(57)【要約】  本発明は、遊離の塩基または酸付加塩の形態での式（A）：2011522784.tif 000048の新規化合物に関する。  本発明はまた、式（A）の化合物の製造法、それを含んでなる組成物、並びに治療上、特にがんにおけるその適用、に関する。
2011522784.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
遊離の塩基または酸付加塩の形態、並びに水和物または溶媒和物の形態での一般式（A）：
【化１】
2011522784.tif 000036
［式中、
Ｘは
【化２】
2011522784.tif 000037
であり、
Ｙは、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2またはＣＮであり；
Ｚは、Ｒ1−Ｃ≡Ｃ−または
【化３】
2011522784.tif 000038
であり、
Ｒ1及びＲ1aが、Ｃ1-18アルキル、Ｃ2-18アルケニル、Ｃ3-10シクロアルキル、Ｃ3-10シクロアルキル−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ3-10シクロアルケニル、Ｃ6-20アリール、Ｃ5-14アリール−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ3-10ヘテロシクリル、Ｃ3-10ヘテロシクリル−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ5-20ヘテロアリール若しくはＣ5-20ヘテロアリール−Ｃ1-6アルキレン基を表わし、これらの基が１または複数のＲ4で任意に置換されたものであり；
Ｒ2は、−ＮＨ2、−ＮＨＲ5、ヒドロキシルまたはＣ1-6アルコキシ基を表わし；
Ｒ3a、Ｒ3b、Ｒ3c及びＲ3dは、各々独立に、水素原子、Ｃ1-18アルキル、Ｃ2-18アルケニル、Ｃ6-20アリールまたは−Ｃ（Ｏ）Ｒ5を表わし；
Ｒ4は、ハロゲン原子、ヒドロキシル、−ＮＨ2、−ＮＨＲ5、−ＮＯ2、−ＣＮ、−ＣＦ3、−Ｃ（Ｏ）Ｒ5、Ｃ1-14アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、Ｃ6-20アリール、Ｃ5-20ヘテロアリールまたはＣ5-14アリール−Ｃ1-6アルキレン基を表わし；
Ｒ5は、Ｃ1-18アルキル、Ｃ2-18アルケニル、Ｃ2-18アルキニル、Ｃ5-14アリール、Ｃ3-10ヘテロシクリル、Ｃ5-20ヘテロアリール、Ｃ5-14アリール−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ5-14アリール−Ｃ2-18アルケニレン、Ｃ5-14アリール−Ｃ2-18アルキニレン、Ｃ5-20ヘテロアリール−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ5-20ヘテロアリール−Ｃ2-18アルケニレン、Ｃ5-20ヘテロアリール−Ｃ2-18アルキニレン、Ｃ3-10ヘテロシクリル−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ3-10ヘテロシクリル−Ｃ2-18アルケニレンまたはＣ3-10ヘテロシクリル−Ｃ2-18アルキニレンを表わす］
、の化合物。
【請求項２】
式（I）、（I’）または（I”）：
【化４】
2011522784.tif 000039
［式中、Ｙ、Ｒ1、Ｒ1a、Ｒ2、Ｒ3a、Ｒ3b、Ｒ3c及びＲ3dは、請求項１で定義される通りである］
の化合物である、請求項１に記載の式（A）の化合物。
【請求項３】
一般式（I）：
【化５】
2011522784.tif 000040
［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3a、Ｒ3b、Ｒ3cは、請求項１で定義される通りである］
の化合物。
【請求項４】
Ｒ1が、Ｃ6-20アリール基を表わし、当該基が１または複数の基Ｒ4で置換され；さらにＲ4がハロゲン原子、−ＣＦ3基、Ｃ1-6アルコキシまたはＣ1-14アルキル基を表わし；
他の基は請求項１で定義される通りである、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
式（II）：
【化６】
2011522784.tif 000041
［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3a、Ｒ3b及びＲ3cは、請求項３または４で定義される通りである］
によって表わされる、請求項３または４に記載の化合物。
【請求項６】
式（II）の化合物において、
Ｒ1は、Ｃ6-20アリール基を表わし、当該基が１または複数のＲ4で置換され；
Ｒ4は、−ＣＦ3またはＣ1-14アルキル基を表わし；
Ｒ2は、−ＮＨ2またはＣ1−Ｃ6アルコキシ基を表わし；
Ｒ3a、Ｒ3b及びＲ3cは、各々独立に、水素原子または−Ｃ（Ｏ）Ｒ5を表わし；
Ｒ5は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基である、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ1が、１つのＲ4と置換され、Ｒ4がパラ位にある、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
式（III）：
【化７】
2011522784.tif 000042
［式中、Ｒ1が、１または複数のＲ4で任意に置換され、Ｒ1及びＲ4は請求項３または４で定義される通りである］
の化合物によって表わされる、請求項３または４に記載の化合物。
【請求項９】
式（IV）：
【化８】
2011522784.tif 000043
［式中、Ｒ1が、１または複数のＲ4で任意に置換されており、Ｒ1及びＲ4は請求項３または４で定義される通りである］
の化合物によって表わされる、請求項３または４に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ1が、Ｃ1-18アルキル、Ｃ6-20アリール、Ｃ3-10シクロアルキルまたはＣ3-10シクロアルケニル基を表わし、これらの基が１または複数のＲ4で任意に置換されている、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ1がＣ6-20アリールを表わす場合、Ｒ1は１つのＲ4で置換され；Ｒ4はハロゲン原子、−ＣＦ3、Ｃ1-14アルキル基またはＣ1-6アルコキシ基を表わす、請求項９または１０に記載の化合物。
【請求項１２】
式（I）の化合物が：
‐メチル５−（４−トリフルオロメチルフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボキシレート；
‐メチル５−（シクロヘキセニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボキシレート；
‐５−（４−トリフルオロメチルフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−ヒドロキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボキシル酸アミド；
‐３−（４−ペンチルフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−ヒドロキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−５−カルボキシル酸アミド、
から選択される、請求項３に記載の化合物。
【請求項１３】
式（II’）：
【化９】
2011522784.tif 000044
［式中、Ｙ、Ｒ1及びＲ3dが請求項１で定義される通りである］
によって表わされる、請求項２に記載の式（I’）の化合物。
【請求項１４】
Ｒ1は、Ｃ6-20アリール基、特にフェニル基を表わし、当該基は１または複数のＲ4と置換され；
Ｒ4は、ハロゲン原子、特にＢｒ、または−ＣＦ3を表わし；
Ｙは、ＣＮまたはＣ（＝Ｏ）Ｒ2を表わし；
Ｒ2は、−ＮＨ2またはＣ1−Ｃ6アルコキシ基を表わし；
Ｒ3dは、水素原子または−Ｃ（Ｏ）Ｒ5を表わし；
Ｒ5は、Ｃ5-14アリール基である、請求項１３に記載の式（II’）の化合物。
【請求項１５】
‐１−（（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−５−（２−（４−ブロモフェニル）エチニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド；
‐１−［（２−（ベンゾイルオキシ）エトキシ）メチル］−５−（２−（４−トリフルオロメチルフェニル）エチニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド；及び
‐１−［（２−（ベンゾイルオキシ）エトキシ）メチル］−５−（２−（４−トリフルオロメチルフェニル）エチニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−ニトリル、
から選択される、請求項１４に記載の式（II’）の化合物。
【請求項１６】
式（II”）：
【化１０】
2011522784.tif 000045
［式中、Ｒ1a、Ｒ2及びＲ3dが、請求項１で定義される通りである］
によって表わされる、請求項２に記載の式（I”）の化合物。
【請求項１７】
Ｒ1aは、Ｃ1-18アルキル、またはＣ5-14アリール−Ｃ1-6アルキレン基を表わし；
Ｒ2は、−ＮＨ2またはＣ1−Ｃ6アルコキシ基を表わし；
Ｒ3dは、水素原子または−Ｃ（Ｏ）Ｒ5を表わし；
Ｒ5は、Ｃ1-18アルキル基である、請求項１６に記載の式（II”）の化合物。
【請求項１８】
‐１−（（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−５−（１−ドデシル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド；
‐メチル１−（（２−アセトキシエトキシ）メチル）−５−（１−（（ピレン−３−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキシレート；
‐１−（（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−５−（１−（（ピレン−３−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド；
‐１−（（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−３−（１−（（ピレン−３−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−カルボキサミド；
‐１−（（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−５−（１−（ナフタレン−１−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド；及び
‐メチル１−（（２−アセトキシエトキシ）メチル）−５−（１−（ピレン−３−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキシレート、
から選択される、請求項１７に記載の式（II”）の化合物。
【請求項１９】
式（VI）：
【化１１】
2011522784.tif 000046
［式中、Ｒ2、Ｒ3a、Ｒ3b及びＲ3cが、式（I）の化合物に関して記載する通りである］
の化合物が、
式（V）：
【化１２】
2011522784.tif 000047
［式中、Ｒ1が、式（I）の化合物に関して記載する通りである］
の化合物と、マイクロ波照射下でのＰｄ触媒薗頭カップリング反応に従って反応する、請求項３〜１２のいずれか１項に記載の式（I）の化合物の製造法。
【請求項２０】
請求項１〜１８のいずれか１項に記載の式（A）の化合物、または医薬として許容される塩のための当該化合物の付加塩、或いは当該化合物の水和物若しくは溶媒和化合物を含んでなる、医薬。
【請求項２１】
少なくとも１つの請求項１〜１８のいずれか１項に記載の式（A）の化合物、または医薬として許容される塩のための当該化合物の付加塩、或いは当該化合物の水和物若しくは溶媒和化合物並びに少なくとも１つの医薬的に許容される賦形剤を含んでなる、医薬組成物。
【請求項２２】
がんの治療及び／又は予防における使用のための、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２３】
膵臓がんの治療及び／又は予防における使用のための、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トリアゾール、特にトリアゾールヌクレオシドの誘導体、その調製、及び特にがん細胞、特に膵臓のがん細胞株の治療及び／又はがん細胞株の成長を防止するためのその治療上の適用、に関する。
【背景技術】
【０００２】
一部のトリアゾールヌクレオシド化合物は既に文献に開示されている。しかしながら、この医薬的性質は、あまり実証されていない。実際、ハロトリアゾールヌクレオシド化合物、アリールトリアゾリルヌクレオシド化合物及びビトリアゾリルヌクレオシド化合物は、Ｗｕ Ｑ．等、Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ ２００４，８７，８１１−８１９；Ｗａｎ Ｊ．等，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．， ２００６，４７，６７２７−６７３１；Ｚｈｕ Ｒ．等，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，２００７，４８，２３８９−２３９３；Ｘｉａ Ｙ．等，Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００７，５，１６９５−７０１；Ｌｉ Ｗ．等，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，２００８，４９，２８０４−２８０９に記載されており、それに関連した特定の医薬上の活性は記載されていない。
【発明の概要】
【０００３】
発明者は今回、式（A）のトリアゾールの新規誘導体、特に式（I）の化合物によって表わされるトリアゾールヌクレオシドが、強力な抗癌活性を有し、同時に、毒性は低い、ことを発見した。特に、彼等は、その新規誘導体は膵臓のがん細胞株に対して有効である、ということを実証する。
膵臓がんは最も致命的なヒトのがんの一つである。ほとんどの患者は転移が進行し、そして死に至る。このがんの攻撃力及び薬剤耐性の急速な発達のため、通常のがん治療はこのがんにほとんど影響を与えない。現在の第一の治療はゲムシタビン、ヌクレオシド薬剤に基づいている。しかしながら、この効果は控えめであり、そしてたった１２％の応答を有するだけである。従って、特に膵臓がんの治療のためにこれまでにない有効な候補を開発する必要がある。
【０００４】
発明者はここに、式（A）の新規トリアゾール誘導体、特に式（I）の化合物によって表わされるトリアゾールヌクレオシドが、顕著にＭｉａＰａＣａ及びＣａｐａｎ−２細胞株（膵臓がん株）の成長を抑制し、そして対照治療のゲムシタビンの強力な代替である、ことを説明する。
第一の態様によれば、本発明は、遊離の塩基または酸付加塩の形態、並びに水和物または溶媒和物の形態での一般式（A）：
【化１】
2011522784.tif 000003
［式中、
Ｘが、
【化２】
2011522784.tif 000004
であり、
Ｙが、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2またはＣＮであり；
Ｚが、Ｒ1−Ｃ≡Ｃ−または
【化３】
2011522784.tif 000005
であり、
Ｒ1及びＲ1aが、Ｃ1-18アルキル、Ｃ2-18アルケニル、Ｃ3-10シクロアルキル、Ｃ3-10シクロアルキル−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ3-10シクロアルケニル、Ｃ6-20アリール、Ｃ5-14アリール−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ3-10ヘテロシクリル、Ｃ3-10ヘテロシクリル−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ5-20ヘテロアリールまたはＣ5-20ヘテロアリール−Ｃ1-6アルキレン基を表わし、これらの基が１または複数のＲ4で任意に置換されたものであり；
Ｒ2が、−ＮＨ2、−ＮＨＲ5、ヒドロキシルまたはＣ1-6アルコキシ基を表わし；
Ｒ3a、Ｒ3b、Ｒ3c及びＲ3dは各々独立に、水素原子、Ｃ1-18アルキル、Ｃ2-18アルケニル、Ｃ6-20アリールまたは−Ｃ（Ｏ）Ｒ5を表わし；
Ｒ4は、ハロゲン原子、ヒドロキシル、−ＮＨ2、−ＮＨＲ5、−ＮＯ2、−ＣＮ、−ＣＦ3、−Ｃ（Ｏ）Ｒ5、Ｃ1-14アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、Ｃ6-20アリール、Ｃ5-20へテロアリールまたはＣ5-14アリール−Ｃ1-6アルキレン基を表わし；
Ｒ5は、Ｃ1-18アルキル、Ｃ2-18アルケニル、Ｃ2-18アルキニル、Ｃ5-14アリール、Ｃ3-10ヘテロシクリル、Ｃ5-20ヘテロアリール、Ｃ5-14アリール−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ5-14アリール−Ｃ2-18アルケニレン、Ｃ5-14アリール−Ｃ2-18アルキニレン、Ｃ5-20ヘテロアリール−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ5-20ヘテロアリール−Ｃ2-18アルケニレン、Ｃ5-20ヘテロアリール−Ｃ2-18アルキニレン、Ｃ3-10ヘテロシクリル−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ3-10ヘテロシクリル−Ｃ2-18アルケニレンまたはＣ3-10ヘテロシクリル−Ｃ2-18アルキニレンを表わす］
の化合物、に関する。
【０００５】
好適な実施形態によれば、式（A）の化合物は式（I）、（I’）または（I”）：
【化４】
2011522784.tif 000006
の化合物である。
式（A）、特に（I）、（I’）及び（I”）の化合物は、１または複数の不斉炭素原子を含んでよい。従って、これらはエナンチオマーまたはジアステレオ異性体の形態で存在する。これらのエナンチオマー及びジアステレオ異性体、並びにラセミ混合物を含むこれらの混合物は、本発明の一部を形成する。
【０００６】
式（A）、特に（I）、（I’）及び（I”）の化合物は、不飽和部を含んでよく、従ってこれらの互変異性型で存在してよい。本発明はまた、互変異性型の式（A）、特に（I）、（I’）及び（I”）の化合物にまで及ぶ。
式（A）、特に（I）、（I’）及び（I”）の化合物は、遊離の塩基の形態または酸付加塩の形態で提供することができ、これらはまた本発明の一部を形成する。これらの塩は、医薬的に許容される酸、または他の酸で調製することができ、これらは例えば式（A）、特に（I）、（I’）及び（I”）の化合物の精製または単離に有用であり、また本発明の一部を形成する。
式（A）、特に（I）、（I’）及び（I”）の化合物はまた、水和物または溶媒和物、すなわち、１または複数の水または溶媒分子との会合または結合の形態で存在することができる。このような水和物及び溶媒和化合物はまた、本発明の一部を形成する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】本発明の一部の化合物、化合物番号１及び４について、ゲムシタビンと比較したＭｉａＰａＣａ細胞上の用量依存性試験の結果を図示する。
【図２】本発明の一部の化合物、化合物番号１、２及び３について、ゲムシタビンと比較したＣａｐａｎ−２細胞上の用量依存性試験の結果を図示する。
【図３】本発明の一部の化合物、化合物番号１及び番号４について、ゲムシタビンと比較したＭｉａＰａＣａ細胞上のアポトーシス試験の結果を図示する。
【図４】ＭｉａＰａＣａ−２に対する活性化合物（14, 16, 18, 22）の用量依存性効果を図示する。
【図５】Ｃａｐａｎ−２に対する活性化合物（14, 18）の用量依存性効果を図示する。
【図６】フローサイトメトリによる、ＭｉａＰａＣａ−２に対する活性化合物（18）のアポトーシス評価を図示する。
【図７】カスパーゼ３及び７の切断アッセイによる、ＭｉａＰａＣａ−２に対する活性化合物（18）のアポトーシス評価を図示する。
【図８】ＥＬＩＳＡアッセイによる、ＭｉａＰａＣａ−２に対する活性化合物（18）のアポトーシス評価を図示する。
【図９】ＭｉａＰａＣａ−２細胞上でＭＴＴアッセイを使用することにより得られた結果に基づく、インビトロ（in vitro）での化合物（1, 4または18）の有利な組合せ効果を図示する。
【図１０】インビボ（in vivo）でのＭｉａＰａＣａ−２腫瘍成長における、単独或いはゲムシタビンとの組合せでの化合物（1または4）による薬剤処理の効果を図示する。
【図１１】単独或いはゲムシタビンとの組合せでの化合物（1または4）による薬剤処理の副作用の非存在を図示する。
【図１２】ゲムシタビンと併用の化合物１、及び化合物１８単独によるｐ−８ ｍＲＮＡ発現の下方制御効果を図示する。
【図１３】化合物４によるＭｉａＰａＣａ−２細胞中のＨｓｐ２７ ｍＲＮＡ発現の抑制を図示する。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明によれば、以下の用語は次の意味を有する：
ここで言及する例えばＣ1-18またはＣ1-10等の接頭語を有する用語はまた、より少数の炭素原子、例えばＣ1-8またはＣ1-6として使用することができる。例えば、用語Ｃ1−Ｃ6を使用する場合、相当する炭化水素鎖が１〜６の炭素原子を含んでよいということを意味する。例えば用語Ｃ3−Ｃ8を使用する場合、相当する炭化水素鎖または環は、３〜８の炭素原子を含んでよいということを意味する。
用語「ハロゲン原子」は、フッ素、クロリン、臭素またはヨード原子に相当する。
【０００９】
ここで使用されるように、用語「アルキル」は、飽和、直鎖または分岐の脂肪族基に言及する。次の例が挙げられる：メチル、エチル、１−プロピル、２−プロピル、１−ブチル、２−メチル−１−プロピル（i-Buとも呼ばれる）、２−ブチル（s-Buとも呼ばれる）、２−メチル−２−プロピル（t-Buとも呼ばれる）、１−ペンチル（n-ペンチルとも呼ばれる）、２−ペンチル、３−ペンチル、２−メチル−２−ブチル、３−メチル−２−ブチル、３−メチル−１−ブチル、２−メチル−１−ブチル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、２−メチル−２−ペンチル、３−メチル−２−ペンチル、４−メチル−２−ペンチル、３−メチル-３−ペンチル、２−メチル-３−ペンチル、２，３−ジメチル−２−ブチル、３，３−ジメチル−２−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル、ｎ−ウンデシル、ｎ−ドデシル、ｎ−トリデシル、ｎ−テトラデシル、ｎ−ペンタデシル、ｎ−ヘキサデシル、ｎ−ヘプタデシル、ｎ−オクタデシル。好適には、本発明によればアルキルは、メチル、エチル、１−プロピル、２−プロピル、１−ブチル、２−メチル−１−プロピル（i-Buとも呼ばれる）、２−ブチル（s-Buとも呼ばれる）、２−メチル−２−プロピル（t-Buとも呼ばれる）、１−ペンチル（n-ペンチルとも呼ばれる）、２−ペンチル、３−ペンチル、２−メチル−２−ブチル、３−メチル−２−ブチル、３−メチル−１−ブチル、２−メチル−１−ブチルである。
【００１０】
ここで使用される場合並びに特に明記しない限り、用語「シクロアルキル」は、上述の飽和環式アルキル基を意味する。次の例が挙げられる：シクロ-プロピル、メチルシクロプロピル、シクロブチル、メチルシクロブチル、メチルシクロペンチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、メチルシクロヘキシル、シクロヘプチル、メチルシクロヘプチル、シクロオクチル等、或いは他に飽和多環式のアルキル基、例えばノルボルニル、フェンキル、トリメチルトリシクロヘプチルまたはアダマンチル等。本発明によれば、好適なシクロアルキルは、シクロペンチルまたはシクロヘキシルである。
用語「アルケニル」は、直鎖または分岐の、少なくとも１つの不飽和部（通常1〜3、好適には1）、すなわち炭素−炭素ｓｐ２二重結合を含んでなる不飽和脂肪族基に相当する。次の例が挙げられる：エチレン、アリル。二重結合は、シスまたはトランス配列中に存在してよい。
【００１１】
用語「シクロアルケニル」は、上述の環式アルケニル基に相当する。次の例が挙げられる：シクロペンテニル、５−ヘキセニル、１−ヘキセニル。
ここで使用される用語「アルキニル」は、直鎖または分岐の、少なくとも１つの不飽和部（通常1〜3、好適には1）、すなわち炭素−炭素ｓｐ３三重結合を含んでなる不飽和脂肪族基に相当する。次の例が挙げられる：アセチレニル、プロパルギル。
用語「シクロアルキニル」は、上述の環式アルキニル基に相当する。次の例が挙げられる：シクロペンチン−１−イル、シクロヘキシン−１−イル。
用語「アルコキシ」は、アルキル基が上述のものである‐Ｏ‐アルキル基に相当する。次の例が挙げられる：メトキシ、エトキシ、プロポキシ。
【００１２】
ここで使用される用語「アリール」は、芳香族のモノまたはポリ環式基を意味する。単環式基の例には、フェニルが含まれる。多環式の環の例には、ナフタレン、アントラセン、ビフェニルが含まれる。
ここで使用される用語「ヘテロシクリル」または「ヘテロシクロアルキル」は、窒素、酸素、または硫黄原子から選択される少なくとも１つのヘテロ原子をさらに含んでなる上述のシクロアルキルに言及する。次の例が挙げられる：ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、１，４−ジオキサニル、１，４−ジチアニル、ホモモルホリニル、１，３，５−トリチアニル（trithianyl）、ピロリジニル、２−ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル。
【００１３】
ここで使用される用語「ヘテロアリール」は、５〜１４の炭素原子、並びに少なくとも１つのヘテロ原子、例えば窒素、酸素または硫黄原子等を含んでなる芳香族の、モノまたはポリ環式基に相当する。このようなモノ及びポリ環式ヘテロアリール基の例には次のものを含んでよい：ピリジル、ジヒドロピリジル、チアゾリル、チオフェニル、フラニル、アゾシニル、ピラニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ピロリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、トリアジニル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５，２−ジチアジニル、チアントレニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサンチニル（phenoxanthinyl）、２Ｈ−ピロリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、１Ｈ−インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、４ａＨ−カルバゾリル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、インドリニル、イソインドリニル、オキサゾリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、オキシインドリル、ベンゾオキサゾリニル、ベンゾチエニル、ベンゾチアゾリル、イサチニル、ピリジル、ジヒドロピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ｓ−トリアジニル、オキサゾリル、チオフラニル。
【００１４】
ここで使用される用語「アリール−アルキレン」は、上述のアルキル基であって、炭素原子に結合した水素原子の１つが上述のアリール基で置換された基に言及する。次の例が挙げられる：ベンジル、２−フェニルエチレン−１−イル、ナフチルメチレン、２−ナフチルエチレン−１−イル、ナフトベンジル、２−ナフトフェニルエチレン−１−イル。
この定義は類推により「ヘテロアリール−アルキレン」、「シクロアルキル−アルキレン」及び「ヘテロシクロアルキル−アルキレン」へ適用する。
ここで使用される用語「アリール−アルケニレン」は、炭素原子に結合した水素原子の１つが上述のアリール基で置換されたアルケニル基に言及する。次の例が挙げられる：２−フェニルエテン−１−イル、２−ナフチルエテン−１−イル。
【００１５】
この定義は、類推により「ヘテロアリール−アルケニレン」、「シクロアルキル−アルケニレン」及び「ヘテロシクロアルキル−アルケニレン」へ適用する。
ここで使用される用語「アリール−アルキニレン」は、炭素原子に結合した水素原子の１つが上述のようなアリール基と置換されたアルキニル基に言及される。次の例が挙げられる：２−フェニルエチン−１−イル、２−ナフチルエチン−１−イル。
この定義は、類推により「ヘテロアリール−アルキニレン」、「シクロアルキル−アルキニレン」及び「ヘテロシクロアルキル−アルキニレン」に適用する。
上述の環は、炭素原子またはヘテロ原子があればこれらを介して結合されてよい。
【００１６】
例えば、これらが炭素原子を介して結合される場合、これらはピリジンの２、３、４、５、または６位、ピリダジンの３、４、５、または６位、ピリミジンの２、４、５、または６位、ピラジンの２、３、５、または６位、フランの２，３，４，または５位、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロールまたはテトラヒドロピロール、オキサゾールの２、４、または５位、イミダゾールまたはチアゾール、イソオキサゾールの３、４、または５位、ピラゾール、またはイソチアゾール、アジリジンの２または３位、アゼチジンの２、３、または４位、キノリンの２、３、４、５、６、７、または８位或いはイソキノリンの１、３、４、５、６、７、または８位で結合される。さらに典型的には、炭素が結合した複素環には、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、５−ピリジル、６−ピリジル、３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル、６−ピリダジニル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、６−ピリミジニル、２−ピラジニル、３−ピラジニル、５−ピラジニル、６−ピラジニル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、または５−チアゾリルが含まれる。
【００１７】
例えば、これらがヘテロ原子、例えば窒素等を介して結合される場合、窒素が結合した複素環は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ−インダゾールの１位、イソインドール、またはイソインドリンの２位、モルホリンの４位、並びにカルバゾールまたはβ−カルボリンの９位で結合する。さらに典型的には、窒素が結合された複素環には、１−アジリジル、１−アゼテジル（azetedyl）、１−ピロリル、１−イミダゾリル、１−ピラゾリル、及び１−ピペリジニルが含まれる。
【００１８】
結合の表示にかかわらず、置換基が多価の場合（言及される構造中の置換基の位置に基づき）、置換基の任意の及びあらゆる可能な方向を対象とする。
以下に言及する「がんの予防薬及び／又は治療薬」は、がんに予防及び／又は治療作用を有する式（I）それ自体の化合物或いはこのような物質を含む医薬品であってよい。
【００１９】
本発明によれば、式（I）の化合物の中で、化合物の第一のグループは例えば：
‐Ｒ1が、基が１または複数のＲ4基で置換されたＣ6-20アリール基、特にフェニル基を表わし；及び
‐Ｒ4が、ハロゲン原子、特にフッ素、−ＣＦ3基、Ｃ1-6アルコキシ、特にメトキシまたはＣ1-14アルキル、特にメチルまたはｎ−ペンチル基を表わし、
他の基は前述の通りである、と定義することができる。
【００２０】
好適な式（I）の化合物の変異形はまた、式（II）：
【化５】
2011522784.tif 000007
［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3a、Ｒ3b及びＲ3cは、式（I）の化合物に関して前述する通りである。］
の化合物によって表わされる。
【００２１】
上記の式（II）の化合物の中で、本発明の好適な実施形態は、式（II）の化合物の１グループを含み、式中：
‐Ｒ1は、Ｃ6-20アリール基、特にフェニル基を表わし、当該基が１または複数のＲ4と置換されたものであり；
‐Ｒ4は、−ＣＦ3、またはＣ1-14アルキル基、特にメチルまたはｎ−ペンチルを表わし；
‐Ｒ2は、−ＮＨ2またはＣ1‐Ｃ6アルコキシ基、特にメトキシを表わし；
‐Ｒ3a、Ｒ3b及びＲ3cは各々独立に、水素原子または−Ｃ（Ｏ）Ｒ5；を表わし、Ｒ5はＣ1-6アルキル基、特にメチルである、である。
この最後のグループの化合物の中で、本発明の好適な実施形態には式（II）の化合物の１グループが含まれ、式中Ｒ1は１つのＲ4と置換され、Ｒ4はＣ6-20アリール基上のパラ配位にある。
【００２２】
他の好適な実施形態では、式（II）の化合物のグループは、Ｒ2がＣ1-6アルコキシ、特にメトキシを表わし、並びにＲ3a、Ｒ3b及びＲ3cが各々−Ｃ（Ｏ）Ｒ5基、を表わし、Ｒ5がＣ1-6アルキル基、特にメチルである場合、Ｒ1が任意に１または複数のＲ4で置換された、Ｃ3-10シクロアルケニル、特にシクロヘキセン−１−イル基を表わし、Ｒ4が式（I）の化合物に関して定義される通りである、と定義される。好適には、Ｒ1がＣ3-10シクロアルケニル、特にシクロヘキセン−１−イル基を表わす場合、Ｒ1は非置換型である。
他の好適な実施形態では、式（II）の化合物の１グループは、例えばＲ2が−ＮＨ2を表わし、Ｒ3a、Ｒ3b及びＲ3cが各々水素原子を表わす場合、Ｒ1は、１または複数のＲ4で任意に置換されたＣ3-10シクロアルキル、特にシクロペンチル基を表わし、Ｒ4はヒドロキシル基である、と定義される。
【００２３】
式（I）の好適な化合物の変異形は、式（III）：
【化６】
2011522784.tif 000008
［式中、Ｒ1は、１または複数のＲ4で任意に置換され、Ｒ1及びＲ4は式（I）の化合物に関して前述した通りであり、「Ａｃ」はアセチル基−Ｃ（Ｏ）ＣＨ3を表わす］
の化合物によって表わされる。
【００２４】
より詳細には、式（III）の化合物において、Ｒ1はＣ6-20アリール基、特にフェニル基、Ｃ3-10シクロアルキル、特にシクロペンチルまたはシクロヘキシル基、或いはＣ1-18アルキル、特にｎ−プロピル基を表わし、当該基は１または複数のＲ4基で置換されており、或いはＲ1はＣ3-10シクロアルケニル、特に１または複数のＲ4で任意に置換されたシクロヘキセン−１−イル基を表わし；Ｒ4は式（I）の化合物に関して前述した通りである。
好適には、このグループにおいて、Ｒ4はハロゲン原子、特にフッ素またはクロリン或いはヒドロキシル基である。
【００２５】
特に、式（III）の化合物において、Ｒ1がＣ6-20アリール基、特にハロゲン原子である１つのＲ4で置換されたフェニル基を表わす場合、Ｒ4はパラ配位にある。
好適には、式（III）の化合物において、Ｒ1がＣ3-10シクロアルキル、特にシクロペンチルまたはシクロヘキシルを表わし、これが1つのＲ4で置換され、Ｒ4がヒドロキシル基である場合、Ｒ4は当該シクロアルキルの1位にある。
さらに特定の変異形では、好適な式（I）の化合物は式（IV）：
【化７】
2011522784.tif 000009
［式中、Ｒ1は１または複数のＲ4で任意に置換され、Ｒ1及びＲ4は式（I）の化合物に関して前述した通りである。］
の化合物によって表わされる。
【００２６】
この最後のグループの化合物中で、本発明の好適な実施形態は式（IV）の化合物のグループを含み、式中：
‐Ｒ1は、Ｃ1-18アルキル基、特にｎ−プロピル基、Ｃ6-20アリール、特にフェニル基、Ｃ3-10シクロアルキル、特にシクロペンチルまたはシクロヘキシル或いはＣ3-10シクロアルケニル、特にシクロヘキセン−１−イル基を表わし、当該基は１または複数のＲ4で任意に置換され、Ｒ4は式（I）の化合物に関して前述した通りである。好適には、この場合において、Ｒ4はハロゲン、特にフッ素またはクロリン原子、−ＣＦ3、ヒドロキシル、Ｃ1-14アルキル基、特にｎ−ペンチルまたはＣ1-6アルコキシ、好適にはメトキシである。
【００２７】
好適な実施形態において、式（IV）の化合物のグループは、例えば、Ｒ1がＣ6-20アリール、特にフェニル基を表わす場合、Ｒ1は１つのＲ4で置換され；Ｒ4はハロゲン原子、−ＣＦ3、Ｃ1-14アルキル基、特にｎ−ペンチルまたはＣ1-6アルコキシ、特にメトキシを表わす、と定義される。
このような場合、Ｒ4は好適にはパラ位に位置する。
他に記述しない限り、式（I）の化合物に関して述べることはまた、式（II）、（III）及び（IV）の化合物のサブグループに対しても有用である。
【００２８】
本発明によれば、式（I）の化合物の中で、化合物の次のリスト：
‐メチル５−（４−トリフルオロメチルフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ−リボフラノシル）‐１Ｈ‐[１，２，４］トリアゾール−３−カルボキシレート；
‐メチル５−（シクロヘキセニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ‐Ｏ‐アセチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−[１，２，４］トリアゾール−３−カルボキシレート；
‐５−（４−トリフルオロメチルフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−ヒドロキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−[１，２，４］トリアゾール−３−カルボキシル酸アミド；
‐３−（４−ペンチルフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−ヒドロキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−[１，２，４］トリアゾール-５−カルボキシル酸アミド；
‐５−（４−ペンチルフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−ヒドロキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−[１，２，４］トリアゾール−３−カルボキシル酸アミド；
‐３−（４−フルオロフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−ヒドロキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−[１，２，４］トリアゾール−５−カルボキシル酸アミド；
‐３−（３−フルオロフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−ヒドロキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−[１，２，４］トリアゾール−５−カルボキシル酸アミド；
‐３−（２−フルオロフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−ヒドロキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−[１，２，４］トリアゾール−５−カルボキシル酸アミド；
‐３−（４−トリフルオロメチルフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−ヒドロキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−[１，２，４］トリアゾール−５−カルボキシル酸アミド；
‐３−（４−メトキシフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−ヒドロキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−[１，２，４］トリアゾール−５−カルボキシル酸アミド；
‐３−（５−クロロペント−１−イニル）−１−（２，３，５−トリ−ヒドロキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−[１，２，４］トリアゾール-５−カルボキシル酸アミド；
‐３−（１−ヒドロキシシクロヘキシルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−ヒドロキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−[１，２，４］トリアゾール−５−カルボキシル酸アミド；
‐３−（シクロヘキセニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−ヒドロキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−[１，２，４］トリアゾール−５−カルボキシル酸アミド、
が挙げられる。
【００２９】
より好適には、式（I）の化合物の次のリスト：
‐メチル５−（４−トリフルオロメチルフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボキシレート；
‐メチル５−（シクロヘキセニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ‐Ｏ‐アセチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボキシレート；
‐５−（４−トリフルオロメチルフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−ヒドロキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボキシル酸アミド；
‐３−（４−ペンチルフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−ヒドロキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−５−カルボキシル酸アミド、
が挙げられる。
【００３０】
式（I’）の好適な化合物の変異形はまた、式（II’）：
【化８】
2011522784.tif 000010
の化合物によって表わされる。
上記の式（II’）の化合物中、本発明の好適な実施形態には式（II’）の化合物の１グループが含まれ、式中：
‐Ｒ1は、Ｃ6-20アリール基、特にフェニル基を表わし、当該基は１または複数のＲ4と置換されており；
‐Ｒ4は、ハロゲン原子、特にＢｒ、または−ＣＦ3を表わし；
‐Ｙは、ＣＮまたはＣ（＝Ｏ）Ｒ2を表わし；
‐Ｒ2は、−ＮＨ2またはＣ1−Ｃ6アルコキシ基、特にメトキシを表わし；
‐Ｒ3dは、水素原子または−Ｃ（Ｏ）Ｒ5を表わし；Ｒ5は、Ｃ5-14アリール基、特にフェニルである。
【００３１】
より好適には、式（I’）の化合物の次のリストを挙げることができる：
−１−（（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−５−（２−（４−ブロモフェニル）エチニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール-３−カルボキサミド；
−１−［（２−（ベンゾイルオキシ）エトキシ）メチル］−５−（２−（４−トリフルオロメチルフェニル）エチニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド；及び
−１−［（２−（ベンゾイルオキシ）エトキシ）メチル］−５−（２−（４−トリフルオロメチルフェニル）エチニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−ニトリル。
式（I”）の好適な化合物の変異形はまた、式（II”）：
【化９】
2011522784.tif 000011
の化合物によって表わすことができる。
【００３２】
上記の式（II”）の化合物中、本発明の好適な実施形態には、式（II”）の化合物の１グループが含まれ、式中：
‐Ｒ1aは、Ｃ1-18アルキル、またはＣ5-14アリール−Ｃ1-6アルキレン基を表わし；
‐Ｒ2は、−ＮＨ2またはＣ1‐Ｃ6アルコキシ基、特にメトキシを表わし；
‐Ｒ3dは、水素原子または−Ｃ（Ｏ）Ｒ5を表わし；Ｒ5はＣ1-18アルキル基、特にメチルである。
【００３３】
より好適には、式（I”）の化合物の次のリストを挙げることができる：
−１−（（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−５−（１−ドデシル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド；
−メチル１−（（２−アセトキシエトキシ）メチル）−５−（１−（（ピレン−３−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキシレート；
−１−（（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−５−（１−（（ピレン−３−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド；
−１−（（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−３−（１−（（ピレン−３−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−カルボキサミド；
−１−（（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−５−（１−（ナフタレン−１−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド；及び
−メチル１−（（２−アセトキシエトキシ）メチル）−５−（１−（ピレン−３−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキシレート。
【００３４】
本発明によれば、式（I）の化合物及び式（II）,（III）及び（IV）の化合物のサブグループを、次のステップに従って調製することができる。
開始化合物及び反応物は他に記述しない限り、市販のまたは文献に記載されるものである、或いは文献に記載のまたは当業者に知られる方法に従って調製することができる。
【００３５】
式（I）の化合物、並びに式（I）の化合物のサブグループを表わす式（II）、（III）及び（IV）の化合物の調製は、スキーム１に図示されるように、マイクロ波照射下でのＰｄ触媒薗頭カップリング反応を使用することによって実施することができる。
【化１０】
2011522784.tif 000012
スキーム１によれば、式（VI）の化合物は、式中Ｒ2、Ｒ3a、Ｒ3b及びＲ3cは、式（I）の化合物に関して定義される通りであり、当該化合物は周知の薗頭反応に従って、式中Ｒ1が式（I）の化合物に関して定義される通りである式（V）の化合物と反応させる。
【００３６】
より正確には、式（V）の化合物及び式（VI）の化合物は、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（0）、ＣｕＩ、トリエチルアミンの存在下で添加され、そしてアルゴン下で新鮮な蒸留アセトニトリル（MeCN）中に懸濁させた。容器を密封しそして１００℃で２５分間マイクロ波を照射し、室温まで冷却した。反応混合物を減圧下で濃縮し、続いて未精製の残渣をフラッシュクロマトグラフィでシリカゲル上で精製した（石油エーテル: 酢酸エチル, 2:1）。対応する生成物を提供するために、精製した物質を真空内で乾燥させた。
他の実施形態によれば、式中Ｒ2が−ＮＨ2を表わし、並びにＲ3a、Ｒ3b及びＲ3cが全て水素原子を表わす式（I）の化合物は、式中Ｒ2がアルコキシ、特にメトキシを表わし、並びにＲ3a、Ｒ3b及びＲ3cが−Ｃ（Ｏ）Ｒ5を表わし、Ｒ5が特にアルキル基である式（I）の化合物からＮＨ3／ＭｅＯＨ中の更なる溶解によって得ることができ、室温で２日間攪拌した。次に、溶媒を除去し、不純物のない状態でアンモノリシス生成物を産生するために残渣をＣＨ2Ｃｌ2で洗浄した。
【００３７】
式（V）の化合物及び触媒は、アクロス（Acros）またはランカスター（Lancaster）から購入することができる。
式（I’）の化合物の調製は、スキーム２に図示されるように、上述のようにマイクロ波照射下でＰｄ触媒薗頭カップリング反応を使用することによって実施することができる。
【化１１】
2011522784.tif 000013
【００３８】
式（I”）の化合物の調製は、スキーム３に図示されるように、ヒュスゲン環化付加反応を使用することによって実施することができる。適当な手順は、特にシア（Xia Y.）等（Org. Biomol. Chem., 2007, 5, 1695-701 及びLi W. 等, Tetrahedron Lett., 2008, 49, 2804-2809）によって開示される。
【化１２】
2011522784.tif 000014
【００３９】
化合物（VI）、（VI’）及び（VI’’）は、ウー（Wu Q.）等（Helv. Chim. Acta 2004, 87, 811-819; Wan J. 等, Tetrahedron Lett., 2006, 47, 6727-6731）が記載した手順に従って合成した。
マイクロ波補助反応をバイオタージによって生産されるイニシエータ（商標登録）クリエーター上で実施した。
1Ｈ ＮＭＲスペクトルを３００または６００ＭＨｚで、13Ｃ ＮＭＲスペクトルを７５または１５０ＭＨｚで、各々バリアンマーキュリー（Varian Mercury）−ＶＸ３００及びバリアンイノバ（Varian Inova）−６００分光計上で記録した。
【００４０】
化学シフトを、内部標準としてＴＭＳを使用し百万分率（ppm）で記録した。
ＺＡＢ−ＨＦ−３Ｆ及びフィニガンＬＣＱアドバンテージ（Finnigan LCQ Advantage）質量分析計を各々使用して、ＦＡＢ及びＥＳＩ質量スペクトルを測定した。
イオンスペック４．７テスラフーリエ（IonSpec 4.7 Tesla Fourier）変換質量分析計を使用して、マトリクッス補助レーザー脱離／イオン化質量分析（MALDI-MS）によって高分解能質量スペクトルを得た。
【００４１】
シリカゲル（200-300メッシュ）上でフラッシュクロマトグラフィを実施することにより全化合物を精製した。
次の実施例は、本発明の一部の化合物の合成を記載する。これらの実施例は制限的であることを意図するものではなく、単に本発明を図示するものである。実施例で括弧中に表示される数値は、表ＩＩ中のものを言及する。
【実施例】
【００４２】
実施例１：メチル５−（４−トリフルオロメチルフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ‐Ｏ‐アセチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボキシレート（化合物番号1）の調製
テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（0）（28.9 mg, 0.025 mmol）、ＣｕＩ（9.5mg, 0.05 mmol）及びトリエチルアミン（0.8 mL, 5.7 mmol）の存在下で、メチル５−ブロモ−１−［２，３，５−トリ‐Ｏ‐アセチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキシレート（232.0 mg, 0.5 mmol）及び４−トリフルオロメチルフェニルエチニル（0.5 mmol）をアルゴン下で４ｍＬの新鮮な蒸留ＭｅＣＮ中に懸濁した。容器を密封し、１００℃で２５分間マイクロ波を照射し、続いて室温まで冷却した。反応混合物を減圧下で濃縮し、そして未精製の残渣をシリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィによって精製した（石油エーテル: 酢酸エチル, 2:1）。対応する生成物を提供するために、精製した物質を真空内で乾燥した。
淡黄色の固形物として単離された、１７７．１ｍｇの生成物が得られた。
【００４３】
【表１】
2011522784.tif 000015
【００４４】
実施例２： メチル５−（シクロヘキセニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ‐Ｏ‐アセチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボキシレート（化合物番号2）
シクロヘキセン−１−イルエチニルを使用したことを除いて、実施例１に記載されるように反応を実施した。
無色油として単離された、９１．６ｍｇの生成物が得られた。
【００４５】
【表２】
2011522784.tif 000016
【００４６】
実施例３： ５−（４−トリフルオロメチルフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−ヒドロキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボキシル酸アミド（化合物番号3）
実施例１に従って調整したメチル−５−（４−トリフルオロメチルフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ‐Ｏ‐アセチル−β−Ｄ−リボフラノ−シル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボキシレート（177.1mg, 0.32 mmol）を、０．２ＭのＮＨ3／ＭｅＯＨ中で溶解し、室温で２日間攪拌した。続いて溶媒を除去し、残渣をＣＨ2Ｃｌ2で洗浄した。白色の固形物として生成物を得た。
白色の固形物として単離された、１１４．８ｍｇの生成物が得られた。
【００４７】
【表３】
2011522784.tif 000017
【００４８】
実施例４： ３−（４−ペンチルフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ−ヒドロキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−５−カルボキシル酸アミド（化合物番号4）
４−ペンチルフェニルエチニルを使用したことを除いて実施例１で前述の基本手順に従って、メチル３−（４−ペンチルフェニルエチニル）−１−（２，３，５−トリ‐Ｏ‐アセチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−５−カルボキシレート（205.6 mg, 0.37 mmol）を調製した。続いて得られた生成物を０．２ＭのＮＨ3／ＭｅＯＨに溶解し、室温で２日間攪拌した。次に溶媒を除去し、そして残渣をＣＨ2Ｃｌ2で洗浄した。
白色の固形物として単離された１１３．５ｍｇの生成物が得られた。
【００４９】
【表４】
2011522784.tif 000018
【００５０】
本発明の他の化合物は、上術の実施例に関して記載した方法で類推により調製することができる。実施例に関して、化合物番号５〜１３（表I）を、さらに調製した。
【００５１】
【表５−１】
2011522784.tif 000019
【表５−２】
2011522784.tif 000020
【表５−３】
2011522784.tif 000021
【表５−４】
2011522784.tif 000022
【表５−５】
2011522784.tif 000023
【００５２】
実施例５：
１−（（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−５−（２−（４−ブロモフェニル）エチニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド（化合物番号14）の調製
４−ブロモメチルフェニルエチニル（34.1mg, 1.2eq）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（0）（12.3 mg, 0.1eq）、ＣｕＩ（1.7 mg, 0.05 eq）、Ｌｉ2ＣＯ3（31.2 mg, 2 eq）及び５−ブロモ−１−［（２−ヒドロキシエトキシ）メチル］−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド（40.3mg）を、アルゴン下で２．８ｍＬのジオキサン／Ｈ2Ｏ（3/1）中で懸濁した。容器を密封し、１００℃で２５分間マイクロ波照射へ供し、続いて室温まで冷却した。反応混合物を減圧下で濃縮し、未精製の残渣をシリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィによって精製した（ＣＨ2Ｃｌ2 / ＣＨ3ＯＨ, 20:1）。対応する生成物を提供するために、精製した物質を真空内で乾燥した。
淡黄色の固形物として単離された、２６．６ｍｇの生成物が得られた。
【００５３】
【表６】
2011522784.tif 000024
【００５４】
実施例６：１−［（２−（ベンゾイルオキシ）エトキシ）メチル］−５−（２−（４−トリフルオロメチルフェニル）エチニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド（化合物番号15）
１−（（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−５−（２−（４−トリフルオロメチルフェニル）エチニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３カルボキサミド（35.8mg）、Ｂｚ2Ｏ（27.2mg, 1.2 eq）及びＤＭＡＰ（12.5 mg, 0.1eq）をＣＨ2Ｃｌ2中に溶解し、室温で２４時間攪拌し、この時ＴＬＣ分析から開始物質の完全な消費が示された。反応混合物中の溶媒を蒸発させ、シリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィにより残渣を精製した（ＣＨ2Ｃｌ2 /ＣＨ3ＯＨ, 30:1）。対応する生成物を提供するために、精製した物質を真空内で乾燥した。
白色粉末として単離された、３７．６ｍｇの生成物が得られた。
【００５５】
【表７】
2011522784.tif 000025
【００５６】
実施例７：１−［（２−（ベンゾイルオキシ）エトキシ）メチル］−５−（２−（４−トリフルオロメチルフェニル）エチニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−ニトリル（化合物番号16）
ＰＯＣｌ3（5mL）中の化合物番号１５（37.4 mg）の溶液を、７０℃で１時間加熱し、続いて濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ中で溶解し、次に水性の飽和ＮａＨＣＯ3、水及びブラインで洗浄した。有機相をＮａ2ＳＯ4中で乾燥させ、続いて濃縮した。シリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィによって未精製の生成物を精製した（石油エーテル / EtOAc, 6:1）。対応する生成物を提供するために、精製した物質を真空内で乾燥した。
白色粉末として単離された、１５．４ｍｇの生成物が得られた。
【００５７】
【表８】
2011522784.tif 000026
【００５８】
実施例８： １−（（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−５−（１−ドデシル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド（化合物番号17）
メチル１−（（２−アセトキシエトキシ）メチル）−５−エチニル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキシレート（26.6 mg, 0.1 mmol）、ＣｕＳＯ4５Ｈ2Ｏ（1.3 mg, 0.05eq）及びアスコルビン酸ナトリウム（10.2 mg, 0.5eq）を、混合溶媒システム（THF / H2O = 1/3, 4 ml）中にアルゴン保護下で溶解した。アジド（28.0 mg, 1.2 eq）を添加した。黄色混合物を４５℃で攪拌し、この時ＴＬＣ分析によりアルキンの全消費が示された。反応混合物中の溶媒を蒸発させ、シリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィにより残渣を精製した（石油エーテル / EtOAc, 1:1）。生成物番号１７−１（39.3 mg）を提供するために生成物を真空内で乾燥した。
４５．６ｍｇの化合物番号１７−１を１０ｍｌの飽和ＮＨ3／ＭｅＯＨに溶解し、室温で１日間攪拌した。次に溶媒を除去し、シリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィにより残渣を精製した（CH2Cl2 / CH3OH, 20:1）。対応する生成物を提供するために精製した物質を真空内で乾燥した。
白色粉末として単離された、３５．６ｍｇの生成物が得られた。
【００５９】
【表９】
2011522784.tif 000027
【００６０】
実施例９： メチル１−（（２−アセトキシエトキシ）メチル）−５−（１−（（ピレン−３−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキシレート（化合物番号18）
メチル１−（（２−アセトキシエトキシ）メチル）−５−エチニル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール-３−カルボキシレート（26.1 mg, 0.1 mmol）、ＣｕＳＯ4５Ｈ2Ｏ（1.2 mg, 0.05 eq）及びアスコルビン酸ナトリウム（10.3 mg, 0.5 eq）をアルゴン保護下で混合溶媒システム（THF / H2O = 3/1, 4 ml）に溶解した。アジド（30 mg, 1.2 eq）を添加した。黄色混合物を４５℃で攪拌し、この時ＴＬＣ分析からアルキンの完全な消費が示された。反応混合物中の溶媒を蒸発させ、シリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィにより残渣を精製した（石油エーテル / EtOAc, 1:1）。対応する生成物を提供するために、生成物を真空内で乾燥した。
白色粉末として単離された、５２．２ｍｇの生成物が得られた。
【００６１】
【表１０】
2011522784.tif 000028
【００６２】
実施例１０： １−（（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−５−（１−（（ピレン−３−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド（化合物番号19）
５２．２ｍｇの化合物番号１８を１０ｍｌの飽和ＮＨ3／ＭｅＯＨに溶解し、室温で１日間攪拌した。続いて溶媒を除去し、シリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィにより残渣を精製した（CH2Cl2 / CH3OH, 20:1）。対応する生成物を提供するために、精製した物質を真空内で乾燥させた。
白色粉末として単離された、３６．９ｍｇの生成物が得られた。
【００６３】
【表１１】
2011522784.tif 000029
【００６４】
実施例１１：１−（（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−３−（１−（（ピレン−３−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−カルボキサミド（化合物番号20）
メチル１−（（２−アセトキシエトキシ）メチル）−３−エチニル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−カルボキシレートを使用したことを除いて、実施例５及び６に記載するように反応を実施した。
白色の固形物として単離された、７７．７ｍｇの生成物が得られた。
【００６５】
【表１２】
2011522784.tif 000030
【００６６】
実施例１２： １−（（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−５−（１−（ナフタレン−１−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド（化合物番号21）
１−アジドナフタレンを使用したことを除いては、実施例５及び６に記載するように反応を実施した。
白色の固形物として単離された、３２ｍｇの生成物が得られた。
【００６７】
【表１３】
2011522784.tif 000031
【００６８】
実施例１３： メチル１−（（２−アセトキシエトキシ）メチル）−５−（１−（ピレン−３−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキシレート（化合物番号22）
１−アジドピレンを使用したことを除いて、実施例５に記載するように反応を実施した。
白色の固形物として単離された、４１．７ｍｇの生成物が得られた。
【００６９】
【表１４】
2011522784.tif 000032
【００７０】
本発明の化合物に対して、これらの抗癌特性及び治療上の活性物質としての価値を実証する薬理学的試験を実施した。
Ａ．本発明の化合物の細胞生存に対する抑制効果の予備測定及び検討
この試験は、ゲムシタビンと同様の効力を示す、より好適にはゲムシタビンより強力である化合物を検討するために実施した。
膵臓がん細胞株、ＭｉａＰａＣａ細胞を、１０％ウシ胎児血清（FBS）で補充したＤＭＥＭ培地（Gibco）に培養した。９６ウェルビュープレート（View Plate）（商標登録）（パッカード社）（Packard）で、上述の同一成分を含む培地２５０μｌの１ウェルあたり１５，０００細胞の密度で細胞を播種した。
【００７１】
Ｃａｐａｎ−２細胞株に関しては、１０％ＦＢＳ及び１％グルタミンを補充したＲＰＭＩ １６４０培地で細胞を培養した。９６ウェルビュープレート（View Plate）（商標登録）（パッカード社）（Packard）で、上述の同一成分を含む培地２５０μｌの１ウェルあたり２万細胞の密度で細胞を播種した。
細胞を２４時間接着及び増殖させた。この時、培地を除去し、続いて１０ｎＭ〜２００μＭの試験化合物の段階希釈物を培地に添加した。ゲムシタビン及び未処理のものをポジティブ及びネガティブコントロールとして含めた。さらに、プレートを３７℃及び５％ＣＯ2で４８時間インキュベートした。適当な処理後に残っている生存細胞の数を比色アッセイ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド，ＭＴＴ）により測定した。
本発明の化合物の異なる用量：５０μＭ、１００μＭ及び２００μＭで、ＭｉａＰａＣａ及びＣａｐａｎ−２細胞の抑制を試験した。
本発明の化合物は、がん細胞上で顕著な抑制活性を示す。実際に、本発明の化合物は、化学耐性がん細胞株（MiaPaCa）及び／又は化学感受性がん細胞株（Capan-2）に特に強力である。
【００７２】
本発明の化合物の薬剤感受性及び／又は耐性がん細胞の抑制効果は、少なくとも１０％である。好適には、１０％〜９０％、より好適には１５％〜８０％、さらに好適には２０％〜６５％である。実際、本発明の最も強力な化合物は、５０μＭで５０％以上の抑制を示す。
化学耐性及び急成長のＭｉａＰａＣａ並びに化学感受性及び成長の遅いＣａｐａｎ−２細胞株において、最低用量で、すなわち５０μＭでの本発明の一部の化合物に関して、結果を示す。同じ濃度で使用した対照薬剤ゲムシタビンと比較した結果を表ＩＩ及び表ＩＩＩに示す。
【００７３】
【表１５】
2011522784.tif 000033
【００７４】
表ＩＩに示されるように、本発明の化合物はゲムシタビンと同様の効力を示し、好適にはゲムシタビンより強力なことである。
より詳細には、表ＩＩによれば、本発明の化合物はＭｉａＣａＰａ及び／又はＣａｐａｎ−２細胞株に活性がある。例えば：
‐化合物番号１は、両細胞タイプに５０％以上の抑制を示す。
‐化合物番号２は、化学感受性の及び成長の遅いＣａｐａｎ−２細胞により強力であるが、化学耐性及び急成長のＭｉａＰａＣａ細胞にも顕著な抑制活性を示す。
‐化合物番号３は、化学耐性及び急成長の細胞と比較して、化学感受性の及び成長の遅いＣａｐａｎ−２細胞により強力である。
‐化合物番号４は、化学耐性及び急成長のＭｉａＰａＣａ細胞により強力であるが、化学感受性の及び成長の遅いＣａｐａｎ−２細胞にもまた非常に良好な抑制活性を示す。
【００７５】
【表１６】
2011522784.tif 000034
【００７６】
表ＩＩＩに関して、本発明の化合物は、ＭｉａＣａＰａ及び／又はＣａｐａｎ−２細胞株に活性がある。例えば：
‐化合物番号１４は、両細胞タイプに５０％以上の抑制を示す。
‐化合物番号１５は、両細胞タイプに５０％以上の抑制を示す。
‐化合物番号１６は、両細胞タイプに５０％以上の抑制を示す。
‐化合物番号１７は、化学耐性及び急成長のＭｉａＰａＣａ−２細胞により強力である。
‐化合物番号１８は、両細胞タイプに５０％以上の抑制を示す。
‐化合物番号１９は、化学耐性及び急成長のＭｉａＰａＣａ−２細胞により強力であり、また化学感受性の及び成長の遅いＣａｐａｎ−２細胞に中等度の抑制活性を示す。
‐化合物番号２０は、化学感受性の及び成長の遅いＣａｐａｎ−２細胞により強力である。
‐化合物番号２１は、化学感受性及び成長の遅いＣａｐａｎ−２細胞により強力である。
‐化合物番号２２は、化学感受性及び成長の遅いＣａｐａｎ−２細胞により強力であるが、また化学耐性及び急成長のＭｉａＰａＣａ−２細胞に中等度の抑制活性を示す。
ゲムシタビンと比較した本発明の化合物の優位性を示すために、さらなる実験（以下のB.及びC.を参照）を実施した。
【００７７】
Ｂ．本発明の一部の化合物の細胞生存に対する用量依存性効果（図1, 2, 4及び5）
細胞を９６ウェルプレート上の２５０μＬ培地中に播種し、２４時間後に、試験する化合物を目的とする最終濃度（10 nM 〜200 μM）まで２５０μＬの培地に添加した。４８時間後、適当な処理後に残っている生存細胞の数をＭＴＴにより測定した。最小有効量（MED）及びＩＣ50値を用量依存性試験から評価した。図１、２、４及び５の結果は、コントロールの未処理細胞と比較して、細胞成長抑制のパーセンテージで示す。
【００７８】
化学耐性及び急成長のＭｉａＰａＣａに関して、本発明の試験した化合物、すなわち化合物番号１及び４の結果を、図１に示す：
‐５０μＭの化合物番号１または４で、約６０％の細胞が死滅し、そして
‐１００μＭの化合物番号１または４で、８０％以上の細胞が死滅し、
‐一方、５０μＭまたは１００μＭのゲムシタビンでは、細胞生存率が停滞し、そして用量の増加とは非依存的に約８０％の細胞が生存したままである。
化学感受性の及び成長の遅いＣａｐａｎ−２に関する本発明の試験した化合物、すなわち化合物番号１、２及び３の結果を、図２に示す：
‐５０μＭの化合物番号１で、約６０％の細胞が死滅し、
‐１００μＭの化合物番号１で、８０％以上の細胞が死滅し、そして１００μＭ以上の化合物番号２又は３の用量に関しては細胞生存率は急速に減少し、一方ゲムシタビンでは細胞生存率は用量の増加とは非依存的に停滞している。
ＭｉａＰａＣａ−２に関する活性化合物（14, 16, 18, 22）の用量依存性効果を図４に、Ｃａｐａｎ−２に関する活性化合物（14, 18）用量依存性効果を図５に示す。
結果として、本発明の化合物は、がん細胞、例えば化学耐性及び急成長のＭｉａＰａＣａ細胞並びに化学感受性の及び成長の遅いＣａｐａｎ−２細胞等に対して活性を有し、従ってがんの治療のため、特に、ゲムシタビン等の既知の薬剤がほとんど効果を有しない及び／又は患者に耐性が生じるがんの治療のための有望な活性成分を構成する。
【００７９】
Ｃ．フローサイトメトリ（図 3及び6）、カスパーゼ３／７切断アッセイ（図 7）、及びＥＬＩＳＡアッセイ（図 8）による、本発明の化合物のＭｉａＰａＣａ細胞に対するアポトーシス評価
１０ｃｍのディッシュに３０万細胞／プレートの密度で細胞を蒔いた。処理後１２、２４及び４８時間のフローサイトメトリ分析のために、細胞を停止させた。トリプシン処理後、細胞ペレットをＰＢＳで洗浄し、低温エタノール７０％中で４℃でオーバーナイトで固定した。リン酸クエン酸バッファーで洗浄後、細胞を２００μＬのＲＮＡアーゼ（500 μg/mL）で処理し、１ｍＬのヨウ化プロピジウム（50 μg/mL）で標識し、フローサイトメトリ（FACS Calibur, Becton Dickinson, Le Pont-De-Claix, France）で即座に分析した。ｓｕｂ−Ｇ０の割合を評価して、細胞死分析を１００万細胞上で行った。各サンプルを３通りに実施した。図３は、未処理のコントロール細胞と比較したアポトーシスの速度比を示す。
本発明の化合物について、この割合はゲムシタビンより高い。本発明の化合物番号１で、この割合は特に高い。実際、適用の２４時間後、アポトーシスは未処理細胞に比べ約８倍高く、ゲムシタビンで処理した細胞に比べ約４倍高い。
フローサイトメトリによる活性ＭｉａＰａＣａ−２に対する活性化合物（18）のアポトーシス評価を、図６に表わす。
【００８０】
図７は、化合物番号１８でのＭｉａＰａＣａにおけるカスパーゼ−３／７の切断アッセイを表わす。カスパーゼ−３／７の活性を、アポワンホモジーニアス（Apo-ONE Homogeneous）カスパーゼ−３／７アッセイ蛍光定量キット（Promega）を使用して測定した。ＭｉａＰａＣａ−２細胞をまず９６ウェルプレート上に１５，０００細胞／ウェルで播種した。２４時間後、細胞を試験化合物で４８時間処理し、製造者（Promega）の指示に従ってフルオロ蛍光定量基質（fluorometric substrate）Ｚ−ＤＥＶＤ−Ｒ１１０の切断によってカスパーゼ−３活性を測定した。次に１００μＬのアポワンホモジーニアスカスパーゼ−３／７試薬を１００μＬのブランク、コントロールまたは培養中の細胞を含有するブラック９６ウェルプレートの各ウェルへ添加した。各実験を３通り実施した。プレートをプレートシーラーで覆い、各ウェルの蛍光を測定する前に室温で３０分間インキュベートした。
【００８１】
アポトーシスもまた、アポトーシスの間に生成された細胞質ヌクレオソームを定量化する酵素結合免疫測定法（ELISA）により評価した（細胞死検出ELISA plus, Roche）。細胞を９６ウェルプレート中に２４時間播種し（15,000 細胞 / ウェル）、試験化合物処理した、またはネガティブコントロールとして未処理とした。４８時間後、９６ウェルプレートを１０分間遠心分離し（200g）、上清を廃棄し、溶解バッファを添加した。溶解後、サンプルを遠心分離し、２０μＬの上清をストレプトアビジンでコーティングしたマイクロタイターのプレートへ移した。ビオチンでコーティングした抗ヒストン抗体及びペルオキシダーゼを結合させた抗ＤＮＡ抗体を各ウェルへ添加し、そしてプレートを室温で２時間インキュベートした。バッファーでの３回の洗浄後、捕捉されたヌクレオソームを定量化するためにペルオキシダーゼ基質を各ウェルへ添加した。２０分のインキュベーション後、プレートをマイクロプレートリーダー中で４０５／４９０ｎｍで読んだ。コントロールと比較して、ヒストン−ＤＮＡ断片中の濃縮が、吸光度中に倍増して発現された。結果を図８に記載する。
【００８２】
用量依存性試験及びアポトーシス試験（実験B. 及びC.）から、未処理の細胞及びゲムシタビンで処理した細胞と比較して、本発明の化合物はがん細胞で顕著な増殖抑制及びアポトーシス増加を示すことが実証される。
【００８３】
Ｄ．インビトロ（in vitro）でのゲムシタビンとの有利な組合せ効果
ゲムシタビンと組合わせた３つの化合物（化合物番号1, 4及び18）の抗癌活性を評価した。図９は、ゲムシタビンの１または１８との結合が抗増殖により効率的であることを示す。
【化１３】
2011522784.tif 000035
【００８４】
Ｅ．インビボ（in vivo）での薬剤処理のＭｉａＰａＣａ−２腫瘍成長における効果
活性化合物１及び４の抗腫瘍効果をＭｉａＰａＣａ−２の異種移植の腫瘍を有するヌードマウスで評価した。研究におけるヒトによる動物の適当な使用に関する機関のガイドラインに従った。約１×１０7のＭｉａＰａＣａ−２細胞を０．１ｍＬのマトリゲル（BD Biosciences Discovery Labware）で異種移植した６週齢のオスのヌードマウスに皮下接種した。ＭｉａＰａＣａ−２腫瘍が１００ｍｍ3に達した時、マウスを試験化合物での処理のためにランダムに選択し、未処理マウスをコントロールとして使用した。各実験群は、８匹のマウスから成っていた。ランダムに選択後、１５０ｍｇ／ｋｇの試験化合物を口腔内注射により３日ごとに５週間注射した。組合せ注射を１日ごとに実施した。腫瘍容量測定を週に一度実施し、式 長さ×幅×深さ×０．５２３６によって算出した。
図１０は、１及び４での処理がＭｉａＰａＣａ−２腫瘍容積を減少し得ることを示す。特に、１をゲムシタビンと組合せた場合に、腫瘍成長は顕著にほぼ抑制された。使用した実験条件で、副作用は観察されなかった（図 11）。
【００８５】
Ｆ．化合物の細胞内標的の同定
ストレスに関連するタンパクであり、抗アポトーシス特性を有するｐ−８が、最も耐性の強い膵臓がん細胞株２つで強く発現され、一方熱ショックタンパク質２７（Hsp27）は、多くの腫瘍細胞で過剰発現され得るタンパク質であり、様々な刺激によって誘発されるアポトーシス細胞死を防ぐ。従って、活性化合物の細胞内標的を調査するために、活性化合物のＭｉａＰａＣａ−２細胞におけるｐ−８及びＨｓｐ２７ ｍＲＮＡの発現に対するの効果を定量ＲＴ−ＰＣＲによって調べた。エキスパンドリバーストランスクリプターゼ（Expand Reverse Transcriptase）（Roche, Meylan, France）を使用して製造者の指示に従って、１μｇの総ＲＮＡを有する２０μＬの反応中で、第一鎖ｃＤＮＡを合成した。ライトサイクラーシステム（Roche）及びタカラ（Berkeley, CA）試薬で定量ＰＣＲを行った。５マイクロリッターの１０倍希釈のｃＤＮＡを、１０μＬのＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ（Taq ポリメラーゼ, 反応バッファー, MgCl2, SYBR green I 色素, 及びデオキシヌクレオチド 三リン酸混合物を含む）並びに４ｎｍｏｌの順方向及び逆方向プライマー（TBPプライマーをコントロールとして使用した）と共に容積２０μＬ中で混合した。９５℃で１０秒間の初期Ｔａｑ活性（initial Taq activation）後、次のサイクリング条件：９５℃で５秒間、５８℃で６秒間、及び７２℃で１２秒間、で４５〜５５サイクルを使用してライトサイクラーＰＣＲを行った。各サンプルを繰り返し分析し、実験を２度繰り返した。レルクアント（ＲｅｌＱｕａｎｔ）（Roche）を使用して結果を分析し、コントロール値のパーセントとして表わした。
【００８６】
図１２から、ゲムシタビン及び１の組合せによって、ｐ−８ ｍＲＮＡ発現が下方制御されたことが示された。特にここで、化合物１８の１回処理はｐ−８の発現を有意に抑制し得る。
図１３から、ＭｉａＰａＣａ−２細胞中のＨｓｐ２７ ｍＲＮＡ発現は、４の処理によってほぼ完全に抑制されたことが示された。
【００８７】
従って、本発明は、膵臓のがん細胞における有意な増殖抑制及びアポトーシス増殖を示す新しい化合物を提供する。上述のインビボ（in vivo）での活性化合物の試験によって、これらの化合物が動物モデルで副作用なく腫瘍成長を抑制することができることが確認された。さらに、上述の結果から、活性化合物のがん細胞に対する抗増殖効果が、抗アポトーシスタンパク質ｐ−８及びＨｓｐ２７の発現を抑制するこれらの能力に関連するかもしれないことが示される。
【００８８】
本発明の化合物は、低毒性のがん予防の及び／又は治療の薬剤を表わし、ヒトを含む哺乳類でがんを治療及び／又は予防することを目的とする組成物の調製に有用である。
従って、本発明の対象は、がん、例えば、脳腫瘍、髄芽腫、神経膠腫、下垂体腫瘍、神経膠細胞、聴神経腫、咽頭がん、喉頭がん、舌がん、胸腺腫、中皮腫、乳がん、肺がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、胃がん、食道がん、結腸直腸がん、結腸がん、直腸がん、肝がん、肝細胞がん、膵臓がん、膵内分泌腫瘍、胆管がん、胆嚢がん、陰茎がん、腎がん、腎盂がん、尿道がん、腎細胞がん、精巣腫瘍、前立腺がん、膀胱がん、外陰がん、子宮がん、子宮頸がん、子宮体がん、子宮肉腫、絨毛性疾患、膣がん、卵巣がん、卵巣胚細胞腫瘍、皮膚がん、悪性黒色腫、菌状息肉腫、基底細胞腫、軟部肉腫、悪性リンパ腫、ホジキン病、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ白血病、成人Ｔ細胞白血病、慢性骨髄増殖性疾患、膵内分泌腫瘍、原発不明のがん、好適には、髄芽腫、乳がん、小細胞肺がん、胃がん、食道がん、結腸直腸がん、結腸がん、膵臓がん、胆管がん、前立腺がん等の予防及び／又は治療の目的で使用のための、本発明の化合物に関連する。本発明のさらなる実施形態は、がんの治療及び／又は予防における使用のための、式（A）、特に式（I）、（I’）及び（I”）の化合物である。
【００８９】
本発明の他の実施形態は、膵臓がんの治療及び／又は予防における使用のための、式（A）、特に式（I）、（I’）及び（I”）の化合物である。
本発明の化合物は、医薬組成物、特に上述の疾患を治療及び／又は予防することを目的とする薬物の調製のために使用することができる。
従って、本発明の一態様は、活性成分として、少なくとも本発明の１つの化合物を含んでなる医薬組成物である。
【００９０】
このような医薬組成物は、少なくとも１つの本発明の化合物、または医薬として許容される塩を有するこの付加塩、或いは後者の水和物若しくは溶媒和化合物、並びに少なくとも１つの医薬的に許容される賦形剤の有効用量を含んでなる。当該賦形剤は、望ましい医薬品形態及び適用経路に従って、当業者に知られている通常の賦形剤の中から選択される。
より詳細には、本発明は式（A）、特に式（I）、（I’）及び（I”）の化合物、または医薬として許容される塩のための当該化合物の付加塩、或いは式（A）、特に式（I）、（I’）及び（I”）の化合物の水和物または溶媒和化合物を含んでなる薬物を対象にする。
【００９１】
経口、舌下、皮下、筋肉内、静脈内、外用、局所的、気管内、鼻腔内、経皮または直腸投与のための本発明の医薬組成物において、式（A）、特に上述の式（I）、（I’）及び（II”）の活性成分、この塩、溶媒和化合物または水和物は、上述の疾患の予防または治療のために通常の医薬賦形剤と混合して単一剤形として動物及びヒトへ適用することができる。
適当な単一剤形は、経口剤形、例えばタブレット、ハードまたはソフトのゼラチンカプセル、粉末、顆粒及び経口溶液または懸濁液等、舌下、バッカル、気管内、眼球内、鼻腔内形態、吸入による形態、外用、経皮、皮下、筋肉内または静脈内形態、直腸形態及びインプラントを含んでなる。外用適用に関しては、本発明の化合物はクリーム、ゲル、軟膏またはローションとして使用することができる。
【００９２】
例としては、本発明の化合物のためのタブレット形態での単一剤形は、次の成分：
本発明の化合物                        ５０，０ｍｇ
マンニトール                          ２２３，７５ｍｇ
クロスカルメロースナトリウム          ６，０ｍｇ
トウモロコシデンプン                  １５，０ｍｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース    ２，２５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム              ３，０ｍｇ
を含むことができる。
【００９３】
非経口経路によって、用量は例えば１５０ｍｇ／ｋｇ／日に達してよい。
適用経路及び患者に応じて、用量の増加または減少することが適当である。これらの用量は、本発明の範囲内に含まれる。
他の態様によれば、本発明はまた、患者への本発明の化合物、または医薬として許容されるこの塩、或いはこの水和物若しくは溶媒和化合物の有効用量の適用を含んでなる、上述の病状の治療方法に関する。
【００９４】
このような治療は、このような治療を必要としている哺乳類へ、活性成分として式（A）、特に式（I）、（I’）及び（I”）の化合物の治療上有効量を適用することを含んでなる。
本発明はさらに、がんの治療において、単独、組合せまたは逐次の使用のための本発明の組成物の使用に関し、：
ａ）少なくとも１または複数の式（A）、特に式（I）、（I’）及び（I”）の化合物の有効量を患者に適用すること、並びに任意に
ｂ）さらに、１または複数のがんの治療で有効な化合物の有効量を適用すること、を含んでなる。
【００９５】
この場合、本発明の化合物と同時適用されるさらなる活性薬剤は、例えば抗癌または細胞分裂停止特性を有する他の分子、例えばプラチナ塩（platine salts）、アントラサイクリン、有糸分裂を減少させる毒素、トポイソメラーゼ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤のキナーゼ阻害剤であってよい。例えば、さらなる活性薬剤はゲムシタビンであってよい。一部の化学療法で使用される温熱療法との組合せを考慮することができるかもしれない。
本発明の化合物はまた、がんの治療のための他の細胞毒性薬剤、分子治療、外科的治療及び／又は放射線療法と組合せて使用してよい。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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