(57)【要約】  ケモカイン介在疾患および状態の処置に使用するための、式(１)2011528030.tif 000080の化合物およびその薬学的に許容される塩。
2011528030.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(１)
【化１】
2011528030.tif 000072
の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
ケモカイン介在疾患または状態の処置に使用するための、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
喘息、アレルギー性鼻炎、ＣＯＰＤ、炎症性腸疾患、骨関節症、骨粗鬆症、リウマチ性関節炎、または乾癬の処置用医薬として使用するための、請求項２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物またその薬学的に許容される塩を薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、医薬組成物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の製造方法であって：
(ａ)  式(２ａ)
【化２】
2011528030.tif 000073
〔式中、ＰＧは保護基または２個の別々の水素原子であり、そしてＬは脱離基である。〕
の化合物を、式(２ｃ)
【化３】
2011528030.tif 000074
のスルホンアミドで、適当な塩基、触媒および溶媒の存在下で処理し、その後、場合により(ｉ)および／または(ii)を任意の順番で行うことを含む：
ｉ)  何らかの保護基の除去；
ii)  塩の形成；
あるいは
(ｂ)  式(２ｂ)
【化４】
2011528030.tif 000075
〔式中、ＰＧ２は保護基であり、そしてＬは脱離基である。〕
の化合物を、式(２ｄ)
【化５】
2011528030.tif 000076
〔式中、ＰＧは保護基または２個の別々の水素原子である。〕
のアミンで、適当な塩基、および溶媒の存在下で処理し、その後、場合により(ｉ)および／または(ii)を任意の順番で行うことを含む：
ｉ)  何らかの保護基の除去、
ii)  塩の形成
ことを含む、方法。
【請求項６】
式(１ａ)
【化６】
2011528030.tif 000077
の化合物、およびその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
式(２ａ)
【化７】
2011528030.tif 000078
〔式中、Ｌはハロゲンである。〕
の化合物。
【請求項８】
式(２ｅ)
【化８】
2011528030.tif 000079
〔式中、Ｌはハロゲンである。〕
の化合物。
【請求項９】
請求項１に記載の式(１)の化合物またはその薬学的に許容される塩、または式(１)の化合物を含む医薬組成物または製剤を、他の治療および／または他の治療剤と同時にまたは連続的に投与することを含む、組合せ治療。
【請求項１０】
喘息、アレルギー性鼻炎、ＣＯＰＤ、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、骨関節症、骨粗鬆症、リウマチ性関節炎、または乾癬の処置のための、請求項９に記載の組合せ治療。
【請求項１１】
式(１)の化合物またはその薬学的に許容される塩を、他の薬剤と共に含む、医薬組成物。
【請求項１２】
喘息、アレルギー性鼻炎、ＣＯＰＤ、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、骨関節症、骨粗鬆症、リウマチ性関節炎、または乾癬の処置のための、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
癌の処置のための、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
次の結晶形態のいずれかである、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩：
(ａ)表３に示すＸ線粉末回折(ＸＲＰＤ)パターンにより特徴付けられる(修飾Ａと命名)；
(ｂ)表４に示すＸ線粉末回折(ＸＲＰＤ)パターンにより特徴付けられる(修飾Ｂと命名)；
(ｃ)表５に示すＸ線粉末回折(ＸＲＰＤ)パターンにより特徴付けられる(修飾Ｃと命名)；
(ｄ)表６に示すＸ線粉末回折(ＸＲＰＤ)パターンにより特徴付けられる(修飾Ｄと命名)；
(ｅ)表７に示すＸ線粉末回折(ＸＲＰＤ)パターンにより特徴付けられる(修飾Ｅと命名)；または
(ｆ)表８に示すＸ線粉末回折(ＸＲＰＤ)パターンにより特徴付けられる(修飾Ｆと命名)。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヘテロ環式化合物、その製造に使用する方法および中間体、それらを含む医薬組成物および治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ケモカイン類は、喘息およびアレルギー性疾患、ならびに自己免疫性病状、例えばリウマチ性関節炎およびアテローム性動脈硬化症を含む、種々の疾患および障害の免疫および炎症性応答に重要な役割を有する。これらの小さい分泌された分子は、保存されたシステインモチーフにより特徴付けられる８−１４kDaタンパク質の増え続けているスーパーファミリーである。現時点で、ケモカインスーパーファミリは、特徴的な構造モチーフを示す３群、Ｃ−Ｘ−Ｃ、Ｃ−ＣおよびＣ−Ｘ３−Ｃファミリーを含む。Ｃ−Ｘ−ＣおよびＣ−Ｃファミリーは、配列類似性を有し、システイン残基のＮＨ−近位対の間の一アミノ酸挿入により互いに区別される。Ｃ−Ｘ３−Ｃファミリーは、システイン残基のＮＨ−近位対の間の３アミノ酸挿入を有することに基づき、他の二つのファミリーと区別される。
【０００３】
Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン類は、インターロイキン−８(ＩＬ−８)および好中球活性化ペプチド２(ＮＡＰ−２)のような、好中球の数種の強力な化学誘引物質およびアクティベーターを含む。
【０００４】
Ｃ−Ｃケモカイン類は、好中球ではなく単球およびリンパ球の強力な化学誘引物質を含む。例は、ヒト単球走化性タンパク質１−３(ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２およびＭＣＰ−３)、ＲＡＮＴＥＳ(活性化正常Ｔ細胞における発現および分泌調節性)、エオタキシンおよびマクロファージ炎症性タンパク質１αおよび１β(ＭＩＰ−１αおよびＭＩＰ−１β)を含む。
【０００５】
Ｃ−Ｘ３−Ｃケモカイン(フラクタルカインとしても既知)は、中枢神経系(ＣＮＳ)のミクログリアならびに単球、Ｔ細胞、ＮＫ細胞および肥満細胞の強力な化学誘引物質およびアクティベーターである。
【０００６】
ケモカイン類の作用は、Ｇタンパク質共役受容体のサブファミリーが仲介する、とりわけ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ２Ａ、ＣＣＲ２Ｂ、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０およびＣＣＲ１１(Ｃ−Ｃファミリーについて)；ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ５(Ｃ−Ｘ−Ｃファミリーについて)およびＣ−Ｘ３−ＣファミリーについてＣＸ３ＣＲ１と命名された受容体が仲介することが試験により証明されている。これらの受容体は、これらの受容体を調節する薬剤が、上記のような障害および疾患の処置に有用であるため、薬剤開発の良好な標的を代表する。
【０００７】
我々のＰＣＴ特許出願ＷＯ２００４／０１１４４３において、我々は、ケモカイン受容体モジュレーターとしてのピリミジニルスルホンアミド誘導体を開示する。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、ここで、式(１)
【化１】
2011528030.tif 000003
の化合物、およびその薬学的に許容される塩を提供する。かかる化合物は、ＷＯ２００４／０１１４４３に開示された化合物を参照して予想されるものではなく、常に２個所の構造的差異を有する。加えて、我々は、式(１)の化合物が、かかる化合物と比較したとき、改善された薬理学的プロファイルを示すことを発見した。具体的に式(１)の化合物は、以下に示す通り少なくとも１個の改善された薬理学的特性を有する。我々は、理論的考察に縛られることを望まないが、式(１)の化合物のこの改善された薬理学的プロファイルは、ヒトにおいてより長い作用時間を生じることが予測される。本発明の一面において、式(１)の化合物の１日１回または２回の投与が可能となり得る。
【０００９】
光学活性形態の合成は、当分野で既知の有機化学により、例えば光学活性出発物質からの合成により、またはラセミ形態の分割により行い得る(例えばEnantioselective Synthesis of fully protected anti 3-amino-2-hydroxy butyrates; Tetrahedron Asymmetry; 1995, vol 6, no 9 pp 2329-2342参照)。同様に、上記活性は、以下に示す標準的研究室法を使用して評価し得る。
【００１０】
本発明の範囲内で、式(１)の化合物またはその塩または溶媒和物は互変異性の現象を示すことがあり、本明細書内の式は、可能性のある互変異性形態の一つのみを示していることがあることは理解されるべきである。本発明は、全ての互変異性形態およびそれらの混合物を含み、式で使用した互変異性形態のいずれか一つのみにのみ限定されるものではないことは理解されるべきである。本明細書内の式は、可能性のある互変異性形態の一つのみを示していることがあり、本明細書はここで図示されている形態だけではなく、図示した化合物の全ての可能な互変異性形態を包含することは理解されるべきである。
【００１１】
式(１)の化合物およびその塩は、例えば、水和された形態のような、溶媒和されたならびに溶媒和物されていない形態で存在できることも理解されるべきである。本発明は、全てのかかる溶媒和されたまたは水和された形態も含むことは理解されるべきである。
【００１２】
本発明は、上に定義した式(１)の化合物ならびにその塩に関する。医薬組成物で使用する塩は薬学的に許容される塩であるが、他の塩は、式(１)の化合物およびその薬学的に許容される塩の製造に有用であり得る。本発明の薬学的に許容される塩は、塩を形成するのに十分に塩基性の上に定義した式(１)の化合物の塩基付加塩を含む。かかる塩は、薬学的に許容されるカチオンを提供する無機または有機塩基と形成され得る。かかる無機または有機塩基との塩は、例えばアルカリ金属塩、例えばナトリウム塩またはカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えばカルシウム塩またはマグネシウム塩、または有機アミン塩、例えばｔｒｉｓ−(２−ヒドロキシエチル)アミン、ジエタノールアミン、またはエタノールアミンとの塩を含む。
【００１３】
本発明は、さらに、上に定義した式(１)の化合物の製造方法を提供し、それは：
(ａ)  式(２ａ)
【化２】
2011528030.tif 000004
〔式中、ＰＧは保護基または２個の別々の水素原子であり、そしてＬは脱離基、例えばハロゲンである。〕
の化合物を、スルホンアミド(２ｃ)：
【化３】
2011528030.tif 000005
で、適当な塩基、触媒および溶媒の存在下で処理し、その後、場合により(ｉ)または(ii)：
ｉ)  何らかの保護基の除去；
ii)  塩の形成
を任意の順番で行うことを含む。
【００１４】
式(２ａ)の化合物とスルホンアミド(２ｃ)の反応は、適当な触媒の存在下、熱またはマイクロ波により加熱することにより実施できる。
【００１５】
適当な塩基の例は、金属(重)炭酸塩、例えばセシウム、カリウム、リチウムまたはナトリウムからのもの、または金属リン酸塩、例えばリチウム、ナトリウムまたはカリウムからのもの(例えばリン酸カリウム(Ｋ３ＰＯ４))、またはトリアルキルアミン類、例えばトリエチルアミンまたはＮ,Ｎ−ジ−イソプロピルエチルアミンを含む。炭酸セシウムを使用するのが最も好都合である。適当な溶媒は、トルエンおよびエーテル類、例えばアニソール、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、１,４−ジオキサン、グライムおよびジグライムまたはエステル類、例えば酢酸ｎ−ブチルまたは酢酸イソプロピルを含む。１,４−ジオキサンを使用するのが便利である。反応は、１０℃〜１２０℃の温度で、好都合には、１０５℃で実施できる。適当な触媒の例は、適当なリガンド、例えば(９,９−ジメチル−９Ｈ−キサンテン−４,５−ジイル)ビス[ジフェニル−ホスフィン(Xantphos)、または２−ジシクロヘキシル−ホスフィノ−２’−(Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ)ビフェニルまたは２−ジシクロヘキシル−ホスフィノ−２’,４’,６’−トリ−イソプロピル,１,１’−ビフェニル(XPHOS)(いずれも０.０１−０.５モル当量で)の存在下の、適当なパラジウム(０)源、例えばパラジウムトリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(０)(Ｐｄ２(ｄｂａ)３)、またはテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム(Ｐｄ(Ｐｈ３)４)(いずれも０.０１−０.５モル当量で)を含む。好都合には、触媒組合せは、１,４−ジオキサン中、０.０１−０.５モル当量のトリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(０)(Ｐｄ２(ｄｂａ)３)と２−ジシクロヘキシル−ホスフィノ−２’,４’,６’−トリ−イソプロピル,１,１’−ビフェニル(Xphos)であり、１０５℃で、塩基としての炭酸セシウムを用いる。
【００１６】
適当な保護基(ＰＧ)は、非環状および環状化合物の両方を含む。非環状保護基の例は、ベンジル、パラ−ニトロベンジルまたはパラ−メトキシルベンジルを含む。好都合には、ＰＧは環状である。適当な環状保護基の例は、シクロヘキシリデン類、シクロペンチリデン類およびアセトニド類を含む。好都合には、アセトニド保護基を使用する。
【００１７】
あるいは；
(ｂ)  式(２ｂ)
【化４】
2011528030.tif 000006
〔式中、ＰＧ２は保護基であり、そしてＬは脱離基、例えばハロゲンである。〕
の化合物を、式(２ｄ)
【化５】
2011528030.tif 000007
〔式中、ＰＧは適当な保護基または２個の別々の水素原子である。〕
のアミンで、適当な塩基および溶媒の存在下で処理し、その後、場合により(ｉ)および／または(ii)：
ｉ)  何らかの保護基の除去；
ii)  塩の形成
を任意の順番で行うことを含む。
【００１８】
式(２ｂ)の化合物とアミン(２ｄ)の反応は、適当な塩基、溶媒の存在下、熱またはマイクロ波により加熱して行うことができる。
【００１９】
適当な塩基の例は、金属、例えばナトリウム、カリウム、セシウムの(重)炭酸塩またはトリアルキルアミン類、例えばトリエチルアミンまたはＮ,Ｎ−ジ−イソプロピルエチルアミンを含む。好都合には、重炭酸ナトリウムを使用する。
【００２０】
適当な溶媒は、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミド類、１−メチル−２−ピロリジノン、トルエンおよびエーテル類、例えばアニソール、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン１,４−ジオキサン、グライム、ジグライムおよびエステル類、例えば酢酸ｎ−ブチルまたは酢酸イソプロピルおよびアルキルニトリル類、例えばアセトニトリルまたはブチロニトリルを含む。好都合には、アセトニトリルを使用する。
【００２１】
反応は、１０℃〜１２０℃の温度で実施できる。
【００２２】
式(２ａ)の化合物は、式(３)
【化６】
2011528030.tif 000008
〔式中、Ｌは脱離基、例えばハロゲンである。〕
の化合物から、適当な塩基および溶媒存在下での、ＰＧが保護基または２個の別々の水素原子であるアミン(２ｄ)での処理により製造できる。
【００２３】
適当な塩基の例は、金属、例えばナトリウム、カリウム、セシウムの(重)炭酸塩またはトリアルキルアミン類、例えばトリエチルアミンまたはＮ,Ｎ−ジ−イソプロピルエチルアミンを含む。好都合には、重炭酸ナトリウムを使用する。
【００２４】
適当な溶媒は、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミド類、１−メチル−２−ピロリジノン、エーテル類、例えばテトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン１,４−ジオキサン、グライムおよびジグライムおよびエステル類、例えば酢酸ブチルまたは酢酸イソプロピルおよびアルキルニトリル類、例えばアセトニトリルまたはブチロニトリルを含む。好都合には、アセトニトリルを使用する。
【００２５】
反応は、１０℃〜１２０℃の温度で、簡便には１００℃で実施できる。
【００２６】
Ｌが脱離基、例えばハロゲンであり、そしてＰＧ２が適当な保護基または水素である式(２ｂ)の化合物は、Ｌが脱離基、例えばハロゲンである式(３)の化合物とスルホンアミド(２ｃ)を、適当な塩基、溶媒の存在下、適当な触媒を使用し、または使用せずに、熱またはマイクロ波により加熱して反応させることにより製造してよく、
そして、場合により、その後(ｉ)または(ii)を任意の順番で行う：
ｉ)  何らかの保護基の付加；
ii)  式(２ｂ)の化合物の別の式(２ｂ)の化合物への変換。
【００２７】
適当な塩基の例は、アルカリ金属、例えばナトリウムまたはカリウムの水酸化物、または金属アルコキシド類、例えばリチウム、ナトリウムまたはカリウムのｔｅｒｔ−ブトキシド、アルカリ金属ヘキサメチルジシラジド類、例えばリチウム、ナトリウムまたはカリウムのヘキサメチルジシラジド、または金属、例えばナトリウム、カリウム、セシウム(ceasium)の炭酸塩を含む。適当な溶媒は、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、１,４−ジオキサン、グライムおよびジグライム。反応の温度は、０℃〜１２０℃で行い得る。適当な触媒の例は、適当なリガンド、例えば(９,９−ジメチル−９Ｈ−キサンテン−４,５−ジイル)ビス[ジフェニル−ホスフィン(Xantphos)、または２−ジシクロヘキシル−ホスフィノ−２’−(Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ)ビフェニルまたは２−ジシクロヘキシル−ホスフィノ−２’,４’,６’−トリ−イソプロピル,１,１’−ビフェニル(XPHOS)存在下の、適当なパラジウム(０)源、例えばテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム(Ｐｄ(Ｐｈ３)４)またはトリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(０)(Ｐｄ２(ｄｂａ)３)を含む。
【００２８】
便利な保護基(ＰＧ２)の例は、エーテル類、例えば[２−(クロロメトキシ)エチル](トリメチル)シランを使用するアルキル化によるトリメチルシリルメチルエーテル類(ＳＥＭ)、またはパラ−メトキシベンジルクロライドを使用するアルキル化によるパラ−メトキシベンジル(ＰＭＢ)基を含む。
【００２９】
Ｌがハロゲンである式(３)の化合物は、Ｌがヒドロキシ基である式(３)の化合物から、適当な溶媒の存在下、または非存在下、ハロゲン化剤、例えばオキシ塩化リンとの反応により製造し得る。本反応は、Ｎ,Ｎ−ジメチルアニリンの存在下、または非存在下で行い得る。適当な溶媒は、トルエン、キシレン類、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、１,４−ジオキサン、グライムおよびジグライムを含む。
反応は、９０℃−１５０℃の温度で実施できる。
【００３０】
Ｌがヒドロキシ基である式(３)の化合物は、式(４)；
【化７】
2011528030.tif 000009
〔式中、Ｌはヒドロキシ基である。〕
の化合物から、適当な塩基および溶媒の存在下での１−(ブロモメチル)−２,３−ジフルオロベンゼンとの反応により製造し得る。
【００３１】
適当な塩基の例は、アルカリ金属、例えばリチウム、ナトリウム、カリウムの水酸化物または金属、例えばリチウム、ナトリウム、カリウム、セシウムの(重)炭酸塩または金属、例えばリチウム、ナトリウム、カリウムまたはセシウムの酢酸塩または金属アルコキシド類、例えばリチウム、ナトリウム、カリウムのｔｅｒｔ−ブトキシドを含む。適当な溶媒は水、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミド類、１−メチル−２−ピロリジノン、エーテル類、例えばテトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、１,４−ジオキサン、グライムおよびジグライムおよびアルコール類、例えばメタノール、エタノールおよびｔｅｒｔ−ブタノールまたはアセトニトリルを含む。好都合には、３０−６０℃で、メタノールと水の混合物中の酢酸ナトリウムを使用する。４０℃で、アセトニトリルと水の混合物中の酢酸ナトリウムを使用するのがさらに好都合である。
【００３２】
Ｌがヒドロキシ基である式(４)の化合物、ＰＧが保護基、例えばアセトニドまたはシクロヘキシリデンまたは２個の別々の水素原子のいずれかである式(２ｃ)および(２ｄ)は、ここに記載する方法を使用して製造するか、市販されているか、または、文献から既知であるか、または既知方法を使用して容易に製造し得る。
【００３３】
式(１)の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはインビボで加水分解可能なエステルの製造について上記したいずれの方法においても、好都合なまたは適当な物質または反応条件は、本発明の個々のそして別の面を表す。
【００３４】
当業者には、本発明の方法において、出発物質または中間体化合物のある種の官能基、例えばヒドロキシル基またはアミノ基を保護基で保護する必要があるかもしれないことは当然である。それ故に、式(１)の化合物の製造は、適当な段階での、１個以上の保護基の除去を含み得る。官能基の保護および脱保護は、J. W. F. McOmieにより編集された‘Protective Groups in Organic Chemistry’, Plenum Press (1973)および‘Protective Groups in Organic Synthesis’, 2nd edition, T. W. Greene & P. G. M. Wuts, Wiley-Interscience (1991)に完全に記載されている。
【００３５】
簡便な脱離基の例は、標準的な化学の教科書、例えばOxford University Pressにより発行された“Organic Chemistry” by Jonathan Clayden et al(3rd Edn 2005)に記載されている。それらはハロゲン基、メシレート基およびトシレート基を含む。ハロゲン、例えば塩素または臭素、好都合には塩素が簡便な脱離基である。
【００３６】
上記の式(１)の化合物を、上記の通り、薬学的に許容されるその塩または溶媒和物に変換し得る。塩は、好都合には塩基付加塩である。
【００３７】
式(１)の化合物は、医薬として、特にケモカイン受容体(特にＣＸＣＲ２)活性のモジュレーターとしての活性を有し、ヒトおよび非ヒト動物のケモカイン類の過剰なまたは制御されない産生により悪化するまたは引き起こされる状態／疾患の処置(治療または予防)に使用し得る。かかる状態／疾患の例は次のものを含み、そこでは、各状態／疾患を個々にまたは組み合わせて挙げる：
(１)  呼吸管  −  慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)を含む閉塞性気道疾患；喘息、例えば気管支、アレルギー性、内因性、外因性および粉塵性喘息、特に慢性または難治性喘息(例えば遅発型喘息および気道過敏反応性)；気管支炎；乾酪性鼻炎、肥厚性鼻炎、化膿性鼻炎、乾燥性鼻炎および薬物性鼻炎を含む、急性、アレルギー性、萎縮性鼻炎および慢性鼻炎；クループ性、線維素性および偽膜性鼻炎および腺病性(scrofoulous)鼻炎を含む、膜性鼻炎；神経性鼻炎(枯草熱)および血管運動性鼻炎を含む季節性鼻炎；サルコイドーシス、農夫肺および関連疾患、類繊維肺(fibroid lung)および特発性間質性肺炎；
【００３８】
(２)  骨および関節  −  リウマチ性関節炎、骨関節症、血清反応陰性脊椎関節症(強直性脊椎炎、乾癬性関節炎およびライター病を含む)、ベーチェット病、シェーグレン症候群および全身性硬化症；
【００３９】
(３)  皮膚  −  乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎および他の湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、水疱性天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、皮膚脈管炎(angiodermas)、脈管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症、ブドウ膜炎、円形脱毛症および春季結膜炎；
【００４０】
(４)  胃腸管  −  セリアック病、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、不確定大腸炎、顕微鏡的大腸炎、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、非炎症性下痢、腸から離れた部位に発現する食物関連アレルギー、例えば、偏頭痛、鼻炎および湿疹；
【００４１】
(５)  中枢および末梢神経系  −  神経変性疾患および認知症疾患、例えばアルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症および他の運動神経疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病および他のプリオン疾患、ＨＩＶ脳症(ＡＩＤＳ性認知症合併症)、ハンチントン病、前頭側頭骨性認知症、レヴィー小体認知症および血管性認知症；多発神経障害、例えばギランバレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、多巣性運動神経障害、神経叢障害；ＣＮＳ脱髄、例えば多発性硬化症、急性播種性／出血性脳脊髄炎、および亜急性硬化性全脳炎；神経筋疾患、例えば重症筋無力症およびランバート−イートン症候群；脊髄疾患、例えば熱帯性痙攣不全対麻痺、およびスティッフマン症候群：新生物随伴症候群、例えば小脳変性および脳脊髄炎；ＣＮＳ外傷；偏頭痛；および卒中；
【００４２】
(６)  他の組織および全身性疾患  −  アテローム性動脈硬化症、後天性免疫不全症候群  (ＡＩＤＳ)、エリテマトーデス、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、Ｉ型糖尿病、ネフローゼ症候群、好酸球性筋膜炎、高ＩｇＥ症候群、らい腫性らい、および特発性血小板減少性紫斑；手術後癒着、および敗血症；
【００４３】
(７)  同種移植片拒絶反応  −  例えば腎臓、心臓、肝臓、肺、骨髄、皮膚および角膜移植後の急性および慢性拒絶反応；および慢性移植片対宿主病；
【００４４】
(８)  癌−  特に非小細胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)、悪性黒色腫、前立腺癌および扁平上皮肉腫、および腫瘍転移、非黒色腫皮膚癌および化学予防転移；
【００４５】
(９)  疾患  −  血管形成がＣＸＣＲ２ケモカインレベルの上昇と関連する疾患(例えばＮＳＣＬＣ、糖尿病性網膜症)；
【００４６】
(１０)  嚢胞性線維症；
【００４７】
(１１)  火傷および慢性皮膚潰瘍；
【００４８】
(１２)  生殖疾患  −  例えば排卵、月経および着床の障害、早産、子宮内膜症；
【００４９】
(１３)  再灌流傷害  −  心臓、脳、末梢肢および他の臓器におけるもの、アテローム性動脈硬化症の阻害。
【００５０】
それ故に、本発明は、治療で使用するための、上で定義した式(１)の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物またはインビボで加水分解可能なエステルを提供する。
【００５１】
好都合には、本発明の化合物は、ケモカイン受容体がＣＸＣケモカイン受容体サブファミリーに属する疾患の処置に使用され、より好都合には標的ケモカイン受容体はＣＸＣＲ２受容体である。
【００５２】
本発明の化合物で処置できる具体的な状態は癌、血管形成がＣＸＣＲ２ケモカインレベル上昇と関連する疾患、および炎症性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、ＣＯＰＤ、リウマチ性関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、骨関節症または骨粗鬆症である。上に挙げた各状態／疾患は、独立してまたはその任意の組み合わせで取って、本発明の独立した一つの態様を表す。
【００５３】
本発明の化合物は、ケモカイン受容体がＣＣＲケモカイン受容体サブファミリーに属する処置にも使用でき、より好都合には標的ケモカイン受容体はＣＣＲ２ｂ受容体である。
【００５４】
別の面において、本発明は、医薬として使用するための、上に定義した式(１)の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物またはインビボで加水分解可能なエステルを提供する。
【００５５】
さらに別の面において、本発明は、ケモカイン受容体活性の調節が有益であるヒト疾患または状態の処置用医薬として使用するための、上に定義した式(１)の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物またはインビボで加水分解可能なエステルを提供する。
【００５６】
さらに別の面において、本発明は、喘息、アレルギー性鼻炎、癌、ＣＯＰＤ、リウマチ性関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、骨関節症または骨粗鬆症の処置用医薬として使用するための、上に定義した式(１)の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物またはインビボで加水分解可能なエステルを提供する。
【００５７】
別の面において、本発明は、治療に使用するための医薬の製造における、上に定義した式(１)の化合物、または薬学的に許容されるその塩または溶媒和物の使用を提供する。
【００５８】
さらに別の面において、本発明は、ケモカイン受容体活性の調節が有益であるヒト疾患または状態の処置用医薬の製造における、上に定義した式(１)の化合物、または薬学的に許容されるその塩または溶媒和物の使用を提供する。
【００５９】
さらに別の面において、本発明は、喘息、アレルギー性鼻炎、癌、ＣＯＰＤ、リウマチ性関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、骨関節症または骨粗鬆症の処置用医薬の製造における、上に定義した式(１)の化合物、または薬学的に許容されるその塩または溶媒和物の使用を提供する。
【００６０】
本明細書の文脈において、用語“治療”は、異なる具体的指示がない限り、“予防”も含む。用語“治療的”および“治療的に”もこれに従い解釈すべきである。
【００６１】
本発明は、なおさらに、ケモカインがケモカイン(特にＣＸＣＲ２)受容体に結合するケモカイン介在疾患の処置方法であって、患者に治療有効量の上に定義した式(１)の化合物、または薬学的に許容される塩または溶媒和物を投与することを含む、方法を提供する。
【００６２】
本発はまた、炎症性疾患、特に喘息、アレルギー性鼻炎、ＣＯＰＤ、リウマチ性関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、骨関節症または骨粗鬆症を有する、またはリスクのある患者における、該疾患の処置方法であって、該患者に治療有効量の上に定義した式(１)の化合物、または薬学的に許容されるその塩または溶媒和物を投与することを含む、方法を提供する。
【００６３】
上記治療的使用に関して、投与する投与量は、当然に、用いる化合物、投与方式、望む処置および適応される障害によって異なる。
【００６４】
式(１)の化合物および薬学的に許容されるその塩または溶媒和物はそれ自体で使用してよいが、一般に式(１)の化合物／塩／溶媒和物(活性成分)が薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と混合されている、医薬組成物の形で投与する。投与方式によって、医薬組成物は、好都合には０.０５〜９９％ｗ(重量パーセント)、より好都合には、０.０５〜８０％ｗ、なお好都合には、０.１０〜７０％ｗ、さらに好都合には０.１０〜５０％ｗの活性成分を含み、全ての重量は層組成物に基づく重量パーセントである。
【００６５】
本発明はまた、上に定義した式(１)の化合物、または薬学的に許容されるその塩または溶媒和物と、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体を含む、医薬組成物も提供する。
【００６６】
本発明は、さらに、上に定義した式(１)の化合物、または薬学的に許容されるその塩または溶媒和物と薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体を混合することを含む、本発明の医薬組成物製造方法を提供する。本医薬組成物は、局所的(例えば肺および／または気道または皮膚)に溶液、懸濁液、ヘプタフルオロアルカンエアロゾルおよび乾燥粉末製剤の形で；または全身的に、例えば錠剤、カプセル剤、シロップ剤、散剤または顆粒剤の形で経口投与により、または溶液または懸濁液の形で非経腸投与により、または皮下投与により、または坐薬の形で直腸投与によりまたは経皮で投与してよい。好都合には、本発明の化合物は経口投与する。
【００６７】
治療薬としてのその使用に加えて、式(１)の化合物およびその薬学的に許容される塩または溶媒和物はまた、新規治療剤の研究の一部として、実験動物、例えばネコ、イヌ、ウサギ、サル、ラットおよびマウスにおけるケモカイン調節活性の評価のためのインビトロおよびインビボ試験系の開発および標準化の薬理学的ツールとしても有用である。
【００６８】
本発明は、さらに、式(１)の化合物または薬学的に許容されるその塩または溶媒和物、または式(１)の化合物を含む医薬組成物または製剤を、喘息、アレルギー性鼻炎、癌、ＣＯＰＤ、リウマチ性関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、骨関節症または骨粗鬆症の何れか一つの処置のための治療および／または薬剤と同時にまたは連続的に投与する、組合せ治療に関する。
【００６９】
特に、炎症性疾患リウマチ性関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、ＣＯＰＤ、喘息およびアレルギー性鼻炎の治療のために、本発明の化合物は、ＴＮＦ−α阻害剤、例えば抗ＴＮＦモノクローナル抗体(例えばRemicade、CDP-870およびD2.E7.)およびＴＮＦ受容体免疫グロブリン分子、例えばエタネルセプト(Enbrel)、非選択的ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２阻害剤(例えばピロキシカム、ジクロフェナク)、プロピオン酸類、例えばナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェンおよびイブプロフェン)、フェナメート(例えばメフェナム酸、インドメタシン、スリンダク、アパゾン)、ピラゾロン類(例えばフェニルブタゾン)、サリチレート類(例えばアスピリン)、ＣＯＸ−２阻害剤(例えばメロキシカム、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブおよびエトリコキシブ)低用量メトトレキサート、レフノミド；シクレソニド；ヒドロキシクロロキン、ｄ−ペニシラミン、オーラノフィンまたは非経腸または経口金製剤のような薬剤と組合せてよい。炎症性腸疾患および過敏性腸障害に関して、さらに簡便な薬剤は、スルファサラジンおよび５−ＡＳＡ類、局所用および全身用ステロイド剤、免疫調節剤および免疫抑制剤、抗生物質、プロバイオティクスおよび抗インテグリン類を含む。
【００７０】
本発明は、さらに、本発明の化合物と、ロイコトリエン生合成阻害剤、５−リポキシゲナーゼ(５−ＬＯ)阻害剤または５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質(ＦＬＡＰ)アンタゴニスト、例えばジロートン；ＡＢＴ−７６１；フェンレウトン；テポキサリン；Abbott-79175；Abbott-85761；Ｎ−(５−置換)−チオフェン−２−アルキルスルホンアミド類；２,６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノールヒドラゾン類；メトキシテトラヒドロピラン類、例えばZeneca ZD-2138；化合物SB-210661；ピリジニル−置換２−シアノナフタレン化合物、例えばL-739,010；２−シアノキノリン化合物、例えばL-746,530；インドールおよびキノリン化合物、例えばMK-591、MK-886、およびBAY x 1005の組合せに関する。
【００７１】
本発明は、さらに、本発明の化合物と、フェノチアジン−３−オン類、例えばＬ−６５１,３９２；アミジノ化合物、例えばCGS-25019c；ベンゾキサルアミン類、例えばオンタゾラスト；ベンゼンカルボキシミドアミド類、例えばBIIL 284/260；および化合物、例えばザフィルカスト、アブルカスト(ablukast)、モンテルカスト、プランルカスト、ベルルカスト(verlukast)(MK-679)、RG-12525、Ro-245913、イラルカスト(CGP 45715A)、およびBAY x 7195から成る群から選択されるロイコトリエン類ＬＴＢ.sub４.、ＬＴＣ.sub４.、ＬＴＤ.sub４.、およびＬＴＥ.sub４.に対する受容体アンタゴニストの組合せに関する。
【００７２】
本発明は、さらに、本発明の化合物と、アイソフォームＰＤＥ４Ｄの阻害剤を含む、ＰＤＥ４阻害剤の組合せに関する。
【００７３】
本発明は、さらに、本発明の化合物と、抗ヒスタミン性Ｈ.sub１.受容体アンタゴニスト、例えばセチリジン、ロラタジン、デスロラタジン、フェキソフェナジン、アステミゾール、アゼラスチン、およびクロルフェニラミンの組合せに関する。
【００７４】
本発明は、さらに、本発明の化合物と、胃保護性Ｈ２受容体アンタゴニストの組合せに関する。
【００７５】
本発明は、さらに、本発明の化合物と、α１−およびα２−アドレナリン受容体アゴニスト血管収縮剤交感神経刺激剤、例えばプロピルヘキセドリン、フェニレフリン、フェニルプロパノールアミン、シュードエフェドリン、塩酸ナファゾリン、塩酸オキシメタゾリン、塩酸テトラヒドロゾリン、塩酸キシロメタゾリン、および塩酸エチルノルエピネフリンの組合せに関する。
【００７６】
本発明は、なおさらに、本発明の化合物と、抗コリン作動剤、例えば臭化イプラトロピウム；臭化チオトロピウム；臭化オキシトロピウム；ピレンゼピン；およびテレンゼピンの組合せに関する。
【００７７】
本発明は、さらに、本発明の化合物と、β１−乃至β４−アドレナリン受容体アゴニスト、例えばメタプロテレノール、イソプロテレノール、イソプレナリン、アルブテロール、サルブタモール、フォルモテロール、サルメテロール、テルブタリン、オルシプレナリン、ビトルテロールメシレート、およびピルブテロール；またはテオフィリンおよびアミノフィリンを含むメチルキサンタニン類；クロモグリク酸ナトリウム；またはムスカリン受容体(Ｍ１、Ｍ２、およびＭ３)アンタゴニストの組合せに関する。
【００７８】
本発明は、さらに、本発明の化合物と、インシュリン様増殖因子Ｉ型(ＩＧＦ−１)摸倣剤の組合せに関する。
【００７９】
本発明は、さらに、本発明の化合物と、全身副作用が減少した吸入グルココルチコイド、例えばプレドニゾン、プレドニゾロン、フルニソリド、トリアムシノロンアセトニド、二プロピオン酸ベクロメタゾン、ブデソニド、プロピオン酸フルチカゾン、およびフロ酸モメタゾンの組合せに関する。
【００８０】
本発明は、さらに、本発明の化合物と、マトリックスメタロプロテアーゼ類(ＭＭＰ)、すなわち、ストロメライシン類、コラゲナーゼ、およびゼラチナーゼ、ならびにアグリカナーゼ；特にコラゲナーゼ−１(ＭＭＰ−１)、コラゲナーゼ−２(ＭＭＰ−８)、コラゲナーゼ−３(ＭＭＰ−１３)、ストロメライシン−１(ＭＭＰ−３)、ストロメライシン−２(ＭＭＰ−１０)、およびストロメライシン−３(ＭＭＰ−１１)およびＭＭＰ−１２の阻害剤の組合せに関する。
【００８１】
本発明は、なおさらに、本発明の化合物と、ケモカイン受容体機能、例えばＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ２Ａ、ＣＣＲ２Ｂ、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０およびＣＣＲ１１(Ｃ−Ｃファミリーについて)；ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ５(Ｃ−Ｘ−Ｃファミリーについて)およびＣ−Ｘ３−ＣファミリーについてＣＸ３ＣＲ１の他のモジュレーターの組合せに関する。
【００８２】
本発明は、さらに、本発明の化合物と、抗ウイルス剤、例えばViracept、ＡＺＴ、アシクロビルおよびファムシクロビル、および抗敗血症化合物、例えばValantの組合せに関する。
【００８３】
本発明は、なおさらに、本発明の化合物と、心血管剤、例えばカルシウムチャネルブロッカー、脂質低下剤、例えばスタチン、フィブラート、ベータブロッカー、ＡＣＥ阻害剤、アンギオテンシン−２受容体アンタゴニストおよび血小板凝集阻害剤の組合せに関する。
【００８４】
本発明は、なおさらに、本発明の化合物と、ＣＮＳ剤、例えば抗鬱剤(例えばセルトラリン)、抗パーキンソン病剤(例えばデプレニル、Ｌ−ドーパ、Requip、Mirapex、ＭＡＯＢ阻害剤、例えばセレギリン(selegine)およびラサギリン、ｃｏｍＰ阻害剤、例えばタスマール、Ａ−２阻害剤、ドーパミン再取り込み阻害剤、ＮＭＤＡアンタゴニスト、ニコチンアゴニスト、ドーパミンアゴニストおよび神経型一酸化窒素合成酵素阻害剤)、および抗アルツハイマー剤、例えばドネペジル、タクリン、ＣＯＸ−２阻害剤、プロペントフィリンまたはメトリホネート(metryfonate)の組合せに関する。
【００８５】
本発明は、なおさらに、本発明の化合物と、(ｉ)トリプターゼ阻害剤；(ii)血小板活性化因子(ＰＡＦ)アンタゴニスト；(iii)インターロイキン変換酵素(ＩＣＥ)阻害剤；(iv)ＩＭＰＤＨ阻害剤；(ｖ)ＶＬＡ−４アンタゴニストを含む接着分子阻害剤；(vi)カテプシン類；(vii)ＭＡＰキナーゼ阻害剤；(viii)グルコース−６ホスフェートデヒドロゲナーゼ阻害剤；(ix)キニン−Ｂ.sub１.−およびＢ.sub２.−受容体アンタゴニスト；(ｘ)抗痛風剤、例えば、コルヒチン；(xi)キサンチンオキシダーゼ阻害剤、例えば、アロプリノール；(xii)尿酸排泄促進剤、例えば、プロベネシド、スルフィンピラゾン、およびベンズブロマロン；(xiii)成長ホルモン分泌促進物質；(xiv)トランスフォーミング増殖因子(ＴＧＦβ)；(xv)血小板由来増殖因子(ＰＤＧＦ)；(xvi)線維芽細胞増殖因子、例えば、塩基性線維芽細胞増殖因子(ｂＦＧＦ)；(xvii)顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(ＧＭ−ＣＳＦ)；(xviii)カプサイシンクリーム；(xix)ＮＫＰ−６０８Ｃ；ＳＢ−２３３４１２(タルネタント)；およびＤ−４４１８から成る群から選択されるタキキニンＮＫ.sub１.およびＮＫ.sub３.受容体アンタゴニスト；(xx)ＵＴ−７７およびＺＤ−０８９２から成る群から選択されるエラスターゼ阻害剤；(xxi)ＴＮＦα変換酵素阻害剤(ＴＡＣＥ)；(xxii)誘導型一酸化窒素合成酵素阻害剤(ｉＮＯＳ)または(xxiii)ＴＨ２細胞上に発現される化学誘引物質受容体相同分子(ＣＲＴＨ２アンタゴニスト)の組合せに関する。
【００８６】
本発明の化合物はまた骨粗鬆症剤、例えばラロキシフェン(roloxifene)、ドロロキシフェン、ラソフォキシフェンまたはフォサマックス(fosomax)および免疫抑制剤、例えばＦＫ−５０６、ラパマイシン、シクロスポリン、アザチオプリン、およびメトトレキサートと組み合わせて使用してもよい。
【００８７】
本発明の化合物はまた、骨関節症の処置のための既存の治療剤と組み合わせて使用してもよい。組み合わせて使用する適当な薬剤は、標準非ステロイド性抗炎症剤(以後ＮＳＡＩＤ)、例えばピロキシカム、ジクロフェナク、プロピオン酸類、例えばナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェンおよびイブプロフェン、フェナメート、例えばメフェナム酸、インドメタシン、スリンダク、アパゾン、ピラゾロン類、例えばフェニルブタゾン、サリチレート類、例えばアスピリン、ＣＯＸ−２阻害剤、例えばセレコキシブ、バルデコキシブ、ロフェコキシブおよびエトリコキシブ、鎮痛剤および関節内治療剤、例えばコルチコステロイドおよびヒアルロン酸類、例えばヒアルガンおよびシンビスクおよびＰ２Ｘ７受容体アンタゴニストを含む。
【００８８】
本発明の化合物はまた、癌の処置のための既存の治療剤と組み合わせて使用してもよい。組合せて使用する適当な薬剤は、次のものを含む：
(ｉ)  内科的腫瘍学で使用される、抗増殖性／抗新生物剤およびそれらの組合せ、例えばアルキル化剤(例えばシスプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、窒素マスダート、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファンおよびニトロソウレア)；代謝拮抗剤(例えば葉酸代謝拮抗剤、例えばフルオロピリミジン類、例えば５−フルオロウラシルおよびテガフール、ラルチトレキセド、メトトレキサート、シトシンアラビノシド、ヒドロキシウレア、ゲムシタビンおよびパクリタキセル(タキソール(登録商標))；抗腫瘍抗生物質(例えばアントラサイクリン類、例えばアドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン−Ｃ、ダクチノマイシンおよびミトラマイシン)；有糸分裂阻害剤(例えばビンカアルカロイド、建生場ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビンおよびタキソイド類、例えばタキソールおよびタキソテール)；およびトポイソメラーゼ阻害剤(例えばエピポドフィロトキシン、例えばエトポシドおよびテニポシド、アムサクリン、トポテカンおよびカンプトテシン)；
(ii)  細胞増殖抑制剤、例えば抗エストロゲン剤(例えばタモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェンおよびヨードキシフェン)、エストロゲン受容体下方調節剤(例えばフルベストラント)、抗アンドロゲン(例えばビカルタミド、フルタミド、ニルタミドおよびシプロテロンアセテート)、ＬＨＲＨアンタゴニストまたはＬＨＲＨアゴニスト(例えばゴセレリン、ロイプロレリンおよびブセレリン)、プロゲストーゲン類(例えばメゲストロールアセテート)、アロマターゼ阻害剤(例えばアナストロゾール、レトロゾール、ボラゾールおよびエキセメスタン)および５α−レダクターゼの阻害剤、例えばフィナステリド；
(iii)  癌細胞浸潤を阻害する薬剤(例えばメタロプロテイナーゼ阻害剤、例えば、マリマスタットおよびウロキナーゼプラスミノーゲンアクティベーター受容体機能の阻害剤)；
(iv)  増殖因子機能の阻害剤、例えばかかる阻害剤は、増殖因子抗体、増殖因子受容体抗体(例えば抗ｅｒｂｂ２抗体トラスツマブ[HerceptinＴＭ]および抗ｅｒｂｂ１抗体セツキシマブ[Ｃ２２５])、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤およびセリン／スレオニンキナーゼ阻害剤、例えば上皮細胞増殖因子ファミリーの阻害剤(例えばＥＧＦＲファミリーチロシンキナーゼ阻害剤、例えばＮ−(３−クロロ−４−フルオロフェニル)−７−メトキシ−６−(３−モルホリノプロポキシ)キナゾリン−４−アミン(ゲフィチニブ、AZD1839)、Ｎ−(３−エチニルフェニル)−６,７−ビス(２−メトキシエトキシ)キナゾリン−４−アミン(エルロチニブ、OSI-774)および６−アクリルアミド−Ｎ−(３−クロロ−４−フルオロフェニル)−７−(３−モルホリノプロポキシ)キナゾリン−４−アミン(CI 1033))、例えば血小板由来増殖因子ファミリーの阻害剤および例えば肝細胞増殖因子ファミリーの阻害剤を含む；
【００８９】
(ｖ)  抗血管新生剤、例えば血管内皮細胞増殖因子の作用を阻害するもの(例えば抗血管内皮細胞増殖因子抗体ベバシズマブ[AvastinＴＭ]、国際特許出願ＷＯ９７／２２５９６、ＷＯ９７／３００３５、ＷＯ９７／３２８５６およびＷＯ９８／１３３５４に記載されたような化合物)および他の機構により作用する化合物(例えばリノミド(linomide)、インテグリンαｖβ３機能の阻害剤およびアンジオスタチン)；
(vi)  血管傷害剤、例えばコンブレタスタチンＡ４および国際特許出願ＷＯ９９／０２１６６、ＷＯ００／４０５２９、ＷＯ００／４１６６９、ＷＯ０１／９２２２４、ＷＯ０２／０４４３４およびＷＯ０２／０８２１３に記載された化合物；
(vii)  アンチセンス治療、例えば上記の標的を指向するもの、例えばISIS 2503、抗ｒａｓアンチセンス；
(viii)  例えば異常遺伝子、例えば異常ｐ５３または異常ＢＲＣＡ１またはＢＲＣＡ２を置き換えるための方法、ＧＤＥＰＴ(遺伝子指向酵素プロドラッグ治療)方法、例えばシトシンデアミナーゼ、チミジンキナーゼまたは細菌ニトロレダクターゼ酵素を使用する方法および化学療法または放射線療法に対する患者耐容性を増強するための方法、例えば多剤耐性遺伝子治療を含む、遺伝子治療方法；および
(ix)  例えば患者の腫瘍細胞の免疫原性を高めるための、エキソビボおよびインビボ方法、例えばサイトカイン類、例えばインターロイキン２、インターロイキン４または顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子でのトランスフェクション、Ｔ細胞アネルギーを減少させるための方法、形質転換免疫細胞、例えばサイトカイン形質転換樹状細胞を使用する方法、サイトカイン形質転換腫瘍細胞株を使用する方法および抗イディオタイプ抗体を使用する方法を含む、免疫治療法。
【００９０】
本発明を、ここで、具体的な記載、実施例、生物学的データおよび参考例を参照することにより説明するが、これらに限定されない：
【００９１】
具体的な記載
式(１)の化合物は、以下に示す既知化合物(表１および２参照)のいずれか一つと比較して、少なくとも一つの改善された薬理学的特性を有する。
ヒトでのクリアランスの肝臓代謝成分が、ヒト肝細胞からの目盛り付きインビトロ内因性クリアランス(ＣＬｉｎｔ)データ(Chem Biol Interact. 2007, 168(1), 2-15参照)および主に血漿タンパク質結合によるヒトの血中での結合の程度から予測される。肝臓の十分に撹拌されたモデルは、肝細胞を使用して測定する内因性クリアランス(ＣＬｉｎｔ)から肝臓の血液クリアランスを予測するモデルである(Drug Metab Dispos. 2005, 33(9), 1304-11)。このモデルは、通常：
【数１】
2011528030.tif 000010
(式中、Ａは肝臓１ｇあたりの肝細胞(１００万)であり、Ｂは体重１キログラムあたりの肝臓グラムであり(これらの値の標準パラメータはＡ＝１２０およびＢ＝２２.１である)、ｆｕヒトは血漿中のヒト遊離画分であり、ｆｕｉｎｃは肝細胞マトリックス中の遊離画分であり、そしてＢ／Ｐはヒト血液中の血液対血漿濃度比である)
として記載される。
【００９２】
上記モデルから、インビトロヒト肝細胞内因性クリアランス(ＣＬｉｎｔ)が減少すると、ヒト代謝クリアランス(ＣＬ)が減少することは明らかである。代謝クリアランス(ＣＬ)の減少は、排出半減期(ｔ1/2)を、それ故に、次の周知の等式を考慮して、見ることができる薬剤の作用期間延長させる：
【数２】
2011528030.tif 000011
排出半減期(ｔ1/2)は、血漿濃度が半分になるのにかかる時間であり(血漿濃度−時間プロファイルの最大面積と関連する相で)、Ｖｄは分布容積である(Clinical Pharmacokinetics, concepts and applications, 3rd edition. 1995. by M Rowland and T. N. Tozer. Publisher Williams and Wilkins参照およびCurrent Drug Matabolism. 2006, 7(3), 251-64参照)。
【００９３】
上記から、低いクリアランス(ＣＬｉｎｔ)および(ＣＬ)は、薬剤の治療濃度を達成するのに必要な投与量と投与頻度の両方に影響を与えることが結論付けられる。低い(ＣＬ)は、治療濃度に到達するのに必要な投与量が少ないことを意味する。
【００９４】
特に、ＷＯ２００４／０１１４４３の化合物、すなわち、実施例２１および３９−４２(表１参照)と式(１)の化合物(表２参照)の比較は、式(１)の化合物が、その肝臓代謝安定性の指標として、改善された有効性(ｐＩＣ５０＝８.２)および低い肝臓内因性クリアランス(Ｃｌｉｎｔ＝２.１)の両方を有することを示す。
【００９５】
特に、ＷＯ２００４／０１１４４３の実施例２１(ｐＩＣ５０＝５.６)(表１)は、式(１)の化合物(Ｃｌｉｎｔ＝２.１)と同等の低い肝臓内因性クリアランス値(Ｃｌｉｎｔ＝２.３)を示す。しかしながら、この化合物は、実施例３９−４２の化合物(３１６−１０００倍)および式(１)の化合物(３９８倍)より遙かに弱い。
【００９６】
ＷＯ２００４／０１１４４３の実施例３９−４２(表１)のいくつかの化合物に含まれる構造修飾は、式(１)の化合物(ｐＩＣ５０＝８.２)と比較して高い有効性(ｐＩＣ５０＝８.１−８.６)をもたらした。しかしながら、実施例３９−４２の化合物は、ＷＯ２００４／０２２４４３の実施例２１の化合物(２.２−７.４倍)および式(１)の化合物(２.４−８.１倍)と比較して、高い肝臓内因性クリアランスにより証明される通り、代謝安定性が低い。さらに、式(１)の化合物は、ヒト血漿において好ましい遊離画分を示す。ヒト血漿での遊離画分改善は、ヒトにおける改善された全体的ヒト全血有効性をもたらすことが予測される。
【００９７】
【表１】
2011528030.tif 000012
−  データを測定していないことを意味する
【００９８】
【表２】
2011528030.tif 000013
【００９９】
本発明を、ここで、以下の非限定的実施例により説明し、そこでは、次のことが適用される：
(ｉ)  記載されているとき、核磁気共鳴(ＮＭＲ)スペクトルは、Varian Unity Inova 300または400 MHz分光計で測定した。１Ｈ  ＮＭＲデータは、主要な構造決定的プロトンのデルタ値の形で記載し、内部標準としてのテトラメチルシラン(ＴＭＳ)に対する百万分率(ppm)で示す。
(ii)  質量分析(ＭＳ)スペクトは、Finnigan Mat SSQ7000またはMicromass Platform分光計で測定した。
(iii)  実施例および方法の表題および副題化合物は、Advanced Chemical Development Inc, CanadaのIUPAC ACD Nameプログラム(version 8.0)を使用して命名した。
(iv)  順相カラムクロマトグラフィーおよび順相ＨＰＬＣは、シリカカラムを使用して行った。逆相高速液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)精製は、Waters Micromass LCZとWaters 600ポンプコントローラー、Waters 2487ディテクターおよびGilson FC024フラクションコレクターまたはWaters Delta Prep 4000またはGilson Auto Purification Systemのいずれかを使用して、Symmetry、NovaPakまたはEx-Terra逆相シリカカラムを使用して行った。
【０１００】
(ｖ)  光学回転は、AA-1000 Polarimeterを使用して測定した。[α]Ｄは、２０℃の温度で、ナトリウムＤ線の波長、５８９.３nmで測定した。
(vi)  図１−６に示すＸ線粉末回折(ＸＲＰＤ)分析は、PANalytical CubiX PRO機を使用して行った。データをPANalytical CubiX PRO機でθ−２θ配置で２°〜４０°  ２θの走査範囲にわたり、０.０２°増分あたり１００秒暴露で集めた。Ｘ線を４５kVおよび４０mAで操作する銅長高精度焦点チューブを使用して発生させた。銅Ｘ線の波長は１.５４１８Åであった。データを、〜２mgの化合物を置くゼロバックグラウンドホルダーに集めた。ホルダーはシリコンの一結晶から成り、それは非回折平面に沿って切断され、光学的に平らな仕上げに磨いた。この表面に入射されたＸ線は、Bragg励起により打ち消された。記載する全てのピークは±０.１θの精度である。
【０１０１】
(vii)以下の略語を使用する：
【表３】
2011528030.tif 000014
【実施例】
【０１０２】
実施例１          
Ｎ−(２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−６−{[(１Ｒ,２Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−１−メチルプロピル]アミノ}ピリミジン−４−イル)アゼチジン−１−スルホンアミド
【化８】
2011528030.tif 000015
ｉ)  １−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エタノン
【化９】
2011528030.tif 000016
クエン酸(７０ｇ、０.３７mol)の水(６７mL)溶液を、水(８９mL)および酢酸エチル(６００mL)中の撹拌している(Ｓ)−カリウム２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−カルボキシレート(J. Med. Chem. 1991, 34, (1), 392-397)(７５ｇ、０.４１mol)の溶液に添加した。有機溶液を分離し、水性溶液を酢酸エチル(３×３００mL)で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮し、高真空下室温で乾燥させて、透明油状物(５９ｇ、０.４１mol)を得た。遊離酸((４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−カルボン酸)を乾燥ジエチルエーテル(８００mL)に撹拌しながら溶解し、窒素雰囲気下に０℃冷却した。メチルマグネシウムブロマイド(ジエチルエーテル中３Ｍ、２００mL、０.６０moles)を滴下した。さらに乾燥ジエチルエーテル(３００mL)を添加し、さらにメチルマグネシウムブロマイド(ジエチルエーテル中３Ｍ、９７mL、０.２９mol)を添加した。添加を７５分間かけて終了させた。反応混合物を０℃でさらに３０分間撹拌し、室温に温め、さらに１８時間撹拌した。酢酸エチル(９１mL)を５分間にわたり滴下し、その間に温度が２１から２５℃に上昇し、混合物を１５分間撹拌した。反応混合物を、氷浴で５℃に予冷した水性塩化アンモニウム(７３０mL中２３０ｇ)に少しずつ添加し、その間に温度は１０℃に上昇した。有機相を分離し、水性相をジエチルエーテル(４×６００mL)で抽出した。合わせた有機フラクションを乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、真空で濃縮して(浴温度＜２０℃)、生成物を薄黄色油状物として得た(２７ｇ、４６％)。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 4.41 (t, 1H), 4.20 (t, 1H), 4.00 (dd, 1H), 2.26 (s, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.40 (s, 3H)。
【０１０３】
ii)  (１Ｒ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]−Ｎ−[(１Ｒ)−１−フェニルエチル]エタナミン
【化１０】
2011528030.tif 000017
(Ｒ)−(α)−メチルベンジルアミン(２９.６ｇ、３１mL、０.２４mol)を、２分間にわたり、撹拌している乾燥アセトニトリル(４３０mL)中の工程ｉ)の生成物(１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エタノン)(２７.１ｇ、０.１９mol)の溶液に、窒素雰囲気下に滴下した。反応混合物を、酢酸(１４.６ｇ、１３.９mL、０.２４mol)を１０分間にわたり滴下する間水浴で冷却した。この間温度を２０−２３℃に維持した。さらに１０分間撹拌後、ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(９９.７ｇ、０.４７mol)を、温度を２４〜２６℃に維持しながら１時間にわたり少しずつ添加した。得られた混合物を室温で７２時間(週末の間)撹拌した。混合物を水性重炭酸ナトリウムに注ぎ、固体重炭酸ナトリウムを発泡が止むまで添加した(ｐＨ７−８)。有機溶液を分離し、水性相をジエチルエーテル(２×５００mL)で抽出した。合わせた有機抽出物を水性塩化ナトリウム(３００mL)で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮して、２相油状物(透明／黄色)(４３.５ｇ)を得た。イソヘキサンを添加し、粘性の下層を分離した。イソヘキサン抽出物を真空で濃縮して、粗生成物を薄黄色油状物として得た(４３ｇ、９２％)。
【０１０４】
上記工程を、さらに２回、各々１０.３ｇおよび３３.６ｇの(Ｒ)−(α)−メチルベンジルアミンと９.４ｇおよび３０.８ｇの１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エタノンを使用して繰り返し、１４.７ｇおよび４３ｇの粗生成物をそれぞれ得た。合わせた粗生成物(１００.７ｇ)を次の通り精製した：
ジアステレオマー生成物混合物を、シリカクロマトグラフィー(Biotage、ＥｔＯＡｃ：イソヘキサン：トリエチルアミン２０：８０：０.５)により少しずつ(各回約２２.５ｇ)精製した。所望の生成物を含む適切なフラクション(頂上のスポット)を２個の別々のバッチ(フラクション１：３２.９ｇ、およびフラクション２：１９.５ｇ)に合わせ、別々に再クロマトグラフィーして(フラクション１を２回、フラクション２を１回)、副題化合物を薄黄色油状物として得た(３９.２ｇ、３３％)。
【０１０５】
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 7.31 (m, 4H), 7.23 (m, 1H), 4.01 (m, 2H), 3.84 (m, 2H), 2.73 (m, 1H), 1.43 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.31 (d, 3H), 0.95 (d, 3H)。
ＧＣ  ＭＳ純度１００％
ＭＳ：ＡＰＣＩ(＋ｖｅ)  １０５(ベースピーク)、２３４(Ｍ−１５)、２５０[Ｍ＋Ｈ]＋
ＨＰＬＣ  ＭＳ純度９７.５％；(不純物なし＞０.８％)
５８９nmで[α]Ｄ＋３３.１７、ｃ＝８.３５mg／ml  ＭｅＯＨ。
キラルＨＰＬＣ純度２２０nmで１００％。(Chirobiotic Vカラム４.６×１００mm、２０℃で１５分間にわたり６.７：３.３：９０、０.１％ＡｃＯＨのＭｅＯＨ溶液：０.１％ＴＥＡのＭｅＯＨ溶液：ＭｅＯＨ、１mL／分で溶出)
【０１０６】
iii)  ｔｅｒｔ−ブチル{(１Ｒ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}カルバメート
【化１１】
2011528030.tif 000018
工程ii)の生成物((１Ｒ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]−Ｎ−[(１Ｒ)−１−フェニルエチル]エタナミン)(１８.９ｇ、７６mmol)、ジ−ｔｅｒｔ−ブチジカーボネート(１６.９ｇ、７６mmol)および２０％水酸化パラジウム(II)炭素(０.９２ｇ)のエタノール(２７０mL)中の混合物を、４雰囲気圧の水素で、室温で撹拌しながら７２時間(週末の間)水素化した。反応混合物をHyfloを通して濾過し、溶媒を蒸発させて、副題化合物を無色結晶固体として得た(１８.７ｇ、１００％)
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 4.56 (bs, 1H), 4.02 (t + bs, 2H), 3.76 (q + bs, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.43 (s, 3H), 1.34 (s, 3H), 1.15 (d, 3H)。
ＧＣ  ＭＳ純度１００％
ＭＳ：ＡＰＣＩ(＋ｖｅ)  ５７(ベースピーク)、２３０(Ｍ−１５)
５８９nmで[α]Ｄ＋１２.４９、ｃ＝９.６mg／ml  ＭｅＯＨ
【０１０７】
iv)  (２Ｒ,３Ｒ)−３−アミノブタン−１,２−ジオールヒドロクロライド
【化１２】
2011528030.tif 000019
工程iii)の生成物(ｔｅｒｔ−ブチル{(１Ｒ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}カルバメート)(１０ｇ、４１mmol)のメタノール(５１mL)溶液を、ジオキサン中４Ｍ  ＨＣｌ(５１mL)で、１０分間にわたり撹拌しながら、温度を２１℃〜２５℃に水浴で維持しながら滴下し、混合物を室温で１８時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残留油物を２回トルエンと共沸蒸留し、高真空下で乾燥させて、副題化合物を、残留溶媒を幾分か保持する黄色の粘性ガム状物として得た(７.３ｇ)。
1H NMR (300 MHz, DMSO):δ 7.79 (bs, 3H), 3.67 (m, 1H), 3.42 (dd, 1H), 3.30 (m, 2H), 1.10 (d, 3H)
【０１０８】
ｖ)  (２Ｒ,３Ｒ)−３−({６−クロロ−２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]ピリミジン−４−イル}アミノ)ブタン−１,２−ジオール
【化１３】
2011528030.tif 000020
工程iv)の生成物((２Ｒ,３Ｒ)−３−アミノブタン−１,２−ジオールヒドロクロライド)(３.３ｇ、(ＮＭＲ分析での７５重量％に基づく)、２.５ｇ、１７mmol)、４,６−ジクロロ−２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]ピリミジン(ＷＯ２００４／０１１４４３)(５.０ｇ、１６mmol)および炭酸水素ナトリウム(４.４ｇ、５３mmol)のアセトニトリル(８０mL)中の混合物を、窒素雰囲気下に、１８時間撹拌しながら加熱還流した。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を真空で除去し、残留物を水および酢酸エチルに分配した。有機相を分離し、水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮して、黄色油状物(７.５ｇ)を得た。油状物をシリカクロマトグラフィー(Biotage、酢酸エチル：イソヘキサン８：２)で精製して、生成物を白色泡状物として得た(５.７ｇ、９５％)。
1H NMR (300 MHz, DMSO):δ 7.70 (d, 1H), 7.32 (m, 2H), 7.15 (m, 1H), 6.32 (s, 1H), 4.83 (d, 1H), 4.59 (t, 1H), 4.37 (q, 2H), 4.21 (bm, 1H), 3.52 (m, 1H), 3.34 (m, 2H), 1.02 (d, 3H)。
ＨＰＬＣ  ＭＳ純度１００％；
ＭＳ：ＡＰＣＩ(＋ｖｅ)  ３７６／３７８[Ｍ＋Ｈ]＋
【０１０９】
vi)  Ｎ−(２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−６−{[(１Ｒ,２Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−１−メチルプロピル]アミノ}ピリミジン−４−イル)アゼチジン−１−スルホンアミド
【化１４】
2011528030.tif 000021
工程ｖ)の生成物((２Ｒ,３Ｒ)−３−({６−クロロ−２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]ピリミジン−４−イル}アミノ)ブタン−１,２−ジオール)(５.３ｇ、１４mmol)、アゼチジン−１−スルホンアミド(ＷＯ２００４／０１１４４３)(２.７ｇ、１９mmol)、パラジウム(II)トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(０)(０.８２ｇ)、XPhos(０.８２ｇ)および炭酸セシウム(６.４ｇ、２０mmol)の乾燥ジオキサン(８５mL)中の混合物を、１０５℃で９０分間、撹拌しながら窒素雰囲気下に加熱した。混合物を室温に冷却し、酢酸(１３mL)を添加し、溶媒を真空で除去した。残留物を水および酢酸エチルに分配し、有機フラクションを分離し、水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮して、赤色泡状物(１０.０ｇ)を得た。生成物を２回クロマトグラフィー(ＳｉＯ２、ＥｔＯＡｃ)で精製して、黄色泡状物を得て、それをＤＣＭに懸濁し、１０分間還流し、撹拌しながら一夜で室温に冷却した。固体を濾過し、真空下で乾燥させて、表題化合物を無色固体(４.２ｇ、６３％)として得て、結晶形態修飾Ａとした。
1H NMR (400 MHz, DMSO):δ 10.49 (s, 1H), 7.35 (m, 2H), 7.14 (m, 1H), 5.99 (s, 1H), 4.71 (s, 1H),4.53 (s, 1H), 4.39 (q, 2H), 4.17 (bs, 1H), 3.88 (t, 4H), 3.48 (m, 1H), 2.12 (m, 2H), 1.04 (d, 3H), 3.33 (m (HODシグナルにより一部不明瞭), 2H)
ＨＰＬＣ  ＭＳ純度９９．２％；
ＭＳ：ＡＰＣＩ(＋ｖｅ)  ４７６[Ｍ＋Ｈ]＋
元素分析：実測値：Ｃ、４５．３２；Ｈ、４．８６；Ｎ、１４．７９；Ｓ、１３．４７％。
計算値：[Ｃ１８Ｈ２３Ｎ５Ｏ４Ｓ２Ｆ２]：Ｃ、４５．４６；Ｈ、４．８７；Ｎ、１４．７３；Ｓ、１３．４８％。
ｍ．ｐ. １１６−１１６．５℃。
５８９nmで[α]Ｄ＋２８．３、ｃ＝０．９７２mg／ml  ＭｅＯＨ
【０１１０】
２２０nmでのキラルＨＰＬＣ純度９８.３％。(Chiralcel ODカラム４.６×２５０mm、４０℃で９０分間にわたり、９０：１０、０.１％ＴＦＡのイソヘキサン溶液：イソプロパノール、１mL／分)で溶出。修飾Ａの結晶性は、本物質(１０.８mg)を水(１５０μl)中、室温で１週間スラリー化することにより改善した。固体を１週間後スラリーから単離し、ＸＲＰＤで分析した。修飾ＡのＸＲＰＤパターンを図１に示す。修飾Ａの特徴的ピークのいくつかを表３に記載する。
【表４】
2011528030.tif 000022
表３。修飾Ａのいくつかの特徴的ピーク
【０１１１】
修飾Ｂを、修飾Ａ(８.９mg)をシクロヘキサン(７０μl)中、室温で１週間スラリー化することにより製造した。固体を１週間後スラリーから単離し、ＸＲＰＤで分析した。修飾ＢのＸＲＰＤパターンを図２に示す。修飾Ｂの特徴的ピークのいくつかを表４に記載する。修飾Ｂはまた、修飾Ａをイソプロパノールに、室温で、およびヘキサン、シクロヘキサン、水またはトルエンに、７０℃で、これら全てについて１週間スラリー化することによっても製造した。
【表５】
2011528030.tif 000023
表４。修飾Ｂのいくつかの特徴的ピーク
【０１１２】
修飾Ｃを、修飾Ａ(９.６mg)をジオキサン(５０μl)中、室温で１週間でスラリー化することにより製造した。固体を１週間後スラリーから単離し、ＸＲＰＤにより分析した。修飾ＣのＸＲＰＤパターンを図３に示す。修飾Ｃの特徴的ピークのいくつかを表５に記載する。
【表６】
2011528030.tif 000024
表５。修飾Ｃのいくつかの特徴的ピーク
【０１１３】
修飾Ｄを、修飾Ａ(９.１mg)を酢酸エチル(５０μl)中、室温で１週間スラリー化することにより製造した。固体を１週間後スラリーから単離し、ＸＲＰＤにより分析した。修飾ＤのＸＲＰＤパターンを図４に示す。修飾Ｄのいくつかの特徴的ピークを表６に記載する。修飾Ｄはまた、修飾Ａを酢酸エチル中、７０℃で１週間スラリー化することによっても製造した。
【表７】
2011528030.tif 000025
表６。修飾Ｄのいくつかの特徴的ピーク
【０１１４】
修飾Ｅを、修飾Ａ(６.８mg)をヘキサン(１００μl)中、室温で１週間スラリー化することにより製造した。固体を１週間後スラリーから単離し、ＸＲＰＤにより分析した。修飾ＥのＸＲＰＤパターンを図５に示す。修飾Ｅの特徴的ピークのいくつかを表７に記載する。
【表８】
2011528030.tif 000026
表７。修飾Ｅのいくつかの特徴的ピーク
【０１１５】
修飾Ｆを、修飾Ａ(９.１mg)をジエチルエーテル(７０μl)中、室温で１週間スラリー化することにより製造した。固体を１週間後スラリーから単離し、ＸＲＰＤで分析した。修飾ＦのＸＲＰＤパターンを、図６に示す。修飾Ｆの特徴的ピークのいくつかを表８に記載する。
【表９】
2011528030.tif 000027
表８。修飾Ｆのいくつかの特徴的ピーク
【０１１６】
実施例２
実施例１の化合物の別製造法
ａ)  (１Ｒ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エタナミン
【化１５】
2011528030.tif 000028
実施例１  工程ii)の生成物((１Ｒ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]−Ｎ−[(１Ｒ)−１−フェニルエチル]エタナミン)(２ｇ、８.０mmol)のエタノール(３０mL)溶液に、水酸化パラジウム(０.０５ｇ、２０％Ｐｄ)を添加し、混合物を５バールで室温で１６時間にわたり撹拌しながら水素化した。さらに水酸化パラジウム(０.２ｇ)を添加し、混合物をさらに７２時間水素化した。混合物をHyfloを通して濾過し、真空で濃縮して、生成物を透明油状物として得た(０.７９ｇ、６７％)。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 4.00 (t, 1H), 3.93 (mq, 1H), 3.81 (t, 1H), 3.06 (m, 1H), 1.43 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.08 (d, 3H)。
GC MS純度100%
MS:APCI(+ve) 44 (ベースピーク), 145 [M+H]＋
【０１１７】
ｂ)  ６−クロロ−２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−Ｎ−{(１Ｒ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}ピリミジン−４−アミン
【化１６】
2011528030.tif 000029
工程ａ)の生成物((１Ｒ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エタナミン)(０.４０ｇ、２.８mmol)、４,６−ジクロロ−２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]ピリミジン(ＷＯ２００４／０１１４４３)(０.７７ｇ、２.５mmol)および炭酸水素ナトリウム(０.２４ｇ、２.８mmol)のアセトニトリル(１２mL)中の混合物を、窒素雰囲気下に、１８時間撹拌しながら加熱還流した。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を真空で除去し、残留物を水および酢酸エチルに分配した。有機相を分離し、水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮して、黄色油状物(１.２ｇ)を得た。油状物をシリカクロマトグラフィー(Biotage、酢酸エチル：イソヘキサン２.５：７.５)で精製して、副題化合物を透明粘性油状物として得た(１.１ｇ、９５％)。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 7.28 (m, 2H), 7.02 (m, 2H), 6.07 (s, 1H), 5.00 (bs, 1H), 4.42 (t, 2H), 4.05 (m, 2H), 3.76 (dd, 1H), 1.42 (s, 3H), 1.33 (s, 3H), 1.17 (d, 3H)。
ＨＰＬＣ  ＭＳ純度１００％；
ＭＳ：ＡＰＣＩ(＋ｖｅ)  ４１６／４１８  [Ｍ＋Ｈ]＋
【０１１８】
ｃ)  Ｎ−[２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−６−({(１Ｒ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}アミノ)ピリミジン−４−イル]アゼチジン−１−スルホンアミド
【化１７】
2011528030.tif 000030
工程ｂ)の生成物(６−クロロ−２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−Ｎ−{(１Ｒ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}ピリミジン−４−アミン)(１.１ｇ、２５mmol)、アゼチジン−１−スルホンアミド(ＷＯ２００４／０１１４４３)(０.５１ｇ、３.８mmol)、パラジウム(II)トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(０)(０.１５ｇ)、XPhos(０.１５ｇ)および炭酸セシウム(１.２ｇ、２０mmol)の乾燥ジオキサン(１５mL)中の混合物を、開放容器中、マイクロ波で１００℃／３００Ｗマックスで、１２分間、撹拌しながら加熱した。混合物を室温に冷却し、酢酸(２.４mL)を添加し、溶媒を真空で除去した。残留物を水および酢酸エチルに分配し、有機フラクションを分離し、水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮して、赤色ガム状物(１.７ｇ)を得た。生成物を２回クロマトグラフィー(ＳｉＯ２、ＥｔＯＡｃ：イソヘキサン１：１  ＥｔＯＡｃ：イソヘキサン４：６)で精製して、生成物を無色泡状物として得た(１.０ｇ、７５％)。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 7.22 (m, 1H), 7.02 (m, 2H), 5.99 (s, 1H), 4.96 (bd, 1H), 4.35 (q, 2H), 4.15 (m, 2H), 3.98 (t, 4H), 3.78 (dd, 1H), 2.24 (m, 2H), 1.44 (s, 3H), 1.34 (s, 3H), 1.18 (d, 3H)。
ＨＰＬＣ  ＭＳ純度９８.０％；
ＭＳ：ＡＰＣＩ(＋ｖｅ)  ５１６  [Ｍ＋Ｈ]＋
【０１１９】
ｄ)  Ｎ−(２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−６−{[(１Ｒ,２Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−１−メチルプロピル]アミノ}ピリミジン−４−イル)アゼチジン−１−スルホンアミド
【化１８】
2011528030.tif 000031
工程ｃ)の生成物(Ｎ−[２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−６−({(１Ｒ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}アミノ)ピリミジン−４−イル]アゼチジン−１−スルホンアミド)(０.８７ｇ、１.７mmol)およびパラ−トルエンスルホン酸(０.８５ｇ、３.４mmol)のメタノール(１９.５mL)および水(５滴)中の混合物を、６０℃で２０時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチルに取り込み、それを水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、蒸発させて、薄黄色泡状物(０.７４ｇ)を得た。クロマトグラフィー(ＳｉＯ２、ＥｔＯＡｃ：イソヘキサン９：１)での精製により、泡状物を得て、それを高真空下、４０℃で１８時間乾燥させて、表題化合物を無色固体として得た(０.５４ｇ、６７％)
1H NMR (300 MHz, DMSO):δ 10.49 (s, 1H), 7.35 (m, 2H), 7.14 (m, 1H), 5.99 (s, 1H), 4.71 (s, 1H),4.53 (s, 1H), 4.39 (q, 2H), 4.17 (bs, 1H), 3.88 (t, 4H), 3.48 (m, 1H), 2.12 (m, 2H), 1.04 (d, 3H), 3.33 (m (HODシグナルにより一部不明瞭), 2H)
ＭＳ：ＡＰＣＩ(＋ｖｅ)  ４７６[Ｍ＋Ｈ]＋
元素分析：実測値：Ｃ、４５.１５；Ｈ、４.７９；Ｎ、１４.５０；Ｓ、１３.３６％。
計算値：[Ｃ１８Ｈ２３Ｎ５Ｏ４Ｓ２Ｆ２]：Ｃ、４５.４６；Ｈ、４.８７；Ｎ、１４.７３；Ｓ、１３.４８％。
【０１２０】
実施例３
スキーム１(以下に示す)に略記する経路を使用した、大規模で繰り返した実施例１の化合物の製造
【化１９】
2011528030.tif 000032
スキーム１
【０１２１】
工程１
【化２０】
2011528030.tif 000033
クエン酸(８４８ｇ、４.４１mol)の水(８００ml)溶液を、撹拌しているカリウム２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−カルボキシレート(J. Med. Chem. 1991, 34, (1), 392-397)(９００ｇ、４.８９mol)の水(１０６２ml)および酢酸エチル(７１５０ml)中の溶液に添加し、１５分間撹拌して、無色２相溶液を得た。添加により発熱反応は見られなかった。有機相を分離し、乾燥させた(ＭｇＳＯ４)。水性層を酢酸エチル(２×３５００ml)で抽出し、有機物を乾燥させた(ＭｇＳＯ４)。有機フラクションを合わせ、真空で濃縮し、高真空下室温で乾燥させて、透明油状物(６８５.１ｇ、４.６６mol)を得た。油状物を−３０℃で２日間、１Ｈ  ＮＭＲ分析によると品質に何等影響なく貯蔵した。油状物をジエチルエーテル(１３０００ml)に溶解し、窒素雰囲気下に５℃に冷却した。メチルマグネシウムブロマイド(ジエチルエーテル中３.０Ｍ、３５００ml、１０.５０mol)を、反応に９０分間にわたり、温度を０−１０℃に維持しながら滴下した。添加完了時混合物を１０℃で３０分間撹拌し、一夜撹拌しながら室温まで温めた。酢酸メチル(７５ml、０.９４mol)を反応混合物に添加し、ガス発生と僅かな発熱がもたらされた。反応混合物を水性塩化アンモニウム(８７００ml中２７５０ｇ)に、温度を添加の間２５℃に維持しながら添加し、１０分間撹拌した。有機相を分離し、水性相をジエチルエーテル(３×７１００ml)で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、真空で濃縮して、ケトンを黄色油状物として得た。
【表１０】
2011528030.tif 000034
【０１２２】
工程２
【化２１】
2011528030.tif 000035
(Ｒ)−(＋)−１−フェニルエチルアミン(７１５ｇ、５.９０mol)を、５５分間にわたり、撹拌しているケトン(７００ｇ、４.８６mol)のアセトニトリル(１１１００ml)に、窒素雰囲気下に滴下した。添加中、わずかな発熱が観察された。反応混合物を１０℃に冷却し、酢酸(３４８ml、６.０３mol)を、温度を２５℃に維持しながら４５分間にわたり滴下し、白色沈殿を形成させた。さらに１０分間撹拌後、ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(２３４０ｇ、１１.０４mol)を、１時間にわたり、温度を２５℃以下に維持しながら少しずつ添加し、ガスの発生が観察された。混合物を室温で一夜撹拌した。反応混合物を水(１１０００ml)に、撹拌しながら窒素雰囲気下(５Ｌ／分流速)に９０分間にわたり添加した。添加により、温度が下がり、ガスが発生した。重炭酸ナトリウム(１５６０ｇ、１８.５７mol)を、混合物に、溶液がｐＨ７となるまで少しずつ添加した。添加により、発熱とガス発生が起こった。有機相を分離し、水性相をジエチルエーテル(２×１００００ml)で抽出した。合わせた有機抽出物を水性塩化ナトリウム(７０００ml中２７６０ｇ)で洗浄し、乾燥(ＭｇＳＯ４)させ、濾過し、真空で濃縮して、２相油状物(透明／黄色)を得た。ヘプタン(２０００ml)を添加し、粘性の下部層を分離した。ヘプタン抽出物を真空で濃縮して、粗生成物を薄黄色油状物として得た(９２９.３ｇ、７６.７％)。ジアステレオマー生成物混合物を少しずつシリカクロマトグラフィー(酢酸エチル：ヘプタン：トリエチルアミン２０：８０：０.５)で精製して、生成物を黄色油状物として得た。低いジアステレオマー純度で単離されたアミンを再クロマトグラフィーして、さらに生成物を得た。
【表１１】
2011528030.tif 000036
【０１２３】
工程３
【化２２】
2011528030.tif 000037
アミン(２３６.１ｇ、０.９５mol)、ジ−ｔｅｒｔ−ブチジカーボネート(２０８.０ｇ、０.９５mol)および２０％水酸化パラジウム(II)炭素(１１.５ｇ)のＩＭＳ(３３７５ml)中の混合物を、４バール圧水素で、室温で撹拌しながら７日間にわたり水素化した。反応混合物をHyfloを通して濾過し、真空で濃縮して、無色結晶性固体を得た。
【表１２】
2011528030.tif 000038
【０１２４】
工程４
【化２３】
2011528030.tif 000039
ジオキサン中４Ｍ  ＨＣｌ(１８００ml、７.２２mol)を、冷却したＢｏｃアミン(３５３.５ｇ、１.４４mol)のメタノール(１８００ml)溶液に、窒素雰囲気下に滴下した。反応の温度は、水浴存在下で、添加中、１４から２０℃の範囲であった。混合物を室温で１８時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残留物を２回トルエンと共沸蒸留し(２×５００ml)、高真空下で乾燥させて、褐色粘性のガム状物を得た。
【表１３】
2011528030.tif 000040
【０１２５】
工程５
【化２４】
2011528030.tif 000041
アミノジオール(２６６.４ｇ、約７５重量％、１９９.８ｇ、１.３８mol)、４,６−ジクロロ−２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]ピリミジン(３９０.０ｇ、１.２７mol)および重炭酸ナトリウム(３６１.０ｇ、４.３０mol)のアセトニトリル(６５００ml)中の混合物を、窒素雰囲気下に１７時間、撹拌しながら加熱還流した。この間に、灰白色懸濁液が形成された。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を真空で除去し、残留物を酢酸エチル(４０００ml)および水(４０００ml)に分配した。有機層を分離し、水(２０００ml)および塩水(２０００ml)で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮して、暗黄色油状物を得た。油状物をシリカクロマトグラフィー(酢酸エチル：ヘプタン４：１)で精製して、クロロピリミジンを黄色ガム状物として得た。
【表１４】
2011528030.tif 000042
【０１２６】
工程６
【化２５】
2011528030.tif 000043
クロロピリミジン(３８２.１ｇ、１.０２mol)、アゼチジン−１−スルホンアミド(２００.０ｇ、１.４８mol)、ジ−パラジウム−トリス(ジベンジリデンアセトン)(５６.１ｇ)、X-Phos(５６.５ｇ)および炭酸セシウム(４６５.０ｇ、１.４３mol)の１,４−ジオキサン(６４００ml)中の混合物を、１０５℃で９０分間、窒素雰囲気下に撹拌しながら加熱した。反応混合物を室温に冷却し、酢酸(９５０ml)を混合物に添加し、１０分間撹拌した。添加中、発熱が観察された。赤色溶液を得て、溶媒を真空で除去し、残留物を酢酸エチル(３５００ml)および水(３５００ml)に分配した。有機相を分離し、水(２５００ml)および塩水(２５００ml)で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過した。得られた赤色溶液を真空で濃縮して、赤色泡状物を得た。生成物をシリカクロマトグラフィー(酢酸エチル：ヘプタン１：１、続いて酢酸エチル)で精製して、黄色泡状物を得た。黄色泡状物をジクロロメタンに溶解し、１０分間還流し、薄黄色沈殿を形成させ、室温に冷却した。沈殿を濾過し、再結晶し(酢酸エチル：ヘプタン)、濾過し、６０℃で真空下に乾燥させて、ＡＳＡピリミジンを無色固体として得た。固体をさらにＤＣＭ(２Ｌ)に室温で５日間、撹拌しながら懸濁させた。固体を濾過し、真空下で乾燥させて、表題実施例１の化合物を無色固体として得た。
【表１５】
2011528030.tif 000044
【０１２７】
生物学的データ
ヒト肝臓内因性クリアランス(ＣＬｉｎｔ)アッセイ
大多数の薬物について、血漿クリアランスの大部分は肝臓代謝に起因する。内因性クリアランス(ＣＬｉｎｔ)は、化合物が代謝を受ける可能性の指標であり、血漿タンパク質結合および肝臓血流の考察から、インビボでの肝臓クリアランスと関連付けることができる。それ故に、ＣＬｉｎｔは、計画内の化合物の相対的代謝安定性の指標として使用でき、そして他の外部プローブ基質と比較し得る。さらに、肝臓代謝クリアランスが問題であることが基地の研究計画内のインビトロでのＣＬｉｎｔの測定は、化合物のインビボでの異なる薬物動態学的行動の理解の有用な手段であり得る。
【０１２８】
試験詳細
次の記載は、ＨＳＡ(ヒト血清アルブミン)を含まない懸濁緩衝液を使用し、ｐＨ７.４の生理学的条件に維持した、ヒト肝細胞インキュベーションから内因性クリアランス(ＣＬｉｎｔ)を概算する方法を略記する。
熟練した科学者がこの試験法の特徴を再現するために、試験法の最初のバリデーション時および最終的承認時に使用した試薬類の特定の供給源およびカタログ番号を引用する。これは、文書化された同等な明細を有するか、または置き換えが本アッセイの動作特性に顕著な影響を有しないことが実験的に確認された後に、適当な別の試薬類に置き換えることを阻むものではない。
肝細胞を、ヒト肝臓の一部の２工程インサイチュコラゲナーゼ潅流法により調製し、インキュベーション前は無タンパク質緩衝液(下記参照)に懸濁させ、氷上に貯蔵した。
【０１２９】
インサイチュコラゲナーゼ潅流によるヒト肝細胞単離
この方法は、Seglen(Preparation of rat liver cells.  I. Effect of Ca2+ on enzymatic dispersion of isolated, perfused liver.  Exptl. Cell Res., 1972, 74, p450 and preparation of isolated rat liver cells. Methods Cell Biol., 1976, 13, p29)の方法に基づき、それ自体、BerryおよびFriend(High yield preparation of isolated rat liver parenchymal cells.  J. Cell Biol., 1969, 43, p506)の１工程法から開発された。
ここで、我々は無タンパク質細胞懸濁液の製造を開示する。
【０１３０】
化学物質および試薬
５％過酸化水素：Milli-Q水で希釈した６０％(ｗ／ｖ)過酸化水素(Fisher Scientific)。
肝臓潅流培地：Gibson Life Technologies (Cat no. 17701)により供給されたすぐ使えるもの。
肝臓消化培地：Gibson Life Technologies (Cat no. 17703)により供給されたすぐ使えるもの。
懸濁液培地：２.３４ｇ  Ｎａ  ＨＥＰＥＳ、２.０ｇ  ＨＳＡフラクションＶ、０.４ｇ  Ｄ−フルクトース、ＤＭＥＭ(１Ｌ粉末当量、Sigma；ｗ／１  ｇ.ｌ−１  グルコース、ｗ／ピルビン酸Ｎａ、ｗ／ｏ  ＮａＨＣＯ３、ｗ／ｏ  フェノールレッド)、Milli-Q水で１Ｌにし、１Ｍ  ＨＣｌでｐＨ７.４にした。(無タンパク質懸濁緩衝液は、２.０ｇ  ＨＳＡフラクションＶを省いて調製)
【０１３１】
肝細胞単離
消化培地で灌流させた肝臓の被膜を切開し、細胞を穏やかに培地へとほぐし入れた。細胞を、篩(約２５０μM)を通して、５０ml懸濁液培地に入れた。篩をさらに懸濁緩衝液で濯ぎ、１００mlの最終容量までビーカーへと入れた。懸濁液を、２個のプラスチック５０mL遠沈管(氷で予冷)に分け入れ、５０×ｇで２分間、４℃で遠心分離した。上清を傾捨し、ペレットを無タンパク質懸濁緩衝液に再懸濁して、元の容積とした。遠心分離工程を繰り返し、各ペレットを約１０ml無タンパク質懸濁緩衝液に再懸濁した。懸濁液を合わせ、無タンパク質懸濁緩衝液で５０mLの容積とした。
【０１３２】
肝細胞収率および生存能の評価
一定量の細胞懸濁液(０.２mL)を０.２ml無タンパク質懸濁緩衝液で希釈した。希釈した細胞に、０.２mLトリパンブルー溶液(０.４％ｗ／ｖ)を添加し、穏やかに混合した。１分後、パスツールピペットを使用してサンプルを取り、毛細管現象によりImproved Neubauer Counting Chamberに満たした。細胞を倒立顕微鏡を使用して計測し(中央の升目のみ)、生存細胞は色素を排出でき、非生存細胞は染色されている。調製物中の生存細胞の割合を、それ故に、次の通り計算した：
【数３】
2011528030.tif 000045
生存細胞の濃度を次の通り計算した：
生存細胞ml−１＝生存細胞計数×１０４×３×５０
計数工程を２回行った。
細胞懸濁液を適当な容積の無タンパク質懸濁緩衝液で希釈して、生存細胞の必要な濃度とし、使用１時間前まで氷上で貯蔵した。
【０１３３】
タンパク質除去
新鮮なヒト肝細胞を、一般に、ＨＳＡ含有懸濁緩衝液に入れる。以下の方法はタンパク質除去を記載する。凍結保存細胞を、単に、タンパク質不含有懸濁緩衝液を使用して調製してよい。
無タンパク質懸濁緩衝液を、単にＨＳＡを省き、タンパク質懸濁緩衝液と同様に調製した。細胞懸濁液を、上記の通り５０×ｇで再遠心分離し、上清を廃棄した。これを、適当な容積の無タンパク質懸濁緩衝液で置き換えた。この工程を２回繰り返し、全ての残っている痕跡量のタンパク質を除去し、細胞の最終再懸濁液が、必要なインキュベーション濃度の２倍濃度であることを確実にした。
【０１３４】
試験法
インキュベートする試験化合物を、ＤＭＳＯ中０.１mMの濃縮貯蔵溶液(１％ｖ／ｖ最終溶媒濃度)から、適当なバイアル中の適当な容積(０.５mL)の無タンパク質懸濁緩衝液に添加した。２×１０６細胞・mL−１(最終インキュベーション細胞濃度２倍、トリパンブルー排泄により生存能＞８５％)濃度の適当な容積の細胞(０.５mL)を別のバイアルに入れ、両方のバイアルを、水浴中３７℃でプレインキュベートする。
５分間のプレインキュベーション後、１×１０６細胞・mL−１の最終細胞濃度とするための適当な容積の緩衝液および化合物を細胞に添加し、反応を進行させた。
適当な時点(例えば５、１０、２０、３０、６０、９０および１２０分)で、一定量(５０μl)をインキュベーション混合物から取り、２容積の氷冷溶媒メタノールに添加し、反応を停止させ、肝細胞を変性させた。細胞または化合物がない対照インキュベーションも行った。インキュベーションを停止したら、サンプルを５分間振盪させ、−２０℃以下で、２時間貯蔵して、タンパク質沈殿を助け、１５分間、３０００rpmで４℃で遠心分離した。上清をＨＰＬＣバイアルに移し、適当な出発点として次の方法を使用するＨＰＬＣ−ＭＳにより分析した：
溶媒：Ａ：０.１％ギ酸のメタノール溶液およびＢ：０.１％ギ酸の水溶液(ｖ／ｖ)
カラム：Waters Xterra C18  ２０×３.９mm、３.５μm
流速  １.５ml.分−１
勾配：０％Ｂを０.３分間、０.７分間にわたり０％から１００％Ｂ、１００％Ｂに０.２分間維持、０.０１分間にわたり１００％から０％Ｂ。
【０１３５】
データ解析および計算方法
インキュベートした化合物の得られたピーク面積をExcelシートに取り込み、ｌｎ[残存濃度]対時間のプロットを作成した。データの処理は、一区画、薬物動態学的モデルに類似する。投与量／Ｃ０がインキュベーションの容積(ml・１０６細胞−１で示す)および排出速度定数ｋ＝０.６９３／ｔ１／２の項をもたらすため、ｔ１／２の点でＣｌｉｎｔを表す等式を、等式１の通り導き出し得る：
【数４】
2011528030.tif 000046
等式１
インキュベーションからの親化合物損失のｔ1/2およびＣＬｉｎｔを決定した。
【０１３６】
有効性(ｐＩＣ５０)  −  リガンド結合アッセイ
ヒトＣＸＣＲ２受容体でのアンタゴニストの有効性を、インビトロで、ヒト組み換えＣＸＣＲ２受容体でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞の膜から、ＣＸＣＲ２放射性リガンド、[１２５Ｉ]インターロイキン−８(ＩＬ−８)の特異的結合を阻害する能力を定量することにより決定した。
【０１３７】
実験法
材料
市販の材料を、次の通り得た：
Ｕ底９６ウェルプレート(３７９９)および２２５cm２通気口付蓋培養フラスコ(３００１)をCostar, Corning, Kent, UKから。マルチスクリーンフィルタープレート(０.４５μm；MAHV N45 50)、真空マニホールドおよびポンプ(XF54 230 50)をMillipore, Watford, UKから。Ｎ−[２−ヒドロキシエチル]ピペラジン−Ｎ’−[２エタンスルホン酸](ＨＥＰＥＳ；H-3375)、エチレンジアミン−テトラ酢酸(ＥＤＴＡ；E1644)、塩化マグネシウム(M-9272)、ゼラチン(G9382)、ジチオスレイトール(ＤＴＴ；D06052)、塩化ナトリウム(S3160/63)、水酸化ナトリウム(B6506)、バシトラシン(B0125)、不活性化ウシ胎児血清(ＦＣＳ；CR0848)およびDMSO Fluka Chemika(41648)をSigma, Poole, UKから。MicroScint-O(6013611)をPackard BioScience, Pangbourne, UKから。完全プロテアーゼ阻害剤カクテル錠(1836145)をBoehringer Mannheim, GmbH, Germanyから。ヒト組み換え[１２５Ｉ]ＩＬ−８  ７４TBq／mmol、０.７１２MBq／ml(IM249)をAmersham, Horsham UKから。他の全ての組織培養試薬は、Invitrogen, Paisley, Scotland, UKから購入した。全ての他の化学試薬は、分析グレードでFisher Scientific, Loughborough, UKから購入した。
【０１３８】
溶液
ＨＥＰＥＳ(１０mM)、塩化カリウム(２.７mM)、塩化ナトリウム(１３７mM)、リン酸水素カリウム(０.４mM)、塩化カルシウム(１.８mM)、塩化マグネシウム(１mM)、ゼラチン(０.１％(ｗ／ｖ))およびバシトラシン(１００μg／ml)含有ＨＥＰＥＳ緩衝化塩溶液ｐＨ７.４。
ＨＥＰＥＳ(１０mM)、塩化カリウム(２.７mM)、塩化ナトリウム(１３７mM)、リン酸水素カリウム(０.４mM)、グルコース(１１mM)含有ＨＥＰＥＳ緩衝化タイロード溶液ｐＨ７.４。
低張緩衝液：水：ＨＥＰＥＳ緩衝化タイロード溶液の３：１混合物。
【０１３９】
細胞培養および膜調製
ＨＥＫ２９３細胞を、予め真核発現ベクターＲｃＣＭＶにクローン化したヒトＣＸＣＲ２(EMBL L19593)ｃＤＮＡでトランスフェクトした。クローン化細胞株を、安定にトランスフェクトしたジェネテシン耐性集団から作成した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２の加湿インキュベーター中、１０％(ｖ／ｖ)ウシ胎児血清およびグルタミン(２mM)含有ＤＭＥＭ培地で慣例通り約８０％コンフルエンスまで増殖させた。細胞をAccutaseＴＭを使用し、３７℃で３〜５分間でフラスコから回収し、氷上、低張緩衝液に２×１０７細胞／mLの密度で再懸濁させた。膜を、氷上、２２０００rpmに設定したポリトロン組織ホモゲナイザーを使用した均質化により調製した。膜フラクションを、均質化細胞を４１％(ｗ／ｖ)スクロース溶液に重層し、１４００００ｇで１時間、４℃で遠心分離するスクロース勾配遠心分離により精製した。膜フラクションを界面で回収し、ＨＥＰＥＳ緩衝化タイロード溶液で４倍希釈し、１０００００ｇで２０分間、４℃で遠心分離した。膜ペレットをＨＥＰＥＳ緩衝化タイロード溶液中１×１０８細胞当量／mLで再懸濁し、−８０℃で一定量ずつ貯蔵した。膜調製および貯蔵に使用した全緩衝液は、製造者の指示に従い調製した１mM  ＤＴＴおよび完全プロテアーゼ阻害剤ＴＭカクテル錠の存在下で製造した。
【０１４０】
アッセイプロトコール
アッセイを、ＨＥＰＥＳ緩衝化塩溶液中、９６ウェルプレートで行った。[１２５Ｉ]ＩＬ−８を、９.６nM貯蔵液から予め希釈した０.０６nM最終濃度で使用した。アッセイ中の最終ＤＭＳＯ濃度は１％(ｖ／ｖ)であった。試験化合物を、ＤＭＳＯでの連続希釈と、ＨＥＰＥＳ緩衝化塩溶液での１０倍希釈により調製し、化合物および１０％ＤＭＳＯを含む作業溶液を得た。[１２５Ｉ]ＩＬ−８の全結合(Ｂ０)についてのコントロールは、化合物非存在下で決定した。非特異的結合(ＮＳＢ)のコントロールは、１μM最終濃度の(１Ｒ)−５−[[(３−クロロ−２−フルオロフェニル)メチル]チオ]−７−[[２−ヒドロキシ−１−メチルエチル]アミノ]チアゾロ[４,５−ｄ]ピリミジン−２(３Ｈ)−オン二水和物、ナトリウム塩存在下、[１２５Ｉ]ＩＬ−８結合を測定することにより決定した。膜の凍結させた一定量を溶かし、添加した全放射標識の約１０％結合を得るための予定した濃度に、典型的に約１ｘ１０６細胞当量／mLに希釈した。各ウェルに添加したアッセイ成分は次の通りである；１０％ＤＭＳＯ含有緩衝液中の１／１０容積の試験化合物または対照、１／１０容積放射標識、８／１０容積希釈膜。プレートを密閉し、２時間、室温でインキュベートした。インキュベーション後、アッセイ混合物をMillipore真空マニホールドを使用して濾過し、２容積の冷ＨＥＰＥＳ緩衝化塩溶液で洗浄した。濾過プレートを空気乾燥させ、個々のフィルターをポリプロピレン試験管にパンチで穴を開けて入れて、放射活性を１分／サンプルでCobra II Gammaカウンター(Packard BioScience)を使用して直接ガンマ計測するか、全濾過プレートを担体プレートに入れ、５０μLのMicroScint-Oを各ウェルに添加した。９６ウェルプレートシンチレーション計数を、１分／サンプルウェルでTopCount装置(Packard BioScience)を使用して行った。
【０１４１】
データ解析
[１２５Ｉ]ＩＬ−８の特異的結合を、各アッセイプレートで決定した対照ＮＳＢ値の平均を引くことにより計算した。データを濃度−応答プロットに変換し、全ての特異的に結合した[１２５Ｉ]ＩＬ−８(Ｂ０−ＮＳＢ)に対する相対的パーセントとして表した。ＩＣ５０を、特異的に結合した[１２５Ｉ]ＩＬ−８を５０％阻害するのに必要な化合物のモル濃度として決定定義した。ＩＣ５０値を、記述統計学(平均±ＳＥＭ)の計算ために逆対数(ｐＩＣ５０)に変換した。ｐＩＣ５０値は、使用した[１２５Ｉ]ＩＬ−８の濃度(０.０６nM)が、ＩＬ−８について決定したＫｄ(平衡解離定数)(１.２nM)より低いため、結合親和性(ｐＫｉ)に近似する。
式(１)の化合物は、＞８のｐＩＣ５０値を有することが判明した。
【０１４２】
血漿タンパク質結合(ＰＰＢ)の測定
薬物の血漿タンパク質への結合の程度は、インビボ有効性および薬物動態学の決定において重要な因子である。血漿タンパク質結合の程度の測定に使用する方法は、３７℃での血漿および緩衝液間の化合物の平衡透析を含む。血漿および緩衝液中の化合物濃度を、質量分析(ＭＳ)検出と共に高速液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)を使用して決定する。透析法は、同時に１０種までの化合物の混合物の使用を含む。本アッセイで使用する濃度で、化合物を単独でまたは混合物で流したときに結果に顕著な差異がないことが示されている。
【０１４３】
方法
膜(分子量カットオフ５０００)を、透析緩衝液に最短で１時間浸すことにより調製した。透析膜を透析セルにマウントした。
化合物のジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)中の貯蔵溶液を調製した。これ、および以後の全ての液体取り扱い工程は、通常、Tecan液体取り扱いロボットを使用して行った。５種までの化合物の混合物を使用した。混合物中の各化合物の濃度は通常１mMであった。混合物を、各混合物が、全てが互いに分子量で５単位違う化合物を含むように選択した。
凍結血漿(ＥＤＴＡ抗凝血)を、通常ヒト血漿結合実験に使用した。血漿のｐＨを、使用直前に１Ｍ  ＨＣｌを使用して７.４に調節した。
化合物(７.５μL)の貯蔵ＤＭＳＯ溶液を、血漿(７５０μl)と共に透析セルに添加した。これを、各混合物で２個ずつ行った。これにより、血漿溶液中１％ＤＭＳＯと、１０μM濃度の各化合物(貯蔵溶液が標準１mMならば)となった。透析細胞を密閉し、Dianormローターユニットに固定し、１８時間、３７℃で平衡化させた。透析セルを平衡化中、ＤＭＳＯ貯蔵溶液を、血漿および緩衝液サンプルの最終分析に使用する最適ＨＰＬＣ／ＭＳ法の作成のために使用した。
【０１４４】
平衡後、セルを開け、Tecan液体取り扱いロボットを使用して、各透析セルの血漿側および緩衝液側から一定量を取った。各サンプルが６倍希釈血漿のマトリックスであるように、ブランク血漿を緩衝液サンプルに添加し、緩衝液を血漿サンプルに添加した。ＤＭＳＯ貯蔵溶液およびブランク６倍希釈血漿から標準を作成した。４種の標準の濃度は、通常５０nM、１５０nM、５００nMおよび２５００nMであった。
【０１４５】
サンプルおよび標準を、ＨＰＬＣとＭＳ検出を使用して分析し、これは、化合物の混合物のデコンヴォルーションを可能にした。ＨＰＬＣ法は、希釈血漿の直接注入を可能にする前向きフラッシングカラムスイッチング法を含んだ。
【０１４６】
結果の計算
クロマトグラムを混合物中の各化合物についての較正曲線を自動的に計算し、緩衝液および血漿サンプルの濃度を内挿するMassLynxソフトウェアを使用して処理した。これらの濃度は、さらに血漿の希釈に対して補正する必要があった。結合パーセントを、次の等式を使用して、MassLynxデータから計算した：
【数５】
2011528030.tif 000047
分子中の１.２倍は、血漿での水性サンプルの小さな希釈による。分母中の６倍は、緩衝液での血漿サンプルの６倍希釈の補正のために入れる。
各化合物の遊離％(１００−結合％)を濃度データから計算し、記録した。
【０１４７】
ラットでのバイオアベイラビリティ(Ｆ)
これは、雄ラットでインビボ薬物動態学的パラメータを得るために使用した方法を記載する。どんな化合物を使用しても適用可能であるが、溶解度、アッセイ感受性、予測クリアランスおよび半減期のようなパラメータに基づく修飾が必要である可能性があり、不適製剤(default formulation)のとき、投与量またはサンプリング間隔は不適切である可能性がある。ここに記載する方法は標準法を表し、そこから正当化され、かつ文書化された修飾を行うことができる。この方法はまた一化合物または混合物(カセット)の投与を可能とする。
【０１４８】
投与量調製
１mg・mL−１の標準投与溶液を調製した。推奨投与媒体(化合物が等張生理食塩水に十分に可溶性でない場合)は、５０％ＰＥＧ  ４００：５０％滅菌水であった。化合物の必要な質量をＰＥＧ４００に溶解し、水を添加した。投与溶液中の化合物濃度を、一定量を５０μg・mL−１の名目濃度に希釈し、２回の標準溶液およびその濃度でのＱＣ標準に対する較正によりアッセイした。
【０１４９】
投与
化合物を、３匹の２５０−３５０ｇのラットの群の尾静脈にボーラスとして静脈内投与した(約１mL・kg−１)。経口投与については、別の３匹の群の動物に、胃ゾンデ(oral gavage)により投与した(３mL・kg−１)。送達量を体重減少により概算した。
通常、餌は投与前に動物から離さなかったが、必要であればこの影響を調査できる。
【０１５０】
サンプル回収
投与前サンプルを経口群から取った。血液サンプル(０.２５mL)を１mlシリンジに採り、サンプル採取後直ちにＥＤＴＡ管に移し、血漿を遠心分離(３分間、１３０００rpm)により調製した。
【０１５１】
標準プロトコールのサンプリング時間(分)
【表１６】
2011528030.tif 000048
【０１５２】
サンプル分析
検体の濃度を、質量分析により血漿で定量的に決定した。
【０１５３】
標準およびＱＣの調製
標準および品質管理貯蔵溶液を、メタノール中５０μg／mLの濃度で調製した。標準およびＱＣ貯蔵溶液をTECAN GENESISで希釈し、次の表に従い血漿に入れた：
【表１７】
2011528030.tif 000049
合わせた標準貯蔵溶液の連続希釈により調製した上記溶液Ａ−Ｈの各々の１０μl、および合わせたＱＣ貯蔵溶液の連続希釈により調製した１０μLの溶液Ｂ、ＤおよびＧを、TECANの５０μLブランク血漿を含む９６ウェル１.２mL  ポリプロピレン管に入れた。製造した標準曲線およびＱＣサンプルの最終濃度を上の表に示す。濃縮したまたは希釈した貯蔵溶液を使用して、高濃度または低濃度の範囲を得ることができる。
【０１５４】
サンプルの調製
試験サンプル、標準およびＱＣの各々に、１５０μLの水を添加した。サンプルを次の通りの順番で配置した：
１. 上行性濃度の順番の標準
２. 上行性濃度手動標準のＱＣ. 
３. ＩＶ投与動物からの試験サンプル(１Ｍ、２Ｍ、３Ｍサンプル)
４. 上行性濃度の順番のＱＣ
５. ＰＯ投与動物からの試験サンプル(４Ｍ、５Ｍ、６Ｍサンプル)
６. 上行性濃度の順番のＱＣ
７. 上行性濃度の順番の標準
サンプルに蓋をし、繰り返し倒置させることにより混合し、３５００rpmで、IEC CENTRA遠心機で２０分間遠心分離した。各サンプルの一定量(１２０μL)をＬＣ／ＭＳで分析した。
【０１５５】
質量分析
TSQ700またはTSQまたはSSQ7000質量分光計とHP1100 HPLC系を使用した。使用した源はＡＰＣＩまたはＥＳＩであった。試験サンプルで見られる濃度範囲を包含する標準および品質管理サンプルは、名目濃度の２５％以内であると予測した。
【０１５６】
結果
薬物動態学的データ分析および作表をWinNonlinおよびExcelを使用して行った。標準ノンコンパートメント分析を使用して、作表したパラメータを概算した。バイオアベイラビリティ(Ｆ)を、投与量を標準化後ｉｖおよび経口ＡＵＣ(血漿濃度時間曲線の積分)の比から計算した。
【０１５７】
溶解度(Ｓ)の測定
化合物の溶解度は、スクリーニングのための化合物の溶液調製に影響し、かつ動物およびヒト試験における化合物の固体投与量の吸収に影響する重要な特性である。以下に記載する溶解度測定のための方法は、化合物の飽和溶液の作製と、その後のＵＶ定量およびＭＳ同定を伴うＨＰＬＣを使用する溶液のアッセイを含む。
【０１５８】
方法
溶解度を決定するための飽和溶液を、ガラスねじ蓋付サンプル管に約０.３−３.０mlの溶媒に幾分かの化合物と共に入れることにより調製する。試験管を、一夜、一定温度の部屋(２０℃)で振盪させる。振盪後、溶液に不溶物質が存在するはずであり、さらに添加し、不溶物質が無くなるまでこれを続けた。サンプルを遠沈管に移し、Heraeus Biofuge Fresco遠心機で、１３０００rpmで約３０分間遠心分離した。上清を取り、新しい遠心管に入れ、再び約３０分間、１３０００rpmで遠心分離した。試験管の底のペレットを形成した不溶物質およびペレット上の液体をアッセイのために除いた。溶液を、ＵＶ定量を伴うＨＰＬＣを使用して分析した。化合物の応答が極めて強いならば、溶液を、応答がより適当なＵＶ応答範囲内に入るように正確に希釈しなければならない。標準もまた化合物のサンプルを正確に秤量し、それを完全に溶解させる適当な容積の溶媒に溶解することにより調製した(典型的に、ＤＭＳＯ、エタノールまたはメタノール)。このサンプルをＨＰＬＣ／ＵＶで分析した。同様にこの標準の応答は、適当なＵＶ応答範囲内に入らなければならず、そうでなければより適切な濃度を調製し、ＨＰＬＣ／ＵＶで分析しなければならない。
【０１５９】
結果
溶解度(Ｓ)を、ＨＰＬＣ／ＵＶクロマトグラムのピーク面積から、サンプルの何らかの希釈および注入容積の差異の補正と共に計算した。次の等式を使用した：
【数６】
2011528030.tif 000050
【０１６０】
参考例１
Ｎ−(２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−６−{[(１Ｒ,２Ｓ)−２,３−ジヒドロキシ−１−メチルプロピル]アミノ}ピリミジン−４−イル)アゼチジン−１−スルホンアミド
【化２６】
2011528030.tif 000051
ｉ)  １−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エタノン
【化２７】
2011528030.tif 000052
(＋)−メチル−(Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−カルボキシレート(５mL)の乾燥１：１ジエチルエーテル／ペンタン(１６０ml)溶液に、−１１５℃で窒素下、１.６Ｍ  メチルリチウム(１８mL)を３０分間にわたり滴下した。さらに１時間４０分間撹拌後、混合物を飽和水性塩化アンモニウム溶液(８０mL)でクエンチし、環境温度にした。有機層を集め、水性層をさらにジエチルエーテルで２回抽出した。有機物を合わせ、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、溶媒を真空で蒸発させて、副題化合物を透明油状物として得た。収量：４.７７ｇ
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 1.40 (s, 3H), 1.47(s, 3H), 2.24(s, 3H), 3.97(m, 1H), 4.19(m, 1H), 4.41(m, 1H)
【０１６１】
ii)  (１Ｒ)−１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]−Ｎ−フェニルメチル]エタナミン
【化２８】
2011528030.tif 000053
工程(ｉ)の生成物(１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エタノン)(３.５８ｇ)のジクロロエタン(４０mL)溶液に、ベンジルアミン(３mL)および氷酢酸(１.６mL)を添加し、混合物を氷浴で冷却した。ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(７.４ｇ)を２５分間にわたり少しずつ添加した。混合物を環境温度で１４時間撹拌した。混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液でクエンチし、ジクロロメタンで４回抽出した。合わせた有機物を集め、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、溶媒を蒸発させて、薄黄色油状物を得た。１０〜２０〜３０〜４０％酢酸エチルのイソヘキサン／酢酸エチル混合物で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、副題化合物を最初に溶出するジアステレオ異性体として薄黄色油状物として得た：収量：３.６６ｇ
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 1.07(d, 3H), 1.36(s, 3H), 1.44(s, 3H), 2.83(quintet, 1H), 3.77(m, 1H), 3.88(, 2H), 4.02(m, 2H), 7.22(m, 1H), 7.35(m, 4H)。
【０１６２】
iii)  (１Ｒ)−１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エタナミン
【化２９】
2011528030.tif 000054
工程(ii)の生成物((１Ｒ)−１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]−Ｎ−フェニルメチル]エタナミン)(３.６５ｇ)のエタノール(５０mL)溶液に１０％パラジウム炭(０.４ｇ)を添加し、４バールで環境温度で１２時間、全体を水素化した。混合物を濾過し、溶媒を真空下で蒸発させて、副題化合物を薄黄色油状物として得た。収量：２.５ｇ
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 1.07(d, 3H), 1.36(s, 3H), 1.46(s, 3H), 3.08(quintet, 1H), 3.82(m, 1H), 3.93(m, 1H), 3.99(m, 1H)
【０１６３】
iv)  ６−クロロ−２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−Ｎ−{(１Ｒ)−１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}ピリミジン−４−アミン
【化３０】
2011528030.tif 000055
工程(iii)の生成物((１Ｒ)−１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エタナミン)(０.６７ｇ)のアセトニトリル(１５mL)溶液に、４,６−ジクロロ−２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]ピリミジン(ＷＯ２００４／０１１４４３)(１.３ｇ)、重炭酸ナトリウム(０.３９ｇ)を添加し、混合物を窒素下で１２時間還流した。冷却した反応混合物を酢酸エチルおよび水に分配した。有機層を集め、水性層をさらに酢酸エチルで抽出した。合わせた有機物を、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、溶媒を蒸発させた。残留物を５〜２０％酢酸エチルのイソヘキサン／酢酸エチル混合物で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、副題化合物を透明油状物として得た。収量：１.２５ｇ
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 1.17(d, 3H), 1.34(s, 3H), 1.43(s, 3H), 3.77(dd, 1H), 4.14(m, 2H), 4.37(m, 2H), 5.02(bs, 1H), 6.06(s, 1H), 7.02(m, 2H), 7.26(m, 1H)
【０１６４】
ｖ)  Ｎ−[２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−６−({(１Ｒ)−１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}アミノ)ピリミジン−４−イル]アゼチジン−１−スルホンアミド
【化３１】
2011528030.tif 000056
工程(iv)の生成物(６−クロロ−２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−Ｎ−{(１Ｒ)−１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}ピリミジン−４−アミン))(０.４５ｇ)、アゼチジン−１−スルホンアミド(ＷＯ２００４／０１１４４３)(０.２９５ｇ)、パラジウム(II)トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(０)(０.１ｇ)、XPhos(０.０５２ｇ)および炭酸セシウム(０.５３ｇ)の乾燥ジオキサン(６mL中の混合物を、マイクロ波で、開放容器中、１００℃／３００マックスで、１５分間、撹拌しながら加熱した。混合物を室温に冷却し、酢酸(２.４mL)を添加し、溶媒を真空で除去した。残留物を水および酢酸エチルに分配し、有機フラクションを分離し、水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮して、赤色ガム状物(１.１ｇ)を得た。残留物を、５〜４０％酢酸エチルのイソヘキサン／酢酸エチル混合物で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶出して、副題化合物を薄黄色泡状物として得た。収量：０.４ｇ
1H NMR (300 MHz, DMSO):δ 1.07(d, 3H), 1.26(s, 3H), 1.33(s, 3H), 2.14(quintet, 2H), 3.67(m, 1H), 3.85(t, 4H), 3.94(m, 2H), 4.15(bs, 1H), 4.38(m, 2H), 5.96(s, 1H), 7.14(m, 1H), 7.33(m, 1H), 7.38(m, 1H), 7.46(m, 1H)
【０１６５】
vi)  Ｎ−(２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−６−{[(１Ｒ,２Ｓ)−２,３−ジヒドロキシ−１−メチルプロピル]アミノ}ピリミジン−４−イル)アゼチジン−１−スルホンアミド
【化３２】
2011528030.tif 000057
工程(ｖ)の生成物((Ｎ−[２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−６−({(１Ｒ)−１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}アミノ)ピリミジン−４−イル]アゼチジン−１−スルホンアミド)(０.３８ｇ)およびパラ−トルエンスルホン酸(０.０９３ｇ)のメタノール(５mL)および水(３滴)中の混合物を６０℃で４時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチルに取り込み、それを水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、蒸発させて、薄黄色泡状物(０.２９ｇ)を得た。ジクロロメタンでの摩砕による精製により、表題化合物を灰白色固体として得た。収量：０.２３ｇ
1H NMR (300 MHz, DMSO):δ 1.04(d, 3H), 2.12(quintet, 2H), 3.30(m, 2H), 3.47(m, 1H), 3.86(m, 4H), 4.17(m, 1H), 4.41(m, 1H), 4.53(bs, 1H), 4.73(bs, 1H), 5.98(bs, 1H), 7.15(m, 1H), 7.32(m, 1H), 7.42(m, 1H), 10.50(bs, 1H)
MS:APCI(+ve) 476 [M+H]+
【０１６６】
参考例２
Ｎ−(２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−６−{[(１Ｓ,２Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−１−メチルプロピル]アミノ}ピリミジン−４−イル)アゼチジン−１−スルホンアミド
【化３３】
2011528030.tif 000058
ｉ)  １−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エタノン
【化３４】
2011528030.tif 000059
(−)−メチル−(Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−カルボキシレート(１mL)の乾燥１：１  ジエチルエーテル／ペンタン(３５mL)溶液に、−１１５℃で窒素下、１.６Ｍ  メチルリチウム(５.６mL)を１０分間にわたり滴下した。さらに８０分間撹拌後、混合物を飽和水性塩化アンモニウム溶液(１５mL)でクエンチし、環境温度にした。有機層を集め、水性層をさらにジエチルエーテルで２回抽出した。有機物を合わせ、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、溶媒を真空で蒸発させて、副題化合物を透明油状物として得た。収量：０.２５ｇ
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 1.40 (s, 3H), 1.50(s, 3H), 2.25(s, 3H), 4.00(dd, 1H), 4.19(t, 1H), 4.42(dd, 1H)
【０１６７】
ii)  (１Ｓ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]−Ｎ−フェニルメチル]エタナミン
【化３５】
2011528030.tif 000060
工程(ｉ)の生成物(１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エタノン)(１.３ｇ)のジクロロエタン(１５mL)溶液にベンジルアミン(１.１mL)および氷酢酸(０.５７５mL)を添加し、混合物を氷浴で冷却した。ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(２.６８ｇ)を２５分間にわたり少しずつ添加した。混合物を環境温度で１４時間撹拌した。混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液でクエンチし、ジクロロメタンで４回抽出した。合わせた有機挿を集め、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、溶媒を蒸発させて、薄黄色油状物を得た。１０〜２０〜３０〜４０％酢酸エチルのイソヘキサン／酢酸エチル混合物で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーでの精製により、副題化合物を最初に溶出するジアステレオ異性体として、透明油状物として得た：収量：１.１ｇ
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 1.08(d, 3H), 1.36(s, 3H), 1.42(s, 3H), 1.47(bs, 1H), 2.84(quintet, 1H), 3.77(m, 1H), 3.89(, 2H), 4.03(m, 2H), 7.24(m, 1H), 7.34(m, 4H)。
【０１６８】
iii)  (１Ｓ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エタナミン
【化３６】
2011528030.tif 000061
工程(ii)の生成物((１Ｓ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]−Ｎ−フェニルメチル]エタナミン)(１.４ｇ)のエタノール(２０mL)に１０％パラジウム炭(０.１８ｇ)を添加し、４バールで環境温度で１２時間、全体を水素化した。混合物を濾過し、溶媒を真空下で蒸発させて、副題化合物を薄黄色油状物として得た。収量：０.８２ｇ
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 1.06(d, 3H), 1.35(s, 3H), 1.44(s, 3H), 3.06(quintet, 1H), 3.82(m, 1H), 3.96(m, 2H)
【０１６９】
iv)  ６−クロロ−２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−Ｎ−{(１Ｓ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}ピリミジン−４−アミン
【化３７】
2011528030.tif 000062
工程(iii)の生成物((１Ｓ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エタナミン)(０.６５５ｇ)のアセトニトリル(１０mL)溶液に、４,６−ジクロロ−２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]ピリミジン(ＷＯ２００４／０１１４４３)(１.２ｇ)、重炭酸ナトリウム(０.３８ｇ)を添加し、混合物を窒素下で１２時間還流した。冷却した反応混合物を酢酸エチルおよび水に分配した。有機層を集め、水性層をさらに酢酸エチルで抽出した。合わせた有機物を乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、溶媒を蒸発させた。残留物を、５〜２０％酢酸エチルのイソヘキサン／酢酸エチル混合物で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、副題化合物を透明油状物として得た。収量：１.５ｇ
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 1.17(d, 3H), 1.34(s, 3H), 1.43(s, 3H), 3.77(dd, 1H), 4.15(m, 2H), 4.37(m, 2H), 4.98(bs, 1H), 6.06(s, 1H), 7.03(m, 2H), 7.26(m, 1H)
【０１７０】
ｖ)  Ｎ−[２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−６−({(１Ｓ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}アミノ)ピリミジン−４−イル]アゼチジン−１−スルホンアミド
【化３８】
2011528030.tif 000063
工程(iv)の生成物(６−クロロ−２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−Ｎ−{(１Ｓ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}ピリミジン−４−アミン))(０.５２ｇ)、アゼチジン−１−スルホンアミド(ＷＯ２００４／０１１４４３)(０.３４ｇ)、パラジウム(II)トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(０)(０.１１５ｇ)、XPhos(０.０６ｇ)および炭酸セシウム(０.６１２ｇ)の乾燥ジオキサン(８mL)中の混合物を、マイクロ波で、開放容器中、１００℃／３００マックスで、２０分間、撹拌しながら加熱した。混合物を室温に冷却し、酢酸(２.４mL)を添加し、溶媒を真空で除去した。残留物を水および酢酸エチルに分配し、有機フラクションを分離し、水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮して、赤色ガム状物(２ｇ)を得た。残留物を、５〜４０％酢酸エチルのイソヘキサン／酢酸エチル混合物で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、副題化合物をクリーム色泡状物として得た。収量：０.４２ｇ
1H NMR (300 MHz, DMSO):δ 1.04(d, 3H), 1.26(s, 3H), 1.33(s, 3H), 2.14(quintet, 2H), 3.65(m, 1H), 3.85(t, 4H), 3.88(m, 4H), 3.94(m, 2H), 4.38(m, 2H), 5.96(s, 1H), 7.13(m, 1H), 7.33(m, 1H), 7.38(m, 1H), 7.46(m, 1H), 10.56 (bs, 1H)
【０１７１】
vi)  Ｎ−(２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−６−{[(１Ｓ,２Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−１−メチルプロピル]アミノ}ピリミジン−４−イル)アゼチジン−１−スルホンアミド
【化３９】
2011528030.tif 000064
工程(ｖ)の生成物((Ｎ−[２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−６−({(１Ｓ)−１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}アミノ)ピリミジン−４−イル]アゼチジン−１−スルホンアミド)(０.３１ｇ)およびパラ−トルエンスルホン酸(０.０７６ｇ)のメタノール(５mL)および水(３滴)中の混合物を６０℃で４.５時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチルに取り込み、それを水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、蒸発させて、薄黄色泡状物を得た。ジクロロメタン／メタノール混合物(１〜２％メタノール)で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーとジクロロメタンでの摩砕による精製により、表題化合物を白色固体として得た。収量：０.１８５ｇ
1H NMR (300 MHz, DMSO):δ 1.07(d, 3H), 2.13(quintet, 2H), 3.23(m, 2H), 3.46(m, 1H), 3.87(t, 4H), 4.23(bs, 1H), 4.39(q, 1H), 4.50(bs, 1H), 4.76(bs, 1H), 6.02(bs, 1H), 7.15(m, 1H), 7.22(bs, 1H), 7.33(m, 1H), 7.44(t, 1H), 10.49(bs, 1H)
MS:APCI(+ve) 476 [M+H]+
【０１７２】
参考例３
Ｎ−(２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−６−{[(１Ｓ,２Ｓ)−２,３−ジヒドロキシ−１−メチルプロピル]アミノ}ピリミジン−４−イル)アゼチジン−１−スルホンアミド
【化４０】
2011528030.tif 000065
ｉ)  １−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エタノン
【化４１】
2011528030.tif 000066
(＋)−メチル−(Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−カルボキシレート(５mL)の乾燥１：１  ジエチルエーテル／ペンタン(１６０ml)溶液に、−１１５℃で窒素下、１.６Ｍ  メチルリチウム(１８mL)を３０分間にわたり滴下した。さらに１時間４０分間撹拌後、混合物を飽和水性塩化アンモニウム溶液(８０mL)でクエンチし、環境温度にした。有機層を集め、水性層をさらにジエチルエーテルで２回抽出した。有機物を合わせ、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、溶媒を真空で蒸発させて、副題化合物を透明油状物として得た。収量：４.７７ｇ
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 1.40 (s, 3H), 1.47(s, 3H), 2.24(s, 3H), 3.97(m, 1H), 4.19(m, 1H), 4.41(m, 1H)
【０１７３】
ii)(１Ｓ)−１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]−Ｎ−フェニルメチル]エタナミン
【化４２】
2011528030.tif 000067
工程(ｉ)の生成物(１−[(４Ｒ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エタノン)(３.５８ｇ)のジクロロエタン(４０mL)溶液に、ベンジルアミン(３mL)および氷酢酸(１.６mL)を添加し、混合物を氷浴で冷却した。ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(７.４ｇ)を２５分間にわたり少しずつ添加した。混合物を環境温度で１４時間撹拌した。混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液でクエンチし、ジクロロメタンで４回抽出した。合わせた有機挿を集め、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、溶媒を蒸発させて、薄黄色油状物。１０〜２０〜３０〜４０％酢酸エチルのイソヘキサン／酢酸エチル混合物で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーでの精製により、副題化合物を２番目に溶出するジアステレオ異性体として、薄黄色油状物として得た：収量：０.７４ｇ
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 1.02(d, 3H), 1.36(s, 3H), 3.38(s, 3H), 2.80(bs, 1H), 2.76(quintet, 2H), 3.68(m, 2H), 3.96(m, 1H), 7.22(m, 1H), 7.35(m, 4H), 
【０１７４】
iii)(１Ｓ)−１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エタナミン
【化４３】
2011528030.tif 000068
工程(ii)の生成物((１Ｓ)−１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]−Ｎ−フェニルメチル]エタナミン)(０.７３ｇ)のエタノール(２０mL)溶液に、１０％パラジウム炭(０.１ｇ)を添加し、４バールで環境温度で１２時間、全体を水素化した。混合物を濾過し、溶媒を真空で蒸発させて、副題化合物を薄黄色油状物として得た。収量：０.４３ｇ
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 1.00(d, 3H), 1.35(s, 3H), 1.43(s, 3H), 2.87(quintet, 1H), 3.63(t, 1H), 3.78(m, 1H), 4.03(m, 1H)
【０１７５】
iv)  ６−クロロ−２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−Ｎ−{(１Ｓ)−１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}ピリミジン−４−アミン
【化４４】
2011528030.tif 000069
工程(iii)の生成物((１Ｓ)−１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エタナミン)(０.３２ｇ)のアセトニトリル(８mL)溶液に、４,６−ジクロロ−２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]ピリミジン(ＷＯ２００４／０１１４４３)(０.６１６ｇ)、重炭酸ナトリウム(０.１８５ｇ)を添加し、混合物を窒素下で１２時間還流した。冷却した反応混合物を酢酸エチルおよび水に分配した。有機層を集め、水性層をさらに酢酸エチルで抽出した。合わせた有機物を乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、溶媒を蒸発させた。残留物を、５〜２０％酢酸エチルのイソヘキサン／酢酸エチル混合物で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、副題化合物を透明油状物として得た。収量：０.５８ｇ
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 1.23(d, 3H), 1.36(s, 3H), 1.44(s, 3H), 3.58(t, 1H), 3.98(t, 2H), 4.14(m, 1H), 4.37(s, 2H) 5.07(bs, 1H), 6.05(s, 1H), 7.02(m, 2H), 7.30(m, 1H)
【０１７６】
ｖ)  Ｎ−[２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−６−({(１Ｓ)−１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}アミノ)ピリミジン−４−イル]アゼチジン−１−スルホンアミド
【化４５】
2011528030.tif 000070
工程(iv)の生成物(６−クロロ−２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−Ｎ−{(１Ｓ)−１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}ピリミジン−４−アミン))(０.３７ｇ)、アゼチジン−１−スルホンアミド(ＷＯ２００４／０１１４４３)(０.２４ｇ)、パラジウム(II)トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(０)(０.０８２ｇ)、XPhos(０.０４２ｇ)および炭酸セシウム(０.４３５ｇ)の乾燥ジオキサン(５mL)中の混合物を、マイクロ波で、開放容器中、１００℃／３００マックスで、１５分間、撹拌しながら加熱した。混合物を室温に冷却し、酢酸(２.４mL)を添加し、溶媒を真空で除去した。残留物を水および酢酸エチルに分配し、有機フラクションを分離し、水および塩水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮して、赤色ガム状物(１.１ｇ)。残留物を、１０〜４０％酢酸エチルのイソヘキサン／酢酸エチル混合物で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、副題化合物を薄黄色泡状物として得た。収量：０.３６ｇ
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 1.24(d, 3H), 1.36(s, 3H), 1.45(s, 3H), 2.26(quintet, 2H), 3.62(t, 1H), 3.95(t, 1H), 3.99(m, 4H), 4.27(m, 1H), 4.34(m, 2H), 5.06(bs, 1H), 5.92(s, 1H), 7.02(m, 2H), 7.23(m, 1H), 7.38(m, 1H), 7.46(m, 1H)
【０１７７】
vi)  Ｎ−(２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−６−{[(１Ｓ,２Ｓ)−２,３−ジヒドロキシ−１−メチルプロピル]アミノ}ピリミジン−４−イル)アゼチジン−１−スルホンアミド
【化４６】
2011528030.tif 000071
工程(ｖ)の生成物((Ｎ−[２−[(２,３−ジフルオロベンジル)チオ]−６−({(１Ｓ)−１−[(４Ｓ)−２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル]エチル}アミノ)ピリミジン−４−イル]アゼチジン−１−スルホンアミド)(０.３４６ｇ)およびパラ−トルエンスルホン酸(０.０８４ｇ)のメタノール(５mL)および水(２滴)中の混合物を６０℃で３時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチルに取り込み、それを水で洗浄し、乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、蒸発させて、薄黄色泡状物を得た。ジクロロメタン／メタノール混合物(２〜４％メタノール)で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーと、ジクロロメタンでの摩砕による精製により、表題化合物を白色固体として得た。収量：０.１８５ｇ
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 1.27(d, 3H), 2.26(quintet, 2H), 3.56(m, 2H), 3.71(m, 1H), 3.96(m, 4H), 4.17(t, 4H), 4.25(m, 1H), 4.35(s, 2H), 5.14(bd, 1H), 6.01(s, 1H), 7.06(m, 2H), 7.23(m, 1H)
MS:APCI(+ve) 476 [M+H]+
【図面の簡単な説明】
【０１７８】
(原文に記載なし)
【図１】
2011528030.tif 000081
【図２】
2011528030.tif 000082
【図３】
2011528030.tif 000083
【図４】
2011528030.tif 000084
【図５】
2011528030.tif 000085
【図６】
2011528030.tif 000086
【国際調査報告】
2011528030.tif 000087
2011528030.tif 000088