(57)【要約】  本発明者らは、ビタミンＤ３（コレカルシフェロール）、２５−ヒドロキシビタミンＤ３（カルシフェジオール）を用いて、高血圧症を治療することについて開示する。医薬組成物の形態と投与量ならびに、薬の製造方法についても開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
収縮期血圧を１２０ｍｍ  Ｈｇ未満までおよび／または拡張期血圧を８０ｍｍ  Ｈｇ未満まで下げるか、またはこれを維持するのに十分な量で、２５−ヒドロキシビタミンＤ３（２５−ＯＨ  Ｄ３）または２５−ＯＨ  Ｄ３とビタミンＤ３との組み合わせを、ヒトに投与することを含む、ヒトを治療する方法。
【請求項２】
ビタミンＤ３と２５−ヒドロキシビタミンＤ３とを別々にヒトに投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ビタミンＤ３と２５−ヒドロキシビタミンＤ３とを一緒にヒトに投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
毎日１回、毎週１回または毎月１回ヒトを治療する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
２５−ＯＨ  Ｄ３と任意にビタミンＤ３とを用いて、収縮期血圧を８０ｍｍ  Ｈｇ未満まで低下させるか維持する、使用法。
【請求項６】
収縮期血圧を８０ｍｍ  Ｈｇ未満まで下げるか、またはこれを維持することが可能な薬、栄養補給食品、栄養補助食品または食品の製造に、２５−ＯＨ  Ｄ３を用いる使用法。
【請求項７】
（ｉ）収縮期血圧を１２０ｍｍ  Ｈｇ未満までおよび／または拡張期血圧を８０ｍｍ  Ｈｇ未満まで下げるか、またはこれを維持するのに十分な量のビタミンＤ３および２５−ヒドロキシビタミンＤ３と、（ｉｉ）薬学的に許容可能なキャリアとを含む、組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［技術分野］
本発明は、２５−ヒドロキシビタミンＤ３（カルシフェジオール）または２５−ヒドロキシビタミンＤ３とビタミンＤとの組み合わせを使用して、高血圧症を治療または健康な血圧レベルを維持することに関する。
【０００２】
［背景技術］
ビタミンＤ（エルゴカルシフェロールおよびコレカルシフェロールなど）とは、それぞれの生物活性によって定義される脂溶性化合物の総称である。ビタミンＤの欠乏によって、子どもではくる病、成人では骨軟化症が起こる。しかしながら、数ヶ月間にわたって１日あたりの推奨摂取量（すなわち、ビタミンＤ５〜１５μｇまたは２００〜６００ＩＵ）の１００倍を超えて慢性的に摂取すると、毒性が生じる可能性がある。ビタミンＤの場合、「毒性の閾値は体重１ｋｇあたり１日で５００〜６００ｍｃｇである。通常、成人はＲＤＡの３倍を超えて長期間消費すべきではない」（Ｇａｒｒｉｓｏｎ  ＆  Ｓｏｍｅｒ，  Ｔｈｅ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，  Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄ．，  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，  ｐｇ．  ８２，  １９９７）。高カルシウム血症は、２５−ヒドロキシビタミンＤ３の血中濃度が３７５ｎｍｏｌ／Ｌを超えると生じることがある。最近になって、ビタミンＤ３の安全な上限レベルは少なくとも２５０μｇ／日であることが確認された（Ｈａｔｈｃｏｃｋら  Ａｍ．Ｊ  Ｃｌｉｎ．  Ｎｕｔｒ．  ８５：６〜１８，  ２００７）。このような健康補助食品を摂取すると、２５−ヒドロキシビタミンＤ３の血中濃度が約２００ｎｍｏｌ／Ｌになることが明らかになっている。
【０００３】
ビタミンＤはプロホルモンの１つである。ビタミンＤ３（コレカルシフェロール）が肝臓でヒドロキシル化されると２５−ヒドロキシビタミンＤ３（カルシフェジオール、２５−ＯＨ  ビタミンＤ３、２５−ＯＨ  Ｄ３）が生成され、これが腎臓や他の組織でさらにヒドロキシル化されて、ビタミンＤの活性ホルモン形態である１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（カルシトリオール）が生成される。カルシトリオールは、血液中に放出され、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）と結合し、標的組織まで運ばれる。カルシトリオールとビタミンＤ受容体とが結合することで、この複合体が細胞核で転写因子として機能するようになる。ビタミンＤは、血中のカルシウムとリンの濃度を調節する。また、骨の形成とミネラル化を促進する。しかしながら、極めて高いレベルでは、ビタミンＤが骨吸収を促進することもある。また、心臓血管系、免疫系、筋肉系の機能を調節することもある。疫学的研究では、ビタミンＤ摂取とそれが血圧またはグルコース代謝におよぼす影響との関連性が見いだされている。ビタミンＤの活性は、副甲状腺ホルモンによる負のフィードバック制御下にある。
【０００４】
ビタミンＤと２５−ＯＨ  Ｄ３は、ともに今まで医薬品として投与されてきている。ビタミンＤは、言うまでもなく、広く利用可能である。米国では以前、２５−ＯＨ  Ｄ３がオルガノン（Ｏｒｇａｎｏｎ）  ＵＳＡから「ＣＡＬＤＥＲＯＬ」という商品名で販売されていたが、現在はＦＤＡの販売中止対象薬の一覧に含まれている。これは、コーン油と２５−ＯＨ  Ｄ３を含有するゼラチンカプセルであった。
【０００５】
現在は、液状の２５−ＯＨ  Ｄ３が、スペインにてＦＡＥＳ  Ｆａｒｍａから「ＨＩＤＲＯＦＥＲＯＬ」という商品名で油性溶液として販売されている。
【０００６】
また、ビタミンＤ３と２５−ＯＨ  Ｄ３との組み合わせが、動物の飼料に用いられている。飼料用の２５−ＯＨ  Ｄ３は、ＤＳＭから「ＲＯＶＩＭＩＸ  ＨＹ−Ｄ」という商品名で市販されている。
【０００７】
５％〜５０％（ｗｔ／ｗｔ）の量で油に溶解された少なくとも２５−ＯＨ  Ｄ３と、２５−（ＯＨ）Ｄ３と油の液滴をカプセル化する作用剤、栄養添加剤（ビタミンＤ３など）を含む飼料プレミックス組成物が、Ｔｒｉｔｓｃｈら（米国特許出願公開第２００３／０１７０３２４号明細書）によって開示されている。このプレミックスを、家禽類、ブタ、イヌまたはネコ用の食品に添加してもよい。この組成物は、２５（ＯＨ）Ｄ３を酸化に対して安定させた。
【０００８】
２５（ＯＨ）ビタミンＤ３とビタミンＤ３の組み合わせを動物用の飼料に添加することが、Ｓｉｍｏｅｓ−Ｎｕｎｅｓら（米国特許出願公開第２００５／００６４０１８号明細書）によって開示されている。特に、約１０μｇ／ｋｇ〜約１００μｇ／ｋｇの２５（ＯＨ）ビタミンＤ３と、約２００ＩＵ／ｋｇ〜約４，０００ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ３を、ブタ用の飼料に添加する。この添加によって、ブタの骨強度が改善される。
【０００９】
２５−ＯＨ  Ｄ３とビタミンＤ３の組み合わせを家禽類用の飼料に添加して、脛骨軟骨発育不全症の影響を改善することが、Ｓｔａｒｋら（米国特許第５，６９５，７９４号明細書）によって開示されている。
【００１０】
Ｃｈｕｎｇらによる国際公開第２００７／０５９９６０号パンフレットには、ビタミンＤ３と２５−ＯＨ  Ｄ３の両方を含有する食餌を与えられた雌ブタで、全身の健康状態、体格、産仔数と健康、その他の生産パラメータが改善されることが開示されている。また、ヒト用の２５−ＯＨ  Ｄ３栄養補助食品が開示されているが、体重１ｋｇあたり５〜１５マイクログラムというその投与量の範囲は極めて高い。
【００１１】
Ｌｉら、２００２年、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １１０：２２９〜２３８には、マウスに１，２５（ＯＨ）２ビタミンＤ３を注射して、レニンを抑制することについて開示されている。彼らは、ビタミンＤ類似体が高血圧症を予防するか寛解させるのに寄与し得ることを示唆している。
【００１２】
本発明者らの知るところでは、従来技術は、２５−ヒドロキシビタミンＤ３を単独またはビタミンＤ３と併用してヒト用の薬として使用して高血圧症を治療することについては、何ら教示も示唆もしていない。
【００１３】
［発明の概要］
本発明によれば、単独ビタミンＤ３との組み合わせのいずれかで投与する２５−ＯＨ  Ｄ３を、薬または栄養補給食品、栄養補助食品または食品として使用して、健康な血圧を維持し、高血圧を予防し、高血圧のレベルを下げることが可能である旨が見いだされている。
【００１４】
本発明の一実施形態では、２５−ＯＨ  Ｄ３あるいは、２５−ＯＨ  Ｄ３とビタミンＤの両方を、ヒトに投与する方法が得られる。結果として、血圧を正常なレベル（収縮期血圧１２０ｍｍ  Ｈｇ未満および／または拡張期血圧８０ｍｍ  Ｈｇ未満など）まで下げるか、正常なレベルに維持することができる。規定投与量を、１日１回、１週間に１回または１ヶ月に１回投与してもよい。
【００１５】
別の態様では、ビタミンＤ３と、２５−ヒドロキシビタミンＤ３と、薬学的に許容されるキャリアとを、ヒトの血圧を正常化する量で含む、ヒトでの用途に適した医薬組成物が得られる。
【００１６】
本発明のさらに別の態様では、高血圧からの持続的な回復を提供するために、２５−ＯＨ  Ｄ３または２５−ＯＨとビタミンＤとの組み合わせを、従来の降圧治療薬と一緒に投与する。
【００１７】
本明細書および特許請求の範囲全体で使用する場合、以下の定義を適用する。
【００１８】
「ビタミンＤ」は、ビタミンＤ３（コレカルシフェロール）および／またはビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）のいずれかを示す。ヒトは、ビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）を生成できないが、これをビタミンＤ源として使うことはできる。ビタミンＤ２は、さまざまな植物によって合成可能であり、ビタミンＤに相当するものとしてサプリメントでビタミンＤに使用されることが多い。
【００１９】
「ビタミンＤ代謝物」は、２５−ヒドロキシビタミンＤ３以外のビタミンＤの代謝物を意味する。
【００２０】
「２５−ＯＨ  Ｄ３」は、具体的には２５−ヒドロキシビタミンＤ３を示す。
【００２１】
「２５−ＯＨ  Ｄ」は、血漿中に見られる主要な循環型であるビタミンＤ２またはビタミンＤ３のいずれかの２５−ヒドロキシル化代謝物を示す。
【００２２】
「予防する」には、疾患の寛解、症候の重篤度の低減、早期介入、疾患の発症期間の延長を含むことを想定しており、患者がその疾患にもはや羅患しないとか、何の症候も経験しないとかいった状況に限定されることを意図したものではない。
【００２３】
血圧は、手動または自動の血圧計で測定できる。「正常な」（動脈）血圧は、医療当局によって１１５／７５ｍｍ  Ｈｇまで徐々に低くなってきている。
【００２４】
［発明の詳細な説明］
ビタミンＤ３および２５−ヒドロキシビタミンＤ３は、どのような供給源から入手したものであってもよく、その組成物も従来の技術を用いて調製してもよい。通常、ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３またはその両方の結晶を、加熱攪拌しながら（別々にまたは一緒に）油に溶解させる。好ましくは、油を容器に移して加熱する。その後、油の温度を維持または経時的に上昇させながら、ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３またはその両方を容器に入れる。組成物を攪拌して、ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３またはその両方の結晶を溶解させる。油に入れる前に、製粉および／または篩過によって結晶の大きさを小さくし、溶解しやすくしておいてもよい。組成物の攪拌は、かき回し、容器の回転、混合、均質化、再循環または超音波処理によって実施してもよい。好ましくは、油を容器に入れて約８０℃〜約８５℃の温度まで加熱し、大きさを揃えた結晶を容器に入れ、中身をかき回して結晶を油に溶解させる。
【００２５】
「油」は、ババス油、ココナッツ油、コフネヤシ油、ムルムル脂、パーム核油またはホシダネヤシ油など、食用油、脂質または脂肪のいずれであってもよい。油は、天然油、合成油、半合成油またはこれらの組み合わせであってもよい。天然油は、どのような供給源に由来するものであってもよい（動物、植物、真菌、海洋など）；合成または半合成油は、都合のよい技術で製造してもよい。好ましくは、油は、植物中鎖トリグリセリド、主にカプリル酸およびカプリン酸の混合物である。組成物は、任意に、たとえば、酸化防止剤、保存剤、溶解剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤または緩衝剤、湿潤剤、これらの組み合わせなどの１種類以上の他の好適な成分を含むものであってもよい。上記は、薬学的に許容されるキャリアの例である。
【００２６】
好適な酸化防止剤は、ヒト用医薬品の用途向けに許容されるものであり、好適な酸化防止剤としては、トコフェロール、混合トコフェロール、天然または合成供給源由来のトコフェロール、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ローズマリー抽出物のような天然酸化防止剤、没食子酸プロピル、ヒト用医薬品の製造に用いられる他の任意の酸化防止剤があげられる。好ましくは、酸化防止剤がトコフェロールである。好適な保存剤としては、メチルパラベン、プロピルパラベン、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、安息香酸、これらの組み合わせがあげられる。好適な溶解剤としては、アルコール、塩素化炭化水素、これらの組み合わせなどの無機溶媒または有機溶媒があげられる。好適な界面活性剤は、パルミチン酸アスコルビル、ポリソルベート、ポリエチレングリコール、これらの組み合わせなど、アニオン系、カチオン系または非イオン系であってもよい。好適なｐＨ調整剤または緩衝剤としては、クエン酸−クエン酸ナトリウム、リン酸−リン酸ナトリウム、酢酸−酢酸ナトリウム、これらの組み合わせがあげられる。好適な湿潤剤としては、グリセロール、ソルビトール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、これらの組み合わせがあげられる。
【００２７】
油組成物を形成したら、これを他のさまざまな有用な組成物に取り込むことができる。そのうちのいくつかを、以下にあげておく。たとえば、エマルションを形成してもよく、これを任意にカプセル化または噴霧乾燥させてもよい。上述した非水性組成物を水性組成物と組み合わせることで、多岐にわたるエマルションを調製できる。エマルションは、どのようなタイプであってもよい。好適なエマルションとしては、水中油滴型エマルション、油中水滴型エマルション、無水エマルション、固体エマルション、マイクロエマルションがあげられる。エマルションの調製には、都合のよい任意の技術を使用してもよい。エマルションは、水性組成物と非水性（油など）組成物を含有し、後者は、油組成物の総重量に対して約３重量％〜約５０重量％の量で油に溶解されたビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３またはその両方を（別々にまたは一緒に）含む。本明細書で使用する場合、「水性組成物」および「水性相」は同義に用いられる。通常、エマルションは約２０％〜約９５％の水性組成物と、約５％〜約８０％の非水性組成物とを含み得る。しかしながら、好ましくは、エマルションが約８５％〜約９５％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）の水性組成物と、約５％〜約１５％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）の非水性組成物とを含有する。都合のよいことに、非水性組成物が液滴として水性組成物中に分散していてもよい。たとえば、液滴の平均直径が水性組成物中で約５００ｎｍ未満であってもよい。都合のよいことに、液滴の平均直径が約１００ｎｍ〜約２００ｎｍである。
【００２８】
特に有利な実施形態では、エマルションは、後にエマルションをさらに処理する（噴霧乾燥など）際に、油組成物のカプセル化を容易にするカプセル化剤を含有する。カプセル化剤は、油組成物をカプセル化できる食用物質であれば何でもよい。好ましくは、カプセル剤が主にコロイド状物質である。このような物質としては、デンプン、動物供給源由来のタンパク質（ゼラチンを含む）、植物供給源由来のタンパク質、カゼイン、ペクチン、アルギン酸塩、寒天、マルトデキストリン、リグニンスルホン酸塩、セルロース誘導体、糖質、糖類、ソルビトール、ゴム、これらの組み合わせがあげられる。
【００２９】
好適なデンプンとしては、植物デンプン（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｒｃｈ  ＆  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹのＣＡＰＳＵＬ（登録商標）またはＨＩ−ＣＡＰ（登録商標）など）、他の食品用化工デンプン、これらの組み合わせがあげられる。好ましくは、デンプンがＣＡＰＳＵＬ（登録商標）化工植物デンプンである。動物供給源由来の好適なタンパク質としては、ゼラチン（ウシゼラチン、ブルーム強度の異なるブタゼラチン（Ａ型またはＢ型）、魚ゼラチンなど）、脱脂乳タンパク質、カゼイン塩、これらの組み合わせがあげられる。好ましくは、動物タンパク質がゼラチンである。植物供給源由来の好適なタンパク質としては、ジャガイモタンパク質（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ  Ｐｒｅｒｅｓ  Ｓｏｃｉｅｔｅ  Ａｎｏｎｙｍｅ，  Ｌｅｓｔｒｅｍ，ＦｒａｎｃｅのＡＬＢＵＲＥＸ（登録商標）など）、マメタンパク質、ダイズタンパク質、これらの組み合わせがあげられる。好ましくは、植物タンパク質がＡＬＢＵＲＥＸ（登録商標）ジャガイモタンパク質である。デキストロース当量の異なる好適なマルトデキストリンとして、マルトデキストリン５、マルトデキストリン１０、マルトデキストリン１５、マルトデキストリン２０、マルトデキストリン２５、これらの組み合わせがあげられる。好ましくは、マルトデキストリンが、マルトデキストリン１５である。好適なセルロース誘導体として、エチルセルロース、メチルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、これらの組み合わせがあげられる。好適な糖類として、ラクトース、スクロースまたはこれらの組み合わせがあげられる。好ましくは、糖類がスクロースである。好適なゴムとして、アカシア、ローカストビーン、カラギーナン、これらの組み合わせがあげられる。好ましくは、ゴムがアカシアゴムである。
【００３０】
エマルションがカプセル化剤を含む場合、このカプセル化剤を都合のよい技術で水に分散させ、水性相を形成してもよい。水性相は、選択した成分の特性に応じて、溶液であっても混合物であってもよい。選択した成分の分散には、均質化、混合、乳化、再循環、静的混合、超音波処理、かき混ぜ、加熱またはこれらの組み合わせをはじめとする都合のよい技術を用いればよい。その後、得られる水性相の粘度を、必要に応じて水を加えて調整してもよい。エマルションの水性組成物は、非水性組成物に関して上述したものを含むがこれに限定されるものではない、他の好適な物質を任意に含むものであってもよい。好ましくは、水性組成物は、カプセル化剤、成膜剤、可塑剤、保存剤、酸化防止剤またはこれらの組み合わせを含むものであってもよい。好適な保存剤として、メチルパラベン、プロピルパラベン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、これらの組み合わせがあげられる。好適な酸化防止剤として、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸、クエン酸、これらの組み合わせがあげられる。
【００３１】
好ましくは、水性相が、オクテニルスクシニルデンプン（ＣＡＰＳＵＬ（登録商標））、マルトデキストリン、アスコルビン酸ナトリウムなどの食品用化工デンプンを含有する。別の好ましい水性相は、ジャガイモタンパク質（ＡＬＢＵＲＥＸ（登録商標））、マルトデキストリン２０、アスコルビン酸ナトリウムを含有する。選択した成分を水に溶解させるには、都合のよい技術、好ましくはかき混ぜを使用してもよい。混合物を、好ましくはこれが均一で塊のないものになるまで均質化する。好ましくは、約５０℃〜約７５℃の温度で均質化を実施する。その後、得られる水性相の最終粘度を、好ましくは約２５０ｃｐ〜約４５０ｃｐ、一層好ましくは約３００ｃｐ〜約４００ｃｐ、なお一層好ましくは約３８５ｃｐの所望の粘度に調整してもよい。
【００３２】
エマルションを形成するには、均質化、ロータ−ステータ剪断、高圧剪断およびキャビテーション、高速「カウリング」または剪断攪拌、これらの組み合わせをはじめとする任意の手段で、非水性組成物と水性相を乳化してもよい。エマルションの容量および粘度については、好ましくは、乳化後に水を加えて調整してもよい。好ましくは、非水性組成物および水性組成物を均質化によって乳化する。好ましくは、エマルションは、鉱物、遷移金属またはペルオキシドを含有しないものとする。
【００３３】
上述したように、他の有用な組成物、特に噴霧乾燥粉末などのカプセル化油の製造時に、エマルションを取り込むかまたは利用してもよい。通常、カプセル化油は、油組成物と、油組成物をカプセル化するカプセル剤とを含み、この場合の油組成物は、油に溶解されたビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３またはその両方を、油組成物の総重量に対して約３重量％〜約５０重量％の量で含有する。カプセル化油の製造には、噴霧乾燥、フリーズドライ、流動床乾燥、トレイ乾燥、吸着、これらの組み合わせをはじめとする従来の技術による上述したエマルションの乾燥など、都合のよい任意の技術を用いればよい。好ましくは、カプセル剤を含有する上記の水性相を有するエマルションを噴霧乾燥してカプセル化油を生成する。噴霧乾燥のパラメータは、最終的なカプセル化油に望ましい物理的特徴に左右される。このような物理的パラメータとしては、粒度、粉末の形状とフロー、水分含有量があげられる。好ましくは、油が、カプセル化油の総重量に対して約３０重量％未満、約２０重量％未満、約１０重量％未満または約５重量％未満の量である。カプセル化油は流動性に優れたものでなければならず、ビタミンＤ３および／または２５−ヒドロキシビタミンＤ３が組成物全体に均一に分散しなければならない。都合のよいことに、カプセル化油が粉末である。他の好適な添加剤をカプセル化油に加えてもよい。このような添加剤の１つが、カプセル化油の流動性を高めるための二酸化ケイ素などのフロー剤であってもよい。
【００３４】
この組成物は、錠剤、カプセル（硬質または軟質など）または注射液（油またはエマルションなど）の形で提供できるものである。これらを１日の単回用量ごとに包装してもよい。
【００３５】
［投与量］
毎日．２種類の有効成分を別々にまたは単独で投与する場合の本発明による組成物は、ビタミンＤまたは２５−ＯＨ  Ｄ３を、約１μｇ〜約５０μｇ、好ましくは約５μｇおよび２５μｇの量で含有する。あるいは、ビタミンＤと２５−ＯＨ  Ｄ３の両方を含む１日の単回投与量に、各有効成分を、約１μｇ〜約５０μｇ、好ましくは約５μｇおよび２５μｇの量で含有する。
【００３６】
ビタミンＤ対２５−ＯＨ  Ｄ３の用量比については、約５０：１〜約１：５０であってもよく、一層好ましくは約２５：１〜約１：２５、なお一層好ましくは約６：１〜約１：６であってもよい。
【００３７】
別個の複数の投与量を単一のキット（または容器）に梱包してもよい。たとえば、１日の投与量３０組を、両方の活性成分を別々に分けて（すなわち別々の６０の投与量）キットを構成してもよいし、混合（すなわち両方の有効成分を含有する３０の投与量）して構成してもよい。この投与量をヒトに投与するための指示をキットに入れておいてもよい。
【００３８】
毎週．１週間の単回投与量には、ビタミンＤまたは２５−ＯＨ  Ｄ３を約７μｇ〜約３５０μｇ、好ましくは約３５〜１７５μｇの量で含有する。あるいは、１週間の単回投与量が、ビタミンＤと２５−ＯＨ  Ｄ３の両方をそれぞれ約７μｇ〜約３５０μｇ、好ましくは約３５〜１７５μｇの量で含有してもよい。ビタミンＤ対２５−ＯＨ  Ｄ３の用量比については、約５０：１〜約１：５０であってもよく、一層好ましくは約２５：１〜約１：２５、なお一層好ましくは約６：１〜約１：６であってもよい。
【００３９】
毎月．１ヶ月の単回投与量には、ビタミンＤまたは２５−ＯＨ  Ｄ３を３０μｇ〜約１５００μｇ、好ましくは約７５μｇ〜約５００μｇの量で含有する。あるいは、１ヶ月の単回投与量が、ビタミンＤと２５−ＯＨ  Ｄ３の両方をそれぞれ、３０μｇ〜約１５００μｇ、好ましくは約７５μｇ〜約５００μｇの量で含有してもよい。１週間または１ヶ月の投与量を１組、２組、３組、４組、５組、６組、７組、８組、９組、１０組、１１組または１２組でキットを構成してもよい。
【００４０】
ビタミンＤ対２５−ＯＨ  Ｄ３の用量比については、５０：１〜約１：５０の範囲とし、一層好ましくは約２５：１〜約１：２５、なお一層好ましくは約６：１〜約１：６の範囲とする。
【００４１】
本発明の別の態様は、２５−ＯＨ  Ｄ３を、単独またはビタミンＤ３との組み合わせで、血圧を制御することが認められている従来の医薬品と同時投与することである。２５−ＯＨ  Ｄ３とともに投与すると、単独で投与する場合よりも当該医薬品の用量が少なくてすみ、結果として、患者に当該医薬品で考えられる副作用が生じる危険性が低くなるか、薬物−薬物相互作用の危険性が低くなる。
【００４２】
高血圧症の制御または低減に用いられる従来の医薬品の例としては、以下のものがあげられる。
・クロルタリドン、ヒドロクロロチアジド、インダパミド、メトラゾンなどの利尿薬
・ブメタニド、エタクリン酸、フロセミド、トルセミドなどのループ利尿薬
・塩酸アミロライド、スピロノラクトン、トリアムテレンなどのカリウム保持性利尿薬
・アドレナリン阻害薬：
○レセルピンなどの末梢性薬剤
○塩酸クロニジン、酢酸グアナベンズ、塩酸グアンファシン、メチルドパなどの中枢性α作動薬
○メシル酸ドキサゾシン、塩酸プラゾシン、塩酸テラゾシンなどのα遮断薬
○アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、フマル酸ビソプロロール、塩酸カルテオロール、酒石酸メトプロロール、コハク酸メトプロロール、ナドロール、硫酸ペンブトロール、ピンドロール、塩酸プロプラノロール、マレイン酸チモロールなどのβ遮断薬
○カルベジロール、塩酸ラベタロールなどのα＋β遮断薬
・塩酸ヒドララジン、ミノキシジルなどの直接血管拡張薬
・カルシウム拮抗薬
○塩酸ジルチアゼム、塩酸ベラパミルなどの非ジヒドロピリジン
○ベシル酸アムロジピン、フェロジピン、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニソルジピンなどのジヒドロピリジン
・塩酸ベナゼプリル、カプトプリル、マレイン酸エナラプリル、ホシノプリルナトリウム、リシノプリル、モエキシプリル、塩酸キナプリル、ラミプリル、トランドラプリルなどのＡＣＥ阻害剤
・ロサルタンカリウム、バルサルタン、イルベサルタンなどのアンジオテンシンＩＩ受容体ブロッカー
・これらの降圧薬または同様の降圧薬のさまざまな組み合わせも利用可能である。
【００４３】
高血圧症の要因として、低カルシウム、レニン−アンジオテンシン系の異常調節、インスリン耐性があげられる。高血圧症は、アテローム性動脈硬化症、心臓発作、心不全、腎症、網膜症、脳卒中の危険性を高める。
【００４４】
本発明の一態様は、高血圧を抑える、高血圧を予防するおよび／または正常な血圧を維持する上で有用な薬、食品または栄養補給食品の製造に、２５−ＯＨ  Ｄ３を用いることである。
【００４５】
［実施例］
［実施例１］
［ヒトの治験］
［材料および方法］
２５−ヒドロキシビタミンＤ３の噴霧乾燥製剤を粉末として提供した。要約すると、２５−ヒドロキシビタミンＤ３およびＤＬ−α−トコフェロールを中鎖トリグリセリドの油に溶解させた後、化工デンプン、スクロース、アスコルビン酸ナトリウムの水溶液に乳化した。このエマルションを二酸化ケイ素の存在下にて噴霧乾燥器で微粒化した。水分含有量（ＬＤＯ）が４％未満になったら、得られた粉末を回収し、４００μｍで篩過した。これをアルミ製の袋に包装して封止した後、１５℃未満の乾燥した場所で保管し、製造から１２ヶ月以内に使用した。
【００４６】
３種類のロットを製造した。詳しく説明すると、アンカー型攪拌羽根を備えるＦＲＹＭＩＸプロセスユニットで、７０℃にて真空下で１２０分間混合してマトリクスを生成した。
・１７．３００ｋｇの水（ＷＢＩ）
・１３．４６ｋｇの食品用化工デンプン（ＣＡＰＳＵＬ  ＨＳ）
・３．２７０ｋｇのスクロース
・０．７３０ｋｇのアスコルビン酸ナトリウム
【００４７】
プロペラスターラーを備える二重壁容器で、８２℃にて３５分間混合して、油相を調製した。
・０．５５０ｋｇのＢＥＲＧＡＢＥＳＴ  ＭＣＴ油６０／４０
・０．０４９ｋｇのカルシフェジオール（ＨＹ−Ｄ  ＵＳＰ）
・０．１８３ｋｇのＤＬ−α−トコフェロール
【００４８】
油相をＦＲＹＭＩＸプロセスユニット内のマトリクスに移し、内部のコロイドミル（６０分、７０℃）で事前乳化させた。この事前乳化物を高圧ホモジナイザに循環させた（２０分）。７０℃での粘度が６０ｍＰａ・ｓ〜９０ｍＰａ・ｓのエマルションを高圧ポンプでスプレーノズルまで送った。流動化剤として、二酸化ケイ素（ＳＩＰＥＲＮＡＴ  ３２０  ＤＳ）を塔に供給した。噴霧乾燥パラメータを以下にあげておく。
【００４９】
【表１】
2011511826.tif 000002
【００５０】
３ロットの２５−ヒドロキシビタミンＤ３それぞれについて、２５−ヒドロキシビタミンＤ３含有量約０．２５％の噴霧乾燥粉末平均８．４ｋｇを得た。製剤の他の成分は、食品用化工デンプン７３．２％、スクロース１７．６％、アスコルビン酸ナトリウム４．０％、中鎖トリグリセリド３．０％、二酸化ケイ素１．０％、ＤＬ−α−トコフェロール１．０％である。
【００５１】
ビタミンＤ３の噴霧乾燥製剤を粉末として提供した。要約すると、ビタミンＤ３およびＤＬ−α−トコフェロールを中鎖トリグリセリドの油に溶解させた後、化工デンプン、スクロース、アスコルビン酸ナトリウムの水溶液に乳化した。このエマルションを二酸化ケイ素の存在下にて噴霧乾燥器で微粒化した。水分含有量（ＬＯＤ）が４％未満になったら、得られた粉末を回収し、篩過して大きな塊を取り除いた。これを１５℃未満の乾燥した場所で保管し、製造から１２ヶ月以内に使用した。
【００５２】
［被験者］
インフォームドコンセントを用いて健康な閉経後の女性（５０〜７０歳）を募集し、以下の基準でふるい分けた。血清２５−ヒドロキシビタミンＤ３が２０ｎｍｏｌ／Ｌ〜５０ｎｍｏｌ／Ｌ、肥満度指数１８ｋｇ／ｍ２〜２７ｋｇ／ｍ２、血圧１４６／９５ｍｍ  Ｈｇ未満、血清カルシウム２．６ｎｍｏｌ／Ｌ未満、空腹時グルコース１００ｍｇ／ｄｌ未満、１週間に３回を超えて激しい運動をしない、高血圧症の治療歴なし、骨代謝に影響する高用量ビタミンＤまたはカルシウムサプリメントまたは薬物（ビスホスホネート、カルシトニン、エストロゲン受容体調節因子、ホルモン補充療法、副甲状腺ホルモン）の使用歴なし、研究中は「日当たりの良い」場所に足を運ばない。
【００５３】
被験者を７つの処理群（すなわち、毎日、毎週、一用量でのボーラス、組み合わせ用量でのボーラス）に無作為に振り分ける。各群を被験者５名ずつで構成する。彼らをスイスのチューリッヒで冬季に４ヶ月間追跡する。
【００５４】
［臨床研究］
目的は、ヒトに投与したビタミンＤ３および２５−ヒドロキシビタミンＤ３の薬物動態特性を研究および比較することであった。両方の物質を等モル量で調査した。レジメンは、２５−ヒドロキシビタミンＤ３を２０μｇ／日（またはそれに相当する量を週ベースで）とする。２５−ヒドロキシビタミンＤ３の既存の最大基線濃度が５０ｎｍｏｌ／Ｌになったら、Ｃａ２＋恒常性の乱れが観察される範囲に被験者が近づくとは思われない。比較目的で、等モル量のビタミンＤ３または２５−ヒドロキシビタミンＤ３のいずれかを投与する必要があった。ビタミンＤ３の投与に関しては、バックグラウンドのばらつきに影響されず、参加者にとっての有効用量を提供するのに十分な用量であると思われる。
【００５５】
毎日：１２０回投与
１．  ２５−ヒドロキシビタミンＤ３    ２０μｇ
２．  ビタミンＤ３        ２０μｇ（８００ＩＵ）
毎週：１６回投与
３．  ２５−ヒドロキシビタミンＤ３    １４０μｇ
４．  ビタミンＤ３        １４０μｇ（５６００ＩＵ）
ボーラス：単回投与
５．  ２５−ヒドロキシビタミンＤ３    １４０μｇ
６．  ビタミンＤ３        １４０μｇ（５６００ＩＵ）
ボーラス：組み合わせ投与
７．  Ｄ３および２５（ＯＨ）Ｄ３      １４０μｇ（５６００ＩＵ）＋１４０μｇ
【００５６】
ハードゲルカプセル（瓶入り）には、噴霧乾燥ビタミンＤ３または２５−ヒドロキシビタミンＤ３のいずれかが１カプセルあたり２０μｇまたは１４０μｇのいずれかで含まれている。各投与量を朝食時に経口摂取した。研究期間は、「毎日」および「毎週」群で４ヶ月であった。「ボーラス」群に登録された被験者は、２回目の研究での来訪時に単一投与量を経口摂取した。
【００５７】
この投与量を摂取後、さまざまな時点で被験者から試料を入手して、２５−ヒドロキシビタミンＤ３の血漿濃度（ピークおよび定常状態など）を求めた。スクリーニング目的と基線値を確立するために、研究への参加前に血液試料を採取し、臨床検査室で、血清中のビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３、カルシウム、クレアチニン、アルブミン、空腹時グルコースを測定した。研究１週目の月曜日に、血清ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の薬物動態；血清マーカー（すなわち、ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３、カルシウム、クレアチニン、アルブミン、ＰＴＨ、ＧＯＴ、ＧＰＴ、ＡＬＰ、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬ、総コレステロール、ｂＡＬＰ、空腹時グルコース）；尿マーカー（すなわち、カルシウム、クレアチニン、ＤＰＤ）を２４時間かけて評価する。１週目の残りの日と２週目の月曜日の１日試料を採取して、血清ビタミンＤ３および２５−ヒドロキシビタミンＤ３、血清マーカー（すなわち、カルシウム、クレアチニン、アルブミン）、尿マーカー（すなわち、カルシウム、クレアチニン）を評価する。３、５、７、９、１１、１３、１５週目の月曜日にも評価を継続する。１６週目の月曜日には、試料を採取して、血清ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３；血清マーカー（すなわち、ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３、カルシウム、クレアチニン、アルブミン、ＰＴＨ、ＧＯＴ、ＧＰＴ、ＡＬＰ、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬ、総コレステロール、ｂＡＬＰ、空腹時グルコース）；尿マーカー（すなわち、カルシウム、クレアチニン、ＤＰＤ）の薬物動態を評価する。
【００５８】
血圧の評価には、１週目の来訪時２（基線）と１週目の残りの４日間に、標準的なプロトコールを用いて（オムロン（ＯＭＲＯＮ）製の専門装置）拡張期血圧と収縮期血圧を測定した。２週目、３週目、５週目、７週目、９週目、１１週目、１３週目、１５週目の来訪時ごとに評価を継続した。
【００５９】
表１は、２５−ＯＨ  Ｄ３で毎日および毎週治療（１日あたり２０μｇ；１週間あたり１４０μｇ）後と、ビタミンＤ３で毎日および毎週治療後（１日あたり２０μｇ；１週間あたり１４０μｇ）の血圧を示す。治療期間は４ヶ月とした。値は、１３回の来訪にわたって繰り返し測定分析後に、２５−ＯＨ  Ｄ３対ビタミンＤ３の基線の血圧および時間に合わせて調整した、ＧＬＭ（一般線形モデル）の最小二乗平均をｍｍＨｇ単位で示したものである。
【００６０】
【表２】
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【００６１】
表２：ビタミンＤ３で毎日および毎週治療（１日あたり２０μｇ；１週間あたり１４０μｇ）した場合と比較した、２５−ＯＨ  Ｄ３で毎日および毎週治療後（１日あたり２０μｇ；１週間あたり１４０μｇ）の血圧の変化。治療期間は４ヶ月とした。値は、１３回の来訪にわたって繰り返し測定分析後に、２５−ＯＨ  Ｄ３対ビタミンＤ３の基線の血圧および時間に合わせて調整した血圧の低下をｍｍＨｇ単位で示したものである。
【００６２】
【表３】
2011511826.tif 000004
【００６３】
これらのデータから、２５−ＯＨ  Ｄ３で毎日または毎週治療すると、意外なことに同じ投与量のビタミンＤ３を摂取する場合に比して血圧の低下度合いがかなり大きくなることが分かる。２５−ＯＨ  Ｄ３での治療後、治療前ならびにビタミンＤ３での治療時に比して、被験者に一層顕著な血圧降下が認められた。２５−ＯＨ  Ｄ３対ビタミンＤ３で治療した被験者での収縮期血圧と拡張期血圧の降下は、それぞれ６．１ｍｍＨｇと１．４ｍｍＨｇであるが、これは臨床的に意義があり、なおかつあらゆる年齢層の被験者で有意な利益を表すエフェクトサイズである。
【００６４】
本研究の被験者は軽い高血圧にすぎず、血圧が１４６／９５ｍｍＨｇを超える被験者は研究に含まれていなかったため、本研究で観察された降下量はなお一層重要である。軽い高血圧の被験者の場合、現在市販されている降圧剤を用いても、通常は達成可能な降下量が小さい。このように、２５（ＯＨ）Ｄ３での治療が意外なことに極めて有効に血圧を下げたのに対し、ビタミンＤ３では効果が観察されなかった。
【００６５】
本明細書にて説明かつ権利請求している本発明は、本明細書に含まれる特定の実施形態によってその範囲が限定されるものではない。これらの実施形態は、本発明のいくつかの態様を例示することを意図したものだからである。等価な実施形態も本発明の範囲に含まれることを想定している。特に、本明細書で示して説明したもの以外にも、上記の説明を読めば、本発明のさまざまな改変が当業者には自明となろう。このような改変も、添付の特許請求の範囲に包含されることを想定している。矛盾が生じた場合は、定義を含めて本開示が優先するものとする。
【国際調査報告】
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