(57)【要約】本発明は、ヒトＣＸＣＲ４に結合し、かつ、高親和性および強力な中和特性を有するとして特徴づけられた抗体を提供する。本発明の抗体は、腫瘍増殖、浸潤、血管形成、または転移を含む、腫瘍形成の処置に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣＸＣＲ４に結合する、ヒト遺伝子操作抗体またはその結合フラグメントであって、
（ａ）本願明細書に記載されるヒトＣＸＣＲ４／１２５Ｉ−ＳＤＦ−１α結合阻害アッセイにおいて、ヒトＣＸＣＲ４について１０ｎＭおよび０．０５ｎＭの間のＩＣ５０で、ＣＸＣＲ４に対するヒトＳＤＦ−１α（配列番号３３）の結合を阻害し、
（ｂ）本願明細書に記載される走化性アッセイにおいて、３０ｎＭおよび０．３ｎＭの間のＩＣ５０で、ＣＸＣＲ４保有細胞の当該細胞表面上の移動を阻害し、
（ｃ）本願明細書に記載される表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）アッセイにおいて、１５ｎＭおよび０．０５ｎＭの間のＫＤで親和性を示すこと、
を特徴とする、ヒト遺伝子操作抗体またはその結合フラグメント。
【請求項２】
請求項１に記載のヒト遺伝子操作抗体において、当該抗体は、ヒトＣＸＣＲ４について０．５ｎＭおよび０．０５ｎＭの間のＩＣ５０で、ＣＸＣＲ４に対するヒトＳＤＦ−１α（配列番号３３）の結合を阻害することを特徴とする、ヒト遺伝子操作抗体。
【請求項３】
請求項１または２に記載のヒト遺伝子操作抗体において、当該抗体は、３．０ｎＭおよび０．３ｎＭの間のＩＣ５０で、ＣＸＣＲ４保有細胞の当該細胞表面上の移動を阻害することを特徴とする、ヒト遺伝子操作抗体。
【請求項４】
請求項１から３のうちいずれか一つに記載のヒト遺伝子操作抗体において、当該抗体は、１．０ｎＭおよび０．０５ｎＭの間のＫＤで親和性を示すことを特徴とする、ヒト遺伝子操作抗体。
【請求項５】
請求項１から４のうちいずれか一つに記載のヒト遺伝子操作抗体において、当該抗体は、本願明細書に記載される腫瘍異種移植片モデルにおいて、１ｍｇ／ｋｇにて投与される場合に、腫瘍増殖を予防することによる抗腫瘍形成活性を示すことを特徴とする、ヒト遺伝子操作抗体。
【請求項６】
請求項１から５のうちいずれか一つに記載のヒト遺伝子操作抗体において、当該抗体は、本願明細書に記載されるアポトーシスアッセイにおいて、２μｇ／ｍＬおよび１０μｇ／ｍＬの間で投与される場合に、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することを特徴とする、ヒト遺伝子操作抗体。
【請求項７】
フレームワーク領域、配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含む軽鎖と、フレームワーク領域、配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、ならびに配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、および配列番号７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２を含む重鎖可変領域を含む重鎖を含み、ヒトＣＸＣＲ４に結合するヒト遺伝子操作抗体またはその結合フラグメント。
【請求項８】
軽鎖が配列番号１６のアミノ酸配列を含む請求項７に記載の抗体。
【請求項９】
重鎖が、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む請求項７または８に記載の抗体。
【請求項１０】
軽鎖が配列番号２２のアミノ酸配列を含む請求項７〜９のいずれかに記載の抗体。
【請求項１１】
重鎖が、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、および配列番号２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む請求項７〜１０のいずれかに記載の抗体。
【請求項１２】
配列番号１７および配列番号２２を含む抗体、配列番号１８および配列番号２２を含む抗体、配列番１９および配列番号２２を含む抗体、配列番号２０および配列番号２２を含む抗体、ならびに配列番号２１および配列番号２２を含む抗体からなる群から選択される請求項７〜１１のいずれかに記載の抗体。
【請求項１３】
配列番号２２の２本の軽鎖、および配列番号１７の２本の重鎖を含む請求項７〜１２のいずれかに記載の抗体。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれかに記載の抗体を、１つ以上の薬学的に許容できる担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含む医薬組成物。
【請求項１５】
治療に用いるための請求項１〜１３のいずれかに記載の抗体。
【請求項１６】
腫瘍増殖、浸潤、血管形成、または転移を含む、腫瘍形成の治療に用いるための請求項１〜１３のいずれかに記載の抗体。
【請求項１７】
腫瘍増殖、浸潤、血管形成、または転移を含む、腫瘍形成の処置のための薬剤の製造における、請求項１から１３のうちいずれか一つに記載のヒト遺伝子操作抗体の使用。
【請求項１８】
腫瘍増殖、浸潤、血管形成、または転移を含む、腫瘍形成の処置を必要とする患者に、処置に有効な量の請求項１から１３のうちいずれか一つに記載のヒト遺伝子操作抗体を投与することを含む、上記腫瘍形成を処置する方法。
【請求項１９】
乳癌、膵臓癌、黒色腫、前立腺癌、腎臓癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、肺癌、卵巣癌、結腸直腸癌、多発性骨髄腫、多形性膠芽腫、および白血病からなる群から選択される癌の治療に用いるための、請求項１〜１３のいずれかに記載の抗体。
【請求項２０】
乳癌、膵臓癌、黒色腫、前立腺癌、腎臓癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、肺癌、卵巣癌、結腸直腸癌、多発性骨髄腫、多形性膠芽腫、および白血病からなる群から選択される癌の処置のための薬剤の製造における、請求項１から１３のうちいずれか一つに記載のヒト遺伝子操作抗体の使用。
【請求項２１】
乳癌、膵臓癌、黒色腫、前立腺癌、腎臓癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、肺癌、卵巣癌、結腸直腸癌、多発性骨髄腫、多形性膠芽腫、および白血病からなる群から選択される癌の処置を必要とする患者に、処置に有効な量の請求項１から１３のうちいずれか一つに記載のヒト遺伝子操作抗体を投与することを含む、上記癌を処置する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＸＣＲ４に対するモノクローナル抗体、ならびにＣＸＣＲ４およびＳＤＦ−１によりもたらされる病因の疾患の処置における当該抗体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＣＸＣＲ４（ケモカイン受容体）は、Ｇタンパク質共役７回膜貫通型受容体である。その他のケモカイン受容体と同様に、ＣＸＣＲ４は、白血球の方向性のある移動および活性化によりもたらされる免疫反応および炎症反応において重要な役割を担う。ＣＸＣＲ４は、非ホジキンリンパ腫および慢性リンパ球性白血病と同様に、種々の癌細胞株ならびに胸、前立腺、肺、卵巣、結腸、膵臓、腎臓、および脳を含む組織中で発現または過剰発現される。
【０００３】
唯一知られるＣＸＣＲ４に対するリガンドは、間質細胞由来因子−１（ＳＤＦ−１、またはＣＸＣＬ１２）である。ＣＸＣＲ４とＳＤＦ−１との相互作用は、腫瘍増殖、浸潤、血管形成、および転移を含む腫瘍形成の多数の段階において重要な役割を担う。
【０００４】
種々の重大な疾患におけるＣＸＣＲ４の関与を考慮して、ＣＸＣＲ４は、治療標的として研究されてきた。例えば、ＡＭＤ３１００（ビシクラム（ｂｉｃｙｃｌａｍ）ＣＸＣＲ４アンタゴニスト）は、多発性骨髄腫および非ホジキンリンパ腫を有する患者に使用可能である。ＣＴＣＥ９９０８（ペプチドＣＸＣＲ４アンタゴニスト）は、現在、癌についてフェーズＩｂ／ＩＩの臨床試験中である。加えて、ＣＸＣＲ４を標的とする抗体は、当該技術分野（特許文献１、特許文献２、および非特許文献１）において開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第０６／０８９１４１号パンフレット
【特許文献２】米国特許出願公開第０７／００５９３０８号明細書
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｃａｒｎｅｃら（Ｃａｒｎｅｃ  Ｘ，  Ｑｕａｎ  Ｌ，  Ｏｌｓｏｎ  Ｗ，  Ｈａｚａｎ  Ｕ，  Ｄｒａｇｉｃ  Ｔ．著）  （２００５年）  「Ａｎｔｉ−ＣＸＣＲ４  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇ  Ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ  Ｅｐｉｔｏｐｅｓ  Ｄｉｆｆｅｒ  Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ  ｉｎ  Ｔｈｅｉｒ  Ａｂｉｌｉｔｙ  Ｔｏ  Ｉｎｈｉｂｉｔ  Ｅｎｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｖｉｒｕｓ  Ｔｙｐｅ  Ｉ」    Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．    ２００５年２月：  １９３０−１９３３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ＣＸＣＲ４を標的とする開発中の種々の薬剤があるものの、ＣＸＣＲ４を標的とする更なる治療薬剤が引き続き必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の抗体は、多数の所望の特性を有する、治療に有効なＣＸＣＲ４アンタゴニストである。本発明の抗体は、増加した化学的かつ物理的な安定性および溶解度を有する。本発明は、高親和性にてヒトＣＸＣＲ４と結合し、ＳＤＦ−１に対するヒトＣＸＣＲ４の結合を阻害するＣＸＣＲ４抗体を提供する。高い力価は、治療レジメンにおいて低用量の使用を可能にする。加えて、これらの抗体は、ＣＸＣＲ４に対するＳＤＦ−１の相互作用に干渉する。
【発明の効果】
【０００９】
これにより、本発明は、腫瘍増殖、浸潤、血管形成、および転移を含む腫瘍形成を減少させる。さらに、本発明の抗体は、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明は、ヒトＣＸＣＲ４に結合する、ヒト遺伝子操作抗体またはその結合フラグメントを含み、これらは、
（ａ）本願明細書に記載されるヒトＣＸＣＲ４／１２５Ｉ−ＳＤＦ−１α結合阻害アッセイにおいて、ヒトＣＸＣＲ４について１０ｎＭおよび０．０５ｎＭの間のＩＣ５０で、ＣＸＣＲ４に対するヒトＳＤＦ−１α（配列番号３３）の結合を阻害し、
（ｂ）本願明細書に記載される走化性アッセイにおいて、３０ｎＭおよび０．３ｎＭの間のＩＣ５０で、ＣＸＣＲ４保有細胞の当該細胞表面上の移動を阻害し、
（ｃ）本願明細書に記載される表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）アッセイにおいて、１５ｎＭおよび０．０５ｎＭの間のＫＤで親和性を示す。
【００１１】
本発明は、好ましくは、ヒトＣＸＣＲ４に結合する、ヒト遺伝子操作抗体またはその結合フラグメントを提供し、これらは、本願明細書に記載されるヒトＣＸＣＲ４／１２５Ｉ−ＳＤＦ−１α結合阻害アッセイにおいて、ヒトＣＸＣＲ４について０．５ｎＭおよび０．０５ｎＭの間のＩＣ５０で、ＣＸＣＲ４に対するヒトＳＤＦ−１α（配列番号３３）の結合を阻害する。
【００１２】
本発明は、好ましくは、ヒトＣＸＣＲ４に結合する、ヒト遺伝子操作抗体またはその結合フラグメントを提供し、これらは、本願明細書に記載される走化性アッセイにおいて、３．０ｎＭおよび０．３ｎＭの間のＩＣ５０で、ＣＸＣＲ４保有細胞の当該細胞表面上の移動を阻害する。
【００１３】
本発明は、好ましくは、ヒトＣＸＣＲ４に結合する、ヒト遺伝子操作抗体またはその結合フラグメントを提供し、これらは、本願明細書に記載される表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）アッセイにおいて、１．０ｎＭおよび０．０５ｎＭの間のＫＤで親和性を示す。
【００１４】
本発明は、好ましくは、ヒトＣＸＣＲ４に結合する、ヒト遺伝子操作抗体またはその結合フラグメントを提供し、これらは、本願明細書に記載される腫瘍異種移植片モデルにおいて、１ｍｇ／ｋｇにて投与される場合に、腫瘍増殖を予防することで抗腫瘍形成活性を示す。
【００１５】
本発明は、好ましくは、ヒトＣＸＣＲ４に結合する、ヒト遺伝子操作抗体またはその結合フラグメントを提供し、これらは、本願明細書に記載されるアポトーシスアッセイにおいて、２μｇ／ｍＬおよび１０μｇ／ｍＬの間で投与される場合に、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する。
【００１６】
本発明は、ヒト遺伝子操作抗体またはその結合フラグメントを含み、これらは、フレームワーク領域、配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含む軽鎖と、フレームワーク領域、配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、ならびに配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、および配列番号７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２を含む重鎖可変領域を含む重鎖とを含み、ここで、上記抗体は、ヒトＣＸＣＲ４に結合する。
【００１７】
さらに、本発明は、ヒトＣＸＣＲ４に結合する抗体を含み、ここで、軽鎖は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、そして、重鎖は、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１８】
加えて、本発明は、ヒトＣＸＣＲ４に結合する抗体を含み、ここで、軽鎖は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、そして、重鎖は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、および配列番号２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１９】
本発明はまた、ヒトＣＸＣＲ４に結合する抗体を含み、ここで、抗体は、配列番号１７および配列番号２２を含む抗体、配列番号１８および配列番号２２を含む抗体、配列番１９および配列番号２２を含む抗体、配列番号２０および配列番号２２を含む抗体、ならびに配列番号２１および配列番号２２を含む抗体からなる群から選択される。
【００２０】
本願明細書において定義される本発明の抗体は、本願明細書に記載されるヒトＣＸＣＲ４／１２５Ｉ−ＳＤＦ−１α結合阻害アッセイにおいて、１０ｎＭ以下のＩＣ５０を有することを特徴とする。好ましくは、本発明の抗体は、ヒトＣＸＣＲ４について５．０ｎＭ以下の結合親和性を有する。最も好ましくは、本発明の抗体は、ヒトＣＸＣＲ４について０．５ｎＭ以下の結合親和性を有する。さらに好ましくは、本発明の抗体は、本願明細書に記載されるヒトＣＸＣＲ４／１２５Ｉ−ＳＤＦ−１α結合阻害アッセイにおいて、ヒトＣＸＣＲ４について１０ｎＭおよび０．０５ｎＭの間のＩＣ５０を有する。さらに好ましくは、本発明の抗体は、本願明細書に記載されるヒトＣＸＣＲ４／１２５Ｉ−ＳＤＦ−１α結合阻害アッセイにおいて、ヒトＣＸＣＲ４について０．５ｎＭおよび０．０５ｎＭの間のＩＣ５０を有する。
【００２１】
本願明細書において定義される本発明の抗体は、本願明細書に記載される走化性アッセイにおいて３０ｎＭ以下のＩＣ５０を有することを特徴とする。好ましくは、本発明の抗体は、走化性アッセイにおいて１５ｎＭ以下のＩＣ５０を有する。より好ましくは、本発明の抗体は、走化性アッセイにおいて３．０ｎＭ以下のＩＣ５０を有する。さらに好ましくは、本発明の抗体は、本願明細書に記載される走化性アッセイにおいて、３０ｎＭおよび０．３ｎＭの間のＩＣ５０を有する。さらに好ましくは、本発明の抗体は、本願明細書に記載される走化性アッセイにおいて、３．０ｎＭおよび０．３ｎＭの間のＩＣ５０を有する。
【００２２】
本願明細書において定義される本発明の抗体は、本願明細書に記載される表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）により抗体の結合活性を評価するアッセイにおいて、１５ｎＭ以下のＫＤを有することを特徴とする。より好ましくは、本発明の抗体は、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイにおいて１０ｎＭ以下のＫＤを有する。最も好ましくは、本発明の抗体は、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイにおいて１．０ｎＭ以下のＫＤを有する。さらに好ましくは、本発明の抗体は、本願明細書に記載されるＢＩＡｃｏｒｅアッセイにおいて、１５ｎＭおよび０．０５ｎＭの間のＫＤを有する。さらに好ましくは、本発明の抗体は、本願明細書に記載されるＢＩＡｃｏｒｅアッセイにおいて、１．０ｎＭおよび０．０５ｎＭの間のＫＤを有する。
【００２３】
本願明細書において定義される本発明の抗体は、本願明細書に記載されるＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスおよびヒト非ホジキンリンパ腫ナマルバ細胞を用いて、腫瘍異種移植片モデルにおいて１０ｍｇ／ｋｇにて投与される場合に腫瘍増殖を予防することによる抗腫瘍形成活性を有することを特徴とする。より好ましくは、本発明の抗体は、１ｍｇ／ｋｇにて投与される場合に腫瘍増殖を予防することによる抗腫瘍形成活性を有する。
【００２４】
本願明細書において定義される本発明の抗体は、本願明細書に記載されるアポトーシスアッセイにおいて腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することを特徴とする。より好ましくは、本発明の抗体は、ナマルバ細胞およびＣＥＭ細胞を含む多数の腫瘍細胞において、２μｇ／ｍＬおよび１０μｇ／ｍＬの間で投与される場合に、核フラグメンテーションおよびカスパーゼ３の活性化、アポトーシスの顕著な特徴（ｈａｌｌｍａｒｋ）を誘導する。
【００２５】
本発明は、医薬組成物を含み、当該医薬組成物は、本願明細書に記載される抗体を１つ以上の薬学的に許容できる担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含む。加えて、本発明は、腫瘍増殖、浸潤、血管形成、または転移を含む、腫瘍形成の処置のための医薬組成物を含み、当該医薬組成物は、本願明細書に記載される種々の抗体を１つ以上の薬学的に許容できる担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含む。さらに、本発明は、乳癌、膵臓癌、黒色腫、前立腺癌、腎臓癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、肺癌、卵巣癌、結腸直腸癌、多発性骨髄腫、多形性膠芽腫、および白血病からなる群から選択される癌の処置のための医薬組成物を含み、当該医薬組成物は、本願明細書に記載される種々の抗体を１つ以上の薬学的に許容できる担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含む。
【００２６】
本発明は、本願明細書に記載される抗体の使用を含み、当該使用は、腫瘍増殖、浸潤、血管形成、または転移を含む腫瘍形成を処置するための薬剤の調製を含む。加えて、本発明は、本願明細書に記載される抗体の使用を含み、当該使用は、乳癌、膵臓癌、黒色腫、前立腺癌、腎臓癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、肺癌、卵巣癌、結腸直腸癌、多発性骨髄腫、多形性膠芽腫、および白血病からなる群から選択される癌を処置するための薬剤の調製を含む。
【００２７】
本発明は、腫瘍増殖、浸潤、血管形成、または転移を含む腫瘍形成を処置する方法を含み、当該方法は、本願明細書に記載される抗体を必要とする患者に投与することを含む。さらに、本発明は、乳癌、膵臓癌、黒色腫、前立腺癌、腎臓癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、肺癌、卵巣癌、結腸直腸癌、多発性骨髄腫、多形性膠芽腫、および白血病からなる群から選択される癌を処置する方法を含み、当該方法は、本願明細書に記載される抗体を必要とする患者に投与することを含む。
【００２８】
「抗体」の一般的な構造は、当該技術分野において非常に良く知られている。ＩｇＧ型の抗体については、鎖内および鎖間のジスフィルド結合を介して架橋される４本のアミノ酸鎖（２本の「重」鎖および２本の「軽」鎖）がある。特定の生物系において発現される場合、未修飾のヒトＦｃ配列を有する抗体は、Ｆｃ領域内でグリコシル化される。抗体は、その他の位置においても同様にグリコシル化され得る。抗体のサブユニット構造および３次元構造は、当該技術分野において良く知られている。各重鎖は、Ｎ末端重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」）および重鎖定常領域（「ＨＣＣＲ」）から構成される。重鎖定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＤ、およびＩｇＡについて３つのドメイン（ＣＨＩ、ＣＨ２、およびＣＨ３）、ならびにＩｇＭおよびＩｇＥについて４つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４）から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本願明細書において「ＬＣＶＲ」）および軽鎖定常領域（「ＬＣＣＲ」）から構成される。
【００２９】
各軽鎖／重鎖ペアの可変領域は、抗体結合部位を形成する。ＨＣＶＲ領域およびＬＣＶＲ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性領域へとさらに細分され得、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存される領域に組み入れられ得る。各ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端へと、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順番にて配置される。本願明細書において、重鎖の３つのＣＤＲは、「ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３」と呼ばれ、そして、軽鎖の３つのＣＤＲは、「ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３」と呼ばれる。ＣＤＲは、抗原との特定の相互作用を形成する残基の大部分を含む。アミノ酸の各ドメインへの配置は、周知の規則（例えば、Ｋａｂａｔ著、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．  （１９９１））に従う。
【００３０】
本発明の抗体は、任意の免疫グロブリンのクラス（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、およびＩｇＥ）から選択される、重鎖定常領域を有し得る。さらに、本発明の抗体は、その他のＩｇＧサブタイプと比較して減少された補体因子に対する結合能力が理由で、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域に由来するＦｃ部分を含む。
【００３１】
抗体は、単一のコピーまたはクローン（例えば、任意の真核、原核またはファージのクローン）に由来し得る。好ましくは、本発明の抗体は、均質または実質的に均質な集団中に存在する。抗体は、Ｆｃ領域を含む、インタクトな完全または完全長の定常領域、あるいは、抗原結合部分を含みかつ抗原結合能力を保持する任意の短縮形である、抗体の部分またはフラグメントであり得る。このような短縮形としては、例えば、開示された抗ＣＸＣＲ４抗体のＣＤＲまたは可変領域を含む、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ'フラグメントまたはＦ（ａｂ'）２フラグメントが挙げられる。さらに、このような短縮抗体形は、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲをコードするＤＮＡとリンカー配列とを結合すること（ｊｏｉｎｉｎｇ）により生成され得る単鎖Ｆｖフラグメントであり得る。（Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ著，「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」，第１１３巻，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，第２６９−３１５頁，１９９４年を参照のこと）。フラグメントまたは部分が特定されてもされなくとも、本願明細書において使用される用語「抗体」は、指定されない限りは、このようなフラグメントまたは部分ならびに単鎖形を含む。タンパク質がＣＸＣＲ４に対して特異的または優先的に結合する能力を保持する限り、本願明細書において開示された配列または配列群を含み、これは、用語「抗体」の範囲内に含まれる。本発明の抗体は、当該技術分野において良く知られる技術、例えば、組み換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、またはこれらの技術の組合せ、あるいは、当該技術分野において容易に知られる他の技術を用いて生成され得る。
【００３２】
用語「ヒト遺伝子操作抗体」は、ヒトゲノム配列に由来するフレームワークおよび定常領域と同一または実質的に同一（実質的にヒト）である、ヒト由来のフレームワーク、ヒンジ領域、および定常領域を有する抗体をいう。完全にヒトのフレームワーク、ヒンジ領域、および定常領域は、ヒト生殖細胞系列配列ならびに自然に発生する体細胞変異を有する配列である。ヒト遺伝子操作抗体は、１つ以上のアミノ酸の置換、欠損、追加を含む、完全にヒトのフレームワーク、ヒンジ、または定常領域から由来する、フレームワーク、ヒンジ、または定常領域を含み得る。多くの場合、ヒト遺伝子操作抗体は、好ましくは、ヒトにおいて実質的に非免疫原性である。
【００３３】
種々の異なるヒトフレームワーク配列は、単一で使用され得るか、または本発明のヒト遺伝子操作抗体を基本に組み合わせて使用され得る。好ましくは、本発明の抗体のフレームワーク領域は、ヒト由来か、または実質的にヒト（ヒト由来の少なくとも９５％、９７％または９９％）である。ヒト由来のフレームワーク領域の配列は、Ｍａｒｉｅ−Ｐａｕｌｅ  Ｌａｆｒａｎｃ，  Ｇｅｒａｒｄ  ＬｅｆｒａｎｃによるＴｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆａｃｔｓｂｏｏｋ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  ２００１，  ＩＳＢＮ  ０１２４４１３５１から取得され得る。
【００３４】
本発明のヒト遺伝子操作抗体に関するフレームワーク配列は、「ドナー」可変フレームワーク領域として役割を果たし、当該技術分野において知られる方法を用いて、本願明細書において特定された同じＣＤＲとともに、更なるヒト遺伝子操作抗体をつくるために使用され得る。さらに、本発明のヒト遺伝子操作抗体に関するフレームワーク配列は、更なるヒト遺伝子操作抗体を作り出すために、他に知られるヒトフレームワーク配列と比較され得る。したがって、この情報は、別の選択された相同ヒトフレームワーク領域を、ヒト遺伝子操作ドナーアミノ酸残基に、これらの位置にて「突然変異」するために使用され得る。さらに、任意の「希有な」アミノ酸は、コンセンサスまたはドナーヒト遺伝子操作のアミノ酸残基が関連する位置にて使用されるような、更なるヒトフレームワークにおいて検出され得る。
【００３５】
用語「阻害する」とは、ＣＸＣＲ４受容体に対する結合という生物学的効果を、実質的に、拮抗させるか、妨げるか、阻むか、抑えるか、遅らすか、妨害するか、除去するか、止めるか、減少させるか、または反転させる能力を意味する。
【００３６】
「ＣＸＣＲ４」または「ヒトＣＸＣＲ４」は、任意のヒトＣＸＣＲ４、ならびに機能的に活性なそれらの変異形をいう。一例としては、限定されないが、配列番号３０、配列番号３１、および配列番号３２が挙げられる。
【００３７】
「患者」は、哺乳類であり、好ましくは、ヒトである。
【００３８】
用語「処置すること」（または「処置する」もしくは「処置」）は、症状、障害、状態、または疾患の進行もしくは重症度を、遅らすか、停止させるか、軽減させるか、反転させることを意味する。
【００３９】
用語「予防すること」（または「予防する」もしくは「予防」）は、症状、障害、状態、または疾患の出現もしくは発生を、阻むか、抑えるか、または阻害することを意味する。急性事象および慢性状態は、処置かつ予防され得る。急性事象において、抗体は、症状、障害、状態、または疾患の始まり（ｏｎｓｅｔ）において投与され、急性事象が終わるときに中止される。一方、慢性状態において、症状、障害、状態、または疾患は、より持続的な時間枠にわたって処置される。
【００４０】
用語「処置に有効な量」とは、単回または複数回の投与量を患者に投与する際に、所望の処置または予防を提供する本発明の抗体の投与量をいう。処置に有効な量は、単回投与（例えば、ボーラス）、複数回投与、または持続的投与につき、約０．００１から２０ｍｇ／ｋｇの量を含み得る。
【００４１】
本発明の特定の抗体としては、配列番号１、２、３、８、９、および１０のアミノ酸配列を含む抗体；配列番号１、４、３、８、９、および１０のアミノ酸配列を含む抗体；配列番号１、５、３、８、９、および１０のアミノ酸配列を含む抗体；配列番号１、６、３、８、９、および１０のアミノ酸配列を含む抗体；配列番号１、７、３、８、９および１０のアミノ酸配列を含む抗体が挙げられる。列挙された配列は、それぞれ、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を表す。
【００４２】
本発明の特定の抗体としては、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲおよび配列番号１１のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む抗体；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲおよび配列番号１２のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む抗体；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲおよび配列番号１３のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む抗体；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲおよび配列番号１４のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む抗体；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲおよび配列番号１５のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む抗体が挙げられる。
【００４３】
本発明は、ＣＸＣＲ４活性に結合かつ阻害する５つの抗体を含む。特に、本発明は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖および配列番号１７のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体；配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖および配列番号１８のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体；配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖および配列番号１９のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体；配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖および配列番号２０のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体；配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖および配列番号２１のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体が挙げられる。
【００４４】
好ましくは、本発明の抗体は（ここで、全ての６つのＣＤＲ、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ、全部の重鎖、全部の軽鎖、または全部の重鎖および軽鎖は、本願明細書中の配列番号によって示される特定の配列により限定される）、さらに、本願明細書に記載されるヒトＣＸＣＲ４／１２５Ｉ−ＳＤＦ−１α結合阻害アッセイにおいて、約１０ｎＭ以下、より好ましくは、約５．０ｎＭ以下、および最も好ましくは、０．５ｎＭ以下のＩＣ５０を有することを特徴とする。さらに好ましくは、本発明の抗体は（ここで、全ての６つのＣＤＲ、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ、全部の重鎖、全部の軽鎖、または全部の重鎖および軽鎖は、本願明細書中の配列番号によって示される特定の配列により限定される）、さらに、本願明細書に記載されるヒトＣＸＣＲ４／１２５Ｉ−ＳＤＦ−１α結合阻害アッセイにおいて、ヒトＣＸＣＲ４について、１０ｎＭおよび０．０５ｎＭの間のＩＣ５０を有することを特徴とする。さらに好ましくは、本発明の抗体は（ここで、全ての６つのＣＤＲ、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ、全部の重鎖、全部の軽鎖、または全部の重鎖および軽鎖は、本願明細書中の配列番号によって示される特定の配列により限定される）、さらに、本願明細書に記載されるヒトＣＸＣＲ４／１２５Ｉ−ＳＤＦ−１α結合阻害アッセイにおいて、ヒトＣＸＣＲ４について、０．５ｎＭおよび０．０５ｎＭの間のＩＣ５０を有することを特徴とする。
【００４５】
より好ましくは、本発明の抗体は（ここで、全ての６つのＣＤＲ、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ、全部の重鎖、全部の軽鎖、または全部の重鎖および軽鎖は、本願明細書中の配列番号によって示される特定の配列により限定される）、さらに、本願明細書に記載される走化性アッセイにおいて、約３０ｎＭ以下、より好ましくは、約１５ｎＭ以下、およびさらにより好ましくは、３．０ｎＭ以下のＩＣ５０を有することを特徴とする。さらに好ましくは、本発明の抗体は（ここで、全ての６つのＣＤＲ、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ、全部の重鎖、全部の軽鎖、または全部の重鎖および軽鎖は、本願明細書中の配列番号によって示される特定の配列により限定される）、さらに、本願明細書に記載される走化性アッセイにおいて、３０ｎＭおよび０．３ｎＭの間のＩＣ５０を有することを特徴とする。さらに好ましくは、本発明の抗体は（ここで、全ての６つのＣＤＲ、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ、全部の重鎖、全部の軽鎖、または全部の重鎖および軽鎖は、本願明細書中の配列番号によって示される特定の配列により限定される）、さらに、本願明細書に記載される走化性アッセイにおいて、３．０ｎＭおよび０．３ｎＭの間のＩＣ５０を有することを特徴とする。
【００４６】
さらにより好ましくは、本発明の抗体は（ここで、全ての６つのＣＤＲ、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ、全部の重鎖、全部の軽鎖、または全部の重鎖および軽鎖は、本願明細書中の配列番号によって示される特定の配列により限定される）、さらに、本願明細書に記載される表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）により抗体の結合活性を評価するアッセイにおいて、約１５ｎＭ以下、より好ましくは、約１０ｎＭ以下、および最も好ましくは、１．０ｎＭ以下のＫＤを有することを特徴とする。さらに好ましくは、本発明の抗体は（ここで、全ての６つのＣＤＲ、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ、全部の重鎖、全部の軽鎖、または全部の重鎖および軽鎖は、本願明細書中の配列番号によって示される特定の配列により限定される）、さらに、本願明細書に記載される表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）により抗体の結合活性を評価するアッセイにおいて、本願明細書に記載されるＢＩＡｃｏｒｅアッセイにおいて１５ｎＭおよび０．０５ｎＭの間のＫＤを有することを特徴とする。さらに好ましくは、本発明の抗体は（ここで、全ての６つのＣＤＲ、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ、全部の重鎖、全部の軽鎖、または全部の重鎖および軽鎖は、本願明細書中の配列番号によって示される特定の配列により限定される）、さらに、本願明細書に記載される表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）により抗体の結合活性を評価するアッセイにおいて、本願明細書に記載されるＢＩＡｃｏｒｅアッセイにおいて１．０ｎＭおよび０．０５ｎＭの間のＫＤを有することを特徴とする。
【００４７】
より好ましくは、本発明の抗体は（ここで、全ての６つのＣＤＲ、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ、全部の重鎖、全部の軽鎖、または全部の重鎖および軽鎖は、本願明細書中の配列番号によって示される特定の配列により限定される）、さらに、本願明細書に記載されるＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスおよびヒト非ホジキンリンパ腫ナマルバ細胞を用いて、腫瘍異種移植片モデルにおいて、１０ｍｇ／ｋｇおよび、更に好ましくは１ｍｇ／ｋｇにて投与される場合に、腫瘍増殖を予防することによる抗腫瘍形成活性を有することを特徴とする。
【００４８】
最も好ましくは、本発明の抗体は（ここで、全ての６つのＣＤＲ、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ、全部の重鎖、全部の軽鎖、または全部の重鎖および軽鎖は、本願明細書中の配列番号によって示される特定の配列により限定される）、さらに、本願明細書に記載されるアポトーシスアッセイにおいて、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することを特徴とする。より好ましくは、本発明の抗体は（ここで、全ての６つのＣＤＲ、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ、全部の重鎖、全部の軽鎖、または全部の重鎖および軽鎖は、本願明細書中の配列番号によって示される特定の配列により限定される）、さらに、ナマルバ細胞およびＣＥＭ細胞を含む多数の腫瘍細胞において、２μｇ／ｍＬおよび１０μｇ／ｍＬの間で投与される場合に、核フラグメンテーションおよびカスパーゼ３の活性化、アポトーシスの顕著な特徴を誘導することを特徴とする。
【実施例】
【００４９】
抗体Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶを、以下に示すように作製し、精製し得る。適切な宿主細胞、例えば、ＨＥＫ  ２９３  ＥＢＮＡまたはＣＨＯを、一時的または安定的のいずれかで、最適な所定のＨＣ：ＬＣベクター比を用いて抗体を分泌する発現系、あるいは、ＨＣ（例えば、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、または配列番号２７）およびＬＣ（例えば、配列番号２８）の両方をコードする単一ベクター系とトランスフェクトする。精製培地（抗体がその中に分泌される）を、多くの一般的に用いられる任意の技術を使用して精製する。例えば、培地を、タンパク質Ａ、あるいは、適合性バッファー（例えば、リン酸バッファー化生理食塩水（ｐＨ７．４））で平衡化されたＧセファロースＦＦカラムに都合よく適用し得る。カラムを洗浄して、非特異的結合要素を除去する。結合された抗体を、例えば、ｐＨ勾配（例えば、０．１Ｍのリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ６．８）から０．１Ｍのクエン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ２．５））により溶出する。抗体フラクションを、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより検出し、その後、プールする。更なる精製を、使用目的に応じて任意に行う。抗体を、一般的な技術を用いて、濃縮および／または滅菌濾過し得る。溶性会合体および多量体を、一般的な技術（サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、またはヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む）により効果的に除去し得る。これらのクロマトグラフィー工程の後の抗体の精製度は、９９％より多い。精製物を、迅速に−７０℃にて凍結し得、または凍結乾燥し得る。これらの抗体のアミノ酸配列を以下に示す。
【００５０】
【表１】
2011520885.tif 000002
【００５１】
【表２】
2011520885.tif 000003
【００５２】
（ヒトＣＸＣＲ４／１２５Ｉ−ＳＤＦ−１α結合阻害アッセイ）
ＣＸＣＲ４に対するＳＤＦ−１の結合は、ＣＸＣＲ４細胞内シグナル経路を活性化することの第１工程である。抗体がＳＤＦ−１とＣＸＣＲ４との相互作用をブロックできるかを決定するために、内因性ＣＸＣＲ４を発現するヒト白血病ＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞を１２５Ｉ−標識ＳＤＦ−１α結合アッセイに用いる。このアッセイを、９６ウェルでＵ底の未処置ポリスチレンプレート中で行う。結合アッセイバッファーを、１０ｍＭのＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）（ｐＨ７．５）および０．２％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するＲＰＭＩ  １６４０倍地で調製する。つまり、３００ｐＭのリガンド（６０ｐＭの１２５Ｉ−ＳＤＦ−１αおよび２４ｐＭの冷ＳＤＦ−１α）、異なる濃度の試験抗体入りのアッセイバッファー、１０００００個のヒトＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞、ならびに０．５ｍｇのシンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）ビーズを含有する、２００μＬの反応混合物を室温にて２時間インキュベートする。プレートを、その後、液体シンチレーションおよびＳＰＡモードにおける蛍光カウンターにおいてカウントする。ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、投与量に依存して、このアッセイにおける結合放射能（ｂｏｕｎｄ  ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ）を減少させる。試験抗体の阻害能力（ＩＣ５０）を、投与量に依存する結合放射能の減少に基づいて、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて計算する。
【００５３】
本願明細書において例示される抗体は、このアッセイにおいて１０ｎＭ以下のＩＣ５０値を示す。例えば、抗体ＩＩＩは、このアッセイにおいて０．４５ｎＭの平均ＩＣ５０を示す。このデータは、本願明細書において例示される抗体が、高親和性にてヒトＣＸＣＲ４と結合し、かつ、ＳＤＦ−１に対するヒトＣＸＣＲ４の結合を阻害することを証明する。
【００５４】
（走化性アッセイ）
ＣＸＣＲ４／ＳＤＦ−１相互作用は、表面上にＣＸＣＲ４を有する細胞の移動（走化性）を制御する。試験抗体に関するアンタゴニストおよび細胞活動を決定するために、走化性アッセイを、内因性ＣＸＣＲ４を発現するヒト組織球性リンパ種Ｕ９３７細胞を用いて行う。つまり、１０％のウシ胎仔血清、１％の最少必須培地（ＭＥＭ）ピルビン酸ナトリウム溶液、１％のＭＥＭ非必須アミノ酸、および１％のＬ−グルタミンを含有するダルベッコ改変イーグル培地（Ｄ−ＭＥＭ）において増殖させた、Ｕ９３７細胞を採取し、走化性アッセイバッファー（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、および０．３％のＢＳＡを含有する１×ＲＰＭＩ培地）で一度洗浄する。洗浄後、細胞を５×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度にてアッセイバッファー中に再懸濁する。アッセイを９６ウェル細胞移動プレート上で行う。一般的に、試験抗体を有するまたは有さない５０μＬの細胞混合物を、０．５μｇ／ｍＬから５０μｇ／ｍＬの範囲で、上部チャンバー上に固定（ｐｌａｔｅ）し、１×走化性アッセイバッファー中で調製された３０μＬのＳＤＦ−１α（１０ｎｇ／ｍＬ）を、下部チャンバーに加える。組み終えた後、プレートを、５％の二酸化炭素下で２．５時間３７℃にてインキュベートする。インキュベーションに続き、５μＬの細胞増殖溶液を、下部チャンバーに加える。プレートを、その後、６０分間３７℃にてインキュベートし、そして、移動した細胞を、マイクロプレートリーダーを用いて、４９２ｎｍの吸光度において測定することにより検出する。ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、細胞移動を阻害し、吸光度の読取りを減少させる。このアッセイにおける試験抗体の阻害能力（ＩＣ５０）を、投与量に依存する４９２ｎｍの吸光度の減少に基づいて、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて計算する。
【００５５】
本願明細書において例示される抗体は、このアッセイにおいて、３０ｎＭ以下の平均ＩＣ５０値を示す。抗体ＩＩＩは、このアッセイにおいて、５．９０ｎＭの平均ＩＣ５０値を示す。このデータは、本願明細書において例示される抗体が、高親和性にてヒトＣＸＣＲ４と結合し、かつ、ＳＤＦ−１に対するヒトＣＸＣＲ４の結合を阻害することを証明する。
【００５６】
（表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）による抗ＣＸＣＲ４抗体の結合活性の評価）
Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）２０００機器を、結合反応速度および親和性を測定するために使用する。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）を、表面プラズモン共鳴の最適な特性を利用して、デキストランバイオセンサーマトリックス内で、相互作用する分子のタンパク質濃度における変化を検出する。特に指定のない限り、全ての試薬および材料を、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ（Ｕｐｓａｌａ、スウェーデン）から購入する。全ての測定を４℃にて行う。結合実験を、Ｓｔｅｎｌｕｎｄら（Ｓｔｅｎｌｕｎｄ  Ｐ，Ｂａｂｃｏｃｋ  ＧＪ，Ｓｏｄｒｏｓｋｉ  Ｊ，Ｍｙｓｚｋａ  ＤＧ）著、（２００３年），  「Ｃａｐｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｏｎ  ａ  ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ｓｕｒｆａｃｅ」，  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ３１６（２）：２４３−５０）、ならびにＮａｖｒａｔｉｌｏら（Ｎａｖｒａｔｉｌｏｖａ  Ｉ，Ｓｏｄｒｏｓｋｉ  Ｊ，Ｍｙｓｚｋａ  ＤＧ）著、（２００５年），  「Ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ，  ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｕｓｉｎｇ  ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」，  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ３３９（２）：２７１−８１）に基本的に記載されるように行う。ランニングバッファーは、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５ｍＭの塩化マグネシウム、１ｍＭの塩化カルシウム、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、２ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、ｐＨ７．５である。Ｃ末端リニアＣ９ペプチドタグ（配列番号２９）を有するヒトＣＸＣＲ４受容体を、クローン化し、Ｍｉｒｚａｂｅｋｏｖら（Ｍｉｒｚａｂｅｋｏｖ，Ｎ．  Ｂａｎｎｅｒｔ，Ｍ．  Ｆａｒｚａｎ，Ｗ．  Ｈｏｆｍａｎｎ，Ｐ．  Ｋｏｌｃｈｉｎｓｋｙ，Ｌ．  Ｗｕ，Ｒ．  ＷｙａｔｔおよびＪ．  Ｓｏｄｒｏｓｋｉ）著、「Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，  ｎａｔｉｖｅ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＣＲ５，  ａ  ｐｒｉｎｃｉｐａｌ  ＨＩＶ−１  ｃｏｒｅｃｅｐｔｏｒ」，Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７４  （１９９９年），ｐｐ．  ２８７４５−２８７５０）により以前に記載された同様の方法にて、イヌ胸腺Ｃｆ２Ｔｈ細胞において過剰発現する。Ｃ末端リニアＣ９ペプチドタグを、１Ｄ４モノクローナル抗体（Ｄ．Ｄ．  Ｏｐｒｉａｎ，  Ｒ．Ｓ．  Ｍｏｌｄａｙ，  Ｒ．Ｊ．  ＫａｕｆｍａｎおよびＨ．Ｇ．  Ｋｈｏｒａｎａ著、「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｂｏｖｉｎｅ  ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｍｏｎｋｅｙ  ｋｉｄｎｅｙ  ｃｅｌｌｓ」，Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８４  （１９８７年），ｐｐ．  ８８７４−８８７８）により認識する。
【００５７】
結合を以下のような複数の分析サイクルを用いて評価する。１Ｄ４  Ｍａｂ（モノクローナルクローン  １Ｄ４，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ）をアミンカップリングによりＣＭ５チップに固定する（約１０，０００−２０，０００の共鳴ユニット抗体）。細胞を、２０ｍＭのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ｐＨ７．０）、０．１Ｍの硫酸アンモニウム、１０％のグリセロール、５ｍＭの塩化マグネシウム、１ｍＭの塩化カルシウム、および完全なエチレンジアミン四酢酸を含まないプロテアーゼ阻害剤のタブレットに再懸濁する。チップ上への注入のために最終４×１０６細胞／ｍＬ（すなわち、２．０×１０６細胞、０．５ｍＬ最終容量）を使用する。５：１の比（細胞：バッファーの容積の比）でトランスフェクトされた細胞および界面活性剤（２％のこはく酸水素コレステリルエステル、１０％のドデシルマルトシド、１０％の３−［（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホナート）を含むランニングバッファーをオートミキサーに移す。この混合物を１０分間インキュベートする。インキュベーション後、１５０μＬの可溶化受容体を、２０μＬ／分の流速で１Ｄ４表面上に注入する。次いで、サンプルループをランニングバッファーで洗浄する。その後、１００μＬ／分の流速で２０μＬの抗体を注入する。次いで、チップを、１００μＬ／分で１０ｍＭの水酸化ナトリウム＋１％のｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシドの２回の１０秒パルスを用いて再生する。各サイクルについての会合速度定数（「ｋｏｎ」）および解離速度定数（「ｋｏｆｆ」）を、ＢＩＡ評価ソフトウェアにおいて「物質移動で１：１（１：１  ｗｉｔｈ  ｍａｓｓ  ｔｒａｎｓｆｅｒ）」結合モデルを用いて評価する。「ＫＤ」は解離定数であり、式：ｋｏｆｆ／ｋｏｎ＝ＫＤによって算出する。結合パラメーターを以下にまとめる。データは、本明細書に例示される抗体が高親和性でヒトＣＸＣＲ４に結合し、ＳＤＦ−１に対するヒトＣＸＣＲ４の結合を阻害することを証明する。
【００５８】
【表３】
2011520885.tif 000004
【００５９】
（ＳＣＩＤ／ナマルバ異種移植片モデルにおける抗腫瘍活性）
ＳＤＦ−１／ＣＸＣＲ４相互作用は、腫瘍増殖、浸潤、血管形成および転移を含む、腫瘍形成の複数の段階において重要な役割を果たすように見える。癌における試験抗体のインビボでの抗腫瘍活性を評価するために、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスおよびヒト非ホジキンリンパ腫ナマルバ細胞を用いる腫瘍異種移植片モデルを利用する。つまり、マトリゲルと混合した２００，０００個のナマルバ細胞（１：１）を、動物の後方横腹に皮下移植する。移植した腫瘍細胞を固形腫瘍として増殖させ、その容積を連続的にモニターし、カリパスを用いて測定することができる。このモデルにおけるインビボでの試験抗体の効果を決定するために、動物（１０／群）を、腫瘍細胞移植の４８時間後、生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水に溶解した異なる用量の試験抗体で処置する。抗体を、１μｇ／マウス、１０μｇ／マウス、および１００μｇ／マウスの範囲で皮下投与し、腫瘍容積および体重を２日または３日ごとに測定する。この研究を、腫瘍増殖に応じて、通常３〜４週続ける。試験抗体の抗腫瘍増殖活性を、ビヒクル単独で処置したコントロール群における腫瘍容積と比較して処置群における腫瘍容積の減少率によって決定する。
【００６０】
１０μｇ／マウス（約０．４ｍｇ／ｋｇ）で投与した場合、抗体Ｉはこのアッセイにおいて腫瘍増殖を阻害する。データは、抗体Ｉが腫瘍増殖を防ぐことによる腫瘍形成活性を有することを証明する。
【００６１】
（ＳＣＩＤ／ナマルバ血液学的リンパ種モデル）
リンパ腫においてＣＸＣＲ４抗体の抗腫瘍活性をさらに調べるために、血液学的リンパ腫モデルを、２００，０００個のナマルバ細胞を尾静脈を介してＳＣＩＤマウスに注入することによって確立する。通常、腫瘍細胞を注入したマウスは５〜６週で死ぬ。このモデルの抗体の効力を試験するために、腫瘍細胞注入の２４時間後、動物（各群１０匹）を３０μｇ／マウスまたは１００μｇ／マウスの試験抗体で処置する。抗体を６週間で４日ごとに１度皮下投与し、動物の生存を毎日基礎として記録する。
【００６２】
この血液学的リンパ腫モデルにおいてビヒクルおよびアイソタイプＩｇＧコントロール群と比較した場合、抗体Ｉの処置群は統計的に有意な生存利益を示した。
【００６３】
（ＳＣＩＤ／ＣＥＭ異種移植片モデルにおける抗腫瘍活性）
癌における試験抗体のインビボでの抗腫瘍活性を評価するために、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスおよびＣＥＭ細胞を用いる腫瘍異種移植片モデルを利用する。つまり、マトリゲルと混合した５．０×１０６ＣＥＭ細胞（１：１）を、動物の後方横腹に皮下注入する。注入した腫瘍細胞を固形腫瘍として増殖させ、それを連続的にモニターし、カリパスにより測定することができる。このモデルにおける試験抗体の効果を決定するために、動物（各群に１０匹）を、腫瘍細胞注入の２４時間後、１０μｇ／マウス、３０μｇ／マウスまたは１００μｇ／マウスの試験抗体で処置する。抗体を４日ごとに１度皮下投与し、腫瘍容積および体重を２日または３日ごとに測定する。
【００６４】
用量依存性腫瘍増殖阻害を、ビヒクルおよびアイソタイプＩｇＧコントロール群と比較して抗体Ｉの処置群の中で観測する。全ての３つの用量で抗体Ｉは腫瘍増殖を著しく阻害する。
【００６５】
（アポトーシスアッセイ）
ＣＸＣＲ４抗体がアポトーシスを誘導するか否かを調べるために、高レベルのＣＸＣＲ４を発現する複数の腫瘍細胞株を試験抗体で処置する。細胞を、１％または１０％のＦＢＳを含むそれらの増殖培地で２〜４日間、異なる濃度の試験抗体で処置する。処置後、細胞を３．７％のホルムアルデヒドで固定し、Ｄ−ＰＢＳ中で洗浄する。細胞をＤ−ＰＢＳ中の０．１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で透過処理し、１％のＢＳＡを含むＤ−ＰＢＳ中で洗浄し、ブロックする。次いで、細胞を、１％のＢＳＡを含むＤ−ＰＢＳに希釈したウサギ抗活性化カスパーゼ３ポリクローナル抗体（カタログ番号５５７１３５ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＮＣ）とともに１時間インキュベートする。細胞をＤ−ＰＢＳで２回洗浄し、その後、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）および１％のＢＳＡを含むＤ−ＰＢＳに希釈した２００ｎｇ／ｍＬのＨｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）とともに１時間インキュベートする。染色したプレートを、ＡｒｒａｙＳｃａｎ  Ｖｔｉ（Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）を用いて走査し、Ｔａｒｇｅｔ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｂｉｏａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎを蛍光シグナルの定量のために使用する。
【００６６】
結果は、抗体Ｉが、ナマルバおよびＣＥＭ細胞を含む複数の腫瘍細胞において核フラグメンテーションおよびカスパーゼ３の活性化を誘導することを証明する。核フラグメンテーションおよびカスパーゼ３の活性化は、アポトーシスの顕著な特徴である。従って、このデータは、２μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬの間で投与される場合、抗体Ｉが腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することを証明する。
【００６７】
抗体Ｉがアポトーシスを誘導することをさらに確認するために、アネキシンＶの変化を、試験抗体またはアイソタイプＩｇＧコントロールでの処置後、ナマルバ細胞においてフローサイトメトリーにより調査する。抗体ＩはアネキシンＶの用量依存性の増加を誘導するが、アイソタイプＩｇＧは効果を有さない。さらに、抗体Ｉは、ＴＵＮＥＬ染色によってＣＥＭ異種移植片腫瘍においても観測されるアポトーシスを誘導する。
【００６８】
［配列表］
（重鎖ＣＤＲ）
配列番号１                      ＧＦＴＳＴＤＹＹＦＳ  
配列番号２                      ＦＩＲＴＫＳＫＧＹＴＴＥＹＳＧＳＶＫＧ
配列番号３                      ＥＰＩＴＴＤＰＲＤＹ
配列番号４                      ＦＩＲＳＫＳＫＧＹＴＴＥＹＳＧＳＶＫＧ
配列番号５                      ＦＩＲＹＫＳＫＧＹＴＴＥＹＳＧＳＶＫＧ
配列番号６                      ＦＩＲＮＫＲＫＧＹＴＴＥＹＳＧＳＶＫＧ
配列番号７                      ＦＩＲＨＫＳＫＧＹＴＴＥＹＳＧＳＶＫＧ
【００６９】
（軽鎖ＣＤＲ）
配列番号８                      ＫＳＳＱＳＬＦＮＳＲＴＲＫＫＹＬＡ
配列番号９                      ＷＡＳＫＲＫＳ
配列番号１０                    ＫＱＳＲＦＬＲＡ
【００７０】
（重鎖可変領域）
配列番号１１
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＳＴＤＹＹＦＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＲＴＫＳＫＧＹＴＴＥＹＳＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＩＴＴＤＰＲＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１２
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＳＴＤＹＹＦＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＲＳＫＳＫＧＹＴＴＥＹＳＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＩＴＴＤＰＲＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１３
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＳＴＤＹＹＦＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＲＹＫＳＫＧＹＴＴＥＹＳＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＩＴＴＤＰＲＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１４
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＳＴＤＹＹＦＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＲＮＫＲＫＧＹＴＴＥＹＳＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＩＴＴＤＰＲＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１５
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＳＴＤＹＹＦＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＲＨＫＳＫＧＹＴＴＥＹＳＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＩＴＴＤＰＲＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【００７１】
（軽鎖可変領域）
配列番号１６
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＦＮＳＲＴＲＫＫＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＫＲＫＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＫＱＳＲＦＬＲＡＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
【００７２】
（完全な重鎖）
配列番号１７
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＳＴＤＹＹＦＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＲＴＫＳＫＧＹＴＴＥＹＳＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＩＴＴＤＰＲＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
配列番号１８
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＳＴＤＹＹＦＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＲＳＫＳＫＧＹＴＴＥＹＳＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＩＴＴＤＰＲＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
配列番号１９
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＳＴＤＹＹＦＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＲＹＫＳＫＧＹＴＴＥＹＳＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＩＴＴＤＰＲＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
配列番号２０
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＳＴＤＹＹＦＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＲＮＫＲＫＧＹＴＴＥＹＳＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＩＴＴＤＰＲＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
配列番号２１
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＳＴＤＹＹＦＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＲＨＫＳＫＧＹＴＴＥＹＳＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＩＴＴＤＰＲＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
【００７３】
（完全な軽鎖）
配列番号２２
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＦＮＳＲＴＲＫＫＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＫＲＫＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＫＱＳＲＦＬＲＡＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【００７４】
（ヌクレオチド配列−重鎖可変領域）
配列番号２３
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＣＴＴＣＡＣＣＡＧＴＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＴＴＴＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＧＧＣＴＴＣＡＴＣＣＧＧＡＣＧＡＡＧＴＣＧＡＡＧＧＧＣＴＡＣＡＣＣＡＣＣＧＡＧＴＡＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＡＡＧＡＧＡＴＧＡＴＴＣＡＡＡＧＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＡＧＣＣＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＣＣＴＣＧＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２４
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＣＴＴＣＡＣＣＡＧＴＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＴＴＴＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＧＧＣＴＴＣＡＴＣＣＧＧＴＣＴＡＡＧＴＣＧＡＡＧＧＧＣＴＡＣＡＣＣＡＣＣＧＡＧＴＡＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＡＡＧＡＧＡＴＧＡＴＴＣＡＡＡＧＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＡＧＣＣＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＣＣＴＣＧＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２５
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＣＴＴＣＡＣＣＡＧＴＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＴＴＴＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＧＧＣＴＴＣＡＴＣＣＧＧＴＡＴＡＡＧＴＣＧＡＡＧＧＧＣＴＡＣＡＣＣＡＣＣＧＡＧＴＡＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＡＡＧＡＧＡＴＧＡＴＴＣＡＡＡＧＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＡＧＣＣＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＣＣＴＣＧＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２６
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＣＴＴＣＡＣＣＡＧＴＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＴＴＴＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＧＧＣＴＴＣＡＴＣＣＧＧＡＡＣＡＡＧＣＧＧＡＡＧＧＧＣＴＡＣＡＣＣＡＣＣＧＡＧＴＡＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＡＡＧＡＧＡＴＧＡＴＴＣＡＡＡＧＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＡＧＣＣＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＣＣＴＣＧＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２７
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＣＴＴＣＡＣＣＡＧＴＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＴＴＴＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＧＧＣＴＴＣＡＴＣＣＧＧＣＡＣＡＡＧＴＣＧＡＡＧＧＧＣＴＡＣＡＣＣＡＣＣＧＡＧＴＡＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＡＡＧＡＧＡＴＧＡＴＴＣＡＡＡＧＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＡＧＣＣＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＧＡＣＣＣＴＣＧＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
【００７５】
（ヌクレオチド配列−軽鎖可変領域）
配列番号２８
ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＡＣＴＣＣＣＴＧＧＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＣＡＣＣＡＴＣＡＡＣＴＧＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＣＴＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＣＧＧＡＣＣＣＧＧＡＡＧＡＡＧＴＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＧＣＴＧＣＴＣＡＴＴＴＡＣＴＧＧＧＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＡＡＡＧＡＧＣＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＧＡＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＣＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＡＡＧＣＡＧＡＧＣＣＧＴＴＴＴＣＴＧＡＧＡＧＣＣＴＴＴＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
【００７６】
（ヒトＣＸＣＲ４受容体に対するＣ末端リニアＣ９ペプチドタグ）
配列番号２９                      ＴＥＴＳＱＶＡＰＡ
【００７７】
（ヒトＣＸＣＲ４）
配列番号３０
ＭＥＧＩＳＳＩＰＬＰＬＬＱＩＹＴＳＤＮＹＴＥＥＭＧＳＧＤＹＤＳＭＫＥＰＣＦＲＥＥＮＡＮＦＮＫＩＦＬＰＴＩＹＳＩＩＦＬＴＧＩＶＧＮＧＬＶＩＬＶＭＧＹＱＫＫＬＲＳＭＴＤＫＹＲＬＨＬＳＶＡＤＬＬＦＶＩＴＬＰＦＷＡＶＤＡＶＡＮＷＹＦＧＮＦＬＣＫＡＶＨＶＩＹＴＶＮＬＹＳＳＶＬＩＬＡＦＩＳＬＤＲＹＬＡＩＶＨＡＴＮＳＱＲＰＲＫＬＬＡＥＫＶＶＹＶＧＶＷＩＰＡＬＬＬＴＩＰＤＦＩＦＡＮＶＳＥＡＤＤＲＹＩＣＤＲＦＹＰＮＤＬＷＶＶＶＦＱＦＱＨＩＭＶＧＬＩＬＰＧＩＶＩＬＳＣＹＣＩＩＩＳＫＬＳＨＳＫＧＨＱＫＲＫＡＬＫＴＴＶＩＬＩＬＡＦＦＡＣＷＬＰＹＹＩＧＩＳＩＤＳＦＩＬＬＥＩＩＫＱＧＣＥＦＥＮＴＶＨＫＷＩＳＩＴＥＡＬＡＦＦＨＣＣＬＮＰＩＬＹＡＦＬＧＡＫＦＫＴＳＡＱＨＡＬＴＳＶＳＲＧＳＳＬＫＩＬＳＫＧＫＲＧＧＨＳＳＶＳＴＥＳＥＳＳＳＦＨＳＳ
【００７８】
（ヒトＣＸＣＲ４イソフォームＡ）
配列番号３１
ＭＳＩＰＬＰＬＬＱＩＹＴＳＤＮＹＴＥＥＭＧＳＧＤＹＤＳＭＫＥＰＣＦＲＥＥＮＡＮＦＮＫＩＦＬＰＴＩＹＳＩＩＦＬＴＧＩＶＧＮＧＬＶＩＬＶＭＧＹＱＫＫＬＲＳＭＴＤＫＹＲＬＨＬＳＶＡＤＬＬＦＶＩＴＬＰＦＷＡＶＤＡＶＡＮＷＹＦＧＮＦＬＣＫＡＶＨＶＩＹＴＶＮＬＹＳＳＶＬＩＬＡＦＩＳＬＤＲＹＬＡＩＶＨＡＴＮＳＱＲＰＲＫＬＬＡＥＫＶＶＹＶＧＶＷＩＰＡＬＬＬＴＩＰＤＦＩＦＡＮＶＳＥＡＤＤＲＹＩＣＤＲＦＹＰＮＤＬＷＶＶＶＦＱＦＱＨＩＭＶＧＬＩＬＰＧＩＶＩＬＳＣＹＣＩＩＩＳＫＬＳＨＳＫＧＨＱＫＲＫＡＬＫＴＴＶＩＬＩＬＡＦＦＡＣＷＬＰＹＹＩＧＩＳＩＤＳＦＩＬＬＥＩＩＫＱＧＣＥＦＥＮＴＶＨＫＷＩＳＩＴＥＡＬＡＦＦＨＣＣＬＮＰＩＬＹＡＦＬＧＡＫＦＫＴＳＡＱＨＡＬＴＳＶＳＲＧＳＳＬＫＩＬＳＫＧＫＲＧＧＨＳＳＶＳＴＥＳＥＳＳＳＦＨＳＳ
【００７９】
（ヒトＣＸＣＲ４イソフォームＢ）
配列番号３２
ＭＥＧＩＳＩＹＴＳＤＮＹＴＥＥＭＧＳＧＤＹＤＳＭＫＥＰＣＦＲＥＥＮＡＮＦＮＫＩＦＬＰＴＩＹＳＩＩＦＬＴＧＩＶＧＮＧＬＶＩＬＶＭＧＹＱＫＫＬＲＳＭＴＤＫＹＲＬＨＬＳＶＡＤＬＬＦＶＩＴＬＰＦＷＡＶＤＡＶＡＮＷＹＦＧＮＦＬＣＫＡＶＨＶＩＹＴＶＮＬＹＳＳＶＬＩＬＡＦＩＳＬＤＲＹＬＡＩＶＨＡＴＮＳＱＲＰＲＫＬＬＡＥＫＶＶＹＶＧＶＷＩＰＡＬＬＬＴＩＰＤＦＩＦＡＮＶＳＥＡＤＤＲＹＩＣＤＲＦＹＰＮＤＬＷＶＶＶＦＱＦＱＨＩＭＶＧＬＩＬＰＧＩＶＩＬＳＣＹＣＩＩＩＳＫＬＳＨＳＫＧＨＱＫＲＫＡＬＫＴＴＶＩＬＩＬＡＦＦＡＣＷＬＰＹＹＩＧＩＳＩＤＳＦＩＬＬＥＩＩＫＱＧＣＥＦＥＮＴＶＨＫＷＩＳＩＴＥＡＬＡＦＦＨＣＣＬＮＰＩＬＹＡＦＬＧＡＫＦＫＴＳＡＱＨＡＬＴＳＶＳＲＧＳＳＬＫＩＬＳＫＧＫＲＧＧＨＳＳＶＳＴＥＳＥＳＳＳＦＨＳＳ
【００８０】
（ヒトＳＤＦ−１α）
配列番号３３
ＫＰＶＳＬＳＹＲＣＰＣＲＦＦＥＳＨＶＡＲＡＮＶＫＨＬＫＩＬＮＴＰＮＣＡＬＱＩＶＡＲＬＫＮＮＮＲＱＶＣＩＤＰＫＬＫＷＩＱＥＹＬＥＫＡＬＮＫ
【配列表】
2011520885000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成22年11月9日(2010.11.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2011520885000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成22年11月16日(2010.11.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フレームワーク領域、配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含む軽鎖と、フレームワーク領域、配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３、ならびに配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、および配列番号７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２を含む重鎖可変領域を含む重鎖を含み、ヒトＣＸＣＲ４に結合するヒト遺伝子操作抗体またはその結合フラグメント。
【請求項２】
軽鎖が配列番号１６のアミノ酸配列を含む請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
重鎖が、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４】
軽鎖が配列番号２２のアミノ酸配列を含む請求項１〜３のいずれかに記載の抗体。
【請求項５】
重鎖が、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、および配列番号２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜４のいずれかに記載の抗体。
【請求項６】
配列番号１７および配列番号２２を含む抗体、配列番号１８および配列番号２２を含む抗体、配列番１９および配列番号２２を含む抗体、配列番号２０および配列番号２２を含む抗体、ならびに配列番号２１および配列番号２２を含む抗体からなる群から選択される請求項１〜５のいずれかに記載の抗体。
【請求項７】
配列番号２２の２本の軽鎖、および配列番号１７の２本の重鎖を含む請求項１〜６のいずれかに記載の抗体。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載の抗体を、１つ以上の薬学的に許容できる担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含む医薬組成物。
【請求項９】
治療に用いるための請求項１〜７のいずれかに記載の抗体。
【請求項１０】
腫瘍増殖、浸潤、血管形成、または転移を含む、腫瘍形成の治療に用いるための請求項１〜７のいずれかに記載の抗体。
【請求項１１】
乳癌、膵臓癌、黒色腫、前立腺癌、腎臓癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、肺癌、卵巣癌、結腸直腸癌、多発性骨髄腫、多形性膠芽腫、および白血病からなる群から選択される癌の治療に用いるための、請求項１〜７のいずれかに記載の抗体。
【国際調査報告】
2011520885.tif 000010
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2011520885.tif 000012