(57)【要約】  本発明は、Ｃ群およびＧ群連鎖球菌のペプチジル−プロリルイソメラーゼ（ＰＰＩ）ポリペプチド、それをコードしているポリヌクレオチドを含む組成物ならびに使用方法に関する。本発明はまた、ＰＰＩポリペプチドおよびポリヌクレオチドを含む免疫原性組成物、ならびにＰＰＩポリペプチドと結合する抗体および抗体断片にも関する。さらに、本発明は、免疫原性組成物を用いて対象においてβ溶血性連鎖球菌に対する免疫応答を誘導する方法、および治療用抗体または抗体断片を投与することによって受動的免疫を与える方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、単離したポリペプチド。
【請求項２】
配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの任意の１つのアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離したポリペプチド。
【請求項３】
請求項１または請求項２に記載の単離したポリペプチドのうちの任意の１つをコードしている、単離したポリヌクレオチド。
【請求項４】
配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および配列番号３１のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列を含む、請求項３に記載の単離したポリヌクレオチド。
【請求項５】
配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および配列番号３１のうちの任意の１つのヌクレオチド配列を含む、請求項３または請求項４に記載の単離したポリヌクレオチド。
【請求項６】
調節要素と作動可能に連結している、請求項３から５のいずれか一項に記載の単離したポリヌクレオチド。
【請求項７】
請求項３から６のいずれか一項に記載の単離したポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドベクター。
【請求項８】
プラスミド、ウイルスベクターおよび発現ベクターのうちの任意の１つまたは複数である、請求項７に記載のポリヌクレオチドベクター。
【請求項９】
請求項３から６のいずれか一項に記載の単離したポリヌクレオチドまたは請求項７および８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドベクターを含み、ｅｘ  ｖｉｖｏである細胞。
【請求項１０】
細菌、酵母細胞、哺乳動物細胞および昆虫細胞からなる群から選択される、請求項９に記載の細胞。
【請求項１１】
請求項１または請求項２に記載の単離したポリペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項１２】
請求項３から６のいずれか一項に記載の単離したポリヌクレオチドまたは請求項７および８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドベクターを含む免疫原性組成物。
【請求項１３】
患者に請求項１１または請求項１２に記載の免疫原性組成物を投与することを含む、患者においてβ溶血性連鎖球菌細菌またはβ溶血性連鎖球菌感染症に対する免疫応答を誘導する方法。
【請求項１４】
β溶血性連鎖球菌細菌またはβ溶血性連鎖球菌感染症がＡ群、Ｂ群、Ｃ群またはＧ群に由来する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
患者におけるβ溶血性連鎖球菌感染症の予防的処置に有用な医薬品の製造における、請求項１または請求項２に記載の単離したポリペプチドの使用。
【請求項１６】
患者におけるβ溶血性連鎖球菌感染症の予防的処置に有用な医薬品の製造における、請求項３から６のいずれか一項に記載の単離したポリヌクレオチドまたは請求項７および８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドベクターの使用。
【請求項１７】
請求項１または請求項２に記載の単離したポリペプチドを含むキット。
【請求項１８】
請求項３から６のいずれか一項に記載の単離したポリヌクレオチドまたは請求項７および８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドベクターを含むキット。
【請求項１９】
細胞に対して、請求項１または請求項２に記載の単離したポリペプチドをコードしている単離したポリヌクレオチドを含有するプラスミドを用いて形質転換、トランスフェクトまたは感染させることと、細胞による前記ポリペプチドの発現を可能にする条件下で細胞を培養することと、前記ポリペプチドを細胞から精製することとを含む、単離したポリペプチドを産生する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に細菌学、感染症および免疫学の分野に関する。より詳細には、本発明は、β溶血性連鎖球菌ポリペプチドを含むポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび免疫原性組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
β溶血性連鎖球菌（ＢＨＳ）種は、表在性の感染症からより重篤な病気の範囲の数々のヒト疾患の原因である重要な病原体である。これらには、血清群Ａ、Ｂ、ＣおよびＧからの種が含まれる。Ａ群連鎖球菌の細菌（化膿性連鎖球菌（ＧＡＳ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ））が病気のほとんどの事例について責任があり、咽頭炎、猩紅熱、膿痂疹、蜂窩織炎または丹毒などの非侵襲性疾患をもたらす場合があるが、一部の株は、毒素ショック症候群、壊死性筋膜炎および敗血症などのより重篤な侵襲性感染症をもたらす場合がある。さらに、表在性感染症合併症は免疫媒介性の続発症をもたらす場合がある。ランスフィールドのＢ群連鎖球菌（ストレプトコッカス・アガラクチア（ＧＢＳ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ））は、新生児における新生児敗血症の主な原因であり、高齢患者において肺炎を引き起こす場合がある。連鎖球菌Ｃ群およびＧ群は、当初は動物病原体として認識されていたが、近年では、ヒト疾患の強力な潜在性を有することが示されている。病気は、一般に、Ａ群連鎖球菌と同様に自身を提示するが、免疫媒介性の続発症をもたらすことは示されていない。Ｃ群およびＧ群連鎖球菌は、多くの場合根本的な健康の問題を有する患者に存在し、高齢患者にとって重要であり、いくつかの連鎖球菌種に分散されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
一態様では、本発明は、Ｃ群またはＧ群連鎖球菌のオープンリーディングフレーム番号５５４（ＯＲＦ５５４）によってコードされている新規ポリペプチドを提供する。一実施形態では、本発明は、ストレプトコッカス・ジスガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）亜種エキシミリス（ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）、すなわち、配列番号２、配列番号８、配列番号１０、配列番号２６および配列番号２８、ストレプトコッカス・コンステラータス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｕｓ）亜種コンステラータス（ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｕｓ）、すなわち、配列番号４および配列番号３２、ストレプトコッカス・アンギノサス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｎｇｉｎｏｓｕｓ）、すなわち、配列番号６および配列番号３０から得られた、数種の様々な新規ＯＲＦ５５４配列のコンセンサス配列である配列番号１１に記載のアミノ酸配列、またはその断片を含む、単離したポリペプチドを提供する。一部の実施形態では、単離したポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および／もしくは配列番号３２に記載のアミノ酸配列、またはその断片を含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、単離したポリペプチドはペプチジル−プロリルイソメラーゼ（ＰＰＩ）活性を有する。
【０００５】
別の態様では、本発明は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および／もしくは配列番号３２と少なくとも９０％、９５％または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる単離したポリペプチドを提供する。一部の実施形態では、単離したポリペプチドはペプチジル−プロリルイソメラーゼ活性を有する。
【０００６】
別の態様では、本発明は、連鎖球菌ＯＲＦ５５４ポリペプチドまたはその断片をコードしている単離したポリヌクレオチドを提供する。一実施形態では、本発明は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列またはその断片を含むポリペプチドをコードしている単離したポリヌクレオチドを提供する。一部の実施形態では、単離したポリヌクレオチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの任意の１つもしくは複数に記載のアミノ酸配列、またはその断片を含む、またはそれからなるポリペプチドをコードしている。一部の実施形態では、単離したポリヌクレオチドは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および配列番号３１のうちの任意の１つもしくは複数に記載のヌクレオチド配列、またはその断片を含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは調節要素と作動可能に連結している。
【０００７】
別の態様では、本発明は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるポリペプチド（またはその断片）をコードしている単離したポリヌクレオチドを提供する。一部の実施形態では、単離したポリペプチドはペプチジル−プロリルイソメラーゼ活性を有する。他の実施形態では、単離したポリヌクレオチドは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および配列番号３１、またはその断片のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％または９９％同一であるヌクレオチド配列を含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは調節要素と作動可能に連結している。一部の実施形態では、調節要素は誘導性プロモーターおよび／または構成的プロモーターを含む。
【０００８】
別の態様では、本発明は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２、またはその断片のうちの任意の１つもしくは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドベクターを提供する。一部の実施形態では、単離したポリペプチドはペプチジル−プロリルイソメラーゼ活性を有する。ベクターは、たとえば、プラスミドベクター、ウイルスベクターなどであることができる。他の実施形態では、ポリヌクレオチドベクターは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および配列番号３１のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるヌクレオチド配列（またはその断片）を含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドベクターは、組換え連鎖球菌ＰＰＩタンパク質の産生を可能にする発現ベクターである。
【０００９】
別の態様では、本発明は、ＯＲＦ５５４によってコードされるＣ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩをコードしているヌクレオチド配列またはその断片を含む、またはそれからなる単離したポリヌクレオチドを含むｅｘ  ｖｉｖｏ細胞を提供する。一部の実施形態では、Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩはＯＲＦ５５４によってコードされており、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるアミノ酸配列またはその断片を含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、単離したポリヌクレオチドは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および配列番号３１のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるヌクレオチド配列またはその断片を含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、細胞は、Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩまたはその断片を産生する。一部の実施形態では、宿主細胞は、単離したポリヌクレオチドと作動可能に連結している調節配列を含む単離したポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドベクターを含む。一部の実施形態では、宿主細胞は、構成的または誘導性プロモーターであり得る調節要素を含むポリヌクレオチドベクターを含む。一部の実施形態では、宿主細胞は、プラスミド、ウイルスベクターまたは発現ベクターであるポリヌクレオチドベクターを含む。一部の実施形態では、宿主細胞は、細菌、哺乳動物細胞、昆虫細胞または酵母細胞から選択される。
【００１０】
別の態様では、本発明は、対象においてＣ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドに対する免疫応答を誘発させるために有用な免疫原性組成物を提供する。一部の実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるポリペプチドまたはその断片を含む、またはそれからなる。他の実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および配列番号３１のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含む、またはそれからなる単離したポリヌクレオチドまたはその断片を含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、調節要素、たとえば、対象における単離したポリヌクレオチドの発現を調節する誘導性または構成的プロモーターなどをさらに含む。
【００１１】
別の態様では、本発明は、Ｃ群またはＧ群連鎖球菌のＯＲＦ５５４によってコードされている連鎖球菌ＰＰＩと結合するエピトープ結合領域を含む、またはそれからなる免疫学的試薬を提供する。一部の実施形態では、免疫学的試薬は、ＯＲＦ５５４によってコードされている少なくとも１つの連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドと特異的に結合する抗体を含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるポリペプチドと結合する。抗体はモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であり得る。一部の実施形態では、抗体は、たとえばヒト化抗体を含めたキメラ抗体である。
【００１２】
別の態様では、本発明は、対象に、Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩタンパク質またはその断片を含む免疫原性組成物を投与することを含む、対象においてβ溶血性連鎖球菌またはβ溶血性連鎖球菌感染症に対する免疫応答を誘導する方法を提供する。一部の実施形態では、ＰＰＩタンパク質は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。
【００１３】
別の態様では、本発明は、対象に、Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩタンパク質またはその断片をコードしているポリヌクレオチドを含む免疫原性組成物を投与することを含む、対象においてβ溶血性連鎖球菌またはβ溶血性連鎖球菌感染症に対する免疫応答を誘導する方法を提供する。一部の実施形態では、ＰＰＩタンパク質は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。他の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および配列番号３１のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、調節要素、たとえば、対象における単離したポリヌクレオチドの発現を調節する誘導性または構成的プロモーターなどをさらに含む。
【００１４】
別の態様では、本発明は、対象におけるβ溶血性連鎖球菌感染症の予防的処置に有用な医薬品の製造における、単離したＣ群もしくはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドまたはその断片の使用を提供する。一部の実施形態では、対象はヒトである。一部の実施形態では、ＰＰＩポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。
【００１５】
別の態様では、本発明は、対象におけるβ溶血性連鎖球菌感染症の予防的処置に有用な医薬品の製造における、Ｃ群もしくはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドまたはその断片をコードしている単離したポリヌクレオチドの使用を提供する。一部の実施形態では、対象はヒト患者である。一部の実施形態では、ＰＰＩポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。他の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および配列番号３１のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、調節要素、たとえば、対象における単離したポリヌクレオチドの発現を可能にする誘導性または構成的プロモーターなどをさらに含む。
【００１６】
別の態様では、本発明は、対象におけるβ溶血性連鎖球菌感染症の予防的処置に有用な医薬品の製造における、Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドのエピトープと特異的に結合する領域を含む免疫学的試薬の使用を提供する。一部の実施形態では、免疫学的試薬は抗体を含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、対象はヒト患者である。一部の実施形態では、ＰＰＩポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、抗体はモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であり得る。一部の実施形態では、抗体は、たとえばヒト化抗体またはポリクローナル抗体などのキメラ抗体であり得る。
【００１７】
別の態様では、本発明は、Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドのエピトープと特異的に結合する治療上有効な量の抗体またはその断片を、薬学的に有効な賦形剤中で投与することを含む、対象においてβ溶血性連鎖球菌感染症を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、対象はヒトである。一部の実施形態では、ＰＰＩポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、抗体はモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であり得る。一部の実施形態では、抗体は、たとえばヒト化抗体またはポリクローナル抗体などのキメラ抗体であり得る。
【００１８】
さらに他の態様では、本発明は、（ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるアミノ酸配列を有する、単離したＣ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチド、（ｂ）Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドをコードしている単離したポリヌクレオチド（上記）、および／または（ｃ）Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドのエピトープと特異的に結合する抗体（上記）を含むキットを提供する。
【００１９】
配列表の簡単な説明
配列番号１は、ストレプトコッカス・ジスガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）亜種エキシミリス（ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）におけるＯＲＦ５５４のヌクレオチド配列である。
【００２０】
配列番号２は、ストレプトコッカス・ジスガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）亜種エキシミリス（ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）におけるＯＲＦ５５４によってコードされているアミノ酸配列である。
【００２１】
配列番号３は、ストレプトコッカス・コンステラータス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｕｓ）亜種コンステラータス（ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｕｓ）におけるＯＲＦ５５４のヌクレオチド配列である。
【００２２】
配列番号４は、ストレプトコッカス・コンステラータス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｕｓ）亜種コンステラータス（ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｕｓ）におけるＯＲＦ５５４によってコードされているアミノ酸配列である。
【００２３】
配列番号５は、ストレプトコッカス・アンギノサス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｎｇｉｎｏｓｕｓ）におけるＯＲＦ５５４のヌクレオチド配列である。
【００２４】
配列番号６は、ストレプトコッカス・アンギノサス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｎｇｉｎｏｓｕｓ）におけるＯＲＦ５５４によってコードされているアミノ酸配列である。
【００２５】
配列番号７は、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属種Ｎ０４Ａ２７株におけるＯＲＦ５５４のヌクレオチド配列である。
【００２６】
配列番号８は、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属種Ｎ０４Ａ２７株におけるＯＲＦ５５４によってコードされているアミノ酸配列である。
【００２７】
配列番号９は、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属種Ｎ０４ＡＦＴ株におけるＯＲＦ５５４のヌクレオチド配列である。
【００２８】
配列番号１０は、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属種Ｎ０４ＡＦＴ株におけるＯＲＦ５５４によってコードされているアミノ酸配列である。
【００２９】
配列番号１１は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８および配列番号１０のポリペプチドのコンセンサスアミノ酸配列である。
【００３０】
配列番号１２は、エス・アガラクチア（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、ＧＢＳ０８２７のＯＲＦ５５４のヌクレオチド配列である。
【００３１】
配列番号１３は、エス・アガラクチア（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、ＧＢＳ０８２７のＯＲＦ５５４によってコードされているアミノ酸配列である。
【００３２】
配列番号１４は、化膿性連鎖球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ＳＰＹ＿１３９０のＯＲＦ５５４のヌクレオチド配列である。
【００３３】
配列番号１５は、化膿性連鎖球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ＳＰＹ＿１３９０のＯＲＦ５５４によってコードされているアミノ酸配列である。
【００３４】
配列番号１６は、エス・ズーペディミカス（Ｓ．ｚｏｏｐｅｄｉｍｉｃｕｓ）のＯＲＦ５５４のヌクレオチド配列である。
【００３５】
配列番号１７は、エス・ズーペディミカス（Ｓ．ｚｏｏｐｅｄｉｍｉｃｕｓ）のＯＲＦ５５４によってコードされているアミノ酸配列である。
【００３６】
配列番号１８は、プライマーＤ５５４  Ｆ１のヌクレオチド配列である。
【００３７】
配列番号１９は、プライマーＤ５５４  Ｆ２のアミノ酸配列である。
【００３８】
配列番号２０は、プライマーＤ５５４  Ｆ５のヌクレオチド配列である。
【００３９】
配列番号２１は、プライマーＤ５５４  Ｒ１のアミノ酸配列である。
【００４０】
配列番号２２は、プライマーＤ５５４  Ｒ４のヌクレオチド配列である。
【００４１】
配列番号２３は、プライマーＡＴＣＣ１２３９４  ５５４  Ｆのヌクレオチド配列である。
【００４２】
配列番号２４は、プライマーＡＴＣＣ１２３９４  ５５４  Ｒのアミノ酸配列である。
【００４３】
配列番号２５は、ストレプトコッカス・ジスガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）亜種エキシミリス（ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）におけるＯＲＦ５５４のヌクレオチド配列である。
【００４４】
配列番号２６は、ストレプトコッカス・ジスガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）亜種エキシミリス（ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）におけるＯＲＦ５５４によってコードされているアミノ酸配列である。
【００４５】
配列番号２７は、ストレプトコッカス・ジスガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）亜種エキシミリス（ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）におけるＯＲＦ５５４のヌクレオチド配列である。
【００４６】
配列番号２８は、ストレプトコッカス・ジスガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）亜種エキシミリス（ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）におけるＯＲＦ５５４によってコードされているアミノ酸配列である。
【００４７】
配列番号２９は、ストレプトコッカス・アンギノサス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｎｇｉｎｏｓｕｓ）におけるＯＲＦ５５４のヌクレオチド配列である。
【００４８】
配列番号３０は、ストレプトコッカス・アンギノサス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｎｇｉｎｏｓｕｓ）におけるＯＲＦ５５４によってコードされているアミノ酸配列である。
【００４９】
配列番号３１は、ストレプトコッカス・コンステラータス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｕｓ）亜種コンステラータス（ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｕｓ）におけるＯＲＦ５５４のヌクレオチド配列である。
【００５０】
配列番号３２は、ストレプトコッカス・コンステラータス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｕｓ）亜種コンステラータス（ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｕｓ）におけるＯＲＦ５５４によってコードされているアミノ酸配列である。
【発明を実施するための形態】
【００５１】
本発明は、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）のオープンリーディングフレーム５５４（ＯＲＦ５５４）に対応するＣ群またはＧ群連鎖球菌種から得られたポリペプチドおよびポリヌクレオチドを記載する。ＯＲＦ５５４のＤＮＡおよびアミノ酸配列は、公開国際特許出願ＷＯ０２／０８３８５９に提供されている。これらのＯＲＦ５５４ポリペプチドは化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ペプチジル−プロリルイソメラーゼ（ＰＰＩ）タンパク質に類似している。これらのポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、対象においてβ溶血性連鎖球菌またはβ溶血性連鎖球菌感染症に対する免疫応答を誘導するための免疫原性組成物中で使用することができる。
【００５２】
用語「ポリヌクレオチド」、「核酸」および「核酸断片」は、本明細書中で互換性があるように使用する。これらの用語には、リン酸ジエステル結合によって接続されたヌクレオチドが包含される。「ポリヌクレオチド」は、合成、非天然または変更されたヌクレオチド塩基を含有していてもよい、一本鎖または二本鎖であるリボ核酸（ＲＮＡ）またはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）ポリマーであり得る。ＤＮＡのポリマーの形態のポリヌクレオチドは、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡのうちの１つもしくは複数のセグメント、またはその混合物を含み得る。ヌクレオチド塩基は、本明細書中で、単一文字のコードで示す：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、イノシン（Ｉ）およびウラシル（Ｕ）。
【００５３】
「タンパク質」または「ポリペプチド」とは、ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド中のコード配列によって決定される特定の順序で配置されているアミノ酸の鎖である。
【００５４】
用語「単離した」とは、天然状態から「人の手によって」変更されたことを意味する。組成物または物質が自然に存在する場合、それが「単離」されているとみなされるためには、その元の環境から変化もしくは取り出されているか、または両方でなければならない。たとえば、本明細書中でこの用語を用いるように、生きた動物に自然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離」されていないが、その天然状態の同時に存在する物質から分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離」されている。単離したポリヌクレオチドまたは単離したポリペプチドは、それが自然に存在する宿主細胞から精製し得る。本発明が対象とする分野の技術者に知られている慣用の核酸精製方法を使用して、単離したポリヌクレオチドを得ることができる。
【００５５】
Ｃ群またはＧ群連鎖球菌のＯＲＦ５５４ポリヌクレオチド
本明細書に記載のＣ群またはＧ群連鎖球菌のＯＲＦ５５４ポリヌクレオチドは、標準のクローニングおよびスクリーニング技術を用いて得られ得る。これらのポリヌクレオチドは、たとえば、ゲノムＤＮＡから、ｍＲＮＡに由来するｃＤＮＡライブラリから、ゲノムＤＮＡライブラリから得られ得るか、または、たとえばｃＤＮＡライブラリからのＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲ（逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応）によってなど、周知かつ市販の技術を用いて合成することができる。
【００５６】
用語「組換え」とは、たとえば、ポリヌクレオチドを、たとえば化学合成または遺伝子操作技術を用いた単離したポリヌクレオチドの操作によって、２つ以上のそうでなければ分離されているポリヌクレオチドセグメントの人工的な組合せによって作製することを意味する。「組換えＤＮＡ構築体」は、少なくとも１つの調節要素と作動可能に連結している、本発明の単離したポリヌクレオチドのうちの任意のものを含む。
【００５７】
一態様では、本発明は、Ｃ群またはＧ群連鎖球菌プロリル−ペプチジルイソメラーゼ（ＰＰＩ）タンパク質をコードしている単離したポリヌクレオチドまたはその断片を提供する。
【００５８】
一実施形態では、単離したポリヌクレオチドは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードしている。配列番号１１のアミノ酸配列は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８および配列番号１０によって表されるＣ群またはＧ群種ストレプトコッカス・ジスガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）亜種エキシミリス（ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）のＯＲＦ５５４の概念的な翻訳から得られたポリペプチド配列をアラインメントした後に得られたコンセンサス配列である。
【００５９】
一実施形態では、本発明は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０もしくは配列番号３２、またはその断片を含む任意の１つまたは複数のポリペプチドをコードしている単離したポリヌクレオチドを提供する。例示的なヌクレオチド配列を配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および配列番号３１に記載する。別の実施形態では、本発明は、遺伝暗号の縮重が原因で配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および配列番号３１に示すポリヌクレオチド配列とは異なるポリヌクレオチドを提供する。これらのポリヌクレオチドは、同じＯＲＦ５５４ポリペプチドをコードしている。
【００６０】
Ｃ群またはＧ群連鎖球菌のＯＲＦ５５４ポリヌクレオチドの相同分子種および対立遺伝子変異体は、当分野で周知の方法を用いて容易に同定することができる。ＯＲＦ５５４ポリヌクレオチドの対立遺伝子変異体および相同分子種は、典型的には配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および配列番号３１に示すヌクレオチド配列のうちの任意の１つもしくは複数、またはその断片と少なくとも約９０〜９５％以上同一であるヌクレオチド配列を含むことができる。ＯＲＦ５５４ポリヌクレオチドの対立遺伝子変異体および相同分子種は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの任意の１つもしくは複数に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードすることができる。そのようなポリヌクレオチドは、ストリンジェントな条件下で、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および／もしくは配列番号３１に記載のヌクレオチド配列、またはその断片を有するポリヌクレオチドのうちの任意の１つもしくは複数とハイブリダイズすることができるとして、容易に同定することができる。
【００６１】
さらに、ＯＲＦ５５４ポリヌクレオチドの対立遺伝子変異体および相同分子種は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および／もしくは配列番号３１に記載のポリヌクレオチドの断片、またはこれらのヌクレオチド配列の断片などの、Ｃ群またはＧ群連鎖球菌のＯＲＦ５５４ポリヌクレオチドのコード領域の断片のみを含むことができる。特定の実施形態では、そのような断片は免疫原性断片をコードしている。
【００６２】
当業者には、多くの配列同一性のレベルが関連するポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列の同定に有用であることが十分に理解されよう。配列アラインメントおよび％同一性の計算は、ＬＡＳＥＲＧＥＮＥ（商標）生物情報学計算スイート（ＤＮＡＳＴＡＲ  Ｉｎｃ．、ウィスコンシン州Ｍａｄｉｓｏｎ）のＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）プログラムを用いて行うことができる。配列の複数のアラインメントは、初期設定パラメータ、たとえばＧＡＰ  ＰＥＮＡＬＴＹ＝１０およびＧＡＰ  ＬＥＮＧＴＨ  ＰＥＮＡＬＴＹ＝１０を使用して、アラインメントのＣｌｕｓｔａｌ方法を用いて行うことができる（ＨｉｇｇｉｎｓおよびＳｈａｒｐ、Ｇｅｎｅ、７３（１）：２３７〜４４、１９８８）。Ｃｌｕｓｔａｌ方法を用いた対アラインメントの初期設定パラメータは、たとえばＫＴＵＰＬＥ１、ＧＡＰ  ＰＥＮＡＬＴＹ＝３、ＷＩＮＤＯＷ＝５およびＤＩＡＧＯＮＡＬＳ  ＳＡＶＥＤ＝５であることができる。
【００６３】
本発明のＯＲＦ５５４ポリヌクレオチドは、免疫原性組成物中に包含させるための組換えポリペプチドの産生および他の用途に使用し得る。組換えポリペプチドの産生のために、ポリヌクレオチドには、成熟ポリペプチドのコード配列を単独で、または、リーダーもしくは分泌配列、プレもしくはプロまたはプレプロ−タンパク質配列、または他の融合ペプチド部分をコードしているものなどの、他のコード配列と連結した成熟ポリペプチドのコード配列が含まれ得る。たとえば、融合したポリペプチドの精製を容易にするマーカー配列をコード配列と連結させることができる（Ｇｅｎｔｚら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８６：８２１〜８２４、１９８９を参照）。また、ポリヌクレオチドは、転写、非翻訳配列、スプライシング、およびポリアデニル化シグナルなどの、非コード５’および３’配列を含有してもよい。
【００６４】
特定の実施形態では、本明細書に提供するポリヌクレオチド配列情報により、本明細書に開示する選択したポリヌクレオチドのヌクレオチド配列と特異的にハイブリダイズする能力を有する、比較的短いＤＮＡ（またはＲＮＡ）オリゴヌクレオチド配列の調製が可能となる。本明細書で使用する用語「オリゴヌクレオチド」とは、２個以上、通常は三（３）個より多く、典型的には十（１０）個より多く、百（１００）個またはそれ以上に至るまでの（ただし、２０〜３０個が好ましい）デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドを含む分子として定義される。正確な大きさは多くの要因に依存し、さらにこれらはオリゴヌクレオチドの最終的な機能または使用に依存する。したがって、一部の実施形態では、選択したヌクレオチド配列、たとえば、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および配列番号３１に示したものなどの配列に基づいて、適切な長さの核酸プローブを調製する。Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドと特異的にハイブリダイズするそのような核酸プローブの能力により、様々な実施形態においてこれらに特定の有用性が与えられる。一部の実施形態では、プローブを、所定の試料中の相補的配列の存在を検出するための様々なアッセイで使用することができる。
【００６５】
一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドをプライマーとして使用し得る。これらのプライマーは、化学合成、ＤＮＡ複製、逆転写、またはその組合せを含めた任意の様式で作製し得る。そのようなプライマーの配列は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術を用いてＣ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドをコードしている定義されたＯＲＦ５５４ポリヌクレオチドセグメントを検出、増幅または突然変異させるのに使用する、本明細書に記載のポリヌクレオチドを用いて設計する。
【００６６】
特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドをハイブリッドの形成を検出するための適切な標識と組み合わせて用いることが有利である。放射性のもの、酵素性のもの、または他のリガンド、たとえばアビジン／ビオチンを含めた、検出可能なシグナルを与えることができる様々な適切な標識が当分野で知られている。
【００６７】
本明細書に記載のポリペプチドをコードしている完全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するため、ならびに配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および配列番号３１に記載のポリヌクレオチド配列、またはその断片と高い配列類似度を有する他の遺伝子（ストレプトコッカス・ジスガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）以外の種由来の相同体および相同分子種をコードしている遺伝子が含まれる）のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するために、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６および配列番号１８〜配列番号２４、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および配列番号３１のうちの１つ、またはその断片中に含有されるヌクレオチド配列と同一または十分に同一であるポリヌクレオチドを、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡのハイブリダイゼーションプローブとして、または核酸増幅（ＰＣＲ）反応のプライマーとして使用し得る。典型的には、これらのヌクレオチド配列は、参照ポリヌクレオチド配列と少なくとも約９０％同一〜少なくとも約９９％同一である。プローブまたはプライマーは、一般に、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも３０個のヌクレオチドまたは少なくとも５０個のヌクレオチドを含む。
【００６８】
完全長ｃＤＮＡを得る、または短いｃＤＮＡを伸長するための、当業者が利用可能かつ周知のいくつかの方法が存在し、たとえば、ｃＤＮＡ末端迅速増幅（ＲＡＣＥ）方法に基づく方法などである。Ｆｒｏｈｍａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５、８９９８〜９００２、１９８８を参照。たとえば、ＭＡＲＡＴＨＯＮ（商標）技術（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．）によって例示されるこの技術の最近の改変により、より長いｃＤＮＡの検索が著しく単純化された。ＭＡＲＡＴＨＯＮ（商標）技術では、選択した組織から抽出したｍＲＮＡおよびそれぞれの末端上にライゲーションさせた「アダプター」配列からｃＤＮＡを調製した。その後、遺伝子特異的およびアダプター特異的なオリゴヌクレオチドプライマーの組合せを用いて、核酸増幅（ＰＣＲ）を実施してｃＤＮＡの「欠損した」５’末端を増幅する。その後、「ネスト」プライマー、すなわち、増幅産物内でアニーリングするように設計されたプライマー（典型的には、アダプター配列中のさらに３’にアニーリングするアダプター特異的プライマーおよび既知の遺伝子配列中のさらに５’にアニーリングする遺伝子特異的プライマー）を用いてＰＣＲ反応を繰り返す。その後、この反応の産物をＤＮＡ配列決定によって分析し、既存のｃＤＮＡと直接合わせることによって完全な配列を与えること、または、５’プライマーを設計するための新しい配列情報を用いて別々の完全長ＰＣＲを実施することのいずれかによって、完全長ｃＤＮＡを構築することができる。
【００６９】
Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチド
一態様では、本発明は、とりわけ免疫原としておよび免疫原性組成物中で使用することができる、単離したＣ群またはＧ群連鎖球菌ペプチジル−プロリルイソメラーゼ（ＰＰＩ）ポリペプチド（ＯＲＦ５５４によってコードされている）を提供する。ＰＰＩポリペプチドは組換えポリペプチドであり得る。
【００７０】
一実施形態では、本発明は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む単離したポリペプチドを提供する。配列番号１１に記載のアミノ酸配列は、ストレプトコッカス・ジスガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）亜種エキシミリス（ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）のＯＲＦ５５４で得られたポリヌクレオチド配列、ならびに配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８および配列番号１０に記載のものをアラインメントした後に得られたコンセンサス配列である。
【００７１】
一実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％、もしくは９９％同一、または１００％同一であるアミノ酸配列、前記ポリペプチドの機能的および非機能的な天然に存在する変異体または生物学的等価物、前記ポリペプチドの組換え産生した変異体または生物学的等価物、前記ポリペプチドの相同分子種および／または対立遺伝子変異体、ならびに前記ポリペプチドの断片を含む。
【００７２】
Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドの生物学的等価物または変異体には、機能的および非機能的なポリペプチドがどちらも含まれる。機能的な生物学的等価物または変異体には、対象において免疫学的または抗原性応答を誘発する能力を維持している、ポリペプチドの天然に存在するアミノ酸配列変異体が含まれる。機能的な変異体は、典型的には、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの１つもしくは複数の１つもしくは複数のアミノ酸の保存的置換、またはポリペプチドの重大でない領域中の重大でない残基の置換、欠失もしくは挿入が含有される。
【００７３】
一部の実施形態では、修飾および変化をＰＰＩポリペプチドの構造中に行い、それでも変化していないＣ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドと同じ抗原性を有するＰＰＩポリペプチドを得ることができる。たとえば、はっきり感知できるほどの抗原性の損失を伴わずに、配列中の特定のアミノ酸を他のアミノ酸で置換することができる。ポリペプチドの生物学的な機能活性を定義するのは、そのポリペプチドの相互作用の能力および性質であるため、特定のアミノ酸配列置換をポリペプチド配列中に行い、それでも同様の特性を有するポリペプチドを得ることができる。
【００７４】
そのような修飾および変化を行うにあたって、アミノ酸のヒドロパシー指数を考慮することができる。ポリペプチドに相互作用的な生物学的機能を与えることにおけるヒドロパシーアミノ酸指数の重要性は、当分野で一般に理解されている（ＫｙｔｅおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、１５７：１０５〜１３２、１９８２）。特定のアミノ酸を同様のヒドロパシー指数またはスコアを有する他のアミノ酸で置き換え、それでも同様の生物活性を有するポリペプチドをもたらすことができることが当分野で知られている。それぞれのアミノ酸には、その疎水性および荷電の特徴に基づいてヒドロパシー指数が割り当てられている。それらの指数は、イソロイシン（＋４．５）、バリン（＋４．２）、ロイシン（＋３．８）、フェニルアラニン（＋２．８）、システイン／シスチン（＋２．５）、メチオニン（＋１．９）、アラニン（＋１．８）、グリシン（−０．４）、スレオニン（−０．７）、セリン（−０．８）、トリプトファン（−０．９）、チロシン（−１．３）、プロリン（−１．６）、ヒスチジン（−３．２）、グルタミン酸（−３．５）、グルタミン（−３．５）、アスパラギン酸（−３．５）、アスパラギン（−３．５）、リシン（−３．９）、およびアルギニン（−４．５）である。
【００７５】
アミノ酸残基の相対ヒドロパシー特徴によって、生じるポリペプチドの二次および三次構造が決定され、立ち代ってこれがポリペプチドと酵素、基質、受容体、抗体、抗原などの他の分子との相互作用を定義することは、当分野で一般に認められている。アミノ酸を同様のヒドロパシー指数を有する別のアミノ酸によって置き換え、それでも機能的に等価なポリペプチドを得ることができることは、当分野で知られている。一部の実施形態では、修飾または変化したＰＰＩポリペプチドは、ヒドロパシー指数がそれぞれの元のアミノ酸の±２以内である１つまたは複数の置換されたアミノ酸を含む。他の実施形態では、それぞれの置換されたアミノ酸のヒドロパシー指数はその元のアミノ酸の±１以内である。さらに他の実施形態では、それぞれの置換されたアミノ酸のヒドロパシー指数はその元のアミノ酸の±０．５以内である。
【００７６】
また、同様のアミノ酸の置換は、特にそれによって作製される生物学的な機能的に等価なポリペプチドまたはペプチドを免疫学的実施形態で使用することを意図する場合は、親水性に基づいて行うこともできる。米国特許第４，５５４，１０１号は、その隣接アミノ酸の親水性によって支配される、ポリペプチドの最大局所平均親水性は、その免疫原性および抗原性と相関すると教示している。
【００７７】
本明細書で使用する用語「変異体」とは、それぞれ参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは異なるポリヌクレオチドまたはポリペプチドであるが、必須の特性を保持している。ポリヌクレオチドの典型的な変異体は、参照ポリヌクレオチドとはヌクレオチド配列が異なる。変異体のヌクレオチド配列の変化は、参照ポリヌクレオチドによってコードされているポリペプチドのアミノ酸配列を変更してもしなくてもよい。以下に記述するように、ヌクレオチドの変化は、参照配列によってコードされているポリペプチドのアミノ酸の置換、付加、欠失、融合および切断をもたらし得る。ポリペプチドの典型的な変異体は、参照ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なる。一般に、差異は、参照ポリペプチドの配列および変異体ポリペプチドの配列が全体的に類似しており、多くの領域が同一であるように限定される。変異体ポリペプチドおよびその参照ポリペプチドは、１つまたは複数の置換、付加および欠失の任意の組合せによってアミノ酸配列が異なり得る。置換または挿入されたアミノ酸残基は、遺伝暗号によってコードされているものであってもなくてもよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変異体は、対立遺伝子変異体などの天然に存在するものであってよく、または、天然に存在することが知られていない変異体であってもよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの非天然に存在する変異体は、突然変異誘発技術または直接合成によって作製し得る。
【００７８】
組換え系
ポリペプチドの組換え産生には、本発明のＯＲＦ５５４ポリヌクレオチドを含む発現系が取り込まれるように宿主細胞を遺伝子操作することができる。ポリヌクレオチドは、たとえば、Ｄａｖｉｓら、ＢＡＳＩＣ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ（１９８６）およびＳａｍｂｒｏｏｋら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ、２ｎｄ  ｅｄ．、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８９）などの多くの標準の実験室の手引きに記載されている方法によって、宿主細胞内に導入することができる。それらの方法には、たとえば、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストランを介したトランスフェクション、トランスベクション、微量注入、超音波、カチオン性脂質を介したトランスフェクション、電気穿孔、形質導入、スクレープ負荷、バリスティック導入、および感染が含まれる。
【００７９】
適切な宿主細胞の代表的な例には、細菌細胞（たとえば、連鎖球菌、ブドウ球菌、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ストレプトマイセス属種および枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）細胞）、酵母細胞（たとえば、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）属菌およびサッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属菌）、哺乳動物細胞（たとえば、ＣＨＯ細胞）、ならびに昆虫細胞（たとえば、Ｓｆ９およびＳｆ２１）が含まれる。
【００８０】
組換え産生したポリペプチドは、高速液体クロマトグラフィー、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、およびレクチンクロマトグラフィーを含めた周知の方法によって組換え細胞培養物から回収および精製し得る。
【００８１】
無数のベクター系のうちの任意の１つまたは複数を用いて、Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドを異種細胞系において発現および産生させ得る。そのようなベクター系には、とりわけ、染色体、エピソームおよびウイルスに由来する系、たとえば、細菌プラスミド、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）（米国特許第４，８３７，１５１号）などの弱毒化した細菌、バクテリオファージ、トランスポゾン、酵母エピソーム、挿入因子、酵母染色体要素、ワクシニアおよび他のポックスウイルス、シンドビス、アデノウイルス、バキュロウイルス、ＳＶ４０などのパポバウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、レトロウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（米国特許第５，６４３，５７６号）などのアルファウイルス、水疱性口内炎ウイルスなどの非区域性マイナス鎖ＲＮＡウイルス（米国特許第６，１６８，９４３号）などのウイルスに由来するベクター、ならびにその組合せ、たとえば、プラスミド、ならびにコスミドおよびファージミドなどのバクテリオファージ遺伝因子に由来するベクターが含まれる。発現系には、発現を調節および生じさせる制御領域、たとえばプロモーターおよび他の調節要素（ポリアデニル化シグナルなど）が含まれるべきである。一般に、ポリヌクレオチドを維持、増殖または発現させて宿主においてポリペプチドを産生させるために適した任意の系またはベクターを使用し得る。適切なヌクレオチド配列は、たとえば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ，Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ（上記）に記載のものなどの、様々な周知かつ常用の技術のうちの任意のものによって発現系内に挿入し得る。
【００８２】
一実施形態では、本発明は、Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドをコードしているＣ群またはＧ群連鎖球菌のＯＲＦ５５４ポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。発現ベクターは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０および配列番号３２のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるポリペプチドをコードしているＯＲＦ５５４ポリヌクレオチドを含む。あるいは、発現ベクターは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９および配列番号３１のうちの任意の１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％もしくは９９％同一、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含む、またはそれからなるポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、本発明の発現ベクターは、エンハンサー−プロモーターと作動可能に連結したポリヌクレオチドを含む。さらに他の実施形態では、発現ベクターは、原核プロモーターと作動可能に連結したポリヌクレオチドを含む。あるいは、発現ベクターは、真核プロモーターであるエンハンサー−プロモーターと作動可能に連結したポリヌクレオチドを含む。発現ベクターは、カルボキシ末端アミノ酸の３’側に位置し、コードされているポリペプチドの転写単位内にあるポリアデニル化シグナルをさらに含み得る。
【００８３】
本明細書で使用する用語「調節要素」とは、核酸配列の発現の一部の側面を制御する遺伝因子をいう。たとえば、プロモーターとは、作動可能に連結しているコード領域の転写の開始を促進する調節要素である。他の調節要素は、エンハンサー、サイレンサー、スプライシングシグナル、ポリアデニル化シグナル、終止シグナル、ＲＮＡ輸出要素、内部リボソーム進入部位などである。
【００８４】
本明細書で使用するプロモーターとは、転写が開始される点（すなわち転写開始部位）の前（上流）の、典型的には約１００対以内のヌクレオチドのＤＮＡ分子の領域である。その領域は、典型的には、異なる遺伝子中で同様の相対的位置に位置する数種のＤＮＡ配列要素を含有する。本明細書で使用する用語「プロモーター」には、当分野において一般化された真核ＲＮＡポリメラーゼＩＩ転写単位の上流プロモーター領域、プロモーター領域またはプロモーターと呼ばれるものが含まれる。
【００８５】
別の種類の別個の転写調節配列要素はエンハンサーである。エンハンサーは、特定のコード領域（たとえば遺伝子）に時間、位置および発現レベルの特異性をもたらす。エンハンサーの主要な機能は、そのエンハンサーと結合する１つまたは複数の転写因子を含有する細胞において、コード配列の転写のレベルを増加させることである。プロモーターとは異なり、エンハンサーは、プロモーターが存在する限りは、転写開始部位から様々な距離に位置する場合に機能することができる。
【００８６】
本明細書で使用する語句「エンハンサー−プロモーター」とは、エンハンサーおよびプロモーター要素をどちらも含有する複合単位を意味する。エンハンサー−プロモーターは、少なくとも１つの遺伝子産物をコードしているコード配列と作動可能に連結している。本明細書で使用する語句「作動可能に連結した」または「作動可能に連結している」とは、エンハンサー−プロモーターが、そのコード配列の転写がそのエンハンサー−プロモーターによって制御および調節されるようにコード配列と接続していることを意味する。エンハンサー−プロモーターをコード配列と作動可能に連結させる手段は当分野で周知である。また、当分野で周知のように、転写が制御されるコード配列に相対的な正確な配向および位置は、とりわけ、エンハンサー−プロモーターの具体的な性質に依存する。したがって、ＴＡＴＡボックス最小限プロモーターは、典型的には転写開始部位の約２５〜約３０塩基対上流に位置し、上流プロモーター要素は、典型的には転写開始部位の約１００〜約２００塩基対上流に位置する。対照的に、エンハンサーは開始部位から下流に位置することができ、その部位から相当の距離であることができる。
【００８７】
本明細書に記載のベクター構築体において使用するエンハンサー−プロモーターは、形質移入する細胞において発現を駆動する任意のエンハンサー−プロモーターであることができる。周知の特性を有するエンハンサー−プロモーターを用いることによって、遺伝子産物の発現のレベルおよびパターンを最適化することができる。たとえば、一般的に使用されているプロモーターは、ポリオーマ、アデノウイルス２、サイトメガロウイルスおよびシミアンウイルス４０に由来する。原核および真核細胞のどちらの他の適切な発現系にも、本明細書中に参考として組み込まれているＳａｍｂｒｏｏｋら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」、第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク州Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、１９８９の第１６および１７章を参照されたい。
【００８８】
別の実施形態では、発現ベクターは特定の細胞種における核酸の発現を優先的に指示することができる（たとえば、組織特異的な調節要素を用いて核酸を発現させる）。組織特異的な調節要素は当分野で知られている。適切な組織特異的なプロモーターの非限定的な例には、アルブミンプロモーター（肝臓に特異的、Ｐｉｎｋｅｒｔら、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ、１：２６８〜２７７ページ、１９８７）、リンパ系に特異的なプロモーター（ＣａｌａｍｅおよびＥａｔｏｎ、Ａｄｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、４３：２３５〜２７５ページ、１９８８）、Ｔ細胞受容体のプロモーター（ＷｉｎｏｔｏおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ、ＥＭＢＯ  Ｊ、８：７２９〜７３３ページ、１９８９）および免疫グロブリン（Ｂａｎｅｒｊｉら、Ｃｅｌｌ、３３：７２９〜７４０ページ、１９８３）、（ＱｕｅｅｎおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｃｅｌｌ、３３：７４１〜７４８ページ、１９８３）、ニューロンに特異的なプロモーター（たとえば神経細線維プロモーター、ＢｙｒｎｅおよびＲｕｄｄｌｅ、ＰＮＡＳ、８６：５４７３〜５４７７ページ、１９８９）、膵臓に特異的なプロモーター（Ｅｄｌｕｎｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３０：９１２〜９１６ページ、１９８５）、ならびに乳腺に特異的なプロモーター（たとえば乳清プロモーター、米国特許第４，８７３，３１６号および国際出願ＥＰ２６４，１６６）が含まれる。別の実施形態では、調節要素には、たとえばネズミｈｏｘプロモーター（ＫｅｓｓｅｌおよびＧｒｕｓｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９：３７４〜３７９ページ、１９９０）およびａ−フェトプロテインプロモーター（ＣａｍｐｅｓおよびＴｉｌｇｈｍａｎ、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ、３：５３７〜５４６ページ、１９８９）などの発生的に調節されるプロモーターが含まれる。
【００８９】
ベクターＤＮＡは、慣用の形質転換、感染またはトランスフェクション技術を介して原核または真核細胞内に導入することができる。本明細書で使用する用語「形質転換」および「トランスフェクション」とは、たとえばリン酸カルシウムまたは塩化カルシウム共沈殿、ＤＥＡＥ−デキストランを介したトランスフェクション、リポフェクション、超音波および電気穿孔法を含めた、外来核酸を宿主細胞内に導入するための、様々な当分野で認識されている技術をいうことを意図する。宿主細胞に対して形質転換またはトランスフェクションを行う適切な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」、２ｎｄ  ｅｄ．、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８９）および他の実験室の手引き中に見つけることができる。
【００９０】
原核生物におけるポリペプチドの産生は、ほとんどの場合、融合または非融合タンパク質のどちらかの発現を指示する構成的または誘導性プロモーターを含有するベクターを有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）において実施する。構成的プロモーターには、たとえば、λＰＬ、ｓｐｃリボソームおよびβ−ラクタマーゼが含まれる。誘導性プロモーターには、たとえば、アラビノース、ｌａｃ、ｔａｃおよびマルトース結合タンパク質が含まれる。融合ベクターは、それにコードされているタンパク質の、通常は組換えタンパク質のアミノ末端に、いくつかのアミノ酸を付加する。そのような融合ベクターは、典型的には、組換えタンパク質の発現を増加させること、組換えタンパク質の溶解度を増加させること、および親和性精製においてリガンドとして作用することによって組換えタンパク質の精製を支援することの３つの目的を果たす。多くの場合、融合発現ベクター中では、融合タンパク質の精製に続いて組換えタンパク質を融合部分から分離することを可能にするために、融合部分と組換えタンパク質との接合部にタンパク質分解的切断部位を導入する。そのような酵素およびその同族認識配列には、Ｘａ因子、トロンビンおよびエンテロキナーゼが含まれる。また、本発明は、本発明の少なくとも１つのポリヌクレオチドを含むベクター（たとえば、発現ベクター、配列決定ベクター、クローニングベクター）、本発明のベクターを用いて遺伝子操作した宿主細胞、および組換え技術による本発明のポリペプチドの産生も提供する。本発明のＤＮＡ構築体に由来するＲＮＡを使用して、そのようなタンパク質を産生するために無細胞翻訳系を用いることもできる。
【００９１】
Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩ抗体
また、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、もしくは配列番号１１に記載のアミノ酸配列、その断片および類似体を含むものを含めた本発明のポリペプチド、または前記配列、断片および／もしくは類似体を発現する細胞は、本発明のポリペプチドと特異的に結合する抗体を産生させる免疫原としても使用することができる。一態様では、本発明は、（ａ）Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドと特異的に結合する抗体、（ｂ）細胞、細胞もしくは組織抽出物、または生体液中の、連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドの存在を検出するため、または量もしくは濃度を測定するための、そのような抗体の使用、および（ｃ）対象においてβ溶血性連鎖球菌感染症を処置するためのそのような抗体の使用を提供する。
【００９２】
本発明の抗体には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、および抗イディオタイプ抗体が含まれる。ポリクローナル抗体とは、抗原で免疫化した動物の血清に由来する抗体分子の異種集団である。モノクローナル抗体は、特異的な抗原に結合する実質的に同種の抗体集団である。一般に、抗体は、たとえば、従来のハイブリドーマ技術（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５〜４９９）、組換えＤＮＡ方法（米国特許第４，８１６，５６７号）、または抗体ライブラリを用いたファージディスプレイ（Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４〜６２８、Ｍａｒｋｓら（１９９１）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１〜５９７）を使用して作製することができる。さらなる抗体産生技術には、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、ｅｄｓ．ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、１９８８を参照されたい。本発明は、任意の特定の供給源、産生方法、または抗体の他の特別な特徴に限定されない。
【００９３】
Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドエピトープと特異的に結合する抗体を産生または単離するための他の適切な方法を使用することができる。一部の実施形態では、組換え抗体は、ペプチドまたはタンパク質ディスプレイライブラリ、たとえば、バクテリオファージ、リボソーム、オリゴヌクレオチド、ＲＮＡおよびｃＤＮＡディスプレイライブラリから選択される（ＥＰ３６８，６８４、ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４、ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１７５５、ＰＣＴ／ＧＢ９２／００２２４０、ＰＣＴ／ＧＢ９２／００８８３、ＰＣＴ／ＧＢ９３／００６０５、ＰＣＴ／ＧＢ９４／０１４２２、ＰＣＴ／ＧＢ９４／０２６６２、ＰＣＴ／ＧＢ９７／０１８３５、ＷＯ９０／１４４４３、ＷＯ９０／１４４２４、ＷＯ９０／１４４３０、ＰＣＴ／ＵＳ９４／１２３４、ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９６／０７７５４、ＥＰ６１４，９８９、ＷＯ９５／１６０２７、ＷＯ８８／０６６３０、ＷＯ９０／３８０９、米国特許第４，７０４，６９２号、ＰＣＴ／ＵＳ９１／０２９８９、ＷＯ８９／０６２８３、ＥＰ３７１，９９８、ＥＰ５５０，４００、ＥＰ２２９，０４６、およびＰＣＴ／ＵＳ９１／０７１４９）。他の実施形態では、組換え抗体は、確率論的に作製されたペプチドまたはタンパク質のライブラリから選択される（米国特許第５，７２３，３２３号、第５，７６３，１９２号、第５，８１４，４７６号、第５，８１７，４８３号、第５，８２４，５１４号、第５，９７６，８６２号、ＷＯ８６／０５８０３、およびＥＰ５９０，６８９）。さらに他の実施形態では、組換え抗体は、ヒト抗体のレパートリーを産生することができるトランスジェニック動物において産生させる（Ｎｇｕｙｅｎら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、４１：９０１〜９０７、１９９７、Ｓａｎｄｈｕら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１６：９５〜１１８、１９９６、およびＥｒｅｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．、９３：１５４〜１６１、１９９８）。組換え抗体を産生する他の技術には、たとえば、（ａ）選択したリンパ球抗体による方法（「ＳＬＡＭ」）などの単一細胞抗体産生技術（米国特許第５，６２７，０５２号）、（ｂ）ゲルミクロ液滴およびフローサイトメトリー方法（Ｐｏｗｅｌｌら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、８：３３３〜３３７、１９９０）、ならびに（ｃ）Ｂ細胞選択（Ｓｔｅｅｎｂａｋｋｅｒｓら、Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｏｒｔｓ、１９：１２５〜１３４、１９９４）が含まれる。また、これらの同じ方法を、抗Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩ抗体のその特異的結合標的に対する親和性および／または結合力を向上させるためにも展開することができる。
【００９４】
インタクトな抗体は免疫グロブリン（Ｉｇ）であり、これらは、典型的には、２本の軽鎖（それぞれ約２５ｋＤａ）および２本の重鎖（それぞれ約５０ｋＤａ）からなる四量体のグリコシル化されたタンパク質である。軽鎖は２つのアイソタイプ（λおよびκ）に分類され、重鎖は５つのアイソタイプ（Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、およびＭ）に分類される。一部の重鎖アイソタイプは、アイソタイプサブクラス、たとえば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４へとさらに分けられる。
【００９５】
様々な抗体のドメインおよび三次元構造が当分野で知られている（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、上記）。手短に述べると、軽鎖は１個の定常ドメイン（ＣＬ）および１個のＮ末端可変ドメイン（ＶＬ）からなる。重鎖は３個または４個の定常ドメイン（ＣＨ）、１個のヒンジ領域、および１個のＮ末端可変ドメイン（ＶＨ）からなる。ＶＨドメインに隣接するＣＨはＣＨ１と命名される。ＶＨおよびＶＬドメインは、フレームワーク（ＦＲ）領域と呼ばれる４つの保存された配列の領域を含有し（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４）、これらは相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性配列の３つの領域の足場を形成する。ＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）は、抗原を特異的に認識および結合する抗体アミノ酸のほとんどを含有する。重鎖ＣＤＲはＨ１、Ｈ２、およびＨ３と示し、一方で軽鎖ＣＤＲはＬ１、Ｌ２、およびＬ３と示す。
【００９６】
Ｆａｂ断片（断片抗原結合）は、定常領域間のジスルフィド結合によって共有結合されたＶＨ−ＣＨ１ドメインおよびＶＬ−ＣＬドメインからなる。Ｆｖ断片はより小さく、非共有結合したＶＨドメインおよびＶＬドメインからなる。非共有ドメインが解離する傾向を克服するために、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）を構築することができる。ｓｃＦｖは、（ａ）ＶＨのＣ末端をＶＬのＮ末端と、または（ｂ）ＶＬのＣ末端をＶＨのＮ末端と連結させる柔軟なポリペプチドを含有する。１５量体（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３ペプチドをリンカーとして使用し得るが、他のリンカーが当分野で知られている。
【００９７】
抗体の多様性は、可変領域および様々な体性事象をコードしている複数の生殖系列遺伝子を使用することによって作製する。体性事象には、可変性遺伝子セグメントを組み換え、多様化し（Ｄ）、遺伝子セグメントを連結させて（Ｊ）完全なＶＨ領域を作製すること、および可変を組み換え、遺伝子セグメントを連結させて完全なＶＬ領域を作製することが含まれる。ＣＤＲ３（Ｈ３）が抗体配列内の分子多様性の最大源である。たとえば、Ｈ３は、２個のアミノ酸残基という短いもの、または２６を超えるものであることができる。最も小さな抗原結合断片はＦｖであり、これはＶＨドメインおよびＶＬドメインからなる。
【００９８】
本発明の抗Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩ抗体は、抗体定常領域またはその一部を場合によって含む。たとえば、ＶＬドメインは、そのＣ末端がＣκまたはＣλなどの軽鎖定常ドメインに付着していてもよい。同様に、ＶＨドメインまたはその一部分は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ、ならびに任意のアイソタイプサブクラスなどの重鎖のすべてまたは一部に付着していてもよい。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４などの抗体アイソタイプは、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインによって決定される。アイソタイプは、これらのドメインを変化させることによって、抗原結合に影響を与えずに切り換えることができる。定常領域は当分野で知られている（たとえばＫａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｎｏ．９１−３２４２、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９９１を参照）。
【００９９】
また、用語「抗体」には、インタクトな分子および抗原と結合することができるＦａｂなどの断片がどちらも含まれることも意味する。Ｆａｂ断片はインタクトな抗体のＦｃ断片を欠いており、循環からより迅速にクリアランスされ、インタクトな抗体よりも非特異的組織結合が少ない場合がある（Ｗａｈｌら、１９８３、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．、２４：３１６〜３２５）。本発明に有用な抗体のＦａｂおよび他の断片は、インタクトな抗体分子の方法に従ってＣ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドを検出および定量するために使用し得ることを理解されたい。
【０１００】
キメラ抗体とは、ネズミモノクローナル抗体に由来する可変領域（ＶＨ、ＶＬ）およびヒト免疫グロブリン定常領域（ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３、ＣＬ）を有するものなどの、その異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。キメラ抗体およびその産生方法は当分野で知られている（Ｃａｂｉｌｌｙら、１９８４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：３２７３〜３２７７、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、１９８４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１〜６８５５、Ｂｏｕｌｉａｎｎｅら、１９８４、Ｎａｔｕｒｅ、３１２：６４３〜６４６、Ｃａｂｉｌｌｙら、欧州特許出願１２５０２３（１９８４年１１月１４日公開）、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら、欧州特許出願１７１４９６（１９８５年２月１９日公開）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、欧州特許出願１７３４９４（１９８６年３月５日公開）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、ＰＣＴ出願ＷＯ８６／０１５３３（１９８６年３月１３日公開）、Ｋｕｄｏら、欧州特許出願１８４１８７（１９８６年１月１１日公開）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、欧州特許出願１７３４９４（１９８６年３月５日公開）、Ｓａｈａｇａｎら、１９８６、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３７：１０６６〜１０７４、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９号（１９８７年５月７日）、Ｌｉｕら、１９８７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８４：３４３９〜３４４３、Ｓｕｎら、１９８７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８４：２１４〜２１８、Ｂｅｔｔｅｒら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４０：１０４１〜１０４３）。これらの参考文献は、本明細書中に参考として組み込まれている。
【０１０１】
抗体は、様々な様式で、たとえば、タンパク質が発現されたことを確認するため、またはタンパク質がどこで発現されたかを確認するために使用する。たとえば、標識した抗体（たとえばＦＡＣＳ用に蛍光標識）をインタクトな細菌と共にインキュベーションし、細菌表面上に標識が存在することでタンパク質の位置を確認することができる。
【０１０２】
免疫原性組成物
本発明は、Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドのうちの１つまたは複数を含む免疫原性組成物を提供する。一部の実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号２、４、６、８および１０と少なくとも９０％、９５％、９９％または１００％同一であるアミノ酸残基の配列を含む１つまたは複数のＰＰＩポリペプチドと、１つまたは複数の生理的に許容される担体とを含む。
【０１０３】
他の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドと、１つまたは複数の生理的に許容される担体とを含む。一部の実施形態では、免疫原性組成物は、配列番号１、３、５、７および／もしくは９のうちの１つまたは複数と少なくとも９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む。
【０１０４】
本明細書で使用する用語「免疫原性組成物」とは、免疫原性組成物を接種した対象において免疫応答を刺激することができる投与可能な形態の、任意の種類の生物剤をいう。免疫応答には、抗体の誘導および／またはＴ細胞応答の誘導が含まれ得る。免疫原性組成物を参照して使用する用語「保護」とは、本明細書では、問題の疾患または状態に関連する症状のうちの任意のものの寛解（部分的または完全なもの）をいう。したがって、本免疫原性組成物による、エス・ジスガラクチエ（Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）（亜種ジスガラクチエ（Ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）およびエキシミリス（ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）が含まれる）などのストレプトコッカス属種による感染症からの対象の保護は、一般に、細菌成長ならびに／または関節炎、心内膜炎、髄膜炎、多漿膜炎、気管支肺炎、髄膜炎、永久聴覚損失および敗血症性ショックを含めた連鎖球菌感染症に関連する臨床症状のうちの１つもしくは複数の消失をもたらす。
【０１０５】
本明細書に開示する方法には、ストレプトコッカス属の種（たとえば、ストレプトコッカス・ジスガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）、エス・ジスガラクチエ（Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）亜種エキシミリス（ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）、エス・ジスガラクチエ（Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）亜種ジスガラクチエ（Ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）、化膿性連鎖球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、エス・アガラクチア（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、エス・アンギノサス（Ｓ．ａｎｇｉｎｏｓｕｓ）、エス・コンステラータス（Ｓ．ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｕｓ）、エス・エキシミリス（Ｓ．ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）およびエス・インターメディウス（Ｓ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ））を含めた１つまたは複数の病原体に対する免疫応答を誘導することが含まれ得る。たとえば、この方法には、１つまたは複数の連鎖球菌病原体、たとえばエス・ジスガラクチエ（Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）亜種エキシミリス（ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）に対するポリクローナル抗体の産生を誘導することが含まれ得る。一部の実施形態では、この方法には、単離したＣ群またはＧ群連鎖球菌のＯＲＦ５５４ポリヌクレオチドまたはＰＰＩポリペプチドが含まれる組成物を対象に投与することが含まれる。
【０１０６】
様々な試験を用いて本発明のポリペプチドのｉｎ  ｖｉｔｒｏ免疫原性を評価する。たとえば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏオプソニンアッセイは、ストレプトコッカス属種の細胞、問題のポリペプチドに対する特異的抗体を含有する熱失活させた血清、および外因性の補体源の混合物を一緒にインキュベートすることによって実施する。オプソニン化貪食作用は、新しく単離した多形核細胞（ＰＭＮ）および抗体／補体／ストレプトコッカス属種の細胞の混合物のインキュベーション中に進行する。抗体および補体でコーティングされた細菌細胞は、オプソニン化貪食作用の際に死滅する。オプソニン化貪食作用を回避する生存細菌のコロニー形成単位（ｃｆｕ）は、アッセイ混合物をプレートすることによって決定する。力価は、アッセイ対照との比較によって決定した、≧５０％の細菌死滅を与える最高希釈率の逆数として報告する。試験した最低血清希釈率（１：８）で５０％未満の死滅を実証する検体は、オプソニン化貪食作用抗体（ＯＰＡ）力価４を有すると報告される。上述の方法はＧｒａｙ方法の改変である（Ｇｒａｙ、Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ、Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ、ｐ．６９４〜６９７、１９９０）。
【０１０７】
試験血清＋細菌細胞および熱失活させた補体を含有する試験血清対照をそれぞれの個々の血清中に含める。この対照は、抗生物質または他の血清構成成分の存在が細菌株を直接（すなわち、補体またはＰＭＮの非存在下で）死滅させることができるかどうかを評価するために使用される。既知のオプソニン力価を有するヒト血清を陽性ヒト血清対照として使用する。それぞれの未知の血清におけるオプソニン抗体価を血清の初期希釈率の逆数として計算し、血清を用いない対照と比較して５０％のｃｆｕの低下が得られた。
【０１０８】
また、全細胞ＥＬＩＳＡアッセイを用いてポリペプチド抗原のｉｎ  ｖｉｔｒｏ免疫原性および表面露出も評価することができ、ここでは、目的の細菌株を９６ウェルプレートなどのプレート上にコーティングし、免疫化した動物からの試験血清を細菌細胞と反応させる。試験ポリペプチド抗原に特異的な任意の抗体が、ポリペプチド抗原の表面露出させたエピトープと反応性を有する場合は、これを当業者に知られている標準の方法によって検出することができる。
【０１０９】
その後、所望のｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性を実証する任意のポリペプチドをｉｎ  ｖｉｖｏ動物免疫誘発モデル（ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｉｍａｌ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  ｍｏｄｅｌ）で試験し得る。特定の実施形態では、免疫原性組成物は、当業者に知られている免疫化の方法および経路（たとえば、鼻腔内、非経口、筋肉内、経口、直腸、経膣、経皮、腹腔内、静脈内、皮下など）によって、動物（たとえばマウス）の免疫化に使用する。特定のストレプトコッカス・ジスガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）の免疫原性組成物を用いて動物を免疫化した後、ストレプトコッカス・ジスガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）または他の連鎖球菌種を用いて動物を免疫誘発し、ストレプトコッカス・ジスガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）または他のストレプトコッカス属種の感染に対する耐性についてアッセイする。
【０１１０】
Ｃ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩ／ＯＲＦ５５４ポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、対象への投与に適した免疫原性組成物内に取り込ませる。そのような組成物は、典型的には、核酸分子またはタンパク質を、薬学的に許容される担体と共に含む。本明細書で使用する「薬学的に許容される担体」という語句には、薬学的な投与に適合性のある任意かつすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤、賦形剤などが含まれるものとする。薬学的に活性のある物質のためのそのような媒体および薬剤の使用は当分野で周知である。任意の慣用の媒体または薬剤が活性化合物に不適合である場合以外は、そのような媒体を本発明の組成物中で使用することができる。補助活性化合物も組成物中に取り込ませることができる。
【０１１１】
本発明の免疫原性組成物は、その目的の投与経路に適合するように製剤化する。投与経路の例には、非経口（たとえば、筋肉内、静脈内、皮内、皮下、腹腔内）、経粘膜（たとえば、経口、直腸、鼻腔内、経膣、呼吸器）および経皮（局所）が含まれる。非経口、皮内、または皮下の施用に使用する液剤または懸濁液には、以下の構成成分が含まれることができる：無菌的な希釈剤、たとえば、注射用水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒、抗細菌剤、たとえば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン、抗酸化剤、たとえば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム、キレート化剤、たとえばエチレンジアミン四酢酸、緩衝液、たとえば、アセテート、シトレートまたはホスフェート、および等張性を調節するための薬剤、たとえば、塩化ナトリウムまたはデキストロース。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基を用いて調節することができる。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチックで作製したアンプル、使い捨てシリンジまたは複数の用量バイアルに封入することができる。
【０１１２】
注射使用に適した医薬組成物には、無菌的な注射用液剤または分散液を即時調製するための無菌的な水溶液または分散液および無菌的な散剤が含まれる。静脈内投与では、適切な担体には、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、ニュージャージー州Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ）またはリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）が含まれる。すべての場合で、組成物は無菌的でなければならず、容易な注射針通過性が存在する程度に流体であるべきである。これは製造および保管の条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されていなければならない。担体は、たとえば、水、エタノール、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエテイレン（ｐｏｌｙｅｔｈｅｙｌｅｎｅ）グリコールなど）、ならびに適切なその混合物を含有する溶媒または分散媒であってもよい。適切な流動性は、たとえば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散液の場合は所要の粒子径を維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持することができる。微生物の作用の予防は、様々な抗細菌剤および抗真菌剤、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸などによって達成することができる。多くの場合、組成物中に等張化剤、たとえば、糖、マニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、ソルビトールなどのポリアルコールおよび／または塩化ナトリウムを含める。注射用組成物の持続吸収は、組成物に吸収を遅延させる薬剤、たとえば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによってもたらすことができる。
【０１１３】
無菌的な注射用液剤は、活性化合物（たとえば、Ｃ群もしくはＧ群連鎖球菌ＰＰＩポリペプチド、ＯＲＦ５５４ポリヌクレオチドまたはそれに対する抗体）を所要量で、適切な溶媒中に、必要に応じて上記に列挙した成分のうちの１つまたは組合せと共に取り込ませ、次いで滅菌濾過によって調製することができる。一般に、分散液は、活性化合物を、基本分散媒および上記に列挙したもののうちからの所要の他の成分を含有する無菌的なビヒクル内に取り込ませることによって調製する。無菌的な注射用液剤を調製するための無菌的な散剤の場合は、好ましい調製方法は真空乾燥および凍結乾燥であり、これにより、活性成分＋事前に滅菌濾過した溶液からの任意の追加の所望の成分の散剤が得られる。
【０１１４】
経口組成物には、一般に、不活性希釈剤または食用担体が含まれる。これらは、ゼラチンカプセルに封入するか、錠剤へと圧縮することができる。経口治療的投与の目的のためには、活性化合物を賦形剤と共に取り込ませ、錠剤、トローチ、またはカプセルの形態で使用することができる。また、経口組成物は、洗口液として使用するために流体担体を用いて調製することもでき、流体担体中の化合物を経口施用し、口をすすいで吐き出すまたは飲み込む。薬学的に適合性のある結合剤および／またはアジュバント材料を組成物の一部として含めることができる。錠剤、丸薬、カプセル、トローチなどは、以下の成分のうちの任意のもの、または同様の性質の化合物を含有することができる：結合剤、たとえば、微結晶セルロース、トラガカントガムもしくはゼラチン、賦形剤、たとえば、デンプンもしくはラクトース、崩壊剤、たとえば、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、もしくはコーンスターチ、潤滑剤、たとえば、ステアリン酸マグネシウムもしくはＳｔｅｒｏｔｅｓ、流動促進剤、たとえばコロイド状二酸化ケイ素、甘味剤、たとえば、スクロースもしくはサッカリン、または香味料、たとえば、ペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジ香料。
【０１１５】
吸入による投与には、化合物は、適切な噴霧剤、たとえば二酸化炭素などの気体を含有する加圧容器もしくは分注器、またはネブライザーから、エアロゾルスプレーの形態で送達する。また、全身投与は、経粘膜または経皮手段によることもできる。経粘膜または経皮投与の場合は、透過する障壁に適した浸透剤を製剤中に使用する。そのような浸透剤は一般に当分野で知られており、経粘膜投与の場合は、浸透剤には、たとえば、洗剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が含まれる。経粘膜投与は、鼻腔スプレーまたは坐薬の使用によって達成することができる。経皮投与の場合は、一般に当分野で知られているように、活性化合物は軟膏、膏薬、ゲル、またはクリームに製剤化される。
【０１１６】
また、化合物は、直腸送達用の坐薬（たとえば、カカオ脂および他のグリセリドなどの慣用の坐薬基剤を用いる）または保留浣腸の形態で調製することもできる。
【０１１７】
一実施形態では、活性化合物は、徐放性製剤など、移植片および微小カプセル封入送達系を含めた、身体からの迅速な排除に対して化合物を保護する担体を用いて調製する。
【０１１８】
エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの、生分解性の生体適合性ポリマーを担体として使用することができる。そのような製剤を調製する方法は、当業者に明らかである。また、材料はＡｌｚａ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から購入することもできる。また、リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を用いて感染細胞に標的化したリポソームが含まれる）を薬学的に許容される担体として使用することもできる。これらは、当業者に知られている方法に従って、たとえば本明細書中に参考として組み込まれている米国特許第４，５２２，８１１号に記載のように調製することができる。
【０１１９】
用量の投与および均一性を容易にするために、経口または非経口組成物を単位剤形として製剤化することが有利である。本明細書で使用する単位剤形とは、処置する対象の単位用量に適した物理的に別々の単位をいい、それぞれの単位は、所望の治療効果を生じるように計算された事前に決定された量の活性化合物を、所要の薬学的担体と会合して含有する。本発明の単位剤形の仕様は、活性化合物の固有の特徴および達成する特定の治療効果、ならびに個体を処置するためのそのような活性化合物を化合する分野に特有の制限によって指示され、かつそれに直接的に依存する。
【０１２０】
組合せ免疫原性組成物は、本発明のポリペプチドのうちの１つまたは複数を、１つまたは複数の既知の連鎖球菌の多糖または多糖−タンパク質のコンジュゲートと組み合わせることによって提供する。
【０１２１】
多糖−タンパク質のコンジュゲートのタンパク質構成成分は、「担体タンパク質」と呼ばれる。用語「担体タンパク質」には、無毒性、非反応源性かつ十分な量および純度で入手可能なタンパク質が群として含まれる。担体タンパク質は、標準のコンジュゲーション手順に従順である。たとえば、ＣＲＭ１９７を担体タンパク質として使用することができる。ＣＲＭ１９７（Ｗｙｅｔｈ、ノースカロライナ州Ｓａｎｆｏｒｄ）は、カザミノ酸および酵母抽出物に基づく培地中で成長させたジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）株Ｃ７（β１９７）の培養物から単離した、ジフテリア毒素の無毒性変異体（トキソイド）である。ＣＲＭ１９７は、限外濾過、硫安塩析、およびイオン交換クロマトグラフィーによって精製する。他のジフテリアトキソイドも担体タンパク質としての使用に適している。
【０１２２】
他の適切な担体タンパク質には、破傷風トキソイド、百日咳トキソイド、コレラトキソイド（たとえばＷＯ／２００４／０８３２５１に記載）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、および緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の外毒素Ａなどの失活細菌毒素が含まれる。外膜複合体ｃ（ＯＭＰＣ）、ポリン、トランスフェリン結合タンパク質、ニューモリシン、肺炎球菌表面タンパク質Ａ（ＰｓｐＡ）、肺炎球菌付着因子タンパク質（ＰｓａＡ）、またはインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄなどの細菌外膜タンパク質も使用することができる。卵白アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）などの他のタンパク質も担体タンパク質として使用することができる。
【０１２３】
ポリヌクレオチドを含む免疫原性組成物は、様々なベクターおよび発現系によってレシピエントに送達する。そのような系には、とりわけ、染色体、エピソームおよびウイルスに由来する系、たとえば、細菌プラスミド、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）などの弱毒化した細菌（米国特許第４，８３７，１５１号）、バクテリオファージ、トランスポゾン、酵母エピソーム、挿入因子、酵母染色体要素、ウイルス、たとえば、ワクシニアおよび他のポックスウイルス、アデノウイルス、バキュロウイルス、ＳＶ４０などのパポバウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルスおよびレトロウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルスなどのアルファウイルス（米国特許第５，６４３，５７６号）、シンドビスウイルスおよびセミリキ（ｓｅｍｉｌｉｋｉ）森林ウイルス、水疱性口内炎ウイルスなどの非区域性マイナス鎖ＲＮＡウイルス（米国特許第６，１６８，９４３号）に由来するベクター、ならびにプラスミドならびにコスミドおよびファージミドなどのバクテリオファージ遺伝因子に由来するもの等の、その組合せに由来するベクターが含まれる。発現系には、発現を調節および生じさせる制御領域、たとえばプロモーターおよび他の調節要素（ポリアデニル化シグナルなど）が含まれるべきである。一般に、ポリヌクレオチドを維持、増殖または発現させて宿主においてポリペプチドを産生させるために適した任意の系またはベクターを使用し得る。適切なヌクレオチド配列は、たとえば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」、第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク州Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、１９８９に記載のものなどの、様々な周知かつルーチン的な技術のうちの任意のものによって発現系内に挿入し得る。
【０１２４】
本発明の免疫原性組成物は、典型的には、所望に応じて標準かつ周知の無毒性の生理的に許容できる担体、アジュバント、およびビヒクルを含有する単位剤形で非経口投与する。
【０１２５】
薬学的に許容できるビヒクルとは、副作用を引き起こさず、たとえば、活性化合物の投与を容易にする、体内におけるその寿命および／もしくはその有効性を増加させる、溶液中のその溶解度を増加させる、あるいはその保存性を増強させることを可能にする、医薬組成物または免疫原性組成物内に入る化合物または化合物の組合せを指定するものと理解される。これらの薬学的に許容できるビヒクルは周知であり、選択する活性化合物の性質および投与様式に従って、当業者によって適応される。
【０１２６】
注射用調製物、たとえば、無菌的な注射用の水性または油性の懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて、既知の技術に従って製剤化する。また、無菌的な注射用調製物は、無毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の無菌的な注射用の液剤または懸濁液、たとえば１，３−ブタンジオール中の溶液であることもできる。
【０１２７】
用いることができるこの許容できるビヒクルおよび溶媒は、とりわけ、水、リンゲル液、および等張塩化ナトリウム溶液である。さらに、無菌的な不揮発性油が溶媒または懸濁媒として慣習的に用いられる。この目的のために、合成モノ−またはジ−グリセリドなどの任意の無刺激の不揮発性油を用いることができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸も注射用調製物において使用が見つかる。
【０１２８】
担体には、リン酸、乳酸、トリスなどで緩衝した中性の生理食塩水が含まれる。ウイルスベクターを投与する場合、ベクター構築体を受ける個体においてどのような不都合な反応も引き起こさないように、欠損を妨害するアデノウイルス粒子または内毒素および他の発熱物質などの望ましくない汚染物質を本質的に含まないようにベクターを十分に精製する。一部の実施形態では、ベクターを精製する手段は、塩化セシウム勾配遠心分離などの浮遊密度勾配の使用を含む。
【０１２９】
担体はリポソームであることもできる。リポソームを送達ビヒクルとして使用する手段は当分野で周知である（たとえばＳｃｈｗｅｎｄｅｎｅｒ  ＲＡ、Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．、６２０：１１７〜１２８、２００７による総説を参照）。
【０１３０】
また、本発明の免疫原性組成物は、遺伝子発現を制御する調節配列と作動可能に連結している本発明のポリヌクレオチド配列も含む。目的のポリヌクレオチド配列を、ＤＮＡの発現を促進する調節要素、すなわち、プロモーターおよび／またはエンハンサー要素の制御下で、プラスミドなどの発現ベクター内へと操作する。一部の実施形態では、ヒトサイトメガロウイルス前初期プロモーター／エンハンサーを使用する（米国特許第５，１６８，０６２号）。プロモーターは、細胞に特異的であり、事前に決定された細胞中でのみポリヌクレオチドの実質的な転写を許容してもよい。
【０１３１】
本発明のポリヌクレオチドは、「裸」ＤＮＡ（米国特許第５，５８０，８５９号）として宿主に直接導入するか、またはブピバカインおよび他の局所麻酔剤（米国特許第５，５９３，９７２号）ならびに陽イオン性ポリアミン（米国特許第６，１２７，１７０号）などの促進剤を有する組成物に製剤化される。
【０１３２】
このポリヌクレオチド免疫化手順では、本発明のポリペプチドは一過性の基準でｉｎ  ｖｉｖｏで発現され、宿主の染色体には遺伝物質が挿入または組み込まれない。この手順は、目的の遺伝物質を染色体内に挿入または組み込むことが目的である遺伝子治療とは区別されるべきである。免疫化によって投与したポリヌクレオチドが宿主において形質転換した表現型を生じさせないことを確認するために、アッセイを使用する（たとえば米国特許第６，１６８，９１８号）。
【０１３３】
また、特定の実施形態では、本明細書に記載の免疫原性組成物は１つまたは複数のアジュバントも含む。アジュバントとは、免疫原または抗原と共に投与した場合に免疫応答を増強させる物質である。いくつかのサイトカインまたはリンホカインが免疫調節活性を有することが示されており、したがってアジュバントとして有用であり、それだけには限定されないが、インターロイキン１−α、１−β、２、４、５、６、７、８、１０、１２（たとえば米国特許第５，７２３，１２７号を参照）、１３、１４、１５、１６、１７および１８（ならびにその突然変異形態）、インターフェロン−α、βおよびγ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）（たとえば、米国特許第５，０７８，９９６号およびＡＴＣＣ受託番号３９９００を参照）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ならびに腫瘍壊死因子αおよびβが含まれる。本明細書に記載の免疫原性組成物で有用なさらに他のアジュバントには、ケモカインを含めた、それだけには限定されないが、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、およびＲＡＮＴＥＳ、接着分子、たとえばセレクチン、たとえば、Ｌ−セレクチン、Ｐ−セレクチンおよびＥ−セレクチン、ムチン様分子、たとえば、ＣＤ３４、ＧｌｙＣＡＭ−１およびＭａｄＣＡＭ−１、インテグリンファミリーのメンバー、たとえば、ＬＦＡ−１、ＶＬＡ−１、Ｍａｃ−１およびｐ１５０．９５、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバー、たとえば、ＰＥＣＡＭ、ＩＣＡＭ、たとえば、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、およびＩＣＡＭ−３、ＣＤ２ならびにＬＦＡ−３、共刺激分子、たとえば、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ、血管成長因子、神経成長因子、線維芽細胞成長因子、表皮成長因子、Ｂ７．２、ＰＤＧＦ、ＢＬ−１、および血管内皮成長因子を含めた成長因子、Ｆａｓ、ＴＮＦ受容体、Ｆｌｔ、Ａｐｏ−１、ｐ５５、ＷＳＬ−１、ＤＲ３、ＴＲＡＭＰ、Ａｐｏ−３、ＡＩＲ、ＬＡＲＤ、ＮＧＲＦ、ＤＲ４、ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＩＣＫ２、およびＤＲ６を含めた受容体分子、ならびにカスパーゼ（ＩＣＥ）が含まれる。
【０１３４】
免疫応答を増強するために使用する適切なアジュバントには、それだけには限定されないが、米国特許第４，９１２，０９４号に記載のＭＰＬ（商標）（３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａ、Ｃｏｒｉｘａ、モンタナ州Ｈａｍｉｌｔｏｎ）がさらに含まれる。合成脂質Ａ類似体もしくはアミノアルキルグルコサミンホスフェート化合物（ＡＧＰ）、またはその誘導体もしくは類似体も、アジュバントとしての使用に適しており、これらはＣｏｒｉｘａ（モンタナ州Ｈａｍｉｌｔｏｎ）から入手可能であり、米国特許第６，１１３，９１８号に記載されている。１つのそのようなＡＧＰは、２−［（Ｒ）−３−テトラデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ］エチル２−デオキシ−４−Ｏ−ホスホノ−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−テトラデカノイオキシテトラデカノイル（ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｏｘｙｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌ）］−２−［（Ｒ）−３−テトラデカノイルオキシテトラデカノイル−アミノ］−ｂ−Ｄ−グルコピラノシドであり、これは５２９としても知られている（以前はＲＣ５２９として知られていた）。この５２９アジュバントは水性形態（ＡＦ）または安定な乳濁液（ＳＥ）として製剤化される。
【０１３５】
さらに他のアジュバントには、ムラミルペプチド、たとえば、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）、水中油乳濁液、たとえば、ＭＦ５９（米国特許第６，２９９，８８４号）（モデル１１０Ｙ微小流動化装置（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ、マサチューセッツ州Ｎｅｗｔｏｎ）などの微小流動化装置を用いてサブミクロン粒子に製剤化した、５％のスクワレン、０．５％のＴｗｅｅｎ８０、および０．５％のＳｐａｎ８５（様々な量のＭＴＰ−ＰＥを含有していてもよい）を含有する）、およびＳＡＦ（サブミクロンの乳濁液に微小流動体化したか、もしくは渦撹拌してより大きな粒子径の乳濁液を作製した、１０％のスクワレン、０．４％のＴｗｅｅｎ８０、５％のプルロニックブロックポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含有する）、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、アルミニウム塩（ミョウバン）、たとえば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、Ａｍｐｈｉｇｅｎ、Ａｖｒｉｄｉｎｅ、Ｌ１２１／スクワレン、Ｄ−ラクチド−ポリ乳酸／グリコシド、プルロニックポリオール、死滅させたボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）、サポニン、たとえば、米国特許第５，０５７，５４０号に記載のＳｔｉｍｕｌｏｎ（商標）ＱＳ−２１（Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ、マサチューセッツ州Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ）、米国特許第５，２５４，３３９号に記載のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（ＣＳＬ  Ｌｉｍｉｔｅｄ、オーストラリアＰａｒｋｖｉｌｌｅ）、および免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、細菌リポ多糖、合成ポリヌクレオチド、たとえばＣｐＧモチーフを含有するオリゴヌクレオチド（たとえば米国特許第６，２０７，６４６号）、欧州特許第１，２９６，７１３号および第１，３２６，６３４号に記載のＩＣ−３１（Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌ  ＡＧ、オーストリアＶｉｅｎｎａ）、百日咳毒素（ＰＴ）もしくはその突然変異体、コレラ毒素もしくはその突然変異体（たとえば、米国特許第７，２８５，２８１号、第７，３３２，１７４号、第７，３６１，３５５号および第７，３８４，６４０号）、または大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）熱不安定毒素（ＬＴ）もしくはその突然変異体、特にＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２（たとえば、米国特許第６，１４９，９１９号、第７，１１５，７３０号および第７，２９１，５８８号）が含まれる。
【０１３６】
治療的抗体および抗原結合ポリペプチド
本発明は、とりわけ、連鎖球菌ＰＰＩ内の特異的エピトープを認識するヒト化モノクローナル抗体などの治療的免疫学的試薬を、対象に、対象において有益な治療反応を生じる条件下で投与することによって、連鎖球菌感染症を処置することに向けられている。「免疫学的試薬」には、たとえば、抗体、ヒト化抗体、抗体断片、抗原結合要素またはＣＤＲを含むペプチドなどが含まれる。「有益な治療反応」には、たとえばβ−溶血性連鎖球菌の貪食またはオプソニン化の誘導が含まれる。本発明はまた、β−溶血性連鎖球菌感染症を処置または予防するための医薬品の製造における、開示した免疫学的試薬の使用にも向けられている。
【０１３７】
一態様では、本発明は、患者においてβ−溶血性連鎖球菌感染症に関連する疾患を予防または処置する方法を提供する。本発明の一部の方法は、患者に、有効な用量の、連鎖球菌ＰＰＩエピトープと特異的に結合する抗体を投与することを伴う。そのような方法は、対象においてβ溶血性連鎖球菌疾患を予防または処置するために特に有用である。「対象」には、コンパニオン動物、家畜、哺乳動物、およびヒト患者などの任意の脊椎動物が含まれる。例示的な方法には、有効な用量の、連鎖球菌ＰＰＩと結合する抗体または抗原結合ペプチドを投与することが含まれる。一部の実施形態には、有効な用量の、抗体、または連鎖球菌ＰＰＩ内のエピトープと特異的に結合する抗原認識部位もしくはＣＤＲを含む他のペプチド、たとえば、配列番号２、４、６、８、１０および１１のうちの任意の１つまたは複数のアミノ酸配列を含むＰＰＩなどを投与することが含まれる。
【０１３８】
さらに別の態様では、本発明は、連鎖球菌ＰＰＩと結合する抗体または他の抗原結合ペプチドを対象に投与し、β溶血性連鎖球菌に対するクリア応答（ｃｌｅａｒｉｎｇ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を誘導することを特長とする。たとえば、そのようなクリア応答は、Ｆｃ受容体媒介性の貪食によって達成することができる。
【０１３９】
本発明の治療的免疫学的試薬は、典型的には望ましくない汚染物質から実質的に純粋である。これは、免疫学的試薬が典型的には少なくとも約５０％ｗ／ｗ（重量／重量）の純度であること、かつ妨害するタンパク質および汚染物質を実質的に含まないことを意味する。一部の実施形態では、免疫学的試薬は少なくとも約８０％ｗ／ｗの純度である。他の実施形態では、免疫学的試薬は少なくとも９０または約９５％ｗ／ｗの純度である。しかし、慣用のタンパク質精製技術を用いて、少なくとも９９％ｗ／ｗの純度の均一なペプチドを得ることができる。
【０１４０】
この方法は、無症候性の対象および現在疾患の症状を示している対象のどちらにも使用することができる。本明細書に記載のように、そのような方法で使用する抗体は、ヒト、ヒト化、キメラもしくは非ヒト抗体、またはその断片（たとえば、抗原結合断片、エピトープ結合領域もしくはＣＤＲを含むペプチド）であることができ、モノクローナルまたはポリクローナルであることができる。
【０１４１】
別の態様では、本発明は、抗体を薬学的担体と共に医薬組成物として投与することを特長とする。あるいは、抗体は、少なくとも１つの抗体鎖をコードしているポリヌクレオチドを投与することによって対象に投与することができる。ポリヌクレオチドが発現されて患者において抗体鎖が産生される。ポリヌクレオチドは抗体の重鎖および軽鎖をコードしていてもよい。ポリヌクレオチドが発現されて患者において重鎖および軽鎖が産生される。例示的な実施形態では、患者の血液中の投与した抗体のレベルについて患者を監視する。
【０１４２】
処置に従順な対象には、疾患の危険性があるが症状を示していない個体、および現在症状を示している患者が含まれる。したがって、本免疫原性組成物および治療的抗体は一般集団に予防的投与することができる。無症候性の対象では、処置は任意の年齢で開始することができる。処置は、抗体レベルを経時的にアッセイすることによって監視することができる。免疫応答または抗体レベルが降下した場合は、追加免疫用量が示される。
【０１４３】
予防的用途では、免疫原性組成物または医薬品は、β溶血性連鎖球菌感染症に感受性がある、または他の様式でその危険性にある対象に、感染症に関連する生化学的、組織学的および／または行動性の疾患症状、その合併症ならびに疾患の発生中に提示される中間の病理学的表現型を含めた、危険性を排除もしくは低下させる、重篤度を減らす、または疾患の発生を遅延させるために十分な量で投与する。治療的用途では、組成物または医薬品は、そのような疾患が疑われる、または既にそれに罹患している患者に、その合併症および疾患の発生における中間の病理学的表現型を含めた疾患の症状（生化学的、組織学的および／または行動性）を治癒または少なくとも部分的に抑止するために十分な量で投与する。
【０１４４】
治療的または予防的処置を達成するために十分な量は、治療上または予防上有効な用量として定義される。予防的および治療的レジームの両方において、免疫学的試薬は、通常、十分な免疫応答が達成されるまでいくつかの用量で投与する。用語「免疫応答」または「免疫学的応答」には、レシピエント対象中の抗原に向けられた液性（抗体媒介性）および／または細胞性（抗原に特異的なＴ細胞もしくはその分泌産物によって媒介）の応答の発生が含まれる。そのような応答は、能動的応答、すなわち、免疫原の投与によって誘導されるもの（上記）、または受動的応答、すなわち、免疫グロブリンもしくは抗体もしくは刺激したＴ細胞の投与によって誘導されるものであることができる。典型的には、免疫応答を監視し、免疫応答が減退し始めた場合は繰返しの用量を与える。
【０１４５】
β−溶血性連鎖球菌感染症を処置するための本発明の組成物の有効用量は、投与手段、標的部位、患者の生理状態、患者がヒトであるか別の動物であるか、投与する他の医薬品、および処置が予防的であるか治療的であるかを含めた、多くの異なる要因に応じて変動する。通常、対象はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含めた非ヒト哺乳動物も処置することができる。処置用量は、安全性および有効性を最適化するために滴定する必要があり得る。
【０１４６】
抗体を用いた受動的免疫化には、用量は、宿主の体重の約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、より通常は０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ（たとえば、０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．７５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇなど）の範囲である。たとえば、用量は、約１ｍｇ／体重１ｋｇもしくは約１０ｍｇ／体重１ｋｇまたは１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であることができる。上記範囲の中間の用量も、本発明の範囲内にあることが意図される。そのような用量を、１日１回、交互の日、週１回、月１回、２カ月毎、３カ月毎、または経験的分析によって決定された任意の他のスケジュールに従って対象に投与することができる。例示的な処置は、複数の用量を長期間、たとえば少なくとも６カ月にわたって投与することを伴う。さらなる例示的な処置レジームは、２週間に１回または１カ月に１回または３〜６カ月に１回投与することを伴う。例示的な用量スケジュールには、１〜１０ｍｇ／ｋｇまたは１５ｍｇ／ｋｇを連続した日に、３０ｍｇ／ｋｇを交互の日に、または６０ｍｇ／ｋｇを週に１回が含まれる。一部の方法では、異なる結合特異性を有する２つ以上のモノクローナル抗体を同時に投与し、その場合、投与したそれぞれの抗体の用量は示した範囲内となる。
【０１４７】
抗体は、通常は複数の機会に投与する。単一用量間の間隔は、週１回、月１回または年１回であることができる。また、患者における連鎖球菌ＰＰＩに対する抗体の血液レベルを測定することによって示されるように、間隔は不規則であることもできる。一部の方法では、用量は、１〜１０００μｇ／ｍｌ、一部の方法では２５〜３００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度が達成されるように調節する。あるいは、抗体は持続放出製剤として投与することができ、その場合、必要な頻度はより低い。用量および頻度は患者における抗体の半減期に応じて変動する。一般に、ヒト化抗体が最も長い半減期を示し、キメラ抗体および非ヒト抗体が続く。
【０１４８】
投与の用量および頻度は、処置が予防的であるか治療的であるかに応じて変動する場合がある。予防的用途では、患者の耐性を増強させるために、未だ病状がない患者に本抗体またはそのカクテルを含有する組成物を投与する。そのような量は「予防的に有効な用量」であると定義される。この場合、正確な量はやはり患者の健康状態および全身免疫に依存するが、一般に０．１〜２５ｍｇ／用量、特に０．５〜２．５ｍｇ／用量の範囲である。比較的低い用量を比較的低頻度の間隔で長期間かけて投与する。
【０１４９】
治療的用途では、疾患の進行が低下または終結するまで、好ましくは患者が疾患の症状の部分的または完全な寛解を示すまで、場合によっては比較的短い間隔での比較的高い用量（たとえば約１〜２００ｍｇの抗体／用量、５〜２５ｍｇの用量をより一般的に使用する）が必要である。その後、本特許を予防的レジームで投与することができる。
【０１５０】
抗体をコードしている核酸の用量の範囲は、約１０ｎｇ〜１ｇ、１００ｎｇ〜１００ｍｇ、１μｇ〜１０ｍｇ、または３０〜３００μｇのＤＮＡ／患者である。感染性ウイルスベクターの用量は、１０〜１００個のビリオン／用量またはそれより多くまで変動する。
【０１５１】
治療的免疫学的試薬は、予防的および／または治療的処置のために非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内または筋肉内手段によって投与することができる。免疫原性剤の最も典型的な投与経路は静脈点滴または皮下投与であるが、他の経路も同等に有効であることができる。次に最も一般的な経路は筋肉内注射である。この種の注射は、最も典型的には腕または脚の筋肉中に行う。一部の方法では、投入物が蓄積される特定の組織内に免疫学的試薬を直接注射し、たとえば頭蓋内注射である。筋肉内注射または静脈点滴が抗体の投与に好ましい。一部の方法では、微量インフュージョン装置などの持続放出組成物または装置として抗体を投与する（たとえばＭｅｄｉｐａｄ（商標）装置、Ｍｅｅｈａｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、４６：１０７〜１１９、１９９７を参照。）
【０１５２】
上記に暗示したように、β溶血性連鎖球菌感染症に対する免疫応答は、受動的免疫化に使用する抗体をコードしている核酸およびその構成成分の鎖を投与することによってｉｎ  ｖｉｖｏ（またはｅｘ  ｖｉｖｏ）で形成することができる。そのような核酸はＤＮＡまたはＲＮＡであることができる。免疫学的試薬をコードしている核酸セグメントは、典型的には、患者の意図する標的細胞におけるＤＮＡセグメントの発現を可能にするプロモーターおよびエンハンサーなどの調節要素と連結している。免疫応答の誘導に望ましい血液細胞における発現には、軽鎖もしくは重鎖免疫グロブリン遺伝子由来のプロモーターおよびエンハンサー要素またはＣＭＶ主要中間体初期プロモーターおよびエンハンサーが発現の指示に適切である。連結した調節要素およびコード配列は、多くの場合ベクター内にクローニングする。二重鎖抗体の投与には、２本の鎖を同じまたは別々のベクター中にクローニングすることができる。
【０１５３】
レトロウイルス系（たとえばＬａｗｒｉｅおよびＴｕｍｉｎ、Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．、３：１０２  １０９（１９９３）を参照）、アデノウイルスベクター（たとえばＢｅｔｔら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、６７：５９１１（１９９３）を参照）、アデノ関連ウイルスベクター（たとえばＺｈｏｕら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１７９：１８６７（１９９４）を参照）、ワクシニアウイルスおよび鶏痘ウイルスを含めたポックスファミリーからのウイルスベクター、シンドビスおよびセムリキ森林ウイルスに由来するものなどのアルファウイルス属からのウイルスベクター（たとえばＤｕｂｅｎｓｋｙら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、７０：５０８、１９９６を参照）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（Ｊｏｈｎｓｔｏｎら、米国特許第５，６４３，５７６号を参照）ならびに水疱性口内炎ウイルス（Ｒｏｓｅ、米国特許第６，１６８，９４３号を参照）およびパピローマウイルス（Ｏｈｅら、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、６：３２５（１９９５）、Ｗｏｏら、ＷＯ９４／１２６２９およびＸｉａｏおよびＢｒａｎｄｓｍａ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．、２４：２６３０〜２６２２（１９９６））などのラブドウイルスを含めた、いくつかのウイルスのベクター系が利用可能である。
【０１５４】
ＣＤＲを含む抗体もしくは抗体断片をコードしているＤＮＡ、またはそれを含有するベクターは、リポソーム内にパッケージングすることができる。適切な脂質および関連する類似体は、Ｅｐｐｓｔｅｉｎら、米国特許第５，２０８，０３６号、Ｆｅｌｇｎｅｒら、米国特許第５，２６４，６１８号、Ｒｏｓｅ、米国特許第５，２７９，８３３号、およびＥｐａｎｄら、米国特許第５，２８３，１８５号に記載されている。また、免疫原をコードしているベクターおよびＤＮＡは粒子状担体と吸着または会合させることもでき、その例には、ポリメチルメタクリレートポリマーおよびポリ乳酸およびポリ（ラクチド−コ−グリコリド）が含まれる。たとえばＭｃＧｅｅら、Ｊ．Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌ．、１４（２）：１９７〜２１０（１９９７）を参照されたい。
【０１５５】
ポリヌクレオチドベクターまたは裸ポリヌクレオチド（たとえばＤＮＡ）は、典型的には全身投与（たとえば、静脈内、腹腔内、経鼻、胃、皮内、筋肉内、真皮下、もしくは頭蓋内インフュージョン）または局所施用によって個々の患者に投与することによって、ｉｎ  ｖｉｖｏで送達することができる（たとえばＡｎｄｅｒｓｏｎら、米国特許第５，３９９，３４６号を参照）。用語「裸ポリヌクレオチド」とは、トランスフェクション促進剤と一緒に投与しないポリヌクレオチドをいう。裸ポリヌクレオチドは場合によってはプラスミドベクター中にクローニングする。プラスミドベクターには、ブピバカインなどのトランスフェクション促進剤がさらに含まれることができる（Ｗｅｉｎｅｒら、米国特許第５，５９３，９７２号）。また、ＤＮＡは遺伝子銃を用いて投与することもできる。ＸｉａｏおよびＢｒａｎｄｓｍａ、上記を参照されたい。抗体（またはＣＤＲを含む断片）をコードしているＤＮＡを微視的金属ビーズの表面上に沈殿させる。微粒子を衝撃波または膨張ヘリウムガスで加速させ、数細胞層の深度まで組織に貫通させる。たとえば、Ａｇｒｉｃｅｔｕｓ，Ｉｎｃ．、ウィスコンシン州Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎによって製造されるＡＣＣＥＬ（商標）遺伝子送達装置、すなわちＤＮＡ銃が本発明の実施における使用に適している。あるいは、化学的または機械的刺激と共にＤＮＡを単に皮膚上にスポットすることによって、裸ＤＮＡは皮膚を通過して血流内に入ることができる（Ｈｏｗｅｌｌら、ＷＯ９５／０５８５３を参照）。
【０１５６】
別の実施形態では、免疫学的試薬をコードしているベクターは、個々の患者から外移植した細胞（たとえば、リンパ球、骨髄吸引液、組織生検）または万能ドナー造血幹細胞などの細胞にｅｘ  ｖｉｖｏで送達することができ、続いて、通常はベクターを取り込んだ細胞を選択した後に、細胞を患者内に再移植する。
【０１５７】
本発明の免疫学的試薬は、β−溶血性連鎖球菌疾患の処置に少なくとも部分的に有効である他の薬剤と任意選択で組み合わせて投与することができる。また、本発明の免疫学的試薬は、標的細胞または組織に対する治療的免疫学的試薬の接近性を増強させる他の薬剤、たとえばリポソームなどと組み合わせて投与することもできる。そのような薬剤の同時投与は、所望の効果を達成するために必要な治療的免疫学的試薬（たとえば、治療用抗体または抗体鎖）の用量を減少させることができる。
【０１５８】
本発明の免疫学的試薬は、多くの場合、活性治療剤を含む医薬組成物として、すなわち、様々な他の薬学的に許容できる構成成分と共に投与する。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（１５ｔｈ  ｅｄ．、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．（１９８０））。好ましい形態は意図する投与様式および治療的用途に依存する。また、組成物には、所望する製剤に応じて、動物またはヒト投与用の医薬組成物を製剤化するために一般的に使用されているビヒクルとして定義される、薬学的に許容される無毒性の担体または希釈剤も含めることができる。希釈剤は、組合せの生物活性に影響が与えられないように選択する。そのような希釈剤の例は、蒸留水、リン酸緩衝溶液、リンゲル液、デキストロース溶液、およびハンクス液である。さらに、医薬組成物または製剤には、他の担体、アジュバント、または無毒性、非治療的、非免疫原性の安定化剤なども含まれ得る。
【０１５９】
また、医薬組成物には、タンパク質、多糖、たとえば、キトサン、ポリ乳酸、ポリグリコール酸およびコポリマー（ラテックス官能化セファロース（ｌａｔｅｘ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ  ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）（商標）、アガロース、セルロースなど）、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマー、ならびに脂質凝集体（油液滴またはリポソームなど）等の、大きな、ゆっくりと代謝される巨大分子も含めることができる。さらに、これらの担体は免疫刺激剤（すなわちアジュバント）として機能することができる。
【０１６０】
非経口投与には、本発明の免疫学的試薬は、注射用用量の生理的に許容される希釈剤中の物質の溶液または懸濁液を、水、油、生理食塩水、グリセロール、またはエタノールなどの無菌的な液体であることができる薬学的担体と共に投与することができる。さらに、湿潤剤または乳化剤、界面活性剤、ｐＨ緩衝液物質などの補助物質が組成物中に存在することができる。医薬組成物の他の構成成分は、石油、動物、植物、または合成起源のもの、たとえば、ピーナッツ油、ダイズ油、および鉱物油である。一般に、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコールが、特に注射用液剤の好ましい液体担体である。抗体はデポー注射または移植片調製物の形態で投与することができ、これは、活性成分の持続放出を可能にする様式で製剤化することができる。例示的な組成物は、５０ｍＭのＬ−ヒスチジン、１５０ｍＭのＮａＣｌからなり、ＨＣｌでｐＨ６．０に調節した水性緩衝液中で製剤化したモノクローナル抗体を５ｍｇ／ｍＬで含む。
【０１６１】
典型的には、組成物は液体の液剤または懸濁液のいずれかとしての注射用として調製し、注射前に液体ビヒクル中で溶液または懸濁液にする適切な固体形を調製することもできる。また、調製物は、上述のように、アジュバント効果を増強させるために、乳化、またはリポソームまたはポリ乳酸、ポリグリコリド、もしくはコポリマーなどの微小粒子中にカプセル封入することもできる（Ｌａｎｇｅｒ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９：１５２７（１９９０）およびＨａｎｅｓ、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、２８：９７（１９９７）を参照）。本発明の免疫学的試薬は、活性成分の持続的またはパルス状の放出を可能にする様式で製剤化することができるデポー注射または移植片調製物の形態で投与することができる。
【０１６２】
他の投与様式に適したさらなる製剤には、経口、鼻腔内、および肺の製剤、坐薬、ならびに経皮施用が含まれる。坐薬では、結合剤および担体には、たとえば、ポリアルキレングリコールまたはトリグリセリドが含まれ、そのような坐薬は、活性成分を０．５％〜１０％、好ましくは１％〜２％の範囲で含有する混合物から形成することができる。経口製剤には、製薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、および炭酸マグネシウムなどの賦形剤が含まれる。これらの組成物は、液剤、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル、持続放出製剤または散剤の形態をとり、１０％〜９５％の活性成分、好ましくは２５％〜７０％を含有する。
【０１６３】
あるいは、皮膚パッチまたはトランスフェロソームを使用して経皮送達を達成することができる（Ｐａｕｌら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２５：３５２１（１９９５）、Ｃｅｖｃら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、１３６８：２０１〜２１５（１９９８））。
【０１６４】
また、本発明は、β溶血性連鎖球菌感染症に罹患しているまたはそれに感受性のある患者において処置を監視する方法、すなわち、患者に投与している処置の過程を監視する方法も提供する。この方法は、症候性の患者に対する治療的処置および無症候性の患者に対する予防的処置のどちらを監視するためにも使用することができる。特に、この方法は受動的免疫化を監視する（たとえば、投与した抗体のレベルを測定する）ために有用である。
【０１６５】
一部の方法は、免疫学的試薬の用量を投与する前に、たとえば患者における抗体のレベルまたはプロフィールのベースライン値を決定し、これを処置後のプロフィールまたはレベルの値と比較することを伴う。レベルまたはプロフィールの値の有意な増加（すなわち、同じ試料の繰返し測定における典型的な実験誤差の範囲を超えるもの、そのような測定の平均からの１倍標準偏差として表す）は、陽性の処置結果（すなわち、免疫学的試薬の投与が所望の応答を達成したこと）を示す。免疫応答の値が有意に変化しない場合、または減少する場合は、陰性の処置結果が示される。処置が受動的免疫療法である場合、抗体レベルは特徴的な半減期で経時的に減少することが予測される。
【０１６６】
分析用の組織試料は、典型的には、患者由来の血液、血漿、血清、粘液または脳脊髄液である。試料は、たとえば、連鎖球菌ＰＰＩに対する抗体のレベルまたは力価について分析する。連鎖球菌ＰＰＩに特異的な抗体を検出するためのＥＬＩＳＡ方法を実施例セクションに記載する。一部の方法では、投与した抗体のレベルまたは力価はクリアアッセイを用いて、たとえばｉｎ  ｖｉｔｒｏ貪食アッセイで決定する（たとえばＪａｎｓｅｎら、Ｃｌｉｎ．Ｄｉａｇｎ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、８（２）：２４５〜２５０、２００１を参照）。
【０１６７】
受動的免疫化後の抗体プロフィールは、典型的には直後の抗体濃度のピーク、続いて指数関数的な減衰を示す。追加の用量なしでは、減衰は、投与した抗体の半減期に応じて数日から数カ月の期間以内に処置前のレベルに近づく。
【０１６８】
一部の方法では、患者における連鎖球菌ＰＰＩに対する抗体のベースライン測定を投与前に行い、そのすぐ後に、ピーク抗体レベルを決定するために２回目の測定を行い、抗体レベルの減衰を監視するために１回または複数回のさらなる測定を、間隔をおいて行う。抗体のレベルがベースラインまたはベースラインを減算したピークの事前に決定された割合（たとえば、５０％、２５％もしくは１０％）まで減退した際に、抗体のさらなる用量の投与を投与する。一部の方法では、ピークまたはバックグラウンドを減算した続いて測定したレベルを事前に測定した参照レベルと比較して、他の患者における有益な予防的または治療的処置レジームを構成する。測定した抗体レベルが参照レベルよりも有意に低い（たとえば、平均から、処置から利点を得ている患者の集団の参照値の１倍標準偏差を減算したもの未満である）場合は、抗体のさらなる用量の投与が示される。
【０１６９】
さらなる方法には、連鎖球菌感染症または関連する疾患を診断または監視するために研究者または医師によって常法として利用されている、任意の当分野で認識されている生理的な症状を、処置の過程にわたって監視することが含まれる。たとえば、蜂窩織炎、丹毒、膿痂疹、壊死性筋膜炎、咽頭炎、咽頭の赤み、悪寒、発熱、頭痛、嘔気、嘔吐、頻拍、倦怠感、扁桃腺の肥大、リンパ節の肥大および／または発疹の症状を監視することができる。
【０１７０】
本明細書は、すべてその全体が本明細書中に参考として組み込まれている、本明細書内で引用した参考文献の教示に鑑みてより徹底的に理解される。本明細書内の実施形態は本発明の実施形態の例示を提供し、本発明の範囲を限定すると解釈されるべきでない。当業者は、多くの他の実施形態が特許請求した発明によって包含され、本明細書および実施例は例示的のみとしてみなされることを意図し、本発明の真の範囲および精神は以下の請求項によって示されることを理解されよう。
【実施例】
【０１７１】
（実施例１）
エス・ジスガラクチエ（Ｓ．ＤＹＳＧＡＬＡＣＴＩＡＥ）ＯＲＦ５５４のクローニング
Ａ群の１２個のゲノム配列およびＢ群連鎖球菌種の複数のゲノム配列が公的に入手可能である。オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）番号５５４（ＯＲＦ５５４）のＤＮＡおよびタンパク質の配列は、これらの連鎖球菌ゲノムの多くで同定されている。たとえば、公開国際特許出願ＷＯ０２／０８３８５９号を参照されたい。しかし、Ｃ群およびＧ群のゲノムには限定された配列情報しか存在しない。他のＧ群およびＣ群連鎖球菌株におけるこのＯＲＦ５５４の配列を本明細書に開示する。
【０１７２】
ＯＲＦ５５４を含有する既知の連鎖球菌配列をＡｌｉｇｎＸ（ベクターＮＴＩ）でアラインメントし、相同領域を使用して縮重プライマーを構築した（Ｗｅｓｓｎｅｒ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８６（５５５４）：１４９５〜１４９６、１９９９、ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：１０９１５〜１０９１９、１９９２、およびＲｈｅｅら、Ａｐｐｌｉｅｄ  ａｎｄ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、７１（２）：８１７〜８２５、２００５を参照）。オリゴヌクレオチドプライマーは、高い融解温度および低い自己二量体化の潜在性を維持する一方で最小限の縮重を有するように設計した。新規Ｃ群またはＧ群連鎖球菌のＯＲＦ５５４ポリヌクレオチドを単離、増幅および同定するために使用したオリゴヌクレオチドプライマーのヌクレオチド配列を配列番号１８〜２６に記載する。
【０１７３】
初期のＰＣＲ研究は、連鎖球菌Ｃ単離株ＡＴＣＣ１２３９４（ストレプトコッカス・ジスガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）亜種エキシミリス（ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ））に対して作成したゲノムＤＮＡ調製物を用いて行った。ＯＲＦ５５４の５’および３’末端に対する部分的な遺伝子配列が得られた。その後、これらの配列に基づいて順方向および逆方向プライマー（それぞれ配列番号２３および配列番号２４）を設計し、次いで、これを用いて様々なＧおよびＣ株からのＯＲＦ５５４の約７００〜９００ｂｐの配列をＰＣＲによって生成した。
【０１７４】
これらの株からのＯＲＦ５５４のゲノムまたはタンパク質配列はどれも、本開示以前には定義されていなかった。単離したＡＴＣＣ１２３９４からのＯＲＦ５５４で得られたヌクレオチド配列を配列番号１に示し、そのアミノ酸配列を配列番号２に示す。
【０１７５】
ＯＲＦ５５４は５個の単離株で見つかった：ＡＴＣＣから入手したＡＴＣＣ１２３９４、ＡＴＣＣ３５６６６およびＡＴＣＣ２７８２３、ならびに前臨床スクリーニングの一部［研究番号６１２２Ｋ１−９０００号、Ｃｒｏｓｓ  Ｓｅｃｔｉｏｎａｌ  Ｓｅｒｏｌｏｇｙ  Ｓｔｕｄｙ、オーストラリア、Ｆ．Ｌａｕｄａｔ．ＭＤ、パリ］として得られた２個のランスフィールドＧ群単離株、Ｎ０４Ａ２７およびＮ０４ＡＦＴ。そのそれぞれのヌクレオチド配列を配列番号１、３、５、７、９、２５、２７、２９および３１に示す。そのそれぞれのアミノ酸配列を配列番号２、４、６、８、１０、２６、２８、３０および３２に示す。コンセンサスアミノ酸配列を配列番号２、４、６、８および１０の間で作成し、配列番号１１に表す。
【０１７６】
新規Ｃ群またはＧ群連鎖球菌のＰＰＩおよびＯＲＦ５５４の配列と既知のＡ群およびＢ群連鎖球菌のＰＰＩおよびＯＲＦ５５４の配列との間のタンパク質および核酸配列のアラインメントおよびＣｌｕｓｔａｌ  Ｗ分析（Ｃｈｅｎｎａら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、３１、３４９７〜３５００（２００３））により割合が与えられ、表１に要約した。
【０１７７】
【表１】
2011525112.tif 000002
【０１７８】
（実施例２）
Ｃ／Ｇ群ブドウ球菌のＰＰＩエピトープに対する抗体
オプソニン化として知られるプロセスである抗体と細菌との結合は、食細胞による細菌の取込みおよび死滅をもたらすことができる。そのような抗体は、バルクのヒトもしくは動物源由来であるかヒトもしくはネズミもしくはキメラのモノクローナル源由来であるか、または単独でもしくは組み合わせて使用するかに関わらず、新生児敗血症または手術後の敗血症または膿瘍の漏れなど、ＢＨＳが血流中に存在する可能性がある場合は、予防的または治療的な設定のどちらでも使用することができる。
【０１７９】
ＯＲＦ５５４によってコードされている組換えＣ群またはＧ群ブドウ球菌のペプチジル−プロリルイソメラーゼポリペプチドに対する抗体をマウスにおいて産生させた。これの抗β溶血性連鎖球菌抗血清およびモノクローナル抗体を様々なβ溶血性連鎖球菌（ＢＨＳ）株に対してスクリーニングする過程において、一部の抗血清および抗体が、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群連鎖球菌）ならびにＣ群およびＧ群連鎖球菌（これには、連鎖球菌種ストレプトコッカス・アンギノサス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｎｇｉｎｏｓｕｓ）、ストレプトコッカス・コンステラータス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｕｓ）、ストレプトコッカス・インターメディウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、ストレプトコッカス・ジスガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）亜種エキシミリス（ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）およびストレプトコッカス・ジスガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）亜種ジスガラクチエ（Ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）が含まれる）（表２）のメンバーを含めた多くのＢＨＳ株に対して交差反応性であることが注目された。抗体のスクリーニングは蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）によって行った。手短に述べると、熱死滅させた連鎖球菌をマウス抗Ｃ群およびＧ群連鎖球菌ＰＰＩ抗体と共に氷上で４５分間インキュベーションし、続いて２回の洗浄を行った。その後、連鎖球菌をヤギ抗マウス−Ａｌｅｘａ−４８８抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、オレゴン州Ｅｕｇｅｎｅ）と共に３０分間氷上でインキュベーションし、続いて２回の洗浄を行った。このように処理した細胞を、ＦＡＣＳ機で実行した（たとえばＤｅＭａｓｔｅｒら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．、７０（１）：３５０〜３５９、２００２を参照）。この交差反応性は、Ｃ群もしくはＧ群ＯＲＦ５５４またはそれによってコードされているポリペプチドを、Ａ群またはＢ群連鎖球菌による感染症およびＣ群またはＧ群連鎖球菌による感染症に対して保護するために有効な免疫応答を誘導するための免疫原性組成物中で使用し得ることも意味する。
【０１８０】
表２は、ＯＲＦ５５４によってコードされているＣ群またはＧ群連鎖球菌ＰＰＩに対する抗血清および抗体の交差反応性を示す。表２によれば、記号「＋」は、抗体が抗原に対してバックグラウンドよりも少なくとも３倍高く反応することを意味し、記号「＋／−」は、抗体が抗原に対してバックグラウンドよりも２倍〜３倍高く反応することを意味し、記号「−」は、抗体シグナルの検出がバックグラウンド以下であることを意味する。
【０１８１】
【表２−１】
2011525112.tif 000003
【０１８２】
【表２−２】
2011525112.tif 000004
【０１８３】
【表２−３】
2011525112.tif 000005
【０１８４】
【表２−４】
2011525112.tif 000006
【０１８５】
【表２−５】
2011525112.tif 000007
【０１８６】
【表２−６】
2011525112.tif 000008
【０１８７】
【表２−７】
2011525112.tif 000009
【配列表】
2011525112000001.app
【国際調査報告】
2011525112.tif 000010
2011525112.tif 000011
2011525112.tif 000012
2011525112.tif 000013
2011525112.tif 000014
2011525112.tif 000015
2011525112.tif 000016