(57)【要約】  本発明は、遠位のテトラゾール又はカルボン酸基を含む一又は複数の血清アルブミン結合側鎖で誘導体化されたＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログに関する。更に、本発明は、その組成物及びＹレセプター調節に応答性である症状の治療方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一のアミノ酸残基及び／又はペプチド骨格のＮ末端及び／又はＣ末端が、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、又はＡ−Ｃ−によって定まる血清アルブミン結合側鎖で誘導体化され、ここで、
Ａ−は
2011520847.tif 000078
であり、
ここで、ｐは１０、１１、１２、１３、１４、１５及び１６からなる群から選択され、ｄは０、１、２、３、４及び５からなる群から選択され、
−Ｂ−は
2011520847.tif 000079
からなる群から選択され、
ここで、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され、ｙは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１及び１２からなる群から選択され；
あるいはＡ−は
2011520847.tif 000080
であり、ここで、ｎは１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８及び１９からなる群から選択され、
−Ｂ−は、
2011520847.tif 000081
からなる群から選択され、
ここで、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され；
−Ｃ−は
2011520847.tif 000082
からなる群から選択され、
ここで、ｂ及びｅはそれぞれ独立して０、１、及び２からなる群から選択され、ｃ及びｆはそれぞれ独立して０、１、及び２からなる群から選択され；
但し、
ｃが０であれば、ｂは１又は２であり、
ｃが１又は２であれば、ｂは０であり、
ｆが０であれば、ｅは１又は２であり、
ｆが１又は２であれば、ｅは０であり、
但し、Ａ−が
2011520847.tif 000083
であれば、−Ｃ−は欠失されてもよく；
−Ｄ−は前記アミノ酸残基に結合し、スペーサーである、ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ。
【請求項２】
ペプチドが、
式Ｉに記載のＰＰアナログ
Ｚ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｘａａ２２−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｘａａ２５−Ｘａａ２６−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｘａａ３４−Ａｒｇ−Ｘａａ３６
（Ｉ）
（上式中、
ＺはＮ末端アミノ基に結合した側鎖Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、又はＡ−Ｃ−、又はＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、Ａ−Ｃ−がアミノ酸の側鎖に結合しているときには存在せず、
１位のＡｌａは欠失されていてもよく、
Ｘａａ１０はＡｓｐ、Ａｓｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１１はＡｓｐ、Ａｓｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであｒ、
Ｘａａ１２はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１３はＴｈｒ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１４はＰｒｏ又はヒドロキシプロリンであり、
Ｘａａ１５はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１６はＧｌｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１７はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ１８はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１９はＧｌｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２０はＴｙｒ、Ｐｈｅ、又は３−ピリジルアラニンであり、
Ｘａａ２１はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり
Ｘａａ２２はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２３はＡｓｐ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２４はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ２５はＡｒｇ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２６はＡｒｇ、Ｈｉｓ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２７はＴｙｒ、Ｐｈｅ、ホモＰｈｅ、又は３−ピリジルアラニンであり、
Ｘａａ２８はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ２９はＡｓｎ、Ｇｌｎ、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ３０はＭｅｔ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ３１はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
３３位のＡｒｇはＬｙｓで置換されていてもよく、
Ｘａａ３４はＧｌｎ、Ａｓｎ、又はＨｉｓであり、
３５位のＡｒｇはＬｙｓで置換されていてもよく、
Ｘａａ３６はＴｙｒ、３−ピリジルアラニン；である）；
式ＩＩに記載のＰＹＹアナログ
Ｚ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｘａａ２２−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｘａａ２５−Ｘａａ２６−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｘａａ３４−Ａｒｇ−Ｘａａ３６
（ＩＩ）
（上式中、
ＺはＮ末端アミノ基に結合した側鎖Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、又はＡ−Ｃ−であるか又はＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、Ａ−Ｃ−がアミノ酸の側鎖に結合しているときには存在せず、
１及び２位のＴｙｒ−Ｐｒｏは欠失されていてもよく、
１位のＴｙｒはＡｌａで置換されていてもよく、又は欠失されていてもよく、
Ｘａａ３はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ４はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
６位のＧｌｕはＶａｌで置換されていてもよく、
７位のＡｌａはＴｙｒで置換されていてもよく、
Ｘａａ１０はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、Ｘａａ１１はＡｓｐ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１２はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１３はＳｅｒ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１４はＰｒｏ、ヒドロキシプロリン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１５はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１６はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１７はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ１８はＡｓｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１９はＡｒｇ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２０はＴｙｒ、Ｐｈｅ、３−ピリジルアラニン、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２１はＴｙｒ、Ｐｈｅ、３−ピリジルアラニン、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２２はＡｓｐ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２３はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２４はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、１−アミノ酪酸、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２５はＡｒｇ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２６はＨｉｓ、Ａｒｇ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２７はＴｙｒ、Ｐｈｅ、ホモＰｈｅ、又は３−ピリジルアラニンであり、
Ｘａａ２８はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、１−アミノ酪酸、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２９はＡｓｎ、Ｇｌｎ、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ３０はＭｅｔ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、１−アミノ酪酸、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ３１はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、１−アミノ酪酸、又はＬｙｓであり、
３２位のＴｙｒはＬｙｓで置換されていてもよく、
Ｘａａ３４はＧｌｎ、Ａｓｎ、又はＨｉｓであり、
Ｘａａ３６はＴｙｒ、３−ピリジルアラニン、又はＬｙｓである）；
からなる群から選択され、
ここで、該化合物が、遠位カルボン酸又はテトラゾール基を含む血清アルブミン結合側鎖で修飾されている、請求項１に記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ。
【請求項３】
血清アルブミン結合側鎖が、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、及びＬｙｓからなる群から選択されるペプチド骨格のアミノ酸の側鎖のアミノ基に結合している請求項１又は２に記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ。
【請求項４】
スペーサー−Ｄ−が一又は複数の８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（Ｏｅｇ）分子を含む請求項１から３の何れか一項に記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ。
【請求項５】
前記誘導体がＹ１レセプターに対してよりもＹ２及び／又はＹ４レセプターに対して選択性である請求項１から４の何れか一項に記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ。
【請求項６】
前記誘導体がＹ５レセプターに対してよりもＹ２及び／又はＹ４レセプターに対して選択性である請求項１から５の何れか一項に記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ。
【請求項７】
前記誘導体が、ヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰと比較して改善したＰＫプロファイルを示す請求項１から６の何れか一項に記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ。
【請求項８】
前記誘導体が、ヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰと比較して遅効型特性を示す請求項１から７の何れか一項に記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ。
【請求項９】
誘導体がヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰと比較して改善されたインビボ半減期を示す、請求項１から８の何れか一項に記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ。
【請求項１０】
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１３］ｈＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000084
（配列番号３）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］
［Ｌｙｓ１３，Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０，Ｇｌｎ３４］ｈＰＰ（１−３６）
2011520847.tif 000085
（配列番号４）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）−アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１３］ｈＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000086
（配列番号５）；
Ｎ−イプシロン１０−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１０，Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000087
（配列番号６）；
Ｎ−イプシロン１０−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１０，Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000088
（配列番号７）；
Ｎ−イプシロン１１−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１１］ｈＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000089
（配列番号８）；
Ｎ−イプシロン１１−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１１］ｈＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000090
（配列番号９）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１３，Ｌｅｕ１７，Ｎｌｅ３０，Ｇｌｎ３４］ｈＰＰ（１−３６）
2011520847.tif 000091
（配列番号１０）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１３］ｈＰＹＹ２−３６
2011520847.tif 000092
（配列番号１１）；
Ｎ−イプシロン４−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］ｈＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000093
（配列番号１２）；
Ｎ−イプシロン４−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］ｈＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000094
（配列番号１３）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ａｓｎ１０，Ａｓｐ１１，Ｌｙｓ１３，Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０，Ｖａｌ３１］ｈＰＰ（１−３６）
2011520847.tif 000095
（配列番号１４）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１３，Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ２８，Ｖａｌ３０，Ｇｌｎ３４］ｈＰＰ（１−３６）
2011520847.tif 000096
（配列番号１５）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１３，Ｌｅｕ１７，Ｖａｌ２８，Ｌｅｕ３０，Ｇｌｎ３４］ｈＰＰ（１−３６）
2011520847.tif 000097
（配列番号１６）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１３，Ｌｅｕ１７，Ｖａｌ３０，Ｇｌｎ３４］ｈＰＰ（１−３６）
2011520847.tif 000098
（配列番号１７）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１３，Ｌｅｕ１７，Ｇｌｎ２９，Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ（１−３６）
2011520847.tif 000099
（配列番号１８）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１３，Ａｒｇ２６］ｈＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000100
（配列番号１９）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ａｌａ１，Ｌｅｕ３，Ｇｌｕ４，Ｖａｌ６，Ｔｙｒ７，Ｌｙｓ１３，Ａｒｇ２６］ｈＰＹＹ（１−３６）
2011520847.tif 000101
（配列番号２０）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ａｌａ１，Ｇｌｕ４，Ｌｙｓ１３，Ａｒｇ２６］ｈＰＹＹ（１−３６）
2011520847.tif 000102
（配列番号２１）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ａｌａ１，Ｇｌｕ４，Ｔｙｒ７，Ｌｙｓ１３，Ａｒｇ２６］ｈＰＹＹ（１−３６）
2011520847.tif 000103
（配列番号２２）；
Ｎ−アルファ−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］ｈＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000104
（配列番号２３）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１３］ｈＰＰ（１−３６）
2011520847.tif 000105
（配列番号２４）；
Ｎ−イプシロン４−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ４］ｈＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000106
（配列番号２５）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１３，Ｇｌｎ３４］ｈＰＰ（１−３６）
2011520847.tif 000107
（配列番号２６）；
Ｎ−イプシロン１１−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１１］ｈＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000108
（配列番号２７）；
Ｎ−イプシロン１１−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１１］ｈＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000109
（配列番号２８）；
Ｎ−イプシロン１１−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１１，Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000110
（配列番号２９）；
Ｎ−イプシロン１１−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１１，Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000111
（配列番号３０）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１３］ｈＰＰ（１−３６）
2011520847.tif 000112
（配列番号３１）；
Ｎ−イプシロン１８−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１８，Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000113
（配列番号３２）；
Ｎ−アルファ−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］ｈＰＹＹ１８−３６
2011520847.tif 000114
（配列番号３３）；
Ｎ−イプシロン２５−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ２５］ｈＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000115
（配列番号３４）；
Ｎ−イプシロン２４−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ２４］ｈＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000116
（配列番号３５）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１３，Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ（１−３６）
2011520847.tif 000117
（配列番号３６）；
Ｎ−イプシロン２５−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｅｕ１７，Ｌｙｓ２５，Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ（１−３６）
2011520847.tif 000118
（配列番号３７）；
Ｎ−イプシロン１５−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１５，Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ（１−３６）
2011520847.tif 000119
（配列番号３８）；
Ｎ−イプシロン１０−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１０，Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０，Ｇｌｎ３４］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000120
（配列番号３９）；
Ｎ−イプシロン１９−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１９］ｈＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000121
（配列番号４０）；
Ｎ−イプシロン３３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０，Ｌｙｓ３３］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000122
（配列番号４１）；
Ｎ−イプシロン３３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０，Ｌｙｓ３３］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000123
（配列番号４２）；
Ｎ−イプシロン１８−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｅｕ１７，Ｌｙｓ１８，Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000124
（配列番号４３）；
Ｎ−イプシロン２９−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｅｕ１７，Ｌｙｓ２９，Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000125
（配列番号４４）；
Ｎ−イプシロン２６−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｅｕ１７，Ｌｙｓ２６，Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000126
（配列番号４５）；
Ｎ−イプシロン２６−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｅｕ１７，Ｌｙｓ２６，Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000127
（配列番号４６）；
Ｎ−イプシロン３５−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０，Ｌｙｓ３５］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000128
（配列番号４７）；
Ｎ−イプシロン３５−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０，Ｌｙｓ３５］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000129
（配列番号４８）；
Ｎ−イプシロン２５−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｅｕ１７，Ｌｙｓ２５，Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000130
（配列番号４９）；
Ｎ−イプシロン２５−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｅｕ１７，Ｌｙｓ２５、Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000131
（配列番号５０）；
Ｎ−イプシロン１３−［４−（１６−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ヘキサデカノイルスルファモイル）ブチリル］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１３］ＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000132
（配列番号５１）；
Ｎ−イプシロン２５−［４−（１６−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ヘキサデカノイルスルファモイル）ブチリル］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ２５］ＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000133
（配列番号５２）；
Ｎ−アルファ−［４−（１６−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ヘキサデカノイルスルファモイル）ブチリル］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］ＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000134
（配列番号５３）；
Ｎ−アルファ−［４−（１６−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ヘキサデカノイルスルファモイル）ブチリル］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］ＰＹＹ（３−３６）
2011520847.tif 000135
（配列番号５４）；
Ｎ−アルファ−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000136
（配列番号５５）；
Ｎ−アルファ−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ２−３６
2011520847.tif 000137
（配列番号５６）；
Ｎ−イプシロン１８−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１８］ＰＹＹ３−３６
2011520847.tif 000138
（配列番号５７）；
Ｎ−イプシロン２２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ２２］ＰＹＹ３−３６
2011520847.tif 000139
（配列番号５８）；
Ｎ−イプシロン２６−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ２６］ＰＹＹ３−３６
2011520847.tif 000140
（配列番号５９）；
Ｎ−イプシロン２９−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ２９］ＰＹＹ３−３６
2011520847.tif 000141
（配列番号６０）；
Ｎ−イプシロン３６−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ３６］ＰＹＹ３−３６
2011520847.tif 000142
（配列番号６１）；
Ｎ−イプシロン２１−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ２１］ＰＹＹ３−３６
2011520847.tif 000143
（配列番号６２）；
Ｎ−イプシロン３０−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ３０］ＰＹＹ３−３６
2011520847.tif 000144
（配列番号６３）；
Ｎ−イプシロン３１−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ３１］ＰＹＹ３−３６
2011520847.tif 000145
（配列番号６４）；
Ｎ−イプシロン１４−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１４］ＰＹＹ３−３６
2011520847.tif 000146
（配列番号６５）；
Ｎ−イプシロン１５−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１５］ＰＹＹ３−３６
2011520847.tif 000147
（配列番号６６）；
Ｎ−イプシロン１６−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ１６］ＰＹＹ３−３６
2011520847.tif 000148
（配列番号６７）；
Ｎ−イプシロン２０−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ２０］ＰＹＹ３−３６
2011520847.tif 000149
（配列番号６８）；
Ｎ−イプシロン２８−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ２８］ＰＹＹ３−３６
2011520847.tif 000150
（配列番号６９）；
Ｎ−イプシロン３２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｙｓ３２］ＰＹＹ３−３６
2011520847.tif 000151
（配列番号７０）；
Ｎ−イプシロン２５−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｅｕ１７，Ｌｙｓ２５，Ｌｅｕ３０］ＰＰ１−３６
2011520847.tif 000152
（配列番号７１）；
Ｎ−イプシロン１５−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｅｕ１７，Ｌｙｓ１５，Ｌｅｕ３０］ＰＰ１−３６
2011520847.tif 000153
（配列番号７２）；
Ｎ−イプシロン１３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｅｕ１７，Ｌｙｓ１３，Ｌｅｕ３０，Ｇｌｎ３４］ＰＰ１−３６酸
2011520847.tif 000154
（配列番号７４）；及び
Ｎ−アルファ−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０］ＰＰ１−３６
2011520847.tif 000155
（配列番号７５）
からなる群から選択される請求項１から９の何れか一項に記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ。
【請求項１１】
請求項１から１０の何れか一項に記載されたＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログと一又は複数の薬学的賦形剤を含有する組成物。
【請求項１２】
請求項１から１０の何れか一項に記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの投与による、Ｙレセプター調節に応答性である症状の治療方法。
【請求項１３】
Ｙレセプター調節に応答性である症状が肥満症である請求項１２に記載の治療方法。
【請求項１４】
投与計画が、一日一回、週一回、月二回、又は月一回からなる群から選択される請求項１２又は１３に記載の治療方法。
【請求項１５】
肥満症又は肥満関連疾患、例えば食物摂取の減少のようなＹレセプター調節に応答性である症状の治療のための医薬の調製における請求項１から１０の何れか一項に記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は治療用ペプチドの分野、つまり、新規の遅効型ペプチド誘導体、例えばペプチドＹＹ（ＰＹＹ）及び膵臓ポリペプチド（ＰＰ）誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＰＹＹは遠位小腸及び結腸中のＬ細胞から食事中に放出される。ＰＹＹはＹ１、Ｙ２、及びＹ５レセプターサブタイプを共に活性化させる。ペプチドＰＹＹは、胃腸（ＧＩ）管において末梢効果を有しており、また満腹シグナルとして中心的に作用することが知られている。ＰＹＹはＰＹＹ（１−３６）として放出されるが、ＰＹＹ（３−３６）に切断され、これが循環ＰＹＹのおよそ５０％を構成する。分解の原因となる酵素はジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）である。ＰＹＹ（３−３６）はＹ１、Ｙ４、及びＹ５レセプターに対してよりもＹ２レセプターに対して選択性を示す。
【０００３】
ＰＰは膵島中の内分泌細胞から分泌されるホルモンであり、放出は食物摂取によって刺激される。それはＹ４レセプターのアゴニストとして好ましくは作用するが、またＹ５レセプターに対してある程度の親和性を示す。ＰＰは食物摂取を低減させることが知られており、エネルギー消費を潜在的に増加させる。Ｙ２及びＹ４レセプターサブタイプは食物摂取の重要な調節因子と考えられる。
【０００４】
Ｙ１及びＹ５レセプターに対してよりもＹ２又はＹ４に対してのみ選択性であるアゴニスト又はＹ１及びＹ５レセプターに対してよりもＹ２及びＹ４レセプター双方に対して選択性であるアゴニストは例えば肥満症のような症状の治療のために有益であると考えられる。かかるペプチド薬の設計では、望まれない副作用（例えば血圧の増加）を生じる、Ｙ１に対するアゴニスト効果が比較的低いことが重要である。更に、Ｙ５レセプターの活性化は、食物摂取を増加させるので、望ましくない。しかしながら、Ｙ５レセプターは、循環ペプチドが接近できるとは期待されないＣＮＳの領域において発現される。
【０００５】
従って、ＰＹＹ及びＰＰは相対的に広いレセプター結合特異性のため薬学的薬剤としての使用には最適ではない。ＰＹＹはＹ２レセプターに加えてＹ１及びＹ５レセプターに作用し、ＰＰはＹ４レセプターに加えてＹ５レセプターに作用する。また、ＰＹＹ（３−３６）及びＰＰ双方とも直ぐに分解し、最適以下の薬物動態特性を示し、よって少なくとも一日一回又は一日二回投与されなければならない。ＰＹＹ（３−３６）の半減期はブタで＜３０分であると報告され (Ito T等, Journal of Endocrinology (2006), 191, pp113-119)、ＰＰの半減期はヒトで７分と報告されている(Adrian T.E.等, Gut (1978), 19, pp907-909)。
【０００６】
Yレセプター調節に応答性である症状、例えば肥満症の治療では、ＹレセプターサブタイプＹ２又はＹ４単独に対して特異的であるＰＹＹ又はＰＰアナログ、又はレセプターサブタイプＹ２及びＹ４の双方に同時に作用し、重要なことにヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰペプチドよりも低頻度の投与の投薬計画で使用することができるように、遅効型薬物動態特性をまた示すアナログを使用することは魅力的であろう。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１Ａ】ＰＹＹ（３−３６）及びＰＹＹアナログの投与後のＣ５７ＢＬマウスにおける食物摂取に対する効果（ＢｉｏＤＡＱ）。試験した化合物はビヒクル、配列番号１、配列番号３、及び配列番号４である。用量は１μｍｏｌ／ｋｇ皮下ｏｉｄであった。
【図１Ｂ】図１Ａに記載したＰＹＹアナログの投与後のＣ５７ＢＬマウスにおける食物摂取に対する効果（ＢｉｏＤＡＱ）であるが、異なった統計的方法を使用して表される。
【図２】１μｍｏｌ／ｋｇ皮下の用量での配列番号２（ｈＰＰ（１−３６））及びＰＰアナログ配列番号２９及び配列番号３０の投与後の痩せたＣ５７ＢＬマウスにおける食物摂取に対する効果（ＢｉｏＤＡＱ）。
【図３】０．０３及び０．１μｍｏｌ／ｋｇ皮下の用量での配列番号４３の投与後のＣ５７ＢＬマウスにおける食物摂取に対する効果（ＢｉｏＤＡＱ）。
【図４】０．３及び１．０μｍｏｌ／ｋｇ皮下の用量での配列番号２３の投与後のＣ５７ＢＬマウスにおける食物摂取に対する効果（ＢｉｏＤＡＱ）。
【図５】０．１、０．３及び１．０μｍｏｌ／ｋｇ皮下の用量での配列番号４０の投与後のＣ５７ＢＬマウスにおける食物摂取に対する効果（ＢｉｏＤＡＱ）。
【図６】０．３及び１．０μｍｏｌ／ｋｇ皮下の用量での配列番号３の投与後のｏｂ／ｏｂマウスにおける体重変化。
【図７】０．３及び１．０μｍｏｌ／ｋｇ皮下の用量での配列番号３での処置の１４日目におけるｏｂ／ｏｂマウスにおけるベースラインからの体重変化パーセント。
【図８】ミニブタにおける薬物動態プロファイルの決定。試験した化合物は配列番号３である。用量は６ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈内である。
【図９】１．０μｍｏｌ／ｋｇ皮下の用量での配列番号５７、配列番号５８及び配列番号５９の投与後の痩せたＣ５７ＢＬマウスにおける食物摂取に対する効果（ＢｉｏＤＡＱ）。
【図１０】１．０μｍｏｌ／ｋｇ皮下の用量での配列番号４３、配列番号４６及び配列番号５５の投与後の痩せたＣ５７ＢＬマウスにおける食物摂取に対する効果（ＢｉｏＤＡＱ）。
【図１１】日暮れ前での痩せたラットにおける１．０μｍｏｌ／ｋｇの用量での配列番号５７、配列番号５８及び配列番号５９の単一の皮下投与後の食物摂取に対する効果。
【発明の概要】
【０００８】
本発明はＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログに関し、ここで、少なくとも一のアミノ酸残基及び／又はペプチド骨格のＮ末端及び／又はＣ末端が、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、又はＡ−Ｃ−によって定まる血清アルブミン結合側鎖で誘導体化され、ここで、
Ａ−は
2011520847.tif 000002
であり、
ここで、ｐは１０、１１、１２、１３、１４、１５及び１６からなる群から選択され、ｄは０、１、２、３、４及び５からなる群から選択され、
−Ｂ−は
2011520847.tif 000003
からなる群から選択され、
ここで、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され、ｙは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１及び１２からなる群から選択され；
あるいはＡ−は
2011520847.tif 000004
であり、ここで、ｎは１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８及び１９からなる群から選択され、
−Ｂ−は、
2011520847.tif 000005
からなる群から選択され、
ここで、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され；
−Ｃ−は
2011520847.tif 000006
からなる群から選択され、
ここで、ｂ及びｅはそれぞれ独立して０、１、及び２からなる群から選択され、ｃ及びｆはそれぞれ独立して０、１、及び２からなる群から選択され、但し、
ｃが０であれば、ｂは１又は２であり、
ｃが１又は２であれば、ｂは０であり、
ｆが０であれば、ｅは１又は２であり、
ｆが１又は２であれば、ｅは０であり、
但し、Ａ−が
2011520847.tif 000007
であれば、−Ｃ−は欠失されてもよく；
−Ｄ−は前記アミノ酸残基に結合し、スペーサーである。
【０００９】
一態様では、本発明は、ここに定義されたＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログと一又は複数の薬学的賦形剤を含有する組成物に関する。
【００１０】
一態様では、本発明は、先の実施態様の何れかに記載されたＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの投与による、Ｙレセプター調節に応答性である症状の治療方法に関する。
【００１１】
一態様では、本発明は、Ｙレセプター調節に応答性である症状、例えば食物摂取の減少及び／又はエネルギー消費の増加ののような肥満症又は肥満関連疾患の治療のための医薬の調製におけるここに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ使用に関する。
【００１２】
一態様では、本発明は、哺乳動物における投与のための、ここに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの使用に関し、ここで、前記誘導体はヒトＰＰ及びＰＹＹ化合物と比較して遅効特性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
遅効型薬物動態特性は、インビボで関心あるペプチド薬を血清アルブミンに結合させることにより達成することができる。この結合は共有的又は非共有的でありうる。関心あるペプチドに脂肪酸又はそのアナログを結合させることによって、それはアルブミンに非共有的に結合しうる。この発明は、アルブミンに強く結合し、ペプチド薬の作用期間を延長する新規な側鎖を結合させたペプチドであって、投薬は一日一回又は別法では週一回だけでよいペプチド薬の設計を記述している。
【００１４】
ここに記載される脂肪酸アルブミンバインダーは、これら新規の脂肪酸アナログが遠位カルボン酸基又はテトラゾール基を示すので、過去に刊行されている脂肪酸アルブミンバインダーと比較して構造的に異なっている。これは、メチル基を示す脂肪酸と比較して１０倍を越えてアルブミン結合を増加させる。これは、かなりより遅延され、週一回の投薬プロファイルを示すペプチドアナログになる。
【００１５】
例えばＬｅｖｅｍｉｒ(登録商標)（国際公開第９５／０７９３１号）及びＬｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ（国際公開第９８／０８８７１号）のように、アシル化ペプチドは過去に記載されている。しかしながら、一日一回の投与よりも低頻度の投与に適したＰＹＹ又はＰＰアナログは、上述のタンパク質及びペプチドで例証されたものよりも高い血清アルブミンへの結合性を必要とする。
【００１６】
一態様では、本発明は、改善されたＰＫプロファイルを有するＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログを提供する。一態様では、本発明は、場合によっては適切なスペーサーを介して結合され、それらを一日一回又はそれ以下の頻度、例えば週一回、月二回、又は月一回の投薬計画での投与に適したものにする遅効型特性を示すアルブミン結合側鎖を有するＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログを提供する。この発明のアルブミン結合ハンドルは遠位カルボン酸又はテトラゾール基を有する。一態様では、アルブミン結合ハンドルは脂肪二酸を含む。一態様では、アルブミン結合ハンドルは脂肪二酸である。
【００１７】
一態様では、本発明は、高親和性アルブミン結合効果を有するＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログを提供する。一態様では、高親和性アルブミン結合効果は、ヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰペプチド又はその非アシル化アナログに対して、少なくとも１０倍、例えば少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、又は少なくとも１００倍高い本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログのアルブミン結合性として定義される。
【００１８】
一態様では、本発明は、他の文献に記載された他のアナログ、例えばヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰペプチド又はその非アシル化アナログと比較して改善された生物学的利用能を有するＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体を提供する。一態様では、本発明は、他の文献に記載された他のアナログ、例えばヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰペプチド又はその非アシル化アナログとは異なり、改善された経口生物学的利用能を有するＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体を提供する。
【００１９】
一態様では、本発明は、他の文献に記載された他のアナログ、例えばヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰペプチド又はその非アシル化アナログとは異なり、改善された酵素安定性を有するＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログを提供する。
【００２０】
「アゴニスト」なる用語は、標的レセプターを活性化させ、該レセプターに対する内在性アゴニストにより誘発されるインビボ又はインビトロ効果の一又は複数を誘発する任意の化合物を意味する。
【００２１】
ペプチドの「遅効型特性」は、低頻度の投薬、例えば一日一回又はあるいは週一回の投薬となるペプチドの延長された作用期間である。本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの遅効型特性は、ヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰペプチド又はその非アシル化アナログと比較して延長された血漿半減期又は延長された生物学的活性として顕在化する。一態様では、本発明の化合物の延長は、ここに記載された方法、例えばミニブタＰＫアッセイを使用して、動物、例えば健常なブタへの皮下又は静脈内投与後のその血漿中濃度をモニターすることによって、決定される。比較のために、皮下又は静脈内投与後のヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、ＰＰペプチド又はその非アシル化アナログの血漿中濃度もまたフォローされる。本発明の他のＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰ化合物の延長を同じようにして決定することができる。一態様では、本発明の化合物の延長は、化合物の皮下投与後に、生物学的アッセイ、例えばマウスにおける食物摂取アッセイ、例えば空腹誘導リフィーディングアッセイで、化合物の効果の期間をモニターすることによって決定される。比較のため、皮下投与後のヒトＰＹＹ（３−３６）、ＰＰペプチド又はその非アシル化アナログの効果期間もまたフォローされる。
【００２２】
「ヒトＰＹＹ」及び「ｈＰＹＹ」又は「ヒトＰＰ」及び「ｈＰＰ」なる用語は、配列番号１に係るＰＹＹ（１−３６）、又は配列番号１に係るＰＹＹ（３−３６）で、１及び２位のＮ末端アミノ酸が欠失しているもの、及び配列番号２に係るＰＰ（１−３６）をそれぞれ意味することが意図される。一態様では、ＰＹＹなる用語はヒトＰＹＹを指すことが意図される。一態様では、ＰＰなる用語はヒトＰＰを指すことが意図される。
【００２３】
ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）及び膵臓ペプチド（ＰＰ）
ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）及び膵臓ペプチド（ＰＰ）は双方ともニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）がまた属するＰＰ折り畳みファミリーのペプチド群に属する。それらは全て相同であり、Ｃ末端アミドを有する３６アミノ酸のペプチドとして天然に分泌される。それらは、非常に安定な構造と考えられる共通の三次元折り畳みによって特徴付けられる。ヒトＰＹＹ（１−３６）及びヒトＰＰ（１−３６）のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号１及び配列番号２に示される。
【００２４】
Ｙ２レセプターに対するＰＹＹの特異性の決定基は主にペプチドのＣ末端部に位置している。Ｙ１レセプターに対するＰＹＹの特異性の決定基はＮ末端及びＣ末端の双方に位置している。天然に生じるペプチドＰＹＹ（３−３６）はＹ１よりもＹ２に対して相対的に選択的であり、このペプチドは現在臨床治験中である。
【００２５】
ＰＰはＹ４レセプターに対して選択的であり、この特異性に対する決定基はＮ末端部に主に位置している。ＰＰのＣ末端部はＰＹＹと比較して主に一つの重要な残基が異なる。ＰＰでは、３４位がプロリン残基（Ｐｒｏ３４）である一方、ＰＹＹでは、この残基はＧｌｎ（Ｇｌｎ３４）である。Ｐｒｏ３４をＧｌｎ３４に変異させると、ＰＰがＹ４特異性に加えてＹ２選択的になることが知られている（J. Jorgensen等, 1990, Eur. J. Pharm 186, 105-114）。この二重作用機序は食欲抑制に対して有益な効果を付与することが知られており、よって肥満症の潜在的な治療法である。
【００２６】
ＰＰ折り畳みペプチドレセプター
一態様では、この発明は、Ｙ１、Ｙ２及びＹ５レセプターよりＹ４レセプターに対して選択的であり、遅効型薬物動態特性を有するＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログに関する。一態様では、この発明は、Ｙ１、Ｙ４、及びＹ５レセプターに対してよりもＹ２レセプターに対して選択的であり、遅効型薬物動態特性を有するＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログに関する。一態様では、この発明は、Ｙ１及びＹ５レセプターに対してよりもＹ２及びＹ４レセプターに対して選択的であり、遅効型薬物動態特性を有するＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体 又はそのアナログに関する。
【００２７】
一態様では、他のレセプターに対してよりも特異的レセプターに対して「選択的」であるペプチドは、レセプター機能のアッセイ、例えばカルシウム動員アッセイでインビトロで測定し、ＥＣ５０値によって比較して、他のＹレセプターに対する一つのＹレセプターに対して少なくとも１０倍、例えば少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、又は少なくとも１００倍高い効能を示すペプチドを意味する。
【００２８】
ＰＰ折り畳みペプチド又はそのアナログは、動物モデル及びヒトにおけるこれらのペプチドのあるものの証明された効果に基づき、また肥満の人々が低い基底レベルのＰＰ及びＰＹＹ並びにこれらのペプチドの低い食餌反応を有しているという事実に基づき、肥満症及び関連疾患の治療における使用について示唆されている。更に、Ｙ２及びＹ４アゴニスト双方は胃腸（ＧＩ）管において抗分泌及び吸収促進効果を有することが証明されている。多くの胃腸疾患の治療におけるＹ２及びＹ４アゴニストの潜在的な使用が示唆されている。
【００２９】
例えば肥満症及び腸内分泌過多のような、Ｙ４レセプター調節に応答性である症状の治療では、遅効型Ｙ４レセプター選択的アゴニストを使用することが望ましいであろう。ＰＰの相対的に短い半減期は、定常の暴露レベルが患者にとって非常に不具合な頻繁の投薬を必要とするので、このペプチドの治療的使用を制限している。Ｙ１レセプター活性化は心血管副作用を引き起こし得、Ｙ２レセプター活性化は用量を制限する嘔気及び嘔吐を生じ得るので、ＰＰのＹ４レセプター選択性を保持することが望ましいであろう。
【００３０】
例えば肥満症及び腸内分泌過多のような、Ｙ２レセプター調節に応答性である症状の治療では、遅効型Ｙ２レセプター選択的アゴニストを使用することが望ましいであろう。ＰＹＹ（３−３６）の相対的に短い半減期は、定常の暴露レベルが患者にとって非常に不具合な頻繁の投薬を必要とするので、このペプチドの治療的使用を制限している。Ｙ１及びＹ５レセプター活性化は心血管副作用を引き起こし得、Ｙ４レセプター活性化はこれまでに知られていない副作用を生じ得るので、ＰＹＹ（３−３６）のＹ２レセプター選択性を保持することが望ましいであろう。
【００３１】
例えば肥満症及び腸内分泌過多のような、Ｙ２及びＹ４双方のレセプター調節に応答性である症状の治療では、Ｙ２又はＹ４レセプター単独の活性化と比較して相加効果がＹ２及びＹ４レセプターの同時の活性化から得られうるので、遅効型二重作用Ｙ２及びＹ４レセプター選択的アゴニストを使用することが望ましいであろう。
【００３２】
ＰＹＹ又はＰＰペプチドのアナログ
ペプチドに言及するここで使用される「アナログ」なる用語は、ペプチドの一又は複数のアミノ酸残基が、他のアミノ酸残基で置換されており、及び／又は一又は複数のアミノ酸残基が、ペプチドから欠失されており、及び／又は一又は複数のアミノ酸残基が、ペプチドに付加されており、及び／又はペプチドの一又は複数のアミノ酸残基が就職されている修飾されたペプチドを意味する。アミノ酸残基のこのような付加又は欠失は、ペプチドのＮ末端及び／又はペプチドのＣ末端で生じ得る。本発明に係る化合物を記述するために簡単な命名法が使用され、例えば、［Ｇｌｎ３４］ｈＰＰ（２−３６）は、３４位の天然に生じるプロリンがＧｌｎで置換され、１位の天然に生じるアラニンが欠失されているヒトＰＰのアナログを示す。ペプチドは、脊椎動物、例えばヒト、マウス、ヒツジ、ヤギ、ウシ、又はウマから誘導されうる。「脊椎動物」なる用語は、全てが分割型脊柱及び区別できるよく分化した頭部によって特徴付けられる魚類、両生類、爬虫類、鳥類、及び哺乳類を含む脊索動物門の主要な部門の脊椎動物亜門のメンバーを意味する。「哺乳動物」なる用語は、ヒト並びに例えばコンパニオン哺乳動物、動物園哺乳動物、及び食料源哺乳動物のような哺乳類綱において恒常性維持機構を持つ動物界の全ての他の温血メンバーを意味する。コンパニオン哺乳動物の幾つかの例は、イヌ(canines)（例えばイヌ(dogs)）、ネコ(felines)（例えばネコ(cats)）及びウマであり；食料源哺乳動物の幾つかの例は、ブタ、ウシ、ヒツジ等である。一態様では、哺乳動物はヒト又はコンパニオン哺乳動物である。一態様では、哺乳動物は男性又は女性のヒトである。 
【００３３】
ここで使用される「ポリペプチド」及び「ペプチド」なる用語は、ペプチド結合により結合した少なくとも５つの構成アミノ酸からなる化合物を意味する。光学異性体が述べられていない全てのアミノ酸はＬ-異性体を意味するものと理解されなければならない。しかしながら、本発明の範囲であるとまた考えられるものは一又は複数のアミノ酸のＤ-アミノ酸残基である。
【００３４】
本発明に係るペプチドの構成アミノ酸は遺伝暗号によりコードされるアミノ酸の群からのものであってよく、それらは遺伝暗号によりコードされない天然アミノ酸、並びに合成アミノ酸でありうる。遺伝暗号によりコードされない天然アミノ酸は、例えばγ-カルボキシグルタメート、オルニチン、ホスホセリン、Ｄ-アラニン及びＤ-グルタミンである。合成アミノ酸は、化学合成により製造されるアミノ酸、すなわち遺伝暗号によりコードされるアミノ酸のＤ-異性体、例えばＤ-アラニン及びＤ-ロイシン、Ａｉｂ(α-アミノイソ酪酸)、Ａｂｕ(α-アミノ酪酸)、Ｔｌｅ(tert-ブチルグリシン)、β-アラニン、３-アミノメチル安息香酸、アントラニル酸を含む。
【００３５】
２２のタンパク新生アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、シスチン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、ヒドロキシプロリン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンである。
【００３６】
よって、非タンパク新生アミノ酸は、ペプチド結合を介してペプチドに導入可能な部分であるが、タンパク新生アミノ酸ではない。例は、γ-カルボキシグルタメート、オルニチン、ホスホセリン、Ｄ-アミノ酸、例えばＤ-アラニン及びＤ-グルタミン、化学合成により製造されるアミノ酸を含む非タンパク新生合成アミノ酸、すなわち遺伝暗号によりコードされるアミノ酸のＤ-異性体、例えばＤ-アラニン及びＤ-ロイシン、Ａｉｂ(α-アミノイソ酪酸)、Ａｂｕ(α-アミノ酪酸)、Ｔｌｅ(tert-ブチルグリシン)、３-アミノメチル安息香酸、アントラニル酸、デス-アミノ(des-amino)-ヒスチジン、アミノ酸のベータアナログ、例えばβ-アラニン等、Ｄ-ヒスチジン、デスアミノ-ヒスチジン、２-アミノ-ヒスチジン、β-ヒドロキシ-ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα-アセチル-ヒスチジン、α-フルオロメチル-ヒスチジン、α-メチル-ヒスチジン、３-ピリジルアラニン、２-ピリジルアラニン又は４-ピリジルアラニン、(１-アミノシクロプロピル)カルボン酸、(１-アミノシクロブチル)カルボン酸、(１-アミノシクロペンチル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘキシル)カルボン酸、(１-アミノシクロへプチル)カルボン酸、又は(１-アミノシクロオクチル)カルボン酸である。
【００３７】
本発明において使用される非天然アミノ酸は、例えば、チオチロシン、オルニチン、３−メルカプトフェニルアラニン、３−又は４−アミノフェニルアラニン、３−又は４−アセチルフェニルアラニン、２−又は３−ヒドロキシフェニルアラニン（ｏ−又はｍ−チロシン）、ヒドロキシメチルグリシン、アミノエチルグリシン、１−メチル−１−メルカプトエチルグリシン、アミノエチルチオエチルグリシン及びメルカプトエチルグリシンを含む。本発明において有用な非天然アミノ酸の多くは商業的に入手できる。他のものは当該分野で知られている方法によって調製することができる。
【００３８】
一態様では、本発明のペプチドは少なくとも３４アミノ酸長である。他の実施態様では、ペプチドは少なくとも２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、又は３３アミノ酸長でありうる。更に、一態様では、本発明のペプチドは天然のＬ−アミノ酸残基及び／又は修飾された天然のＬ−アミノ酸残基のみを含む。あるいは、一態様では、本発明のペプチドは非天然のアミノ酸残基を含まない。
【００３９】
本発明の実施態様では、最大１７アミノ酸が、ＰＹＹ（配列番号１）又はＰＰ（配列番号２）と比較して修飾されている。本発明の実施態様では、最大１５アミノ酸が、ＰＹＹ（配列番号１）又はＰＰ（配列番号２）と比較して修飾されている。本発明の実施態様では、最大１０アミノ酸が、ＰＹＹ（配列番号１）又はＰＰ（配列番号２）と比較して修飾されている。本発明の実施態様では、最大８アミノ酸が、ＰＹＹ（配列番号１）又はＰＰ（配列番号２）と比較して修飾されている。本発明の実施態様では、最大７アミノ酸が、ＰＹＹ（配列番号１）又はＰＰ（配列番号２）と比較して修飾されている。本発明の実施態様では、最大６アミノ酸が、ＰＹＹ（配列番号１）又はＰＰ（配列番号２）と比較して修飾されている。本発明の実施態様では、最大５アミノ酸が、ＰＹＹ（配列番号１）又はＰＰ（配列番号２）と比較して修飾されている。本発明の実施態様では、最大４アミノ酸が、ＰＹＹ（配列番号１）又はＰＰ（配列番号２）と比較して修飾されている。本発明の実施態様では、最大３アミノ酸が、ＰＹＹ（配列番号１）又はＰＰ（配列番号２）と比較して修飾されている。本発明の実施態様では、最大２アミノ酸が、ＰＹＹ（配列番号１）又はＰＰ（配列番号２）と比較して修飾されている。本発明の実施態様では、１のアミノ酸が、ＰＹＹ（配列番号１）又はＰＰ（配列番号２）と比較して修飾されている。
【００４０】
また他の実施態様では、本発明のペプチドは、それぞれＰＹＹ（１−３６）、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰ（１−３６）の全長にわたって、ＰＹＹ（１−３６）、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰ（１−３６）に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、８０％、又は９０％の配列同一性を示しうる。また他の実施態様では、本発明のペプチドは、ＮＰＹに対して少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、８０％、又は９０％の配列同一性を示しうる。２つのアナログ間の配列同一性を決定するための方法の一例として、２つのペプチド［Ｇｌｎ３４］ＰＰ（１−３６）及びＰＰ（１−３６）を整列させる。ＰＰ（１−３６）に対するＧｌｎ３４アナログの配列同一性は、アラインされた同一の残基数から異なった残基数を引いたものをＰＰ（１−３６）中の全残基数で割ったものによって与えられる。従って、上記例では、配列同一性は（３６−１）／３６である。
【００４１】
一態様では、本発明は、少なくとも二つのＰＰ折り畳みモチーフを含むペプチドに関し、ここで、少なくとも二つのＰＰ折り畳みモチーフは少なくともＮ末端ポリプロリンＰＰ折り畳みモチーフ及びＣ末端部ＰＰ折り畳みモチーフを含み、ＰＰ折り畳みペプチドは非天然のアミノ酸残基を含まない。
【００４２】
一態様では、本発明のペプチドはＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログを含む。本発明の一態様では、本発明のペプチドは、ＰＰ、ＰＹＹ又はＮＰＹペプチドの一つの更なる断片に共有的に結合したＰＰ、ＰＹＹ又はＮＰＹペプチドの断片を含み、ここで、各ＰＰ、ＰＹＹ又はＮＰＹ断片がＰＰ折り畳みモチーフを含むＰＰ折り畳みキメラペプチドを含む。
【００４３】
より詳細には、一態様では、本発明は、一又は複数のアミノ酸配列修飾を含むＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログに関する。かかる修飾は、置換、挿入、及び／又は欠失を、単独で又は組み合わせて含む。特定の態様では、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、「非本質的」アミノ酸残基の一又は複数の修飾を含む。本発明の文脈では、「非本質的」アミノ酸残基は、それぞれＰＹＹ又はＰＰアナログペプチドのＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの活性を無効にし又は実質的に減少させることなく、ヒトＰＹＹ又はＰＰアミノ酸配列において改変、つまり欠失又は置換され得る残基である。
【００４４】
本発明の一態様では、本発明に係る誘導体のＣ末端は酸かアミドの何れかとして終端されうる。特定の態様では、本発明の誘導体のＣ末端はアミドである。
【００４５】
置換。一態様では、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、ヒトＰＹＹ又はＰＰそれぞれのアミノ酸配列中に、単独で又は一又は複数の挿入又は欠失と組み合わせて、一又は複数の置換を有しうる。一態様では、置換は、ＰＹＹ又はＰＰアナログペプチドそれぞれのＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの活性を無効にし又は実質的に減少させない。一態様では、本発明は、ヒトＰＹＹ又はＰＰそれぞれのアミノ酸配列中に、単一の置換、又は一を越えるアミノ酸残基の保存的又は非保存的置換を有するＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログに関する。一態様では、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、一、二、又は三のアミノ酸置換を含む。
【００４６】
一態様では、ヒトＰＹＹのアミノ酸残基のＰＹＹヘリカルＣ末端領域（例えば、残基２０、２４、２５、２７及び２９）、末端残基（３２−３６）、及び／又は５及び８位のＮ末端プロリンは置換されない。一態様では、アミノ酸残基はヒトＰＹＹの３２から３６位は置換されない。一態様では、ヒトＰＹＹのアミノ酸残基は、５、７、８、２０、２４、２５、２７、２９、３２、３３、３４、３５、３６，及びその任意の組合せから選択される一又は複数のアミノ酸配列位置では置換されない。
【００４７】
一態様では、アミノ酸は保存的置換によって置換されうる。ここで使用される「保存的置換」なる用語は、一又は複数のアミノ酸が他の生物学的に類似の残基によって置き換えられることを示す。例は、例えば小アミノ酸、酸性アミノ酸、極性アミノ酸、塩基性アミノ酸、疎水性アミノ酸及び芳香族アミノ酸のような類似の特性を持つアミノ酸残基の置換を含む。例えば、本発明の好適な実施態様では、Ｍｅｔ残基がノルロイシン (Nle)で又はロイシン、イソロイシン又はバリン（これらはＭｅｔとは異なり、直ぐには酸化されない）で置換される。内在性哺乳動物ペプチド及びタンパク質に通常は見出されない残基での 保存的置換の他の例は、例えば、オルニチン、カナバニン、アミノエチルシステイン又は他の塩基性アミノ酸とのＡｒｇ又はＬｙｓの保存的置換であろう。ペプチド及びタンパク質における表現型的にサイレントな置換に関する更なる情報については、例えばBowie等 Science 247, 1306-1310, 1990を参照のこと。本発明の保存的に置換されたアナログは、例えば１０までの保存的置換を、又は一態様では、５の、また別の実施態様では３又はそれ以下の保存的置換を有しうる。
【００４８】
一態様では、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、PYY又はPPそれぞれの配列への一又は複数の非天然及び／又は非アミノ酸、例えばアミノ酸模倣物の置換を含みうる。好ましい実施態様では、ＰＹＹ又はＰＰの配列中に挿入される非アミノ酸は、βターン模倣物又はリンカー分子、例えば−ＮＨ−Ｘ−ＣＯ−であり得、ここで、Ｘ＝（ＣＨ２）ｎ（ここで、ｎは２−２０でありうる）又は−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２（−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−）ｍ−ＣＨ２−ＣＯ−（ここでｍ＝１−５）。好ましいリンカー分子は、アミノカプロイル（「Ａｃａ」）、β−アラニル、及び８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノイルを含む。βターン模倣物は商業的に入手可能であり（BioQuadrant Inc, Quebec, Canada）、文献に記載されている（Hanessian等, Tetrahedron 12789-854 (1997)；Gu等, Tetrahedron Letters 44: 5863-6 (2003)；Bourguet等, Bioorganic及びMedicinal Chemistry Letters 13: 1561-4 (2003)；Grieco等, Tetrahedron Letters 43: 6297-9 (2002)；Souers等, Tetrahedron 57: 7431-48 (2001)；Tsai等, Bioorganic及びMedicinal Chemistry 7: 29-38 (1999)；Virgilio等, Tetrahedron 53: 6635-44 (1997)）。
【００４９】
欠失及びトランケーション。  一態様では、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、単独で又は一又は複数の挿入又は置換と組み合わせて、ヒトＰＹＹ又はＰＰそれぞれのアミノ酸配列からの一又は複数のアミノ酸残基の欠失を有しうる。一態様では、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、ヒトＰＹＹ又はＰＰそれぞれのＮ末端又はＣ末端から一又は複数のアミノ酸残基が欠失されうる。一態様では、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、ヒトＰＹＹ又はＰＰそれぞれのアミノ酸位置２から３５の一又は複数のアミノ酸残基が欠失されうる。かかる欠失は、ヒトＰＹＹ又はＰＰのアミノ酸位置２から３５の一を越える保存的又は非保存的欠失を含みうる。好ましい実施態様では、ヒトＰＹＹ又はＰＰの位置２４から３６のアミノ酸残基は欠失されない。
【００５０】
一態様では、本発明のＰＰ折り畳みペプチドは、天然のＰＰ折り畳みペプチドの少なくとも一の生物学的活性が保持される限り、Ｎ又はＣ末端トランケーション、又は位置２から３５のアミノ酸の内部欠失を含みうる。好ましい実施態様では、位置５から８及び２４から３６、より詳細には５から８及び３２から３５のアミノ酸残基は欠失されない。
【００５１】
挿入。  一態様では、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、単独で又は一又は複数の欠失及び／又は置換と組み合わせて、ヒトＰＹＹ又はＰＰそれぞれのアミノ酸配列中に挿入された一又は複数のアミノ酸残基を有しうる。一態様では、本発明は、ヒトＰＹＹ又はＰＰのアミノ酸配列中への単一の挿入、又は一を越えるアミノ酸残基の保存的又は非保存的挿入を有するＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログに関する。また更なる実施態様では、一又は複数のアミノ酸がペプチドアナログのＮ末端又はＣ末端部に挿入されうる。また更なる実施態様では、アミノ酸残基はヒトＰＹＹ又はＰＰそれぞれの位置２４から３６には挿入されない。
【００５２】
一態様では、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、ＰＹＹ又はＰＰそれぞれの配列中への一又は複数の非天然アミノ酸及び／又は非アミノ酸の挿入を含みうる。また他の実施態様では、ヒトＰＹＹ又はＰＰの配列中に挿入される非天然アミノ酸は、βターン模倣物又はリンカー分子でありうる。リンカー分子の例は、アミノカプロイル（「Ａｃａ」）、β−アラニル、及び８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノイルを含む。
【００５３】
一態様では、本発明は、例えば限定しないが、アミノカプロイル（「Ａｃａ」）、β−アラニル、及び８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノイルのようなリンカーによって置換される残基５−２４の欠失によって特徴付けられるＰＹＹ又はＰＰ模倣物に関する。また、これらの模倣物は、例えば２位のＣｙｓによるＳ−Ｓによって、及び２７位のＤ−Ｃｙｓによって安定化される。
【００５４】
また他の実施態様では、ＰＰ折り畳みペプチドはＬｙｓとＧｌｕの間のラクタム架橋によって安定化される。一例は、限定されないが、２８位のＬｙｓ及び３２位のＧｌｕである。本発明の一態様では、ＰＹＹ又はＰＰペプチドのアナログは、上述の修飾、つまり、欠失、トランケーション、挿入、及び置換の組合せを含む。本発明の一態様では、ＰＹＹ又はＰＰペプチドのアナログは一、二、又は三のアミノ酸置換を含む。
【００５５】
ＰＰ配列において、Ａｓｐ１０は特に溶液中で環化を生じ、開環してα及びβ−アスパラギン酸の混合物を形成し、同時に立体化学をスクランブルさせる環状イミデートを形成する傾向にある。本発明のペプチド対（ｖ）、（ｖｉ）及び（ｖｉｉｉ）では、その残基がＧｌｕによって置換されている。この置換はペプチド内の特別な静電ポテンシャル分布を保存し、とそれによってペプチドの全体的安定性並びにその溶解度を保持する。１０位のＧｌｕはγ−Ｇｌｕを形成するアナログ環化／開環を受けないので、そのＡｓｐ１０対応物と比較して医薬用薬剤としてのペプチドのバルク及び溶液安定性を改善するという有益な効果を有している。改善された溶液安定性は合成収率の増加を生じ、密接に関連したβ-Ａｓｐ不純物からの所望の産物の面倒で費用がかかり廃棄物を生じる精製の必要性を低減する。一態様では、本発明に係るアルブミン結合ハンドルはＰＰ配列中のＡｓｐ１０に結合されうる。
【００５６】
この発明のＰＹＹ又はＰＰペプチドでは、Ｍｅｔが、この改変を受けにくい残基で置換されうる。例えば、ヒトＰＰ配列中のＭｅｔ１７及びＭｅｔ３０残基は溶液中での保存時に潜在的に酸化を受けうる。すなわち、Ｎｌｅは本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチドにおいてＭｅｔに対するバイオイソスターであるので、Ｍｅｔは、この位置での酸化を防ぎ、脂肪族側鎖構造を保存するＮｌｅで置換されうる。また、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ及びＶａｌをＭｅｔのイソスターとして使用することができる。また、脂肪族αヘリックス促進アミノ酸１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸又は１−アミノシクロペンチル）カルボン酸をＭｅｔの代替物として使用してもよい。
【００５７】
本発明の一態様では、ヒトＰＰの酵素分解は、ＰＰ配列からのＡｌａ１の除去、つまり、アナログＰＰ（２−３６）の形成によって防止され、溶液中及び凍結乾燥物としての双方でのペプチドの安定性を改善し、よって医薬としてのその性質を改善する。別法では、ＰＰ配列からのＡｌａ２を、ＤＰＰＩＶ酵素切断に対する安定性をまた改善する密接に関連したＡｉｂと置換してもよい。 
【００５８】
上に提供した様々な安定性を改善する修飾は、単独で又は併せて、これらのペプチドの薬学的特性における有意な進歩である。高収量及び少ない精製に至る合成中と、これらのペプチドの凍結乾燥物及び溶液の延長された有効期間の改善された双方の安定性は、原料、溶媒、電力等の使用と廃棄物の生産をまた低減することによって、この発明のペプチドの生産の環境負荷を有意に低減（かつその再製造の必要性を低減）する。
【００５９】
ポリペプチドに言及してここで使用される「ＤＰＰ-ＩＶ保護された」なる用語は、血漿ペプチダーゼジペプチジルアミノペプチダーゼ−４(ＤＰＰ-ＩＶ)に対して上記誘導体を耐性あるものにするために、化学的に修飾されたポリペプチドを意味する。血漿中におけるＤＰＰ-ＩＶ酵素は、ＰＹＹ、ＰＰ等、幾つかのペプチドホルモンの分解に関与していることが知られている。よって、ＤＰＰ-ＩＶによる分解速度を低減するために、ＤＰＰ-ＩＶ媒介性の加水分解に対して敏感なポリペプチドのアナログ及び誘導体を開発するための多くの努力がなされている。
【００６０】
本発明の一態様では、ＰＹＹ又はＰＰ誘導体はＤＰＰＩＶ保護されたＰＹＹ又はＰＰ誘導体である。本発明の一態様では、上記ＰＹＹ又はＰＰ誘導体は、ＰＹＹ又はＰＰの安定性に相対してＤＰＰ−ＩＶ分解に対して安定化されている。一態様では、本発明に係る誘導体は、ＰＹＹ又はＰＰよりもＤＰＰ−ＩＶに対してより耐性であるＤＰＰ−ＩＶ保護された誘導体である。
【００６１】
ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶによる分解に対するペプチドの耐性は次の分解アッセイによって決定される：
１００μＬの０．１Ｍのトリエチルアミン−ＨＣｌバッファー、ｐＨ７．４中において、ペプチドのアリコート（５ｎｍｏｌ）を、５ｍＵの酵素活性に相当する１μＬの精製ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶと共に３７℃で１０−１８０分インキュベートする。１０％のトリフルオロ酢酸５μＬを添加して、酵素反応を終結させ、タンパク質分解産物を分離し、ＨＰＬＣ分析を使用して定量する。この分析を実施するための一方法は次の通りである：混合物をＶｙｄａｃ Ｃ１８ワイドポア（３０ｎｍ孔、５μｍ粒子）２５０×４．６ｍｍのカラムに充填し、Siegel等, Regul. Pept. 1999; 79, 93-102及びMentlein等, Eur. J. Biochem. 1993; 214, 829-35に従って、０．１％のトリフルオロ酢酸中アセトニトリルの線形段階的勾配（３分間は０％のアセトニトリル、１７分間は０−２４％のアセトニトリル、１分間は２４−４８％のアセトニトリル）で１ｍｌ／分の流量で溶出させる。ペプチドとその分解産物を、２２０ｎｍ（タンパク質結合）又は２８０ｎｍ（芳香族アミノ酸）の吸光度によりモニターでき、標準のものとの関連でそれらのピーク面積を積分することにより定量する。ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶによるペプチドの加水分解速度は、加水分解されるペプチドが１０％未満になるインキュベート時間で推定される。
【００６２】
あるいは、ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶよる分解に対するペプチドの耐性は、以下の分解アッセイにより測定される：ペプチドのアリコート(４ｎｍｏｌ)を、１．６％のヒト血清アルブミンの存在下又は不在下、４０μＬの０．０８５Ｍトリス-ＨＣｌバッファー、ｐＨ８．０において２２時間、１０．９ｍＵの精製されたジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶと共に、３７℃でインキュベートする。０、４及び２２時間後、１０μｌの試料を取り出し、１％のトリフルオロ酢酸を１００μＬ混合することにより、酵素反応を終了させる。ペプチド分解産物を分離し、ＨＰＬＣ分析を使用して定量する。この分析を実施するための一方法は次の通りである：混合物をアジレント・ゾーバックス(Agilent Zorbax)３００ＳＢ-Ｃ１８(５μｍの粒子)１５０×２．１ｍｍのカラムに適用し、０．０７％のＴＦＡと共に、０．１％のトリフルオロ酢酸から１００％のアセトニトリルまでの線形勾配をつけて、０．５ｍｌ／分の流量で３０分溶出させる。ペプチドとその分解産物は、２１４ｎｍの吸光度をモニターし、それらのピーク面積を積分することにより定量される。ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶに対するペプチドの安定性は、インタクトなペプチドと、切断後に２つのアミノ末端アミノ酸を欠く分解産物のピーク面積の合計に対するインタクトなペプチドのピーク面積として決定される。
【００６３】
ＰＹＹ又はＰＰペプチドの誘導体又はそのアナログ
ペプチドに関してここで使用される「誘導体」なる用語は、少なくとも一の置換基がその未修飾のペプチド又はそのアナログに存在していない化学的に修飾されたペプチド又はそのアナログ、すなわち共有結合的に修飾されたペプチドを意味する。典型的な修飾は、アミド、炭水化物、アルキル基、アシル基、エステル等である。一態様では、ＰＹＹ又はＰＰの誘導体は、脊椎動物由来であり、又はここに記載されたそのアナログはアルブミン結合ハンドルで修飾されている。アルブミン結合ハンドルはＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの配列内のアミノ酸残基のＮ末端又はＣ末端又は側鎖において単独で生じうる。あるいは、ＰＹＹ又はＰＰアナログペプチドに沿って複数の誘導体化部位が存在しうる。一又は複数のアミノ酸のリジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、又はシステインとの置換は更なる誘導体化の部位を提供しうる。あるいは、ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、一、二、又は三のアルブミン結合ハンドル分子に結合されうる。
【００６４】
ＰＹＹ又はＰＰペプチド又はそのアナログにおける任意のアミノ酸一を誘導体化できる。本発明の一態様では、誘導体化されるアミノ酸残基はアミノ基を含む。一態様では、誘導体化されたアミノ酸残基はアミノ基を含む。一態様では、誘導体化されたアミノ酸残基は側鎖に第１級アミノ基を含む。一態様では、誘導体化されたアミノ酸残基はリジンである。本発明の一態様では、誘導体化されたアミノ酸残基はシステインである。本発明の一態様では、一つのアミノ酸残基が誘導体化される。本発明の別の一態様では、本発明に係る誘導体は一つの位置だけが誘導体化され、例えば一つのアミノ酸残基だけが誘導体化される。
【００６５】
一態様では、ＰＰペプチド又はそのアナログのアミノ末端位置が誘導体化され、ここで、該位置はＰＰ（１−３６）ペプチドに対するものである。一態様では、ＰＰペプチド又はそのアナログのアミノ末端位置がアシル化され得、ここで、該位置はＰＰ（１−３６）ペプチドに対するものである。一態様では、ＰＰペプチド又はそのアナログのアミノ末端位置は、ＣＨ３（ＣＨ２）ｒＣＯ−を含むアルブミン結合基で誘導体化され得、ここで、ｒは１６又は１８であり、該位置はＰＰ（１−３６）ペプチドに対するものである。
【００６６】
一態様では、ＰＰペプチド又はそのアナログの１８位が誘導体化され得、ここで、該位置はＰＰ（１−３６）ペプチドに対するものである。一態様では、ＰＰペプチド又はそのアナログの１８位がアシル化され得、ここで、該位置はＰＰ（１−３６）ペプチドに対するものである。一態様では、ＰＰペプチド又はそのアナログの１８位が、ＣＨ３（ＣＨ２）ｒＣＯ−を含むアルブミン結合基で誘導体化され得、ここで、ｒは１６又は１８であり、該位置はＰＰ（１−３６）ペプチドに対するものである。
【００６７】
一態様では、ＰＰペプチド又はそのアナログのアミノ末端位置が誘導体化されうる。一態様では、ＰＰペプチド又はそのアナログのアミノ末端位置がアシル化されうる。一態様では、ＰＰペプチド又はそのアナログのアミノ末端位置が、ＣＨ３（ＣＨ２）ｒＣＯ−を含むアルブミン結合基で誘導体化され得、ここで、ｒは１６又は１８である。一態様では、ＰＹＹ（３−３６）又はそのアナログのアミノ末端位置が、ＣＨ３（ＣＨ２）ｒＣＯ−を含むアルブミン結合基で誘導体化され得、ここで、ｒは１６又は１８である。
【００６８】
一態様では、ＰＹＹペプチド又はそのアナログの１８位が誘導体化され得、ここで、該位置はＰＹＹ（１−３６）ペプチドに対するものである。一態様では、ＰＹＹペプチド又はそのアナログの１８位がアシル化され得、ここで、該位置はＰＹＹ（１−３６）ペプチドに対するものである。一態様では、ＰＹＹペプチド又はそのアナログの１８位が、ＣＨ３（ＣＨ２）ｒＣＯ−を含むアルブミン結合基で誘導体化され得、ここで、ｒは１６又は１８であり、該位置はＰＹＹ（１−３６）ペプチドに対するものである。
【００６９】
一態様では、ＰＹＹペプチド又はそのアナログの１９位が誘導体化され得、ここで、該位置はＰＹＹ（１−３６）ペプチドに対するものである。一態様では、ＰＹＹペプチド又はそのアナログの１９位がアシル化され得、ここで、該位置はＰＹＹ（１−３６）ペプチドに対するものである。一態様では、ＰＹＹペプチド又はそのアナログの１９位が、ＣＨ３（ＣＨ２）ｒＣＯ−を含むアルブミン結合基で誘導体化され得、ここで、ｒは１６又は１８であり、該位置はＰＹＹ（１−３６）ペプチドに対するものである。
【００７０】
一態様では、ＰＹＹペプチド又はそのアナログの２２位が誘導体化され得、ここで、該位置はＰＹＹ（１−３６）ペプチドに対するものである。一態様では、ＰＹＹペプチド又はそのアナログの２２位がアシル化され得、ここで、該位置はＰＹＹ（１−３６）ペプチドに対するものである。一態様では、ＰＹＹペプチド又はそのアナログの２２位が、ＣＨ３（ＣＨ２）ｒＣＯ−を含むアルブミン結合基で誘導体化され得、ここで、ｒは１６又は１８であり、該位置はＰＹＹ（１−３６）ペプチドに対するものである。
【００７１】
一態様では、ＰＹＹペプチド又はそのアナログの２３位が誘導体化され得、ここで、該位置はＰＹＹ（１−３６）ペプチドに対するものである。一態様では、ＰＹＹペプチド又はそのアナログの２３位がアシル化され得、ここで、該位置はＰＹＹ（１−３６）ペプチドに対するものである。一態様では、ＰＹＹペプチド又はそのアナログの２３位が、ＣＨ３（ＣＨ２）ｒＣＯ−を含むアルブミン結合基で誘導体化され得、ここで、ｒは１６又は１８であり、該位置はＰＹＹ（１−３６）ペプチドに対するものである。
【００７２】
アミノ基を含むアミノ酸残基の例は、リジン、オルニチン、イプシロン−Ｎ−アルキル化リジン、例えばイプシロン−Ｎメチルリジン、Ｏ−アミノエチルセリン、Ｏ−アミノプロピルセリン又は側鎖に第１級又は第２級アミノ基を含む長いＯアルキル化セリンである。本発明の一態様では、誘導体化されたアミノ酸残基は側鎖に第１級アミノ基を含む。第１級アミノ基を含むアミノ酸残基の例はリジン、オルニチン、Ｏ−アミノエチルセリン、Ｏ−アミノプロピルセリン、又は側鎖に第１級アミノ基を含む長いＯアルキル化セリンである。
【００７３】
アルブミン結合性の決定方法の一例は次の通りである：血清アルブミン結合性は、ヒト又は他の種由来の固定化血清アルブミンを含むカラムを使用して測定することができる。与えられたペプチドの親和性は、カラムからの変更された溶出時間によって測定することができ、異なったアルブミン結合ペプチド間の相対的親和性は、溶出時間プロファイルを比較することによって樹立することができる。他の方法では、血清アルブミンペプチドはビオチン化され得、ペプチドの結合性は、固定化アルブミンを含むマイクロタイタープレートを使用する酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）技術によって決定することができる。結合の可視化は、西洋わさびペルオキシダーゼ又はアルカリホスファターゼの何れかに結合させたアビジン又はストレプトアビジンを使用してなされる。異なったアルブミン結合ペプチドの相対的親和性を測定することができる。アルブミン結合性の測定に使用することができる他の親和性実験はＢｉａｃｏｒｅ分析及び及びマイクロカロリメトリーを含む。
【００７４】
本発明の一態様では、アルブミン結合残基は親油性残基である。一態様では、親油性残基は、場合によっては例えばアルキル化、アシル化、エステル形成、又はアミド形成等のコンジュゲート化学によりスペーサーを介してリジン残基に、又はマレイミドカップリングによりシステイン残基に結合される。ここで使用される「スペーサー」なる用語は、ペプチドとアルブミン結合ハンドルを分離する分子単位を意味する。一態様では、ここで使用される「スペーサー」なる用語は、少なくとも５の非水素原子を含み、これらの３０−５０％がＮ又はＯの何れかである化学的部分でペプチドとアルブミン結合残基とを分離するスペーサーを意味する。
【００７５】
本発明の一態様では、アルブミン結合残基は、生理学的ｐＨで負に帯電している。本発明の一態様では、アルブミン結合残基は、負に帯電可能な基を含む。負に帯電可能な好ましい一つの基はカルボン酸基である。
【００７６】
本発明の一態様では、アルブミン結合残基は、直鎖アルキル基、分枝アルキル基、ω-カルボン酸基、及び部分的又は完全に水素化されたシクロペンタノフェナントレン骨格を有する基からなる群から選択される。
【００７７】
本発明の一態様では、アルブミン結合残基はシバクロニル(cibacronyl)残基である。
【００７８】
本発明の一態様では、アルブミン結合残基は、６〜４０の炭素原子、８〜２６の炭素原子、又は８〜２０の炭素原子を有する。
【００７９】
本発明の一態様では、アルブミン結合残基は、ｒが４〜３８の整数、特に４〜２４の整数であるＣＨ３（ＣＨ２）ｒＣＯ−を含む群から選択され、より好ましくは、ＣＨ３（ＣＨ２）６ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）８ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１０ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１２ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１４ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１６ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１８ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）２０ＣＯ−及びＣＨ３（ＣＨ２）２２ＣＯ−を含む群から選択されるアシル基である。
【００８０】
本発明の一態様では、アルブミン結合残基は、直鎖又は分枝アルカンα,ω-ジカルボン酸のアシル基である。
【００８１】
本発明の一態様は、ペプチドを含むペプチド誘導体であり、ここで、ペプチド骨格の少なくとも一のアミノ酸残基、例えばリジン、及び／又はＮ末端及び／又はＣ末端はＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、又はＡ−Ｃ−の何れかで誘導体化され、ここで、
Ａ−は
2011520847.tif 000008
であり、
ここで、ｐは１０、１１、１２、１３、１４、１５及び１６からなる群から選択され、ｄは０、１、２、３、４及び５からなる群から選択され、
−Ｂ−は
2011520847.tif 000009
からなる群から選択され、
ここで、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され、ｙは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１及び１２からなる群から選択され；
あるいはＡ−は
2011520847.tif 000010
であり、ここで、ｎは１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８及び１９からなる群から選択され、
−Ｂ−は、
2011520847.tif 000011
からなる群から選択され、
ここで、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され；
−Ｃ−は
2011520847.tif 000012
からなる群から選択され、
ここで、ｂ及びｅはそれぞれ独立して０、１、及び２からなる群から選択され、ｃ及びｆはそれぞれ独立して０、１、及び２からなる群から選択され；
但し、
ｃが０であれば、ｂは１又は２であり、
ｃが１又は２であれば、ｂは０であり、
ｆが０であれば、ｅは１又は２であり、
ｆが１又は２であれば、ｅは０であり、
−Ｄ−は前記アミノ酸残基に結合し、スペーサーである。
【００８２】
一態様では、本発明は先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログに関し、ここで、ペプチドは、
式Ｉに記載のＰＰアナログ
Ｚ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｘａａ２２−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｘａａ２５−Ｘａａ２６−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｘａａ３４−Ａｒｇ−Ｘａａ３６
（Ｉ）
（上式中、
Ｚは、Ｎ末端アミノ基に結合した側鎖Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、又はＡ−Ｃ−であるか、又はＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、Ａ−Ｃ−がアミノ酸の側鎖に結合しているときには存在せず、
１位のＡｌａは欠失されていてもよく、
Ｘａａ１０はＡｓｐ、Ａｓｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１１はＡｓｐ、Ａｓｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１２はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１３はＴｈｒ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１４はＰｒｏ又はヒドロキシプロリンであり、
Ｘａａ１５はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１６はＧｌｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１７はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ１８はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１９はＧｌｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２０はＴｙｒ、Ｐｈｅ、又は３−ピリジルアラニンであり、
Ｘａａ２１はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２２はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２３はＡｓｐ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２４はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ２５はＡｒｇ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２６はＡｒｇ、Ｈｉｓ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２７はＴｙｒ、Ｐｈｅ、ホモＰｈｅ、又は３−ピリジルアラニンであり、
Ｘａａ２８はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ２９はＡｓｎ、Ｇｌｎ、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ３０はＭｅｔ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ３１はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
３３位のＡｒｇはＬｙｓで置換されていてもよく、
Ｘａａ３４はＧｌｎ、Ａｓｎ、又はＨｉｓであり、
３５位のＡｒｇはＬｙｓで置換されていてもよく、
Ｘａａ３６はＴｙｒ、３−ピリジルアラニンである）
式ＩＩに記載のＰＹＹアナログ
Ｚ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｘａａ２２−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｘａａ２５−Ｘａａ２６−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｘａａ３４−Ａｒｇ−Ｘａａ３６
（ＩＩ）
（上式中、
Ｚは、Ｎ末端アミノ基に結合した側鎖Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、又はＡ−Ｃ−であるか、又はＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、Ａ−Ｃ−がアミノ酸の側鎖に結合しているときには存在せず、
１及び２位のＴｙｒ−Ｐｒｏは欠失されていてもよく、
１位のＴｙｒはＡｌａで置換されるか又は欠失されていてもよく、
Ｘａａ３はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ４はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
６位のＧｌｕはＶａｌで置換されていてもよく、
７位のＡｌａはＴｙｒで置換されていてもよく、
Ｘａａ１０はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１１はＡｓｐ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１２はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１３はＳｅｒ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１４はＰｒｏ、ヒドロキシプロリン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１５はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１６はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１７はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ１８はＡｓｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１９はＡｒｇ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２０はＴｙｒ、Ｐｈｅ、３−ピリジルアラニン、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２１はＴｙｒ、Ｐｈｅ、３−ピリジルアラニン、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２２はＡｓｐ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２３はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２４はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、１−アミノ酪酸、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２５はＡｒｇ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２６はＨｉｓ、Ａｒｇ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２７はＴｙｒ、Ｐｈｅ、ホモＰｈｅ、又は３−ピリジルアラニンであり、
Ｘａａ２８はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、１−アミノ酪酸、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２９はＡｓｎ、Ｇｌｎ、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ３０はＭｅｔ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、１−アミノ酪酸、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ３１はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、１−アミノ酪酸、又はＬｙｓであり、
３２位のＴｙｒはＬｙｓで置換されていてもよく、
Ｘａａ３４はＧｌｎ、Ａｓｎ、又はＨｉｓであり、
Ｘａａ３６はＴｙｒ、３−ピリジルアラニン、又はＬｙｓである）
からなる群から選択され、ここで、該化合物は、遠位カルボン酸又はテトラゾール基を含む血清アルブミン結合側鎖で修飾されているものである。
【００８３】
一態様では、上記Ｎ末端はアミノ基及び／又は上記Ｃ末端はカルボン酸基である。
【００８４】
本発明の一態様では、−Ｄ−はペプチドにアルブミンハンドルの距離をもたらすスペーサーであり、一又は複数の保存的ＰＥＧ分子、一又は複数の保存的グリシン又は他の小さい極性残基からなる群から選択されうる。一態様では、上記スペーサーは、一又は複数の保存的８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（Ｏｅｇ）分子又はＰＥＧ型の他のスペーサーでありうる。一態様では、上記スペーサーは、ペプチドであり得、グリシンポリマーを形成する一又は複数の保存的Ｇｌｙ分子でありうる。一態様では、スペーサーは、幾つかの極性又は親水性アミノ酸からなりうる。限定しないが一例は（Ｓｅｒ−Ｇｌｙ）ｎであり、ｎは整数；ｎ＝１−２０又は１−１０又は１−５である。一態様では、スペーサーは、非アルファ−アミノ酸、例えばβ−アラニン又は８−アミノ−カプリル酸又はその組合せから構成されうる。
【００８５】
一態様では、Ｄは
2011520847.tif 000013
からなる群から選択され、ここで、ｋは０、１、２、３、４、５、１１及び２７からなる群から選択され、ｍは０、１、２、３、４、５及び６からなる群から選択される。
【００８６】
一態様では、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−は
2011520847.tif 000014
2011520847.tif 000015
2011520847.tif 000016
2011520847.tif 000017
から選択され組み合わされる。
【００８７】
一態様では、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−は、
2011520847.tif 000018
2011520847.tif 000019
2011520847.tif 000020
2011520847.tif 000021
から選択され組み合わされる。
【００８８】
一態様では、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−は
2011520847.tif 000022
からなる群から選択される。
【００８９】
一態様では、本発明は、ＰＹＹ又はＰＰアナログ又はその誘導体に関し、ここで、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−は２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルである。一態様では、本発明は、ＰＹＹ又はＰＰアナログ又はその誘導体に関し、ここで、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−は２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）−アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルである。一態様では、本発明は、ＰＹＹ又はＰＰアナログ又はその誘導体に関し、ここで、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−は［４−（１６−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ヘキサデカノイルスルファモイル）ブチリル］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］である。
【００９０】
一態様では、本発明は、ＰＹＹ又はＰＰアナログ又はその誘導体に関し、ここで、ペプチド骨格の少なくとも一のアミノ酸残基及び／又はＮ末端アミノ基はＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−で誘導体化され、ここで、誘導体はアルブミンに結合する。
【００９１】
一態様では、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄはアルブミン結合断片Ａ−Ｂ−Ｃ−及び親水性スペーサーＤからなる。
【００９２】
脂肪二酸、例えばヘキサデカン二酸、オクタデカン二酸、又はドデカン二酸を結合させると、脂肪酸の遠位端に更なる負の電荷を導入する。これは、血清アルブミンへの親和性を増加させる。二酸は負に荷電したアミノ酸、例えばこれに限定しないがＬ-γ-グルタメートのようなスペーサーに結合されうる。脂肪二酸は親水性スペーサー、例えばトラネキサム酸及びイソニペコチン酸に結合されうる。
【００９３】
一態様では、組み合わせた二酸（Ａ−Ｂ−Ｃ−又はＡ−Ｃ−）及びスペーサー（−Ｄ−）は一又は複数の保存的スペーサー、例えば８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（Ｏｅｇ）で分離されうる。
【００９４】
一態様では、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、食物摂取の減少、体重への効果、胃内容排出、呼吸商の変化、及び／又は腸電解質分泌に対する効果に関して、ヒトＰＹＹ又はＰＰそれぞれの生物学的活性の少なくとも約２５％、特に約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、又は９９％を保持する。一態様では、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、それぞれ改善されたＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ活性を示す。一態様では、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、食物摂取の減少、体重への効果、胃内容排出、呼吸商の変化、及び／又は腸電解質分泌に対する効果に関して、ヒトＰＹＹ又はＰＰそれぞれの生物学的活性の少なくとも約１１０％、１２５％、１３０％、１４０％、１５０％、２００％、又はそれ以上を示す。上記生物学的効果を測定する方法はこの文書の後のセクションに提供する。一態様では、ＰＹＹ又はＰＰペプチドアナログ又はその誘導体は、ここに記載されたアッセイの一つにおいて（例えば、食物摂取、体重への効果、胃内容排出、呼吸商の変化、及び／又は腸電解質分泌に対する効果）その同じアッセイにおけるヒトＰＹＹ又はＰＰの効能と等しいかそれより大きい効能を有している。あるいは、ＰＹＹ又はＰＰペプチドアナログ又はその誘導体は、ヒトＰＹＹ又はＰＰと比較して、改善された製造容易性、安定性、及び／又は製剤化の容易性を示しうる。
【００９５】
一態様では、ＰＹＹ又はＰＰペプチドアナログ 又は誘導体は、ヒトPYY又はPPと比較して改善されたインビボ遅効型特性を示す。
【００９６】
アルブミン結合ハンドルは、アミノ、カルボキシル、又はチオール基に結合し得、Ｎ又はＣ末端に、又はリジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、又はシステインの側鎖に結合しうる。あるいは、アルブミン結合ハンドルはジアミン及びジカルボン酸基に結合しうる。
【００９７】
本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログはまた一又は複数のアミノ酸残基に対して化学的改変を含むＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログを含む。かかる化学的改変は、アミド化、グリコシル化、アシル化、硫酸化、リン酸化、アセチル化、及び環化を含む。化学的改変は、ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの配列内のＮ末端又はＣ末端又は側鎖で単独で生じうる。一態様では、これらペプチドのＣ末端は遊離の−ＯＨ又は−ＮＨ２基を有しうる。一態様では、Ｎ末端部は、イソブチルオキシカルボニル基、イソプロピルオキシカルボニル基、ｎ−ブチルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、イソカプロイル基（ｉｓｏｃａｐ）、オクタニル基、オクチルグリシン基（Ｇ（Ｏｃｔ））、８−アミノオクタン酸基又はＦｍｏｃ基でキャップされうる。一態様では、環化はＬｙｓとＧｌｕの間、又はＬｙｓとＡｓｐの間のラクタム架橋又はジスルフィド架橋によりうる。あるいは、ＰＹＹ又はＰＰアナログペプチドに沿って化学的改変の複数の部位が存在しうる。
【００９８】
一態様では、本発明は、ＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰの何れか一つに対して齧歯類及び非齧歯類モデルにおいて実質的に改善された消失半減期を有するＰＹＹ又はＰＰの誘導体又はそのアナログに関する。
【００９９】
本発明の一態様では、齧歯類及び非齧歯類モデルにおける消失半減期は、ＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰの何れか一に対して少なくとも３倍改善されている。本発明の一態様では、齧歯類及び非齧歯類モデルにおける消失半減期は、ＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰの何れか一に対して少なくとも６倍改善されている。本発明の一態様では、齧歯類及び非齧歯類モデルにおける消失半減期は、ＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰの何れか一に対して少なくとも１０倍改善されている。本発明の一態様では、齧歯類及び非齧歯類モデルにおける消失半減期は、ＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰの何れか一に対して少なくとも５０倍改善されている。一態様では、本発明はＰＹＹ又はＰＰの誘導体又はそのアナログに関し、ここで、前記誘導体又はアナログは、非齧歯類モデルを使用してインビボで決定して、ヒトＰＹＹ（３−３６）と比較して、５−５００倍の範囲、例えば１０−５００、２０−５００、５０−５００、１０−４００、２０−４００、５０−４００、１００−５００、１００−４００又は２００−５００倍の消失半減期の改善を示す。一態様では、本発明はＰＹＹ又はＰＰの誘導体又はそのアナログに関し、ここで、前記誘導体は、非齧歯類モデルを使用してインビボで決定して、ヒトＰＰと比較して、５０−５０００倍の範囲、例えば１００−５０００、２００−５０００、５００−５０００、１００−４０００、２００−４０００、５００−４０００、１０００−５０００、１０００−４０００又は２０００−５０００倍の消失半減期の改善を示す。
【０１００】
一態様では、本発明は、ＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰの何れか一に対して非齧歯類モデルにおいて実質的に改善された消失半減期を有し、Ｙ２及び／又はＹ４レセプターに対する結合がＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰの何れか一と少なくとも同じレベルの効力を有するＰＹＹ又はＰＰの誘導体又はそのアナログに関する。一態様では、本発明は、ＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰの何れか一に対して非齧歯類モデルにおいて実質的に改善された消失半減期を有し、Ｙ２及び／又はＹ４レセプターに対する結合がＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰの何れか一の少なくとも５０％、例えば６０％、７０％、８０％又は８０％の効力を有しているＰＹＹ又はＰＰの誘導体又はそのアナログに関する。
【０１０１】
一態様では、本発明は、ラットへの静脈内投与後に少なくとも１０時間のインビボ半減期を有するＰＹＹ又はＰＰの誘導体又はそのアナログに関する。
【０１０２】
一態様では、本発明は、ミニブタへの皮下又は静脈内投与後に少なくとも１０時間、例えば少なくとも２０時間、少なくとも３０時間、少なくとも４０時間、少なくとも５０時間、少なくとも１００時間、少なくとも１５０時間、少なくとも２００時間、少なくとも２５０時間、少なくとも３００時間、又は少なくとも３５０時間のインビボ半減期を、またあるいはミニブタへの皮下又は静脈内投与後に少なくとも８０時間のインビボ半減期を有するＰＹＹ又はＰＰの誘導体又はそのアナログに関する。
【０１０３】
一態様では、本発明は、肺投与に適した粒子に製剤化されうるＰＹＹ又はＰＰの誘導体又はそのアナログに関する。
【０１０４】
一態様では、本発明は、中性ｐＨ、最も特定的には６−８の範囲において化学的かつ物理的に安定であるＰＹＹ又はＰＰの誘導体又はそのアナログに関する。
【０１０５】
本発明の実施態様では、上記特徴の組合せが達成される。
【０１０６】
ある範囲のアルブミン結合残基が、遠位酸性基を有する４−４０の炭素原子を含む直鎖又は分枝状親油性部分のなかで知られている。
【０１０７】
ここでの式において、結合基Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤからの末端の破線結合は、接合結合と見なされるべきであり、別の記載がない限りメチレン基で終わらない。本発明の化合物において、基Ａ、Ｂ、Ｃ、及び／又はＤはアミド結合によって互いに結合される。
【０１０８】
一態様では、本発明は、本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログに関し、ここで、ペプチドはＮ末端部からの一又は複数のアミノ酸の連続配列の欠失により切り詰められうる。一態様では、上記ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログにおいて、一又は複数のアミノ酸の連続配列はＰＹＹ中の１から２５位又はＰＰ中の１から２位から選択される。
【０１０９】
一態様では、本発明は、血清アルブミン結合側鎖がペプチド骨格のアミノ酸の側鎖に結合しているＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログに関する。
【０１１０】
一態様では、本発明は、血清アルブミン結合側鎖がペプチド骨格のアミノ酸の側鎖のアミノ基に結合しているＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログに関する。
【０１１１】
一態様では、本発明は、血清アルブミン結合側鎖が、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、及びＬｙｓからなる群から選択されるペプチド骨格のアミノ酸の側鎖のアミノ基に結合しているＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログに関する。
【０１１２】
一態様では、本発明は、スペーサー−Ｄ−が一又は複数の８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（Ｏｅｇ）分子を含む本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログに関する。
【０１１３】
一態様では、本発明は、本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、前記誘導体がＹ１レセプターに対してよりもＹ２及び／又はＹ４レセプターに対して選択性であるものに関する。
【０１１４】
一態様では、本発明は、本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、前記誘導体がＹ５レセプターに対してよりもＹ２及び／又はＹ４レセプターに対して選択性であるものに関する。
【０１１５】
一態様では、本発明は、本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、前記誘導体が一日一回の投薬計画での投与に適しているものに関する。
【０１１６】
一態様では、本発明は、本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、前記誘導体が週一回の投薬計画での投与に適しているものに関する。
【０１１７】
一態様では、本発明は、本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、前記誘導体が月二回の投薬計画での投与に適しているものに関する。
【０１１８】
一態様では、本発明は、本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、前記誘導体が月一回の投薬計画での投与に適しているものに関する。
【０１１９】
一態様では、本発明は、本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、前記誘導体がヒトＰＹＹ又はＰＰと比較して改善されたＰＫプロファイルを示すものに関する。
【０１２０】
一態様では、本発明は、本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、前記誘導体がヒトＰＹＹ又はＰＰと比較して遅効型特性を示すものに関する。
【０１２１】
一態様では、本発明は、本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、前記誘導体がヒトＰＹＹ又はＰＰと比較して改善されたインビボ半減期を示すものに関する。
【０１２２】
一態様では、本発明は、本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、前記誘導体の治療的に有効な用量がヒトＰＹＹ又はＰＰと比較して少ない副作用を引き起こすものに関する。
【０１２３】
一態様では、本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体は、表Ａに示した化合物からなる群から選択され得、但し、該化合物は配列番号１、配列番号２又は配列番号７３ではない。表Ａ中、配列番号１はヒトＰＹＹ（３−３６）、配列番号２はヒトＰＰ（１−３６）、配列番号７３は［Ｌｅｕ１７，Ｌｅｕ３０］ｈＰＰ（２−３６）である。
【０１２４】
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【０１２５】
一態様では、本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体は、配列番号３、配列番号１２、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号４０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、及び配列番号７０からなる群から選択される。一態様では、本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体は、配列番号４、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２４、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５５、配列番号５６、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７５からなる群から選択される。一態様では、本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体は、配列番号２３、配列番号５７、配列番号５８、配列番号４３、及び配列番号５５からなる群から選択される。
【０１２６】
臨床的適応症
本発明は、治療的有効量の本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログをかかる治療を必要とする哺乳動物に末梢的に投与することを含む、哺乳動物においてＹ２及び／又はＹ４レセプターにより調節される疾病、症状又は疾患の治療方法を提供する。本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、単独で又は該疾病、症状又は疾患あるいは疾病、症状又は疾患の併存症の治療に有用である少なくとも一種の更なる薬学的薬剤との組合せで使用されうる。哺乳動物においてＹ２及び／又はＹ４レセプターアゴニストにより調節される疾病、症状又は疾患は、肥満症及び体重過多を含む。かかる疾病、症状又は疾患の併発症は、かかる疾病、症状又は疾患の治療によって偶発的に改善される可能性が高い。更に提供されるものは、治療的有効量の本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログを哺乳動物に末梢的に投与することを含む、治療を必要とする哺乳動物において肥満症を治療する方法である。
【０１２７】
ここで使用される場合、化合物の「治療的有効量」なる用語は、治療前又はビヒクル処置群において決定された適切なコントロール値に対して、所定の疾患及び／又はその合併症の臨床的徴候を治癒し、緩和し又は部分的に抑止するのに十分な量を言う。これを達成するために十分な量は「治療的有効量」と定義する。それぞれの目的に対する有効量は疾患又は傷害の重症度並びに患者の体重及び一般的症状に依存するであろう。適切な投薬量の決定は、常套的な実験を使用し、値のマトリックスを作成し、マトリックス中の異なった点を試験することによって達成することができ、これは全て、経験ある医師又は獣医の通常の技量の範囲内であると理解される。
【０１２８】
ここで用いられる「治療(処置)」、「治療する(処置する)」なる用語及びその他の変化形は、病気又は疾患のような症状と闘う目的での、患者の管理及び世話を意味する。その用語は、患者が罹患している所定の疾患の治療の全範囲を含むことを意図するものであり、例えば、その徴候もしくは合併症を緩和するため、病気、疾患もしくは状態の進行を遅らせるため、病気、疾患もしくは状態を治癒もしくは除くため、及び／又は症状を予防するための当該活性化合物の投与が含まれ、ここで予防は病気、症状、又は疾患と闘う目的での患者の管理及び世話であると理解されるべきであり、徴候又は合併症の発症を防ぐための当該活性化合物の投与が含まれる。「治療(処置)している」、「治療(処置)する」、又は「治療(処置)」なる用語は、双方の防止的、つまり予防的、及び対症的処置を包含する。また提供されるものは、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの体重管理又は体重低減量を哺乳動物に末梢性に投与することを含む哺乳動物における体重を低減させ又は体重減少を促進する（体重増加の防止又は抑制を含む）方法である。
【０１２９】
また提供されるものは、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの食物摂取低減量を哺乳動物に末梢性に投与することを含む哺乳動物における食物摂取を低減させる方法である。
【０１３０】
また提供されるものは、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの満腹誘導量を哺乳動物に末梢性に投与することを含む哺乳動物における満腹誘導方法である。
【０１３１】
また提供されるものは、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログのカロリー摂取低減量を哺乳動物に末梢性に投与することを含む哺乳動物におけるカロリー摂取低減方法である。
【０１３２】
また提供されるものは、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの治療的有効量の投与により栄養分利用能を低減するす方法である。一態様では、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの治療的有効量の投与により、食物摂取を抑制し、胃内容排出を遅延化し、胃酸分泌を抑制し、及び膵臓酵素分泌を抑制する方法が提供される。一態様では、本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの治療的有効量の投与により、代謝疾患、例えば１型、２型、又は妊娠性糖尿病、肥満症及び他のインスリン抵抗性症候群（Ｘ症候群）の発現を治療又は予防する方法が提供される。
【０１３３】
一態様では、被験者におけるエネルギー代謝を改変するための方法がここに開示される。該方法は、被験者に治療的有効量の本発明のアゴニストを投与し、それによってエネルギー消費を改変することを含む。エネルギーはあらゆる生理学的プロセスで燃焼される。体は、そのプロセスの効率を調節し、又は生じるプロセスの数と性質を変化させることによってそのエネルギー消費の速度を直接改変しうる。例えば、消化の間、体はエネルギーを消費し、食物を腸を通して移動させ、食物を消化し、細胞内において、細胞代謝の効率が改変されて程度の差はあれ熱を生じうる。一態様では、食物摂取を協調的に改変し、エネルギー消費を交換的に改変する、本願に記載された精確な回路網の任意のまた全ての操作のための方法がここに開示される。エネルギー消費は細胞代謝、タンパク質合成、代謝速度、及びカロリー利用の結果である。よって、この実施態様では、末梢的投与がエネルギー消費の増加と、カロリー利用の効率の減少を生じる。一態様では、本発明に係るレセプターアゴニストの治療的有効量が被験者に投与され、よってエネルギー消費が増加される。
【０１３４】
本発明の一態様では、肥満症を治療し又は予防するための方法が提供され、ここで、該方法は、治療的又は予防的有効量のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログを それを必要とする被験者に投与することを含む。好ましい実施態様では、被験者は肥満であるか又は体重過多の被験者である。「肥満症」はこの開示の目的では３０を越える肥満度指数として一般に定義されるが、体重を減少させる必要があるか又はそれを望む３０未満の肥満度指数の者を含む任意の被験者が「肥満」の範囲に含められる。インスリン抵抗性、グルコース不耐性であり、又は任意の形態の真性糖尿病（例えば１、２型又は妊娠性糖尿病）である被験者はこの方法から恩恵を受けうる。本発明の一態様では、食物摂取を減少させ、栄養分利用能を減少させ、体重減少を生じさせ、体組成に影響を及ぼし、及び体エネルギー量を改変し又はエネルギー消費を増加させ、真性糖尿病を治療し、及び脂質プロファイルを改善する（ＬＤＬコレステロール及びトリグリセリド量の低減及び／又はＨＤＬコレステロール量の改変を含む）方法が提供され、ここで、該方法は、有効量の本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログを被験者に投与することを含む。好ましい実施態様では、治療的又は予防的有効量の本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログを被験者に投与することを含む本発明の方法は、それを必要とする被験者における栄養分利用能の減少によって緩和することができる症状又は疾患を治療し又は予防するために使用される。かかる症状及び疾患は、限定されないが、高血圧、脂質異常症、循環器疾患、摂食障害、インスリン抵抗性、肥満症、及び任意の種類の糖尿病を含む。
【０１３５】
理論によって限定されることを意図しないが、本発明の末梢的に投与されるＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの食物摂取の減少、胃内容排出の遅延、栄養分利用能の減少、及び体重減少の惹起における効果が、ＰＰファミリーにおけるもの又はそれに類似する一又は複数の独特のレセプタークラスとの相互作用によって決定されると考えられる。より詳細には、ＰＹＹを好む（又はＹ７）レセプターに類似したレセプター又はレセプター群が関与していると思われる。
【０１３６】
本発明に有用な更なるアッセイは、体重及び／又は体組成に対するＰＰ折り畳み化合物、例えばＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの効果を決定することができるものを含む。例示的なアッセイは、代謝疾患に対する食餌誘導肥満（ＤＩＯ）マウスモデルの利用を含むものでありうる：
１２５匹の雌ＣＢＡマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ（日本）に注文できる。５週齢でそれらはノボノルディスクのアニマルユニットに到着する。マウスは逆転された日／夜サイクルにある。マウス＃１−１００は高脂肪食餌Ｄ１２３０９，Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔ（６０％ｋｃａｌの脂肪）に自由にアクセスできる。この食餌はＣＢＡマウスにおいて肥満症を誘発するのに効果的であることが過去に示されている。第一実施態様では、マウス＃１０１−１２５に１１％ｋｃａｌの脂肪を含むコントロール食餌（Ｄ１２３１０）を与えた。第二実施態様では、マウス＃１０１−１２５に、１０％ｋｃａｌの脂肪を含むコントロール食餌（Ｄ１２４５０Ｂ）を与えた。マウスの体重を毎週の基準で測定する。高脂肪が与えられたマウス（Ｄ１２４９２又はＤ１２３０９）が低脂肪食餌マウスと比較して十分な体重を獲得したとき（およそ１５−２０％の体重過多）、それらを研究で使用する。体重に基づいて、異常マウスを取り除き、残りのマウスを、グループ毎に類似した体重を得る目的でグループ分けする。研究を開始する前に、全てのマウスを体組成のためにスキャンする（ＮＭＲスキャン）。研究開始の一週間前に、マウスの体重を毎日測定して安定したベースラインを得、手順までそれらを気候順化させる。マウスは次の通りに群に分けられる；
グループ１（ｎ＝１０）：ＰＹＹアナログの皮下投与（供与量０．３μｍｏｌ／ｋｇ，１０ｍｌ／ｋｇ）
グループ２（ｎ＝１０）：ＰＹＹアナログの皮下投与（供与量１μｍｏｌ／ｋｇ，１０ｍｌ／ｋｇ）
グループ３（ｎ＝１０）：ＰＰアナログの皮下投与（供与量０．３μｍｏｌ／ｋｇ，１０ｍｌ／ｋｇ）
グループ４（ｎ＝１０）：ＰＰアナログの皮下投与（供与量１μｍｏｌ／ｋｇ，１０ｍｌ／ｋｇ）
グループ５（ｎ＝１０）：ヒトＰＹＹ（３−３６）の皮下投与（供与量１μｍｏｌ／ｋｇ，１０ｍｌ／ｋｇ）
グループ６（ｎ＝１０）：ヒトＰＰの皮下投与（供与量１μｍｏｌ／ｋｇ，１０ｍｌ／ｋｇ）
グループ７（ｎ＝１０）：ビヒクルのの皮下投与
グループ８（ｎ＝１０）：参照としての低脂肪群
一又は複数のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ並びにコントロール化合物、例えばヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、及びヒトＰＰを、５０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、１６５ｍＭのＮａＣｌ，ｐＨ＝７．４中に溶解させる。投薬を、消灯の直ぐ前に、毎日同じ時点で一日一回実施される。皮下投与に対する代替として、化合物の幾らか又は全ての投与をＡｌｚｅｔ浸透圧ミニポンプを介して送達されうる。ポンプは例えば１μｍｏｌ／ｋｇ／２４時間のように化合物の任意の量を送達するように設定されうる。マウスに３週間投薬する。全マウスの体重は、投薬との組合せで毎日記録される。１週間及び３週間の治療後、ＱＮＭＲシステム(Echo Medical Systems, Houston, Texas)を使用してマウスの体組成をスキャンする。その後、マウスを頸椎脱臼で安楽死させる。データをＧｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍで解析する。統計的有意性を、ＡＮＯＶＡの後にＴｕｋｅｙの事後検定を用いてグループを比較することによって評価する。＜０．０５のｐ値は統計的に有意であると考えられる。
【０１３７】
他のアッセイでは、ｏｂ／ｏｂマウスを使用して、体重及び体組成に対する本発明の化合物の効果を解析する。このアッセイは、ｏｂ／ｏｂマウス(Taconic, Hudson, NY)が使用される点を除いて、ＤＩＯマウスに対して上述したアッセイと同様である。これらのマウスは通常の食餌で維持される（Altromin 1324, Brogaarden, Denmark）。
【０１３８】
呼吸商（ＲＱ，ＣＯ２生産をＯ２消費で割ったものとして定義）及び代謝速度を、全動物間接熱量測定法(Oxymax, Columbus Instruments, Columbus, OH)を使用して決定することができる。マウスをイソフルランの過量投与によって安楽死させることができ、肥満指数（両側性精巣上体脂肪パッド重さ）を測定する。本発明の方法において、本発明の好ましいＰＰ折り畳みペプチドはここに記載のアッセイ（特に、食物摂取、胃内容排出、膵臓分泌、体重低下又は体組成アッセイ)の一つで効能を有しているものである。
【０１３９】
ＰＰ折り畳みペプチドの効果を決定するのに有用な更なるアッセイは急性食物摂取を測定するアッセイ、例えば絶食誘導リフィーディングアッセイである： 
マウスにおける急性食物摂取：  痩せたＣ５７ＢＬ雄マウスはＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ（日本）から得られる。それらは１２：１２の昼：夜サイクル（消灯１０：００ＡＭ，点灯１０：００ＰＭ）で維持され、ペレット化されたＤ１２４５０Ｂ齧歯類食餌（Research Diets, Inc., New Brunswick, NJ）が給餌され、水は自由とされる。マウスは７−８週齢で到着し、研究の最小２週間前にＢｉｏＤＡＱシステムで気候順化される。実験の日に、マウスは９−１２週齢である。それらは水は自由にアクセスさせるが一晩（２０−２４ｈ）絶食させる。実験の日に、マウスに皮下注射を施し（用量体積＝１０ｍＬ／ｋｇ）、それらのケージに戻し、予め計量した食物をケージに直ぐに配する。使用された投薬ビヒクルは、５０ｍＭのＫ２ＨＰＯ４、０．０５％のｔｗｅｅｎ８０，ｐＨ＝８．０であり、用量はモル濃度基準で試験化合物に対して計算する。アッセイ設計：
・投薬の前の日に２：００ＰＭからマウスを絶食させる
・１０：００ＡＭに消灯する３０分前にマウスを計量し投薬する
・１０ｍｌ／ｋｇ皮下でマウスに投薬する
・マウスに一回投薬し、食物摂取を、２４時間の間、ＢｉｏＤＡＱシステム（Research Diets, Inc., New Brunswick, NJ）を使用してモニターする。
ＢｉｏＤＡＱシステムは、それぞれが高感度ウエイトを備える食物トレーを有する３２のマウスボックスからなる。マウスが食餌すると、食物トレーの内容物が登録される。個々の食物トレーの重量変化がある度にデータが登録される。開始の食物重量から各時点で食物重量を差し引くことによって、累積的食物摂取が計算される。
【０１４０】
ラットにおける急性食物摂取：  痩せた雄のスプラーグドーリーラット(~180g)をTaconic（欧州）から得る。到着直後及び投薬前の２週間、ラットを昼夜逆転サイクル（各ケージに２匹で１０ａｍから１０ｐｍまで消灯）でハウスに入れる。ラットに通常の食餌(Altromin 1324, Brogaarden, Denmark)を施す。投薬１週間前に、ラットをＦｅｅｄＷｉｎシステムに移動させ、そこでラットを順化のために個々のケージに配する。ＦｅｅｄＷｉｎシステム(Ellegards Systems, Faaborg, Denmark)は食物及び水摂取の個々の連続した登録のための３２のステーションを含んでいる。一つのステーションは、金属の蓋と２つのスケール（一つは食物摂取のため、一つは水摂取のため）を有する一つのケージによりなる。食物及び水摂取は、ケージの各側の２つのスケールに配されている食物及び水の前負荷量の消失の測定によって推定される。実験の日に、暗くなる前に皮下注射（用量体積＝１−２ｍＬ／ｋｇ）でラットに投薬し、そのケージに戻す。投薬後、水及び食物摂取がＦｅｅｄＷｉｎシステムによって登録される。データは１５分毎に４８時間の間、集める。各グループに対する食物消費を、要求された期間に対して計算する。
【０１４１】
ブタにおける急性食物摂取：  若い雌のLandrace Yorkshire DurocブタをGundsoegaard, Denmarkから得る。一週間の順化の間、動物をグループでハウスに入れる。順化及び実験期間の双方ともいつでも動物にはブタ用食餌(Prima Antonio)が自由に提供される。個々の食物摂取の測定では、動物を個々の囲いに配する。食物摂取を、Ｍｐｉｇｗｉｎシステム(Ellegards Systems, Faaborg, Denmark)を使用して１５分毎に食物の重さを記録することによってオンラインでモニターする。実験の最初の日（月曜の朝）にブタに皮下注射で「投薬し（用量体積＝０．０２５−０．０４ｍＬ／ｋｇ）、食物摂取を、実験の終わり（金曜の午後）まで５日間モニターする。各グループに対する食物消費を、要求された期間に対して計算する。
【０１４２】
本発明の化合物のＰＫを測定するために有用なアッセイはミニブタＰＫアッセイである。Ellegaard Gottingen Minipigs A/S, Denmarkからのおよそ１８から２２ｋｇの体重の５匹の雄のGottingenミニブタを実験に含めた。ミニブタには静脈内（ｉ．ｖ．）投薬及び採血に使用した２つの中心静脈カテーテルが挿入されていた。化合物を５０ｍＭのＫ２ＨＰＯ４，０．０５％のｔｗｅｅｎ８０，ｐＨ＝８．０に１８０ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度になるまで溶解させた。ブタに６ｎｍｏｌ化合物／ｋｇ体重で投薬した。血液試料を次の時点で採取した：投与前、投薬後３０分、１、２、４、８、２４、４８、７２、９６、１２０、１６８及び２４０時間。血液試料を、安定化のためにＥＤＴＡを含む試験管に集め、遠心分離前に最大２０分間、氷上に維持した。血漿を分離するための遠心分離手順は、４℃、３０００ｒｐｍ、１０分間であった。血漿を集め、アッセイするまで−２０℃に保存されたＭｉｃｒｏｎｉｃチューブに直ぐに移した。
【０１４３】
更なるミニブタＰＫアッセイを、本発明の化合物のＰＫを測定するために使用した。Ellegaard Gottingen Minipigs A/Sからの１５から３５ｋｇ体重のミニブタを実験に含めた。動物には静脈内（ｉ．ｖ．）投薬及び採血に使用した２つの中心静脈カテーテルが挿入されていた。化合物を１０ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のｔｗｅｅｎ８０，ｐＨ＝４．０に４０ｎｍｏｌ／ｍｌから２００ｎｍｏｌ／ｍｌの範囲の濃度になるまで溶解させた。ミニブタに１０ｎｍｏｌ化合物／ｋｇ体重で静脈内投薬したが、時折、他の用量、例えば４ｎｍｏｌ／ｋｇ、３０ｎｍｏｌ／ｋｇ又は５０ｎｍｏｌ／ｋｇで投与した。各化合物は３又は４のミニブタに投薬され、２つの化合物を同じ動物に同時に与えてもよい。血液を投与前と最初の投与後の１０時間に１２回採取した。投薬後１３日まで一日一回、血液を更に採取した。血液試料を、安定化のためにＥＤＴＡバッファー、トラジロール及びＶａｌ−Ｐｙｒを含む試験管中に集め、最大２０分間、氷上に維持した。血漿を分離するために試料を４℃、２０００Ｇで１０分間、遠心分離した。血漿を集め、アッセイするまで−２０℃に保存されたＭｉｃｒｏｎｉｃチューブに直ぐに移した。
【０１４４】
血漿試料を、Ａｃｃｅｌａ ＨＰＬＣポンプとオートサンプラー（双方ともThermoFisher)が連結されたＬＴＱ-オービトラップ(Orbitrap)質量分析計(ThermoFisher Scientiifc, Bremen)でのＬＣ-ＭＳによりアッセイした。質量分析計にはエレクトロスプレーインターフェィスが具備されており、これは正のイオン化モードで操作された。分析は、ｍ／ｚ８２９．８±１．５Ｄａの選択されたイオンモニタリングモードで実施した。化合物は８２９．４５２９Ｄａで検出され、これは、３．６ｐｐｍの精度での［Ｍ＋６Ｈ］６＋に対応する。定量目的のために、６つの最も強力なアイソトープピークを、５ｐｐｍの精度で抽出した。ＨＰＬＣはジュピター・プロテオ（Jupiter Proteo）カラム（４μ）９０Ａ（５０×２．０ｍｍＩＤ）で実施した。移動相は、Ａ．０．１％のギ酸、及びＢ．アセトニトリルに０．１％のギ酸が入ったものから構成された。勾配は、１０％Ｂから２０％Ｂまで０から０．２分、ついで２０％Ｂから３４％Ｂまで０．２分から６分で操作した。流量は０．３ｍｌ／分であった。血漿試料の分析では、３０μｌの血漿を９０μｌのエタノールで沈殿させた。１００μｌの上清に、２０μｌの９５％アセトニトリル（５％のギ酸を含む）及び２００μｌのヘプタンを添加した。ヘプタン相を５分後に除去し、残りの溶液を上述のようなＬＣ−ＭＳによって分析した。血漿標準体の構築については、次の濃度で化合物を血漿（ミニブタ）にスパイクさせた：１ｎＭ、２ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、２０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ。血漿標準を試料として処理した。定量の下限値は２ｎＭと推定した。
【０１４５】
非コンパートメント解析(NCA): 血漿濃度−時間プロファイルを、WinNonlin Professional 5.0 (Pharsight Inc., Mountain View, CA, USA)を使用して非コンパートメント薬物動態解析（ＮＣＡ）によって分析した。ＮＣＡは、各動物からの個々の血漿濃度−時間プロファイルを使用して実施した。
【０１４６】
胃内容排出の測定のための例示的なアッセイは、(Asakawa A等, Characterization of the effects of pancreatic polypeptide in the regulation of energy balance, Gastroenterology, 2003,124, 1325-1336)に「胃内容排出」の見出しの下に１３２６頁の材料及び方法のセクションに記載されている。 
【０１４７】
食欲は当業者に知られた任意の手段によって測定することができる。例えば、ヒトにおいて、減少した食欲は生理学的評価によって評価されうる。かかる実施態様では、レセプターアゴニストの投与は、主観的空腹、満腹、及び／又は膨満の変化を生じる。空腹は当業者に知られている任意の手段によって評価することができる。一態様では、空腹は、生物心理学的アッセイを使用して、例えば質問表を使用する空腹感及び知覚の評価によって、評価される。
【０１４８】
減少した食物摂取、体重減少、又は肥満症の治療の結果として、それを必要とする患者における高血圧の寛解に加えて、本発明の化合物を低血圧の治療に使用することができる。
【０１４９】
本発明の化合物は膵島又は膵臓細胞におけるグルコース反応性を増強し、誘導し、亢進し又は回復するのにまた有用でありうる。これらの作用は、例えば上述のもの及び米国特許出願ＵＳ２００４０２２８８４６のもののような代謝疾患に伴う症状を治療し又は予防するのに有用でありうる。かかる活性を決定するためのアッセイは当該分野で知られている。例えば、公開された米国特許出願ＵＳ２００４０２２８８４６（その全体を出典明示により援用）には、膵島単離及び培養並びに胎児膵島成熟化のためのアッセイが記載されている。特許出願ＵＳ２００４０２２８８４６の実施例には、腸由来ホルモンペプチド、例えば膵臓ペプチド（ＰＰ）、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）、ニューロペプチドＫ（ＮＰＫ）、ＰＹＹ、セクレチン、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）及びボンベシンをＳｉｇｍａから購入した。コラゲナーゼＸＩ型をＳｉｇｍａから得た。ＲＰＭＩ１６４０内容培地及びウシ胎仔血清をＧｉｂｃｏから得た。抗インスリン抗体を含むラジオイムノアッセイキット（［１２５Ｉ］−ＲＩＡキット）をＬｉｎｃｏ、Ｓｔ Ｌｏｕｉｓから購入した。出生直後のラット膵島をＰ−０２年齢のラットから得た。成体ラット膵島を６−８週齢のラットから得た。胎仔ラット膵島を次のようにして得た。妊娠した雌のラットを妊娠日数ｅ２１に犠牲にした。子宮から胎仔を取り除いた。１０−１４の膵臓を各同腹仔から解体し、ハンクスバッファーで２回洗浄した。膵臓をプール化し、６ｍｌの１ｍｇ／ｍｌコラゲナーゼ（ＸＩ型、Ｓｉｇｍａ）中に懸濁させ、絶えず振盪しながら８−１０分間３７℃でインキュベートした。消化は、１０容量の氷冷ハンクスバッファーを加え、ハンクスバッファーで三回洗浄することによって停止させた。ついで、膵島をＦｉｃｏｌｌ勾配によって精製し、１μＭのＩＢＭＸの添加を伴うか伴わないで１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）／ＲＰＭＩ培地中で培養した。５日の最後に、２０の膵島を手で各チューブに拾い上げ、静的なインスリン放出についてアッセイした。一般に、膵島を最初にＫＲＰバッファーで洗浄し、ついで、３ｍＭ（低）グルコースを含む１ｍｌのＫＲＰバッファーと共に絶えず振盪しながら３７℃で３０分間インキュベートした。上清を集めた後、膵島をついで３７℃で１時間、１７ｍＭ（高）グルコースと共にインキュベートした。低又は高グルコース刺激から放出されたインスリンについて、［１２５Ｉ］−ＲＩＡキットを使用してラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によってアッセイした。Ｅ２１胎仔膵島を、２００ｎｇ／ｍｌのＰＹＹ、ＰＰ、ＣＣＫ、ＮＰＫ、ＮＰＹ、セクレチン、ＧＬＰ−Ｉ又はボンベシンの存在下で５日間培養した。
【０１５０】
標準的な齧歯類食餌Ｐｕｒｉｎａ５００８が供給された全てのｆａ／ｆａ雄において糖尿病を自然に発現する近交系（＞Ｆ３０世代）ラットモデルであるZucker Diabetic Fatty （ＺＤＦ）雄ラットを使用する例示的なインビボアッセイがまた提供される。ＺＤＦ ｆａ−ｆａ雄では、高血糖症が約７週齢で発症し始め、グルコースレベル（供給）が典型的には１０から１１週齢までに５００ｍｇ／ＤＬに達する。インスリンレベル（供給）は糖尿病の発症中では高い。しかしながら、１９週齢までに、インスリンは痩せたコントロール同腹仔の一匹のおおよそのレベルまで低下する。肥満ラットのトリグリセリド及びコレステロールレベルは痩せたものより通常は高い。該アッセイでは、１群当たり６匹のラットで３群の７週齢のＺＤＦラットに１４日間、Ａｌｚｅｔポンプによる注入処置を施した：１）ビヒクルコントロール、２）及び３）それぞれ１００ｐｍｏｌ／ｋｇ／ｈ及び５００ｐｍｏｌ／ｋｇ／ｈの２つの異なった用量のＰＹＹ。４種の測定を、注入前、注入後の７日目及び１４日目に行った：１）血漿中グルコースレベル、２）血漿中インスリンレベル、及び３）血漿中トリグリセリド（ＴＧ）レベル、並びに経口グルコース負荷（ＯＧＴＴ）試験。従って、これらのアッセイを、所望の活性を試験するために本発明の化合物に対して使用することができる。
【０１５１】
本発明の化合物は不安の治療に使用することができる。高架式十字迷路試験による不安様行動についての投与されたペプチドの効果を測定する方法は、(Asakawa A等, Characterization of the effects of pancreatic polypeptide in the regulation of energy balance, Gastroenterology, 2003, 124, 1325-1336)に見出し「繰り返し投与」の下に１３２７頁の材料及び方法セクションに記載されている。
【０１５２】
本発明の化合物は任意の起源の鼻炎の治療に使用されうる。鼻炎のマーカーとしての鼻血流に対する投与されたペプチドの効果を測定する方法は、(Cervin A等, Functional effects of neuropeptide Y receptors on blood flow and nitric oxide levels in the human nose. Am J Respir Crit Care Med. 1999 Nov;160(5 Pt 1):1724-8)の１７２５頁１１行に記載されている。
【０１５３】
本発明の化合物は創傷治癒を促進するのに有用でありうる。本発明の化合物は、限定しないが、歯科手術及び美容的手術を含む任意の種類の手術後のレクリエーション時間の減少に有用であり得る。本発明の化合物は、限定するものではないが、末梢動脈疾患を含むこれが望まれる疾患の治療における動脈形成を促進するのに有用でありうる。
【０１５４】
本発明の化合物は、広範囲の生物学的活性を示し、幾つかはその抗分泌性及び腸運動抑制特性に関連している。該化合物は、上皮細胞との直接の相互作用によって、又はおそらくは腸分泌を刺激するホルモン又は神経伝達物質の分泌を阻害することによって、胃腸分泌を抑制しうる。抗分泌特性は、胃及び／又は膵臓分泌の抑制を含み、胃炎、急性膵炎、バレット食道、及び胃食道逆流症の治療又は予防に有用である場合がある。
【０１５５】
本発明の化合物は、過剰な腸電解質及び水分泌並びに減少した吸収に関連する多くの胃腸疾患(例えば Harrison's Principles of Internal Medicine, McGraw-Hill Inco, New York, 12版を参照)、例えば感染性下痢、炎症性下痢、短小腸症候群、又は例えば回腸瘻造設術のような外科手術後に典型的に生じる下痢の治療に有用である。
【０１５６】
感染性下痢の例は、限定しないが、急性ウイルス性下痢、急性細菌性下痢（例えば サルモネラ, カンピロバクター,及びクロストリジウム又は原虫感染による)、又は旅行者の下痢 (例えばノーウォークウイルス又はロタウイルス)を含む。炎症性下痢の例は、限定しないが、吸収不良症候群、熱帯性スプルー, 慢性膵炎、クローン病、下痢、及び過敏性腸症候群を含む。本発明のペプチドを、例えば手術後の又はコレラによる胃腸疾患を含む緊急の又は生命を脅かす状況を治療するために使用することができることもまた発見された。腸電解質分泌を測定する方法は、(Eto B等 Comparison of the antisecretory effect of endogenous forms of peptide YY on fed and fasted rat jejunum. Peptides. 1997;18(8):1249-55)の１２５０頁に記載されている。
【０１５７】
本発明の化合物は、また腸管損傷に伴う徴候（例えば下痢）を単に治療することではなく、腸管損傷を治療又は予防するのにもまた有用でありうる。腸管に対するかかる損傷尾は、化学療法誘発下痢、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、腸萎縮症、腸粘膜喪失、及び／又は腸粘膜機能喪失であり、又はその結果でありうる（その全体を出典明示によりここに援用する国際公開第０３／１０５７６３号を参照）。国際公開第０３／１０５７６３号に記載されたように、かかる活性のアッセイは、１２：１２昼夜サイクル中で収容され、標準的な齧歯類食餌（Teklad LM 485, Madison, WI）及び水に自由にアクセスできる２５０−３００グラムの範囲の１１週齢の雄ＨＳＤラットを含む。動物は実験の２４時間前に絶食された。慢性的結腸炎症の簡単で再現可能なラットモデルは過去にMorris GP等., "Hapten- induced model of chronic inflammation and ulceration in the rat colon." Gastroenterology. 1989; 96:795-803によって記載されている。それは、比較的長い期間の炎症及び潰瘍を示し、特に制御された形式で結腸炎症性疾患の病態生理学を研究し、ヒトにおける炎症性腸疾患に潜在的に応用できる新たな治療を研究する機会をもたらす。ラットは３％のイソフルオランで麻酔し、３７℃に設定された調節加熱パッド上に配した。経管栄養針を７ｃｍ結腸中に直腸性に挿入した。50%のエタノール（ｖ／ｖ）に溶解させたハプテントリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）を、Mazelin等, "Protective role of vagal afferents in experimentally-induced colitis in rats." Juton Nerv Syst. 1998;73:38 45に記載されたようにして、３０ｍｇ／ｋｇの用量、０ ０．４−０．６ｍＬの全体積で、経管栄養針を通して結腸管腔中に送達させた。コントロール群には結腸内的に生理食塩水（ＮａＣｌ０．９％）が投与された。結腸炎の誘導から４日後に、結腸を麻酔ラットから摘出し、ラットをついで断頭によって安楽死させた。切除した結腸及び脾臓の重さを測定し、結腸の写真を撮って肉眼的形態的損傷のスコア化を行った。炎症は充血及び腸壁肥厚の領域として定義した。
【０１５８】
本発明のＹ４レセプター選択的アゴニストは便秘の治療において価値がある。便通の頻度は便秘の指標であり、当業者に知られている任意の手段によって測定することができる。
【０１５９】
Ｙ４選択的アゴニストは、下痢又は腸ストーマからの分泌過多の治療において、及び嘔気又は嘔吐の治療において、又は抗嘔気又は制吐剤又は嘔気及び／又は嘔吐を生じる傾向のある薬剤での同時治療としてまた価値がある。
【０１６０】
本発明のＹ４選択的化合物、及びＰＰそれ自体はまた嘔吐及び嘔気に対する治療又は保護に有用である。
【０１６１】
本発明の一態様では、慢性治療が開始されるまでに治療される被験者においてこれらの化合物が意図された効果を有することを担保するために、本発明の化合物が投与される急性試験を実施してもよい。これらの手段を通して、本発明の化合物での治療に感受性である患者のみがこれらの化合物で治療されることが担保される。
【０１６２】
一態様では、本発明は、ここに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの投与によるＹレセプター調節に応答性である症状の治療方法に関する。本発明の一態様では、上記治療方法において、Ｙレセプター調節に応答性である症状は肥満症である。本発明の一態様では、上記治療方法において、症状は、肥満関連疾患、例えば食物摂取の減少、Ｘ症候群（メタボリックシンドローム）、糖尿病、２型真性糖尿病又はインスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）、高血糖症、インスリン抵抗性、耐糖能障害、循環器疾患、高血圧、アテローム硬化症、冠動脈疾患、心筋梗塞、末梢血管疾患、脳卒中、血栓閉栓疾患、高コレステロール血症、高脂血症、胆嚢疾患、変形性関節症、睡眠時無呼吸、生殖疾患、例えば多嚢胞性卵巣症候群、又は乳房、前立腺、又は結腸の癌である。本発明の一態様では、上記治療方法において、症状は、過剰な腸電解質及び水分泌又は吸収低下に関連する疾患、例えば感染性下痢、炎症性下痢、短小腸症候群、又は例えば回腸瘻造設術のような外科手術後に典型的に起こる下痢である。感染性下痢の例は、限定しないが、急性ウイルス性下痢、急性細菌性下痢（例えばサルモネラ、カンピロバクター，及びクロストリジウム又は原虫感染による）、又は旅行者の下痢 (例えばノーウォークウイルス又はロタウイルス)を含む。炎症性下痢の例は、限定しないが、吸収不良症候群, 熱帯性スプルー、慢性膵炎、クローン病、下痢，及び過敏性腸症候群を含む。本発明の一態様では、上記治療方法において、症状は腸への損傷によって特徴付けられる症状、例えば化学療法誘発下痢、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、腸萎縮症、腸粘膜喪失、及び／又は腸粘膜機能喪失である。本発明の一態様では、上記治療方法において、症状は、腸炎症症状、例えば潰瘍性大腸炎、クローン病又は過敏性腸症候群である。本発明の一態様では、上記治療方法において、症状はアレルギー性又は非アレルギー性鼻炎である。本発明の一態様では、上記治療方法において、応答性の症状は不安である。本発明の本発明の一態様では、上記治療方法において、投与計画は、一日一回、週一回、月二回、又は月一回からなる群から選択される。本発明の一態様では、上記治療方法において、前記誘導体は、ヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰに比較して改善されたＰＫプロファイルを示す。本発明の一態様では、上記治療方法において、前記誘導体は、ヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰと比較して遅効型特性を示す。本発明の一態様では、上記治療方法において、前記誘導体は、ヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）又はＰＰと比較して改善されたインビボ半減期を示す。本発明の一態様では、上記治療方法において、治療的に効果的な用量の前記誘導体はヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰと比較して少ない副作用を生じる。
【０１６３】
一態様では、本発明は、Ｙレセプター調節に応答性である症状、例えば肥満症又は肥満関連疾患、例えば食物摂取の減少の治療のための医薬の調製におけるここに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの使用に関する。
一態様では、ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、ビヒクルと比較して、少なくとも５％、例えば少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％又は３０％の食物摂取の減少をもたらす。一態様では、ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、ビヒクルと比較して、５−３０％、例えば少なくとも５−２０％、５−１５％又は１０−２０％の範囲の食物摂取の減少をもたらす。
一態様では、ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、ビヒクルと比較して、少なくとも５％、例えば少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％又は３０％の体重減少をもたらす。一態様では、ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、ビヒクルと比較して、５−３０％、例えば少なくとも５−２０％、５−１５％又は１０−２０％の範囲で体重減少をもたらす。
一態様では、本発明は、哺乳動物における投与のためのここに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの使用に関し、ここで、前記誘導体はヒトＰＰ及びＰＹＹ化合物と比較して遅効型特性を示す。
【０１６４】
Y レセプター活性に対するＰＰ折り畳みペプチドのインビトロ効果の測定
Ｙレセプター及びキメラＧプロテインを同時発現する細胞を使用するカルシウム動員の測定：
ヒトＹレセプターに対する試験化合物の効能は、ＹレセプターがＧｑ経路を介してカップリングすることを可能にする乱雑なＧプロテインのＧｑｉ５並びにヒトＹレセプターを安定に形質移入したＣＨＯ細胞中で用量応答実験を実施することによって決定され、ＦＬＩＰＲ（FLIPRtetra from Molecular Devices, CA, USA）を使用して測定されるカルシウム動員の増加が生じる。
【０１６５】
Ａ．細胞の調製
１．  適切な抗生物質を含むＤＭＥＭ−Ｆ１２中に維持された接着性Ｙレセプター及びＧｑｉ５二重安定ＣＨＯ細胞をコンフルエンス近くになるまで９６ウェルのポリ−Ｄ−リジン被覆マイクロプレートに蒔き、一晩増殖させる。
【０１６６】
Ｂ．試薬の調製
２．  プロベネシド酸(Invitrogen #P36400)の２５０ｍＭ（１００Ｘ）ストックを作製し、１ｍｌのアッセイに溶解させる。
３．  染料添加液を調製する（一マイクロプレートに対して）：１０ｍｌのアッセイバッファーと１００μｌのプロベネシド酸（最終濃度：２．５ｍＭ）原液を、（キットに提供された）染料添加混合液のバイアルに加える。激しく撹拌する。
【０１６７】
Ｃ．アッセイ
４．  １００μｌの染料添加溶液を、１００μｌの培地中に細胞を含む９６ウェルプレートの各ウェルに加える（又は試験されるリガンドに応じて他のバッファー）。細胞を３７℃／５％ＣＯ２インキュベーターに配する。細胞をアッセイ前に１時間、インキュベートする。
５．  染料混合物中での細胞のインキュベーション中に、溶液を、レセプターアゴニスト（５Ｘ）から、ＨＢＳＳ／ＨＥＰＥＳ：２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．０１％のＮａＮ３，ｐＨ７．４を含むハンクス平衡塩類溶液（１Ｘ）（リガンドとしてペプチドを使用するならば０．１％ＢＳＡを含む）中で調製する。連続希釈を９６ウェル化合物プレート（ＶＷＲ＃６２４０９−１０８，ＮＵＮＣ，Ｖ−ボトム）で行う。
６．  細胞への染料混合物の添加から１時間後に、ＦＬＩＰＲ（Molecular Devices, CA, USA製のＦＬＩＰＲｔｅｔｒａ）を使用して蛍光を測定する。
測定は三組でなされる。ＥＣ５０値を標準的な薬理学的データハンドリングソフトウェアＰｒｉｓｍ５．０(graphPad Sofware, San Diego, USA)を使用して計算した。
【０１６８】
ＡＣＴＯｎｅベースＦＬＩＰＲアッセイを使用するＹ２又はＹ４レセプター活性の測定：
ＡＣＴＯｎｅ（登録商標）はＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ(San Jose, CA)製で、Ｇｓ及びＧｉカップリング７ＴＭレセプターシグナルの測定のための容易にスケールアップ可能なｃＡＭＰバイオセンサーＨＴＳプラットホームである。細胞は、ｃＡＭＰ及びｃＧＭＰに応答するかなり非特徴的イオンチャネルである、修飾されたラット嗅覚環状ヌクレオチド開口型（ＣＮＧ）カルシウムチャネルの周りに発生されるバイオセンサーを発現する。ＣＮＧはｃＡＭＰ選択性であるように操作されており、よってカルシウム又は膜電位応答性染料を通してシグナル伝達するｃＡＭＰ応答性バイオセンサーとして機能する。Ｙ２又はＹ４レセプターを発現するＡＣＴＯｎｅ ＨＥＫ−２９３細胞はＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから得られる。細胞に、細胞質中にだけ分散するカルシウム応答性染料を負荷する。有機アニオントランスポーターの阻害剤であるプロベネシドを、染料が細胞から離れるのを防止するために添加する。ホスホジエステラーゼ阻害剤が、フォーマットされたｃＡＭＰが分解するのを防止するために添加される。イソプロテレノール（β１／β２アゴニスト）がアデニル酸シクラーゼを活性化させるために加えられる。Ｙ２又はＹ４レセプターアゴニストを加えると、アデニル酸シクラーゼが不活化される。ついで、細胞質中の減少したカルシウム濃度を蛍光の増加として検出する。試験物質と共に、ＥＣ８０に一致する濃度のイソプロテレノールが全てのウェルに添加される。
【０１６９】
・  細胞をＧｒｅｉｎｅｒ３８４−ウェルプレート中に蒔く。１μｌ当たり５６０細胞を含む２５μｌの細胞懸濁液を、ＭｕｌｔｉｄｒｏｐＴＭ（384-Multidrop，Labsystems製, Finland）を使用して全てのウェルに加える。
・  ついで、プレートを９枚のプレートまで重ねて５％ＣＯ２を含むインキュベーターで３７℃で一晩インキュベートする。
・  細胞プレートにＭｕｌｔｉｄｒｏｐＴＭを使用して、ＦＬＩＰＲカルシウム４キット（Molecular Devices, CA, USA）からの２５μｌプローブを充填する。
・  細胞プレートをインキュベーターに戻し、９枚のプレートまで重ねて３７℃で６０分間インキュベートする。
・  ついで、細胞プレートを、プレートを積み重ねないで使用前に６０分間、室温に配する。プレートをアルミフォイルで覆って光を避ける（染料は、高いベースライン及び変動を生じる昼光によって励起されうる）。
・  ＦＬＩＰＲ（Molecular Devices, CA, USA製のＦＬＩＰＲｔｅｔｒａ）は同時に１μｌの試料と１μｌのイソプロテレノール（０．０５μＭの最終濃度）を加える。
・  ウェルからの蛍光シグナルを、ＦＬＩＰＲへの試料添加から３３０秒後に測定する。
【０１７０】
投与及び薬学的組成物
本発明の他の目的は、０．１ｍｇ／ｍｌから２５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している本発明に記載の誘導体を含有する医薬製剤を提供することであり、該製剤は３．０から９．０のｐＨを有する。製剤は、緩衝系、保存料、等張化剤、キレート剤、安定剤及び界面活性剤を更に含有しうる。ここで使用される「薬学的組成物」なる用語は、薬学的賦形剤、例えばバッファー、保存料、及び場合によっては緊張改変剤及び／又は安定剤と共に本発明に係る活性誘導体を含有する製品を意味する。よって、薬学的組成物はまた医薬製剤として当該分野で知られている。
【０１７１】
一態様では、本発明は、ここに定義されたＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログと一又は複数の薬学的賦形剤を含有する組成物に関する。
【０１７２】
本発明の一態様では、医薬製剤は水性製剤、すなわち水を含有する製剤である。このような製剤は、典型的には溶液又は懸濁液である。本発明の一態様では、医薬製剤は水溶液である。「水性製剤」なる用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含有する製剤と定義される。同様に「水溶液」なる用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含有する溶液と定義され、「水性懸濁液」なる用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含有する懸濁液と定義される。
【０１７３】
一態様では、医薬製剤は凍結乾燥製剤であり、医師又は患者が使用前にそれに溶媒及び／又は希釈剤を加える。
【０１７４】
一態様では、医薬製剤は、如何なる事前の溶解も必要なしに使用準備が整っている乾燥製剤（例えば凍結乾燥又はスプレー乾燥）である。
【０１７５】
一態様では、本発明は、本発明に記載の誘導体の水溶液、及びバッファーを含有する医薬製剤に関し、該誘導体は０．１ｍｇ／ｍｌ又はそれ以上の濃度で存在し、該製剤は約３．０から約９．０のｐＨを有する。
【０１７６】
本発明の一態様では、製剤のｐＨは約７．０から約９．５である。本発明の一態様では、製剤のｐＨは約３．０から約７．０である。本発明の一態様では、製剤のｐＨは約５．０から約７．５である。本発明の一態様では、製剤のｐＨは約７．５から約９．０である。本発明の一態様では、製剤のｐＨは約７．５から約８．５である。本発明の一態様では、製剤のｐＨは約６．０から約７．５である。本発明の一態様では、製剤のｐＨは約６．０から約７．０である。一態様では、製剤のｐＨは約８．０から約８．５である。
【０１７７】
本発明の一態様では、それぞれの投与は０．０１ｍｇから１０ｍｇの本発明に記載の活性誘導体を含む。一態様では、投与される用量は０．０５ｍｇより多い活性誘導体を含む。一態様では、投与される用量は０．１ｍｇより多い活性誘導体を含む。一態様では、投与される用量は１０ｍｇまでの本発明に記載の活性誘導体を含む。一態様では、投与される用量は９ｍｇまでの本発明に記載の活性誘導体を含む。一態様では、投与される用量は８ｍｇまでの本発明に記載の活性誘導体を含む。一態様では、投与される用量は７ｍｇまでの本発明に記載の活性誘導体を含む。一態様では、投与される用量は６ｍｇまでの本発明に記載の活性誘導体を含む。一態様では、投与される用量は５ｍｇまでの本発明に記載の活性誘導体を含む。一態様では、投与される用量は０．２ｍｇから５ｍｇの活性誘導体を含む。
【０１７８】
本発明の一態様では、バッファーは、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、グリシルグリシン、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム、及びトリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン、ビシン、トリシン、リンゴ酸、コハク酸塩、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸又はそれらの混合物から選択される。これらの特定のバッファーの各一が本発明の別の実施態様を構成する。
【０１７９】
本発明の一態様では、製剤は、薬学的に許容可能な保存料を更に含有する。本発明の更なる一態様では、保存料は、フェノール、ｏ−クレゾール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル、２−フェノキシエタノール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸ブチル、２−フェニルエタノール、ベンジルアルコール、クロロブタノール、及びチオメロサール、ブロノポール、安息香酸、イミド尿素、クロロヘキシジン、デヒドロ酢酸ナトリウム、クロロクレゾール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル、塩化ベンゼトニウム、クロルフェネシン（３ｐ−クロルフェノキシプロパン−１，２−ジオール）又はそれらの混合物からなる群から選択される。一態様では、保存料はフェノール又はｍ−クレゾールである。本発明の一態様では、保存料は、０．１ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している。本発明の一態様では、保存料は、０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している。本発明の一態様では、保存料は、５ｍｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している。本発明の一態様では、保存料は、１０ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している。これらの特定の保存料の各一が、本発明の別の実施態様を構成する。医薬組成物中に保存料を使用することは、当業者によく知られている。簡便には、Remington:The Science and Practice of Pharmacy, １９版, 1995が参照される。
【０１８０】
本発明の一態様では、製剤は等張化剤を更に含有しうる。本発明の一態様では、等張化剤は、塩（例えば塩化ナトリウム）、糖又は糖アルコール、アミノ酸（例えば、Ｌ−グリシン、Ｌ−ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、スレオニン）、アルジトール（例えばグリセロール（グリセリン）、１，２−プロパンジオール（プロピレングリコール）、１，３−プロパンジオール、１，３−ブタンジオール）ポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ４００）、又はそれらの混合物からなる群から選択される。任意の糖、例えば単糖類、二糖類又は多糖類、又は水溶性グルカン類、例えばフルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、アルファ及びベータＨＰＣＤ、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、及びカルボキシメチルセルロース−Ｎａを使用することができる。一態様では、糖添加剤はスクロースである。糖アルコールは、少なくとも一の−ＯＨ基を有するＣ４−Ｃ８炭化水素と定義され、例えばマンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、ズルシトール、キシリトール、及びアラビトールを含む。一態様では、糖アルコール添加剤はマンニトールである。上述した糖又は糖アルコールは、個々に又は組合せて使用されうる。使用される量は、糖又は糖アルコールが液状調製物に溶解し、本発明の方法を使用して得られた安定化効果に悪影響を与えない限りは、固定された限界値があるものではない。一態様では、糖又は糖アルコールの濃度は、約１ｍｇ／ｍｌから約１５０ｍｇ／ｍｌである。本発明の一態様では、等張化剤は１ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌである。本発明の一態様では、等張化剤は１ｍｇ／ｍｌから７ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の一態様では、等張化剤は５ｍｇ／ｍｌから７ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の一態様では、等張化剤は８ｍｇ／ｍｌから２４ｍｇ／ｍｌである。本発明の一態様では、等張化剤は２５ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。これらの特定の等張化剤の各一が本発明の別の態様を構成する。医薬組成物に等張化剤を使用することは、当業者によく知られている。簡便には、Remington:The Science and Practice of Pharmacy, １９版, 1995が参照される。
【０１８１】
本発明の一態様では、製剤はキレート剤を更に含有する。本発明の一態様では、キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸、及びアスパラギン酸の塩、及びそれらの混合物から選択される。本発明の一態様では、キレート剤は０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している。本発明の一態様では、キレート剤は０．１ｍｇ／ｍｌから２ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している。本発明の一態様では、キレート剤は２ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。これらの特定のキレート剤の各一が本発明の別の態様を構成する。医薬組成物にキレート剤を使用することは当業者によく知られている。簡便には、Remington:The Science and Practice of Pharmacy, １９版, 1995が参照される。
【０１８２】
本発明の一態様では、製剤は安定剤を更に含有する。医薬組成物に安定剤を使用することは、当業者によく知られている。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19版, 1995が参照される。
【０１８３】
本発明の医薬組成物は、組成物の保存中、ポリペプチドによる凝集体形成を低減させるのに十分な量のアミノ酸塩基を更に含有しうる。「アミノ酸塩基」とは、アミノ酸又はアミノ酸の組合せを意図しており、任意の与えられたアミノ酸が、その遊離塩基の形態又はその塩の形態の何れかで存在している。アミノ酸の組合せを使用する場合、全てのアミノ酸が遊離塩基の形態で存在していてもよく、全てが塩の形態で存在していてもよく、又は幾つかが遊離塩基の形態で存在していてもよく、残りが塩の形態で存在していてもよい。一態様では、本発明の組成物の調製に使用されるアミノ酸は、荷電側鎖を担持しているもの、例えばアルギニン、リジン、アスパラギン酸、及びグルタミン酸である。特定のアミノ酸(例えば、メチオニン、ヒスチジン、イミダゾール、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、スレオニン及びそれらの混合物)の任意の立体異性体(すなわち、Ｌ、Ｄ、又はそれらの混合物)、又はこれらの立体異性体の組合せが、該特定のアミノ酸が遊離塩基の形態又は塩の形態の何れかで存在している限り、本発明の薬学的組成物中に存在していてもよい。一態様では、Ｌ-立体異性体が使用される。また本発明の組成物は、これらのアミノ酸のアナログと共に製剤化されてもよい。「アミノ酸アナログ」とは、本発明の液状薬学的組成物の保存中に、ポリペプチドによる凝集体形成を低減させるという所望の効果をもたらす天然に生じるアミノ酸の誘導体を意図している。適切なアルギニンアナログは、例えばアミノグアニジン、オルニチン及びＮ−モノエチル−Ｌ−アルギニンを含み、適切なメチオニンアナログはエチオニン及びブチオニンを含み、適切なシステインアナログはＳ−メチル−Ｌ−システインを含む。他のアミノ酸と同様、アミノ酸アナログは、遊離塩基の形態又は塩の形態の何れかで組成物中に導入される。本発明の一態様では、アミノ酸又はアミノ酸アナログは、タンパク質の凝集を防止し又は遅延化させるのに十分な濃度で使用される。
【０１８４】
本発明の一態様では、メチオニン(又は他の硫黄含有アミノ酸又はアミノ酸アナログ)は、治療剤として作用するポリペプチドが酸化を受けやすい少なくとも一のメチオニン残基を有するポリペプチドである場合、メチオニン残基のメチオニンスルホキシドへの酸化を阻害するために添加されうる。「阻害」とは、経時的なメチオニン酸化種の蓄積を最小にすることを意図している。メチオニン酸化を阻害すると、適切な分子形態でのポリペプチドの保持が更に高まる。メチオニン(Ｌ又はＤ)の任意の立体異性体又はそれらの任意の組合せを使用することができる。添加される量は、メチオニンスルホキシドの量が規制機関にとって許容可能であるような、メチオニン残基の酸化を阻害するのに十分な量とするべきである。典型的には、これは、組成物が約１０％から約３０％を越えるメチオニンスルホキシドを含まないことを意味する。一般的に、これは、メチオニン残基に添加されるメチオニンの比率が、約１：１から約１０００：１、例えば１０：１から約１００：１の範囲になるようにメチオニンを添加することで、達成することができる。
【０１８５】
本発明の一態様では、製剤は高分子量ポリマー又は低分子量化合物の群から選択される安定剤を更に含有する。
【０１８６】
本発明の一態様では、安定剤はポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ３３５０）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、カルボキシ／ヒドロキシセルロース又はその誘導体（例えばＨＰＣ、ＨＰＣ-ＳＬ、ＨＰＣ-Ｌ及びＨＰＭＣ)、シクロデキストリン類、硫黄含有物質、例えばモノチオグリセロール、チオグリコール酸及び２-メチルチオエタノール、及び異なった塩（例えば塩化ナトリウム）から選択される。これらの特定の安定剤の各一が本発明の他の態様を構成する。
【０１８７】
医薬組成物はまたその中の治療的に活性なポリペプチドの安定性を更に向上させる付加的な安定剤を含有しうる。
【０１８８】
本発明にとって特に興味がある安定剤には、限定されるものではないが、メチオニンの酸化からポリペプチドを保護するメチオニン及びＥＤＴＡと、凍結融解又は機械的剪断に伴う凝集からポリペプチドを保護する非イオン性界面活性剤が含まれる。
【０１８９】
本発明の一態様では、製剤は更に界面活性剤を含有する。本発明の一態様では、２つの異なった界面活性剤を含有する。ここで使用される「界面活性剤」なる用語は、水溶性（親水性）部分、頭部、及び脂肪溶解性（親油性）セグメントから構成される任意の分子又はイオンを意味する。界面活性剤は特に界面に蓄積し、親水性部分が水（親水性相）に向けて配向し、親油性部分が油又は疎水性相（つまり、ガラス、空気、油等）に向く。界面活性剤がミセルを形成し始める濃度は臨界ミセル濃度又はＣＭＣとして知られている。更に、界面活性剤は液体の表面張力を低下させる。界面活性剤はまた両親媒性化合物としても知られている。「洗浄剤」なる用語は界面活性剤一般に使用される同義語である。
【０１９０】
アニオン性界面活性剤は、ケノデオキシコール酸、ケノデオキシコール酸ナトリウム塩、コール酸、デヒドロコール酸、デオキシコール酸、デオキシコール酸メチルエステル、ジギトニン、ジギトキシゲニン、Ｎ、Ｎ−ジメチルドデシルアミンＮ−オキシド、ドキュセートナトリウム、グリコケノデオキシコール酸ナトリウム、グリココール酸水和物、グリコデオキシコール酸一水和物、グリコデオキシコール酸ナトリウム塩、グリコデオキシコール酸ナトリウム塩、グリコリトコール酸３硫酸二ナトリウム塩、グリコリトコール酸エチルエステル、Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム塩、Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム塩、Ｎ−ラウロイルサルコシン、Ｎ−ラウロイルサルコシン、ドデシル硫酸リチウム、ルゴール、１−オクタンスルホン酸ナトリウム塩、１−オクタンスルホン酸ナトリウム塩、１−ブタンスルホン酸ナトリウム、１−デカンスルホン酸ナトリウム、１−ドデカンスルホン酸ナトリウム、１−ヘプタンスルホン酸ナトリウム、１−ヘプタンスルホン酸ナトリウム、１−ノナンスルホン酸ナトリウム、１−プロパンスルホン酸ナトリウム一水和物、２−ブロモエタンスルホン酸ナトリウム、コール酸ナトリウム水和物、雄牛又は羊の胆液、コール酸ナトリウム水和物、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、ヘクサン硫酸ナトリウム、オクチル硫酸ナトリウム、ペンタン硫酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、タウロケノデオキシコール酸ナトリウム塩、タウロケノデオキシコール酸ナトリウム塩一水和物、タウロリトコール酸３硫酸二ナトリウム塩、タウロウルソデオキシコール酸ナトリウム塩、トリズマ（Ｔｒｉｚｍａ）（登録商標）ドデシルサルフェイト、ＤＳＳ（ドキュセートナトリウム、ＣＡＳ登録番号［５７７−１１−７］）、ドキュセートカルシウム（ＣＡＳ登録番号［１２８−４９−４］）、ドキュセートカリウム（ＣＡＳ登録番号［７４９１−０９−０］）、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム又はラウリル硫酸ナトリウム）、ドデシルホスホコリン（ＦＯＳ−コリン−１２）、デシルホスホコリン（ＦＯＳ−コリン−１０）、ノニルホスホコリン（ＦＯＳ−コリン−９）、ジパルミトイルホスファチジン酸、カプリル酸ナトリウム、及び／又はウルソデオキシコール酸の群から選択され得る。
【０１９１】
カチオン性界面活性剤は、臭化アルキルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザイルコニウム、塩化ベンザイルコニウム、塩化ベンジルジメチルヘクサデシルアンモニウム、塩化ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウム、テトラクロロよう素酸ベンジルトリメチルアンモニウム、臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウム、臭化ドデシルエチルジメチルアンモニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、臭化エチルヘクサデシルジメチルアンモニウム、臭化エチルヘクサデシルジメチルアンモニウム、臭化ヘクサデシルトリメチルアンモニウム、臭化ヘクサデシルトリエチルアンモニウム、臭化ヘクサデシルトリメチルアンモニウム、ポリオキシエチレン（１０）−Ｎ−タロウ−１，３−ジアミノプロパン、臭化トンゾニウム、及び／又は臭化トリメチル（テトラデシル）アンモニウムの群から選択され得る。
【０１９２】
非イオン性界面活性剤は：ＢｉｇＣＨＡＰ、ビス（ポリエチレングリコールビス［イミダゾイルカルボニル］）、ポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドであるブロックコポリマー、ポロキサマーのようなブロックコポリマー、ポロキサマー１８８及びポロキサマー４０７、Ｂｒｉｊ（登録商標）３５、Ｂｒｉｊ（登録商標）５６、Ｂｒｉｊ（登録商標）７２、Ｂｒｉｊ（登録商標）７６、Ｂｒｉｊ（登録商標）９２Ｖ、Ｂｒｉｊ（登録商標）９７、Ｂｒｉｊ（登録商標）５８Ｐ、クレモフォール（登録商標）ＥＬ、デカエチレングリコールモノドデシルエステル、Ｎ−デカノイル−Ｎ−メチルグルカミン、ｎ−デカノイル−Ｎ−メチルグルカミン、アルキルポリグルコシド、エトキシ化ヒマシ油、ヘプタエチレングリコールモノデシルエーテル、ヘプタエチレングリコールモノドデシルエーテル、ヘプタエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、ヘクサエチレングリコールモノドデシルエーテル、ヘクサエチレングリコールモノヘクサデシルエーテル、ヘクサエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、ヘクサエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、イゲパルＣＡ−６３０、イゲパルＣＡ−６３０、メチル−６−Ｏ−（Ｎ−ヘプチルカルバモイル）−ベータ−Ｄ−グルコピラノシド、ノナエチレングリコールモノドデシルエーテル、Ｎ−ノナノイル−Ｎ−メチルグカミン、Ｎ−ノナノイル−Ｎ−メチルグカミン、オクタエチレングリコールモノデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノドデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノヘクサデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド、ペンタエチレングリコールモノデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノドデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノヘクサデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノヘクシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノオクチルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールエーテルＷ−１、ポリオキシエチレン１０トリデシルエーテル、ポリオキシエチレン１００ステアレ−ト、ポリオキシエチレン２０イソヘクサデシルエーテル、ポリオキシエチレン２０オレイルエーテル、ポリオキシエチレン４０ステアレ−ト、ポリオキシエチレン５０ステアレ−ト、ポリオキシエチレン８ステアレ−ト、ポリオキシエチレンビス（イミダゾイルカルボニル）、ポリオキシエチレン２５、プロピレングリコールステアレ−ト、キラヤ樹皮からのサポニン、Ｓｐａｎ（登録商標）２０、Ｓｐａｎ（登録商標）４０、Ｓｐａｎ（登録商標）６０、Ｓｐａｎ（登録商標）６５、Ｓｐａｎ（登録商標）８０、Ｓｐａｎ（登録商標）８５、タージトール１５−Ｓ−１２型、タージトール１５−Ｓ−３０型、タージトール１５−Ｓ−５型、タージトール１５−Ｓ−７型、タージトール１５−Ｓ−９型、タージトールＮＰ−１０型、タージトールＮＰ−４型、タージトールＮＰ−４０型、タージトールＮＰ−７型、タージトールＮＰ−９型、テトラデシル−β−Ｄ−マルトシド、テトラエチレング��コールモノデシルエーテル、テトラエチレングリコールモノドデシルエーテル、テトラエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、トリエチレングリコールモノデシルエーテル、トリエチレングリコールモノドデシルエーテル、トリエチレングリコールモノヘクサデシルエーテル、トリエチレングリコールモノオクチルエーテル、トリエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、ＴｒｉｔｏｎＣＦ−２１、ＴｒｉｔｏｎＣＦ−３２、ＴｒｉｔｏｎＤＦ−１２、ＴｒｉｔｏｎＤＦ−１６、ＴｒｉｔｏｎＧＲ−５Ｍ、ＴｒｉｔｏｎＱＳ−１５、ＴｒｉｔｏｎＱＳ−４４、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、ＴｒｉｔｏｎＸ−１０２、ＴｒｉｔｏｎＸ−１５、ＴｒｉｔｏｎＸ−１５１、ＴｒｉｔｏｎＸ−２００、ＴｒｉｔｏｎＸ−２０７、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１１４、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１６５溶液、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−３０５溶液、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−４０５、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−４５、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−７０５−７０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）４０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）６、ＴＷＥＥＮ（登録商標）６５、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８１、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８５、チロキサポール、スフィンゴリン脂質（スフィンゴミエリン）及びスフィンゴ糖脂質（セラミド、ガングリオシド）、リン脂質、及び／又はｎ−ウンデシルβ−Ｄ−グルコピラノシドの群から選択し得る。
【０１９３】
双性イオン界面活性剤は、ＣＨＡＰＳ、ＣＨＡＰＳＯ、３−（デシルジメチルアンモニオ）プロパンスルホン酸内塩、３−（ドデシルジメチルアンモニオ）プロパンスルホン酸内塩、３−（ドデシルジメチルアンモニオ）プロパンスルホン酸内塩、３−（Ｎ、Ｎ−ジメチルミリスチルアンモニオ）プロパンスルホン酸、３−（Ｎ、Ｎ−ジメチルオクタデシルアンモニオ）プロパンスルホン酸、３−（Ｎ、Ｎ−ジメチルオクチルアンモニオ）プロパンスルホン酸内塩、３−（Ｎ、Ｎ−ジメチルパルミチルアンモニオ）プロパンスルホン酸、Ｎ−アルキル−Ｎ、Ｎ−ジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホン酸、３−クロロアミド−１−プロピルジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホン酸、ドデシルホスホコリン、ミリストイルリゾホスファチジルコリン、両性洗浄剤３−１２（Ｎ−ドデシル−Ｎ、Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホン酸）、両性洗浄剤３−１０（３−（デシルジメチルアンモニオ）プロパンスルホン酸内塩）、両性洗浄剤３−０８（３−（オクチルジメチルアンモニオ）プロパンスルホン酸）、グリセロリン脂質（レシチン、ケファリン、ホスファチジルセリン）、グリセロ糖脂質（ガラクトピラノシド）、アルキル、アルコキシル（アルキルエステル）、リゾホスファチジル及びホスファチジルコリンのアルコキシ（アルキルエーテル）−誘導体、例えば、リゾホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリンのラウロイル及びミリストイル誘導体、ジパルミトイルホスファチジルコリン、及びコリン、エタノールアミン、ホスファチジン酸、セリン、スレオニン、グリセロール、イノシトール、リゾホスファチジルセリン及びリゾホスファチジルスレオニンである極性頭部基の修飾、アシルアルニチン及び誘導体、リジン、アルギニン又はヒスチジンのＮベータ−アシル化誘導体、又はリジン又はアルギニンの側鎖アシル化誘導体、リジン、アルギニン又はヒスチジンと中性又は酸性アミノ酸の何れか組合わせを含むジペプチドのＮベータ−アシル化誘導体、中性アミノ酸と２つの荷電アミノ酸の何れか組合わせを含むトリペプチドのＮベータ−アシル化誘導体、又はイミダゾリン誘導体、長鎖脂肪酸及びそれらの塩Ｃ６−Ｃ１２（例えば、オレイン酸酸及びカプリル酸）の群から選択される界面活性剤、Ｎ−ヘクサデシル−Ｎ、Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホン酸、アニオン性（アルキル−アリール−スルホン酸）、一価の界面活性剤、パルミトイルリゾホスファチジルリゾホスファチジル−Ｌ−セリン、リゾリン脂質（例えば、エタノールアミン、コリン、セリン又はスレオニンの１−アシル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸エステル）、又はこれらの混合物の群から選択し得る。
【０１９４】
ここで使用される「アルキルポリグルコシド」なる用語は、マルトシド、サッカリド等のような１以上のグルコシド部分によって置換されたＣ５−２０−アルキル、−アルケニル又は−アルキニルの直鎖型又は分枝型に関する。これらのアルキルポリグルコシドの実施態様はＣ６−１８−アルキルポリグルコシドを含む。これらのアルキルポリグルコシドの具体的実施態様はＣ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｃ１４、Ｃ１６、Ｃ１８及びＣ２０アルキル鎖のような偶数の炭素鎖を含む。グルコシド部分の具体的実施態様はピラノシド、グルコピラノシド、マルトシド及びスクロースを含む。発明の実施態様において、６より少ないグルコシド部分がアルキル基に結合する。発明の実施態様において、５より少ないグルコシド部分がアルキル基に結合する。発明の実施態様において、４より少ないグルコシド部分がアルキル基に結合する。発明の実施態様において、３より少ないグルコシド部分がアルキル基に結合する。発明の実施態様において、２より少ないグルコシド部分がアルキル基に結合する。アルキルポリグリコシドの具体的な実施態様はｎ−デシルβ−Ｄ−グルコピラノシド、デシルβ−Ｄ−マルトピラノシド、ドデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド、ｎ−ドデシルβ−Ｄ−マルトシド、テトラデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド、デシルβ−Ｄ−マルトシド、ヘクサデシルβ−Ｄ−マルトシド、デシルβ−Ｄ−マルトトリオシド、ドデシルβ−Ｄ−マルトトリオシド、テトラデシルβ−Ｄ−マルトトリオシド、ヘクサデシルβ−Ｄ−マルトトリオシド、ｎ−ドデシル−スクロース、ｎ−デシル−スクロース、スクロースモノカプレート、スクロースモノラウレート、スクロースモノミリステート及びスクロースモノパルミテートのようなアルキルグリコシドである。
【０１９５】
医薬組成物中における界面活性剤の使用は当業者によく知られている。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19版, 1995が参照される。
【０１９６】
本発明の一態様では、製剤はＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）やベンズアミジン塩酸塩のようなプロテアーゼ阻害剤を更に含有するが、他の市販のプロテアーゼ阻害剤もまた使用することができる。プロテアーゼ阻害剤の使用は、自触媒作用を阻害するためにプロテアーゼのチモーゲンを含有している医薬組成物において特に有用である。
【０１９７】
その他の成分が本発明のペプチド医薬製剤に存在することもありうる。そのような更なる成分には、湿潤剤、乳化剤、抗酸化剤、充填剤、張度調節剤、キレート剤、金属イオン、油性ビヒクル、タンパク質（例えばヒト血清アルブミン、ゼラチン又はタンパク質）及び双性イオン（例えばベタイン、タウリン、アルギニン、グリシン、リジン、ヒスチジンのようなアミノ酸）が含まれる。そのような更なる成分は、当然ながら、本発明の医薬製剤の全体の安定性に悪影響を及ぼしてはならない。
【０１９８】
本発明に記載のアナログ又は誘導体を含む医薬組成物は、そのような治療を必要とする患者の幾つかの部位に投与され得、例えば局所的部位、例えば皮膚及び粘膜部位、吸収をバイパスする部位、例えば動脈、静脈、心臓への投与、及び吸収を含む部位、例えば皮膚、皮下、筋肉又は腹部への投与である。
【０１９９】
本発明に記載の医薬組成物の投与は、幾つかの投与経路、例えば舌、舌下、頬、口、経口、胃及び腸、鼻、肺を介して、例えば細気管支及び肺胞及び／又はそれらを組合せたもの、表皮、真皮、経皮、膣、直腸、眼を介して、例えば結膜、尿管、及び非経口を介して、そのような治療を必要としている患者になされうる。
【０２００】
本発明の組成物は、幾つかの投薬形態、例えば溶液、懸濁液、エマルション、マイクロエマルション、多相エマルション、フォーム、膏薬、ペースト、プラスター、軟膏、錠剤、コート錠剤、チューインガム、リンス、カプセル、例えば硬質ゼラチンカプセル及び軟質ゼラチンカプセル、坐薬、直腸用カプセル、ドロップ、ゲル、スプレー、パウダー、エアゾール、吸入剤、点眼剤、眼軟膏、眼用リンス、膣用ペッサリー、膣用リング、膣用軟膏、注射液、インサイツ形質転換溶液、例えばインサイツゲル化、インサイツ硬化、インサイツ沈殿、インサイツ結晶化のもの、輸液、及び移植片として投与されうる。
【０２０１】
本発明の組成物は、本発明の誘導体の安定性を更に高め、生物学的利用能を増加させ、溶解度を高め、副作用を低減させ、当業者によく知られている時間療法を達成し、また患者のコンプライアンスを高め、又はそれらの任意の組合せのために、例えば共有的、疎水的及び静電気的相互作用を介して、医薬担体、医薬デリバリー系及び先端医薬デリバリー系に更に配合され、又は結合され得る。担体、医薬デリバリー系及び先進医薬デリバリー系の例には、限定されるものではないが、ポリマー、例えばセルロース及び誘導体、多糖類、例えばデキストラン及び誘導体、デンプン及び誘導体、ポリ(ビニルアルコール)、アクリレート及びメタクリレートポリマー、ポリ乳酸及びポリグリコール酸及びそれらのブロックコポリマー、ポリエチレングリコール、担体タンパク質、例えばアルブミン、ゲル、例えばサーモゲル化系、例えば当業者によく知られているブロックコポリマー系、ミセル、リポソーム、ミクロスフィア、ナノ粒子、液晶及びそれらの分散液、脂質-水系における相挙動の当業者によく知られているＬ２相とそのディスパージョン、ポリマーミセル、多相エマルション、自己乳化、自己-マイクロ乳化、シクロデキストリン及びその誘導体、及びデンドリマーが含まれる。
【０２０２】
本発明の組成物は、場合によっては当業者によく知られた装置を使用し、本発明の誘導体を投与するための固形物、半固形物、パウダー及び溶液の製剤化に有用である。
【０２０３】
本発明の組成物は、制御された徐放性、持続性、遅延及び持続放出薬物デリバリー系の製剤に特に有用である。より詳細には、限定されるものではないが、組成物は、当業者によく知られている非経口用の制御放出及び徐放系（双方の系は、投与数を何倍も低下させる)製剤に有用である。更により好ましくは、皮下投与される制御放出及び徐放系である。本発明の範囲を限定するものではないが、有用な制御放出系及び組成物の有用な例は、ヒドロゲル、油性ゲル、液晶、ポリマーミセル、ミクロスフィア、ナノ粒子である。
【０２０４】
本発明の組成物に有用な徐放系の製造方法は、限定されるものではないが、結晶化、凝縮、共結晶化、沈殿、共沈殿、乳化、分散、高圧ホモジナイズ、カプセル化、噴霧乾燥、マイクロカプセル化、コアセルベーション、相分離、ミクロスフィアを製造するための溶媒蒸発、押出及び超臨界プロセスを含む。一般的には、Handbook of Pharmaceutical Controlled Release (Wise, D.L.編 Marcel Dekker, New York, 2000)及びDrug及びthe Pharmaceutical Sciences vol. 99: Protein Formulation及びDelivery (MacNally, E.J.編 Marcel Dekker, New York, 2000)を参照。
【０２０５】
非経口投与は、シリンジ、場合によってはペン状シリンジによる皮下、筋肉内、腹膜内又は静脈内注射によって実施することができる。あるいは、非経口投与は輸液ポンプにより実施することができる。更なる選択肢は、鼻用又は肺用液体又はパウダースプレーの形態で本発明の誘導体を投与するための溶液又は懸濁液又は粉末であってもよい組成物である。また更なる選択肢としては、本発明に記載の誘導体を含む医薬組成物を、例えば針のない注射、又はイオン導入パッチであってよいパッチによる経皮投与、又は頬等の経粘膜投与用に適合させることもできる。
【０２０６】
「安定化された製剤」なる用語は、物理的安定性が増した、化学的安定性が増した、又は物理的及び化学的安定性が増した製剤を意味する。
【０２０７】
ここで使用されるタンパク質製剤の「物理的安定性」なる用語は、タンパク質が熱-機械的ストレスに暴露され、及び／又は不安定な表面及び界面、例えば疎水性表面及び界面と相互作用する結果として、タンパク質が生物学的に不活性になり及び／又は不溶性の凝集体が形成されるというタンパク質の傾向を意味する。水性タンパク質製剤の物理的安定性は、適切な容器(例えばカートリッジ又はバイアル)に充填された製剤を、様々な時間、異なる温度で機械的／物理的ストレス(例えば攪拌)に暴露した後に、視覚検査及び／又は濁度測定することで評価される。製剤の視覚検査は、暗色背景で、鋭く集光されたライト下において実施される。製剤の濁度は、例えば０から３のスケールで、濁りの程度をランク付けする視覚スコア(濁りのない製剤は視覚スコア０に相当し、日光下で視覚的に濁りのある製剤は視覚スコア３に相当する)により特徴付ける。製剤は、日光下で視覚的濁りを示す場合に、タンパク質会合に関して物理的に不安定であると分類される。また製剤の濁度は、当業者によく知られている簡単な濁度測定法により評価することもできる。また水性タンパク質製剤の物理的安定性は、タンパク質の構造状態のプローブ又は分光剤を使用して評価することもできる。プローブは、好ましくはタンパク質の非天然配座異性体に結合する小分子である。タンパク質構造の小分子分光プローブの一例はチオフラビンＴである。チオフラビンＴは、アミロイド原繊維の検出に広範囲に使用されている蛍光染料である。原繊維、おそらく他のタンパク質立体配置が存在すると、チオフラビンＴが約４５０ｎｍで新たな励起極大を引き起こし、原繊維タンパク質形態に結合した時に、約４８２ｎｍで増強発光する。未結合のチオフラビンＴは、本質的にはその波長で非蛍光性である。
【０２０８】
天然から非天然状態までのタンパク質構造における変化のプローブとして、他の小分子を使用することができる。例えば、タンパク質の暴露された疎水性パッチに優先的に結合する「疎水性パッチ」プローブである。疎水性パッチは、その天然状態にあるタンパク質の３次構造内に一般的に埋められているが、タンパク質の展開及び変性が始まると、暴露されるようになる。これらの小分子の例、分光プローブは、芳香族の疎水性染料、例えばアントラセン、アクリジン、フェナントロリン等である。他の分光プローブは金属-アミノ酸錯体、例えば疎水性アミノ酸、例えばフェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、及びバリン等のコバルト金属錯体である。<BR>
【０２０９】
ここで使用されるタンパク質製剤の「化学的安定性」なる用語は、天然のタンパク質構造と比較して、免疫原性の潜在的増加及び／又は生物学的効力の潜在的低下を伴う、化学的な分解産物の形成に至るタンパク質構造における化学的共有変化を意味する。種々の化学的な分解産物は、天然タンパク質の性質及び種類、及びタンパク質が暴露される環境に応じて形成されうる。化学的分解の排除は、多くの場合、完全に回避することはできず、当業者によく知られているように、タンパク質製剤の保存及び使用中に、化学的な分解産物の量の増加が見られる。殆どのタンパク質は、脱アミド化する傾向にあり、グルタミニル又はアスパラギニル残基の側鎖アミド基が加水分解されて、遊離カルボン酸を形成する。他の分解経路は高分子量の形質転換産物の形成に関与しており、２又はそれ以上のタンパク質分子は、アミド転移及び／又はジスルフィド相互作用を介して互いに共有結合し、共有結合した二量体、オリゴマー及びポリマーの分解産物の形成に至る（Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern. T.J.及びManning M.C., Plenum Press, New York 1992）。（例えばメチオニン残基の）酸化も、化学的分解の他の変形例として挙げることができる。タンパク質製剤の化学的安定性は、異なる環境条件に暴露させた後、種々の時点での化学的な分解産物の量を測定することにより評価することができる（分解産物の形成は、多くの場合、例えば温度上昇により促進される）。個々の分解産物の各々の量は、多くの場合、様々なクロマトグラフィー技術（例えばＳＥＣ−ＨＰＬＣ及び／又はＲＰ−ＨＰＬＣ）を使用し、分子サイズ及び／又は電荷に応じて、分解産物を分離することにより測定される。
【０２１０】
よって、上に概要を述べたように、「安定化された製剤」とは、物理的安定性が増加、化学的安定性が増加、又は物理的及び化学的安定性が増加した製剤を意味する。一般的に、製剤は、有効期限に到達するまで、使用及び保存中に(推奨される用途及び保存条件で)安定していなければならない。
【０２１１】
本発明の一態様では、本発明の誘導体を含有する医薬製剤は、６週間以上の使用と、３年以上の保存に対して安定している。
【０２１２】
本発明の一態様では、本発明の誘導体を含有する医薬製剤は、４週間以上の使用と、３年以上の保存に対して安定している。
【０２１３】
本発明の一態様では、本発明の誘導体を含有する医薬製剤は、４週間以上の使用と、２年以上の保存に対して安定している。
【０２１４】
本発明の一態様では、本発明の誘導体を含有する医薬製剤は、２週間以上の使用と、２年以上の保存に対して安定している。
【０２１５】
本発明に記載の誘導体を用いた治療は、例えば抗糖尿病薬、抗肥満薬、食欲調節剤、高血圧治療薬、糖尿病から生じるか又は糖尿病に関連する合併症の治療及び／又は予防のための薬剤及び肥満から生じるか肥満に関連する合併症及び疾患の治療及び／又は予防のための薬剤から選択される第二又はそれより多い薬学的に活性な物質と組み合わせることもできる。これらの薬学的に活性な物質の例は、インスリン、スルホニル尿素類、ビグアニド類、メグリチニド類、グルコシダーゼ阻害剤、グルカゴンアンタゴニスト、ＤＰＰ−ＩＶ（ジペプチジルペプチダーゼ-ＩＶ)インヒビター、グルコース新生及び／又はグリコーゲン分解の刺激に関与している肝酵素のインヒビター、グルコース取り込みのモジュレーター、脂質代謝を調節する化合物、例えばＨＭＧＣｏＡインヒビター(スタチン類)のような抗高脂血症剤、胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰアナログ）、食糧摂取量を低下させる化合物、ＲＸＲアゴニスト及びβ細胞のＡＴＰ依存性カリウムチャンネルに作用する薬剤；コレスチラミン、コレスチポール、クロフィブラート、ジェムフィブロジル、ロバスタチン、プラバスタチン、シンバスタチン、プロブコール、デキストロチロキシン、ネテグリニド、レパグリニド；β遮断薬、例えば、アルプレノロール、アテノロール、チモロール、ピンドロール、プロプラノロール、及びメトプロロール、ＡＣＥ(アンギオテンシン変換酵素)阻害薬、例えば、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、フォシノプリル、リシノプリル、アラトリオプリル、キナプリル及びラミプリル、カルシウムチャネル遮断薬、例えば、ニフェジピン、フェロジピン、ニカルジピン、イスラジピン、ニモジピン、ジルチアゼム及びベラパミル、及びα遮断薬、例えば、ドキサゾシン、ウラピジル、プラゾシン及びテラゾシン；ＣＡＲＴ(コカインアンフェタミン調節転写)アゴニスト、ＮＰＹ(神経ペプチドＹ)アンタゴニスト、ＰＹＹアゴニスト、Ｙ２レセプターアゴニスト、Ｙ４レセプターアゴニスト、混合Ｙ２／Ｙ４レセプターアゴニスト、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）レセプターアゴニスト、アミリンレセプターアゴニスト、ＭＣ４(メラノコルチン４)アゴニスト、オレキシンアンタゴニスト、ＴＮＦ(腫瘍壊死因子)アゴニスト、ＣＲＦ(コルチコトロピン放出因子)アゴニスト、ＣＲＦＢＰ(コルチコトロピン放出因子結合タンパク質)アンタゴニスト、ウロコルチンアゴニスト、β３アゴニスト、オキシントモジュリン及びアナログ、ＭＳＨ(メラノサイト刺激ホルモン)アゴニスト、ＭＣＨ(メラノサイト集中ホルモン)アンタゴニスト、ＣＣＫ(コレシストキニン)アゴニスト、セロトニン再摂取インヒビター、セロトニン及びノルエピネフェリン再摂取インヒビター、混合セロトニン及びノルアドレナリン作動性化合物、５ＨＴ(セロトニン)アゴニスト、ボンベシンアゴニスト、ガラニンアンタゴニスト、成長ホルモン、成長ホルモン放出化合物、ＴＲＨ(チロトロピン放出ホルモン)アゴニスト、ＵＣＰ２又は３(脱共役タンパク質２又は３)モジュレーター、レプチンアゴニスト、ＤＡアゴニスト(ブロモクリプチン、ドプレキシン)、リパーゼ／アミラーゼインヒビター、ＲＸＲ(レチノイドＸレセプター)モジュレーター、ＴＲβアゴニスト；ヒス���ミンＨ３アンタゴニスト、胃抑制ポリペプチドアゴニスト又はアンタゴニスト（ＧＩＰアナログ類）ガストリン及びガストリンアナログである。
【０２１６】
本発明の誘導体と上述の化合物の一又は複数と場合によっては一又は複数の更なる薬学的に活性な物質の任意の適切な組合せが本発明の範囲内にあると考えられることが理解されなければならない。
【０２１７】
本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ並びに組成物は、経腸（例えば、経口投与）又は非経口経路を含む任意の経路で投与されうる。一態様では、非経口経路が好ましく、静脈内、関節内、腹腔内、皮下、筋肉内、胸骨内注射及び注入並びに舌下、経皮、局所、経鼻経路を含む経粘膜、又は吸入、例えば肺吸入による投与を含む。ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、個々の目的に対して効果的である用量で、哺乳動物、例えばヒトを含む動物に、任意の簡便な投与経路、例えば経口、頬側、経鼻、経眼内、経肺、局所、経皮、経膣、直腸内、眼内、非経口（とりわけ、皮下、筋肉内、及び静脈内を含む、上記参照）経路によって投与することができる。一態様では、投与は非経口投与経路を介してなされる。一態様では、ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、皮下的に及び／又は経鼻的に投与される。皮下注射は簡単に自己投与できることはよく知られている。
【０２１８】
「末梢的投与」なる用語は中枢神経系の外側への投与を意味する。末梢的投与は、脳への直接投与を含まない。末梢的投与は、限定されないが、静脈内、血管内、筋肉内、皮下、肺内、経口、舌下、経腸、直腸内、経皮、又は鼻腔内投与を含む。
【０２１９】
ここで使用される場合、「溶媒和物」なる用語は、溶質(この場合は、本発明に係る化合物）と溶媒により生じる様々な化学量論比の複合体である。溶媒は、例示すると、水、エタノール又は酢酸を含みうる。
【０２２０】
ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、適切なビヒクルに分散させて投与することができ、又はそれらは適切な組成物の形態で投与されうる。かかる組成物もまた本発明の範囲にある。次に記載されているものは適切な医薬組成物である。
【０２２１】
本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、特定のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログを、一又は複数の生理学的に又は薬学的に許容可能な賦形剤と共に含有する医薬組成物の形態でありうる。
【０２２２】
ここで使用される「薬学的に許容可能な」なる用語は、通常の薬学的用途に適していること、すなわち患者に有害事象のような重大な副作用を起こさせないことを意味する。
【０２２３】
ここで使用される「賦形剤」なる用語は、医薬組成物に通常添加される化学的な化合物、例えばバッファー、等張剤、保存料等を意味する。
【０２２４】
本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログを含有する医薬組成物は、固形、半固形又は流体組成物の形態でありうる。
【０２２５】
滅菌溶液又は分散液である流体組成物は、例えば注入液の静脈内、筋肉内、クモ膜下腔内、硬膜外、腹腔内又は皮下注射によって利用されうる。PYY又はPP ペプチド誘導体又はそのアナログはまた滅菌固形組成物としても調製することができ、これは、例えば滅菌水、生理食塩水又は他の適切な滅菌注射用媒体を使用して投与前又は投与時に溶解させ又は分散させることができる。組成物の流体形態は、溶液、ナノエマルションを含むエマルション、懸濁液、分散液、リポソーム組成物、混合物、スプレー、又はエアゾール（二つの後者のタイプは特に経鼻投与に関連している）でありうる。
【０２２６】
溶液又は分散液のための適切な媒体は、通常は、水又は薬学的に許容可能な溶媒、例えば油（例えば、ゴマ又はピーナッツ油）又は有機溶媒、例えばプロパノール又はイソプロパノールに基づいている。本発明に係る組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤、例えば ｐＨ調節剤、例えば組成物の等張性を生理学的に許容可能なレベルに調節するための浸透圧的に活性な薬剤、粘度調節剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤、保存料、抗酸化剤等を更に含みうる。一態様では、媒体は水である。
【０２２７】
経鼻投与のための組成物はまた非刺激性ビヒクル、例えばポリエチレングリコール、グリコフロール等、並びに当業者によって良く知られている吸収促進剤（例えばRemington’s Pharmaceutical Scienceを参照)を含む。
【０２２８】
非経口投与では、一態様では、ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、一般に、薬学的に許容可能な賦形剤又は担体、つまり用いられる用量及び濃度でレシピエントに非毒性であり組成物の他の成分と適合性であるものと、注射可能な単位投薬形態（溶液、懸濁液、又はエマルション）で所望の純度でそれを混合することにより製剤化できる。
【０２２９】
一般に、製剤は、ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログを、液体担体又は微細に分割された固形担体又は双方と均一にかつ密に接触させることにより調製される。ついで、必要ならば、製品は所望の製剤に成形される。特に、担体は非経口担体、より特定的にはレシピエントの血液と等張である溶液である。かかる担体の例は、水、リンガー液、及びデキストロース液を含む。非水性ビヒクル、例えば不揮発油及びオレイン酸エチル、並びにリポソームがまたここでは有用である。ここに記載されたＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの両親媒のため、適切な形態はまたミセル製剤、リポソーム及び一又は複数の適切な脂質、例えばリン脂質等を含有する他のタイプの製剤を含む。一態様では、それらは水性担体、例えば約３．０から約８．０のｐＨ、特に、約３．５から約７．４、３．５から６．０、又は３．５から約５のｐＨの、等張バッファー溶液に懸濁される。
【０２３０】
組成物はまたより頻度の少ない投与計画を得るために投与後にＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの制御された又は延長された送達となるように設計されてもよい。通常、一日１−２回の投与を含む投薬計画が適切と考えられるが、本発明の範囲には他の投与計画、例えばより頻繁な又は頻度の少ないものも含まれる。In order to achieve a prolonged delivery of ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又そのアナログの延長されたデリバリーを達成するためには、そこからレセプターアゴニストが循環系中にゆっくりと放出される投与部位にデポーを形成するために脂質又は油を含む適切なビヒクルを用いてもよいし、又はインプラントを使用してもよい。この点における適切な組成物はレセプターアゴニストが導入されるリポソーム及び生物分解性粒子を含む。
【０２３１】
固形組成物が要求される状況では、固形組成物は、錠剤、例えば一般的な錠剤、発泡錠、糖衣錠、メルト錠剤又は舌下錠、ペレット、粉剤、顆粒、グラニュー剤、粒状物質、固形分散体又は固溶体 の形態でありうる。組成物の半固形形態は、チューインガム、軟膏、クリーム、リニメント剤、ペースト、ゲル又はヒドロゲルでありうる。,本発明に係る薬学的組成物の他の適切な投薬形態は、膣座剤、座剤、プラスター、パッチ、錠剤、カプセル剤、サシェ、トローチ、デバイス等々でありうる。投薬形態は、適切な被覆による錠剤に対して、自由に又は制御された形で化合物を放出するように設計されうる。
【０２３２】
薬学的組成物は本発明に係る治療的有効量のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログを含有しうる。本発明の薬学的組成物における本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの含有量は、例えば薬学的組成物の約０．１から約１００％ｗ／ｗである。
【０２３３】
薬学的組成物は薬学的製剤化における当業者によく知られている方法の何れかによって調製することができる。
【０２３４】
薬学的組成物において、ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、通常、薬学的賦形剤、つまり治療的に不活性な物質又は担体と組み合わされる。担体は所望される投薬形態及び投与経路に応じて様々な形態を採りうる。薬学的に許容可能な賦形剤は、例えばフィラー、バインダー、崩壊剤、希釈剤、流動促進剤、溶媒、乳化剤、安定剤、賦活薬、香味料、色材、ｐＨ調節剤、遅延剤、湿潤剤、界面活性剤、保存料、抗酸化剤等でありうる。詳細は、例えば Remington’s Pharmaceutical Science or Pharmaceutical Excipient Handbookのような薬学ハンドブックに見出すことができる。
【０２３５】
一態様では、この発明に係る組成物は、身体的状態、安定性、及び本ＰＹＹアナログペプチドのインビボ放出速度及びインビボ排出速度に影響を及ぼす。例えば Remington's Pharmaceutical Sciences 1435-712, 18版, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania (1990)を参照のこと。
【０２３６】
より詳細には、本発明に係る薬学的組成物の投与は、標的組織がその経路を介して利用できる限り、任意の一般的な経路を介しうる。一態様では、薬学的組成物は、任意の一般的な末梢的方法、例えば静脈内、皮内、筋肉内、 乳房内、腹腔内、クモ膜下腔内、眼球後（例えば時間放出）；経口、舌下、経鼻、肛門内、膣内、又は経皮デリバリー、又は特定の部位への外科的移植によって被験者に導入されうる。治療は、単一用量又は所定の期間にわたる複数の用量からなりうる。本発明の組成物の制御された連続的放出もまた考えられる。
【０２３７】
製剤は液体であり得、又は固体、例えば再構成のために凍結乾燥されうる。本発明の水性組成物は、薬学的に許容可能な担体又は水性媒体に溶解又は分散させた有効量のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログを含む。薬学的に活性な物質に対するかかる媒体又は薬剤の使用は当該分野でよく知られている。任意の一般的な媒体又は薬剤が活性成分と不適合性である場合を除いて、治療用組成物におけるその使用が考えられる。補充的な活性成分もまた組成物中に導入することができる。
【０２３８】
本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、遊離塩基、又は界面活性剤（例えば ソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(Tween 20)、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート(Tween 80)、レシチン、, ポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレンコポリマー(Pluronics)、ヒドロキシプロピルセルロース）又は錯化剤（例えばヒドロキシプロピル-b-シクロデキストリン、スルホブチルエーテル-b-シクロデキストリン(Captisol)、ポリビニルピロリドン）と適切に混合された水中における薬理学的に許容可能な塩の溶液としての投与のために調製されうる。薬学的に許容可能な塩は、（タンパク質の遊離アミノ基で形成され）、無機酸、例えば塩酸又はリン酸、又は有機酸、例えば酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸等で形成される酸付加塩を含む。遊離カルボキシル基で形成される塩もまた無機塩基、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、又は水酸化第二鉄、及びイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカイン等の有機塩基から誘導されうる。かかる製品は当業者に良く知られている手順によって直ぐに調製される。分散液はまたグリセロール、液体ポリエチレングリコール、及びその混合物及び油中で調製することができる。通常の貯蔵及び使用条件下で、これらの調製物は微生物の増殖を防止するための保存料を含む。
【０２３９】
一態様では、本発明の薬学的組成物は、例えば注射又は注入のような非経口投与に適するように製剤化される。一態様では、ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、水性担体、例えば約３．０から約８．０のｐＨ、特に、約３．５から約７．４、約３．５から約６．０、又は約３．５から約５．０、又は約３．７から約４．７のｐＨの、バッファー溶液に懸濁される。有用なバッファーは、酢酸ナトリウム／酢酸、乳酸ナトリウム／乳酸、アスコルビン酸、クエン酸ナトリウム-クエン酸、重炭酸ナトリウム／炭酸、コハク酸ナトリウム／コハク酸、ヒスチジン、安息香酸ナトリウム／安息香酸、及びリン酸ナトリウム、及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを含む。貯蔵又は「デポー」遅延放出調製物の形態を、治療的に有効な量の調製物が長い時間にわたって又は経皮注射又は送達後に血流中に送達されるように使用しうる。
【０２４０】
注射用に適した薬学的組成物は滅菌水溶液又は分散物及び滅菌注射用溶液又は分散物の即時の調製のための滅菌パウダーを含む。全ての場合、形態は滅菌されているべきであり、容易にシリンジで使用できる程度に流動性でなければならない。また本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは製造及び保存条件下で安定であることが望ましく、例えば細菌や真菌のような微生物の汚染作用に対して保存されていなければならない。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばソルビトール、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）、ジメチルアセトアミド、Cremorphor EL、それらの適切な混合物、及び油（例えば大豆、ゴマ、ヒマシ、綿実、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、グリコフロール、コーン）を含む溶媒又は分散媒体でありうる。適切な流動性は、例えば、コーティング、例えばレシチンの使用によって、分散液の場合には必要とされる粒子サイズの維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗細菌及び抗真菌剤、例えばメタクレゾール、ベンジルアルコール、パラベン（メチル、プロピル、ブチル）、クロロブタノール、フェノール、フェニル水銀塩（酢酸塩、ホウ酸塩、硝酸塩）、ソルビン酸、チメロサール等によってもたらされる。多くの場合、緊張剤（例えば糖、塩化ナトリウム）を含めることが有益であろう。注射用組成物の持続性吸収は、吸収を遅延させる薬剤（例えばアルミニウムモノステアレート及びゼラチン）の組成物における使用によりもたらされうる。
【０２４１】
滅菌された注射用溶液は、上に列挙した様々な他の成分と共に適切な溶媒中に必要とされる量の活性化合物を導入し、必要に応じて濾過滅菌を行うことによって調製することができる。一般に、分散液は、ベースの分散媒体及び上に列挙されたものからの必要とされる他の成分を含む滅菌ビヒクル中に様々な滅菌活性成分を導入することによって調製される。滅菌された注射用溶液のための滅菌された粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分プラス過去に滅菌濾過されたその溶液からの任意の更なる所望の成分の粉末を生じる真空乾燥及び凍結乾燥である。一般に、ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、患者への投与のための安定し安全な薬学的組成物に製剤化されうる。本発明の方法での使用に対して考えられる薬学的製剤は、およそ０．０１から２０％（ｗ／ｖ）、特に０．０５から１０％のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログを含みうる。ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、炭水化物又は多価アルコールを緊張度改変剤として、また場合によってはおよそ０．００５から５．０％（ｗ／ｖ）のｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、メチル、エチル、プロピル凹帯ブチルパラベン及びフェノールからなる群から選択される保存料を含む約３．０から約７．０の最終組成物のｐＨを可能にする酢酸塩、リン酸塩、クエン酸塩又はグルタミン酸塩バッファー中でありうる。かかる保存料は、製剤化されるペプチドが複数回使用の製品に含められる場合に一般に含められる。
【０２４２】
本発明の一態様では、本発明の医薬製剤は、ある範囲の濃度のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ、例えば約０．０１％から約９８％ｗ／ｗ、又は約１から約９８％ｗ／ｗ、又は特に８０％から９０％ｗ／ｗ、又は特に約０．０１％から約５０％ｗ／ｗ、又はより特定的には約１０％から約２５％ｗ／ｗをこの態様では含みうる。十分な量の注射用水を使用して所望の濃度の溶液を得ることができる。ここに記載される医薬製剤は凍結乾燥されてもよい。
【０２４３】
一般に、ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの治療的又は予防的に有効な量は、レシピエントの年齢、体重、及び疾病又は代謝症状又は疾患の症状又は重篤度によって決定される。例えば Remington's Pharmaceutical Sciences 697-773を参照。またWang及びHanson, Parenteral Formulations of Proteins及びPeptides: Stability and Stabilizers, Journal of Parenteral Science and Technology, Technical Report No. 10, Supp. 42:2S (1988)を参照。典型的には、約０．００１μｇ／ｋｇ体重／日から約１０００μｇ／ｋｇ体重／日の投薬量が使用されうるが、当業者が分かるように、おおよその量を使用してもよい。投薬は、製剤に応じて、一日一回、二回、三回、四回又はそれ以上であるか、より少なく、例えば週一回、月一回、又は三ヶ月に一回であり得、ここに記載の他の組成物と併用されてもよい。本発明はここに記載された投薬量には限定されないことに留意されなければならない。
【０２４４】
適切な投薬量は、関連した用量応答データとの関連で代謝症状又は疾患のレベルを決定するための確立されたアッセイを使用することによって確認されうる。最終の投薬計画は、薬剤の作用を改変する因子、例えば薬剤の特異的活性、損傷の重篤度及び患者の応答性、患者の年齢、症状、体重、性別及び食餌、任意の感染の重篤度、投与時間及び他の臨床的要因を考慮して、担当医師によって決定されるであろう。研究が実施されるにつれて、適切な投薬量レベル及び特定の疾患及び症状に対する治療期間に関して更なる情報が現れるであろう。
【０２４５】
投薬の頻度は、薬剤の薬物動態パラメータ及び投与経路に依存する。最適な薬学的製剤は、投与経路及び所望される投薬量に応じて当業者によって決定されるであろう。例えば、上掲のRemington's Pharmaceutical Sciences, 1435-1712頁を参照のこと。このような製剤は、身体的状態、安定性、投与される薬剤のインビボ放出速度及びインビボ排出速度に影響を及ぼしうる。投与経路に応じて、適切な用量は、体重、体表面積又は器官サイズに従って計算されうる。適切な治療用量を決定するために必要な計算の更なる改良は、過度な実験なく、特にここに開示された投薬情報及びアッセイ、並びに動物又はヒトの臨床試験において観察された薬物動態データに照らして、当業者によって常套的になされる。
【０２４６】
本発明の薬学的組成物及び治療方法はヒトの医薬品及び動物用医薬品の分野で有用でありうることが理解される。よって、治療される被験者は哺乳動物、特にヒト又は他の動物である。獣医用の目的に対しては、被験体は例えば家畜、例えばウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ及びヤギ、コンパニオン動物、例えばイヌ及びネコ、外来性及び／又は動物園動物、実験室動物、例えばマウス、ラット、モルモット及びハムスター；及び家禽類、例えばニワトリ、シチメンチョウ、アヒル及びガチョウを含む。
【０２４７】
本ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体 又はそのアナログ及びそれらを含む組成物はまたここに述べられた治療用途のための医薬の製造において有用である。
一態様では、本発明は医薬の調製のための本発明に係る誘導体の使用に関する。
【０２４８】
合成
本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログは、自動化ペプチド合成機か又は伝統的なベンチ合成の何れかを使用する標準的な固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）によって合成することができる。固体支持体は、例えばＴｅｎｔａｇｅｌ Ｓ ＲＡＭ、クロロトリチル（Ｃｌ）又はＷａｎｇ（ＯＨ）樹脂であり得、これらの全てが直ぐに商業的に入手可能である。その樹脂の活性なアミノ又はヒドロキシル基はＮ−Ｆｍｏｃアミノ酸のカルボキシル基と直ぐに反応し、それによって、樹脂に結合したリンカーへの結合を介してそれをポリマーに共有的に結合させる。樹脂結合Ｆｍｏｃアミノ酸は、基を直ぐに切断するＮ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）中の２０％ピペリジンの混合物に暴露することによって脱保護することができる。続くアミノ酸は、カップリング試薬を使用してカップリングされ、Ｆｍｏｃ基の別の脱保護が続く。生じるアミノ酸の樹脂結合アミノ酸鎖へのカップリングを容易にする試薬の例は、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、テトラ−メチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、１Ｈ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）である。
【０２４９】
ＳＰＰＳは、所望の配列が得られるまで、段階的な形で継続される。合成の終わりに、樹脂が結合され保護されたペプチドは脱保護され、側鎖上の保護基を切断し、また樹脂からペプチドを切断する。これは、例えばトリイソプロピルシラン（ＴＩＰＳ）のようなスカベンジャーを含むトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）で行われる。ついで、ペプチドをジエチルエーテルに沈殿させ、単離する。固相化学よりもむしろ溶液化学によるペプチド合成がまた実行可能である。
【０２５０】
本発明によって生産されるＰＰ折り畳みペプチドを精製することが望ましい場合がある。ペプチド精製技術は当業者によく知られている。これらの技術は、一レベルでは、ペプチド及び非ペプチド画分への細胞環境の粗分画を含む。ペプチドを他のタンパク質から分離し、関心あるペプチドをクロマトグラフィー及び電気泳動技術を使用して更に精製して、部分的な又は完全な精製（又は均一性を達成するまでの精製）を達成することができる純粋なペプチドの調製に特に適合している分析方法は、イオン交換クロマトグラフィー、排除クロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、及び等電点電気泳動である。ペプチドを精製する特に効率的な方法は逆相ＨＰＬＣと、続く液体クロマトグラフィー／質量分析法（ＬＣ／ＭＳ）及びマトリックス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）質量分析法による精製産物の特徴付けである。純度の更なる確認はアミノ酸解析によって達成される。
【０２５１】
一態様では、本発明は精製に関し、一態様では、本発明に係るペプチド誘導体の実質的な精製に関する。ここで使用される「精製されたペプチド」なる用語は、他の成分から単離可能な組成物を意味するものであり、ここで、ペプチドはその天然に得られうる状態に対して任意の度合いまで精製される。よって、精製されたペプチドは、それが天然に生じうる環境から免れたペプチドをまた意味する。一般に、「精製された」とは、様々な他の成分を除去するために分画が施され、その発現される生物学的活性を実質的に保持するペプチド組成物を意味する。「実質的に精製された」なる用語が使用される場合、この標記は、ペプチドが組成物の主要な成分を形成し、例えば組成物中の約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％又はそれ以上のペプチドを構成する組成物を意味する。
【０２５２】
ペプチド精製に使用するために適した様々な技術は当業者によく知られている。これらは、例えば、硫酸アンモニウム、ＰＥＧ、抗体等を用いた沈殿；熱変性と続く遠心分離；クロマトグラフィー工程、例えばイオン交換、ゲル濾過、逆相、ヒドロキシアパタイト及びアフィニティクロマトグラフィー；等電点電気泳動；ゲル電気泳動；及びこのような技術と他の技術の組合せを含む。当該分野で一般的に知られているように、様々な精製工程を実施する順序は変更することができ、又はある工程を省略することができると考えられ、それでも実質的に精製されたタンパク質又はペプチドの適切な調製方法が得られる。
【０２５３】
ペプチドが常にその最も精製された状態で提供されべきという一般的な要求はない。実際、実質的に精製度がより少ない製品も所定の態様の有用性を有しているであろう。部分的な精製はより少ない精製工程を組み合わせて使用することにより、又は同じ一般的精製スキームの異なったフォピン(fopins)を利用することにより、達成することができる。例えば、ＨＰＬＣ装置を利用して実施されるカチオン交換カラムクロマトグラフィーは、一般に、低圧クロマトグラフィーシステムを利用する同じ技術よりも高い「何倍かの」精製を可能にすることが理解される。低い度合いの相対的精製を示す方法はタンパク質の回収全体において、又は発現されたタンパク質の活性を維持する点に利点を有している場合がある。
【０２５４】
該プロセスで得られた他の成分から本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチドを場合によっては精製し単離することができる。ペプチドを精製するための方法は米国特許第５８４９８８３号に見出すことができる。これらの文献は、本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチドを単離し精製するのに有用でありうるＧ−ＣＳＦ組成物の単離と精製の特定の例示的方法を記述している。これらの特許の開示に照らせば、当業者が本発明に係るＰＹＹ又はＰＰペプチドを所定の供給源から精製するために使用されうる数多くの精製技術に気づくであろうことは明らかである。
本発明の精製されたＰＰ折り畳みペプチド組成物を製造するためにアニオン交換及び免疫親和性クロマトグラフィーの組合せを用いることができることもまた考えられる。
【０２５５】
発明の実施態様
１．  少なくとも一のアミノ酸残基及び／又はペプチド骨格のＮ末端及び／又はＣ末端が、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、又はＡ−Ｃ−によって定まる血清アルブミン結合側鎖で誘導体化され、ここで、
Ａ−は
2011520847.tif 000050
であり、
ここで、ｐは１０、１１、１２、１３、１４、１５及び１６からなる群から選択され、ｄは０、１、２、３、４及び５からなる群から選択され、
−Ｂ−は
2011520847.tif 000051
からなる群から選択され、
ここで、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され、ｙは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１及び１２からなる群から選択され；
あるいはＡ−は
2011520847.tif 000052
であり、ここで、ｎは１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８及び１９からなる群から選択され、
−Ｂ−は、
2011520847.tif 000053
からなる群から選択され、
ここで、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され；
−Ｃ−は
2011520847.tif 000054
からなる群から選択され、
ここで、ｂ及びｅはそれぞれ独立して０、１、及び２からなる群から選択され、ｃ及びｆはそれぞれ独立して０、１、及び２からなる群から選択され；
但し、
ｃが０であれば、ｂは１又は２であり、
ｃが１又は２であれば、ｂは０であり、
ｆが０であれば、ｅは１又は２であり、
ｆが１又は２であれば、ｅは０であり、
但し、Ａ−が
2011520847.tif 000055
であれば、−Ｃ−は欠失されてもよく；
−Ｄ−は前記アミノ酸残基に結合し、スペーサーである、ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ。
２．  ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、少なくとも一のアミノ酸残基及び／又はペプチド骨格のＮ末端及び／又はＣ末端が、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、又はＡ−Ｃ−によって定まる血清アルブミン結合側鎖で誘導体化され、ここで、
Ａ−は
2011520847.tif 000056
であり、ここで、ｐは１０、１１、１２、１３、１４、１５及び１６からなる群から選択され、ｄは０、１、２、３、４及び５からなる群から選択され、
−Ｂ−は
2011520847.tif 000057
からなる群から選択され、
ここで、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され、ｙは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１及び１２からなる群から選択され; 
又はA-は、
2011520847.tif 000058
であり、ここで、ｎは１２、１３、１４、１５、１６  １７、１８及び１９からなる群から選択され、
−Ｂ−は、
2011520847.tif 000059
からなる群から選択され、ここで、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され；−Ｃ−は、
2011520847.tif 000060
からなる群から選択され、ここで、ｂ及びｅはそれぞれ独立して０、１、及び２からなる群から選択され、ｃ及びｆはそれぞれ独立して０、１、及び２からなる群から選択され；
但し、
ｃが０であれば、ｂは１又は２であり、
ｃが１又は２であれば、ｂは０であり、
ｆが０であれば、ｅは１又は２であり、
ｆが１又は２であれば、ｅは０であり、
−Ｄ−は前記アミノ酸残基に結合し、スペーサーであるもの。
３．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ペプチドが脊椎動物由来であるもの。
４．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ペプチドが、
式Ｉに記載のＰＰアナログ
Ｚ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｘａａ２２−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｘａａ２５−Ｘａａ２６−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｘａａ３４−Ａｒｇ−Ｘａａ３６
（Ｉ）
（上式中、
ＺはＮ末端アミノ基に結合した側鎖Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、又はＡ−Ｃ−であるか又はＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、Ａ−Ｃ−がアミノ酸の側鎖に結合しているときには存在せず、
１位のＡｌａは欠失されていてもよく、
Ｘａａ１０はＡｓｐ、Ａｓｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１１はＡｓｐ、Ａｓｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１２はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１３はＴｈｒ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１４はＰｒｏ又はヒドロキシプロリンであり、
Ｘａａ１５はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１６はＧｌｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１７はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ１８はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、Ｘａａ１９はＧｌｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２０はＴｙｒ、Ｐｈｅ、又は３−ピリジルアラニンであり、
Ｘａａ２１はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２２はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２３はＡｓｐ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２４はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ２５はＡｒｇ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２６はＡｒｇ、Ｈｉｓ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２７はＴｙｒ、Ｐｈｅ、ホモＰｈｅ、又は３−ピリジルアラニンであり、
Ｘａａ２８はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ２９はＡｓｎ、Ｇｌｎ、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ３０はＭｅｔ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ３１はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
３３位のＡｒｇはＬｙｓで置換されていてもよく、
Ｘａａ３４はＧｌｎ、Ａｓｎ、又はＨｉｓであり、
３５位のＡｒｇはＬｙｓで置換されていてもよく、
Ｘａａ３６はＴｙｒ、３−ピリジルアラニンである）；
式ＩＩに記載のＰＹＹアナログ
Ｚ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｘａａ２２−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｘａａ２５−Ｘａａ２６−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｘａａ３４−Ａｒｇ−Ｘａａ３６
（ＩＩ）
（上式中、
Ｚは、Ｎ末端アミノ基に結合した側鎖Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、又はＡ−Ｃ−であるか、又はＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、Ａ−Ｃ−がアミノ酸の側鎖に結合しているときには存在せず、
１及び２位のＴｙｒ−Ｐｒｏは欠失されていてもよく、
１位のＴｙｒはＡｌａで置換されていてもよく、又は欠失されていてもよく、
Ｘａａ３はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ４はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
６位のＧｌｕはＶａｌで置換されていてもよく、
７位のＡｌａはＴｙｒで置換されていてもよく、
Ｘａａ１０はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１１はＡｓｐ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１２はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１３はＳｅｒ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１４はＰｒｏ、ヒドロキシプロリン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１５はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１６はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１７はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ１８はＡｓｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１９はＡｒｇ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２０はＴｙｒ、Ｐｈｅ、３−ピリジルアラニン、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２１はＴｙｒ、Ｐｈｅ、３−ピリジルアラニン、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２２はＡｓｐ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２３はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２４はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、１−アミノ酪酸、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２５はＡｒｇ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２６はＨｉｓ、Ａｒｇ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２７はＴｙｒ、Ｐｈｅ、ホモＰｈｅ、又は３−ピリジルアラニンであり、
Ｘａａ２８はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、１−アミノ酪酸、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２９はＡｓｎ、Ｇｌｎ、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ３０はＭｅｔ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、１−アミノ酪酸、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ３１はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、１−アミノ酪酸、又はＬｙｓであり、
３２位のＴｙｒはＬｙｓで置換されていてもよく、
Ｘａａ３４はＧｌｎ、Ａｓｎ、又はＨｉｓであり、
Ｘａａ３６はＴｙｒ、３−ピリジルアラニン、又はＬｙｓである）
から選択され、
ここで、該化合物は、遠位カルボン酸又はテトラゾール基を含む血清アルブミン結合側鎖で修飾されているもの。
５．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、ペプチドが、
式Ｉに記載のＰＰアナログ
Ｚ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｘａａ２２−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｘａａ２５−Ｘａａ２６−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｘａａ３４−Ａｒｇ−Ｘａａ３６
（Ｉ）
（上式中、
Ｚは、Ｎ末端アミノ基に結合した側鎖Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、又はＡ−Ｃ−であるか、又はＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、Ａ−Ｃ−がアミノ酸の側鎖に結合しているときには存在せず、
Ｘａａ１０はＡｓｐ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１１はＡｓｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１２はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１３はＴｈｒ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１４はＰｒｏ又はヒドロキシプロリンであり、
Ｘａａ１５はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１６はＧｌｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１７はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ１８はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１９はＧｌｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２０はＴｙｒ、Ｐｈｅ、又は３−ピリジルアラニンであり、
Ｘａａ２１はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２２はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２３はＡｓｐ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２４はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ２５はＡｒｇ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２６はＡｒｇ、Ｈｉｓ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２７はＴｙｒ、Ｐｈｅ、ホモＰｈｅ、又は３−ピリジルアラニンであり、
Ｘａａ２８はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ２９はＡｓｎ又はＧｌｎであり、
Ｘａａ３０はＭｅｔ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ３１はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ３４はＧｌｎ、Ａｓｎ、又はＨｉｓであり、
Ｘａａ３６はＴｙｒ、３−ピリジルアラニンである）；
式ＩＩに記載のＰＹＹアナログ
Ｚ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｘａａ２２−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｘａａ２５−Ｘａａ２６−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｘａａ３４−Ａｒｇ−Ｘａａ３６
（ＩＩ）
（上式中、
Ｚは、Ｎ末端アミノ基に結合した側鎖Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、又はＡ−Ｃ−であるか、又はＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、Ａ−Ｃ−がアミノ酸の側鎖に結合しているときには存在せず、
１及び２位のＴｙｒ−Ｐｒｏは欠失されていてもよく、
Ｘａａ３はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ４はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１０はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１１はＡｓｐ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１２はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１３はＳｅｒ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１４はＰｒｏ又はヒドロキシプロリンであり、
Ｘａａ１５はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１６はＧｌｕ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１７はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ１８はＡｓｎ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ１９はＡｒｇ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２０はＴｙｒ、Ｐｈｅ、３−ピリジルアラニン、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２１はＴｙｒ、Ｐｈｅ、３−ピリジルアラニン、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２２はＡｓｐ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２３はＡｌａ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２４はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ２５はＡｒｇ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２６はＨｉｓ、Ａｒｇ、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン、又はＬｙｓであり、
Ｘａａ２７はＴｙｒ、Ｐｈｅ、ホモＰｈｅ、又は３−ピリジルアラニンであり、
Ｘａａ２８はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ２９はＡｓｎ又はＧｌｎであり、
Ｘａａ３０はＭｅｔ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ３１はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ホモロイシン、ノルロイシン、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、又は１−アミノ酪酸であり、
Ｘａａ３４はＧｌｎ、Ａｓｎ、又はＨｉｓであり、
Ｘａａ３６はＴｙｒ又は３−ピリジルアラニンである）；
から選択され、ここで、該化合物は、遠位カルボン酸又はテトラゾール基を含む血清アルブミン結合側鎖で修飾されているもの。
６．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、ペプチドが、Ｎ末端からの一又は複数のアミノ酸の連続配列によって切断されていてもよいもの。
７．  実施態様６に記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、一又は複数のアミノ酸の連続配列が、ＰＹＹ中の１から２５位又はＰＰ中の１から２位からなる群から選択されるもの。
８．  実施態様６に記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、一又は複数のアミノ酸の連続配列が、ＰＹＹ中の１から２、及び１から１７位からなる群から選択されるもの。
９．  実施態様６に記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、一又は複数のアミノ酸の連続配列が、ＰＰ中の１位からなる群から選択されるもの。
１０．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、血清アルブミン結合側鎖がペプチド骨格のアミノ酸の側鎖に結合しているもの。
１１．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、血清アルブミン結合側鎖がペプチド骨格のアミノ酸の側鎖のアミノ基に結合しているもの。
１２．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、血清アルブミン結合側鎖がＰＰのアミノ末端位置又は１８位に結合しているもの。
１３．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、血清アルブミン結合側鎖がＰＹＹのアミノ末端位置、１８位又は２２位に結合しているもの。
１４．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、血清アルブミン結合側鎖が、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、オルニチン，及びＬｙｓからなる群から選択されるペプチド骨格のアミノ酸の側鎖のアミノ基に結合しているもの。
１５．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、スペーサー−Ｄ−が、一又は複数の８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（Ｏｅｇ）分子、例えば２つの８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（Ｏｅｇ）分子を含むもの。
１６．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−が、［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチル］、［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］，及び［４−（１６−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ヘキサデカノイルスルファモイル）ブチリル］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］からなる群から選択されるもの。
１７．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、ＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログが、配列番号２３、配列番号５７、配列番号５８、配列番号４３，及び配列番号５５からなる群から選択されるもの。
１８．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、前記誘導体がＹ１レセプターに対してよりもＹ２及び／又はＹ４レセプターに対して選択性であるもの。
１９．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、前記誘導体がＹ５レセプターに対してよりもＹ２及び／又はＹ４レセプターに対して選択性であるもの。
２０．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、前記誘導体が毎日一回の投薬計画での投与に適しているもの。
２１．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、前記誘導体が毎週一回の投薬計画での投与に適しているもの。
２２．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、前記誘導体が月二回の投薬計画での投与に適しているもの。
２３．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、前記誘導体が月一回の投薬計画での投与に適しているもの。
２４．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、前記誘導体が、ヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰと比較して改善したＰＫプロファイルを示すもの。
２５．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、前記誘導体が、ヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰと比較して遅効型特性を示すもの。
２６．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、前記誘導体が、ヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰと比較して改善されたインビボ半減期を示すもの。
２７．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログであって、ここで、前記誘導体の治療的有効量がヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰと比較して少ない副作用を生じるもの。
２８．  配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２，及び配列番号１３からなる群から選択される先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ。
２９．  配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５，及び配列番号５６からなる群から選択される先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ。
３０．  配列番号３から配列番号７２、配列番号７４及び配列番号７５からなる群から選択される先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログ。
３１．  先の実施態様の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログと一又は複数の薬学的賦形剤を含有する組成物。
３２．  実施態様１−３０の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの投与による、Ｙレセプター調節に応答性である症状の治療方法。
３３．  Ｙレセプター調節に対する応答性である症状が肥満症である実施態様３２に記載の治療方法。
３４．  Ｙレセプター調節に応答性である症状が、肥満関連疾患、例えば食物摂取の減少, Ｘ症候群(メタボリックシンドローム)、糖尿病、２型真性糖尿病又はインスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）、高血糖症、インスリン抵抗性、又は耐糖能障害である実施態様３２又は３３に記載の治療方法。
３５．  Ｙレセプター調節に応答性である症状は肥満関連循環器疾患、例えば高血圧、 アテローム硬化症、冠動脈疾患、心筋梗塞、末梢血管疾患、脳卒中、血栓閉栓疾患、 高コレステロール血症、又は高脂血症である実施態様３２又は３３に記載の治療方法。
３６．  Ｙレセプター調節に応答性である症状が、下痢、例えば感染性下痢、炎症性下痢、 化学療法誘発性下痢、短小腸症候群、又は例えば回腸瘻造設術のような外科施術後に典型的に生じる下痢である実施態様３２に記載の治療方法。
３７．  Ｙレセプター調節に応答性である症状が、腸への損傷によって特徴付けられる症状、例えば化学療法誘発下痢、潰瘍性大腸炎、クローン病、腸萎縮症、腸粘膜の喪失、及び／又は腸粘膜機能の喪失である実施態様３２に記載の治療方法。
３８．  Ｙレセプター調節に応答性である症状が、腸炎症症状、例えば潰瘍性大腸炎又はクローン病である実施態様３２に記載の治療方法。
３９．  Ｙレセプター調節に応答性である症状がアレルギー性又は非アレルギー性鼻炎である実施態様３２に記載の治療方法。
４０．  Ｙレセプター調節に応答性である症状が不安である実施態様３２に記載の治療方法。
４１．  投与計画が、一日一回、週一回、月二回、又は月一回からなる群から選択される実施態様３２−４０の何れかに記載の治療方法。
４２．  前記誘導体が、ヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰと比較して改善されたＰＫプロファイルを示す実施態様３２−４１の何れかに記載の治療方法。
４３．  前記誘導体が、ヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰと比較して遅効特性を示す実施態様３２−４２の何れかに記載の治療方法。
４４．  前記誘導体が、ヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰと比較して改善されたインビボ半減期を示す実施態様３２−４２の何れかに記載の治療方法。
４５．  前記誘導体の治療的に有効な用量がヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰと比較して少ない副作用を生じる実施態様３２−４４の何れかに記載の治療方法。
４６．  肥満症又は肥満関連疾患、例えば食物摂取の減少のようなＹレセプター調節に応答性である症状の治療のための医薬の調製における実施態様１−３０の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの使用。
４７．  哺乳動物における投与のための実施態様１−３０の何れかに記載のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの使用であって、前記誘導体がヒトＰＹＹ、ＰＹＹ（３−３６）、又はＰＰと比較して遅効特性を示す使用。
【実施例】
【０２５６】
使用される略語：
ｒ．ｔ：  室温
ＡｃＣＮ：  アセトニトリル
ＤＩＰＥＡ：  ジイソプロピルエチルアミン
Ｈ２Ｏ：  水
ＣＨ３ＣＮ：  アセトニトリル
ＤＭＦ：  ＮＮジメチルホルムアミド
ＢＴＵ：  ２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル−）−１，１，３，３テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
Ｆｍｏｃ：  ９Ｈ−フクオレン−９−イルメトキシカルボニル
Ｂｏｃ：  ｔｅｒｔブチルオキシカルボニル
ＯｔＢｕ：  ｔｅｒｔブチルエステル
ｔＢｕ：  ｔｅｒｔブチル
Ｔｒｔ：  トリフェニルメチル
Ｐｍｃ：  ２，２，５，７，８−ペンタメチル−クロマン−６−スルホニル
Ｄｄｅ：  １−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル
ＨＦＩＰ：  ヘキサフルオロイソプロパノール
ｉｖＤｄｅ：  １−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルブチル
Ｍｔｔ：  ４−メチルトリチル
Ｍｍｔ：  ４−メトキシトリエチル
ＤＣＭ：  ジクロロメタン
ＴＩＰＳ：  トリイソプロピルシラン
ＴＦＡ：  トリフルオロ酢酸
Ｅｔ２Ｏ：  ジエチルエーテル
ＮＭＰ：  １−メチル−ピロロジン−２−オン
ＤＩＰＥＡ：  ジイソプロピルエチルアミン
ＨＯＡｃ：  酢酸
ＨＯＡｔ：  １−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ：  １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＤＩＣ：  ジイソプロピルカルボジイミド
ＭＷ：  分子量
【０２５７】
樹脂結合ペプチドの合成
ＳＰＰＳ法Ｉ
保護されたペプチジル樹脂を、ＮＭＰ（Ｎ−メチルピロリドン）中でＤＩＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）及びＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）媒介カップリングを用いる製造者から供給されるプロトコルを用い、０．２５ｍｍｏｌスケールにてAdvanced ChemTech Synthesiser (APEX 348)でＦｍｏｃ法により合成した。ペプチドアミド合成に使用した出発樹脂は、Ｔｅｎｔａｇｅｌ ＲＡＭ（Rapp Polymere, Germany）、ＲｉｎｋアミドＣｈｅｍＭａｔｒｉｘ樹脂(Matrix Innovation, Canada) Ｒｉｎｋ−アミド樹脂(Merck/Novabiochem)であり、Ｗａｎｇ又はクロロトリチル樹脂の何れかを、カルボキシＣ末端を有するペプチド用に使用した。使用される保護されたアミノ酸誘導体は、標準Ｆｍｏｃ-アミノ酸（例えばAdvanced Chemtech、又はNovabiochemから供給）であった。誘導体化されるリジンのイプシロンアミノ基をＭｔｔで保護した。ある場合には、ペプチドの合成は、ジペプチドの使用、例えばＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍからの疑似プロリン、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔｂｕ）−ΨＳｅｒ（Ｍｅ，Ｍｅ）−ＯＨの使用により改善できる(例えば、Novobiochem 2002/2003又はより新刊のカタログ、又はW.R. Sampson(1999), J. Pep. Sci. 5, 403を参照)。
【０２５８】
ＳＰＰＳ法ＩＩ
保護されたペプチジル樹脂を、ＣＥＭ社（ＵＳＡ）のＬｉｂｅｒｔｙでのＦｍｏｃ方策に従って合成した。ＮＭＰ（Ｎ−メチルピロリドン）中でＤＩＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）及びＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）媒介カップリングを用いる製造者から供給されるプロトコルを用い、０．２５ｍｍｏｌ又は０．５ｍｍｏｌ何れかのスケールを使用した。ペプチドアミド合成に使用した出発樹脂は、Ｔｅｎｔａｇｅｌ ＲＡＭ（Rapp Polymere, Germany）、ＲｉｎｋアミドＣｈｅｍＭａｔｒｉｘ樹脂（Matrix Innovation, Canada）Ｒｉｎｋ−アミド樹脂（Merck/Novabiochem）であり、Ｗａｎｇ又はクロロトリチル樹脂の何れかを、カルボキシＣ末端を有するペプチド用に使用した。使用される保護されたアミノ酸誘導体は、標準Ｆｍｏｃ−アミノ酸（例えばAdvanced Chemtech、又はNovabiochemから供給)であった。１３位のリジンのイプシロンアミノ基をＭｔｔで保護した。ある場合には、ペプチドの合成は、ジペプチドの使用、例えばＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍからの疑似プロリン、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔｂｕ）−ΨＳｅｒ（Ｍｅ，Ｍｅ）−ＯＨの使用により改善できる（例えば、Novobiochem 2002/2003又はより新刊のカタログ、又はW.R. Sampson(1999), J. Pep. Sci. 5, 403を参照)。
【０２５９】
Ｍｔｔ-保護を除去する他の手段：  樹脂をシリンジに配し、２×１０分、ヘキサフルオロイソプロパノールで処理し、Ｍｔｔ基を除去した。ついで上述したようにして樹脂をＤＣＭ及びＮＭＰで洗浄し、アルブミンハンドルのカップリングの前に５％のＤＩＰＥＡで中和させた。
【０２６０】
リジン残基への側鎖の結合手順：  アルブミン結合残基Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｃ−Ｄ−、Ａ−Ｂ−Ｃ−、又はＡ−Ｂ−は、ＤＩＣ、ＨＯＢｔ／ＤＩＣ、ＨＯＡｔ／ＤＩＣ、又はＨＢＴＵに限定されるものではないが、標準的なアシル化試薬を使用し、保護されていないペプチドを溶液中でアシル化するか、又は樹脂に結合したペプチドを段階的にアシル化することにより、ペプチドに結合させることができる。
【０２６１】
固相法ＩＩＩ
保護されたペプチジル樹脂を、製造者からの指示書に従ってＰｒｅｌｕｄｅ（Protein technologieｓ）で合成した。典型的には、製造者に従って、３００ｍｇの樹脂 (Tentagel S Ram, Rapp Polymere)を１０ｍｌの反応容器において使用し、又は１グラムのＴｅｎｔａｇｅ Ｓ ＲＡＭ樹脂を４０ｍｌの反応容器において使用した。ペプチドの段階的な組み立てを、Ｐｒｅｌｕｄｅの製造者に従って、標準的なＦｍｏｃ／ｔ−Ｂｕ方策を使用して行った。
【０２６２】
ペプチジル樹脂のマニュアル合成
１ｇのＴｅｎｔａｇｅｌ Ｓ Ｒａｍ０．２５ｍｍｏｌ／ｇ（Rapp Polymere, Germany）を、ポリプロピレンフリットを有する５０ｍｌシリンジにおいて３０分、ＮＭＰ中で膨潤させた。ついで、樹脂をＮＭＰ中の２０％ピペリジンを用いて２０分間、脱保護し、およそＮＭＰで洗浄した。ついで、アミノ酸５ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔｂｕ）−ＯＨを、ＮＭＰ中の１０ｍｌの０．５ＭのＨＯＡｔに可溶化させ、樹脂に加えた。ついで、５ｍｍｏｌのＤＩＣと１ｍｍｏｌのコリジンを加え、３０分間、カップリングさせた。ついで、過剰のアミノ酸を、ＮＭＰでの洗浄によって除去し、Ｆｍｏｃ基を、ＮＭＰ中の２０％ピペリジンによって１５分間、除去した。ついで、ピペリジンを、ＮＭＰでの洗浄によって除去し、樹脂を次のアミノ酸に対して準備を整わせた。先に記載されたＳＰＰＳ合成法に従って、アミノ酸を段階的な形で添加し、最終ペプチド配列を得た。最後に、Ｎ−αアミノをＢｏｃ基で保護した。場合によっては、ＰＹＹ（３−３６）に対して、１３位において、Ｓｅｒを、上にアルブミンハンドルを結合させたＬｙｓ（Ｍｔｔ）によって置き換えた。
【０２６３】
ペプチドでのアルブミンハンドルの合成
保護されたペプチジル樹脂を、ニートなおよそ３０ｍｌのヘキサフルオロイソプロパノール（ＨＦＩＰ）中で２分間、膨潤させ、更にＨＦＩＰを添加して、５分間静置させた。三回目の添加を実施し、２０分間静置させた。ついで、樹脂をＮＭＰと、簡単にＮＭＰ中の２０％ピペリジンで、再びＮＭＰで洗浄し、ピペリジンを除去した。ついで、ＮＭＰ中の６ｍｌの０．５ＭのＨＯＡｔ中にＦｍｏｃ−Ｏｅｇ（ＮｅｏＭＰＳ）を３ｍｍｏｌ加え、３ｍｍｏｌのＤＩＣを加え、２時間静置させた。ついで、洗浄し、ＮＭＰ中の２０％ピペリジンで脱保護し、洗浄した後、上述のＦｍｏｃ−Ｏｅｇを再び加えた。ついで、脱保護と洗浄後に、６ｍｌのＮＭＰ中０．５ＭのＨＯＡｔ溶液中の３ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ−ｔＢｕ（IRIS-Biotech, Germany）を加え、ついで、３ｍｍｏｌのＤＩＣを加え、およそ１９時間、静置させた。残基のＦｍｏｃ基３ｍｍｏｌを除去した後、６ｍｌの０．５ＭのＨＯＡｔ溶液中のＦｍｏｃ−トラネキサム酸（ＮｅｏＭＰＳ）を加えた後、３ｍｍｏｌのＤＩＣを加え、＞２時間、静置させた。カップリング後に、樹脂を洗浄し、Ｆｍｏｃを、ＮＭＰ中の２０％ピペリジンによって除去し、ＮＭＰ洗浄後、６ｍｌの０．５ＭのＨＯＡｔ溶液中の３ｍｍｏｌのモノ−ｔｅｒｔブチル−ドデカン二酸を加え、ついで３ｍｍｏｌのＤＩＣを加え、＞１６時間、静置させた。樹脂をＮＭＰ及びジエチルエーテルで洗浄し、乾燥させた。
【０２６４】
最終の脱保護及び単離
ペプチド及び側鎖保護基を、３０ｍｌの９２％ＴＦＡ、５％ＴＩＰＳ及び３％エタノールをおよそ２時間添加することによって、除去した。ついで、ＴＦＡを集め、アルゴン流によって濃縮し、ジエチルエーテルを加えて、ペプチドを沈殿させた。ペプチドをエーテルで５回洗浄し、乾燥させた。
【０２６５】
ＨＰＬＣ分析
ＨＰＬＣ分析法Ｉ：
バッファーＡ：  水中０．１％ＴＦＡ
バッファーＢ：  ＡｃＣＮ中０．１％
勾配：  ５０分で０％バッファーＢから９０％バッファーＢ
流量：  ０．５ｍｌ／分
カラム：  Ｊｕｂｉｔｏｒ Ｐｒｏｔｅｏ Ｃ１２，４．６×２５０ｍｍ，
カラム温度：  ４２℃
【０２６６】
ＨＰＬＣ分析法ＩＩ
バッファーＡ：  ９０％水／１０％ＡｃＣＮ中の０．５Ｍ重炭酸アンモニウム
バッファーＢ：  ７０％ＡｃＣＮ／３０％水
勾配  １６分で２５％バッファーＢから５５％
流量：  ０．４ｍｌ／分
カラム：  Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３，１．８ｕｍ，２．１×１５０ｍｍ
カラム温度：  ３０℃
【０２６７】
実施例１：
配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号１３のマニュアル合成。
合成は上述の方法「ペプチジル樹脂の合成」「ペプチド上のアルブミンハンドルの合成」及び「最終の脱保護及び単離」を使用して実施した。
【０２６８】
分析データ
配列番号１
保持時間  ＨＰＬＣ法Ｉ：２５．９分
保持時間  ＨＰＬＣ法ＩＩ：５．６分
Ｍｗ計算値：  ４０４９．６ｇ／ｍｏｌ
ＭＡＬＤＩ ＭＳ：  ４０４６．４ｇ／ｍｏｌ
【０２６９】
配列番号３
保持時間  ＨＰＬＣ法Ｉ：３３．１分
保持時間  ＨＰＬＣ法ＩＩ：１１．５分
Ｍｗ計算値：  ４９７３．８ｇ／ｍｏｌ
ＭＡＬＤＩ ＭＳ：  ４９７２．３ｇ／ｍｏｌ
【０２７０】
配列番号１３
保持時間  ＨＰＬＣ法Ｉ：３４．０分
保持時間  ＨＰＬＣ法ＩＩ：１０．２分
Ｍｗ計算値：  ４９３２．７ｇ／ｍｏｌ
ＭＡＬＤＩ ＭＳ：  ４９３１．７ｇ／ｍｏｌ
【０２７１】
実施例２：
配列番号２、配列番号６、配列番号７、配列番号８及び配列番号９の自動化合成。
合成は、Ｌｉｂｅｒｔｙペプチド合成機で、０．５ｇのＴｅｎｔａｇｅｌ ＨＬ ＲＡＭ樹脂（Rapp Polymere, Germany）を使用してＳＰＰＳ法ＩＩに記載されたようにして実施した。Ｌｉｂｅｒｔｙ装置での合成語に、樹脂を、フィルターフリットを有する５０ｍｌのシリンジに移した。アルブミンハンドルは、上述の方法「ペプチド上のアルブミンハンドルの合成」を使用して合成した。ついで、樹脂を、上述のようにして、９０％ＴＦＡ、５％ＴＩＰＳ及び５％水で処理し、Ｅｔ２Ｏに沈殿させた。
【０２７２】
生物学的アッセイ
哺乳動物（例えばヒト）における体重増加の減少及び肥満症の治療における薬学的に活性な薬剤としての本発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの有用性は、一般的なアッセイ及び以下に記載されるインビトロ及びインビボアッセイにおいてアゴニストの活性によって証明されうる。
【０２７３】
かかるアッセイは、この発明のＰＹＹ又はＰＰペプチド誘導体 又はそのアナログの活性を既知化合物の活性と比較することができる手段をまた提供する。
【０２７４】
実施例３：ＰＹＹ及びＰＰアナログのレセプター効力
ＰＹＹ及びＰＰ誘導体及びそのアナログのレセプター効力を、ここに記載された方法「ＡＣＴＯｎｅベースＦＬＩＰＲアッセイを使用するＹ２又はＹ４レセプター活性の測定」を使用して決定した。結果を表１及び表２に示す。
表１ アシル化位置及びアルブミンハンドルのタイプの関数としてのＹ２及びＹ４レセプターACTOneアッセイでのＰＹＹアナログの活性  ND = 決定されず
2011520847.tif 000061
【０２７５】
表２ アシル化位置及びアルブミンハンドルのタイプの関数としてのＹ２及びＹ４レセプターACTOneアッセイでのＰＰアナログの活性  ND = 決定されず
2011520847.tif 000062
【０２７６】
実施例４：血漿試料の定量アッセイ
ＰＹＹ及びＰＰペプチド誘導体又はそのアナログの血漿濃度の決定には、次の方法１−４を使用した。表３はどの方法をどの化合物に使用したかを示している。
表３
2011520847.tif 000063
2011520847.tif 000064
【０２７７】
方法１
血漿試料を、アセラ(Accela)ＨＰＬＣポンプとオートサンプラー(双方ともThermoFisher)が連結されたＬＴＱ-オービトラップ(Orbitrap)質量分析計(ThermoFisher Scientiifc, Bremen)におけるＬＣ-ＭＳによりアッセイした。質量分析計にはエレクトロスプレーインターフェィスが具備されており、正のイオン化モードで操作された。分析は、ｍ／ｚ８２９．８±１．５Ｄａの選択されたイオンモニタリングモードで、実施した。化合物は８２９．４５２９Ｄａで検出され、これは、３．６ｐｐｍの精度での［Ｍ＋６Ｈ］６＋に対応する。定量目的のために、６つの最も強力なアイソトープピークを、５ｐｐｍの精度で抽出した。ＨＰＬＣはジュピター・プロテオ(Jupiter Proteo)カラム（４μ）９０Ａ（５０×２．０ｍｍＩＤ）で実施した。移動相は、Ａ．０．１％のギ酸、及びＢ．アセトニトリルに０．１％のギ酸が入ったものから構成された。勾配は、１０％Ｂから２０％Ｂまで０から０．２分、ついで２０％Ｂから３４％Ｂまで０．２分から６分で操作した。流量は０．３ｍｌ／分であった。血漿試料の分析では、３０μｌの血漿を９０μｌのエタノールで沈殿させた。１００μｌの上清に、２０μｌの９５％アセトニトリル（５％のギ酸を含む）及び２００μｌのヘプタンを添加した。ヘプタン相を５分後に除去し、残りの溶液を上述のようなＬＣ−ＭＳによって分析した。血漿標準体の構築については、次の濃度で化合物を血漿（ミニブタ）にスパイクさせた：１ｎＭ、２ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、２０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ。血漿標準を試料として処理した。定量の下限値は２ｎＭと推定した。
【０２７８】
方法２
試験物質（様々なＰＹＹ及びＰＰ化合物）を、後のTandem Mass Spectrometric Detection （ＴＦＣ／ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）を備え、液体クロマトグラフィーに乱流クロマトグラフィーをカップリングさせたものにより血漿中でアッセイした。正モードイオン化及び単一に荷電されたイオンに断片化された複数のプロトン化種の複数反応モニタリング（ＭＲＭ）を選択性のために用いた。方法の選択性により一試料中で４つまでの化合物を定量することができ、例えば１匹の動物当たり４までのカセット投薬ができる。未知の試料中の試験物質の濃度を、量の関数としてピーク面積を使用して計算した。分析物でスパイクした血漿試料に基づく検量グラフを回帰分析によって構築した。標準アッセイに対する典型的なダイナミックレンジは１−２０００ｎｍｏｌ／ｌであった。方法の性能は、３つの濃度レベルで二通りで品質管理（ＱＣ）試料を同時アッセイすることによって担保した。
分析物のストック及び作業溶液を血漿中で調製し、３７℃で１時間、インキュベートした。
試料調製：４０．０μｌのＥＤＴＡ−血漿に１６０μｌの５０％メタノール、１％ギ酸を加え、ついで、４℃で１４３００ｒｐｍ（１６４５７ｇ）にて２０分間、遠心分離した。上清を９６ウェルプレートに移し、プレートを３７℃で１／２時間０．４％ＢＳＡと共にインキュベートした。注射容量は２５μｌであった。
分析は、ＴｕｒｂｏＩｏｎＳｐｒａｙインターフェースを使用してＳｃｉｅｘ ＡＰＩ３０００質量分析計 (MDS/Sciex, Concord, ON, Canada)で実施した。ＴＦＣ／ＬＣシステムは２つのＦｌｕｘ Ｒｈｅｏｓ２０００の４基一組のポンプ、Ｃｏｈｅｓｉｖｅ ＶＩＭモジュール(Cohesive Technologies, Franklin, MA, USA)及びCTC LC/PAL自動サンプラー(CTC Analytics, Zingen, Switzerland)から構成されていた。試料のクリーンアップのために、Ｔｕｒｂｏ流量Ｃ８カラム（０．５×５０ｍｍ）（Thermo Scientific, Franklin, MA, USA）を使用し、ＬＣ分離をＰｒｏｔｅｏ４μｍカラム（２．０×５０ｍｍ）（Phenomenex, Torrance, CA, USA）で行った。溶出物は、均一濃度で、メタノール、アセトニトリル、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水及びギ酸の勾配組合せであった。
【０２７９】
方法３
試験物質（様々なＰＹＹ及びＰＰ化合物）を、後のOrbitrap Mass Spectrometric Detection （ＴＦＣ／ＬＣ／ＭＳ）を備え、液体クロマトグラフィーに乱流クロマトグラフィーをカップリングさせたものにより血漿中でアッセイした。正モードイオン化及び複数のプロトン化種の精確な質量獲得を選択性のために用いた。方法の選択性により一試料中で４つまでの化合物を定量することができ、例えば１匹の動物当たり４までのカセット投薬ができる。
未知の試料中の試験物質の濃度を、量の関数としてピーク面積を使用して計算した。分析物でスパイクした血漿試料に基づく検量グラフを回帰分析によって構築した。標準アッセイに対する典型的なダイナミックレンジは１−２０００ｎｍｏｌ／ｌであった。方法の性能は、３つの濃度レベルで二通りで品質管理（ＱＣ）試料を同時アッセイすることによって担保した。
分析物のストック及び作業溶液を血漿中で調製し、３７℃で１時間、インキュベートした。
試料調製：４０．０μｌのＥＤＴＡ−血漿に１６０μｌの５０％メタノール、１％ギ酸を加え、ついで、ボルテックスし、４℃で１４３００ｒｐｍ（１６４５７ｇ）にて２０分間、遠心分離した。上清を９６ウェルプレートに移し、プレートを３７℃で１／２時間０．４％ＢＳＡと共にインキュベートした。注射容量は２５μｌであった。
分析は、加熱プローブを有するエレクトロスプレーインターフェースを使用してＬＴＱ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ質量分析計（Thermo Scientific, Bremen, Germany）で実施した。ＴＦＣ／ＬＣシステムは２つのＦｌｕｘ Ｒｈｅｏｓ Ａｌｌｅｇｒｏの４基一組のポンプ、ＶＩＭモジュール（Thermo Scientific, Franklin, MA, USA）及びＣＴＣ ＬＣ／ＰＡＬ自動サンプラー（CTC Analytics, Zingen, Switzerland）から構成されていた。試料のクリーンアップのために、Ｔｕｒｂｏ流量Ｃ８カラム（０．５×５０ｍｍ）（Thermo Scientific, Franklin, MA, USA）を使用し、ＬＣ分離をＰｒｏｔｅｏ４μｍカラム（２．０×５０ｍｍ）（Phenomenex, Torrance, CA, USA）で行った。溶出物は、均一濃度で、メタノール、アセトニトリル、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水及びギ酸の勾配組合せであった。
【０２８０】
方法４
血漿試料を、Ａｃｃｅｌａ ＨＰＬＣポンプとオートサンプラー（双方ともＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）が連結されたＬＴＱ−オービトラップ（Orbitrap）質量分析計(ThermoFisher Scientiifc, Bremen)でのＬＣ-ＭＳによりアッセイした。質量分析計にはエレクトロスプレーインターフェィスが具備されており、これは正のイオン化モードで操作された。分析は、最も強いイオンの５Ｄａのウィンドウを含む選択されたイオンモニタリングモードで実施した。定量目的のために、最も強力なアイソトープピークを、５ｐｐｍの精度で抽出した。ＨＰＬＣはジュピター・プロテオ(Jupiter Proteo)カラム（４μ）９０Ａ（５０×２．０ｍｍＩＤ）で実施した。移動相は、Ａ．０．１％のギ酸、及びＢ．アセトニトリルに０．１％のギ酸が入ったものから構成された。勾配は、５％Ｂから３０％Ｂ（又は３５％Ｂ）まで０−６分で操作した。流量は０．３ｍｌ／分であった。血漿試料の分析では、３０μｌの血漿を１％ギ酸を含む６０μｌのアセトニトリルで沈殿させた。血漿標準体の構築については、次の濃度で化合物を血漿（ミニブタ）にスパイクさせた：１ｎＭ、２ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、２０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ。血漿標準を試料として処理した。定量の下限値は約１−２ｎＭと推定した。
【０２８１】
実施例５：マウスの研究
ビヒクル、配列番号１、配列番号３、配列番号４の食物摂取に対する効果を痩せた絶食再栄養Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいてモニターした。マウスに単一用量のペプチド（１μｍｏｌ／ｋｇ皮下）を投与した３０分後に、食物戻り及び累積的食物摂取を２４時間にわたって測定した。結果を表４、図１Ａ及び１Ｂに示す。表４、図１Ａ及び１Ｂにおいて分かるように、食物摂取低減における遅効型ＰＹＹ（３−３６）及びＰＰアナログの効果は未修飾のヒトＰＹＹ（３−３６）と比較して延長されている。すなわち、食物摂取低減における配列番号３及び配列番号４（それぞれ遅効型ＰＹＹ（３−３６）及びＰＰアナログ）の効果は、未修飾ヒトＰＹＹ（３−３６）（配列番号１）の効果と比較して延長されている。未修飾ヒトＰＹＹ（３−３６）の食物摂取低減効果は投与６時間後に消えたが、遅効型ＰＹＹ（３−３６）及びＰＰアナログの効果はペプチド投与の２４時間後まで維持されている。更に、遅効型ペプチドに対する異なった薬物動態プロファイルと一致している場合がある未修飾ヒトＰＹＹ（３−３６）と比較して、遅効型ＰＹＹ（３−３６）及びＰＰアナログに対して効果の発現に明らかな遅延が観察される。一方向ＡＮＯＶＡをソフトウェアＧｒａｐｈ−Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン５．０）を使用して各時点で実施した。図１Ａにおけるデータに対して使用された統計的方法は、ソフトウェアＧｒａｐｈ−Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン５．０）を使用する独立ｔ検定であった。図１Ｂ及び表４におけるデータに対して使用された統計的方法はＡＮＯＶＡ、事後ダネット法であった。図１Ａ及び１Ｂ中の星印はビヒクル群に対する有意性を示している＊）ｐ＜０．０５，＊＊）ｐ＜０．０１，＊＊＊）ｐ＜０．００１。
表４
2011520847.tif 000065
【０２８２】
実施例６：マウスの研究；急性
ビヒクルとの比較で食物摂取に対するＰＰ及びＰＹＹアナログの急性効果を評価するために研究を行った。絶食させた痩せたＣ５７ＢＬ／６マウスにビヒクル又はペプチドの単一の皮下注射を施した後、約３０分で、食物戻り及び累積的食物摂取を続いて測定した。一方向ＡＮＯＶＡをソフトウェアＧｒａｐｈ−Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン５．０）を使用して各時点で実施した。
【０２８３】
研究６Ａ
マウスにビヒクル、ｈＰＰ（１−３６）又は２つのＰＰアナログ  配列番号２９及び配列番号５０の一つを投与した。ペプチド用量は（１．０μｍｏｌ／ｋｇ）であった。結果は表５及び図２に示す。表５及び図２に示されるように、遅効型ＰＰアナログの食物摂取低減効果は、未修飾のヒトＰＰ（１−３６）配列番号２の効果と比較して延長されている。未修飾のヒトＰＰの食物摂取低減効果は投与後１２時間で消えたのに対して、遅効型ＰＰアナログの効果はペプチド投与後３６時間でも維持されている。
表５
2011520847.tif 000066
【０２８４】
研究６Ｂ
２通りの異なった用量（０．３μｍｏｌ／ｋｇ及び１．０μｍｏｌ／ｋｇ）でビヒクル又はＰＰアナログ配列番号４３をマウスに投与した。結果を表６及び図３に示す。表６及び図３から分かるように、遅効型ＰＰアナログ配列番号４３は用量依存的に食物摂取を低減させ、注射後４−１２時間累積的食物摂取を減少させた。しかしながら、最も高い用量（０．１μｍｏｌ／ｋｇ）だけが統計的有意性に達した。
表６
2011520847.tif 000067
【０２８５】
研究６Ｃ
２通りの異なった用量（０．３μｍｏｌ／ｋｇ及び１．０μｍｏｌ／ｋｇ）でビヒクル又は遅効型ＰＹＹアナログ配列番号２３をマウスに投与した。結果を表７及び図４に示す。表７及び図４から分かるように、ＰＹＹアナログ配列番号２３は用量依存的に食物摂取を低減させ、注射後９６時間までの間、統計的に有意に減少した累積的食物摂取を生じた。
表７
2011520847.tif 000068
【０２８６】
研究６Ｄ
３通りの異なった用量（０．１，０．３μｍｏｌ／ｋｇ及び１．０μｍｏｌ／ｋｇ）でビヒクル又はＰＹＹアナログ配列番号４０をマウスに投与した。結果を表８及び図５に示す。表８及び図５から分かるように、ＰＹＹアナログ配列番号４０は３通り全ての用量で食物摂取を効果的に減少させた。
表８
2011520847.tif 000069
【０２８７】
研究６Ｅ
マウスにビヒクル（ｎ＝８）又はＰＹＹアナログ配列番号５７（ｎ＝８）、配列番号５８（ｎ＝７）、及び配列番号５９（ｎ＝８）の一つを投与した。ペプチド用量は１．０μｍｏｌ／ｋｇであった。結果は表９及び図９に示す。そこに示されるように、ＰＹＹアナログ配列番号５７及び配列番号５８は、食物摂取を効果的に減少させ、注射後に１−４８時間で累積的食物摂取を統計的に有意に減少させた。アナログ配列番号５９の効果はあまり顕著ではなく、注射から６−３６時間後に統計的に有意な累積的食物摂取の減少を生じた。
表９
2011520847.tif 000070
【０２８８】
研究６Ｆ
マウスにビヒクル（ｎ＝８）又はＰＰアナログ配列番号４３（ｎ＝８）、配列番号４６（ｎ＝７）、及び配列番号５５（ｎ＝８）の一つを投与した。ペプチド用量は１．０μｍｏｌ／ｋｇであった。結果は表１０及び図１０に示す。そこに示されるように、遅効型ＰＰアナログ配列番号４３及び配列番号５５は、食物摂取を効果的に減少させ、注射後に１−１２時間（配列番号４３）及び１−４８時間（配列番号５５）の累積的食物摂取を統計的に有意に減少させた。アナログ配列番号４６の効果はあまり顕著ではなく、注射から４時間後に統計的に有意な累積的食物摂取の減少を生じた。
表１０
2011520847.tif 000071
【０２８９】
実施例７：マウスの研究；慢性
体重について二通りの用量（０．３μｍｏｌ／ｋｇ及び１．０μｍｏｌ／ｋｇ）での配列番号３の効果を決定するための慢性研究を行った。Ｏｂ／ｏｂマウスを一日一回の皮下注射で２週間処置した。結果を図６及び７に示す。図６に示されるように、体重は、試験期間中、用量依存的に減少した。２週間後、体重は、それぞれ０．３及び１．０μｍｏｌ／ｋｇで処置した動物に対して４．５％及び８．５％と統計的に有意に減少した（図７）。ビヒクル処置動物の体重は、試験期間中、２．８％増加した（図７）。
【０２９０】
実施例８：ラットの研究；急性
研究８Ａ
ビヒクルと比較して食物摂取に対するｈＰＹＹ（３−３６）（配列番号１）及びＰＹＹアナログ（配列番号３）の急性効果を評価するための研究を行った。消灯のおよそ３０分前にビヒクル又はペプチドの単一の皮下注射を痩せたラットに施し、ついで累積的食物摂取を測定した。結果を表１１に示す。表１１に見られるように、ＰＹＹアナログ配列番号３での処置では、痩せたラットにおいて急性食物摂取に統計的に有意な減少が生じた。これに対して、ｈＰＹＹ（３−３６）の効果は統計的に有意ではなかった。
表１１  平均累積食物摂取
2011520847.tif 000072
【０２９１】
研究８Ｂ
ビヒクル（ｎ＝７）と比較して食物摂取に対する天然ＰＹＹ３−３６（配列番号１，ｎ＝５）及びＰＹＹアナログ配列番号５７（ｎ＝６）、配列番号５８（ｎ＝５）、及び配列番号５９（ｎ＝５）の急性効果を評価するための研究を行った。消灯のおよそ３０分前にビヒクル又はペプチドの単一の皮下注射を痩せたラットに施し、ついで累積的食物摂取を測定した。結果を表１２及び図１１に示す。それから分かるように、天然のＰＹＹ（配列番号１）での処置では痩せたラットにおける食物摂取には効果がなかった。これに対して、ＰＹＹアナログ配列番号５７及び配列番号５８での処置では、急性食物摂取に統計的に有意な減少が生じた。累積的食物摂取は、配列番号５７及び配列番号５８それぞれの投薬後、６−２４時間及び６−４８時間で減少した。アナログ配列番号５９の効果はあまり顕著ではなく、注射の２４時間後に統計的に有意な減少した累積的食物摂取を生じた。
表１２
2011520847.tif 000073
【０２９２】
実施例９：ブタの研究；急性
ブタにおける食物摂取についての配列番号２３の急性効果を評価するための研究を行った。ビヒクル（ｎ＝３）又はペプチド（ｎ＝４）の単一の皮下注射でブタに投薬し、累積的食物摂取を続いて測定した。結果を表１３に示す。ここで分かるように、３０ｎｍｏｌ／ｋｇの配列番号２３での処置により、投薬から１２時間後に累積的食物摂取に統計的に有意な減少が生じた。
表１３
2011520847.tif 000074
【０２９３】
実施例１０：
ミニブタにおける配列番号３のＰＫプロファイルの決定。５匹のＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタに配列番号３おの単一静脈内ボーラス投与量を投与した；血液試料を示された時点で採取し、配列番号３の血漿中濃度をここに記載されたようにしてＬＣ／ＭＳによって決定した。配列番号３の平均消失半減期（ｔ１／２）は、ここに記載の血漿中濃度−時間プロファイルの非コンパートメント解析によって１２±４時間であると計算された。結果は図８に示す。よって、配列番号３の半減期は、ブタ中において未修飾ＰＹＹ（３−３６）に対して＜３０分という報告された半減期と比較してかなり延長されている（Ito T等, Journal of Endocrinology (2006), 191, pp 113-119）。
【０２９４】
実施例１１：
本発明の化合物のＰＫを測定するために有用なアッセイはミニブタＰＫアッセイである。Ellegaard Gottingen Minipigs A/S, Denmarkからのおよそ１５から３５ｋｇの重さの雄のＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ（ｎ≧３）を研究に含めた。ミニブタには静脈内（ｉ．ｖ．）投薬及び採血に使用した２つの中心静脈カテーテルが挿入されていた。化合物を５０ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、０．０５％のｔｗｅｅｎ８０，ｐＨ＝８．０に適切な濃度（例えば２５−５００ｎｍｏｌ／ｍＬ）になるまで溶解させた。ブタに１から３０ｎｍｏｌ化合物／ｋｇ体重で静脈内（ｉ．ｖ．）に又は皮下的（ｓ．ｃ．）に投薬した。血液試料を次の適切な時点で採取した：例えば投与前、投薬後３０分、１、２、４、８、２４、４８、７２、９６、１２０、１６８及び２４０時間。血液試料を、安定化のためにＥＤＴＡバッファー（アプロチニン１５０００ＫＩＥ／ｍＬ及びＶａｌ−Ｐｙｒ０．３０ｍＭを含む）を含む試験管に集め、遠心分離前に最大２０分間、氷上に維持した。血漿を分離するための遠心分離手順は、４℃、３０００ｒｐｍ、１０分間であった。血漿を集め、アッセイするまで−２０℃に保存されたＭｉｃｒｏｎｉｃチューブに直ぐに移した。
【０２９５】
更なるミニブタＰＫアッセイを、本発明の化合物のＰＫを測定するために使用した。Ellegaard Gottingen Minipigs A/Sからの１５から３５ｋｇ体重のミニブタを実験に含めた。動物には静脈内（ｉ．ｖ．）投薬及び採血に使用した２つの中心静脈カテーテルが挿入されていた。化合物を１０ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のｔｗｅｅｎ８０，ｐＨ＝４．０に４０ｎｍｏｌ／ｍｌから２００ｎｍｏｌ／ｍｌの範囲の濃度になるまで溶解させた。ミニブタに１０ｎｍｏｌ化合物／ｋｇ体重で静脈内投薬したが、時折、他の用量、例えば４ｎｍｏｌ／ｋｇ、３０ｎｍｏｌ／ｋｇ又は５０ｎｍｏｌ／ｋｇで投与した。各化合物は３又は４のミニブタに投薬され、２つの化合物を同じ動物に同時に与えてもよい。血液を投与前と最初の投与後の１０時間に１２回採取した。投薬後１３日まで一日一回、血液を更に採取した。血液試料を、安定化のためにＥＤＴＡバッファー、トラジロール及びＶａｌ−Ｐｙｒを含む試験管中に集め、最大２０分間、氷上に維持した。血漿を分離するために試料を４℃、２０００Ｇで１０分間、遠心分離した。血漿を集め、アッセイするまで−２０℃に保存されたＭｉｃｒｏｎｉｃチューブに直ぐに移した。
【０２９６】
結果はＰＹＹアナログ又はその誘導体に対しては表１４に示す。
結果はＰＰアナログ又はその誘導体に対しては表１５に示す。
【０２９７】
表１４  アシル化位置及びアルブミンハンドルのタイプの関数としてのミニブタで試験したＰＹＹアナログ又はその誘導体の半減期(ｔ1/2)
2011520847.tif 000075
表１５  アシル化位置及びアルブミンハンドルのタイプの関数としてのミニブタで試験したＰＰアナログ又はその誘導体の半減期（ｔ1/2）
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【０２９８】
ここに引用された刊行物、特許出願及び特許を含む全ての文献は、各文献が、出典明示により個々にかつ特に援用され、その全内容がここに記載されているかの如く（法により許容される最大の範囲まで）、出典明示によりここに援用される。
【０２９９】
全ての表題及び副題は、ここでは便宜的にのみ使用されており、決して本発明を限定するものとは解釈すべきでない。
【０３００】
その全ての可能性のある変形例における、上述した要素の任意の組合せは、他に示されず、又は文脈においてはっきりと矛盾していない限りは、本発明に含まれる。
【０３０１】
ここに提供される任意かつ全ての実施例、又は例示的言語（例えば、「等」）の使用は、単に本発明をより例証することを意図しており、他に示されない限り、本発明の範囲に限定をもたらすものではない。明細書中の如何なる語句も、任意の請求項に記載していない要素が本発明の実施に必須であることを示していると解すべきではない。
【０３０２】
ここでの特許文献の引用及び援用は単に便宜上なされているもので、そのような特許文献の有効性、特許性、及び／又は権利行使性についての見解を反映させるものではない。
【０３０３】
この発明は、適用される法律に容認されるここに添付された特許請求の範囲に記載された主題事項の全ての変形例及び均等物を含む。
【図１Ａ】
2011520847.tif 000156
【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2011520847.tif 000161
【図６】
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【図７】
2011520847.tif 000163
【図８】
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【図９】
2011520847.tif 000165
【図１０】
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【図１１】
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【配列表】
2011520847000001.app
【国際調査報告】
2011520847.tif 000168
2011520847.tif 000169
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