(57)【要約】本発明は、式Ｉの選択的な５−ＨＴ７受容体拮抗化合物および片頭痛の治療におけるそれらの使用を提供する。2011500575.tif 000046（式中、Ａは、−Ｃ（Ｈ）＝または−Ｎ＝であり、かつ、Ｒ１−７は本願明細書に定義される通りである）。
2011500575.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式の化合物
【化１】
2011500575.tif 000045
（式中、
Ａは、−Ｃ（Ｈ）＝または−Ｎ＝であり、
Ｒ１は、ｉ）水素、ｉｉ）メチル、ｉｉｉ）エチル、ｉｖ）ヒドロキシメチル、ｖ）ヒドロキシエチル、ｖｉ）任意に１〜３のフルオロ基で置換されたフェニル、ｖｉｉ）任意に１〜３のフルオロ基で置換されたベンジル、およびｖｉｉｉ）ピリジルからなる群から選択される置換基であり、
Ｒ２は、水素、メチル、またはエチルであり、
Ｒ３は、水素、メチル、またはクロロであり、
Ｒ４は、ｉ）水素、ｉｉ）フルオロ、ｉｉｉ）メチル、ｉｖ）ヒドロキシ、ｖ）ヒドロキシメチル、ｖｉ）ヒドロキシエチル、ｖｉｉ）メトキシメチル、ｖｉｉｉ）シアノメチル、およびｉｘ）メチルスルホニルアミノメチルからなる群から選択され、
Ｒ５は、水素またはフルオロであるが、ただしＲ５がフルオロである場合、Ｒ４はフルオロであり、
Ｒ６およびＲ７は、同一であり、水素、メチル、およびフルオロからなる群から一緒に選択されるが、ただしＲ６およびＲ７が水素ではない場合、Ｒ４およびＲ５は両方とも水素である）
または、その薬理学的に許容できる塩。
【請求項２】
Ｒ１は、メチル、エチル、または任意に１〜２のフルオロ基で置換されたフェニルである請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１は、メチル、エチル、または任意に１〜２のフルオロ基で置換されたフェニルであり、かつ、Ｒ４はヒドロキシ、ヒドロキシメチル、またはメトキシメチルである請求項１記載の化合物。
【請求項４】
３’−［４−（１−エチル−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−ピペラジン−１−イル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−オールである請求項１記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩。
【請求項５】
薬理学的に許容できる担体、希釈剤または賦形剤と合わせて、有効成分として請求項１〜４いずれか１項に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項６】
治療における使用のための請求項１〜４いずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
ヒトの片頭痛の治療のための方法であって、このような治療を必要とするヒトに、有効量の請求項１記載の化合物を投与する工程を含む方法。
【請求項８】
ヒトの片頭痛の予防的な治療のための方法であって、このような治療を必要とするヒトに、有効量の請求項１記載の化合物を投与する工程を含む方法。
【請求項９】
ヒトの片頭痛の治療における使用のための請求項１〜４いずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
ヒトの片頭痛の予防的治療における使用のための請求項１〜４いずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
片頭痛の治療のための薬物の製造における請求項１〜４いずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１２】
片頭痛の予防的治療のための薬物の製造における請求項１〜４いずれか１項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規で強力な５−ＨＴ７受容体拮抗薬を提供する。特定の本発明の化合物は、他のセロトニン受容体と比較して、５−ＨＴ７受容体に対して選択的である。
【背景技術】
【０００２】
神経伝達物質であるセロトニン（５−ヒドロキシトリプタミン、５−ＨＴ）は、少なくとも１４種の別個の受容体の不均一な集団から生じる豊かな薬理作用を有する。各受容体は、（しばしば重複するが）異なる全身分布、ならびにセロトニンに対する異なる親和性およびセロトニンとの相互作用に対する異なる生理反応をもたらす独特のセロトニン結合部位を有する。５−ＨＴ７受容体は、温度調節、概日リズム、学習および記憶、海馬のシグナル、ならびに睡眠における重要な機能的役割を有することが示されてきた。当該５−ＨＴ７受容体はまた、様々な神経障害（片頭痛および不安症を含む）および、持続痛（より具体的には、炎症性疼痛および神経因性疼痛）に関連している。
【０００３】
高親和性５−ＨＴ７受容体拮抗薬は、上記の５−ＨＴ７受容体に関連した障害（片頭痛および持続痛、特に、炎症性疼痛および神経因性疼痛を含む）の治療に対して有用な治療法を与える。５−ＨＴ７受容体に対して選択的でもある高親和性５−ＨＴ７受容体拮抗薬は、他の受容体のタイプ（例えば、他のセロトニン受容体サブクラス（５−ＨＴ１Ａ、５−ＨＴ１Ｂおよび５−ＨＴ１Ｄまたはα  アドレナリン受容体など））の調節と関連する望ましくない有害事象なしに、このような治療上の利点を与える。他の５−ＨＴ受容体サブタイプに対する５−ＨＴ７受容体の選択性の達成は、５−ＨＴ７拮抗薬の設計において困難であることが示されてきた。５−ＨＴ１Ａ受容体作動薬は、セロトニン症候群と関連する。５−ＨＴ１Ｂおよび５−ＨＴ１Ｄ受容体作動薬は、胸痛などの有害事象と関連している。
【０００４】
非特許文献１には、５−ＨＴ７受容体リガンドを得るための様々なこれまでのアプローチが記載されている。特許文献１には、特定の２−（ピペラジン−１−イル）−３−フェニル−ピラジンおよびピリジンを含む、５−ＨＴ７拮抗薬が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００４／０６７７０３号パンフレット
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｌｅｏｐｏｌｄｏ、Ｍ．（２００４）「Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ（７）  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  （５−ＨＴ（７）Ｒｓ）  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｌｉｇａｎｄｓ」、Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１１、６２９〜６６１
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、新規で強力な５−ＨＴ７受容体拮抗薬を提供する。本発明の特定の化合物は、他のセロトニン受容体と比較して、５−ＨＴ７受容体に対して選択的である。
【０００８】
本発明は、式Ｉの選択的な５−ＨＴ７受容体拮抗化合物
【化１】
2011500575.tif 000003
（式中、
Ａは、−Ｃ（Ｈ）＝または−Ｎ＝であり、
Ｒ１は、ｉ）水素、ｉｉ）メチル、ｉｉｉ）エチル、ｉｖ）ヒドロキシメチル、ｖ）ヒドロキシエチル、ｖｉ）任意に１〜３のフルオロ基で置換されたフェニル、ｖｉｉ）任意に１〜３のフルオロ基で置換されたベンジル、およびｖｉｉｉ）ピリジルからなる群から選択される置換基であり、
Ｒ２は、水素、メチル、またはエチルであり、
Ｒ３は、水素、メチル、またはクロロであり、
Ｒ４は、ｉ）水素、ｉｉ）フルオロ、ｉｉｉ）メチル、ｉｖ）ヒドロキシ、ｖ）ヒドロキシメチル、ｖｉ）ヒドロキシエチル、ｖｉｉ）メトキシメチル、ｖｉｉｉ）シアノメチル、およびｉｘ）メチルスルホニルアミノメチルからなる群から選択され、
Ｒ５は、水素またはフルオロであるが、ただしＲ５がフルオロである場合、Ｒ４はフルオロであり、
Ｒ６およびＲ７は、同一であり、水素、メチル、およびフルオロからなる群から一緒に選択されるが、ただしＲ６およびＲ７が水素ではない場合、Ｒ４およびＲ５は両方とも水素である）
または、その薬理学的に許容できる塩を提供する。
【０００９】
本発明はまた、薬理学的に許容できる担体、希釈剤、もしくは賦形剤と合わせて、式Ｉの化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含む医薬組成物を提供する。
【００１０】
本発明の別の態様では、治療における使用のための、１以上の式Ｉの化合物、またはその薬理学的に許容できる塩（単数または複数）が提供される。この態様は、医薬品としての使用のための、１以上の式Ｉの化合物、またはその薬理学的に許容できる塩（単数または複数）を含む。同様に、本発明のこの態様は、哺乳類（特にヒト）における片頭痛の治療、哺乳類（特にヒト）における片頭痛の予防的治療、および／もしくは哺乳類（特にヒト）における持続痛（特に炎症性疼痛または神経因性疼痛）の治療における使用のための、１以上の式Ｉの化合物、またはその薬理学的に許容できる塩（単数または複数）を提供する。
【００１１】
本発明のこの態様の１つの実施態様は、哺乳類の片頭痛を治療するための方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬理学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法を提供する。
【００１２】
本発明のこの態様の別の実施態様は、哺乳類の片頭痛の予防的治療のための方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、すなわち、片頭痛に対して感受性のある哺乳動物に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬理学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法を提供する。
【００１３】
本発明のこの態様のさらに別の実施態様は、哺乳類の持続痛の治療のための方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬理学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法を提供する。これの特定の実施態様は、炎症性疼痛および／または神経因性疼痛の治療である。
【００１４】
本発明のこの態様のさらに別の実施態様は、哺乳類の不安症の治療のための方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬理学的に許容できる塩を投与する工程を含む方法を提供する。
【００１５】
式Ｉの化合物、またはその薬理学的に許容できる塩を利用する上記治療方法の好ましい実施態様では、当該哺乳動物はヒトである。
【００１６】
本発明の別の態様では、片頭痛の治療および／もしくは予防的治療のための薬物の製造における、式Ｉの化合物、またはその薬理学的に許容できる塩の使用が提供される。
【００１７】
本発明の別の態様では、持続痛、特に炎症性疼痛および／もしくは神経因性疼痛の治療のための薬物の製造における、式Ｉの化合物、またはその薬理学的に許容できる塩の使用が提供される。
【００１８】
本発明の別の態様では、不安症の治療のための薬物の製造における、式Ｉの化合物、またはその薬理学的に許容できる塩の使用が提供される。
【００１９】
さらに、本発明は、薬理学的に許容できる担体、希釈剤もしくは賦形剤と合わせて、式Ｉの化合物、またはその薬理学的に許容できる塩を含んでいる、片頭痛の治療および／または片頭痛の予防的治療に適合された医薬製剤を提供する。
【００２０】
同様に、本発明は、薬理学的に許容できる担体、希釈剤もしくは賦形剤と合わせて、式Ｉの化合物、またはその薬理学的に許容できる塩を含んでいる、持続痛、特に炎症性疼痛および／または神経因性疼痛の治療に適合された医薬製剤を提供する。
【００２１】
さらに、本発明は、薬理学的に許容できる担体、希釈剤もしくは賦形剤と合わせて、式Ｉの化合物、またはその薬理学的に許容できる塩を含んでいる、不安症の治療に適合された医薬製剤を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本願明細書全体で使用される一般的な化学用語は、それらの通常の意味を有する。
【００２３】
本願明細書で使用される用語「アミノ保護基」は、化合物の他の官能基が反応する間、アミノ官能性を遮断または保護するために通常使用される置換基を意味する。使用されるアミノ保護基の化学種は、誘導体化されたアミノ基が、分子の他の位置における引き続く反応の条件に対して安定であり、適切な時点で、分子の残りを破壊することなく除去され得る限り重要ではない。アミノ保護基の選択および使用（付加および引き続く除去）は、当業者間で周知である。上記の用語で言及された基のさらなる例は、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（第３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ、１９９９、第７章、今後は「Ｇｒｅｅｎｅ」と呼ぶ）に記載されている。
【００２４】
用語「医薬の」または「薬理学的に許容できる」は、本願明細書で形容詞として使用される場合、受容者に対して、実質的に無毒性および実質的に有害ではないことを意味する。
【００２５】
「医薬組成物」は、担体、溶剤、賦形剤および／または塩が、組成物の有効成分（例えば、式Ｉの化合物）と適合しなければならないことをさらに意味する。用語「医薬製剤」および「医薬組成物」は、一般的に交換可能であり、これらは、本願の目的のためにそのように使用されることが当業者によって理解される。
【００２６】
用語「有効量」は、５−ＨＴ７受容体に拮抗することができる、かつ／または、所定の薬理学的効果を引き出すことができる式Ｉの化合物の量を意味する。
【００２７】
用語「適した溶剤」は、反応物を十分に可溶化して所望の反応をもたらす媒体を生じ、所望の反応に干渉しない、任意の溶剤または溶剤の混合物を意味する。
【００２８】
医薬組成物における使用が意図された化合物は、可能かつ保証されているならば、特性（取扱特性、安定性、薬物動態、および／または生物学的利用率など）を最適化する目的で、塩形態に変換されてもよい。いずれの化合物についても、どの対イオンが意図された使用についての特性の最適な組み合わせを有する塩形態（例えば、結晶性の塩形態）を生成するかについては予測できない。化合物を所定の塩形態に変換する方法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００２）；Ｂｅｒｇｅ、Ｓ．Ｍ、Ｂｉｇｈｌｅｙ、Ｌ．Ｄ．、およびＭｏｎｋｈｏｕｓｅ、Ｄ．Ｃ．、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、６６：１（１９７７）参照）。このような塩もまた本発明の実施態様である。塩が、様々なモル比で、酸と、例えば、ヘミ酸塩、一酸塩、二酸塩などを与えるために形成され得ることは周知である。塩形成の手順において、酸は特定の化学量論比で加えられた場合、確かめるために分析されない限り、当該塩は、そのモル比で形成されたものと推定される（しかし分かっていない）。
【００２９】
本願明細書で使用される略称は、下記の通り定義される。
「ＤＣＭ」はジクロロメタンを意味する。「ＭＳ（ＥＳ）」は、エレクトロスプレーイオン化を使用している質量分析を意味する。「ＳＣＸクロマトグラフィー」は、ＳＣＸカラムまたはカートリッジ上のクロマトグラフィーを意味する。本願明細書で使用される「ＳＣＸカラム」または「ＳＣＸカートリッジ」は、Ｖａｒｉａｎ  Ｂｏｎｄ  Ｅｌｕｔｅ（登録商標）シリカベースの強力な陽イオン交換樹脂カラムまたは使い捨てのカートリッジまたは等価物（例えば、ＳＣＸ−２カートリッジ）を意味する。
【００３０】
本発明の化合物の全ては、５−ＨＴ７拮抗薬として有用である一方、特定のクラス、例えば、置換基についての下記の列挙された選択のいずれかを有する化合物が好ましい。
１）Ｒ１は、メチル、エチル、任意に１〜２のフルオロ基で置換されたフェニル、またはベンジルからなる群から選択される。
２）Ｒ１は、メチル、エチル、および任意に１〜２のフルオロ基で置換されたフェニルからなる群から選択される。
３）Ｒ１は、メチルまたはエチルである。
４）Ｒ１は、フェニルである。
５）Ｒ１は、フェニルであり、Ｒ２は、水素であり、Ｒ３は、クロロであり、かつ、Ｒ４は、ヒドロキシ、ヒドロキシメチルまたはメトキシメチルである。
６）Ｒ４は、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、またはメトキシメチルである。
７）Ｒ４は、ヒドロキシである。
８）Ｒ４は、ヒドロキシメチルである。
９）Ｒ４は、メトキシメチルである。
１０）Ｒ１は、メチル、エチル、および任意に１〜２のフルオロ基で置換されたフェニルからなる群から選択され、かつ、Ｒ４は、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、またはメトキシメチルである。
【００３１】
一般的に、ピラジニル化合物は、ピリジル化合物よりも好ましい。ピラジニル化合物のうち、好ましいものは、上記の項１〜１０のいずれか１つの置換基の選択を有するものである。同様に、ピリジル化合物のうち、好ましい化合物は、上記の項１〜１０のいずれか１つの置換基の選択を有するものである。
【００３２】
本発明の特定の好ましい化合物は、本願明細書の実施例に記載されたもの（遊離塩基およびその薬理学的に許容できる塩を含む）である。１つの特に好ましい化合物は、３’−［４−（１−エチル−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−ピペラジン−１−イル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−オールまたはその薬理学的に許容できる塩（例えば、実施例１の化合物）である。
【００３３】
本発明の化合物は、下記の合成スキームに従って、周知のかつ当該技術分野において承認された方法によって調製され得る。これらのスキームの工程について適した反応条件は、当該技術分野で周知であり、溶剤および試薬（ｃｏ−ｒｅａｇｅｎｔｓ）の適切な代替物は、当業者の技量の範囲内である。同様に、必要に応じてまたは所望により、様々な周知の技術によって合成中間体が単離および／または精製でき、頻繁に、様々な中間体を、引き続く合成工程で、少しの精製をすることで、または全く精製をせずに直接的に使用できることが当業者によって理解されるだろう。さらに、当業者は、いくつかの状況では、部分が導入される順序は重要ではないことを理解するだろう。式Ｉの化合物の生産に要求される工程の特定の順序は、当業者によってよく理解されているように、合成される特定の化合物、出発化合物、および置換部分の相対的な不安定性に依存する。全ての置換基は、別段の記載がない限り、前に定義された通りであり、全ての試薬は周知でありかつ当該技術分野において承認されている。
【００３４】
下記スキームＩは、本発明の化合物を得るための１つの一般的な合成経路を示す。
【化２】
2011500575.tif 000004
【００３５】
このスキームでは、Ａが窒素である式ＶＩＩの化合物は、Ｈａｌが典型的にクロロである。ジ−ハロピペラジンは、Ｎが保護されたピペラジンおよび適した塩基（炭酸カリウムなど）と、適切な溶剤（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドなど）中で、昇温状態で反応し、式ＶＩの化合物を与える（Ａは窒素である）。Ａが−ＣＨ＝である式ＶＩＩの化合物は、Ｈａｌが典型的にブロモまたはヨードである。ジ−ハロピリジルは、Ｎが保護されたピペラジンと、当該技術分野で周知の、適した触媒的結合条件下（Ｊｏｈｎ  Ｐ．ＷｏｌｆｅおよびＳｔｅｐｈｅｎ  Ｌ．Ｂｕｃｈｗａｌｄ．Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ、Ｃｏｌｌ．第１０巻、４２３頁（２００４）；第７８巻、２３頁（２００２））で結合し、式ＶＩの化合物（ＡはＣＨである）を与える。
【００３６】
式ＶＩの化合物は、当業者に周知の条件下（例えば、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、１９９９、第２章および第７章、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ社参照）で脱保護され得、式ＩＩＩのアミンを与える。当該アミンは、適切なピラゾールアルデヒドと、当業者に周知の還元的アミノ化条件下（Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ、第２版、１９９９、８３５〜８４６頁、Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ社）でさらに反応し、式ＩＩの化合物を与える。次いで、式ＩＩの化合物は、市販の入手可能な適切に置換されたピペリジン、または当該技術分野で周知の方法によって作製され得る適切に置換されたピペリジンと反応することができ、所望の遊離塩基Ｉを与える。所望であれば、当該遊離塩基は、当該技術分野で周知の手段（例えば、薬理学的に許容できる酸との反応による）によって塩形態に変換される。
【００３７】
あるいは、式ＶＩの中間体は、ピペリジンＶＩＩＩと、昇温状態で反応することができ、式Ｖの中間体を与える。次いで、中間体Ｖは、当業者に周知の条件下で脱保護され、式ＩＶの化合物を与える。次いで、得られたアミンは、適切なピラゾールアルデヒドと、当業者に周知な還元的アミノ化条件下で反応し、式Ｉの化合物を与える。
【化３】
2011500575.tif 000005
【００３８】
置換されたピラゾールは、市販の入手可能なものか、または一般的に公知の手順（例えば、可変のＲ１、Ｒ２、およびＲ３が以前に定義されたものであるスキームＩＩに示された手順）によって合成され得るもののいずれかである。Ｒ２がＲ３と等しくない場合、環化から得た位置異性体の生成物は、一般的なクロマトグラフィー技術で分離しなければならない。ＸＩＩが不安定なアルデヒドである場合、ＸＩＩは、典型的に、アセタールの形態にある。式ＸＩＩの化合物は、適したヒドラジンと反応し、式ＸＩの化合物を与える。次いで、中間体ＸＩは、ＰＯＣｌ３と、適した溶剤（ジメチルホルムアミドなど）中で、昇温状態で反応し、式ＩＸの所望の中間体を与える。
【化４】
2011500575.tif 000006
【００３９】
化学上の変更は、スキームＩＩＩに示されるように、アルデヒド前駆体が環化前駆体に取り込まれる場合に使用できる。式ＸＩＶの化合物は、適したヒドラジンと反応し、式ＸＩＩＩのピラゾールエステルを与え、これは、適した還元剤（ＬｉＡｌＨ４など）で還元され、式ＸＩＩのピラゾールアルコールを与える。当該アルコールは、当業者に周知の方法で酸化され得、式ＩＸの所望のピラゾールアルデヒドを与える。
【００４０】
下記の調製および実施例は、本発明の化合物の合成に有用な方法を示したものである。調製および実施例中で示された化合物のうちの多くの名称は、ＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）（バージョン  ７．０  ソフトウェア）またはＩＳＩＳ／ＤｒａｗのためのＡｕｔｏｎｏｍ  ２０００で描かれた構造から与えられた。
【実施例】
【００４１】
（調製１  ３’−クロロ−２，３，５，６−テトラヒドロ−［１，２’］ビピラジニル−４−カルボン酸  ｔ−ブチルエステル）
【化５】
2011500575.tif 000007
２Ｌの３つ口丸底フラスコに、２，３−ジクロロピラジン（７８．７ｇ、０．５３２ｍｏｌ）、ピペラジン−１−カルボン酸  ｔ−ブチルエステル（１００ｇ、０．５３７ｍｏｌ）、炭酸カリウム（８８．２ｇ、０．６３８ｍｏｌ）、次いで、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（０．７８０Ｌ）を入れ、結果として生じたスラリーを、１１０℃まで、窒素下で、激しく撹拌しながら加熱した。室温まで冷却し、水（０．３９０Ｌ）およびメチル  ｔ−ブチルエーテル（０．３９０Ｌ）を加え、混合物を６０分間撹拌した。撹拌を止め、層を分離した。有機層を水で洗浄し（２×２００ｍＬ）、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、濃縮し、１４５ｇの３’−クロロ−２，３，５，６−テトラヒドロ−［１，２’］ビピラジニル−４−カルボン酸  ｔ−ブチルエステルを黄色のシロップとして得た（９１％収率）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）８．１０（ｓ、１Ｈ）、７．９１（ｓ、１Ｈ）、３．５９（ｍ、４Ｈ）、３．４０（ｎ、４Ｈ）、１．４８（ｓ、９Ｈ）。
【００４２】
（調製２  ３’−クロロ−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピラジニル）
【化６】
2011500575.tif 000008
１，４−ジオキサン中の４Ｍ  ＨＣｌ（１０ｍＬ）を、３’−クロロ−２，３，５，６−テトラヒドロ−［１，２’］ビピラジニル−４−カルボン酸  ｔ−ブチルエステル（６．８０ｇ、２２．７６ｍｍｏｌ）に加えた。１，４−ジオキサン（４０ｍＬ）を加え、反応物を超音波にさらし、次いで、室温で、窒素下、３時間撹拌した。さらに１，４−ジオキサン中のＨＣｌ（４０ｍＬ）を加え、１時間撹拌した。クロロホルム（４００ｍＬ）を加え、２Ｎ  水酸化ナトリウム（２００ｍＬ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（硫酸マグネシウム）、濃縮し、３’−クロロ−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピラジニルを黄色油状物として得て、これを放置して結晶化し、固形物を得た（４．０ｇ、８８％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１９９．１（Ｍ＋１）。
【００４３】
（調製３  ４−（２−クロロ−ピリジン−３−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸  ｔ−ブチルエステル）
【化７】
2011500575.tif 000009
２−クロロ−３−ブロモピリジン（５．００ｇ、２６．０ｍｍｏｌ）およびピペラジン−１−カルボン酸  ｔ−ブチルエステル（３．７３ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）を、無水トルエン（２００ｍＬ）中、室温で、窒素下で撹拌した。ナトリウム  ｔ−ブトキシド（２．８８ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．３６６ｇ、０．４０ｍｍｏｌ）および４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（０．６９４ｇ、１．２０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を脱気し、１００℃（オイルバスの温度）まで３時間加熱した。室温まで冷却し、１００ｍＬの水を加え、２×２００ｍＬの酢酸エチルで抽出した。有機層を真空中で濃縮し、精製し（シリカゲルクロマトグラフィー、３０：７０  酢酸エチル：イソヘキサンで溶出）、真空乾燥器中で一晩乾燥し、４−（２−クロロ−ピリジン−３−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸  ｔ−ブチルエステルをベージュ色の粉末として得た（３．０１ｇ、５１％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２９８（Ｍ＋１）。
【００４４】
（調製４  １−（２−クロロ−ピリジン−３−イル）−ピペラジン）
【化８】
2011500575.tif 000010
４−（２−クロロ−ピリジン−３−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸  ｔ−ブチルエステル（２．００ｇ、６．７２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍＬ）中室温で撹拌し、次いで、トリフルオロ酢酸（５ｍＬ）を加えた。反応物を２時間撹拌し、溶剤を真空中で除去し、次いで、遊離塩基を、ＳＣＸ−２（登録商標）クロマトグラフィー（メタノールで洗浄し、次いで、メタノール中の約３Ｍ  アンモニアで溶出）を使用して形成した。真空中で濃縮し、１−（２−クロロ−ピリジン−３−イル）−ピペラジンを褐色の油状物として得た（１．４７ｇ、１１０％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１９８（Ｍ＋１）。
【００４５】
（調製５  １−（３−フルオロ−フェニル）−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール）
【化９】
2011500575.tif 000011
塩酸（５Ｍ、１２ｍＬ、６０ｍｍｏｌ）を４，４−ジメトキシブタ−２−オン（６．６１ｇ、６．６７ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）および３−フルオロフェニルヒドラジン塩酸塩（８．１３ｇ、５０ｍｍｏｌ）の混合物（エタノール（５０ｍＬ）中）に加えた。還流下で、窒素下で７．５時間、加熱および撹拌し、室温まで冷却し、６０時間放置した。エタノールを真空中でエバポレーションし、その残渣をシリカ上でクロマトグラフに供した（ＤＣＭで溶出）。ジクロロメタンをエバポレーションし、１−（３−フルオロ−フェニル）−３−メチル−１Ｈ−ピラゾールを液体として得た（４．３８ｇ、４９％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１７１．１（Ｍ＋１）。
【００４６】
（調製６  １−（２，５−ジフルオロ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール）
【化１０】
2011500575.tif 000012
１，１，３，３−テトラメトキシプロパン（８．２ｇ、５０ｍｍｏｌ）を、２，５−ジフルオロフェニルヒドラジン（９．０２２ｇ、６２．６ｍｍｏｌ）および塩酸（５Ｍ、５ｍＬ、２５ｍｍｏｌ）の混合物（エタノール（５０ｍＬ）中）に加え、還流下、窒素下で、１７時間加熱および撹拌した。混合物を冷却し、エタノールを真空中でエバポレートし、残渣をＤＣＭ（８０ｍＬ）中で懸濁し、当該ＤＣＭ溶液をろ過し、ＳＣＸ−２カラムに通した。溶出剤を回収し、第２のＳＣＸ２カラムに通し、当該溶出剤をエバポレートし、１−（２，５−ジフルオロ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾールを液体として得た（８．７９ｇ、９７％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１８１（Ｍ＋１）。
【００４７】
（調製７  １−（３−フルオロ−フェニル）−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド）
【化１１】
2011500575.tif 000013
オキシ塩化リン（２０．８ｍＬ、３４．３ｇ、２２３．７ｍｍｏｌ）を、撹拌しながら、９５℃で、窒素下で、１−（３−フルオロ−フェニル）−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール（４．３８ｇ、２４．８６ｍｍｏｌ）（ジメチルホルムアミド（１９．２ｍＬ、１８．１７ｇ、２４８．６ｍｍｏｌ）中）に滴下した。９５℃で、１５時間加熱し、室温まで冷却し、氷に注ぎ、炭酸水素ナトリウムで中和した。水溶液を酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）で抽出し、乾燥し（硫酸マグネシウム）、ろ過し、ＳＣＸ−２カラムに通した。溶剤をエバポレートし、１−（３−フルオロ−フェニル）−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒドを固形物として得た（４．２２ｇ、８３％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２０５．１（Ｍ＋１）。
【００４８】
（調製８  １−（２，５−ジフルオロ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド）
【化１２】
2011500575.tif 000014
標記の中間体を、調製７と同様の方法を使用して、１−（２，５−ジ−フルオロ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾールを使用して調製した。ＭＳ（ＥＳ）［Ｍ＋Ｈ］  ２０９．１。
【００４９】
（調製９  ５−メチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド）
【化１３】
2011500575.tif 000015
（２−ジメチルアミノメチレン−３−オキソ−酪酸エチルエステル）
アセト酢酸エチル（１５ｍＬ、０．１１８ｍｏｌ）を、ジメトキシメチル−ジメチル−アミン（１９ｍＬ、０．１４２ｍｏｌ）に加え、混合物を１時間還流した。当該混合物をエバポレートし、２−ジメチルアミノメチレン−３−オキソ−酪酸エチルエステルを得た（２１．７ｇ、９９％）。
【００５０】
（５−メチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステル）
２−ジメチルアミノメチレン−３−オキソ−酪酸エチルエステル（０．６６２ｇ、３．５７ｍｍｏｌ）およびピリジン−２−イル−ヒドラジン（０．４１０ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）をエタノール（１５ｍＬ）中で溶解させ、２時間還流した。当該混合物をエバポレートし、次いで、飽和炭酸水素ナトリウムで希釈し、酢酸エチルで３回抽出した。溶液を乾燥し（硫酸ナトリウム）、ろ過し、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（５０：５０  酢酸エチル：ヘキサンで溶出）を使用して精製し、５−メチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステルを白色の固形物として得た（０．７００ｇ、８５％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２３２（Ｍ＋１）。
【００５１】
（（５−メチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−メタノール）
水素化アルミニウムリチウム（０．２２５ｇ、５．９２ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（１５ｍＬ）に０℃で加え、次いで、テトラヒドロフラン（５ｍＬ）中の５−メチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステル（０．６８５ｇ、２．９６ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下した。混合物を室温まで加温し、２時間撹拌し、次いで、当該溶液を０℃まで冷却した。飽和硫酸ナトリウム水溶液（０．５ｍＬ）を加え、室温まで加温し、次いで、２時間撹拌した。固形物質をろ過し、次いで、溶液を乾燥し（硫酸ナトリウム）、ろ過し、濃縮し、（５−メチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−メタノールを白色の固形物として得た（０．５０１ｇ、８９％）。
【００５２】
（５−メチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド）
ジメチルスルホキシド（０．７５１ｍＬ、１０．６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）中で溶解させ、−７８℃まで冷却した。ＤＣＭ（８ｍＬ）中の塩化オキサリル（０．５７７ｍＬ、６．６２ｍｍｏｌ）を滴下し、１５分間撹拌した。ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の（５−メチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−メタノール（０．５０１ｇ、２．６５ｍｍｏｌ）を滴下し、１時間、−７８℃で撹拌した。トリエチルアミン（１．８５ｍＬ、１３．２ｍｍｏｌ）を加え、当該混合物を室温まで、１時間加温した。当該混合物を飽和炭酸水素ナトリウムで希釈し、ＤＣＭで３回抽出した。当該溶液を乾燥し（硫酸ナトリウム）、ろ過し、濃縮し、５−メチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒドを白色の固形物として得た（０．４９６ｇ、１００％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１８８（Ｍ＋１）。
【００５３】
（調製１０  ３−エチル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド）
【化１４】
2011500575.tif 000016
Ｎ−［１−メチル−プロパ−（Ｅ）−イリデン］−Ｎ’−フェニル−ヒドラジン
酢酸（１．００ｍＬ、１７．４５ｍｍｏｌ）およびフェニルヒドラジン（１．９８ｍＬ、２０．００ｍｍｏｌ）を、２−ブタノン（２．１５ｍＬ、２４．００ｍｍｏｌ）のエタノール（９０ｍＬ）溶液に室温で加えた。反応物を１時間撹拌し、次いで、溶剤を真空中で除去し、Ｎ−［１−メチル−プロパ−（Ｅ）−イリデン］−Ｎ’−フェニル−ヒドラジンをオレンジ色の粗油状物として得た（３．２１ｇ、９９％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１６３（Ｍ＋１）。
【００５４】
（３−エチル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド）
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４．５９ｍＬ、５９．３６ｍｍｏｌ）および塩化ホスホリル（５．５２ｍＬ、５９．３６ｍｍｏｌ）の氷冷溶液に、Ｎ−［１−メチル−プロパ−（Ｅ）−イリデン］−Ｎ’−フェニル−ヒドラジン（３．２１ｇ、１９．７９ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）溶液を滴下した。室温まで加温し、次いで、７５℃まで５時間加熱した。室温まで冷却し、飽和炭酸カリウムの氷冷溶液に注いだ。ＤＣＭで抽出し（３×２０ｍＬ）、ＩＳＴ  Ｐｈａｓｅ  Ｓｅｐａｒａｔｏｒ  Ｆｒｉｔ（登録商標）に通して濃縮した。精製し（シリカゲルクロマトグラフィー、０：１００〜２０：８０  酢酸エチル：イソヘキサンで溶出）、３−エチル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒドを褐色の固形物として得た（６００ｍｇ、１５％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２０１（Ｍ＋１）。
【００５５】
（調製１１  ３，５−ジメチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド）
【化１５】
2011500575.tif 000017
（３，５−ジメチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸  エチルエステル）
２−アセチル−３−オキソ酪酸エチルエステル（２０．７４ｇ、０．１２０ｍｏｌ）および２−ピリジルヒドラジン（１４．５ｍＬ、０．１３３ｍｏｌ）を酢酸（１６０ｍＬ）に溶解させ、当該混合物を１８時間撹拌した。濃縮し、ＤＣＭで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し、乾燥し（硫酸ナトリウム）、ろ過し、濃縮し、３，５−ジメチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステルを油状物として得た（２８．６ｇ、９７％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４６（Ｍ＋１）。
【００５６】
（３，５−ジメチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−メタノール
水素化アルミニウムリチウム（０．３５９ｇ、９．４６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２５ｍＬ）中、−１０℃で懸濁させ、テトラヒドロフラン（５ｍＬ）中の３，５−ジメチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステル（１．１６０ｇ、４．７３ｍｍｏｌ）を滴下した。当該混合物を２５℃まで加温させ、４時間撹拌した。当該混合物を０℃まで冷却し、次いで、飽和硫酸ナトリウム溶液（１ｍＬ）で慎重にクエンチした。当該混合物を室温で２時間撹拌し、次いで、沈殿物をろ過し、溶液を乾燥し、濃縮し、（３，５−ジメチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−メタノールを黄色の固形物として得た（０．８２１ｇ、８６％）。
【００５７】
（３，５−ジメチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド）
ジメチルスルホキシド（０．３２４ｍＬ、４．５６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）中で溶解させ、当該溶液を−７８℃まで冷却した。塩化オキサリル（０．２３９ｍＬ、２．７４ｍｍｏｌ）を当該混合物に滴下し、−７８℃で２０分間攪拌した。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の（３，５−ジメチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−メタノール（０．３６９ｇ、１．８２ｍｍｏｌ）を加え、当該混合物を−７８℃で１時間撹拌した。トリエチルアミン（１．２７ｍＬ、９．１２ｍｍｏｌ）を当該混合物に加え、室温まで加温し、次いで、１８時間撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、当該水溶液をＤＣＭで３回抽出し、有機溶液を乾燥し、次いでろ過し、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（２０：８０  ヘキサン：酢酸エチルで溶出）を使用して精製し、３，５−ジメチル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒドを黄色の固形物として得た（０．３５８ｇ、９７％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２０２（Ｍ＋１）。
【００５８】
（調製１２  １−（２−ヒドロキシ−エチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド）
【化１６】
2011500575.tif 000018
１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド（０．１１０ｇ、１．１４ｍｍｏｌ）、２−ブロモエタノール（０．１７２ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（０．２３６ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２ｍＬ）中で合わせた。マイクロ波により、１５０℃で２０分間加熱した。室温まで冷却し、ろ過し、アセトニトリルで洗浄した。濾液を濃縮し、１−（２−ヒドロキシ−エチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒドを得た（０．１５５ｇ、９７％）。ＧＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１４０（Ｍ＋）。
【００５９】
（調製１３  Ｎ−ピペリジン−４−イルメチル−メタンスルホンアミド）
【化１７】
2011500575.tif 000019
ｔ−ブチル  ４−（アミノメチル）テトラヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボキシレート（１．５０ｇ、７．０ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（無水）（２０ｍＬ）溶液に、メタンスルホニルクロリド（５６９μＬ、７．３５ｍｍｏｌ、１．０５当量）を加えた。これに、トリエチルアミン（２．０５ｍＬ、１４．７ｍｍｏｌ、２．１当量）を１５分間かけて滴下した。室温で３時間撹拌し、次いで、水（２０ｍＬ）を撹拌しながら加えた。有機相を単離し、次いで、２Ｍ  塩酸水溶液（２０ｍＬ）、および飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）で洗浄した。当該有機層を乾燥し（硫酸マグネシウム）、濃縮し、４−（メタンスルホニル−アミノメチル）−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔ−ブチルエステルを得た（２．１ｇ、１０２％）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３１５．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。１，４−ジオキサン（２５ｍＬ）中のこの化合物の溶液（２．１ｇ、７．２ｍｍｏｌ、１当量）に、４Ｍ  塩化水素のジオキサン溶液（１７．９５ｍＬ、７２ｍｍｏｌ、１０当量）を加えた。室温で２９時間撹拌し、２Ｍ  水酸化ナトリウム水溶液で塩基性にし、次いで、ＤＣＭ（２０ｍＬ）を加えた。層を分離し、水溶液を２度ＤＣＭ（２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。水層をさらに４回、３：１  クロロホルム：イソプロパノール（２５ｍＬ）で抽出した。当該水層を１０ｍＬ未満の量にまで濃縮し、更に４回、３：１  クロロホルム：イソプロパノール（２５ｍＬ）で抽出した。これまでの全ての有機抽出物と合わせ、Ｎ−ピペリジン−４−イルメチル−メタンスルホンアミド（７０３ｍｇ、５０％）を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１９３（Ｍ＋１）。
【００６０】
（調製１４  ピペリジン−４−イル−アセトニトリル）
【化１８】
2011500575.tif 000020
（４−シアノメチレンピペリジン−１−カルボン酸  ｔ−ブチルエステル）
シアノメチルホスホン酸ジエチル（５．３３ｇ、４．８８ｍＬ、３０．１１ｍｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の炭酸カリウム（３．４７ｇ、２５．０９ｍｍｏｌ）に加え、室温で１５分間撹拌し、次いで、還流下で１５分間加熱した。この混合物に、４−オキソピペリジン−１−カルボン酸  ｔ−ブチルエステル（５．００、２５．０９ｍｍｏｌ）を加え、還流下、窒素下で、２４時間加熱し、室温まで冷却させ、一晩放置した。当該反応混合物を炭酸カリウム水溶液（１０％、８０ｍＬ）に注ぎ、結果として生じた混合物を酢酸エチルで抽出した（２×５０ｍＬ）。有機物を合わせ、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空中でエバポレートし、４−シアノメチレンピペリジン−１−カルボン酸  ｔ−ブチルエステルを、液体として得て、これは放置すると凝固した（５．３９ｇ、９６．６％）。ＮＭＲ（δ−ＣＤＣｌ３）１．５（ｓ、９Ｈ）、２．４（ｍ、２Ｈ）、２．６（ｍ、２Ｈ）、３．５（ｍ、４Ｈ）、５．２（ｓ、１Ｈ）。
【００６１】
（４−シアノメチルピペリジン−１−カルボン酸  ｔ−ブチルエステル）
エタノール（１６０ｍＬ）中の４−シアノメチレンピペリジン−１−カルボン酸  ｔ−ブチルエステル（５．３９ｇ、２４．２５ｍｍｏｌ）を、エタノール（２０ｍＬ）中の５％  パラジウム炭素（０．６９ｇ）の懸濁液に加え、室温で、撹拌しながら、６０ｐｓｉ（約４１２ＫＰａ）で６時間水素化した。混合物をセライトに通してろ過し、溶剤を真空中でエバポレートし、４−シアノメチルピペリジン−１−カルボン酸  ｔ−ブチルエステルを、油状物として得た。これは放置すると凝固して固形物を与えた（５．４３ｇ、９９．８％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４７（Ｍ＋Ｎａ）。
【００６２】
（ピペリジン−４−イルアセトニトリル）
トリフルオロ酢酸（２３ｍＬ、３４．７ｇ、３０４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２５ｍＬ）中の４−シアノメチルピペリジン−１−カルボン酸  ｔ−ブチルエステル（５．４３ｇ、２４．２１ｍｍｏｌ）に加え、室温で１８時間撹拌した。溶剤を真空中で除去し、メタノール（５０ｍＬ）中に溶解させ、ＳＣＸ−２カラム上に注いだ。メタノール中の２Ｍ  アンモニアで溶出し、溶出剤をエバポレートし、ピペリジン−４−イルアセトニトリルを油状物として得た。これは放置すると凝固した（２．７８ｇ、９２％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１２５．１（Ｍ＋１）。
【００６３】
（調製１５  ３’−クロロ−４−（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピラジニル）
【化１９】
2011500575.tif 000021
２Ｌの３つ口丸底フラスコに、３’−クロロ−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピラジニル（３９ｇ、０．１９６ｍｏｌ）、１，２−ジクロロエタン（７８０ｍＬ）、次いで１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド（ｃａｒｂａｌｅｈｙｄｅ）（２５．５ｇ、０．２０６ｍｏｌ）を入れ、１５分間、窒素下で、激しく撹拌した。トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（４５．７７ｇ、２１５ｍｍｏｌ）を３回に分けて、１０分間隔で加えた。メタノール（１００ｍＬ）をゆっくりと加え、２０分間撹拌し、白色のフォームに濃縮した。当該フォームを塩化メチレンに溶解させ、１ｋｇのシリカプラグに加えた。生成物を５−１０％  イソプロピルアルコール／ＤＣＭで溶出し、当該生成物を含んでいる画分を濃縮し、３’−クロロ−４−（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピラジニルを黄色油状物として得た（３７ｇ、６０％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０７（Ｍ＋１）。
【００６４】
下記の化合物は、適切な２−クロロ−３−（ピペラジン−１−イル）ピラジンまたは１−（２−クロロ−ピリジン−３−イル）ピペラジン、および置換−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒドを使用して、基本的に、調製１５の方法によって調製した。
【００６５】
【表１−１】
2011500575.tif 000022
【００６６】
【表１−２】
2011500575.tif 000023
【００６７】
（調製２８  ３’−ピペリジン−１−イル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピラジニル）
【化２０】
2011500575.tif 000024
（３’−ピペリジン−１−イル−２，３，５，６−テトラヒドロ−［１，２’］ビピラジニル−４−カルボン酸  ｔ−ブチルエステル）
３’−クロロ−２，３，５，６−テトラヒドロ−［１，２’］ビピラジニル−４−カルボン酸  ｔ−ブチルエステル（０．４ｇ、１．３４ｍｍｏｌ、１当量）およびピペリジン（６６２μＬ、６．６９ｍｍｏｌ、５当量）を、マイクロ波バイアルに入れ、封をし、ＣＥＭ（商標）マイクロ波で、１８０℃まで、最大３００ワットパワーで、１時間加熱した（注意−圧力が上昇した）。２Ｍ  水酸化ナトリウム水溶液（５ｍＬ）およびＤＣＭ（５ｍＬ）を加え、次いで、疎水性のフリットに通し、分離した。水層を２度、ＤＣＭ（５ｍＬ）で抽出し、有機抽出物を合わせ、濃縮し、３’−ピペリジン−１−イル−２，３，５，６−テトラヒドロ−［１，２’］ビピラジニル−４−カルボン酸  ｔ−ブチルエステルを得た（０．４６ｇ、９９％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３４８．３（Ｍ＋１）。
【００６８】
（３’−ピペリジン−１−イル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピラジニル）
トリフルオロ酢酸（１．００ｍＬ、１３．２４ｍｍｏｌ、１０当量）を、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の３−ピペリジン−１−イル−２，３，５，６−テトラヒドロ−［１，２’］ビピラジニル−４−カルボン酸  ｔ−ブチルエステル（０．４６ｇ、１．３２ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に加え、次いで、当該混合物を室温で４時間撹拌した。当該反応混合物を濃縮し、次いで、メタノール中に溶解させ、１０ｇ  ＳＣＸ−２  イオン交換カートリッジ（メタノールで予洗した）上に充填した。１カラムボリュームのメタノールで洗浄し、次いで、１カラムボリュームの３．５Ｍ  アンモニア（メタノール中）で溶出した。濃縮し、３’−ピペリジン−１−イル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピラジニルを得た（０．３１７ｇ、９７％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４８．２（Ｍ＋１）。
【００６９】
下記の化合物は、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−クロロピリジン−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート、またはｔｅｒｔ−ブチル  ４−（３−クロロピラジン−２−イル）ピペリジン−１−カルボキシレートおよび置換されたピペリジンを使用して、基本的に調製２８の方法によって調製した。
【００７０】
【表２】
2011500575.tif 000025
【００７１】
（調製３４  トルエン−４−スルホン酸  １−［４−（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピラジニル−３’−イル］−ピペリジン−４−イルメチルエステル）
【化２１】
2011500575.tif 000026
ｐ−トルエンスルホニルクロリド（２７２ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ、１．１当量）を、ＤＣＭ（３ｍＬ）中の｛１−［４−（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピラジニル−３’−イル］−ピペリジン−４−イル｝−メタノール（０．５ｇ、１．３０ｍｍｏｌ、１当量）、遊離塩基およびトリエチルアミン（１．４３ｍＬ、１０．２４ｍｍｏｌ、１．１当量）の溶液に、０℃で加えた。当該混合物を、窒素下で２０．５時間撹拌した。さらに一部のｐ−トルエンスルホニルクロリド（０．１３ｇ、０．６８２ｍｍｏｌ、０．５当量）を、当該反応混合物に加え、さらに４．５時間、撹拌を続けた。反応物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）でクエンチし、次いで、疎水性フリットに通して分離した。水層を２度、ＤＣＭ（２０ｍＬ）で洗浄し、有機抽出物を合わせ、濃縮した。４０ｇ  シリカゲルカラム上のフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０−１０％  メタノールで溶出）によって精製し、トルエン−４−スルホン酸  １−［４−（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピラジニル−３’−イル］−ピペリジン−４−イルメチルエステルを得た（０．３６ｇ、５１％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５４０．２（Ｍ＋１）。
【００７２】
（実施例１  ３’−［４−（１−エチル−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−ピペラジン−１−イル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−オール  塩酸塩）
【化２２】
2011500575.tif 000027
１−（２−クロロ−ピリジン−３−イル）−４−（１−エチル−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−ピペラジン（０．１５５ｍｇ、０．４８４ｍｍｏｌ、１当量）および４−ヒドロキシピペリジン（２４５．０９ｍｇ、２．４２ｍｍｏｌ、５当量）をマイクロ波バイアルに入れ、封をし、ＣＥＭ（商標）マイクロ波で、１８０℃まで最大３００ワットパワーで１時間加熱した。冷却した混合物を、さらに１時間、同様の条件下で再度反応させた。水（５ｍＬ）およびＤＣＭ（５ｍＬ）を、冷却した反応混合物に加え、次いで、疎水性フリットに通して分離した。水層を２度、ＤＣＭ（５ｍＬ）で抽出し、有機抽出物を合わせ、濃縮した。４０ｇ  シリカゲルカラム上のフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中４−８％  メタノールで溶出した）によって精製した。この物質（１０１ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を最小量の５０％  アセトニトリル水溶液に溶解させた。２Ｍ  塩酸（１３０μＬ、０．２６ｍｍｏｌ）を加え、凍結乾燥し、３’−［４−（１−エチル−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−ピペラジン−１−イル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−オール  塩酸塩を得た（１１１ｍｇ、５４％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８５．２（Ｍ＋１）。
【００７３】
下記の化合物は、適切な４−（置換−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−１−（２−クロロ−ピリジン−３−イル）ピペラジンまたは４−（置換−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−１−（２−クロロ−ピラジン−３−イル）ピペラジン、および置換ピペリジンを使用して、基本的に、実施例１の方法によって調製した。
【００７４】
【表３】
2011500575.tif 000028
【００７５】
【表４】
2011500575.tif 000029
【００７６】
【表５】
2011500575.tif 000030
【００７７】
【表６】
2011500575.tif 000031
【００７８】
（実施例２４  ｛３’−［４−（１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−ピペラジン−１−イル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−イル｝−メタノール  塩酸塩）
【化２３】
2011500575.tif 000032
１，２−ジクロロエタン（１０ｍＬ）中の（３’−ピペラジン−１−イル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−イル）−メタノール（０．１４５ｇ、０．５２４ｍｍｏｌ、１当量）および１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド（９７．６９ｍｇ、０．７８７ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液に、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１６６．７９ｍｇ、０．７８７ｍｍｏｌ、１．５当量）を、一度に、固形物として加えた。当該混合物を、室温、窒素下で２０時間撹拌した。２Ｍ  水酸化ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）およびＤＣＭ（２０ｍＬ）を加えた。相分離器を使用して分離し、水層をＤＣＭ（１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を濃縮し、高ｐＨ  逆相  ＨＰＬＣによって精製した。この物質（１２０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を、最小量の５０％  アセトニトリル水溶液に溶解させた。２Ｍ  塩酸（１５５μＬ、０．３１ｍｍｏｌ）を加え、凍結乾燥し、標記の化合物を得た（１２７ｍｇ、５８％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８５．２（Ｍ＋１）。
【００７９】
下記の化合物は、適切な１−（２−（置換−ピペリジン−１−イル）ピリジン−３−イル）ピペラジンまたは２−（置換−ピペリジン−１−イル）−３−（ピペラジン−１−イル）ピラジン、および置換−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒドを使用して、基本的に、実施例２４の方法によって調製した。
【００８０】
【表７】
2011500575.tif 000033
【００８１】
【表８】
2011500575.tif 000034
【００８２】
【表９】
2011500575.tif 000035
【００８３】
【表１０】
2011500575.tif 000036
【００８４】
（実施例５１  ｛１−［４−（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピラジニル−３’−イル］−ピペリジン−４−イル｝−アセトニトリル  塩酸塩）
【化２４】
2011500575.tif 000037
シアン化ナトリウム（７８．４６ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ、２．４当量）を、ジメチルスルホキシド（５ｍＬ）中のトルエン−４−スルホン酸  １−［４−（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピラジニル−３’−イル］−ピペリジン−４−イルメチルエステル（０．３６ｇ、０．６６７ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に加えた。当該溶液を５０℃まで、撹拌しながら５．７５時間加熱し、次いで、室温まで冷却した。水（２０ｍＬ）を加え、水層を３回ＤＣＭ（２０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。４０ｇ  シリカゲルカラム上のフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中勾配２−１０％  メタノールで溶出）によって精製した。高ｐＨ  逆相  ＨＰＬＣ（ＵＶによる誘導）によってさらに精製した。この物質（１４８ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を最小量の５０％  アセトニトリル水溶液に溶解させた。２Ｍ  塩酸（１９０μＬ、０．３８ｍｍｏｌ）を加え、凍結乾燥し、｛１−［４−（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピラジニル−３’−イル］−ピペリジン−４−イル｝−アセトニトリル  塩酸塩を得た（１６６ｍｇ、５８％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９５．２（Ｍ＋１）。
【００８５】
（実施例５２  ３’−［４−（１−エチル−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−ピペラジン−１−イル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−オール  二塩酸塩）
【化２５】
2011500575.tif 000038
４−（２−クロロ−ピリジン−３−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化２６】
2011500575.tif 000039
３−ブロモ−２−クロロピリジン（４６０ｇ、２．３９ｍｏｌ）をトルエン（２．３リットル）中で撹拌した。Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルピペラジン（４４５．２ｇ、２．３９ｍｏｌ）を加え、窒素で１５分間パージした。トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（４３．７８ｇ、４７．８ｍｍｏｌ）および４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（８２．９９ｇ、１４３ｍｍｏｌ）を加え、窒素で１５分間パージした。当該混合物を１ガロン（約３７８５ｃｍ３）のオートクレーブに移し、窒素下で保持した。ナトリウム  ｔ−ブトキシド（２５２．６９ｇ、２．６３ｍｏｌ）を加えた（わずかな発熱が認められた）。当該オートクレーブを窒素で４０ｐｓｉ（２７５．６ＫＰａ）まで加圧し、圧力を放出し、これを３回繰り返し、次いで、窒素で２０〜４０ｐｓｉ（１３７．８〜２７５．６Ｋｐａ）まで加圧し、混合物を１１０℃まで急速に加熱した。温度は、発熱反応によって約１１３℃まで上昇した。反応物を２．７５時間、１１０℃、２０〜４０ｐｓｉ（１３７．８〜２７５．６Ｋｐａ）で窒素下で撹拌した。当該混合物を冷却させ、反応の完了を確かめた（ＨＰＬＣ分析）。当該混合物をガラス繊維紙でろ過し、トルエンで洗浄した。
【００８６】
ろ過した混合物を分離用フラスコに移し、水（２リットル）で抽出した。水層を２回酢酸エチルで抽出した（３Ｌ、次いで２Ｌ）。合わせた有機相を２回、１５％  ＮａＣｌ溶液（４Ｌ、次いで２Ｌ）で洗浄した。有機物を３０分間、硫酸ナトリウムおよび脱色炭（１００ｇ）とともに撹拌した。混合物をろ過し、濾液をロータリーエバポレーター上でエバポレートし、濃色の油状物（８３１ｇ）を得た。
【００８７】
上記の粗生成物を酢酸エチル（３Ｌ）中で溶解させ、シリカゲルを詰めた（６Ｋｇ、ヘプタンを使用して詰めた）焼結ガラス漏斗上に充填した。カラムを、９５％  ヘプタン：５％  酢酸エチル（８Ｌ）で洗浄し、次いで、７０％  ヘプタン：３０％  酢酸エチルで溶出し、粗生成物を含んでいる画分を回収した。生成物を含んでいる画分を合わせ、シリカゲルクロマトグラフィーによって、５％  メチル  ｔ−ブチルエーテル（ＤＣＭ中）でさらに精製し、４−（２−クロロ−ピリジン−３−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸  ｔ−ブチルエステル（３３１ｇ、４６．５％）を黄色の固形物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  ５００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）δ８．０７８（ｄｄ、Ｊ＝３．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．３０（ｄｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．２０１（ｍ、１Ｈ）、３．６１６（ｍ、４Ｈ）、３．０１８（ｍ、４Ｈ）、１．４８５（ｓ、９Ｈ）。
【００８８】
（ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（４−ヒドロキシピペリジン−１−イル）ピリジン−３−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート）
【化２７】
2011500575.tif 000040
２Ｌ  フラスコにスターラー、熱電対、および表面下添加のための窒素ラインを備え、窒素雰囲気下で３０分間パージした。４−（２−クロロ−ピリジン−３−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸  ｔ−ブチルエステル（１００ｇ、０．３３６ｍｏｌ）、４−ヒドロキシピペリジン（３７．３６ｇ、０．３６９ｍｏｌ）、ナトリウム  ｔ−ブトキシド（８０．６８ｇ、０．８３９ｍｏｌ）、およびアセタト（２’−ジ−ｔ−ブチルホスフィノ−１，１’−ビフェニル−２−イル）パラジウム（ＩＩ）（２．３３ｇ、５．０４ｍｍｏｌ）を加えた。固形物の混合物を窒素雰囲気下に１５分間置いた。セパレートフラスコ中のトルエン（９３３ｍＬ）を窒素で３０分間泡立たせた。このトルエンを固形物の混合物に加え、２８時間撹拌し、窒素を反応混合物中でゆっくりと泡立たせ、温度を１６〜２０℃の間に水浴で制御した。水（１Ｌ）を滴下し、温度を２５℃未満に維持した。相を分離し、水層をトルエン（５００ｍＬ）で抽出した。有機物を合わせ、２回、１５％  ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。有機相をロータリーエバポレーター上でエバポレートし、油状物を得た。トルエン（２５０ｍＬ）を加え、２回エバポレートし、１２７．７ｇの油状物を得た。当該油状物を酢酸エチル（２５５ｍＬ（２回に分けた））に溶解させ、６５〜７０℃まで加熱した。ヘプタン（１２７７ｍＬ（１０回に分けた））を６５〜７０℃で加えた。溶液を常温まで冷却し、１６〜１８時間放置した。黄色の混合物を０〜５℃まで１時間冷却し、次いでろ過した。固形物をヘプタン中の２０％  酢酸エチル溶液で、０〜５℃で洗浄した。当該固形物を４５〜５０℃で真空乾燥器中で乾燥し、ｔ−ブチル  ４−（２−（４−ヒドロキシピペリジン−１−イル）ピリジン−３−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートを得た（６６．６ｇ、５４．７％）。１Ｈ  ＮＭＲ  ５００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）δ７．９５８（ｄｄ、Ｊ＝３．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．１０（ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．８３４（ｍ、１Ｈ）、４．０１（ｄ、Ｊ＝３．２、２Ｈ）、３．８６５（ｍ、１Ｈ）、３．５７８（ｍ、４Ｈ）、３．０４１（ｍ、４Ｈ）、２．９４５（ｍ、２Ｈ）、１．６４３（ｍ、２Ｈ）、１．４８７（ｓ、９Ｈ）。
【００８９】
（１−（３−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）ピペリジン−４−オール  二塩酸塩）
【化２８】
2011500575.tif 000041
氷浴で冷却した２Ｌ  フラスコ中に、ＨＣｌガスをメタノール（９００ｍＬ）に加え、７．３１Ｍ  溶液を調製し、温度を２０℃未満に維持した。
【００９０】
ｔ−ブチル  ４−（２−（４−ヒドロキシピペリジン−１−イル）ピリジン−３−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（３０６．５ｇ、０．８４６ｍｏｌ）を１２リットル  フラスコに加え、次いでメタノール（６１３ｍＬ）およびトルエン（３．０６Ｌ）を加えた。混合物を撹拌し、溶液を得て、次いで、上記メタノール  ＨＣｌ溶液（５７９ｍＬ）を加えた。当該溶液を３５℃まで２時間、次いで、４時間、常温で加熱した。得られた結晶性生成物をろ過し、当該結晶をトルエンで洗浄し、次いで、真空乾燥器中で４０〜４５℃で乾燥し、１−（３−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）ピペリジン−４−オール  二塩酸塩を結晶性固形物として得た（２８３．５ｇ、９９．４７％）。１Ｈ  ＮＭＲ  ３００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ）δ９．６２４（ｂｓ、２Ｈ）７．８９０（ｄｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．６３３（ｄ、Ｊ＝７．７５Ｈｚ、１Ｈ）、７．１３７（ｍ、１Ｈ）、３．９１６（ｂｍ、２Ｈ）、３．７２７（ｂｍ、１Ｈ）、３．２３６（ｂｓ、９Ｈ）、１．８７７（ｂｍ、２Ｈ）、１．５１５（ｂｍ、２Ｈ）。
【００９１】
（１−（３−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）ピペリジン−４−オール）
【化２９】
2011500575.tif 000042
１−（３−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）ピペリジン−４−オール  二塩酸塩（２８１．０、０．８３８ｍｏｌ）を、飽和塩化ナトリウム水溶液（２．４５リットル）中で溶解させた。２Ｍ  ＮａＯＨ（約１Ｌ）を、ｐＨを１１．３にするために加えた。当該混合物を３回、ＤＣＭで抽出した（３×２．０４Ｌ）。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、窒素を抽気しながら、溶剤をロータリーエバポレーター上でエバポレートし、フォームを得た。当該フォームが安定である場合、当該物質を２〜３時間、５０℃で、真空下でさらに乾燥し、１−（３−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）ピペリジン−４−オールを得た（２０７．５ｇ、９４．１％）。１Ｈ  ＮＭＲ  ３００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）δ７．９２３（ｄｄ、Ｊ＝３．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．１０（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．８１５（ｍ、１Ｈ）、４．０４０（ｍ、２Ｈ）、３．８４０（ｍ、１Ｈ）、３．０４８（ｂｓ、８Ｈ）、２．８９８（ｍ、２Ｈ）、２．０２８（ｍ、２Ｈ）、１．８６２（ｓ、２Ｈ？？）、１．６３４（ｍ、２Ｈ）。
【００９２】
（３’−［４−（１−エチル−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−ピペラジン−１−イル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−オール）
【化３０】
2011500575.tif 000043
１−（３−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）ピペリジン−４−オール（２０７ｇ、０．７８９ｍｏｌ）および１−エチル−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド（１３０．８ｇ、０．９４７ｍｏｌ）をジクロロエタン（４．５５Ｌ）中で溶解させた。−５℃まで冷却し、温度を約５℃未満に維持しながら、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（３３４．５ｇ、１．５７８ｍｏｌ）を何度かに分けて（ｐｏｒｔｉｏｎ−ｗｉｓｅ）加えた。氷浴を取り除き、反応物を１０℃まで、約１時間にわたって加温した。当該反応物を１８〜２０℃まで加温し、３時間撹拌した。
【００９３】
反応混合物を１５℃まで冷却し、２Ｎ  ＮａＯＨ（２Ｌ）を加えた。相を分離し、水層を２回、ＤＣＭで抽出した（２×１．３Ｌ）。合わせた有機層をガラス繊維紙でろ過した。有機物を１Ｎ  ＨＣｌで抽出した（１×２．５Ｌ  １回、２×１Ｌ）。生成物を含む合わせた水層に、５０％  ＮａＯＨ（４００ｍＬ）を加え、ｐＨを１１．６に至らしめた。得られた乳白色の水層をＤＣＭで抽出した（１×３Ｌ、２×１．５Ｌ）。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥した。脱色炭（Ｇ−６０、４４ｇ）を加え、混合物を常温で２０分間撹拌した。ガラス繊維紙でろ過し、ＤＣＭ（１Ｌ）ですすぎ、溶剤をエバポレートし、３’−［４−（１−エチル−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−ピペラジン−１−イル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−オールを油状物として得た（３３０ｇ、１０９％）。１Ｈ  ＮＭＲ  ３００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）（Ｅ２９−Ｈ７０３５７−０３１）δ７．８７（ｄｄ、Ｊ＝３．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．３７（ｓ、１Ｈ）７．０５（ｄｄ、Ｊ＝６．２６Ｈｚ、１Ｈ）、６．７７（ｍ，１Ｈ）、４．０６５（ｑ、Ｊ＝７．３５Ｈｚ、２Ｈ）、３．９９（ｂｍ、２Ｈ）、３．８０２（ｂｍ、１Ｈ）、３．３６５（ｓ、２Ｈ）、２．６５８（ｂｍ、２Ｈ）、２．５５１（ｂｍ、３Ｈ）、２．２３６（ｓ、３Ｈ）、１．９８５（ｂｍ、２Ｈ）、１．６１５（ｂｍ、２Ｈ）、１．３８１（ｔ、Ｊ＝７．２６Ｈｚ、３Ｈ）。
【００９４】
（３’−［４−（１−エチル−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−ピペラジン−１−イル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−オール  二塩酸塩）
３’−［４−（１−エチル−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−ピペラジン−１−イル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−オール（４１５ｇ、１．０７９ｍｏｌ））を、エタノール（５．５リットル）およびメチル  ｔ−ブチルエーテル（６．２３リットル）中に溶解させた。当該溶液を、窒素雰囲気下で撹拌し、５０〜５５℃まで加熱した。エタノール中の２．９６Ｍ  ＨＣｌ溶液（０．７２９Ｌ）を、５０〜５５℃で５０分間かけて加えた。当該混合物を４０．１℃まで９０分間かけて冷却した。当該混合物を２０℃まで２０分間かけて冷却し、次いで、２０℃で３０分間撹拌した。当該混合物をろ過し、メチル  ｔ−ブチルエーテルで洗浄した（３×５００ｍＬ）。固形物を真空乾燥器中、５０〜５５℃、真空下で、わずかに窒素掃引しながら、２４時間乾燥し、３’−［４−（１−エチル−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−ピペラジン−１−イル］−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジニル−４−オール  二塩酸塩を得た（４１６ｇ、８４．３％）。１Ｈ  ＮＭＲ  ５００ＭＨｚ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．８９（ｄｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．８２８（ｓ、１Ｈ）、７．２７５（ｄｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．８６（ＣＤ３ＯＨ）、４．３８５（ｓ、２Ｈ）、４．２２０（ｑ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、４．０４（ｂｍ、２Ｈ）、３．９７６（ｂｍ、１Ｈ）、３．７０（ｂｍ、４Ｈ）、３．５１１（ｂｍ、２Ｈ）、３．４１０（ｂｔ、２Ｈ）、３．１４５（ｔ、Ｊ＝８．１、２Ｈ）、２．４６７（ｓ、３Ｈ）、２．０８２（ｂｍ、２Ｈ）、１．７１６（ｂｍ、２Ｈ）、１．４１６（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、３Ｈ）。塩化物の分析は、ＩＣＰ／ＭＳによって得た（１５．６％）。
【００９５】
本発明の５−ＨＴ７受容体拮抗薬は、５−ＨＴ７受容体に対して相対的に選択的である。本発明の化合物は、他の５−ＨＴ受容体サブタイプ（特に５−ＨＴ１Ａ、５−ＨＴ１Ｂおよび５−ＨＴ１Ｄ受容体）と比較して、５−ＨＴ７受容体に対して特に相対的に選択的である。この選択性は、下記の受容体結合アッセイおよび受容体拮抗薬活性アッセイで示される。
【００９６】
（膜の調製）
アフィニティーおよび拮抗薬活性のアッセイのための膜は、基本的に、下記の通り調製した。ＡＶ−１２  細胞（５−ＨＴ７受容体を安定して発現する）を、単層として、５×Ｔ−１５０  フラスコ中で、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（３：１）５％  ＦＢＳ、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、４００ｍｇ／ｍＬ  ジェネテシン、５０ｍｇ／ｍＬ  トブラマイシンで増殖させた。９０％  コンフルエンスまで増殖後、培地を除去し、Ｈｙｂｒｉｔｅｃｈ培地（２％  ウマ血清、１００ｍｇ／ｍＬ  硫酸デキストラン、１ｍｇ／ｍＬ  ヌセリン（ｎｕｃｅｌｌｉｎ）、１ｍｇ／ｍＬ  ヒトトランスフェリン（部分的に鉄飽和）、５０ｍｇ／ｍＬ  トブラマイシン、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１００ｍｇ／ｍＬ  ジェネテシン、０．０４％  プルロニック  Ｆ６８を含む）に置き換えた。（Ｈｙｂｒｉｔｅｃｈ培地は、懸濁液中の細胞増殖を補助するための、低カルシウムに改変されたＤＭＥＭ／Ｆ１２培地であり、下記の処方を有する：ビオチン  ７．３μｇ／Ｌ、塩化カルシウム無水物  １１ｍｇ／Ｌ、塩化コリン  ８．９８ｍｇ／Ｌ、硫酸銅５Ｈ２Ｏ  ３．７５μｇ／Ｌ、Ｄグルコース（ブドウ糖）  ６．００ｇ／Ｌ、ＤＬ  リポ酸  チオクト酸（ｔｈｉｏｃｔｉｃ）  ０．２１ｍｇ／Ｌ、エタノールアミン（ｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ）  ＨＣＬ  １０ｍｇ／Ｌ、硝酸鉄  ９＊Ｈ２Ｏ  ５０μｇ／Ｌ、硫酸鉄  ７＊Ｈ２Ｏ  ０．４２ｍｇ／Ｌ、葉酸  ４ｍｇ／Ｌ、グリシン  ３０ｍｇ／Ｌ、Ｉ  イノシトール  １２．６ｍｇ／Ｌ、Ｌ  アラニン  ８．９ｍｇ／Ｌ、Ｌ  アルギニン  ＨＣＬ  ２１１ｍｇ／Ｌ、Ｌ  アスパラギン  Ｈ２Ｏ  １５ｍｇ／Ｌ、Ｌ  アスパラギン酸  １３．３ｍｇ／Ｌ、Ｌ  シスチン  ２＊ＨＣｌ  ６２．６ｍｇ／Ｌ、Ｌ  グルタミン酸  ７．３５ｍｇ／Ｌ、Ｌ  グルタミン  １．４６  ｇ／Ｌ、Ｌ  ヒスチジン  ＨＣｌ  Ｈ２Ｏ  ４２ｍｇ／Ｌ、Ｌ  イソロイシン、１０５ｍｇ／Ｌ、Ｌ  ロイシン  １０５ｍｇ／Ｌ、Ｌ  リジン  ＨＣｌ  １４６ｍｇ／Ｌ、Ｌ  メチオニン  ３０ｍｇ／Ｌ、Ｌ  フェニルアラニン  ６６ｍｇ／Ｌ、Ｌ  プロリン  １７．２５ｍｇ／Ｌ、Ｌ  セリン  ４２ｍｇ／Ｌ、Ｌ  スレオニン  ９５ｍｇ／Ｌ、Ｌ  トリプトファン  １６ｍｇ／Ｌ、Ｌ  チロシン二ナトリウム塩  １０４ｍｇ／Ｌ、Ｌ  バリン  ９４ｍｇ／Ｌ、無水塩化マグネシウム  ２８．６４ｍｇ／Ｌ、無水硫酸マグネシウム  ４８．８４ｍｇ／Ｌ、ナイアシンアミド  ４ｍｇ／Ｌ、ＫＣｌ  ３１１．８ｍｇ／Ｌ、プトレシン（ｐｕｒｅｓｃｉｎｅ）  ２＊ＨＣ  １０．０８ｍｇ／Ｌ、ピリドキサール  ＨＣｌ  ４ｍｇ／Ｌ、ピリドキシン  ＨＣｌ  ３０μｇ／Ｌ、リボフラビン  ０．４ｍｇ／Ｌ、ＮａＣｌ  ５．５０  ｇ／Ｌ、ヒポキサンチンナトリウム  ４．７７ｍｇ／Ｌ、パントテン酸ナトリウム  ４ｍｇ／Ｌ、無水リン酸水素二ナトリウム  ７１．２ｍｇ／Ｌ、リン酸二水素ナトリウム  ６２．５ｍｇ／Ｌ、ピルビン酸ナトリウム  ２２０ｍｇ／Ｌ、亜セレン酸ナトリウム  ５．００μｇ／Ｌ、チアミン  ＨＣｌ  ４ｍｇ／Ｌ、チミジン  ０．７３ｍｇ／Ｌ、ビタミン  Ｂ−１２  ０．６８ｍｇ／Ｌ、硫酸亜鉛  ７＊Ｈ２Ｏ  ０．４３ｍｇ／Ｌ）。培地を条件付けるために、細胞を一晩増殖させた。翌朝、条件培地（計約１５０ｍＬ）を取り除き、滅菌容器に保存した。細胞をトリプシン処理し、条件培地中に��収した。未使用の懸濁培地を、総体積を５００ｍＬに、細胞密度を５×１０５細胞／ｍＬにするために加えた。懸濁培養液量を、３週間かけて繰り返して増やし、収集までに所望の量および密度にした（目的とした細胞密度  約３．５〜４．０×１０６細胞／ｍＬ）。細胞を遠心分離（１，５００ｇ、４℃、３０分間）によって収集した。上清をデカンテーションし、細胞ペレットを氷冷リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で再懸濁した。細胞懸濁液を５０ｍＬ  遠心管に分注し、１，５００ｇ、４℃で、１５分間遠心分離した。上清を除去し、ペレットを秤量し、次いで、ドライアイス上で凍結させた。
【００９７】
膜を調製するため、上記のペレットを氷冷したトリスバッファー（２０ｍＭ  トリス  ＨＣｌ、ｐＨ  ７．４、２３℃、５ｍＭ  ＥＤＴＡ）に再懸濁し、Ｗｈｅａｔｏｎ  組織グラインダーでホモジナイズした。可溶化液を、引き続いて２００×ｇで５分間、４℃で遠心分離し、大きい断片をペレットにし、廃棄した。上清を収集し、４０，０００×ｇ、６０分間、４℃で遠心分離した。得られたペレットを最終バッファー（５０ｍＭ  トリス  ＨＣｌおよび０．５ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ  ７．４を含んでいる）に再懸濁した。膜調製物をドライアイス上で急速凍結し、−８０℃で保存した。タンパク質濃度は、Ｂｒａｄｆｏｒｄ．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、７２：２４８−２５４、１９７６による方法で測定した。
【００９８】
ｃＡＭＰ機能分析のため、上記で得た５−ＨＴ７−発現細胞を１５０ｃｍ２フラスコ中で増殖させ、基本的に下記の通り処理した。培地をフラスコから吸引し、細胞を１ｍＬ  ＰＢＳで洗浄した。酵素フリーの細胞解離液（特殊培地（ｗｗｗ．ｃｈｅｍｉｃｏｎ．ｃｏｍ）カタログ番号Ｓ−００４−Ｂ）を使用して、細胞をフラスコ表面から放出し、完全培地に再懸濁した。細胞試料の細胞数を計測し、残りを上記のように３分間遠心分離した。得られた細胞ペレットをＰＢＳ中に、濃度１×１０６細胞／ｍＬとなるように再懸濁し、ｃＡＭＰアッセイにおいて上記のように直接使用した。
【００９９】
（５−ＨＴ７受容体アフィニティー：放射リガンド結合アッセイ）
［３Ｈ］５−ＨＴ  結合をＫａｈｌら（Ｊ．Ｂｉｏｍｏ．ｌ  Ｓｃｒｅｅｎ、２：３３−４０（１９９７）によって報告されたアッセイ条件を改変した条件を使用して、基本的に下記の通り行った。放射リガンド結合アッセイは、９６ウェル  マイクロタイタープレート（全量は１２５μｌであり、次の反応バッファーを含む：５０ｍＭ  トリス、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１０ｍＭ  パージリン、０．１％  アスコルビン酸、ｐＨ  ７．４）中で室温で行った。競合結合は、０．１〜１０，０００ｎＭに及ぶ１１個の試験化合物の濃度で、１ｎＭ  ［３Ｈ］５−ＨＴの存在下で行った。標識されていない５−ＨＴ（１０μＭ）は、非特異的な結合を定めるために使用した。結合反応は、０．１５μｇの膜ホモジネート（２．３１ｎｇ／μＬ、６５μＬ／ウェル）および０．５ｍｇのシンチレーション近接アッセイのフルオロマイクロスフィアの添加によって開始した。反応物は室温で３時間インキュベーションし、次いで、Ｔｒｉｌｕｘ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ（商標）シンチレーションカウンタで、受容体に結合した放射リガンドを検出するために計測した。結合データは、コンピューターを使った４パラメータ  フィット分析（ｆｉｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ）（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ社、英国、サリー州、ギルフォード）によって分析した。チェン−プルソフ（Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ）式（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、２２：３０９９−３１０８（１９７３））を使用して、ＩＣ５０値をＫｉ値に変換した。
【０１００】
例示された化合物は、基本的に、記載された通りに試験し、≦５０ｎＭのＫｉ値を有することを見出した。実施例１の化合物は、基本的に、記載された通りに試験し、約１６．２ｎＭのＫｉ値を有することを見出した。
【０１０１】
他のセロトニン受容体サブタイプ、ならびにα１および２  アドレナリン受容体についてのアフィニティーは、所望の受容体サブタイプ（５−ＨＴ１Ａ、５−ＨＴ１Ｂ、および５−ＨＴ１Ｄサブタイプ、ならびに５−ＨＴ２Ａ、５−ＨＴ２Ｂ、５−ＨＴ２Ｃ、５−ＨＴ４、５−ＨＴ５、および５−ＨＴ６受容体サブタイプを含む）を安定して発現している細胞由来の膜を使用して、上記放射リガンド受容体結合アッセイの改変によってすぐに測定され得る。Ｋｉ−ｘ／Ｋｉ−５ＨＴ７の選択性比（Ｋｉ−ｘは、比較されている受容体についてのＫｉ）は、５−ＨＴ７受容体に対するある化合物の相対的なアフィニティーを示す。例示された化合物は試験され、他のセロトニン受容体に対する選択性比は≧４、かつ、アドレナリン（ａｎｄｒｏｎｅｒｇｉｃ）受容体に対する選択性比は≧４であることを見出した。実施例１の化合物は、基本的に記載されたように試験し、下記の選択性特性を有することを見出した。
【０１０２】
【表１１】
2011500575.tif 000044
【０１０３】
（機能的拮抗薬アッセイ：ｃＡＭＰ形成の測定）
セロトニンおよびセロトニン性薬物が５−ＨＴ７受容体を形質移入されたＣＨＯ細胞におけるｃＡＭＰ生成刺激能力によって判定される場合、５−ＨＴ７受容体は機能的にＧ−タンパク質に共役される（Ｒｕａｔら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＵＳＡ）、９０：８５４７−８５５１、１９９３）。従って、機能的な受容体活性は、市販の入手可能な、細胞に基づいた、均質の、時間分解蛍光アッセイキット（例えば、Ｃｉｓｂｉｏ−ＵＳ社（マサチューセッツ州、ベッドフォード）製のキット）を使用して、アデニル酸シクラーゼ活性の測定によって測定され得る。基本的に、製造者によって提供される手順および試薬を使用して、約２０，０００のヒト５−ＨＴ７受容体を発現しているＡＶ−１２細胞（上記の通り）は、結合アッセイについて記載された範囲の用量濃度の試験化合物とともに使用される。５−ＨＴについてのＥＣ−９０  用量−反応曲線は、競合的拮抗を示すために平行して測定される。ｃＡＭＰ標準曲線もまた、実験ごとに追加した。アッセイ後、プレートを、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（商標）計器（パーキンエルマー、マサチューセッツ州、ウェルズリー）で読み取り、データを標準曲線に規準化し、受容体結合アッセイの結果についての上記のデータ分析のために、阻害率に変換した。Ｋｂ（ｎＭ）は、化合物の拮抗薬の効力の基準として算出した。好ましい化合物は、阻害率＞７５％を有するものである。さらに他の好ましい化合物は、Ｋｂ＜５０ｎＭを有するものである。実施例１の化合物は、基本的に上記のように試験し、Ｋｂ値が約２．９７ｎＭ（阻害＝約１０８％）の完全拮抗薬であることが見出した。
【０１０４】
（硬膜外血漿タンパク質溢出（ＰＰＥ）の動物モデル）
硬膜外血漿タンパク質溢出モデルは、片頭痛についての確立されたモデルである。アッセイ条件下で、試験化合物が硬膜への血漿タンパク質の溢出を減少させる能力は、片頭痛の症状を通じた硬膜の炎症を減少させる、または予防する化合物の能力を示すと考えられる（Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｋ．Ｗ．ら、Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ、８（１９９７）２２３７−２２４０参照）。
【０１０５】
硬膜外血漿タンパク質溢出を減少させる、または予防する能力について化合物をアッセイするため、Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２５０〜３５０ｇ）のオスをペントバルビタールナトリウム（６５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）で麻酔し、切歯バーセット（ｉｎｃｉｓｏｒ  ｂａｒ  ｓｅｔ）を−２．５ｍｍに設定して、定位固定フレーム（Ｄａｖｉｄ  Ｋｏｐｆ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）に固定した。正中矢状頭皮切開の後、２対の両側の孔を頭蓋骨に開けた（後方（ｐｏｓｔｅｒｉａｌｌｙ）に３．２ｍｍ、側方（ｌａｔｅｒａｌｌｙ）に１．８および３．８ｍｍ、全ての座標はブレグマを基準としている）。対のステンレス鋼の刺激電極（先端部以外は絶縁されている）（Ｒｈｏｄｅｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を、両脳半球の穴を通じて、深さ９．２ｍｍまで下げた。
【０１０６】
試験化合物を、投与量１ｍＬ／ｋｇで、大腿静脈に静脈内投与した（ｉ．ｖ．）。注射から約８分後、動物にフルオレセインイソチオシアネート−ウシ血清アルブミン（ＦＩＴＣ−ＢＳＡ）（２０ｍｇ／ｋｇ、静脈内）を投薬した。ＦＩＴＣ−ＢＳＡは、タンパク質溢出のマーカーとして機能する。試験化合物の注射から１０分後、左側の三叉神経節を電気的に刺激した（５分間、電流強度は１．０ｍＡ（５Ｈｚ、５ミリ秒パルス、毎２００ミリ秒）、モデルＳ４８  グラスインスツルメント（Ｇｒａｓｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）刺激装置およびＰＳＩＵ６  光電子分離ユニット（ｐｈｏｔｏｅｌｅｃｔｒｉｃ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｕｎｉｔ）（Ｇｒａｓｓ−Ｔｅｌｅｆａｃｔｏｒ）による）。
【０１０７】
あるいは、一晩絶食させたラットに、試験化合物を、経口的に、胃管栄養法で、２ｍＬ／ｋｇ投薬した。投薬の約５０分後、当該動物に麻酔をかけ、定位固定フレームに上記のように固定した。経口投薬５８分後、当該動物にＦＩＴＣ−ＢＳＡ（２０ｍｇ／ｋｇ、静脈内）を投薬した。化合物投薬６０分後、当該動物を上記のように電気的に刺激した。
【０１０８】
刺激の停止から５分後、当該動物を放血によって屠殺した（４０ｍＬの生理食塩水を使用）。頭蓋の頂点を取り除き、硬膜の膜試料を両方の脳半球から取り除き、水ですすぎ、顕微鏡のスライドガラス上に平らに広げた。乾燥したら、組織に７０％  グリセロール／水の溶液でカバースリップした。
【０１０９】
各試料のＦＩＴＣ−ＢＳＡの量を、格子モノクロメータ、分光光度計、およびコンピューター作動のステージを備えた蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ）で定量した。蛍光測定は、約４９０ｎｍの励起波長および約５３５ｎＭで測定された発光強度で、各硬膜試料ごとに５×５のグリッド（目盛５００μｍ）、２５点で行った。２５回分の測定の平均偏差および標準偏差を測定した。
【０１１０】
三叉神経節の電気的刺激によって引き起こされた溢出は、同側性効果（すなわち、三叉神経節が刺激された硬膜の側のみで生じる）であった。これにより、対照として、他の（刺激されていない）半分の硬膜の使用が可能となる。刺激されていない側の溢出量に対する、刺激された側からの硬膜の溢出量の割合を算出した。生理食塩水のみを投与された対照動物は、約２．０の割合をもたらした。対照的に、刺激された側からの硬膜の溢出を効果的に予防した化合物では、約１．０の割合をもたらした。
【０１１１】
好ましい化合物は、溢出を効果的に予防するものである。実施例１の化合物を、基本的に、記載されたようにアッセイし、０．１ｍｇ／ＫｇのＩＤ１００を有することを見出し、約１．１５の割合を与えた。
【０１１２】
本発明の方法で使用された化合物を、製剤することなく直接投与することも可能である一方、当該化合物は、通常、有効成分として少なくとも１つの式Ｉの化合物、またはその薬理学的に許容できる塩、ならびに少なくとも１つの薬理学的に許容できる担体、希釈剤および／または賦形剤を含んでいる医薬組成物の形態で投与される。これらの組成物は、様々な経路（経口、舌下、頬側、鼻腔内、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、および経肺を含む）によって投与され得る。このような医薬組成物およびこれらを調製する工程は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（フィラデルフィア科学大学、編集、第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ社、２００５）参照。
【０１１３】
当該組成物は、好ましくは、単位投与形態で処方され、各投与量は、約０．１〜約２００ｍｇ（さらに通常は、約１．０〜約３０ｍｇ）の有効成分を含む。用語「単位投与形態」は、ヒト被験者および他の哺乳類への単位投与量として適した物理的に分離した単位を意味し、各単位は、少なくとも１つの適切な薬理学的に許容できる担体、希釈剤および／または賦形剤と合わせて、所望の治療上の効果を生むように算出された、所定の量の活性物質を含む。
【０１１４】
当該化合物は、広い投与量範囲にわたって一般的に効果的である。例えば、１日あたりの投与量は、通常、約０．０１〜約３０ｍｇ／ｋｇの範囲内（例えば、約０．１〜約１５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内）であり、単回または分けて服用される。しかし、実際に投与される化合物の量は、医師によって、関連状況（治療される症状、選択された投与経路、投与される実際の化合物（単数または複数）、個々の患者の年齢、体重、および反応、ならびに患者の症状の重症度を含む）の観点から決定され、従って、上記の投与量範囲は決して本発明の範囲を制限することを意図したものではないことが理解されるだろう。いくつかの例では、上記下限未満の投与量レベルが適切であってもよく、一方他の場合では、さらに高用量が使用されてもよい。
【０１１５】
本発明の方法において使用された化合物の投与のために使用される製剤のタイプは、使用される特定の化合物、選択された投与経路から要求される薬物動態プロファイルのタイプ、および患者の状態によって決定されてもよい。
【国際調査報告】
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