(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの無水一乳酸塩。
【請求項２】
乳酸塩が一ＤＬ−乳酸塩である、請求項１に記載の塩。
【請求項３】
乳酸塩が一Ｌ−乳酸塩である、請求項１に記載の塩。
【請求項４】
乳酸塩が一Ｄ−乳酸塩である、請求項１に記載の塩。
【請求項５】
(ａ)治療的有効量の請求項１−４のいずれかに記載の塩；および
(ｂ)少なくとも１種の薬学的に許容される担体、希釈剤、媒体または賦形剤
を含む、医薬組成物。
【請求項６】
ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害に応答する疾患の処置のための、請求項５に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
発明の分野
本発明はＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの塩、ならびにそれを含む医薬組成物およびそれを用いた処置方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
関連背景技術
化合物Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド(別名、Ｎ−ヒドロキシ−３−(４−{[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)−エチルアミノ]−メチル}−フェニル)−アクリルアミド)は、ＷＯ０２／２２５７７に記載の通り式(Ｉ)：
【化１】
0005771257.tif 000002
を有する。価値ある薬理学的特性が、この化合物にあるとされている；それ故に、それは、例えば、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害に応答する疾患の治療において有用なヒストンデアセチラーゼ阻害剤として使用できる。ＷＯ０２／２２５７７は、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの具体的塩または塩水和物もしくは溶媒和物を何等開示していない。
【発明の概要】
【０００３】
発明の要約
本発明は、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの塩に関する。本発明の好ましい態様は、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの塩酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メシル酸塩、酒石酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、ゲンチシン酸塩、リンゴ酸塩、マロン酸塩、シュウ酸塩、リン酸塩、プロピオン酸塩、硫酸塩、コハク酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩および亜鉛塩に関する。
【０００４】
本発明は、さらに、(ａ)治療的有効量の本発明のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの塩；および(ｂ)少なくとも１種の薬学的に許容される担体、希釈剤、媒体または賦形剤を含む、医薬組成物に関する。
【０００５】
本発明はまた、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害に応答する疾患の処置方法であって、そのような処置を必要とする対象に治療的有効量の本発明のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの塩を投与することを含む、方法にも関する。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】図１はＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基の形態Ａ、Ｂ、Ｃ、ＨＡおよびＨＢのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図２】図２はＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの塩酸塩のＸ線粉末回折パターンを示す。
【図３Ａ】図３Ａは、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのＤＬ−乳酸塩の形態ＡのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのＤＬ−乳酸塩の形態ＨＡのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図３Ｃ】図３Ｃは、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのＤＬ−乳酸塩の形態ＳＡのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図３Ｄ】図３Ｄは、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのＬ−乳酸塩のＸ線粉末回折パターンを示す。
【図３Ｅ】図３Ｅは、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの無水Ｄ−乳酸塩のＸ線粉末回折パターンを示す。
【図４】図４は、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのマレイン酸塩の形態ＡおよびＨＡのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図５】図５は、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのヘミ酒石酸塩の形態Ａ、ＢおよびＣのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図６】図６は、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのメシル酸(メタンスルホン酸)塩の形態ＡおよびＢのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図７】図７は、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの酢酸塩の形態ＡおよびＳＡのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図８】図８は、本発明のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの安息香酸塩の形態Ａ、ＳＡおよびＳＢのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図９】図９は、本発明のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのクエン酸塩のＸ線粉末回折パターンを示す。
【図１０】図１０は、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのヘミフマル酸塩の形態Ａ、ＢおよびＨＡのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図１１】図１１は、本発明のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのゲンチシン酸塩のＸ線粉末回折パターンを示す。
【図１２】図１２は、本発明のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのヘミリンゴ酸塩の形態ＡおよびＳＡのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図１３】図１３は、本発明のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのマロン酸塩のＸ線粉末回折パターンを示す。
【図１４】図１４は、本発明のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのシュウ酸塩のＸ線粉末回折パターンを示す。
【図１５】図１５は、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのリン酸塩の形態Ａ、ＳＡ、ＳＢおよびＨＡのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図１６】図１６は、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのプロピオン酸塩の形態ＡおよびＳＡのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図１７】図１７は、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの硫酸塩の形態ＡおよびＳＡのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図１８】図１８は、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのヘミコハク酸塩の形態Ａ、Ｂ、ＳＡおよびＨＡのＸ線粉末回折パターンを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
発明の詳細な記載
ここで使用する“塩”は、有機酸または塩基薬剤と薬学的に許容される無機または有機酸または塩基の反応により製造される化合物を意味する；ここで使用する“塩”は、本発明に従い製造された塩の水和物および溶媒和物を包含する。薬学的に許容される無機または有機酸または塩基の例は、Handbook of Pharmaceutical Salts, P.H. Stahl and C.G. Wermuth (eds.), VHCA, Zurich 2002, pp. 334-345のTables 1-8に挙げられている。ここで使用する“多形”は、Ｘ線粉末回折パターン、物理化学的および／または薬物動態学的特性、および熱力学的安定性に関して他と異なる、別個の“結晶修飾”または“多形性形態”または“結晶形態”を意味する。
【０００８】
本発明の第一の態様は、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの塩に関する。好ましい態様において、本塩はＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの塩酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メシル酸塩(メタンスルホン酸塩)、酒石酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、ゲンチシン酸塩、リンゴ酸塩、マロン酸塩、シュウ酸塩、リン酸塩、プロピオン酸塩、硫酸塩、コハク酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩および亜鉛塩から選択される。本発明の特に好ましい態様は、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの塩酸塩、乳酸塩(ＤＬ−乳酸塩、Ｌ−乳酸塩、Ｄ−乳酸塩；無水、水和物および溶媒和物形態)、マレイン酸塩、メシル酸塩およびヘミ酒石酸塩に関する。
【０００９】
したがって、本発明は、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの塩酸塩、好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの１：１塩塩酸に関する。本塩酸塩は２.４mg／mLの良好な水溶性および良好な固有の(intrinsic)溶解速度を有する。それはまたメタノールに高い溶解性をおよび他の一般的有機溶媒に相当な溶解性を示す。それは約２３５.７℃の分解温度を有する単一の、優秀な結晶性の、無水／溶媒和されていない多形として生じる。それは非吸湿性(０.３２％)であり、高濃度のクロライドイオン存在下でＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの優勢な形である。環境温度での平衡によりさらなる多形は観察されない；本塩酸塩は、リン酸緩衝液(ｐＨ＝６.８)中で遊離塩基に変わる。Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの塩酸塩のＸＲＰＤを図２に示す。
【００１０】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの乳酸塩、好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの１：１乳酸塩、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの一水和物乳酸塩、またはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの無水乳酸塩に関する。本発明の一つの好ましい態様において、本乳酸塩はＤＬ−乳酸塩であり、より好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの１：１一水和物ＤＬ−乳酸塩またはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの１：１無水ＤＬ−乳酸塩である。ＤＬ−乳酸塩の多形性形態Ａ、ＨＡおよびＳＡがＸＲＰＤパターンにおいて見ることができ、各々図３Ａ−３Ｃに示す。本ＤＬ−乳酸塩は優れた水溶性および良好な固有の溶解を有する。ＤＬ−乳酸塩の多形性形態Ａ(無水ＤＬ−乳酸塩)は約１８３−１８６℃で融解および分解し、１２０℃まで０.２％の乾燥減量(ＬＯＤ)で、わずかに吸湿性である。形態Ａは、ＤＬ−乳酸塩の他の形態よりも有機溶媒および水中で安定である。ほとんどの情況下で、形態Ａは他の何らかの形態に変化しないが、ｐＨ１および２での平衡で、塩化物が形成され、０℃および１０℃およびアセトン／水混合物中で、形態Ａは、ＤＬ−乳酸塩の形態ＨＡと共に見られた。ＤＬ−乳酸塩の形態ＨＡ(一水和物ＤＬ−乳酸塩)は約１２０℃で融解および分解し、１１０℃まで０.４％、１３０℃まで３.０％および１５５℃まで４.４％(分解を伴う)のＬＯＤでわずかに吸湿性である。ほとんどの情況下で、形態ＨＡは形態Ａにゆっくりと変わるが、ｐＨ１および２での平衡で、塩化物が形成される。メタノール中での平衡により、ＤＬ−乳酸塩の形態ＨＡは形態ＳＡに変わり、それはＤＬ−乳酸塩の一メタノール溶媒和物である。形態ＳＡは約１２３℃で融解および分解し、１４０℃まで５.９％(分解を伴う)のＬＯＤである。
【００１１】
本発明の他の好ましい態様において、本乳酸塩はＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのＬ−(＋)−乳酸塩である；より好ましくは、本乳酸塩はＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの無水Ｌ−(＋)−乳酸塩である。Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのＬ−(＋)−乳酸塩のＸＲＰＤパターンを図３Ｄに示す。融解および分解両方とも、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのＬ−(＋)−乳酸塩無水形態で約１８４.７℃で起こる。本発明のさらに別の好ましい態様において、本乳酸塩はＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのＤ−(−)−乳酸塩である；より好ましくは、本乳酸塩はＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの無水Ｄ−(−)−乳酸塩である。Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのＤ−(−)−乳酸塩のＸＲＰＤパターンを図３Ｅに示す。融解および分解両方ともＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのＤ−(−)−乳酸塩無水形態で約１８４.１℃で起こる。
【００１２】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのマレイン酸塩、好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの１：１マレイン酸塩に関する。マレイン酸は、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドと１：１塩を形成した唯一のジカルボン酸である。マレイン酸塩の多形性形態ＡおよびＨＡが図４に示すＸＲＰＤパターンにおいて見られ得る。マレイン酸塩の形態Ａは、加熱により、約１７７℃で融解せずに分解する。そのＬＯＤは１５０℃で０.２％未満であり、それは非吸湿性である。本マレイン酸塩は２.６mg／mLの良好な水溶性および良好な固有の溶解を示す。それはメタノールおよびエタノールにおいて高い溶解性を示し、そして他の一般的有機溶媒に相当な溶解性を示す。形態Ａの水和物であるマレイン酸塩の形態ＨＡは、加熱により、約１５０℃で融解せずに分解する。ＬＯＤは１００℃で約６.０％である。
【００１３】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのメシル酸(またはメタンスルホン酸)塩、好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの１：１メシル酸塩に関する。メシル酸塩の形態ＡおよびＢが図５に示すＸＲＰＤパターンにおいて見られ得る。メシル酸塩の形態Ａは、加熱により、約１９２℃で融解せずに分解する。そのＬＯＤは１５０℃で０.２％未満であり、形態Ａはほんのわずかに吸湿性である(８５％ｒ.ｈ.で０.３５％水分未満)。本メシル酸塩は１２.９mg／mLの優れた水溶性および高い固有の溶解速度を有する。それはメタノールおよびエタノールに高い溶解性を有し、残りの有機溶媒にかなりの溶解性を有する。平衡により、形態Ａは水中では形態Ｂに、０.１Ｎ  ＨＣｌ中では塩酸塩に、そしてリン酸緩衝液(ｐＨ＝６.８)中では遊離塩基に変わる。メシル酸塩の形態Ｂは環境温度での酢酸エチルとの反応と、その後の懸濁液の５０℃までの加熱により、または水中での形態Ａの変換により得ることができる。本メシル酸塩は少なくとも４種の結晶修飾で単離され、そのうち２種が非常に結晶性で、わずかに吸湿性(０.８２％)の、白色固体(形態ＡおよびＢを含む)であり、そのうちの他の２種が黄色でありおよび化学量論を超える過剰のメタンスルホン酸、すなわち、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド１molあたり０.５mol未満の付加であった；後者の２種の形態は非常に吸湿性であり、すなわち、９３％ｒ.ｈ.で少なくとも〜４０％の重量増加である。
【００１４】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの酒石酸塩、好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの２：１酒石酸塩(ヘミ酒石酸塩)塩、およびより好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの２：１  Ｌ−酒石酸塩に関する。ヘミ酒石酸塩の形態Ａ、ＢおよびＣが、図６に示すＸＲＰＤパターンにおいて見られ得る。Ｌ−酒石酸塩の形態Ａ、無水ヘミ酒石酸塩は、加熱により、約２０９℃で融解せずに分解する。ＬＯＤは１５０℃で０.３％未満であり、形態Ａはわずかに吸湿性である(８５％ｒ.ｈ.で０.５％水分未満)。本Ｌ−酒石酸塩は３.５mg／mLの良好な水溶性および良好な固有の溶解を有する。それはアセトン、酢酸エチルおよび他の一般的有機溶媒に良好な溶解性を示し、そしてアルコール類に限られた溶解性を示す。平衡により、形態Ａは、メタノール中で形態Ｃに、０.１Ｎ  ＨＣｌ中で塩酸塩に、およびリン酸緩衝液(ｐＨ＝６.８)中で遊離塩基に変わる。また無水ヘミ酒石酸塩である酒石酸塩の形態Ｂは、加熱により、１６０℃以上で融解せずに分解する。ＬＯＤは１５０℃で２.０％であり、その吸湿性の性質を示す。酒石酸塩の形態Ｃは、アセトン中、環境温度での形態Ａの平衡により得る。
【００１５】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの酢酸塩、好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの１：１酢酸塩に関する。酢酸塩の形態ＡおよびＳＡが、図７に示すＸＲＰＤパターンにより見られ得る。酢酸塩の形態Ａは、加熱により、６０℃以上で融解せずに急速に分解する。それは約２mg／mLの水溶性を有する。酢酸塩の形態ＳＡはアセトン溶媒和物であり、約１４０℃で１３.５％のＬＯＤを有する。この溶媒和物は９０℃未満で安定である。
【００１６】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの安息香酸塩、好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの１：１安息香酸塩に関する。安息香酸塩の形態Ａ、ＳＡおよびＳＢが、図８に示すＸＲＰＤパターンにおいて見られ得る。アセトン中の反応から単離した安息香酸塩の形態Ａは優れた結晶性および１６０℃以上の高分解温度を有する。そのＬＯＤは１４０℃で０.６％未満である。それは約０.７mg／mLの水溶性を有する。安息香酸塩の形態ＳＡはエタノール溶媒和物であり、１１０℃以上で起こる分解前は５.２％のＬＯＤを有する。安息香酸塩の形態ＳＢは２−プロパノール溶媒和物であり、１００℃を以上で起こる分解前は６.３％のＬＯＤを有する。
【００１７】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのクエン酸塩、好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの２：１クエン酸塩(ヘミクエン酸塩)に関する。本クエン酸塩は、図９に示すＸＲＰＤパターンにおいて見られ得る。本ヘミクエン酸塩は、約１.２mg／mLの水溶性を有する。それは、１８０℃以上の分解温度を有する単一の、結晶性および無水／溶媒和されていない多形として生じる。
【００１８】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのフマル酸塩、好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの２：１フマル酸塩(ヘミフマル酸塩)に関する。ヘミフマル酸塩の形態Ａ、Ｂ、およびＨＡが、図１０に示すＸＲＰＤパターンにおいて見られ得る。エタノールおよび水(１：０.０５)の反応から単離されたヘミフマル酸塩の形態Ａは、優れた結晶性および２１７℃の高分解温度を有する。そのＬＯＤは、２００℃で０.７％未満である。それは約０.４mg／mLの水溶性を有する。エタノール中の反応から単離されたヘミフマル酸塩の形態Ｂは、良好な結晶性および１６０℃以上の分解温度を有する。それは２段階ＬＯＤを示す：１５０℃まで約１.１％およびその後１５０℃〜２００℃で１.７％。２−プロパノール中の反応から単離された恐らく水和物であるヘミフマル酸塩の形態ＨＡは、良好な結晶性および１００℃以上の分解温度を有する。それは２段階ＬＯＤを示す：７５℃まで約３.５％およびその後７５℃〜１５０℃で６％。
【００１９】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのゲンチシン酸塩、好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの１：１ゲンチシン酸塩に関する。本ゲンチシン酸塩は、図１１に示すＸＲＰＤパターンにおいて見られ得る。本ゲンチシン酸塩は約０.３mg／mLの水溶性を有する。それは、単一の、結晶性および無水／溶媒和されていない多形として生じる。
【００２０】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのリンゴ酸塩、好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの２：１リンゴ酸(ヘミリンゴ酸)塩に関する。ヘミリンゴ酸塩の形態ＡおよびＳＡが、図１２において示すＸＲＰＤパターンにおいて見られ得る。エタノールおよび水(１：０.０５)または非希釈(neat)エタノールおよび２−プロパノール中の反応から単離したヘミリンゴ酸塩の形態Ａは、優れた結晶性および２０６℃の高分解温度を有する。それは、１７５℃まで２％ＬＯＤを示す。それは、約１.４mg／mLの水溶性を有する。本ヘミリンゴ酸塩の形態ＳＡは、アセトン中の塩形成反応から得られた。それは優れた結晶性を有するが、分解が約８０℃で徐々に開始する。７５℃までのそのＬＯＤは０.６％に達する。
【００２１】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのマロン酸塩、好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの２：１マロン酸(ヘミマロン酸)塩に関する。本マロン酸塩は、図１３において示すＸＲＰＤパターンにおいて見られ得る。本ヘミマロン酸塩は約２mg／mLの水溶性を有する。それは、１７０℃以上の分解温度を有する、単一の、結晶性および無水／溶媒和されていない多形として生じる。
【００２２】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのシュウ酸塩に関する。本シュウ酸塩は、図１４において示すＸＲＰＤパターンにおいて見られ得る。
【００２３】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのリン酸塩、好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの１：１リン酸塩に関する。リン酸塩の形態Ａ、ＳＡ、ＳＢおよびＨＡが、図１５において示すＸＲＰＤパターンにおいて見られ得る。アセトン中の反応から単離したリン酸塩の形態Ａは、優れた結晶性および１８７℃の高分解温度を有する。それは、１６５℃まで１％ＬＯＤを示す。それは約６mg／mLの水溶性を有する。エタノール中の反応から単離したリン酸塩の形態ＳＡは、良好な結晶性を示し、加熱により徐々の重量損失を示す。それは、１５０℃まで６.６％ＬＯＤを示す。２−プロパノール中の反応から単離したリン酸塩の形態ＳＢは、優れた結晶性を示し、加熱により徐々の重量損失を示す。それは、１５０℃まで約７％ＬＯＤを示す。エタノールおよび水(１：０.０５)中の反応から単離した水和物であるリン酸塩の形態ＨＡは、優れた結晶性および約１８０℃の高分解温度を有する。それは、１５０℃まで７％ＬＯＤを示す。
【００２４】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのプロピオン酸塩、好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの１：１プロピオン酸塩に関する。プロピオン酸塩の形態ＡおよびＳＡが、図１６において示すＸＲＰＤパターンにおいて見られ得る。アセトン中の反応から単離したプロピオン酸塩の形態Ａは、優れた結晶性を有する；その分解温度は約９９℃である。それは、１４０℃まで約７％ＬＯＤを示す。それは、約４mg／mLの水溶性を有する。２−プロパノールの反応から単離した、プロピオン酸塩の形態ＳＡは、優れた結晶性を有する２−プロパノール溶媒和物である。それは、加熱により１４０℃まで約１５％ＬＯＤの徐々の重量損失を示す。
【００２５】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの硫酸塩、好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの１：１硫酸塩に関する。硫酸塩の形態ＡおよびＳＡが、図１７において示すＸＲＰＤパターンにおいて見られ得る。酢酸エチル中の反応から黄色吸湿性粉末として単離した硫酸塩の形態Ａは、乏しい結晶性、約１６０℃の分解温度を有し、１５０℃まで約７％ＬＯＤを示す。それは環境条件で非常に吸湿性である。２−プロパノール中の反応から単離した硫酸塩の形態ＳＡは、優れた結晶性および約１６２℃の高分解温度を有する２−プロパノール溶媒和物である。それは１５０℃まで約９−１２％ＬＯＤを示す。
【００２６】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのコハク酸塩、好ましくはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの２：１コハク酸(ヘミコハク酸)塩に関する。ヘミコハク酸塩の形態Ａ、Ｂ、ＨＡおよびＳＡが、図１８において示すＸＲＰＤパターンにおいて見られ得る。エタノールおよび水(１：０.０５)または非希釈エタノール中の反応から再現性よく単離されるヘミコハク酸塩の形態Ａは、優れた結晶性および約２０４℃の非常に高い分解温度を有する。それは、２００℃まで約１.１％ＬＯＤを示す。それは約０.４mg／mLの水溶性を有する。アセトンまたは酢酸エチル中の反応から単離したヘミコハク酸塩の形態Ｂは、良好な結晶性および１５０℃以上の分解温度を有する。それは２段階ＬＯＤを示す：１２５℃まで約１.５％および１５０℃までさらに１.３−２.９％。２−プロパノール中の反応から単離したヘミコハク酸塩の形態ＳＡは、良好な結晶性および約１５５℃の高分解温度を有する２−プロパノール溶媒和物である。それは２段階ＬＯＤを示す：７０℃まで約３％および１４０℃までさらに４.６％。２−プロパノールおよび水(１：０.０５)中の反応から単離した、ヘミコハク酸塩の一水和物である形態ＨＡは、優れた結晶性および約１８０℃の高分解温度を示す。それは、１６０℃まで約４.６％ＬＯＤを示し、一水和物に対応する。
【００２７】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのナトリウム塩に関する。黄色粉末として単離されたこの結晶性塩は、目に見えて吸湿性である。
【００２８】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのカリウム塩に関する。黄色粉末として単離されたこの結晶性塩は、目に見えて吸湿性である。
【００２９】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのカルシウム塩に関する。この塩は、環境温度を超える(above-ambient)ガラス転移温度を有する非晶性物質として単離できる。非晶性ではあるが、この塩はナトリウムまたはカリウム塩より低い吸湿性であった。
【００３０】
本発明は、さらにＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの亜鉛塩に関する。この塩は、環境温度を超えるガラス転移温度を有する非晶性物質として単離できる。非晶性ではあるが、この塩はナトリウムまたはカリウム塩より低い吸湿性であった。
【００３１】
本発明の第二の態様は：
(ａ)治療的有効量のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの塩；および
(ｂ)少なくとも１種の薬学的に許容される担体、希釈剤、媒体または賦形剤
を含む医薬組成物に関する。
【００３２】
“治療的有効量”は、それを必要とする対象に投与したときに、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害により軽減される疾患状態の有効な処置に十分である、本発明の塩の量を意味することを意図する。治療的に有効である、ある本発明の化合物の量は、疾患状態およびその重症度、それを必要とする対象のアイデンティティなどのような因子により変わり、その量は当業者により慣用的に決定できる。
【００３３】
少なくとも１種の薬学的に許容される担体、希釈剤、媒体または賦形剤は当業者により容易に選択でき、望む投与の形式により決定される。適当な投与の形式の説明的例は、経口、経鼻、非経腸、局所、経皮および直腸である。本発明の医薬組成物は、当業者により適当であると認識される任意の医薬形態を取り得る。適当な医薬形態は、固体、半固体、液体または凍結乾燥製剤、例えば錠剤、散剤、カプセル剤、坐薬、懸濁液、リポソーム剤およびエアロゾル剤を含む。
【００３４】
本発明の第三の態様は、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害に応答する疾患の処置方法であって、そのような処置を必要とする対象に、治療的有効量のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの塩を投与することを含む、方法に関する。上述の通り、適当な投与の形式の説明的例は、経口、経鼻、非経腸、局所、経皮および直腸である。結晶形態の投与は、本発明の第九の態様の医薬組成物の投与により、または何らかの他の有効な手段により達成し得る。
【００３５】
本発明の具体的態様をここで以下の実施例を参照して証明する。これらの実施例は単に本発明の説明のために開示し、いかなる方法でも本発明の範囲を限定するものと取ってはならないことは理解すべきである。
【００３６】
以下の実施例において、結晶化度について、“優秀”は、鋭く、そして７０カウントを超える強度を有するＸＲＰＤ主ピークを有する物質を意味する；“良好”は、鋭く、そして３０−７０カウント内の強度を有するＸＲＰＤ主ピークを有する物質を意味する；および“劣等”は、幅広であり、そして３０カウント未満の強度を有するＸＲＰＤ主ピークを有する物質を意味する。加えて、“乾燥減量”(ＬＯＤ)は、環境温度と分解温度の間で測定される重量損失を意味する。後者は、熱重量曲線対温度の最初の逸脱の開始により近似される。これは、重量損失が全塩で同じ速度で起こらないため、真の開始ではない。それ故に、実際の分解温度は記載のものより低いであろう。塩形成、化学量論、および溶媒の不存在および存在を、対応する塩形成剤および反応溶媒の１Ｈ−ＮＭＲ化学シフトの観察により確認する(表は塩形成剤または溶媒の一つの特徴的化学シフトを含む)。水含有量は、水ピークが広かったためＮＭＲデータから抜いていない。遊離塩基のプロトン化の程度を、ベンジル型(Ｈｂｚ)プロトンの化学シフトにおける変化により評価する。さらに、本発明の塩は、自由に流動する粉末(ＦＦＰ)、粘性無晶性物質(ＳＡＭ)(これは凝集して、一つの球状塊を形成するか反応容器の壁に粘着する傾向のあるガム状粘稠度を有した)または無晶性ゲル(ＡＧ)として析出した。最後に、“−”は測定を行わなかったことを意味する。
【実施例】
【００３７】
実施例１
酢酸塩の製造
約４０−５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基一水和物を、１mlの表１に挙げられた溶媒に懸濁した。化学量論量の酢酸を、その後懸濁液に添加した。本混合物を６０℃または環境温度のいずれかで撹拌した(透明な溶液が形成されたとき、撹拌を４℃で続けた)。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤ、ＴＧＡおよび数例で１Ｈ−ＮＭＲで分析した。
【表１】
0005771257.tif 000003
【００３８】
アセトン中の塩形成反応は、非常に結晶性の塩を生じ、１：１のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド対アセテート比で、化学量論アセトン溶媒和物Ａとして同定された。イソプロピルアルコールおよび酢酸エチル中の６０℃での塩形成反応は同じ結晶性の、溶媒和されていない酢酸塩(形態Ａ)を生じた。１０５℃以上での付随する重量損失は水の損失(塩が水和物ならば)または酢酸の損失もしくは両方のいずれかによる。
【００３９】
実施例２
安息香酸塩の製造
約４０〜５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基一水和物を、１mlの表２に挙げられた溶媒に懸濁した。化学量論量の安息香酸をその後懸濁液に添加した。本混合物を環境温度で撹拌した(透明な溶液が形成されたとき、撹拌を４℃で続けた)。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤ、ＴＧＡおよび数例で１Ｈ−ＮＭＲで分析した。
【表２】
0005771257.tif 000004
【００４０】
エタノール単独および水と一緒の中での塩形成反応は、同じエタノール溶媒和物Ａを生じた。化学量論のプロトン化塩基：ベンゾエート：エタノールはＮＭＲにより１：１：０.５である。溶媒損失および分解は１０℃／分の加熱速度での密集した事象(closely spaced event)であり、そしてエタノール含有量は最初測定できなかった。最終的に、それは１２０℃で１０分間保持することにより測定した。５.２％のＬＯＤは、式単位あたり０.５モルのエタノールに相当する。イソプロピルアルコール単独および水と一緒の中で同じイソプロパノール(ＩＰＡ)溶媒和物Ｂを生じた。化学量論のプロトン化塩基：ベンゾエートはＮＭＲで１：１である。溶媒損失および分解は１０℃／分の加熱速度で密集しており、イソプロパノール含有量は最初測定できなかった。最終的に、それは１２０℃で１０分間保持することにより測定した。６.３％ＬＯＤは、式単位あたり０.５モルのＩＰＡに相当する。溶媒含有量およびＸＲＰＤパターンに基づき、２種の溶媒和物ＡおよびＳＢは異性体構造(isostructural)である。アセトン中の塩形成反応は、何等溶媒または水を含まず、優秀結晶化度および高分解温度の１：１化学量論塩の安息香酸塩を生じた(形態Ａ)。
【００４１】
実施例３
塩酸塩の形成
約４０〜５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基を、１mlの表３に挙げられた溶媒に懸濁した。化学量論量の塩酸をその後懸濁液に添加した。本混合物を６０℃または環境温度のいずれかで撹拌した(透明な溶液が形成されたとき、撹拌を４℃で続けた)。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤ、ＴＧＡおよび数例で１Ｈ−ＮＭＲで分析した。
【表３】
0005771257.tif 000005
【００４２】
上記５種の反応すべて同じ結晶性塩を生じた。本塩は無水であり、高温で分解した。
【００４３】
実施例４
ヘミクエン酸塩の形成
約４０〜５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基を、１mlの表４に挙げられた溶媒に懸濁した。化学量論量のクエン酸をその後懸濁液に添加した。本混合物を６０℃または環境温度のいずれかで撹拌した(透明な溶液が形成されたとき、撹拌を４℃で続けた)。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤ、ＴＧＡおよび数例で１Ｈ−ＮＭＲで分析した。
【表４】
0005771257.tif 000006
【００４４】
６０℃への加熱(アセトンおよびエタノール)、ならびに水の導入(６０℃でイソプロピルアルコールと水、アセトンと水)により、溶媒または水を何等含まない非常に結晶性の塩を生じた。環境／６０℃でのアセトンについての高ＬＯＤ値は、結晶性粉末内の無晶性物質の存在による。化学量論の塩は、シトレートイオンについての予測されるピークが溶媒のものと同時であるため、ＤＭＳＯ−ｄ６中の１Ｈ−ＮＭＲでは測定できなかった。しかしながら、１３Ｃ−ＮＭＲ分光学は１７７.３および１７１.６ppmで２個の１３Ｃ＝Ｏシグナルを示した。前者はプロトン化カルボン酸基および後者は非プロトン化カルボキシレートによる。
【００４５】
実施例５
ヘミフマル酸塩の形成
約４０〜５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基一水和物を、１mlの表５に挙げられた溶媒に懸濁した。化学量論量のフマル酸をその後懸濁液に添加した。本混合物を６０℃または環境温度のいずれかで撹拌した(透明な溶液が形成されたとき、撹拌を４℃で続けた)。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤ、ＴＧＡおよび数例で１Ｈ−ＮＭＲで分析した。
【表５】
0005771257.tif 000007
【００４６】
イソプロピルアルコールおよびアセトン中の環境温度での塩形成反応は、化学量論２：１(プロトン化塩基：フマレート)のフマル酸塩、すなわち、ヘミフマル酸塩を生じた。これらのいずれも溶媒和物ではないが、それらは劣等結晶化度および低分解温度を有した。イソプロピルアルコールの環境温度でのＬＯＤは、水の損失と関連している可能性が最もある。エタノール、エタノールと水、およびイソプロピルアルコールと水中の、全ての環境温度または６０℃での塩形成反応は、化学量論２：１(プロトン化塩基：フマレート)のフマル酸塩、すなわち、ヘミフマル酸塩を生じた。エタノールおよび水およびイソプロピルアルコールおよび水(１：０.０５)中の、環境または６０℃での塩形成反応は、同一ＸＲＰＤスペクトルを生じた(無水形態Ａ)。エタノールにより環境温度で形成された塩のスペクトルは、似ているにもかかわらず、いくつかの小さな差を示し、それは、類似構造の、独特なヘミフマレート多形(形態Ｂ)を示し得る。
【００４７】
実施例６
ゲンチシン酸塩の形成
約４０〜５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基を、１mlの表６に挙げられた溶媒に懸濁した。化学量論量の２,５−ジヒドロキシ安息香酸(ゲンチシン酸)をその後懸濁液に添加した。本混合物を６０℃または環境温度のいずれかで撹拌した(透明な溶液が形成されたとき、撹拌を４℃で続けた)。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤ、ＴＧＡおよび数例で１Ｈ−ＮＭＲで分析した。
【表６】
0005771257.tif 000008
【００４８】
製造したゲンチシン酸塩は非常に結晶性で、無水であり、非常に高温で分解した。化学量論の塩はＮＭＲで１：１である。
【００４９】
実施例７
一水和物ＤＬ−乳酸塩の形成
約４０〜５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基を、１mlの表７に挙げられた溶媒に懸濁した。化学量論量の乳酸をその後懸濁液に添加した。本混合物を環境温度で撹拌し、透明溶液が形成されたとき、撹拌を４℃で続けた。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤ、ＴＧＡおよび１Ｈ−ＮＭＲで分析した。
【表７】
0005771257.tif 000009
【００５０】
イソプロピルアルコールおよびアセトン中、４℃での塩形成反応は、化学量論(１：１)ＤＬ−乳酸塩、一水和物を生じた。本塩は結晶性であり、７７℃を超えて脱水し始め、１５０℃を超えて分解した。
【００５１】
実施例８
マレイン酸塩の形成
約４０〜５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基一水和物を、１mlの表８に挙げられた溶媒に懸濁した。化学量論量のマレイン酸をその後懸濁液に添加した。本混合物を６０℃または環境温度のいずれかで撹拌した(透明な溶液が形成されたとき、撹拌を４℃で続けた)。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤ、ＴＧＡおよび数例で１Ｈ−ＮＭＲで分析した。
【表８】
0005771257.tif 000010
【００５２】
イソプロピルアルコールおよびアセトン中、６０℃での塩形成反応は、〜１８０℃以上で分解する非常に結晶性の、無水固体を生じた。マレイン酸は、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドと１：１塩を形成した唯一のジカルボン酸であった。その１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、２個のオレフィンプロトンに対応する６.０１ppmでの共鳴、および１個の非プロトン化カルボン酸による１０.７９ppmの共鳴を示す。マレイン酸はまた高水含有量の塩も形成し、その水は穏やかな加熱条件下で無くなる。エタノール中での塩形成反応(ＲＴ〜４℃)が水和物を形成しそうである(形態ＨＡ)。
【００５３】
実施例９
ヘミリンゴ酸塩の形成
約４０〜５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基一水和物を、１mlの表９に挙げられた溶媒に懸濁した。化学量論量のリンゴ酸をその後懸濁液に添加した。本混合物を６０℃または環境温度のいずれかで撹拌した(透明な溶液が形成されたとき、撹拌を４℃で続けた)。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤ、ＴＧＡおよび数例で１Ｈ−ＮＭＲで分析した。
【表９】
0005771257.tif 000011
【００５４】
エタノールおよび水、エタノールおよびイソプロピルアルコール中の塩形成反応は同じ結晶性および無水のヘミリンゴ酸塩を生じた。エタノールおよび水(１：０.０５)およびエタノールの間のＬＯＤの差異は、２個のサンプル中の無晶性物質の異なる量を反映し得る。アセトン中の塩形成反応は、〜９５℃以上で連続的に重量を失う異なるヘミリンゴ酸塩を提供した。この塩はアセトン溶媒和物(形態ＳＡ)である。溶媒損失および分解は、密集した熱事象である。
【００５５】
実施例１０
ヘミマロン酸塩の形成
約４０〜５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基を、１mlの表１０に挙げられた溶媒に懸濁した。化学量論量マロン酸をその後懸濁液に添加した。本混合物を６０℃または環境温度のいずれかで撹拌した(透明な溶液が形成されたとき、撹拌を４℃で続けた)。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤ、ＴＧＡおよび数例で１Ｈ−ＮＭＲで分析した。
【表１０】
0005771257.tif 000012
【００５６】
全反応は同じヘミマロン酸塩を提供した。結晶化度は通常良好であるが、無晶性ハローが全てのＸＲＰＤスペクトルで見られた。これらの物質と結合している水は、恐らく無晶性要素による増加した水分吸着によるものである。合成中の環境条件が、良質の塩を生じる。
【００５７】
実施例１１
メシル酸塩の形成
約４０〜５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基一水和物を、１mlの表１１に挙げられた溶媒に懸濁した。化学量論量のメタンスルホン酸をその後懸濁液に添加した。本混合物を６０℃または環境温度のいずれかで撹拌した(透明な溶液が形成されたとき、撹拌を４℃で続けた)。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤ、ＴＧＡおよび数例で１Ｈ−ＮＭＲで分析した。
【表１１】
0005771257.tif 000013
【００５８】
酢酸エチル中の塩形成反応は、室温での撹拌により黄色塩を生じた。本塩(形態Ａ)は結晶性であり、２段階重量損失を示し、ＮＭＲによると、何等溶媒を含まないが、１分子を超えるメタンスルホネート(メシレート)を有するように見える。アセトン中の塩形成反応は、６０℃で加熱後白色粉末の単離を提供した。それは優秀結晶化度を示したが、１種を超える多形性形態(形態ＡおよびＢ)の混合物であり得る。ＮＭＲによると、それは何等溶媒を含まないが、１分子を超えるメタンスルホネートを含むように見える。反応を環境温度で開始し、次いで得られた帯黄色粉末懸濁液を５０℃に加熱する、酢酸エチル中の他の塩形成反応は、図５に示す新規形態Ｂの単離を提供する。
【００５９】
実施例１２
シュウ酸塩の形成
約４０〜５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基を、１mlの表１２に挙げられた溶媒に懸濁した。化学量論量の塩形成剤シュウ酸をその後懸濁液に添加した。本混合物を６０℃または環境温度のいずれかで撹拌した(透明な溶液が形成されたとき、撹拌を４℃で続けた)。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤ、ＴＧＡおよび数例で１Ｈ−ＮＭＲで分析した。
【表１２】
0005771257.tif 000014
【００６０】
シュウ酸塩は、シュウ酸のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの懸濁液への添加により直ぐに沈殿したが、単離が困難であり、濾過中に水を吸収するように見えた。
【００６１】
実施例１３
リン酸塩の形成
約４０〜５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基一水和物を、１mlの表１３に挙げられた溶媒に懸濁した。化学量論量のリン酸をその後懸濁液に添加した。本混合物を６０℃または環境温度のいずれかで撹拌した(透明な溶液が形成されたとき、撹拌を４℃で続けた)。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤ、ＴＧＡおよび数例で１Ｈ−ＮＭＲで分析した。
【表１３】
0005771257.tif 000015
【００６２】
エタノールおよびイソプロピルアルコール中の塩形成反応は、エタノールおよびイソプロパノールヘミ溶媒和物(各々形態ＳＡおよびＳＢ)をもたらした。エタノールおよび水では、大きなＬＯＤにも係わらずＮＭＲで痕跡量のエタノールしか検出されなかった。本物質は、穏やかな加熱および真空条件で水を失う吸湿性であるかまたは水和物(形態ＨＡ)である(ＴＧＡにより測定した水の損失は、１０℃／分で〜６０℃までで完了する)。アセトンおよび酢酸エチル中の塩形成反応は同じ結晶性および無水リン酸塩(形態Ａ)を生じた。化学量論は１：１が最も可能性が高い。本塩は高分解温度を示す。
【００６３】
実施例１４
プロピオン酸塩の形成
約４０〜５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基一水和物を、１mlの表１４に挙げられた溶媒に懸濁した。化学量論量のプロピオン酸をその後懸濁液に添加した。本混合物を６０℃または環境温度のいずれかで撹拌した(透明な溶液が形成されたとき、撹拌を４℃で続けた)。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤ、ＴＧＡおよび数例で１Ｈ−ＮＭＲで分析した。
【表１４】
0005771257.tif 000016
【００６４】
エタノール中の塩形成反応は未反応遊離塩基を提供した(最もありそうなのは形態ＨＢ)。イソプロピルアルコールは、プロピオン酸塩のＩＰＡ溶媒和物を生じた(形態ＳＡ)。ＮＭＲに基づき、ＩＰＡ含有量は〜０.５である。本塩は１５％の重量損失を示し、これはＩＰＡと非同定成分の損失に対応する。アセトン中および酢酸エチルの塩形成反応は同じ結晶性および溶媒和されていない塩(形態Ａ)を生じた。〜１００℃で開始する６.３〜７％の重量損失は、水(本塩が水和物であるならば)、プロピオン酸または分解産物による。重量損失完了後(〜１４０℃)、本塩は分解する。本物質をＮＭＲ用にＤＭＳＯに溶解したとき、遊離プロピオン酸および痕跡量のみのプロピオネートが検出されたことは注目すべきである。
【００６５】
実施例１５
硫酸塩の形成
約４０〜５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基一水和物を、１mlの表１５に挙げられた溶媒に懸濁した。化学量論量の硫酸をその後懸濁液に添加した。本混合物を６０℃または環境温度のいずれかで撹拌した(透明な溶液が形成されたとき、撹拌を４℃で続けた)。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤ、ＴＧＡおよび数例で１Ｈ−ＮＭＲで分析した。
【表１５】
0005771257.tif 000017
【００６６】
イソプロピルアルコール中の塩形成反応は白色結晶性塩の単離をもたらした。それは式単位あたり１.５molのＩＰＡを含むイソプロパノール溶媒和物(形態ＳＡ)として同定された。ＤＭＳＯ中、０.５molのＩＰＡがプロトン化される。酢酸エチル中の塩形成反応は黄色吸湿性粉末(形態Ａ)を提供する。濾過中、本サンプルは目に見えて水分を吸収し、その劣等結晶化度はこの作用に起因する。
【００６７】
実施例１６
ヘミコハク酸塩の形成
約４０〜５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基一水和物を、１mlの表１６に挙げられた溶媒に懸濁した。化学量論量のコハク酸をその後懸濁液に添加した。本混合物を６０℃または環境温度のいずれかで撹拌した(透明な溶液が形成されたとき、撹拌を４℃で続けた)。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤ、ＴＧＡおよび数例で１Ｈ−ＮＭＲで分析した。
【表１６】
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【００６８】
４種の明らかに異なるヘミコハク酸塩が単離された：一水和物(形態Ａ)(環境でエタノール)、イソプロパノールのヘミ溶媒和物(形態ＳＡ)(イソプロピルアルコール)、および２種の溶媒和されていない形態ＡおよびＢ。形態Ａは高い結晶化度、２００℃までの最少重量損失、および高い分解温度を示す。加えて、それは、エタノールおよびエタノールおよび水で６０℃で証明されるように、再現性よく合成できた。
【００６９】
実施例１７
ヘミ酒石酸塩の形成
約４０〜５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基一水和物を、１mlの表１７に挙げられた溶媒に懸濁した。化学量論量の酒石酸をその後懸濁液に添加した。本混合物を６０℃または環境温度のいずれかで撹拌した(透明な溶液が形成されたとき、撹拌を４℃で続けた)。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤ、ＴＧＡおよび数例で１Ｈ−ＮＭＲで分析した。
【表１７】
0005771257.tif 000019
【００７０】
遊離塩基と酒石酸の塩形成反応は、高温への加熱が必要であった。２００℃以上で分解する非常に結晶性の、無水塩がヘミタートレートとして単離され、形態Ａと命名した。形態Ｂは１回イソプロピルアルコールおよび水で６０℃で単離され、Ａと非常に類似した構造ではあるが、そのＸＲＰＤパターンで顕著な差異が見られた。
【００７１】
実施例１８
無水ＤＬ−乳酸塩の形成
ＤＬ−乳酸(４.０ｇ、８５％水溶液、純粋ＤＬ−乳酸３.４ｇに相当)を水(２７.２ｇ)で希釈し、その溶液を９０℃(内部温度)で１５時間加熱する。本溶液を室温に冷却し、以下の塩形成工程で乳酸溶液として使用する。
【００７２】
Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基、形態ＨＡ(１０.０ｇ)をメカニカル・スターラーと共に４首反応フラスコに入れる。脱塩水(１１０.５ｇ)を添加し、本懸濁液を６５℃(内部温度)に３０分以内加熱する。ＤＬ−乳酸溶液をこの懸濁液に３０分間、６５℃で添加する。ＤＬ−乳酸塩溶液添加中、本懸濁液は溶液に変わる。添加用漏斗を脱塩水(９.１ｇ)で濯ぎ、本溶液を６５℃でさらに３０分間撹拌する。本溶液を４５℃(内部温度)に冷却し、種晶(１０mg  Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドＤＬ−ラクテート一水和物)をこの温度で添加する。本懸濁液を３３℃に冷却し、さらに２０時間、その温度で撹拌する。本懸濁液を６５℃に再加熱し、１時間この温度で撹拌し、３３℃に１時間以内に冷却する。さらに３時間、３３℃で撹拌後、生成物を濾過により単離し、フィルターケーキを脱塩水(２×２０ｇ)で洗浄する。湿潤フィルターケーキを真空で５０℃で乾燥させて、無水Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドＤＬ−乳酸塩を結晶性生成物として得る。生成物は、ＨＰＬＣおよび１Ｈ−ＮＭＲで、一水和物塩(形態ＨＡ)と同一である。ＸＲＰＤは無水形態の存在を示す。
【００７３】
上記の方法に従い実施したさらなる塩形成実験において、生成物溶液を６５℃で濾過してその後４５℃に冷却、種晶添加および結晶化した。全例で、形態Ａ(無水和物形態)が生成物として得られた。
【００７４】
実施例１９
無水乳酸塩の形成
ＤＬ−乳酸(２.０ｇ、８５％水溶液、純粋ＤＬ−乳酸１.７ｇに対応)を水(１３.６ｇ)で希釈し、その溶液を９０℃(内部温度)で１５時間加熱する。本溶液を室温に冷却し、以下の塩形成工程で乳酸溶液として使用する。
【００７５】
Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基、形態ＨＡ(５.０ｇ)をメカニカル・スターラーと共に４首反応フラスコに入れる。脱塩水(５４.８５ｇ)を添加し、本懸濁液を４８℃(内部温度)に３０分以内加熱する。ＤＬ−乳酸溶液をこの懸濁液に３０分間、４８℃で添加する。種晶を添加し(５mg  Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドＤＬ−乳酸塩、無水和物形態Ａの、０.２５ｇの水中の懸濁液として)、撹拌をさらに２時間、４８℃で続ける。温度を６５℃(内部温度)に３０分以内に上げ、本懸濁液をさらに２.５時間この温度で撹拌する。次いで温度を４８℃に２時間以内に冷却し、撹拌をこの温度でさらに２２時間続ける。生成物を濾過により単離し、フィルターケーキを脱塩水(２×１０ｇ)で洗浄する。湿潤フィルターケーキを真空で４５−５０℃で乾燥させて、無水Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドＤＬ−乳酸塩(形態Ａ)を結晶性生成物として得る。溶融および分解は共に１８８．３℃で起こる。
【００７６】
実施例２０
ＤＬ−乳酸塩一水和物からＤＬ−乳酸塩無水物への変換
ＤＬ−乳酸(０.５９ｇ、８５％水溶液、純粋ＤＬ−乳酸０.５ｇに対応)を水(４.１ｇ)で希釈し、その溶液を９０℃(内部温度)で１５時間加熱する。本溶液を室温に冷却し、以下の塩形成工程で乳酸溶液として使用する。
【００７７】
１０ｇのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドＤＬ−乳酸塩一水和物を４首反応フラスコに入れる。水(１１０.９ｇ)を添加し、続いて乳酸溶液を添加する。乳酸の添加用漏斗を水(１５.６５ｇ)で濯ぐ。本懸濁液を８２℃(内部温度)に加熱して、溶液を得る。本溶液を１５分間、８２℃で撹拌し、他の反応フラスコに熱濾過して、透明溶液を得る。温度を５０℃に冷却し、種晶を添加する(１０mg  Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドＤＬ−乳酸塩、無水和物形態の、０.５ｇの水中の懸濁液として)。温度を３３℃に冷却し、撹拌をさらに１９時間この温度で続ける。形成した懸濁液を再び６５℃(内部温度)に４５分以内に加熱し、６５℃で１時間撹拌し、３３℃に１時間以内に冷却する。３３℃でさらに３時間撹拌後、生成物を濾過により単離し、湿潤フィルターケーキを水(５０ｇ)で洗浄する。生成物を真空で５０℃で乾燥させて、結晶性無水Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドＤＬ−乳酸塩(形態Ａ)を得る。
【００７８】
実施例２１
無水ＤＬ−乳酸塩の形成
ＤＬ−乳酸(８.０ｇ、８５％水溶液、純粋ＤＬ−乳酸６.８ｇに対応)を水(５４.４ｇ)で希釈し、その溶液を９０℃(内部温度)で１５時間加熱する。本溶液を室温に冷却し、以下の塩形成工程で乳酸溶液として使用する。
【００７９】
Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基、形態ＨＡ(２０ｇ)を１Ｌガラスリアクターに入れ、エタノール／水(２０９.４ｇの１：１ｗ／ｗ混合物)を添加する。明黄色懸濁液を６０℃(内部温度)に３０分以内に加熱し、乳酸溶液を３０分間この温度で添加する。添加用漏斗を水(１０ｇ)で濯ぐ。本溶液を３８℃に２時間以内に冷却し、種晶(２０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドＤＬ−乳酸塩、無水和物形態)を３８℃で添加する。３８℃でさらに２時間撹拌後、混合物を２５℃に６時間以内に冷却する。２５℃から１０℃への冷却を５時間以内、１０℃から５℃への冷却を４時間以内および５℃から２℃への冷却を１時間以内続ける。本懸濁液をさらに２時間、２℃で撹拌し、生成物を濾過により単離する。湿潤フィルターケーキを水(２×３０ｇ)で洗浄し、生成物を真空で４５℃で乾燥させて、結晶性無水Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドＤＬ−乳酸塩(形態Ａ)を得る。
【００８０】
実施例２２
ナトリウム塩の形成
約５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基一水和物を１mlのメタノールに懸濁した。化学量論量の水酸化ナトリウムをその後懸濁液に添加した。本混合物を５０℃で撹拌した。透明溶液が形成されたら、撹拌を４℃で続けた。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤおよびＴＧＡで分析した。Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのナトリウム塩を黄色の非常に吸湿性の粉末として単離し、それは濾過中に水分を吸収した。
【００８１】
実施例２３
カリウム塩の形成
約５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基一水和を１mlのメタノールに懸濁した。化学量論量の水酸化カリウムをその後懸濁液に添加した。本混合物を５０℃で撹拌した。透明溶液が形成されたら、撹拌を４℃で続けた。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤおよびＴＧＡで分析した。Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのカリウム塩を黄色の非常に吸湿性の粉末として単離し、それは濾過中に水分を吸収した。
【００８２】
実施例２４
カルシウム塩の形成
約５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基一水和物を１mlのメタノールに懸濁した。化学量論量の水酸化ナトリウムをその後懸濁液に添加した。本混合物を５０℃で撹拌した。透明溶液が形成されたら、化学量論量の二塩化カルシウムを添加し、直ぐに帯黄色固体沈殿が誘発された。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤおよびＴＧＡで分析した。Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのカルシウム塩はＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのナトリウムまたはカリウム塩より吸湿性が低く、容易に単離できた。
【００８３】
実施例２５
亜鉛塩の形成
約５０mgのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基一水和物を１mlのメタノールに懸濁した。化学量論量の水酸化ナトリウムをその後懸濁液に添加した。本混合物を５０℃で撹拌した。透明溶液が形成されたら、化学量論量の硫酸亜鉛を添加し、直ぐに帯黄色固体沈殿が誘発された。固体を濾過により回収し、ＸＲＰＤおよびＴＧＡで分析した。Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの亜鉛塩はＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのナトリウムまたはカリウム塩より吸湿性が低く、容易に単離できた。
【００８４】
実施例２６
塩酸塩の形成
３.６７ｇ(１０mmol)の遊離塩基一水和物(Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド)および４０mlの無水エタノールを、マグネティック・スターラーおよび添加用漏斗を備えた２５０ml  ３首フラスコに入れた。撹拌しているこの懸濁液に、７.５mlの２Ｍ  ＨＣｌ(１５mmol、５０％過剰)を滴下し、透明溶液をもたらした。白色固体が１０分以内に析出し、撹拌を環境でさらに２時間続けた。本混合物を氷浴で約３０分間冷却し、白色固体を濾過により回収した。それを１回冷エタノール(１０ml)で洗浄し、一晩真空下で乾燥させて、３.７２ｇのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの塩化物を得た(９６.２％)。
【００８５】
ＨＣｌを収率を改善するために過剰で用いたが、等モル量でも８０％を超える収率を提供したことは注目すべきである。メチル−１Ｈ−インドール−３−イル環のプロトン化を介した二塩形成は、ＨＣｌを大過剰で使用したときでさえ起こらない。１、１.５、および２当量のＨＣｌは、生成物として同じ一塩化物を提供した。加えて、ＮＭＲデータは、プロトン化により起こるであろう環近接でのプロトンのシフトを何等示さない。
【００８６】
実施例２７
Ｌ−酒石酸塩の形成
３.６７ｇ(１０mmol)の遊離塩基一水和物(Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド)および５０mlの無水エタノールを、マグネティック・スターラーおよび添加用漏斗を備えた２５０ml  ３首フラスコに入れた。本混合物を６０℃に加熱し、熱懸濁液に１５ml  無水エタノールに溶解した０.８３ｇ(５.５mmol、１０％過剰)のｌ−酒石酸を滴下した。最初に、大きな黄色の凝集塊がされ、それが適切な撹拌を妨害したが、経時的にこれは自由に誘導し、撹拌できる黄色粉末へと変換した。撹拌を６０℃で２時間続けた。本混合物を続いて室温に冷却し、氷浴に約３０分間入れた。本黄色粉末を濾過により回収し、１回冷無水エタノール(１０ml)で洗浄した。それを一晩真空下で乾燥させ、４.１ｇのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのｌ−酒石酸(ヘミ酒石酸)塩を得た(９６.６％)。
【００８７】
実施例２８
ＤＬ−乳酸一水和物塩の形成
３.６７ｇ(１０mmol)の遊離塩基一水和物、形態ＨＡ(Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド)および７５mlのアセトンを、マグネティック・スターラーおよび添加用漏斗を備えた２５０ml  ３首フラスコに入れた。この撹拌している懸濁液に、２０ml  アセトンに溶解した１０mlの１Ｍ  乳酸水溶液(１０mmol)を滴下し、透明溶液を得た。撹拌を環境で続け、約１時間後白色固体が析出した。本混合物を氷浴で冷却し、さらに１時間撹拌した。本白色固体を濾過により回収し、１回冷アセトン(１５ml)で洗浄した。それを続いて真空下で乾燥させて、３.９４ｇのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのＤＬ−乳酸一水和物塩を得た(８６.２％)。
【００８８】
実施例２９
メシル酸塩の形成
３.６７ｇ(１０mmol)遊離塩基一水和物(Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド)および７５mlの酢酸エチルを、メカニカル・スターラーおよび添加用漏斗を備えた２５０ml  ３首フラスコに入れた。この撹拌している懸濁液に、２０mlの酢酸エチルに溶解した０.６５ml(１０mmol)のメタンスルホン酸を滴下し、自由に流動する黄色粉末の撹拌可能な懸濁液を得た。本混合物を５０℃に加熱し、そこに一晩維持し、その間に黄色粉末が白色固体に変わった。本懸濁液を室温に冷却し、白色固体を濾過により回収した。それを１回冷酢酸エチル(１５ml)で洗浄し、一晩真空下で乾燥させて、４.３８ｇのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのメシル酸塩を得た(９８.３％)。
【００８９】
最初に形成された黄色粉末は、等モル量を超えるメタンスルホン酸を含むメシル酸塩の多形であることは注意すべきである。その結果、この固体は、非常に高度に吸湿性である。４０または５０℃で２〜４時間以内の穏やかな加熱により、この黄色粉末は、等モル量のメタンスルホン酸を含む白色結晶性固体に変わる。この塩は非吸湿性である。メタンスルホン酸を環境温度で添加し、その後温度に加熱することも注意すべきである。高温での添加は、塩の柔らかくそしてガム状物質としての即時の沈殿をもたらすことが観察された。
【００９０】
実施例３０
マレイン酸塩の形成
３.６７ｇ(１０mmol)の遊離塩基一水和物(Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド)および７５mlのアセトンを、メカニカル・スターラーおよび添加用漏斗を備えた２５０ml  ３首フラスコに入れた。本混合物を４５℃に加熱し、この懸濁液に、２５ml  アセトンに溶解した１.１６ｇ(１０mmol)のマレイン酸を滴下した。添加はゆっくりであったが、本塩は、撹拌を妨げる柔らかいガム状固体として析出した。撹拌を一晩、４５℃で続け、その間に固体は白色の自由に流動する粉末に変わった。本混合物を室温に冷却し、氷浴に約３０分間入れた。本白色固体を濾過により回収し、１回冷アセトン(１５ml)で洗浄し、一晩、真空下で乾燥させて、４.２１ｇのＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドのマレイン酸塩を得た(９０.５％)。
【００９１】
合成のためのより好ましい溶媒は２−プロパノールであることは注意すべきである。しかしながら、最適化中に、所望の形態に加えて、低分解温度(１１８.９℃)の他の多形が、黄色粉末として２−プロパノールから単離され得ることが観察された。
【００９２】
実施例３１
無水Ｌ−(＋)−乳酸塩の形成
Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基(２０.０ｇ)を、実施例１９に記載の方法に従いＬ−(＋)−乳酸(６.８ｇ)で処理して、結晶性Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドＬ−(＋)−乳酸塩、無水形態を得た。溶融および分解は共に１８４.７℃で起こる。ＸＲＰＤパターンは図３Ｄに示す通りである(２θ＝９.９、１１.４、１３.８、１８.１、１８.５、１９.７、２０.２、２１.６、２５.２、２９.９)。
【００９３】
実施例３２
無水Ｄ−(−)−乳酸塩の形成
Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド遊離塩基(２０.０ｇ)を、実施例１９に記載の方法に従いＤ−(−)−乳酸(６.８ｇ)で処理して、結晶性Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドＤ−(−)−乳酸塩、無水形態を得た。溶融および分解は共に１８４.１℃で起こる。ＸＲＰＤパターンは図３Ｅに示す通りである(２θ＝９.９、１１.４、１３.８、１８.１、１８.５、１９.７、２０.２、２１.６、２５.２)。
【００９４】
遊離塩基、塩酸塩、ＤＬ−乳酸塩、マレイン酸塩、メシル酸塩および酒石酸塩の物理的特徴付け
Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの遊離塩基、塩化物、マレイン酸塩、メシル酸塩および酒石酸塩各々について多くの実験を行い、すなわち、元素組成、化学量論、純度、融解または分解点、飽和溶液のｐＨ、溶解性、熱重量分析、吸湿性特性、固有の溶解および安定性を決定するために行った。
【００９５】
ＨＰＬＣ法：
装置：Agilent 1100
カラム：Zorbax SB-C18(３.５μm)、１５０mm  Ｌ×３.０mm  ＩＤ
移動相：(Ａ)  ０.１％トリフルオロ酢酸水溶液(ｖ／ｖ)
(Ｂ)  ０.１％トリフルオロ酢酸のアセトニトリル溶液(ｖ／ｖ)
流速：０.８mL／分
カラム温度：５０℃
勾配：
【表１８】
0005771257.tif 000020
注入容量：５μL
注入質量：１μg
検出：ＵＶ、２８０nm
サンプル溶媒：メタノール
【００９６】
全サンプルを、ＨＰＬＣ分析前にメタノール中０.２mg／mLの濃度に調製／希釈した。各塩の新たに調製したサンプルを外部標準較正分析のための参照標準として使用した。
【００９７】
ＬＣ／ＭＳ分析：
【表１９】
0005771257.tif 000021
【００９８】
１Ｈ−ＮＭＲ  スペクトルをＤＭＳＯ−ｄ６中で記録した。
【００９９】
ＤＳＣ：全６種の物質は融解前に分解し、それ故に示差走査熱量測定は適用不可能であった。
【０１００】
ｐＨ値：水中の医薬物質の飽和溶液または１％懸濁液の室温でのｐＨを記録した。
【０１０１】
水溶性：注意深く秤量した一定量(２０−５０mg)のサンプルを１mlの溶媒に溶解し、２４時間室温での平衡を伴う。溶解性を重量測定法またはＵＶ−ＶＩＳ分光分析のいずれかにより測定した。透明溶液のｐＨもまた測定した。しかしながら、溶解により遊離形への解離が可能であり、それが溶解性およびｐＨの両方に影響するため、塩の水への溶解性の測定の困難さは強調すべきである。報告された溶解性より相当低い濃度で塩溶液を形成する試みが不成功であることは起こりそうもないことではない(完全な検討について：M. Pudipeddi, A. T. M. Serajuddin, D. J. W. Grant, and P. H. Stahl in “Handbook of Pharmaceutical Salts Properties Selection and Use”、２７頁およびその中の引用文献を参照のこと)。
【０１０２】
報告された溶解性の濃度より低いメシル酸塩の溶液を最初は製造できたが、貯蔵時間が経つに連れて固体の沈殿が起きた。加えて、メシル酸塩水溶液性溶液について、多形転移が観察された。両方の場合の残渣をマススペクトルで分析し、遊離塩基であることが判明し、この沈殿が分解産物ではないことを示す。
【０１０３】
固有の溶解：約３０mgの各物質を０.１３cm２のペレットに圧縮した。遊離塩基ペレットのほとんどは水性溶解媒体と接触の血に分解し、それ故に上記の溶解速度は遊離塩基の真の固有の溶解に対応していない。０.１Ｎ  ＨＣｌ中、遊離塩基ペレットは完全に溶解し、溶解速度は測定しなかった。他の塩のペレットは少なくとも数分間完全なままであり、固有の溶解速度を測定できた。溶解速度試験を回転ディスク法(VanKell装置)で行った。２００r.p.m.の一回転速度を使用して医薬物質を５００mL容器に３７℃で溶解した。本溶液を続いてＵＶセル測定を通してポンプ輸送し、および本溶解容器に戻した。
【０１０４】
上記試験の結果を以下の表１８に示す。
【表２０】
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【０１０５】
表１８に示す通り、塩の各々は遊離塩基の溶解性より約３桁優れている。塩酸塩、マレイン酸塩およびＬ−酒石酸塩は約０.３％の非常に類似した溶解性を有する。メシル酸塩は１.３％で全ての中で最も可溶性である。(大凡の溶解性を、溶液の密度を１ｇ／mLと仮定して、mg／mLの濃度から推算した。)固有の溶解速度はそれに応じて変化した。
【０１０６】
加えて、一水和物ＤＬ−乳酸塩および無水ＤＬ−乳酸塩の各々について、多くの実験を行い、すなわち、純度、融解または分解点、熱重量分析、吸湿性特性および固有の溶解を決定するために行った。これらの実験の結果を以下の表１９に示す。
【表２１】
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【０１０７】
また撹拌実験も一水和物および無水ＤＬ−乳酸塩について行った。特に、ＤＬ−乳酸塩の形態ＡとＨＡの混合物を一定および温度にわたり撹拌した。これらの実験の結果を以下の表２０および２１に示す。
【表２２】
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【表２３】
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【０１０８】
Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの遊離塩基、塩酸塩、マレイン酸塩、一水和物ＤＬ−乳酸塩、メシル酸塩およびヘミ酒石酸塩各々の溶液中(表２２)、固体状態(表２３)および賦形剤混合物(表２４)存在下での安定性もまた測定した。
【表２４】
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【表２５】
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【表２６】
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【０１０９】
Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの遊離塩基、塩酸塩、ＤＬ−乳酸塩、マレイン酸塩、メシル酸塩および酒石酸塩の各々は、溶液および固体状態の両方で非常に良好な安定性特性を示した。大凡、１.５％の総分解が、乳酸塩緩衝液(ｐＨ３.５)、水、およびメタノール中の溶液としての全塩および遊離塩基について観察された。塩もまた、試験したすべてのtox溶液において非常に良好な安定性も示した(ＣＭＣ、ＨＰＭＣ、ＫｌｕｃｅｌおよびＴｗｅｅｎ−８０)。
【０１１０】
加えて、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドの遊離塩基、塩酸塩、ＤＬ−乳酸塩、マレイン酸塩、メシル酸塩および酒石酸塩各々はまた、５０℃／７５％ｒ.ｈ.で２週間後、試験した全賦形剤混合物で非常に良好な安定性を示した。
【０１１１】
追加的試験
以下に記載の塩の大凡の溶解性を、５−１５mgの塩を１mLの溶媒に懸濁することにより水およびｐＨ１で測定した。サンプルを環境温度で少なくとも２０時間平衡した。上清を濾過し、溶解性測定に使用し、それは水のいては重量測定法で、およびｐＨ１についてはＵＶ−ＶＩＳ分光学で行った。固体残渣をＸＲＰＤにより分析した。さらに、以下に記載の塩の固体サンプルを、７日間または１０日間のいずれか９３％ｒ.ｈ.に保持した。続いてそれらをＸＲＰＤおよびＴＧＡで測定した(後者が必要であると思われるならば)。不可逆性のまたはゆっくりした可逆性事象のみが検出できる。結果を以下の表２５に記載する。
【表２７】
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【０１１２】
上記表２５に見ることができる通り、ほとんどの塩は、９３％ＲＨで７日間または１０日間のいずれかの貯蔵後に何等不可逆性転移をしなかった。しかしながら、以下の観察が注目された：酢酸塩は新規形態に変換され、それはまた塩水溶液の平衡により単離された。この新規形態は恐らく水和物を形成している。
【０１１３】
平衡水溶液からの固体残渣をＸＲＰＤおよび必要であると思われるならば他の技術で試験した。結果を以下の通り要約できる：
・  クエン酸、ゲンチシン酸、リンゴ酸およびリン酸の塩で構造変化は観察されなかった。
・  プロピオン酸塩平衡の固体残渣は遊離塩基のみから成った。
・  酢酸塩、安息香酸塩、フマル酸塩およびコハク酸塩は新規塩多形に変換した。
【０１１４】
ＸＲＰＤ分析が、プロピオン酸塩以外の全例で、溶液が対応する塩と平衡にあることを示したとの事実から、表２５における水性溶解性は塩を表す(Chapter 2, in Handbook of Pharmaceuticals Salts;Authors: M. Pudipeddi, A. T. M. Serajuddin, D. J. W. Grant, and P. H. Stahl)。
【０１１５】
ｐＨ１緩衝液溶液中での平衡中、全塩とも塩化物に変換した。これは０.３〜０.６mg／mlの間に入る、観察された狭い範囲の溶解性に反映されている(塩化物についてＳ＝０.２５mg／mL)。
【０１１６】
本発明をその具体的態様を参照して上記に記載しているが、多くの変化、修飾および変形がここに記載された本発明の概念から逸脱することなく成し得ることは明らかである。したがって、添付の請求の範囲の精神および広い範囲に入る全てのこのような変化、修飾および変形を包含することを意図する。ここに引用された全ての特許明細書、特許および他の刊行物は、その全体を引用により本明細書に包含させる。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図４】
0005771257.tif 000037
【図５】
0005771257.tif 000038
【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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