(57)【要約】  １，２−ジチオールチオン誘導体を含有する薬学組成物であって、肝Ｘレセプター（ＬＸＲ α）又はステロール調節エレメント結合タンパク質（ＳＲＥＢＰ−１）の過剰活性に起因する疾病の予防及び治療に有用な薬学組成物を提供する。具体的には、前記薬学組成物は、４−メチル−５−（２−ピラジニル）−１，２−ジチオール−３−チオン、３−メチル−１，２−ジチオール−３−チオン又は５−（６−メトキシピラジニル）−４−メチル−１，２−ジチオール−３−チオンなどの１，２−ジチオールチオン誘導体を含有する。前記薬学組成物は、レニンに起因した高血圧、アルドステロン症、副腎白質ジストロフィー、糸球体硬化症、タンパク尿症、腎症、脂肪肝、高トリグリセリド血症、高レニン血症の予防及び治療に有効である。
2011529047.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
肝Ｘレセプター（ＬＸＲ α）の過剰発現又は過剰活性に起因する疾病の予防又は治療のための薬学組成物であって、
前記薬学組成物は、有効成分として下記式１で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、その溶媒和物、その水和物, そのプロドラッグを含む薬学組成物。
【化１】
2011529047.tif 000007
Ｘは、炭素又は窒素であり、Ｑは、硫黄、酸素又は−Ｓ＝Ｏであり、Ｒ１及びＲ２は各々独立に、水素原子、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ３−７シクロアルコキシ、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ３−７シクロアルキルチオ、Ｃ１−７アルケニル、Ｃ１−７アルキニル、Ｃ１−７アルキルスルホニル、Ｃ１−７アルキルアミノカルボニル、ＨＯ−Ｃ１−７アルキル、ＨＳ−Ｃ１−７アルキル、ヒドロキシ、チオール、ハロゲン、カルボキシル、ニトロ、シアノ、Ｃ１−７アルキルカルボニル、Ｃ１−７アルコキシカルボニル、Ｃ１−７アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル−Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキル、アミノ、Ｃ１−７アルキルアミノ、Ｃ１−７アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４アルキルスルホンアミノ、フェニル、ヘテロアリール、フェニル−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリール−Ｃ１−４アルキル、フェニル−Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル、フェニル−Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキル、フェノキシ−Ｃ１−４アルキル、フェニルチオ−Ｃ１−４アルキル、フェニルカルボニルアミノ、フェノキシ−Ｃ１−４アルキルカルボニルアミノ、フェニル−Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリールチオ−Ｃ１−４アルキル及びヘテロアリール−Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキルからなる群から選択され；前記ヘテロアリールは、窒素、硫黄及び酸素からなる群から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む五員環又は六員環化合物であり、；前記フェニル及びヘテロアリールは、置換又は非置換であり、可能な置換基は、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ１−７アルケニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ニトロ、アミノ、シアノ、ＨＯ−Ｃ１−４アルキル、ＨＳ−Ｃ１−４アルキル、ＨＯ−Ｃ１−７アルコキシ、ＨＯ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルコキシ、チオール、ヒドロキシ及びカルボキシルからなる群から選択され、置換される場合、前記フェニル及びヘテロアリールは一置換又は多置換であり；前記フェニル及びヘテロアリールは各々独立に、少なくとも１つのベンゼン又は前記ヘテロアリールと縮合され；また、前記縮合されたフェニル及びヘテロアリールは、置換又は非置換であり、可能な置換基は、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ１−７アルケニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ニトロ、アミノ、シアノ、ＨＯ−Ｃ１−４アルキル、ＨＳ−Ｃ１−４アルキル、ＨＯ−Ｃ１−７アルコキシ、ＨＯ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルコキシ、チオール、ヒドロキシ及びカルボキシルからなる群から選択され、置換される場合、前記フェニル及びヘテロアリールは、一置換又は多置換である。
【請求項２】
ステロール調節エレメント結合タンパク質−１ｃ（ＳＲＥＢＰ−１ｃ）の過剰発現又は過剰活性に起因する疾病の予防又は治療のための薬学組成物であって、
前記薬学組成物は、下記式１の化合物、その薬学的に許容可能な塩、その溶媒和物、その水和物又はそのプロドラッグを有効成分として含む薬学組成物。
【化２】
2011529047.tif 000008
Ｘは、炭素又は窒素であり、Ｑは、硫黄、酸素又は−Ｓ＝Ｏであり、Ｒ１及びＲ２は各々独立に、水素原子、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ３−７シクロアルコキシ、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ３−７シクロアルキルチオ、Ｃ１−７アルケニル、Ｃ１−７アルキニル、Ｃ１−７アルキルスルホニル、Ｃ１−７アルキルアミノカルボニル、ＨＯ−Ｃ１−７アルキル、ＨＳ−Ｃ１−７アルキル、ヒドロキシ、チオール、ハロゲン、カルボキシル、ニトロ、シアノ、Ｃ１−７アルキルカルボニル、Ｃ１−７アルコキシカルボニル、Ｃ１−７アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル−Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキル、アミノ、Ｃ１−７アルキルアミノ、Ｃ１−７アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４アルキルスルホンアミノ、フェニル、ヘテロアリール、フェニル−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリール−Ｃ１−４アルキル、フェニル−Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル、フェニル−Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキル、フェノキシ−Ｃ１−４アルキル、フェニルチオ−Ｃ１−４アルキル、フェニルカルボニルアミノ、フェノキシ−Ｃ１−４アルキルカルボニルアミノ、フェニル−Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリールチオ−Ｃ１−４アルキル及びヘテロアリール−Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキルからなる群から選択され；前記ヘテロアリールは、窒素、硫黄及び酸素からなる群から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む五員環又は六員環化合物であり、；前記フェニル及びヘテロアリールは、置換又は非置換であり、可能な置換基は、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ１−７アルケニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ニトロ、アミノ、シアノ、ＨＯ−Ｃ１−４アルキル、ＨＳ−Ｃ１−４アルキル、ＨＯ−Ｃ１−７アルコキシ、ＨＯ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルコキシ、チオール、ヒドロキシ及びカルボキシルからなる群から選択され、置換される場合、前記フェニル及びヘテロアリールは一置換又は多置換であり；前記フェニル及びヘテロアリールは各々独立に、少なくとも１つのベンゼン又は前記ヘテロアリールと縮合され；また、前記縮合されたフェニル及びヘテロアリールは、置換又は非置換であり、可能な置換基は、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ１−７アルケニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ニトロ、アミノ、シアノ、ＨＯ−Ｃ１−４アルキル、ＨＳ−Ｃ１−４アルキル、ＨＯ−Ｃ１−７アルコキシ、ＨＯ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルコキシ、チオール、ヒドロキシ及びカルボキシルからなる群から選択され、置換される場合、前記フェニル及びヘテロアリールは、一置換又は多置換である。
【請求項３】
レニンに起因した高血圧、アルドステロン症、副腎白質ジストロフィー、糸球体硬化症、タンパク尿症、腎症、脂肪肝、高トリグリセリド血症又は高レニン血症の予防又は治療のための薬学組成物であって、
前記薬学組成物は、下記式１の化合物、その薬学的に許容可能な塩、その溶媒和物、その水和物又はそのプロドラッグを有効成分として含む薬学組成物。
【化３】
2011529047.tif 000009
Ｘは、炭素又は窒素であり、Ｑは、硫黄、酸素又は−Ｓ＝Ｏであり、Ｒ１及びＲ２は各々独立に、水素原子、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ３−７シクロアルコキシ、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ３−７シクロアルキルチオ、Ｃ１−７アルケニル、Ｃ１−７アルキニル、Ｃ１−７アルキルスルホニル、Ｃ１−７アルキルアミノカルボニル、ＨＯ−Ｃ１−７アルキル、ＨＳ−Ｃ１−７アルキル、ヒドロキシ、チオール、ハロゲン、カルボキシル、ニトロ、シアノ、Ｃ１−７アルキルカルボニル、Ｃ１−７アルコキシカルボニル、Ｃ１−７アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル−Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキル、アミノ、Ｃ１−７アルキルアミノ、Ｃ１−７アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４アルキルスルホンアミノ、フェニル、ヘテロアリール、フェニル−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリール−Ｃ１−４アルキル、フェニル−Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル、フェニル−Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキル、フェノキシ−Ｃ１−４アルキル、フェニルチオ−Ｃ１−４アルキル、フェニルカルボニルアミノ、フェノキシ−Ｃ１−４アルキルカルボニルアミノ、フェニル−Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリールチオ−Ｃ１−４アルキル及びヘテロアリール−Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキルからなる群から選択され；前記ヘテロアリールは、窒素、硫黄及び酸素からなる群から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む五員環又は六員環化合物であり、；前記フェニル及びヘテロアリールは、置換又は非置換であり、可能な置換基は、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ１−７アルケニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ニトロ、アミノ、シアノ、ＨＯ−Ｃ１−４アルキル、ＨＳ−Ｃ１−４アルキル、ＨＯ−Ｃ１−７アルコキシ、ＨＯ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルコキシ、チオール、ヒドロキシ及びカルボキシルからなる群から選択され、置換される場合、前記フェニル及びヘテロアリールは一置換又は多置換であり；前記フェニル及びヘテロアリールは各々独立に、少なくとも１つのベンゼン又は前記ヘテロアリールと縮合され；また、前記縮合されたフェニル及びヘテロアリールは、置換又は非置換であり、可能な置換基は、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ１−７アルケニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ニトロ、アミノ、シアノ、ＨＯ−Ｃ１−４アルキル、ＨＳ−Ｃ１−４アルキル、ＨＯ−Ｃ１−７アルコキシ、ＨＯ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルコキシ、チオール、ヒドロキシ及びカルボキシルからなる群から選択され、置換される場合、前記フェニル及びヘテロアリールは、一置換又は多置換である。
【請求項４】
脂肪肝の予防又は治療のための薬学組成物であって、
前記薬学組成物は、下記式１の化合物、その薬学的に許容可能な塩、その溶媒和物、その水和物又はそのプロドラッグを有効成分として含む薬学組成物。
【化４】
2011529047.tif 000010
Ｘは、炭素又は窒素であり、Ｑは、硫黄、酸素又は−Ｓ＝Ｏであり、Ｒ１及びＲ２は各々独立に、水素原子、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ３−７シクロアルコキシ、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ３−７シクロアルキルチオ、Ｃ１−７アルケニル、Ｃ１−７アルキニル、Ｃ１−７アルキルスルホニル、Ｃ１−７アルキルアミノカルボニル、ＨＯ−Ｃ１−７アルキル、ＨＳ−Ｃ１−７アルキル、ヒドロキシ、チオール、ハロゲン、カルボキシル、ニトロ、シアノ、Ｃ１−７アルキルカルボニル、Ｃ１−７アルコキシカルボニル、Ｃ１−７アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル−Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキル、アミノ、Ｃ１−７アルキルアミノ、Ｃ１−７アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４アルキルスルホンアミノ、フェニル、ヘテロアリール、フェニル−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリール−Ｃ１−４アルキル、フェニル−Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル、フェニル−Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキル、フェノキシ−Ｃ１−４アルキル、フェニルチオ−Ｃ１−４アルキル、フェニルカルボニルアミノ、フェノキシ−Ｃ１−４アルキルカルボニルアミノ、フェニル−Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリールチオ−Ｃ１−４アルキル及びヘテロアリール−Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキルからなる群から選択され；前記ヘテロアリールは、窒素、硫黄及び酸素からなる群から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む五員環又は六員環化合物であり、；前記フェニル及びヘテロアリールは、置換又は非置換であり、可能な置換基は、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ１−７アルケニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ニトロ、アミノ、シアノ、ＨＯ−Ｃ１−４アルキル、ＨＳ−Ｃ１−４アルキル、ＨＯ−Ｃ１−７アルコキシ、ＨＯ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルコキシ、チオール、ヒドロキシ及びカルボキシルからなる群から選択され、置換される場合、前記フェニル及びヘテロアリールは一置換又は多置換であり；前記フェニル及びヘテロアリールは各々独立に、少なくとも１つのベンゼン又は前記ヘテロアリールと縮合され；また、前記縮合されたフェニル及びヘテロアリールは、置換又は非置換であり、可能な置換基は、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ１−７アルケニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ニトロ、アミノ、シアノ、ＨＯ−Ｃ１−４アルキル、ＨＳ−Ｃ１−４アルキル、ＨＯ−Ｃ１−７アルコキシ、ＨＯ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルコキシ、チオール、ヒドロキシ及びカルボキシルからなる群から選択され、置換される場合、前記フェニル及びヘテロアリールは、一置換又は多置換である。
【請求項５】
式１で表される前記化合物が、オルチプラズ（４−メチル−５−（２−ピラジニル）−１，２−ジチオール−３−チオン）である、請求項１から請求項４のいずれか１項に記載の薬学組成物。
【請求項６】
脂肪肝の予防又は治療のための薬学組成物であって、オルチプラズ（４−メチル−５−（２−ピラジニル）−１，２−ジチオール−３−チオン）、その薬学的に許容可能な塩、その溶媒和物、その水和物又はそのプロドラッグを有効成分として含む薬学組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肝臓Ｘレセプターα（ＬＸＲ α）の発現又は活性の抑制、及び、ステロール調節エレメント結合タンパク質−１（ＳＲＥＢＰ−１：ｓｔｅｒｏｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｌｅｍｅｎｔ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）の発現又は活性を抑制する１，２−ジチオールチオン（１，２−ｄｉｔｈｉｏｌｔｈｉｏｎｅ）誘導体に関する。本発明はまた、１，２−ジチオールチオン誘導体を含む薬学組成物に関する。該薬学組成物は、ＬＸＲ α又はＳＲＥＢＰ−１の過剰発現に起因する疾病の予防又は治療に有効である。このような疾病としては、例えば、脂肪肝、高トリグリセリド血症、高レニン血症、レニンに起因した高血圧、アルドステロン症(ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｉｓｍ)、副腎白質ジストロフィー（ａｄｒｅｎｏｌｅｕｋｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、糸球体硬化症、蛋白尿症、腎症（ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）を含む。
【０００２】
本発明は、教育科学技術部優秀研究センター（ＥＲＣ）事業の一環として行われた研究から導き出されたものである［課題固有番号Ｒ１１−２００７−１０７−０１００１−０、課題名：代謝及び炎症疾患新薬開発研究センター］。
【背景技術】
【０００３】
肝臓Ｘレセプター（ＬＸＲ）、ペルオキシソーム増殖因子活性化レセプター（ＰＰＡＲ：ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ-ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、及びファルネソイドＸレセプター（ＦＸＲ：ｆａｒｎｅｓｏｉｄ Ｘ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）は、第２型受容体スーパーファミリー（ｔｙｐｅＩＩ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ）に属する核ホルモン受容体（ｎｕｃｌｅａｒ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）である。これらの受容体は、レチノイドＸレセプター（ＲＸＲ：ｒｅｔｉｎｏｉｄ Ｘ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）とヘテロダイマーを形成して、ＤＮＡに結合する。リガンドが結合しない場合には、前記ヘテロダイマーがＤＮＡに結合し、コリプレッサー蛋白質と複合体を形成し、一方、リガンドが結合する場合には、構造的変化が生じ、コリプレッサー蛋白質が分離し、補助活性蛋白質（ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ）が結合し、標的遺伝子の転写が促進される（非特許文献１）。核ホルモン受容体のうち、ＬＸＲは、コレステロール代謝及び恒常性と関連がある遺伝子の転写調節に重要な役割を果たしている。このような遺伝子の例として、アポリポプロテインＥ（ａｐｏＥ）、ＡＢＣＡ１、ＡＢＣＧ１、ＡＢＣＧ５、ＡＢＣＧ８、コレステロール７α−ヒドロキシラーゼ（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ 7α-ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ）及びスカベンジャー受容体ｃｌａｓｓＢ タイプＩ（ｓｃａｖｅｎｇｅｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｌａｓｓＢ ｔｙｐｅＩ）が含まれる（非特許文献２）。またＬＸＲは、ＳＲＥＢＰ−１ｃ遺伝子に直接に作用し、脂質代謝を調節する（非特許文献３）。
【０００４】
ＬＸＲには、ＬＸＲ αとＬＸＲ βの２つの異性体が存在する。ＬＸＲ αは、主に肝臓に存在し、ＬＸＲ βは、ほとんどの臓器に存在する。ＬＸＲ αは、天然リガンドであるオキシステロール類、高濃度のグルコース及び人工リガンドであるＴ０９０１０１７、ＧＷ３９６５によって活性化され、脂質生成に関連する遺伝子の発現、及びコレステロール恒常性を調節する。肝臓で脂質が合成されるとき、ＬＸＲ αは、脂質センサとして作用し、脂質合成遺伝子の発現を調節する重要な転写因子であるＳＲＥＢＰ−１ｃの発現及び活性を著しく増加させることにより、肝組織内の脂肪酸合成を促進し、血中トリグリセリドの量を増加させる。
【０００５】
ＬＸＲ αが誘発する、非アルコール性脂肪肝症の発症には、２つの異なる経路があり、それらはＳＲＥＢＰ−１ｃ依存的経路と、ＳＲＥＢＰ−１ｃ非依存的経路である。ＳＲＥＢＰ−１ｃ依存的脂肪肝は、ＬＸＲ α媒介性ＳＲＥＢＰ−１ｃの転写活性化を介して、脂質生成遺伝子の発現が上向き調節されて現れる。ＳＲＥＢＰ−１ｃ非依存的脂肪肝は、ＬＸＲ αの活性化が、遊離脂肪酸のキャリアであるＣＤ３６タンパク質の発現を増加させることによって、より多くの脂肪酸が肝臓へ移動するために現れる。このように、ＬＸＲ α活性化は、非アルコール性脂肪肝症の発症を促進する。しかしながら、今のところＬＸＲ αの活性を調節することによって、脂肪肝を抑制する薬物は知られていない。
【０００６】
ＳＲＥＢＰは、ステロールによって調節される遺伝子の転写調節部位であるステロール応答エレメント（ＳＲＥ：ｓｔｅｒｏｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｌｅｍｅｎｔ）に結合する蛋白質であり、ＳＲＥＢＰ蛋白質は、三種のイソ型（ｉｓｏｆｏｒｍ）で存在し、それらは、ＳＲＥＢＰ−１ａ、ＳＲＥＢＰ−１ｃ及びＳＲＥＢＰ−２である。ＳＲＥＢＰ−１ａ及びＳＲＥＢＰ−１ｃは、同一遺伝子から転写され、ＳＲＥＢＰ−２は、これとは異なる遺伝子から発現される。ＳＲＥＢＰ−１ｃは、脂肪酸合成に関連した遺伝子の転写を調節する転写因子であり、ＳＲＥＢＰ−２は、コレステロール合成に関連した遺伝子の転写を調節する転写因子である。ＳＲＥＢＰは、静止状態では、小胞体膜蛋白質として存在し、サイズは、１２５キロダルトン（ｋＤａ）である。ＳＲＥＢＰは、ステロール枯渇などの刺激によって活性化される前には、不活性化形態で膜に結合している。ＳＲＥＢＰは、活性化されるときにゴルジ体に移動し、切断され、６５キロダルトン・サイズの活性型蛋白質になる。ＳＲＥＢＰは、活性化されるとき、核内に移動して標的遺伝子のＳＲＥに結合し、脂質合成遺伝子の発現を増加させる。ＳＲＥＢＰ−１ｃの標的遺伝子としては、脂肪酸合成を促進する酵素である脂肪酸合成酵素（ＦＡＳ）、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）、ステアロイルＣｏＡ不飽和酵素（ＳＣＤ）などがある。血中から肝臓に流入する遊離脂肪酸と、肝臓で直接生成する脂肪酸との量が、超低密度脂タンパク（ＶＬＤＬ）形態で排出されたり、又はベータ酸化される脂肪酸の量より多い場合、肝臓での脂質代謝均衡が崩れて脂肪肝症が発症する。そのため、肝臓での脂肪合成を促進する蛋白質であるＦＡＳ、ＡＣＣ、ＳＣＤを誘導し、及び調節するＳＲＥＢＰ−１ｃは、アルコール性又は非アルコール性の脂肪肝症（Ｌｉｖｅｒ  ｓｔｅａｔｏｓｉｓ）の重要要因である（非特許文献４及び非特許文献５）。脂肪肝は、脂肪が肝臓の全重量の５％以上を超える病的状態を意味するが、脂肪肝症を含む肝疾患は、４０〜５０代の成人の死亡原因のうち、癌の次に最もよくある原因である。先進国では、人口のうち約３０％は、すでに脂肪肝症状を示しており、それらのうち２０％は、肝線維化を経て肝硬変症に進む。このような肝硬変患者の５０％は、肝硬変と診断された後、１０年以内に肝疾患で死亡する。非アルコール性脂肪肝は、現在、西欧型高脂肪食摂取の増加と運動不足とによって発病率が上昇している。現在のところ、食習慣などの生活習慣を改善することが唯一の治療方法である。
【０００７】
現在、脂肪肝を薬物学的に治療するのに有用な薬剤は、ほとんどない状態であるので、運動と食餌療法とが勧められているに過ぎないが、実際に、かような方法による脂肪肝の治療効率は非常に低く、有効な治療剤開発への要求が切実である状況である。薬物補助療法として、ベタイン、グルクロネート、メチオニン、コリン、脂肪親和性（ｌｉｐｏｔｒｏｐｈｉｃ）製剤が補助的に利用されもするが、それらの医学的又は薬学的効果が完全に証明されているわけではない。従って、副作用がなく、脂肪肝を効果的に治療する薬剤の開発が切望されている。
【０００８】
一方、ＳＲＥＢＰ−１及びＳＲＥＢＰ−２は、老人では、腎臓での発現が増加し、増加したＳＲＥＢＰ−１及びＳＲＥＢＰ−２によって、腎臓での脂質合成、及びトリグリセリドとコレステロールとの蓄積が増加するが、これは、糸球体硬化症、タンパク尿症及び腎症の原因となりえる（非特許文献６）。
【０００９】
ＬＸＲ αは、腎臓でのレニンの分泌において、重要な役割を担うと報告されている。ＬＸＲ αとＬＸＲ βは、いずれもレニンを生成する傍糸球体細胞に豊富に発現される。Ｍｏｒｅｌｌｏらによれば、ＬＸＲ αのアゴニストであるＴ０９０１０１７及びＧＷ３９６５が、腎臓でのレニンのｍＲＮＡの発現を増加させ、血中レニン活性を増加させる（非特許文献７）。血中に過度のレニンが存在すると、高レニン血症を招き、これによって、高血圧及びアルドステロン症が現れる。
【００１０】
ＬＸＲはまた、ｉｎ ｖｉｖｏで超長鎖脂肪酸（ＶＬＣＦＡ）が分解されずに脳に入って行き、神経細胞を破壊する稀な疾患である副腎白質ジストロフィー（ＡＬＤ）と関連したＡＢＣＤ２遺伝子の発現を調節するので、ＬＸＲの阻害剤は、ＡＬＤの治療に有用であると報告されている（非特許文献８）。
【００１１】
硫黄含有化合物であるジチオールチオンは、アブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ）植物に存在することが発見され、それらのいくつかの置換体は、肝臓の保護効果があるものもあると知られている。１，２−ジチオールチオンの代表的な化合物は、オルチプラズ(Ｏｌｔｉｐｒａｚ)（４−メチル−５−（２−ピラジニル）−１，２−ジチオール−３−チオン）であり、１９８０年代初めに、住血吸虫（ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓ）治療剤として使われた薬剤であって、癌の化学的予防薬、及び肝硬変治療薬として研究されている。オルチプラズは、ｉｎ ｖｉｖｏ組織の、細胞内チオール含有量を増加させ、グルタチオン（ＧＳＨ）プールの維持に関連した酵素の発現を誘発するほか、求電子性物質の解毒に関与する酵素の発現をも誘導する。オルチプラズによって、その活性が上昇する酵素としては、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：キノン還元酵素、ミクロソームエポキシドヒドロラーゼ、グルタチオン Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）及びＵＤＰ−ＧＴなどを挙げることができ、特に、ＧＳＴは、四塩化炭素やアセトアミノフェンなどの毒性物質による肝毒性を防御する酵素である。
【００１２】
本発明の発明者らは、オルチプラズが、ＴＧＦ βの発現を抑制することを発見し、肝線維化及び肝硬化の予防及び治療のための製薬組成物に関する特許を獲得した（特許文献１）。本発明の発明者らはまた、オルチプラズが、Ｃ／ＥＢＰ β−ＬＩＰの発現を増加させ、またＣ／ＥＢＰ α遺伝子及びＰＰＡＲ γ遺伝子の発現を抑制することを発見し、肥満の予防又は治療用薬物に関する特許を獲得した（特許文献２）。また本発明の発明者らは、オルチプラズを始めとする１，２−ジチオールチオン化合物が、ＲＳＫ１（ｐ９０ リボソームＳ６キナーゼ１）のキナーゼ活性を増進させることを発見し、糖尿病及びその合併症の予防及び治療のための、１，２−ジチオールチオン含有薬剤に関する特許も獲得している（特許文献３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】韓国特許第１０−０４０４３０３号公報
【特許文献２】韓国特許第１０−０５７６１５７号公報
【特許文献３】韓国特許第１０−０５９０８１８号公報
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Hermanson et al., Trends Endocrinol. Metab., 2002, 13: 55-60
【非特許文献２】Schwartz et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 2000, 274: 794-802
【非特許文献３】Yoshikawa et al., Mol. Cell. Biol., 2001, 21: 2991-3000
【非特許文献４】Kohijima et al., Int．J．Mol．Med．，2008，21(4): 507-511
【非特許文献５】Donohue, World J．Gastroenterol．2007，13(37): 4974-4978
【非特許文献６】Jiang et al．，Kidney Int．，2005，68(6): 2608-2620
【非特許文献７】Morello et al．，J．Clin．Invest．，2005，115: 1913-1922
【非特許文献８】Weinhofer et al．，J．Biol．Chem．，2005，280: 41243-41251
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明では、ＬＸＲ α又はＳＲＥＢＰ−１の阻害剤を提供する。本発明ではさらに、ＬＸＲ α又はＳＲＥＢＰ−１の過剰発現に起因する疾病の予防及び治療のための薬学組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者らは、前記課題を解決するために、さまざまな薬物の効果をスクリーニングした。その結果、本発明者らは、オルチプラズを始めとする１，２−ジチオールチオン誘導体を含有する薬物投与によって、ＬＸＲ α及びＬＸＲ α依存性ＳＲＥＢＰ−１の発現及び活性化が抑制されることを発見した。また１，２−ジチオールチオン誘導体によって、ＳＲＥＢＰ−１が抑制されると、標的遺伝子である脂質生成遺伝子の発現が顕著に抑制され、さらに、高脂質食餌によって誘発される肝組織での中性脂質蓄積が抑制されることを発見した。これらの発見に基づいて、本発明では、ＬＸＲ α又はＳＲＥＢＰ−１の過剰発現に起因する疾病の予防及び治療のための、１，２−ジチオールチオン誘導体を含有する、薬学組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１７】
本発明による薬学組成物は、有効成分として１，２−ジチオールチオン誘導体を含有する。前記薬学組成物は、ＬＸＲ αの過剰発現又は過剰活性、又はＳＲＥＢＰ−１の過剰発現又は過剰活性に起因する疾病の予防及び治療に効果的である。１，２−ジチオールチオン誘導体の例としては、オルチプラズ（４−メチル−５−（２−ピラジニル）−１，２−ジチオール−３−チオン ４−ｍｅｔｈｙｌ−５−(２−ｐｙｒａｚｉｎｙｌ) −１,２−ｄｉｔｈｉｏｌ−３−ｔｈｉｏｎｅ）、３−メチル−１，２−ジチオール−３−チオン(３−ｍｅｔｈｙｌ−１,２−ｄｉｔｈｉｏｌ−３−ｔｈｉｏｎ)、５−（６−メトキシピラジニル）−４−メチル−１，２−ジチオール−３−チオン(５−(６−ｍｅｔｈｏｘｙｐｙｒａｚｉｎｙｌ) −４−ｍｅｔｈｙｌ−１,２−ｄｉｔｈｉｏｌ−３−ｔｈｉｏｎｅ)が挙げられる。前記薬学組成物を投与すると、ＳＲＥＢＰ−１の発現及び活性が抑制される。前記ＳＲＥＢＰ−１は、ＬＸＲ αの活性化を調節して、脂質生成酵素遺伝子の発現を調節する重要な転写因子である。さらに脂質生成遺伝子の発現が抑制されることにより、代謝異常による脂肪肝症による、肝組織内のトリグリセリドの蓄積が抑制される。したがって、１，２−ジチオールチオン誘導体を有効成分として含有する本発明の薬学組成物は、脂肪肝症を予防及び治療に有効である。また本発明による薬学組成物は、高トリグリセリド血症、高レニン血症、レニンに起因した高血圧、アルドステロン症、副腎白質ジストロフィー、糸球体硬化症、タンパク尿症、腎症の予防及び治療に有効である。
【００１８】
さらに、本発明は、本発明で提供する化合物又は組成物を使用して、ＬＸＲ α又はＳＲＥＢＰ−１の発現又は活性を阻害する方法を提供する。前記阻害は、ＬＸＲ α又はＳＲＥＢＰ−１の過剰発現又は過剰活性と関連した疾病又は状態の抑制又は治療となりえる。
【００１９】
また、本発明は、ＬＸＲ α又はＳＲＥＢＰ−１の過剰発現又は過剰活性と関連した疾病又は状態、例えば、脂肪肝症、高中性脂肪血症、高レニン血症、レニンに起因した高血圧、アンドステロン症、副腎白質ジストロフィー、糸球体硬化症、タンパク尿症、腎障害を予防又は治療する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】オルチプラズ投与スケジュールを示す。
【図２】高脂質食餌で発現が増加したＬＸＲ αに対するオルチプラズ治療の結果である。結果は、正常食餌群であるＬＸＲ α ｍＲＮＡに対する値で示した（ＮＤ：正常食餌、ＨＦＤ：高脂質食餌，Ｏｌｔ：オルチプラズ，＊＊：ＮＤ群と比較してｐ＜０．０１，＃＃：ＨＦＤ治療群のみと比較してｐ＜０．０１）。
【図３】ＬＸＲ α過剰発現によって上昇したＬＸＲ αの活性に対するオルチプラズの治療効果を示す（Ｓ．Ｓ：スーパーシフト）。
【図４】高脂質食餌で発現が増加したＳＲＥＢＰ−１に対するオルチプラズの治療結果を示す（ＮＤ：正常食餌、ＨＦＤ：高脂質食餌，Ｏｌｔ：オルチプラズ、＊＊：ＮＤ群と比較してｐ＜０．０１，＃＃：ＨＦＤ治療群のみと比較してｐ＜０．０１）。
【図５】ＬＸＲ α活性化剤であるＴ０９０１３１７で、肝細胞株であるＨ４ＩＩＥ、ＨｅｐＧ２及びラットの初代培養した肝細胞を治療した後での、ＳＲＥＢＰ−１タンパク質の発現に対するオルチプラズの治療結果を示す。ＳＲＥＢＰ−１タンパク質はウェスタンブロット法によって確認した（Ｓ．Ｅ：短時間フィルム露光、Ｌ．Ｅ：長時間フィルム露光、Ａ：全細胞抽出溶解液、Ｂ：ＨｅｐＧ２ cellの核分画。
【図６】ＬＸＲ α活性化剤処理で発現が増加したＳＲＥＢＰ−１に対する１，２−ジチオールチオン誘導体のウェスタンブロットの結果である。
【図７】ＬＸＲ α活性化剤処理で発現が増加したＳＲＥＢＰ−１に対する１，２−ジチオールチオン誘導体のウェスタンブロットの結果である。
【図８】ＬＸＲ α活性化剤処理で発現が増加したＳＲＥＢＰ−１に対する１，２−ジチオールチオン誘導体のウェスタンブロットの結果である。
【図９】高脂質食餌によって誘導された脂肪肝動物モデルにオルチプラズを投与した場合の、高脂質食餌によって誘導された脂質生成遺伝子（ＦＡＳ、ＡＣＣ）の肝組織内発現量を比較した結果である。
【図１０】高脂質食餌によって誘導された脂肪肝動物モデルにオルチプラズを投与したときの、前記高脂質食餌によって誘導された脂肪肝動物モデルの肝組織におけるトリグリセリド量に対するオルチプラズの治療結果を示す。
【図１１】高脂質食餌によって誘導された脂肪肝動物モデルにオルチプラズを投与したときの、オイルレッドＯで染色した肝組織の画像である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明は、オルチプラズなどの１，２−ジチオールチオン誘導体がＬＸＲ αの活性を抑制し、脂質生成遺伝子発現を調節する細胞タンパク質である、ステロール調節エレメント結合タンパク質−１（ＳＲＥＢＰ−１）の発現及び活性を抑制するということを発見したことに基づいたものである。本発明の発明者らは、高脂質食餌で発現が増加したマウスのＬＸＲ αの発現が、オルチプラズによって抑制され（図２）、ＬＸＲ結合ＤＮＡエレメントに対するＬＸＲ αの結合能も、オルチプラズによって弱まるということを発見した（図３）。また本発明の発明者らは、ＬＸＲ αの活性化剤として知られているＴ０９０１３１７を肝細胞株に付与したときに増加するＳＲＥＢＰ−１の発現が、オルチプラズ又は他の１，２−ジチオールチオン誘導体によって抑制されることを発見した（図４〜図８）。
【００２２】
オルチプラズなどの１，２−ジチオールチオン誘導体の投与は、ＬＸＲ αの活性化を調節して、脂質生成酵素の遺伝子発現を調節する重要な転写因子であるＳＲＥＢＰ−１の発現及び活性を抑制し、さらに脂質生成遺伝子の発現を抑制することにより、代謝異常による脂肪肝症による肝組織内のトリグリセリドの蓄積を抑制する。したがって、１，２−ジチオールチオン誘導体を有効成分として含有する本発明の薬学組成物は、脂肪肝症の予防及び治療に有効である。本発明の発明者らは、高脂質食餌の投与によって、肝組織内にトリグリセリドの含有量が増加したマウスに、オルチプラズを投与した場合、前記トリグリセリドの含有量が有意に減少し（図１０及び図１１）、また、前記高脂質食餌投与マウスで増加した脂肪酸合成酵素である脂肪酸合成酵素（ＦＡＳ）及びアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）の発現がオルチプラズの投与によって有意に抑制されることを発見した（図９）。
【００２３】
本発明の発明者らによる発見に基づき、本発明は、ＬＸＲ αの過剰発現又は過剰活性、又はＳＲＥＢＰ−１の過剰発現又は過剰活性に起因する疾病の予防用及び治療用の薬学組成物を提供する。前記薬学組成物は、下記式１で表される１，２−ジチオールチオン誘導体、その薬学的に許容される塩、それらの溶媒物又は水和物、又はそれらのプロドラッグを有効成分として含有し、及び薬学的に許容される担体を含む薬学組成物である。
【００２４】
【化１】
2011529047.tif 000003
【００２５】
Ｘは、炭素又は窒素であり、Ｑは、硫黄、酸素又は−Ｓ＝Ｏであり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、水素原子、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ３−７シクロアルコキシ、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ３−７シクロアルキルチオ、Ｃ１−７アルケニル、Ｃ１−７アルキニル、Ｃ１−７アルキルスルホニル、Ｃ１−７アルキルアミノカルボニル、ＨＯ−Ｃ１−７アルキル、ＨＳ−Ｃ１−７アルキル、ヒドロキシ、チオール、ハロゲン、カルボキシル、ニトロ、シアノ、Ｃ１−７アルキルカルボニル、Ｃ１−７アルコキシカルボニル、Ｃ１−７アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル−Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキル、アミノ、Ｃ１−７アルキルアミノ、Ｃ１−７アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４アルキルスルホンアミノ、フェニル、ヘテロアリール、フェニル−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリール−Ｃ１−４アルキル、フェニル−Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル、フェニル−Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキル、フェノキシ−Ｃ１−４アルキル、フェニルチオ−Ｃ１−４アルキル、フェニルカルボニルアミノ、フェノキシ−Ｃ１−４アルキルカルボニルアミノ、フェニル−Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリールチオ−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリール−Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキルからなる群から選択され、前記ヘテロアリールは、窒素、硫黄及び酸素からなる群から選択された少なくとも１つのヘテロ原子を含有する五員環又は六員環の化合物であり、前記フェニル及びヘテロアリールは、置換されていても非置換であってもよく、可能な置換基は、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ１−７アルケニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ニトロ、アミノ、シアノ、ＨＯ−Ｃ１−４アルキル、ＨＳ−Ｃ１−４アルキル、ＨＯ−Ｃ１−７アルコキシ、ＨＯ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルコキシ、チオール、ヒドロキシ、カルボキシルからなる群から選択され、前記フェニル及びヘテロアリールが置換される場合には、一置換又は多置換であってよい。前記フェニル及びヘテロアリールはそれぞれ独立に、少なくとも１つのベンゼン又は前述のヘテロアリールと縮合してもよく、前記縮合したフェニル及びヘテロアリールは、置換されていてもよく、又は非置換であってもよく、可能な置換基は、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ１−７アルケニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ニトロ、アミノ、シアノ、ＨＯ−Ｃ１−４アルキル、ＨＳ−Ｃ１−４アルキル、ＨＯ−Ｃ１−７アルコキシ、ＨＯ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルコキシ、チオール、ヒドロキシ、カルボキシルからなる群から選択され、置換される場合、前記フェニル及びヘテロアリールは一置換又は多置換であってよい。
【００２６】
前記ＬＸＲ αの過剰発現又は過剰活性、又はＳＲＥＢＰ−１の過剰発現又は過剰活性に起因する疾病としては、レニンに起因した高血圧、アルドステロン症、副腎白質ジストロフィー、糸球体硬化症、タンパク尿症、腎症、脂肪肝、高トリグリセリド血症、高レニン血症などを挙げることができるが、これに限定されるものではない。よって、本発明は、レニンに起因した高血圧、アンドステロン症、副腎白質ジストロフィー、糸球体硬化症、タンパク尿症又は腎症、脂肪肝、高トリグリセリド血症又は高レニン血症の予防用及び治療用の薬学組成物であって、式１で表される１，２−ジチオールチオン誘導体を有効成分として含有し、薬剤学的に許容される担体を含む薬学組成物を提供する。
【００２７】
本発明はまた、下記式１で表される１，２−ジチオールチオン誘導体、その薬学的に許容可能な塩、それらのプロドラッグ、それらの溶媒和物又は水和物を有効成分として含有し、及び薬剤学的に許容される担体を含む薬学組成物を投与することを含む、試験管内（in vitro）又は生体内（in vivo）で、ＬＸＲ α又はＳＲＥＢＰ−１の発現又は活性を阻害する方法を提供する。
【００２８】
【化２】
2011529047.tif 000004
【００２９】
ここで、Ｘは、炭素又は窒素であり、Ｑは、硫黄、酸素又は−Ｓ＝Ｏであり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、水素原子、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ３−７シクロアルコキシ、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ３−７シクロアルキルチオ、Ｃ１−７アルケニル、Ｃ１−７アルキニル、Ｃ１−７アルキルスルホニル、Ｃ１−７アルキルアミノカルボニル、ＨＯ−Ｃ１−７アルキル、ＨＳ−Ｃ１−７アルキル、ヒドロキシ、チオール、ハロゲン、カルボキシル、ニトロ、シアノ、Ｃ１−７アルキルカルボニル、Ｃ１−７アルコキシカルボニル、Ｃ１−７アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル−Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキル、アミノ、Ｃ１−７アルキルアミノ、Ｃ１−７アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４アルキルスルホンアミノ、フェニル、ヘテロアリール、フェニル−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリール−Ｃ１−４アルキル、フェニル−Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル、フェニル−Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキル、フェノキシ−Ｃ１−４アルキル、フェニルチオ−Ｃ１−４アルキル、フェニルカルボニルアミノ、フェノキシ−Ｃ１−４アルキルカルボニルアミノ、フェニル−Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリールチオ−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリール−Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキルからなる群から選択される。前記ヘテロアリールは、窒素、硫黄及び酸素からなる群から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含有する五員環又は六員環化合物を意味する。前記フェニル及びヘテロアリールは、置換されていてもよく、又は非置換であってもよく、可能な置換基としては、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ１−７アルケニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ニトロ、アミノ、シアノ、ＨＯ−Ｃ１−４アルキル、ＨＳ−Ｃ１−４アルキル、ＨＯ−Ｃ１−７アルコキシ、ＨＯ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルコキシ、チオール、ヒドロキシ、カルボキシルから構成された群（基）から選択され、置換される場合には、前記フェニル及びヘテロアリールは一置換又は多置換であってよい。前記フェニル及びヘテロアリールはそれぞれ独立に、少なくとも１つのベンゼン又は前述のヘテロアリールと縮合してもよく、前記縮合したフェニル及びヘテロアリールは、置換されていてもよく、又は非置換であってもよく、可能な置換基としては、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ１−７アルケニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ニトロ、アミノ、シアノ、ＨＯ−Ｃ１−４アルキル、ＨＳ−Ｃ１−４アルキル、ＨＯ−Ｃ１−７アルコキシ、ＨＯ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルコキシ、チオール、ヒドロキシ、カルボキシルからなる群から選択され、置換される場合には、前記フェニル及びヘテロアリールは一置換又は多置換であってよい。
【００３０】
本発明はまた、下記式１で表される１，２−ジチオールチオン誘導体、その薬学的に許容可能な塩、それらのプロドラッグ、それらの溶媒和物又は水和物を有効成分として含有し、また、薬剤学的に許容される担体を含む薬学組成物を投与することを含む、ＬＸＲ α又はＳＲＥＢＰ−１の過剰発現又は過剰活性と関連した疾病又は状態を予防又は治療する方法を提供する。
【００３１】
【化３】
2011529047.tif 000005
【００３２】
ここで、Ｘは、炭素又は窒素であり、Ｑは、硫黄、酸素又は−Ｓ＝Ｏであり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、水素原子、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ３−７シクロアルコキシ、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ３−７シクロアルキルチオ、Ｃ１−７アルケニル、Ｃ１−７アルキニル、Ｃ１−７アルキルスルホニル、Ｃ１−７アルキルアミノカルボニル、ＨＯ−Ｃ１−７アルキル、ＨＳ−Ｃ１−７アルキル、ヒドロキシ、チオール、ハロゲン、カルボキシル、ニトロ、シアノ、Ｃ１−７アルキルカルボニル、Ｃ１−７アルコキシカルボニル、Ｃ１−７アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル−Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキル、アミノ、Ｃ１−７アルキルアミノ、Ｃ１−７アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４アルキルスルホンアミノ、フェニル、ヘテロアリール、フェニル−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリール−Ｃ１−４アルキル、フェニル−Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル、フェニル−Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキル、フェノキシ−Ｃ１−４アルキル、フェニルチオ−Ｃ１−４アルキル、フェニルカルボニルアミノ、フェノキシ−Ｃ１−４アルキルカルボニルアミノ、フェニル−Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリールチオ−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリール−Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキルからなる群から選択される。前記ヘテロアリールは、窒素、硫黄及び酸素からなる群から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含有する五員環又は六員環化合物を意味する。前記フェニル及びヘテロアリールは、置換されていても、又は非置換であってもよく、可能な置換基としては、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ１−７アルケニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ニトロ、アミノ、シアノ、ＨＯ−Ｃ１−４アルキル、ＨＳ−Ｃ１−４アルキル、ＨＯ−Ｃ１−７アルコキシ、ＨＯ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルコキシ、チオール、ヒドロキシ、カルボキシルからなる群から選択され、置換される場合には、前記フェニル及びヘテロアリールは一置換又は多置換であってよい。前記フェニル及びヘテロアリールはそれぞれ独立に、少なくとも１つのベンゼン又は前述のヘテロアリールと縮合していてもよい。前記縮合されたフェニル及びヘテロアリールは、置換されていてもよく、又は非置換であってもよく、可能な置換基としては、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ１−７アルケニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ニトロ、アミノ、シアノ、ＨＯ−Ｃ１−４アルキル、ＨＳ−Ｃ１−４アルキル、ＨＯ−Ｃ１−７アルコキシ、ＨＯ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルコキシ、チオール、ヒドロキシ、カルボキシルからなる群から選択され、置換される場合には、前記フェニル及びヘテロアリールは一置換又は多置換であってよい。
【００３３】
ＬＸＲ α又はＳＲＥＢＰ−１の過発現又は過活性と関連した疾病又は状態を予防又は治療する方法の一例として、前記疾病又は状態は、例えば、脂肪肝、高トリグリセリド血症、高レニン血症、レニンに起因した高血圧、アルドステロン症、副腎白質ジストロフィー、糸球体硬化症、タンパク尿症、腎症である。実施形態では、本明細書に開示される化合物は、これらの疾病又は状態の１つ又はそれ以上を改善し、及び/又は発現を遅らせるために使用される。
本発明の薬学組成物に含まれる１，２−ジチオールチオン誘導体には、１，２−ジチオール−３−チオン及び、二環式分子を含む有機化合物と、それらの誘導体有機化合物とが含まれる。二環式分子は、ピラジン、ピリダジン、ピリミジン、チアゾール又はチオフェンであってよい（表１）。
【００３４】
【表１】
2011529047.tif 000006
【００３５】
本発明は、前記化合物が形成されうる薬学的に許容可能な塩、又はそれらの溶媒和物、水和物又はプロドラッグを含んでよい。薬剤学的に許容される付加塩は、薬剤学的に許容される酸付加塩、及び薬剤学的に許容される塩基付加塩を含む。本明細書に記載の「薬剤学的に許容される酸付加塩」には、式１で表される化合物を用いて形成されうる非毒性酸付加塩が含まれ、それは治療的に活性である。式１の化合物は元来、塩基性特性を有しており、適当な酸で処理することにより、薬剤学的に許容される酸付加塩に転換されうる。適当な酸は、無機酸又は有機酸でありうる。無機酸としては、例えば、塩酸又はブロム酸などのハロゲン化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などを挙げることができる。有機酸としては、例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸（すなわち、ブタン二酸）、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノ−サリチル酸、パモ酸などを挙げることができる。酸性特性を有する前記転換された化合物は、適当な有機又は無機の塩基で処理することによって、その薬剤学的に許容される塩基付加塩に転換されうる。適当な塩基付加塩としては、例えば、アンモニウム塩；アルカリ及びアルカリ土類金属塩、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩；ベンザチン塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン塩、ヒドラバミン塩（ｈｙｄｒａｂａｍｉｅ ｓａｌｔ）などの有機塩基との塩；アルギニン、リシンなどのアミノ酸との塩を含む。
【００３６】
本発明の組成物は、薬剤学的分野で一般的な方法によって、経口投与に適した単位投与型の製剤及び注射剤に剤形化することができ、これを投与できる。単位投与型の製剤には、硬質及び軟質のカプセル剤、錠剤、散剤、懸濁剤、シロップ剤が含まれる。経口投与に適した単位投与型の製剤には、 少なくとも１つの薬物学的活性成分を含み、またそれ以外に、少なくとも１つの薬剤学的に不活性である一般的な担体が含まれていてよい。少なくとも１つの薬剤学的に不活性である一般的な担体としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤が含まれる。賦形剤としては、例えば、粉末、ラクトース、カルボキシメチルセルロース、カオリンが挙げられる。結合剤としては、例えば、水、ゼラチン、アルコール、グルコース、アラビアゴム（Ａｒａｂｉａ ｒｕｂｂｅｒ）、トラガカントゴムが挙げられる。崩壊剤としては、例えば、粉末、デキストリン、アルギン酸ナトリウムが挙げられる。潤滑剤としては、例えば、タルク、ステアリン酸（ｓｔａｒｉｃ ａｃｉｄ）、ステアリン酸マグネシウム、流動パラフィンが挙げられる。本発明ではまた、溶解のための溶解補助剤をさらに含んでもよい。
【００３７】
本発明の組成物の１日投与容量は、投与しようとする対象の疾病の進行程度、発病時期、年齢、健康状態、合併症などによって異なる。例えば、成人に対して、１日あたり、本発明の組成物を１〜５００ｍｇ、特に、３０〜２００ｍｇ投与できる。投与は１日１回又は数回分割して投与できる。
【００３８】
以下、本発明について、実験例によって詳細に説明する。下記実施例は、本発明について具体的に例示するだけであり、本発明の内容が、下記実施例に限定されるものではない。
【００３９】
（参考例１：実験動物及び食餌）
実験動物として使われた雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（平均体重２５〜３０ｇ）は、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｏｒｉｅｎｔ（韓国・ソウル）から購入した。実験に使用する前、少なくとも１週間、５５±５％の湿度、２２±２℃の温度及び換気が調節されたソウル大学校薬科大学動物実験研究棟で動物を適応させた。午前７時と午後７時を基準として、１２時間周期で明暗を変えた。実験期間中、マウスが摂取した食餌量及び飲料水量には、有意的な変化が観察されなかった。動物の重さと状態とを毎週１回検査した。２つのグループのマウスは、高脂質食餌（Ｄｙｅｔｓ Ｉｎｃ．，Ｂｅｔｈｌｅｈｅｍ）又は正常食餌でそれぞれ１０週間飼育した。それぞれのグループについて、最後の４週間の間、オルチプラズ（１０又は３０ｍｇ／ｋｇ、３回／週）をマウスに投与した（図１）。各グループは、全部で１０匹のマウスから構成された。
【００４０】
（参考例２：試料準備）
オルチプラズ及び１，２−ジチオールチオン誘導体は、株式会社ＣＪから提供を受けた。本発明に使われた１，２−ジチオールチオン誘導体は、韓国特許第１０−０６０４２６１号公報に記載された方法によって製造されうる。脂肪肝誘発のための高脂質食餌は、米国・ダイエット社（Ｄｙｅｔ Ｃｏ．）から購入した。オルチプラズを４０％ＰＥＧ２００で希釈して、所望の濃度に調製した。
【００４１】
（参考例３：リアルタイム−ＲＴ ＰＣＲ）
マウスの肝臓から抽出した全ＲＮＡ（２μｇ）、ｄ（Ｔ）１６プライマー、及びＡＭＶ逆転写酵素を使用し、ｃＤＮＡを得た。遺伝子の相対的な量は、サイバーグリーン染料（ＣｙＢｒ ｇｒｅｅｎ ｄｙｅ）を使用したリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法によって定量した。リアルタイム ＲＴ−ＰＣＲは、ロッシュ社（マンハイム、ドイツ）のＬｉｇｈｔ-ｃｙｃｌｅｒ２．０を利用した。メーカーの方法によって、ＰＣＲを行い、Ｌｉｇｈｔ-ｃｙｃｌｅｒ ｓｏｆｔｗａｒｅ４．０プログラムを使用し、各遺伝子の相対的な量を分析した。
【００４２】
（参考例４：ウェスタンブロット）
Ｌａｅｍｍｌｉ ＵＫ法（１９７０）によって、Ｍｉｇｈｔｙ Ｓｍａｌｌ ＩＩ ＳＥ２５０装置を使用し、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を行った。肝試料の溶解分画を、サンプル希釈緩衝液［６３ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ．６．８）、１０％グリセロール、２％ＳＤＳ、０．００１３％ブロモフェノールブルー、５％β−メルカプトエタノール］に希釈し、７．５％及び９％のゲルを使用し、電極緩衝液（１Ｌ溶液中にＴｒｉｓ １５ｇ、グリシン７２ｇ、ＳＤＳ ５ｇ含む）内で電気泳動した。電気泳動が終わったゲルは、電気泳動装置を利用し、緩衝液［２５ｍＭ Ｔｒｉｓ、１９２ｍＭグリシン、２０％ｖ／ｖ メタノール（ｐＨ．８．３）］内で、１９０ｍＡｍｐｓで１時間、ニトロセルロース紙にタンパク質を転移させた。Ａｎｔｉ−ＳＲＥＢＰ−１を一次抗体として反応させた後、二次抗体として西洋わさびペルオキシダーゼ−ヤギ抗ウサギＩｇＧ（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ-ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｇｏａｔ ａｎｔｉ-ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ）を１時間反応させた。その後、ＥＣＬ 化学発光分析システム（Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ｇａｉｔｈｅｓｂｅｒｇ、ＭＡ）を使用して免疫反応性蛋白質を可視化させた。各試料中の蛋白質量の同質性は、anti−β−actin抗体（Ｓｉｇｍａ、セントルイス、ＭＯ）を使用して確認した。
【００４３】
（参考例５：分析方法）
下記実施例で提示した資料は、薬物学的計算プログラムを利用して分析したものであり、多様な実験群間の有意性を一方向平方偏差分析法（Ｆｉｓｈｅｒ，Ｒ．Ａ．，Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｗｏｒｋｅｒｓ，Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ: Ｏｌｉｖｅｒ ＆ Ｂｏｙｄ，１９２５）で検定した後、ニューマン・クールズ検査（Ｎｏｒｍａｎ ＧＲ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ: Ｔｈｅ Ｂａｒｅ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ，２０００）で判定した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。
【００４４】
（実験例１：発現が増加したＬＸＲ αに対するオルチプラズ処置の効果）
マウスを、高脂質食餌及び正常食餌で１０週間飼育した。高脂質食餌で飼育したマウス群に、最後の４週間の間、オルチプラズ（１０−３０ｍｇ／ｋｇ、３回／週）、すなわち、１，２−ジチオールチオン化合物、を投与したマウスの肝組織のＬＸＲ αの発現を測定した。肝組織からｍＲＮＡを単離し、ＲＴ−ＰＣＲを介してｃＤＮＡを合成した後、特定プライマー（ｍｏｕｓｅ ＬＸＲ、５’−ＴＧＣＣＡＴＣＡＧＣＡＴＣＴＴＣＴＣＴＧ−３’（ｓｅｎｓｅ）及び５’−ＧＧＣＴＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣＡＴＴＡＧＣ−３’（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ））を使用し、リアルタイムＰＣＲを行った。正常食餌群（ＮＤ）のＬＸＲ α ｍＲＮＡの発現レベルを１としたときの、高脂質食餌群、又は、高脂質食餌かつオルチプラズ投与群の相対的な発現レベルを測定し、その結果を図２に示した。これにより、細胞内脂質センサであるＬＸＲ αの発現が、高脂質食餌によって有意に増加し（ｐ＜０．０１）、ＬＸＲ α発現の増加は、オルチプラズ投与によって抑制される（ｐ＜０．０１）ということが明らかになった。
【００４５】
（実験例２：オルチプラズ処置によるＬＸＲ αの活性抑制効果）
ＬＸＲ αは、ＲＸＲαとダイマーを形成し、標的遺伝子プロモーターに存在する特定領域（ＬＸＲＥ）に結合することにより、遺伝子の発現を調節する。オルチプラズ処置によって、ＬＸＲＥ結合能が変化するか否かを、ゲルシフトアッセイで確認した。ＳＲＥＢＰ−１ｃ遺伝子のＬＸＲＥ二本鎖オリゴヌクレオチドを、［γ−３２Ｐ］ＡＴＰとＴ４ ポリヌクレオチドキナーゼとを使用し、５’−末端を放射性同位元素で標識した。その後、標識したプローブ（１ｍｌ、＞１０６ｃｐｍ）と核分画タンパク質とを結合緩衝液中で反応させた。反応液を４％ポリアクリルアミド・ゲルで電気泳動した後、オートラジオグラフィーで分析した。実験に使われたＬＸＲＥオリゴヌクレオチド配列は、５’−ＣＡＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＧＴＡＡＣＣＣＣＡＧＣ−３’である。ＤＮＡ結合特異性は、コールドプローブ滴定（ｃｏｌｄ ｐｒｏｂｅ ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）及びスーパーシフトアッセイにより確認した。コールドプローブ滴定のために、２０倍多い（モル基準）非標識オリゴヌクレオチドをあらかじめ反応させた。スーパーシフトのために、ＬＸＲ α抗体又はＲＸＲα抗体（２μｇ）を反応混合物と、室温で約３０分間反応させ、そこに、放射線同位元素で標識されたプローブを加え、さらに３０分間反応させた後、電気泳動した。
【００４６】
ＬＸＲ α及びＲＸＲαが過剰発現した場合、対照群（ｍｏｃｋ）に比べて移動の遅い泳動バンドの密度が高まった（図３Ａの最初のバンド及び２番目のバンドを参照のこと）。ＬＸＲ α及びＲＸＲαの抗体を使用し、スーパーシフトを行ったとき、ＬＸＲ α抗体及びＲＸＲα抗体によって、ＤＮＡタンパク結合が減少し、スーパーシフトされたバンドが観察された（図３Ａ、３番目のバンド〜５番目のバンド）。これは、ＬＸＲ α／ＲＸＲα複合体の、ＤＮＡ結合特異性を支持する結果である。
【００４７】
オルチプラズが投与されると、移動が遅延するバンド（図３の最初のバンド〜３番目のバンド）の密度が低くなった（図３Ｂの４番目のバンド及び５番目のバンド）。これは、ＬＸＲ αの、ＤＮＡ結合能がオルチプラズ処置によって実質的に弱まるということを示している。
【００４８】
（実験例３：発現が増加したＳＲＥＢＰ−１に対するオルチプラズ処置の効果）
実験例１で使用したマウスの肝組織におけるＳＲＥＢＰ−１の発現レベルを測定した。肝組織からｍＲＮＡを単離し、ＲＴ−ＰＣＲによってｃＤＮＡを合成した後、これに特定プライマー（ｍｏｕｓｅ ＳＲＥＢＰ−１、５’−ＡＡＣＧＴＣＡＣＴＴＣＣＡＧＣＴＡＧＡＣ−３’（ｓｅｎｓｅ）及び５’−ＣＣＡＣＴＡＡＧＧＴＧＣＣＴＡＣＡＧＡＧＣ−３’（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ））を用いて、リアルタイムＰＣＲを行った。正常食餌群（ＮＤ）のＳＲＥＢＰ−１ｍＲＮＡの発現レベルを１としたとき、高脂質食餌群、又は、高脂質食餌かつオルチプラズ投与群の相対的な発現レベルを測定した。その結果を図４に示した。ＳＲＥＢＰ−１の発現が高脂質食餌によって有意に増加し（ｐ＜０．０１）、ＳＲＥＢＰ−１発現の増加は、オルチプラズ投与によって抑制される（ｐ＜０．０１）ということが明らかになった。
【００４９】
（実験例４：オルチプラズ処置によるＳＲＥＢＰ−１の発現及び活性の抑制効果）
肝細胞株であるＨ４ＩＩＥ、ＨｅｐＧ２、及びラット初代培養肝細胞を、ＬＸＲ α活性化剤であるＴ０９０１３１７で処置し、ウェスタンブロット法によって、ＳＲＥＢＰ−１タンパク質を確認した。ＳＲＥＢＰ−１の発現は、Ｔ０９０１３１７で処置した後、１２時間以内に顕著に増加した（図５Ａの各ゲル写真の４番目のカラム）。ＳＲＥＢＰ−１タンパク質の発現の増加は、オルチプラズ処置を行うと、濃度依存的に減少した（図５Ａの各ゲル写真の５番目及び６番目のカラム）。これは、ＳＲＥＢＰ−１の発現がオルチプラズによって抑制されることを示す。
【００５０】
また、Ｔ０９０１３１７を投与したＨｅｐＧ２細胞株におけるＳＲＥＢＰ−１の核内移動の増加が、オルチプラズ処置によって濃度依存的に減少した（図５Ｂ）。これは、ＳＲＥＢＰ−１の活性が、オルチプラズによって抑制されることを示す。
【００５１】
細胞分画は以下の方法で単離した。低浸透圧緩衝溶液［１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．９）、１０ｍＭ ＫＣｌ、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５％ノニデットＰ−４０、１ｍＭ ＤＴＴ及び０．５ｍＭフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）］を肝細胞株に加え、氷中に１０分放置した。その後、溶液を７，２００ｇで５分間遠心分離し、上澄み液を細胞質分画として使用した。別途、高浸透圧緩衝溶液［２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．９）、４００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｍＭ ＤＴＴ及び１ｍＭ ＰＭＳＦ］を肝細胞株に加え、氷中に１時間放置した。その後、得られた溶液を１５，０００ｇで１０分間遠心分離して上澄み液を取り、核分画として使用した。別途、溶液緩衝液［１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．９）、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１０％グリセロール、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、０．５％ノニデット Ｐ−４０、１ｍＭ ＤＴＴ及び０．５ｍＭ ＰＭＳＦ］をＰＢＳで洗浄した細胞に加え、氷中で１時間溶解させた。その後、得られた溶液を１０，０００ｇで１０分間遠心分離した後、上澄み液を全細胞抽出液として使用した。これらの細胞分画は、使用時まで−７０゜Ｃに保管した。タンパク質濃度は、ブラッドフォードアッセイ（Ｂｒａｄｆｏｒｄ ａｓｓａｙ；Ｂｉｏ−Ｒａｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｓｓａｙ ｋｉｔ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）で定量した。
【００５２】
（実験例５：１，２−ジチオールチオン誘導体ら処置によるＳＲＥＢＰ−１の発現抑制効果）
ＬＸＲ α活性化剤（Ｔ０９０１３１７）によって増加したＳＲＥＢＰ−１の発現に対する１，２−ジチオールチオン誘導体の効果を、Ｈ４ＩＩＥ細胞株を利用して評価した。Ｈ４ＩＩＥ細胞株をＴ０９０１３１７で処置することで増加したＳＲＥＢＰ−１の発現が、１，２−ジチオールチオン誘導体処置によって抑制された（図６〜図８）。
【００５３】
（実験例６：脂肪酸合成酵素ＦＡＳ及びＡＣＣの発現に対する、オルチプラズ処置による抑制効果）
実験例１で使用したマウスの肝組織におけるＳＲＥＢＰ−１の標的遺伝子であるＦＡＳ及びＡＣＣの発現レベルを測定した。肝組織からｍＲＮＡを単離し、ＲＴ−ＰＣＲによりｃＤＮＡを合成した後、これを特定プライマー（ｍｏｕｓｅ ＡＣＣ１、５’−ＧＴＣＡＧＣＧＧＡＴＧＧＧＣＧＧＡＡＴＧ−３’（ｓｅｎｓｅ）及び５’−ＣＧＣＣＧＧＡＴＧＣＣＡＴＧＣＴＣＡＡＣ−３’（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ）；ｍｏｕｓｅ ＦＡＳ、５’−ＡＧＣＧＧＣＣＡＴＴＴＣＣＡＴＴＧＣＣＣ−３’（ｓｅｎｓｅ）及び５’−ＣＣＡＴＧＣＣＣＡＧＡＧＧＧＴＧＧＴＴＧ−３’（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ））を使用して、リアルタイムＰＣＲを行った。正常食餌群（ＮＤ）のＦＡＳ及びＡＣＣのｍＲＮＡの発現レベルを１としたとき、高脂質食餌群、又は、高脂質食餌かつオルチプラズ投与群の相対的なＦＡＳｍＲＮＡ又はＡＣＣｍＲＮＡの発現レベルを測定した。結果を図９に示した。ＦＡＳ及びＡＣＣの発現が、高脂質食餌によって有意に増加し（ｐ＜０．０１）、ＦＡＳ及びＡＣＣ発現の増加は、オルチプラズ投与によって抑制される（ｐ＜０．０１）ということが明らかになった。
【００５４】
（実験例７：オルチプラズ投与による高脂質食餌に蓄積になった肝組織内のトリグリセリドの含有量抑制効果）
実験例１で使用したマウスの肝組織内の実験例１におけるトリグリセリド含有量に対するオルチプラズの効果を評価した。肝組織内のトリグリセリド含有量は、脂肪肝を示す指標である。オルチプラズを投与した後（Ｂａｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００７，４６: ７３０−７３９）、肝組織内のトリグリセリド含有量を測定した。高脂質食餌を１０週実施したマウスでは、肝組織内のトリグリセリド含有量が、正常食餌群に比べて顕著に増加した（ｐ＜０．０１）。一方、オルチプラズが投与された場合には、組織内トリグリセリドの含有量が有意に減少した（ｐ＜０．０１）（図１０）。
【００５５】
（実験例８：高脂質食餌によって誘導された脂肪肝動物モデルの肝組織におけるオルチプラズ治療効果）
実験例７で使用した、高脂質食餌によって誘導された脂肪肝に対するオルチプラズの治療効果を、脂肪特異染色剤であるオイルレッドＯ染色法を利用して確認した。脂肪肝の肝組織を、１０％中性ホルマリン溶液で固定し、一般的な固定工程及び脱水工程を行った後、工程後の肝組織をパラフィンに包埋した。包埋した組織に対して、４μｍ厚に組織切片を行い、オイルレッドＯで染色した後、光学顕微鏡で観察した。高脂質食餌群では、オイルレッドＯで赤く染色された部分が顕著に現れ（ＨＦＤ＋ビークル（vehicle））、オルチプラズが投与された群（ＨＦＤ＋オルチプラズ）では、赤く染色された部分が顕著に減った（図１１）。これにより、オルチプラズ治療効果が高いことがわかる。
【００５６】
１，２−ジチオールチオン誘導体を有効成分として含有する多様な形態の製剤を調製した。
【００５７】
（製造例１）
オルチプラズ２５ｍｇ
乳糖５０ｍｇ
澱粉１０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム適量
【００５８】
前記の成分を混合し、一般的な錠剤の製造方法によって打錠し、錠剤を製造した。
【００５９】
（製造例２）
３−メチル−１，２−ジチオール−３−チオン５０ｍｇ
乳糖５０ｍｇ
澱粉１０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム適量
【００６０】
前記の成分を混合し、一般的な錠剤の製造方法によって打錠し、錠剤を製造した。
【００６１】
（製造例３）
５−（６−メトキシピラジニル）−４−メチル−１，２−ジチオール−３−チオン  １００ｍｇ
乳糖５０ｍｇ
澱粉１０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム適量
【００６２】
前記の成分を混合し、一般的な散剤の製造方法によって、散剤を製造した。
【００６３】
（製造例４）
オルチプラズ２５０ｍｇ
乳糖５０ｍｇ
澱粉１０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム適量
【００６４】
前記の成分を混合し、一般的な散剤の製造方法によって、散剤を製造した。
【００６５】
（製造例５）
オルチプラズ２５ｍｇ
乳糖３０ｍｇ
澱粉２８ｍｇ
タルク２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム適量
【００６６】
前記の成分を混合し、一般的な方法によるカプセル剤の製造方法によってゼラチン軟カプセルに充填し、カプセル剤を製造した。
【００６７】
（製造例６）
５−（６−メトキシピラジニル）−４−メチル−１，２−ジチオール−３−チオン５０ｍｇ
乳糖３０ｍｇ
澱粉２８ｍｇ
タルク２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム適量
【００６８】
前記の成分を混合し、一般的なカプセル剤の製造方法によってゼラチン軟カプセルに充填し、カプセル剤を製造した。
【００６９】
（製造例７）
オルチプラズ１００ｍｇ
異性化糖１０ｇ
砂糖３０ｍｇ
ナトリウムＣＭＣ １００ｍｇ
レモン香料  適量
精製水  バランス
（精製水適量を加えて全体１００ｍｌとする）
【００７０】
前記の成分を通常の懸濁剤の製造方法によって懸濁剤を製造し、１００ｍｌ容量の褐色瓶に充填して滅菌し、懸濁剤を製造した。
【００７１】
（製造例８）
３−メチル−１，２−ジチオール−３−チオン２５０ｍｇ
乳糖３０ｍｇ
澱粉２０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム適量
【００７２】
前記の成分を均一に混合し、ポリエチレンがコーティングされた袋に充填して密閉し、散剤を製造した。
【００７３】
（製造例９）
軟質カプセル剤１錠中に以下を含む：
オルチプラズ１００ｍｇ
ポリエチレングリコール４００ ４００ｍｇ
濃グリセリン５５ｍｇ
精製水３５ｍｇ
【００７４】
ポリエチレングリコールと濃グリセリンとを混合し、ここに精製水を加え、この混合物を約６０℃で維持した状態で、１，２−ジチオールチオン誘導体を加えた。約１，５００ｒｐｍで撹拌して、均一に混合した。その後ゆっくりと撹拌しつつ温度を室温に冷却し、真空ポンプを使用して気泡を除去し、軟質カプセルの内容物とした。軟質カプセルの被膜は、一般的に公知のゼラチン、可塑剤でソフト処方とした。１カプセル当たりゼラチン１３２ｍｇ、濃グリセリン５２ｍｇ、７０％ジソルビトール液６ｍｇ、着香剤としてエチルバニリン適量及びコーティング剤としてカルナウバワックスを使用し、通常の調剤法で製造した。
【産業上の利用可能性】
【００７５】
本発明による薬学組成物は、ＬＸＲ αの過剰発現又は過剰活性、又はＳＲＥＢＰ−１の過剰発現又は過剰活性に起因する疾病の予防又は治療に有効である。前記薬学組成物を投与すると、ＳＲＥＢＰ−１の発現及び活性が阻害される。ＳＲＥＢＰ−１は、ＬＸＲ α活性化調節を介して、脂質生成酵素遺伝子の発現を調節する重要な転写因子であり、さらに脂質生成遺伝子の発現を抑制することにより、代謝障害による脂肪肝症による肝組織内のトリグリセリドの蓄積を抑制する。従って、１，２−ジチオールチオン誘導体を有効成分として含有する本発明の薬学組成物は、脂肪肝症の予防及び治療に有効である。また、本発明による薬学組成物は、高トリグリセリド血症、高レニン血症、レニンに起因した高血圧、アルドステロン症、副腎白質ジストロフィー、糸球体硬化症、タンパク尿症、腎症の予防及び治療に有効である。
【図１】
2011529047.tif 000011
【図２】
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【図４】
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【図９】
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【図１０】
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【図３】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2011529047.tif 000019
【図８】
2011529047.tif 000020
【図１１】
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【配列表】
2011529047000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成23年1月25日(2011.1.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】
肝Ｘレセプター（ＬＸＲ α）の過剰発現又は過剰活性に起因する疾病の予防又は治療のための薬学組成物であって、
・    前記薬学組成物は、有効成分として下記式１で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、その溶媒和物、その水和物又はそのプロドラッグを含む薬学組成物。
【化１】
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Ｘは、炭素又は窒素であり、Ｑは、硫黄、酸素又は−Ｓ＝Ｏであり、Ｒ１及びＲ２は各々独立に、水素原子、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ３−７シクロアルコキシ、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ３−７シクロアルキルチオ、Ｃ１−７アルケニル、Ｃ１−７アルキニル、Ｃ１−７アルキルスルホニル、Ｃ１−７アルキルアミノカルボニル、ＨＯ−Ｃ１−７アルキル、ＨＳ−Ｃ１−７アルキル、ヒドロキシ、チオール、ハロゲン、カルボキシル、ニトロ、シアノ、Ｃ１−７アルキルカルボニル、Ｃ１−７アルコキシカルボニル、Ｃ１−７アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル−Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキル、アミノ、Ｃ１−７アルキルアミノ、Ｃ１−７アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４アルキルスルホンアミノ、フェニル、ヘテロアリール、フェニル−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリール−Ｃ１−４アルキル、フェニル−Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキル、フェニル−Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキル、フェノキシ−Ｃ１−４アルキル、フェニルチオ−Ｃ１−４アルキル、フェニルカルボニルアミノ、フェノキシ−Ｃ１−４アルキルカルボニルアミノ、フェニル−Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ−Ｃ１−４アルキル、ヘテロアリールチオ−Ｃ１−４アルキル及びヘテロアリール−Ｃ１−４アルキルチオ−Ｃ１−４アルキルからなる群から選択され；前記ヘテロアリールは、窒素、硫黄及び酸素からなる群から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む五員環又は六員環化合物であり、；前記フェニル及びヘテロアリールは、置換又は非置換であり、可能な置換基は、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ１−７アルケニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ニトロ、アミノ、シアノ、ＨＯ−Ｃ１−４アルキル、ＨＳ−Ｃ１−４アルキル、ＨＯ−Ｃ１−７アルコキシ、ＨＯ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルコキシ、チオール、ヒドロキシ及びカルボキシルからなる群から選択され、置換される場合、前記フェニル及びヘテロアリールは一置換又は多置換であり；前記フェニル及びヘテロアリールは各々独立に、少なくとも１つのベンゼン又は前記ヘテロアリールと縮合され；また、前記縮合されたフェニル及びヘテロアリールは、置換又は非置換であり、可能な置換基は、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７アルキルチオ、Ｃ１−７アルケニルオキシ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ニトロ、アミノ、シアノ、ＨＯ−Ｃ１−４アルキル、ＨＳ−Ｃ１−４アルキル、ＨＯ−Ｃ１−７アルコキシ、ＨＯ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルキルチオ、ＨＳ−Ｃ１−７アルコキシ、チオール、ヒドロキシ及びカルボキシルからなる群から選択され、置換される場合、前記フェニル及びヘテロアリールは、一置換又は多置換である。
【国際調査報告】
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