(57)【要約】本発明は、ガレートカテキン（ＧＣ）を含む緑茶抽出物（ＧＴＥ）と、ＧＣの腸内吸収を防止するために高分子とを含む血糖制御用組成物に関する。【選択図】図7【特許請求の範囲】
【請求項１】
血糖調節用組成物であって、
ガレートカテキン（ＧＣ）を含む緑茶抽出物（ＧＴＥ）と、ＧＣの腸吸収を防止するための高分子とを含むことを特徴とする組成物。
【請求項２】
前記ＧＣはＥＧＣＧまたはＥＣＧのうち少なくとも一つを含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記高分子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＰＥＧ誘導体、ＰＥＧ共重合体、水溶性共重合体、メトキシＰＥＧ（ｍＰＥＧ）またはポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記高分子の分子量は１，０００〜２，０００，０００ダルトンであることを特徴とする請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
請求項１に記載の組成物を含むことを特徴とする機能性食品。
【請求項６】
前記食品は、飲料、錠剤または粉末であることを特徴とする請求項５に記載の機能性食品。
【請求項７】
請求項１に記載の組成物の血糖制御量及びその薬学的に許容される賦形剤を含むことを特徴とする薬学的組成物。
【請求項８】
前記ＧＣは、ＥＧＣＧまたはＥＣＧを含むことを特徴とする請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記高分子は、ＰＥＧ、ＰＥＧ誘導体、ＰＥＧ共重合体、水溶性共重合体、メトキシＰＥＧ（ｍＰＥＧ）またはＰＰＧであることを特徴とする請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記高分子の分子量は、１，０００〜５０，０００ダルトンであることを特徴とする請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
対象体の血糖値を調節する方法であって、
請求項１に記載の組成物を対象体に投与する段階を含むことを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、食後の血糖増加を低めるカテキン関連組成物に関し、より詳細には、本発明は、ガレートカテキン（ＧＣ）を含む緑茶抽出物（ＧＴＥ）と、ガレートカテキン（ＧＣ）の腸内吸収を妨害する高分子とを含む血糖調節のための機能性食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
２型糖尿病は末梢のインスリン抵抗性及びβ-細胞機能不全の二つの主な特性を有する。肥満、長期高血糖などの遺伝的及び環境的要因により、人間の２型糖尿病が誘発または悪化される恐れがある。高血糖は複数のメカニズムを通って末梢のインスリン抵抗性及びβ-細胞の損傷を引き起こし、これを総括して糖毒性と呼ばれる（Ｂｏｒｏｎａ，２００８）。ＭＯＤＹ−２糖尿病では、グルコキナーゼ遺伝子の機能的な欠陥により、肝臓での糖取り組みが制限され、食後高血糖が長期化（Ｊｉａｎｇ等、２００８）され、結果的にβ−細胞の過負荷が発生する。従って、空腹時血糖調節だけでなく、食後の高血糖を最小化するための努力は、２型糖尿病を予防及び治療するにおいて重要である。今までのアミラーゼ阻害剤またはグルコシダーゼ阻害剤が食後の高血糖を減少させることができるが、これらの使用は、単糖への転換を妨げ、いくつかの胃腸の副作用を引き起こす恐れがある。緑茶（Camellia  sinensis）の葉はポリフェノールを含んでおり、カテキン系は主なポリフェノールである。緑茶葉から水で抽出されたカテキンには、主にガレート、エピカテキンガレート（ＥＣＧ）及びエピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）を含むガレートカテキン（ＧＣ）が含まれる。２型糖尿病について、生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）及び生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で緑茶抽出物（ＧＴＥ）またはＥＧＣＧの効果を総合的に検討した。しかし、ＧＴＥまたはＥＧＣＧが実際に人間の肥満及び２型糖尿病を予防または治療するために利用することができるかについての議論は、まだ確立されていない（Ａｎｄｅｒｓｏｎ＆Ｐｏｌａｎｓｋｙ、２００２；Ｆｕｋｉｎｏ等、２００５；Ｎａｆｔａｌｉｎ等、２００３）。最近、数ヶ月の期間に亘って糖尿病患者に毎日緑茶を飲ませた結果、血糖値、ＨｂＡ１Ｃ値、インスリン抵抗性及び炎症マーカーの軽減に効果がないことが明かになった（Ｆｕｋｉｎｏ等、２００５）。興味深いことに、経口投与されたＧＴＥは胃腸管からの糖（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ等、２００５；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ等、２０００；Ｚｈｕ等、２００１）及びコレステロール（Ｒａｅｄｅｒｓｔｏｒｆｆ等、２００３）の吸収を抑制することができるということが確認された。これは、ＧＴＥが２型糖尿病及び肥満に影響を与える基本メカニズムの一つであると考えられる。ＥＧＣＧ及びエピカテキン−３−ガレート（ＥＣＧ）を含むガレートカテキン（ＧＣ）は、主に腸管内腔での混合ミセル形成（Ｒａｅｄｅｒｓｔｏｒｆｆ等、２００３）及び 腸上皮でのＮａ−糖共輸送体（ＳＧＬＴ１）の抑制（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ等、２０００）によって、抑制効果に関与すると示される。ルミナール効果を発揮するために必要なＧＣの摂取量は、分子らの低い経口バイオアベイラビリティにより、人間が耐えられる量であると思われる（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ等、２０００；Ｖａｎ  Ａｍｅｌｓｖｏｏｒｔ等、２００１）。しかし、摂取したカテキンの一定比率は必然的に血液に吸収され、人体内の他の部位に活性を有する。従って、経口摂取されたＧＴＥの糖及び脂質代謝に及ぶ効果は、胃腸管及び循環に及ぶ効果を合わせたものである。一部報告で、ＧＴＥの経口摂取は鼠（Ｓａｂｕ等、２００２）及び人間（Ｔｓｕｎｅｋｉ等、２００４）で経口糖負荷試験（ＯＧＴＴ）時に血糖値を減少させるということが確認された。しかし、高糖がカテキン攝取の直後に適用されたため、このような結果はＧＣのルミナール効果に起因する可能性がある（Ｎａｆｔａｌｉｎ等、２００３）。また、鼠は実験中にＧＴＥの非常に低い経口バイオアベイラビリティを有するため、ＧＴＥが循環に吸収された後のＧＴＥ効果の検出はより難しい。従って、循環だけでなく胃腸管中のＧＴＥ及びＥＧＣＧの効果を評価することが求められる。
【０００３】
本発明者らは循環系でのＧＣが血糖値の増加及びインスリン過分泌を引き起こすことを発見した。従って、腸ＧＴＥの吸収阻害剤とＧＴＥを組み合わせて適用すると、腸管内腔での肯定的なＧＴＥ効果が効果的に得られ、食後血糖値の増加を低めることができる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、利用可能な血糖降下剤とは相違するメカニズムを用いる液体吸収だけでなく、腸内糖吸収を抑制することにより、副作用を発生することなく食後の血糖を低める組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
長期間の食後高血糖は２型糖尿病及び肥満において有害な要因である。緑茶抽出物（ＧＴＥ）の消費の利点は、依然として確認が必要な事項である。本発明者らは、血糖及びインスリン値に及ぶ循環する緑茶カテキンの効果を報告する。人間にＧＴＥを摂取させて１時間後、経口糖負荷により血糖及びインスリン値が対照群に比べて高くなる。ガレートカテキンは腸管内腔内で糖とコレステロール吸収を減少させると知られているが、前記効果のために必要である。エピガロカテキン−３−ガレートによる治療は、肝臓、脂肪、膵臓β−細胞及び骨格筋細胞への２−デオキシグルコース取り込みを妨げる。グルコース不耐性は、ガレートカテキンの腸管吸収の阻害剤として用いられるポリエチレングリコールと混合されたＧＴＥまたはガレートカテキン−欠乏ＧＴＥによって改善された。このような発見は、循環されている時のガレートカテキンが組職への正常な糖取り込みを遮断することにより、血糖値を増加させ、副次的な高インスリン血症を引き起こす反面、これらが腸管内腔内にある場合、糖の循環への流入を減少させることを示唆する。このような知見は、特に肯定的なルミナール効果を誘発する２型糖尿病及び肥満の予防治療のためのガレートカテキンの非吸収性誘導体の開発を促進する。
【０００６】
本発明の一側面は、ガレートカテキン（ＧＣ）を含む緑茶抽出物（ＧＴＥ）と、ガレートカテキン（ＧＣ）の腸内吸収を防ぐための高分子と、を含む血糖調節用組成物に関する。前記ＧＣ成分はＥＧＣＧまたはＥＣＧのうち一つ以上を含むことができる。前記高分子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＰＥＧ誘導体、ＰＥＧ共重合体、水溶性共重合体、メトキシＰＥＧ（ｍＰＥＧ）、またはポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）であることができる。前記高分子は１，０００〜２，０００，０００ダルトンの分子量を有することができる。
【０００７】
本発明の他の側面は、前記組成物を含む機能性食品に関する。前記食品は飲料、錠剤及び粉末であることができるが、これに限らない。
【０００８】
本発明のさらに他の側面は、前記組成物の血糖調節量及びその薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物に関する。前記ＧＣはＥＧＣＧまたはＥＣＧ、または両方を含むことができる。前記高分子はＰＥＧ、ＰＥＧ誘導体、ＰＥＧ共重合体、水溶性共重合体、メトキシＰＥＧ（ｍＰＥＧ）、またはＰＰＧを含むことができる。前記高分子は１，０００〜５０，０００ダルトンの分子量を有することが好ましい。
【０００９】
本発明のさらに他の側面は、前記組成物を対象体に投与する段階を含む被験者の血糖値を制御する方法に関する。
【００１０】
本発明の前記目的及びその他の目的は、添付図面及び請求の範囲を参照する下記詳細な説明によってより明確に理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
本発明はただ例示的に示した添付図面及び以下の詳細な説明によって、より完全に理解することができ、本発明をこれに制限しない。
【図１】糖耐性に及ぶＧＴＥの両面的な効果を示す。ＧＴＥ摂取直後の人間のＯＧＴＴ中の血糖（Ａ）及び血漿インスリン（Ｂ）値を変化させる。摂取されたＧＴＥには〜５００ｍｇＥＧＣＧが含まれている。各グループ当たりｎ＝６である。ＧＴＥ摂取１時間後の人間のＯＧＴＴ中の血糖（Ｃ）及び血漿インスリン（Ｄ）値を変化させる。摂取されたＧＴＥには〜２５０ｍｇのＥＧＣＧが含まれている。各グループ当たりｎ＝５である。個々は実験前に一晩絶食させた。対照群被験者には同量の水を摂取させた。Ｔｗｏ−ｔａｉｌｅｄ、ｕｎｐａｉｒｅｄ  Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔで同一時点での対照群値と比較して＊Ｐ＜０．０５及び＊＊Ｐ＜０．０１で示した。
【図２】糖耐性に及ぶ循環ＧＣの効果を示す。（Ａ）各カテキン注入３０分後に鼠のＩＰＧＴＴ中の血糖値を変化させた。鼠は、１２時間絶食させた後、静脈内にＰＢＳのみ、またはＤＭＳＯ中にＥＣを含むＰＢＳ、ＥＣＧ、ＥＧＣまたはＥＧＣＧ（各１０ｍｇ／ｋｇ）を注入した。曲線下面積（ＡＵＣ）はカテキンがない対照群値の比率として（Ｂ）に図示した。ＡＮＯＶＡのボンフェローニ補正（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ  ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）によって、対照群値（Ｂ）または同一時点でのもの（Ａ）と比較して＊Ｐ＜０．０５及び＊＊Ｐ＜０．０１で示した。各グループ当りｎ＝５−７である。
【図３】糖取り込みのＥＧＣＧ−仲裁減少を示す。２−デオキシ−[３Ｈ]糖は（Ａ）分化されたＬ６筋芽細胞、（Ｂ）ＨｅｐＧ２肝細胞、（Ｃ）分化された３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞及び（Ｄ）ＩＮＳ−１β細胞を含む培地での１００ｎＭのインスリンを含むかまたは含まないＥＧＣＧの指定された濃度で２０分培養した後添加した。結果はインスリン存在または不存在時の各対照群値の比率で示した。ＡＮＯＶＡのボンフェローニ補正によってインスリンがない対応する対照群と比較して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、インスリンがある各対照群と比較して＃Ｐ＜０．０５、＃＃Ｐ＜０．０１、＃＃＃Ｐ＜０．００１で示した。各グループ当りｎ＝３である。
【図４】分化されたＬ６筋芽細胞（Ａ）、ＨｅｐＧ２肝細胞（Ｂ）、分化された３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞（Ｃ）及びＩＮＳ−１β細胞（Ｄ）でのＥＧＣＧの前処理によって基底またはインスリン−刺激ＰＫＢのリン酸化が変更されたことを示す代表的なデータである。
【図５】血糖値及びインスリン抵抗性に及ぶ循環するＥＧＣＧの効果を示す。ＥＧＣＧ注入（１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）は４時間絶食した鼠（Ａ及びＣ）及びＫｉｒ６．２ｋ／ｏマウス（Ｂ及びＤ）で行った。対照群動物はＰＢＳのみ処理した。ＥＧＣＧの注入３０分後に血糖値の大幅な増加が観察された。次に、インスリン（１ＩＵ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を矢印で示す時間に注入した。血糖値の変化率はＣ及びＤで示し、インスリン注入直前に得られた二つのグループの値を１００に正規化した。Ｔｗｏ−ｔａｉｌｅｄ、ｕｎｐａｉｒｅｄ  Ｓｔｕｄｅｎｔ'ｓ  ｔ−ｔｅｓｔによって、同一時点での対照群値と比較して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１で示した。＃＃Ｐ＜０．０１はｔｗｏ−ｔａｉｌｅｄ、ｐａｉｒｅｄ  Ｓｔｕｄｅｎｔ'ｓ  ｔ−ｔｅｓｔによってＥＧＣＧ注入直前及び３０分後との比較を示す。各グループ当りｎ＝５である。
【図６】ＧＣ−欠乏ＧＴＥが循環及び胃腸管での天然ＧＴＥの効果を減少させることを示す。（Ａ）４時間絶食した鼠に、対照群としてＰＢＳ、天然ＧＴＥ（１００ｍｇ／ｋｇ）またはＧＣ−欠乏ＧＴＥ（１００ｍｇ／ｋｇ）をインスリン注入（１ＩＵ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）３０分前に静脈内に注入した。（Ｂ）インスリン注入直前に得られる三つのグループの値を１００に正規化させた。＃Ｐ＜０．０５はｔｗｏ−ｔａｉｌｅｄ、ｐａｉｒｅｄ  Ｓｔｕｄｅｎｔ'ｓ  ｔ−ｔｅｓｔによってＥＧＣＧ注入直前及び３０分後との比較を示す。各グループ当りｎ＝５である。（Ｃ）鼠は、１２時間絶食させた後、腹腔内高糖負荷３０分前にＧＣ−欠乏ＧＴＥまたは天然ＧＴＥを含むＰＢＳ、またはＰＢＳのみを静脈中に注入した。各グループ当りｎ＝５である。（Ｄ）鼠は、１２時間絶食させた後、経口高糖負荷直前に蒸溜水のみ、または天然ＧＴＥ（９００ｍｇ／ｋｇ）、ＧＣ−欠乏ＧＴＥ（９００ｍｇ／ｋｇ）またはＥＧＣＧ（９０ｍｇ／ｋｇ）を含む蒸溜水を経口摂取させた。 ＡＮＯＶＡのボンフェローニ補正によって同一時点での対照群値と比較して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１で示した。各グループ当りｎ＝６である。
【図７】ＧＴＥとともにＰＥＧを摂取するとＧＴＥの循環効果が遮断されるということを示す。（Ａ）鼠は、１２時間絶食させた後、経口高糖負荷直前に蒸溜水のみ（対照群）、またはＰＥＧ、天然ＧＴＥ（９００ｍｇ／ｋｇ）またはＧＴＥとともにＰＥＧを含む蒸溜水を経口摂取させる。各グループ当りｎ＝４である。（Ｂ）志願者を実験前に一晩絶食させる。翌朝には、水のみ、またはＥＧＣＧ１２５ｍｇまたは５００ｍｇを含むＧＴＥを含む水、またはＥＧＣＧ５００ｍｇと含むＧＴＥとともにＰＥＧを摂取させる。経口糖負荷は摂取直後に得られる。各グループ当りｎ＝８−１０である。（Ｃ及びＤ）一晩絶食した志願者に５００ｍｇのＥＧＣＧを含むＧＴＥを含む水またはＧＴＥとともにＰＥＧを摂取させた１時間後に経口糖負荷が得られた。対照群被験者に同量の水を摂取させた。各グループ当りｎ＝５−６である。ＡＮＯＶＡのボンフェローニ補正によって同一時点での対照群値と比較して、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１及び＊＊＊Ｐ＜０．００１で示した。
【図８】腸及び循環内に及ぶＧＣの両面的効果を示す。点線は分子の動きを示し、矢印線はインスリンによる促進を示し、ブロック線はＧＣによる阻害を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
ここで用いるように、「担体（ｃａｒｒｉｅｒｓ）」は適用する投与量及び濃度でこれに露出する細胞または哺乳動物に非毒性である薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤を含む。薬学的に許容される担体は、多くの場合水性ｐＨ緩衝溶液である。薬学的に許容される担体の例としては制限されず、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸を含む酸化防止剤；低分子量（約１０未満の残基）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または兔疫グロブリンを含むタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリシンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノースまたはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールまたはソルビトールなどの糖アルコール；ソディウムなどの塩形成対イオン；及び／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）などの非イオン性界面活性剤を含む。
【００１３】
ここで用いるように、「有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」は、有利または所望の臨床的または生化学結果をもたらすために効果的な量である。有効量は、１回またはそれ以上投与することができる。本発明の目的において、阻害剤化合物の有効量は、疾患状態の進行を緩和、改善、安定化、逆転、遅延させるために十分な量である。
【００１４】
ここで用いるように、治療目的用の「哺乳動物（ｍａｍｍａｌ）」は、人間、家畜、及び犬、猫、牛、馬、羊、豚などの動物園、スポーツまたはペット動物等を含む哺乳動物として分類される任意の動物を指す。
【００１５】
ここで用いるように、「薬学的に許容される担体及び／または希釈剤（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ａｎｄ／ｏｒ  ｄｉｌｕｅｎｔ）」は、任意及び全ての溶媒、分散媒体、コーティング抗菌剤及び抗真菌剤等、等張及び吸収遅延剤等を含む。このような媒質及び薬学的活性物質の作用剤の使用は当業界で公知されている。任意の従来媒質または作用剤が活性成分と不適合な場合を除き、治療組成物においてその使用が考慮される。補助活性成分も組成物に混合することができる。
【００１６】
特に、投与の便利さ及び投薬量の均一性のために、投与単位形態で非経口組成物を策定することが有利である。ここで用いる投与単位形態は、治療される哺乳動物のための単一用量として適する物理的に別個の単位を指し、各単位は求められる薬学的担体に関連して所望の治療効果を生むために計算された活性物質の所定量を含む。本発明の投与単位形態における明細書では、（ａ）達成される活性物質の特異的特性及び特定治療効果、及び（ｂ）身体の健康が損なわれた疾患状態を有する生存の被験者の疾患治療のために従来技術で規定された前記活性成分の化合物の限界による。
【００１７】
主な活性成分は投与単位形態に適切な薬学的に許容される担体と有効量の便利かつ効果的な投与のために配合される。単位投与形態は、例えば、約０．５μｇ〜２，０００ｍｇ範囲の量で主要な活性化合物を含むことができる。比率で示すと、活性化合物は一般的に担体の約０．５μｇ／ｍｌから存在する。補助活性成分を含む組成物の場合には、投与量は前記成分の投与方式及び通常の容量を参照して決める。
【００１８】
ここで用いるように、「対象体（ｓｕｂｊｅｃｔ）」は哺乳動物であり、好ましくは人間である。
【００１９】
本発明に係る血糖を低める効果を有する組成物の製造方法は、ＥＧＣＧまたはＥＣＧのうち少なくとも一つ以上を含むＧＣを緑茶から抽出する段階、ＧＣ−含有抽出液または粉末、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＰＥＧ誘導体（例えば、ＰＥＧ−アルキル、ＰＥＧ−ジアルキル、ＰＥＧ−エステル、ＰＥＧ−ジエステル等）、ＰＥＧ共重合体（例えばＰＥＧ−ＰＰＧ、ＰＥＧ−ＰＰＧ−ＰＥＧ（ポロクサマー、プルロニック））、水溶性共重合体（例えば、ポリビニルピロリジン等）のようなポリグリコール（ＰＧ）、または選択的にＧＣと結合する高分子のうち少なくとも一つ と混合する段階を含む。
【００２０】
前記組成物はまた、濃縮された商業的に利用可能なＧＣとＰＧを混合することにより製造されることができる。前記組成物は、１０〜２，０００ｍｇの濃度のＧＣ及びＰＧ（０．０１〜５０ｇ／ｇＧＣ）を含む。前記ＰＧ分子量は、１００〜２，０００，０００ダルトン、より好ましくは５００〜１００，０００ダルトン、もっとも好ましくは１，０００〜８０，０００、１，０００〜５０，０００ダルトン、または１，０００〜８，０００ダルトンであり、この場合、不快感を与えない摂取や血糖の制御に優れる。
【００２１】
この際、用いられるＰＧの化学構造は、求められる物性及び性質に応じて、ＰＧの末端にＣ１−Ｃ６アルキル、アリール、アセチル、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはアリールが置換されたアセチル、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはアリールが置換されたスルホンなどが一つまたは二つが置換された多様なＰＧ誘導体であることができる。
【００２２】
前記ＧＣの製造方法は、
【００２３】
１．乾燥された葉を沸騰水抽出して得られた抽出液を濾過する段階と、
【００２４】
２．前記濾過液を凍結乾燥して粉末を得る段階と、
【００２５】
３．前記粉末を蒸溜水に溶解させた後、カラムクロマトグラフィーによってＧＣまたはこれを含む分画を錠剤する段階と含む。
【００２６】
前記段階をより詳細に説明すると、段階１では、緑茶葉をお湯（８０〜９５℃、葉重量の１０〜５０倍）に入れ、抽出及び濾過のために５分〜１時間徐々に撹拌した。段階２では、前記濾過液を凍結乾燥して緑茶のポリフェノールを含む粉末を得た。段階３では、粉末中のポリフェノール化学物質を精製及び修得するためにカラムクロマトグラフィーを行った。本発明では、高多孔性ポリスチレンゲルカラムクロマトグラフィー（粒径７５〜１５０μm、Ｄｉａｉｏｎ  ＨＰ−２０、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ  Ｋａｇａｋｕ  Ｃｏ．、Ｊａｐａｎ；Ｃｏｌｕｍｎ、２５ΦＸ１，０００ｍｍ）を用いた。この際、抽出溶媒は１００ｍｌのメタノール：Ｈ２Ｏ（１：５）を用いて抽出し、さらに１００ｍｌのメタノール：Ｈ２Ｏ（２：５）を用いて再抽出した。流速は５ｍｌ／分である。
【００２７】
前記方法によって得られた緑茶ポリフェノール化合物の成分を分析した結果、分画１ではガロカテキン及びエピガロカテキンが検出され、分画２ではカテキン、エピカテキン、ガロカテキンガレート及びＥＧＣＧが検出された。分画物３ではＥＣＧが検出された。
【００２８】
本発明によると、製造された組成物に含まれるＧＣは、腸管内でＳＧＬＴ（ｓｏｄｉｕｍ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ）の活性を阻害して腸の糖吸収を抑制する。これは、アミラーゼ活性を阻害する既存の血糖降下剤より副作用が少ない。また、循環で血糖を増加させるＧＣ自体の腸内吸収は、ポリグリコール（ＰＧ）をともに投与することにより抑制することができる。従って、本発明は食後の血糖値を減少させることにより、健常人の糖尿病予防、糖尿素因をもっている人の糖尿病の進行を抑制し、糖尿病患者の糖尿病合併症を緩和させることができる。
【００２９】
本発明のＧＣ含有組成物は、 市販のタイプで経口投与する。これは食前または食事中に投与することができ、食事直前に投与することが好ましい。
【００３０】
本発明のＧＣ含有組成物は、緑茶から抽出された天然の生理活性物質であるため、動物及び人間に経口投与した場合、循環に吸収されないため、副作用及び急性毒性をもたらすことなく、安全である。従って、本発明は、ＧＣ及びＰＧを含む植物または機能性健康食品を提供して食後血糖を制御する。
【００３１】
本発明によって薬学的製剤に製造する場合、ＧＣ及びＰＧは商業及び薬学的に利用可能な物質とともに混合して形成され、経口摂取を目的とする錠剤、硬質または軟質のカプセル、チュアブル錠、粉末、液剤または懸濁剤に製造されることができる。
【００３２】
組成物を用いて経口投与可能な材料として錠剤、硬質または軟質のカプセル、チュアブル錠、粉末、液剤または懸濁剤の形成するにおいて、アラビアガム、コーンスターチ、微細結晶質セルロースまたはゼラチンのような結合剤、リン酸カルシウムまたはラクトースのような賦形剤、アルギン酸、コーンスターチまたはジャガイモ澱粉のような崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、スクロースまたはサッカリンのような甘味剤、及びサリチル酸メチルまたはフルーツフレーバーのような香味剤を含むことができる。カプセルの場合には、前記材料に他に、油脂のような液状材料を含むことができる。
【００３３】
ＧＣ及びＰＧを含む経口適用可能な材料を形成するにおいて、薬学的で純粋であり、実質的に無毒性であり、活性物質の作用に影響を与えない潜在的な全ての補助材料を混合及び使用することができる。
【００３４】
本発明において血糖調節剤として効果を達成するための量は、疾患の種類、疾患の重症度、性別、年齢、体重、健康状態、投与方式、投与回数及び時間、併用薬物の有無及び他の関連環境を考慮して、医者によって決めることができる。
【００３５】
本発明のＧＣ及びＰＧ（０．０１〜５０グラムＧＣ）を含む前記薬学的薬剤は、経口摂取の場合、ＥＧＣＧ、ＥＣＧまたはこれらの混合物を基準に、体重ｋｇ当たり０．５〜１００ｍｇ、好ましくは１〜５０ｍｇを一日に１〜数回、より好ましくは一日に１〜３回で食事前、食事中、または食事後に投与することができる。
【００３６】
本発明のＧＣ及びＰＧは、市販飲料 、ミネラルウォーター、アルコール飲料、チューインガム、キャラメル、キャンディー、アイスクリーム、クッキーの補助材料に製造されることができる。また、食後血糖を低めるために、ビタミン及びミネラルなどを含む健康食品や健康補助食品に適用することができる。
【００３７】
データ分析
本発明により、ＥＧＣＧ及びＥＣＧのような録茶のＧＣが循環する時、血糖値を増加させながら胃腸管で活性化されて血糖値を急激に減少させるということを確認した（図８参照）。緑茶ポリフェノールは、腸内のスクラーゼ及びα−アミラーゼ活性を抑制すると報告されているが、ＧＣは主要抑制剤ではないことができ、これは緑茶の抑制効果は少量のＧＣを有する紅茶の場合より弱いためである（１９）。腸の糖取り込みはＳＧＬＴ１によって仲裁され、ＧＴＥ及びＧＣは人間の腸象皮細胞のＳＧＬＴ１の競争的阻害剤であることが確認された（９、２０）。本研究では、代謝的に重要な細胞への血糖取り込みがＥＧＣＧの存在下で抑制された。細胞の糖輸送体に及ぶＧＣの阻害効果は、マウスの脂肪細胞（２１）、鼠の脂肪細胞（２２）、人間の赤血球（７）で観察されている。従って、ＧＣはＮａ−ｇｌｕｃｏｓｅ  ｃｏ−ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓだけでなくＮａ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓを含む人体での多様な糖輸送体の活性を妨げる可能性があることを推測することができる。従って、胃腸管でのＧＣは糖が循環に流入することを減少させることにより、糖尿病及び肥満の調節には役立てることができるが（２３）、循環では有害である可能性がある。このような二つの部分でのＧＣの両面的な効果は、血糖調節でのこれらの正確な役割を評価しようとする試みを混乱させる可能性がある。本発明者らは、またＥＧＣＧのみの循環またはより顕著にＧＴＥを循環させることにより、急性インスリン抵抗性を観察した。後者の増幅は、追加の効果を発揮することができる他の構成要素、例えばＥＣＧ及び没食子酸に起因することができ、または他の緑茶成分の存在下でＥＧＣＧの遅延された代謝に起因する可能性がある（１６）。従って、緑茶カテキンによる循環での糖の蓄積はインスリンの過多分泌を誘導することができるということが予想される。長期間のβ−細胞過負荷が、結局β−細胞の障害を誘導する有害な結果を表すということは驚くべきことではない。
【００３８】
本研究において、ＧＴＥは緑茶を毎日経口投与することによって容易に得られる１〜２μＭの血中ＥＧＣＧ濃度に効果的であった（２４）。鼠を利用した実験でこのような循環効果をもっと観察することができ、鼠はＥＧＣＧの経口バイオアベイラビリティが非常に低いためである（１５、１６）。ＧＴＥの循環効果を明確に確認するために、本発明者らは鼠よりＥＧＣＧの比較的高い経口バイオアベイラビリティを有する人間に長期間ＯＧＴＴを適用して、ＧＴＥは糖値が調節値に戻ることを妨げるということが分かった。人間に適用可能な濃度範囲内でＥＧＣＧ循環効果を試す生体内報告で、比較的長期間の腹腔内ＥＧＣＧ適用により鼠の重量損失が誘導されるということを示した（１７）。しかし、 本発明者らは生殖器官が大幅に劣化することを確認した。これは、おそらくアンドロゲン産生ライディッヒ細胞で糖取り込みのＥＧＣＧの抑制に起因することができる（７）。最近の研究（７）では、１００ｎＭのＥＣＧが赤血球細胞で１型糖輸送体に結合するために糖と競争して反応率がその最大値の半分であることが明らかになった。同じ効果が１μＭのＥＧＣＧで達成された。このような点で、ＥＧＣＧによって誘導される肝の糖新生に対する効果が減少することは、部分的に肝臓での糖取り込みのＥＧＣＧ−仲裁阻害に起因すると想定することができる（７、２５）。また、一部の癌治療においてＥＧＣＧの有益な効果は、部分的にＥＧＣＧが正常細胞より代謝的に活性状態であり、解糖に依存的な癌細胞に与えることができる糖欠乏効果に起因することができる（２６）。他のポリフェノール、例えばケルセチン及びミリセチンは細胞の糖取り込みを約１０μＭに阻害するため、比較的広範の安全域を有することができる（２７）。
【００３９】
天然緑茶治療による２型糖尿病及び肥満管理の努力は、全身吸収されるＧＣが実際に細胞糖取り込みを妨げて血糖及びインスリン値を増加させるため、気を付けなければならない。食事中の適宜な緑茶摂取（一日１〜２コップ）は循環に流入されるＧＣが最小量であるため有益であることができるが、その長期間の効果は特定の人口カテゴリーでは制限されることができる（２８）。多くの試験で腸内の糖吸収を阻害するために天然生成物の能力を測定した。しかし、これら試験の何れも糖及び脂質の吸収の非吸収性ＧＣ−誘導阻害剤の利用を突き止めることができなかった。循環での否定的な影響を最小化しながら、腸管内腔でのＧＣの肯定的な影響を最大化することが、このような代謝疾患を制御するために推薦されることができる。
【００４０】
本発明は、ここに記載された特定の実施形態によって範囲が制限されない。上述した詳細な説明及び添付された図面から多様な変形が可能であることは、当業界において通常の知識を有する者には明白であろう。このような変形は添付された請求範囲内に属する。下記実施例は本発明を例示的に提供するものであり、これに制限されない。
【００４１】
実施例
実施例１−材料及び方法
実施例１．１−材料
ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ'ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ'ｓ ｍｅｄｉｕｍ）、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ＦＢＳ（ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ）及びＦＣＳ（ｆｅｔａｌ  ｃａｌｆ  ｓｅｒｕｍ）はＧiｂcｏ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）で購入した。ＲＰＭＩ−１６４０培地はＷｅｌｇｅｎｅ（Ｄａｅｇｕ、Ｋｏｒｅａ）で購入した。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ；Ｎｏｖａｓｙｎ  ＴＧ  ヒドロキシ樹脂）は動物研究のためにＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から運送された。人間研究のためのＰＥＧは親切にもＴａｅｊｏｏｎ（Ｓｅｏｕｌ、Ｋｏｒｅａ）から提供された。緑茶葉（ＢＯＳＵＮＧ  ＳＥＩＪＡＫ）はボソン緑茶会社（Ｊｅｏｎｎａｍ、Ｋｏｒｅａ）で購入した。エピガロカテキン−３−ガレート（ＥＧＣＧ）、エピカテキン−３−ガレート（ＥＣＧ）、エピガロカテキン（ＥＧＣ）及びエピカテキン（ＥＣ）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）で購入した。他の全ての化学薬品はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから入手した。
【００４２】
実施例１．２−細胞培養
鼠Ｌ６筋芽細胞は１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳを含む低グルコースＤＭＥＭで培養密度が８０％に逹するまで培養した。分化を誘導するために、細胞は、さらに７日間２％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ（２４．９ｍＭグルコース）で培養した。細胞の生存力はトリパンブルー生存力テストで評価した。筋管の状態への筋原性の分化は形態学的及び生化学的の両方で評価した。マウス３Ｔ３−Ｌ１前脂肪細胞を５％ＣＯ２と平衡化した培養器でビオチンまたはパントテン酸を添加しない１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭの３５−ｍｍ培養皿で３７℃で融合されるように培養した。（０日）融合２日後に１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭでメチルイソブチルキサンチン（０．５ｍＭ）、デキサメタゾン（０．５μＭ）及びインスリン（５μｇ／ｍｌ）に分化を誘導した。２日目にはメチルイソブチルキサンチンとデキサメタゾンを除去し、インスリン処理は追加２日間継続した。４日目以後には１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ（インスリン補充なし）を２日毎に交換した。細胞（２Ｘ１０６細胞／皿）は８日目の実験に用いられた。細胞分化はオイルレッド−Ｏ染色で評価した。人間の肝細胞癌ＨｅｐＧ２の細胞株を３７℃で１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭで維持させた。鼠のインスリン−分泌ＩＮＳ−Ｉ細胞を１０％のＦＢＳ、１０ｍＭのＮ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ'−（２−エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、１ｍＭのソディウムピルビン酸、５０ｍＭの２−メルカプトエタノール、１００ＩＵ／ｍｌのペニシリン及び１００ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシンが補充されたＲＰＭＩ−１６４０培地で培養した。
【００４３】
実施例１．３−ＧＴＥ製造
動物研究には、緑茶葉２０ｇを超純水１，０００ｍｌに添加した。８０℃で５分間撹拌した後、茶葉を減圧下で濾紙（Ａｄｖａｎｔｅｃ２濾紙、Ｈｙｕｎｄａｉ  ｍｉｃｒｏ  Ｃｏ．，Ｓｅｏｕｌ、Ｋｏｒｅａ）を用いて濾過して除去した。抽出物を凍結乾燥して乾燥した。（総３ｇのＧＴＥが 採取され、ＥＧＣＧ、ＥＣＧ、ＥＧＣ及びＥＣは夫々約１００、５３、５６及び３１ｍｇ／ｇＧＴＥである）。同量のＧＴＥ溶液を室温で５分間２ｇのＰＥＧビーズと混合した。濾過後、上澄み液を凍結乾燥して（ＥＧＣＧ、ＥＣＧ、ＥＧＣ及びＥＣは夫々約２６、１４、４２及び２５ｍｇ／ｇＧＴＥである）ＧＣ−欠乏ＧＴＥ（ＧＴＥ−ＧＣ）を得た。その結果、樹脂の前処理が優先的にＧＴＥ溶液からＧＣを減少させるということが分かった。人間の研究のために、３０ｇの緑茶葉を超純水５００ｍｌに添加した。８０℃で３分間撹拌した後、茶葉を濾過で除去すると約５００ｍｇのＥＧＣＧを含む３５０ｍｌ溶液が残る。
【００４４】
実施例１．４−人間でのＯＧＴＴ
ＨＯＭＡ指数によって判定されたインスリン抵抗性がなく、糖尿病の家族歴がない２０〜２９歳の健康な男性志願者を無作為に選別し、実験が始まる前に一晩絶食を行った。まず、１００ｍｇ／ｄｌを超える絶食血糖値を示す個人は 除外した。午前９：００に、夫々７５ｇのグルコースを含む１５０ｍｌ水を飲む直前または１時間の前に３５０ｍｌ水のみ（対照群）、または１２５ｍｇ、２５０ｍｇまたは５００ｍｇのＥＧＣＧを含むＧＴＥ溶液３５０ｍｌを経口摂取するようにした。被験者の他のグループには、ＧＴＥ溶液とともにＰＥＧ（１１０ｍｇ／１００ｍｇＥＧＣＧ）を摂取するようにした。前腕の静脈に血管カテーテルを挿入して血液を採取した後、血糖と血漿インスリン値を指定された時間に測定した。血糖値はＧｌｕｃｏｃａｒｄテストストリップII（Ａｒｋｒａｙ  Ｉｎｃ．，Ｋｙｏｔｏ、Ｊａｐａｎ）を利用して測定した。血漿インスリン値は免疫放射測定キット（ＩＮＳＵＬＩＮ  ＭＹＲＩＡ、Ｔｅｃｈｎｏ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ、Ｓｅｓｔｏ、Ｉｔａｌｙ）を利用して測定した。研究を始める前に、その目的及び危険を注意深く説明し、作成された情報同意書を全ての参加者から受けた。プロトコルは、人間研究を規制する韓国大邱市のＩＲＢ啓明大学倫理委員会から承認を受けた。
【００４５】
実施例１．５−動物の腹腔内のブドウ糖負荷試験（ＩＰＧＴＴ）及びＯＧＴＴ
スプラーグドーリー（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）鼠はＨｙｏｃｈａｎｇ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｏ．（Ｓｅｏｕｌ、Ｋｏｒｅａ）で購入した。１２時間絶食後、ペントバルビタールナトリウム（４０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．；Ｎｅｍｂｕｔａｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、Ｈａｎｌｉｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏ．、Ｓｅｏｕｌ、Ｋｏｒｅａ）で鼠を麻酔させた後、エピカテキン：ＥＧＣＧ、ＥＧＣ、ＥＣＧ及びＥＣ（夫々３００μｌのＰＢＳで１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）のうち一つを注入した。ＥＣをＰＢＳ添加前に予め微量のＤＭＳＯに溶解させた。また、他の実験では、鼠を三つのグループに無作為分離した：対照群、ＧＴＥ及びＧＴＥ−ＧＣ。ＧＴＥグループの鼠には尾静脈を介して天然ＧＴＥ（３００μｌのＰＢＳで１００ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．；ＥＧＣＧとして１０ｍｇ／ｋｇ）を注入し、対照群の鼠には３００μｌのＰＢＳのみと注入し、ＧＴＥ−ＧＣグループの鼠には同量のＧＣ−欠乏ＧＴＥ（３００μｌのＰＢＳで１００ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．；ＥＧＣＧとして２．６ｍｇ／ｋｇ）を注入した。注入３０分後、グルコース（６００μｌの蒸溜水で２．０ｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を注入した。ＯＧＴＴのために、鼠に１ｍｌの蒸溜水のみ（対照群）、または天然ＧＴＥ（９００ｍｇ／ｋｇ）、ＧＣ−欠乏ＧＴＥ（９００ｍｇ／ｋｇ）、ＥＧＣＧ（９０ｍｇ／ｋｇ）、天然ＧＴＥとともにＰＥＧ（１１０ｍｇ／１００ｍｇＥＧＣＧ）またはＰＥＧのみのうち一つを含む１ｍｌの蒸溜水を摂取させた。摂取直後、各鼠にグルコース（２ｇ／ｋｇ）を含む１ｍｌの蒸溜水を経口で供給した。血糖値を分析するために、指定された時間に尾静脈から血液を採取した。全ての実験は、動物研究を管理するための韓国大邱市の啓明大学研究倫理委員会から承認を受けた。
【００４６】
実施例１．６−動物のインスリン耐性試験（ＩＴＴ）
Ｋｉｒ６．２ノックアウト（ｋ／ｏ）マウスは神戸大学のＳｕｓｕｍｕ  Ｓｅｉｎｏ教授から提供された。４時間絶食後、Ｋｉｒ６．２ｋ／ｏマウスまたは正常鼠にＰＢＳ（マウスに１００μｌ、鼠に３００μｌ）のみ、またはＥＧＣＧ（１０ｍｇ／ｋｇ）、天然ＧＴＥ（１００ｍｇ／ｋｇ）またはＧＣ−欠乏ＧＴＥ（１００ｍｇ／ｋｇ）を含むＰＢＳを静脈内に注入した。注入３０分後、マウスと鼠にインスリン（１ＩＵ／ｋｇ；ＩＮＳＵＬＩＮ  ＬＩＳＰＲＯ、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ、ＩＮ）を含む通常の生理食塩水（マウスに３００μｌ、鼠に６００μｌ）を腹腔内に注入した。血液サンプルの採取は、指定された時間に尾静脈を介して行われた。
【００４７】
実施例１．７−２−デオキシ糖取り込み分析
要約すると、３０分間血清がない状態で培養した後、細胞をＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒリン酸塩−ＨＥＰＥＳ緩衝液［ＫＲＰＨ緩衝液：１０ｍＭのリン酸塩緩衝液、ｐＨ７．４；１ｍＭのＭｇＳＯ４、１ｍＭのＣａＣｌ２、１３６ｍＭのＮａＣl、４．７ｍＭのＫＣｌ及び１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．６]で洗滌した後、ＥＧＣＧ（０、０．１、１．０または１０μＭ）を含むＫＲＰＨ緩衝液に２０分間１００ｎＭのインスリンがあるかまたはない状態で培養した。グルコース輸送は２−デオキシ−［３Η]グルコース（０．１ｍＭ、０．５μＣi／ｍｌ；ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を添加して測定した。培養１０分後、氷冷のＰＢＳで迅速に３回洗滌して反応を停止させた。次に、細胞は０．２ＭのＮａＯＨを含むＰＢＳに溶解させて糖取り込みをシンチレーション測定で評価した。
【００４８】
実施例１．８−ウエスタンプロット分析
タンパク質キナーゼＢ（ＰＫＢ）の活性に及ぶＥＧＣＧの効果を測定するために、ＰＫＢのリン酸化状態をＥＧＣＧ及びインスリンの相違する濃度を含む培地にＬ６、ＩＮＳ−Ｉ、ＨＥＰＧ２及び３Ｔ３Ｌ−１細胞を露出させた後検討した。２−デオキシ糖取り込み分析として実験細胞を３０分間グルコースのない培地に露出させた後、ＥＧＣＧ（０、０．１、１．０または１０μＭ）を含むＫＲＰＨに２０分間１００ｎＭのインスリンがあるかまたはない状態で培養した。５ｍＭのグルコースを添加してさらに１０分間培養した後、氷冷のＰＢＳで迅速に３回洗滌して反応を停止させた。全細胞タンパク質を４℃で２０分間溶解緩衝液［１０ｍＭのＴｒｉｓ−Ｃｌ（ｐＨ７．４）、１３０ｎｉＭのＮａＣl、５％（ｖ／ｖ）トリトンＸ−１００、５ｍＭのＥＤＴＡ、２００ｎＭのアプロチニン、２０ｍＭのロイペプチン、５０ｍＭのフェナントロリン、２８０ｍＭのベンズアミジン−ＨＣｌ］から抽出した。ライセートをＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｏｎ−ｐ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）で電気泳動させる。特異抗体［抗ホスホ−ＰＫＢ（Ｓｅｒ４７３）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｎｖｅｒｓ、ＭＡ）及び抗β−アクチン抗体（Ｓｉｇｍａ）］で探針した後、免疫反応性バンドを強化された化学発光（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｌｉｔｔｌｅ  Ｃｈａｌｆｏｎｔ、ＵＫ）を利用してホースラディッシュペルオキシダーゼ−標識二次抗体（１：５，０００；Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＣＡ）で可視化した。
【００４９】
実施例１．９−ＨＰＬＣを利用したＧＴＥからのカテキン分析
ＨＰＬＣ分析は、モデル２４８７二重吸光検出器（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏ．，Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）が装着されたＷａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ２６９５液体クロマトグラフ上で行った。ウォーターズシンメトリー（Ｗａｔｅｒｓ  ｓｙｍｍｅｔｒｙ）Ｃl８逆相パッキングカラム（４．５ｍｍｘ２５０ｍｍ、５μｍ）を本研究において分離のために２５℃で用いられた。カテキンは２３５ｎｍで同時に測定した。グラジエント溶離は１ｍｌ／分の流速で、溶媒Ａ（水−トリフルオロ酢酸、９９．９：０．１ｖ／ｖ）と溶媒Ｂ（アセトニトリル−トリフルオロ酢酸、９９．９：０．１ｖ／ｖ）の比率を変化させることによって行った。移動相組成物は１０分で９．５％から１４％に直線的に変化させ、次に、１０分間同一組成物を維持した後に１５分内に溶媒Ｂを２７．５％まで直線的に増加させる。次に、移動相組成物を次の進行のために５分間に亘って初期状態に戻す。製造溶液の全部を０．４５μｍの膜（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、Ｍａｉｓｅｍｏｒｅ、ＵＫ）を介して濾過し、移動相はＨＰＬＣに注入する前に脱ガスさせた。
【００５０】
実施例１．１０−統計的分析
結果は平均±ＳＥＭで示した。統計的分析のためにＳＰＳＳ（放出１４．０）ソフトウェアパッケージ（ＳＰＳＳ  Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ）を用いた。曲線下面積はＭｉｃｒｏｃａｌ  Ｏｒｉｇｉｎソフトウェア（バージョン７．０；Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ、ＭＡ）で計算した。両グループの比較はＳｔｕｄｅｎｔ'ｓ  ｔｗｏ−ｔａｉｌｅｄ  Ｍｅｓｔ  ｆｏｒ  ｐａｉｒｅｄ  ｏｒ  ｕｎｐａｉｒｅｄ  ｄａｔａを用いて行った。二つ以上のグループの比較のためには、比較的少量のサンプルを扱うために、ボンフェローニ補正で分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いてテストした。グループ間の差異はＰ＜０．０５である場合に有意のあるとみなした。
【００５１】
実施例２−結果
実施例２．１−人間のＯＧＴＴ中の血糖及び血漿インスリン値に及ぶＧＴＥ摂取の効果
健康な男性志願者で行われたＯＧＴＴの結果から、糖耐性に及ぶＧＴＥ摂取の効果はＧＴＥ及び糖投与の間の時間遅延の程度に応じて変わるということが分かった。経口投与されたＧＴＥは、ＧＴＥ投与直後に糖を摂取する場合にＯＧＴＴ中の対照群でより低い血糖値を維持した（図１Ａ）。このような効果は以前に報告された結果とも同様である（１４）。ＯＧＴＴ中に血糖値を低めるＧＴＥの効果は、糖投与より１時間前に投与する場合に逆転された（図１Ｃ）。血糖値は糖負荷６０分後に対照群でよりＧＴＥグループで顕著に高かった（Ｐ＜０．０１）。ＧＴＥ及びグルコース摂取の間の１時間間隔は、茶成分、特にカテキンの血中濃度がＧＴＥ摂取１〜２時間後にピークになると知られているため選択した（４、１５）。興味深いことに、血漿インスリン値も６０分でＧＴＥグループで顕著に高く（Ｐ＜０．０５）、これは高い血糖値が高い比率でインスリン分泌を誘導することができるということを示唆する。
【００５２】
実施例２．２．−茶カテキンのＥＧＣＧ及びＥＣＧは糖耐性に非常に重要
人間にＧＴＥ成分が非正常的なＯＧＴＴの原因となるかを明確にするために、ＩＰＧＴＴを鼠に行った（図２）。エピカテキンを糖耐性でのその役割を確認するために集中的に研究したため、ＥＧＣＧ、ＥＣＧ、ＥＧＣ及びＥＣをＩＰＧＴＴのために用いた。各カテキンをグルコース投与３０分前に鼠に注入した。注入されたＥＧＣＧの量（１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）は注入３０分後に約１μＭの血中濃度を得るために選択した（１６、１７）。相違する薬物動態学プロファイルがあるとしても他のカテキンも同量で用いた（１０）。対照群に比べて糖負荷３０分後に血糖値がＥＧＣＧ及びＥＣＧによってより増加し（Ｐ＜０．０１）、ＥＣ及びＥＧＣは効果がなかった。このような結果は、糖耐性に及ぶＧＴＥの効果は主に二つのＧＣ、即ち、ＥＧＣＧ及びＥＣＧによるものであるということを示唆する。水溶性ＧＴＥでＥＧＣＧの量はＥＣＧでより約２        〜３倍高いため、追加研究ではＧＣの代表としてＥＧＣＧを用いて行った。
【００５３】
実施例２．３−細胞への２−デオキシ−[３Ｈ]−糖取り込みはＥＧＣＧによって阻害される
ＥＧＣＧの基底及びインスリン−刺激糖取り込みの用量依存性は、β−細胞を含む代謝的に重要な細胞で評価した（図３）。基底及びインスリン−刺激糖取り込みの両方とも、全てのＥＧＣＧ−前処理された細胞においてＥＧＣＧ用量−依存性によって減少された。また、１０μＭのＥＧＣＧまでのテストされた細胞株でＥＧＣＧはホスホ−ＰＫＢの基底及びインスリン−調節発現を変化させなかった（図４）。
【００５４】
実施例２．４−循環ＥＧＣＧは急激に血糖値とインスリン抵抗性を増加させる
β−細胞のインスリン分泌だけでなく末梢のインスリン抵抗性を調節するＡＴＰ−敏感性カリウム（ＫＡＴＰ）チャンネル及びＥＧＣＧ−仲裁糖耐性の間の関連可能性を検討した。正常鼠及びＫｉｒ６．２ｋ／ｏマウスはＥＧＣＧ注入前４時間絶食させた。正常鼠及びＫｉｒ６．２ｋ／ｏマウス両方の血糖値の有意的な増加がＥＧＣＧ注入３０分後に確認された（Ｐ＜０．０１；図５Ａ、Ｂ）。前記結果は、ＥＧＣＧ−誘導された血糖値の変化はＫＡＴＰチャンネルに係わるメカニズムを介して仲裁されないことを示唆する。インスリンで処理する場合、血糖の消失速度が少々遅くなったが、ＥＧＣＧ−前処理鼠及びＫｉｒ６．２ｋ／ｏマウスでは顕著に観察された（Ｐ＜０．０１；図５Ｃ、Ｄ）。
【００５５】
実施例２．５−ＧＣ−欠乏ＧＴＥ効果
４時間絶食した鼠にＧＴＥを注入すると、図５ＡでＥＧＣＧのみを注入した場合の結果と同様に血糖値が著しく増加し（Ｐ＜０．０５；図６Ａ）、ＧＣ−欠乏ＧＴＥ注入では変化しなかった（Ｐ＝０．１１４）。ＩＴＴによってＧＴＥグループで注目すべきのインスリン抵抗性が明かになり（２０分にＰ＜０．０１）、一方、ＧＴＥ−ＧＣグループではインスリン抵抗性の顕著な改善が観察された（図６Ｂ）。また、他の実験では、鼠を４時間でなく１２時間絶食させ、ＧＴＥ自体による血糖値の増加を最小化させた。次に、糖負荷３０分前にＰＢＳのみ、天然ＧＴＥまたはＧＣ−欠乏ＧＴＥを含むＰＢＳを静脈内に注入した。図６Ｃで示すように、ＩＰＧＴＴ中のＧＴＥ−処理グループでの血糖値はＰＢＳ対照群でより顕著に増加し（１０及び２０分にＰ＜０．０１）、一方、ＧＴＥ−ＧＣグループでは対照群と類似の糖値を示した。胃腸管内のＧＣ循環での糖吸収効果は、鼠のＯＧＴＴによって評価した。これは、ＧＴＥ経口摂取直後に糖摂取を行った（図６Ｄ）。予想通り、血糖値はＰＢＳのみを摂取した対照群グループよりＧＴＥ投与グループが低い水準でＯＧＴＴ中に維持された。ＧＣ−欠乏ＧＴＥ、またはＥＧＣＧ−投与グループは、ＧＴＥ−処理グループでより低い効率で糖吸収を阻害することで観察され、これはまた腸管内腔での糖吸収の遮断に及ぶＧＴＥの効果にもまた重要であるということを示す。
【００５６】
実施例２．６−ＧＴＥとともにＰＥＧの投与効果
樹脂ＰＥＧがＧＴＥのＧＣの腸内吸収を選別的に阻害するという仮定下で、天然ＧＴＥをＰＥＧとともに摂取した        。摂取直後の鼠のＯＧＴＴ中に血糖値は、ＧＴＥのみを投与したグループと比較すると、対照群（Ｐ＜０．０５）でよりＧＴＥ+ＰＥＧグループで顕著に低かった（図７Ａ）。対照群グループとＰＥＧのみが処理されたグループの間には、血糖値の差異がなく、これはＰＥＧ自体が用いられた濃度範囲での腸内運動性または糖吸収に影響を与えないことを示す。人間のＯＧＴＴのための時間は基底血糖値に及ぶＧＣ循環効果を観察するために３時間に延長した（図７Ｂ）。ＯＧＴＴの初期の間にはＧＴＥグループでの血糖値が対照群より低く示されたが、ＯＧＴＴの後期の間には対照群でより顕著に高かった。また、これはＧＴＥ+ＰＥＧグループでは観察されなかった。人間のＯＧＴＴをＧＴＥ+ＰＥＧ摂取１時間後に行う場合、血糖及び血漿インスリン値も糖及びインスリン値の顕著な増加を示すＧＴＥグループに対照的に正常であった（図７Ｃ、Ｄ）。
【００５７】
実施例３−緑茶抽出物及び粉末の製造
動物研究のために、２０ｇの緑茶葉を超純水１，０００ｍｌに添加した。８０℃で５分間撹拌した後、茶葉を減圧下で濾紙（Ａｄｖａｎｔｅｃ２濾紙、Ｈｙｕｎｄａｉ  ｍｉｃｒｏ  Ｃｏ．，Ｓｅｏｕｌ、Ｋｏｒｅａ）を用いて濾過して除去した。抽出物は凍結乾燥で乾燥した。（総３ｇのＧＴＥが得られ、ＥＧＣＧ、ＥＣＧ、ＥＧＣ及びＥＣは夫々約１００、５３、５６及び３１ｍｇ／ｇＧＴＥである）
【００５８】
実施例４−ＧＣ−欠乏ＧＴＥ粉末の製造
実施例３の後、同量のＧＴＥ溶液を室温で５分間２ｇのＰＥＧ（３，０００〜４，０００）ビーズと混合した。濾過後、上澄み液を凍結乾燥（ＥＧＣＧ、ＥＣＧ、ＥＧＣ及びＥＣは夫々約２６、１４、４２及び２５ｍｇ／ｇＧＴＥである）して、ＧＣ−欠乏ＧＴＥ（ＧＴＥ−ＧＣ）が得られた。その結果、樹脂前処理はＧＴＥ溶液からＧＣを優先的に減少させるということが分かる。
【００５９】
実施例５−緑茶抽出物及び粉末の製造
人間の研究のために、３０ｇの緑茶葉を超純水５００ｍｌに添加した。８０℃で３分間撹拌した後、茶葉を濾過で除去し、約５００ｍｇのＥＧＣＧ及び約２６０ｍｇのＥＣＧを含む３５０ｍｌ溶液が残る。
【００６０】
実施例６−薬学組成物の製造
実施例６−１：錠剤
５０ｍｇのＥＧＣＧ、ＥＣＧまたはその混合形態；５０ｍｇのＰＥＧ（４，０００）；２０ｍｇの澱粉；適量のステアリン酸マグネシウムを含む錠剤は、通常の錠剤製造の方法によって血糖調節剤として製造することができる。
【００６１】
実施例６−２：カプセル
５０ｍｇのＥＧＣＧ、ＥＣＧまたはその混合形態；５０ｍｇのＰＥＧ（４，０００）；１９ｍｇの澱粉；１ｍｇのタルク；適量のステアリン酸マグネシウムを含むカプセルは、通常のカプセル製造の方法によって血糖調節剤として製造することができる。
【００６２】
実施例６−３：顆粒
顆粒は通常の顆粒製造の方法の一般的な方法によって血糖調節剤として製造することができる。
【００６３】
当業界において通常の知識を有した者は、ここで記載する本発明の具体的な実施形態は一般的な実験を用いて確認または認識することができる。このような均等物は本発明の請求範囲内に含むと認められる。
【００６４】
参考文献
１．Ｂｏｎｏｒａ  Ｅ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｂｅｔａ−ｃｅｌｌｓ：ｉｓ  ｉｔ  ｆｅａｓｉｂｌｅ？Ｎｕｔｒ  Ｍｅｔａｂ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｄｉｓ  ２００８；１８：７４〜８３。
２．Ｊｉａｎｇ  ＭＨ、Ｆｅｉ  Ｊ、Ｌａｎ  ＭＳ、ｅｔ  ａｌ．Ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｃ  Ｇｃｋ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ｉｎ  ａｇｅｉｎｇ  ｒａｔｓ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｄｉａｂｅｔｏｇｅｎｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ  ２００８；５１：１５２５〜１５３３。
３．Ｌａｍｂｅｒｔ  ＪＤ、  Ｙａｎｇ  ＣＳ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｅａ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ．Ｊ  Ｎｕｔｒ  ２００３；１３３（Ｓｕｐｐｌ）：Ｓ３２６２〜Ｓ３２６７。
４．Ｙａｎｇ  ＣＳ、Ｃｈｅｎ  Ｌ、Ｌｅｅ  ＭＪ、Ｂａｌｅｎｔｉｎｅ  Ｄ、Ｋｕｏ  ＭＣ、Ｓｃｈａｎｔｚ  ＳＰ．Ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  ｕｒｉｎｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｔｅａ  ｃａｔｅｃｈｉｎｓ  ａｆｔｅｒ  ｉｎｇｅｓｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ａｍｏｕｎｔｓ  ｏｆ  ｇｒｅｅｎ  ｔｅａ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｐｒｅｖ  １９９８；７：３５１〜３５４。
５．Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＲＡ、Ｐｏｌａｎｓｋｙ  ＭＭ．Ｔｅａ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ  ２００２；５０：７１８２〜７１８６。
６．Ｆｕｋｉｎｏ  Ｙ、Ｓｈｉｍｂｏ  Ｍ、Ａｏｋｉ  Ｎ、Ｏｋｕｂｏ  Ｔ、Iｓｏ  Ｈ．Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｆｏｒ  ａｎ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｇｒｅｅｎ  ｔｅａ  ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ  ｏｎ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｍａｒｋｅｒｓ．Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｓｃｉ  Ｖｉｔａｍｉｎｏｌ（Ｔｏｋｙｏ）２００５；５１：３３５〜３４２。
７．Ｎａｆｔａｌｉｎ  ＲＪ、Ａｆｚａｌ  I、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  Ｐ、ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ａｎｄｒｏｇｅｎｓ、ｇｒｅｅｎ  ｔｅａ  ｃａｔｅｃｈｉｎｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ａｎｔｉａｎｄｒｏｇｅｎ  ｆｌｕｔａｍｉｄｅ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｅｘｔｅｒｎａｌ  ｇｌｕｃｏｓｅ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ＧＬＵＴｌ．Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２００３；１４０：４８７〜４９９。
８．Ｊｏｈｎｓｔｏｎ  Ｋ、Ｓｈａｒｐ  Ｐ、Ｃｌｉｆｆｏｒｄ  Ｍ、Ｍｏｒｇａｎ  Ｌ．Ｄｉｅｔａｒｙ  ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ  ｄｅｃｒｅａｓｅ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｕｐｔａｋｅ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｃａｃｏ−２  ｃｅｌｌｓ．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ２００５；５７９：１６５３〜１６５７。
９．Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｙ、Ｓｕｚｕｋｉ  Ｍ、Ｓａｔｓｕ  Ｈ、ｅｔ  ａｌ．Ｇｒｅｅｎ  ｔｅａ  ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｔｈｅ  ｓｏｄｉｕｍ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ｏｆ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ａ  ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ  ２０００；４８：５６１８〜５６２３。
１０．Ｚｈｕ  Ｍ、Ｃｈｅｎ  Ｙ、Ｌｉ  ＲＣ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｓｙｓｔｅｍ  ｌｉｎｅａｒｉｔｙ  ｏｆ  ｔｅａ  ｃａｔｅｃｈｉｎｓ  ｉｎ  ｒａｔ．Ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃａ  ２００１；３１：５１〜６０。
１１．Ｒａｅｄｅｒｓｔｏｒｆｆ  ＤＧ、Ｓｃｈｌａｃｈｔｅｒ  ＭＦ、Ｅｌｓｔｅ  Ｖ、Ｗｅｂｅｒ  Ｐ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ＥＧＣＧ  ｏｎ  ｌｉｐｉｄ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｌａｓｍａ  ｌｉｐｉｄ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ．Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２００３；１４：３２６〜３３２。
１２．Ｖａｎ  Ａｍｅｌｓｖｏｏｒｔ  ＪＭ、Ｖａｎ  Ｈｏｆ  ＫＨ、Ｍａｔｈｏｔ  ＪＮ、Ｍｕｌｄｅｒ  ＴＰ、Ｗｉｅｒｓｍａ  Ａ、Ｔｉjｂｕｒｇ  ＬＢ．Ｐｌａｓｍａ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ  ｔｅａ  ｃａｔｅｃｈｉｎｓ  ａｆｔｅｒ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ｏｒａｌ  ｄｏｓｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ．Ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃａ  ２００１；３１：８９１〜９０１。
１３．Ｓａｂｕ  ＭＣ、Ｓｍｉｔｈａ  Ｋ、Ｋｕｔｔａｎ  Ｒ．Ａｎｔｉ−ｄｉａｂｅｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｇｒｅｅｎ  ｔｅａ  ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｒｅｄｕｃｉｎｇ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｊ  Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２００２；８３：１０９〜１１６。
１４．Ｔｓｕｎｅｋｉ  Ｈ、Ｉｓｈｉｚｕｋａ  Ｍ、Ｔｅｒａｓａｗａ  Ｍ、Ｗｕ  ＪＢ、Ｓａｓａｏｋａ  Ｔ、Ｋｉｍｕｒａ  Ｉ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｇｒｅｅｎ  ｔｅａ  ｏｎ  ｂｌｏｏｄ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ａｎｄ  ｓｅｒｕｍ  ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｉｎ  ｄｉａｂｅｔｉｃ（ｄｂ／ｄｂ）ｍｉｃｅ  ａｎｄ  ｏｎ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｈｕｍａｎｓ．ＢＭＣ  Ｐｈａｒｍａｃｏ  ｌ２００４；４：１８〜２７。
１５．Ｌｅｅ  ＭＪ、Ｍａｌｉａｋａｌ  Ｐ、Ｃｈｅｎ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ｔｅａ  ｃａｔｅｃｈｉｎｓ  ａｆｔｅｒ  ｉｎｇｅｓｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｒｅｅｎ  ｔｅａ  ａｎｄ（−）−ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ−３−ｇａｌｌａｔｅ  ｂｙ  ｈｕｍａｎｓ：ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ  ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｐｒｅｖ  ２００２；１１：１０２５〜１０３２。
１６．Ｃｈｅｎ  Ｌ、Ｌｅｅ  ＭＪ、Ｌｉ  Ｈ、Ｙａｎｇ  ＣＳ．Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ、ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ、ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｅａ  ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ．Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ  Ｄｉｓｐｏｓ  １９９７；２５：１０４５〜１０５０。
１７．Ｋａｏ  ＹＨ、Ｈｉｉｐａｋｋａ  ＲＡ、Ｌｉａｏ  Ｓ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ａｎｄ  ｆｏｏｄ  ｉｎｔａｋｅ  ｂｙ  ｇｒｅｅｎ  ｔｅａ  ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  ｇａｌｌａｔｅ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ２０００；１４１：９８０〜９８７。
１８．Ｌｉｎ  ＹＳ、Ｔｓａｉ  ＹＪ、Ｔｓａｙ  ＪＳ、Ｌｉｎ  ＪＫ．Ｆａｃｔｏｒｓ  ａｆｆｅｃｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｔｅａ  ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ  ａｎｄ  ｃａｆｆｅｉｎｅ  ｉｎ  ｔｅａ  ｌｅａｖｅｓ．Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ  ２００３；５１：１８６４〜１８７３。
１９．Ｈａｒａ  Ｙ、Ｈｏｎｄａ  Ｍ．Ｔｈｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  α−ａｍｙｌａｓｅ  ｂｙ  ｔｅａ  ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ．Ａｇｒｉｃ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９９０；５４：１９３９〜１９４５。
２０．Ｓｈｉｍｉｚｕ  Ｍ、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｙ、Ｓｕｚｕｋｉ  Ｍ、Ｓａｔｓｕ  Ｈ、Ｍｉｙａｍｏｔｏ  Ｙ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｂｙ  ｔｅａ  ｃａｔｅｃｈｉｎｓ．ＢｉｏＦａｃｔｏｒｓ  ２０００；１３：６１〜６５。
２１．Ｎｏｍｕｒａ  Ｍ、Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｔ、Ｎａｇａｔａ  Ｎ、ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ  ｏｎ  ｉｎｓｕｌｉｎ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｕｐｔａｋｅ  ｉｎ  ＭＣ３Ｔ３−Ｇ２／ＰＡ６  ａｄｉｐｏｓｅ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｉｏｌ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ２００８；３１：１４０３〜１４０９。
２２．Ｓｔｒｏｂｅｌ  Ｐ、Ａｌｌａｒｄ  Ｃ、Ｐｅｒｅｚ−Ａｃｌｅ  Ｔ、Ｃａｌｄｅｒｏｎ  Ｒ、Ａｌｄｕｎａｔｅ  Ｒ、Ｌｅｉｇｈｔｏｎ  Ｆ．Ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ、qｕｅｒｃｅｔｉｎ  ａｎｄ  ｃａｔｅｃｈｉｎ−ｇａｌｌａｔｅ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｕｐｔａｋｅ  ｉｎ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｒａｔ  ａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ  ２００５；３８６：４７１〜４７８。
２３．Ａｒａｋａｗａ  Ｋ、Ｉｓｈｉｈａｒａ  Ｔ、Ｏｋｕ  Ａ、ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｉｎ  Ｃ５７ＢＬ／ＫｓＪ−ｄｂ／ｄｂ  ｍｉｃｅ  ｂｙ  ｏｒａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａ＋−ｇｌｕｃｏｓｅ  ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｔ−１０９５．Ｂｒｉｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  ２００１；１３２：５７８〜５８６。
２４．Ｃｈｏｗ  ＨＨ、Ｃａｉ  Ｙ、Ａｌｂｅｒｔｓ  ＤＳ、ｅｔ  ａｌ．Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｅａ  ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｓｉｎｇｌｅ−ｄｏｓｅ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  ｇａｌｌａｔｅ  ａｎｄ  ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｎ  Ｅ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｐｒｅｖ  ２００１；１０：５３〜５８。
２５．Ｃｏｌｌｉｎｓ  ＱＦ、Ｌｉｕ  ＨＹ、Ｐｉ  Ｊ、Ｌｉｕ  Ｚ、Qｕｏｎ  ＭＪ、Ｃａｏ  Ｗ．Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ−３−ｇａｌｌａｔｅ（ＥＧＣＧ）、ａ  ｇｒｅｅｎ  ｔｅａ  ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ、ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｇｌｕｃｏｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ５'−ＡＭＰ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００７；２８２：３０１４３〜３０１４９。
２６．Ｋｉｍ  ＪＷ、ＤａｎＧ  ＣＶ．Ｃａｎｃｅｒ'ｓ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｗｅｅｔ  ｔｏｏｔｈ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｗａｒｂｕｒｇ  ｅｆｆｅｃｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００６；６６：８９２７〜８９３０。
２７．Ｐａｒｋ  ＪＢ．Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ  ａｒｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｕｐｔａｋｅ  ｉｎ  Ｕ９３７  ｃｅｌｌｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  １９９９；２６０：５６８〜５７４。
２８．Ｐｏｌｙｃｈｒｏｎｏｐｏｕｌｏｓ  Ｅ、Ｚｅｉｍｂｅｋｉｓ  Ａ、Ｋａｓｔｏｒｉｎｉ  ＣＭ、ｅｔ  ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｂｌａｃｋ  ａｎｄ  ｇｒｅｅｎ  ｔｅａ  ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ  ｏｎ  ｂｌｏｏｄ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎｎｏｎ−ｏｂｅｓｅ  ｅｌｄｅｒｌｙ  ｍｅｎ  ａｎｄ  ｗｏｍｅｎ  ｆｒｏｍ  Ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅａｎ  Ｉｓｌａｎｄｓ（ＭＥＤＩＳ  ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔｕｄｙ）．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｕｔｒ  ２００８；４７：１０〜１６。
【図１】
2011529041.tif 000002
【図２】
2011529041.tif 000003
【図３】
2011529041.tif 000004
【図４】
2011529041.tif 000005
【図５】
2011529041.tif 000006
【図６】
2011529041.tif 000007
【図７】
2011529041.tif 000008
【図８】
2011529041.tif 000009
【国際調査報告】
2011529041.tif 000010
2011529041.tif 000011
2011529041.tif 000012