(57)【要約】  組成物におけるオレオソームの物理的安定性は、多価アルコールと、その組成物のpHを6より低く下げることができる酸を加えることによって保たれる。得られる組成物は、とりわけ、化粧品、食品、および医薬品の製造に有用でありうる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
安定化されたオレオソーム調製物の製造方法であって、
(a)  オレオソーム調製物を用意すること、および
(b)  そのオレオソーム調製物を、(i)多価アルコールおよび(ii)オレオソーム調製物のpHを6.0より低いpHに下げることができる酸の存在下で、混合すること、
を含んでなる上記方法。
【請求項２】
45℃で2ヵ月間貯蔵したとき、安定化されたオレオソーム調製物が遊離のオイルを5容量％より少なく含む、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
オレオソーム調製物が少なくとも1％のオレオソームを含む、請求項1または2に記載の方法。
【請求項４】
多価アルコールが非芳香族ジオール、トリオールまたはポリオールである、請求項1〜3のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
非芳香族ジオール、トリオールまたはポリオールが200,000ダルトン以下の分子量を有する、請求項4に記載の方法。
【請求項６】
多価アルコールが2個以上のアルコール含有アミノ酸を含むペプチドまたはポリペプチドである、請求項1〜3のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
アルコール含有アミノ酸がトレオニンおよびセリンからなる群より選択される、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
ペプチドまたはポリペプチドが調製物中に0.5〜3.5％の量で存在する、請求項6または7に記載の方法。
【請求項９】
(i)多価アルコール、および(ii)約10-6モル/リットル以上の[H+]濃度、を含む安定化されたオレオソーム調製物。
【請求項１０】
45℃で2ヵ月間貯蔵したとき、安定化されたオレオソーム調製物が遊離のオイルを5容量％より少なく含む、請求項9に記載の組成物。
【請求項１１】
安定化されたオレオソーム調製物が少なくとも1％のオレオソームを含む、請求項9に記載の組成物。
【請求項１２】
多価アルコールが非芳香族ジオール、トリオールまたはポリオールである、請求項10または11に記載の組成物。
【請求項１３】
非芳香族ジオール、トリオールまたはポリオールが200,000ダルトン以下の分子量を有する、請求項10〜12のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項１４】
請求項9〜13のいずれか1項に記載の組成物を含んでなる完成製剤。
【請求項１５】
完成製剤がパーソナルケア製品、化粧品、外用医薬品、スキンケア製品、薬用化粧品、皮膚用医薬品、外用動物医薬品、食品、または工業製品である、請求項14に記載の完成製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なオレオソーム含有組成物、ならびにそれらの製造方法に関するものである。これらの組成物は人体の皮膚に局所適用するための製品との関連において有用である。
【背景技術】
【０００２】
パーム油、ヒマワリ油、ナタネ（キャノーラ）油のような植物種子油は、多種多様な産業上および栄養上の用途によって世界的に主要な農産物となっている。米国だけでも年間150億ポンドを上回る植物種子油が生産されている。SEED TECHNOLOGY AND ITS BIOLOGICAL BASIS, M. Black & J.D. Bewley (編), Sheffield Biological Sciences (2000)に記載されるWallis J.らによる「Seed oils and their metabolic engineering（種子油およびそれらの代謝工学）」を参照されたい。米国での植物種子油生産高の98％は栄養目的のためであり、食用油やマーガリンの製造などに使われている。植物油の残りはセッケン、可塑剤、ポリマー、界面活性剤、潤滑油といった工業製品を製造する際の原料として使用されている。
【０００３】
植物油はトリアシルグリセロールであり、すなわち、グリセロール部分の各ヒドロキシル基が脂肪酸でエステル化されたものである。トリアシルグリセロールのグリセロール骨格は構造的に不変であるが、グリセロールに結合された脂肪酸は植物油によってかなり相違する。
【０００４】
脂肪酸の構造が植物油の物理的および化学的性質を決める。例えば、脂肪酸に含まれる二重結合の数（しばしば「不飽和度」と呼ばれる変数）は油の融点に影響を与え、一方脂肪酸の鎖長はその粘性、潤滑性および可溶性に影響する。
【０００５】
トリアシルグリセロール分子は水性環境では不溶性であり、油滴へと合体する傾向がある。こうした水不溶性トリアシルグリセロールを貯蔵するため、植物は種子細胞内に直径1〜10μmほどの独特な種子油貯蔵コンパートメントを発達させており、これらは「オイルボディ」、「オレオソーム」、「リピドボディ」および「スフェロソーム」としてさまざまに知られている（まとめて「オレオソーム」という）。Huang, Ann. Rev. Plant Mol. Biol. 43: 177-200 (1992)を参照されたい。植物油のほかに、これらのオレオソームは2種類の化学成分、すなわち、リン脂質とあるクラスのタンパク質（当技術分野ではオイルボディタンパク質として知られる）を含む。構造的見地から、オレオソームはトリアシルグリセロールコアがリン脂質の半単位膜によってカプセル化されたものであり、そこにオイルボディタンパク質が内蔵されている。オイルボディタンパク質は、オレオソームがより大きな油滴に合体することを防止する役目を担っていると考えられる。
【０００６】
植物油を抽出するためには、種子を破砕または圧壊し、次に、一般的には有機溶媒を用いて植物油を他の種子成分（例えば、種子タンパク質や炭水化物）から分離することを含む方法により、精製する。有機溶媒を使わない植物油抽出法も開発されており、例えば、Embong and Jelen, Can. Inst. Food Sci. Techn. J. 10: 239-43 (1977)に記載される。
【０００７】
しかしながら、これらの抽出法の主目的は純粋な植物油を取得することであるので、通常こうした方法はオレオソーム構造を破壊する。したがって、植物油から調製された従来の組成物は一般に無傷のオレオソームを含まない。
【０００８】
例えば、Voultouryらの米国特許第5,683,740号および第5,613,583号には、脂質小胞を含む採油用植物の破砕した種子から調製されたエマルションが開示されている。これらの特許に記載された破砕法の過程で、オレオソームはそれらの構造的完全性を実質的に失ってしまう。したがって、この破砕法においては種子油の70〜90％が遊離油の状態で放出されることが開示されている。
【０００９】
一方、構造的に無傷の形態で植物種子から単離されたオレオソームは、すでに認められた実際的な有用性を有する。とりわけ、オレオソームは、外因的な乳化剤の非存在下に、室温で水性化合物と油の複合混合物の調製を可能にし（GuthらのPCT出願第2005/097059号参照）、また、MurrayらのPCT出願第2005/030169号に記載されるように、オレオソームに活性成分を負荷させることが可能である。
【００１０】
オレオソームを調製するための非破壊的方法がDeckersらによって米国特許第6,146,645号、第6,183,762号、第6,210,742号、第6,372,234号、第6,582,710号、第6,596,287号、第6,599,513号および第6,761,914号に開示されている（まとめて「Deckers特許」という）。Deckers特許によれば、精製されたオレオソーム調製物が得られ、そのオレオソーム調製物を用いて、多様な他の物質の存在下でエマルションを調製することができる。そうしたエマルションの調製は、望ましい乳化バランス、粘度、外観を達成し、かつこれらのエマルションを特に化粧品、食品、医薬品および工業的応用に適するようにすることを目的としている。
【００１１】
GrayらおよびGalleyらの、それぞれPCT出願第2007/122421号および同第2007/122422号は、製剤化および哺乳類への投与に適するオレオソーム含有組成物に関する。開示されたオレオソーム組成物は、「オイルカード」(oil curd)と呼ばれるものであるが、採油用の植物および穀物から調製することができる。かかる組成物はさらに外因的な植物性物質、例えば植物種子タンパク質（アルブミン、グロブリン、プロラミン、グルテリンなど）および炭水化物を含んでいる。後者は、PCT出願第2007/122421号によれば、いくつかの望ましい性質、例えば、エマルション安定性の向上および特定の化学薬品（特に界面活性剤）との適合性を与える。
【００１２】
実用化のために、オレオソーム調製物は、長期貯蔵中のように、さまざまな条件が関係しうる場合、輸送中によく発生するように、オレオソーム調製物が温度変動を受ける場合、あるいはオレオソーム調製物を製剤化プロセス（せん断力の使用、加熱・冷却工程、または反応性化学薬品の添加を必要とすることがある）で一成分として用いる場合に、望ましくない物理的または化学的変化を受けないことが好ましい。この最後の点に関しては、細菌、真菌、マイコプラズマなどの生物因子が特に懸念される。なぜならば、それらのオイルボディ調製物への暴露はオレオソームの崩壊をよく起こすからである。
【００１３】
オレオソームを生物因子への暴露から保護するため、オレオソーム調製物に防腐剤を添加することがある。しかし、安全性への懸念およびオレオソームの外被タンパク質との化学反応性/相互作用により、多くの公知の防腐剤（例えば、第四級アンモニウム塩、ホルムアルデヒド放出化合物、塩素化化合物、フタル酸エステルなど）は、食品、化粧品、スキンケア製品、局所医薬品などの用途での使用には不適格であると見なされている。したがって、こうした用途に最も広く受け入れられる望ましい防腐剤は、安息香酸塩、サリチル酸塩、ソルビン酸塩、プロピオン酸塩などの酸塩と、デヒドロ酢酸やフェルラ酸(ferulic acid)などの酸である。
【００１４】
防腐剤の役割を果たすためには、酸または酸塩防腐剤は実質的にそれらの酸の形態でなければならず、すなわち、6.0より低いpH、好ましくは4.0〜5.0のpHでなければならない。ところが、本発明者らは、この酸性pH範囲内では、オレオソーム構造が弱体化して、オレオソームから油が「漏れる」という点で、オレオソーム調製物が物理的安定性を失うことを観察した。それゆえ、他の成分中にオレオソームを混在させること、それによって無傷のオレオソームを含む完成製剤を製造することは、問題となる。
【００１５】
こうした問題は、オレオソームをスキンケア製品に混入する場合に特に深刻である。スキンケア製品はヒトの皮膚と適合するように処方されることが多く、そのためpHが4.1〜5.8の範囲にある。Segger, et al., IFSCC 10: 2 (2007) を参照されたい。いくつかの外用製品、例えば皮膚の角質除去剤(skin exfoliant)（乳酸、グリコール酸、サリチル酸のような酸を含む）は、さらに低いpH（3.5〜4.5の範囲）を有し、これはオレオソームがおおむね物理的に安定しているpH値をはるかに下回る。
【００１６】
さらに、一価アルコールの存在下では、オレオソーム構造が弱体化して、オレオソームからの油漏出が起こることを、本発明者らは見い出した。その結果、典型的なオレオソーム調製物は、ハンドサニタイザー（手の殺菌剤）のような、高レベルの一価アルコールを必要とする製品において物理的に安定でない。
【００１７】
Deckers特許によるオレオソーム調製物には、細菌、真菌、その他の生物因子の存在下で安定性を確保するため、Glydant Plus(登録商標)、Phenonip(登録商標)、メチルパラベン、プロピルパラベン、Germall 115(登録商標)、Germaben II(登録商標)、フィチン酸およびこれらの混合物を添加することができる。しかし、Deckers特許は、これらの作用剤が構成成分であるオレオソーム調製物の物理的完全性に及ぼす影響について明記していない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１８】
【特許文献１】米国特許第5,683,740号
【特許文献２】米国特許第5,613,583号
【特許文献３】PCT出願第2005/097059号
【特許文献４】PCT出願第2005/030169号
【特許文献５】米国特許第6,146,645号
【特許文献６】米国特許第6,183,762号
【特許文献７】米国特許第6,210,742号
【特許文献８】米国特許第6,372,234号
【特許文献９】米国特許第6,582,710号
【特許文献１０】米国特許第6,596,287号
【特許文献１１】米国特許第6,599,513号
【特許文献１２】米国特許第6,761,914号
【特許文献１３】PCT出願第2007/122421号
【特許文献１４】PCT出願第2007/122422号
【非特許文献】
【００１９】
【非特許文献１】Wallis J.ら, 「Seed oils and their metabolic engineering（種子油およびそれらの代謝工学）」, SEED TECHNOLOGY AND ITS BIOLOGICAL BASIS, M. Black & J.D. Bewley (編), Sheffield Biological Sciences (2000)
【非特許文献２】Huang, Ann. Rev. Plant Mol. Biol. 43: 177-200 (1992)
【非特許文献３】Embong and Jelen, Can. Inst. Food Sci. Techn. J. 10: 239-43 (1977)
【非特許文献４】Segger, et al., IFSCC 10: 2 (2007)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
要するに、オレオソーム調製物の従来の製造方法には欠点が存在する。特に、望ましくない物理的または化学的変化（安定化されなければ、さまざまな条件下で起こる）に対してオレオソーム調製物を安定化するための改善された方法が求められている。従来のプラクティスによれば、微生物的観点から保存され、かつ上述したように酸性pH範囲および高レベルの一価アルコールの存在下で調製物の物理的側面に関して安定している、オレオソーム調製物が得られるかどうか、またそれがどのようにして得られるのかは不明である。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明は、オレオソームの物理的安定性を著しく危うくすることなく、6.0より低いpHでオレオソームの保存を可能にする系を提供する。
【００２２】
したがって、本発明の一態様によれば、安定化されたオレオソーム調製物を製造するための方法が提供される。本発明の方法は、(a)オレオソーム調製物を用意し、次に(b)そのオレオソーム調製物を、(i)多価アルコールおよび(ii)オレオソーム調製物のpHを6.0より低いpHに下げることができる酸性化合物の存在下で、混合することを含んでなる。
【００２３】
本発明の安定化されたオレオソーム調製物は20容量％の多価アルコールを含みうる。好ましい実施形態では、多価アルコールが非ハロゲン化化合物である。別の好ましい実施形態では、多価アルコールが非芳香族ジオール、非芳香族トリオール、または非芳香族ポリオールである。
【００２４】
別の態様によれば、本発明は、オレオソーム、多価アルコール、および10-6モル/リットル以上の[H+]濃度を含む新規組成物を提供する。
【００２５】
本発明のオレオソーム調製物は、室温で長期間貯蔵したとき、その物理的側面だけでなく、微生物的観点からも安定している。かくして、安定化オレオソーム調製物を室温で2年間貯蔵した時点で、その調製物に含まれる全オイル含量の好ましくは95容量％以上がオレオソーム内に存在する。
【００２６】
本発明に従って得られるオレオソーム調製物は、とりわけ、化粧品、食品、医薬品、工業製品を含めて、多種多様な完成製剤の製造において有用である。
【００２７】
本発明の他の特徴および利点は以下の詳細な説明から明らかになるだろう。しかし、詳細な説明および具体的な実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すと同時に、例示としてのみ提供されることを理解すべきである。というのは、本発明の精神および範囲に含まれるさまざまな変更や修飾が以下の詳細な説明から当業者には明白であるからである。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
発明の詳細な説明
上述したように、本発明は、オレオソーム調製物の改善された保存方法に関する。本発明者らは、驚いたことに、微生物的に安定したオレオソーム調製物であって、酸性pH範囲内でその物理的側面の点でさらに安定しているオレオソーム調製物が得られることを見い出した。この改良型オレオソーム調製物は、酸性条件下での貯蔵を受け入れ、突然の温度変化にさらされたとき向上した安定性を示し、そして(i)酸性pHを有するオレオソーム含有完成製剤（例えば、ヒト皮膚への外用品、これらは完成形態でしばしば酸性である）、または(ii)高レベルの一価アルコールを含むオレオソーム含有完成製剤、に製剤化することができる。加えて、これらの改良型オレオソーム調製物は、一成分としてオレオソーム調製物を取り入れている最終製剤の効率のよい製造を可能にする。とりわけ、外から加えられた油相を含むオレオソーム調製物と水相とを混合する製剤化プロセスにおいて、その水相を混合するのに要するエネルギーと時間が実質的に少なくてすむ。
【００２９】
したがって、本発明は、安定化されたオレオソーム調製物の製造方法を提供し、この方法は、
(a)  オレオソーム調製物を用意すること、および
(b)  そのオレオソーム調製物を、(i)多価アルコールおよび(ii)オレオソーム調製物のpHを6.0より低いpHに下げることができる酸性化合物の存在下で、混合すること、
を含んでなる。
【００３０】
本発明に従って得られたオレオソーム調製物は、微生物的観点および物理的観点から安定している。好ましくは、オレオソーム調製物の物理的外観が、室温で2年間または45℃で2ヵ月間貯蔵したとき、いかなる有意な変化も受けない。さらに、前記条件下で貯蔵した時点で、本発明のオレオソーム調製物中の全オイル含量の95容量％以上がオレオソーム内に残存することが好ましい。より好ましくは99容量％以上、最も好ましくは100容量％がオレオソーム内に存在する。
【００３１】
オレオソーム調製物
本明細書において「オレオソーム」（oleosome）とは、生細胞から得られる離散的な細胞内の油またはろう貯蔵オルガネラを意味する。オレオソームは、その種のオルガネラを含む細胞であれば、植物細胞、真菌細胞、酵母細胞(Leber, R. et al, 1994, Yeast 10: 1421-28)、細菌細胞(Pieper-Fuerst et al., 1994, J. Bacteriol. 176: 4328-37)、および藻類細胞(Roessler, P.G., 1988, J. Phycol. (London) 24: 394-400)を含めて、どのような細胞から得られたものでもよい。
【００３２】
本発明の好ましい実施形態では、オレオソームは植物細胞から得られたものであり、ここで「細胞」は、オレオソームが存在する花粉、胞子、種子および植物栄養器官のそれぞれから得られる細胞を含む。一般的には、Huang, Ann. Rev. Plant Physiol. 43: 177-200 (1992)を参照されたい。さらに好ましくは、本発明で用いるオレオソームは植物の種子から得られたものである。
【００３３】
本発明において有用な植物種子の中で、好ましいものは以下からなる植物種の群より選択される植物種から得られる種子である：アーモンド(Prunus dulcis)；アニス(Pimpinella anisum)；アボカド(Persea spp.)；ブナの実(beech nut) (Fagus sylvatica)；ボリジ(Boragio officinalis)；ブラジルナッツ(Bertholletia excelsa)；キャンドルナッツ(Aleuritis tiglium)；カラパ(Carapa guineensis)；カシューナッツ(Ancardium occidentale)；ヒマ(Ricinus communis)；ココナツ(Cocus nucifera)；コリアンダー(Coriandrum sativum)；ワタの実(Gossypium spp.)；クランベ(Crambe abyssinica)；クレピス・アルピナ(Crepis alpina)；クロトン(Croton tiglium)；キュウリ(Cucumis sativus)；クフェア(Cuphea spp.)；ディル(Anethum gravealis)；ユーフォルビア(Euphorbia lagascae)；マツヨイグサ(Oenothera biennis)；ジモルフォテカ・プルビアリス(Dimorphoteca pluvialis)；アマナズナ(false flax) (Camelina sativa)；フェンネル(Foeniculum vulgaris)；ラッカセイ(Arachis hypogaea)；ヘーゼルナッツ(Corylus avellana)；アサ(大麻)(Cannabis sativa)；ギンセンソウ(honesty plant) (Lunnaria annua）；ホホバ(Simmondsia chinensis）；カポックの実(Ceiba pentandra）；ククイの実(Aleurites moluccana）；レスクエレラ(Lesquerella spp.)；アマニ/アマ(Linum usitatissimum）；ルピナス(Lupinus spp.）；マカデミアナッツ(Macademia spp.）；トウモロコシ(Zea mays）；メドウフォーム(Limnanthes alba）；カラシ(Brassica spp.およびSinapis alba）；オリーブ(Olea spp.）；アブラヤシ(Elaeis guineeis）；オイチシカ(Licania rigida）；パパイヤ(Assimina triloba）；ピーカン(Juglandaceae spp.）；エゴマ(Perilla frutescens）；ナンヨウアブラギリ(physic nut) (Jatropha curcas）；ピリナッツ(Canarium ovatum）；マツの実(pine spp.）；ピスタチオ(Pistachia vera）；ポンガム(Bongamin glabra）；ケシの実(Papaver soniferum）；カボチャ(Cucurbita pepo)；ナタネ(Brassica spp.）；ベニバナ(Carthamus tinctorius）；ゴマ(Sesamum indicum）；ダイズ(Glycine max)；セイヨウカボチャ(Cucurbita maxima）；サラノキ(Shorea rubusha）；ルリギク(Stokesia laevis）；ヒマワリ(Helianthus annuus）；ツクマ(tukuma) (Astocarya spp.）；アブラギリの実(Aleuritis cordata）；ヴァーノニア(Vernonia galamensis)；およびこれらの混合物。最も好ましくは、植物の種子は以下を含む植物種の群より選択される：ナタネ(Brassica spp.）、ダイズ（Glycine max）、ヒマワリ(Helianthus annuus）、アブラヤシ(Elaeis guineeis）、ワタの実(Gossypium spp.）、ラッカセイ(Arachis hypogaea）、ココナツ(Cocus nucifera）、ヒマ（Ricinus communis）、ベニバナ(Carthamus tinctorius）、カラシ(Brassica spp.およびSinapis alba）、コリアンダー(Coriandrum sativum）、セイヨウカボチャ（Cucurbita maxima）、アマニ/アマ(Linum usitatissimum）、ブラジルナッツ（Bertholletia excelsa）、ホホバ(Simmondsia chinensis）、トウモロコシ(Zea mays）、ハマナ(Crambe abyssinica）、およびルッコラ(Eruca sativa）。ここで最も好ましいものはベニバナ(Carthamus tinctorius)から調製されたオイルボディである。
【００３４】
植物からオレオソームを調製するためには、当業者によく知られている農業栽培実施法を用いて、このような植物を成長させて、結実させる。種子を収穫し、必要に応じて、例えばふるい分けするかまたは洗い流すことによって、石や種子皮のような物質を取り除き（皮をむき）、場合により種子を乾かした後、その種子を機械的破砕によって加工する。好ましくは、種子を破砕する前に液相を添加する。これは「湿式粉砕」として知られている。油抽出法における湿式粉砕は、カラシ(Aguilar et al. 1991, J. Texture Studies 22: 59-84)、ダイズ(米国特許第3,971,856号；Cater et al, 1974, J. Am. Oil Chem. Soc. 51: 137-41)、ラッカセイ(米国特許第4,025,658号および第4,362,759号)、ワタの実(Lawhon et al, 1977, J. Am. Oil Chem. Soc. 54: 75-80)、およびココナツ(Kumar et al, 1995, INFORM 6: 1217-40)を含む、さまざまな植物種からの種子について報告されている。
【００３５】
好ましくは、その液体は水であるが、エタノールのような有機溶媒を用いてもよい。破砕に先立って、液相中で約15分〜約2日間にわたり種子に吸収（imbibe）させることも有利である。吸収により細胞壁が柔らかくなり、破砕プロセスが容易になる。より長い期間の吸収は発芽過程に似ており、その結果、種子成分の組成にある種の有利な変化をもたらす可能性がある。
【００３６】
種子はコロイドミルを使って粉砕することが好ましい。コロイドミルのほかに、工業規模で用いられる量の種子を加工することができる、以下を含む他の粉砕・破砕装置を本発明で利用してもよい：ディスクミル、コロイドミル、ピンミル、オービタルミル、IKAミルおよび工業用ホモジナイザー。ミルの選択は、利用する種子の供給源だけでなく、種子のスループット要件にも左右される。
【００３７】
本発明によれば、破砕プロセスの間、種子のオイルボディは無傷のままで存在することが重要である。したがって、種子油の加工において常用される、オイルボディを破壊しがちな操作条件はどれも本発明の方法に適していない。
【００３８】
粉砕温度は好ましくは10℃〜90℃である。より好ましくは、それは15℃〜50℃であり、最も好ましくは18℃〜30℃である。一方、pHは好ましくは2.0〜11.0、より好ましくは6.0〜9.0、最も好ましくは7.0〜9.0の範囲に維持される。
【００３９】
固形の汚染物質、例えば、種子皮、繊維状物質、未溶解の炭水化物とタンパク質、および他の不溶性汚染物質は、粉砕した種子画分から取り除く。固形汚染物質の分離はデカンテーション遠心分離機を用いて行うことができる。種子のスループット要件に応じて、デカンテーション遠心分離機の処理能力を変えてもよく、例えば3相デカンターのような他のモデルのデカンテーション遠心分離機を用いてもよい。運転条件は用いる特定の遠心分離機により変化し、不溶性の汚染物質が沈降して、デカンテーションの際に沈降した状態のままであるように調整する必要がある。これらの条件下でオイルボディ相と液相の部分的分離を観察することができる。
【００４０】
不溶性の汚染物質を取り除いた後、オレオソーム画分を水相から分離する。本発明の一実施形態では、円筒型遠心分離機(tubular bowl centrifuge)を使用する。好ましい実施形態では、分離板型遠心分離機(disc stack centrifuge)を利用する。あるいはまた、液体サイクロンまたは自然重力下での相の沈降または他のいずれかの重力分離技術を利用してもよい。また、濾過（例えば、メンブレン限外濾過およびクロスフローマイクロフィルトレーション）のようなサイズ排除法によってオレオソーム画分を水性画分から分離することも可能である。
【００４１】
この目的のために遠心分離機を用いる場合、重要なパラメーターはその遠心分離機を作動させるために用いるリングダム(ring dam)のサイズである。リングダムは、中心にさまざまな大きさの円形開口部を有する取り外し可能なリングであり、それらはオレオソーム相からの水相の分離を調節し、それによって、得られるオレオソーム画分の純度を支配する。選択されるリングダムのサイズは、オレオソーム調製物の希望する最終コンシステンシーだけでなく、用いる遠心分離機のタイプおよび油料種子の種類によっても左右される。
【００４２】
本発明の一実施形態によれば、ベニバナオレオソームはSA-7 (Westfalia)分離板型遠心分離機をサイズ69〜75mmのリングダムと併用することで得られる。分離効率はさらに流量によっても影響され、この実施形態では、一般的に流量を0.5〜7.0L/分に維持する。温度は26℃〜40℃に維持することが好ましい。
【００４３】
用いる遠心分離機のモデルに応じて、水相からのオレオソーム画分の最適な分離が達成されるように、流量とリングダムのサイズを調整することができる。こうした調整はプロセス工学の分野の当業者には明らかだろう。
【００４４】
固形分の分離とオレオソーム画分からの水相の分離を同時に行うことが可能である。これは、重力に基づいた分離法、例えば3相円筒型遠心分離機、デカンター、液体サイクロン、またはサイズ排除による分離法を用いて、実施することができる。
【００４５】
本発明の方法のこの段階で得られるオレオソーム組成物は一般に、比較的クルードであって、多くの種子タンパク質（糖化されたものと糖化されてないもの）や他の汚染物質（グルコシノレートまたはその分解産物など）を含む。本発明はそのような組成物を包含するが、好ましい実施形態では、相当量の種子汚染物質を取り除いてから、安定化されたオレオソーム調製物を調製する。
【００４６】
種子汚染物質の除去を行うために、上記のように、水相から分離した後に得られたオイルオレオソーム調製物を1回以上洗浄する。その洗浄は、オレオソーム画分を液相中に再懸濁し、その再懸濁した画分を遠心分離することにより行う。こうして「洗浄済みオレオソーム調製物」が得られる。
【００４７】
本発明によれば、洗浄条件は一般にオレオソーム調製物の希望する純度に応じて選択される。この点に関して、異なるオレオソーム純度のオレオソーム調製物を得るために、コントロールされた方法で変更しうる条件としては、洗浄に用いる液相の構成、洗浄時間、液相とオレオソーム相の比、およびpHが挙げられる。例えば、液相は水または有機溶媒でありうる。一般的には、(i)オレオソームの等電点（等電点は一般に、オレオソーム供給源に応じて、4〜6の間で変化する）からpH値で1以上離れたpHを有する、緩衝化液相を選択することが有利である。なぜならば、そのような条件はオレオソームと汚染物質の分離を容易にするからである。さらに、緩衝化液相は、(ii)オレオソームが安定しているpHを有する、すなわち、一般にやや塩基性のpH範囲（pH7.0〜9.0）にある、ことが有利である。
【００４８】
本発明に適する緩衝液系は、塩化ナトリウムを0.01M〜2Mの濃度で含む系、25mM〜50mMの濃度の重炭酸ナトリウム緩衝液、および低塩濃度緩衝液（例えば、50mM Tris-HCl、pH7.5）によって例示される。ベニバナオレオソームを調製する場合には、45mM重炭酸ナトリウム緩衝液(pH8.2)が比較的純粋なオレオソーム調製物を得るのに特に適している。
【００４９】
そのような緩衝液を用いて、例えば、非オイルボディタンパク質が2％以下のオレオソーム調製物を得ることができる。オレオソーム純度に影響を及ぼす別の条件は、本発明によれば、洗浄時間およびオレオソーム/液相の相対量である。プロセス工学の分野の当業者には理解されるように、洗浄時間を引き延ばしかつ/または洗浄回数を増やすことにより、また、大量の液相を用いることにより、収量は減るものの、一般的により高いオレオソーム純度を得ることが可能である。
【００５０】
洗浄条件は調製されたオレオソームの供給源に応じて調整しうる。特に、緩衝液の組成、洗浄時間、pHなどの上記パラメーターは、汚染成分だけでなくオレオソーム調製物の構成にも影響を与えるように変えることができる。なぜならば、これらはオレオソームの供給源に応じて変化するからである。
【００５１】
こうして、洗浄条件の関数として、「本質的に純粋な」オレオソーム調製物が得られる；すなわち、唯一存在するタンパク質はオイルボディタンパク質である。好ましい実施形態において、オレオソーム画分は非オイルボディタンパク質を30％(w/w)未満、より好ましくは20％(w/w)未満、より一層好ましくは10％(w/w)未満しか含まない。最も好ましい実施形態では、オレオソーム画分が2％(w/w)以下の非オイルボディタンパク質を含む。
【００５２】
いくつかの異なるpH値で洗浄することは、汚染物質（特にタンパク質）の段階的除去を可能にするので、有益でありうる。オレオソーム洗浄時に種子タンパク質と他の汚染物質の除去をモニターするために、SDSゲル電気泳動または他の分析技術を用いることが便利である。さらに、洗浄工程を2回以上実施する場合には、異なる洗浄工程ごとに洗浄条件を変えてもよい。
【００５３】
洗浄工程の間に全部の水相を取り除く必要はなく、また、最終洗浄済みオレオソーム調製物を水、緩衝液系（例えば、50mM Tris-HCl pH7.5）、または他の液相中に懸濁してもよい。そうすることが必要なら、pHをpH2.0〜11.0、好ましくはpH6.0〜9.0、最も好ましくはpH7.0〜8.5に調整する。オレオソーム調製物中の水の量は変えることができ、水の量に応じて、多かれ少なかれ粘性のオレオソーム調製物が本発明に従って得られる。かくして、本発明のオレオソーム調製物は、容量基準で、好ましくは10％より多く65％より少ない水、さらに好ましくは15％より多く50％より少ない水、最も好ましくは20％より多く50％より少ない水を含有する。
【００５４】
本発明によれば、オレオソーム調製物を製造する方法はバッチ操作法または連続フロー法で行うことができる。特に、分離板型遠心分離機を用いる場合は、連続流を発生するようにポンプシステムを設定することが有利である。利用できるポンプの例は、空気圧作動型のダブルダイヤフラムポンプ(double-diaphragm pump)および油圧系の容積移送式真空ポンプ(positive-displacement pump)または蠕動ポンプ(peristaltic pump)である。
【００５５】
デカンテーション遠心分離機および円筒型遠心分離機への均一なコンシステンシーの供給を維持するため、分離工程の合間にIKAホモジナイザーのようなホモジナイザーを加えることができる。また、オイルボディ調製物を洗浄するために用いる各種の遠心分離機またはサイズ排除型分離装置の合間に、インライン式ホモジナイザーを加えることもできる。リングダムのサイズ、緩衝液の組成、温度およびpHは各洗浄工程で異なっていてよい。
【００５６】
前述に従って得られたオレオソーム調製物は、以下でより詳しく述べるアプローチによって安定化することができる。
【００５７】
多価アルコール
本明細書において、「多価アルコール」とは、2個以上のヒドロキシル基をもつヒドロキシル含有有機化合物を意味する。本発明ではどのような多価アルコールを用いてもよい。好ましくは、多価アルコールは低分子量から中間分子量まで、200,000ダルトン未満の水溶性の非ハロゲン化多価アルコールである。
【００５８】
したがって、用いる多価アルコールは適切には非芳香族のジオール、トリオール、またはポリオールである。多価アルコールがジオールである場合、それはグリコールまたは非芳香族グリコール誘導体でありうる。適当なグリコール誘導体としては、ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、へキシレングリコール、ジプロピレングリコール、ヘキサンジオール、またはポリブチレングリコールが挙げられる。多価アルコールがトリオールである場合、それは適切には1,2,6ヘキサントリオールまたはグリセロールである。グリセロールのポリマー、例えば、ジ-、トリ-、テトラ-、ペンタ-、ヘキサ-、セプタ-、オクタ-、ノナ-、またはデカグリセロールを用いてもよい。グリセロールの軽度置換誘導体およびそのポリマーも適している。グリセロールの軽度置換誘導体およびそのポリマーは、これらの分子の6個ごとまたはそれより少ない数ごとのヒドロキシル基のうちの1個が修飾されている分子である。特に好ましい置換はエステル化である。
【００５９】
多価アルコールがポリオールである場合、少なくとも1個の炭素原子はそれに結合されたヒドロキシル基をもたないことが好ましい。グリセロール、およびソルビトールのような糖類は、炭素原子ごとに結合されたヒドロキシル基を有するポリオールの例である。実際、グリセロールとその直鎖状および非直鎖状（分岐状）ポリマー類似体（ポリグリセロール）が本発明における好ましい多価アルコールである。かかるポリオールのいくつかのエトキシレートは、それらが室温で液体であるかまたは水溶性であるという条件で、本発明の製剤中で使用するのに適しており、例えば、sorbeth 6、sorbeth 20、sorbeth 30、およびsorbeth 40が適している。ポリビニルアルコールはこれとの関連で適している他のポリオールの例である。
【００６０】
また、本発明に従って多価糖類を用いることも可能であり、かかる多価糖類には、グルコースやフルクトースのような単糖類、スクロースのような二糖類、およびデンプンやセルロースのような複合多価糖類が含まれる。さらに、軽度に置換された糖エステルは、そうしたエステルが多価のままであるという条件で、使用することができる。
【００６１】
さらに、多価アルコールとして外因性のペプチドおよびポリペプチドを本発明に従って用いることも可能である。ただし、そうしたペプチドおよびポリペプチドは、トレオニンおよびセリンから選択されたアルコール含有アミノ酸残基を2個以上含まなければならない。セリンもしくはトレオニンを含むペプチドまたはポリペプチドをそのように用いる場合、それらは水溶性であって、80ダルトン〜200,000ダルトンの分子量をもつことが好ましい。さらに、それらは二次または三次構造をもたないことが好適である。本発明によれば、セリン-およびトレオニン-含有ペプチドおよびポリペプチドは、それぞれ、精製された形で用いることが好ましいが、2種以上のポリペプチドの混合物を利用してもよい。
【００６２】
前述の説明を踏まえて、化学に精通した当業者であれば、適当な多価アルコールを特定することができよう。さらに、そのような当業者は、具体的に列挙しなかった他の多価アルコールならびに多価アルコールの混合物が本発明の精神および範囲から逸脱することなく使用できることを認識するだろう。
【００６３】
酸性化合物
本発明によれば、上述したようにオレオソーム調製物中に溶解したとき、その調製物のpHを約6.0以下に下げる、すなわち、約10-6モル/リットルの[H+]濃度を有するオレオソーム調製物をもたらす、酸性化合物または酸塩はどれも適している。よって、好ましい実施形態では、その酸性化合物は、オレオソーム組成物のpHを約5.0〜約6.0、より好ましくは約5.0〜約4.0、最も好ましくは約4.0〜約3.5に下げる能力について選択される。これとの関連で適している酸性化合物のクラスの例は、クエン酸、リン酸、塩酸、安息香酸、プロピオン酸、グリコール酸、レチノイン酸、乳酸、ソルビン酸、グルコン酸、デヒドロ酢酸、ヒアルロン酸、リンゴ酸、フマル酸、サリチル酸、およびこれらのいずれかの混合物である。角質除去(exfoliation)作用のある化粧品として処方するためのオレオソーム調製物には、グリコール酸、乳酸、レチノイン酸、および/またはサリチル酸の使用が好適である。
【００６４】
安定化されたオレオソーム調製物の製造
本発明のオレオソーム調製物は好ましくは少なくとも1容量％のオレオソームを含む。より好ましくは、オレオソーム調製物は少なくとも5、10、20、30、40、50、60または75容量％のオレオソームを含む。
【００６５】
そのような調製物を安定化するため、本発明によれば、酸性化合物を添加する前にオレオソーム調製物に多価アルコールを添加することが好ましい。その添加時に、多価アルコールを、単純な混合または撹拌により、例えば、低速せん断（一般には500rpm未満）のオーバーヘッド型スターラーまたはマグネチックスターラーと撹拌子を用いて、オレオソーム調製物中に分散させる。より大規模な操業では、標準インライン式ミキサーまたはホモジナイザーを使用することができ、均質混合物を得るのに有効な他の手段も同様に使用できる。ただし、混合または撹拌プロセスの間に発生するせん断力が適度であって、オレオソームが無傷のまま残存しなければならない。
【００６６】
上で述べたように、オレオソーム調製物に含まれる水相の量はさまざまでありうる。多価アルコールはオレオソーム調製物の水相の部分を形成する。非タンパク質性のジオール、トリオールまたはポリオールを用いる場合、その多価アルコールの濃度は好ましくはオレオソーム調製物の水相の15〜95容量％の範囲であり、より好ましくは25〜75容量％、より一層好ましくは水相の40〜60容量％の範囲である。最も好ましくは、非タンパク質性の多価アルコールと水は安定化オレオソーム調製物中に等しい分量で存在する。多価アルコールがペプチドまたはポリペプチドである場合、その多価アルコールの濃度は好ましくはオレオソーム調製物の水相の0.5〜10容量％の範囲であり、より好ましくは0.5〜5容量％、より一層好ましくは0.5〜3.5容量％の範囲である。
【００６７】
このようにして得られた十分に混合されたオレオソーム-多価アルコール混合物を用いて、pHを6以下に下げることができる酸性化合物を加えて、その酸をオレオソーム調製物中に分散させることにより、その調製物のpHを調整する。必要とされる酸性化合物の量は、用いる酸性化合物またはそれらの混合物により変わるが、一般には10容量％までに限定することが好ましい。標準電子式pHメーターのような標準計測器を用いて、希望のpHが確実に得られるように、酸性化合物の添加中その調製物のpHをモニターすることができる。上述したように、酸性化合物の前に多価アルコールを添加することが好ましい。というのは、最終工程としてpHを調整することが望ましいからである。しかしながら、一度再現可能な方法が確立されて、酸性化合物の必要量がわかれば、その順序を逆にしたり、または両方の化合物を一緒に添加したりすることが可能である。
【００６８】
前述のオレオソーム安定化法は常温常圧で行うことができ、また、オレオソーム調製物をその生物学的供給源から得てからすぐに行うことが好ましい。しかしながら、この方法はオレオソーム調製物を取得してから1時間以内に行うか、またはオレオソーム調製物を取得してから12時間以内でさえも行うことができる。また、上で述べたような、オレオソームを単離するための連続法の一部として安定化法を行ってもよい。
【００６９】
オレオソームの安定性を評価するために、遊離のオイルの出現を、目視検査により、すなわち、オレオソーム調製物中の油滴の出現により、またはより定量的な分析方法、例えばヘキサン抽出（以下の実施例4参照）により、モニターすることができる。好ましくは、本発明のオレオソーム調製物の外観は、室温で2年間または45℃で2ヶ月間貯蔵したとき、いかなる有意な変化も受けず、そしてオレオソーム特性または化学的構成のいずれも変化しない。本発明のオレオソーム調製物を45℃で2ヶ月間貯蔵した時点で、オレオソーム調製物の全オイル含量の好ましくは95容量％以上はオレオソーム内に残存し（すなわち、遊離のオイルは5容量％未満）、より好ましくは99容量％以上（遊離のオイルは1容量％未満）、最も好ましくは100容量％（遊離のオイルなし）がオレオソーム内に残存する。
【００７０】
本発明はさらに、新規なオレオソーム調製物を包含する。したがって、別の態様において、本発明は、(i)多価アルコールおよび(ii)10-6モル/リットル以上の[H+]濃度を含む、オレオソーム調製物を含んでなる組成物を提供する。そのような組成物は10-5モル/リットル以上の[H+]濃度、または10-4モル/リットル以上の[H+]濃度、または10-3.5モル/リットル以上の[H+]濃度を含みうる。本組成物は前述した酸および多価アルコールのうちのどれを含んでいてもよい。
【００７１】
安定化されたオレオソーム調製物の有用性
本発明に従って得られた安定化オレオソーム調製物は、そのオレオソーム調製物に1種以上の追加の化合物を添加することによって、例えばDeckers特許やPCT出願第2005/030169号およびPCT出願第2005/097059号に概説されるような、多くの完成製剤を製造するための一成分として用いることができる。本明細書中で「完成製剤」とは、その意図した最終用途にすぐに使える状態にある、そのような製剤を意味する。
【００７２】
完成製剤は、クリーム、ジェル、ローション、ろう様固形物、軟膏(ointment)、軟膏(salve)、ペースト、スプレー、または乳液を含むがこれらに限らない、さまざまな剤形で提示することができる。有利には、そのような製剤の製造を、外因的な乳化剤を用いないで実施する。
【００７３】
本発明の完成製剤は、哺乳類の表面領域に局所適用される製剤、例えば、パーソナルケア製品、化粧品、外用医薬品、スキンケア製品、薬用化粧品、皮膚用医薬品、および外用動物医薬品により例示される。上記オレオソーム調製物を用いて処方できる他の製品は、食品、機能性食品、および栄養補助食品、ならびに医薬品および工業製品である。
【００７４】
先に述べたように、本発明に従って調製されたオレオソームは、それらの完成形態で酸性pHに保持される製品、とりわけ、一般にヒト皮膚のpH範囲（約5.0〜6.0）で完成品として処方されるスキンケア製品、の製造において特に有用である。本発明に従って調製されたオレオソームを用いて好都合に処方することができる他のパーソナルケア製品は、角質除去製品（一般にpH3.5〜4.5である）およびアクネトリートメント（同様にpH＜5である）である。さらに、本発明のオレオソーム調製物は、一価アルコール（エチルアルコールを含む）を高い容量パーセントで含むハンドサニタイザーのようなパーソナルケア製品により例示される、完成製剤の製造にも有用である。
【００７５】
以下の実施例を参照することにより本発明をさらに説明するが、これらの実施例は単なる例示であって、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【００７６】
実施例１．ベニバナからのオレオソーム調製物の取得
本実施例では、ベニバナからのオレオソーム画分の回収について記載する。得られた調製物は洗浄済みの無傷のオレオソームを含む。
【００７７】
種子汚染物質の除去
全量45kgの乾燥ベニバナ(Carthamus tinctorius)種子を65℃の水道水120Lほどで2回、約15℃の水道水120Lほどで1回洗浄した。廃水を分離するために、スクリーンメッシュを備えたバレルの中で洗浄を行った。
【００７８】
種子の破砕
洗浄した種子を、MZ-130交差状歯付きローター/ステーター粉砕セットとトップローディング型ホッパーが装備されたコロイドミル（Colloid Mill, MZ-130 (Fryma社); 処理能力: 350 kg/hr）に、そのホッパーから流し込み、同時に、粉砕に先立って約100Lの45mM重炭酸ナトリウム緩衝液(pH8.2)を外部接続ホースから供給した。ミルの運転は1Rの間隙設定で行ったが、これは18℃および30℃で100ミクロン未満の粒子径となるように選ばれた。45kgの種子すべてを10分で粉砕した。
【００７９】
均質化および固形分の除去
得られたスラリーをインライン式ナイフホモジナイザー（Dispax Reactor(登録商標) DR 3-6/A, IKA(登録商標)Works社）に約7L/分の速度でポンプ移送した。得られたスラリーを、デカンテーション遠心分離機(NX-314B-31, Alfa-Laval社)を3250rpmの運転速度に上げてから、直接その遠心分離機に送り込んだ。25分で、約160kgの種子粉砕スラリーがデカントされた。この工程でのスラリー移送のためWatson-Marlow (モデル704)蠕動ポンプを使用した。
【００８０】
オレオソームの分離
オレオソーム画分の分離は、3相分離・自己排出型ボウルと取り外し可能なリングダムシリーズを装備した分離板型遠心分離機(SB 7, Westfalia社) (最大処理能力: 83L/分; リングダム: 69mm)を用いて行った。運転速度は〜8520rpmであった。Watson-Marlow (モデル704)蠕動ポンプを用いて、デカントされた液相(DL)を、運転速度に上げた後の遠心分離機に送り込んだ。これにより、デカントされた液相が、水と可溶性種子タンパク質を含む重相(HP1)およびオイルボディを含む軽相(LP1)に分離する。遠心分離機を1回通過させた後に得られたオレオソーム画分は未洗浄オレオソーム調製物と呼ばれる。その後、この未洗浄オレオソーム画分を、45mM重炭酸ナトリウム緩衝液(pH8.2, 35℃, 4L/分)と混合しながら、インライン式スタティックミキサーに通して、第2の分離板型遠心分離機(SA 7, Westfalia社) (最大処理能力: 83L/分; リングダム: 73mm)に送った。運転速度は〜8520rpmであった。次に、分離されたオレオソームを含む軽相(LP2)を、45mM重炭酸ナトリウム緩衝液(pH8.2, 35℃, 4L/分)と混合しながら、別のインライン式スタティックミキサーに通して、第3の分離板型遠心分離機(SA 7, Westfalia社) (最大処理能力: 83L/分; リングダム: 75mm)に送った。運転速度は〜8520rpmであった。全手順を室温で実施した。2回目以後の分離で得られた調製物はすべて洗浄済みオレオソーム調製物と呼ばれる。
【００８１】
実施例２．多価アルコールとしてのグリセリンの存在下に約4.5のpHで安定化されたベニバナオレオソーム調製物の製造
75％固形分のベニバナオレオソーム分散体100gに、低速せん断混合を用いて、25gの純粋なグリセリン（純度99％以上）を加えた。これにより、全オレオソームレベルが60％に低下した（水20％、グリセリン20％）。この分散体のpHは一般に＞8.5である。この分散体に、低速せん断撹拌しながら、市販の防腐剤Geogard Ultra（グルコノデルタラクトンと安息香酸のブレンドからなる）1.25gを添加すると、分散体のpHが4.2〜4.5に下がった。この分散体は微生物チャレンジ試験に合格し、また、25℃で6ヶ月後にオレオソームの漏出がまったく観察されなかった。
【００８２】
実施例３．多価アルコールとしてのデカグリセリンの存在下に約4.5のpHで安定化されたベニバナオレオソーム調製物の製造
75％固形分のベニバナオレオソーム分散体100gに、プロペラ（400rpm、10分）のもとで、25gのNatrulon H-10 (デカグリセリン、Lonza社製)を加えた。これにより、全オレオソームレベルが60％に低下した（水20％、デカグリセリン20％）。この分散体のpHは一般に約7.5であった。この分散体に、低速せん断撹拌しながら、Lonza社製の市販の防腐剤Geogard(登録商標) Ultra（グルコノデルタラクトンと安息香酸のブレンドからなる）1.25gを添加した。平衡化した時点で、この防腐剤は分散体のpHを4.5に低下させた。
【００８３】
実施例４．多価アルコールの存在下および非存在下、約4.5のpHでのベニバナオレオソーム調製物の安定性
安定化されたオレオソーム調製物を実施例1および2に従って製造した。
【表１】
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【００８４】
オレオソーム調製物の安定性を定量的方法で評価するため、以下の方法を用いることができる。
【００８５】
1.  サンプルあたり4本の清潔な乾いた16×100mmスクリューキャップ付きPyrex試験管にラベルを貼って、その重さを量る(+/-0.0001g)。ラベルにサンプル名AおよびT1、サンプル名BおよびT1を記入し、その後T1をT2に置き換えて繰り返す。数値を記録する。1mLのオレオソームサンプルを加える。
【００８６】
2.  サンプル容器を10〜12回反転してサンプルを十分に混合し、すぐに広口径の1mLピペットチップを用いて1mLのサンプルを取る。
【００８７】
3.  サンプルを2個の試験管番号T1に注入する。
【００８８】
4.  試験管の上部のサンプルを拭き取り、サンプルを含む試験管の重さを再度量る(+/-0.0001g)。数値を記録する。
【００８９】
5.  サンプルを含む試験管に3mLの純粋ヘキサンを添加し、試験管にテフロン内張りキャップをかぶせて、試験管の側面にくっついているサンプルを取り込むようにしながら、激しく30秒間振とうして混合する。
【００９０】
6.  サンプルを医療用遠心分離機で3,000rpmのフルスピードにて2分間遠心してサンプルをペレット化する。遊離のオイルはヘキサン（上層）中にとどまり、オイルボディ/サンプルの残部は沈降する。
【００９１】
7.  ガラス製の注入ピペットを用いて、遊離のオイルを含むヘキサンを可能なかぎり多くサンプルの上部から慎重に取り出して、試験管T2に注入する。試験管T2を加熱ブロックに配置し、ステップ6および7を繰り返す。後続の抽出物をT2に入れる。
【００９２】
8.  ブロックを40〜45℃に加熱しながら、試験管を緩やかな高純度N2ガス流(Pierce Reacti-Vapマニホールド)にさらすことによって、サンプルからヘキサンを蒸発させる。ヘキサンを1時間以上蒸発させる。
【００９３】
9.  遊離のオイルを含む試験管の重さを再度量り、N2蒸発に15分間もどす。
【００９４】
10.  2回連続して読み取った数値が同じ(+/-0.0002)になるまで、試験管の重さを再度量る。これは、すべての溶媒が除去された遊離のオイルを示す。
【００９５】
サンプルの計算：
サンプルの質量：
試験管1の質量：              11.9365g
試験管1＋サンプルの質量：    12.4022g
サンプルの質量：              0.4657g
試験管2の質量：              12.0706g
試験管2＋サンプルの質量：    12.0865g
サンプルの質量：              0.0159g
純粋ヘキサンに起因するオイルボディの崩壊 ＝ 0.0040g/抽出
サンプルに対する％としての遊離のオイル：
(サンプルの質量T2-補正)/(T1中のサンプル)×100
＝ (0.0159-0.0120/0.4657)×100
＝ 0.84％
実施例５．多価アルコールの存在下に約6以下のpHで安定化されたベニバナオレオソーム調製物を含むスキンクリームの製造
成分 パーセント
相1（油相）
グリセリン安定化オレオソーム                                10.0％
（59.33％のオレオソーム、19.33％の水、
19.33％のグリセリン、1％のGeogard Ultraからなる)
デカグリセリルデカオレエート                                5.0％
相2（水相）
水                                                          70.2％
デカグリセリン                                              5.0％
NaOH (0.25N)                                                6.20％
相3
Aristoflex AVC                                              1.3％
(アクリロイルジメチルタウリンアンモニウム/VPコポリマー)
相4
Geogard Ultra (グルコノデルタラクトンと安息香酸)            2.0％
相5
香料                                                        0.30％
【００９６】
手順
1.  低速せん断撹拌しながら相1の成分を一緒にする。
【００９７】
2.  相2の成分を一緒にする。pHは約11である。
【００９８】
3.  低速せん断混合しながら相2を相1にゆっくり添加する。非常に速く（通常は1分未満で）均質になる。
【００９９】
4.  高速せん断混合(500rpm)しながら相3を徐々に添加する。
【０１００】
5.  相4と相5を添加して、さらに5分間撹拌する。pHをチェックして5〜6に調整する。
【０１０１】
実施例６．多価アルコールの存在下に約4.0のpHで安定化されたベニバナオレオソーム調製物を含む角質除去製品(exfoliating product)の製造
成分 パーセント
相1（油相）
グリセリン安定化オレオソーム                                12.5％
（59.33％のオレオソーム、19.33％の水、
19.33％のグリセリン、1％のGeogard Ultraからなる)
相2（水相）
グリコール酸（70％活性）                                    8.0％
水                                                          74.25％
水酸化ナトリウム（十分量、pH4.0にする）                     1.5％
相3
Aristoflex AVC                                              1.5％
(アクリロイルジメチルタウリンアンモニウム/VPコポリマー)
相4
Geogard Ultra (グルコノデルタラクトンと安息香酸)            2.0％
相5
香料                                                        0.25％
【０１０２】
手順
1.  冷却および撹拌しながら相2の成分を一緒にして、pHをチェックする。pHを約4.0にする。
【０１０３】
2.  低速せん断混合しながら相2を相1にゆっくり添加する。非常に速く（通常は1分未満で）均質になる。
【０１０４】
3.  高速せん断混合(500rpm)しながら相3をゆっくり添加する。相3は初めに凝固し、次に徐々に再分散して、混合物の粘性を高める。
【０１０５】
4.  相4と相5を添加して、さらに5分間撹拌する。
【０１０６】
実施例７．多価アルコールの存在下に約5.2のpHで安定化されたベニバナオレオソーム調製物を含む保湿ローションの製造
成分 パーセント
相1
グリセリン安定化オレオソーム                                10％
（59.33％のオレオソーム、19.33％の水、
19.33％のグリセリン、1％のGeogard Ultraからなる)
デカグリセリルデカオレエート                                5％
オクチルメトキシシンナメート                                2％
相2
グリセリン                                                  5％
水                                                          74.9％
相3
Aristoflex AVC                                              1.1％
(アクリロイルジメチルタウリンアンモニウム/VPコポリマー)
相4
Geogard Ultra (グルコノデルタラクトンと安息香酸)            2.0％
NaOH                                                        十分量
【０１０７】
手順
1.  相1を300〜500rpmで8〜10分間混合する。
【０１０８】
2.  相2を相1に徐々に添加し、その間500rpmで10分かけて混合する。
【０１０９】
3.  相3を添加し、700rpmでさらに5分間混合する。
【０１１０】
4.  相4を添加して、撹拌(700rpm)しながらNaOHでpHを5.0〜5.5に調整する。
【０１１１】
5.  粘度70,000cp (スピンドルTC、2rpmおよび25℃)。
【０１１２】
実施例８．多価アルコールの存在下に約4.0のpHで安定化されたベニバナオレオソーム調製物を含む角質除去クリームの製造
成分 パーセント
相1
グリセリン安定化オレオソーム                                10％
（59.33％のオレオソーム、19.33％の水、
19.33％のグリセリン、1％のGeogard Ultraからなる)
デカグリセリルデカオレエート                                5％
オクチルメトキシシンナメート                                2％
相2
グリコール酸（70％）                                        8％
水                                                          73.5％
相3
Aristoflex AVC                                              1.1％
(アクリロイルジメチルタウリンアンモニウム/VPコポリマー)
相4
デヒドロ酢酸(DHA)、サリチル酸、安息香酸、
および塩化ベンゼトニウム(Geogard 361)                        0.4％
NaOH                                                         十分量
【０１１３】
手順
1.  相1を300〜500rpmで8〜10分間混合する。
【０１１４】
2.  相2を相1に徐々に添加し、その間300〜500rpmで10分かけて混合する。
【０１１５】
3.  相3を添加し、700rpmでさらに5分間混合する。
【０１１６】
4.  相4を添加し、2分間撹拌(700rpm)しながらNaOHでpHを4.0に調整する。
【０１１７】
5.  粘度、約150,000cp (スピンドルTC、2rpmおよび25℃)。
【０１１８】
実施例９．多価アルコールの存在下に約5.3のpHで安定化されたベニバナオレオソーム調製物を含むナチュラル・モイスチャライザーの製造
成分 パーセント
相1
グリセリン安定化オレオソーム                                10％
（59.33％のオレオソーム、19.33％の水、
19.33％のグリセリン、1％のGeogard Ultraからなる)
デカグリセリルデカオレエート                                5％
TiO2（疎水性に改質したもの）                                2％
相2
グリセリン                                                  5％
水                                                          74.9％
相3
カラギーナン(Genuvisco)                                     1.1％
相4
Geogard Ultra (グルコノデルタラクトンと安息香酸)            2.0％
NaOH                                                        十分量
【０１１９】
手順
1.  相1を300〜500rpmで10分間混合する。
【０１２０】
2.  相2を相1に徐々に添加し、その間300〜500rpmで10分かけて混合する。
【０１２１】
3.  相3を添加し、700rpmでさらに5分間混合する。
【０１２２】
4.  相4を添加し、700rpmで2分間撹拌する。
【０１２３】
5.  NaOHでpHを5.0〜5.5に調整する。
【０１２４】
6.  粘度、約40,000cps。
【０１２５】
実施例１０．多価アルコールの存在下に約5.7のpHで安定化されたベニバナオレオソーム調製物を含むナチュラル・モイスチャライザーの製造
成分 パーセント
相1
グリセリン安定化オレオソーム                                10％
（59.33％のオレオソーム、19.33％の水、
19.33％のグリセリン、1％のGeogard Ultraからなる)
TiO2（疎水性に改質したもの）                                1％
相2
グリセリン                                                  10％
水                                                          76.75％
相3
カラギーナン(Genuvisco)                                     1.1％
相4
グルコースオキシダーゼ/ラクトペルオキシダーゼ防腐剤         1.15％
HCl                                                         十分量
【０１２６】
手順
1.  相1を300〜500rpmで10分間混合する。
【０１２７】
2.  相2を相1に徐々に添加し、その間300〜500rpmで10分かけて混合する。
【０１２８】
3.  相3を添加し、700rpmでさらに5分間混合する。
【０１２９】
4.  相4を添加し、500rpmで2分間撹拌する。
【０１３０】
5.  HClでpHを5.5〜6.0に調整する。
【０１３１】
6.  粘度、約42,000cps。
【０１３２】
実施例１１．多価アルコール（デカグリセリン）の存在下に約5.3のpHで安定化されたベニバナオレオソーム調製物を含むモイスチャライザーの製造
成分 パーセント
相1
標準オレオソーム（75％のオレオソーム、25％の水）             10.0
Natrulon H-10（デカグリセリン/水）                           2.50
相2
Polyaldo DGDO (10-10-0)（ポリグリセリル-10デカオレエート）   5.00
Uvinul MC 80 (エチルヘキシルメトキシシンナメート)            2.00
香料                                                         0.50
相3
脱イオン水                                                  77.90
相4
Geogard Ultra (グルコノラクトン/安息香酸ナトリウム)          1.00
Aristoflex AVC                                               1.10
(アクリロイルジメチルタウリンアンモニウム/VPコポリマー)
【０１３３】
手順
1.  相1をプロペラのもとで一緒に合わせて400rpmで10分間混合することによりデカグリセリン安定化オレオソーム調製物を調製する。
【０１３４】
2.  記載順に相2を添加し、さらに10分間混合する。
【０１３５】
3.  相3を徐々に添加し、プロペラのもとで400rpmから650rpmにゆっくりと速度を上げながら20分間混合する。
【０１３６】
4.  記載順に相4を添加し、そのバッチが均質かつ粘性になるまで650rpmで混合する。pHを5.2〜5.5に調整する。
【０１３７】
実施例１２．多価アルコールの存在下で安定化されたベニバナオレオソーム調製物を含むハンドサニタイザーの製造
成分 パーセント
相1
グリセリン安定化オレオソーム                                12.5
（59.33％のオレオソーム、19.33％の水、
19.33％のグリセリン、1％のGeogard Ultraからなる)
香料                                                        0.3
相2
脱イオン水                                                  30.0
相3
エチルアルコール                                            55.0
相4
Methocel J75M (ヒドロキシプロピルメチルセルロース) Amercol  1.0
相5
水酸化ナトリウム溶液                                        十分量
クエン酸溶液                                                十分量
【０１３８】
手順
1.  プロペラのもとで、相1の成分を一緒に合わせて400rpmで10分間混合する。
【０１３９】
2.  相2を徐々に添加する。速度を600rpmに上げて10分間混合する。
【０１４０】
3.  全部の水を加えた後、徐々に相3の添加を開始し、10分間混合する。
【０１４１】
4.  相4を徐々に添加し、20分間混合してガムを適切に分散させる。
【０１４２】
5.  水酸化ナトリウムを添加してpHを8.5〜9.0に上げ、ガムの粘性を高める。均質になるまで混合する。
【０１４３】
6.  クエン酸を添加してpHを6.5〜7.0に調整する。
【０１４４】
実施例１３．多価アルコールの存在下で安定化されたベニバナオレオソーム調製物を含むマーガリンの製造
成分 グラム
パーム油                                                  1500
ダイズ油                                                  1653
水                                                        751.2
塩                                                        72
グリセリン安定化オレオソーム                              10.8
（59.33％のオレオソーム、19.33％の水、
19.33％のグリセリン、1％のGeogard Ultraからなる)
レシチン                                                  8
乳酸                                                      1.8
βカロテン                                                0.28
ソルビン酸カリウム                                        3
【０１４５】
手順
1.  ダイズ油をケトルに入れる。かき混ぜながら130°Fに加熱する。
【０１４６】
2.  パーム油を添加し、温度を維持する。
【０１４７】
3.  かき混ぜながらレシチンを添加する。5分間混合する。
【０１４８】
4.  別のケトルに水を入れ、140°Fに加熱する。
【０１４９】
5.  かき混ぜながら塩、乳酸、ソルビン酸カリウムを添加する。5分間混合する。
【０１５０】
6.  グリセリン安定化オレオソームを添加する。5分間混合する。
【０１５１】
7.  かき混ぜながらそのオイルブレンドにβカロテンを加える。
【０１５２】
8.  オイルブレンドと水ブレンドを一緒に合わせて130°Fの温度に維持する。10分間混合する。
【０１５３】
9.  均質化および超高温加熱処理を開始する。
【０１５４】
目下好ましい実施例であると考えられるものに関連して本発明を説明してきたが、本発明は開示した実施例に限定されないことを理解すべきである。それどころか、本発明は、添付の特許請求の範囲および精神に含まれるさまざまな変更および同等の構成を包含するものとする。
【０１５５】
あらゆる刊行物、特許および特許出願は、個々の刊行物、特許および特許出願が参照によりそのまま組み込まれることを具体的にかつ個別に示されるのと同程度に、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる。
【国際調査報告】
2011522779.tif 000003
2011522779.tif 000004
2011522779.tif 000005