(57)【要約】  本発明はヒトにおける瘢痕化阻害のためのＴＧＦ−β３を用いた新しい治療法、及びヒトにおける瘢痕化阻害における新しい使用のためのＴＧＦ−β３を提供する。第１の治療時に、ＴＧＦ−β３は、創縁のセンチメートル毎又は創傷が形成される部位のセンチメートル毎に、第１の治療的な有効量において供与され；次の治療時に、ＴＧＦ−β３は、創縁のセンチメートル毎に、より大きな治療的な有効量のＴＧＦ−β３において供与される。治療は互いに８から４８時間離れてなされる。ＴＧＦ−β３は皮内注射によって与えられ得る。ヒトの創傷治癒に付随する瘢痕阻害の適切な治療計画を選択するキット及び方法もまた提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトの創傷治癒の際に形成される瘢痕化を阻害する方法において、
第１の治療時に、創縁のセンチメートル毎、又は創傷が形成される部位のセンチメートル毎に、第１の治療的な有効量のＴＧＦ−β３を与え；
創傷が形成された後で、第１の治療の８から４８時間後になされる、第２の治療時に、前記創傷に、第１の治療時に与えられるＴＧＦ−β３の治療的な有効量よりも大きな治療的に有効量のＴＧＦ−β３を与える、
瘢痕化が阻害される体の部位の治療を含む方法。
【請求項２】
ＴＧＦ−β３が局所注射によって与えられる請求項１に記載の方法。
【請求項３】
創傷が形成される部位において第一の治療がなされ、局所注射が形成される創傷の正中線に実質的に沿った投与である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
第１の治療が創傷が形成される部位になされ、局所注射が創傷が形成されるそれぞれの創縁への投与である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
第１又は第２の治療が創縁になされ、局所注射が創縁の０．５センチメートル以内の部位に投与される、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
第１及び／又は第２の治療が、創傷の各末端の上の少なくとも０．５センチメートルに広がった領域へのＴＧＦ−βを与えることを含む、請求項１から５の何れか一項に記載の方法。
【請求項７】
ヒトの創傷治癒において形成する瘢痕化を阻害する方法において、
第１の治療時に、創傷が形成される部位のセンチメートル毎に、第１の治療的な有効量のＴＧＦ−β３が与えられ；
創傷が形成し、第１の治療の８から４８時間後になされる、第２の治療時に、前記創傷に、第１の治療時に与えられるＴＧＦ−β３の治療的な有効量よりも大きな治療的な有効量のＴＧＦ−β３が与えられる、
瘢痕化が阻害される体の部位の治療を含む方法。
【請求項８】
ヒトの創傷治癒において形成する瘢痕化を阻害する方法において、
第１の治療時に、創縁のセンチメートル毎、又は将来の創縁のセンチメートル毎に、第１の治療的な有効量のＴＧＦ−β３を与え；
創傷が形成し、第１の治療の８から４８時間後になされる、第２の治療時に、前記創傷に、第１の治療時に与えられるＴＧＦ−β３の治療的な有効量よりも大きな治療的な有効量のＴＧＦ−β３が与えられる、
瘢痕化が阻害される体の部位の治療を含む方法。
【請求項９】
第３又は第４の治療を更に含む請求項１から８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０】
第３又更なる治療時に与えられるＴＧＦ−β３の量が、実質的に第２の治療時に与えらられる量に等しい、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
第３又は更なる治療時に与えられるＴＧＦ−β３の治療的な有効量が先立つ治療時に与えられるＴＧＦ−β３の量よりも大きい、請求項１から９の何れか１項に記載の方法。
【請求項１２】
第２、又は更なる、治療時に創傷のセンチメートル毎に与えられるＴＧＦ−β３の量が、先立つ治療時に与えられる量より少なくとも１００ｎｇ大きい、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
第２、又は更なる、治療時に創傷のセンチメートル毎に与えられるＴＧＦ−β３の量が、先立つ治療時に与えられる量より少なくとも５００ｎｇ大きい、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
第１の治療時に、創縁、又は潜在的な創縁のセンチメートル毎に与えられるＴＧＦ−β３の量が約１００ｎｇである、請求項１から１３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
第１の治療時に、創縁、又は潜在的な創縁のセンチメートル毎に与えられるＴＧＦ−β３の量が約２００ｎｇである、請求項１から１３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１６】
治療が約２４時間離れている請求項１から１５の何れか一項に記載の方法。
【請求項１７】
創傷が皮膚創傷である、請求項１から１６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１８】
創傷が循環系の創傷である、請求項１から１７の何れか一項に記載の方法。
【請求項１９】
創傷が外科手術の結果である、請求項１から１８の何れか一項に記載の方法。
【請求項２０】
ＴＧＦ−β３が局所注射により体の部位に投与される、請求項７から１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ＴＧＦ−β３が製薬的に許容可能な溶液中で投与され、そのうち約１００μｌが治療される体の部位にセンチメートル毎に投与される、請求項１から２０の何れか一項に記載の方法。
【請求項２２】
第１の治療が創傷の前になされる、請求項７から２１の何れか一項に記載の方法。
【請求項２３】
第１の治療が創傷の１時間前までになされる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
第１の治療が創傷後になされる、請求項７から２１の何れか一項に記載の方法。
【請求項２５】
第１の治療が創傷の２時間後までになされる、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
第１の治療が創傷閉鎖後になされる、請求項７から２１の何れか一項に記載の方法。
【請求項２７】
第１の治療が創傷閉鎖の２時間後までになされる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ヒトの創傷治癒に付随する瘢痕化阻害のための適切な治療計画の選択方法において、このような瘢痕化阻害を必要とする患者が、第１の治療の８から４８時間後になされる第２の治療を完了することができるかどうか決定し；
患者が第１の治療の８から４８時間後になされる第２の治療を完了することができる場合、
第１の治療時に、瘢痕化が阻害される、創縁のセンチメートル毎、又は創傷が形成される部位のセンチメートル毎に、第１の治療的な有効量のＴＧＦ−β３が与えられ；
創傷が形成し、第１の治療の８から４８時間後になされる、第２の治療時に、前記創傷に第１の治療時に与えられるＴＧＦ−β３の治療的な有効量よりも大きな治療的な有効量のＴＧＦ−β３が与えられるような、
瘢痕化が阻害される体の部位の治療を含む治療計画を選択するか；又は
患者が第１の治療の８から４８時間後になされる第２の治療を完了することができない場合、
単一の治療時に、瘢痕化が阻害される、創縁のセンチメートル毎、又は創傷が形成される部位のセンチメートル毎に、約１５０ｎｇから３４９ｎｇのＴＧＦ−β３が与えられること、
を含む治療計画を選択することを含む方法。
【請求項２９】
第１の治療時に、第１の治療的な有効量のＴＧＦ−β３が、創縁のセンチメートル毎又は創傷が形成される部位のセンチメートル毎に与えられるように、医薬が与えられ；次の治療時に、前の治療の８から４８時間後に、創縁のセンチメートル毎に、より大きな治療的な有効量のＴＧＦ−β３が与えられるように、医薬が与えられる、ヒトの創傷又はヒトの創傷が形成される部位の治療における、瘢痕化を阻害するための、医薬としてのＴＧＦ−β３の使用。
【請求項３０】
医薬が注入可能な医薬である、請求項２９で使用されるＴＧＦ−β３。
【請求項３１】
医薬が皮内注射のためである、請求項３０で使用されるＴＧＦ−β３。
【請求項３２】
ＴＧＦ−β３の必要量が、医薬の１００μｌ中に与えられるように、医薬が製剤化される、請求項２９から３１の何れか一項に記載のＴＧＦ−β３。
【請求項３３】
第１の治療時に、第１の治療的な有効量のＴＧＦ−β３が、創縁のセンチメートル毎又は創傷が形成される部位のセンチメートル毎に与えられるように、医薬が与えられ；次の治療時に、前の治療の８から４８時間後に、創縁のセンチメートル毎に、より大きな治療的な有効量のＴＧＦ−β３が与えられるように、医薬が与えられる、ヒトの創傷又はヒトの創傷が形成される部位の治療における、瘢痕化を阻害するための、医薬として使用するためのＴＧＦ−β３。
【請求項３４】
医薬が注入可能な医薬である、請求項３３で使用されるＴＧＦ−β３。
【請求項３５】
医薬が皮内注射のためである、請求項３４で使用されるＴＧＦ−β３。
【請求項３６】
ＴＧＦ−β３の必要量が、医薬の１００μｌ中に与えられるように、医薬が製剤化される、請求項３３から３５の何れか一項に記載のＴＧＦ−β３。
【請求項３７】
創傷治癒に付随する瘢痕化阻害における使用のためのキットにおいて、互いに８から４８時間離れた時間に、創傷又は創傷が形成される部位に投与するためのＴＧＦ−β３を含む、第１及び第２のバイアルを含むキット。
【請求項３８】
ヒトの創傷治癒に付随する瘢痕化阻害における使用のためのキットにおいて、
ＴＧＦ−β３を含む組成物の第１の量、この第１の量は、第１の治療時に、創傷又は創傷が形成される部位へ投与するためのものであり；
ＴＧＦ−β３を含む組成物の第２の量、この第２の量は、第２の治療時に、創傷に投与するためのものであり；
互いに８から４８時間離れた時間における、第１の治療時に投与される投与量より大きな治療的な有効量のＴＧＦ−β３の投与量が、第２の治療時に創傷に投与されるような様式における、組成物の第１及び第２の量の投与に関する説明書を含むキット。
【請求項３９】
第１及び第２の組成物の量がそれぞれ異なる第１及び第２の組成物を含み、ここで第２の組成物が第１の組成物よりも大きな濃度のＴＧＦ−β３を含む、請求項３８に記載のキット。
【請求項４０】
第１及び第２の組成物が実質的に等しい濃度のＴＧＦ−β３を含み、説明書が、第２の治療時に投与される第２の組成物の容量が、第１の治療時に投与される第１の組成物の容量よりも大きいべきであることを示す、請求項３８に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はヒトの創傷治癒において形成する瘢痕阻害の新しい方法の提供に関する。本発明はまたＴＧＦ−β３の新規の使用、創傷治癒に伴う瘢痕阻害のための適切な治療計画の選択の新しい方法、及び創傷治癒に関する瘢痕阻害における使用のためのキットを提供する。
【背景技術】
【０００２】
トランスフォーミング成長因子−ベータ（ＴＧＦ−β）は多様な生物学的活性を有するサイトカインのファミリーである。ＴＧＦ−βファミリーは、５つのアイソフォーム、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β４、およびＴＧＦ−β５を含む。
ＴＧＦ−βファミリーのメンバーは、２つのペプチド鎖を含むダイマーの形で、自然に存在する。活性化ＴＧＦ−ダイマーは、約２５．４ｋＤａの分子量を有する。
【０００３】
ＴＧＦ−β３は体の至る場所の瘢痕化の予防、軽減又は阻害に有用であることが示されている。この効果は特にＴＧＦ−β３の創傷治癒に関連する瘢痕阻害の能力に関して有利である。ヒトＴＧＦ−β３のアミノ酸配列は配列番号１に示され、ＴＧＦ−β３をコードする核酸配列は、配列番号２に示される。
【０００４】
全ての成体のほ乳類を通じて創傷の治癒への瘢痕化の応答は共通である。組織の種類の多数で瘢痕化応答は保存され、それぞれの場合に同じ結果に至り、「瘢痕」と呼ばれる繊維組織を形成する。瘢痕は「体の任意の組織におけるけが又は病気の場所において形成する繊維質の結合組織」と定義されてもよい。
【０００５】
創傷治癒の結果の瘢痕の場合、瘢痕は回復応答の結果として生じる構造を構成する。この回復過程は傷を負った動物の死を予防するための生物学的な要請への進化的な解法として起こった。感染又は血液損失による死の危険を克服するために、傷を負った組織を再生するより、むしろ体は傷を負った領域を治療するために素早く反応する。傷を負った組織は創傷化の前に存在した同じ組織の構造になるように再生することはないため、瘢痕は創傷化していない組織と比較した際の異常な形態の点から同定され得る。
【０００６】
巨視的に見ると、瘢痕は周囲の組織の表面の下に落ち込むか、又は傷を負っていない周囲の表面の上に隆起し得る。瘢痕は正常組織より比較的暗い色であり得るか（高色素沈着）、又は周囲と比較してより白い色を有し得る（低色素沈着）。皮膚の瘢痕の場合、高色素沈着又は低色素沈着は、すぐに明らかな化粧品の欠陥を構成する。皮膚の瘢痕は創傷化していない皮膚に比較してより赤くなり、気づかれ、美容的に受け入れられなくなり得ることもまた知られている。瘢痕の美容上の外見は、患者における瘢痕の心理学的な衝撃に寄与する大きな因子の一つであり、これらの影響が、瘢痕を引き起こした創傷が治癒した後も長く残り得ることが知られている。
【０００７】
それらの心理的な影響に加え、瘢痕はまた患者に肉体的な有害な影響を有し得る。これらの影響は典型的には、瘢痕と正常組織間の機械的な際の結果として生じる。瘢痕の異常な構造と組成は、それらが典型的には対応する正常組織よりも柔軟でないことを意味する。その結果、瘢痕は（動きの可能な範囲を制限し得る瘢痕の関節被覆の場合のような）正常機能の障害の原因となり得、若年から存在する場合、正常な発育を遅延し得る。
【０００８】
上記に照らせば、ＴＧＦ−β３は、創傷治癒において起き得る、瘢痕の臨床管理における大きな有用性があるが、創傷治癒に付随する瘢痕を阻害するために使用され得る治療の新しい改善された方法の必要性が残ることも理解されるだろう。
【発明の概要】
【０００９】
本発明の幾つかの態様の目的は、創傷治癒において形成する瘢痕阻害の改善された方法を提供することである。本発明の他の態様の目的は、ＴＧＦ−β３の新しい使用を提供することである。これらの新しいＴＧＦ−β３の使用は、従来技術から知られた使用の代替の使用を構成し得るが、既に知られている使用に比較して、それらが改善された使用を構成することが好適であり得る。
【００１０】
本発明の第１の態様では、ヒトの創傷治癒において形成する瘢痕阻害の方法を提供し、該方法は瘢痕化が阻害される体の部位の治療を含む：
第１の治療時に、創縁のセンチメートル毎、又は創傷が形成される部位のセンチメートル毎に、第１の治療的な有効量のＴＧＦ−β３を与え；
創傷が形成し、第１の治療の８から４８時間後に起きる、第２の治療時に、前記の創傷に、第１の治療時に与えられるＴＧＦ−β３の治療的な有効量よりも大きい治療的な有効量のＴＧＦ−β３が与えられる。
【００１１】
第２の態様では、本発明はヒトの創傷治癒において形成する瘢痕化阻害の方法を提供し、該方法は、瘢痕化が阻害される体の部位の治療を含み：
第１の治療時に、創傷が形成される部位のセンチメートル毎に第１の治療的な有効量のＴＧＦ−β３を与え；
瘢痕が形成し、第１の治療の８から４８時間後に起きる、第２の治療時に、前記創傷に、第１の治療時に与えられるＴＧＦ−β３の治療的な有効量よりも大きい治療的な有効量のＴＧＦ−β３が与えられる。
【００１２】
第３の態様では、本発明はヒトの創傷治癒において形成する瘢痕化阻害の方法を提供し、該方法は、瘢痕化が阻害される体の部位の治療を含み；
第１の治療時に、創縁のセンチメートル毎、又は将来の創縁のセンチメートル毎に、第１の治療的な有効量のＴＧＦ−β３が与えられ；
創傷が形成され、第１の治療の８から４８時間後に起きる、第２の治療時に、前記創傷に、第１の治療時に与えられるＴＧＦ−β３の治療的な有効量よりも大きい治療的な有効量のＴＧＦ−β３が与えられる。
【００１３】
本発明は、さもなければ創傷治癒において期待される瘢痕化が、瘢痕化が低減される部位を、第２（及び任意の続く）治療時に、第１より大きな治療的な有効量のＴＧＦ−β３によって処理する、少なくとも２回の治療を含む治療計画の使用によって驚くほど効果的に阻害され得るという、発明者の発見に基づく。第１の治療時に、創傷化又は創傷閉鎖の周辺の時間帯で起きてもよく、次いでそれぞれの更なる治療は、先立つ治療の８から４８時間後に起きてもよい。本開示において初めて記述されるこれらの治療計画は、既知の治療方法を使用して得られる瘢痕と比較して大幅に低減した瘢痕を引き起こす。
【００１４】
任意の仮説に拘束されることを望まず、発明者は創傷又は創傷が形成される部位における細胞が、第１の治療時に与えられる治療的な有効量のＴＧＦ−β３に曝されることによって、創傷治癒の比較的初期における瘢痕化応答を低減することができると考える。第２の（及び更なる）治療時に与えられるＴＧＦ−β３は、さもなければ創傷部位で生じる生物学的過程の瘢痕化前の「カスケード」に拮抗するために役立ち得る。このようなカスケードは典型的には自己増殖であり、自身の誘導又は瘢痕化を誘導する更なる因子の誘導を引き起こすことができる種々の向繊維因子を伴う。第２の治療時にＴＧＦ−β３のより大きな投与量の使用はこの増殖に拮抗するようであり、従って、先行の技術を使用して達成することができるものより効果的に瘢痕化を阻害する。
【００１５】
恐らくは、下記の先行技術の教示の結果として、治療のこのモードは以前に示唆されていないことに注意することは重要である。しかし、発明者はこの新しいアプローチが瘢痕化阻害において、今日までに知られる他のＴＧＦ−β３治療計画を使用することによって達成され得る効果より顕著に大きな、驚くべき有益な効果を有することを見出した。
【００１６】
抗瘢痕化の結果が特に効果的に達成されるだけでなく、当業者は、ＴＧＦ−β３の２回の比較的高投与量を使用する治療計画は、より少量の投与を使用する既知の計画ほど有益ではないと、先行技術から考えるであろうから、本発明の発見は非常に驚くべきことである。
【００１７】
以前は、ＴＧＦ−β３への抗瘢痕化応答は、図１及び２に示す種類の「ベル型」の投与応答曲線の形態を取ることが、当業者によって理解されていた。この曲線の高又は低終点における投与は、投与応答の中央の位置における投与よりも効果的でなかった。これらの発見に基づき、瘢痕化が阻害される部位のセンチメートル毎の患者に投与されるＴＧＦ−β３の好ましい治療的有効量は、約２００ｎｇと定義された。より低い投与量（約１００ｎｇ）又はより高い投与量（５００ｎｇのような）２００ｎｇのような瘢痕化の効果的な低減は起こらなかった。瘢痕化の動物モデルにおいて行った更なる研究は、瘢痕化を増加するように期待され得る方法において、ＴＧＦ−β３のレベルを向上することで、コラーゲンが増加することを示唆した。発明者及びこの分野の他者による調査では、創傷化の前、又は創傷の形成後の創縁に投与される場合、ＴＧＦ−β３の２００ｎｇの投与量が患者の瘢痕化阻害に効果的であることが決定された。
【００１８】
ＴＧＦ−β３の抗瘢痕化効果の研究により、ヒトの瘢痕化阻害に使用される最適な投与量が２００ｎｇであると確認されると、更なる調査は、瘢痕化が低減される部位へのこの投与量の繰り返しの投与によって何らかの利益が予想されるかどうか考慮した。これらの結果から、創傷への２００ｎｇのＴＧＦ−β３の繰り返しの投与は、観察される抗瘢痕化効果の点で、何ら利益をもたらさないことが示された。
【００１９】
投与応答曲線が、（単一投与の治療計画において）創傷に投与されるＴＧＦ−β３の投与量を増加することにより、治療効果を低減し得ることを認定した場合、治療計画の一部としてＴＧＦ−β３の漸増的な投与を使用する如何なる示唆も非生産的であると考えられる。（発明者及びその他の集団によって）行われた実験に基づけば、治療の複数の使用は、単一の治療計画と同様に効果的ではなく、より複雑で効果であるに過ぎないことが予想される。更に、投与量の増加で抗瘢痕化効果が実際に低減するベル曲線の上部に入る投与量の増加を引き起こすので、創傷に投与するＴＧＦ−β３の量を時間と共に増加させる計画は、好ましい先行技術の計画よりも効果的でない治療に実際になるであろうことが予想される。
【００２０】
上記に照らせば、当業者が、繰り返しの治療を使用し、第１と第２の治療の間で供与するＴＧＦ−β３の量が増加する、ここに記載の種類の治療を考慮する契機を有することはあり得ない。従って、本開示に記載の発見が、創傷の瘢痕化を臨床的に阻害するために使用され得る治療の範囲に、驚くべき、付加価値を供給することは望ましい。
【００２１】
ここに開示される治療の方法は、お互いが少なくとも８から４８時間離れて起きる、少なくとも２回の治療を必要とするので、２回、又はそれ以上の治療を完了することができないであろう患者において使用することは適切ではない。この所見は、ヒトの創傷治癒に付随する瘢痕化阻害のための適切な治療計画の選択方法において、
このような瘢痕化阻害を必要とする患者が、第１の治療の８から４８時間後に起きる第２の治療を完了することができるかどうか決定し；
患者が第１の治療の８から４８時間後に起きる第２の治療を完了することができる場合、本発明の最初の３つの態様の何れかに一致する治療方法を含む治療計画を選択するか；又は
患者が第１の治療の８から４８時間後に起きる第２の治療を完了することができない場合は、
単一の治療時に、瘢痕化が阻害される、創縁のセンチメートル毎、又は創傷が形成される部位のセンチメートル毎に、約１５０ｎｇから３４９ｎｇのＴＧＦ−β３が与えられること、
を含む治療計画を選択することを含む方法を提供する、本発明の更なる態様を与える。この単一の治療のセンチメートル毎に与えられるＴＧＦ−β３の量は、好ましくは約２００ｎｇであってもよい。
【００２２】
本発明の様々な態様及び実施態様において、本開示は、体の部位に与えられるＴＧＦ−β３の量は、このような部位のセンチメートル毎に与えられる量を参照して定義する（例えば、創傷化する部位のセンチメートル毎、又は創縁又は将来の創縁のセンチメートル毎）。これらの文章はこのような部位に与えられるＴＧＦ−β３の量を決定するが、この量が与えられる様式を制限するものでは無いことが望ましい。特に、これらの文章は治療される部位のセンチメートル毎にＴＧＦ−β３の投与が必要であると理解されるべきではない（これは、好ましい実施態様であり得るが）。ＴＧＦ−β３の特定の量が、瘢痕化が阻害される部位に与えられることを許可する、任意の部位に起きる任意の回数の投与によって、必要なＴＧＦ−β３が与えられ得る。
【００２３】
本発明の更なる態様では、瘢痕化を阻害するための、創傷又は創傷が形成される部位の処理において、医薬として使用するためのＴＧＦ−β３の使用を提供し、ここで第１の治療時に、創縁のセンチメートル毎又は創傷が形成される部位のセンチメートル毎に第１の治療的な有効量のＴＧＦ−β３が与えられるように、医薬を与え、次の治療時に、より大きい治療的な有効量のＴＧＦ−β３が創縁のセンチメートル毎に与えられるように、前の治療の８から４８時間の間に、医薬が与えられる。
【００２４】
本発明の態様に一致する医薬は、凍結乾燥した注射可能な組成物のような、再構成することができる医薬であってもよい。
【００２５】
本発明の別の態様では、瘢痕化を阻害するための、創傷又は創傷が形成される部位の処理において、医薬として使用するためのＴＧＦ−β３の使用を提供し、ここで第１の治療時に、創縁のセンチメートル毎又は創傷が形成される部位のセンチメートル毎に第１の治療的な有効量のＴＧＦ−β３が与えられるように、医薬が与えられ、次の治療時に、より大きい治療的な有効量のＴＧＦ−β３が創縁のセンチメートル毎に与えられるように、前の治療の８から４８時間の間に、医薬が与えられる。
【００２６】
本発明の更なる態様では、創傷の治癒において形成する瘢痕化を阻害するためのＴＧＦ−β３の使用を提供し、ここで創縁のセンチメートル毎又は創傷が形成される部位のセンチメートル毎に第１の治療的な有効量のＴＧＦ−β３を与えるを含む、第１の治療の例において、及び創傷が形成され、第１の治療の８から４８時間後に起きる、前記創傷に第１の治療的な有効量より大きい第２の治療的な有効量のＴＧＦ−β３を与えることを含む第２の治療時に、投与するためのＴＧＦ−β３が調製される。
【００２７】
更に、本発明に従って製造された医薬を含む、本発明の方法に影響を及ぼす手段は、通常、創傷治癒に付随する瘢痕化阻害において使用されるキットの形態で提供され得、該キットは、互いに８から４８時間離れた時間において、創傷又は創傷が形成される場所に投与するためのＴＧＦ−β３を含む、少なくとも第１及び第２のバイアルを含むことを見出した。
【００２８】
本発明の更なる態様では、ヒトの創傷治癒に付随する瘢痕化阻害における使用のためのキットであって、
ＴＧＦ−β３を含む組成物の第１の量、この第１の量は、第１の治療時に、創傷又は創傷が形成される部位へ投与するためのものであり；
ＴＧＦ−β３を含む組成物の第２の量、この第２の量は、第２の治療時に、創傷に投与するためのものであり；
互いに８から４８時間離れた時間における、第１の治療時に投与される投与量より大きな治療的な有効量のＴＧＦ−β３の投与量が、第２の治療時に創傷に投与されるような様式における、組成物の第１及び第２の量の投与に関する説明書を含むキットが提供される。
【００２９】
このようなキットにおいて与えられる組成物は、再構成する前に（凍結乾燥した注射可能な組成物のような）適切な形態で提供され得る。
【００３０】
第１及び第２の組成物の量がそれぞれ異なる第１及び第２の組成物を含むことは好適であり得、ここで第２の組成物は第１の組成物より大きな濃度のＴＧＦ−β３を含む。この場合、説明書は、第１及び第２の治療時に部位に投与すべき第１及び第２の組成物と実質的に類似の容量を示し得る。単なる例として、第２の組成物は、約１００ｎｇ／１００μｌ第１の組成物の濃度より大きいか；又は更に２００ｎｇ／１００μｌ、５００ｎｇ／１００μｌ又は１０００ｎｇ／１００μｌ第１の組成物の濃度より大きくてもよい。
【００３１】
その代わりに、第１及び第２の組成物は実質的に同じ濃度のＴＧＦ−β３を含み得、説明書は、第２の治療時に投与される第２の組成物の用量は、第１の治療時に投与される第１の組成物の容量よりも大きいべきであることを示し得る。
【００３２】
本発明の更なる実施態様では、ＴＧＦ−β３は、瘢痕化を阻害するために創傷又は創傷が形成される部位にＴＧＦ−β３を脈動的に送達するために、皮下移植又は貯蔵医薬システムによって与えられ、ここで第１の治療時に、創縁のセンチメートル毎又は創傷が形成される部位のセンチメートル毎に第１の治療的な有効量のＴＧＦ−β３が与えられるように、医薬が与えられ、次の治療時に、より大きい治療的な有効量のＴＧＦ−β３が創縁のセンチメートル毎に与えられるように、前の治療の８から４８時間の間に、医薬が与えられる。
【００３３】
本発明のこの態様に記載の医薬は、例えば、ＴＧＦ−β３を含むミクロスフィア又はマイクロカプセルシステムに基づくポリ乳酸及びグリコール酸（ＰＬＧＡ）コポリマーのようなバルク侵食システムに製剤化され得るか又はＰＬＧＡ：エチルセルロースの混合システムもまた使用され得る。本発明のこの態様に記載の更なる医薬は、ポリマーの加水分解が迅速なポリ（オルト）エステル及びポリ無水マトリックスのような侵食性のマトリックスにＴＧＦ−β３が組み込まれた表面侵食システムにおいて製剤化され得る。本発明のこの態様に記載の医薬は、また上記のような脈動的な送達システムと上記の凍結乾燥した注射可能な組成物のような即時放出システムを組み合わせることにより製剤化し得る。ＴＧＦ−β３は、それぞれの治療時に、同じ経路で、同じ形態により投与され得る一方で、異なる治療は、異なる医薬及び／又は異なる投与経路によってＴＧＦ−β３を供給し得ることが望ましい。本発明の好ましい実施態様では、第１の治療は、皮内注射のような注射によってＴＧＦ−β３を与えてもよく、一方で治療の第２（及び任意の続き）は、局所製剤のような代替の経路によって、ＴＧＦ−β３を供給することを含み得る。
【００３４】
発明者は本発明から導出され得る利点が体の至る部位における創傷に適応可能であり得ると考える。しかし、阻害される瘢痕を付随する創傷は、皮膚創傷であることが好適であり得る。例示的な目的のため、他の組織及び臓器に適用可能であり続けるが、本発明の実施態様は、皮膚創傷を引用して一般的には記載される。単なる例として、別の好ましい実施態様では、創傷は循環系の創傷、特に血管（この場合治療は再狭窄を阻害し得る）であり得る。瘢痕化が本発明に従って阻害され得る他の創傷は明細書の他の場所で考慮される。創傷は（待期的手術のような）外科手術の結果であり得、これは本発明の好ましい実施態様を構成する。
【００３５】
発明者は本明細書に開示の方法、使用、及びキットは、国内の動物、（ウマのような）競技動物又は農業動物のような、ヒト又は非ヒト動物を含む、全ての動物における瘢痕化阻害に使用し得ると考える。瘢痕化が阻害される創傷は好ましくはヒト検体のものである。
【００３６】
本発明の方法は、第３又は更なる治療を含んでいてもよい。このような更なる治療は、患者の看護責任のある臨床医が、瘢痕化の所望の阻害が達成されたと決定するまで、必要であり継続され得る。それぞれの治療は、先立つ治療の８から４８時間後に起きるべきである。第３又は更なる治療の時期の更なるガイダンスは、第１及び第２の相対的な時期に関連するここの開示から理解され得る。
【００３７】
第３の治療（及び任意の更なる治療）において体の部位に与えられるＴＧＦ−β３の量は、第２の治療時に与えられる量と実質的に同じであってもよい（このように投与量は第２の治療の後に効果的に「プラトー」を与える）。その代わりに、第３（又は続く）治療時に体の部位に与えられるＴＧＦ−β３の量は、（それぞれの治療に合わせて与えられるＴＧＦ−β３の量が漸増するように）前の治療時に与えられるＴＧＦ−β３の量に比べて大きくてもよい。
【００３８】
本発明の方法を実施し得る幾つかの様式があり、これらは当業者にとって明確である。特定の好ましい実施態様は次に限定されない例によって下に記載される。これらの例が本発明の最初の３つの態様のそれぞれに適用可能であることが望ましい。
【００３９】
一の実施態様では、第１及び第２の治療（及び適切な他の治療）は、両者ともに実質的に同じ濃度でＴＧＦ−β３を含む組成物を使用し得る。この実施態様では、第２の治療時に体の部位に投与される組成物の量は、第１の治療時に投与される量よりも大きく、この差異は異なる治療の間の投与量を増加する。
【００４０】
第１及び第２の治療（及び、適切な任意の更なる治療）は異なる組成物を使用してもよく、ここで第２の治療時に使用する組成物は、第１の治療時に使用される組成物よりも大きな濃度のＴＧＦ−β３を含むことが好適であり得る。この場合、治療間の投与量の増加が、組成物中のＴＧＦ−β３の濃度の増加の結果として起きるので、ＴＧＦ−β３を含む組成物と実質的に類似の容量が第１及び第２の治療（又は第２の治療において更に小さな容量）において部位に投与され得る。単なる例として、第２の（及び更なる）治療は、先立つ治療時に使用する組成物における濃度よりも約１００ｎｇ／１００μｌ大きい濃度のＴＧＦ−β３を含む組成物を使用し得る。その代わりに、組成物の濃度は、２００ｎｇ／１００μｌ、５００ｎｇ／１００μｌ又は１０００ｎｇ／１００μｌより大きく異なっていてもよい。
【００４１】
体の部位（創傷が形成される、創縁、又は将来の創縁）のセンチメートル毎に与えられる治療的な有効投与量は、約１００ｎｇのＴＧＦ−β３までか、約２００ｎｇのＴＧＦ−β３までか、約３００ｎｇのＴＧＦ−β３までか、約４００ｎｇのＴＧＦ−β３までか、約５００ｎｇのＴＧＦ−β３までか、約６００ｎｇのＴＧＦ−β３までか、約７００ｎｇのＴＧＦ−β３までか、約８００ｎｇのＴＧＦ−β３までか、約９００ｎｇのＴＧＦ−β３までか、約１０００ｎｇのＴＧＦ−β３までか、又はそれより多く含んでいてもよい。これらの値は患者における瘢痕化阻害に関する実施態様において特に適し得る。
【００４２】
第２の治療時に体の部位のセンチメートル毎に与えられる治療的な有効投与量は、第１の治療時における投与量よりも、約１００ｎｇのＴＧＦ−β３か、２００ｎｇのＴＧＦ−β３か、３００ｎｇのＴＧＦ−β３か、４００ｎｇのＴＧＦ−β３か、５００ｎｇのＴＧＦ−β３か、６００ｎｇのＴＧＦ−β３か、７００ｎｇのＴＧＦ−β３か、８００ｎｇのＴＧＦ−β３か、９００ｎｇのＴＧＦ−β３か、更に１０００ｎｇのＴＧＦ−β３大きくてもよい。次の治療は、前の治療時に与えられる投与量から約１００ｎｇのＴＧＦ−β３か、２００ｎｇのＴＧＦ−β３か、３００ｎｇのＴＧＦ−β３か、４００ｎｇのＴＧＦ−β３か、５００ｎｇのＴＧＦ−β３か、６００ｎｇのＴＧＦ−β３か、７００ｎｇのＴＧＦ−β３か、８００ｎｇのＴＧＦ−β３か、９００ｎｇのＴＧＦ−β３か、１０００ｎｇのＴＧＦ−β３だけ変化するＴＧＦ−β３の投与量を使用してもよい。
【００４３】
それぞれの治療時に与えられるＴＧＦ−β３の量は、センチメートル毎に与えられる量に基づく本開示を参照するが、本開示はこれに限定されることなく、任意の適切な単位によって測定される創傷に適用され得る適切な投与量を決定するために使用され得ることが望ましい。
【００４４】
第１の治療は創傷化の前に起きることが好適であり得、この場合、創傷が形成される部位にＴＧＦ−β３が供給され得る。ＴＧＦ−β３が、（皮内注射のような）皮膚への局所投与によって投与される場合、これはＴＧＦ−β３を含む溶液の皮膚への導入の結果として生じるブレブを引き起こし得る。好ましい一態様では、ブレブは創傷が形成される部位で起き得、実際創傷はブレブを切開することにより形成され得る。この場合、第１の治療時に与えられるＴＧＦ−β３の量は、創傷が形成される部位の長さを参照して決定され得る。
【００４５】
その代わりに、創傷が形成される祖部位のそれぞれの末端に、２個のブレブが生じ得る。これらのブレブは、好ましくは、創縁が形成される０．５センチメートル以内に位置し得る。この場合、第１の治療時に与えられるＴＧＦ−β３の量は、形成される創傷の長さを参照して決定され、将来の創縁のセンチメートルで測定され得る（下記）。
【００４６】
好ましくは、創傷化する前の部位にＴＧＦ−β３を供給するために使用されるブレブは、創傷が形成される部位の全長を実質被覆し得る。より好ましくは、創傷が形成される部位の長さを超えて延び得る。適切には、このようなブレブは、形成される創傷のそれぞれの末端を超えて約０．５センチメートル（又はそれ以上）延びてもよい。
【００４７】
本発明のこれらの実施態様に記載の皮内注射は、創傷が形成される中線に実質的に平行、又は形成される創縁に平行に挿入される皮下注射針によって投与され得る。注射部位は、ＴＧＦ−β３が与えられる領域の長さに沿って、お互いに約１センチメートル離して間隔をあけてもよい。
【００４８】
その代わりに、第１の治療時に存在する創傷へのＴＧＦ−β３の供給を含むことは好適であり得る。発明者は、抗瘢痕化活性に関連する生物学的な機構は、細胞が創傷化の前又は後にＴＧＦ−β３に曝されても同じであると考える。それぞれの場合において、必要な生物学的活性は、瘢痕化が阻害される部位の細胞が、治療的な有効量である約３５０から１０００ｎｇのＴＧＦ−β３に、創傷化の前又は後に曝されている限り、達成し得る。
【００４９】
ＴＧＦ−β３が存在する創傷に与えられる本発明の実施態様では、必要量は創傷の長さを参照して決定され得、（下で考察するように）創縁のセンチメートルで測定され得る。ＴＧＦ−β３は、それぞれの創縁の全体の長さに沿って好ましくは与えられるべきであり、創傷化した領域を超えてさえ供給されてもよい。好ましい実施態様では、ＴＧＦ−β３は、創縁の末端を超えて約０．５センチメートル（又はそれ以上）延長した長さに沿って供給されてもよい。
【００５０】
皮内注射はまたＴＧＦ−β３が存在する創傷に投与され得る好ましい経路を表す。この実施態様に従って投与される皮内注射はそれぞれの創縁に投与されるべきである。注射の部位は、創傷の末端から０．５センチメートル以内であることが好適であり得る。注射は、創傷の末端に実質的に平行に挿入される皮下注射によって投与され得る。注射部位は、処理される領域の長さに沿ってお互いに約１センチメートル離れて間隔を置かれてもよい。
【００５１】
第１の治療時における創傷へのＴＧＦ−β３の供与に関連して先立つ段落で示された判断は、また第２（又は更なる）の治療における供給に適用されることができるだろう。創傷化が起きた後に第２の治療が起きるので、これは存在する創傷へのＴＧＦ−β３の供給をいつも含むであろう。創傷は与えられる創傷の運用戦略に依存して、開くか又閉じていてもよい。
【００５２】
第１の治療が、創傷が形成される場所へのＴＧＦ−β３の供給を含む場合、創傷化が開始する１時間以前に、好ましくは創傷化が開始する３０分以前に、最も好ましくは創傷化が開始する１０分以前に、供給が起きることが好適であり得る。
【００５３】
第１の治療は存在する創傷へのＴＧＦ−β３の供給を含み、この治療がなされる時間は、創傷が形成された後に経過した時間を参照して選択されてもよい。この場合、本発明に従って、第１の治療は、創傷化の２時間以内に、好ましくは、創傷化の１時間３０分以内に、より好ましくは創傷化の１時間以内に、更により好ましくは、創傷化の３０分以内に、最も好ましくは創傷化の１５分以内に、開始されることが好適であり得る。
【００５４】
その代わりに又はそれに加えて、第１の治療の時期は、治療される創傷の閉鎖後に経過した時間を参照して選択され得る。この場合、本発明に従って、第１の治療は創傷閉鎖が完了して２時間以内に、好ましくは、創傷閉鎖が完了して１時間３０分以内に、より好ましくは、創傷閉鎖が完了して１時間以内に、更により好ましくは創傷閉鎖が完了して３０分以内に、最も好ましくは創傷閉鎖が完了して１５分以内に、開始されることが好適であり得る。臨床上の理由によって創傷が完全に閉鎖しない場合（例えば、創傷の範囲内への接近を維持することが必要な場合）、一度創傷が着手した手続きの一部として閉鎖する完全な程度に閉鎖すれば、創傷閉鎖は完了したと考えてもよい。
【００５５】
創傷閉鎖後の経過時間を参照する第１の治療の選択は、長期化した外科手術の手続きの場合に特に関連し得ることが望ましいが、ここで創傷は外科手術が実施される部位に接近することを可能にするために、長期間開き続けなければならない。
【００５６】
治療の間の経過時間は８から４８時間であってもよい。より好ましくは、経過時間は、少なくとも１０時間、更により好ましくは少なくとも１２時間、更により好ましくは少なくとも１４時間、更により好ましくは少なくとも１６時間、更により好ましくは少なくとも１８時間、さらにより好ましくは少なくとも２０時間、更により好ましくは少なくとも２２時間、最も好ましくは、約２４時間にすべきである。
【００５７】
治療の間の経過時間は、４８時間までにしてもよいが、好ましくは約４４時間まで、より好ましくは約４０時間まで、更により好ましくは約３６時間まで、更により好ましくは約３２時間まで、更により好ましくは約２８時間まで、最も好ましくは約２４時間までにしてよい。
【００５８】
本発明の方法を実施する場合、瘢痕化が阻害される領域の細胞は、治療的な有効量のＴＧＦ−β３を含む薬学的に許容可能な溶液に「浸される」べきである。これは瘢痕化を阻害するために十分なＴＧＦ−β３に細胞を曝す局所環境を作るであろう。さもなければ創傷化形成に含まれる細胞は、創縁における注射によるか（又は将来の創傷の縁に沿って−図１３のパネルＢに示す技術）、又は創傷が形成される部位への直接注射によって（例えば、創傷化される部位を被覆するブレブを生じさせることによって−図１３のパネルＡに示す技術）ＴＧＦ−β３が投与されるかに関わらず、ＴＧＦ−β３の治療的有効量を受ける。これらの投与のいずれかは、細胞周辺の領域におけるＴＧＦ−β３の抗瘢痕化濃度を確立することができる。
【００５９】
第１の治療が、創傷化する部位への直接注射を使用する場合、ＴＧＦ−β３の必要量は、創傷化する部位を被覆する細胞の周辺で、将来の創傷のラインに沿って投与される、単一の注射の投与（又は連続の「単一」投与）によって確立され得る（図１３のパネルＡに示す技術）。第１の治療がそれぞれの創縁に「対の」注射を使用する場合（又はそれぞれの将来の創縁の下方への「対」注射−図１３のパネルＢに示す技術）、それぞれの縁への注射が同じ領域を処理するために必要となるため、投与されるＴＧＦ−β３の全量は、単一の注射経路（上記）によって与えられるよりも大きいことが望ましいであろう。
【００６０】
本発明の方法において、適切な薬学的組成物の投与による手段によって、ＴＧＦ−β３が必要とする体の部位に与えられることが望ましい。概して、任意の薬学的に許容可能な溶液を使用してもよいが、発明者は本発明に従って使用するための組成物が、マルトースやトリハロースのような糖を有利に含み得ることを見出した。このような糖は、組成物の安定化に役立ち得、また配合されたＴＧＦ−β３の生物学的活性を増加し得る。好ましい組成物は、注射、特に皮内注射に適切なものであってもよい。皮内注射によってＴＧＦ−β３を投与するために使用され得る組成物の多くの製剤は、当業者に知られているであろう。適切な製剤の例は、国際公開第２００７／００７０９５号として刊行された、同時係属中の出願、において記載され、この出願において記載される種類の製剤は、本明細書の
実施例において報告される実験に使用された。
【００６１】
本開示において使用される種々の用語は、次に更に疑念を回避するために記述される。簡潔のため、これらの用語の幾つかは、本発明の特定の態様だけ参照して記述され得ることが望ましい。しかし、他に文脈上必要がある箇所を除いて、次のこれらの用語の記述は、本発明の全ての態様に適用されるであろう。
【００６２】
投与されたＴＧＦ−β３の内容物、効能及び量の計算
ＴＧＦ−β３（及び特に本発明で使用されるＴＧＦ−β３の好適な形態である組み換えヒトＴＧＦ−β３）を含む溶液のタンパク質内容物は好ましくは英国の国立生物学標準研究所（ＮＩＢＳＣ）のトランスフォーミング成長因子ベータ（ヒトｒＤＮＡ由来）の標準試薬コード９８／６０８で標準化された定量的な酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定されうる。このようなタンパク質内容物の決定から溶液の濃度を得、従って、一定量の溶液として体の部位の１センチメートルに与えられるＴＧＦ−β３の量は、当業者によって計算し得る。このプロトコルは実施例において溶液のタンパク質内容物を決定する際に使用される。
【００６３】
当業者がＮＩＢＳＣの標準試薬コード９８／６０８の標準サンプルを手に入れることができない場合、発明者は自身のＴＧＦ−β３産物(Lonza Bulk Drug Substance Lot 205-0505-005)を標準として使用することにより、ＥＬＩＳＡがＮＩＢＳＣ標準試薬コード９８／６０８で得られ値に５２％近似した値を与えることを見出した。ＮＩＢＳＣ標準試薬コード９８／６０８の代わりに、この代替の標準を使用することが望ましい場合、必要なＴＧＦ−β３の量が従って決定されるべきである。
【００６４】
本発明に従って使用されるＴＧＦ−β３の生物活性（即ち、効能）は、ミンク肺上皮細胞株（ＭＬＥＣ）；アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）カタログ番号ＣＣＬ−６４の増殖阻害によって決定され得る。好ましい実施態様では、生物活性は上で述べた英国の国立生物学標準研究所の標準試薬コード９８／６０８を使用し標準化された評価によって定量され得る。標準試薬コード９８／６０８は、ＴＧＦ−β３タンパク質のマイクログラム毎１００００任意単位（ＡＵ）の特異的な生物活性を有すると考えられ、関心のあるサンプルのＭＬＥＣ阻害活性を標準試薬コード９８／６０８のＭＬＥＣ阻害活性と比較することにより、任意単位の関心のあるサンプルの生物活性をすぐに決定することができる。
【００６５】
このように、ＴＧＦ−β３の５００ｎｇの投与は、ＴＧＦ−β３活性の５０００ＡＵを供給し、ＴＧＦ−β３の１０００ｎｇの投与は、ＴＧＦ−β３活性の１００００ＡＵを供給する。発明者は類似の治療効果は、５００ｎｇの投与量の場合は、約３５００から６５００ＡＵのＴＧＦ−β３活性の量によって、１０００ｎｇの投与量の場合は、約８５００から１１５００ＡＵのＴＧＦ−β３活性の量によって、得ることができると考える。本開示においてＴＧＦ−β３の５００ｎｇ又は１０００ｎｇ等の使用の参照は従って構築し得る。
【００６６】
創傷が形成される部位のセンチメートル
簡単な参照のため、創傷が形成される場所の長さは、本発明に従って瘢痕化を減少するために与えられるＴＧＦ−β３の量を決定するために、センチメートルで測定され得る。ＴＧＦ−β３の治療的有効量が創傷の末端に与えられることを保証するために、創傷が形成される意図した長さを超えて延びるように、長さが計算され処理されることは好適であり得る。従って、創傷が形成される（及び、従って該部位の長さが処理される）部位の計算された長さが、約０．５センチメートル（又はそれ以上）の距離だけ、意図した創傷のそれぞれの末端を超えて延びることは好適であり得る。
【００６７】
将来の創縁のセンチメートル
本開示の目的のため、創傷が形成される部位の長さは、将来の創縁をセンチメートルの番号で測定するように、創傷が形成されるそれぞれの縁の長さの合計として（センチメートルで）計算されるべきである。長さが形成する創縁の末端を超えるよう計算され処理されることは好適であり得、このことは、創傷の末端に治療的有効量のＴＧＦ−β３が与えられることを保証する助けとなり得る。従って、計算された将来の創縁の長さ（及び従って処理される場所の長さ）が形成される創傷のそれぞれの末端を超えて約０．５センチメートル（もしくはそれ以上）の距離だけ延びることは好適であり得る。
【００６８】
創縁のセンチメートル
本開示の目的のため、創傷の長さは、創縁をセンチメートルの番号で測定するように、それぞれの創縁の長さの合計として（センチメートルで）計算されるべきである。部位の長さが形成する創縁の末端を超えるよう計算され処理されることは好適であり得る。このことは、創傷の末端に治療的有効量のＴＧＦ−β３が与えられることを保証する助けとなり得る。従って、本発明に従って処理され計算された創縁の長さが、それぞれの末端を超えて約０．５センチメートル（もしくはそれ以上）の距離だけ延びることは好適であり得る。
【００６９】
ＴＧＦ−β３
本開示の目的のために、ＴＧＦ−β３は配列番号１に示したアミノ酸配列を含むペプチドを含むようにされてもよい。ＴＧＦ−β３は好ましくは二量体のＴＧＦ−β３であり得るが、発明者はここに記載の瘢痕化の阻害はＴＧＦ−β３の単量体を使用して達成し得ると考える。実施例に記載の研究において使用されたのは、（それぞれが配列番号１に示すアミノ酸残基の配列を有する２つのポリペプチド鎖を含む）野生型ヒトＴＧＦ−β３のホモ二量化活性断片である。
【００７０】
発明者は本開示に記載の瘢痕化の阻害が、ＴＧＦ−β３誘導体の治療的に有効な断片を使用してもまた達成し得ると考える。ＴＧＦ−β３の断片は配列番号１に提供される配列情報を参照して即時決定し得、誘導体は当業者によく知られた手段を使用してこの配列情報に基づき調製し得る。適切な誘導体の例は国際特許第２００７／１０４８４５号として発行された発明者の同時係属中の出願に開示される。
【００７１】
（配列番号１に一致する２つのペプチド鎖を含む）野生型の二量体活性断片以外のＴＧＦ−β３の形態を使用することが望ましい場合、このような薬剤は自然発生の形態と同じではない分子量を有し得ることが望ましい。従って、本発明の医薬又は方法において使用されるこのような薬剤の治療的有効量は、分子量の差異を反映するために、変化しても良い。従って、野生型の二量体活性断片の半分の分子量を有するＴＧＦ−β３の形態が使用される場合、明細書の他の場所に設定される適切な治療有効量は半分になる。
【００７２】
このようなＴＧＦ−β３の断片又は誘導体の治療効果はいくつかの適切な実験モデルの何れかを参照することによりすぐに評価し得る。このようなモデルは、生物学的効果を示すインビトロモデル（治療効果に関連すると期待され得る）又はヒト又は非ヒトの検体を使用するインビトロ調査を含み得る。単なる例として、明細書の他の場所に設定された実施例に記載の技術は、ＴＧＦ−β３の断片又は誘導体の治療効果を調べるために使用又は適用され得る。
「治療的な有効量」
本開示の目的のための治療的な有効量のＴＧＦ−β３は、本発明に従って使用する場合、創傷の治癒に付随する瘢痕化を予防、低減、阻害することができる。例えば、ＴＧＦ−β３の単一投与を使用する投与応答実験において考慮した際に治療的に有効でないＴＧＦ−β３の量は、本明細書に記載の通り、２回の治療を使用する瘢痕化モデルにおいて未だ治療的に有効であり得ることが望ましい。
【００７３】
瘢痕化の予防／阻害／低減／縮小
本発明の文脈において瘢痕の阻害は、コントロール処理又は処理しない創傷の治癒において発生する瘢痕のレベルに比較した際に、本発明の方法に従って処理された創傷の治癒において発生する瘢痕化の如何なる程度の予防、低減、縮小又は阻害も含むと理解されるべきである。簡潔のために、本明細書は主にＴＧＦ−β３を使用した瘢痕化の「阻害」を言及するが、このような言及はまた、文脈上他に必要がある場合を除いて、ＴＧＦ−β３を使用する瘢痕化の予防、低減又は縮小を含むと理解されるべきである。
【００７４】
薬学的に許容可能
ここで使用する場合、「薬学的に許容可能な」なる用語は、「一般的に安全と見なされている」分子成分及び組成物を指し、それらは生理学的に許容され、ヒトに投与された際に、異常亢進、めまい等のような、アレルギー又は類似の有害反応を典型的には起さない。好ましくは、ここで使用される場合、「薬学的に許容可能」なる用語は、連邦又は州政府の監督庁によって承認されているか又は動物における、及びより詳細にはヒトにおける使用のためのアメリカ薬局方又は他の一般的に認可された薬局方にリストされていることを意味する。
【００７５】
薬学的組成物及び投与
本発明が提供する治療のための組成物はそれ自体として使用することができるが、例えば、意図された投与経路及び標準の薬務に関して選択された、適切な薬学的賦形剤、希釈剤又は担体を含む混合剤として、薬学的な製剤として投与することが好適であり得る。従って、一態様では、本発明は、薬学的に許容可能な賦形剤、希釈剤及び／又は担体を付随する、少なくとも一の活性成分、又はその薬学的に許容可能な誘導体を含む、薬学的な組成物又は製剤を提供する。
【００７６】
本発明の組成物はヒト又は獣医学において使用されるための任意の便利な方法によって投与されるために製剤化され得る。本発明は従ってその範囲内にヒト又は獣医学において使用されるために適用される本発明の生成物を含む薬学的組成物を含む。
【００７７】
治療的な使用のための、許容可能な賦形剤、希釈剤及び担体は薬学分野においてよく知られており、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy。Lippincott Williams & Wilkins (A.R. Gennaro edit. 2005)に記載されている。薬学的な賦形剤、希釈剤、及び担体の選択は、意図された投与経路及び標準の薬務に関して選択し得る。
【００７８】
創傷
発明者は、本発明に記載のＴＧＦ−β３を使用する治療の方法が、全ての種類の創傷における瘢痕化を効果的に阻害するために使用され得ると考える。
【００７９】
瘢痕化が本発明の医薬及び方法を使用して阻害され得る特定の創傷の例は、限定されるものではないが、皮膚の創傷からなる群から独立して選択されるもの；角膜瘢を引き起こすような（ＬＡＳＩＫ手術、ＬＡＳＥＫ手術、ＰＲＫ手術、眼房水濾過手術、白内障手術又は水晶体嚢が瘢痕化しやすくなり得る外科手術のような、眼の外科手術の結果生じる瘢痕化の阻害を含む）眼の創傷；（豊胸に共通の）被膜拘縮になりやすい創傷；血管の創傷；（瘢痕化の予防、低減又は阻害が神経の再結合及び／又は神経機能を高め得る）中枢及び末端神経系の創傷；腱、靱帯又は筋肉の創傷；口唇及び口蓋（例えば、口唇又は口蓋の治療の結果生じる瘢痕化の阻害のため）を含む、口腔の創傷； 肝臓、心臓、脳、消化器官及び再生器官のような内部器官の創傷；（瘢痕化の阻害が接着の形成及び／又は形成される接着の大きさを低減し得る）腹腔、骨盤腔及び胸腔のような体腔の創傷；及び外科手術の創傷（特に、瘢痕再生のような、美容整形に付随する創傷）。本発明の医薬及び方法は、皮膚創傷に付随する瘢痕化の予防、低減又は阻害のために使用されることが特に好ましい。
【００８０】
瘢痕化の評価
瘢痕化の程度、及び従って達成された何らかの瘢痕化阻害は、瘢痕の巨視的な臨床評価によって評価し得る。これは、検体における瘢痕の直接的な評価によって達成され得るか；又は瘢痕の写真の像；又は瘢痕から得られたシリコンの鋳型、又はこのような鋳型によって作製された陽性石膏；の評価による。本開示の目的のために、「処理された瘢痕」は、本発明の記載に従って処理された創傷の治癒において形成した瘢痕を含むようにされるべきである。
【００８１】
瘢痕を評価する際に考慮され得る瘢痕の巨視的な性質は
ｉ）瘢痕の色。上記指摘したように、瘢痕は、周辺の皮膚に対して典型的に低色素沈着または高色素沈着である場合がある。瘢痕化の阻害は、治療された瘢痕の色素沈着の方が、治療されていない瘢痕の色素沈着より、瘢痕がない皮膚に酷似する場合、認められる場合がある。頻繁に瘢痕は周辺の皮膚より赤い場合もある。この場合には、治療されていない瘢痕に比較して、治療された瘢痕の発赤がより早く、またはより完全に、または周辺の皮膚の外観に、より酷似するように薄くなる場合、瘢痕化の阻害を認める場合がある。色は例えば分光光度計を用いてすぐに測定することができる。
ｉｉ）瘢痕の高さ。瘢痕は、周辺の皮膚に比較して典型的に盛り上がる、または窪む場合がある。治療された瘢痕の高さが治療されていない瘢痕より瘢痕のない皮膚の高さに酷似する（つまり、盛り上がらず、窪んでもいない）場合、瘢痕化の阻害を認める場合がある。瘢痕の高さは患者において（例えば、測定によって）直接、又は（瘢痕から得た鋳型の測定によって）間接的に測定することができる。
ｉｉｉ）瘢痕の表面質感。瘢痕は、周辺皮膚より比較的に滑らかな表面（「光っている」外観の瘢痕を生じて）、または周辺皮膚より粗い表面を有する場合がある。治療された瘢痕の表面質感が治療されていない瘢痕の表面質感より瘢痕のない皮膚に酷似する場合、瘢痕化の阻害を認める場合がある。表面質感もまた患者において（例えば、測定によって）直接、又は（瘢痕から得た鋳型の測定によって）間接的に測定することができる。
ｉｖ）瘢痕の硬さ。瘢痕の構成および構造が異常なので、瘢痕を囲む無傷の皮膚より硬いのが通常である。この場合は、治療された瘢痕の硬さが治療されていない瘢痕の硬さより瘢痕のない皮膚に酷似する場合、瘢痕化の阻害を認める場合がある。
を含む。
【００８２】
好ましくは、治療された瘢痕は、本明細書に設定された巨視的評価のパラメータの少なくとも１つに対して評価する際に、瘢痕化の阻害が認められる。また治療された瘢痕は、より好ましくは、該パラメータの少なくとも２つに対して瘢痕化の阻害を認め、さらに好ましくは少なくとも３つとし、最も好ましくはこれらのパラメータの少なくとも４つとする（例えば、上記で設定された４つの全てのパラメータ）。
【００８３】
高さ、長さ、幅、表面面積、増加及び減少体積、瘢痕の粗さ／滑らかさは、例えば、光学３次元測定装置を使用することにより、検体において直接測定し得る。瘢痕測定は、検体において直接、又は（瘢痕のシリコン鋳型の複製印象を作製することにより形成され得る）瘢痕の代わりの鋳型又は石膏においてなされ得る。これらの方法の全てが、光学３次元測定装置を使用するか、又は瘢痕の写真の画像解析によって解析され得る。３次元光学測定は、全ての肌及び瘢痕パラメータの正確な決定を保証する全ての軸に、マイクロメーター範囲の解像度を有する。当業者は、適切なパラメーターを調べるために、手動測定のための測定器、超音波、３次元写真撮影（例えばCanfield Scientific, Inc.から利用可能なハードウェア及び／又はソフトウェアを使用する）及び高解像度磁気共鳴画像法を含む、更なる非侵襲性の方法及び装置を使用することが可能であることに気づくであろう。
【００８４】
瘢痕化の阻害は、治療しない瘢痕と比較した場合の、治療した瘢痕の高さ、長さ、幅、表面面積、減少又は増加体積、粗さ又は滑らかさ又はそれらの任意の組み合わせの低減によって表されてもよい。
【００８５】
顕微鏡評価のための一の好ましい方法は、全体評価である。これは、専門家パネル又は市民パネルによる巨視的な写真像の評価手段によるか、又は臨床医又は患者自身による巨視的な評価手段によって臨床的に達成され得る。評価はＶＡＳ（可視アナログ基準）又は明確な基準によって得てもよい。瘢痕化の評価（及び従って達成された何らかの瘢痕化低減）のための適切なパラメータの例は下に記載される。更なる適切なパラメータの例及びそのようなパラメータが補足され得る手段は、Duncan等(2006)、Beausang等(1998)及びvan Zuijlen等(2002)によって記述される。
【００８６】
可視アナログ基準（ＶＡＳ）瘢痕スコアを使用する評価
瘢痕の評価は、瘢痕ベースのＶＡＳを使用して得てもよい。瘢痕の評価における使用のための適切なＶＡＳは、Duncan等(2006)又はBeausang 等(1998)によって記述される方法に基づいてもよい。これは典型的には０ｃｍが認知できない瘢痕と見なされ、１０ｃｍが非常に弱い肥厚性瘢痕と見なされる、１０ｃｍラインである。この方法におけるＶＡＳの使用によって、瘢痕の評価の簡単な補足と定量化が可能となる。ＶＡＳ点数付けは瘢痕の巨視的及び／又は微視的評価のために使用され得る。
【００８７】
単なる例として、適切な瘢痕化の巨視的な評価は、左から右に、０（正常皮膚に一致する）から１０（悪性の瘢痕を示す）の基準を表す、０から１０ｃｍラインからなるＶＡＳを使用して実行されてもよい。印は瘢痕の全体の評価に基づく１０ｃｍラインにおいて評価者によって付けられてもよい。これは、瘢痕の高さ、幅、輪郭、色のようなパラメータを考慮し得る。最も良い瘢痕は（典型的には小さい幅であり、正常の肌のような色、高さ及び輪郭を有し）、基準の「正常の肌」末端（ＶＡＳラインの左手の側面）に対する点数であり得、悪性の瘢痕は（典型的には大きな幅であり、増加した性質及び均等でない輪郭及びより白い色を有し）基準の「悪性瘢痕」末端（ＶＡＳラインの右手の側面）に対する点数であり得る。印は次いで左手の側面から測定され瘢痕評価の最終値をセンチメートル（小数点第１位まで）で提供し得る。
【００８８】
（巨視的評価又は微視的評価のいずれかの）瘢痕の代替の評価は、どれが好ましい外見を有するかを決定するために、（処理した区域及び別の処理しないか、又はコントロールで処理した区域のような）２個の瘢痕又は２個の瘢痕の区域の比較を含み、垂直線によって交差する２個の１００ｍｍＶＡＳラインを含むＶＡＳを使用して行われてもよい。この種のＶＡＳにおいて、２個のＶＡＳラインは比較する２個の瘢痕に一致し、一方で垂直線はゼロ（比較する瘢痕の間に認知可能な差異が無いことを示す）を表す。最大の１００％（それぞれのＶＡＳラインの末端にある１００ｍｍ）は、瘢痕の一つが周囲の肌と比較して認知できなくなったことを示す。
【００８９】
この方法における瘢痕の顕微鏡像を評価する特に好ましい方法は、世界瘢痕比較基準（ＧＳＣＳ）と呼ばれる。この基準は欧州医薬品庁（ＥＭＥＡ）によって好意的に認知され、瘢痕が評価され、瘢痕阻害に付随する臨床的に関連する終点を決定し得る好適な基準として承認される。特に、臨床パネル評価に基づくＧＳＣＳのバージョン、これはＥＭＥＡによって特に関連すると考えられる、を使用することは、好適であり得る。
【００９０】
ＧＳＣＳのような、この種のＶＡＳを使用する瘢痕ペアの比較の際、評価者は、どの瘢痕が好ましい外見を有するか、又は両者の認知できる差異がないかどうかを最初に決定する。認知可能な差異がない場合、このことは、ゼロの垂直線にマークすることによって記録される。認知可能な差異がある場合、評価者は好適な瘢痕において見出される改善のレベルを決定するためのアンカーとして２個の瘢痕のうちより悪い方を使用し、次いで基準の相対的な箇所における点数を記録する（即ち、瘢痕の外見の比較に従う基準を設定する）。記録された点はアンカーの瘢痕に対する改善のパーセンテージを表す。
【００９１】
発明者は、瘢痕の巨視的又は微視的な出現を評価する際のこの種のＶＡＳ測定の使用は、幾つかの利点を提供することを見出した。これらのＶＡＳは本質的に直感的なので、それらは、１）異なる肌の種類における異なる瘢痕の感受性を反映する像の使用する多大な訓練の必要性を減少し、このツールを、大きな３つの局面において展開するように比較的単純にし；２）データの変動制を減らし、即ち、それぞれの瘢痕ペアの一の評価が医薬及びプラシーボ瘢痕の２個の独立した評価に反するように行われ；３）よく確立されたＶＡＳ（即ち、データの継続配布）の原理及び同じ基準における格付けの利点を含み；４）臨床医及び患者への医薬の効果（パーセント改善）をより簡便に知ることを可能にする。
【図面の簡単な説明】
【００９２】
本発明は次に付随の実施例及び図面を参照して更に説明する。
【図１】図１は１回の治療時に、ヒトの創傷に与えられる異なるＴＧＦ−β３の投与量の抗瘢痕化活性を比較する。
【図２】図２は２回の治療時に、ヒトの創傷に約１時間以内に投与される、異なるＴＧＦ−β３の投与量の抗瘢痕化活性を比較する。
【図３】図３は２回の治療時に、ヒトの創傷に約２４時間離れて投与される、異なるＴＧＦ−β３の投与量の瘢痕化活性を比較する。
【図４】図４はＴＧＦ−β３コントロールで処理した瘢痕又はプラシーボで処した瘢痕の顕微鏡像を比較する。３個のＴＧＦ−β３で処理した瘢痕に、約２４時間離れた治療時に、異なる量のＴＧＦ−β３が供給された。
【図５】図５はＴＧＦ−β３又はプラシーボで処理した創傷治癒において形成した瘢痕から得られた３次元シミュレーション及び瘢痕の測定を示す。
【図６】図６はＴＧＦ−β３又はプラシーボで処理した創傷治癒において形成した瘢痕から得られた３次元シミュレーション及び瘢痕の測定を示す。
【図７】図７はＴＧＦ−β３又はプラシーボで処理した創傷治癒において形成した瘢痕から得られた３次元シミュレーション及び瘢痕の測定を示す。
【図８】図８は（約１時間離れた２回の治療時に、センチメートル毎に５ｎｇ、５０ｎｇ、２００ｎｇ又は５００ｎｇ投与される）ＴＧＦ−β３を使用する４回の実験計画で処理した創傷治癒において形成したコントロール処理した瘢痕において、時系列で得られた瘢痕化阻害の強度を比較する。
【図９】図９は（約２４時間離れた２回の治療時に、センチメートル毎に５ｎｇ、５０ｎｇ、２００ｎｇ又は５００ｎｇ投与される）ＴＧＦ−β３を使用する４回の実験計画で処理した創傷治癒において形成したコントロール処理した瘢痕において、時系列で得られた瘢痕化阻害の強度を比較する。
【図１０】図１０は、ＴＧＦ−β３の異なる投与量に応答する瘢痕形成のラットモデルにおける「ベル型」の投与応答曲線を示す。ＴＧＦ−β３は約２４時間離れたＴＧＦ−β３の２回の注射を介して創傷に供給された。それぞれの注射において与えられるＴＧＦ−β３の量はそれぞれの治療における量と等しいものであった。
【図１１】図１１は、コントロール処理した創傷の治癒において（それぞれは、投与されるＴＧＦ−β３の量が治療の間で一定に保たれる２回の治療に従う）、及び本発明に従って治療した創傷治癒において達成される瘢痕化阻害の強度を比較する。
【図１２】図１２は、（２回の治療において希釈コントロールを与える）プラシーボ処理した創傷、及びコントロール処理した治癒において（それぞれは、投与されるＴＧＦ−β３の量が治療の間で一定に保たれる２回の治療に従う）生成する瘢痕及び本発明に従って処理する創傷治療において生成する瘢痕の代表的な像を示す。
【図１３】図１３は、本発明に従って瘢痕化を阻害することが望まれる体の部位にＴＧＦ−β３を供給するために使用され得る好ましい投与経路を示す写真を示す。パネルＡは創傷ができる部位にＴＧＦ−β３を含む組成物を一回注射する投与を示す。この注射は創傷が形成する部位（２個の内部点の間）を被覆し、意図する創傷部位（外部点によって境界される領域）の上に広がる領域を被覆するブレブを引き起こす。パネルＢは将来の創縁に沿ったＴＧＦ−β３を含む組成物の投与を示す。実線は創傷が形成される部位を示し、ＴＧＦ−β３が投与され得る部位は、将来の創傷を囲む点によって示される。パネルＣ及びＤは存在する（縫合によって閉じられる）創傷の縁へのＴＧＦ−β３を含む組成物の投与を示す。
【図１４】図１４は、本発明に従ってＴＧＦ−β３を投与するために使用され得る皮内注射による好ましい方法を示す。 ＴＧＦ−β３を投与するための皮下注射針を部位Ｂの皮内に挿入し、（１ｃｍの距離で部位Ｂと離れている）部位Ａに進める。次いで１００μｌの組成物を、針を抜くように、部位ＡとＢの間に均等に投与する。次いで針を部位Ｃの皮内に挿入し、部位Ｂの方向に進め、投与工程を繰り返す。１個の創縁への投与が完了したら、他の縁への投与を繰り返してもよい。
【発明を実施するための形態】
【実施例】
【００９３】
図１
図１は、１回の治療時に投与された種々の異なる投与量のＴＧＦ−β３を用いて得られる抗瘢痕化効果を示す用量反応曲線を得るために発明者が行った臨床試験から得られたデータを示す。ＴＧＦ−β３又はプラシーボが１回の皮内注射として、１センチメートルの実験創傷に投与去れた。図は、部位を因子とした、最小二乗及び妥当性分析（ＡＮＯＶＡ）から９５％の信頼区間のＴＧＦ−β３の治療効果を示す。治療効果を試験するために、ＴＧＦ−β３の瘢痕であるＴｏＳｃａｒがそれぞれの検体の別の腕のプラシーボＴｏＳｃａｒと自動的に合わせて差し引かれた。ＴｏＳｃａｒは６周及び３、４、５、６及び７ヶ月のＶＡＳ点数（ｍｍ）の合計として計算された。瘢痕は１００ｍｍＶＡＳラインを使用して投与後（６周、３、４、５、６及び７ヶ月）の６個の時間点において、独立した市民パネルによって計算された。
【００９４】
図１は、創縁のセンチメートル毎に一回の５０ｎｇ、２００ｎｇ及び５００ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３を適用することにより、瘢痕化が効果的に阻害されることを示す。改善レベルは、２００ｎｇ／１００μｌの投与量において観察された、最大の改善（ＴＧＦβ３で処理した瘢痕において、平均＞５０ｍｍの瘢痕改善）、最大の投与量の範囲、即ち、創縁のセンチメートル毎に５００ｎｇ／１００μｌに対し、医薬の効果の減少を伴う、典型的な用量反応曲線を示す。
【００９５】
図２
図２は発明者によって行われた臨床試験から得られたデータを示す。この試験においては、ＴＧＦ−β３及びプラシーボは、（２回の皮内注射によって）２回の離れた治療時にそれぞれ投与された。しかし、本発明の方法とは異なり、第１の治療は創傷化の直前に起きるが、第２の治療は創傷閉鎖の直後に起きた、即ち、両者の投与は、お互いの約１時間以内に投与され（第１は創傷の１０から３０分前、及び第２は創傷後の１０から３０分）、与えられるＴＧＦ−β３の量は、それぞれの治療において同じであった。図は、部位を因子とした、最小二乗及び妥当性分析（ＡＮＯＶＡ）から９５％の信頼区間のＴＧＦ−β３の治療効果を示す。治療効果を試験するために、ＴＧＦ−β３の瘢痕であるＴｏＳｃａｒがそれぞれの検体の別の腕のプラシーボＴｏＳｃａｒと自動的に合わせて差し引かれた。ＴｏＳｃａｒは６周及び３、４、５、６及び７ヶ月のＶＡＳ点数（ｍｍ）の合計として計算された。瘢痕は１００ｍｍＶＡＳラインを使用して投与後（６周、３から７ヶ月）の６個の時間点において、独立した市民パネルによって計算された。
【００９６】
図２は、創傷閉鎖の前及び直後（即ち、両者の投与が約１時間以内）に、創縁のセンチメートル毎に二回の５ｎｇ、５０ｎｇ、２００ｎｇ及び５００ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３を適用することにより、瘢痕化が効果的に阻害されることを示す。改善レベルは、２００ｎｇ／１００μｌの投与量において観察された、最大の改善（ＴＧＦβ３で処理した瘢痕において、平均＞４０ｍｍの瘢痕改善）、最大の投与量の範囲、即ち、創縁のセンチメートル毎に５００ｎｇ／１００μｌに対し、医薬の効果の減少を伴う、典型的な用量反応曲線を示す。瘢痕化が阻害された全体の程度は一回投与計画よりわずかに低いが、改善の程度及びＴＧＦ−β３治療を（約１時間以内に）２回行った用量応答曲線は、ＴＧＦ−β３を一回与えた場合と同等である（図１参照）。このことは、ＴＧＦ−β３を繰り返し投与することは、瘢痕化阻害のより大きな阻害に必ずしもつながらず、何かがこの化合物の抗瘢痕化効果を幾らか減少し得ることを示す。
【００９７】
図３
図３はヒトの調査における発明者によって得られた比較のデータを示す。この調査では、ＴＧＦ−β３及びプラシーボを使用する治療が、第１は創傷化の前及び第２は創傷化の約２４時間後である、２回の治療時に（それぞれ、皮内注射によって）なされた。図は、部位を因子とした、最小二乗及び妥当性分析（ＡＮＯＶＡ）から９５％の信頼区間のＴＧＦ−β３の治療効果を示す。ＴＧＦ−β３を用いたコントロール処理の治療効果を試験するために、ＴＧＦ−β３の瘢痕であるＴｏＳｃａｒがそれぞれの検体の別の腕のプラシーボＴｏＳｃａｒと自動的に合わせて差し引かれた。ＴｏＳｃａｒは６周及び３、４、５、６及び７ヶ月のＶＡＳ点数（ｍｍ）の合計として計算された。瘢痕は１００ｍｍＶＡＳラインを使用して投与後（６周、３、４、５、６及び７ヶ月）の６個の時間点において、独立した市民パネルによって計算された。
【００９８】
図３は、創傷化の前及び約２４時間後に、創縁のセンチメートル毎に二回の５ｎｇ、５０ｎｇ、２００ｎｇ及び５００ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３を適用することにより、瘢痕化が効果的に阻害されることを示す。これらの治療の実験方法のうち、５００ｎｇのＴＧＦ−β３が、２４時間離れた治療において投与される、本発明に記載の方法は他より注目に値するほど効果的である。
【００９９】
図４
図４は、異なるＴＧＦ−β３コントロール治療計画を使用して、阻害し得る瘢痕化の程度が異なる３個の検体の顕微鏡像を表す。顕微鏡像は、発明者によって行われる臨床試験において、プラシーボ処理及びＴＧＦ−β３コントロール処理した創傷の治癒において生成した検体の瘢痕から得られる（創傷のセンチメートル毎の５０ｎｇ、２００ｎｇ及び５００ｎｇ／１００μｌのＴＧＦβ３の約２４時間離れた２回の治療時に２回の投与）。それぞれの治療時に同量のＴＧＦ−β３が投与され、使用量が表題に示される（創縁のセンチメートル毎の５０ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３は上段左、同じ検体のプラシーボは上段右に示され、創縁のセンチメートル毎の２００ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３は中段左、同じ検体のプラシーボは中段右に示され、創縁のセンチメートル毎の５００ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３は下段左、同じ検体のプラシーボは下段右に示される。）
【０１００】
本発明の方法で処理される創傷（下段左）は、最大の瘢痕化阻害が得られた効果を観察することができる。
【０１０１】
図５
図５は、発明者によって行われた臨床試験において、プラシーボ処理及びＴＧＦ−β３処理した（１００μｌの５０ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３又は１００μｌのプラシーボを、創縁のセンチメートル毎に、約２４時間離れて２回投与した）創傷の治癒において生成した瘢痕のシリコン鋳型の測定分析から得られた、３次元シミュレーション及び瘢痕測定を示す。これは、本発明に記載の治療方法ではなく、（図６に沿って）本発明に記載の治療方法の驚くべき効果（結果は図７に設定される）を示す比較のデータを提供するために役立つことに注意されたい。
【０１０２】
上段のパネルは元の３次元シミュレーションであり、明確化のため、下段のパネルは白い矢頭によって瘢痕の境界が区切られ、像の残りの領域は瘢痕に囲まれた正常の皮膚であることを示す。それぞれの瘢痕の定量パラメータの範囲は測定によって分析され、プラシーボと比較してＴＧＦβ３で処理した瘢痕の表面領域においては、３０．２１％の減少が示された（ＴＧＦβ３で処理した創傷の表面領域＝１２．８２３ｍｍ２、プラシーボで処理した創傷瘢痕の表面領域＝１８．３７５ｍｍ２）。
【０１０３】
図６
図６は、発明者によって行われた臨床試験において、プラシーボ処理及びＴＧＦ−β３処理した（１００μｌの２００ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３又は１００μｌのプラシーボを、創縁のセンチメートル毎に、約２４時間離れて２回投与した）創傷の治癒において生成した瘢痕のシリコン鋳型の測定分析から得られた、３次元シミュレーション及び瘢痕測定を示す。図６で示した結果と同様に、これは、本発明に記載の治療方法ではなく、その代わりに、本発明に記載の治療方法の驚くべき効果を示す比較のデータを提供するために役立つことに注意されたい。
【０１０４】
上段のパネルは元の３次元シミュレーションであり、明確化のため、下段のパネルは白い矢頭によって瘢痕の境界が区切られ、像の残りの領域は瘢痕に囲まれた正常の皮膚であることを示す。それぞれの瘢痕の定量パラメータの範囲は測定によって分析され、プラシーボと比較してＴＧＦβ３で処理した瘢痕の表面領域においては、７５．１９％の減少が示された（ＴＧＦβ３で処理した創傷の表面領域＝３．５３２ｍｍ２、プラシーボで処理した創傷瘢痕の表面領域＝１４．２３９ｍｍ２）。測定分析の結果はまたプラシーボ処理と比較してＴＧＦβ３処理によって、瘢痕における体積の増加が７３．３３％減少することを示した。（ＴＧＦβ３で処理した創傷の増加体積＝０．０００８ｍｍ３、プラシーボで処理した創傷の増加体積＝０．００３ｍｍ３）。
【０１０５】
図７
図７は、プラシーボ処理及びＴＧＦ−β３コントロール処理した（１００μｌの５００ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３又は１００μｌのプラシーボを、創縁のセンチメートル毎に、等しい量のＴＧＦ−β３を供与する２回の治療時に、約２４時間離れて２回投与した）創傷の治癒において生成した瘢痕のシリコン鋳型の測定分析から得られた、３次元シミュレーション及び瘢痕測定を示す。
【０１０６】
上段のパネルは元の３次元シミュレーションであり、明確化のため、下段のパネルは白い矢頭によって瘢痕の境界が区切られ、像の残りの領域は瘢痕に囲まれた正常の皮膚であることを示す。この調査において得られた最大の瘢痕化阻害は、２回の比較的高投与量のＴＧＦ−β３を用いた処理に応答して観察される。このアプローチは瘢痕化を阻害するために有効であるが、このような治療計画に付随するコストは（より小さな全量のＴＧＦ−β３を使用する一方で、効率的な瘢痕化阻害が達成され得る）本発明に記載の治療方法よりも高い。
【０１０７】
図８ 
図８は、発明者によって行われた、（それぞれが皮内注射によって試験物質を投与することを含む）２回の治療時に、ＴＧＦ−β３又はプラシーボが投与される臨床試験から得られた結果を示し、第１の治療は創傷化の前に起き、第２の治療は創傷閉鎖の直後に起きる、即ち、両者のＴＧＦ−β３の投与量はお互いに同じであり、約１時間以内（創傷化の１０から３０分前及び創傷後の１０から３０分）に投与される。 治療の実験的な方法は、図８に結果が示され、本発明に記載の治療方法を表していないが、その代わりに、本発明の方法の驚くべき効果を示す、別の（治療に有効な）治療方法であることが理解されるであろう。
【０１０８】
図８は、平均可視アナログ基準（ＶＡＳ）点数（ｍｍ）として、ＴＧＦβ３（再度「Ｊｕｖｉｓａｔａ」と標識化）とプラシーボの治療効果を示す。瘢痕は１００ｍｍＶＡＳラインを使用して投与後（６週間、３から７ヶ月）の６時間点において独立した市民パネルによって記録された。
【０１０９】
図８は創傷閉鎖の前及び直後（即ち、両者の投与は約１時間以内）に創縁のセンチメートル毎に５ｎｇ、５０ｎｇ、２００ｎｇ及び５００ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３の１００μｌの投与を２回適用することにより、瘢痕化が阻害されることを示す。改善のレベルは、用量応答的であり、典型的には初期の時間点（６週間以降）において初めて明らかになり、評価期間を通じて（即ち、調査の７ヶ月まで）維持される。
＊はＴＧＦ−β３コントロール処理した創傷とプラシーボ処理した創傷治癒の結果生じた瘢痕化の顕著な差異（ｐ＜０．０５）を示す。
【０１１０】
図９ 
図９は発明者によって行われた、ＴＧＦ−β３を使用する治療的に有効な抗瘢痕化治療を比較する更なる臨床試験から得られたデータを示す。
【０１１１】
ＴＧＦβ３及びプラシーボは２回の治療の治療において皮内注射によって投与され、第１は創傷化の前であり、第２は約２４時間後である。与えられるＴＧＦ−β３の量は、治療の間で変わらず、この調査は本発明に記載の治療を構成しない。図は、平均可視アナログ基準（ＶＡＳ）点数（ｍｍ）として、ＴＧＦβ３（再度「Ｊｕｖｉｓａｔａ」と標識化）とプラシーボの治療効果を示す。瘢痕は１００ｍｍＶＡＳラインを使用して投与後（６週間、３から７ヶ月）の６時間点において独立した市民パネルによって記録された。
【０１１２】
図９は創傷化の前及び創傷閉鎖の約２４時間後に創縁のセンチメートル毎に５ｎｇ、５０ｎｇ、２００ｎｇ及び５００ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３の１００μｌの投与を２回適用することにより、瘢痕化が阻害されることを示す。改善のレベルは、用量応答的であり、典型的には初期の時間点（６週間以降）において初めて明らかになり、評価期間を通じて（即ち、調査の７ヶ月まで）維持される。驚くべきことに、効果の強度は以前のデータから期待されるものより、はるかに大きい。本発明の方法（それぞれの治療において治療される体の部位のセンチメートル毎に５００ｎｇのＴＧＦ−β３が与えられる）は、他の治療方法（それら自身がいまだ治療効果がある）より驚くほど効果的である。
＊はＴＧＦ−β３コントロール処理した創傷とプラシーボ処理した創傷治癒の結果生じた瘢痕化の顕著な差異（ｐ＜０．０５）を示す。
【０１１３】
図１０
図１０は、ヒト検体において観察されるＴＧＦ−β３の「ベル型」投与応答曲線が、また動物実験においても観察されることを示す。ここで、ＴＧＦ−β３は、２４時間離れた２回の治療（第１の治療は、創傷化時又は周辺において起きる）において、実験用ラットの創傷に供給された。それぞれの治療時に創傷のセンチメートル毎に与えられるＴＧＦ−β３の量はＸ軸に示される（５ｎｇ／ｃｍ、５０ｎｇ／ｃｍ、２００ｎｇ／ｃｍ又は５００ｎｇ／ｃｍ）。
【０１１４】
明らかなように、低投与量のＴＧＦ−β３又は高投与量のＴＧＦ−β３を用いた繰り返しの治療は、ほとんど瘢痕化阻害を引き起こさなかった。
【０１１５】
図１１
創傷治癒及び瘢痕化のラット実験モデルが、未処理のコントロール、又は第１と第２の治療の間でＴＧＦ−β３の投与量が増加しないＴＧＦ−β３を用いたコントロール治療と比較して、本発明の医薬及び方法を使用して達成し得る瘢痕化阻害を示すために使用された。
【０１１６】
図１１は希釈したコントロール（「プラシーボ処理創傷」）で処理した１ｃｍの切開したラットの創傷の治療において生成した瘢痕と、以下の計画：
ｉ）センチメートル毎に２０ｎｇのＴＧＦ−β３を使用したＴＧＦ−β３のコントロール治療；
ｉｉ）センチメートル毎に１００ｎｇのＴＧＦ−β３を使用したＴＧＦ−β３のコントロール治療；又は
ｉｉｉ）本発明に記載のＴＧＦ−β３治療
の１つを与えた創傷の治癒において形成した瘢痕の間の巨視的なＶＡＳ値の平均的な差異を比較したグラフである。
【０１１７】
それぞれの場合において、創傷は、創傷化の前の第１及び約２４時間後の第２の、２回の治療を受けた。
【０１１８】
プラシーボ処理したコントロール創傷は、それぞれが希釈剤の投与を構成する、２回の治療がなされた。これらのプラシーボ処理した創傷は、瘢痕化のためのベースライン値を与え、これを参照して、ＴＧＦ−β３処理によって生成する瘢痕化阻害を決定し得る。「コントロール処理した創傷」は、それぞれが２０ｎｇ／１００μｌ又は１００ｎｇ／μｌのＴＧＦ−β３の注射を含む（それぞれの治療時に同じ濃度のＴＧＦ−β３が注射される）、２回の治療がなされた。「処理される創傷」は、第１の治療時に２０ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３の注射を含み、一方で第２の治療時に１００ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３の注射を含む、本発明に記載の漸増する投与量計画がなされた。
【０１１９】
それぞれの動物は２個の創傷を受け、それらは、それぞれの動物の創傷が、処理した創傷（本発明に記載のＴＧＦ−β３で処理した例）、又は（それぞれの治療時に同じ投与量のＴＧＦ−β３を用いたコントロール処理を受ける）コントロール処理した創傷だけでなく、プラシーボ処理した創傷を含むように準備された。
【０１２０】
創傷化の７０日後に、瘢痕は評価され、ＶＡＳ値は算出された。
【０１２１】
上の図１０において報告した結果と一致して、コントロール処理した（２０ｎｇ／１００μｌ又は１００ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３を用いて２回投与した）創傷は、プラシーボを受けたコントロールの未処理の創傷と比較して瘢痕化の低減を示した。ＴＧＦ−β３の量は、このモデルにおける「ベル型」分布において最も効果的であることが示される領域にあるので、このことは驚くべきことではない。しかし、（第１の治療時に与えられる治療的に有効な量よりも大きな量のＴＧＦ−β３が、第２の治療時に与えられる）本発明の方法に従って投与される創傷が、創傷治癒において形成する瘢痕化阻害の点において顕著に大きな効果をしめしたことは驚くべき発見である。２０ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３に続いて１００ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３を用いる投与の抗瘢痕化効果は、２０ｎｇ／１００μｌ又は１００ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３を２回投与する結果に一致して得られる付加的な抗瘢痕化効果から期待されるものより、顕著に大きな相乗効果がある。
【０１２２】
結果は、本発明の方法によって処理する、創傷治癒において観察された瘢痕化の阻害は、同量の投与量のＴＧＦ−β３を供給する、２回の治療時にＴＧＦ−β３を投与することを含む、代替の治療計画を使用して処理する、創傷治癒において観察されたものより、はるかに大きいものであることを示す。 
【０１２３】
図１２
図１２は上の図１１に関連して記載する研究において得られた瘢痕化の巨視的な外見の代表的な画像である。これらの瘢痕の画像は、創傷化の７０日後に得られ、示された矢頭は瘢痕の末端を示す。
【０１２４】
示した瘢痕は、（プラシーボ処理したコントロール創傷を与える）プラシーボ又は（本発明に記載の漸増的な投与計画を受ける、処理した創傷、又はコントロール処理した創傷の何れかを生産するための）ＴＧＦ−β３の何れかを用いた、２４時間離れた２回の治療がなされる１ｃｍの切開したラット創傷の治癒において形成する瘢痕である。
【０１２５】
コントロールのプラシーボ処理した創傷の治癒において生成する瘢痕の代表的な画像をパネルＡに示す。パネルＢは、それぞれが２０ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３の注射を含む、２回の治療がなされるＴＧＦ−β３のコントロール処理した創傷の治癒において生成する瘢痕を示す。パネルＣは、それぞれが１００ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３の注射を含む、２回の治療がなされるＴＧＦ−β３のコントロール処理した創傷の治癒において生成する瘢痕を示す。パネルＤに示す瘢痕は、本発明に従って処理した創傷治癒において生成した。第１の治療時に、それらは２０ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３が注射され、第２の治療時に、１００ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３が注射された。 
【０１２６】
画像は、ＴＧＦ−β３で処理した結果得られた瘢痕は、プラシーボ処理した創傷と比較して、幅が小さくなり、より白くなくなり（低色素沈着の低減）及び周囲の皮膚とよく調和するという点において、低減されることを示す。コントロールのＴＧＦ−β３で処理した創傷が、瘢痕化の阻害を示す事実は、上で示した投与応答曲線の発生において観察される効果に一致する。図１１に関連して報告されるように、約２４時間後の１００ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３の注射に続く、創傷化の前の２０ｎｇ／１００μｌのＴＧＦ−β３の漸増的な投与計画を用いて処理した創傷は、他の治療計画で処理した創傷治癒において形成する瘢痕に比べ、周囲の創傷化していない皮膚により近い瘢痕を得る、最も大きな瘢痕化阻害を示す。
【０１２７】
配列情報
ＴＧＦ−β３（配列番号１）
ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴ
ＴＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＬＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＳＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳ
配列番号２−野生型ヒトＴＧＦ−β３をコードするＤＮＡ
ＧＣＴ  ＴＴＧ  ＧＡＣ  ＡＣＣ  ＡＡＴ  ＴＡＣ  ＴＧＣ  ＴＴＣ  ＣＧＣ  ＡＡＣ  ＴＴＧ  ＧＡＧ  ＧＡＧ  ＡＡＣ  ＴＧＣ  ＴＧＴ  ＧＴＧ  ＣＧＣ  ＣＣＣ  ＣＴＣ  ＴＡＣ  ＡＴＴ  ＧＡＣ  ＴＴＣ  ＣＧＡ  ＣＡＧ  ＧＡＴ  ＣＴＧ  ＧＧＣ  ＴＧＧ  ＡＡＧ  ＴＧＧ  ＧＴＣ  ＣＡＴ  ＧＡＡ  ＣＣＴ  ＡＡＧ  ＧＧＣ  ＴＡＣ  ＴＡＴ  ＧＣＣ  ＡＡＣ  ＴＴＣ  ＴＧＣ  ＴＣＡ  ＧＧＣ  ＣＣＴ  ＴＧＣ  ＣＣＡ  ＴＡＣ  ＣＴＣ  ＣＧＣ  ＡＧＴ  ＧＣＡ  ＧＡＣ  ＡＣＡ  ＡＣＣ  ＣＡＣ  ＡＧＣ  ＡＣＧ  ＧＴＧ  ＣＴＧ  ＧＧＡ  ＣＴＧ  ＴＡＣ  ＡＡＣ  ＡＣＴ  ＣＴＧ  ＡＡＣ  ＣＣＴ  ＧＡＡ  ＧＣＡ  ＴＣＴ  ＧＣＣ  ＴＣＧ  ＣＣＴ  ＴＧＣ  ＴＧＣ  ＧＴＧ  ＣＣＣ  ＣＡＧ  ＧＡＣ  ＣＴＧ  ＧＡＧ  ＣＣＣ  ＣＴＧ  ＡＣＣ  ＡＴＣ  ＣＴＧ  ＴＡＣ  ＴＡＴ  ＧＴＴ  ＧＧＧ  ＡＧＧ  ＡＣＣ  ＣＣＣ  ＡＡＡ  ＧＴＧ  ＧＡＧ  ＣＡＧ  ＣＴＣ  ＴＣＣ  ＡＡＣ  ＡＴＧ  ＧＴＧ  ＧＴＧ  ＡＡＧ  ＴＣＴ  ＴＧＴ  ＡＡＡ  ＴＧＴ  ＡＧＣ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図８−３】
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【図８−４】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【図９−３】
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【図９−４】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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