(57)【要約】  本発明は、塩基の形態または酸との付加塩の形態にあるコンブレタスタチン（Ａ）：式（Ｉ）を調製するための方法であって、式（Ｚ）−（Ｉｂ）：式（ＩＶ）の化合物が得られるように、塩基およびＴ３Ｐの存在下で、式（ＩＩ）の（Ｚ）−アミノ化合物の塩を式（ＩＩＩ）（ＰＧはアミン官能基を保護する基を示す。）の二重保護Ｌ−セリン誘導体とカップリングさせ、次に、塩の形態にあるコンブレタスタチン（Ａ）が得られるように、酸の存在下で（Ｚ）−（Ｉｂ）を脱保護および開環し；並びに、場合により、塩基の形態にあるコンブレタスタチン（Ａ）が得られるように、塩基を添加することからなり、（Ｚ）−アミノ化合物の塩が（Ｚ）異性体の状態にある式（Ｖ）のアミノ化合物の塩の濃縮によって得られる方法に関する。2011513286.tif 000038
2011513286.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
塩基の形態または酸との付加塩の形態にあるコンブレタスタチン（Ａ）：
【化１】
2011513286.tif 000021
を調製するための方法であって：
式（Ｚ）−（Ｉｂ）：
【化６】
2011513286.tif 000022
の化合物が得られるように、塩基および式（ＩＩＩ）：
【化２】
2011513286.tif 000023
のＴ３Ｐの存在下で、（Ｚ）−アミノ化合物
【化３】
2011513286.tif 000024
または（Ｚ）−アミノ化合物の塩
【化４】
2011513286.tif 000025
（Ｂ−は対イオンを示す。）
を式
【化５】
2011513286.tif 000026
（ＰＧはアミン官能基を保護する基を示す。）
の二重保護Ｌ−セリン誘導体とカップリングさせ、
次に、塩の形態にある式（Ａ）のコンブレタスタチンが得られるように、酸の存在下で（Ｚ）−（Ｉｂ）を脱保護および開環し、
並びに、場合により、塩基の形態にある式（Ａ）のコンブレタスタチンが得られるように、塩基を添加することからなり、
（Ｚ）−アミノ化合物の塩が：
アセトニトリル中の（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の塩の混合物の懸濁液にベンジルアルコールを添加し、次に、
（Ｚ）異性体の状態にある濃縮されたアミノ化合物の塩を機械的に分離する、
ことからなる、（Ｚ）異性体の状態にある式：
【化７】
2011513286.tif 000027
のアミノ化合物の塩の濃縮によって得られる方法。
【請求項２】
（Ｚ）異性体の状態にある式：
【化８】
2011513286.tif 000028
（Ｂ−は対イオンを表す。）
のアミノ化合物の塩の濃縮方法であって：
アセトニトリル中の（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の塩の混合物の懸濁液にベンジルアルコールを添加し、次に、
（Ｚ）異性体の状態にある濃縮されたアミノ化合物の塩を機械的に分離する、
ことからなる方法。
【請求項３】
機械的分離が濾過である請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
塩基の形態または酸との付加塩の形態にあるコンブレタスタチン（Ａ）：
【化９】
2011513286.tif 000029
を調製するための方法であって：
式（Ｚ）−（Ｉｂ）：
【化１３】
2011513286.tif 000030
の化合物が得られるように、塩基およびＴ３Ｐの存在下で、（Ｚ）−アミノ化合物
【化１０】
2011513286.tif 000031
または（Ｚ）−アミノ化合物の塩
【化１１】
2011513286.tif 000032
（Ｂ−は対イオンを示す。）
を式
【化１２】
2011513286.tif 000033
（ＰＧはアミン官能基を保護する基を示す。）
の二重保護Ｌ−セリン誘導体とカップリングさせ、
次に、塩の形態にあるコンブレタスタチン（Ａ）が得られるように、酸の存在下で（Ｚ）−（Ｉｂ）を脱保護および開環し、
並びに、場合により、塩基の形態にあるコンブレタスタチン（Ａ）が得られるように、塩基を添加することからなる方法。
【請求項５】
ＰＧがＢＯＣ、ＣＢＺまたはＦＭＯＣを表す、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
Ｂ−がＣｌ−またはＳＯ４２−を示す、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ＰＧがＢＯＣを表し、およびＢ−がＣｌ−を示す、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
塩基が三級アミンである、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
塩基がトリエチルアミン（ＴＥＡ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）またはメチルピペリジンである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
（Ｚ）−アミノ化合物または（Ｚ）−アミノ化合物の塩および式（ＩＩ）の化合物を、同じ容器内、Ｔ３Ｐおよび塩基の存在下で共に反応させる、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
重量基準で表されるアセトニトリル／（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の塩の割合が５から１７、好ましくは、１０から１２である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
濃縮を行う温度が２０から７０℃である、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
重量基準で表されるベンジルアルコール／（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の塩の割合が１から４、好ましくは、２から３である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
式（ＩＩＩ）
【化１４】
2011513286.tif 000034
のＴ３Ｐの、式
【化１５】
2011513286.tif 000035
の（Ｚ）−アミノ化合物または式：
【化１６】
2011513286.tif 000036
（Ｂ−は対イオンを示す。）
の（Ｚ）−アミノ化合物の塩と式
【化１７】
2011513286.tif 000037
（ＰＧはアミン官能基を保護する基を示す。）
の二重保護Ｌ−セリン誘導体とのカップリングへの使用。
【請求項１５】
ＰＧがＢＯＣ、ＣＢＺもしくはＦＭＯＣを示し、および／またはＢ−がＣｌ−もしくはＳＯ４２−を示す、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
塩基が三級アミンである、請求項１４または１５に記載の使用。
【請求項１７】
（Ｚ）−アミノ化合物または（Ｚ）−アミノ化合物の塩と式（ＩＩ）の化合物とを、同じ容器内、Ｔ３Ｐおよび塩基の存在下で共に反応させる、請求項１４から１６のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、塩基または酸との付加塩の形態にあるコンブレタスタチン（Ａ）：
【０００２】
【化１】
2011513286.tif 000003
を調製するための方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＵＳ６７５９５５５は、式：
【０００４】
【化２】
2011513286.tif 000004
のコンブレタスタチンを調製するための方法を記載し、式中、Ｘは−ＮＨ２または以下の２つの基：
【０００５】
【化３】
2011513286.tif 000005
のうちの１つを表し、
ＰＧはアミン官能基を保護する基を示す。
【０００６】
Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０００，８，２４１７−２４２５およびＵＳ２００３／０２２０４０４もコンブレタスタチンの調製方法を記載する。
【０００７】
Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｒｅｓ．１９９９，５４（１），５４−６５は、ペプチド結合の形成において酸賦活剤を比較し、ＴＤＢＴＵが最良であると結論付けている。
【０００８】
Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００６，１４，３２３１−３２４４は、酸賦活剤としてＤＣＣ、ＨＯＢｔ−Ｈ２Ｏを用いるカップリングでの、式（Ａ）のコンブレタスタチンの調製を記載する（工程ｅ、化合物１０）。
【０００９】
Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９９９，１８４７−１８４８はアミド結合の調製におけるＴ３Ｐを記載する。しかしながら、Ｔ３ＰはＨＡＰｙＵよりも多くのエピマー化を生じ、収率に劣るものとして記載される（表３を参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許第６７５９５５５号明細書
【特許文献２】米国特許出願公開第２００３／０２２０４０４号明細書
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０００，８，２４１７−２４２５
【非特許文献２】Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｒｅｓ．１９９９，５４（１），５４−６５
【非特許文献３】Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００６，１４，３２３１−３２４４
【非特許文献４】Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９９９，１８４７−１８４８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
請求項１の主題である方法は、これらの文献には記述も示唆もされていない。同様に、ベンジルアルコールおよびアセトニトリルを用いるアミノ化合物塩の濃縮もＴ３Ｐを用いるカップリングも記述されていない。
【００１３】
コンブレタスタチンまたはスチルベン誘導体は強力な細胞毒性を示し、結果として、抗癌剤として用いることができる。しかしながら、最も強力な細胞毒性を示すものは（Ｚ）異性体である。これらの化合物は、特には、ＵＳ５７３１３５３、ＵＳ５５６１１２２またはＵＳ６７５９５５５に記載される。出願人はコンブレタスタチン（Ａ）の調製方法を改善している。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、塩基の形態または酸との付加塩の形態にあるコンブレタスタチン（Ａ）：
【００１５】
【化４】
2011513286.tif 000006
を調製するための方法であって、式（Ｚ）−（Ｉｂ）：
【００１６】
【化９】
2011513286.tif 000007
の化合物が得られるように、塩基および式（ＩＩＩ）：
【００１７】
【化５】
2011513286.tif 000008
のＴ３Ｐの存在下で、（Ｚ）−アミノ化合物
【００１８】
【化６】
2011513286.tif 000009
または（Ｚ）−アミノ化合物の塩
【００１９】
【化７】
2011513286.tif 000010
（Ｂ−は対イオンを示す。）
を式
【００２０】
【化８】
2011513286.tif 000011
（ＰＧはアミン官能基を保護する基を示す。）
の二重保護Ｌ−セリン誘導体とカップリングさせ、次に、塩（−ＮＨ３＋）の形態にあるコンブレタスタチン（Ａ）が得られるように酸の存在下で（Ｚ）−（Ｉｂ）を脱保護および開環し、並びに、場合により、塩基（−ＮＨ２）の形態にあるコンブレタスタチン（Ａ）が得られるように塩基を添加することからなり、
（Ｚ）−アミノ化合物の塩が：
アセトニトリル中の（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の塩の混合物の懸濁液にベンジルアルコールを添加し、次に、
（Ｚ）異性体の状態の濃縮されたアミノ化合物の塩を機械的に分離する、
ことからなる、（Ｚ）異性体の状態の式：
【００２１】
【化１０】
2011513286.tif 000012
（Ｂ−は対イオンを示す。）
のアミノ化合物の塩の濃縮によって得られる方法に関する。
【００２２】
本発明は、（Ｚ）異性体の状態にある式
【００２３】
【化１１】
2011513286.tif 000013
（Ｂ−は対イオンを示す。）
のアミノ化合物の塩の濃縮であって：
アセトニトリル中の（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の塩の混合物の懸濁液にベンジルアルコールを添加し、並びに
（Ｚ）異性体の状態の濃縮されたアミノ化合物の塩を機械的に分離する、
ことからなる濃縮にも関する。
【００２４】
本発明は、塩基の存在下における（Ｚ）−アミノ化合物または（Ｚ）−アミノ化合物の塩と二重保護Ｌ−セリン誘導体とのカップリングへの、式（ＩＩＩ）
【００２５】
【化１２】
2011513286.tif 000014
のＴ３Ｐの使用にも関する。
【００２６】
重量基準で表される、アセトニトリル／（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の塩の割合は、５から１７、好ましくは、１０から１２である。濃縮を行う温度は、好ましくは、２０から７０℃である。重量基準で表される、ベンジルアルコール／（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の塩の割合は、１から４、好ましくは、２から３である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
下記スキーム１はコンブレタスタチン（Ａ）の調製方法の反応工程（ｉ）から（ｉｖ）を記述する：
【００２８】
【化１３】
2011513286.tif 000015
工程（ｉ）：２−メトキシ−５−［２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ビニル］ニトロベンゼンの２つの（Ｚ）および（Ｅ）異性体（（Ｚ）−および（Ｅ）−ニトロ）の混合物の形態にあるニトロ化合物の塩を生じる、塩基の存在下での、ニトロメトキシベンズアルデヒドと臭化または塩化トリメトキシベンジルホスホニウムとのウィッティヒ反応；
工程（ｉｉ）：塩（Ｂ−は対イオン、例えば、Ｃｌ−またはＳＯ４２−を示す。）に変換される（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の混合物を生じる、混合物の還元と、それに続く（Ｚ）−アミノ化合物を分離する工程；
工程（ｉｉｉ）：化合物（Ｚ）−（Ｉｂ）
【００２９】
【化１４】
2011513286.tif 000016
（ＰＧはアミン官能基を保護する基を示す：これは、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）または９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）であり得る。）を生じる、（Ｚ）−アミノ化合物の塩と−ＯＨおよびアミノ官能基で二重に保護されるＬ−セリン誘導体（式（ＩＩ）の化合物）とのカップリング；
工程（ｉｖ）および（ｖ）：塩化または非塩化形態にあるコンブレタスタチン（Ａ）を生じる、脱保護および開環。
【００３０】
工程（ｉ）はＵＳ５７３１３５３および、その上、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０００，８，２４１７−２４２５（スキーム１）に記述される。この反応は、芳香族溶媒（例えば、トルエン）のような有機溶媒中、塩基、好ましくは、ＭｅＯＮａまたはＮａＨのような強塩基の存在下で行われる。（Ｚ）／（Ｅ）比は７５／２５のオーダーのものである。
【００３１】
ＵＳ６７５９５５５に記載される還元工程（ｉｉ）は（（Ｉａ）に対して２当量を上回る）過剰の鉄の存在下で行われる。ＵＳ５５２５６３２（実施例２、工程２）に記載されるような亜鉛の存在下での還元も可能ではあるが、これは完結せず（収率＝４９．３％）、加えて、「アゾ」副生物多量の形成を生じる。十分な純度の（Ｚ）−アミノ化合物が、１以上の複雑な分離により、次に得られる。還元に続く分離は連続結晶化によって行われる。第１結晶化は（Ｅ）−アミノ化合物を除去することを可能にし、次に第２結晶化が（Ｚ）−アミノ化合物を単離することを可能にする（ＵＳ６７５９５５５、実施例１を参照）。
【００３２】
工程（ｉｉｉ）のカップリングは、ＥＤＣｌ（塩化１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド）、ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）、ＴＯＴＵ（Ｏ−［エトキシカルボニル］シアノメチレンアミノ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート）、ＨＢＴＵ（Ｏ−ベンゾトリアゾル−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＰｉｖＣｌ（塩化ピバロイル）またはＮ，Ｎ−カルボニルジイミダゾールのような酸賦活剤の存在下で有利に行われる。「酸賦活剤」（「カップリング剤」）という用語は、この機能が、ペプチド結合の形成を促進するため、酸官能基−ＣＯＯＨを活性化することである化合物を示すのに用いられる。酸賦活剤に関するさらなる詳細については、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社によって発行される総説ＣｈｅｍＦｉｌｅｓ  Ｖｏｌ．７，Ｎｏ．２，ｐａｇｅ  ３、そうでなければＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ｒｅｐｏｒｔ  Ｎｏ．６７２，２００４，６０，２４４７−２４６７，「Ｒｅｃｅｎｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」を参照することができる。総説Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ２００５，６１，１０８２７−１０８５２は多くの酸賦活剤が入手可能であることを開示する。
【００３３】
工程（ｉｖ）は、開環を促進し、塩（−ＮＨ３＋）の形態のコンブレタスタチン（Ａ）を得るため、酸の存在下で行われる。これには脱保護／開環が含まれる。ＢＯＣの存在下で、例えばメタノール溶液の形態にある、塩酸が有利に用いられ、塩酸塩が得られる。水酸化ナトリウムのような塩基を用いてこの塩を中和することにより、塩基の形態にあるコンブレタスタチン（Ａ）が得られる（実施例１−工程（ｉｉｉ）を参照）。
【００３４】
本発明による方法
本発明の方法はスキーム１の同じ工程を繰り返し述べるが、工程（ｉｉ）および（ｉｉｉ）が改善されている。実際、本発明においては、工程（ｉｉ）の最中に：
アセトニトリル中の（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の塩の混合物の懸濁液にベンジルアルコールを添加し、並びに
（Ｚ）異性体の状態の濃縮されたアミノ化合物の塩を機械的に分離する、
ことからなる方法によってアミノ化合物の塩の（Ｚ）異性体が得られる。
【００３５】
従って、（Ｚ）異性体が「濃縮」によって得られ、この用語は、上述の方法の２つの工程の最後で、（Ｚ）異性体の割合が（Ｅ）異性体に対して増加することを意味する；（Ｚ）および（Ｅ）異性体の混合物から（Ｚ）異性体を分離するための方法を語ることもできる。（再）結晶化と比較して、濃縮は直接的で実行が簡単であるという利点を有する。これは、残留（Ｅ）異性体の含有率が低い（これは＜１ｍｏｌ％までであり得る；生成物の純度が（Ｚ）に関しては９９．９３％であり、（Ｅ）に関しては０．０７％である実施例１を参照）、（Ｚ）異性体の状態にある濃縮されたアミノ化合物を得ることを可能にする。機械的分離は、例えば、濾過または遠心であり得る。機械的分離の最後に、場合により、（Ｚ）異性体の塩を洗浄および乾燥させることができる。
【００３６】
懸濁液は５から１７、好ましくは、１０から１２（即ち、懸濁液中のアセトニトリルの重量が５から１７×（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の重量である。）の、重量基準で表される、アセトニトリル／（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の割合を好ましく有する。
【００３７】
添加されるベンジルアルコールの量は、好ましくは、重量基準で表されるベンジルアルコール／（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の塩の割合が１から４、好ましくは、２から３（即ち、添加されるベンジルアルコールの量が１から４×（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の量である。）であるようなものである。この割合は最終生成物の高（Ｚ）／（Ｅ）比を維持することを可能にする。ベンジルアルコールの機能は（Ｅ）−アミノ化合物の塩を優先的に溶解することである。
【００３８】
濃縮は、好ましくは２０から７０℃、有利には３０から７０℃、好ましくは３５から６５℃の温度で行う。７０℃を上回ると、アミノ化合物が徐々に分解し始める。
【００３９】
懸濁液を調製するための好ましい方法を以下に説明する。水／メタノール混合液のような水およびアルコールの混合液であり得る溶媒中で、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ４）を用いて（Ｚ）−および（Ｅ）−ニトロ化合物を還元する。還元後、強酸（例えば、ＨＣｌまたはＨ２ＳＯ４）を反応媒体中に導入すると、前記酸は反応中間体と反応し、亜ジチオン酸塩および重亜硫酸塩残滓とも反応する。その後、（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の塩（例えば、塩酸塩または硫酸塩）の混合物が得られる。次に、遊離塩基が得られるように（−ＮＨ３＋→−ＮＨ２）強塩基を添加し、この遊離塩基を有機溶媒、例えば、ジクロロメタン（ＤＣＭ）のような塩素化溶媒で抽出する。アルコール中の強酸を有機相に添加した後、アセトニトリル中の（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の塩の懸濁液が得られるようにアルコールをアセトニトリルで置換する。強酸はＨＣｌまたはＨ２ＳＯ４であり得る（Ｂ−＝ＣｌまたはＳＯ４−）。溶媒置換は、減圧下でアルコールを事実上完全に除去した後、アセトニトリルを添加することによって行うことができる。アセトニトリルの添加は減圧下でのアルコールの除去と同時に行うこともできる。アルコールは、好ましくは、メタノールまたはエタノールのような軽質アルコールである。
【００４０】
工程（ｉｉｉ）では、（Ｚ）−アミノ化合物の塩と式（ＩＩ）の二重保護Ｌ−セリン誘導体とのカップリングを、有機溶媒中で、無水プロパンリン酸（Ｔ３Ｐ）を酸賦活剤として用いて、塩基の存在下で行う。塩基の機能は酸種を補足し、塩を遊離塩基に変化させることである。添加される塩基の量は（Ｚ）−アミノ化合物の塩に対して２から３当量である（２．７当量が用いられる実施例１を参照）。Ｔ３Ｐおよび塩基の存在下で（Ｚ）−アミノ化合物を式（ＩＩ）の化合物と直接カップリングさせることも可能である；この場合、添加される塩基の割合はより小さく、１から２当量である（塩から出発するときよりも約１当量少ない。）。
【００４１】
塩基はトリエチルアミン（ＴＥＡ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）またはメチルピペリジンのような三級アミンであり得る。有機溶媒はジクロロメタン（ＤＣＭ）、トルエン、メチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ）、酢酸エチル、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｍｅ−テトラヒドロフラン（Ｍｅ−ＴＨＦ）またはシクロペンチルメチルエーテルであり得る。
【００４２】
Ｔ３Ｐは下記式を有する：
【００４３】
【化１５】
2011513286.tif 000017
他の酸賦活剤ではなくＴ３Ｐを用いる利点は、Ｔ３Ｐの副生物を容易に除去することができ（副生物はすべて水中に可溶である。）、これが安価な賦活剤であることである。加えて、この反応は、「ワンポット」法に従って共にもたらされる、（塩または塩基形態の）（Ｚ）−アミノ化合物および化合物（ＩＩ）の存在下で行うことができる：従って、（塩または塩基の形態の）（Ｚ）−アミノ化合物および化合物（ＩＩ）は、同じ容器内で、Ｔ３Ｐおよび塩基の存在下で共に反応する。ＰｉｖＣｌ（塩化ピバロイル）のような幾つかは、同じ反応で、（Ｚ）−アミノ化合物の塩を添加できるまでに化合物（ＩＩ）の酸官能基の事前活性化を必要とするため、これはすべてのカップリング試薬の状況ではない。
【００４４】
最後に、本発明者らは、Ｔ３Ｐが非対称中心のエピマー化を生じることがなく、これによりコンブレタスタチン（Ａ）を良好な純度および良好な収率で得ることが可能となることに注目している。Ｔ３Ｐがカップリング生成物に関して良好な収率を得ることを可能にすることも注目されている（表ＩＩＩを参照）。
【００４５】
カップリング反応は、一般には、ＤＣＭの還流温度のような、５℃から７０℃の温度で行う。（Ｚ）−アミノ化合物に対するＴ３Ｐの割合は１から２当量、好ましくは、１．５から１．８当量である。
【実施例】
【００４６】
（実施例１（本発明による））
工程（ｉ）：
５から１０℃の、トルエン（９１．１リットル）、臭化トリメトキシベンジルホスホニウム（１５．３５ｋｇ、２９．３３ｍｏｌ）および４−メトキシ−３−ニトロベンズアルデヒド（５．０６ｋｇ、２７．９３ｍｏｌ）を含む混合物にナトリウムメトキシド（５．６６ｋｇ、２９．３４ｍｏｌ）の溶液を流し込む。反応の最後に、酢酸０．３２リットル（５．５９ｍｏｌ）を流し込む。媒体を２０℃で維持した後、これを濾過する。このケークをトルエン（１１．１リットル）で洗浄する。濾液を水（２０．２リットル）で数回洗浄した後、減圧下で濃縮する。次に、イソプロピルアルコール（８７．６リットル）を導入し、媒体を濃縮した後、冷却する。次いで、この懸濁液を１０℃で濾過する。単離された生成物を減圧下で乾燥させる（６．４６ｋｇ、５２．２％）。単離された生成物の純度は、（Ｚ）に関しては７８％、（Ｅ）に関しては２２％のオーダーである。
【００４７】
工程（ｉｉ）：
５０℃の水（８０ｍｌ）を、メタノール（１００ｍｌ）、還元しようとする（Ｚ）−および（Ｅ）−ニトロ化合物（２０ｇ、０．０５８ｍｏｌ）および亜ジチオン酸ナトリウム（３６．８ｇ、０．１７９ｍｏｌ、３．１当量）を含む媒体に流し込む。ひとたび反応が完了したら（５０℃で１時間放置）、塩酸（３６．３ｍｌ、０．４０６ｍｏｌ）を添加する。水（７０ｍｌ）およびＤＣＭ（８０ｍｌ）、次いでｐＨ＝７までの水酸化ナトリウム（アルカリ溶液３０．５％、１０Ｎ）を流し込むことによって処理を行う。ＤＣＭ（２０ｍｌ）で再抽出した後に水相を除去し、次にＤＣＭ相を減圧下（３５℃で約２００ｍｂａｒ）で濃縮してアセトニトリル（１６０ｍｌ）で置換する；ＤＣＭからアセトニトリルへの溶媒の変更は約２００ｍｌの反応体積が保持されるように減圧下で行う。塩酸メタノール溶液（２７ｍｌ、０．０８１ｍｏｌ）を流し込んだ後、約２３３ｍｌの一定体積でのメタノール−アセトニトリルからアセトニトリルへの溶媒変更が行われるように減圧下（９０ｍｂａｒ）で溶媒を留去する。溶媒変更の最後に、総体積（溶媒＋有機化合物）を２８０ｍｌに調整する。
【００４８】
その結果、懸濁液が白色液（ｗｈｉｔｅ  ｂｒｏｔｈ）の形態で得られる。次に、ベンジルアルコール（４６ｍｌ）を４５±３℃で懸濁液に添加する。２５℃に冷却した後、媒体を濾過し、アセトニトリル（３０ｍｌ）およびベンジルアルコール（３．３ｍｌ）で洗浄する。次いで、単離された生成物を減圧下で乾燥させる（１１．７ｇ、７４．４％）。この生成物は、ＨＰＬＣによる決定で、（Ｚ）に関しては９９．９３％、（Ｅ）に関しては０．０７％の純度を有する。工程（ｉｉ）の最後に、（Ｚ）−アミノ化合物の塩が、簡潔および直接的に、良好な純度で得られる。
【００４９】
工程（ｉｉｉ）：
２０℃のＴＥＡ（５３．４ｍｌ、０．３８３ｍｏｌ）、次いでＤＣＭ中のＴ３Ｐの溶液（１５４ｇ、０．２４２ｍｏｌ）を、ＤＣＭ（５００ｍｌ）、塩酸塩形態の（Ｚ）−アミノ化合物（５０ｇ、０．１４２ｍｏｌ）およびＰＧ＝ＢＯＣである式（ＩＩ）の二重保護Ｌ−セリン（Ｌ−セリン−Ｎ−ＢＯＣ−アセトニド；４１．８ｇ、０．１７０ｍｏｌ）を含む媒体に流し込む。この媒体を還流させた後、水（５００ｍｌ）を添加する。沈殿および濃縮による分離の後、塩酸メタノール溶液（１８９．５ｍｌ、１．１３６ｍｏｌ）およびメタノール（１８９．５ｍｌ）を添加する。水（３００ｍｌ）を媒体に添加した後、沈殿によって相を分離する。酢酸イソプロピル（６５０ｍｌ）を水相に添加した後、水酸化ナトリウム（１１５ｍｌ、１．１５０ｍｏｌ）を２０℃で流し込む。沈殿によって分離され、洗浄されている有機相を減圧下で濃縮した後、６５℃に加熱する。メタノール（３５ｍｌ）、次いで塩酸メタノール溶液（４７．４ｍｌ、０．１４２ｍｏｌ）をこの温度で添加する。冷却および濾過の後、生成物が単離される（４９．６ｇ、７９．５％）。この最終生成物は９９．２％の純度を有する。
【００５０】
（実施例２（本発明による））
塩酸塩形態の（Ｚ）−アミノ化合物Ｚ−アミノスチル（Ｚ−ａｍｉｎｏｓｔｉｌ），ＨＣｌ（５０．０ｇ）、Ｎ−ＢＯＣ−アセトニド（４１．８ｇ）およびＤＣＭ  ５００ｍｌを、ジャケットを備える１．６リットル反応器に投入する。次に、２２±３℃でトリエチルアミン５３．４ｍｌ（２．７当量）を、次いでＤＣＭ中５０％（１．７当量）のＴ３Ｐの溶液を流し込む。この混合物をＤＣＭの還流温度で１時間撹拌する。続いて、混合物を２２±３℃に冷却し、脱塩水５００ｍｌを添加する。この混合物を放置して沈殿により分離し、相を分離する。ＤＣＭ相を６重量％（３０ｇ）のリン酸水素ナトリウムの水溶液５００ｍｌ、次いで脱塩水５００ｍｌで洗浄する。ＤＣＭ相を、３６０から１５０ｍｂａｒまでの減圧下、約４０から５０℃で濃縮する。その後、３ｍｏｌ／ｌのメタノール中のＨＣｌの溶液（３７９ｍｌ、８当量）、次いで脱塩水３００ｍｌを流し込む。この混合物を放置して沈殿により分離し、相を分離する。ＤＣＭ／メタノール相を脱塩水（２００ｍｌ）で再抽出し、相を分離する。酢酸イソプロピル６５０ｍｌ、次いで３０％水酸化ナトリウム溶液（８．１当量）１１５ｍｌを添加する。この混合物を放置して沈殿により分離し、有機相を脱塩水４００ｍｌで洗浄する。この混合物を放置して沈殿により分離し、相を分離する。次に、有機相を、３００から３５０ｍｌが得られるまで１６０から６０ｍｂａｒまでの減圧下で濃縮し、ＤＣＭ→酢酸イソプロピル溶媒変更を行う。次いで、この混合物を６２℃で加熱してメタノール３５ｍｌを添加し、３ｍｏｌ／ｌのメタノール中の塩酸の溶液（４７．４ｍｌ、１当量）を流し込む。その後、得られる生成物を放置して周囲温度に冷却し、この白色液を濾過する。最終固体を洗浄する。
【００５１】
実施例３から６においては、開始時に（Ｚ）−および（Ｅ）−ニトロ化合物の異なる量を用いて工程（ｉｉ）を反復する。アセトニトリル／（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の塩の割合は１０．８で固定し、一方ベンジルアルコール／（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の塩の割合は可変である。
【００５２】
（実施例３（本発明による））
５０℃の水（６０ｍｌ）を、メタノール（５０ｍｌ）、還元しようとする（Ｚ）−および（Ｅ）−ニトロ化合物（１５ｇ、０．０４３ｍｏｌ）並びに亜ジチオン酸ナトリウム（２７．２ｇ、０．１３３ｍｏｌ）を含む媒体に流し込む。ひとたび反応が完了したら、塩酸（２６．２ｍｌ、０．３１４ｍｏｌ）を添加する。水およびＤＣＭ、次いでｐＨ＝７までの水酸化ナトリウムを流し込むことによって処理を行う。塩酸メタノール溶液（１８．９ｍｌ、０．０５８６ｍｏｌ）をＤＣＭ相に添加した後、溶媒をアセトニトリルで置換する。その結果、液体が得られる。次に、ベンジルアルコール（３１ｍｌ）をこの懸濁液に５０℃で添加し、６５℃で２時間維持する。冷却後、媒体を濾過し、洗浄する。その後、単離された生成物を減圧下で乾燥させる。
【００５３】
（実施例４から６）：実施例３と同じであるが、ベンジルアルコールの異なる量を用いる。
【００５４】
【表１】
2011513286.tif 000018
【００５５】
実施例５および７から９においては、ベンジルアルコール／（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の塩の割合が２．２５で固定され、アセトニトリル／（Ｚ）−および（Ｅ）−アミノ化合物の塩の割合は可変である。
【００５６】
【表２】
2011513286.tif 000019
【００５７】
実施例１０から１４は、Ｔ３Ｐ以外のカップリング剤を用いるカップリング（工程（ｉｉｉ））の結果を説明する。
【００５８】
（実施例１０（比較））：ＴＯＴＵの使用
工程（ｉｉｉ）の条件を繰り返すが、酸賦活剤としてのＴＯＴＵの存在下においてである（ＴＯＴＵ  １当量＋ＴＥＡ  ５当量）。最終収率は７１％のみである。
【００５９】
（実施例１１（比較））：ＴＯＴＵの使用
５℃のＴＥＡ（０．７１ｇ、７．０ｍｍｏｌ）、次いでＴＯＴＵ（０．４６ｇ、１．４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１０ｍｌ）、塩酸塩形態の（Ｚ）−アミノ化合物（０．５０ｇ、１．４  ｍｍｏｌ）およびＰＧ＝ＢＯＣである式（ＩＩ）の二重保護Ｌ−セリン（Ｌ−セリン−Ｎ−ＢＯＣ−アセトニド；０．３５ｇ、１．４ｍｍｏｌ）を含む媒体に流し込む。この媒体を５℃で２４時間維持した後、水（５ｍｌ）を添加する。沈殿による分離の後、有機相をＨＰＬＣによって分析する。カップリング生成物の定量的に決定される収率は５０．１％であり、この純度は６９．３％である。
【００６０】
（実施例１２（比較））：ＢＯＰ−Ｃｌ（塩化ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸）の使用
５℃のＮＭＭ（０．４２ｇ、４．２ｍｍｏｌ）、次いでＢＯＰ−Ｃｌ（０．７２ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（５ｍｌ）、（Ｚ）−アミノ化合物（０．５０ｇ、１．４ｍｍｏｌ）およびＰＧ＝ＢＯＣである式（ＩＩ）の二重保護Ｌ−セリン（Ｌ−セリン−Ｎ−ＢＯＣ−アセトニド；０．３５ｇ、１．４ｍｍｏｌ）を含む媒体に流し込む。この媒体を５℃で２４時間保持した後、水（５ｍｌ）を添加する。沈殿による分離の後、有機相をＨＰＬＣによって分析する。カップリング生成物の定量的に決定される収率は２９．１％であり、この純度は９１．６％である。
【００６１】
（実施例１３（比較））：ＰｙＣｌＯＰ（クロロトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）の使用
５℃のＮＭＮ（０．４２ｇ、４．２ｍｍｏｌ）、次いでＰｙＣｌＯＰ（１．２ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル（１０ｍｌ）、（Ｚ）−アミノ化合物（０．５０ｇ、１．４ｍｍｏｌ）およびＰＧ＝ＢＯＣである式（ＩＩ）の二重保護Ｌ−セリン（Ｌ−セリン−Ｎ−ＢＯＣ−アセトニド；０．７０ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を含む媒体に流し込む。この媒体を５℃で２４時間維持した後、水（５ｍｌ）を添加する。沈殿による分離の後、有機相をＨＰＬＣによって分析する。カップリング生成物の定量的に決定される収率は５３．３％であり、この純度は８３．９％である。
【００６２】
（実施例１４（比較））：ＰｙＢＲＯＰ（ブロモ−トリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）の使用
２５℃のＮＭＮ（０．４２ｇ、４．２ｍｍｏｌ）、次いでＰｙＢＲＯＰ（０．６５ｇ、１．４ｍｍｏｌ）を、Ｍｅ−ＣＮ（５ｍｌ）、（Ｚ）−アミノ化合物（０．５０ｇ、１．４ｍｍｏｌ）およびＰＧ＝ＢＯＣである式（ＩＩ）の二重保護Ｌ−セリン（Ｌ−セリン−Ｎ−ＢＯＣ−アセトニド；０．３５ｇ、１．４ｍｍｏｌ）を含む媒体に流し込む。この媒体を２５℃で２４時間維持した後、水（５ｍｌ）を添加する。沈殿による分離の後、有機相をＨＰＬＣによって分析する。カップリング生成物の定量的に決定される収率は２４．９％であり、この純度は７５．４％である。
【００６３】
【表３】
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Ｔ３Ｐが、カップリング生成物に関して、ＴＯＴＵ、ＢＯＰ−Ｃｌ、ＰｙＣｌＯＰまたはＰｙＢＲＯＰよりも良好な収率を得ることを可能にすることに留意されたい。
【国際調査報告】
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