(57)【要約】  本発明は、ＶＥＧＦ結合ペプチドを提供する。さらに、本発明は、単独でおよび他の抗血管形成分子と共に抗体とコンジュゲートしたＶＥＧＦペプチドを提供する。異常な血管形成に関連する障害を治療する方法を含めた、ペプチドおよび化合物の様々な使用を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
［ＶＥＧＦ−ペプチド］が以下の配列を有するペプチドである、式：Ｒ１−［ＶＥＧＦ−ペプチド］−Ｒ２の化合物、または薬学的に許容できるその塩：
Ｘ１−Ｘ２−Ｐ３−Ｎ４−Ｃ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｖ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｗ１３−Ｘ１４−Ｃ１５−Ｆ１６−Ｅ１７−Ｒ１８−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３（配列番号１３１）［式中、Ｒ１は、存在しない、ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）Ｃ６Ｈ５、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜５Ｍｅ、アミド−２−ＰＥＧ、またはＮ−アシルもしくはＮ−アルキルアミノ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、Ｒ２は、存在しない、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨ（ＣＨ３）、ＮＨＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣ６Ｈ５、ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、ＮＨＯＣＨ３、ＮＨＯＣＨ２ＣＨ３、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、Ｘ１は疎水性アミノ酸残基であり、Ｘ２は負荷電残基であり、Ｘ６は負荷電残基であり、Ｘ７は疎水性アミノ酸残基であり、Ｘ８は環構造を含む残基であり、Ｘ１０は疎水性アミノ酸であってよく、Ｘ１１は芳香族アミノ酸であり、Ｘ１２は、Ｖ、ＥおよびＫａｃからなる群から選択され、Ｘ１４は、ＥまたはＶであり、Ｘ１９は、任意の疎水性アミノ酸残基、またはそのＤ−異性体であってよく、Ｘ２０は、存在しなくてもよく、あるいは任意の中性、疎水性もしくは芳香族のアミノ酸またはそのＤ−異性体であってよく、Ｘ２１は、存在しなくてもよく、あるいは任意の正荷電残基もしくは任意の脂肪族の非極性残基またはそのＤ−アイソフォームであってよく、Ｘ２２は、存在しなくてもよく、またはＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｆ、Ｅ、Ｋａｃ、もしくはそのＤ−異性体からなる群から選択されてもよく、Ｘ２３は、存在しなくてもよく、またはＧ、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｑ、Ｅ、Ｆ、Ｔ、Ｗ、Ｓ、Ｙ、およびＫａｃならびにそのＤ−異性体からなる群から選択され、Ｘ１、Ｘ２、Ｐ３、Ｎ４、Ｖ９、Ｘ１０、Ｘ１２、Ｘ１４、Ｅ１７およびＣ末端残基からなる群のうちの１つは、直接または中間体リンカーを介して抗体の結合部位と共有結合している求核性側鎖またはＮ末端アミノ基もしくはＣ末端カルボキシル基を含む連結残基で置換されていてもよく、連結残基は、Ｋ、Ｒ、Ｙ、Ｃ、Ｔ、Ｓ、リシンの相同体、ホモシステイン、ホモセリン、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｎ末端残基およびＣ末端残基からなる群から選択される］。
【請求項２】
［ＶＥＧＦ−ペプチド］に、配列番号３４〜１３６および配列番号１９２〜１９５からなる群から選択される１つまたは複数と実質的に相同的な配列が含まれる、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
［ＶＥＧＦ−ペプチド］に、Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）（配列番号７８）と実質的に相同的な配列が含まれる、前記請求項のいずれかに記載の化合物。
【請求項４】
Ｍが、式（配列番号１９５）：｛Ｃ（Ｏ）ＣＨ３｝−Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｋ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）−｛ＮＨ２｝を含む連結残基Ｋで置換されている、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
連結残基が存在し、連結残基の側鎖と共有結合した直鎖状または分枝状リンカーをさらに含む、前記請求項に記載の化合物。
【請求項６】
リンカーが式ＬまたはＬ’を含み、Ｌが、式：−［コネクター］−Ｘ−Ｙ−Ｚまたは−Ｘ−Ｙ−Ｚ−のものであり、Ｌ’が、式：−［コネクター］−Ｘ−Ｙ−Ｚ’または−Ｘ−Ｙ−Ｚ’−のものであり、式中、リンカーが分枝状であるとき、［コネクター］は存在し、存在する場合は連結残基と共有結合しており、１つまたは複数の追加の活性分子Ｘは、Ｃ、Ｈ、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、Ｆ、ＣＬ、Ｂｒ、およびＩからなる群から選択される任意の原子が含まれる生物学的に適合性がある接続鎖であり、ポリマーまたはブロックコポリマーを含んでいてもよく、リンカーが直鎖状の場合は連結残基と共有結合しており、Ｙは存在し、置換されていてよい構造：
【化１】
2011522794.tif 000125
［式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、およびｅは、独立して、炭素または窒素であり、ｆは、炭素、窒素、酸素、または硫黄である］を有し、Ｙは、十分な原子価の任意の２つの環位置で独立してＸおよびＺと接着しており、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、またはｆのうちの４つ以下のみが同時に窒素であり、好ましくは、環構造中のａ、ｂ、ｃ、ｄ、およびｅは、それぞれ炭素であり、Ｚは、存在する場合は
【化２】
2011522794.tif 000126
の構造を有し、Ｚ’は、存在する場合は
【化３】
2011522794.tif 000127
［式中、ｑ＝０〜５である］の構造を有し、抗体−Ｎ−は、存在する場合は、抗体の結合部位中の側鎖との共有結合である、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘが
【化４】
2011522794.tif 000128
であり、Ｘ−Ｙが
【化５】
2011522794.tif 000129
［式中、ｖおよびｗは、Ｘの主鎖の長さが６〜１２個の原子であるように選択され、Ｒｂは、水素、置換もしくは非置換のＣ１〜１０アルキル、置換もしくは非置換のＣ３〜７シクロアルキル−Ｃ０〜６アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−Ｃ０〜６アルキルであり、ｖ＝１または２であり、ｗ＝１または２であり、Ｒｂは好ましくは水素である］であり得る、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
リンカーが直鎖状であり、［コネクター］は存在せず、Ｚは、存在する場合は化合物１００１〜１０８０からなる群から選択され、Ｚ’は、存在する場合は化合物２００１〜２０８０からなる群から選択される、請求項６から７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｚ’が存在し、化合物２０１８の式を含む、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
［活性分子−１］が請求項５〜９のいずれか一項に記載の［ＶＥＧＦ−ペプチド］であり、［コネクター］が［ＶＥＧＦ−ペプチド］および［活性分子−２］の両方と共有結合しており、［コネクター］がリンカーＬまたはＬ’とも共有結合している、以下の式を含む化合物。
【化６】
2011522794.tif 000130
【請求項１１】
［コネクター］が式：−［ＡＭ１−スペーサー］−［分枝］−［ＡＭ２−スペーサー］−を含み、［ＡＭ−１−スペーサー］および［ＡＭ−２−スペーサー］は、それぞれ独立して、［分枝］と共有結合した、生物学的に適合性があるポリマー、ブロックコポリマー、Ｃ、Ｈ、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、もしくはその塩、アルキル、アルケニル、アルキニル、オキソアルキル、オキソアルケニル、オキソアルキニル、アミノアルキル、アミノアルケニル、アミノアルキニル、スルホアルキル、スルホアルケニル、スルホアルキニル、ホスホアルキル、ホスホアルケニル、またはホスホアルキニル基であり、［分枝］は、少なくとも３個の反応基を有する分子であり、［ＡＭ−１−スペーサー］は、［分枝］および［活性分子−１］と共有結合しており、［ＡＭ−２−スペーサー］は、［分枝］および［活性分子−２］と共有結合している、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
［ＡＭ−１−スペーサー］および［ＡＭ−２−スペーサー］が、それぞれ独立して、その対応する活性分子および［分枝］と共有結合を形成することができる中性の水溶性分子であり、アミノポリエチレングリコール酸、ポリエチレングリコール二価酸、アミノアルカン酸、アミノアルカン酸、ポリグリシン、２−ＰＥＧ、４−ＰＥＧおよび６−ＰＥＧからなる群から選択され、それぞれが４−ＰＥＧであり得る、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
［分枝］が３つの直交する反応基を含む化学部分であり、システイン分枝、ジアミノプロピオン酸系の分枝、ジアミノブタン酸系の分枝、オルニチン系の分枝、リシン系の分枝、ホモシステイン分枝、ビスマレイミド分枝、マレイミド酸分枝、その誘導体および相同体、ならびに以下の構造からなる群から選択される、請求項１０から１２のいずれか一項に記載の化合物：
【化７】
2011522794.tif 000131
【請求項１４】
［分枝］−Ｌが以下からなる群から選択される、請求項１３に記載の化合物：
【化８】
2011522794.tif 000132
【請求項１５】
［活性分子２］が式：Ｒ３−［Ａｎｇ２−ペプチド］−Ｒ４のＡｎｇ−２結合ペプチドであり、式中、Ｒ３は、存在しない、ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）Ｃ６Ｈ５、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜５Ｍｅ、アミド−２−ＰＥＧ、Ｎ−アシルおよびＮ−アルキル、アミノ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、Ｒ４は、存在しない、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨ（ＣＨ３）、ＮＨＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣ６Ｈ５、ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、ＮＨＯＣＨ３、ＮＨＯＣＨ２ＣＨ３、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、［Ａｎｇ２−ペプチド］は、Ｑ１  Ｘ２  Ｙ３  Ｑ４  Ｘ５  Ｌ６  Ｄ７  Ｅ８  Ｘ９  Ｄ１０  Ｘ１１  Ｘ１２  Ｘ１３  Ｘ１４  Ｄ１５  Ｘ１６  Ｆ１７  Ｍ１８  Ｘ１９  Ｑ２０  Ｑ２１  Ｇ２２（配列番号１０７）と実質的に相同的な配列を含み、式中、ｘ２は、Ｋ、Ｎ、Ｒ、Ｈ、Ｋａｃ、Ｎｉｃｋ、およびＣｂｃＫからなる群から選択され、Ｘ５は、Ｐ、ｈＰ、ｄｈＰ、およびＢｎＨＰからなる群から選択され、Ｘ９は、Ｌ、Ｉ、ＴｈＡ、およびＫａｃからなる群から選択され、Ｘ１１は、Ｑ、Ｎ、Ｃ、Ｋ、Ｋａｃ、Ｄａｂ、およびＤａｐからなる群から選択され、Ｘ１２は、Ｌ、ＨＬ、Ｎｖａ、Ｉ、ＨｃｈＡ、ＨＦ、およびＴｈＡからなる群から選択され、Ｘ１３は、Ｌ、ＨＬ、Ｎｖａ、Ｉ、ＨｃｈＡ、ＨＦ、およびＴｈＡからなる群から選択され、Ｘ１４は、芳香族残基からなる群から選択され、Ｘ１６は、ＱおよびＮからなる群から選択され、Ｘ１９は、ＬおよびＩからなる群から選択され、［Ａｎｇ−２−ペプチド］が、Ａｎｇ２−連結残基の求核性側鎖またはＮ末端アミノ基もしくはＣ末端カルボキシル基を介して［コネクター］と共有結合しており、Ａｎｇ２−連結残基が、Ｋ、Ｒ、Ｙ、Ｃ、Ｔ、Ｓ、リシンの相同体、ホモシステイン、ホモセリン、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｎ末端残基およびＣ末端残基を含む群から選択され、Ｑ１、Ｅ８、Ｘ９、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｄ１５、Ｘ１６、Ｍ１８、Ｘ１９またはＧ２２のうちの１つが、Ａｎｇ２−連結残基で置換されている、請求項１０から１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
［Ａｎｇ２−ペプチド］が、配列番号１３７〜１９１からなる群から選択される１つまたは複数の化合物と実質的に相同的な配列を含む、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ１がＣ（Ｏ）ＣＨ３であり、Ｒ２がＮＨ２であり、Ｒ１−［Ａｎｇ−ペプチド］−Ｒ２が（配列番号１５３）：
｛Ｃ（Ｏ）ＣＨ３｝−Ｑ−（Ｋａｃ）−Ｙ−Ｑ−Ｐ−Ｌ−Ｄ−Ｅ−（Ｋａｃ）−Ｄ−Ｋ−Ｔ−Ｌ−Ｙ−Ｄ−Ｑ−Ｆ−Ｍ−Ｌ−Ｑ−Ｑ−Ｇ−｛ＮＨ２｝であり、位置１１のＫが、［コネクター］と共有結合したＡｎｇ２−連結残基である、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
［ＶＥＧＦ−ペプチド］が、ＶＥＧＦ−連結残基の求核性側鎖またはＮ末端アミノ基もしくはＣ末端カルボキシル基を介して［コネクター］と共有結合しており、ＶＥＧＦ−連結残基が、Ｋ、Ｒ、Ｙ、Ｃ、Ｔ、Ｓ、リシンの相同体、ホモシステイン、ホモセリン、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｎ末端残基およびＣ末端残基を含む群から選択される、請求項１０から１７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
化合物５００１〜化合物５０２８および化合物５０３１〜化合物５０７４からなる群から選択され、化合物５０５３、５０６０、５０６１および５０６２からなる群から選択され得る、請求項１０から１８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｚ基が、存在する場合は、抗体の結合部位と共有結合している、請求項１０から１９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
抗体が存在し、化合物が６００１〜６０２６、６０２８、６０２９、および６０３１〜６０７４からなる群から選択され、化合物６０５３、６０６０、６０６１および６０６２からなる群から選択され得る、請求項１０から２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
化合物６０５３の式を含む、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
抗体が存在し、触媒抗体であり、アルドラーゼ抗体、βラクタマーゼ抗体、エステラーゼ抗体、およびアミダーゼ抗体からなる群から選択され得る、請求項６から２２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２４】
抗体が存在し、ｈ３８ｃ２からのＶＨおよびＶＬドメインを含む完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ＶＨ、ＶＬ、二重特異性抗体、ミニボディー、またはｈ３８ｃ２からのＶＨおよびＶＬドメインならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４からなる群から選択される定常ドメインを含む完全長抗体であり、ｈ３８Ｃ２  ＩｇＧ１であり得る、請求項６から２３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２５】
治療上有効な量の前記請求項のいずれかに記載の化合物を含み、治療上有効な量の１つまたは複数の、好ましくは５−フルロウラシル、イリノテカン、タキソテール、スニチニブ、アキシチニブ、オキサリプラチン、ベバシズマブ、およびセツキシマブからなる群から選択される化合物である化学療法剤を任意選択でさらに含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗血管形成活性を保有する新規化合物ならびにこれらの化合物を作製および使用する方法に関する。具体的には、本発明は、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）と結合するペプチドおよびこれらのペプチドを取り込んだ巨大分子、ならびにそれに関連する方法および使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
血管形成は、新しい血管が形成される基礎的なプロセスであり、繁殖、発生および創傷修復など様々な正常な身体の活動に必須である。血管形成は、正常状態の下では非常に制御されたプロセスであるが、多くの疾患（「血管形成病」として特徴づけられる）が非制御の血管形成によって引き起こされるまたは悪化する。たとえば、眼球の血管新生が盲目の最も一般的な原因として関連づけられている。関節炎などの特定の既存の状態では、新しく形成された毛細血管が関節に浸潤し、軟骨を破壊する。糖尿病では、網膜内に形成された新しい毛細血管が硝子体に浸潤し、出血し、盲目を引き起こす。また、固形腫瘍の成長および転移も血管形成依存性である（Ｊ．Ｆｏｌｋｍａｎ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、４６：４６７〜４７３（１９８６）、Ｊ．Ｆｏｌｋｍａｎ、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．、８２：４〜６（１９８９））。たとえば、２ｍｍより大きくまで肥大する腫瘍は、新しい毛細血管の成長を誘導することによってそれ自身の血液供給を得ることが示されている。これらの新しい血管が腫瘍中に包埋された後、これらは、腫瘍細胞が循環に入って肝臓、肺、および骨などの遠位に転移する手段を提供する（Ｎ．Ｗｅｉｄｎｅｒ他、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３２４：１〜８（１９９１））。
【０００３】
血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）は非常に強力な血管形成因子として同定されており、多くのヒト腫瘍の成長および転移に必要である。多くの研究が、血管形成または転移を制限または予防するためにＶＥＧＦ経路を阻害する試みを焦点としている。Ｆａｉｒｂｒｏｔｈｅｒ他：「Ｎｏｖｅｌ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｔｏ  ｂｉｎｄ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｔａｒｇｅｔ  ｔｈｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ」（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９８、３７、１７７５４〜１７７６４）は、ＶＥＧＦと結合する、変動する能力を有するペプチドを開示している。血管形成関連因子アンジオポイエチン−２（「Ａｎｇ−２」）と結合する様々なペプチドが同定されている（Ｏｌｉｎｅｒ，Ｊ．他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ、２０４（６）、５０７〜５１６（２００４））。Ａｎｇ−２結合ペプチドは、抗血管形成活性を保有することが示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
既知の化合物を超える改善された特徴、たとえばＶＥＧＦとの結合の改善などを示す化合物を提供することが望ましい。ＶＥＧＦおよびＡｎｇ２のどちらとも結合を示す化合物を提供することが、さらに望ましい。
【０００５】
本明細書中における任意の技術への言及は、言及した技術が一般的な常識の一部を形成するということのいかなる承認でも示唆でもなく、また、そう捉えられるべきでない。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の［ＶＥＧＦ−ペプチド］
本発明は、ヒトＶＥＧＦ（配列番号３によって例示）と結合することができるペプチド、化合物、および医薬組成物を提供する。したがって、一部の態様では、本発明は、Ｖ１−Ｅ２−Ｐ３−Ｎ４−Ｃ５−Ｄ６−Ｉ７−Ｈ８−Ｖ９−Ｍ１０−Ｗ１１−Ｖ１２−Ｗ１３−Ｘ１４−Ｃ１５−Ｆ１６−Ｅ１７−Ｒ１８−Ｘ１９（配列番号１２２）の配列と実質的に相同的な配列が含まれるペプチドを提供する。式中、Ｘ１４は、ＥまたはＶであり、Ｘ１９は、天然もしくは非天然の疎水性アミノ酸、またはそのＤ−異性体である。
【０００７】
驚くべきことに、このクラスのペプチド、およびその誘導体（以下に詳述する）が、関連する構造のペプチドを超える、改善されたＶＥＧＦとの結合を実証することが見い出された。特に、位置１２を中性の疎水性残基、特にバリンに変異させることで、この位置にグルタミン酸などの負荷電基を有するペプチドを超える、改善された結合特徴がもたらされる。一部の実施形態では、本発明は、配列番号１２２と実質的に相同的な配列が含まれるペプチドを提供する［ただし、Ｖ１２はＥで置換されていない］。一部の実施形態では、Ｘ１９はＬである。Ｘ１９はＤ−Ｌｅｕであり得る。Ｘ１９は、ＩなどのＬの保存的置換、またはＡもしくはＶなどの他の疎水性残基、または前述のうちの任意のもののＤ−異性体であり得る。
【０００８】
本発明のさらなる誘導体は、Ｃ末端に少なくとも１〜４個の残基の付加を提供する。一部の実施形態は、Ｃ末端に２〜４個の残基の付加を提供する。一部の実施形態は、Ｃ末端に２個の残基の付加を提供する。一部の実施形態は、Ｃ末端に３個の残基の付加を提供する。一部の実施形態は、Ｃ末端に４個の残基の付加を提供する。
【０００９】
したがって、本発明は、Ｖ１−Ｅ２−Ｐ３−Ｎ４−Ｃ５−Ｄ６−Ｉ７−Ｈ８−Ｖ９−Ｍ１０−Ｗ１１−Ｖ１２−Ｗ１３−Ｘ１４−Ｃ１５−Ｆ１６−Ｅ１７−Ｒ１８−Ｘ１９−Ｘ２０（配列番号１２３）の配列と実質的に相同的な配列が含まれるペプチドも提供する。式中、Ｘ２０は、任意の中性、疎水性または芳香族のアミノ酸である。Ｘ２０は、Ｙ、Ｆ、Ｗなどの任意の芳香族アミノ酸、またはそのＤ−アイソフォームであり得る。Ｘ２０は、Ｍ、Ｉ、Ｌ、Ｎｌｅ、Ａなどの任意の中性の疎水性アミノ酸、またはそのＤ−アイソフォームであり得る。
【００１０】
一部の態様では、本発明は、Ｖ１−Ｅ２−Ｐ３−Ｎ４−Ｃ５−Ｄ６−Ｉ７−Ｈ８−Ｖ９−Ｍ１０−Ｗ１１−Ｖ１２−Ｗ１３−Ｘ１４−Ｃ１５−Ｆ１６−Ｅ１７−Ｒ１８−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１（配列番号１２４）の配列と実質的に相同的な配列が含まれるペプチドを提供する。式中、Ｘ２１は任意のアミノ酸である。一部の態様では、ｘ２１は、Ｇ、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｒ、もしくはＫ（ａｃ）などの任意の中性または正荷電のアミノ酸、またはそのＤ−アイソフォームであり得る。たとえば、Ｘ２１はＤ−Ａｌａであり得る。
【００１１】
一部の態様では、本発明は、Ｖ１−Ｅ２−Ｐ３−Ｎ４−Ｃ５−Ｄ６−Ｉ７−Ｈ８−Ｖ９−Ｍ１０−Ｗ１１−Ｖ１２−Ｗ１３−Ｘ１４−Ｃ１５−Ｆ１６−Ｅ１７−Ｒ１８−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｘ２２（配列番号１２５）の配列と実質的に相同的な配列が含まれるペプチドを提供する。式中、Ｘ２２は、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｅ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｆ、Ｅなどの任意の脂肪族、極性、もしくは負荷電のアミノ酸、またはそのＤ−異性体である。
【００１２】
一部の態様では、本発明は、Ｖ１−Ｅ２−Ｐ３−Ｎ４−Ｃ５−Ｄ６−Ｉ７−Ｈ８−Ｖ９−Ｍ１０−Ｗ１１−Ｖ１２−Ｗ１３−Ｘ１４−Ｃ１５−Ｆ１６−Ｅ１７−Ｒ１８−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３（配列番号１２６）の配列と実質的に相同的な配列が含まれるペプチドを提供する。式中、Ｘ２３は任意のアミノ酸である。Ｘ２３は、Ｇ、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｑ、Ｅ、Ｆ、Ｔ、Ｗ、Ｓ、およびＹ、ならびにそのＤ−異性体からなる群から選択され得る。Ｘ２３は、Ｇ、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｑ、Ｅ、Ｆ、Ｔ、Ｓ、およびＹ、ならびにそのＤ−異性体からなる群から選択され得る。一部の態様では、Ｘ２３は、二重環を有する側鎖を含まない。一部の態様では、Ｘ２３はＷではない。一部の態様では、Ｘ２３は、Ｅ、Ｔ、Ｓ、Ｌ、もしくはＦ、またはそのＤ−異性体であり得る。
【００１３】
一部の実施形態では、カルボキシル末端の５個の残基のうちの少なくとも１個がＤ−異性体であることが好ましい場合があることが、見い出された。一部の態様では、５個のＣ末端に位置する残基のうちの少なくとも２個がＤ−異性体である。一部の態様では、５個のＣ末端に位置する残基のうちの３個以下がＤ−異性体である。一部の態様では、５個のＣ末端に位置する残基のうちの１〜３個がＤ−異性体である。一部の態様では、カルボキシル末端の４個の残基のうちの少なくとも１個がＤ−異性体である。一部の態様では、４個のＣ末端に位置する残基のうちの少なくとも２個がＤ−異性体である。一部の態様では、４個のＣ末端に位置する残基のうちの３個以下がＤ−異性体である。一部の態様では、４個のＣ末端に位置する残基のうちの１〜３個がＤ−異性体である。これらのそれぞれについて、Ｘ１９の後に少なくとも２個、好ましくは少なくとも３個の追加の残基が存在することが好ましい。最適化された数のＤ−異性体をＣ末端に提供することにより、Ｃ末端における酵素分解、特に残基Ｅ１７とＲ１８との間の酵素分解、および残基Ｒ１８とＸ１９との間の酵素分解に対する耐性の増加の利点がもたらされることが見い出された。
【００１４】
本発明の一部の態様では、Ｘ１９はＬであってよく、Ｘ２０は存在し、Ｙであってよく、Ｘ２１は存在し、脂肪族の疎水性アミノ酸であってよく（Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｖ、Ｇから選択され得る）、Ｘ２２は存在し、疎水性アミノ酸である（Ｌ、Ｐ、Ｖから選択され得る）。特定の実施形態では、Ｘ１９、Ｘ２１およびＸ２２のうちの２つはＤ−異性体である。一部の実施形態では、Ｘ２３は、存在しても存在しなくてもよい。
【００１５】
特定の態様では、本発明の特定のペプチドおよび化合物には、配列番号３６〜１０６のうちの１つまたは複数と実質的に相同的なペプチド配列が含まれ得る。
【００１６】
別の態様では、本発明は、Ｖ１−Ｅ２−Ｐ３−Ｎ４−Ｃ５−Ｄ６−Ｉ７−Ｈ８−Ｖ９−Ｍ１０−Ｗ１１−Ｅ１２−Ｗ１３−Ｅ１４−Ｃ１５−Ｆ１６−Ｅ１７−Ｒ１８−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３（配列番号１２７）の配列と実質的に相同的な配列が含まれるペプチドを提供する。式中、Ｘ１９は、天然もしくは非天然の疎水性アミノ酸、またはそのＤ−異性体であり、Ｘ２０は、芳香族アミノ酸、中性アミノ酸、疎水性アミノ酸もしくは極性アミノ酸、またはそのＤ−異性体であり、Ｘ２１は、疎水性アミノ酸もしくは正荷電アミノ酸、またはそのＤ−異性体であり、Ｘ２２は存在しないか、または疎水性アミノ酸、芳香族アミノ酸、負荷電アミノ酸、もしくはそのＤ−異性体であり、Ｘ２３は存在しないか、または芳香族アミノ酸、中性アミノ酸、疎水性アミノ酸もしくはそのＤ−異性体である。Ｘ１９はＬであり得る。代替実施形態では、Ｘ１９はＤ−Ｌｅｕである。Ｘ１９は、ＩなどのＬの保存的置換、またはＡもしくはＶなどの他の疎水性残基、または前述のうちの任意のもののＤ−異性体であり得る。Ｘ２０は、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｙ、Ｗ、Ｆ、Ｍ、Ｓ、およびＴまたはそのＤ−異性体からなる群から選択され得る。Ｘ２０は、Ａ、Ｙ、Ｆ、Ｍ、およびＳまたはそのＤ−異性体からなる群から選択され得る。Ｘ２１は、Ｋ、Ｒ、Ｈ、オルチニン、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｉ、およびＬまたはそのＤ−異性体からなる群から選択され得る。Ｘ２１は、Ｋ、Ｒ、およびＧまたはそのＤ−異性体からなる群から選択され得る。Ｘ２０が疎水性または芳香族である場合、Ｘ２１は正荷電アミノ酸であり得る。Ｘ２０がＡ、ＦまたはＹのうちの１つである場合、Ｘ２１は、ＫもしくはＲまたはそのＤ−異性体のうちの１つであり得る。Ｘ２１が疎水性である場合、Ｘ２０は極性であり得る。Ｘ２２は、存在する場合は、Ｅ、Ｄ、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ｗ、Ｙ、およびＦまたはそのＤ−異性体からなる群から選択され得る。Ｘ２２は、存在する場合は、Ｅ、ＧおよびＷまたはそのＤ−異性体からなる群から選択され得る。Ｘ２１正荷電残基である場合、Ｘ２２は、存在する場合は、負荷電残基であり得る。Ｘ２１がＫである場合、Ｘ２２はＥであり得る。Ｘ２３は、存在する場合は、Ｗ、Ｙ、Ｆ、Ｇ、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、およびＭ、またはそのＤ−異性体からなる群から選択され得る。Ｘ２３は、存在する場合は、Ｗ、Ｆ、Ｇ、Ａ、Ｌ、およびＭ、またはそのＤ−異性体からなる群から選択され得る。
【００１７】
特定の態様では、本発明の特定のペプチド、化合物および医薬組成物には、以下のうちの１つまたは複数と実質的に相同的なペプチド配列が含まれ得る：
配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１。
【００１８】
本発明のペプチドは、診断、スクリーニングおよび治療学を含めた様々な用途に使用することができる。本発明のペプチドおよび化合物は、治療用途で直接用いてもよく、または、半減期（ＰＫ）の増加などのさらなる治療的価値をもたらすより大きな分子と共有もしくは非共有結合して使用してもよい。半減期の増加をもたらし得る分子の例には、タンパク質、ポリペプチド、抗体、抗体断片、特に抗体のＦｃドメインが含まれる。
【００１９】
本発明は、式：Ｒ１−［ＶＥＧＦ−ペプチド］−Ｒ２の化合物を提供する
［式中、［ＶＥＧＦ−ペプチド］は、Ｘ１−Ｘ２−Ｐ３−Ｎ４−Ｃ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｖ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｗ１３−Ｘ１４−Ｃ１５−Ｆ１６−Ｅ１７−Ｒ１８−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３（配列番号１３１）の配列と実質的に相同的な配列が含まれるペプチドであり、Ｒ１は、存在しない、ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）Ｃ６Ｈ５、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜５Ｍｅ、アミド−２−ＰＥＧ、Ｎ−アシルおよびＮ−アルキル、アミノ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、Ｒ２は、存在しない、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨ（ＣＨ３）、ＮＨＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣ６Ｈ５、ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、ＮＨＯＣＨ３、ＮＨＯＣＨ２ＣＨ３、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、Ｘ１は疎水性アミノ酸残基であり、Ｘ２は負荷電残基であり、Ｘ６は負荷電残基であり、Ｘ７は疎水性アミノ酸残基であり、Ｘ８は環構造を含む残基であり、Ｘ１０は、Ｍまたは任意の疎水性アミノ酸であってよく、Ｘ１１は芳香族アミノ酸であり、Ｘ１２は、Ｖ、ＥおよびＫａｃからなる群から選択され、Ｘ１４は、ＥまたはＶであり、Ｘ１９は、任意の疎水性アミノ酸残基、またはそのＤ−異性体であってよく、Ｘ２０は、存在しなくてもよく、あるいは任意の中性、疎水性もしくは芳香族のアミノ酸またはそのＤ−異性体であってよく、Ｘ２１は、存在しなくてもよく、あるいは任意の正荷電残基もしくは任意の脂肪族の非極性残基またはそのＤ−アイソフォームであってよく、Ｘ２２は、存在しなくてもよく、またはＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｆ、Ｅ、Ｋａｃ、もしくはそのＤ−異性体からなる群から選択されてもよく、Ｘ２３は、存在しなくてもよく、またはＧ、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｑ、Ｅ、Ｆ、Ｔ、Ｗ、Ｓ、Ｙ、およびＫａｃならびにそのＤ−異性体からなる群から選択される。
【００２０】
Ｘ１はＶであり得る。Ｘ２はＥであり得る。Ｘ６はＤであり得る。Ｘ７はＩであり得る。Ｘ８はＨであり得る。Ｘ１１はＷであり得る。［ＶＥＧＦ−ペプチド］は、Ｖ１−Ｅ２−Ｐ３−Ｎ４−Ｃ５−Ｄ６−Ｉ７−Ｈ８−Ｖ９−Ｘ１０−Ｗ１１−Ｘ１２−Ｗ１３−Ｘ１４−Ｃ１５−Ｆ１６−Ｅ１７−Ｒ１８−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３（配列番号１３２）の配列と実質的に相同的な配列が含まれるペプチドであり得る。式中、Ｘ１０は、Ｍまたは任意の疎水性アミノ酸であってよく、Ｘ１２は、Ｖ、ＥおよびＫａｃからなる群から選択され、Ｘ１４は、ＥまたはＶであり、Ｘ１９は、任意の疎水性アミノ酸残基、またはそのＤ−異性体であってよく、Ｘ２０は、存在しなくてもよく、あるいは任意の中性、疎水性もしくは芳香族のアミノ酸またはそのＤ−異性体であってよく、Ｘ２１は、存在しなくてもよく、あるいは任意の正荷電残基もしくは任意の脂肪族の非極性残基またはそのＤ−アイソフォームであってよく、Ｘ２２は、存在しなくてもよく、またはＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｆ、Ｅ、Ｋａｃ、もしくはそのＤ−異性体からなる群から選択されてもよく、Ｘ２３は、存在しなくてもよく、またはＧ、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｑ、Ｅ、Ｆ、Ｔ、Ｗ、Ｓ、Ｙ、およびＫａｃならびにそのＤ−異性体からなる群から選択される。
【００２１】
［ＶＥＧＦ−ペプチド］には、以下のうちの１つまたは複数と実質的に相同的な配列が含まれる：
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ（配列番号３４）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｇ−Ｗ（配列番号３５）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｖ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｆ−Ｒ−Ｅ−Ａ（配列番号３６
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｖ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｆ−Ｋ−Ｅ−Ａ（配列番号３７）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｖ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｍ−Ｋ（配列番号３８）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｒ−Ｅ−Ｌ（配列番号３９）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｉ−Ｆ（配列番号４０）Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ（配列番号４１）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｗ−Ｇ（配列番号４２）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｖ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｇ−Ｇ（配列番号４３）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｌ−Ｙ（配列番号４４）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｓ−Ｇ−Ｇ−Ｇ（配列番号４５）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｍ−Ｒ−Ｌ−Ｔ（配列番号４６）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ（配列番号４７）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｖ−Ｋ（配列番号４８）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｍ−Ｒ（配列番号４９）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｉ−Ｌ（配列番号５０）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−（Ｙｏｍｅ）−Ｇ−Ｌ−Ｔ（配列番号５１）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｇ（配列番号５２）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｆ−Ｋ−Ｅ−Ａ（配列番号５３）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−（Ｎｌｅ）−Ｋ（配列番号５４）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｌ−Ｔ（配列番号５５）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｇ−Ｆ（配列番号５６）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｉ−Ｋ（配列番号５７）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｋ（配列番号５８）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｍ−Ｇ−Ｌ−Ｔ（配列番号５９）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−（Ｋａｃ）（配列番号６０）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｇ−Ｇ（配列番号６１）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｍ−Ｋ（配列番号６２）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｍ−Ｒ−Ｅ−Ｌ（配列番号６３）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−（配列番号６４）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｍ−Ｋ−Ｅ−Ｌ（配列番号６５）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｐ−Ｗ（配列番号６６）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｌ−Ｋ（配列番号６７）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｌ−（Ｋａｃ）（配列番号６８）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｌ−Ｔ（配列番号６９）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｅ−Ｆ（配列番号７０）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｌ−Ｓ（配列番号７１）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｌ（配列番号７２）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−Ｔ（配列番号７３）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｖ−Ｑ（配列番号７４）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｌ−Ｅ（配列番号７５）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｐ−Ｌ（配列番号７６）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｐ−Ｆ（配列番号７７）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）（配列番号７８）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｒ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−（Ｋａｃ）（配列番号７９）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−（Ｄ−Ｔｙｒ）−Ｇ−（Ｄ−Ｐｒｏ）−Ｌ（配列番号８０）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−（Ｄ−Ｔｙｒ）−Ｇ−（Ｄ−Ｐｒｏ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）（配列番号８１）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−（Ｄ−Ｔｙｒ）−Ｇ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−（Ｋａｃ）（配列番号８２）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−Ｙ−（Ａｉｂ）−Ｌ−Ｔ（配列番号８３）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−Ｖ−（Ｄ−Ｇｌｎ）（配列番号８４）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−Ｌ−（Ｄ−Ｔｈｒ）（配列番号８５）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−（Ｃｈａ）−Ｇ−（ＤＬｅｕ）−Ｔ（配列番号８６）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ａｉｂ）−Ｌ−（Ｄ−Ｔｈｒ）（配列番号８７）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ｓａｒ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）−Ｔ（配列番号８８）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−（Ｄ−Ｐｒｏ）−Ｌ（配列番号８９）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−Ｖ−（Ｄ−Ｇｌｎ）（配列番号９０）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ａｉｂ）−Ｌ−Ｔ（配列番号９１）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−（Ｄ−Ｔｙｒ）−Ｇ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−Ｔ（配列番号９２）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−（Ｄ−Ｔｙｒ）−Ｇ−Ｌ−Ｔ（配列番号９３）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−（Ｄ−Ｔｙｒ）−Ｄ−Ｌ−（Ｄ−Ｔｈｒ）（配列番号９４）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−（Ａｉｂ）（配列番号９５）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−（Ｄ−Ｔｈｒ）（配列番号９６）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｖ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ（配列番号９７）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｖ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｐ−Ｆ（配列番号９８）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｖ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｐ−（配列番号９９）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｖ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｐ−Ｅ（配列番号１００）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｖ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｐ−Ｑ（配列番号１０１）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｖ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−Ｔ（配列番号１０２）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｖ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｌ（（配列番号１０３）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｖ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−Ｋａｃ（配列番号１０４）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｖ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｌ−Ｔ（配列番号１０５）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｖ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）（配列番号１０６）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ａ−Ｋ（配列番号１０８）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｆ−Ｋ−Ｅ−Ｗ（配列番号１０９）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ａ−Ｒ（配列番号１１０）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｆ−Ｋ（配列番号１１１）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ａ−Ｋ−Ｅ−Ｆ（配列番号１１２）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ｗ−Ｇ（配列番号１１３）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ｗ−Ｆ（配列番号１１４）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ａ−Ｋ−Ｅ−Ａ（配列番号１１５）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ａ−Ｋ−Ｅ−Ｍ（配列番号１１６）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ａ−Ｋ−Ｅ−Ｌ（配列番号１１７）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｆ−Ｋ−Ｅ−Ｌ（配列番号１１８）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｆ−Ｋ−Ｅ−Ａ（配列番号１１９）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｙ−Ｇ−Ｇ−Ｇ（配列番号１２０）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｍ−Ｋ（配列番号１２１）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−（Ｎｌｅ）−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ａｉｂ）−Ｌ−Ｔ（配列番号１２８）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｌ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ａｉｂ）−Ｌ−Ｔ（配列番号１２９）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｖ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ａｉｂ）−Ｌ−Ｔ（配列番号１３０）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−（Ｋａｃ）−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−Ｖ−（Ｄ−Ｇｌｎ）（配列番号１３６）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｋ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−（Ｋａｃ）（配列番号１９２）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｋ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−Ｔ（配列番号１９３）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｋ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｐ−Ｌ（配列番号１９４）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｋ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）（配列番号１９５）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ（−Ｄ−Ｌｅｕ）−Ｋ（配列番号１９６）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−Ｋ（配列番号１９７）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｋ−Ｒ−（Ｄ−Ｌｅｕ）（配列番号１９８）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−ＫＷ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−（Ｎ−メチルグルタメート）−Ｒ−Ｌ（配列番号１９９）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−ＫＷ−Ｖ−Ｅ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−（Ｄ−Ｇｌｕ）−Ｒ−Ｌ（配列番号２００）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−ＫＷ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ（Ｎ−メチルアルギニン）（配列番号２０１）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−ＫＷ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−（Ｄ−Ａｓｎ）（配列番号２０２）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−ＫＷ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−（Ａｉｂ）（配列番号２０３）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−ＫＷ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−（Ａｉｂ）−Ｒ−Ｌ（配列番号２０４）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−ＫＷ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−（ナフタリン）−Ｅ−Ｒ−Ｌ（配列番号２０５）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｋ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−Ｌ−Ｔ（配列番号２０６）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｋ−Ｌ−Ｅ（配列番号２０７）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−（Ｄ−Ｌｅｕ）（配列番号２０８）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｋ−Ｒ−Ｌ（配列番号２０９）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｋ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−（ホモアルギニン）−Ｌ−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）（配列番号２１０）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｋ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｙ−Ｇ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−Ｅ（配列番号２１１）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｋ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−Ｇ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−Ｅ（配列番号２１２）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｋ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ａｉｂ）−Ｌ−Ｅ（配列番号２１３）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｋ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ａｉｂ）−Ｌ−Ｅ（配列番号２１４）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｋ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−（Ｄ−Ｌｅｕ）−Ｋ（配列番号２１５）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｋ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−（Ｋａｃ）−Ｌ−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）（配列番号２１６）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｋ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−（Ｋａｃ）−（シクロ−Ｌｅｕ）−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）（配列番号２１７）
Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｋ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−（Ｋａｃ）−（Ｔｌｅ）−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）（配列番号２１８）
【００２２】
一部の実施形態では、本発明の［ＶＥＧＦ−ペプチド］は、配列番号６０、７３、７６、７８、１９２、１９３、１９４、または１９５からなる群から選択される。
【００２３】
Ｘ１０はＭであり得る。［ＶＥＧＦ−ペプチド］は、Ｖ１−Ｅ２−Ｐ３−Ｎ４−Ｃ５−Ｄ６−Ｉ７−Ｈ８−Ｖ９−Ｍ１０−Ｗ１１−Ｘ１２−Ｗ１３−Ｘ１４−Ｃ１５−Ｆ１６−Ｅ１７−Ｒ１８−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３（配列番号１３３）の配列と実質的に相同的な配列が含まれるペプチドであり得る。式中、Ｘ１２は、Ｖ、ＥおよびＫａｃからなる群から選択され、Ｘ１４は、ＥまたはＶであり、Ｘ１９は、任意の疎水性アミノ酸残基、またはそのＤ−異性体であってよく、Ｘ２０は、存在しなくてもよく、あるいは任意の中性、疎水性もしくは芳香族のアミノ酸またはそのＤ−異性体であってよく、Ｘ２１は、存在しなくてもよく、あるいは任意の正荷電残基もしくは任意の脂肪族の非極性残基またはそのＤ−アイソフォームであってよく、Ｘ２２は、存在しなくてもよく、またはＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｆ、Ｅ、Ｋａｃ、もしくはそのＤ−異性体からなる群から選択されてもよく、Ｘ２３は、存在しなくてもよく、またはＧ、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｑ、Ｅ、Ｆ、Ｔ、Ｗ、Ｓ、Ｙ、およびＫａｃならびにそのＤ−異性体からなる群から選択される。
【００２４】
Ｘ１２はＥであり得る。［ＶＥＧＦ−ペプチド］は、Ｖ１−Ｅ２−Ｐ３−Ｎ４−Ｃ５−Ｄ６−Ｉ７−Ｈ８−Ｖ９−Ｍ１０−Ｗ１１−Ｅ１２−Ｗ１３−Ｘ１４−Ｃ１５−Ｆ１６−Ｅ１７−Ｒ１８−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３（配列番号１３４）の配列と実質的に相同的な配列が含まれるペプチドであり得る。式中、Ｘ１４は、ＥまたはＶであり、Ｘ１９は、任意の疎水性アミノ酸残基、またはそのＤ−異性体であってよく、Ｘ２０は、存在しなくてもよく、あるいは任意の中性、疎水性もしくは芳香族のアミノ酸またはそのＤ−異性体であってよく、Ｘ２１は、存在しなくてもよく、あるいは任意の正荷電残基もしくは任意の脂肪族の非極性残基またはそのＤ−アイソフォームであってよく、Ｘ２２は、存在しなくてもよく、またはＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｆ、Ｅ、Ｋａｃ、もしくはそのＤ−異性体からなる群から選択されてもよく、Ｘ２３は、存在しなくてもよく、またはＧ、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｑ、Ｅ、Ｆ、Ｔ、Ｗ、Ｓ、Ｙ、およびＫａｃならびにそのＤ−異性体からなる群から選択される。
【００２５】
［ＶＥＧＦ−ペプチド］には、以下のうちの１つまたは複数と実質的に相同的な配列が含まれ得る：
配列番号３４、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１。
【００２６】
Ｘ１２はＶであり得る。［ＶＥＧＦ−ペプチド］は、Ｖ１−Ｅ２−Ｐ３−Ｎ４−Ｃ５−Ｄ６−Ｉ７−Ｈ８−Ｖ９−Ｍ１０−Ｗ１１−Ｖ１２−Ｗ１３−Ｘ１４−Ｃ１５−Ｆ１６−Ｅ１７−Ｒ１８−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３（配列番号１３５）の配列と実質的に相同的な配列が含まれるペプチドであり得る。式中、Ｘ１４は、ＥまたはＶであり、Ｘ１９は、任意の疎水性アミノ酸残基、またはそのＤ−異性体であってよく、Ｘ２０は、存在しなくてもよく、あるいは任意の中性、疎水性もしくは芳香族のアミノ酸またはそのＤ−異性体であってよく、Ｘ２１は、存在しなくてもよく、あるいは任意の正荷電残基もしくは任意の脂肪族の非極性残基またはそのＤ−アイソフォームであってよく、Ｘ２２は、存在しなくてもよく、またはＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｆ、Ｅ、Ｋａｃ、もしくはそのＤ−異性体からなる群から選択されてもよく、Ｘ２３は、存在しなくてもよく、またはＧ、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｑ、Ｅ、Ｆ、Ｔ、Ｗ、Ｓ、Ｙ、およびＫａｃならびにそのＤ−異性体からなる群から選択される。
【００２７】
［ＶＥＧＦ−ペプチド］には、以下のうちの１つまたは複数と実質的に相同的な配列が含まれ得る：
配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０
【００２８】
本明細書中に記載の［ＶＥＧＦ−ペプチド］の様々な実施形態に関連して、本発明の一部の態様では、Ｒ１はＣ（Ｏ）ＣＨ３であり得る。本発明の一部の態様では、Ｒ２はＮＨ２である。Ｒ１および／またはＲ２は存在しなくてもよい。Ｘ１９は、Ｌ、Ｉ、Ａ、Ｖ、ＧまたはそのＤ−異性体からなる群から選択され得る。Ｘ１９はＬであり得る。Ｘ１９はＤ−Ｌｅｕであり得る。Ｘ２０はＹであり得る。Ｘ２０はＤ−Ｔｙｒであり得る。Ｘ２１は、Ｄ−Ａｌａ、Ｇ、ＡｉｂおよびＫａｃからなる群から選択され得る。Ｘ２１はＤ−Ａｌａであり得る。Ｘ２１はＧであり得る。Ｘ２２は、Ｌ、Ｖ、Ｐ、Ｄ−Ｌｅｕ、Ｄ−Ｐｒｏからなる群から選択され得る。Ｘ２２はＤ−Ｌｅｕであり得る。Ｘ２２はＤ−Ｐｒｏであり得る。Ｘ２２はＬであり得る。Ｘ２３は存在しなくてもよい。
【００２９】
本発明の一部の実施形態では、［ＶＥＧＦ−ペプチド］は（配列番号７８）である。一部の実施形態では、Ｒ１−［ＶＥＧＦ−ペプチド］−Ｒ２は｛Ｃ（Ｏ）ＣＨ３｝−Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｋ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）−｛ＮＨ２｝（配列番号１８８）であり、Ｋ１１は連結残基である。
【００３０】
連結
連結残基の存在（それぞれＶＥＧＦ−連結残基およびＡｎｇ２−連結残基のどちらも）は、本発明の化合物に、足場、巨大分子および他の部分と連結するための多大な柔軟性を与える。具体的には、本発明の化合物は、抗体、抗体断片、ＰＥＧ分子、アルブミンなどの足場と、高い信頼性で、確実に、効率的に共有結合していてよい。驚くべきことに、対応するペプチド中の特定の主要位置の連結残基を位置決定することで、ペプチドの安定性および／または結合の増加がもたらされることが見い出された。連結残基は、その化学特徴がその位置での特異的な、信頼性のある、方向性がある、効率的な化学共有結合を可能にする側鎖が提供されるように、選択することができる。本発明の一部の態様では、連結残基は、直接または中間体リンカーを介して抗体の結合部位と共有結合している。連結は不可逆的であり得る。
【００３１】
本発明の化合物は、連結残基を介してリンカー部分Ｌ（またはＬ’、後に記載する）と共有結合していてよい。数々のリンカーが可能であり、多くの適切なリンカーが、その内容が本明細書中に参考として組み込まれているＵＳ２００６２０５６７０号に開示されている。特に、ＵＳ２００６２０５６７０号に具体的かつ一般に記載されている、リンカーを記載している一般式、特定のリンカー構造、リンカーの合成ならびにＸ、ＹおよびＺ基の様々な要素の組合せに関するその態様が、本明細書に含まれる。リンカーは直鎖状または分枝状であってよく、１つまたは複数の炭素環または複素環基が含まれていてよい。リンカーの長さは直鎖状原子の数に関して見てよく、芳香環などの環状部分は、環の周りの最短経路をとることによって計数する。一部の実施形態では、リンカーは、５〜１５個の原子、他の実施形態では１５〜３０個の原子、さらに他の実施形態では３０〜５０個の原子、さらに他の実施形態では５０〜１００個の原子、さらに他の実施形態では１００〜２００個の原子の直鎖状のストレッチを有する。他のリンカーの検討事項には、溶解度、親油性、親水性、疎水性、安定性（ほぼ安定および予定される分解）、強剛性、柔軟性、免疫原性、抗体結合の変調、ミセルまたはリポソーム内に取り込まれる能力などの、生じる化合物の物理的または薬物動態学的特性に対する影響が含まれる。
【００３２】
本発明の一部の態様では、化合物は、連結残基の側鎖と共有結合したリンカー（Ｌ）または（Ｌ’）を含む。リンカーは、式：−［コネクター］−Ｘ−Ｙ−Ｚ、−［コネクター］−Ｘ−Ｙ−Ｚ’、−Ｘ−Ｙ−Ｚ−、または−Ｘ−Ｙ−Ｚ’−を含んでいてもよく、式中、リンカーが分枝状であるとき、［コネクター］は存在し、存在する場合は連結残基と共有結合しており、１つまたは複数の追加の活性分子Ｘは、Ｃ、Ｈ、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、Ｆ、ＣＬ、Ｂｒ、およびＩからなる群から選択される任意の原子が含まれる生物学的に適合性がある接続鎖であり、ポリマーまたはブロックコポリマーを含んでいてもよく、かつ、リンカーが直鎖状の場合は連結残基と共有結合しており、Ｙは、少なくとも１つの環構造を含む、存在していてもよい認識基であり、Ｚは、抗体の結合部位中のアミノ酸側鎖と共有結合を形成することができる反応基であり、Ｚ’は、抗体の結合部位中のアミノ酸側鎖との共有結合を含む接着部分である。
【００３３】
存在する場合は、Ｙは、以下の置換された構造を有していてよい：
【００３４】
【化１】
2011522794.tif 000002
式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、およびｅは、独立して、炭素または窒素であり、ｆは、炭素、窒素、酸素、または硫黄であり、Ｙは、十分な原子価の任意の２つの環位置で独立してＸおよびＺと接着しており、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、またはｆのうちの４つ以下のみが同時に窒素であり、好ましくは、環構造中のａ、ｂ、ｃ、ｄ、およびｅは、それぞれ炭素である。一部の態様では、Ｙはフェニルであり得る。任意の理論に束縛されることを望まないが、Ｙ基は、Ｚ基が反応性アミノ酸側鎖と反応できるように、反応基が抗体結合部位内に配置されることを補助できると考えられている。
【００３５】
リンカーは、抗体、タンパク質、またはその断片などの巨大分子と共有または非共有的に結合を形成することができる反応基を含有するように設計し得る。反応基は、特定の結合部位中の反応性残基との使用について選択する。たとえば、アルドラーゼ抗体による修飾のための化学部分は、ケトン、ジケトン、βラクタム、活性エステルハロケトン、ラクトン、酸無水物、マレイミド、α−ハロアセトアミド、シクロヘキシルジケトン、エポキシド、アルデヒド、アミジン、グアニジン、イミン、エネアミン、ホスフェート、ホスホネート、エポキシド、アジリジン、チオエポキシド、覆われたまたは保護されたジケトン（たとえばケタール）、ラクタム、ハロケトン、アルデヒドなどであり得る。本発明のペプチドをリンカーＬまたはＬ’と連結させる本発明の実施形態では、部分Ｚ（または巨大分子と接着した場合はＺ’）が反応基である。
【００３６】
一部の実施形態では、Ｚには、アジチジノン、ジケトン、アシルβ−ラクタム、活性エステル、ハロケトン、シクロヘキシルジケトン基、アルデヒド、マレイミド、活性アルケン、活性アルキン、または、一般に、求核もしくは求電子置換を受けやすい脱離基を含む分子を形成するように配置された、１つまたは複数のＣ＝Ｏ基が含まれる。他の基には、ラクトン、酸無水物、α−ハロアセトアミド、イミン、ヒドラジド、またはエポキシドが含まれ得る。抗体の結合部位中の反応性求核基（たとえば、リシンまたはシステイン側鎖）と共有結合することができる例示的なリンカーの求電子反応基には、アシルβ−ラクタム、単純ジケトン、スクシンイミド活性エステル、マレイミド、リンカーを有するハロアセトアミド、ハロケトン、シクロヘキシルジケトン、アルデヒド、アミジン、グアニジン、イミン、エネアミン、ホスフェート、ホスホネート、エポキシド、アジリジン、チオエポキシド、覆われたまたは保護されたジケトン（たとえばケタール）、ラクタム、スルホネートなど、イミン、ケタール、アセタールなどの覆われたＣ＝Ｏ基、および任意の他の知られている求電子基が含まれる。特定の実施形態では、反応基には、アシルβ−ラクタム、単純ジケトン、スクシンイミド活性エステル、マレイミド、リンカーを有するハロアセトアミド、ハロケトン、シクロヘキシルジケトン、またはアルデヒドを形成するように配置された、１つまたは複数のＣ＝Ｏ基が含まれる。ＺまたはＺ’は、存在する場合は、置換アルキル、置換シクロアルキル、置換アリール、置換アリールアルキル、置換ヘテロシクリル、または置換ヘテロシクリルアルキルであってよく、少なくとも１つの置換基は、１，３−ジケトン部分、アシルβ−ラクタム、活性エステル、α−ハロケトン、アルデヒド、マレイミド、ラクトン、酸無水物、α−ハロアセトアミド、アミン、ヒドラジド、またはエポキシドである。一部の態様では、Ｚ基は、存在する場合は、抗体の結合部位と共有結合している。他の態様では、Ｚ基は、本発明のペプチドに半減期の増加を提供することができる巨大分子足場と共有結合している。
【００３７】
一部の態様では、Ｚは、存在する場合は、以下の構造を有する：
【００３８】
【化２】
2011522794.tif 000003
式中、ｑ＝０〜５である。ｑは、１または２であり得る。ｑは１であり得る。他の態様では、ｑは２であり得る。
【００３９】
Ｚ’は、存在する場合は、以下の構造を有し得る：
【００４０】
【化３】
2011522794.tif 000004
式中、ｑ＝０〜５であり、抗体−Ｎ−は、抗体の結合部位中の側鎖との共有結合である。ｑは、１または２であり得る。ｑは１であり得る。他の態様では、ｑは２であり得る。
【００４１】
Ｘは、３つの構成要素を含む基Ｘｐ−Ｘｓ−Ｘｙであってよく、式中、Ｘｐは、連結残基の側鎖と組合せ可能であるように特異的に適応させた基であり、Ｘｓは、Ｘ基のスペーサー領域であり、Ｘｙは、Ｙ基と結合するように適応させた基である。一部の態様では、Ｘｙは、アミド結合、エナミン結合、またはグアニジウム結合から選択される。Ｘｙは、Ｙ基に隣接した（２個の原子以内）水素分子が提供されるように選択し得る。理論に束縛されることを望まないが、Ｈ原子は、Ｈ結合の相互作用によって、疎水性ポケットのＹ基の認識を、特にｈ３８Ｃ２などの触媒抗体の結合間隙の疎水性ポケットに関して補助することができると考えられている（たとえば図２Ａ）。したがって、アミド結合は、たとえば、ＮＨ基がＹ基と直接結合して水素結合のためのＮＨ基のＨが提供されるように、配向されていてよい。あるいは、ＮＨ基のＨがＹ基から２原子離れて隣接しているが、それでもＨ結合に利用可能であるように、アミドのＣ＝Ｏ基がＹ基と結合していてよい。一部の態様では、Ｘｓは、Ｘｓが任意の過剰に反応性の基を提供しないように選択する。Ｘｓは、２〜１５個の原子のＸ基の全長が提供されるように選択し得る。Ｘｓは、Ｘ基の全長が２〜１０個の原子のであるように選択し得る。Ｘｓは、Ｘ基の全長が４〜８個の原子であるように選択し得る。Ｘｓは、Ｘ基の全長が５個の原子であるように選択し得る。Ｘｓは、Ｘ基の全長が６個の原子であるように選択し得る。Ｘｐは、理想的には、連結残基との特異的な方向性の共有結合戦略が可能となるように選択する。たとえば、連結残基が求核基を含む場合、Ｘｐは求電子基であってよく、逆もまた同様である。たとえば、連結残基の側鎖がＫ、Ｈ、Ｙ、オルチニン、Ｄａｐ、またはＤａｂなどのアミン基を含む場合、Ｘｐは、ＣＯＯＨ、または他の同様に反応性の求電子剤であり得る。連結残基がＤまたはＥである場合、Ｘｐはアミン基などの求核基を含み得る。これらの戦略のどちらも、アミド結合形成戦略によってＸｐ基と連結残基との間に共有結合が形成されることを可能にする。連結基がＣ、Ｃの相同体、または他のチオール基含有残基である場合、Ｘｐは、マレイミド基を含んで、Ｘｐ基と連結残基とを共有結合するチオール−マレイミド付加反応戦略を可能にし得る。一部の態様では、Ｘｐは、チオール基を含んで、連結残基とＸｐ基との間にジスルフィド架橋が形成されることも可能にし得る。
【００４２】
Ｘの主鎖の長さは３〜１５個の原子であり得る。
【００４３】
Ｘは、
【００４４】
【化４】
2011522794.tif 000005
であってよく、一部の態様では、Ｘ−Ｙは、
【００４５】
【化５】
2011522794.tif 000006
であってよい。式中、ｖおよびｗは、Ｘの主鎖の長さが６〜１２個の原子、または３〜９個の原子、または４〜７個の原子、または６個の原子、または７個の原子、または８個の原子であるように選択する。ＶおよびＷは、それぞれ０〜８であり得る。Ｖは、１または２であり得る。Ｗは、１または２であり得る。ＶおよびＷは、それぞれ１であり得る。Ｒｂは、水素、置換もしくは非置換のＣ１〜１０アルキル、置換もしくは非置換のＣ３〜７シクロアルキル−Ｃ０〜６アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−Ｃ０〜６アルキルであり得る。ＲｂはＨであり得る。一部の態様では、ＶおよびＷはどちらも１であり、ＲｂはＨである。
【００４６】
本発明による特定の実施形態は、以下の構造を有する：
【００４７】
【化６】
2011522794.tif 000007
式中、ペプチドは本発明の［ＶＥＧＦ−ペプチド］であり、ｖは、１、２、３、４、または５であり、ｗは、１、２、３、４、または５であり、ｑは、０、１、２、３、４、または５であり、Ｒｂは、水素、置換もしくは非置換のＣ１〜１０アルキル、置換もしくは非置換のＣ３〜７シクロアルキル−Ｃ０〜６アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−Ｃ０〜６アルキルである。特定の実施形態では、ｖは、１、２、または３であり、ｗは、１、２、または３であり、ｑは、０、１、２、または３である。一部の実施形態では、ｖは、１または２であり、ｗは、１または２であり、ｑは、１または２であり、ＲｂはＨである。
【００４８】
一部の態様では、本発明は、化合物２００１〜２０１０、化合物２０１４〜２０１６、化合物２０１８、化合物２０２０、化合物２０２２〜２０２４、化合物２０２７〜２０３３、化合物２０３６、化合物２０３８、化合物２０４１〜２０４２、化合物２０４５〜２０４６、化合物２０４８〜２０５０、および化合物２０５２〜２０５３からなる群から選択される化合物を提供する。これらの化合物は、触媒抗体、たとえばアルドラーゼ抗体、たとえばｈ３８Ｃ２の結合部位と共有結合していてよい。一部の態様では、本発明は、化合物２０１８、２０３６、２０４５、および２０５０からなる群から選択される本発明の化合物を提供する。これらの化合物は、触媒抗体、たとえばアルドラーゼ抗体、たとえばｈ３８Ｃ２の結合部位と共有結合していてよい。一部の態様では、本発明は、化合物２０１８を提供する。
【００４９】
また、本発明は、本発明のペプチドをコードしている核酸配列（ＤＮＡ配列、ＲＮＡ配列、およびＤＮＡ−ＲＮＡ配列が含まれる）、ならびにその前駆体も提供する。
【００５０】
二官能性分子
一部の態様では、本発明は、以下の式の化合物を提供する：
【００５１】
【化７】
2011522794.tif 000008
式中、［活性分子−１］は本発明の［ＶＥＧＦ−ペプチド］であり、［コネクター］は、［ＶＥＧＦ−ペプチド］および［活性分子−２］の両方と共有結合した部分である。本発明の一部の態様では、［コネクター］は、［ＶＥＧＦ−ペプチド］に加えて複数の他の［活性分子］と共有結合していてよいことを理解されたい。
【００５２】
Ｒ１−［ＶＥＧＦ−ペプチド］−Ｒ２は、｛Ｃ（Ｏ）ＣＨ３｝−Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｋ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）−｛ＮＨ２｝（配列番号１８８）であってよく、Ｋ１１は、［コネクター］と共有結合したＶＥＧＦ−連結残基であり得る。
【００５３】
活性分子は、［コネクター］と共有結合し、生物系と相互作用することができる任意の化学的、生化学的、または生物学的な実体であり得る。例には、治療剤、薬物、プロドラッグ、標的化剤、毒素、タンパク質、ペプチド、核酸分子、および脂質が含まれる。本発明の一部の態様では、活性分子はペプチドであり、抗血管形成ペプチドであり得る。一部の態様では、活性分子は、必要に応じて本発明の［ＶＥＧＦ−ペプチド］および／または本発明の［Ａｎｇ２−ペプチド］である。
【００５４】
［ＶＥＧＦ−ペプチド］は、ＶＥＧＦ−連結残基の求核性側鎖またはＮ末端アミノ基もしくはＣ末端カルボキシル基を介して［コネクター］と共有結合し得る。あるいは、リンカーが分枝状でない場合、［ＶＥＧＦ−ペプチド］は、ＶＥＧＦ−連結残基の求核性側鎖またはＮ末端アミノ基もしくはＣ末端カルボキシル基を介してＬまたはＬ’のＸ基と共有結合し得る。ＶＥＧＦ−連結残基は、Ｋ、Ｒ、Ｙ、Ｃ、Ｔ、Ｓ、リシンの相同体、ホモシステイン、ホモセリン、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｎ末端残基およびＣ末端残基を含む群から選択され得る。ＶＥＧＦ−連結残基は、Ｋ、Ｙ、Ｔ、Ｄａｐ、およびＤａｂからなる群から選択され得る。本発明の一部の態様では、ＶＥＧＦ−連結残基はＫである。連結残基はＫ１０であり得る。連結残基はＫ１２であり得る。本発明の一部の態様では、Ｖ１、Ｅ２、Ｐ３、Ｎ４、Ｖ９、Ｍ１０、Ｖ１２、Ｘ１４、Ｅ１７および［ＶＥＧＦ−ペプチド］のＣ末端残基からなる群のうちの１つは、直接または中間体リンカーを介して抗体の結合部位と共有結合している求核性側鎖またはＮ末端アミノ基もしくはＣ末端カルボキシル基を含む（ＶＥＧＦ−）連結残基で置換されており、連結残基は、Ｋ、Ｒ、Ｙ、Ｃ、Ｔ、Ｓ、リシンの相同体、ホモシステイン、ホモセリン、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｎ末端残基およびＣ末端残基を含む群から選択される。連結残基がＮ末端またはＣ末端に位置する一部の態様では、連結は、それぞれのアミノ酸側鎖を介してではなく、Ｎ末端のアミノ基またはＣ末端のカルボキシル基を介して行われ得る。本発明の一部の態様では、Ｖ１、Ｎ４、Ｍ１０、Ｖ１２、Ｘ１４、およびＥ１７のうちの１つがＶＥＧＦ−連結残基で置換されている。本発明の一部の態様では、Ｍ１０およびＶ１２のうちの１つが連結残基で置換されている。本発明の一部の態様では、Ｍ１０がＶＥＧＦ−連結残基で置換されている。本発明の一部の態様では、Ｖ１２がＶＥＧＦ−連結残基で置換されている。
【００５５】
［コネクター］は、式：−［ＡＭ１−スペーサー］−［分枝］−［ＡＭ２−スペーサー］−を含み得る。式中、［ＡＭ−１−スペーサー］および［ＡＭ−２−スペーサー］は、それぞれ独立して、［分枝］と共有結合した、生物学的に適合性があるポリマー、ブロックコポリマー、Ｃ、Ｈ、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、もしくはその塩、アルキル、アルケニル、アルキニル、オキソアルキル、オキソアルケニル、オキソアルキニル、アミノアルキル、アミノアルケニル、アミノアルキニル、スルホアルキル、スルホアルケニル、スルホアルキニル、ホスホアルキル、ホスホアルケニル、またはホスホアルキニル基であり、［分枝］は、少なくとも３個の反応基を有する分子であり、［ＡＭ−１−スペーサー］は、［分枝］および［活性分子−１］と共有結合しており、［ＡＭ−２−スペーサー］は、［分枝］および［活性分子−２］と共有結合している。［ＡＭ−１−スペーサー］および［ＡＭ−２−スペーサー］は、それぞれ独立して、その対応する活性分子および［分枝］と共有結合を形成することができる中性の水溶性分子であり得る。活性分子がペプチドを含む場合、［ＡＭ−１−スペーサー］および［ＡＭ−２−スペーサー］は、対応する活性分子とペプチド結合と形成することができ得る。
【００５６】
［ＡＭ−１−スペーサー］および［ＡＭ−２−スペーサー］は、それぞれ独立して、アミノポリエチレングリコール酸、ポリエチレングリコール二価酸、アミノアルカン酸、アミノアルカン酸、およびポリグリシンからなる群から選択され得る。［ＡＭ−１−スペーサー］および［ＡＭ−２−スペーサー］は、それぞれ独立して、以下からなる群から選択され得る（単にスペーサーの特定の適切な種を例示するために、以下に代表的な分子を示す）：
【００５７】
【化８】
2011522794.tif 000009
【００５８】
［ＡＭ−１−スペーサー］および［ＡＭ−２−スペーサー］は、それぞれ独立して、２−ＰＥＧ、４−ＰＥＧ、および６−ＰＥＧからなる群から選択され得る：
【００５９】
【化９】
2011522794.tif 000010
【００６０】
［ＡＭ−１−スペーサー］および［ＡＭ−２−スペーサー］は、それぞれ独立して、６個の原子の長さ〜１５個の原子の長さであり得る。［ＡＭ−１−スペーサー］および［ＡＭ−２−スペーサー］は、それぞれ独立して、４−ＰＥＧスペーサーであり得る。［ＡＭ−１−スペーサー］および［ＡＭ−２−スペーサー］は、それぞれ独立して、２−ＰＥＧスペーサーであり得る。［ＡＭ−１−スペーサー］および［ＡＭ−２−スペーサー］は、それぞれ独立して、１−ＰＥＧスペーサーであり得る。［ＡＭ−１−スペーサー］は、６個の原子〜１５個の原子の長さであり得る。［ＡＭ−１−スペーサー］は４−ＰＥＧであり得る。［ＡＭ−２−スペーサー］は、６個の原子〜１５個の原子の長さであり得る。［ＡＭ−２−スペーサー］は４−ＰＥＧであり得る。
【００６１】
［分枝］は、３つの直交する反応基を含む化学部分であり得る。［分枝］は、システイン、ジアミノプロピオン酸、ジアミノブタン酸、オルニチン、リシン、ホモシステイン、ビスマレイミド、およびマレイミド酸、ならびにその誘導体および相同体からなる群から選択され得る。
【００６２】
［分枝］は、
【００６３】
【化１０】
2011522794.tif 000011
ならびにその誘導体および相同体からなる群から選択され得る。［分枝］はシステインであり得る。
【００６４】
本発明の化合物は、式：［分枝］−Ｌまたは［分枝］−Ｌ’を含み得る。式中、Ｌはリンカーであり、Ｌ’は、抗体の結合部位中のアミノ酸側鎖と共有結合したリンカーであり、［分枝］はＬまたはＬ’と共有結合している。［分枝］−Ｌは、以下からなる群から選択され得る：
【００６５】
【化１１】
2011522794.tif 000012
【００６６】
［Ａｎｇ２ペプチド］
本発明の一部の態様では、［活性分子２］は、Ａｎｇ−２結合ペプチド［Ａｎｇ２−ペプチド］である。［Ａｎｇ２−ペプチド］は、Ａｎｇ２−連結残基の求核性側鎖またはＮ末端もしくはＣ末端を介して［コネクター］と共有結合していてよく、Ａｎｇ２−連結残基は、Ｋ、Ｒ、Ｙ、Ｃ、Ｔ、Ｓ、リシンの相同体、ホモシステイン、ホモセリン、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｎ末端残基およびＣ末端残基を含む群から選択される。Ａｎｇ２−連結残基がＣ末端またはＮ末端に位置する場合、連結はその位置での特定のアミノ酸の側鎖ではなく、Ｎ末端のアミノ基またはＣ末端のカルボキシル基を介するものであり得る。Ａｎｇ２−連結残基は、Ｋ、Ｙ、Ｔ、Ｄａｐ、およびＤａｂからなる群から選択され得る。Ａｎｇ２−連結残基はＫであり得る。
【００６７】
本発明の一部の態様では、［Ａｎｇ２−ペプチド］は、Ｑ１Ｘ２Ｙ３Ｑ４Ｘ５Ｌ６Ｄ７Ｅ８Ｘ９Ｄ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｄ１５Ｘ１６Ｆ１７Ｍ１８Ｘ１９Ｑ２０Ｑ２１Ｇ２２（配列番号１０７）と実質的に相同的な配列を含む。式中、Ｘ２は、Ｋ、Ｎ、Ｒ、Ｈ、Ｋａｃ、Ｎｉｃｋ、およびＣｂｃＫからなる群から選択され、Ｘ５は、Ｐ、ｈＰ、ｄｈＰ、およびＢｎＨＰからなる群から選択され、Ｘ９は、Ｌ、Ｉ、ＴｈＡ、およびＫａｃからなる群から選択され、ｘ１１は、Ｑ、Ｎ、Ｃ、Ｋ、Ｋａｃ、Ｄａｂ、およびＤａｐからなる群から選択され、Ｘ１２は、Ｌ、ＨＬ、Ｎｖａ、Ｉ、ＨｃｈＡ、ＨＦ、およびＴｈＡからなる群から選択され、Ｘ１３は、Ｌ、ＨＬ、Ｎｖａ、Ｉ、ＨｃｈＡ、ＨＦ、およびＴｈＡからなる群から選択され、Ｘ１４は、芳香族残基からなる群から選択され、Ｘ１６は、ＱおよびＮからなる群から選択され、Ｘ１９は、ＬおよびＩからなる群から選択され、Ｑ１、Ｅ８、Ｘ９、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｄ１５、Ｘ１６、Ｍ１８、Ｘ１９またはＧ２２のうちの１つは、Ａｎｇ２−連結残基で置換されている。
【００６８】
一部の態様では、Ｘ２は、Ｋ、Ｎ、およびＫａｃからなる群から選択される。Ｘ２はＮであり得る。Ｘ２はＫａｃであり得る。一部の態様では、Ｘ５は、Ｐ、ｈＰ、およびｄｈＰからなる群から選択される。Ｘ５はＰであり得る。一部の態様では、Ｘ９はＬである。一部の態様では、Ｘ９はＫａｃである。一部の態様では、Ｘ１１は、Ｋ、Ｋａｃからなる群から選択される。一部の態様では、Ｘ１３は、Ｌ、ＨＬ、Ｎｖａ、Ｉからなる群から選択される。Ｘ１３はＬであり得る。一部の態様では、Ｘ１４は、Ｆ、Ｙ、Ｗ、ＢＰＡ、ＣＦ、ＮＦからなる群から選択される。Ｘ１４はＹであり得る。一部の態様では、Ｘ１６はＱである。Ａｎｇ２−連結残基はＸ９、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｄ１５、Ｘ１６、Ｍ１８およびＸ１９からなる群のうちの１つを置換し得る。Ｘ１１はＡｎｇ２−連結残基の位置であり得る。
【００６９】
［Ａｎｇ２−ペプチド］は、配列番号１３７〜１９１からなる群から選択される１つまたは複数の化合物と実質的に相同的な配列を含み得る。Ａｎｇ−２ペプチドは、配列番号１３７〜１７２および配列番号１８２からなる群から選択される化合物を含み得る。［Ａｎｇ２−ペプチド］は、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５７、配列番号１６１、配列番号１７４、および配列番号１８１からなる群から選択される１つまたは複数の化合物と実質的に相同的な配列を含み得る。
【００７０】
［Ａｎｇ２−ペプチド］は、Ｑ（Ｋａｃ）ＹＱＰＬＤＥ（Ｋａｃ）ＤＫＴＬＹＤＱＦＭＬＱＱＧ（配列番号１５３）と実質的に相同的な配列を含む。Ｒ１はＣ（Ｏ）ＣＨ３であり得る。Ｒ２はＮＨ２であり得る。一部の態様では、Ｒ１−［Ａｎｇ−ペプチド］−Ｒ２は｛Ｃ（Ｏ）ＣＨ３｝Ｑ（Ｋａｃ）ＹＱＰＬＤＥ（Ｋａｃ）ＤＫＴＬＹＤＱＦＭＬＱＱＧ−｛ＮＨ２｝（配列番号１５３）であってよく、Ｋ１１は、［コネクター］と共有結合したＡｎｇ２−連結残基である。
【００７１】
本発明の一部の態様では、化合物は、化合物５００１〜５０２８および５０３１〜５０６２からなる群から選択され得る。一部の態様では、化合物は、化合物５００１〜５０２８および化合物５０３１〜５０７４からなる群から選択される。一部の態様では、化合物は、５０５３、５０６０、５０６１および５０６２からなる群から選択される。一部の態様では、化合物は化合物５０５３である。一部の態様では、化合物は５０３７である。本発明の一部の態様では、化合物６００１〜６０２８および６０３１〜６０６２からなる群から選択される化合物。一部の態様では、化合物は、化合物６００１〜６０２６、６０２９、６０３１〜６０６９からなる群から選択される。一部の態様では、化合物は、化合物６００１〜６０２８および化合物６０３１〜６０７４からなる群から選択される。一部の態様では、化合物は、化合物６０５３、６０６０、６０６１および６０６２からなる群から選択される。一部の態様では、化合物は化合物６０５３である。一部の態様では、化合物は化合物６０３７である。
【００７２】
抗体
ＵＳ２００６２０５６７０号の内容、特に段落［０１５３］〜［０２３３］が、とりわけ、抗体、有用な断片や変異体およびその変形、結合部位およびＣＤＲ、抗体の調製、発現、ヒト化、アミノ酸修飾、グリコシル化、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、抗体の血清半減期の増加、発現ベクター、哺乳動物宿主系、ならびに折りたたみ、また、抗体技術の他の要素を記載しており、本明細書中に参考として組み込まれている。
【００７３】
記載したように、特定の実施形態では、本発明の化合物と併せて使用することができる特定の抗体は、抗体結合部位中に反応性側鎖を必要とし得る。反応性側鎖は、天然に存在するか、または突然変異によって抗体内に配置し得る。抗体結合部位の反応性残基は、残基が抗体を作製するために最初に同定されたリンパ球細胞中に存在する核酸によってコードされている場合など、抗体と関連していてよい。あるいは、アミノ酸残基は、特定の残基をコードするようにＤＮＡを意図的に変異させることによって生じ得る（たとえば、Ｍｅａｒｅｓ他のＷＯ０１／２２９２２号を参照）。反応性残基は、たとえば、本明細書中に記載したように独特のコドン、ｔＲＮＡ、およびアミノアシル−ｔＲＮＡを用いた生合成取り込みによって生じた、非天然残基であり得る。別の手法では、アミノ酸残基またはその反応性官能基（たとえば、求核性アミノ基またはスルフヒドリル基）は、抗体結合部位中のアミノ酸残基と接着していてよい。したがって、本明細書中で使用する「抗体の結合部位中のアミノ酸残基を介して」生じる抗体との共有結合とは、連結が、抗体結合部位のアミノ酸残基と直接、または抗体結合部位のアミノ酸残基の側鎖と連結している化学部分を介することができることを意味する。一部の実施形態では、アミノ酸はシステインであり、側鎖の反応基はスルフヒドリル基である。他の実施形態では、アミノ酸残基はリシンであり、側鎖の反応基はε−アミノ基である。
【００７４】
触媒抗体は、１つまたは複数の反応性アミノ酸側鎖を含む適切な結合部位を有する、抗体の一供給源である。そのような抗体には、アルドラーゼ抗体、βラクタマーゼ抗体、エステラーゼ抗体、アミダーゼ抗体などが含まれる。
【００７５】
一実施形態は、マウスモノクローナル抗体ｍＡｂ３３Ｆ１２およびｍＡｂ３８Ｃ２などのアルドラーゼ抗体、ならびにそのような抗体の適切にキメラ化およびヒト化した型（たとえば、ｈ３８Ｃ２、配列番号１および２）を含む。マウスｍＡｂ３８Ｃ２（およびｈ３８Ｃ２）は、ＨＣＤＲ３の近くであるがその外側に反応性リシンを有し、反応性免疫化によって作製された新しい触媒抗体クラスのプロトタイプであり、天然アルドラーゼ酵素を機械的に模倣する。Ｃ．Ｆ．Ｂａｒｂａｓ三世他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７８：２０８５〜２０９２（１９９７）を参照）。使用し得る他のアルドラーゼ触媒抗体には、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０１５を有するハイブリドーマ８５Ａ２、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０１４を有するハイブリドーマ８５Ｃ７、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０１７を有するハイブリドーマ９２Ｆ９、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−８２３を有するハイブリドーマ９３Ｆ３、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−８２４を有するハイブリドーマ８４Ｇ３、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０１８を有するハイブリドーマ８４Ｇ１１、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０１９を有するハイブリドーマ８４Ｈ９、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−８２５を有するハイブリドーマ８５Ｈ６、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０１６を有するハイブリドーマ９０Ｇ８によって産生された抗体が含まれる。反応性リシンを介して、これらの抗体は、天然アルドラーゼのエナミン機構を用いてアルドールおよびレトロアルドール反応を触媒する。Ｊ．Ｗａｇｎｅｒ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７０：１７９７〜１８００（１９９５）、Ｃ．Ｆ．Ｂａｒｂａｓ三世他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７８：２０８５〜２０９２（１９９７）、Ｇ．Ｚｈｏｎｇ他、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．、３８：３７３８〜３７４１（１９９９）、Ａ．Ｋａｒｌｓｔｒｏｍ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、９７：３８７８〜３８８３（２０００）を参照されたい。アルドラーゼ抗体およびアルドラーゼ抗体を作製する方法は、本明細書中に参考として組み込まれている、米国特許第６，２１０，９３８号、第６，３６８，８３９号、第６，３２６，１７６号、第６，５８９，７６６号、第５，９８５，６２６号、および第５，７３３，７５７号に開示されている。
【００７６】
また、本発明の化合物は、本発明の化合物を、チオエステラーゼおよびエステラーゼ触媒抗体の結合部位中に見つかるものなどの反応性システインと連結させることによっても形成し得る。適切なチオエステラーゼ触媒抗体は、Ｋ．Ｄ．Ｊａｎｄａ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、９１：２５３２〜２５３６（１９９４）によって記載されている。適切なエステラーゼ抗体は、Ｐ．Ｗｉｒｓｃｈｉｎｇ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７０：１７７５〜１７８２（１９９５）によって記載されている。反応性アミノ酸含有抗体は、反応性アミノ酸をコードするように抗体結合部位の残基を変異すること、または抗体結合部位中のアミノ酸側鎖を、反応基を含有するリンカーで化学的に誘導体化することを含めた、当分野で周知の手段によって調製し得る。
【００７７】
抗体はヒト化抗体であり得る。本発明の化合物が抗体の結合部位と共有結合しており、そのような抗体がヒト化されている場合、そのような抗体は、Ｚ基に対して高い連結親和性を保持してヒト化することが重要である。様々な形態のヒト化ネズミアルドラーゼ抗体が企図される。一実施形態では、ヒト定常ドメインＣκおよびＣγ１１を有するヒト化アルドラーゼ触媒抗体ｈ３８ｃ２  ＩｇＧ１またはｈ３８ｃ２  Ｆａｂを使用する。Ｃ．Ｒａｄｅｒ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．、３３２：８８９〜８９９（２００３）は、ｈ３８ｃ２  Ｆａｂおよびｈ３８ｃ２  ＩｇＧ１を産生するために使用し得る遺伝子配列およびベクターを開示している。ヒト生殖系列Ｖｋ遺伝子ＤＰＫ−９およびヒトＪｋ遺伝子ＪＫ４をｍ３８ｃ２のκ軽鎖可変ドメインのヒト化のフレームワークとして使用し、ヒト生殖系列遺伝子ＤＰ−４７およびヒトＪＨ遺伝子ＪＨ４をｍ３８ｃ２の重鎖可変ドメインのヒト化のフレームワークとして使用した。図２Ａは、ｍ３８ｃ２、ｈ３８ｃ２、およびヒト生殖系列中の可変の軽鎖と重鎖との間の配列アラインメントを例示する。ｈ３８ｃ２は、そのアロタイプのうちの任意のものを含めた、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の定常ドメインを利用し得る。図２Ｂは、Ｇ１ｍ（ｆ）アロタイプを用いたｈ３８ｃ２  ＩｇＧ１の一実施形態を例示しており、このｈ３８ｃ２  ＩｇＧ１の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列は図中に記載されている。抗体がＧ１ｍ（ｆ）アロタイプを有するｈ３８ｃ２  ＩｇＧ１である本発明の化合物の特定の実施形態では、Ｚは、重鎖の位置９９のリシン残基の側鎖と結合する。この残基は、図２Ｂにおいて太字によって示す。別の実施形態では、ｈ３８ｃ２の可変ドメイン（ＶＬおよびＶＨ）ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４からの定常ドメインを含むキメラ抗体を使用する。抗体は、ｈ３８ｃ２からのＶＨおよびＶＬドメインを含む完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ＶＨ、ＶＬ、二重特異性抗体、またはミニボディーであり得る。抗体は、ｈ３８ｃ２からのＶＨおよびＶＬドメインならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４からなる群から選択される定常ドメインを含む抗体であり得る。抗体はｈ３８Ｃ２  ＩｇＧ１であり得る。抗体は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、またはＩｇＥ抗体からの定常領域を含む、ネズミアルドラーゼ抗体のヒト化型であり得る。別の実施形態では、抗体は、ネズミアルドラーゼ抗体からの可変領域およびヒトＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、またはＩｇＥ抗体からの定常領域を含むキメラ抗体である。さらなる実施形態では、抗体は、天然またはネイティブのヒトＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、またはＩｇＥ抗体からのポリペプチド配列を含む、ネズミアルドラーゼ抗体の完全なヒト型である。
【００７８】
様々な形態のヒト化アルドラーゼ抗体断片も企図される。一実施形態ではｈ３８ｃ２  Ｆ（ａｂ’）２を使用する。ｈ３８ｃ２  Ｆ（ａｂ’）２は、ｈ３８ｃ２  ＩｇＧ１のタンパク質分解消化によって生じ得る。別の実施形態では、介在リンカー（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３によって接続されていてよい、ｈ３８ｃ２からのＶＬおよびＶＨドメインを含むｈ３８ｃ２  ｓｃＦｖを使用する。ヒト化の代替として、ヒト抗体を作製することができる。たとえば、現在では、免疫化（または触媒抗体の場合は反応性免疫化）した際に、内在性免疫グロブリン産生の非存在下においてヒト抗体の完全なレパートリーを生じることができる、トランスジェニック動物（たとえばマウス）を作製することが可能である。
【００７９】
あるいは、ファージディスプレイ技術（たとえば、Ｊ．ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ他、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２〜５５３（１９９０）、Ｈ．Ｊ．ｄｅ  Ｈａａｒｄ他、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２７４、１８２１８〜１８２３０（１９９９）、およびＡ．Ｋａｎｐｐｉｋ他、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、２９６、５７〜８６（２０００）を参照）を用いて、免疫化していないドナーからの免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーを使用してヒト抗体および抗体断片をｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生することができる。上に示したように、ヒト抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化させたＢ細胞によっても作製し得る。たとえば、米国特許第５，５６７，６１０号および第５，２２９，２７５号、ならびにＣ．Ａ．Ｋ．Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８５：３９９５〜３９９９（１９８８）を参照されたい。
【００８０】
本明細書中に記載した抗体のアミノ酸配列修飾（複数可）が企図される。たとえば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異体は、適切なヌクレオチド変化を抗体の核酸内に導入することによって、またはペプチド合成によって調製する。そのような修飾には、たとえば、抗体のアミノ酸配列からの欠失、それ内への挿入、および／またはそれ内の残基の置換が含まれる。欠失、挿入、および置換の任意の組合せを行って最終構築体に到達するが、ただし、最終構築体は所望の特徴を保有する。また、アミノ酸変化は、グリコシル化部位の数または位置の変化など、抗体の翻訳後プロセスも変更し得る。Ｂ．Ｃ．ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＪ．Ａ．Ｗｅｌｌｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１〜１０８５（１９８９）に記載されているように、突然変異誘発の好ましい位置である抗体の特定の残基または領域を同定するために有用な方法は、「アラニンスキャン突然変異誘発」と呼ばれる。
【００８１】
本発明の化合物および組成物の例示的な使用
本発明は、血管形成を阻害もしくは減少させる方法、または血管形成障害に関連する疾患もしくは症状を治療もしくは予防する方法における、本発明の化合物または本発明の医薬組成物の使用を提供する。本発明は、患者に治療上有効な用量の本発明の化合物および組成物を投与することを含む、血管形成を阻害もしくは減少させる方法、または血管形成障害に関連する疾患もしくは症状を治療もしくは予防する方法を提供する。また、本発明の化合物および組成物を送達または投与する方法ならびに本発明の化合物および組成物を用いた治療方法も提供する。本明細書中で使用する血管形成に媒介される状態とは、異常な血管形成活性によって引き起こされる状態、または血管形成活性を変調する化合物が治療的使用を有する状態である。本発明の一態様は、有効量の本明細書中に記載の化合物または組成物を対象に投与することを含む、ＶＥＧＦ活性をｉｎ  ｖｉｖｏで変調する方法を提供する。本発明の別の態様には、診断目的のために本発明の化合物および組成物を使用する方法が含まれる。本発明の化合物および組成物で治療および／または診断し得る疾患および状態には、癌、関節炎、高血圧、腎臓病、乾癬、眼球障害、感染症または外科的処置に関連する眼の血管形成、黄斑変性症、糖尿病性網膜症などが含まれる。
【００８２】
より詳細には、本発明に関連して本明細書中で使用する「癌」の例には、肺癌（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、頭部または頸部の癌、卵巣癌、結腸癌、直腸癌、前立腺癌、肛門部の癌、胃癌、乳癌、腎臓もしくは輸尿管の癌、腎細胞癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、脊髄軸の腫瘍、中咽頭、下咽頭、食道、膵臓、肝臓、胆嚢および胆管、小腸、尿（ｕｒｉｎａ）の癌腫、リンパ腫、または前述の癌のうちの１つもしくは複数の組合せから選択される癌が含まれる。さらにより詳細には、本発明に関連して本明細書中で使用する「癌」の例には、肺癌（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、乳癌、卵巣癌、結腸癌、直腸癌、前立腺癌、肛門部の癌、または前述の癌のうちの１つもしくは複数の組合せから選択される癌が含まれる。
【００８３】
一部の態様では、本発明の化合物は、加齢黄斑変性症（ウェットおよびドライのどちらも）、緑内障、糖尿病性網膜症（糖尿病性黄斑浮腫が含まれる）、脈絡膜血管新生膜（ＣＮＶ）、ブドウ膜炎、近視性変性、眼腫瘍、網膜中心静脈閉塞、ルベオーシス、眼血管新生、中心性漿液性網膜症、ドライアイ、網膜中心動脈閉塞、嚢胞様黄斑浮腫および他の網膜の変性疾患などの眼表面疾患等の、眼の疾患の治療および／または予防に使用し得る。眼内にある間は分子の酵素分解はわずかしか存在しないため、一部の実施形態では、それぞれの標的に対して高い結合親和性を有するが、より低いＰＫ、すなわち半減期を有する分子を用いることが有利であり得るが、分子が眼を離れた後は、眼外での潜在的な直接効果または副作用を最小限にするために、可能な限り早く分子が分解および腎クリアランスを受けることが望ましい場合がある。本発明の一部の態様では、化合物６０３７を眼の疾患の治療に使用する。本発明の一部の態様では、化合物６０４４を眼の疾患の治療に使用する。本発明の一部の態様では、化合物６０５３を眼の疾患の治療に使用する。
【００８４】
本発明による化合物は、溶媒和物、特に水和物であり得る。水和は化合物もしくは化合物を含む組成物の製造中に起こり得るか、または、水和は化合物の吸湿性性質が原因で経時的に起こり得る。
【００８５】
別の態様では、本発明には、化合物および組成物の少なくとも１つの物理的または生物学的特徴を変更する方法が含まれる。この方法には、本発明の［ＶＥＧＦ−ペプチド］を抗体の結合部位と、直接またはリンカーを介して共有結合させることが含まれる。改変し得る本発明の化合物の特徴には、それだけには限定されないが、結合親和性、分解に対する感受性（たとえばプロテアーゼによる）、薬物動態学、薬力学、免疫原性、溶解度、親油性、親水性、疎水性、安定性（ほぼ安定、および予定される分解のどちらか）、強剛性、柔軟性、抗体結合の変調などが含まれる。また、本発明の特定の化合物の生物学的効力は、抗体によって提供されるエフェクター機能（複数可）の追加によって増加させ得る。たとえば、抗体は、補体媒介性のエフェクター機能などのエフェクター機能を提供する。任意の理論によって束縛されることを望まずに、本発明の化合物の抗体部分は、一般に、より小さい大きさの［ＶＥＧＦ−ペプチド］のｉｎ  ｖｉｖｏの半減期を延長し得る。したがって、一態様では、本発明は、［ＶＥＧＦ−ペプチド］の有効な循環半減期を増加させる方法を提供する。
【００８６】
別の態様では、本発明には、ＶＥＧＦ、またはＶＥＧＦおよびＡｎｇ２を含めた１つもしくは複数の他の活性分子に対する結合特異性を生じさせるために、抗体の結合部位を改変する方法が含まれる。そのような方法には、本明細書中に記載のように、抗体の結合部位中の反応性アミノ酸側鎖を、［ＶＥＧＦ−ペプチド］−リンカー化合物のリンカー上の化学部分と共有結合させることが含まれる。リンカーの化学部分は、［ＶＥＧＦ−ペプチド］−リンカー化合物が抗体結合部位と共有結合している場合に、［ＶＥＧＦ−ペプチド］がその同族と結合することができるように、［ＶＥＧＦ−ペプチド］から十分な距離である（他の半減期を増加させる巨大分子を係留するために同様の制約が存在する）。典型的には、抗体は、標的分子に特異的であるとみなされない。特定の実施形態では、共有結合前の抗体は、約１×１０−５モル／リットル未満のＶＥＧＦに対する親和性を有する。しかし、抗体を［ＶＥＧＦ−ペプチド］と共有結合させた後、改変された抗体は、好ましくは、少なくとも約１×１０−６モル／リットル、または、少なくとも約１×１０−７モル／リットル、または、少なくとも１×１０−８モル／リットル、あるいは少なくとも１×１０−９モル／リットル、または、少なくとも約１×１０−１０モル／リットルの、標的分子に対する親和性を有する。
【００８７】
本発明の［ＶＥＧＦ−ペプチド］を免疫適格な個体に投与することで、コンジュゲートに対する抗体の産生がもたらされ得る。そのような抗体は、抗体イディオタイプを含めた可変領域、および標的化剤または標的化剤を抗体とコンジュゲートさせるために使用した任意のリンカーに向けられている場合がある。［ＶＥＧＦ−ペプチド］の免疫原性の減少は、長鎖ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）系のスペーサーなどを［ＶＥＧＦ−ペプチド］と接着させることなどの、当分野で周知の方法によって達成することができる。長鎖ＰＥＧおよび他のポリマーは、外来エピトープを覆うその能力が知られており、これにより、外来エピトープを提示する治療タンパク質の免疫原性の減少がもたらされる（Ｎ．Ｖ．Ｋａｔｒｅ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４４：２０９〜２１３（１９９０）、Ｇ．Ｅ．Ｆｒａｎｃｉｓ他、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．、６８：１〜１８（１９９８）。あるいは、またはそれに加えて、抗体−［ＶＥＧＦ−ペプチド］のコンジュゲートを投与した個体に、シクロスポリンＡ、抗ＣＤ３抗体などの免疫抑制剤を投与し得る。また、上記は、必要な場合は変更を加えて、Ａｎｇ２などの他の活性分子が分枝状リンカーを介して本発明の化合物と共有結合している場合にも適用される。
【００８８】
また、本発明は、本発明の化合物の立体異性体、互変異性体、溶媒和物、プロドラッグ、および薬学的に許容できる塩も提供する。
【００８９】
医薬組成物、投与方法および組合せ療法
本発明はまた、治療上有効な量の本発明の１つまたは複数の化合物を含む医薬組成物も提供する。本発明はまた、そのような組成物を用いた治療方法、および本発明の医薬組成物を調製する方法も提供する。ＵＳ２００６２０５６７０号の内容、特に、投与（［０４９８］、［０４９９］）、配合物（［０４９９］、［０５００］、［０５０１］、［０５０２］）、調製物（［０５０３］、［５０４］）、キット（［０５０５］）、投薬戦略（［０５０６］、［０５０７］、［０５０８］、［０５０９］）を記載している段落［０４９７］〜［０５１０］が、それぞれの標的化剤／アミノ酸標的化剤／本発明の［ペプチド］、および本発明の［ペプチド］が向けられている生物学的標的を可視化または位置決定するための方法の通り本明細書中に参考として組み込まれている。
【００９０】
また、本発明には、本発明の１つまたは複数の化合物または組成物を、１つまたは複数の腫瘍学治療剤と組み合わせて投与することも含まれる、それぞれを、その治療的に適切なレジメンに従って投与する。組合せ療法の構成要素は、同時にまたは同時でなく投与し得る。構成要素は、同じまたは別々の組成物中で、同じまたは異なる投与経路によって投与し得る。適切な腫瘍学治療剤ならびに本発明のペプチドおよび化合物と組み合わせて使用し得る組合せの例は、ＵＳ２００６２０５６７０号（本明細書中に参考として組み込まれている）の表４〜６に記載されている。本発明の医薬組成物は、治療上有効な量の１つまたは複数の化学療法剤をさらに含んでいてもよく、化学療法剤は、好ましくは、５−フルオロウラシル、イリノテカン、タキソテール、スニチニブ、アキシチニブ、オキサリプラチン、ベバシズマブ、セツキシマブ、またはその化学的均等物からなる群から選択される化合物である。一部の態様では、化学療法剤は、５−フルオロウラシル、イリノテカン、タキソテール、スニチニブ、およびアキシチニブ、またはその化学的均等物からなる群から選択される。
【００９１】
本発明の化合物の合成の例
本発明の化合物は、当分野で知られている技術を用いて調製することができる。典型的には、［ＶＥＧＦ−ペプチド］もしくは［Ａｎｇ２−ペプチド］（または他の活性分子）の合成が最初のステップであり、本明細書中に記載のように実施する。その後、接続する構成要素（リンカー）と連結させるために活性分子を誘導体化させて、その後、これを抗体と合わせる。当業者は、使用する具体的な合成ステップが３つの構成要素の正確な性質に依存することを容易に理解されよう。したがって、本明細書中に記載の［ＶＥＧＦ−ペプチド］−リンカーのコンジュゲートおよび本発明の化合物を容易に合成することができる。［ＶＥＧＦ−ペプチド］および［Ａｎｇ２−ペプチド］は、当業者に知られている多くの技術によって合成し得る。固相ペプチド合成には、例示的な技術の要約をＣｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（Ｗｉｌｌｉａｍｓ他編）、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、フロリダ州Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ（１９９７）中に見つけ得る。
【００９２】
典型的には、当分野で周知の手順に従って、所望のペプチド活性分子を固相上で順次合成する。たとえば、米国特許出願第２００３／００４５４７７号を参照されたい。リンカーは、固相上で部分的もしくは完全にペプチドに接着させ得るか、または、ペプチドを樹脂から除去した後に溶液相技術を用いて付加し得る（図１Ａおよび１Ｂを参照）。たとえば、Ｎ−保護したアミノおよびカルボン酸含有連結部分を、４−ヒドロキシメチル−フェノキシメチル−ポリ（スチレン−１％ジビニルベンゼン）などの樹脂に接着させ得る。Ｎ−保護基は、適切な酸（たとえば、ＢｏｃにはＴＦＡ）または塩基（たとえば、Ｆｍｏｃにはピペリジン）によって除去し、ペプチド配列を通常のＣ末端からＮ末端の様式で展開させ得る（図１Ａを参照）。あるいは、ペプチド配列を最初に合成し、リンカーを最後にＮ末端アミノ酸残基に付加し得る（図１Ｂを参照）。さらに別の方法は、合成中に適切な側鎖を脱保護し、適切な反応性のリンカーで誘導体化することを伴う。たとえば、リシン側鎖を脱保護し、活性エステルを有するリンカーと反応させ得る。あるいは、既に側鎖に接着した適切に保護されたリンカー部分を有するアミノ酸誘導体（図１Ｂを参照）、または一部の例ではα−アミノ窒素を、成長しているペプチド配列の一部として付加し得る。
【００９３】
固相合成の最後に、連続してまたは単一操作のどちらかで、標的化剤−リンカーのコンジュゲートを樹脂から除去し、脱保護する。標的化剤−リンカーのコンジュゲートの除去および脱保護は、樹脂と結合したペプチド−リンカーのコンジュゲートを、切断試薬、たとえば、チオアニソール、水、またはエタンジチオールなどの捕捉剤を含有するトリフルオロ酢酸で処理することによって、単一操作で達成することができる。標的化剤の脱保護および放出後、標的化剤ペプチドのさらなる誘導体化を実施し得る。完全に脱保護されたペプチジル活性分子−リンカーのコンジュゲートは、以下の種類のうちの任意のものまたはすべてを用いた、一連のクロマトグラフィーステップによって精製する：酢酸塩形態の弱塩基性の樹脂上のイオン交換、誘導体化していないポリスチレン−ジビニルベンゼン（たとえばＡＭＢＥＲＬＩＴＥ  ＸＡＤ）上の疎水性吸着クロマトグラフィー、シリカゲル吸着クロマトグラフィー、カルボキシメチルセルロース上のイオン交換クロマトグラフィー、たとえばＳＥＰＨＡＤＥＸ  Ｇ−２５、ＬＨ−２０または向流分配上の分配クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、オクチルまたはオクタデシルシリル−シリカ結合相カラム充填上の特に逆相ＨＰＬＣ。
【図面の簡単な説明】
【００９４】
【図１Ａ】本発明の標的化剤−リンカーのコンジュゲートの固相合成を例示する図である。
【図１Ｂ】本発明の標的化剤−リンカーのコンジュゲートの固相合成を例示する図である。
【図２Ａ】ｍ３８ｃ２、ｈ３８ｃ２、およびヒト生殖系列の可変ドメインのアミノ酸配列のアラインメントを例示する図である。フレームワーク領域（ＦＲ）および相補性決定領域（ＣＤＲ）は、Ｋａｂａｔ他に従って定義されている。アステリスク（＊）は、ｍ３８ｃ２とｈ３８ｃ２またはｈ３８ｃ２とヒト生殖系列の間の差異を表す。
【図２Ｂ】ヒト化３８ｃ２  ＩｇＧ１の一実施形態の軽鎖および重鎖（それぞれ配列番号１および２）のアミノ酸配列を例示する図である。
【図３】リンカー反応基として役割を果たし得る様々な構造を示す図である。構造Ａ〜Ｃは、抗体の結合部位の表面接近可能な反応性求核基（たとえば、リシンまたはシステイン側鎖）と可逆的な共有結合を形成する。構造Ａ〜Ｃ中のＲ’１、Ｒ’２、Ｒ’３、およびＲ４は置換基を表し、これらには、たとえば、Ｃ、Ｈ、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）またはその塩が含まれる。Ｘは、Ｎ、Ｃ、または任意の他のヘテロ原子である。また、これらの置換基には、アルキル、アルケニル、アルキニル、オキソアルキル、オキソアルケニル、オキソアルキニル、アミノアルキル、アミノアルケニル、アミノアルキニル、スルホアルキル、スルホアルケニル、またはスルホアルキニル基、ホスホアルキル、ホスホアルケニル、ホスホアルキニル基などの基も含まれ得る。Ｒ’２およびＲ’３は、構造ＢおよびＣに例示するように環状であることができる一方で、Ｘはヘテロ原子であることができる。たとえば、ＸがＮであり、Ｒ’１およびＲ３が環状構造の一部を形成する場合は、構造Ａは、反応性求核剤と不可逆的な共有結合を形成することができる。構造Ｄ〜Ｇは、抗体の結合部位中の反応性求核基と不可逆的な共有結合を形成し得る。これらの構造では、Ｒ’’１およびＲ’’２は、Ｃ、Ｏ、Ｎ、ハロゲン化物またはメシルもしくはトシルなどの脱離基を表す。
【図４】抗体の結合部位中の反応性アミノ酸側鎖を用いた反応性の改変に適切であり、したがってリンカー反応基として役割を果たし得る、様々な求電子剤を示す図である。キー：（Ａ）アシルβ−ラクタム、（Ｂ）単純ジケトン、（Ｃ）スクシンイミド活性エステル、（Ｄ）マレイミド、（Ｅ）リンカーを有するハロアセトアミド、（Ｆ）ハロケトン、（Ｇ）シクロヘキシルジケトン、および（Ｈ）アルデヒド。波線は、リンカーまたは標的化剤の残りの部分との接着点を示す。Ｘはハロゲンを指す。
【図５】図３の化合物Ａ〜Ｇへの、抗体結合部位中の求核性（「ｎｕ」）側鎖の付加を示す図である。抗体−Ｎｕ−は、抗体の結合部位中の求核剤を保有するアミノ酸側鎖との共有結合を指す。
【図６】図５の化合物Ａ〜Ｈと合わせる、抗体中の求核性側鎖の付加を示す図である。抗体−Ｎｕ−は、抗体の結合部位中の求核剤を保有するアミノ酸側鎖との共有結合を指す。
【図７】
【００９５】
【化１２】
2011522794.tif 000013
の合成を示す図である。
【図８】配列番号１５３を例として使用した、［Ａｎｇ２−ペプチド］−［Ａｎｇ２−スペーサー］の例示的な合成を示す図である。
【図９】配列番号１８８を例として使用した、［ＶＥＧＦ−ペプチド］−［ＶＥＧＦ−スペーサー］の例示的な合成を示す図である。
【図１０】化合物５０５３の例示的な合成を示す図である。
【図１１】ビヒクルまたは化合物６０５３で治療した後（ＩＰ、１回／週）の、Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植の腫瘍体積を示す図である。データは、０〜３５日目ではｎ＝２０匹／群（３５日目を超えるすべての群ではｎ＝１０）の平均およびＳＥとして示し、垂直の矢印は最初の投薬日を示す。３５日目に対ビヒクルで＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１（ダネットの多重比較試験を用いた一方向ＡＮＯＶＡ）。
【図１２】ビヒクルまたは化合物６０５３で治療した後（ＩＰ、１回／週）の、Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植の腫瘍微小血管密度を示す図である。データは、ｎ＝９〜１０匹／群の平均およびＳＥとして示す。対ビヒクルで＊Ｐ＜０．０５（ダネットの多重比較試験を用いた一方向ＡＮＯＶＡ）。
【図１３】ビヒクルまたは化合物６０５３で治療した後（ＩＰ、１回／週）の、Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植の腫瘍体積を示す図である。データは、ｎ＝１０匹／群の平均およびＳＥとして示し、垂直の矢印は最初の投薬日を示す。対ビヒクルで＊＊Ｐ＜０．０１（ダネットの多重比較試験を用いた一方向ＡＮＯＶＡ）。
【図１４】ビヒクルまたは化合物６０５３で治療した後（ＩＰ、１回／週）の、Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植の生存腫瘍体積を示す図である。データは、ｎ＝９〜１０匹／群の平均およびＳＥとして示す。対ビヒクルで＊＊Ｐ＜０．０１（ダネットの多重比較試験を用いた一方向ＡＮＯＶＡ）。
【図１５】ビヒクルまたは化合物６０５３で治療した後（ＩＰ、１回／週）の、Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植のＡｎｇ２免疫反応性を示す図である。データは、ｎ＝９〜１０匹／群の平均およびＳＥとして示す。対ビヒクルで＊＊Ｐ＜０．０１（ダネットの多重比較試験を用いた一方向ＡＮＯＶＡ）。
【図１６】ビヒクルまたは化合物６０５３で治療した後（ＩＰ、１回／週）の、Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植のＶＥＧＦＲ２の免疫反応性の合計の割合としての、リン酸化ＶＥＧＦＲ２（ｐＶＥＧＦＲ２）の免疫反応性を示す図である。データは、ｎ＝９〜１０匹／群の平均およびＳＥとして示す。対ビヒクルで＊＊Ｐ＜０．０１（ダネットの多重比較試験を用いた一方向ＡＮＯＶＡ）。
【図１７】ビヒクルまたは化合物６０５３で毎週治療した後（ＩＰ、１回／週）の、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５乳腺癌（Ａ）およびＡ４３１皮膚癌（Ｂ）の腫瘍体積を示す図である。データは、ｎ＝９〜１０匹／群の平均およびＳＥとして示し、垂直の矢印は最初の投薬日を示す。６８日目に対ビヒクルで＊Ｐ＜０．０５、３５日目に対ビヒクルで＊＊Ｐ＜０．０１（ダネットの多重比較試験を用いた一方向ＡＮＯＶＡ）。
【図１８】ビヒクル、化合物６０５３単独（ＩＰ）、５−ＦＵ単独（ＩＰ）、または５−ＦＵと組み合わせた化合物６０５３（どちらもＩＰ）で週１回治療した後の、Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植の腫瘍体積を示す図である。データは、ｎ＝９〜１０匹／群の平均およびＳＥとして示し、垂直の矢印は最初の投薬日を示す。２９日目に対ビヒクルで＊＊Ｐ＜０．０１（ボンフェローニの多重比較試験を用いた一方向ＡＮＯＶＡ）。
【図１９】ビヒクル、化合物６０５３単独（ＩＰ）、イリノテカン単独（ＩＰ）、またはイリノテカンと組み合わせた化合物６０５３（どちらもＩＰ）で毎週治療した後の、Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植の腫瘍体積を示す図である。データは、ｎ＝９〜１０匹／群の平均およびＳＥとして示し、垂直の矢印は最初の投薬日を示す。２９日目に対ビヒクルで＊＊Ｐ＜０．０１（ボンフェローニの多重比較試験を用いた一方向ＡＮＯＶＡ）。
【図２０】ビヒクル、化合物６０５３単独（ＩＰ）、タキソテール単独（ＩＰ）、またはタキソテールと組み合わせた化合物６０５３（どちらもＩＰ）で週１回治療した後の、Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植の腫瘍体積を示す図である。データは、ｎ＝９〜１０匹／群の平均およびＳＥとして示し、垂直の矢印は最初の投薬日を示す。２９日目に対ビヒクルで＊＊Ｐ＜０．０１、対ビヒクルおよび対化合物６０５３単独で＊＊＊Ｐ＜０．０１（ボンフェローニの多重比較試験を用いた一方向ＡＮＯＶＡ）。
【図２１】ビヒクル、化合物６０５３単独（ＩＰ）、毎日のスニチニブ（ＰＯ）、またはスニチニブ（ＰＯ）と組み合わせた化合物６０５３（ＩＰ）で週１回治療した後の、Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植の腫瘍体積を示す図である。データは、ｎ＝９〜１０匹／群の平均およびＳＥとして示し、垂直の矢印は最初の投薬日を示す。２８日目に対ビヒクルで＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１（ボンフェローニの多重比較試験を用いた一方向ＡＮＯＶＡ）。
【図２２】ビヒクル、化合物６０５３単独（ＩＰ）、毎日のアキシチニブ（ＰＯ）、またはアキシチニブ（ＰＯ）と組み合わせた化合物６０５３（ＩＰ）で週１回治療した後の、Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植の腫瘍体積を示す図である。データは、ｎ＝９〜１０匹／群の平均およびＳＥとして示し、垂直の矢印は最初の投薬日を示す。２８日目に対ビヒクルで＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１（ボンフェローニの多重比較試験を用いた一方向ＡＮＯＶＡ）。
【図２３】ビヒクル、化合物２０７１、化合物２０４９、または化合物２０４６（すべてＩＰ）で週１回治療した後の、Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植の腫瘍体積を示す図である。データは、ｎ＝１０匹／群の平均およびＳＥとして示し、垂直の矢印は最初の投薬日を示す。
【図２４】ビヒクル、化合物２０４９、化合物６０４５、化合物６０４２、または化合物６０５３（すべてＩＰ）で週１回治療した後の、Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植の腫瘍体積を示す図である。データは、ｎ＝１０匹／群の平均およびＳＥとして示し、垂直の矢印は最初の投薬日を示す。２８日目に対ビヒクルで＊＊Ｐ＜０．０１（化合物６０４５、６０４２、および６０５３）。
【図２５】ビヒクル、化合物４０４３、化合物２０１８、または化合物６０５３（すべてＩＰ）で週１回治療した後の、Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植の腫瘍体積を示す図である。データは、ｎ＝１０匹／群の平均およびＳＥとして示し、垂直の矢印は最初の投薬日を示す。２８日目に対ビヒクルで＊＊Ｐ＜０．０１（化合物４０４３および２０１８）、２８日目に対ビヒクルで＊＊＊Ｐ＜０．００１（化合物６０５３、１０および３０ｍｇ／ｋｇの毎週の用量）。
【図２６】ビヒクル、化合物２０１８、化合物４０４３、化合物６０５３、化合物６０６２、または化合物２０１８および４０４３の組合せ（すべてＩＰ）で週１回治療した後の、Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植の腫瘍体積を示す図である。データは、ｎ＝９匹／群の平均およびＳＥとして示し、垂直の矢印は最初の投薬日を示す。
【図２７】ビヒクル、化合物４０４３、化合物２０１８、化合物６０５３、または化合物４０４３および２０１８の組合せ（すべてＩＰ）で週１回治療した後の、Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植の腫瘍体積を示す図である。データは、ｎ＝１０匹／群の平均およびＳＥとして示し、垂直の矢印は最初の投薬日を示す。４２日目に対ビヒクルで＊＊Ｐ＜０．０１（化合物４０４３および６０５３、ならびに化合物４０４３および２０１８の組合せ）。
【図２８】ビヒクル、化合物４０４３、化合物２０１８、化合物６０５３、または化合物４０４３および２０１８の組合せ（すべてＩＰ）で週１回治療した後の、Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植の腫瘍体積を示す図である。データは、ｎ＝１０匹／群の平均およびＳＥとして示し、垂直の矢印は最初の投薬日を示す。３２日目に対ビヒクルで＊Ｐ＜０．０５（化合物２０１８、ならびに化合物４０４３および２０１８の組合せ）、３２日目に対ビヒクルで＊＊Ｐ＜０．０１（化合物６０５３）。
【図２９】ＩＶＴ注射の３日後およびＶＥＧＦ投薬の４８時間後での、ウサギＶＥＧＦ誘導性網膜漏出におけるフルオレセイン血管造影法の等級付けを示す図である。化合物６０３７の用量応答研究。
【図３０】ＩＶＴ注射の７日後およびＶＥＧＦ投薬の４８時間後での、ウサギＶＥＧＦ誘導性網膜漏出におけるフルオレセイン血管造影法の等級付けを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００９６】
定義
以下の略記、用語および語句は、本明細書中では以下に定義するように使用する。
【００９７】
非天然アミノ酸の略記
ＢｎＨＰとは、（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシプロリンを指す。
【００９８】
Ｔｌｅとは、ｔｅｒｔブチルグリシンを指す。
【００９９】
メチルチロシンまたはＴｙｒ−ＯＭｅ（Ｙｍｅ）とは、以下を指す。
【０１００】
【化１３】
2011522794.tif 000014
【０１０１】
ノルバリンまたはＮｖａとは、以下を指す。
【０１０２】
【化１４】
2011522794.tif 000015
【０１０３】
デヒドロプロリンまたはＤＨＰとは、以下を指す。
【０１０４】
【化１５】
2011522794.tif 000016
【０１０５】
ヒドロキシプロリンまたはＨＰとは、以下を指す。
【０１０６】
【化１６】
2011522794.tif 000017
【０１０７】
ホモシクロヘキシルアラニンまたはＨＣｈＡとは、以下を指す。
【０１０８】
【化１７】
2011522794.tif 000018
【０１０９】
ホモフェニルアラニンまたはＨＦとは、以下を指す。
【０１１０】
【化１８】
2011522794.tif 000019
【０１１１】
チアゾリルアラニンまたはＴｈＡとは、以下を指す。
【０１１２】
【化１９】
2011522794.tif 000020
【０１１３】
ホモロイシンまたはＨＬとは、以下を指す。
【０１１４】
【化２０】
2011522794.tif 000021
【０１１５】
εアシルリシンまたはＫａｃ（またはＡｃＫ）とは、以下を指す。
【０１１６】
【化２１】
2011522794.tif 000022
【０１１７】
４−ベンゾイルフェニルアラニンまたはＢＰＡとは、以下を指す。
【０１１８】
【化２２】
2011522794.tif 000023
【０１１９】
εクロロベンジルカルバメートリシンまたは（ＣｌＢｎカルバメート）ＫまたはＣｂｃＫとは、以下を指す。
【０１２０】
【化２３】
2011522794.tif 000024
【０１２１】
チエニルアラニンまたはＴＡとは、以下を指す。
【０１２２】
【化２４】
2011522794.tif 000025
【０１２３】
ジアミノ酪酸またはＤａｂとは、以下を指す。
【０１２４】
【化２５】
2011522794.tif 000026
【０１２５】
ジアミノプロピオン酸またはＤａｐとは、以下を指す。
【０１２６】
【化２６】
2011522794.tif 000027
【０１２７】
４−ニトロフェニルアラニンまたはＮＯ２ＦまたはＮＦとは、以下である。
【０１２８】
【化２７】
2011522794.tif 000028
【０１２９】
４−カルボキシフェニルアラニンまたは（ＣＯ２Ｈ）ＦまたはＣＦとは、以下である。
【０１３０】
【化２８】
2011522794.tif 000029
【０１３１】
アミド２−ＰＥＧとは、以下を指す。
【０１３２】
【化２９】
2011522794.tif 000030
【０１３３】
ニコチニルリシン（ＮｉｃＫ）とは、以下を指す。
【０１３４】
【化３０】
2011522794.tif 000031
【０１３５】
ジフルオロベンゾイルまたはＤＦＢとは、以下を指す。
【０１３６】
【化３１】
2011522794.tif 000032
【０１３７】
ジクロロベンゾイルまたはＤＣＢとは、以下を指す。
【０１３８】
【化３２】
2011522794.tif 000033
【０１３９】
「Ｏ」ＰＥＧまたはＯＰとは、以下を指す。
【０１４０】
【化３３】
2011522794.tif 000034
【０１４１】
ピリジニルカルボキシレートまたはＰｙＣとは、以下を指す。
【０１４２】
【化３４】
2011522794.tif 000035
【０１４３】
「４」ＰＥＧまたは４Ｐ（リシン残基と接着して示す）とは、以下を指す。
【０１４４】
【化３５】
2011522794.tif 000036
【０１４５】
サルコシンまたはＳａｒとは、以下を指す。
【０１４６】
【化３６】
2011522794.tif 000037
【０１４７】
ノルロイシン（Ｎｌｅ）とは、以下を指す。
【０１４８】
【化３７】
2011522794.tif 000038
【０１４９】
２−アミノ酪酸（Ａｉｂ）とは、以下を指す。
【０１５０】
【化３８】
2011522794.tif 000039
【０１５１】
Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン（Ｙｍｅ）とは、以下を指す。
【０１５２】
【化３９】
2011522794.tif 000040
【０１５３】
β−シクロヘキシル−Ｌ−アラニン（Ｃｈａ）とは、以下を指す。
【０１５４】
【化４０】
2011522794.tif 000041
【０１５５】
Ｌ−チロシンメチルエステル（ＹＯＭｅ）とは、以下を指す。
【０１５６】
【化４１】
2011522794.tif 000042
【０１５７】
接頭辞「Ｄ」、たとえば、Ｄ−ＡｌａもしくはＮ−Ｍｅ−Ｄ−Ｉｌｅ、または小文字で記載した場合、たとえば、ａ、ｉ、ｌ（Ａｌａ、Ｉｌｅ、ＬｅｕのＤ型）によって別段に指摘しない限りは、本明細書および添付の特許請求の範囲に記載されているペプチド中のアミノ酸およびアミノアシル残基のα−炭素の立体化学は、天然または「Ｌ」立体配置である。カーン−インゴールド−プレローグの「Ｒ」および「Ｓ」の指示は、ペプチドのＮ末端にある特定のアシル置換基中のキラル中心の立体化学を指定するために使用する。指示「Ｒ，Ｓ」とは、２つの鏡像異性体のラセミ混合物を示すことを意味する。この命名法は、Ｒ．Ｓ．Ｃａｈｎ他、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．、５：３８５〜４１５（１９６６）に記載されているものに従う。
【０１５８】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」とは、互換性があるように使用され、アミノ酸残基のポリマーをいう。本明細書中で使用するこれらの用語は、それ中の１つまたは複数のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工の化学類似体であるアミノ酸ポリマーに適用される。また、これらの用語は、天然に存在するアミノ酸ポリマーにも適用される。アミノ酸は、ペプチドの結合機能が維持されている限りは、ＬまたはＤ型であることができる。ペプチドは、ペプチド内の２つの非隣接アミノ酸間の分子内結合を有する環状、たとえば、主鎖から主鎖、側鎖から主鎖および側鎖から側鎖の環化であってもよい。環状ペプチドは、当分野で周知の方法によって調製することができる。たとえば、米国特許第６，０１３，６２５号を参照されたい。
【０１５９】
すべてのペプチド配列は、α−Ｎ末端アミノ酸残基が左にあり、α−Ｃ末端アミノ酸残基が右にある、一般に認識されている慣習に従って記載する。本明細書中で使用する用語「Ｎ末端」とは、ペプチド中のアミノ酸の遊離α−アミノ基をいい、用語「Ｃ末端」とは、ペプチド中のアミノ酸の遊離α−カルボン酸末端をいう。基でＮ末端化されたペプチドとは、Ｎ末端アミノ酸残基のα−アミノ窒素上に基を保有するペプチドをいう。基でＮ末端化されたアミノ酸とは、α−アミノ窒素上に基を保有するアミノ酸をいう。
【０１６０】
一般に、用語「疎水性アミノ酸」または「非極性アミノ酸」とは、生理的ｐＨでイオン化された基を含有しないアミノ酸残基を意味する。疎水性アミノ酸残基の例には、それだけには限定されないが、Ｇｌｙ、アリルグリシン、シクロヘキシルグリシン（Ｃｈｇ）、Ｄｐｇ、ヒドロキシプロリン、ＨｏＬｅｕ、アロＩｌｅ、Ａｌａ、Ａｂｕ（アミノ酪酸）、ホモシクロロイシン、Ａｃｐｃ（１−アミノシクロプロパン−１−カルボン酸）、Ａｉｂ、Ａｉｃ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｃｙｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｃｈａ（β−シクロヘキシルアラニン）、シクロペンチルアラニン、β−シクロプロピルアラニン、３，３−ジフェニルアラニン、β−２−フリルアラニン、ホモシクロヘキシルアラニン（ＨｏＣｈａ）３−（１−ナフチルアラニン、２−フリルアラニン、ピリジルアラニン、キノリルアラニン、チアゾリルアラニン、チエニルアラニン、Ｖａｌ、Ｎｖａ、環置換フェニルアラニン、Ｓａｒ、ＨｏＳｅｒ、Ｔｉｃ、Ｔｉｃ（ＯＨ）、環置換トリプトファン、環置換チロシン、およびその誘導体が含まれる。
【０１６１】
一般に、用語「脂肪族アミノ酸」および「非極性の脂肪族アミノ酸」とは、非芳香族の疎水性側鎖を有するアミノ酸を意味する。例には、それだけには限定されないが、Ａｌａ、アリルＧｌｙ、Ｎｖａ、Ｃｈｇ、Ａｂｕ、Ａｉｂ、Ａｉｃ、Ａｃｐｃ、ホモシクロロイシン、シクロペンチルアラニン、β−シクロプロピルアラニン、Ｃｈａ、ＨｏＣｈａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、およびＭｅｔならびにその誘導体が含まれる。
【０１６２】
一般に、用語「芳香族アミノ酸」とは、芳香環側鎖を有するアミノ酸を意味する。例には、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、２−フリルアラニン、Ｔｙｒ（Ｍｅ）およびその誘導体が含まれる。
【０１６３】
一般に、用語「極性アミノ酸」には、極性および非荷電のアミノ酸、負荷電アミノ酸ならびに正荷電アミノ酸が含まれる。例には、Ａｒｇ、ＨｏＡｒｇ、Ｃｉｔ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｙｓ（Ａｃ）、およびその誘導体が含まれる。
【０１６４】
一般に、用語「正荷電アミノ酸」（または塩基性アミノ酸）とは、生理的条件で側鎖がプロトン化されているまたはプロトン化され得るアミノ酸を意味する。例には、それだけには限定されないが、Ｌｙｓ、オルニチン（Ｏｒｎ）、Ａｒｇ、ＨｏＡｒｇ、Ｄａｂ、Ｄａｐ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓおよびその誘導体が含まれる。
【０１６５】
一般に、用語「負荷電アミノ酸」（または酸性アミノ酸）とは、生理条件下で側鎖が脱プロトン化され得るアミノ酸を意味する。例には、それだけには限定されないが、Ａｓｐ、Ａｓｕ、Ｇｌｕ、Ａａｄ、およびその誘導体が含まれる。
【０１６６】
一般に、「極性の非荷電アミノ酸」とは、生理的条件下で水とＨ結合を形成することができる非荷電側鎖を有するアミノ酸を意味する。例には、それだけには限定されないが、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ（Ａｃ）、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｉｔ、ＨｏＣｉｔおよびその誘導体が含まれる。
【０１６７】
「実質的に相同的」とは、少なくとも約７５％、好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、または最も好ましくは少なくとも約９５％の、定義された長さのペプチド配列にわたるアミノ酸残基の一致を意味する。実質的に相同的な配列は、国立バイオテクノロジー情報がんセンター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）からｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖで入手可能なＢＬＡＳＴプログラムなどの、配列データバンクで利用可能な標準のソフトウェアを用いて、配列を比較することによって同定することができる。
【０１６８】
一般に、「置換された」とは、それ中に含有される水素原子との１つまたは複数の結合が、それだけには限定されないが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩなどのハロゲン原子、ヒドロキシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、およびエステル基などの基中の酸素原子、チオール基、アルキルおよびアリールスルフィド基、スルホン基、スルホニル基、スルホキシド基などの基中の硫黄原子、アミン、アミド、アルキルアミン、ジアルキルアミン、アリールアミン、アルキルアリールアミン、ジアリールアミン、Ｎ−オキシド、イミド、およびエナミンなどの基中の窒素原子、トリアルキルシリル基、ジアルキルアリールシリル基、アルキルジアリールシリル基、およびトリアリールシリル基などの基中のケイ素原子、ならびに様々な他の基中の他のヘテロ原子等の、非水素または非炭素原子との結合によって置き換えられている、以下に定義する基をいう。また、置換アルキル基および置換シクロアルキル基などには、炭素または水素原子との１つまたは複数の結合が、カルボニル、カルボキシル、およびエステル基中の酸素、イミン、オキシム、ヒドラゾン、およびニトリルなどの基中の窒素等のヘテロ原子との結合によって置き換えられている基も含まれる。本明細書中で用いる「置換されていてよい」基とは、置換または非置換であり得る。したがって、たとえば、「置換されていてよいアルキル」とは、置換アルキル基および非置換アルキル基をどちらもいう。
【０１６９】
語句「非置換アルキル」とは、ヘテロ原子を含有しないアルキル基をいう。したがって、この語句には、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシルなどの直鎖状アルキル基が含まれる。また、この語句には、それだけには限定されないが、例として以下に提供するものを含めた、直鎖状アルキル基の分枝鎖状異性体も含まれる：−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）など。この語句には、シクロアルキル基は含まれない。したがって、語句、非置換アルキル基には、第一級アルキル基、第二級アルキル基、および第三級アルキル基が含まれる。非置換アルキル基は、親化合物中の１つまたは複数の炭素原子、酸素原子、窒素原子、および／または硫黄原子と結合していてよい。可能な非置換アルキル基には、１〜２０個の炭素原子を有する直鎖および分枝鎖状のアルキル基が含まれる。あるいは、そのような非置換アルキル基は、１〜１０個の炭素原子を有するか、または１〜約６個の炭素原子を有する低級アルキル基である。他の非置換アルキル基には、１〜３個の炭素原子を有する直鎖および分枝鎖状のアルキル基が含まれ、メチル、エチル、プロピル、および−ＣＨ（ＣＨ３）２が含まれる。
【０１７０】
語句「置換アルキル」とは、炭素または水素との１つまたは複数の結合が、それだけには限定されないが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩなどのハロゲン化物中のハロゲン原子、ヒドロキシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、およびエステル基などの基中の酸素原子、チオール基、アルキルおよびアリールスルフィド基、スルホン基、スルホニル基、スルホキシド基などの基中の硫黄原子、アミン、アミド、アルキルアミン、ジアルキルアミン、アリールアミン、アルキルアリールアミン、ジアリールアミン、Ｎ−オキシド、イミド、およびエナミンなどの基中の窒素原子、トリアルキルシリル基、ジアルキルアリールシリル基、アルキルジアリールシリル基、およびトリアリールシリル基などの基中のケイ素原子、ならびに様々な他の基中の他のヘテロ原子等の、非水素および非炭素原子との結合によって置き換えられているアルキル基をいう。また、置換アルキル基には、炭素または水素原子との１つまたは複数の結合が、カルボニル、カルボキシル、およびエステル基中の酸素、イミン、オキシム、ヒドラゾン、およびニトリルなどの基中の窒素等のヘテロ原子によって置き換えられている基も含まれる。置換アルキル基には、とりわけ、炭素または水素原子との１つまたは複数の結合が、フッ素原子との１つまたは複数の結合によって置き換えられているアルキル基が含まれる。置換アルキル基の一例は、トリフルオロメチル基を含有するトリフルオロメチル基および他のアルキル基である。他のアルキル基には、置換アルキル基がヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ基、またはヘテロシクリルオキシ基を含有するように、炭素または水素原子との１つまたは複数の結合が、酸素原子との結合によって置き換えられているものが含まれる。さらに他のアルキル基には、アミン、アルキルアミン、ジアルキルアミン、アリールアミン、（アルキル）（アリール）アミン、ジアリールアミン、ヘテロシクリルアミン、（アルキル）（ヘテロシクリル）アミン、（アリール）（ヘテロシクリル）アミン、またはジヘテロシクリルアミン基を有するアルキル基が含まれる。
【０１７１】
語句「非置換アルキレン」とは、上記定義した二価の非置換アルキル基をいう。したがって、メチレン、エチレン、およびプロピレンは、それぞれ非置換アルキレンの例である。語句「置換アルキレン」とは、上記定義した二価の置換アルキル基をいう。置換または非置換の低級アルキレン基は、１〜約６個の炭素を有する。
【０１７２】
語句「非置換シクロアルキル」とは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルなどの環状アルキル基、ならびに上記定義した直鎖および分枝鎖状のアルキル基で置換されたそのような環をいう。また、この語句には、それだけには限定されないが、アダマンチルノルボルニル、およびビシクロ［２．２．２］オクチルなどなどの多環アルキル基、ならびに上記定義した直鎖および分枝鎖状のアルキル基で置換されたそのような環も含まれる。したがって、この語句には、とりわけ、メチルシクロヘキシル基が含まれる。この語句には、ヘテロ原子を含有する環状アルキル基は含まれない。非置換シクロアルキル基は、親化合物中の１つまたは複数の炭素原子、酸素原子、窒素原子、および／または硫黄原子と結合していてよい。一部の実施形態では、非置換シクロアルキル基は３〜２０個の炭素原子を有する。他の実施形態では、そのような非置換アルキル基は３〜８個の炭素原子を有し、他のものでは、そのような基は３〜７個の炭素原子を有する。
【０１７３】
語句「置換シクロアルキル」は、置換アルキル基が非置換アルキル基に対して有するものと同じ意味を、非置換シクロアルキル基に対して有する。したがって、この語句には、それだけには限定されないが、オキソシクロヘキシル、クロロシクロヘキシル、ヒドロキシシクロペンチル、およびクロロメチルシクロヘキシル基が含まれる。
【０１７４】
語句「非置換アリール」とは、ヘテロ原子を含有しないアリール基をいう。したがって、この語句には、それだけには限定されないが、例として、フェニル、ビフェニル、アントラセニル、およびナフテニルなどの基が含まれる。語句「非置換アリール」には、ナフタレンなどの縮合環を含有する基が含まれるが、トリルなどのアリール基は本明細書中で以下に記載の置換アリール基であるとみなされるため、環員のうちの１つと結合したアルキルまたはハロ基などの他の基を有するアリール基は含まれない。典型的には、非置換アリールは、６〜約１０個の炭素原子を有する低級アリールであり得る。１つの非置換アリール基はフェニルである。しかし、非置換アリール基は、親化合物中の１つまたは複数の炭素原子、酸素原子、窒素原子、および／または硫黄原子と結合していてよい。
【０１７５】
語句「置換アリール基」は、置換アルキル基が非置換アルキル基に対して有するものと同じ意味を、非置換アリール基に対して有する。しかし、置換アリール基には、芳香族炭素のうちの１つが上述の非炭素または非水素原子のうちの１つと結合しているアリール基も含まれ、また、アリール基の１つまたは複数の芳香族炭素が本明細書中に定義した置換および／または非置換のアルキル、アルケニル、またはアルキニル基と結合しているアリール基も含まれる。これには、アリール基の２個の炭素原子がアルキル、アルケニル、またはアルキニル基の２個の原子と結合して、縮合環系（たとえば、ジヒドロナフチルまたはテトラヒドロナフチル）を定義する結合配置が含まれる。したがって、語句「置換アリール」には、それだけには限定されないが、とりわけ、トリルおよびヒドロキシフェニルが含まれる。
【０１７６】
語句「非置換アルケニル」とは、少なくとも１つの二重結合が２個の炭素原子間に存在する以外は、上記定義した非置換アルキル基に関して記載したものなどの、直鎖および分枝鎖状ならびに環状の基をいう。例には、それだけには限定されないが、とりわけ、ビニル、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）＝Ｃ（Ｈ）２、−Ｃ（ＣＨ３）＝Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）、−Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）＝ＣＨ２、シクロヘキセニル、シクロペンテニル、シクロヘキサジエニル、ブタジエニル、ペンタジエニル、およびヘキサジエニルが含まれる。低級非置換アルケニル基は１〜約６個の炭素を有する。
【０１７７】
語句「置換アルケニル」は、置換アルキル基が非置換アルキル基に対して有するものと同じ意味を、非置換アルケニル基に対して有する。置換アルケニル基には、非炭素または非水素原子が別の炭素と二重結合した炭素と結合しているアルケニル基、および非炭素または非水素原子のうちの１つが別の炭素との二重結合に関与していない炭素と結合しているアルケニル基が含まれる。たとえば、−ＣＨ＝ＣＨ−ＯＣＨ３および−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＯＨはどちらも置換アルケニルである。−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３などの、ＣＨ２基がカルボニルによって置き換えられているオキソアルケニルも置換アルケニルである。語句「非置換アルケニレン」とは、上記定義した二価の非置換アルケニル基をいう。たとえば、−ＣＨ＝ＣＨ−は例示的な非置換アルケニレンである。語句「置換アルケニレン」とは、上記定義した二価の置換アルケニル基をいう。
【０１７８】
語句「非置換アルキニル」とは、少なくとも１つの三重結合が２個の炭素原子間に存在する以外は、上記定義した非置換アルキル基に関して記載したものなどの、直鎖および分枝鎖状の基をいう。例には、それだけには限定されないが、とりわけ、−Ｃ≡Ｃ（Ｈ）、−Ｃ≡Ｃ（ＣＨ３）、−Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）、−Ｃ（Ｈ２）Ｃ≡Ｃ（Ｈ）、−Ｃ（Ｈ）２Ｃ≡Ｃ（ＣＨ３）、および−Ｃ（Ｈ）２Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）が含まれる。非置換低級アルキニル基は１〜約６個の炭素を有する。
【０１７９】
語句「置換アルキニル」は、置換アルキル基が非置換アルキル基に対して有するものと同じ意味を、非置換アルキニル基に対して有する。置換アルキニル基には、非炭素または非水素原子が別の炭素と三重結合した炭素と結合しているアルキニル基、および非炭素または非水素原子が別の炭素との三重結合に関与していない炭素と結合しているアルキニル基が含まれる。例には、それだけには限定されないが、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ≡ＣＨ−ＣＨ３および−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ≡ＣＨなどの、ＣＨ２基がカルボニルによって置き換えられているオキソアルキニルが含まれる。
【０１８０】
語句「非置換アルキニレン」とは、上記定義した二価の非置換アルキニル基をいう。−Ｃ≡Ｃ−は非置換アルキニレンの一例である。語句「置換アルキニレン」とは、上記定義した二価の置換アルキニル基をいう。
【０１８１】
語句「非置換アラルキル」とは、非置換アルキル基の水素または炭素結合が上記定義したアリール基との結合によって置き換えられている、上記定義した非置換アルキル基をいう。たとえば、メチル（−ＣＨ３）は非置換アルキル基である。メチル基の水素原子がフェニル基との結合によって置き換えられている場合、たとえばメチルの炭素がベンゼンの炭素と結合している場合、化合物は非置換アラルキル基である（すなわちベンジル基）。したがって、この語句には、それだけには限定されないが、ベンジル、ジフェニルメチル、および１−フェニルエチル（−ＣＨ（Ｃ６Ｈ５）（ＣＨ３））などの基が含まれる。
【０１８２】
語句「置換アラルキル」は、置換アリール基が非置換アリール基に対して有するものと同じ意味を、非置換アラルキル基に対して有する。しかし、置換アラルキルには、基のアルキル部分の炭素または水素結合が非炭素または非水素原子との結合によって置き換えられている基も含まれる。置換アラルキル基の例には、それだけには限定されないが、−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ６Ｈ５）、および−ＣＨ２（２−メチルフェニル）が含まれる。
【０１８３】
語句「非置換アラルケニル」とは、非置換アルケニル基の水素または炭素結合が上記定義したアリール基との結合で置き換えられている、上記定義した非置換アルケニル基をいう。たとえば、ビニルは非置換アルケニル基である。ビニル基の水素原子がフェニル基との結合によって置き換えられている場合、たとえばビニルの炭素がベンゼンの炭素と結合している場合、化合物は非置換アラルケニル基である（すなわちスチリル基）。したがって、この語句には、それだけには限定されないが、スチリル、ジフェニルビニル、および１−フェニルエテニル（−Ｃ（Ｃ６Ｈ５）（ＣＨ２））などの基が含まれる。
【０１８４】
語句「置換アラルケニル」は、置換アリール基が非置換アリール基に対して有するものと同じ意味を、非置換アラルケニル基に対して有する。置換アラルケニル基には、基のアルケニル部分の炭素または水素結合が非炭素または非水素原子との結合によって置き換えられている基も含まれる。置換アラルケニル基の例には、それだけには限定されないが、−ＣＨ＝Ｃ（Ｃｌ）（Ｃ６Ｈ５）および−ＣＨ＝ＣＨ（２−メチルフェニル）が含まれる。語句「非置換アラルキニル」とは、非置換アルキニル基の水素または炭素結合が上記定義したアリール基との結合によって置き換えられている、上記定義した非置換アルキニル基をいう。たとえば、アセチレンは非置換アルキニル基である。アセチレン基の水素原子がフェニル基との結合によって置き換えられている場合、たとえばアセチレンの炭素がベンゼンの炭素と結合している場合、化合物は非置換アラルキニル基である。したがって、この語句には、それだけには限定されないが、−Ｃ≡Ｃ−フェニルおよび−ＣＨ２−Ｃ≡Ｃ−フェニルなどの基が含まれる。語句「置換アラルキニル」は、置換アリール基が非置換アリール基に対して有するものと同じ意味を、非置換アラルキニル基に対して有する。しかし、置換アラルキニル基には、基のアルキニル部分の炭素または水素結合が非炭素または非水素原子との結合によって置き換えられている基も含まれる。置換アラルキニル基の例には、それだけには限定されないが、−Ｃ≡Ｃ−Ｃ（Ｂｒ）（Ｃ６Ｈ５）および−Ｃ≡Ｃ（２−メチルフェニル）が含まれる。
【０１８５】
語句「非置換ヘテロアルキル」とは、炭素鎖がＮ、Ｏ、およびＳから選択される１つまたは複数のヘテロ原子によって中断されている、上記定義した非置換アルキル基をいう。Ｎを含有する非置換ヘテロアルキルは、炭素鎖中にＮＨまたはＮ（非置換アルキル）を有し得る。たとえば、非置換ヘテロアルキルには、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシアルコキシ、チオエーテル、アルキルアミノアルキル、アミノアルキルオキシ、および他のそのような基が含まれる。典型的には、非置換ヘテロアルキル基は、１〜５個のヘテロ原子、特に１〜３個のヘテロ原子を含有する。一部の実施形態では、非置換ヘテロアルキルには、たとえば、エチルオキシエチルオキシエチルオキシなどのアルコキシアルコキシアルコキシ基が含まれる。語句「置換ヘテロアルキル」は、置換アルキル基が非置換アルキル基に対して有するものと同じ意味を、非置換ヘテロアルキル基に対して有する。
【０１８６】
語句「非置換ヘテロアルキレン」とは、上記定義した二価の非置換ヘテロアルキル基をいう。たとえば、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−および−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−はどちらも例示的な非置換ヘテロアルキレンである。語句「置換ヘテロアルキレン」とは、上記定義した二価の置換ヘテロアルキル基をいう。
【０１８７】
語句「非置換ヘテロアルケニル」とは、炭素鎖がＮ、Ｏ、およびＳから選択される１つまたは複数のヘテロ原子によって中断されている、上記定義した非置換アルケン基をいう。Ｎを含有する非置換ヘテロアルケニルは、炭素鎖中にＮＨまたはＮ（非置換アルキルまたはアルケン）を有し得る。語句「置換ヘテロアルケニル」は、置換ヘテロアルキル基が非置換ヘテロアルキル基に対して有するものと同じ意味を、非置換ヘテロアルケニル基に対して有する。
【０１８８】
語句「非置換ヘテロアルケニレン」とは、上記定義した二価の非置換ヘテロアルケニル基をいう。したがって、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ＝ＣＨ−は非置換ヘテロアルケニレンの一例である。語句「置換ヘテロアルケニレン」とは、上記定義した二価の置換ヘテロアルケニル基をいう。
【０１８９】
語句「非置換ヘテロアルキニル」とは、炭素鎖がＮ、Ｏ、およびＳから選択される１つまたは複数のヘテロ原子によって中断されている、上記定義した非置換アルキニル基をいう。Ｎを含有する非置換ヘテロアルキニルは、炭素鎖中にＮＨまたはＮ（非置換アルキル、アルケン、またはアルキン）を有し得る。語句「置換ヘテロアルキニル」は、置換ヘテロアルキル基が非置換ヘテロアルキル基に対して有するものと同じ意味を、非置換ヘテロアルキニル基に対して有する。
【０１９０】
語句「非置換ヘテロアルキニレン」とは、上記定義した二価の非置換ヘテロアルキニル基をいう。したがって、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−Ｃ≡Ｃ−は非置換ヘテロアルキニレンの一例である。語句「置換ヘテロアルキニレン」とは、上記定義した二価の置換ヘテロアルキニル基をいう。
【０１９１】
語句「非置換ヘテロシクリル」とは、それだけには限定されないが、そのうちの１つまたは複数が、それだけには限定されないがＮ、Ｏ、およびＳなどのヘテロ原子である、３つ以上の環員を含有する、キヌクリジルなどの、単環、二環、および多環の環状化合物を含めた芳香族および非芳香族の環状化合物をどちらもいう。語句「非置換ヘテロシクリル」には、ベンズイミダゾリルなどの縮合複素環が含まれるが、２−メチルベンズイミダゾリルなどの化合物は置換ヘテロシクリル基であるため、環員のうちの１つと結合したアルキルまたはハロ基などの他の基を有するヘテロシクリル基は含まれない。ヘテロシクリル基の例には、それだけには限定されないが、ピロリル、ピロリニル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ジヒドロピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアゾリル（たとえば、４Ｈ−１，２，４−トリアゾリル、１Ｈ−１，２，３−トリアゾリル、２Ｈ−１，２，３−トリアゾリルなど）、テトラゾリル（たとえば、１Ｈ−テトラゾリル、２Ｈテトラゾリルなど）等の、１〜４個の窒素原子を含有する不飽和の３〜８員の環、それだけには限定されないが、ピロリジニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル等の、１〜４個の窒素原子を含有する飽和の３〜８員の環、それだけには限定されないが、インドリル、イソインドリル、インドリニル、インドリジニル、ベンズイミダゾリル、キノリル、イソキノリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル等の、１〜４個の窒素原子を含有する縮合不飽和複素環基、それだけには限定されないが、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル（たとえば、１，２，４−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリルなど）等の、１〜２個の酸素原子および１〜３個の窒素原子を含有する不飽和の３〜８員の環、それだけには限定されないが、モルホリニル等の、１〜２個の酸素原子および１〜３個の窒素原子を含有する飽和の３〜８員の環、たとえば、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾオキサジニル（たとえば２Ｈ−１，４−ベンゾオキサジニルなど）等の、１〜２個の酸素原子および１〜３個の窒素原子を含有する不飽和縮合複素環基、それだけには限定されないが、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル（たとえば、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、１，２，５−チアジアゾリルなど）等の、１〜３個の硫黄原子および１〜３個の窒素原子を含有する不飽和の３〜８員の環、それだけには限定されないが、チアゾロジニル等の、１〜２個の硫黄原子および１〜３個の窒素原子を含有する飽和の３〜８員の環、それだけには限定されないが、チエニル、ジヒドロジチイニル、ジヒドロジチオニル、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロチオピラン等の、１〜２個の硫黄原子を含有する飽和および不飽和の３〜８員の環、それだけには限定されないが、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾチアジニル（たとえば２Ｈ−１，４−ベンゾチアジニルなど）、ジヒドロベンゾチアジニル（たとえば２Ｈ−３，４−ジヒドロベンゾチアジニルなど）等の、１〜２個の硫黄原子および１〜３個の窒素原子を含有する不飽和縮合複素環、それだけには限定されないが、フリル等の、酸素原子を含有する不飽和の３〜８員の環、ベンゾジオキソリル（たとえば、１，３−ベンゾジオキソイルなど）等の、１〜２個の酸素原子を含有する不飽和縮合複素環、それだけには限定されないが、ジヒドロオキサチイニル等の、１個の酸素原子および１〜２個の硫黄原子を含有する不飽和の３〜８員の環、１，４−オキサチアン等の、１〜３個の酸素原子および１〜２個の硫黄原子を含有する飽和の３〜８員の環、ベンゾチエニル、ベンゾジチイニル等の、１〜２個の硫黄原子を含有する不飽和縮合環、ならびに、ベンゾオキサチイニル等の、１個の酸素原子および１〜３個の酸素原子含有する不飽和縮合複素環が含まれる。また、ヘテロシクリル基には、環中の１つまたは複数のＳ原子が１個または２個の酸素原子と二重結合している（スルホキシドおよびスルホン）、上述したものが含まれる。たとえば、ヘテロシクリル基には、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロチオフェンオキシド、およびテトラヒドロチオフェン１，１−ジオキシドが含まれる。一部の実施形態では、ヘテロシクリル基は５個または６個の環員を含有する。他の実施形態では、ヘテロシクリル基には、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ピロリジン、イミダゾール、ピラゾール、１，２，３−トリアゾール、１，２，４−トリアゾール、テトラゾール、チオモルホリン、そのＳ原子が１つまたは複数のＯ原子と結合しているチオモルホリン、ピロール、ホモピペラジン、オキサゾリジン−２−オン、ピロリジン−２−オン、オキサゾール、キヌクリジン、チアゾール、イソオキサゾール、フラン、およびテトラヒドロフランが含まれるがそれだけには限定されない。
【０１９２】
語句「置換ヘテロシクリル」とは、置換アルキル基および置換アリール基に関して上述したものなどの、環員のうちの１つが非水素原子と結合している、上記定義した非置換ヘテロシクリル基をいう。例には、それだけには限定されないが、２−メチルベンズイミダゾリル、５−メチルベンズイミダゾリル、５−クロロベンズチアゾリル、１−メチルピペラジニル、および２−クロロピリジルが含まれる。
【０１９３】
語句「非置換ヘテロアリール」とは、上記定義した非置換の芳香族ヘテロシクリル基をいう。したがって、非置換ヘテロアリール基には、それだけには限定されないが、フリル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピリジニル、ベンズイミダゾリル、およびベンゾチアゾリルが含まれる。語句「置換ヘテロアリール」とは、上記定義した置換の芳香族ヘテロシクリル基をいう。語句「非置換ヘテロシクリルアルキル」とは、非置換アルキル基の水素または炭素結合が上記定義したヘテロシクリル基との結合によって置き換えられている、上記定義した非置換アルキル基をいう。たとえば、メチル（−ＣＨ３）は非置換アルキル基である。メチル基の水素原子がヘテロシクリル基との結合によって置き換えられている場合、たとえばメチルの炭素がピリジンの炭素２（ピリジンのＮと結合している炭素のうちの１つ）またはピリジンの炭素３もしくは４と結合している場合、化合物は非置換ヘテロシクリルアルキル基である。
【０１９４】
語句「置換ヘテロシクリルアルキル」は、置換アラルキル基が非置換アラルキル基に対して有するものと同じ意味を、非置換ヘテロシクリルアルキル基に対して有する。置換ヘテロシクリルアルキル基には、非水素原子が、それだけには限定されないが、ピペリジニルアルキル基のピペリジン環中の窒素原子などの、ヘテロシクリルアルキル基のヘテロシクリル基中のヘテロ原子と結合している基も含まれる。語句「非置換ヘテロシクリルアルケニル」とは、非置換アルケニル基の水素または炭素結合が上記定義したヘテロシクリル基との結合で置き換えられている、上記定義した非置換アルケニル基をいう。たとえば、ビニルは非置換アルケニル基である。ビニル基の水素原子がヘテロシクリル基との結合によって置き換えられている場合、たとえばビニルの炭素がピリジンの炭素２またはピリジンの炭素３もしくは４と結合している場合、化合物は非置換ヘテロシクリルアルケニル基である。
【０１９５】
語句「置換ヘテロシクリルアルケニル」は、置換アラルケニル基が非置換アラルケニル基に対して有するものと同じ意味を、非置換ヘテロシクリルアルケニル基に対して有する。しかし、置換ヘテロシクリルアルケニル基には、非水素原子が、それだけには限定されないが、ピペリジニルアルケニル基のピペリジン環中の窒素原子などの、ヘテロシクリルアルケニル基のヘテロシクリル基中のヘテロ原子と結合している基も含まれる。語句「非置換ヘテロシクリルアルキニル」とは、非置換アルキニル基の水素または炭素結合が上記定義したヘテロシクリル基との結合によって置き換えられている、上記定義した非置換アルキニル基をいう。たとえば、アセチレンは非置換アルキニル基である。アセチレン基の水素原子がヘテロシクリル基との結合によって置き換えられている場合、たとえばアセチレンの炭素がピリジンの炭素２またはピリジンの炭素３もしくは４と結合している場合、化合物は非置換ヘテロシクリルアルキニル基である。
【０１９６】
語句「置換ヘテロシクリルアルキニル」は、置換アラルキニル基が非置換アラルキニル基に対して有するものと同じ意味を、非置換ヘテロシクリルアルキニル基に対して有する。置換ヘテロシクリルアルキニル基には、非水素原子が、それだけには限定されないが、ピペリジニルアルキニル基のピペリジン環中の窒素原子などの、ヘテロシクリルアルキニル基のヘテロシクリル基中のヘテロ原子と結合している基も含まれる。語句「非置換アルコキシ」とは、水素原子との結合が、上記定義した他の非置換アルキル基の炭素原子との結合によって置き換えられている、ヒドロキシル基（−ＯＨ）をいう。
【０１９７】
語句「置換アルコキシ」とは、水素原子との結合が、上記定義した他の置換アルキル基の炭素原子との結合によって置き換えられている、ヒドロキシル基（−ＯＨ）をいう。「薬学的に許容できる塩」には、無機塩基、有機塩基、無機酸、有機酸、または塩基性もしくは酸性のアミノ酸との塩が含まれる。無機塩基の塩には、たとえば、ナトリウムまたはカリウムなどのアルカリ金属、カルシウムおよびマグネシウムまたはアルミニウムなどのアルカリ土類金属、ならびにアンモニアが含まれる。有機塩基の塩には、たとえば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、およびトリエタノールアミンが含まれる。無機酸の塩には、たとえば、塩酸、ヒドロホウ酸、硝酸、硫酸、およびリン酸が含まれる。有機酸の塩には、たとえば、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびｐ−トルエンスルホン酸が含まれる。塩基性アミノ酸の塩には、たとえば、アルギニン、リシンおよびオルニチンが含まれる。酸性アミノ酸には、たとえば、アスパラギン酸およびグルタミン酸が含まれる。
【０１９８】
「互変異性体」とは、互いに平衡状態にある化合物の異性体をいう。異性体の濃度は化合物が見つかる環境に依存し、たとえば、化合物が固体であるか、または有機溶液もしくは水溶液中にあるかに応じて異なり得る。たとえば、水溶液中では、ケトンは典型的にはそのエノール型と平衡状態にある。したがって、ケトンおよびそのエノールは、互いの互変異性体であると言われる。当業者には容易に理解されるように、様々な官能基および他の構造が互変異性を示す場合があり、本発明の化合物のすべての互変異性体が本発明の範囲内にある。
【０１９９】
特定の実施形態は、プロドラッグと呼ばれる誘導体である。表現「プロドラッグ」とは、薬学上または治療上活性のある薬物の誘導体、たとえば、エステルおよびアミドをいい、誘導体は、たとえば、薬物と比較して増強された送達および治療的価値などの増強された特徴を有し、酵素的または化学的プロセスによって薬物へと変換させることができる。たとえば、Ｒ．Ｅ．Ｎｏｔａｒｉ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１１２：３０９〜３２３（１９８５）、Ｎ．Ｂｏｄｏｒ、Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ、６：１６５〜１８２（１９８１）、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ（Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編）の第１章、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８５）、およびＡ．Ｇ．Ｇｉｌｍａｎ他、Ｇｏｏｄｍａｎ  Ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ（１９９０）を参照。したがって、プロドラッグは、薬物の代謝安定性もしくは輸送特徴を変更するため、薬物の副作用もしくは毒性をマスクするため、薬物の香味を改善するため、または薬物の他の特徴もしくは特性を変更するために設計し得る。本発明の化合物には、図から明らかな任意またはすべての不斉原子において濃縮または分割された光学異性体が含まれる。ラセミおよびジアステレオマーの混合物の両方も、ならびに個々の光学異性体を、その鏡像異性またはジアステレオマーのパートナーが実質的に含まれないように、単離または合成することができる。すべてのそのような立体異性体が本発明の範囲内にある。
【０２００】
本明細書中で使用する用語「カルボキシ保護基」とは、化合物の他の官能部位に関与する反応が実施されている間にカルボン酸官能基を遮断または保護するために用いる、カルボン酸保護エステル基をいう。カルボキシ保護基は、たとえば、本明細書中に参考として組み込まれているＧｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、ページ１５２〜１８６、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８１）に開示されている。さらに、カルボキシ保護基をプロドラッグとして使用することができ、カルボキシ保護基は、たとえば酵素的加水分解によってｉｎ  ｖｉｖｏに容易に開裂して、生物活性のある親を放出することができる。Ｔ．ＨｉｇｕｃｈｉおよびＶ．Ｓｔｅｌｌａは、本明細書中に参考として組み込まれている「Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」、Ａ．Ｃ．Ｓ．シンポジウムシリーズの第１４巻、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（１９７５）中にプロドラッグの概念の議論を提供している。そのようなカルボキシ保護基は、その開示が本明細書中に参考として組み込まれている、米国特許第３，８４０，５５６号および第３，７１９，６６７号、Ｓ．Ｋｕｋｏｌｊａ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、９３：６２６７〜６２６９（１９７１）、およびＧ．Ｅ．Ｇｕｔｏｗｓｋｉ、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．、２１：１７７９〜１７８２（１９７０）に記載のように、ペニシリンおよびセファロスポリンの分野におけるカルボキシル基の保護において大規模に用いられており、当業者に周知である。カルボキシル基を含有する化合物のプロドラッグとして有用なエステルの例は、たとえば、本明細書中に参考として組み込まれているページ１４〜２１、Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ（Ｅ．Ｂ．Ｒｏｃｈｅ編）、Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８７）中に見つけることができる。代表的なカルボキシ保護基は、Ｃ１〜Ｃ８アルキル（たとえば、メチル、エチルまたは第三級ブチルなど）、ハロアルキル、アルケニル、シクロアルキルおよびその置換された誘導体、たとえば、シクロヘキシル、シクロペンチルなど、シクロアルキルアルキルおよびその置換された誘導体、たとえば、シクロヘキシルメチル、シクロペンチルメチルなど、アリールアルキル、たとえば、フェネチルまたはベンジルおよびその置換された誘導体、たとえば、アルコキシベンジルまたはニトロベンジル基など、アリールアルケニル、たとえばフェニルエテニルなど、アリールおよびその置換された誘導体、たとえば５−インダニルなど、ジアルキルアミノアルキル（たとえばジメチルアミノエチルなど）、アルカノイルオキシアルキル基、たとえば、アセトキシメチル、ブチリルオキシメチル、バレリルオキシメチル、イソブチリルオキシメチル、イソバレリルオキシメチル、１−（プロピオニルオキシ）−１−エチル、１−（ピバロイルオキシル）−１−エチル、１−メチル−１−（プロピオニルオキシ）−１−エチル、ピバロイルオキシメチル、プロピオニルオキシメチルなど���シクロアルカノイルオキシアルキル基、たとえば、シクロプロピルカルボニルオキシメチル、シクロブチルカルボニルオキシメチル、シクロペンチルカルボニルオキシメチル、シクロヘキシルカルボニルオキシメチルなど、アロイルオキシアルキル、たとえば、ベンゾイルオキシメチル、ベンゾイルオキシエチルなど、アリールアルキルカルボニルオキシアルキル、たとえば、ベンジルカルボニルオキシメチル、２−ベンジルカルボニルオキシエチルなど、アルコキシカルボニルアルキル、たとえば、メトキシカルボニルメチル、シクロヘキシルオキシカルボニルメチル、１−メトキシカルボニル−１−エチルなど、アルコキシカルボニルオキシアルキル、たとえば、メトキシカルボニルオキシメチル、ｔ−ブチルオキシカルボニルオキシメチル、１−エトキシカルボニルオキシ−１−エチル、１−シクロヘキシルオキシカルボニルオキシ−１−エチルなど、アルコキシカルボニルアミノアルキル、たとえばｔ−ブチルオキシカルボニルアミノメチルなど、アルキルアミノカルボニルアミノアルキル、たとえばメチルアミノカルボニルアミノメチルなど、アルカノイルアミノアルキル、たとえばアセチルアミノメチルなど、複素環カルボニルオキシアルキル、たとえば、４−メチルピペラジニルカルボニルオキシメチルなど、ジアルキルアミノカルボニルアルキル、たとえば、ジメチルアミノカルボニルメチル、ジエチルアミノカルボニルメチルなど、（５−（アルキル）−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）アルキル、たとえば（５−ｔ−ブチル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メチルなど、ならびに（５−フェニル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）アルキル、たとえば（５−フェニル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メチルなどである。本明細書中で使用する用語「Ｎ−保護基」または「Ｎ−保護した」とは、アミノ酸もしくはペプチドのＮ末端を保護する、またはアミノ基を合成手順中の望ましくない反応に対して保護することを意図する基をいう。一般的に使用されるＮ−保護基は、たとえば、本明細書中に参考として組み込まれているＧｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８１）に開示されている。たとえば、Ｎ−保護基は、アシル基、たとえば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、２−クロロアセチル、２−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、ｏ−ニトロフェノキシアセチル、ａ−クロロブチリル、ベンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、４−ニトロベンゾイルなど、スルホニル基、たとえば、ベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニルなど、カルバメート形成基、たとえば、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、２，４−ジメトキシベ���ジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル、１−（ｐ−ビフェニリル）−１−メチルエトキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２，−トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシカルボニル、４−ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル−９−メトキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、フェニルチオカルボニルなど、アルキル基、たとえば、ベンジル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチルなど、およびシリル基、たとえばトリメチルシリルなどを含むことができる。一部の実施形態では、Ｎ−保護基は、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、フェニルスルホニル、ベンジル、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、およびベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）である。
【０２０１】
本明細書中で使用する「ハロ」、「ハロゲン」または「ハロゲン化物」とは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩをいう。
【０２０２】
本明細書中で使用する、任意の保護基、アミノ酸または他の化合物の略記は、別段に指摘しない限りは、その一般的な使用法、認識されている略記、またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１１：９４２〜９４４（１９７２）に従う。本明細書中で使用する「実質的に純粋」とは、そのような純度を評価するために当業者によって使用される、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、ゲル電気泳動、および高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などの標準の分析方法によって決定して容易に検出可能な不純物を含まないと考えられる程度に十分均一である、または、さらなる精製により、酵素活性および生物活性などの物質の物理的および化学的特性が検出可能に変更されないように十分に純粋であることを意味する。実質的に純粋には、本発明の化合物が、組成物の主要な構成要素を形成する、たとえば、組成物中の物質の約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％以上を構成する、組成物が含まれる。実質的に化学的に純粋化合物を生成するための、化合物の精製方法は、当業者に知られている。しかし、実質的に化学的に純粋な化合物は、立体異性体の混合物であり得る。そのような場合は、さらなる精製により化合物の特異的活性が増加し得る。しかし、本発明の化合物は、必ずしも特定の精製した状態で提供する必要はない。特定の実施形態では、および所望の使用に応じて、部分精製した組成物が有用性を有する。たとえば、本発明の化合物のより高い全回収率を与え得る精製方法が、より低い度合の相対的精製を生じ得る。本明細書中で使用する「生物活性」とは、化合物、組成物、もしくは他の混合物のｉｎ  ｖｉｖｏ活性、または化合物、組成物もしくは他の混合物をｉｎ  ｖｉｖｏ投与した際に生じる生理的応答をいう。したがって、生物活性には、そのような化合物、組成物、および混合物の治療効果、診断的効果および薬学的活性が包含される。本発明のポリペプチド含有する組成物またはその組成物の修飾語として使用する用語「生物活性のある」または「機能的」とは、本発明の化合物に特徴的またはそれに類似する少なくとも１つの活性を示すポリペプチドをいう。
【０２０３】
本明細書中で使用する「薬物動態学」とは、投与した化合物の経時的な血清中濃度をいう。薬力学とは、標的および非標的組織中の投与した化合物の経時的な濃度、ならびに標的組織に対する効果（たとえば効能）および非標的組織に対する効果（たとえば毒性）をいう。たとえば、薬物動態学または薬力学の改善は、たとえば、不安定な連結を使用することによって、または任意のリンカーの化学的性質を改変すること（たとえば、溶解度、荷電を変化することなど）によって、特定の標的化剤または生物剤のために設計することができる。本明細書中で用いる語句「有効量」および「治療上有効な量」とは、本発明の組成物の１つまたは複数の生物活性特徴のレベルの観察可能な変化を起こすために有用、もしくはそれを支援することができる、本発明の化合物の量、または、そのレシピエントに有益な効果、たとえば症状の寛解を与えるために十分な用量をいう。任意の特定の対象の具体的な治療上有効な用量レベルは、治療する症状または障害、症状または障害の重篤度、具体的な化合物の活性、投与経路、化合物のクリアランス速度、治療期間、化合物と組み合わせてまたは同時に使用する薬物、対象の年齢、体重、性別、食習慣、および全体的な健康などを含めた様々な要因、ならびに医学の分野および科学で周知の他の要因に依存する。治療上有効な量は、治療する組織において血管形成の測定可能な阻害を生じるために十分な、本発明の化合物の量、すなわち、血管形成阻害量であることができる。血管形成の阻害は、免疫組織化学、または当業者に知られている他の方法によって、ｉｎ  ｓｉｔｕで測定することができる。「治療上有効な量」を決定する際に考慮する様々な一般的な検討事項は当業者に知られており、たとえば、Ｇｉｌｍａｎ，Ａ．Ｇ．他、Ｇｏｏｄｍａｎ  Ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ（１９９０）、およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、ペンシルベニア州Ｅａｓｔｏｎ（１９９０）に記載されている。
【０２０４】
本明細書中で使用する用語「同時投与した」および「同時投与」には、本発明の１つまたは複数の化合物と１つの他の腫瘍学治療剤の、実質的に同時の投与が包含される。
【０２０５】
本明細書中で使用する用語「同時でない」投与には、本発明の１つまたは複数の化合物を、重複するかどうかにかかわらず、異なる時点に任意の順序で投与することが包含される。これには、それだけには限定されないが、組合せの構成要素を用いた逐次治療（前治療、後治療、または重複治療など）、および薬物を交互にする、または１つの構成要素を長期的に投与し、他の構成要素（複数可）を断続的に投与するレジメンが含まれる。
【実施例】
【０２０６】
本発明の多用途性を以下の実施例によって例示し、これらは、本発明の典型的な実施形態を例示するものであり、特許請求の範囲または明細事項をいかなる様式でも制限するものではない。
【０２０７】
（実施例１）
本発明の化合物の合成
本発明のペプチドは、以下の手順によって抗体３８Ｃ２と連結させることができる：１ｍＬのリン酸緩衝溶液中の抗体３８Ｃ２（１０ｍｇ／ｍＬ）を、１２μＬの１０ｍｇ／ｍＬのペプチドストック溶液に加え、生じる混合物を使用前に室温で２時間維持する。
【０２０８】
（実施例２）
Ｃ．Ｒａｄｅｒ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３３２：８８９〜８９９（２００３）は、ｈ３８ｃ２を作製する一手法を詳述している。以下にこの参考文献中の結果、材料および方法を詳述する。ヒト化  ヒトＶκ遺伝子ＤＰＫ−９およびヒトＪκ遺伝子ＪＫ４を、ｍ３８ｃ２のκ軽鎖可変ドメインのヒト化のフレームワークとして使用し、ヒトＶＨ遺伝子ＤＰ−４７およびヒトＪＨ遺伝子ＪＨ４を、重鎖可変ドメインのヒト化のフレームワークとして使用した。Ｋａｂａｔ他によって定義されるすべての相補性決定領域（ＣＤＲ）残基、ならびに軽鎖および重鎖可変ドメインの両方中の定義されたフレームワーク残基を、ｍ３８ｃ２からヒトフレームワーク上へと移植した。移植したフレームワーク残基の選択は、マウスｍＡｂ３３Ｆ１２  Ｆａｂ（ＰＤＢ  １ＡＸＴ）の結晶構造に基づき得る。ｍＡｂ３３Ｆ１２  Ｆａｂは、可変ドメイン中でｍ３８ｃ２と９２％の配列相同性を共有し、同一のＣＤＲの長さを共有する。さらに、３３Ｆ１２およびｍ３８ｃ２はどちらも同様の触媒活性を有する。フレームワーク残基は、軽鎖中の５個の残基および重鎖中の７個の残基からなり（図７Ａ）、ｍ３８ｃ２の触媒活性に直接または間接的に参加する可能性の高い残基を包含していた。これらには、重鎖のフレームワーク領域３（ＦＲ３）中に位置するｍ３８ｃ２の反応性リシンＬｙｓＨ９３が含まれる。マウスｍＡｂ３３Ｆ１２および３８Ｃ２の間で保存的な６個の残基、ＳｅｒＨ３５、ＶａｌＨ３７、ＴｒｐＨ４７、ＴｒｐＨ１０３、およびＰｈｅＬ９８は、ＬｙｓＨ９３のεアミノの５Å半径以内に存在する。これらの残基もヒト化中で保存的である。ＬｙｓＨ９３は、マウスｍＡｂ３３Ｆ１２および３８Ｃ２の疎水性の高い基質結合部位の底部に位置する。ＣＤＲ残基に加えて、いくつかのフレームワーク残基がこのポケットの内側に並ぶ。これらのうち、ＬｅｕＬ３７、ＧｌｎＬ４２、ＳｅｒＬ４３、ＶａｌＬ８５、ＰｈｅＬ８７、ＶａｌＨ５、ＳｅｒＨ４０、ＧｌｕＨ４２、ＧｌｙＨ８８、ＩｌｅＨ８９、およびＴｈｒＨ９４をヒトフレームワーク上に移植した。
【０２０９】
発現
ヒト化可変ドメインをヒト定常ドメインＣκおよびＣγ１１と融合させることによって、ｈ３８Ｃ２を大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中で発現されるＦａｂとして最初に作製した。次に、哺乳動物細胞中におけるヒトＩｇＧ１発現のために操作したＰＩＧＧベクターを用いて、ｈ３８ｃ２  ＩｇＧをｈ３８ｃ２  Ｆａｂから形成した。一過的に形質移入したヒト２９３Ｔ細胞からの上清を組換えタンパク質Ａ上でのアフィニティークロマトグラフィーに供して、約１ｍｇ／Ｌのｈ３８Ｃ２  ＩｇＧ１が得られた。純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、続いてクマシーブルー染色によって確立した。
【０２１０】
β−ジケトン化合物
【０２１１】
【化４２】
2011522794.tif 000043
【０２１２】
β−ジケトンにｍ３８ｃ２を共有付加させることによって形成されるエナミノンは、λｍａｘ＝３１８ｎｍの特徴的なＵＶ吸光度を有する。ｍ３８ｃ２  ＩｇＧと同様、ｈ３８Ｃ２  ＩｇＧは、β−ジケトンとインキュベーションした後に特徴的なエナミノン吸光度を示した。陰性対照として、ｈ３８Ｃ２と同じＩｇＧ１アイソタイプであるが反応性リシンを有さない組換えヒト抗ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０  ｍＡｂ  ｂ１２は、β−ジケトン２とのインキュベーションの後にエナミノン吸光度を現さなかった。β−ジケトンとｍ３８ｃ２およびｈ３８Ｃ２との結合の定量的比較のために、著者らは競合ＥＬＩＳＡを用いた。抗体を漸増濃度のβ−ジケトン２および３と共にインキュベーションし、固定したＢＳＡとコンジュゲートしたβ−ジケトン１に対してアッセイした。見かけの平衡解離定数は、β−ジケトン２で３８μＭ（ｍ３８ｃ２）および７．６μＭ（ｈ３８Ｃ２）であり、β−ジケトン３で０．４３μＭ（ｍ３８ｃ２）および１．０μＭ（ｈ３８Ｃ２）であり、マウスおよびヒト化抗体で類似のβ−ジケトン結合特性が明らかとなった（図６）。
【０２１３】
分子モデリング−ｈ３８Ｃ２  Ｆａｂの分子モデルは、関連するアルドラーゼ抗体、マウス３３Ｆ１２  Ｆａｂ（タンパク質データバンク番号：１ＡＸＴ）の結晶構造を鋳型として用いた相同性モデリングによって構築した。マウス３３Ｆ１２  Ｆａｂの結晶構造は、２．１５Åの分解能で事前に決定されている。ＩＮＳＩＧＨＴ  ＩＩソフトウェア（Ａｃｃｅｌｒｙｓ）中のＨＯＭＯＬＯＧＹモジュールを用いた、マウス３３Ｆ１２および３８Ｃ２のアミノ酸配列のアラインメントにより、どちらの配列も高度に相同的であることが確認された。これらは、２つの可変ドメイン中の２２６個のアミノ酸のうち１９個が互いに異なり、そのＣＤＲは同じ長さを共有する。３８Ｃ２の低分解能の結晶構造によって観察されるように、高い配列相同性に加えて、どちらの構造も相当な構造的類似度を示す。ｈ３８Ｃ２アミノ酸配列に適合させるためにモデルの残基を突然変異させ、側鎖は標準の回転異性体に基づいて配置した。その後、このモデルを、それぞれ１００ステップの最も急勾配の下降最小化、続いてコンジュゲート勾配最小化を使用して、ＩＮＳＩＧＨＴ  ＩＩ中のＤＩＳＣＯＶＥＲモジュールを用いて最小化した。
【０２１４】
ｈ３８Ｃ２  Ｆａｂの構築
ｍ３８ｃ２の可変の軽鎖および重鎖ドメインの配列（それぞれ配列番号４および５）、ならびにヒト生殖系列配列ＤＰＫ−９（配列番号６）、ＪＫ４（配列番号７）、ＤＰ−４７（配列番号８）、およびＪＨ４（配列番号９、１０、１１）の配列（Ｖ  ＢＡＳＥ、ｈｔｔｐ：／／ｖｂａｓｅ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／）を用いて、それぞれヒト化ＶκおよびＶＨを合成アセンブリするための重複オリゴヌクレオチドを設計した。配列ＮＸＳ／Ｔならびに内部制限部位ＨｉｎｄＩＩＩ、Ｘｂａｌ、ＳａｃＩ、ＡｐａＩ、およびＳｆｉＩを有するＮ−グリコシル化部位は回避した。ＰＣＲは、Ｅｘｐａｎｄ  Ｈｉｇｈ  Ｆｉｄｅｌｉｔｙ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いることによって実施した。ヒト化Ｖκオリゴヌクレオチドは、Ｌフランクセンス（Ｒａｄｅｒ，Ｃ．、Ｒｉｔｔｅｒ，Ｇ．、Ｎａｔｈａｎ，Ｓ．、Ｅｌｉａ，Ｍ．、Ｇｏｕｔ，Ｉ．、Ｊｕｎｂｌｕｔｈ，Ａ．Ａ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７５：１３６６８〜１３６７６（２０００））（センス５’−ＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＧＣＣＣＡＧＧＣＧＧＣＣＧＡＧＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＴＣＣＡ−３’配列番号１２）；ｈ３８Ｃ２Ｌ１（センス；５’−ＧＡＧＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧ−３’）（配列番号１３）；ｈ３８Ｃ２Ｌ２（アンチセンス；５’−ＡＴＴＣＡＧＡＴＡＴＧＧＧＣＴＧＣＣＡＴＡＡＧＴＧＴＧＣＡＧＧＡＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＧＡＧＣＧＧＣＡＡＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＣＧＣＧＧＴＣ−３’）（配列番号１４）；ｈ３８Ｃ２Ｌ３（センス；５’−ＴＡＴＧＧＣＡＧＣＣＣＡＴＡＴＣＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＴＣＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴ−３’）（配列番号１５）；ｈ３８Ｃ２Ｌ４（アンチセンス；５’−ＣＴＧＡＡＡＣＧＴＧＡＴＧＧＧＡＣＡＣＣＡＣＴＧＡＡＡＣＧＡＴＴＧＧＡＣＡＣＴＴＴＡＴＡＧＡＴＣＡＧＧＡＧＣＴＴＡＧＧＡＧＡＣＴＧ−３’）（配列番号１６）；ｈ３８Ｃ２Ｌ５（センス；５’−ＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＣＡＴＣＡＣＧＴＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＧ−３’）（配列番号１７）；ｈ３８Ｃ２Ｌ６（アンチセンス；５’−ＧＡＴＣＴＣＣＡＣＣＴＴＧＧＴＣＣＣＴＣＣＧＣＣＧＡＡＡＧＴＡＴＡＡＧＧＧＡＧＧＴＧＧＧＴＧＣＣＣＴＧＡＣＴＡＣＡＧＡＡＧＴＡＣＡＣＴＧＣＡＡＡＡＴＣＴＴＣＡＧＧＴＴＧＣＡＧ−３’）（配列番号１８）；Ｌアンチセンスフランク（Ｃ．Ｒａｄｅｒ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７５：１３６６８〜１３６７６（２０００））（アンチセンス５’−ＧＡＣＡＧＡＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＡＣＡＧＴＴＣＧＴＴＴＧＡＴＣＴＣＣＡＣＣＴＴＧＧＴＣＣＴＣＣ−３’配列番号医１９）であった。ヒト化ＶＨヌクレオチドは、Ｈフランクセンス（Ｃ．Ｒａｄｅｒ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７５：１３６６８〜１３６７６（２０００）（センス５’−ＧＣＴＧＣＣＣＡＡＣＣＡＧＣＣＡＴＧＧＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡ−３’配列番号２０）；ｈ３８Ｃ２Ｈ１（センス；５’−ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＴＴＣＣＣＴＧＣＧＣＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＣＴ−３’）（配列番号２１）；ｈ３８Ｃ２Ｈ２（アンチセンス；５’−ＣＴＣＣＡＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＴＧＧＡＧＡＣＴＧＧＣＧＧＡＣＣＣＡＧＣＴＣＡＴＣＣＡＡＴＡＧＴＴＧＣＴＡＡＡＧＧＴＧＡＡＧＣＣＡＧＡＧＧＣＴＧＣＡＣＡＧＧＡＧＡＧ−３’）（配列番号２２）；ｈ３８Ｃ２Ｈ３（センス；５’−ＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＣＡＧＡＧＡＴＴＣＧＴＣＴＧＣＧＣＡＧＴＧＡＣＡＡＣＴＡＣＧＣＣＡＣＧＣＡＣＴＡＴＧＣＡＧＡＧＴＣＴＧＴＣ−３’）（配列番号２３）；ｈ３８Ｃ２Ｈ４（アンチセンス；５’−ＣＡＧＡＴＡＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＴＴＧＧＡＡＴＴＧＴＣＡＣＧＧＧＡＧＡＴＧＧＴＧＡＡＧＣＧＧＣＣＣＴＴＧＡＣＡＧＡＣＴＣＴＧＣＡＴＡＧＴＧＣＧＴＧ−３’）（配列番号２４）；ｈ３８Ｃ２Ｈ５（センス；５’−ＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＧＣＡＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＡＡＡＡＣＧ−３’）（配列番号２５）；ｈ３８Ｃ２Ｈ６（アンチセンス；５’−ＴＧＡＧＧＡＧＡＣＧＧＴＧＡＣＣＡＧＧＧＴＧＣＣＣＴＧＧＣＣＣＣＡＧＴＡＧＣＴＧＡＡＡＣＴＧＴＡＧＡＡＧＴＡＣＧＴＴＴＴＡＣＡＧＴＡＡＴＡＡＡＴＧＣＣＣＧＴＧ−３’）（配列番号２６）；Ｈフランクアンチセンス（Ｃ．Ｒａｄｅｒ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７５：１３６６８〜１３６７６（２０００））（アンチセンス５’−ＧＡＣＣＧＡＴＧＧＧＣＣＣＴＴＧＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＧＡＣＧＧＴＧＡＣＣＡＧＧＧＴＧＣＣ−３’配列番号２７）であった。アセンブリ後、ヒト化ＶκおよびＶＨをそれぞれヒトＣκおよびＣγ１１と融合させ、生じた軽鎖および重鎖の断片を融合し、記載のようにファージミドベクターｐＣｏｍｂ３Ｘ内にＳｆｉＩ−クローニングした（Ｃ．Ｒａｄｅｒ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７５：１３６６８〜１３６７６（２０００）、Ｃ．Ｆ．Ｂａｒｂａｓ三世他、Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ニューヨーク州Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ（２００１））。正しいｈ３８Ｃ２配列を有するクローンを濃縮するために、Ｆａｂをファージ上に表示させ、ＢＳＡとコンジュゲートさせた、固定したβ−ジケトン１（ＪＷ）に対する１ラウンドのパニングによって選択した。可溶性Ｆａｂが単一のクローンから生じ、固定したＪＷ−ＢＳＡとの結合について、西洋ワサビペルオキシダーゼとコンジュゲートしたロバ抗ヒトＦ（ａｂ’）２ポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を二次抗体として用いたＥＬＩＳＡによって試験した。陽性クローンの軽鎖および重鎖コード配列を、それぞれプライマーＯＭＰＳＥＱ（５’−ＡＡＧＡＣＡＧＣＴＡＴＣＧＣＧＡＴ��ＧＣＡＧ−３’、配列番号２８）およびＰＥＬＳＥＱ（５’−ＣＴＡＴＴＧＣＣＴＡＣＧＧＣＡＧＣＣＧＣＴＧ−３’、配列番号２９）を用いたＤＮＡ配列決定によって分析して（Ｃ．Ｆ．Ｂａｒｂａｓ三世他、Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ニューヨーク州Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、（２００１））、ｈ３８Ｃ２のアセンブリされたＶκおよびＶＨの配列を確認した。
【０２１５】
ｈ３８Ｃ２  ＩｇＧ１の構築、産生、および精製−最近記載されたベクターＰＩＧＧ（Ｃ．Ｒａｄｅｒ他、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．、１６：２０００〜２００２（２００２））を、ｈ３８Ｃ２  ＩｇＧ１の哺乳動物発現に用いた。哺乳動物発現ベクターＰＩＧＧ−ｈ３８ｃ２を図２３に例示する。この９ｋｂのベクターは、二方向性のＣＭプロモーター構築体によって駆動される重鎖γ１および軽鎖κ発現カセットを含む。プライマーＰＩＧＧ−ｈ３８Ｃ２Ｈ（センス、５’−ＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＣＡＣＴＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧ−３’）（配列番号３０）およびＧＢＡＣＫ（５’−ＧＣＣＣＣＣＴＴＡＴＴＡＧＣＧＴＴＴＧＣＣＡＴＣ−３’、配列番号３１）を用いて（Ｃ．Ｆ．Ｂａｒｂａｓ三世他、Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ニューヨーク州Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ（２００１））、ファージミドベクターｐＣｏｍｂ３Ｘ中のｈ３８Ｃ２  ＦａｂからのＶＨコード配列を増幅し、ＳａｃＩおよびＡｐａＩで消化し、適切に消化したベクターＰＩＧＧ内にクローニングした。プライマーＰＩＧＧ−ｈ３８Ｃ２Ｌ（センス：５’−ＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＣＴＴＧＴＴＧＣＴＣＴＧＧＡＴＣＴＣＴＧＧＴＧＣＣＴＡＣＧＧＧＧＡＧＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣ−３’）（配列番号３２）およびＬＥＡＤＢ（５’−ＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＧＴＴＧＧＧＣＡＧＣ−３’、配列番号３３）を用いて（Ｃ．Ｆ．Ｂａｒｂａｓ三世他、Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ニューヨーク州Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ（２００１））、ファージミドベクターｐＣｏｍｂ３Ｘ中のｈ３８Ｃ２  Ｆａｂからの軽鎖コード配列を増幅し、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＸｂａＩで消化し、既にｈ３８Ｃ２重鎖を含有する適切に消化したベクターＰＩＧＧ内にクローニングした。中間体および最終のＰＩＧＧベクター構築体は、ＱＩＡＧＥＮプラスミドＭａｘｉキットを用いて調製した大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株ＳＵＲＥ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）中で増幅させた。ｈ３８Ｃ２  ＩｇＧ１は、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いたヒト２９３Ｔ細胞の一過性形質移入によって、調製した最終ＰＩＧＧベクター構築体から産生させた。形質移入した細胞は、ＲＰＭＩ  １６４０（Ｈｙｃｌｏｎｅ）中のＧＩＢＣＯ  １０％超低ＩｇＧ（＜０．１％）ＦＣＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に２週間維持した。この間、培地を３回回収して交換した。回収した培地は、組換えタンパク質Ａ  ＨｉＴｒａｐカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上のアフィニティークロマトグラフィーに供した。この精製ステップにより、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ＢｉｏＰｈｏｔｏｍｅｔｅｒを用いた２８０ｎｍでの光学密度を測定することによって決定して、２．４５ｍｇのｈ３８Ｃ２  ＩｇＧ１が２，３００ｍＬの回収した培地から得られた。Ｓｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ  １０Ｋ透析カセット（Ｐｉｅｒｃｅ）中でＰＢＳに対して��析した後、Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−１５遠心濾過装置（ＵＦＶ２ＢＴＫ４０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて抗体を７６０μｇ／ｍＬまで濃縮し、０．２μｍのＡｃｒｏｄｉｓｃ  １３ＭＭ  Ｓ−２００シリンジフィルター（Ｐａｌｌ）を通して無菌濾過した。最終収量は２．１３ｍｇであった（８７％）。精製したｈ３８Ｃ２  ＩｇＧ１は、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、続いてクマシーブルー染色によって確認した。
【０２１６】
エナミノンの形成−抗体（ｈ３８Ｃ２  ＩｇＧ１またはｂ１２  ＩｇＧ１）を、β−ジケトン２に、２５μＭの抗体結合部位および１２５μＭのβ−ジケトンの最終濃度まで加えた。この混合物を室温で１０分間インキュベーションした後、ＳＯＦＴｍａｘ  Ｐｒｏソフトウェア（バージョン３．１．２）を用いてＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｐｌｕｓ  ３８４  ＵＶプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）上でＵＶスペクトルを得た。
【０２１７】
結合アッセイ−別段に言及しない限りは、すべての溶液はリン酸緩衝溶液（ｐＨ７．４）であった。β−ジケトン２または３（５０μＬ）のどちらかの２×溶液を５０μＬの抗体（ｈ３８Ｃ２またはｍ３８ｃ２のどちらか）に加え、３７℃で１時間インキュベーションした。溶液をピペット操作によって混合した。抗体の最終濃度は０．４〜８ｎＭの抗体結合部位であり、β−ジケトン２および３の最終濃度は、それぞれ１０−９〜１０−２Ｍおよび１０−１０〜１０−４Ｍであった。Ｃｏｓｔａｒ  ３６９０  ９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）のそれぞれのウェルを、１００ｎｇの、ＴＢＳ中のβ−ジケトン１のＢＳＡコンジュゲートでコーティングした。その後、ウェルをＴＢＳ中の３％（ｗ／ｖ）のＢＳＡでブロッキングした。その後、５０μＬの抗体／β−ジケトンの混合物を加え、続いて、５０μＬの、西洋ワサビペルオキシダーゼとコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＦｃ  ＩｇＧポリクローナル抗体（Ｐｉｅｒｃｅ）またはウサギ抗マウスＦｃ  ＩｇＧポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）のどちらかの１：１，０００希釈液を加えた。続いて、これに５０μＬのＡＢＴＳ基質溶液を加えた。それぞれの添加の間に、プレートを覆い、３７℃で１時間インキュベーションし、その後、脱イオンＨ２Ｏで５回洗浄した。β−ジケトンを用いない反応が適切な値に達するまで（０．５＜Ａ４０５＜１．０）、４０５ｎｍでの吸光度を上述のように監視した。それぞれのウェルについて、ＥＬＩＳＡシグナルの画分阻害（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）（ｖｉ）を、方程式ｉを用いて計算した：
ｖｉ＝（Ａｏ−Ａｉ）／（Ａｏ）  （ｉ）
［式中、Ａｏは、β−ジケトンの非存在下で得られたＥＬＩＳＡ吸光度であり、Ａｉは、β−ジケトンの存在下で得られた吸光度である］。一価の結合タンパク質では、可溶性β−ジケトンと結合した抗体の画分（ｆ）はｖｉに等しい。しかし、ＩｇＧ抗体は二価であり、ＥＬＩＳＡシグナルは二重にリガンド結合した抗体の存在によってのみ阻害され、一価結合によっては阻害されない。したがって、二価抗体のスティーブンス補正を使用した：
ｆｉ＝（ｖｉ）１／２  （ｉｉ）
以下の関係性を用いて、見かけの平衡解離定数を決定した（［ｒｅｆ．３７］から修正）：
ｆｉ＝ｆｍｉｎ＋（ｆｍａｘ−ｆｍｉｎ）（１＋ＫＤ／ａ０）−１  （ｉｉｉ）
式中、ａ０は、全β−ジケトン濃度に対応し、ＫＤは平衡解離定数であり、ｆｍｉｎおよびｆｍａｘは、抗体結合部位がそれぞれ非占有または飽和である場合の、実験によって決定した値を表す。この方程式はＫＤ値が抗体濃度よりも少なくとも１０倍高い場合にのみ妥当であるため、方程式ｉｉｉから決定されたＫＤ値はこの基準を満たすことが確認された。データは、ＫＤ、ｆｍａｘ、およびｆｍｉｎを調節可能なパラメータを用いて、ＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈ（バージョン３．０．５、Ａｂｅｌｂｅｃｋソフトウェア）の非線形最小二乗当てはめ手順に当てはめ、方程式ｉｖを用いて正規化した：
ｆｎｏｒｍ＝（ｆｉ−ｆｍｉｎ）／（ｆｍａｘ−ｆｍｉｎ）  （ｉｖ）
【０２１８】
（実施例３）
本発明のペプチドと本発明のリンカーとの連結。
本発明の化合物は、いくつかの手法によって調製することができる。一手法では、［ペプチド］−リンカー化合物は、抗体の結合部位中のアミノ酸の側鎖と共有反応するように設計された１つまたは複数の反応基が含まれるリンカーを用いて合成する。標的化剤−リンカー化合物および抗体は、リンカー反応基がアミノ酸側鎖と共有結合を形成する条件下で合わせる。
【０２１９】
別の手法では、連結は、抗体およびリンカーを含む抗体−リンカー化合物を合成することによって達成することができ、リンカーには、［ペプチド］の適切な化学部分と共有反応するように設計された１つまたは複数の反応基が含まれる。［ペプチド］は、リンカー反応基との反応に適切な部分を提供するために修飾する必要があり得る。抗体−リンカーおよび［ペプチド］は、リンカー反応基が標的化剤および／または生物剤と共有結合する条件下で合わせる。
【０２２０】
抗体−［ペプチド］のコンジュゲートを形成するさらなる手法では、二重リンカー設計を使用する。特定の実施形態では、［ペプチド］−リンカーと反応基を有するリンカーとを含む、［ペプチド］−リンカー化合物を合成する。抗体と、第１のステップの［ペプチド］−リンカーの反応基との反応を受けやすい化学基を有するリンカーとを含む、抗体−リンカー化合物を合成する。その後、これらの２つのリンカー含有化合物を、リンカーが共有結合して抗体−［ペプチド］化合物を形成する条件下で合わせる。表９は、リンカーと共有結合した［ＶＥＧＦ−ペプチド］を含む、本発明の例示的な化合物を示す。Ｄ−アミノ酸は小文字を使用することによって示す。たとえば、化合物２０１８（Ｋ１０が連結残基として置換された配列番号７８を含み、配列番号１９５とも等価である）には、残基「Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）」が含まれ、これらは「Ｒ−Ｌ−Ｙ−ａ−ｌ」と記載されている。ジスルフィド結合は、２つのシステイン残基の間を接続する線として示されている。
【０２２１】
Ｚは、可逆的または不可逆的な共有結合を形成する基であり得る。一部の実施形態では、可逆的な共有結合は、図３に示すものなどのジケトンＺ基を用いて形成し得る。したがって、構造Ａ〜Ｃは、抗体の結合部位中の反応性求核基（たとえば、リシンまたはシステイン側鎖）と可逆的な共有結合を形成し得る。図３の構造Ａ〜Ｃ中のＲ’１、Ｒ’２、Ｒ’３、およびＲ４は、Ｃ、Ｈ、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）またはその塩であることができる置換基を表す。また、これらの置換基には、アルキル、アルケニル、アルキニル、オキソアルキル、オキソアルケニル、オキソアルキニル、アミノアルキル、アミノアルケニル、アミノアルキニル、スルホアルキル、スルホアルケニル、またはスルホアルキニル基、ホスホアルキル、ホスホアルケニル、ホスホアルキニル基などの基も含まれ得る。また、Ｒ’２およびＲ’３は、構造ＢおよびＣに例示した環構造を形成することもできる。図３のＸはヘテロ原子であることができる。可逆的な共有結合を形成する他のＺ基には、アミジン、イミン、および図３の構造Ｇによって包含される他の反応基が含まれる。図４には、可逆的な共有結合を形成する他のリンカー反応基の構造、たとえば、構造Ｂ、Ｇ、Ｈ、ならびにＸが脱離基でない場合はＥおよびＦが含まれる。
【０２２２】
抗体の結合部位と不可逆的な共有結合を形成するＺ反応基には、図３の構造Ｄ〜Ｇ（たとえばＧがイミデートである場合）ならびに図４の構造Ａ、ＣおよびＤが含まれる。Ｘが脱離基である場合、図４の構造ＥおよびＦも不可逆的な共有結合を形成し得る。そのような構造は、標的化剤−リンカーを、抗体の結合部位に対する反応性求核基と不可逆的に接着させるために有用である。本明細書中で使用するＬ’とは、抗体を標的化剤と連結し、式−Ｘ−Ｙ−Ｚ’−を有するリンカー部分である。図５および６は、それぞれ、抗体の結合部位中の反応性の求核性側鎖の、図３および４に例示するＺ部分への付加機構を例示する。
【０２２３】
リンカーがジケトン部分を反応基として有し、連結が抗体結合部位中のリシン残基の側鎖アミノ基と起こる場合を以下に示す。抗体は、示したそれぞれの結合部位について反応性アミノ酸側鎖を有する二価として模式的に示されている。
【０２２４】
【化４３】
2011522794.tif 000044
【０２２５】
以下に示す別の実施形態は、リンカーがβラクタム部分を反応基として有し、連結が抗体結合部位中のリシン残基の側鎖アミノ基と起こる場合のものである。抗体は、示したそれぞれの結合部位について反応性アミノ酸側鎖を有する二価として模式的に示されている。
【０２２６】
【化４４】
2011522794.tif 000045
【０２２７】
本発明の化合物は、本明細書中に記載の［ペプチド］−リンカー化合物を多価抗体の結合部位と共有結合させることによっても、容易に合成し得る。たとえば、リンカーにジケトン反応性部分が含まれる［ペプチド］−リンカーのコンジュゲートを、０．５当量のｈ３８Ｃ２  ＩｇＧ１などのアルドラーゼ抗体とインキュベーションして、本発明の化合物を生成することができる。
【０２２８】
アルキンおよびアジド（Ｒは、本発明の［ペプチド］と接着されていてよい）を合わせるために「クリック化学」を用いた、［リンカー］−［抗体］をペプチドと合わせる反応機構のさらなる例を以下に示す。
【０２２９】
【化４５】
2011522794.tif 000046
【０２３０】
（実施例４）
【０２３１】
【化４６】
2011522794.tif 000047
の合成は、図７に提供されている。
【０２３２】
（実施例５）
Ａｎｇ２と相互作用するＡｎｇ２結合化合物の能力を、Ｔｉｅ−２との競合によって測定した。これらの試験は、その内容が全体で本明細書中に参考として組み込まれている、ＵＳ２００８１６６３６４号に（およびＰＣＴ／ＩＥ２００７／０００１１０号にも）記載されている。特に、様々なＡｎｇ２−結合ペプチドの利点および不利点、特定のＡｎｇ２−結合ペプチドを触媒抗体と共有結合させることの利点および不利点（ならびにｈ３８Ｃ２との連結に具体的に関連する部分）、対応するＡｎｇ２特異的なペプチドの特定の残基を連結残基として使用することの利点および不利点（このコンテキストでは、連結残基とは、リンカーと共有結合した残基を意味する（たとえば、本明細書中の実施例４で使用する））を詳述している、ＰＣＴ／ＩＥ２００７／０００１１０号およびＵＳ２００８１６６３６４号の部分。競合的ＥＬＩＳＡには、担体タンパク質を用いずに、ヒトアンジオポイエチン−２タンパク質およびＴｉｅ−２−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を再構成した。マウス抗ヒトＴｉｅ−２（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を一次抗体として使用し、ヤギ抗マウス−ＩｇＧ１−ＨＲＰ（Ｐｉｅｒｃｅ）を二次抗体として使用した。ＰｉｅｒｃｅのＴＭＢ基質を使用した。
【０２３３】
高結合の半ウェルプレートを、５０μｌのＰＢＳ中のＡｎｇ−２（１００ｎｇ／ウェル）でコーティングし、４℃で終夜インキュベーションした。プレートを洗浄緩衝液（０．１％のＴｗｅｅｎ  ２０、ＰＢＳ、ｐＨ７．４）で３回洗浄し、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Ｓｃｙｔｅｋ）、１００μｌ／ウェルを用いて、室温（「ＲＴ」）で１時間ブロッキングした。ブロッキング溶液を除去した後、５０μｌのＡｎｇ−２結合ペプチド化合物（１ｕＭおよび５×段階希釈）を、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋを希釈剤として用いた０．２５ｎＭのｈＴｉｅ−２−Ｆｃの存在下で加え、ＲＴで２時間インキュベーションした。プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄した。その後、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋで希釈した５０ｕｌの０．１ｕｇ／ｍｌのマウス抗ヒトＴｉｅ−２を加え、ＲＴで１時間インキュベーションした。インキュベーション後、５０ｕｌのＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋ中のヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰの１：５，０００希釈液を加え、ＲＴで１時間インキュベーションした。３回洗浄した後、５０μｌ（２５μｌのＴＭＢ＋２５μｌのＨ２Ｏ２）を加え、３〜５分間インキュベーションした。発色を監視し、２５μｌの２ＭのＨ２ＳＯ４で停止した。５４０ｎｍの補正波長を用いたＯＤ４５０ｎｍを測定した。ＩＣ５０値（Ａｎｇ−２−Ｔｉｅ−２の結合の５０％阻害）は、Ｐｒｉｓｍ４ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）中の非線形Ｓ字形用量応答曲線当てはめ関数を用いて計算した。
【０２３４】
逆競合ＥＬＩＳＡには、ヒトＴｉｅ−２−Ｆｃ、アンジオポイエチン−２タンパク質、ビオチン標識した抗ヒトＡｎｇ−２抗体、およびストレプトアビジンＨＲＰ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）ならびにＰｉｅｒｃｅのＴＭＢ基質を使用した。高結合の半ウェルプレートを、５０μｌのＰＢＳ中のＴｉｅ−２−Ｆｃ（５０ｎｇ／ウェル）でコーティングし、４℃で終夜インキュベーションした。プレートを洗浄緩衝液（０．１％のＴｗｅｅｎ  ２０、ＰＢＳ、ｐＨ７．４）で３回洗浄し、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ、１５０μｌ／ウェルを用いて、ＲＴで１時間ブロッキングした。プレートを３回洗浄した。洗浄後、５０μｌのＡｎｇ−２結合ペプチド化合物（５０ｎＭ、５×段階希釈）を、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ中の５０ｎｇ／ｍｌ（０．８３ｎＭ）のＡｎｇ−２の存在下で加え、ＲＴで１時間インキュベーションした。プレートを３回洗浄し、５０μｌのＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋ中の１μｇ／ｍｌのビオチン標識した抗Ａｎｇ−２検出抗体を加え、ＲＴで２時間インキュベーションした。プレートを３回洗浄し、５０μｌのストレプトアビジンＨＲＰ（Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ中の１：２００希釈液）をＲＴで２０分間加えた。プレートを３回洗浄し、５０μｌ（２５μｌのＴＭＢ＋２５μｌのＨ２Ｏ２）の基質溶液を加え、２０〜３０分間インキュベーションした。発色は、２５μｌの２ＭのＨ２ＳＯ４で停止した。５４０ｎｍの補正波長を用いたＯＤ４５０ｎｍを測定した。ＩＣ５０値（Ａｎｇ−２−Ｔｉｅ−２の結合の５０％阻害）は、Ｐｒｉｓｍ４ソフトウェア中の非線形Ｓ字形用量応答曲線当てはめ関数を用いて計算した。
【０２３５】
競合的ＥＬＩＳＡによって決定した、例示的なＡｎｇ−２結合ペプチド化合物のＩＣ５０値を表５に提示する。ＩＣ５０値は、Ａｎｇ２−連結残基（Ｔ）の側鎖を介して実施例４に示したリンカーと共有結合したＡｎｇ２−結合ペプチドおよびＡｎｇ２−連結残基の側鎖を介して実施例４のリンカーと共有結合したＡｎｇ２−結合ペプチドについて提供し、リンカーのＺ基は、ｈ３８Ｃ２の結合部位（Ｐ）と共有結合している。
【０２３６】
表５では、化合物４０２１、４０２２および４０２３は、リンカーまたはリンカー−抗体のどちらともコンジュゲートしていない、Ａｎｇ−２結合ペプチド単独であり、化合物４０２４および４０２５は、リンカー−抗体とコンジュゲートしたＡｎｇ−２結合ペプチドであり［リンカーは４Ｐ（「４」ＰＥＧ）である］、化合物４０２６〜４０６３は、リンカー−抗体とコンジュゲートしたＡｎｇ−２結合ペプチドである［リンカーはＯＰ（「Ｏ」ＰＥＧ）であり、実施例４に示すリンカーの構造を有する］。化合物４０２４〜４０６３は、別段に指定した場合以外は、以下に示すデータを得る際にヒト化アルドラーゼ抗体とコンジュゲートさせた。表中に示す本発明のすべての化合物は、別段に指定した場合（たとえば、化合物４０２６、４０４９、４０５０、４０５１および４０５２）以外は、Ｎ末端がアシル基およびＣ末端がアミノ基でキャップされていた。表５では、ペプチド化合物のアミノ酸配列を示し、リンカーＯＰまたは４Ｐの位置を、リンカーが接着している内部アミノ酸残基に続く括弧内に示す。化合物４０２６では、Ｎ末端「ＯＰ」リンカーがペプチド配列の最初に示されている。
【０２３７】
たとえば、表５の化合物４０２４は、Ｑ（Ｋａｃ）Ｙ  ＱＰＬ  ＤＥＬ  ＤＫ（４Ｐ）Ｔ  ＬＹＤ  ＱＦＭ  ＬＱＱ  Ｇ（親配列番号は配列番号１３８）の配列を有する。この例では、第２のアミノ酸残基はεアシルリシンであり、続いてチロシンであり、連結位置（この場合は４Ｐリンカー）はリシン残基１１であり、続いてスレオニンである。また、化合物４０５２は、（アミド２−ＰＥＧ）ＱＫａｃＹ  ＱＰＬ  ＤＥＬ  ＤＫ（０Ｐ）Ｔ  ＬＹＤ  ＱＦＭＬＱＱ  Ｇ（配列番号１６２）の配列を有する。この場合、Ｎ末端グルタミン残基がアミド−２−ＰＥＧ基によってキャップされ、第２のアミノ酸残基はεアシルリシンであり、ＯＰリンカーはリシン残基１１と接着している。
【０２３８】
また、表５および６は、半減期（Ｔ１／２）およびより短い試験期間に基づいた、Ｔ１／２を決定するための代替方法である「スクリーニング」半減期も示す（結果は括弧内）。「スクリーニング」Ｔ１／２には、試験化合物を雄のスイスウェブスターマウスに静脈内投与した。血液試料は、１つの時点あたり４匹のマウスから、眼窩後洞出血を介して、０．０８、５、および３２時間の時点に採取した。試験化合物の血液レベルはＥＬＩＳＡによって決定した。データは、５分間に対する３２時間での試験化合物の割合として報告した。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎバージョン４．１（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いてさらなるデータ分析を行った後、正常なＴ１／２を同様に計算した。曲線の形状に基づいてデータをモデルに当てはめた（すなわち、二重指数関数的な下降を２区画モデルに当てはめるなど）。最良の当てはめの基準（すなわち最低の％ＣＶ）は、反復再重み付け最小二乗に基づく。
【０２３９】
逆競合的ＥＬＩＳＡによって決定した、例示的なＡｎｇ−２結合ペプチド化合物のＩＣ５０値を表５に提示する。別段に指定しない限りは、ＩＣ５０値は、標的化ペプチド＋リンカーおよび実施例４のリンカーを介して抗体（Ｐ）と連結した標的化ペプチドについて提供する。表５では、化合物は、ヒト化アルドラーゼ抗体ｈ３８ｃ２および実施例４に示すリンカー構造（ＯＰ）とコンジュゲートしている。
【０２４０】
異種移植研究
Ｃｏｌｏ２０５細胞を、１０％のＦＢＳ  ＲＰＭＩ培地を用いて培養し、０．１ｍｌのハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）中の３×１０６個の細胞を、ヌードマウスの右上脇腹に皮下注射した。７〜９日後、動物を２００〜３００ｍｍ３の平均腫瘍サイズを有する適切な数の群へと無作為化した。その後、マウスを必要な量の本発明の化合物で治療し、腫瘍体積を週に２回測定した。その平均腫瘍体積が２０００ｍｍ３に達した際に動物を屠殺した。屠殺の際、腫瘍を秤量し、さらなる組織学的な研究用に保存した。治療の効能は、治療群対対照群の腫瘍体積の差を測定することによって評価した。結果は％Ｔ／Ｃとして報告し、％Ｔ／Ｃは、％Ｔ／Ｃ＝（Ｖｔ−Ｖ０）／（Ｃｔ−Ｃ０）×１００として計算し、式中、Ｖ０およびＶｔは、群の開始および屠殺時での治療群の平均腫瘍体積である。Ｃ０およびＣｔは、群の開始および屠殺時での対照群の平均腫瘍体積である（表７）。
【０２４１】
（実施例６）
例示的な［ＶＥＧＦ−ペプチド］−［リンカー］化合物を表９に示し、例示的な［ＶＥＧＦ−ペプチド］−［リンカー］−抗体化合物を表１０に示す。
【０２４２】
（実施例７）
ＶＥＧＦペプチド結合アッセイ
高結合の半ウェルの９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３６９０）を、５０μｌのＰＢＳ中の組換えヒトＶＥＧＦＲ２／Ｆｃ（５０ｎｇ／ウェル）でコーティングし、４℃で終夜インキュベーションした。プレートを１×洗浄緩衝液（ＫＰＬカタログ＃５０−６５−００）で３回洗浄し、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Ｓｃｙｔｅｋ＃ＡＡＡ５００）を用いて室温（ＲＴ）で１時間ブロッキングした後、５０μｌのＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋ中の２５ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＶＥＧＦ１６５の存在下で本発明ＶＥＧＦ−ペプチドを段階希釈し（濃度：０．１２８〜１０，０００ｎＭ）、その後、９６ウェルプレートに加え、ＲＴで１時間インキュベーションした。この様式で試験した本発明のペプチドはすべて、アミノ末端がＣ（Ｏ）ＣＨ３基およびカルボキシル末端がＮＨ２基でキャップされていた。その後、プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄し、希釈し（１：５００）、ビオチン標識した抗ヒトＶＥＧＦ抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ＃ＢＡＦ２９３）を加え、ＲＴで２時間インキュベーションした。プレートを洗浄した後、ストレプトアビジンＨＲＰコンジュゲート（Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ中に１：２００）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ＃ＤＹ９９８）を加えて結合した抗ＶＥＧＦ抗体を検出し、続いてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質（Ｐｉｅｒｃｅ、カタログ＃３４０２１）を発色のために加えた。反応は２ＭのＨ２ＳＯ４で停止した。５４０ｎｍの補正波長を用いて、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ）を使用してＯＤ４５０を測定した。データはＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて分析した。ＯＤ４５０値は、ＶＥＧＦペプチドの濃度の関数としてプロットした。ＶＥＧＦ−ＶＥＧＦＲ２の相互作用を阻害するＶＥＧＦペプチドの効力の指標であるＩＣ５０値は、Ｐｒｉｓｍ中のＳ字形用量応答曲線を当てはめて得られた。ＶＥＧＦ結合アッセイの結果を表１および２に示す（表１はＶ１２を有するＶＥＧＦペプチドを特色とし（配列番号３４を除く）、表２はＥ１２を有するＶＥＧＦペプチドを特色とする）。表１および２は、試験した本発明の化合物を親配列番号ごとに示すが、試験した化合物のＮ’およびＣ’末端は上述のようにキャップされていた。すべての化合物を同時に試験したわけではなく、括弧内に示したＩＣ５０値は正規化されている。
【０２４３】
（実施例８）
ペプチド係留
無水ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）（２ｍＬ）中のリンカー（実施例４に示す）（０．１ｇ、０．３ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート）（０．１１ｇ、０．３ｍｍｏｌ）の溶液を、氷浴中、アルゴン雰囲気下で２〜５℃まで冷却した。ＮＭＭ（Ｎ−メチルモルホリン）（０．１２ｇ、０．９ｍｍｏｌ）を、シリンジを介して導入し、５分間攪拌した。無水ＤＭＦ（２ｍｌ）中のペプチド（配列番号６４）（０．２４ｇ、０．１ｍｍｏｌ）の別の冷溶液を最初の反応器に加え、３０分間攪拌した。ＬＣＭＳ（液体クロマトグラフィー／質量分析）による監視下で反応が完了した後、水（１ｍｌ）を加え、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）を用いて反応混合物を精製して、２７８５の質量を有する純粋な生成物が得られた（１４５ｍｇ）。以下の図に、ペプチド結合以外の任意の結合に関与している非天然のアミノ酸および残基の完全な構造を示す。したがって、どちらのシステインのＮも示す。本発明の他の化合物は共有結合によって形成される。
【０２４４】
【化４７】
2011522794.tif 000048
【０２４５】
（実施例９）
［ペプチド］−［リンカー］部分と［抗体］との共有結合
［ペプチド］−［リンカー］−［抗体］の複合体のプログラミングおよび精製
係留ペプチドは、ｈ３８Ｃ２と３：１の比で、室温で終夜プログラミングした。生じる［ペプチド］−［リンカー］−［抗体］の巨大分子をＰＤ−１０脱塩カラムによって精製した。タンパク質濃度はＵＶ  Ａ２８０によって測定した。［ペプチド］−［リンカー］−［抗体］の巨大分子を、プログラミング効率のためにＬＣＭＳ分析によって特徴づけた。
【０２４６】
（実施例１０）
マウスＰＫアッセイ（リバースＥＬＩＳＡ様式）
ＰＫ研究は、投薬開始時に約２０〜２２グラムの重さの雄のスイスウェブスターマウス（ＣＦＷ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒｓ、カリフォルニア州Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ）を用いて実施した。［ＶＥＧＦ−ペプチド］−［リンカー］−［抗体］の複合体は、尾部静脈を介したＩＶ投与によって与え、血液試料は、１つの時点あたり３匹のマウスから、眼窩後洞出血を介して、０．０８、０．５、１、３、５、７および２４時間の時点で採取した。３２時間までの時点では、マウスはイソフルランで麻酔下にあり、出血体積は０．１ｍＬ／出血を超えなかった。残りの時点（３２〜１２０時間）では、マウスをＣＯ２吸入によって屠殺し、屠殺時心臓試料を採取した。試料採取の前にすべての血液チューブにプロテアーゼ阻害剤カクテルを加えた。血液を氷上で３０分間凝血させ、その後、１２０００ｒｐｍで５〜１０分間、４℃で遠心分離して血清を収集し、直ちに−８０℃でＥＬＩＳＡによる分析まで保管した。投薬液剤を用いて、ＶＥＧＦリバースＥＬＩＳＡによる血清試料分析のための検量線を確立した。それぞれの血清試料の一部分は、ＶＥＧＦリバースＥＬＩＳＡ（本明細書中でＩｇＧコーティングＥＬＩＳＡとも記載する）またはＶＥＧＦ  ＥＬＩＳＡ（ＶＥＧＦコーティングＥＬＩＳＡ）のどちらかによって分析した。
【０２４７】
ＶＥＧＦリバースＥＬＩＳＡ
高結合の半ウェルの９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３６９０）を、コーティング緩衝液中の１：１００のヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ＥＬＩＳＡキット、カタログ＃Ｅ８０−１０４）で、４℃で終夜コーティングした。プレートを１×洗浄緩衝液（ＫＰＬカタログ＃５０−６５−００）で３回洗浄し、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Ｓｃｙｔｅｋ＃ＡＡＡ５００）を用いて室温（ＲＴ）で１時間ブロッキングした後、調製した投薬液剤標準（範囲：３．９１〜５００ｎｇ／ｍｌ）および血清試料をプレートに加え、プレート振盪機上で１時間インキュベーションして、［ＶＥＧＦ−ペプチド］−［リンカー］−［抗体］の複合体をプレートと結合させた。その後、固定濃度のＶＥＧＦ（３ｎＭ）を加え、プレート振盪機上で１時間インキュベーションした。その後、プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄し、希釈した（１：５００）ビオチン標識した抗ヒトＶＥＧＦ抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ＃ＢＡＦ２９３）を加え、ＲＴで２時間インキュベーションした。プレートを洗浄した後、ストレプトアビジンＨＲＰコンジュゲート（Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ中に１：２００）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ＃ＤＹ９９８）を加えて結合した抗ＶＥＧＦ抗体を検出し、続いて、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質（Ｐｉｅｒｃｅ、カタログ＃３４０２１）を発色のために加えた。反応は２ＭのＨ２ＳＯ４で停止した。５４０ｎｍの補正波長を用いて、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ）を使用してＯＤ４５０を測定した。［ＶＥＧＦ−ペプチド］−［リンカー］−［抗体］の複合体の血清濃度は検量線を用いて計算した。ＥＬＩＳＡによって決定された血清化合物濃度は、時間の関数としてプロットした。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎバージョン４．１（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いてさらなるデータ分析を行って、［ペプチド］−［リンカー］−［抗体］の複合体のβ半減期（Ｔ１／２）および曲線下面積（ＡＵＣ）を決定した。
【０２４８】
ＶＥＧＦ  ＥＬＩＳＡ
高結合の半ウェルの９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３６９０）を、５０μｌのＰＢＳ／ウェル中のｒｈＶＥＧＦ１６５（６．２５ｎｇ／ウェル）でコーティングし、４℃で終夜インキュベーションした。プレートを１×洗浄緩衝液（ＫＰＬカタログ＃５０−６５−００）で３回洗浄し、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Ｓｃｙｔｅｋ＃ＡＡＡ５００）を用いて室温（ＲＴ）で１時間ブロッキングした後、調製した投薬液剤標準（範囲：３．９１〜５００ｎｇ／ｍｌ）および血清試料をプレートに加え、１時間インキュベーションして、［ＶＥＧＦ−ペプチド］−［リンカー］−［抗体］の複合体をプレート上にコーティングされたＶＥＧＦと結合させた。その後、プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄し、希釈したヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ（１：５０００）（Ｂｅｔｈｙｌ  Ａ８０−１０４Ｐ−５２）を加え、ＲＴで１時間インキュベーションし、続いて、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質（Ｐｉｅｒｃｅ、カタログ＃３４０２１）を発色のために加えた。反応は２ＭのＨ２ＳＯ４で停止した。５４０ｎｍの補正波長を用いて、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ）を使用してＯＤ４５０を測定した。［ＶＥＧＦ−ペプチド］−［リンカー］−［抗体］の複合体の血清濃度は検量線を用いて計算した。ＥＬＩＳＡによって決定された血清［ＶＥＧＦ−ペプチド］−［リンカー］−［抗体］の複合体の濃度は、時間の関数としてプロットした。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎバージョン４．１（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いてさらなるデータ分析を行って、［ＶＥＧＦ−ペプチド］−［リンカー］−［抗体］の複合体のβ半減期（Ｔ１／２）および曲線下面積（ＡＵＣ）を決定した。
【０２４９】
表３は、一連の［ＶＥＧＦ−ペプチド］−［リンカー］−［抗体］の複合体の結合を示す。それぞれの複合体の［ＶＥＧＦ−ペプチド］部分は配列番号３４に基づき、Ｃ５およびＣ１５を例外として、Ｘ１〜Ｘ１９の残基のうちの１つが、連結残基としてＫによって置換されている。それぞれの場合で、［ＶＥＧＦ−ペプチド］は、アミノ末端がＣ（Ｏ）ＣＨ３基およびカルボキシル末端がＮＨ２基でキャップされていた。それぞれの複合体の［リンカー］部分は実施例４に示したものであった。それぞれの複合体［抗体］部分はｈ３８Ｃ２であり、配列番号１および配列番号２を含む。また、表６は、特定の［ＶＥＧＦ−ペプチド］−［リンカー］−［抗体］の複合体半減期データ、および曲線下面積（ＡＵＣ）を表すデータも示す。ＡＵＣデータは、α半減期およびβ半減期をどちらも考慮して、曲線下合計面積を表す。
【０２５０】
表４は、一連の［ＶＥＧＦ−ペプチド］−［リンカー］−［抗体］の複合体の結合を示す。それぞれの複合体の［ＶＥＧＦ−ペプチド］部分は示した配列番号に基づき、示した残基が、連結残基としてＫによって置換されている。それぞれの場合で、［ＶＥＧＦ−ペプチド］は、アミノ末端がＣ（Ｏ）ＣＨ３基およびカルボキシル末端がＮＨ２基でキャップされていた。ペプチドの残基１〜１８は、表４に示さないが、他の箇所に記載した通りであったが、連結残基の対応する置換を例外とする（これらの実施形態のそれぞれの場合で、連結残基はＫである）。それぞれの複合体［リンカー］部分は実施例４に示したものであった。それぞれの複合体［抗体］部分はｈ３８Ｃ２であり、配列番号１および配列番号２を含む。また、表４は、特定の［ペプチド］−［リンカー］−［抗体］の複合体の一部の半減期データも示す。結果はＶＥＧＦ  ＥＬＩＳＡおよびＶＥＧＦリバースＥＬＩＳＡのどちらからも得られた（結果は括弧内）。
【０２５１】
（実施例１１）
式：［Ａｎｇ２−ペプチド］−［コネクター］−［ＶＥＧＦ−ペプチド］の本発明の化合物の合成を図８〜１０に示す。
【０２５２】
（実施例１２）
式：［Ａｎｇ２−ペプチド］−［コネクター］−［ＶＥＧＦ−ペプチド］の本発明の例示的な化合物を表１１に示す。
【０２５３】
（実施例１３）
表１２は、以下の式の本発明の例示的な化合物を示す：
【０２５４】
【化４８】
2011522794.tif 000049
【０２５５】
（実施例１４）
実施例１３の化合物を、ＶＥＧＦ結合（ＩＣ５０）、ＶＥＧＦ  Ｔ１／２、Ａｎｇ２結合（ＩＣ５０）、およびＡｎｇ２  Ｔ１／２について試験した。試験方法は上述の通りであった。結果を表８に示す。実施例１３に例示した本発明の化合物は、固定比の［Ａｎｇ−２−ペプチド］および［ＶＥＧＦ−ペプチド］を含有する。Ａｎｇ−２の循環レベルは、前立腺癌（２．５ｎｇ／ｍｌのＡｎｇ−２および０．２ｎｇ／ｍｌのＶＥＧＦ）ならびに乳癌（２ｎｇ／ｍｌのＡｎｇ−２および０．３ｎｇ／ｍｌのＶＥＧＦ）の患者において、ＶＥＧＦの循環レベルよりも約１０倍ことが報告されている（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ（２００３）３３、８８３〜８９０を参照）。本発明の一部の化合物（たとえば実施例１４参照）は、同じ分子内の互いと比較して、また他の分子と比較して、Ａｎｇ２およびＶＥＧＦのどちらについても幅広い結合ＩＣ５０およびｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を実証することが明らかである。したがって、特定の用途では、それぞれの標的のより多い循環量を可能にするために、Ａｎｇ２に対する結合親和性がＶＥＧＦに対するその結合親和性よりも約３〜約１５倍高い化合物を使用することが望ましい場合がある。当然、様々な治療的応用は、本発明の様々な化合物を必要または許容または有利にし得る。
【０２５６】
たとえば、化合物６０５３は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイにおいて、ＶＥＧＦ結合では３Ｅ−１０のＫＤおよびＡｎｇ−２結合では９Ｅ−１１のＫＤを示した。特定の癌患者において血漿濃度Ａｎｇ−２がより高いと報告されているため、Ａｎｇ−２結合に対する親和性がより高いことは有利であり得る。化合物６０５３は、同様のＶＥＧＦ阻害ＩＣ５０（０．７ｎＭ）およびＡｎｇ−２阻害ＩＣ５０（０．６ｎＭ）を示す。さらに、化合物６０５３の［Ａｎｇ２−ペプチド］および［ＶＥＧＦ−ペプチド］構成要素の両方の、マウスにおける安定性（Ｔ１／２）は非常に類似している。化合物２０１８、化合物４０４３および化合物６０５３を比較する、続くアッセイを実施した（表８）。
【０２５７】
Ｉｎ  ｖｉｖｏ  薬理学
化合物６０５３の抗腫瘍活性をヒト異種移植モデルにおいて評価した。異種移植は、腫瘍細胞を５〜７週齢の雌のｎｕ／ｎｕマウス内に皮下（ＳＣ）移植することによって誘導し、治療開前に２００〜４００ｍｍ３の体積まで確立させた。腫瘍が確立された後、マウスを同じ腫瘍体積を有する治療群へと無作為化し（ｎ＝９〜１０匹／群）、化合物６０５３の治療を腹腔内（ＩＰ）注射によって週１回投与した。組合せ研究では、追加の抗癌剤を毎週のＩＰ注射によってまたは毎日の経口胃管栄養法（ＰＯ）のどちらかによって投与し、治療は化合物６０５３と同時に開始した。治療期間中、腫瘍体積を週に１回または２回、カリパーを用いて測定し、体重を毎週測定した。一部の研究では、ビヒクルで治療した対照群における腫瘍体積が２０００ｍｍ３に達した際に、すべてのマウスをＣＯ２窒息によって屠殺し、腫瘍を切除した。偽生存研究では、それぞれの治療群の平均腫瘍体積が２０００ｍｍ３を超えた際に、マウスをＣＯ２窒息によって屠殺し、腫瘍を切除し、秤量し、さらなる組織学的および／または免疫化学的評価のために処理した。
【０２５８】
（実施例１５）
単一薬剤試験
Ｃｏｌｏ２０５（ヒト結腸腺癌）異種移植モデルにおいて実施した実験を図１１に例示する。化合物６０５３の毎週の投与により、Ｃｏｌｏ２０５腫瘍の増殖が用量依存的に阻害された。３５日目に、ビヒクルで治療した対照と比較して、３ｍｇ／ｋｇの化合物６０５３（ＩＰ、１回／週）により腫瘍増殖の有意な約３０％の減少がもたらされた一方で、１０または３０ｍｇ／ｋｇ（ＩＰ、１回／週）では、腫瘍増殖の有意な約５０％の減少が見られた。また、１０または３０ｍｇ／ｋｇの化合物６０５３の治療は、対照群と比較して持続的な腫瘍阻害ももたらした。化合物６０５３治療は体重増加に影響を与えず（データ示さず）、マウスは試験全体にわたって良好な健康状態であるように見えた。
【０２５９】
３５日目に、ビヒクルで治療したマウスおよび化合物６０５３で治療した群のそれぞれの半分を屠殺し、腫瘍を切除し、スナップ凍結した。化合物６０５３の抗血管形成効果を評価するために、腫瘍微小血管密度を、ビヒクルまたは化合物６０５３で治療したＣｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植腫瘍の凍結切片において免疫組織化学的に評価した。腫瘍をＣＤ３１に対するマウス特異的モノクローナル抗体で染色し、それぞれの腫瘍からの３つの切片の５つの領域から免疫反応性を定量した。腫瘍微小血管密度は、ビヒクルで治療した群と比較して、化合物６０５３治療（３０ｍｇ／ｋｇ、１回／週）において有意に約４４％減少しており（図１２）、分子の抗血管形成活性が確認された。
【０２６０】
独立したＣｏｌｏ２０５異種移植試験でも、化合物６０５３の毎週の投与により、Ｃｏｌｏ２０５腫瘍の増殖が用量依存的に再び阻害された。３０ｍｇ／ｋｇの毎週の用量では、ビヒクルで治療した対照と比較して、化合物６０５３は２８日目に腫瘍増殖の有意な約７０％の減少をもたらした（ＣＯ２窒息によって屠殺（図１３））。切除した腫瘍を切片にし、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色し、標準の画像分析の計算方法およびソフトウェアを用いて生存腫瘍の面積を評価した。生存腫瘍の面積は、それぞれの腫瘍からの４つの切片について決定し、その後、これらの測定値の平均値を試験終了時の腫瘍体積で乗算して、それぞれの腫瘍の生存腫瘍体積の推定を得た。Ｃｏｌｏ２０５結腸腺癌異種移植における実験からの生存腫瘍体積データを図１４に示す。生存腫瘍体積は、ビヒクルで治療した群と比較して、化合物６０５３で治療したマウスにおいて、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇの用量でそれぞれ有意に約６０％および約７６％減少した。
【０２６１】
化合物６０５３がＡｎｇ２およびＶＥＧＦの両方をｉｎ  ｖｉｖｏで標的とするかどうかを調べるために、Ａｎｇ２の発現およびリン酸化ＶＥＧＦＲ２（ｐＶＥＧＦＲ２）のレベルに対する化合物６０５３の効果を、ビヒクルまたは化合物６０５３で治療したＣｏｌｏ２０５異種移植腫瘍における免疫蛍光を用いて評価した。これらの腫瘍の凍結切片を、ＦＩＴＣで標識した抗Ａｎｇ２モノクローナル抗体で染色し、Ａｎｇ２免疫反応性を、それぞれの腫瘍からの１つの切片の３つの画像から定量した。ビヒクルで治療した群と比較して、Ａｎｇ２免疫反応性は、化合物６０５３で治療した群（１０および３０ｍｇ／ｋｇ）において有意に約７０％減少していた（図１５）。また、これらの腫瘍の凍結切片を、ＦＩＴＣで標識したＶＥＧＦＲ抗体およびローダミンで標識したｐＶＥＧＦＲ２抗体を用いて二重染色し、ｐＶＥＧＦＲ２の免疫反応性を、それぞれの腫瘍からの１つの切片の３つの画像から定量し、ＶＥＧＦＲ２の免疫反応性の合計の割合（ｐＶＥＧＦＲ２／ＶＥＧＦＲ２）として表した。ｐＶＥＧＦＲ２／ＶＥＧＦＲ２は、ビヒクルで治療した群と比較して、化合物６０５３治療によって用量依存的な様式で有意に減少しており、１０および３０ｍｇ／ｋｇでそれぞれ約４３％および約７０％であった（図１６）。これらのデータは、化合物６０５３が、Ｃｏｌｏ２０５異種移植モデルにおいてＡｎｇ２およびＶＥＧＦの経路のどちらにも影響を与えることを実証している。
【０２６２】
また、化合物６０５３の抗腫瘍効能は、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５乳癌異種移植モデルおよびＡ４３１皮膚癌異種移植モデルにおいても評価した。化合物６０５３の毎週の投与（３０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）により、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５モデルにおける腫瘍増殖において有意な４５％の減少（６８日目）（図１７Ａ）、およびＡ４３１モデルの腫瘍増殖において有意な５４％の減少（３５日目）（図１７Ｂ）がもたらされた。したがって、化合物６０５３は、３つの異なるヒト異種移植腫瘍モデルにおいて有意な抗腫瘍効能を実証する。
【０２６３】
さらなる単一薬剤試験を化合物２０１８、２０３６、２０４９、２０７１、４０４３、および６０５３で実施し、図２３〜２８に示す。
【０２６４】
（実施例１６）
組合せ試験
化合物６０５３の抗腫瘍効果をＣｏｌｏ２０５異種移植モデルで実施した組合せ療法の試験においてさらに評価し、化合物６０５３（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、毎週）の抗腫瘍効果を、単独で、ならびに５−フルロウラシル（５−ＦＵ、図１８）、イリノテカン（図１９）、タキソテール（図２０）、スニチニブ（図２１）、およびアキシチニブ（図２２）と組み合わせて比較した。化合物６０５３とこれらの化学療法剤（５−ＦＵ、イリノテカン、タキソテール）または試験した複数のチロシンキナーゼ阻害剤（スニチニブ、アキシチニブ）との組合せにより、どの単一の単独療法よりも有意に高い、腫瘍増殖速度の阻害がもたらされた（ボンフェローニ多重比較試験を用いた二方向ＡＮＯＶＡによってｐ＜０．０５）。化合物６０５３＋タキソテールの組合せ研究では（図１７）、１つの腫瘍が異常値であり（５７日目に２０００ｍｍ３を超える腫瘍体積に達し、安楽死を必要とした）、したがって分析から除去した。結論として、これらのデータは、腫瘍および血管形成の作用機構をどちらも標的とする、複数の抗癌治療剤と組み合わせた化合物６０５３の幅広い応用の優れた前臨床での理論を提供する。
【０２６５】
前臨床での効果の概要
化合物６０５３は、ナノモーラー以下の力価でヒトＡｎｇ２およびヒトＶＥＧＦ結合とその同族受容体との結合を阻害し、前臨床での種属にわたって持続的でバランスのとれた薬物動態学プロフィールを実証した。化合物６０５３は複数のヒト異種移植腫瘍モデルにわたって有効であり、腫瘍増殖の遅延および腫瘍増殖停止時間によって証明されるように、抗血管形成および抗腫瘍細胞治療剤を含めた複数の標準の治療剤と組み合わせて追加の利点を提供した。これらを合わせると、これらのデータは、Ａｎｇ２およびＶＥＧＦに対する化合物６０５３の高い効力が、単独で、および標準の化学療法剤と組み合わせて、腫瘍増殖および生存度に有意に影響を与えることを示唆している。
【０２６６】
（実施例１７）
ＶＥＧＦで誘導したウサギ眼網膜漏出アッセイにおける抗血管形成活性
化合物６０５４、６０３７、および６０４４の抗血管形成活性を、ＶＥＧＦで誘導したウサギ眼網膜漏出アッセイにおいて評価した。このアッセイは、３日間または７日間の様式で行った。３日間のアッセイ様式では、それぞれのウサギの右眼（３匹のウサギ／群）に、０日目に化合物（１ｍｇ／眼）またはビヒクルを注射し（ＩＶＴ）、続いて、翌日すなわち１日目に、同じ眼にＶＥＧＦ（１μｇ／眼）を注射した（ＩＶＴ）。３日目に、フルオレセインをＩＶによって注射し、眼の血管造影を撮影した。７日間のアッセイ様式では、化合物（１ｍｇ／眼）を０日目に注射し、ＶＥＧＦ（１μｇ／眼）を５日目に注射し、フルオレセインを７日目にＩＶによって注射した。さらに、結合および半減期を上述のようにアッセイし、表１４に示す。参考として、化合物６０３７のＶＥＧＦ半減期を約３６時間として表１４に示し、この図は、類似分子である化合物２０５３のＶＥＧＦ半減期である（表４を参照）。
【０２６７】
フルオレセイン血管造影を撮影した後、バックグラウンドと比較した網膜血管間の蛍光強度に基づいて、それぞれの眼に０〜４の等級付けを与えた。０の等級付けは、ＶＥＧＦによって誘導しなかったバックグラウンドに等しい網膜血管間の蛍光強度を示し、最小限の網膜漏出または網膜不漏出を表す。４の等級付けは、ＶＥＧＦ誘導性網膜漏出バックグラウンドに等しい蛍光強度を示し、フルオレセインの重篤な網膜漏出を示す。３日間のＶＥＧＦ誘導性網膜漏出アッセイでは、化合物６０３７は、１ｍｇ／眼の用量で１網膜漏出等級付けを有する効能を示した（図２９）。０．１ｍｇおよび０．０１ｍｇの用量は効能を示さなかった。
【０２６８】
化合物６０３７、６０４４および６０５４を、７日間のウサギ漏出アッセイにおいて評価した。化合物６０３７は１ｍｇの用量で効能を示し、２の等級付けを有していた（図３０）。
【０２６９】
したがって、本発明を幅広く開示し、上述の代表的な実施形態を参照しながら例示した。当業者は、本発明の精神および範囲から逸脱せずに、本発明に様々な改変を行うことができることを理解されよう。すべての出版物、特許出願、および発行された特許は、それぞれの個々の出版物、特許出願または発行された特許が、その全体が参考として組み込まれていると具体的かつ個別に示されている場合と同程度に、本明細書中に参考として組み込まれている。参考として組み込まれている本文に含有される定義は、本開示中の定義と矛盾する場合は排除される。
【０２７０】
明白にするために別々の実施形態のコンテキストで記載した、本発明の特定の特徴は、単一の実施形態中で組み合わせて提供してもよいことを理解されよう。逆に、簡潔にするために単一の実施形態のコンテキストで記載した本発明の様々な特長は、別々または任意の適切な部分的な組合せでも提供し得る。
【０２７１】
本発明の一実施形態に関して記載した任意の限定は、本発明の任意の他の実施形態に適用され得ることが、具体的に企図される。さらに、本発明の任意の組成物は本発明の任意の方法において使用してよく、本発明の任意の方法を用いて、本発明の任意の組成物を生成または利用してよい。特に、特許請求の範囲中に記載した本発明の任意の態様は、単独で、または１つもしくは複数の追加の特許請求の範囲および／もしくは明細書本文の態様と組み合わせて、特許請求の範囲および／または明細書本文の他の箇所に記載された本発明の他の態様と組合せ可能であることを理解されたい。
【０２７２】
特許請求の範囲中で使用する用語「または」とは、代替物のみを指すまたは代替物が相互排他的であると明確に指定しない限りは、「および／または」を意味するために使用するが、明細書本文は、代替物のみならびに「および／または」を指す定義を支持する。
【０２７３】
本明細書中で使用する「ａ」または「ａｎ」とは、別段に明白に指定しない限りは、１つまたは複数を意味し得る。本明細書中、特許請求の範囲で使用し、単語「含む」と併せて使用する場合、単語「ａ」または「ａｎ」とは、１つまたは１つより多くを意味し得る。本明細書中で使用する「別の」とは、少なくとも第２のもの以上を意味し得る。
【０２７４】
本発明を参照して本明細書中で使用する単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）／含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」および単語「有する（ｈａｖｉｎｇ）／含まれる、含める（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」とは、記述した特長、整数、ステップまたは構成要素の存在を指定するために使用するが、１つまたは複数の他の特長、整数、ステップ、構成要素またはそれらの群の存在または追加を除外しない。
【０２７５】
【表１−１】
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【０２７６】
【表１−２】
2011522794.tif 000051
【０２７７】
【表２】
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【０２７８】
【表３】
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【０２７９】
【表４−１】
2011522794.tif 000054
【０２８０】
【表４−２】
2011522794.tif 000055
【０２８１】
【表５−１】
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【０２８２】
【表５−２】
2011522794.tif 000057
【０２８３】
【表６−１】
2011522794.tif 000058
【０２８４】
【表６−２】
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【０２８５】
【表７】
2011522794.tif 000060
【０２８６】
【表８−１】
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【０２８７】
【表８−２】
2011522794.tif 000062
【０２８８】
【表９−１】
2011522794.tif 000063
【０２８９】
【表９−２】
2011522794.tif 000064
【０２９０】
【表９−３】
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【０２９１】
【表９−４】
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【０２９２】
【表９−５】
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【０２９３】
【表９−６】
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【０２９４】
【表９−７】
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【０２９５】
【表９−８】
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【０２９６】
【表９−９】
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【０２９７】
【表９−１０】
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【０２９８】
【表９−１１】
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【０２９９】
【表９−１２】
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【０３００】
【表１０−１】
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【０３０１】
【表１０−２】
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【０３０２】
【表１０−３】
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【０３０３】
【表１０−４】
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【０３０４】
【表１０−５】
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【０３０５】
【表１０−６】
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【０３０６】
【表１０−７】
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【０３０７】
【表１０−８】
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【０３０８】
【表１０−９】
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【０３０９】
【表１０−１０】
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【０３１０】
【表１０−１１】
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【０３１１】
【表１０−１２】
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【０３１２】
【表１０−１３】
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【０３１３】
【表１０−１４】
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【０３１４】
【表１０−１５】
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【０３１５】
【表１０−１６】
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【０３１６】
【表１０−１７】
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【０３１７】
【表１１−１】
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【０３１８】
【表１１−２】
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【０３１９】
【表１１−３】
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【０３２０】
【表１１−４】
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【０３２１】
【表１１−５】
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【０３２２】
【表１１−６】
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【０３２３】
【表１１−７】
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【０３２４】
【表１１−８】
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【０３２５】
【表１１−９】
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【０３２６】
【表１１−１０】
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【０３２７】
【表１１−１１】
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【０３２８】
【表１１−１２】
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【０３２９】
【表１１−１３】
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【０３３０】
【表１１−１４】
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【０３３１】
【表１２−１】
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【０３３２】
【表１２−２】
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【０３３３】
【表１２−３】
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【０３３４】
【表１２−４】
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【０３３５】
【表１２−５】
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【０３３６】
【表１２−６】
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【０３３７】
【表１２−７】
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【０３３８】
【表１２−８】
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【０３３９】
【表１２−９】
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【０３４０】
【表１２−１０】
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【０３４１】
【表１２−１１】
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【０３４２】
【表１２−１２】
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【０３４３】
【表１２−１３】
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【０３４４】
【表１２−１４】
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【０３４５】
【表１２−１５】
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【０３４６】
【表１２−１６】
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【０３４７】
【表１２−１７】
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【０３４８】
【表１３】
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【０３４９】
【表１４】
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【受託番号】
【０３５０】
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０１５
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０１４
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０１７
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−８２３
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−８２４
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０１８
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０１９
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−８２５
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１０１６
【図１−１】
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【図１−２】
2011522794.tif 000134
【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2011522794.tif 000139
【図６】
2011522794.tif 000140
【図７】
2011522794.tif 000141
【図８】
2011522794.tif 000142
【図９】
2011522794.tif 000143
【図１０】
2011522794.tif 000144
【図１１】
2011522794.tif 000145
【図１２】
2011522794.tif 000146
【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
2011522794.tif 000153
【図２０】
2011522794.tif 000154
【図２１】
2011522794.tif 000155
【図２２】
2011522794.tif 000156
【図２３】
2011522794.tif 000157
【図２４】
2011522794.tif 000158
【図２５】
2011522794.tif 000159
【図２６】
2011522794.tif 000160
【図２７】
2011522794.tif 000161
【図２８】
2011522794.tif 000162
【図２９】
2011522794.tif 000163
【図３０】
2011522794.tif 000164
【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成23年4月7日(2011.4.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
［ＶＥＧＦ−ペプチド］が以下の配列を有するペプチドである、式：Ｒ１−［ＶＥＧＦ−ペプチド］−Ｒ２の化合物、または薬学的に許容できるその塩：
Ｖ１−Ｅ２−Ｐ３−Ｎ４−Ｃ５−Ｄ６−Ｉ７−Ｈ８−Ｖ９−Ｍ１０−Ｗ１１−Ｖ１２−Ｗ１３−Ｘ１４−Ｃ１５−Ｆ１６−Ｅ１７−Ｒ１８−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｘ２２−Ｘ２３（配列番号１２６）
［式中、Ｒ１は、存在しない、ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）Ｃ６Ｈ５、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜５Ｍｅ、アミド−２−ＰＥＧ、またはＮ−アシルもしくはＮ−アルキルアミノ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、
Ｒ２は、存在しない、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨ（ＣＨ３）、ＮＨＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣ６Ｈ５、ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、ＮＨＯＣＨ３、ＮＨＯＣＨ２ＣＨ３、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、
Ｘ１４は、ＥまたはＶであり、
Ｘ１９は、疎水性アミノ酸残基、またはそのＤ−異性体のいずれか一つであってよく、
Ｘ２０は、存在しなくてもよく、あるいは中性、疎水性もしくは芳香族のアミノ酸またはそのＤ−異性体のいずれか一つであってよく、
Ｘ２１は、存在しなくてもよく、あるいは正荷電残基もしくは脂肪族の非極性残基またはそのＤ−アイソフォームのいずれか一つであってよく、
Ｘ２２は、存在しなくてもよく、またはＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｆ、Ｅ、Ｋａｃ、もしくはそのＤ−異性体からなる群から選択されてもよく、
Ｘ２３は、存在しなくてもよく、またはＧ、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｑ、Ｅ、Ｆ、Ｔ、Ｓ、Ｙ、およびＫａｃならびにそのＤ−異性体からなる群から選択され、
Ｖ１、Ｅ２、Ｐ３、Ｎ４、Ｖ９、Ｍ１０、Ｖ１２、Ｘ１４、Ｅ１７およびＣ末端残基からなる群のうちの１つは、直接または中間体リンカーを介して抗体の結合部位と共有結合している求核性側鎖またはＮ末端アミノ基もしくはＣ末端カルボキシル基を含む連結残基で置換されていてもよく、連結残基は、Ｋ、Ｒ、Ｙ、Ｃ、Ｔ、Ｓ、リシンの相同体、ホモシステイン、ホモセリン、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｎ末端残基およびＣ末端残基からなる群から選択される］。
【請求項２】
［ＶＥＧＦ−ペプチド］に、配列番号３６〜６５、６７〜１０６、配列番号１２８〜１３０、配列番号１９２〜１９７、配列番号２００および配列番号２１０〜２１８からなる群から選択される１つと相同な配列が含まれる、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
［ＶＥＧＦ−ペプチド］に、Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｍ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）（配列番号７８）と相同な配列が含まれる、請求項１または２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４】
１０番目の位置にあるＭが、式（配列番号１９５）：Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｋ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）を含む連結残基Ｋで置換されている、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１がＣ（Ｏ）ＣＨ３である、請求項１から４のいずれか一つに記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２がＮＨ２である、請求項１から５のいずれか一つに記載の化合物。
【請求項７】
式｛Ｃ（Ｏ）ＣＨ３｝−Ｖ−Ｅ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｖ−Ｋ−Ｗ−Ｖ−Ｗ−Ｅ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｒ−Ｌ−Ｙ−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｄ−Ｌｅｕ）−｛ＮＨ２｝を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
連結残基が存在し、連結残基の側鎖と共有結合した直鎖状または分枝状リンカーをさらに含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
リンカーが式ＬまたはＬ’を含み、Ｌが、式：−［コネクター］−Ｘ−Ｙ−Ｚまたは−Ｘ−Ｙ−Ｚ−のものであり、Ｌ’が、式：−［コネクター］−Ｘ−Ｙ−Ｚ’または−Ｘ−Ｙ−Ｚ’−のものであり、
式中、リンカーが分枝状であるとき、［コネクター］は存在し、存在する場合は連結残基と共有結合しており、１つまたは複数の追加の活性分子Ｘは、Ｃ、Ｈ、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、Ｆ、ＣＬ、Ｂｒ、およびＩからなる群から選択される任意の原子が含まれる生物学的に適合性がある接続鎖であり、ポリマーまたはブロックコポリマーを含んでいてもよく、リンカーが直鎖状の場合は連結残基と共有結合しており、
Ｙは存在し、置換されていてよい構造：
【化１】
2011522794.tif 000266
［式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、およびｅは、独立して、炭素または窒素であり、ｆは、炭素、窒素、酸素、または硫黄である］を有し、Ｙは、十分な原子価の任意の２つの環位置で独立してＸおよびＺと接着しており、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、またはｆのうちの４つ以下のみが同時に窒素であり、好ましくは、環構造中のａ、ｂ、ｃ、ｄ、およびｅは、それぞれ炭素であり、
Ｚは、存在する場合は
【化２】
2011522794.tif 000267
の構造を有し、Ｚ’は、存在する場合は
【化３】
2011522794.tif 000268
［式中、ｑ＝０〜５である］の構造を有し、抗体−Ｎ−は、存在する場合は、抗体の結合部位中の側鎖との共有結合である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｘが
【化４】
2011522794.tif 000269
であり、Ｘ−Ｙが
【化５】
2011522794.tif 000270
［式中、ｖおよびｗは、Ｘの主鎖の長さが６〜１２個の原子であるように選択され、Ｒｂは、水素、置換もしくは非置換のＣ１〜１０アルキル、置換もしくは非置換のＣ３〜７シクロアルキル−Ｃ０〜６アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−Ｃ０〜６アルキルであり、ｖ＝１または２であり、ｗ＝１または２であり、Ｒｂは好ましくは水素である］であり得る、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
リンカーが直鎖状であり、［コネクター］は存在せず、Ｚは、存在する場合は化合物１００１〜１０８０からなる群から選択され、Ｚ’は、存在する場合は化合物２００１〜２０８０からなる群から選択される、請求項９または１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｚ’が存在し、化合物２０１８の式を含む、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
［活性分子−１］が請求項８〜１２のいずれか一項に記載の［ＶＥＧＦ−ペプチド］であり、［コネクター］が［ＶＥＧＦ−ペプチド］および［活性分子−２］の両方と共有結合しており、［コネクター］がリンカーＬまたはＬ’とも共有結合している、以下の式を含む化合物。
【化６】
2011522794.tif 000271
【請求項１４】
［コネクター］が式：−［ＡＭ１−スペーサー］−［分枝］−［ＡＭ２−スペーサー］−を含み、［ＡＭ−１−スペーサー］および［ＡＭ−２−スペーサー］は、それぞれ独立して、［分枝］と共有結合した、生物学的に適合性があるポリマー、ブロックコポリマー、Ｃ、Ｈ、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、もしくはその塩、アルキル、アルケニル、アルキニル、オキソアルキル、オキソアルケニル、オキソアルキニル、アミノアルキル、アミノアルケニル、アミノアルキニル、スルホアルキル、スルホアルケニル、スルホアルキニル、ホスホアルキル、ホスホアルケニル、またはホスホアルキニル基であり、［分枝］は、少なくとも３個の反応基を有する分子であり、［ＡＭ−１−スペーサー］は、［分枝］および［活性分子−１］と共有結合しており、［ＡＭ−２−スペーサー］は、［分枝］および［活性分子−２］と共有結合している、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
［ＡＭ−１−スペーサー］および［ＡＭ−２−スペーサー］が、それぞれ独立して、その対応する活性分子および［分枝］と共有結合を形成することができる中性の水溶性分子であり、アミノポリエチレングリコール酸、ポリエチレングリコール二価酸、アミノアルカン酸、アミノアルカン酸、ポリグリシン、２−ＰＥＧ、４−ＰＥＧおよび６−ＰＥＧからなる群から選択され、それぞれが４−ＰＥＧであり得る、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
［分枝］が３つの直交する反応基を含む化学部分であり、システイン分枝、ジアミノプロピオン酸系の分枝、ジアミノブタン酸系の分枝、オルニチン系の分枝、リシン系の分枝、ホモシステイン分枝、ビスマレイミド分枝、マレイミド酸分枝、その誘導体および相同体、ならびに以下の構造からなる群から選択される、請求項１４から１５のいずれか一項に記載の化合物：
【化７】
2011522794.tif 000272
【請求項１７】
［分枝］−Ｌが以下からなる群から選択される、請求項１６に記載の化合物：
【化８】
2011522794.tif 000273
【請求項１８】
［活性分子２］が式：Ｒ３−［Ａｎｇ２−ペプチド］−Ｒ４のＡｎｇ−２結合ペプチドであり、式中、
Ｒ３は、存在しない、ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、Ｃ（Ｏ）Ｃ６Ｈ５、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１〜５Ｍｅ、アミド−２−ＰＥＧ、Ｎ−アシルおよびＮ−アルキル、アミノ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、
Ｒ４は、存在しない、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨ（ＣＨ３）、ＮＨＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣ６Ｈ５、ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、ＮＨＯＣＨ３、ＮＨＯＣＨ２ＣＨ３、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、
［Ａｎｇ２−ペプチド］は、Ｑ１  Ｘ２  Ｙ３  Ｑ４  Ｘ５  Ｌ６  Ｄ７  Ｅ８  Ｘ９  Ｄ１０  Ｘ１１  Ｘ１２  Ｘ１３  Ｘ１４  Ｄ１５  Ｘ１６  Ｆ１７  Ｍ１８  Ｘ１９  Ｑ２０  Ｑ２１  Ｇ２２（配列番号１０７）と相同な配列を含み、式中、ｘ２は、Ｋ、Ｎ、Ｒ、Ｈ、Ｋａｃ、Ｎｉｃｋ、およびＣｂｃＫからなる群から選択され、Ｘ５は、Ｐ、ｈＰ、ｄｈＰ、およびＢｎＨＰからなる群から選択され、Ｘ９は、Ｌ、Ｉ、ＴｈＡ、およびＫａｃからなる群から選択され、Ｘ１１は、Ｑ、Ｎ、Ｃ、Ｋ、Ｋａｃ、Ｄａｂ、およびＤａｐからなる群から選択され、Ｘ１２は、Ｌ、ＨＬ、Ｎｖａ、Ｉ、ＨｃｈＡ、ＨＦ、およびＴｈＡからなる群から選択され、Ｘ１３は、Ｌ、ＨＬ、Ｎｖａ、Ｉ、ＨｃｈＡ、ＨＦ、およびＴｈＡからなる群から選択され、Ｘ１４は、芳香族残基からなる群から選択され、Ｘ１６は、ＱおよびＮからなる群から選択され、Ｘ１９は、ＬおよびＩからなる群から選択され、
［Ａｎｇ−２−ペプチド］が、Ａｎｇ２−連結残基の求核性側鎖またはＮ末端アミノ基もしくはＣ末端カルボキシル基を介して［コネクター］と共有結合しており、Ａｎｇ２−連結残基が、Ｋ、Ｒ、Ｙ、Ｃ、Ｔ、Ｓ、リシンの相同体、ホモシステイン、ホモセリン、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｎ末端残基およびＣ末端残基を含む群から選択され、Ｑ１、Ｅ８、Ｘ９、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｄ１５、Ｘ１６、Ｍ１８、Ｘ１９またはＧ２２のうちの１つが、Ａｎｇ２−連結残基で置換されている、請求項１３から１７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
［Ａｎｇ２−ペプチド］が、配列番号１３７〜１９１からなる群から選択される１つの化合物と相同な配列を含む、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ１がＣ（Ｏ）ＣＨ３であり、Ｒ２がＮＨ２であり、Ｒ１−［Ａｎｇ−ペプチド］−Ｒ２が（配列番号１５３）：
｛Ｃ（Ｏ）ＣＨ３｝−Ｑ−（Ｋａｃ）−Ｙ−Ｑ−Ｐ−Ｌ−Ｄ−Ｅ−（Ｋａｃ）−Ｄ−Ｋ−Ｔ−Ｌ−Ｙ−Ｄ−Ｑ−Ｆ−Ｍ−Ｌ−Ｑ−Ｑ−Ｇ−｛ＮＨ２｝であり、位置１１のＫが、［コネクター］と共有結合したＡｎｇ２−連結残基である、請求項１９に記載の化合物。
【請求項２１】
［ＶＥＧＦ−ペプチド］が、ＶＥＧＦ−連結残基の求核性側鎖またはＮ末端アミノ基もしくはＣ末端カルボキシル基を介して［コネクター］と共有結合しており、ＶＥＧＦ−連結残基が、Ｋ、Ｒ、Ｙ、Ｃ、Ｔ、Ｓ、リシンの相同体、ホモシステイン、ホモセリン、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｎ末端残基およびＣ末端残基を含む群から選択される、請求項１３から２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
化合物５００１〜化合物５０２８、化合物５０３２〜化合物５０６４および化合物５０７０〜化合物５０７４からなる群から選択される、請求項１３から２１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２３】
化合物５０５３、５０６０、５０６１および５０６２からなる群から選択される、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２４】
化合物が５０５３である、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｚ基が、存在する場合は、抗体の結合部位と共有結合している、請求項１３から２４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２６】
抗体が存在し、化合物が６０３２〜６０７４からなる群から選択される、請求項１３から２５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２７】
化合物が６０５３、６０６０、６０６１および６０６２からなる群から選択される、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２８】
化合物６０５３の式を含む、請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
抗体が存在し、触媒抗体であり、アルドラーゼ抗体、βラクタマーゼ抗体、エステラーゼ抗体、およびアミダーゼ抗体からなる群から選択される、請求項９から２８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３０】
抗体が存在し、ｈ３８ｃ２からのＶＨおよびＶＬドメインを含む完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ＶＨ、ＶＬ、二重特異性抗体、ミニボディー、またはｈ３８ｃ２からのＶＨおよびＶＬドメインならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４からなる群から選択される定常ドメインを含む完全長抗体であり、ｈ３８Ｃ２  ＩｇＧ１であり得る、請求項９から２９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３１】
ＶＬドメインが配列番号１の残基番号１〜１０７のアミノ酸を含み、ＶＨドメインが配列番号２の残基番号１〜１１３のアミノ酸を含む、請求項２９または３０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３２】
配列番号１および配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３３】
以下の式で表される化合物6053を含む化合物であって、
【化９】
2011522794.tif 000274

「-抗体」はh32c2の結合部位と共有結合することを示し、h32c2は配列番号１および配列番号２のアミノ酸を含み、さらに共有結合が配列番号２のアミノ酸の位置９９のリシン残基の側鎖と結合するものである、請求項３２記載の化合物。
【請求項３４】
治療上有効な量の請求項１〜３３のいずれかに記載の化合物を含み、治療上有効な量の１つまたは複数の、好ましくは５−フルロウラシル、イリノテカン、タキソテール、スニチニブ、アキシチニブ、オキサリプラチン、ベバシズマブ、およびセツキシマブからなる群から選択される化合物である化学療法剤を任意選択でさらに含む医薬組成物。
【請求項３５】
血管新生を阻害もしくは減少させるための、または血管形成障害に関連する疾患もしくは症状を治療もしくは予防するための請求項１〜３３のいずれかに記載の化合物を含む医薬組成物、または請求項３４に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
血管形成障害が、肺癌（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、頭部または頸部の癌、卵巣癌、結腸癌、直腸癌、前立腺癌、肛門部の癌、胃癌、乳癌、腎臓もしくは輸尿管の癌、腎細胞癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、脊髄軸の腫瘍、中咽頭、下咽頭、食道、膵臓、肝臓、胆嚢および胆管、小腸、尿（ｕｒｉｎａ）の癌腫、リンパ腫、または前述の癌のうちの１つもしくは複数の組合せから選択される癌からなる群から選ばれる、請求項３５に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
血管形成障害が、加齢黄斑変性症（ウェットまたはドライ）、緑内障、糖尿病性網膜症（糖尿病性黄斑浮腫が含まれる）、脈絡膜血管新生膜（ＣＮＶ）、ブドウ膜炎、近視性変性、眼腫瘍、網膜中心静脈閉塞、ルベオーシス、眼血管新生、中心性漿液性網膜症、ドライアイ、網膜中心動脈閉塞、嚢胞様黄斑浮腫からなる群から選ばれる、請求項３５に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
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