(57)【要約】  本発明は診断の手段及び方法に関する。具体的には本発明は、拡張型心筋症に罹患している被験体が、虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断する方法に関する。さらに、ある形態の拡張型心筋症に罹患している被験体においてどの薬剤を投与すべきか診断する方法に関する。最後に本発明は、以下のマーカー：1）トロポニン、及び2）GDF-15（増殖分化因子15）、ナトリウム利尿ペプチド、3）胎盤増殖因子（PLGF）、エンドグリン、sFLT1（可溶性FLT1）を用いて、上記方法を実施するための診断用装置及びキットを含む。【選択図】図1-1
2011523044.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
拡張型心筋症に罹患している被験体が、虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断する方法であって、
a）拡張型心筋症に罹患している被験体のサンプル中において、以下のペプチド：
トロポニン若しくはその変異体；並びに
GDF-15若しくはその変異体；並びに
PLGF若しくはその変異体、エンドグリン若しくはその変異体、及びsFLT1若しくはその変異体の群から1つ以上の血管形成マーカー；
の量を測定するステップと、
b）ステップa）で測定された量を参照量と比較するステップであって、それによって被験体が虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断される前記ステップ
とを含む、前記方法。
【請求項２】
GDF-15の量の増加と、トロポニンの量の減少と、PLGF及び／若しくはsFLT1の量の増加並びに／又はエンドグリンの量の減少とが非虚血状態を示す、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
GDF-15の量の減少と、トロポニンの量の増加と、PLGF及び／若しくはsFLT1の量の減少並びに／又はエンドグリンの量の増加とが虚血状態を示す、請求項1に記載の方法。
【請求項４】
血管形成マーカーがPlGF及び／又はsFLT1である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
【請求項５】
血管形成マーカーがPlGFである、請求項4に記載の方法。
【請求項６】
心筋トロポニンがトロポニンTである、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
【請求項７】
0.008 pg/mlより高いトロポニンTの濃度が虚血状態を示す、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
0.008 pg/mlより低いトロポニンTの濃度が非虚血状態を示す、請求項6に記載の方法。
【請求項９】
さらにナトリウム利尿ペプチドの量を測定する、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１０】
ナトリウム利尿ペプチドの量の増加が心筋機能障害及び／又は心不全を示す、請求項9に記載の方法。
【請求項１１】
ナトリウム利尿ペプチドがNT-proBNPである、請求項9又は10に記載の方法。
【請求項１２】
> 125 pg/mlのNT-proBNPの濃度が心不全を示す、請求項6〜11のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１３】
以下の濃度：< 600 pg/mlのGDF-15；< 8 pg/mlのPlGF；> 4.8 ng/mlのエンドグリン；< 120 pg/mlのsFlT1が虚血状態を示す、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１４】
以下の濃度：> 1000 pg/mlのGDF-15；> 11 pg/mlのPlGF；< 4.2 ng/mlのエンドグリン；> 142 pg/mlのsFlT1が非虚血状態を示す、請求項1〜13のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１５】
ある形態の拡張型心筋症に罹患している被験体においてどの薬剤を投与すべきか診断及び／又は決定する方法であって、
a）拡張型心筋症に罹患している被験体のサンプル中において、以下のペプチド：
トロポニン若しくはその変異体；並びに
GDF-15若しくはその変異体；
PLGF若しくはその変異体、エンドグリン若しくはその変異体、及びsFLT1若しくはその変異体の群から1つ以上の血管形成マーカー；
場合により、ナトリウム利尿ペプチド若しくはその変異体；
の量を測定するステップと、
b）ステップa）で測定された量を参照量と比較するステップであって、それによって被験体が虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断される前記ステップと、
c）a）で測定された量及び／又はb）で得られた拡張型心筋症の形態についての情報に従い、被験体にどの薬剤を投与すべきか診断及び／又は決定するステップ
とを含む、前記方法。
【請求項１６】
薬剤が、スタチン、ACE阻害剤、アンジオテンシン受容体拮抗薬、及び／又はアルドステロン拮抗薬から選択される、請求項15に記載の方法。
【請求項１７】
拡張型心筋症に罹患している被験体が、虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断するための装置であって、
a）拡張型心筋症に罹患している被験体のサンプル中において、以下のペプチド：
トロポニン若しくはその変異体；並びに
GDF-15若しくはその変異体；
PLGF若しくはその変異体、エンドグリン若しくはその変異体、及びsFLT1若しくはその変異体の群から1つ以上の血管形成マーカー；
場合により、ナトリウム利尿ペプチド若しくはその変異体；
の量を測定する手段と、
b）ステップa）で測定された量を参照量と比較する手段であって、それによって被験体が虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断される前記手段
とを含み、請求項1〜14のいずれか1項に記載の本発明の方法を実施するために適している、前記装置。
【請求項１８】
ある形態の拡張型心筋症に罹患している被験体においてどの薬剤を投与すべきか診断及び／又は決定するための装置であって、
a）拡張型心筋症に罹患している被験体のサンプル中において、以下のペプチド：
トロポニン若しくはその変異体；並びに
GDF-15若しくはその変異体；
PLGF若しくはその変異体、エンドグリン若しくはその変異体、並びにsFLT1若しくはその変異体の群から1つ以上の血管形成マーカー；
場合により、ナトリウム利尿ペプチド若しくはその変異体；
の量を測定する手段と、
b）ステップa）で測定された量を参照量と比較する手段であって、それによって被験体が虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断される前記手段
とを含み、請求項15及び16のいずれか1項に記載の本発明の方法を実施するために適している、前記装置。
【請求項１９】
請求項1〜16のいずれか1項に記載の本発明の方法を実施するために適したキットであって、
a）拡張型心筋症に罹患している被験体のサンプル中において、以下のペプチド：
トロポニン若しくはその変異体；並びに
GDF-15若しくはその変異体；
PLGF若しくはその変異体、エンドグリン若しくはその変異体、及びsFLT1若しくはその変異体の群から1つ以上の血管形成マーカー；
場合により、ナトリウム利尿ペプチド若しくはその変異体；
の量を測定するための手段と、
b）ステップa）で測定された量を参照量と比較するための手段であって、それによって被験体が虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断される前記手段
とを含み、本発明の方法を実施するために適している、前記キット。
【請求項２０】
請求項1〜16のいずれか1項に記載の方法を実施するための説明書をさらに含む、請求項19に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は診断の手段及び方法に関する。具体的には、本発明は、拡張型心筋症に罹患している被験体において、虚血性型と非虚血性型とを区別する方法に関する。さらに、拡張型心筋症に罹患している被験体がどの治療を受容可能であるかを診断する方法に関する。最後に本発明は、上記方法を実施するための診断用装置及びキットを含む。
【背景技術】
【０００２】
拡張型心筋症（「DCM」）は、心肥大と一方若しくは両方の心室の収縮機能障害を特徴とする症候群である。最も初期の異常は、通常、心室拡大及び収縮期収縮不全であり、しばしば（必ずではないが）後になって発症する鬱血性心不全の兆候及び症状を伴う。時折患者において、顕著な所見は、わずかにのみ拡張した左心室を伴う収縮不全の所見である。見かけ上正常な一流の運動選手は、正常な収縮機能を有するかなりの心室拡大を示し得る。長期的な影響は完全にはわかっていないが、これは激しいスポーツトレーニングへの生理的適応であり、疾患状態を表していないようであると考えられている。
【０００３】
DCMの罹患率は、軽度又は無症状の症例は過少報告されている結果として、おそらく実際の数字はもっと多いが、年間人口100,000人あたり5〜8症例であると報告され、増加しているようである。
【０００４】
原因は多くの場合に限定できないが、75を超える特定の心筋疾患は、DCMの臨床症状を引き起こし得る。この状態は、様々な細胞毒性、代謝性、免疫学的、家族性、及び感染性メカニズムによって引き起こされる心筋障害の最終結果である、最終的な共通経路を表していると思われる。
【０００５】
拡張型心筋症は多様な疾患である。具体的には、虚血性型の拡張型心筋症だけでなく、非虚血性型の拡張型心筋症（その異型は、アテローム性動脈硬化に伴う非虚血性心筋症である）が存在することが知られている。虚血性拡張型心筋症において、冠動脈疾患が根本原因だと見なされている。非虚血性拡張型心筋症では、冠動脈疾患は、心筋症の根本の主原因とは見なされておらず、代わりに、遺伝的、代謝性及び炎症性の状態が主原因であると考えられている。部分的には、弁疾患又は動脈肥大における肥大に続く病的状態も、非虚血性拡張型心筋症を引き起こし得る。アテローム性動脈硬化に伴う非虚血性心筋症は、アテローム性動脈硬化が、観察される心筋症の根本原因ではないために、特に診断が難しい。
【０００６】
拡張型心筋症は、心エコー検査を用いて容易に診断することができる。しかし、心エコー検査は心筋症の根本原因についての情報を与えない。これは、2つ以上の原因が考慮に入れられるべき場合、例えば糖尿病において、特に当てはまる。さらに、主に侵襲的方法である本方法は、疾患の進行に関与するメカニズムを説明することができない。
【０００７】
被験体において拡張型心筋症の根本原因を決定することが非常に望ましいことは、上記から理解されるべきである。より好ましくは、拡張型心筋症が、虚血性拡張型心筋症であるか、又は非虚血性拡張型心筋症であるか決定することは望ましい。拡張型心筋症の重度の結果を防ぐために、血管形成状態のそのような評価に基づいて、被験体がどの治療を受容可能であるか予測することができる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
従って、本発明の根底にある技術的な問題は、例えば適切な治療を選択するために、拡張型心筋症に罹患している患者において、その虚血性型に罹患しているか、又は非虚血性型に罹患しているか決定するための手段及び方法を提供することだと考えられ得る。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
その技術的な問題は、特許請求の範囲及び以下本明細書に記載される実施形態によって解決される。
【００１０】
従って、本発明は、拡張型心筋症に罹患している被験体が、虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断する方法であって、
a）拡張型心筋症に罹患している被験体のサンプル中において、以下のペプチド：
トロポニン若しくはその変異体；並びに
GDF-15若しくはその変異体；並びに
PLGF若しくはその変異体、エンドグリン若しくはその変異体、及びsFLT1若しくはその変異体の群から1つ以上の血管形成マーカー；
の量を測定するステップと、
b）ステップa）で測定された量を参照量と比較するステップであって、それによって被験体が虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断される前記ステップ
とを含む、前記方法に関する。
【００１１】
好ましい実施形態において、本発明の方法は、ナトリウム利尿ペプチドの量を測定することをさらに含む。
【００１２】
言い換えれば、本発明の方法は、拡張型心筋症を呈する被験体が、その虚血性型に罹患しているか、又は非虚血性型に罹患しているかを分析することを可能にする。虚血性型は、根本となる冠動脈疾患によって引き起こされ、非虚血性型は、冠動脈疾患以外の病的状態によって引き起こされるため、本発明の方法により、拡張型心筋症の根本原因及びメカニズムを決定することが可能となる。本発明の方法はまた、拡張型心筋症のモニター、確認、及び下位分類のためにも使用し得る。本方法は手動で実施してもよいし、又は自動化によって支援してもよい。好ましくは、ステップ（a）及び／又は（b）は、全体的又は部分的に自動化によって、例えば、ステップ（a）の測定又はステップ（b）のコンピューターによって実行される比較のために適したロボット及びセンサーの装置によって支援し得る。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１−１】図1-1は、両患者群についてのNT-proBNP、高感度トロポニンT、PlGF、sFlT1、エンドグリン、GDF-15レベルを示す。
【図１−２】図1-2は、図1-1の続きである。
【図２】図2は、虚血性及び非虚血性心筋症について別々に、様々なバイオマーカーについて互いの相関を示す。
【図３】図3は、虚血性及び非虚血性心筋症について別々に、様々なバイオマーカーについて互いの相関を示す。
【図４】図4は、虚血性及び非虚血性心筋症について別々に、様々なバイオマーカーについて互いの相関を示す。
【図５】図5は、虚血性及び非虚血性心筋症について別々に、様々なバイオマーカーについて互いの相関を示す。
【図６】図6は、虚血性及び非虚血性心筋症について別々に、様々なバイオマーカーについて互いの相関を示す。
【図７】図7は、虚血性及び非虚血性心筋症について別々に、様々なバイオマーカーについて互いの相関を示す。
【図８】図8は、虚血性及び非虚血性心筋症について別々に、様々なバイオマーカーについて互いの相関を示す。
【図９】図9は、虚血性及び非虚血性心筋症について別々に、様々なバイオマーカーについて互いの相関を示す。
【図１０】図10は、虚血性及び非虚血性心筋症について別々に、様々なバイオマーカーについて互いの相関を示す。
【図１１】図11は、虚血性及び非虚血性心筋症について別々に、様々なバイオマーカーについて互いの相関を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本明細書で用いる「診断する」という用語は、虚血性拡張型心筋症と非虚血性拡張型心筋症とを区別すること、即ち、本明細書に記載するように、被験体が拡張型心筋症の虚血性型又は非虚血性型に罹患している可能性を評価することを意味する。当業者によって理解されるように、そのような評価は通常、診断される被験体の100％において正確であることを意図しない。しかし、その用語は、被験体の統計的に有意な一部が、前記血管形成状態を呈すると正しく診断され得ることを要する。一部が統計的に有意であるかどうかは、様々な周知の統計評価手段、例えば信頼区間の決定、p値の決定、スチューデントのt検定、マン-ホイットニー検定等を用いて、当業者によって造作なく決定され得る。詳細はDowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983に見出される。好ましい信頼区間は、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも98%又は少なくとも99%である。p値は、好ましくは、0.1、0.05、0.01、0.005、又は0.0001である。好ましくは、一定のコホート又は集団の被験体の少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%又は少なくとも90%について、本発明により想定される可能性で診断が正確となる。
【００１５】
好ましくは、本発明の方法はインビトロ法である。さらに、上に明示的に記載されるステップの他にステップを含み得る。例えば、さらなるステップはサンプルの前処理又は本方法によって得られた結果の評価に関し得る。
【００１６】
本明細書で用いる「被験体」という用語は、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトに関する。しかし、本発明は、本明細書の他の部分に記載するように、被験体が拡張型心筋症に罹患していることを想定している。
【００１７】
「拡張型心筋症」又はDCMという用語は当業者に周知である。より具体的には、DCMは、左心室又は両心室の心室拡大及び収縮障害（収縮不全）を意味する。DCMを有する個体は、鬱血性心不全CHFの症状を示すことが多い。
【００１８】
「サンプル」という用語は、体液のサンプル、分離した細胞のサンプル、又は組織若しくは器官に由来するサンプルを意味する。体液のサンプルは周知技術によって得ることができ、好ましくは、血液、血漿、血清、又は尿のサンプルを含み、より好ましくは、血液、血漿又は血清のサンプルを含む。組織又は器官サンプルは、例えば生検によって、任意の組織又は器官から得てよい。分離細胞は、遠心又は細胞選別等の分離技術によって体液又は組織若しくは器官から得てよい。好ましくは、細胞、組織又は器官サンプルは、本明細書に記載するペプチドを発現又は産生する細胞、組織又は器官から得る。
【００１９】
「ナトリウム利尿ペプチド」という用語は、心房性ナトリウム利尿ペプチド（Atrial Natriuretic Peptide:ANP）型及び脳性ナトリウム利尿ペプチド（Brain Natriuretic Peptide:BNP）型のペプチド、並びに同一の予測可能性を有するそれらの変異体を含む。本発明においてナトリウム利尿ペプチドはANP型及びBNP型のペプチドとそれらの変異体を含む（例えば、Bonow, 1996, Circulation 93: 1946-1950を参照）。ANP型ペプチドはpre-proANP、proANP、NT-proANP、及びANPを含む。BNP型ペプチドはpre-proBNP、proBNP、NT-proBNP、及びBNPを含む。プレプロペプチド（pre-proBNPの場合には134個のアミノ酸）は、短いシグナルペプチドを含んでおり、これは酵素的に切断されてプロペプチドを放出する（proBNPの場合は108個のアミノ酸）。このプロペプチドはN末端プロペプチド（NT-プロペプチド、NT-proBNPの場合には76個のアミノ酸）及び活性ホルモン（BNPの場合には32個のアミノ酸、ANPの場合には28個のアミノ酸）にさらに切断される。本発明においてナトリウム利尿ペプチドは好ましくはNT-proANP、ANPであり、より好ましくはNT-proBNP、BNP、及びそれらの変異体である。ANP及びBNPは活性ホルモンであり、それらの各不活性型であるNT-proANP及びNT-proBNPよりも半減期が短い。BNPは血中で代謝されるのに対して、NT-proBNPは無傷の分子として血中を循環しそのまま腎臓から排出される。NT-proBNPのインビボでの半減期はBNPの半減期（20分）よりも長い120分である（Smith 2000, J Endocrinol. 167: 239-46）。分析前（preanalytics）はNT-proBNPの方がより強固であり、そのためサンプルの中央検査所までの輸送が容易である（Mueller 2004, Clin Chem Lab Med 42: 942-4）。血液サンプルは室温で数日間保管することができ、或いは回収のロスなく郵送若しくは輸送することができる。これに対して、BNPを室温で又は4℃で48時間保管すると濃度は少なくとも20％失われる（Mueller, 上掲；Wu 2004, Clin Chem 50: 867-73）。従って、目的の時間経過又は性質に応じて、ナトリウム利尿ペプチドの活性型又は不活性型のいずれかの測定が有利であり得る。本発明において最も好ましいナトリウム利尿ペプチドはNT-proBNP又はその変異体である。上で簡潔に論じた通り、本発明において意味するヒトNT-proBNPは、好ましくはヒトNT-proBNP分子のN末端部分に対応する76アミノ酸長を含むポリペプチドである。ヒトBNP及びNT-proBNPの構造は既に詳細に先行技術、例えばWO 02/089657号、WO 02/083913号、又はBonow, 上掲に記載されている。好ましくは、本明細書で用いるヒトNT-proBNPはEP 0 648 228 B1で開示されているヒトNT-proBNPである。それらの先行技術文献は、これらの文献に開示されるNT-proBNP及びその変異体の具体的な配列に関して、参照により本明細書に援用される。本発明において意味するNT-proBNPはさらに、上記のヒトNT-proBNPの具体的配列の対立遺伝子変異体及びその他の変異体を含む。具体的には、ヒトNT-proBNPに対してアミノ酸レベルで少なくとも60％の同一性、より好ましくは少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、又は少なくとも99％の同一性を有する変異体ポリペプチドが意図される。実質的に類似しかつ意図されている変異体は、各全長ペプチドに対する診断手段又はリガンドによって依然として認識されるタンパク質分解産物である。また、ヒトNT-proBNPのアミノ酸配列と比較してアミノ酸の欠失、置換、及び／又は付加を有���る変異体ポリペプチドも、そのポリペプチドがNT-proBNPの性質を有しているものである限りは、含まれる。本明細書ではNT-proBNPの性質は免疫学的及び／又は生物学的性質を意味する。好ましくは、NT-proBNP変異体はNT-proBNPの性質と同等の免疫学的性質（即ち、エピトープ組成）を有している。従って、これらの変異体は、ナトリウム利尿ペプチドの量の測定に用いられる上記手段又はリガンドによって認識可能であるものとする。NT-proBNPの生物学的及び／又は免疫学的性質はKarlら（Karl 1999, Scand J Clin Invest 230:177-181）、Yeoら（Yeo 2003, Clinica Chimica Acta 338:107-115）に記載されているアッセイで検出することができる。また、変異体には、翻訳後修飾されたペプチド、例えばグリコシル化ペプチドが含まれる。さらに、本発明において、変異体には、サンプル採取後に、例えばペプチドへの標識（特に放射性又は蛍光標識）の共有結合又は非共有結合によって修飾されているペプチド又はポリペプチドが含まれる。
【００２０】
「心筋トロポニン」という用語は、心臓の細胞、好ましくは心内膜下の細胞で発現されるすべてのトロポニンアイソフォームを意味する。こうしたアイソフォームは、例えば、Anderson 1995, Circulation Research, vol. 76, no. 4: 681-686 及び Ferrieres 1998, Clinical Chemistry, 44: 487-493に記載されるように、当技術分野で十分に特性決定されている。好ましくは、心筋トロポニンは、トロポニンT及び／又はトロポニンI、最も好ましくはトロポニンTを意味する。トロポニンのアイソフォームは、本発明の方法では、一緒に即ち同時に若しくは逐次的に測定してもよいし、又は個別に即ち他のアイソフォームをまったく測定しないで測定してもよいことは理解されるべきである。ヒトトロポニンT及びヒトトロポニンIのアミノ酸配列は、Anderson, 上掲及び Ferrieres 1998, Clinical Chemistry, 44: 487-493に開示されている。
【００２１】
「心筋トロポニン」という用語はまた、上記の特定のトロポニンの変異体、即ち、好ましくはトロポニンIの変異体及びより好ましくはトロポニンTの変異体を含む。そのような変異体は、特定の心筋トロポニンと少なくとも同一の本質的な生物学的性質及び免疫学的性質を有する。特に、それらが、本明細書に記載する同一の特定のアッセイにより、例えば、該心筋トロポニンを特異的に認識するポリクロナール抗体又はモノクローナル抗体を用いたELISAアッセイにより、検出可能な場合、それらは、同一の本質的な生物学的性質及び免疫学的性質を有する。さらに、本発明において意味する変異体は、少なくとも1つのアミノ酸の置換、欠失、及び／又は付加に起因して異なるアミノ酸配列を有することは理解されるべきである。この場合、変異体のアミノ酸配列は、依然として、好ましくは、特定のトロポニンのアミノ配列と少なくとも50％、60％、70％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、又は99％の同一性を有する。変異体は、対立遺伝子変異体、又は任意の他の種特異的なホモログ、パラログ、若しくはオルソログであり得る。さらに、本明細書において意味する変異体には、特定の心筋トロポニン又は上記のタイプの変異体の断片が、こうした断片が上に記載する本質的な免疫学的性質及び生物学的性質を有しているものである限りは、含まれる。そのような断片は、例えば、トロポニンの分解産物であり得る。さらに、リン酸化やミリスチル化のような翻訳後修飾に起因して異なる変異体が含まれる。
【００２２】
本発明において特に好ましいトロポニンTアッセイは、検出限界が0.001 ng/ml〜0.0015 ng/mlのElecsys（登録商標）2010分析器（Roche Diagnostics）である。
【００２３】
「増殖分化因子-15」又は「GDF-15」という用語は、トランスフォーミング増殖因子（TGF）-βサイトカインスーパーファミリーのメンバーであるポリペプチドに関する。ポリペプチド、ペプチド、及びタンパク質という用語は本明細書全体にわたって相互に交換可能に用いられている。GDF-15はもともとはマクロファージ阻害性サイトカイン-1としてクローニングされ、後に胎盤性トランスフォーミング増殖因子-β、胎盤性骨形成タンパク質、非ステロイド系抗炎症剤活性化遺伝子-1、及び前立腺由来因子としても同定されている（Bootcov, 上掲；Hromas, 1997 Biochim Biophys Acta 1354:40-44；Lawton 1997, Gene 203:17-26；Yokoyama-Kobayashi 1997, J Biochem(Tokyo), 122:622-626；Paralkar 1998, J Biol Chem 273: 13760-13767）。他のTGF-β関連サイトカインと同様に、GDF-15は不活性の前駆体タンパク質として合成され、これはジスルフィド結合でホモ二量体となる。N末端プロペプチドがタンパク質分解切断されると、GDF-15は約28 kDaの二量体タンパク質として分泌される（Bauskin 2000, Embo J 19:2212-2220）。GDF-15のアミノ酸配列はWO99/06445号、WO00/70051号、WO2005/113585号、Bottner 1999, Gene 237:105-111、Bootcov, 上掲、Tan, 上掲、Baek 2001, Mol Pharmacol 59:901-908、Hromas, 上掲、Paralkar, 上掲、Morrish 1996, Placenta 17:431-441、又はYokoyama-Kobayashi, 上掲中に開示されている。本明細書で用いるGDF-15は上記の特定のGDF-15ポリペプチドの変異体も含む。そのような変異体は、少なくとも、特定のGDF-15ポリペプチドと同一の本質的な生物学的及び免疫学的性質を有している。特に、それらが、本明細書に記載する同一の特定のアッセイにより、例えば、該GDF-15ポリペプチドを特異的に認識するポリクロナール抗体又はモノクローナル抗体を用いたELISAアッセイにより、検出可能な場合、それらは、同一の本質的な生物学的性質及び免疫学的性質を有する。さらに、本発明において意味する変異体は、少なくとも1つのアミノ酸の置換、欠失、及び／又は付加に起因して異なるアミノ酸配列を有することは理解されるべきである。この場合、変異体のアミノ酸配列は、依然として、好ましくは、特定のGDF-15ポリペプチドのアミノ配列と少なくとも50％、60％、70％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、又は99％の同一性を有する。さらに、本明細書において意味する変異体には、特定のGDF-15ポリペプチド又は上記のタイプの変異体の断片が、こうした断片が上に記載する本質的な免疫学的性質及び生物学的性質を有しているものである限りは、含まれる。そのような断片は、例えば、GDF-15ポリペプチドの分解産物であり得る。さらに、リン酸化やミリスチル化のような翻訳後修飾に起因して異なる変異体が含まれる。本発明における好ましいGDF-15アッセイは、WollertらによってClinical Chemistry 53, No 2, 2007, p. 284-291に記載されているアッセイである。
【００２４】
本明細書で用いる「PlGF（胎盤増殖因子）」という用語は、149アミノ酸長のポリペプチドであり、ヒト血管内皮細胞増殖因子（VEGF）の血小板由来増殖因子様領域と高い相同性（53％同一性）を有する胎盤由来の増殖因子を意味する。VEGFと同様、PlGFはインビトロ及びインビボで血管形成活性を有する。例えば、トランスフェクトしたCOS-1細胞由来のPlGFの生化学的及び機能的特性決定により、PlGFは、インビトロで内皮細胞の増殖を刺激することができるグリコシル化二量体分泌タンパク質であることが明らかとなった（Maqlione 1993, Oncogene 8(4):925-31）。好ましくは、PlGFは、ヒトPlGFを意味し、より好ましくはGenebankアクセッション番号P49763, GI: 17380553（Genebankは、米国NCBIのウェブサイトwww.ncbi.nlm.nih.gov/entrezから利用可能である）で示されるアミノ酸配列を有するヒトPlGFを意味する。さらに、本発明において意味する変異体は、少なくとも1つのアミノ酸の置換、欠失、及び／又は付加に起因して異なるアミノ酸配列を有することは理解されるべきである。この場合、変異体のアミノ酸配列は、依然として、好ましくは、特定のPlGFのアミノ配列と少なくとも50％、60％、70％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、又は99％の同一性を有する。変異体は、対立遺伝子変異体、スプライス変異体又は任意の他の種特異的なホモログ、パラログ、若しくはオルソログであり得る。さらに、本明細書において意味する変異体には、特定のPlGF又は上記のタイプの変異体の断片が、こうした断片が上に記載する本質的な免疫学的性質及び生物学的性質を有しているものである限りは、含まれる。そのような断片は、例えば、PlGFの分解産物であり得る。さらに、リン酸化やミリスチル化のような翻訳後修飾に起因して異なる変異体が含まれる。
【００２５】
本明細書で用いる「エンドグリン」という用語は、非還元型が180kDa、還元後が95kDa、及びN末端が脱グリコシル化された還元型が66kDaの分子量を有するポリペプチドを意味する。このポリペプチドは、二量体を形成することができ、TGF-β及びTGF-β受容体に結合する（下記参照）。エンドグリンはリン酸化されることもある。好ましくは、エンドグリンはヒトエンドグリンを意味する。より好ましくは、ヒトエンドグリンはGenebankアクセッション番号AAC63386.1, GI: 3201489で示されるアミノ酸配列を有する。さらに、本発明において意味する変異体は、少なくとも1つのアミノ酸の置換、欠失、及び／又は付加に起因して異なるアミノ酸配列を有することは理解されるべきである。この場合、変異体のアミノ酸配列は、依然として、好ましくは、特定のエンドグリンのアミノ配列と少なくとも50％、60％、70％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、又は99％の同一性を有する。変異体は、対立遺伝子変異体、スプライス変異体又は任意の他の種特異的なホモログ、パラログ、若しくはオルソログであり得る。さらに、本明細書において意味する変異体には、特定のエンドグリン又は上記のタイプの変異体の断片が、こうした断片が上に記載する本質的な免疫学的性質及び生物学的性質を有しているものである限りは、含まれる。そのような断片は、例えば、エンドグリンの分解産物であり得る。さらに、リン酸化やミリスチル化のような翻訳後修飾に起因して異なる変異体が含まれる。
【００２６】
本明細書で用いる「可溶性(s)Flt-1」という用語は、VEGF受容体FLT1の可溶性形態であるポリペプチドを意味する。sFLT1は、ヒト臍帯静脈内皮細胞のならし培養培地中で同定された。内在性可溶性FLT1（sFLT1）受容体は、クロマトグラフィーにおいて及び免疫学的に組換えヒトsFLT1と類似し、同程度の高親和性で［125I］VEGFと結合する。ヒトsFLT1は、インビトロでKDR/Flk-1の細胞外ドメインと共にVEGF安定化複合体を形成することが示されている。好ましくは、sFLT1はヒトsFLT1を意味する。より好ましくは、ヒトsFLT1は、Genebankアクセッション番号P17948, GI: 125361で示されるFlt-1のアミノ酸配列から推定できる。マウスsFLT1のアミノ酸配列は、Genebankアクセッション番号BAA24499.1, GI: 2809071で示される。さらに、本発明において意味する変異体は、少なくとも1つのアミノ酸の置換、欠失、及び／又は付加に起因して異なるアミノ酸配列を有することは理解されるべきである。この場合、変異体のアミノ酸配列は、依然として、好ましくは、特定のsFLT1のアミノ配列と少なくとも50％、60％、70％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、又は99％の同一性を有する。変異体は、対立遺伝子変異体、スプライス変異体又は任意の他の種特異的なホモログ、パラログ、若しくはオルソログであり得る。さらに、本明細書において意味する変異体には、特定のsFLT1又は上記のタイプの変異体の断片が、こうした断片が上に記載する本質的な免疫学的性質及び生物学的性質を有しているものである限りは、含まれる。そのような断片は、例えば、sFLT1の分解産物であり得る。さらに、リン酸化やミリスチル化のような翻訳後修飾に起因して異なる変異体が含まれる。
【００２７】
本発明において、PlGF、エンドグリン及びsFLT1は、「血管形成マーカー」と称される。
【００２８】
本明細書に記載のペプチド又はポリペプチドの量の測定は、その量又は濃度を、好ましくは半定量的又は定量的に測定することに関する。測定は、直接的又は間接的に行うことができる。直接的な測定は、ペプチド又はポリペプチド自体から得られ、その強度がサンプル中に存在するペプチド分子数と直接相関するシグナルに基づいて、ペプチド又はポリペプチドの量又は濃度を測定することに関する。（本明細書では強度シグナルと称されることもある）そのようなシグナルは、例えばペプチド又はポリペプチドの特定の物理的又は化学的な特性についての強度値を測定することによって得ることができる。間接的な測定は、二次成分（即ちペプチド若しくはポリペプチドそれ自体ではない成分）又は生物学的読み取り系、例えば測定可能な細胞応答、リガンド、標識又は酵素反応生成物から得られるシグナルの測定を含む。
【００２９】
本発明においては、ペプチド又はポリペプチドの量の測定は、サンプル中のペプチドの量を測定するためのあらゆる周知な手段によって行うことができる。該手段は、様々なサンドイッチ、競合又は他のアッセイ形式において標識した分子を利用することができる免疫アッセイの装置及び方法を含む。該アッセイは、ペプチド又はポリペプチドの存在又は非存在を示すシグナルを生成する。さらにシグナル強度は、好ましくは、サンプル中に存在するポリペプチドの量と直接的に又は間接的に（例えば反比例で）相関し得る。別の好適な方法は、正確な分子量又はNMRスペクトル等のペプチド又はポリペプチドに特有の物理的又は化学的特性を測定することを含む。該方法は、好ましくは、バイオセンサー、免疫アッセイと連結した光学装置、バイオチップ、質量分析計、NMR分析器又はクロマトグラフィー装置等の分析装置を含む。さらに方法としては、マイクロプレートELISAに基づく方法、完全に自動化又はロボット化した免疫アッセイ（例えばElecsysTM分析器で利用できる）、CBA（酵素的コバルト結合アッセイ法（enzymatic Cobalt Binding Assay）、例えばRoche-HitachiTM分析器で利用できる）、及びラテックス凝集アッセイ（例えばRoche-HitachiTM分析器で利用できる）が含まれる。
【００３０】
好ましくは、ペプチド又はポリペプチドの量の測定は、（a）細胞応答の強度がペプチド又はポリペプチドの量を示す細胞応答を誘導することができる細胞に、該ペプチド又はポリペプチドを適切な時間にわたり接触させるステップ、（b）その細胞応答を測定するステップを含む。細胞応答を測定するためには、好ましくは、サンプル又は処理したサンプルを、培養細胞に加え、内部又は外部の細胞応答を測定する。その細胞応答としては、測定可能なレポーター遺伝子の発現、又はペプチド、ポリペプチド若しくは小分子等の物質の分泌が挙げられる。その発現又は物質は、ペプチド又はポリペプチドの量と相関する強度シグナルを生じる。
【００３１】
また好ましくは、ペプチド又はポリペプチドの量の測定は、サンプル中のペプチド又はポリペプチドから得られる特有の強度シグナルを測定するステップを含む。上記のように、このようなシグナルは、質量スペクトルで観察されるペプチド若しくはポリペプチドに特有の質量対電荷（m/z）又はペプチド若しくはポリペプチドに特有のNMRスペクトルで観察されるシグナル強度であり得る。
【００３２】
ペプチド又はポリペプチドの量の測定は、好ましくは、（a）該ペプチドを特定のリガンドに接触させるステップ、（b）（場合により）非結合リガンドを除去するステップ、（c）結合リガンドの量を測定するステップを含み得る。その結合リガンドは、強度シグナルを生じる。本発明において、結合は、共有結合及び非共有結合を含む。本発明において、リガンドは、任意の化合物、例えば本明細書に記載のペプチド又はポリペプチドに結合する、ペプチド、ポリペプチド、核酸又は小分子であり得る。好ましいリガンドには、抗体、核酸、ペプチド又はポリペプチド、例えば、該ペプチド若しくはポリペプチドに対する受容体若しくは結合パートナー、及び該ペプチドの結合ドメインを含むその断片、並びに核酸又はペプチドアプタマー等のアプタマーがある。このようなリガンドを調製するための方法は、当技術分野で周知である。例えば、好適な抗体又はアプタマーの同定及び生産は、市販の業者からも提供される。当業者は、より高い親和性又は特異性をもつ前記リガンドの誘導体を開発する方法に精通している。例えば、ランダム変異を核酸、ペプチド又はポリペプチドに導入することができる。これらの誘導体は、例えばファージディスプレイ法等の当技術分野で知られるスクリーニング法により、結合について試験することができる。本明細書において、抗体は、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体だけでなく、抗原又はハプテンに結合することができるFv、Fab及びF(ab)2フラグメント等のそのフラグメントも含む。本発明はまた、一本鎖抗体、並びに所望の抗原特異性を示す非ヒトドナー抗体のアミノ酸配列をヒトアクセプター抗体の配列と組み合わせたヒト化ハイブリッド抗体も含む。ドナー配列は通常、少なくともドナーの抗原結合アミノ酸残基を含むが、他の構造的及び／又は機能的に関連性のあるドナー抗体のアミノ酸残基も含んでもよい。このようなハイブリッドは、当技術分野で周知の種々の方法により調製することができる。好ましくは、リガンド又は薬剤がペプチド又はポリペプチドに特異的に結合する。本発明において、特異的な結合とは、そのリガンド又は薬剤が、分析するサンプル中に存在する他のペプチド、ポリペプチド又は物質に、実質的に結合する（「交差反応する」）べきではないことを意味する。好ましくは、特異的に結合するペプチド又はポリペプチドは、関連のある他のどのペプチド又はポリペプチドよりも、少なくとも3倍、より好ましくは少なくとも10倍、さらに好ましくは少なくとも50倍高い親和性で結合するべきである。非特異的な結合も、例えばウェスタンブロットにおけるそのサイズに従って、又はサンプル中に相対的により多量に存在することによって、明確に区別し測定できる場合は、許容できる場合がある。リガンドの結合は、当技術分野で知られるあらゆる方法によって測定することができる。好ましくは、該方法は、半定量的又は定量的である。好適な方法は、次に記載される。
【００３３】
第一に、リガンドの結合は、例えばNMR又は表面プラズモン共鳴によって、直接測定することができる。
【００３４】
第二に、リガンドが、対象とするペプチド又はポリペプチドの酵素活性の基質としても作用する場合は、酵素反応生成物を測定することができる（例えばプロテアーゼの量は、例えばウェスタンブロットで、切断された基質の量を測定することによって測定することができる）。或いは、リガンドが酵素特性自体を示す場合があり、「リガンド／ペプチド若しくはポリペプチド」複合体、又はペプチド若しくはポリペプチドそれぞれによって結合するリガンドを、強度シグナルの発生によって検出可能となる好適な基質と接触させることができる。酵素反応生成物の測定のために、好ましくは基質の量は飽和している。基質は、反応前に検出可能な標識で標識化してもよい。好ましくは、サンプルを適切な時間にわたり、基質と接触させる。適切な時間は、検出可能な、好ましくは測定可能な量の生成物が生成するのに必要な時間を意味する。生成物の量を測定する代わりに、特定の（例えば検出可能な）量の生成物が現れるために必要な時間を測定することができる。
【００３５】
第三に、リガンドの検出及び測定を可能とする標識に、リガンドを共有結合又は非共有結合で結合させることができる。標識は、直接的又は間接的な方法により行うことができる。直接的な標識は、リガンドに標識を直接（共有結合又は非共有結合で）結合させることを含む。間接的な標識は、一次リガンドに二次リガンドが（共有結合又は非共有結合で）結合することを含む。二次リガンドは、一次リガンドに特異的に結合するべきである。二次リガンドは、好適な標識と結合する及び／又はその二次リガンドに結合する三次リガンドの標的（受容体）となることができる。二次、三次又はより高次のリガンドの使用は、シグナルを増強するために用いられる場合が多い。好適な二次及び高次のリガンドとしては、抗体、二次抗体、及び周知のストレプトアビジン-ビオチン系（Vector Laboratories, Inc.）が挙げられる。リガンド又は基質は、当技術分野で知られる一種以上のタグで「タグ付加」してもよい。このようなタグは、より高次のリガンドの標的となってもよい。好適なタグには、ビオチン、ジゴキシゲニン、Hisタグ、グルタチオン-S-転移酵素、FLAG、GFP、mycタグ、A型インフルエンザウイルスヘマグルチニン（HA）、マルトース結合タンパク質等がある。ペプチド又はポリペプチドの場合は、タグは、好ましくはN末端及び／又はC末端にある。好適な標識は、適切な検出法によって検出可能な任意の標識である。典型的な標識としては、金粒子、ラテックスビーズ、アクリダンエステル、ルミノール、ルテニウム、酵素活性標識、放射性標識、磁性標識（例えば、常磁性及び超常磁性標識等の「磁性ビーズ」）、並びに蛍光標識が挙げられる。酵素活性標識としては、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ及びその誘導体が挙げられる。検出のための好適な基質には、ジアミノベンジジン（DAB）、3,3'-5,5'-テトラメチルベンジジン、NBT-BCIP（Roche Diagnosticsの既製のストック溶液として利用できる、4-ニトロブルーテトラゾリウムクロライド及び5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル-ホスフェート）、CDP-StarTM（Amersham Biosciences）、ECFTM（Amersham Biosciences）がある。好適な酵素と基質の組み合わせによって、当技術分野で知られる方法により（例えば、感光膜又は好適なカメラシステムを用いて）測定可能な呈色反応生成物、蛍光又は化学発光が生じることになる。酵素反応の測定に関しては、上で規定した基準を同様に適用する。典型的な蛍光標識は、蛍光タンパク質（例えばGFP及びその誘導体）、Cy3、Cy5、テキサスレッド、フルオレセイン及びAlexa色素（例えばAlexa 568）を含む。別の蛍光標識は、例えばMolecular Probes（Oregon）から入手できる。蛍光標識として量子ドットの使用も想定される。典型的な放射性標識は、35S、125I、32P、33P等を含む。放射性標識は、感光膜又はホスフォイメージャー等の適切な周知の任意の方法によって検出することができる。本発明において好適な測定法には、沈降（特に免疫沈降）、電気化学発光（電気的に生成された化学発光）、RIA（放射免疫アッセイ）、ELISA（酵素結合免疫吸着アッセイ）、サンドイッチ酵素免疫試験、電気化学発光サンドイッチ免疫アッセイ（ECLIA）、解離増感ランタニド蛍光イムノアッセイ（dissociation-enhanced lanthanide fluoro immuno assay （DELFIA））、シンチレーション近接アッセイ（SPA）、比濁法（turbidimetry）、比ろう法（nephelometry）、ラテックスにより増感される比濁法若しくは比ろう法、又は固相免疫試験も含まれる。当技術分野で知られる別の方法（例えばゲル電気泳動、二次元ゲル電気泳動、SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE））、ウェスタンブロッティング及び質量分析法）は、単独で、又は上記の標識化若しくは他の検出法と組み合わせて用いることができる。
【００３６】
ペプチド又はポリペプチドの量は、好ましくは、次の通り測定してもよい：（a）上記に記載するペプチド又はポリペプチドに対するリガンドを含む固体支持体を、ペプチド又はポリペプチドを含むサンプルに接触させ、（b）支持体に結合するペプチド又はポリペプチドの量を測定する。好ましくは、核酸、ペプチド、ポリペプチド、抗体及びアプタマーからなる群より選択されるリガンドは、好ましくは固定化形態で固体支持体上に存在する。固体支持体を製造するための材料は、当技術分野で周知であり、特に、市販のカラム材料、ポリスチレンビーズ、ラテックスビーズ、磁性ビーズ、コロイド金属粒子、ガラス、及び／又はシリコンのチップと表面、ニトロセルロースストリップ、膜、シート、デュラサイト（duracyte）、反応トレイのウェル及び壁、プラスチックチューブ等が含まれる。リガンド又は薬剤は、多くの様々な担体と結合することができる。周知の担体の例には、ガラス、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリカーボネート、デキストラン、ナイロン、アミロース、天然の及び修飾されたセルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、及びマグネタイトが含まれる。担体の性質は、本発明の目的に応じて、可溶性又は不溶性のいずれかであり得る。前記リガンドを固着／固定化するための好適な方法は周知であり、これに限定されないが、イオン性、疎水性、共有結合の相互作用等が含まれる。本発明では、アレイとして「懸濁アレイ」を使用することも想定される（Nolan 2002, Trends Biotechnol. 20(1):9-12）。そのような懸濁アレイでは、担体、例えばマイクロビーズ又はミクロスフェアが懸濁液中に存在する。そのアレイは、おそらく標識され、様々なリガンドを担持する異なるマイクロビーズ又はミクロスフェアから構成される。そのようなアレイの製造方法は、例えば固相化学及び光解離性保護基に基づくものが、一般的に知られている（米国特許第5,744,305号）。
【００３７】
本明細書で用いる「量」という用語には、ポリペプチド又はペプチドの絶対量、該ポリペプチド又はペプチドの相対量又は濃度だけでなく、これに関連する又はこれから導くことができるあらゆる値又はパラメーターが含まれる。そのような値又はパラメーターには、直接的な測定によって前記ペプチドから得られる全ての特有の物理的又は化学的な特性に由来する強度シグナル値、例えば、質量スペクトル又はNMRスペクトルにおける強度値が含まれる。さらに、本明細書の他の部分に記載する間接的な測定により得られる全ての値又はパラメーター、例えば、ペプチドに対する応答として生物学的読み取り系で測定される応答レベル又は特異的に結合したリガンドから得られる強度シグナルが含まれる。上記の量又はパラメーターと相関する値は、全ての標準的な数学的手法によっても得られ得ることは理解されるべきである。
【００３８】
本明細書で用いる「比較」という用語は、分析対象のサンプルに含まれるペプチド又はポリペプチドの量を、本明細書の他の部分に記載する適切な参照源の量と比較することを含む。本明細書で用いる比較は、対応するパラメーター又は値の比較、例えば、絶対量が絶対参照量と比較され、さらに、濃度が参照濃度と比較され、又は試験サンプルから得られる強度シグナルが参照サンプルの同じ種類の強度シグナルと比較されることを意味することは理解されるべきである。本発明の方法のステップ（b）において意味する比較は、手動で、又はコンピューター支援で実施し得る。コンピューター支援の比較において、測定された量の値は、コンピュータープログラムによってデータベースに保存されている適切な参照に対応する値と比較し得る。コンピュータープログラムは、比較の結果をさらに評価し得る。即ち、適切なアウトプット形式で所望の評価を自動的に提供し得る。ステップa）において測定される量と参照量との比較に基づいて、拡張型心筋症の原因を同定することができる。従って、比較される量の差異又は類似性が、虚血性拡張型心筋症に罹患している被験体及び非虚血性拡張型心筋症に罹患している被験体を同定することを可能にするように、参照量を選ぶべきである。
【００３９】
従って、本明細書で用いる「参照量」という用語は、被験体の拡張型心筋症を虚血性又は非虚血性に割り振ることを可能にするポリペプチドの量を意味する。従って、参照は、（i）虚血性拡張型心筋症に罹患していることがわかっている被験体、又は（ii）非虚血性拡張型心筋症に罹患していることがわかっている被験体のいずれかに由来し得る。さらに、参照量は、好ましくは閾値を規定する。適切な参照量又は閾値量は、試験サンプルと一緒に即ち同時に若しくは逐次的に、分析対象の参照サンプルから本発明の方法によって測定され得る。閾値として機能する参照量は、正常上限（ULN）、即ち被験体（例えば臨床試験に登録された患者）の集団に見られる生理的な量の上限から導かれ得る。被験体の一定の集団についてのULNは、様々な周知技術によって決定され得る。適切な技術は、本発明の方法において測定されるペプチド又はポリペプチド量についての集団の中央値を決定することであり得る。
【００４０】
血管形成は、既存の血管から毛細血管出芽プロセスによる新たな血管の形成として知られている。このプロセスは、生理的条件下で、本質的には血管内皮細胞増殖因子（VEGF）のような血管形成増殖因子によって駆動される。このような血管形成増殖因子の発現は、低酸素状態によって枢軸的に制御されている。従って、組織が虚血状態になった場合、細胞は、血管形成によって組織に新たな血管を誘致する血管形成増殖因子を産生し始める。
【００４１】
しかしながら、被験体の血管形成能力、即ち、その血管形成状態は、複雑な生物学的パラメーターに依存する。様々な血管形成促進因子及び血管形成の阻害因子が報告されている（Nyberg 2005, Cancer Res 65:3967-3979）。
【００４２】
血管形成は、増殖性の腫瘍が低酸素状態の影響をより一層受けるようになる腫瘍増殖の間に見られる。
【００４３】
低酸素状態及び虚血状態を伴う他の病状として、冠動脈疾患が挙げられる。前記疾患は、冠動脈系血管における狭窄又は閉塞によって、例えば、アテローム性動脈硬化又は血栓塞栓閉塞を特徴とする。冠動脈疾患は、心筋の虚血をもたらす。このような虚血は、治療せずに放置した場合、心臓の生理機能を重度に妨げ、結果的に心不全又は心筋梗塞さえも含む心疾患を引き起こし得る。冠動脈疾患に罹患している患者については、血管形成療法が前述の生命にかかわる状態を回避する上で役立ち得る。さらに、血管形成療法は、ステント移植又はバイパス術のような複雑な心臓治療介入を回避するのにさえも役立つかもしれない。
【００４４】
既に上述したように、VEGFに加えて様々な因子が血管形成に関与することが報告されている。胎盤増殖因子（PlGF）は、その推定上の受容体であるFlt-1（Khurana 2005, Circulation 111:2828-2836）と共に、動脈形成に関連したプロセスで役割を担うことが示唆されている密接に関連した増殖因子である。動脈形成及び血管形成に関与し得る他の因子には、トランスフォーミング増殖因子-βスーパーファミリーのメンバー、並びにALK受容体又はエンドグリンのようなそれらの受容体又は結合パートナーが挙げられる（van Laake 2006, Circulation, 114:2288-2297; Bobik 2006, Arterioscler Thromb Vasc Biol 26: 1712-1720; Bertolino 2005, Chest Supplement 128: 585-590）。線維芽細胞増殖因子（FGF）、血小板由来増殖因子（PDGF）並びにサイトカイン及びマトリクスメタロプロテアーゼもまた有力な血管形成因子として記載されている（Nyberg, 前掲）。
【００４５】
心筋梗塞MIに罹患している患者は、心筋トロポニン、好ましくはトロポニンT又はI、最も好ましくはトロポニンTを用いて診断することができる。心筋梗塞は、心筋の壊死状態、即ち細胞死によって引き起こされると考えられている。心筋トロポニンは、細胞死の後に放出され、それ故、MIの診断のために用いることができる。血中のトロポニンTの量が上昇している場合、即ち0.1 ng/mlを超えている場合、急性心血管事象が推測され、患者は適宜治療される。しかし、心筋トロポニンは、細胞死に先立つ病的状態、例えば虚血においても（少量）放出されることが知られている。非常に低い心筋トロポニン量の信頼できる測定を可能にするために、好ましくは、心筋トロポニン、特にトロポニンの量は、非常に感度の良いトロポニンt試験系で測定され、好ましくは、前記試験系は、サンプル中、好ましくは血液、血清又は血漿サンプル中において0.002 ng/mlトロポニンの量を測定できる。本発明において特に好ましいトロポニンTアッセイは、検出限界が0.001 ng/ml〜0.0015 ng/ml、一般に0.0015 ng/mlのElecsys（登録商標）2010分析器（Roche Diagnostics）である。
【００４６】
心不全は、体全体に十分な量の血液を満たす又は排出する心臓の能力を損なう構造的又は機能的心疾患のいずれかに起因し得る一症状である。最良の治療をもってしても、心不全は年間約10％の死亡率と関係している。心不全は慢性疾患であり、中でも急性心血管事象（心筋梗塞など）の後に生じるか、又は、例えば心筋組織における炎症性若しくは変性変化の結果として生じ得る。心不全患者は、NYHA系に従ってクラスI、II、III及びIVに分類される。心不全を患う患者は、治療的処置を受けずに健康を完全に回復することはできないだろう。
【００４７】
心筋機能障害は、心臓の筋肉（心筋）のいくつかの病的状態を説明する総称である。心筋機能障害は、心不全とは異なり、一時的な病的状態（例えば虚血、毒性物質、アルコールなどにより引き起こされるもの）であり得る。心筋機能障害は、根本の原因を取り除いた後は消失するだろう。しかしながら、無症候性の心筋機能障害は心不全を発症する可能性もある（これは治療で処置する必要がある）。しかし、心筋機能障害はまた、心不全、慢性心不全、さらには重篤な慢性心不全にもなり得る。
【００４８】
心筋機能障害及び心不全は、特にその症状が「軽度」とみなされる場合には、診断されないことが多い。心不全の慣用的な診断法は、周知の血管容量ストレスマーカーであるNT-proBNPに基づくものである。しかしながら、いくつかの医療状況下におけるNT-proBNPに基づく心不全の診断は、全てではないがかなりの人数の患者では不正確であるようである（例えば、Beck 2004, Canadian Journal of Cardiology 20: 1245-1248；Tsuchida 2004, Journal of Cardiology, 44:1-11）。ところが、特に心不全を罹患している患者には、心不全の支持療法が緊急に必要と考えられる。一方、心不全の不正確な診断の結果、多くの患者が不十分な又は有害な副作用さえ有することのある治療レジメンを受けることになる。
【００４９】
本発明において、以下の参照値は、虚血性又は非虚血性心筋症の存在を示すと考えられる。
【００５０】
本明細書に記載する心筋トロポニン、好ましくはトロポニンI又はT、特にトロポニンT：好ましくは0.008 pg/ml、より好ましくは0.005 pg/ml、最も好ましくは0.003 pg/ml。当業者は、特定の試験（本明細書ではRoche DiagnosticsのElecsys 2010）で測定された量は、使用説明書及び情報に示されている限度内において変化し得ることを知っている。使用説明書及び情報は参照により本明細書に援用される。
【００５１】
本明細書に記載するGDF-15：好ましくは1000 pg/ml、より好ましくは750 pg/ml、最も好ましくは600 pg/ml。
【００５２】
本明細書に記載するPlGF：好ましくは11 pg/ml、より好ましくは8 pg/ml。本明細書に記載するエンドグリン：好ましくは4.8 ng/ml、より好ましくは4.2 ng/ml。本明細書に記載するsFLT1：好ましくは142 pg/ml、より好ましくは120 pg/ml。
【００５３】
個体において測定された心筋トロポニン（トロポニンT又はI）の量が、上に挙げた量を超えている場合、このことは個体が虚血性DCMに罹患している（即ちおそらく非虚血性DCMに罹患していない）ことを示す。その量が参照値未満である場合、逆のことが当てはまる。
【００５４】
また本発明において、上に挙げた参照値に関して、心筋トロポニン、特にトロポニンTの量の増加は、心筋の虚血及び低酸素状態及び／又は壊死を示し、一方、参照値に関して、心筋トロポニン、特にトロポニンTの量の減少は、心筋の虚血及び低酸素状態及び／又は壊死の不存在を示す。従って、本発明の方法の好ましい実施形態において、心筋トロポニン、特にトロポニンTの量の増加は、心筋の虚血及び低酸素状態及び／又は壊死を示す。本発明の方法の別の好ましい実施形態において、心筋トロポニン、特にトロポニンTの量の減少は、心筋の虚血及び低酸素状態及び／又は壊死を示す。
【００５５】
個体において測定されたGDF-15の量が、上に挙げた量を超えている場合、このことは個体が非虚血性DCMに罹患している（即ちおそらく虚血性DCMに罹患していない）ことを示す。その量がそれらの値未満である場合、逆のことが当てはまる。
【００５６】
また本発明において、上に挙げた参照値に関して、GDF-15の量の増加は、心筋において生じる炎症過程を示し、一方、参照値に関して、GDF-15の量の減少は、心筋における炎症過程の不存在を示す。従って、本発明の方法の好ましい実施形態において、GDF-15の量の増加は、心筋において生じる炎症過程を示し、一方、GDF-15の量の減少は、心筋における炎症過程の不存在を示す。
【００５７】
さらに、前記バイオマーカーはそれぞれ、互いに統計的に独立していることが見出されている。
【００５８】
本発明において、上に挙げた参照値に関して、PlGF及びsFLT1の量の増加並びにエンドグリンの量の減少は、非虚血性心筋症を示し、一方、参照値に関して、PLGF及びsFLT1の量の減少並びにエンドグリンの量の増加は、血管形成促進状態を示す。血管形成（「血管形成促進」）状態は、虚血状態又は過程の発生を示し、一方、反血管形成状態は虚血状態又は過程の非発生を示す。従って、本発明の方法の好ましい実施形態において、PLGF及びsFLT1の量の増加並びにエンドグリンの量の減少は、非虚血性心筋症を示す。本発明の方法の別の好ましい実施形態において、PLGF及びsFLT1の量の減少並びにエンドグリンの量の増加は、各個体における虚血性心筋症を示す。本発明の一実施形態において、PlGF及びsFLT1の両方が測定される。本発明の別の実施形態において、PlGF及びsFLT1の一方のみ、好ましくはPlGFが測定される。
【００５９】
アテローム性動脈硬化に伴う非虚血性心筋症に罹患している個体において、参照値は、エンドグリンを除いて、上に挙げた値と同じか又は類似している。本発明の一つの利点は、個体がアテローム性動脈硬化に伴う非虚血性DCMに罹患しているかどうか診断することができるということである。これらの場合に、エンドグリン値は以下の通りである：好ましくは4.8 ng/ml、より好ましくは4.2 ng/ml、特に3.8 ng/ml。
【００６０】
本明細書に記載するナトリウム利尿ペプチド、好ましくはBNP又はNT-proBNP、特にNT-proBNP：好ましくは125 pg/ml、特に200 pg/ml、最も好ましくは350 pg/ml。
【００６１】
さらに、本発明の好ましい実施形態において、上に挙げた参照値に関して、ナトリウム利尿ペプチド、特にNT-proBNPの量の増加は、心筋機能障害、特に心不全を示し、一方、参照値に関して、ナトリウム利尿ペプチド、特にNT-proBNPの量の減少は、心筋機能障害の不存在、特に心不全の不存在を示す。従って、本発明の方法の好ましい実施形態において、ナトリウム利尿ペプチド、特にNT-proBNPの量の増加は、心筋機能障害、特に心不全を示す。本発明の方法の別の好ましい実施形態において、ナトリウム利尿ペプチド、特にNT-proBNPの量の減少は、心筋機能障害の不存在、特に心不全の不存在を示す。
【００６２】
心筋機能障害又は心不全の発症は、個体が虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているかという事実とは独立している。心筋症の両形態には、程度の差はあるが重度の形態の心筋機能障害又は心不全が伴い得る。両用語は当業者には周知である。
【００６３】
従って本発明はまた、心疾患、好ましくは心筋機能障害及び心不全の群からの心疾患にも関する。
【００６４】
本明細書で用いる「心筋機能障害」という用語は、総称であり、心筋のいくつかの病的状態に関する。心筋機能障害は、一時的な病的状態（例えば虚血、毒性物質、アルコールなどにより引き起こされるもの）であり得る。心筋機能障害は、根本の原因を取り除いた後は消失するだろう。本発明において、心筋機能障害は、無症候性の心筋機能障害であってもよい。心筋機能障害、特に無症候性の心筋機能障害は心不全を発症する可能性もある。心筋機能障害は重篤な慢性心不全にもなり得る。一般に、心筋機能障害は、心臓の収縮及び／又は拡張機能の障害であり、心筋機能障害は心不全に伴って又は心不全を伴わずに生じ得る。前記心不全は、無症候であり得る。
【００６５】
本明細書で用いる「心不全」という用語は、心臓の収縮及び／又は拡張機能の障害に関する。好ましくは、本明細書において意味する心不全はまた慢性の心不全である。心不全はNew York Heart Association（NYHA）に従って機能分類系に分類することができる。NYHAクラスIの患者は心血管系疾患の明確な症状はないが、既に機能障害の客観的証拠がある。身体活動に制限はなく、通常の身体活動を行っても過度の疲労、動悸、又は呼吸困難（息切れ）を引き起こさない。NYHAクラスIIの患者は身体活動にわずかに制限がある。これらの患者は安静時は快適であるが、通常の身体活動で疲労、動悸、又は呼吸困難を生じる。NYHAクラスIIIの患者は身体動作に著しい制限がみとめられる。これらの患者は安静時は快適であるが、通常以下の身体活動で疲労、動悸、又は呼吸困難が生ずる。NYHAクラスIVの患者は不快感なしにいずれの身体活動も行うことができない。これらの患者は安静時でも心臓の機能不全の症状を示す。心不全、即ち心臓の収縮及び／又は拡張機能の障害は、例えば心エコー検査、血管造影、シンチグラフィー、又は磁気共鳴映像法により決定することも可能である。この機能障害は、上述したように心不全の症候を伴い得るが（NYHAクラスII〜IV）、一部の患者は有意な症候がないことがある（NYHA I）。さらに、心不全は左心室駆出分画率（LVEF）の低減によっても明らかである。より好ましくは、本明細書で用いる心不全は、60％未満、40％〜60％、又は40％未満の左心室駆出分画率（LVEF）を伴う。
【００６６】
従って、ナトリウム利尿ペプチドの量の測定は、虚血性又は非虚血性拡張型心筋症に罹患している個体が心筋機能障害及び／又は心不全にも罹患しているか否か、並びにその機能障害／不全が重篤か又はあまり重篤でないか、評価することをさらに可能にする。
【００６７】
従って本発明の方法は非常に信頼できる診断を提供する。この問題を解決するために現在使用されている技術は、多くの時間が必要で、かつコストが大きい。しかし、本発明の方法は、信頼でき、速く、かつより低コストの診断を可能にし、テストストリップのような携帯可能なアッセイにさえ組み入れることができる。従って本方法は、救急患者を診断するのに特によく適している。本発明の知見のおかげで、被験体に適した血管形成療法を確実に選択することができる。患者の誤った治療に起因する重篤な副作用を回避することができる。
【００６８】
本発明はまた、ある形態の拡張型心筋症に罹患している被験体においてどの薬剤を投与すべきか診断及び／又は決定する方法であって、
a）拡張型心筋症に罹患している被験体のサンプル中において、以下のペプチド：
トロポニン若しくはその変異体；並びに
GDF-15若しくはその変異体；
PLGF若しくはその変異体、エンドグリン若しくはその変異体、及びsFLT1若しくはその変異体の群から1つ以上の血管形成マーカー；
場合により、ナトリウム利尿ペプチド若しくはその変異体；
の量を測定するステップと、
b）ステップa）で測定された量を参照量と比較するステップであって、それによって被験体が虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断される前記ステップと、
c）a）で測定された量及び／又はb）で得られた拡張型心筋症の形態についての情報に従い、被験体にどの薬剤を投与すべきか診断及び／又は決定するステップ
とを含む、前記方法にも関する。
【００６９】
本明細書で用いる「診断する」という用語は、本発明において試験を受けている被験体に、ある薬剤を投与すべきか否かについて評価することを意味する。薬剤は以下から選択される：
A）心機能に作用する薬剤、好ましくは：プロプラノロール（proprenolol）、メトプロロール、ビソプロロール、カルベジロール、ブシンドロール、ネビボロール等のβブロッカー；硝酸塩；ドブタミン、ドーパミン、エピネフリン、イソプロテレノール（isoprotenerol）、ノルエピネフリン、フェニレフリン等のアドレナリン作動薬；ジゴキシン、ジギトキシン等の陽性変力薬；利尿薬、特にループ利尿薬、チアジド及びチアジド様利尿薬、カリウム保持性利尿薬、I型ミネラルコルチドイド受容体拮抗薬、炭酸脱水酵素阻害薬、血管収縮拮抗薬（vasopressure antagonist）。
【００７０】
これらの薬剤が投与されるべきか否かという情報は、ナトリウム利尿ペプチドのレベルの上昇が測定される場合に提供される。適切なナトリウム利尿ペプチドは、BNP、NT-proBNP、ANP、NT-proANP、好ましくはBNP又はNT-proBNP、特にNT-proBNPである。ナトリウム利尿ペプチドのレベルが、NT-proBNPの場合には、≧300 pg/ml、好ましくは≧500 pg/ml、より好ましくは≧800 pg/ml、さらにより好ましくは≧2000 pg/mlに達する場合、1種以上の上記薬剤が投与されるべきである。
【００７１】
B）抗炎症薬、好ましくは：ACE阻害剤、特にエナラプリル、カプトプリル、ラミプリル、トランドラプリル；アンジオテンシン受容体拮抗薬及びアルドステロン拮抗薬、特にロサルタン、バルサルタン、イルベサルタン、カンデサルタン、テルミサルタン、エプロサルタン、スピロノラクトン；スタチン類、特にアトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン；NSAIDS；選択的COX-2阻害剤。
【００７２】
これらの薬剤が投与されるべきか否かという情報は、炎症過程を示すGDF-15のレベルの上昇が測定される場合に提供される。GDF-15のレベルが、≧800 pg/ml、好ましくは≧1200 pg/ml、より好ましくは≧1500 pg/ml、特に≧2000 pg/mlに達する場合、1種以上の上記薬剤が投与されるべきである。
【００７３】
C）血管形成促進治療用薬剤
上記「血管形成促進治療」という用語は、被験体において血管形成の過程を全身的又は局所的に誘導又は増進する治療に関する。好ましくは、前記血管形成促進治療は、好ましくはVEGF、PlGF、エンドグリン、抗Flt-1抗体及びALK5修飾剤からなる群より選択される血管形成促進薬の投与を含む。
【００７４】
本明細書で用いる「受容可能である」という用語は、本方法により受容可能であると同定された統計的に有意な被験体の一部が、想定された治療に対し、心臓の患部において血管形成を示すことによって反応することを意味する。
【００７５】
前記方法の好ましい実施形態において、PLGF及びsFLT1の量の減少並びにエンドグリンの量の増加は、血管形成促進治療を受容可能な被験体を除外する。これらの薬剤が投与されるべきか否かという情報は、反血管形成過程を示すPlGFのレベルの上昇（低下）が測定される場合に提供される。PlGFのレベルが、≧8 pg/ml、好ましくは≧10 pg/ml、より好ましくは≧12 pg/ml、特に≧15 pg/mlに達する場合、1種以上の上記薬剤が投与されるべきである。
【００７６】
これらの薬剤が投与されるべきか否かという情報は、血管形成過程を示すエンドグリン及び／又はsFLT1のレベルの上昇が測定される場合にも提供され得る。エンドグリンのレベルが、≧4.8 pg/ml、好ましくは≧4.4 pg/ml、より好ましくは≧4.2 pg/mlに達する場合、1種以上の上記薬剤が投与されるべきである。sFLT1のレベルが、≧142 pg/ml、より好ましくは≧125 pg/ml、より好ましくは≧110 pg/ml、特に≧90 pg/mlに達する場合、1種以上の上記薬剤が投与されるべきである。
【００７７】
D）一般に、トロポニンI及び／又はT、特にトロポニンTは心筋壊死の存在及び／又は壊死の程度を示す。トロポニンT/Iのレベルの低下が観察されない場合には、このペプチドは、経皮冠動脈治療介入によって治療することができる心不全及び／又は血管狭窄を示す。
【００７８】
これらの薬剤が投与されるべきか否かという情報は、心不全又は血管狭窄を示すトロポニンI及び／又はトロポニンT、特にトロポニンTのレベルの上昇が測定される場合に提供される。
【００７９】
本発明は、拡張型心筋症に罹患している被験体が虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断するための装置であって、
a）拡張型心筋症に罹患している被験体のサンプル中において、以下のペプチド：
トロポニン若しくはその変異体；並びに
GDF-15若しくはその変異体；
PLGF若しくはその変異体、エンドグリン若しくはその変異体、及びsFLT1若しくはその変異体の群から1つ以上の血管形成マーカー；
場合により、ナトリウム利尿ペプチド若しくはその変異体；
の量を測定する手段と、
b）ステップa）で測定された量を参照量と比較する手段であって、それによって被験体が虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断される前記手段
とを含み、上に記載する本発明の方法を実施するために適している、前記装置をさらに含む。
【００８０】
本明細書で用いる「装置」という用語は、予測を可能とするために、互いが動作可能となるよう連結された少なくとも上記の手段を含む手段からなるシステムに関する。上記ポリペプチドの一つの量を測定するための好ましい手段、並びに比較を実施するための手段は、本発明の方法に関連して上に開示されている。動作可能となるように手段を連結する方法は、装置に含まれる手段の種類に応じて変わる。例えば、ペプチドの量を自動的に測定するための手段を適用する場合には、その自動的に動作する手段により得られるデータを、所望の結果を得るために、例えばコンピュータープログラムによって処理することができる。好ましくは、そのような場合、その手段は単一の装置によって構成される。従って該装置は、適用されるサンプル中のペプチド又はポリペプチドの量の測定について解析するユニット、及び評価のためにその得られたデータを処理するコンピューターユニットを含むことができる。コンピューターユニットは、好ましくは、本明細書の他の部分に記載する保存された参照量又はその値を含むデータベース、並びに測定されたポリペプチドの量の、データベースの保存された参照量との比較を実行するためのコンピューターによって実行されるアルゴリズムを含む。本明細書で用いる「コンピューターによって実行される」とはコンピューターユニットに具体的に包含されるコンピューター可読プログラムコードを意味する。或いは、テストストリップのような手段をペプチド又はポリペプチドの量を測定するために使用する場合には、比較のための手段は、対照ストリップ、又は測定量を参照量に割り当てる表を含んでもよい。テストストリップは、好ましくは、本明細書に記載するペプチド又はポリペプチドと特異的に結合するリガンドと組み合わせられる。ストリップ又は装置は、好ましくは、該ペプチド又はポリペプチドと該リガンドとの結合を検出するための手段を含む。検出のための好ましい手段は、上記の本発明の方法に関する実施形態と関連して開示されている。そのような場合、その手段は動作可能なように連結され、システムの使用者は、その量の測定結果と、取扱説明書に定められる指示又は解説によりその診断値又は予測値を結びつける。その手段は、かかる実施形態で個々の装置として存在してもよく、好ましくはキットとして一緒にパッケージングされる。当業者は、さらなる苦労をすることなくその手段を連結する方法を理解するだろう。好ましい装置は、専門の臨床医の特別な知識がなくても適用することができるものであり、例えば、単にサンプルを付加すればよいテストストリップ又は電子装置である。結果は、臨床医による解釈を必要とする未加工データのアウトプットとして得ることができる。しかし好ましくは、装置のアウトプットは、その解釈にあたり臨床医を必要としないように処理された、即ち評価された未加工データである。さらに好ましい装置は、分析ユニット／装置（例えば、バイオセンサー、アレイ、ナトリウム利尿ペプチドを特異的に認識するリガンドと結合した固体支持体、表面プラズモン共鳴装置、NMR分析装置、質量分析装置等）、及び／又は本発明の方法における上記の評価ユニット／装置を備える。
【００８１】
また、本発明は、ある形態の拡張型心筋症に罹患している被験体においてどの薬剤を投与すべきか診断及び／又は決定するための装置であって、
a）拡張型心筋症に罹患している被験体のサンプル中において、以下のペプチド：
トロポニン若しくはその変異体；並びに
GDF-15若しくはその変異体；
PLGF若しくはその変異体、エンドグリン若しくはその変異体、及びsFLT1若しくはその変異体の群から1つ以上の血管形成マーカー；
場合により、ナトリウム利尿ペプチド若しくはその変異体；
の量を測定する手段と、
b）ステップa）で測定された量を参照量と比較する手段であって、それによって被験体が虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断される前記手段
とを含み、上に記載する本発明の方法を実施するために適している、前記装置に関する。
【００８２】
さらに、本発明は、上に記載する本発明の方法を実施するために適したキットであって、
a）拡張型心筋症に罹患している被験体のサンプル中において、以下のペプチド：
トロポニン若しくはその変異体；並びに
GDF-15若しくはその変異体；
PLGF若しくはその変異体、エンドグリン若しくはその変異体、及びsFLT1若しくはその変異体の群から1つ以上の血管形成マーカー；
場合により、ナトリウム利尿ペプチド若しくはその変異体；
の量を測定するための手段と、
b）ステップa）で測定された量を参照量と比較するための手段であって、それによって被験体が虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断される前記手段
とを含み、上に記載する本発明の方法を実施するために適した、前記キットに関する。好ましくは、キットは本発明の方法を実施するための説明書を含む。
【００８３】
本明細書で用いる「キット」という用語は、好ましくは別個に又は単一容器内に提供される、上記手段の集合を意味する。また好ましくは、容器は本発明の方法を実施するための説明書も含む。
【００８４】
本明細書で引用される全ての参考文献は、それらの全体の開示内容及び本明細書で特別に言及された開示内容について、参照により本明細書に援用される。
【実施例】
【００８５】
以下の実施例は、本発明を例示するにすぎない。これらは、本発明の範囲を限定するものであると解釈すべきでない。
【００８６】
虚血性心筋症に罹患している合計114人の患者及び非虚血性心筋症に罹患している合計68人の患者を調査に含めた。全ての患者は心エコー検査によって評価され、30％未満の左心室駆出分画率を有していた。さらに全ての患者に冠動脈造影を行い、この方法の結果に基づいて、患者を虚血性又は非虚血性心筋症に割り当てた。
【００８７】
両方の表において、Iは虚血性DCMを表し、NIは非虚血性DCMを表す。
【００８８】
表1は、両患者群についてのマーカーレベルの数値を示す。
【表１】
2011523044.tif 000003
【００８９】
表2は、NT-proBNPと他の診断試験との相関、並びに虚血性と非虚血性心筋症との相関の違いを示す。
【表２】
2011523044.tif 000004
【図１−１】
2011523044.tif 000005
【図１−２】
2011523044.tif 000006
【図２】
2011523044.tif 000007
【図３】
2011523044.tif 000008
【図４】
2011523044.tif 000009
【図５】
2011523044.tif 000010
【図６】
2011523044.tif 000011
【図７】
2011523044.tif 000012
【図８】
2011523044.tif 000013
【図９】
2011523044.tif 000014
【図１０】
2011523044.tif 000015
【図１１】
2011523044.tif 000016
【手続補正書】
【提出日】平成22年3月15日(2010.3.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
拡張型心筋症に罹患している被験体が、虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断する方法であって、
a）拡張型心筋症に罹患している被験体のサンプル中において、以下のペプチド：
トロポニン若しくはその変異体；並びに
GDF-15若しくはその変異体；並びに
PLGF若しくはその変異体、エンドグリン若しくはその変異体、及びsFLT1若しくはその変異体の群から1つ以上の血管形成マーカー；
の量を測定するステップと、
b）ステップa）で測定された量を参照量と比較するステップであって、それによって被験体が虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断される前記ステップ
とを含む、前記方法。
【請求項２】
GDF-15の量の増加と、トロポニンの量の減少と、PLGF及び／若しくはsFLT1の量の増加並びに／又はエンドグリンの量の減少とが非虚血状態を示す、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
GDF-15の量の減少と、トロポニンの量の増加と、PLGF及び／若しくはsFLT1の量の減少並びに／又はエンドグリンの量の増加とが虚血状態を示す、請求項1に記載の方法。
【請求項４】
血管形成マーカーがPlGF及び／又はsFLT1である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
【請求項５】
血管形成マーカーがPlGFである、請求項4に記載の方法。
【請求項６】
心筋トロポニンがトロポニンTである、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
【請求項７】
0.008 ng/mlより高いトロポニンTの濃度が虚血状態を示す、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
0.008 ng/mlより低いトロポニンTの濃度が非虚血状態を示す、請求項6に記載の方法。
【請求項９】
さらにナトリウム利尿ペプチドの量を測定する、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１０】
ナトリウム利尿ペプチドの量の増加が心筋機能障害及び／又は心不全を示す、請求項9に記載の方法。
【請求項１１】
ナトリウム利尿ペプチドがNT-proBNPである、請求項9又は10に記載の方法。
【請求項１２】
> 125 pg/mlのNT-proBNPの濃度が心不全を示す、請求項6〜11のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１３】
以下の濃度：< 600 pg/mlのGDF-15；< 8 pg/mlのPlGF；> 4.8 ng/mlのエンドグリン；< 120 pg/mlのsFlT1が虚血状態を示す、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１４】
以下の濃度：> 1000 pg/mlのGDF-15；> 11 pg/mlのPlGF；< 4.2 ng/mlのエンドグリン；> 142 pg/mlのsFlT1が非虚血状態を示す、請求項1〜13のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１５】
ある形態の拡張型心筋症に罹患している被験体においてどの薬剤を投与すべきか診断及び／又は決定する方法であって、
a）拡張型心筋症に罹患している被験体のサンプル中において、以下のペプチド：
トロポニン若しくはその変異体；並びに
GDF-15若しくはその変異体；
PLGF若しくはその変異体、エンドグリン若しくはその変異体、及びsFLT1若しくはその変異体の群から1つ以上の血管形成マーカー；
場合により、ナトリウム利尿ペプチド若しくはその変異体；
の量を測定するステップと、
b）ステップa）で測定された量を参照量と比較するステップであって、それによって被験体が虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断される前記ステップと、
c）a）で測定された量及び／又はb）で得られた拡張型心筋症の形態についての情報に従い、被験体にどの薬剤を投与すべきか診断及び／又は決定するステップ
とを含む、前記方法。
【請求項１６】
薬剤が、スタチン、ACE阻害剤、アンジオテンシン受容体拮抗薬、及び／又はアルドステロン拮抗薬から選択される、請求項15に記載の方法。
【請求項１７】
拡張型心筋症に罹患している被験体が、虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断するための装置であって、
a）拡張型心筋症に罹患している被験体のサンプル中において、以下のペプチド：
トロポニン若しくはその変異体；並びに
GDF-15若しくはその変異体；
PLGF若しくはその変異体、エンドグリン若しくはその変異体、及びsFLT1若しくはその変異体の群から1つ以上の血管形成マーカー；
場合により、ナトリウム利尿ペプチド若しくはその変異体；
の量を測定する手段と、
b）ステップa）で測定された量を参照量と比較する手段であって、それによって被験体が虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断される前記手段
とを含み、請求項1〜14のいずれか1項に記載の本発明の方法を実施するために適している、前記装置。
【請求項１８】
ある形態の拡張型心筋症に罹患している被験体においてどの薬剤を投与すべきか診断及び／又は決定するための装置であって、
a）拡張型心筋症に罹患している被験体のサンプル中において、以下のペプチド：
トロポニン若しくはその変異体；並びに
GDF-15若しくはその変異体；
PLGF若しくはその変異体、エンドグリン若しくはその変異体、及びsFLT1若しくはその変異体の群から1つ以上の血管形成マーカー；
場合により、ナトリウム利尿ペプチド若しくはその変異体；
の量を測定する手段と、
b）ステップa）で測定された量を参照量と比較する手段であって、それによって被験体が虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断される前記手段
とを含み、請求項15及び16のいずれか1項に記載の本発明の方法を実施するために適している、前記装置。
【請求項１９】
請求項1〜16のいずれか1項に記載の本発明の方法を実施するために適したキットであって、
a）拡張型心筋症に罹患している被験体のサンプル中において、以下のペプチド：
トロポニン若しくはその変異体；並びに
GDF-15若しくはその変異体；
PLGF若しくはその変異体、エンドグリン若しくはその変異体、及びsFLT1若しくはその変異体の群から1つ以上の血管形成マーカー；
場合により、ナトリウム利尿ペプチド若しくはその変異体；
の量を測定するための手段と、
b）ステップa）で測定された量を参照量と比較するための手段であって、それによって被験体が虚血性拡張型心筋症に罹患しているか、又は非虚血性拡張型心筋症に罹患しているか診断される前記手段
とを含み、本発明の方法を実施するために適している、前記キット。
【請求項２０】
請求項1〜16のいずれか1項に記載のの方法を実施するための説明書をさらに含む、請求項19に記載のキット。
【国際調査報告】
2011523044.tif 000017
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