(57)【要約】
2011525486.tif 000016  活動亢進性免疫系を特徴とする疾患または状態を予防または治療するための、シクロリグナンのある種のピクロ誘導体の使用が開示されている。本発明によるシクロリグナンの例には、ピクロポドフィリン、デオキシピクロポドフィリン、アンヒドロピクロポドフィロールまたはデオキシアンヒドロピクロポドフィロールが挙げられる。式（Ｉ）【選択図】なし
2011525486.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物、
【化１】
2011525486.tif 000012
（式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨおよびエステル基からなる群から選択され、
Ｒ２は、ＯおよびＨ２個からなる群から選択されており、
５員原子環は、β結合２個のシス型立体配置を有する）、
ならびに薬学的に許容されるその塩の、活動亢進性免疫系(hyperactive immune system)を予防または治療する医薬を製造するための使用。
【請求項２】
関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、アルツハイマー病、喘息、湿疹様皮膚炎、および移植後の移植片拒絶反応からなる群から選択される、少なくとも１種の疾患を予防または治療するための、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｒ２がＯであり、Ｒ１およびトリメトキシフェニル基がα位にある、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
Ｒ２がＨ２個であり、Ｒ１およびトリメトキシフェニル基がα位にある、請求項１または２に記載の使用。
【請求項５】
Ｒ１が、ＯＣＯＨ、ＯＣＯ（ＣＨ２）０−１８ＣＨ３、ＯＣＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ、ＯＣＯＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、ＯＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３、ＯＣＯＣ５ＮＨ４およびＯＰＯ３Ｈ２からなる群から選択される、請求項１から４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記化合物が、ピクロポドフィリンおよびデオキシピクロポドフィリンからなる群から選択される、請求項１から３のいずれかに記載の使用。
【請求項７】
前記化合物が、アンヒドロピクロポドフィロールおよびデオキシアンヒドロピクロポドフィロールからなる群から選択される、請求項１、２または４に記載の使用。
【請求項８】
鎮痛剤、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、コルチコステロイド、疾患修飾薬および免疫抑制薬からなる群から選択される、少なくとも１種の更なる薬物と組み合わせる、請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項９】
関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、アルツハイマー病、喘息、湿疹様皮膚炎、および移植後の移植片拒絶反応からなる群から選択される、少なくとも１種の疾患を予防および／または治療するための、
式Ｉの化合物、
【化２】
2011525486.tif 000013
（式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨおよびエステル基からなる群から選択され、
Ｒ２は、ＯおよびＨ２個からなる群から選択されており、
５員原子環は、β結合２個のシス型立体配置を有する）、
ならびに薬学的に許容されるその塩。
【請求項１０】
関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、アルツハイマー病、喘息、湿疹様皮膚炎、移植後の移植片拒絶反応からなる群から選択される、少なくとも１種の疾患を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、式Ｉの化合物、
【化３】
2011525486.tif 000014
（式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨおよびエステル基からなる群から選択され、
Ｒ２は、ＯおよびＨ２個からなる群から選択されており、
５員原子環は、β結合２個のシス型立体配置を有する）、
ならびに薬学的に許容されるその塩を投与することを含む方法。
【請求項１１】
哺乳動物の免疫反応性を調節するための、
式Ｉによる化合物、
【化４】
2011525486.tif 000015
（式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨおよびエステル基からなる群から選択され、
Ｒ２は、ＯおよびＨ２個からなる群から選択されており、
５員原子環は、β結合２個のシス型立体配置を有する）、
ならびに薬学的に許容されるその塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、活動亢進性免疫系(hyperactive immune system)を特徴とする状態を予防および／または治療するためのある種のシクロリグナンに関する。
【背景技術】
【０００２】
人間の免疫系は、数百万年に亘って進化することにより、感染性微生物およびその毒性因子から我々を保護する工夫された防御機構を発展させてきた。免疫系は、２つの部分に区分できる。第１の部分は、先天性または古来からの免疫系であり、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞リンパ球、単球／マクロファージ、樹状細胞、好中球、好塩基球、好酸球、組織肥満細胞および上皮細胞からなり、病原体、例えば細菌を認識し、病原体除去の多様な機構を引き起こす。第２の部分は、適応的免疫系であり、ＴおよびＢリンパ球によって媒介される、より最近になって進化した免疫反応系である。このＴ細胞は、適応的細胞性免疫反応、即ち細胞性免疫を媒介し、ヘルパーＴ、調節性Ｔおよび細胞傷害性Ｔの各リンパ球を包含する胸腺由来リンパ球である。このリンパ球は、骨髄に由来し、抗原に対するＢ細胞受容体の表面免疫グロブリンを発現し、抗原との相互作用後に特異抗体を分泌することにより、体液性免疫を構成している。以上のことから、リンパ球が免疫系において鍵となる役割を果たしていることは明白である。
【０００３】
正常な免疫系は、生物体において、組織または因子のうち「自己」を「異物」と識別する能力を有するが、それでもなお自己免疫が、一部の病理条件下で起こる恐れがある。自己免疫疾患の典型的な特徴は、組織傷害が、自己の組織との生物体の免疫反応により起こされることである。自己免疫の背後にある正確な機構は不明であるが、寄与する因子には、内因性だけでなく外因性のものもあり得る。内因性の場合、抗原提示の変化、Ｔ細胞補助の増加、Ｂ細胞機能の増加、アポトーシス欠陥、サイトカイン不均衡、および／または免疫調節の変化が関与し得る。したがって、自己免疫疾患の原因は様々になり得るものであり、恐らくは多因子性である。
【０００４】
免疫系の過反応性が起こす疾患は、自己免疫、アレルゲンおよび移植された移植片により引き起こされる。
【０００５】
自己免疫疾患の発症率は、一般に先進国で増加しており、１つの仮説によれば、これは、改善された生活様式の結果とも言える、即ち、清潔過ぎる環境では、寄生虫および細菌のような外因性抗原に曝されることが殆どないであろう。様々な多くの自己免疫疾患が存在するが、主要および／または重大なそうした疾患の中に、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎および多発性硬化症が含まれる。
【０００６】
関節リウマチは、免疫異常のために、対称性関節炎、関節びらん、および関節外合併症が特徴的に生じる多重系障害である。これは、最も一般的で身体障害性の自己免疫性関節炎であり、欧米人口の約１〜３％が罹患している。そのうち約１０％は、疼痛ならびに骨格および関節の変形を伴う重度疾患を発現する。
【０００７】
クローン病は、重大な炎症性腸疾患であり、寛解および増悪を伴う慢性であることが多い。一般的症状は、下痢、体重減少、腹痛（ときどき閉塞性）および発熱である。局所性合併症には、腸狭窄、穿孔、膿瘍および瘻孔が挙げられる。当該患者は、吸収不良のために支持的な栄養療法を必要とし得る。
【０００８】
潰瘍性大腸炎も、長年に亘り再発および寛解を伴う重大な炎症性腸疾患である。活動性疾患の特徴は、血液および粘液の混じる頻繁な下痢、切迫感、時折の腹痛ならびに体重減少である。この疾患は、大腸癌を発現する危険性を高める。
【０００９】
多発性硬化症は、ＣＮＳのミエリン鞘を冒すが、末梢ニューロンを冒すことのない炎症状態である。この疾患は、良性で、再発および寛解の経過を辿るか、または最初から激しい進行を示す場合もある。この疾患は、視神経、脳幹、小脳および脊髄を冒し、脊髄が冒されると、四肢の不全麻痺、膀胱および腸の機能障害などが起こる。
【００１０】
アルツハイマー病は、神経変性状態であり、その進行は免疫抑制療法により低下するようである。この疾患は、進行が遅いが、最終的には、覚醒状態を失うことなく知性、認識および記憶機能の全体的障害を特徴とする認知症に至る。６５歳過ぎの人の約５％および８０歳過ぎの人の２０％が、この疾患に罹っている。この疾患は、通常の自己免疫疾患に普通は分類されないが、幾つかの後向き調査の結果から、抗炎症剤が認知症から保護することが示唆されている（Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｋａｓｐｅｒ  ＤＬ等編、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２００５、２３９３〜２４０６頁におけるＢｉｒｄ  ＴＤおよびＭｉｌｌｅｒ  ＢＬ）。
【００１１】
喘息および湿疹様皮膚炎のようなアトピー性アレルギー状態も、一般的な免疫疾患である。湿疹様皮膚炎（アトピー性皮膚炎）は、普通幼児期に始まり、成人期になっても続くことが時々ある再発性状態である。典型的な特徴は、細胞間表皮浮腫および掻痒であり、慢性になった後、苔蘚化および落屑が見られる。アトピーは、免疫過反応性を発現する遺伝傾向を意味する。
【００１２】
臓器移植は、現代医学における重要な治療形態であるが、移植臓器は、受容者の免疫系にとって標的となり得る抗原を含有している。循環しているＴ細胞は、グラフト（移植片）拒絶反応の主因であるが、こうしたアロ抗原に対する抗体も、移植片拒絶反応を媒介することができる。免疫系の抑制を必要とする臓器、組織または細胞の移植が、人間において益々頻繁に行われている。
【００１３】
自己免疫疾患の病因は不明であり、こうした疾患の多くは効率的な治療法を欠いている。したがって、こうした疾患の大部分ばかりでなく、アレルギー性疾患および移植後の新規で有効な代替治療が緊急に必要とされている。
【００１４】
鎮痛剤、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、コルチコステロイド、疾患修飾薬および／または免疫抑制薬が、頻繁に使用されているが、上記疾患の多くは効率的な治療法を欠いている。したがって、新規でより有効な代替治療が必要とされている。
先行技術
国際公開第１９８６／００４０６２号は、一部の膠原病、例えば関節リウマチ、神経疾患、例えば多発性硬化症、および移植片の拒絶に対して有用であるとして、ある種のシクロリグナンを開示している。しかし、前記シクロリグナンは、本発明のものとは異なる。
【００１５】
特定のシクロリグナン誘導体は、インビトロで免疫抑制的または抗炎症的性質を有することが以前に示された。Ｇｏｒｄａｌｉｚａ  Ｍ等、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ、１９９６、３９、２８６５〜２８６８頁、およびＫａｄｏｔａ  Ｓ等、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９８７、２８、２８５７〜２８６０頁を参照されたい。
【００１６】
欧州特許公開第０７１１７６５Ａ１号も、免疫抑制活性を有すると言われているシクロリグナン誘導体を開示している。
【００１７】
国際公開第２００２／１０２８０４号は、ＩＧＦ−１受容体の阻害、および癌などのＩＧＦ−１Ｒ依存性疾患の治療のために、ピクロポドフィリンおよびデオキシピクロポドフィリンを含めたある種のシクロリグナンの使用を開示している。
【００１８】
国際公開第２００７／０９７７０７号は、２型糖尿病、黄斑変性および関連疾患の治療、および避妊のために、ピクロポドフィリンおよびデオキシピクロポドフィリンを含むある種のシクロリグナンの使用を開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１９】
【特許文献１】国際公開第１９８６／００４０６２号
【特許文献２】欧州特許公開第０７１１７６５Ａ１号
【特許文献３】国際公開第２００２／１０２８０４号
【特許文献４】国際公開第２００７／０９７７０７号
【非特許文献】
【００２０】
【非特許文献１】Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｋａｓｐｅｒ  ＤＬ等編、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２００５、２３９３〜２４０６頁におけるＢｉｒｄ  ＴＤおよびＭｉｌｌｅｒ  ＢＬ
【非特許文献２】Ｇｏｒｄａｌｉｚａ  Ｍ等、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ、１９９６、３９、２８６５〜２８６８頁、およびＫａｄｏｔａ  Ｓ等、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９８７、２８、２８５７〜２８６０頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明は、シクロリグナンのある種のピクロ誘導体（シス型立体配置を有する）が、免疫抑制（免疫調節）剤として作用できるという観察に基づいている。したがって、該誘導体は、活動亢進性免疫系が起こす、自己免疫疾患、アトピー性アレルギー、および移植後の移植片拒絶反応などの炎症性疾患の治療に使用することができる。
【００２２】
第１の態様では、式Ｉの化合物、
【００２３】
【化１】
2011525486.tif 000003
【００２４】
（式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨおよびエステル基からなる群から選択され、Ｒ２は、ＯおよびＨ２個からなる群から選択されており、５員原子環は、β結合２個のシス型立体配置を有する）、ならびに薬学的に許容されるその塩の、活動亢進性免疫系を予防または治療する医薬を製造するための使用が提供される。
【００２５】
式Ｉの前記化合物は、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、アルツハイマー病、喘息、湿疹様皮膚炎、および移植後の移植片拒絶反応からなる群から選択される、少なくとも１種の疾患を予防または治療する医薬を製造するために使用することができる。
【００２６】
第２の態様では、前記疾患の少なくとも１種を予防および／または治療するために、式Ｉの化合物、ならびに薬学的に許容されるその塩が提供される。
【００２７】
第３の態様では、治療を必要とする対象に、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、前記疾患の少なくとも１種を治療する方法が提供される。
【００２８】
第４の態様では、哺乳動物の免疫反応性を調節するために、式Ｉの化合物の使用が提供される。
【００２９】
図面に関して本発明を説明する。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】化合物ピクロポドフィリンおよびアンヒドロピクロポドフィロールの構造式を示す図である。
【図２】化合物デオキシピクロポドフィリンおよびデオキシアンヒドロピクロポドフィロールの構造式を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
一態様では、本発明は、式Ｉの化合物、
【００３２】
【化２】
2011525486.tif 000004
【００３３】
（式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨおよびエステル基からなる群から選択され、Ｒ２は、ＯおよびＨ２個からなる群から選択されており、５員原子環は、β結合２個のシス型立体配置を有する）、
ならびに薬学的に許容されるその塩の、活動亢進性免疫系を予防または治療する医薬を製造するための使用を提供する。
【００３４】
特に、式Ｉの化合物は、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、アルツハイマー病、喘息、湿疹様皮膚炎、および移植後の移植片拒絶反応からなる群から選択される、少なくとも１種の疾患を予防または治療する医薬を製造するために使用することができる。
【００３５】
Ｒ２がＯである場合、式Ｉに示すように、５員原子環の炭素へその酸素を付ける二重結合が存在する。Ｒ２が水素原子２個である場合、各水素原子は、５員原子環の炭素に各々１つの結合で付いている。
【００３６】
顕著なことには、式Ｉの化合物は、太い実線で示すように、５員原子環がシス型立体配置、即ちβ結合２個のピクロ誘導体である。Ｒ１およびトリメトキシフェニル基は、波線で図示するように、α位またはβ位のいずれにあってもよい。５員原子環は、式Ｉの右側に示されている。
【００３７】
本発明の一実施形態では、式ＩＩの化合物、
【００３８】
【化３】
2011525486.tif 000005
【００３９】
（式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨおよびエステル基からなる群から選択される）、ならびに薬学的に許容されるその塩の使用が提供され、ラクトン環は、β結合２個のシス型立体配置を有しており、Ｒ１およびトリメトキシフェニル基は、破線で図示するように、α位にある。式ＩＩは、Ｒ２＝Ｏであり、Ｒ１およびトリメトキシフェニル基がα位にある式Ｉに等しい。ラクトン環は、式ＩＩの右側に示されている５員原子環である。
【００４０】
式ＩＩの好ましい化合物は、ピクロポドフィリン（図１上部）およびデオキシピクロポドフィリン（図２上部）であり、これらの化合物は、本発明に従った使用に特に適していることが判明した。
【００４１】
本発明の別の実施形態では、式ＩＩＩの化合物、
【００４２】
【化４】
2011525486.tif 000006
【００４３】
（式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨおよびエステル基からなる群から選択される）、ならびに薬学的に許容されるその塩の使用が提供され、シクロエーテル環は、太い実線で示すように、β結合２個のシス型立体配置を有しており、Ｒ１およびトリメトキシフェニル基は、破線で図示するように、α位にある。式ＩＩＩは、Ｒ２がＨ２個であり、Ｒ１およびトリメトキシフェニル基がα位にある式Ｉに相当する。
【００４４】
式ＩＩＩの好ましい化合物は、アンヒドロピクロポドフィロール、即ちピクロポドフィリン環状エーテル（図１下部）、およびデオキシアンヒドロピクロポドフィロール、即ちデオキシピクロポドフィリンエーテル（図２下部）である。
【００４５】
式Ｉの化合物２種以上の混合物の、本発明に従って医薬を製造するための使用は、本発明の範囲に入っている。
【００４６】
エステル基としてのＲ１は、リン酸エステルおよびアミノ酸エステルなど、薬学的に許容される任意のエステル基を指定することができる。エステル基は、遊離のカルボキシル基または別の酸性基も含むことができる。特にエステル基は、ＯＣＯＨ、ＯＣＯ（ＣＨ２）０−１８ＣＨ３、ＯＣＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ、ＯＣＯＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、ＯＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３、ＯＣＯＣ５ＮＨ４およびＯＰＯ３Ｈ２からなる群から選択することができる。特定の実施形態では、Ｒ１はＯＣＯＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２である。エステル誘導体を使用する主目的は、当該化合物の薬学的性質、例えば水溶性を改善することである。
【００４７】
本発明は、様々な自己免疫疾患を予防または治療する医薬を調製するための式Ｉの化合物の使用を指す。このような化合物で予防または治療できる自己免疫疾患の非限定的な例は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、重症筋無力症、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎、グッドパスチャー症候群、尋常性天疱瘡、１型糖尿病、自己免疫性胃炎、アジソン病、悪性貧血、セリアック病、筋炎、ショーグレン症候群、全身性硬化症、強皮症、壊死性糸球体腎炎、ウェゲナー肉芽腫症、ギラン・バレー症候群、ランゲルハンス組織球増殖症、サルコイドーシスおよび自己免疫性炎症性肺疾患である。治療可能な疾患群には、アルツハイマー病も加えることができる。
【００４８】
更に、喘息、湿疹様皮膚炎（アトピー性皮膚炎）、鼻炎およびじんま疹などのアトピー性アレルギー状態も、式Ｉの化合物で予防または治療することができる。
【００４９】
その上、式Ｉの化合物は、臓器、組織または細胞を移植した後の移植片拒絶反応、および移植片対宿主病を予防または治療するためにも使用することができる。
【００５０】
関節リウマチを予防または治療する医薬を製造するために、上記した任意の化合物の使用が提供される。
【００５１】
クローン病を予防または治療する医薬を製造するために、上記した任意の化合物の使用が提供される。
【００５２】
潰瘍性大腸炎を予防または治療する医薬を製造するために、上記した任意の化合物の使用が提供される。
【００５３】
多発性硬化症を予防または治療する医薬を製造するために、上記した任意の化合物の使用が提供される。
【００５４】
アルツハイマー病を予防または治療する医薬を製造するために、上記した任意の化合物の使用が提供される。
【００５５】
喘息を予防または治療する医薬を製造するために、上記した任意の化合物の使用が提供される。
【００５６】
湿疹様皮膚炎を予防または治療する医薬を製造するために、上記した任意の化合物の使用が提供される。
【００５７】
移植後の移植片拒絶反応を予防または治療する医薬を製造するために、上記した任意の化合物の使用が提供される。
【００５８】
追加の療法を要する疾患または状態の場合、本発明の化合物を使用する治療は、他種の治療と併用し得る。例えば、該化合物は、細胞を感作し、他の治療の効果を増強するために有用になり得る。したがって、本発明は、医薬、手術などによる治療など、別種の療法と組み合わせた式Ｉの化合物の使用も指す。自己免疫疾患、アレルギー状態の治療または移植片拒絶反応の予防をするために、本発明の化合物と共に使用できる薬物または療法の例には、それだけに限らないが、鎮痛剤（例えば、パラセタモール）、非ステロイド抗炎症薬即ちＮＳＡＩＤ（例えば、アスピリン、メロキシカム）、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン）、疾患修飾薬（例えば、メソトレキセート、サルファサラジン）、および／または免疫抑制薬（例えば、アザチオプリン、レフルノミド、シクロスポリン、シクロホスファミド）が挙げられる。
【００５９】
式Ｉによる化合物、式ＩＩによる化合物、および式ＩＩＩによる化合物を含めた、上記の任意の化合物について、鎮痛剤（例えば、パラセタモール）、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ、例えば、アスピリン、メロキシカム）、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン）、疾患修飾薬（例えば、メソトレキセート、サルファサラジン）、および／または免疫抑制薬（例えば、アザチオプリン、レフルノミド、シクロスポリン、シクロホスファミド）からなる群から選択される、少なくとも１種の更なる薬物と組み合わせた使用が提供される。
【００６０】
別の態様では、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、アルツハイマー病、喘息、湿疹様皮膚炎、および移植後の移植片拒絶反応からなる群から選択される、少なくとも１種の疾患を予防または治療するために、上記に定義したような式Ｉによる化合物、ならびに薬学的に許容されるその塩が提供される。
【００６１】
更に別の態様では、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、アルツハイマー病、喘息、湿疹様皮膚炎、および移植後の移植片拒絶反応からなる群から選択される、少なくとも１種の疾患を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、上記に定義したような式Ｉによる化合物、ならびに薬学的に許容されるその塩を投与することを含む方法が提供される。
【００６２】
更に別の態様では、哺乳動物の免疫反応性を調節するために、上記に定義したような式Ｉの化合物、ならびに薬学的に許容されるその塩の使用が提供される。好ましい実施形態では、哺乳動物は人間である。
【００６３】
上記ピクロ誘導体、即ち、ラクトン環またはエーテル環にシス型立体配置を有するシクロリグナンの合成用出発物質として使用される、ポドフィロトキシンおよびデオキシポドフィロトキシンは、植物中に自然に産する。植物からそうした化合物を抽出することは、可能である。純粋形態の前記物質を調製するために、例えば、ポドフィルム・エモジ（Ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｅｍｏｄｉ）またはポドフィルム・ペルタツム（Ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｐｅｌｔａｔｕｍ）の乾燥した微粉砕根茎を有機溶媒で抽出することができる。その後、抽出液をシリカゲル上でろ過し、濃縮することができる。当該物質を含有する分画を集め、酸性アルミナおよびシリカゲル上などでのクロマトグラフィーにより、該物質を更に精製し、最後に再結晶することができる。
【００６４】
ピクロポドフィリンは、精製したポドフィロトキシンから調製することができる。例えば、ポドフィロトキシンを７０％含水エタノール中に溶解でき、この溶液に酢酸ナトリウムを添加してもよく、その混合物を１２時間などの期間、還流し、撹拌してもよい。その後、混合物を冷却し、ろ過することができる。沈殿生成物のピクロポドフィリンは、酢酸エチルで洗浄し、次いで、Ｏ  Ｂｕｃｈａｒｄｔ等（Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ  Ｓｃｉ  １９８６、７５、１０７６〜１０８０頁）に本質的に記載されるように、無水エタノールからの再結晶により精製する、あるいは移動相がヘキサン−酢酸エチル混合物のシリカゲル上、および／または移動相が含水メタノールのオクタデシルシラン結合シリカ上でのクロマトグラフィーにより精製することができる。ピクロポドフィリンの全合成は、ＪＷ  Ｇｅｎｓｌｅｒ等（Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １９６０、８２、１７１４〜１７２７頁）により記載されている。
【００６５】
デオキシピクロポドフィリンは、精製したデオキシポドフィロトキシンから、本質的に同じ手順を用いて調製することができる。当業者は、この説明、およびこの説明で言及した参考文献を考慮して、ピクロポドフィリンおよびデオキシピクロポドフィリンを調製することができる。
【００６６】
アンヒドロピクロポドフィロールおよびデオキシアンヒドロピクロポドフィロールは、ピクロポドフィリンおよびデオキシピクロポドフィリンからそれぞれ調製することができる。
【００６７】
式ＩＩおよびＩＩＩの化合物の追加例として、ピクロポドフィリンおよびアンヒドロピクロポドフィロールの各種エステル、ならびに薬学的に許容されるその塩を挙げることができ、そうした化合物は、従来の手順により調製することができる。
【００６８】
経口投与のために、本発明の化合物は、カプセル、丸薬、錠剤、トローチ、散剤、溶液、懸濁液または乳濁液などの固体または液体製剤に処方することができる。
【００６９】
局所塗布のために、該化合物は、軟膏（ｕｎｇｕｅｎｔ）、クリーム、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、ローション、溶液またはパッチの形態で投与することができる。
【００７０】
非経口投与のために、該化合物は、注射調剤として、または医薬担体としての生理的に許容される希釈剤における該化合物の溶液、懸濁液または乳濁液の持続的静脈内注入により投与し得るが、こうした担体は、界面活性剤および他の薬学的に許容される補助剤を添加した、または添加していない水、アルコール、油、乳濁液および他の許容される有機溶媒などの滅菌した液体でもよい。
【００７１】
吸入のために、該化合物は、エアロゾルとして送達させる粉末または溶液として処方してもよい。
【００７２】
該化合物は、活性成分を持続的に放出できるように処方し得る、デポー注射剤またはインプラント製剤の形態で投与することもできる。
【００７３】
本発明は、本明細書に示した特定の実施形態に限定されないことを理解されたい。以下の実施例は、例示のために提示され、本発明の範囲を制限することを意図していない。
【実施例】
【００７４】
実験項
材料
薬品
ピクロポドフィリン（純度９９．５％）およびデオキシピクロポドフィリン（純度９９．５％）は、ポドフィロトキシン（Ｓｉｇｍａおよび他の商業的供給源から）およびデオキシポドフィロトキシン（Ａｎａｌｙｔｅｃｏｎ  ＳＡ、Ｐｒｅ  Ｊｏｒａｔ、スイス）からそれぞれ合成した。アンヒドロピクロポドフィロール（純度９９％）およびデオキシアンヒドロピクロポドフィロール（純度９９％）は、ピクロポドフィリンおよびデオキシピクロポドフィリンから、下記のようにそれぞれ合成した。
アンヒドロピクロポドフィロールの調製
高収率の生成物を与えるアンヒドロピクロポドフィロールの合成法を開発した。手短に言うと、先ず、ピクロポドフィリンのｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテルを、ピクロポドフィリンおよびイミダゾールのジメチルホルムアミド中の混合物に、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ｔ−ＢＤＭＳ）クロリドをＮ２下で添加することにより調製した。その黄色溶液を室温で終夜撹拌し、水中に注ぎ入れた。その誘導体を精製した後、テトラヒドロフラン中水素化リチウムアルミニウムでラクトン基を還元した。次いで、生成した混合物を室温で３時間撹拌すると、遊離のヒドロキシ基２個を有するピクロポドフィロールのｔ−ＢＤＭＳ誘導体が生成した。この化合物のジクロロメタン溶液に、トリフェニルホスフィンおよびアゾジカルボン酸ジエチルを添加した後、混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を蒸発させた後、アンヒドロピクロポドフィロールのｔ−ＢＤＭＳエーテル粗製物を精製した。その誘導体のテトラヒドロフラン溶液にフッ化テトラブチルアンモニウムを添加することにより、非誘導体化アンヒドロピクロポドフィロールを得た。次いで、その混合物を室温で終夜撹拌した。精製後、純粋な遊離アンヒドロピクロポドフィロールを白色固体として得た。
デオキシアンヒドロピクロポドフィロールの調製
デオキシアンヒドロピクロポドフィロールは、デオキシピクロポドフィリンから同様に合成した。手短に言うと、デオキシピクロポドフィリンのラクトン基は、テトラヒドロフラン中の水素化リチウムアルミニウムを用いて還元した。その混合物を室温で３時間撹拌すると、遊離のヒドロキシ基２個を有するデオキシピクロポドフィロールが生成した。この化合物のジクロロメタン溶液に、トリフェニルホスフィンおよびアゾジカルボン酸ジエチルを添加した後、混合物を室温で３時間撹拌した。次いで、純粋な生成物のデオキシアンヒドロピクロポドフィロールを精製後に得た。
実験
全てのインビボ実験は、実験動物の使用に対する倫理指針に従って行い、地元倫理委員会により認可された。
実験１．マウスにおけるシクロリグナンのトランスおよびシス異性体の毒作用
この実験は、マウスにおけるシクロリグナンのトランスおよびシス異性体の全身毒作用を調べることにより、シクロリグナンの立体化学の一般毒性に対する有意性を判定するために実施した。病原体を保持していない５週齢ヌードマウス（ｎｕ／ｎｕ）を使用し、無菌施設のプラスチック隔離飼育器内に収容した。ポドフィロトキシン、デオキシポドフィロトキシン、ピクロポドフィリンおよびデオキシピクロポドフィリンによる実験的処置を、ＤＭＳＯおよび食塩水の混合物１０μＬに溶解した各化合物を腹腔内に毎日、５日間注射することにより行った。１日１回の注射用量は２８ｍｇ／ｋｇ／ｄであり、マウス６匹を各薬物に対して用いた。対照マウスは媒体だけで処置した。
【００７５】
マウスは、不快、疾患および体重減少の徴候について毎日チェックした。その結果を表１に示してある。ポドフィロトキシンで処置したマウスは、速やかに病気に罹り、２日目に動物は全て死んでいた。デオキシポドフィロトキシン処置マウスは、２日目に重篤な毒性徴候を示し、３日後に全て死んでいた。対照的に、ピクロポドフィリンまたはデオキシピクロポドフィリンのいずれかで処置したマウスは、５日の全期間生存し、明白な毒性徴候を全く示さなかった（表１）。この結果は、ラクトン環がシス型立体配置のシクロリグナン、ピクロポドフィリンおよびデオキシピクロポドフィリンは、対応するトランス異性体のポドフィロトキシンおよびデオキシポドフィロトキシンより、毒性が遥かに低いことを示す。後者の２種は、微小管阻害剤であることが知られており、このことから毒性を説明し得る。
【００７６】
【表１】
2011525486.tif 000007
【００７７】
この結果は、シクロリグナンにおけるラクトン環の立体配置が、その毒性にとって決定的に重要である、即ち、ラクトン環がトランス立体配置のポドフィロトキシンおよびデオキシポドフィロトキシンは、対応するシス異性体のピクロポドフィリンおよびデオキシピクロポドフィリンとは対照的に、一般に有毒であることを示す。
実験２．マウスにおける血中リンパ球に対するピクロポドフィリンの作用
この実験では、２０ｇの健常マウスを、媒体としてＤＭＳＯ／ヒマワリ油の９：１を用いた、用量２０ｍｇ／ｋｇ／１２ｈの腹腔内注射を１日２回行って、ピクロポドフィリンで処置した。対照群は、媒体だけで処置した（１日当たり合計：ＤＭＳＯ／油を２０μＬ）。各群にはマウス３匹が含まれていた。７日間処置後、マウスを犠牲にし、血液試料を採取した。試料中の血液細胞数は、Ｂａｙｅｒ  ＡＢ（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ）製のＡｄｖｉａ１２０血液検査システムを用いて計数した。結果は表２に示してある。
【００７８】
【表２】
2011525486.tif 000008
【００７９】
この結果は、ピクロポドフィリンによる処置が、マウスにおける血中リンパ球の数を減少させたことを示しており、免疫系に対する抑制作用に合致している。
実験３．ラットにおける血中リンパ球に対するピクロポドフィリンの作用
この実験では、２００ｇの健常ラット（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）を、媒体としてＤＭＳＯ／ヒマワリ油の９：１を用いた、用量２０ｍｇ／ｋｇ／１２ｈの腹腔内注射を１日２回行って、ピクロポドフィリンで処置した。対照群は、媒体だけで処置した（１日当たり合計：ＤＭＳＯを２００μＬ）。各群にはラット５匹が含まれていた。１４日間処置後、ラットを犠牲にし、血液試料を採取した。試料中の血液細胞数は、Ｂａｙｅｒ  ＡＢ（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ）製のＡｖｉａ１２０血液検査システムを用いて計数した。結果は表３に示してある。
【００８０】
【表３】
2011525486.tif 000009
【００８１】
この結果は、ピクロポドフィリンによる処置が、ラットにおける血中リンパ球を５０％超減少させたことを示しており、免疫系に対する抑制作用に合致している。
実験４．ヒト血中のヘルパーＴリンパ球および細胞傷害性Ｔリンパ球の活性化に対する、ピクロポドフィリンおよびデオキシピクロポドフィリンの作用
ヒト血液リンパ球のサブグループの活性化に対するピクロポドフィリンおよびデオキシピクロポドフィリンの作用を、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）で決定した。ヒト末梢血からのリンパ球をｆｉｃｏｌｌ−ｈｙｐａｑｕｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ａｍｅｒｓｈａｍ）で精製し、次いでＦＡＣＳ管中に０．５ｍｌ中５０００００細胞／管で分配した。細胞は、ヘルパーＴ細胞および細胞傷害性Ｔ細胞の活性化用１０％ウシ血清（ＢＧＳ、Ｓｉｇｍａ）、１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ）および１％グルタミン（Ｓｉｇｍａ）を補充したＲＰＭＩ培地（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）において維持した。その細胞を、ピクロポドフィリンおよびデオキシピクロポドフィリンの非存在下（対照リンパ球）、または濃度０．１および２．５μＭの存在下で、室温で３０分間インキュベートした。洗浄後、細胞を表面分子のＣＤ４、ＣＤ８およびＣＤ６９に対して１５分染色した。ＣＤ４およびＣＤ８は、Ｔリンパ球の２つのサブセット、即ちヘルパーＴ細胞および細胞傷害性Ｔ細胞によりそれぞれ発現し、ＣＤ６９は、リンパ球活性化マーカーである。染色は、次の蛍光体コンジュゲート抗体：抗ＣＤ４ＰＢ、抗ＣＤ８ＡＰＣ、抗ＣＤ６９ＡＰＣＣｙ７（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて行った。次いで、細胞を、２％ＦＣＳおよび０．０５％ＮａＮ３を含有するＰＢＳ（ＦＡＣＳ緩衝液）で洗浄した後、細胞のアポトーシスを判定するために、ヨウ化プロピル（ＰＩ）／ＦＩＴＣアネキシンＶ（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で染色し、更に１５分間のインキュベーションおよび洗浄の後、細胞をフローサイトメトリー（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ、Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で分析した。データは、Ｃｅｌｌｑｕｅｓｔコンピュータソフトウェア（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて評価した。結果は表４に示してある。
【００８２】
【表４】
2011525486.tif 000010
【００８３】
非処置対照では、ヘルパーＴ細胞の約９％（ＣＤ４／ＣＤ６９）および細胞傷害性Ｔ細胞の約６％（ＣＤ８／ＣＤ６９）が活性化された。ピクロポドフィリンおよびデオキシピクロポドフィリンは共に、活性化細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＤ８／ＣＤ６９）の数を用量依存的に減少させた。こうした結果は、シクロリグナンの有意な免疫抑制作用に合致している。該シクロリグナンは、ＰＩおよびアネキシン分析で示されるように、細胞のアポトーシスを誘発しなかった。
【００８４】
ここに述べた結果は、自己免疫疾患の関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎および多発性硬化症、ならびに移植後の移植片拒絶反応およびアレルギー疾患に対する、シクロリグナンのモデル系における作用を示唆している。該シクロリグナンは、アルツハイマー病に対するモデルにもなり得る。
実験５．ヒト血中のリンパ球の増殖に対する、ピクロポドフィリンおよびデオキシピクロポドフィリンの作用
ヒトＴリンパ球の機能、即ち、抗原／マイトジェンに反応したヒトＴリンパ球の増殖能力に対する、ピクロポドフィリンおよびデオキシピクロポドフィリンの作用を、トリチウム標識チミジンの経時的取込みアッセイを用いて測定した。患者末梢血からのリンパ球をｆｉｃｏｌｌ−ｈｙｐａｑｕｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ａｍｅｒｓｈａｍ）で精製し、９６ウェルプレート中に１０００００細胞／ウェルで分配し、試料を全て、同一のものを３点とした。細胞は、１０％ヒト血清（Ｓｉｇｍａ）、１００単位／ｍＬのペニシリン（Ｓｉｇｍａ）、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ）および２ｍＭのＬ−グルタミン（Ｓｉｇｍａ）を補充したＲＰＭＩ１６４０培地（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）において維持した。リンパ球の増殖は、Ｔリンパ球マイトジェンのコンカナバリンＡ（Ｃｏｎ  Ａ）１０μｇ／ｍＬ（Ｓｉｇｍａ）で刺激した。シクロリグナンと共に、およびそれなしで、Ｃｏｎ  Ａで３日間インキュベーションの後、１μＣｉの３Ｈ−チミジン（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を各ウェルに添加し、更に１８時間後に細胞を採集し、洗浄して、新たに合成されたＤＮＡ中に取り込まれた３Ｈ−チミジンの量を、シンチレーション計数により決定した。その結果は表５に示してある。
【００８５】
【表５】
2011525486.tif 000011
【００８６】
この結果は、末梢血Ｔリンパ球の増殖が、自己免疫疾患においてピクロポドフィリンおよびデオキシピクロポドフィリンにより抑制されたことを示す。
【図１】
2011525486.tif 000017
【図２】
2011525486.tif 000018
【手続補正書】
【提出日】平成21年12月23日(2009.12.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物、
【化１】
2011525486.tif 000019
（式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨおよびエステル基からなる群から選択され、
Ｒ２は、ＯおよびＨ２個からなる群から選択されており、
５員原子環は、β結合２個のシス型立体配置を有する）、
ならびに薬学的に許容されるその塩の、 関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、アルツハイマー病、喘息、および湿疹様皮膚炎からなる群から選択される、少なくとも１種の疾患を予防または治療する医薬を製造するための使用。  
【請求項２】
Ｒ２がＯであり、Ｒ１およびトリメトキシフェニル基がα位にある、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｒ２がＨ２個であり、Ｒ１およびトリメトキシフェニル基がα位にある、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
Ｒ１が、ＯＣＯＨ、ＯＣＯ（ＣＨ２）０−１８ＣＨ３、ＯＣＯＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ、ＯＣＯＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２およびＯＰＯ３Ｈ２からなる群から選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記化合物が、ピクロポドフィリンおよびデオキシピクロポドフィリンからなる群から選択される、請求項１または２に記載の使用。
【請求項６】
前記化合物が、アンヒドロピクロポドフィロールおよびデオキシアンヒドロピクロポドフィロールからなる群から選択される、請求項１または３に記載の使用。
【請求項７】
鎮痛剤、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、コルチコステロイド、疾患修飾薬および免疫抑制薬からなる群から選択される、少なくとも１種の更なる薬物と組み合わせる、請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項８】
関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、アルツハイマー病、喘息、および湿疹様皮膚炎からなる群から選択される、少なくとも１種の疾患を予防および／または治療するための、
式Ｉの化合物、
【化２】
2011525486.tif 000020
（式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨおよびエステル基からなる群から選択され、
Ｒ２は、ＯおよびＨ２個からなる群から選択されており、
５員原子環は、β結合２個のシス型立体配置を有する）、
ならびに薬学的に許容されるその塩。
【請求項９】
関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、アルツハイマー病、喘息、および湿疹様皮膚炎からなる群から選択される、少なくとも１種の疾患を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、式Ｉの化合物、
【化３】
2011525486.tif 000021
（式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨおよびエステル基からなる群から選択され、
Ｒ２は、ＯおよびＨ２個からなる群から選択されており、
５員原子環は、β結合２個のシス型立体配置を有する）、
ならびに薬学的に許容されるその塩を投与することを含む方法。
【国際調査報告】
2011525486.tif 000022
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