(57)【要約】  本発明は、バレット食道を罹患する患者に関し、特に第一選択療法が不成功であった場合及び異形成が診断された場合に療法の決定を助ける方法に関する。かかる方法は、（ａ）Ｈｅｒ２、（ｂ）ｃＭｅｔ、（ｃ）グアニリルシクラーゼ又は（ｄ）ＩＧＦ１Ｒを標的とするベクターを含むイメージング剤の使用を含んでいる。本発明は、インビトロ又は好ましくはインビボでの放射性同位体イメージング又は光学イメージングのために適している。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
バレット食道に罹患していると予め診断された個々の患者に関して最も好適な治療コースの決定を助ける方法であって、
（ｉ）（ａ）Ｈｅｒ２、（ｂ）ｃＭｅｔ、（ｃ）グアニリルシクラーゼＣ及び（ｄ）ＩＧＦ１Ｒから選択される１種のタンパク質マーカーを選択的に標的とするベクターを含むイメージング剤であって、前記ベクターはイメージング成分で標識されており、前記イメージング成分は放射性同位体及び光学レポーターから選択されるイメージング剤を用意する段階、
（ｉｉ）段階（ｉ）からの第１のイメージング剤を用いて前記患者の食道の少なくとも一部分のイメージングを行う段階、
（ｉｉｉ）段階（ｉｉ）のイメージングから、患者の食道の１以上の位置においてバックグラウンドに対するイメージング剤の取込みの増加が存在するか否かについて判定を行う段階、
（ｉｖ）段階（ｉｉｉ）の判定が異常な取込みを示す場合には、段階（ｉｉ）で使用したイメージング剤のタンパク質マーカーに応じて、患者に対する適切なターゲティング療法、即ち
（ａ）Ｈｅｒ２に関しては、Ｈｅｒ２を標的とする薬物又は療法による治療、
（ｂ）ｃＭｅｔに関しては、ｃＭｅｔを標的とする薬物又は療法による治療、
（ｃ）グアニリルシクラーゼＣに関しては、グアニリルシクラーゼＣを標的とする薬物又は療法、又は
（ｄ）ＩＧＦ１Ｒに関しては、ＩＧＦ１Ｒを標的とする薬物又は療法
を決定する段階、並びに
（ｖ）段階（ｉｉｉ）の判定が正常である場合には、段階（ｉｖ）で決定されるターゲティング療法をその患者個体に対しては不適当であると判定し、前記患者に対して異なる療法を施すか、或いは段階（ｉｉ）で使用したベクターと異なるベクターを含む第２のイメージング剤を用いて前記患者について段階（ｉｉｉ）〜（ｖ）を繰り返す段階
を含んでなる方法。
【請求項２】
タンパク質マーカーがＨｅｒ２及びｃＭｅｔから選択される、請求項１記載の方法。
【請求項３】
タンパク質マーカーがＨｅｒ２である、請求項２記載の方法。
【請求項４】
イメージング成分が、人体のＰＥＴ外部イメージングに適する放射性同位体又は人体のＳＰＥＣＴ外部イメージングに適する放射性同位体である、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
イメージング成分が光学レポーターである、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
光学レポーターが赤色乃至近赤外波長６００〜１２００ｎｍに吸収極大を有する色素である、請求項５記載の方法。
【請求項７】
光学レポーターが生体適合性である、請求項５又は請求項６記載の方法。
【請求項８】
患者がバレット食道中の異形成に罹患していると予め診断されている、請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
患者が、抗逆流投薬、内視鏡粘膜切除及び外科的切除の１以上からなる第一選択療法に対して既に応答しなくなっている、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
段階（ｖ）の異なる療法が、プロトンポンプ阻害剤による化学療法、内視鏡粘膜切除及び外科的切除から選択される、請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
段階（ｖ）の異なる療法が、段階（ｉｖ）の残りのターゲティング療法選択肢（ａ）〜（ｄ）のうち、段階（ｖ）で不適当であると判定されなかったものから選択される、請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載の方法。
【請求項１２】
段階（ｉ）のイメージング剤が医薬組成物として提供される、請求項１乃至請求項１１のいずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
さらに、（ｖｉ）段階（ｉｖ）の（ａ）〜（ｄ）に定義されたターゲティング療法が開始された場合、段階（ｉｉ）のイメージング剤を使用して前記開始された療法の効力をモニターする段階を含む、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
請求項１乃至請求項１３のいずれか１項記載の方法で使用するためのイメージング剤の製造における、請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載の段階（ｉ）に定義された標識ベクターの使用。
【請求項１５】
請求項１乃至請求項１３のいずれか１項記載の方法における、請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載の段階（ｉ）に定義されたイメージング剤の使用。
【請求項１６】
イメージング剤がキットによって製造される、請求項１５記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バレット食道を罹患する患者に関し、特に第一選択療法が不成功であった場合及び異形成（ｄｙｓｐｌａｓｉａ）が診断された場合に療法の決定を助ける方法に関する。かかる方法は、（ａ）Ｈｅｒ２、（ｂ）ｃＭｅｔ、（ｃ）グアニリルシクラーゼ又は（ｄ）ＩＧＦ１Ｒを標的とするベクターを含むイメージング剤の使用を含んでいる。
【０００２】
本発明はまた、本発明の方法におけるイメージング剤及び／又は標識ベクターの使用も提供する。
【背景技術】
【０００３】
食道癌はすべての報告された癌症例の５％未満を占めるが、米国では毎年約３００００の新しいかかる症例が診断され、生存率は低い（下記参照）。食道癌は、悪性である細胞のタイプに応じて２つの主要タイプ（扁平上皮癌及び腺癌）に分類できる。バレット食道は、食道癌（特に腺癌）の発生リスクの増加と関連した前悪性状態である［Ｋｉｅｓｓｌｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｌｉｎ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．，４，９７９−９８７（２００６）］。慢性逆流はバレット食道のリスクを増加させ、したがって胃食道逆流（ＧＥＲＤ）は食道癌の危険因子であることが示唆されてきた。
【０００４】
米国及び西欧では、食道の腺癌は扁平上皮癌より多い。食道癌は治療可能な疾患であり得るが、滅多に治癒しない。総合５年生存率は５〜３０％である。食道癌の早期診断は患者の生存率を向上させる。主な治療法には、手術のみ又は放射線と組み合わせた化学療法がある。食道癌の治療で使用される化学療法には、５−フルオロウラシル及びシスプラチンがある。正確な手術前ステージングのないことが臨床上の大きな問題である。
【０００５】
バレット食道における低グレードの異形成（即ち、異常な組織増殖）の存在は食道癌発生の危険因子であるが、監視は現在では組織病理学に頼っている［Ｌｉｍ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｎｄｏｓｃｏｐｙ，３９，５８１−７（２００７）］。バレット食道における異形成の診断は、現在では１〜２ｃｍごとのランダム４象限生検（シアトルプロトコル）によるが、これは多大の時間及び費用がかかる［ＤａＣｏｓｔａ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．，２０（１），４１−５７（２００６）］。バレット食道における異形成は、常用内視鏡検査時に見えないのが普通である［Ｅｎｄｌｉｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｕｔ，４８，３１４−３１９（２００１）］。
【０００６】
米国特許第６，０３５，２２９号（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）には、カテーテルの末端にある照明及びイメージング用プローブを用いてバレット食道を検出するためのシステムが記載されている。この文書には、光学造影剤は開示されていない。
【０００７】
高度の異形成組織又は悪性組織の検出に際してメチレンブルー色素を使用することで、インビボでのバレット食道の染色がインビトロでの生検試料の染色と比較された［Ｃａｎｔｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｎｄｏｓｃｏｐｙ，３３，３９１−４００（２００１）］。
【０００８】
Ｋｉｅｓｓｌｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ［Ｃｌｉｎ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．，４，９７９−９８７（２００６）］は、共焦点レーザー内視鏡検査を用いたバレット上皮及び関連する新形成（ｎｅｏｐｌａｓｉａ）の検出を助けるためにフルオレセインを使用することを報告した。
【０００９】
国際公開第２００５／０５８３７１号には、インビボでの食道癌及びバレット食道のイメージングのための光学イメージング用造影剤が開示されている。かかる造影剤は、バレット食道において異常に発現される生物学的標的に対して親和性を有している。国際公開第２００５／０５８３７１号の造影剤は、好ましくは下記式を有する。
Ｖ−Ｌ−Ｒ
式中、
Ｖは食道癌又はバレット食道において異常に発現される標的に対して親和性を有する１以上のベクター部分であり、
Ｌはリンカー部分又は化学結合（ｂｏｎｄ）であり、
Ｒは光学イメージングにおいて検出可能な１以上のレポーター部分である。
【００１０】
広範囲の標的が記載されているが、標的は好ましくはＥ−カドヘリン、ＣＤ４４、Ｐ６２／ｃ−ｍｙｃ（ＨＧＦレセプター）、Ｐ５３及びＥＧＦＲ／ｅｒＢ−２から選択される。ベクター（Ｖ）は、好ましくはペプチド、ペプトイド成分、オリゴヌクレオチド、オリゴ糖、脂肪関連化合物及び旧来の有機薬物様小分子から選択されると述べられている。レポーター（Ｒ）は、好ましくは電磁スペクトルの紫外部から近赤外部までの波長領域の光と相互作用する色素である。
【００１１】
バレット食道は、扁平食道上皮が円柱上皮で置き換えられたこと（化生（ｍｅｔａｐｌａｓｉａ））を特徴とする状態である。一定割合のバレット食道患者は食道腺癌を発生し、この過程での臨界段階は異形成を生じることである。したがって、異形成を診断された患者は、疾患の程度に応じ、抗逆流投薬、内視鏡粘膜切除及び外科的切除を含み得る治療を受ける（図表１：“Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂａｒｒｅｔｔ’ｓ  Ｃｏｌｕｍｎａｒ−ｌｉｎｅｄ  Ｏｅｓｏｐｈａｇｕｓ”，ＵＫ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，Ａｕｇｕｓｔ  ２００５；ｗｗｗ．ｂｓｇ．ｏｒｇ．ｕｋからの要約）。
【００１２】
【表１】
2011513211.tif 000002
【００１３】
治療された患者を６ヶ月間隔で追跡することで、療法に対する応答が評価される。応答者（即ち、療法が有効であることを示す証拠が得られた患者）は低リスク患者と見なされる一方、非応答者に対しては治療の継続／追加が考慮される。特に第一選択治療に応答しないバレット食道患者の間では、さらに標的特異的な療法が開発されつつあることを考えると、一層良好な療法選択の必要性が存在している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
国際公開第２００５／０５８３７１号パンフレット
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明は、バレット食道に罹患している患者に関して療法の決定を助ける方法に関する。本方法は、（ａ）Ｈｅｒ２、（ｂ）ｃＭｅｔ、（ｃ）グアニリルシクラーゼ又は（ｄ）ＩＧＦ１Ｒを標的とするベクターを含むイメージング剤の使用を含んでいる。本方法は、第一選択治療に応答しない患者に対して特に価値がある療法選択ツールを提供する。罹患組織においてこれらのマーカーの１種を強く発現することが示される患者は、これらの細胞タンパク質を標的とする療法から利益を得ると予想される（図表２）。
【００１６】
【表２】
2011513211.tif 000003
【００１７】
本発明は、バレット患者の亜集団においてｃＭｅｔ、Ｈｅｒ２、ＩＧＦ１−Ｒ及びグアニリルシクラーゼＣの発現が増加することを示す証拠を提供する。したがって、これらのタンパク質を標的とする適当なイメージング剤を用いてかかる患者を同定すれば、これらの亜集団はｃＭｅｔ、Ｈｅｒ２、ＩＧＦ１−Ｒ又はグアニリルシクラーゼＣを標的とする薬物療法からの利益を受けることができ、それと同時に療法リソースの一層有効な使用が可能となろう。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
第１の態様では、本発明は、バレット食道に罹患していると予め診断された個々の患者に関して最も好適な治療コースの決定を助ける方法であって、
（ｉ）（ａ）Ｈｅｒ２、（ｂ）ｃＭｅｔ、（ｃ）グアニリルシクラーゼＣ及び（ｄ）ＩＧＦ１Ｒから選択される１種のタンパク質マーカーを選択的に標的とするベクターを含むイメージング剤であって、前記ベクターはイメージング成分で標識されており、前記イメージング成分は放射性同位体及び光学レポーターから選択されるイメージング剤を用意する段階、
（ｉｉ）段階（ｉ）からの第１のイメージング剤を用いて前記患者の食道の少なくとも一部分のイメージングを行う段階、
（ｉｉｉ）段階（ｉｉ）のイメージングから、患者の食道の１以上の位置においてバックグラウンドに対するイメージング剤の取込みの増加が存在するか否かについて判定を行う段階、
（ｉｖ）段階（ｉｉｉ）の判定が異常な取込みを示す場合には、段階（ｉｉ）で使用したイメージング剤のタンパク質マーカーに応じて、患者に対する適切なターゲティング療法、即ち
（ａ）Ｈｅｒ２に関しては、Ｈｅｒ２を標的とする薬物又は療法による治療、
（ｂ）ｃＭｅｔに関しては、ｃＭｅｔを標的とする薬物又は療法による治療、
（ｃ）グアニリルシクラーゼＣに関しては、グアニリルシクラーゼＣを標的とする薬物又は療法、又は
（ｄ）ＩＧＦ１Ｒに関しては、ＩＧＦ１Ｒを標的とする薬物又は療法
を決定する段階、並びに
（ｖ）段階（ｉｉｉ）の判定が正常である場合には、段階（ｉｖ）で決定されるターゲティング療法をその患者個体に対しては不適当であると判定し、前記患者に対して異なる療法を施すか、或いは段階（ｉｉ）で使用したベクターと異なるベクターを含む第２のイメージング剤を用いて前記患者について段階（ｉｉｉ）〜（ｖ）を繰り返す段階
を含んでなる方法を提供する。
【００１９】
「予め診断された」という用語は、患者が既にバレット食道を罹患していると診断されたか、或いはバレット食道を罹患していると疑われることを意味する。診断は、臨床的症状に加えて、通例は第一選択内視鏡検査を用いた確認に基づいて行われる。かかる第一選択内視鏡検査は、ランダム４象限生検試料を集めるため、現在では白色光を用いて実施される。これらの生検試料の組織学的評価により、疾患の程度が確認される。
【００２０】
「イメージング剤」という用語は、哺乳動物体のインビボイメージング又は哺乳動物体から採取した生検試料のインビトロイメージングのために適した化合物を意味する。好ましくは、哺乳動物は生きているヒト被験体である。インビボイメージングは侵襲的（例えば、手術中検査又は内視鏡検査）であってもよいし、或いは非侵襲的であってもよい。好ましいインビボイメージング方法は内視鏡検査である。
【００２１】
「選択的に標的とする」という用語は、ベクターがバックグラウンド組織及び他の潜在的な標的に比べて標的に対する実質的に高い親和性を有することを意味する。ベクターは、高い親和性（０〜５０ｎＭの範囲内のＫｉ値、好ましくはサブｎＭ（即ち、１．０ｎＭ未満）のＫｉ値）をもって標的に結合できる。
【００２２】
Ｈｅｒ２、ｃＭｅｔ、グアニリルシクラーゼＣ及びＩＧＦ１Ｒという用語は、これらの通常の意味を有する。さらに詳しい説明は以下の通りである。
【００２３】
Ｈｅｒ２はｅｒｂＢ−２としても知られている。Ｈｅｒ２は、上皮増殖因子レセプター系の一員である。それは１８５ｋＤａの細胞膜表面結合レセプターチロシンキナーゼであり、細胞増殖及び分化に関連するシグナルトランスダクション経路に関与している。
【００２４】
ｃＭｅｔレセプターは、肝細胞増殖因子／散乱因子（ＨＧＦ／ＳＦ）に対する高親和性レセプターであって、主として間葉細胞によって生産され、主にｃＭｅｔ発現上皮細胞に対して内分泌的及び／又は傍分泌的に作用するジスルフィド結合ヘテロ二量体分子である。
【００２５】
グアニリルシクラーゼＣ（ＧＣＣ）は、下部胃腸管の表皮細胞における流体分泌を制御する役割をもったグアニリルシクラーゼレセプターの一員である。それは、ＧＵＣＹ２Ｃ遺伝子（１２ｐ１２）によってエンコードされた１２３ｋＤａの刷子縁膜タンパク質であり、細胞外リガンド結合ドメイン、単一の膜貫通スパニング領域及び細胞質ドメインからなっている。
【００２６】
インスリン様増殖因子レセプター（ＩＧＦ−１Ｒ、遺伝子位置１５ｑ２５）は、細胞生存、増殖並びに細胞−細胞接着の調節において重要な役割をもった１５５ｋＤａの膜貫通ヘテロ四量体である。それは２つの細胞外αサブユニット及び２つの膜貫通βサブユニットからなっている。αサブユニットはＩＧＦ−１に対する結合ドメインを含む一方、βサブユニットの細胞内部分は自己リン酸化及びシグナリング開始のためのチロシンキナーゼを含んでいる。ＩＧＦ１−Ｒはインスリンレセプターに対して６０％の配列相同性を有している。同様に、その主リガンドであるＩＧＦ−１はインスリンに対して５０％の相同性を有するが、下流のシグナリング経路は共通でない。
【００２７】
インビボイメージングのために適する放射性同位体は金属又は非金属であってよく、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージング用の陽電子放射体又は単光子放出コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）用のγ線放射体である。イメージング成分が放射性金属イオン（即ち、放射性金属（ｒａｄｉｏｍｅｔａｌ））である場合、好適な放射性金属は、64Ｃｕ、48Ｖ、52Ｆｅ、55Ｃｏ、94mＴｃ又は68Ｇａのような（ＰＥＴイメージング用の）陽電子放射体、或いは99mＴｃ、111Ｉｎ、113mＩｎ又は67Ｇａのような（ＳＰＥＣＴイメージング用の）γ線放射体であり得る。好ましい放射性金属は、99mＴｃ、64Ｃｕ、68Ｇａ及び111Ｉｎである。最も好ましい放射性金属はγ線放射体、特に99mＴｃである。イメージング成分が（ＳＰＥＣＴイメージング用の）γ線を放出する放射性ハロゲンである場合、放射性ハロゲンは好適には123Ｉ、131Ｉ及び77Ｂｒから選択される。好ましいγ線放出放射性ハロゲンは123Ｉである。イメージング成分が陽電子を放出する放射性非金属である場合、好適なかかる陽電子放射体は11Ｃ、13Ｎ、15Ｏ、17Ｆ、18Ｆ、75Ｂｒ、76Ｂｒ及び124Ｉを包含する。好ましい陽電子放出放射性非金属は11Ｃ、13Ｎ、18Ｆ及び124Ｉであり、特に11Ｃ及び18Ｆが好ましく、18Ｆが最も好ましい。
【００２８】
患者から採取した生検試料のインビトロイメージングのために適する好適な放射性同位体は当技術分野で公知であり、125Ｉ、3Ｈ及び14Ｃを包含する。
【００２９】
イメージング成分が光学レポーターである場合、レポーターは光学イメージング操作で直接又は間接に検出できる任意の成分である。レポーターは、光散乱剤（例えば、着色又は無着色粒子）、吸光剤又は発光剤であり得る。さらに好ましくは、レポーターは発色団又は蛍光化合物のような色素である。色素は、紫外域乃至近赤外域の波長をもった電磁スペクトル中の光と相互作用する任意の色素であり得る。最も好ましくは、レポーターは蛍光性を有する。
【００３０】
好ましい有機発色性及び発蛍光性レポーターには、広範な非局在化電子系を有する群、例えばシアニン類、メロシアニン類、インドシアニン類、フタロシアニン類、ナフタロシアニン類、トリフェニルメチン類、ポルフィリン類、ピリリウム色素、チアピリリウム色素、スクアリリウム色素、クロコニウム色素、アズレニウム色素、インドアニリン類、ベンゾフェノキサジニウム色素、ベンゾチアフェノチアジニウム色素、アントラキノン類、ナフトキノン類、インダスレン類、フタロイルアクリドン類、トリスフェノキノン類、アゾ色素、分子内及び分子間電荷移動色素及び色素錯体、トロポン類、テトラジン類、ビス（ジチオレン）錯体、ビス（ベンゼン−ジチオレート）錯体、ヨードアニリン色素、ビス（Ｓ，Ｏ−ジチオレン）錯体がある。緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及び異なる吸収／発光特性を有するＧＦＰの変種のような蛍光タンパク質も有用である。特定の状況においてはある種の希土類金属（例えば、ユウロピウム、サマリウム、テルビウム又はジスプロシウム）の錯体が使用され、蛍光ナノ結晶（量子ドット）についても同様である。
【００３１】
使用できる発色団の具体例には、フルオレセイン、スルホローダミン１０１（Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ）、ローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、ローダミン１９、インドシアニングリーン、シアニン色素であるＣｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、Ｍａｒｉｎａ  Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ  ８８、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ  ５１４、テトラメチルローダミン、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ３５０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４３０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５３２、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５４６、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５６８、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５９４、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６３３、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６６０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６８０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ７００及びＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ７５０がある。
【００３２】
特に好ましいのは、４００ｎｍ乃至３μｍ、特に６００〜１３００ｎｍの範囲内の可視乃至近赤外領域内に吸収極大を有する色素である。光学イメージングモダリティー及び測定技法には、特に限定されないが、ルミネセンスイメージング、内視鏡検査、蛍光内視鏡検査、光学コヒーレンス断層撮影、透過率イメージング、時間分解透過率イメージング、共焦点イメージング、非線形顕微鏡検査、光音響イメージング、音響光学イメージング、スペクトル分析、反射スペクトル分析、干渉分析、コヒーレンス干渉分析、拡散光学断層撮影及び蛍光媒介拡散光学断層撮影（連続波、時間ドメイン及び周波数ドメインシステム）、並びに光の散乱、吸光、偏光、ルミネセンス、蛍光寿命、量子収量及び消光の測定がある。
【００３３】
段階（ｉｖ）及び段階（ｖ）に関しては、バックグラウンドに対する取込みの増加は段階（ｉ）のタンパク質マーカー（ａ）〜（ｄ）の存在を表している。健常なバックグラウンド食道組織（扁平上皮）は、ゼロレベル又は低レベルのかかるマーカーしか示さないからである。これは、段階（ｉｖ）のターゲティング療法が価値を有し得ることを表している。
【００３４】
Ｈｅｒ２結合のために適するベクターには、抗体Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社）及びＰｅｒｔｕｚｕｍａｂ（Ｏｍｎｉｔａｒｇ（商標），Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社）がある。これらは、Ｐａｌ  ｅｔ  ａｌ［Ｒｅｖ．Ｅｎｄｏｃｒ．Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｏｒｄ．，８，２６９−２７７（２００７）］によって総説されている。Ｈｅｒ２に対して特異的な親和性を有するアフィボディも記載されている。例えば、Ｎｉｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ［Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．Ｄｅｖ．，１０，１６７−１７５（２００７）］を参照されたい。
【００３５】
ｃＭｅｔ結合のために適するベクターには、下記のアミノ酸配列（配列番号１）を含む１７〜３０のアミノ酸の環状ペプチドがある。
Ｃｙｓa−Ｘ1−Ｃｙｓc−Ｘ2−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ3−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−
Ｃｙｓd−Ｔｒｐ−Ｃｙｓb−Ｔｙｒ−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6
式中、
Ｘ1はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、
Ｘ2はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
Ｘ3はＴｈｒ又はＡｒｇであり、
Ｘ4はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、
Ｘ5はＳｅｒ又はＴｈｒであり、
Ｘ6はＡｓｐ又はＧｌｕであり、
Ｃｙｓa-dの各々はシステイン残基であって、残基ａ及びｂ並びに残基ｃ及びｄは環化して２つの独立したジスルフィド結合を形成している。
【００３６】
好ましいかかるペプチドは、下記配列番号２及び配列番号３のものである。
（配列番号２）Ｓｅｒ−Ｃｙｓa−Ｘ1−Ｃｙｓc−Ｘ2−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ3−
Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓd−Ｔｒｐ−Ｃｙｓb−Ｔｙｒ−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6
（配列番号３）Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓa−Ｘ1−Ｃｙｓc−Ｘ2−Ｇｌｙ−
Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ3−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓd−Ｔｒｐ−Ｃｙｓb−Ｔｙｒ−Ｘ4−
Ｘ5−Ｘ6−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ
特に好ましいかかるペプチドは、Ａｒｇに等しいＸ3を有している。最も好ましいｃＭｅｔターゲティングペプチドは下記のものである。
Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓa−Ｔｙｒ−Ｃｙｓc−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−
Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓd−Ｔｒｐ−Ｃｙｓb−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−
Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ
グアニリルシクラーゼＣターゲティングのために適するベクターは当技術分野で公知であり、通例は大腸菌の耐熱性エンテロトキシン（ＳＴペプチド）のペプチド類似体に基づいている。ＩＧＦ１Ｒターゲティングのために適するベクターは、Ｃｌｅｍｍｏｎｓ［Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．，６，８２１−８３３（２００６）］によって記載されている。
【００３７】
段階（ｉｖ）では、適切なターゲティング療法は、それぞれＨｅｒ２、ｃＭｅｔ、グアニリルシクラーゼＣ又はＩＧＦ１Ｒに対して上流又は下流効果を有することが知られている任意のものである。可能なかかる療法は細胞傷害剤による化学療法であって、好適なかかる細胞傷害剤には、５−フルオロウラシル、シスプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシン、ドキソルビシン、メトトレキセート、トポテカン、パクリタキセル、ビノレルビン及びドセタキセルがある。かかる細胞傷害剤は、シスプラチン／５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カルボプラチン／パクリタキセル又はシスプラチン／イリノテカンのように組み合わせて使用することもできる。細胞傷害剤はまた、下記の特異的療法と併用することも可能であろう。
【００３８】
Ｈｅｒ２を標的とするイメージング剤が異常な取込みを見出した場合、段階（ｉｖ）（ａ）のための好ましい療法には、証明された効力を有する一般に認められたＨｅｒ２ターゲティング薬物であるＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）（トラスツズマブ）による治療がある［ＵＫ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ；Ｂｏｈｍｅ“Ａｎｔｉ−ＨＥＲ２  ｔｈｅｒａｐｙ：Ｈｏｗ  ｔｏ  ｕｓｅ  Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｒａｃｔｉｃｅ”．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．Ｎｕｒｓｉｎｇ，４，３０−３６（２０００）］。
【００３９】
ｃＭｅｔを標的とするイメージング剤が異常な取込みを見出した場合、段階（ｉｖ）（ｂ）のための好ましい療法は公知であり、Ｗａｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ［Ｎｅｏｐｌａｓｉａ，８，９４９−９５５（２００６）］によって記載されているような小分子阻害剤ＰＨＡ６６５７５２による治療を含んでいる。
【００４０】
ＧＣＣを標的とするイメージング剤が異常な取込みを見出した場合、段階（ｉｖ）（ｃ）のための好ましい療法には、ＧＣＣに関連して結腸癌のマーカーとして既に開発されたものがある。即ち、例えばＷａｌｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌは、ＳＴペプチド及び熱切除に基づくＧＣＣターゲティング療法を記載している［“Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ  ｆｏｒ  ｎｅａｒ−ｉｎｆｒａｒｅｄ  ｔｈｅｒｍａｌ  ａｂｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ  ｂｙ  ｇｕａｎｙｌｙｌ  ｃｙｃｌａｓｅ  Ｃ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｇｏｌｄ  ｎａｎｏｓｈｅｌｌｓ”Ｆｕｔｕｒｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２，７０５−７１６（２００６）］。熱切除はバレット患者に対する可能な治療法として広く論じられており、したがってその場合には実行可能な療法選択肢にもなると考えられる。
【００４１】
ＩＧＦ１Ｒを標的とするイメージング剤が異常な取込みを見出した場合、段階（ｉｖ）（ｄ）のための好ましい療法には、癌療法においてＩＧＦ１Ｒを標的とする公知の治療法がある。これらは、Ｔａｏ  ｅｔ  ａｌ［“Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  １  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐａｔｈｗａｙ  −  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ”Ｎａｔ．Ｃｌｉｎ．Ｐｒａｃｔ．Ｏｎｃｏｌ．４，５９１−６０２（２００７）］；Ｓｈａｏ  ｅｔ  ａｌ［“Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ＩＧＦ１Ｒａ  ｎｄ  ＨＥＲ２  ｓｕｒｆａｃｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｕｓｉｎｇ  ｓｉｎｇｌｅ  ｗａｌｌ  ｃａｒｂｏｎ  ｎａｎｏｔｕｂｅｓ”Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１８，３１５１０１（２００７）］；Ｍａｒｔｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ［“Ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  Ｉ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｂｙ  ＡＤＷ７４２，ａｌｏｎｅ  ｏｒ  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｉｍａｔｉｎｉｂ，ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ，ｏｒ  ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ，ｉｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｉｎ  Ｅｗｉｎｇ  ｔｕｍｏｒ”Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１２，３５３２−３５４０（２００６）］；Ｂｏｈｕｌａ  ｅｔ  ａｌ［“Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｔｙｐｅ  １  ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓ  ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ”Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ  １４，６６９−６８２（２００３）］によって記載されている。キナーゼ阻害剤又はモノクローナル抗体を使用する追加の癌治療アプローチは、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ［Ｒｅｃ．Ｒｅｓｕｌｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１７２，５９−７６（２００７）］によって記載されている。
【００４２】
段階（ｉｖ）のターゲティング療法は、当技術分野で公知の通り、静脈内投与、経口投与又は局所適用（例えば、食道への噴霧）のような通常の患者投与経路によって送達できる。食道への一層効率的な送達のために薬物を製剤化する方法は当技術分野で公知であり［Ｂａｔｃｈｅｌｏｒ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．，２２（２），１７５−１８１（２００５］及びＣｏｌｌａｕｄ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．，１２３，２０３−２１０（２００７）］、したがって本発明の段階（ｉｖ）の療法を任意にはかかる製剤によって送達することができる。
【００４３】
段階（ｉ）のイメージング剤は、当技術分野で公知の通り、静脈内投与又は経口投与のような通常の患者投与経路によって送達できる。イメージング成分が放射性同位体である場合、イメージング剤は好ましくは静脈内経路によって投与される。そのようにすれば、患者及び施術者が受ける放射線量を一層綿密に制御できるからである。イメージング成分が光学レポーターである場合、静脈内又は経口投与経路が使用できる。上述の通り、食道への一層効率的な経口送達のために薬物を製剤化して一層長い局所食道接触時間を得る方法は当技術分野で公知であり、したがって本発明の段階（ｉ）の光学イメージング剤を任意にはかかる製剤によって送達することができる。
【００４４】
段階（ｖ）の「異なる療法」は、個々の患者にとって新しい治療又は治療コース（即ち、患者が以前に受けたことのない治療）である。「異なる療法」は、段階（ｉｖ）の残りのターゲティング療法選択肢（ａ）〜（ｄ）のうち、段階（ｖ）で不適当であると判定されなかったものから選択できる。これは手術及び緩和ケアを含み得る。
【００４５】
好ましい態様
第１の態様の方法は、好ましくはインビボイメージングを用いて、したがってインビボイメージングに適したレポーターを用いて実施される。段階（ｉ）のタンパク質マーカーは、好ましくはＨｅｒ２及びｃＭｅｔから選択され、最も好ましくはＨｅｒ２である。マーカーがＨｅｒ２である場合、好ましい療法はＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）である。段階（ｉｉｉ）の異常な取込みは、好ましくは上昇した取込みである。それは組織バックグラウンドに比べてイメージング剤の高い取込み量を与え、したがって「ホットスポット」による検出を容易にすると期待されるからである。
【００４６】
イメージング部分は、インビトロ及びインビボイメージングアプローチの両方に関して好ましくは光学レポーターであり、さらに好ましくは蛍光近赤外色素である。光学レポーターは、好ましくは生体適合性でもある（即ち、インビボ光学イメージングのために適している）。「生体適合性」という用語は、無毒性であり、したがって副作用或いは投与時の苦痛又は不快感なしに哺乳動物体（特に人体）に投与するのに適していることを意味する。かかるＮＩＲ色素は、好適には赤色乃至近赤外波長６００〜１２００ｎｍに吸収極大を有している。ＮＩＲ色素は、好ましくはシアニン色素である。
【００４７】
ＮＩＲ色素は、好ましくはシアニン色素又はベンゾピリリウム色素である。発蛍光団である好ましいシアニン色素は、下記式Ｉのものである。
【００４８】
【化１】
2011513211.tif 000004
【００４９】
式中、
各Ｘ’は独立に−Ｃ(ＣＨ3)2、−Ｓ−、−Ｏ−及び−Ｃ[(ＣＨ2)aＣＨ3][(ＣＨ2)bＭ]−（式中、ａは０〜５の値を有する整数であり、ｂは１〜５の値を有する整数であり、ＭはＧ基であるか、或いはＳＯ3Ｍ1及びＨから選択される。）から選択され、
各Ｙ’は独立にＨ、−ＣＨ2ＮＨ2、−ＳＯ3Ｍ1、−ＣＨ2ＣＯＯＭ1、−ＮＣＳ、Ｆ及びＧ基からなる群から選択される１〜４の基を表し、Ｙ’基は芳香環の任意の位置に配置されており、
Ｑ’は独立にＨ、ＳＯ3Ｍ1、ＮＨ2、ＣＯＯＭ1、アンモニウム、エステル基、ベンジル及びＧ基からなる群から選択され、
Ｍ1はＨ又はＢc（ここに、Ｂｃは生体適合性陽イオンである。）であり、
ｌは１〜３の整数であり、
ｍは１〜５の整数であり、
Ｘ’、Ｙ’及びＱ’の少なくとも１つはＧ基からなり、
Ｇは共有結合を介して色素をベクターに結合するために適した反応基又は官能基である。
【００５０】
「生体適合性陽イオン」（Ｂc）という用語は、イオン化して負に帯電した基と共に塩を形成する正に帯電した対イオンを意味する。この場合、前記正に帯電した対イオンも無毒性であり、したがって哺乳動物体（特に人体）への投与に適している。好適な生体適合性陽イオンの例には、アルカリ金属であるナトリウム及びカリウム、アルカリ土類金属であるカルシウム及びマグネシウム、並びにアンモニウムイオンがある。好ましい生体適合性陽イオンはナトリウム及びカリウムであり、最も好ましくはナトリウムである。
【００５１】
Ｇ基はベクターの相補的な基と反応して、シアニン色素発蛍光団とベクターとの間に共有結合を形成する。Ｇはペプチドの相補的な官能基と反応し得る反応基であってもよいし、或いは別法としてベクターの反応基と反応し得る官能基を含んでいてもよい。反応基及び官能基の例には、活性エステル、イソチオシアネート、マレイミド、ハロアセトアミド、酸ハライド、ヒドラジド、ビニルスルホン、ジクロロトリアジン、ホスホラミダイト、ヒドロキシル、アミノ、スルフヒドリル、カルボニル、カルボン酸及びチオホスフェートがある。好ましくは、Ｇは活性エステルである。
【００５２】
「活性化エステル」又は「活性エステル」という用語は、良好な脱離基であり、したがってアミンのような求核性化合物との一層容易な反応を可能にするように設計された関連カルボン酸のエステル誘導体を意味する。好適な活性エステルの例は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、スルホスクシンイミジルエステル、ペンタフルオロフェノール、ペンタフルオロチオフェノール、ｐ−ニトロフェノール、ヒドロキシベンゾトリアゾール及びＰｙＢＯＰ（即ち、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）である。好ましい活性エステルは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド又はペンタフルオロフェノールエステル、特にＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルである。
【００５３】
さらに好ましいシアニン色素は、下記式Ｉａのものである。
【００５４】
【化２】
2011513211.tif 000005
【００５５】
式中、
Ｙ1及びＹ2は独立に−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ6−又は−ＣＲ7Ｒ8−であり、Ｙ1及びＹ2の少なくとも一方が−ＣＲ7Ｒ8−であるように選択され、
Ｒ1及びＲ2は独立にＨ、−ＳＯ3Ｍ1又はＲaであり、
Ｒ3はＨ、Ｃ1-5アルキル、Ｃ1-6カルボキシアルキル又はＲa基であり、
Ｒ4〜Ｒ6は独立にＣ1-5アルキル、Ｃ1-6カルボキシアルキル又はＲaであり、
Ｒ7はＨ又はＣ1-3アルキルであり、
Ｒ8はＲa又はＣ1-6カルボキシアルキルであり、
Ｒaは独立にＣ1-4スルホアルキルであり、
Ｍ1は式Ｉで定義した通りであり、
式Ｉａのシアニン色素は１以上のＲa基並びにＲ1、Ｒ2及びＲa基に由来する全部で１〜６のスルホン酸置換基を有することを条件とする。
【００５６】
「スルホン酸置換基」という用語は、式−ＳＯ3Ｍ1（式中、Ｍ1は上記に定義した通りである。）の置換基を意味する。式Ｉａの好ましい色素は、３〜６のスルホン酸置換基を有している。−ＳＯ3Ｍ1置換基は炭素原子に共有結合しており、炭素原子はアリール（即ち、Ｒ1又はＲ2基）又はアルキル（即ち、Ｒa基）であり得る。式Ｉａ中では、Ｒa基は好ましくは式−(ＣＨ2)kＳＯ3Ｍ1を有する。式中、Ｍ1は上記に定義した通りであり、ｋは１〜４の値を有する整数である。ｋは好ましくは３又は４である。
【００５７】
特に好ましいシアニン色素は、下記式Ｉｂのものである。
【００５８】
【化３】
2011513211.tif 000006
【００５９】
式中、
Ｒ9及びＲ10は独立にＨ又はＳＯ3Ｍ1であって、Ｒ9及びＲ10の少なくとも一方はＳＯ3Ｍ1であり、
Ｒ11及びＲ12は独立にＣ1-4アルキル又はＣ1-6カルボキシアルキルであり、
Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15及びＲ16は独立にＲb基（式中、ＲbはＣ1-4アルキル、Ｃ1-6カルボキシアルキル又は−(ＣＨ2)qＳＯ3Ｍ1であり、ｑは３又は４の値を有する整数である。）であり、
Ｍ1は式Ｉ及び式Ｉａに関して定義した通りであり、
シアニン色素はＲ9、Ｒ10及びＲb基に全部で１〜４のＳＯ3Ｍ1置換基を有することを条件とする。
【００６０】
式Ｉｂの好ましいシアニン色素は、ベクターへのコンジュゲーションを容易にするため、１以上のＣ1-6カルボキシアルキル基が存在するように選択される。
【００６１】
式Ｉｂの好ましい個別シアニン色素を表１にまとめて示す。
【００６２】
【表３】
2011513211.tif 000007
【００６３】
特に好ましいシアニン色素は、下記式Ｉｂのものである。
【００６４】
【化４】
2011513211.tif 000008
【００６５】
式中、
Ｒcは独立にＲa基又はＣ1-6カルボキシアルキルであり、
Ｒ17〜Ｒ20は独立にＣ1-5アルキル又はＲc基であり、Ｒ17＝Ｒ18＝Ｒc又はＲ19＝Ｒ20＝Ｒd（式中、ＲdはＣ1-2アルキルである。）であるように選択され、
Ｒa及びＭ1は式Ｉに関して上記に定義した通りである。
【００６６】
式Ｉｂ及び式Ｉｃの特に好ましいシアニン色素はＣｙ５**及びＡｌｅｘａ６４７であり、Ｃｙ５**が理想的である。
【００６７】
「ベンゾピリリウム色素」という用語は、その通常の意味を有する。本発明の好適なベンゾピリリウム色素はＢｚｐMで表され、下記式ＩＩを有する。
【００６８】
【化５】
2011513211.tif 000009
【００６９】
式中、
Ｙ1は下記式Ｙa又は式Ｙbの基であり、
【００７０】
【化６】
2011513211.tif 000010
【００７１】
Ｒ21〜Ｒ24及びＲ29〜Ｒ33は独立にＨ、−ＳＯ3Ｍ1、Ｈａｌ、Ｒg及びＣ3-12アリールから選択され、
Ｒ25はＨ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-6カルボキシアルキル、Ｃ3-12アリールスルホニル又はＣｌであり、或いはＲ25は任意にはＲ26、Ｒ34、Ｒ35又はＲ36の１つと共に五員又は六員の不飽和脂肪族環、不飽和ヘテロ脂肪族環又は芳香環を形成でき、
Ｒ26及びＲ36は独立にＲg基であり、
Ｒ27及びＲ28は独立にＣ1-4アルキル、Ｃ1-4スルホアルキル又はＣ1-6ヒドロキシアルキルであり、或いは任意にはＲ29及び／又はＲ30の一方又は両方と共に五員又は六員のＮ含有複素環又はヘテロアリール環を形成でき、
Ｘは−ＣＲ34Ｒ35−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓｅ−、−ＮＲ36−又は−ＣＨ＝ＣＨ−（式中、Ｒ34〜Ｒ36は独立にＲg基である。）であり、
ＲgはＣ1-4アルキル、Ｃ1-4スルホアルキル、Ｃ1-6カルボキシアルキル又はＣ1-6ヒドロキシアルキルであり、
ｗは１又は２であり、
Ｊは生体適合性陰イオンであり、
Ｍ1は式Ｉに関して定義した通りであり、
ＢｚｐMはＲ21〜Ｒ36基から選択される１以上のスルホン酸置換基を含むことを条件とする。
【００７２】
「生体適合性陰イオン」（Ｊ）という用語は、イオン化して正に帯電した基（この場合にはインドリニウム基）と共に塩を形成する負に帯電した対イオンを意味する。この場合、前記負に帯電した対イオンも無毒性であり、したがって哺乳動物体（特に人体）への投与に適している。対イオン（Ｊ-）は、モル相当量で存在することでＢｚｐM色素上の正電荷をバランスさせる陰イオンを表す。電荷をバランスさせる量が存在する限り、陰イオン（Ｊ）は好適には単一又は複数の電荷を有する。陰イオンは好適には無機酸又は有機酸から導かれる。好適な陰イオンの例には、塩化物イオン又は臭化物イオンのようなハロゲン化物イオン、硫酸イオン、硝酸イオン、クエン酸イオン、酢酸イオン、リン酸イオン及びホウ酸イオンがある。好ましい陰イオンは塩化物イオンである。
【００７３】
式ＩＩのベンゾピリリウム色素（ＢｚｐM）は、緑色ないし近赤外波長（５００〜１２００ｎｍ、好ましくは５５０〜１０００ｎｍ、さらに好ましくは６００〜８００ｎｍ）の光を用いる光学イメージング方法で直接又は間接に検出できる蛍光色素又は発色団である。好ましくは、ＢｚｐMは蛍光性を有する。
【００７４】
本発明の好適なイメージング剤は、ＢｚｐMが下記式ＩＩａ又は式ＩＩｂを有するものである。
【００７５】
【化７】
2011513211.tif 000011
【００７６】
式中、Ｘ、ｗ、Ｊ及びＲ21〜Ｒ33は式ＩＩに関して定義した通りである。
【００７７】
Ｒ25がＲ26／Ｒ34〜Ｒ36の１つと共に五員又は六員の不飽和脂肪族環、不飽和ヘテロ脂肪族環又は芳香環を形成する場合、好適なかかる芳香環には、フェニル、フラン、チアゾール、ピリジル、ピロール及びピラゾール環がある。好適な不飽和環は、少なくともＲ25が結合したＣ＝Ｃを含んでいる。
【００７８】
Ｒ27及び／又はＲ28がＲ29及び／又はＲ30の一方又は両方と共に五員又は六員のＮ含有複素環又はヘテロアリール環を形成する場合、好適なかかる環には、チアゾール、ピリジル、ピロール及びピラゾール環並びにこれらの部分水素化変種がある。好ましくは、ピリジル又はジヒドロピリジルである。
【００７９】
ベンゾピリリウム色素の好ましい特徴
ベクターは、好ましくは式ＩＩのＢｚｐMのＲ25、Ｒ26、Ｒ34、Ｒ35又はＲ36の位置、さらに好ましくはＲ26、Ｒ34、Ｒ35又はＲ36の位置、最も好ましくはＲ26、Ｒ34又はＲ35の位置に結合している。結合を容易にするため、関連するＲ25、Ｒ26、Ｒ34、Ｒ35又はＲ36置換基は好ましくはＣ1-6カルボキシアルキル、さらに好ましくはＣ3-6カルボキシアルキルである。
【００８０】
ベンゾピリリウム色素（ＢｚｐM）は、好ましくは２以上のスルホン酸置換基、さらに好ましくは２〜６のスルホン酸置換基、最も好ましくは２〜４のスルホン酸置換基を有する。好ましくは、スルホン酸置換基の少なくとも１つはＣ1-4スルホアルキル基である。かかるスルホアルキル基は、好ましくは式ＩＩのＲ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ34、Ｒ35又はＲ36の位置にあり、さらに好ましくはＲ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ34又はＲ35の位置にあり、最も好ましくはＲ27及びＲ28の一方又は両方と共にＲ26の位置にある。式ＩＩのスルホアルキル基は、好ましくは式−(ＣＨ2)kＳＯ3Ｍ1（式中、Ｍ1はＨ又はＢcであり、ｋは１〜４の値を有する整数であり、Ｂcは（上記に定義したような）生体適合性陽イオンである。）を有する。ｋは好ましくは３又は４である。
【００８１】
式ＩＩ中、ｗは好ましくは１である。Ｒ25は好ましくはＨ又はＣ1-4カルボキシアルキルであり、最も好ましくはＨである。Ｘは好ましくは−ＣＲ34Ｒ35−又は−ＮＲ36−であり、最も好ましくは−ＣＲ34Ｒ35−である。
【００８２】
好ましいＢｚｐM色素は下記式ＩＩＩを有する。
【００８３】
【化８】
2011513211.tif 000012
【００８４】
式中、Ｙ1、Ｒ21〜Ｒ24、Ｒ26、Ｒ34、Ｒ35及びＪは式ＩＩに関して定義した通りである。
【００８５】
式ＩＩＩの好適な色素は、下記式ＩＩＩａ又は式ＩＩＩｂを有する。
【００８６】
【化９】
2011513211.tif 000013
【００８７】
式ＩＩＩ、式ＩＩＩａ及び式ＩＩＩｂの好ましいＲ21〜Ｒ24及びＲ26〜Ｒ33基は、式ＩＩａ及び式ＩＩｂに関して上記に定義した通りである。式ＩＩＩ、式ＩＩＩａ及び式ＩＩＩｂ中、Ｒ34及びＲ35は好ましくは一方がＲj基でありかつ他方がＲk基であるように選択される。ＲjはＣ1-2アルキル、最も好ましくはメチルである。ＲkはＣ1-4アルキル、Ｃ1-6カルボキシアルキル又はＣ1-4スルホアルキル、好ましくはＣ3-6カルボキシアルキル又は−(ＣＨ2)kＳＯ3Ｍ1（式中、ｋは３又は４であるように選択される。）である。
【００８８】
好ましくは、式ＩＩＩの色素は、ベクターへの容易な共有結合を可能にするためにＣ1-6カルボキシアルキル置換基を有する。
【００８９】
式ＩＩ又は式ＩＩＩ中、Ｒ27及び／又はＲ28がＲ29及び／又はＲ30の一方又は両方と共に五員又は六員のＮ含有複素環又はヘテロアリール環を形成する場合、好ましいかかる環はピリジル又はジヒドロピリジルである。Ｒ28基がＲ30と共に環化された好ましいかかるＹ1基は、下記式Ｙcを有する。
【００９０】
【化１０】
2011513211.tif 000014
【００９１】
Ｒ27及びＲ28基の両方が環化された好ましいかかるＹ1基は、下記式Ｙdを有する。
【００９２】
【化１１】
2011513211.tif 000015
【００９３】
式中、Ｒ27、Ｒ29及びＲ31〜Ｒ33は上記に定義した通りであり、各Ｘ1は独立にＨ又はＣ1-4アルキルである。
【００９４】
式Ｙc中、好ましくは下記の通りである。
各Ｘ1はＣＨ3であり、
Ｒ9＝Ｒ31＝Ｈであり、
Ｒ32はＨであり、
Ｒ32はＣＨ3又は−Ｃ(ＣＨ3)3、さらに好ましくは−Ｃ(ＣＨ3)3である。
【００９５】
式Ｙd中、好ましくは下記の通りである。
Ｒ29はＨであり、
Ｒ32はＨであり、
Ｒ33は好ましくはＣＨ3又は−Ｃ(ＣＨ3)3、さらに好ましくは−Ｃ(ＣＨ3)3である。
【００９６】
式ＩＩの−ＮＲ27Ｒ28基は下記のいずれかであることが好ましい。
（ｉ）この基は開鎖形態にある。即ち、Ｒ27／Ｒ28基はＲ29／Ｒ30の一方又は両方と共に環化されていない。好ましいかかるＲ27及びＲ28基は、Ｃ1-4アルキル及びＣ1-4スルホアルキルから独立に選択され、最も好ましくはエチル及びＣ3-4スルホアルキルから独立に選択される。
（ｉｉ）この基は環化されて、式Ｙc又は式Ｙd、さらに好ましくは式Ｙcの環状Ｙ1置換基を生じる。
開鎖形態（ｉ）が最も好ましい。
【００９７】
式ＩＩＩの特に好ましい色素は、下記式ＩＩＩｃ、式ＩＩＩｄ又は式ＩＩＩｅを有する。
【００９８】
【化１２】
2011513211.tif 000016
【００９９】
式中、
Ｍ1及びＪは上記に定義した通りであり、
Ｒ37及びＲ38は独立にＣ1-4アルキル及びＣ1-4スルホアルキルから選択され、
Ｒ39はＨ又はＣ1-4アルキルであり、
Ｒ40はＣ1-4アルキル、Ｃ1-4スルホアルキル又はＣ1-6カルボキシアルキルであり、
Ｒ41はＣ1-4スルホアルキル又はＣ1-6カルボキシアルキルであり、
Ｒ42はＣ1-4アルキル、Ｃ1-4スルホアルキル又はＣ1-6カルボキシアルキルであり、
Ｘ2，Ｘ3及びＸ4は独立にＨ又はＣ1-4アルキルである。
式ＩＩＩｄ、式ＩＩＩｅ及び式ＩＩＩｆの色素は、好ましくはＲ40〜Ｒ42の１以上がＣ1-4スルホアルキルであるように選択される。
【０１００】
式ＩＩＩｄの好ましい特定の色素は、次式のＤＹ−６３１及びＤＹ−６３３である。
【０１０１】
【化１３】
2011513211.tif 000017
【０１０２】
式ＩＩＩｅの好ましい特定の色素は、次式のＤＹ−６５２である。
【０１０３】
【化１４】
2011513211.tif 000018
【０１０４】
好ましい特定のベンゾピリリウム色素はＤＹ−６３１及びＤＹ−６５２であり、ＤＹ−６５２が最も好ましい。
【０１０５】
第１の態様の方法は、患者がバレット食道における異形成に罹患していると予め診断された場合、特に（癌を発生するリスクが高く、現行のガイドライン下では罹患組織の完全除去が指示される）高グレード異形成患者に対して特に有用であると予想される。段階（ｖ）の異なる療法は、好ましくはプロトンポンプ阻害剤による化学療法、内視鏡粘膜切除及び外科的切除から選択される。
【０１０６】
本方法はまた、患者が患者が第一選択療法に対して既に応答しなくなっている場合（即ち、「非応答者」である場合）に特に有用である。このような応答の欠如は、通例は追跡内視鏡検査によって判定される（図表１参照）。その場合、第一選択療法は通例は抗逆流投薬、内視鏡粘膜切除及び外科的切除の１以上であり、したがって本方法は最も適切な第二選択療法を見つけることに向けられる。
【０１０７】
段階（ｉ）のイメージング剤は、好ましくは医薬組成物として提供される。かかる組成物は、イメージング剤を哺乳動物への投与に適した形態で生体適合性キャリヤーと共に含んでいる。「生体適合性キャリヤー」とは、組成物が生理学的に許容され得るようにして（即ち、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにして）イメージング剤を懸濁又は溶解できる流体（特に液体）である。生体適合性キャリヤーは、好適には、無菌のパイロジェンフリー注射用水、（有利には注射用の最終生成物が等張性になるように平衡させ得る）食塩水のような水溶液、或いは１種以上の張度調整物質（例えば、生体適合性対イオンを有する血漿陽イオンの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。好ましくは、生体適合性キャリヤーはパイロジェンフリー注射用水又は等張食塩水である。
【０１０８】
イメージング剤及び生体適合性キャリヤーは無菌健全性及び／又は放射能安全性の維持並びに適宜不活性ヘッドスペースガス（例えば、窒素又はアルゴン）を維持することができ、しかもそれぞれ、注射器又はカニューレで溶液の追加及び吸引もできる密封容器からなる適当なバイアル又は容器に入れた状態で供給される。好ましいかかる容器は、セプタムシールバイアルであり、気密蓋をオーバーシール（通例アルミニウム製）でクリンプしたものである。蓋は、無菌健全性を維持したまま皮下注射針で一回又は複数回穿刺するのに適したもの（例えばクリンプオン式セプタムシール蓋）である。かかる容器は、適宜、例えば、ヘッドスペースガスの交換又は溶液の脱気などのため、蓋が真空に耐えることができ、しかも酸素又は水蒸気のような外部大気ガスを侵入させずに減圧のような圧力変化にも耐えることができるという追加の利点も有する。
好ましい多用量用容器は、複数回分の患者用量を収容した単一バルクバイアル（例えば容積１０〜３０ｃｍ3のもの）からなり、臨床症状に応じて製剤の有効期間中様々な時間間隔で１回分の用量を臨床グレードのシリンジに吸引することができる。プレフィルドシリンジは１回分の患者用量つまり「単位用量」を収容するように設計され、そのため好ましくは使い捨てその他臨床用に適したシリンジである。本発明の医薬組成物は、好ましくは１人の患者用に適した用量を有し、上述したような適当な注射器又は容器に入れて供給される。
【０１０９】
かかる医薬組成物は、抗菌防腐剤、ｐＨ調整剤、フィラー、安定剤又は重量オスモル濃度調整剤のような追加賦形剤を任意に含むことができる。「抗菌防腐剤」という用語は、潜在的に有害な微生物（例えば、細菌、酵母又はかび）の増殖を阻止する薬剤を意味する。抗菌防腐剤はまた、使用する用量に応じて多少の殺菌性を示すこともある。本発明の抗菌防腐剤の主な役割は、医薬組成物におけるこのような微生物の増殖を阻止することである。しかし、抗菌防腐剤は、任意には投与に先立って前記組成物を製造するために使用されるキットの１種以上の成分における潜在的に有害な微生物の増殖を阻止するためにも使用できる。好適な抗菌防腐剤には、パラベン類（即ち、メチル、エチル、プロピル又はブチルパラベン或いはこれらの混合物）、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールがある。好ましい抗菌防腐剤はパラベン類である。
【０１１０】
「ｐＨ調整剤」という用語は、組成物のｐＨがヒト又は哺乳動物への投与のために許容される範囲（およそｐＨ４．０〜１０．５）内にあることを保証するために有用な化合物又は化合物の混合物を意味する。好適なかかるｐＨ調整剤には、トリシン、リン酸塩又はＴＲＩＳ［即ち、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン］のような薬学的に許容される緩衝剤、及び炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物のような薬学的に許容される塩基がある。組成物をキットの形態で使用する場合には、ｐＨ調整剤を任意には独立のバイアル又は容器に入れて供給することができ、その結果としてキットのユーザーは多段操作の一部としてｐＨを調整することができる。
【０１１１】
「フィラー」という用語は、製造及び凍結乾燥の際の材料の取扱いを容易にすることができる薬学的に許容される増量剤を意味する。好適なフィラーには、塩化ナトリウムのような無機塩、及びスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースのような水溶性糖又は糖アルコールがある。
【０１１２】
かかる医薬組成物は、無菌製造条件下で（即ち、クリーンルーム内で）製造して所望の無菌で非発熱性の生成物を得ることができる。基本構成部分、特に関連する試薬並びにイメージング剤に接触する装置部品（例えば、バイアル）は無菌であることが好ましい。かかる構成部分及び試薬は、無菌濾過或いは（例えば、γ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は（例えば、エチレンオキシドによる）化学処理を用いる）終末滅菌を始めとする、当技術分野で公知の方法によって滅菌できる。一部の構成部分を予め滅菌しておけば、最小数の操作を実施すれば済むので好ましい。しかし、予防策として、医薬組成物の製造における最終段階として少なくとも無菌濾過段階を含めることが好ましい。
【０１１３】
かかる医薬組成物はまた、キットから製造することもできる。
【０１１４】
第１の態様の方法は、好ましくはさらに（ｖｉ）段階（ｉｖ）の（ａ）〜（ｄ）に定義されたターゲティング療法が開始された場合、段階（ｉｉ）のイメージング剤を使用して前記開始された療法の効力をモニターする段階を含む。そのようにすることは、イメージング剤が療法／化学療法と同じタンパク質マーカーを標的とするので、標的の異常な発現が存続しているか否かを判定するのに最も好都合であり、したがって療法の有効性の客観的尺度になると予想される。
【０１１５】
本発明の方法のための好適なベクターは、上述の通り、各種文献で知られており、場合によっては商業的に入手可能である。ＳＴペプチドの合成並びに放射性医薬品イメージングのための111Ｉｎ及び99mＴｃによる放射性標識用のキレーターとのコンジュゲーションは、各種文献に記載されている［Ｃｕｔｈｂｅｒｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．，４２．９２５７−５９（２００１）；Ｗｏｌｆｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，４３，３９２−３９９（２００２）；Ｇｉｂｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１５，８７２−８８０（２００４）］。Ｈｅｒ２イメージング用の放射性標識アフィボディは、Ｅｎｇｆｅｌｄｔ  ｅｔ  ａｌ［Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｍｏｌ．Ｉｍａｇｉｎｇ，３４，７２２−７３３（２００７）；Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，６７，２１７８−２１８６（２００７）；Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１８，５４９−５５８  ａｎｄ  １９５６−１９６４（２００７）］によって記載されている。
【０１１６】
イメージング成分がフッ素の放射性同位体（例えば、18Ｆ）からなる場合、放射性原子は、18Ｆ−フッ化物と良好な脱離基を有する適当な前駆体（例えば、臭化アルキル、メシル化アルキル又はトシル化アルキル）との反応を用いる直接標識によって導入できる。18Ｆはまた、18Ｆ(ＣＨ2)3ＯＭｓ（式中、Ｍｓはメシレートである。）のようなアルキル化剤でアミン前駆体をＮ−アルキル化してＮ−(ＣＨ2)318Ｆを得るか、或いは18Ｆ(ＣＨ2)3ＯＭｓ又は18Ｆ(ＣＨ2)3Ｂｒでヒドロキシル基をＯ−アルキル化することによっても導入できる。18Ｆはまた、18Ｆ(ＣＨ2)3ＯＨ反応体でＮ−ハロアセチル基をアルキル化して−ＮＨ(ＣＯ)ＣＨ2Ｏ(ＣＨ2)318Ｆ誘導体を得るによっても導入できる。アリール系に関しては、アリールジアゾニウム塩、アリールニトロ化合物又はアリール第四級アンモニウム塩からの18Ｆ−フッ化物求核置換が、アリール−18Ｆ誘導体への可能な経路である。18Ｆ−標識及び123Ｉ−標識誘導体への合成経路のさらなる詳細は、Ｂｏｌｔｏｎ［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）］によって記載されている。
【０１１７】
光学レポーターは、通常の方法によってベクターにコンジュゲートすることができる。これに関しては、Ａｃｈｉｌｅｆｕ［Ｔｅｃｈｎｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ．，３，３９３−４０９（２００４）］，Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ［Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，８（１７），３６２３−２６（２００６）及びＢｕｌｌｏｋ  ｅｔ  ａｌ［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４８，５４０４−５４０７（２００５）］を参照されたい。シアニン色素とｃＭｅｔターゲティングペプチドとのコンジュゲーションは、実施例７（後述）にも示されている。
【０１１８】
第２の態様では、本発明は、第１の態様の方法で使用するためのイメージング剤の製造における、第１の態様で定義された標識ベクターの使用を提供する。ベクター及びイメージング剤の好ましい態様は、第１の態様に記載された通りである。
【０１１９】
第３の態様では、本発明は、第１の態様の方法における、第１の態様で定義されたイメージング剤の使用を提供する。ベクター及びイメージング剤の好ましい態様は、第１の態様に記載された通りである。
【０１２０】
イメージング剤は、当技術分野で公知の通り、任意にはキットによって製造することができる。
【実施例】
【０１２１】
以下の実施例によって本発明を例証する。実施例１は、本発明の組織マイクロアレイ方法を例示する。実施例２は、ｃＭｅｔレベルが正常組織で低く、化生組織、異形成組織及び（程度は低いが）腺癌組織で強くアップレギュレートされていることを実証している。ｃＭｅｔは高リスクステージ（異形成又は腺癌）への進行にかかわらずすべてのバレット患者で高く発現されたので、この発現プロファイルを疾患の進行と結び付けることはできない。しかし、実施例２が示す通り、ｃＭｅｔのイメージングはｃＭｅｔを標的とする療法が適切であることの良好な指標である。
【０１２２】
実施例３は、Ｈｅｒ２の発現が扁平上皮組織では最小であり、バレット組織及び高グレード異形成では強染色、低グレード異形成では弱染色、並びに腺癌試料では可変染色強度を伴っていたことを実証している。特に興味深いのは、Ｈｅｒ２の発現が低グレード異形成（ＬＧＤ）、高グレード異形成（ＨＧＤ）又は癌に隣接したバレット組織で高かったことである。染色強度は隣接病変の程度と共に増加し、Ｈｅｒ２と疾患の進行との関連の可能性を指摘している。実施例３が示す通り、Ｈｅｒ２のイメージングはＨｅｒ２を標的とする療法が適切であることの良好な指標である。
【０１２３】
実施例４は、ＩＧＦ１−Ｒが扁平上皮組織では低染色又は無染色を示したが、バレット化生、異形成及び腺癌ステージでは発現の増加を示したことを実証している。実施例４が示す通り、ＩＧＦ１−ＲのイメージングはＩＧＦ１−Ｒを標的とする療法が適切であることの良好な指標である。
【０１２４】
実施例５は、グアニリルシクラーゼＣが扁平上皮組織で検出できるものの、以後のステージでは発現が増加し、低グレード異形成及び癌では９０〜１００％に達することを例示する。実施例３が示す通り、ＧＣＣのイメージングはＧＣＣを標的とする療法が適切であることの良好な指標である。
【０１２５】
実施例６は、ｃＭｅｔターゲティングペプチド（化合物１）の合成を例示する。
【０１２６】
実施例７は、シアニン色素による実施例６のペプチドの標識方法を例示する。
【０１２７】
略語
通常の一文字又は三文字アミノ酸略語を使用する。
Ａｃｍ：        アセトアミドメチル
ＡＣＮ：        アセトニトリル
Ｂｏｃ：        ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
ＤＣＭ：        ジクロロメタン
ＤＭＳＯ：      ジメチルスルホキシド
Ｆｍｏｃ：      ９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＢＴＵ：      Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチ                ルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＰＬＣ：      高速液体クロマトグラフィー
ＮＨＳ：        Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
ＮＭＭ：        Ｎ−メチルモルホリン
ＮＭＰ：        １−メチル−２−ピロリジノン
Ｐｂｆ：        ２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホ                ニル
ｔＢｕ：        ｔ−ブチル
ＴＦＡ：        トリフルオロ酢酸
ＴＩＳ：        トリイソプロピルシラン
Ｔｒｔ：        トリチル。
【０１２８】
実施例１：組織マイクロアレイ
一定範囲の組織学的所見を有するバレット食道患者から新鮮な生検組織試料を集めた。２０の胃対照、７の扁平上皮対照、２０のバレット化生、２０の低グレード異形成、２０の高グレード異形成及び２０の腺癌を含む全部で１０７の試料を得た。上記組織試料について組織マイクロアレイを実施したが、各コアは約０．６ｍｍの直径を有し、深さは可変であった。組織マイクロアレイ用のプロトコルは、Ｃａｍｐ  ｅｔ  ａｌ［“Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｉｓｓｕｅ  ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ”．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．８０，１９４３−１９４９（２０００）］によって記載されている。コアを得たのと同じパラフィンブロックから全切片スライドを作成した。すべての組織は患者の生検からのものであり、いずれの患者も食道の異形成／腺癌に対して特異的な化学療法は受けていなかった。
【０１２９】
以下の生物学的マーカー、即ち（ａ）Ｈｅｒ２、（ｂ）ｃＭｅｔ、（ｃ）グアニリルシクラーゼ及び（ｄ）ＩＧＦ１Ｒの発現を測定し、その結果を実施例２〜５に記載する。化生とは組織の性質の異常な変化（食道化生では、正常な扁平上皮が円柱上皮に置き換わること）をいうのに対し、異形成とは異常な組織増殖（食道異形成では、化生円柱上皮が増殖の抑制を失い始めること）をいう。
【０１３０】
実施例２：ｃＭｅｔの発現
Ｃ−ｍｅｔは、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）に対するレセプターとして作用する。免疫組織化学分析において、以下の抗体、即ちＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社の抗ヒトＨＧＦ  Ｒ（ｃ−Ｍｅｔ）ヤギ抗体（ＡＦ２７６）１：２５（ＴＭＡ及び全切片染色のために使用した）及びＮｏｖｏｃａｓｔｒａ社のｃ−Ｍｅｔ（ＨＧＦ  Ｒ）マウスモノクローナル（８Ｆ１１）（非特異的染色）を使用した。
【０１３１】
実施例１と同様にして免疫組織化学分析を行ったところ、下記表１に示す結果が得られた。
【０１３２】
【表４】
2011513211.tif 000019
【０１３３】
実施例３：Ｈｅｒ２の発現
ＣＯＮＦＩＲＭ（商標）抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ抗体（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ、タクソン、米国アリゾナ州）を使用した。これは、Ｈｅｒ２／ｎｅｕタンパク質のＣＯＯＨ末端に対して親和性を有する３０ｍｇ／ｍＬのウサギモノクローナル抗体クローン４Ｂ５  ＩＧＦ１であった。結果を下記表２に示す。
【０１３４】
【表５】
2011513211.tif 000020
【０１３５】
実施例４：ＩＧＦ１−Ｒの発現
インスリン関連増殖因子１レセプター（ＩＧＦ１−Ｒ）は、チロシンキナーゼ活性を有する細胞レセプターであって、これは有糸分裂誘発性及び腫瘍形成性も有している。使用した抗体は、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ社のマウス抗インスリン様増殖因子−１レセプターモノクローナル（ＭＡＢ１１２０）であった。
【０１３６】
結果を下記表３に示す。
【０１３７】
【表６】
2011513211.tif 000021
【０１３８】
実施例５：グアニリルシクラーゼＣの発現
ＧＣ−Ｃは、腸の上皮細胞によって特異的に発現される表面レセプターである。使用した抗体は、Ａｂｇｅｎｔ社のＧＵＣＹ２Ｃウサギポリクローナル（ＡＰ７１３６ａ）１：５０であった。結果を下記表４に示す。
【０１３９】
【表７】
2011513211.tif 000022
【０１４０】
実施例６：ｃＭｅｔターゲティングペプチド（化合物１）の合成
段階（ａ）：保護線状前駆体の合成
前駆体線状ペプチドは下記の構造を有している。
Ａｃ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ2。
【０１４１】
０．１ｍｍｏｌのＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  Ｎｏｖａｇｅｌ樹脂から出発するＦｍｏｃ化学を用いて、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３３Ａペプチド合成機上でペプチジル樹脂Ｈ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｈｒ（ψMe,Meｐｒｏ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ポリマーをアセンブルした。カップリング段階では、（ＨＢＴＵを用いて）予備活性化した過剰量の１ｍｍｏｌアミノ酸を適用した。Ｇｌｕ−Ｔｈｒプソイドプロリン（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ  ０５−２０−１１２２）を配列に組み込んだ。樹脂を窒素バブラー装置に移し、無水酢酸（１ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した溶液で６０分間処理した。濾過によって無水物溶液を除去し、樹脂をＤＣＭで洗浄してから窒素流下で乾燥した。
【０１４２】
２．５％のＴＩＳ、２．５％の４−チオクレゾール及び２．５％の水を含むＴＦＡ（１０ｍＬ）中で、側鎖保護基の除去及び樹脂からのペプチド切断を２時間３０分にわたり同時に実施した。樹脂を濾過によって取り除き、ＴＦＡを真空中で除去し、残留物にジエチルエーテルを添加した。生じた沈殿をジエチルエーテルで洗浄し、空気乾燥することで、２６４ｍｇの粗ペプチドを得た。
【０１４３】
粗ペプチドを分取ＨＰＬＣ（勾配：４０分で２０〜３０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）  ２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３０分）によって精製することで、純粋な化合物１の線状前駆体１００ｍｇを得た。純生成物を分析ＨＰＬＣ（勾配：１０分で１０〜４０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）  ５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：６．５４分）によって分析した。さらに、エレクトロスプレー質量分析法を用いて追加の生成物特性決定を実施した（ＭＨ22+計算値：１４６４．６、ＭＨ22+実測値：１４６５．１）。
【０１４４】
段階（ｂ）：単環式Ｃｙｓ４−１６ジスルフィドブリッジの形成
Ｃｙｓ４−１６；Ａｃ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ2。
【０１４５】
段階（ａ）からの線状前駆体（１００ｍｇ）を５％ＤＭＳＯ／水（２００ｍＬ）に溶解し、アンモニアを用いて溶液をｐＨ６に調整した。反応混合物を５日間撹拌した。次いで、ＴＦＡを用いて溶液をｐＨ２に調整し、大部分の溶媒を真空中での蒸発によって除去した。生成物の精製のため、残留物（４０ｍＬ）を分取ＨＰＬＣカラム上に少しずつ注入した。
【０１４６】
残留物を分取ＨＰＬＣ（勾配：０％Ｂを１０分間、次いで４０分で０〜４０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）  ２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：４４分）によって精製することで、純粋な化合物１の単環式前駆体７２ｍｇを得た。
【０１４７】
（異性体Ｐ１乃至Ｐ３の混合物としての）純生成物を分析ＨＰＬＣ（勾配：１０分で１０〜４０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）  ５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：５．３７分（Ｐ１）、５．６１分（Ｐ２）、６．０５分（Ｐ３））によって分析した。さらに、エレクトロスプレー質量分析法を用いて追加の生成物特性決定を実施した（ＭＨ22+計算値：１４６３．６、ＭＨ22+実測値：１４６４．１（Ｐ１）、１４６４．４（Ｐ２）、１４６４．３（Ｐ３））。
【０１４８】
段階（ｃ）：第２のＣｙｓ６−１４ジスルフィドブリッジの形成（化合物１）
段階（ｂ）からの単環式前駆体（７２ｍｇ）を窒素ブランケット下で７５％ＡｃＯＨ／水（７２ｍＬ）に溶解した。１Ｍ  ＨＣｌ（７．２ｍＬ）及びＡｃＯＨ中の０．０５Ｍ  Ｉ2（４．８ｍＬ）をその順序で添加し、混合物を４５分間撹拌した。１Ｍアスコルビン酸（１ｍＬ）を添加して無色の混合物を得た。大部分の溶媒を真空中で蒸発させ、残留物（１８ｍＬ）を水／０．１％ＴＦＡ（４ｍＬ）で希釈し、分取ＨＰＬＣを用いて生成物を精製した。
【０１４９】
残留物を分取ＨＰＬＣ（勾配：０％Ｂを１０分間、次いで４０分で２０〜３０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）  ２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：４３〜５３分）によって精製することで、５２ｍｇの純粋な化合物１を得た。純生成物を分析ＨＰＬＣ（勾配：１０分で１０〜４０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）  ５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：６．５４分）によって分析した。さらに、エレクトロスプレー質量分析法を用いて追加の生成物特性決定を実施した（ＭＨ22+計算値：１３９１．５、ＭＨ22+実測値：１３９２．５）。
【０１５０】
実施例７：化合物１に対するシアニン色素のコンジュゲーション
化合物１（実施例６、１０ｍｇ）、ＮＭＭ（４μＬ）及びＣｙ５  ＮＨＳエステル（５．７ｍｇ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＰＡ１５１０４）をＮＭＰ（１ｍＬ）に溶解し、反応混合物を７時間撹拌した。次いで、反応混合物を５％アセトニトリル／水（８ｍＬ）で希釈し、分取ＨＰＬＣを用いて生成物を精製した。
【０１５１】
粗ペプチドを分取ＨＰＬＣ（勾配：４０分で５〜５０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＨＣＯＯＨ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＨＣＯＯＨ）、流量：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）  ２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３５．５分）によって精製することで、８．１ｍｇの純粋な色素結合生成物を得た。純生成物を分析ＨＰＬＣ（勾配：１０分で５〜５０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＨＣＯＯＨ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＨＣＯＯＨ）、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）  ５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：８．１５分）によって分析した。さらに、エレクトロスプレー質量分析法を用いて追加の生成物特性決定を実施した（ＭＨ22+計算値：１７１０．６、ＭＨ22+実測値：１７１１．０）。
【国際調査報告】
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