(57)【要約】  本発明は、PM00104の他の抗癌薬との併用に関し、癌の治療におけるこれらの併用の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
PM00104または薬学的に許容できるその塩の治療有効量、ならびに抗腫瘍白金配位錯体、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害薬、アントラサイクリン、トポイソメラーゼIおよび/またはII阻害薬、抗腫瘍モノクローナル抗体、mTOR阻害薬、ならびにチロシンキナーゼ阻害薬から選択される別の抗癌薬の治療有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与するステップを含む、癌を治療する方法。
【請求項２】
癌の治療における、抗腫瘍白金配位錯体、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害薬、アントラサイクリン、トポイソメラーゼIおよび/またはII阻害薬、抗腫瘍モノクローナル抗体、mTOR阻害薬、ならびにチロシンキナーゼ阻害薬から選択される抗癌薬の治療有効性を増強する方法であって、前記抗癌薬の治療有効量およびPM00104または薬学的に許容できるその塩の治療有効量をそれを必要とする患者に投与するステップを含む、方法。
【請求項３】
PM00104または薬学的に許容できるその塩、ならびに抗腫瘍白金配位錯体、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害薬、アントラサイクリン、トポイソメラーゼIおよび/またはII阻害薬、抗腫瘍モノクローナル抗体、mTOR阻害薬、ならびにチロシンキナーゼ阻害薬から選択される他の抗癌薬が、同じ組成物の部分を形成する、請求項1または2に記載の方法。
【請求項４】
PM00104または薬学的に許容できるその塩、ならびに抗腫瘍白金配位錯体、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害薬、アントラサイクリン、トポイソメラーゼIおよび/またはII阻害薬、抗腫瘍モノクローナル抗体、mTOR阻害薬、ならびにチロシンキナーゼ阻害薬から選択される他の抗癌薬が、同時に、または異なる時間に投与するための別々の組成物として提供される、請求項1または2に記載の方法。
【請求項５】
PM00104または薬学的に許容できるその塩、ならびに抗腫瘍白金配位錯体、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害薬、アントラサイクリン、トポイソメラーゼIおよび/またはII阻害薬、抗腫瘍モノクローナル抗体、mTOR阻害薬、ならびにチロシンキナーゼ阻害薬から選択される他の抗癌薬が、異なる時間に投与するための別々の組成物として提供される、請求項4に記載の方法。
【請求項６】
PM00104と併用される抗癌薬が抗腫瘍白金配位錯体である、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
PM00104と併用される抗癌薬が、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、BBR3464、サトラプラチン、テトラプラチン、オルミプラチン、およびイプロプラチンから選択される抗腫瘍白金配位錯体である、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
PM00104と併用される抗癌薬が代謝拮抗薬である、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
PM00104と併用される抗癌薬が、5-フルオロウラシル、ゲムシタビン、シタラビン、カペシタビン、デシタビン、フロクスウリジン、6-メルカプトプリン、メトトレキセート、フルダラビン、アミノプテリン、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、およびチオグアニンから選択される代謝拮抗薬である、請求項8に記載の方法。
【請求項１０】
PM00104と併用される抗癌薬が有糸分裂阻害薬である、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
PM00104と併用される抗癌薬が、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、およびビノレルビンから選択される有糸分裂阻害薬である、請求項10に記載の方法。
【請求項１２】
PM00104と併用される抗癌薬がアントラサイクリンである、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
PM00104と併用される抗癌薬が、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、ピクサントロン、およびバルルビシンから選択されるアントラサイクリンである、請求項12に記載の方法。
【請求項１４】
PM00104と併用される抗癌薬がトポイソメラーゼIおよび/またはII阻害薬である、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
PM00104と併用される抗癌薬が、トポテカン、SN-38、イリノテカン、カンプトテシン、ルビテカン、エトポシド、およびテニポシドから選択されるトポイソメラーゼIおよび/またはII阻害薬である、請求項14に記載の方法。
【請求項１６】
PM00104と併用される抗癌薬が抗腫瘍モノクローナル抗体である、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
PM00104と併用される抗癌薬が、ベバシズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、トラスツズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、アレムツズマブ、およびゲムツズマブから選択される抗腫瘍モノクローナル抗体である、請求項16に記載の方法。
【請求項１８】
PM00104と併用される抗癌薬がチロシンキナーゼ阻害薬である、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
PM00104と併用される抗癌薬が、エルロチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ、ボスチニブ、セジラニブ、ダサチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、カネルチニブ、ラパチニブ、レスタウルチニブ、ニロチニブ、セマキサニブ、スニチニブ、およびバンデタニブから選択されるチロシンキナーゼ阻害薬である、請求項18に記載の方法。
【請求項２０】
PM00104と併用される抗癌薬がmTOR阻害薬である、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
PM00104と併用される抗癌薬が、テムシロリムス、シロリムス、エベロリムス、およびデフォロリムスから選択されるmTOR阻害薬である、請求項20に記載の方法。
【請求項２２】
治療すべき癌が、肺癌、肉腫、悪性メラノーマ、胸膜中皮腫、膀胱癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞癌、乳癌、結腸直腸癌、腎臓癌、食道癌、副腎癌、耳下腺癌、頭部および頸部の癌、子宮頸部癌、中皮腫、白血病、およびリンパ腫から選択される、請求項1から21のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
請求項1から22のいずれか一項に記載の方法のための薬物を製造するための、PM00104または薬学的に許容できるその塩の使用。
【請求項２４】
請求項1から22のいずれか一項に記載の方法のための薬物を製造するための、抗腫瘍白金配位錯体、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害薬、アントラサイクリン、トポイソメラーゼIおよび/またはII阻害薬、抗腫瘍モノクローナル抗体、mTOR阻害薬、ならびにチロシンキナーゼ阻害薬から選択される抗癌薬の使用。
【請求項２５】
請求項1から22のいずれか一項に記載の方法のための、PM00104または薬学的に許容できるその塩。
【請求項２６】
請求項1から22のいずれか一項に記載の方法のための、抗腫瘍白金配位錯体、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害薬、アントラサイクリン、トポイソメラーゼIおよび/またはII阻害薬、抗腫瘍モノクローナル抗体、mTOR阻害薬、ならびにチロシンキナーゼ阻害薬から選択される抗癌薬。
【請求項２７】
一剤形のPM00104もしくは薬学的に許容できるその塩、ならびに/または抗腫瘍白金配位錯体、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害薬、アントラサイクリン、トポイソメラーゼIおよび/もしくはII阻害薬、抗腫瘍モノクローナル抗体、mTOR阻害薬、およびチロシンキナーゼ阻害薬から選択される一剤形の別の抗癌薬、ならびに請求項1から22のいずれか一項に記載の方法において両方の薬物を併用して用いるための指示を含む、癌の治療において用いるためのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、PM00104の、他の抗癌薬、とりわけ抗腫瘍白金配位錯体、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害薬、アントラサイクリン、トポイソメラーゼIおよび/またはII阻害薬、抗腫瘍モノクローナル抗体、mTOR阻害薬、ならびにチロシンキナーゼ阻害薬から選択される他の抗癌薬との併用に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌は、身体の一部分における細胞が制御不能に増殖し始める場合に発生する。多くの種類の癌が存在するが、これらは全て、異常な細胞の制御不能の増殖から生じるものである。癌細胞は近傍の組織に侵入することができ、血流およびリンパ系によって身体の他の部分に広がり得る。癌にはいくつかの主要なタイプがある。癌腫は悪性の新生物であり、上皮細胞から生じる、非制御で進行性の異常な増殖である。上皮細胞は、器官、血管の内層および他の小腔を含めた身体の内側および外側表面を覆っている。肉腫は、骨、軟骨、脂肪、筋肉、血管、または他の結合組織もしくは支持組織における細胞から生じる癌である。白血病は、骨髄などの血液形成組織において生じる癌であり、多数の異常な血液細胞の生成および血流への侵入を引き起こす。リンパ腫および多発性骨髄腫は、免疫系の細胞から生じる癌である。
【０００３】
さらに、癌は侵襲性であり、周囲の組織に浸潤し、転移を生じる傾向がある。癌は周囲の組織中に直接拡散することができ、身体の他の部分にリンパ系および循環系によって拡散することもある。
【０００４】
癌には、局在性の疾患に対する外科手術および放射線照射、ならびに化学療法を含めた多くの治療が利用可能である。しかし、多くの癌のタイプに対して利用可能な治療の有効性は限られており、臨床上の利点を示す、新しい、改善された形態の治療が必要とされている。これは、特に、進行および/もしくは転移疾患を呈する患者にとって、ならびに耐性の獲得により、または付随する毒性による治療法の投与における限界により、無効または非認容性となった、確立された治療法で以前に治療された後に進行性の疾患を再発する患者にとって当てはまる。
【０００５】
1950年代以来、癌の化学療法上のマネジメントにおいて著しい進歩がなされている。残念なことに、全癌患者の50%を超える患者は、治療に最初に反応した後、最初の治療法に反応せず、または再発を経験し、進行性の転移疾患により最終的に死亡する。したがって、新規な抗癌薬剤のデザインおよび発見に持続的に取り組むことは決定的に重要である。
【０００６】
理想的な抗腫瘍薬は、非癌細胞に対するその毒性に比べて広い指標で癌細胞を選択的に死滅させ、また、薬物への長期間曝露の後でも癌細胞に対するその有効性を維持するものであろう。残念なことに、知られている薬剤での現在の化学療法には、理想的なプロファイルを有するものはない。殆どは非常に狭い治療指標を有し、さらに、癌細胞は、わずかに致死量以下の濃度の化学療法薬剤に曝露されるとそのような薬剤に対する耐性を発生し、かなりしばしば他の抗腫瘍薬剤のいくつかに対して交叉耐性を発生することがある。
【０００７】
PM00104は、ジョルマイシンおよびレニエラマイシン、ならびにまたサフラシンおよびサフラマイシン化合物に関連するアルカロイドである。ジョルマイシンは、皮膚から、および太平洋の裸鰓亜目のブチウミウシ(Jorunna funebris)の粘液から単離された天然化合物である(Fontana A.ら、Tetrahedron (2000)、56、7305〜8頁)。さらに、レニエラマイシンのファミリーは、海綿および被嚢類から単離されると開示されている(James M.F.ら、J. Am. Chem. Soc. (1982)、104、265〜269頁;Oku N.ら、Journal Natural Products (2003)、66、1136〜9頁)。サフラシンおよびサフラマイシン化合物は、Manzanares I.ら、Curr. Med. Chem. Anti-Cancer Agents (2001)、1、257〜276頁、ならびにWO00/18233およびWO 01/87894に開示されている。
【０００８】
PM00104は、固形腫瘍および非固形腫瘍の細胞系に対して著しいin vitro活性を実証し、ならびに乳房および前立腺など、マウスにおいて異種移植したいくつかのヒト細胞系において著しいin vivo活性を実証している。PM00104の作用機序に対する予備的な洞察は、細胞サイクルの変化、DNA結合特性、および転写阻害を示唆していた。この化合物は以下の化学構造を有する。
【０００９】
【化１】
2011520921.tif 000002
【００１０】
PM00104のさらなる詳細は、WO01/87894を参照されたい。さらに、PM00104の医薬組成物、ならびに投与の投与量およびスケジュールに関しては、とりわけ参照によって本明細書に援用されるWO2007/052076およびWO2008/135792を参照されたい。
【００１１】
癌は、動物およびヒトにおける主な死因であるので、癌に罹患している患者に投与すべき安全かつ有効な治療法を得るために、いくつかの努力がなされ、依然として努力がなされつつある。本発明が解決すべき問題は、癌の治療に有用である抗癌の治療法を提供することである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】WO00/18233
【特許文献２】WO01/87894
【特許文献３】WO2007/052076
【特許文献４】WO2008/135792
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Fontana A.ら、Tetrahedron (2000)、56、7305〜8頁
【非特許文献２】James M.F.ら、J. Am. Chem. Soc. (1982)、104、265〜269頁
【非特許文献３】Oku N.ら、Journal Natural Products (2003)、66、1136〜9頁
【非特許文献４】Manzanares I.ら、Curr. Med. Chem. Anti-Cancer Agents (2001)、1、257〜276頁
【非特許文献５】Burger「Medicinal Chemistry and Drug Discovery」第6版(Donald J. Abraham編集、2001、Wiley)
【非特許文献６】「Design and Applications of Prodrugs」(H. Bundgaard編集、1985、Harwood Academic Publishers)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、PM00104が他の抗癌薬剤、とりわけ抗腫瘍白金配位錯体、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害薬、アントラサイクリン、トポイソメラーゼIおよび/またはII阻害薬、抗腫瘍モノクローナル抗体、mTOR阻害薬、ならびにチロシンキナーゼ阻害薬から選択される他の抗癌薬の抗腫瘍活性を増強し、したがってPM00104および他の抗癌薬剤が、癌の治療に対する併用療法において上首尾に用いられ得ることを確立するものである。
【００１５】
したがって、本発明は、併用療法を用いた癌の治療のための医薬組成物、キット、方法、および併用療法のための薬物の製造におけるPM00104の使用を目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明の一態様にしたがって、本発明者らは、PM00104または薬学的に許容できるその塩をベースにした、および別の抗癌薬を用いた癌の治療に有効な併用療法を提供する。
【００１７】
別の一実施形態において、本発明は、PM00104または薬学的に許容できるその塩の治療有効量、ならびにPM00104を投与する前に、間に、または後に投与される治療有効量の別の抗癌薬を、そのような治療を必要とする患者に投与するステップを含む、癌を治療する方法を包含する。2つの薬物が同じ組成物の部分を形成してもよく、または同時に、もしくは異なる時間に投与するための別々の組成物として提供されてもよい。
【００１８】
別の一態様において、本発明は、PM00104または薬学的に許容できるその塩の治療有効量を、それを必要とする患者に投与するステップを含む、癌の治療における抗癌薬の治療有効性を増大または増強する方法を包含する。PM00104を、他の抗癌薬を投与する前に、間に、または後に投与する。
【００１９】
別の一実施形態において、本発明は、別の抗癌薬との併用療法において、癌を治療するための薬物を製造するための、PM00104または薬学的に許容できるその塩の使用を包含する。
【００２０】
さらなる一態様において、本発明は、癌の治療のための併用療法において用いるための、PM00104または薬学的に許容できるその塩、および/または別の抗癌薬、ならびに薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物を包含する。
【００２１】
本発明は、一剤形のPM00104または薬学的に許容できるその塩、および/または一剤形の別の抗癌薬、および両方の薬物を併用において用いるための指示を含む、癌の治療において用いるためのキットも包含する。
【００２２】
好ましい一態様において、本発明は、PM00104または薬学的に許容できるその塩の、別の抗癌薬との相乗的併用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】Hs746T細胞におけるPM00104およびシスプラチン併用の阻害効果を示す図である。
【図２】AGS細胞におけるPM00105およびシスプラチン併用の阻害効果を示す図である。
【図３】HGC-27細胞におけるPM00106およびシスプラチン併用の阻害効果を示す図である。
【図４】Hs746T細胞(図4)におけるPM00104およびSN38併用の阻害効果を示す図である。
【図５】AGS細胞におけるPM00104およびSN39併用の阻害効果を示す図である。
【図６】HGC-27細胞におけるPM00104およびSN40併用の阻害効果を示す図である。
【図７】Hs746T細胞におけるPM00104および5-FU併用の阻害効果を示す図である。
【図８】AGS細胞におけるPM00104および6-FU併用の阻害効果を示す図である。
【図９】HGC-27細胞におけるPM00104および7-FU併用の阻害効果を示す図である。
【図１０】Hs746T細胞におけるPM00104およびドキソルビシン併用の阻害効果を示す図である。
【図１１】AGS細胞におけるPM00105およびドキソルビシン併用の阻害効果を示す図である。
【図１２】HGC-27細胞におけるPM00106およびドキソルビシン併用の阻害効果を示す図である。
【図１３】Hs746T細胞におけるPM00104およびドセタキセル併用の阻害効果を示す図である。
【図１４】AGS細胞におけるPM00105およびドセタキセル併用の阻害効果を示す図である。
【図１５】HGC-27細胞におけるPM00106およびドセタキセル併用の阻害効果を示す図である。
【図１６】Hs746T細胞におけるPM00104およびオキサリプラチン併用の阻害効果を示す図である。
【図１７】AGS細胞におけるPM00105およびオキサリプラチン併用の阻害効果を示す図である。
【図１８】HGC-27細胞におけるPM00106およびオキサリプラチン併用の阻害効果を示す図である。
【図１９】5637細胞におけるPM00104およびゲムシタビン(Gemzar(登録商標))併用の阻害効果を示す図である。
【図２０】UM-UC-3細胞におけるPM00105およびゲムシタビン(Gemzar(登録商標))併用の阻害効果を示す図である。
【図２１】5637細胞におけるPM00104およびシスプラチン併用の阻害効果を示す図である。
【図２２】UM-UC-3細胞におけるPM00105およびシスプラチン併用の阻害効果を示す図である。
【図２３】BxPC-3細胞におけるPM00104およびゲムシタビン(Gemzar(登録商標))併用の阻害効果を示す図である。
【図２４】PANC-1細胞におけるPM00105およびゲムシタビン(Gemzar(登録商標))併用の阻害効果を示す図である。
【図２５】MIA PaCa-2細胞におけるPM00106およびゲムシタビン(Gemzar(登録商標))併用の阻害効果を示す図である。
【図２６】SW1990細胞におけるPM00107およびゲムシタビン(Gemzar(登録商標))併用の阻害効果を示す図である。
【図２７】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ゲムシタビン(140mg/kg/日)、またはPM00104プラスゲムシタビンで治療したマウスにおけるMIA PaCa-2腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図２８】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、エルロチニブ(100mg/kg/日)、またはPM00104プラスエルロチニブで治療したマウスにおけるMIA PaCa-2腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図２９】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、エルロチニブ(50mg/kg/日)、またはPM00104プラスエルロチニブで治療したマウスにおけるMIA PaCa-2腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図３０】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ゲムシタビン(180mg/kg/日)、またはPM00104プラスゲムシタビンで治療したマウスにおけるBxPC-3腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図３１】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、エルロチニブ(50mg/kg/日)、またはPM00104プラスエルロチニブで治療したマウスにおけるBxPC-3腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図３２】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、エルロチニブ(30mg/kg/日)、またはPM00104プラスエルロチニブで治療したマウスにおけるBxPC-3腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図３３】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、エルロチニブ(15mg/kg/日)、またはPM00104プラスエルロチニブで治療したマウスにおけるBxPC-3腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図３４】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、シスプラチン(5mg/kg/日)、またはPM00104プラスシスプラチンで治療したマウスにおけるUM-UC-3腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図３５】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ゲムシタビン(180mg/kg/日)、またはPM00104プラスゲムシタビンで治療したマウスにおけるUM-UC-3腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図３６】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、パクリタキセル(15mg/kg/日)、またはPM00104プラスパクリタキセルで治療したマウスにおけるUM-UC-3腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図３７】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、シスプラチン(5mg/kg/日)、またはPM00104プラスシスプラチンで治療したマウスにおけるHs746T腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図３８】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、パクリタキセル(10mg/kg/日)、またはPM00104プラスパクリタキセルで治療したマウスにおけるHs746T腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図３９】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、5-FU(50/100mg/kg/日)、またはPM00104プラス5-FUで治療したマウスにおけるHs746T腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図４０】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、イリノテカン(20mg/kg/日)、またはPM00104プラスイリノテカンで治療したマウスにおけるHs746T腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図４１】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ドキソルビシン(6mg/kg/日)、またはPM00104プラスドキソルビシンで治療したマウスにおけるHs746T腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図４２】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ドセタキセル(16mg/kg/日)、またはPM00104プラスドセタキセルで治療したマウスにおけるHs746T腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図４３】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ドセタキセル(8mg/kg/日)、またはPM00104プラスドセタキセルで治療したマウスにおけるHs746T腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図４４】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、オキサリプラチン(8mg/kg/日)、またはPM00104プラスオキサリプラチンで治療したマウスにおけるHs746T腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図４５】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、オキサリプラチン(4mg/kg/日)、またはPM00104プラスオキサリプラチンで治療したマウスにおけるHs746T腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図４６】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、5-FU(100mg/kg/日)、またはPM00104プラス5-FUで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図４７】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、5-FU(50mg/kg/日)、またはPM00104プラス5-FUで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図４８】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ドセタキセル(16mg/kg/日)、またはPM00104プラスドセタキセルで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図４９】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ドセタキセル(8mg/kg/日)、またはPM00104プラスドセタキセルで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図５０】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、オキサリプラチン(8mg/kg/日)、またはPM00104プラスオキサリプラチンで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図５１】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、オキサリプラチン(4mg/kg/日)、またはPM00104プラスオキサリプラチンで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図５２】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ドキソルビシン(6mg/kg/日)、またはPM00104プラスドキソルビシンで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図５３】対照、PM00104(0.45mg/kg/日)、ドキソルビシン(6mg/kg/日)、またはPM00104プラスドキソルビシンで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図５４】対照、PM00104(0.23mg/kg/日)、ドキソルビシン(6mg/kg/日)、またはPM00104プラスドキソルビシンで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図５５】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、パクリタキセル(12.5mg/kg/日)、またはPM00104プラスパクリタキセルで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図５６】対照、PM00104(0.45mg/kg/日)、パクリタキセル(12.5mg/kg/日)、またはPM00104プラスパクリタキセルで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図５７】対照、PM00104(0.23mg/kg/日)、パクリタキセル(12.5mg/kg/日)、またはPM00104プラスパクリタキセルで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図５８】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、シスプラチン(5mg/kg/日)、またはPM00104プラスシスプラチンで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図５９】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、シスプラチン(3mg/kg/日)、またはPM00104プラスシスプラチンで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図６０】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、イリノテカン(18mg/kg/日)、またはPM00104プラスイリノテカンで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図６１】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、イリノテカン(10mg/kg/日)、またはPM00104プラスイリノテカンで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図６２】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、パクリタキセル(25mg/kg/日)、またはPM00104プラスパクリタキセルで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図６３】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、パクリタキセル(12.5mg/kg/日)、またはPM00104プラスパクリタキセルで治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図６４】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ソラフェニブ(60mg/kg/日)、またはPM00104プラスソラフェニブで治療したマウスにおけるHepG2腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図６５】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ソラフェニブ(30mg/kg/日)、またはPM00104プラスソラフェニブで治療したマウスにおけるHepG2腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図６６】対照、PM00104(0.6mg/kg/日)、ソラフェニブ(60mg/kg/日)、またはPM00104プラスソラフェニブで治療したマウスにおけるHepG2腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図６７】対照、PM00104(0.6mg/kg/日)、ソラフェニブ(30mg/kg/日)、またはPM00104プラスソラフェニブで治療したマウスにおけるHepG2腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図６８】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ソラフェニブ(60mg/kg/日)、またはPM00104プラスソラフェニブで治療したマウスにおけるPLC/PRF/5腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図６９】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ソラフェニブ(30mg/kg/日)、またはPM00104プラスソラフェニブで治療したマウスにおけるPLC/PRF/5腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図７０】対照、PM00104(0.45mg/kg/日)、ソラフェニブ(60mg/kg/日)、またはPM00104プラスソラフェニブで治療したマウスにおけるPLC/PRF/5腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図７１】対照、PM00104(0.45mg/kg/日)、ソラフェニブ(30mg/kg/日)、またはPM00104プラスソラフェニブで治療したマウスにおけるPLC/PRF/5腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図７２】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ベバシズマブ(5mg/kg/日)、またはPM00104プラスベバシズマブで治療したマウスにおけるSK-OV-3腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図７３】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ベバシズマブ(2.5mg/kg/日)、またはPM00104プラスベバシズマブで治療したマウスにおけるSK-OV-3腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図７４】肺癌細胞系:A-549細胞におけるゲムシタビンと併用のPM00104の阻害効果を示す図である。
【図７５】肺癌細胞系:NCI-H460細胞におけるゲムシタビンと併用のPM00105の阻害効果を示す図である。
【図７６】肺癌細胞系:NCI-H23細胞におけるゲムシタビンと併用のPM00106の阻害効果を示す図である。
【図７７】肺癌細胞系:A-549細胞におけるパクリタキセルと併用のPM00104の阻害効果を示す図である。
【図７８】肺癌細胞系:NCI-H460細胞におけるパクリタキセルと併用のPM00105の阻害効果を示す図である。
【図７９】肺癌細胞系:NCI-H23細胞におけるパクリタキセルと併用のPM00106の阻害効果を示す図である。
【図８０】肺癌細胞系:A-549細胞におけるシスプラチンと併用のPM00104の阻害効果を示す図である。
【図８１】肺癌細胞系:NCI-H460細胞におけるシスプラチンと併用のPM00105の阻害効果を示す図である。
【図８２】肺癌細胞系:NCI-H23細胞におけるシスプラチンと併用のPM00106の阻害効果を示す図である。
【図８３】乳癌細胞系:MDA-MB-231細胞におけるゲムシタビンと併用のPM00104の阻害効果を示す図である。
【図８４】乳癌細胞系:BT-474細胞におけるゲムシタビンと併用のPM00105の阻害効果を示す図である。
【図８５】乳癌細胞系:MCF-7細胞におけるゲムシタビンと併用のPM00106の阻害効果を示す図である。
【図８６】乳癌細胞系:MDA-MB-231細胞におけるパクリタキセルと併用のPM00104の阻害効果を示す図である。
【図８７】乳癌細胞系:BT-474細胞におけるパクリタキセルと併用のPM00105の阻害効果を示す図である。
【図８８】乳癌細胞系:MCF-7細胞におけるパクリタキセルと併用のPM00106の阻害効果を示す図である。
【図８９】乳癌細胞系:MDA-MB-231細胞におけるドキソルビシンと併用のPM00104の阻害効果を示す図である。
【図９０】乳癌細胞系:BT-474細胞におけるドキソルビシンと併用のPM00105の阻害効果を示す図である。
【図９１】乳癌細胞系:MCF-7細胞におけるドキソルビシンと併用のPM00106の阻害効果を示す図である。
【図９２】結腸癌細胞系:HCT-116細胞における5-フルオロウラシル(5-FU)と併用のPM00104の阻害効果を示す図である。
【図９３】結腸癌細胞系:LoVo細胞における5-フルオロウラシル(5-FU)と併用のPM00105の阻害効果を示す図である。
【図９４】結腸癌細胞系:HT-29細胞における5-フルオロウラシル(5-FU)と併用のPM00106の阻害効果を示す図である。
【図９５】結腸癌細胞系:HCT-116細胞におけるオキサリプラチンと併用のPM00104の阻害効果を示す図である。
【図９６】結腸癌細胞系:LoVo細胞におけるオキサリプラチンと併用のPM00105の阻害効果を示す図である。
【図９７】結腸癌細胞系:HT-29細胞におけるオキサリプラチンと併用のPM00106の阻害効果を示す図である。
【図９８】結腸癌細胞系:HCT-116細胞におけるイリノテカンと併用のPM00104の阻害効果を示す図である。
【図９９】結腸癌細胞系:LoVo細胞におけるイリノテカンと併用のPM00105の阻害効果を示す図である。
【図１００】結腸癌細胞系:HT-29細胞におけるイリノテカンと併用のPM00106の阻害効果を示す図である。
【図１０１】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ベバシズマブ(5mg/kg/日)、またはPM00104プラスベバシズマブで治療したマウスにおけるNCI-H460腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図１０２】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ベバシズマブ(2.5mg/kg/日)、またはPM00104プラスベバシズマブで治療したマウスにおけるNCI-H460腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図１０３】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、テムシロリムス(20mg/kg/日)、またはPM00104プラステムシロリムスで治療したマウスにおけるNCI-H460腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図１０４】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、テムシロリムス(10mg/kg/日)、またはPM00104プラステムシロリムスで治療したマウスにおけるNCI-H460腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図１０５】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ゲムシタビン(180mg/kg/日)、またはPM00104プラスゲムシタビンで治療したマウスにおけるNCI-H460腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図１０６】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ゲムシタビン(90mg/kg/日)、またはPM00104プラスゲムシタビンで治療したマウスにおけるNCI-H460腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図１０７】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ゲムシタビン(180mg/kg/日)、またはPM00104プラスゲムシタビンで治療したマウスにおけるCaLu-6腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図１０８】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ゲムシタビン(90mg/kg/日)、またはPM00104プラスゲムシタビンで治療したマウスにおけるCaLu-6腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図１０９】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ペメトレキセド(125mg/kg/日)、またはPM00104プラスペメトレキセドで治療したマウスにおけるCaLu-6腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図１１０】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ペメトレキセド(100mg/kg/日)、またはPM00104プラスペメトレキセドで治療したマウスにおけるCaLu-6腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図１１１】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ペメトレキセド(125mg/kg/日)、またはPM00104プラスペメトレキセドで治療したマウスにおけるNCI-H460腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図１１２】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ペメトレキセド(100mg/kg/日)、またはPM00104プラスペメトレキセドで治療したマウスにおけるNCI-H460腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図１１３】対照、PM00104(0.9mg/kg/日)、ペメトレキセド(100mg/kg/日)、またはPM00104プラスペメトレキセドで治療したマウスにおけるH-Meso-1腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【図１１４】対照、PM00104(0.45mg/kg/日)、ペメトレキセド(100mg/kg/日)、またはPM00104プラスペメトレキセドで治療したマウスにおけるH-Meso-1腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明者らは、PM00104と他の抗癌薬を併用した場合、PM00104はこれらの抗癌薬の抗癌活性を大きく増強することを見出した。したがって、本発明は、PM00104または薬学的に許容できるその塩の、別の抗癌薬との併用をベースにした癌の効果的な治療の提供を目的とする。
【００２５】
別の一態様において、本発明は、PM00104または薬学的に許容できるその塩、および別の抗癌薬を用いる相乗的併用に関する。このような相乗的併用は、実施例1から24において説明するものを含めた本明細書に記載する方法を適用することによって、および相乗的併用に対する結果を分析することによって得ることができる。
【００２６】
本出願における「癌」は、腫瘍、新生物、および悪性の組織または細胞を原因として有するあらゆる他の悪性疾患を含むことを意味する。
【００２７】
本明細書で用いられる「治療する」の語は、別段の指摘がなければ、疾患の症状もしくは病理学的根拠を逆転し、軽減し、その進行を阻害し、減弱することを意味し、またはそれに対してそのような語が適用する障害もしくは状態、またはそのような障害もしくは状態の1つもしくは複数の症状を防止することを意味する。本明細書で用いられる「治療」の語は、別段の指摘がなければ、「治療する」について直前に定義した通りの治療の行為を意味する。
【００２８】
本明細書を通して用いられる「併用」の語は、癌に罹患している患者に、同時に、または異なる時間に、同じまたは別の薬剤製剤において、言及する治療用薬剤を投与することを包含することを意味する。治療用薬剤を異なる時間に投与する場合、これらを、生じるべき増強的な、または相乗的な反応を提供するのに十分に近い時間において投与しなければならない。
【００２９】
別の一態様において、本発明は、PM00104または薬学的に許容できるその塩を、別の抗癌薬と一緒に用いる併用療法によって癌を効果的に治療するための薬物を製造するための、PM00104または薬学的に許容できるその塩の使用を目的とする。
【００３０】
さらなる一態様において、本発明は、治療有効量の別の抗癌薬との併用における、PM00104または薬学的に許容できるその塩の治療有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与するステップを含む、癌を治療する方法を目的とする。
【００３１】
腫瘍のタイプおよび疾患の発生段階に応じて、本発明の治療方法の抗癌効果は、それだけには限定されないが、腫瘍の増殖の阻害、腫瘍の増殖の遅延、腫瘍の退行、腫瘍の縮小、腫瘍のサイズおよび/または腫瘍マーカーの低減、治療の休止時の腫瘍の再増殖までの時間の増大、疾患の進行の緩徐化、および転移の防止を含む。本発明の治療方法を、そのような治療を必要とするヒト患者などの患者に投与する場合、前記治療方法は、抗癌効果の程度、反応速度、疾患の進行までの時間、または生存率などによって測定してある効果を生成することが予想される。特に、本発明の治療方法は、ヒト患者、とりわけ再発患者、または以前の化学療法に対して抵抗性の患者に適する。第一線の治療法も想定される。
【００３２】
上記に言及したように、PM00104は、海洋性化合物であるジョルマイシンおよびレニエラマイシン、ならびにまたサフラシンおよびサフラマイシン化合物に関連するアルカロイドであり、以下の構造を有する。
【００３３】
【化２】
2011520921.tif 000003
【００３４】
「PM00104」の語は、本明細書において、患者への投与時に本明細書に記載する化合物を(直接的もしくは間接的に)提供することが可能なあらゆる薬学的に許容される塩、溶媒和化合物、水和物、プロドラッグ、またはあらゆる他の化合物を網羅するものとされる。塩、溶媒和化合物、水和物、およびプロドラッグの調製は、当技術分野において知られている方法によって行われてよい。
【００３５】
薬学的に許容される塩は、従来の化学方法によって、塩基性または酸性の部分を含む親化合物から合成されてよい。一般的に、このような塩は、例えば、これらの化合物の遊離の酸または塩基の形態を、水中または有機溶媒中または2つの混合液中、化学量論量の好適な塩基または酸と反応させることによって調製される。一般的に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルなどの非水性の媒体が好ましい。酸付加塩の例には、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩などの鉱酸付加塩、ならびに例えば、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、およびp-トルエンスルホン酸塩などの有機酸付加塩が含まれる。アルカリ付加塩の例には、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、およびアンモニウム塩などの無機塩、ならびに、例えば、エチレンジアミン、エタノールアミン、N,N-ジアルキレンエタノールアミン、トリエタノールアミン、および塩基性アミノ酸塩などの有機アルカリ塩が含まれる。
【００３６】
PM00104のプロドラッグであるあらゆる化合物が、本発明の範囲および精神の範囲内である。「プロドラッグ」の語は、その最も広い意味において用いられ、in vivoでPM00104に変換される誘導体を包含する。プロドラッグは、生物学的条件下で、加水分解、酸化、または他の方法で反応してPM00104をもたらすことができる。プロドラッグの例には、それだけには限定されないが、生物加水分解性のアミド、生物加水分解性のエステル、生物加水分解性のカルバメート、生物加水分解性のカーボネート、生物加水分解性のウレイド、および生物加水分解性のホスフェート類似体などの生物加水分解性の部分を含むPM00104の誘導体および代謝物が含まれる。プロドラッグは、典型的には、Burger「Medicinal Chemistru and Drug Discovery」第6版(Donald J. Abraham編集、2001、Wiley)、および「Design and Applications of Prodrugs」(H. Bundgaard編集、1985、Harwood Academic Publishers)によって記載されているものなど、よく知られている方法を用いて調製することができる。
【００３７】
さらに、本明細書に言及されるあらゆる薬物は、遊離の化合物として、または溶媒和化合物(例えば、水和物)としてのいずれかで、結晶の形態であってもよく、両方の形態とも本発明の範囲内であるものとされる。溶媒和の方法は、当技術分野内で一般的に知られている。
【００３８】
本発明にしたがって用いるためのPM00104は、参照によって本明細書に援用されるWO 01/87894において開示されている合成のプロセスにしたがって調製することができる。
【００３９】
用いることができるPM00104の医薬組成物には、静脈内投与に適する賦形剤と一緒の、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥組成物などが含まれる。好ましくは、PM00104は無菌の凍結乾燥製品として供給および貯蔵されてよく、治療上の使用に妥当な製剤中にPM00104および賦形剤を含んでいる。とりわけ、妥当なpHに緩衝化されたショ糖およびリン酸塩を含む製剤が好ましい。PM00104製剤に対するさらなる指導は、その全文が参照によって本明細書に援用されるWO 2007/052076に示される。
【００４０】
PM00104、またはその医薬組成物、または化合物を含む医薬組成物の投与は、静脈内注入によるのが好ましい。最高72時間、より好ましくは1時間と24時間の間の注入時間を用いることができ、約1時間、約3時間、または約24時間のいずれかが最も好ましい。病院に一夜入院せずに治療を行えるようにする短い注入時間が特に望ましい。しかし、注入は、所望により、約24時間、またはそれより長くてもよい。
【００４１】
PM00104の投与は周期的に行うのが好ましい。好ましい投与方法において、PM00104の静脈内注入を、典型的には、各サイクルの第1日目に患者に投与し、次いで、サイクルの残りの間に患者を回復させる。各サイクルの好ましい持続時間は、典型的には3週または4週であり、必要に応じて複数のサイクルを与えてもよい。投与の遅延および/または投与量の低減、ならびにスケジュール調整を個々の患者の状態および治療に対する認容性に応じて適宜行う。PM00104投与および投与量に対するさらなる指導には、例えば、詳しい参照によって本明細書に援用される、WO 2008/135792を参照されたい。
【００４２】
本発明において、PM00104、または薬学的に許容されるその塩の、肺癌、肉腫、悪性メラノーマ、胸膜中皮腫、膀胱癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞癌、乳癌、結腸直腸癌、腎臓癌、食道癌、副腎癌、耳下腺癌、頭部および頸部の癌、子宮頸部癌、中皮腫、白血病、およびリンパ腫から選択される癌の治療における別の抗癌薬との併用がとりわけ好ましい。
【００４３】
さらに、PM00104、または薬学的に許容されるその塩の、癌の治療における、より詳しくは、肺癌、肉腫、悪性メラノーマ、胸膜中皮腫、膀胱癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞癌、乳癌、結腸直腸癌、腎臓癌、食道癌、副腎癌、耳下腺癌、頭部および頸部の癌、子宮頸部癌、中皮腫、白血病、およびリンパ腫から選択される癌の治療における、抗腫瘍白金配位錯体、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害薬、アントラサイクリン、トポイソメラーゼIおよび/またはII阻害薬、抗腫瘍モノクローナル抗体、mTOR阻害薬、ならびにチロシンキナーゼ阻害薬から選択される別の抗癌薬との併用がとりわけ好ましい。
【００４４】
好ましい一実施形態において、本発明は、PM00104、または薬学的に許容されるその塩の、癌の治療における、より詳しくは、胃癌、膀胱癌、肺癌、および結腸直腸癌から選択される癌の治療における抗腫瘍白金配位錯体との併用を目的とする。この化学療法の群には、それだけには限定されないが、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、BBR3464、サトラプラチン、テトラプラチン、オルミプラチン、およびイプロプラチンが含まれる。とりわけ好ましいのは、PM00104または薬学的に許容できるその塩の、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、BBR3464、サトラプラチン、テトラプラチン、オルミプラチン(ormiplatin)、およびイプロプラチンとの併用であり、さらにより好ましいのは、癌の治療における、より詳しくは、胃癌、膀胱癌、肺癌、および結腸直腸癌から選択される癌の治療におけるシスプラチンおよびオキサリプラチンとの併用である。
【００４５】
別の好ましい一実施形態において、本発明は、PM00104、または薬学的に許容されるその塩の、癌の治療における、より詳しくは、胃癌、膵臓癌、膀胱癌、結腸直腸癌、肺癌、乳癌、および中皮腫から選択される癌の治療における代謝拮抗薬との併用を目的とする。この化学療法群には、それだけには限定されないが、5-フルオロウラシル、ゲムシタビン、シタラビン、カペシタビン、デシタビン、フロクスウリジン、6-メルカプトプリン、メトトレキセート、フルダラビン、アミノプテリン、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、およびチオグアニンが含まれる。とりわけ好ましいのは、PM00104または薬学的に許容できるその塩の、5-フルオロウラシル、ゲムシタビン、シタラビン、カペシタビン、デシタビン、フロクスウリジン、6-メルカプトプリン、メトトレキセート、フルダラビン、アミノプテリン、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、およびチオグアニンとの併用であり、さらにより好ましいのは、癌の治療における、より詳しくは、胃癌、膵臓癌、膀胱癌、結腸直腸癌、肺癌、乳癌、および中皮腫から選択される癌の治療における、5-フルオロウラシル、ペメトレキセド、およびゲムシタビンとの併用である。
【００４６】
別の好ましい一実施形態において、本発明は、PM00104、または薬学的に許容されるその塩の、癌の治療における、より詳しくは、胃癌、膀胱癌、肺癌、および乳癌から選択される癌の治療における有糸分裂阻害薬との併用を目的とする。この化学療法群には、それだけには限定されないが、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、およびビノレルビンが含まれる。PM00104または薬学的に許容できるその塩の、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、およびビノレルビンとの併用がとりわけ好ましく、癌の治療における、より詳しくは、胃癌、膀胱癌、肺癌、および乳癌から選択される癌の治療における、パクリタキセルおよびドセタキセルとの併用がさらにより好ましい。
【００４７】
別の好ましい一実施形態において、本発明は、PM00104、または薬学的に許容されるその塩の、癌の治療における、より詳しくは、胃癌および乳癌の治療におけるアントラサイクリンとの併用を目的とする。この化学療法群には、それだけには限定されないが、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、ピクサントロン、およびバルルビシンが含まれる。PM00104または薬学的に許容できるその塩の、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、ピクサントロン、およびバルルビシンとの併用がとりわけ好ましく、癌の治療における、より詳しくは、胃癌および乳癌の治療における、ドキソルビシンとの併用がさらにより好ましい。
【００４８】
別の好ましい一実施形態において、本発明は、PM00104、または薬学的に許容されるその塩の、癌の治療における、より詳しくは、胃癌および結腸直腸癌の治療におけるトポイソメラーゼIおよび/またはII阻害薬との併用を目的とする。この化学療法群には、それだけには限定されないが、トポテカン、SN-38、イリノテカン、カンプトテシン、ルビテカン、エトポシド、およびテニポシドが含まれる。PM00104または薬学的に許容できるその塩の、トポテカン、SN-38、イリノテカン、カンプトテシン、ルビテカン、エトポシド、およびテニポシドとの併用がとりわけ好ましく、癌の治療における、より詳しくは、胃癌および結腸直腸癌の治療における、SN-38およびイリノテカンとの併用がさらにより好ましい。
【００４９】
別の好ましい一実施形態において、本発明は、PM00104、または薬学的に許容されるその塩の、癌の治療における、より詳しくは、卵巣癌および肺癌の治療における抗腫瘍モノクローナル抗体との併用を目的とする。この化学療法群には、それだけには限定されないが、ベバシズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、トラスツズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、アレムツズマブ、およびゲムツズマブが含まれる。PM00104または薬学的に許容できるその塩の、ベバシズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、トラスツズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、アレムツズマブ、およびゲムツズマブとの併用がとりわけ好ましく、癌の治療における、より詳しくは、卵巣癌および肺癌の治療における、ベバシズマブとの併用がさらにより好ましい。
【００５０】
別の好ましい一実施形態において、本発明は、PM00104、または薬学的に許容されるその塩の、癌の治療における、より詳しくは、肝細胞癌および膵臓癌から選択される癌の治療におけるチロシンキナーゼ阻害薬との併用を目的とする。この化学療法群には、それだけには限定されないが、エルロチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ、ボスチニブ、セジラニブ、ダサチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、カネルチニブ、ラパチニブ、レスタウルチニブ、ニロチニブ、セマキサニブ、スニチニブ、およびバンデタニブが含まれる。PM00104または薬学的に許容できるその塩の、エルロチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ、ボスチニブ、セジラニブ、ダサチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、カネルチニブ、ラパチニブ、レスタウルチニブ、ニロチニブ、セマキサニブ、スニチニブ、およびバンデタニブとの併用がとりわけ好ましく、癌の治療における、より詳しくは、肝細胞癌および膵臓癌から選択される癌の治療における、エルロチニブおよびソラフェニブとの併用がさらにより好ましい。
【００５１】
別の好ましい一実施形態において、本発明は、PM00104、または薬学的に許容されるその塩の、癌の治療における、より詳しくは、肺癌の治療におけるmTOR阻害薬との併用を目的とする。この化学療法群には、それだけには限定されないが、テムシロリムス、シロリムス(ラパマイシン)、エベロリムス、およびデフォロリムスが含まれる。PM00104または薬学的に許容できるその塩の、テムシロリムス、シロリムス(ラパマイシン)、エベロリムス、およびデフォロリムスとの併用がとりわけ好ましく、癌の治療における、より詳しくは、肺癌の治療における、テムシロリムスとの併用がさらにより好ましい。
【００５２】
本発明は、親化合物から、以前に開示されている従来の化学的方法によって合成することができる、本明細書に言及されるあらゆる薬物のあらゆる薬学的に許容される塩を含む。
【００５３】
PM00104または薬学的に許容できるその塩、および他の抗癌薬を、同時に、または異なる時間に投与するための別々の薬物として提供してもよい。好ましくは、PM00104および他の抗癌薬を、異なる時間に投与するための別々の薬物として提供する。別々に、かつ異なる時間に投与する場合、PM00104または他の抗癌薬のいずれかを最初に投与してよい。さらに、両方の薬物を同じ日に、または異なる日に投与してよく、これらは治療サイクルの間、同じスケジュールを用いて、または異なるスケジュールで投与することができる。したがって、本発明の医薬組成物は、単一の薬学的に許容される製剤中に全ての成分(薬物)を含んでいてよい。あるいは、成分を別々に調合し、相互に併用して投与してもよい。当業者にはよく知られている様々な薬学的に許容される製剤を、本発明において用いてもよい。さらに、併用の薬物を、異なる投与経路を用いて投与してもよい。例えば、薬物の1つが、錠剤またはカプセル剤などの経口投与に適する形態であってよく、他の1つが、滅菌液剤、懸濁剤、または乳剤など非経口的注射(静脈内、皮下、筋肉内、血管内、または注入を含む)に適する形態であってよい。あるいは、両方の薬物を同じ投与経路によって投与してもよい。本発明において用いるのに好適な製剤の選択を、投与様式、および組成物の成分の溶解性の特性に基づいて、当業者が日常的に行ってもよい。
【００５４】
併用の化合物の正確な投与量は、特定の製剤、適用様式、ならびに特定の部位、患者、および治療する腫瘍にしたがって変化する。年齢、体重、性別、食事、投与時間、排泄の速度、患者の状態、薬物の併用、反応の感受性、および疾患の重症度などの他の因子を考慮に入れる。投与は、最大耐容投与量内で持続的に、または周期的に行われてよい。
【００５５】
別の一態様において、本発明は、癌の治療における別の抗癌薬と併用してPM00104を投与するためのキットであって、少なくとも1サイクル用の投与量単位における、PM00104または薬学的に許容できるその塩の供給、および両方の薬物を併用して用いるための印刷された指示書を含むキットを目的とする。
【００５６】
関連する一態様において、本発明は、癌の治療において別の抗癌薬と併用してPM00104を投与するためのキットであって、少なくとも1サイクル用の投与量単位における、PM00104または薬学的に許容できるその塩の供給、少なくとも1サイクル用の投与量単位における他の抗癌薬の供給、および両方の薬物を併用して用いるための印刷された指示書を含むキットを目的とする。
【００５７】
別の一態様において、本発明は、癌の治療において別の抗癌薬と併用して用いるための、PM00104または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または賦形剤を含む医薬組成物も提供する。
【００５８】
さらなる一態様において、本発明は、癌の治療において用いるための、PM00104または薬学的に許容できるその塩、別の抗癌薬、および薬学的に許容できる担体または賦形剤を含む医薬組成物も提供する。
【００５９】
別の一態様において、本発明は、別の抗癌薬との併用療法における、癌の治療のための薬物を製造するための、PM00104または薬学的に許容できるその塩の使用をさらに提供する。
【００６０】
関連の一態様において、本発明は、癌の治療のための薬物を製造するための、別の抗癌薬と併用したPM00104または薬学的に許容できるその塩の使用をさらに提供する。
【００６１】
別の一態様において、本発明は、PM00104または薬学的に許容できるその塩の治療有効量を、治療有効量の別の抗癌薬と併用して投与するステップを含む、癌の治療のためのPM00104または薬学的に許容できるその塩を提供する。
【００６２】
別の一態様において、本発明は、治療有効量の別の抗癌薬の投与と併用して、PM00104または薬学的に許容できるその塩の治療有効量を投与するステップを含む、癌を治療するための方法を提供し、併用を一緒に、または別々に投与することができる。本発明の好ましい実施形態において、PM00104または薬学的に許容できるその塩、および他の抗癌薬を、相乗的に有効な量において投与する。
【００６３】
一実施形態において、癌細胞を、PM00104または薬学的に許容できるその塩、および別の抗癌薬の併用と接触させ、または別の方法で治療する。癌細胞は、好ましくはヒトであり、癌腫細胞、肉腫細胞、白血病細胞、およびリンパ腫細胞を含む。より好ましくは、癌細胞は、肺癌、肉腫、悪性メラノーマ、胸膜中皮腫、膀胱癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞癌、乳癌、結腸直腸癌、腎臓癌、食道癌、副腎癌、耳下腺癌、頭部および頸部の癌、子宮頸部癌、中皮腫、白血病、およびリンパ腫の細胞である。特に、癌細胞は、ヒト胃癌細胞、ヒト膀胱癌細胞、およびヒト膵臓癌細胞を含む。さらに、併用は、癌細胞に対して、とりわけ、ヒト胃癌細胞、ヒト膀胱癌細胞、ヒト膵臓癌細胞、ヒト肺癌細胞、ヒト結腸直腸癌細胞、およびヒト乳癌細胞に対して、相乗的な阻害効果を提供する。
【００６４】
例えば、併用は、接触させた癌細胞の増殖または生存を阻害する。接触させなかった癌細胞に比べて、接触させた癌細胞の増殖または生存が低レベルであることは、PM00104または薬学的に許容できるその塩、および癌患者を治療するのに有効であるとして選択された別の抗癌薬の併用を支持するものである。
【００６５】
別の一態様において、本発明は、前記癌細胞を、有効量のPM00104または薬学的に許容できるその塩と接触させることを含む、一緒にまたは別々に別の抗癌薬と併用して、癌細胞の増殖を阻害するための方法を提供する。
【００６６】
別の一態様において、本発明は、前記癌細胞を、PM00104または薬学的に許容できるその塩、および一緒にまたは別々に別の抗癌薬の相乗的併用と接触させることを含む、癌細胞の増殖を阻害するための方法を提供し、前記併用は、(i)別の抗癌薬の非存在下のPM00104または薬学的に許容できるその塩、あるいは(ii)PM00104の非存在下の他の抗癌薬に比べて、癌細胞の増殖に対する阻害の改善を提供する。
【００６７】
別の一態様において、本発明は、癌細胞の増殖を阻害するための別の抗癌薬と併用して用いるための、有効量のPM00104または薬学的に許容できるその塩を含む医薬組成物を提供する。
【００６８】
関連の一態様において、本発明は、癌細胞の増殖を阻害するための、PM00104または薬学的に許容できるその塩、および別の抗癌薬の有効な併用を含む医薬組成物を提供する。
【００６９】
別の一態様において、本発明は、癌細胞の増殖を阻害するための、PM00104または薬学的に許容できるその塩、および別の抗癌薬の相乗的併用を含む医薬組成物を提供し、前記併用は、(i)別の抗癌薬の非存在下における、PM00104または薬学的に許容できるその塩、あるいは(ii)PM02734の非存在下における他の抗癌薬に比べて、癌細胞の増殖に対する阻害の改善を提供する。
【００７０】
別の一実施形態において、PM00104または薬学的に許容できるその塩、および別の抗癌薬の併用は、in vivoで腫瘍の増殖を阻害し、または腫瘍のサイズを低減する。とりわけ、併用は、癌細胞、肉腫細胞、白血病細胞、およびリンパ腫細胞のin vivoの増殖を阻害する。好ましくは、併用は、肺癌、肉腫、悪性メラノーマ、胸膜中皮腫、膀胱癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞癌、乳癌、結腸直腸癌、腎臓癌、食道癌、副腎癌、耳下腺癌、頭部および頸部の癌、子宮頸部癌、中皮腫、白血病、およびリンパ腫の細胞のin vivoの増殖を阻害する。とりわけ、癌細胞は、ヒト胃癌細胞、ヒト膀胱癌細胞、ヒト膵臓癌細胞、ヒト肝細胞癌細胞、ヒト肺癌細胞、ヒト中皮腫細胞、およびヒト卵巣癌細胞を含む。同様に、併用は、in vivoで、癌腫、肉腫、白血病、およびリンパ腫の腫瘍のサイズを低減する。好ましくは、併用は、肺癌、肉腫、悪性メラノーマ、胸膜中皮腫、膀胱癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞癌、乳癌、結腸直腸癌、腎臓癌、食道癌、副腎癌、耳下腺癌、頭部および頸部の癌、子宮頸部癌、中皮腫、白血病、およびリンパ腫のサイズを低減する。特に、併用は、in vivoで、ヒト肝細胞癌、中皮腫、胃、膀胱、膵臓、肺、および卵巣の腫瘍のサイズを低減する。
【００７１】
例えば、併用は、動物モデルにおいて、腫瘍の増殖を阻害し、またはヒト癌異種移植片の、とりわけ、ヒト肝細胞癌、中皮腫、胃、膀胱、膵臓、肺、および卵巣の腫瘍の異種移植片のサイズを低減する。併用で投与した動物モデルにおけるヒト癌異種移植片の増殖の低減、またはサイズの低減は、癌患者を治療するのに有効であるとして、PM00104または薬学的に許容できるその塩、および別の抗癌薬の併用をさらに支持するものである。
【００７２】
本発明の一実施形態にしたがって、腫瘍の増殖の阻害を、2つの薬物(PM00104および別の薬物)を併用する治療の平均腫瘍重量と、他の薬物の単独療法の治療の平均腫瘍重量を比べて評価する。したがって、併用療法の増強の評価および相加性の程度に対する定義および評価基準は以下の通りである。
-増強は、併用療法の反応が、併用療法において用いられるのと同じスケジュールおよび投与量で、単一の薬剤として投与された(単独療法)最も有効な薬物の最良の反応を超える場合に決定され得る。
-相加性は、以下の通り、単独療法治療の腫瘍の成長阻害の%対併用治療の腫瘍の成長阻害の%を比較することによって決定される:
1.併用において用いた投与量を、単独療法として投与した各薬物に対して100-%T/Cとして腫瘍成長阻害の%を決定する。%T/Cは、治療群における平均腫瘍重量(T)を、対照群における平均腫瘍重量(C)に対して比べることによって得られる(T/C×100%)。
2.各薬剤が、単独療法として投与された場合と同じ反応を生成する場合、2つのスコアを加算して「予想反応」を決定する。
3.この「予想反応」を、併用療法群について決定された腫瘍成長阻害の%から差し引く:
a.負の数であれば、2つの薬物を併用した効果が相加性未満であることを意味する。
b.得られた数がゼロに近ければ、2つの薬物を併用した効果は相加性と決定される。
c.正の数であれば、2つの薬物を併用した効果が相加性を超えることを意味する。
【００７３】
したがって、併用治療の相加効果を超えることは相乗効果に相当し、この場合、2つの薬物の併用の効果は、単独で投与した場合の各薬物の効果を考慮して予想されたものを治療的に上回る。
【００７４】
したがって、別の一態様において、本発明は、別の抗癌薬と一緒にまたは別々に併用して、有効量のPM00104または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む、腫瘍のサイズを低減するための方法を提供する。
【００７５】
別の一態様において、本発明は、別の抗癌薬と併用して、有効量のPM00104または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む、腫瘍の増殖を阻害するための方法を提供する。
【００７６】
関連の一態様において、本発明は、一緒にまたは別々に、PM00104または薬学的に許容できるその塩、および抗癌薬の有効な併用を投与するステップを含む、腫瘍の増殖を阻害するための方法を提供する。
【００７７】
以下の実施例は、本発明をさらに説明するものである。この実施例を、本発明の範囲を制限するものと解釈してはならない。
【００７８】
より簡潔な記載を提供するために、本明細書に示すいくつかの定量的表現は、「約」の語で制限されない。「約」の語が明示的に用いられても、または用いられなくても、本明細書に示す全ての量は、実際に示す値に言及することを意味すると理解され、このような所定の値に対する実験条件および/または測定条件による同等物および近似を含めて、当業者に基づいて合理的に推測されるような所定の値に対する近似に言及することも意味することが理解される。
【００７９】
(実施例)
(実施例1)
ヒト胃癌細胞系に対する化学療法薬剤との併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vitro試験
本試験の目的は、胃癌の治療において用いられる化学療法薬剤の抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を決定することであった。
【００８０】
PM00104と併用して以下の薬剤を評価した:シスプラチン、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン(SN38)、5-フルオロウラシル(5-FU)、ドキソルビシン、ドセタキセル、およびオキサリプラチン。このアッセイに選択したヒト胃癌細胞系は以下の通りであった:Hs746T、HGC-27、およびAGS細胞系。Hs746TおよびAGS細胞系を、10%ウシ胎児血清(FBS)、1.5g/L炭酸水素ナトリウム、4.5g/Lグルコース、および4mM L-グルタミンを補ったダルベッコ変法イーグル培地(DMEM)中で増殖させた。HGC-27細胞系を、20%FBSおよび2mM L-グルタミンを補ったイスコーブの改変ダルベッコ培地(IMDM)中で増殖させた。
【００８１】
スクリーニングを2つの部分において行った。
a.第1セットのアッセイでは、各腫瘍細胞系において薬物を72時間曝露した後、各薬物に対するIC50値を決定した。
【００８２】
全細胞系を、それぞれの増殖培地中、37℃、5%CO2、および湿度98%で維持した。増殖培地製剤は抗生物質を含んでいなかった。プレーティング前日、細胞に、新鮮な完全増殖培地を与えた。収集(プレーティング)日、細胞をトリパンブルー排除染色法によって計数した。
【００８３】
細胞を収集し、96ウェルマイクロタイタープレート中、培地150μL中10,000個の細胞密度で播種し、24時間インキュベートして、細胞を付着させた後、薬物を添加した。基準のデータを回収するために、時間0に非治療の細胞に対してMTSアッセイを行った(24時間細胞をインキュベートした後)。
【００８４】
PM00104、シスプラチン、SN38、および5-FUの保存溶液を調製した直後、2.0mg/mLで100%DMSO中プレートに加えた。ドキソルビシンおよびオキサリプラチンの保存溶液を、組織培養用滅菌水中、両薬物に対して2.0mg/mLで調製した。ドセタキセルの保存溶液を、エタノール中、2.0mg/mLで調製した。無血清RPMI 1640培地中さらなる段階希釈を調製して、最終の4×治療濃度を達成した。ウエルごとに希釈した各試験物品の50μLを加えた。
【００８５】
細胞毒性効果を、生存細胞数を決定するための比色法であるMTSアッセイ(テトラゾリウム)によって測定した。インキュベート期間(0日目のプレートに対して24時間、ならびに試験および対照のプレートに対して72時間)の後、各マイクロタイターウェルにMTS+PMS溶液25μLを加え、37℃で4時間インキュベートした。次いで、インキュベーターからプレートを取り除き、プレートシェーカー上に5分間配置した(光線から保護するためにアルミホイルで覆った)。分光光度計プレートリーダー上、490nmで吸光度を読んだ。
【００８６】
各試験薬剤に対する2回から4回のアッセイの平均からIC50値を計算した。SoftMaxプログラムを用いて回帰曲線を生成し、次いで50%阻害濃度(mg/mL)を手操作で補間した。
【００８７】
各細胞系に対する各薬剤の個々のIC50値をTable 1(表1)に示す。
【００８８】
【表１】
2011520921.tif 000004
【００８９】
b.第2セットのアッセイでは、各細胞系を、以下の組合せの独特のIC50濃度において、上記で言及した各薬剤と併用してPM00104とインキュベートした。
PM00104のIC50    薬剤のIC50
100%               0%
75%                25%
70%                30%
60%                40%
50%                50%
40%                60%
30%                70%
25%                75%
0%                 100%
0%                 0%
【００９０】
細胞培養および細胞のプレーティングを先に記載した通りに行った。各薬物の保存溶液も、1.0mg/mLの薬物濃度で先に記載した通りに調製した。これらの保存溶液を、さらに適宜段階希釈して出発濃度に到達させた。さらなる段階希釈を無血清RPMI 1640培地中に調製して、最終の8×治療濃度を達成した。ウエルごとに希釈した各試験物品25μLを加えた。
【００９１】
細胞毒性効果を、上記に記載した通りにMTSアッセイによって測定した。以下の通りデータを分析した。
1.Prism(Graphpad)ソフトウエアプログラムを用いて、データを対照の値に標準化した(100%=薬剤(薬物)の非存在下の細胞の増殖;0%=ブランク対照)。
2.標準化したデータをx/yグラフとしてプロットした。各薬剤(薬物)に対する100%IC50の値を結んで線を引いた。値が線を大幅に上回れば拮抗作用を示し、下回れば相乗作用を示し、線上であれば相加作用を示した。
【００９２】
腫瘍細胞に対する相乗的な細胞毒性が最適の効果であり、PM00104と別の薬物との併用がいずれかの薬物単独よりも有効であることを意味する。統計上有意な観察は、併用の(PM00104+別の薬物)吸光度値と両方のエンドポイント値(PM00104および他の薬物単独)との間に差が存在することを必要とする。値の大多数が、線(エンドポイント)を統計的に超え、またはそれ未満である場合は、それぞれ拮抗作用または相乗作用と記載され、その他の場合は、そのパターンは相加性の相互作用とさらに一致する。
【００９３】
このアッセイにより、以下のことが見出された:
a.ヒト胃癌細胞におけるPM00104のシスプラチンとの併用は、殆ど全ての投与量比で、Hs746T細胞系(図1)、AGS細胞系(図2)、およびHGC-27細胞系(図3)において相乗的であった。
b.Hs746T細胞系における(図4)PM00104のSN38との併用は、殆どの投与量比で相乗的であり、75/25〜60/40の投与量比でAGS細胞系において(図5)、ならびに70/30および60/40の投与量比でHGC-27細胞系において(図6)相乗的な傾向を示した。
c.PM00104の5-FUとの併用は、75/25〜40/60の投与量比でHs746T細胞系において(図7)、ならびに75/25〜60/40の投与量比でAGS細胞系において(図8)相乗的な傾向を示した。HGC-27細胞系において(図9)、併用は相加的な傾向を示した。
d.PM00104のドキソルビシンとの併用は、殆ど全ての投与量比でHs746T細胞系において(図10)相乗的であり、AGS細胞系(図11)およびHGC-27細胞系(図12)において相加的な傾向を示した。
e.PM00104のドセタキセルとの併用は、Hs746T細胞系において(図13)相乗的であり、AGS細胞系において(図14)相加的な傾向を示し、HGC-27細胞系において(図15)拮抗的な傾向を示した。
f.PM00104のオキサリプラチンとの併用は、Hs746T細胞系(図16)、AGS細胞系(図17)、およびHGC-27細胞系(図18)において相加的な傾向を示した。
【００９４】
(実施例2)
ヒト膀胱癌細胞系に対する化学療法薬剤との併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vitro試験
本試験の目的は、膀胱癌の治療において用いられる化学療法薬剤の抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を決定することであった。
【００９５】
PM00104と併用して以下の薬剤を評価した:ゲムシタビン(Gemzar(登録商標))およびシスプラチン。このアッセイに選択したヒト膀胱癌細胞系は以下の通りであった:5637細胞系およびUM-UC-3細胞系。5637細胞系を、10%FBS、1.5g/L炭酸水素ナトリウム、4.5g/Lグルコース、10mM HEPES、1mMピルビン酸ナトリウム、および2mM L-グルタミンを補ったRPMI 1640培地中で増殖させた。UM-UC-3細胞系を、10%FBSおよび2mM L-グルタミンを補ったMEM イーグル培地中で増殖させた。
【００９６】
スクリーニングを実施例1に開示した2つの部分において行った。
a.第1セットのアッセイでは、各腫瘍細胞系において薬物を72時間曝露した後、各薬物のIC50値を決定した。これは、実施例1に開示したものと同じ方法を用いた。
【００９７】
2.0mg/mLのPM00104およびシスプラチンの保存溶液を100% DMSO中に調製した。2.0mg/mLのゲムシタビンの保存溶液を、組織培養用滅菌水中に調製した。さらなる段階希釈を無血清RPMI 1640培地中に調製して、最終の4×治療濃度を達成した。ウエルごとに希釈した各試験物品50μLを加えた。
【００９８】
各試験薬剤に対する3回から4回のアッセイの平均からIC50値を計算した。各細胞系に対する各薬剤の個々のIC50値をTable 2(表2)に示す。
【００９９】
【表２】
2011520921.tif 000005
【０１００】
b.第2セットのアッセイでは、各細胞系を、実施例1に開示したものと同じ投与量比において、上記で言及した各薬剤と併用してPM00104とインキュベートした。
【０１０１】
スクリーニングのこの第2の部分で用いた方法は、実施例1に開示したものと同じであった。
【０１０２】
各薬物の保存溶液も、2.0mg/mLの薬物濃度で以前に記載されている通りに調製した。これらの保存溶液を、さらに適宜段階希釈して出発濃度に到達させた。さらなる段階希釈を無血清RPMI 1640培地中に調製して、最終の8×治療濃度を達成した。ウエルごとに希釈した各試験物品25μLを加えた。
【０１０３】
このアッセイにより、以下のことが見出された:
a.ヒト膀胱癌細胞におけるPM00104のゲムシタビンとの併用は、5637細胞系において(図19)相乗的であり、UM-UC-3細胞系において(図20)相加的な傾向を示した。
b.5637細胞系における(図21)PM00104のシスプラチンとの併用は相乗的であり、60/40、30/70および25/75の投与量比でUM-UC-3細胞系において(図22)相加的な傾向を示した。
【０１０４】
(実施例3)
ヒト膵臓癌細胞系に対する化学療法薬剤との併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vitro試験
本試験の目的は、膵臓癌の治療において用いられる化学療法薬剤の抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を決定することであった。
【０１０５】
PM00104と併用して評価した薬剤はゲムシタビン(Gemzar(登録商標))であった。このアッセイに選択したヒト膵臓癌細胞系は以下の通りであった:BxPC-3、PANC-1、MIA PaCA-2、およびSW 1990細胞系。BxPC-3細胞系を、10% FBS、1.5g/L炭酸水素ナトリウム、4.5g/Lグルコース、10mM HEPES、1mMピルビン酸ナトリウム、および2mM L-グルタミンを補ったRPMI 1640培地中で増殖させた。PANC-1細胞系を、10% FBS、1.5g/L炭酸水素ナトリウム、4.5g/Lグルコース、および4mM L-グルタミンを補ったDMEM中で増殖させた。MIA PaCA-2細胞系を、10% FBS、1.5g/L炭酸水素ナトリウム、4.5g/Lグルコース、2.5%ウマ血清、および2mM L-グルタミンを補ったDMEM中で増殖させた。SW1990細胞系を、10% FBSおよび2mM L-グルタミンを補ったRPMI 1640培地中で増殖させた。
【０１０６】
スクリーニングを実施例1に開示した2つの部分において行った。
a.第1セットのアッセイでは、各腫瘍細胞系において薬物を72時間曝露した後、各薬物のIC50値を決定した。これは、実施例1に開示したものと同じ方法を用いた。
【０１０７】
2.0mg/mLのPM00104の保存溶液を100% DMSO中に調製した。2.0mg/mLのゲムシタビンの保存溶液を、組織培養用滅菌水中に調製した。さらなる段階希釈を、無血清RPMI 1640培地中に調製して、最終の4×治療濃度を達成した。ウエルごとに希釈した各試験物品50μLを加えた。
【０１０８】
各試験薬剤に対する3回のアッセイの平均からIC50値を計算した。各細胞系に対する各薬剤の個々のIC50値をTable 3(表3)に示す。
【０１０９】
【表３】
2011520921.tif 000006
【０１１０】
b.第2セットのアッセイでは、各細胞系を、実施例1に開示したものと同じ投与量比のゲムシタビンと併用してPM00104とインキュベートした。
【０１１１】
スクリーニングのこの第2の部分で用いた方法は、実施例1に開示したものと同じであった。
【０１１２】
各薬物の保存溶液も、2.0mg/mLの薬物濃度で以前に記載されている通りに調製した。これらの保存溶液を、さらに適宜段階希釈して出発濃度に到達させた。さらなる段階希釈を無血清RPMI 1640培地中に調製して、最終の8×治療濃度を達成した。ウエルごとに希釈した各試験物品25μLを加えた。
【０１１３】
このアッセイにより、ヒト膵臓癌細胞におけるPM00104のゲムシタビンとの併用は、全ての細胞系(BxPC-3細胞系(図23)、PANC-1細胞系(図24)、MIA PaCA-2細胞系(図25)、およびSW1990細胞系(図26))において相乗的であったことが見出された。
【０１１４】
(実施例4)
ヒト膵臓腫瘍異種移植片におけるエルロチニブおよびゲムシタビンとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
本試験の目的は、ヒト膵臓癌の異種移植片モデルを用いることによって、エルロチニブおよびゲムシタビンの抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を評価することであった。
【０１１５】
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍細胞懸濁液で腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス15匹を含み、治療群は各々10マウス/群であった。
【０１１６】
この試験に用いた腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、VA)から入手した、MIAPaCA-2細胞系であった。
【０１１７】
MIAPaCA-2細胞を、10% FBS、1.5g/L炭酸水素ナトリウム、4.5g/Lグルコース、2.5%  ウマ血清、および4mM L-グルタミンを補ったDMEM中で増殖させた。各動物に、抗生物質なしの50%マトリゲル/50%無血清培地の0.2mL懸濁液中in vitroの第18継代からの1×107個のMIAPaCA-2細胞を、トロカールを用いて右側腹部上に皮下的に(SC)移植した。マトリゲルは、4℃で液体であり37℃で固体である生物学的細胞外マトリックスであり、局部領域において細胞の緊密な結合を維持することによって腫瘍の増殖を促進する。細菌の培養を、移植用に調製した細胞のアリコートに対して行った。培養物は全て、移植24時間後および48時間後両方とも、細菌の汚染に対して陰性であった。
【０１１８】
バーニアキャリパースを用いることによって腫瘍の測定値を決定した。長楕円に対する体積を計算するための公式を用いて、2次元の腫瘍測定値から腫瘍体積(mm3)を推定した:腫瘍体積(mm3)=[L×W2]÷2、式中、Lは長さであり、これはmmにおける最長の直径であり、Wは幅であり、これは腫瘍のmmにおける最短の直径である。単位密度を仮定して、体積を重量に変換する(すなわち、1mm3=1mg)。175±100mm3(平均±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。
【０１１９】
DPI(移植後日数)13日に治療を開始した。これらの実験において、併用療法群を同時に2つの薬物を同時投与することによって治療し、治療を順序付けようとはしなかった。
【０１２０】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。エルロチニブは錠剤の形態で提供され、これを0.5%カルボキシメチルセルロース/0.4% Tween-80/食塩水中に溶解した。ゲムシタビンは、ゲムシタビンHClを含む白色固形粉末の形態で提供され、これを0.9%食塩水中再構成した。
【０１２１】
試験群および治療レジメンをTable 4(表4)に列挙する。
【０１２２】
【表４】
2011520921.tif 000007
【０１２３】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、週2回記録した。アッセイした様々な濃度で、併用における2つの薬剤(PM00104およびエルロチニブ、またはPM00104およびゲムシタビン)間の平均腫瘍重量、対エルロチニブまたはゲムシタビンの平均腫瘍重量をそれぞれ比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０１２４】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０１２５】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判定基準は以下の通りであった:
-併用群の反応が、併用療法において用いたのと同じスケジュールおよび投与量で、最も有効な薬剤を単一薬剤として投与(単独療法)した最良の反応を上回った場合に増強と決定した。
-以下の通りに、単独療法群の腫瘍増殖阻害の%対併用群の腫瘍増殖阻害の%を比較することによって上記で論じたように相加性と決定した:
1.併用において用いた投与量で単独療法として投与した各薬物に対して、100-%T/Cとして、腫瘍増殖阻害の%の決定。治療群における平均腫瘍重量(T)を、対照群における平均腫瘍重量(C)に対して比較することによって、%T/Cを得た(T/C×100%)。
2.各薬剤が単独療法として投与した場合と同じ反応を生成する場合、2つのスコアを一緒に加えて「予想反応」を決定した。
3.この「予想反応」を、併用療法群に対して決定した腫瘍増殖阻害の%から差し引いた:
a.負の数であれば、2つの薬物を併用した効果が相加性未満であることを意味した。
b.得られた数がゼロに近ければ、2つの薬物を併用した効果は相加性であると決定した。
c.正の数であれば、2つの薬物を併用した効果が相加性を超えることを意味した。
【０１２６】
したがって、併用治療の相加効果を超えることは相乗効果に相当し、この場合2つの薬物の併用の効果は、各薬物を単独で投与した場合の効果を考慮して予想されるものを治療的に上回る。
【０１２７】
Table 5(表5)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図27〜29は、対照(ビヒクル)、PM00104、ゲムシタビン、PM00104プラスゲムシタビン、またはPM00104プラスエルロチニブの様々な投与量で治療したマウスにおけるMIAPaCA-2腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０１２８】
【表５】
2011520921.tif 000008
【０１２９】
Table 6(表6)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびゲムシタビン140mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびゲムシタビン腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のゲムシタビンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０１３０】
【表６】
2011520921.tif 000009
【０１３１】
Table 7(表7)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびエルロチニブ100mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびエルロチニブの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のエルロチニブとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０１３２】
【表７】
2011520921.tif 000010
【０１３３】
Table 8(表8)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびエルロチニブ50mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびエルロチニブの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のエルロチニブとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０１３４】
【表８】
2011520921.tif 000011
【０１３５】
このアッセイにより、以下のことが見出された:
a.PM00104およびゲムシタビンの併用は、対照群に比べて統計的に有意な(p≦0.001)抗腫瘍活性をもたらした。この併用療法は、単一薬剤群で得られた結果を上回る統計的に有意な(p<0.001)活性の増強を生成した。治療の終わりに、この増強は相加性を超えることが決定された。
b.PM00104およびエルロチニブの(両方の投与量のエルロチニブの)併用は、対照群に比べて統計的に有意な(p≦0.001)抗腫瘍活性、および得られた結果を上回る統計的に有意な(p<0.001)活性の増強をもたらした。この増強は相加性を超えることが決定された。
【０１３６】
(実施例5)
ヒト膵臓腫瘍異種移植片におけるゲムシタビンとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
本試験の目的は、ヒト膵臓癌の異種移植片モデルを用いることによって、ゲムシタビンの抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を評価することであった。
【０１３７】
全ての実験に、メスCB17.SCIDマウス(Charles River Lab.)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍細胞懸濁液で腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス15匹を含み、治療群は各々10マウス/群であった。
【０１３８】
この試験に用いた腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、VA)から入手した、BxPC-3細胞系であった。
【０１３９】
BxPC-3細胞を、抗生物質なしで10% FBSおよびL-グルタミンを補った完全RPMI 1640中で増殖させた。各動物に、抗生物質なしのマトリゲルおよびRPMI 1640無血清培地の0.2mL懸濁液中、in vitroの第12継代からの1×107個のBxPC-3細胞を、13Gトロカールおよび1ccシリンジを用いて右側腹部上にSC移植した。細菌の培養を、移植用に調製した細胞のアリコートに対して行った。培養物は全て、移植24時間後および48時間後両方とも、細菌の汚染に対して陰性であった。
【０１４０】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。175±100mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 14日に開始した。
【０１４１】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。ゲムシタビンは、ゲムシタビンHClを含む白色固形粉末の形態で提供され、これを0.9%食塩水中再構成した。
【０１４２】
試験群および治療レジメンをTable 9(表9)に列挙する。
【０１４３】
【表９】
2011520921.tif 000012
【０１４４】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、週2回記録した。併用における2つの薬剤(PM00104およびゲムシタビン)間の平均腫瘍重量、対ゲムシタビンの平均腫瘍重量を比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０１４５】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０１４６】
Table 10(表10)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図30は、対照(ビヒクル)、PM00104、ゲムシタビン、およびPM00104プラスゲムシタビンで治療したマウスにおけるBxPC-3腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０１４７】
【表１０】
2011520921.tif 000013
【０１４８】
Table 11(表11)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびゲムシタビン180mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびゲムシタビンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のゲムシタビンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０１４９】
【表１１】
2011520921.tif 000014
【０１５０】
このアッセイにより、PM00104およびゲムシタビンの併用は、対照群に比べて統計的に有意な(p≦0.05)抗腫瘍活性をもたらすことが見出された。さらに、併用療法は、相加性を上回る活性の増強を生成した。
【０１５１】
(実施例6)
ヒト膵臓腫瘍異種移植片におけるエルロチニブとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
本試験の目的は、ヒト膵臓癌の異種移植片モデルを用いることによって、エルロチニブの抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を評価することであった。
【０１５２】
全ての実験に、メスCB17.SCIDマウス(Charles River Lab.)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍細胞懸濁液で腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス15匹を含み、治療群は各々10マウス/群であった。
【０１５３】
この試験に用いた腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、VA)から入手した、BxPC-3細胞系であった。この細胞系を、実施例5に記載した通りに増殖させ、動物に移植した。
【０１５４】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。175±100mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 9日に開始した。
【０１５５】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。エルロチニブは錠剤の形態で提供され、これを0.5%  カルボキシメチルセルロース/0.4% Tween-80/食塩水(CTS)中に溶解した。
【０１５６】
試験群および治療レジメンをTable 12(表12)に列挙する。
【０１５７】
【表１２】
2011520921.tif 000015
【０１５８】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、週2回記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104およびエルロチニブ)間の平均腫瘍重量、対エルロチニブの平均腫瘍重量を比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０１５９】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０１６０】
Table 13(表13)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図31〜33は、様々な投与量の対照(ビヒクル)、PM00104、エルロチニブ、およびPM00104プラスエルロチニブで治療したマウスにおけるBxPC-3腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０１６１】
【表１３】
2011520921.tif 000016
【０１６２】
Table 14(表14)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびエルロチニブ50mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびエルロチニブの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のエルロチニブとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０１６３】
【表１４】
2011520921.tif 000017
【０１６４】
Table 15(表15)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびエルロチニブ30mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびエルロチニブの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のエルロチニブとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０１６５】
【表１５】
2011520921.tif 000018
【０１６６】
Table 16(表16)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびエルロチニブ15mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびエルロチニブの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のエルロチニブとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０１６７】
【表１６】
2011520921.tif 000019
【０１６８】
このアッセイにより、PM00104およびエルロチニブの併用は、試験した3つの投与量で、相加性を超える抗腫瘍活性の増強をもたらすことが見出された。
【０１６９】
(実施例7)
ヒト膀胱腫瘍異種移植片におけるシスプラチン、パクリタキセル、およびゲムシタビンとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
本試験の目的は、ヒト膀胱癌の異種移植片モデルを用いることによって、シスプラチン、パクリタキセル、およびゲムシタビンの抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を評価することであった。
【０１７０】
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍細胞懸濁液で腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス15匹を含み、治療群は各々10マウス/群であった。
【０１７１】
この試験に用いた腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、VA)から入手した、UM-UC-3細胞系であった。
【０１７２】
UM-UC-3細胞を、10% FBS、1.5g/L炭酸水素ナトリウム、0.1mM必須アミノ酸、1mMピルビン酸ナトリウム、および2mM L-グルタミンを補った最小必須培地(イーグル)中で増殖させた。各動物に、抗生物質なしの50%マトリゲルおよび50%無血清培地の0.2mL懸濁液中in vitroの第17継代からの5×106個のUM-UC-3細胞を、トロカールおよび1ccシリンジを用いて右側腹部上にSC移植した。細菌の培養を、移植用に調製した細胞のアリコートに対して行った。培養物は全て、移植24時間後および48時間後両方とも、細菌の汚染に対して陰性であった。
【０１７３】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。175±100mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 15日に開始した。
【０１７４】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。ゲムシタビンは、ゲムシタビンHClを含む白色固形粉末の形態で提供され、これを0.9%食塩水中再構成した。シスプラチンおよびパクリタキセルは溶液として提供され、これらを0.9%食塩水でさらに希釈した。
【０１７５】
試験群および治療レジメンをTable 17(表17)に列挙する。
【０１７６】
【表１７】
2011520921.tif 000020
【０１７７】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、週2回記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104およびシスプラチン、PM00104およびゲムシタビン、またはPM00104およびパクリタキセル)間の平均腫瘍重量、対シスプラチン、ゲムシタビン、またはパクリタキセルの平均腫瘍重量をそれぞれ比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０１７８】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０１７９】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０１８０】
Table 18(表18)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図34〜36は、対照(ビヒクル)、PM00104、シスプラチン、ゲムシタビン、パクリタキセル、および対応する併用で治療したマウスにおけるUM-UC-3腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０１８１】
【表１８】
2011520921.tif 000021
【０１８２】
Table 19(表19)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびシスプラチン5mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびシスプラチンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のシスプラチンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０１８３】
【表１９】
2011520921.tif 000022
【０１８４】
Table 20(表20)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびゲムシタビン180mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびゲムシタビンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のゲムシタビンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０１８５】
【表２０】
2011520921.tif 000023
【０１８６】
Table 21(表21)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびパクリタキセル15mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびパクリタキセルの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のパクリタキセルとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０１８７】
【表２１】
2011520921.tif 000024
【０１８８】
このアッセイにより、以下のことが見出された:
a.PM00104およびシスプラチンの併用は、統計的に有意に(p<0.001)超える抗腫瘍活性の相加的な増強をもたらした。
b.PM00104およびゲムシタビンの併用は、対照群に比べて統計的に有意な(p≦0.001)抗腫瘍活性をもたらした。治療期間の終わりに(DPI 29日)、増強は相加性を超えることが決定された。
c.PM00104およびパクリタキセルの併用は、単独療法の対照と比べた場合に、統計的に有意な(p<0.001)抗腫瘍活性の増強をもたらした。実験の終わりに、この増強は相加性であることが決定された。
【０１８９】
(実施例8)
ヒト胃腫瘍異種移植片におけるシスプラチンおよびパクリタキセルとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
本試験の目的は、ヒト胃癌の異種移植片モデルを用いることによって、シスプラチンおよびパクリタキセルの抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を評価することであった。
【０１９０】
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍細胞懸濁液で腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス11匹を含み、2〜4群はマウス7匹を含み、残りの群はマウス8匹を含んでいた。
【０１９１】
この試験に用いた腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、VA)から入手した、Hs746T細胞系であった。
【０１９２】
Hs746T細胞を、10% FBS、1.5g/L炭酸水素ナトリウム、4.5g/Lグルコース、および4mM L-グルタミンを補ったDMEM中で増殖させた。各動物に、抗生物質なしの50%マトリゲルおよび50%無血清培地の0.2mL懸濁液中in vitroの第18継代からの5×106個のHs746T細胞を、トロカールを用いて右側腹部上にSC移植した。細菌の培養を、移植用に調製した細胞のアリコートに対して行った。培養物は全て、移植24時間後および48時間後両方とも、細菌の汚染に対して陰性であった。
【０１９３】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。175±100mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 16日に開始した。
【０１９４】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。シスプラチンおよびパクリタキセルは溶液として提供され、これらを0.9%食塩水でさらに希釈した。
【０１９５】
試験群および治療レジメンをTable 22(表22)に列挙する。
【０１９６】
【表２２】
2011520921.tif 000025
【０１９７】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、週2回記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104およびシスプラチン、またはPM00104およびパクリタキセル)間の平均腫瘍重量、対シスプラチンまたはパクリタキセルの平均腫瘍重量をそれぞれ比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０１９８】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０１９９】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０２００】
Table 23(表23)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図37〜38は、対照(ビヒクル)、PM00104、シスプラチン、パクリタキセル、および対応する併用で治療したマウスにおけるHs746T腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０２０１】
【表２３】
2011520921.tif 000026
【０２０２】
Table 24(表24)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびシスプラチン5mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびシスプラチンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のシスプラチンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０２０３】
【表２４】
2011520921.tif 000027
【０２０４】
Table 25(表25)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびパクリタキセル10mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびパクリタキセルの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のパクリタキセルとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０２０５】
【表２５】
2011520921.tif 000028
【０２０６】
このアッセイにより、以下のことが見出された:
a.PM00104およびシスプラチンの併用は、いずれかの単一の薬剤の対照群で得られた結果を上回る、統計的に有意な(p<0.01)抗腫瘍活性の増強をもたらし、併用群において腫瘍の殆ど完全な退行をもたらした。フォローアップ期間の終わりに、増強は相加性を超えることが決定された。
b.治療期間の間、およびフォローアップ期間の終わりに、PM00104およびパクリタキセルの併用は、いずれかの単一の薬剤の対照群で得られた結果を上回る、統計的に有意な(p≦0.01)抗腫瘍活性の増強をもたらし、腫瘍の殆ど完全な退行をもたらした。
【０２０７】
(実施例9)
ヒト胃腫瘍異種移植片におけるフルオロウラシル(5-FU)、イリノテカン、およびドキソルビシンとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
本試験の目的は、ヒト胃癌の異種移植片モデルを用いることによって、5-FU、イリノテカン、およびドキソルビシンの抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を評価することであった。
【０２０８】
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍細胞懸濁液で腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス15匹を含み、治療群は各々10マウス/群を有した。
【０２０９】
この試験に用いた腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、VA)から入手した、Hs746T細胞系であった。この細胞系を、実施例8に記載した通りに増殖させ、動物に移植した。
【０２１０】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。175±100mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 15日に開始した。
【０２１１】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。5-FUは溶液として提供され、これを注射用水でさらに希釈した。イリノテカンはイリノテカンHCl三水和物を含む溶液の形態で提供され、これを0.9%滅菌食塩水中希釈した。ドキソルビシンは凍結乾燥粉末の形態で提供され、これを0.9%食塩水中再構成した。
【０２１２】
試験群および治療レジメンをTable 26(表26)に列挙する。
【０２１３】
【表２６】
2011520921.tif 000029
【０２１４】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、週2回記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104および5-FU、PM00104およびイリノテカン、またはPM00104およびドキソルビシン)間の平均腫瘍重量、対5-FU、イリノテカン、またはドキソルビシンの平均腫瘍重量をそれぞれ比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０２１５】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０２１６】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０２１７】
Table 27(表27)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図39〜41は、対照(ビヒクル)、PM00104、5-FU、イリノテカン、ドキソルビシン、および対応する併用で治療したマウスにおけるHs746T腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０２１８】
【表２７】
2011520921.tif 000030
【０２１９】
Table 28(表28)は、PM00104 0.9mg/kg/日、ならびにDPI 15日に5-FU 50mg/kg/日ならびにDPI22日および29日に5-FU 100mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104および5-FUの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量の5-FUとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０２２０】
【表２８】
2011520921.tif 000031
【０２２１】
Table 29(表29)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびイリノテカン20mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびイリノテカンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のイリノテカンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０２２２】
【表２９】
2011520921.tif 000032
【０２２３】
Table 30(表30)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびドキソルビシン6mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびドキソルビシンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のドキソルビシンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０２２４】
【表３０】
2011520921.tif 000033
【０２２５】
このアッセイにより、以下のことが見出された:
a.PM00104および5-FUの併用は、治療期間の間、抗腫瘍活性の相加性の増強をもたらし、観察期間の終わりに相加性を超えることが決定された。
b.PM00104およびイリノテカンの併用は、いずれかの単一の薬剤の対照群で得られた結果を上回る、極めて統計的に有意な(p<0.001)抗腫瘍活性の増強をもたらし、増強は、実験の終わりに相加性を超えると等級付けされた。
c.PM00104およびドキソルビシンの併用は、いずれかの単一の薬剤の対照群で得られた結果を上回る、統計的に有意な(p<0.01)抗腫瘍活性の増強をもたらし、増強は、実験の終わりに相加性を超えると等級付けされた。
【０２２６】
(実施例10)
ヒト胃腫瘍異種移植片におけるドセタキセルおよびオキサリプラチンとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
本試験の目的は、ヒト胃癌の異種移植片モデルを用いることによって、ドセタキセルおよびオキサリプラチンの抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を評価することであった。
【０２２７】
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍細胞懸濁液で腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス15匹を含み、治療群は各々10マウス/群を有した。
【０２２８】
この試験に用いた腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、VA)から入手したHs746T細胞系であった。この細胞系を、実施例8に記載した通りに増殖させ、動物に移植した。
【０２２９】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。175±100mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 14日に開始した。
【０２３０】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。ドセタキセルは希釈用濃縮物として提供され、これを注射用水(wfi)中13%エタノールでさらに希釈した。オキサリプラチンは溶液として提供され、これを5%デキストロース注射液、USPでさらに希釈した。
【０２３１】
試験群および治療レジメンをTable 31(表31)に列挙する。
【０２３２】
【表３１】
2011520921.tif 000034
【０２３３】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、週2回記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104およびドセタキセル、またはPM00104およびオキサリプラチン)間の平均腫瘍重量、対ドセタキセルまたはオキサリプラチンの平均腫瘍重量をそれぞれ比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０２３４】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０２３５】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０２３６】
Table 32(表32)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図42〜45は、対照(ビヒクル)、PM00104、ドセタキセル、オキサリプラチン、および対応する併用で治療したマウスにおけるHs746T腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０２３７】
【表３２】
2011520921.tif 000035
【０２３８】
Table 33(表33)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびドセタキセル16mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびドセタキセルの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のドセタキセルとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０２３９】
【表３３】
2011520921.tif 000036
【０２４０】
Table 34(表34)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびドセタキセル8mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびドセタキセルの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のドセタキセルとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０２４１】
【表３４】
2011520921.tif 000037
【０２４２】
Table 35(表35)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびオキサリプラチン8mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびオキサリプラチンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のオキサリプラチンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０２４３】
【表３５】
2011520921.tif 000038
【０２４４】
Table 36(表36)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびオキサリプラチン4mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびオキサリプラチンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のオキサリプラチンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０２４５】
【表３６】
2011520921.tif 000039
【０２４６】
このアッセイにより、以下のことが見出された:
a.PM00104およびドセタキセルの併用は、単一薬剤の対照群としてドセタキセルで得られた結果ではなく、単一薬剤の対照群としてPM00104で得られた結果を上回る、統計的に有意な(p<0.01)抗腫瘍活性の増強をもたらし、増強は、ドセタキセル16mg/kg/日の場合は実験の終わりに相加性未満と等級付けされ、ドセタキセル8mg/kg/日の場合は実験の終わりに相加性を超えると等級付けされた。
b.PM00104およびオキサリプラチンの併用は、いずれかの単一の薬剤の対照群で得られた結果を上回る、統計的に有意な(p<0.001)抗腫瘍活性の増強をもたらし、増強は、実験の終わりに相加性を超えると等級付けされた。
【０２４７】
(実施例11)
ヒト胃腫瘍異種移植片における5-フルオロウラシル(5-FU)との併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
本試験の目的は、ヒト胃癌の異種移植片モデルを用いることによって、5-FUの抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を評価することであった。
【０２４８】
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍フラグメントで腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス15匹を含み、治療群は各々10マウス/群を有した。
【０２４９】
この試験に用いた腫瘍モデルは、DCT Tumor Bankから入手した、MRI-H-254細胞系であった。
【０２５０】
MRI-H-254フラグメントをドナー動物から除去し、組織を、膜およびあらゆる出血性の、壊死性の領域から壊死組織除去し、in vivoの第5継代からの3〜4mm3のフラグメントを、13Gトロカールを用いて各動物の右側腹部上にSC移植した。細菌の培養を、試験を移植するのに用いる細胞に対して行った。培養物は全て、移植24時間後および48時間後両方とも、細菌の汚染に対して陰性であった。
【０２５１】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。175±100mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 20日に開始した。
【０２５２】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。5-FUは注射用バイアルの形態で提供され、これを0.9%滅菌食塩水で希釈した。
【０２５３】
試験群および治療レジメンをTable 37(表37)に列挙する。
【０２５４】
【表３７】
2011520921.tif 000040
【０２５５】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、週2回記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104および5-FU)間の平均腫瘍重量、対5-FUの平均腫瘍重量を比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０２５６】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０２５７】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０２５８】
Table 38(表38)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図46〜47は、対照(ビヒクル)、PM00104、5-FU、および対応する併用で治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０２５９】
【表３８】
2011520921.tif 000041
【０２６０】
Table 39(表39)は、PM00104 0.9mg/kg/日および5-FU 100mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104および5-FUの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量の5-FUとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０２６１】
【表３９】
2011520921.tif 000042
【０２６２】
Table 40(表40)は、PM00104 0.9mg/kg/日および5-FU 50mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104および5-FUの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量の5-FUとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０２６３】
【表４０】
2011520921.tif 000043
【０２６４】
このアッセイにより、PM00104および5-FUの併用は、いずれかの単一薬剤の対照群で得られた結果を上回る、統計的に有意な(p<0.01)抗腫瘍活性の増強をもたらし、増強は、実験の終わりに相加性を超えると等級付けされたことが見出された。
【０２６５】
(実施例12)
ヒト胃腫瘍異種移植片におけるドセタキセルおよびオキサリプラチンとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
本試験の目的は、ヒト胃癌の異種移植片モデルを用いることによって、ドセタキセルおよびオキサリプラチンの抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を評価することであった。
【０２６６】
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍フラグメントで腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス15匹を含み、治療群は各々10マウス/群を有した。
【０２６７】
この試験に用いた腫瘍モデルは、DCT Tumor Bankから入手した、MRI-H-254細胞系であった。この細胞系を、実施例11に記載した通りに増殖させ、動物に移植した。
【０２６８】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。175±100mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 20日に開始した。
【０２６９】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。ドセタキセルは希釈用濃縮物として提供され、これを注射用水中13%エタノールでさらに希釈した。オキサリプラチンは溶液として提供され、これを5%デキストロース注射液、USPでさらに希釈した。
【０２７０】
試験群および治療レジメンをTable 41(表41)に列挙する。
【０２７１】
【表４１】
2011520921.tif 000044
【０２７２】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、週2回記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104およびドセタキセル、またはPM00104およびオキサリプラチン)間の平均腫瘍重量、対ドセタキセルまたはオキサリプラチンの平均腫瘍重量をそれぞれ比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０２７３】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０２７４】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０２７５】
Table 42(表42)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図48〜51は、対照(ビヒクル)、PM00104、ドセタキセル、オキサリプラチン、および対応する併用で治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０２７６】
【表４２】
2011520921.tif 000045
【０２７７】
Table 43(表43)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびドセタキセル16mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびドセタキセルの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のドセタキセルとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０２７８】
【表４３】
2011520921.tif 000046
【０２７９】
Table 44(表44)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびドセタキセル8mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびドセタキセルの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のドセタキセルとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０２８０】
【表４４】
2011520921.tif 000047
【０２８１】
Table 45(表45)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびオキサリプラチン8mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびオキサリプラチンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のオキサリプラチンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０２８２】
【表４５】
2011520921.tif 000048
【０２８３】
Table 46(表46)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびオキサリプラチン4mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびオキサリプラチンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のオキサリプラチンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０２８４】
【表４６】
2011520921.tif 000049
【０２８５】
このアッセイにより、以下のことが見出された:
a.PM00104およびドセタキセルの併用は、統計的に有意な(p<0.001)抗腫瘍活性の増強をもたらした。この増強は相加性を超えることが見出された。
b.PM00104およびオキサリプラチンの併用は、統計的に有意な(p<0.001)抗腫瘍活性の増強をもたらした。この増強は相加性を超えると等級付けされた。
【０２８６】
(実施例13)
ヒト胃腫瘍異種移植片におけるドキソルビシンおよびパクリタキセルとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
本試験の目的は、ヒト胃癌の異種移植片モデルを用いることによって、ドキソルビシンおよびパクリタキセルの抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を評価することであった。
【０２８７】
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍フラグメントで腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス11匹を含み、2〜6群は1群あたり8匹/群のマウスを含み、残りの群は1群あたり9匹/群のマウスを含んでいた。
【０２８８】
この試験に用いた腫瘍モデルは、DCT Tumor Bankから入手した、MRI-H-254細胞系であった。この細胞系を、実施例11に記載した通りに増殖させ、動物に移植した。
【０２８９】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。175±100mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 17日に開始した。
【０２９０】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。ドキソルビシンは凍結乾燥粉末の形態で提供され、これを0.9%食塩水中再構成した。パクリタキセルは溶液として提供され、これを0.9%食塩水でさらに希釈した。
【０２９１】
試験群および治療レジメンをTable 47(表47)に列挙する。
【０２９２】
【表４７】
2011520921.tif 000050
【０２９３】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、週2回記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104およびドキソルビシン、またはPM00104およびパクリタキセル)間の平均腫瘍重量、対ドキソルビシンまたはパクリタキセルの平均腫瘍重量をそれぞれ比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０２９４】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０２９５】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０２９６】
Table 48(表48)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図52〜57は、対照(ビヒクル)、PM00104、ドキソルビシン、パクリタキセル、および対応する併用で治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０２９７】
【表４８】
2011520921.tif 000051
【０２９８】
Table 49(表49)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびドキソルビシン6mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびドキソルビシンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のドキソルビシンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０２９９】
【表４９】
2011520921.tif 000052
【０３００】
Table 50(表50)は、PM00104 0.45mg/kg/日およびドキソルビシン6mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびドキソルビシンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のドキソルビシンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３０１】
【表５０】
2011520921.tif 000053
【０３０２】
Table 51(表51)は、PM00104 0.23mg/kg/日およびドキソルビシン6mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびドキソルビシンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のドキソルビシンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３０３】
【表５１】
2011520921.tif 000054
【０３０４】
Table 52(表52)は、PM00104 0.90mg/kg/日およびパクリタキセル12.5mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびパクリタキセルの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のパクリタキセルとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３０５】
【表５２】
2011520921.tif 000055
【０３０６】
Table 53(表53)は、PM00104 0.45mg/kg/日およびパクリタキセル12.5mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびパクリタキセルの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のパクリタキセルとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３０７】
【表５３】
2011520921.tif 000056
【０３０８】
Table 54(表54)は、PM00104 0.23mg/kg/日およびパクリタキセル12.5mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびパクリタキセルの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のパクリタキセルとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３０９】
【表５４】
2011520921.tif 000057
【０３１０】
このアッセイにより、以下のことが見出された。
a.PM00104およびドキソルビシンの併用は、抗腫瘍活性の増強をもたらした。この増強は相加性未満であることが見出された。さらに、評価した投与量およびスケジュールにおいて、併用はいくつかの毒性の徴候をもたらし、動物間の死亡率は50%であった。
b.PM00104およびパクリタキセルの併用は、統計的に有意な(p<0.001)抗腫瘍活性の増強をもたらした。この増強は相加性未満であると等級付けされ、低い方の投与量のPM00104で観察された最良の結果であった。
【０３１１】
(実施例14)
ヒト胃腫瘍異種移植片におけるシスプラチン、パクリタキセル、およびイリノテカンとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
本試験の目的は、ヒト胃癌の異種移植片モデルを用いることによって、シスプラチン、パクリタキセル、およびイリノテカンの抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を評価することであった。
【０３１２】
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍フラグメントで腫瘍を移植した。ビヒクル対照群は15匹のマウスを含み、治療群は各々9マウス/群を有した。
【０３１３】
この試験に用いた腫瘍モデルは、DCT Tumor Bankから入手した、MRI-H-254細胞系であった。この細胞系を、実施例11に記載した通りに増殖させ、動物に移植した。
【０３１４】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。175±100mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 16日に開始した。
【０３１５】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。シスプラチンおよびパクリタキセルは溶液として提供され、これらを0.9%食塩水でさらに希釈した。イリノテカンはイリノテカンHCl三水和物を含む溶液の形態で提供され、これを0.9%滅菌食塩水中希釈した。
【０３１６】
試験群および治療レジメンをTable 55(表55)に列挙する。
【０３１７】
【表５５】
2011520921.tif 000058
【０３１８】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、週2回記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104およびシスプラチン、PM00104およびイリノテカン、またはPM00104およびパクリタキセル)間の平均腫瘍重量、対シスプラチン、イリノテカン、またはパクリタキセルの平均腫瘍重量をそれぞれ比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０３１９】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０３２０】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０３２１】
Table 56(表56)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図58〜63は、対照(ビヒクル)、PM00104、シスプラチン、イリノテカン、パクリタキセル、および対応する併用で治療したマウスにおけるMRI-H-254腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０３２２】
【表５６】
2011520921.tif 000059
【０３２３】
Table 57(表57)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびシスプラチン5mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびシスプラチンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のシスプラチンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３２４】
【表５７】
2011520921.tif 000060
【０３２５】
Table 58(表58)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびシスプラチン3mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびシスプラチンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のシスプラチンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３２６】
【表５８】
2011520921.tif 000061
【０３２７】
Table 59(表59)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびイリノテカン18mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびイリノテカンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のイリノテカンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３２８】
【表５９】
2011520921.tif 000062
【０３２９】
Table 60(表60)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびイリノテカン10mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびイリノテカンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のイリノテカンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３３０】
【表６０】
2011520921.tif 000063
【０３３１】
Table 61(表61)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびパクリタキセル25mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびパクリタキセルの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のパクリタキセルとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３３２】
【表６１】
2011520921.tif 000064
【０３３３】
Table 62(表62)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびパクリタキセル12.5mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびパクリタキセルの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のパクリタキセルとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３３４】
【表６２】
2011520921.tif 000065
【０３３５】
このアッセイにより、以下のことが見出された:
a.PM00104およびシスプラチンの併用は、単一薬剤の対照群としてPM00104で得られた結果ではなく、単一薬剤の対照群としてシスプラチンで得られた結果を上回る、統計的に有意な(p<0.001)抗腫瘍活性の増強をもたらし、増強は、実験の終わりに相加性未満であると等級付けされた。
b.PM00104およびイリノテカンの併用は、単一薬剤の対照群としてPM00104で得られた結果ではなく、単一薬剤の対照群としてイリノテカンで得られた結果を上回る、極めて統計的に有意な(p<0.001)抗腫瘍活性の増強をもたらし、増強は、実験の終わりに相加性未満であると等級付けされた。
c.PM00104およびパクリタキセルの併用は抗腫瘍活性の増強をもたらし、増強は、投与量12.5mg/kg/日のパクリタキセルで統計的に有意であった(p<0.001)。この増強は相加性未満であると等級付けされた。
【０３３６】
(実施例15)
ヒト肝細胞癌異種移植片におけるソラフェニブとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
本試験の目的は、ヒト肝細胞癌の異種移植片モデルを用いることによって、ソラフェニブの抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を評価することであった。
【０３３７】
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍細胞懸濁液で腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス15匹を含み、治療群は各々9マウス/群を有した。
【０３３８】
この試験に用いた腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、VA)から入手した、HepG2細胞系であった。
【０３３９】
HepG2細胞を、10% FBS、1.5g/L炭酸水素ナトリウム、0.1mM可欠アミノ酸、1.0mMピルビン酸ナトリウム、および2mM L-グルタミンを補ったMEM中で増殖させた。各動物に、抗生物質なしの50%マトリゲルおよび50%無血清培地の0.2mL懸濁液中5×106個のHepG2細胞を、13Gトロカールを用いて右側腹部上にSC移植した。細菌の培養を、移植用に調製した細胞のアリコートに対して行った。培養物は全て、移植24時間後および48時間後両方とも、細菌の汚染に対して陰性であった。
【０３４０】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。175±100mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 19日に開始した。
【０３４１】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。ソラフェニブは錠剤の形態で提供され、これをCremophor EL/エタノール/水(CEW)最終比率(12.5、12.5、75)中溶解した。
【０３４２】
試験群および治療レジメンをTable 63(表63)に列挙する。
【０３４３】
【表６３】
2011520921.tif 000066
【０３４４】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、週2回記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104およびソラフェニブ)間の平均腫瘍重量、対ソラフェニブの平均腫瘍重量を比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０３４５】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０３４６】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０３４７】
Table 64(表64)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図64〜67は、対照(ビヒクル)、PM00104、ソラフェニブ、および対応する併用で治療したマウスにおけるHepG2腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０３４８】
【表６４】
2011520921.tif 000067
【０３４９】
Table 65(表65)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびソラフェニブ60mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびソラフェニブの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のソラフェニブとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３５０】
【表６５】
2011520921.tif 000068
【０３５１】
Table 66(表66)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびソラフェニブ30mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびソラフェニブの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のソラフェニブとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３５２】
【表６６】
2011520921.tif 000069
【０３５３】
Table 67(表67)は、PM00104 0.6mg/kg/日およびソラフェニブ60mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびソラフェニブの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のソラフェニブとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３５４】
【表６７】
2011520921.tif 000070
【０３５５】
Table 68(表68)は、PM00104 0.6mg/kg/日およびソラフェニブ30mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびソラフェニブの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のソラフェニブとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３５６】
【表６８】
2011520921.tif 000071
【０３５７】
このアッセイにより、PM00104およびソラフェニブの併用は、ソラフェニブの対照群で得られた結果を上回る、統計的に有意な(p<0.01)抗腫瘍活性の増強をもたらすことが見出された。観察された増強は、相加性未満であると等級付けされた。
【０３５８】
(実施例16)
ヒト肝細胞癌異種移植片におけるソラフェニブとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
本試験の目的は、ヒト肝細胞癌の異種移植片モデルを用いることによって、ソラフェニブの抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を評価することであった。
【０３５９】
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍細胞懸濁液で腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス15匹を含み、治療群は各々10マウス/群を有した。
【０３６０】
この試験に用いた腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、VA)から入手した、PLC/PRF/5細胞系であった。
【０３６１】
PLC/PRF/5を、10% FBSおよび1% L-グルタミンを補ったイーグル最小必須培地中で増殖させた。各動物に、抗生物質なしの50%マトリゲルおよび50%無血清MEM培地の0.2mL懸濁液中5×106個のPLC/PRF/5細胞を、13Gトロカールおよび1mLシリンジを用いて右側腹部上にSC移植した。細菌の培養を、移植用に調製した細胞のアリコートに対して行った。培養物は全て、移植24時間後および48時間後両方とも、細菌の汚染に対して陰性であった。
【０３６２】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。175±100mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 14日に開始した。
【０３６３】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。ソラフェニブは錠剤の形態で提供され、これをCremophor EL/エタノール/水(CEW)  最終比率(12.5、12.5、75)中溶解した。
【０３６４】
試験群および治療レジメンをTable 69(表69)に列挙する。
【０３６５】
【表６９】
2011520921.tif 000072
【０３６６】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、週2回記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104およびソラフェニブ)間の平均腫瘍重量、対ソラフェニブの平均腫瘍重量を比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０３６７】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０３６８】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０３６９】
Table 70(表70)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図68〜71は、対照(ビヒクル)、PM00104、ソラフェニブ、および対応する併用で治療したマウスにおけるPLC/PRF/5腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０３７０】
【表７０】
2011520921.tif 000073
【０３７１】
Table 71(表71)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびソラフェニブ60mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびソラフェニブの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のソラフェニブとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３７２】
【表７１】
2011520921.tif 000074
【０３７３】
Table 72(表72)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびソラフェニブ30mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびソラフェニブの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のソラフェニブとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３７４】
【表７２】
2011520921.tif 000075
【０３７５】
Table 73(表73)は、PM00104 0.45mg/kg/日およびソラフェニブ60mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびソラフェニブの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のソラフェニブとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３７６】
【表７３】
2011520921.tif 000076
【０３７７】
Table 74(表74)は、PM00104 0.45mg/kg/日およびソラフェニブ30mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびソラフェニブの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のソラフェニブとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３７８】
【表７４】
2011520921.tif 000077
【０３７９】
このアッセイにより、PM00104およびソラフェニブの併用は、ソラフェニブの対照群で得られた結果を上回る、統計的に有意な(p<0.01)抗腫瘍活性の増強をもたらすことが見出され、両薬物とも低い方の投与量に観察された最良の結果であった。この最良の増強は、相加性を超えると等級付けされた。
【０３８０】
(実施例17)
ヒト卵巣腫瘍異種移植片におけるベバシズマブとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
本試験の目的は、ヒト卵巣癌の異種移植片モデルを用いることによって、ベバシズマブの抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を評価することであった。
【０３８１】
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍フラグメントで腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス15匹を含み、治療群は各々10マウス/群を有した。
【０３８２】
この試験に用いた腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、VA)から入手した、SK-OV-3細胞系であった。
【０３８３】
SK-OV-3フラグメントをドナー動物から除去し、組織を、膜およびあらゆる出血性の、壊死性の領域から壊死組織除去し、in vivoの第2継代からの3〜4mm3のフラグメントを、13Gトロカールを用いて各動物の右側腹部上にSC移植した。細菌の培養を、試験を移植するのに用いる細胞に対して行った。培養物は全て、移植24時間後および48時間後両方とも、細菌の汚染に対して陰性であった。
【０３８４】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。175±100mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 14日に開始した。
【０３８５】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。ベバシズマブは溶液として提供され、これを0.9%食塩水でさらに希釈した。
【０３８６】
試験群および治療レジメンをTable 75(表75)に列挙する。
【０３８７】
【表７５】
2011520921.tif 000078
【０３８８】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、週2回記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104およびベバシズマブ)間の平均腫瘍重量、対ベバシズマブの平均腫瘍重量を比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０３８９】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０３９０】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０３９１】
Table 76(表76)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図72〜73は、対照(ビヒクル)、PM00104、ベバシズマブ、および対応する併用で治療したマウスにおけるSK-OV-3腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０３９２】
【表７６】
2011520921.tif 000079
【０３９３】
Table 77(表77)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびベバシズマブ5mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびベバシズマブの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のベバシズマブとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３９４】
【表７７】
2011520921.tif 000080
【０３９５】
Table 78(表78)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびベバシズマブ2.5mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびベバシズマブの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のベバシズマブとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０３９６】
【表７８】
2011520921.tif 000081
【０３９７】
このアッセイにより、PM00104およびベバシズマブの併用は、いずれかの単一の薬剤の対照群で得られた結果を上回る、抗腫瘍活性の増強をもたらすことが見出された。低い方の投与量のベバシズマブでは、この増強は、アッセイの終わりに相加性を超えると等級付けされた。
【０３９８】
(実施例18)
ヒト肺癌、乳癌、および結腸癌細胞系に対する化学療法薬剤との併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vitro試験
本試験の目的は、肺癌、乳癌、および結腸癌の治療において用いられる化学療法薬剤の抗腫瘍活性を増強するPM00104の能力を決定することであった。
【０３９９】
PM00104と併用して以下の薬剤を評価した:パクリタキセル、シスプラチン、ゲムシタビン、ドキソルビシン、5-フルオロウラシル(5-FU)、イリノテカン、およびオキサリプラチン。このアッセイに選択したヒト癌細胞系は以下の通りであった:A-549細胞系(肺癌)、NCI-H460細胞系(肺癌)、NCI-H23細胞系(肺癌)、MDA-MB-231細胞系(乳癌)、BT-474細胞系(乳癌)、MCF-7細胞系(乳癌)、LoVo細胞系(結腸癌)、HCT-116細胞系(結腸癌)、およびHT-29細胞系(結腸癌)。
-A-549細胞、NCI-H460細胞、MDA-MB-231細胞、MCF-7細胞、LoVo細胞、およびHT-29細胞を、10%ウシ胎児血清(FBS)、1%ペニシリン/ストレプトマイシン、および2mM L-グルタミンを補ったダルベッコ変法イーグル培地(DMEM)中で増殖させた。
-NCI-H23細胞を、10%ウシ胎児血清(FBS)、1%ペニシリン/ストレプトマイシン、および2mM L-グルタミンを補ったRPMI中で増殖させた。
-BT-474細胞を、1% ITS(インスリン、トランスフェリン、およびセレン)、10%ウシ胎児血清(FBS)、1%ペニシリン/ストレプトマイシン、および2mM L-グルタミンを補ったRPMI中で増殖させた。
-HCT-116細胞を、10%ウシ胎児血清(FBS)、1%ペニシリン/ストレプトマイシン、および2mM L-グルタミンを補ったマッコイ培地中で増殖させた。
【０４００】
スクリーニングを2つの部分において行った。
a.第1セットのアッセイでは、各腫瘍細胞系において薬物を72時間曝露した後、各薬物のIC50値を決定した。
【０４０１】
全細胞系を、それぞれの増殖培地中、37℃、5%CO2、および湿度98%に維持した。プレーティングの前に、細胞培養物をトリプシン処理し、自動化フローサイトメーターを用いて細胞数を推定した。
【０４０２】
細胞を回収し、96ウェルマイクロタイタープレート中、培地150μL中好適な細胞密度(細胞5,000〜10,000個)に播種し、24時間インキュベートして細胞を付着させた後、薬物添加した。
【０４０３】
PM00104、パクリタキセル、ゲムシタビン、ドキソルビシン、5-フルオロウラシル(5-FU)、およびイリノテカンの1.0mg/mL保存溶液を100%DMSO中に調製した。シスプラチンおよびオキサリプラチンの1.0mg/mL保存溶液を、組織培養用二回滅菌水中に調製した。無血清培地中、さらなる段階希釈を調製して、最終の4×治療濃度を達成した。希釈した各試験物品50μLをウエルごとに加えた。
【０４０４】
細胞毒性効果を、生存細胞数を決定するための比色法であるMTTアッセイ(テトラゾリウム)によって測定した。インキュベーション期間(72時間)の後、各マイクロタイターウェルにMTT溶液50μLを加え、37℃でさらなる8時間インキュベートした。次いで、培地を取り除き、DMSO 50μLを加えてMTT結晶を溶解した。分光光度計マイクロプレートリーダー上、540nmで吸光度を読んだ。
【０４０５】
各試験薬剤に対する2回から4回のアッセイの平均からIC50値を計算した。Prism v5.02ソフトウエア(GraphPad)を用いて回帰曲線を生成し、次いで50%阻害濃度を自動的に補間した。
【０４０６】
各細胞系に対する各薬剤の個々のIC50値をTable 79(表79)に示す。
【０４０７】
【表７９】
2011520921.tif 000082
【０４０８】
b.第2セットのアッセイでは、細胞系を、以下の組合せの独特のIC50濃度において、上記で言及した各薬剤と併用してPM00104とインキュベートした。
PM00104のIC50      薬剤のIC50
100%               0%
75%                25%
70%                30%
60%                40%
50%                50%
40%                60%
30%                70%
25%                75%
0%                100%
【０４０９】
細胞培養および細胞のプレーティングを先に記載した通りに行った。各薬物の保存溶液も、1.0mg/mLの薬物濃度で先に記載した通りに調製した。これらの保存溶液を、さらに適宜段階希釈して出発濃度に到達させた。さらなる段階希釈を無血清培地中に調製して、最終の8×治療濃度を達成した。ウエルごとに希釈した各試験物品25μLを加えた。
【０４１０】
細胞毒性効果を、上記に記載した通りにMTTアッセイによって測定した。以下の通りにデータを分析した。
1.Prism v5.02ソフトウエア(Graphpad)プログラムを用いて、データを対照値に標準化した(100%=薬剤の非存在下(ビヒクル単独)の細胞の成長;0%=ブランク対照)。
2.標準化したデータをx/yグラフとしてプロットした。各薬剤(薬物)に対する100%IC50の値を結んで線を引いた。値が線を大幅に上回れば拮抗作用を示しており、大幅に下回れば相乗作用を示し、線上であれば相加作用を示していた。
【０４１１】
腫瘍細胞に対する相乗的な細胞毒性が最適の効果であり、PM00104と別の薬物との併用がいずれかの薬物単独よりも有効であることを意味する。統計上有意な観察は、併用の(PM00104+別の薬物)細胞生存の%値と両方のエンドポイント値(PM00104および他の薬物単独)との間に差が存在することを必要とする。値の大多数が、線(エンドポイント)を統計的に超え、またはそれ未満である場合は、それぞれ拮抗作用または相乗作用と記載され、その他の場合は、そのパターンは相加性の相互作用とさらに一致する。
【０４１２】
このアッセイにしたがって、以下のことが見出された:
a.ヒト肺癌細胞におけるPM00104のゲムシタビンとの併用は、NCI-H23細胞系において(図76)60/40、70/30、および75/25の投与量比で相乗的であり、NCI-H460細胞系において(図75)、75/25の投与量比で相乗効果を有する相加性の傾向を示した。さらに、A549細胞系において(図74)、併用は相加性の傾向を示した。
b.ヒト肺癌細胞におけるPM00104のパクリタキセルとの併用は、NCI-H23細胞系において(図79)相乗的であり、NCI-H460細胞系(図78)およびA549細胞系(図77)において相加性の傾向を示した。
c.ヒト肺癌細胞におけるPM00104のシスプラチンとの併用は、NCI-H460細胞系において(図81)30/70および50/50の投与量比で相乗的であった。A549細胞系において(図80)相加性の傾向を示し、NCI-H23細胞系において(図82)拮抗性の傾向を示した。
d.ヒト乳癌細胞におけるPM00104のゲムシタビンとの併用は、MDA-MB-231細胞系(図83)、BT-474細胞系(図84)、およびMCF-7細胞系(図85)において相乗的であった。
e.ヒト乳癌細胞におけるPM00104のパクリタキセルとの併用は、MCF-7細胞系(図88)において相乗的であり、MDA-MB-231細胞系(図86)およびBT-474細胞系(図87)において相加性の傾向を示した。
f.ヒト乳癌細胞におけるPM00104のドキソルビシンとの併用はMDA-MB-231細胞系(図89)、BT-474細胞系(図90)、およびMCF-7細胞系(図91)において相乗的であった。
g.結腸癌細胞におけるPM00104の5-フルオロウラシルとの併用は、全てまたは殆んど全ての投与量比でHT-29細胞系(図94)およびLoVo細胞系(図93)において相乗的であり、HCT-116(図92)において相加性の傾向を示した。
h.ヒト結腸癌細胞におけるPM00104のオキサリプラチンとの併用は、LoVo細胞系(図96)、HT-29細胞系(図97)、およびHCT-116細胞系(図95)において相加性の傾向を示した。
i.ヒト結腸癌細胞におけるPM00104のイリノテカンとの併用は、LoVo細胞系(図99)において相乗的であり、HT-29細胞系(図100)およびHCT-116細胞系(図98)において相加性の傾向を示した。
【０４１３】
(実施例19)
ヒト肺癌異種移植片におけるテムシロリムスおよびベバシズマブとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス15匹を含み、治療群は各々10マウス/群を有した。
【０４１４】
この試験に用いた腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、VA)から入手したヒトNSCLC細胞系である、NCI-H460細胞系であった。NCI-H460細胞を、10% FBS、10mM Hepes、1mMピルビン酸ナトリウム、4.5g/lグルコース、1.5g/l炭酸水素ナトリウム、および2mM L-グルタミンを補ったRPMI-1640培地中で増殖させた。in vitroの第7継代からの細胞を、13Gトロカールと一緒に1mlシリンジを用いて実験用マウス中にSC移植した:血清または抗生物質のないNCI-H460の50%マトリゲル/50% RPMI培地0.2ml中細胞5×106個/マウス。細菌の培養を、試験を移植するのに用いる細胞に対して行った。培養物は全て、移植24時間後および48時間後両方とも、細菌の汚染に対して陰性であった。
【０４１５】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。139±36mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 9日に開始した。
【０４１６】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。テムシロリムスは非水性エタノール溶液の形態で提供され、これをポリソルベート80(40%w/v)、ポリエチレングリコール400(42.8%w/v)、および無水アルコール(19.9%w/v)を含む希釈液でさらに希釈し、次いで0.9%食塩水中投与濃度にさらに希釈した。ベバシズマブは溶液として提供され、これを0.9%食塩水でさらに希釈した。
【０４１７】
試験群および治療レジメンをTable 80(表80)に列挙する。
【０４１８】
【表８０】
2011520921.tif 000083
【０４１９】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、2〜3回/週記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104およびベバシズマブ、またはPM00104およびテムシロリムス)間の平均腫瘍重量、対ベバシズマブまたはテムシロリムスの平均腫瘍重量をそれぞれ比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０４２０】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０４２１】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０４２２】
Table 81(表81)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図101〜104は、対照、PM00104、ベバシズマブ、テムシロリムス、および対応する併用で治療したマウスにおけるNCI-H460腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０４２３】
【表８１】
2011520921.tif 000084
【０４２４】
Table 82(表82)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびベバシズマブ5mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびベバシズマブの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のベバシズマブとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０４２５】
【表８２】
2011520921.tif 000085
【０４２６】
Table 83(表83)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびベバシズマブ2.5mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびベバシズマブの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のベバシズマブとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０４２７】
【表８３】
2011520921.tif 000086
【０４２８】
Table 84(表84)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびテムシロリムス20mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびテムシロリムスの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のテムシロリムスとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０４２９】
【表８４】
2011520921.tif 000087
【０４３０】
Table 85(表85)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびテムシロリムス10mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびテムシロリムスの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のテムシロリムスとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０４３１】
【表８５】
2011520921.tif 000088
【０４３２】
このアッセイにより、PM00104およびベバシズマブの併用は、いずれかの単一の薬剤の対照群で得られた結果を上回る、抗腫瘍活性の増強をもたらすことが見出された。ベバシズマブの両方の投与量で、アッセイの終わりにこの増強は相加性を超えると等級付けされた。
【０４３３】
このアッセイにより、PM00104およびテムシロリムスの併用は、いずれかの単一の薬剤の対照群で得られた結果を上回る、抗腫瘍活性の増強をもたらすことが見出された。テムシロリムスの両方の投与量で、アッセイの終わりにこの増強は相加性を超えると等級付けされた。
【０４３４】
(実施例20)
ヒト肺癌異種移植片におけるゲムシタビンとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス15匹を含み、治療群は各々9マウス/群を有した。
【０４３５】
この試験に用いた腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、VA)から入手したヒトNSCLC細胞系である、NCI-H460細胞系であった。この細胞系を、実施例19に記載した通りに増殖させ、動物に移植した。実験用マウス中にSC移植したものは、in vitroの第9継代からの細胞であった。
【０４３６】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。175±100mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 8日に開始した。
【０４３７】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。ゲムシタビンはゲムシタビンHClを含む白色固体粉末の形態で提供され、これを0.9%食塩水中再構成した。
【０４３８】
試験群および治療レジメンをTable 86(表86)に列挙する。
【０４３９】
【表８６】
2011520921.tif 000089
【０４４０】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、2〜3回/週記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104およびゲムシタビン)間の平均腫瘍重量、対ゲムシタビンの平均腫瘍重量を比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０４４１】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０４４２】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０４４３】
Table 87(表87)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図105〜106は、対照、PM00104、ゲムシタビン、および対応する併用で治療したマウスにおけるNCI-H460腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０４４４】
【表８７】
2011520921.tif 000090
【０４４５】
Table 88(表88)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびゲムシタビン180mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびゲムシタビンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のゲムシタビンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０４４６】
【表８８】
2011520921.tif 000091
【０４４７】
Table 89(表89)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびゲムシタビン90mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびゲムシタビンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のゲムシタビンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０４４８】
【表８９】
2011520921.tif 000092
【０４４９】
このアッセイにより、PM00104およびゲムシタビンの併用は、抗腫瘍活性の増強をもたらすことが見出された。低い方の投与量のゲムシタビンを有する併用の増強は、試験の終わりに相加性として等級付けされた。
【０４５０】
(実施例21)
ヒト肺癌異種移植片における、ゲムシタビンとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス13匹を含み、治療群は各々9マウス/群を有した。
【０４５１】
この試験に用いた腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、VA)から入手したヒト肺癌細胞系である、CaLu-6細胞系であった。CaLu-6細胞を、10% FBSおよび2mM L-グルタミンを補ったイーグル最小必須培地(MEM)中で増殖させた。in vitroの第12継代からの細胞を、13Gトロカールと一緒に1mlシリンジを用いて実験用マウス中にSC移植した:血清または抗生物質のないCaLu-6の50%マトリゲル/50% MEM培地0.2ml中細胞5×106個/マウス。細菌の培養を、試験を移植するのに用いる細胞に対して行った。培養物は全て、移植24時間後および48時間後両方とも、細菌の汚染に対して陰性であった。
【０４５２】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。99±17mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 9日に開始した。
【０４５３】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。ゲムシタビンはゲムシタビンHClを含む白色固体粉末の形態で提供され、これを0.9%食塩水中再構成した。
【０４５４】
試験群および治療レジメンをTable 90(表90)に列挙する。
【０４５５】
【表９０】
2011520921.tif 000093
【０４５６】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、2〜3回/週記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104およびゲムシタビン)間の平均腫瘍重量、対ゲムシタビンの平均腫瘍重量を比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０４５７】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０４５８】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０４５９】
Table 91(表91)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図107〜108は、対照、PM00104、ゲムシタビン、および対応する併用で治療したマウスにおけるCaLu-6腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０４６０】
【表９１】
2011520921.tif 000094
【０４６１】
Table 92(表92)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびゲムシタビン180mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびゲムシタビンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のゲムシタビンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０４６２】
【表９２】
2011520921.tif 000095
【０４６３】
Table 93(表93)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびゲムシタビン90mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびゲムシタビンの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のゲムシタビンとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０４６４】
【表９３】
2011520921.tif 000096
【０４６５】
このアッセイにより、PM00104およびゲムシタビンの併用は、抗腫瘍活性の増強をもたらすことが見出された。ゲムシタビンの両方の投与量で、アッセイの終わりにこの増強は相加性を超えると等級付けされた。
【０４６６】
(実施例22)
ヒト肺癌異種移植片におけるペメトレキセドとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス15匹を含み、治療群は各々10マウス/群を有した。
【０４６７】
この試験に用いた腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、VA)から入手したヒト肺細胞系である、CaLu-6細胞系であった。この細胞系を、実施例21に記載した通りに増殖させ、動物に移植した。実験用マウス中にSC移植したのは、in vitroの第10継代からの細胞であった。
【０４６８】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。86±16mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 9日に開始した。
【０４６９】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。ペメトレキセドはペメトレキセド二ナトリウムを含む固体粉末の形態で提供され、これを0.9%食塩水中再構成した。
【０４７０】
試験群および治療レジメンをTable 94(表94)に列挙する。
【０４７１】
【表９４】
2011520921.tif 000097
【０４７２】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、2〜3回/週記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104およびペメトレキセド)間の平均腫瘍重量、対ペメトレキセドの平均腫瘍重量を比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０４７３】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０４７４】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０４７５】
Table 95(表95)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図109〜110は、対照、PM00104、ペメトレキセド、および対応する併用で治療したマウスにおけるCaLu-6腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０４７６】
【表９５】
2011520921.tif 000098
【０４７７】
Table 96(表96)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびペメトレキセド125mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびペメトレキセドの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のペメトレキセドとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０４７８】
【表９６】
2011520921.tif 000099
【０４７９】
Table 97(表97)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびペメトレキセド100mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびペメトレキセドの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のペメトレキセドとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０４８０】
【表９７】
2011520921.tif 000100
【０４８１】
このアッセイにより、PM00104およびペメトレキセドの併用は、抗腫瘍活性の増強をもたらすことが見出された。ペメトレキセド投与量の両方の投与量で、この増強は、アッセイの終わりに相加性を超えると等級付けされた。
【０４８２】
(実施例23)
ヒト肺癌異種移植片におけるペメトレキセドとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス14匹を含み、治療群は各々9マウス/群を有した。
【０４８３】
この試験に用いた腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、VA)から入手したヒト肺細胞系である、NCI-H460細胞系であった。この細胞系を、実施例19に記載した通りに増殖させ、動物に移植した。実験用マウス中にSC移植したのは、in vitroの第16継代からの細胞であった。
【０４８４】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。118±32mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 8日に開始した。
【０４８５】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。ペメトレキセドはペメトレキセド二ナトリウムを含む固体粉末の形態で提供され、これを0.9%食塩水中再構成した。
【０４８６】
試験群および治療レジメンをTable 98(表98)に列挙する。
【０４８７】
【表９８】
2011520921.tif 000101
【０４８８】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、2〜3回/週記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104およびペメトレキセド)間の平均腫瘍重量、対ペメトレキセドの平均腫瘍重量を比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０４８９】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０４９０】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０４９１】
Table 99(表99)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図111〜112は、対照、PM00104、ペメトレキセド、および対応する併用で治療したマウスにおけるNCI-H460腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０４９２】
【表９９】
2011520921.tif 000102
【０４９３】
Table 100(表100)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびペメトレキセド125mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびペメトレキセドの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のペメトレキセドとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０４９４】
【表１００】
2011520921.tif 000103
【０４９５】
Table 101(表101)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびペメトレキセド100mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびペメトレキセドの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のペメトレキセドとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０４９６】
【表１０１】
2011520921.tif 000104
【０４９７】
このアッセイにより、PM00104およびペメトレキセドの併用は、抗腫瘍活性の増強をもたらすことが見出された。ペメトレキセドの両方の投与量で、アッセイの終わりにこの増強は相加性を超えると等級付けされた。
【０４９８】
(実施例24)
ヒト中皮腫異種移植片におけるペメトレキセドとの併用におけるPM00104の効果を決定するためのin vivo試験
全ての実験に、メス胸腺欠損ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、WI)を利用した。動物を換気したラックケージ中に収容し、餌および水を自由に与えた。少なくとも5日間マウスを順化させた後、腫瘍を移植した。ビヒクル対照群はマウス15匹を含み、治療群は各々10マウス/群を有した。
【０４９９】
この試験に用いた腫瘍モデルは、DTP、DCTD腫瘍貯蔵所(tumor repository)から入手したヒト中皮腫細胞系である、H-Meso-1細胞系であった。H-Meso-1細胞を、10% FBSおよび2mM L-グルタミンを補ったRPMI-1640培地中で増殖させた。細胞を、13Gトロカールと一緒に1mlシリンジを用いて実験用マウス中にSC移植した:血清または抗生物質のないH-Meso-1の50%マトリゲル/50% RPMI培地0.2ml中細胞5×106個/マウス。細菌の培養を、試験を移植するのに用いる細胞に対して行った。培養物は全て、移植24時間後および48時間後両方とも、細菌の汚染に対して陰性であった。
【０５００】
実施例4に開示した通りに腫瘍の測定値を決定した。175±100mm3(平均値±SD)のサイズ範囲内で腫瘍が好適な体積に到達したら、LabCat(登録商標)In LifeモジュールV 8.0 SP1腫瘍追跡および測定ソフトウエアを用いることによって、マウスを腫瘍重量に基づいて治療群と対照群とに無作為化した。治療はDPI 6日に開始した。
【０５０１】
PM00104は、凍結乾燥PM00104粉末のバイアルの形態で提供され、これを注射用水で再構成した。ペメトレキセドはペメトレキセド二ナトリウムを含む固体粉末の形態で提供され、これを0.9%食塩水中再構成した。
【０５０２】
試験群および治療レジメンをTable 102(表102)に列挙する。
【０５０３】
【表１０２】
2011520921.tif 000105
【０５０４】
腫瘍サイズの測定値を、治療開始から試験終了まで、2〜3回/週記録した。アッセイした様々な濃度の、併用における2つの薬剤(PM00104およびペメトレキセド)間の平均腫瘍重量、対ペメトレキセドの平均腫瘍重量を比較して腫瘍増殖阻害を評価した。
【０５０５】
全ての評価時の全動物群に対する、平均値、標準偏差、および平均値の標準誤差を、腫瘍体積に対して決定した。試験の最終日を含む各測定日の腫瘍体積に対してスチューデントのt検定を行って、併用治療群と単一の単独療法治療群との間にいかなる統計的な有意差が存在するか否かを決定した。
【０５０６】
併用療法に対する増強の評価および相加性の程度に対する定義および判断基準は、実施例4に開示したものと同じであった。
【０５０７】
Table 103(表103)は各治療で得られた%T/C値を報告するものであり、図113〜114は、対照、PM00104、ペメトレキセド、および対応する併用で治療したマウスにおけるH-Meso-1腫瘍の腫瘍体積の評価(平均値±SEM)を示すものである。
【０５０８】
【表１０３】
2011520921.tif 000106
【０５０９】
Table 104(表104)は、PM00104 0.9mg/kg/日およびペメトレキセド100mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびペメトレキセドの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のペメトレキセドとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０５１０】
【表１０４】
2011520921.tif 000107
【０５１１】
Table 105(表105)は、PM00104 0.45mg/kg/日およびペメトレキセド100mg/kg/日の投与量で、単一薬剤として、および併用で投与したPM00104およびペメトレキセドの腫瘍増殖阻害の%を示すものである。さらに、PM00104の前記投与量のペメトレキセドとの併用の増強および相加性の程度を提供する。
【０５１２】
【表１０５】
2011520921.tif 000108
【０５１３】
このアッセイにより、PM00104およびペメトレキセドの併用は、抗腫瘍活性の増強をもたらすことが見出された。PM00104の両方の投与量で、この増強は、アッセイの終わりに相加性を超えると等級付けされた。
【図１】
2011520921.tif 000109
【図２】
2011520921.tif 000110
【図３】
2011520921.tif 000111
【図４】
2011520921.tif 000112
【図５】
2011520921.tif 000113
【図６】
2011520921.tif 000114
【図７】
2011520921.tif 000115
【図８】
2011520921.tif 000116
【図９】
2011520921.tif 000117
【図１０】
2011520921.tif 000118
【図１１】
2011520921.tif 000119
【図１２】
2011520921.tif 000120
【図１３】
2011520921.tif 000121
【図１４】
2011520921.tif 000122
【図１５】
2011520921.tif 000123
【図１６】
2011520921.tif 000124
【図１７】
2011520921.tif 000125
【図１８】
2011520921.tif 000126
【図１９】
2011520921.tif 000127
【図２０】
2011520921.tif 000128
【図２１】
2011520921.tif 000129
【図２２】
2011520921.tif 000130
【図２３】
2011520921.tif 000131
【図２４】
2011520921.tif 000132
【図２５】
2011520921.tif 000133
【図２６】
2011520921.tif 000134
【図２７】
2011520921.tif 000135
【図２８】
2011520921.tif 000136
【図２９】
2011520921.tif 000137
【図３０】
2011520921.tif 000138
2011520921.tif 000139
【図３１】
2011520921.tif 000140
【図３２】
2011520921.tif 000141
【図３３】
2011520921.tif 000142
【図３４】
2011520921.tif 000143
【図３５】
2011520921.tif 000144
【図３６】
2011520921.tif 000145
【図３７】
2011520921.tif 000146
【図３８】
2011520921.tif 000147
【図３９】
2011520921.tif 000148
【図４０】
2011520921.tif 000149
【図４１】
2011520921.tif 000150
【図４２】
2011520921.tif 000151
【図４３】
2011520921.tif 000152
【図４４】
2011520921.tif 000153
【図４５】
2011520921.tif 000154
【図４６】
2011520921.tif 000155
【図４７】
2011520921.tif 000156
【図４８】
2011520921.tif 000157
【図４９】
2011520921.tif 000158
【図５０】
2011520921.tif 000159
【図５１】
2011520921.tif 000160
【図５２】
2011520921.tif 000161
【図５３】
2011520921.tif 000162
【図５４】
2011520921.tif 000163
【図５５】
2011520921.tif 000164
【図５６】
2011520921.tif 000165
【図５７】
2011520921.tif 000166
【図５８】
2011520921.tif 000167
【図５９】
2011520921.tif 000168
【図６０】
2011520921.tif 000169
【図６１】
2011520921.tif 000170
【図６２】
2011520921.tif 000171
【図６３】
2011520921.tif 000172
【図６４】
2011520921.tif 000173
2011520921.tif 000174
【図６５】
2011520921.tif 000175
【図６６】
2011520921.tif 000176
【図６７】
2011520921.tif 000177
【図６８】
2011520921.tif 000178
【図６９】
2011520921.tif 000179
【図７０】
2011520921.tif 000180
【図７１】
2011520921.tif 000181
【図７２】
2011520921.tif 000182
【図７３】
2011520921.tif 000183
【図７４】
2011520921.tif 000184
【図７５】
2011520921.tif 000185
【図７６】
2011520921.tif 000186
【図７７】
2011520921.tif 000187
【図７８】
2011520921.tif 000188
【図７９】
2011520921.tif 000189
【図８０】
2011520921.tif 000190
【図８１】
2011520921.tif 000191
【図８２】
2011520921.tif 000192
【図８３】
2011520921.tif 000193
【図８４】
2011520921.tif 000194
【図８５】
2011520921.tif 000195
【図８６】
2011520921.tif 000196
【図８７】
2011520921.tif 000197
【図８８】
2011520921.tif 000198
【図８９】
2011520921.tif 000199
【図９０】
2011520921.tif 000200
【図９１】
2011520921.tif 000201
【図９２】
2011520921.tif 000202
【図９３】
2011520921.tif 000203
【図９４】
2011520921.tif 000204
【図９５】
2011520921.tif 000205
【図９６】
2011520921.tif 000206
【図９７】
2011520921.tif 000207
【図９８】
2011520921.tif 000208
【図９９】
2011520921.tif 000209
【図１００】
2011520921.tif 000210
【図１０１】
2011520921.tif 000211
【図１０２】
2011520921.tif 000212
【図１０３】
2011520921.tif 000213
【図１０４】
2011520921.tif 000214
【図１０５】
2011520921.tif 000215
【図１０６】
2011520921.tif 000216
【図１０７】
2011520921.tif 000217
【図１０８】
2011520921.tif 000218
【図１０９】
2011520921.tif 000219
【図１１０】
2011520921.tif 000220
【図１１１】
2011520921.tif 000221
【図１１２】
2011520921.tif 000222
【図１１３】
2011520921.tif 000223
【図１１４】
2011520921.tif 000224
【国際調査報告】
2011520921.tif 000225
2011520921.tif 000226
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