(57)【要約】  本発明は、α−７ニコチン受容体の部分アゴニストとアセチルコリンエステラーゼ阻害剤との組み合わせに関する。本発明はまた、本発明に従う組み合わせを含む医薬組成物、および認知障害の処置におけるこれらの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
α−７ニコチン受容体の部分アゴニストとアセチルコリンエステラーゼ阻害剤との組み合わせ。
【請求項２】
α−７ニコチン受容体の部分アゴニストが、塩基の形態または酸との付加塩の形態、水和物または溶媒和物の形態にて、一般式（Ｉ）の化合物であることを特徴とする、請求項１に記載の組み合わせ：
【化１】
2011522017.tif 000006
式中：
Ｘは、酸素原子または式ＮＺの基を表し、ここでＺは水素原子または（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基を表し、
ｎは数字０、１または２を表し、および
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ、互いに独立に、水素もしくはハロゲン原子、またはトリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、シアノ基、ヒドロキシル基、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、場合によりハロゲン原子もしくはトリフルオロメチル基、シアノ基、ヒドロキシル基、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基もしくは（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基で置換されていてもよいフェノキシ基またはフェニル基を表し、または他にはＲ２およびＲ３は、一緒になって、式−ＯＣＨ２Ｏ−または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−の基を形成する。
【請求項３】
Ｘが酸素原子を表し；
ｎが数字０を表し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５それぞれが水素原子を表し；
Ｒ３がハロゲン原子を表す
ことを特徴とする、請求項２に記載の組み合わせ。
【請求項４】
α−７ニコチン受容体の部分アゴニストが、塩基の形態または酸との付加塩の形態、水和物または溶媒和物の形態にて、４−ブロモフェニル１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボキシラートであることを特徴とする、請求項２または３に記載の組み合わせ。
【請求項５】
４−ブロモフェニル１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボキシラートが、（２Ｅ）−ブタ−２−エンジオアート塩の形態であることを特徴とする、請求項５に記載の組み合わせ。
【請求項６】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤が、リバスチグミンおよびドネペジルから選択されることを特徴とする、請求項１から５のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項７】
α−７ニコチン受容体の部分アゴニストが４−ブロモフェニル１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボキシラート（２Ｅ）−ブタ−２−エンジオアートであり、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がリバスチグミンであることを特徴とする、請求項１から６のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項８】
α−７ニコチン受容体の部分アゴニストが４−ブロモフェニル１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボキシラート（２Ｅ）−ブタ−２−エンジオアートであり、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジルであることを特徴とする、請求項１から７のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項９】
活性成分として請求項１から８のいずれか一項に記載の組み合わせと、さらに少なくとも１つの医薬的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１０】
まず請求項１から５のいずれか一項に記載のα−７ニコチン受容体の部分アゴニスト、および第２に、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤を含み、α−７ニコチン受容体の部分アゴニストおよびアセチルコリンエステラーゼ阻害剤が別個の区画にあり、同時、別々に投与される、または経時的に続けられること（連続投与）を目的としたキット。
【請求項１１】
認知障害の処置を目的とした薬剤の調製のための、請求項１から８のいずれか一項に記載の組み合わせの使用。
【請求項１２】
認知障害がアルツハイマー病に関連することを特徴とする、請求項１１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、α−７ニコチン受容体の部分アゴニストとアセチルコリンエステラーゼ阻害剤との組み合わせ、本発明の組み合わせを含む医薬組成物、および認知障害、より詳細にはアルツハイマー病に関連する認知障害の処置におけるこれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
「認知障害」という用語は、特に短期間および長期間の記憶障害、作業記憶障害、注意および覚醒プロセス障害、意味記憶障害、空間記憶障害、および高度な実行機能（抽象化および立案、判断）障害に関連する高度な知的機能欠損を意味することを目的とする。
【０００３】
アルツハイマー病に関連する認知障害を患う患者は、現在アセチルコリンエステラーゼ阻害剤を投与することによって処置されている。
【０００４】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤を用いてアルツハイマー病に関連する認知障害を処置する際の問題の１つは、処置された患者の多くが、投与を繰り返すにつれて徐々に負の副作用を示すという事実にある。このように、処置された患者の１０から１５％が、胃腸に関する副作用（悪心、嘔吐、下痢）のために処置を中断しなければならず、処置された患者の４０％はこれらの副作用のために最適な治療用量を受容できない。さらに、処置された患者の３０から５０％だけが処置に応答し、観察される治療効果は、多くの場合、症状をある程度安定化するに過ぎない（総説として、ｒｅｐｏｒｔ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｄｅｃｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，ＵＳＡ，Ｊｕｎｅ  ２００６を参照のこと）。
【０００５】
結果として、認知障害、より詳細にはアルツハイマー病に関連する認知障害を患う患者の処置に際してより有効であり、さらに負の副作用がより少ない薬剤を見出すことが必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】ｒｅｐｏｒｔ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｄｅｃｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，ＵＳＡ，Ｊｕｎｅ  ２００６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、α−７ニコチン受容体の部分アゴニストとアセチルコリンエステラーゼ阻害剤との組み合わせを提案することによって、この技術的問題に対応することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
α−７ニコチン受容体（α７−ｎＡＣｈＲ）の部分アゴニストは、様々なタイプの記憶または認知機能を調べる幾つかの動物モデルにおいて、前認知（ｐｒｏ−ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ）特性を有することが記載されている（Ｂｉｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００７，３２．：１−１６；Ｐｉｃｈａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００７，３２：１７−３４）。
【０００９】
完全なアゴニストを使用するのではなく、部分アゴニストを使用することにより、大きな技術的進歩をもたらす。これは、α−７ニコチン受容体が迅速で明白な脱感作現象を示すことが知られているからである。完全なアゴニストとは異なり、部分アゴニストは、受容体を非常にごく僅かに脱感作し、それにより結果として、処置を繰り返しても治療効果が維持される。
【００１０】
本発明の組み合わせは、２つの活性成分が個々に摂取される場合の効果と比較して改善された効果を示す。特に、前認知の薬理学的効果の大きさに関して、この組み合わせでは、２つの活性成分を個々に摂取した場合に生じる効果に比べてより大きな効果が観察される。
【００１１】
この組み合わせのより大きな効果により：
処方用量を低減でき、従って処置に対する許容度を良好にできる（胃腸管に関する副作用の低減）；
良好な許容度のために、患者の処置期間を長くできる；
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤単独での処置に比べて組み合わせの処置に応答する患者のパーセンテージを増大できる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】実験群それぞれについて第１の順応セッション中の自発運動中に費やされた時間を示す。
【図２】実験群それぞれについての想起セッション中での、２つの対象物、即ち新しい対象物および馴染みのある対象物に対する探索時間（秒単位）を示す。
【図３】実験群それぞれについての想起セッション中での、認識指数を示す。
【図４】実験群のそれぞれについての想起セッション中での、２つの対象物、即ち新しい対象物および馴染みのある対象物に対する探索時間（秒単位）を示す。
【図５】実験群のそれぞれについての想起セッション中での、認識指数を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の第１の主題は、α−７ニコチン受容体の部分アゴニストとアセチルコリンエステラーゼ阻害剤との組み合わせに関する。
【００１４】
本発明の第２の主題は、活性成分としてこうした組み合わせを含む医薬組成物に関する。
【００１５】
本発明の第３の主題は、様々な起源の認知障害、より詳細にはアルツハイマー病に関連する認知障害の処置のために、こうした組み合わせをの使用に関する。
【００１６】
故に、本発明の第１の主題は、α−７ニコチン受容体の部分アゴニストとアセチルコリンエステラーゼ阻害剤との組み合わせに関する。
【００１７】
本発明のα−７ニコチン受容体の部分アゴニストのうち、塩基の形態または酸との付加塩の形態、水和物または溶媒和物の形態にて、一般式（Ｉ）のα−７ニコチン受容体の部分アゴニストを挙げることができる：
【００１８】
【化１】
2011522017.tif 000002
式中：
Ｘは、酸素原子または式ＮＺの基を表し、ここでＺは水素原子または（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基を表し、
ｎは数字０、１または２を表し、および
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ、互いに独立に、水素もしくはハロゲン原子、またはトリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、シアノ基、ヒドロキシル基、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、場合によりハロゲン原子もしくはトリフルオロメチル基、シアノ基、ヒドロキシル基、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、もしくは（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基で置換されたフェノキシ基またはフェニル基を表し、またはその他にＲ２およびＲ３は、一緒になって、式−ＯＣＨ２Ｏ−または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−の基を形成する。
【００１９】
一般式（Ｉ）の化合物は、文献ＷＯ００／５８３１１に記載されている。
【００２０】
本発明の内容において、
「ｔおよびｚが１から６の値を有することができるＣｔ−Ｃｚ」という表現は：ｔまたｚ個の炭素原子を有することができる炭素鎖を意味することを目的とし、例えば「Ｃ１−Ｃ３」という用語は、１から３個の炭素原子を有することができる炭素鎖を意味することを目的とする；
「ハロゲン原子」という用語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子を意味することを目的とする；
「アルキル基」という用語は、直鎖または分枝鎖の飽和脂肪族基を意味することを目的とする。例として、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチルなどの基を挙げることができる；
「アルコキシ基」という用語は、アルキル基が上記で定義された通りである−Ｏ−アルキルラジカルを意味することを目的とする。
【００２１】
上記で定義された一般式（Ｉ）の化合物は、α−７ニコチン受容体の部分アゴニストとして文献ＷＯ００／５８３１１に記載されている。
【００２２】
本発明に従って使用できる一般式（Ｉ）の化合物の塩は、医薬的に許容される酸を用いて調製できるが、例えば式（Ｉ）の化合物の精製または単離に有用な他の酸の塩も本発明の一部である。
【００２３】
一般式（Ｉ）の化合物は、水和物または溶媒和物の形態、即ち１つ以上の水分子または溶媒と組み合わせたまたは会合した形態で存在できる。こうした水和物または溶媒和物も本発明の一部である。
【００２４】
一般式（Ｉ）の化合物は、１つ以上の非対称炭素原子を含むことができる。故に、これらはエナンチオマーまたはジアステレオマーの形態で存在できる。これらのエナンチオマーおよびジアステレオマー、ならびにラセミ混合物を含むこれらの混合物は本発明の一部である。
【００２５】
本発明に従って使用できる式（Ｉ）の化合物の第１の群は、Ｘが酸素原子を表すものである。
【００２６】
本発明に従って使用できる式（Ｉ）の化合物の第２の群は、ｎが数字０を表すものである。
【００２７】
本発明に従って使用できる式（Ｉ）の化合物の第３の群は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５がそれぞれ、互いに独立に、水素またはハロゲン原子を表すものである。
【００２８】
本発明に従って使用できる式（Ｉ）の化合物の第４の群は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がそれぞれ水素原子を表し、Ｒ３がハロゲン原子を表すものである。
【００２９】
本発明に従って使用できる式（Ｉ）の化合物の第５の群は、
Ｘが酸素原子を表し；
ｎが数字０を表し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がそれぞれ水素原子を表し；
Ｒ３がハロゲン原子を表す
ものである。
【００３０】
本発明の内容において使用できる式（Ｉ）の化合物のうち、特に、塩基の形態または酸との付加塩の形態、水和物または溶媒和物の形態にて、４−ブロモフェニル１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボキシラートを挙げることができる。
【００３１】
本発明に従って使用できる４−ブロモフェニル１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボキシラートの塩の例は、フマラート（（２Ｅ）−ブタ−２−エンジオアート）塩である。
【００３２】
本発明に従って、一般式（Ｉ）の化合物は、出願ＷＯ００／５８３１１に記載されるプロセスに従って調製できる。
【００３３】
例：４−ブロモフェニル１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボキシラート（２Ｅ）−ブタ−２−エンジオアートの調製
４−ブロモフェニル１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボキシラート（ＷＯ００／５８３１１）２３２．４５ｇを、６ｌのジャケット付き反応器において、エタノール２３３１ｍｌ中に入れる。反応媒体を６０℃にする。次いで、予め６０℃に加熱されたエタノール１０００ｍｌおよび水９７ｍｌ中のフマル酸８７．１７ｇ溶液を添加する。溶媒１９００ｍｌを続けて蒸留し、次いで反応媒体を２．５時間にわたって２０℃まで冷却する。２０℃になって２．５時間後、４−ブロモフェニル１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボキシラート（２Ｅ）−ブタ−２−エンジオアートをろ過し、エタノール４００ｍｌで２回洗浄し、次いで真空下、５０℃にて乾燥する。
【００３４】
融点（ＤＳＣ）：１７５℃
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．８０（ｂｓ（ａ），２Ｈ），２，１０（ｂｓ，２Ｈ），３．１０（ｂｓ，６Ｈ），３．７１（ｂｓ，１Ｈ），３．８４（ｂｓ，１Ｈ），４．２５（ｂｓ，０．５Ｈ），４．４０（ｂｓ，０．５Ｈ），６．５８（ｓ，２Ｈ），７．１４（ｍ，２Ｈ），７．５７（ｍ，２Ｈ），１１（ｂｓ，２Ｈ）。（ａ）ｂｓ＝幅の広い一重線。
【００３５】
本発明の目的のために、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、文献において既知のあらゆるアセチルコリンエステラーゼ阻害剤から選択できる。例として、特にリバスチグミン（Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標））およびドネペジル（Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標））を挙げることができる。
【００３６】
故に、本発明に従う組み合わせの例は、４−ブロモフェニル１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボキシラート（２Ｅ）−ブタ−２−エンジオアートとリバスチグミンとからなる組み合わせである。
【００３７】
本発明に従う組み合わせの別の例は、４−ブロモフェニル１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボキシラート（２Ｅ）−ブタ−２−エンジオアートとドネペジルとからなる組み合わせである。
【００３８】
本発明の第２の主題は、活性成分として、上記で定義された組み合わせ、および１つ以上の医薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【００３９】
医薬組成物は、本発明に従う組み合わせに存在する各活性成分の最小量の活性用量を含有する。
【００４０】
本発明はまた、本発明に従う組み合わせに存在する各活性成分のサブ活性用量を含有する医薬組成物に関する。こうしたサブ活性用量の使用により、本発明に従う組み合わせに存在する１つ以上の活性成分の副作用を回避できる。
【００４１】
賦形剤は、所望の医薬形態および投与モードに従って、当業者に既知の有用な賦形剤から選択される。
【００４２】
組成物は、経口、非経口、または直腸投与されることができる。好適な単位投与形態は、錠剤、軟または硬ゲルカプセル、散剤、顆粒剤および経口液剤または懸濁液剤などの経口投与の形態、舌下、口腔内、気管内、眼内または鼻腔内投与形態、吸入による投与形態、局所、経皮、皮下、筋肉内または静脈内投与形態、直腸投与形態および体内埋め込みが含まれる。局所適用の場合、クリーム、ゲル、軟膏またはローションの状態で本発明に従う活性成分を使用することができる。
【００４３】
本発明によれば、２つの活性成分を同じ経路、例えば経口により投与し、または活性成分の一方を第１の経路、例えば経口により投与し、他方の活性成分を異なる経路、例えば非経口により投与する。
【００４４】
錠剤形態の組成物を調製する場合、活性成分は、ゼラチン、デンプン、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、アラビアガム、マンニトール、微結晶セルロース、ヒプロメロースなどのような１つ以上の医薬賦形剤と混合される。
【００４５】
錠剤は、スクロースで、セルロース誘導体で、またはコーティングに好適な他の材料でコーティングできる。錠剤は、種々の技術、例えば直接圧縮、乾式または湿式造粒またはホットメルトによって調製できる。活性成分を希釈剤と混合し、この混合物を軟または硬ゲルカプセルに注ぐことによってゲルカプセル形態の医薬組成物を得ることもできる。
【００４６】
非経口投与のためには、薬理学的相溶化剤、例えばプロピレングリコールまたはブチレングリコールを含有する、水性懸濁液剤、等張生理食塩水または滅菌注射液剤を使用する。
【００４７】
通常の実施によれば、各患者に好適な投与量は、投与モード、ならびに患者の年齢、体重および応答によって医師が決定する。
【００４８】
用量は、所望の効果、処置期間、および使用される投与経路に依存する。
【００４９】
例えば経口投与に関して、本発明に従う組み合わせの各活性成分の毎日の用量は、次の通りである：
α−７ニコチン受容体の部分アゴニスト：一人あたり一日０．５から５００ｍｇ、特に一人あたり一日１から１００ｍｇ；
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤：一人あたり一日３から２００ｍｇ、特に一人あたり一日５から１００ｍｇ。
【００５０】
より高いまたは低い投与量が好適な特別な場合もあり得る。こうした投与量は、本発明の内容から逸脱しない。
【００５１】
α−７ニコチン受容体の部分アゴニストおよびアセチルコリンエステラーゼ阻害剤のそれぞれの用量は、一般に互いにほぼ同一であるか、または互いに異なることができる。
【００５２】
例として、錠剤の形態であるα−７ニコチン受容体の部分アゴニストの単位投与形態は、次の成分を含む：
化合物  ４ｍｇ
マンニトール  １７４ｍｇ
クロスカラメロースナトリウム  ６ｍｇ
コーンスターチ  １５ｍｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース  ２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム  ３ｍｇ
さらなる例として、錠剤形態であるアセチルコリンエステラーゼ阻害剤の単位投与形態は、１０ｍｇのアセチルコリンエステラーゼ阻害剤および可能な賦形剤、例えば微結晶セルロース、コロイダルシリカ、タルク、クロスカラメロースナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムを含むことができる。
【００５３】
各活性成分の投与はまた、同時に、別々に行うことができ、または経時的に続けること（連続投与）ができる。
【００５４】
投与が同時に行われる場合、２つの活性成分は、錠剤またはゲルカプセルのような２つの活性成分を含む単一の医薬組成物内で合わせることができる。
【００５５】
２つの活性成分はまた、これらの投与が同時であるか、ないかに拘わらず、別個の医薬組成物に存在することもできる。この趣旨で、本発明に従う組み合わせは、まず、少なくとも１つの上記で定義されたα−７ニコチン受容体の部分アゴニスト、および第２に、少なくとも１つの上記で定義されたアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を含み、このα−７ニコチン受容体の部分アゴニストおよびアセチルコリンエステラーゼ阻害剤は別個の区画にあり、これらは同時、別々に投与される、または経時的に続けられること（連続投与）を目的としているキットの形態であってもよい。
【００５６】
本発明の別の主題は、認知障害、より詳細にはアルツハイマー病に関連する認知障害の処置を目的とする薬剤の調製のための、上述された組み合わせの使用に関する。
【００５７】
本発明の主題はまた、認知障害、より詳細にはアルツハイマー病に関連する認知障害を処置する方法であって、この方法は、患者に、上記で定義されたα−７ニコチン受容体の部分アゴニストの活性またはサブ活性最小用量と、上記で定義されたアセチルコリンエステラーゼ阻害剤の活性またはサブ活性最小用量とを投与することを含み、前記用量は、上述されたように、同時に、別々に、または連続的に投与される。
【００５８】
認知障害に対する組み合わせの効果は、げっ歯類（ラットおよびマウス）における２つの行動上の精神薬理学的試験により評価された。
【００５９】
これらの試験は、認知障害の主要なタイプの１つ、即ち記憶障害、より詳細には視覚的なエピソード記憶障害を対象とする。
【００６０】
この目的は、これらの認知障害の処置において、個々に摂取される２つの活性成分によって生じる効果に比較して、前認知の薬理学的効果の大きさにおいて、組み合わせの効果がより大きいことを示すことである。
【００６１】
１．欠損のないラットにおける自然忘却に関する試験
第１の試験は、成体ラットにおいて、対象物の認識試験における自然忘却プロトコルを用いて、視覚的なエピソード記憶タスクにおける本発明に従う組み合わせの前認知相乗作用を示すことを目的とする。
【００６２】
１．）順応期間：このプロトコルでは、動物をまず、環境状況（６５×４５×４５ｃｍの木製チャンバー）において２分間の順応セッションに供する。活発な自発運動に費やす時間をタイマーを用いて測定する。
【００６３】
２．）学習期間：２４時間後、２つのまったく同一の対象物（金属の三角形またはＬｅｇｏ製のピラミッドのいずれか）を実験装置内に置く。各ラットをチャンバーの中央に入れ、この鼻を対象物／刺激がある場所とは反対の壁にむける。提示される対象物のペアを、各ラット群について等しく変更する。動物を、最大３分の期間のうち、２つの対象物を探索する期間が２０秒に等しくなるまで実験チャンバー中に残す。探索が２０秒に到達したらすぐに、ラットをハウジングケージに戻す。この手順により、馴染みのある対象物に対する動物の浸透程度を均質化でき、それにより動物同士の比較が可能な学習程度を得ることができる。
【００６４】
３．）想起セッション：想起セッションは、すべての群について２４時間の忘却期間後に行う。ラットは、学習期間の間に遭遇した対象物および未知の対象物からなる対象物のペアと対面させる。ラットは学習セッションの場合と同じ方法で入れられる。
【００６５】
この試験を３分間継続させ、その間２つの対象物それぞれを探索するのに費やした時間を測定する。
【００６６】
動物が予め記憶された対象物をはっきりと思い出す場合、主に新しい対象物を探索する。反対に、動物が馴染みのある対象物を忘却した場合には、新しい対象物と馴染みのある対象物とを探索するのに費やす時間は同様である。
【００６７】
学習および想起セッションに関して、対象物の探索は、動物が対象物に向かって、前記対象物の周り２センチメートル周囲に鼻を向ける場合、または対象物に鼻もしくは足で触れる場合に計数される。ラットが対象物の周りまたは対象物を置いた部位の周りを移動する場合、こうした行動は探索であると考えない。
【００６８】
生データを秒単位で表す。
【００６９】
試験化合物は、プロトコルの３つのセッションそれぞれの６０分前に経口投与する（ラット調査）。
【００７０】
４つの実験群を形成し、前記群はそれぞれ次を受容する：
１−ビヒクル（メチルセルロース＋Ｔｗｅｅｎ単独）
２−α−７ニコチン受容体の部分アゴニスト（不活性用量）
３−アセチルコリンエステラーゼ阻害剤（不活性用量）
４−α−７ニコチン受容体の部分アゴニスト（不活性用量）＋アセチルコリンエステラーゼ阻害剤（不活性用量）
想起セッション中、学習セッションの２４時間後、秒単位で表される２つの対象物を探索するのに費やした時間、および認識指数（新しい対象物を探索するのに費やした時間／新しい対象物および馴染みのある対象物を探索するのに費やした総時間）を測定する。
【００７１】
馴染みのある対象物および新しい対象物に関して探索時間が同様であることは、馴染みのある対象物を忘却した、即ち視覚的なエピソード記憶欠損があるという事実を反映している。
【００７２】
反対に、馴染みのある対象物に対する時間より新しい対象物に対する探索時間が長いことは、馴染みのある対象物をはっきりと思い出した、即ち視覚的エピソード記憶が改善されていることを反映している。
【００７３】
相対的に低い認識指数は、馴染みのある対象物を忘却した、即ち視覚的エピソード記憶欠損があるという事実を反映している。
【００７４】
反対に、高い認識指数は、馴染みのある対象物をはっきりと思い出した、即ち視覚的なエピソード記憶が改善していることを反映している。
【００７５】
以下の結果は、次の４つの実験群を形成することによって得られたが、前記群はそれぞれ次を受容する：
群１：ビヒクル、メチルセルロース＋Ｔｗｅｅｎ単独）
群２：４−ブロモフェニル１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボキシラート（２Ｅ）−ブタ−２−エンジオアート、０．１ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．（不活性用量）
群３：リバスチグミン、０．０３ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．（不活性用量）
群４：４−ブロモフェニル１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボキシラート（２Ｅ）−ブタ−２−エンジオアート、０．１ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．＋リバスチグミン、０．０３ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．（不活性用量）。
【００７６】
上記用量は塩基当量にて表される。
【００７７】
図１および表１は、実験群それぞれについて第１の順応セッション中の自発運動中に費やされた時間を示す。
【００７８】
【表１】
2011522017.tif 000003
【００７９】
２つの化合物それぞれまたは２つの化合物の組み合わせの一回の投与後、環境状況への順応セッション中、自発運動における変化は観察されなかった。
【００８０】
図２および３における表２は、実験群それぞれについての想起セッション中での：
２つの対象物、即ち新しい対象物および馴染みのある対象物に対する探索時間（秒単位）；および
上記で定義された認識指数
を示す。
【００８１】
想起セッション中、学習セッションの２４時間後、ビヒクル単独で処置された動物、または２つの化合物（１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボキシラート（２Ｅ）−ブタ−２−エンジオアート、またはリバスチグミン）それぞれの不活性用量で処置された動物は、馴染みのある対象物と新しい対象物との間に顕著な区別を示さない。これは、馴染みのある対象物が忘却されたという事実を反映している。
【００８２】
反対に、試験された化合物それぞれの不活性用量の組み合わせで処置された動物は、馴染みのある対象物に比べて新しい対象物に対して非常に長い探索を示し、これは馴染みのある対象物をはっきりと思い出したことを反映している。この効果は、秒単位で表される２つの対象物に関する探索時間について、および認識指数（表２および図２および３）について観察される。
【００８３】
【表２】
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【００８４】
上記の結果は、視覚的なエピソード記憶試験において、本発明に従う組み合わせが、個々に摂取された２つの活性成分によって生じる前認知効果に比べて、明らかにより大きな前認知効果を有することを示している。
【００８５】
２．マウスにおけるβ−アミロイドタンパク質２５−３５の脳室内（ＩＣＶ）注射により誘導される短期間の視覚的なエピソード記憶欠損の試験
β−アミロイドペプチドは、アルツハイマー病において観察される老人斑の主要な構成要素である。Ａβ２５−３５ペプチドフラグメントは、神経学的毒性を誘導するのに必要十分な１１個のアミノ酸を含有する。このペプチドの脳室内（ＩＣＶ）注射が、強い妥当性を伴って、アルツハイマー病の病態生理学的モデルであると考えられるのはこうしたことが理由である。
【００８６】
Ａβ２５−３５アミロイドペプチドを最終濃度３ｍｇ／ｍｌにて蒸留水中に溶解する。次いで毒性ペプチドの凝集体を形成させるために３７℃にて４日間温置する。コントロール動物は、同じアミノ酸で構成されるが、ランダム配列に従って組織化されるスクランブルペプチドを受容する。スクランブルペプチドは、神経細胞毒性を示さない（毒性なし）。
【００８７】
ペプチドは、イソフルランで麻酔されたＣＤ−１株のマウスに脳室内注射される。３ｍｍ長さを有する２８ゲージの針を装着させたマイクロシリンジを使用する。それぞれの目から等距離にあり、目の軸と耳の軸との間の距離が等しい中心線の右側１ｍｍに針を片側挿入し、３μｌの凝集ペプチドを１分間にわたって注射する。マウスは、脳内注射から６から１４日間の間に行動試験のために使用される。
【００８８】
使用される行動実験プロトコルは、上述したラットにおける自然忘却試験に使用されたものに相当する。
【００８９】
１．）順応期間：このプロトコルにおいて、マウスをまず、環境状況（５２×５２×４０ｃｍのライトグレーＰＶＣ鎖、６Ｌｕｘでの照射）への１０分間の順応セッションに供する。活発な自発運動に費やした時間をタイマーを用いて測定する。
【００９０】
２．）学習期間：２４時間後、２つのまったく同一の対象物（金属の三角形（５．５×３．３ｃｍ）または赤色Ｌｅｇｏブリックの四角形（３．０×３．０×３．０ｃｍ）のいずれか）を実験装置に配置する。各マウスをチャンバーの中央に入れ、この鼻を対象物／刺激がある場所とは反対の壁にむける。提示される対象物のペアを、各群のマウスについて等しく変更する。動物を、最大３分の期間のうち、２つの対象物を探索するのに費やした時間が１０秒に等しくなるまで実験チャンバーに残す。探索が１０秒になったらすぐに、マウスをハウジングケージに戻す。この手順により、馴染みのある対象物に対する動物の浸透程度が均質化でき、それにより動物同士の比較が可能な学習程度を得ることができる。
【００９１】
３．）想起セッション：想起セッションは、すべての群について１時間の忘却期間後に行う。この短期間の忘却期間は、コントロール動物においては良好な想起能力レベルを誘導し、他の動物においては毒性ペプチドの注射によって誘導される欠損を明らかにすることができる。マウスは、学習期間の間に遭遇した対象物および未知の対象物からなる対象物のペアと対面させる。マウスは学習セッションの間と同じ方法でチャンバーに入れられる。
【００９２】
この試験は５分間継続させ、この期間中、２つの対象物それぞれを探索するのに費やした時間を測定する。
【００９３】
この短期間の忘却期間の間、コントロール動物は、新しい対象物により大きな探索を示し、これは馴染みのある対象物をはっきりと思い出したことを反映している。反対に、欠損を有する動物は、統計学的に差のない、２つの対象物に対する探索時間を示す。
【００９４】
学習および想起セッションについて、対象物の探索は、動物が対象物に向かって、前記対象物の周り２センチメートル周囲に鼻を向ける場合、または対象物に鼻もしくは足で触れる場合に計数される。ラットが対象物の周りを移動するまたは対象物の上に乗る場合、こうした行動は探索であると考えない。
【００９５】
生データを秒単位で表す。
【００９６】
試験されるべき化合物は、プロトコルの３つのセッションそれぞれの６０分前に腹腔内投与される。
【００９７】
５つの実験群を形成し、この群はそれぞれ次を受容する：
１−コントロールのスクランブルペプチド（非毒性）、ビヒクル
２−Ａβ２５−３５ペプチド（毒性）、ビヒクル
３−Ａβ２５−３５ペプチド、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤（不活性用量）
４−Ａβ２５−３５ペプチド、α−７ニコチン受容体の部分アゴニスト（不活性用量）
５−Ａβ２５−３５ペプチド、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤（不活性用量）＋α−７ニコチン受容体の部分アゴニスト（不活性用量）
想起セッション中、即ち学習セッションの１時間後、秒単位で表される２つの対象物を探索するのに費やした時間を測定する。
【００９８】
馴染みのある対象物および新しい対象物に関して探索時間が同様であることは、馴染みのある対象物を忘却した、即ち短期間の想起能力レベルの完全な消滅があるという事実を反映している。
【００９９】
反対に、馴染みのある対象物に対する時間より新しい対象物に対する探索時間が長いことは、短期間の記憶想起能力レベルが良好であるこを反映している。
【０１００】
認識指数（新しい対象物を探索するのに費やした時間／新しい対象物および馴染みのある対象物を探索するのに費やした総時間）も測定する。
【０１０１】
相対的に低い認識指数は、馴染みのある対象物を完全に忘却した、即ち短期間の想起能力レベルの完全な消滅があるという事実を反映している。
【０１０２】
反対に、高い認識指数は、馴染みのある対象物をはっきりと思い出した、即ち短期間の記憶想起能力レベルが良好であることを反映している。
【０１０３】
以下の結果は、次の５つの実験群を形成することによって得られたが、これらの群はそれぞれ次を受容する：
１−コントロールスクランブルペプチド（非毒性）、ビヒクル
２−Ａβ２５−３５ペプチド（毒性）、ビヒクル
３−Ａβ２５−３５ペプチド、ドネペジル、０．１ｍｇ／ｋｇ（不活性用量）
４−Ａβ２５−３５ペプチド、４−ブロモフェニル１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボキシラート（２Ｅ）−ブタ−２−エンジオアート、０．１ｍｇ／ｋｇ（不活性用量）
５−Ａβ２５−３５ペプチド、ドネペジル、０．１ｍｇ／ｋｇ＋４−ブロモフェニル１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボキシラート（２Ｅ）−ブタ−２−エンジオアート、０．１ｍｇ／ｋｇ（不活性用量）。
【０１０４】
上記用量は塩基当量にて表される。
【０１０５】
２つの化合物それぞれの単一投与、または両方の組み合わせの単一投与後、自発運動の変化は、環境状況への順応セッション中に観察されない。同様に、学習期間中に２つの同一対象物に対する探索時間の変更も報告されなかった。
【０１０６】
表３および図４および５は、実験群のそれぞれについての想起セッション中での：
２つの対象物、即ち新しい対象物および馴染みのある対象物に対する探索時間（秒単位）；および
上記で定義された認識指数
を示す。
【０１０７】
想起セッション中、非毒性コントロールペプチドで処置された動物は、未変化の短期間記憶想起能力レベルを示し、これにより結果として馴染みのある対象物に比べて、新しい対象物に対する探索時間が顕著に長くなる。
【０１０８】
反対に、毒性ペプチドを受容した動物は、短期間の想起能力レベルが完全に消滅しており、結果として馴染みのある対象物と新しい対象物との探索が同一である。
【０１０９】
４−ブロモフェニル１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボキシラート（２Ｅ）−ブタ−２−エンジオアートの用量およびドネペジルの用量は、それぞれこれ自体では不活性であり、能力レベルでの改善はみられない。一方で、これら２つの製品を共投与した場合、非常に顕著な前記憶改善（ｐｒｏｍｎｅｓｉｃ）効果が観察され、結果として非毒性ペプチドで処置された動物のものと同様またはさらに優れた短期間の想起能力レベルに戻る（表３および図４および５）
【０１１０】
【表３】
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【０１１１】
上記の結果は、短期間の視覚的エピソード記憶欠損の試験において、本発明に従う組み合わせが、２つの活性成分を個々に摂取した場合に生じる前記憶改善効果に比べて顕著に大きい前記憶改善効果をもたらすことを示す。
【０１１２】
上記２つの一連の実験にて得られた結果はすべて、活性成分をそれぞれ単独で同じ投与量で投与した場合に比べて、げっ歯類における対象物認識タスクでの視覚的エピソード記憶障害に対する効力の観点から、本発明に従う組み合わせのより大きな効果を示している。この大きな効果は、欠損のない動物において観察され、この能力レベルが改善されるだけでなく、毒性アミロイドペプチドの脳内注射を用いるアルツハイマー病の病態生理学的モデルにおいても観察される。
【０１１３】
このより大きな効果は、認知障害、より詳細にはこのタイプの認知機能が特に損なわれていることがわかっている病理学的症状であるアルツハイマー病に関連する認知障害に対して、本発明に従う組み合わせの効力を表している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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