：
この研究の目的は、細胞増殖抑制におけるイミプラミンブルーの能力、そして骨髄腫細胞において、ならびに種々の血液学的癌細胞型においてアポトーシスを誘導するその効能を確定することであった。
【０２３２】
材料および方法：
イミプラミンブルーは、エモリー大学皮膚科学部から入手した。骨髄腫細胞（ＭＭ．１Ｓ、ＭＭ．１Ｒ、ＲＰＭＩ８２２６およびＵ２６６）に関するＭＴＴ検定を用いて、細胞生存度を評価した。フローサイトメトリーによりアネキシンＶ染色および細胞周期分析を実行して、アポトーシスのレベルを査定し、細胞周期停止を分析した。抗体を用いてウエスタンブロッティングを実施して、種々の標的に及ぼすイミプラミンブルーの影響を分析した。骨髄腫患者からの骨髄を、Ｗｉｎｓｈｉｐ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅからの承諾により入手した。
結果：
【０２３３】
骨髄腫細胞を７２時間まで処理した場合、細胞生存度検定は、１０μＭまでのイミプラミンブルーの処理が、６ｕＭ〜１０μＭの間で有効に、８０％より多い増殖抑制を生じる、ということを示した。アネキシンＶ染色によるアポトーシス検定は、類似の濃度でアポトーシスを受けるよう細胞が誘導された、ということを示す。プロカスパーゼ（カスパーゼ８、９、３およびＰＡＲＰ）は、約４８時間で、０．５μＭという低い濃度から、１０μＭまでのイミプラミンブルーで、広範に切断された。ＭＭ．１Ｓ細胞中のｐｈｏｓ−ｐ５３およびＧＡＤＤ４５のレベル増大に基づいて、ＤＮＡ損傷を観察した。細胞周期プロフィールは、イミプラミンブルーがＭＭ．１Ｓ細胞において、細胞周期停止、ならびにアポトーシスの両方を誘導する、ということを示した。イミプラミンブルーを、ボルテゾミブまたはペリフォシンと併用することは、併用に付加的利益が存在する、ということを示唆した。イミプラミンブルーは、ＭＭ．１Ｓ細胞におけるサイトカインＩＬ−６およびＩＧＦ１による増殖利益を克服する。イミプラミンブルーは、白血病およびリンパ腫細胞株の両方において、細胞増殖抑制を誘導した。骨髄腫患者から得た初代細胞は、単一剤として単独での、またはボルテゾミブとの併用での、イミプラミンブルーによるＣＤ３８陽性集団の非常に有意な細胞殺害を示した。ｐｈｏｓ−ＡＫＴは有意に低減されなかったが、一方、ｐｈｏｓ−ｐ５３およびＧＡＤＤ４５は、ＭＭ．１Ｓにおけるイミプラミンブルー処理の結果として上方調節された。
結論：
【０２３４】
イミプラミンブルーは、骨髄腫ならびに初代骨髄腫細胞の両方において、そして他の血液学的癌細胞株においても、アポトーシスおよび細胞周期停止を誘導する潜在力を有する。細胞性応答は、主に、ＤＮＡ損傷、アポトーシスおよび細胞周期停止によるものであると思われる。イミプラミンブルーは、血液学的癌の治療において臨床的有用性を有すると考えられる。
参考文献：
【０２３５】
１．抗うつ薬イミプラミン、クロミプラミンおよびシタロプラムはカスパーゼ−３作用によりヒトＡＭＬ（ＨＬ−６０）細胞におけるアポトーシスを誘導する。Ｘｉａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ．  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ．  １９９９；  １３；  ３３８−３４７
２．ＩＧＲ１黒色腫細胞のイオンチャンネルおよび増殖に及ぼすイミプラミンの作用。Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｍｂｒ  Ｂｉｏｌ．  ２００２；  １８８：  １３７−１４９
３．ｐ２１Ｃｉｐ１は海馬の歯状回の顆粒細胞層下部におけるニューロン増殖を制限する。Ｐｅｃｈｎｉｃｋ，  ｅｔ  ａｌ．  ２００８；  ＰＮＡＳ；  １０５，  １３５８−１３６３
４．アルカリコメットアッセイを用いた抗うつ薬治療後のＣ６神経膠腫細胞におけるＤＮＡ損傷の査定。Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｒｃｈ．  Ｔｏｘｉｃｏｌ．  ２００２；  ７５；  ２４３−２５０
５．イミプラミンによる長期処置はＮＧ１０８−１５細胞において、細胞増殖を抑制し、セロトニン２Ｃ受容体ｍＲＮＡ発現を増強する。Ｓｕｋｍａ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ．  ２００３；  ９２，  ４３３−４３６。
実施例８：代表的トリアリールメタンおよびスーパーオキシドジスムターゼのＥＳＲスペクトル
【０２３６】
Ｌｉは、ＥＳＲを用いて、単離エンドソームによるＮＡＤＰＨ依存性Ｏ２の産生を確証した（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊａｎｕａｒｙ  ２００６，  ｐ．１４０−１５４，  ２６（１）：  １４０−１５４  （２００６））。ＢｒｕｋｅｒモデルＥＭＸ  ＥＳＲ分光計（Ｂｒｕｋｅｒ）を用いて、ＥＳＲ検定を室温で実行した。各試料からの小胞性分画を、総容積５００μｌのＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で、スピントラップ剤である５０ｍＭの５，５−ジメチル−１−ピロリンＮ−オキシド（ＤＭＰＯ）と混合した。この溶液は、イミノ二酢酸キレート樹脂（１０ｍｌ／リットル；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を含有した。ＮＡＤＰＨを１００μＭに付加することにより反応を開始し、直ちにＥＳＲ分光計中に入れた。ＤＭＰＯ−ヒドロキシルラジカル付加体形成を、１０分間検定した。計器設定を以下に示す：受信機利得、１×１０６；変調周波数、１００ｋＨｚ；マイクロ波電力、４０．１４ｍＷ；変調振幅、１．０Ｇ；および掃引速度、１Ｇ／ｓ。
【０２３７】
即時適用に際しては、ゲンチアナバイオレット、ＤＴＴブラックおよびイミプラミンブルーの、ならびにスーパーオキシドジスムターゼのＥＳＲスペクトルを、実質的にＬｉらに記載されたような条件を用いて得た。ＥＳＲスペクトル（図１６〜１８）は、これらのトリアリールメタン化合物がスーパーオキシドと反応することによりラジカルを形成し、したがってＲＯＳを生成するスーパーオキシドジスムターゼの能力を抑制するように思われる、ということを示す。
【０２３８】
本発明は、本明細書中に記載される特定の実施形態により範囲を限定されるべきでない。実際、記載されたもののほかに、本発明の種々の修正が、前記の説明ならびに添付の図面から、当業者に明らかになる。このような修正は、添付の特許請求の範囲内であるよう意図される。
【０２３９】
種々の出版物が本明細書中で引用され、それらの記載内容は参照により本明細書中で援用される。
【図１】
2011507971.tif 000086
【図２】
2011507971.tif 000087
【図３】
2011507971.tif 000088
【図４】
2011507971.tif 000089
【図５】
2011507971.tif 000090
【図６】
2011507971.tif 000091
【図７】
2011507971.tif 000092
【図８】
2011507971.tif 000093
【図９】
2011507971.tif 000094
【図１０】
2011507971.tif 000095
【図１１】
2011507971.tif 000096
【図１２】
2011507971.tif 000097
【図１３】
2011507971.tif 000098
【図１４】
2011507971.tif 000099
【図１５】
2011507971.tif 000100
【図１６】
2011507971.tif 000101
【図１７】
2011507971.tif 000102
【図１８】
2011507971.tif 000103
【手続補正書】
【提出日】平成22年8月30日(2010.8.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｔＮＯＸを発現する癌細胞を有する哺乳類における癌を治療するための薬剤の調製におけるトリアリールメタン治療薬の使用。
【請求項２】
前記哺乳類がヒトである請求項１記載の使用。
【請求項３】
前記癌が、血管腫、黒色腫、直腸癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、小細胞肺癌、結腸癌、慢性リンパ球性癌、有毛細胞白血病、食道癌、前立腺癌、乳癌、骨髄腫およびリンパ腫からなる群から選択される請求項１記載の使用。
【請求項４】
前記癌が転移癌である請求項１記載の使用。
【請求項５】
前記ヒトが、トリアリールメタン治療薬の投与前に抗癌療法を受けたために免疫抑制される請求項１記載の使用。
【請求項６】
前記癌がｔＮＯＸを発現する細胞を有する固形腫瘍の形態で症状発現される請求項１記載の使用。
【請求項７】
前記腫瘍が上皮組織、リンパ組織、結合組織、骨または中枢神経系の腫瘍である請求項６記載の使用。
【請求項８】
化合物が、非経口的に、経口的に、腫瘍に直接、または埋め込み装置を介して、任意に徐放性処方物を用いて投与される請求項１記載の使用。
【請求項９】
化合物が、以下の式：
【化１】
2011507971.tif 000104
（式中、Ｊは、２つのアリール環の間の直接結合、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲまたは（ＣＲ２）ｎを表し、
ｎ＝０〜４、
Ｅは、ＣＨ、本明細書中で定義されるような置換基Ｚに結合されるＣ、またはＮであり、
Ｒ＝Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキル、
Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテル、
Ｙ＝Ｏ、ＳまたはＮＲ２（ここで、アミンは、任意に、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルアリールまたはアリールアルキル部分を介してオルト位置で環に連結し戻され得る）、
Ｚ＝任意置換基、アリール環に結合される単環式環、あるいはベンゼン環またはシクロヘキサジエン環に結合される第二アリールまたはへテロアリール環、
ここで、前記アリールまたはへテロアリール環は、任意の遊離位置で、Ｈまたは本明細書中で定義されるような置換基Ｚで置換され得るし、
Ｅのうちの少なくとも１つはＮであり、
Ｚにより定義される置換基は、Ｃ１−６アルキル、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”（ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキルである）からなる群から選択され、
任意に、Ｘは、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールおよびチオールエーテルからなる群から選択される）
のうちの１つ、ならびに式２および３におけるヘテロアリールを含む式４に対する対応物、を有するか、その製薬上許容可能な塩およびプロドラッグである請求項１記載の使用であって、化合物が、ラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る使用。
【請求項１０】
化合物が次式：
【化２】
2011507971.tif 000105
（式中、Ｊは、２つのアリール環の間の直接結合、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲまたは（ＣＲ２）ｎを表し、
ｎ＝０〜４、
Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテル、
Ｚ＝任意置換基、アリール環に結合される単環式環、あるいはベンゼン環またはシクロヘキサジエン環に結合される第二アリールまたはへテロアリール環、
ここで、前記アリールまたはへテロアリール環は、任意の遊離位置で、Ｈまたは本明細書中で定義されるような置換基Ｚで置換され得るし、
Ｚにより定義される置換基は、Ｃ１−６アルキル、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”（ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキルである）からなる群から選択され、
Ｘ’は、Ｏ、Ｓ、ＮＲまたはＮＲ２＋であり、
Ｔは、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−、ＮＲ、Ｏ、Ｓ、（−ＣＲ２）ｎ、（−ＣＲ２）ｎ−ＮＲ−、（−ＣＲ２）ｎ−Ｏ−および（−ＣＲ２）ｎ−Ｓ−からなる群から選択され、そして
Ｕは、−Ｃ（Ｏ）−、ＮＲ、Ｓ、Ｏおよび（−ＣＲ２）ｎからなる群から選択される（ここで、ＵまたはＴが（−ＣＲ２）ｎである場合、ｎは１〜４である）が、
但し、Ｊが（−ＣＲ２）ｎ（ここで、ｎ＝０）であり、Ｔが（−ＣＲ２）ｎである場合には、ＵはＮＲでない）、
ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグを有する請求項１〜９のいずれかに記載の使用であって、化合物が、ラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る使用。
【請求項１１】
ＵおよびＴ置換基を含む三環式環が以下の：
【化３】
2011507971.tif 000106
【化４】
2011507971.tif 000107
ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグからなる群から選択される請求項１０記載の使用であって、化合物がラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る使用。
【請求項１２】
ＵおよびＴ置換基を含む三環式環が、以下の：
【化５】
2011507971.tif 000108
ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグからなる群から選択される請求項１０記載の使用であって、化合物がラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る使用。
【請求項１３】
化合物が、次式：
【化６】
2011507971.tif 000109
【化７】
2011507971.tif 000110
（式中、Ｊは、２つのアリール環の間の直接結合、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲまたは（ＣＲ２）ｎを表し、
ｎ＝０〜４、
Ｒ＝Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキル、
Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテル、
Ｚ＝任意置換基、アリール環に結合される単環式環、あるいはベンゼン環またはシクロヘキサジエン環に結合される第二アリールまたはへテロアリール環、
ここで、前記アリールまたはへテロアリール環は、任意の遊離位置で、Ｈまたは本明細書中で定義されるような置換基Ｚで置換され得るし、
Ｚにより定義される置換基は、Ｃ１−６アルキル、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”（ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキルである）からなる群から選択されるが、
任意に、Ｘは、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールおよびチオールエーテルからなる群から選択されるが、
但し、Ｊが−（ＣＲ２）ｎである場合、ｎは０でない）
ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグを有する請求項１０記載の使用であって、前記化合物がラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る使用。
【請求項１４】
化合物が、次式：
【化８】
2011507971.tif 000111
【化９】
2011507971.tif 000112
（式中、Ｊは、２つのアリール環の間の直接結合、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲまたは（ＣＲ２）ｎを表し、
ｎ＝０〜４、
Ｒ＝Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキル、
Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテル、ならびに
Ｚ＝任意置換基、アリール環に結合される単環式環、あるいはベンゼン環またはシクロヘキサジエン環に結合される第二アリールまたはへテロアリール環、
ここで、前記アリールまたはへテロアリール環は、任意の遊離位置で、Ｈまたは本明細書中で定義されるような置換基Ｚで置換され得るし、
Ｚにより定義される置換基は、Ｃ１−６アルキル、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”（ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキルである）からなる群から選択される）
ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグを有する請求項１０記載の使用であって、前記化合物がラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る使用。
【請求項１５】
化合物が、次式：
【化１０】
2011507971.tif 000113
（式中、Ｊは、２つのアリール環の間の直接結合、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲまたは（ＣＲ２）ｎを表し、
ｎ＝０〜４、
Ｒ＝Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキル、
Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテル、
Ｚ＝任意置換基、アリール環に結合される単環式環、あるいはベンゼン環またはシクロヘキサジエン環に結合される第二アリールまたはへテロアリール環、
ここで、前記アリールまたはへテロアリール環は、任意の遊離位置で、Ｈまたは本明細書中で定義されるような置換基Ｚで置換され得るし、
Ｚにより定義される置換基は、Ｃ１−６アルキル、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”（ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキルである）からなる群から選択される）
ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグを有する請求項１０記載の使用であって、前記化合物がラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る使用。
【請求項１６】
化合物が、次式：
【化１１】
2011507971.tif 000114
【化１２】
2011507971.tif 000115
【化１３】
2011507971.tif 000116
【化１４】
2011507971.tif 000117
【化１５】
2011507971.tif 000118
（式中、Ｊは、２つのアリール環の間の直接結合、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲまたは（ＣＲ２）ｎを表し、
ｎ＝０〜４、
Ｒは、独立して、Ｈ、置換または非置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキルであり（ここで、置換基は、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アリール、ヘテロシクロ、ハロ、アミノ、カルボキシル、カルバミルおよびシアノからなる群から選択される）、そして
Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテル）
ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグを有する請求項１０記載の使用であって、前記化合物がラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る使用。
【請求項１７】
化合物が、次式：
【化１６】
2011507971.tif 000119
（式中、ｎは０〜４であり、
Ｒは、独立して、Ｈ、置換または非置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキルであり（ここで、置換基は、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アリール、ヘテロシクロ、ハロ、アミノ、カルボキシル、カルバミルおよびシアノからなる群から選択される）、
Ｘは、独立して、Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテルであり、好ましくはアミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールおよびチオールエーテルから選択され、
Ｘ‘はＯ、Ｓ、ＮＲまたはＮＲ２＋であり、
Ｚ＝任意置換基であり（ここで、個々の芳香族環は任意の位置でＨまたは本明細書中で定義されるような置換基Ｚで置換され得る）、そして
Ｚにより定義される置換基は、Ｃ１−６アルキル（シクロアルキルを含む）、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”（ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキルである）からなる群から選択される）
ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグを有する請求項１記載の使用であって、前記化合物がラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る使用。
【請求項１８】
ｎが２である請求項１７記載の使用。
【請求項１９】
化合物が、次式：
【化１７】
2011507971.tif 000120
（式中、Ｒは、独立して、Ｈ、置換または非置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキルであり（ここで、置換基は、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アリール、ヘテロシクロ、ハロ、アミノ、カルボキシル、カルバミルおよびシアノからなる群から選択される）、
Ｘは、独立して、Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテルであり、好ましくはアミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールおよびチオールエーテルから選択され、
Ｘ’は、Ｏ、Ｓ、ＮＲまたはＮＲ２＋である）
ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグを有する請求項１７記載の使用であって、前記化合物がラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る使用。
【請求項２０】
化合物が、次式：
【化１８】
2011507971.tif 000121
ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグを有する請求項１７記載の使用であって、前記化合物がラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る使用。
【請求項２１】
眼性障害を治療するための薬剤の調製におけるトリアリールメタン含有化合物の使用であって、任意に、前記トリアリールメタン含有化合物の量が治療的有意量のＮＡＤＰＨオキシダーゼを抑制するのに十分であり、任意に、前記哺乳類がヒトである使用。
【請求項２２】
前記眼性障害が、湿性または乾性加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、緑内障、新生血管性緑内障、網膜血管炎、ブドウ膜炎、例えば後部ブドウ膜炎、結膜炎、緑内障に派生する網膜炎、上強膜炎、強膜炎、視神経炎、球後視神経炎、白内障、眼手術後眼性炎症、物理的眼外傷に起因する眼性炎症、眼性アレルギーおよびドライアイ、例えば緑内障または白内障からなる群から選択される請求項２１記載の使用。
【請求項２３】
前記化合物が、点眼薬または眼に直接投与するための他の適切な局所処方物、結膜下注射、眼周囲注射または硝子体内注射の形態での局所投与による、外科的移植による、全身投与によるまたはイオン導入による、任意に徐放性処方物を用いる投与のために処方される請求項２１記載の使用。
【請求項２４】
前記化合物が請求項９〜１６のいずれかの式を有する化合物である請求項２１記載の使用。
【請求項２５】
前記化合物が請求項１７〜２０のいずれかの式を有する化合物である請求項２１記載の使用。
【請求項２６】
哺乳類における寄生生物感染を治療するのに用いるための薬剤の調製におけるトリアリールメタン治療薬の使用。
【請求項２７】
トリフェニルメタン治療薬の量が治療的有意量のＮＡＤＰＨオキシダーゼを抑制するのに十分である請求項２６記載の使用。
【請求項２８】
前記哺乳類がヒトである請求項２６記載の使用。
【請求項２９】
寄生生物感染が、マラリア、トリパノソーマ症およびリーシュマニア症からなる群から選択される請求項２６記載の使用。
【請求項３０】
前記投与が徐放性処方物を用いて提供される請求項２６記載の使用。
【請求項３１】
前記化合物が請求項９〜１６のいずれかに記載の式を有する化合物である請求項２６記載の使用。
【請求項３２】
前記化合物が請求項１７〜２０のいずれかに記載の式を有する化合物である請求項２６記載の使用。
【請求項３３】
次式：
【化１９】
2011507971.tif 000122
（式中、Ｊは、２つのアリール環の間の直接結合、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲまたは（ＣＲ２）ｎを表し、
ｎ＝０〜４、
Ｅは、ＣＨ、本明細書中で定義されるような置換基Ｚに結合されるＣ、またはＮであり、
Ｒ＝Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキル、
Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテル、好ましくはアミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールおよびチオールエーテルから選択され、
Ｙ＝Ｏ、ＳまたはＮＲ２（ここで、アミンは、任意に、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルアリールまたはアリールアルキル部分を介してオルト位置で環に連結し戻され得る）、
Ｚ＝任意置換基、アリール環に結合される単環式環、あるいはベンゼン環またはシクロヘキサジエン環に結合される第二アリールまたはへテロアリール環、
ここで、前記アリールまたはへテロアリール環は、任意の遊離位置で、Ｈまたは本明細書中で定義されるような置換基Ｚで置換され得るし、
Ｚにより定義される置換基は、Ｃ１−６アルキル、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”（ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキルである）からなる群から選択され、
Ｘ’は、Ｏ、Ｓ、ＮＲまたはＮＲ２＋であり、
Ｔは、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−、ＮＲ、Ｏ、Ｓ、（−ＣＲ２）ｎ、（−ＣＲ２）ｎ−ＮＲ−、（−ＣＲ２）ｎ−Ｏ−および（−ＣＲ２）ｎ−Ｓ−からなる群から選択され、そして
Ｕは、−Ｃ（Ｏ）−、ＮＲ、Ｓ、Ｏおよび（−ＣＲ２）ｎからなる群から選択される（ここで、ＵまたはＴが（−ＣＲ２）ｎである場合、ｎは１〜４である）が、
但し、Ｊが（−ＣＲ２）ｎであり、およびｎ＝０であり、そしてＴが（−ＣＲ２）ｎである場合には、ＵはＮＲでない）、
を有する化合物、ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグであって、化合物が、ラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る化合物。
【請求項３４】
ＵおよびＴ置換基を含む三環式環が以下の：
【化２０】
2011507971.tif 000123
【化２１】
2011507971.tif 000124
からなる群から選択される請求項３３記載の化合物、ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグであって、化合物が、ラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る化合物。
【請求項３５】
前記ＵおよびＴ置換基を含む三環式環が、以下の：
【化２２】
2011507971.tif 000125
からなる群から選択される請求項３３記載の化合物、ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグであって、化合物が、ラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る化合物。
【請求項３６】
化合物が、次式：
【化２３】
2011507971.tif 000126
【化２４】
2011507971.tif 000127
（式中、Ｊは、２つのアリール環の間の直接結合、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲまたは（ＣＲ２）ｎを表し、
ｎ＝０〜４、
Ｒ＝Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキル、
Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテル、そして
Ｚ＝任意置換基、アリール環に結合される単環式環、あるいはベンゼン環またはシクロヘキサジエン環に結合される第二アリールまたはへテロアリール環、
ここで、前記アリールまたはへテロアリール環は、任意の遊離位置で、Ｈまたは本明細書中で定義されるような置換基Ｚで置換され得るし、
Ｚにより定義される置換基は、Ｃ１−６アルキル、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”（ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキルである）からなる群から選択されるが、
但し、Ｊが−（ＣＲ２）ｎである場合、ｎは０ではない）
を有する請求項３３記載の化合物、ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグであって、前記化合物がラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る化合物。
【請求項３７】
化合物が、次式：
【化２５】
2011507971.tif 000128
【化２６】
2011507971.tif 000129
（式中、Ｒ＝Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキル、
Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテル、そして
Ｚ＝任意置換基、アリール環に結合される単環式環、あるいはベンゼン環またはシクロヘキサジエン環に結合される第二アリールまたはへテロアリール環、
ここで、前記アリールまたはへテロアリール環は、任意の遊離位置で、Ｈまたは本明細書中で定義されるような置換基Ｚで置換され得るし、
Ｚにより定義される置換基は、Ｃ１−６アルキル、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”（ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキルである）からなる群から選択される）
を有する請求項３３記載の化合物、ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグであって、前記化合物がラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る化合物。
【請求項３８】
化合物が、次式：
【化２７】
2011507971.tif 000130
（式中、Ｊは、２つのアリール環の間の直接結合、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲまたは（ＣＲ２）ｎを表し、
ｎ＝０〜４、
Ｒ＝Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキル、
Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテル、
Ｚ＝任意置換基、アリール環に結合される単環式環、あるいはベンゼン環またはシクロヘキサジエン環に結合される第二アリールまたはへテロアリール環、
ここで、前記アリールまたはへテロアリール環は、任意の遊離位置で、Ｈまたは本明細書中で定義されるような置換基Ｚで置換され得るし、そして
Ｚにより定義される置換基は、Ｃ１−６アルキル、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”（ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキルである）からなる群から選択される）
を有する請求項３３記載の化合物、ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグであって、前記化合物がラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る化合物。
【請求項３９】
化合物が、次式：
【化２８】
2011507971.tif 000131
【化２９】
2011507971.tif 000132
【化３０】
2011507971.tif 000133
【化３１】
2011507971.tif 000134
【化３２】
2011507971.tif 000135
【化３３】
2011507971.tif 000136
（式中、Ｊは、２つのアリール環の間の直接結合、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲまたは（ＣＲ２）ｎを表し、
ｎ＝０〜４、
Ｘ＝Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテル）
を有する請求項３３記載の化合物、ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグであって、前記化合物がラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る化合物。
【請求項４０】
次式：
【化３４】
2011507971.tif 000137
（式中、ｎは１〜４であり、
Ｒは、独立して、Ｈ、置換または非置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアリールアルキルであり（ここで、置換基は、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アリール、ヘテロシクロ、ハロ、アミノ、カルボキシル、カルバミルおよびシアノからなる群から選択される）、
Ｘは、独立して、Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテルであり、好ましくはアミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールおよびチオールエーテルから選択され、
Ｘ’は、Ｏ、Ｓ、ＮＲまたはＮＲ２＋であり、
Ｚ＝任意の置換基（ここで、個々の芳香族環は任意の遊離位置でＨまたは本明細書中で定義されるような置換基Ｚで置換され得る）、そして
Ｚにより定義される置換基は、Ｃ１−６アルキル（シクロアルキルを含む）、アルケニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、ハロ（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ２Ｒ’、−ＳＲ’、−Ｎ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”および−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ”（ここで、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはアリールアルキルである）からなる群から選択される）
を有する化合物、ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグであって、前記化合物がラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る化合物。
【請求項４１】
ｎが２である請求項４０記載の化合物。
【請求項４２】
前記化合物が、次式：
【化３５】
2011507971.tif 000138
（式中、Ｘは、独立して、Ｈ、アミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールまたはチオールエーテルであり、好ましくはアミン、ヒドロキシ、エーテル、チオールおよびチオールエーテルから選択され、そして
Ｘ’は、Ｏ、Ｓ、ＮＲまたはＮＲ２＋である）
を有する請求項４０記載の化合物、ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグであって、前記化合物がラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る化合物。
【請求項４３】
前記化合物が、次式：
【化３６】
2011507971.tif 000139
を有する請求項４０記載の化合物、ならびにその製薬上許容可能な塩およびプロドラッグであって、前記化合物がラセミ混合物、立体異性体または精製エナンチオマーとして存在し、そして化合物が、水和物および溶媒和物の形態で存在し得る化合物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９０】
【化３０】
2011507971.tif 000140
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９２】
【化３１】
2011507971.tif 000141
【国際調査報告】
2011507971.tif 000142
2011507971.tif 000143
2011507971.tif 000144