(57)【要約】  ウイルス感染を阻害することを必要としている哺乳動物においてウイルス感染を阻害する方法は、有効量の２７３、３６５および５１０により代表されるＦＧＩ−１０３の化合物の少なくとも１つを、ウイルス感染を防止するために予防的に又はウイルス感染の後治療的に投与することを含む。これらの化合物は、感染性ウイルス粒子放出を防止する方法としてカスパーゼ８を選択的に阻害すると思われる。これらの化合物は、ＩＶ、ＩＰ、経口的に、又は他の慣用の投与経路を介して投与されうる。これらの化合物は、１ng／kg〜２００mg／kg体重のオーダーの相対的に低い投薬量を必要とし、高度に有効である。
2011500830.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルス感染を阻害することを必要とする哺乳動物においてウイルス感染を阻害する方法であって、該哺乳動物に有効量の少なくとも１種の活性な作用物質を投与することを含み、該活性な作用物質は、式  Ｙ−Ｘ−Ｙ１
［但しＹ又はＹ１の１つは存在していなくてもよく、
上記式中、ＹおよびＹ１は、各々独立に、１〜６個の炭素原子のアルキル基であり、該アルキル基は、直鎖状、分岐状又は環状、飽和、部分的に不飽和又はアリールであることができ、そして存在するＹおよびＹ１の各々は、１個又は２個の水素原子を有する２個の窒素原子を含み、但し該窒素原子の１個までは、Ｙが環状である場合には環原子を構成することができそして水素原子を持たなくてもよく、そして
Ｘは、３又は４個の環部分Ｚからなり、各Ｚは、独立に５個又は６個の炭素原子であり、そして飽和、不飽和又はアリールであることができ、２、３又は４個のＺは隣接したＺと融合していてもよく、融合していない環部分Ｚは少なくとも１つの他の環部分Ｚに、単結合又はエチルもしくはプロピル基により結合しており、該エチルもしくはプロピル基は、単結合もしくは二重結合により結合した酸素もしくは窒素原子を有していてもよく、そして該Ｘは、環又はエチルもしくはプロピル炭素原子の代わりに、各々独立にＯ、Ｎ又はＳである１〜５個のヘテロ原子を含み、そして該化合物は、更に、ヒドロキシル（−ＯＨ）、アミノ（ＮＨ２）、アミド、クロロ、フルオロもしくは他のハロゲン、アルコキシ（−ＯＲ）、アリールオキシ（−ＯＡｒ）、トリアルキルアンモニウム（−ＮＲ３＋）、アルキルアミド（−ＮＨＣＯＲ、−ＮＲＣＯＲ’）、アリールアミド（−ＮＨＣＯＡｒ、−ＮＲＣＯＡｒ、−ＮＡｒＣＯＡｒ）、アリールカルバモイル（−ＮＨＣＯＯＡｒ、−ＮＲＣＯＯＡｒ）、アルキルカルバモイル（−ＮＨＣＯＯＲ、−ＮＲＣＯＯＲ’）、シアノ（−ＣＮ）、ニトロ（−ＮＯ２）、エステル（−ＣＯＯＲ、−ＣＯＯＡｒ）又はアルキルハロ（式中、各場合に、該アルキル、Ｒ又はＡＲ基は、１〜６個の炭素原子を有する）からなる群より選ばれる１個又は２個までの誘導体化部分を有することができる］
を有する、ウイルス感染を阻害する方法。
【請求項２】
前記ウイルスが、エボラウイルス、マールブルグウイルス、インフルエンザ、肝炎Ｂウイルス、肝炎Ｃウイルス、ラッサ熱ウイルス、リフト渓谷熱ウイルス、はしか、狂犬病、豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス、ウシコロナウイルス、ＳＡＲＳ、ウエストナイルウイルス、ＨＩＶ、牛痘ウイルス、デングウイルス、呼吸合胞体ウイルス、ヒトメタニューモウイルス又はパラインフルエンザである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記投与が、ＩＰ、ＩＶ、ＩＭ、非経口、皮下であるか、又は粘膜表面に適用されるか、皮膚に適用されるか又は吸入による、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記投与がＩＰ、ＩＶ又は経口である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記作用物質が、２−［２−（５−カルバミミドイル−ベンゾフラン−２−イル）−ビニル］−Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボキサミジン；キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジアミン，Ｎ，Ｎ'−ビス（３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３，９−ジメチル；ベンゼンカルボキシミドアミド，４，４'−（２，５−チオフェニル）ビスであり、
前記作用物質が塩酸塩として存在することができ、そして前記作用物質がヒドロキシル（−ＯＨ）、アミノ（ＮＨ２）、アミド、クロロ、フルオロもしくは他のハロゲン、アルコキシ（−ＯＲ）、アリールオキシ（−ＯＡｒ）、トリアルキルアンモニウム（−ＮＲ３＋）、アルキルアミド（−ＮＨＣＯＲ、−ＮＲＣＯＲ’）、アリールアミド（−ＮＨＣＯＡｒ、−ＮＲＣＯＡｒ、−ＮＡｒＣＯＡｒ）、アリールカルバモイル（−ＮＨＣＯＯＡｒ、−ＮＲＣＯＯＡｒ）、アルキルカルバモイル（−ＮＨＣＯＯＲ、−ＮＲＣＯＯＲ’）、シアノ（−ＣＮ）、ニトロ（−ＮＯ２）、エステル（−ＣＯＯＲ、−ＣＯＯＡｒ）又はアルキルハロ（式中、各場合に、該アルキル、Ｒ又はＡＲ基は、１〜６個の炭素原子を有する）からなる群より選ばれる２個までの誘導体化基を有することができる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記作用物質が、２−［２−（５−カルバミミドイル−ベンゾフラン−２−イル）−ビニル］−Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボキサミジン；キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジアミン，Ｎ，Ｎ'−ビス（３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３，９−ジメチル四塩酸塩；ベンゼンカルボキシミドアミド，４，４'−（２，５−チオフェニル）ビス，二塩酸塩である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記作用物質が、薬学的に許容されうる溶液剤又は懸濁剤として投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
哺乳動物ウイルスの処理のための薬学的に純粋な作用物質であって、該作用物質が、式  Ｙ−Ｘ−Ｙ１
［但し、Ｙ又はＹ１の１つは存在していなくてもよく、
上記式中、ＹおよびＹ１は、各々独立に、１〜６個の炭素原子のアルキル基であり、該アルキル基は、直鎖状、分岐状又は環状、飽和、部分的に不飽和又はアリールであることができ、そして存在するＹおよびＹ１の各々は、１個又は２個の水素原子を有する２個の窒素原子を含み、但し該窒素原子の１個までは、Ｙが環状である場合には環原子を構成することができそして水素原子を持たなくてもよく、そして
Ｘは、３又は４個の環部分Ｚからなり、各Ｚは、独立に５個又は６個の炭素原子であり、そして飽和、不飽和又はアリールであることができ、２、３又は４個のＺは隣接したＺと融合していてもよく、融合していない環部分Ｚは少なくとも１つの他の環部分Ｚに、単結合又はエチルもしくはプロピル基により結合しており、該エチルもしくはプロピル基は、単結合もしくは二重結合により結合した酸素もしくは窒素原子を有していてもよく、そして該Ｘは、環又はエチルもしくはプロピル炭素原子の代わりに、各々独立にＯ、Ｎ又はＳである１〜５個のヘテロ原子を含み、そして該化合物は、更に、ヒドロキシル（−ＯＨ）、アミノ（ＮＨ２）、アミド、クロロ、フルオロもしくは他のハロゲン、アルコキシ（−ＯＲ）、アリールオキシ（−ＯＡｒ）、トリアルキルアンモニウム（−ＮＲ３＋）、アルキルアミド（−ＮＨＣＯＲ、−ＮＲＣＯＲ’）、アリールアミド（−ＮＨＣＯＡｒ、−ＮＲＣＯＡｒ、−ＮＡｒＣＯＡｒ）、アリールカルバモイル（−ＮＨＣＯＯＡｒ、−ＮＲＣＯＯＡｒ）、アルキルカルバモイル（−ＮＨＣＯＯＲ、−ＮＲＣＯＯＲ’）、シアノ（−ＣＮ）、ニトロ（−ＮＯ２）、エステル（−ＣＯＯＲ、−ＣＯＯＡｒ）又はアルキルハロ（式中、各場合に、該アルキル、Ｒ又はＡＲ基は、１〜６個の炭素原子を有する）からなる群より選ばれる１個又は２個までの誘導体化部分を有することができる］
の薬学的に許容されうる純粋な化合物である、薬学的に純粋な作用物質。
【請求項９】
前記化合物が請求項１の方法であり、前記作用物質が、２−［２−（５−カルバミミドイル−ベンゾフラン−２−イル）−ビニル］−Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボキサミジン、キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジアミン，Ｎ，Ｎ'−ビス（３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３，９−ジメチル；ベンゼンカルボキシミドアミド，４，４'−（２，５−チオフェニル）ビスであり、
前記作用物質が塩酸塩として存在することができ、そして前記作用物質がヒドロキシル（−ＯＨ）、アミノ（ＮＨ２）、アミド、クロロ、フルオロもしくは他のハロゲン、アルコキシ（−ＯＲ）、アリールオキシ（−ＯＡｒ）、トリアルキルアンモニウム（−ＮＲ３＋）、アルキルアミド（−ＮＨＣＯＲ、−ＮＲＣＯＲ’）、アリールアミド（−ＮＨＣＯＡｒ、−ＮＲＣＯＡｒ、−ＮＡｒＣＯＡｒ）、アリールカルバモイル（−ＮＨＣＯＯＡｒ、−ＮＲＣＯＯＡｒ）、アルキルカルバモイル（−ＮＨＣＯＯＲ、−ＮＲＣＯＯＲ’）、シアノ（−ＣＮ）、ニトロ（−ＮＯ２）、エステル（−ＣＯＯＲ、−ＣＯＯＡｒ）又はアルキルハロ（式中、各場合に、該アルキル、Ｒ又はＡＲ基は、１〜６個の炭素原子を有する）からなる群より選ばれる２個までの誘導体化基を更に有することができる、請求項８に記載の薬学的に許容されうる純粋な化合物。
【請求項１０】
ウイルス感染について哺乳動物ホストを処理するための組成物であって、該組成物は、式  Ｙ−Ｘ−Ｙ１
［但し、Ｙ又はＹ１の１つは存在していなくてもよく、
上記式中、ＹおよびＹ１は、各々独立に、１〜６個の炭素原子のアルキル基であり、該アルキル基は、直鎖状、分岐状又は環状、飽和、部分的に不飽和又はアリールであることができ、そして存在するＹおよびＹ１の各々は、１個又は２個の水素原子を有する２個の窒素原子を含み、但し該窒素原子の１個までは、Ｙが環状である場合には環原子を構成することができそして水素原子を持たなくてもよく、そして
Ｘは、３又は４個の環部分Ｚからなり、各Ｚは、独立に５個又は６個の炭素原子であり、そして飽和、不飽和又はアリールであることができ、２、３又は４個のＺは隣接したＺと融合していてもよく、融合していない環部分Ｚは少なくとも１つの他の環部分Ｚに、単結合又はエチルもしくはプロピル基により結合しており、該エチルもしくはプロピル基は、単結合もしくは二重結合により結合した酸素もしくは窒素原子を有していてもよく、そして該Ｘは、環又はエチルもしくはプロピル炭素原子の代わりに、各々独立にＯ、Ｎ又はＳである１〜５個のヘテロ原子を含み、そして該化合物は、更に、ヒドロキシル（−ＯＨ）、アミノ（ＮＨ２）、アミド、クロロ、フルオロもしくは他のハロゲン、アルコキシ（−ＯＲ）、アリールオキシ（−ＯＡｒ）、トリアルキルアンモニウム（−ＮＲ３＋）、アルキルアミド（−ＮＨＣＯＲ、−ＮＲＣＯＲ’）、アリールアミド（−ＮＨＣＯＡｒ、−ＮＲＣＯＡｒ、−ＮＡｒＣＯＡｒ）、アリールカルバモイル（−ＮＨＣＯＯＡｒ、−ＮＲＣＯＯＡｒ）、アルキルカルバモイル（−ＮＨＣＯＯＲ、−ＮＲＣＯＯＲ’）、シアノ（−ＣＮ）、ニトロ（−ＮＯ２）、エステル（−ＣＯＯＲ、−ＣＯＯＡｒ）又はアルキルハロ（式中、各場合に、該アルキル、Ｒ又はＡＲ基は、１〜６個の炭素原子である）からなる群より選ばれる１個又は２個までの誘導体化部分を有することができる］の作用物質を含み、該作用物質は、薬学的に許容されうる担体中に、２５０mg／kg前記ホストの重量以下の有効量で存在する、組成物。
【請求項１１】
前記作用物質は、１ng〜２００mg／kg体重の範囲において投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記作用物質は、１ng〜１mg／kg体重の範囲において投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ウイルス感染について哺乳動物ホストを処理する方法であって、該哺乳動物においてカスパーゼ３およびカスパーゼ８の少なくとも１つを選択的に阻害することを含む方法。
【請求項１４】
前記作用物質が、前記カスパーゼが前記ウイルスと分子的に相互作用するのを防止する分子である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記作用物質が、２−［２−（５−カルバミミドイル−ベンゾフラン−２−イル）−ビニル］−Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボキサミジン；キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジアミン，Ｎ，Ｎ'−ビス（３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３，９−ジメチル四塩酸塩；ベンゼンカルボキシミドアミド，４，４'−（２，５−チオフェニル）ビス，二塩酸塩である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記作用物質が、前記ウイルスによる感染時に又は感染の前に前記ホストに予防的に投与される、請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
前記作用物質が、前記ウイルスによる最初の感染の後に、前記ホストに治療的に投与される、請求項２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権データおよび参照による取り込み
本願は、２００７年１０月２４日に出願されたU.S. Provisional  patent Application No. 60/982,227に対する優先権の利益を主張するものであり、この出願は参照によりそのまま取り込まれる。本願は、U.S. Patent Application Publication WO 2008/089125 A2および対応するU.S. Patent Application Serial Number 12/013,640の全体の開示も参照により取り込む。
【０００２】
政府の支援
ここに開示されそして特許請求された本発明をもたらす研究は、U.S. Government Contract HDTRA1-07-C-0080により部分的に資金を提供されそして政府は、出血熱ウイルス処理に関連するある用途に対する限定された本願の権利を享受することができる。
【０００３】
先行技術の背景
当業者は、異なるウイルス感染症を単一の作用物質又は作用物質のファミリーで阻害することができるように、１種より多くの特定のウイルス作用物質(viral agents)を阻害する作用物質(agents)を同定することが望ましいであろうということを認識している。同様に、ウイルス自体に対する生存圧力をかけない「汎ウイルス」作用物質("pan viral" agent)などを同定し、それによりウイルス母集団により示される頻繁な突然変異により無効にされるのを回避することが望ましいであろう。これまで、種々のウイルスファミリーを横断する極めて多様なウイルス感染様式および特徴を考えると、共通の治療を確立することは困難であった。明らかにＴＳＧ１０１により媒介される１つの経路は、進行中の研究の主題である。しかしながら、この経路を介する阻害は、選択的抗体の発生に主として基づいており、そして商業的ベースでこれらの経路に介入するための特定の作用物質又は組成物は同定されていない。これらの努力は、中でも6,835,816および6,248,523に検討されている。
【０００４】
最近、あるファミリーの化合物が、抗バクテリア活性、特に抗ボツリヌス中毒活性に対する関係を有するとして同定された。これらの化合物は、U.S. Patent Applications 11/464,001および11/464,007に同定されている。これらの両方共参照によりそのまま本明細書に組み込まれる。化合物それ自体は、元々抗腫瘍活性を有する化合物のスクリーニングにおいて同定された。このような化合物が抗ウイルス活性および抗バクテリア活性を示すならば、それは真に格別なことであろう。最近、やはり参照により本明細書に組み込まれる60/884,928に記載のとおり、２つの関連した化合物が、エボウイルスの攻撃からマウスを保護するある能力を有することが示された。合衆国および世界の残りの多くの国において、エボラは「細菌戦争」におけるように、引き渡し可能な兵器の点から見てのみウイルス脅威である。限定された種類の治療剤による他のウイルス感染症の処置は依然として確立されるべきである。
【０００５】
発明の背景
発明の分野
本発明は、種々のウイルス型により引き起こされるウイルス感染症を予防、処置および／又は管理するのに更に有効である小分子のファミリーを含む組成物のセットに関する。本発明は、更に、患者、ウイルス感染を経験している又はウイルス感染の危険にある患者であるヒト又は動物への本発明の組成物の投与の方法およびウイルス感染を阻害するのに更に有効な関連した阻害剤を同定するための追加の化合物をスクリーニングするための方法に関する。本発明は、また、研究された化合物およびその他の化合物、例えば選択的カスパーゼ阻害剤の可能な作用様式（ＭＯＡ）を同定することにより、ウイルス感染の阻害のための可能な基本的な生物学的活性経路も与える。
【０００６】
関連した技術
ウイルスは、ヒトおよび動物罹病率および死亡率と関連した広い種類のヒトおよび動物感染症における原因作用物質であることが長く知られている。多くの異なるウイルス病原体は、ヒトおよび動物における衰弱させる疾患又は致死的疾患（例えばインフルエンザ）を絶えず引き起こしてきたが、他のものは新興（emerging）又は再興（reemerging）である（例えば、ＨＩＶ、ウエストナイルウイルス、ＳＡＲＳ等）である。
【０００７】
動物およびヒトにおけるウイルス感染を処置又は予防するための努力は、一般に２つの広い範疇：ワクチンおよび抗ウイルス薬、に分類されうる。ワクチンは、一般に免疫原の投与により個体の免疫系をプライミングすることにより働く。免疫原は、典型的には、不活性化ウイルス(killed virus)、弱毒化ウイルス(attenuated virus)又は感染を引き起こすことはできないが免疫応答をトリガーするのには十分なウイルスサブユニットである。免疫原は予防接種によりターゲティングされた生きているウイルスに似ているので、免疫系は実際の感染の早期段階期間中にウイルスを容易に同定しそして排除することができる。入手可能ならば、ワクチンは、疾患を引き起こす特定のウイルスに対して個体を免疫感作するのに非常に有効である。
【０００８】
しかしながら、ワクチンは、一般に、感染前に個体を免疫感作させるのにのみ有効である（即ち、ワクチンは、疾患の症候を経験しているかもしれない又は経験していないかもしれない感染した個体を処置するための手段としては効果がない）。更に、ワクチンは、高度に突然変異可能なウイルスに対して個体を予防接種するのにはしばしば効果がない。何故ならば、これらのウイルスは予防接種により発生したいかなる免疫も逃れることができるからである。
【０００９】
研究は、既に感染している個体を処置するためおよび予防接種法が入手可能でないか又は成功がおぼつかないウイルス疾患を処置又は予防するための手段として抗ウイルス医薬を開発することにも集中した。抗ウイルス医薬を開発するためのこのようなアプローチは、「合理的薬物デザイン(rational drug design)」と呼ばれるものによりウイルス感染の基本的機構又は工程に介入する分子又は薬物を同定することを追求した。又は、代わりに、インターフェロン又は抗体などの抗ウイルス薬物を、ある範囲の病原体に対する免疫系を広く刺激するようにデザインすることができる。
【００１０】
一般に、ウイルスは、その正常な感染サイクル期間中下記と同質の一連の工程を進む：（１）結合（即ち、ウイルスキャプシド又はコートタンパク質とホスト細胞表面のレセプター間の特異的結合）、（２）侵入（一般にエンドサイトーシス又は膜融合によるホスト細胞への入り込み）、（３）脱殻（uncoating）（即ち、ウイルスコートを消化又は分解して内容物およびウイルスゲノムを細胞中に放出させること）、（４）複製および組み立て（即ち、新しいウイルス粒子を形成するのに必要な中間体を含む新しいウイルスタンパク質およびＤＮＡ／ＲＮＡの合成）、（６）成熟（即ち、成熟したウイルス粒子を形成するための翻訳後の修飾およびプロセシング）および（６）放出又は出芽（即ち、ウイルス粒子を遊離させて新しいホスト細胞に感染させること）。しかしながら、すべてのウイルスがこれらの工程のすべてを要約された方式において進行するとは限らない。例えば、ＨＩＶは、ホスト細胞から放出された後成熟する。
【００１１】
近年において、プロテアーゼ阻害剤の開発を含む新規な抗ウイルス薬のデザインおよび開発の顕著な成功にもかかわらず、現存の治療は、それらを使用して処置することができるウイルスの数および広さの点で限定されている。更に、多くのウイルスの株は、それらのウイルスゲノムの突然変異の結果として抗ウイルス薬に耐性となった。したがって、ウイルス疾患を処置又は予防するための抗ウイルス薬、特に種々のウイルス型に対する有望性を示す抗ウイルス薬の開発に対する当技術分野における要求があり続けている。一般に現存のワクチチンおよび薬物による処置を逃れることができる高度に突然変異可能なウイルスに対して有効な新規な抗ウイルス薬の開発に対する当技術分野における要求もあり続けている。
【００１２】
本願の有効な出願日の後、provisional U.S. Patent Application No. 60/884,928において検討された化合物のファミリーの有効性の広がった説明は、U.S. Patent Application 12/013,640に提示されている。出願人は、更に、１種以上のウイルスおよびウイルスファミリーに対して活性を与える化合物の活性の範囲、機構およびファミリーを拡大した。本願の出願時に、本願の譲受人、Functional Genetics, Incは、U.S. Patent Application 12/013,640の専用実施権者である。
【００１３】
発明の要約
ウイルス感染に対して有効とされた化合物は、USSN 60/884,928および12/013,640においてこれまで同定された広い種類の化合物から選び出される。本願の詳細な説明に記載のとおり、構造類似性に基づくのみならず活性にも基づくより限定されたファミリーの同定を可能とする追加の情報が開発された。化合物の活性は、主として細胞に基づくアッセイとして反映されるｉｎ−ｖｉｔｒｏ実験および主としてチャレンジ(challenge)に基づく方法を含むｉｎ  ｖｉｖｏ実験により本明細書では証明される。これらの分子に対する耐性および有効性の一般的レベルもまた与えられる。
【００１４】
特定的には、本発明の化合物は、下記の構造式
【化１】
2011500830.tif 000003
［式中、Ｙは、
【化２】
2011500830.tif 000004
（式中、ｎは１又は２である）であり；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５およびＸ６は各々独立に、Ｎ、Ｓ、Ｏ、ＳＯ２、ＣＲ７又はＮＲ８であり、そしてＸ１、Ｘ２の少なくとも１つはＮ、Ｓ、Ｏ、ＳＯ２又はＮＲ８であり；
Ｌは、直接の結合又は
【化３】
2011500830.tif 000005
（式中、Ｚは場合により置換されているアルキル、アルケニル、ジアルケニル、トリアルケニル又はアリール又はＣ（Ｏ）ＮＨである）であることができるリンカーであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、各々独立に、水素、アミノ、安定化されたカルボカチオンを有するアミン、カルボキシル、場合により置換されているアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルコキシ、アリールオキシ、シクロアルキルオキシ、ヘテロアリールオキシ、アルコキシカルボニル、アルキルアミノ、カルボルノイル、アルキルアミノカルボニル、アルキルスルフヒドリル、アルキルヒドロキシマートであり；
Ｒ８は、水素、ＯＨ、ハロゲン又は場合により置換されているアルキルである］
により記載される化合物のファミリーから選び出される。
【００１５】
ある態様においては、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４の少なくとも１つは、水素、アミジン、２−イミダゾリン、アミノ、グアニジン、メチル、アミノメチル−ヒドロキサミン又はメチルアミン−グアニジンである。ある態様においては、Ｒ５は、水素、アミジン、２−イミダゾリン、アミノ、グアニジン、メチル、アミノメチル−ヒドロキサミン、メチルアミン−グアニジン、４−オキシ−ベンズアミジン、１Ｈ−インドール−６−カルボキサミジン、又は１Ｈ−インドール−５−カルボキサミジンである。ある態様においては、Ｒ６は、水素、アミジン、ベンズアミジン、ベンズイミダゾリン、イミダゾリン、グアニジン、イミダゾール、オキサゾール、ベンゾフラン−２−イル−イミダゾリン、ベンゾフラン−２−イル−アミジン、ベンゾフラン−２−イル−グアニジン、ベンゾチオフェン−２−イル−イミダゾリン、ベンゾチオフェン−２−イル−アミジン、ベンゼン−２−イルアミジン、ベンゾフラン−２−イル−イミダゾール又はベンゾフラン−２−イル−オキサゾールである。ある態様においては、Ｘ１又はＸ２の少なくとも１つは、Ｎ、ＮＨ、Ｓ、Ｏ、ＳＯ２、ＣＨ、Ｃ−ＣＨ３、Ｃ−フェニル、Ｎ−エタノール、Ｎ−クロロエチル、Ｃ−アミノ、Ｃ−（２−インドール−６−イミダゾリン）、Ｃ−（２−インドール−６−アミジン）、Ｃ−（２−インドール−５−イミダゾリン）又はＣ−（２−インドール−５−アミジン）である。ある態様においては、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５又はＸ６の少なくとも１つは、Ｎ、ＮＨ、Ｓ、Ｏ、ＳＯ２又はＣＨである。ある態様においては、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６又はＲ７の少なくとも１つは、−Ｈ、−ＣＨ３、−ＮＨ２、
【化４】
2011500830.tif 000006
である。ある態様においては、Ｒ５は、−ＮＨ２、
【化５】
2011500830.tif 000007
である。ある態様においては、Ｒ６は、
【化６】
2011500830.tif 000008
である。ある態様においては、Ｒ７は、−Ｈ、−ＣＨ３、−ＮＨ２、
【化７】
2011500830.tif 000009
である。ある態様においては、Ｒ８は、−Ｈ、−（ＣＨ２）２ＯＨ又は−（ＣＨ２）２Ｃｌである。ある態様においては、Ｌは、直接の結合、
【化８】
2011500830.tif 000010
である。ある態様においては、化合物は、下記の構造式
【化９】
2011500830.tif 000011
を有する。
【００１６】
特に関心のある化合物は、ＮＳＣ化合物３６９７２３、２９４１９９、３０６３６５、３００５１０、２９４２０６、および２９４２０２、ならびに化合物５０４１０および５０４１３を含む。総括的に、これらの化合物および図６Ａ〜６Ｃに記載の化合物および関連した化合物のファミリーは本明細書ではＦＧＩ−１０３化合物と記載される。これらの化合物の化学式は、図５に示された共通の構造単位の評価と共に、図１〜４および６Ａ〜６Ｃに与えられる。しかしながら、活性は、これらの化合物に限定されずそして同様な構造の活性化合物のリストが与えられる。このリストは、選択に対する高められたガイダンスを与える仮の構造式の同定を可能とする。
【００１７】
本願は、多数のウイルスのファミリーに対して活性を示す化合物のファミリーを指向した特許出願について適当である広範なデータを含む。この出願は明白な構成を有する。ある構造情報を与える多数の図、続いて３つの最も多く試験した化合物の各々についての活性情報が下記に記載される。本願の詳細な説明は、これらの図に並行して、集合的にそのクラスに注意を向け、次いで３つの異なる活性化合物の各々の研究された性能に注意を向ける。その後、基本的生物学的経路に関する化合物の共通の活性および投与経路および有効性が提示される。次いで特許請求の範囲が提示される。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
本発明を、最初に出願された出願に記載されそして以下に検討される図面を参照して説明する。
【図１】本発明の活性化合物の構造式を与える。
【図２】本発明の活性化合物の構造式を与える。
【図３】本発明の活性化合物の構造式を与える。
【図４】本発明の活性化合物の構造式を与える。
【図５】本発明の化合物のある共通の化学構造単位を示す。
【図６Ａ】細胞に基づくアッセイにおいて少なくともエボラウイルスおよび／又はサル痘に対してウイルス阻害活性を示すことが証明された本発明の方法の２７化合物のいくらかを列挙する。
【図６Ｂ】細胞に基づくアッセイにおいて少なくともエボラウイルスおよび／又はサル痘に対してウイルス阻害活性を示すことが証明された本発明の方法の２７化合物のいくらかを列挙する。
【図６Ｃ】細胞に基づくアッセイにおいて少なくともエボラウイルスおよび／又はサル痘に対してウイルス阻害活性を示すことが証明された本発明の方法の２７化合物のいくらかを列挙する。
【図７】図７は、集合的に、略図によりおよびグラフにより化合物のＦＧＩ−１０３ファミリーの作用の様式のためのいくらかの証拠を与え、これはこのファミリーの化合物がウイルス粒子組み立てを妨害することを示唆する。
【図８】図８は、本発明の小分子活性作用物質がウイルスタンパク質合成が完了した後経路を阻害するのに有効であることを示唆する、特にＦＧＩ−１０３化合物７２３のｉｎ−ｖｉｔｒｏ試験を使用して得られたデータの集合的要約をグラフで与える。
【図９】図９も、本発明の小分子のｉｎ−ｖｉｔｒｏ試験に基づいており、ＦＧＩ−１０３分子がプロテアーゼである酵素である、あるｓａｐａｃｅ酵素の活性を選択的に阻害することを証明する。
【図１０】図１０は、ｉｎ−ｖｉｔｒｏアッセイにおいてインフルエンザ阻害を示す。図６Ａにその式が示されている３つの活性化合物３６５、２０２および７２３のグラフ表現である。ＦＩＧ−１０３化合物は、感染チャレンジ(infection challenge)に対する保護を与えるのに有効であることが示された。
【図１１】図１１も、ＦＩＧ−１０３化合物３６５および７２３の両方についての、対照的な結果、インフルエンザウイルスの阻害、をグラフで示す。送達ビヒクルはネガティブコントロールとして示される。
【図１２】図１２は、ＦＧＩ−１０３ファミリーの化合物の４つのグラフおよび牛痘ウイルスに対する細胞に基づくアッセイにおけるそれらの活性を示す。このアッセイおよびすべてのアッセイについて基本的パラメーターは図の下部左コーナーに与えられている。
【図１３】豚ストックを世界的に徹底的に破壊する商業的に危険なウイルスであるブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)に対する最も研究されたＦＧＩ−１０３化合物の２つ、７２３および３６５についての活性を示す。
【図１４】図１３と同様に、ヒトウイルスのみならず動物ウイルスの処理におけるＦＧＩ−１０３化合物の有効性を表により示す。特に、哺乳動物がウシコロナウイルスにさらされ、図１４に検討された。
【図１５】図１５は、エボラチャレンジからのマウスの保護を示す、本発明により検討されたＦＧＩ−１０３ファミリーの２つの化合物についてのｉｎ  ｖｉｖｏ活性を示す。
【図１６】図１６は、異なるパネルのＦＧＩ−１０３化合物についてのマールブルグウイルス（ＭＡＲＶ）によるマウスのｉｎ  ｖｉｖｏチャレンジの結果をグラフで示す。やはり、すべてのこれらの化合物の構造式は図６Ａ〜６Ｃに示される。
【図１７】図１７は、マウスチャレンジにおける牛痘に対するＦＧＩ−１０３化合物のファミリーの相対的活性を示す。重要なことに、図１５〜１７は、試験した化合物の治療的活性のみならず予防も反映し、チャレンジ時、チャレンジ前およびチャレンジ後に投与がなされた。
【図１８】図１８は、エボラ、マールブルグ、インフルエンザ、ラッサ熱、リフト渓谷熱、牛痘、ＰＲＲＳ、デング熱およびＨＩＶに対して試験されている、これらの化合物の広い範囲の活性および適用可能性の指標を一目で与えることを意図した表である。これらは、もちろん、先行する図および後に続く図により示されたとおり、これらの分子が有効である唯一のウイルスではなくて共通の表を表す。
【図１９】図１９〜３６は、ＦＧＩ化合物の最も活性なものの１つ、化合物７２３の試験を反映する。したがって、図１９は、この化合物の最も重要なデータ点のいくらかの表による提示である。この提示は、示唆された作用の機構も含む。
【図２０】図２０は、細胞に基づくアッセイに基づいて特定の値で達成されたウイルス力価の減少を比較するデータおよび関連して安全性情報を与える。本願全体にわたり、用語ＳＩ５０は、安全性指数を示すのに使用されそしてＥＣ５０値をＣＣ５０で割ることにより得られる。
【図２１】図２１は、パラインフルエンザウイルスおよび呼吸合胞体ウイルスを含むパラミクソウイルスに対する活性作用物質として７２３を使用する細胞に基づくアッセイの結果をグラフおよび表に示す。
【図２２】図２２は、肝炎Ｂウイルス（ＨＢＶ）に対する７２３を含む細胞に基づくアッセイに関するより多くの情報をグラフおよび表に示す。
【図２３】同じタイプの情報か図２３に与えられ、図２３は、デング熱、他の認識された「バイオテロリズム脅威」ウイルスおよび国際的災難の原因に対する細胞に基づくアッセイにおいて７２３により与えられる保護の結果を提示する。
【図２４】図２４は、活性な保護化合物として７２３を使用するエボラウイルスおよびマールブルグウイルスからのチャレンジに対して細胞生存に関する情報を与える。示されたとおり、活性化合物の低い値で、１００％阻害が達成される。
【図２５】図２５は、エボラウイルスに対するｉｎ  ｖｉｖｏ保護をグラフの形態で示す。このアッセイにおいて、エボラチャレンジに対する１００％阻害は、７２３によりマウスにおいて与えられた。
【図２６】図２６も、エボラウイルスに対する７２３のｉｎ  ｖｉｖｏ試験の結果を表し、今回は用量を注入後に投与して、治療基準のみにおける結果を示す。
【図２７】図２７は、エボラ感染の４日後にマウスに７２３を投与する結果に関するグラフ情報を与える。
【図２８】ｉｎ  ｖｉｖｏでのマールブルグウイルスチャレンジに対する保護は、図２８に示される。
【図２９】図２９は、ＩＰ投与の後の７２３の血清レベルを示す。
【図３０】図３０は、ＩＰ投与後の時点で種々の身体組織における７２３の濃度に関する情報をグラフ形態で提示する。
【図３１】図３１は、時間に対して、これらの疾患のＥＣ５０値に比較して、投与後のモルモットにおける７２３の血清濃度について同様な情報をグラフ形態で与える。
【図３２】図３２は、単回又は多数回投与の後の種々の組織における７２３の濃度に関する情報をグラフ形態で示す。
【図３３】図３３は、７２３「プロドラッグ」の経口投与の後の薬物アベイラビリティーの棒グラフ情報を提供する。
【図３４】図３４は、７２３で処理されるとき種々の細胞型についての安全情報を表の形態で一目で与える。示されたとおり、関与したウイルスのいくらかの性質を考えて、これらのアッセイのあるものは、Frederick, Maryland(Fort Detrick)におけるＵＳＡＭＲＩＩＤの生物学的安全レベル４の実験室で行われた。
【図３５】図３５は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの作用物質又は薬物としての７２３に関する安全／毒性情報を与える。
【図３６】図３６は、優良研究所実施基準に従うＦＧＩ−１０３化合物７２３の製造についての合成スキームを与える。
【図３７】図３７〜５３は、ＦＧＩ１０３ファミリーの他の化合物−３６５と呼ばれる化合物の試験を指向する。図３７は、他のＦＧＩ−１０３化合物についての最も重要なデータ点のいくらかの表による表示である。この提示は、示唆された作用機構も含む。
【図３８】図３８は、種々のウイルス、動物およびヒトを苦しめるウイルス、に対する化合物３６５の活性の要約を表の形態で与える。
【図３９】図３９は、検出されたルシフェラーゼのレベルとして測定された肝炎Ｃウイルスを阻害することにおける化合物３６５の有効性を示す。
【図４０】図４０は、デング熱のすべての血清型による感染に対する化合物３６５により与えられた保護を示す細胞アッセイの結果をグラフおよび表で示す。
【図４１】図４１は、Ｖｅｒｏ細胞に基づくアッセイにおけるエボラチャレンジに対する３６５を使用することにより得られたデータをグラフおよび表で示す。
【図４２】図４２は、ＭＴ−４細胞におけるＨＩＶ感染の阻害をグラフおよび表により示す。
【図４３】上記したとおり、ＰＲＲＳウイルスは、世界中の豚母集団に疫病をもたらす商業的に危険なウイルスである。図４３は化合物３６５によるＰＲＲＳウイルスの阻害を示す表形態の情報を与える。
【図４４】図４４は、細胞（Ｖｅｒｏ細胞）アッセイにおけるリフト渓谷熱ウイルスを阻害するための化合物３６５の試験結果をグラフおよび表形態で示す。図４４において、本願の図の多くにおけると同じく、試験されたウイルスの分布、および関連したウイルスに関する情報は右下コーナーに示される。
【図４５】図４５は、マールブルグウイルスを阻害する３６５の能力を測定する細胞アッセイを調べる
【図４６】図４６は、Ｖｅｒｏ細胞アッセイにおける、ラッサ熱ウイルスによる感染を阻害することにおける化合物３６５の有効性をグラフおよび表により示す。
【図４７】図４７は、コントロールすることが困難であることが示されたウイルス、ＳＡＲＳおよびウシコロナウイルス、他の重要の家畜疾患、の両方の活性を阻害するのに３６５が有効であることを表により示す。
【図４８】７２３と同様に、化合物３６５は、ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ−ｖｉｔｒｏで試験された。図４８は、エボラウイルスに対する治療モードでマウスに３６５を使用することにより得られたデータのグラフ提示である。治療モードにおいては、投与はチャレンジ後に行う。
【図４９】図４９は、マウスの治療剤としてｉｎ  ｖｉｖｏで３６５を使用する牛痘ウイルスの投与により与えられた生存の延長を示す。
【図５０】図５０は、安全を証明する種々の濃度における３６５の用量に対するマウスの応答をグラフ形態で示す。
【図５１】図５１は、５mg／kg投薬後の３６５の血清レベルを与えるグラフである。
【図５２】ＰＢＭＣを使用して、図５２は、３６５の投与後のサイトカインレベル（コントロールに対する）をグラフ形態で示す。
【図５３】図５３は、持続した一貫した純度および製造レベルを与えるための優良研究室実施と合致した方式で当業者により追跡されうる化合物３６５の合成スキームを与える。
【図５４】化合物７２３および３６５は、両方ともバランスした四環構造である。有効なＦＧＩ化合物は、活性な三環化合物も含む。図５４は、活性な三環構造の化合物５１０の最も重要なデータ点のいくらかの表による提示である。この提示は、示唆された作用機構も含む。
【図５５】図５５は、６種の異なるウイルス脅威に対する種々の細胞に基づくアッセイから化合物５１０について得られた効能および安全性を表の形態で示す。
【図５６】図５６は、エボラウイルスを防止および処置することにおける化合物５１０の有効性をグラフおよび表に示。
【図５７】図５７は、細胞に基づくアッセイにおける化合物５１０を使用する牛痘に対して得られたウイルス力価の減少を証明する。
【図５８】図５８は、世界中の健康およびバイオテロの脅威の両方を与えるフラビウイルスのファミリーの一部である、肝炎Ｃウイルスを処理するための５１０を使用することによる結果を、タンパク質ブロット、グラフおよび表により示す。
【図５９】Ｖｅｒｏ細胞アッセイにおいて、化合物５１０は、図５９に示されたとおり、ウエストナイルウイルスに対して有効であることが証明された。
【図６０】図６０は、減少したウイルス力価により示されたとおり、ラッサ熱ウイルスの阻害を示す。
【図６１】図６１は、阻害剤として５１０を使用してＲＳＶ感染後の細胞生存を示す、細胞に基づくアッセイを示す。パラインフルエンザについての表のデータも含まれる。
【図６２】図６２において、生存率は、マールブルグウイルスによるチャレンジに対するマウスの保護を証明するｉｎ  ｖｉｖｏアッセイのための手段である。
【図６３】図６３は、エボラウイルスに対するｉｎ  ｖｉｖｏチャレンジとしてマウスを保護することにおける５１０の有効性をグラフ形態で提示する。５１０の有効性は、種々の用量にわたって示される。
【図６４】図６４は、優良研究室実施と合致したその製造を許容する化合物５１０の合成スキームを示す。
【図６５】図６５は、化合物５１０が、カスパーゼ１、２および８の高められた阻害を与えるが、カスパーゼ４、９又は１０の阻害を与えない選択的にカスパーゼを阻害するデータを、グラフの形態で示す。
【図６６】図６６は、ＩＣ５０値による化合物５１０のカスパーゼ阻害データを示す。
【図６７】図６７は、活性部位をブリッジするのに化合物５１０がいかに適合しているかを示す、化合物５１０によるカスパーゼ阻害を説明するための可能な分子モデルを示す。
【図６８】研究された他のＦＧＩ−１０３化合物に関すると同じく、図６８に略図およびグラフで示されたとおり、５１０は、感染性ウイルス粒子の組み立てを妨害又は防止することにより作用すると思われる。
【図６９】図６９は、処理剤として７２３を使用して処理の時間により生じた全ウイルス粒子発生に対する影響を反映するデータを示す。
【図７０】図７０は、化合物７２３が原子配位モデリングにより提示されたカスパーゼ２の活性部位にいかに構造的に適合するかを示す、異なる種類のモデリングイメージを示す。
【図７１】図７１は、ＦＧＩ−１０３化合物が酵素の活性部位を妨害するのにいかに適合しうるかを証明する、カスパーゼ８のための原子結晶構造モデルを示す。
【００１９】
発明の詳細な説明
本願の発明は、ウイルス感染処置における適用可能性を発見する。今なおカタログに載せられそして試験されなければならない動物およびヒトに対する同定されたウイルス脅威の膨大な収集があるが、ＦＧＩ−１０３の化合物は、広範囲のウイルスを処理するのに活性であることをそれ自体示した。これらの化合物は、エボラウイルスによりチャレンジされたマウスを治療的に又は予防的に処理するのに使用されるとき、１００％生存を証明した。本発明者が知る限りでは、これは、今日までいかなる作用物質によっても証明されていない。エボラは合衆国政府および他の政府が兵器としての潜在力を有すると同定した多くの「バイオテロリズム」ウイルスの脅威の１つである。同じ化合物がインフルエンザなどの予防接種することが困難でありうるウイルスに対する有効性を同時に証明した。Ｆｌｕワクチンは、インフルエンザの絶えず突然変異する株からの特定の危険にある高齢者および他の免疫が危うくなった個体において弱く働く。今日まで、ＦＧＩ−１０３ファミリーの化合物により与えられた保護から免がれる能力を示す株はなかった。
【００２０】
しかしながら、本発明の有効な化合物は、そのように限定されない。ｉｎ−ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ試験の両方におけるウイルスに対して有効であると証明されたので、本発明の化合物は、ＰＲＲＳウイルスおよびウシコロナウイルスなどの動物ウイルス並びに世界的な健康問題およびバイオテロリズムの脅威の両方を有する他のウイルス、例えばＳＡＲＳおよびデングウイルス処理するのに有効であることも証明された。
【００２１】
当業者は、図６Ａ〜６Ｃの化合物であって、その各々が少なくとも１つの細胞に基づくアッセイ（エボラ又はサル痘に対して）における活性を有しそして下記するとおりより綿密に研究されそして試験されたこれらの化合物の性質を有することが示された図６Ａ〜６Ｃの化合物を選ぶならば、予防的又は治療的に又はその両方で、多数のウイルスに対する活性を示す見込みのある化合物のファミリーを記述することができる。そのファミリーは、下記式により表わすことができる。
Ｙ−Ｘ−Ｙ１
［但しＹ又はＹ１の１つは存在していなくてもよく、
上記式中、ＹおよびＹ１は、各々独立に、１〜６個の炭素原子のアルキル基であり、該アルキル基は、直鎖状、分岐状又は環状、飽和、部分的に不飽和又はアリールであることができ、そして存在するＹおよびＹ１の各々は、１個又は２個の水素原子を有する２個の窒素原子を含み、但し該窒素原子の１個までは、Ｙが環状である場合には環原子を構成することができそして水素原子を持たなくてもよく、そして
Ｘは、３又は４個の環部分Ｚからなり、各Ｚは、独立に５個又は６個の原子であり、そして飽和、不飽和又はアリールであることができ、２、３又は４個のＺは隣接したＺと融合していてもよく、融合していない環部分Ｚは少なくとも１つの他の環部分Ｚに、単結合又はエチルもしくはプロピル基により結合しており、該エチルもしくはプロピル基は、単結合もしくは二重結合により結合した酸素もしくは窒素原子を有していてもよく、そして該Ｘは、環又はエチルもしくはプロピル炭素原子の代わりに、各々独立にＯ、Ｎ又はＳである１〜５個のヘテロ原子を含み、そして該化合物は、更に、ヒドロキシル（−ＯＨ）、アミノ（ＮＨ２）、アミド、クロロ、フルオロもしくは他のハロゲン、アルコキシ（−ＯＲ）、アリールオキシ（−ＯＡｒ）、トリアルキルアンモニウム（−ＮＲ３＋）、アルキルアミド（−ＮＨＣＯＲ、−ＮＲＣＯＲ’）、アリールアミド（−ＮＨＣＯＡｒ、−ＮＲＣＯＡｒ、−ＮＡｒＣＯＡｒ）、アリールカルバモイル（−ＮＨＣＯＯＡｒ、−ＮＲＣＯＯＡｒ）、アルキルカルバモイル（−ＮＨＣＯＯＲ、−ＮＲＣＯＯＲ’）、シアノ（−ＣＮ）、ニトロ（−ＮＯ２）、エステル（−ＣＯＯＲ、−ＣＯＯＡｒ）又はアルキルハロ（式中、各場合に、該アルキル、Ｒ又はＡＲ基は、１〜６個の炭素原子を有する）からなる群より選ばれる１個又は２個までの誘導体化部分(derivatizing moieties)を有することができる］。
【００２２】
本明細書で使用された医学的および科学的という用語は、可能ならば、それらの標準および通常の意味において使用される。本明細書で使用された用語「処理」は、ウイルスによる感染を防止、限定又は遅くすることを意味する。したがって、ホストは、ＦＧＩ−１０３化合物の投与により処理されることができ、その場合に、そのホストは、ウイルスによる感染の尤度が高い危険な区域に入る前にＦＧＩ−１０３化合物を与えられる。このタイプの処理は、エボラなどのウイルスに対する自然の保護が殆どないウイルスが流行している区域に軍人および支持職員が配置される場合又は、予防的保護が重要である、例えばインフルエンザにより与えられる感染などの全地域に流行している感染の場合に、特定の用途を有する。
【００２３】
ホスト、即ち哺乳動物（代表的哺乳動物は、ヒト、商業的家畜、例えばウマ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ等を含み、マウス、ラット、ウサギおよびそれらの対応物を含むアッセイおよび発見における価値のある動物、ならびにイヌ、ネコ、サルおよび関連した家畜のような非商業的動物を含む。野生動物母集団、例えばヘラジカ、シカ、オオカミ、ヤギュウ等におけるウイルス感染を本発明の化合物を使用して処理することも可能である）は、ホストのウイルスを「除去される(cured)」こと、即ちホストの身体にウイルス感染が残らないこと、又はウイルスを阻害されること、即ち、身体自身の天然の資源がウイルス増殖を妨害しそして侵入ウイルスを圧倒することができるように低いレベルに感染性ウイルス粒子発生を減少させること、により処理されうる。他の形態の処理においては、投与された化合物は、疾患を遅くすることができ、又は、はやめに存続を延長して他の処置を活用することができる。
【００２４】
投与は、種々の経路のいずれかにより行うことができる。慣用の投与経路は、ＩＶ、ＩＭおよびＩＰを含む。データは、正しく誘導体化された化合物は、図３３に示されたとおり、経口的に投与されうることを示唆している。皮下、皮膚および吸入経路を使用して本発明の活性作用物質を送達することもできる。重要なことに、本発明の化合物は極めて活性である。最小有効濃度は、１ng／kgという低い範囲にあることができる。ＥＣ５０値は、ＥＤ５０値およびＣＣ５０値と共に多数の化合物について与えられており、広い範囲の有効な投薬量に対する安全性を証明する。本願において詳細に検討された化合物の各々について、ＥＣ５０値をＣＣ５０で割ることにより計算された安全性指数が提示される。したがって、ＦＧＩ−１０３化合物それ自体のいくらかは以前に記載されており、そして、０．００２〜２００mg／kg体重の投薬量値で使用するのに適当であると係属中のU.S.Patent Application 12/013,640に記載されているが、約１０ng／kg〜約１２５mg／kgの集中した範囲が最も活性な化合物について好ましいことがありうる。したがって、本発明の薬剤の好ましい範囲がターゲット投薬量として１ng／kg／日〜１２５mg／kg／日、ＩＶの範囲にあることを同定することができる。最小投薬量プロトコールはない。このために、下記するとおり、ＦＧＩ１０３化合物は、０．１〜１０mg／kgの範囲の用量が感染前又は感染後に送達されると、ウイルス媒介死亡を防止するのに十分であるような、そうしなければ致死的なウイルス（デボラ、マールブルグ、デング、インフルエンザ）に対する動物モデルにおける強い活性を示す。当業者は、本明細書においてターゲットおよび化合物が与えられると、特定の哺乳動物、特定のウイルスおよび特定の投与方式のための特定の投薬量を同定することを、慣用のプロトコールにより十分に身につける。
【００２５】
クラスとしてのＦＧＩ１０３化合物
実施例として３つの別々の集中的な症例研究が下記に与えられているけれども、ＦＧＩ化合物を全体として調べる価値がある。ウイルス作用物質の選択に対するＦＧＩ化合物間の比較試験は、図１０〜１７に記載されている。これらの研究に関して注目すべきことは、研究されたＦＧＩ−１０３化合物の各々は他のものよりもいくらかのウイルスに対してより有効であるけれども、各々は、多数のウイルスに対して有効であるということである。したがって、図１０において、３６５および２０２の両方とも、インフルエンザ感染に対して有効であることが証明されたが、７２３−試験されたＦＧＩ−１０３化合物の最も有効なものの１つは、比較的劣っていることを示した。他のフォーマットで再試験すると、それはより良好であった。
【００２６】
図１１は、ＨＩＶ、おそらく有効な療法を最も活発に今日探索される１つのウイルス、に対する１uM投薬量有効性を比較する。図１２に示されたとおり、４つの異なるＦＧＩ−１０３化合物の各々は、牛痘ウイルス−他のＤＮＡウイルス、を阻害することが示され、３つは予防的に処理されるとき、約１０uMの投薬量値で完全な阻害を示す。同様に、７２３および３６５の両方とも、ＰＲＲＳを阻害するのに測定された値で有効性を示し、図１３、そして同じ２つの試験化合物は、ＳＡＲＳと類似しているウシコロナウイルスに対して有効であることが示された、図１４。７２３を、１０mg／kg投薬レベルで、チャレンジの１時間前の投薬、次いで２回のその後の投与で、他のＦＧＩ１０３化合物、２０２と共に、ｉｎ  ｖｉｖｏでエボラに対して試験した。処置された動物の１００％が生存した。他の出血性ウイルス、マールブルグに対する同様な性能は、図１６に示されるとおりｉｎ  ｖｉｖｏで証明された。多くのＤＮＡウイルスがＲＮＡに基づいているが、異なるクラスのウイルスがＤＮＡを使用する。ＦＧＩ−１０３化合物は、牛痘ウイルスなどのＤＮＡウイルスに対して有効であることが示された。図１７は、牛痘に対する種々のＦＧＩ化合物についての生存データを示す。
【００２７】
ＦＧＩ−１０３化合物についてこの早期のデータで証明された結果の他の重要な局面は、ｉｎ−ｖｉｔｒｏでの細胞に基づくアッセイによってのみならず、ｉｎ  ｖｉｖｏでも有効であることが示されたということである。あるクラスの化合物は、ＲＮＡウイルスおよびＤＮＡウイルスを含む広い種類のウイルス作用物質に対してその証明されたｉｎ−ｖｉｔｒｏ活性を保持するが、ｉｎ  ｖｉｖｏで試験されるときその活性を保持することは稀である。図６Ａ〜６Ｃに構造的に示されたＦＧＩ１０３化合物の各々が、より多くはないとしても、少なくとも１つのウイルス作用物質に対してｉｎ−ｖｉｔｒｏ活性を示したことおよび今日まで試験された作用物質のどれも、ｉｎ−ｖｉｖｏでその活性を保持することができなかったことおよびＦＧＩ−１０３化合物が多数の種類のウイルスを阻害するのに使用することができるという発見の重要性が明らかであるということを心に留められたい。クラスとしてＦＧＩ−１０３化合物により処理された多様なウイルスは注目さされうる。エボラ、マールブルグおよびデング熱などのバイオテロリズムの脅威が認識されるウイルスは、ＦＧＩ−１０３化合物により有効に阻害される。リフト渓谷熱およびラッサ熱ウイルスのような他の処理抵抗性ウイルスは、図１０〜１７に記載の情報に反映されるとおりＦＧＩ−１０３化合物と命名された化合物のクラスにより有効に処理される。下記する３つの「症例研究」により補足される早期試験の要約は図１８に示される。単一の抗ウイルス剤が、そんなにも多くの異なるウイルスファミリーから選ばれたそんなにも多くの異なるウイルスに対して有効性を示すことは各別なことである。もちろん、多数のウイルスに対して多数のＦＧＩ−１０３化合物の安全性および効力を示すことはライフワークであろう。下記するとおりウイルスよりはむしろホストタンパク質又は経路をターゲティングすると思われるこのファミリーの小分子の試験は、しばらくは続くであろう。にもかかわらず、今日まで行われた広範な試験は、これらの作用物質の広い適用可能性を証明し、そしてウイルスを特異的に攻撃するよりはむしろ、ウイルス感染又は複製に関係するある身体作用、経路又はタンパク質をターゲティングすることを納得できるように証明する。
【００２８】
これらの結果は、グループＩウイルス（ポックスウイルスに対する活性により証明される）；グループＩＶウイルス（ウシコロナウイルスに対する活性により証明される）；グループＶ（エボウイルスにより代表される）および本願の図面に提示されたとおりに試験されたウイルスにより代表されるウイルスの他のファミリーを含む多数のウイルスに対する活性を有することを明らかに示唆する。
【００２９】
最初の結果は、これらの化合物の作用様式に関する情報と一緒になって、これらの化合物がホストのターゲティングと関連した広いスペクトル活性に基づく他のグループのウイルスに対する活性を有することを明らかに示す。これらは、グループＩＩ、ＩＩＩ、ＶＩおよびＶＩＩのウイルスを含むであろう。
【００３０】
ウイルスグループ分け：
グループＩ：ウイルスは、二本鎖ＤＮＡを有しそしてヘルペスウイルス科（例えばＨＳＶ１（口のヘルペス）、ＨＳＶ２（生殖器のヘルペス）、ＶＺＶ（水痘）、ＥＢＶ（エプスタイン−バールウイルス）、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）、ポックスウイルス科（痘瘡）および多くのテール付きバクテリオファージのようなウイルスファミリーを含む。ミミウイルスもこのグループに入れられる。
グループＩＩ：ウイルスは、一本鎖ＤＮＡを有しそしてパルボウイルス科および重要なバクテリオファージＭ１３のようなウイルスファミリーを含む。
【００３１】
【表１】
2011500830.tif 000012
【００３２】
グループＩＩＩ：ウイルスは、二本鎖ＲＮＡゲノムを有し、例えば、ロタウイルス。これらのゲノムは常にセグメント化されている。
【００３３】
グループＩＶ：ウイルスは、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡゲノムを有する。ピコルナウイルス（肝炎Ａウイルス、エンテロウイルス、ライノウイルス、ポリオウイルス、および口蹄疫ウイルスのような周知のウイルスを含むウイルスのファミリーである）、ＳＡＲＳウイルス、肝炎Ｃウイルス、黄熱ウイルスおよびルベラウイルスを含む多くの周知のウイルスがこのグループで見いだされる。
【００３４】
グループＶ：ウイルスは、ネガティブセンス一本鎖ＲＮＡゲノムを有する。致死的なエボラおよびマールブルグウイルスは、インフルエンザウイルス、はしか、ムンプスおよび狂犬病と共にこのグループの周知のメンバーである。
【００３５】
【表２】
2011500830.tif 000013
2011500830.tif 000014
【００３６】
グループＶＩ：ウイルスは、一本鎖ＲＮＡゲノムを有しそして逆転写酵素を使用して複製する。レトロウイルスは、このグループに含まれ、ＨＩＶはそのメンバーである。
【００３７】
グループＶＩＩ：ウイルスは、二本鎖ＤＮＡゲノムを有し、そして逆転写酵素を使用して複製する。肝炎Ｂウイルスはこのグループに見出されうる。
【００３８】
本発明者等は、ウイルス増殖のために必要なホスト機構の多くは、哺乳動物又は真核生物種間で高度に保存されているターゲットを利用することを発見した。結果として、これらの化合物は、ヒトおよび獣医学的ウイルス疾患に対する用途を有することができる。これらのウイルス疾患は、ＰＲＲＳウイルス、ブタもしくはウシサーコウイルス、ブタもしくはウシコロナウイルス、ブタもしくはウシＲＳＶ、ブタ、ウシもしくはニワトリインフルエンザ、ＥＩＡＶ、ブルータング又は口蹄疫（ＦＭＤ）ウイルスを含むが、それらに限定されない。
【００３９】
あるウイルスは、より慢性疾患の原因でありそして罹患率又は死亡率はウイルスの存在に関係する。これらの疾患は、肝細胞癌（ＨＢＶ又はＨＣＶと関連している）、慢性疲労症候群（ＥＢＶと関連している）およびウイルス感染と関連した他の疾患を含む。ＦＩＧ−１０３化合物は、これらのウイルス関連疾患およびウイルス自体の処理において有効であろう。
【００４０】
ＦＧＩ−１０３化合物は、単一ウイルス病原体（例えばＨＩＶ又はＨＢＶ）又はその組み合わせ（ＨＩＶおよびＨＢＶ）の処理又は防止（予防）のために使用されうる。同様に、これらの個々の又は広いスペクトル適用は、上記したウイルスグループのいずれか又はすべてを含意することができる。
【００４１】
他の方法は、ヒトおよび動物における１種以上のウイルスと関連したある適応症(indication)のための化合物の使用であることができる。例えば、これらの化合物は、上記したグループからの病原体の１種以上により引き起こされうる呼吸器ウイルス感染の予防又は処理のために使用することができる。同様に、これらの化合物は、１種以上の血液媒介性病原体(blood-borne pathogen)（例えば、ＨＩＶおよび／又はＨＢＶおよびＨＣＶ）に対する用途を有することができる。
【００４２】
化合物は、ヒトにおける急性又は慢性のウイルスの予防、処理又は維持のための用途を有することができる。急性用途は、ウイルス感染の短期間予防また処理を含み、その例は、インフルエンザ、ロタウイルス又はフィロウイルス感染を含む。慢性用途は、生殖器ヘルペスで観察されるような反復性の突然の増加又はまれにしか起こらない突然の増加（帯状ヘルペス(shingles)期間中の帯状疱疹(zoster)感染と関連した突然の増殖などの）を含む。同様に、慢性ウイルス感染について低いレベルのウイルスロードを維持するための長期にわたり処理を意図することができる（例えば、ＨＩＶ、ＨＢＶ又はＨＣＶ処理ための）。もちろん、ｉｎ−ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方において多数のウイルスに対して予防的におよび／又は治療的に有効な保護を示す、本明細書に記載のアッセイを使用して与えられた化学構造式に応答する他のＦＧＩ１０３化合物の活性を評価することができる。
【００４３】
ＦＧＩ−１０３化合物７２３
図１９は、２−［２−（５−カルバミミドイル−ベンゾフラン−２−イル）−ビニル］−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボキサミジンとしての化合物７２３を同定する。図１９に示されたとおり、この化合物は、ｉｎ−ｖｉｔｒｏで、異なるファミリーから選ばれた多様なウイルスに対して顕著に低い投薬量レベルで有効であることが証明された。この同じ化合物は、予防的に（チャレンジの時の又はチャレンジの前に）投与されようと治療的に（チャレンジ後にのみ投与される）投与されようと、致死的チャレンジに対して哺乳動物（マウス）に対するｉｎ  ｖｉｖｏで１００％保護を与えることが証明された。それは、２〜４時間のオーダーに対する哺乳動物モデルにおけるｔ１／２を示しそして良好な安全性指数有する。この化合物に関する試験は連続する。それは、化学的には、上記したＹ−Ｘ−Ｙ１に適合する。
【００４４】
種々の疾患であって、それに対してこの化合物をあるフォーマットで試験した種々の疾患が図２０に記載されている。すべてのウイルスに対するすべてではない試験が完了されているが、この化合物、７２３は、種々のファミリーから選ばれたウイルスのスペクトルに対して広いベースの活性を示す。行われた試験の１つの例として、図２１において、パラインフルエンザおよびＲＳＶを含むパラミクソウイルスのグループに対するアッセイはｉｎ−ｖｉｔｒｏで完了した。このアッセイの終点は、ある精密なスケールの力価測定よりはむしろ細胞死であるが、７２３がウイルスチャレンジに対する高度の保護を与えるのに有効であることが明らかに示され得、これは、ウイルスに感染しているか又はこのようなウイルスに脅かされている哺乳動物ホストを処理するのにこの化合物を使用することができるという結論を支持する。試験されたウイルスの大部分に関すると同じく、この化合物は、入手可能なすべての血清型に対して同様な性能を示し、主要な血清型のみを処理するのにしばしば注文仕立ての先行技術の努力とは重要な違いを示した。
【００４５】
肝炎Ｂウイルス（ＨＢＶ）を処置するのに７２３のナノモルレベルでの有効性は、図２２に記載されている。ＨＢＶは世界の人口の約１／３に感染しており、これまで唯一の知られている処置は支持ステップであり、この疾患は予防接種によってのみ回避される。グラフは、見出されたウイルスコピーの数の減少の用量応答方式での例示を与える。細胞は７２３により処置又は保護されるからである。ＨＢＶは、肝臓の硬変などの慢性疾患と関連したウイルスの１つである。硬変は種々のソースにより引き起こされうるけれども、ＨＢＶ母集団を減少させそしてＨＢＶ感染を処理することは、ＨＢＶ病人における硬変のより有効な介入および阻害を可能とするであろう。
【００４６】
デング熱並びに肝炎Ｃウイルスおよびウエストナイルウイルスなどの類似した他のウイルスも、７２３の投与により処理される。図２３に示されたアッセイで使用された細胞は、ＤＣ−Ｓｉｇｎ細胞であり、そしてチャレンジに直面した感染した細胞の数は、７２３で処置されるとき、有効量の７２３が投与されるとき激烈に下がる。デング熱は、ある重要なウイルスである。何故ならば、「バイオテロリズム」脅威および、したがってそれを処理するのに利用可能な手段を構成するので、それは国家安全保障の争点およびアフリカおよび熱帯地方の多くの全体にわたる健康の脅威となるからである。デング熱は、４つの主要な血清型により特徴付けられ、−過去において、これらの血清型は、予防接種を無効にするのに十分に異なっていて、−交差血清型保護(cross-serotype protection)がなく、これは多数の血清型流行のための機会を与える。図２３に示されたとおり、７２３は、すべての４つのデング血清型に対して有効でありそして予防的又は治療的に投与され得、これは、このウイルスの処理における劇的な進歩を与える。
【００４７】
最も劇的で恐怖のウイルス侵入体の中でも、バイオテロリズムの脅威として最も広く同定されたウイルス侵入体は、エボラおよびマールブルグのような出血熱ウイルスである。これらのウイルスに対するｉｎ−ｖｉｔｒｏ試験は、相対的に低い投薬量で１００％阻害を示した。ＦＧＩ−１０３化合物ファミリーのこのメンバーについてのＥＣ５０値は、顕著に低い用量、０．０５０uM以下である。
【００４８】
ｉｎ−ｖｉｔｒｏでウイルスチャレンジに対して有効であることが示された多くの化合物は、ｉｎ  ｖｉｖｏでは、効力を失うか又は同様な予防的もしくは治療的有効性を示さない。これに対しては種々の理由があり、−基本的には、哺乳動物系は複雑であり、−どんな経路の投与が使用されても、ｉｎ−ｖｉｔｒｏでしばしば観察される同じタイプの抗ウイルス有効性をｉｎ  ｖｉｖｏで送達することに基本的な障害がある。しかしながら、図２５に示されたとおり、化合物７２３は、ｉｎ  ｖｉｖｏで劇的に有効である。１０匹のマウスにＩＰ投与されると、７２３は、チャレンジの時（ゼロ日）ならびに２日目および５日目に投与されると、１０mg／kgで完全な保護を与えた。対照的に、活性作用物質７２３のないビヒクルは１００％近い死亡率を経験した。
【００４９】
重要なことには、図２６に示されたとおり、感染の１日目に１０mg／kgの単回投与は、チャレンジされたマウスに対する９０％保護を与え、これは治療的および予防的有用性を証明する。その半分の投薬量、５mg／kgにおいてすら、生存率は２５％レベルであったが、７２３不存在のビヒクルは１００％死亡率を与えた。図２７は、ある方法ではより顕著ですらあり、そして感染の４日目、即ち、チャレンジ（マウスに適合したＥＢＯＶによる接種）の４日後に、１０mg／kgレベルで単回の投与の有効性を証明する。明らかに、化合物７２３は、治療的および予防的にウイルス感染を処理する点で重要な好機を与える。
【００５０】
図２８に示されたとおり、ｉｎ  ｖｉｖｏでの同じ有効性が、他のバイオテロリズムの脅威、マールブルグウイルスに対して証明される。エボラの場合と同じく、０、２および５日目の１０mg／kgの処理は、生存率として測定して１００％保護を与えた.明らかに、化合物７２３およびＦＧＩ−１０３ファミリーの化合物の多くのメンバーは、ｉｎ−ｖｉｔｒｏで得られると同じ種類のｉｎ  ｖｉｖｏでの活性を示す。
【００５１】
哺乳動物、特にヒトに投与するための予防的又は治療的作用物質を開発するのに重要なバラメーターは、血清濃度としてしばしば測定される、作用物質が血液中に残存する時間である。０時間および１２時間の時点で７２３、１０mg／kgを受け取るマウスでの７２３の血清濃度の時間的経過が図２９に示される。示されたとおり、血清濃度レベルは急速に低下し、２時間のｔ１／２を与える。４時間までに、血清濃度は、エボラでＥＣ５０より低く下がり、ＲＳＶおよびＰＩＶでは、８時間＋までにＥＣ５０より低く下がる。更に、示されたとおり、この化合物は、これらのウイルスに対して１０mg／kg投与方式で有効な保護を与える。これは、特定の組織で見いだされた作用物質の濃度により説明されうる。かくして図３０において、肝臓および腎臓における濃度は高いが、脾臓および心臓における濃度は相対的に低い。これは、肝臓および腎臓組織をターゲティングするウイルスが、非常に低い用量の７２３によってすらより有効に保護されることを示唆することができる。
【００５２】
図３１および３２は、モルモットモデルで同じタイプのデータを示す。図３１は、モルモットにおいて７２３について４時間のｔ１／２を与えるが、０および２４時間での投与又は１０回の投与は、同様な組織蓄積パターンを示す。したがって、この作用物質は、肺、肝臓および腎臓をターゲティングするウイルスに対して特に有効でありうる。
【００５３】
ある範囲のウイルスに対する多数の哺乳動物ホストにおける感染を治療するのに有効な、検討されたタイプの作用物質が常に望ましい。ＦＧＩ−１０３ファミリーの化合物は、まさにこのタイプの好機を与える。しかしながら、経口的に摂取されることができそして保護を与えることができる作用物質を提供することは、常に最も望ましい。これは、より広がった分布およびより高度の遂行を可能とし、−患者は接種を必要とする製剤よりもより容易に経口製剤を投与される。７２３および他の１０３化合物の経口投与への適性を証明するために、化合物７２３は、図３３に示されたとおりアミド基をヒドロキシ部分で修飾することにより誘導体化されて、活性作用物質を与えるために消化されるプロドラッグを与える。同じ１０mg／kg投薬量のプロドラッグの投与は、同じ時間枠でＩＰ投与により達成される血清レベル以上の血清レベルを与えた。これは、ＦＧＩ−１０３化合物が同じ又はほぼ同じ有効投薬レベルで、ＩＶ、ＩＭ、ＩＰおよび経口的に投与されうることを強く示す。
【００５４】
安全性は、ヒトを含む哺乳動物に投与されるべき作用物質を製剤化するときの最も重要な考慮事項である。したがって、ＣＣ５０（化合物の細胞毒性の目安）は、基本的に重要なバラメーターである。図３４に示されたとおり、広い種類の細胞に対する細胞に基づくアッセイに基づいて、７２３のＣＣ５０値は安全性閾値より十分に上にある。化合物の安全性自体は、図３５に示されたとおり、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＬＤ５０（致死量）の研究で証明された。有効投薬量以上で、１００mg／kgまで、化合物は十分に許容される。０日に投与された２００mg／kgは致死量を構成した。その値以下では、投薬は、図３５にも示されたとおり、時間に対して重量に対する影響を殆ど及ぼさないかないか又は全然及ぼさない。
【００５５】
グループとしてのＦＧＩ−１０３の化合物は、それ自体すべてが新規化合物ということではない。多くは、薬学的に純粋な状態で又は投与に適当な製剤（薬学的に許容されうる担体中の懸濁剤および溶液剤）において調製されていない。７２３および他のＦＧＩ−１０３化合物の使用は、この種の薬学的調製を容易にする合成方法を必要とする。適当な合成経路が図３６に記載されているが、化合物への他の経路を使用することもできる。使用される物質および実現される収率は、ウイルス感染に対する活性な作用物質として７２３を含む医薬の合成および製剤調製において、優良研究所実施の維持又はＧＬＰを可能とする。
【００５６】
ＦＧＩ−１０３化合物３６５
化合物７２３は、２つの融合した環系を有する上記した一般式Ｙ−Ｘ−Ｙ１の四環化合物である。図３７に示されたとおり、化合物３６５、キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジアミン，Ｎ，Ｎ’−ビス［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３，９−ジメチル−，四塩酸塩（塩として）は、ＦＧＩ−１０３ファミリーの化合物の狭められた式を満足するが、「Ｘ」成分が融合した４環系であるという点で７２３とは明白に異なる構造の他の化合物である。しかしながら、図３７に記載のデータに示されたとおり、化合物３６５は、広い種類のウイルスに対して同じ種類の予防的／治療的有効性を示し、広い種類の細胞中で安全であり、そしてエボラを含む危険なバイオテロリズム脅威ウイルスに対してｉｎ  ｖｉｖｏで１００％保護を与える。この作用物質は、広い種類のウイルスファミリーを横断して、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ラッサ熱ウイルス、ＳＡＲＳ、リフト渓谷ウイルス、ＰＲＲＳ、デング、ウシコロナウイルス、エボラおよびマールブルグウイルスに対して試験されそして効力を示した。この情報のいくらかは、濃度、毒性および安全性情報と共に、図３８に要約されている。示されたとおり、多くの環境において、３６５は７２３より高い活性ですらある。
【００５７】
肝炎Ｃウイルスは、血液媒介性病原体(blood born pathogen)であり、それに対する既知のワクチンは存在しない。ＨＣＶに対する３６５の有効性は図３９に示されており、図３９において、約１uMで、３６５は、Ｈｕｈ７ヒトヘパトーマ細胞でウイルスの完全な阻害（ルシフェラーゼシグナルの不存在はウイルスの不存在を示す）を与えた。３６５は、ＨＣＶに対して１３の安全性指数を与え、したがって、このウイルスに対する強力な作用物質を与える。このウイルスは他の場合には種々の感染後の支持工程により取り組まれるが、しかし慢性肝臓疾患とも関連している。
【００５８】
化合物７２３は、デング熱に対して試験された。この重要なウイルス且つ強力な恐怖の兵器も、図４０に示されたとおり、非常に低いレベルで化合物３６５によって強く阻害される。また、以前の処理剤を困惑させたデング熱の１つの局面、血清型の実質的な変動は、ＦＧＩ−１０３ファミリー化合物にとっては重要ではない。７２３と同様にそして図４０に示されたとおり、３６５は、顕著に類似した結果で、デング血清型の各々に対して有効である。
【００５９】
エボラは、もちろん評価されるべき重要なウイルスである。エボラは、潜在力のあるバイオテロリズム脅威を構成しそして自然の保護を持たないヒトが急派されうる世界の地方に特有である。３６５は、エボラウイルスの強力な阻害を示す。図４１に示されたとおり、Ｖｅｒｏ細胞に基づくアッセイにおいて、３６５は、１０uMより少ない低いレベルで１００％阻害を与えた。エボラは、狂犬病およびはしかならびにパラミクソおよびニューモウイルスに対する類似性を有し、ここでも、広い種類のウイルスの処理における作用物質としての３６５の広い適用性を示す。
【００６０】
化合物７２３で述べたとおり、可能性のある処理および治療に関してＨＩＶほど注目をされたウイルスは多分なかった。図４２において、グラフおよび表により提示されたデータは、３６５がＨＩＶの強力な阻害剤であることを示し、適度の濃度で１００％阻害を達成する。この値は、３６５のＣＣ５０値よりはるかに低く、ＨＩＶに対してターゲティングされた強力な薬物においては珍しい大きな安全性指数を与える。
【００６１】
ヒトに感染するウイルスに対する抗ウイルス剤の開発は特に重要である。毎年数十億ドルの家畜を殺すＰＲＲＳおよび同様なウイルスに対する有効性も同様に重要である。図４３は、このウイルスの阻害における３６５の高度の有効性を示す。たったの３．２のＥＣ１００で、これは、強い潜在力のある作用物質である。
【００６２】
化合物３６５は、リフト渓谷熱ウイルスに対する同様な有効性を示し、この化合物についてＣＣ５０指数よりはるかに低い安全値で１００％阻害（ウイルス粒子放出ゼロ）を与える。たったの０．３７uMのＥＣ５０で、この作用物質は、ＲＶＦＶの処理のための３０という大きな安全性指数を与える。このデータは、図４４に示されており、図４４は、Ｖｅｒｏ細胞アッセイの結果をグラフおよび表により与える。同様なアッセイにおいて、マールブルグウイルスおよびラッサ熱ウイルスの両方とも、感染したＶｅｒｏ細胞に投与された３６５により阻害されることが示された。ヒトおよび哺乳動物疾患の処置のための広い基盤を持った抗ウイルス剤および抗バイオテロリズム剤の両方として３６５の適性を証明するこの試験のデータは、図４５および４６に示される。
【００６３】
ＳＡＲＳは、予防又は支持的処理以外の処理のない、中国およびアジアの地域で猛威をふるったウイルスである。関連したウイルス、ウシコロナウイルスは、商業的脅威を与える。両方とも３６５による安全性バリアーを横断することなく３６５により阻害される。より強力な作用物質は典型的には安全性がより少ないが、３６５は、ＦＧＩ−１０３ファミリーの他の化合物と同様に、安全性を犠牲にすることなく、ヒトおよび商業的に重要な哺乳動物におけるウイルスを処理するための好機を与える。
【００６４】
化合物７２３と同様に、化合物３６５は、ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ−ｖｉｔｒｏで有効であることも示された。上記したとおり、この時点でエボラを治療的処理する方法は知られていない。最も多くの「処理」は、身体の自然の免疫系がウイルスに向けられることを期待した支持的手段からなる。図４８に示されたとおり、５mg／kgの低い投薬量で、３６５は、マウスに適合したエボラウイルスによる１０匹のマウスのチャレンジの１日後に投与されるとき１００％保護を与える。重要なことに、図４８に示されたとおり、この作用物質は、このように投与されるとき典型的な用量応答曲線を示し、減少した投薬量では減少した保護を与える。
【００６５】
３６５は、（０．２および５日目に投与されるとき）ポックスウイルスでチャレンジされたマウスについての生存結果を最終的には改善しないけれども、それは生存時間を一様に延長した。上記したとおり、生存時間を延長することは、既知の阻害剤を持たない作用物質を処理するのに重要であり、身体の自然の防御が侵入者に対して作用するための時間を与える。ポックスウイルスに対する生存時間を延長することにおける３６５の有効性は、図４９に記載されている。
【００６６】
７２３の場合と同じく、３６５は、ヒトおよび商業的もしくは獣医学的に重要な哺乳動物の処理を意図する。したがって、安全性は、主要な関心事である。図５０に示されたとおり、３６５の活性を考えて、可能性のある投薬量レベルより十分に上の量で、２５mg／kgまでで、すべての動物（マウス）は生存しておりそしてそれらの体重は３６５の投与により有意に影響を受けなかった。
【００６７】
７２３と同様に、いったん投与されると、３６５は、相対的に急速に去り、ＢＡＬＢ／ｃマウスに与えられた５mg／kg用量の後の血清濃度の時間経過は図５１に示される。図５２は、今回ＰＢＭＣに５uM用量の投与後の時間経過に対するサイトカインレベルも示す。サイトカインレベル混乱は、潜在的に危険な薬物の指示でありうる。図５２に示されたとおり、主要なサイトカインについてのサイトカインレベルは作用物質を含まないビヒクルに応答して示されたそれと実質的に異ならない。
【００６８】
上記したとおり、広い種類のウイルスに対して３６５は治療剤としておよび予防的に強い抗ウイルス活性を与える。薬学的に純粋な且つ許容されうる３６５のソースを与えるためおよび薬学的に適切な懸濁剤および溶液剤を含む適当な製剤を調製するために、ＧＬＰにしたがって実施されうる合成スキームが提示されなければならない。このようなスキームは図５３に記載されている。短い４つの工程手順は、広範囲のウイルスの強力な阻害剤、３６５を生成する。
【００６９】
ＦＧＩ−１０３化合物５１０
化合物５１０、ベンゼンカルボキシミドアミド，４，４’−（２，５−チオフェンジイル）ビス（塩として二塩酸塩）は、それがあるときはＦＧＩの「バックアップ」１０３化合物と呼ばれるように７２３に類似した性能を有する。そして更に、図５４に示されたとおり、それは７２３および３６５とは構造が非常に異なる。それは、４環の代わりに、Ｓがヘテロ環原子である非融合三環構造を使用する。しかしながら、それは、上記式Ｙ−Ｘ−Ｙ１に合致し、そしてこのクラスの多くのメンバーと同様に、抗ウイルス剤としての強力な活性を示す。それは、エボラウイルス、ラッサ熱ウイルス、牛痘、ウエストナイルウイルス、ＲＳＶおよびＰＩＶを含む広い種類のウイルスに対してｉｎ−ｖｉｔｒｏ試験で示されたとおり有効であり、そして広い種類の細胞において使用されるとき安全であることが示された。華々しいことに、上記した他のＦＧＩ−１０３化合物と同様に、それは予防的又は治療的に使用されて、エボラウイルスによる致死的チャレンジに対して１００％保護を与える。それは、マールブルグウイルスに対しても保護を与える。ＦＧＩ−１０３化合物以外には、他の作用物質は、強力なウイルス病原体に対してそんなに有効であることが証明されていない。このデータは、図５５の表に要約されており、多くのウイルスファミリーから選ばれた広い種類のウイルスに対するこの作用物質の使用の効能および安全性の両方を示す。
【００７０】
前記したとおり、エボラおよびマールブルグウイルスなどの出血熱ウイルスは、恐怖の兵器としての危険な好機を与える。したがって、ヒトにより安全に許容される阻害剤の提供は、重要な目標である。５１０は、その姉妹化合物と同様に、図５６に示された、細胞生存率として測定されたとおり、これらのウイルスの１００％阻害を与える。これらの細胞に基づくアッセイは、Ｖｅｒｏ細胞で行われる。この性能は、５１０が、はしか、狂犬病、ＲＳＶ、ＰＩＶおよびＨＭＰＶ（ヒトメタニューモウイルス、そしてＲＮＡウイルス）を含む、他のＦＧＩ−１０３化合物が活性を測定また示唆した同じウイルスファミリーに対して有効であることを強く示唆する。
【００７１】
７２３および３６５の試験で示されたとおり、ポックスウイルスの阻害は、重要でありそして通常困難な目標である。５１０は、適度の投薬量でＶｅｒｏ細胞で低いウイルス力価を伴う、ポックスウイルスの強い阻害を与える。図５７に示された試験は、約０．２５０uMの低いＥＣ５０値および大きな安全性指数を与える。ＨＣＶの同様な阻害が、７２時間の時間経過に対する約３０ｕＭでゼロとなるウイルス力価により図２８に示される。ウイルス活性の不存在を証明するために、ＨＣＶｎ５Ａタンパク質の還元生成物を証明するブロッティングを行い、そして図５８に示す。ＨＣＶと同様に、デングおよびウエストナイルウイルスのような関連したウイルスは、だいたい同じ条件で５１０により処理に供されるべきである。ウエストナイルウイルスに対する有効性は、１００％阻害を示す図５９に示されたデータに反映されている。姉妹化合物と同様に、５１０は、ラッサ熱ウイルスおよびパラミクソウイルスに対して有効であることも示され、細胞に基づくアッセイデータは、それぞれ図６０および６１に示されている。
【００７２】
７２３および３６５と同様に、もし５１０が有効な抗ウイルス剤であろうとするならば、ｉｎ−ｖｉｔｒｏ試験により予測される活性に並行するｉｎ  ｖｉｖｏ活性の証明は重要である。５１０は、同じウイルスターゲットに対する同じ種類のｉｎ  ｖｉｖｏ保護を実際に与え、マールブルグウイルスのチャレンジの時点でおよびマールブルグウイルスのチャレンジの２日および５日後に１０mg／kgで投与されるとき１００％保護を与える。図６２に示されたこのデータは、抗ウイルス剤としての５１０の有効性を明らかに証明する。治療的に使用されて、感染の２日後に投与されると、５１０は図６３に示されたとおり、用量応答方式でエボラウイルスに対して保護を与えた。
【００７３】
ＦＧＩ−１０３化合物の他のメンバーと同様に、５１０は、普通に入手可能な出発物質
から簡単に合成することができ、これは、薬学的に純粋な化合物ならびに薬学的に許容されうる担体中の溶液剤および懸濁剤を含む薬学的に許容されうる調製物を提供することを実施可能とする。この化合物の簡単な合成スキームは図６４に示される。
【００７４】
ＦＧＩ−１０３化合物−可能性のある作用方法−カスパーゼ阻害
ＦＧＩ−１０３化合物がそうであるが、試験および構造により同定された最初の化合物がそのタイプの最善の可能な化合物であること、は稀である。小さな置換基および置換付加および取り去り(subtractions)を包含するための出発化合物の誘導体化は、１種以上の哺乳動物ホストにおける１種以上のウイルスの処理において改良された有効性を与えることができるということがしばしば言える。誘導体化の実際の例は、下記する。しかしながら、可能性のある作用方法の知識は、誘導体化の正しいコースに当業者を案内することができる。本発明者等はこの理論により束縛されないが、ＦＧＩ−１０３化合物は、ウイルス粒子組み立てに必須のある種のカスパーゼ酵素（プロテアーゼ）を選択的に阻害することにより作用する、−即ち、ウイルスの普通のライフサイクルにおいて、そのサイクルにおいて遅く介入し、ウイルスが成熟すため又は細胞表面に運ばれるのに必要なあるプロテアーゼ作用を妨害することにより作用する、という証拠が増加している。ウイルスが表面への途中でプロテアーゼをハイジャックする重要な消化工程がＦＧＩ−１０３化合物によりどうも阻害されると結論することは非合理的ではない。
【００７５】
カスパーゼは、従来、アポトーシスおよび炎症のエフェクターとしてのそれらの役割と関連して研究された。しかしながら、最近の証拠は、細胞増殖および細胞サイクル進行などの他の細胞プロセスにおけるカスパーゼの追加の役割も指摘している。例えば、Los M.,et al., caspases: more than just killers ? Trends Immunol. 22(1): 31-4(2001): Algeciras-Schimnich A, et al., Apotosis-independent functions of killer caspases. Curr Opin Cell Biol. 14(6): 721-6(2002); launay S., et al., Vital funcyions for lethal caspases. Oncogene 24(33): 5137-48(2005。本発明について部分的に本明細書で述べられたＦＧＩの最近の研究は、カスパーゼのプロテアーゼ活性がウイルスの感染サイクル期間中ウイルスにより利用される、というカスパーゼの更に他の役割を示唆する。実際に、カスパーゼ活性は、ＦＧＩ−１０３カスパーゼ阻害剤がウイルスの首尾よくホスト細胞に感染する能力を妨げおよび／又は妨害することを示す、本明細書に記載の証拠に照らして、種々のウイルスによるウイルス感染にとって重要であるか又は必須であると思われる。したがって、カスパーゼを阻害するための種々の組成物および方法がウイルス感染および疾患を予防、処理および／又は管理するのに有効でありうることは、一般に本明細書において進行される。
【００７６】
試験されたＦＧＩ−１０３化合物の多くは、カスパーゼ２、３および８を選択的に阻害しそしてカスパーゼＩをより少ない程度に阻害する。ファミリーとしてのこの阻害についての総合的値は、図９のグラフに記載されている。これは、図８で得られそして提示されたデータと共に、ＦＧＩ−１０３化合物の抗ウイルス作用は、ウイルスタンパク質合成が完了した後、又は少なくともすべての主要ウイルスタンパク質合成の後、しかしＴＳＧ１０１に結合することによる細胞の表面への提示の前に、ウイルスライフサイクルに介入することを強く示す。文献で示されたとおり、ＴＳＧ１０１は、細胞から脱出するためにウイルスにより使用されるＥＳＣＲＴタンパク質のファミリーのメンバーである。ＴＳＧ１０１−ウイルス相互作用の阻害は、ウイルス出芽を阻害するのに有効である。ＴＳＧ１０１指向抗体(TSG-101-directed antibodies)の使用によるこの阻害現象は、U.S.Patent Application Serial Number 10/675,979に開示および特許請求されている（許可された）。その出願における抗ウイルス剤、抗体、の性質は、本願のＦＧＩ−１０３化合物の小分子作用物質とは極めて異なっているが、許可された出願は、ウイルスとＴＳＧ１０１との相互作用の説明を提示しており、本発明者等がＴＳＧ１０１とのウイルスによる複合体化の前に起こる抗ウイルス活性に向けることを可能とする。
【００７７】
ＦＧＩ５１０によるカスパーゼ阻害のプロフィルは、図６５に特定的に与えられているが、やはり、カスパーゼ２、３および８の選択的阻害およびカスパーゼ１のある程度の阻害を示す。この選択的阻害は、図６６において表の形態で与えられる。例えばカスパーゼ９と比較して阻害されたカスパーゼターゲットのＩＣ５０値の差に留意されたい。これは、カスパーゼ結晶構造の知識と組み合わされて、他のカスパーゼにまさるカスパーゼ８およびカスパーゼ３の選択的阻害を説明するのを助ける図６７に示されたとおりの、化合物５１０およびＦＧＩ−１０３化合物ファミリーの可能な「適合」（fit）の仮説をたてることができる。この適合は、Ｙ−Ｘ−Ｙ１構造として表されたＦＧＩ−１０３ファミリーの化合物を、誘導体化に依存してぴったり合わせる。今回は抗ウイルス剤として化合物７２３を使用して同様なモデル化実習が図７１に示される。５１０の適合と同様に、これは、７２３がウイルス／カスパーゼ相互作用のために必要な部位をブロックして、ウイルス粒子成熟を阻害することを示唆する。
【００７８】
図７は、これらの化合物についてウイルス粒子増殖に関するデータを一般的に示し、そして図６８は化合物５１０について特定的に示し、細胞が単離された粒子に感染すると、ＦＧＩ−１０３化合物不存在下では、ビヒクルはウイルス増殖をブロックできないが、ＦＧＩ−１０３化合物および特に５１０は、感染性ウイルス粒子の形成を実際に阻害することを証明する。やはり、これは、ＦＧＩ−１０３化合物がウイルスタンパク質合成後、しかし表面に運ばれる前にウイルスのライフサイクルに介入して、阻害されたウイルスが感染した細胞を脱出することができる前に必要な重要な酵素による消化工程を妨害することを強く示唆する。
【００７９】
ＦＧＩ−１０３化合物による介入のタイミングは、５１０を使用して作成された図６９に記載のデータに反映されるＭＤＣＫ細胞アッセイから得られたデータにより強化される。ＲＳＶの感染経路およびタイミングは周知であり、右下コーナーに記載されている。分かりうるとおり、ウイルス組立期間中の任意の時点で、ＦＧＩ−１０３化合物の投与は、ウイルスが表面に運ばれそして出芽するような時間まで（１８時間後等）、ウイルス粒子形成を阻害する。このアイデアは、７２３の存在下の誘導されたアポトーシスの阻害を反映する、図７０に記載のデータにより強化される。したがって、ウイルス感染を阻害又は処理する方法は、成熟のためにウイルスにより使用されるカスパーゼ、特にカスパーゼ８、３および２を選択的に阻害するが他の内因性カスパーゼ活性（細胞に有害であろう）を阻害しない作用物質を投与することにある。
【００８０】
誘導体化−例としてＦＧＩ−１０３化合物３６５
上記したとおり、特定の作用の方法の同定および所望の介入（哺乳動物におけるウイルス感染を予防的又は治療的に処理するための選択的カスパーゼ阻害）を考えると、効能を改良するため、安全性又は耐性を改良するため、化合物を特定の状況、投与方式又はウイルスに適応させる等のために、ＦＧＩ−１０３化合物ファミリーの１つ以上のコア分子を誘導体化することが望ましくなりうる。誘導体化自体は当業者に知られているよく確立された方法である。しかしながら、ＦＧＩ−１０３化合物をいかに誘導体化することができるかを更に証明するために、化合物３６５を下記するとおり一連の誘導体化に供した。これらは、改良されたもしくは選択的活性の化合物を同定するためではなくてむしろＦＧＩ−１０３の誘導体化し易さを証明するために与えられる。
【００８１】
３０６３６５（ＢＧ９）およびその誘導体（ＢＧ１１、ＢＧ１５、ＢＧ１６、ＢＧ１７、ＢＧ２０）のための合成経路
機器
ＩＲ：Thermo-Scientific Nicolet 6700 FT-IR Diamond Crystal
ＮＭＲ：１Ｈおよび１３ＣＮＭＲスペクトルは、
Varian Gemini-200分光計（それぞれ２００および５０MHzで）および
Bruker Ultrashield Advance III 分光計（それぞれ５００および１２５MHzで）で、内部標準としてＴＭＳ又はＴＭＳ−Ｎａ塩を使用して指示された溶媒において、記録された。
化学シフトは、ppm（a）値で表わされそしてカップリング定数（Ｊ）はHzで表わされる。
合成されたた化合物のＥＳＩ  ＭＳスペクトルは、キャリング溶媒溶液として０．２％ＨＣＯＯＨを伴うＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＝１／１を使用して陽イオンモードでAgilent Technologies 6210 Time-of-Flight LC/MS機器で記録された。サンプルは、純粋なアセトニトリル（ＨＰＬＣグレード）中に溶解した。選ばれた値は下記のとおりであつた：
毛管電圧４kV；ガス温度３５０℃；乾燥ガス１２ｌ分−ｌ；噴霧器圧力４５psig；フラグメンテーター電圧７０V。
【００８２】
一般的方法
すべての工程は、少なくとも二重に行われた。ターゲット化合物は、ＩＲ、１Ｈおよび１３ＣＮＭＲスペクトル、ＨＰＬＣ−ＥＳＩＭＳスペクトルにより特徴付けられた（塩基および塩）。塩の融点＝＞２８０℃であった。すべての塩は水溶性であった。
【００８３】
ＢＧ９の合成
【化１０】
2011500830.tif 000015
【００８４】
無水エタノール２５０mL中の１，５−ジアミノナフタレン１（５．０ｇ，３１．６mmol）、アセト酢酸エチル２（４０mL，３１３．５mmol）およびｐ−ＴｓＯＨ（２．３８mg）の懸濁液を、分子篩（４Å）を充填されたディーン．シュタークトラップを備えた二口丸底フラスコ中で加熱還流した。撹拌しながら１２０℃の温度で油浴中で４時間加熱した後、混合物を室温に冷却しそして蒸発乾固した（冷却すると沈殿が生じる）。粗生成物をエタノールで摩砕し、そして沈澱をブフナー漏斗上に集め、減圧下に乾燥して、１１．３９g（９４％）の収率で生成物としてＢＧ５（２−ブテン酸，３−[[５−[[（Ｅ又はＺ）−３−エトキシ−１−メチル−３−オキソ−１−プロペニル]アミノ]−１−ナフタレニル]アミノ］−，エチルエステル，（Ｅ又はＺ）−）を得た。
【表３】
2011500830.tif 000016
ＢＧ５（２．００ｇ、５．２３mmol）およびＥａｔｏｎ試薬（５．５mL、２９．１mmol、市販、Aldrich）の混合物を９０℃で５時間撹拌した。反応混合物を氷浴中で５℃に冷却し、そして飽和した氷冷Ｎａ２ＣＯ３溶液（３１ｇＮａ２ＣＯ３／１００mLＨ２Ｏ）に注意深く注いだ。固体をろ過し、ろ液を水（３×５mL）、ＥｔＯＨ（１０mL）で洗浄し、５０℃で減圧下に乾燥して１．４２７６ｇ（９４％）の収率で生成物としてＢＧ６（キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジオン，４，１０−ジヒドロ−３，９−ジメチル−）を得た。
【表４】
2011500830.tif 000017
ＰＯＣｌ３（２８．３８mL、３０９．１０mmol）中のＢＧ６（１．３７mg、４．７３mmol）の懸濁液を６時間９０℃で加熱し、１２０℃で１４時間続行した。室温に冷却すると、混合物を氷／水混合物にゆっくりと注ぎ、そして濃厚水性ＮＨ３をｐＨ９まで加えた。形成された沈澱をろ過しそしてＨ２ＯおよびＥｔＯＨでよく洗浄した。生成物ＢＧ７（キノ［８，７−ｈ］キノリン，１，７−ジクロロ−３，９−ジメチル−）を減圧下に６０℃で乾燥して１．４４４２ｇ（９３％）の収率を得た。
【表５】
2011500830.tif 000018
Ｍｅ２Ｎ（ＣＨ２）３ＮＨ２  ６mL中のＢＧ７（１６０mg、０．４９mmol）の懸濁液をＡｒ下に４８時間撹拌還流した。次いで混合物を氷冷水４０mLに注いだ。得られた固体をろ過し、ケークをＭｅＯＨ（５mL）で洗浄しそして減圧下に４５℃で乾燥して、５７９．４mg（８６％）の収率でＢＧ８（キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジアミン，Ｎ１，Ｎ７−ビス［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３，９−ジメチル−）を得た。
【表６】
2011500830.tif 000019
ＢＧ８（３００mg、０．６５mmol）をＭｅＯＨ１０mL中に懸濁させ、そして反応混合物を激しく撹拌した。８．６MＥｔＯＨ／ＨＣｌ溶液１５mLを加え、撹拌を室温で４８時間続けた。溶媒を減圧下に除去し、得られた固体を９６％ＥｔＯＨ２１mLに懸濁させ、ろ過し、そしてケークを９６％ＥｔＯＨ９mLで洗浄した。減圧下に４５℃で乾燥すると、ＢＧ９（キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジアミン，Ｎ１，Ｎ７−ビス［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３，９−ジメチル−，テトラクロリド）が得られた（３４２．６mg；８７％）。
【表７】
2011500830.tif 000020
【００８５】
ＢＧ１１の合成
【化１１】
2011500830.tif 000021
【００８６】
無水エタノール２５０mL中の１，５−ジアミノナフタレン１（５．０g，３１．６mmol）、アセト酢酸エチル２（４０mL，３１３．５mmol）およびｐ−ＴｓＯＨ（２．３８mg）の懸濁液を、分子篩（４Å）を充填されたディーン．シュタークトラップを備えた二口丸底フラスコ中で加熱還流した。撹拌しながら１２０℃の温度で油浴中で４時間加熱した後、混合物を室温に冷却しそして蒸発乾固した（冷却すると沈殿が生じる）。粗生成物をエタノールで摩砕し、そして沈澱をブフナー漏斗上に集め、減圧下に乾燥して、１１．３９g（９４％）の収率で生成物としてＢＧ５（２−ブテン酸，３−[[５−[[（Ｅ又はＺ）−３−エトキシ−１−メチル−３−オキソ−１−プロペニル]アミノ]−１−ナフタレニル]アミノ］−，エチルエステル，（Ｅ又はＺ）−）を得た。
【表８】
2011500830.tif 000022
ＢＧ５（２．００ｇ、５．２３mmol）およびＥａｔｏｎ試薬（５．５mL、２９．１mmol、市販、Aldrich）の混合物を９０℃で５時間撹拌した。反応混合物を氷浴中で５℃に冷却し、そして飽和した氷冷Ｎａ２ＣＯ３溶液（３１ｇＮａ２ＣＯ３／１００mLＨ２Ｏ）に注意深く注いだ。固体をろ過し、ろ液を水（３０×５０mL）、ＥｔＯＨ（１０mL）で洗浄し、５０℃で減圧下に乾燥して１．４２７６ｇ（９４％）の収率で生成物としてＢＧ６（キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジオン，４，１０−ジヒドロ−３，９−ジメチル−）を得た。
【表９】
2011500830.tif 000023
ＰＯＣｌ３（２８．３８mL、３０９．１０mmol）中のＢＧ６（１．３７mg、４．７３mmol）の懸濁液を６時間９０℃で加熱し、１２０℃で１４時間続行した。室温に冷却すると、混合物を氷／水混合物にゆっくりと注ぎ、そして濃厚水性ＮＨ３をｐＨ９まで加えた。形成された沈澱をろ過しそしてＨ２ＯおよびＥｔＯＨでよく洗浄した。生成物ＢＧ７（キノ［８，７−ｈ］キノリン，１，７−ジクロロ−３，９−ジメチル−）を減圧下に６０℃で乾燥して１．４４４２ｇ（９３％）の収率を得た。
【表１０】
2011500830.tif 000024
Ｅｔ２Ｎ（ＣＨ２）３ＮＨ２  ６mL中のＢＧ７（１６０mg、０．４９mmol）の懸濁液をアルゴン下に１５０℃で５６時間撹拌した。次いで混合物を氷冷水４０mLに注いだ。得られた固体をろ過し、ケークをＭｅＯＨ（５mL）で洗浄しそして減圧下に４５℃で乾燥して、２０８．４mg（８３％）の収率でＢＧ１０（キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジアミン，Ｎ１，Ｎ７−ビス［３−（ジエチルアミノ）プロピル］−３，９−ジメチル−）、融点＝１９２〜１９５℃、を得た。
【表１１】
2011500830.tif 000025
ＢＧ１０（３００mg、０．５８mmol）をＭｅＯＨ１０mL中に懸濁させ、そして反応混合物を激しく撹拌した。８．６M ＥｔＯＨ／ＨＣｌ溶液１５mLを加え、撹拌を室温で４８時間続けた。溶媒を減圧下に除去し、得られた固体を９６％ＥｔＯＨ２１mLに懸濁させ、ろ過し、そしてケークを９６％ＥｔＯＨ９mLで洗浄した。減圧下に４５℃で乾燥すると、ＢＧ１１（キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジアミン，Ｎ１，Ｎ７−ビス［３−（ジエチルアミノ）プロピル］−３，９−ジメチル−，四塩酸塩）が得られた（３０３．５mg；７９％）。
【表１２】
2011500830.tif 000026
【００８７】
ＢＧ１５の合成
【化１２】
2011500830.tif 000027
【００８８】
無水エタノール２５０mL中の１，５−ジアミノナフタレン１（５．０g，３１．６mmol）、アセト酢酸エチル２（４０mL，３１３．５mmol）およびｐ−ＴｓＯＨ（２．３８mg）の懸濁液を、分子篩（４Å）を充填されたディーン．シュタークトラップを備えた二口丸底フラスコ中で加熱還流した。撹拌しながら１２０℃の温度で油浴中で４時間加熱した後、混合物を室温に冷却しそして蒸発乾固した（冷却すると沈殿が生じる）。粗生成物をエタノールで摩砕し、そして沈澱をブフナー漏斗上に集め、減圧下に乾燥して、１１．３９g（９４％）の収率で生成物としてＢＧ５（２−ブテン酸，３−[[５−[[（Ｅ又はＺ）−３−エトキシ−１−メチル−３−オキソ−１−プロペニル]アミノ]−１−ナフタレニル]アミノ］−，エチルエステル，（Ｅ又はＺ）−）を得た。
【表１３】
2011500830.tif 000028
ＢＧ５（２．００ｇ、５．２３mmol）およびＥａｔｏｎ試薬（５．５mL、２９．１mmol、市販、Aldrich）の混合物を９０℃で５時間撹拌した。反応混合物を氷浴中で５℃に冷却し、そして飽和した氷冷Ｎａ２ＣＯ３溶液（３１ｇＮａ２ＣＯ３／１００mLＨ２Ｏ）に注意深く注いだ。固体をろ過し、ろ液を水（３×５０mL）、ＥｔＯＨ（１０mL）で洗浄し、５０℃で減圧下に乾燥して１．４２７６ｇ（９４％）の収率で生成物としてＢＧ６（キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジオン，４，１０−ジヒドロ−３，９−ジメチル−）を得た。
【表１４】
2011500830.tif 000029
ＰＯＣｌ３（２８．３８mL、３０９．１０mmol）中のＢＧ６（１．３７mg、４．７３mmol）の懸濁液を６時間９０℃で加熱し、１２０℃で１４時間続行した。室温に冷却すると、混合物を氷／水混合物にゆっくりと注ぎ、そして濃厚水性ＮＨ３をｐＨ９まで加えた。形成された沈澱をろ過しそしてＨ２ＯおよびＥｔＯＨでよく洗浄した。生成物ＢＧ７（キノ［８，７−ｈ］キノリン，１，７−ジクロロ−３，９−ジメチル−）を減圧下に６０℃で乾燥して１．４４４２ｇ（９３％）の収率を得た。
【表１５】
2011500830.tif 000030
２−ピペリジン−１−イル−エチルアミン３mL中のＢＧ７（２００mg、０．６１mmol）の懸濁液をアルゴンガス下に１７０〜１８０℃で１０時間撹拌した。次いで混合物を氷冷水４０mLに注いだ。得られた固体をろ過し、ケークをＭｅＯＨ５mLで洗浄しそして減圧下に４５℃で乾燥して、２５５mg（８２％）の収率でＢＧ１２を得た。融点＝３０６〜３１０℃；
【表１６】
2011500830.tif 000031
ＢＧ１２（３９０mg、０．７６mmol）をＭｅＯＨ１０mL中に懸濁させ、そして反応混合物を激しく撹拌した。８．６M ＥｔＯＨ／ＨＣｌ溶液１５mLを加え、撹拌を室温で４８時間続けた。溶媒を減圧下に除去し、得られた固体を９６％ＥｔＯＨ２１mLに懸濁させ、ろ過し、そしてケークを９６％ＥｔＯＨ９mLで洗浄した。減圧下に４５℃で乾燥すると、ＢＧ１５（キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジアミン，３，９−ジメチル−Ｎ１，Ｎ７−ビス［２−（１−ピペリジニル）エチル］−，四塩酸塩）が得られた（３４１．６mg；６８％）。
【表１７】
2011500830.tif 000032
【００８９】
ＢＧ１６の合成
【化１３】
2011500830.tif 000033
【００９０】
無水エタノール２５０mL中の１，５−ジアミノナフタレン１（５．０g，３１．６mmol）、アセト酢酸エチル２（４０mL，３１３．５mmol）およびｐ−ＴｓＯＨ（２．３８mg）の懸濁液を、分子篩（４Å）を充填されたディーン．シュタークトラップを備えた二口丸底フラスコ中で加熱還流した。撹拌しながら１２０℃の温度で油浴中で４時間加熱した後、混合物を室温に冷却しそして蒸発乾固した（冷却すると沈殿が生じる）。粗生成物をエタノールで摩砕し、そして沈澱をブフナー漏斗上に集め、減圧下に乾燥して、１１．３９g（９４％）の収率で生成物としてＢＧ５（２−ブテン酸，３−[[５−[[（Ｅ又はＺ）−３−エトキシ−１−メチル−３−オキソ−１−プロペニル]アミノ]−１−ナフタレニル]アミノ］−，エチルエステル，（Ｅ又はＺ）−）を得た。
【表１８】
2011500830.tif 000034
ＢＧ５（２．００ｇ、５．２３mmol）およびＥａｔｏｎ試薬（５．５mL、２９．１mmol、市販、Aldrich）の混合物を９０℃で５時間撹拌した。反応混合物を氷浴中で５℃に冷却し、そして飽和した氷冷Ｎａ２ＣＯ３溶液（３１ｇＮａ２ＣＯ３／１００mLＨ２Ｏ）に注意深く注いだ。固体をろ過し、ろ液を水（３×５０mL）、ＥｔＯＨ（１０mL）で洗浄し、５０℃で減圧下に乾燥して１．４２７６ｇ（９４％）の収率で生成物としてＢＧ６（キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジオン，４，１０−ジヒドロ−３，９−ジメチル−）を得た。
【表１９】
2011500830.tif 000035
ＰＯＣｌ３（２８．３８mL、３０９．１０mmol）中のＢＧ６（１．３７mg、４．７３mmol）の懸濁液を６時間９０℃で加熱し、１２０℃で１４時間続行した。室温に冷却すると、混合物を氷／水混合物にゆっくりと注ぎ、そして濃厚水性ＮＨ３をｐＨ９まで加えた。形成された沈澱をろ過しそしてＨ２ＯおよびＥｔＯＨでよく洗浄した。生成物ＢＧ７（キノ［８，７−ｈ］キノリン，１，７−ジクロロ−３，９−ジメチル−）を減圧下に６０℃で乾燥して１．４４４２ｇ（９３％）の収率を得た。
【表２０】
2011500830.tif 000036
２−ピペリジン−１−イル−プロピルアミン中のＢＧ７（２００mg、０．６１mmol）の懸濁液をアルゴンガス下に１７０〜１８０℃で１０時間撹拌した。次いで混合物を氷冷水４０mLに注いだ。得られた固体をろ過し、ケークをＭｅＯＨ５mLで洗浄しそして減圧下に４５℃で乾燥して、２９３mg（８９％）の収率でＢＧ１３（キノ［８，７−ｈ］キノリン，１，７−ジアミン，３，９−ジメチル−Ｎ１，Ｎ７−ビス［３−（１−ピペリジニル）プロピル］−）を得た。融点＝３０４〜３０７℃
【表２１】
2011500830.tif 000037
ＢＧ１３（４５０mg、０．８３mmol）をＭｅＯＨ１０mL中に懸濁させ、そして反応混合物を激しく撹拌した。ＥｔＯＨ／ＨＣｌ溶液（８．６M）を加え、撹拌を室温で４８時間続けた。溶媒を減圧下に除去し、得られた固体を９６％ＥｔＯＨ（２１mL）に懸濁させ、ろ過し、そしてケークを９６％ＥｔＯＨ（９mL）で洗浄した。減圧下に４５℃で乾燥すると、ＢＧ１６（キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジアミン，３，９−ジメチル−Ｎ１，Ｎ７−ビス［３−（１−ピペリジニル）プロピル］−，四塩酸塩）が得られた（５０９．１mg；８９％）。
【表２２】
2011500830.tif 000038
【００９１】
ＢＧ１７の合成
【化１４】
2011500830.tif 000039
【００９２】
無水エタノール２５０mL中の１，５−ジアミノナフタレン１（５．０g，３１．６mmol）、アセト酢酸エチル２（４０mL，３１３．５mmol）およびｐ−ＴｓＯＨ（２．３８mg）の懸濁液を、分子篩（４Å）を充填されたディーン．シュタークトラップを備えた二口丸底フラスコ中で加熱還流した。撹拌しながら１２０℃の温度で油浴中で４時間加熱した後、混合物を室温に冷却しそして蒸発乾固した（冷却すると沈殿が生じる）。粗生成物をエタノールで摩砕し、そして沈澱をブフナー漏斗上に集め、減圧下に乾燥して、１１．３９g（９４％）の収率で生成物としてＢＧ５（２−ブテン酸，３−[[５−[[（Ｅ又はＺ）−３−エトキシ−１−メチル−３−オキソ−１−プロペニル]アミノ]−１−ナフタレニル]アミノ］−，エチルエステル，（Ｅ又はＺ）−）を得た。
【表２３】
2011500830.tif 000040
ＢＧ５（２．００ｇ、５．２３mmol）およびＥａｔｏｎ試薬（５．５mL、２９．１mmol、市販、Aldrich）の混合物を９０℃で５時間撹拌した。反応混合物を氷浴中で５℃に冷却し、そして飽和した氷冷Ｎａ２ＣＯ３溶液（３１ｇＮａ２ＣＯ３／１００mLＨ２Ｏ）に注意深く注いだ。固体をろ過し、ろ液を水（３×５０mL）、ＥｔＯＨ（１０mL）で洗浄し、５０℃で減圧下に乾燥して１．４２７６ｇ（９４％）の収率で生成物としてＢＧ６（キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジオン，４，１０−ジヒドロ−３，９−ジメチル−）を得た。
【表２４】
2011500830.tif 000041
ＰＯＣｌ３（２８．３８mL、３０９．１０mmol）中のＢＧ６（１．３７mg、４．７３mmol）の懸濁液を６時間９０℃で加熱し、１２０℃で１４時間続行した。室温に冷却すると、混合物を氷／水混合物にゆっくりと注ぎ、そして濃厚水性ＮＨ３をｐＨ９まで加えた。形成された沈澱をろ過しそしてＨ２ＯおよびＥｔＯＨでよく洗浄した。生成物ＢＧ７（キノ［８，７−ｈ］キノリン，１，７−ジクロロ−３，９−ジメチル−）を減圧下に６０℃で乾燥して１．４４４２ｇ（９３％）の収率を得た。
【表２５】
2011500830.tif 000042
Ｅｔ２Ｎ（ＣＨ２）２ＮＨ２  １１mL中のＢＧ７（３００mg、０．９２mmol）の懸濁液をアルゴン下に４５時間撹拌還流した。次いで混合物を氷冷水（４０mL）に注いだ。得られた固体をろ過し、ケークをＭｅＯＨ（５mL）で洗浄しそして減圧下に４５℃で乾燥して、２６８mg（９０％）の収率でＢＧ１４（キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジアミン，Ｎ１，Ｎ７−ビス［２−（ジエチルアミノ）エチル］−３，９−ジメチル−）を得た。
【表２６】
2011500830.tif 000043
ＢＧ１４（２２３mg、０．４６mmol）をＭｅＯＨ（１０mL）中に懸濁させ、そして反応混合物を激しく撹拌した。ＥｔＯＨ／ＨＣｌ溶液（８．６M）を加え、撹拌を室温で４８時間続けた。溶媒を減圧下に除去し、得られた固体を９６％ＥｔＯＨ（２１mL）に懸濁させ、ろ過し、そしてケークを９６％ＥｔＯＨ（９mL）で洗浄した。減圧下に４５℃で乾燥すると、ＢＧ１７（キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジアミン，Ｎ１，Ｎ７−ビス［２−（ジエチルアミノ）エチル］−３，９−ジメチル−，四塩酸塩）が得られた（１７６mg；６１％）。
【表２７】
2011500830.tif 000044
【００９３】
ＢＧ２０の合成
【化１５】
2011500830.tif 000045
【００９４】
無水エタノール２５０mL中の１，５−ジアミノナフタレン１（５．０g，３１．６mmol）、アセト酢酸エチル２（４０mL，３１３．５mmol）およびｐ−ＴｓＯＨ（２．３８mg）の懸濁液を、分子篩（４Å）を充填されたディーン．シュタークトラップを備えた二口丸底フラスコ中で加熱還流した。撹拌しながら１２０℃の温度で油浴中で４時間加熱した後、混合物を室温に冷却しそして蒸発乾固した（冷却すると沈殿が生じる）。粗生成物をエタノールで摩砕し、そして沈澱をブフナー漏斗上に集め、減圧下に乾燥して、１１．３９g（９４％）の収率で生成物としてＢＧ５（２−ブテン酸，３−[[５−[[（Ｅ又はＺ）−３−エトキシ−１−メチル−３−オキソ−１−プロペニル]アミノ]−１−ナフタレニル]アミノ］−，エチルエステル，（Ｅ又はＺ）−）を得た。
【表２８】
2011500830.tif 000046
ＢＧ５（２．００ｇ、５．２３mmol）およびＥａｔｏｎ試薬（５．５mL、２９．１mmol、市販、Aldrich）の混合物を９０℃で５時間撹拌した。反応混合物を氷浴中で５℃に冷却し、そして飽和した氷冷Ｎａ２ＣＯ３溶液（３１ｇＮａ２ＣＯ３／１００mLＨ２Ｏ）に注意深く注いだ。固体をろ過し、ろ液を水（３×５０mL）、ＥｔＯＨ（１０mL）で洗浄し、５０℃で減圧下に乾燥して１．４２７６ｇ（９４％）の収率で生成物としてＢＧ６（キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジオン，４，１０−ジヒドロ−３，９−ジメチル−）を得た。
【表２９】
2011500830.tif 000047
ＰＯＣｌ３（２８．３８mL、３０９．１０mmol）中のＢＧ６（１．３７mg、４．７３mmol）の懸濁液を６時間９０℃で加熱し、１２０℃で１４時間続行した。室温に冷却すると、混合物を氷／水混合物にゆっくりと注ぎ、そして濃厚水性ＮＨ３をｐＨ９まで加えた。形成された沈澱をろ過しそしてＨ２ＯおよびＥｔＯＨでよく洗浄した。生成物ＢＧ７（キノ［８，７−ｈ］キノリン，１，７−ジクロロ−３，９−ジメチル−）を減圧下に６０℃で乾燥して１．４４４２ｇ（９３％）の収率を得た。
【表３０】
2011500830.tif 000048
Ｍｅ２Ｎ（ＣＨ２）２ＮＨ２中のＢＧ７（３００mg、０．９２mmol）の懸濁液をアルゴンガス下に７日間撹拌還流した。次いで混合物を氷冷水（４０mL）に注いだ。得られた固体をろ過し、ケークをＭｅＯＨ（５mL）で洗浄しそして減圧下に４５℃で乾燥して、５３４mg（８１％）の収率でＢＧ１８（キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジアミン，Ｎ１，Ｎ７−ビス［２−（ジメチルアミノ）エチル］−３，９−ジメチル−）を得た。融点＝３１７〜３１８℃。
【表３１】
2011500830.tif 000049
ＢＧ１８（３３８mg、０．７８mmol）をＭｅＯＨ（１０mL）中に懸濁させ、そして反応混合物を激しく撹拌した。ＥｔＯＨ／ＨＣｌ溶液（８．６M）を加え、撹拌を室温で４８時間続けた。溶媒を減圧下に除去し、得られた固体を９６％ＥｔＯＨ（２１mL）に懸濁させ、ろ過し、そしてケークを９６％ＥｔＯＨ（９mL）で洗浄した。減圧下に４５℃で乾燥すると、ＢＧ２０（キノ［８，７−ｈ］キノリン−１，７−ジアミン，Ｎ１，Ｎ７−ビス［２−（ジメチルアミノ）エチル］−３，９−ジメチル−，四塩酸塩）が得られた（３８２．９mg；８５％）。
【表３２】
2011500830.tif 000050
【００９５】
本発明の組成物は、ウイルス感染を経験中の又はウイルス感染の危険にあるヒト又は動物に投与するための、治療的有効量の上記した小分子（又は小分子の組み合わせ）のいずれかを、他の物質、例えば、適当な担体、賦形剤等と共に含む薬学的組成物を更に含むことができる。このような薬学的組成物は、固体、ゲル又は液体形態にあることができ、そしてＩＶ、ＩＭ、ＩＰ又は非経口的に、局所的に、経口的に又は粘膜表面および経路により（例えば、直腸および膣坐剤を含む）個体に適切に投与することができる。治療的有効量に相当する正確な投薬量は、哺乳動物によりおよびウイルスにより変わるであろう。試験されたＦＧＩ−１０３化合物の各々について特定の実施例で前記した投薬量範囲は、大表的であり、そして、本明細書に記載されそして当業者に知られているアッセイ方法に従って、任意の所与のウイルスおよび哺乳動物ホストについて適当な投薬量値に達するのに十分な情報を当業者に提供する。当業者は、本明細書におけるターゲットおよび化合物の同定を与えられると、特定の哺乳動物、特定のウイルスおよび特定の投与方式を同定すことを、慣用のプロトコールにより十分できるようになる。例えば、"Remington: The Science amd Practice of Pharmacy, " University of the Sciences in Philadelphia, 21st ed., mack publishing Co., (2005), 参照。それらの開示はそのまま参照により取り込まれる。
【００９６】
本発明の組成物の「治療的に有効な」量は、患者又は動物におけるホスト細胞のウイルス感染又はウイルス疾患の予防又は改善により決定されうる。ヒト患者に投与されるとき、本発明の作用物質又は組成物の総日用量(total daily usage)は、信頼できる医学的判定の範囲内で主治医により決定されるであろう。任意の特定の患者についての特定の治療的有効用量レベルは、種々のファクター：達成されるべき細胞応答又は生理学的応答のタイプおよび程度；使用される特定の組成物の活性；使用される特定の作用物質又は組成物；患者の年齢、体重、一般的健康状態、性および食事；投与の時間、投与経路および組成物の排出速度；処理の期間；組成物と組み合わせて又は組成物と一緒に使用される薬物および、医学分野および獣医学分野で周知の同様なファクターに依存するであろう。例えば、所望の治療効果を達成するのに必要なレベルよりも低いレベルで作用物質の投与を開始することおよび所望の効果が達成されるまで投薬量を徐々に増加させることも十分に当技術分野の熟練の範囲内にある。
【００９７】
本発明はある態様および実施例に関して開示されたが、記載された態様に対する多数の修正、変更および変化が、特許請求の範囲に記載のとおりの本発明の範囲から逸脱することなく可能である。したがって、本発明は、記載された態様に限定されるのではなく、特許請求の範囲の言葉およびその同等物により規定された全範囲を有することを意図する。
【図１】
2011500830.tif 000051
【図２】
2011500830.tif 000052
【図３】
2011500830.tif 000053
【図４】
2011500830.tif 000054
【図５】
2011500830.tif 000055
【図６Ａ】
2011500830.tif 000056
【図６Ｂ】
2011500830.tif 000057
【図６Ｃ】
2011500830.tif 000058
【図７】
2011500830.tif 000059
【図８】
2011500830.tif 000060
【図９】
2011500830.tif 000061
【図１０】
2011500830.tif 000062
【図１１】
2011500830.tif 000063
【図１２】
2011500830.tif 000064
【図１３】
2011500830.tif 000065
【図１４】
2011500830.tif 000066
【図１５】
2011500830.tif 000067
【図１６】
2011500830.tif 000068
【図１７】
2011500830.tif 000069
【図１８】
2011500830.tif 000070
【図１９】
2011500830.tif 000071
【図２０】
2011500830.tif 000072
【図２１】
2011500830.tif 000073
【図２２】
2011500830.tif 000074
【図２３】
2011500830.tif 000075
【図２４】
2011500830.tif 000076
【図２５】
2011500830.tif 000077
【図２６】
2011500830.tif 000078
【図２７】
2011500830.tif 000079
【図２８】
2011500830.tif 000080
【図２９】
2011500830.tif 000081
【図３０】
2011500830.tif 000082
【図３１】
2011500830.tif 000083
【図３２】
2011500830.tif 000084
【図３３】
2011500830.tif 000085
【図３４】
2011500830.tif 000086
【図３５】
2011500830.tif 000087
【図３６】
2011500830.tif 000088
【図３７】
2011500830.tif 000089
【図３８】
2011500830.tif 000090
【図３９】
2011500830.tif 000091
【図４０】
2011500830.tif 000092
【図４１】
2011500830.tif 000093
【図４２】
2011500830.tif 000094
【図４３】
2011500830.tif 000095
【図４４】
2011500830.tif 000096
【図４５】
2011500830.tif 000097
【図４６】
2011500830.tif 000098
【図４７】
2011500830.tif 000099
【図４８】
2011500830.tif 000100
【図４９】
2011500830.tif 000101
【図５０】
2011500830.tif 000102
【図５１】
2011500830.tif 000103
【図５２】
2011500830.tif 000104
【図５３】
2011500830.tif 000105
【図５４】
2011500830.tif 000106
【図５５】
2011500830.tif 000107
【図５６】
2011500830.tif 000108
【図５７】
2011500830.tif 000109
【図５８】
2011500830.tif 000110
【図５９】
2011500830.tif 000111
【図６０】
2011500830.tif 000112
【図６１】
2011500830.tif 000113
【図６２】
2011500830.tif 000114
【図６３】
2011500830.tif 000115
【図６４】
2011500830.tif 000116
【図６５】
2011500830.tif 000117
【図６６】
2011500830.tif 000118
【図６７】
2011500830.tif 000119
【図６８】
2011500830.tif 000120
【図６９】
2011500830.tif 000121
【図７０】
2011500830.tif 000122
【図７１】
2011500830.tif 000123
【国際調査報告】
2011500830.tif 000124