(57)【要約】本発明は、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬及び、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩を、単独で、又はその他の抗アテローム性動脈硬化症薬と組み合わせて、その治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによる、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療するためのこれらの使用に関している。【選択図】図１２
2011528364.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
方法が、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている、哺乳動物に投与することを含有してなる、泡沫細胞の形成を阻害する方法。
【請求項２】
方法が、アデノシンＡ2Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている、哺乳動物に投与することを含有してなる、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療する方法。
【請求項３】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬が、式：
【化１５】
2011528364.tif 000017
（式中の、Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、（Ｃ７〜Ｃ１４）アラルキル、（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルケニル、又は（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルキニルであり；
Ｒ３は、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルケニル、又は（Ｃ２〜Ｃ５）アルキニルであり；
Ａは、炭素−炭素結合、炭素が１〜４個のアルキル鎖、炭素が２〜４個のアルケニル鎖、又は炭素が２〜４個のアルキニル鎖であり：
Ｘは、窒素、酸素、又は硫黄から選ばれる、１〜４個のヘテロ原子を含有している（但し、少なくとも１個のヘテロ原子は窒素である）、置換されていてもよい、５又は６員の芳香族複素環であり；
Ｍは、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキレン、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニレン、又は（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニレンであり（ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレン基の少なくとも１つの炭素原子はカルボニルとして存在し、そしてアルキレン、アルケニレン、又はアルキニレン基の残りの炭素原子の１つ又はそれ以上が−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ７）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、又は−Ｓ（Ｏ）２−に置き換わっていてもよい）；
Ｇ１及びＧ２は、独立して、ＣＨ又はＮであり；
Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルキニル、置換されていてもよい（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、（Ｃ７〜Ｃ１４）アラルキル、（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルケニル、又は（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルキニル、アシル、置換されていてもよいアルコキシ、アラルコキシアルキルチオ、アミノ、置換アミノ、ジ置換アミノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、ニトロ、シアノ、アジド、ヒドロキシ、スルフヒドリル、Ｓ（Ｏ）アルキル、Ｓ（Ｏ）２アルキル、ＣＯ２Ｈ、ＳＯ３Ｈであるか；又は
それらが結合している炭素原子と共に、Ｒ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６の何れか一方が、窒素、酸素、又は硫黄から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有している５又は６員の複素環又は芳香族複素環を形成するか；或いは
それらが結合している炭素原子と共に、Ｒ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６の何れか一方が独立して、−ＯＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ（Ｒ７）Ｏ−、−ＯＣ（Ｒ７）２Ｏ−、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、ＯＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−及び−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−を含有している縮合環の群から選ばれる、炭素環式又は複素環式の縮合環を形成してもよく；
Ｒ７は、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルケニル、又は（Ｃ２〜Ｃ５）アルキニルである）：
の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬が、式：
【化１６】
2011528364.tif 000018
（式中の、Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、（Ｃ７〜Ｃ１４）アラルキル、（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルケニル、又は（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルキニルであり；
Ｒ３は、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルケニル、又は（Ｃ２〜Ｃ５）アルキニルであり；
Ａは、炭素−炭素結合、炭素が１〜４個のアルキル鎖、炭素が２〜４個のアルケニル鎖、又は炭素が２〜４個のアルキニル鎖であり；
Ｘは、窒素、酸素、又は硫黄から選ばれる、１〜４個のヘテロ原子を含有していて（但し、少なくとも１個のヘテロ原子は窒素である）、低級アルキル、アミノ、ヒドロキシ、アルキルオキシ、アシルオキシ及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１又は２個の置換基で置換されていてもよい、５又は６員の芳香族複素環であり；
Ｍは、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキレン、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニレン、又は（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニレンであり（ここで、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレン基の少なくとも１つの炭素原子はカルボニルとして存在し、そしてアルキレン、アルケニレン、又はアルキニレン基の残りの炭素原子の１つ又はそれ以上が−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ７）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−に置き換わっていてもよい）；若しくは低級アルキルで置換されている炭素であり；
Ｇ１及びＧ２は、独立して、ＣＨ又はＮであり；
Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルキニル、置換されていてもよい（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、（Ｃ７〜Ｃ１４）アラルキル、（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルケニル、又は（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルキニル、アシル、置換されていてもよいアルコキシ、アラルコキシアルキルチオ、アミノ、置換アミノ、ジ置換アミノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、ニトロ、シアノ、アジド、ヒドロキシ、スルフヒドリル、Ｓ（Ｏ）アルキル、Ｓ（Ｏ）２アルキル、ＣＯ２Ｈ、ＳＯ３Ｈであるか；又は
それらが結合している炭素原子と共に、Ｒ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６の何れか一方が、窒素、酸素、又は硫黄から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有している５又は６員の複素環又は芳香族複素環を形成するか；或いは
それらが結合している炭素原子と共に、Ｒ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６の何れか一方が、−ＯＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ（Ｒ７）Ｏ−、−ＯＣ（Ｒ７）２Ｏ−、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、ＯＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−及び−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−を含有している縮合環の群から選ばれる、炭素環式又は複素環式の縮合環を形成し；
Ｒ７は、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルケニル、又は（Ｃ２〜Ｃ５）アルキニルである）：
の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬が、式：
【化１７】
2011528364.tif 000019
（式中の、Ｒ１及びＲ２は、独立して、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル又はアリルであり；
Ａは、炭素−炭素結合であり；
Ｘは、
【化１８】
2011528364.tif 000020
よりなる群から選ばれ；
Ｍは、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｏ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）−、及び  −ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−よりなる群から選ばれ；
Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルキニル、置換されていてもよい（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、（Ｃ７〜Ｃ１４）アラルキル、（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルケニル、又は（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルキニル、アシル、置換されていてもよいアルコキシ、アラルコキシ、アミノ、置換アミノ、ジ置換アミノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、ニトロ、ヒドロキシ、ＣＯ２Ｈであるか；又は
それらが結合している炭素原子と共に、Ｒ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６のどちらか一方が、窒素、酸素、又は硫黄から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有している５又は６員の複素環又は芳香族複素環を形成するか；或いは
それらが結合している炭素原子と共に、Ｒ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６のどちらか一方が、結合するＲ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６のどちらか一方が−ＯＣＨ２Ｏ−である、複素環式縮合環を形成する）：
の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬が、式：
【化１９】
2011528364.tif 000021
（式中の、Ｒ１及びＲ２は、独立して、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルであり；
Ａは、炭素−炭素結合であり；
Ｘは、
【化２０】
2011528364.tif 000022
よりなる群から選ばれ；
Ｍは、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり；
Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルキニル、置換されていてもよい（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、（Ｃ７〜Ｃ１４）アラルキル、（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルケニル、又は（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルキニル、アシル、置換されていてもよいアルコキシ、アラルコキシ、アミノ、置換アミノ、ジ置換アミノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、ニトロ、ヒドロキシ、ＣＯ２Ｈであるか；又は
それらが結合している炭素原子と共に、Ｒ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６のどちらか一方が、窒素、酸素、又は硫黄から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有している５又は６員の複素環又は芳香族複素環を形成するか；或いは
それらが結合している炭素原子と共に、Ｒ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６のどちらか一方が、−ＯＣＨ２Ｏ−を含有している複素環式縮合環を形成する）：
の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬が、式：
【化２１】
2011528364.tif 000023
（式中の、Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、（Ｃ７〜Ｃ１４）アラルキル、（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルケニル、又は（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルキニルであり；
Ｒ３は、Ｈ又は（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルであり；
Ｒ９は、独立して、フェニル又はピラゾール環；何れかの位置がアミノ、低級アルキル、又はカルボキシルで置換されているフェニル又はピラゾール環；又は何れか２つの位置がアミノ、低級アルキル、及びカルボキシルから選ばれる置換基で置換されているフェニル又はピラゾール環であるか；又は
Ｒ９は、
【化２２】
2011528364.tif 000024
よりなる群から選ばれる）：
の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項８】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬が、式：
【化２３】
2011528364.tif 000025
（式中の、Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、（Ｃ７〜Ｃ１４）アラルキル、（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルケニル、又は（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルキニルであり；
Ｒ８は、フェニル、置換フェニル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、又はベンジルである）：
の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項９】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬が、
８−（３−アミノ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１，３−ジプロピル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン；
［３−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）イソキサゾール−５−イル］メチル−安息香酸塩；
８−（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−ピロール−２−イル）−１，３−ジプロピル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン；
４−｛［５−（１，３−ジプロピル−２，６−ジオキソ−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−４−オキソブタン酸；
４−｛［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−４−オキソブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル；
４−｛［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−４−オキソブタン−１−アミニウムクロライド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−フェニルアセトアミド；
２−（２，４−ジクロロフェノキシ）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（４−イソブチルフェニル）アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（４−ニトロフェニル）アセトアミド；
２−［４−ベンジルオキシフェニル］−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
２−［４−ヒドロキシフェニル］−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−フェニルプロパンアミド；
（２Ｒ）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−フェニルプロパンアミド；
｛３−［（Ｅ）−２−（１，３−ジプロピル−７−メチル−２，６−ジオキソ−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）ビニル］イソキサゾール−５−イル｝メチル安息香酸塩
２−（４−クロロフェノキシ）−Ｎ−［５−（１，３−ジプロピル−２，６−ジオキソ−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（４−フルオロフェニル）アセトアミド；
２−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（３−クロロフェニル）アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（３−フルオロフェニル）アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−［４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル］アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（４−クロロフェニル）アセトアミド；
２−（３，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（４−｛［２−（トリフルオロメチル）ベンジル］オキシ｝フェニル）アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（４−｛［３−（トリフルオロメチル）ベンジル］オキシ｝フェニル）アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（４−｛４−ニトロ−ベンジルオキシ｝フェニル）アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］アセトアミド；
４−［（Ｅ）−２−（７−メチル−１，３−ジプロピル−２，６−ジオキソ−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）ビニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸フェニル
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］−２−フェニルアセトアミド；
８−（５−アミノ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１，３−ジプロピル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン；
８−（３−アミノ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１，３−ジメチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジメチル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−フェニルアセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（３，４−ジフルオロフェニル）アセトアミド；
２−（２，３，４−トリメトキシフェニル）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
Ｎ−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−Ｎ’−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］尿素；
Ｎ−（３−クロロフェニル）−Ｎ’−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］尿素；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−Ｎ’−（３−メトキシフェニル）尿素；
２−［４−（ベンジルオキシ）−３−メトキシフェニル］−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
２−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）アセトアミド；
Ｎ−（４−メチルフェニル）−２−｛［５−（１，３−ジプロピル−２，６−ジオキソ−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］オキシ｝アセトアミド；
Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−｛［３−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］オキシ｝アセトアミド；
Ｎ−（４−フルオロフェニル）−２−｛［３−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］オキシ｝アセトアミド；
２−｛［３−（１，３−ジイソブチル−２，６−ジオキソ−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］オキシ｝−Ｎ−（４−フルオロフェニル）アセトアミド；
２−｛［３−（１，３−ジイソブチル−２，６−ジオキソ−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］オキシ｝−Ｎ−（４−ブロモフェニル）アセトアミド；
２−｛［５−（２，６−ジオキソ−１．３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］オキシ｝−Ｎ−（４−フルオロフェニル）アセトアミド；
２−｛［５−（２，６−ジオキソ−１．３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］オキシ｝−Ｎ−（４−ブロモフェニル）アセトアミド；
２−｛［５−（１，３−ジイソブチル−２，６−ジオキソ−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］オキシ｝−Ｎ−（４−フルオロフェニル）アセトアミド；
２−｛［５−（１，３−ジイソブチル−２，６−ジオキソ−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］オキシ｝−Ｎ−（４−ブロモフェニル）アセトアミド；
Ｎ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル−２−｛［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］オキシ｝アセトアミド；
２−｛［５−（２，６−ジオキソ−１．３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］オキシ｝−Ｎ−（４−メトキシフェニル）アセトアミド；
１−［５−（２，６−ジオキソ−１．３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−３−（４−メトキシフェニル）−尿素；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（４−ｓｅｃ−ブチル−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（４−メチル−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（４−（モルホリン−４−イル）−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（４−カルボキシ−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（３，４−ジメチル−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（３，４−ジメトキシ−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（ピリジン−４−イル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［２−オキソ−２−（４−フェニル−ピペラジン−１−イル）−エトキシ」−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
８−（５−｛２−［４−（４−フルオロフェニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−エトキシ｝−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１，３−ジプロピル−３，７−ジヒドロ−プリン−２，６−ジオン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［２−オキソ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−エトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
８−（５−｛２−［４−（４−ベンジル−フェニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−エトキシ｝−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１，３−ジプロピル−３，７−ジヒドロ−プリン−２，６−ジオン；
１，３−ジアリル−８−｛５−［２−オキソ−２−（４−フェニル−ピペラジン−１−イル）−エトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛３−［（３，４−メチレンジオキシ−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−イソキサゾール−５−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛３−［（３，４−ジメトキシ−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−イソキサゾール−５−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛３−［（４−フルオロ−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−イソキサゾール−５−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛３−［（４−メトキシ−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−イソキサゾール−５−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛６−［（４−ヨード−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−ピリジン−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛６−［（４−ヨード−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−ピリダジン−３−イル｝−キサンチン；
Ｎ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル−２−｛［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジアリル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］オキシ｝アセトアミド；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（４−（エトキシカルボニル）−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−（２−ヒドロキシピリジン−５−イル）−キサンチン；及び
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（４−（アミノスルホニル）フェニルカルバモイル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチンよりなる群から選ばれる、又はこれらの薬学的に許容される塩である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項１０】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬が、
【化２４】
2011528364.tif 000026
よりなる群から選ばれる、又はそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項１１】
方法が、脳卒中及び心臓発作の予防を更に含有してなる、請求項１〜１０の何れか一項に記載の方法。
【請求項１２】
方法が、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び
（１）ＡＣＥ阻害薬；
（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；
（３）レニン阻害剤；
（４）利尿剤；
（５）カルシウムチャネル遮断薬；
（６）β−ブロッカー；
（７）血小板凝集阻害薬；
（８）コレステロール吸収調節薬；
（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；
（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；
（１１）ＡＣＡＴ阻害薬；及び
（１２）アデノシンＡ３受容体拮抗薬；
よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、
又はそれぞれの場合に、それらの薬学的に許容される塩：
との組み合わせの治療有効量を、それを必要としている、哺乳動物に投与することを含有してなる、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療する方法。
【請求項１３】
方法が、脳卒中及び心臓発作の予防を更に含有してなる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
方法が、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及びアデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、との組み合わせの治療有効量を、それを必要としている、哺乳動物に投与することを含有してなる、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療する方法。
【請求項１５】
方法が、脳卒中及び心臓発作の予防を更に含有してなる、請求項１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、及びアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬又はそれらの薬学的に許容される塩を、単独で又はその他の抗アテローム性動脈硬化症薬と組合わせて、その治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによるアテローム性動脈硬化症を予防及び治療するためのこれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
心血管疾患は、特に米国及び西欧諸国において、罹患率及び死亡率の主因である。心血管疾患で最も高頻度に見られる、アテローム性動脈硬化症は、心臓発作、脳卒中及び血管循環問題の本質的原因である。アテローム性動脈硬化症は、多くの細胞型、生化学的事象及び分子的因子に関連している複雑な疾患である。病気に対する遺伝的素因、性別、喫煙及びダイエットのような生活習慣、年齢、高血圧、及び高コレステロール血症を含む高脂血症を含む、幾つかの原因因子が、心血管疾患の発症に関係している。これらの因子の幾つか、特に高脂血症及び高コレステロール血症（高血中コレステロール濃度）がアテローム性動脈硬化症に関連する重要な危険因子をもたらしている。
【０００３】
コレステロールは、カイロミクロンとして一般に知られている、リポタンパク質粒子、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬｓ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬｓ）、及び高密度リポタンパク質（ＨＤＬｓ）内に遊離及びエステル化したコレステロールとして、血中に存在している。血中総コレステロールの濃度は、（１）消化管からのコレステロールの吸収、（２）炭水化物、タンパク質、脂肪及びエタノールのような食品成分からのコレステロールの合成、及び（３）組織、特に肝臓による血液からのコレステロールの除去、及びそれに続くコレステロールの胆汁酸、ステロイドホルモン、及び胆汁性コレステロールへの変換、による影響を受ける。コレステロールの蓄積による、マクロファージ泡沫細胞の形成が、アテローム性動脈硬化症の発症における重要な事象である。
【０００４】
血中コレステロール濃度の維持は、遺伝因子及び環境因子の両方による影響を受ける。遺伝因子は、コレステロール生合成における律速酵素の濃度、肝臓における低密度リポタンパク質の受容体の濃度、コレステロールを胆汁酸へ変換する律速酵素の濃度、リポタンパク質を合成及び分泌する速度、及びヒトの性別を包含する。ヒトにおける血中コレステロール濃度の止血に影響する環境因子は、食事構成、喫煙率、身体的活動、各種医薬品の使用を包含する。食事変数は、脂肪（飽和及び多価不飽和脂肪酸）の量及び種類、コレステロールの量、繊維の量及び種類、及び多分、ビタミンＣ及びＤのようなビタミン並びにカルシウムのようなミネラルの量を包含する。
【０００５】
臨床研究によって、高い血漿ＬＤＬ濃度が、加速されたアテローム発生、すなわち、アテローム性動脈硬化症の形成と関連するということが確証されている。
【０００６】
一方、高血圧が、脳卒中、心臓発作、心不全及び不整脈のような心血管疾患の主な原因であるということがよく認識されている。高血圧は、体中を循環する血管内の血液の圧力が正常より高い状態（疾患）である。長時間にわたって収縮期圧が１５０ｍｍＨｇより高い或いは拡張期圧が９０ｍｍＨＧを上回るときは、身体に損傷を受ける。例えば、過度な収縮期圧は何れかの血管を破裂させる可能性があり、脳内でそれが起こると、脳卒中をもたらす。高血圧は、最終的にアテローム性動脈硬化症をもたらす、血管の肥厚及び狭窄も引き起こす。
【０００７】
しかしながら、高血圧を減少させても、冠動脈疾患の罹病率及び死亡率に期待したより低い影響を与える。考えられる１つの理由は、抗−高血圧薬の異なった抗−動脈硬化能力である。高血圧の減少は、それ自体、抗−動脈硬化作用を有しているが、ある抗−高血圧薬については、血圧低下を凌駕する抗−動脈硬化特性が実験的及び臨床的に証拠付けられている。例えば、カルシウム拮抗薬については、大動脈脂質沈着の縮小及び動脈増殖の減少を報告する、実験データが発表されている。
【０００８】
アデノシンは、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３に分類される４つの細胞膜受容体の活性化を介して多数の生理学的機能を発揮する。全てのアデノシンサブクラスがＧ−タンパク質結合受容体に属しているが、これらは異なったセカンドメッセンジャー系に関連している。最近、アデノシンＡ２Ｂアデノシン受容体の分子薬理学及び生理学の理解において著しい進歩を遂げている。
【０００９】
アデノシンＡ２Ｂ受容体は、肥満細胞分泌、遺伝子発現、細胞増殖、腸管機能、神経分泌、血管拡張及び喘息の調節に関連していると考えられている。一般にＡ２Ｂアデノシン受容体サブタイプの拮抗薬は抗炎症作用を有していると開示されている。
【発明の概要】
【００１０】
驚くべきことに、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬は、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬の抗炎症効果とは無関係に、アテローム性動脈硬化性プラーク蓄積の進行を阻害又は遅延することにより、アテローム性動脈硬化症の予防及び治療に用いることができるということをこの度見出した。従って、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬は、脳卒中及び心臓発作の予防にも用いることができる。更に驚くべきことに、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬は、アテローム性動脈硬化性プラークの退縮のために用いることができる。
【００１１】
従って、本発明は、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法を提供し、その方法はアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、単独で又はその他の治療薬剤と組合わせて、哺乳動物に投与することを含有している。
【００１２】
本発明の方法で用いられるアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬は、これに限定されないが、式
【００１３】
【化１】
2011528364.tif 000003
【００１４】
（式中の、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｇ１、及びＧ２は本明細書の発明の詳細な説明に記載されているような意味を有している）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩を包含する。
【００１５】
本発明のその他の目的、特徴、利点及び態様は以下の記載及び添付されている特許請求の範囲から当業者には明らかになるだろう。しかしながら、以下の記載、添付されている特許請求の範囲、及び具体的な実施例は、本発明の好ましい実施態様を示しているとはいえ、説明することだけを目的として示されていることを理解されたい。開示されている発明の精神及び範囲内の多様な変更及び修正は以下の記載から当業者には容易に明らかになるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１Ａ、１Ｂ、１Ｃ及び１Ｄは、正常酸素（Ｎ）及び低酸素（Ｈ）条件下での、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞、ヒトマクロファージ（ＨＭ）及び泡沫細胞（ＦＣ）における、アデノシンＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体のｍＲＮＡ及びタンパク質の発現をそれぞれ示す。アデノシンＡ２Ｂ受容体の発現レベルを、各試料における内部標準（βアクチン）の発現レベルに対して正規化している。
【図２】図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ及び２Ｄは、正常酸素（Ｎ）及び低酸素（Ｈ）条件下での、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞、ヒトマクロファージ（ＨＭ）及び泡沫細胞（ＦＣ）における、アデノシンＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体の発現のウェスタンブロット分析をそれぞれ示す。細胞抽出物を調製して、抗Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３抗体を用いるイムノブロットアッセイに付した。チューブリンはタンパク質の等負荷を示す。
【図３】図３Ａ、３Ｂ、３Ｃ及び３Ｄは、結合試験によって評価した、ヒトＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシン受容体のＢｍａｘ（タンパク質のｆｍｏ／ｍｇ）をそれぞれ示す。値は平均値であって、縦軸は、それぞれ３回実施した４つの独立した実験の平均の標準誤差（Ｓ．Ｅ．）を表す。
【図４】図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄ、４Ｅ、４Ｆ及び４Ｇは、正常酸素（Ｎ）条件下（それぞれ、図４Ａ、４Ｃ及び４Ｅ）及び低酸素（Ｈ）条件下（４Ｂ、４Ｄ、４Ｆ及び４Ｇ）での、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞、ヒトマクロファージ（ＨＭ）及び泡沫細胞（ＦＣ）におけるＨＩＦ−１αに対する１００μＭアデノシンの効果を示す。Ｕ９３７細胞を、５０及び１００μｇのｏｘＬＤＬで処理した（図４Ｅ、４Ｇ及び４Ｆ）。ＨＩＦ−１βはタンパク質の等負荷を示す。ＨＩＦ−１αのウェスタンブロットのデンシトメトリー定量化では、平均±Ｓ．Ｅ．値（Ｎ＝３）であり；対照と比較して＊Ｐ＜０．０５。
【図５】図５は、ＨＩＦ−１αの蓄積及び１００ｎＭのＭＲＥ−３００８Ｆ２０、ＳＣＨ５８２６１、ＤＰＣＰＸ及びＭＲＥ−２０２９Ｆ２０による拮抗作用に対するアデノシン（１００ｎＭ）の効果を示す。ＨＩＦ−１αウェスタンブロットのデンシトメトリー定量化では、平均±Ｓ．Ｅ．値（Ｎ＝３）である。
【図６】図６は、アデノシン受容体作動薬の非存在下（カラム１）、及び存在下：１０及び１００ｎＭのＣＨＡ（カラム２、３）；５００及び１０００ｎＭのＣＧＳ２１６８０（カラム４、５）；１０及び１００ｎＭの１−デオキシ−１−［６−｛４−［（フェニルカルバモイル）−メトキシ］フェニルアミノ｝−９Ｈ−プリン−９−イル］−Ｎ−エチル−β−Ｄ−リボフラヌロンアミド（カラム６、７）；１０及び１００ｎＭのＣＩ−ＩＢ−ＭＥＣＡ（カラム８、９）：におけるＨＩＦ−１αの蓄積を示す。ＨＩＦ−１αウェスタンブロットのデンシトメトリー定量化では、平均±Ｓ．Ｅ．値（Ｎ＝３）であり；対照と比較して＊Ｐ＜０．０５。
【図７】図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｆ、７Ｇ、７Ｈ及び７Ｉは、泡沫細胞（ＦＣ）におけるｓｉＲＮＡトランスフェクションによるアデノシン受容体サイレンシングを示す。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによる、βアクチンｍＲＮＡに関連している、アデノシン受容体ｍＲＮＡの相対的定量化。泡沫細胞を、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシン受容体のｍＲＮＡでトランスフェクトして（それぞれ、図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ及び７Ｄ）、２４時間、４８時間及び７２時間培養した。プロットは平均±Ｓ．Ｅ．値（Ｎ＝３）であり、対照と比較して（０時点）＊Ｐ＜０．０１。それぞれのアデノシン受容体サブタイプのｓｉＲＮＡで処理して２４、４８及び７２時間培養した泡沫細胞由来のタンパク質抽出物の、抗Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体ポリクローナル抗体を用いるウェスタンブロット分析（それぞれ、図７Ｅ、７Ｆ、７Ｇ及び７Ｈ）。チューブリンはタンパク質の等負荷を示す。図７Ｉは、ｓｉＲＮＡの非存在下（カラム２）、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ又はＡ３アデノシン受容体のｓｉＲＮＡの存在下（それぞれ、カラム３、４、５、６）、並びにＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシン受容体のｓｉＲＮＡの同時存在下（ｓｉＡｄｏＲｓ）（カラム７）における、ＨＩＦ−α調節に対するアデノシンの効果を示す。ウェスタンブロットのデンシトメトリー定量化では、平均±Ｓ．Ｅ．値（Ｎ＝３）であり；対照（カラム１）（７２時間スクランブルトランスフェクションした細胞）と比較して＊Ｐ＜０．０５。
【図８】図８は、ＶＥＧＦ分泌に対するアデノシンの効果を示す。泡沫細胞を、１００ｎＭのＤＰＣＰＸ、ＳＣＨ５８２６１、ＭＲＥ−３００８Ｆ２０又はＭＲＥ−２０２９Ｆ２０の存在下及び非存在下で１００μＭのアデノシンで処理した。棒グラフは平均値であり、そして縦軸はそれぞれ３回実施した、４つの独立した実験の平均の標準誤差を示し；対照又は７２時間スクランブルトランスフェクションした細胞（−ｓｉＲＮＡ）と比較して＊Ｐ＜０．０５。
【図９】図９は、ＩＬ-８分泌に対するアデノシンの効果を示す。泡沫細胞を、１００ｎＭのＤＰＣＰＸ、ＳＣＨ５８２６１、ＭＲＥ−３００８Ｆ２０又はＭＲＥ−２０２９Ｆ２０の存在下及び非存在下で１００μＭのアデノシンで処理した。棒グラフは平均値であり、そして縦軸はそれぞれ３回実施した、４つの独立した実験の平均値の標準誤差を示し；対照又は７２時間スクランブルトランスフェクションした細胞（−ｓｉＲＮＡ）と比較して＊Ｐ＜０．０５。
【図１０】図１０Ａ，１０Ｂ、１０Ｃ及び１０Ｄは、アデノシンＡ３受容体拮抗薬ＭＲＥ−３００８Ｆ２０の添加による、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンの存在下でのＰＭＡで処理したＵ９３７細胞からの泡沫細胞形成の阻害を示す。細胞を、ｏｘＬＤＬの非存在下で（図１０Ａ）、ｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）の存在下であるが、アデノシンの非存在下で（図１０Ｂ）、又はｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）及びアデノシン（１００μＭ）の存在下で（図１０Ｃ）、３７℃で２４時間の培養による並行培養でオイルレッドＯで脂肪染色し、続いてパラホルムアルデヒド固定した。図１０Ｄは、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンが誘発する泡沫細胞形成に対するＡ３受容体拮抗薬ＭＲＥ−３００８Ｆ２０（１００ｎＭ）の効果を示す。
【図１１】図１１Ａ、１０Ｂ及び１０Ｃは、アデノシンＡ３受容体拮抗薬ＶＵＦ５５７４の添加による、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンの存在下でのＰＭＡで処理したＵ９３７細胞からの泡沫細胞形成の阻害を示す。細胞を、ｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）の存在下であるが、アデノシンの非存在下で（図１１Ａ）、又はｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）及びアデノシン（１００μＭ）の存在下で（図１１Ｂ）、３７℃で２４時間の培養による並行培養でオイルレッドＯで脂肪染色し、続いてパラホルムアルデヒド固定した。図１１Ｃは、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンが誘発する泡沫細胞形成に対するＡ３受容体拮抗薬ＶＵＦ５５７４（１０ｎＭ）の効果を示す。
【図１２】図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ及び１２Ｄは、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０の添加による、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンの存在下でのＰＭＡで処理したＵ９３７細胞からの泡沫細胞形成の阻害を示す。細胞を、ｏｘＬＤＬの非存在下で（図１２Ａ）、ｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）の存在下であるが、アデノシンの非存在下で（図１２Ｂ）、又はｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍＬ）及びアデノシン（１００μＭ）の存在下で（図１２Ｃ）、３７℃で２４時間の培養による並行培養でオイルレッドＯで脂肪染色し、続いてパラホルムアルデヒド固定した。図１２Ｄは、ｏｘＬＤＬ及びアデノシンが誘発する泡沫細胞形成に対するアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０（１００ｎＭ）の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本明細書の上で述べたように、マクロファージ泡沫細胞形成は、アテローム性動脈硬化性病変及びプラークの進行における重要な過程である。アテローム性動脈硬化症は、動脈の壁にある損傷易発性部位の内皮細胞の機能障害によって始まって、動脈内膜への単球の侵入をもたらす。次いで、これらの細胞は、徐々にコレステロールを負荷した大きい「泡沫細胞」に変化する、大量の酸化ＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ）を取り込むマクロファージに分化する。顕微鏡下では、この時点で、動脈壁中の脂肪線条として病変が現れる。アテローム性動脈硬化性病変の進行によって、動脈壁の厚さが増大して内膜への酸素伝播が著しく減少する。これらの低酸素領域は、これらの細胞がアテローム性動脈硬化性病変及びプラークが発症している間は低酸素に見舞われることを露呈する大量の泡沫細胞を含有している。実際、動脈壁における酸素の需要と供給のアンバランスがアテローム性動脈硬化性病変の進行に対する重要な因子であると示唆されている（Bjornheden et al., Arterioscler. Thromb. Vasc., 1989, 19, 870-876）。
【００１８】
低酸素に対する細胞応答に関与している最も重要な因子である、低酸素誘導因子−１（ＨＩＦ−１）は、誘導発現されるＨＩＦ−１αサブユニット及び恒常的に発現されるＨＩＦ−１βサブユニットからなるヘテロ二量体転写因子である（Semenza et al., Trends Mol. Med.,2001, 7:345-350）。ｏｘＬＤＬが低酸素誘導因子−１（ＨＩＦ−１）のヒトＭｏｎｏ−Ｍａｃ−６マクロファージ内への蓄積を誘発することが報告されていて、ＨＩＦ−１がアテローム性動脈硬化症に関与していることを示唆している。ＨＩＦ−１が血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現及び血管形成に重要な役割を果たしているということは、ＶＥＧＦがマクロファージのアテローム発生及び血管形成活性に関連する重要な変更を介在するという認識によって確立されている。最近の研究結果では、アテローム性動脈硬化性プラーク内の新血管形成が進行したアテローム性動脈硬化症／再狭窄の兆候であることを示唆している（Shatrov et al., Blood, 2003, 101:4847-4849）。更に、アテローム性動脈硬化状態ではマクロファージにおけるＨＩＦ−１の高発現が泡沫細胞形成及びアテローム性動脈硬化症を促進することが報告されている（Jiang et al., Eur. J. Pharmacol., 2007, 562:183-190）。
【００１９】
ヒトのアテローム性動脈硬化組織から単離された泡沫細胞は、その他の強力な血管形成剤、インターロイキン−８（ＣＸＣＬ−８、ＩＬ−８）のレベルの上昇を示す。最近、ＣＸＣＬ８が、ウサギ及びヒト動脈硬化性プラーク内の低酸素領域中で見つけられた泡沫細胞によって上方制御されることが示されている。泡沫細胞からのＣＸＣＬ８の低酸素誘発分泌が、平滑筋、血管内皮及びＴ細胞のアテローム性動脈硬化性プラーク内への動員、それによるプラークの進行を引き起こすだろうということが報告されている。アテローム性動脈硬化症及び癌の全てのステージにおいて、新血管形成が組織病理学の主要特性である。
【００２０】
プリンヌクレオシドである、アデノシンは、特にエネルギーの供給が細胞エネルギーの需要量を満たさないとき、組織機能の主要な局所調節因子として合意の上に同定されているので、１９８０年代には、報復的代謝物と評価されていた（Newby A.C., Trends Biol. Sci., 1984, 9:42-44）。低酸素、虚血、炎症及び損傷の間は、アデノシン濃度が非常に高濃度に達すると考えられる。このような条件下で、アデノシンは細胞外空間に放出されて、細胞外Ｇ−タンパク質の活性化を介して、アデノシン受容体、すなわち、アデノシンＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体サブタイプ、を結合するように伝達する。Ａ３受容体の活性化を介して、アデノシンが、ある特定の癌細胞株において、低酸素条件下でＨＩＦ−１αの蓄積を誘発して、引き続きＶＥＧＦ濃度を増大することが報告され、癌性血管形成におけるアデノシンの強力な役割を示唆している（Merighi et al., Biochem. Pharmacol., 2006, 72:19-31; Merighi et al., Mol. Pharmacol., 2007, 72:395-406）。更に、イヌのマクロファージにおいて、アデノシンＡ２Ａ受容体サブタイプの活性化がＨＩＦ−１α及びＶＥＧＦの蓄積を誘発するのに対して、単球中で増大した濃度のＶＥＧＦがＡ１受容体の活性化と関連していることが、最近報告されている（De Ponti et al., J. Leukoc. Biol., 2007, 82:392-402; Ramanathan et al., Molecular Biology of the Cell, 2007, 18:14-23）。
【００２１】
驚くべきことに、アデノシンＡ２Ｂ受容体がマクロファージの泡沫細胞への低酸素誘導形質転換を促進することがこの度見出された。更に、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬が泡沫細胞の形成を阻害するために使用できるということが見出された。従って、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬は動脈硬化性プラーク蓄積の進行を抑えて遅延させることによってアテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防するために使用できる。更に驚くべきことに、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬が動脈硬化性プラークの退縮のために使用できることが明らかにされている。
【００２２】
従って、本発明は、泡沫細胞形成を阻害する方法、それによりアテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法を提供し、この方法は、それを必要としている哺乳動物に、アデノシンＡ2Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を投与することを含有している。
【００２３】
更に本発明は、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬を、（１）アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）アシル−ＣｏＡ：コレステロールＯ−アシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ３受容体拮抗薬；又はそれぞれの場合に、それらの薬学的に許容される塩：よりなる群から選ばれる少なくとも１つの別の治療薬と組み合わせて含有してなる、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防するための併用治療を提供する。
【００２４】
言い換えれば、本発明はアテローム性動脈硬化症の予防及び治療、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法を提供し、その方法は、それを必要としている哺乳動物に、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び：
（１）ＡＣＥ阻害薬；
（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；
（３）レニン阻害剤；
（４）利尿剤；
（５）カルシウムチャネル遮断薬；
（６）β−ブロッカー；
（７）血小板凝集阻害薬；
（８）コレステロール吸収調節薬；
（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；
（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；
（１１）ＡＣＡＴ阻害薬；及び
（１２）アデノシンＡ３受容体拮抗薬；
又はそれぞれの場合に、それらの薬学的に許容される塩：
よりなる群から選ばれる少なくとも１つの別の治療薬の組み合わせの治療有効量を投与することを含有している。
【００２５】
以下に記載されているものは、本発明のある特定の態様を述べるために本明細書で用いられている多様な用語のいくつかの定義である。しかしながら、本明細書で用いられている定義は、当該技術分野で一般に知られているようなもので、特定の場合にこれらが別段に限定されていない限り、これらは明細書を通して用いられる。
【００２６】
用語「予防」は、本明細書の上で述べられている疾患の発症を予防するために健康な患者に予防的に投与することを示す。
【００２７】
用語「治療」は、病気、疾患又は障害、例えばアテローム性動脈硬化性プラーク蓄積の進展と闘うことを目的とする患者の管理及びケアと理解される。
【００２８】
用語「治療有効量」は、研究者又は医者が求める組織、系又は動物（ヒトを含む）の目的とする生物学的又は医学的応答を引き起こすであろう薬物又は治療薬の量を示す。
【００２９】
用語「哺乳動物又は患者」は本明細書では互換的に用いられて、これに限定されないが、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ウシ、サル、ウサギ、マウス及び実験動物を包含する。好ましい哺乳動物はヒトである。
【００３０】
用語「薬学的に許容される塩」は、当該技術分野で周知の方法に従って製造できる製薬業界で通常用いられている非毒性の塩を示す。本発明で用いられる化合物の薬学的に許容される塩は、酸で形成される塩、すなわち、鉱酸、有機カルボン酸及び有機スルホン酸、
例えばそれぞれに塩酸、マレイン酸及びメタンスルホン酸のような酸付加塩を示す。同様に、本発明で用いられる化合物の薬学的に許容される塩は、塩基で形成される塩、すなわち、アルカリ及びアルカリ土類金属塩、例えば、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウム塩、更にアンモニウム塩、例えばアンモニウム、トリメチルアンモニウム、ジエチルアンモニウム及びトリス（ヒドロキシメチル）−メチル−アンモニウム塩及び酸性基が構造の一部を構成する場合に、アミノ酸との塩のようなカチオン性の塩を示す。
【００３１】
用語、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬と、本明細書の上で言及されているその他の治療薬、又はいずれの場合も、それらの薬学的に許容される塩、との「併用」は、その成分を、１つの医薬組成物として、又はその１部として、単一剤形で一緒に投与できることを意味する。併用は、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び本明細書の上で言及されているその他の治療薬（複数も可）、又はいずれの場合も、それらの薬学的に許容される塩を、それぞれ別々にしかし同一投与計画の１部として投与することも包含する。別々に投与する場合に、それが好ましくそれが可能であっても、成分を実質的に同時に投与する必要はない。従って、併用は、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩と、その他の治療薬、又はいずれの場合も、それらの薬学的に許容される塩とを、異なった調剤又は剤形として、しかし同時に投与することも示す。併用は、異なった時点であらゆる順序で別々に投与することも包含する。
【００３２】
本明細書で用いられる用語「低級アルキル」は、対応する１〜１０個の炭素原子を有するアルケン由来の、直鎖又は分枝鎖の１価のラジカル、すなわち、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル（全ての異性体）等、を意味する。同様に「低級アルキレン」は、対応するアルカンの２価のラジカルを示す。更に、本明細書で用いられる、アルコキシ、アルカノイル、アルケニル、シクロアルケニル、その他のような、アルカンから由来する名称を有するその他の残基は、「低級」で修飾される場合、１０個以下の炭素原子の炭素鎖を有する。炭素の最小数が１より大きい、例えばアルケニル（２個の炭素が最小）及びシクロアルキル（３個の炭素が最小）のような場合は、「低級」が、少なくとも炭素の最小数を意味すると理解できる。
【００３３】
本明細書で用いられる用語「置換アルキル」は、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオケト、カルボキシル、カルボキシアルキル、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−Ｓ（Ｏ）−アルキル、−Ｓ（Ｏ）−置換アルキル、−Ｓ（Ｏ）−アリール、−Ｓ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｓ（Ｏ）２−アルキル、−Ｓ（Ｏ）２−置換アルキル、−Ｓ（Ｏ）２−アリール、−Ｓ（Ｏ）２−ヘテロアリール、並びにモノ−及びジアルキルアミノ、モノ−及びジ（置換アルキル）アミノ、モノ−及びジアリールアミノ、モノ−及びジヘテロアリールアミノ、モノ−及びジヘテロシクリルアミノ、並びにアルキル、アリール、ヘテロアリール並びにヘテロシクリルよりなる群から選ばれる異なった置換基を有している非対称ジ置換アミノ基よりなる群から選ばれる、１〜５個の置換基、そして好ましくは１〜３個の置換基を有している、アルキル基、好ましくは１〜１０炭素原子のもの（「置換低級アルキル」）を示す。本明細書で用いられる、接頭辞「置換」を有するその他の残基は、１つ又はそれ以上の上記置換基を包含するように意図されている。
【００３４】
本明細書で用いられる用語「アルコキシ」は、基「アルキル−Ｏ−」を示し、ここでアルキルは上で定義されているようなものである。好ましいアルコキシ基は、例示すると、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ｎ−ヘキソキシ、１，２−ジメチルブトキシな等を包含する。
【００３５】
本明細書で用いられる用語「アルケニル」は、好ましくは２〜１０個の炭素原子、そしてより好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、少なくとも１つ、好ましくは１つ又は２つのアルケニル不飽和部分を有しているアルケニル基を示す。好ましいアルケニル基は、エテニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、ｎ−プロペニル（−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２）、イソ−プロペニル（−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２）等を包含する。
【００３６】
本明細書で用いられる用語「アルキニル」は、好ましくは２〜１０個の炭素原子、そしてより好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、少なくとも１つ、好ましくは１つ又は２つのアルキニル不飽和部分有している、アルキニル基を示す。
【００３７】
本明細書で用いられる用語「アシル」は、基アルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換アルキル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、アリール−Ｃ（Ｏ）−、置換アリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−及び複素環−Ｃ（Ｏ）−、を示し、ここでアルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及び複素環は本明細書に定義されているようなものである。
【００３８】
本明細書で用いられる用語「アシルアミノ」は、基−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲを示し、ここでそれぞれのＲは、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、又はヘテロシクリルであって、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロシクリルは本明細書に定義されているようなものである。
【００３９】
本明細書で用いられる用語「アリール」は、単環（例えば、フェニル）又は複数の縮合（condensed、fused）環（例えば、ナフチル又はアントリル）を有する、６〜１４個の炭素原子の不飽和芳香族炭素環式基を示す。好ましいアリールは、フェニル、ナフチル等を包含する。特に別段のアリール置換基の定義に制約されない限り、このようなアリール基は、アシルオキシ、ヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリル、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、複素環、ヘテロシクロオキシ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、−Ｓ（Ｏ）−アルキル、−Ｓ（Ｏ）−置換アルキル、−Ｓ（Ｏ）−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−Ｓ（Ｏ）２−アルキル、−Ｓ（Ｏ）２−置換アルキル、−Ｓ（Ｏ）２−アリール、−Ｓ（Ｏ）２−ヘテロアリール、トリハロメチルよりなる群から選ばれる１〜５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基で随意に置換されていてもよい。好ましい置換基はアルキル、アルコキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、及びチオアルコキシを包含する。
【００４０】
本明細書で用いられる用語「シクロアルキル」は、単一の環状リング又は複数の縮合環を有している３〜１２個の炭素原子の環状アルキル基を示す。このようなシクロアルキル基は、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチル等のような単環構造、又はアダマンチル等のような多環構造を包含する。
【００４１】
本明細書で用いられる用語「ハロ」又は「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを示して、フルオロ、ブロモ又はクロロが好ましい。
【００４２】
本明細書で用いられる用語「ヘテロアリール」は、１〜１５個の炭素原子、及び少なくとも１つの環内に（１つより多い環がある場合）酸素、窒素及び硫黄よりなる群から選ばれる、１〜４個のヘテロ原子を有する、芳香族複素環を示す。
【００４３】
特に別段のヘテロアリール置換基の定義に制約されない限り、このようなヘテロアリール基は、アシルオキシ、ヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリル、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシアルキル、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、複素環、ヘテロシクロオキシ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、−Ｓ（Ｏ）−アルキル、−Ｓ（Ｏ）−置換アルキル、−Ｓ（Ｏ）−アリール、−Ｓ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｓ（Ｏ）２−アルキル、−Ｓ（Ｏ）２−置換アルキル、−Ｓ（Ｏ）２−アリール、−Ｓ（Ｏ）２−ヘテロアリール、トリハロメチルよりなる群から選ばれる１〜５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基で随意に置換されていてもよい。好ましい置換基はアルキル、アルコキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、及びチオアルコキシを包含する。このようなヘテロアリール基は単環（例えば、ピリジル又はフリル）又は多縮合環（例えば、インドリジニル又はベンゾチエニル）を有することができる。
【００４４】
「複素環」又は「ヘテロシクリル」は、単環又は多縮合環、１〜１５個の炭素原子、及びその環内に酸素、窒素及び硫黄よりなる群から選ばれる１〜４個のヘテロ原子、を有する１価の飽和又は不飽和炭素環基を示す。このような複素環基は、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、アリールオキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、ヘテロアリール、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、トリハロメチル等よりなる群から選ばれる１〜５個の置換基で随意に置換されていてもよい。このような複素環基は単環又は多縮合環を有することができる。
【００４５】
１つ又はそれ以上の置換基を含有している上記のあらゆる基に関して、そのような基が、立体的に非現実的でそして／又は合成的に実施不可能である置換又は置換パターンを何れも含んでいないことは、もちろん、理解される。
【００４６】
本発明が適用する適切なアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬は、ＰＳＢ１１１５カリウム塩、ＰＳＢ６０３、ＭＲＳ１７５４及びアロキサジン（Sigma-aldrichi 及び／又は Tocris Bioscience から市販されている）を包含する。その他の適切な拮抗薬は、米国特許第６，５４５，００２号；米国特許第６，８２５，３４９号；米国特許第６，９１６，８０４号；米国特許第７，１６０，８９２号；米国特許第７，２０５，４０３号；及び米国特許第７，３４２，００６号（これらの全内容は参照により本明細書に取り込まれている）に開示されているようなものを包含する。
【００４７】
随意に、本発明の方法で用いられるアデノシンＡ２Ｂ拮抗薬は、その他のアデノシン受容体サブタイプ、特にアデノシンＡ３受容体サブタイプに対して拮抗活性を示してもよい。
【００４８】
一態様では、本発明は、米国特許第７，２０５，４０３号に開示されているアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬の治療有効量を、それを必要としている、哺乳動物に投与することによる、泡沫細胞形成を阻害する方法、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法に関している。
【００４９】
より詳細には、本発明は式（Ｉ）のアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩を用いて、泡沫細胞形成を阻害する方法、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防する方法を提供する。
【００５０】
【化２】
2011528364.tif 000004
【００５１】
式中の、Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、（Ｃ７〜Ｃ１４）アラルキル、（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルケニル、又は（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルキニルである。
Ｒ３は、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、又は（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニルである。
Ａは、炭素−炭素結合、１〜４炭素のアルキル鎖、２〜４炭素のアルケニル鎖、又は２〜４炭素のアルキニル鎖である。
Ｘは、窒素、酸素、又は硫黄から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有している（但し、少なくとも１つのヘテロ原子は窒素である）、置換されていてもよい５又は６員の芳香族複素環である。
Ｍは、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキレン、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニレン、又は（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニレンであり、そこではアルキレン、アルケニレン、又はアルキニレン基の少なくとも１つの炭素原子はカルボニルとして存在して、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレン基の１つ又はそれ以上の残りの炭素原子は、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ７）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−で置き換わっていてもよい。
Ｇ１及びＧ２は、独立してＣＨ又はＮである。
【００５２】
Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルキニル、置換されていてもよい（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、（Ｃ７〜Ｃ１４）アラルキル、（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルケニル、又は（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルキニル、置換されていてもよいアルコキシ、アラルコキシアルキルチオ、アミノ、置換アミノ、ジ置換アミノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、ニトロ、シアノ、アジド、ヒドロキシ、スルフヒドリル、Ｓ（Ｏ）アルキル、Ｓ（Ｏ）２アルキル、ＣＯ２Ｈ、ＳＯ３Ｈであるか；
又はそれらが結合している炭素原子と共に、Ｒ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６のどちらか一方が、窒素、酸素、又は硫黄から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有している５又は６員の複素環又は芳香族複素環を形成するか；
或いはそれらが結合している炭素原子と共に、Ｒ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６のどちらか一方が独立して、−ＯＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ（Ｒ７）Ｏ−、−ＯＣ（Ｒ７）２Ｏ−、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−及び−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−を含有している縮合環の群から選ばれる、炭素環式又は複素環式の縮合環を形成する。
Ｒ７は、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルケニル、又は（Ｃ２〜Ｃ５）アルキニルである。
【００５３】
本発明の特定の実施態様では、本発明の方法は、式（Ｉ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施される。
【００５４】
【化３】
2011528364.tif 000005
【００５５】
式中の、Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、（Ｃ７〜Ｃ１４）アラルキル、（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルケニル、又は（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルキニルである。
Ｒ３は、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、又は（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニルである。
Ａは、炭素−炭素結合、１〜４炭素のアルキル鎖、２〜４炭素のアルケニル鎖、又は２〜４炭素のアルキニル鎖である。
Ｘは、窒素、酸素、又は硫黄から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有していて（但し、少なくとも１つのヘテロ原子は窒素である）、低級アルキル、アミノ、ヒドロキシ、アルキルオキシ、アシルオキシ及びアシルアミノよりなる群から選ばれる１個又は２個の置換基で置換されていてもよい、５又は６員の芳香族複素環である。
Ｍは、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキレン、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニレン、又は（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニレンであり、そこではアルキレン、アルケニレン、又はアルキニレン基の少なくとも１つの炭素原子はカルボニルとして存在して、アルキレン、アルケニレン、又はアルキニレン基の少なくとも１つ又はそれ以上の残りの炭素原子は、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ７）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−で置き換わっていてもよいか、
或いは低級アルキルで置換されている炭素である。
Ｇ１及びＧ２は、独立してＣＨ又はＮである。
【００５６】
Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルキニル、置換されていてもよい（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、（Ｃ７〜Ｃ１４）アラルキル、（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルケニル、又は（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルキニル、アシル、置換されていてもよいアルコキシ、アラルコキシアルキルチオ、アミノ、置換アミノ、ジ置換アミノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、ニトロ、シアノ、アジド、ヒドロキシ、スルフヒドリル、Ｓ（Ｏ）アルキル、Ｓ（Ｏ）２アルキル、ＣＯ２Ｈ、ＳＯ３Ｈであるか；又は
それらが結合している炭素原子と共に、Ｒ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６のどちらか一方が、窒素、酸素、又は硫黄から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有している５又は６員の複素環又は芳香族複素環を形成するか；或いは
それらが結合している炭素原子と共に、Ｒ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６のどちらか一方が独立して、−ＯＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ（Ｒ７）Ｏ−、−ＯＣ（Ｒ７）２Ｏ−、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−及び−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−を含有している縮合環の群から選ばれる、炭素環式又は複素環式の縮合環を形成する。
Ｒ７は、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルケニル、又は（Ｃ２〜Ｃ５）アルキニルである。
【００５７】
式（ＩＡ）を有している式（Ｉ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩が好ましい。
【００５８】
【化４】
2011528364.tif 000006
【００５９】
式中の、Ｒ１及びＲ２は、独立して、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル又はアリルである。
Ａは、炭素−炭素結合である。
Ｘは、
【００６０】
【化５】
2011528364.tif 000007
【００６１】
よりなる群から選ばれる。
Ｍは、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｏ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）−、及び−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−よりなる群から選ばれる。
Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルキニル、置換されていてもよい（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、（Ｃ７〜Ｃ１４）アラ）ルキル、（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルケニル、又は（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルキニル、アシル、置換されていてもよいアルコキシ、アラルコキシ、アミノ、置換アミノ、ジ置換アミノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、ニトロ、ヒドロキシ、ＣＯ２Ｈであるか；又は
それらが結合している炭素原子と共に、Ｒ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６のどちらか一方が、窒素、酸素、又は硫黄から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有している５又は６員の複素環又は芳香族複素環を形成するか；或いは
それらが結合している炭素原子と共に、Ｒ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６のどちらか一方が、結合するＲ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６のどちらか一方が−ＯＣＨ２Ｏ−である、複素環式縮合環を形成する。
【００６２】
式（ＩＢ）を有している式（Ｉ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩も好ましい。
【００６３】
【化６】
2011528364.tif 000008
【００６４】
式中の、Ｒ１及びＲ２は、独立して、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルである。
Ａは、炭素−炭素結合である。
Ｘは、
【００６５】
【化７】
2011528364.tif 000009
【００６６】
よりなる群から選ばれる。
Ｍは、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−である。
Ｇ１及びＧ２は、独立してＣＨ又はＮである。
Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ５）アルキニル、置換されていてもよい（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、（Ｃ７〜Ｃ１４）アラルキル、（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルケニル、又は（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルキニル、アシル、置換されていてもよいアルコキシ、アラルコキシ、アミノ、置換アミノ、ジ置換アミノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、ニトロ、ヒドロキシ、ＣＯ２Ｈであるか；又は
それらが結合している炭素原子と共に、Ｒ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６のどちらか一方が、窒素、酸素、又は硫黄から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有している５又は６員の複素環又は芳香族複素環を形成するか；或いは
それらが結合している炭素原子と共に、Ｒ４及びＲ５又はＲ５及びＲ６のどちらか一方が、−ＯＣＨ２Ｏ−を含有している、複素環式縮合環を形成する。
【００６７】
本発明の別の特定の実施態様では、本発明の方法は、式（ＩＩ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施される。
【００６８】
【化８】
2011528364.tif 000010
【００６９】
式中の、Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、（Ｃ７〜Ｃ１４）アラルキル、（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルケニル、又は（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルキニルである。
Ｒ３は、Ｈ又は（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルである。
Ｒ９は、独立して、フェニル又はピラゾール環；何れかの位置がアミノ、低級アルキル、又はカルボキシルで置換されているフェニル又はピラゾール環；又は何れか２つの位置が、アミノ、低級アルキル、及びカルボキシルから選ばれる置換基で置換されているフェニル又はピラゾール環；或いは
Ｒ９は次の式よりなる群から選ばれる。
【００７０】
【化９】
2011528364.tif 000011
【００７１】
本発明の更に別の特定の実施態様では、本発明の方法は、式（ＩＩＩ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩の治療有効量を、それを必要としている哺乳動物に投与することによって実施される。
【００７２】
【化１０】
2011528364.tif 000012
【００７３】
式中の、Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、（Ｃ７〜Ｃ１４）アラルキル、（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルケニル、又は（Ｃ８〜Ｃ１４）アラルキニルである。
Ｒ８は、フェニル、置換フェニル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、又はベンジルである。
【００７４】
式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の化合物の限定されない例は、本明細書の以下に挙げられているようなもの、又はそれらの薬学的に許容される塩を包含する。
８−（３−アミノ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１，３−ジプロピル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン；
［３−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）イソキサゾール−５−イル］メチル−安息香酸塩；
８−（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−ピロール−２−イル）−１，３−ジプロピル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン；
４−｛［５−（１，３−ジプロピル−２，６−ジオキソ−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−４−オキソブタン酸；
４−｛［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−４−オキソブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル；
４−｛［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アミノ｝−４−オキソブタン−１−アミニウムクロライド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−フェニルアセトアミド；
２−（２，４−ジクロロフェノキシ）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（４−イソブチルフェニル）アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（４−ニトロフェニル）アセトアミド；
２−［４−ベンジルオキシフェニル］−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
２−［４−ヒドロキシフェニル］−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−フェニルプロパンアミド；
（２Ｒ）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−フェニルプロパンアミド；
｛３−［（Ｅ）−２−（１，３−ジプロピル−７−メチル−２，６−ジオキソ−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）ビニル］イソキサゾール−５−イル｝メチル安息香酸塩
２−（４−クロロフェノキシ）−Ｎ−［５−（１，３−ジプロピル−２，６−ジオキソ−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（４−フルオロフェニル）アセトアミド；
２−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（３−クロロフェニル）アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（３−フルオロフェニル）アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−［４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル］アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（４−クロロフェニル）アセトアミド；
２−（３，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（４−｛［２−（トリフルオロメチル）ベンジル］オキシ｝フェニル）アセトアミド；
【００７５】
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（４−｛［３−（トリフルオロメチル）ベンジル］オキシ｝フェニル）アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（４−｛４−ニトロ−ベンジルオキシ｝フェニル）アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（４−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］アセトアミド；
４−［（Ｅ）−２−（７−メチル−１，３−ジプロピル−２，６−ジオキソ−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）ビニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸フェニル
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］−２−フェニルアセトアミド；
８−（５−アミノ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１，３−ジプロピル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン；
８−（３−アミノ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−１，３−ジメチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジメチル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−フェニルアセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（３，４−ジフルオロフェニル）アセトアミド；
２−（２，３，４−トリメトキシフェニル）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
Ｎ−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−Ｎ’−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］尿素；
Ｎ−（３−クロロフェニル）−Ｎ’−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］尿素；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−Ｎ’−（３−メトキシフェニル）尿素；
２−［４−（ベンジルオキシ）−３−メトキシフェニル］−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
２−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド；
Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−２−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）アセトアミド；
Ｎ−（４−メチルフェニル）−２−｛［５−（１，３−ジプロピル−２，６−ジオキソ−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］オキシ｝アセトアミド；
Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−｛［３−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］オキシ｝アセトアミド；
Ｎ−（４−フルオロフェニル）−２−｛［３−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］オキシ｝アセトアミド；
２−｛［３−（１，３−ジイソブチル−２，６−ジオキソ−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］オキシ｝−Ｎ−（４−フルオロフェニル）アセトアミド；
２−｛［３−（１，３−ジイソブチル−２，６−ジオキソ−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］オキシ｝−Ｎ−（４−ブロモフェニル）アセトアミド；
２−｛［５−（２，６−ジオキソ−１．３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］オキシ｝−Ｎ−（４−フルオロフェニル）アセトアミド；
２−｛［５−（２，６−ジオキソ−１．３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］オキシ｝−Ｎ−（４−ブロモフェニル）アセトアミド；
２−｛［５−（１，３−ジイソブチル−２，６−ジオキソ−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］オキシ｝−Ｎ−（４−フルオロフェニル）アセトアミド；
２−｛［５−（１，３−ジイソブチル−２，６−ジオキソ−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］オキシ｝−Ｎ−（４−ブロモフェニル）アセトアミド；
【００７６】
Ｎ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル−２−｛［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］オキシ｝アセトアミド；
２−｛［５−（２，６−ジオキソ−１．３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］オキシ｝−Ｎ−（４−メトキシフェニル）アセトアミド；
１−［５−（２，６−ジオキソ−１．３−ジプロピル−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］−３−（４−メトキシフェニル）−尿素；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（４−ｓｅｃ−ブチル−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（４−メチル−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（４−（モルホリン−４−イル）−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（４−カルボキシ−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（３，４−ジメチル−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（３，４−ジメトキシ−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（ピリジン−４−イル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［２−オキソ−２−（４−フェニル−ピペラジン−１−イル）−エトキシ」−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
８−（５−｛２−［４−（４−フルオロフェニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−エトキシ｝−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１，３−ジプロピル−３，７−ジヒドロ−プリン−２，６−ジオン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［２−オキソ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−エトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
８−（５−｛２−［４−（４−ベンジル−フェニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−エトキシ｝−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１，３−ジプロピル−３，７−ジヒドロ−プリン−２，６−ジオン；
１，３−ジ−アリル−８−｛５−［２−オキソ−２−（４−フェニル−ピペラジン−１−イル）−エトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛３−［（３，４−メチレンジオキシ−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−イソキサゾール−５−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛３−［（３，４−ジメトキシ−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−イソキサゾール−５−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛３−［（４−フルオロ−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−イソキサゾール−５−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛３−［（４−メトキシ−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−イソキサゾール−５−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛６−［（４−ヨード−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−ピリジン−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛６−［（４−ヨード−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−ピリダジン−３−イル｝−キサンチン；
Ｎ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル−２−｛［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジアリル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］オキシ｝アセトアミド；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（４−（エトキシカルボニル）−フェニルカルバモイル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン；
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−（２−ヒドロキシピリジン−５−イル）−キサンチン；及び
１，３−ジ−ｎ−プロピル−８−｛５−［（４−（アミノスルホニル）フェニルカルバモイル）−メトキシ］−２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−キサンチン。
【００７７】
式（ＩＡ）及び（ＩＢ）の化合物、特に、
【００７８】
【化１１】
2011528364.tif 000013
【００７９】
、２−［４−ベンジルオキシフェニル］−Ｎ−［５−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］アセトアミド、又はその薬学的に許容される塩；及び
【００８０】
【化１２】
2011528364.tif 000014
【００８１】
、ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０としても知られている、Ｎ−１、３−ベンゾジオキソール−５−イル−２−｛［５−２、６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−２，３，６，９−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］オキシ｝アセトアミド、又はその薬学的に許容される塩、よりなる群から選ばれるようなものが好ましい。
【００８２】
本明細書の上で述べたように、本発明は更に、（１）ＡＣＥ阻害薬；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害薬；及び  （１２）アデノシンＡ３受容体拮抗薬よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤と組み合わせる、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬：又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有してなる、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、それに続く脳卒中及び心臓発作を予防するための併用療法を提供する。
【００８３】
本明細書で上述したように、本発明の併用療法で用いられるアデノシンＡ２ｂ受容体拮抗薬は、別のアデノシン受容体サブタイプに対して、特にアデノシンＡ３受容体サブタイプに対して随意に拮抗薬活性を示してもよい。
【００８４】
レニンアンジオテンシン系（ＲＡＳ）の阻害薬は、例えば、N. Eng. J. Med., 1987, 316, 1429-1435 に記載されているように、血圧を下げて、高血圧及び鬱血性心不全に有益に作用する、周知の薬剤である。天然の酵素レニンは腎臓から放出されて循環血液中でアンジオテンシノゲンを開裂してデカペプチドのアンジオテンシンＩを形成する。これは肺、腎臓及びその他の臓器内で、順にアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）によって開裂してオクタペプチドのアンジオテンシンＩＩを形成する。このオクタペプチドは動脈血管収縮により直接的に、そしてナトリウムイオン関連ホルモンアルドステロンを副腎から放出することにより間接的に、血圧を増大させ、細胞外液量の増大が同時に起こる。レニンの酵素活性の阻害剤は、アンジオテンシンＩの形成の減少をもたらす。その結果、より少量のアンジオテンシンＩＩが産生する。この活性ペプチドホルモンの減少した濃度がレニン阻害剤の抗高血圧作用の直接要因である。
【００８５】
アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬は、アンジオテンシンＩＩ受容体のＡＴ１−受容体サブタイプと結合するが、受容体を活性化しないような活性薬剤であると理解されている。ＡＴ１受容体を阻害することによって、これらの拮抗薬を、例えば抗高血圧剤として、用いることができる。
【００８６】
本発明の併用に用いることができる適切なアンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬は、異なった構造特性を有する、好ましくは非ペプチド構造を有するもののようなＡＴ１受容体拮抗薬を包含する。例えば、バルサルタン（valsartan；米国特許第５，３９９，５７８号；ヨーロッパ特許第４４３９８３号）、ロサルタン（losartan；米国特許第５，１３８．０６９号；ヨーロッパ特許第２５３３１０号）、カンデサルタン（candesartan；米国特許第５，７０３，１１０号；米国特許第５，１９６，４４４号；ヨーロッパ特許第４５９１３６号）、エプロサルタン（eprosartan；米国特許第５，１８５，３５１号；ヨーロッパ特許第４０３１５９号）、イルベサルタン（irbesartan；米国特許第５，２７０，３１７号；ヨーロッパ特許第４５４５１１号）、オルメサルタン（olmesartan；米国特許第５，６１６，５９９号；ヨーロッパ特許第５０３７８５号）、タソサルタン（tasosartan；米国特許第５，１４９，６９９号；ヨーロッパ特許第５３９０８６号）、及びテルミサルタン（telmisartan；米国特許第５，５９１，７６２号；ヨーロッパ特許第５０２３１４号）よりなる群から選ばれる化合物を挙げることができる。
【００８７】
好ましいＡＴ１−受容体拮抗薬は市場に出回っているような薬剤であり、最も好ましいものはロサルタン及びバルサルタン又は、いずれの場合も、それらの薬学的に許容される塩である。
【００８８】
ＡＣＥ阻害薬によるアンジオテンシンＩのアンジオテンシンＩＩへの酵素分解の阻害は、血圧を調節するための成功した変法であるので、高血圧を治療するための有用な治療方法も提供する。
【００８９】
本発明の併用に用いられる適切なＡＣＥ阻害薬は、例えば、アラセプリル（alasepril）、ベナゼプリル（benazepril）、カプトプリル（captopril）、セロナプリル（ceronapril）、シラザプリル（cilazapril）、デラプリル（delapril）、エナラプリル（enalapril）、ホシノプリル（fosinopril）、イミダプリル（imidapril）、リシノプリル（lisinopril）、モエキシプリル（moexipril)、モベルトプリル（moveltopril）、ペリンドプリル（perindopril）、キナプリル（quinapril）、ラミプリル（ramipril）、スピラプリル（spirapril）、テモカプリル（temocapril）、トランドラプリル（trandolapril）、及びゾフェノプリル（zofenopril）よりなる群から選ばれる化合物、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩である。
【００９０】
好ましいＡＣＥ阻害薬は市場に出回っているような薬剤であり、最も好ましいＡＣＥ阻害薬はラミプリル（米国特許第５，０６１，７２２号）である。
【００９１】
レニンの酵素活性の阻害剤は、アンジオテンシンＩの形成において減少をもたらす。その結果としてより少ない量のアンジオテンシンＩＩが産生する。この活性ペプチドホルモンの減少した濃度が、例えば、レニン阻害剤の降圧作用の直接要因である。
【００９２】
適切なレニン阻害剤は異なった構造特性を有している化合物を包含する。例えば、ジテキレン（ditekiren）、レミキレン（remikiren）、テルラキレン（terlakiren）、及びザンキレン（zankiren）よりなる群から選ばれる化合物、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を挙げることができる。
【００９３】
特に、本発明は米国特許第５，５５９，１１１号、同第６，１９７，９５９号及び同第６，３７６，６７２号（これらの全ての内容は、参照により、本明細書に取り込まれている）に開示されているレニン阻害剤に関している。
【００９４】
本発明の好ましいレニン阻害剤は、米国特許第６，１９７，９５９号及び同第６，３７６，６７２号に開示されているレニン阻害剤、特に、式（ＶＩ）及び（ＶＩＩ）のそれぞれＲＯ６６−１１３２及びＲＯ６６−１１６８、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を包含する。
【００９５】
【化１３】
2011528364.tif 000015
【００９６】
好ましいレニン阻害剤は、米国特許第５，５５９，１１１号に開示されている、δ−アミノ−γ−ヒドロキシ−ω−アリール−アルカン酸アミド誘導体、特に、アリスキレン（aliskiren）としても知られている、式（ＶＩＩＩ）の化合物も包含する。
【００９７】
【化１４】
2011528364.tif 000016
【００９８】
特定に定義されない場合には、用語「アリスキレン」は、遊離塩基としても、及びその塩として、特にその薬学的に許容される塩、もっとも好ましくは、そのヘミフマ（ー）ル酸塩としても理解されるべきである。
【００９９】
利尿剤は、例えば、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、メチルクロチアジド、及びクロロタリドンよりなる群から選ばれるチアジド誘導体である。もっとも好ましい利尿剤はヒドロクロロチアジドである。更に利尿剤は、アミロリド又はトリアメテリンのようなカリウム保持性利尿剤、又はこれらの薬学的に許容される塩である。
【０１００】
ＣＣＢの群は本質的に、ジルチアゼム型及びベラパミル型のＣＣＢのような、ジヒドロピリジン（ＤＨＰｓ）及び非ＤＨＰｓを含有している。
【０１０１】
当該併用において有用なＣＣＢは、アムロジピン（amlodipine）、フェロジピン（felodipine）、リオシジン（ryosidine）、イスラジピン（isradipine）、ラシジピン（lasidipine）、ニカルジピン（nicardipine）、ニフェジピン（nifedipine）、ニグルジピン（niguldipine）、ニルジピン（niludipine）、ニモジピン（nimodipine）、ニソルジピン（nisoldipine）、ニトレンジピン（nitrendipine）及びニバルジピン（nivaldipine）よりなる群から選ばれる代表的なＤＨＰが好ましく、そして、フルナリジン（flunarizine）、プレニラミン（prenylamine）、ジルチアゼム（diltiazem）、フェンジリン(fendiline）、ガロパミル（gallopamil）、ミベフラジル（mibefradil）、アニパミル（anipamil）、チアパミル（tiapamil）及びベラパミル（verapamil）よりなる群から選ばれる代表的な非ＤＨＰが好ましく、そして何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩が好ましい。これらＣＣＢの全ては、例えば、抗高血圧薬、抗狭心症薬又は抗不整脈薬として、治療に用いられる。
【０１０２】
好ましいＣＣＢは、アムロジピン、ジルチアゼム（diltiazem）、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニモジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン及びベラパミル、又は例えば、特異的ＣＣＢに依存するもの、それらの薬学的に許容される塩を包含する。ＤＨＰとして特に好ましいものは、アムロジピン、又はその薬学的に許容される塩、特にそのベシル酸塩である。特に好ましい代表的な非ＤＨＰは、ベラパミル、又はその薬学的に許容される塩、特にその塩酸塩である。
【０１０３】
本発明で用いるのに適しているβ−ブロッカーは、β−アドレナリン受容体に対してエピネフィリンと競合して、エピネフィリンの作用を妨げる、ベータアドレナリン遮断薬（β−ブロッカー）を包含する。β−ブロッカーが、α−アドレナリン受容体と比べてβ−アドレナリン受容体に対して選択的であって、そのため顕著なα−ブロッキング効果を有していないことが好ましい。適切なβ−ブロッカーは、アセブトロール（acebutolol）、アテノロール（atenolol）、ベタキソロール（betaxolol）、ビソプロロール（bisoprolol）、カルテオロール（carteolol）、カルベジロール（carvedilol）、エスモロール（esmolol）、ラベタロール（labetalol）、メトプロロール（metoprolol）、ナドロール（nadolol）、オクスプレノロール（oxprenolol）、ペンブトロール（penbutolol）、ピンドロール（pindolol）、プロプラノロール（propranolol）、ソタロール（sotalol）及びチモロール（tomolol）から選ばれる化合物を包含する。β−ブロッカーが酸又は塩基であるか、又はそうでなければ薬学的に許容される塩又はプロドラッグを形成することが可能な場合は、これらの形態は本明細書に包含されるものと考えられ、その化合物を、遊離形態、又は生理的に加水分解可能で許容可能なエステルのような、生理学的に許容される塩、或いはプロドラッグの形態で投与できることが理解される。例えば、メトプロロールはその酒石酸塩として適切に投与され、プロプラノロールは塩酸塩として適切に投与される等である。
【０１０４】
血小板凝集阻害薬は、例えば、ＰＬＡＶＩＸ（登録商標；硫酸クレピドグレル(
clopidogrel bisulfate)）、ＰＬＥＴＡＬ（登録商標；シロスタゾール(cilostazol)）及びアスピリンを包含する。
【０１０５】
コレステロール吸収調節薬は、例えば、ＺＥＴＩＡ（登録商標；エゼチミブ(ezetimibe)）を包含する。
【０１０６】
ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬（β−ヒドロキシ−β−メチルグルタリル−コエンザイムＡ還元阻害薬、又はスタチンとも呼ばれる）は、血漿コレステロール濃度を含む脂質濃度を低下するために用いることのできる活性薬物であると理解されている。
【０１０７】
ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬は異なった構造特徴を有する化合物を包含する。例えば、アトルバスタチン（atorvastatin）、セリバスタチン（cerivastatin）、フルバスタチン（fluvastatin）、ロバスタチン（lovastatin）、ピタバスタチン（pitavastatin）、プラバスタチン（pravastatin）、ロスバスタチン（rosuvastatin）及びシンバスタチン（simvastatin）よりなる群から選ばれる化合物、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を挙げることができる。
【０１０８】
好ましいＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬は、市場に出回っているような薬剤であり、最も好ましいのは、アトルバスタチン、ロスバスタチン及びシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩である。
【０１０９】
ＨＤＬ増大化合物は、これに限定されないが、コレステロールエステル転送タンパク（ＣＥＴＰ）阻害剤を包含する。ＣＥＴＰ阻害剤の例は、米国特許第６，１４０，３４３号及び同第６，１９７，７８６号に開示されているもの、例えば、トルセトラピブ（torcetrapib）として知られている化合物；国際ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２００６０１４４１３号に開示されているもの、例えば、アナセトラピブ（anacetrapib）として知られている化合物；及び米国特許第６，４２６，３６５号に開示されているもの、例えば、ＪＴＴ−７０５として知られている化合物を包含する。
【０１１０】
アシル−ＣｏＡ：コレステロールＯ−アシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）は、コレステロールからのコレステロールエステルの合成に触媒作用する酵素で、コレステロールの代謝及びその消化器への吸収に極めて重要な役割を果たしているので、ＡＣＡＴ酵素の阻害薬は抗−高脂血症薬として用いることができる。ＡＣＡＴ阻害薬の例は、これに限定されないが、アバシミベ（avasimibe）及びパクチミベ（pactimibe）を包含する。
【０１１１】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬は、これに限定されないが、ＭＲＳ１１９１、ＭＲＳ１２２０、ＭＲＳ１３３４、ＭＲＳ１５２３、ＭＲＳ３７７７ヘミシュウ酸塩、ＶＵＦ５５７４、ＰＳＢ１０塩酸塩、ＰＳＢ１１塩酸塩及びレベルシン（Sigma-Aldrich 及び／又は Tocris Bioscience から市販されている）を包含する。その他の適切な拮抗薬は、米国特許第６，３５８，９６４号；米国特許第６，６２０，８２５号；米国特許第６，６７３，８０２号；米国特許第６，６８６，３６６号；米国特許第６，９２１，８２５号；米国特許第７，０６４，２０４号、米国特許第７，３７１，７３７号；及び米国特許出願公開第２００６０１７８３８５号に開示されているもの、例えば、ＭＲＥ−３００８Ｆ２０として知られる化合物を包含する。
【０１１２】
本発明による併用が、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬と、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬、例えば、ロサルタン又はバルサルタン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトロバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有していることが好ましい。
【０１１３】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬と、ＡＣＥ阻害薬、例えば、ラミプリル、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び任意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトロバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩から成っている、本発明による併用も好ましい。
【０１１４】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬と、レニン阻害剤、例えば、アリスキレン、又はそれらの薬学的に許容される塩、好ましくはそのヘミフマル酸塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１１５】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬と、ＣＣＢ、例えばアムロジピン、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１１６】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬と、β−ブロッカー、例えば、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、カルベジロール、エスモロール、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール及びチモロール、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそのれら薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１１７】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬と、血小板凝集阻害薬、例えばクロピドグレル、又はアスピリン、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１１８】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬と、アデノシンＡ３受容体拮抗薬、例えば、ＭＲＥ−３００８Ｆ２０、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び随意に、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び／又はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１１９】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬と、利尿剤、例えばヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び随意に、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１２０】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬と、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩を含有する、本発明による併用も好ましい。
【０１２１】
一般名又は商標名によって同定される活性薬物の構造は、標準的な抄録「The Merck Index」又は「Physician's Desk Reference」の最新版から、又はデータベース、例えば、Patents International（例えば、IMS World Piblications）又は Current Drug から引き出すことができる。これらの対応する内容を、参照により、本明細書に取り込まれている。当業者は誰でも、活性薬剤の同定が可能で、これらの参考文献に基づいて、製造すること、及び医薬品の適応及び特性を、インビトロ及びインビボの両方で、標準的な試験モデルで、試験することも同様に可能である。
【０１２２】
本明細書で上述したように、本発明のアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、及び併用パートナーは、それらの薬学的に許容される塩として存在していてもよい。これらの化合物が、例えばアミノ基のような少なくとも１つの塩基中心を有している場合は、これらはこれらの酸付加塩を形成できる。同様に、少なくとも１つの酸性基（例えば、ＣＯＯＨ）を有している化合物は、塩基との塩を形成できる。さらに化合物が、例えばカルボキシル基とアミノ基の両方を含有する場合、対応する内部塩（internal salts）を形成できる。
【０１２３】
対応する活性成分又は薬学的に許容される塩は、水和物のような溶媒和物の形態で、又は、例えばそれらの再結晶においてのような、用いる他の溶媒を含んで、も用いることができる。
【０１２４】
更に別の態様では、本発明は、泡沫細胞形成の阻害、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症の予防及び治療、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作の予防のための、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含有してなる、医薬組成物に関している。
【０１２５】
本明細書で上述したように、本発明の医薬組成物で用いられるアデノシンＡ２Ｂ拮抗薬は、随意に、別のアデノシン受容体サブタイプに対して、特にアデノシンＡ３受容体サブタイプに対して拮抗活性を示してもよい。
【０１２６】
更に、本発明は、アテローム性動脈硬化症の予防及び治療、例えば、アテローム性動脈硬化性プラークの進行の遅延、及び最終的に退縮、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作の予防のための、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬と、
（１）ＡＣＥ阻害薬、好ましくは、ラミプリル、それらの薬学的に許容される塩；
（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、好ましくは、ロサルタン又はバルサルタン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩；
（３）レニン阻害剤、好ましくは、アル好きレン、又はそれらの薬学的に許容される塩、例えばそのヘミフマル酸塩；
（４）利尿剤、好ましくは、ヒドロクロロチアジド、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、好ましくは、アムロジピン、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（６）β−ブロッカー、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（７）血小板凝集阻害薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（８）コレステロール吸収調節薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、好ましくは、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩；
（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩；
（１１）ＡＣＡＴ阻害薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；及び
（１２）アデノシンＡ３受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩：よりなる群から選ばれる少なくとも１つの他の治療薬剤との組合せの治療有効量、及び薬学的に許容される担体を含有してなる、医薬組成物を提供する。
【０１２７】
本明細書の上で開示したように、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬は、（１）ＡＣＥ阻害薬、例えば、ラミプリル；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、例えば、ロサルタン又はバルサルタン；（３）レニン阻害剤、例えば、アルスキレン；（４）利尿剤、例えば、ヒドロクロロチアジド；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、例えば、アムロジピン；（６）β−ブロッカー、例えば、メトプロロール；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、例えば、アトルバスタチン、ロスバスタチン又はシンバスタチン；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害薬；及び（１２）アデノシンＡ３受容体拮抗薬：又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩：よりなる群から選ばれるれる少なくとも１つの他の治療薬剤と組み合わせて、医薬組成物として併用投与することができる。成分を従来の剤形で、通常は薬学的に許容される担体又は希釈剤と共に、併用投与することができる。
【０１２８】
本発明の方法の実施にあたって、本発明のアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、又はその併用パートナーを、ヒトを含む、哺乳動物への経口又は経直腸、経皮及び非経口投与のような各種投経路にを介する投与に適している医薬組成物に製剤化できる。経口投与用に、アデノシンＡ２ｂ受容体拮抗薬、又はその併用パートナーを含有してなる医薬組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、丸剤、カプセル、粉末、マイクロエマルジョン、単位用量パケット等の形態を採ることができる。ａ）希釈剤、例えば、乳糖、ブドウ糖、蔗糖、マンニトール、ソルビトール、セルロース及び／又はグリシン；ｂ）滑沢剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウム又はカルシウム塩及び／又はポリエチレングリコール；錠剤についてはｃ）結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、でんぷん糊、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び／又はポリビニルピロリドン；所望によりｄ）崩壊剤、例えば、でんぷん、寒天、アルギン酸又はそのナトリウム塩、又は発泡性混合物；及び／又はｅ）吸収剤、着色剤、香料及び甘味剤と共に活性成分を含有している錠剤及びゼラチンカプセルが好ましい。注射用組成物は水性等張溶液又は懸濁液が好ましく、そして坐薬は脂肪乳液又は懸濁液から有利に調製される。
【０１２９】
当該組成物を、滅菌させてもよく、そして／又は保存、安定化、湿潤又は乳化剤のような補助剤、溶解促進剤、浸透圧調節剤及び／又は緩衝剤を含有してもよい。更にこれらは、その他の治療有効物質を含有していてもよい。当該組成物は、それぞれに従来の混合、顆粒又はコーティング方法に従って調製されて、そして約０．１〜９０％、好ましくは約１〜８０％の活性成分を含有する。
【０１３０】
治療的に有効であるために必要な本発明の化合物の量は、勿論、治療する個々の哺乳動物によって変化するであろう、そして最終的には医師又は獣医師の判断によって決まる。考慮すべき因子は、治療する疾患の重症度、投与経路、製剤の特性、哺乳動物の体重、体表面積、年齢及び全身状態、並びに投与される特定の化合物を包含する。適切な投与計画を、このような因子を考慮し、そして文献に報告されている用量及び Physician's Desk Reference (58th ed., 2004）で推奨されている用量に従って、当業者が選択することができる。
【０１３１】
本発明による医薬併用剤の活性成分についての好ましい投与量は、治療的に有効な投与量であって、特に、市販品のそれである。
【０１３２】
通常は、経口投与の場合、例えば、体重が約７５ｋｇの患者に対して、１日当たり約１μｇ〜約３ｇの概算用量が推定される。
【０１３３】
例えば、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬の適切な治療有効用量は、１日当たり約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇの範囲である。例えば投与量は、１日当たり体重に対して約０．００２ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ〜約２０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ〜約１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの範囲、最も好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ〜約５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの範囲である。アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬は、単位用量で都合良く投与され、例えば、単位剤形当たり５μｇ〜１ｇの活性成分を、都合良くには１０μｇ〜７５０ｍｇを、最も都合良くには５０μｇ〜１００ｍｇを含有している。好ましい単位剤形は、例えば、約５μｇ〜約１ｇ、好ましくは約５０μｇ〜約１００ｍｇを含有している、１日最大３回まで投与される、例えば、錠剤又はカプセルである。
【０１３４】
ＡＣＥ阻害薬の場合は、好ましいＡＣＥ阻害薬の単位剤形は、例えば、約５ｍｇ〜約２０ｍｇ、好ましくは、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ又は４０ｍｇのベナゼプリル；約６．５〜１００ｍｇ、好ましくは、６．２５ｍｇ、１２．５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ又は１００ｍｇのカプトプリル；約２．５ｍｇ〜約２０ｍｇ、好ましくは、２．５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ又は２０ｍｇのエナラプリル；約１０ｍｇ〜約２０ｍｇ、好ましくは、１０ｍｇ又は２０ｍｇのフォシノプリル；約２．５ｍｇ〜約４ｍｇ、好ましくは、２ｍｇ又は４ｍｇのペリンドプリル；約５ｍｇ〜約２０ｍｇ、好ましくは、５ｍｇ、１０ｍｇ又は２０ｍｇのキナプリル；又は約１．２５ｍｇ〜約５ｍｇ、好ましくは、１．２５ｍｇ、２．５ｍｇ又は５ｍｇのラミプリルを含有する、例えば、錠剤又はカプセルである。１日１回投与が好ましい。
【０１３５】
アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、例えば、バルサルタンは、適切な単位剤形、例えば、治療有効量のアンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、例えば、約２０〜約３２０ｍｇのバルサルタンを含有している、カプセル又は錠剤の形態で供給される。活性成分の投与は、例えばアンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、例えばバルサルタンを、１日用量２０ｍｇ又は４０ｍｇで開始して、１日当たり８０ｍｇ及び更に１日当たり１６０ｍｇ、そして最終的に１日当たり３２０ｍｇまで増量して、１日３回まで可能である。その用量を、例えば、朝に、昼に又は夕方に摂取することができる。
【０１３６】
レニン阻害剤、例えば、アリスキレンの場合、体重約７５ｋｇの、ヒトを含む、温血動物に投与する用量は、特にレニン活性を阻害するのに有効な用量、例えば、血圧を下げるのに有効な用量は、約３ｍｇ〜約３ｇ、好ましくは、約１０ｍｇ〜約１ｇであり、例えば２０ｍｇ／ヒト／日〜２００ ｍｇ／ヒト／日を、例えば同じ大きさのものであってもよいが、好ましくは、１〜４つの単回用量に分割したものである。通常は、小児は成人用量の約半分を摂取する。各個体に必要な用量は、例えば活性成分の血清濃度を測定することによって、モニターして、最適濃度に調節することができる。単回用量は、成人患者当たり、例えば、７５ｍｇ、１５０ｍｇ又は３００ｍｇを含んでいる。
【０１３７】
利尿剤の場合は、好ましい単位剤形は、例えば、約５ｍｇ〜約５０ｍｇ、好ましくは、約６．２５ｍｇ〜約２５ｍｇを含有している、例えば、錠剤又はカプセルである。ヒドロクロロチアジドの１日用量の６．２５ｍｇ、１２．５ｍｇ又は２５ｍｇを１日に１回投与することが好ましい。
【０１３８】
ＣＣＢｓ、例えば、アムロジピンの場合は、好ましい単位剤形は、経口で投与しときに、１日当たり、約１ｍｇ〜約４０ｍｇ、好ましくは、２．５ｍｇ〜２０ｍｇを含有する、例えば、錠剤又はカプセルである。
【０１３９】
ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害薬の場合は、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害薬の好ましい単位剤形は、例えば、約５ｍｇ〜約１２０ｍｇ、好ましくは、アトルバスタチンを用いるときは、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、又は８０ｍｇのアトルバスタチンを、
例えば、１日１回投与するように、含有している、例えば錠剤又はカプセルである。
【０１４０】
アデノシンＡ３受容体拮抗薬の場合は、好ましい単位剤形は、１日に患者の体重当たり、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、約１０ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは約５ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは約０．５ｍｇ／ｋｇ未満、そして最も好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇ未満の範囲である。
ある特定の実施態様では、アデノシンＡ３受容体拮抗薬は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、約０．１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、約０．５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの用量で投与される。
【０１４１】
本発明は別々に投与されてもよい化合物の併用によるアテローム性動脈硬化症を予防及び治療する方法に関しているので、本発明は、キットの形態ににある別々になった医薬組成物の組み合わせにも関している。キットは、例えば、２つの別々の医薬組成物：（１）アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含有している組成物；及び（２）ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、レニン阻害剤、利尿剤、カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、β−ブロッカー、血小板凝集阻害薬、コレステロール吸収調節薬、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物、ＡＣＡＴ阻害剤、及びアデノシンＡ３受容体拮抗薬よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、それらの薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含有している組成物：を含むことができる。（１）及び（２）の量は、別々に併用投与したときに有益な治療効果（複数を含む）が達成されるような量である。キットは、別々の組成物を収容するための、分離したボトル又は分離したホイルパックのような容器を含有していて、それぞれの区画は、例えば、（１）又は（２）を含有している複数の剤形（例えば、錠剤）を含有している。
あるいは、活性成分を含有している剤形を分離するのではなく、キットはそれぞれが全用量を含有する分離した区画（それが別々の剤形を含んでいる）を含有することができる。このタイプのキットの例は、個々のブリスターが２つ（又はそれ以上）の錠剤を含有していて、１つ（又はそれ以上）の錠剤が医薬組成物（１）を含んでいて、第２（又はそれ以上）の錠剤が医薬組成物（２）を含んでいる、ブリスターパックである。
一般に、キットは、別々の成分の投与についての説明書を含んでいる。キット形態は、別々の成分を異なった剤形（例えば、経口及び非経口）で投与することが好ましい場合、別々の成分を異なった投与間隔で投与するとき、又は併用の個々の成分の滴定を処方医師が望む場合に、特に有利である。
本発明の場合、それ故、キットは：
（１）第１剤形に、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含有している組成物の治療有効量；
（２）第２剤形に、ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、レニン阻害剤、利尿剤、カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、β−ブロッカー、血小板凝集阻害薬、コレステロール吸収調節薬、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物、ＡＣＡＴ阻害剤、及びアデノシンＡ３受容体拮抗薬よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合もそれらの薬学的に許容される塩、を投与に続いて有益な治療効果に到達するような量で、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含有している組成物；及び
（３）当該第１及び第２剤形を含有している容器：
を含有している。
【０１４２】
アデノシンＡ2Ｂ受容体拮抗薬の単独での作用、又は（１）ＡＣＥ阻害剤；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ３受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、薬学的に許容される塩との併用での、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬の作用は、とりわけ、インビトロ及び／又はインビボでの試験の方法によって、例えば、本明細書の具体的実施例に記載されているように、実験的に明らかにできる。
【０１４３】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬、又はそれらの薬学的に許容される塩、又はそれらの併用パートナーは各種の投与経路で投与できる。それぞれの薬剤は、それぞれの治療薬単独、又はそれらの特定の組み合わせについて、最大の応答を引き起こすための最適な薬物濃度を確認するために、幅広い用量範囲に渡って試験することができる。これらの検討には、１群あたり少なくとも６匹の動物からなる治療群を用いることが好ましい。それぞれの検討は、個々の成分を評価するのと同時に、併用治療群の効果を確認するという方法で、最良に実施される。薬物の効果は急性投与でも観察できるが、慢性期において応答を観察することが好ましい。長期の検討は、代償性反応の完全な発現を引き起こすことができる十分な期間を含んでいので、その観察された効果は、持続した或いは持続性の効果を示す試験系の実際の応答を最もよく表現するだろう。
【０１４４】
代表的な検討は、例えば、ＷＨＨＬ（Watanable heritable hyperlipidemic）ウサギを家族性高コレステロール血症モデルとして用いて（Atherosclerosis, 36:261-268, 1980）、又は今やアテローム性動脈硬化症の主要モデルの１つになっているアポリポタンパク質Ｅノックアウトマウスモデルを用いて（Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 24:1006-1014, 2004; Trends Cardiovasc. Med., 14:187-190, 2004）、実施できる。アポリポタンパク質Ｅノックアウトマウス検討は、例えば、Johnson et al.,（Circulation, 111:1422-1430, 2005）に記載のようにして、又はその変法を用いて、実施できる。
【０１４５】
得られる結果は、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬が、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬の抗炎症効果とは無関係に、泡沫細胞形成の阻害、及びそれ故にアテローム性動脈硬化症の予防及び治療、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作の予防に用いることができることを示している。更に驚くべきことに、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬は、動脈硬化性プラークの退縮のために用いることができるということが、明らかにされた。
【０１４６】
更に、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬と、（１）ＡＣＥ阻害剤；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ３受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、薬学的に許容される塩との併用が、その他の治療薬剤単独の投与より高い治療効果を達成することが見出された。より高い有効性は、長い作用持続時間としても立証できる。作用持続時間は、次の投与前にベースラインに戻るまでの時間として、又は濃度曲線下面積（ＡＵＣ）としての何れかでモニターすることができる。
【０１４７】
更なる利点は、本発明によって併用される個々の薬物のより低い用量は、例えば、その用量を少なくするばかりではなく、より少ない頻度で投与するように、用量を減らすために、又は副作用の発生を減少するために用いることができる。
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬と、（１）ＡＣＥ阻害剤；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ３受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、その薬学的に許容される塩との併用投与は、より高い割合の治療患者に顕著な応答、すなわち、より高い応答比結果をもたらす。
【０１４８】
アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬と、（１）ＡＣＥ阻害剤；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ３受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、その薬学的に許容される塩との併用療法は、アテローム性動脈硬化症の予防及び治療、及びそれに続く脳卒中及び心臓発作の予防に対してより有効な治療をもたらすということを示すことができる。
特に、いっそう驚くべきことは、本発明の併用が、有益な、特に相乗的な治療効果をもたらすばかりではなく、驚くべき有効性の持続のような併用療法からもたらされる利益をも導くという知見である。
【０１４９】
本発明は更に、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬単独の、又は（１）ＡＣＥ阻害剤；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬；（３）レニン阻害剤；（４）利尿剤；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）；（６）β−ブロッカー；（７）血小板凝集阻害薬；（８）コレステロール吸収調節薬；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ３受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、その薬学的に許容される塩との併用による、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作を予防する薬剤の製造のための使用に関する。
【０１５０】
従って、本発明の別実施態様は、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗薬の単独での、又は（１）ＡＣＥ阻害剤、又はそれらの薬学的に許容される塩；（２）アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；（３）レニン阻害剤、又はそれらの薬学的に許容される塩；（４）利尿剤、又はそれらの薬学的に許容される塩；（５）カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、又はそれらの薬学的に許容される塩；（６）β−ブロッカー、又はそれらの薬学的に許容される塩；（７）血小板凝集阻害薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；（８）コレステロール吸収調節薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；（９）ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａ還元酵素阻害薬、又はそれらの薬学的に許容される塩；（１０）高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）増大化合物；（１１）ＡＣＡＴ阻害剤；及び（１２）アデノシンＡ３受容体拮抗薬；よりなる群から選ばれる少なくとも１つのその他の治療薬剤、又は何れの場合も、その薬学的に許容される塩との併用による、アテローム性動脈硬化症を予防及び治療し、そしてそれに続く脳卒中及び心臓発作を予防する薬剤の製造のための使用に関している。
【０１５１】
上の記載は、好ましい実施態様を包含して本発明を十分に開示している。特に本明細書に開示されている実施態様の修正及び改良は以下の特許請求の範囲の範囲内である。更なる推考を必要とせずに、当業者は、前述の説明を用いて、本発明をその最大限に利用できるものと考える。従って、本明細書の実施例は、本発明のある特定の態様の単なる説明と解釈されるものであって、決して本発明の範囲を限定するものではない。本明細書を通して用いられている略語は当該技術分野で一般的に知られているようなものである。
【０１５２】
材料及び方法
細胞培養
ヒト骨髄単球細胞株Ｕ９３７をＡＴＣＣから入手して、１０％ウシ胎仔血清、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を補完したＲＰＭ１６４０培地中、５％ＣＯ２／９５％空気中、３７℃で保持した。
【０１５３】
末梢血からヒトマクロファージ（ＨＭ）の調製
末梢血単核細胞を軟膜から、フィコール・ハイパック分配（Ficoll-Hypaque gradient;Ficoll-Paque, research Grade, Amersham Pharmacia Biotech AB, Cologno Monzese, Italy）で、Gessi et al., (Mol. Pharmacol., 2004, 65:711-719）に既に記載されているようにして単離した。グルタミン（２ｍＭ）、ヒトＡＢ血清（５％,Sigma）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を含有しているＲＰＭＩ１６４０培地中で、単球を接着によって選択して、７日に渡る接着でマクロファージに分化させた。
【０１５４】
低酸素処理
モジュラー型培養チャンバー（modular incubator chamber）内で低酸素曝露を行って、１％のＯ２、５％のＣＯ２、及び残余のＮ２を含有する混合ガス（MiniGalaxy, RSBiotech, Irvine, Scotland）を供給した。
【０１５５】
泡沫細胞（ＦＣ）形成
Ｕ９３７細胞を酢酸ミリスチン酸ホルボール（ＰＭＡ、４０ｎＭ）で７２時間処理にて誘発して、マクロファージに分化した。使用前に、ｏｘＬＤＬを、０．１５Ｍの塩化ナトリウム及び０．３ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）の溶液１Ｌに対して４℃で１２時間、次いでＲＰＭＩ１６４０培地（各回１Ｌで、２回交換）に対して２４時間、透析した。全ての透析は、ピアス社の Slide-A-Lyzer 透析カセット（分子量１０，０００画分）を用いて実施した。透析後、リポタンパク質は０．４５μｍ（細孔径）フィルターを通過させて滅菌し、次いでこれ（５０〜１００μｇ／ｍＬ、Intracel, Frederick, MD）をＰＭＡで処理したＵ９３７細胞に加えて、血清を含有していないＲＰＭＩ１６４０中で４８時間培養した。アデノシンによる細胞の処理は全て、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）阻害剤、エリスロ−９−（２−ヒドロキシ−３−ノニル）アデニン（ＥＨＮＡ、５μＭ）の存在下で実施し、そしてアデノシン拮抗薬による処理はＡＤＡの存在下で実施した。
【０１５６】
オイルレッドＯ染色分析
ＰＭＡ−分化Ｕ９３７細胞の試験薬物による処理を、ｏｘＬＤＬの添加２時間前に実施した。低酸素下で２４時間ｏｘＬＤＬに曝露した後、Ｕ９３７細胞をリン酸緩衝生理食塩水−緩衝４％パラホルムアルデヒド溶液中に１５分間固定し、次いで風乾した。オイルレッドＯ（６０％イソプロパノール溶液）染色を、基本的に Kalayoglu and Byrne（Infect. Immun., 1998, 66:5067-5072）に既に記載されているように、１５分間行った。ニコンの Eclipse E800 顕微鏡を用い、１００倍の顕微鏡明視野で細胞を表示した。泡沫細胞を、細胞質がオイルレッドＯで染色可能な脂質滴で膨らんでいるマクロファージと定義付けた。
【０１５７】
リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ
全細胞質ＲＮＡを酸性グアニジンチオシアネートフェノール法によって抽出した。アデノシン受容体ｍＲＮＡの定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲアッセイ（Higuchi et al., Biotehchnology, 1993, 11, 1026-1030）を、ABI Prism 7700 Sequence Detection System（Applied Biosystems, Warrington Cheshire, UK）中、遺伝子特異的蛍光標識された TaqMan MGB プローブ（副溝バインダー；minor groove binder）を用いて実施した。Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシンサブタイプのリアルタイムＲＴ−ＰＣＲについては、assays-on-demand（登録商標）遺伝子発現産物、ＮＭ０００６７４、ＮＭ０００６７５、ＮＭ０００６７６及びＮＭ０００６７７をそれぞれ用いた。更に、アデノシン受容体ｃＤＮＡプラスミド標準品の、少なくとも６オーダーの大きさ（１０−１１〜１０−１６ｇ／μＬ）の範囲に及ぶ曲線が生じた。これらの標準曲線は、Ｃｔ値とプラスミド量の対数との間の直線関係を表している（Gessi et al., Mol. Pharmacol. 2005, 67:2137-2147）。アデノシン受容体伝達の定量化を、プラスミド希釈系列から作り出したＣｔ値の標準曲線から内挿して行った（Kalayoglu and Byrne, Infect. Immun., 1998, 66:5067-5072）。ＨＩＦ−１α、ＶＥＧＦ及びＩＬ−８のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲについては、assays-on-demand（登録商標）遺伝子発現産物、ＮＭ、ＮＭ及びＮＭをそれぞれ用いた。参照遺伝子のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲには、内在性コントロールヒトβ−アクチンキットを用い、そしてプローブはＶＩＣ（登録商標；Applera）で蛍光標識した。
【０１５８】
膜調製
Ｕ９３７細胞及びマクロファージを、それぞれに、低張緩衝液及びリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で、ポリトロン（Kinematica）を用いて、ホモジナイズして、先の記載（Gessi et al., Mol. Pharmacol., 2004, 65:711-719）のように、４８，０００ｘｇで３０分間遠心分離した。タンパク質濃度を、ウシ血清を標準品として用いて、Bio Rad 法（Bradford, Anal. Biochem., 1976, 72:248-254）に従って測定した。
【０１５９】
結合実験
Gessi et al.（Mol. Pharmacol. 65:711-719, 2004）に従って、結合アッセイを実施した。飽和実験において、膜（アッセイ当たりタンパク質７０μｇ）を５０ｍＭのＴｒｉｓ ＨＣＬ緩衝液（Ａ２Ａに対しては１０ｍＭのＭｇＣｌ２；Ａ２Ｂに対しては１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＤＴＡ及び０．１ｍＭのベンズアミジン；そしてＡ３に対しては１０ｍＭのＭｇＣｌ２及び１ｍＭのＥＤＴＡ）、ｐＨ７．４中で培養して、１，３−ジプロピル−８−シクロペンチルキサンチン（［３Ｈ］ＤＰＣＰＸ）（０．４〜４０ｎＭ）；（４−（２−［７−アミノ−２−（２−フリル）−［１，２，４］トリアゾロ−［２，３２］−［１，３，６］−トリアジニル−アミノ］エチル）−フェノール）（［３Ｈ］ＺＭ２４１３８５）（０．３〜３０ｎＭ）；Ｎ−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−２−［５−（１，３−ジプロピル−２，６−ジオキソ−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル−オキシ］−アセトアミド（［３Ｈ］ＭＲＥ２０２９Ｆ２０）（０．４〜４０ｎＭ）；５−Ｎ−（４−メトキシフェニル−カルバモイル）アミノ−８−プロピル−２−（２フリル）−ピラゾロ−［４，３ｅ］−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（［３Ｈ］ＭＲＥ３００８Ｆ２０）（０．４〜４０ｎＭ）の濃度を上げて、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシン受容体をそれぞれ標識化した。フィルターに結合した放射能を、Micro-Scint20 を用いて、Top Count Microplate Scintillation Counter（効率５７％）上に集計した。
【０１６０】
ウェスタンブロット分析
全細胞溶解物を先に記載されている（２７）ようにして調製した。ヒトアデノシンＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ（Alpha Diagnostic）及びＡ３受容体（Aviva）に対する特異抗体（１：１０００希釈）を用いてアデノシン受容体を評価した。ＨＩＦの検出を目的とする実験では、５％の脱脂粉乳を含むＰＢＳ／０.１％のツイーン−２０中、４℃で１晩、ＨＩＦ−１αに対する抗体（１：２５０希釈）及びＨＩＦ−１βに対する抗体（１：１０００希釈）を用いてウェスタンブロットアッセイを実施した。ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Pierce, Rockford, IL）を用いて、タンパク質濃度を測定した。等しいタンパク質負荷を保証するために、チューブリン（１：２５０）を用いた。VersaDoc Imaging System (Bio-Rad）を用いて、免疫活性を算定して定量化した。
【０１６１】
酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）
細胞によって培地中に分泌されたＶＥＧＦ及びＩＬ−８タンパク質の濃度をＶＥＧＦ及びＩＬ−８ＥＬＩＳＡキット（R & D Systems）を用い、製造会社の説明書に従って測定した。データは、３回の独立した実験から得た平均±ＳＤとして表した。
【０１６２】
細胞のｓｉＲＮＡによる処理
泡沫細胞を６ウェルプレートに固定して、トランスフェクションの前に、５０〜７０％集密になるまで生育した。ｓｉＲＮＡのトランスフェクションを、RNAiFectTM Transfection Kit（Qiagen）を用い、１００ｎＭの濃度で実施した。非特異的コントロールリボヌクレオチドのセンス鎖（５’−ＡＣＵ ＣＵＡ ＵＣＵ ＧＣＡ ＣＧＣ ＵＧＡ ＣｄＴｄＴ−３’）及びアンチセンス鎖（５’−ｄＴｄＴ ＵＧＡ ＧＡＵ ＡＧＡ ＣＧＵ ＧＣＧ ＣＡＣＵ Ｇ−３’）を、Merighi et al., （Neoplasia, 7:894-903, 2005）によって既に報告されているのと同一条件下で用いた。Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ、Ａ３ＡＲ及びＨＩＦ−１αｓｉＲＮＡｓは、Santa Cruz Biotechnology （Santa Cruz, CA）から入手した。
【０１６３】
統計的分析
図中及びテキスト中の全ての値は、Ｎ回観測（Ｎ≧３で）の平均値±標準誤差（Ｓ．Ｅ．）として表されている。データセットは分散分析（ＡＮＯＶＡ）及びダネット検定（必要に応じて）によって検定した。０．０５未満のＰ値は統計的に有意であると見なした。
【０１６４】
結果
ＰＭＡで処理したＵ９３７、マクロファージ及びＵ９３７由来の泡沫細胞における、正常酸素及び低酸素条件下でのアデノシン受容体ｍＲＮＡの発現
正常酸素及び低酸素条件下でのＰＭＡで処理したＵ９３７、ヒトマクロファージ及びＵ９３７由来の泡沫細胞における、アデノシン受容体ｍＲＮＡの発現をリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ実験によって評価した。
Ａ１サブタイプに関しては、正常酸素及び低酸素の両方で、３つの細胞モデル全てにおいて同様なレベルで発現した（低酸素に対する正常酸素での増大が、Ｕ９３７、ヒトマクロファージ及び泡沫細胞で、それぞれ、１．３±０．２、１．１±０．１、１．２±０．１倍、図１Ａ）。
同様に、Ａ２Ａ及びＡ３受容体サブタイプでは、正常酸素及び低酸素の両方で、調べた３つの細胞タイプ全てにおいて同様なレベルで発現した（低酸素に対する正常酸素での増大が、Ｕ９３７、ヒトマクロファージ及び泡沫細胞で、それぞれ、Ａ２Ａ ０．９±０．１、１．１±０．２、０．９±０．１倍；Ａ３ ０．７±０．１、０．７±０．１、０．８±０．１倍、図１Ｂ及び図１Ｄ）。
Ａ２Ｂ受容体サブタイプの発現ではヒトマクロファージにおいて最も高いレベルであって、３つの細胞タイプ全てで低酸素によって有意に上昇した（低酸素に対する正常酸素での増大が、Ｕ９３７、ヒトマクロファージ及び泡沫細胞で、それぞれ、Ａ２Ｂ １．５±０．２、１．８±０．１、１．９±０．１倍、図１Ｃ）。
【０１６５】
アデノシン受容体伝達の評価を、プラスミド希釈系列から作成したＣｔ値の標準曲線から内挿して行った。アデノシン受容体の発現レベルをβ−アクチンの発現レベルに正規化すると、類似結果が得られた。
【０１６６】
ウェスタンブロッティング及び結合試験の方法による、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞、ヒトマクロファージ及びＵ９３７由来の泡沫細胞におけるアデノシン受容体タンパク質の発現
正常酸素及び低酸素条件における、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞、ヒトマクロファージ及びＵ９３７由来の泡沫細胞において、全てのアデノシン受容体サブタイプのタンパク質評価を、ウェスタンブロッティング実験によって、試験した。図２で報告するように、ｍＲＮＡデータに従って調べた３つの細胞タイプ全てにおいて、全てのアデノシン受容体の存在が観察された。
【０１６７】
異なったアデノシンサブタイプのタンパク質の量を定量化するために、結合試験を実施した。Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体の親和性（ＫＤ、ｎＭ）及び密度（Ｂｍａｘ、タンパク質のｆｍｏｌ／ｍｇ）値を評価するために、それぞれ、［３Ｈ］ＤＰＣＰＸ、［３Ｈ］ＺＭ２４１３８５、［３Ｈ］ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０及び［３Ｈ］ＭＲＥ−３００８Ｆ２０拮抗薬放射性リガンドを用いた。
Ａ１受容体に関しては、Ｕ９３７細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が４．０±０．３及び４．４±０．４であり、そしてＢｍａｘ値が５２±６及び８０±１０タンパク質ｆｍｏｌ／ｍｇであった；ヒトマクロファージでは、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が２．８±０．３及び２．８±０．４であり、そしてＢｍａｘ値が８５±９及び８３±１０であった；泡沫細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が３．３±０．５及び３．７±０．６であり、そしてＢｍａｘ値が７８±１０及び１０２±１２であった（図３Ａ）。
Ａ２Ａ受容体に関しては、Ｕ９３７細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が２．８±０．３及び２．５±０．２であり、そしてＢｍａｘ値が６２±９及び５７±８であった；ヒトマクロファージでは、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が２．２±０．３及び２．３±０．３であり、そしてＢｍａｘ値が１０９±１２及び９０±１０であった；泡沫細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が２．１±０．１及び２．２±０．１であり、そしてＢｍａｘ値が８４±９及び７５±７であった（図３Ｂ）。
Ａ２Ｂ受容体に関しては、Ｕ９３７細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が４．３±０．４及び４．１±０．５であり、そしてＢｍａｘ値が３３±３及び７３±６であった；ヒトマクロファージでは、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が４．９±０．３及び４．８±０．６であり、そしてＢｍａｘ値が１７３±１５及び２４０±１８であった；泡沫細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が２．０±０．２及び１．９８±０．２であり、そしてＢｍａｘ値が９０±８及び１４０±１２であった（図３Ｃ）。
最後に、Ａ３受容体に関しては、Ｕ９３７細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が１．５±０．１及び２．０±０．１であり、そしてＢｍａｘ値が２３５±２６及び２６７±２８であった；ヒトマクロファージでは、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が４．５±０．５及び４．８±０．７であり、そしてＢｍａｘ値が２５４±２４及び３６０±３３であった；泡沫細胞では、正常酸素及び低酸素条件において、それぞれ、ＫＤ値が１．７±０．１及び２．３±０．１であり、そしてＢｍａｘ値が２５０±３０及び２７５±３２タンパク質ｆｍｏｌ／ｍｇであった（図３Ｄ）。
【０１６８】
アデノシン受容体は、低酸素においてＨＩＦ−１αタンパク質の蓄積を誘発する
ＨＩＦ−１αタンパク質の蓄積に対するａｄｏの作用を評価するために、ＰＭＡで処理したＵ９３７、ヒトマクロファージ及び泡沫細胞を、アデノシン（１００μＭ）と４、８及び２４時間培養した。ＰＭＡ及びｏｘＬＤＬが、正常酸素下においてＨＩＦ−１αを誘発することが単独に明らかにされているので、正常酸素及び低酸素の両方で、経時的実験を実施した。
この実験条件で、ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞において、正常酸素条件下で、２４時間後のアデノシンによってほとんど増加しないＨＩＦ−１αタンパク質に特異的なわずかなバンドだけを検出した（デンシトメトリー分析による評価で１．４倍の増加、図４Ａ）。対照的に、ＨＩＦ−１αタンパク質に特異的な強いバンドが、低酸素条件下で４時間から現れ始めて、アデノシンによって有意に誘発され、そして２４時間まで安定であった（図４Ｂ）。
ヒトマクロファージにおいて、正常酸素条件下では、ＨＩＦ−１αの存在が観察されなかったのに対して、低酸素条件下ではアデノシン誘発を評価するために４時間の時点が最適であった（それぞれ、図４Ｃ及び４Ｄ）。
最後に、Ｕ９３７由来泡沫細胞では、ｏｘＬＤＬの２つの異なった用量（５０及び１００μｇ／ｍＬ）の存在下での経時的実験を実施した。この場合もやはり、正常酸素条件下で、５０μｇ／ｍＬのｏｘＬＤＬで処理した後、２４時間目にＨＩＦ−１αタンパク質に特異的なわずかなバンドだけを検出して、これはアデノシンによる僅かな影響を受けたものであった（図４Ｅ）。対照的に、ＨＩＦ−１αタンパク質に特異的な強いバンドが、低酸素条件下で、４時間から現れ始めて、アデノシン（１００μｍ）によって増大し、２４時間後にも安定であり、そして５０又は１００μｇ／ｍＬのｏｘＬＤＬを用いて得られたものと類似していた（図４Ｆ及び４Ｇ）。その結果、アデノシンの泡沫細胞へＨＩＦ−１αタンパク質を蓄積する効果を検討するために、５０μｇ／ｍＬの濃度で４時間の低酸素を選択した。
どのアデノシン受容体がアデノシン誘発ＨＩＦ−１αタンパク質に関与していたかを評価するために、低酸素条件下でアデノシンを添加する前に、泡沫細胞はアデノシン受容体の選択的拮抗薬で処理した。図５に示されているように、アデノシンの作用は、それぞれＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシン受容体の関与が示唆されている、ＤＰＣＰＸ、ＳＣＨ５８２６１、ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０及びＭＲＥ−３００８Ｆ２０（１００ｎＭ）によって部分的に拮抗された。従って、ＨＩＦ−１α蓄積に高い親和性を有する一連の作動薬：シクロヘキシル−アデノシン（ＣＨＡ；１０、１００ｎＭ）、２［ｐ−（カルボキシエチル）−フェネチルアミノ］−ＮＥＣＡ（ＣＧＳ５２６８０；５００、１０００ｎＭ）、１−デオキシ−１−［６−｛４−［（フェニルカルバモイル）−メトキシ］フェニルアミノ｝−９Ｈ−プリン−９−イル］−Ｎ−エチル−β−Ｄ−リボフランヌロンアミド（１０、１００ｎＭ）及びＮ６−（３−ヨードベンジル）−２−クロロアデノシン−５’−Ｎ−メチルウロンアミド（ＣＩ−ＩＢ−ＭＥＣＡ；１０，１００ｎＭ）の濃度増大効果を評価した。図６に示されているように、全ての作動薬が、泡沫細胞においてＨＩＦ−１αタンパク質を誘導することができた。ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞及びヒトマクロファージにおいて、同様の結果が得られた。
【０１６９】
ｓｉＲＮＡ処理によるアデノシン受容体のノックダウン
アデノシン誘発ＨＩＦ−１α蓄積における、異なった受容体サブタイプの関与を更に解明するために、それぞれのアデノシン受容体を、それぞれ、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体の一過性サイレンシングを誘導する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を用いてノックダウンした。泡沫細胞を、それぞれのアデノシンサブタイプを標的とするｓｉＲＮＡでトランスフェクトした。トランスフェクトの４８時間及び７２時間後に、アデノシン受容体ｍＲＮＡ（それぞれ、図７Ａ〜７Ｄ）及びタンパク質のレベルが有意に減少した（それぞれ、図７Ｅ〜７Ｈ）。模擬トランスフェクション及びｓｉＲＮＡによるトランスフェクションの何れも、関連のないｍＲＮＡを標的としておらず、アデノシン受容体発現を阻害した。図７Ｉに示されているように、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３サブタイプに対するｓｉＲＮＡでの低酸素条件下７２時間の細胞処理は、ＨＩＦ−１α調節に対するアデノシンの効力、この効力における全てのアデノシンサブタイプの役割をさらに支援するもの、を低減した。
【０１７０】
転写レベルでのＨＩＦ−１αタンパク質蓄積の制御
アデノシンによるＨＩＦ−１αタンパク質蓄積に関与する分子機構を検討するために、ＨＩＦ−１αｍＲＮＡ発現に対するヌクレオシドの効力を評価した。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ実験では、正常酸素条件下でアデノシンによる細胞の処理がＨＩＦ−１αｍＲＮＡレベルに影響を及ぼさないのに対して、低酸素条件下で、処理の４時間後に、ＨＩＦ−１αｍＲＮＡレベルを、それぞれ、１．６±０．１、１．９±０．１及び１．５±０．１倍に時間依存的に増大させたことを明らかにした。
【０１７１】
アデノシン受容体は低酸素条件下でＶＥＧＦを誘発する
ＶＥＧＦ産生に対するアデノシンの効力を、低酸素条件下２４時間、Ｕ９３７由来泡沫細胞の上澄液で試験した。アデノシン（１００ｎＭ）はＶＥＧＦレベルを１６５±１０％まで増大して、この効果は、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体への関与が示唆されているＭＲＥ−２０２９Ｆ２０及びＭＲＥ−３００８Ｆ２０（１００ｎＭ）によって非常に減少して、それ程ではないが、Ａ２Ａ拮抗薬、ＳＣＨ５８２６１によって阻害された（図８）。更に、ＨＩＦ−１αのｓｉＲＮＡによる細胞の処理は、アデノシンが誘発したＶＥＧＦ産生の増大を無効にして、ヌクレオシドがＨＩＦ−１α調節を介して作動していることを示唆した。
【０１７２】
Ａ２Ｂアデノシン受容体は低酸素条件下でＩＬ−８の増大を誘発する
ＩＬ−８産生に対するアデノシンの効力を、低酸素条件下２４時間及び４８時間、Ｕ９３７由来泡沫細胞の上澄液で試験した。アデノシン（１００ｎＭ）はＩＬ−８レベルを１５８±１０％まで増大して、この効果は、Ａ２Ｂ拮抗薬、ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０又はＡ２Ｂサイレンシングによって阻害されたが、１００ｎＭのＤＰＣＰＸ、ＳＣＨ５８６２１及びＭＲＥ−３００８Ｆ２０（Ａ２Ｂ受容体に対する選択的な効果が示唆されている）によっては阻害されなかった（図９）。アデノシンＡ２Ｂ受容体作動薬、１−デオキシ−１−［６−｛４−［（フェニルカルバモイル）メトキシ］フェニルアミノ｝−９Ｈ−プリン−９−イル］−Ｎ−エチル−β−Ｄ−リボフラヌロンアミドの用量応答曲線は、ＩＬ−８分泌を刺激するＥＣ５０値が５８±６ｎＭであることを明らかにし、Ａ２Ｂ受容体サブタイプのこの応答への関与を示唆した。アデノシンＡ２Ｂ受容体作動薬の効力（１μＭ、ＩＬ−８分泌の１４２±８％）がＡ２Ｂ受容体拮抗薬ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０によって完全に阻止された。最後に、アデノシンによって誘発されるＩＬ−８分泌がＨＩＦ−１αタンパク質の増大を介して影響を受けるのか否かを調べるために、アデノシンで刺激する前に、細胞をＨＩＦ−１αのｓｉＲＮＡで処理した。トランスフェクションの７２時間後に、ＩＬ−８分泌はＨＩＦ−１αサイレンシングの影響を受けず、アデノシンによって誘発されるこの効果が、ＨＩＦ−１αに依存していなかったことを示唆した。
【０１７３】
Ｕ９３７由来泡沫細胞におけるコレステロール／コレステリルエステルの定量
Ｕ９３７細胞からの泡沫細胞形成を、コレステロール／コレステリルエステルの定量を実施して評価した。ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞の酸化ＬＤＬへの曝露が、コレステロールの０．１３７から０．２００への、コレステロール＋コレステリルエステル（総コレステロール）の０．２０５から０．４４３への、そしてコレステリルエステルの０．０６８から０．２４３への増大を誘発する。
【０１７４】
Ｕ９３７由来泡沫細胞におけるオイルレッドＯ染色
図１０Ａに示されているように、ｏｘＬＤＬを伴わないＵ９３７細胞は、高濃度の中性脂質を含有しておらず、中性脂肪に特異的な染料である、オイルレッドＯで染色されない。ＰＭＡで処理したＵ９３７細胞の５０μｇ／ｍＬのｏｘＬＤＬによる２４時間処理後に、大きい細胞質内脂質液滴を特徴とする泡沫細胞の増大が観察された（図１０Ｂ）。この効果は、アデノシン（１００μＭ）と共に培養した後に増大した（図１０Ｃ）。しかしながら、それに続くアデノシンＡ2Ｂ受容体拮抗薬ＭＲＥ−２０２９Ｆ２０（１００ｎＭ）による処理が泡沫細胞の形成を阻止した（図１０Ｄ）。
【０１７５】
同様に、図１１Ｄ及び図１２Ｄにそれぞれ示されているように、Ｕ９３７由来泡沫細胞のアデノシンＡ3受容体拮抗薬、ＭＲＥ−３００８Ｆ２０（１００ｎＭ）及びＶＵＦ５５７４（１０ｎＭ）による処理も泡沫細胞の形成を阻止した。
【０１７６】
要するに、これらのデータは、アデノシンＡ２Ｂ及びＡ３受容体の活性化が、泡沫細胞の形成及びプラークの血管形成及び発症をもたらす低酸素条件下でのＨＩＦ−１α及びＶＥＧＦの蓄積を誘発すること、及びＡ２Ｂ受容体サブタイプもＩＬ-８（ＨＩＦ−１α）蓄積に関与していることを明らかにしている。従って、アデノシンＡ２Ｂ及びＡ３受容体拮抗薬、又はＡ２Ｂ／Ａ３二重拮抗薬は、アテローム性動脈硬化性プラークの形成及び進展を阻止するために用いることができる。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図４−４】
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【図５】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図７−３】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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