(57)【要約】  本発明は、本明細書に別に開示される多数のものの中でも特に、皮膚の狼瘡（円板状のもの）、関節、肺及び腎臓の全身性狼瘡などのＳＬＥと関連する種々の病状及び状態、溶血性貧血及び低リンパ球数などの血液状態、リンパ節腫脹、並びに記憶喪失、発作及び精神病などのＣＮＳ作用の治療のための、チロシン１７５がロイシンによって置換されている（Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰ）又はロイシン１７６がグルタミン酸によって置換されている（Ｌ１７６Ｅ  ＣＲＰ）突然変異体ＣＲＰ分子の使用に関する。本発明の別の態様では、ＳＬＥと関連する病状又は状態を発症する危険がある患者が発症する可能性の低減が、本発明の更なる態様である。本発明は、全身性狼瘡のＳＬＥのために二次的に生じる多くの病状又は状態の治療における、突然変異体Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰ又はＬ１７６Ｅ  ＣＲＰの使用に関する。本発明はまた、免疫性血小板減少症紫斑病の治療に関する。これらの突然変異体ＣＲＰ分子に基づいた医薬組成物もまた、開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者における全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、ＳＬＥと関連する二次的病状、状態若しくは徴候、又は免疫性血小板減少症紫斑病を治療、阻害又はその可能性を低減する方法であって、前記患者に、Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰ及びＬ１７６Ｅ  ＣＲＰからなる群から選択される少なくとも１つの化合物の有効量を、キャリヤ、添加剤又は賦形剤と組み合わせて、さらに任意で天然又は合成活性キャリヤと組み合わせて投与することを含む方法。
【請求項２】
前記二次的病状、状態又は徴候が、漿膜炎、頬部発疹、円板状発疹、舌上、口若しくは鼻中の痛む所又は潰瘍、関節炎、溶血性貧血、リンパ節腫脹、低リンパ球数、低血小板数、血液中の抗核抗体の存在、皮膚病変、ＣＮＳ作用、肺作用、脱毛、レイノー症候群、ループス腎炎及び光に対する感受性、疲労、発熱、嘔気、嘔吐、下痢、腺の肥大、食欲不振及び体重減少からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記二次的病状、状態又は徴候が、漿膜炎である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記二次的病状、状態又は徴候が、ループス腎炎である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
前記二次的病状、状態又は徴候が、ループス腎炎以外である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項６】
前記二次的病状、状態又は徴候が、関節炎である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項７】
前記ＣＮＳ作用が、精神病の記憶喪失である、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記病状、状態又は徴候が、頬部発疹又は円板状発疹である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項９】
前記病状、状態又は徴候が、リンパ節腫脹である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項１０】
免疫性血小板減少症紫斑病を治療するために用いられる、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記治療が、前記患者における出血、皮膚上の赤い斑点、口の膜の赤い斑点、紫色の口の膜の領域、鼻出血、歯肉出血、消化管出血、尿出血及び脳出血の少なくとも１つを低減する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記治療が、循環血小板を増加させる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記化合物が、Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰである、請求項１から１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記化合物が、Ｌ１７６Ｅ  ＣＲＰである、請求項１から１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記化合物が、Ｌ１７５Ｌ  ＣＲＰ及びＬ１７６Ｅ  ＣＲＰの組み合わせである、請求項１から１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記化合物が、天然又は合成活性キャリヤと組み合わされる、請求項１から１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰ、Ｌ１７６Ｅ  ＣＲＰ又はそれらの混合物からなる群から選択されるＣＲＰ突然変異体ポリペプチドの有効量を、医薬的に許容可能なキャリヤ、添加剤又は賦形剤と組み合わせて、さらに任意で活性キャリヤと組み合わせて含む医薬組成物。
【請求項１８】
前記ＣＲＰ突然変異体ポリペプチドが、Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ＣＲＰ突然変異体ポリペプチドが、Ｌ１７６Ｅ  ＣＲＰである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ＣＲＰ突然変異体ポリペプチドが、Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰ及びＬ１７６Ｅ  ＣＲＰの混合物である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２１】
活性キャリヤと組み合わせて製剤される、請求項１７から２０のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、抗マラリア薬、コルチコステロイド、免疫抑制剤及びそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの薬剤をさらに含む、請求項１７から２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
前記ＮＳＡＩＤが、アスピリン、トルメチン、アスピリン、ジクロフェナク、エトドラック、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラック、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピロキシカム、セレコキシブ、スリンダック及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記コルチコステロイドが、プレドニゾン、ベタメタゾン、酢酸メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
前記免疫抑制剤が、メトトレキサート、シクロホスファミド、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル（セルセプト）及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２６】
全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、ＳＬＥと関連する二次的病状、状態若しくは徴候、又は免疫性血小板減少症紫斑病の治療のための医薬の製造における、医薬的に許容可能なキャリヤ、添加剤又は賦形剤と組み合わせた、さらに任意で活性キャリヤと組み合わせた、Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰ、Ｌ１７６Ｅ  ＣＲＰ又はそれらの混合物からなる群から選択されるＣＲＰ突然変異体ポリペプチドの使用。
【請求項２７】
前記二次的病状、状態又は徴候が、漿膜炎、頬部発疹、円板状発疹、舌上、口若しくは鼻中の痛む所又は潰瘍、関節炎、溶血性貧血、リンパ節腫脹、低リンパ球数、低血小板数、血液中の抗核抗体の存在、皮膚病変、ＣＮＳ作用、肺作用、脱毛、レイノー症候群、ループス腎炎及び光に対する感受性、疲労、発熱、嘔気、嘔吐、下痢、腺の肥大、食欲不振及び体重減少からなる群から選択される、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
前記二次的病状、状態又は徴候が、漿膜炎である、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
前記二次的病状、状態又は徴候が、ループス腎炎である、請求項２７に記載の使用。
【請求項３０】
前記二次的病状、状態又は徴候が、ループス腎炎以外である、請求項２７に記載の使用。
【請求項３１】
前記二次的病状、状態又は徴候が、関節炎である、請求項２７に記載の使用。
【請求項３２】
前記二次的病状、状態又は徴候が、ＣＮＳ作用である、請求項２７に記載の使用。
【請求項３３】
前記ＣＮＳ作用が、精神病の記憶喪失である、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
前記二次的病状、状態又は徴候が、頬部発疹又は円板状発疹である、請求項２７に記載の使用。
【請求項３５】
前記二次的病状、状態又は徴候が、リンパ節腫脹である、請求項２７に記載の使用。
【請求項３６】
前記突然変異体ＣＲＰ化合物が、免疫性血小板減少症紫斑病（ＩＴＰ）を治療するために使用される、請求項２７に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、本明細書に別に開示される多数のものの中でも特に、皮膚の狼瘡（円板状のもの）、関節、肺及び腎臓の全身性狼瘡などのＳＬＥと関連する種々の病状及び状態、溶血性貧血及び低リンパ球数などの血液状態、リンパ節腫脹、並びに記憶喪失、発作及び精神病などのＣＮＳ（中枢神経）作用の治療のための突然変異体ＣＲＰ分子の使用に関する。本発明の別の態様では、ＳＬＥと関連する病状又は状態を発症する危険がある患者が発症する可能性の抑制又は低減が、本発明の更なる態様である。本発明は、全身性狼瘡のＳＬＥのために二次的に生じる多くの病状又は状態の治療における、突然変異体Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰ及び／又はＬ１７６Ｅ  ＣＲＰの使用に関する。本発明はまた、免疫性血小板減少症紫斑病の治療に関する。これらの突然変異体ＣＲＰ分子に基づいた医薬組成物もまた、開示される。
【０００２】
関連出願／優先権の主張
本出願は、２００８年６月３日に出願された米国仮出願番号ＵＳ６１／１３０，７４９号、発明の名称「免疫性血小板減少症及びループス腎炎における治療有用性が改善されたＣ反応性タンパク質突然変異体の開発（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  Ｃ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｕｔａｎｔ  ｗｉｔｈ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｂｅｎｅｆｉｔ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ  ａｎｄ  Ｌｕｐｕｓ  Ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）」の優先権の利益を主張し、参照により本明細書にその全文が援用される。
【背景技術】
【０００３】
Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）は、怪我、感染又は炎症後に血清中に著しく増加した濃度で見られる急性期タンパク質である（（１）参照）。ＣＲＰの生物学的活性は、ＩｇＧのＦｃ受容体（ＦｃγＲ）とのリガンド結合及び相互作用、又は補体系の活性化によって媒介される。これらの生物学的活性として、損傷を受けた細胞、核抗原及び微生物病原体の除去を認識し、促進することが挙げられる。
【０００４】
ＣＲＰはまた、抗炎症活性を有し、これが本発明者らの最近の研究及び特許の焦点である。本発明者らは、精製ＣＲＰの単回注射が、ＳＬＥの２種のマウスモデル（２、３）、腎毒性腎炎（ＮＴＮ）（３）、及び免疫性血小板減少症（ＩＴＰ）のモデルにおいて（５）保護的であるということを示した。これらの疾患モデルの共通する特徴は、ＦｃγＲによる炎症細胞の免疫複合体活性化である。本発明者らは、これらの疾患では、ＣＲＰ治療における初期事象は、抑制性マクロファージの誘発であるということを見出している。これは、その受容体の一つ、ＦｃγＲＩを介したＣＲＰ結合及びシグナル伝達に続いて起こる。ＩＴＰの実験では、ＣＲＰ誘発抑制性マクロファージの移入は、レシピエントマウスを疾患から保護するのに十分である（５）。マウスでは、ヒトと同様に、ＣＲＰは、ＦｃγＲＩに加えてＦｃγＲＩＩと結合するが、この相互作用は、ＮＴＮ又はＩＴＰモデルのいずれでも必須ではない。ＣＲＰは、アテローム性動脈硬化症及び心血管疾患に関与する可能性があるという他の実験による証拠がある。ＣＲＰが動脈にアテロームを起こす作用のほとんどは、内皮細胞でのＦｃγＲＩＩとの相互作用に起因する。また、ＣＲＰは、虚血部位で補体を活性化することによって心筋再潅流傷害を増大するという実験証拠もある。このように、ＣＲＰの潜在的な心血管副作用は、補体活性化及びＦｃγＲＩＩ結合に起因するが、その抗炎症活性は、ＦｃγＲＩによって媒介される。したがって、ＦｃγＲＩとのその結合を増加し、補体及びＦｃγＲＩＩとの相互作用を低減するようなＣＲＰの修飾は、その抗炎症活性を増大すること及び炎症性活性を低減することが期待される。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、本明細書に別に開示される多数のものの中でも特に、皮膚の狼瘡（円板状のもの）、関節、肺及び腎臓の全身性狼瘡などのＳＬＥと関連する種々の病状及び状態、溶血性貧血及び低リンパ球数などの血液状態、リンパ節、腫脹並びに記憶喪失、発作及び精神病などのＣＮＳ作用の治療のための、チロシン１７５がロイシンによって置換されている（Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰ）又はロイシン１７６がグルタミン酸によって置換されている（Ｌ１７６Ｅ  ＣＲＰ）突然変異体ＣＲＰ分子の使用に関する。本発明の別の態様では、ＳＬＥと関連する病状又は状態を発症する危険がある患者が発症する可能性の抑制又は低減が、本発明の更なる態様である。本発明は、ＳＬＥのために二次的に生じる多くの病状又は状態の治療における、突然変異体Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰ又はＬ１７６Ｅ  ＣＲＰの使用に関する。本発明の特定の態様では、漿膜炎、頬部発疹（頬及び鼻筋にわたる発疹）、円板状発疹（顔、首及び胸の鱗状、円板状の痛む所）、痛む所又は潰瘍（舌上、口若しくは鼻中）、関節炎、溶血性貧血、リンパ節腫脹、低リンパ球数、低血小板数、血液中の抗核抗体の存在、皮膚病変、ＣＮＳ作用（記憶喪失、発作、脳卒中及び精神病など）、肺の症状／作用（炎症（胸膜炎）、慢性肺炎、慢性びまん性間質性肺疾患及び肺の瘢痕など）、脱毛、レイノー症候群、ループス腎炎及び光に対する感受性、疲労、発熱、嘔気、嘔吐、下痢、腺の肥大、食欲不振、冷気に対する感受性（レイノー現象）及び体重減少などの、ＳＬＥの二次的状態、病状又は徴候のいずれか１つ以上が、本発明の化合物及び医薬組成物を用いて治療される。本発明はまた、免疫性血小板減少症紫斑病の治療に関する。Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰ又はＬ１７６Ｅ  ＣＲＰ（特に、Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰ）の選択的結合の特徴により、これらの突然変異体ＣＲＰ分子を使用する治療方法は、上記の病状及び状態の１つ以上の治療において高い有効性を提供し、ＣＲＰが使用される場合に生じる副作用（毒性及び望ましくない炎症）の発生率が比較的低い。
【０００６】
本発明の方法は、ＳＬＥを患っている患者に、有効量のＹ１７５Ｌ  ＣＲＰ（突然変異体ＣＲＰ）又はＬ１７６ＥＣＲＰ（突然変異体ＣＲＰ）を、単独で又はヒト血清アルブミンなどの天然若しくは合成キャリヤと組み合わせ、任意でＳＬＥ、特に、本明細書に別に記載されるその患者のその二次的病状、状態又は症状のうちのいずれか１つ以上を治療するのに有効な量の医薬的に許容可能な添加剤、キャリヤ又は賦形剤の存在下で、投与することを含む。本発明の任意の実施形態では、ＣＲＰ又は本明細書に開示される他の化合物の１つを、ループス腎炎などの腎臓関連疾患又は状態において、ＳＬＥがもたらす場合又はそれ自体が発現する場合を含め、ＳＬＥを患っている患者に投与する。本発明はまた、免疫性血小板減少症紫斑病の治療に関する。有効量のＹ１７５Ｌ  ＣＲＰ又はＬ１７６Ｅ  ＣＲＰを、単独で又は医薬的に許容可能な添加剤、キャリヤ若しくは賦形剤と組み合わせて含む医薬組成物が、本発明の更なる態様である。
【０００７】
本発明の別の実施形態では、単独又は活性キャリヤと組み合わせた本発明の化合物（Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰ又はＬ１７６Ｅ  ＣＲＰ）が、ＳＬＥの治療において従来使用されている少なくとも１つの更なる薬剤の有効量と同時投与されてもよい。これらの薬剤としては、例えば、特に、従来のＮＳＡＩＤであるＣＯＸ−２阻害剤及びサリチル酸（アスピリンなど）を含む非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、抗マラリア薬（ヒドロキシクロロキン、キナクリンなど）、コルチコステロイド（プレドニゾン（デルタゾン）、ベタメタゾン（セレストン）、酢酸メチルプレドニゾロン（メドロール、デポ−メドロール）、ヒドロコルチゾン（コルテフ、ハイドロコートン）及びデキサメタゾン（デカドロン、ヘキサドロール）など）、並びに免疫抑制剤（メトトレキサート（リウマトレックス）、シクロホスファミド（シトキサン）、アザチオプリン（イムラン）及びミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ、そしてセルセプト）等）などを挙げることができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】ＣＲＰ、Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰ（突然変異体ＣＲＰ）のアミノ酸配列及びＬ１７６Ｅ  ＣＲＰ（別の突然変異体ＣＲＰ）のアミノ酸配列を示す図である。
【図２】図２Ａ〜Ｃは、突然変異体ＣＲＰと共に培養したヒト単球のサイトカイン反応の増大を示す図である。ヒト末梢血単球は、抗ＣＤ１４マイクロビーズでの正の選択によって精製された。細胞は、ヒトＣＲＰ又は組み換えＹ１７５Ｌ突然変異体ＣＲＰと共に２４時間培養された。上清を回収し、サイトカインについてＥＬＩＳＡによって分析した（平均±ＳＥＭ、ｎ＝３）。
【図３】図３Ａ〜Ｂは、マウスのマクロファージでの突然変異体ＣＲＰのＦｃγＲＩへの結合の増加を示す図である。腹腔滲出細胞を単離し、精製ヒト又は突然変異体ＣＲＰと共に培養した。マクロファージとのＣＲＰ結合を、２色フローサイトメトリーによって検出した。Ａ．ＦｃγＲＩを発現するマクロファージ（ＦｃγＲＩＩｂ-/-マウス由来）。Ｂ．ＦｃγＲＩＩｂを発現するマクロファージ（ＦｃＲ  γ鎖-/-マウス由来）。
【図４】図４Ａ〜Ｂは、ＣＲＰ処理脾臓細胞の移入が、ＩＴＰにおいて血小板減少症を低減することを示す図である。脾臓細胞を、ＣＲＰ（２００μｇ／ｍｌ）又はＩＶＩＧ（１８ｍｇ／ｍｌ）を用い、インビトロで３０分間処理した。ＢＳＡ処理した細胞を、細胞移入なしに相当する対照として使用した。１×１０6個の洗浄細胞を、レシピエントマウスに静脈注射した。レシピエントを、２μｇの抗ＣＤ４１で２４時間後に処理した。注射の前（正常）及び２４時間後に血小板を計数した。結果は、平均±ＳＥＭ、ｎ＝３、＊ｐ＜．０５、＊＊ｐ＜．０１である。
【図５】ＣＲＰ前処理が、ＴＮＦ−αを阻害し、ＬＰＳに対する単球のＩＬ−１０応答を増大することを示す図である。ヒト末梢血単球を、ＣＲＰと共に２０時間培養し、次いで、単独又はＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍｌ）と共に４時間培養した。培養上清を、サイトカインについてＥＬＩＳＡによって分析した。左．ＴＮＦ−α。右．ＩＬ−１０。３試料（ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ）のウェルの平均±ＳＥＭが示されている。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明を説明するために、以下の用語が使用される。
【００１０】
用語「患者」とは、本発明の化合物を使用して治療可能な、ＳＬＥと関連する状態又は病状を治療するために本発明の化合物が投与される、治療又は療法を必要とする動物、好ましくは哺乳類、さらにより好ましくはヒトを指す。
【００１１】
用語「化合物」は、本明細書において、本明細書に開示されるいずれかの特定の化合物を指すために使用される。文脈におけるその使用の範囲内で、この用語は、通常は単一化合物、通常は種々の長さのポリペプチドを指す。
【００１２】
用語「全身性紅斑性狼瘡」、「ＳＬＥ」又は「狼瘡」は、免疫系が身体の細胞及び組織を攻撃し、炎症及び組織損傷をもたらす慢性潜在的衰弱性疾患又は致死的自己免疫疾患を述べるために使用される。ＬＳＥとは、関節、皮膚、筋肉、顔及び口、腎臓、中枢神経系及び身体のその他の部分に影響を及ぼす免疫疾患のいくつかの形態を指す。ＳＬＥは、潜在的に致死的になり得る、慢性及び炎症性疾患である。ＳＬＥは、自己免疫疾患又はリウマチ性疾患のいずれかとして分類され得る。症状の変化は、再燃及び寛解と呼ばれる。再燃は、症状が増大するＳＬＥがより活性な期間であり、寛解は、狼瘡の症状がわずかな又は全く存在しない期間である。米国だけで、推定２７０，０００〜１，５００，０００人以上がＳＬＥを有しており、世界中で、推定５，０００，０００人がこの疾患を有している。嚢胞性繊維症又は脳性麻痺よりも、よく見られる。
【００１３】
ＳＬＥの具体的な原因は分かっていない。遺伝的因子及び環境因子の両方が関与している多因子疾患であると考えられている。多因子疾患では、未知の環境因子に加えて、両親からの遺伝子の組み合わせが、形質、状態又は疾患を引き起こす。ヒト白血球抗原をコードする染色体６上の遺伝子の群が、この疾患に対するヒトの感受性又は耐性において主要な役割を果たすことが分かっている。ＳＬＥと関連する特定のＨＬＡ抗原は、ＤＲ２及びＤＲ３である。免疫系が適切に機能しない場合には、免疫系は、自分の身体の細胞と異質（外来）細胞とを区別するその能力を失う。抗核抗体は、ＳＬＥを有するヒトにおいて産生される自己抗体（自分の身体の細胞と戦う抗体）である。それらは、ＳＬＥを有する患者の血液中によく現れる。
【００１４】
研究によって、一部のヒトは、ＳＬＥになる傾向を受け継ぎ得ることが示唆されており、新たな調査は、ＳＬＥの新たな患者は、１人が既にこの疾患を有している家族中でよりよく見られるということを示唆している。しかし、ＳＬＥが、親から子へ直接的に受け継がれるということを支持する証拠はない。妊娠可能な時期（１８〜４５歳）の女性は、男性よりも８〜１０倍ＳＬＥにかかる可能性が高く、子供及び高齢者もまた、この疾患にかかり得る。
【００１５】
ＳＬＥは、予測不可能であり、二人として、この疾患の全く同じ徴候を有するものはいない。医師が、ＳＬＥを有するヒトと他の結合組織疾患を有するヒトとを区別するのに役立つ１１の判定基準がある。ヒトが、次の１１の判定基準の中の４つ以上を示す場合には、そのヒトは、ＳＬＥ診断の必要条件を満たす。
【００１６】
１．頬部発疹−頬及び鼻筋にわたる蝶形発疹；
２．円板状発疹−顔、首及び胸上の鱗状、円板状の痛む所；
３．漿膜炎−痛み及び息切れを引き起こす、心臓、肺、腹部の周りの内膜の炎症；
４．光線過敏症−日光に対する異常反応としての皮膚発疹；
５．舌、口、又は鼻中の痛む所又は潰瘍；
６．関節炎；
７．腎臓障害−尿中の持続性タンパク質又は細胞嚢胞；
８．発作及び精神病などの中枢神経系の問題；
９．低白血球数、低リンパ球数、低血小板数又は溶血性貧血などの血液の問題；
１０．免疫系の問題（免疫機能障害／調節不全）−血液中の二本鎖ＤＮＡ、Ｓｍ抗原又はリン脂質に対する異常な自己抗体の存在；
１１．血液中の異常な抗核抗体の存在。
【００１７】
ＳＬＥのその他の症状／徴候として、炎症性の肺の問題、リンパ節腫脹、発熱、嘔気、嘔吐、下痢、腺の肥大、食欲不振、冷気に対する感受性（レイノー現象）、体重減少及び脱毛が挙げられる。
【００１８】
ＳＬＥと関連する多数の病状、状態及び／又は徴候にもかかわらず、ヒトがこの疾患を有するかどうかを決定する単一の兆候及び症状の組がないので、診断することが困難である。ＳＬＥを診断できる単一の試験はない。ＳＬＥを診断するために使用されるいくつかの試験として、腎臓の問題を検出するための尿検査、血液中の補体タンパク質の量を測定するための試験、血液疾患を検出するための全血球計算及び血液中の抗核抗体を検出するためのＡＮＡ試験が挙げられる。さらに、肺及び心臓の問題を調べるために、Ｘ線を指示することができる。
【００１９】
用語「有効」とは、文脈内で、意図される効果を生じる、期間に対しての化合物、組成物又は成分の量を意味する（治療される、又は発生する可能性が低減される病状、状態又は徴候に応じて極めて大幅に変わり得る）。２つ以上の化合物が投与される（同時投与）、又は１つの成分が使用される場合には、化合物又は成分は、所望の又は意図される効果、多くの場合において、好ましい治療結果をもたらすのに有効な量で使用される。
【００２０】
用語「治療」又は「治療する」は、有益な又は所望の結果、好ましくは臨床結果を得るための方法を述べるために使用される。本発明の目的として、有益な又は所望の臨床結果は、それらに限定されないが、次のうちの１以上を含む：１つ以上の症状の軽減、疾患の広がりの減少又は阻害、疾患の安定可（すなわち、悪化しない）状態、疾患の蔓延の可能性の阻害、防止又は低減、疾患の発現又は再発の阻害又は可能性の低減、「再燃」の発現の可能性の低下、遅延、阻害又は低減、病状の改善、寛解のもたらし（部分又は完全を問わず）、疾患及び／又は症状の発生率の低下、免疫若しくは腎機能の安定化（すなわち、悪化しないこと）又は免疫若しくは腎機能の改善。
【００２１】
「再燃」とは、特定の組織における活性、通常は炎症活性の増大を指す。ＳＬＥの「治療」は、ＳＬＥの症状が存在しない場合に施されてもよく、このような治療（「治療」の定義が示すように）は、再燃の発生率又は可能性を低減させる。また、皮膚発疹（頬及び円板状のもの）、関節炎、漿膜炎（心臓、肺、腹部の周りの内膜の炎症）、痛む所（口、鼻及び舌）、免疫機能障害／調節不全、中枢神経系の問題（精神病、発作及び脳卒中など）、血液の問題（低白血球数、低血小板数又は貧血など）、血液中の抗核抗体の存在及び腎臓疾患／機能障害（特に、ＳＬＥ関連腎炎）などの、ＳＬＥ又はいずれの関連病状若しくは状態の、いずれの態様の病理学的帰結の低減も、「治療」に包含される。
【００２２】
ＩＴＰの場合には、本発明の化合物は、ＩＴＰを治療又は阻害、特に出血、皮膚上の赤い斑点、口の膜の赤い斑点、紫色の口の膜の領域、鼻出血、歯肉出血、消化管出血、尿出血及び脳出血の症状を低減又は阻害するために、有効な量で投与できる。これらの症状の１つ以上の低減は、ＩＴＰの治療における成功の尺度である。さらに、ＩＴＰの場合には、治療の成功によって血小板数の増加が見られる。
【００２３】
「ＳＬＥ再燃」とは、本明細書において、ＳＬＥを有する患者において起こる再燃（すなわち、急性臨床事象）を指すために使用される。ＳＬＥ再燃は、それらに限定されないが、腎臓、脳、肺、心臓、肝臓、結合組織及び皮膚などの種々の主要な臓器であり得る。再燃は、ＳＬＥによって影響を受けることがあるすべての組織における活性を含み得る。寛解は、狼瘡症状がほとんど又は全くない期間を指すために使用される用語である。
【００２４】
ＳＬＥを有する個体における腎再燃の「発生率の低減」とは、個体における腎再燃の重篤度の低減（例えば、高用量コルチコステロイド及び／又はシクロホスファミドなどの、この状態のために通常使用される他の薬物の必要性及び／又は量（例えば、それの摂取）の低減を含み得る）、期間及び／又は頻度の低減（治療を受けていないものと比較しての遅延又は腎再燃までの時間の増大など）のいずれも意味する。当業者によって理解されるように、個体は、治療に対するその反応において異なるかもしれず、そのため、例えば、「個体において腎再燃の発生率を低減する方法」は、その特定の個体において、そのような投与がそのような発生率の低減を引き起こす可能性が高いであろうという妥当な予想に基づいて、本明細書に記載される複合体を投与することをもたらす。
【００２５】
用語「免疫性血小板減少症紫斑病」又は「ＩＴＰ」は、本明細書を通じて、病原性血小板特異的抗体によって媒介される血小板クリアランスを特徴とする自己免疫疾患を述べるために使用される。この疾患は、血小板の減少を特徴とし、これは、出血又は挫傷による目に見える皮膚の染みを引き起こす。症状として、次のものを挙げることができる：出血、皮膚上の赤い斑点、口の膜の赤い斑点、紫色の口の膜の領域、鼻出血、歯肉出血、消化管出血、尿出血及び脳出血。免疫性血小板減少症紫斑病（ＩＴＰ）は、循環血小板数の減少（血小板減少症）が、出血傾向、あざができやすいこと（紫斑病）、又は毛細血管から皮膚及び粘膜への血液溢出（点状出血）として現れる臨床症候群である。
【００２６】
ＩＴＰを有するヒトでは、血小板は、血小板膜抗原に対する自己抗体で被覆されており、脾臓血球貯留、及び単核マクロファージによる食作用をもたらす。結果として生じる循環血液中の血小板の寿命短縮は、骨髄巨核球による血小板産生の増加によって不完全にしか補償されず、血小板数の減少をもたらす。
【００２７】
ＩＴＰの診断を確かめるために、白血病、骨髄癆性骨髄浸潤、脊髄形成異常症、再生不良性貧血又は薬物有害反応などの血小板減少の他の原因が除かれる。血小板の凝集による偽性血小板減少症も、診断上考慮される。ＩＴＰの診断を確かめる単一の検査結果又は臨床所見はなく、それは除外診断である。
【００２８】
病態生理学：異常な自己抗体（通常は１つ以上の血小板膜糖タンパク質（ＧＰ）に対して特異性を有する免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ））は、循環血小板膜と結合する。自己抗体によって被覆された血小板は、限定ではないが、主に脾臓においてマクロファージによるＦｃ受容体を介した食作用を誘発する。脾臓は、血小板自己抗体が、白髄において形成されるからだけでなく、赤髄中のマクロファージが、免疫グロブリンによって被覆された血小板を破壊することからも、ＩＴＰの病態生理学において重要な臓器である。
【００２９】
骨髄巨核球が、増産して正常な数の循環血小板を維持できない場合には、血小板減少症及び紫斑病が生じる。血小板産生障害は、トロンボポエチンの代償性増加の不全及び巨核球アポトーシスが原因である。
【００３０】
米国では、慢性ＩＴＰの年間発生率は、１００，０００人あたり５．８〜６．６件であると推定されるが、これらのデータは、大集団を基にした調査から得たものではない。急性ＩＴＰのほとんどの患者は、特に小児では、軽度で自己限定的であり、治療を受けていない場合がある。したがって、急性ＩＴＰの推定される発生率は調べることが難しく、この疾患の規模を少なく述べていると思われる。
【００３１】
長期の罹病率及び死亡率の一番の原因は、出血である。ＩＴＰと関連する最も多い死因は、血小板数が１０×１０9／Ｌ（＜１０×１０3／ｍＬ）未満の患者での自然又は偶発性外傷誘発性頭蓋内出血である。この状況は、患者の１％未満で起こる。
【００３２】
慢性治療抵抗性ＩＴＰを有する患者において血小板数を安全な範囲に維持するために、コルチコステロイド、その他の免疫抑制薬の長期投薬又は脾臓摘出が必要であり得る。この疾患を有する患者では、罹病率及び死亡率は、治療と関連し、コルチコステロイドを用いる治療又は脾臓摘出の合併症を反映し得る。
【００３３】
小児では、有病率は、男児及び女児の間で同じである。成人では、女性は、男性の約３倍の罹患率である。小児は、どの年齢でも罹患する可能性はあるが、小児における有病率のピークは、３〜５歳である。成人は、どの年齢でも罹患する可能性はあるが、ほとんどの場合、３０〜４０歳の女性において診断される。６０歳を超える高齢の患者における発病は珍しく、血小板減少症のその他の原因を調べるのが当然とされる。これらの患者における最もあり得る原因は、骨髄異形成症候群、急性白血病及び骨髄浸潤（骨髄癆）である。
【００３４】
用語「Ｃ反応性タンパク質」又は「ＣＲＰ」は、本明細書において、その濃度が体内で生じている炎症過程の間に著しく上昇する、急性相反応物の分類のメンバーである２０６個のアミノ酸のタンパク質を述べるのに使用される。損傷を受けた細胞の除去を補助し、疾患に対する体液性反応に影響を及ぼすと考えられている。また、感染に対する初期防御系として、自然免疫において重要な役割を果たすと考えられている。ＣＲＰは、炎症のマーカーとして、そしてＳＬＥ並びに関連病状及び／又は状態の治療のために主に使用される。ＣＲＰは、ヒトにおける原型急性相反応物であり、自然免疫系の成分である。ＣＲＰは、ＳＬＥを有する患者の自己抗体の標的である核抗原、並びに損傷を受けた膜及び微生物抗原と結合する。ＣＲＰは、従来の補体経路を活性化し、ＦｃγＲを介して食細胞と相互作用する。ＣＲＰは、内毒素性ショック及び炎症性肺胞炎などの種々の炎症状態に対して保護的である。内毒素性ショックに対するＣＲＰの保護は、ＦｃγＲを必要とし、マクロファージによるインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）合成のＦｃγＲ依存性誘導と関連する。
【００３５】
ＣＲＰは、自然免疫認識、オプソニン作用、並びに自己免疫及び炎症の調節を提供する急性相血清タンパク質である。ＣＲＰは、ＳＬＥにおけるいくつかの自己抗原、例えば、Ｓｍ及びＲＮＰのＳｍＤｌ及び７０Ｋタンパク質、ヒストン及びクロマチンと結合し得る。ＣＲＰは、補体を活性化でき、ヒト及びマウスにおいてＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩと結合し得る。ＣＲＰは、ヒトの血清中に見られる天然物であり、非毒性であると考えられている。
【００３６】
ＣＲＰは、２０６個のアミノ酸単位を有する。Ｃ反応性タンパク質の全配列は、図１に示される（配列識別番号１）。ＣＲＰのポリペプチド配列はまた、次の受入番号：ＢＣ１２５１３５、ＮＭ０００５６７、ＢＣ０７０２５７、ＢＣ０２０７６６、Ｍ１１８８０、Ｍ１１７２５、Ｘ５６２１４及びＸ５６６９２を有し、その配列のすべては、参照により本明細書に援用される。配列識別番号１はまた、次のように表される：
【００３７】
【化１】
2011522044.tif 000002
（配列識別番号：１）
【００３８】
Ｙ１７５Ｌ突然変異体ＣＲＰは、上記のようなＣＲＰの２０６個のアミノ酸を含有し、チロシン１７５がロイシンによって置換される。
【００３９】
【化２】
2011522044.tif 000003
（配列識別番号：２）
【００４０】
Ｌ１７６Ｅ突然変異体ＣＲＰは、上記のようなＣＲＰの２０６個のアミノ酸を含有し、ロイシン１７６がグルタミン酸によって置換される。全配列は、以下に示される。
【００４１】
【化３】
2011522044.tif 000004
（配列識別番号：３）
【００４２】
本発明の一態様では、Ｙ１７５Ｌ又はＬ１７６Ｅ突然変異体Ｃ反応性タンパク質は、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）又はＳＬＥを有する患者に生じる二次的病状、状態若しくは症状のいずれか１つ以上を治療するために、ヒト患者に送達するための投与製剤として調製され、投与される。
【００４３】
本発明のＹ１７５Ｌ又はＬ１７６Ｅ突然変異体Ｃ反応性タンパク質ポリペプチドは、医薬的に許容可能な添加剤、キャリヤ又は賦形剤と組み合わせて医薬組成物として直接投与されてもよく、あるいは、キャリヤと組み合わせて（本明細書において別に記載されるキャリヤに吸着又は共有結合されて）使用されてもよい。これらは、ＳＬＥ及びその二次的病状、状態及び徴候、特にループス腎炎及びＩＴＰ並びに本明細書において別に記載されるようなものなどの治療において有用である。
【００４４】
用語「キャリヤ」又は「活性キャリヤ」は、本明細書において、本発明のＹ１７５Ｌ又はＬ１７６Ｅ突然変異体Ｃ反応性タンパク質ポリペプチドと組み合わせて使用できるポリマーなどの複合体分子を述べるために本文中で使用される。キャリヤは、オリゴリシン若しくはポリリシン、オリゴアルギニン若しくはポリアルギニン、又はそれらの混合物（通常、約５〜１０００マー以上であるが、約１０〜約１００マーの範囲もある）、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、ポリヒスチジン、ポリアスパラギン、ポリグルタミンなどのオリゴマーポリペプチド、あるいは援用によりその全文が本明細書に組み込まれる、Ｃｈｕｎ  Ｌｉらの米国特許公報２００３／０２３２９６８において別に開示されるようなデンドリマーであり得る。さらなるデンドリマーは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（米国）又はＤｅｎｄｒｉｔｉｃ  Ｎａｎｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（米国，Ｍｉｃｈｉｇａｎ，Ｍｏｕｎｔ  Ｐｌｅａｓｅ）から入手可能である。デンドリマーとしては、多くのものの中でも特に、ＰＡＭＡＭデンドリマー、亜リン酸デンドリマー、ポリプロピレンイミンデンドリマー、リシンデンドリマーを挙げることができる。また、デンドリマーは、カスケード分子とも呼ばれ、コア、通常は炭素コアから出る多数の分岐を有するポリマーである。これらのデンドリマーの多くは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ又はＤｅｎｄｒｉｔｉｃ  Ｎａｎｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから市販されている。
【００４５】
タンパク質又はポリペプチドを結合するその他の方法として、適した連結基の吸着又は共有結合による粒子表面の修飾が挙げられ、続いて連結基にタンパク質が結合され得る。更なるキャリヤの例として、特に、ポリエチレングリコール（約１００〜約２０００の範囲の平均分子量を有する）、ポリエチレングリコールと同様の分子量のポリエチレングリコール共（ｃｏ−）ポリプロピレングリコール共重合体（ランダム又はブロック共重合体）、アルブミン（好ましくは、ヒト治療のためのヒト血清アルブミン）、コラーゲン（好ましくは、ヒト組み換えコラーゲン）、ゼラチン、デキストラン（シクロデキストリンなど）、アルギネート、ポリラクチド／グリコリド、ポリヒドロキシブチレート、ポリビニルアルコール、ポリ酸無水物ミクロスフェア及びリポソームが挙げられる。当業者は、当技術分野で周知の技術及び方法を用いて、本治療用ポリペプチドをキャリヤと複合体化又は結合する方法を容易に分かるであろう。
【００４６】
用語「同時投与」又は「併用療法」は、ＳＬＥ、関連病状、状態又は症状を治療するために、有効量の少なくとも２つの活性化合物が同時に使用される治療を述べるために使用される。用語同時投与は、好ましくは、同時に患者へ２つの活性化合物を投与することを含むが、個々の化合物の有効量が同時に患者中に存在すれば、化合物が患者に同時に投与される必要はない。
【００４７】
種々の実施形態によれば、本発明のＹ１７５Ｌ又はＬ１７６Ｅ突然変異体Ｃ反応性タンパク質ポリペプチド化合物を、治療又は予防／阻害のために、医薬組成物の形態で使用できる。この医薬組成物は、本明細書で別に記載される活性キャリヤ、特に、ポリペプチドキャリヤと任意で組み合わされる、上記で開示される突然変異体ポリペプチドを含む。別に開示されるＣＲＰ突然変異体の活性代謝物も使用できる。例えば、医薬組成物の実施形態は、Ｙ１７５Ｌ及び／又はＬ１７６Ｅ突然変異体ＣＲＰの混合物及びＣＲＰの代謝産物を含み得る。経口投与形態は、固体、半固体及び液体から選択される形態にし得る。
【００４８】
医薬組成物はまた、医薬的に許容可能な賦形剤、添加剤又は不活性キャリヤ（本明細書での活性ポリペプチドと複合体化されている活性キャリヤと区別できるもの）も含み得る。医薬的に許容可能な賦形剤、添加剤又は不活性キャリヤは、固体、半固体及び液体から選択される形態にし得る。医薬的に許容可能な賦形剤又は添加剤は、デンプン、結晶セルロース、デンプングリコール酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルポリピロリドン、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、スクロース、ゼラチン、ケイ酸、ポリエチレングリコール、水、アルコール、プロピレングリコール、植物油、コーンオイル、ピーナッツオイル、オリーブオイル、界面活性剤、滑沢剤、崩壊剤、防腐剤、香料添加剤、色素剤及びその他の従来の添加剤から選択できる。医薬組成物は、活性物質を医薬的に許容可能な賦形剤又は添加剤と混合することによって製剤され得る。ポリペプチドキャリヤが使用される場合には、薬剤投与形態の調製において、ポリペプチドをポリペプチドキャリヤと組み合わせ、その後に他の成分と組み合わせることが好ましい。
【００４９】
医薬組成物は、滅菌等張水溶液、丸剤、点滴剤、ペースト、クリーム、噴霧剤（エアロゾルなど）、カプセル剤、錠剤、糖衣錠剤、顆粒剤、坐剤、液体、ローション、懸濁液、乳剤、軟膏、ゲルなどから選択される形態にできる。投与経路は、皮下、静脈内、腸内、非経口、経口、経肺（特に肺疾患治療のため）、口内、経鼻、筋肉内、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、鼻腔内、腹腔内及び局所（特に、特定の皮膚発疹及び皮膚状態のため）から選択できる。
【００５０】
対象又は患者は、例えば、ヒト、家畜などの哺乳類、又はその他の動物から選択できる。対象は、本明細書において別に記載される、ＳＬＥ又はＩＴＰと関連する１つ以上の病状、状態又は症状を有する。
【００５１】
本発明の化合物は、ＳＬＥ、ＳＬＥと関連するいずれか１つ以上の病状又は状態、例えば、漿膜炎、頬部発疹（頬及び鼻筋にわたる発疹）、円板状発疹（顔、首及び胸の鱗状、円板状の痛む所）、痛む所又は潰瘍（舌上、口若しくは鼻中の）、関節炎、溶血性貧血、
低リンパ球数、低血小板数、血液中の抗核抗体の存在、皮膚病変、ＣＮＳ作用（記憶喪失、発作、脳卒中及び精神病など）、肺の症状／作用（炎症（胸膜炎）、慢性肺炎、慢性びまん性間質性肺疾患及び肺の瘢痕など）、脱毛、レイノー症候群、ループス腎炎及び光に対する感受性、疲労、発熱、嘔気、嘔吐、下痢、腺の肥大、食欲不振、冷気に対する感受性（レイノー現象）及び体重減少を治療又はその可能性を低減するのに有効な量で投与できる。ＩＴＰの場合には、薬剤投与形態の本発明の化合物を、ＩＴＰを治療又は阻害する量で、特に出血、皮膚上の赤い斑点、口の膜の赤い斑点、紫色の口の膜の領域、鼻出血、歯肉出血、消化管出血、尿出血及び脳出血の症状を低減又は阻害する量で投与できる。これらのそれぞれは、ＩＴＰの治療における成功の尺度である。さらに、ＩＴＰの場合には、治療の成功によって血小板数の増加が見られる。
【００５２】
当業者は、これらに限定されないが、動物対象、年齢、性別、体重、患者における病態又は病状の部位、これまでの病歴、その他の医薬などのいくつかの可変要素を考慮することによって、治療及び／又は予防／可能性の低減、又は阻害との関連の中で、本発明の１つ以上の化合物の有効量を容易に決定できるであろう。
【００５３】
例えば、ヒト患者のための化合物の用量は、有効量であり、わずか５０〜１００μｇから少なくとも約５００ｍｇ〜１グラム以上の範囲とでき、薬物の送達及び治療される病状又は状態と合致する方法で投与できる。経口投与の場合には、活性物質は、通常、毎日１〜４回以上投与される。経皮パッチ又はその他の局所投与は、活性物質の吸収率及び患者の皮膚への送達に応じて、１日に１回以上又は１日に１回より少ない頻度で薬物を連続して投与できる。もちろん、非経口投与が好ましい治療選択肢に相当する場合には、活性物質を投与するために筋肉内投与又は遅いＩＶ点滴静注を用いてもよい。ヒト患者に１日あたり投与されるＣＲＰの量は、好ましくは、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ以上、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約７．５ｍｇ／ｋｇ、約０．２５ｍｇ／ｋｇ〜約６ｍｇ／ｋｇ、約１．２５〜約５．７ｍｇ／ｋｇの範囲である。
【００５４】
本発明の化合物の用量は、ＳＬＥの発生に先立って、ＳＬＥ再燃の際に、又は予想される再燃の前の寛解の間に投与されてもよい。例えば、用量は、漿膜炎、頬部発疹（頬及び鼻筋にわたる発疹）、円板状発疹（顔、首及び胸の鱗状、円板状の痛む所）、痛む所又は潰瘍（舌上、口若しくは鼻中）、関節炎、溶血性貧血、低リンパ球数、低血小板数、血液中の抗核抗体の存在、皮膚病変、ＣＮＳ作用（記憶喪失、発作、脳卒中及び精神病など）、慢性肺炎及び肺の瘢痕などの肺作用、脱毛、レイノー症候群、ループス腎炎、光に対する感受性、疲労、発熱、嘔気、嘔吐、下痢、腺の肥大、食欲不振、冷気に対する感受性（レイノー現象）、体重減少及び脱毛などの、これらの病状若しくは状態のいずれか１つ以上を治療する目的で、並びに／又はそれらが生じ、若しくは現れる可能性を低減する目的で投与されてもよい。用量は、ＳＬＥを予測又は再燃を予測して以外に、診断に先立って投与してもよい。用量はまた、再燃の間に投与されてその重篤度を低減することが好ましい。ＩＴＰの場合には、最初にＩＴＰと診断された時点、又は、出血、皮膚上の赤い斑点、口の膜の赤い斑点、紫色の口の膜の領域、鼻出血、歯肉出血、消化管出血、尿出血及び脳出血の症状などのＩＴＰ症状の最初の徴候が見られた時点で化合物が投与され、これらの症状のうち１つ以上の低減が、成功の尺度である。さらに、治療は、血小板数減少の最初の徴候の時点で、本発明の化合物の投与を含めることができる。本化合物を使用するＩＴＰの場合には、治療の成功によって血小板数の増加が見られる。
【００５５】
本発明の別の実施形態では、薬剤投与形態での本発明のＹ１７５Ｌ及び／又はＬ１７６Ｅ突然変異体ＣＲＰ化合物（単独、又は本明細書において別に記載される活性キャリヤと組み合わせて）を、全身性紅斑性狼瘡又は免疫性血小板減少症紫斑病（ＩＴＰ）の治療において従来使用される少なくとも１つのさらなる薬剤の有効量と同時投与してもよい。これらの薬剤としては、例えば、特に、ＣＯＸ−２阻害剤及びサリチル酸（アスピリン、トルメチン、アスピリン、ジクロフェナク、エトドラック、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラック、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピロキシカム、セレコキシブ、スリンダック等）などの従来のＮＳＡＩＤを含む非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、抗マラリア薬（ヒドロキシクロロキン、キナクリンなど）、コルチコステロイド（プレドニゾン（デルタゾン）、ベタメタゾン（セレストン）、酢酸メチルプレドニゾロン（メドロール、デポ−メドロール）、ヒドロコルチゾン（コルテフ、ハイドロコートン）及びデキサメタゾン（デカドロン、ヘキサドロール）など）、並びに免疫抑制剤（メトトレキサート（リウマトレックス）、シクロホスファミド（シトキサン）、アザチオプリン（イムラン）及びミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ、そしてセルセプト）等）などを挙げることができる。ＩＴＰの場合には、治療は、コルチコステロイド（上記の通り）又は免疫抑制剤を含むことができる。一つの実施形態では、ＩＴＰ治療に使用される好ましい薬剤として、デキサメタゾン又はプレドニゾンが挙げられる。
【００５６】
本発明はまた、患者において自己抗体産生を抑制する方法に関し、この方法は、Ｙ１７５Ｌ及び／又はＬ１７６Ｅ突然変異体ＣＲＰ化合物の有効量を、医薬的に許容可能な添加剤、賦形剤又はキャリヤと組み合わせ、任意で活性キャリヤと組み合わせて患者に投与することを含む。
【００５７】
ＦｃγＲとのＣＲＰ相互作用についての結晶構造は解明されている（６）。ＣＲＰとＦｃγＲとの間の接触残基は同定されており、少数の突然変異体ＣＲＰ分子は、ヒトＦｃγＲとの結合について表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して試験されている。チロシン１７５がロイシンによって置換されている（Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰ）これらの突然変異体の１つは、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩとの結合が減少しているが、ＦｃγＲＩとの結合は保持している（表１）。Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰはまた、補体を活性化する能力を失っている（７）。
【００５８】
【表１】
2011522044.tif 000005
【００５９】
本発明者らはまた、Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰを、ヒト単球によるサイトカイン合成の誘導について試験した（図２）。末梢血単球は、突然変異体タンパク質と共に２４時間培養した後に数種のサイトカインを放出した。精製されたヒトＣＲＰに対するサイトカイン反応は、かなり低かった。サイトカインは、抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−１０及びＩＬ−１ＲＡを含んでいたが、ＦｃγＲＩの刺激と関連するその他のサイトカイン（ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１ｂ、ＴＮＦ−ａ）も含んでいた。夾雑エンドトキシンのあらゆる寄与を防ぐために、培養物にポリミキシンＢ（１０μｇ／ｍｌ）を加えた。突然変異体タンパク質の活性の増大についての１つの説明は、それが阻害性受容体であるＦｃγＲＩＩｂと結合できないことであろう（２）。Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰ及びＦｃｇＲＩＩｂの直接結合実験は行っていないが、細胞外領域でのＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩｂの配列は、ほぼ同一である。
【００６０】
Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰが選択的抗炎症活性の候補であるので、本発明者らは、マウスマクロファージとのその結合を試験した。結果は、Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰは、マウスマクロファージ上のＦｃγＲＩとの結合が増加し、ＦｃγＲＩＩｂと通常に結合することを示している（図３）。したがって、Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰの分析は、ヒト及びマウスの両方において、ＦｃγＲＩＩと比べてＦｃγＲＩとの相互作用の増大を示す。本発明者らは、Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰは、自己免疫及び炎症性疾患の抑制において天然ＣＲＰよりも有効であろうと予測する。インビボ検査によるこの立証は、ＳＰＲの精製受容体との結合分析を用いる有用な突然変異体のスクリーニングの方法を支持するであろう。
【００６１】
実験的取り組み
目的１。研究は、Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰを特徴とする突然変異体ＣＲＰは、自己免疫及び免疫複合体疾患モデルにおけるより大きな有効性を有し、有害な心血管作用の可能性は少ないであろうと予測する。治療上有用なＣＲＰ突然変異体の開発は、治療薬としてのＣＲＰにおける商業的関心を増大させるであろう。マウスＩＴＰモデルにおいて試験するために、高度に精製された低エンドトキシンＹ１７５Ｌ  ＣＲＰの十分な量を調製する。このモデルは、マクロファージ上のＦｃγＲＩとのＣＲＰ結合によって開始され、迅速な結果を提供するので選択された。突然変異体は、このモデルにおいて、野生型ＣＲＰよりもより有効なものとなると予測される。
【００６２】
実験計画は、過去の結果に基づく。マウス脾臓細胞又はインターフェロン（ＩＦＮ）−γ処理された骨髄マクロファージ（ＢＭＭ）を、インビトロで漸増濃度（５０〜４００μｇ／ｍｌ）のＣＲＰ又はＹ１７５Ｌ  ＣＲＰで処理し、洗浄し、未処置のレシピエントに注入する。２４時間後、レシピエントにおいて、ラットｍＡｂ（抗ＣＤ４１）の注射によってマウス血小板に血小板減少症が誘発される。抗血小板抗体の注射の２４時間後に血液中の血小板を計数する。マクロファージの移入無しで、又は対照タンパク質（ＢＳＡ）で処理されたマクロファージの使用で、２４時間の時点で血小板数は最小となり、血小板減少症が観察される。この血小板減少症は、ＣＲＰ処理した、又は静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩｇ）処理したマクロファージの移入によって防ぐことができる（図４）。抗血小板抗体の注射１時間前におけるＣＲＰの静脈内への直接注射も、マウスを実験的ＩＴＰから保護する。高用量のＣＲＰを用いた場合でさえ、受身伝達も、直接注射も、血小板数の完全な回復は提供しない。Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰは、未修飾ＣＲＰよりも低濃度でより有効であろうと考えられる。残存の血小板クリアランスが、Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰを使用して治療されるであろう可能性がある。
【００６３】
心血管疾患におけるこの突然変異体の有用性を評価するには、さらなる研究が必要とされる。ループス腎炎が、提案されるＣＲＰの治療への応用であるので、本発明者らは、ループス（狼瘡）の関連で見られる心血管疾患に焦点を当てる計画である。ＳＬＥを有する患者及びマウスは、アテローム性動脈硬化症及び冠動脈脈管炎が増大した。本発明者らはまた、ＭＲＬ／ｌｐｒ  ＳＬＥマウスモデルにおいて、短期間高用量ＣＲＰ治療及び長期間低用量ＣＲＰを受けることの効果を研究することも計画している。これらのマウスは、高脂質食を与えられた場合にアテローム発生及び心筋梗塞が増大した。Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰは、これらのモデルにおいて試験されるが、これはＳＴＣ  Ｇａｐ基金の１年間では完了しないであろう。
【００６４】
目的２。本発明者らはまた、ヒト単球を使用して２つのインビトロモデルを研究する。第１のモデルでは、ヒト単球は、細菌単独と比較して、細菌（肺炎球菌）と結合しているＣＲＰと共に培養した後に炎症性サイトカイン（ＴＮＦ−α及びＩＬ−１）放出の増大を示す（４）。この反応は、ＦｃγＲＩＩａ依存性である。第２のモデルでは、リガンドのない高濃度のＣＲＰに２４時間曝された単球は、炎症性刺激に対して無応答性となる。この無応答性は、人間でのマウスにおける抑制性マクロファージの誘発に対応するものであると考えられる。しかし、関与する受容体は同定されていない。ヒトＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩａ受容体によって使用されるシグナル伝達経路は重複しており、受容体遮断抗体を使用する研究は、確実なものではない。ＦｃγＲＩと結合するがＦｃγＲＩＩａとは結合しないＹ１７５Ｌ突然変異体を、ＦｃγＲＩＩａと結合するがＦｃγＲＩとは結合しない前記Ｌ１７６Ｅ突然変異体と一緒に使用することによって、この経路を明確にすることが可能である。成功すれば、これらの研究は、マウスモデルに直接対応するヒトのシステムを確立する。これらの知見は、狼瘡のマウスモデルにおけるＣＲＰの効果が、ヒト疾患の治療につながるという証拠を提供することによって、本発明者らの技術の市場性を増大する。
【００６５】
実験計画は、ヒト対象から末梢血単球を単離することである。次いで、本発明者らは、ＣＲＰ結合に影響を及ぼすので、ＦｃγＲＩＩａの２つの対立形質の形態（Ｈｉｓ又はＡｒｇｌ３１）のどちらを、各個体が発現するのかを明らかにする。細胞を、先に述べた肺炎球菌と結合しているＣＲＰで、又は、そのアテローム発生に対する関連性のために本発明者らが開発するモデルである酸化低密度リポタンパク質（ｏｘＬＤＬ）で刺激する。単球サイトカイン応答を、２４時間後に測定する。肺炎球菌と結合しているＣＲＰは、炎症性サイトカイン、ＴＮＦ−α及びＩＬ−１ｂの放出を増大する。本発明者らは、ＦｃｇＲＩＩａと不十分にしか結合しないＹ１７５Ｌ  ＣＲＰは、ＦｃγＲＩＩａと結合しないためにこれらのサイトカインを誘導せず、そしてＦｃγＲＩと不十分にしか結合しないＬ１７６Ｅ  ＣＲＰは、野生型ＣＲＰに相当するか、又はより大きな効果を有すると考える。
【００６６】
第２の実験のセットでは、末梢血単球を、種々の濃度のＣＲＰ、Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰ又はＬ１７６Ｅ  ＣＲＰと共に２０時間培養する。この前培養の後、培養物をリポ多糖類（ＬＰＳ、標準炎症刺激）又は免疫複合体を用いて刺激する。本発明者らは、２０〜２００μｇ／ｍｌの濃度でのＣＲＰの前培養は、ＬＰＳ刺激に対するＴＮＦ−α応答を低減させるが、抗炎症性ＩＬ−１０反応を増大させることを見出した（図５）。本発明者らは、この試験において突然変異体ＣＲＰ分子を比較する。本発明者らは、Ｙ１７５Ｌ  ＣＲＰは、天然ＣＲＰと比較して、無応答性を誘導する同等以上の能力を有し、Ｌ１７６Ｅ  ＣＲＰは、活性が減少すると考える。
【００６７】
総括
本発明は、自己免疫障害、例えばＳＬＥ及び免疫性血小板減少症紫斑病（ＩＴＰ）を治療するための新規生物因子の必要性に向けられる。ＩＴＰは、比較的よくある障害であり、本来、急性又は慢性のいずれでもあり得る。小児期の患者及び一部の成人の患者では、血小板減少症は、ウイルス感染に続いて起こり、ウイルス症候群が消散した後は自己限定性である。慢性ＩＴＰは、ほとんどの病状に関与し、主に女性に見られる。ＩＴＰは、より深刻な全身性疾患であるＳＬＥ発症の前兆であり得る。ＩＴＰはまた、ＡＩＤＳの合併症でもあり、免疫抑制が禁忌であるので治療が困難である。ＩＴＰの従来の治療は、ＳＬＥと同様にコルチコステロイド治療を用いることが多く、それは、骨粗しょう症、白内障形成、糖尿病の悪化又は発症、及び多数のその他の問題などの多くの重度の副作用を有する。ＳＬＥ同様、新しい有効な生物学的方法が有効であることは明らかである。ＳＬＥ及びＩＴＰの両方で、モノクローナル抗体であるリツキシマブは有望であるが、この治療は、抗体形成細胞の免疫系を最大１年間低下させる。ＩＶＩＧ治療は、ＳＬＥ及びＩＴＰにおいて相当な有効性を有する生物学的治療であるが、高価であり、一時的にしか有効でない。これらの関連疾患に対する新しい方法は、全身性副作用の少ない、より直接的で有効な治療を提供する。
【００６８】
これらの実験は、改善された有効性を有すると予想され、副作用を低減する可能性がある有望なＣＲＰ突然変異体を迅速に評価することを補助する。本明細書に記載される研究はまた、有用な突然変異体の予備的確認を、ＳＰＲを使用しての種々のＦｃｇＲとの結合の親和性によって行うことができるという原理の証明を提供する。ヒト単球におけるさらなる研究は、マウスの研究成果のヒトへの転換をさらに支持する。
【００６９】
本明細書において参照又は言及されるすべての特許及び刊行物は、本発明が属する技術分野における当業者のレベルを示し、このような参照される特許又は刊行物はそれぞれ、個別にその全文が参照により本明細書に援用されるか、又はその全文が本明細書に記されるのと同程度に、参照により本明細書に援用される。
【００７０】
本明細書に記載される特定の方法及び組成物は、好ましい実施形態を代表するものであり、例示であって、本発明の範囲の限定を意図しない。その他の目的、態様及び実施形態は、この明細書を検討する当業者に思い浮かぶであろうが、それらは特許請求の範囲によって定められる本発明の趣旨に包含される。本発明の範囲及び趣旨から逸脱することなく、本明細書に開示される本発明に多種多様な置換及び修飾がなされるであろうことは、当業者に容易に理解される。本明細書に例示的に記載される本発明は、本明細書に必須と明確に記載されていないいずれかの要素又は制限なしで、適宜実施できる。本明細書において例示的に記載される方法及び過程は、異なる順序のステップで適宜実施でき、それらは、本明細書において、又は特許請求の範囲において示されるステップの順序に必ずしも限定されない。
【００７１】
使用されている用語及び表現は、限定ではなく説明するために使用され、このような用語及び表現の使用において、示され及び記述されたいずれの特徴の等価物、又はその一部も除外する意図はなく、特許請求の範囲に記載された発明の範囲内で種々の変更が可能であることが認識される。したがって、本発明は、好ましい実施形態及び任意の特徴によって具体的に開示されているが、本明細書において開示される概念の変更及び変形は、当業者によって行われることができ、このような変更及び変形は、特許請求の範囲に定められる本発明の範囲内にあると考えられることは理解されるであろう。
【００７２】
本発明は、本明細書において広く、一般的に記載されている。属の開示の範囲内に入るより狭い種及び亜属の分類はそれぞれ、本発明の一部を同様に形成する。これは、属からいずれかの対象を除去する条件又は否定の限定を伴った本発明の属の記載を含み、除外される事項が本明細書に具体的に列挙されているかどうかを問わない。
【００７３】
さらに、本発明の特徴又は態様が、マーカッシュグループに関して記載される場合には、当業者は、それにより本発明はまた、マーカッシュグループのいずれの個々の要素又は要素のサブグループに関して記載されることを認識するであろう。
【００７４】
参考文献
１．Marnell, L., Mold, C, and Du Clos, T. W. 2005年 C-reactive protein: ligands, receptors and role in inflammation. Clin Immunol 1 17:104-1 11.
２．Rodriguez, W., Mold, C., Kataranovski, M., Hurt, J., Marnell, L.L., and Du Clos, T. W. 2005年 Reversal of ongoing proteinuria in autoimmune mice by treatment with C-reactive protein. Arthritis Rheum 52:642-650.
３．Rodriguez, W., Mold, C., Marnell, L.L., Hutt, J., Silverman, GJ., Tran, D., and Du Clos, T. W. 2006年 Prevention and reversal of nephritis in MRL/lpr mice with a single injection of C- reactive protein. Arthritis Rheum 54:325-335.
４．Mold, C., and Du Clos, T. W. 2006年 C-reactive protein increases cytokine responses to Streptococcus pneumoniae through interactions with Fc gamma receptors. J Immunol 176:7598-7604.
５．Marjon, K.D., L.L. Marnell, C. Mold, and T.W. Du Clos. 2009年 Macrophages activated by C- reactive protein through Fc綵ochRI transfer suppression of immune thrombocytopenia. Journal of Immunology 182:1397-1.
５．Bang, R., L.L. Marnell, C. Mold, MP. Stein, K. Du Clos, C. Chivington-Buck, and T.W.Du Clos. 2005年 Overlap of Human Fc綵ochRI, Fc綵ochRlla, and C1q binding sites in C-reactive protein as determined by site-directed mutagenesis. Journal of Biological Chemistry 280:25095-25102.
６．Lu, J., L. L. Marnell, K.D. Marjon, C. Mold, T.W. Du Clos, and P.D. Sun. 2008年 Structural recognition and functional activation of Fc綵ochR by innate pentraxins. Nature, 456:989-992.
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【手続補正書】
【提出日】平成23年2月4日(2011.2.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７４】
参考文献
１．Marnell, L., Mold, C, and Du Clos, T. W. 2005年 C-reactive protein: ligands, receptors and role in inflammation. Clin Immunol 1 17:104-1 11.
２．Rodriguez, W., Mold, C., Kataranovski, M., Hurt, J., Marnell, L.L., and Du Clos, T. W. 2005年 Reversal of ongoing proteinuria in autoimmune mice by treatment with C-reactive protein. Arthritis Rheum 52:642-650.
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７．Lu, J., L. L. Marnell, K.D. Marjon, C. Mold, T.W. Du Clos, and P.D. Sun. 2008年 Structural recognition and functional activation of FcγR by innate pentraxins. Nature, 456:989-992.
【国際調査報告】
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