(57)【要約】神経学的な状態の治療のための化合物がテスト化合物を得て含む候補を同定する方法；ヒストンデアセチラーゼ３（ＨＤＡＣ３）のヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するためにテスト化合物の第１の活性を検定すること；ＨＤＡＣ３以外のヒストンデアセチラーゼのヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するためにテスト化合物の第２の活性を検定すること；そして、テスト化合物の第１の活性がテスト化合物の第２の活性より大きい場合テスト化合物を神経学的な状態の治療のための候補化合物と確認すること。【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経学的な状態の治療のための候補化合物を確認する方法であって、以下の方法：
ヒストンデアセチラーゼ３（ＨＤＡＣ３）のヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するためにテスト化合物の第１の活性を検定すること；
ＨＤＡＣ３以外のクラスＩまたはクラスＩＩ組織ヒストンデアセチラーゼのヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するためにテスト化合物の第２の活性を検定すること；
そして、テスト化合物の第１の活性がテスト化合物の第２の活性より大きい場合、テスト化合物を神経学的な状態の治療のための候補化合物と確認することはフラタキシン欠乏と関連した：
を含む方法。
【請求項２】
第２の活性がＨＤＡＣ３以外のクラスＩヒストンデアセチラーゼのヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するテスト化合物の活性である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＨＤＡＣ３以外のクラスＩヒストンデアセチラーゼがヒストンデアセチラーゼ１（ＨＤＡＣｌ）、ヒストンデアセチラーゼ２（ＨＤ  ＡＣ２）またはヒストンデアセチラーゼ８（ＨＤＡＣ８）である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ＨＤＡＣ３がヒトＨＤＡＣ３である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
ＨＤＡＣ３以外のヒストンデアセチラーゼがヒト・ヒストンデアセチラーゼである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項６】
第１の活性が第２の活性より大きい少なくとも約２倍である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項７】
神経学的な状態が三塩基反復の（と）関連した展開である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項８】
神経学的な状態がフリートライヒ運動失調である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
神経学的な状態が筋強直性ジストロフィー、脊髄筋萎縮、脆弱Ｘ染色体症候群、Ｈｕｎｔｉｎｇｄｏｎの疾患、脊髄小脳失調またはＫｅｎｎｅｄｙの疾患である、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
神経学的な状態（以下を含んでいる方法）の治療のための候補化合物を確認する方法：
ヒストンデアセチラーゼ３（ＨＤ  ＡＣ３）のヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するためにテスト化合物の第１の活性を検定すること；
ヒストンデアセチラーゼ１（ＨＤＡＣｌ）のヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するためにテスト化合物の第２の活性を検定すること；
ヒストンデアセチラーゼ２（ＨＤ  ＡＣ２）のヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するためにテスト化合物の第３の活性を検定すること；
ヒストンデアセチラーゼ８（ＨＤＡＣ８）のヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するためにテスト化合物の第４の活性を検定すること；
そして、テスト化合物の第１の活性がテスト化合物のより大きい各々の２、３、および４活性めである場合テスト化合物を神経学的な状態の治療のための候補化合物と確認すること。
【請求項１１】
ＨＤＡＣ３、ＨＤＡＣｌ、ＨＤＡＣ２の各々、およびＨＤＡＣ  ８は人間である請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
第１の活性が少なくとも約２倍のより大きい各々の２、３、および４活性めである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
神経学的な状態が三塩基反復の（と）関連した展開である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
神経学的な状態がフリートライヒ運動失調である請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
神経学的な状態が筋強直性ジストロフィー、脊髄筋萎縮、脆弱Ｘ染色体症候群、ハンチントン舞踏病、脊髄小脳失調またはＫｅｎｎｅｄｙの疾患である請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
神経学的な状態（以下を含んでいる方法）の治療のための候補化合物を確認する方法：
ヒストンデアセチラーゼ３（ＨＤＡＣ３）のヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するためにテスト化合物の活性を検定すること；
ヒストンデアセチラーゼ１、２、４、５、６、７、８、９、および１０の各々のヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するためにテスト化合物の一組の活性を検定すること；
そして、テスト化合物の第１の活性がテスト化合物の活性の一組の各活性より大きい場合テスト化合物を神経学的な状態の治療のための候補化合物と確認すること。
【請求項１７】
請求項１、２、１３、または１６（方法が複数の検査化合物のために繰り返される）の方法。
【請求項１８】
表現が神経学的な状態において減少する遺伝子の表示を増加させるために候補化合物の活性を検定することをさらに有することを特徴とする請求項１、２、１３、または１６、に記載の方法。
【請求項１９】
遺伝子がフラタキシンである、請求項１８に記載の方法。
神経学的な状態の治療のための候補化合物を確認する方法は、テスト化合物を得ることを含む；
ヒストンデアセチラーゼ３（ＨＤＡＣ３）のヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するためにテスト化合物の第１の活性を検定すること；
ＨＤＡＣ３以外のヒストンデアセチラーゼのヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するためにテスト化合物の第２の活性を検定すること；
そして、テスト化合物の第１の活性がテスト化合物の第２の活性より大きい場合テスト化合物を神経学的な状態の治療のための候補化合物と確認すること。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の請求）
本願は、２００７年１０月２６日に出願された米国仮特許出願第６０／９８２，８８２号の利益を主張し、この米国仮特許出願の全体の内容は、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（技術分野）
本発明は神経学的な条件の治療のための役立つ化合物を確認する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
フリートライヒ運動失調（ＦＲＤＡ）は白人において最も一般的な遺伝した運動失調症である（Ｐａｎｄｏｌｆｏ（１９９９）Ｓｅｍｉｎを参照。Ｎｅｕｒｏｌ．１９：３１１）。ＦＲＤＡをもつ個人はパートナー・タンパク質（例えばアコニターゼ）に鉄‐硫黄クラスタのメッセンジャーＲＮＡをコード化しているフラタキシン、非常に節約された２１０のアミノ酸性原子核をコード化された、糸粒体のタンパク質（すなわち鉄のホメオスタシスに関係している思案）、記憶および転送の不足を有する（Ｂｕｌｔｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｓｃｉｅｎｃｅ（３０５：２４２）を参照；Ｓｅｚｎｅｃその他（２００５）Ｈｕｍ．ＭｏＩ。Ｇｅｎｅｔ．１４：４６３；カラブリア住民その他（２００５）Ｊ。Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｄ．２３３：１４５）。
【０００４】
フラタキシン不足は、結果として結果として歩行および手協調運動障害になっている進歩的な脊髄小脳神経変性、不明瞭言語、筋脱力および神経外せき柱変形、心筋症および糖尿病を有する感覚の損失に導く。通常、症状の第１の出現の後の１５〜２０年以内に、罹患者は、車椅子に限定されて、後期段階にあって、完全に無能力にされる。大部分の罹患者は、心疾患の成人期の初めに死ぬ。抗酸化剤、そして、鉄−キレータ・ベースの戦略はＦＲＤＡを処理するために用いた、これらの戦略は疾患および原因（すなわち、フラタキシン欠乏）でないことの症状だけを治療する。従って、神経学的な状態（例えばＦＲＤＡ）の治療のフラタキシン・タンパク質式を復元することができる分子を開発する必要が、ある。
【０００５】
ＦＲＤＡ患者の９８％で見つかるＤＮＡ異常は、フラタキシン遺伝子（非特許文献１を参照）の第１のイントロンのＧＡＡ三塩基反復の不安定ｈｙｐｅｒ―展開である。ゲノムＤＮＡの三塩基反復展開は、筋強直性ジストロフィー、脊髄筋萎縮、脆弱Ｘ染色体症候群、ハンチントン舞踏病、脊髄小脳失調、筋萎縮性側索硬化症、Ｋｅｎｎｅｄｙの疾患、脊髄および球の筋萎縮およびアルツハイマー病を含んでいる多くの他の神経学的な条件（例えば、神経組織および神経筋疾患）と関係している。三塩基反復展開は、遺伝子発現変化によって疾患を引き起こす場合がある。ハンチントン舞踏病、脊髄小脳失調、脆弱Ｘ染色体症候群および筋強直性ジストロフィーにおいて例えば、拡張された繰り返しは、結果として遺伝子サイレンシングに導く。従って、神経学的な条件の遺伝子の正規関数を復元することができる分子を確認して、開発する必要が、ある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｃａｍｐｕｚａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７１：１４２３（１９９６）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（要旨）
本発明は、なかでも、ヒストンデアセチラーゼ３（ＨＤＡＣ３）の特定のインヒビターでもある化合物がフラタキシン表現を増加させるという不意の発見に基づく。したがって、本発明は、ＨＤＡＣ３活性（例えば、フリートライヒ運動失調）によって遺伝子形質発現の抑制と関連した神経学的な条件の治療に役立つことがありえるＨＤＡＣ３の特定のインヒビターを確認する方法を提供する。
【０００８】
ＨＤＡＣ３の特定のインヒビターは、他のＨＤＡＣｓの抑制と関連した毒性を減らして、抑制を病気にかかった細胞の表現において減らされる遺伝子の表示を増加させることができるＨＤＡＣに集中させることによって、効果を広域ＨＤＡＣインヒビターの使用の上の神経学的な条件の治療に提供する。この種の特定のＨＤＡＣ３インヒビターは、より高い治療係数を提供する。そして、慢性であるか長期の処理の間、患者によって結果としてより良好な許容度になる。
【０００９】
一つの態様において、試験を得ることによる構成する神経学的な状態の治療のための候補化合物を確認する本発明機能方法；
ヒストンデアセチラーゼ３（ＨＤＡＣ３）のヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するために試験化合物の第１の活性を検定すること；
ＨＤＡＣ３（例えば、ＨＤＡＣｌ、ＨＤＡＣ２またはＨＤＡＣ８）以外のクラスＩヒストンデアセチラーゼのヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するために試験化合物の第２の活性を検定すること；
そして、試験化合物の第１の活性が試験化合物の第２の活性より大きい場合、試験化合物を神経学的な状態の治療のための候補化合物と確認することはフラタキシン欠乏と関連した。
【００１０】
別の態様においては、本発明は、試験化合物を得ることによって神経学的な状態の治療のための候補化合物を確認する方法を特徴とする；
ＨＤＡＣ３のヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するために試験化合物の第１の活性を検定すること；
ＨＤＡＣｌのヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するために試験化合物の第２の活性を検定すること；
ＨＤＡＣ２のヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するために試験化合物の第３の活性を検定すること；
ＨＤＡＣ８のヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するために試験化合物の第４の活性を検定すること；
そして、試験化合物の第１の活性が試験化合物のより大きい各々の２、３、および４活性めである場合試験化合物を神経学的な状態の治療のための候補化合物と確認すること。
【００１１】
更なる態様において、本発明は、試験化合物を得ることによって神経学的な状態の治療のための候補化合物を確認する方法を特徴とする；
ＨＤＡＣ３のヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するために試験化合物の第１の活性を検定すること；
ＨＤＡＣ３（例えば、ＨＤＡＣｌ、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ８、ＨＤＡＣ９またはＨＤＡＣｌＯ）以外のクラスＩまたはクラスＩＩ組織ヒストンデアセチラーゼのヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するために試験化合物の第２の活性を検定すること；
そして、試験化合物の第１の活性が試験化合物の第２の活性より大きい場合、試験化合物を神経学的な状態の治療のための候補化合物と確認することはフラタキシン欠乏と関連した。
【００１２】
別の態様においては、本発明は、試験化合物を得ることによって神経学的な状態の治療のための候補化合物を確認する方法を特徴とする；
ＨＤＡＣ３のヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するために試験化合物の活性を検定すること；
ヒストンデアセチラーゼ１、２、４、５、６、７、８、９、および１０の各々のヒストンデアセチラーゼ活性を阻害するために試験化合物の一組の活性を検定すること；
そして、試験化合物の第１の活性が試験化合物の活性の一組の各活性より大きい場合試験化合物を神経学的な状態の治療のための候補化合物と確認すること。
【００１３】
上記方法のいくつかの実施形態において、ＨＤＡＣｓ（例えば、ＨＤＡＣ３）の一つ以上は、ヒトＨＤＡＣ（例えば、ヒトＨＤＡＣ３）である。
【００１４】
上記方法のいくつかの実施形態において、第１の活性が他の活性（例えば、２、３、または４活性めまたは活性の一組の各活性）より少なくとも約１．５倍大きい（例えば、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１５―折り目またはより大きな２０倍）場合、試験化合物は神経学的な状態の治療のための候補化合物と確認される。
【００１５】
上記方法のいくつかの実施形態において、神経学的な状態は、フリートライヒ運動失調、筋強直性ジストロフィー、脊髄筋萎縮、脆弱Ｘ染色体症候群、Ｈｕｎｔｉｎｇｄｏｎの疾患、脊髄小脳失調、Ｋｅｎｎｅｄｙの疾患、筋萎縮性側索硬化症、脊髄および球の筋萎縮またはアルツハイマー病である。上記方法のいくつかの実施例において、神経学的な状態は、三塩基反復（例えば、フリートライヒ運動失調、筋強直性ジストロフィー、脊髄筋萎縮、脆弱Ｘ染色体症候群、ハンチントン舞踏病、脊髄小脳失調またはＫｅｎｎｅｄｙの疾患）の展開と関係している。
【００１６】
いくつかの実施形態において（方法が表現が神経学的な状態（例えば、フラタキシン、ハンチンチン、脳から派生した神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ペルオキシゾーム増殖因子活性レセプタ―γ、活性化補助因子１、α（ＰＧＣｌＡ）、ａｔａｘｉｎ、脆弱なＸ精神遅滞（ＦＭＲｌ）、筋緊張性ジストロフィ・プロテインキナーゼ（ＤＭＰＫ）またはアンドロゲン受容体）において減少する一つ以上の遺伝子の表示を増加させるために候補化合物の活性を検定して更に含む上記）。
【００１７】
いくつかの実施形態では、上記方法は、例えば、細胞系（例えば、ＨｅｐＧ２）上の候補化合物の毒性を検定することによって候補化合物の一般の細胞毒性を検定することを更に含む。
【００１８】
いくつかの実施形態では、上記方法は、複数の試験化合物（例えば、少なくとも１０、２０、５０、１００、２００、５００、または１０００試験化合物）のために繰り返される。
【００１９】
いくつかの実施形態では、方法は、神経学的な状態（例えば、フリートライヒ運動失調、筋強直性ジストロフィー、脊髄筋萎縮、脆弱Ｘ染色体症候群、ハンチントン舞踏病、脊髄小脳失調、Ｋｅｎｎｅｄｙの疾患、筋萎縮性側索硬化症、脊髄および球の筋萎縮またはアルツハイマー病）の動物または細胞モデルに候補化合物を与えることを更に含む。上記方法のいくつかの実施例において、方法は動物に候補化合物を与えることを更に含む、または、神経学的な状態の細胞モデルは三塩基反復（例えば、フリートライヒ運動失調、筋強直性ジストロフィー、脊髄筋萎縮、脆弱Ｘ染色体症候群、ハンチントン舞踏病、脊髄小脳失調またはＫｅｎｎｅｄｙの疾患）の展開と関係している。
【００２０】
別の態様においては、本発明は、上記方法のいずれかを実行して、医薬品組成物の候補化合物を公式化して、神経学的な状態を有する患者に医薬品組成物を投与することを含む神経学的な状態（例えば、フリートライヒ運動失調、筋強直性ジストロフィー、脊髄筋萎縮、脆弱Ｘ染色体症候群、ハンチントン舞踏病、脊髄小脳失調、Ｋｅｎｎｅｄｙの疾患、筋萎縮性側索硬化症、脊髄および球の筋萎縮またはアルツハイマー病）を扱う方法を特徴とする。
【００２１】
更なる態様において、この用途は、神経学的な状態を有する患者に本願明細書において記載されている方法によって確認されるＨＤＡＣインヒビターを管理することを含む神経学的な状態（例えば、フリートライヒ運動失調、筋強直性ジストロフィー、脊髄筋萎縮、脆弱Ｘ染色体症候群、ハンチントン舞踏病、脊髄小脳失調、Ｋｅｎｎｅｄｙの疾患、筋萎縮性側索硬化症、脊髄および球の筋萎縮またはアルツハイマー病）を扱う方法を特徴とする。
【００２２】
別の態様においては、この用途は、処理のための薬の準備または神経学的な状態（例えば、フリートライヒ運動失調、筋強直性ジストロフィー、脊髄筋萎縮、脆弱Ｘ染色体症候群、ハンチントン舞踏病、脊髄小脳失調、Ｋｅｎｎｅｄｙの疾患、筋萎縮性側索硬化症、脊髄および球の筋萎縮またはアルツハイマー病）の予防において本願明細書において記載されている方法によって確認されるＨＤＡＣインヒビターの使用を特徴とする。
【００２３】
さもなければ定められない限り、本願明細書において用いられるすべての専門的および科学的な用語は共通に、本発明が帰属する当業者によって理解するのと同じ意味を有する。本願明細書において記載されているそれらに対する方法および類似の材料または均等物が本発明の実施またはテストすること際に用いられることができるにもかかわらず、適切な方法および材料は後述する。
本願明細書において記載のすべての刊行物、特許出願、特許および他の参照は、それらの全部において引用したものとする。
コンフリクトの場合には、定義を含めた本明細書が優先するだろう。
加えて、材料、方法および実施例は、図示して、制限する予定であるだけでなかった。
【００２４】
本発明の他の特徴および効果は、以下の詳細な説明から、そして、請求項から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は、ＨＤ  ＡＣ３の示された濃度の管理の後ヒト細胞のフラタキシン・メッセンジャーＲＮＡ表現の折り目―アップレギュレーションを表している棒グラフである―特定のヒストンデアセチラーゼ・インヒビターＲＧＦＡ８。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
（詳細な説明）
本発明は特定のヒストンデアセチラーゼ３（ＨＤ  ＡＣ３）インヒビターもフラタキシンの発現を増加させて、従って、神経学的な条件（例えば、減少したフラタキシン表現と関連した神経学的な条件）の治療に役立つことがありえたという不意の発見に関する。
したがって、本発明は、さまざまな慢性および深刻な神経学的な条件（例えば、フリートライヒ運動失調）のための薬物療法学として使われることができる化合物を確認する方法を提供する。
【００２７】
ヒストンデアセチラーゼ・インヒビター
ＦＲＤＡ患者の９８％で見つかるＤＮＡ異常は結果としてフラタキシン遺伝子の転写の欠陥になるフラタキシン遺伝子の第１のイントロンのＧＡＡ三塩基反復の不安定ｈｙｐｅｒ―展開である（Ｃａｍｐｕｚａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．１９９６、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７１を参照：１４２３−２７）。ＦＲＤＡ患者はフラタキシン・メッセンジャーＲＮＡの著しい不足を有する、そして、ＧＡＡ三塩基反復がより長いほど、フラタキシン欠乏はより深い。ＦＲＤＡは、三塩基反復疾患を代表する：ＦＲＤＡ患者アレレが６６―１７００の繰り返しを有すると共に、通常のアレレは６―３４の繰り返しを有する。より長いＧＡＡ三塩基反復は、疾患の初期の発症および増加したひどさと関係している。本発明は、三塩基反復（例えばＦＲＤＡまたはハンチントン舞踏病）の展開と関係している神経系疾患の遺伝子機能を復元することができる特定のＨＤＡＣ３インヒビターを確認する方法を提供する。例えば、本願明細書において記載されている方法によって確認されるＨＤＡＣ３インヒビターは、リンパ球のフラタキシン・メッセンジャーＲＮＡおよびタンパク質をＦＲＤＡ患者から増やす。「ヒストンデアセチラーゼ３（ＨＤ  ＡＣ３）インヒビター」は、ヒストン、非ヒストン性染色体タンパク質および他の細胞タンパク質のアセチル化のレベルを調整するためにＨＤＡＣ３と結合する小分子である。本願明細書において記載されている方法によって確認されるＨＤＡＣ３インヒビターは、細胞目標のアセチル化のレベルを調整するために、ＨＤＡＣ３と対話することができる。
【００２８】
本願明細書において記載されているように、ＨＤＡＣはアセチル化された標的タンパク質からアセチル基（脱アセチル）の除去に触媒作用を及ぼすポリペチドに特有の特徴を有するいかなるポリペチドでもありえる。ＨＤＡＣｓに特有の特集は、従来技術において周知で、実施例、Ｆｉｎｎｉｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９９、Ｎａｔｕｒｅ、４０１のために見える：１８８。このように、ＨＤＡＣは、ヒストン（例えば、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ２Ａ）およびＨ２Ｂ（ヌクレオソームを形成する）のＮ末端に位置する節約されたリジン残基のｅアミノ基を脱アセチル化することによって遺伝子転写を抑制するポリペチドでありえる。
ＨＤＡＣｓも、他のタンパク質（例えばｐ５３、Ｅ２Ｆ、α）を脱アセチル化する―チュービュリンおよびＭｙｏＤ。Ａｎｎｅｍｉｅｋｅ  ｅｔ  ａｌ．２００３、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ。３７０：７３７を参照。ＨＤＡＣｓは核に限局されることもできる、そして、特定のＨＤＡＣｓは核、更には細胞原形質で見つかることができる。
【００２９】
本願明細書において記載されている方法によって確認されるＨＤＡＣ３インヒビターは、いかなるＨＤＡＣとも対話することができる。しかしながら、ＨＤＡＣ３インヒビターは、一つ以上の他のＨＤＡＣｓ（例えば、クラスＩまたはクラスＩＩ組織の一つ以上のＨＤＡＣｓ）と比較して、ＨＤＡＣ３を阻害するために、少なくとも約２倍（例えば、少なくとも約５倍、１０倍、１５倍か２０倍）より大きな活性を有する。クラスＩ  ＨＤＡＣｓは、最も密接に酵母転写制御因子ＲＰＤ３に似ているものである。クラスＩ  ＨＤＡＣｓの実施例は、アミノ酸配列の４５％〜９３％のアイデンティティからＨＤＡＣｓ  １、２、３および８までのＨＤＡＣｓ  １、２、３および８（呈している脱アセチル化酵素領域を有するいかなるＨＤＡＣと同様にも）を含む。クラスＩＩ組織ＨＤＡＣｓは、最も密接に酵母ＨＤＡＣｌ酵素に似ているものである。クラスＩＩ組織ＨＤＡＣｓの例としては、ＨＤＡＣｓ  ４、５、６、７、９および１０が挙げられる。
【００３０】
試験化合物の検査
特定の態様においてＨＤＡＣ３インヒビターは、それらが活性１またはより他のＨＤＡＣｓを阻害するより、よりＨＤＡＣ３（例えば、２、３、４、５、１０またはより多くの時間）の活性を阻害する試験化合物（例えば、一群の試験化合物から）を確認することによって見つかる。試験化合物のＨＤＡＣ阻害力は、標準手段によって検定されることができる。簡潔には、分析法は、概して、試験化合物の有無のＨＤＡＣ酵素を有するアセチル化されたＨＤＡＣ基質を暖めて、基質からアセチル基の除去を検出することが必要である。ＨＤＡＣ抑制分析は、例えば、細胞において、細胞抽出物において、または、無細胞混合において実行されることができる。典型的なＨＤＡＣ抑制分析は、Ｐｅｒｅｚ―Ｂａｌａｄｏ  ｅｔ  ａｌ．２００７、Ｊ。Ｍｅｄに記載されている。化学、５０：２４９７―２５０５；Ｈｅｒｍａｎその他、２００６、Ｎａｔ。化学Ｂｉｏｌ、２：５５１―５５８；Ｂｅｃｋｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．２００７、Ｉｎｔ．Ｊ。イチョウガニ科、１２１：１  １３８―４８、そして、Ｋｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ。０：ＢＪ２００７０７７９。ＨＤＡＣ分析キットは、ＢＩＯＭＯＬ（Ｐｌｙｍｏｕｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、ＰＡ）およびＵｐｓｔａｔｅ（Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ、ＶＡ）から市販されている。ＨＤＡＣインヒビターのスクリーニングのための小分子マイクロアレイ方法は、Ｖｅｇａｓ  ｅｔ  ａｌ．２００７、Ａｎｇｅｗに記載されている。Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ。Ｅｎｇｌ、０：ａｎｉｅ．２００７０３１９８。
【００３１】
精製されたタンパク質（部分的に精製されたタンパク質）が、細胞において、組換えタンパク質または細胞抽出物を精製したので、例えば、ＨＤＡＣ３および他のＨＤＡＣ酵素は設けられていることができる。ＨＤＡＣ３および他のＨＤＡＣ酵素の浄化または部分精製は標準手段によって実行されることができる。そして、アフィニティークロマトグラフィおよび免疫沈降を含む。
【００３２】
ＨＤＡＣ基質は、市販の基質（例えば、Ｆｌｕｏｒ  ｄｅ  ＬｙｓＴＭ  ＢＩＯＭＯＬ）またはアセチル化された細胞ＨＤＡＣ基質（例えば、ヒストンＨ２Ａ、ヒストンＨ２Ｂ、ヒストンＨ３、ヒストンＨ４、α）でありえる―チュービュリン、ＮＦκＢ―３またはｐ５３。典型的な更なる基質には、前のタンパク質（例えば、Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ４の残基２―２４または１―１８）のアセチル化されたペプチドが含まれる。
【００３３】
ＨＤＡＣ基質の脱アセチルは、標準手段によって検出されることができる。市販の基質は、脱アセチル化されたリジンを検出する蛍光または比色試薬を備えている。他の実施態様として、基質は３Ｈアセチル化されることができる、そして、脱アセチルは基質から３Ｈの解放を測定することによって検出される。更なる態様において、抗体は、アセチル化された基質と脱アセチル化された基質を区別するために用いることができる。例えば、アセチル化されたαに特有の抗体―チュービュリンはＳｉｇｍａから入手可能である、そして、アセチル化されたヒストンＨ３に特有の抗体はＵｐｓｔａｔｅから入手可能である。
【００３４】
ＨＤＡＣ３インヒビターと確認される化合物は、神経障害（例えば、フラタキシン（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ  ＯＯＯ  １４４．３）、ハンチンチン（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ＿００２１１１．６）、脳から派生した神経栄養因子）において過小発現する一つ以上の遺伝子の表示の誘導用に、更に試験されることができる（ＢＤＮＦ；ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ  ｌ  ７０７３５．４）、ペルオキシゾーム増殖因子活性レセプタ―γ、活性化補助因子１、α（ＰＧＣｌＡ；ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ  ０１３２６１．３）、ａｔａｘｉｎｓ（例えばａｔａｘｉｎ  １（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ＿０００３３２．２）、脆弱なＸ精神遅滞で、ある（ＦＭＲｌ；ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ  ００２０２４．３）、筋緊張性ジストロフィ・プロテインキナーゼ（ＤＭＰＫ；ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ＿００４４０９．３）、またはアンドロゲン受容体（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ＿００００４４．２）。
リストされたＧｅｎＢａｎｋ受入れ番号は、典型的なヒト相補ＤＮＡシーケンスを示して、制限するはずでない。他の対立遺伝子または代わりにスプライスされたバージョンのシーケンスが、使われることもできる。
【００３５】
概して、インヒビターは核酸または遺伝子のタンパク質製品を表す細胞または無細胞抽出液に与えられる、そして、遺伝子産物の表示はインヒビターの非存在下でその表現と比較される。いかなる細胞も用いられることができる。そして、主題（例えば、神経障害を有する主題）または細胞系の細胞から得られる一次細胞を含む。典型的な細胞には、神経細胞、ノイロン細胞およびリンパ球が含まれる。細胞は、複数のサンプルまたは複数の分析が同じ細胞ソースによってされることができるために分析を拡大・縮小する際の楽を提供する単離されたおよび格納された凍結するアリクォットでありえる。一つの実施形態において、細胞はリンパ球（例えば、フリートライヒ運動失調患者に由来する）である。そして、それは一次細胞またはリンパ芽球腫細胞系の細胞である。
【００３６】
核酸およびタンパク質遺伝子産物の表示の決定は、いくつかの標準分析法のいずれかによって達成されることができる。核酸発現は、例えば、ハイブリダイゼーション（例えば、ノーザンブロット法）、核酸マイクロアレイ、ＰＣＲ（例えば、逆転写―ＰＣＲ（ＲＴ―ＰＣＲ）または定量的ＲＴ―ＰＣＲ）、プライマー伸長、遺伝子形質発現の連続分析、ヌクレアーゼ保護分析またはリポーター遺伝子構造物で測定されることができる。タンパク質発現は、例えば、イムノブロッティング（例えば、ウエスタンブロット法）、免疫沈降、吸収検定（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＲＩＡ）、ペプチド・マイクロアレイまたは融合タンパク（例えば、ＧＦＰ融合）で測定されることができる。
【００３７】
慢性の使用のための役立つ化合物は、重要な細胞毒性活性を示さない濃度で、ＨＤＡＣ３を阻害する。細胞毒性活性は、インジケータ細胞系（例えば、ヒト変わる肝細胞ＨｅｐＧ２）を有する化合物を暖めることで測定されることができる。概して化合物の管理後の２４―７２時間との間に、生菌数は、潜伏期間の後決定される。生菌は、運転中の電池（例えばＭＴＳ）によって着色した製品に変わる基質を計数しているかまたは使用している細胞を含むがこれに限らず多くの方法で測定されることができる。ＨＤＡＣ３活性と細胞毒性の比は、疾患によって減らされる遺伝子産物の表示を増加させて、長い期間にわたる管理に許容できる分子を確認することができる。
【００３８】
試験化合物
一つ以上の他のＨＤＡＣｓより大きな範囲に、新規な方法が確認するために用いることができ、例えば、例えば、小さい有機であるか無機分子（例えば、１，０００のＤａ未満の分子量によって）、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチドまたは炭水化物を（ＨＤＡＣ３を阻害する）合成させる。ある種の実施形態では、本発明のスクリーンは、試験化合物のライブラリを利用する。ここで使用しているように、「試験化合物」は、いかなる化学化合物（例えば、巨大分子（例えば、ポリペチド、タンパク質錯体、グリコプロテインまたは核酸）または小分子（例えば、アミノ酸、ヌクレオチド、有機であるか無機の化合物））でもありえる。試験化合物は、１モルにつき約１０，０００グラム未満、１モルにつき５，０００グラム未満、１モルにつき１，０００グラム未満または１モルにつき約５００グラム未満の式量を有することができる。試験化合物は、総合的で、自然に生じることがありえる（例えば、ハーブまたは天然物）かまたは天然および合成成分を含むことができる。試験化合物の例としては、抗酸化剤、構造的に抗酸化剤、ペプチド、ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ（例えば、ｐｅｐｔｏｉｄｓ）、アミノ酸、アミノ酸アナログ、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体および有機であるか無機の化合物（例えば、ヘテロ有機であるか有機金属の化合物）に似ている化合物、が挙げられる。
【００３９】
試験化合物は、個々に選別されることがありえるかまたは、平行でありえる。平行したスクリーニングの実施例は、化学薬品の大きいライブラリの高いスループット薬スクリーンである。試験化合物のこの種のライブラリは、発生することができるかまたは、例えば、Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ社、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡから購入されることができる。
ライブラリは、化合物の多様な範囲をカバーするように設計されていることがありえる。
例えば、ライブラリは、５００、１，０００、１０，０００、５０，０００または１００，０００以上のユニークな化合物を含むことができる。あるいは、従来の実験および散発的な証拠は、強化された可能性の化合物のクラスまたはカテゴリを暗示することができる。
ライブラリは、設計されることができて、化学薬品のこの種の種類をカバーするために総合されることができる。
【００４０】
組み合わせライブラリの統合は公知技術で、概説された（Ｇｏｒｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  ３７：１３８５−１４０１，  （１９９４）；  ＤｅＷｉｔｔ，  ａｎｄ  Ｃｚａｒｎｉｋ，  Ａｃｅ．  Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｓ．，  ２９：１１４，  （１９９６）；  Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｃｅ．  Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｓ．，  ２９：１２３，  （１９９６）；  Ｅｌｌｍａｎ，  Ｊ．  Ａ．  Ａｃｅ．  Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｓ．，  ２９：１３２，  （１９９６）；  Ｇｏｒｄｏｎ，  ｅｔ  ａｌ，  Ａｃｅ．  Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｓ．，  ２９：１４４  （１９９６）；  Ｌｏｗｅ，  Ｇ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｒｅｖ．，  ３０９  （１９９５）；  Ｂｌｏｎｄｅｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｒｅｎｄｓ  Ａｎａｌ．  Ｃｈｅｍ．，  １４：８３  （１９９５）；  Ｃｈｅｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  １１６：２６６１  （１９９４）；  Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔｅｎｔｓ  Ｎｏｓ．  ５，３５９，１１５，  ５，３６２，８９９，  ａｎｄ  ５，２８８，５１４；  ａｎｄ  ＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏｓ．  ＷＯ  ９２／１００９２，  ＷＯ  ９３／０９６６８，  ＷＯ  ９１／０７０８７，  ＷＯ  ９３／２０２４２，  ａｎｄ  ＷＯ  ９４／０８０５１）。
【００４１】
化合物のライブラリは、ライブラリの部材が所望の活性を有するかどうか決定して、その場合は、活性種を確認するために放送されることができる。組み合わせライブラリを放送する方法は記載されていた（Ｇｏｒｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ  Ｍｅｄ）参照。Ｃｈｅｍ．上記）。スクリーニングの後、所望の活性を有する化合物は、いかなる数の技術（例えば、マススペクトル分析（ＭＳ）、ＮＭＲ（ＮＭＲ）、マトリックスによって援助されたレーザ脱離電離／飛行時間（ＭＡＬＤＩ―ＴＯＦ）分析、など）によって確認されることができる。試験化合物のスクリーニング・ライブラリに役立つ典型的な分析は、本願明細書において記載されている。
【００４２】
ＨＤＡＣ３インヒビターを使用する能力
ＨＤＡＣ３インヒビター（例えば、本願明細書において記載されている方法によって確認されるそれら）が、予防的に、または、さまざまな神経学的な条件（例えば、フラタキシン欠乏に伴う神経学的な条件）の治療として使われることができる。より詳しくは、ＨＤＡＣ３インヒビター（例えば、本願明細書において記載されている方法によって確認されるそれら）は遅延するかまたは神経組織であるか神経筋状態の開始を防止するために用いることができる。そして、神経学的な状態（例えば、神経組織であるか神経筋状態）を受けて同じく哺乳類（例えば人間被験者）を治療する。神経組織の条件の非限定的な実施例としては、脆弱Ｘ染色体症候群、フリートライヒ運動失調、ハンチントン舞踏病、脊髄小脳失調、筋萎縮性側索硬化症、Ｋｅｎｎｅｄｙの疾患、脊髄および球の筋萎縮およびアルツハイマー病が挙げられるが、これに限定されるものではない。神経筋条件の非限定的な実施例は、脊髄筋萎縮および筋強直性ジストロフィーを含む。
【００４３】
どのＨＤＡＣ３インヒビターが管理されることができるかという哺乳類（例えば人間）が、上記の条件を進展させることの危険がある人々と同様に上記の条件が欠点になっているそれらを含む。例えば、神経組織の条件を進展させることの危険がある哺乳類は、個人のゲノムの特定の核酸一次構造（例えば、フラタキシン遺伝子配列、ハンチンチン遺伝子配列、ａｔａｘｉｎ遺伝子配列、壊れやすいＸ精神遅滞（ＦＭＲｌ）遺伝子配列、筋緊張性ジストロフィ・プロテインキナーゼ（ＤＭＰＫ）遺伝子配列またはアンドロゲン受容体遺伝子配列）の繰り返しの長さ、範囲および／または数を最初に決定する（１）ことを含む多数の方法で同定されることができる；コアヒストンのアセチル化度；または、表現は特定のメッセンジャーＲＮＡまたはタンパク質（例えば、フラタキシン、ハンチンチン、脳から派生した神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ペルオキシゾーム増殖因子活性レセプタ―γ、活性化補助因子１、α（ＰＧＣｌＡ）、ａｔａｘｉｎ、脆弱なＸ精神遅滞（ＦＭＲｌ）、筋緊張性ジストロフィ・プロテインキナーゼ（ＤＭＰＫ）またはアンドロゲン受容体）の中で水平になる、そして、（２）がそれを通常の個人のそれと比較する、（Ｒｉｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６，  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．，  ２０：２１８３−９２；  Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．  ＭｏＩ．  Ｄｉａｇｎ．，  ５：１０１−  １０９；  Ｅｖｅｒｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４，  Ｂｒａｉｎ，  １２７：２３８５−２４０５；  Ｍｏｎｃｋｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，  ９１  ：５１３−５２０；  ａｎｄ  Ｃａｓｋｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２５６：７８４−７８９）。
【００４４】
神経組織であるか神経筋条件を進展させることの危険がある個人は、特定の核の援助シーケンスの繰り返し、コアヒストンのアセチル化度または特定の遺伝子の表示の異常な数を有する人である。例えば、フリートライヒ運動失調を開発することの危険がある哺乳類は、フラタキシン遺伝子の第１のイントロンのＧＡＡ三つ子の繰り返しの長さ、範囲または数を決定することによって同定されることができる。上記の分析がＧＡＡ三つ子（例えば、ＧＡＡ三つ子の４０、５０、６０、６６または７０繰り返しを超える）の３４以上の繰り返しがあることを示す場合、哺乳類はフリートライヒ運動失調の危険があるとみなされることができる。フリートライヒ運動失調の危険がある哺乳類は、フラタキシン・メッセンジャーＲＮＡのレベルまたは哺乳類において表されるタンパク質を決定することによって同定されることもできる。フラタキシン・メッセンジャーＲＮＡまたはタンパク質のレベルが通常健常な個人（例えば、無影響の同胞）において観察されるレベルより低い場合、哺乳類はフリートライヒ運動失調の危険があるだろう。
【００４５】
ＨＤＡＣ３インヒビターは、神経学的な状態の動物または細胞モデルに与えられることができる。典型的なモデルは、Ｂａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｇｏｎｉｔｅｌ，  ２００６，  ＭｏＩ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，  ３２：１４７−１５８；  Ｐｕｃｃｉｏ，  ２００７，  Ｈａｎｄｂ．  Ｅｘｐ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，  １７８：３６５−３７５；  Ｂａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｈａｙ，  ２００４，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ＭｏＩ．  Ｂｉｏｌ．，  ２７７：３−１５；  Ｗａｎｓｉｎｋ  ａｎｄ  Ｗｉｅｒｉｎｇａ，  ２００３，  Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ．  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．，  １００：２３０−４２１；  Ｍｅｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５，  ＮｅｕｒｏＲｘ，  ２：４７１−４７９；  Ｇｕ  ａｎｄ  Ｎｅｌｓｏｎ，  ２００３，  Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ．  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．，  １００：１２９−１３９；  Ｈｏｏｇｅｖｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｍｉｃｒｏｓｃ．  Ｒｅｓ．  Ｔｅｃｈ．，  ５７：１４８−１５５；  Ｇａｒｄｉａｎ，  ２００６，  Ｉｄｅｇｇｙｏｇｙ  Ｓｚ．，  ５９：３９６−３９９；  Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５，  ＮｅｕｒｏＲｘ，  ２：４４７−４６４；  Ｌｅｖｉｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，  ２７：６９１−６９７；  Ｅｖｅｒｅｔｔ  ａｎｄ  Ｗｏｏｄ，  ２００４，  Ｂｒａｉｎ，  １２７：２３８５−２４０５；  Ｏｕｔｅｉｒｏ  ａｎｄ  Ｍｕｃｈｏｗｓｋｉ，  ２００４，  Ｊ．  ＭｏＩ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，  ２３：４９−６０；  Ｂｅａｌ  ａｎｄ  Ｆｅｒｒａｎｔｅ，  Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，  ５：３７３−３８４；  Ｌｉｎｋ，  ２００１，  Ｍｅｃｈ．  Ａｇｅｉｎｇ  Ｄｅｖ．，  １２２：１６３９−４９；  Ｈｅｉｎｔｚ  ａｎｄ  Ｚｏｇｈｂｉ，  ２０００，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，  ６２：７７９−８０２；  Ｍａｒｔｉｎ，  ２００７，  Ｒｅｖ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，  １８：１１５−１３６；  Ｃａｕｃｈｉ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｈｅｕｖｅｌ，  ２００６，  Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒ．  Ｄｉｓ．，  ３：３３８−３５６；  Ｇｒｉｅｂ，  ２００４，  Ｆｏｌｉａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．，  ４２：２３９−２４８；  Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，  ８４：１１５１−６０；  Ｎｅｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７，  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ，  １７７２：２８５−２９７；  Ｖａｎ  Ｄａｍ  ａｎｄ  Ｄｅ  Ｄｅｙｎ，  ２００６，  Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．，  ５：９５６−９７０；  ａｎｄ  Ｓｈａｕｇｈｎｅｓｓｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  ＭｏＩ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，  ２４：２３−３２において考察される。
【００４６】
哺乳類に与えられるＨＤＡＣ３インヒビターの量は、ヒストン・アセチル化のレベルを復元するために適当ないかなる量（またはメッセンジャーＲＮＡまたはタンパク質表現のレベル）でもありえるそれに対する悩まされた哺乳類の健常な個人（例えば無影響の同胞）の中で代表する。管理が連続的に実行される場合、管理されるＨＤＡＣ３インヒビターの量は有効量またはその適当な分数でありえる。この種の総計は、年齢、物理条件、サイズ、重量、扱われている状態、状態のひどさおよびいかなる並列の処理を含むも個々の患者パラメータ次第である。例えば、神経組織の状態の開始を防止するかまたは遅延させるのに必要である有効量範囲は、扱われている状態の進行を阻害するための有効量範囲より低くありえる。適切な投薬を決定する要因は、当業者に周知で、ルーチン試験によって対象にされることができる。例えば、物理化学的、毒物学的および薬動力学の特性の決定は、標準化学薬品およびバイオアッセイを用いてなされることができて、数学的モデリング技法を用いることにより化学、薬理学的および毒物学的な技術において公知でありえる。治療的な有用性および一回分を盛っている療法は、この種の技術の結果から、そして、適当な薬動力学のおよび／または薬力学的モデルを用いることにより挿入されていることがありえる。患者に与えられるＨＤＡＣ３インヒビターの正確な量は、付き添いの医師の責任である。
【００４７】
概して、特殊（インヒビター（例えば、本願明細書において記載されている方法によって確認されるそれら）が哺乳類のｋｇ重量当たり０．１から３０ｍｇまで用量で経口的に、または、注入によって管理されることができるＨＤＡＣ３）において、２〜１５ｍｇ／ｋｇは、哺乳類の中で加重値を与える。成人の人間のための用量範囲は、通常、３５から１，０５０ｍｇ／日まで８から２，４００ｍｇ／日まで、例えば、ある。化合物の塩が投与される場合、投与される塩の量は塩基に関して算出される。
【００４８】
ＨＤＡＣ３インヒビター（例えば、本願明細書において記載されている方法によって確認されるそれら）は、多数の方法で管理されることができる。例えば、直腸に、局所的に、または、筋肉内、腹腔内皮下であるか静脈内注射によって、ＨＤＡＣ３インヒビターは、経口投与されることができる。好ましくは、インヒビターは、経口投与されるかまたは注入によってある。他のルートは、的状赤血球上へ、それの近くで、または、それの中で脊髄液および直接のはじめにに直接鞘内の管理を含む。投与経路は、扱われている状態およびその厳しさ次第である。ＨＤＡＣ３インヒビター（例えば、本願明細書において記載されている方法によって確認される）の毒性および治療有効性は、細胞培養または実験動物の標準製薬手順（例えば、ＬＤ５０（集団の５０％にとって致命的な用量）およびＥＤ５０（治療的に集団の５０％に効果的用量）を決定するための）で測定されることができる。毒性および治療効果の用量比は治療指数であり、ＬＤ５０と  ＥＤ５０  との比として表すことができる。高い治療的なインデックスを呈する化合物は、好まれる。他の実施形態では、治療係数は、ビトロ（例えば、ＨｅｐＧ２細胞または他の細胞系（発展ＩＣ５０））の細胞上のＨＤＡＣ３インヒビターの発展阻害力と比較して、ＨＤＡＣ３インヒビター（ＨＤＡＣ３  ＩＣ５０）のＨＤＡＣ３に特有の阻害力を検定することによって推定されることができる。増殖阻害性（例えば、細胞障害能または細胞分裂停止）効果とＨＤＡＣ３に特有の禁止効果間の比率は、治療係数の評価を提供する。
【００４９】
医薬品組成物
本願明細書において記載されている方法によって確認されるＨＤＡＣ３インヒビターは、適切であるかまたは医薬品組成物として公式化されて管理されることができる。
医薬品組成物は、ＨＤＡＣインヒビターの適当な量を、他の役立つ成分と同様に適当なキャリアと組み合わせて含む。
【００５０】
内服に適しているＨＤＡＣ３インヒビターの医薬品組成物は、（１）別々のユニット（例えば各々ＨＤＡＣ３インヒビターの予定価格を含んでいるカプセル、カシェ剤、錠剤またはトローチ剤）の形であることができる；粉または顆粒である（２）；食物塊、舐剤またはペーストである（３）；溶液または水性液体または非水溶液体のサスペンションである（４）；または油―水の液体エマルジョンまたはｗａｔｅｒ―油の液体がエマルジョンペンキで塗る（５）。口の局所投与に適している組成物は、例えばｂｕｃｃａｌｌｙに、または、舌下的に、トローチ剤を含む。非経口投与に適している組成物は、水性および非―水性の無菌サスペンションまたは注入溶液を含む。直腸管理に適している組成物は、坐薬として示されることができる。
【００５１】
ＨＤＡＣ３インヒビターの医薬品組成物は、固体または液体担体を使用して調製されることができる。固体または液体担体は、製剤の他の要素と互換性を持たなければならないおよび受取人に有害であってはならない。医薬品組成物が錠剤形である場合、ＨＤＡＣ３インヒビターは適切な規模の必要な圧縮性を有するキャリアを混ぜ合わせられて、要求される形状およびサイズにおいて圧縮される。組成が粉末形態においてある場合、キャリアは微細に分かれた主成分を有する混合物の微粉固体である。粉および錠剤は、主成分の最高９９％を含むことができる。適当な固形担体としては、例えば、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、砂糖、乳糖、デキストリン、デンプン、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリジン、低融点ワックスおよびイオン交換樹脂が挙げられる。固体担体は、香料、潤滑油、可溶化剤、沈澱防止剤、充填剤、滑走剤、圧縮援助、結合剤または錠剤―崩壊剤として作用することができる一つ以上の物質を含むことができる。適切なキャリアは、封入材料でもありえる。
【００５２】
組成物が溶液、サスペンション、エマルジョン、シロップ、エリキシルまたは加圧組成物である場合、液体担体が用いられることができる。この場合、ＨＤＡＣ３インヒビターは、薬学的に受け入れられる液体担体において溶かされるかまたは懸架される。好適な経口薬および非経口投与のための液体担体の例には、（１）水が含まれる。（２）アルコール、例えば一価アルコールおよび多価アルコール（例えばグリコールおよびそれらの誘導体）；そして、（３）油（例えば椰子油および落花生油）。非経口投与としては、キャリアは、エチルオレアートおよびイソプロピルミリステートなどのオイルエステルもまた、使用可能である。加圧組成物用のための液体担体は、ハロゲン化炭化水素または他の薬学的に受け入れられる推進体を含む。液体担体は、他の適切な医薬品添加物（例えば可溶化剤）を含むことができる；乳化剤；バッファ；防腐剤；甘味料；香料；沈澱防止剤；糊料；色；粘性調節装置；スタビライザ；浸透調節装置；セルロース誘導体（例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム）；抗酸化剤；そして、静菌剤。他のキャリアは、トローチ剤（例えば坐薬（例えばカカオ脂またはポリエチレングリコール）を調製する際に使用するそれらと同様に蔗糖、アカシア、トラガカンタ、ゼラチンおよびグリセリン）を調製するために使用するそれらを含む。
【００５３】
組成物が注入または注入によって静脈内に、または、腹膜内に投与されることになっている場合、ＨＤＡＣ３インヒビターの溶液は水において調合されることができる。そして、任意に無毒性界面活性剤を混ぜ合わせられる。分散系は、グリセリン、液体ポリエチレングリコール、トリアセチンおよびそれらの混合物において、そして、油において調合されることもできる。通常の貯蔵及び使用の条件下で、これらの調製物は微生物の生長を防止するための保存剤を含む。注入または注入に適している組成は主成分から成る滅菌水溶液または分散系または無菌の粉を含むことができる。そして、それは無菌の注射剤または不融性溶液または分散系の即座の準備に適している。そして、任意にリポソームに簡約される。全例において、最終的な剤形は、製造条件および記憶中で無菌でなければならなくて、流動的でなければならないおよび安定でなければならない。液体担体または溶媒は、上記の通りの溶媒または液体分散媒でありえる。正しい流動性は、たとえばリポソームの形成により、分散液の場合、必要とされる粒子サイズの維持により、又は界面活性剤の使用により維持され得る。微生物の作用の予防は、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、およびチメロサールなどの様々な抗菌剤および抗真菌剤により成し遂げることができる。たいていの場合、等張剤、例えば糖、バッファー又は塩化ナトリウムを含ませることが好ましいであろう。注入可能な組成物の長期の吸収は、例えば、一ステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンのような吸収遅延剤の組成物中での使用により、達成され得る。無菌の注射可能の溶液は、ＨＤＡＣ３インヒビターをフィルタ殺菌が続いて上で、必要に応じて、列挙される他の成分でさまざまなものを有する適当な溶媒の必要な量に取り入れることによって調合される。無菌の注射可能の溶液の準備のための無菌の粉の場合、好適な調整法は真空乾燥および凍結乾燥技術である。そして、それは、前に無菌のろ過した溶液に存在するいかなる添加された所望の成分に加えても、ＨＤＡＣ３インヒビターの粉を産生する。
【００５４】
医薬品組成物は、単位投与量またはマルチ用量形で、または、ＨＤＡＣ３インヒビターの遅いか制御解放を考慮に入れる形であることがありえる。各単位投与量は、錠剤、カプセルまたは包装された組成物（例えば、小包にされた粉、バイアル、アンプル、予備充填されたシリンジまたは小さい袋を含んでいる液体）の形であることができる。単位投与量の形態も、パッケージ形のいずれの種類の組成物の適当な数でありえる。マルチ用量の形態の医薬品組成物は、容器（例えば密封されたアンプルおよびバイアル）で包まれて、中にあることができる。この場合、ＨＤＡＣ３インヒビターは、凍結に格納されることができる―使用の前にすぐ滅菌液体担体の添加だけを必要としている状態を（凍結乾燥する）乾燥させる。加えて、即座の注入溶液およびサスペンションは、以前記載されている種類の無菌の粉、顆粒および錠剤から準備されることができる。
【実施例】
【００５５】
実施例１
ＲＧＦＡ８は、ＲＧＦ  Ａ８にせよ、Ｔｏが決定するＨＤＡＣ３の規定したＩｎｈｉｂｉｔｏｒである（Ｎ１−（２−アミノフェニル）−Ｎ７−ｐ−ｔｏｌｙｌｈｅｐｔａｎｅｄｉａｍｉｄｅ；ＷＯ  ２００７／０５８９２７は）いかなる特定のＨＤＡＣのための規定のもまたはＨＤＡＣｓ、ＲＧＦＡ８の活性およびＡ（ＴＳＡ）がそうであった周知のＨＤＡＣインヒビター毛スタチンのサブセットは個々の精製されたＨＤＡＣ酵素のパネルおよび核抽出物（ＨＤＡＣｓ．の混成を含んだ）にテストした。ＨＤＡＣ酵素阻害分析は、基本的にＢｅｃｋｅｒｓその他にて説明したように、精製されたＨＤＡＣｓ  １―１０、２００７、Ｉｎｔ．Ｊ。Ｃａｎｃｅｒ．１２１を使用して実行された：１１３８―４８、そして、Ｐｅｒｅｚ―Ｂａｌａｄｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊ。Ｍｅｄ。化学、５０：２４９７―２５０５。核抽出物を用いた抑制分析法は、Ｈｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．２００６、Ｎａｔにて説明したように、基本的に実行された。化学Ｂｉｏｌ．２：５５１―５５８。簡潔には、精製されたＨＤＡＣｓまたは核抽出物は、検定される化合物の非存在下でアセチル化された基質によって暖められて、化合物の濃度増大によってあった。基質消費速度脱アセチルは各状態の下で測定された、そして、各ＨＤＡＣに関する最大半減抑制濃度は標準手段で測定された。
【００５６】
０．２０の±０．２３μＭ（表１）の最大半減抑制濃度（ＩＣ５０）については、ＲＧＦＡ８は、ＨＤＡＣ３に最も作動中だった。少なくとも１０倍のより小さい活性は、他のＨＤＡＣｓ上の、または、核抽出物上のＲＧＦＡ８によって観察された。ＴＳＡがＲＧＦ８より多くのＨＤＡＣ３の強力阻害剤であるとわかったにもかかわらず、ＴＳＡはＨＤＡＣ３（０．００９６の±０．００７１のＩＣ５０）と比較して、ＨＤＡＣ６（０．００１４の±０．０００６のＩＣ５０）およびＨＤＡＣｌ（０．００６７の±０．００１１のＩＣ５０）上のより大きな阻害力を有した。ＴＳＡによるμＭ以下抑制は、ＨＤＡＣｓがテストした全てのために観察された。
【００５７】
表１．ＲＧＦＡ８およびＴＳＡによるＨＤＡＣ活性の抑制
【００５８】
【表１】
2011500090.tif 000002
この実施例は、ＲＧＦＡ８が特に他のヒトＨＤＡＣｓと比較して、ＨＤＡＣ３を阻害することを証明する。ＨＤＡＣ３に特有であるＨＤＡＣインヒビターは、神経学的な条件（例えば、フリートライヒ運動失調）を扱うために用いることができる。
【００５９】
実施例２
Ｆｒａｔａｘｉｎ  ＴｏのＲＧＦＡ８  Ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎは、ＲＧＦ  Ａ８または他の化合物がフラタキシンの発現を増加させることができるかどうか、通常のドナーから末しょう血液から分離されるヒトリンパ球が１―３０のμＭ  ＲＧＦＡ８によって暖められたと決定する。フラタキシン・メッセンジャーＲＮＡレベルは、定量的ＲＴ―ＰＣＲによって測定されて、ハウスキーピング遺伝子ＧＡＤＰＨの表現レベルに正常化された（Ｈｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２：５５１―５５８（２００６））。
【００６０】
ビヒクル制御（図１、通常のリンパ球）と比較して１６―折り目について増加を最大を観察して、ＲＧＦＡ８は、テストされるすべての濃度で、通常のリンパ球または患者リンパ球のフラタキシンの発現を増加させた。この実施例は、ＲＧＦＡ８がフラタキシン表現を増加させることによってフリートライヒ運動失調を有する患者を治療するために用いることができることを示す。
【００６１】
実施例３
他のＨＤＡＣｓと関連して、ＨＤＡＣ３  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  Ａ化学ライブラリのための画面は、特にＨＤＡＣ３を阻害した化合物を確認するために映し出された。
簡潔には、試験化合物の化学ライブラリは標準有機化学方法によって作成された、そして、精製されたＨＤＡＣｓ  １―１０上の化合物の阻害力は決定された（実施例１を参照）。２０以上の化合物は、確認された。典型的な化合物（ＨＤＡＣｌのためのそれらの阻害力）ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、ＨＤＡＣ５およびＨｅｐＧ２細胞上のそれらの発展阻害力は、表２に示される。ＨＤＡＣ阻害力は、実施例１にて説明したように、基本的に測定された。ＨｅｐＧ２細胞の成長阻害は、５χｌＯ４細胞／ｍｌの密度で化合物の階段希釈をＨｅｐＧ２細胞に加えて、３７  ０Ｃ（５％のＣＯ２）で７２時間の混合を暖めることで測定された。生菌は、それから、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６を使用して、測定された。ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ細胞増殖反応測定法（プロメガ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）。ＲＧＦＡ８および周知のＨＤＡＣインヒビターＭＳ―２７５の活性も、示される。
【００６２】
表２  確認されたＨＤＡＣ３阻害剤の活性
【００６３】
【表２】
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化合物のための阻害力の活性は、ＨＤＡＣ３（表３）のためのＩＣ５０によってＨＤＡＣｓ  １、２および５のためのＩＣ５０を分けることによって決定された。各化合物のための推定された治療係数は、ＨＤＡＣ３活性（表３）のためのＩＣ５ＯによってＨｅｐＧ２成長ＩＣ５０を分けることによって決定された。更に、化合物は、通常のドナー（実施例２を参照）の末しょう血液から分離されるヒトリンパ球のフラタキシン（ＦＸＮｌ）メッセンジャーＲＮＡの表示を増加させるために、その活性のための定量的ＲＴ―ＰＣＲによって検定された。簡潔には、化合物は１０のμＭの濃度でリンパ球に加えられた、そして、ＦＸＮｌメッセンジャーＲＮＡの表示の増加はビヒクル制御と比較して決定された。大部分の確認された化合物は１０のμＭ（表３）の濃度でフラタキシン・メッセンジャーＲＮＡ表現を増加させた。そして、これらの化合物がＦｒｉｅｄｒｉｃｈの運動失調症の処理および本願明細書において記載されている他の神経障害に役立つことがありえることを示した。化合物６は、しかしながら、ＨＤＡＣ３の強い抑制を示さなくて、フラタキシン表現を増加させるために作動中でなかった。ＭＳ―２７５は、フラタキシン・メッセンジャーＲＮＡ表現をかなり増加させたが、長期の使用のためにあまりに細胞毒性でもよい。化合物２１は、強いＨＤＡＣ３阻害力を有する化合物およびフラタキシン表現を増加させるのに効果的である比較的低い細胞毒性を例証する。
【００６４】
表３  相対的ＨＤＡＣ阻害活性およびＦＸＮ１発現への影響
【００６５】
【表３】
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他の実施形態
本発明の多数の実施形態が記載されていたにもかかわらず、さまざまな修正が本発明の精神と範囲から逸脱することなくなされることができることが理解されよう。したがって、他の実施形態は、以下の請求項の範囲内である。
【図１】
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【国際調査報告】
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