(57)【要約】インスリン分泌性ペプチド結合体の生物活性の安定性を提供し、それを維持することができる医薬製剤が、本発明で提供される。本発明で提供される医薬製剤には、液体および凍結乾燥製剤、単位用量剤形および多回使用剤形、ならびにそれらの組合せが含まれる。本発明は、インスリン分泌性ペプチド結合体、特にアルブミンとエキセンディン−４またはその誘導体との結合体を含む医薬製剤、およびその投与方法を提供する。本発明は、本明細書に記載の医薬製剤を投与することによって、糖尿病およびインスリン分泌性ペプチド関連の疾患または状態を治療する方法も提供する。
2011506442.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルブミンおよびインスリン分泌性ペプチドの結合体であって、前記インスリン分泌性ペプチドは、天然のエキセンディン−４配列と比較して３つ以下のアミノ酸の置換、欠失または挿入を有する配列を含み、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの濃度である結合体と；緩衝剤と；少なくとも１ｍＭの濃度である張性調整剤と；安定剤と；界面活性剤とを含み、約４〜約８のｐＨを有する医薬製剤。
【請求項２】
前記結合体が、前記ペプチドのリジンのεアミノに共有結合している［２−［２−［２−マレイミドプロピオナミド（エトキシ）エトキシ］酢酸リンカーに共有結合しているアルブミンシステイン３４チオールを含む、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項３】
前記結合体が、以下：
【化８】
2011506442.tif 000026
の通りであり（配列番号３３）、
式中、Ｘはアルブミンのアミノ酸のＳ、ＯまたはＮＨである、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項４】
前記リジンが天然のエキセンディン−４配列に付加されている、請求項２に記載の医薬製剤。
【請求項５】
前記リジンが天然のエキセンディン−４配列のカルボキシ末端に付加されている、請求項２に記載の医薬製剤。
【請求項６】
前記アルブミンがヒト血清アルブミンである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項７】
前記アルブミンが組換え体血清アルブミンである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項８】
前記アルブミンが組換え体ヒト血清アルブミンである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項９】
前記結合体が、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０−ＮＨ２のカルボキシ末端リジンのεアミノに共有結合している［２−［２−［２マレイミドプロピオナミド（エトキシ）エトキシ］酢酸リンカーに共有結合している組換え体ヒト血清アルブミンシステイン３４チオールを含む、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項１０】
前記結合体が精製されている、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１１】
前記結合体が約１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌの濃度である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１２】
前記結合体が約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌの濃度である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１３】
前記結合体が約１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの濃度である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１４】
前記結合体が約１０ｍｇ／ｍｌの濃度である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１５】
前記結合体が約２０ｍｇ／ｍｌの濃度である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１６】
前記ｐＨが約５と約７の間である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１７】
前記ｐＨが約５．０である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１８】
前記ｐＨが約７．０である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１９】
前記緩衝剤が酢酸緩衝剤である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項２０】
前記酢酸緩衝剤が酢酸ナトリウム緩衝剤であり、前記ｐＨが約４．０〜約６．０である、請求項１９に記載の医薬製剤。
【請求項２１】
前記緩衝剤がリン酸緩衝剤である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項２２】
前記リン酸緩衝剤がリン酸ナトリウム緩衝剤であり、前記ｐＨが約６．０〜約８．０である、請求項２１に記載の医薬製剤。
【請求項２３】
前記緩衝剤が１ｍＭ〜約２０ｍＭの濃度である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項２４】
前記緩衝剤が５ｍＭ〜約１５ｍＭの濃度である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項２５】
前記緩衝剤が約１０ｍＭの濃度である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項２６】
前記張性調整剤が塩化ナトリウムである、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項２７】
前記塩化ナトリウムが約１３５ｍＭ〜約１５５ｍＭの濃度である、請求項２６に記載の医薬製剤。
【請求項２８】
前記塩化ナトリウムが約１３５ｍＭの濃度である、請求項２６に記載の医薬製剤。
【請求項２９】
前記塩化ナトリウムが約１５０ｍＭの濃度である、請求項２６に記載の医薬製剤。
【請求項３０】
前記張性調整剤がソルビトールである、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３１】
ソルビトールが約５％（ｗ／ｖ）である、請求項３０に記載の医薬製剤。
【請求項３２】
前記安定剤がオクタン酸ナトリウムである、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３３】
前記オクタン酸ナトリウムが約５ｍＭの濃度である、請求項３２に記載の医薬製剤。
【請求項３４】
前記界面活性剤がプルロニックＦ６８である、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３５】
前記プルロニックＦ６８が約０．１％（ｗ／ｖ）である、請求項３４に記載の医薬製剤。
【請求項３６】
前記医薬製剤が防腐剤をさらに含む、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３７】
前記防腐剤が、メタノール、エタノール、イソプロパノール、グリセロール、レソルシノール、２−メチル−２，４−ペンタジオール、メルチオレート（チメロサール）、塩化ベンザルコニウムおよび安息香酸ナトリウムからなる群から選択される、請求項３６に記載の医薬製剤。
【請求項３８】
前記医薬製剤が単位用量剤形である、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３９】
前記医薬製剤が多回使用剤形である、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４０】
前記医薬製剤が液体剤形である、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４１】
前記医薬製剤が凍結乾燥剤形である、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４２】
前記医薬製剤が非経口投与に適する、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４３】
前記医薬製剤が、皮下、静脈内、筋肉内、経皮、動脈内、腹腔内、経肺または経口投与に適する、請求項４２に記載の医薬製剤。
【請求項４４】
前記医薬製剤が皮下投与に適する、請求項４２に記載の医薬製剤。
【請求項４５】
前記結合体が１０ｍｇ／ｍｌの濃度であり、前記緩衝剤が１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムであり、前記張性調整剤が１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムであり、前記安定剤が５ｍＭの濃度のオクタン酸ナトリウムであり、前記界面活性剤が０．１％（ｗ／ｖ）の濃度のプルロニックＦ６８であり、約５．０のｐＨを有する請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項４６】
前記結合体が１０ｍｇ／ｍｌの濃度であり、前記緩衝剤が１０ｍＭの濃度のリン酸ナトリウムであり、前記張性調整剤が１３５ｍＭの濃度の塩化ナトリウムであり、前記安定剤が８ｍＭの濃度のオクタン酸ナトリウムであり、前記界面活性剤が１５ｍｇ／Ｌの濃度のポリソルベート８０であり、約７．０のｐＨを有する請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項４７】
対象においてＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、ＩＩ型糖尿病を有する対象に、アルブミンおよびインスリン分泌性ペプチドの結合体であり、前記インスリン分泌性ペプチドが、天然のエキセンディン−４配列と比較して３つ以下のアミノ酸の置換、欠失または挿入を有する配列を含み、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの濃度である結合体と；緩衝剤と；張性調整剤と；安定剤と；界面活性剤とを含み、約４〜約８のｐＨを有する医薬製剤を投与することを含む方法。
【請求項４８】
対象においてＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、ＩＩ型糖尿病を有する対象に、請求項１〜４５、８１または８２のいずれか一項に記載の医薬製剤を投与することを含む方法。
【請求項４９】
対象においてＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、ＩＩ型糖尿病を有する対象に、請求項４６または請求項８３に記載の医薬製剤を投与することを含む方法。
【請求項５０】
前記対象に１週あたり約１．０〜４．０ｍｇの前記結合体を投与することを含む、請求項４７〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記対象に１週あたり約１．５〜２．０ｍｇの前記結合体を投与することを含む、請求項４７〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記対象に１週あたり約３．０〜４．０ｍｇの前記結合体を投与することを含む、請求項４７〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記対象に週１回１．５ｍｇの前記結合体を投与することを含む、請求項４７〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記対象に週１回２．０ｍｇの前記結合体を投与することを含む、請求項４７〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記対象に週１回３．０ｍｇの前記結合体を投与することを含む、請求項４７〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記対象に週２回１．５ｍｇの前記結合体を投与することを含む、請求項４７〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
（ａ）１．５ｍｇの前記結合体を第一の期間に週１回前記対象に投与するステップと、
（ｂ）２．０ｍｇの前記結合体を第二の期間に週１回前記対象に投与するステップと
を上記の順序で含む、請求項４７〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記第一の期間が４週間であり、前記第二の期間が８週間である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
（ａ）１．５ｍｇの前記結合体を第一の期間に週２回前記対象に投与するステップと、
（ｂ）２．０ｍｇの前記結合体を第二の期間に週２回前記対象に投与するステップと
を上記の順序で含む、請求項４７〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記第一の期間が４週間である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
（ａ）１．５ｍｇの前記結合体を第一の期間に週１回前記対象に投与するステップと、
（ｂ）２．０ｍｇの前記結合体を第二の期間に週１回前記対象に投与するステップと、
（ｃ）３．０ｍｇの前記結合体を第三の期間に週１回前記対象に投与するステップと
を上記の順序で含む、請求項４７〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記第一の期間が４週間であり、前記第二の期間が４週間である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記第一の期間が２週間であり、前記第二の期間が２週間である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
対象においてＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、ＩＩ型糖尿病を有する対象に、インスリン分泌性結合エキセンディン−４誘導体を含む医薬製剤を投与することを含み、前記誘導体が、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０−ＮＨ２のカルボキシ末端リジンのεアミノに共有結合している［２−［２−［２マレイミドプロピオナミド（エトキシ）エトキシ］酢酸リンカーに共有結合している組換え体ヒト血清アルブミンシステイン３４チオールを含み、前記対象に１．５ｍｇの前記結合エキセンディン−４誘導体を週１回投与する方法。
【請求項６５】
対象においてＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、ＩＩ型糖尿病を有する対象に、インスリン分泌性結合エキセンディン−４誘導体を含む医薬製剤を投与することを含み、前記誘導体が、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０−ＮＨ２のカルボキシ末端リジンのεアミノに共有結合している［２−［２−［２マレイミドプロピオナミド（エトキシ）エトキシ］酢酸リンカーに共有結合している組換え体ヒト血清アルブミンシステイン３４チオールを含み、前記対象に１．５ｍｇの前記結合エキセンディン−４誘導体を週２回投与する方法。
【請求項６６】
対象においてＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、ＩＩ型糖尿病を有する対象に、インスリン分泌性結合エキセンディン−４誘導体を含む医薬製剤を投与することを含み、前記誘導体が、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０−ＮＨ２のカルボキシ末端リジンのεアミノに共有結合している［２−［２−［２マレイミドプロピオナミド（エトキシ）エトキシ］酢酸リンカーに共有結合している組換え体ヒト血清アルブミンシステイン３４チオールを含み、前記対象に２．０ｍｇの前記結合エキセンディン−４誘導体を週１回投与する方法。
【請求項６７】
対象においてＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、ＩＩ型糖尿病を有する対象に、インスリン分泌性結合エキセンディン−４誘導体を含む医薬製剤を投与することを含み、前記誘導体が、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０−ＮＨ２のカルボキシ末端リジンのεアミノに共有結合している［２−［２−［２マレイミドプロピオナミド（エトキシ）エトキシ］酢酸リンカーに共有結合している組換え体ヒト血清アルブミンシステイン３４チオールを含み、前記対象に２．０ｍｇの前記結合エキセンディン−４誘導体を週２回投与する方法。
【請求項６８】
対象においてＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、ＩＩ型糖尿病を有する対象に、インスリン分泌性結合エキセンディン−４誘導体を含む医薬製剤を投与することを含み、前記誘導体が、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０−ＮＨ２のカルボキシ末端リジンのεアミノに共有結合している［２−［２−［２マレイミドプロピオナミド（エトキシ）エトキシ］酢酸リンカーに共有結合している組換え体ヒト血清アルブミンシステイン３４チオールを含み、前記対象に３．０ｍｇの前記結合エキセンディン−４誘導体を週１回投与する方法。
【請求項６９】
対象においてＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、ＩＩ型糖尿病を有する対象に、インスリン分泌性結合エキセンディン−４誘導体を含む医薬製剤を投与することを含み、前記誘導体が、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０−ＮＨ２のカルボキシ末端リジンのεアミノに共有結合している［２−［２−［２マレイミドプロピオナミド（エトキシ）エトキシ］酢酸リンカーに共有結合している組換え体ヒト血清アルブミンシステイン３４チオールを含み、前記対象に１．５ｍｇの前記結合エキセンディン−４誘導体を週１回、４週間にわたって投与し、続いて２．０ｍｇの前記結合エキセンディン−４誘導体を週１回投与する方法。
【請求項７０】
対象においてＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、ＩＩ型糖尿病を有する対象に、インスリン分泌性結合エキセンディン−４誘導体を含む医薬製剤を投与することを含み、前記誘導体が、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０−ＮＨ２のカルボキシ末端リジンのεアミノに共有結合している［２−［２−［２マレイミドプロピオナミド（エトキシ）エトキシ］酢酸リンカーに共有結合している組換え体ヒト血清アルブミンシステイン３４チオールを含み、前記対象に１．５ｍｇの前記結合エキセンディン−４誘導体を週２回、４週間にわたって投与し、続いて２．０ｍｇの前記結合エキセンディン−４誘導体を週１回投与する方法。
【請求項７１】
対象においてＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、ＩＩ型糖尿病を有する対象に、インスリン分泌性結合エキセンディン−４誘導体を含む医薬製剤を投与することを含み、前記誘導体が、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０−ＮＨ２のカルボキシ末端リジンのεアミノに共有結合している［２−［２−［２マレイミドプロピオナミド（エトキシ）エトキシ］酢酸リンカーに共有結合している組換え体ヒト血清アルブミンシステイン３４チオールを含み、前記対象に１．５ｍｇの前記結合エキセンディン−４誘導体を週２回、４週間にわたって投与し、続いて２．０ｍｇの前記結合エキセンディン−４誘導体を週２回投与する方法。
【請求項７２】
対象においてＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、ＩＩ型糖尿病を有する対象に、インスリン分泌性結合エキセンディン−４誘導体を含む医薬製剤を投与することを含み、前記誘導体が、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０−ＮＨ２のカルボキシ末端リジンのεアミノに共有結合している［２−［２−［２マレイミドプロピオナミド（エトキシ）エトキシ］酢酸リンカーに共有結合している組換え体ヒト血清アルブミンシステイン３４チオールを含み、前記対象に１．５ｍｇの前記結合エキセンディン−４誘導体を週１回、４週間にわたって投与し、続いて２．０ｍｇの前記結合エキセンディン−４誘導体を週１回、４週間にわたって投与し、続いて３．０ｍｇの前記結合エキセンディン−４誘導体を週１回投与する方法。
【請求項７３】
対象においてＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、ＩＩ型糖尿病を有する対象に、インスリン分泌性結合エキセンディン−４誘導体を含む医薬製剤を投与することを含み、前記誘導体が、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０−ＮＨ２のカルボキシ末端リジンのεアミノに共有結合している［２−［２−［２マレイミドプロピオナミド（エトキシ）エトキシ］酢酸リンカーに共有結合している組換え体ヒト血清アルブミンシステイン３４チオールを含み、前記対象に１．５ｍｇの前記結合エキセンディン−４誘導体を週１回、２週間にわたって投与し、続いて２．０ｍｇの前記結合エキセンディン−４誘導体を週１回、２週間にわたって投与し、続いて３．０ｍｇの前記結合エキセンディン−４誘導体を週１回投与する方法。
【請求項７４】
対象におけるＩＩ型糖尿病の治療のためのキットであって、請求項１〜４６または８１〜８３のいずれか一項に記載の医薬製剤を含む１つまたは複数の容器を含むキット。
【請求項７５】
前記１つまたは複数の容器がそれぞれ前記医薬製剤の単位剤形を含む、請求項７４に記載のキット。
【請求項７６】
前記医薬製剤が凍結乾燥されている、請求項７４に記載のキット。
【請求項７７】
前記凍結乾燥されている医薬製剤が、非還元糖の存在下での凍結乾燥によって生成される、請求項７４に記載のキット。
【請求項７８】
前記非還元糖がショ糖またはトレハロースである、請求項７４に記載のキット。
【請求項７９】
前記凍結乾燥されている医薬製剤を再構成するための滅菌希釈剤を含む１つまたは複数の容器をさらに含む、請求項７６に記載のキット。
【請求項８０】
少なくとも３カ月の間、１日に１０００ｍｇ以上のメトホルミンの安定用量を前記対象に投与する、請求項４７〜７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
アルブミンおよびインスリン分泌性ペプチドの結合体であって、前記インスリン分泌性ペプチドが、天然のエキセンディン−４配列と比較して３つ以下のアミノ酸の置換、欠失または挿入を有する配列を含み、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの濃度である結合体と；緩衝剤と；張性調整剤と；安定剤と；界面活性剤とからなり、約４．０〜約８．０のｐＨを有する医薬製剤。
【請求項８２】
（ａ）以下の式
【化９】
2011506442.tif 000027
（配列番号３３）による結合体であって、上式で、Ｘはアルブミンのシステイン３４のＳであり、１０ｍｇ／ｍｌの濃度である結合体と；
（ｂ）１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムである緩衝剤と；
（ｃ）１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムである張性調整剤と；
（ｄ）５ｍＭの濃度のオクタン酸ナトリウムである安定剤と；
（ｅ）０．１％（ｗ／ｖ）の濃度のプルロニックＦ６８である界面活性剤と
からなり、約５．０のｐＨを有する医薬製剤。
【請求項８３】
（ａ）以下の式
【化１０】
2011506442.tif 000028
（配列番号３３）による結合体であって、上式で、Ｘはアルブミンのシステイン３４のＳであり、１０ｍｇ／ｍｌの濃度である結合体と；
（ｂ）１０ｍＭの濃度のリン酸ナトリウムである緩衝剤と；
（ｃ）１３５ｍＭの濃度の塩化ナトリウムである張性調整剤と；
（ｄ）８ｍＭの濃度のオクタン酸ナトリウムである安定剤と；
（ｅ）１５ｍｇ／Ｌの濃度のポリソルベート８０である界面活性剤と
からなり、約７．０のｐＨを有する医薬製剤。
【請求項８４】
前記アルブミンがヒト血清アルブミンである、請求項４７〜４９、６４〜７３または８１〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
前記対象がヒトである、請求項４７〜４９、６４〜７３または８１〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００７年１２月１１日に出願された米国仮特許出願第６１／００７，３４６号、２００８年２月１５日に出願された米国仮特許出願第６１／０２９，２９５号、および２００８年１２月３日に出願された米国仮特許出願第６１／２００，８７９号の利益を主張する。米国仮特許出願第６１／００７，３４６号、同第６１／０２９，２９５号、および同第６１／２００，８７９号のそれぞれは、その全体が本明細書中に参考により援用される。
【０００２】
インスリン分泌性ペプチド結合体を含む医薬製剤、およびその投与方法が提供される。本製剤は糖尿病、および他のインスリン分泌性ペプチド関連の疾患の治療で有用である。
【背景技術】
【０００３】
世界での全ての年齢層の糖尿病発生率は、２０００年に２．８％または１７１，０００，０００人であると推定され、２０３０年には４．４％または３６６，０００，０００人になると予測されている。非特許文献１を参照。米国単独では、２００５年に糖尿病の発生率は２０，８００，０００人、または米国の人口の約７％と推定された。非特許文献２を参照。糖尿病の全対象の約９５％は、ＩＩ型の疾患を有する。糖尿病は現在、米国で第５の死因であり、心血管疾患、腎不全、失明および下肢切断から生じる過剰な罹患率に関連する。
【０００４】
同様に、肥満は、世界中で人口集団にますます影響を及ぼしている状態である。世界保健機構によると、１９９５年に、世界で概算２００，０００，０００人の肥満成人がおり、別の１８，０００，０００人の５歳未満の児童が過体重と分類された。２０００年現在、肥満成人の数は、３００，０００，０００人以上まで増加していた。非特許文献３を参照。
【０００５】
インスリン分泌性ペプチドは、ＩＩ型インスリン非依存性糖尿病、ならびに肥満などの関連代謝異常の管理のための、可能性がある治療剤として調査されてきた。近年、アルブミンへのインスリン分泌性ペプチドの結合が、それらの低い毒性および治療上の利点を維持しつつ、インビボでより長い作用時間を提供することができることが示された。例えば、非特許文献４を参照。そのような医薬生成物の製剤は、安定性を提供し、有効性を維持するのに有用であり得る。したがって、インスリン分泌性ペプチド結合体を含む医薬製剤の必要性が、当技術分野にある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｗｉｌｄら、２００４年、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ２７巻（５号）：１０４７〜１０５３頁
【非特許文献２】Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、２００５年、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｆａｃｔ  Ｓｈｅｅｔ：  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｓｔｉｍａｔｅｓ  ｏｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ、２００５年
【非特許文献３】Ｆｏｒｍｉｇｕｅｒａら、２００４年、Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ＆  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、１８巻：６号、１１２５〜１１４６頁
【非特許文献４】Ｇｉａｎｎｏｕｋａｋｉｓ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ．４巻（１０号）：１２４５〜９頁（２００３年）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
インスリン分泌性ペプチド結合体の生物活性の安定性を提供し、それを維持することができる医薬製剤が、ここで提供される。ここで提供される医薬製剤には、液体および凍結乾燥製剤、単位用量剤形および多回使用剤形、ならびにそれらの組合せが含まれる。医薬製剤は、皮下、静脈内、筋肉内、経皮、動脈内、腹腔内などの非経口経路を通して、または経口経路、局所経路または吸入経路などを通しての投与に適したものであり得る。
【０００８】
一態様では、インスリン分泌性ペプチド結合体、緩衝剤、張性調整剤、安定剤、界面活性剤、および任意選択で防腐剤を含む医薬製剤が本明細書で提供され、前記製剤は約３．０〜８．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、製剤は約４．０〜８．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、製剤は約４．０〜６．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、製剤は約６．０〜８．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、製剤は約６．０〜９．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、製剤は約５．０〜７．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、製剤は約４．５〜６．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、製剤は約５．０〜６．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、製剤は約５．１〜６．０、約５．２〜６．０、約５．３〜６．０、約５．４〜６．０、約５．５〜６．０、約５．６〜６．０、約５．７〜６．０または約５．８〜６．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、前記製剤は約３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９または９．０のｐＨを有する。特定の実施形態では、製剤は約５．０のｐＨを有する。別の特定の実施形態では、製剤は約７．０のｐＨを有する。
【０００９】
インスリン分泌性ペプチドは、当業者に公知である任意のインスリン分泌性ペプチドであってよい。例えば、それは、ホルモンインスリンの合成または発現を刺激すること、またはその刺激を引き起こすことができる、任意のペプチドであってよい。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは、グルカゴン様ペプチド１、エキセンディン−３およびエキセンディン−４およびそれらの前駆体、誘導体または断片からなる群から選択される。好ましい実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは、エキセンディン−４またはその誘導体である。例示的な誘導体は、本明細書に記載されている。
【００１０】
インスリン分泌性ペプチド結合体は、アルブミンに結合させることができる。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは、ヒト血清アルブミンに結合される。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは、組換え体ヒト血清アルブミンに結合される。
【００１１】
別の態様では、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの濃度における、エキセンディン−４またはその誘導体へのアルブミンの結合体、緩衝剤、張性調整剤、安定剤、界面活性剤、および任意選択で防腐剤を含む医薬製剤であって、約４〜約８のｐＨを有する製剤がここで提供される。好ましい実施形態では、エキセンディン−４へのアルブミンの結合体は、エキセンディン−４（１〜３９）−Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体である。用語「エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体」は、式
【００１２】
【化１】
2011506442.tif 000003
（配列番号３５）の化合物をアルブミンに共有結合的に結合することによって作製される結合体を指し、この結果、式
【００１３】
【化２】
2011506442.tif 000004
（配列番号３４）の結合体が生じ、上式で、Ｘはアルブミンのシステイン３４の硫黄原子である。エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体は、アルブミンのシステイン３４側鎖チオールを［２−［２−［２−マレイミドプロピオンアミド（エトキシ）エトキシ］酢酸リンカーに共有結合的に連結し、これを今度は、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０−ＮＨ２のカルボキシ末端リジン、すなわちリジン４０のεアミノに共有結合的に連結することによって形成できることを当業者は認識しよう。
【００１４】
一部の実施形態では、医薬製剤は、１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウム、１〜１０ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１〜３０ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含有するｐＨ６．５〜７．５の５〜３０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含む。特定の実施形態では、製剤は、１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウム、１〜１０ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１〜３０ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含有するｐＨ６．５〜７．５の５〜３０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含む。特定の実施形態では、製剤は、１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウム、１〜１０ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１〜３０ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含有する１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含み、前記製剤は、約５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９または８．０のｐＨを有する。特定の実施形態では、製剤は、１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウム、１〜１０ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１〜３０ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含有するｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含む。特定の実施形態では、製剤は、１３５ｍＭ塩化ナトリウム、１．６ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１５ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含有するｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含む。特定の実施形態では、製剤は、１３５ｍＭ塩化ナトリウム、１．６ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１５ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含有するｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体からなる。特定の実施形態では、製剤は、１３５ｍＭ塩化ナトリウム、１．６ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１５ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含有するｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体からなる。
【００１５】
一部の実施形態では、医薬製剤は、１〜１５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．０５〜０．２％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８、および１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウムまたは２〜８％（ｗ／ｖ）ソルビトールのいずれかを含有する、ｐＨ４．５〜５．５の５〜３０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含む。特定の実施形態では、製剤は、１〜１５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．０５〜０．２％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８、および１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウムまたは２〜８％（ｗ／ｖ）ソルビトールのいずれかを含有する、ｐＨ４．５〜５．５の５〜３０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含む。特定の実施形態では、製剤は、１〜１５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．０５〜０．２％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８、および１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウムまたは２〜８％（ｗ／ｖ）ソルビトールのいずれかを含有する、１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含み、前記製剤は、約４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４または５．５のｐＨを有する。特定の実施形態では、製剤は、１〜１５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．０５〜０．２％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８、および１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウムまたは２〜８％（ｗ／ｖ）ソルビトールのいずれかを含有する、ｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含む。特定の実施形態では、製剤は、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび０．１％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８（すなわち、ポロキサマー１８８）を含有するｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含む。特定の実施形態では、製剤は、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび０．１％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８（すなわち、ポロキサマー１８８）を含有するｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体からなる。特定の実施形態では、製剤は、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび０．１％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８（すなわち、ポロキサマー１８８）を含有するｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体からなる。
【００１６】
別の態様では、本発明は、糖尿病、肥満、またはインスリン分泌性ペプチドで治療できる他の疾患または状態、例えば前糖尿病（例えば、耐糖能異常（ＩＧＴ）もしくは空腹時血糖異常（ＩＦＧ））、糖尿病、例えばＩ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、高齢発症成人性自己免疫性糖尿病としても公知の成人性潜伏型自己免疫性糖尿病（「ＬＡＤＡ」）、緩徐発症Ｉ型糖尿病、１．５型糖尿病、ステロイド糖尿病、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）治療誘発糖尿病、先天性もしくはＨＩＶ関連リポジストロフィー（「脂肪再分布症候群」）を有する対象における糖尿病発達、肥満（すなわち、３０ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩ）、過体重（すなわち、２５ｋｇ／ｍ２〜３０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩ）、メタボリックシンドローム（エックス症候群）、神経系障害、手術、インスリン抵抗性、無自覚性低血糖、拘束性肺疾患、胃腸障害、例えば、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、機能性消化不良、胃腸障害に関連する疼痛、例えばＩＢＳおよび機能性消化不良に関連する疼痛、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、ＩＢＤに関連する疼痛、高血糖症、例えば、手術（例えば、主要な外科的処置、例えば、冠状動脈バイパス手術）に関連する高血糖症、例えば、糖尿病、例えばＩＩ型糖尿病を有する対象における手術に関連する高血糖症、メタボリックシンドローム、冠状動脈心不全（ＣＨＦ）、β細胞機能障害に関連する障害、β細胞欠損に関連する障害、β細胞の不十分な数に関連する障害、またはインスリン分泌性ペプチドもしくはインスリン分泌性ペプチド結合体で治療できる他の状態を有する対象を治療する方法であって、インスリン分泌性ペプチド結合体を、例えば本明細書に記載の医薬製剤中で、対象に投与することを含む方法を提供する。
【００１７】
別の態様では、本発明は、有効な量のインスリン分泌性ペプチド結合体を、例えば、１つまたは複数の第二の治療薬と一緒に、本明細書に記載の医薬製剤中で、対象に投与することによって、糖尿病、肥満またはインスリン分泌性ペプチドで治療できる他の障害を治療する方法を提供する。一部の実施形態では、第二の治療薬は、抗糖尿病薬である。一部の実施形態では、抗糖尿病薬は経口抗糖尿病薬（ＯＡＤ）、例えばビグアナイド、例えばメトホルミンである。
【００１８】
本発明は、本発明の医薬製剤および剤形を含むキットも包含する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】２５℃で６カ月インキュベートされた製剤のＳＥＣ−ＨＰＬＣ経時的純度プロットを表すグラフである。
【図２】４０℃で３カ月インキュベートされた製剤のＳＥＣ−ＨＰＬＣ経時的純度プロットを表すグラフである。
【図３】２５℃で６カ月インキュベートされた製剤のＲＰ−ＨＰＬＣペプチド分解物プロットを表すグラフである。
【図４】４０℃で３カ月インキュベートされた製剤のＲＰ−ＨＰＬＣペプチド分解物プロットを表すグラフである。
【図５】２５℃における、酢酸ナトリウム緩衝液含有製剤対リン酸ナトリウム緩衝液含有製剤のＳＥＣ−ＨＰＬＣ純度比較を表すグラフである。
【図６】２５℃における、酢酸ナトリウム緩衝液含有製剤対リン酸ナトリウム緩衝液含有製剤のＲＰ−ＨＰＬＣペプチド分解物比較を表すグラフである。
【図７】２５℃で６カ月後における、酢酸ナトリウム緩衝液含有製剤対リン酸ナトリウム緩衝液含有製剤のＳＤＳ−ＰＡＧＥ比較を示す図である。
【図８】２５℃における、様々なｐＨの製剤のＳＥＣ−ＨＰＬＣ純度比較を表すグラフである。
【図９】２５℃における、様々なｐＨの製剤のＲＰ−ＨＰＬＣペプチド分解物比較を表すグラフである。
【図１０】２５℃における、様々な張性調整剤を含むｐＨ５．０製剤のＳＥＣ−ＨＰＬＣ純度比較を表すグラフである。
【図１１】２５℃における、様々な張性調整剤を含むｐＨ５．０製剤のＲＰ−ＨＰＬＣペプチド分解物比較を表すグラフである。
【図１２】２５℃における、様々な安定剤を含むｐＨ６．０製剤のＳＥＣ−ＨＰＬＣ純度比較を表すグラフである。
【図１３】２５℃における、様々な安定剤を含むｐＨ６．０製剤のＲＰ−ＨＰＬＣペプチド分解物比較を表すグラフである。
【図１４】２５℃における、様々な濃度のエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含有するｐＨ６ソルビトール製剤のＳＥＣ−ＨＰＬＣ純度比較を表すグラフである。
【図１５】２５℃における、様々な濃度のエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含有するｐＨ６ソルビトール製剤のＲＰ−ＨＰＬＣ純度比較を表すグラフである。
【図１６】１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体、ｐＨ５．０の酢酸ナトリウム緩衝液、１５０ｍＭ塩化ナトリウムおよび５ｍＭオクタン酸ナトリウムを含有する製剤のＳＥＣ−ＨＰＬＣ純度プロットを表すグラフである。
【図１７】１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体、ｐＨ５．０のリン酸ナトリウム緩衝液、１５０ｍＭ塩化ナトリウムおよび５ｍＭオクタン酸ナトリウムを含有する製剤のＳＥＣ−ＨＰＬＣ純度プロットを表すグラフである。
【図１８】１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体、ｐＨ５．０の酢酸ナトリウム緩衝液、１５０ｍＭ塩化ナトリウムおよび５ｍＭオクタン酸ナトリウムを含有する製剤のＲＰ−ＨＰＬＣペプチド分解物プロットを表すグラフである。
【図１９】１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体、ｐＨ５．０のリン酸ナトリウム緩衝液、１５０ｍＭ塩化ナトリウムおよび５ｍＭオクタン酸ナトリウムを含有する製剤のＲＰ−ＨＰＬＣペプチド分解物プロットを表すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
５．１  定義
本明細書で用いる場合、以下の用語は、特に明記しない限り以下の意味を有するものとする。
【００２１】
本明細書で用いる場合、「約」は、特に明記しない限り、用語によって修飾される値の上下１０％以下である値を指す。例えば、用語「約２０ｍｇ／ｍｌ」は、１８ｍｇ／ｍｌ〜２２ｍｇ／ｍｌの範囲を意味する。「約」がｐＨ範囲に関して用いられる場合、例えば「約ｐＨ５．０」の場合、ｐＨ値はその用語によって修飾されるｐＨの上下０．５以下である。したがって、「約ｐＨ５．０」は、ｐＨ４．５〜５．５の範囲を意味する。同様に、「約ｐＨ７．０」は、ｐＨ６．５〜ｐＨ７．５の範囲を意味する。
【００２２】
本明細書で用いる場合、「対象」は、それらに限定されないが、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウスなどを含む、哺乳動物などの動物を指す。好ましい実施形態では、対象はヒトである。ある実施形態では、対象はヒト以外の動物、例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギまたはウマなどのヒト以外の動物である。対象は雄でも雌でもよい。
【００２３】
本明細書で用いる場合、「インスリン分泌性」は、インスリン分泌活性、すなわち、ホルモンインスリンの合成または発現を刺激するかその刺激を引き起こす能力を有することを意味する。インスリン分泌性ペプチドには、ＧＬＰ−１、エキセンディン−３、エキセンディン−４、およびＧＬＰ−１、エキセンディン−３およびエキセンディン−４およびインスリン分泌活性を有する他のペプチドなどのペプチドの前駆体、誘導体または断片が含まれるが、これらに限定されない。
【００２４】
「グルカゴン様ペプチド−１」（「ＧＬＰ−１」）および「ＧＬＰ−１誘導体」は、一般に、高血糖症の間インスリン分泌を刺激し、グルカゴン分泌を抑制し、（プロ）インスリン生合成を刺激し、胃内容排出および酸分泌を減速する腸ホルモンである。一部の実施形態では、グルカゴン様ペプチドは、ＧＬＰ−１（７〜３７）である。一部の実施形態では、グルカゴン様ペプチドは、ＧＬＰ−１（７〜３６）である。一部のＧＬＰおよびＧＬＰ誘導体、例えば配列番号３〜１５として本明細書に記載されるものは、細胞によるグルコース取込みを促進するが、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第５，５７４，００８号に開示されるように、インスリン発現を刺激しない。
【００２５】
「エキセンディン−３」は、メキシコヒゲトカゲＨｅｌｏｄｅｒｍａ  ｈｏｒｒｉｄｕｍの唾液分泌から単離された天然のＧＬＰ−１アゴニストであり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている米国特許第５，４２４，２８６号に開示されているように、哺乳動物のＧＬＰ−１アミノ酸配列と５３％の重複部分を共有する。エキセンディン−３のアミノ酸配列は、ＨＳＤＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１６）である。
【００２６】
「エキセンディン−４」は、アメリカドクトカゲＨｅｌｏｄｅｒｍａ  ｓｕｓｐｅｃｔｕｍの唾液腺毒液から単離される天然のＧＬＰ−１アゴニストであり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第５，４２４，２８６号に開示されているように、哺乳動物のＧＬＰ−１アミノ酸配列と５３％の重複部分を共有する。エキセンディン−４のアミノ酸配列は、ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１７）である。エキセンディン−４はグルコース依存的にグルカゴンを減少させ、インスリン分泌を増加させ、ヒトＧＬＰ−１受容体に結合して活性化することを含む、ＧＬＰ−１のある作用を模倣する。エキセンディン−４は、第一相インスリン応答の回復、グルカゴン分泌の調節、胃内容排出の遅延、および食物摂取量の減少を通して空腹時および食後のグルコース濃度を低減させることによって、血糖調節を改善する。
【００２７】
「反応基」は、共有結合を形成することができる化学基である。そのような反応性剤を関心のあるインスリン分泌性ペプチドに連結または結合させ、修飾インスリン分泌性ペプチドを形成することができる。反応基は、一般に、エステルまたは混合無水物としてのカルボキシ、ホスホリルまたはアシル基、またはイミダートであることができ、それによって、アルブミン上の標的部位でアミノ基、ヒドロキシまたはチオールなどの官能基と共有結合を形成することができる。ほとんどの場合、エステルは、フェノール化合物を含み、またはチオールエステル、アルキルエステル、リン酸エステルなどとなる。反応基には、スクシンイミジルおよびマレイミド基が含まれる。
【００２８】
「官能基」は、修飾インスリン分泌性ペプチド上の反応基が反応して共有結合を形成することができる、アルブミン上の基である。官能基には、エステル反応性実体に結合するヒドロキシル基；マレイミドおよびマレイミド基、イミダートおよびチオエステル基に結合するチオール基；ならびに反応性実体上のカルボキシ、ホスホリルまたはアシル基に結合するアミノ基が含まれる。
【００２９】
「連結基」は、反応基をインスリン分泌性ペプチドに連結するために用いることができる化学部分である。連結基は、１つまたは複数のアルキル基、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル基など、アルキル基によって置換されたアルコキシ基、アルケニル基、アルキニル基またはアミノ基、シクロアルキル基、多環式基、アリール基、ポリアリール基、置換されたアリール基、複素環基および置換された複素環基を含むことができる。連結基は、ＡＥＡ（（２−アミノ）エトキシ酢酸）または好ましい連結基ＡＥＥＡ（［２−（２−アミノ）エトキシ）］エトキシ酢酸）などのポリエトキシアミノ酸を含むこともできる。
【００３０】
本明細書で用いる場合、「アルブミン」は、その単量体形で、起源の種類によって約６５〜６７キロダルトンの分子量を有する、血漿中で最も豊富なタンパク質を指す。用語「アルブミン」は、「血清アルブミン」と同義的に用いられ、本発明のインスリン分泌性ペプチドと結合体を形成するアルブミンの源を規定するものではない。したがって、本明細書で用いる場合、用語「アルブミン」は、血液または漿液などの天然の源から精製されるアルブミン、または化学的に合成されるアルブミンもしくは組換え技術によって生成されるアルブミンを指すことができる。本明細書で記載されるインスリン分泌性ペプチド結合体のアルブミンの例示的な形を、下のセクション５．５．５．１で提供する。
【００３１】
「インスリン分泌性ペプチド結合体」は、インスリン分泌性ペプチドとアルブミン上の官能基との間で形成される共有結合を通してアルブミンに結合された、インスリン分泌性ペプチドを含む。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは、それにアルブミンが共有結合される反応基を含むように修飾されている。一部の実施形態では、反応基は、連結基を通してインスリン分泌性ペプチドに連結される。
【００３２】
「安定」製剤には、その中のペプチドまたはペプチド結合体が、保存後にその物理的安定性および／または化学的安定性および／または生物活性を実質的に保持する製剤が含まれる。タンパク質安定性を測定するための様々な分析手法が当技術分野で利用可能で、例えば、Ｌｅｅ，  Ｖ．、１９９１年、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、２４７〜３０１頁（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．）およびＪｏｎｅｓ，  Ａ．１９９３年、Ａｄｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０巻：２９〜９０頁でレビューされている。安定性は、選択された期間の選択された温度で測定することができる。好ましくは、製剤は、室温（約２５℃）または４０℃で少なくとも１、２、３、４、５または６カ月間安定であり、および／または約２〜８℃で少なくとも１、２、３、４、５または６カ月間安定である。さらに、特定の実施形態では、製剤は好ましくは冷凍（例えば、−７０℃）後に安定である。特定の実施形態では、安定性の基準は以下の通りである：（１）製剤は、視覚分析によって透明のままである；（２）製剤の濃度、ｐＨおよびモル浸透圧は、約±１０％以下の変化である；（３）ＳＥＣ−ＨＰＬＣによって測定した場合、約１０％以下、より好ましくは約５％以下、または最も好ましくは約１％以下の凝集体が形成される；および（４）ＳＤＳ−ＰＡＧＥまたはＲＰ−ＨＰＬＣによって測定した場合、１０％以下、より好ましくは約５％以下、または最も好ましくは１％以下のペプチドまたはペプチド結合体が分解する。
【００３３】
本明細書で用いる場合、「安定剤」は、本明細書で定義される「安定」製剤を達成するものである。
【００３４】
ペプチドまたはペプチド結合体は、色および／または清澄度の目視検査により、または紫外線散乱もしくはサイズ排除クロマトグラフィーによって測定した場合に、医薬製剤中でそれが凝集、沈殿および／または変性のいかなる徴候も実質的に示さない場合、「その物理的安定性を保持する」。例えば、ペプチド結合体のペプチドは、医薬製剤でその物理的安定性を保持し、そこでは、ペプチドまたはペプチド結合体の約１０％未満、より好ましくは約５％未満、または最も好ましくは約１％未満が製剤中に凝集体として存在する。
【００３５】
ペプチドまたはペプチド結合体は、所与の時間の化学的安定性が、ペプチドが下で定義されるその生物活性を保持するとみなされるようなものである場合、医薬製剤中で「その化学的安定性を保持する」。化学的安定性は、ペプチドの化学的に変化させられた形を検出、定量化することによって評価することができる。化学的変化は、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび／またはマトリックス支援レーザー脱離イオン化／飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ  ＭＳ）を用いて評価することができる、サイズ改変（例えばクリッピング）を含むことができる。他の型の化学的変化には、例えば、イオン交換クロマトグラフィーによって評価することができる電荷変化（例えば、脱アミドの結果として起こる）が含まれる。
【００３６】
ペプチドまたはペプチド結合体は、医薬製剤中のペプチドがその意図する目的のために生物学的に活性である場合、医薬製剤中で「その生物活性を保持する」。例えば、医薬製剤中のペプチドの生物活性が、その医薬製剤が調製されたときに示された生物活性の少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％（アッセイの誤差の範囲内）である場合、生物活性は保持されている。特定のペプチドの生物活性は、当業者に公知であるそのペプチドの生物活性である。例えば、ＧＬＰ−１の生物活性には、高血糖症の間のインスリン分泌の刺激、グルカゴン分泌の抑制、（プロ）インスリン生合成の刺激、胃内容排出および酸分泌の減速、ならびに血糖レベルの低減が含まれるが、これらに限定されない。
【００３７】
本明細書で用いる場合、「緩衝液」は、ｐＨの変化に抵抗して、その酸塩基結合体成分の作用によって溶液のｐＨ値を許容範囲に維持する緩衝溶液を指す。本発明の緩衝液は、約４〜約８、好ましくは約５〜約７、最も好ましくは約５〜約６の範囲のｐＨを有する。一部の実施形態では、緩衝液のｐＨは、約３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９または８．０である。この範囲にｐＨを調節する緩衝液の例には、酢酸（例えば酢酸ナトリウム）、リン酸（例えばリン酸ナトリウム）、コハク酸（例えばコハク酸ナトリウム）、グルコン酸、ヒスチジン、クエン酸および他の有機酸緩衝液が含まれる。
【００３８】
本明細書で用いる場合、「張性調整剤」は、適当な量では、製剤を等張性にする化合物を指し、その例には、例えば、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、ラクトース、ソルビトール、ショ糖、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、グリシンなどが含まれる。「等張性」は、関心の製剤が、ヒト血液と実質的に同じモル浸透圧濃度を有することを意味する。等張性の製剤は、一般に約２５０〜３５０ｍＯｓｍ、好ましくは約２５０〜約３３０ｍＯｓｍのモル浸透圧濃度を有する。モル浸透圧濃度は、例えば、蒸気圧または氷結タイプの浸透圧計を用いて測ることができる。
【００３９】
本明細書で用いる場合、「界面活性剤」は、溶液に溶解した場合、液体と固体との間の界面張力を低減させる化合物を指し、それは、再構成されるタンパク質の凝集を減少させるため、および／または再構成される製剤中での粒子状物質の形成を減少させるために製剤に加えることができる。本明細書で記載の製剤および方法のために有用な界面活性剤の例には、ポリソルベート（例えばポリソルベート２０もしくは８０）；ポロキサマー（例えばポロキサマー１８８（プルロニックＦ６８））；トリトン；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；ラウリル硫酸ナトリウム；ナトリウムオクチルグリコシド；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−またはステアリル−スルホベタイン；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−またはステアリル−サルコシン；リノレイル−、ミリスチル−またはセチル−ベタイン；ラウロアミドプロピル−、コカミドプロピル−、リノールアミドプロピル−、ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−またはイソステアラミドプロピル−ベタイン（例えばラウロアミドプロピル）；ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−またはイソステアラミドプロピル−ジメチルアミン；ナトリウムメチルココイル−または二ナトリウムメチルオレイル−タウレート；ならびにＭＯＮＡＱＵＡＴ（商標）シリーズ（Ｍｏｎａ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．、Ｐａｔｅｒｓｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、およびエチレンおよびプロピレングリコールの共重合体などが含まれる。
【００４０】
本明細書で用いる場合、「防腐剤」は、例えば、その中の細菌活動を実質的に低減させ、このように、多回使用製剤の生成を容易にするために製剤に加えることができる化合物を指す。可能な防腐剤の例には、ｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、メタノール、エタノール、イソ−プロパノール、ブチルパラベン、エチルパラベン、メチルパラベン、フェノール、グリセロール、キシリトール、レソルシノール、カテコール、２，６−ジメチルシクロヘキサノール、２−メチル−２，４−ペンタジオール、デキストラン、ポリビニルピロリドン、２−クロロフェノール、塩化ベンゼトニウム、メルチオレート（チメロサール）、安息香酸（プロピルパラベン）ＭＷ１８０．２、安息香酸ＭＷ１２２．１２、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウムおよび塩化セチルピリジニウムが含まれる。
【００４１】
本明細書で用いる場合、「増量剤」は、凍結乾燥混合物に質量を加え、凍結乾燥ケークの物理的構造に寄与する（例えば、開放孔構造を維持する実質的に均一な凍結乾燥ケークの生成を容易にする）ことができる化合物を指す。例示的な増量剤には、マンニトール、グリシン、ポリエチレングリコールおよびキソルビトール（ｘｏｒｂｉｔｏｌ）が含まれる。薬学的に許容されるケークを提供することに加えて、増量剤は一般的に、崩壊温度の変更、凍結融解保護の提供、長期保管時のタンパク質安定性のさらなる強化などの有用な特性も、凍結乾燥組成物に付与する。これらの剤は、張性調整剤の役目を果たすこともできる。
【００４２】
本明細書で用いる場合、「還元糖」は、金属イオンを還元するか、タンパク質のリジンおよび他のアミノ基と共有結合的に反応することができるヘミアセタール基を含むものであり、「非還元糖」は、還元糖のこれらの特性を有しないものである。還元糖の例は、フルクトース、マンノース、マルトース、ラクトース、アラビノース、キシロース、リボース、ラムノース、ガラクトースおよびグルコースである。非還元糖には、ショ糖、トレハロース、ソルボース、メレチトースおよびラフィノースが含まれる。好ましくは、本明細書で記載される凍結乾燥医薬製剤は、還元糖の非存在下で、または非還元糖だけの存在下で凍結乾燥される。
【００４３】
本明細書で用いる場合、「薬学的に許容される担体」は、哺乳動物、好ましくはヒトへの投与に適する、薬学的に許容される物質、組成物または媒体を指す。担体には、体の１つの器官または一部から体の別の器官または一部への対象薬剤の運搬または輸送に関与する、液体もしくは固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒またはカプセル化材が含まれる。各担体は、その製剤の他の成分と適合し、対象に過度に傷害性（例えば、致死的）ではないという意味において「許容される」ものでなければならない。好ましい一実施形態では、薬学的に許容される担体は、Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（ＦＤＡ）またはＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  Ａｇｅｎｃｙ（ＥＭＥＡ）などの政府規制機関によって、ヒトへの投与が承認されている。
【００４４】
任意の疾患または障害を「予防すること」またはその「予防」は、疾患または障害を得る危険の低減を指す（すなわち、疾患の臨床症状の少なくとも１つが、その疾患に曝露するかその素因を有する可能性があるが、その疾患の症状をまだ経験しないか示さない対象で起こらないようにすること）。好ましくは、予防は、疾患または障害にまだ罹患していないか、疾患または障害の症状をまだ示していない対象、例えば、まだ糖尿病でないか、まだ糖尿病の症状を示していない対象における、化合物または組成物の使用を指す。
【００４５】
任意の疾患または障害を「治療すること」またはその「治療」は、一実施形態では、対象に存在する疾患または障害を改善すること（すなわち、疾患またはその臨床症状のうちの少なくとも１つの発達を停止または低減させること）を指す。別の実施形態では、「治療すること」または「治療」は、対象が識別できないであろう少なくとも１つの身体パラメータを改善することを指す。さらに別の実施形態では、「治療することまたは治療」は、身体的に（例えば、識別できる症状の安定化）または生理的に（例えば、身体パラメータの安定化）または両方で、疾患を調節することを指す。
【００４６】
本明細書で用いる場合、治療に関して「有効量」は、疾患を治療するために対象に投与される場合、その疾患を治療するのに十分であるインスリン分泌性ペプチド結合体の量を意味する。有効量は、とりわけ、用いるインスリン分泌性ペプチド、疾患およびその重症度、ならびに治療対象の年齢、体重その他によって異なってもよい。
【００４７】
５．２  医薬製剤
本発明は、インスリン分泌性ペプチド結合体の医薬製剤を提供する。製剤は、皮下、静脈内、筋肉内、経皮、動脈内もしくは腹腔内経路などの非経口経路を通して、または経口、局所もしくは吸入経路などの他の経路を通した投与に適したものであり得る。
【００４８】
結合体中のインスリン分泌性ペプチドは、当業者に公知である任意のインスリン分泌性ペプチドであってよい。それは、ホルモンインスリンの合成または発現を刺激すること、またはその刺激を引き起こすができる任意のペプチドであってよい。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは、グルカゴン様ペプチド１、エキセンディン−３およびエキセンディン−４およびそれらの前駆体、誘導体または断片からなる群から選択される。特定の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは、エキセンディン−４または誘導体である。例示的な誘導体を、下に詳細に記載する。
【００４９】
一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは、アルブミンに結合される。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは、血清アルブミンに結合される。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは、ヒト血清アルブミンに結合される。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは、組換え体ヒト血清アルブミンに結合される。インスリン分泌性ペプチドおよびインスリン分泌性ペプチド結合体を、下のセクション５．５で詳細に記載する。
【００５０】
遊離のアルブミンは、約８０、７０、６０、５０、４０、３０、２５、２０、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、０．５、０．１、０．０５または０．０１ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤中に存在できることが企図される。特定の実施形態では、遊離のアルブミンは、約８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、２５、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、０．５、０．１、０．０５または０．０１ｍｇ／ｍｌ未満で存在する。好ましくは、遊離のアルブミンは、約１５ｍｇ／ｍｌ以下で存在し、より好ましくは、遊離のアルブミンは１０ｍｇ／ｍｌ以下、最も好ましくは５ｍｇ／ｍｌ未満で存在する。一部の実施形態では、本明細書で記載される製剤に存在する遊離のアルブミンは、１０ｍｇ／ｍｌ以下である。一部の実施形態では、本明細書で記載される製剤に存在する遊離のアルブミンは、１ｍｇ／ｍｌ以下である。一部の実施形態では、本明細書で記載される製剤に存在する遊離のアルブミンは、０．５ｍｇ／ｍｌ以下である。一部の実施形態では、本明細書で記載される製剤に存在する遊離のアルブミンは、０．１ｍｇ／ｍｌ以下である。一部の実施形態では、本明細書で記載される製剤に存在する遊離のアルブミンは、０．０５ｍｇ／ｍｌ以下である。
【００５１】
本発明の製剤中のインスリン分泌性ペプチド結合体の実際の投薬量レベルは、対象に有毒であることなく、特定の対象、組成物および投与様式のための所望の治療応答を達成するために有効である有効成分の量を得るために、変えることができる。選択される投薬量レベルは、使用される本発明の特定の組成物の活性、投与経路、投与時間、使用される特定の化合物の排出速度、治療持続時間、用いる特定の組成物と併用される他の薬剤、化合物および／または物質、治療対象の年齢、性別、体重、状態、健康状態および既往病歴、ならびに医学分野で周知である類似の因子を含む、様々な薬物動態学的因子に依存する。
【００５２】
特定の実施形態では、本発明による製剤は、それを必要とする対象へのインスリン分泌性ペプチド結合体の皮下投与に適する。一部の実施形態では、約１０００μｇ〜３０００μｇ（例えば、１０２５μｇ、１０５０μｇ、１０７５μｇ、１１００μｇ、１１２５μｇ、１１５０μｇ、１１７５μｇ、１２００μｇ、１２２５μｇ、１２５０μｇ、１２７５μｇ、１３００μｇ、１３２５μｇ、１３５０μｇ、１３７５μｇ、１４００μｇ、１４２５μｇ、１４５０μｇ、１４７５μｇ、１５００μｇ、１５２５μｇ、１５５０μｇ、１５７５μｇ、１６００μｇ、１６２５μｇ、１６５０μｇ、１６７５μｇ、１７００μｇ、１７２５μｇ、１７５０μｇ、１７７５μｇ、１８００μｇ、１８２５μｇ、１８５０μｇ、１８７５μｇ、１９００μｇ、１９２５μｇ、１９５０μｇ、１９７５μｇ、２０００μｇ、２０２５μｇ、２０５０μｇ、２０７５μｇ、２１００μｇ、２１２５μｇ、２１５０μｇ、２１７５μｇ、２２００μｇ、２２２５μｇ、２２５０μｇ、２２７５μｇ、２３００μｇ、２３２５μｇ、２３５０μｇ、２３７５μｇ、２４００μｇ、２４２５μｇ、２４５０μｇ、２４７５μｇ、２５００μｇ、２５２５μｇ、２５５０μｇ、２５７５μｇ、２６００μｇ、２６２５μｇ、２６５０μｇ、２６７５μｇ、２７００μｇ、２７２５μｇ、２７５０μｇ、２７７５μｇ、２８００μｇ、２８２５μｇ、２８５０μｇ、２８７５μｇ、２９００μｇ、２９２５μｇ、２９５０μｇ、または２９７５μｇ）、好ましくは約１０００μｇ〜２７５０μｇ（例えば、１０２５μｇ、１０５０μｇ、１０７５μｇ、１１００μｇ、１１２５μｇ、１１５０μｇ、１１７５μｇ、１２００μｇ、１２２５μｇ、１２５０μｇ、１２７５μｇ、１３００μｇ、１３２５μｇ、１３５０μｇ、１３７５μｇ、１４００μｇ、１４２５μｇ、１４５０μｇ、１４７５μｇ、１５００μｇ、１５２５μｇ、１５５０μｇ、１５７５μｇ、１６００μｇ、１６２５μｇ、１６５０μｇ、１６７５μｇ、１７００μｇ、１７２５μｇ、１７５０μｇ、１７７５μｇ、１８００μｇ、１８２５μｇ、１８５０μｇ、１８７５μｇ、１９００μｇ、１９２５μｇ、１９５０μｇ、１９７５μｇ、２０００μｇ、２０２５μｇ、２０５０μｇ、２０７５μｇ、２１００μｇ、２１２５μｇ、２１５０μｇ、２１７５μｇ、２２００μｇ、２２２５μｇ、２２５０μｇ、２２７５μｇ、２３００μｇ、２３２５μｇ、２３５０μｇ、２３７５μｇ、２４００μｇ、２４２５μｇ、２４５０μｇ、２４７５μｇ、２５００μｇ、２５２５μｇ、２５５０μｇ、２５７５μｇ、２６００μｇ、２６２５μｇ、２６５０μｇ、２６７５μｇ、２７００μｇ、または２７２５μｇ）、より好ましくは約１０００〜２５００μｇ（例えば、１０２５μｇ、１０５０μｇ、１０７５μｇ、１１００μｇ、１１２５μｇ、１１５０μｇ、１１７５μｇ、１２００μｇ、１２２５μｇ、１２５０μｇ、１２７５μｇ、１３００μｇ、１３２５μｇ、１３５０μｇ、１３７５μｇ、１４００μｇ、１４２５μｇ、１４５０μｇ、１４７５μｇ、１５００μｇ、１５２５μｇ、１５５０μｇ、１５７５μｇ、１６００μｇ、１６２５μｇ、１６５０μｇ、１６７５μｇ、１７００μｇ、１７２５μｇ、１７５０μｇ、１７７５μｇ、１８００μｇ、１８２５μｇ、１８５０μｇ、１８７５μｇ、１９００μｇ、１９２５μｇ、１９５０μｇ、１９７５μｇ、２０００μｇ、２０２５μｇ、２０５０μｇ、２０７５μｇ、２１００μｇ、２１２５μｇ、２１５０μｇ、２１７５μｇ、２２００μｇ、２２２５μｇ、２２５０μｇ、２２７５μｇ、２３００μｇ、２３２５μｇ、２３５０μｇ、２３７５μｇ、２４００μｇ、２４２５μｇ、２４５０μｇ、または２４７５μｇ）、最も好ましくは約１０００μｇ〜２０００μｇ（例えば、１０２５μｇ、１０５０μｇ、１０７５μｇ、１１００μｇ、１１２５μｇ、１１５０μｇ、１１７５μｇ、１２００μｇ、１２２５μｇ、１２５０μｇ、１２７５μｇ、１３００μｇ、１３２５μｇ、１３５０μｇ、１３７５μｇ、１４００μｇ、１４２５μｇ、１４５０μｇ、１４７５μｇ、１５００μｇ、１５２５μｇ、１５５０μｇ、１５７５μｇ、１６００μｇ、１６２５μｇ、１６５０μｇ、１６７５μｇ、１７００μｇ、１７２５μｇ、１７５０μｇ、１７７５μｇ、１８００μｇ、１８２５μｇ、１８５０μｇ、１８７５μｇ、１９００μｇ、１９２５μｇ、１９５０μｇ、または１９７５μｇ）のインスリン分泌性ペプチド結合体の量のインスリン分泌性ペプチド結合体１用量を対象に投与する。
【００５３】
一部の実施形態では、特定の対象における、本明細書に記載の疾患または状態を治療するのに有効であり得る、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の投薬量は、週毎の投薬計画に従って対象に投与される。したがって、特定の実施形態では、所望の治療応答を達成するために、総１週投薬量のインスリン分泌性ペプチド結合体を数週間にわたって対象に投与することができる。特定の実施形態では、総１週用量がその週の間に単回投与で、すなわち週１回投与され、総１週用量は、１０００μｇまたは１５００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含む。特定の実施形態では、総１週用量が週１回投与され、上記用量は２０００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含む。
【００５４】
特定の実施形態では、総１週用量はその週の間に２回投与で、すなわち週２回投与され、各投与が１０００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、総１週用量が合計で２０００μｇに達する。特定の実施形態では、総１週用量が週２回投与され、各投与が１５００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、総１週用量が合計で３０００μｇに達する。特定の実施形態では、総１週用量が週２回投与され、各投与が１６００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、総１週用量が合計で３２００μｇに達する。特定の実施形態では、総１週用量が週２回投与され、各投与が１７００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、総１週用量が合計で３４００μｇに達する。特定の実施形態では、総１週用量が週２回投与され、最初の投与が１５００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、２回目の投与が２０００μｇの量のインスリン分泌性ペプチドを含み、総１週用量が合計で３５００μｇに達する。特定の実施形態では、総１週用量が週２回投与され、各投与が１７５０μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、総１週用量が合計で３５００μｇに達する。特定の実施形態では、総１週用量が週２回投与され、各投与が１８００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、総１週用量が合計で３６００μｇに達する。特定の実施形態では、総１週用量が週２回投与され、各投与が１９００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、総１週用量が合計で３８００μｇに達する。特定の実施形態では、総１週用量が週２回投与され、各投与が２０００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、総１週用量が合計で４０００μｇに達する。
【００５５】
他の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、８、９、１０、１１、１２または１３日毎に１回投与することができる。他の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、３、４、５、６、７または８日の期間毎に２回投与することができる。他の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、９、１０、１１、１２、１３または１４日の期間毎に２回投与することができる。
【００５６】
一部の実施形態では、製剤中のインスリン分泌性ペプチド結合体（遊離のアルブミンを含まない）の濃度は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約７５ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌまたは約１０ｍｇ／ｍｌ〜２０ｍｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、製剤中のインスリン分泌性ペプチド結合体の濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌまたは約５００ｍｇ／ｍｌよりも高い。一部の実施形態では、製剤中のインスリン分泌性ペプチド結合体の濃度は、約１００ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌまたは約０．１ｍｇ／ｍｌよりも低い。好ましい実施形態では、製剤中のインスリン分泌性ペプチド結合体の濃度は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌまたは約１〜約１５ｍｇ／ｍｌである。特に好ましい実施形態では、製剤中のインスリン分泌性ペプチド結合体の濃度は、約１ｍｇ／ｍｌである。他の特に好ましい実施形態では、製剤中のインスリン分泌性ペプチド結合体の濃度は、約２．５ｍｇ／ｍｌである。他の特に好ましい実施形態では、製剤中のインスリン分泌性ペプチド結合体の濃度は、約５ｍｇ／ｍｌである。他の特に好ましい実施形態では、製剤中のインスリン分泌性ペプチド結合体の濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌである。
【００５７】
特定の実施形態では、本明細書の製剤は、単独療法として投与することができる。言い換えると、本明細書の製剤は、本明細書で提供される１つまたは複数の状態を治療するための活性剤の単独投与として提供することができる。
【００５８】
本明細書の製剤は、治療される特定の適応症のために有用な１つまたは複数の第二の治療薬、好ましくは製剤のインスリン分泌性ペプチド結合体に悪影響を与えない相補活性を有するものと併用投与すること、またはそれらを含むこともできる。特定の実施形態では、そのような第二の治療薬は、インスリン分泌性ペプチド結合体と一緒に、意図する目的に有効である量で存在することができる。特定の実施形態では、第二の治療薬は、抗糖尿病薬、例えば経口抗糖尿病薬、例えばビグアナイド、例えばメトホルミンである。
【００５９】
医薬製剤は、生理的に適するｐＨを維持する緩衝剤を含むことができる。さらに、緩衝剤は、製剤の等張性および化学的安定性を高める役目を果たすことができる。一部の実施形態では、製剤は約３．０〜８．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、製剤は約４．０〜８．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、製剤は約４．０〜６．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、製剤は約６．０〜８．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、製剤は約６．０〜９．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、製剤は約５．０〜７．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、製剤は約４．５〜６．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、製剤は約５．０〜６．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、製剤は約５．１〜６．０、約５．２〜６．０、約５．３〜６．０、約５．４〜６．０、約５．５〜６．０、約５．６〜６．０、約５．７〜６．０または約５．８〜６．０のｐＨを有する。一部の実施形態では、前記製剤は約３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９または９．０のｐＨを有する。特定の実施形態では、製剤は約５．０のｐＨを有する。別の特定の実施形態では、製剤は約７．０のｐＨを有する。ｐＨは、必要に応じて、当技術分野で公知である技術によって調節することができる。例えば、ｐＨを所望のレベルに調節するために、必要に応じて塩酸または水酸化ナトリウムを加えることができる。
【００６０】
本発明の製剤で有用な緩衝剤には、酢酸、リン酸、コハク酸、ヒスチジン、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ジエタノールアミン、クエン酸、他の有機酸およびそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。製剤は、ナトリウムまたはカルシウムなどの、適すると考えられる任意の対イオンをさらに含むことができる。好ましい実施形態では、緩衝剤は酢酸緩衝剤（酢酸ナトリウム緩衝剤など）である。別の好ましい実施形態では、緩衝剤はリン酸緩衝剤（リン酸ナトリウム緩衝剤など）である。
【００６１】
緩衝剤は、適するｐＨを維持するのに十分な量で存在する。一部の実施形態では、緩衝剤は、約０．１ｍＭ〜約１００ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約５０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約３０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約２５ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約２０ｍＭ、または約５ｍＭ〜約１５ｍＭで製剤中に存在する。特定の実施形態では、緩衝剤は、約５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭまたは１５ｍＭである。一部の実施形態では、緩衝剤は、約１０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝剤またはリン酸ナトリウム緩衝剤である。
【００６２】
製剤は、製剤の等張性の維持に寄与する、張性調整剤を含むことができる。一部の実施形態では、製剤は等張性であり、すなわち、製剤は、血漿と同じかほぼ同じ浸透圧を有する。等張性の製剤は、一般に約２５０〜３５０ｍＯｓｍ、好ましくは約２５０〜約３３０ｍＯｓｍの浸透圧を有する。一部の実施形態では、製剤は高張性である。一部の実施形態では、製剤は低張性である。
【００６３】
張性調整剤は、当業者にとって明らかな任意の張性調整剤、例えば塩、糖、糖アルコール、ポリオールまたはアミノ酸であってよい。例示的な張性調整剤には、それらに限定されないが、塩、例えば塩化ナトリウム、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム、糖またはポリオール、例えばラクトース、ソルビトール、ショ糖、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、グリシンおよびそれらの組合せが含まれる。一部の好ましい実施形態では、張性調整剤は塩化ナトリウムである。他の好ましい実施形態では、張性調整剤はソルビトールである。特定の実施形態では、組み合わせた張性調整剤は、上に述べたように等張性である総モル浸透圧濃度を与える。
【００６４】
製剤が凍結乾燥製剤である場合、張性調整剤として塩または非還元糖が好ましい。「非還元糖」は、金属イオンを還元すること、またはタンパク質中のリジンおよび他のアミノ基と共有結合的に反応することができるヘミアセタール基を含まないものである。非還元糖には、ショ糖、トレハロース、ソルボース、メレチトースおよびラフィノースが含まれる。非還元糖は、凍結乾燥および以降の保存後のペプチドの化学的および／または物理的不安定性を防止または低減することができる。
【００６５】
張性調整剤は、製剤の所望の張性を維持する量で、製剤中に存在する。一部の実施形態では、張性調整剤は、約０．１％〜約５０％（ｗ／ｖ）、約０．５％〜約２０％（ｗ／ｖ）、約１％〜約１０％（ｗ／ｖ）または約４％〜約６％（ｗ／ｖ）で存在する。一部の実施形態では、張性調整剤は、約５％（ｗ／ｖ）で存在する。一部の実施形態では、張性調整剤は、少なくとも１ｍＭの濃度で存在する。一部の実施形態では、張性調整剤は、約１ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１５０ｍＭまたは約５０ｍＭ〜約１００ｍＭで存在する。一部の好ましい実施形態では、製剤は約１３５ｍＭ塩化ナトリウムを含む。他の好ましい実施形態では、製剤は約１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含む。他の好ましい実施形態では、製剤は約５％ソルビトール（ｗ／ｖ）を含む。
【００６６】
製剤は、貯蔵温度の変動の間、結合体を安定させて、分解生成物、ペプチド分解物および凝集を最小にするために、安定剤を含むこともできる。本発明の製剤で有用な安定剤には、オクタン酸ナトリウム、Ｎａ−Ｎ−アセチルトリプトファン、Ｈ−グルタミン酸、アルギニン、窒素およびそれらの組合せが含まれるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、安定剤はオクタン酸ナトリウムである。
【００６７】
特定の実施形態では、安定剤は、約０．１ｍＭ〜３０ｍＭ、約０．５ｍＭ〜２０ｍＭ、約１ｍＭ〜約１５ｍＭまたは約５ｍＭ〜約１０ｍＭで製剤中に存在する。特定の実施形態では、安定剤は、約１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、１５ｍＭ、１６ｍＭ、１７ｍＭ、１８ｍＭ、１９ｍＭまたは２０ｍＭで製剤中に存在する。好ましい実施形態では、安定剤は、約５ｍＭのオクタン酸ナトリウムである。
【００６８】
製剤は、界面活性剤を含むこともできる。界面活性剤は、溶液に溶解した場合、液体と固体との間の界面張力を低減させる化合物であり、再構成されるタンパク質の凝集を減少させるため、および／または再構成される製剤中での粒子状物質の形成を減少させるために製剤に加えることができる。例示的な界面活性剤には、ポリソルベート（例えばポリソルベート２０または８０）；ポロキサマー（例えばポロキサマー１８８（プルロニックＦ６８））；トリトン；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；ラウリル硫酸ナトリウム；ナトリウムオクチルグリコシド；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−またはステアリル−スルホベタイン；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−またはステアリル−サルコシン；リノレイル−、ミリスチル−またはセチル−ベタイン；ラウラミドプロピル−、コカミドプロピル−、リノールアミドプロピル−、ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−またはイソステアラミドプロピル−ベタイン（例えばラウロアミドプロピル）；ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−またはイソステアラミドプロピル−ジメチルアミン；ナトリウムメチルココイル−または二ナトリウムメチルオレイル−タウレート；およびＭＯＮＡＱＵＡＴ（商標）シリーズ（Ｍｏｎａ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．、Ｐａｔｅｒｓｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、ならびにエチレンおよびプロピレングリコールの共重合体などが含まれる。
【００６９】
界面活性剤の量は、それが、製剤化されたペプチドもしくはペプチド結合体の凝集を減少させ、および／または製剤中の粒子状物質の形成を最小にし、および／または吸着を減少させるようなものである。例えば、界面活性剤は、約０．００１〜１％（ｗ／ｖ）、好ましくは約０．０１〜０．５％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在することができる。一部の実施形態では、製剤は、ポロキサマーである界面活性剤を含む。一部の実施形態では、製剤はプルロニックＦ６８を含む。特定の実施形態では、製剤は、約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）のプルロニックＦ６８、より好ましくは約０．１％（ｗ／ｖ）のプルロニックＦ６８を含む。
【００７０】
特定の実施形態では、製剤は、上で特定された剤（すなわち、インスリン分泌性ペプチド結合体、緩衝剤、張性調整剤および界面活性剤）を含み、ベンジルアルコール、フェノール、ｍ−クレゾール、クロロブタノールおよび塩化ベンゼトニウムなどの１つまたは複数の防腐剤を含有しない。他の実施形態では、特に製剤が多回使用製剤である場合は、防腐剤が製剤に含まれてもよい。例示的な防腐剤には、ｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブチルパラベン、エチルパラベン、メチルパラベン、フェノール、グリセロール、キシリトール、レソルシノール、カテコール、２，６−ジメチルシクロヘキサノール、２−メチル−２，４−ペンタジオール、デキストラン、ポリビニルピロリドン、２−クロロフェノール、塩化ベンゼトニウム、メルチオレート（チメロサール）、安息香酸（プロピルパラベン）ＭＷ１８０．２、安息香酸ＭＷ１２２．１２、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウムおよび塩化セチルピリジニウムが含まれるが、これらに限定されない。これらの防腐剤のいずれかを、本開示製剤中で唯一の防腐剤として、または互いと組み合わせて用いることができる。
【００７１】
好ましい実施形態では、製剤の緩衝剤および他の成分と適合する（すなわち、溶液は澄明である）防腐剤が用いられる。緩衝剤が酢酸ナトリウムまたはリン酸ナトリウムである場合、適合する防腐剤には、メタノール、エタノール、イソプロパノール、グリセロール、レソルシノール、２−メチル−２，４−ペンタジオール、メルチオレート（チメロサール）、塩化ベンザルコニウム、安息香酸ナトリウム、塩化セチルピリジニウムが含まれる。
【００７２】
製剤で用いられる防腐剤の濃度は、当業者の判断に従って決定することができる。一部の実施形態では、約０．００５〜１０％（ｗ／ｖ）、約０．１〜１．０％（ｗ／ｖ）または約０．３〜０．７％（ｗ／ｖ）の防腐剤が製剤中に存在する。一部の実施形態では、約０．００５、０．１、０．３、０．５、０．７または１．０％（ｗ／ｖ）の防腐剤が製剤中に存在する。
【００７３】
開放孔構造を維持する実質的に均一な凍結乾燥ケークの生成を容易にするために、増量剤が凍結乾燥製剤に含まれてもよい。例示的な増量剤には、マンニトール、グリシン、ポリエチレングリコールおよびキソルビトールが含まれる。増量剤は、張性調整剤の役目も果たすことができる。
【００７４】
１つまたは複数の他の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ第１９版、Ｇｅｎａｒｒｏ，  Ａ．編（１９９５年）に記載されるものなどが製剤に含まれてもよいが、それらは、製剤の所望の特性にあまり悪影響を与えないものとする。本発明の製剤の追加の構成成分には、水、例えば注射用蒸留水、植物油、メチルセルロースなどの増粘剤、抗吸着剤、湿潤剤、アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤、ＥＤＴＡなどのキレート化剤、金属錯体（例えばＺｎ−タンパク質錯体）、ポリエステルなどの生物分解性ポリマー、および／またはナトリウムなどの塩形成対イオンなどが含まれてもよい。許容される担体、賦形剤または安定剤は、それらが使用される投薬量および濃度で対象に無毒であるような量で存在する。
【００７５】
本発明による最適な製剤は、製剤が保存される時間、製剤が保存および使用される条件、製剤を投与することができる特定の対象集団などの因子によって変動し得る。
【００７６】
特定の実施形態では、本明細書で記載される製剤は、単回または複数回投与のための、バイアル、ボトル、チューブ、注射器または他の容器に入れることができる。そのような容器は、ガラスまたはポリマー材、例えばポリプロピレン、ポリエチレン、ポリ塩化ビニルまたはポリオレフィンなどで作製することができる。一部の実施形態では、単一用量を引き抜き、次に針を抜いた後に再密封するために、容器は、針で貫通することができるゴム栓などのシールまたは他の密閉システムを含むことができる。当技術分野で公知である注射液、凍結乾燥製剤、再構成された凍結乾燥製剤、または再構成可能な注射用粉末のためのそのような全ての容器は、本開示製剤および方法で使用することが企図される。特定の実施形態では、容器は単一用量または複数用量を含むペンタイプの送達装置である。そのようなペンタイプの送達装置は恒久的なもの、例えば、単一用量または複数用量を含む使い捨て式カートリッジを収納する恒久的なペンでよく、または全体の装置が使い捨て式のもの、例えば、単一用量または複数用量を含む使い捨て式ペンでよい。ペンタイプの送達装置が複数用量を含む特定の実施形態では、用量を予めセットすること、すなわち固定することができる。他の実施形態では、用量は可変的な用量でよく、すなわち、使用者がダイヤルインすることができる。一部の実施形態では、ペンタイプの送達装置は、使い捨て式針の取付けを容易にする、ルアーロック、ルアーコーンまたは他の針取付けコネクタを含む。他の実施形態では、ペンタイプ送達装置は、ステーキドニードル（ｓｔａｋｅｄ  ｎｅｅｄｌｅ）、すなわち恒久針を含む。別の特定の実施形態では、容器は注射器である。一部の実施形態では、注射器は、使い捨て式針の取付けを容易にする、ルアーロック、ルアーコーンまたは他の針取付けコネクタを含む。他の実施形態では、注射器は、ステーキドニードル、すなわち恒久針を含む。一部の実施形態では、注射器は、単一用量または複数用量を予備充填される。
【００７７】
本明細書で提供される製剤は、様々な投薬量のために、様々なバイアルサイズに様々な濃度で製剤化することができる。例えば、投薬量は、０．２５、０．５、１または２ｍｌのバイアル、または任意の他のサイズのバイアルもしくは当業者に公知である他の容器内に製剤化することができる。
【００７８】
インビボ投与のために用いられる製剤は、無菌でなければならない。これは、製剤の調製の前かその後の、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。あるいは、全体の製剤の無菌性は、タンパク質を除く成分を、例えば約１２０℃で約３０分間加圧滅菌することによって達成することができる。
【００７９】
特定の実施形態では、本発明は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの濃度のエキセンディン−４またはその誘導体へのアルブミンの結合体、緩衝剤、張性調整剤、安定剤、界面活性剤、および任意選択で防腐剤を含む医薬製剤であって、約４〜約８のｐＨを有する製剤を提供する。
【００８０】
特定の実施形態では、医薬製剤は、アルブミンおよびインスリン分泌性ペプチドの結合体であって、前記インスリン分泌性ペプチドは、天然のエキセンディン−４配列と比較して３つ以下のアミノ酸の置換、欠失または挿入を有する配列を含み、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの濃度である結合体と；緩衝剤と；少なくとも１ｍＭの濃度である張性調整剤と；安定剤と；界面活性剤とを含むか、あるいはそれらからなり、前記製剤は、約４〜約８のｐＨを有する。
【００８１】
特定の実施形態では、エキセンディン−４アルブミン結合体は、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０−ＮＨ２のカルボキシ末端リジンのεアミノ上の［２−［２−［２マレイミドプロピオナミド（エトキシ）エトキシ］酢酸リンカーに共有結合している組換え体ヒト血清アルブミンシステイン３４チオールを含む。そのような結合体は、アルブミンのシステイン３４チオールにリンカーを共有結合させることによって形成することができる。一部の実施形態では、エキセンディン−４アルブミン結合体は、約１０ｍｇ／ｍｌ〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度である。一部の実施形態では、緩衝剤は、ｐＨが約５．０〜６．０の酢酸ナトリウムまたはリン酸ナトリウム緩衝剤またはそれらの組合せである。一部の実施形態では、張性調整剤は塩化ナトリウムまたはソルビトールである。一部の実施形態では、安定剤はオクタン酸ナトリウムである。一部の実施形態では、界面活性剤はプルロニックＦ６８である。
【００８２】
特定の実施形態では、医薬製剤は、１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウム、１〜１０ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１〜３０ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含有するｐＨ６．５〜７．５の５〜３０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌのインスリン分泌性ペプチド結合体を含むか、またはそれからなる。特定の実施形態では、製剤は、１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウム、１〜１０ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１〜３０ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含有するｐＨ６．５〜７．５の５〜３０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのインスリン分泌性ペプチド結合体を含むか、またはそれからなる。特定の実施形態では、製剤は、１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウム、１〜１０ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１〜３０ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含有する１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのインスリン分泌性ペプチド結合体を含むか、またはそれからなり、前記製剤は、約５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９または８．０のｐＨを有する。特定の実施形態では、製剤は、１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウム、１〜１０ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１〜３０ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含有するｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのインスリン分泌性ペプチド結合体を含むか、またはそれからなる。特定の実施形態では、製剤は、１３５ｍＭ塩化ナトリウム、１．６ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１５ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含有するｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのインスリン分泌性ペプチド結合体を含むか、またはそれからなる。
【００８３】
好ましい実施形態では、医薬製剤は、１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウム、１〜１０ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１〜３０ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含むｐＨ６．５〜７．５の５〜３０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含むか、またはそれからなる。
【００８４】
特定の実施形態では、製剤は、１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウム、１〜１０ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１〜３０ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含有するｐＨ６．５〜７．５の５〜３０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含むか、またはそれからなる。特定の実施形態では、製剤は、１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウム、１〜１０ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１〜３０ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含有する１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含むか、またはそれからなり、前記製剤は、約５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９または８．０のｐＨを有する。特定の実施形態では、製剤は、１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウム、１〜１０ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１〜３０ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含有するｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含むか、またはそれからなる。特定の実施形態では、製剤は、１３５ｍＭ塩化ナトリウム、１．６ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１５ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含有するｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含むか、またはそれからなる。
【００８５】
特定の実施形態では、製剤は、１３５ｍＭ塩化ナトリウム、１．６ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１５ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含むｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌのインスリン分泌性ペプチド結合体からなる。特定の実施形態では、製剤は、１３５ｍＭ塩化ナトリウム、１．６ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１５ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含むｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４またはその誘導体とのアルブミンの結合体からなる。特定の実施形態では、製剤は、１３５ｍＭ塩化ナトリウム、１．６ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１５ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含むｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体からなる。特定の実施形態では、製剤は、１３５ｍＭ塩化ナトリウム、１．６ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび１５ｍｇ／Ｌポリソルベート８０を含むｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体からなる。
【００８６】
特定の実施形態では、医薬製剤は、１〜１５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．０５〜０．２％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８、および１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウムまたは２〜８％（ｗ／ｖ）ソルビトールのいずれかを含有する、ｐＨ４．５〜５．５の５〜３０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌのインスリン分泌性ペプチド結合体を含むか、またはそれからなる。特定の実施形態では、製剤は、１〜１５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．０５〜０．２％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８、および１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウムまたは２〜８％（ｗ／ｖ）ソルビトールのいずれかを含有する、ｐＨ４．５〜５．５の５〜３０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのインスリン分泌性ペプチド結合体を含むか、またはそれからなる。特定の実施形態では、製剤は、１〜１５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．０５〜０．２％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８、および１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウムまたは２〜８％（ｗ／ｖ）ソルビトールのいずれかを含有する、１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのインスリン分泌性ペプチド結合体を含むか、またはそれからなり、前記製剤は、約４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４または５．５のｐＨを有する。特定の実施形態では、製剤は、１〜１５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．０５〜０．２％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８、および１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウムまたは２〜８％（ｗ／ｖ）ソルビトールのいずれかを含有する、ｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのインスリン分泌性ペプチド結合体を含むか、またはそれからなる。特定の実施形態では、製剤は、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび０．１％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８（すなわちポロキサマー１８８）を含有するｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのインスリン分泌性ペプチド結合体を含むか、またはそれからなる。
【００８７】
好ましい実施形態では、医薬製剤は、１〜１５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．０５〜０．２％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８、および１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウムまたは２〜８％（ｗ／ｖ）ソルビトールのいずれかを含有する、ｐＨ４．５〜５．５の５〜３０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含むか、またはそれからなる。特定の実施形態では、製剤は、１〜１５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．０５〜０．２％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８、および１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウムまたは２〜８％（ｗ／ｖ）ソルビトールのいずれかを含有する、ｐＨ４．５〜５．５の５〜３０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含むか、またはそれからなる。特定の実施形態では、製剤は、１〜１５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．０５〜０．２％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８、および１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウムまたは２〜８％（ｗ／ｖ）ソルビトールのいずれかを含有する、１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含むか、またはそれからなり、前記製剤は、約４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４または５．５のｐＨを有する。特定の実施形態では、製剤は、１〜１５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．０５〜０．２％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８、および１００〜２００ｍＭ塩化ナトリウムまたは２〜８％（ｗ／ｖ）ソルビトールのいずれかを含有する、ｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含むか、またはそれからなる。特定の実施形態では、製剤は、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび０．１％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８（すなわちポロキサマー１８８）を含有するｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含むか、またはそれからなる。
【００８８】
特定の実施形態では、製剤は、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび０．１％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８（すなわちポロキサマー１８８）を含有するｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌのインスリン分泌性ペプチド結合体からなる。特定の実施形態では、製剤は、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび０．１％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８（すなわちポロキサマー１８８）を含有するｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４またはその誘導体とのアルブミンの結合体からなる。特定の実施形態では、製剤は、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび０．１％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８（すなわちポロキサマー１８８）を含有するｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体からなる。特定の実施形態では、製剤は、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび０．１％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８（すなわちポロキサマー１８８）を含有するｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体からなる。
【００８９】
本明細書で提供される医薬製剤は、当業者が有用であると考える任意の形であってよい。例えば、それらは、液状のもしくは凍結乾燥された製剤、単位用量剤形または多回使用剤形、およびそれらの組合せの形であってよい。したがって、製剤には、液体単位用量剤形、液体多回使用剤形、凍結乾燥単位用量剤形および凍結乾燥多回使用剤形が含まれる。
【００９０】
一部の実施形態では、製剤は液体製剤である。他の実施形態では、製剤は凍結乾燥製剤である。凍結乾燥は、関心のペプチド調製物から水を除去する役目を果たす、タンパク質を保存するために通常使用される技術である。凍結乾燥過程で安定性を高めるため、および／または保存後の凍結乾燥生成物の安定性を向上させるために、前凍結乾燥製剤に賦形剤を含有させることができる。Ｐｉｋａｌ，  Ｍ．１９９０年、Ｂｉｏｐｈａｒｍ．３巻（９号）：２６〜３０頁およびＡｒａｋａｗａら１９９１年、Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．８巻（３号）：２８５〜２９１頁を参照。
【００９１】
凍結乾燥製剤は、当業者の判断に従って再構成することができる。好ましい実施形態では、例えば注射用蒸留水で再構成されると、本明細書で記載の液体製剤の１つをもたらす凍結乾燥製剤が提供される。本発明は、インスリン分泌性ペプチド結合体の凍結乾燥製剤を再構成する方法であって、凍結乾燥製剤を提供することと、凍結乾燥製剤を再構成して、本明細書で記載のインスリン分泌性ペプチド結合体製剤を形成することとを含む方法も提供する。
【００９２】
所望の段階、一般的にペプチドを対象に投与する時間に、再構成される製剤中のタンパク質濃度が少なくとも１、２、３、４、５、１０、２０、３０、４０、５０ｍｇ／ｍｌであるように、凍結乾燥製剤を希釈剤で再構成することができる。一部の実施形態では、再構成される製剤中のタンパク質濃度は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、または約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌである。特定の実施形態では、再構成される製剤中のタンパク質濃度が約４５〜５５ｍｇ／ｍｌであるように、凍結乾燥製剤を希釈剤で再構成することができる。好ましい実施形態では、再構成される製剤中のタンパク質濃度が約５０ｍｇ／ｍｌであるように、凍結乾燥製剤を希釈剤で再構成することができる。希釈剤は、当業者が適すると考える任意の希釈剤、例えば注射用蒸留水などであってよい。
【００９３】
本明細書で提供される医薬製剤には、単位用量剤形および多回使用剤形の両方が含まれる。一部の実施形態では、製剤は単位用量剤形である。「単位用量剤形」は、対象への単一投与を目的とする量での、パッケージ形態の医薬製剤を指す。一部の実施形態では、製剤は単位用量剤形である。特定の実施形態では、単位投薬量は、約０．０１〜１００ｍｇ、０．１〜５０ｍｇ、１〜１０ｍｇまたは１〜５ｍｇのインスリン分泌性ペプチド結合体を含む。特定の実施形態では、単位投薬量は、約１、２、３、４、５、７．５、１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００ｍｇのインスリン分泌性ペプチド結合体を含む。そのような単位投薬量は、当業者に公知である技術によって調製することができる。
【００９４】
一部の実施形態では、製剤は多回使用剤形である。多回使用製剤は、対象のために使いやすさを高め、バイアル内容物の完全な使用を可能にすることによって廃棄物を減少させ、かなりの製造コスト引き下げをもたらすことができる。多回使用医薬製剤は、いろいろなときに製剤の一部を抜き取ることを可能にする多回用量容器、例えば、バイアル、アンプル、その他に含まれてもよい。上で詳述のように、多回使用製剤に、製剤中の緩衝剤に適合する１つまたは複数の防腐剤が存在してもよい。
【００９５】
好ましくは、本発明の製剤は、安定である。一部の実施形態では、製剤は、約４℃の温度で少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６カ月または３６カ月を超えて安定である。他の実施形態では、製剤は、約２５℃の温度で少なくとも約１、２もしくは３週間、または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６カ月または３６カ月を超えて安定である。他の実施形態では、製剤は、約４０℃の温度で少なくとも約１、２もしくは３週間、または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６カ月または３６カ月を超えて安定である。
【００９６】
５．２．１  医薬製剤の調製
本明細書で提供される製剤は、当業者にとって明らかな任意の技術によって調製することができる。特定の実施形態では、製剤は、製剤の調製に適する条件下でインスリン分泌性ペプチド結合体を製剤の他の成分と接触させることによって調製することができる。例えば、インスリン分泌性ペプチド結合体は、当業者にとって明らかな任意の技術によって、他の成分と混合すること、他の成分で透析すること、他の成分でダイアフィルターすること、または他の成分と接触させることができる。インスリン分泌性ペプチド結合体は、当業者にとって明らかな任意の技術によって調製することができる。例示的な技術を、本明細書に記載する。インスリン分泌性ペプチド結合体は、当業者によって適すると考えられる任意の方法によって精製することができる。例示的な方法を、本明細書に記載する。
【００９７】
本発明の製剤のインスリン分泌性ペプチド結合体は、所望の製剤組成での製剤に先立ち、当技術分野で公知である任意の精製法によって精製することができる。一部の実施形態では、結合体は、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）によって精製される。ＨＩＣは、当業者に公知である任意のＨＩＣ技術であってよい。特定の実施形態では、結合体は、２つのＨＩＣ精製、例えば連続する２つのＨＩＣ精製によって精製することができる。
【００９８】
一実施形態では、第一の精製段階は、インスリン分泌性ペプチド結合体を、フェニルセファロース、すなわち、フェニル基に共有結合しているビーズ形成アガロースゲル濾過マトリックスと接触させることを含む。特定の実施形態では、この段階は、非結合インスリン分泌性ペプチドを、遊離型であるか結合型であるかに関係なくアルブミン種から分離する。特定の実施形態では、フェニルセファロースは、５ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび５ｍＭ硫酸アンモニウムを含むｐＨ６．０のリン酸緩衝液で平衡させる。これらの条件下では、非結合化合物はフェニルセファロースに結合することができるが、結合体はフェニルセファロースを貫流することができる。次に、結合体は、さらなる精製のための貫流分画として、収集することができる。
【００９９】
特定の実施形態では、結合体の精製は、第二のＨＩＣ段階をさらに含み、そこでは、フェニルセファロース貫流物を、ブチルセファロース、すなわち、ブチル基に共有結合しているビーズ形成アガロースゲル濾過マトリックスと接触させ、結合体を非結合アルブミン、二量体非結合アルブミンおよび残留非結合化合物からさらに精製する。特定の実施形態では、ブチルセファロースは、５ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび７５０ｍＭ硫酸アンモニウムを含むｐＨ６．０前後の緩衝液で平衡させる。次に、ブチルセファロースを、上記の第一の精製段階のフェニルセファロース貫流物と接触させる。特定の実施形態では、結合体の溶出は、直線的または段階的に低減する塩こう配、またはそれらの組合せを用いて達成することができ、そこでは、非結合アルブミンは、約７５０ｍＭ硫酸アンモニウムで溶出され、二量体非結合アルブミンは約５５０ｍＭ硫酸アンモニウムで溶出され、化合物−アルブミン結合体（所望の種）は約１００ｍＭ硫酸アンモニウムで溶出され、非結合化合物および他の種は水またはその同等物で溶出することができる。これらの種には、例えば、二量体、三量体、もしくは重合体のアルブミン結合体、または１：１を超える化合物対アルブミンの化学量を含むアルブミン結合体生成物が含まれてもよい。
【０１００】
特定の実施形態では、結合体の精製は、ＨＩＣの後に結合体を洗浄して限外濾過によって濃縮することをさらに含む。一部の実施形態では、滅菌水、生理食塩水または緩衝液を用いて、精製結合体から硫酸アンモニウムおよび緩衝液成分を除去することができる。
【０１０１】
他の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２００６年１２月２２日に出願された「Ｐｒｏｃｅｓｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｅｆｏｒｍｅｄ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｌｂｕｍｉｎ  ａｎｄ  ａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｇｅｎｔ」という名称の米国特許出願第１１／６４５，２９７号（公開番号第２００７／０２６９８６３号）に記載の精製方法によって精製することができる。
【０１０２】
特定の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体の精製の後に、当業者に明らかな任意の技術によって、結合体を所望の製剤組成物、例えば本発明の製剤に再製剤化することができる。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ第１６版、Ｏｓｏｌ，  Ａ．編（１９８０年）を参照。例えば、液体製剤は、容器内で成分を混合し、水または緩衝液を所望の容量および濃度まで加えることによって調製することができる。他の例示的な技術には、透析、限外濾過、ダイアフィルトレーション、サイズ排除クロマトグラフィーなどが含まれる。一般に、結合体は、本明細書で提供される製剤を与える条件の下で、製剤成分と接触させることができる。
【０１０３】
特定の実施形態では、精製インスリン分泌性ペプチド結合体の再製剤化は、上記の第二のＨＩＣ精製段階、すなわちブチルセファロースクロマトグラフィーから溶出するインスリン分泌性ペプチド結合体を含む分画を適する容器にプールすることを含む。次に、プールされた物質を、当技術分野で公知である任意の濃縮方法を用いて濃縮することができる。特定の実施形態では、プールされた物質は、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００ｍｇ／ｍｌ、または１００ｍｇ／ｍｌを超えるタンパク質濃度が達成されるまで、限外濾過膜およびポンピング系を用いて濃縮することができる。特定の実施形態では、プールされた物質は、約７０ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度に濃縮される。次に、濃縮生成物は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０容または１０容を超える水に対してダイアフィルターすることができ、そこでは、インスリン分泌性ペプチド結合体を含む溶液の容量は、一定に保たれる。特定の実施形態では、濃縮生成物は、少なくとも１０容の水に対してダイアフィルターされる。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体を含むダイアフィルターされた溶液は、次に、所望の製剤組成物と接触、すなわち混合させて、インスリン分泌性ペプチド結合体を含む製剤組成物を達成することができる。特定の実施形態では、５×濃度の所望の製剤組成物を調製することができ、また、インスリン分泌性ペプチド結合体を含む４部の溶液を１部の５×製剤溶液と混合させ、本明細書で記載のインスリン分泌性ペプチド結合体製剤を達成することができる。特定の実施形態では、生じた溶液のタンパク質濃度を測定することができ、また、１×製剤緩衝液中の所望濃度のインスリン分泌性ペプチド結合体を達成するために、必要に応じてタンパク質濃度を製剤緩衝液で調節することができる。一部の実施形態では、１×製剤緩衝液中のインスリン分泌性ペプチド結合体の最終濃度は、約１、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００ｍｇ／ｍｌであるか、または１００ｍｇ／ｍｌを超える。特定の実施形態では、１×製剤緩衝液中のインスリン分泌性ペプチド結合体の最終濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌである。別の特定の実施形態では、１×製剤緩衝液中のインスリン分泌性ペプチド結合体の最終濃度は、約５０ｍｇ／ｍｌである。生成物は、保存のために、当技術分野で公知である任意の方法によって、調製の前にさらに濾過することができる。
【０１０４】
代替実施形態では、精製インスリン分泌性ペプチド結合体の再製剤化は、以下の段階を含むことができる。例として、かつ非限定的に、以下を示す。上述のように、第二のＨＩＣ精製段階、すなわちブチルセファロースクロマトグラフィーの後に得られる分画のプール、および約７０ｍｇ／ｍｌへのインスリン分泌性ペプチド結合体の濃縮の後、濃縮生成物は、次に、本発明の所望の製剤組成物を含む少なくとも１０容のダイアフィルトレーション緩衝液に対してダイアフィルターすることができ、そこでは、製剤組成物は、界面活性剤ポロキサマー１８８（プルロニックＦ６８）を含まない。濃縮生成物は、少なくとも１０容のダイアフィルトレーション緩衝液に対してダイアフィルターすることができ、そこでは、インスリン分泌性ペプチド結合体を含む溶液の容量は一定に保たれる。必要に応じて、５×濃度の界面活性剤ポロキサマー１８８を含む「５×ポロキサマー１８８溶液」、例えば０．５％（ｗ／ｖ）ポロキサマー１８８を、上記のダイアフィルトレーション緩衝液で次に調製することができ、およびインスリン分泌性ペプチド結合体を含む４部の溶液を１部の５×ポロキサマー１８８溶液と混合させることができる。生じた溶液のタンパク質濃度を測定することができ、また、１×製剤緩衝液中の約５０ｍｇ／ｍｌ濃度のインスリン分泌性ペプチド結合体を達成するために、必要に応じてタンパク質濃度を製剤緩衝液で調節することができる。生成物は、保存のために、当技術分野で公知である任意の方法によって、調製の前にさらに濾過することができる。
【０１０５】
他の実施形態では、凍結乾燥製剤は、ペプチドまたはペプチド結合体を他の成分と接触させ、生じた混合物を凍結乾燥することによって調製することができる。この目的のために、Ｈｕｌｌ５０（商標）（Ｈｕｌｌ、ＵＳＡ）またはＧＴ２０（商標）（Ｌｅｙｂｏｌｄ−Ｈｅｒａｅｕｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）凍結乾燥器など多くの凍結乾燥器が利用可能である。凍結乾燥は、製剤を凍結させ、その後、一次乾燥に適する温度で凍結内容物から氷を昇華させることによって達成することができる。この条件下で、生成物の温度は、共融点または製剤の崩壊温度以下にある。一般的に、一次乾燥のための棚温度は、一般に約５０〜２５０ｍＴｏｒｒの範囲の適する圧力下で、約−３０〜−５℃である（一次乾燥の間、生成物は凍結した状態を保つ）。主に、製剤、試料を保持する容器（例えば、ガラス製バイアル）のサイズおよびタイプ、ならびに液体容量が、乾燥に必要とされる時間を決定し、それは数時間から数日（例えば４０〜６０時間）の範囲であり得る。二次乾燥段階は、主に容器のタイプおよびサイズならびに使用するタンパク質のタイプによって、約０〜４０℃で実施することができる。しかし、特定の実施形態では、二次乾燥段階は必要でないかもしれない。例えば、凍結乾燥の脱水相全体を通しての棚温度は、約−３０〜−５℃であり得る。二次乾燥に必要とされる時間および圧力は、例えば温度および他のパラメータに依存する、適する凍結乾燥ケークを生成するものになる。二次乾燥時間は、生成物中の所望の残留水分レベルによって決定され、一般的に、少なくとも約５時間（例えば１０〜１５時間）がかかる。圧力は、一次乾燥段階で使用されるものと同じでよい。凍結乾燥条件は、製剤およびバイアルサイズによって異なってもよい。
【０１０６】
５．２．１．１  調製製剤の評価
一態様では、本発明はインスリン分泌性ペプチド結合体、例えば、本明細書で提供される方法によって調製および／または製剤化されるエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体の試料を評価して、試料中の１つまたは複数の種のレベルを測定する方法を提供する。特定の実施形態では、本方法は、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えば、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含む試料中の１つまたは複数の種のレベルの値を判定すること；および値を参照値と比較し、それによって試料を評価することを含む。参照値は、任意の所定の値または値域、例えば、政府機関、例えばＦＤＡ、または別の関係者、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体の承認調製物の製造業者、または大要典拠（ｃｏｍｐｅｎｄｉａｌ  ａｕｔｈｏｒｉｔｙ）、例えばＵＳＰによって設定された値であってよい。
【０１０７】
種は、当業者が試料において評価できるであろう任意の種であってよい。例には、インスリン分泌性ペプチド結合体、未結合のアルブミンおよび未結合のインスリン分泌性ペプチド、またはそのような種の任意の誘導体が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、未結合のインスリン分泌性ペプチドの誘導体は、酸化ペプチド、例えばメチオニン残基で酸化されたもの、脱アミノ化されたペプチド、例えばアスパラギンもしくはグルタミン残基で脱アミノ化されたもの、または酸化および脱アミノ化されたペプチドであってよい。特定の実施形態では、種は、高分子（例えば；アルブミン）との複数のインスリン分泌性ペプチドの結合体、例えば２：１のペプチド対高分子、または３：１のペプチド対高分子、または４：１のペプチド対高分子である。
【０１０８】
好ましい実施形態では、種は、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体である。
【０１０９】
好ましい実施形態では、評価種は、未結合のアルブミンである。好ましい実施形態では、試料中の未結合アルブミンのレベルの値は、１０．０ｍｇ／ｍｌ未満である。
【０１１０】
好ましい実施形態では、評価種は、未結合のエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２である。好ましい実施形態では、未結合のエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２のレベルの値は、２５．０μｇ／ｍｌ未満である。
【０１１１】
特定の実施形態では、評価種は、２：１の比率でアルブミンに結合している、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２である。
【０１１２】
特定の実施形態では、評価種は、３：１の比率でアルブミンに結合している、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２である。
【０１１３】
当技術分野で公知である任意の方法を用いて、インスリン分泌性ペプチド結合体を含む試料中の種の値を測定することができる。一部の実施形態では、試料中の未結合の種のレベルは、ゲル電気泳動、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣＭＳ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、逆相クロマトグラフィー、例えば逆相ＨＰＬＣ、円二色性、融点、モル浸透圧または紫外吸光度、例えば２８０ｎｍの吸光度で測定される。
【０１１４】
特定の実施形態では、結合体、未結合のアルブミン、未結合のペプチドおよび／または高分子との複数のインスリン分泌性ペプチドの結合体を検出または定量化するために、疎水性相互作用クロマトグラフィーが有用である。
【０１１５】
特定の実施形態では、結合体、未結合のアルブミン、未結合のペプチドおよび／または高分子との複数のインスリン分泌性ペプチドの結合体を検出または定量化するために、ゲル電気泳動が有用である。特定の実施形態では、検出を促進するために、ゲル電気泳動を免疫学的検出、例えばウェスタンブロットまたは酵素結合免疫吸着検定法と組み合わせてもよい。
【０１１６】
特定の実施形態では、結合体、未結合のアルブミン、未結合のペプチドおよび／または高分子との複数のインスリン分泌性ペプチドの結合体を検出するために、ＬＣＭＳが有用である。
【０１１７】
特定の実施形態では、未結合のペプチドおよび／または未結合のペプチドの誘導体を検出または定量化するために、逆相ＨＰＬＣが有用である。
【０１１８】
５．３  治療方法
インスリン分泌性ペプチドで治療できる障害または状態を対象で治療する方法も、本明細書で提供される。特定の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドで治療できる障害または状態は、肥満である。特定の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドで治療できる障害または状態は、糖尿病である。理論によって束縛されることを望まないが、ここで提供される医薬製剤は、グルコース依存性、インスリン依存性およびインスリン非依存性機構を通して、高血糖症を正常化すると考えられている。上記医薬製剤は、ＩＩ型糖尿病の治療のための主要な剤として、およびＩ型糖尿病の治療のための補助剤として有用である。特定の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドで治療できる障害または状態は、ＩＩ型糖尿病である。一部の実施形態では、本方法は、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えば本明細書に記載のインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の治療的有効量を、対象に投与する段階を含む。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体は、エキセンディン−４またはその誘導体とのアルブミンの結合体である。好ましい実施形態では、対象はヒトである。
【０１１９】
ペプチドの作用が血中グルコース濃度に依存性であるという点で、医薬製剤はＩ型およびＩＩ型両方の糖尿病を有する対象の治療に特に適し、したがって、血糖降下剤の副作用の危険は、現在の治療方法を用いる危険よりも大きく低減される。
【０１２０】
したがって、特定の態様では、対象でＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、本明細書で記載の製剤をＩＩ型糖尿病を有する対象に投与することを含む方法が本明細書で提供される。一部の実施形態では、製剤は、アルブミンおよびインスリン分泌性ペプチドの結合体であって、前記インスリン分泌性ペプチドが天然のエキセンディン−４配列と比較して３つ以下のアミノ酸の置換、欠失または挿入を有する配列を含み、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの濃度である結合体と；緩衝剤と；張性調整剤と；安定剤と；界面活性剤とを含み、前記製剤は、約４〜約８のｐＨを有する。特定の実施形態では、上記方法は、インスリン分泌性結合エキセンディン−４誘導体を含む製剤を、ＩＩ型糖尿病を有する対象に投与することを含み、前記誘導体は、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０−ＮＨ２のカルボキシ末端リジンのεアミノに共有結合している［２−［２−［２マレイミドプロピオナミド（エトキシ）エトキシ］酢酸リンカーに共有結合している組換え体ヒト血清アルブミンシステイン３４チオールを含む。
【０１２１】
本発明の医薬製剤は、肥満対象の治療のために用いることもできる。本発明の医薬製剤は、インスリン分泌性ペプチドで治療可能な任意の障害または疾患を有する対象の治療のために用いることもできる。
【０１２２】
５．３．１  対象
本発明の特定の実施形態では、対象は、動物、例えば哺乳動物、例えばヒト以外の霊長類である。特定の実施形態では、対象はヒトである。対象は、雄または雌の対象であり得る。特定の実施形態では、対象はヒト以外の動物、例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ネコまたはイヌなどである。
【０１２３】
特定の実施形態では、対象は、それらに限定されないが、肥満およびＩＩ型糖尿病を含めた、インスリン分泌性ペプチドで治療できる障害または状態の危険がある。一部の実施形態では、対象は肥満の危険がある。一部の実施形態では、対象はＩＩ型糖尿病の危険がある。
【０１２４】
一部の実施形態では、対象は健康でない。一部の実施形態では、対象は、それらに限定されないが、肥満またはＩＩ型糖尿病を含めた、インスリン分泌性ペプチドで治療できる状態を有するか患っている。
【０１２５】
一部の実施形態では、対象は肥満である。一部の実施形態では、対象はヒトであり、３０ｋｇ／ｍ２以上の肥満度指数（ＢＭＩ）を有する。一部の実施形態では、対象はヒトであり、３０ｋｇ／ｍ２〜３５ｋｇ／ｍ２の間のＢＭＩを有する。一部の実施形態では、対象はヒトであり、３５ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩを有する。一部の実施形態では、対象はヒトであり、４０ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩを有する。一部の実施形態では、対象は、その年齢および身長および／または民族の標準体重の１２０％を超える重さである。
【０１２６】
一部の実施形態では、対象はＩＩ型糖尿病を有する。一部の実施形態では、対象は異常なグルコースレベルを有する。特定の実施形態では、対象は高いグルコースレベルを有する。一部の実施形態では、対象はヒトであり、８ｍｍｏｌ／Ｌ（１３８ｍｇ／ｄｌ）以上の平均全血グルコースレベル、および／または９．０ｍｍｏｌ／Ｌ（１５４ｍｇ／ｄｌ）以上の平均血漿血グルコースレベルを有する。一部の実施形態では、対象はヒトであり、８ｍｍｏｌ／Ｌ（１３８ｍｇ／ｄｌ）〜１６ｍｍｏｌ／Ｌ（２８１ｍｇ／ｄｌ）の間の平均全血グルコースレベル、および／または９．０ｍｍｏｌ／Ｌ（１５４ｍｇ／ｄｌ）〜１７ｍｍｏｌ／Ｌ（３１４ｍｇ／ｄｌ）の間の平均血漿血グルコースレベルを有する。一部の実施形態では、対象はヒトであり、１６ｍｍｏｌ／Ｌ（２８１ｍｇ／ｄｌ）を超える平均全血グルコースレベル、および／または１７ｍｍｏｌ／Ｌ（３１４ｍｇ／ｄｌ）を超える平均血漿血グルコースレベルを有する。
【０１２７】
一部の実施形態では、対象はヒトであり、６．５％以上のグリコシル化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）レベルを有する。一部の実施形態では、対象はヒトであり、６．５％〜１１％の間のＨｂＡ１ｃレベルを有する。一部の実施形態では、対象はヒトであり、１１％以上のＨｂＡ１ｃレベルを有する。
【０１２８】
特定の実施形態では、対象は、インスリン分泌性ペプチド、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体で治療できる疾患、障害または状態を有する。例えば、対象はメタボリックシンドロームを有する。Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ  ＰｒｏｇｒａｍのＡｄｕｌｔ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｐａｎｅｌ（ＡＴＰＩＩＩ）の三次報告書によると、メタボリックシンドロームを有する対象は、以下の基準のうちの３つ以上を有する：（１）男性については１０２ｃｍを超える胴囲、女性については８８ｃｍを超える胴囲；（２）１．７ｍｍｏｌ／ｌを超える血清トリグリセリド；（３）１３０／８５ｍｍＨｇを超える血圧；（４）男性では１．０ｍｍｏｌ／ｌ未満、女性では１．３ｍｍｏｌ／ｌ未満のＨＤＬコレステロール；および（５）６．１ｍｍｏｌ／ｌを超える（５．６ｍｍｏｌ／ｌ超が適用可能なこともある）血清グルコース。世界保健機構（ＷＨＯ）によると、メタボリックシンドロームを有する対象は、糖尿病または空腹時血糖異常（ＩＦＧ）または耐糖能異常（ＩＧＴ）またはインスリン抵抗性（クランプ試験によって評価される）に加えて、以下の基準のうちの少なくとも２つを有する：（１）男性では０．９０、女性では０．８５を超えるＷＨＲ（ｗａｉｓｔ−ｔｏ−ｈｉｐ  ｒａｔｉｏ）；（２）１．７ｍｍｏｌ／ｌを超える血清トリグリセリド、または男性では０．９ｍｍｏｌ／ｌ未満、女性では１．０ｍｍｏｌ／ｌ未満のＨＤＬコレステロール；（３）１４０／９０ｍｍＨｇを超える血圧；（４）２０マイクログラム／分を超える尿中アルブミン排泄速度、または３０ｍｇ／ｇを超えるアルブミン：クレアチニン比。したがって、対象がメタボリックシンドロームについてＡＴＰＩＩＩまたはＷＨＯによって定義される基準を満たすならば、対象はメタボリックシンドロームを有する。
【０１２９】
一部の実施形態では、対象は前糖尿病（例えば、耐糖能異常（ＩＧＴ）または空腹時血糖異常（ＩＦＧ））を有する。一部の実施形態では、対象は糖尿病、例えば、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病を有する。一部の実施形態では、対象は、高齢発症成人性自己免疫性糖尿病としても公知の、成人性潜伏型自己免疫性糖尿病（「ＬＡＤＡ」）を有する。一部の実施形態では、対象は緩徐発症Ｉ型糖尿病を有する。一部の実施形態では、対象は１．５型糖尿病を有する。一部の実施形態では、対象はステロイド糖尿病を有する。一部の実施形態では、対象はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）治療誘発糖尿病を有する。一部の実施形態では、対象は、先天性またはＨＩＶ関連のリポジストロフィー（「脂肪再分布症候群」）関連の糖尿病を有する。一部の実施形態では、対象は神経系障害を有する。一部の実施形態では、対象はインスリン抵抗性を有する。一部の実施形態では、対象は無自覚性低血糖を有する。一部の実施形態では、対象は拘束性肺疾患を有する。一部の実施形態では、対象は、胃腸障害、例えば、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、機能性消化不良、または胃腸障害に関連する疼痛、例えばＩＢＳおよび機能性消化不良に関連する疼痛を有する。一部の実施形態では、対象は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、例えばクローン病および潰瘍性大腸炎、またはＩＢＤに関連する疼痛を有する。一部の実施形態では、対象は、高血糖症、例えば手術（例えば、主要な外科的措置、例えば冠状動脈バイパス手術）に関連する高血糖症、例えば糖尿病、例えばＩＩ型糖尿病、またはメタボリックシンドロームを有する対象の手術に関連する高血糖症を有する。一部の実施形態では、対象は冠状動脈心不全（ＣＨＦ）を有する。一部の実施形態では、対象はβ細胞機能障害に関連する障害、β細胞の欠損に関連する障害、またはβ細胞の不十分な数に関連する障害を有する。
【０１３０】
一部の実施形態では、対象は肥満である。一部の実施形態では、対象は、肥満であるが、糖尿病でも前糖尿病でもない；肥満であり、糖尿病または前糖尿病である；肥満であるが、メタボリックシンドロームを患っていない；肥満であり、メタボリックシンドロームを患っている；過体重であるが、糖尿病でも前糖尿病でもない；過体重であり、糖尿病または前糖尿病である；過体重であるが、メタボリックシンドロームを患っていない；過体重であり、メタボリックシンドロームを患っている；メタボリックシンドロームを患っているが、糖尿病でも前糖尿病でもない（メタボリックシンドロームの定義に依存する）；メタボリックシンドロームを患っているが、肥満でも過体重でもない。
【０１３１】
一部の実施形態では、対象は以下の特性の１つまたは複数を有する：（１）糖尿病または前糖尿病；（２）過体重または肥満；および（３）メタボリックシンドローム。
【０１３２】
一部の実施形態では、対象は抗糖尿病薬に未経験である。一部の実施形態では、対象は他の抗糖尿病薬に未経験であるか、経口抗糖尿病薬（ＯＡＤ）に未経験である。他の実施形態では、対象は、１つまたは複数の他の抗糖尿病薬、例えばＯＡＤによってそれ以前に治療されている。他の実施形態では、対象は、メトホルミン、スルホニル尿素、チアゾリジンジオンまたはそれらの組合せによってそれ以前に治療されている。一部の実施形態では、対象は、ＯＡＤによる活性治療計画によって治療中、すなわち、その治療下にある。一実施形態では、対象は、インスリン分泌性ペプチド結合体の投与の前１週間、２日または１日以内に、ＯＡＤ、例えばメトホルミンを投与されている。具体的な実施形態において、対象は、少なくとも３カ月の間、毎日≧１０００ｍｇメトホルミンの安定用量を投与されている。例示的なＯＡＤを、下に提供する。
【０１３３】
特定の実施形態では、対象は、メトホルミンによる活性治療計画によって現在治療中、すなわち、その治療下にある。一実施形態では、対象は、インスリン分泌性ペプチド結合体の投与の前１週間、２日または１日以内に、メトホルミンを投与されている。特定の実施形態において、対象は、少なくとも３カ月の間、毎日≧１０００ｍｇメトホルミンの安定用量を投与されている。
【０１３４】
特定の実施形態では、本明細書の製剤は、単独療法として投与することができる。言い換えると、本明細書の製剤は、本明細書で提供される１つまたは複数の状態の治療のための活性剤の、単独投与として提供され得る。
【０１３５】
５．３．２  抗糖尿病薬による併用療法
本明細書で提供される方法および製剤では、インスリン分泌性ペプチド結合体は、糖尿病、肥満、またはインスリン分泌性ペプチド、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体で治療できる障害の治療または予防において、１つまたは複数の第二の治療薬と一緒に、または組み合わせて用いることができる。一部の実施形態では、これらの剤の組合せは、そのような疾患または障害のために、いずれかの単一の治療単独でよりも有効な治療をもたらすことができる。
【０１３６】
本明細書で提供される製剤は、当技術分野の医師が適すると考える任意の手段によって、第二の治療薬と組み合わせることができる。例えば、製剤を本明細書で記載のように投与することができ、第二の治療薬は、任意の手段によって、また、その剤に適する任意のスケジュールおよび用量によって投与することができる。投与方法、用量および投薬スケジュールは、当業者の技術の範囲内であり、第二の活性剤についての知識に基づいて決定することができる。特定の実施形態では、用量および投薬スケジュールは、当業者が併用療法のために調節することができる。製剤および第二の剤は、一緒に投与する必要はない。しかし、特定の実施形態では、適する場合、必要に応じて製剤および第二の剤を一緒に投与することができる。特定の実施形態では、製剤は、必要に応じて、インスリン分泌性ペプチドに加えて第二の剤を含むことができる。
【０１３７】
本明細書で提供される方法において、１つまたは複数の第二の治療成分または剤を、インスリン分泌性ペプチド結合体と一緒に用いることができる。第二の治療薬には、経口抗糖尿病薬（ＯＡＤ）または肥満防止薬を含めた、抗糖尿病薬が含まれる。
【０１３８】
５．３．２．１  ＯＡＤ
本明細書で提供される併用療法で使用される例示的なＯＡＤには、それらに限定されないが、スルホニル尿素、例えばトルブタミド（Ｏｒｉｎａｓｅ）、アセトヘキサミド（Ｄｙｍｅｌｏｒ）、トラザミド（Ｔｏｌｉｎａｓｅ）、クロルプロパミド（Ｄｉａｂｉｎｅｓｅ）、グリピジド（Ｇｌｕｃｏｔｒｏｌ）、グリブリド（Ｄｉａｂｅｔａ、Ｍｉｃｒｏｎａｓｅ、Ｇｌｙｎａｓｅ）、グリベンクラミド、グリメピリド（Ａｍａｒｙｌ）またはグリクラジド（Ｄｉａｍｉｃｒｏｎ）；ビグアナイド、例えばメトホルミン、フェンホルミンまたはブホルミン；グリニド、例えばＳｔａｒｌｉｘ（ナテグリニド）、Ｐｒａｎｄｉｎ（レパグリニド）、Ｇｌｕｆａｓｔ（ミチグリニド）；メグリチニド、例えばレパグリニド（Ｐｒａｎｄｉｎ）またはナテグリニド（Ｓｔａｒｌｉｘ）；チアゾリジンジオン、例えばロジグリタゾン（Ａｖａｎｄｉａ）、ピオグリタゾン（Ａｃｔｏｓ）またはトログリタゾン（Ｒｅｚｕｌｉｎ）；あるいはα−グルコシダーゼ阻害剤、例えばミグリトール（Ｇｌｙｓｅｔ）またはアカルボース（Ｐｒｅｃｏｓｅ／Ｇｌｕｃｏｂａｙ）が含まれる。
【０１３９】
５．３．２．２  ＤＰＰ  ＩＶ阻害剤
一部の実施形態では、本明細書で提供される併用療法で用いられる第二の治療薬は、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤（ＤＰＰ  ＩＶ阻害剤）である。ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＤＰＰ−ＩＶの酵素活性の阻害を示す任意の化合物であり得る。ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤の例は、例えば、（ｉ）Ｄ．  Ｊ．  Ｄｒｕｃｋｅｒ、２００３年、Ｅｘｐ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｄｒｕｇｓ、１２巻：８７〜１００頁；（ｉｉ）Ｋ．  Ａｕｇｕｓｔｙｎｓら、２００３年、Ｅｘｐ．  Ｏｐｉｎ．  Ｔｈｅｒ．  Ｐａｔｅｎｔｓ、１３巻：４９９〜５１０頁；（ｉｉｉ）Ｃ．  Ｆ．  Ｄｅａｃｏｎら、２００４年、Ｅｘｐ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．  Ｄｒｕｇｓ、１３巻：１０９１〜１１０２頁；（ｉｖ）Ａ．  Ｅ．  Ｗｅｂｅｒ、２００４年、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．、４７巻：４１３５〜４１４１頁；（ｖ）Ｊ．  Ｊ．  Ｈｏｌｓｔ、２００４年、Ｅｘｐ．  Ｏｐｉｎ．  Ｅｍｅｒｇ．  Ｄｒｕｇｓ、９巻：１５５〜１６６頁；（ｖｉ）Ａｕｇｕｓｔｙｎｓら、２００５年、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐａｔｅｎｔｓ、１５巻（１０号）：１３８７〜１４０７頁；（ｖｉｉ）Ｓｅｂｏｋｏｖａら、２００７年、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７巻：５４７〜５５５頁に記載され、それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１４０】
ＤＰＰ  ＩＶ阻害剤が経口的に利用可能であるか、経口的に投与される場合、ＤＰＰ  ＩＶ阻害剤は、本明細書に記載されるようにＯＡＤである。言い換えると、ＯＡＤには、本明細書で記載のＤＰＰ  ＩＶ阻害剤のいくつかまたは全てが含まれてもよい。
【０１４１】
ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤の具体例には、それらに限定されないが、ジペプチド誘導体またはジペプチド模倣薬、例えばアラニン−ピロリジド、イソロイシン−チアゾリジドおよび偽基質Ｎ−バリルプロリル、Ｏ−ベンゾイルヒドロキシルアミンが含まれ、例えば、米国特許第７，２５３，１７２号、同第７，２４１，７５６号、同第７，２３８，７２４号、同第７，２３８，７２０号、同第７，２３６，６８３号、同第７，２３５，５３８号、同第７，２３０，０７４号、同第７，２３０，００２号、同第７，２２９，９６９号、同第７，２２３，５７３号、同第７，２１７，７１１号、同第７，２０８，４９８号、同第７，２０５，４０９号、同第７，２０５，３２３号、同第７，１９６，２０１号、同第７，１９２，９５２号、同第７，１８９，７２８号、同第７，１８６，８４６号、同第７，１８６，７３１号、同第７，１８３，２９０号、同第７，１８３，２８０号、同第７，１７９，８０９号、同第７，１６９，９２６号、同第７，１６９，８０６号、同第７，１６６，５７９号、同第７，１５７，４９０号、同第７，１４４，８８６号、同第７，１３２，４４３号、同第７，１２５，８７３号、同第７，１２５，８６３号、同第７，１２２，５５５号、同第７，１１５，６５０号、同第７，１０９，１９２号、同第７，１０１，８７１号、同第７，０９８，２３９号、同第７，０８４，１２０号、同第７，０７８，３９７号、同第７，０７８，２８１号、同第７，０７４，７９４号、同第７，０６０，７２２号、同第７，０５３，０５５号、同第７，０３４，０３９号、同第７，０２６，３１６号、同第６，９１１，４６７号、同第６，８９０，８９８号、同第６，８９０，９０５号、同第６，８６９，９４７号、同第６，８６７，２０５号、同第６，８６１，４４０号、同第６，８４４，３１６号、同第６，８４９，６２２号、同第６，８２５，１６９号、同第６，８１２，３５０号、同第６，８０３，３５７号、同第６，８００，６５０号、同第６，７２７，２６１号、同第６，７１６，８４３号、同第６，７１０，０４０号、同第６，７０６，７４２号、同第６，６９９，８７１号、同第６，６４５，９９５号、同第６，６１７，３４０号、同第６，６９９，８７１号、同第６，５７３，２８７号、同第６，４３２，９６９号、同第６，３９５，７６７号、同第６，３８０，３９８号、同第６，３１９，８９３号、同第６，３０３，６６１号、同第６，２４２，４２２号、同第６，２０１，１３２号、同第６，１７２，０８１号、同第６，１６６，０６３号、同第６，１２４，３０５号、同第６，１１０，９４９号、同第６，１０７，３１７号、同第６，１００，２３４号、同第６，０４０，１４５号、同第６，０１１，１５５号、同第５，９３９，５６０号、同第５，４６２，９２８号に記載され、それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１４２】
ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤のさらなる例は、米国特許出願公開第２００７０１７２５２５号、同第２００７０１８５０６１号、同第２００７０１６７５０号、同第２００７０１４９４５１号、同第２００７０１４２３８３号、同第２００７０１４２４３６号、同第２００７０１２３５７９号、同第２００７０１１２０５９号、同第２００７０１０５８９０号、同第２００７００９８７８１号、同第２００７００９３４９２号、同第２００７００８２９３２号、同第２００７００８２９０８号、同第２００７００７２８１０号、同第２００７００７２８０４号、同第２００７００７２８０３号、同第２００７００６０５４７号、同第２００７００４９６１９号、同第２００７００４９５９６号、同第２００７００２１４７７号、同第２００６０２９３２９７号、同第２００６０２８１７９６号、同第２００６０２８１７２７号、同第２００６０２７６４８７号、同第２００６０２７６４１０号、同第２００６０２７０７２２号、同第２００６０２７０７０１号、同第２００６０２７０６７９号、同第２００６０２６４４５７号、同第２００６０２６４４３３号、同第２００６０２６４４０１号、同第２００６０２６４４００号、同第２００６０２５８６４６号、同第２００６０２５８６２１号、同第２００６０２４７２２６号、同第２００６０２２９２８６号、同第２００６０２１７４２８号、同第２００６０２１１６８２号、同第２００６０２０５７１１号、同第２００６０２０５６７５号、同第２００６０１７３０５６号、同第２００６０１５４８６６号、同第２００６０１４２５８５号、同第２００６０１３５７６７号、同第２００６０１３５５６１号、同第２００６０１３５５１２号、同第２００６０１１６３９３号、同第２００６０１１１３３６号、同第２００６０１１１４２８号、同第２００６００７９５４１号、同第２００６００７４０５８号、同第２００６００７４０８７号、同第２００６００６９１１６号、同第２００６００５８３２３号、同第２００６００５２３８２号、同第２００６００４６９７８号、同第２００６００４０９６３号、同第２００６００３９９７４号、同第２００６００１４９５３号、同第２００６００１４７６４号、同第２００６０００４０７４号、同第２００５００５９７２４号、同第２００５００５９７１６号、同第２００５００４３２９２号、同第２００５００３８０２０号、同第２００５００３２８０４号、同第２００５０２７２７６５号、同第２００５０２７２６５２号、同第２００５０２６１２７１号、同第２００５０２６０７３２号、同第２００５０２６０７１２号、同第２００５０２４５５３８号、同第２００５０２３４２３５号、同第２００５０２３３９７８号、同第２００５０２３４１０８号、同第２００５０２２２２４２号、同第２００５０２２２２２２号、同第２００５０２２２１４０号、同第２００５０２１５７８４号、同第２００５０２１５６０３号、同第２００５０２０９２４９号、同第２００５０２０９１５９号、同第２００５０２０３０９５号、同第２００５０２０３０３１号、同第２００５０２０３０２７号、同第２００５０１９２３２４号、同第２００５０１８７２２７号、同第２００５０１７６７７１号、同第２００５０１７１０９３号、同第２００５０１６４９８９号、同第２００５０１４３３７７号、同第２００５０１４３４０５号、同第２００５０１３７２２４号、同第２００５０１３１０１９号、同第２００５０１３０９８５号、同第２００５０１３０９８１号、同第２００５０１１３３１０号、同第２００５０１０７３９０号、同第２００５０１０７３０９号、同第２００５００９６３４８号、同第２００５００９０５３９号、同第２００５００７５３３０号、同第２００５００７０７１９号、同第２００５００７０７０６号、同第２００５００７０５３５号、同第２００５００７０５３１号、同第２００５００７０５３０号、同第２００５００６５１４８号、同第２００５００６５１４５号、同第２００５００６５１４４号、同第２００５００４３２９９号、同第２００５００４３２９２号、同第２００５００３２８０４号、同第２００５００２６９２１号、同第２００５０００４２０５号、同第２００５０００４１１７号、同第２００５００３２８０４号、同第２００４０２５９９０３号、同第２００４０２５９９０２号、同第２００４０２５９８８３号、同第２００４０２５９８７０号、同第２００４０２５９８４３号、同第２００４０２５４２２６号、同第２００５０２５４１６７号、同第２００４０２４２８９８号、同第２００４０２４２６３６号、同第２００４０２４２５６８号、同第２００４０２４２５６６号、同第２００４０２３６１０２号、同第２００４０２３５７５２号、同第２００４０２２９９２６号、同第２００４０２２９８４８号、同第２００４０２２９８２０号、同第２００４０２０９８９１号、同第２００４０１８６１５３号、同第２００４０１８０９２５号、同第２００４０１７６４２８号、同第２００４０１７６４０６号、同第２００４０１７１５５５号、同第２００４０１７１８４８号、同第２００４０１６７３４１号、同第２００４０１６７１３３号、同第２００４０１５２７４５号、同第２００４０１４７４３４号、同第２００４０１３８２１５号、同第２００４０１３８２１４号、同第２００４０１２１９６４号、同第２００４０１１６３２８号、同第２００４０１１０８１７号、同第２００４０１０６６５６号、同第２００４０１０６８０２号、同第２００４０１０６６５５号、同第２００４００９７５１０号、同第２００４００８７５８７号、同第２００４００８２５７０号、同第２００４００８２４９７号、同第２００４００７７６４５号、同第２００４００７２８９２号、同第２００４００６３９３５号、同第２００４００３４０１４号、同第２００３０２３２７８８号、同第２００３０２２５１０２号、同第２００３０２１６４５０号、同第２００３０２１６３８２号、同第２００３０１９９５２８号、同第２００３０１９５１８８号、同第２００３０１６６５７８号、同第２００３０１６２８２０号、同第２００３０１４９０７１号、同第２００３０１３４８０２号、同第２００３０１３０２８１号、同第２００３０１３０１９９号、同第２００３０１２５３０４号、同第２００３０１１９７５０号、同第２００３０１１９７３８号、同第２００３０１０５０７７号、同第２００３０１００５６３号、同第２００３００９２６３０号、同第２００３００８７９５０号、同第２００３００７８２４７号、同第２００３００６０４９４号、同第２００２０１９８２４２号、同第２００２０１９８２０５号、同第２００２０１８３３６７号、同第２００２０１６５１６４号、同第２００２０１６１００１号、同第２００２０１１０５６０号、同第２００２０１０３３８４号、同第２００３００９６８５７号、同第２００２００７１８３８号、同第２００２００６５２３９号、同第２００２００６１８３９号、同第２００２００４９１６４号、同第２００２００１９４１１号、同第２００２０００６８９９号、同第２００１００２０００６号に見ることができ、それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１４３】
ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤のさらに他の例は、国際公開第０７／０５４５７７号、同第０７／０５３８６５号、同第０５／１１６０２９号、同第０５／０８７２３５号、同第０５／０８２３４８号、同第０５／０８２８４９号、同第０５／０７９７９５号、同第０５／０７５４２６号、同第０５／０７２５３０号、同第０５／０６３７５０号、同第０５／０５８８４９号、同第０５／０４９０２２号、同第０５／０４７２９７号、同第０５／０４４１９５号、同第０５／０４２４８８号、同第０５／０４２００３号、同第０５／０４００９５号、同第０５／０３７８２８号、同第０５／０３７７７９号、同第０５／０３４９４０号、同第０５／０３３０９９号、同第０５／０３２５９０号、同第０５／０３０７５１号、同第０５／０３０１２７号、同第０５／０２６１４８号、同第０５／０２５５５４号、同第０５／０２３７６２号、同第０５／０２０９２０号、同第０５／１９１６８号、同第０５／１２３１２号、同第０５／１２３０８号、同第０５／１２２４９号、同第０５／１１５８１号、同第０５／０９９５６号、同第０５／０３１３５号、同第０５／００８４８号、同第０５／００８４６号、同第０４／１１２７０１号、同第０４／１１１０５１号、同第０４／１１１０４１号、同第０４／１１０４３６号、同第０４／１１０３７５号、同第０４／１０８７３０号、同第０４／１０４２１６号、同第０４／１０４２１５号、同第０４／１０３９９３号、同第０４／１０３２７６号、同第０４／９９１３４号、同第０４／９６８０６号、同第０４／９２１２８号、同第０４／８７６５０号、同第０４／８７０５３号、同第０４／８５６６１号、同第０４／８５３７８号、同第０４／７６４３４号、同第０４／７６４３３号、同第０４／７１４５４号、同第０４／６９１６２号、同第０４／６７５０９号、同第０４／６４７７８号、同第０４／５８２６６号、同第０４／５２３６２号、同第０４／５２８５０号、同第０４／５００２２号、同第０４／５０６５８号、同第０４／４８３７９号、同第０４／４６１０６号、同第０４／４３９４０号、同第０４／４１８２０号、同第０４／４１７９５号、同第０４／３７１６９号、同第０４／３７１８１号、同第０４／３３４５５号、同第０４／３２８３６号、同第０４／２０４０７号、同第０４／１８４６９号、同第０４／１８４６８号、同第０４／１８４６７号、同第０４／１４８６０号、同第０４／０９５４４号、同第０４／０７４６８号、同第０４／０７４４６号、同第０４／０４６６１号、同第０４／００３２７号、同第０３／１０６４５６号、同第０３／１０４２２９号、同第０３／１０１９５８号、同第０３／１０１４４８号、同第０３／９９２７９号、同第０３／９５４２５号、同第０３／８４９４０号、同第０３／８２８１７号、同第０３／８０６３３号、同第０３／７４５００号、同第０３／７２５５６号、同第０３／７２５２８号、同第０３／６８７５７号、同第０３／６８７４８号、同第０３／５７６６６号、同第０３／５７１４４号、同第０３／５５８８１号、同第０３／４５２２８号、同第０３／４０１７４号、同第０３／３８１２３号、同第０３／３７３２７号、同第０３／３５０６７号、同第０３／３５０５７号、同第０３／２４９６５号、同第０３／２４９４２号、同第０３／２２８７１号、同第０３／１５７７５号、同第０３／０４４９８号、同第０３／０４４９６号、同第０３／０２５３０号、同第０３／０２５９６号、同第０３／０２５９５号、同第０３／０２５９３号、同第０３／０２５５３号、同第０３／０２５３１号、同第０３／００１８１号、同第０３／００１８０号、同第０３／００２５０号、同第０２／８３１０９号、同第０２／８３１２８号、同第０２／７６４５０号、同第０２／６８４２０号、同第０２／６２７６４号、同第０２／５５０８８号、同第０２／５１８３６号、同第０２／３８５４１号、同第０２／３４９００号、同第０２／３０８９１号、同第０２／３０８９０号、同第０２／１４２７１号、同第０２／０２５６０号、同第０１／９７８０８号、同第０１／９６２９５号、同第０１／８１３３７号、同第０１／８１３０４号、同第０１／６８６０３号、同第０１／５５１０５号、同第０１／５２８２５号、同第０１／３４５９４号、同第００／７１１３５号、同第００／６９８６８号、同第００／５６２９７号、同第００／５６２９６号、同第００／３４２４１号、同第００／２３４２１号、同第００／１０５４９号、同第９９／６７２７８号、同第９９／６２９１４号、同第９９／６１４３１号、同第９９／５６７５３号、同第９９／２５７１９号、同第９９／１６８６４号、同第９８／５００６６号、同第９８／５００４６号、同第９８／１９９９８号、同第９８／１８７６３号、同第９７／４０８３２号、同第９５／２９６９１号、同第９５／１５３０９号、同第９３／１０１２７号、同第９３／０８２５９号、同第９１／１６３３９号、ＥＰ１５１７９０７、ＥＰ１５１３８０８、ＥＰ１４９２７７７、ＥＰ１４９０３３５、ＥＰ１４８９０８８、ＥＰ１４８０９６１、ＥＰ１４７６４３５、ＥＰ１４７６４２９、ＥＰ１４６９８７３、ＥＰ１４６５８９１、ＥＰ１４６３７２７、ＥＰ１４６１３３７、ＥＰ１４５０７９４、ＥＰ１４４６１１６、ＥＰ１４４２０４９、ＥＰ１４４１７１９、ＥＰ１４２６３６６、ＥＰ１４１２３５７、ＥＰ１４０６８７３、ＥＰ１４０６８７２、ＥＰ１４０６６２２、ＥＰ１４０４６７５、ＥＰ１３９９４２０、ＥＰ１３９９４７１、ＥＰ１３９９４７０、ＥＰ１３９９４６９、ＥＰ１３９９４３３、ＥＰ１３９９１５４、ＥＰ１３８５５０８、ＥＰ１３７７２８８、ＥＰ１３５５８８６、ＥＰ１３５４８８２、ＥＰ１３３８５９２、ＥＰ１３３３０２５、ＥＰ１３０４３２７、ＥＰ１３０１１８７、ＥＰ１２９６９７４、ＥＰ１２８０７９７、ＥＰ１２８２６００、ＥＰ１２６１５８６、ＥＰ１２５８４７６、ＥＰ１２５４１１３、ＥＰ１２４８６０４、ＥＰ１２４５５６８、ＥＰ１２１５２０７、ＥＰ１２２８０６１、ＥＰ１１３７６３５、ＥＰ１１２３２７２、ＥＰ１１０４２９３、ＥＰ１０８２３１４、ＥＰ１０５０５４０、ＥＰ１０４３３２８、ＥＰ０９９５４４０、ＥＰ０９８０２４９、ＥＰ０９７５３５９、ＥＰ０７３１７８９、ＥＰ０６４１３４７、ＥＰ０６１０３１７、ＥＰ０５２８８５８、ＣＡ２４６６８７０、ＣＡ２４３３０９０、ＣＡ２３３９５３７、ＣＡ２２８９１２５、ＣＡ２２８９１２４、ＣＡ２１２３１２８、ＤＤ２９６０７５、ＤＥ１９８３４５９１、ＤＥ１９８２８１１３、ＤＥ１９８２３８３１、ＤＥ１９６１６４８６、ＤＥ１０３３３９３５、ＤＥ１０３２７４３９、ＤＥ１０２５６２６４、ＤＥ１０２５１９２７、ＤＥ１０２３８４７７、ＤＥ１０２３８４７０、ＤＥ１０２３８２４３、ＤＥ１０１４３８４０、ＦＲ２８２４８２５、ＦＲ２８２２８２６、ＪＰ２００５５０７２６１；ＪＰ２００５５０５５３１、ＪＰ２００５５０２６２４、ＪＰ２００５５００３２１、ＪＰ２００５５００３０８、ＪＰ２００５０２３０３８、ＪＰ２００４５３６１１５、ＪＰ２００４５３５４４５、ＪＰ２００４５３５４３３、ＪＰ２００４５３４８３６、ＪＰ２００４５３４８１５、ＪＰ２００４５３２２２０、ＪＰ２００４５３０７２９、ＪＰ２００４５２５９２９、ＪＰ２００４５２５１７９、ＪＰ２００４５２２７８６、ＪＰ２００４５２１１４９、ＪＰ２００４５０３５３１、ＪＰ２００４３１５４９６、ＪＰ２００４２４４４１２、ＪＰ２００４０４３４２９、ＪＰ２００４０３５５７４、ＪＰ２００４０２６８２０、ＪＰ２００４０２６６７８、ＪＰ２００４００２３６８、ＪＰ２００４００２３６７、ＪＰ２００３５３５８９８、ＪＰ２００３５３５０３４、ＪＰ２００３５３１２０４、ＪＰ２００３５３１１９１、ＪＰ２００３５３１１１８、ＪＰ２００３５２４５９１、ＪＰ２００３５２０８４９、ＪＰ２００３３２７５３２、ＪＰ２００３３００９７７、ＪＰ２００３２３８５６６、ＪＰ２００２５３１５４７、ＪＰ２００２５２７５０４、ＪＰ２００２５１７４０１、ＪＰ２００２５１６３１８、ＪＰ２００２３６３１５７、ＪＰ２００２３５６４７２、ＪＰ２００２３５６４７１、ＪＰ２００２２６５４３９、ＪＰ２００１５１０４４２、ＪＰ２０００５１１５５９、ＪＰ２０００３２７６８９、ＪＰ２０００１９１６１６、ＪＰ１９９８１８２６１３、ＪＰ１９９８０８１６６６、ＪＰ１９９７５０９９２１、ＪＰ１９９５５０１０７８、ＪＰ１９９３５０８６２４に見ることができ、それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１４４】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、１０００、７００または５００ダルトン未満の分子量を有する小分子、例えば、核酸、またはタンパク質もしくはペプチド以外の有機分子である。
【０１４５】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、β−アミノ酸誘導体、例えば３（Ｒ）−アミノ−１−［３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ−］ピラジン−７−イル］−４−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−１−オン（ＭＫ−０４３１；Ｊａｎｕｖｉａ）、またはその医薬用の塩、水和物または多形であり、それらは、米国特許第６，６９９，８７１号、ＥＰ１４１２３５７、ＷＯ０３／０４４９８およびＵＳ２００３１００５６３に詳細に記載され、それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、シタグリプチンである。シタグリプチンは、経口活性でありかつ選択的なＤＰＰ−ＩＶ阻害剤として記載され、米国および欧州において、単独で、またはメトホルミンまたはスルホニル尿素またはＰＰＡＲγアゴニストと併用して、糖尿病の治療のために最近承認された。それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第６，６９９，８７１号、Ｋｉｍら、２００５年、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．４８巻：１４１〜１５１頁を参照。
【０１４６】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、シアノピロリジド、例えば、（１−［［３−ヒドロキシ−１−アダマンチル）アミノ］アセチル］−２−シアノ−（Ｓ）−ピロリジン（ＬＡＦ２３７またはビルダグリプチン）、１−［２−［５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］エチルアミノ］アセチル−２−シアノ−（Ｓ）−ピロリジン（ＮＶＰ−ＤＰＰ７２８）、または（１Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）−２−［２（Ｓ）−アミノ−２−（３−ヒドロキシアダマンタン−１−イル）アセチル］−２−アザビシクロ［−３．１．０］ヘキサン−３−カルボニトリル（サキサグリプチンまたはＢＭＳ−４７７１８）であり、それらは、例えば、米国特許第６，６１７，３４０号、６，４３２，９６９号、６，３９５，７６７号、６，１６６，０６３号、６，１２４，３０５号、６，１１０，９４９号、６，０１１，１５５号、６，１０７，３１７号、ＷＯ９８／１９９９８およびＪＰ２０００５１１５５９、ＷＯ００／３４２４１、ＥＰ１１３７６３５およびＪＰ２００２５３１５４７で詳細に開示され、それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１４７】
一部の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ビルダグリプチンである。一部の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＮＶＰ−ＤＰＰ７２８である。ビルダグリプチンおよびＮＶＰ−ＤＰＰ７２８は、経口活性で選択的なＤＰＰ−ＩＶ阻害剤として記載されている。それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｖｉｌｌｈａｕｅｒら、２００２年、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ、４５巻：２３６２〜２３６５頁、Ｖｉｌｌｈａｕｅｒら、２００３年、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ、４６巻：２７７４〜２７８９頁を参照。ビルダグリプチン（ＬＡＦ  ２３７）は、現在米国において第ＩＩＩ相臨床試験中である。それは、メトホルミンまたはスルホニル尿素またはチアゾリジンジオンと組み合わせて使用することが、欧州で承認されている。
【０１４８】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、サキサグリプチンである。サキサグリプチンは、現在ＩＩ型糖尿病の治療のために、米国および欧州において第ＩＩＩ相臨床試験中である。その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ａｕｇｅｒｉら、２００５年、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．、４８巻（５号）：５０２５〜５０３７頁を参照。
【０１４９】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、３−（Ｌ−イソロイシル）チアゾリジン（イソロイシン−チアゾリジドまたはＰＳＮ−９３０１）である。イソロイシン−チアゾリジドは、ＪＰ２００１５１０４４２、ＷＯ９７／４０８３２、米国特許第６，３０３，６６１号およびＤＥ１９６１６４８６で見ることができ、それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。イソロイシン−チアゾリジドは、経口活性で選択的なＤＰＰ−ＩＶ阻害剤として記載されている。それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｐｅｄｅｒｓｏｎら、１９９８年、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、４７巻：１２５３〜１２５８頁；Ｅｐｓｔｅｉｎら、２００７年、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｏｎ．  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．  Ｄｒｕｇｓ．、８巻（４号）：３３１〜３３７頁を参照。
【０１５０】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、米国特許第７，１６９，９２６号および７，０３４，０３９号に記載されているような、ＳＹＲ−３２２（アログリプチン）またはＳＹＲ−４７２であり、それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１５１】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｄｅａｃｏｎら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ（１９９８）４７巻：７６４７６９頁に開示されているようなバリン−ピロリジドである。
【０１５２】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、［１−［２（Ｓ）−アミノ−３−メチルブチリル］ピロリジン−２（Ｒ）−イル］ボロン酸（ＰＴ−１００）である。
【０１５３】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＮｏｒｄｈｏｆｆら、２００６年、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１６巻：１７４４〜１７４８頁に記載されるような、β−フェネチルアミンである。
【０１５４】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる出願番号ＷＯ０６／０３４４３５に記載されるような、ＰＴ−６３０（ＤＢ−１６０）である。
【０１５５】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＰｅｉら、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ、２００６年１１月２日；４９巻（２２号）：６４３９〜４２頁に記載されるような、ＡＢＴ−３４１である。
【０１５６】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＭａｄａｒら、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．、２００６年１０月１９日；４９巻（２１号）：６４１６〜２０頁に記載のような、ＡＢＴ−２７９である。
【０１５７】
特定の実施形態では、ＤＤＰ−ＩＶ阻害剤は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる出願番号ＷＯ０４／１８４６８に記載のような、ＢＩ−１３５６／Ｏｎｄｅｒｏである。
【０１５８】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＳＹＲ−６１９である。
【０１５９】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＧＳＫ−８２３０９３である。
【０１６０】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＰＳＮ  ９３０１である。
【０１６１】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＴＡ−６６６６である。
【０１６２】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＣＲ−１４０２３である。
【０１６３】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＣＲ−１４０２５である。
【０１６４】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＣＲ−１４２４０である。
【０１６５】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＣＲ−１３６５１である。
【０１６６】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＮＮＣ−７２−２１３８である。
【０１６７】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＮＮ−７２０１である。
【０１６８】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＰＨＸ−１１４９である。
【０１６９】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＰＨＸ−１００４である。
【０１７０】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＳＮＴ−１８９３７９である。
【０１７１】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＧＲＣ−８０８７である。
【０１７２】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＳＫ−０４０３である。
【０１７３】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＧＳＫ−８２５９６４である。
【０１７４】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＴＳ−０２１である。
【０１７５】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＧＲＣ−８２００である。
【０１７６】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＧＲＣ−８１１６である。
【０１７７】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＦＥ１０７５４２である。
【０１７８】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＭＰ−５１３である。
【０１７９】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＢＩ３５６である。
【０１８０】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＡＬＳ  ２−０４２６である。
【０１８１】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＡＢＴ２７９である。
【０１８２】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＴＳ−２０１である。
【０１８３】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＫＲＰ−１０４である。
【０１８４】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、Ｒ１５７９である。
【０１８５】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＬＹ２４６３６６５である。
【０１８６】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＡＲＩ−２２４３である。
【０１８７】
特定の実施形態では、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤は、ＳＳＲ−１６２３６９である。
【０１８８】
５．３．２．３  他の第二の治療薬
一部の実施形態では、第二の治療薬は、インスリン受容体アゴニストである。一部の実施形態では、インスリン受容体アゴニストは、ヒトインスリンまたはインスリン類似体；基礎インスリン、例えばＬａｎｔｕｓ（インスリングラルギン）、Ｌｅｖｅｍｉｒ（インスリンデテミール）、ＮＮ５４０１、ＮＮ−３４４、Ａｌｂｕｌｉｎ−Ｇ；または即効性のインスリン、例えばＮｏｖｏｌｏｇ（インスリンアスパルト）、Ｈｕｍａｌｏｇ（インスリンリスプロ）、Ａｐｉｄｒａ（インスリングルリシン）である。
【０１８９】
一部の実施形態では、第二の治療薬は、Ｓｙｍｌｉｎ（プラムリンチド）などのアミリン受容体アゴニストである。
【０１９０】
一部の実施形態では、第二の治療薬は、グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド／胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）類似体；ＢＡＹ−２７−９９５５、Ｃｐｄ  ＧまたはＩＳＩＳ−３２５，５６８などのグルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）アンタゴニスト；ＩＳＩＳ−３７７，１３１などの糖質コルチコイド受容体（ＧＣＣＲ）アンタゴニスト；クロミウムおよびバナジウム塩または誘導体；ＢＶＴ−３４９８などの１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ（１１β−ＨＳＤ１および１１β−ＨＳＤ２）デヒドロゲナーゼおよびレダクターゼ阻害剤；タンパク質チロシンホスファターゼ１ｂ（ＰＴＰ  １ｂ）阻害剤；グルコース輸送体（ＧＬＵＴ）およびアイソフォーム（ＧＬＵＴ１、ＧＬＵＴ４）阻害剤；ナトリウム−グルコース共輸送体およびアイソフォーム（ＳＧＬＴ１、ＳＧＬＴ２）阻害剤、例えばダパグリフォジン、セルジルフォジンおよびＡＶＥ−２２６８；サーチュイン（ＳＩＲＴ）およびアイソフォームアゴニスト（ＳＩＲＴ１）、例えばレズベラトロル、ＳＲＴ−５０１；ＰＰＡＲγ／δアゴニスト；ＰＰＡＲα／γアゴニスト、例えばテサグリタサール、ムラグリタザール、ナベグリタザール；フルクトース−１，６−ビスホスファターゼ（ＦＢＰａｓｅ）阻害剤、例えばＣＳ−９１７、ＭＢ−７８０３；グルコース依存性インスリン分泌性受容体（ＧＤＩＲ、Ｇタンパク質結合受容体１１９、ＧＰＲ−１１９）アゴニスト、例えばＡＤＰ−６６８；Ｇタンパク質結合受容体ＧＰＲ−４０、ＧＰＲ−１２０、ＧＰＲ−１０９Ａ（ＨＭ−７４Ａ）アゴニストによるグルコース依存性インスリン分泌；線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）およびアイソフォーム（ＦＧＦ−２１）類似体；ＣＸＳ−２０３などのプレセニリン結合ロンボイド様タンパク質（ＰＳＡＲＬ）アンタゴニスト；肝臓インスリン感作物質（ＨＩＳＳ）、骨形態形成タンパク−９（ＢＭＰ−９）；オステオカルシン；ビスファチン（ニコチンアミドホスホリボシル転移酵素、Ｎａｍｐｔ）；メタグリダセン、ＭＢＸ−２０４４などの選択的ＰＰＡＲγ調節因子（ＳＰＰＡＲＭ）；ＲＯ−２８−１６７５などのグルコキナーゼ（ＧＫ）活性化剤；ＰＳＮ−３５７などのリン酸グリコーゲン（ＧＰ）阻害剤；島新生遺伝子関連タンパク質（ＩＮＧＡＰ）などのβ細胞成長因子；ＣＤ−３アンタゴニスト、例えばテプリズマブ、ＧＡＤ６５アンタゴニスト、例えばＤｉａｍｙｄ、ＤｉａＰｅｐ２７７、インターロイキン１阻害剤（ＩＬ−１）、例えばＸＯＭＡ−０５２、ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ）阻害剤、寛容原、例えばＮＢＩ−６０２４、ＴＲＸ４である。
【０１９１】
一部の実施形態では、第二の治療薬は、肥満防止薬である。一部の実施形態では、肥満防止薬は、カンナビノイド１受容体（ＣＢ１Ｒ）逆作動薬およびアンタゴニスト、例えばＡｃｏｍｐｌｉａ／Ｚｉｍｕｌｔｉ（リモナバント）、Ｍｅｒｉｄｉａ（シブトラミン）またはＸｅｎｉｃａｌ（オルリスタッド）である。
【０１９２】
一部の実施形態では、第二の治療薬は、胃腸ホルモン類似体である。一部の実施形態では、胃腸ホルモン類似体は、Ｇａｔｔｅｘ（テヅグルチド）などのグルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）類似体；ＰＹＹ（１−３６）、ＰＹＹ（３−３６）などのペプチドＹＹ類似体；膵臓ポリペプチド（ＰＰ）類似体；またはガストリン類似体である。
【０１９３】
５．３．３  治療のための対象の選択
一態様では、本発明は、本明細書で提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、それ以前に抗糖尿病薬で治療された対象を特定することを含む方法を提供する。当技術分野で公知である任意の抗糖尿病薬による過去の治療は、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えば本明細書で記載のインスリン分泌性ペプチド結合体による治療のための対象を特定するための根拠の役目を果たすことができる。例示的な抗糖尿病薬は、上で提供されている。一部の実施形態では、抗糖尿病薬は経口抗糖尿病薬（ＯＡＤ）である。一部の実施形態では、その対象が抗糖尿病薬、例えばＯＡＤによってそれ以前に治療されていないならば、対象は治療のために特定される。他の実施形態では、その対象が抗糖尿病薬、例えばＯＡＤによってそれ以前に治療されているならば、対象は治療のために特定される。対象が抗糖尿病薬、例えばＯＡＤによってそれ以前に治療されているかどうかは、当技術分野の医師の判断によって決定することができる。特定の実施形態では、本発明は、本明細書で提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、他の抗糖尿病薬によって低血糖を経験した対象を特定することを含む方法を提供する。
【０１９４】
特定の実施形態では、本発明は、本明細書で提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、その前に治療を受け、体重増加または望ましくない体重増加を経験した対象を特定することを含む方法を提供する。
【０１９５】
特定の実施形態では、本発明は、本明細書で提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、それ以前に第二の活性剤、例えばＯＡＤ、例えばスルホニル尿素、メトホルミンまたはチアゾリジンジオンによって治療された対象を特定することを含み、抗糖尿病薬の投与が、望ましい治療予後、例えば、当技術分野の医師によって判定される対象のグルコースレベルの許容される制御をもたらしたかどうかを決定することをさらに含むこともできる方法を提供する。許容される血糖制御は、それらに限定されるが、全血中グルコースの減少、血漿血中グルコースの減少、間質性グルコース（ＩＧ）の減少、および／またはＨｂＡ１ｃレベルの減少によって示すことができる。一部の実施形態では、本発明は、本明細書で提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、対象のグルコースレベルの許容される制御をもたらした抗糖尿病薬、例えばＯＡＤをそれ以前に投与された対象を特定することを含む方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、本明細書で提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、対象のグルコースレベルの許容される制御をもたらさなかった抗糖尿病薬、例えばＯＡＤをそれ以前に投与された対象を特定することを含む方法を提供する。前述の方法は、インスリン分泌性ペプチド結合体または製剤を、特定された対象に投与することをさらに含むことができる。
【０１９６】
一部の実施形態では、本発明は、本明細書で提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、インスリン分泌性ペプチド結合体の最初の投与の前に、抗糖尿病薬、例えばＯＡＤを投与された対象を特定することを含む方法を提供する。特定の実施形態では、ＯＡＤはメトホルミンである。一部の実施形態では、本発明は、本明細書で提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、別の抗糖尿病薬、例えばＯＡＤを３０、２５、２０、１５、１０または５日以内前（特定する時間から測定した）に投与された対象を特定することを含み、インスリン分泌性ペプチド結合体または製剤を、他の抗糖尿病薬の投与から３０、２５、２０、１５、１０または５日以内に投与することをさらに含む方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、本明細書で提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、別の抗糖尿病薬、例えばＯＡＤの有効量を投与されていない対象を特定すること、次に、インスリン分泌性ペプチド結合体の最初の投与のとき（例えば、それと同じ時間または同じ日）に他の抗糖尿病薬を投与することを含む方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、本明細書で提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、別の抗糖尿病薬、例えばＯＡＤの有効量を投与されていない対象を特定すること、次に、対象にインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤の最初の投与をすることを含む方法を提供する。
【０１９７】
別の態様では、本発明は、前糖尿病、例えば耐糖能異常（ＩＧＴ）および／または空腹時血糖異常（ＩＦＧ））を有する対象を治療するための方法であって、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えば本明細書で記載のインスリン分泌性ペプチド結合体製剤を、前糖尿病を治療するために有効な量で前記対象に投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体は、アルブミンに結合しているエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２である。一部の実施形態では、本発明は、本明細書で提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、ＩＦＧおよび／またはＩＧＴを有する対象を特定することを含む方法を提供する。一部の実施形態では、本方法は、当技術分野の医師によるＩＦＧの診断を有する対象を特定することを含む。一部の実施形態では、本発明は、本明細書で提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、１００ｍｇ／ｄｌ（５．６ｍｍｏｌ／ｌ）を超えるが１２６ｍｇ／ｄｌ（７．０ｍｍｏｌ／ｌ）未満の空腹時血漿グルコースレベルを有する対象を特定することを含む方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、本明細書で提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、当技術分野の医師によるＩＧＴの診断を有する対象を特定することを含む方法を提供する。一部の実施形態では、本方法は、１４０ｍｇ／ｄｌ（７．８ｍｍｏｌ／ｌ）を超えるが２００ｍｇ／ｄｌ（１１．１ｍｍｏｌ／ｌ）未満の２時間経口ブドウ糖負荷試験レベルを有する対象を特定することを含む。前述の方法は、インスリン分泌性ペプチド結合体または製剤を、特定された対象に投与することをさらに含むことができる。
【０１９８】
別の態様では、本発明は、肥満であるが糖尿病でも前糖尿病でもない対象を治療するための方法であって、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えば本明細書で記載のインスリン分泌性ペプチド結合体製剤を、肥満を治療するために有効な量で前記対象に投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体は、アルブミンに結合しているエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２である。一部の実施形態では、本発明は、本明細書で提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、インスリン分泌性ペプチド結合体による治療のための、肥満であるが糖尿病でも前糖尿病でもない対象を特定することを含み、それ以前に肥満防止薬で治療された対象を特定することを含む方法を提供する。当技術分野で公知である任意の肥満防止薬による過去の治療は、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えば本明細書で記載のインスリン分泌性ペプチド結合体による治療のための対象の選択の根拠の役目を果たすことができる。一部の実施形態では、肥満防止薬はオルリスタットである。一部の実施形態では、肥満防止薬はシブトラミンである。他の実施形態では、肥満防止薬はリラグルチド（ＮＮ２２１１）である。リラグルチド（ＮＮ２２１１）は、構造Ａｒｇ（３４）Ｌｙｓ（２６）−（Ｎ−ε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎ−α−ヘキサデカノイル））−ＧＬＰ−１（７〜３６）−ＮＨ２を有するＧＬＰ−１類似体である。一部の実施形態では、その対象がリラグルチドによってそれ以前に治療されていないならば、対象は治療のために選択される。他の実施形態では、本発明は、本明細書で提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、それ以前にリラグルチドで治療された対象を特定することを含む方法を提供する。前述の方法は、インスリン分泌性ペプチド結合体または製剤を、特定された対象に投与することをさらに含むことができる。
【０１９９】
特定の実施形態では、対象がそれ以前にリラグルチドによって治療されている場合、本発明は、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、当技術分野の医師が判断する望ましい治療予後、例えば対象のベースライン体重の５％超に達する体重減少をもたらしたリラグルチドを事前に投与されている対象を特定することを含む方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、対象のベースライン体重の５％超に達する体重減少をもたらしたリラグルチドを事前に投与されている対象を特定することを含む方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤による治療のための対象を選択する方法であって、対象のベースライン体重の５％超に達する体重減少をもたらさなかったリラグルチドを事前に投与されている対象を特定することを含む方法を提供する。前述の方法は、インスリン分泌性ペプチド結合体または製剤を、特定された対象に投与することをさらに含むことができる。
【０２００】
５．３．４  神経系障害の治療
ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体および製剤は、鎮静剤として用いることができる。本発明の一態様では、中枢または末梢の神経系の活性化の増加をもたらす異常を有する、哺乳動物対象を鎮静する方法が提供される。本方法は、本明細書で記載されるインスリン分泌性ペプチド結合体を含む医薬製剤を、対象で鎮静または抗不安作用を起こすのに十分な量で対象に投与することを含む。医薬製剤は、脳室内、経口、皮下、筋内、または静脈内に投与することができる。そのような方法は、不安、運動障害、攻撃性、精神病、発作、パニック発作、ヒステリーおよび睡眠障害などの神経系の状態を治療または改善するために有用である。
【０２０１】
関連の態様では、本発明は哺乳動物対象の活動性を増加させる方法であって、本明細書で記載されるインスリン分泌性ペプチド結合体を含む医薬製剤を、対象で活性化作用を起こすのに十分な量で対象に投与することを含む方法を包含する。好ましくは、対象は、中枢または末梢の神経系の活性低下をもたらす状態を有する。医薬製剤は、インスリン分泌性ペプチド関連の疾患または状態の治療で用いることができる。特定の実施形態では、医薬製剤は、中枢神経系の覚醒が有利であろういくつかの状態を挙げると、うつ病、統合失調情動障害、睡眠時無呼吸、集中力の劣る注意欠陥症候群、記憶喪失、健忘症およびナルコレプシーの治療または改善で用いることができる。
【０２０２】
ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体および製剤は、うつ病、統合失調情動障害、睡眠時無呼吸、集中力の劣る注意欠陥症候群、記憶喪失、健忘症およびナルコレプシーの治療または改善のために、覚醒を誘導するために用いることもできる。治療の治療効力は、それらの状態を評価するための対象との面談、心理学的／神経学的試験、またはこれらの状態に関連する症状の改善によって監視することができる。例えば、ナルコレプシーの治療は、睡眠発作の発生を監視することによって評価することができる。他の例として、対象の集中力、または記憶能力に対する修飾ＩＴＰの効果を、当業者に周知であるいくつかの診断検査のいずれかを使用して試験することができる。
【０２０３】
５．３．５  手術後治療
ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体および製剤は、手術後治療のために用いることができる。対象は、対象に手術が実施される前の約１〜１６時間の間、対象の手術の間、および対象の手術の後の約５日間以内の間、本明細書で記載される結合インスリン分泌性ペプチドを含む医薬製剤を必要とする。
【０２０４】
医薬製剤は、手術が始まる約１６時間前から約１時間前に投与される。異化作用およびインスリン抵抗性を減少させるために、本発明で用いられる化合物が投与されるべき手術前の時間の長さは、いくつかの要素に依存する。これらの要素は、当技術分野の医師に一般に公知であり、その例には、最も重要なものとして、手術前の予備期間中に、対象が絶食させられるか、またはグルコース注入もしくは飲料、または他の形態の糧を供給されるかどうかが含まれる。他の重要な要素には、対象の性別、体重および年齢、血中グルコース調節不能の程度、血中グルコース調節不能の根本原因、手術に起因する予想される外傷の程度、投与経路および生物学的利用率、体内での持続性、製剤、ならびに投与される化合物の効力が含まれる。本発明で用いられる修飾インスリン分泌性ペプチドの投与を開始する好ましい時間帯は、手術が始まる約１時間前から約１０時間前である。投与を開始する最も好ましい時間帯は、手術が始まる２時間前と８時間前の間である。
【０２０５】
特定のタイプの手術、待機腹部手術の後のインスリン抵抗性は、手術後初日に最も著しく、少なくとも５日間持続し、正常化するのに最長３週間かかることがある。したがって、手術後の対象は、当技術分野の医師が理解し、判定する要素によって決まる手術の外傷に続くしばらくの間、本発明の医薬製剤の投与を必要とすることがある。これらの要素には、手術後に対象が絶食させられるか、またはグルコース注入もしくは飲料、または他の形態の糧を供給されるかどうか、加えて、非限定的に、対象の性別、体重および年齢、血中グルコース調節不能の程度、血中グルコース調節不能の根本原因、手術に起因する実際の外傷の程度、投与経路および生物学的利用率、体内での持続性、製剤、ならびに投与される化合物の効力が含まれる。本発明で用いられる化合物の好ましい投与期間は、手術から５日以内である。
【０２０６】
５．３．６  インスリン抵抗性治療
ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体および製剤は、手術後治療でのそれらの使用から独立に、インスリン抵抗性を治療するために利用することができる。インスリン抵抗性は、細胞表面受容体へのインスリン結合の減少、または細胞内代謝の変化に帰することができる。インスリン感受性の低下を特徴とする第一のタイプは、インスリン濃度の上昇によって一般的に克服することができる。インスリン応答性の低下を特徴とする第二のタイプは、多量のインスリンによって克服することができない。外傷後のインスリン抵抗性は、インスリン抵抗性の程度に比例するインスリンの用量によって克服することができ、したがって明らかにインスリン感受性の低下に起因する。
【０２０７】
５．３．７  吐き気が軽減されている糖尿病または肥満の治療
参照によりその全体が本明細書に組み込まれる２００６年１１月９日に出願の「Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ａｎｄ／ｏｒ  Ｏｂｅｓｉｔｙ  ｗｉｔｈ  Ｒｅｄｕｃｅｄ  Ｎａｕｓｅａ  Ｅｆｆｅｃｔ」という名称の米国特許出願第１１／５９５，５７６号（公開番号第２００７／０２０７９５８号）に記載のように、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体および製剤は、吐き気副作用を軽減させつつ、インスリン分泌性ペプチド関連の疾患または状態の治療で用いることができる。
【０２０８】
５．３．８  他の状態
ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体および製剤は、それを必要とする対象においてフィブリノーゲンの濃度を変化させるために用いることができる。それを必要とする対象においてフィブリノーゲンの濃度を低下させる方法であって、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤の有効量を対象に投与することを含み、対象においてフィブリノーゲンの濃度が低減される方法がここで提供される。フィブリノーゲンレベルの上昇した対象においてフィブリノーゲンの濃度を低下させる方法であって、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤の有効量を対象に投与することを含み、対象においてフィブリノーゲンの濃度が低減される方法がここで提供される。それを必要とする対象の改善された心血管リスクプロファイルを提供する方法であって、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤の有効量を対象に投与することと、対象でフィブリノーゲン濃度の低下を測定することとを含み、対象の心血管リスクプロファイルが改善される方法がここで提供される。フィブリノーゲンレベルの上昇した対象の改善された心血管リスクプロファイルを提供する方法であって、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤の有効量を対象に投与することと、対象でフィブリノーゲン濃度の低下を測定することとを含み、対象の心血管リスクプロファイルが改善される方法がここで提供される。それを必要とする対象を治療する方法であって、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤の有効量を対象に投与することを含み、対象におけるフィブリノーゲンの濃度が低減される方法がここで提供される。フィブリノーゲンレベルの上昇した対象を治療する方法であって、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤の有効量を対象に投与することを含み、対象におけるフィブリノーゲンの濃度が低減される方法がここで提供される。
【０２０９】
ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体および製剤は、それを必要とする対象においてリポタンパク質の粒径またはサブクラス組成を変化させるために用いることができる。それを必要とする対象において大粒子ＬＤＬ、大粒子ＨＤＬ、総ＨＤＬまたは前記リポタンパク質の任意の組合せの濃度を増加させる方法であって、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤の有効量を前記対象に投与することを含み、前記対象で大粒子ＬＤＬ、大粒子ＨＤＬ、総ＨＤＬまたは前記リポタンパク質の任意の組合せの濃度が増加される方法がここで提供される。大粒子ＬＤＬ、大粒子ＨＤＬ、総ＨＤＬまたはそれらの任意の組合せが低下した対象において、大粒子ＬＤＬ、大粒子ＨＤＬ、総ＨＤＬレベルまたは前記リポタンパク質の任意の組合せの濃度を増加させる方法であって、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤の有効量を前記対象に投与することを含み、前記対象で大粒子ＬＤＬ、大粒子ＨＤＬ、総ＨＤＬまたは前記リポタンパク質の任意の組合せの濃度が増加される方法がここで提供される。それを必要とする対象において小粒子ＬＤＬ、極小ＬＤＬ、総ＬＤＬまたは前記リポタンパク質の任意の組合せの濃度を低減させる方法であって、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤の有効量を前記対象に投与することを含み、小粒子ＬＤＬの濃度が低減される方法がここで提供される。小粒子ＬＤＬ、極小ＬＤＬ、総ＬＤＬまたはそれらの任意の組合せのレベルが上昇した対象において、小粒子ＬＤＬ、極小ＬＤＬ、総ＬＤＬまたは前記リポタンパク質の任意の組合せの濃度を低減させる方法であって、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤の有効量を前記対象に投与することを含み、小粒子ＬＤＬの濃度が低減される方法がここで提供される。それを必要とする対象の改善された心血管リスクプロファイルを提供する方法であって、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤の有効量を前記対象に投与することと、大粒子ＬＤＬ、大粒子ＨＤＬ、総ＨＤＬまたは前記リポタンパク質の任意の組合せの濃度増加を測定することとを含み、前記対象の心血管リスクプロファイルが改善される方法がここで提供される。大粒子ＬＤＬ、大粒子ＨＤＬ、総ＨＤＬまたはそれらの任意の組合せのレベルが低下した対象の改善された心血管リスクプロファイルを提供する方法であって、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤の有効量を前記対象に投与することと、大粒子ＬＤＬ、大粒子ＨＤＬ、総ＨＤＬまたは前記リポタンパク質の任意の組合せの濃度増加を測定することとを含み、前記対象の心血管リスクプロファイルが改善される方法がここで提供される。小粒子ＬＤＬ、極小ＬＤＬまたは総ＬＤＬまたは前記リポタンパク質の任意の組合せのレベルが上昇した対象を治療する方法であって、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤の有効量を前記対象に投与することを含み、前記対象で小粒子ＬＤＬ、極小ＬＤＬ、総ＬＤＬまたは前記リポタンパク質の任意の組合せの濃度が低減される方法がここで提供される。それを必要とする対象においてＬＤＬまたはＨＤＬの平均粒径を増加させる方法であって、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤の有効量を前記対象に投与することを含み、前記対象でＬＤＬまたはＨＤＬの粒径が増加される方法がここで提供される。小粒子ＬＤＬのレベルが上昇し、大粒子ＨＤＬのレベルが低下し、総ＨＤＬまたはその任意の組合せのレベルが低下した対象において、ＬＤＬまたはＨＤＬの平均粒径を増加させる方法であって、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体または製剤の有効量を前記対象に投与することを含み、前記対象でＬＤＬまたはＨＤＬの粒径が増加される方法がここで提供される。
【０２１０】
５．３．９  投薬量および投与頻度
インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、当業者によって適すると考えられる任意の技術によって投与することができる。例えば、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、以下の手段のいずれかによって投与することができる：（ａ）経腸的、例えば経口的（口から）、直腸（例えば坐薬もしくは浣腸の形で）、栄養管（例えば、胃栄養管、十二指腸栄養管、胃フィステル形成）；（ｂ）非経口的、例えば、皮下、静脈内、筋内、皮内（皮膚自体に）、経皮的（皮膚、例えば無傷の皮膚を通しての拡散）、動脈内、腹腔内、心臓内（心臓に）投与、骨内（骨髄に）投与、髄膜下（脊柱管に）に、経粘膜（粘膜を通しての拡散、例えば、ガス注入（鼻で吸う）、鼻から、例えば鼻腔内に）、舌下的（舌の下）に、口内（頬を通して）、経膣的、吸入（例えば、肺投与）；（ｃ）局所的；（ｄ）硬膜外（硬膜外腔への注射もしくは注入）；および（ｅ）硝子体内。インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の各投与は、ボーラスまたは注入によってもよい。好ましい実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、皮下に投与される。特定の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、針を用いて、例えば、２５ゲージ針、２６ゲージ針、２７ゲージ針、２８ゲージ針、２９ゲージ針、３０ゲージ針、３１ゲージ針、３２ゲージ針または３３ゲージ針、またはより高いゲージ針を用いて、皮下に投与される。
【０２１１】
インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の投薬量および投与頻度は、当業者が決定することができる。障害または状態の治療に有効であるインスリン分泌性ペプチド結合体の量は、障害または状態の性質および程度、ならびに有効成分が投与される経路によって異なる。頻度および投薬量は、障害または状態の程度、投与経路、ならびに対象の年齢、体重、応答および過去の病歴によって、各対象に特異な要素によっても異なる。有効量は、インビトロまたは動物モデル試験系から誘導される、用量反応曲線から推定することができる。
【０２１２】
インスリン分泌性ペプチド結合体の例示的な用量には、１キログラムの対象または試料重量あたりの、ミリグラムまたはマイクログラムの量のインスリン分泌性ペプチド結合体（例えば、１キログラムにつき約１マイクログラムから１キログラムにつき約５０マイクログラム、例えば、１キログラムにつき約１０マイクログラムから１キログラムにつき約３０マイクログラム）が含まれる。
【０２１３】
一部の実施形態では、特定の対象のために所望の治療応答を達成するのに有効であることができる、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の投薬量は、数週間にわたって投与される週毎の投薬計画に従って対象に投与される。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、週に１回（例えば、単一用量で）投与することができる。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、週に２回（例えば、２つの同じであるか異なる用量で）投与することができる。他の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、２、３、４、５または６日毎に１回投与することができる。他の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、８、９、１０、１１、１２または１３日毎に１回投与することができる。他の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、３、４、５、６、７または８日の期間毎に２回投与することができる。他の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、９、１０、１１、１２、１３または１４日の期間毎に２回投与することができる。
【０２１４】
一部の実施形態では、用量は週に１回または２回投与され、用量は、インスリン分泌性ペプチド結合体を、約１０００μｇ〜３０００μｇ（例えば、１０２５μｇ、１０５０μｇ、１０７５μｇ、１１００μｇ、１１２５μｇ、１１５０μｇ、１１７５μｇ、１２００μｇ、１２２５μｇ、１２５０μｇ、１２７５μｇ、１３００μｇ、１３２５μｇ、１３５０μｇ、１３７５μｇ、１４００μｇ、１４２５μｇ、１４５０μｇ、１４７５μｇ、１５００μｇ、１５２５μｇ、１５５０μｇ、１５７５μｇ、１６００μｇ、１６２５μｇ、１６５０μｇ、１６７５μｇ、１７００μｇ、１７２５μｇ、１７５０μｇ、１７７５μｇ、１８００μｇ、１８２５μｇ、１８５０μｇ、１８７５μｇ、１９００μｇ、１９２５μｇ、１９５０μｇ、１９７５μｇ、２０００μｇ、２０２５μｇ、２０５０μｇ、２０７５μｇ、２１００μｇ、２１２５μｇ、２１５０μｇ、２１７５μｇ、２２００μｇ、２２２５μｇ、２２５０μｇ、２２７５μｇ、２３００μｇ、２３２５μｇ、２３５０μｇ、２３７５μｇ、２４００μｇ、２４２５μｇ、２４５０μｇ、２４７５μｇ、２５００μｇ、２５２５μｇ、２５５０μｇ、２５７５μｇ、２６００μｇ、２６２５μｇ、２６５０μｇ、２６７５μｇ、２７００μｇ、２７２５μｇ、２７５０μｇ、２７７５μｇ、２８００μｇ、２８２５μｇ、２８５０μｇ、２８７５μｇ、２９００μｇ、２９２５μｇ、２９５０μｇ、または２９７５μｇ）、好ましくは約１０００μｇ〜２７５０μｇ（例えば、１０２５μｇ、１０５０μｇ、１０７５μｇ、１１００μｇ、１１２５μｇ、１１５０μｇ、１１７５μｇ、１２００μｇ、１２２５μｇ、１２５０μｇ、１２７５μｇ、１３００μｇ、１３２５μｇ、１３５０μｇ、１３７５μｇ、１４００μｇ、１４２５μｇ、１４５０μｇ、１４７５μｇ、１５００μｇ、１５２５μｇ、１５５０μｇ、１５７５μｇ、１６００μｇ、１６２５μｇ、１６５０μｇ、１６７５μｇ、１７００μｇ、１７２５μｇ、１７５０μｇ、１７７５μｇ、１８００μｇ、１８２５μｇ、１８５０μｇ、１８７５μｇ、１９００μｇ、１９２５μｇ、１９５０μｇ、１９７５μｇ、２０００μｇ、２０２５μｇ、２０５０μｇ、２０７５μｇ、２１００μｇ、２１２５μｇ、２１５０μｇ、２１７５μｇ、２２００μｇ、２２２５μｇ、２２５０μｇ、２２７５μｇ、２３００μｇ、２３２５μｇ、２３５０μｇ、２３７５μｇ、２４００μｇ、２４２５μｇ、２４５０μｇ、２４７５μｇ、２５００μｇ、２５２５μｇ、２５５０μｇ、２５７５μｇ、２６００μｇ、２６２５μｇ、２６５０μｇ、２６７５μｇ、２７００μｇ、または２７２５μｇ）、より好ましくは約１０００〜２５００μｇ（例えば、１０２５μｇ、１０５０μｇ、１０７５μｇ、１１００μｇ、１１２５μｇ、１１５０μｇ、１１７５μｇ、１２００μｇ、１２２５μｇ、１２５０μｇ、１２７５μｇ、１３００μｇ、１３２５μｇ、１３５０μｇ、１３７５μｇ、１４００μｇ、１４２５μｇ、１４５０μｇ、１４７５μｇ、１５００μｇ、１５２５μｇ、１５５０μｇ、１５７５μｇ、１６００μｇ、１６２５μｇ、１６５０μｇ、１６７５μｇ、１７００μｇ、１７２５μｇ、１７５０μｇ、１７７５μｇ、１８００μｇ、１８２５μｇ、１８５０μｇ、１８７５μｇ、１９００μｇ、１９２５μｇ、１９５０μｇ、１９７��μｇ、２０００μｇ、２０２５μｇ、２０５０μｇ、２０７５μｇ、２１００μｇ、２１２５μｇ、２１５０μｇ、２１７５μｇ、２２００μｇ、２２２５μｇ、２２５０μｇ、２２７５μｇ、２３００μｇ、２３２５μｇ、２３５０μｇ、２３７５μｇ、２４００μｇ、２４２５μｇ、２４５０μｇ、または２４７５μｇ）、最も好ましくは約１０００μｇ〜２０００μｇ（例えば、１０２５μｇ、１０５０μｇ、１０７５μｇ、１１００μｇ、１１２５μｇ、１１５０μｇ、１１７５μｇ、１２００μｇ、１２２５μｇ、１２５０μｇ、１２７５μｇ、１３００μｇ、１３２５μｇ、１３５０μｇ、１３７５μｇ、１４００μｇ、１４２５μｇ、１４５０μｇ、１４７５μｇ、１５００μｇ、１５２５μｇ、１５５０μｇ、１５７５μｇ、１６００μｇ、１６２５μｇ、１６５０μｇ、１６７５μｇ、１７００μｇ、１７２５μｇ、１７５０μｇ、１７７５μｇ、１８００μｇ、１８２５μｇ、１８５０μｇ、１８７５μｇ、１９００μｇ、１９２５μｇ、１９５０μｇ、または１９７５μｇ）のインスリン分泌性ペプチド結合体の量で含む。一部の実施形態では、用量は、１０００μｇ〜２０００μｇの量のインスリン分泌性ペプチドを含む。一部の実施形態では、用量は、１５００μｇ〜２０００μｇの量のインスリン分泌性ペプチドを含む。
【０２１５】
特定の実施形態では、総１週用量はその週の間に単一の投与で、すなわち週１回投与され、総１週用量は、１０００μｇまたは１５００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含む。特定の実施形態では、総１週用量は週１回投与され、用量は２０００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含む。特定の実施形態では、総１週用量は週に２回の投与にわたって、すなわち週２回で投与され、各投与は、１０００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、合計総１週用量は２０００μｇに達する。特定の実施形態では、総１週用量は週２回で投与され、各投与は、１５００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、合計総１週用量は３０００μｇに達する。特定の実施形態では、総１週用量は週２回で投与され、各投与は、１６００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、合計総１週用量は３２００μｇに達する。特定の実施形態では、総１週用量は週２回で投与され、各投与は、１７００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、合計総１週用量は３４００μｇに達する。特定の実施形態では、総１週用量は週２回投与され、最初の投与は１５００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、２回目の投与は２０００μｇの量のインスリン分泌性ペプチドを含み、合計総１週用量は３５００μｇに達する。特定の実施形態では、総１週用量は週２回で投与され、各投与は、１７５０μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、合計総１週用量は３５００μｇに達する。特定の実施形態では、総１週用量は週２回で投与され、各投与は、１８００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、合計総１週用量は３６００μｇに達する。特定の実施形態では、総１週用量は週２回で投与され、各投与は、１９００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、合計総１週用量は３８００μｇに達する。特定の実施形態では、総１週用量は週２回で投与され、各投与は、２０００μｇの量のインスリン分泌性ペプチド結合体を含み、合計総１週用量は４０００μｇに達する。
【０２１６】
特定の実施形態では、これらの投薬量またはここで記載される他の例示的な投薬量は、対象への薬量の便利な投与のための送達装置で提供することができる。当技術分野で公知である任意の送達装置を用いることができる。特定の実施形態では、送達装置は、皮下送達のために構成された注射器、例えば、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３ゲージまたは３３ゲージを超える針を備えた０．３、０．５、１、２、３ｍｌまたは３ｍｌを超える注射器である。
【０２１７】
異なる治療有効量のインスリン分泌性ペプチド結合体を、異なる障害および状態に適用することができ、そのことは当業者ならば容易にわかる。
【０２１８】
特定の実施形態では、ここで提供されるインスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の投与は繰り返すことができ、投与は、少なくとも１２時間、１日、３６時間、２日、６０時間、３日、８４時間、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、４週間、６週間、２カ月、７５日、３カ月または６カ月離すことができる。特定の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の反復投与は、３日もしくは４日、１週間または２週間離される。
【０２１９】
特定の実施形態では、本方法を実施することができ、製剤は、単一の、１回用量として、または長期的に与えることができる。長期／長期的には、本発明の製剤が、所定の個体に１回を超えて投与されることを意味する。例えば、長期投与は、週毎に、隔週に、月毎に、または多少頻繁に対象に投与される製剤の複数投与であってよく、そのことは当業者に明らかである。当技術分野の医師の判断により適当である場合、長期投与は、数週、数カ月または数年継続されてよい。さらに、当技術分野の医師の判断で、特定の用量が、許容されない耐容性プロファイル、例えば吐き気および嘔吐の頻繁で激しい発作を示す場合、医師は、そのようなプロファイルを低減させるために用量を減少させることができる。例えば、本明細書で記載される用量は、１５００μｇ用量から１０００μｇ用量に減少させることができ、または２０００μｇ用量を１５００μｇ用量に減少させることができる。
【０２２０】
反復投与の過程で投与されるインスリン分泌性ペプチド結合体の用量は、一定に保つことができるか、またはより早期の投与で投与されるインスリン分泌性ペプチド結合体の用量と比較して、変更すること、例えば増減させることができる。特定の実施形態では、反復投与の過程で投与されるインスリン分泌性ペプチド結合体の用量は、一定に保たれる。したがって、一部の実施形態では、１５００μｇのインスリン分泌性ペプチド結合体の週用量が対象に投与され、投与は週に１５００μｇの週単位で繰り返される。他の実施形態では、２つの１５００μｇ薬量で送達される、３０００μｇのインスリン分泌性ペプチド結合体の週用量が対象に投与され、週２回の投与は、１週間につき３０００μｇのインスリン分泌性ペプチド結合体の総１週用量で、週単位で繰り返される。一部の実施形態では、２０００μｇのインスリン分泌性ペプチド結合体の週用量が対象に投与され、投与は週に２０００μｇの週単位で繰り返される。他の実施形態では、２つの２０００μｇ薬量で送達される、４０００μｇのインスリン分泌性ペプチド結合体の週用量が対象に投与され、週２回の投与は、１週間につき４０００μｇのインスリン分泌性ペプチド結合体の総１週用量で、週単位で繰り返される。一部の実施形態では、３０００μｇのインスリン分泌性ペプチド結合体の週用量が対象に投与され、投与は週に３０００μｇの週単位で繰り返される。
【０２２１】
他の実施形態では、対象に投与されるインスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の用量は、反復投与の過程で増加される。例えば、特定の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体の１５００μｇの最初の総１週用量が第一の期間に対象に投与され、続いて第二の期間に、インスリン分泌性ペプチド結合体の２０００μｇの総１週用量が投与される。一部の実施形態では、第一の期間は、１、２、３、４、５、６、７、８週またはそれ以上である。特定の実施形態では、第一の期間は４週間であり、すなわち、用量の増加は投薬の５週目の当初に開始される。一部の実施形態では、第二の期間は、１、２、３、４、５、６、７、８週またはそれ以上である。特定の実施形態では、週用量は、長期的に投与される（すなわち、第二の期間は本明細書で記載の長期投与である）。別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体の１５００μｇの最初の総１週用量は４週の間対象に投与され、直後に、インスリン分泌性ペプチド結合体の２０００μｇの総１週用量の長期投与（５週目に開始される）が続く。
【０２２２】
特定の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の用量は、以下に示す順序の段階で対象に投与される：（ａ）第一の期間に週１回対象に１．５ｍｇのインスリン分泌性ペプチド結合体を投与する；（ｂ）第二の期間に週１回対象に２．０ｍｇのインスリン分泌性ペプチド結合体を投与する。一部の実施形態では、第一の期間は４週間である。一部の実施形態では、第二の期間は８週間である。
【０２２３】
対象に投与されるインスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の用量が反復投与の過程で増加される別の実施形態では、２つの１５００μｇ薬量で送達される、インスリン分泌性ペプチド結合体の３０００μｇの最初の総１週用量が第一の期間に対象に投与され、続いて、２つの２０００μｇ薬量で送達される、インスリン分泌性ペプチド結合体の４０００μｇの総１週用量が第二の期間に投与される。一部の実施形態では、第一の期間は、１、２、３、４、５、６、７、８週またはそれ以上である。特定の実施形態では、第一の期間は４週間であり、すなわち、用量の増加は投薬の５週目の当初に開始される。一部の実施形態では、第二の期間は、１、２、３、４、５、６、７、８週またはそれ以上である。特定の実施形態では、週用量は、長期的に投与される（すなわち、第二の期間は本明細書で記載の長期投与である）。別の実施形態では、２つの１５００μｇ薬量で送達される、インスリン分泌性ペプチド結合体の３０００μｇの最初の総１週用量が４週の間対象に投与され、直後に、２つの２０００μｇ薬量で送達される、インスリン分泌性ペプチド結合体の４０００μｇの総１週用量が長期投与（５週目に開始される）される。
【０２２４】
特定の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の用量は、以下に示す順序の段階で対象に投与される：（ａ）第一の期間に週２回対象に１．５ｍｇのインスリン分泌性ペプチド結合体を投与する；（ｂ）第二の期間に週２回対象に２．０ｍｇのインスリン分泌性ペプチド結合体を投与する。一部の実施形態では、第一の期間は４週間である。一部の実施形態では、第二の期間は８週間である。
【０２２５】
対象に投与されるインスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の用量が反復投与の過程で増加される別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体の１５００μｇの最初の総１週用量が第一の期間に対象に投与され、続いて、インスリン分泌性ペプチド結合体の２０００μｇの総１週用量が第二の期間に投与され、続いて第三の期間に、インスリン分泌性ペプチド結合体の３０００μｇの総１週用量が投与される。一部の実施形態では、第一の期間は１、２、３、４、５、６、７、８週またはそれ以上であり、第二の期間は１、２、３、４、５、６、７、８週またはそれ以上である。特定の実施形態では、第一の期間は４週間であり、第二の期間は４週間であり、すなわち、用量の増加は投薬の５週目および９週目の当初に開始される。特定の実施形態では、第一の期間は２週間であり、第二の期間は２週間であり、すなわち、用量の増加は投薬の３週目および５週目の当初に開始される。一部の実施形態では、第三の期間は、１、２、３、４、５、６、７、８週またはそれ以上である。特定の実施形態では、週用量は、長期的に投与される（すなわち、第三の期間は本明細書で記載の長期投与である）。別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体の１５００μｇの最初の総１週用量が４週の間対象に投与され、直後に、インスリン分泌性ペプチド結合体の２０００μｇの総１週用量が４週間投与（５週目に開始される）され、直後に、３０００μｇの総１週用量が長期投与（９週目に開始される）される。別の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体の１５００μｇの最初の総１週用量が２週間対象に投与され、直後に、インスリン分泌性ペプチド結合体の２０００μｇの総１週用量が２週間投与（３週目に開始される）され、直後に、３０００μｇの総１週用量が長期投与（５週目に開始される）される。
【０２２６】
特定の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の用量は、以下に示す順序の段階で対象に投与される：（ａ）第一の期間に週１回対象に１．５ｍｇのインスリン分泌性ペプチド結合体を投与する；（ｂ）第二の期間に週１回対象に２．０ｍｇのインスリン分泌性ペプチド結合体を投与する；および（ｃ）第三の期間に週１回対象に３．０ｍｇのインスリン分泌性ペプチド結合体を投与する。一部の実施形態では、第一の期間は４週間である。一部の実施形態では、第二の期間は８週間である。
【０２２７】
他の実施形態では、対象に投与されるインスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の用量は、反復投与の過程で低減される。例えば、特定の実施形態では、１５００μｇのインスリン分泌性ペプチド結合体が第一の期間に週２回、３０００μｇの総１週用量で対象に投与され、続いて第二の期間に、インスリン分泌性ペプチド結合体の２０００μｇの総１週用量が投与される。別の特定の実施形態では、１５００μｇのインスリン分泌性ペプチド結合体が第一の期間に週２回、３０００μｇの総１週用量で対象に投与され、続いて、１０００μｇのインスリン分泌性ペプチド結合体が第二の期間に週２回、２０００μｇの総１週用量で対象に投与される。一部の実施形態では、第一の期間は、１、２、３、４、５、６、７、８週またはそれ以上である。特定の実施形態では、第一の期間は４週間である。一部の実施形態では、第二の期間は１、２、３、４、５、６、７、８週またはそれ以上である。特定の実施形態では、週用量は、長期的に投与される（すなわち、第二の期間は本明細書で記載の長期投与である）。
【０２２８】
本明細書で記載されるインスリン分泌性ペプチド結合体の有効量は、実質的な毒性を引き起こすことなく、治療的な利点を提供する。
【０２２９】
インスリン分泌性ペプチド結合体の毒性は、細胞培養または実験動物における標準の薬学手順によって、例えばＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）またはＬＤ１００（集団の１００％に致死的な用量）を測定することによって判断することができる。毒性と治療効果との間の用量比は、治療指数である。高い治療指数を示す化合物が、好ましい。これらの細胞培養アッセイおよび動物試験から得られるデータは、ヒトで使用することが有毒でない薬量範囲を処方するときに用いることができる。好ましくは、本明細書で記載される化合物の投薬量は、ほとんどまたは全く毒性のない有効用量を含む循環濃度の範囲内にある。投薬量は、使用する剤形および用いる投与経路によって、この範囲内で異なることができる。的確な製剤、投与経路および投薬量は、対象の状態を考慮して個々の医師が選択することができる。（例えば、Ｆｉｎｇｌら、１９９６年、「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」、第９版、第２章、２９頁、Ｅｌｌｉｏｔ  Ｍ．  Ｒｏｓｓを参照）。
【０２３０】
５．３．９．１  併用療法の投与経路および投薬量
本明細書で記載されるインスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤、および１つまたは複数の第二の治療薬は、実質的に同じ時間に、すなわち並行して、例えば同じ時間内もしくは同じ日などに、または別々にずらした時間に、すなわち他の抗糖尿病薬の投与の前もしくは後に逐次的に、例えば別の日、週などに投与することができる。したがって、本発明の方法は、同時または非同時の治療のそのような体系の全てを含むものと理解されたい。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、他の第二の治療薬の投与から０．１、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８時間内、または１８時間より長い時間内に投与される。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、他の第二の治療薬の投与から１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４日内、または１４日を超える日数内に投与される。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、第二の治療薬の投与から１、２、３、４、５週内、または５週より長い期間内に投与される。
【０２３１】
ここで提供される併用療法の一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、ここで提供される投薬計画に従って、例えば５、６、７、８または９日の間隔で、または１２、１３、１４、１５または１６日の間隔で、皮下注射によって対象に投与される。治療する疾患および対象の状態により、特定の１つまたは複数の第二の治療薬は、経口、非経口（例えば筋肉内、腹腔内、静脈内、大脳室内（ＩＣＶ）、嚢内注射もしくは注入、皮下注射、または移植）、吸入噴霧、鼻、膣、直腸、舌下または局所の投与経路によって投与することができ、また、各投与経路に適当な従来の無毒の薬学的に許容される希釈剤、賦形剤または担体を含む適する投薬単位製剤で、単独または一緒に製剤化することができる。特定の第二の治療薬およびインスリン分泌性ペプチド結合体が別々に投与される場合、それらは異なる経路によって投与されてもよい。
【０２３２】
製剤は、当技術分野の医師によって適すると考えられる任意の注射部位に投与することができる。特定の実施形態では、製剤は、腹部、腿または腕に投与される。
【０２３３】
製剤は、当技術分野の医師によって適すると考えられる任意の時間に投与することができる。特定の実施形態では、製剤は、朝、食前、または睡眠前の晩、またはそれらの組合せにより投与される。
【０２３４】
しかし、任意の特定の対象のための特定の用量レベルおよび投薬頻度を変更することができ、それらは、年齢、体重、健康状態、性別、食事、投与の様式および時間、排泄速度、薬剤組合せ、特定の状態の程度、ならびに治療を受ける宿主を含む様々な要素によることは理解されよう。
【０２３５】
ここで提供される併用療法の１つまたは複数の剤に反応して、対象が、有害事象、例えば、吐き気、嘔吐、注射関連の皮膚反応、低血糖症、すなわち低血糖症の臨床徴候を有する血糖レベル、６０ｍｇ／ｄＬ（３．３ｍｍｏｌ／Ｌ）、または極端で急速な体重減少などの任意の他の全身症状もしくは徴候を万が一経験する場合には、当分野の医師の判断によって、１つまたは複数の剤の特定の用量レベルおよび投薬頻度を低減または調節することができる。
【０２３６】
ここで提供される併用療法の特定の実施形態では、対象は、インスリン分泌性ペプチド結合体およびＯＡＤ、例えばビグアナイド、例えばメトホルミンを投与される。別の特定の実施形態では、対象は、インスリン分泌性ペプチド結合体および２つのＯＡＤ、例えばビグアナイド、例えばメトホルミン、スルホニル尿素またはチアゾリジンジオン、および第二のＯＡＤを投与される。
【０２３７】
５．４  キット
さらなる実施形態では、本発明は、本発明のインスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤を含むキットを提供し、それは、例えば、本明細書で記載の治療方法を実施するときに用いることができる。例えば、本発明は、それを必要とする対象におけるＩＩ型糖尿病の治療のためのキットを提供する。キットは、当分野の医師への配布のためのパッケージに入れた、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤を含む。キットは、本明細書で記載のインスリン分泌性結合体の使用説明書、例えば、例として、前糖尿病（例えば、耐糖能異常（ＩＧＴ）および空腹時血糖異常（ＩＦＧ））、糖尿病、例えばＩ型糖尿病もしくはＩＩ型糖尿病、高齢発症成人性自己免疫性糖尿病としても公知の成人性潜伏型自己免疫性糖尿病（「ＬＡＤＡ」）、緩徐発症Ｉ型糖尿病および１．５型糖尿病、ステロイド誘導糖尿病、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）治療誘発糖尿病、先天性もしくはＨＩＶ関連リポジストロフィー（「脂肪再分布症候群」）を有する対象における糖尿病発達、肥満（すなわち、３０ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩ）、過体重（すなわち、２５ｋｇ／ｍ２〜３０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩ）、メタボリックシンドローム（エックス症候群）、神経系障害、手術、インスリン抵抗性、無自覚性低血糖、拘束性肺疾患、胃腸障害、例えば、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、機能性消化不良、胃腸障害に関連する疼痛、例えばＩＢＳおよび機能性消化不良に関連する疼痛、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、ＩＢＤに関連する疼痛、高血糖症、例えば、手術（例えば、主要な外科的処置、例えば、冠状動脈バイパス手術）に関連する高血糖症、例えば、糖尿病、例えばＩＩ型糖尿病を有する対象における手術に関連する高血糖症、メタボリックシンドローム、冠状動脈心不全（ＣＨＦ）、β細胞機能障害に関連する障害、β細胞欠損に関連する障害、β細胞の不十分な数に関連する障害、ならびにインスリン分泌性ペプチドもしくはインスリン分泌性ペプチド結合体で治療できる他の状態を有する（またはそれらであるかそれらを経ている）対象の治療のために、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤を投与するための説明書を含むラベルまたは表示を含むことができる。
【０２３８】
キットは、本明細書で記載のインスリン分泌性結合体の使用説明書、例えば、体重減少を促進し、インスリン合成および放出を刺激し、インスリン取込みに対する脂肪組織、筋肉組織もしくは肝臓組織の感受性を高め、グルコース取込みを刺激し、消化過程、例えば胃内容排出を遅くし（例えば、速度を減少させ）、グルカゴンの分泌をブロックもしくは阻害し、β細胞の機能、増殖および／または活性を促進し、糖尿病対象で第１段階インスリン放出を回復させ、食物摂取量を減少させ、食欲を低下させ、肝臓疾患、例えば肥満、糖尿病もしくは高血糖症に関連する肝疾患（例えば、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ））を予防するか、それから保護するためにインスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤を投与するための説明書を含むラベルまたは表示を含むことができる。
【０２３９】
ラベル上の説明書には、本明細書に記載のインスリン分泌性ペプチド結合体の保存条件の説明書がさらに含まれてもよい。
【０２４０】
特定の実施形態では、キットは、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の単位薬量または多回使用薬量を含む１つまたは複数の容器、例えば、ボトル、バイアル、アンプル、充填済み容器、例えば充填済み注射器もしくは充填済み注射ペン、マイクロチップ（例えば、その内容物の制御放出のためのマイクロチップ）または試験管を含むことができる。剤形は、液体または凍結乾燥製剤として含まれてもよい。凍結乾燥剤形を含むキットは、再構成された製剤中のタンパク質、インスリン分泌性ペプチド結合体の濃度が少なくとも１、２、３、４、５、１０、２０、３０、４０、５０ｍｇ／ｍｌ、例えば約１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌであるような、凍結乾燥製剤を再構成するための希釈剤を含む１つまたは複数の追加の容器をさらに含むことができる。
【０２４１】
キットは、それらに限定されないが、緩衝剤、フィルター、針、注射器および取扱説明書を含む添付文書を含む、本明細書で記載の治療方法を実施するのに有用な１つまたは複数の追加の成分をさらに含むことができる。特定の実施形態では、キットは、例えば対象へのインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の皮下投与に有用である、例えば、２５ゲージ針、２６ゲージ針、２７ゲージ針、２８ゲージ針、２９ゲージ針、３０ゲージ針、３１ゲージ針、３２ゲージ針または３３ゲージ針、またはより高いゲージ針などの針を含む。特定の実施形態では、キットは、インスリン分泌性ペプチド結合体製剤の投与手段の安全な廃棄のために有用な構成要素、例えば使用済み注射器および針のための鋭利物容器を含むことができる。
【０２４２】
好ましい実施形態では、キットは、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の第一の投薬量を予め充填した１つまたは複数の注射器、および、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の第二のより高い投薬量を予め充填した１つまたは複数の注射器を含み、これは、例えば本明細書で記載の投薬計画の過程で対象に漸増薬量を投与するのに有用である。特定の実施形態では、キットは、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の第一の投薬量を予め充填した１、２、３、４、５、６、７、８個、または８個を超える注射器を含む。別の特定の実施形態では、キットは、インスリン分泌性ペプチド結合体、例えばインスリン分泌性ペプチド結合体製剤の第二のより高い投薬量を予め充填した１、２、３、４、５、６、７、８個、または８個を超える注射器を含む。
【０２４３】
一部の実施形態では、第一の投薬量を予め充填した注射器は、インスリン分泌性ペプチド結合体を約１０００μｇの量で含む。一部の実施形態では、第一の投薬量を予め充填した注射器は、インスリン分泌性ペプチド結合体を約１５００μｇの量で含む。一部の実施形態では、第二のより高い投薬量を予め充填した注射器は、インスリン分泌性ペプチド結合体を約２０００μｇの量で含む。
【０２４４】
他の実施形態では、キットは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個または１０個を超える空の注射器、および１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個または１０個を超えるバイアルを含み、各バイアルは、１用量、２用量、３用量、４用量、５用量、６用量、７用量、８用量、９用量、１０用量または１０を超える用量のインスリン分泌性ペプチド結合体製剤を含む。他の実施形態では、キットは、１用量、２用量、３用量、４用量、５用量、６用量、７用量、８用量、９用量、１０用量または１０を超える用量のインスリン分泌性ペプチド結合体製剤を予め充填された１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、または１０個を超える注射器を含む。一部の実施形態では、注射器は、使い捨て式針の取付けを容易にする、ルアーロック、ルアーコーンまたは他の針取付けコネクタを含む。他の実施形態では、注射器は、ステーキドニードル、すなわち恒久針を含む。
【０２４５】
特定の実施形態では、キットはペンタイプの送達装置、および１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、または１０個を超える交換可能なカートリッジを含み、交換可能なカートリッジは、１用量、２用量、３用量、４用量、５用量、６用量、７用量、８用量、９用量、１０用量または１０を超える用量のインスリン分泌性ペプチド結合体製剤を含み、例えば予め充填されている。ペンタイプの送達装置が複数用量を含む特定の実施形態では、用量を予めセットすること、すなわち固定することができる。他の実施形態では、用量は可変的な用量でよく、すなわち、使用者がダイヤルインすることができる。特定の実施形態では、キットは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０用量または１０を超える用量のインスリン分泌性ペプチド結合体製剤が予め充填された、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個または１０個を超えるペンタイプの送達装置を含む。一部の実施形態では、ペンタイプの送達装置は、使い捨て式針の取付けを容易にする、ルアーロック、ルアーコーンまたは他の針取付けコネクタを含む。特定の実施形態では、キットは使い捨て式のペンタイプ送達装置を含む。他の実施形態では、ペンタイプ送達装置は、ステーキドニードル、すなわち恒久針を含む。一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．１％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８および１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含有するｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝剤中の１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含む。他の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体製剤は、１．６ｍＭオクタン酸ナトリウム、１５ｍｇ／Ｌポリソルベート８０および１３５ｍＭ塩化ナトリウムを含有するｐＨ７．０の１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝剤中の１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含む。
【０２４６】
５．５  インスリン分泌性ペプチド結合体
本発明は、インスリン分泌性ペプチド結合体を含む医薬製剤を対象とする。有用なインスリン分泌性ペプチドは、ＧＬＰ−１、エキセンディン−３およびエキセンディン−４ならびにそれらの前駆体、誘導体および断片を含むが、これらに限定されない。そのようなインスリン分泌性ペプチドは、米国特許第６，５１４，５００号、第６，８２１，９４９号、第６，８８７，８４９号、第６，８４９，７１４号、第６，３２９，３３６号、第６，９２４，２６４号、ＷＯ０３／１０３５７２および第６，５９３，２９５号に開示のものを含み、そのそれぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２４７】
好ましい一実施形態ではインスリン分泌性ペプチドは、Ｃ末端アミド（ＣＯ−ＮＨ２）である。
【０２４８】
一部の実施形態ではインスリン分泌性ペプチドは、ＧＬＰ−１である。一部の実施形態ではインスリン分泌性ペプチドは、ＧＬＰ−１誘導体である。一部の実施形態ではインスリン分泌性ペプチドは、エキセンディン−３である。
【０２４９】
一部の実施形態ではインスリン分泌性ペプチドは、エキセンディン−３誘導体である。一部の実施形態ではインスリン分泌性ペプチドは、エキセンディン−４である。一部の実施形態ではインスリン分泌性ペプチドは、エキセンディン−４誘導体である。一部の実施形態ではインスリン分泌性ペプチドは、エキセンディン−４（１〜３９）−ＮＨ２である。一部の実施形態ではインスリン分泌性ペプチドは、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０−ＮＨ２である。
【０２５０】
好ましい一実施形態ではインスリン分泌性ペプチド結合体は、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体である。
【０２５１】
５．５．１  ＧＬＰ−１およびその誘導体
ホルモングルカゴンは、当業者に公知の任意の方法により合成され得る。一部の実施形態ではそれは、続いて３つのペプチド：グルカゴン、ＧＬＰ−１およびグルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ−２）にタンパク質分解的に切断される高分子量前駆体分子として合成される。ＧＬＰ−１は、配列番号１（ＨＤＥＦＥＲＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＧ）に示す通り、非プロセス型では３７アミノ酸を有する。非プロセス型ＧＬＰ−１は、本質的にインスリン生合成の誘導を媒介できない。しかし、非プロセス型ＧＬＰ−１ペプチドは、ＧＬＰ−１のアミノ酸７〜３７を有する３１アミノ酸長のペプチド（７〜３７ペプチド）（「ＧＬＰ−１（７〜３７）」）配列番号２（ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＧ））に天然で転換される。ＧＬＰ−１（７〜３７）は、Ｃ末端グリシンのタンパク質分解的除去による追加のプロセシングも受けてＧＬＰ−１（７〜３６）を生成し、ＧＬＰ−１（７〜３６）は、主として、アルギニンアミドとしてアミド化型になっているＣ末端残基アルギニンを有する、ＧＬＰ−１（７〜３６）アミドとしても存在し得る。このプロセシングは、腸およびより少ない量で膵臓で起こり、ＧＬＰ−１（７〜３７）のインスリン分泌性活性を有するポリペプチドが生じる。
【０２５２】
ホルモンインスリンの合成または発現を刺激すること、またはその刺激を引き起こすことができる場合に、化合物は「インスリン分泌性活性」を有すると称される。ＧＬＰ−１（７〜３７）およびＧＬＰ−１（７〜３６）のホルモン活性は、インスリンの生合成を誘導すると考えられる膵臓β細胞に対して特異的であると考えられる。グルカゴン様ペプチドホルモンは、成人発症型糖尿病、インスリン分泌の動態が異常である高血糖症によって特徴付けられる状態の病変形成の研究で有用である。さらに、グルカゴン様ペプチドは、この疾患の療法および治療、ならびに高血糖症の療法および治療で有用である。
【０２５３】
ペプチド部分（断片）は、ヒトＧＬＰ−１の決定されたアミノ酸配列から選択され得る。同義的な用語「ペプチド断片」および「ペプチド部分」には、天然存在のアミノ酸配列から誘導可能な、合成および天然存在両方のアミノ酸配列が含まれるものとする。
【０２５４】
ＧＬＰ−１についてのアミノ酸配列は、いくつかの研究者から報告されている。Ｌｏｐｅｚ，Ｌ．Ｃ．ら、１９８３年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、ＵＳＡ  ８０巻：５４８５〜５４８９頁、Ｂｅｌｌ，Ｇ．Ｉ．ら、１９８３年、Ｎａｔｕｒｅ  ３０２巻：７１６〜７１８頁、Ｈｅｉｎｒｉｃｈ，Ｇ．ら，１９８４年、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１１５巻：２１７６〜２１８１頁を参照。プレプログルカゴンｍＲＮＡの構造およびその対応するアミノ酸配列は周知である。前駆体遺伝子産物、プログルカゴンのグルカゴンおよび２つのインスリン分泌性ペプチドへのタンパク質分解的プロセシングは特徴付けられている。本明細書で用いる場合、表記ＧＬＰ−１（１〜３７）は、１（Ｎ末端）から３７（Ｃ末端）までの全てのアミノ酸を有するＧＬＰ−１ポリペプチドを意味する。同様に、ＧＬＰ−１（７〜３７）は、７（Ｎ末端）から３７（Ｃ末端）までの全てのアミノ酸を有するＧＬＰ−１ポリペプチドを意味する。同様に、ＧＬＰ−１（７〜３６）は、番号７（Ｎ末端）から番号３６（Ｃ末端）までの全てのアミノ酸を有するＧＬＰ−１ポリペプチドを意味する。
【０２５５】
一実施形態では、ＧＬＰ−１（７〜３６）およびそのペプチド断片は、そのそれぞれの内容が参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ｍ．、１９６２年、Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５巻：２１４９頁およびＳｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｙｏｕｎｇ、Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｆｒｅｅｍａｎ、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、１９６９年２７〜６６頁）によって記載された周知の固相ペプチド合成によってなど下に詳細に示す従来の手段によって合成される。しかし、それはプログルカゴンポリペプチドまたはＧＬＰ−１の断片を、例えばタンパク質分解酵素を使用して天然存在のアミノ酸配列を断片化することによって得ることもできる。さらに、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＭａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８２年によって開示される組換えＤＮＡ技術の使用を介してプログルカゴンペプチドまたはＧＬＰ−１の所望の断片を得ることが可能である。
【０２５６】
本明細書に記載の方法のために有用なペプチドには、ＧＬＰ−１（１〜３７）およびＧＬＰ−１（７〜３６）などのＧＬＰ−１から誘導可能なものが含まれる。ペプチドが「天然存在のアミノ酸配列から誘導可能」と言われるのは、それが天然存在の配列を断片化することによって取得され得る場合、または天然存在のアミノ酸配列もしくはこの配列をコードする遺伝物質（ＤＮＡまたはＲＮＡ）の配列の知識に基づいて合成され得る場合である。
【０２５７】
ＧＬＰ−１（１〜３７）、特にＧＬＰ−１（７〜３６）など、ＧＬＰ−１の「誘導体」と称される分子も有用である。そのような「誘導体」は、以下の特徴を有する：（１）それはＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１の同様のサイズの断片に実質的な相同性を共有する、（２）それはインスリン分泌性ホルモンとして機能できる、（３）上記誘導体は、本明細書で提供されるアッセイの少なくとも１つを使用して、ＧＬＰ−１のインスリン分泌活性の少なくとも１％、５％、１０％、２５％、５０％、７５％、１００％または１００％を超えるインスリン分泌活性を有する。
【０２５８】
ＧＬＰ−１の誘導体がＧＬＰ−１と「実質的な相同性」を共有すると言われるのは、誘導体のアミノ酸配列がＧＬＰ−１（１〜３７）に対して少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％の同一性を共有する場合である。この文脈における同一性パーセントは、配列をアラインし、かつ最大の配列相同性パーセントを達成するために必要であればギャップを導入した後に、ペプチド中の対応するアミノ酸残基に同一（すなわちアライメントにおける所与の位置においてアミノ酸残基が同じ残基である）、または類似（すなわち、上記に論じた通り、アライメントにおける所与の位置においてアミノ酸置換が保存的置換である）である候補配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージを意味する。特定の実施形態では、ＧＬＰ−１誘導体は、天然存在のＧＬＰ−１配列との配列同一性パーセントまたは配列類似性パーセントによって特徴付けられる。配列同一性および類似性のパーセンテージを含めた、配列相同性は、当技術分野で周知の配列アライメント手法、好ましくはこの目的のために設計されたコンピューターアルゴリズムを、前記コンピューターアルゴリズムの初期設定パラメータまたはそれらを含むソフトウェアパッケージで使用して決定される。
【０２５９】
有用な誘導体には、天然存在のＧＬＰ−１ペプチドの配列に実質的に相同な配列を含有することに加えて１つまたは複数の追加のアミノ酸をそれらのアミノ末端および／もしくはカルボキシ末端または前記配列の内部に含有し得るＧＬＰ−１断片も含まれる。したがって、有用な誘導体は、天然存在のＧＬＰ−１配列には存在しない可能性がある１つまたは複数のアミノ酸を含有し得るＧＬＰ−１のポリペプチド断片を、そのようなポリペプチドがＧＬＰ−１のインスリン分泌活性の少なくとも１％、５％、１０％、２５％、５０％、７５％、１００％または１００％を超えるインスリン分泌活性を有するという条件で含む。追加のアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸もしくはＬ−アミノ酸またはそれらの組合せであり得る。
【０２６０】
有用なＧＬＰ−１断片には、天然存在のＧＬＰ−１ペプチドの配列に実質的に相同な配列を含有しているが、ＧＬＰ−１ペプチド上に天然で見出される、それらのアミノ末端および／またはカルボキシ末端における１つまたは複数の追加のアミノ酸を欠失しているものも含まれる。したがって、ＧＬＰ−１の有用なポリペプチド断片は、そのようなポリペプチドがＧＬＰ−１のインスリン分泌活性の少なくとも１％、５％、１０％、２５％、５０％、７５％、１００％または１００％を超えるインスリン分泌活性を有するという条件で、天然存在のＧＬＰ−１配列に通常存在する１つまたは複数のアミノ酸を欠失していてもよい。特定の実施形態では、ポリペプチド断片は天然存在のＧＬＰ−１配列に通常存在するアミノ酸１つを欠失している。一部の実施形態では、ポリペプチド断片は天然存在のＧＬＰ−１配列に通常存在するアミノ酸２つを欠失している。一部の実施形態では、ポリペプチド断片は天然存在のＧＬＰ−１配列に通常存在するアミノ酸３つを欠失している。一部の実施形態では、ポリペプチド断片は天然存在のＧＬＰ−１配列に通常存在するアミノ酸４つを欠失している。
【０２６１】
重要でないアミノ酸置換を有する（したがって天然の配列とは異なるアミノ酸配列を有する）上述の断片の明白またはトリビアル（ｔｒｉｖｉａｌ）な変異体も、そのような変異体が上述のＧＬＰ−１誘導体と実質的に同じインスリン分泌活性を有するという条件で有用である。明白またはトリビアルな置換の例には、１つの塩基性残基と他の塩基性残基（すなわちＡｒｇとＬｙｓ）の置換、１つの疎水性残基と他の疎水性残基（すなわちＬｅｕとＩｌｅ）の置換、または１つの芳香族残基と他の芳香族残基（すなわちＰｈｅとＴｙｒ）の置換などが含まれる。
【０２６２】
インスリン分泌活性を有するＧＬＰ−１誘導体に加えて、細胞によるグルコースの取込みを刺激するがインスリンの発現または分泌を刺激しないＧＬＰ−１誘導体も、本明細書で記載の方法のために有用である。そのようなＧＬＰ−１誘導体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第５，５７４，００８号に記載されている。
【０２６３】
本明細書に記載の方法で使用される、細胞によるグルコースの取込みを刺激するがインスリンの発現または分泌を刺激しないＧＬＰ−１誘導体には：
【０２６４】
【化３】
2011506442.tif 000005
が含まれる。これらのペプチドは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第５，５７４，００８号に記載の通りインスリン分泌活性を有さないにもかかわらず、糖尿病および高血糖状態を治療するために有用であるＣ末端ＧＬＰ−１断片である。
【０２６５】
本明細書に記載の製剤および方法で使用される追加のＧＬＰ−１誘導体には、配列：ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡ  ＷＬＶＫＧＲＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号２８）を有する、エキセンディン−４のＣ末端アミノ酸９個に融合したＧＬＰ−１（７〜３６）を含むＧＬＰ−１／エキセンディン−４ハイブリッドペプチドが含まれる。
【０２６６】
参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第７，１４１，５４７号に記載の以下の融合タンパク質分子：［Ｇｌｙ８］ＧＬＰ−１（７〜３６）−［Ｇｌｙ８］ＧＬＰ−１（７〜３６）−ヒト血清アルブミン（アルビグルチド）を含むＧＬＰ−１誘導体も、本明細書に記載の製剤および方法で有用である。
【０２６７】
本明細書に記載の製剤および方法で使用される追加のＧＬＰ−１誘導体には、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第７，１４１，５４７号に記載の以下のＧＬＰ−１融合タンパク質分子：ＧＬＰ−１（７〜３６）−ヒト血清アルブミン、ヒト血清アルブミン−ＧＬＰ−１（７〜３６）、［Ｇｌｙ８］ＧＬＰ−１（７〜３６）−ヒト血清アルブミン、ヒト血清アルブミン−［Ｇｌｙ８］ＧＬＰ−１（７〜３６）、ＧＬＰ−１（７〜３６）−ＧＬＰ−１（７〜３６）−ヒト血清アルブミン、ＧＬＰ−１（９〜３６）ヒト血清アルブミン、および［Ｇｌｙ８］ＧＬＰ−１（７〜３６）−ＧＬＰ−１（７〜３６）ヒト血清アルブミンが含まれる。
【０２６８】
本明細書に記載の製剤および方法で使用される追加のＧＬＰ−１誘導体は、参照によりその全体が組み込まれる米国特許第７，２７１，１４９号に記載の、［Ｇｌｙ８］［Ｇｌｕ２２］ＧＬＰ−１（７〜３６）と、それに融合したエキセンディン−４（１〜３９）のＣ末端アミノ酸８個と、それに融合したリンカー配列と、それに融合した、配列
【０２６９】
【化４】
2011506442.tif 000006
を有するヒト血清アルブミンとを含むＧＬＰ−１／エキセンディン−４／ヒト血清アルブミンハイブリッドポリペプチドが含まれる。
【０２７０】
５．５．２  エキセンディン−３およびエキセンディン−４ペプチドならびに誘導体
エキセンディン−３およびエキセンディン−４は、アミノ酸３９個のペプチド（残基２および３で異なっている）であり、ＧＬＰ−１に約５３％相同であり、インスリン分泌性薬剤として使用される。
【０２７１】
エキセンディン−３のアミノ酸配列は、
ＨＳＤＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１６）であり、エキセンディン−４のアミノ酸配列は、
ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１７）である。
【０２７２】
アミノ酸配列：エキセンディン−４（１〜３１）ｄｅｓＧｌｕ１７Ｔｙｒ３２（配列番号１８）ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＹおよびエキセンディン−４（１〜３０）Ｔｙｒ３１（配列番号１９）ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＹを含むエキセンディン−４のインスリン分泌性断片も、本明細書に記載の製剤のために有用である。
【０２７３】
アミノ酸配列：エキセンディン−４（９〜３９）（配列番号２０）
ＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳを含む天然エキセンディン−４の抑制断片も有用である。
【０２７４】
他の例示的インスリン分泌性ペプチドは配列番号２１〜２７に示されている。
【０２７５】
【数１】
2011506442.tif 000007
本明細書に記載の製剤のために有用なペプチドには、天然存在のエキセンディン−３およびエキセンディン−４ペプチドから誘導可能なペプチドが含まれる。ペプチドが「天然存在のアミノ酸配列から誘導可能」と言われるのは、それが、天然存在の配列を断片化することによって取得され得る場合、または天然存在のアミノ酸配列もしくはこの配列をコードする遺伝物質（ＤＮＡまたはＲＮＡ）の配列の知識に基づいて合成され得る場合である。
【０２７６】
本明細書に記載の製剤のために有用な分子には、エキセンディン−３およびエキセンディン−４の「誘導体」と称されるものも含まれる。本発明の一実施形態では「誘導体」は、以下の特徴を有する：（１）それはエキセンディン−３もしくはエキセンディン−４またはエキセンディン−３もしくはエキセンディン−４の同様の長さにした断片と実質的な相同性を共有する、（２）それはインスリン分泌性ホルモンとして機能できる、（３）上記誘導体は、ここで提供されるアッセイの少なくとも１つを使用して、エキセンディン−３またはエキセンディン−４のいずれかのインスリン分泌活性の少なくとも１％、５％、１０％、２５％、５０％、７５％、１００％または１００％を超えるインスリン分泌活性を有する。
【０２７７】
エキセンディン−３またはエキセンディン−４の誘導体がエキセンディン−３およびエキセンディン−４と「実質的な相同性」を共有すると言われるのは、その誘導体のアミノ酸配列がエキセンディン−３およびエキセンディン−４と少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％の同一性を共有する場合である。この文脈における同一性パーセントは、最大の配列相同性パーセントを達成するために配列をアラインし、必要に応じてギャップを導入した後に、天然ペプチド中の対応するアミノ酸残基に同一（すなわちアライメントにおける所与の位置のアミノ酸残基が同じ残基である）または類似（すなわち、上記に論じた通り、アライメントにおける所与の位置のアミノ酸置換が保存的置換である）である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージを意味する。特定の実施形態ではエキセンディン−３またはエキセンディン−４誘導体は、天然存在のエキセンディン−３またはエキセンディン−４配列とのその配列同一性パーセントまたは配列類似性パーセントによって特徴付けられる。配列同一性および類似性のパーセンテージを含めた、配列相同性は、当技術分野で周知の配列アライメント手法、好ましくはこの目的のために設計されたコンピューターアルゴリズムを、前記コンピューターアルゴリズムの初期設定パラメータまたはそれらを含むソフトウェアパッケージで使用して決定される。
【０２７８】
有用な誘導体には、天然存在のエキセンディン−３またはエキセンディン−４ペプチドの配列と同じまたは実質的に相同な配列を含有することに加えて１つまたは複数の追加のアミノ酸をそれらのアミノ末端および／もしくはカルボキシ末端または前記配列の内部に含有し得るエキセンディン−３またはエキセンディン−４断片も含まれる。したがって、有用な誘導体は、天然存在のエキセンディン−３またはエキセンディン−４配列には存在しない可能性がある１つまたは複数のアミノ酸を含有し得るエキセンディン−３またはエキセンディン−４のポリペプチド断片を、そのようなポリペプチドがエキセンディン−３またはエキセンディン−４のいずれかのインスリン分泌活性の少なくとも１％、５％、１０％、２５％、５０％、７５％、１００％または１００％を超えるインスリン分泌活性を有するという条件で含む。
【０２７９】
同様に、有用な誘導体には、天然存在のエキセンディン−３またはエキセンディン−４ペプチドの配列に実質的に相同である配列を含有しているが、エキセンディン−３またはエキセンディン−４ペプチド上で天然で見出される、それらのアミノ末端および／またはカルボキシ末端における１つまたは複数の追加のアミノ酸を欠失している可能性があるエキセンディン−３またはエキセンディン−４断片が含まれる。したがって、有用な誘導体は、天然存在のエキセンディン−３またはエキセンディン−４配列に通常存在する１つまたは複数のアミノ酸を欠失している可能性があるエキセンディン−３またはエキセンディン−４のポリペプチド断片を、そのようなポリペプチドがエキセンディン−３またはエキセンディン−４のいずれかのインスリン分泌活性の少なくとも１％、５％、１０％、２５％、５０％、７５％、１００％または１００％を超えるインスリン分泌活性を有するという条件で含む。
【０２８０】
有用な誘導体は、５、４、３、２または１個を超えないアミノ酸の追加、欠失または置換以外の点では、天然存在のエキセンディン−３またはエキセンディン−４ペプチドのものと配列が同じであるエキセンディン−３またはエキセンディン−４断片をさらに含む。特定の実施形態では、誘導体は、天然のエキセンディン−３またはエキセンディン−４配列と比較して、５個を超えない、４個を超えない、３個を超えない、２個を超えないまたは１個を超えないアミノ酸の追加、欠失または置換を含有する。したがって、有用な誘導体は、天然のエキセンディン−３またはエキセンディン−４配列と比較して５、４、３、２または１個を超えないアミノ酸の追加、欠失または置換以外は同じである、エキセンディン−３またはエキセンディン−４のポリペプチド断片を、そのようなポリペプチドがエキセンディン−３またはエキセンディン−４のいずれかのインスリン分泌活性の少なくとも１％、５％、１０％、２５％、５０％、７５％、１００％または１００％を超えるインスリン分泌活性を有するという条件で含む。
【０２８１】
有用な誘導体には、重要でないアミノ酸置換を有する（したがって天然配列とは異なるアミノ酸配列を有する）上述の断片の保存的変異体も、そのような変異体がインスリン分泌活性をいまだ有するという条件で含まれる。保存的置換の例には、１つの塩基性残基と他の塩基性残基（すなわちＡｒｇとＬｙｓ）の置換、１つの疎水性残基と他の疎水性残基（すなわちＬｅｕとＩｌｅ）の置換、または１つの芳香族残基と他の芳香族残基（すなわちＰｈｅとＴｙｒ）の置換などが含まれる。以下の６群はそれぞれ、互いに保存的置換であるアミノ酸を含む：
アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）およびスレオニン（Ｔ）
アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）
アスパラギン（Ｎ）およびグルタミン（Ｑ）
アルギニン（Ｒ）およびリジン（Ｋ）
イソロイシン（Ｉ）ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）およびバリン（Ｖ）
フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）およびトリプトファン（Ｗ）
それぞれの内容の全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，１４１，５４７号または第７，２７１，１４９号に記載の以下の融合タンパク質分子：エキセンディン−４（１〜３９）−ヒト血清アルブミンおよびヒト血清アルブミン−エキセンディン−４（１〜３９）を含むエキセンディン−４誘導体も同様に本明細書に記載の製剤および方法で有用である。
【０２８２】
５．５．３  インスリン分泌性ペプチドのアルブミンとの結合体
本明細書に記載の医薬製剤の有用なインスリン分泌性ペプチド結合体には、アルブミンに結合したインスリン分泌性ペプチドおよびそれらの誘導体が含まれる。いくつかの方法が、インスリン分泌性ペプチドをアルブミンに連結させるのに使用できる。特定の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドは、当業者に公知の任意の手法によってアルブミンに連結される。一部の実施形態では、共有結合を形成させるのに利用できる、アルブミン上の反応性官能基と反応できる反応基を含むように、インスリン分泌性ペプチドを修飾する。
【０２８３】
反応基は、例えば、血清タンパク質またはペプチド上の１つまたは複数のアミノ基、ヒドロキシル基またはチオール基と反応することによってアルブミンとの安定な共有結合を形成するその能力に関して選択される。好ましくは反応基は、アルブミン上の１つのアミノ基、ヒドロキシル基またはチオール基のみと反応する。好ましくは反応基は、アルブミン上の特定のアミノ基、ヒドロキシル基またはチオール基と反応する。本明細書に記載の方法の有用な結合体は、アルブミン上のアミノ基、ヒドロキシル基またはチオール基と反応基との反応を介してアルブミンに共有結合的に結合する修飾ペプチドまたはその修飾誘導体を含む。したがって、有用な結合体は、その反応基がアルブミンへの共有結合を形成する修飾ペプチドまたはその修飾誘導体を含む。
【０２８４】
タンパク質上の官能基と共有結合を形成させるのに、様々な活性カルボキシル基、特にエステルを、化学的反応基として使用できる。これらの連結剤において多数の様々なヒドロキシル基が使用できるが、最も好都合なのは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、Ｎ−ヒドロキシ−スルホスクシンイミド（ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ）、マレイミド−ベンゾイル−スクシンイミド（ＭＢＳ）、γ−マレイミド−ブチリロキシスクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）および３−マレイミドプロピオン酸（３−ＭＰＡ）であろう。
【０２８５】
第一級アミンは、ＮＨＳエステルの主な標的である。タンパク質のＮ末端に存在する利用可能なε−アミン基は、ＮＨＳエステルと反応する。しかし、タンパク質上のε−アミノ基は、ＮＨＳカップリングに望ましくないか、または利用可能でない可能性がある。５種のアミノ酸がその側鎖に窒素を有するが、リジンのε−アミンだけがＮＨＳエステルと顕著に反応する。ＮＨＳエステル結合反応が第一級アミンと反応する際に、アミド結合が形成でき、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドを放出する。反応基を含有するこれらのスクシンイミドを本明細書でスクシンイミジル基と称する。
【０２８６】
特定の実施形態ではアルブミン上の官能基は、アミノ酸残基３４（Ｃｙｓ３４）に位置する単一の遊離チオール基であり、化学反応基は（ＧＭＢＡまたはＭＰＡ）などのマレイミド含有基である。ＧＭＢＡは、γ−マレイミド−ブトリルアミドを表している。そのようなマレイミドを含有する基は、本明細書でマレイミド基と称される。
【０２８７】
一部の実施形態では、アルブミンは、インスリン分泌性ペプチド上のスクシンイミジル基またはマレイミド基に共有結合している。一部の実施形態では、アルブミンのアミノ基、ヒドロキシル基またはチオール基は、インスリン分泌性ペプチド上のスクシンイミジル基またはマレイミド基に共有結合している。一部の実施形態では、アルブミンシステイン３４チオールは、インスリン分泌性ペプチドのリジンのεアミノで［２−［２−［２−マレイミドプロピオンアミド（エトキシ）エトキシ］酢酸リンカーに共有結合する。
【０２８８】
特定の一実施形態では、反応基は、単一の所定のアミノ酸でペプチドに、任意選択で連結基を介して結合した単一のＭＰＡ反応基であり、ＭＰＡは、アルブミンの実質的に単一のアミノ酸残基、好ましくはシステイン３４でアルブミンに共有結合する。好ましい一実施形態ではアルブミンは組換え体ヒトアルブミンである。特定の実施形態では、反応基、好ましくはＭＰＡは、１つまたは複数の連結基、好ましくはＡＥＥＡ、ＡＥＡまたはアミノ−オクタン酸、より好ましくは８−アミノ−オクタン酸を介してペプチドに連結している。反応基、好ましくはＭＰＡが、複数の連結基を介してもペプチドに連結している実施形態の特定の例で、各連結基は、好ましくはＡＥＡ（（２−アミノ）エトキシ酢酸）、ＡＥＥＡ（［２−（２−アミノ）エトキシ）］エトキシ酢酸）およびアミノ−オクタン酸から、より好ましくは８−アミノ−オクタン酸からなる群から独立して選択され得る。一実施形態では、反応基、好ましくはＭＰＡは、１列に配置している１、２、３、４、５または６個のＡＥＥＡ連結基を介してペプチドに連結する。他の実施形態では、反応基、好ましくはＭＰＡは、１列に配置している１、２、３、４、５または６個の８−アミノ−オクタン酸連結基を介してペプチドに連結している。
【０２８９】
特定の実施形態では、反応基は、そのような反応基の連結に適したインスリン分泌性ペプチドの任意の残基に連結できる。この残基は、ペプチドの末端または内部の残基であり得る。特定の実施形態では、反応基は、ペプチドのカルボキシ末端またはアミノ末端に連結され得る。有利な実施形態では、反応基は、ペプチドの単一の部位に連結する。これは、当業者に公知の保護基を使用して達成され得る。特定の実施形態では、インスリン分泌性ペプチドの誘導体は、反応基の連結のために組み込まれた残基を含み得る。連結のために有用な残基は、リジン、アスパラギン酸およびグルタミン酸残基を含むがこれらに限定されない。残基はペプチドの内部または末端で組み込まれ得る。特定の実施形態では、反応基は、内部リジン残基に連結される。特定の実施形態では、反応基は、末端リジン残基に連結される。特定の実施形態では、反応基は、アミノ末端のリジン残基に連結される。特定の実施形態では、反応基は、カルボキシ末端のリジン残基、例えばＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１（７〜３７）またはエキセンディン−４のカルボキシ末端のリジン残基に連結される。
【０２９０】
アルブミンへの結合のために、インスリン分泌性ペプチドを反応基で修飾する様式は、インスリン分泌性ペプチドを含む様々な要素の性質に依存して著しく変化するであろう。合成手順は、簡潔であり、高収率を提供し、かつ高純度の生成物を可能にするように選択されよう。通常、化学的反応基は、インスリン分泌性ペプチド合成の最終段階で、例えば、活性エステルを形成する、カルボシキル基エステル化で作製されよう。修飾されたインスリン分泌性ペプチドの生成のための特定の方法は、それぞれの内容が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第６，３２９，３３６号、第６，８４９，７１４号または第６，８８７，８４９号に記載されている。
【０２９１】
インスリン分泌性ペプチド結合体は、アルブミンに非特異的にも結合し得る。アミノ基への結合は、特に非特異的結合のためのアミド結合の形成で一般に使用されよう。そのような結合を形成するために、インスリン分泌性ペプチド結合体に結合した化学的な反応基として、種々のカルボキシル基、特にエステルを使用できる。多数の異なるヒドロキシル基をこれらの連結剤で使用できるが、最も好都合なのは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）およびＮ−ヒドロキシ−スルホスクシンイミド（ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ）である。利用できる他の連結剤は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第５，６１２，０３４号に記載されている。
【０２９２】
一部の実施形態ではインスリン分泌性ペプチド結合体は、インスリン分泌性ペプチドに融合したアルブミン融合タンパク質、すなわちアルブミン分子またはその断片もしくは変異体を含み得る。アルブミン融合タンパク質は、アルブミンの全体または一部をコードするポリヌクレオチドに連結した治療用タンパク質の全てまたは一部をコードするポリヌクレオチドを含む核酸の翻訳によって生成され得る。一部の実施形態では、アルブミン融合タンパク質は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第７，１４１，５４７号または第７，２７１，１４９号に記載のグルカゴン様ペプチド１に融合したアルブミンまたはその断片もしくは変異体を含む。一部の実施形態では、アルブミン融合タンパク質は、エキセンディン−３またはその断片もしくは変異体に融合したアルブミンまたはその断片もしくは変異体を含む。一部の実施形態では、アルブミン融合タンパク質は、エキセンディン−４またはその断片もしくは変異体に融合したアルブミンまたはその断片もしくは変異体を含む。一部の実施形態では、アルブミン融合タンパク質は、米国特許第７，１４１，５４７号または第７，２７１，１４９号に記載の［Ｇｌｙ８］ＧＬＰ−１（７〜３６）−［Ｇｌｙ８］ＧＬＰ−１（７〜３６）−ヒト血清アルブミン（アルビグルチド）である。
【０２９３】
５．５．４  インスリン分泌性ペプチド合成
インスリン分泌性ペプチドは、当業者に公知の固相ペプチド化学の標準的方法によって合成され得る。例えば、インスリン分泌性ペプチド断片は、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ合成機を使用するＳｔｅｗａｒｄおよびＹｏｕｎｇによって記載（Ｓｔｅｗａｒｄ，Ｊ．Ｍ．  ａｎｄ  Ｙｏｕｎｇ，  Ｊ．Ｄ．、１９８４年、Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第２版（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＩＩ）の手順に従う固相化学の手法によって合成され得る。同様に多数の断片が合成され、次いで大きな断片を形成するために互いに連結され得る。これらの合成ペプチド断片は、特定の位置でのアミノ酸置換を伴っても作製され得る。固相ペプチド合成のための多数の手法の要約をＪ．Ｍ．Ｓｔｅｗａｒｄ  ａｎｄ  Ｊ．Ｄ．Ｙｏｕｎｇ、１９６３年、Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｃｏ．、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ）、およびＪ．  Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ、１９７３年、Ｈｏｒｍｏｎａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、２巻、４６頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）で確認できる。伝統的な溶液合成については、Ｇ．  Ｓｃｈｒｏｄｅｒ  ａｎｄ  Ｋ．  Ｌｕｐｋｅ、Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、１巻（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を参照。一部の実施形態ではインスリン分泌性ペプチドの合成は、それぞれの内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第６，３２９，３３６号、第６，８４９，７１４号または第６，８８７，８４９号に記載の通りである。
【０２９４】
５．５．５  結合
好ましくはペプチドおよびアルブミンは、モル比１：１で、またはモル比約１：１で結合体中に存在する。好ましい一実施形態では、ペプチドおよびアルブミンは、モル比１：１で、またはモル比約１：１で結合体中に存在し、ペプチドは反応基に、任意選択で連結基を介して、ペプチド上の実質的に１つだけの部位に連結され、反応基はアルブミン上の実質的に１つだけの部位でアルブミンに連結される。
【０２９５】
好ましくは、ペプチド結合体中のアルブミンはヒト血清アルブミンである。好ましくはアルブミンへの反応基の１つの連結部位は、好ましくはアルブミンのシステイン３４のチオールである（例えばマレイミド結合を介して）。特定の一実施形態では、反応基は、ペプチドに、任意選択で連結基を介して、１つの定められたアミノ酸で連結した１つのＭＰＡ反応基であり、ＭＰＡはアルブミンの実質的に１つのアミノ酸残基、好ましくはシステイン３４でアルブミンに共有結合で連結される。
【０２９６】
好ましい一実施形態では結合体は、マレイミド基を有する修飾ペプチドを、チオール含有血清タンパク質、好ましくはアルブミンとｐＨ３．０から８．０を含む条件の下で接触させることによって形成され、したがって好ましくは生理学的条件下で切断され得ない安定なチオエーテル結合を形成する。好ましい実施形態では血清タンパク質は、組換え体ヒトアルブミンである。
【０２９７】
一実施形態では、結合体の修飾ペプチドは、そのＣ末端でアミド化されている。他の実施形態では修飾ペプチドは、そのＣ末端でアミド化されない。結合体は、そのようなアミド化されたペプチドも含み得る。
【０２９８】
好ましい一実施形態では、１つの反応基は、修飾ペプチドの定められた部位に共有結合的に連結される。結合体の好ましい一実施形態では１つの反応基は、修飾ペプチドの定められた部位に共有結合的に連結され、反応基はアルブミンの１つの定められた部位、好ましくはアルブミンのアミノ酸残基Ｃｙｓ３４のチオール基に共有結合的に連結される。好ましくは、本発明の修飾ペプチドまたは結合体の反応基は、マレイミド基を含み、モル比約１：１のペプチド：アルブミン結合体を形成する。特定の実施形態では、ペプチド対血清タンパク質のモル比が１：１のものはさらに高い比より良い生物学的活性および少ない免疫原性を提供することから、さらに高い比よりもモル比１：１が好ましい（例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれるＳｔｅｈｌｅら、１９９７年、Ａｎｔｉ−Ｃｎａｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ、８巻：６７７〜６８５頁を参照）。
【０２９９】
好ましい一実施形態では、アルブミンは、組換え体ヒトアルブミンである。予め形成されたペプチド：アルブミン結合体の生成のための具体的な方法は、それぞれの内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる、２００６年４月１１日に出願された米国仮特許出願第６０／７９１，２４１号、表題「Ｐｒｏｃｅｓｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｅｆｏｒｍｅｄ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｌｂｕｍｉｎ」および２００６年１２月２２日に出願された米国特許出願第１１／６４５，２９７号（公開番号第２００７／０２６９８６３号）、表題「Ｐｒｏｃｅｓｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｅｆｏｒｍｅｄ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｌｂｕｍｉｎ  ａｎｄ  ａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｇｅｎｔ」に記載されている。ペプチド：アルブミン結合体の精製のための具体的な方法は、参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００５／０２６７２９３号に記載されている。
【０３００】
特定の実施形態では結合体は、以下：
【０３０１】
【化５】
2011506442.tif 000008
の通りであり（配列番号３１）、上式で、Ｘは前記タンパク質のアミノ酸のＳ、ＯまたはＮＨである。特定の実施形態では、前記タンパク質はアルブミンである。特定の実施形態では、前記タンパク質はアルブミンであり、Ｘは前記アルブミンのＣｙｓ３４のＳ（硫黄）である。結合体のアルブミンは上に記載の任意のアルブミンであり得る。
【０３０２】
特定の実施形態では、結合体は、以下：
【０３０３】
【化６】
2011506442.tif 000009
の通りであり（配列番号３２）、上式で、Ｘは前記タンパク質のアミノ酸のＳ、ＯまたはＮＨである。特定の実施形態では、前記タンパク質はアルブミンである。特定の実施形態では、前記タンパク質はアルブミンであり、Ｘは前記アルブミンのＣｙｓ３４のＳ（硫黄）である。結合体のアルブミンは下に記載の任意のアルブミンであり得る。
【０３０４】
５．５．５．１  アルブミン
当業者に公知の任意のアルブミンが本明細書に記載の製剤のインスリン分泌性ペプチド結合体を形成するために使用され得る。一部の実施形態ではアルブミンは、宿主種から単離され、結合体形成における使用のために精製された血清アルブミンであり得る。血清アルブミンは、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、オバイン、ウマまたはヒトアルブミンを含むが、これらに限定されない当業者に公知の任意の哺乳動物の血清アルブミンであり得る。一部の実施形態ではアルブミンはヒト血清アルブミンである。一部の実施形態ではアルブミンはウシ血清アルブミンである。
【０３０５】
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）は、血清の浸透圧のかなりの割合に関与しており、内因性および外因性のリガンドの担体としても機能する。その成熟型でＨＳＡは、分子量約６６ｋＤに相当する５８５アミノ酸の非グリコシル化単量体タンパク質である。その球状構造は、連続した一連の９つの二重ループを生じる１７本のジスルフィド架橋によって維持される。参照により全体として本明細書に組み込まれるＢｒｏｗｎ，  Ｊ．  Ｒ．、Ａｌｂｕｍｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ、Ｒｏｓｅｎｏｅｒ，  Ｖ．  Ｍ．ら（編集）、Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ（１９７７年）を参照。天然成熟ヒト血清アルブミン配列は：
【０３０６】
【化７】
2011506442.tif 000010
である。したがって、アルブミンの成熟型と形成された結合体は本明細書に記載の方法の範囲内である。特に記載しない限り、本明細書におけるアルブミンへの言及は、アルブミンの成熟型を指す。
【０３０７】
一部の実施形態では、アルブミンは、組換え体血清アルブミンである。組換え体アルブミンは、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、オバイン、ウマまたはヒトアルブミンを含むが、これらに限定されない当業者に公知の任意の哺乳動物のアルブミンであり得る。好ましい一実施形態では、組換え体アルブミンは、組換え体ヒトアルブミン、具体的には組換え体ヒトアルブミン（ｒＨＡ）である。様々な実施形態において、ｒＨＡは、哺乳動物または非哺乳動物生物で生成され得る。一実施形態では、ｒＨＡは、非哺乳動物生物で生成される。ｒＨＡの生成のために使用され得る非哺乳動物生物の例には、酵母、細菌、植物、真菌および昆虫が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態では、ｒＨＡは、植物全体または真菌全体で生成される。他の実施形態では、ｒＨＡは、培養植物細胞、培養真菌細胞または培養昆虫細胞で生成される。他の実施形態では、ｒＨＡは、非ヒト哺乳動物または非ヒト哺乳動物細胞で生成される。ｒＨＡの生成のために使用され得る非ヒト哺乳動物の例には、ウシ科、イヌ科、イノシシ科、齧歯目、ウサギ目および霊長目（ヒトを除く）のうちの１つに属するものが含まれるが、これらに限定されない。特定の一実施形態では、ｒＨＡの生成のために使用される非ヒト哺乳動物は、ウシ、イヌ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラット、マウス、ウサギ、チンパンジーおよびゴリラからなる群から選択される。他の実施形態では、ｒＨＡの生成のために使用される非ヒト哺乳動物細胞は、ウシ、イヌ、ブタ、オバイン、カプリン、齧歯類、ウサギ、または非ヒト霊長類細胞であるが、これらに限定されない。ヒト血液または漿液から精製されたアルブミンと比較して、非ヒト生物で生成されたｒＨＡの主な有利点は、ｒＨＡの製造過程においてヒト由来産物がないことである。そのような管理された生成方法の使用は、構造の不均一性が低い、より純粋な生成物をもたらす。
【０３０８】
一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体は、アルブミン前駆体を含み得る。ヒトアルブミンは、肝臓の肝細胞で合成され、次いで血流に分泌される。この合成は、まず第１に前駆体、プレプロ−ＨＳＡ（新生ポリペプチドを分泌経路に方向付ける１８アミノ酸のシグナル配列を含む）を生じる。したがって、アルブミン前駆体と形成された結合体は、本明細書に記載の結合体の範囲内である。
【０３０９】
特定の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体が、アルブミンの分子性変異体を含み得る。アルブミンの変異体は、ヒト集団におけるアルブミンの多型から生じる天然の変異体を含み得る。ヒト血清アルブミンの３０を超える明らかに異なる遺伝的変異体が、様々な条件下での電気泳動分析によって同定されている。例えば、それぞれの内容が参照により全体として本明細書に組み込まれるＷｅｉｔｋａｍｐら、Ａｎｎ．  Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅｔ．、３６巻（４号）：３８１〜９２頁（１９７３年）、Ｗｅｉｔｋａｍｐ、Ｉｓｒ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｓｃｉ．、９巻（９号）：１２３８〜４８頁（１９７３年）、Ｆｉｎｅら、Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ、２５巻（８号）：２９１〜４頁（１９７６年）、Ｆｉｎｅら、Ｒｅｖ．  Ｆｒ．  Ｔｒａｎｓｆｕｓ．  Ｉｍｍｕｎｏｈｅｍａｔｏｌ．、２５巻（２号）：１４９〜６３頁（１９８２年）、Ｒｏｃｈｕら、Ｒｅｖ．  Ｆｒ．  Ｔｒａｎｓｆｕｓ．  Ｉｍｍｕｎｏｈｅｍａｔｏｌ．、３１巻（５号）：７２５〜３３頁（１９８８年）、Ａｒａｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ  ８６巻（２号）：４３４〜８頁（１９８９年）を参照。したがって、アルブミンの分子変異体と形成された結合体は、本明細書に記載の結合体の範囲内である。
【０３１０】
特定の一実施形態では、アルブミン変異体は、天然の成熟ヒト血清アルブミンの配列と比較して５、４、３、２または１つを超えるアミノ酸置換、欠失または挿入を有さない。
【０３１１】
一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体は、アルブミンと実質的な相同性を共有するアルブミンの誘導体を含み得る。例えば結合体は、天然のヒト血清アルブミン、すなわち配列番号３０に少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％の同一性を共有するアミノ酸配列を有するアルブミン相同体と形成され得る。この文脈における同一性百分率は、配列をアラインし、かつ最大の配列相同性百分率を達成するために必要であればギャップを導入した後に、ペプチド中の対応するアミノ酸残基と同一（すなわちアライメントにおける所与の位置においてアミノ酸残基が同じ残基である）または類似である（すなわち、上記に論じた通り、アライメントにおける所与の位置においてアミノ酸置換が保存的置換である）候補配列中のアミノ酸残基の百分率を意味する。特定の実施形態では、アルブミン誘導体は、天然に存在するアルブミン配列とのその配列同一性百分率または配列類似性百分率によって特徴付けられる。配列同一性および類似性の百分率を含む配列相同性は、当技術分野で周知の配列アライメント手法、好ましくはＢＬＡＳＴなど、この目的のために設計されたコンピューターアルゴリズムを使用して、前記コンピューターアルゴリズムの初期設定パラメータまたはそれらを含むソフトウェアパッケージを使用して決定される。
【０３１２】
特定の実施形態では、アルブミン相同体は、遊離システインを含む。特定の実施形態では、アルブミン相同体は、１つの遊離システインを含む。一部の実施形態では、アルブミン相同体は、遊離のシステイン３４を含む。
【０３１３】
一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体は、ヒト血清アルブミンの少なくとも１００、２００、３００、４００、５００または５００を超えるアミノ酸のＮ末端断片を含み得る。他の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体は、Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ  Ｎ末端配列の改変を含むヒト血清アルブミン変異体を含み得る。他の実施形態ではインスリン分泌性ペプチド結合体は、３個のＮ末端アミノ酸残基Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｈｉｓ中に少なくとも１つの欠失を含み得る。他の実施形態ではインスリン分泌性ペプチド結合体は、Ｇｌｕ−３、Ａｌａ−２、Ｇｌｕ−１、Ｐｈｅ０−ＨＳＡ（配列番号３０の１〜５８５）またはそれ自体のＮ末端断片などのアルブミンのＮ末端伸長を含み得る。本発明の他の実施形態ではヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）変異体は、ＨＳＡ（配列番号３０の２〜５８５）、ＨＳＡ（配列番号３０の３〜５８５）、ＨＳＡ（配列番号３０の４〜５８５）、Ａｓｐ−Ａｌａ−ＨＳＡ（配列番号３０の４〜５８５）、Ｘａａ３−ＨＳＡ（配列番号３０の１〜５８５）（ここでＸａａ３は天然ＨＳＡにおいて位置３を占めるＨｉｓ残基が置換されているアミノ酸残基である）、およびそれ自体のＮ末端断片からなる群から選択される。
【０３１４】
一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体は、アルブミンの構造誘導体を含み得る。アルブミンの構造誘導体には、アルブミン型活性を有するタンパク質またはペプチド、例えばアルブミンの機能的断片が含まれ得る。一部の実施形態では、誘導体は、アルブミンの抗原決定基、すなわち抗アルブミン抗体によって認識され得るポリペプチドの部分である。一部の実施形態では、組換え体アルブミンは、ヒトにおけるヒト血清アルブミンの血漿半減期の７５％〜１００％の血漿半減期を有することが好ましく、かつヒト血清アルブミンをコードする遺伝子の改変によって得られる任意のタンパク質であり得る。例示的かつ非限定的には、組換え体アルブミンは、参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第６，７８７，６３６号に記載の通り、微量金属、例えばニッケルおよび／または銅の結合が低減または消失するように、アルブミンの微量金属結合領域にだけ挿入または欠失を含有し得る。具体的には、組換え体アルブミンは、それがニッケルおよび／または銅などの微量金属の結合の低減または消失を示すように、Ｎ末端領域または結合領域ＶＩで、Ｎ末端の少なくとも１アミノ酸の短縮を介するなどで改変できる、。この結合領域への他の適切な改変には、この部位で最も高い微量金属結合を破壊するのに十分である延長または挿入などの変異が含まれる。アルブミンによる微量金属結合の低下は、アルブミン組成物で治療される対象における微量金属へのアレルギー反応の可能性を低下させるのに有利である。
【０３１５】
アルブミンの構造誘導体は、これだけに限定されないが、オリゴヌクレオチド介在（部位特異的）変異誘発、アラニン置換およびポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）変異誘発を含めた、当業者に公知の任意の方法を使用して生成され得る。部位特異的変異誘発（Ｃａｒｔｅｒ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｊ．  ２３７巻：１〜７頁（１９８６年）、Ｚｏｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １５４巻：３２９〜５０頁（１９８７年）を参照）、カセット変異導入、制限部位選択変異導入（Ｗｅｌｌｓら、Ｇｅｎｅ  ３４巻：３１５〜３２３頁（１９８５年）を参照）または他の公知の手法が、アルブミン変異体ＤＮＡまたはアルブミンの構造誘導体をコードする配列を生成するためのクローン化されたアルブミンをコードするＤＮＡ上で実施できる（Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（ｃｕｒｒｅｎｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ）、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、３ｄ．ｅｄ．Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（２００１年））。これらの開示それぞれの内容を参照により全体として本明細書に組み込む。
【０３１６】
特定の実施形態では、アルブミン誘導体には、アルブミンタンパク質のｉｎ  ｖｉｔｒｏ修飾によって取得できる、ヒトにおけるヒト血清アルブミンの血漿半減期の、好ましくは７５％〜１００％の血漿半減期を有するいかなる巨大分子も含まれる。一部の実施形態では、アルブミンは、脂肪酸で修飾される。一部の実施形態では、アルブミンは、金属イオンで修飾される。一部の実施形態では、アルブミンは、アルブミンへの高い親和性を有する小分子で修飾される。一部の実施形態では、アルブミンは、これだけに限定されないがグルコース、ラクトース、マンノースおよびガラクトースを含めた糖で修飾される。
【０３１７】
一部の実施形態では、インスリン分泌性ペプチド結合体は、アルブミン融合タンパク質、すなわち治療用タンパク質またはその断片もしくは変異体に融合したアルブミン分子、またはその断片もしくは変異体を含み得る。アルブミン融合タンパク質は、アルブミンの全体または一部をコードするポリヌクレオチドに連結した治療用タンパク質の全体または一部をコードするポリヌクレオチドを含む核酸の転写によって生成させることができる。当業者に公知の任意のアルブミン融合タンパク質が、本発明の過程による結合体の形成に使用できる。例示的アルブミン融合タンパク質は、それぞれの内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第６，５４８，６５３号、第６，６８６，１７９号、第６，９０５，６８８号、第６，９９４，８５７号、第７，０４５，３１８号、第７，０５６，７０１号、第７，１４１，５４７号および第７，２７１，１４９号に記載されている。一部の実施形態では、アルブミン融合タンパク質は、米国特許第７，１４１，５４７号または第７，２７１，１４９号に記載されているグルカゴン様ペプチド１に融合したアルブミンまたはその断片もしくは変異体を含む。一部の実施形態では、アルブミン融合タンパク質は、エキセンディン−３またはその断片もしくは変異体に融合したアルブミンまたはその断片もしくは変異体を含む。一部の実施形態では、アルブミン融合タンパク質は、エキセンディン−４またはその断片もしくは変異体に融合したアルブミンまたはその断片もしくは変異体を含む。一部の実施形態では、アルブミン融合タンパク質は、マルチイヤーのエキセンディン−４またはその断片もしくは変異体に融合したアルブミンまたはその断片もしくは変異体を含む。
【０３１８】
本明細書に記載の結合体を形成するために使用されるアルブミンは、当業者に公知の方法または材料を使用して得られる。例えば、アルブミンは、商業的供給元、例えばＮｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａ  ＵＫ  Ｌｔｄ（Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ、ＵＫ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅから得られる組換え体ヒトアルブミン）、Ｃｏｒｔｅｘ−Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｓａｎ  Ｌｅａｎｄｒｏ、Ｃａｌｉｆ．、血清アルブミン）、Ｔａｌｅｃｒｉｓ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ、Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ、血清アルブミン）、ＺＬＢ  Ｂｅｈｒｉｎｇ（Ｋｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｒｕｓｓｉａ，ＰＡ）またはＮｅｗ  Ｃｅｎｔｕｒｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ、Ａｌａ．；Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓから得られる組換え体ヒトアルブミン）から得られる。
【０３１９】
一部の実施形態では、アルブミンは、ＲＥＣＯＭＢＵＭＩＮ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａ  ＵＫ  Ｌｔｄ．（Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ，ＵＫ））である。Ｒｅｃｏｍｂｕｍｉｎ（登録商標）は、組換え酵母技術を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで生成される組換え体ヒトアルブミン（ｒＨＡ）であり、この技術では、遺伝的に改変された酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）が可溶性ｒＨＡを分泌し、続いてそれが、生物製剤製造のための賦形剤または医学的デバイスのコーティングとしての使用のために回収、精製および処方される。ＨＳＡに優るｒＨＡの主な有利点は、製造過程で動物由来またはヒト由来の生成物を使用せずに酵母でそれが発現されることである。そのような管理された生成方法の使用は、構造的不均一性が低い、より純粋な生成物をもたらす。以前の研究は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでそれらの生物化学的特徴、放射線標識効率および生物学的挙動に関して可溶性ｒＨＡとＨＳＡの間に顕著な差異がないことを示している。Ｄｏｄｓｗｏｒｔｈら、１９９６年、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ａｐｐｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２４巻：１７１〜１７６頁を参照。
【０３２０】
一部の実施形態では、アルブミンは、ＭＥＤＷＡＹ（登録商標）（ＡＬＢＲＥＣ（登録商標）、ＧＢ−１０５７、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ  Ｔａｎａｂｅ  Ｐｈａｒｍａ  Ｃｏｒｐ．、Ｏｓａｋａ、Ｊａｐａｎ）である。ＭＥＤＷＡＹは、組換え酵母技術を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで生成される組換え体ヒトアルブミン（ｒＨＡ）であり、この技術では、遺伝的に改変された酵母（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）が可溶性ｒＨＡを分泌し、続いてそれが、示されている処置のために回収、精製および処方され得る。
【０３２１】
一部の実施形態では、結合体に使用されるアルブミン変異体は、ＡＬＢＡＧＥＮ（商標）（Ｎｅｗ  Ｃｅｎｔｕｒｙ  Ｐｈａｒｍａ、Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ、ＡＬ）である。ＡＬＢＡＧＥＮは、ＨＳＡ（２〜５８５）であり、１つのＮ末端欠失によって生じる金属結合特性の改変により低アレルギー性である。
【０３２２】
一部の実施形態ではアルブミンは、ＡＬＢＵＣＵＬＴ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａ  ＵＫ  Ｌｔｄ．（Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ、ＵＫ））である。Ａｌｕｂｕｃｕｌｔ（商標）は、特に細胞培養での適用のために設計された、酵母から得られる組換え体ヒトアルブミン溶液である。それは、動物またはヒト由来の物質を使用せずに産生され、したがってヒトまたは動物由来のウイルスまたはプリオン混入の危険がない。
【実施例】
【０３２３】
本発明は、どのような方法においても限定することを意図しない以下の実施例により例示される。
【０３２４】
（実施例１）
６．１  エキセンディン−４アルブミン結合体の調製
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）Ｃｙｓ３４と結合したエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２（以下、下記実施例では「エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体」）を、それぞれの内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第６，３２９，３３６号、米国特許出願公開第２００５／０２６７２９３号、２００６年１２月２２日に出願された米国特許出願第１１／６４５，２９７号、表題「Ｐｒｏｃｅｓｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｅｆｏｒｍｅｄ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｌｂｕｍｉｎ」に記載の通り調製した。
【０３２５】
エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２の調製
エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２を、参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第６，３２９，３３６号に記載の方法により調製した。簡潔には、１００μｍｏｌスケールでのエキセンディン−４の固相ペプチド合成を、手作業での固相合成、およびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡレジンを使用するＳｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを使用して実施した。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手作業で実施し、ＣＨＣｌ３ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）５ｍｌに溶解させた３当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４の溶液で２時間レジンを処理することによって完了させた。次いでレジンをＣＨＣｌ３（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、３−マレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）へのアミノエトキシエトキシ酢酸（ＡＥＥＡ）基の添加のために合成を再自動化した。レジンの切断および生成物の単離を８５％ＴＦＡ／５％ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを使用して実施し、続いてドライアイスで冷却したＥｔ２Ｏによって沈殿させた。生成物をＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリＨＰＬＣシステムを使用する調製用逆相ＨＰＬＣによって精製した。
【０３２６】
エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体の調製
次にエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２を、その内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる、２００６年１２月２２日に出願された米国特許出願第１１／６４５，２９７号（公開番号２００７／０２６９８６３）、表題「Ｐｒｏｃｅｓｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｅｆｏｒｍｅｄ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｌｂｕｍｉｎ  ａｎｄ  ａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｇｅｎｔ」に記載の通りヒト組換え体血清アルブミンに結合させた。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅで発現させた組換え体アルブミンを精製し、チオグリコール酸で処理し、結合の前にフェニルセファロースＨＩＣで精製した。結合反応物は、最終モル比０．７：１でメルカプトアルブミン富化アルブミン１７５μｌと混合した１０ｍＭエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２  ３５μｌを含んでいた。反応を３０分間、３７℃で進行させ、次いで液体クロマトグラフィー／質量分析およびブチルセファロースＨＩＣによる精製のために４Ｃで保存した。
【０３２７】
その内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる、２００６年１２月２２日に出願された米国特許出願第１１／６４５，２９７号（公開番号２００７／０２６９８６３）、表題「Ｐｒｏｃｅｓｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｅｆｏｒｍｅｄ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｌｂｕｍｉｎ  ａｎｄ  ａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｇｅｎｔ」に記載の通り、結合反応混合物を塩含有率が高い水性緩衝剤で平衡化した疎水性支持体に、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体を添加し、塩濃度を減少させるこう配を支持体に適用し、溶出されたアルブミン結合体を回収することによって精製した。
【０３２８】
（実施例２）
６．２  エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体を含む製剤の安定性検査
この実施例は、エキセンディン−４−アルブミン結合体のタンパク質構造の保存および安定性に関して評価され、それらに適した条件および賦形剤を提供するものとして同定された製剤を記載する。
【０３２９】
６．２．１  製剤マトリックス
表１に示す賦形剤を用いて２７の製剤を調製した。エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体製剤は、（１）ｐＨ範囲５．０〜７．０（５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０）、（２）１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ５．０）または１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ６．０〜７．０）、（３）張性調整剤としての１５０ｍＭ塩化ナトリウム、５％（ｗ／ｖ）ソルビトール、９％（ｗ／ｖ）ショ糖または５％（ｗ／ｖ）グリセロール、（４）安定剤としての５ｍＭオクタン酸ナトリウム、５ｍＭオクタン酸ナトリウム＋５ｍＭ  Ｎａ−Ｎ−アセチルトリプトファン、５ｍＭオクタン酸ナトリウム＋５ｍＭ  Ｈ−Ｇｌｕｔまたは５ｍＭ  オクタン酸ナトリウム＋２０ｍＭアルギニン、（５）界面活性剤としての０．１％プルロニック（ｗ／ｖ）Ｆ６８、および（６）濃度１０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬまたは４０ｍｇ／ｍＬのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体を含んでいた。
【０３３０】
全ての賦形剤（酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ソルビトール、ショ糖、グリセロール、オクタン酸ナトリウム、Ｎａ−Ｎ−アセチルトリプトファン、Ｈ−ｇｌｕｔ、アルギニン、プルロニックＦ６８）の保存物を調製し、滅菌濾過し、４℃で保存した。各賦形剤を最終濃度まで加え、滅菌濾過し、溶液のｐＨを調整した。使用に供するため、製剤を滅菌０．５ｍｌガラスバイアルに入れた。
【０３３１】
【表１】
2011506442.tif 000011
６．２．２  製剤検査のための方法
表２に要約する通り、いくつかの方法を製剤中のエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体の物理的および化学的安定性を特徴付けるために実行した。清澄度、色および粒子の存在についての目視検査に基づく外観分析を製剤の品質を決定するために実施した。ｐＨメーターおよび浸透圧計を許容可能な範囲内での製剤のｐＨおよび浸透圧の維持を判定するために使用した。ＯＤ２８０によるペプチド濃度分析および相互作用疎水性クロマトグラフィー（ＨＩＣ−ＨＰＬＣ）を許容可能な範囲内での製剤のペプチド濃度の維持を判定するために実施した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥを製剤中のペプチドの純度を評価するために使用した。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）を凝集、純度および一般的安定性の検査として実行した。逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）は、相対的疎水性に基づいて分子を分離し、製剤中のペプチドの分解物をモニターするために使用した。
【０３３２】
【表２】
2011506442.tif 000012
４℃、２５℃および４０℃で最長６カ月間まで保存した各製剤中のエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体の安定性を表３に要約する通りに検査した。
【０３３３】
【表３】
2011506442.tif 000013
６．２．３  製剤のｐＨ、濃度および浸透圧
製剤のｐＨ結合体濃度および浸透圧を０時点；５℃、２５℃および４０℃における３カ月時点；、ならびに５℃および２５℃における６カ月時点に、表４から９に示す通り評価した。グルタミン酸、グリセロールおよびアルギニンを含む製剤は、高浸透圧であることが見出され、その後、１カ月後に不安定性によりマトリックスから除かれた。ショ糖を含む製剤は、１カ月後に、非イオン性張性調整剤との重複によりマトリックスから除かれた。エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体を４０ｍｇ／ｍｌの濃度で含有する一部の製剤は、それらの標的結合体濃度が、ＯＤ２８０による観察よりも２ｍｇ超少なかった。
【０３３４】
【表４】
2011506442.tif 000014
【０３３５】
【表５】
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【０３３６】
【表６】
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【０３３７】
【表７】
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【０３３８】
【表８】
2011506442.tif 000018
【０３３９】
【表９】
2011506442.tif 000019
６．２．４  温度の効果
様々な製剤中のエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体の安定性プロファイルを促進的安定性条件下（温度２５℃または４０℃）で６カ月間を超えて検査した。主な分解産物としてペプチド分解物および凝集物が挙げられる。
【０３４０】
図１に示す通り、オクタン酸ナトリウムまたはオクタン酸ナトリウムとＮａ−Ｎ−アセチルトリプトファンとの組合せのいずれかを含有するｐＨ６．０のソルビトール製剤は、２５℃で６カ月後に他の製剤よりわずかに（０．０５〜０．２％）良かった。同様に図２に示す通り、オクタン酸ナトリウムまたはオクタン酸ナトリウムとＮａ−Ｎ−アセチルトリプトファンとの組合せのいずれかを含有するｐＨ６．０のソルビトール製剤は、４０℃で３カ月後に他の試料と比較してより高い純度（０．４〜４．０％）を維持していた。
【０３４１】
図３および４は、ＲＰ−ＨＰＬＣで決定した２５℃で６カ月間および４０℃で３カ月間それぞれインキュベートした製剤中のペプチド分解物の経時変化を表す。ｐＨ６．０で２０ｍｇ／ｍｌまたは４０ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体を含有する製剤およびｐＨ７．０の製剤などの高濃度かつ高ｐＨの製剤は、２５〜４０℃での他の試料より多くのペプチド分解物（＞２０％）を含有することが見出された。一般的に、ｐＨ５．０の製剤などｐＨがより低い製剤は、４０℃でエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体のより少ないレベルのペプチド分解物を有する。
【０３４２】
６．２．５  緩衝剤の効果
１０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝剤およびリン酸ナトリウム緩衝剤中でのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体の安定性を検査した。
【０３４３】
図５のＳＥＣ−ＨＰＬＣ純度比較によって示される通り、酢酸およびリン酸緩衝剤中のエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体の安定性は、リン酸緩衝剤を含有する製剤が６カ月後にわずかに良好であったが、顕著には異ならないようであった。
【０３４４】
図６のＲＰ−ＨＰＬＣペプチド分解物比較によって示す通り、ペプチド分解物の著しい増加（＞１０％）が、６カ月の終了時に酢酸ナトリウム緩衝剤中の製剤と比較してリン酸ナトリウム緩衝製剤において観察された。
【０３４５】
図７は、酢酸ナトリウム中のｐＨ５．０の製剤とリン酸ナトリウム緩衝剤中のｐＨ６．０の製剤との２５℃で６カ月後のＳＤＳ−ＰＡＧＥ比較を示す。ｐＨ５．０の酢酸ナトリウム緩衝剤を含有する製剤などの低ｐＨの製剤は、主バンドの下に低分子量の不純物および微量のより低い分子量の分解産物を示した。
【０３４６】
６．２．６  ｐＨの効果
エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体の安定性を、ｐＨ５．０、ｐＨ６．０およびｐＨ７．０が含まれる範囲のｐＨを有する製剤で検査した。図８は、２５℃で６カ月間インキュベートした様々なｐＨの製剤のＳＥＣ−ＨＰＬＣ純度比較を示す。塩を含有するｐＨ５．０とｐＨ６．０との製剤は、両製剤が約９６．０％の純度を保持して同程度であった。ほとんどの時点でｐＨ７．０の製剤は、ｐＨ５．０およびｐＨ６．０の製剤よりもわずかに低い純度を示した。
【０３４７】
図９は、２５℃で６カ月間インキュベートした様々なｐＨの製剤のＲＰ−ＨＰＬＣペプチド分解物比較を示す。ｐＨ５．０の製剤は、約２０μｇ／ｍＬの最も少ない量のペプチド分解物を有し、ｐＨ６．０の製剤は約４０μｇ／ｍＬのペプチド分解物を有し、かつｐＨ７．０の製剤は約６０μｇ／ｍＬを超えるペプチド分解物を有した。
【０３４８】
６．２．７  張性調整剤の効果
エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体の安定性を、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、５％（ｗ／ｖ）ソルビトール、９％（ｗ／ｖ）ショ糖および５％（ｗ／ｖ）グリセロールを含めた様々な張性調整剤を含有する製剤で検査した。
【０３４９】
図１０は、２５℃で０〜６カ月間インキュベートした様々な張性調整剤を含有するｐＨ５．０の製剤のＳＥＣ−ＨＰＬＣ純度比較を表し、この図に示す通り、塩化ナトリウム製剤とソルビトール製剤とは６カ月後に同程度（純度で約０．２％内）であった。
【０３５０】
図１１は、２５℃で０〜６カ月間インキュベートした様々な張性調整剤を含有するｐＨ５．０の製剤のＲＰ−ＨＰＬＣペプチド分解物比較を表し、この図に示す通り、ソルビトール製剤が塩化ナトリウム製剤よりわずかに少ない（約１０％）ペプチド分解物を含有して、塩化ナトリウム製剤とソルビトール製剤とは６カ月後に同程度であった。
【０３５１】
６．２．８  安定剤の効果
５ｍＭオクタン酸ナトリウムに加えて、この検査で様々な安定剤：５ｍＭ  Ｎａ−Ｎ−アセチルトリプトファン、５ｍＭ  Ｈ−グルタミン酸、２０ｍＭ  アルギニンおよび窒素を検査した。
【０３５２】
図１２は、２５℃で０〜６カ月間インキュベートした様々な安定剤を含有するｐＨ６．０の製剤のＳＥＣ−ＨＰＬＣ純度比較を示す。２５℃での６カ月後、５ｍＭオクタン酸ナトリウムを含有する製剤ならびに５ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび２０ｍＭアルギニンを含有する製剤は、約９６．２％の純度を維持しており、５ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび窒素を含有する製剤は約９５．９％の純度を維持していた。
【０３５３】
図１３は、２５℃で１〜６カ月間インキュベートした様々な安定剤を含有するｐＨ６．０の製剤のＲＰ−ＨＰＬＣペプチド分解物比較を表し、この図に示す通り、２０ｍＭアルギニンを含有する製剤は、５ｍＭオクタン酸ナトリウムまたは窒素重層を伴う５ｍＭオクタン酸ナトリウムのいずれかを含有する製剤よりもわずかに少ないペプチド分解物（約１０％）を示した。
【０３５４】
６．２．９  結合体濃度の効果
１０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌおよび４０ｍｇ／ｍｌを含む範囲のエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体の濃度を検査した。
【０３５５】
図１４は、１０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌおよび４０ｍｇ／ｍｌのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体を含有するｐＨ６．０ソルビトール製剤を２５℃で６カ月間保存した場合でのＳＥＣ−ＨＰＬＣ純度比較を表す。純度は、結合体濃度依存であることが観察された。２５℃での６カ月間のインキュベーション後で最も高い純度は、２０ｍｇ／ｍｌ結合体を含有する製剤より約０．９％高い純度、４０ｍｇ／ｍｌ結合体を含有する製剤より約１．６％高い純度のレベルを維持した１０ｍｇ／ｍｌの結合体を含有する製剤で観察された。
【０３５６】
図１５は、１０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌおよび４０ｍｇ／ｍｌのＣＪＣ−１１３４−ＰＣを含有するｐＨ６．０ソルビトール製剤の２５℃での６カ月間のインキュベーション後のＲＰ−ＨＰＬＣ純度比較を表す。同様に、１０ｍｇ／ｍｌ結合体を含有する製剤が約４０μｇ／ｍＬの最も少ない量のペプチド分解物を有することから、ペプチド分解物の量は結合体濃度依存であることが見出された。分解は、２５℃での６カ月間のインキュベーション後に１０ｍｇ／ｍｌ製剤で観察された分解と比較して２０ｍｇ／ｍｌ製剤で約１．７２倍多く、４０ｍｇ／ｍｌ製剤で約３倍多かった。
【０３５７】
６．２．１０  結論
ペプチド分解物は、緩衝剤組成およびｐＨの組合せによって影響されるようである。エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体の製剤のためには低いｐＨが好ましい。塩化ナトリウムとソルビトールの両方がエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体での適合性の張性調整剤であることが見出された。
【０３５８】
ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析は、より高いインキュベーション温度でインキュベートしたｐＨ５．０およびｐＨ６．０の製剤について同程度の純度データを示したが、一方ＲＰ−ＨＰＬＣは、最も少ない量のペプチド分解物がｐＨ５．０製剤で生じたことを示した。ペプチド分解物は、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体製剤においてより重要な安定性の問題であると考えられることから、有用なｐＨは１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝剤でのｐＨ５．０である。
【０３５９】
張性調整剤に関して、酢酸ナトリウム緩衝剤および１５０ｍＭ塩化ナトリウムまたは５％（ｗ／ｖ）ソルビトールのいずれかを含有するｐＨ５．０製剤は、４℃、２５℃および４０℃でインキュベートした場合に６カ月間の経過にわたって同程度であった。ＳＥＣ−ＨＰＬＣデータは、両方の製剤について４℃で６カ月間で０．５％未満の純度の低下を示し、２５℃で約２．５％の低下を示した。４０℃で３カ月後に約５．０％の純度の低下がＳＥＣ−ＨＰＬＣによって両方の製剤について観察された。これらのデータは、図１６（１５０ｍＭ塩化ナトリウム製剤）および図１７（５％（ｗ／ｖ）ソルビトール製剤）にそれぞれ示されている。さらにＲＰ−ＨＰＬＣ分析は、これら２種の製剤が４℃および２５℃で６カ月後にペプチド分解物をそれぞれ約８〜２０μｇ／ｍＬに最小化したことを示す。これらのデータは、図１８（１５０ｍＭ塩化ナトリウム製剤）および図１９（５％（ｗ／ｖ）ソルビトール製剤）にそれぞれ示されている。
【０３６０】
したがって、塩化ナトリウムおよびソルビトールの両方の張性調整剤は、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体での製剤に対して適合性である。安定剤に関して、５ｍＭオクタン酸ナトリウムおよび２０ｍＭアルギニン製剤は、２５℃で６カ月後に純度および低いレベルのペプチド分解物を維持した。
【０３６１】
このように有用な製剤は、５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．１％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８および１５０ｍＭ塩化ナトリウムまたは５％（ｗ／ｖ）ソルビトールのいずれかを含有する１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝剤ｐＨ５．０中の１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体を含む。
【０３６２】
（実施例３）
６．３  防腐剤
様々な防腐剤を製剤（１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体を含む１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝剤ｐＨ７．０、または１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝剤ｐＨ５．０）とのそれらの適合性について検査した。防腐剤には、０．００５％、０．１％または１．０％（ｗ／ｖ）のｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブチルパラベン、エチルパラベン、メチルパラベン、フェノール、グリセロール、キシリトール、レソルシノール、カセコール、２，６−ジメチルシクロヘキサノール、２−メチル−２，４−ペンタジオール、デキストラン、ポリビニルピロリドン、２−クロロフェノール、塩化ベンゼトニウム、メルチオレート（チメロサール）、安息香酸（プロピルパラベン）ＭＷ１８０．２、安息香酸ＭＷ１２２．１２、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウムおよび塩化セチルピリジニウムが含まれる。
【０３６３】
メタノール、エタノール、イソプロパノール、グリセロール、レソルシノール、２−メチル−２，４−ペンタジオール、メルチオレート（チメロサール）、塩化ベンザルコニウム、および安息香酸ナトリウムを濃度０．００５％、０．１％、１．０％（ｗ／ｖ）で含有する製剤は、透明な溶液を生じた。濃度０．００５％、０．１％または１．０％（ｗ／ｖ）の塩化セチルピリジニウムは、ｐＨ７．０のリン酸ナトリウム緩衝剤を含有する製剤で使用された場合は透明な溶液を生じ、ｐＨ５．０の酢酸ナトリウム緩衝剤を含有する製剤で使用された場合は濁った溶液を生じた。
【０３６４】
ブチルパラベン、エチルパラベンまたはメチルパラベンは濃度０．００５％および０．１％（ｗ／ｖ）で透明な溶液を生じたが、これらそれぞれの防腐剤は濃度０．３％、０．５％、０．７％および１．０％（ｗ／ｖ）で溶液に不溶性になる。
【０３６５】
同様にｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、フェノール、塩化ベンゼトニウムまたはクロロブタノールを含有する製剤は、濃度０．１％（ｗ／ｖ）で透明であったが、これらの防腐剤を１％（ｗ／ｖ）含有する場合は不透明、混濁または不溶性である。
【０３６６】
安息香酸（プロピルパラベン）ＭＷ１８０．２または安息香酸ＭＷ１２２．１２を含有する製剤は、濃度０．００５％（ｗ／ｖ）で透明な溶液を生じたが、濃度０．１％および１．０％（ｗ／ｖ）ではそれぞれ不溶性であった。
【０３６７】
この混濁および不溶性の問題は、緩衝剤（酢酸ナトリウムもしくはリン酸ナトリウム）、または他の成分と、製剤で選択された防腐剤との間の潜在的不適合性として確認された。
【０３６８】
主要な製剤とのそれらの適合性、安全性およびそれらの使用頻度に基づいて、メタノール、エタノール、イソプロパノール、グリセロール、レソルシノール、２−メチル−２，４−ペンタジオール、メルチオレート（チメロサール）、塩化ベンザルコニウム、安息香酸ナトリウムおよび塩化セチルピリジニウムがエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２アルブミン結合体製剤で有用な防腐剤である。
【０３６９】
（実施例４）
６．４  １０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝剤ｐＨ５．０、５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．１％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８および１５０ｍＭ  ＮａＣｌ中でのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体の安定性
この実施例は、５℃、２５℃（１２カ月間まで）および４０℃（３カ月間まで）でインキュベートした場合の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝剤ｐＨ５．０、５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．１％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８および１５０ｍＭ塩化ナトリウム中に処方したエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体の安定性を示す。
【０３７０】
全ての賦形剤（酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、オクタノエート、プルロニックＦ６８）の保存物を調製し、滅菌濾過し、４℃で保存した。各賦形剤を最終濃度まで加え、滅菌濾過し、溶液のｐＨを調整した。製剤を使用に供するために、１３ｍｍのグレイブチルストッパーを有する滅菌３．０ｍｌ  Ｔｙｐｅ  Ｉガラスバイアルに入れた。
【０３７１】
エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体の安定性を、（１）外観、（２）ｐＨメーターによって測定するｐＨ、（３）ＨＩＣ−ＨＰＬＣおよびＡ２８０によって測定するタンパク質濃度、（４）ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって決定する純度、（５）ＲＰ−ＨＰＬＣによって測定するペプチド分解物の量、および（６）ＳＥＣ−ＨＰＬＣによって測定する凝集物含有率（＞三量体を含有する種）を測ることによって決定した。
【０３７２】
安定性検査の結果を表１０〜１２に示す。１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝剤ｐＨ５．０、５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．１％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８、および１５０ｍＭ塩化ナトリウム中に処方したエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体の安定性は、５℃および２５℃でインキュベートした場合少なくとも１２カ月間、４０℃でインキュベートした場合少なくとも３カ月間維持された。各時点で製剤は、粒子を含まない透明、淡い黄色から琥珀色の外観を呈し；ｐＨは４．５から６．０の間で維持され；タンパク質濃度は８．０から１２．０ｍｇ／ｍＬの間に維持され；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ後、単一バンドが現れ、結合体標準物と分子量で一致し、ラージドメインの分解は示しておらず；分子量増大凝集物の含有率は＜１％であった。
【０３７３】
【表１０】
2011506442.tif 000020
【０３７４】
【表１１】
2011506442.tif 000021
【０３７５】
【表１２】
2011506442.tif 000022
（実施例５）
６．５  １０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝剤ｐＨ７．０、１．６ｍＭオクタン酸ナトリウム、１５ｍｇ／Ｌポリソルベート８０および１３５ｍＭ塩化ナトリウム中でのエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体の安定性
この実施例は、５℃、２５℃（１８カ月間まで）および４０℃（６カ月間まで）でインキュベートした場合の１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝剤ｐＨ７．０、１．６ｍＭオクタン酸ナトリウム、１５ｍｇ／Ｌポリソルベート８０および１３５ｍＭ塩化ナトリウム中に処方したエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体の安定性を示す。
【０３７６】
全ての賦形剤（リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、オクタン酸ナトリウム、ポリソルベート８０）の保存物を調製し、滅菌濾過し、４℃で保存した。各賦形剤を最終濃度まで加え、滅菌濾過し、溶液のｐＨを調整した。製剤を使用に供するために、１３ｍｍのグレイブチルストッパーを有する滅菌３．０ｍｌ  Ｔｙｐｅ  Ｉガラスバイアルに入れた。
【０３７７】
エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体の安定性を、（１）外観、（２）ｐＨメーターによって測定するｐＨ、（３）浸透圧計で測定する浸透圧（ｍＯｓｍ）、（４）ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって決定する純度、（５）ＲＰ−ＨＰＬＣによって測定するペプチド分解物の量、および（６）ＳＥＣ−ＨＰＬＣによって測定する凝集物含有率（＞三量体を含む種）を測ることによって決定した。
【０３７８】
安定性検査の結果を表１３〜１５に示す。各時点で製剤は、粒子を含まない透明、淡い黄色から琥珀色の外観を呈し；ｐＨは７．０に維持され；浸透圧は２５０〜３３０ｍＯｓｍの間に維持され；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ後、単一バンドが現れ、結合体標準物と分子量で一致し、ラージドメインの分解は示さず；分子量増大凝集物の含有率は０％であった。
【０３７９】
【表１３】
2011506442.tif 000023
【０３８０】
【表１４】
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【０３８１】
【表１５】
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（実施例６）
６．６  エキセンディン−４結合体製剤の血糖値への効果
この実施例は、ＩＩ型糖尿病を有する対象に皮下投与したエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体製剤の用量範囲の安全性、耐用性、薬物動態学的および薬力学的効果を評価するためのランダム化プラセボ対照二重盲検単一漸増用量第Ｉ／ＩＩ相臨床試験の結果を記載する。
【０３８２】
４種の単回皮下用量（１．５ｍｇおよび２．０ｍｇを含む）のエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体およびプラセボの効果を検査した。結合体を本明細書に記載の製剤で１０ｍｇ／ｍｌの濃度で投与した。
【０３８３】
空腹時血漿ブドウ糖値を、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体の投与に続いて各対象について２から７日目に測定した。血糖値も血糖測定器を使用して１日あたり６時点：（１）空腹時／朝食開始の５分前、（２）朝食開始２時間後、（３）昼食開始５分前、（４）昼食開始２時間後、（５）夕食開始５分前、（６）夕食開始２時間後に測定した。各対象についてこれら６回の測定の平均値を投与後の１〜７日目について算出した。
【０３８４】
結合体で治療した対象における空腹時血漿ブドウ糖値および日中の平均ブドウ糖値は、プラセボ治療対象における空腹時血漿ブドウ糖値および日中の平均ブドウ糖値と比較してそれぞれ低下していた。
【０３８５】
（実施例７）
６．７  エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体製剤でのＩＩ型糖尿病の治療
５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．１％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８および１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含有する１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝剤ｐＨ５．０中に１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体を含む医薬製剤を、それを必要とするヒト対象でＩＩ型糖尿病を治療するために使用する。ＩＩ型糖尿病を有する患者は：（１）エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体１．５ｍｇを含む製剤の１週間に１回の投与、合計１２週間の治療、または（２）エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体１．５ｍｇを含む製剤の１週間に１回の投与を４週間に続いてエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体２．０ｍｇを含む製剤の１週間に１回の投与を８週間、のいずれかを受ける。
【０３８６】
患者は、結合体での治療の前の少なくとも３カ月間、１日≧１０００ｍｇのメトホルミンを安定投与される。対象は、結合体の初回投与の前１４日間で日常スクリーニング評価を受ける。スクリーニングの少なくとも３カ月前にＩＩ型糖尿病であると診断された患者を以下の基準：インホームドコンセント、十分な病歴、組み入れ／除外基準の概説、併用薬剤の調査、十分な理学的検査、体重、バイタルサイン（血圧、体温、脈拍、呼吸数）、１２リードＥＣＧ、尿中薬物選別および呼気アルコール検査、臨床検査分析（臨床化学、血液学、および凝固）、検尿、血清妊娠検査（閉経前の女性のみ）、空腹時血漿グルコース値、ＨｂＡ１ｃレベル、フルクトサミン、液体プロファイル、合計ＩｇＥレベル、および免疫原性試料採取について評価する。
【０３８７】
エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体を早朝の空腹時に患者の腹部に皮下注射で投与する。患者は、投与期間を通じて当業者である開業医によって、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体製剤の安全性および有効性を決定するための臨床検査分析（臨床化学、血液学、凝集）、フルクトサミン、液体プロファイルおよびＨｂＡ１ｃのための血液採取、１２リードＥＣＧおよび理学的検査を含んでモニターされる。
【０３８８】
（実施例８）
６．８  エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体製剤でのＩＩ型糖尿病の治療
５ｍＭオクタン酸ナトリウム、０．１％（ｗ／ｖ）プルロニックＦ６８および１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含有する１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝剤ｐＨ５．０中に１０ｍｇ／ｍｌエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体を含む医薬製剤をそれを必要とするヒト対象でＩＩ型糖尿病を治療するために使用する。ＩＩ型糖尿病を有する患者は、（１）エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体１．５ｍｇを含む製剤を１週間に２回投与、結合体の１週間の合計投与量３．０ｍｇで１２週間の治療、または（２）エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体１．５ｍｇを含む製剤を１週間に２回投与、結合体の１週間の合計投与量３．０ｍｇで４週間の治療に続いてエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体２．０ｍｇを含む製剤を１週間に１回投与でさらに８週間の治療、のいずれかを受ける。
【０３８９】
患者は、結合体での治療の前の少なくとも３カ月間、１日≧１０００ｍｇのメトホルミンを安定投与される。対象は、結合体の初回投与の前１４日間で日常スクリーニング評価を受ける。スクリーニングの少なくとも３カ月前にＩＩ型糖尿病であると診断された患者を以下の基準：インホームドコンセント、十分な病歴、組み入れ／除外基準の概説、併用薬剤の調査、十分な理学的検査、体重、バイタルサイン（血圧、体温、脈拍、呼吸数）、１２リードＥＣＧ、尿中薬物選別および呼気アルコール検査、臨床検査分析（臨床化学、血液学、および凝固）、検尿、血清妊娠検査（閉経前の女性のみ）、空腹時血漿グルコース値、ＨｂＡ１ｃレベル、フルクトサミン、液体プロファイル、合計ＩｇＥレベル、および免疫原性試料採取について評価する。
【０３９０】
エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体を早朝の空腹時に患者の腹部に皮下注射で投与する。投与期間を通じて当技術分野の医師が、エキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体製剤の安全性および有効性を決定するための臨床検査分析（臨床化学、血液学、凝集）、フルクトサミン、液体プロファイルおよびＨｂＡ１ｃのための血液採取、１２リードＥＣＧおよび理学的検査を含めた、患者のモニタリングを行う。
【０３９１】
（実施例９）
６．９  実施例７および８に記載のエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体製剤で治療された対象
実施例７に記載の投与計画を含む第１回臨床試験を実施した。試験は３カ月間継続し、メトホルミン治療によって適切に管理されないＩＩ型糖尿病を有する患者１４４名を登録した。患者を３つの平行治療群：１週間あたり１．５ｍｇのコホート：１週間あたり１．５ｍｇから４週間後に１週間あたり２ｍｇに容量設定したコホート：およびプラセボコホートの１つに無作為化した。実施例８に記載の投与計画を含む第２回臨床試験を実施した。試験は３カ月間継続し、メトホルミン治療によって適切に管理されないＩＩ型糖尿病を有する患者８０名を登録した。患者を３つの平行治療群：１週間に１．５ｍｇを２回から４週間後に１週間あたり２ｍｇに容量設定したコホート：３ｍｇ（１週間に１．５ｍｇを２回）のコホート：およびプラセボコホートの１つに無作為化した。２回の試験は、同じ登録基準および検査判定を有し、したがって統合して分析できる。
【０３９２】
製剤の結合体は、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａによって製造される組換え体アルブミンであるＲｅｃｏｍｂｕｍｉｎ（登録商標）を使用して生成した。医薬製剤は、３１ゲージ針で小容量（≦０．２ｍｌ）で注射した。
【０３９３】
糖尿病の治療で、抗糖尿病剤の効能の主な証明は、ＨｂＡ１ｃの低下である。ＨｂＡ１ｃ％（ヘモグロビンＡ１ｃ、すなわちグリコシル化されたヘモグロビンのパーセンテージ）は、抗糖尿病剤での治療に先行する数カ月間の対象の平均血糖値を表し、慢性血糖症の最も一般的に使用される測定法である。
【０３９４】
ＨｂＡ１ｃの顕著な低下がベースラインおよびプラセボ群の両方と比較して全ての活性治療群において治療期間を通じて見られた（１．５ｍｇ、２ｍｇ併用群およびプロトコールあたり３ｍｇ、統合分析による）。１２週間の治療期間の終了時に患者が１．４％のＨｂＡ１ｃの減少を達成した３ｍｇ投与群で最も強い低下が観察された。ＨｂＡ１ｃの低下は、１．５ｍｇおよび２ｍｇ群の両方では０．８％であり、プラセボ群では０．４％であった。
【０３９５】
１．２ｋｇ（ベースラインに対して有意）の体重減少が３ｍｇ群において患者の８０％超でいくらかの体重が減少して達成され、対して試験のプラセボ群では０．４ｋｇの低下（ベースラインに対して有意でない）であった。第１回臨床試験の１．５ｍｇおよび２ｍｇの投与群でそれぞれ２．０ｋｇおよび１．３ｋｇの体重減少が観察された（ＩＴＴ（包括解析）でベースラインに対しては有意だが、プラセボに対しては有意でない）。
【０３９６】
薬剤は十分に許容された。両試験の全ての治療にわたる薬剤関連の悪心の割合は２３％であり、対してプラセボ群では１０％であった、両試験の全ての治療にわたる全ての嘔吐の割合は１１％であり、対してプラセボ群では６％であった、両試験の全ての治療にわたる全ての下痢の割合は１０％であり、プラセボ群では８％であった。これらの有害事象の事例は、経時的に減少した。例えば、３ｍｇの高投与量コホートでは２８日後に悪心または嘔吐はなかった。
【０３９７】
注射部位有害事象は、まれであり、実際にプラセボ群よりも治療群で生じる頻度が低かった。
【０３９８】
これらのデータは、実施例７および実施例８に記載のエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体製剤の投与が、体重減少および優れたＧＩ耐用性を伴うＨｂＡ１ｃの強い低下を生じることを実証する。さらに液体製剤および少ない注射容量（ベリーファインゲージ針を介して）は、注射部位反応をほとんど生じなかった。したがって、本明細書に記載のエキセンディン−４（１〜３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ２ＨＳＡ結合体製剤の投与は、糖尿病の治療について患者の選好の視点から明確な有利点をここに表している。
【０３９９】
本明細書に引用する全ての出版物、特許および特許出願は、参照により組み込まれることをそれぞれ個々の出版物または特許出願が具体的かつ個別に示されるのと同様に、全ての目的について全体として参照により組み込まれる。明確な理解の目的で例示および実施例の方法で先行する発明が幾分詳細に記載されているが、本発明の教示を考慮すると特定の変更および改変が添付の特許請求の範囲の精神および範囲から逸脱することなくこれに実施され得ることは当業者に明らかである。
【図１】
2011506442.tif 000029
【図２】
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【図３】
2011506442.tif 000031
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図８】
2011506442.tif 000035
【図９】
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【図１０】
2011506442.tif 000037
【図１１】
2011506442.tif 000038
【図１２】
2011506442.tif 000039
【図１３】
2011506442.tif 000040
【図１４】
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【図１５】
2011506442.tif 000042
【図１６】
2011506442.tif 000043
【図１７】
2011506442.tif 000044
【図１８】
2011506442.tif 000045
【図１９】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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