(57)【要約】本明細書は、改変クロストリジウム毒素、かかる毒素を含む組成物および、かかる改変クロストリジウム毒素および組成物を用いる哺乳類における慢性神経性炎症を治療する方法を開示する。
2011514307.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類における慢性神経性炎症を治療する方法であって、必要とする哺乳類に治療上有効量の、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む改変クロストリジウム毒素を含む組成物を投与する工程を含み、ここで、組成物の投与が炎症誘導性分子の放出を低下させ、それにより、慢性神経性炎症に関連する症状が軽減される方法。
【請求項２】
改変クロストリジウム毒素が、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシルへの直線状の順序で、1)クロストリジウム毒素酵素ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン、2)クロストリジウム毒素酵素ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、3)オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、およびクロストリジウム毒素酵素ドメイン、4)オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、5)クロストリジウム毒素転位置ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメインおよびオピオイドペプチド結合ドメイン、または6)クロストリジウム毒素転位置ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン およびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む請求項 1の方法。
【請求項３】
オピオイドペプチド結合ドメインが、エンケファリン、BAM22 ペプチド、エンドモルフィン、エンドルフィン、ダイノルフィン、ノシセプチンまたはヘモルフィンである請求項 1の方法。
【請求項４】
クロストリジウム毒素転位置ドメインが、BoNT/A 転位置ドメイン、BoNT/B 転位置ドメイン、BoNT/C1 転位置ドメイン、BoNT/D 転位置ドメイン、BoNT/E 転位置ドメイン、BoNT/F 転位置ドメイン、BoNT/G 転位置ドメイン、TeNT 転位置ドメイン、BaNT 転位置ドメイン、またはBuNT 転位置ドメインである請求項 1の方法。
【請求項５】
クロストリジウム毒素酵素ドメインが、BoNT/A 酵素ドメイン、BoNT/B 酵素ドメイン、BoNT/C1 酵素ドメイン、BoNT/D 酵素ドメイン、BoNT/E 酵素ドメイン、BoNT/F 酵素ドメイン、BoNT/G 酵素ドメイン、TeNT 酵素ドメイン、BaNT 酵素ドメイン、またはBuNT 酵素ドメインである請求項 1の方法。
【請求項６】
哺乳類における慢性神経性炎症を治療する方法であって、必要とする哺乳類に治療上有効量の、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位を含む改変クロストリジウム毒素を含む組成物を投与する工程を含み、ここで、組成物の投与が、炎症誘導性分子の放出を低下させ、それによって慢性神経性炎症に関連する症状が低減される方法。
【請求項７】
改変クロストリジウム毒素が、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシルへの直線状の順序で、 1)クロストリジウム毒素酵素ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン、2)クロストリジウム毒素酵素ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、3)オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位およびクロストリジウム毒素酵素ドメイン、4)オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、5)クロストリジウム毒素転位置ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素酵素ドメインおよびオピオイドペプチド結合ドメイン、または6)クロストリジウム毒素転位置ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、オピオイドペプチド結合ドメイン およびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む請求項 6の方法。
【請求項８】
オピオイドペプチド結合ドメインが、エンケファリン、BAM22 ペプチド、エンドモルフィン、エンドルフィン、ダイノルフィン、ノシセプチンまたはヘモルフィンである請求項 6の方法。
【請求項９】
クロストリジウム毒素転位置ドメインが、 BoNT/A 転位置ドメイン、BoNT/B 転位置ドメイン、BoNT/C1 転位置ドメイン、BoNT/D 転位置ドメイン、BoNT/E 転位置ドメイン、BoNT/F 転位置ドメイン、BoNT/G 転位置ドメイン、TeNT 転位置ドメイン、BaNT 転位置ドメイン、またはBuNT 転位置ドメインである請求項 6の方法。
【請求項１０】
クロストリジウム毒素酵素ドメインが、BoNT/A 酵素ドメイン、BoNT/B 酵素ドメイン、BoNT/C1 酵素ドメイン、BoNT/D 酵素ドメイン、BoNT/E 酵素ドメイン、BoNT/F 酵素ドメイン、BoNT/G 酵素ドメイン、TeNT 酵素ドメイン、BaNT 酵素ドメイン、またはBuNT 酵素ドメインである請求項 6の方法。
【請求項１１】
外来性プロテアーゼ切断部位が、植物パパイン切断部位、昆虫パパイン切断部位、甲殻類パパイン切断部位、エンテロキナーゼ切断部位、ヒトライノウイルス 3C プロテアーゼ切断部位、ヒトエンテロウイルス 3C プロテアーゼ切断部位、タバコエッチウイルスプロテアーゼ切断部位、タバコ葉脈はん紋ウイルス切断部位、サブチリシン切断部位、ヒドロキシルアミン切断部位、またはカスパーゼ 3 切断部位である請求項 6の方法。
【請求項１２】
必要とする哺乳類における慢性神経性炎症の治療用医薬の製造における改変クロストリジウム毒素の使用であって、改変クロストリジウム毒素が、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位を含み、治療上有効量の医薬の哺乳類への投与が炎症誘導性分子の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状が低減される使用。
【請求項１３】
必要とする哺乳類における慢性神経性炎症の治療における改変クロストリジウム毒素の使用であって、該使用が哺乳類に治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を投与する工程を含み、ここで改変クロストリジウム毒素が、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位を含み、改変クロストリジウム毒素の投与が、炎症誘導性分子の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状が低減される使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本特許出願は、2007年10月23日出願の米国仮特許出願第 60/982,021号、2008年6月27日出願の米国仮特許出願第 61/076,228 号および2008年9月10日出願の米国仮特許出願第 61/090,692号からの35 U.S.C. § 119(e)にしたがう優先権を主張し、これらは引用によりその全体を本明細書に含める。
【背景技術】
【０００２】
クロストリジウム毒素、例えば、ボツリヌス神経毒(BoNT)、BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C1、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/FおよびBoNT/G、ならびに破傷風(Tetanus)神経毒 (TeNT)が神経伝達を阻害する能力は、多種多様な治療および美容用途に用いられており、例えば、William J. Lipham, COSMETIC AND CLINICAL APPLICATIONS OF BOTULINUM TOXIN (Slack, Inc., 2004)を参照されたい。医薬組成物として市販されているクロストリジウム毒素としては、BoNT/A 調製物、例えば、BOTOX（登録商標）(Allergan、Inc.、Irvine、CA)、Dysport（登録商標）/Reloxin（登録商標）、(Beaufour Ipsen、Porton Down、England)、Linurase（登録商標） (Prollenium、Inc.、Ontario、Canada)、Neuronox（登録商標） (Medy-Tox, Inc.、Ochang-myeon、South Korea)、BTX-A (Lanzhou Institute Biological Products、China)およびXeomin（登録商標） (Merz Pharmaceuticals、GmbH.、Frankfurt、Germany)；ならびにBoNT/B 調製物、例えば、MyoBloc（商標）/NeuroBloc（商標） (Elan Pharmaceuticals、San Francisco、CA)が挙げられる。一例として、BOTOX（登録商標） は以下の適応症のために１以上の国で現在認可されている: アカラシア、成人性痙縮、裂肛、背部痛、眼瞼痙攣、歯ぎしり、痙性斜頚、本態性振戦、眉間のしわまたは運動過多の顔のしわ、頭痛、片側顔面痙攣、膀胱の運動亢進、多汗症、若年性脳性麻痺、多発性硬化症、ミオクローヌス性障害、鼻から唇へのしわ、攣縮性発声障害、斜視および VII 神経障害。
【０００３】
クロストリジウム毒素治療法は多くの適応症への使用が成功している。一般に、クロストリジウム毒素治療の投与は良好に耐用される。しかし、いくつかの用途における毒素投与は、有益な効果を達成するためにより多い用量が必要とされるために挑戦的でありうる。より多い用量は、毒素が身体の間質液および循環系、例えば、心血管系およびリンパ系を介して移動する可能性を上昇させ得、その結果、毒素治療の標的ではない領域への望ましくない毒素の分散が起こりうる。かかる分散は、望ましくない副作用、例えば、治療標的ではない神経細胞における神経伝達物質放出の阻害または治療標的ではない筋肉の麻痺を導きうる。例えば、治療的に有効量のBoNT/A 治療を斜頸のために頚の筋肉に投与された患者は、中咽頭への毒素の分散のために嚥下障害を起こしうる。別の例として治療上有効量のBoNT/A治療を過活動膀胱のために膀胱に投与された患者はドライマウスおよび/またはドライアイを発症しうる。したがって、治療部位において有効であるが、毒素治療の標的ではない領域においては無視できるか最小の効果しか有さない改善されたクロストリジウム毒素に対する要求がいまだに存在する。
【０００４】
クロストリジウム毒素処置は、神経伝達物質をシナプス間隙へと分泌するために用いられるエキソサイトーシスプロセスを破壊することによって神経伝達物質放出を阻害する。医薬品業界によって、感覚神経に基づく病気、例えば、様々な種類の慢性疼痛、神経性炎症および泌尿生殖障害(urogentital disorder)、ならびにその他の障害、例えば、膵炎の治療のための現在のその筋弛緩用途を超えるクロストリジウム毒素治療の使用を拡大することが大きく望まれている。クロストリジウム毒素に基づく治療を拡大するために現在用いられている１つのアプローチは、クロストリジウム毒素を改変することを伴い、それにより、改変毒素が非クロストリジウム毒素標的細胞のための変化した細胞ターゲティング能力を有するようにすることである。この再標的化能力は、クロストリジウム毒素の天然ターゲティングドメインを非クロストリジウム毒素標的細胞に存在する非クロストリジウム毒素受容体に対する選択的結合活性を示すターゲティングドメインによって置換することにより達成される。ターゲティングドメインに対するかかる改変の結果、非クロストリジウム毒素標的細胞 (再標的化(re-targeted))に存在する非クロストリジウム毒素受容体 (標的受容体)に選択的に結合することが出来る改変毒素が生じる。非クロストリジウム毒素標的細胞へのターゲティング活性を有する改変クロストリジウム毒素は、非クロストリジウム毒素標的細胞に存在する受容体に結合し、細胞質へと転位置し、そしてその非クロストリジウム毒素標的細胞のSNARE複合体に対するタンパク分解効果を発揮することができる。 
【０００５】
神経性炎症は、感覚ニューロンからの炎症性メディエーターおよび増感化合物の局所性放出を最終的には導く複雑な生物学的プロセスによって媒介される一連の血管および非血管炎症応答を包含する。有害な刺激、例えば、病原体、細胞に対する傷害、または刺激物により傷害を受けると、炎症媒介性および増感分子、例えば、ヒスタミン、プロスタグランジン、ロイコトリエン、セロトニン、中性プロテアーゼ、サイトカイン、ブラジキニンおよび一酸化窒素が、炎症媒介性細胞、例えば、肥満細胞、免疫細胞、血管内皮細胞、および血管平滑筋細胞から放出される。引用によりその全体を本明細書に含めるJennelle Durnett Richardson and Michael R. Vasko, Cellular Mechanisms of Neurogenic Inflammation, 302(3) J. Pharmacol. Exp. Ther. 839-845 (2002)を参照されたい。これら炎症媒介性および増感分子は感覚ニューロンに作用して、末梢神経終末からの炎症誘導性分子、例えば、神経ペプチド、例えばサブスタンスP (SP)およびカルシトニン遺伝子関連ペプチド (CGRP)、プロスタグランジン、およびアミノ酸、例えばグルタミン酸の放出を刺激する。放出されると、これら炎症誘導性分子は、典型的には以下によって特徴づけられる炎症応答の誘発の原因となる：浮腫 (血漿の浸出に二次的な膨潤)、過敏症 (特定の感覚ニューロンの興奮性の変化に二次的)、および刺激部位を超えて広がる(炎症応答)紅斑 (血管拡張に二次的な発赤および温感)。前掲。基礎となる炎症症状は一次感覚ニューロンの活性化および次いで炎症誘導性分子の放出により引き起こされるので、応答は神経性炎症と名付けられる。
【０００６】
通常、神経性炎症は、有害な刺激を除き、損傷組織の治癒プロセスを開始させる生物による保護機構として役立つ。この急性神経性炎症は、組織の完全性を維持し、組織修復に貢献することにより防御の第一線を形成する。実際、急性神経性炎症の非存在下では、創傷および感染は治癒せず、組織の進行性の破壊が生物の生存を損なうであろう。しかし、重篤または長期の侵害刺激は慢性神経性炎症応答をもたらし、修復を媒介するよりもむしろ傷害を誘発する。この慢性神経性炎症は、広範なヒトの疾患の基礎にある広範な関連しない障害の病態生理学に関係している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
慢性神経性炎症を治療しようとする試みの成功には限界がある。これは部分的には、慢性神経性炎症の病因学が、様々な炎症誘導性分子および重複するメカニズムを介して炎症を誘発するようである多数の炎症媒介性および増感分子に部分的には基づく複雑な応答であるという事実に起因する。Richardson ＆ Vasko、302(3) J. Pharmacol. Exp. Ther. 839-845 (2002)参照。それゆえ、感覚ニューロンからの炎症誘導性分子の慢性放出を妨げることができる化合物および方法が、慢性神経性炎症の治療のために非常に望ましいと考えられる。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本明細書は、慢性神経性炎症を患う個体の治療のための改変クロストリジウム毒素組成物および方法を開示する。これは必要とする個体に治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を含む組成物を投与することによって達成される。開示される方法は、慢性神経性炎症の治療のために、安全かつ安価で、外来患者に基づく治療を提供する。 
【０００９】
したがって、本発明の側面は、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む改変クロストリジウム毒素を含む組成物を提供する。かかる組成物の開発に有用な改変クロストリジウム毒素は、例えば、Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Non-Clostridial Toxin Target Cells、米国特許出願第11/776,075号(Jul. 11、2007)； Dolly, J.O. et al., Activatable Clostridial Toxins、米国特許出願第11/829,475号 (Jul. 27、2007)； Foster, K.A. et al., Fusion Proteins、国際特許出願公開 WO 2006/059093 (Jun. 8、2006)；および Foster, K.A. et al., Non-Cytotoxic Protein Conjugates、国際特許出願公開 WO 2006/059105 (Jun. 8、2006)において記載されており、そのそれぞれはその全体を引用により本明細書に含める。改変クロストリジウム毒素を含む組成物は医薬組成物でありうる。かかる医薬組成物は、改変クロストリジウム毒素に加えて、医薬用担体、医薬成分、またはその両方を含みうる。
【００１０】
本発明の別の側面は、哺乳類における神経性炎症の治療方法を提供し、該方法は、必要とする哺乳類に、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む改変クロストリジウム毒素を含む治療上有効量の組成物を投与する工程を含み、ここで、組成物の投与は炎症誘導性分子の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。本明細書に開示されるいずれの改変クロストリジウム毒素も利用可能であると想定され、例えば、Steward、前掲、(2007)； Dolly、前掲、(2007)； Foster、前掲、WO 2006/059093 (2006)；および Foster、前掲、WO 2006/059105 (Jun. 8、2006)に開示のものが含まれる。  
【００１１】
本発明の別の側面は、哺乳類における神経性炎症の治療方法を提供し、該方法は、必要とする哺乳類に、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位を含む改変クロストリジウム毒素を含む治療上有効量の組成物を投与する工程を含み、ここで、組成物の投与は炎症誘導性分子の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。本明細書に開示されるいずれの改変クロストリジウム毒素も利用可能であると想定され、例えば、Steward、前掲、(2007)； Dolly、前掲、(2007)； Foster、前掲、WO 2006/059093 (2006)；および Foster、前掲、WO 2006/059105 (Jun. 8、2006) に開示のものが含まれる。
【００１２】
本発明のさらに別の側面は、必要とする哺乳類における慢性神経性炎症の治療用医薬の製造における改変クロストリジウム毒素の使用を提供し、ここで、改変クロストリジウム毒素はオピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含み、ここで、治療上有効量の医薬の哺乳類への投与は炎症誘導性分子の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。本明細書に開示されるいずれの改変クロストリジウム毒素も利用可能であると想定され、例えば、Steward、前掲、(2007)； Dolly、前掲、(2007)； Foster、前掲、WO 2006/059093 (2006)；およびFoster、前掲、WO 2006/059105 (Jun. 8、2006) に開示のものが含まれる。
【００１３】
本発明のさらに別の側面は、必要とする哺乳類における慢性神経性炎症の治療における改変クロストリジウム毒素の使用を提供し、該使用は、哺乳類に治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を投与する工程を含み、ここで、改変クロストリジウム毒素はオピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメインを含み、改変クロストリジウム毒素の投与は炎症誘導性分子の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。本明細書に開示されるいずれの改変クロストリジウム毒素も利用可能であると想定され、例えば、Steward、前掲、(2007)； Dolly、前掲、(2007)； Foster、前掲、WO 2006/059093 (2006)； およびFoster、前掲、WO 2006/059105 (Jun. 8、2006) に開示のものが含まれる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図1は、中枢および末梢神経細胞における神経伝達物質放出およびクロストリジウム毒素中毒の現在のパラダイムの模式図を示す。図1Aは、中枢および末梢神経細胞の神経伝達物質放出機構の模式図を示す。放出プロセスは２工程を含むものとして記載できる: 1)小胞ドッキング、ここで、神経伝達物質分子を含む小胞の小胞に結合したSNARE タンパク質が、細胞膜に位置する膜に結合した SNARE タンパク質と結合する；および、2) 神経伝達物質放出、ここで、小胞が細胞膜と融合し、神経伝達物質分子がエキソサイトーシスされる。図1Bは、中枢および末梢神経細胞における破傷風およびボツリヌス毒素活性についての中毒機構の模式図を示す。この中毒プロセスは、４工程を含むものとして記載できる: 1) 受容体結合、ここで、クロストリジウム毒素がクロストリジウム受容体系に結合し、中毒プロセスを開始する； 2) 複合体インターナリゼーション、ここで毒素結合の後、毒素/受容体系複合体を含む小胞が細胞内にエンドサイトーシスされる； 3) 軽鎖転位置、ここで複数の事象が起こると考えられ、例えば、小胞の内部pHの変化、クロストリジウム毒素重鎖のHN ドメインを含むチャンネル孔の形成、クロストリジウム毒素軽鎖の重鎖からの分離、および活性軽鎖の放出； および 4) 酵素による標的改変、ここで、クロストリジウム毒素の活性軽鎖が、その標的SNARE基質、例えば、SNAP-25、VAMPまたはシンタキシンをタンパク分解により切断し、それにより小胞ドッキングおよび神経伝達物質放出が阻止される。
【図２】図2は、天然クロストリジウム毒素のドメイン編成を示す。一本鎖形態は、酵素ドメイン、転位置ドメイン、およびオピオイドペプチド結合ドメインを含むアミノからカルボキシルへの直鎖状編成を示す。転位置および酵素ドメインの間に位置する二本鎖ループ領域を二重SSブラケットによって示す。この領域は、天然プロテアーゼ、例えば、内因性クロストリジウム毒素プロテアーゼまたは環境中にて生じた天然プロテアーゼによるタンパク分解切断時に、一本鎖形態の毒素を二本鎖形態に変換する内因性二本鎖ループプロテアーゼ切断部位を含む。一本鎖形態の上に、クロストリジウム毒素結合ドメインのHCC 領域を示す。この領域は、β-三葉型ドメインを含み、アミノからカルボキシルへの直鎖状編成にてα-フォールド、β4/β5 ヘアピンターン、β-フォールド、β8/β9 ヘアピンターンおよびγ-フォールドを含む。
【図３】図3は、改変毒素のアミノ末端に位置する増強したターゲティングドメインを有する改変クロストリジウム毒素を示す。図3Aは、アミノからカルボキシルへの直鎖状編成にて、結合要素、転位置要素、外来性プロテアーゼ切断部位 (P)を含む二本鎖ループ領域、および治療要素を含む改変クロストリジウム毒素の一本鎖ポリペプチド形態を示す。P プロテアーゼによりタンパク分解切断されると、一本鎖形態の毒素は二本鎖形態に変換される。図3Bは、アミノからカルボキシルへの直鎖状編成にて、結合要素、治療要素、外来性プロテアーゼ切断部位 (P)を含む二本鎖ループ領域および転位置要素を含む改変クロストリジウム毒素の一本鎖ポリペプチド形態を示す。P プロテアーゼによりタンパク分解切断されると、一本鎖形態の毒素は二本鎖形態に変換される。
【図４】図4は、他の２つのドメインの間に位置する増強したターゲティングドメインを有する改変クロストリジウム毒素を示す。図4Aは、アミノからカルボキシルへの直鎖状編成にて、治療要素、外来性プロテアーゼ切断部位 (P)を含む二本鎖ループ領域、結合要素、および転位置要素を含む改変クロストリジウム毒素の一本鎖ポリペプチド形態を示す。P プロテアーゼによりタンパク分解切断されると、一本鎖形態の毒素は二本鎖形態に変換される。図4Bは、アミノからカルボキシルへの直鎖状編成にて、 転位置要素、外来性プロテアーゼ切断部位 (P)を含む二本鎖ループ領域、結合要素、および治療要素を含む改変クロストリジウム毒素の一本鎖ポリペプチド形態を示す。P プロテアーゼによりタンパク分解切断されると、一本鎖形態の毒素は二本鎖形態に変換される。図4Cは、アミノからカルボキシルへの直鎖状編成にて、治療要素、結合要素、外来性プロテアーゼ切断部位 (P)を含む二本鎖ループ領域、および転位置要素を含む改変クロストリジウム毒素の一本鎖ポリペプチド形態を示す。P プロテアーゼによりタンパク分解切断されると、一本鎖形態の毒素は二本鎖形態に変換される。図4Dは、アミノからカルボキシルへの直鎖状編成にて、転位置要素、結合要素、外来性プロテアーゼ切断部位 (P)を含む二本鎖ループ領域、および治療要素を含む改変クロストリジウム毒素の一本鎖ポリペプチド形態を示す。P プロテアーゼによりタンパク分解切断されると、一本鎖形態の毒素は二本鎖形態に変換される。
【図５】図5は、改変毒素のカルボキシル末端に位置する増強したターゲティングドメインを有する改変クロストリジウム毒素を示す。図5Aは、アミノからカルボキシルへの直鎖状編成にて、治療要素、外来性プロテアーゼ切断部位 (P)を含む二本鎖ループ領域、転位置要素、および結合要素を含む改変クロストリジウム毒素の一本鎖ポリペプチド形態を示す。P プロテアーゼによりタンパク分解切断されると、一本鎖形態の毒素は二本鎖形態に変換される。図5Bは、アミノからカルボキシルへの直鎖状編成にて、転位置要素、外来性プロテアーゼ切断部位 (P)を含む二本鎖ループ領域、治療要素、および結合要素を含む改変クロストリジウム毒素の一本鎖ポリペプチド形態を示す。P プロテアーゼによりタンパク分解切断されると、一本鎖形態の毒素は二本鎖形態に変換される。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の側面は部分的には、改変クロストリジウム毒素を提供する。本明細書において用いる場合、「改変クロストリジウム毒素」とは、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含むあらゆる分子を意味する。本発明の側面の実施に有用な例示的な改変クロストリジウム毒素は、例えば、Steward、前掲、(2007)； Dolly、前掲、(2007)； Foster、前掲、WO 2006/059093 (2006)； Foster、前掲、WO 2006/059105 (Jun. 8、2006)において開示されている。
【００１６】
クロストリジウム・ボツリヌス(botulinum)、クロストリジウム・テタニ(tetani)（破傷風菌）、クロストリジウム・バラチイ(baratii)およびクロストリジウム・ブチリクム(butyricum)により生産されるクロストリジウム毒素は、ヒトおよびその他の哺乳類の治療および美容処置に非常に広く用いられている。クロストリジウム・ボツリヌスの株は、抗原的に異なるタイプの７種のボツリヌス毒素 (BoNT)を生産し、それらはヒト(BoNT/A、/B、/Eおよび/F)、動物(BoNT/C1および/D)におけるボツリヌス中毒大流行の調査によって同定されたか、あるいは土壌から単離された(BoNT/G)。BoNTは、互いにおよそ 35％のアミノ酸同一性を有し、同じ機能的ドメイン編成および全体構造を共有する。クロストリジウム毒素の各タイプ内で、それらのアミノ酸配列において、およびこれらタンパク質をコードする核酸において、なんらか異なるサブタイプが存在しうることが、当業者に認識されている。例えば、現在４つのBoNT/A サブタイプ、BoNT/A1、BoNT/A2、BoNT/A3およびBoNT/A4が存在し、特定のサブタイプは別のBoNT/A サブタイプと比較した場合およそ89％のアミノ酸同一性を示す。７つのすべてのBoNT血清型は類似の構造および薬理特性を有するが、それぞれはまた異質な細菌学的特徴を示す。一方、破傷風毒素 (TeNT)は、クロストリジウム・テタニ（破傷風菌）の均一な群により生産される。２つの別の種のクロストリジウムである、クロストリジウム・バラチイおよびクロストリジウム・ブチリクムも、BoNT/FおよびBoNT/Eとそれぞれ類似の毒素であるBaNTおよび BuNTをそれぞれ生産する。
【００１７】
それぞれの成熟二本鎖分子は３つの機能的に異なるドメインを含む: 1)神経伝達物質放出装置のコア成分を特異的に標的化する亜鉛依存性エンドペプチダーゼ活性を含むメタロプロテアーゼ領域を含むLC に位置する酵素ドメイン； 2)細胞内小胞から標的細胞の細胞質へのLCの放出を促進するHC (HN)のアミノ-末端半分に含まれる転位置ドメイン；および 3)標的細胞の表面に位置する受容体複合体への毒素の結合活性および結合特異性を決定するHC (HC)のカルボキシル-末端半分内にある結合ドメイン。HC ドメインは機能を示すおよそ同じサイズの２つの異なる構造特徴を含み、 HCN および HCC サブドメインと称される。表 1は例示的なクロストリジウム毒素にみられる各ドメインのおよその境界領域を示す。
表1.  クロストリジウム毒素 参照配列および領域
【表１】
2011514307.tif 000003
【００１８】
これら３つの機能ドメインの結合、転位置および酵素活性はすべて毒性に必要である。このプロセスのすべての詳細はいまだに正確には知られていないが、クロストリジウム毒素が神経細胞に入り、神経伝達物質放出を阻害する、全体としての細胞中毒機構は、血清型またはサブタイプにかかわらず類似である。出願人は、以下の記載に限定されることを望まないが、中毒機構は少なくとも４工程を含むとして説明することができる： 1) 受容体結合、2) 複合体インターナリゼーション、3) 軽鎖転位置、および、4) 酵素による標的改変 (図1参照)。このプロセスは、クロストリジウム毒素のHC ドメインが、標的細胞の細胞膜表面に位置する毒素-特異的受容体系に結合すると開始する。受容体複合体の結合特異性は、部分的には、それぞれのクロストリジウム毒素受容体複合体を異なるように構成すると考えられるガングリオシドおよびタンパク質受容体の特定の組合せによって達成されると考えられている。いったん結合すると、毒素/受容体複合体はエンドサイトーシスによりインターナライズされ、インターナライズされた小胞は特定の細胞内経路へと選別される。転位置工程は、小胞区画の酸性化によりトリガーされるようである。このプロセスは、疎水性を上昇させ、毒素の二本鎖形態の形成を促進する２つの重要な pH-依存的構造再編成を開始させるようである。いったん活性化されると、毒素の軽鎖エンドペプチダーゼが細胞内小胞から細胞質ゾルへと放出され、ここでそれは特異的に神経伝達物質放出装置の３つの既知のコア成分の１つを標的化するようである。これらのコアタンパク質、小胞-結合膜タンパク質 (VAMP)/シナプトブレビン、25 kDaのシナプトソーム関連タンパク質 (SNAP-25)およびシンタキシンは、シナプス小胞ドッキングおよび神経終末での融合に必要であり、可溶性 N-エチルマレイミド-感受性 因子-付着タンパク質-受容体 (SNARE) ファミリーのメンバーを構成する。BoNT/AおよびBoNT/EはSNAP-25をカルボキシル末端領域にて切断し、それぞれ９または２６のアミノ酸セグメントを放出し、BoNT/C1もSNAP-25をカルボキシル末端付近で切断する。ボツリヌス血清型BoNT/B、BoNT/D、BoNT/F およびBoNT/G、および破傷風毒素は、VAMPの保存された中央部分に対して作用し、VAMPのアミノ末端部分を細胞質ゾルへと放出する。BoNT/C1はシンタキシンを細胞質ゾル膜表面の近くの単一の部位にて切断する。シナプスの SNAREの選択的タンパク分解は、インビボでクロストリジウム毒素により起こる神経伝達物質放出の遮断の原因である。クロストリジウム毒素のSNARE タンパク質標的は様々な非神経細胞タイプにおけるエキソサイトーシスに共通である； これら細胞において、神経細胞におけるように、軽鎖ペプチダーゼ活性がエキソサイトーシスを阻害する、例えば、Yann Humeau et al., How Botulinum and Tetanus Neurotoxins Block Neurotransmitter Release, 82(5) Biochimie. 427-446 (2000)； Kathryn Turton et al., Botulinum and Tetanus Neurotoxins: Structure, Function and Therapeutic Utility, 27(11) Trends Biochem. Sci. 552-558. (2002)； Giovanna Lalli et al., The Journey of Tetanus and Botulinum Neurotoxins in Neurons, 11(9) Trends Microbiol. 431-437, (2003)を参照されたい。
【００１９】
本発明の一つの側面において、改変クロストリジウム毒素は、部分的には、クロストリジウム毒素酵素ドメインを含む。本明細書において用いる場合、「クロストリジウム毒素酵素ドメイン」という用語は、中毒プロセスの酵素による標的改変工程を実行しうるあらゆるクロストリジウム毒素ポリペプチドを意味する。したがって、クロストリジウム毒素酵素ドメインはクロストリジウム毒素基質を特異的に標的化し、クロストリジウム毒素基質、例えば、SNAP-25 基質、VAMP 基質および シンタキシン基質などのSNARE タンパク質のタンパク分解切断を包含する。クロストリジウム毒素酵素ドメインの非限定的な例としては、例えば、BoNT/A 酵素ドメイン、BoNT/B 酵素ドメイン、BoNT/C1 酵素ドメイン、BoNT/D 酵素ドメイン、BoNT/E 酵素ドメイン、BoNT/F 酵素ドメイン、BoNT/G 酵素ドメイン、TeNT 酵素ドメイン、BaNT 酵素ドメイン、およびBuNT 酵素ドメインが挙げられる。クロストリジウム毒素酵素ドメインのその他の非限定的な例としては、例えば、配列番号1のアミノ酸 1-448、配列番号2のアミノ酸 1-441、配列番号3のアミノ酸 1-449、配列番号4のアミノ酸 1-445、配列番号5のアミノ酸 1-422、配列番号6のアミノ酸 1-439、配列番号7のアミノ酸 1-446、配列番号8のアミノ酸 1-457、配列番号9のアミノ酸 1-431、および配列番号10の アミノ酸 1-422が挙げられる。
【００２０】
クロストリジウム毒素酵素ドメインとしては、これらに限定されないが、天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体、例えば、クロストリジウム毒素酵素ドメインアイソフォームおよびクロストリジウム毒素酵素ドメインサブタイプ； 非-天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体、例えば、保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体、非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体、クロストリジウム毒素酵素ドメイン キメラ、その活性のクロストリジウム毒素酵素ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せが挙げられる。
【００２１】
本明細書において用いる場合、「クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体」という用語は、天然であれ非天然であれ、開示された参照配列 (表1)の対応する領域から少なくとも１アミノ酸の変化を有し、かかる参照配列の対応する領域に対するパーセント同一性において記載することが出来るクロストリジウム毒素酵素ドメインを意味する。明示的に示さない場合、開示された態様の実施に有用なクロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体は、中毒プロセスの酵素による標的改変工程を実行する変異体である。非限定的な例として、配列番号1のアミノ酸 1-448を含むBoNT/A 酵素ドメイン変異体は、配列番号1の アミノ酸領域 1-448と比較して少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する；配列番号2のアミノ酸 1-441を含むBoNT/B 酵素ドメイン変異体は、配列番号2のアミノ酸領域 1-441と比較して、少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する；配列番号3のアミノ酸 1-449を含むBoNT/C1 酵素ドメイン変異体は、配列番号3のアミノ酸領域 1-449と比較して少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する；配列番号4のアミノ酸 1-445を含むBoNT/D 酵素ドメイン変異体は、配列番号4のアミノ酸領域 1-445と比較して少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する；配列番号5のアミノ酸 1-422を含むBoNT/E 酵素ドメイン変異体は、配列番号5のアミノ酸領域 1-422と比較して少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する； 配列番号6のアミノ酸 1-439を含む BoNT/F 酵素ドメイン変異体は、配列番号6のアミノ酸領域 1-439と比較して少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する；配列番号7のアミノ酸 1-446を含むBoNT/G 酵素ドメイン変異体は、配列番号7のアミノ酸領域 1-446と比較して少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する； および配列番号8のアミノ酸 1-457を含むTeNT 酵素ドメイン変異体は、配列番号8のアミノ酸領域 1-457と比較して少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する。
【００２２】
クロストリジウム毒素の各血清型において、そのアミノ酸配列、そしてかかるタンパク質をコードする核酸においていくらか相違する天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体が存在し得ることが当業者に認識されている。例えば、現在５つのBoNT/A サブタイプ、BoNT/A1、BoNT/A2、BoNT/A3、BoNT/A4およびBoNT/A5が存在し、特定の酵素ドメインサブタイプは別のBoNT/A 酵素ドメインサブタイプと比較した場合におよそ 95％のアミノ酸同一性を示す。本明細書において用いる場合、「天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体」という用語は、天然プロセスにより生産されるあらゆるクロストリジウム毒素酵素ドメインを意味し、これらに限定されないが、選択的スプライシングされた転写産物から生産されたクロストリジウム毒素酵素ドメインアイソフォーム、自然突然変異により生産されたクロストリジウム毒素酵素ドメインアイソフォームおよびクロストリジウム毒素酵素ドメインサブタイプが挙げられる。天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体は、天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインと実質的に同様に機能することができ、本発明のあらゆる側面において参照クロストリジウム毒素酵素ドメインの代わりとなりうる。天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体は、１以上の アミノ酸、２以上の アミノ酸、３以上の アミノ酸、４以上の アミノ酸、５以上の アミノ酸、10以上の アミノ酸、20以上の アミノ酸、30以上の アミノ酸、40以上の アミノ酸、50以上の アミノ酸 または100以上の アミノ酸、天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインから置換している可能性がある。天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体はまた、少なくとも 10 の連続する アミノ酸、少なくとも 15 の連続する アミノ酸、少なくとも20の連続するアミノ酸、または少なくとも25の連続するアミノ酸、天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインから置換している可能性があり、天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインに対して 少なくとも50％のアミノ酸同一性、65％のアミノ酸同一性、75％のアミノ酸同一性、85％のアミノ酸同一性または95％のアミノ酸同一性を有する。
【００２３】
天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体の非限定的な例は、クロストリジウム毒素酵素ドメインアイソフォーム、例えば、BoNT/A 酵素ドメインアイソフォーム、BoNT/B 酵素ドメインアイソフォーム、BoNT/C1 酵素ドメインアイソフォーム、BoNT/D 酵素ドメインアイソフォーム、BoNT/E 酵素ドメインアイソフォーム、BoNT/F 酵素ドメインアイソフォーム、BoNT/G 酵素ドメインアイソフォーム、およびTeNT 酵素ドメインアイソフォームである。クロストリジウム毒素酵素ドメインアイソフォームは、クロストリジウム毒素酵素ドメインアイソフォームが基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインと実質的に同様に機能することが出来、本発明のあらゆる側面において参照クロストリジウム毒素酵素ドメインの代わりとなることが出来る。
【００２４】
天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体の別の非限定的な例は、クロストリジウム毒素酵素ドメイン サブタイプ、例えば、サブタイプ BoNT/A1、BoNT/A2、BoNT/A3、BoNT/A4およびBoNT/A5からの酵素ドメイン；サブタイプ BoNT/B1、BoNT/B2、BoNT/B 二価(bivalent)およびBoNT/B タンパク非分解性(nonproteolytic)からの酵素ドメイン；サブタイプ BoNT/C1-1および BoNT/C1-2からの酵素ドメイン；サブタイプ BoNT/E1、BoNT/E2およびBoNT/E3からの酵素ドメイン；および、サブタイプ BoNT/F1、BoNT/F2、BoNT/F3 およびBoNT/F4からの酵素ドメインである。クロストリジウム毒素酵素ドメイン サブタイプ は、クロストリジウム毒素酵素ドメイン サブタイプが基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインと実質的に同様に機能することができ、本発明のあらゆる側面において参照クロストリジウム毒素酵素ドメインの代わりとなることが出来る。 
【００２５】
本明細書において用いる場合、「非-天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体」という用語は、ヒトの操作の助けを借りて生産されたあらゆるクロストリジウム毒素酵素ドメインを意味し、例えば、これらに限定されないが、ランダム突然変異誘発または合理的設計を用いて遺伝子操作によって生産されたクロストリジウム毒素酵素ドメインおよび化学合成によって生産されたクロストリジウム毒素酵素ドメインが挙げられる。非-天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体の非限定的な例としては、例えば、保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体、非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体、クロストリジウム毒素酵素ドメイン キメラ 変異体および活性のクロストリジウム毒素酵素ドメイン断片が挙げられる。
【００２６】
本明細書において用いる場合、「保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体」という用語は、参照クロストリジウム毒素酵素ドメイン配列 (表1)からの元のアミノ酸のものと類似の少なくとも１つの 性質を有する別のアミノ酸またはアミノ酸 アナログによって少なくとも１つの アミノ酸が置換されたクロストリジウム毒素酵素ドメインを意味する。性質の例としては、これらに限定されないが、類似のサイズ、トポグラフィー、電荷、疎水性、親水性、親油性、共有結合能、水素結合能、物理化学的性質等、またはそれらのあらゆる組合せが挙げられる。保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体 は、保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインと実質的に同様に機能することができ、本発明のあらゆる側面において参照クロストリジウム毒素酵素ドメインの代わりとなることが出来る。保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体は、１以上の アミノ酸、２以上の アミノ酸、３以上の アミノ酸、４以上の アミノ酸、５以上の アミノ酸、10以上の アミノ酸、20以上の アミノ酸、30以上の アミノ酸、40以上の アミノ酸、50以上の アミノ酸、100以上の アミノ酸、または200以上の アミノ酸、保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインから置換している可能性がある。保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体はまた、保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインから、少なくとも 10 の連続する アミノ酸、少なくとも 15 の連続する アミノ酸、少なくとも20の連続するアミノ酸、または少なくとも25の連続するアミノ酸、置換している可能性があり、保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインに対して少なくとも50％のアミノ酸同一性、65％のアミノ酸同一性、75％のアミノ酸同一性、85％のアミノ酸同一性 または95％のアミノ酸同一性を有する。保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体の非限定的な例としては、例えば、保存的 BoNT/A 酵素ドメイン変異体、保存的 BoNT/B 酵素ドメイン変異体、保存的 BoNT/C1 酵素ドメイン変異体、保存的 BoNT/D 酵素ドメイン変異体、保存的 BoNT/E 酵素ドメイン変異体、保存的 BoNT/F 酵素ドメイン変異体、保存的 BoNT/G 酵素ドメイン変異体、および保存的 TeNT 酵素ドメイン変異体が挙げられる。
【００２７】
本明細書において用いる場合、「非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体」という用語は、1) 少なくとも１つの アミノ酸が非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインから欠失している； 2) 少なくとも１つの アミノ酸が非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメインが基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインに付加している； または 3) 少なくとも１つの アミノ酸が参照クロストリジウム毒素酵素ドメイン配列(表1)からの元のアミノ酸のものと類似の性質を共有していない別のアミノ酸またはアミノ酸アナログによって置換されている、クロストリジウム毒素酵素ドメインを意味する。非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体 は、非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインと実質的に同様に機能することができ、本発明のあらゆる側面において参照クロストリジウム毒素酵素ドメインの代わりとなることが出来る。非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体 は、１以上の アミノ酸、２以上の アミノ酸、３以上の アミノ酸、４以上の アミノ酸、５以上の アミノ酸、および10以上の アミノ酸、非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインから欠失している可能性がある。非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体は、１以上の アミノ酸、２以上の アミノ酸、３以上の アミノ酸、４以上の アミノ酸、５以上の アミノ酸、および10以上の アミノ酸、非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインに対して付加している可能性がある。非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体は、１以上の アミノ酸、２以上の アミノ酸、３以上の アミノ酸、４以上の アミノ酸、５以上の アミノ酸、10以上の アミノ酸、20以上の アミノ酸、30以上の アミノ酸、40以上の アミノ酸、50以上の アミノ酸、100以上の アミノ酸、または200以上の アミノ酸、非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインから置換している可能性がある。非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体はまた、少なくとも 10 の連続する アミノ酸、少なくとも 15 の連続する アミノ酸、少なくとも20の連続するアミノ酸、または少なくとも25の連続するアミノ酸、非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインから置換している可能性があり、非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素酵素ドメインに対して少なくとも50％のアミノ酸同一性、65％のアミノ酸同一性、75％のアミノ酸同一性、85％のアミノ酸同一性 または95％のアミノ酸同一性を有する。非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体の非限定的な例としては、例えば、非-保存的 BoNT/A 酵素ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/B 酵素ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/C1 酵素ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/D 酵素ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/E 酵素ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/F 酵素ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/G 酵素ドメイン変異体、および非-保存的 TeNT 酵素ドメイ��変異体が挙げられる。
【００２８】
本明細書において用いる場合、「クロストリジウム毒素酵素ドメイン キメラ」という用語は、少なくともクロストリジウム毒素酵素ドメインの一部および少なくとも１つのその他のポリペプチドの少なくとも一部を含み、表1の参照クロストリジウム毒素酵素ドメインとは異なる少なくとも１つの 性質を有する毒素 酵素ドメインを形成しているポリペプチドを意味し、ただし、このクロストリジウム毒素酵素ドメイン キメラは依然として神経伝達物質放出装置のコア成分を特異的に標的化することができるものであり、したがってクロストリジウム毒素が基質をタンパク分解により切断する細胞機構全体を実行することに寄与することができるものである。かかるクロストリジウム毒素酵素ドメイン キメラは例えば、Lance E. Steward et al., Leucine-based Motif and Clostridial Toxins、米国特許出願公開 2003/0027752 (Feb. 6、2003)； Lance E. Steward et al., Clostridial Neurotoxin Compositions and Modified Clostridial Neurotoxins、米国特許出願公開 2003/0219462 (Nov. 27、2003)；および Lance E. Steward et al., Clostridial Neurotoxin Compositions and Modified Clostridial Neurotoxins、米国特許出願公開 2004/0220386 (Nov. 4、2004)に記載されており、そのそれぞれはその全体を引用により本明細書に含める。
【００２９】
本明細書において用いる場合、「活性のクロストリジウム毒素酵素ドメイン断片」という用語は、本発明の側面において有用であり得る酵素ドメインを含むあらゆる様々なクロストリジウム毒素断片を意味するが、ただし、かかる酵素ドメイン断片は、神経伝達物質放出装置のコア成分を特異的に標的化できるものであり、したがってクロストリジウム毒素が基質をタンパク分解により切断する細胞機構の全体を実行することに寄与できるものである。クロストリジウム毒素の酵素ドメインはおよそ 420-460 アミノ酸の長さであり、酵素ドメインを含む(表1)。研究により、クロストリジウム毒素酵素ドメインの全長は、酵素ドメインの酵素活性に必要ではないことが示された。非限定的な例として、BoNT/A 酵素ドメインの最初の８のアミノ酸(配列番号1の残基1-8)は、酵素活性に必要ではない。別の非限定的な例として、TeNT 酵素ドメインの最初の８の アミノ酸(配列番号8の残基1-8)は、酵素活性に必要ではない。同様に、酵素ドメインのカルボキシル末端は活性に必要ではない。非限定的な例として、BoNT/A 酵素ドメインの最後の 32 アミノ酸 (配列番号1の残基 417-448)は酵素活性に必要ではない。別の非限定的な例として、TeNT 酵素ドメインの最後の 31 アミノ酸 (配列番号8の残基427-457)は酵素活性に必要ではない。したがって、この態様の側面は、例えば、少なくとも 350 アミノ酸、少なくとも 375 アミノ酸、少なくとも 400 アミノ酸、少なくとも 425 アミノ酸および少なくとも 450 アミノ酸の長さを有する酵素ドメインを含むクロストリジウム毒素酵素ドメインを含みうる。この態様の別の側面は、例えば、多くとも 350 アミノ酸、多くとも 375 アミノ酸、多くとも 400 アミノ酸、多くとも 425 アミノ酸および多くとも 450 アミノ酸の長さを有する酵素ドメインを含むクロストリジウム毒素酵素ドメインを含みうる。
【００３０】
様々な配列アラインメント方法のいずれを用いて天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体および非-天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体のパーセント同一性を決定してもよく、例えば、これらに限定されないが、グローバル(global)方法、ローカル(local)方法およびハイブリッド方法、例えば、セグメントアプローチ方法が挙げられる。パーセント同一性を決定するプロトコールは当業者の技術範囲内で本教示から常套の手順である。
【００３１】
グローバル方法では、分子の最初から最後まで配列をアラインし、個々の残基対のスコアを足すことにより、およびギャップペナルティを課すことにより最良のアラインメントを決定する。非限定的な方法としては、例えば、CLUSTAL W、例えば、Julie D. Thompson et al., CLUSTAL W: Improving the Sensitivity of Progressive Multiple Sequence Alignment Through Sequence Weighting, Position-Specific Gap Penalties and Weight Matrix Choice, 22(22) Nucleic Acids Research 4673-4680 (1994)参照；および反復リファインメント(iterative refinement)が挙げられ、例えば、Osamu Gotoh, Significant Improvement in Accuracy of Multiple Protein Sequence Alignments by Iterative Refinement as Assessed by Reference to Structural Alignments, 264(4) J. Mol. Biol. 823-838 (1996)を参照されたい。
【００３２】
ローカル方法では、入力配列のすべてによって共有される１以上の保存モチーフを同定することによって配列をアラインする。非限定的な方法としては、例えば、Match-box、例えば、Eric Depiereux and Ernest Feytmans, Match-Box: A Fundamentally New Algorithm for the Simultaneous Alignment of Several Protein Sequences, 8(5) CABIOS 501-509 (1992)参照； Gibbs sampling、例えば、C. E. Lawrence et al., Detecting Subtle Sequence Signals: A Gibbs Sampling Strategy for Multiple Alignment, 262(5131) Science 208-214 (1993)参照； Align-M、例えば、Ivo Van Walle et al., Align-M - A New Algorithm for Multiple Alignment of Highly Divergent Sequences, 20(9) Bioinformatics,:1428-1435 (2004)参照、が挙げられる。
【００３３】
ハイブリッド方法は、グローバルおよびローカルアラインメント方法の両方の機能的側面を組み合わせたものである。非限定的な方法としては、例えば、セグメント-対-セグメント比較、例えば、Burkhard Morgenstern et al., Multiple DNA and Protein Sequence Alignment Based 0n Segment-To-Segment Comparison, 93(22) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 12098-12103 (1996)参照； T-Coffee、例えば、Cedric Notredame et al., T-Coffee: A Novel Algorithm for Multiple Sequence Alignment, 302(1) J. Mol. Biol. 205-217 (2000)参照； MUSCLE、例えば、Robert C. Edgar, MUSCLE: Multiple Sequence Alignment With High Score Accuracy and High Throughput, 32(5) Nucleic Acids Res. 1792-1797 (2004)参照； および DIALIGN-T、例えば、Amarendran R Subramanian et al., DIALIGN-T: An Improved Algorithm for Segment-Based Multiple Sequence Alignment, 6(1) BMC Bioinformatics 66 (2005)参照、が挙げられる。
【００３４】
したがって、一つの態様において、本明細書に開示される改変クロストリジウム毒素はクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む。この態様の一つの側面において、クロストリジウム毒素酵素ドメインは、天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体、例えば、クロストリジウム毒素酵素ドメインアイソフォームまたはクロストリジウム毒素酵素ドメイン サブタイプを含む。この態様の別の側面において、クロストリジウム毒素酵素ドメインは、非-天然クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体、例えば、保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体、非-保存的クロストリジウム毒素酵素ドメイン変異体、クロストリジウム毒素 キメラ 酵素ドメイン、活性のクロストリジウム毒素酵素ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【００３５】
別の態様において、クロストリジウム毒素酵素ドメインはBoNT/A 酵素ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BoNT/A 酵素ドメインは配列番号1のアミノ酸 1-448を含む。この態様の別の側面において、BoNT/A 酵素ドメインは、 天然 BoNT/A 酵素ドメイン変異体、例えば、BoNT/A アイソフォームからの酵素ドメインまたはBoNT/A サブタイプからの酵素ドメインを含む。この態様の別の側面において、BoNT/A 酵素ドメインは、配列番号1の天然 BoNT/A 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-448、例えば、配列番号1のBoNT/A アイソフォームのアミノ酸 1-448または配列番号1のBoNT/A サブタイプのアミノ酸 1-448を含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/A 酵素ドメインは、非-天然 BoNT/A 酵素ドメイン変異体、例えば、保存的 BoNT/A 酵素ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/A 酵素ドメイン変異体、BoNT/A キメラ 酵素ドメイン、活性のBoNT/A 酵素ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。 この態様のさらに別の側面において、BoNT/A 酵素ドメインは、配列番号1の非-天然 BoNT/A 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-448、例えば、配列番号1の保存的 BoNT/A 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-448、配列番号1の非-保存的 BoNT/A 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-448、配列番号1の活性のBoNT/A 酵素ドメイン断片のアミノ酸 1-448、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【００３６】
この態様の別の側面において、BoNT/A 酵素ドメインは、配列番号1のアミノ酸 1-448に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％ または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/A 酵素ドメインは、配列番号1のアミノ酸 1-448に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００３７】
この態様の別の側面において、BoNT/A 酵素ドメインは、例えば、配列番号1のアミノ酸 1-448に対して、多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号1のアミノ酸 1-448に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号1のアミノ酸 1-448に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号1のアミノ酸 1-448に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号1のアミノ酸 1-448に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号1のアミノ酸 1-448に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００３８】
この態様の別の側面において、BoNT/A 酵素ドメインは、例えば、配列番号1のアミノ酸 1-448に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号1のアミノ酸 1-448に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号1のアミノ酸 1-448に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号1のアミノ酸 1-448に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失；配列番号1のアミノ酸 1-448に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加； または配列番号1のアミノ酸 1-448に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００３９】
別の態様において、クロストリジウム毒素酵素ドメインはBoNT/B 酵素ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BoNT/B 酵素ドメインは配列番号2のアミノ酸 1-441を含む。この態様の別の側面において、BoNT/B 酵素ドメインは、天然 BoNT/B 酵素ドメイン変異体、例えば、BoNT/B アイソフォームからの酵素ドメインまたはBoNT/B サブタイプからの酵素ドメインを含む。この態様の別の側面において、BoNT/B 酵素ドメインは配列番号2の天然 BoNT/B 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-441、例えば、配列番号2のBoNT/B アイソフォームのアミノ酸 1-441または配列番号2のBoNT/B サブタイプのアミノ酸 1-441を含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/B 酵素ドメインは、非-天然 BoNT/B 酵素ドメイン変異体、例えば、保存的 BoNT/B 酵素ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/B 酵素ドメイン変異体、BoNT/B キメラ 酵素ドメイン、活性のBoNT/B 酵素ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/B 酵素ドメインは、配列番号2の非-天然 BoNT/B 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-441、例えば、配列番号2の保存的 BoNT/B 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-441、配列番号2の非-保存的 BoNT/B 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-441、配列番号2の活性のBoNT/B 酵素ドメイン断片のアミノ酸 1-441、またはそれらのいずれかの組合せを含む。 
【００４０】
この態様の別の側面において、BoNT/B 酵素ドメインは、例えば、配列番号2のアミノ酸 1-441に対して、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/B 酵素ドメインは、配列番号2のアミノ酸 1-441に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００４１】
この態様の別の側面において、BoNT/B 酵素ドメインは、例えば、配列番号2のアミノ酸 1-441に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号2のアミノ酸 1-441に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号2のアミノ酸 1-441に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号2のアミノ酸 1-441に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号2のアミノ酸 1-441に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号2のアミノ酸 1-441に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００４２】
この態様の別の側面において、BoNT/B 酵素ドメインは、例えば、配列番号2のアミノ酸 1-441に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号2のアミノ酸 1-441に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号2のアミノ酸 1-441に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号2のアミノ酸 1-441に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号2のアミノ酸 1-441に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加；または配列番号2のアミノ酸 1-441に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００４３】
別の態様において、クロストリジウム毒素酵素ドメインはBoNT/C1 酵素ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BoNT/C1 酵素ドメインは配列番号3のアミノ酸 1-449を含む。この態様の別の側面において、BoNT/C1 酵素ドメイン は、天然 BoNT/C1 酵素ドメイン変異体、例えば、BoNT/C1 アイソフォームからの酵素ドメインまたはBoNT/C1 サブタイプからの酵素ドメインを含む。この態様の別の側面において、BoNT/C1 酵素ドメインは、配列番号3の天然 BoNT/C1 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-449、例えば、配列番号3のBoNT/C1 アイソフォームのアミノ酸 1-449または配列番号3のBoNT/C1 サブタイプのアミノ酸 1-449を含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/C1 酵素ドメインは非-天然 BoNT/C1 酵素ドメイン変異体、例えば、保存的 BoNT/C1 酵素ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/C1 酵素ドメイン変異体、BoNT/C1 キメラ 酵素ドメイン、活性のBoNT/C1 酵素ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/C1 酵素ドメインは、配列番号3の非-天然 BoNT/C1 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-449、例えば、配列番号3の保存的 BoNT/C1 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-449、配列番号3の非-保存的 BoNT/C1 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-449、配列番号3の活性のBoNT/C1 酵素ドメイン断片のアミノ酸 1-449、またはそれらのいずれかの組合せを含む。 
【００４４】
この態様の別の側面において、BoNT/C1 酵素ドメインは、配列番号3のアミノ酸 1-449に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/C1 酵素ドメインは、配列番号3のアミノ酸 1-449に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００４５】
この態様の別の側面において、BoNT/C1 酵素ドメインは、例えば、配列番号3のアミノ酸 1-449に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換；配列番号3のアミノ酸 1-449に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号3のアミノ酸 1-449に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号3のアミノ酸 1-449に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号3のアミノ酸 1-449に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号3のアミノ酸 1-449に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。 
【００４６】
この態様の別の側面において、BoNT/C1 酵素ドメインは、例えば、配列番号3のアミノ酸 1-449に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換；配列番号3のアミノ酸 1-449に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号3のアミノ酸 1-449に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失；配列番号3のアミノ酸 1-449に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号3のアミノ酸 1-449に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加； または配列番号3のアミノ酸 1-449に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。 
【００４７】
別の態様において、クロストリジウム毒素酵素ドメインは BoNT/D 酵素ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BoNT/D 酵素ドメインは、配列番号4のアミノ酸 1-445を含む。この態様の別の側面において、BoNT/D 酵素ドメインは、天然 BoNT/D 酵素ドメイン変異体、例えば、BoNT/D アイソフォームからの酵素ドメインまたはBoNT/D サブタイプからの酵素ドメインを含む。この態様の別の側面において、BoNT/D 酵素ドメインは、配列番号4の天然 BoNT/D 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-445、例えば、配列番号4のBoNT/D アイソフォームのアミノ酸 1-445または配列番号4のBoNT/D サブタイプのアミノ酸 1-445を含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/D 酵素ドメインは、非-天然 BoNT/D 酵素ドメイン変異体、例えば、保存的 BoNT/D 酵素ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/D 酵素ドメイン変異体、BoNT/D キメラ 酵素ドメイン、活性のBoNT/D 酵素ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/D 酵素ドメインは、配列番号4の非-天然 BoNT/D 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-445、例えば、配列番号4の保存的 BoNT/D 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-445、配列番号4の非-保存的 BoNT/D 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-445、配列番号4の活性のBoNT/D 酵素ドメイン断片のアミノ酸 1-445、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【００４８】
この態様の別の側面において、BoNT/D 酵素ドメインは、配列番号4のアミノ酸 1-445に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/D 酵素ドメインは、配列番号4のアミノ酸 1-445に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００４９】
この態様の別の側面において、BoNT/D 酵素ドメインは、例えば、配列番号4のアミノ酸 1-445に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換；配列番号4のアミノ酸 1-445に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号4のアミノ酸 1-445に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号4のアミノ酸 1-445に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号4のアミノ酸 1-445に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号4のアミノ酸 1-445に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００５０】
この態様の別の側面において、BoNT/D 酵素ドメインは、例えば、配列番号4のアミノ酸 1-445に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号4のアミノ酸 1-445に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号4のアミノ酸 1-445に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号4のアミノ酸 1-445に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号4のアミノ酸 1-445に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加； または配列番号4のアミノ酸 1-445に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００５１】
別の態様において、クロストリジウム毒素酵素ドメインはBoNT/E 酵素ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BoNT/E 酵素ドメインは配列番号5のアミノ酸 1-422を含む。この態様の別の側面において、BoNT/E 酵素ドメインは、天然 BoNT/E 酵素ドメイン変異体、例えば、BoNT/E アイソフォームからの酵素ドメインまたはBoNT/E サブタイプからの酵素ドメインを含む。この態様の別の側面において、BoNT/E 酵素ドメインは、配列番号5の天然 BoNT/E 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-422、例えば、配列番号5のBoNT/E アイソフォームのアミノ酸 1-422または配列番号5のBoNT/E サブタイプのアミノ酸 1-422を含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/E 酵素ドメインは、非-天然 BoNT/E 酵素ドメイン変異体、例えば、保存的 BoNT/E 酵素ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/E 酵素ドメイン変異体、BoNT/E キメラ 酵素ドメイン、活性のBoNT/E 酵素ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/E 酵素ドメインは、配列番号5の非-天然 BoNT/E 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-422、例えば、配列番号5の保存的 BoNT/E 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-422、配列番号5の非-保存的 BoNT/E 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-422、配列番号5の活性のBoNT/E 酵素ドメイン断片のアミノ酸 1-422、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【００５２】
この態様の別の側面において、BoNT/E 酵素ドメインは、配列番号5のアミノ酸 1-422に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/E 酵素ドメインは、配列番号5のアミノ酸 1-422に対して例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００５３】
この態様の別の側面において、BoNT/E 酵素ドメインは、例えば、配列番号5のアミノ酸 1-422に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換；配列番号5のアミノ酸 1-422に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号5のアミノ酸 1-422に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号5のアミノ酸 1-422に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号5のアミノ酸 1-422に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号5のアミノ酸 1-422に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００５４】
この態様の別の側面において、BoNT/E 酵素ドメインは、例えば、配列番号5のアミノ酸 1-422に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号5のアミノ酸 1-422に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号5のアミノ酸 1-422に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号5のアミノ酸 1-422に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号5のアミノ酸 1-422に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加； または配列番号5のアミノ酸 1-422に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００５５】
別の態様において、クロストリジウム毒素酵素ドメインはBoNT/F 酵素ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BoNT/F 酵素ドメインは配列番号6のアミノ酸 1-439を含む。この態様の別の側面において、BoNT/F 酵素ドメインは、天然 BoNT/F 酵素ドメイン変異体、例えば、BoNT/F アイソフォームからの酵素ドメインまたはBoNT/F サブタイプからの 酵素ドメインを含む。この態様の別の側面において、BoNT/F 酵素ドメインは、配列番号6の天然 BoNT/F 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-439、例えば、配列番号6のBoNT/F アイソフォームのアミノ酸 1-439または配列番号6のBoNT/F サブタイプのアミノ酸 1-439を含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/F 酵素ドメインは、非-天然 BoNT/F 酵素ドメイン変異体、例えば、保存的 BoNT/F 酵素ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/F 酵素ドメイン変異体、BoNT/F キメラ 酵素ドメイン、活性のBoNT/F 酵素ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/F 酵素ドメインは、配列番号6の非-天然 BoNT/F 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-439、例えば、配列番号6の保存的 BoNT/F 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-439、配列番号6の非-保存的 BoNT/F 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-439、配列番号6の活性のBoNT/F 酵素ドメイン断片のアミノ酸 1-439またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【００５６】
この態様の別の側面において、BoNT/F 酵素ドメインは、配列番号6のアミノ酸 1-439に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/F 酵素ドメインは、配列番号6のアミノ酸 1-439に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００５７】
この態様の別の側面において、BoNT/F 酵素ドメインは、例えば、配列番号6のアミノ酸 1-439に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号6のアミノ酸 1-439に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号6のアミノ酸 1-439に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号6のアミノ酸 1-439に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号6のアミノ酸 1-439に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号6のアミノ酸 1-439に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００５８】
この態様の別の側面において、BoNT/F 酵素ドメインは、例えば、配列番号6のアミノ酸 1-439に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換；配列番号6のアミノ酸 1-439に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号6のアミノ酸 1-439に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号6のアミノ酸 1-439に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号6のアミノ酸 1-439に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加； または配列番号6のアミノ酸 1-439に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００５９】
別の態様において、クロストリジウム毒素酵素ドメインは BoNT/G 酵素ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BoNT/G 酵素ドメインは配列番号7のアミノ酸 1-446を含む。この態様の別の側面において、BoNT/G 酵素ドメインは、天然 BoNT/G 酵素ドメイン変異体、例えば、BoNT/G アイソフォームからの酵素ドメインまたはBoNT/G サブタイプからの酵素ドメインを含む。この態様の別の側面において、BoNT/G 酵素ドメインは、配列番号7の天然 BoNT/G 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-446、例えば、配列番号7のBoNT/G アイソフォームのアミノ酸 1-446 または配列番号7のBoNT/G サブタイプのアミノ酸 1-446を含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/G 酵素ドメインは、非-天然 BoNT/G 酵素ドメイン変異体、例えば、保存的 BoNT/G 酵素ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/G 酵素ドメイン変異体、BoNT/G キメラ 酵素ドメイン、活性のBoNT/G 酵素ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/G 酵素ドメインは、配列番号7の非-天然 BoNT/G 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-446、例えば、配列番号7の保存的 BoNT/G 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-446、配列番号7の非-保存的 BoNT/G 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-446、配列番号7の活性のBoNT/G 酵素ドメイン断片のアミノ酸 1-446、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【００６０】
この態様の別の側面において、BoNT/G 酵素ドメインは、配列番号7のアミノ酸 1-446に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/G 酵素ドメインは、配列番号7のアミノ酸 1-446に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００６１】
この態様の別の側面において、BoNT/G 酵素ドメインは、例えば、配列番号7のアミノ酸 1-446に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号7のアミノ酸 1-446に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号7のアミノ酸 1-446に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号7のアミノ酸 1-446に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号7のアミノ酸 1-446に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号7のアミノ酸 1-446に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。 
【００６２】
この態様の別の側面において、BoNT/G 酵素ドメインは、例えば、配列番号7のアミノ酸 1-446に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換；配列番号7のアミノ酸 1-446に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号7のアミノ酸 1-446に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号7のアミノ酸 1-446に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号7のアミノ酸 1-446に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加； または配列番号7のアミノ酸 1-446に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。 
【００６３】
別の態様において、クロストリジウム毒素酵素ドメインはTeNT 酵素ドメインを含む。この態様の一つの側面において、TeNT 酵素ドメインは、配列番号8のアミノ酸 1-457を含む。この態様の別の側面において、TeNT 酵素ドメインは、天然 TeNT 酵素ドメイン変異体、例えば、TeNT アイソフォームからの酵素ドメインまたはTeNT サブタイプからの酵素ドメインを含む。この態様の別の側面において、TeNT 酵素ドメインは、配列番号8の天然 TeNT 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-457、例えば、配列番号8のTeNT アイソフォームのアミノ酸 1-457 または配列番号8のTeNT サブタイプのアミノ酸 1-457を含む。この態様のさらに別の側面において、TeNT 酵素ドメインは、 非-天然 TeNT 酵素ドメイン変異体、例えば、保存的 TeNT 酵素ドメイン変異体、非-保存的 TeNT 酵素ドメイン変異体、TeNT キメラ 酵素ドメイン、活性のTeNT 酵素ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、TeNT 酵素ドメインは、配列番号8の非-天然 TeNT 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-457、例えば、配列番号8の保存的 TeNT 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-457、配列番号8の非-保存的 TeNT 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-457、配列番号8の活性のTeNT 酵素ドメイン断片のアミノ酸 1-457、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【００６４】
この態様の別の側面において、TeNT 酵素ドメインは、配列番号8のアミノ酸 1-457に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、TeNT 酵素ドメインは、配列番号8のアミノ酸 1-457に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００６５】
この態様の別の側面において、TeNT 酵素ドメインは、例えば、配列番号8のアミノ酸 1-457に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号8のアミノ酸 1-457に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号8のアミノ酸 1-457に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号8のアミノ酸 1-457に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号8のアミノ酸 1-457に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号8のアミノ酸 1-457に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００６６】
この態様の別の側面において、TeNT 酵素ドメインは、例えば、配列番号8のアミノ酸 1-457に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号8のアミノ酸 1-457に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号8のアミノ酸 1-457に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号8のアミノ酸 1-457に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号8のアミノ酸 1-457に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加； または配列番号8のアミノ酸 1-457に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００６７】
別の態様において、クロストリジウム毒素酵素ドメインはBaNT 酵素ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BaNT 酵素ドメインは配列番号9のアミノ酸 1-431を含む。この態様の別の側面において、BaNT 酵素ドメインは、 天然 BaNT 酵素ドメイン変異体、例えば、BaNT アイソフォームからの酵素ドメインまたはBaNT サブタイプからの酵素ドメインを含む。この態様の別の側面において、BaNT 酵素ドメインは、配列番号9の天然 BaNT 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-431、例えば、配列番号9のBaNT アイソフォームのアミノ酸 1-431または配列番号9のBaNT サブタイプのアミノ酸 1-431を含む。この態様のさらに別の側面において、BaNT 酵素ドメインは、非-天然 BaNT 酵素ドメイン変異体、例えば、保存的 BaNT 酵素ドメイン変異体、非-保存的 BaNT 酵素ドメイン変異体、BaNT キメラ 酵素ドメイン、活性のBaNT酵素ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、BaNT 酵素ドメインは、配列番号9の非-天然 BaNT 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-431、例えば、配列番号9の保存的 BaNT 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-431、配列番号9の非-保存的 BaNT 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-431、配列番号9の活性のBaNT  酵素ドメイン断片のアミノ酸 1-431、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【００６８】
この態様の別の側面において、BaNT 酵素ドメインは、 配列番号9のアミノ酸 1-431に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BaNT 酵素ドメインは、配列番号9のアミノ酸 1-431に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。 
【００６９】
この態様の別の側面において、BaNT 酵素ドメインは、例えば、配列番号9のアミノ酸 1-431に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号9のアミノ酸 1-431に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号9のアミノ酸 1-431に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号9のアミノ酸 1-431に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号9のアミノ酸 1-431に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号9のアミノ酸 1-431に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００７０】
この態様の別の側面において、BaNT 酵素ドメインは、例えば、配列番号9のアミノ酸 1-431に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号9のアミノ酸 1-431に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号9のアミノ酸 1-431に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号9のアミノ酸 1-431に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号9のアミノ酸 1-431に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加； または配列番号9のアミノ酸 1-431に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００７１】
別の態様において、クロストリジウム毒素酵素ドメインはBuNT 酵素ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BuNT 酵素ドメインは、配列番号10のアミノ酸 1-422を含む。この態様の別の側面において、BuNT 酵素ドメインは、天然 BuNT 酵素ドメイン変異体、例えば、BuNT アイソフォームからの酵素ドメインまたはBuNT サブタイプからの酵素ドメインを含む。この態様の別の側面において、BuNT 酵素ドメインは、配列番号10の天然 BuNT 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-422、例えば、配列番号10のBuNT アイソフォームのアミノ酸 1-422 または配列番号10のBuNT サブタイプのアミノ酸 1-422を含む。この態様のさらに別の側面において、BuNT 酵素ドメインは、非-天然 BuNT 酵素ドメイン変異体、例えば、保存的 BuNT 酵素ドメイン変異体、非-保存的 BuNT 酵素ドメイン変異体、BuNT キメラ 酵素ドメイン、活性のBuNT 酵素ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、BuNT 酵素ドメインは、配列番号10の非-天然 BuNT 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-422、例えば、配列番号10の保存的 BuNT 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-422、配列番号10の非-保存的 BuNT 酵素ドメイン変異体のアミノ酸 1-422、配列番号10の活性のBuNT 酵素ドメイン断片のアミノ酸 1-422、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【００７２】
この態様の別の側面において、BuNT 酵素ドメインは、配列番号10のアミノ酸 1-422に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BuNT 酵素ドメインは、配列番号10のアミノ酸 1-422に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００７３】
この態様の別の側面において、BuNT 酵素ドメインは、例えば、配列番号10のアミノ酸 1-422に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号10のアミノ酸 1-422に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号10のアミノ酸 1-422に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号10のアミノ酸 1-422に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号10のアミノ酸 1-422に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号10のアミノ酸 1-422に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００７４】
この態様の別の側面において、BuNT 酵素ドメインは、例えば、配列番号10のアミノ酸 1-422に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100または200の連続するアミノ酸置換を有するポリペプチドを含む。この態様の別の側面において、BuNT 酵素ドメインは、例えば、配列番号10のアミノ酸 1-422に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100または200の連続するアミノ酸置換を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BuNT 酵素ドメインは、例えば、配列番号10のアミノ酸 1-422に対して、多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100または200の連続するアミノ酸欠失を有するポリペプチドを含む。この態様の別の側面において、BuNT 酵素ドメインは、例えば、配列番号10のアミノ酸 1-422に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100または200の連続するアミノ酸欠失を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BuNT 酵素ドメインは、例えば、配列番号10のアミノ酸 1-422に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100または200の連続するアミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。この態様の別の側面において、BuNT 酵素ドメインは、、例えば、配列番号10のアミノ酸 1-422に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100または200の連続するアミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００７５】
「転位置ドメイン」は、転位置活性を有するクロストリジウム神経毒素重鎖の部分を含む。「転位置」とは、小胞膜を介するポリペプチドの輸送を促進する能力を意味し、それによりポリペプチドのいくらかまたはすべてが細胞質に露出される。様々なボツリヌス神経毒素において、転位置は、エンドソーム内のpHの低下によって起こる重鎖のアロステリック立体配置変化を伴うと考えられている。この立体配置変化は重鎖のN 末端半分を伴い、それによって媒介されているようであり、その結果、 小胞膜において孔が形成される；この変化は、エンドソーム小胞内から細胞質へのタンパク分解性の軽鎖の移動を可能とする。例えば、Lacy、et al.、Nature Struct. Biol. 5:898-902 (October 1998)を参照。
【００７６】
ボツリヌス神経毒素重鎖の転位置-媒介部分のアミノ酸配列は当業者に公知である；さらに、この部分内のそれらアミノ酸残基は、転位置活性の付与に必須であることも知られている。それゆえ、例えば、様々な破傷風菌(Clostridium tetanus)またはクロストリジウム・ボツリヌス神経毒素サブタイプのいずれかの重鎖の天然 N-末端 ペプチド半分を転位置ドメインとして用いること、または、様々な重鎖のN-末端半分の一次配列をアラインし、コンセンサス一次転位置配列を、配列間の保存されたアミノ酸、極性、立体および疎水性特性に基づいて選択することにより、類似の転位置ドメインを設計することは、当業者の能力の範囲内であろう。
【００７７】
本発明の別の側面において、改変クロストリジウム毒素は、部分的には、クロストリジウム毒素転位置ドメインを含む。 本明細書において用いる場合、「クロストリジウム毒素転位置ドメイン」という用語は、クロストリジウム毒素軽鎖転位置を媒介する中毒プロセスの転位置工程を実行することが出来るあらゆるクロストリジウム毒素 ポリペプチドを意味する。したがって、クロストリジウム毒素転位置ドメインは、クロストリジウム毒素 軽鎖の膜を横切る移動を促進し、移動は、クロストリジウム毒素 軽鎖の膜を介する細胞内小胞から細胞の細胞質への移動を含む。クロストリジウム毒素転位置ドメインの非限定的な例としては、例えば、BoNT/A 転位置ドメイン、BoNT/B 転位置ドメイン、BoNT/C1 転位置ドメイン、BoNT/D 転位置ドメイン、BoNT/E 転位置ドメイン、BoNT/F 転位置ドメイン、BoNT/G 転位置ドメイン、TeNT 転位置ドメイン、BaNT 転位置ドメイン、およびBuNT 転位置ドメインが挙げられる。クロストリジウム毒素転位置ドメインのその他の非限定的な例としては、例えば、配列番号1のアミノ酸 449-873、配列番号2のアミノ酸 442-860、配列番号3のアミノ酸 450-868、配列番号4のアミノ酸 446-864、配列番号5のアミノ酸 423-847、配列番号6のアミノ酸 440-866、配列番号7のアミノ酸 447-865、配列番号8のアミノ酸 458-881、配列番号9のアミノ酸 432-857、および配列番号10のアミノ酸 423-847が挙げられる。
【００７８】
クロストリジウム毒素転位置ドメインとしては、これらに限定されないが、天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体、例えば、クロストリジウム毒素転位置ドメインアイソフォームおよびクロストリジウム毒素転位置ドメイン サブタイプ； 非-天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体、例えば、保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体、非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体、クロストリジウム毒素転位置ドメイン キメラ、それらの活性のクロストリジウム毒素転位置ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せが挙げられる。
【００７９】
本明細書において用いる場合、「クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体」という用語は、 天然であれ非天然であれ、開示された参照配列 (表1)の対応する領域から少なくとも１つの アミノ酸変化を有し、その参照配列の対応する領域に対してパーセント同一性において記載できるクロストリジウム毒素転位置ドメインを意味する。明示的に示さない場合、開示された態様の実施に有用なクロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体は、クロストリジウム毒素軽鎖の転位置を媒介する中毒プロセスの転位置工程を実行する変異体である。非限定的な例として、配列番号1のアミノ酸 449-873を含むBoNT/A 転位置ドメイン変異体 は、配列番号1のアミノ酸領域 449-873と比較して 少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する； 配列番号2のアミノ酸 442-860を含むBoNT/B 転位置ドメイン変異体は、配列番号2のアミノ酸領域 442-860と比較して少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する； 配列番号3のアミノ酸 450-868を含む BoNT/C1 転位置ドメイン変異体は、配列番号3のアミノ酸領域 450-868と比較して少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する； 配列番号4のアミノ酸 446-864を含むBoNT/D 転位置ドメイン変異体は、配列番号4 のアミノ酸領域 446-864と比較して少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する；配列番号5のアミノ酸 423-847を含むBoNT/E 転位置ドメイン変異体は、配列番号5のアミノ酸領域 423-847と比較して少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する； 配列番号6のアミノ酸 440-866 を含む BoNT/F 転位置ドメイン変異体は、配列番号6のアミノ酸領域 440-866 と比較して少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する； 配列番号7のアミノ酸 447-865を含むBoNT/G 転位置ドメイン変異体は、配列番号7のアミノ酸領域 447-865と比較して少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する； 配列番号8のアミノ酸 458-881を含む TeNT 転位置ドメイン変異体は、配列番号8のアミノ酸領域 458-881と比較して少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する； 配列番号9のアミノ酸 432-857を含む BaNT 転位置ドメイン変異体は、配列番号9 のアミノ酸領域 432-857と比較して少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する；および、配列番号10のアミノ酸 423-847 を含む BuNT 転位置ドメイン変異体は、配列番号10のアミノ酸領域 423-847と比較して少なくとも１アミノ酸の相違、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する。
【００８０】
クロストリジウム毒素の各血清型のなかに、アミノ酸配列において、およびかかるタンパク質をコードする核酸においてもなんらか相違する天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体が存在しうることが当業者に認識されている。例えば、現在５つのBoNT/A サブタイプ、BoNT/A1、BoNT/A2、BoNT/A3、BoNT/A4およびBoNT/A5があり、特定の転位置ドメイン サブタイプは別のBoNT/A 転位置ドメイン サブタイプと比較した場合におよそ87％のアミノ酸同一性を示す。本明細書において用いる場合、「天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体」という用語は、天然プロセスによって生産されたあらゆるクロストリジウム毒素転位置ドメインを意味し、例えば、これらに限定されないが、選択的スプライシングされた転写産物から生産されたクロストリジウム毒素転位置ドメインアイソフォーム、自然突然変異により生産されたクロストリジウム毒素転位置ドメインアイソフォームおよびクロストリジウム毒素転位置ドメイン サブタイプが挙げられる。天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体 は、天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインと実質的に同様に機能することができ、本発明のあらゆる側面において参照クロストリジウム毒素転位置ドメインの代わりとなることができる。天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体は、１以上の アミノ酸、２以上の アミノ酸、３以上の アミノ酸、４以上の アミノ酸、５以上の アミノ酸、10以上の アミノ酸、20以上の アミノ酸、30以上の アミノ酸、40以上の アミノ酸、50以上の アミノ酸 または100以上の アミノ酸、天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインから置換している可能性がある。天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体はまた、少なくとも 10 の連続する アミノ酸、少なくとも 15 の連続する アミノ酸、少なくとも20の連続するアミノ酸、または少なくとも25の連続するアミノ酸、天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインから置換している可能性があり、天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインに対して少なくとも50％のアミノ酸同一性、65％のアミノ酸同一性、75％のアミノ酸同一性、85％のアミノ酸同一性 または95％のアミノ酸同一性を有する。
【００８１】
天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体の非限定的な例は、クロストリジウム毒素転位置ドメインアイソフォーム、例えば、BoNT/A 転位置ドメインアイソフォーム、BoNT/B 転位置ドメインアイソフォーム、BoNT/C1 転位置ドメインアイソフォーム、BoNT/D 転位置ドメインアイソフォーム、BoNT/E 転位置ドメインアイソフォーム、BoNT/F 転位置ドメインアイソフォーム、BoNT/G 転位置ドメインアイソフォーム、TeNT 転位置ドメインアイソフォーム、BaNT 転位置ドメインアイソフォーム、およびBuNT 転位置ドメインアイソフォームである。 クロストリジウム毒素転位置ドメインアイソフォーム は、クロストリジウム毒素転位置ドメインアイソフォームが基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインと実質的に同様に機能することができ、本発明のあらゆる側面において 参照クロストリジウム毒素転位置ドメインの代わりとなることが出来る。
【００８２】
天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体の別の非限定的な例は、クロストリジウム毒素転位置ドメイン サブタイプ、例えば、サブタイプ BoNT/A1、BoNT/A2、BoNT/A3、BoNT/A4およびBoNT/A5からの転位置ドメイン；サブタイプ BoNT/B1、BoNT/B2、BoNT/B 二価(bivalent) および BoNT/B タンパク非分解性(nonproteolytic)からの転位置ドメイン；サブタイプ BoNT/C1-1および BoNT/C1-2からの転位置ドメイン；サブタイプ BoNT/E1、BoNT/E2およびBoNT/E3からの転位置ドメイン；およびサブタイプ BoNT/F1、BoNT/F2、BoNT/F3およびBoNT/F4からの転位置ドメインである。クロストリジウム毒素転位置ドメイン サブタイプ は、クロストリジウム毒素転位置ドメイン サブタイプが基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインと実質的に同様に機能することができ、本発明のあらゆる側面において参照クロストリジウム毒素転位置ドメインの代わりとなることが出来る。  
【００８３】
本明細書において用いる場合、「非-天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体」という用語は、ヒトの操作の助けを借りて生産されたあらゆるクロストリジウム毒素転位置ドメインを意味し、例えば、これらに限定されないが、ランダム突然変異誘発または合理的設計を用いて遺伝子操作によって生産されたクロストリジウム毒素転位置ドメインおよび化学合成によって生産されたクロストリジウム毒素転位置ドメインが挙げられる。非-天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体の非限定的な例としては、例えば、保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体、非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体、クロストリジウム毒素転位置ドメイン キメラ 変異体および活性のクロストリジウム毒素転位置ドメイン断片が挙げられる。
【００８４】
本明細書において用いる場合、「保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体」という用語は、参照クロストリジウム毒素転位置ドメイン配列 (表1)からの元のアミノ酸のものと類似の少なくとも１つの 性質を有する別のアミノ酸またはアミノ酸 アナログによって少なくとも１つの アミノ酸が置換されたクロストリジウム毒素転位置ドメインを意味する。性質の例としては、これらに限定されないが、類似のサイズ、トポグラフィー、電荷、疎水性、親水性、親油性、共有結合能、水素結合能、物理化学的性質等、またはそれらのあらゆる組合せが挙げられる。保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体は、保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインと実質的に同様に機能することができ、本発明のあらゆる側面において参照クロストリジウム毒素転位置ドメインと代わることが出来る。保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体は、１以上の アミノ酸、２以上の アミノ酸、３以上の アミノ酸、４以上の アミノ酸、５以上の アミノ酸、10以上の アミノ酸、20以上の アミノ酸、30以上の アミノ酸、40以上の アミノ酸、50以上の アミノ酸、100以上の アミノ酸、または200以上の アミノ酸、保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインから置換している可能性がある。保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体はまた、少なくとも 10 の連続する アミノ酸、少なくとも 15 の連続する アミノ酸、少なくとも20の連続するアミノ酸、または少なくとも25の連続するアミノ酸、保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインから置換している可能性があり、保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインに対して少なくとも50％のアミノ酸同一性、65％のアミノ酸同一性、75％のアミノ酸同一性、85％のアミノ酸同一性 または95％のアミノ酸同一性を有する。保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体の非限定的な例としては、例えば、保存的 BoNT/A 転位置ドメイン変異体、保存的 BoNT/B 転位置ドメイン変異体、保存的 BoNT/C1 転位置ドメイン変異体、保存的 BoNT/D 転位置ドメイン変異体、保存的 BoNT/E 転位置ドメイン変異体、保存的 BoNT/F 転位置ドメイン変異体、保存的 BoNT/G 転位置ドメイン変異体、保存的 TeNT 転位置ドメイン変異体、保存的 BaNT 転位置ドメイン変異体、および保存的 BuNT 転位置ドメイン変異体が挙げられる。
【００８５】
本明細書において用いる場合、「非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体」という用語は、1) 少なくとも１つの アミノ酸が非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインから欠失している； 2) 少なくとも１つの アミノ酸が非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメインが基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインに付加している； または 3) 少なくとも１つの アミノ酸が参照クロストリジウム毒素転位置ドメイン配列(表1)からの元のアミノ酸のものと類似の性質を共有していない別のアミノ酸またはアミノ酸アナログによって置換されている、クロストリジウム毒素転位置ドメインを意味する。非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体は、非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインと実質的に同様に機能することができ、本発明のあらゆる側面において、参照クロストリジウム毒素転位置ドメインと代わりうる。非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体は、１以上の アミノ酸、２以上の アミノ酸、３以上の アミノ酸、４以上の アミノ酸、５以上の アミノ酸、および10以上の アミノ酸、非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインから欠失している可能性がある。非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体は、１以上の アミノ酸、２以上の アミノ酸、３以上の アミノ酸、４以上の アミノ酸、５以上の アミノ酸、および10以上の アミノ酸、非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインに対して付加している可能性がある。非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体は、１以上の アミノ酸、２以上の アミノ酸、３以上の アミノ酸、４以上の アミノ酸、５以上の アミノ酸、10以上の アミノ酸、20以上の アミノ酸、30以上の アミノ酸、40以上の アミノ酸、50以上の アミノ酸、100以上の アミノ酸、または200以上の アミノ酸、非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインから置換している可能性がある。非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体はまた、少なくとも 10 の連続する アミノ酸、少なくとも 15 の連続する アミノ酸、少なくとも20の連続するアミノ酸、または少なくとも25の連続するアミノ酸、非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインから置換している可能性があり、非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体が基づく参照クロストリジウム毒素転位置ドメインに対して少なくとも50％のアミノ酸同一性、65％のアミノ酸同一性、75％のアミノ酸同一性、85％のアミノ酸同一性 または95％のアミノ酸同一性を有する。非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体の非限定的な例としては、例えば、非-保存的 BoNT/A 転位置ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/B 転位置ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/C1 転位置ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/D 転位置ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/E 転位置ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/F 転位置ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/G 転位置ドメイン変異体、および非-保存的 TeNT 転位置ドメイン変異体、非-保存的 BaNT 転位置ドメイン変異体、および非-保存的 BuNT 転位置ドメイン変異体が挙げられる。
【００８６】
本明細書において用いる場合、「クロストリジウム毒素転位置ドメイン キメラ」という用語は、少なくともクロストリジウム毒素転位置ドメインの一部および少なくとも１つのその他のポリペプチドの少なくとも一部を含み、表1の参照クロストリジウム毒素転位置ドメインとは異なる少なくとも１つの 性質を有する毒素 転位置ドメインを形成しているポリペプチドを意味し、ただし、このクロストリジウム毒素転位置ドメイン キメラは依然として神経伝達物質放出装置のコア成分を特異的に標的化することができるものであり、したがってクロストリジウム毒素が基質をタンパク分解により切断する細胞機構全体を実行することに寄与することができるものである。
【００８７】
本明細書において用いる場合、「活性のクロストリジウム毒素転位置ドメイン断片」という用語は、本発明の側面において有用であり得る転位置ドメインを含むあらゆる様々なクロストリジウム毒素断片を意味するが、ただし、かかる活性の断片は、LCの細胞内小胞から標的細胞の細胞質への放出を促進することができるものであり、 したがって、クロストリジウム毒素が基質をタンパク分解により切断する細胞機構の全体を実行することに寄与できるものである。クロストリジウム毒素の重鎖からの転位置ドメインはおよそ 410-430  アミノ酸の長さであり、転位置ドメインを含む(表1)。研究により、クロストリジウム毒素重鎖からの転位置ドメインの全長は、転位置ドメインの転位置活性に必要ではないことが示された。したがって、この態様の側面は、例えば、少なくとも 350 アミノ酸、少なくとも 375 アミノ酸、少なくとも 400 アミノ酸および少なくとも 425 アミノ酸の長さを有する転位置ドメインを含むクロストリジウム毒素転位置ドメインを含みうる。この態様の別の側面は、例えば、多くとも 350 アミノ酸、多くとも 375 アミノ酸、多くとも 400 アミノ酸 および多くとも 425 アミノ酸の長さを有する転位置ドメインを含むクロストリジウム毒素転位置ドメインを含みうる。
【００８８】
様々な配列アラインメント方法のいずれを用いて天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体および非-天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体のパーセント同一性を決定してもよく、例えば、これらに限定されないが、グローバル(global)方法、ローカル(local)方法およびハイブリッド方法、例えば、セグメントアプローチ方法が挙げられる。パーセント同一性を決定するプロトコールは当業者の技術範囲内で本教示から常套の手順である。
【００８９】
したがって、一つの態様において、本明細書に開示される改変クロストリジウム毒素 はクロストリジウム毒素転位置ドメインを含む。この態様の一つの側面において、クロストリジウム毒素転位置ドメインは、天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体、例えば、クロストリジウム毒素転位置ドメインアイソフォームまたはクロストリジウム毒素転位置ドメイン サブタイプを含む。この態様の別の側面において、クロストリジウム毒素転位置ドメインは、非-天然 クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体、例えば、保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体、非-保存的クロストリジウム毒素転位置ドメイン変異体、クロストリジウム毒素 キメラ 転位置ドメイン、活性のクロストリジウム毒素転位置ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【００９０】
別の態様において、クロストリジウム毒素転位置ドメインはBoNT/A 転位置ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BoNT/A 転位置ドメインは配列番号1のアミノ酸 449-873を含む。この態様の別の側面において、BoNT/A 転位置ドメインは、天然 BoNT/A 転位置ドメイン変異体、例えば、BoNT/A アイソフォームからの転位置ドメインまたはBoNT/A サブタイプからの転位置ドメインを含む。この態様の別の側面において、BoNT/A 転位置ドメインは、配列番号1の天然 BoNT/A 転位置ドメイン変異体 のアミノ酸 449-873、例えば、配列番号1のBoNT/A アイソフォームのアミノ酸 449-873または配列番号1のBoNT/A サブタイプのアミノ酸 449-873を含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/A 転位置ドメインは、非-天然 BoNT/A 転位置ドメイン変異体、例えば、保存的 BoNT/A 転位置ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/A 転位置ドメイン変異体、BoNT/A キメラ 転位置ドメイン、活性のBoNT/A 転位置ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/A 転位置ドメインは、配列番号1の非-天然 BoNT/A 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 449-873、例えば、配列番号1の保存的 BoNT/A 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 449-873、配列番号1の非-保存的 BoNT/A 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 449-873、配列番号1の活性のBoNT/A 転位置ドメイン断片のアミノ酸 449-873、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【００９１】
この態様の別の側面において、BoNT/A 転位置ドメインは、配列番号1のアミノ酸 449-873に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。 この態様のさらに別の側面において、BoNT/A 転位置ドメインは、配列番号1のアミノ酸 449-873に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００９２】
この態様の別の側面において、BoNT/A 転位置ドメインは、例えば、配列番号1のアミノ酸 449-873に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号1のアミノ酸 449-873に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号1のアミノ酸 449-873に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失；配列番号1のアミノ酸 449-873に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号1のアミノ酸 449-873に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号1のアミノ酸 449-873に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００９３】
この態様の別の側面において、BoNT/A 転位置ドメインは、例えば、配列番号1のアミノ酸 449-873に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換；配列番号1のアミノ酸 449-873に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100または200の連続するアミノ酸置換；配列番号1のアミノ酸 449-873に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号1のアミノ酸 449-873に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号1のアミノ酸 449-873に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加； または配列番号1のアミノ酸 449-873に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００９４】
別の態様において、クロストリジウム毒素転位置ドメインはBoNT/B 転位置ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BoNT/B 転位置ドメインは配列番号2のアミノ酸 442-860を含む。この態様の別の側面において、BoNT/B 転位置ドメインは、天然 BoNT/B 転位置ドメイン変異体、例えば、BoNT/B アイソフォームからの転位置ドメインまたはBoNT/B サブタイプからの転位置ドメインを含む。この態様の別の側面において、BoNT/B 転位置ドメインは、配列番号2の天然 BoNT/B 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 442-860、例えば、配列番号2のBoNT/B アイソフォームのアミノ酸 442-860または配列番号2のBoNT/B サブタイプのアミノ酸 442-860を含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/B 転位置ドメインは、非-天然 BoNT/B 転位置ドメイン変異体、例えば、保存的 BoNT/B 転位置ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/B 転位置ドメイン変異体、BoNT/B キメラ 転位置ドメイン、活性のBoNT/B 転位置ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/B 転位置ドメインは、配列番号2の非-天然 BoNT/B 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 442-860、例えば、配列番号2の保存的 BoNT/B 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 442-860、配列番号2の非-保存的 BoNT/B 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 442-860、配列番号2の活性のBoNT/B 転位置ドメイン断片のアミノ酸 442-860、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【００９５】
この態様の別の側面において、BoNT/B 転位置ドメインは、配列番号2のアミノ酸 442-860に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/B 転位置ドメインは、配列番号2のアミノ酸 442-860に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。 
【００９６】
この態様の別の側面において、BoNT/B 転位置ドメインは、例えば、配列番号2のアミノ酸 442-860に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号2のアミノ酸 442-860に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100または200の非連続アミノ酸置換； 配列番号2のアミノ酸 442-860に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号2のアミノ酸 442-860に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号2のアミノ酸 442-860に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号2のアミノ酸 442-860に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００９７】
この態様の別の側面において、BoNT/B 転位置ドメインは、例えば、配列番号2のアミノ酸 442-860に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号2のアミノ酸 442-860に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号2のアミノ酸 442-860に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号2のアミノ酸 442-860に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失；配列番号2のアミノ酸 442-860に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加； または配列番号2のアミノ酸 442-860に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【００９８】
別の態様において、クロストリジウム毒素転位置ドメインはBoNT/C1 転位置ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BoNT/C1 転位置ドメインは配列番号3のアミノ酸 450-868を含む。この態様の別の側面において、BoNT/C1 転位置ドメインは、天然 BoNT/C1 転位置ドメイン変異体、例えば、BoNT/C1 アイソフォームからの転位置ドメインまたはBoNT/C1 サブタイプからの転位置ドメインを含む。この態様の別の側面において、BoNT/C1 転位置ドメインは、配列番号3の天然 BoNT/C1 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 450-868、例えば、配列番号3のBoNT/C1 アイソフォームのアミノ酸 450-868または配列番号3のBoNT/C1 サブタイプのアミノ酸 450-868を含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/C1 転位置ドメインは、非-天然 BoNT/C1 転位置ドメイン変異体、例えば、保存的 BoNT/C1 転位置ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/C1 転位置ドメイン変異体、BoNT/C1 キメラ 転位置ドメイン、活性のBoNT/C1 転位置ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/C1 転位置ドメインは、配列番号3の非-天然 BoNT/C1 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 450-868、例えば、配列番号3の保存的 BoNT/C1 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 450-868、配列番号3の非-保存的 BoNT/C1 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 450-868、配列番号3の活性のBoNT/C1 転位置ドメイン断片のアミノ酸 450-868、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【００９９】
この態様の別の側面において、BoNT/C1 転位置ドメインは、配列番号3のアミノ酸 450-868に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。 この態様のさらに別の側面において、BoNT/C1 転位置ドメインは、配列番号3のアミノ酸 450-868に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１００】
この態様の別の側面において、BoNT/C1 転位置ドメインは、例えば、配列番号3のアミノ酸 450-868に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号3のアミノ酸 450-868に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号3のアミノ酸 450-868に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失；配列番号3のアミノ酸 450-868に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失；配列番号3のアミノ酸 450-868に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号3のアミノ酸 450-868に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１０１】
この態様の別の側面において、BoNT/C1 転位置ドメインは、例えば、配列番号3のアミノ酸 450-868に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号3のアミノ酸 450-868に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号3のアミノ酸 450-868に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号3のアミノ酸 450-868に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号3のアミノ酸 450-868に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加；配列番号3のアミノ酸 450-868に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１０２】
別の態様において、クロストリジウム毒素転位置ドメインは、BoNT/D 転位置ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BoNT/D 転位置ドメインは、配列番号4のアミノ酸 446-864を含む。この態様の別の側面において、BoNT/D 転位置ドメインは、天然 BoNT/D 転位置ドメイン変異体、例えば、BoNT/D アイソフォームからの転位置ドメインまたはBoNT/D サブタイプからの転位置ドメインを含む。この態様の別の側面において、BoNT/D 転位置ドメインは、配列番号4の天然 BoNT/D 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 446-864 、例えば、配列番号4のBoNT/D アイソフォームのアミノ酸 446-864または配列番号4のBoNT/D サブタイプのアミノ酸 446-864を含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/D 転位置ドメインは、非-天然 BoNT/D 転位置ドメイン変異体、例えば、保存的 BoNT/D 転位置ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/D 転位置ドメイン変異体、BoNT/D キメラ 転位置ドメイン、活性のBoNT/D 転位置ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/D 転位置ドメインは、配列番号4の非-天然 BoNT/D 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 446-864、例えば、配列番号4の保存的 BoNT/D 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 446-864、配列番号4の非-保存的 BoNT/D 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 446-864 、配列番号4の活性のBoNT/D 転位置ドメイン断片のアミノ酸 446-864、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【０１０３】
この態様の別の側面において、BoNT/D 転位置ドメインは、配列番号4のアミノ酸 446-864に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/D 転位置ドメインは、配列番号4のアミノ酸 446-864に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１０４】
この態様の別の側面において、BoNT/D 転位置ドメインは、例えば、配列番号4のアミノ酸 446-864に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号4のアミノ酸 446-864に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号4のアミノ酸 446-864に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号4のアミノ酸 446-864に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失；配列番号4のアミノ酸 446-864に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号4のアミノ酸 446-864に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１０５】
この態様の別の側面において、BoNT/D 転位置ドメインは、例えば、配列番号4のアミノ酸 446-864に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号4のアミノ酸 446-864に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号4のアミノ酸 446-864に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号4のアミノ酸 446-864に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号4のアミノ酸 446-864に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加； または配列番号4のアミノ酸 446-864に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１０６】
別の態様において、クロストリジウム毒素転位置ドメインは、BoNT/E 転位置ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BoNT/E 転位置ドメインは、配列番号5のアミノ酸 423-847を含む。この態様の別の側面において、BoNT/E 転位置ドメインは、天然 BoNT/E 転位置ドメイン変異体、例えば、BoNT/E アイソフォームからの転位置ドメインまたはBoNT/E サブタイプからの転位置ドメインを含む。この態様の別の側面において、BoNT/E 転位置ドメインは、配列番号5の天然 BoNT/E 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 423-847 、例えば、配列番号5のBoNT/E アイソフォームのアミノ酸 423-847または配列番号5のBoNT/E サブタイプのアミノ酸 423-847を含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/E 転位置ドメインは、非-天然 BoNT/E 転位置ドメイン変異体、例えば、保存的 BoNT/E 転位置ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/E 転位置ドメイン変異体、BoNT/E キメラ 転位置ドメイン、活性のBoNT/E 転位置ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/E 転位置ドメインは、配列番号5の非-天然 BoNT/E 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 423-847、例えば、配列番号5の保存的 BoNT/E 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 423-847、配列番号5の非-保存的 BoNT/E 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 423-847、配列番号5の活性のBoNT/E 転位置ドメイン断片のアミノ酸 423-847、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【０１０７】
この態様の別の側面において、BoNT/E 転位置ドメインは、配列番号5のアミノ酸 423-847に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/E 転位置ドメインは、配列番号5のアミノ酸 423-847に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１０８】
この態様の別の側面において、BoNT/E 転位置ドメインは、例えば、配列番号5のアミノ酸 423-847に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号5のアミノ酸 423-847に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号5のアミノ酸 423-847に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号5のアミノ酸 423-847に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失；配列番号5のアミノ酸 423-847に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号5のアミノ酸 423-847に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。 
【０１０９】
この態様の別の側面において、BoNT/E 転位置ドメインは、例えば、配列番号5のアミノ酸 423-847に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号5のアミノ酸 423-847に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号5のアミノ酸 423-847に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号5のアミノ酸 423-847に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号5のアミノ酸 423-847に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加； または配列番号5のアミノ酸 423-847に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１１０】
別の態様において、クロストリジウム毒素転位置ドメインは、BoNT/F 転位置ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BoNT/F 転位置ドメインは、配列番号6のアミノ酸 440-866を含む。この態様の別の側面において、BoNT/F 転位置ドメインは、天然 BoNT/F 転位置ドメイン変異体、例えば、BoNT/F アイソフォームからの転位置ドメインまたはBoNT/F サブタイプからの転位置ドメインを含む。 この態様の別の側面において、BoNT/F 転位置ドメインは、配列番号6の天然 BoNT/F 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 440-866 、例えば、配列番号6のBoNT/F アイソフォームのアミノ酸 440-866または配列番号6のBoNT/F サブタイプのアミノ酸 440-866を含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/F 転位置ドメインは、非-天然 BoNT/F 転位置ドメイン変異体、例えば、保存的 BoNT/F 転位置ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/F 転位置ドメイン変異体、BoNT/F キメラ 転位置ドメイン、活性のBoNT/F 転位置ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/F 転位置ドメインは、配列番号6の非-天然 BoNT/F 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 440-866、例えば、配列番号6の保存的 BoNT/F 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 440-866、配列番号6の非-保存的 BoNT/F 転位置ドメイン変異体 のアミノ酸 440-866 、配列番号6の活性のBoNT/F 転位置ドメイン断片のアミノ酸 440-866、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【０１１１】
この態様の別の側面において、BoNT/F 転位置ドメインは、配列番号6のアミノ酸 440-866に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/F 転位置ドメインは、配列番号6のアミノ酸 440-866に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。 
【０１１２】
この態様の別の側面において、BoNT/F 転位置ドメインは、例えば、配列番号6のアミノ酸 440-866に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号6のアミノ酸 440-866に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換；配列番号6のアミノ酸 440-866に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号6のアミノ酸 440-866に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失；配列番号6のアミノ酸 440-866に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号6のアミノ酸 440-866に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１１３】
この態様の別の側面において、BoNT/F 転位置ドメインは、例えば、配列番号6のアミノ酸 440-866に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号6のアミノ酸 440-866に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号6のアミノ酸 440-866に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号6のアミノ酸 440-866に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号6のアミノ酸 440-866に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加； または配列番号6のアミノ酸 440-866に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１１４】
別の態様において、クロストリジウム毒素転位置ドメインは、BoNT/G 転位置ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BoNT/G 転位置ドメインは、配列番号7のアミノ酸 447-865を含む。この態様の別の側面において、BoNT/G 転位置ドメインは、天然 BoNT/G 転位置ドメイン変異体、例えば、BoNT/G アイソフォームからの転位置ドメインまたはBoNT/G サブタイプからの転位置ドメインを含む。この態様の別の側面において、BoNT/G 転位置ドメインは、配列番号7の天然 BoNT/G 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 447-865 、例えば、配列番号7のBoNT/G アイソフォームのアミノ酸 447-865または配列番号7のBoNT/G サブタイプのアミノ酸 447-865を含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/G 転位置ドメインは、非-天然 BoNT/G 転位置ドメイン変異体、例えば、保存的 BoNT/G 転位置ドメイン変異体、非-保存的 BoNT/G 転位置ドメイン変異体、BoNT/G キメラ 転位置ドメイン、活性のBoNT/G 転位置ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/G 転位置ドメインは、配列番号7の非-天然 BoNT/G 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 447-865、例えば、配列番号7の保存的 BoNT/G 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 447-865、配列番号7の非-保存的 BoNT/G 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 447-865、配列番号7の活性のBoNT/G 転位置ドメイン断片のアミノ酸 447-865、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【０１１５】
この態様の別の側面において、BoNT/G 転位置ドメインは、 配列番号7のアミノ酸 447-865に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BoNT/G 転位置ドメインは、配列番号7のアミノ酸 447-865に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１１６】
この態様の別の側面において、BoNT/G 転位置ドメインは、例えば、配列番号7のアミノ酸 447-865に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号7のアミノ酸 447-865に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号7のアミノ酸 447-865に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号7のアミノ酸 447-865に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失；配列番号7のアミノ酸 447-865に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号7のアミノ酸 447-865に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１１７】
この態様の別の側面において、BoNT/G 転位置ドメインは、例えば、配列番号7のアミノ酸 447-865に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換；配列番号7のアミノ酸 447-865に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号7のアミノ酸 447-865に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号7のアミノ酸 447-865に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号7のアミノ酸 447-865に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加； または配列番号7のアミノ酸 447-865に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１１８】
別の態様において、クロストリジウム毒素転位置ドメインは、TeNT 転位置ドメインを含む。この態様の一つの側面において、TeNT 転位置ドメインは、配列番号8のアミノ酸 458-881を含む。この態様の別の側面において、TeNT 転位置ドメインは、天然 TeNT 転位置ドメイン変異体、例えば、TeNT アイソフォームからの転位置ドメインまたはTeNT サブタイプからの転位置ドメインを含む。この態様の別の側面において、TeNT 転位置ドメインは、配列番号8の天然 TeNT 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 458-881、例えば、配列番号8のTeNT アイソフォームのアミノ酸 458-881または配列番号8のTeNT サブタイプのアミノ酸 458-881を含む。この態様のさらに別の側面において、TeNT 転位置ドメインは、非-天然 TeNT 転位置ドメイン変異体、例えば、保存的 TeNT 転位置ドメイン変異体、非-保存的 TeNT 転位置ドメイン変異体、TeNT キメラ 転位置ドメイン、活性のTeNT 転位置ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、TeNT 転位置ドメインは、配列番号8の非-天然 TeNT 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 458-881、例えば、配列番号8の保存的 TeNT 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 458-881、配列番号8の非-保存的 TeNT 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 458-881、配列番号8の活性のTeNT 転位置ドメイン断片のアミノ酸 458-881、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【０１１９】
この態様の別の側面において、TeNT 転位置ドメインは、配列番号8のアミノ酸 458-881に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、TeNT 転位置ドメインは、配列番号8のアミノ酸 458-881に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。 
【０１２０】
この態様の別の側面において、TeNT 転位置ドメインは、例えば、配列番号8のアミノ酸 458-881に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号8のアミノ酸 458-881に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換；配列番号8のアミノ酸 458-881に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失；配列番号8のアミノ酸 458-881に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号8のアミノ酸 458-881に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号8のアミノ酸 458-881に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１２１】
この態様の別の側面において、TeNT 転位置ドメインは、例えば、配列番号8のアミノ酸 458-881に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号8のアミノ酸 458-881に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号8のアミノ酸 458-881に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号8のアミノ酸 458-881に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号8のアミノ酸 458-881に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加； または配列番号8のアミノ酸 458-881に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１２２】
別の態様において、クロストリジウム毒素転位置ドメインは、BaNT 転位置ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BaNT 転位置ドメインは、配列番号9のアミノ酸 432-857を含む。この態様の別の側面において、BaNT 転位置ドメインは、天然 BaNT 転位置ドメイン変異体、例えば、BaNT アイソフォームからの転位置ドメインまたはBaNT サブタイプからの転位置ドメインを含む。この態様の別の側面において、BaNT 転位置ドメインは、配列番号9の天然 BaNT 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 432-857、例えば、配列番号9のBaNT アイソフォームのアミノ酸 432-857または配列番号9のBaNT サブタイプのアミノ酸 432-857を含む。この態様のさらに別の側面において、BaNT 転位置ドメインは、非-天然 BaNT 転位置ドメイン変異体、例えば、保存的 BaNT 転位置ドメイン変異体、非-保存的 BaNT 転位置ドメイン変異体、BaNT キメラ 転位置ドメイン、活性のBaNT転位置ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、BaNT 転位置ドメインは、配列番号9の非-天然 BaNT 転位置ドメイン変異体 のアミノ酸 432-857、例えば、配列番号9の保存的 BaNT 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 432-857、配列番号9の非-保存的 BaNT 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 432-857、配列番号9の活性のBaNT転位置ドメイン断片のアミノ酸 432-857、またはそれらのいずれかの組合せを含む。
【０１２３】
この態様の別の側面において、BaNT 転位置ドメインは、配列番号9のアミノ酸 432-857に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BaNT 転位置ドメインは、配列番号9のアミノ酸 432-857に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１２４】
この態様の別の側面において、BaNT 転位置ドメインは、例えば、配列番号9のアミノ酸 432-857に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号9のアミノ酸 432-857に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号9のアミノ酸 432-857に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号9のアミノ酸 432-857に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失；配列番号9のアミノ酸 432-857に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号9のアミノ酸 432-857に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。 
【０１２５】
この態様の別の側面において、BaNT 転位置ドメインは、例えば、配列番号9のアミノ酸 432-857に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号9のアミノ酸 432-857に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号9のアミノ酸 432-857に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号9のアミノ酸 432-857に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号9のアミノ酸 432-857に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加； または配列番号9のアミノ酸 432-857に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１２６】
別の態様において、クロストリジウム毒素転位置ドメインは、BuNT 転位置ドメインを含む。この態様の一つの側面において、BuNT 転位置ドメインは、配列番号10のアミノ酸 423-847を含む。この態様の別の側面において、BuNT 転位置ドメインは、天然 BuNT 転位置ドメイン変異体、例えば、BuNT アイソフォームからの転位置ドメインまたはBuNT サブタイプからの転位置ドメインを含む。この態様の別の側面において、BuNT 転位置ドメインは、配列番号10の天然 BuNT 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 423-847、例えば、配列番号10のBuNT アイソフォームのアミノ酸 423-847または配列番号10のBuNT サブタイプのアミノ酸 423-847を含む。この態様のさらに別の側面において、BuNT 転位置ドメインは、非-天然 BuNT 転位置ドメイン変異体、例えば、保存的 BuNT 転位置ドメイン変異体、非-保存的 BuNT 転位置ドメイン変異体、BuNT キメラ 転位置ドメイン、活性のBuNT 転位置ドメイン断片、またはそれらのいずれかの組合せを含む。この態様のさらに別の側面において、BuNT 転位置ドメインは、配列番号10の非-天然 BuNT 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 423-847、例えば、配列番号10の保存的 BuNT 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 423-847、配列番号10の非-保存的 BuNT 転位置ドメイン変異体のアミノ酸 423-847、配列番号10の活性のBuNT 転位置ドメイン断片のアミノ酸 423-847、またはそれらのいずれかの組合せを含む。 
【０１２７】
この態様の別の側面において、BuNT 転位置ドメインは、配列番号10のアミノ酸 423-847に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BuNT 転位置ドメインは、配列番号10のアミノ酸 423-847に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１２８】
この態様の別の側面において、BuNT 転位置ドメインは、例えば、配列番号10のアミノ酸 423-847に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換；配列番号10のアミノ酸 423-847に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸置換； 配列番号10のアミノ酸 423-847に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号10のアミノ酸 423-847に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸欠失； 配列番号10のアミノ酸 423-847に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加； または配列番号10のアミノ酸 423-847に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１２９】
この態様の別の側面において、BuNT 転位置ドメインは、例えば、配列番号10のアミノ酸 423-847に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換；配列番号10のアミノ酸 423-847に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸置換； 配列番号10のアミノ酸 423-847に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失； 配列番号10のアミノ酸 423-847に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸欠失；配列番号10のアミノ酸 423-847に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加； または配列番号10のアミノ酸 423-847に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、または100の連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１３０】
本発明の別の側面において、改変クロストリジウム毒素は、部分的には、オピオイドペプチド結合ドメインを含む。「結合ドメイン」とは、生理的条件下で標的細胞に特徴的な細胞表面マーカーに優先的に結合することができるアミノ酸配列 領域を意味する。細胞表面マーカーは、ポリペプチド、多糖、脂質、糖タンパク質、リポタンパク質を含み得、またはこれらの１以上の構造的特徴を有しうる。「優先的に相互作用する」とは、細胞表面マーカーについての結合ドメインの解離定数 (Kd) が、あらゆる別の細胞表面マーカーについての結合ドメインのものより少なくとも一桁小さいことを意味する。好ましくは、解離定数は 少なくとも 2桁小さく、より好ましくは解離定数は神経毒素または改変神経毒素が曝されているあらゆるその他の細胞表面マーカーについての結合ドメインのものより、少なくとも 3桁小さい。結合ドメインの例は、例えば、Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capability and Enhanced Targeting Activity、米国特許出願第11/776,043号 (Jul. 11、2007)； Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Clostridial Toxin Target Cells、米国特許出願第11/776,052号 (Jul. 11、2007)； およびSteward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Non-Clostridial Toxin Target Cells、米国特許出願第11/776,075号 (Jul. 11、2007)に記載されており、そのそれぞれはその全体を引用により本明細書に含める。
【０１３１】
本明細書に開示されるオピオイドペプチド結合ドメインの非限定的な例は、例えば、エンケファリン、エンドモルフィン、エンドルフィン、ダイノルフィン、ノシセプチンまたはヘモルフィンである。したがって、一つの態様において、結合ドメインはオピオイドペプチドを含む。
【０１３２】
別の態様において、オピオイドペプチドはエンケファリンペプチドを含む。この態様の側面において、エンケファリン ペプチドは、Leu-エンケファリン、Met-エンケファリン、Met-エンケファリン MRGLまたはMet-エンケファリン MRFを含む。この態様の別の側面において、エンケファリン ペプチドは、 配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55を含む。
【０１３３】
この態様の別の側面において、エンケファリンは、配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、エンケファリンは、配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１３４】
この態様の別の側面において、エンケファリンは、例えば、配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55に対して少なくとも 1、2、または3の非連続アミノ酸置換；配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55に対して多くとも 1、2、または3の非連続アミノ酸置換；配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55に対して少なくとも 1、2、または3の非連続アミノ酸欠失； 配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55に対して多くとも 1、2、または3の非連続アミノ酸欠失； 配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55に対して少なくとも 1、2、または3の非連続アミノ酸付加；または配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55に対して多くとも 1、2、または3の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１３５】
この態様の別の側面において、エンケファリンは、例えば、配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55に対して少なくとも 1、2、または3の連続するアミノ酸置換； 配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55に対して多くとも 1、2、または3の連続するアミノ酸置換；配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55に対して少なくとも 1、2、または3の連続するアミノ酸欠失； 配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55に対して多くとも 1、2、または3の連続するアミノ酸欠失；配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55に対して少なくとも 1、2、または3の連続するアミノ酸付加；または配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55に対して多くとも 1、2、または3の連続するアミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１３６】
別の態様において、オピオイドペプチドは、ウシ副腎髄質-22 (BAM22) ペプチドを含む。この態様の側面において、BAM22 ペプチドは、BAM22 ペプチド (1-12)、BAM22 ペプチド (6-22)、BAM22 ペプチド (8-22) またはBAM22 ペプチド (1-22)を含む。この態様の別の側面において、BAM22 ペプチドは、配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22 または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22を含む。
【０１３７】
この態様の別の側面において、BAM22は、配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22；または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、BAM22 ペプチド 結合ドメイン は、配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22；または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22 に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１３８】
この態様の別の側面において、BAM22 ペプチドは、例えば、配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22；または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22に対して少なくとも 1、2、3、4、または5の非連続アミノ酸置換；配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22；または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22に対して多くとも 1、2、3、4、または5の非連続アミノ酸置換；配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22；または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22に対して少なくとも 1、2、3、4、または5の非連続アミノ酸欠失； 配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22；または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22に対して多くとも 1、2、3、4、または5の非連続アミノ酸欠失；配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22；または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22に対して少なくとも 1、2、3、4、または5の非連続アミノ酸付加；または配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のア��ノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22；または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22に対して多くとも 1、2、3、4、または5の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１３９】
この態様の別の側面において、BAM22 は、例えば、配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22；または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22に対して少なくとも 1、2、3、4、または5の連続するアミノ酸置換；配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22；または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22に対して多くとも 1、2、3、4、または5の連続するアミノ酸置換； 配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22；または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22に対して少なくとも 1、2、3、4、または5の連続するアミノ酸欠失； 配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22；または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22に対して多くとも 1、2、3、4、または5の連続するアミノ酸欠失；配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22；または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22に対して少なくとも 1、2、3、4、または5の連続するアミノ酸付加；または 配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22；または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22 に対して多くとも 1、2、3、4、または5の連続するアミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。  
【０１４０】
別の態様において、オピオイドペプチドは、エンドモルフィン ペプチドを含む。この態様の側面において、エンドモルフィン ペプチドは、エンドモルフィン-1またはエンドモルフィン-2を含む。この態様の別の側面において、エンドモルフィン ペプチドは、配列番号62または配列番号63を含む。
【０１４１】
この態様の別の側面において、エンドモルフィンは、配列番号62または配列番号63に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。 この態様のさらに別の側面において、エンドモルフィン は、配列番号62または配列番号63に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１４２】
この態様の別の側面において、エンドモルフィンは、例えば、配列番号62または配列番号63に対して少なくとも 1、2、または3の非連続アミノ酸置換；配列番号62または配列番号63に対して多くとも 1、2、または3の非連続アミノ酸置換；配列番号62または配列番号63に対して少なくとも 1、2、または3の非連続アミノ酸欠失； 配列番号62または配列番号63に対して多くとも 1、2、または3の非連続アミノ酸欠失；配列番号62または配列番号63に対して少なくとも 1、2、または3の非連続アミノ酸付加； または配列番号62または配列番号63に対して多くとも 1、2、または3の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１４３】
この態様の別の側面において、エンドモルフィンは、例えば、配列番号62または配列番号63に対して少なくとも 1、2、または3の連続するアミノ酸置換； 配列番号62または配列番号63に対して多くとも 1、2、または3の連続するアミノ酸置換；配列番号62または配列番号63に対して少なくとも 1、2、または3の連続するアミノ酸欠失； 配列番号62または配列番号63に対して多くとも 1、2、または3の連続するアミノ酸欠失；配列番号62または配列番号63に対して少なくとも 1、2、または3の連続するアミノ酸付加； または配列番号62または配列番号63に対して多くとも 1、2、または3の連続するアミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。 
【０１４４】
別の態様において、オピオイドペプチドは、エンドルフィン ペプチドを含む。この態様の側面において、エンドルフィン ペプチドは、エンドルフィン-α、ネオエンドルフィン-α、エンドルフィン-β、ネオエンドルフィン-βまたはエンドルフィン-γを含む。この態様の別の側面において、エンドルフィン ペプチドは、配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69を含む。
【０１４５】
この態様の別の側面において、エンドルフィンは、配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、エンドルフィンは、配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１４６】
この態様の別の側面において、エンドルフィンは、例えば、配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69に対して少なくとも 1、2、3、4、または5の非連続アミノ酸置換；配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69に対して多くとも 1、2、3、4、または5の非連続アミノ酸置換； 配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69に対して少なくとも 1、2、3、4、または5の非連続アミノ酸欠失；配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69に対して多くとも 1、2、3、4、または5の非連続アミノ酸欠失；配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69に対して少なくとも 1、2、3、4、または5の非連続アミノ酸付加；または配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69に対して多くとも 1、2、3、4、または5の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１４７】
この態様の別の側面において、エンドルフィンは、例えば、配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69に対して少なくとも 1、2、3、4、または5の連続するアミノ酸置換；配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69に対して多くとも 1、2、3、4、または5の連続するアミノ酸置換； 配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69に対して少なくとも 1、2、3、4、または5の連続するアミノ酸欠失； 配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69に対して多くとも 1、2、3、4、または5の連続するアミノ酸欠失；配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69に対して少なくとも 1、2、3、4、または5の連続するアミノ酸付加；または配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69に対して多くとも 1、2、3、4、または5の連続するアミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。  
【０１４８】
別の態様において、オピオイドペプチドは、ダイノルフィン ペプチドを含む。この態様の側面において、ダイノルフィン ペプチドは、ダイノルフィン A、ダイノルフィン B (ロイモルフィン)またはリモルフィンを含む。この態様の別の側面において、ダイノルフィン ペプチドは、配列番号70、配列番号71、配列番号72、配列番号73、配列番号74、配列番号75、配列番号76、配列番号77、配列番号78、配列番号79、配列番号80、配列番号81、配列番号82、配列番号83、配列番号84、配列番号85、配列番号86、配列番号87、配列番号88、配列番号89、配列番号90、配列番号91、配列番号92、配列番号93、配列番号94、配列番号95、配列番号96、配列番号97、配列番号98、配列番号99または配列番号100を含む。
【０１４９】
この態様の別の側面において、ダイノルフィンは、配列番号70、配列番号79または配列番号95に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、ダイノルフィンは、配列番号70、配列番号79または配列番号95に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１５０】
この態様の別の側面において、ダイノルフィンは、例えば、配列番号70、配列番号79または配列番号95に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の非連続アミノ酸置換； 配列番号70、配列番号79または配列番号95に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の非連続アミノ酸置換；配列番号70、配列番号79または配列番号95に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の非連続アミノ酸欠失；配列番号70、配列番号79または配列番号95に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の非連続アミノ酸欠失； 配列番号70、配列番号79または配列番号95に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の非連続アミノ酸付加；または配列番号70、配列番号79または配列番号95に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１５１】
この態様の別の側面において、ダイノルフィンは、例えば、配列番号70、配列番号79または配列番号95に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の連続するアミノ酸置換；配列番号70、配列番号79または配列番号95に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の連続するアミノ酸置換；配列番号70、配列番号79または配列番号95に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の連続するアミノ酸欠失； 配列番号70、配列番号79または配列番号95に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の連続するアミノ酸欠失； 配列番号70、配列番号79または配列番号95に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の連続するアミノ酸付加；または配列番号70、配列番号79または配列番号95に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の連続するアミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１５２】
別の態様において、オピオイドペプチドは、ノシセプチン ペプチドを含む。この態様の側面において、ノシセプチン ペプチドは、ノシセプチン RK、ノシセプチン、神経ペプチド 1、神経ペプチド 2または神経ペプチド 3を含む。この態様の別の側面において、ノシセプチン ペプチドは、配列番号101、配列番号102、配列番号103、配列番号104、配列番号105、配列番号106、配列番号107、配列番号108、配列番号109または配列番号110を含む。
【０１５３】
この態様の別の側面において、ノシセプチンは、配列番号101、配列番号108、配列番号109または配列番号110に対して、例えば、少なくとも 70％、少なくとも 75％、少なくとも 80％、少なくとも 85％、少なくとも 90％または少なくとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。この態様のさらに別の側面において、ノシセプチンは、配列番号101、配列番号108、配列番号109または配列番号110に対して、例えば、多くとも 70％、多くとも 75％、多くとも 80％、多くとも 85％、多くとも 90％ または多くとも 95％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１５４】
この態様の別の側面において、ノシセプチンは、例えば、配列番号101、配列番号108、配列番号109または配列番号110に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の非連続アミノ酸置換；配列番号101、配列番号108、配列番号109または配列番号110に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の非連続アミノ酸置換； 配列番号101、配列番号108、配列番号109または配列番号110に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の非連続アミノ酸欠失；配列番号101、配列番号108、配列番号109または配列番号110に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の非連続アミノ酸欠失； 配列番号101、配列番号108、配列番号109または配列番号110に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の非連続アミノ酸付加；または配列番号101、配列番号108、配列番号109または配列番号110に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の非連続アミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１５５】
この態様の別の側面において、ノシセプチンは、例えば、配列番号101、配列番号108、配列番号109または配列番号110に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の連続するアミノ酸置換；配列番号101、配列番号108、配列番号109または配列番号110に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の連続するアミノ酸置換； 配列番号101、配列番号108、配列番号109または配列番号110に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の連続するアミノ酸欠失；配列番号101、配列番号108、配列番号109または配列番号110に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の連続するアミノ酸欠失；配列番号101、配列番号108、配列番号109または配列番号110に対して少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の連続するアミノ酸付加； または配列番号101、配列番号108、配列番号109または配列番号110に対して多くとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の連続するアミノ酸付加を有するポリペプチドを含む。
【０１５６】
クロストリジウム毒素はそれぞれおよそ 150 kDaの一本鎖ポリペプチドとして翻訳され、それは次いで天然プロテアーゼによりジスルフィドループ内でタンパク分解切断により切断される(図18)。この切断は、ジスルフィド架橋を形成する２つのシステイン残基の間に作られる別々の二本鎖ループ領域内で起こる。この翻訳後プロセシングにより、およそ 50 kDaの軽鎖 (LC)およびおよそ 100 kDaの重鎖 (HC)が２つの鎖の間の一つのジスルフィド結合および非共有相互作用によって一緒になって含まれる二本鎖分子が生じる(図2)。改変クロストリジウム毒素の組換え生産を容易にするために、外来性プロテアーゼ切断部位を用いて、本明細書に開示される一本鎖ポリペプチド形態の改変クロストリジウム毒素を二本鎖形態に変換することが出来る。例えば、それぞれを引用によりその全体を本明細書に含める、Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Targeting Capabilities For Endogenous Clostridial Toxin Receptor Systems、米国特許出願公開US 2008/0096248 (Apr. 24、2008)； Steward, L.E. et al., Activatable Clostridial Toxins、米国特許出願公開US 2008/0032930 (Feb. 7、2008)； Steward、前掲、(2007)； Dolly、前掲、(2007)； Foster、前掲、WO 2006/059093 (2006)；およびFoster、前掲、WO 2006/059105 (2006)を参照。
【０１５７】
あらゆるすべてのプロテアーゼ切断部位が、一本鎖ポリペプチド形態のクロストリジウム毒素を二本鎖形態へと変換するために用いることが出来ることが想定され、例えば、これらに限定されないが、内因性 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位および外来性プロテアーゼ切断部位が挙げられる。したがって、本発明の一つの側面において、改変クロストリジウム毒素は、部分的には、二本鎖ループ領域内の内因性プロテアーゼ切断部位を含む。本発明の別の側面において、改変クロストリジウム毒素は、部分的には、二本鎖ループ領域内の外来性プロテアーゼ切断部位を含む。本明細書において用いる場合、「二本鎖ループ領域」という用語は、一本鎖形態のクロストリジウム毒素を二本鎖形態に変換するために用いられるプロテアーゼ切断部位を含むクロストリジウム毒素のアミノ酸配列を意味する。クロストリジウム毒素 二本鎖ループ領域の非限定的な例としては、例えば、配列番号1のアミノ酸 430-454 を含むBoNT/Aの二本鎖ループ領域； 配列番号2のアミノ酸 437-446を含むBoNT/Bの二本鎖ループ領域；配列番号3の アミノ酸 437-453を含むBoNT/C1の二本鎖ループ領域；配列番号4のアミノ酸 437-450を含むBoNT/Dの二本鎖ループ領域；配列番号5のアミノ酸 412-426 を含むBoNT/Eの二本鎖ループ領域； 配列番号6のアミノ酸 429-445を含むBoNT/Fの二本鎖ループ領域； 配列番号7のアミノ酸 436-450を含むBoNT/Gの二本鎖ループ領域；および配列番号8 のアミノ酸 439-467を含むTeNTの二本鎖ループ領域が挙げられる(表2)。
【０１５８】
表2. クロストリジウム毒素の二本鎖ループ領域
【表２】
2011514307.tif 000004
【０１５９】
本明細書において用いる場合、「内因性二本鎖ループプロテアーゼ切断部位」という用語は、「天然二本鎖ループプロテアーゼ切断部位」と同義であり、天然クロストリジウム毒素の二本鎖ループ領域内にみられる天然プロテアーゼ切断部位を意味し、例えばこれらに限定されないが、天然 クロストリジウム毒素 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位 変異体、例えば、クロストリジウム毒素 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位アイソフォームおよびクロストリジウム毒素 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位サブタイプが挙げられる。内因性プロテアーゼ切断部位の非限定的な例としては、例えば、BoNT/A 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位、BoNT/B 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位、BoNT/C1 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位、BoNT/D 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位、BoNT/E 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位、BoNT/F 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位、BoNT/G 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位および TeNT 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位が挙げられる。
【０１６０】
上記のように、クロストリジウム毒素はおよそ 150 kDaの一本鎖ポリペプチドとして翻訳され、次いで天然プロテアーゼによりジスルフィドループ内にてタンパク分解切断により切断される。この翻訳後プロセシングにより、およそ 50 kDaの軽鎖 (LC)およびおよそ 100 kDaの重鎖 (HC)が一つのジスルフィド結合および非共有相互作用によって一緒になって含まれる二本鎖分子が生じる。プロテアーゼの実体(identity)は現在知られていないが、多くのクロストリジウム毒素についての二本鎖ループプロテアーゼ切断部位が決定されている。BoNTにおいて、K448-A449での切断は一本鎖ポリペプチド形態のBoNT/Aを二本鎖形態へと変換する； K441-A442での切断は一本鎖ポリペプチド形態のBoNT/Bを二本鎖形態へと変換する； K449-T450での切断は一本鎖ポリペプチド形態のBoNT/C1を二本鎖形態へと変換する； R445-D446での切断は一本鎖ポリペプチド形態の BoNT/Dを二本鎖形態へと変換する； R422-K423での切断は一本鎖ポリペプチド形態のBoNT/Eを二本鎖形態へと変換する； K439-A440での切断は一本鎖ポリペプチド形態のBoNT/Fを二本鎖形態へと変換する；およびK446-S447での切断は一本鎖ポリペプチド形態のBoNT/Gを二本鎖形態へと変換する。一本鎖ポリペプチド形態のTeNTの A457-S458でのタンパク分解切断の結果、二本鎖形態が生じる。一本鎖ポリペプチド形態のBaNTのK431-N432でのタンパク分解切断の結果、二本鎖形態が生じる。一本鎖ポリペプチド形態のBuNTのR422-K423でのタンパク分解切断の結果、二本鎖形態が生じる。かかる二本鎖ループプロテアーゼ切断部位は改変クロストリジウム毒素にインフレームに作動可能に連結されて融合タンパク質とされる。しかし、二本鎖ループ内の付加的な切断部位も切断されるようであり、失われる小さいペプチド断片の生成をもたらすことに注意されたい。非限定的な例として、BoNT/A 一本鎖ポリペプチドの切断は、最終的には二本鎖ループ内の１０アミノ酸断片の欠失をもたらす。 
【０１６１】
したがって、一つの態様において、内因性クロストリジウム毒素二本鎖ループプロテアーゼ切断部位を含むプロテアーゼ切断部位が一本鎖毒素の二本鎖形態への変換に用いられる。この態様の側面において、タンパク分解切断による二本鎖形態への変換は、例えば、BoNT/A 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位、BoNT/B 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位、BoNT/C1 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位、BoNT/D 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位、BoNT/E 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位、BoNT/F 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位、BoNT/G 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位、TeNT 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位、BaNT 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位、またはBuNT 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位を含む部位から起こる。
【０１６２】
この態様の別の側面において、タンパク分解切断による二本鎖形態への変換は、例えば、配列番号1のアミノ酸 430-454を含むBoNT/Aの二本鎖ループ領域； 配列番号2のアミノ酸 437-446を含むBoNT/Bの二本鎖ループ領域；配列番号3のアミノ酸 437-453を含むBoNT/C1の二本鎖ループ領域；配列番号4のアミノ酸 437-450を含むBoNT/Dの二本鎖ループ領域；配列番号5のアミノ酸 412-426を含むBoNT/Eの二本鎖ループ領域；配列番号6のアミノ酸 429-445を含むBoNT/Fの二本鎖ループ領域；配列番号7のアミノ酸 436-450を含むBoNT/Gの二本鎖ループ領域； または、配列番号8のアミノ酸 439-467を含むTeNTの二本鎖ループ領域；配列番号9のアミノ酸 421-435を含むBaNTの二本鎖ループ領域； または配列番号10のアミノ酸 412-426を含むBuNTの二本鎖ループ領域を含む部位から起こる。
【０１６３】
外来性プロテアーゼ切断部位もまた、本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素の一本鎖ポリペプチド形態を二本鎖形態へと変換するのに利用できると考えられる。本明細書において用いる場合、「外来性プロテアーゼ切断部位」という用語は、「非天然プロテアーゼ切断部位」または「非ネイティブプロテアーゼ切断部位」と同義であり、天然クロストリジウム毒素からの二本鎖ループ領域に通常は存在しないプロテアーゼ切断部位を意味するが、ただし、外来性プロテアーゼ切断部位はヒトプロテアーゼ切断部位ではなく、また、本明細書に開示される活性化可能ポリペプチドをコードするコンストラクトを発現する宿主細胞において発現されるプロテアーゼに感受性のプロテアーゼ切断部位ではない。
【０１６４】
あらゆるすべての外来性プロテアーゼ切断部位が一本鎖ポリペプチド形態のクロストリジウム毒素を二本鎖形態に変換するのに利用でき、本発明の側面の実施に有用であると考えられる。外来性プロテアーゼ切断部位の非限定的な例としては、例えば、植物パパイン切断部位、昆虫パパイン切断部位、甲殻類パパイン切断部位、エンテロキナーゼ切断部位、ヒトライノウイルス 3C プロテアーゼ切断部位、ヒトエンテロウイルス 3C プロテアーゼ切断部位、タバコエッチウイルス (TEV) プロテアーゼ切断部位、タバコ葉脈はん紋ウイルス (TVMV) 切断部位、サブチリシン 切断部位、ヒドロキシルアミン 切断部位、または カスパーゼ 3 切断部位が挙げられる。
【０１６５】
あらゆるすべての長さの外来性プロテアーゼ切断部位が本発明の側面において有用であり得ると考えられるが、ただし、外来性プロテアーゼ切断部位は、そのそれぞれのプロテアーゼによって切断されることができるものである。したがって、この態様の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、少なくとも 6 アミノ酸、少なくとも 7 アミノ酸、少なくとも 8 アミノ酸、少なくとも 9 アミノ酸、少なくとも 10 アミノ酸、少なくとも 15 アミノ酸、少なくとも 20 アミノ酸、少なくとも 25 アミノ酸、少なくとも 30 アミノ酸、少なくとも 40 アミノ酸、少なくとも 50 アミノ酸、または少なくとも 60 アミノ酸の長さを有しうる。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、多くとも 6 アミノ酸、多くとも 7 アミノ酸、多くとも 8 アミノ酸、多くとも 9 アミノ酸、多くとも 10 アミノ酸、多くとも 15 アミノ酸、多くとも 20 アミノ酸、多くとも 25 アミノ酸、多くとも 30 アミノ酸、多くとも 40 アミノ酸、多くとも 50 アミノ酸、または多くとも 60 アミノ酸の長さを有しうる。
【０１６６】
一つの態様において、外来性プロテアーゼ切断部位は改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置する。この態様の側面において、改変クロストリジウム毒素は外来性プロテアーゼ切断部位を含み、例えば、植物パパイン切断部位、昆虫パパイン切断部位、甲殻類パパイン切断部位、非ヒトエンテロキナーゼプロテアーゼ切断部位、タバコエッチウイルスプロテアーゼ切断部位、タバコ葉脈はん紋ウイルスプロテアーゼ切断部位、ヒトライノウイルス 3C プロテアーゼ切断部位、ヒトエンテロウイルス 3C プロテアーゼ切断部位、サブチリシン 切断部位、ヒドロキシルアミン切断部位、SUMO/ULP-1 プロテアーゼ切断部位、および非ヒト カスパーゼ 3 切断部位を含む。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、改変BoNT/A、改変BoNT/B、改変BoNT/C1、改変BoNT/D、改変BoNT/E、改変BoNT/F、改変BoNT/G、改変TeNT、改変BaNT、または改変BuNTの二本鎖ループ内に位置する。
【０１６７】
この態様の一つの側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置する非ヒト エンテロキナーゼ切断部位を含みうる。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するウシ エンテロキナーゼ プロテアーゼ切断部位を含みうる。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、配列番号21を含む改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するウシ エンテロキナーゼ プロテアーゼ切断部位を含みうる。この態様のさらに別の側面において、ウシ エンテロキナーゼ プロテアーゼ切断部位は、例えば、改変BoNT/A、改変BoNT/B、改変BoNT/C1、改変BoNT/D、改変BoNT/E、改変BoNT/F、改変BoNT/G、改変TeNT、改変BaNT、または改変BuNTの二本鎖ループ内に位置する。
【０１６８】
この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するタバコエッチウイルス プロテアーゼ切断部位を含みうる。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、コンセンサス配列 E-P5-P4-Y-P2-Q*-G (配列番号22)または E-P5-P4-Y-P2-Q*-S (配列番号23)を含む改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するタバコエッチウイルス プロテアーゼ切断部位を含み得、ここで、P2、P4およびP5 はいずれのアミノ酸でもよい。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、配列番号24、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29、配列番号30、配列番号31、配列番号32 または配列番号33を含む改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するタバコエッチウイルス プロテアーゼ切断部位を含みうる。この態様のさらに別の側面において、タバコエッチウイルス プロテアーゼ切断部位は、例えば、改変BoNT/A、改変BoNT/B、改変BoNT/C1、改変BoNT/D、改変BoNT/E、改変BoNT/F、改変BoNT/G、改変TeNT、改変BaNT、または改変BuNTの二本鎖ループ内に位置する。
【０１６９】
この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するタバコ葉脈はん紋ウイルス プロテアーゼ切断部位を含みうる。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、コンセンサス配列 P6-P5-V-R-F-Q*-G (配列番号113) またはP6-P5-V-R-F-Q*-S (配列番号114)を含む改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するタバコ葉脈はん紋ウイルス プロテアーゼ切断部位を含み得、ここで、P5およびP6 はいずれのアミノ酸でもよい。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、配列番号115、配列番号116、配列番号117、または配列番号118を含む改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するタバコ葉脈はん紋ウイルス プロテアーゼ切断部位を含みうる。この態様のさらに別の側面において、タバコ葉脈はん紋ウイルス プロテアーゼ切断部位 は、例えば、改変BoNT/A、改変BoNT/B、改変BoNT/C1、改変BoNT/D、改変BoNT/E、改変BoNT/F、改変BoNT/G、改変TeNT、改変BaNT、または 改変BuNTの二本鎖ループ内に位置する。
【０１７０】
この態様のさらに別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するヒトライノウイルス 3C プロテアーゼ切断部位を含みうる。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、コンセンサス配列 P5-P4-L-F-Q*-G-P (配列番号34)を含む改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するヒトライノウイルス 3C プロテアーゼ切断部位を含み得、ここで、 P4はG、A、V、L、I、M、SまたはTであり、P5はいずれのアミノ酸でもよく、DまたはEが好ましい。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、配列番号35、配列番号36、配列番号37、配列番号38、配列番号39または配列番号40を含む改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するヒトライノウイルス 3C プロテアーゼ切断部位を含みうる。 この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、PRESCISSION（登録商標）によって切断されうる改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するヒトライノウイルス 3C プロテアーゼを含みうる。この態様のさらに別の側面において、ヒトライノウイルス 3C プロテアーゼ切断部位は、例えば、改変BoNT/A、改変BoNT/B、改変BoNT/C1、改変BoNT/D、改変BoNT/E、改変BoNT/F、改変BoNT/G、改変TeNT、改変BaNT、または改変BuNTの二本鎖ループ内に位置する。
【０１７１】
この態様のさらに別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するサブチリシン切断部位を含みうる。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、コンセンサス配列 P6-P5-P4-P3-H*-Y (配列番号41)または P6-P5-P4-P3-Y-H* (配列番号42)を含む改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するサブチリシン切断部位を含み得、ここで、P3、P4および P5およびP6 はいずれのアミノ酸でもよい。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、配列番号43、配列番号44、または配列番号45を含む改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するサブチリシン切断部位を含みうる。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、GENENASE（登録商標）によって切断されうる改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するサブチリシン切断部位を含みうる。この態様のさらに別の側面において、サブチリシン切断部位は、例えば、改変BoNT/A、改変BoNT/B、改変BoNT/C1、改変BoNT/D、改変BoNT/E、改変BoNT/F、改変BoNT/G、改変TeNT、改変BaNT、または改変BuNTの二本鎖ループ内に位置する。
【０１７２】
この態様のさらに別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するヒドロキシルアミン切断部位を含みうる。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、複数のジペプチド N*Gを含むヒドロキシルアミン切断部位を含みうる。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、配列番号46、または配列番号47を含む改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するヒドロキシルアミン切断部位を含みうる。この態様のさらに別の側面において、ヒドロキシルアミン切断部位は、例えば、改変BoNT/A、改変BoNT/B、改変BoNT/C1、改変BoNT/D、改変BoNT/E、改変BoNT/F、改変BoNT/G、改変TeNT、改変BaNT、または改変BuNTの二本鎖ループ内に位置する。
【０１７３】
この態様のさらに別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するSUMO/ULP-1 プロテアーゼ切断部位を含みうる。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、コンセンサス配列 G-G*-P1’-P2’-P3’ (配列番号112) を含む改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するSUMO/ULP-1 プロテアーゼ切断部位を含み得、ここで、 P1’、P2’、および P3’ はいずれのアミノ酸でもよい。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、配列番号48を含む改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するSUMO/ULP-1 プロテアーゼ切断部位を含みうる。この態様のさらに別の側面において、SUMO/ULP-1 プロテアーゼ切断部位は、例えば、改変BoNT/A、改変BoNT/B、改変BoNT/C1、改変BoNT/D、改変BoNT/E、改変BoNT/F、改変BoNT/G、改変TeNT、改変BaNT、または改変BuNTの二本鎖ループ内に位置する。
【０１７４】
この態様の一つの側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置する非ヒト カスパーゼ 3 切断部位を含みうる。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置するマウス カスパーゼ 3 プロテアーゼ切断部位を含みうる。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、コンセンサス配列 D-P3-P2-D*P1’ (配列番号119)を含む改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置する非ヒト カスパーゼ 3 プロテアーゼ切断部位を含み得、ここで、P3 はいずれのアミノ酸でもよいがEが好ましく、P2 はいずれのアミノ酸でもよく、P1’ はいずれのアミノ酸でもよいが、GまたはSが好ましい。この態様の別の側面において、外来性プロテアーゼ切断部位は、例えば、配列番号120、配列番号121、配列番号122、配列番号123、配列番号124、または配列番号125を含む改変クロストリジウム毒素の二本鎖ループ内に位置する非ヒト カスパーゼ 3 プロテアーゼ切断部位を含みうる。この態様のさらに別の側面において、ウシ エンテロキナーゼ プロテアーゼ切断部位は、例えば、改変BoNT/A、改変BoNT/B、改変BoNT/C1、改変BoNT/D、改変BoNT/E、改変BoNT/F、改変BoNT/G、改変TeNT、改変BaNT、または改変BuNTの二本鎖ループ内に位置する。
【０１７５】
二本鎖ループ領域は天然 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位を外来性プロテアーゼ切断部位により置換するよう改変される。この改変において、天然 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位は作動不可能とされ、したがってそのプロテアーゼによって切断されることができない。外来性プロテアーゼ切断部位のみがその対応する外来性 プロテアーゼによって切断されうる。このタイプの改変において、外来性 プロテアーゼ部位は改変クロストリジウム毒素と作動可能にインフレームに連結されて融合タンパク質とされ、この部位は、そのぞれぞれの外来性 プロテアーゼによって切断されることができる。内因性 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位の外来性プロテアーゼ切断部位による置換は、外来性部位が内因性部位の切断部位位置に近い位置において操作される部位の置換でありうる。内因性 二本鎖ループプロテアーゼ切断部位の外来性プロテアーゼ切断部位による置換は、外来性 部位が内因性 部位の切断部位位置とは異なる位置において操作される外来性 部位の付加であり得、内因性 部位は作動不可能となるよう操作される。プロテアーゼ切断部位の位置および種類は重要であり得る。というのは、特定の結合ドメインは遊離のアミノ-末端またはカルボキシル-末端アミノ酸を必要とするからである。例えば、オピオイドペプチド結合ドメインが２つの別のドメインの間に配置される場合、例えば図4参照、プロテアーゼ切断部位の選択の基準は、その部位を切断するプロテアーゼが、結合ドメインのその受容体への選択的結合に必要な結合ドメインの遊離のアミノ-末端またはカルボキシル-末端を曝露する、平坦な切断(flush cut)を残すかどうかでありうる。
【０１７６】
天然 プロテアーゼ切断部位は、天然 二本鎖ループプロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する少なくとも２アミノ酸を変化させることによって作動不可能にされうる。より広範な変化を作ることが出来るが、ただし、二本鎖ループ領域の２つのシステイン残基はインタクトなまま残り、領域が依然としてジスルフィド架橋を形成できるものとする。アミノ酸変化の非限定的な例としては、アミノ酸の欠失またはもとのアミノ酸の異なるアミノ酸による置換が挙げられる。したがって、一つの態様において、天然 プロテアーゼ切断部位は、天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を変化させることによって作動不可能にされる。この態様の別の側面において、天然プロテアーゼ切断部位は、例えば、天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む少なくとも３ アミノ酸； 天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む少なくとも４ アミノ酸；天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む少なくとも５アミノ酸； 天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む少なくとも６アミノ酸； 天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む少なくとも７アミノ酸； 天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む少なくとも８アミノ酸； 天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む少なくとも９アミノ酸； 天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む少なくとも10アミノ酸；天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む少なくとも 15 アミノ酸； または天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む少なくとも 20 アミノ酸を変化させることによって作動不可能にされる。
【０１７７】
この態様のさらに別の側面において、天然 二本鎖 プロテアーゼ切断部位は、例えば、天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む多くとも３アミノ酸； 天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む多くとも４アミノ酸； 天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む多くとも５アミノ酸；天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む多くとも６アミノ酸；天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む多くとも７アミノ酸； 天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む多くとも８ アミノ酸；天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む多くとも９アミノ酸；天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む多くとも10アミノ酸； 天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む多くとも 15 アミノ酸； または天然プロテアーゼによって切断されるペプチド結合に隣接する２アミノ酸を含む多くとも 20 アミノ酸を変化させることによって作動不可能にされる。
【０１７８】
本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素はさらに所望により可動性スペーサーを含む可動性領域を含んでいてもよいと理解される。可動性スペーサーを含む可動性領域は、 ポリペプチドの特徴、特質または性質を最適化するためにポリペプチド 領域の長さを調節するために用いることが出来る。非限定的な例として、１以上の 可動性スペーサーをタンデムに含むポリペプチド 領域はプロテアーゼ切断部位をより良好に曝露するために用いることが出来、それにより、プロテアーゼによるその部位の切断が促進される。別の非限定的な例として、１以上の 可動性スペーサーをタンデムに含むポリペプチド 領域は、オピオイドペプチド結合ドメインをよりよく提示するために用いることが出来、それにより、その結合ドメインのその受容体との結合が促進される。
【０１７９】
ペプチドを含む可動性スペーサーは少なくとも１アミノ酸の長さであり、非荷電アミノ酸を小さい側鎖R基とともに含み、例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシンまたはセリンが挙げられる。したがって、一つの態様において、可動性スペーサーは、例えば、少なくとも 1 アミノ酸、少なくとも 2 アミノ酸、少なくとも 3 アミノ酸、少なくとも 4 アミノ酸、少なくとも 5 アミノ酸、少なくとも 6 アミノ酸、少なくとも 7 アミノ酸、少なくとも 8 アミノ酸、少なくとも 9 アミノ酸、または少なくとも 10 アミノ酸の長さを有しうる。別の態様において、可動性スペーサーは、例えば、多くとも 1 アミノ酸、多くとも 2 アミノ酸、多くとも 3 アミノ酸、多くとも 4 アミノ酸、多くとも 5 アミノ酸、多くとも 6 アミノ酸、多くとも 7 アミノ酸、多くとも 8 アミノ酸、多くとも 9 アミノ酸、または多くとも 10 アミノ酸の長さを有しうる。さらに別の態様において、可動性スペーサーは例えば、1-3 アミノ酸の間、2-4 アミノ酸の間、3-5 アミノ酸の間、4-6 アミノ酸の間、または5-7 アミノ酸の間でありうる。可動性スペーサーの非限定的な例としては、例えば、G-スペーサー、例えば、GGG、GGGG (配列番号49)、およびGGGGS (配列番号50) またはA-スペーサー、例えば AAA、AAAA (配列番号51)およびAAAAV (配列番号111)が挙げられる。かかる可動性領域は作動可能にインフレームに改変クロストリジウム毒素に連結されて融合タンパク質とされる。
【０１８０】
したがって、一つの態様において、本明細書において開示される改変クロストリジウム毒素は、さらに可動性スペーサーを含む可動性領域を含みうる。別の態様において、本明細書において開示される改変クロストリジウム毒素はさらに、複数の可動性スペーサーをタンデムに含む可動性領域を含みうる。この態様の側面において、可動性領域はタンデムに、例えば、少なくとも1のG-スペーサー、少なくとも 2のG-スペーサー、少なくとも 3のG-スペーサー、少なくとも 4のG-スペーサーまたは少なくとも 5のG-スペーサーを含みうる。この態様の別の側面において、可動性領域はタンデムに、例えば、多くとも 1のG-スペーサー、多くとも 2のG-スペーサー、多くとも 3のG-スペーサー、多くとも 4のG-スペーサーまたは多くとも 5のG-スペーサーを含みうる。この態様のさらに別の側面において、可動性領域はタンデムに、例えば、少なくとも 1のA-スペーサー、少なくとも 2のA-スペーサー、少なくとも 3のA-スペーサー、少なくとも 4のA-スペーサーまたは少なくとも 5のA-スペーサーを含みうる。この態様のさらに別の側面において、可動性領域はタンデムに、例えば、多くとも 1のA-スペーサー、多くとも 2のA-スペーサー、多くとも 3のA-スペーサー、多くとも 4のA-スペーサーまたは多くとも 5のA-スペーサーを含みうる。この態様の別の側面において、改変クロストリジウム毒素は、１コピー以上の同じ可動性スペーサー、１コピー以上の異なる可動性スペーサー 領域、またはそれらのいずれかの組合せを含む可動性領域を含みうる。
【０１８１】
この態様の別の側面において、可動性スペーサーを含む改変クロストリジウム毒素は、例えば、 改変BoNT/A、改変BoNT/B、改変BoNT/C1、改変BoNT/D、改変BoNT/E、改変BoNT/F、改変BoNT/G、改変TeNT、改変BaNT、または改変BuNTであり得る。
【０１８２】
本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素はあらゆるすべての位置にて可動性スペーサーを含みうると考えられるが、ただし、改変クロストリジウム毒素は中毒プロセスを実行することができるものである。この態様の側面において、可動性スペーサーは、例えば、酵素ドメインおよび転位置ドメイン、酵素ドメインおよびオピオイドペプチド結合ドメイン、酵素ドメインおよび外来性プロテアーゼ切断部位の間に位置する。この態様の別の側面において、G-スペーサーは、例えば、酵素ドメインおよび転位置ドメイン、酵素ドメインおよびオピオイドペプチド結合ドメイン、酵素ドメインおよび外来性プロテアーゼ切断部位の間に位置する。この態様の別の側面において、A-スペーサーは、例えば、酵素ドメインおよび転位置ドメイン、酵素ドメインおよびオピオイドペプチド結合ドメイン、酵素ドメインおよび外来性プロテアーゼ切断部位の間に位置する。
【０１８３】
この態様の別の側面において、可動性スペーサーは、例えば、オピオイドペプチド結合ドメインおよび転位置ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメインおよび酵素ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位の間に位置する。この態様の別の側面において、G-スペーサーは、例えば、オピオイドペプチド結合ドメインおよび転位置ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメインおよび酵素ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位の間に位置する。この態様の別の側面において、A-スペーサーは、例えば、オピオイドペプチド結合ドメインおよび転位置ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメインおよび酵素ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位の間に位置する。
【０１８４】
この態様のさらに別の側面において、可動性スペーサーは、例えば、転位置ドメインおよび酵素ドメイン、転位置ドメインおよびオピオイドペプチド結合ドメイン、転位置ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位の間に位置する。この態様の別の側面において、G-スペーサーは、例えば、転位置ドメインおよび酵素ドメイン、転位置ドメインおよびオピオイドペプチド結合ドメイン、転位置ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位の間に位置する。この態様の別の側面において、A-スペーサーは、例えば、転位置ドメインおよび酵素ドメイン、転位置ドメインおよびオピオイドペプチド結合ドメイン、転位置ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位の間に位置する。
【０１８５】
本明細書に開示される改変クロストリジウム毒素は、オピオイドペプチド結合ドメインを、あらゆるすべての位置にて含みうると考えられるが、ただし、改変クロストリジウム毒素が中毒プロセスを実行することができるものとする。非限定的な例としては、 例えば、オピオイドペプチド結合ドメインを改変クロストリジウム毒素のアミノ末端に位置させる；オピオイドペプチド結合ドメインを改変クロストリジウム毒素のクロストリジウム毒素酵素ドメインと転位置ドメインとの間に位置させる；およびオピオイドペプチド結合ドメインを改変クロストリジウム毒素のカルボキシル末端に位置させる。別の非限定的な例としては、例えば、オピオイドペプチド結合ドメインを改変クロストリジウム毒素のクロストリジウム毒素酵素ドメインとクロストリジウム毒素転位置ドメインとの間に位置させる。天然クロストリジウム毒素の酵素ドメインはネイティブな開始メチオニンを含む。したがって、酵素ドメインがアミノ-末端 位置でないドメイン編成において、開始メチオニンを含むアミノ酸配列は、アミノ-末端 ドメインの前に位置させるべきである。同様に、オピオイドペプチド結合ドメインがアミノ-末端位置にある場合、開始メチオニンを含むアミノ酸配列およびプロテアーゼ切断部位は、オピオイドペプチド結合ドメインが遊離のアミノ末端を要求する状況においては作動可能に連結させるとよい。例えば、引用によりその全体を本明細書に含めるShengwen Li et al., Degradable Clostridial Toxins、米国特許出願第 11/572,512号 (Jan. 23、2007)参照。さらに、開始メチオニンを含む別のポリペプチドのアミノ末端に作動可能に連結したポリペプチドを付加する場合、もとのメチオニン残基は欠失させうることが当該技術分野において公知である。
【０１８６】
したがって、一つの態様において、改変クロストリジウム毒素は、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシへ直線状の順序において、オピオイドペプチド結合ドメイン、転位置ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位および酵素ドメインを含みうる (図3A)。この態様の一つの側面において、改変クロストリジウム毒素は、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシへ直線状の順序において、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位 およびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含みうる。
【０１８７】
別の態様において、改変クロストリジウム毒素は、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシへ直線状の順序において、オピオイドペプチド結合ドメイン、酵素ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、および転位置ドメインを含みうる (図3B)。この態様の一つの側面において、改変クロストリジウム毒素は、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシへ直線状の順序において、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素転位置ドメインを含みうる。
【０１８８】
さらに別の態様において、改変クロストリジウム毒素は、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシへ直線状の順序において、酵素ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、オピオイドペプチド結合ドメイン、および転位置ドメインを含みうる (図4A)。この態様の一つの側面において、改変クロストリジウム毒素は、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシへ直線状の順序において、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、オピオイドペプチド結合ドメインおよびクロストリジウム毒素転位置ドメインを含みうる。
【０１８９】
さらに別の態様において、改変クロストリジウム毒素は、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシへ直線状の順序において、転位置ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、オピオイドペプチド結合ドメイン、および酵素ドメインを含みうる(図4B)。この態様の一つの側面において、改変クロストリジウム毒素は、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシへ直線状の順序において、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位およびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含みうる。
【０１９０】
別の態様において、改変クロストリジウム毒素は、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシへ直線状の順序において、酵素ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン、 外来性プロテアーゼ切断部位、および転位置ドメインを含みうる (図4C)。この態様の一つの側面において、改変クロストリジウム毒素は、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシへ直線状の順序において、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素転位置ドメインを含みうる。
【０１９１】
さらに別の態様において、改変クロストリジウム毒素は、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシへ直線状の順序において、転位置ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位および酵素ドメインを含みうる (図4D)。この態様の一つの側面において、改変クロストリジウム毒素は、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシへ直線状の順序において、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位およびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含みうる。
【０１９２】
さらに別の態様において、改変クロストリジウム毒素は、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシへ直線状の順序において、酵素ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、転位置ドメイン、およびオピオイドペプチド結合ドメインを含みうる(図5A)。この態様の一つの側面において、改変クロストリジウム毒素は、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシへ直線状の順序において、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、およびオピオイドペプチド結合ドメインを含みうる。
【０１９３】
さらに別の態様において、改変クロストリジウム毒素は、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシへ直線状の順序において、転位置ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、酵素ドメインおよびオピオイドペプチド結合ドメインを含みうる(図5B)。この態様の一つの側面において、改変クロストリジウム毒素は、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシへ直線状の順序において、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位およびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含みうる。
【０１９４】
本発明において有用な組成物は一般に、改変クロストリジウム毒素を含む医薬上許容される組成物として投与される。本明細書において用いる場合、「医薬上許容される」という用語は、個体に投与された場合に有害な、アレルギー性またはその他の不都合なまたは望ましくない反応を生じさせないあらゆる分子実体または組成物を意味する。本明細書において用いる場合、「医薬上許容される組成物」という用語は「医薬組成物」と同義であり、治療的に有効な濃度の活性成分、例えば、本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素のいずれかを意味する。改変クロストリジウム毒素を含む医薬組成物は、医学および獣医学用途のために有用である。医薬組成物は、患者に単独で、またはその他の補助的な活性成分、薬剤、薬物またはホルモンと組み合わせて投与されうる。医薬組成物は様々なプロセスのいずれを用いて製造してもよく、例えば、これらに限定されないが、常套の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠製造、微粒子化、乳化、カプセル封入、捕捉、および凍結乾燥が挙げられる。医薬組成物は様々な形態のいずれをとってもよく、例えば、これらに限定されないが、滅菌溶液、懸濁液、乳濁液、凍結乾燥物、錠剤、丸剤、ペレット、カプセル、散剤、シロップ、エリキシルまたはその他のいずれかの投与に好適な投与形態が挙げられる。
【０１９５】
本発明の側面は、部分的には、改変クロストリジウム毒素を含む組成物を提供する。本明細書に開示されるいずれの組成物も、必要とする哺乳類における神経性炎症の治療方法において有用でありうると考えられるが、ただし、組成物は神経性炎症に関連する症状を防止または低減する。改変クロストリジウム毒素を含む組成物の非限定的な例としては、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む改変クロストリジウム毒素が挙げられる。本明細書に開示されるいずれの改変クロストリジウム毒素も利用可能であると想定され、例えば、Steward、前掲、(2007)； Dolly、前掲、(2007)； Foster、前掲、WO 2006/059093 (2006)； Foster、前掲、WO 2006/059105 (Jun. 8、2006)に開示のものが挙げられる。２以上の異なる改変クロストリジウム毒素を別々の組成物または単一の組成物の一部として提供することができることも理解される。
【０１９６】
改変クロストリジウム毒素を含む医薬組成物は、所望により活性成分の医薬上許容される組成物への加工を促進する医薬上許容される担体を含んでいてもよいと考えられる。本明細書において用いる場合、「医薬上許容される担体」という用語は「医薬的担体」と同義であり、投与された場合に長期または永続的有害作用を実質的に有さないあらゆる担体を意味し、例えば、「薬学的に許容される媒体、安定化剤、希釈剤、添加剤、補助剤または賦形剤」といった用語を包含する。かかる担体は一般に活性化合物と混合されるか、活性化合物を希釈または封入することが許容され、固体、半固体または液体の剤であり得る。活性成分は可溶性であってもよいし、所望の担体または希釈剤中の懸濁液として送達されてもよいことが理解される。様々な医薬上許容される担体のいずれも使用することができ、例えば、これらに限定されないが、水性媒体、例えば、水、塩水、グリシン、ヒアルロン酸等； 固体担体、例えば、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウム等； 溶媒； 分散媒； 被覆； 抗細菌および抗真菌薬； 等張および吸収遅延 薬剤； またはあらゆるその他の不活性成分が挙げられる。医薬上許容される担体の選択は、投与形態に依存しうる。医薬上許容される担体が活性成分と適合しない場合を除き、その医薬上許容される組成物における使用が想定される。かかる医薬用担体の特定の使用の非限定的な例は、PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS (Howard C. Ansel et al., eds., Lippincott Williams ＆ Wilkins Publishers, 7th ed. 1999)； REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (Alfonso R. Gennaro ed., Lippincott, Williams ＆ Wilkins, 20th ed. 2000)； GOODMAN ＆ GILMAN'S THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS (Joel G. Hardman et al., eds., McGraw-Hill Professional, 10th ed. 2001)；および HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL EXCIPIENTS (Raymond C. Rowe et al.,  APhA Publications, 4th edition 2003)にみることが出来る。これらのプロトコールは常套の手法であり、あらゆる改変が本明細書の開示から当業者の技術範囲内である。
【０１９７】
さらに、本明細書に開示される医薬組成物は所望により、これらに限定されないが、その他の医薬上許容される成分(または医薬成分)を含んでいてもよいと考えられ、例えば、これらに限定されないが、緩衝剤、保存料、浸透圧調整剤、塩類、抗酸化剤、浸透圧調節剤、生理学的物質、薬学的物質、増量剤、乳化剤、湿潤剤、甘味料または芳香剤等が挙げられる。様々な緩衝剤およびpH調整手段が本明細書に開示する医薬組成物の調製のために利用できるが、ただし、結果として得られる調製物は医薬上許容されるものである。かかる緩衝剤としては、これらに限定されないが、酢酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、中性緩衝食塩水、リン酸緩衝食塩水およびホウ酸緩衝剤が挙げられる。酸または塩基を必要に応じて組成物のpHを調整するために用いることが出来ることが理解される。医薬上許容される抗酸化剤としては、これらに限定されないが、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アセチルシステイン、ブチル化ヒドロキシアニソールおよびブチル化ヒドロキシトルエンが挙げられる。有用な保存料としては、これらに限定されないが、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、チメロサール、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀、安定化オキシクロロ組成物、例えば、PURITE（登録商標）およびキレート化剤(chelant)、例えば、DTPAまたはDTPA-ビスアミド、カルシウム DTPA、およびCaNaDTPA-ビスアミドが挙げられる。医薬組成物に有用な浸透圧調整剤としては、これらに限定されないが、塩類、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトールまたはグリセリンおよびその他の医薬上許容される浸透圧調整剤が挙げられる。医薬組成物は塩として提供してもよく、多くの酸により形成することが出来、例えば限定されないが、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸などが挙げられる。塩は、対応する遊離の塩基形態と比較して水性またはその他のプロトン性溶媒においてより可溶性である傾向がある。薬学分野において公知のこれらおよびその他の物質は本発明において有用な医薬組成物に含めることができることが理解される。
【０１９８】
一つの態様において、改変クロストリジウム毒素を含む組成物は、改変クロストリジウム毒素を含む医薬組成物である。この態様の側面において、改変クロストリジウム毒素を含む医薬組成物はさらに、医薬的担体、医薬成分、または医薬的担体と医薬成分との両方を含む。この態様の別の側面において、改変クロストリジウム毒素を含む医薬組成物はさらに、少なくとも一つの医薬的担体、少なくとも一つの医薬成分、または少なくとも一つの医薬的担体および少なくとも一つの医薬成分を含む。 
【０１９９】
炎症とは、侵害刺激に対する実際の組織応答 (浮腫、紅斑等)をいう。神経性炎症とは、この組織応答が、末梢感覚神経末端からの炎症性メディエーターの放出を介して惹起および/または維持される事実をいう (即ち、通常のこれら神経における脊髄への求心性シグナル伝達に対して、遠心性機能)。
【０２００】
本発明の側面は、部分的には、慢性神経性炎症を提供する。 本明細書において用いる場合、「慢性神経性炎症」という用語は、治療されるべき少なくとも一つの基礎となる症状が侵害の感覚神経に基づく病因学、例えば、炎症誘導性分子の放出によるものである病態生理学効果を有する炎症応答を意味する。慢性神経性炎症には一次神経性炎症と二次神経性炎症との両方が含まれる。本明細書において用いる場合、「一次」神経性炎症という用語は、一次感覚神経末端(例えば C およびA-デルタ繊維)からの物質の放出により惹起される、またはそれに起因する組織炎症 (炎症症状)をいう。本明細書において用いる場合、「二次」神経性炎症という用語は、感覚神経末端を刺激し、神経からの炎症性メディエーターの放出を引き起こす、非神経細胞起源(例えば、血管床からの溢出または組織間質由来、例えば、肥満細胞または免疫細胞由来)の炎症性メディエーター、例えば、ペプチドまたはサイトカインにより惹起される組織炎症をいう。これら神経由来炎症性メディエーターはまた、感覚神経を刺激することが出来、そして非神経細胞標的(例えば、肥満細胞)に作用することができる。両方の形態 (一次および二次)の神経性炎症の正味の効果は、末梢感覚神経繊維の感作によって維持される炎症状態を有することである。結果としての神経性炎症の生理学的結果は、問題となる組織に依存し、例えば、皮膚痛覚 (異痛、痛覚過敏)、関節炎、内臓痛および機能不全、肺機能不全 (喘息、COPD)、および膀胱機能不全 (疼痛、過活動膀胱)をもたらす。
【０２０１】
本明細書において用いる場合、「炎症誘導性分子」という用語は、炎症応答を刺激するためになんらかの様式で作用する感覚ニューロンによって放出されるあらゆる分子を意味する。炎症誘導性分子の非限定的な例としては、これらに限定されないが、サブスタンスP (SP) および カルシトニン遺伝子関連 ペプチド (CGRP)などの神経ペプチド、プロスタグランジン、およびグルタミン酸などのアミノ酸が挙げられる。本明細書において用いる場合、「炎症媒介分子」という用語は、炎症誘導性分子を放出するように感覚神経末端を直接に刺激することにより神経性炎症に影響を与えるあらゆる分子を意味する。分子は、炎症媒介分子のための受容体が感覚ニューロンにおいて発現されていると、感覚ニューロンに対する直接の刺激効果を有する。炎症媒介分子の非限定的な例としては、これらに限定されないが、ヒスタミン、ブラジキニン、ATP、アセチルコリン、セロトニン、一酸化窒素、ロイコトリエン、サイトカイン、ケモカイン、エイコサノイド、および中性プロテアーゼ、トリプターゼ、およびリゾチーム(lysosyme)などの酵素が挙げられる。本明細書において用いる場合、「炎症感作分子」という用語は、感覚神経末端を感作することにより神経性炎症に影響を与え、それにより、所与の刺激による炎症誘導性分子の放出を増加させるあらゆる分子を意味する。炎症感作分子の非限定的な例としては、これらに限定されないが、プロスタグランジン、ATP、ブラジキニン、インターロイキン-1β、インターロイキン-6、腫瘍壊死因子-α、神経成長因子、セロトニン、および一酸化窒素が挙げられる。
【０２０２】
慢性神経性炎症症状としては、これらに限定されないが、浮腫、充血、紅斑、あざ(bruising)、圧痛、凝り、膨れ、発熱、悪寒、鼻詰まり、頭重、呼吸障害、体液鬱滞、凝血、食欲不振、心拍数の増加、肉芽腫の形成、線維症(fibrinous)、膿、非粘性漿液、または潰瘍および疼痛が挙げられる。慢性神経性炎症に伴う実際の症状は周知であり、当業者が以下の因子を考慮することにより判定することが出来、因子としては、これらに限定されないが、神経性炎症の位置、神経性炎症の原因、神経性炎症の重篤度、罹患した組織または器官、および関連する障害が挙げられる。
【０２０３】
慢性神経性炎症症状は、様々なヒト疾患の基礎となる大きな関連しない障害の群と関連しうる。慢性神経性炎症を症状として示す障害の非限定的な例としては、これらに限定されないが、座瘡、酸の逆流/胸焼け、アルツハイマー病、虫垂炎、動脈炎、関節炎、喘息、 アテローム性動脈硬化、自己免疫障害、亀頭炎、眼瞼炎、細気管支炎、気管支炎、滑液包炎、癌、心臓炎、セリアック病、蜂巣炎、子宮頸炎、胆管炎、胆嚢炎、絨毛羊膜炎、慢性閉塞性肺疾患 (COPD)、肝硬変、大腸炎、結膜炎、膀胱炎、風邪、涙腺炎、認知症、皮膚炎、皮膚筋炎、気腫、脳炎、心内膜炎、子宮内膜炎、腸炎、全腸炎、上顆炎、精巣上体炎、筋膜炎、結合組織炎、胃炎、胃腸炎、歯肉炎、糸球体腎炎、舌炎、心臓疾患、肝炎、汗腺膿瘍、高血圧、回腸炎、炎症性神経障害、インスリン耐性、間質性膀胱炎、虹彩炎、虚血性心疾患、角膜炎、角結膜炎、喉頭炎、乳腺炎、乳様突起炎、髄膜炎、メタボリック・シンドローム (シンドローム X)、片頭痛、脊髄炎、心筋炎、筋炎、腎炎、肥満、臍炎、卵巣炎、精巣炎、骨軟骨炎、骨減少症、骨粗鬆症、骨炎、耳炎、膵炎、パーキンソン病、耳下腺炎、骨盤内炎症性疾患、心膜炎、腹膜炎、咽頭炎、静脈炎、胸膜炎、肺炎、直腸炎、前立腺炎、歯髄炎、腎盂腎炎、門脈炎、リウマチ熱、鼻炎、卵管炎、唾液腺炎、副鼻腔炎、けいれん性結腸、口内炎、滑膜炎、腱炎(tendonitis)、腱炎(tendinosis)、腱滑膜炎、血栓性静脈炎、へんとう炎、三角炎、腫瘍、尿道炎、ブドウ膜炎、膣炎、血管炎、および外陰炎が挙げられる。引用によりその全体を本明細書に含める、Eric R. First, Application of Botulinum Toxin to the Management of Neurogenic Inflammatory Disorders、米国特許第6,063,768号も参照されたい。
【０２０４】
慢性神経性炎症の症状を示す障害の１つのタイプは関節炎である。関節炎には、滑膜の炎症に起因する身体の関節に対する傷害を伴う症状の群が含まれ、これらに限定されないが、骨関節炎、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、強直性脊椎炎等の脊椎関節症、反応性関節炎 (ライター症候群)、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患に伴う腸疾患性関節炎、ウィップル病およびベーチェット病、敗血症性関節炎、痛風 (痛風性関節炎、結晶性(crystal)滑膜炎、代謝性関節炎としても知られる)、偽痛風 (カルシウム・ピロリン酸沈着症)、およびスティル病が挙げられる。関節炎は１つの関節 (単関節炎)、２から４の関節(少関節炎)または５以上の関節 (多発性関節炎)を冒し得、自己免疫疾患または非自己免疫疾患のいずれかでありうる。 
【０２０５】
慢性神経性炎症の症状を示すもう１つのタイプの障害は自己免疫障害である。自己免疫疾患は、各疾患の主な臨床病理的特徴に応じて全身性および臓器特異的自己免疫障害に大きく分けることが出来る。全身性自己免疫疾患としては、これらに限定されないが、全身性エリテマトーデス (SLE)、シェーグレン症候群 、強皮症、関節リウマチおよび多発性筋炎が挙げられる。局所的自己免疫疾患は、内分泌性 (1型糖尿病、橋本甲状腺炎、アジソン病等)、皮膚性(尋常性天疱瘡)、血液性(自己免疫性溶血性貧血)、神経性(多発性硬化症)であり得、あるいは身体の組織の実質的にあらゆる限局性の塊を伴うものであり得る。自己免疫障害のタイプとしては、これらに限定されないが、急性散在性脳脊髄炎 (ADEM)、アジソン病、アレルギーまたは過敏症、抗リン脂質抗体症候群 (APS)、関節炎、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、水疱性類天疱瘡、セリアック病、シャーガス病、慢性閉塞性肺疾患 (COPD)、1型糖尿病 (IDDM)、子宮内膜症、線維筋痛、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群 (GBS)、橋本甲状腺炎、汗腺膿瘍、特発性血小板減少性紫斑病、炎症性腸疾患、間質性膀胱炎、狼瘡 (例えば、円盤状紅斑性狼瘡、薬剤誘発性エリテマトーデス、ループス腎炎、新生児ループス、亜急性皮膚エリテマトーデスおよび全身性エリテマトーデス)、限局性強皮症、多発性硬化症 (MS)、重症筋無力症、筋疾患、ナルコレプシー、神経ミオトニー(neuromyotonia)、尋常性天疱瘡、悪性貧血、原発性胆汁性肝硬変、再発性播種性脳脊髄炎 (多面的(multiphasic)播種性脳脊髄炎)、リウマチ熱、統合失調症、強皮症、シェーグレン症候群 、腱滑膜炎、血管炎、および白斑が挙げられる。引用によりその全体を本明細書に含める、Pamela D. Van Schaack ＆ Kenneth L. Tong, Treatment of Autoimmune Disorder with a Neurotoxin、米国特許出願公開 2006/138059号を参照されたい。
【０２０６】
慢性神経性炎症の症状を示す別のタイプの障害は炎症性筋疾患である。炎症性筋疾患は免疫系が筋肉の成分を攻撃する問題によってもたらされ、筋肉において炎症の症状が生じる。炎症性筋疾患としては、これらに限定されないが、皮膚筋炎、封入体筋炎、および多発性筋炎が挙げられる。
【０２０７】
慢性神経性炎症の症状を示す別のタイプの障害は血管炎である。血管炎はリンパ管および静脈 (静脈炎)、動脈 (動脈炎)および毛細血管などの血管を含む脈管壁の白血球遊走に起因する炎症およびその結果としての損傷を特徴とする様々な障害の群である。炎症は体内の部位に拘わらずあらゆるサイズの血管を冒しうる。それは動脈および/または静脈のいずれも冒しうる。炎症は限局性であり得、それは、脈管内の単一の位置を冒すことを意味する；あるいはそれは、炎症領域が特定の臓器または組織にわたって散在する広範囲なものであり得、すなわち、体内の１つを超える臓器系を冒しうる。血管炎としては、これらに限定されないが、バージャー病 (閉塞性血栓性血管炎)、脳血管炎 (中枢神経系血管炎)、チャーグ・ストラウス動脈炎、クリオグロブリン血症、本態性クリオグロブリン血症(essential cryoglobulinemic vasculitis)、巨細胞性(giant cell)(側頭) 動脈炎、ゴルファー血管炎(Golfer's vasculitis)、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、過敏性血管炎 (アレルギー性血管炎)、川崎病、顕微鏡的多発動脈炎/多発性血管炎、結節性多発動脈炎、リウマチ性多発性筋痛 (PMR)、リウマチ性血管炎、高安動脈炎、ヴェーゲナー肉芽腫、および結合組織障害、例えば、全身性エリテマトーデス (SLE)、関節リウマチ (RA)、再発性多発性軟骨炎、ベーチェット病、またはその他の結合組織障害に二次的な血管炎、ウイルス感染に二次的な血管炎が挙げられる。
【０２０８】
慢性神経性炎症の症状を示す別のタイプの障害は皮膚障害である。皮膚障害としては、これらに限定されないが、皮膚炎、例えば、慢性光線性皮膚炎、湿疹、例えば、 アトピー性湿疹、接触湿疹、乾性(xerotic)湿疹、脂漏性皮膚炎、発汗異常、円板状(discoid)湿疹、静脈性(venous)湿疹、疱疹状皮膚炎、神経皮膚炎、および自家感作性皮膚炎、および鬱滞性皮膚炎、汗腺膿瘍、乾癬、例えば、尋常性乾癬、爪乾癬、滴状乾癬、頭皮乾癬、インバス(inverse)乾癬、膿疱性乾癬、および紅皮症乾癬、酒さおよび強皮症、例えば、限局性強皮症が挙げられる。
【０２０９】
慢性神経性炎症の症状を示す別のタイプの障害は、胃腸障害である。胃腸障害としては、これらに限定されないが、過敏性大腸疾患、炎症性腸疾患、例えば、クローン病および潰瘍性大腸炎、例えば、潰瘍性直腸炎、左側結腸炎、汎大腸炎および劇症大腸炎が挙げられる。
【０２１０】
したがって、一つの態様において、慢性神経性炎症を患う哺乳類は、治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を含む組成物により治療され、かかる投与は炎症誘導性分子の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。この態様の一つの側面において、慢性神経性炎症を患う哺乳類は、治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を含む組成物により治療され、かかる投与 は炎症誘導性分子の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。この態様の一つの側面において、慢性神経性炎症障害を患う哺乳類は、治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を含む組成物により治療され、かかる投与はSPの放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。この態様の一つの側面において、慢性神経性炎症障害を患う哺乳類は治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を含む組成物により治療され、かかる投与はCGRPの放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。この態様の別の側面において、慢性神経性炎症障害を患う哺乳類は、治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を含む組成物により治療され、かかる投与はプロスタグランジンの放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。この態様の別の側面において、慢性神経性炎症障害を患う哺乳類は、治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を含む組成物により治療され、かかる投与はグルタミン酸の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。
【０２１１】
本発明の側面は、部分的には、哺乳類を提供する。哺乳類にはヒトが含まれ、ヒトは患者であり得る。本発明の別の側面は、部分的には、個体を提供する。個体にはヒトが含まれ、ヒトは患者であり得る。
【０２１２】
本発明の側面は、部分的には、改変クロストリジウム毒素を含む組成物を投与することを提供する。 本明細書において用いる場合、「投与する」という用語は、改変クロストリジウム毒素を含む組成物を、臨床的に、治療的に、または実験的に有益な結果をもたらす可能性のある患者に提供するあらゆる送達機構を意味する。改変クロストリジウム毒素は、細胞取り込みアプローチを用いて患者に送達することができ、ここで、改変クロストリジウム毒素は細胞内にまたは遺伝子治療アプローチにより送達され、ここで改変クロストリジウム毒素は、発現ベクターから発現された前駆体RNAから発現される。
【０２１３】
本明細書に開示される改変クロストリジウム毒素を含む組成物は、細胞取り込みアプローチを用いて哺乳類に投与されうる。改変クロストリジウム毒素を含む組成物の細胞取り込みアプローチを用いる投与は、様々な経腸または非経口アプローチを含み、例えば、これらに限定されないが、いずれかの許容可能な形態、例えば、錠剤、液剤、カプセル、散剤等における経口投与； いずれかの許容可能な形態、例えば、ドロップ、スプレー、クリーム、ゲルまたは軟膏における局所投与；いずれかの許容可能な形態、例えば、静脈内ボーラス 注射、静脈内注入、動脈内ボーラス注射、動脈内注入および血管系へのカテーテル点滴における血管内投与； いずれかの許容可能な形態、例えば、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、皮下注入、眼内注射、網膜注射、または網膜下注射または硬膜外注射における組織周囲および組織内(peri- and intra-tissue) 投与； いずれかの許容可能な形態、例えば、カテーテル点滴における膀胱内投与； および配置機器、例えば、インプラント、パッチ、ペレット、カテーテル、浸透圧ポンプ、坐薬、生体内分解性送達系、非生体内分解性送達系またはその他の埋め込み延長または徐放系によるものが挙げられる。生分解性高分子および使用方法の例示的なリストは、例えば、Handbook of Biodegradable Polymers (Abraham J. Domb et al., eds., Overseas Publishers Association, 1997)に記載されている。
【０２１４】
改変クロストリジウム毒素を含む組成物は当業者に公知の様々な方法によって哺乳類に投与することが出来、例えば、限定されないが、リポソーム中へのカプセル封入、イオン泳動、またはその他の媒体、例えば、ヒドロゲル、シクロデキストリン、生分解性ナノカプセル、および生体接着性ミクロスフェアへの封入、またはタンパク性ベクターによるものが挙げられる。改変クロストリジウム毒素を含む組成物を患者に投与するための送達機構は、例えば、Leonid Beigelman et al., Compositions for the Delivery of Negatively Charged Molecules、米国特許第6,395,713号 (May 28、2002)；およびAchim Aigner, Delivery Systems for the Direct Application of siRNAs to Induce RNA Interference (RNAi) in vivo, 2006(716559) J. Biomed. Biotech. 1-15 (2006)； Controlled Drug Delivery: Designing Technologies for the Future (Kinam Park ＆ Randy J. Mrsny eds., American Chemical Association, 2000)； Vernon G. Wong ＆ Mae W. L. Hu, Methods for Treating Inflammation-mediated Conditions of the Eye、米国特許第6,726,918号 (Apr. 27、2004)； David A. Weber et al., Methods and Apparatus for Delivery of Ocular Implants、米国特許出願公開US2004/0054374 (Mar. 18、2004)； Thierry Nivaggioli et al., Biodegradable Ocular Implant、米国特許出願公開US2004/0137059 (Jul. 15、2004)； Patrick M. Hughes et al., Anti-Angiogenic Sustained Release Intraocular Implants and Related Methods、米国特許出願第11/364,687号(Feb. 27、2006)； およびPatrick M. Hughes et al., Sustained Release Intraocular Drug Delivery Systems、米国特許出願公開 2006/0182783 (Aug. 17、2006)において記載されており、これらそれぞれは引用によりその全体を本明細書に含める。
【０２１５】
本明細書に開示される改変クロストリジウム毒素を含む組成物は、神経性炎症障害に寄与する神経に基づく病因学を示す細胞内での改変クロストリジウム毒素の発現による遺伝子治療アプローチを用いて患者に投与することも出来る。改変クロストリジウム毒素は発現ベクターに作動可能に連結した核酸分子から発現させることが出来、例えば、P. D. Good et al., Expression of Small, Therapeutic RNAs in Human Cell Nuclei, 4(1) Gene Ther. 45-54 (1997)； James D. Thompson, Polymerase III-based expression of therapeutic RNAs、米国特許第6,852,535号 (Feb. 8、2005)； Maciej Wiznerowicz et al., Tuning Silence:  Conditional Systems for RNA Interference, 3(9) Nat. Methods 682-688m (2006)； Ola Snoeve and John J. Rossi, Expressing Short Hairpin RNAi in vivo, 3(9) Nat. Methods 689-698 (2006)； および Charles X. Li et al., Delivery of RNA Interference, 5(18) Cell Cycle 2103-2109 (2006)を参照されたい。当業者であればいずれの改変クロストリジウム毒素も適当な発現ベクターを用いて真核細胞において発現させることが出来ることを認識している。
【０２１６】
改変クロストリジウム毒素を発現させることが出来る発現ベクターは、神経性炎症障害に寄与する神経に基づく病因学を示す細胞における改変クロストリジウム毒素の永続的または安定な発現を提供することが出来る。あるいは、改変クロストリジウム毒素を発現させることが出来る発現ベクターは、神経性炎症障害に寄与する神経に基づく病因学を示す細胞における改変クロストリジウム毒素の一過性の発現を提供することが出来る。かかる一過性に発現させるベクターは必要により繰り返して投与するとよい。改変クロストリジウム毒素を発現するベクターは上記の送達機構および投与経路によって投与してもよく、患者から取り出した標的細胞への投与、次いで、患者への再導入によってもよいし、所望の標的細胞への導入を可能とするその他のあらゆる手段を用いることが出来、例えば、Larry A. Couture and Dan T. Stinchcomb, Anti-gene Therapy: The Use of Ribozymes to Inhibit Gene Function, 12(12) Trends Genet. 510-515 (1996)を参照されたい。
【０２１７】
改変クロストリジウム毒素を含む組成物を哺乳類に投与するために用いられる実際の送達機構は当業者によって、これらに限定されないが、神経性炎症障害のタイプ、神経性炎症障害の位置、神経性炎症障害の原因、神経性炎症障害の重篤度、望まれる軽減の程度、望まれる軽減の持続時間、用いる特定の改変クロストリジウム毒素、用いる改変クロストリジウム毒素の排出速度、用いる改変クロストリジウム毒素の薬力学、組成物に含めるその他の化合物の性質、特定の投与経路、患者の特定の特徴、病歴および危険因子、例えば、年齢、体重、全体的健康等またはそれらのいずれかの組合せといった因子を考慮することによって決定され得る。
【０２１８】
一つの態様において、改変クロストリジウム毒素を含む組成物は治療すべき部位に注射によって投与される。この態様の側面において、改変クロストリジウム毒素を含む組成物の注射は、例えば、筋肉内注射、皮下注射、または皮膚注射による。この態様の側面において、改変クロストリジウム毒素を含む組成物の注射は下部尿路へのものであり、例えば、 膀胱壁、尿道括約筋または膀胱頸部が挙げられる。
【０２１９】
改変クロストリジウム毒素を含む組成物は、様々な経路を用いて哺乳類に投与することが出来る。本明細書に開示する神経性炎症障害の治療方法のために好適な投与経路には局所および全身性投与の両方が含まれる。局所投与の結果、哺乳類の身体全体と比較して特定の位置により有意に組成物が送達されるが、一方、全身性投与の結果、患者の実質的に身体全体に組成物が送達される。本明細書に開示する神経性炎症障害の治療方法に好適な投与経路には中枢および末梢投与の両方が含まれる。中枢投与の結果、組成物が患者の実質的に中枢神経系に送達され、例えば、髄腔内投与、硬膜外投与ならびに頭蓋注射またはインプラントが挙げられる。末梢投与の結果、中枢神経系の外側の患者の実質的にあらゆる領域に組成物が送達され、脊椎または脳への直接投与以外のあらゆる投与経路が含まれる。哺乳類に用いられる改変クロストリジウム毒素を含む組成物の実際の投与経路は、これらに限定されないが、神経性炎症障害のタイプ、神経性炎症障害の位置、神経性炎症障害の原因、神経性炎症障害の重篤度、望まれる軽減の程度、望まれる軽減の持続時間、用いる特定の改変クロストリジウム毒素、用いる改変クロストリジウム毒素の排出速度、用いる改変クロストリジウム毒素の薬力学、組成物に含めるその他の化合物の性質、特定の投与経路、哺乳類の特定の特徴、病歴および危険因子、例えば、年齢、体重、全体的健康等またはそれらのいずれかの組合せといった因子を考慮することによって当業者によって決定されうる。
【０２２０】
一つの態様において、改変クロストリジウム毒素を含む組成物は全身性に哺乳類に投与される。別の態様において、改変クロストリジウム毒素を含む組成物は局所的に哺乳類に投与される。この態様の一つの側面において、改変クロストリジウム毒素を含む組成物は哺乳類の膀胱に投与される。この態様の別の側面において、改変クロストリジウム毒素を含む組成物は哺乳類の前立腺に投与される。この態様の別の側面において、改変クロストリジウム毒素を含む組成物は哺乳類の子宮に投与される。 
【０２２１】
本発明の側面は、部分的には、治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を含む組成物を投与することを提供する。本明細書において用いる場合、「治療上有効量」という用語は「治療上有効用量」と同義であり、神経性炎症障害の治療について用いられる場合、所望の治療効果を達成するために必要な改変クロストリジウム毒素の最小用量を意味し、神経性炎症障害に関連する症状を軽減するのに十分な用量を含む。この態様の側面において、治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を含む組成物は神経性炎症障害に関連する症状を、例えば、少なくとも 10％、少なくとも 20％、少なくとも 30％、少なくとも 40％、少なくとも 50％、少なくとも 60％、少なくとも 70％、少なくとも 80％、少なくとも 90％または少なくとも 100％軽減する。この態様の別の側面において、治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を含む組成物は神経性炎症障害に関連する症状を、例えば、多くとも 10％、多くとも 20％、多くとも 30％、多くとも 40％、多くとも 50％、多くとも 60％、多くとも 70％、多くとも 80％、多くとも 90％ または多くとも 100％軽減する。この態様のさらに別の側面において、治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を含む組成物は神経性炎症障害に関連する症状を、例えば約 10％ 〜 約 100％、約 10％ 〜 約 90％、約 10％ 〜 約 80％、約 10％ 〜 約 70％、約 10％ 〜 約 60％、約 10％ 〜 約 50％、約 10％ 〜 約 40％、約 20％ 〜 約 100％、約 20％ 〜 約 90％、約 20％ 〜 約 80％、約 20％ 〜 約 20％、約 20％ 〜 約 60％、約 20％ 〜 約 50％、約 20％ 〜 約 40％、約 30％ 〜 約 100％、約 30％ 〜 約 90％、約 30％ 〜 約 80％、約 30％ 〜 約 70％、約 30％ 〜 約 60％、または約 30％ 〜 約 50％軽減する。本明細書において用いる場合、記載された事項、数、パーセンテージまたは項目の値を限定する場合の「約」という用語は、記載された事項、パーセンテージ、パラメーターまたは項目の値の＋または−10％の範囲をいう。この態様のさらに別の側面において、治療上有効量の改変クロストリジウム毒素は、ニューロンの活動を、例えば、少なくとも１週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも ２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１１ヶ月、または少なくとも１２ヶ月阻害するのに十分な用量である。
【０２２２】
哺乳類に投与すべき改変クロストリジウム毒素を含む組成物の実際の治療上有効量は、因子、例えば、これらに限定されないが、神経性炎症障害のタイプ、神経性炎症障害の位置、神経性炎症障害の原因、神経性炎症障害の重篤度、望まれる軽減の程度、望まれる軽減の持続時間、用いる特定の改変クロストリジウム毒素、用いる改変クロストリジウム毒素の排出速度、用いる改変クロストリジウム毒素の薬力学、組成物に含めるその他の化合物の性質、特定の投与経路、患者の特定の特徴、病歴および危険因子、例えば、年齢、体重、全体的健康等またはそれらのいずれかの組合せを考慮することにより当業者によって決定されうる。さらに、改変クロストリジウム毒素を含む組成物の反復投与を用いる場合、改変クロストリジウム毒素を含む組成物の実際の有効量はさらに、因子、例えば、これらに限定されないが、投与頻度、改変クロストリジウム毒素を含む組成物の半減期、またはそれらのいずれかの組合せに依存するであろう。改変クロストリジウム毒素を含む組成物の有効量は、ヒトへの投与の前に、インビトロアッセイおよび動物モデルを用いるインビボ投与研究から外挿することが出来ることが当業者に公知である。必要有効量における広い変動が様々な投与経路の異なる効率を鑑みると予測される。例えば、経口投与は一般に静脈内投与または硝子体内注射よりもより高い用量レベルを要求することが予測される。これら用量レベルにおける変動は、最適化の標準的経験的ルーチンを用いて調整することが出来、それは当業者に周知である。正確な治療上有効な用量レベルおよびパターンは、好ましくは上記の因子を考慮して主治医によって決定される。
【０２２３】
非限定的な例として、改変クロストリジウム毒素を含む組成物を哺乳類に投与する場合、治療上有効量は一般に約 1 fg 〜約 3.0 mgの範囲内である。この態様の側面において、改変クロストリジウム毒素を含む組成物の有効量は、例えば、約 100 fg 〜約 3.0 mg、約 100 pg 〜約 3.0 mg、約 100 ng 〜約 3.0 mg、または約 100 μg 〜約 3.0 mgであり得る。この態様の別の側面において、改変クロストリジウム毒素を含む組成物の有効量は、例えば、約 100 fg 〜約 750 μg、約 100 pg 〜約 750 μg、約 100 ng 〜約 750 μg、または約 1 μg 〜約 750 μgでありうる。この態様のさらに別の側面において、改変クロストリジウム毒素を含む組成物の治療上有効量は、例えば、少なくとも 1 fg、少なくとも 250 fg、少なくとも 500 fg、少なくとも 750 fg、少なくとも 1 pg、少なくとも 250 pg、少なくとも 500 pg、少なくとも 750 pg、少なくとも 1 ng、少なくとも 250 ng、少なくとも 500 ng、少なくとも 750 ng、少なくとも 1 μg、少なくとも 250 μg、少なくとも 500 μg、少なくとも 750 μg、または少なくとも 1 mgでありうる。この態様のさらに別の側面において、改変クロストリジウム毒素を含む組成物の治療上有効量は、例えば、多くとも 1 fg、多くとも 250 fg、多くとも 500 fg、多くとも 750 fg、多くとも 1 pg、多くとも 250 pg、多くとも 500 pg、多くとも 750 pg、多くとも 1 ng、多くとも 250 ng、多くとも 500 ng、多くとも 750 ng、多くとも 1 μg、少なくとも 250 μg、多くとも 500 μg、多くとも 750 μg、または多くとも 1 mgでありうる。
【０２２４】
別の非限定的な例として、改変クロストリジウム毒素を含む組成物を哺乳類に投与する場合、治療上有効量は一般に約 0.00001 mg/kg 〜約 3.0 mg/kgの範囲内である。この態様の側面において、改変クロストリジウム毒素を含む組成物の有効量は、例えば、約 0.0001 mg/kg 〜約 0.001 mg/kg、約 0.03 mg/kg 〜約 3.0 mg/kg、約 0.1 mg/kg 〜約 3.0 mg/kg、または約 0.3 mg/kg 〜約 3.0 mg/kgでありうる。この態様のさらに別の側面において、改変クロストリジウム毒素を含む組成物の治療上有効量は、例えば、少なくとも 0.00001 mg/kg、少なくとも 0.0001 mg/kg、少なくとも 0.001 mg/kg、少なくとも 0.01 mg/kg、少なくとも 0.1 mg/kg、または少なくとも 1 mg/kgでありうる。この態様のさらに別の側面において、改変クロストリジウム毒素を含む組成物の治療上有効量は、例えば、多くとも 0.00001 mg/kg、多くとも 0.0001 mg/kg、多くとも 0.001 mg/kg、多くとも 0.01 mg/kg、多くとも 0.1 mg/kg、または多くとも 1 mg/kgであり得る。
【０２２５】
投与は単回用量または累積 (複数回用量) であり得、当業者によって容易に決定されうる。例えば、神経性炎症障害の治療は有効用量の改変クロストリジウム毒素を含む組成物の１回投与を含みうる。非限定的な例として、改変クロストリジウム毒素を含む組成物の有効用量は、例えば、神経性炎症障害の症状を示す部位でのまたはその付近での単回注射または沈積として患者に１回投与されうる。あるいは、神経性炎症障害の治療は、ある範囲の期間にわたって実施される改変クロストリジウム毒素を含む組成物の有効用量の複数回投与を含み得、例えば、毎日、数日に１回、毎週、毎月または毎年であり得る。非限定的な例として、改変クロストリジウム毒素を含む組成物は哺乳類に１年に１回または２回投与されうる。投与のタイミングは哺乳類によって変動し得、哺乳類の症状の重篤度などの因子に依存する。例えば、改変クロストリジウム毒素を含む組成物の有効用量は不定期間にわたって、または患者がもはや治療を必要としなくなるまで１ヶ月に１回哺乳類に投与されうる。当業者であれば哺乳類の症状は治療経過にわたってモニターすることが出来、投与される改変クロストリジウム毒素を含む組成物の有効量はそれにしたがって調整できることを認識しているであろう。
【０２２６】
本明細書に開示される改変クロストリジウム毒素を含む組成物は、治療の全体の治療効率を上昇させるためにその他の治療用化合物と組み合わせて哺乳類に投与することも出来る。複数の化合物の適応症の治療のための使用は、副作用の存在を低減しつつ有益効果を上昇させうる。
【０２２７】
本発明の側面は以下にもまた記載されうる:
【０２２８】
1. 哺乳類における神経性炎症を治療する方法であって、該方法は必要とする哺乳類に治療上有効量の、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む改変クロストリジウム毒素を含む組成物を投与する工程を含み、ここで、組成物の投与は、炎症誘導性分子の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。
【０２２９】
2. 哺乳類における神経性炎症を治療する方法であって、該方法は必要とする哺乳類に治療上有効量の、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む改変クロストリジウム毒素を含む組成物を投与する工程を含み、ここで、組成物の投与は、炎症を誘発する神経ペプチドの放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。
【０２３０】
3. 哺乳類における神経性炎症を治療する方法であって、該方法は必要とする哺乳類に治療上有効量の、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む改変クロストリジウム毒素を含む組成物を投与する工程を含み、ここで、組成物の投与は、炎症を誘発するプロスタグランジンまたはグルタミン酸の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。
【０２３１】
4. 1-3の方法であって、ここで、改変クロストリジウム毒素は、 一本のポリペプチドのアミノからカルボキシルへの直線状の順序で、1)クロストリジウム毒素酵素ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン、2)クロストリジウム毒素酵素ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、3)オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、およびクロストリジウム毒素酵素ドメイン、4)オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、5)クロストリジウム毒素転位置ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメインおよびオピオイドペプチド結合ドメイン、または6)クロストリジウム毒素転位置ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン およびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む。
【０２３２】
5. 1-3の方法であって、ここで、オピオイドペプチド結合ドメインは、エンケファリン、BAM22 ペプチド、エンドモルフィン、エンドルフィン、ダイノルフィン、ノシセプチンまたはヘモルフィンである。
【０２３３】
6. 5の方法であって、ここで、エンケファリンは、 Leu-エンケファリン、Met-エンケファリン、Met-エンケファリン MRGLまたはMet-エンケファリン MRFである。
【０２３４】
7. 5の方法であって、ここで、エンケファリンは配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55を含む。
【０２３５】
8. 5の方法であって、BAM22 ペプチドが、BAM22 ペプチド (1-12)、BAM22 ペプチド (6-22)、BAM22 ペプチド (8-22)またはBAM22 ペプチド (1-22)である。
【０２３６】
9. 5の方法であって、BAM22 ペプチドが、配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22；または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22を含む。
【０２３７】
10. 5の方法であって、エンドモルフィンがエンドモルフィン-1またはエンドモルフィン-2である。
【０２３８】
11. 5の方法であって、エンドモルフィンが配列番号62または配列番号63を含む。
【０２３９】
12. 5の方法であって、エンドルフィンが、エンドルフィン-α、ネオエンドルフィン-α、エンドルフィン-β、ネオエンドルフィン-βまたはエンドルフィン-γである。
【０２４０】
13. 5の方法であって、エンドルフィンが配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69を含む。
【０２４１】
14. 5の方法であって、ダイノルフィンが、ダイノルフィン A、ダイノルフィン B (ロイモルフィン)またはリモルフィンである。
【０２４２】
15. 5の方法であって、ダイノルフィンが配列番号70、配列番号71、配列番号72、配列番号73、配列番号74、配列番号75、配列番号76、配列番号77、配列番号78、配列番号79、配列番号80、配列番号81、配列番号82、配列番号83、配列番号84、配列番号85、配列番号86、配列番号87、配列番号88、配列番号89、配列番号90、配列番号91、配列番号92、配列番号93、配列番号94、配列番号95、配列番号96、配列番号97、配列番号98、配列番号99または配列番号100を含む。
【０２４３】
16. 5の方法であって、ノシセプチンが、ノシセプチン RK、ノシセプチン、神経ペプチド 1、神経ペプチド 2または神経ペプチド 3である。
【０２４４】
17. 5の方法であって、ノシセプチンが配列番号101、配列番号102、配列番号103、配列番号104、配列番号105、配列番号106、配列番号107、配列番号108、配列番号109または配列番号110を含む。
【０２４５】
18. 1-3の方法であって、クロストリジウム毒素転位置ドメインが、BoNT/A 転位置ドメイン、BoNT/B 転位置ドメイン、BoNT/C1 転位置ドメイン、BoNT/D 転位置ドメイン、BoNT/E 転位置ドメイン、BoNT/F 転位置ドメイン、BoNT/G 転位置ドメイン、TeNT 転位置ドメイン、BaNT 転位置ドメイン、またはBuNT 転位置ドメインである。
【０２４６】
19. 1-3の方法であって、クロストリジウム毒素酵素ドメインが、BoNT/A 酵素ドメイン、BoNT/B 酵素ドメイン、BoNT/C1 酵素ドメイン、BoNT/D 酵素ドメイン、BoNT/E 酵素ドメイン、BoNT/F 酵素ドメイン、BoNT/G 酵素ドメイン、TeNT 酵素ドメイン、BaNT 酵素ドメイン、またはBuNT 酵素ドメインである。
【０２４７】
20. 1-3の方法であって、神経性炎症が、座瘡、酸の逆流/胸焼け、アルツハイマー病、虫垂炎、動脈炎、関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化、自己免疫障害、亀頭炎、眼瞼炎、細気管支炎、気管支炎、滑液包炎、癌、心臓炎、セリアック病、蜂巣炎、子宮頸炎、胆管炎、胆嚢炎、絨毛羊膜炎、慢性閉塞性肺疾患 (COPD)、肝硬変、大腸炎、結膜炎、膀胱炎、風邪、涙腺炎、認知症、皮膚炎、皮膚筋炎、気腫、脳炎、心内膜炎、子宮内膜炎、腸炎、全腸炎、上顆炎、精巣上体炎、筋膜炎、結合組織炎、胃炎、胃腸炎、歯肉炎、糸球体腎炎、舌炎、心臓疾患、肝炎、汗腺膿瘍、高血圧、回腸炎、炎症性神経障害、インスリン耐性、間質性膀胱炎、虹彩炎、虚血性心疾患、角膜炎、角結膜炎、喉頭炎、乳腺炎、乳様突起炎、髄膜炎、メタボリック・シンドローム (シンドローム X)、片頭痛、脊髄炎、心筋炎、筋炎、腎炎、肥満、臍炎、卵巣炎、精巣炎、骨軟骨炎、骨減少症、骨粗鬆症、骨炎、耳炎、膵炎、パーキンソン病、耳下腺炎、骨盤内炎症性疾患、心膜炎、腹膜炎、咽頭炎、静脈炎、胸膜炎、肺炎、直腸炎、前立腺炎、歯髄炎、腎盂腎炎、門脈炎、リウマチ熱、鼻炎、卵管炎、唾液腺炎、副鼻腔炎、けいれん性結腸、口内炎、滑膜炎、腱炎(tendonitis)、腱炎(tendinosis)、腱滑膜炎、血栓性静脈炎、へんとう炎、三角炎、腫瘍、尿道炎、ブドウ膜炎、膣炎、血管炎、または外陰炎に関連する。
【０２４８】
21. 1-3の方法であって、神経性炎症が関節炎に関連する。
【０２４９】
22. 21の方法であって、関節炎が、単関節炎、少関節炎、または多発性関節炎である。
【０２５０】
23. 21の方法であって、関節炎が、自己免疫疾患または非自己免疫疾患である。
【０２５１】
24. 21の方法であって、関節炎が、骨関節炎、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、敗血症性関節炎、脊椎関節症、痛風、偽痛風、またはスティル病である。
【０２５２】
25. 24の方法であって、脊椎関節症が、強直性脊椎炎、反応性関節炎 (ライター症候群)、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患に伴う腸疾患性関節炎、ウィップル病またはベーチェット病である。
【０２５３】
26. 1-3の方法であって、神経性炎症が自己免疫障害に関連する。
【０２５４】
27. 26の方法であって、自己免疫障害が全身性自己免疫障害または臓器特異的自己免疫障害である。
【０２５５】
28. 26の方法であって、自己免疫障害が、急性散在性脳脊髄炎 (ADEM)、アジソン病、アレルギー、抗リン脂質抗体症候群 (APS)、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、水疱性類天疱瘡、セリアック病、シャーガス病、慢性閉塞性肺疾患 (COPD)、1型糖尿病 (IDDM)、子宮内膜症、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群 (GBS)、橋本甲状腺炎、汗腺膿瘍、特発性血小板減少性紫斑病、炎症性腸疾患、間質性膀胱炎、狼瘡 (例えば、円盤状紅斑性狼瘡、薬剤誘発性エリテマトーデス、ループス腎炎、新生児ループス、亜急性皮膚エリテマトーデスおよび全身性エリテマトーデス)、限局性強皮症、多発性硬化症 (MS)、重症筋無力症、筋疾患、ナルコレプシー、神経ミオトニー、尋常性天疱瘡、悪性貧血、原発性胆汁性肝硬変、再発性播種性脳脊髄炎、リウマチ熱、統合失調症、強皮症、シェーグレン症候群、腱滑膜炎、血管炎、または白斑である。
【０２５６】
29. 1-3の方法であって、神経性炎症が炎症性筋疾患に関連する。 
【０２５７】
30. 29の方法であって、炎症性筋疾患が、皮膚筋炎、封入体筋炎、または多発性筋炎である。
【０２５８】
31. 1-3の方法であって、神経性炎症が血管炎に関連する。
【０２５９】
32. 31の方法であって、血管炎が、バージャー病、脳血管炎、チャーグ・ストラウス動脈炎、クリオグロブリン血症、本態性クリオグロブリン血症、巨細胞性動脈炎、ゴルファー血管炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、過敏性血管炎、川崎病、顕微鏡的多発動脈炎/多発性血管炎、結節性多発動脈炎、リウマチ性多発性筋痛 (PMR)、リウマチ性血管炎、高安動脈炎、またはヴェーゲナー肉芽腫である。
【０２６０】
33. 1-3の方法であって、神経性炎症が皮膚障害に関連する。
【０２６１】
34. 33の方法であって、皮膚障害が、皮膚炎、湿疹、鬱滞性皮膚炎、汗腺膿瘍、乾癬、酒さまたは強皮症である。
【０２６２】
35. 34の方法であって、湿疹が、アトピー性湿疹、接触湿疹、乾性湿疹、脂漏性皮膚炎、発汗異常、円板状湿疹、静脈性湿疹、疱疹状皮膚炎、神経皮膚炎、または自家感作性皮膚炎である。
【０２６３】
36. 34の方法であって、乾癬が、尋常性乾癬、爪乾癬、滴状乾癬、頭皮乾癬、インバス乾癬、膿疱性乾癬、または紅皮症乾癬である。
【０２６４】
37. 1-3の方法であって、神経性炎症が胃腸障害に関連する。
【０２６５】
38. 37の方法であって、胃腸障害が過敏性大腸疾患または炎症性腸疾患(inflammatory bowel)である。
【０２６６】
39. 37の方法であって、炎症性腸疾患がクローン病または潰瘍性大腸炎である。
【０２６７】
40.哺乳類における神経性炎症を治療する方法であって、該方法は、必要とする哺乳類に治療上有効量の、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位を含む改変クロストリジウム毒素を含む組成物を投与する工程を含み、組成物の投与が炎症誘導性分子の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。
【０２６８】
41. 哺乳類における神経性炎症を治療する方法であって、該方法は、必要とする哺乳類に治療上有効量の、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位を含む改変クロストリジウム毒素を含む組成物を投与する工程を含み、組成物の投与が炎症を誘発する神経ペプチドの放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。
【０２６９】
42. 哺乳類における神経性炎症を治療する方法であって、該方法は、必要とする哺乳類に治療上有効量の、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位を含む改変クロストリジウム毒素を含む組成物を投与する工程を含み、組成物の投与が炎症を誘発するプロスタグランジンまたはグルタミン酸の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。
【０２７０】
43. 40-42の方法であって、改変クロストリジウム毒素が一本のポリペプチドのアミノからカルボキシルへの直線状の順序で、1)クロストリジウム毒素酵素ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン、2)クロストリジウム毒素酵素ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、3)オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位 およびクロストリジウム毒素酵素ドメイン、4)オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、5)クロストリジウム毒素転位置ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素酵素ドメインおよびオピオイドペプチド結合ドメイン、または6)クロストリジウム毒素転位置ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、オピオイドペプチド結合ドメイン およびクロストリジウム毒素酵素ドメイン、を含む。
【０２７１】
44. 40-42の方法であって、オピオイドペプチド結合ドメインが、エンケファリン、BAM22 ペプチド、エンドモルフィン、エンドルフィン、ダイノルフィン、ノシセプチンまたはヘモルフィンである。
【０２７２】
45. 44の方法であって、エンケファリンが、Leu-エンケファリン、Met-エンケファリン、Met-エンケファリン MRGLまたはMet-エンケファリン MRFである。
【０２７３】
46. 44の方法であって、エンケファリンが配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55を含む。
【０２７４】
47. 44の方法であって、BAM22 ペプチドが、BAM22 ペプチド (1-12)、BAM22 ペプチド (6-22)、BAM22 ペプチド (8-22)またはBAM22 ペプチド (1-22)である。
【０２７５】
48. 44の方法であって、BAM22 ペプチドが、配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22；または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22を含む。
【０２７６】
49. 44の方法であって、エンドモルフィンがエンドモルフィン-1またはエンドモルフィン-2である。
【０２７７】
50. 44の方法であって、エンドモルフィンが配列番号62または配列番号63を含む。
【０２７８】
51. 44の方法であって、エンドルフィンが、エンドルフィン-α、ネオエンドルフィン-α、エンドルフィン-β、ネオエンドルフィン-βまたはエンドルフィン-γである。
【０２７９】
52. 44の方法であって、エンドルフィンが配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69を含む。
【０２８０】
53. 44の方法であって、ダイノルフィンが、ダイノルフィン A、ダイノルフィン B (ロイモルフィン)またはリモルフィンである。
【０２８１】
54. 44の方法であって、ダイノルフィンが配列番号70、配列番号71、配列番号72、配列番号73、配列番号74、配列番号75、配列番号76、配列番号77、配列番号78、配列番号79、配列番号80、配列番号81、配列番号82、配列番号83、配列番号84、配列番号85、配列番号86、配列番号87、配列番号88、配列番号89、配列番号90、配列番号91、配列番号92、配列番号93、配列番号94、配列番号95、配列番号96、配列番号97、配列番号98、配列番号99または配列番号100を含む。
【０２８２】
55. 44の方法であって、ノシセプチンが、ノシセプチン RK、ノシセプチン、神経ペプチド 1、神経ペプチド 2または神経ペプチド 3である。
【０２８３】
56. 44の方法であって、ノシセプチンが配列番号101、配列番号102、配列番号103、配列番号104、配列番号105、配列番号106、配列番号107、配列番号108、配列番号109または配列番号110を含む。
【０２８４】
57. 40-42の方法であって、クロストリジウム毒素転位置ドメインが、BoNT/A 転位置ドメイン、BoNT/B 転位置ドメイン、BoNT/C1 転位置ドメイン、BoNT/D 転位置ドメイン、BoNT/E 転位置ドメイン、BoNT/F 転位置ドメイン、BoNT/G 転位置ドメイン、TeNT 転位置ドメイン、BaNT 転位置ドメイン、またはBuNT 転位置ドメインである。
【０２８５】
58. 40-42の方法であって、クロストリジウム毒素酵素ドメインが、BoNT/A 酵素ドメイン、BoNT/B 酵素ドメイン、BoNT/C1 酵素ドメイン、BoNT/D 酵素ドメイン、BoNT/E 酵素ドメイン、BoNT/F 酵素ドメイン、BoNT/G 酵素ドメイン、TeNT 酵素ドメイン、BaNT 酵素ドメイン、またはBuNT 酵素ドメインである。
【０２８６】
59. 40-42の方法であって、外来性プロテアーゼ切断部位が、植物パパイン切断部位、昆虫パパイン切断部位、甲殻類パパイン切断部位、エンテロキナーゼ切断部位、ヒトライノウイルス 3C プロテアーゼ切断部位、ヒトエンテロウイルス 3C プロテアーゼ切断部位、タバコエッチウイルス プロテアーゼ切断部位、タバコ葉脈はん紋ウイルス 切断部位、サブチリシン切断部位、ヒドロキシルアミン切断部位、またはカスパーゼ 3 切断部位である。
【０２８７】
60. 40-42の方法であって、神経性炎症が、座瘡、酸の逆流/胸焼け、アルツハイマー病、虫垂炎、動脈炎、関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化、自己免疫障害、亀頭炎、眼瞼炎、細気管支炎、気管支炎、滑液包炎、癌、心臓炎、セリアック病、蜂巣炎、子宮頸炎、胆管炎、胆嚢炎、絨毛羊膜炎、慢性閉塞性肺疾患 (COPD)、肝硬変、大腸炎、結膜炎、膀胱炎、風邪、涙腺炎、認知症、皮膚炎、皮膚筋炎、気腫、脳炎、心内膜炎、子宮内膜炎、腸炎、全腸炎、上顆炎、精巣上体炎、筋膜炎、結合組織炎、胃炎、胃腸炎、歯肉炎、糸球体腎炎、舌炎、心臓疾患、肝炎、汗腺膿瘍、高血圧、回腸炎、炎症性神経障害、インスリン耐性、間質性膀胱炎、虹彩炎、虚血性心疾患、角膜炎、角結膜炎、喉頭炎、乳腺炎、乳様突起炎、髄膜炎、メタボリック・シンドローム (シンドローム X)、片頭痛、脊髄炎、心筋炎、筋炎、腎炎、肥満、臍炎、卵巣炎、精巣炎、骨軟骨炎、骨減少症、骨粗鬆症、骨炎、耳炎、膵炎、パーキンソン病、耳下腺炎、骨盤内炎症性疾患、心膜炎、腹膜炎、咽頭炎、静脈炎、胸膜炎、肺炎、直腸炎、前立腺炎、歯髄炎、腎盂腎炎、門脈炎、リウマチ熱、鼻炎、卵管炎、唾液腺炎、副鼻腔炎、けいれん性結腸、口内炎、滑膜炎、腱炎(tendonitis)、腱炎(tendinosis)、腱滑膜炎、血栓性静脈炎、へんとう炎、三角炎、腫瘍、尿道炎、ブドウ膜炎、膣炎、血管炎、または外陰炎に関連する。
【０２８８】
61. 40-42の方法であって、神経性炎症が関節炎に関連する。
【０２８９】
62. 61の方法であって、関節炎が、単関節炎、少関節炎、または多発性関節炎である。
【０２９０】
63. 61の方法であって、関節炎が自己免疫疾患または非自己免疫疾患である。
【０２９１】
64. 61の方法であって、関節炎が、骨関節炎、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、敗血症性関節炎、脊椎関節症、痛風、偽痛風、またはスティル病である。
【０２９２】
65. 64の方法であって、脊椎関節症が、強直性脊椎炎、反応性関節炎 (ライター症候群)、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患に伴う腸疾患性関節炎、ウィップル病またはベーチェット病である。
【０２９３】
66. 40-42の方法であって、神経性炎症が自己免疫障害に関連する。
【０２９４】
67. 66の方法であって、自己免疫障害が全身性自己免疫障害または臓器特異的自己免疫障害である。
【０２９５】
68. 67の方法であって、自己免疫障害が、急性散在性脳脊髄炎 (ADEM)、アジソン病、アレルギー、抗リン脂質抗体症候群 (APS)、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、水疱性類天疱瘡、セリアック病、シャーガス病、慢性閉塞性肺疾患 (COPD)、1型糖尿病 (IDDM)、子宮内膜症、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群 (GBS)、橋本甲状腺炎、汗腺膿瘍、特発性血小板減少性紫斑病、炎症性腸疾患、間質性膀胱炎、狼瘡 (例えば、円盤状紅斑性狼瘡、薬剤誘発性エリテマトーデス、ループス腎炎、新生児ループス、亜急性皮膚エリテマトーデスおよび全身性エリテマトーデス)、限局性強皮症、多発性硬化症 (MS)、重症筋無力症、筋疾患、ナルコレプシー、神経ミオトニー、尋常性天疱瘡、悪性貧血、原発性胆汁性肝硬変、再発性播種性脳脊髄炎、リウマチ熱、統合失調症、強皮症、シェーグレン症候群、腱滑膜炎、血管炎、または白斑である。
【０２９６】
69. 40-42の方法であって、神経性炎症が炎症性筋疾患に関連する。 
【０２９７】
70. 69の方法であって、炎症性筋疾患が、皮膚筋炎、封入体筋炎、または多発性筋炎である。
【０２９８】
71. 40-42の方法であって、神経性炎症が血管炎に関連する。
【０２９９】
72. 71の方法であって、血管炎が、バージャー病、脳血管炎、チャーグ・ストラウス動脈炎、クリオグロブリン血症、本態性クリオグロブリン血症、巨細胞性動脈炎、ゴルファー血管炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、過敏性血管炎、川崎病、顕微鏡的多発動脈炎/多発性血管炎、結節性多発動脈炎、リウマチ性多発性筋痛 (PMR)、リウマチ性血管炎、高安動脈炎、またはヴェーゲナー肉芽腫である。
【０３００】
73. 40-42の方法であって、神経性炎症が皮膚障害に関連する。 
【０３０１】
74. 73の方法であって、皮膚障害が、皮膚炎、湿疹、鬱滞性皮膚炎、汗腺膿瘍、乾癬、酒さまたは強皮症である。
【０３０２】
75. 74の方法であって、湿疹が、アトピー性湿疹、接触湿疹、乾性湿疹、脂漏性皮膚炎、発汗異常、円板状湿疹、静脈性湿疹、疱疹状皮膚炎、神経皮膚炎、または自家感作性皮膚炎である。
【０３０３】
76. 74の方法であって、乾癬が、尋常性乾癬、爪乾癬、滴状乾癬、頭皮乾癬、インバス乾癬、膿疱性乾癬、または紅皮症乾癬である。
【０３０４】
77. 40-42の方法であって、神経性炎症が胃腸障害に関連する。
【０３０５】
78. 77の方法であって、胃腸障害が過敏性大腸疾患または炎症性腸疾患(inflammatory bowel)である。
【０３０６】
79. 77の方法であって、炎症性腸疾患がクローン病または潰瘍性大腸炎である。
【０３０７】
80.必要とする哺乳類における慢性神経性炎症の治療用医薬の製造における改変クロストリジウム毒素の使用であって、改変クロストリジウム毒素が、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含み、治療上有効量の医薬の哺乳類への投与が炎症誘導性分子の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。 
【０３０８】
81.必要とする哺乳類における慢性神経性炎症の治療用医薬の製造における改変クロストリジウム毒素の使用であって、改変クロストリジウム毒素が、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含み、治療上有効量の医薬の哺乳類への投与が、炎症を誘発する神経ペプチドの放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。
【０３０９】
82.必要とする哺乳類における慢性神経性炎症の治療用医薬の製造における改変クロストリジウム毒素の使用であって、改変クロストリジウム毒素が、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含み、治療上有効量の医薬の哺乳類への投与が、炎症を誘発するプロスタグランジンまたはグルタミン酸の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。 
【０３１０】
83.必要とする哺乳類における慢性神経性炎症の治療用医薬の製造における改変クロストリジウム毒素の使用であって、改変クロストリジウム毒素が、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位を含み、治療上有効量の医薬の哺乳類への投与が、炎症誘導性分子の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。 
【０３１１】
84.必要とする哺乳類における慢性神経性炎症の治療用医薬の製造における改変クロストリジウム毒素の使用であって、改変クロストリジウム毒素が、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位を含み、治療上有効量の医薬の哺乳類への投与が炎症を誘発する神経ペプチドの放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。 
【０３１２】
85.必要とする哺乳類における慢性神経性炎症の治療用医薬の製造における改変クロストリジウム毒素の使用であって、改変クロストリジウム毒素が、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位を含み、治療上有効量の医薬の哺乳類への投与が炎症を誘発するプロスタグランジンまたはグルタミン酸の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。
【０３１３】
86.必要とする哺乳類における慢性神経性炎症の治療のための改変クロストリジウム毒素の使用であって、該使用が哺乳類に治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を投与する工程を含み、改変クロストリジウム毒素が、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメインを含み、改変クロストリジウム毒素の投与が、炎症誘導性分子の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。
【０３１４】
87.必要とする哺乳類における慢性神経性炎症の治療のための改変クロストリジウム毒素の使用であって、該使用が哺乳類に治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を投与する工程を含み、改変クロストリジウム毒素が、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメインを含み、改変クロストリジウム毒素の投与が炎症を誘発する神経ペプチドの放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。
【０３１５】
88.必要とする哺乳類における慢性神経性炎症の治療のための改変クロストリジウム毒素の使用であって、該使用が哺乳類に治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を投与する工程を含み、改変クロストリジウム毒素が、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメインを含み、改変クロストリジウム毒素の投与が、炎症を誘発するプロスタグランジンまたはグルタミン酸の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。
【０３１６】
89.必要とする哺乳類における慢性神経性炎症の治療のための改変クロストリジウム毒素の使用であって、該使用が哺乳類に治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を投与する工程を含み、改変クロストリジウム毒素が、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位を含み、改変クロストリジウム毒素の投与が、炎症誘導性分子の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。
【０３１７】
90.必要とする哺乳類における慢性神経性炎症の治療のための改変クロストリジウム毒素の使用であって、該使用が哺乳類に治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を投与する工程を含み、改変クロストリジウム毒素が、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位を含み、改変クロストリジウム毒素の投与が、炎症を誘発する神経ペプチドの放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。 
【０３１８】
91.必要とする哺乳類における慢性神経性炎症の治療のための改変クロストリジウム毒素の使用であって、該使用が哺乳類に治療上有効量の改変クロストリジウム毒素を投与する工程を含み、改変クロストリジウム毒素が、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、および外来性プロテアーゼ切断部位を含み、改変クロストリジウム毒素の投与が、炎症を誘発するプロスタグランジンまたはグルタミン酸の放出を低下させ、それにより慢性神経性炎症に関連する症状を低減させる。
【０３１９】
92. 80-91の方法であって、改変クロストリジウム毒素が、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシルへの直線状の順序で、1)クロストリジウム毒素酵素ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、オピオイドペプチド結合ドメイン、2)クロストリジウム毒素酵素ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、3)オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位 およびクロストリジウム毒素酵素ドメイン、4)オピオイドペプチド結合ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、5)クロストリジウム毒素転位置ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素酵素ドメインおよびオピオイドペプチド結合ドメイン、または6)クロストリジウム毒素転位置ドメイン、外来性プロテアーゼ切断部位、オピオイドペプチド結合ドメイン およびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む。
【０３２０】
93. 80-91の方法であって、オピオイドペプチド結合ドメインが、エンケファリン、BAM22 ペプチド、エンドモルフィン、エンドルフィン、ダイノルフィン、ノシセプチンまたはヘモルフィンである。
【０３２１】
94. 93の方法であって、エンケファリンが、Leu-エンケファリン、Met-エンケファリン、Met-エンケファリン MRGL またはMet-エンケファリン MRFである。
【０３２２】
95. 93の方法であって、エンケファリンが配列番号52、配列番号53、配列番号54または配列番号55を含む。
【０３２３】
96. 93の方法であって、BAM22 ペプチドが、BAM22 ペプチド (1-12)、BAM22 ペプチド (6-22)、BAM22 ペプチド (8-22)またはBAM22 ペプチド (1-22)である。
【０３２４】
97. 93の方法であって、BAM22 ペプチドが、配列番号56のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号57のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号58のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号59のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22； 配列番号60のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22；または配列番号61のアミノ酸 1-12、アミノ酸 6-22、アミノ酸 8-22またはアミノ酸 1-22を含む。
【０３２５】
98. 93の方法であって、エンドモルフィンが、エンドモルフィン-1またはエンドモルフィン-2である。
【０３２６】
99.93の方法であって、エンドモルフィンが配列番号62または配列番号63を含む。
【０３２７】
100. 93の方法であって、エンドルフィンが、エンドルフィン-α、ネオエンドルフィン-α、エンドルフィン-β、ネオエンドルフィン-βまたはエンドルフィン-γである。
【０３２８】
101.93の方法であって、エンドルフィンが配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68または配列番号69を含む。
【０３２９】
102.93の方法であって、ダイノルフィンが、ダイノルフィン A、ダイノルフィン B (ロイモルフィン)またはリモルフィンである。
【０３３０】
103.93の方法であって、ダイノルフィンが配列番号70、配列番号71、配列番号72、配列番号73、配列番号74、配列番号75、配列番号76、配列番号77、配列番号78、配列番号79、配列番号80、配列番号81、配列番号82、配列番号83、配列番号84、配列番号85、配列番号86、配列番号87、配列番号88、配列番号89、配列番号90、配列番号91、配列番号92、配列番号93、配列番号94、配列番号95、配列番号96、配列番号97、配列番号98、配列番号99または配列番号100を含む。
【０３３１】
104. 93の方法であって、ノシセプチンが、ノシセプチン RK、ノシセプチン、神経ペプチド 1、神経ペプチド 2または神経ペプチド 3である。
【０３３２】
105. 93の方法であって、ノシセプチンが配列番号101、配列番号102、配列番号103、配列番号104、配列番号105、配列番号106、配列番号107、配列番号108、配列番号109または配列番号110を含む。
【０３３３】
106. 93の方法であって、クロストリジウム毒素転位置ドメインが、BoNT/A 転位置ドメイン、BoNT/B 転位置ドメイン、BoNT/C1 転位置ドメイン、BoNT/D 転位置ドメイン、BoNT/E 転位置ドメイン、BoNT/F 転位置ドメイン、BoNT/G 転位置ドメイン、TeNT 転位置ドメイン、BaNT 転位置ドメイン、またはBuNT 転位置ドメインである。
【０３３４】
107. 93の方法であって、クロストリジウム毒素酵素ドメインが、BoNT/A 酵素ドメイン、BoNT/B 酵素ドメイン、BoNT/C1 酵素ドメイン、BoNT/D 酵素ドメイン、BoNT/E 酵素ドメイン、BoNT/F 酵素ドメイン、BoNT/G 酵素ドメイン、TeNT 酵素ドメイン、BaNT 酵素ドメイン、またはBuNT 酵素ドメインである。
【０３３５】
108. 83-85および89-91の方法であって、外来性プロテアーゼ切断部位が、植物パパイン切断部位、昆虫パパイン切断部位、甲殻類パパイン切断部位、エンテロキナーゼ切断部位、ヒトライノウイルス 3C プロテアーゼ切断部位、ヒトエンテロウイルス 3C プロテアーゼ切断部位、タバコエッチウイルス プロテアーゼ切断部位、タバコ葉脈はん紋ウイルス 切断部位、サブチリシン切断部位、ヒドロキシルアミン切断部位、またはカスパーゼ 3 切断部位である。
【０３３６】
109. 80-91の方法であって、神経性炎症が、座瘡、酸の逆流/胸焼け、アルツハイマー病、虫垂炎、動脈炎、関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化、自己免疫障害、亀頭炎、眼瞼炎、細気管支炎、気管支炎、滑液包炎、癌、心臓炎、セリアック病、蜂巣炎、子宮頸炎、胆管炎、胆嚢炎、絨毛羊膜炎、慢性閉塞性肺疾患 (COPD)、肝硬変、大腸炎、結膜炎、膀胱炎、風邪、涙腺炎、認知症、皮膚炎、皮膚筋炎、気腫、脳炎、心内膜炎、子宮内膜炎、腸炎、全腸炎、上顆炎、精巣上体炎、筋膜炎、結合組織炎、胃炎、胃腸炎、歯肉炎、糸球体腎炎、舌炎、心臓疾患、肝炎、汗腺膿瘍、高血圧、回腸炎、炎症性神経障害、インスリン耐性、間質性膀胱炎、虹彩炎、虚血性心疾患、角膜炎、角結膜炎、喉頭炎、乳腺炎、乳様突起炎、髄膜炎、メタボリック・シンドローム (シンドローム X)、片頭痛、脊髄炎、心筋炎、筋炎、腎炎、肥満、臍炎、卵巣炎、精巣炎、骨軟骨炎、骨減少症、骨粗鬆症、骨炎、耳炎、膵炎、パーキンソン病、耳下腺炎、骨盤内炎症性疾患、心膜炎、腹膜炎、咽頭炎、静脈炎、胸膜炎、肺炎、直腸炎、前立腺炎、歯髄炎、腎盂腎炎、門脈炎、リウマチ熱、鼻炎、卵管炎、唾液腺炎、副鼻腔炎、けいれん性結腸、口内炎、滑膜炎、腱炎(tendonitis)、腱炎(tendinosis)、腱滑膜炎、血栓性静脈炎、へんとう炎、三角炎、腫瘍、尿道炎、ブドウ膜炎、膣炎、血管炎、または外陰炎に関連する。
【０３３７】
110. 80-91の方法であって、神経性炎症が関節炎に関連する。
【０３３８】
111. 110の方法であって、関節炎が、単関節炎、少関節炎、または多発性関節炎である。
【０３３９】
112. 110の方法であって、関節炎が自己免疫疾患または非自己免疫疾患である。
【０３４０】
113. 110の方法であって、関節炎が、骨関節炎、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、敗血症性関節炎、脊椎関節症、痛風、偽痛風、またはスティル病である。
【０３４１】
114. 113の方法であって、脊椎関節症が、強直性脊椎炎、反応性関節炎 (ライター症候群)、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患に伴う腸疾患性関節炎、ウィップル病またはベーチェット病である。
【０３４２】
115. 80-91の方法であって、神経性炎症が自己免疫障害に関連する。
【０３４３】
116. 115の方法であって、自己免疫障害が全身性自己免疫障害または臓器特異的自己免疫障害である。
【０３４４】
117. 115の方法であって、自己免疫障害が、急性散在性脳脊髄炎 (ADEM)、アジソン病、アレルギー、抗リン脂質抗体症候群 (APS)、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、水疱性類天疱瘡、セリアック病、シャーガス病、慢性閉塞性肺疾患 (COPD)、1型糖尿病 (IDDM)、子宮内膜症、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群 (GBS)、橋本甲状腺炎、汗腺膿瘍、特発性血小板減少性紫斑病、炎症性腸疾患、間質性膀胱炎、狼瘡 (例えば、円盤状紅斑性狼瘡、薬剤誘発性エリテマトーデス、ループス腎炎、亜急性皮膚エリテマトーデス、新生児ループス、および全身性エリテマトーデス)、限局性強皮症、多発性硬化症 (MS)、重症筋無力症、筋疾患、ナルコレプシー、神経ミオトニー、尋常性天疱瘡、悪性貧血、原発性胆汁性肝硬変、再発性播種性脳脊髄炎、リウマチ熱、統合失調症、強皮症、シェーグレン症候群、腱滑膜炎、血管炎、または白斑である。
【０３４５】
118. 80-91の方法であって、神経性炎症が炎症性筋疾患に関連する。
【０３４６】
119. 118の方法であって、炎症性筋疾患が、皮膚筋炎、封入体筋炎、または多発性筋炎である。
【０３４７】
120. 80-91の方法であって、神経性炎症が血管炎に関連する。
【０３４８】
121. 120の方法であって、血管炎が、バージャー病、脳血管炎、チャーグ・ストラウス動脈炎、クリオグロブリン血症、本態性クリオグロブリン血症、巨細胞性動脈炎、ゴルファー血管炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、過敏性血管炎、川崎病、顕微鏡的多発動脈炎/多発性血管炎、結節性多発動脈炎、リウマチ性多発性筋痛 (PMR)、リウマチ性血管炎、高安動脈炎、またはヴェーゲナー肉芽腫である。
【０３４９】
122. 80-91の方法であって、神経性炎症が皮膚障害に関連する。
【０３５０】
123. 122の方法であって、皮膚障害が、皮膚炎、湿疹、鬱滞性皮膚炎、汗腺膿瘍、乾癬、酒さまたは強皮症である。
【０３５１】
124. 122の方法であって、湿疹が、アトピー性湿疹、接触湿疹、乾性湿疹、脂漏性皮膚炎、発汗異常、円板状湿疹、静脈性湿疹、疱疹状皮膚炎、神経皮膚炎、または自家感作性皮膚炎である。
【０３５２】
125. 122の方法であって、乾癬が、尋常性乾癬、爪乾癬、滴状乾癬、頭皮乾癬、インバス乾癬、膿疱性乾癬、または紅皮症乾癬である。
【０３５３】
126. 80-91の方法であって、神経性炎症が胃腸障害に関連する。
【０３５４】
127. 126の方法であって、胃腸障害が過敏性大腸疾患または炎症性腸疾患(inflammatory bowel)である。
【０３５５】
128. 126の方法であって、炎症性腸疾患がクローン病または潰瘍性大腸炎である。
【実施例】
【０３５６】
慢性神経性炎症の治療
以下の実施例は、特定の態様を説明することにより提供するが、本発明の範囲を限定する意図はまったくない。 
【０３５７】
関節リウマチと診断された62 歳の女性は関節の凝りと膨れを訴えている。医師は関節の凝りと膨れとは慢性神経性炎症に起因すると判定する。この女性を罹患部の近傍において本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素を含む組成物の局所投与により治療する。患者の症状をモニターし、治療の約 1-3日後に、女性は関節の凝りと膨れの低下を示す。１ヶ月および３ヶ月の検査において、女性は治療部位において関節の凝りと膨れが低下し続けていることを示す。慢性神経性炎症の症状の軽減は、改変クロストリジウム毒素を含む組成物による治療の成功を示す。本明細書に開示の改変クロストリジウム毒素の類似のタイプの局所投与を、単関節炎、少関節炎、または多発性関節炎を伴う慢性神経性炎症、例えば、骨関節炎、若年性特発性関節炎、敗血症性関節炎、脊椎関節症 (例えば、強直性脊椎炎、反応性関節炎 (ライター症候群)、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患に伴う腸疾患性関節炎、ウィップル病またはベーチェット病)、滑膜炎、痛風、偽痛風、またはスティル病、ならびに、滑液包炎、リウマチ熱、または腱滑膜炎を患う患者の治療に用いることが出来る。さらに、全身性投与も開示された改変クロストリジウム毒素を慢性神経性炎症の治療のために投与することに用いることが出来る。
【０３５８】
慢性閉塞性肺疾患 (COPD) と診断された58 歳の男性は呼吸困難を訴えている。医師は呼吸困難は慢性神経性炎症に起因すると判定する。男性を本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素を含む組成物の静脈内投与により全身的に治療する。患者の症状をモニターし、治療の約 1-3日後に、男性は呼吸能力における改善を示す。１ヶ月および３ヶ月の検査において、男性は呼吸の改善が続いていることを示す。慢性神経性炎症の症状におけるこの軽減は改変クロストリジウム毒素を含む組成物による治療の成功を示す。本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素の類似のタイプの全身性投与は、喘息、細気管支炎、気管支炎、気腫、喉頭炎、咽頭炎、胸膜炎、肺炎、鼻炎、副鼻腔炎、またはその他のいずれかのタイプの慢性呼吸器障害を伴う慢性神経性炎症を患う患者の治療に用いることが出来る。さらに、吸入による投与も開示される改変クロストリジウム毒素の慢性神経性炎症の治療のための投与に用いることが出来る。
【０３５９】
皮膚筋炎と診断された67 歳の男性は筋肉痛を訴えている。医師は痛みは慢性神経性炎症に起因すると判定する。男性を罹患部の近傍における本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素を含む組成物の局所投与によって治療する。患者の症状をモニターし、治療の約 1-3日後、男性は痛みの低下を示す。１ヶ月および３ヶ月の検査において、男性は筋肉の運動の向上と痛みの低下が続いていることを示す。慢性神経性炎症の症状における軽減は、改変クロストリジウム毒素を含む組成物による治療の成功を示す。本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素の類似のタイプの局所投与は、封入体筋炎、重症筋無力症、多発性筋炎またはその他のいずれかのタイプの炎症性筋疾患、ならびに、筋膜炎、結合組織炎、筋炎、神経ミオトニー、腱炎(tendinosis)、または腱炎(tendonitis)を伴う慢性神経性炎症を患う患者の治療に用いることが出来る。さらに、全身性投与も開示される改変クロストリジウム毒素の慢性神経性炎症の治療ための投与のために用いることができる。
【０３６０】
チャーグ・ストラウス動脈炎と診断された73 歳の女性は呼吸時の喘鳴を訴えている。医師は喘鳴は慢性神経性炎症に起因すると判定する。女性を本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素を含む組成物の静脈内投与によって全身性に治療する。患者の症状をモニターし、治療の約 1-3日後、女性は喘鳴を有さなくなったことを示す。１ヶ月および３ヶ月の検査において、女性は呼吸時に依然として喘鳴がないことを示す。この慢性神経性炎症の症状における軽減は、改変クロストリジウム毒素を含む組成物による治療の成功を示す。本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素の同様のタイプの全身性投与は、あらゆる血管炎、例えば、バージャー病、脳血管炎、クリオグロブリン血症、本態性クリオグロブリン血症、巨細胞性動脈炎、ゴルファー血管炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、過敏性血管炎、川崎病、顕微鏡的多発動脈炎/多発性血管炎、結節性多発動脈炎、リウマチ性多発性筋痛 (PMR)、リウマチ性血管炎、高安動脈炎、またはヴェーゲナー肉芽腫、ならびに、動脈炎、心臓炎、心内膜炎、心臓疾患、高血圧、虚血性心疾患、心筋炎、心膜炎、静脈炎、門脈炎、または血栓性静脈炎を伴う慢性神経性炎症を患う患者の治療に用いることが出来る。
【０３６１】
酒さと診断された37 歳の男性は皮膚の発赤を訴えている。医師は発赤は慢性神経性炎症に起因すると判定する。男性は罹患部の近傍において本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素を含む組成物の局所投与により治療される。患者の症状をモニターし、治療の約 1-3日後、男性は皮膚の発赤の軽減を示す。１ヶ月および３ヶ月の検査において、男性は肌の色合いの改善と発赤の低下が続いていることを示す。この慢性神経性炎症の症状における軽減は、改変クロストリジウム毒素を含む組成物による治療の成功を示す。類似のタイプの本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素の局所投与は、座瘡、子宮頸炎、皮膚炎、湿疹 (例えば、アトピー性湿疹、接触湿疹、乾性湿疹、脂漏性皮膚炎、発汗異常、円板状湿疹、静脈性湿疹、疱疹状皮膚炎、神経皮膚炎、または自家感作性皮膚炎)、子宮内膜炎、歯肉炎、舌炎、汗腺膿瘍、角膜炎、角結膜炎、乳腺炎、乾癬 (例えば、尋常性乾癬、爪乾癬、滴状乾癬、頭皮乾癬、インバス乾癬、膿疱性乾癬、または紅皮症乾癬)、強皮症、鬱滞性皮膚炎、口内炎、へんとう炎、膣炎、白斑、または外陰炎を伴う慢性神経性炎症を患う患者の治療に用いることが出来る。さらに、全身性投与も慢性神経性炎症の治療のために開示された改変クロストリジウム毒素を投与するために用いることが出来る。
【０３６２】
クローン病と診断された33 歳の女性は腹痛および下痢を訴えている。医師は腹痛と下痢とは慢性神経性炎症に起因すると判定する。女性を全身性に本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素を含む組成物の静脈内投与によって治療する。患者の症状をモニターし、治療の約 1-3日後、女性は腹痛の低下を示し、下痢がなくなっていることを示す。１ヶ月および３ヶ月の検査において、女性は腹痛と下痢の軽減が続いていることを示す。慢性神経性炎症の症状のこの軽減は改変クロストリジウム毒素を含む組成物による治療の成功を示す。同様のタイプの本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素の全身性投与は、炎症性腸疾患、例えば、潰瘍性大腸炎 (例えば、潰瘍性直腸炎、左側結腸炎、汎大腸炎および劇症大腸炎)、あらゆる過敏性大腸疾患、ならびに、大腸炎、腸炎、全腸炎、胃炎、胃腸炎、メタボリック・シンドローム (シンドローム X)、けいれん性結腸、またはあらゆるその他の胃腸障害を伴う慢性神経性炎症を患う患者の治療に用いることが出来る。
【０３６３】
全身性エリテマトーデスと診断された46 歳の男性は、発熱、関節痛、および疲労を訴えている。医師はこれらの症状は慢性神経性炎症に起因すると判定する。男性を本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素を含む組成物の静脈内投与により全身性に治療する。患者の症状をモニターし、治療の約 1-3日後、男性は健康状態の改善、発熱の消失を示し、関節の痛みは軽減し、疲労もなくなっている。１ヶ月および３ヶ月の検査において、男性は関節痛の軽減が続いており、発熱や疲労により苦しんでいないことを示す。この慢性神経性炎症の症状における軽減は、改変クロストリジウム毒素を含む組成物による治療の成功を示す。同様のタイプの本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素の全身性投与は、その他のあらゆる全身性自己免疫障害、例えば、これらに限定されないが、抗リン脂質抗体症候群 (APS)、水疱性類天疱瘡、シャーガス病、円盤状紅斑性狼瘡、薬剤誘発性エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、ギラン・バレー症候群、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、新生児ループス、悪性貧血、リウマチ性多発性筋痛、関節リウマチ、強皮症、シェーグレン症候群、亜急性皮膚エリテマトーデス、ヴェーゲナー肉芽腫を伴う慢性神経性炎症を患う患者の治療に用いることが出来る。
【０３６４】
橋本甲状腺炎と診断された58 歳の男性は、抑欝、冷え性、体重増加、物忘れ、および便秘を訴えている。医師はこれらの症状は慢性神経性炎症に起因すると判定する。男性を罹患部の近傍において本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素を含む組成物の局所投与によって治療する。患者の症状をモニターし、治療の約 1-3日後、男性は訴えているすべての症状の軽減を示す。１ヶ月および３ヶ月の検査において、男性は依然として抑欝、冷え性、体重増加、物忘れ、および便秘を経験していないことを示す。この慢性神経性炎症の症状の軽減は、改変クロストリジウム毒素を含む組成物による治療の成功を示す。類似のタイプの本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素の全身性投与は、その他のあらゆる局所自己免疫障害、例えば、これらに限定されないが、急性散在性脳脊髄炎 (ADEM)、アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎 (例えば、原発性胆汁性肝硬変)、自己免疫性内耳疾患、セリアック病、クローン病、1型糖尿病、子宮内膜症、巨細胞性動脈炎、グレーブス病、間質性膀胱炎、ループス腎炎、多発性硬化症、限局性強皮症、尋常性天疱瘡、再発性播種性脳脊髄炎、硬化性胆管炎、潰瘍性大腸炎、または白斑を伴う慢性神経性炎症を患う患者の治療に用いることが出来る。さらに、全身性投与も、慢性神経性炎症の治療のために開示される改変クロストリジウム毒素を投与するために用いることが出来る。
【０３６５】
関節リウマチと診断された59 歳の男性は関節の凝りと膨れを訴えている。医師は関節の凝りと膨れは慢性神経性炎症に起因すると判定する。女性を罹患部の近傍において本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素を含む組成物の局所投与により治療する。患者の症状をモニターし、治療の約 1-3日後、女性は関節の凝りと膨れの軽減を示す。１ヶ月および３ヶ月の検査において、女性は依然として治療部位での関節の凝りと膨れが軽減し続けていることを示す。この慢性神経性炎症の症状の軽減は改変クロストリジウム毒素を含む組成物による治療の成功を示す。類似のタイプの本明細書に開示する改変クロストリジウム毒素の局所投与は、あらゆる単関節炎、少関節炎、または多発性関節炎、例えば、骨関節炎、若年性特発性関節炎、敗血症性関節炎、脊椎関節症 (例えば、強直性脊椎炎、反応性関節炎 (ライター症候群)、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患に伴う腸疾患性関節炎、ウィップル病またはベーチェット病)、滑膜炎、痛風、偽痛風、またはスティル病、ならびに、滑液包炎、リウマチ熱、または腱滑膜炎を伴う慢性神経性炎症を患う患者の治療に用いることが出来る。さらに、全身性投与も慢性神経性炎症の治療のために開示される改変クロストリジウム毒素を投与するために用いることが出来る。
【０３６６】
本発明の上記の記載は例示および説明の目的の例示的なものである。本発明の精神と範囲から逸脱することなく変更および改変を行うことができることが当業者に明らかであろう。本明細書に引用するすべての文献は引用により本明細書に含める。以下の請求の範囲はすべてのかかる変更および改変を包含するように解釈されるべきであると意図される。
【図１−Ａ】
2011514307.tif 000005
【図１−Ｂ】
2011514307.tif 000006
【図２】
2011514307.tif 000007
【図３−Ａ】
2011514307.tif 000008
【図３−Ｂ】
2011514307.tif 000009
【図４−Ａ】
2011514307.tif 000010
【図４−Ｂ】
2011514307.tif 000011
【図４−Ｃ】
2011514307.tif 000012
【図４−Ｄ】
2011514307.tif 000013
【図５−Ａ】
2011514307.tif 000014
【図５−Ｂ】
2011514307.tif 000015
【手続補正書】
【提出日】平成22年6月23日(2010.6.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2011514307000001.app
【国際調査報告】
2011514307.tif 000016
2011514307.tif 000017
2011514307.tif 000018