(57)【要約】  本願は、特に紅斑性狼瘡の処置に有用な、スフィンゴシン−１−リン酸（Ｓ１Ｐ）に対して活性な式（Ｉ）のオキサジアゾールに基づく化合物を開示する。Ａはフェニルまたは５員もしくは６員のヘテロアリール環であり；Ｂは下式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）の１つから選択される。2011506568.tif 000047
2011506568.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2011506568.tif 000045
［式中、
Ａはフェニルまたは５員もしくは６員のヘテロアリール環であり；
Ｒ１は、ハロゲン、Ｃ（１−３）アルコキシ、Ｃ（１−３）フルオロアルキル、シアノ、Ｃ（１−３）フルオロアルコキシ、Ｃ（１−６）アルキルおよびＣ（３−６）シクロアルキルから独立に選択される２個までの置換基であり；
Ｒ２は水素、ハロゲンまたはＣ（１−４）アルキルであり；
Ｂは以下：
【化２】
2011506568.tif 000046
の１つから選択され；
Ｒ３は水素、Ｃ（１−３）アルキルまたは（ＣＨ２）１−３ＣＯ２Ｈであり；
Ｒ４は水素またはＣ（１−３）アルキルであり；
Ｒ２またはＲ４がアルキルである場合、それは酸素が挿入されていてもよい］
の化合物、またはその薬学上許容される塩。
【請求項２】
Ａがフェニルであり；
Ｒ１が、クロロ、イソプロポキシおよびシアノから独立に選択される２個までの置換基であり；
Ｒ２が水素またはメチルであり；
Ｂが（ａ）であり；
Ｒ３が水素、メチルまたは（ＣＨ２）１−３ＣＯ２Ｈであり；
Ｒ４が水素である、
式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩。
【請求項３】
５−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリル、
［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸、
３−［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸、
４−［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酪酸、
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリル、
［８−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメン−４−イル］酢酸、
３−［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸、
［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸、
６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリル、
［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸、
３−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸、
およびそれらの薬学上許容される塩
から選択される化合物。
【請求項４】
Ｓ１Ｐ１受容体により媒介される症状または障害の処置のための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項５】
症状または障害が、多発性硬化症、自己免疫疾患、慢性炎症疾患、喘息、炎症性神経障害、関節炎、移植、クローン病、潰瘍性大腸炎、紅斑性狼瘡、乾癬、虚血再潅流傷害、固形腫瘍および腫瘍転移、脈管形成に関連する疾患、血管疾患、疼痛症状、急性ウイルス性疾患、炎症性腸症状、インスリン依存性および非インスリン依存性糖尿病である、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
症状が紅斑性狼瘡である、請求項４に記載の使用。
【請求項７】
Ｓ１Ｐ１受容体により媒介される症状または障害の処置において使用するための薬剤の製造のための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項８】
症状または障害が、多発性硬化症、自己免疫疾患、慢性炎症疾患、喘息、炎症性神経障害、関節炎、移植、クローン病、潰瘍性大腸炎、紅斑性狼瘡、乾癬、虚血再潅流傷害、固形腫瘍および腫瘍転移、脈管形成に関連する疾患、血管疾患、疼痛症状、急性ウイルス性疾患、炎症性腸症状、インスリン依存性および非インスリン依存性糖尿病である、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
症状が紅斑性狼瘡である、請求項７に記載の使用。
【請求項１０】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物を含んでなる、医薬組成物。
【請求項１１】
Ｓ１Ｐ１受容体により媒介され得る、ヒトを含む哺乳類における症状または障害の処置方法であって、罹患者に治療上安全かつ有効な量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩を投与することを含んでなる、方法。
【請求項１２】
症状が紅斑性狼瘡である、請求項１１に記載の処置方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
本発明は、薬理活性を有する新規なオキサジアゾール誘導体、それらの製造のための方法、それらを含有する医薬組成物および種々の障害の処置におけるそれらの使用に関する。
スフィンゴシン１−リン酸（Ｓ１Ｐ）は、スフィンゴシンキナーゼによるスフィンゴシンのリン酸化により形成される生物活性脂質性メディエーターであり、血中に高レベルで見られる。それは血小板および肥満細胞などの造血系起源のものを含むいくつかの細胞種により産生および分泌される(Okamoto et al 1998 J Biol Chem 273(42):27104; Sanchez and Hla 2004, J Cell Biochem 92:913)。それは、細胞増殖、分化、運動、血管新生および炎症性細胞および血小板の活性化の調節を含む広範な生物学的作用を有する(Pyne and Pyne 2000, Biochem J. 349:385)。受容体のＧタンパク質共役内皮分化遺伝子ファミリーの一部をなすＳ１Ｐ応答性受容体の５つのサブタイプ、Ｓ１Ｐ１（Ｅｄｇ−１）、Ｓ１Ｐ２（Ｅｄｇ−５）、Ｓ１Ｐ３（Ｅｄｇ−３）、Ｓ１Ｐ４（Ｅｄｇ−６）およびＳ１Ｐ５（Ｅｄｇ−８）が記載されている(Chun et al 2002 Pharmacological Reviews 54:265, Sanchez and Hla 2004 J Cellular Biochemistry, 92:913)。これら５つの受容体は異なるｍＲＮＡ発現を示し、Ｓ１Ｐ１−３が広く発現され、Ｓ１Ｐ４はリンパ組織および造血組織で、そして、Ｓ１Ｐ５は主に脳で、また、程度は低いが脾臓で発現される。それらはＧタンパク質の異なるサブセットを介してシグナルを伝達し、種々の生物学的応答を誘発する(Kluk and Hla 2002 Biochem et Biophysica Acta 1582:72, Sanchez and Hla 2004, J Cellular Biochem 92:913)。
【０００２】
Ｓ１Ｐ１受容体に関して提案されている役割としては、リンパ球の輸送、サイトカイン誘導／抑制、および内皮細胞への作用が挙げられる(Rosen and Goetzl 2005 Nat Rev Immunol. 5:560)。Ｓ１Ｐ１受容体のアゴニストが、ＭＳの実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデルを含むいくつかの自己免疫および移植動物モデルで、誘導された疾患の重篤度を軽減するために使用されている(Brinkman et al 2003 JBC 277:21453; Fujino et al 2003 J Pharmacol Exp Ther 305:70; Webb et al 2004 J Neuroimmunol 153:108; Rausch et al 2004 J Magn Reson Imaging 20:16)。この活性はリンパ系のリンパ球循環に対するＳ１Ｐ１アゴニストの作用により媒介されることが報告されている。Ｓ１Ｐ１アゴニストによる処置は、動物モデルにおける可逆的末梢リンパ球減少症(lymphopoenia)を含む、リンパ節などの二次的リンパ器官内でのリンパ球の隔離をもたらす(Chiba et al 1998, J Immunology 160:5037, Forrest et al 2004 J Pharmacol Exp Ther 309:758; Sanna et al 2004 JBC 279:13839)。アゴニストに関して発表されているデータは、化合物処置が、インターナリゼーションを介した細胞表面からのＳ１Ｐ１受容体の消失を誘導し(Graler and Goetzl 2004 FASEB J 18:551; Matloubian et al 2004 Nature 427:355; Jo et al 2005 Chem Biol 12:703)、リンパ節から血流中へ戻るＴ細胞の移動の減少に寄与するのは免疫細胞に対するこのＳ１Ｐ１受容体の減少であることを示唆している。
【０００３】
Ｓ１Ｐ１遺伝子の欠損は胎児致死をもたらす。リンパ球の移動および輸送におけるＳ１Ｐ１受容体の役割を調べるための実験には、照射された野生型マウスへの標識Ｓ１Ｐ１欠陥Ｔ細胞の養子免疫伝達が含まれた。これらの細胞は、二次的リンパ器官からの移出の減少を示した(Matloubian et al 2004 Nature 427:355)。
【０００４】
Ｓ１Ｐ１はまた、内皮細胞接合の調節における役割も記載されている(Allende et al 2003 102:3665, Blood Singelton et al 2005 FASEB J 19:1646)。この内皮作用について、Ｓ１Ｐ１アゴニストが、免疫障害の調節における役割に寄与している可能性がある単離されたリンパ節に対して作用を有することが報告されている。Ｓ１Ｐ１アゴニストは、リンパ節を排液し、リンパ球移出を防ぐリンパ洞の内皮間質「ゲート」の閉鎖を引き起こした(Wei wt al 2005, Nat. Immunology 6:1228)。
【０００５】
免疫抑制化合物ＦＴＹ７２０（ＪＰ１１０８００２６−Ａ）は、動物およびヒトにおいて循環リンパ球を減少させ、免疫障害の動物モデルにおいて疾患調節活性を有し、緩解中の多発性硬化症の再発において緩解率を引き下げることが示されている(Brinkman et al 2002 JBC 277:21453, Mandala et al 2002 Science 296:346, Fujino et al 2003 J Phrmacology and Experimental Therapeutics 305:45658, Brinkman et al 2004 American J Transplantation 4:1019, Webb et al 2004 J Neuroimmunology 153:108, Morris et al 2005 EurJ Immunol 35:3570, Chiba 2005 Phrmacology and Therapeutics 108:308, Kahan et al 2003, Transplantation 76:1079, Kappos et al 2006 New Eng J Medicine 335:1124)。この化合物は、in vivoでスフィンゴシンキナーゼによりリン酸化されて、Ｓ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ３、Ｓ１Ｐ４およびＳ１Ｐ５受容体においてアゴニスト活性を有する分子を与えるプロドラッグである。臨床試験では、ＦＴＹ７２０による処置が、処置して最初の２４時間に徐脈をもたらすことが示されている(Kappos et al 2006 New Eng J Medicine 335:1124)。この徐脈は、いくつかの細胞に基づく実験および動物実験に基づけば、Ｓ１Ｐ３受容体における促進作用によるものであると思われる。これらには、野生型マウスとは違ってＦＴＹ７２０投与の後に徐脈を示さないＳ１Ｐ３ノックアウト動物の使用およびＳ１Ｐ１選択的化合物の使用が含まれる(Hale et al 2004 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 14:3501, Sanna et al 2004 JBC 279:13839, Koyrakh et al 2005 American J Transplantation 5:529)。
【０００６】
ゆえに、低い徐脈誘発傾向を示すと思われるＳ１Ｐ３を超える選択性を備えたＳ１Ｐ１受容体アゴニスト化合物の必要がある。
【０００７】
以下の特許出願にはＳ１Ｐ１アゴニストとしてのオキサジアゾール誘導体が記載されている：ＷＯ０３／１０５７７１、ＷＯ０５／０５８８４８、ＷＯ０６／０４７１９５、ＷＯ０６／１００６３３、ＷＯ０６／１１５１８８、ＷＯ０６／１３１３３６、ＷＯ０７／０２４９２２およびＷＯ０７／１１６８６６。
【０００８】
以下の特許出願にはＳ１Ｐ受容体アゴニストとしてのテトラヒドロイソキノリニル−オキサジアゾール誘導体が記載されている：ＷＯ０６／０６４７５７、ＷＯ０６／００１４６３、ＷＯ０４／１１３３３０。
【発明の開示】
【０００９】
今般、Ｓ１Ｐ１受容体のアゴニストとなる構造的に新規な化合物種が見つかった。
【００１０】
よって、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩：
【化１】
2011506568.tif 000003
［式中、
Ａはフェニルまたは５員もしくは６員のヘテロアリール環であり；
Ｒ１は、ハロゲン、Ｃ（１−３）アルコキシ、Ｃ（１−３）フルオロアルキル、シアノ、Ｃ（１−３）フルオロアルコキシ、Ｃ（１−６）アルキルおよびＣ（３−６）シクロアルキルから独立に選択される２個までの置換基であり；
Ｒ２は水素、ハロゲンまたはＣ（１−４）アルキルであり；
Ｂは以下：
【化２】
2011506568.tif 000004
の１つから選択され；
Ｒ３は水素、Ｃ（１−３）アルキルまたは（ＣＨ２）１−３ＣＯ２Ｈであり；
Ｒ４は水素またはＣ（１−３）アルキルであり；
Ｒ２またはＲ４がアルキルである場合、それは酸素が挿入されていてもよい］
を提供する。
【００１１】
本発明の一つの実施態様では、
Ａはフェニルであり；かつ／または
Ｒ１は、クロロ、イソプロポキシおよびシアノから独立に選択される２個までの置換基であり；かつ／または
Ｒ２は水素であり；かつ／または
Ｂは（ａ）であり；かつ／または
Ｒ３は水素、メチルまたは（ＣＨ２）１−３ＣＯ２Ｈであり；かつ／または
Ｒ４は水素である。
【００１２】
Ａはフェニルであり；
Ｒ１は、クロロ、イソプロポキシおよびシアノから独立に選択される２個までの置換基であり；
Ｒ２は水素またはメチルであり；
Ｂは（ａ）であり；
Ｒ３は水素、メチルまたは（ＣＨ２）１−３ＣＯ２Ｈであり；
であり；
Ｒ４は水素である。
【００１３】
一つの実施態様では、Ａはフェニルである。別の実施態様では、Ａは３，４−二置換フェニルである。
【００１４】
一つの実施態様では、Ｒ１は２個の置換基であり、その一方はＣ（１−３）アルコキシであり、他方はハロゲンまたはシアノから選択される。別の実施態様では、Ｒ１は２個の置換基であり、その一方はイソプロポキシであり、他方はクロロまたはシアノから選択される。別の実施態様では、Ｒ１はクロロ、イソプロポキシおよびシアノから選択される２個の置換基である。別の実施態様では、Ｒ１はクロロおよびイソプロポキシである。さらなる実施態様では、Ａがフェニルである場合、Ｒ１は３位がクロロであり、４位がイソプロポキシである。別の実施態様では、Ｒ１はイソプロポキシおよびシアノである。さらなる実施態様では、Ａがフェニルである場合、Ｒ１は３位がシアノであり、４位がイソプロポキシである。
【００１５】
一つの実施態様では、Ｒ２は水素またはメチルである。
一つの実施態様では、Ｂは（ａ）である。
一つの実施態様では、Ｒ３は水素、メチルまたは（ＣＨ２）１−３ＣＯ２Ｈである。
一つの実施態様では、Ｒ４は水素である。
【００１６】
基または基の一部（例えば、アルコキシまたはヒドロキシアルキル）としての「アルキル」とは、総ての異性形の直鎖または分枝アルキル基を意味する。「Ｃ（１−６）アルキル」とは、少なくとも１個、多くて６個の炭素原子を含む、上記で定義されたアルキル基を意味する。このようなアルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルが挙げられる。このようなアルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソ−プロポキシ、ブトキシ、イソ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシが挙げられる。
【００１７】
好適なＣ（３−６）シクロアルキル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが挙げられる。
【００１８】
本明細書において「ハロゲン」とは、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）またはヨウ素（Ｉ）を意味し、「ハロ」とは、ハロゲン：フルオロ（−Ｆ）、クロロ（−Ｃｌ）、ブロモ（−Ｂｒ）およびヨード（−Ｉ）を意味する。
【００１９】
「ヘテロアリール」とは、Ｏ、ＮまたはＳから選択される１以上のヘテロ原子を含んでなる不飽和環を表す。５員または６員ヘテロアリール環の例としては、ピロリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、チアゾリル、イソキサゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、フラザニル、フラニル、チエニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニルおよびトリアジニルが挙げられる。
【００２０】
式（Ｉ）の化合物のある特定のものでは、置換基の性質によってキラル炭素原子が存在し、従って、式（Ｉ）の化合物は立体異性体として存在し得る。本発明は、鏡像異性体、ジアステレオ異性体およびラセミ体などのその混合物を含む式（Ｉ）の化合物の立体異性形などの総ての光学異性体に及ぶ。異なる立体異性形は慣例の方法によってあるものを他から分離または分割することができ、あるいはある異性体を慣例の選択的または非対称合成によって得ることもできる。
【００２１】
本明細書において化合物のある特定のものは種々の互変異性形で存在する場合があり、本発明はこのような総ての互変異性形を包含すると理解すべきである。
【００２２】
本発明のある特定の化合物は酸基と塩基基の双方を含み、従って、ある特定のｐＨ値において両性イオンとして存在し得ると理解される。
【００２３】
本発明の好適な化合物は、
５−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリル、
［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸、
３−［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸、
４−［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酪酸、
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリル、
［８−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメン−４−イル］酢酸、
３−［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸、
［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸、
６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリル、
［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸、
３−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸、
またはその薬学上許容される塩である。
【００２４】
式（Ｉ）の化合物の薬学上許容される誘導体には、レシピエントに投与された際に式（Ｉ）の化合物または活性代謝物もしくはその残基を（直接または間接的に）提供し得る式（Ｉ）の化合物の薬学上許容される塩、エステルまたはそのようなエステルの塩のいずれもが含まれる。
【００２５】
式（Ｉ）の化合物は塩を形成し得る。当然のことながら、医薬において使用するためには、式（Ｉ）の化合物は薬学上許容されなければならない。好適な薬学上許容される塩は当業者には明らかであり、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸またはリン酸などの無機酸；および例えばコハク酸、マレイン酸、酢酸、フマル酸、クエン酸、酒石酸、安息香酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸またはナフタレンスルホン酸などの有機酸とともに形成される酸付加塩のような、J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19に記載されているものが含まれる。式（Ｉ）の化合物のある特定のものは、１当量以上の酸とともに酸付加塩を形成し得る。本発明はその範囲に可能性のある総ての化学量論的および非化学量論的形態を含む。塩はまた、無機塩基および有機塩基を含む薬学上許容される塩基からも製造され得る。無機塩基に由来する塩としては、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、リチウム、マグネシウム、マンガン（ＩＩＩ）塩、マンガン（ＩＩ）、カリウム、ナトリウム、亜鉛などが挙げられる。薬学上許容される有機塩基に由来する塩としては、第一級、第二級および第三級アミンの；天然置換アミンを含む置換アミン；ならびに環状アミンが挙げられる。特定の薬学上許容される有機塩基としては、アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチル−モルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リシン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ、トロメタモール）などが挙げられる。塩はまた、例えばポリアミン樹脂などの塩基性イオン交換樹脂からも形成され得る。本発明の化合物が塩基性である場合、無機酸および有機酸を含む薬学上許容される酸からも塩が製造され得る。このような酸としては、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸などが挙げられる。
【００２６】
薬学上許容される付加塩は、慣例的に適当な酸または酸誘導体との反応により製造され得る。塩基との薬学上許容される塩は、慣例的に適当な無機または有機塩基との反応により製造され得る。
【００２７】
式（Ｉ）の化合物は結晶形態または非結晶形態で製造可能であり、結晶性であれば、所望により水和または溶媒和されていてもよい。本発明はその範囲に化学量論的水和物または溶媒和物ならびに種々の量の水および／または溶媒を含有する化合物を含む。
本発明の範囲には、式（Ｉ）の化合物のあらゆる塩、溶媒和物、水和物、複合体、多型、プロドラッグ、放射性標識誘導体、立体異性体および光学異性体が含まれる。
【００２８】
Ｓ１Ｐ１受容体に対する本発明の化合物の能力および効力は、本明細書に記載されているような、ヒトにクローニングされた受容体に対して行われるＧＴＰγＳアッセイにより測定することができる。式（Ｉ）の化合物は、本明細書に記載の機能的アッセイを用い、Ｓ１Ｐ１受容体におけるアゴニスト活性を示した。
【００２９】
よって、式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学上許容される塩は、Ｓ１Ｐ１受容体により媒介される症状または障害の処置に用いられる。特に、式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学上許容される塩は、多発性硬化症、自己免疫疾患、慢性炎症疾患、喘息、炎症性神経障害、関節炎、移植、クローン病、潰瘍性大腸炎、紅斑性狼瘡(lupus erythematosis）、乾癬、虚血再潅流傷害、固形腫瘍および腫瘍転移、脈管形成に関連する疾患、血管疾患、疼痛症状、急性ウイルス性疾患、炎症性腸症状、インスリン依存性および非インスリン依存性糖尿病（本発明では以下「本発明の障害」と呼ぶ）の処置に用いられる。
【００３０】
従って、式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学上許容される塩は紅斑性狼瘡(lupus erythematosis)の処置に用いられる。
【００３１】
従って、式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学上許容される塩は乾癬の処置に用いられる。
【００３２】
従って、式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学上許容される塩は多発性硬化症の処置に用いられる。
【００３３】
本明細書において「処置」は確立された症状の予防ならびに緩和を含むと理解すべきである。
【００３４】
よって、本発明はまた、特に、Ｓ１Ｐ１受容体により媒介される症状または障害の処置において治療物質として使用するための式（Ｉ）の化合物または薬学上許容される塩を提供する。特に、本発明は、多発性硬化症、自己免疫疾患、慢性炎症疾患、喘息、炎症性神経障害、関節炎、移植、クローン病、潰瘍性大腸炎、紅斑性狼瘡(lupus erythematosis)、乾癬、虚血再潅流傷害、固形腫瘍および腫瘍転移、脈管形成に関連する疾患、血管疾患、疼痛症状、急性ウイルス性疾患、炎症性腸症状、インスリン依存性および非インスリン依存性糖尿病の処置において治療物質として使用するための式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩を提供する。
【００３５】
式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学上許容される塩は紅斑性狼瘡(lupus erythematosis)の処置において治療物質として用いられる。
【００３６】
式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学上許容される塩は乾癬の処置において治療物質として用いられる。
【００３７】
式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学上許容される塩は多発性硬化症の処置において治療物質として用いられる。
【００３８】
本発明はさらに、Ｓ１Ｐ１受容体により媒介され得る、ヒトを含む哺乳類における症状または障害の処置方法であって、罹患者に治療上安全かつ有効な量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩を投与することを含んでなる方法を提供する。特に、本発明は、多発性硬化症、自己免疫疾患、慢性炎症疾患、喘息、炎症性神経障害、関節炎、移植、クローン病、潰瘍性大腸炎、紅斑性狼瘡(lupus erythematosis)、乾癬、虚血再潅流傷害、固形腫瘍および腫瘍転移、脈管形成に関連する疾患、血管疾患、疼痛症状、急性ウイルス性疾患、炎症性腸症状、インスリン依存性および非インスリン依存性糖尿病の処置方法であって、罹患者に治療上安全かつ有効な量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩を投与することを含んでなる方法を提供する。
【００３９】
本発明は、罹患者に治療上安全かつ有効な量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩を投与することを含んでなる紅斑性狼瘡(lupus erythematosis)の処置方法を提供する。
【００４０】
本発明は、罹患者に治療上安全かつ有効な量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩を投与することを含んでなる乾癬の処置方法を提供する。
【００４１】
本発明は、罹患者に治療上安全かつ有効な量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩を投与することを含んでなる多発性硬化症の処置方法を提供する。
【００４２】
別の態様において、本発明は、Ｓ１Ｐ１受容体により媒介される症状または障害の処置において使用するための薬剤の製造における式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩の使用を提供する。
【００４３】
特に、本発明は、多発性硬化症、自己免疫疾患、慢性炎症疾患、喘息、炎症性神経障害、関節炎、移植、クローン病、潰瘍性大腸炎、紅斑性狼瘡(lupus erythematosis)、乾癬、虚血再潅流傷害、固形腫瘍および腫瘍転移、脈管形成に関連する疾患、血管疾患、疼痛症状、急性ウイルス性疾患、炎症性腸症状、インスリン依存性および非インスリン依存性糖尿病の処置において使用するための薬剤の製造において使用するための式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩を提供する。
【００４４】
式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学上許容される塩は、紅斑性狼瘡(lupus erythematosis)の処置において使用するための薬剤の製造において用いられる。
【００４５】
式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学上許容される塩は、乾癬の処置において使用するための薬剤の製造において用いられる。
【００４６】
式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学上許容される塩は、多発性硬化症の処置において使用するための薬剤の製造において用いられる。
【００４７】
療法において式（Ｉ）の化合物およびその薬学上許容される塩を使用するためには、それらを通常標準的な薬務に従って医薬組成物へと処方する。本発明はまた、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩と薬学上許容される担体または賦形剤とを含んでなる医薬組成物を提供する。
【００４８】
さらなる態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩と薬学上許容される担体または賦形剤とを混合することを含んでなる、医薬組成物の製造方法を提供する。
【００４９】
適切には周囲温度および大気圧での混合により製造され得る本発明の医薬組成物は、通常、経口投与、非経口投与または直腸投与に適合され、それ自体、錠剤、カプセル剤、経口用液体製剤、粉末、顆粒、トローチ剤、再構成用粉末、注射もしくは注入溶液もしくは懸濁液または坐剤の形態であり得る。経口投与可能な組成物が通常好ましい。
【００５０】
経口投与用の錠剤およびカプセル剤は単位用量形であってよく、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；増量剤（例えば、ラクトース、微晶質セルロースまたはリン酸水素ナトリウム）；錠剤化滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはグリコール酸ナトリウムデンプン）；および許容される湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの慣例の賦形剤を含み得る。これらの錠剤は通常の薬務において周知の方法に従ってコーティングしてもよい。
【００５１】
経口液体製剤は例えば、水性または油性懸濁液、溶液、エマルション、シロップ剤またはエリキシル剤の形態であってもよく、あるいは使用前に水または他の好適なビヒクルで再構成するための乾燥製品の形態であってもよい。このような液体製剤は、沈殿防止剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水素化食用油脂）、乳化剤（例えば、レシチンまたはアラビアガム）、非水性ビヒクル（食用油、例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコールまたは精留植物油を含み得る）、保存剤（例えば、メチルまたはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）、および所望により適当であれば慣例の香味剤または着色剤、バッファー塩および甘味剤を含み得る。経口投与用製剤は、有効化合物の制御放出を得るために適宜処方してもよい。
【００５２】
非経口投関しては、本発明の化合物またはその薬学上許容される塩および無菌ビヒクルを用いた液体単位投与形が製造される。注射用処方物は、本発明の化合物またはその薬学上許容される誘導体および無菌ビヒクルを所望により保存剤を添加して用いた単位投与形、例えば、アンプルまたは多用量で製造され得る。これらの組成物は油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルションの形態をとってもよく、沈殿防止剤、安定剤および／または分散剤などの処方剤を含んでもよい。あるいは、有効成分は、使用前に好適なビヒクル、例えば、無菌パイロジェンフリー水で構築するための粉末形態であってもよい。化合物は、用いるビヒクルおよび濃度によって、ビヒクル中に懸濁するかまたは溶解するかのいずれかが可能である。溶液を製造する際には、化合物を注射用に溶解し、濾過除菌した後に好適なバイアルまたはアンプルに充填し、密閉することができる。有利には、局部麻酔薬、保存剤および緩衝剤などのアジュバントをビヒクルに溶解させる。安定性を高めるためには、組成物をバイアルに充填した後に凍結させ、真空下で水を除去することができる。非経口懸濁液も、化合物をビヒクルに溶解させる代わりに懸濁させること、および滅菌が濾過によって行えないこと以外は、実質的に同様に製造される。この化合物は、無菌ビヒクルに懸濁させる前にエチレンオキシドに曝すことにより滅菌することができる。有利には、化合物の一様な分布を助けるために組成物に界面活性剤または湿潤剤を含める。
【００５３】
ローションは水性または油性基剤を用いて処方することができ、一般に、１以上の乳化剤、安定剤、分散剤、沈殿防止剤、増粘剤または着色剤の含む。滴剤は、１以上の分散剤、安定剤、可溶化剤または沈殿防止剤も含んでなる水性または非水性基剤を用いて処方することができる。それらはまた保存剤も含み得る。
【００５４】
式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩はまた、例えば、ココアバターまたは他のグリセリドなどの慣例の坐剤基剤を含有する坐剤または保留浣腸などの直腸組成物に処方してもよい。
【００５５】
式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩はまたデポー製剤として処方してもよい。このような持続性処方物は移植（例えば、皮下または筋肉内）または筋肉内注射により投与することができる。よって、例えば、本発明の化合物は、好適なポリマー材料もしくは疎水性材料（例えば、許容される油中のエマルションとして）またはイオン交換樹脂を用いて、あるいは難溶性誘導体として、例えば、難溶性の塩として処方することができる。
【００５６】
鼻腔内投与に関しては、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩は、好適な定量または単位用量デバイスを介した投与のための溶液、あるいはまた好適な送達デバイスを用いた投与のために好適な担体と混合した粉末として処方することができる。よって、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩は、経口、口内、非経口、局所的（眼用および鼻腔用を含む）、デポーまたは直腸投与用に、あるいは吸入または吹送（口または鼻のいずれかを介する）による投与に好適な形態で処方することができる。
【００５７】
式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩は、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、ペッサリー、エアゾールまたは滴剤（例えば、眼、耳または鼻用滴剤）の形態での局所投与用に処方することができる。軟膏およびクリームは、例えば、水性または油性基剤を用い、好適な増粘剤および／またはゲル化剤を添加して処方することができる。眼への投与のための軟膏は、無菌成分を用いて無菌的に製造すればよい。
【００５８】
本組成物は、投与方法に応じて、０．１〜９９重量％、好ましくは１０〜６０重量％の有効物質を含み得る。上述の障害の処置に用いられる化合物の用量は、通常、障害の重篤度、罹患者の体重および他の同様の因子によって異なる。しかしながら、一般的な指針としては、好適な単位用量は０．０５〜１０００ｍｇ、１．０〜５００ｍｇまたは１．０〜２００ｍｇであり得、このような単位用量を１日１回より多く、例えば、１日２回または３回投与することができる。
【００５９】
式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩は組合せ製剤として使用してもよい。例えば、本発明の化合物は、シクロスポリンＡ、メトトレキサート、ステロイド類(steriods)、ラパマイシン、炎症性サイトカイン阻害剤、免疫調節剤（生物製品または他の治療有効化合物を含む）と組み合わせて使用可能である。
【００６０】
本発明は、１以上の原子が、自然界で通常に見られる原子量または質量数と異なる原子量または質量数を有する原子で置換されていること以外は、式Ｉで示されているものと同一であり従う、同位元素標識された化合物も含む。本発明の化合物に組み込むことができる同位元素の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、ヨウ素および塩素の同位元素、例えば、３Ｈ、１１Ｃ、１４Ｃ、１８Ｆ、１２３Ｉおよび１２５Ｉが挙げられる。
【００６１】
上述の同位元素および／または他の原子の他の同位元素を含む本発明の化合物および該化合物の薬学上許容される塩も本発明の範囲内にある。同位元素標識された本発明の化合物、例えば、３Ｈ、１４Ｃなどの放射性同位元素が組み込まれているものは、薬剤および／または基質組織分布アッセイに有用である。トリチウム化、すなわち３Ｈ、および炭素−１４、すなわち１４Ｃ、同位元素はそれらの製造の容易さおよび検出性のために特に好ましい。１１Ｃおよび８Ｆ同位元素はＰＥＴ（陽電子放射型断層撮影法）に特に有用であり、１２５Ｉ同位元素はＳＰＥＣＴ（単光子放射コンピューター断層撮影法）に特に有用であり、いずれも脳の画像化に有用である。さらに、重水素、すなわち２Ｈなどのより重い同位元素での置換は、より高い代謝安定性、例えばin vivo半減期の延長または用量要求の低減から来るある特定の治療的利益を与えることができ、ゆえに、いくつかの状況で好ましい場合がある。同位元素標識された、本発明に従う式（Ｉ）の化合物は一般に、以下のスキームおよび／または実施例に開示されている手順を行うことにより、非同位元素標識試薬を容易に入手可能な同位元素標識された試薬に置き換えることによって製造することができる。
【００６２】
さらなる態様において、本発明は式（Ｉ）の化合物の製造方法を提供する。
【００６３】
Ｂが
【化３】
2011506568.tif 000005
であり、Ｒ３が（ＣＨ２）１−３ＣＯ２Ｈある式（Ｉ）の化合物は、スキーム１（ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＡは式（Ｉ）に関して定義された通りであり、ｎは３であり、ｈａｌはクロロ、ブロモまたはヨードであり、Ｐは保護基であり、Ｒはアルキル基（例えば、エチルまたはｔｅｒｔ−ブチル）を表す）に従って製造することができる。
【化４】
2011506568.tif 000006
【００６４】
式（ｉｉ）の化合物（例えば、Tetrahedron (2006), 62(29), 6869-6875に記載のように製造）は、ビス（１，１−ジメチルエチル）ジカーボネートなどの好適な保護試薬を用い、Ｐが例えばｔ−ブトキシカルボニルである好適な保護誘導体（ｉｉｉ）に変換することができる。式（ｉｉｉ）の化合物は、重炭酸ナトリウムなどの好適な塩基の存在下でヒドロキシルアミンと反応させることにより、式（ｉｖ）の化合物に変換することができる。式（ｉｖ）の化合物は、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどの好適な塩基の存在下、所望により、４−ジメチルアミノピリジンなどの触媒の存在下で式（ｖ）の酸塩化物と反応させることにより、式（ｖｉ）の化合物に変換することができる。この反応は最初は室温で行い、その後、オキサジアゾールへの環化を達成するために加熱すればよい。式（ｖｉ）の化合物は、Ｐがｔ−ブトキシカルボニルを表す場合には塩酸などの好適な酸で脱保護することにより、式（ｖｉｉ）の化合物を得ることができる。式（ｖｉｉ）の化合物は、炭酸セシウムなどの好適な塩基の存在下で式（ｖｉｉｉ）のアルキル化剤と反応させることにより、式（ｉｘ）の化合物に変換することができる。式（ｉｘ）の化合物は、水酸化リチウムなどの好適な塩基または（Ｒ＝ｔ−ブチルの場合）塩酸またはトリフルオロ酢酸などの好適な酸で加水分解することにより、ある特定の式（Ｉ）の化合物に変換することができる。式（ｖ）の化合物は、既知の化合物であるか、またはそれ自体既知の化合物であるか、もしくは常法により製造することができる対応する酸から、常法により製造することができる。
【００６５】
Ｒ２がテトラヒドロイソキノリン環系の５位にあり、シアノ基が６位にある式（ｉｉｉ）の化合物は、スキーム２（ここで、Ｒ１は式（Ｉ）に関して定義され、Ｒ４は水素であり、Ｐは保護基である）に示されているように製造することができる。
【化５】
2011506568.tif 000007
【００６６】
式（ｘ）の化合物は、酢酸アンモニウムなどの好適な塩基の存在下でニトロメタンと反応させることにより、式（ｘｉｉ）の化合物に変換することができる。式（ｘｉ）の化合物は、クロロトリメチルシランの存在下で、水素化ホウ素リチウムなどの好適な還元剤で還元することにより、式（ｘｉｉ）の化合物に変換することができる。式（ｘｉｉ）の化合物は、ギ酸エチルなどの好適なホルミル化剤と反応させることにより、式（ｘｉｉｉ）の化合物に変換することができる。式（ｘｉｉｉ）の化合物は、ギ酸などの好適な酸触媒の存在下で、パラホルムアルデヒドなどの好適なホルムアルデヒド供給源と反応させることにより、式（ｘｉｖ）の化合物に変換することができる。式（ｘｉｖ）の化合物は、三臭化ホウ素などの好適な脱メチル化剤と反応させることにより、式（ｘｖ）の化合物に変換することができる。式（ｘｖ）の化合物は、ビス（１，１−ジメチルエチル）ジカーボネートなどの好適な保護試薬を用い、Ｐが例えばｔ−ブトキシカルボニルである好適な式（ｘｖｉ）の保護誘導体に変換することができる。式（ｘｖｉ）の化合物は、無水トリフルオロメタンスルホン酸などの好適なトリフルオロメタンスルホニル化剤と反応させることにより、式（ｘｖｉｉ）の化合物に変換することができる。式（ｘｖｉｉ）の化合物は、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）などの好適な触媒の存在下でシアン化亜鉛などの好適なシアン化物供給源と反応させることにより、式（ｉｉｉ）（式中、Ｒ２が５位にあり、Ｒ４は水素であり、シアノ基が６位にある）の化合物に変換することができる。
【００６７】
限定されるものではないが特許および特許出願を含む、本明細書に引用されている刊行物は総て、それぞれ個々の刊行物が完全に示されているかのように引用することにより本明細書の一部とされることが具体的かつ個々に示されている場合と同様に、引用することにより本明細書の一部とされる。
【実施例】
【００６８】
以下の説明および実施例は本発明の化合物の製造を示す。
略号：
ｇ  −  グラム
ｍｇ  −  ミリグラム
ｍｌ  −  ミリリットル
μｌ  −  マイクロリットル
ＭｅＣＮ  −  アセトニトリル
ＭｅＯＨ  −  メタノール
ＥｔＯＨ  −  エタノール
Ｅｔ２Ｏ  −  ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ  −  酢酸エチル
ＤＣＭ  −  ジクロロメタン
ＤＩＡＤ  −  ジイソプロピルアゾジカルボキシレート
ＤＩＰＥＡ  −  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ  −  Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−ピリジンアミン
ＤＭＥ  −１，２−ビス（メチルオキシ）エタン
ＤＭＦ  −  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ  −  ジメチルスルホキシド
ＥＤＡＣ  −  Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＥＤＣ  −  Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＥＤＣＩ  −  Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＨＯＢＴ／ＨＯＢｔ  −  ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＩＰＡ  −  イソプロピルアルコール
ＮＣＳ  −  Ｎ−クロロスクシンイミド
ＰｙＢＯＰ  −  ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＴＨＦ  −  テトラヒドロフラン
ｄｂａ  −  ジベンジリデンアセトン
ＲＴ  −  室温
℃  −  セ氏度
Ｍ  −  モル
Ｈ  −  プロトン
ｓ  −  一重線
ｄ  −  二重線
ｔ  −  三重線
ｑ  −  四重線
ＭＨｚ  −  メガヘルツ
ＭｅＯＤ  −  変性メタノール
ＬＣＭＳ  −  液体クロマトグラフィー質量分析
ＬＣ／ＭＳ  −  液体クロマトグラフィー質量分析
ＭＳ  −  質量分析
ＥＳ  −  エレクトロスプレー
ＭＨ＋  −  マスイオン  ＋  Ｈ＋
ＭＤＡＰ  −  質量指示自動分取液体クロマトグラフィー
ｓａｔ．  −  飽和
Ｂｏｃ  −  ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
ＳＣＸまたはＳＣＸ−３  −  固相に固定されたベンゼンスルホン酸残基を用いる固相抽出（ＳＰＥ）カラム（例えば、ＩＳＴ  Ｉｓｏｌｕｔｅ（商標）カラム）
【００６９】
一般化学の節
下記の方法は例示目的で示されるものであり、これらの実施例の製法における中間体は、必ずしも、記載されている特定のバッチから製造されたものでなくてもよい。
【００７０】
調製例１
５−［（ヒドロキシアミノ）（イミノ）メチル］−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化６】
2011506568.tif 000008
【００７１】
１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリンカルボニトリル塩酸塩（５．０ｇ／２５．７ｍｍｏｌ、Fluorchemから入手可能）をＤＣＭ（１００ｍＬ）と２Ｎ  ＮａＯＨとで分液した。ＤＣＭ層を回収し、乾燥させ（疎水性フリット）、蒸発させた。遊離塩基１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリンカルボニトリルを乾燥ＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解させ、ビス（１，１−ジメチルエチル）ジカーボネート（１．１当量、６．１７ｇ）で処理した。この反応物をアルゴン下、室温で１８時間攪拌し、２Ｎ  ＮａＯＨ（１００ｍＬ）、２Ｎ  ＨＣｌ（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（疎水性フリット）、蒸発させて、粗１，１−ジメチルエチル−５−シアノ−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボキシレートを得、これをそれ以上精製せずに用いた（ＬＣＭＳ１００％、ＮＭＲ  ｔＢｕＯＨとの２：１混合物）。単離収量７．５８ｇ。1H NMR (400 MHz, CDCl3) d (特に) 7.52 (1H, d), 7.35-7.16 (2H, m), 4.60 (2H, br.s), 3.71 (2H, t), 3.04 (2H, t), 1.5 (9H, s); m/z (API-ES) 203 [M+H-56]+.
【００７２】
上記からの粗材料、ヒドロキシルアミン．ＨＣｌ（１４．３１ｇ、２０６ｍｍｏｌ）および重炭酸ナトリウム（２１．６３ｇ、２５７ｍｍｏｌ）を、エタノール（２００ｍＬ）を含む５００ｍＬ丸底フラスコに加えた。この反応混合物を６５℃で２４時間加熱した。冷却した反応物を蒸発させ、ＤＣＭ（２×１００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）とで分液した。合わせたＤＣＭ層を回収し、乾燥させた。ＬＣ／ＭＳによる分析はこの材料が〜８０％の純度であることを示した。この材料をエタノール（１００ｍＬ）に溶解させ、濾過して不溶解不純物を除去した。ＬＣ／ＭＳによる分析は、この材料が９２％の純度であることを示した。５−［（ヒドロキシアミノ）（イミノ）メチル］−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチルはそれ以上精製せずに用いた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 7.82 (1H, br.s), 7.36-7.16 (3H, m), 4.80 (2H, br.s), 4.58 (2H, br.s), 3.59 (2H, br.t), 2.98 (2H, t), 1.49 (9H, s); m/z (API-ES) 292 [M+H]+.
【００７３】
調製例２
３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］安息香酸メチル
【化７】
2011506568.tif 000009
【００７４】
３−クロロ−４−ヒドロキシ安息香酸メチル（５０ｇ、０．２７モル）、Ｋ２ＣＯ３（７４ｇ、０．５４モル）およびヨードプロパン（２９．５ｍｌ、０．２３モル）を室温、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中で攪拌した。１８時間後、溶媒を真空蒸発により除去し、残渣をＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）中、シリカ６０のカラムでクロマトグラフィーに付し、標題化合物を油状物として得た（５５ｇ、９０％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 8.05 (1H, d), 7.89 (1H, dd), 6.94 (1H, d), 4.60-4.72 (1H, m), 3.89 (3H, s), 1.41 (6H, d); m/z (API-ES) 229 [M+H]+.
【００７５】
調製例３
５−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化８】
2011506568.tif 000010
【００７６】
５−［（ヒドロキシアミノ）（イミノ）メチル］−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製例１）（２ｇ、６．８６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１００ｍＬ）に溶解させ、アルゴン下、室温で３０分間、水素化ナトリウム（６０％分散物、０．３０２ｇ、７．５５ｍｍｏｌ）とともに攪拌した。次に、３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］安息香酸メチル（調製例２）（２．３５５ｇ、１０．３０ｍｍｏｌ）を加え、この反応物を還流温度で１．５時間加熱した。冷却した反応物を蒸発させ、ＤＣＭ（１００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）とで分液した。水層をＤＣＭ（５０ｍＬ）で洗浄し、合わせたＤＣＭ層を乾燥させ（疎水性フリット）、蒸発させた。粗生成物を、ＤＣＭで溶出する小シリカパッドでのクロマトグラフィーにより精製し、５−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（２．５７ｇ、５．４７ｍｍｏｌ、収率８０％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) d  8.23 (1H, s), 8.05 (1H, d), 7.95 (1H, d), 7.34 (1H, t), 7.27 (1H, d), 7.06 (1H, d),  4.76-4.63 (1H, m), 4.66 (2H, br.s), 3.67 (2H, br.t), 3.25 (2H, br.t),  1.51 (9H, s), 1.45 (6H, d); m/z (API-ES) 414, 416 [M+H-56]+.
【００７７】
調製例４
５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化９】
2011506568.tif 000011
【００７８】
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中、３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］安息香酸（ＷＯ２００５／５８８４８に記載のように製造することができる、７３７ｍｇ、３．５９ｍｍｏｌ）および塩化オキサリル（３６０μｌ）の溶液にＤＭＦ（２０μｌ）を加えた。この溶液を室温で９０分間攪拌した後、真空濃縮し、乾燥ＤＭＦ（６ｍＬ）に再溶解させた。別途、５−［（ヒドロキシアミノ）（イミノ）メチル］−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製例１、１．０５ｇ、３．６０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−ピリジンアミン（ＤＭＡＰ）（２０ｍｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１．３１ｍｌ、７．５０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解させた。第一のＤＭＦ溶液５ｍＬを第二の溶液に加え、その黄色溶液を室温で１時間、次いで、９５℃で１８時間攪拌した。この反応物を真空濃縮した後、ＤＣＭ（５０ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）とで分液した。有機液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）で洗浄した後、合わせた水溶液をＤＣＭ（２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機液を真空濃縮して粗褐色油状物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中［０．５〜４％］ＭｅＯＨの勾配）および真空濃縮により、標題化合物を淡黄色固体として得た（５１２ｍｇ、３７％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 8.42 (1H, d), 8.34 (1H, dd), 7.96 (1H, d), 7.34 (1H, t), 7.29 (1H, d), 7.13 (1H, d), 4.80 (1H, sept), 4.67 (2H, s), 3.68 (2H, t), 3.24 (2H, t), 1.51 (9H, s), 1.48 (6H, d); m/z (ES) 361 [M+H-100]+.
【００７９】
調製例５
［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸エチルギ酸塩
【化１０】
2011506568.tif 000012
【００８０】
ＤＭＦ（２ｍＬ）中、２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリル（実施例３、２８．８ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）、ブロモ酢酸エチル（３５．５μｌ、０．３２ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（１３０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）の懸濁液を室温で１時間攪拌した後、５分間６０℃までマイクロ波照射を行った。この懸濁液をＳＣＸカートリッジに加え、生成物をメタノール性アンモニアで溶出させた。真空濃縮により粗生成物（４３ｍｇ）を得、これをＭＤＡＰにより精製し、標題化合物を透明フィルムとして得た（１１．６ｍｇ、３２％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 8.41 (1H, d), 8.33 (1H, dd), 8.09 (1H, br. s), 8.01 (1H, d), 7.34 (1H, 明白な t), 7.21 (1H, d), 7.12 (1H, d), 4.80 (1H, sept), 4.24 (2H, q), 4.00 (2H, s), 3.52 (2H, s), 3.35 (2H, t), 3.07 (2H, t), 1.48 (6H, d), 1.31 (3H, t); m/z (ES) 447 [M+H]+.
【００８１】
調製例６
３−［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸メチルギ酸塩
【化１１】
2011506568.tif 000013
【００８２】
ＤＭＦ（２ｍＬ）中、２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリル（実施例３、２８．８ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）、３−ブロモプロピオン酸メチル（３５μｌ、０．３２ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（１３０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）の懸濁液を室温で１時間攪拌した後、５分間６０℃までマイクロ波照射を行った。３−ブロモプロピオン酸メチル（３５μｌ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、この懸濁液を室温で３．５時間攪拌した後、３０分間１５０℃が達成されるまで昇温するようマイクロ波照射を行った。この懸濁液を濾過し、真空濃縮した後、ＭＤＡＰにより精製し、標題化合物を黄色フィルムとして得た（５．９ｍｇ、１７％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 8.42 (1H, d), 8.33 (1H, dd), 8.21 (1H, br. s), 8.04 (1H, d), 7.35 (1H, t), 7.24 (1H, d), 7.13 (1H, d), 4.80 (1H, sept), 3.99 (2H, s), 3.72 (3H, s), 3.38 (2H, t), 3.12-3.06 (4H, m), 2.78 (2H, t), 1.48 (6H, d); m/z (ES) 447 [M+H]+.
【００８３】
調製例７
４−［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酪酸エチルギ酸塩
【化１２】
2011506568.tif 000014
【００８４】
ＤＭＦ（２ｍＬ）中、２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリル（実施例３、２８．８ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）、４−ブロモ酪酸エチル（４５．８μｌ、０．３２ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（１３０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）の懸濁液を室温で１時間攪拌した後、５分間６０℃までマイクロ波照射を行った。４−ブロモ酪酸エチル（４５．８μｌ、０．３２ｍｍｏｌ）を追加し、懸濁液を室温で３．５時間攪拌した。次にそれを濾過し、真空濃縮し、ＭＤＡＰにより精製し、標題化合物を黄色フィルムとして得た（８．０ｍｇ、２１％）。NMR (400 MHz, CDCl3) d 8.42 (1H, d), 8.34 (1H, dd), 8.27 (br. s), 8.09 (1H, d), 7.39 (1H, t), 7.27 (1H, d), 7.13 (1H, d), 4.80 (1H, sept), 4.19 (2H, s), 4.13 (2H, q), 3.47 (2H, t), 3.28 (2H, t), 2.99 (2H, t), 2.44 (2H, t), 2.10 (2H, ５つ), 1.48 (6H, d), 1.25 (3H, t); m/z (ES) 475 [M+H]+.
【００８５】
調製例８
３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］ベンゾイルクロリド
【化１３】
2011506568.tif 000015
【００８６】
丸底フラスコに３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］安息香酸（Paragos Product Listから入手可能、１０．２ｇ、４７．５ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（１５８ｍｌ）および塩化オキサリル（８．２９ｍｌ、９５ｍｍｏｌ）を仕込んだ。この反応混合物を氷／水浴中で０℃に冷却した後、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．１５８ｍｌ）を加えた。この溶液を一晩周囲温度まで温めた。溶媒を蒸発させ、標題化合物をクリーム色の固体として得た（１１．４ｇ）。1H NMR (CHLOROFORM-d) d: 8.14 (d, 1H), 8.00 (dd, 2.5 Hz, 1H), 6.98 (d, 1H), 4.73 (spt, 1H), 1.44 (d, 6H)
【００８７】
調製例９
２−メチル−１−（メチルオキシ）−３−［（Ｅ）−２−ニトロエテニル］ベンゼン
【化１４】
2011506568.tif 000016
【００８８】
ニトロメタン（４００ｍｌ）中、２−メチル−３−（メチルオキシ）ベンズアルデヒド（Allichem Product Listから入手可能；２０ｇ；１３３ｍｍｏｌ）の溶液に、酢酸アンモニウム（６．１６ｇ；８０ｍｍｏｌ）を加え、得られた橙色の混合物を１００℃で１時間攪拌した後、室温まで冷却し、真空濃縮した。残渣を酢酸エチル（×２）とブラインとで分液し、有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空濃縮した。ジクロロメタン／エーテルで摩砕し、標題化合物を黄色固体として得た（６．６ｇ）。1H NMR (CDCl3) d: 8.35 (d, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.22 (t, 1H), 7.11 (d, 1H), 6.96 (d, 1H), 3.86 (s, 3H), 2.33 (s, 3H)
【００８９】
母液を蒸発させた後、ジエチルエーテルで摩砕することによりさらなる生成物（７．２２ｇ）が得られた。この母液を再び蒸発させ、残渣を、シクロヘキサン中５〜１０％の酢酸エチルで溶出するクロマトグラフィーにより精製し、エーテルで摩砕した後にさらなる生成物を得た（３．４５ｇ）。
【００９０】
調製例１０
｛２−［２−メチル−３−（メチルオキシ）フェニル］エチル｝アミン
【化１５】
2011506568.tif 000017
【００９１】
室温で、水素化ホウ素リチウム（ＴＨＦ中２Ｍ；２．０ｍｌ；４．０ｍｍｏｌ）（曇り）に０．５分かけてクロロトリメチルシラン（１．０２ｍｌ；８．００ｍｍｏｌ）を滴下した。沈殿が形成され、およそ３分間後に、ＴＨＦ（４ｍｌ）中、２−メチル−１−（メチルオキシ）−３−［（Ｅ）−２−ニトロエテニル］ベンゼン（調製例９、１９３ｍｇ；１．０ｍｍｏｌ）を、温度をおよそ２５℃に維持しながら（水冷浴を使用）、シリンジを介して５分かけて滴下した。この溶液を室温で一晩攪拌した。この混合物を氷浴で冷却し、メタノールをゆっくり加え、溶媒を真空下で除去した。残渣を２５％水酸化ナトリウム水溶液とジクロロメタンとで分液した。水相を分離し、ジクロロメタンで３回抽出し、合わせた有機層を蒸発させた。残渣を、メタノール、次いで、メタノール中２Ｎのアンモニアで溶出する固相抽出（ＳＣＸカラム）により精製し、その後、アンモニア含有画分を蒸発させ、標題化合物（８０ｍｇ）を得た。1H NMR (CDCl3) d: 7.10 (t, 1H), 6.78 (d, 1H), 6.73 (d, 1H), 3.81 (s, 3H), 2.91 (t, 2H), 2.77 (t, 2H), 2.18 (s, 3H), 1.76 (br. s., 2H)
【００９２】
調製例１１
｛２−［２−メチル−３−（メチルオキシ）フェニル］エチル｝ホルムアミド
【化１６】
2011506568.tif 000018
【００９３】
｛２−［２−メチル−３−（メチルオキシ）フェニル］エチル｝アミン（調製例１０；１．７５ｇ；１０．６ｍｍｏｌ）を還流下でギ酸エチル（９７％；１５ｍｌ）とともに１５時間加熱した。溶媒を除去して粗生成物（およそ２ｇ）を得、これを、シクロヘキサン中１３〜６３％の酢酸エチルの勾配で溶出するシリカゲルでのクロマトグラフィーにより精製し、標題化合を得た（１．５７ｇ）。MS m/z 194 [MH+]
【００９４】
調製例１２
５−メチル−６−（メチルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルバルデヒド
【化１７】
2011506568.tif 000019
【００９５】
ギ酸（２０ｍｌ）中、｛２−［２−メチル−３−（メチルオキシ）フェニル］エチル｝ホルムアミド（調製例１１；１．９３ｇ；１０．０ｍｍｏｌ）の溶液に、パラホルムアルデヒド（０．３１５ｇ；１０．５ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を還流下（１００℃）で２０分間加熱した。この混合物を氷冷水で室温まですばやく冷却し、溶媒を除去した。ジクロロメタン中メタノールの勾配で溶出するシリカゲルでのクロマトグラフィーにより精製し、標題化合物を白色固体として得（１．６４ｇ）、これをそれ以上精製せずに用いた。MS m/z 206 [MH+]
【００９６】
調製例１３
５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリノール
【化１８】
2011506568.tif 000020
【００９７】
窒素下、０℃で、ジクロロメタン（２５ｍｌ）中、５−メチル−６−（メチルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルバルデヒド（調製例１２；１．４９ｇ；７．２６ｍｍｏｌ）の溶液に、三臭化ホウ素（９．０９ｇ；３６．３ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。０℃で８５分後、メタノール（２５ｍｌ）をゆっくり加え、得られた混合物を室温で３日間放置した。溶媒を除去し、メタノール／ジクロロメタンで摩砕し、白色固体残渣を得；この母液を濃縮し、残渣をＳＣＸ固相抽出カートリッジ（２０ｇ）に適用し、メタノール、次いで、メタノール中２Ｎのアンモニアで溶出し、生成物を溶出させた。溶媒を蒸発させた後に、標題化合物（７８０ｍｇ）を淡黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6) d: 8.91 (br. s., 1H), 6.62 (d, 1H), 6.56 (d, 1H), 3.70 (s, 2H), 2.92 (t, 2H), 2.48 (t, 2H), 1.96 (s, 3H)
【００９８】
調製例１４
６−ヒドロキシ−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化１９】
2011506568.tif 000021
【００９９】
０℃で、ジクロロメタン（５ｍｌ）中、５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリノール（調製例１３；１６３ｍｇ；１．０ｍｍｏｌ）の懸濁液に、トリエチルアミン（０．２１ｍｌ；１．５０ｍｍｏｌ）、次いで、ビス（１，１−ジメチルエチル）ジカーボネート（２４０ｍｇ；１．１０ｍｍｏｌ）を加えた。溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチルとブラインとで分液した。水層を酢酸エチルでさらに抽出し、合わせた有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて黄色油状物を得た。シクロヘキサン中５〜２５％の酢酸エチルの勾配で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、標題化合物を白色泡沫として得た（２３２ｍｇ）。MS m/z 262 [M-H]
【０１００】
調製例１５
５−メチル−６−｛［（トリフルオロメチル）スルホニル］オキシ｝−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化２０】
2011506568.tif 000022
【０１０１】
窒素下、−３０℃で、ジクロロメタン（５ｍｌ）中、６−ヒドロキシ−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製例１４；２６３ｍｇ；１．００ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（０．１６２ｍｌ；２．００ｍｍｏｌ）を加え、次いで、無水トリフルオロメタンスルホン酸（０．１８６ｍｌ；１．１０ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。−３０℃〜−２０℃の間で０．５時間後に溶媒を除去し、残渣を酢酸エチルに溶かした。この溶液を１Ｎ塩酸、次いで、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空濃縮し、標題化合物を淡黄色の油状物として得た（３６８ｍｇ）。MS m/z 394 [M-H]
【０１０２】
調製例１６
６−シアノ−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化２１】
2011506568.tif 000023
【０１０３】
ＤＭＦ（４ｍｌ）中、５−メチル−６−｛［（トリフルオロメチル）スルホニル］オキシ｝−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製例１５；３９５ｍｇ；１．００ｍｍｏｌ）の溶液を、１５分間攪拌しながら、高真空下で脱気した後、窒素下でシアン化亜鉛（１５３ｍｇ；１．３０ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１１６ｍｇ；０．１０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた深黄色混合物を１００℃で６時間攪拌した。溶媒を除去し、残渣を酢酸エチルに溶解させ、溶液を飽和重炭酸ナトリウムで洗浄した。水層を酢酸エチルでさらに抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて粗生成物を得た。シクロヘキサン中５〜２５％の酢酸エチルの勾配で溶出するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、標題化合物（２１４ｍｇ）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3) d: 7.44 (d, 1H), 7.04 (d, 1H), 4.60 (s, 2H), 3.69 (t,  2H), 2.75 (t, 2H), 2.46 (s, 3H), 1.49 (s, 9H)
【０１０４】
調製例１７
６−［（ヒドロキシアミノ）（イミノ）メチル］−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化２２】
2011506568.tif 000024
【０１０５】
６−シアノ−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製例１６；４０４ｍｇ；１．４８ｍｍｏｌ）をエタノール（１０ｍｌ）中、塩酸ヒドロキシルアミン（６１９ｍｇ；８．９０ｍｍｏｌ）および重炭酸ナトリウム（７４８ｍｇ；８．９ｍｍｏｌ）とともに８０℃で一晩攪拌した。重炭酸ナトリウム（４００ｍｇ）および塩酸ヒドロキシルアミン（３００ｍｇ）を追加し、およそ８時間加熱を続けた。この混合物を室温まで冷却し、生じた固体を取り出し、エタノールで洗浄し、高真空下で乾燥させ、標題化合物を白色固体として得た（４３１ｍｇ）。1H NMR (DMSO-d6) d: 7.06 (d, 1H), 6.99 (d, 1H), 4.48 (br. s., 2H), 3.58 (t, 2H), 2.67 (t, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.42 (s, 9H) （交換可能なものは示していない；明瞭には観察されなかった）
【０１０６】
調製例１８
６−［｛［（｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝カルボニル）オキシ］アミノ｝（イミノ）メチル］−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化２３】
2011506568.tif 000025
【０１０７】
ジクロロメタン（１０ｍｌ）中、６−［（ヒドロキシアミノ）（イミノ）メチル］−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製例１７；４３５ｍｇ；１．４２ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（０．３０ｍｌ；２．１４ｍｍｏｌ）、次いで、ジクロロメタン（５ｍｌ）中、３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］ベンゾイルクロリド（調製例８；３６５ｍｇ；１．５７ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、この反応物を濃縮し、残渣を酢酸エチルと飽和重炭酸ナトリウムとで分液した。水層を酢酸エチルでさらに抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空濃縮した。シクロヘキサン中、１０〜５０％の酢酸エチルの勾配で溶出するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、標題化合物を白色泡沫として得た（４１３ｍｇ）。MS m/z 500 [M-H]
【０１０８】
調製例１９
６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化２４】
2011506568.tif 000026
【０１０９】
１，４−ジオキサン（１５ｍｌ）中、６−［｛［（｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝カルボニル）オキシ］アミノ｝（イミノ）メチル］−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製例１８；４１３ｍｇ；０．８２３ｍｍｏｌ）の溶液に、１１０℃でおよそ１８時間攪拌した。この混合物を室温まで冷却し、溶媒を除去した。シクロヘキサン中５〜２５％の酢酸エチル、次いで、シクロヘキサン中１３〜６３％の酢酸エチルで溶出するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、標題化合物を白色泡沫として得た（２２０ｍｇ）。1H NMR (CHLOROFORM-d) d: 8.24 (d, 1H), 8.05 (dd, 1H), 7.76 (d, 1H), 7.10 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 4.72 (spt, 1H), 4.63 (s, 2H), 3.71 (t, 2H), 2.84 (t, 2H), 2.52 (s, 3H), 1.51 (s, 9H), 1.45 (d, 6H)
【０１１０】
調製例２０
３−［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸エチル
【化２５】
2011506568.tif 000027
【０１１１】
アセトニトリル（３ｍｌ）中、６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリントリフルオロ酢酸塩（実施例１０；９０ｍｇ；０．１８ｍｍｏｌ）の懸濁液に、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン（ＤＢＵ；０．１６ｍｌ；１．０９ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液にアクリル酸エチル（０．０３ｍｌ；０．２７ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を７０℃で０．５時間攪拌した。この混合物を室温まで冷却し、溶媒を除去した。残渣を酢酸エチルとブラインとで分液し、水層を酢酸エチルでさらに抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空濃縮し、標題化合物を得た（９０ｍｇ）。MS m/z 484 [MH+]
【０１１２】
調製例２１
［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸エチル
【化２６】
2011506568.tif 000028
【０１１３】
窒素下、室温で、ＤＭＦ（３ｍｌ）中、６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリントリフルオロ酢酸塩（実施例１０；９０ｍｇ；０．１８ｍｍｏｌ）の懸濁液に、炭酸セシウム（１７７ｍｇ；０．５４ｍｍｏｌ）、次いで、ブロモ酢酸エチル（０．０２６ｍｌ；０．２３ｍｍｏｌ）を加えた。３５分後、この混合物を酢酸エチルで希釈し、沈殿を除去した。この溶液を水で洗浄し、水層を酢酸エチルでさらに抽出した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空濃縮し、標題化合物を得た（７５ｍｇ）。MS m/z 470 [MH+]
【０１１４】
調製例２２
６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化２７】
2011506568.tif 000029
【０１１５】
ジクロロメタン（１５ｍｌ）中、３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］安息香酸（AK Scientific Product Catalogから入手可能；８００ｍｇ、３．９０ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化オキサリル（５７１ｍｇ、４．５ｍｍｏｌ）、次いで、ＤＭＦ（触媒量）を加えた。この反応混合物を４５分間攪拌し、塩化オキサリル（０．１ｍｌ）およびＤＭＦ（１滴）を追加し、２０分間攪拌を続けた。溶媒を蒸発させ、残渣をトルエンとともに共蒸発させた後、高真空下で３０分間乾燥させた。この粗酸塩化物をアセトニトリル（１０ｍｌ）に溶解させ、アセトニトリル（１５ｍｌ）中、６−［（ヒドロキシアミノ）（イミノ）メチル］−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製例１７；９１６ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（６０７ｍｇ、６．００ｍｍｏｌ）の懸濁液に加えた。この反応混合物を室温で４０分間攪拌した後、還流下で２４時間加熱した。この反応混合物を冷却し、溶媒を蒸発させた。残渣を酢酸エチルと飽和重炭酸ナトリウム溶液とで分液した。有機相を分離し、ブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて粗生成物を得た（１．３ｇ）。この残渣を、シクロヘキサン中８〜３８％の酢酸エチルで溶出するクロマトグラフィーにより精製し、標題化合物を得た（４８６ｍｇ）。1H NMR (CHLOROFORM-d) d: 8.42 (d, 1H), 8.33 (dd, 1H), 7.76 (d, 1H), 7.12 (d, 1H), 7.11 (d, 1H), 4.80 (spt, 1H), 4.64 (s, 2H), 3.72 (t, 2H), 2.84 (t, 2H), 2.52 (s, 3H), 1.51 (s, 9H), 1.48 (d, 6H)
【０１１６】
調製例２３
［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸エチル
【化２８】
2011506568.tif 000030
【０１１７】
乾燥ＤＭＦ（３ｍｌ）中、２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリルトリフルオロ酢酸塩（実施例１１；１００ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、ブロモ酢酸エチル（４４ｍｇ、３０μｌ、０．２６ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（２００ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）の混合物を室温で１時間攪拌した。この反応混合物を水（１０ｍｌ）で希釈し、酢酸エチル（３×５ｍｌ）で抽出した。合わせた抽出物を乾燥させ、蒸発させた。シクロヘキサン中１０％の酢酸エチルで溶出するシリカゲルでのクロマトグラフィーにより精製し、標題化合物を無色の油状物として得た（８５ｍｇ）。MS m/z 461 [MH]+.
【０１１８】
調製例２４
３−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸エチル
【化２９】
2011506568.tif 000031
【０１１９】
アセトニトリル（３ｍｌ）中、２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリルトリフルオロ酢酸塩（実施例１１；１００ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、アクリル酸エチル（３１ｍｇ、３３μｌ、０．３１ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン（ＤＢＵ；１８７ｍｇ、１８５μｌ、１．２３ｍｍｏｌ）の混合物を室温で３時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチル（１０ｍｌ）に溶解させ、この溶液を水（５ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ、蒸発させた。この残渣を、シクロヘキサン中１０％の酢酸エチルで溶出するシリカゲルでのクロマトグラフィーにより精製し、標題化合物を無色の油状物として得た（８６ｍｇ）。MS m/z 475 [MH]+.
【０１２０】
実施例１
５−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン塩酸塩
【化３０】
2011506568.tif 000032
【０１２１】
５−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製例３）（２．５７ｇ、５．４７ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン中４ＭのＨＣｌ（１００ｍＬ）中で攪拌した。１時間後、反応物は曇りを生じ、さらに１６時間攪拌を続けた。蒸発させ、５−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン塩酸塩（２．２３ｇ、５．４９ｍｍｏｌ、収率１００％）を得た。1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) d  9.43 (2H, s), 8.19 (1H, s), 8.11 (1H dd), 8.03-8.00 (1H, m), 7.51-7.45 (3H, m), 4.89 (1H, sept.), 4.38 (2H, s), 3.43 (2H, t), 3.35-3.32 (2H, m), 1.37 (6H, d); m/z (API-ES) 370, 372 [M+H]+.
【０１２２】
実施例２
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリル塩酸塩
【化３１】
2011506568.tif 000033
【０１２３】
５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製例４；５３．７ｍｇ、０．１１７ｍｍｏｌ）およびジオキサン中４ＭのＨＣｌ（２ｍｌ）の混合物を室温で６４時間攪拌した。この混合物を真空濃縮し、残渣をＥｔ２Ｏで摩砕し、真空乾燥させると、薄褐色固体が残った（３５．１ｍｇ、７６％）。1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) d 9.52 (2H, br. s), 8.52 (1H, d), 8.40 (1H, dd), 8.02 (1H, dd), 7.57, (1H, d), 7.51-7.48 (2H, m), 4.99 (1H, sept.), 4.38 (2H, s), 3.39-3.34 (4H, m), 1.39 (6H, d); m/z (ES) 361 [M+H]+.
【０１２４】
実施例３
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリル
【化３２】
2011506568.tif 000034
【０１２５】
５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製例４、５１２ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）およびジオキサン中４ＭのＨＣｌ（２０ｍｌ）の混合物を室温で１８時間攪拌した。この混合物を真空濃縮して淡黄色固体を得、これをＭｅＯＨに再溶解させた。この溶液をＳＣＸ−３カートリッジ（１０ｇ）に適用し、生成物をＭｅＯＨ中１％のＮＨ３で溶出させた。濃縮して黄色油状物を得、これは一晩放置すると固体となった（３６６ｍｇ、９１％）。1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) d 8.38 (1H, d), 8.32 (1H, dd), 7.94 (1H, d), 7.32-7.17 (2H, m), 7.13 (1H, m), 4.80 (1H, sept), 4.10 (2H, s), 3.20-3.14 (4H, m), 1.48 (6H, d); m/z (ES) 361 [M+H]+.
【０１２６】
実施例４
［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸塩酸塩
【化３３】
2011506568.tif 000035
【０１２７】
ＴＨＦ−ＭｅＯＨ−水（３００μｌ、３００μｌ、２００μＬ）中、［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸エチルギ酸塩（調製例５、１１．６ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（０．３ｍｇ）の溶液に３分間１００℃までマイクロ波照射を行った。２Ｍ  ＨＣｌ水溶液（１ｍＬ）を加えた後、この溶液をＤＣＭ（２×２ｍＬ）で抽出した。合わせた有機液を真空濃縮し、標題化合物を白色固体として得た（１０．１ｍｇ、８５％）。1H NMR (400 MHz, d4-MeOH) d 8.48 (1H, d), 8.44 (1H, dd), 8.21 (1H, d), 7.44 (1H, t), 7.47 (2H, apparent d), 4.97 (1H, sept), 4.70 (2H, s), 4.32 (2H, s), 3.67 (2H, t), 3.57 (2H, t), 1.47 (6H, d); m/z (ES) 419 [M+H]+.
【０１２８】
実施例５
３−［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸塩酸塩
【化３４】
2011506568.tif 000036
【０１２９】
ＴＨＦ−ＭｅＯＨ−水（３００μｌ、３００μｌ、１００μｌ）中、３−［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸メチルギ酸塩（調製例６、５．９ｍｇ、０．０１３２ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（０．１５ｍｇ）の溶液に３分間１００℃までマイクロ波照射を行った。２Ｍ  ＨＣｌ水溶液（１ｍｌ）およびＤＣＭ（２ｍｌ）を順次加えると沈殿が生じた。濾過のより、標題化合物を白色固体として得た（６．５ｍｇ、定量的）。1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) d 12.71 (1H, br s), 11.41 (1H, br s), 8.53 (1H, d), 8.41 (1H, dd), 8.05 (1H, d), 7.57 (1H, d), 7.53 (1H, t), 7.46 (1H, d), 4.99 (1H, sept), 4.53 (2H, br s), 3.46-3.43 (4H, m), 3.65 (2H, br s), 2.98 (2H, t), 1.39 (6H, d); m/z (ES) 433 [M+H]+.
【０１３０】
実施例６
４−［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酪酸塩酸塩
【化３５】
2011506568.tif 000037
【０１３１】
標題化合物は、［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸エチルを４−［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酪酸エチルギ酸塩（調製例７、８．０ｍｇ）に置き換え、実施例４と同様にして製造した。標題化合物は白色固体として得られた（１０．１ｍｇ）。1H NMR (400 MHz, d4-MeOH) d 8.36 (1H, d), 8.33 (1H, dd), 8.23 (1H, d), 7.43 (1H, t), 7.37 (1H, d), 7.35 (1H, d), 4.85 (1H, sept), 4.52 (2H, br s), 3.63-3.54 (4H, br. m), 3.30 (2H, apparent dd), 2.43 (2H, t), 2.06 (2H, quin), 1.36 (6H, d); m/z (ES) 447 [M+H]+.
【０１３２】
実施例７
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリル
【化３６】
2011506568.tif 000038
【０１３３】
ＤＣＭ（５ｍＬ）中、２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリル（実施例３、２５．０ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）およびホルムアルデヒド（Ｈ２Ｏ中３７％ｗ／ｖ、８．０μＬ、０．１０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（２９ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で２０分間攪拌した。ブライン（５ｍＬ）を加え、この水溶液をＤＣＭ（５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機液を真空濃縮し、白色固体を得た。この固体をＤＭＳＯ−ＭｅＯＨに再溶解させ、ＳＣＸカートリッジに加え、ＭｅＯＨで洗浄した。生成物をＭｅＯＨ中ＮＨ３で溶出させ、真空濃縮し、白色固体を得た（２０．１ｍｇ、７８％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 8.41 (1H, d), 8.32 (1H, dd), 7.98 (1H, d), 7.29 (1H, t), 7.20 (1H, d), 7.12 (1H, d), 4.79 (1H, sept), 3.67 (2H, s), 3.30 (2H, t), 2.75 (2H, t), 2.49 (3H, s), 1.47 (6H, d).
【０１３４】
実施例８
３−［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸
【化３７】
2011506568.tif 000039
【０１３５】
室温で、エタノール（２ｍｌ）およびＴＨＦ（２ｍｌ）中、３−［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸エチル（調製例２０；９０ｍｇ；０．１８６ｍｍｏｌ）の溶液に、２Ｎ水酸化ナトリウム（０．１８６ｍｌ；０．３７２ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温でおよそ２．５時間攪拌した。大部分の溶媒を除去し、およそ１ｍｌの水で希釈した後、酢酸（およそ３００μｌ）を加えると沈殿が得られた。この混合物をジクロロメタンで抽出し、溶媒を除去し、ジエチルエーテルで摩砕した後に標題化合物を白色固体として得た（４０ｍｇ）。
1H NMR (DMSO-d6) d: 8.15 (d, 1H), 8.09 (dd, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.09 (d, 1H), 4.88 (spt, 1H), 3.64 (s, 2H), 2.76 (br. s., 4H), 2.72 (t, 2H), 2.44 (t, 2H), 2.41 (s, 3H), 1.36 (d, 6H)
MS m/z 456 [MH+]
【０１３６】
実施例９
［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸
【化３８】
2011506568.tif 000040
【０１３７】
室温で、エタノール（２ｍｌ）およびＴＨＦ（２ｍｌ）中、［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−ｙｌ）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸エチル（調製例２１；７５ｍｇ；０．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、２Ｎ水酸化ナトリウムを加え、得られた混合物を室温で４０分間攪拌した。溶媒を除去し、残渣を水（およそ１ｍｌ）に溶解させた。酢酸（１ｍｌ）を加え、総ての溶媒を除去し、残渣をトルエンとともに共蒸発させ、淡黄色固体を得た。この固体をジエチルエーテルで摩砕して標題化合物を得、これを淡黄色固体として濾別した（５０ｍｇ）。
MS m/z 442 [MH+]
1H NMR (DMSO-d6) d: 8.16 (br. s., 1H), 8.10 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.05 (d, 1H), 4.88 (spt, 1H), 3.70 (br. s., 2H), 2.91 (br. s., 2H), 2.77 (br. s., 4H), 2.42 (br. s., 3H), 1.36 (d, 6H).
【０１３８】
実施例１０
６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリントリフルオロ酢酸塩
【化３９】
2011506568.tif 000041
【０１３９】
０℃で、ジクロロメタン（３ｍｌ）中、６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製例１９；２１０ｍｇ；０．４３４ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（３ｍｌ）を滴下した。得られた混合物を０℃で１時間攪拌し、淡黄色の溶液を得た。溶媒を除去し、トルエンとともに共蒸発させて白色固体を得、これをジエチルエーテルで摩砕し、標題化合物を白色固体として得た（２０６ｍｇ）。
1H NMR (DMSO-d6) d: 9.08 (br. s., 2H), 8.17 (d, 1H), 8.10 (dd, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.28 (d, 1H), 4.84 - 4.94 (m, 1H), 4.38 (br. s., 2H), 3.45 - 3.52 (m, 2H), 2.98 (t, 2H), 2.46 (s, 3H), 1.36 (d, 6H) 
MS m/z 384 [MH+]
【０１４０】
実施例１１
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリルトリフルオロ酢酸塩
【化４０】
2011506568.tif 000042
【０１４１】
ジクロロメタン（３ｍｌ）中、６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（調製例２２；４８６ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）の氷冷溶液に、トリフルオロ酢酸（３ｍｌ）を加えた。この反応混合物を０℃で３０分間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をトルエンから共蒸発させた（×２）。この残渣をジエチルエーテルで摩砕し、標題化合物を無色の固体として得、これを濾別し、乾燥させた（４８５ｍｇ）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) d: 1.48 (6H, d), 2.54 (3H, s), 3.09 (2H, m), 3.5 (2H, 残留溶媒により隠されていた),  4.36 (2H, s),  4.80 (1H, m), 7.08-7.15 (2H, m), 7.85 (1H, d), 8.33 (1H, d), 8.42 (1H, s), 10.20 (2H, br s). MS m/z 375 [MH]+.
【０１４２】
実施例１２
［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸
【化４１】
2011506568.tif 000043
【０１４３】
エタノール（２ｍｌ）中、［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸エチル（調製例２３；８０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の懸濁液に、２Ｍ水酸化ナトリウム（２ｍｌ）を加えた。この反応混合物を室温で２時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を水（５ｍｌ）で希釈した。この溶液を酢酸で酸性化し、酢酸エチル（３×５ｍｌ）で抽出した。水相を蒸発させ、残渣をＭＤＡＰにより精製し、標題化合物を無色の固体として得た（７ｍｇ）。1H NMR (400 MHz, d4MeOH) d: 1.46 (6H, d), 2.55 (3H, s), 3.19 (2H, t), 3.35 (2H, s), 3.67 (2H, t), 3.78 (2H, s), 4.53 (2H, s),  4.95 (1H, m) (水ピークにより一部隠されていた), 7.20 (1H, d), 7.54 (1H, d), 7.85 (1H, d), 8.50-8.60 (2H, m). MS m/z 433 [MH]+.
【０１４４】
実施例１３
３−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸ナトリウム塩
【化４２】
2011506568.tif 000044
【０１４５】
６０℃で、エタノール（２ｍｌ）中、３−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸エチル（調製例２４；８０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の溶液に、２Ｍ水酸化ナトリウム（２ｍｌ）を加えた。この反応混合物を６０℃で２時間攪拌し、室温まで冷却し、水（２ｍｌ）で希釈した。この固体を濾別し、少量の水で洗浄し、乾燥させ、標題化合物を無色の固体として得た（５５ｍｇ）。1H NMR (400 MHz, d6DMSO) d: 1.39 (6H, d), 2.08 (2H, t), 2.44 (3H, s), 2.59-2.78 (6H, m), 3.56 (2H, s), 4.98 (1H, m), 7.09 (1H, d), 7.55 (1H, d), 7.65 (1H, d), 8.40 (1H, dd), 8.50 (1H, s). MS m/z 447 [MH]+.
【０１４６】
Ｓ１Ｐ１  ＧＴＰγＳアッセイのための膜調製物
膜調製物に関しては、総ての工程を４℃で行った。ヒトＳ１Ｐ１受容体を安定発現するラット肝細胞腫細胞またはヒトＳ１Ｐ３受容体を安定発現するラット好塩基球性白血病細胞（ＲＢＬ）を集密度８０％まで増殖させた後、１０ｍｌリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に採取し、１２００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清を除去した後、ペレットを再懸濁させ、細胞をガラスワーリングブレンダー内、２００ｍｌのバッファー（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１ｍＭロイペプチン、２５μｇ／ｍｌバシトラシン、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＰＭＳＦ、２μＭペプスタチンＡ）中、１５秒２バーストでホモジナイズした。最初のバースト後に５分間と最後のバースト後に１０〜４０分間、ブレンダーを氷中に差し込んで消泡した。その後、この材料を５００ｇで２０分間回転させ、上清を４８，０００ｇで３６分間回転させた。このペレットを、ＰＭＳＦとペプスタチンＡを含まないこと以外は上記と同じバッファーに再懸濁させた。次に、この材料を０．６ｍｍのニードルに通して必要な容量とし（通常、元の細胞ペレットの容量の４倍）、アリコートに分けて−８０℃で冷凍保存した。
【０１４７】
Ｓ１Ｐ１  ＧＴＰγＳアッセイのためのもう１つの膜調製物
総ての工程を４℃で行った。細胞をガラスワーリングブレンダー内、２００ｍｌのバッファー（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１ｍＭロイペプチン、２５μｇ／ｍｌバシトラシン、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＰＭＳＦ、２μＭペプスタチンＡ）中、１５秒２バーストでホモジナイズした。最初のバースト後に５分間と最後のバースト後に１０〜４０分間、ブレンダーを氷中に差し込んで消泡した。その後、この材料を５００ｇで２０分間回転させ、上清を４８，０００ｇで３６分間回転させた。このペレットを、ＰＭＳＦとペプスタチンＡを含まないこと以外は上記と同じバッファーに再懸濁させた。次に、この材料を０．６ｍｍのニードルに通して必要な容量とし（通常、元の細胞ペレットの容量の４倍）、アリコートに分けて−８０℃で冷凍保存した。
【０１４８】
Ｓ１Ｐ１  ＧＴＰγＳアッセイ
ヒトＳ１Ｐ１ラット肝細胞腫膜（１．５μｇ／ウェル）を、アッセイバッファー（ＨＥＰＥＳ  ２０ｍＭ、ＭｇＣｌ２  １０ｍＭ、ＮａＣｌ  １００ｍＭ、ｐＨはＫＯＨ  ５Ｍを用いて７．４に調整、ＧＤＰ  １０μＭ  ＦＡＣ（最終アッセイ濃度）およびサポニン９０μｇ／ｍｌ  ＦＡＣも添加）中、麦芽凝集素（ＷＧＡ）コーティングシンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）ビーズ（０．１２５ｍｇ／ウェル）に接着させた。
【０１４９】
３０分氷上でプレカップリングさせた後、ビーズおよび膜懸濁液を、０．１μｌの化合物を含有する白色ＧｒｅｉｎｅｒポリプロピレンＬＶ３８４ウェルプレートに分散させた（５μｌ／ウェル）。その後、アッセイバッファーで構成した５μｌ／ウェル［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ（最終放射性リガンド濃度０．５ｎＭ）をアゴニストプレートに加えた。次に、最終アッセイカクテル（１０．１μｌ）を１０００ｒｐｍで５分間遠心分離した後、すぐにＶｉｅｗｌｕｘリーダーで読み取った。
【０１５０】
総ての試験化合物をＤＭＳＯに１０ｍＭの濃度で溶解させ、１００％ＤＭＳＯで１／４希釈系を用いて調製し、１１点用量応答曲線を作製した。これらの希釈液を、総てのアッセイに関してプレート間でＤＭＳＯ濃度が一定となるように、アッセイプレートに移した。
【０１５１】
データは総て、各プレートについて高い対照ウェル１６と低い対照ウェル１６の平均値に対してノーマライズした。その後、４パラメーター曲線の当てはめを行った。
【０１５２】
Ｓ１Ｐ１  ＧＴＰγＳアッセイの別法
Ｓ１Ｐ１発現ＲＨ７７７７膜（１．５μｇ／ウェル）膜（１．５μｇ／ウェル）を、２３Ｇニードルを通すことによりホモジナイズした。次に、これらをアッセイバッファー（ＨＥＰＥＳ  ２０ｍＭ、ＭｇＣｌ２  １０ｍＭ、ＮａＣｌ  １００ｍＭ、ｐＨはＫＯＨ  ５Ｍを用いて７．４に調整）中、ＷＧＡコーティングＳＰＡビーズ（０．１２５ｍｇ／ウェル）に接着させた。ＧＤＰ  １０μＭ  ＦＡＣおよびサポニン９０μｇ／ｍｌ  ＦＡＣも加えた。
【０１５３】
３０分氷上でプレカップリングさせた後、ビーズおよび膜懸濁液を、０．１μｌの化合物を含有する白色ＧｒｅｉｎｅｒポリプロピレンＬＶ３８４ウェルプレートに分散させた（５μｌ／ウェル）。その後、アッセイバッファーで構成した５μｌ／ウェル［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ（最終放射性リガンド濃度は、Ｓ１Ｐ１の場合０．５ｎＭ、Ｓ１Ｐ３の場合０．３ｎＭ）をこれらのプレートに加えた。次に、最終アッセイカクテル（１０．１μｌ）を密閉し、遠心機で回転させた後、すぐにＶｉｅｗｌｕｘ装置で読み取った。
【０１５４】
本発明の例示的化合物はｐＥＣ５０＞５を有した。実施例１〜７、８、９、１１〜１３は＞７のｐＥＣ５０を有した。実施例２、４、６および８は＞８のｐＥＣ５０を有した。
【０１５５】
Ｓ１Ｐ３
ラット好塩基球性白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）（１．５μｇ／ウェル）からのＳ１Ｐ３膜を、アッセイバッファー（ＨＥＰＥＳ  ２０ｍＭ、ＭｇＣｌ２  ３ｍＭ、ＮａＣｌ  １００ｍＭ、ｐＨはＫＯＨ  ５Ｍを用いて７．４に調整、ＧＤＰ  １０μＭ  ＦＡＣおよびサポニン９０μｇ／ｍｌ  ＦＡＣも添加）中、ＷＧＡコーティングＳＰＡビーズに接着させた（０．１２５ｍｇ／ウェル）。
【０１５６】
３０分氷上でプレカップリングさせた後、ビーズおよび膜懸濁液を、０．１μｌの化合物を含有する白色ＧｒｅｉｎｅｒポリプロピレンＬＶ３８４ウェルプレートに分散させた（５μｌ／ウェル）。その後、アッセイバッファーで構成した５μｌ／ウェル［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ（最終放射性リガンド濃度０．５ｎＭ）をアゴニストプレートに加えた。次に、最終アッセイカクテル（１０．１μｌ）を１０００ｒｐｍで５分間遠心分離した後、すぐにＶｉｅｗｌｕｘリーダーで読み取った。
【０１５７】
総ての試験化合物をＤＭＳＯに１０ｍＭの濃度で溶解させ、１００％ＤＭＳＯで１／４希釈系を用いて調製し、１１点用量応答曲線を作製した。これらの希釈液を、総てのアッセイに関してプレート間でＤＭＳＯ濃度が一定となるように、アッセイプレートに移した。
【０１５８】
データは総て、各プレートについて高い対照ウェル１６と低い対照ウェル１６の平均値に対してノーマライズした。その後、４パラメーター曲線の当てはめを行った。
【０１５９】
Ｓ１Ｐ３  ＧＴＰγＳアッセイの別法
Ｓ１Ｐ３発現ＲＢＬ膜（１．５μｇ／ウェル）を、２３Ｇニードルを通すことによりホモジナイズした。次に、これらをアッセイバッファー（ＨＥＰＥＳ  ２０ｍＭ、ＭｇＣｌ２  １０ｍＭ、ＮａＣｌ  １００ｍＭ、ｐＨはＫＯＨ  ５Ｍを用いて７．４に調整）中、ＷＧＡコーティングＳＰＡビーズ（０．１２５ｍｇ／ウェル）に接着させた。ＧＤＰ  １０μＭ  ＦＡＣおよびサポニン９０μｇ／ｍｌ  ＦＡＣも加えた。
【０１６０】
３０分氷上でプレカップリングさせた後、ビーズおよび膜懸濁液を、０．１μｌの化合物を含有する白色ＧｒｅｉｎｅｒポリプロピレンＬＶ３８４ウェルプレートに分散させた（５μｌ／ウェル）。その後、アッセイバッファーで構成した５μｌ／ウェル［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ（最終放射性リガンド濃度は、Ｓ１Ｐ１の場合０．５ｎＭ、Ｓ１Ｐ３の場合０．３ｎＭ）をこれらのプレートに加えた。次に、最終アッセイカクテル（１０．１μｌ）を密閉し、遠心機で回転させた後、すぐにＶｉｅｗｌｕｘ装置で読み取った。
【０１６１】
このアッセイで供試された例示的化合物はｐＥＣ５０＜６を有し、多くがｐＥＣ５０＜５を有した。実施例１、４、８〜１０、１２および１３はｐＥＣ５０＜５を有した。
【手続補正書】
【提出日】平成22年8月19日(2010.8.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2011506568.tif 000048
［式中、
Ａはフェニルであり；
Ｒ１は、クロロ、イソプロポキシおよびシアノから独立に選択される２個までの置換基であり；
Ｒ２は水素またはメチルであり；
Ｂは：
【化２】
2011506568.tif 000049
であり；
Ｒ３は水素、メチルまたは（ＣＨ２）１−３ＣＯ２Ｈであり；
Ｒ４は水素である］
の化合物、またはその薬学上許容される塩。
【請求項２】
５−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリル、
［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸、
３−［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸、
４−［５−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酪酸、
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−５−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリル、
［８−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメン−４−イル］酢酸、
３−［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸、
［６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸、
６−（５−｛３−クロロ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、
２−［（１−メチルエチル）オキシ］−５−［３−（５−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾニトリル、
［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］酢酸、
３−［６−（５−｛３−シアノ−４−［（１−メチルエチル）オキシ］フェニル｝−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−５−メチル−３，４−ジヒドロ−２（１Ｈ）−イソキノリニル］プロパン酸、
およびそれらの薬学上許容される塩
から選択される化合物。
【請求項３】
Ｓ１Ｐ１受容体により媒介される症状または障害の処置のための、請求項１または２に記載の化合物の使用。
【請求項４】
症状または障害が、多発性硬化症、自己免疫疾患、慢性炎症疾患、喘息、炎症性神経障害、関節炎、移植、クローン病、潰瘍性大腸炎、紅斑性狼瘡、乾癬、虚血再潅流傷害、固形腫瘍および腫瘍転移、脈管形成に関連する疾患、血管疾患、疼痛症状、急性ウイルス性疾患、炎症性腸症状、インスリン依存性および非インスリン依存性糖尿病である、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
症状が紅斑性狼瘡である、請求項３に記載の使用。
【請求項６】
Ｓ１Ｐ１受容体により媒介される症状または障害の処置において使用するための薬剤の製造のための、請求項１または２に記載の化合物の使用。
【請求項７】
症状または障害が、多発性硬化症、自己免疫疾患、慢性炎症疾患、喘息、炎症性神経障害、関節炎、移植、クローン病、潰瘍性大腸炎、紅斑性狼瘡、乾癬、虚血再潅流傷害、固形腫瘍および腫瘍転移、脈管形成に関連する疾患、血管疾患、疼痛症状、急性ウイルス性疾患、炎症性腸症状、インスリン依存性および非インスリン依存性糖尿病である、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
症状が紅斑性狼瘡である、請求項６に記載の使用。
【請求項９】
請求項１または２に記載の化合物を含んでなる、医薬組成物。
【請求項１０】
Ｓ１Ｐ１受容体により媒介され得る、ヒトを含む哺乳類における症状または障害の処置方法であって、罹患者に治療上安全かつ有効な量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩を投与することを含んでなる、方法。
【請求項１１】
症状が紅斑性狼瘡である、請求項１０に記載の処置方法。
【国際調査報告】
2011506568.tif 000050
2011506568.tif 000051
2011506568.tif 000052