(57)【要約】炎症性腸疾患、関節リウマチ、糖尿病、セリアック病、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性肝疾患、アジソン病、シェーグレン症候群、移植拒絶反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病を含む自己免疫性疾患を治療および／または予防するための、方法および組成物が提供される。一実施形態において、本発明は、有効量のシクロホスファミドおよび抗胸腺細胞グロブリンを、自己免疫性疾患の治療または予防が必要な被験体に投与する工程を含む、自己免疫性疾患を治療または予防する方法に関し、当該自己免疫性疾患は、炎症性腸疾患、関節リウマチ、糖尿病、セリアック病、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性肝疾患、アジソン病、シェーグレン症候群、移植拒絶反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病であり、当該被験体の免疫系が、シクロホスファミド投与の後に被験体に継続的に存在する幹細胞から再構築される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
自己免疫性疾患を治療または予防する方法であり、前記方法が、有効量のシクロホスファミドおよび抗胸腺細胞グロブリンを、自己免疫性疾患の治療または予防が必要な被験体に投与する工程を含み、前記自己免疫性疾患が、炎症性腸疾患、関節リウマチ、糖尿病、セリアック病、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性肝疾患、アジソン病、シェーグレン症候群、移植拒絶反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病であり、
前記被験体の免疫系が、シクロホスファミドの投与後に前記被験体に継続的に存在する幹細胞から再構築される、方法。
【請求項２】
自己免疫性疾患を治療または予防する方法であり、前記方法が、有効量のシクロホスファミド、抗胸腺細胞グロブリン、およびグラチラマー酢酸塩を、自己免疫性疾患の治療または予防が必要な被験体に投与する工程を含み、前記自己免疫性疾患が、炎症性腸疾患、関節リウマチ、糖尿病、セリアック病、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性肝疾患、アジソン病、シェーグレン症候群、移植拒絶反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病である、方法。
【請求項３】
自己免疫性疾患を治療または予防する方法であり、前記方法が、
ａ．有効量のシクロホスファミドおよび抗胸腺細胞グロブリンを、自己免疫性疾患の治療または予防が必要な被験体に投与する工程と、
ｂ．前記被験体の免疫系を、シクロホスファミド投与後に前記被験体に継続的に存在する幹細胞を用いて再構築する工程とを含み、前記自己免疫性疾患が、炎症性腸疾患、関節リウマチ、糖尿病、セリアック病、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性肝疾患、アジソン病、シェーグレン症候群、移植拒絶反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病である、方法。
【請求項４】
有効量のシクロホスファミドおよび抗胸腺細胞グロブリンを、自己免疫性疾患の治療または予防が必要な被験体に投与する工程を含む、自己免疫性疾患を治療または予防する方法であり、前記自己免疫性疾患が、炎症性腸疾患、関節リウマチ、糖尿病、セリアック病、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性肝疾患、アジソン病、シェーグレン症候群、移植拒絶反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病であり、
前記方法が、前記被験体に骨髄または幹細胞を移植する工程を含まない、方法。
【請求項５】
有効量のシクロホスファミドおよび抗胸腺細胞グロブリンを、自己免疫性疾患の治療または予防が必要な被験体に投与する工程と、前記被験体の免疫系を内因的に再構築させる工程とを含む、自己免疫性疾患を治療または予防する方法であり、前記自己免疫性疾患が、炎症性腸疾患、関節リウマチ、糖尿病、セリアック病、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性肝疾患、アジソン病、シェーグレン症候群、移植拒絶反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病である、方法。
【請求項６】
前記被験体の免疫系が、シクロホスファミドの投与後に内因的に再構築する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記被験体の免疫系が、抗胸腺細胞グロブリンの投与後に内因的に再構築する、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
幹細胞が、シクロホスファミドの投与と前記被験体の免疫系の再構築との間では前記被験体に投与されない、請求項１、３、および５〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記自己免疫性疾患が、炎症性腸疾患である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記炎症性腸疾患が、潰瘍性大腸炎である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記炎症性腸疾患が、クローン病である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記シクロホスファミドの量が、約２５〜約７５ｍｇ／ｋｇ／日である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記シクロホスファミドの量が、約５０ｍｇ／ｋｇ／日である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記シクロホスファミドが、約３〜約６日間投与される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記シクロホスファミドが、約４日間投与される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗胸腺細胞グロブリンの前記量が、前記被験体のＴ細胞の数を減らすのに有効である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗胸腺細胞グロブリンの前記量が、約１〜約２０ｍｇ／ｋｇ／日である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗胸腺細胞グロブリンの前記量が、約１．５〜約２．５ｍｇ／ｋｇ／日である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗胸腺細胞グロブリンの前記量が、約２．５ｍｇ／ｋｇ／日である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記シクロホスファミドおよび前記抗胸腺細胞グロブリンが、同時に投与される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗胸腺細胞グロブリンが、前記シクロホスファミドの投与の後に投与される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗胸腺細胞グロブリンが、前記シクロホスファミドが免疫リンパ除去を達成した後に投与される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗胸腺細胞グロブリンが、約３〜約６日間投与される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗胸腺細胞グロブリンが、約４日間投与される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
有効量の顆粒球コロニー刺激因子を投与する工程をさらに含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
有効量の抗生物質を投与する工程をさらに含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
有効量のグラチラマー酢酸塩を投与する工程をさらに含む、請求項１および３〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記グラチラマー酢酸塩の量が、約２０〜約４０ｍｇ／ｋｇ／日である、請求項２または２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記グラチラマー酢酸塩の量が、約２０ｍｇ／ｋｇ／日である、請求項２または２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記グラチラマー酢酸塩が、約３０日〜約１年間投与される、請求項２または２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記グラチラマー酢酸塩が、前記シクロホスファミドの前記投与の前に、同時に、または、後に投与される、請求項２または２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記グラチラマー酢酸塩の初回用量が、前記シクロホスファミドの初回用量の約０〜約３０日前に投与される、請求項２または２７に記載の方法。
【請求項３３】
前記グラチラマー酢酸塩の初回用量が、前記シクロホスファミドの最終用量の約０〜約３０日後に投与される、請求項２または２７に記載の方法。
【請求項３４】
前記グラチラマー酢酸塩が、約３０日〜約１年間投与される、請求項２または２７に記載の方法。
【請求項３５】
（ａ）有効量のシクロホスファミドおよび抗胸腺細胞グロブリンと、（ｂ）薬学的に許容可能な担体またはビヒクルとを含む、組成物。
【請求項３６】
有効量のグラチラマー酢酸塩をさらに含む、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
自己免疫性疾患を治療または予防するためのキットであり、（ａ）一つ以上の用量のシクロホスファミドと、（ｂ）一つ以上の用量の抗胸腺細胞グロブリンとを含み、前記自己免疫性疾患が、炎症性腸疾患、関節リウマチ、糖尿病、セリアック病、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性肝疾患、アジソン病、シェーグレン症候群、移植拒絶反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病である、キット。
【請求項３８】
一つ以上の用量のグラチラマー酢酸塩をさらに含む、請求項３７に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２００８年７月２５日に出願された米国仮特許出願第６１／０８３，６０７号の利益を主張し、この出願の開示はその全体が本明細書において参照として援用される。
【背景技術】
【０００２】
背景
炎症性腸疾患は、胃腸管の領域を侵す炎症性障害群である。二つの最も一般的な炎症性腸疾患は、クローン病および潰瘍性大腸炎である。
【０００３】
クローン病（肉芽腫性大腸炎および限局性腸炎としても知られる）は、北米のおよそ５００，０００人の患者を侵し、およそ１．５倍の標準化死亡率の全般的増加および５８年の平均寿命を伴う、自己免疫性疾患である。
【０００４】
クローン病の従来の治療は、腸の一つ以上の外科的切除を含むことが多いが、これは、腸の残りの長さが完全非経口栄養による生涯の静脈栄養補給なしに生命を維持するのに不十分となる、「短腸症候群」と呼ばれる症候群をもたらしうる。
【０００５】
したがって、クローン病等の炎症性腸疾患を含む自己免疫性疾患を治療または予防するための、改良された方法が必要である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
発明の要旨
一実施形態において、本発明は、有効量のシクロホスファミドおよび抗胸腺細胞グロブリンを、自己免疫性疾患の治療または予防が必要な被験体に投与する工程を含む、自己免疫性疾患を治療または予防する方法に関し、当該自己免疫性疾患は、炎症性腸疾患、関節リウマチ、糖尿病、セリアック病、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性肝疾患、アジソン病、シェーグレン症候群、移植拒絶反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病であり、当該被験体の免疫系が、シクロホスファミド投与の後に被験体に継続的に存在する幹細胞から再構築される。
【０００７】
別の実施形態では、本発明は、有効量のシクロホスファミド、抗胸腺細胞グロブリン、およびグラチラマー酢酸塩を、自己免疫性疾患の治療または予防が必要な被験体に投与する工程を含む、自己免疫性疾患を治療または予防する方法に関し、当該自己免疫性疾患は、炎症性腸疾患、関節リウマチ、糖尿病、セリアック病、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性肝疾患、アジソン病、シェーグレン症候群、移植拒絶反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病である。
【０００８】
さらにまた別の実施形態では、本発明は、自己免疫性疾患を治療または予防する方法に関し、当該方法は、（ａ）有効量のシクロホスファミドおよび抗胸腺細胞グロブリンを、自己免疫性疾患の治療または予防が必要な被験体に投与する工程と、（ｂ）シクロホスファミド投与の後に当該被験体に継続的に存在する幹細胞を用いて、当該被験体の免疫系を再構築する工程とを含み、当該自己免疫性疾患は、炎症性腸疾患、関節リウマチ、糖尿病、セリアック病、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性肝疾患、アジソン病、シェーグレン症候群、移植拒絶反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病である。
【０００９】
さらに別の実施形態では、本発明は、有効量のシクロホスファミドおよび抗胸腺細胞グロブリンを、自己免疫性疾患の治療または予防が必要な被験体に投与する工程を含む、自己免疫性疾患を治療または予防する方法に関し、当該自己免疫性疾患は、炎症性腸疾患、関節リウマチ、糖尿病、セリアック病、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性肝疾患、アジソン病、シェーグレン症候群、移植拒絶反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病であり、当該方法は、骨髄または幹細胞を被験体に移植する工程を含まない。
【００１０】
別の実施形態では、本発明は、有効量のシクロホスファミドおよび抗胸腺細胞グロブリンを、自己免疫性疾患の治療または予防が必要な被験体に投与する工程と、当該被験体の免疫系を内因的に再構築させることができる工程とを含む、自己免疫性疾患を治療または予防する方法に関し、当該自己免疫性疾患は、炎症性腸疾患、関節リウマチ、糖尿病、セリアック病、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性肝疾患、アジソン病、シェーグレン症候群、移植拒絶反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病である。
【００１１】
他の実施形態においては、本発明は、（ａ）有効量のシクロホスファミドおよび抗胸腺細胞グロブリンと、（ｂ）薬学的に許容可能な担体またはビヒクルとを含む組成物に関する。いくつかの実施形態において、組成物は、有効量のグラチラマー酢酸塩をさらに含む。
【００１２】
いくつかの実施形態において、本発明は、一つ以上の用量のシクロホスファミドおよび一つ以上の用量の抗胸腺細胞グロブリンを含む、一つ以上の用量の本発明の組成物を含む、自己免疫性疾患の治療または予防のためのキットに関する。ある特定の実施形態では、キットは、一つ以上の用量のグラチラマー酢酸塩をさらに含む。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
発明の詳細な説明
本明細書において用いられるところの、「有効量」は、例えば炎症性腸疾患、関節リウマチ、糖尿病、セリアック病、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性肝疾患、アジソン病、シェーグレン症候群、移植拒絶反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病を含む、自己免疫性疾患を治療または予防するために有効な量である。
【００１４】
本明細書において用いられるところの、「約」という用語は、直後の数字の表示とともに使用される場合には、参照される数字の表示プラスまたはマイナスその参照される数字の表示の１０％までを意味する。
【００１５】
本明細書において用いられるところの、被験体の疾患を「治療する」または疾患を有するか有することが疑われる被験体を「治療する」という用語は、疾患の少なくとも一つの症状が減少し、または悪化が予防されるように、当該被験体に医薬品治療、例えば一つ以上の薬剤の投与を受けさせることをさす。
【００１６】
本発明のいくつかの実施形態は、シクロホスファミドおよび抗胸腺細胞グロブリンを被験体に投与することにより、自己免疫性疾患を治療または予防する方法に関し、当該被験体の免疫系が、シクロホスファミド投与の後に被験体に継続的に存在する幹細胞だけから再構築される。本発明の方法により治療または予防される自己免疫性疾患には、炎症性腸疾患、関節リウマチ、糖尿病、セリアック病、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性肝疾患、アジソン病、シェーグレン症候群、移植拒絶反応、移植片対宿主病、および／または宿主対移植片病が含まれるがこれに限られない。本明細書において用いられるところの、「炎症性腸疾患」または「ＩＢＤ：ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ」という用語には、当技術分野で認められる形の関連した状態群を含む。いくつかの主なＩＢＤの形が公知であり、クローン病（例えば非活動型および活動型の局所腸疾患）および潰瘍性大腸炎（例えば非活動型および活動型）が、これらの障害で最も一般的である。加えて、ＩＢＤには、過敏性腸症候群、顕微鏡的大腸炎、リンパ球プラズマ細胞性腸炎、セリアック病（ｃｏｅｌｉａｃ  ｄｉｓｅａｓｅ）、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎および好酸球性腸炎が含まれる。他のより一般でないＩＢＤの形には、病型不定型大腸炎、感染性大腸炎（ウイルス性、細菌性または原生動物性、例えばアメーバ性大腸炎）（例えばクロストリジウムディフィセル性大腸炎）、偽膜性大腸炎（壊死性大腸炎）、虚血性炎症性腸疾患、ベーチェット病、サルコイドーシス、強皮症、ＩＢＤ関連異形成、異形成関連塊または病変、および原発性硬化性胆管炎が含まれる。
【００１７】
別の実施形態では、本発明は、シクロホスファミド、抗胸腺細胞グロブリン、およびグラチラマー酢酸塩を被験体に投与することにより、自己免疫性疾患を治療または予防する方法に関する。本発明の方法により治療または予防される自己免疫性疾患には、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、関節リウマチ、糖尿病、セリアック病、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性肝疾患、アジソン病、シェーグレン症候群、移植拒絶反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病が含まれるがこれに限られない。
【００１８】
いくつかの実施形態において、本発明は、有効量のシクロホスファミドおよび抗胸腺細胞グロブリンを、自己免疫性疾患の治療または予防が必要な被験体に投与する工程、および当該被験体の免疫系を内因的に再構築させることができる工程により、自己免疫性疾患を治療または予防する方法に関する。ある特定の実施形態において、自己免疫性疾患は、炎症性腸疾患、関節リウマチ、糖尿病、セリアック病、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性肝疾患、アジソン病、シェーグレン症候群、移植拒絶反応、移植片対宿主病、および／または宿主対移植片病である。いくつかの実施形態においては、被験体の免疫系は、シクロホスファミドの投与後に内因的に再構築する。さらに他の実施形態においては、被験体の免疫系は、抗胸腺細胞グロブリンの投与後に内因的に再構築する。本明細書において用いられるところの、「内因的に再構築する」という語句には、外因性の幹細胞を伴わない（例えば幹細胞移植の実施を伴わない）再構築を含む。
【００１９】
免疫リンパ除去（Ｉｍｍｕｎｅ  Ｌｙｍｐｈａｂｌａｔｉｏｎ）の達成
ある特定の実施形態では、シクロホスファミドは、免疫リンパ除去を達成するのに有効な量で投与されうる。被験体の白血球（「ＷＢＣ：ｗｈｉｔｅ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ」）数が約０〜約１００であるときに、免疫リンパ除去が達成される。被験体のＷＢＣを測定する方法は、当業者に周知である。
【００２０】
いくつかの実施形態においては、シクロホスファミドが、約１０〜約１００、約２５〜約７５、約３５〜約６５、または約４５〜約５５の量で投与される。いくつかの実施形態においては、シクロホスファミドが、約１０、約２０、約３０、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約７０、約８０、約９０、または約１００ｍｇ／ｋｇ／日の量で投与される。他の実施形態においては、シクロホスファミドが、約５０ｍｇ／ｋｇ／日の量で投与される。いくつかの実施形態においては、シクロホスファミドが、約３〜約６日の期間、毎日投与される。いくつかの実施形態においては、シクロホスファミドは、約３、約４、約５または約６日の期間、毎日投与される。他の実施形態においては、シクロホスファミドは、約４日の期間、毎日投与される。さらに他の実施形態においては、シクロホスファミドは、約５０ｍｇ／ｋｇ／日の量で、約４日の期間、毎日投与される。
【００２１】
いくつかの実施形態においては、シクロホスファミドは、懸濁液または溶液の形で投与される。いくつかの実施形態においては、シクロホスファミド溶液には、凍結乾燥シクロホスファミドから再構築されたシクロホスファミドが含まれる。凍結乾燥シクロホスファミドは、例えばリン酸緩衝食塩水（「ＰＢＳ：ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ」）、食塩水、水、またはその任意の組み合わせにおいて再構築されうる。いくつかの実施形態において、溶液中のシクロホスファミドの濃度は、約２０ｍｇ／ｍＬである。一実施形態においては、シクロホスファミド溶液は、静脈内投与される。
【００２２】
シクロホスファミドは性腺毒性でありうるため、被験体の受態能を低下させ、または後に妊娠する女性の被験体の自然流産、早期分娩および／または低体重乳児出産のリスクを高める可能性がある。したがって、いくつかの実施形態では、被験体は、妊娠しておらず、または妊娠の危険がない。女性の被験体に妊娠の危険がある場合には、当該方法には、例えば、参照により内容が全体として本明細書に組み込まれる、Ｚ．Ｂｌｕｍｅｎｆｅｌｄ，“Ｇｅｎｄｅｒ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ：ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ  ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｙｏｕｎｇ  ｗｏｍｅｎ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｉｎ  ｍｅｎ  ｅｘｐｏｓｅｄ  ｔｏ  ｇｏｎａｄｏｔｏｘｉｃ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．”Ｍｉｎｅｒｖａ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，３２：２３‐３４（２００７）に記載されるように、性腺刺激ホルモン放出ホルモンアゴニストアナログ（「ＧｎＲＨ‐ａ：ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｇｏｎｉｓｔｉｃ  ａｎａｌｏｇ」）の投与をさらに含みうる。一実施形態において、ＧｎＲＨ‐ａは、ゴセレリン酢酸塩、ロイプロリド酢酸塩、またはナファレリン酢酸塩である。一実施形態において、ＧｎＲＨ‐ａの投与は、シクロホスファミドの一切の性腺毒性を減らす。いくつかの実施形態においては、ＧｎＲＨ‐ａは、シクロホスファミドと同時に投与される。他の実施形態においては、ＧｎＲＨ‐ａは、シクロホスファミドの初回用量の約４〜６ヵ月前から始めて毎月投与され、シクロホスファミドの最終投与まで続く。いくつかの実施形態においては、ＧｎＲＨ‐ａは、約３〜約４ｍｇの量で、毎月投与される。
【００２３】
いくつかの実施形態においては、当該方法は、有効量の抗胸腺細胞グロブリン（「ＡＴＧ：ａｎｔｉ‐ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ  ｇｌｏｂｕｌｉｎ」）を被験体に投与する工程をさらに含む。一実施形態においては、ＡＴＧは、シクロホスファミドの投与と同時に、または後に投与される。別の実施形態では、ＡＴＧは、被験体のＴ細胞の数を減らす。
【００２４】
いくつかの実施形態においては、ＡＴＧは、約１〜約２０ｍｇ／ｋｇ／日の量で投与される。他の実施形態においては、ＡＴＧは、約１０〜約２０ｍｇ／ｋｇ／日の量で投与される。他の実施形態においては、ＡＴＧは、約１．５〜約２．５ｍｇ／ｋｇ／日の量で投与される。他の実施形態においては、ＡＴＧは、約２．５ｍｇ／ｋｇ／日の量で投与される。他の実施形態においては、ＡＴＧは、約１．５ｍｇ／ｋｇ／日の量で投与される。いくつかの実施形態においては、ＡＴＧは、約１〜約１４日の期間、毎日投与される。他の実施形態においては、ＡＴＧは、約３〜約６日の期間、毎日投与される。他の実施形態においては、ＡＴＧは、約４日の期間、毎日投与される。さらに他の実施形態においては、ＡＴＧは、約２．５ｍｇ／ｋｇ／日の量で、約４日の期間、毎日投与される。いくつかの実施形態においては、ＡＴＧは、静脈内投与される。
【００２５】
いくつかの実施形態においては、ＡＴＧは、シクロホスファミドの投与と同時に投与される。いくつかの実施形態においては、ＡＴＧの各用量は、シクロホスファミドの用量が投与されるのと同じ日に投与される。他の実施形態においては、ＡＴＧは、シクロホスファミドの初回または二回目の用量の投与後に投与される。
【００２６】
他の実施形態においては、ＡＴＧは、シクロホスファミドの投与の後に投与される。いくつかの実施形態においては、ＡＴＧの初回用量は、シクロホスファミドの最終用量の投与の約０〜約６日後に投与される。他の実施形態においては、ＡＴＧは、シクロホスファミドの最終用量の投与の約６日後に投与される。
【００２７】
他の実施形態においては、当該方法は、有効量の顆粒球コロニー刺激因子（「ＧＣＳＦ：ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ  ｃｏｌｏｎｙ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ」）を被験体に投与する工程をさらに含む。一実施形態においては、ＧＣＳＦは、免疫系の再構築を促進するのに有効な量で投与される。被験体の絶対好中球数が血液１Ｌあたり１．０×１０９細胞を上回るときに、免疫系の再構築が達成される。絶対好中球数を測定するための技術は、当業者に周知である。
【００２８】
ＧＣＳＦは、シクロホスファミドより前、後、またはこれと同時に投与されうる。一実施形態においては、ＧＣＳＦは、シクロホスファミドが免疫リンパ除去を達成した後に投与される。いくつかの実施形態においては、ＧＣＳＦは、シクロホスファミドの用量の投与の約２〜約８日後に、被験体に投与される。別の実施形態では、シクロホスファミドの投与は、ＧＣＳＦを投与する前に中止する。いくつかの実施形態においては、ＧＣＳＦは、シクロホスファミドの最終用量の投与の約２、約３、約４、約５、約６、約７または約８日後に、被験体に投与される。一実施形態においては、ＧＣＳＦは、静脈内または皮下投与される。
【００２９】
いくつかの実施形態においては、ＧＣＳＦは、約２〜約１０μｇ／ｋｇ／日の量で投与される。他の実施形態においては、ＧＣＳＦは、約５、約６、約７、約８または約９μｇ／ｋｇ／日の量で投与される。いくつかの実施形態においては、ＧＣＳＦは、被験体の絶対好中球数が血液１Ｌあたり１．０×１０９細胞を上回るまで、被験体に投与される。他の実施形態においては、ＧＣＳＦは、約２日の期間、毎日投与される。
【００３０】
他の実施形態においては、当該方法は、有効量の一つ以上の抗生物質を被験体に投与する工程をさらに含む。一実施形態においては、抗生物質は、免疫系の再構築の間に感染を最小化または予防するのに有効な量で投与される。抗生物質は、シクロホスファミドの投与前、投与中、または投与後に投与されうる。適切な抗生物質には、ノルフロキサシン、フルコナゾール、バラシクロビル、シプロフロキサシン、メトロニダゾール、クラリスロマイシン、およびレボフロキサシンが含まれるがこれに限られない。
【００３１】
自己免疫性疾患の再活性化予防
本発明の一態様においては、グラチラマー酢酸塩が、自己免疫性疾患の再活性化を予防するのに有効な量で投与されうる。本明細書において用いられるところの、自己免疫性疾患の再活性化には、自己免疫性疾患の一つ以上の臨床または病理学的指標の出現を含む。クローン病の臨床または病理学的指標には、例えば下痢、胃腸出血、および／または腹痛が含まれる。グラチラマー酢酸塩は、コポリマー‐１としても知られている（参照により各々が全体として本明細書に組み込まれる、米国特許第５，９８１，５８９号、第６，０５４，４３０号、第６，３４２，４７６号、第６，３６２，１６１号、第６，６２０，８４７号、第６，９３９，５３９号、および第７，１９９，０９８号を参照）。一実施形態においては、グラチラマー酢酸塩は、組成物の形である。一実施形態においては、組成物は、商標Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標）の下で販売されるものである。
【００３２】
いくつかの実施形態においては、グラチラマー酢酸塩は、約２０〜約４０ｍｇ／ｋｇ／日の量で投与される。他の実施形態においては、グラチラマー酢酸塩は、約２０ｍｇ／ｋｇ／日の量で投与される。いくつかの実施形態においては、グラチラマー酢酸塩は、少なくとも約３０日の期間、毎日投与される。いくつかの実施形態においては、グラチラマー酢酸塩は、約３０日〜約１年の期間、毎日投与される。他の実施形態においては、グラチラマー酢酸塩は、少なくとも約１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月、７ヵ月、８ヵ月、９ヵ月、１０ヵ月または１１ヵ月間毎日投与される。
【００３３】
いくつかの実施形態において、グラチラマー酢酸塩は、シクロホスファミドの投与の前、同時、または後に投与される。いくつかの実施形態においては、グラチラマー酢酸塩の初回用量は、シクロホスファミドの最終用量の投与の約０〜約３０日後に投与される。いくつかの実施形態においては、グラチラマー酢酸塩の初回用量は、シクロホスファミドの最終用量の投与の約３０日後に投与される。他の実施形態においては、グラチラマー酢酸塩の初回用量は、シクロホスファミドの初回用量の投与の約０〜約３０日前に、例えば約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１５、約２０、約２５、または約３０日前に、投与される。いくつかの実施形態においては、グラチラマー酢酸塩の初回用量は、シクロホスファミドの最終用量の投与の約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１５、約２０、約２５、または約３０日後に投与される。いくつかの実施形態においては、グラチラマー酢酸塩は、皮下投与される。
【００３４】
上記の方法におけるシクロホスファミド、ＡＴＧ、および／またはグラチラマー酢酸塩、およびその任意の組み合わせは、生理的担体またはビヒクルを含む組成物の成分として、都合よく投与されうる。当然のことながら、本発明には、本明細書に開示される医薬化合物、投与量および投与の組合せがさらに含まれる。
【００３５】
組成物は、経口的に、注入により、ボーラス注射により、上皮層または皮膚粘膜層（例えば口腔、直腸、および腸粘膜）を通じた吸収により、または他の任意の都合の良い投与経路により、投与されうる。投与は、全身投与または局所投与でありうる。例えばリポソームカプセル化法、微小粒子、マイクロカプセル、カプセルなど、様々な送達システムが公知であり、実行されうる。
【００３６】
投与の方法には、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、眼（ｏｃｕｌａｒ）、皮下、鼻腔内、硬膜外、経口、舌下、大脳内、膣内、経皮、直腸投与、吸入による投与、または特に耳、鼻、目、もしくは皮膚への局所投与が含まれるがこれに限られない。いくつかの場合には、投与の結果、血流中へのシクロホスファミド、ＡＴＧ、またはグラチラマー酢酸塩の放出が生じる。投与様式は、従事者の裁量に任せられうる。
【００３７】
他の実施形態においては、シクロホスファミド、ＡＴＧ、またはグラチラマー酢酸塩を局所的に投与することを所望することができる。これは、例えば、限定するものではないが、手術中の局所注入により、例えば手術後の創傷被覆材（ｄｒｅｓｓｉｎｇ）と併せた局所適用により、注射により、カテーテル手段により、坐薬または浣腸手段により、またはインプラント手段により達成でき、当該インプラントは、シラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜等の膜を含む、多孔性、非多孔性、もしくはゼラチン状材料、または線維である。
【００３８】
ある特定の実施形態では、シクロホスファミド、ＡＴＧ、またはグラチラマー酢酸塩を、脳室内、クモ膜下腔、ならびに硬膜外注射、および浣腸を含む任意の適切な経路により、中枢神経系または胃腸管に導入することを所望することができる。脳室内注射は、例えば、オマヤレザバー等の槽に取り付けられた脳室内カテーテルにより促進されうる。
【００３９】
肺投与も、例えば、ネブライザーの吸入器およびエアロゾル化剤との製剤を用いて、または、フルオロカーボンオール（ｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ  ｏａｒ）、合成肺界面活性剤中での灌流により、利用することができる。ある特定の実施形態では、シクロホスファミド、ＡＴＧまたはグラチラマー酢酸塩は、トリグリセリド等の、従来の結合剤および賦形剤とともに、坐薬として製剤化されうる。
【００４０】
別の実施形態では、シクロホスファミド、ＡＴＧ、またはグラチラマー酢酸塩は、ビヒクル、特にリポソームにおいて送達されうる（参照により内容が全体として本明細書に組み込まれる、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：１５２７‐１５３３（１９９０）およびＴｒｅａｔ  ｏｒ  ｐｒｅｖｅｎｔら，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  ３１７‐３２７および３５３‐３６５（１９８９）を参照）。
【００４１】
さらに別の実施形態では、シクロホスファミド、ＡＴＧ、またはグラチラマー酢酸塩は、制御放出システムまたは持続放出システムにおいて送達されうる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，上掲，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５‐１３８（１９８４）を参照）。Ｌａｎｇｅｒによるレビュー、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７‐１５３３（１９９０）において論じられる他の制御放出システムまたは持続放出システムが用いられてもよい。一実施形態においては、ポンプが用いられうる（Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７‐１５３３（１９９０）；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄ等，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７（１９８０）；およびＳａｕｄｅｋ等，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ  Ｍｅｄ．３２１：５７４（１９８９））。別の実施形態では、ポリマー材料が用いられうる（各々の内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ（ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ編，１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ（ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌｌ編，１９８４）；ＲａｎｇｅｒおよびＰｅｐｐａｓ，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２：６１（１９８３）；Ｌｅｖｙ等，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０（１９３５）；Ｄｕｒｉｎｇ等，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒａｌ．２５：３５１（１９８９）；およびＨｏｗａｒｄ等，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５（１９８９）を参照）。
【００４２】
さらに別の実施形態においては、制御放出システムまたは持続放出システムは、シクロホスファミド、ＡＴＧ、またはグラチラマー酢酸塩の標的の近く、例えば脊柱、脳、皮膚、肺、甲状腺、結腸または胃腸管に置かれればよく、したがって全身用量の一部だけを必要としうる。
【００４３】
組成物は、被験体への投与に適切な形を提供するために、適切な量の薬学的に許容可能な賦形剤を場合により含みうる。そのような医薬賦形剤は、水、および落花生油、ダイズ油、鉱油、胡麻油など、石油、動物、野菜、または合成由来のものを含む油類等の液体でありうる。医薬賦形剤は、食塩水、アラビアゴム、ゼラチン、デンプンパスタ、タルク、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素などでありうる。加えて、助剤、安定化剤、増粘剤、滑沢剤、および着色剤が用いられうる。一実施形態においては、薬学的に許容可能な賦形剤は、被験体への投与の場合に無菌である。水は、シクロホスファミド、ＡＴＧ、またはグラチラマー酢酸塩が静脈内に投与される場合に、特に有用な賦形剤である。食塩溶液および水性デキストロースおよびグリセリン溶液も、特に注射可能溶液用に、液体賦形剤として用いられうる。適切な医薬賦形剤には、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、フラワー、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなども含まれる。本組成物には、所望の場合、少量の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨ緩衝剤も含みうる。
【００４４】
本組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、錠剤、ピル、ペレット、カプセル、液体含有カプセル、粉末、持続放出製剤、坐薬、エマルション、エアロゾル、スプレー、懸濁液の形、または使用に適した他の任意の形をとりうる。一実施形態においては、組成物はカプセルの形である（例えば、参照により内容が全体として本明細書に組み込まれる米国特許第５，６９８，１５５号を参照)。適切な医薬賦形剤の他の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １４４７‐１６７６（Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編，１９ｔｈ  ｅｄ．１９９５，参照により内容が全体として本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【００４５】
一実施形態においては、シクロホスファミド、ＡＴＧ、またはグラチラマー酢酸塩は、ヒトへの経口投与に適した組成物として、常法により製剤化される。経口送達用の組成物は、例えば、錠剤、ロゼンジ、水性または油性懸濁液、顆粒、粉末、エマルション、カプセル、シロップ、またはエリキシルの形でありうる。経口投与される組成物は、薬学的に口に合う製剤を提供するために、一つ以上の薬剤、例えば、フルクトース、アスパルテーム、またはサッカリン等の甘味剤、ペパーミント、ウィンターグリーン油、またはチェリー等の香味剤、着色剤、および保存剤を含みうる。さらに、錠剤または丸剤の形の場合、胃腸管における崩壊および吸収を遅延させるために組成物がコーティングされ、これにより長期間にわたる持続的作用を提供しうる。シクロホスファミド、ＡＴＧ、またはグラチラマー酢酸塩を追い出す（ｄｒｉｖｉｎｇ）浸透圧活性を取り囲む選択透過膜も、経口投与組成物に適切である。これら後者のプラットフォームにおいては、カプセルを取り囲む環境からの流体を推進化合物（ｄｒｉｖｉｎｇ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）が吸収し、これが膨張して薬剤または薬剤組成物を孔（ａｐｅｒｔｕｒｅ）から押し出す。これらの送達プラットフォームは、即時放出製剤の急上昇するプロフィールとは対照的に、実質的にゼロ次送達プロフィールを提供しうる。モノステアリン酸グリセロールまたはステアリン酸グリセロール等の時間遅延材料も使用されうる。経口組成物には、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、および炭酸マグネシウム等の標準の賦形剤が含まれうる。一実施形態においては、賦形剤は医薬等級のものである。
【００４６】
別の実施形態においては、シクロホスファミド、ＡＴＧ、またはグラチラマー酢酸塩は、静脈内投与用に製剤化されうる。典型的には、静脈内投与用の組成物は、滅菌等張性水性バッファーを含む。必要に応じて、組成物は可溶化剤も含みうる。静脈内投与用の組成物は、注射部位の痛みを緩和するため、リグノカイン等の局所麻酔剤を場合により含みうる。一般に、成分は別々に、または混合して単位剤形で、例えば活性薬剤の量を表示したアンプルまたはサシェ（ｓａｃｈｅｔｔｅ）等の密封容器中の乾燥した凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物として供給される。シクロホスファミド、ＡＴＧ、またはグラチラマー酢酸塩が注入により投与される場合には、それらは、例えば滅菌の医薬等級の水または食塩水を含む注入瓶で調剤されうる。シクロホスファミド、ＡＴＧ、またはグラチラマー酢酸塩が注射により投与される場合には、成分が投与前に混合されうるように、注射用の滅菌水または食塩水のアンプルが提供されうる。
【００４７】
シクロホスファミド、ＡＴＧ、またはグラチラマー酢酸塩は、制御放出もしくは持続放出手段により、または当業者に周知の送達デバイスにより、投与されうる。例には、各々が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第３，８４５，７７０号、第３，９１６，８９９号、第３，５３６，８０９号、第３，５９８，１２３号、第４，００８，７１９号、第５，６７４，５３３号、第５，０５９，５９５号、第５，５９１，７６７号、第５，１２０，５４８号、第５，０７３，５４３号、第５，６３９，４７６号、第５，３５４，５５６号、および第５，７３３，５５６号に記載のものが含まれるがこれに限られない。そのような剤形を用いて、例えばヒドロプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリクス、ゲル、浸透性膜、浸透圧系、多層コーティング、微小粒子、リポソーム、ミクロスフィア、またはその組合せを用いて一つ以上の活性成分の制御放出または持続放出を提供して、様々な比率で所望の放出特性を提供しうる。本明細書に記載のものを含む、当業者に公知の適切な制御放出製剤または持続放出製剤は、本発明の活性成分との使用のために容易に選択されうる。したがって本発明は、制御放出または持続放出に適合する錠剤、カプセル、ジェルキャップ、カプレット等であるがこれに限られない、経口投与に適切な単一単位剤形を包含する。
【００４８】
シクロホスファミド、ＡＴＧ、および／またはグラチラマー酢酸塩、ならびにその任意の組み合わせは、被験体への投与を簡単にするために、キットの形でも提供されうる。典型的なキットは、シクロホスファミド、ＡＴＧ、またはグラチラマー酢酸塩の単位剤形を含む。一実施形態においては、単位剤形は、有効量のシクロホスファミド、ＡＴＧ、またはグラチラマー酢酸塩と、生理的に許容可能な担体またはビヒクルとを含む、無菌でありうる容器内にある。キットは、一つ以上の用量のグラチラマー酢酸塩を含みうる。キットはさらに、自己免疫性疾患を治療または予防するための、シクロホスファミド、ＡＴＧ、またはグラチラマー酢酸塩、およびその任意の組み合わせを含む本発明の組成物の使用を指示するラベルまたは印刷された指示書を含みうる。キットはさらに、本明細書に詳述されるように、単位剤形を投与するのに有用なデバイスを含みうる。かかるデバイスの例には、シリンジ、点滴バッグ、パッチ、吸入器、および浣腸バッグが含まれるがこれに限られない。
【００４９】
ある特定の実施形態に関して本発明を記載しているが、他の実施形態は、本明細書を考慮すれば当業者に明らかとなる。本発明は、以下の実施例の参照によりさらに明確になる。当業者には当然のことながら、材料および方法の両方についての多くの変更が、本発明の範囲内において実施されうる。
【実施例】
【００５０】
（実施例１）
マウスにおけるクローン病に対するシクロホスファミドおよびグラチラマー酢酸塩（「ＧＡ：Ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ  Ａｃｅｔａｔｅ」）の効果（ＴＮＢＳ大腸炎モデル）
ａ．クローン大腸炎の誘発
マウスを、各群の平均体重が等しくなるように、処置群にランダム化する。生後６〜１２週のＢａｌｂ／ｃマウスを、１８Ｇの栄養管（Ｆｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｏｏｌｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いた直腸内投与により、０．１ｍｌの５０％エタノール中２ｍｇのハプテントリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ：ｔｒｉｎｉｔｒｏｂｅｎｚｅｎｅ  ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）で処置する。クローン様大腸炎を誘発するために、この処置を５週間毎週繰り返す。
【００５１】
５週間の処置の後、マウスの体重を量り、クローン様大腸炎の臨床徴候を観察する。体重減少、便の硬さの変化、および／または潜血試験による便中の微量の（ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ）血液により、クローン様大腸炎を判定する。クローン様大腸炎の臨床徴候を、日常活動インデックス（「ＤＡＩ：Ｄａｉｌｙ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ」）を用いて評価する。ＤＡＩは、体重変化（０、＜１％；１、１〜５％；２、５〜１０％、２３、１０〜２０％および４、＞２０％）、腸出血（０、陰性；２、微量の血液；４、目に見える血液）、および便の硬さ（０、普通；２、軟便；４、下痢）の平均である。
【００５２】
ｂ．シクロホスファミドおよびグラチラマー酢酸塩の投与
クローン様大腸炎の確立（０日目）後、マウスの半数に、のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中シクロホスファミド（２０ｍｇ／ｍｌ）を１００〜２００ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内または静脈内注射により投与する。大腸炎進行により特定されるところの）２日目（±２）に、ＧＡを、ＰＢＳ／マンニトール中５００〜２０００マイクログラム／マウスの用量で、連続５日間まで皮下投与する。
【００５３】
マウスの他の半数には、擬注射（ビヒクル）または直腸内５０％エタノールをコントロールとして投与する。
【００５４】
静脈内注射のために、マウスをケージの中で３〜５分間加熱ランプ（ケージ床からおよそ１８〜２５インチ）で暖めて血管を拡張させた後、２８〜３０ゲージ針で側尾静脈に静脈内注射を行うために、個別にコーンまたはＢｒｏｏｍｅタイプの拘束デバイス（ＶＷＲカタログナンバー１０７１８‐０３０）に拘束する。
【００５５】
ｃ．結果
ステップｂに記載の処置の２ヵ月後に、マウスの体重を量り、上述のステップａに記載のように、クローン様大腸炎の臨床徴候を観察する。
（実施例２）
【００５６】
マウスにおけるクローン病に対するシクロホスファミドおよびグラチラマー酢酸塩の効果（ＣＤ４５ＲＢＨｉｇｈ移入モデル）
ａ．クローン大腸炎の誘発
ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈおよびＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｌｏｗＴ細胞サブセットを、免疫磁気選択を用いて、野生型Ｃ５７ＢＬ／６雌マウスの脾臓から単離し、０．５×１０６細胞を、同じバックグラウンドのＲＡＧ−／−マウスに腹腔内注射する。
【００５７】
養子移入の４週間後に、マウスの体重を量り、クローン様大腸炎の臨床徴候を観察する。体重減少、便の硬さの変化、および／または潜血試験による便中の微量の血液により、クローン様大腸炎を判定する。日常活動インデックス（「ＤＡＩ」）を用いて、クローン様大腸炎の臨床徴候を評価する。ＤＡＩは、体重変化（０、＜１％；１、１〜５％；２、５〜１０％、２３、１０〜２０％および４、＞２０％）、腸出血（０、陰性；２、微量の血液；４、目に見える血液）、および便の硬さ（０、普通；２、軟便；４、下痢）の平均である。
【００５８】
ｂ．シクロホスファミドおよびグラチラマー酢酸塩の投与
クローン様大腸炎の確立（０日目）後、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈマウスの半数およびＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｌｏｗマウスの半数に、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中シクロホスファミド（２０ｍｇ／ｍｌ）を１００〜２００ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内または静脈内注射により投与する。大腸炎進行により特定されるところの）２日目（±２）に、ＧＡを、ＰＢＳ／マンニトール中５００〜２０００マイクログラム／マウスの用量で、連続５日間まで皮下投与する。
【００５９】
ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈマウスおよびＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｌｏｗマウスのもう半数には、擬注射（ビヒクル）をコントロールとして投与する。
【００６０】
静脈内注射のために、マウスをケージの中で３〜５分間加熱ランプ（ケージ床からおよそ１８〜２５インチ）で暖めて血管を拡張させた後、２８〜３０ゲージ針で側尾静脈に静脈内注射を行うために、個別にコーンまたはＢｒｏｏｍｅタイプの拘束デバイス（ＶＷＲカタログナンバー１０７１８‐０３０）に拘束する。
【００６１】
ｃ．結果
ステップｂに記載の処置の２ヵ月後に、マウスの体重を量り、上述のステップａに記載のように、クローン様大腸炎の臨床徴候を観察する。
（実施例３）
【００６２】
マウスにおけるクローン病に対するシクロホスファミドおよびグラチラマー酢酸塩の効果（Ｃ３Ｈ．ＩＬ１０−／−モデル）
ａ．クローン大腸炎の誘発
マウスを、各群の平均体重が等しくなるように、処置群にランダム化する。生後６〜１２週のＣ３Ｈ．ＩＬ１０−／−マウスに、１０８ＬＦ８２  Ｅ．ｃｏｌｉ細菌の単回経口強制飼養を行い、重度の大腸炎を確立する。
【００６３】
２ヵ月後、マウスの体重を量り、クローン様大腸炎の臨床徴候を観察する。体重減少、便の硬さの変化、および／または潜血試験による便中の微量の血液により、クローン様大腸炎を判定する。日常活動インデックス（「ＤＡＩ」）を用いて、クローン様大腸炎の臨床徴候を評価する。ＤＡＩは、体重変化（０、＜１％；１、１〜５％；２、５〜１０％、２３、１０〜２０％および４、＞２０％）、腸出血（０、陰性；２、微量の血液；４、目に見える血液）、および便の硬さ（０、普通；２、軟便；４、下痢）の平均である。
【００６４】
ｂ．シクロホスファミドおよびグラチラマー酢酸塩の投与
クローン様大腸炎の確立（０日目）後、マウスの半数に、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中シクロホスファミド（２０ｍｇ／ｍｌ）を１００〜２００ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内または静脈内注射により投与する。大腸炎進行により特定されるところの）２日目（±２）に、ＧＡを、ＰＢＳ／マンニトール中５００〜２０００マイクログラム／マウスの用量で、連続５日間まで皮下投与する。
【００６５】
マウスのもう半数には、擬注射（ビヒクル）または直腸内５０％エタノールをコントロールとして投与する。
【００６６】
静脈内注射のために、マウスをケージの中で３〜５分間加熱ランプ（ケージ床からおよそ１８〜２５インチ）で暖めて血管を拡張させた後、２８〜３０ゲージ針で側尾静脈に静脈内注射を行うために、個別にコーンまたはＢｒｏｏｍｅタイプの拘束デバイス（ＶＷＲカタログナンバー１０７１８‐０３０）に拘束する。
【００６７】
ｃ．結果
ステップｂに記載の処置の２ヵ月後に、マウスの体重を量り、上述のステップａに記載のように、クローン様大腸炎の臨床徴候を観察する。
（実施例４）
【００６８】
ヒトにおけるクローン病に対するシクロホスファミドおよびグラチラマー酢酸塩の効果
１０人のヒト被験体に、非盲検フォーマットでシクロホスファミドおよびグラチラマー酢酸塩を投与する。ヒト被験体が、組み入れ基準の全てを満たし、除外基準のいずれにも当たらない場合に、研究に参加させる。
【００６９】
ａ．組み入れ／除外基準
ヒト被験体は、１８〜７０歳（両端を含む）の男性または女性である。ヒト被験体には、回腸結腸鏡検査法での活動性疾患の証拠および活動インデックスが２５０を上回るクローン病を伴う進行中の疾患活動性の証拠がなければならない。
【００７０】
除外基準は、（１）あらゆる妊娠の危険、（２）＜４５％の心臓駆出率、（３）血清クレアチニン＞２．０、（４）死期前または瀕死のヒト被験体、（５）ビリルビン＞２．０、トランスアミナーゼ＞正常の２×、（６）ＣＤＡＩが２５０未満のヒト被験体、（７）感染が解決または適切に管理されるまでの活動性感染症のヒト被験体、および（８）ＷＢＣ数が＜３０００細胞／μＬ、血小板＜１００，０００細胞／μＬおよび非輸血ヘモグロビン＜１０ｇ／ｄＬのヒト被験体、である。
【００７１】
ｂ．シクロホスファミドの投与
ヒト被験体に、−３日目〜０日目に、５０ｍｇ／ｋｇ／日の用量でシクロホスファミドを静脈内投与する。
【００７２】
出血性膀胱炎を予防するために、シクロホスホルアミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）の投与の前および後に、適切な利尿を維持しなければならない。シクロホスファミド誘発性出血性膀胱炎の予防（一般にＭＥＳＮＡ（２‐メルカプトエタンスルホン酸ナトリウム）または強制利尿）は、ＳＣＴ（幹細胞移植）プログラムにより用いられる確立した臨床診療ガイドラインにしたがって指示される。
【００７３】
６日目（シクロホスファミドの最終用量の６日後）に、すべてのヒト被験体が、絶対好中球数が２日間連続してリットル当たり１．０×１０９を上回るまで、５μｇ／ｋｇ／日の用量でＧＣＳＦを受ける。ヒト被験体は、絶対好中球数が２日間連続してリットル当たり１．０×１０９を上回るまで、抗生物質（ノルフロキサシン、フルコナゾールまたはバラシクロビル）も日常的に与えられる。
【００７４】
ｃ．グラチラマー酢酸塩の投与
ヒト被験体に、３０日目（シクロホスファミドの最終用量の３０日後）に２０ｍｇ／ｋｇの用量でグラチラマー酢酸塩を皮下投与し、一日用量２０ｍｇ／ｋｇのグラチラマー酢酸塩を無期限に与え続ける。
【００７５】
ｄ．結果の評価
ベースライン臨床評価を、−３ヵ月目および０ヵ月目に行い、処置および追跡通院を、３、６、９、１２、１５、１８、２１および２４ヵ月目に行う。処置後の疾患進行経過をモニタするために、結腸鏡検査法を−３、３、１２および２４ヵ月目に行う。
【００７６】
本発明は、自己免疫性疾患の治療および／または予防のための方法および組成物を提供する。本発明の特定の実施形態が記述されているが、以上の明細書は例示的であり限定的ではない。本発明の多くの変化形が、本明細書を検討した当業者に明らかになる。添付の特許請求の範囲はそのような実施形態および変化形の全てを請求することを意図せず、本発明の完全な範囲は、請求項をその等価物の完全な範囲とともに、および、本明細書をそのような変化形とともに参照することにより、決定されねばならない。
【００７７】
本明細書に記載のすべての刊行物および特許は、個々の刊行物または特許が具体的かつ個別に参照により組み込まれるものと表示されるのと同様に、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【国際調査報告】
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