(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症性疾患に罹患している対象における前記炎症性疾患を治療するための医薬の製造のための、ＧＭ−ＣＳＦを中和する化合物とＩＬ−１７を中和する化合物との使用であって、前記ＧＭ−ＣＳＦを中和する化合物が、ＧＭ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦ受容体に結合する抗体またはその機能的断片であり、前記ＩＬ−１７を中和する化合物が、ＩＬ−１７またはＩＬ−１７受容体に結合する抗体またはその機能的断片であり、炎症性疾患が関節リウマチである使用。
【請求項２】
（ａ）前記ＧＭ−ＣＳＦを中和する化合物が、前記ＩＬ−１７を中和する化合物の前に投与されるか、
（ｂ）前記ＧＭ−ＣＳＦを中和する化合物が、前記ＩＬ−１７を中和する化合物の後に投与されるか、または
（ｃ）前記ＧＭ−ＣＳＦを中和する化合物と前記ＩＬ−１７を中和する化合物とが同時に投与される、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記対象が、ヒトまたは非ヒト霊長類である、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記ＧＭ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦ受容体に結合する抗体またはその機能的断片が、ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片である、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記ＧＭ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦ受容体に結合する抗体またはその機能的断片がＧＭ−ＣＳＦのエピトープに結合するものであり、前記エピトープはアミノ酸２３〜２７（ＲＲＬＬＮ）および／またはアミノ酸６５〜７７（ＧＬＲ／ＱＧＳＬＴＫＬＫＧＰＬ）を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記エピトープが、
（ａ）アミノ酸２８〜３１（ＬＳＲＤ）、
（ｂ）アミノ酸３２〜３３（ＴＡ）、および／または
（ｃ）アミノ酸２１〜２２（ＥＡ）
をさらに含む、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１６に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号１８に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３をその軽鎖可変領域に含み、配列番号１４に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、配列番号１５に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２領域、および配列番号１〜１３および５６のいずれかに示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３をその重鎖可変領域に含む、請求項４に記載の使用。
【請求項８】
前記ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１６に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号１８に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３をその軽鎖可変領域に含み、配列番号１４に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、配列番号１５に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２領域、および配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３をその重鎖可変領域に含む、請求項４に記載の使用。
【請求項９】
前記ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、その軽鎖可変領域に配列番号１９、５４、および５５のいずれかに示されているアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の使用。
【請求項１０】
前記ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、その重鎖可変領域に配列番号２０−３３、５２、および５３のいずれかに示されているアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の使用。
【請求項１１】
前記ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号３４に示されている軽鎖アミノ酸配列、および配列番号３５〜４８のいずれかに示されている重鎖アミノ酸配列を含む、請求項７に記載の使用。
【請求項１２】
前記ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号３４に示されている軽鎖アミノ酸配列、および配列番号３５に示されている重鎖アミノ酸配列を含む、請求項７に記載の使用。
【請求項１３】
前記ＩＬ−１７またはＩＬ−１７受容体に結合する抗体またはその機能的断片が、それぞれヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片である、請求項１に記載の使用。
【請求項１４】
（ａ）ＧＭ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦ受容体に結合する抗体またはその機能的断片であるＧＭ−ＣＳＦを中和する化合物と、
（ｂ）ＩＬ−１７またはＩＬ−１７受容体に結合する抗体またはその機能的断片であるＩＬ−１７を中和する化合物と
を含む関節リウマチの治療のための医薬組成物。
【請求項１５】
前記ＧＭ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦ受容体に結合する抗体またはその機能的断片が、ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記ＧＭ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦ受容体に結合する抗体またはその機能的断片が、アミノ酸２３〜２７（ＲＲＬＬＮ）および／またはアミノ酸６５〜７７（ＧＬＲ／ＱＧＳＬＴＫＬＫＧＰＬ）を含むＧＭ−ＣＳＦのエピトープに結合する、請求項１４または１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記エピトープが、
（ａ）アミノ酸２８〜３１（ＬＳＲＤ）、
（ｂ）アミノ酸３２〜３３（ＴＡ）、および／または
（ｃ）アミノ酸２１〜２２（ＥＡ）
をさらに含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１６に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号１８に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３をその軽鎖可変領域に含み、配列番号１４に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、配列番号１５に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２領域、および配列番号１〜１３および５６のいずれかに示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３をその重鎖可変領域に含む、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１６に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号１８に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３をその軽鎖可変領域に含み、配列番号１４に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、配列番号１５に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２領域、および配列番号２のいずれかに示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３をその重鎖可変領域に含む、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、その軽鎖可変領域に配列番号１９、５４、および５５のいずれかに示されているアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、その重鎖可変領域に配列番号２０−３３、５２、および５３のいずれかに示されているアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号３４に示されている軽鎖アミノ酸配列、および配列番号３５〜４８のいずれかに示されている重鎖アミノ酸配列を含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号３４に示されている軽鎖アミノ酸配列、および配列番号３５に示されている重鎖アミノ酸配列を含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記ＩＬ−１７またはＩＬ−１７受容体に結合する抗体またはその機能的断片が、ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は炎症性疾患の治療に関する。本発明の別の態様は、癌などの腫瘍性疾患の治療に関する。本発明のさらに別の態様は、炎症性および／または腫瘍性疾患を治療するための医薬組成物に関する。本出願が出願される法律体系に応じて、本発明は、上記疾患の治療用医薬品の製造における２つの特定の物質の使用にも同様に関連し得る。
【背景技術】
【０００２】
造血成長因子として最初に同定された顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）は、炎症および自己免疫における重要なサイトカインであることがより最近になって示されている。ＧＭ−ＣＳＦ  ｍＲＮＡまたはタンパク質のレベル上昇は、アレルギーおよび乾癬患者、関節炎および喘息患者におけるものを含む、様々な炎症部位で測定される。
【０００３】
多数のｉｎ  ｖｉｖｏ研究により、中和抗体によるＧＭ−ＣＳＦの遮断が、関節炎、実験的自己免疫性脳炎、乾癬、および肺疾患のモデルを含む種々の炎症モデルの炎症促進性疾患を予防し、または治癒までもできることが過去数年にわたって示されている。ＧＭ−ＣＳＦは、成熟好中球およびマクロファージの増殖および活性化を刺激することにより、先天性免疫に重要な役割を果たす。加えて、ＧＭ−ＣＳＦの重要な役割が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで樹状細胞の分化および成熟を支配することにより抗原提示において実証されている。Ｉｎ  ｖｉｖｏでは、ＧＭ−ＣＳＦは、ヒトＰＢＭＣ、Ｔ細胞、およびＡＰＣで１型の炎症促進性サイトカインを優先的に誘導することが報告されている。
【０００４】
インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）は、現在は６つのメンバー、ＩＬ−１７Ａ〜ＩＬ−１７Ｆからなる後天性免疫系のサイトカインのファミリーである。ＩＬ−１７は、互いにかなり高い配列相同性を共有する、現在は５つのメンバーＩＬ−１７ＲＡ〜ＩＬ−１７ＲＥを含むファミリーであるＩＬ−１７受容体に結合することが記述されている。ＩＬ−１７受容体ファミリーのメンバーは、Ｉ型膜貫通型タンパク質である。ＩＬ−１７に対する受容体は免疫系の全ての細胞により豊富に発現されており、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、およびＩＬ−１７Ｄによる種々の細胞タイプの刺激が、ＩＬ−１β、ＴＮＦα、およびＩＬ−６のような他のサイトカイン、ならびにケモカインＩＬ−８およびＭＩＰ−１αの発現を誘導することができることが、現在一般的に受け入れられている。その受容体とは対照的に、ＩＬ−１７は、最近発見されたＴｈ１７細胞により主として産生されており、その発現は感染および自己免疫と関連することが多い。
【０００５】
関節リウマチ（ＲＡ）は、慢性、炎症性、および全身性の自己免疫疾患である。ＲＡの病因および病原性はまだ完全には理解されていないが、この疾患は、侵襲性の滑膜過形成（パンヌス形成）および炎症（滑膜炎）を特徴とし、関節軟骨および硬骨の進行性破壊につながる。関節リウマチ（ＲＡ）は、免疫系の先天性および後天性の両機構に属する多数の細胞タイプおよび因子間の複雑な相互作用から生じる。例えば、様々なサイトカイン発現の一般的な増加、つまり対照と比較して非常に高いレベルのＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＦＮγ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−１、およびＭＩＰ−１βがＲＡ患者に観察されることが報告されている。さらに、ＩＬ−１、ＴＮＦα、およびＩＬ−１８は、ＲＡにおいてＴ細胞を刺激する顕著な炎症性因子として同定されている。公開されている報告では、ＲＡにおけるＧＭ−ＣＳＦの病原的役割が仮定されている。以下の知見がこの仮説を支持している：（ｉ）ＧＭ−ＣＳＦはＲＡ患者の滑膜で産生されており、このサイトカインのレベル上昇は患者の関節液で測定することができる；（ｉｉ）中和性抗ＧＭ−ＣＳＦモノクローナル抗体（ｍＡｂ）による治療は、コラーゲン誘導性関節炎のマウスモデル（ＣＩＡ）の疾患重症度を減少させる；（ｉｉｉ）ＧＭ−ＣＳＦ欠損マウスは、コラーゲンおよびｍＢＳＡによる疾患誘導に対する感受性の低減を示す；（ｉｖ）組換えＧＭ−ＣＳＦをＣＩＡマウスに注射すると、疾患が悪化する；（ｖ）化学療法後にＧＭ−ＣＳＦを投与したＲＡ患者は、関節炎重症度の拡大を示す。
【０００６】
上記の特定されている様々なサイトカインとは別に、ＩＬ−１７レベルがＲＡの滑膜および関節液で上昇し、ＩＬ−１７の遮断が実験モデルでの関節炎期間中の関節炎および関節破壊を低減するため、ＩＬ−１７はＲＡの病理にも関与していると考えられる。加えて、ＩＬ−１７の遺伝子欠損マウスはコラーゲン誘導性関節炎の抑制を示し、ＩＬ−１７−／−マウスは、ＩＬ−１Ｒａ−／−マウスと交配すると、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト欠損Ｂａｌｂ／ｃマウスに通常見られる多発関節炎の自然発生的な発症を完全に欠如する。ＩＬ−１７およびＴＮＦαによる局所的同時刺激は、好中球の動員および生存の両方に対する効果により、気道における好中球のＧＭ−ＣＳＦ依存性蓄積が、マウスでのｉｎ  ｖｉｖｏ実験で引き起こされることも報告されている。
【０００７】
マウスにおいてヒトＲＡ様疾患を研究するために使用されるモデルの１つは、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ）細胞壁（ＳＣＷ）関節炎である。このモデルでは、急性疾患および慢性再発性関節炎は両方とも、マウスの１つの膝関節に細菌細胞壁断片を関節内（ｉ．ａ．）注射することにより誘導することができる。先天性免疫が主要な病原的役割を果たす急性関節炎は、未処置マウスの膝関節にＳＣＷ断片を単回注射することにより得られる。ＳＣＷ断片のｉ．ａ．注射を繰り返すことにより慢性再発性モデルが確立され、後天性免疫のメディエーターが先天性応答の初期の優勢を徐々に引き継いでいく。コラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）は、軟骨コラーゲンＩＩ型（ＣＩＩ）に対するＴ細胞および抗体媒介性の自己免疫応答性に基づく、別の広く受け入れられている関節炎モデルである。このマウスモデルは、いくつかの臨床的、組織病理学的、および免疫学的な特徴をヒトＲＡと共有しており、滑膜炎ならびにその後の重篤な軟骨および硬骨侵食を主な特徴とする。本発明者らは、ＴＮＦα非依存性の慢性ＳＣＷ関節炎モデルおよびＴＮＦα依存性ＣＩＡモデルにおけるＧＭ−ＣＳＦ中和の治療的効能を探究した。加えて、本発明者らは、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１７経路を阻害することにより、先天性免疫および適応免疫を両方とも阻止する効果を研究した。これは、ＩＬ−１７受容体の遺伝子欠損マウス（ＩＬ−１７Ｒ−ＫＯマウス）において、ＧＭ−ＣＳＦを中和することにより、またはＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１７を中和する化合物による併用治療により実施された。本発明者らは、驚くべきことに、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１７経路の併用遮断により、非常に効率的な様式で両タイプの炎症性疾患を治療することができることを観察した。ＣＩＡモデルでは、ＧＭ−ＣＳＦ阻害性化合物およびＩＬ−１７阻害性化合物の併用投与は、コラーゲン誘導性関節炎の臨床スコアを有意に低減させたが、ＧＭ−ＣＳＦ阻害性化合物またはＩＬ−１７阻害性化合物単独による治療は、関節炎の重症度を有意には減少させなかった。加えて、詳細な組織学的分析から、軟骨および硬骨の関節炎および関節破壊に対する併用療法の相乗効果が実証された。このように、両経路の併用遮断は、その結果として炎症および関節破壊からの非常に効果的な保護をもたらした。これらの結果は、ごく最近まで、ＧＭ−ＣＳＦがＩＬ−１７の下流にあると仮定されていたため、特に驚くべきことである（例えば、Kawaguchi M. et al., J. Allergy Clin. Immunol. 114 (2004), 444-450；Starnes T. et al., The Journal of Immunology 169 (2002), 642-646；Laan M. et al., Eur. Respir. J. 21 (2003), 387-393を参照）。したがって、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１７を中和する化合物を併用する治療からは、相加効果または相乗効果は予測されていなかった。本出願は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＩＬ−１７およびＧＭ−ＣＳＦの併用阻止の有利な効果を初めて実証するものである。本明細書で示されているデータは、抗ＩＬ−１７治療と組み合わせた抗ＧＭ−ＣＳＦが、ＲＡだけでなく、本明細書の下記で定義されているような他の自己免疫疾患および炎症性疾患の状況でも顕著な治療効果を示すことを強く表している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
このように、本発明の薬学的手段および方法は、特に関節炎の治療を対象とするが、多発性硬化症、乾癬、ならびに喘息および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの肺炎症を含む他の炎症性疾患にも適用することができる。
【０００９】
定義
本明細書全体にわたって使用される「対象」という用語は、動物を指す。「動物」という用語には、これらに限定されないが、実験動物（げっ歯動物、例えばラット、モルモット、ハムスターまたはマウス、非ヒト霊長類、例えばカニクイザルまたはマカクサル）、家庭内動物またはペット動物（例えば、イヌまたはネコ）、家畜または農業用動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギ、およびブタ動物）、および／またはヒトなどの哺乳類が含まれる。好ましくは、動物は、ヒトまたは非ヒト霊長類である。
【００１０】
本明細書全体にわたって使用される「ＧＭ−ＣＳＦ」という用語は、文献に定義されているようなヒト（ホモサピエンス）および非ヒト霊長類ＧＭ−ＣＳＦの両方を表し、その変異体（相同体）を含む。この用語は、ヒトおよび非ヒト霊長類ＧＭ−ＣＳＦ受容体、およびそれらの変異体（相同体）も含む。非ヒト霊長類ＧＭ−ＣＳＦまたは非ヒト霊長類ＧＭ−ＣＳＦ受容体の特に好ましい変異体（相同体）には、テナガザル（ノマスカス・コンカラー（ｎｏｍａｓｃｕｓ  ｃｏｎｃｏｌｏｒ）、ウエスタンブラッククレスティッドギボン（ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌａｃｋ  ｃｒｅｓｔｅｄ  ｇｉｂｂｏｎ）としても知られている）のＧＭ−ＣＳＦ、ならびにマカク科のサルのＧＭ−ＣＳＦ、例えばアカゲザル（マカカ・ムラッタ（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ））およびカニクイザル（マカカ・ファシキュラリス（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））のＧＭ−ＣＳＦが含まれる。
【００１１】
本明細書の全体にわたって使用される「ＧＭ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦ受容体に結合する抗体」またはその機能的断片という用語は、動物のＧＭ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦ受容体に結合する能力を有する任意の抗体または抗体断片を含む。特に、この用語は、ヒトと上記で言及したサル種の少なくとも１つとの間で交差反応性（ＧＭ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦ受容体に対する結合に関して）を示す任意の抗体またはその断片を含む。例えば、抗体またはその断片は、ヒトＧＭ−ＣＳＦおよびカニクイザル（マカカ・ファシキュラリス）ＧＭ−ＣＳＦの両方に結合（および両方を中和）することが可能である。これは、ヒト対象への治療的投与を目的とする抗体分子の場合は特に有利である。なぜならそのような抗体は、通常、規制認可前に多数の試験を通らなければならず、それらの試験のうちのある初期試験には非ヒト動物種が関与するからである。そのような試験を実施する際に、ヒトと高度な遺伝的類似性を有する種（例えば、カニクイザルなどの非ヒト霊長類）を非ヒト種として使用することは一般的に望ましい。なぜならそのようにして得られる結果は、一般的に、同じ分子をヒトに投与する場合に期待される対応結果を高度に予測させるからである。しかしながら、動物試験に基づくそのような予測能力は、分子の比較可能性に少なくとも部分的に応じており、同じ治療用分子をヒトおよび非ヒト動物に投与することができる場合、種間交差反応性のためこの能力は非常に高い。したがって、ある抗体分子がヒトおよび別の種で同一抗原に対して交差反応性であれば、その同一抗体分子を使用して、ヒトおよび他の種、例えば上記で言及したサル種のうちの１つで試験を実施することができる。これにより、試験自体の効率性、ならびに治療上の見地から最終的な目的種であるヒトにおけるそのような抗体の挙動に関するそのような試験の予測能力をともに向上させる。
【００１２】
本明細書の全体にわたって使用される「ＧＭ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦ受容体に結合する抗体」という用語は、ＧＭ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦ受容体に対するモノクローナル抗体、またはそのような結合能力を有するその機能的断片も含む。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の第１の態様は、炎症性疾患に罹患している対象における該炎症性疾患を治療するための方法であって、ＧＭ−ＣＳＦを中和する化合物（簡潔には、ＧＭ−ＣＳＦ阻害性化合物）およびＩＬ−１７を中和する化合物（簡潔には、ＩＬ−１７阻害性化合物）を投与することを含む方法に関する。本化合物は、当業者に周知のパラメーターに応じて、１つの組成物の一部であってもよく、または別々の医薬品であってもよい。
【００１４】
本方法の好ましい実施形態は、下記の通りである：
（ａ）該ＧＭ−ＣＳＦ中和化合物が、該ＩＬ−１７中和化合物の前にまたはその後で該対象に投与される方法、または両化合物が同時に投与される方法；
（ｂ）該治療対象が上記で定義した動物である、本発明の第１の態様に記載のまたは（ａ）に記載の方法、
（ｃ）該ＧＭ−ＣＳＦ中和化合物が、ポリペプチド、ペプチド模倣物質、核酸、または低分子である、本発明の第１の態様に記載のまたは（ａ）もしくは（ｂ）に記載の方法；
（ｄ）該ポリペプチドが、ＧＭ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦ受容体に結合する抗体またはその機能的断片であり、好ましくは該抗体がモノクローナル抗体またはその機能的断片である、（ｃ）に記載の方法；
（ｅ）該抗体がヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片である、（ｄ）に記載の方法、
（ｆ）該抗体またはその機能的断片が、ヒトおよび非ヒト霊長類ＧＭ−ＣＳＦのエピトープに結合する、（ｄ）または（ｅ）に記載の方法。該エピトープは、ヒトおよび非ヒト霊長類ＧＭ−ＣＳＦの不連続エピトープが好ましく、該エピトープは、好ましくはアミノ酸２３〜２７（ＲＲＬＬＮ）および／またはアミノ酸６５〜７７（ＧＬＲ／ＱＧＳＬＴＫＬＫＧＰＬ）を含む。該アミノ酸配列伸長６５〜７７内の６７位における変異性は、一方ではヒトおよびテナガザルＧＭ−ＣＳＦ（６７位はＲである）と、他方ではマカク科のサル、例えばカニクイザルおよびアカゲザル（６７位はＱである）との間に、ＧＭ−ＣＳＦのこの位置における不均質性があることを反映している；
（ｇ）前記不連続エピトープが、アミノ酸２８〜３１（ＬＳＲＤ）、アミノ酸３２〜３３（ＴＡ）、および／またはアミノ酸２１〜２２（ＥＡ）をさらに含む、（ｆ）に記載の方法；
（ｈ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１〜１３または５６に示されているアミノ酸配列のいずれかを含むＣＤＲ３をその重鎖可変領域に含む、（ｅ）、（ｆ）、および（ｇ）のいずれかに記載の方法；
（ｉ）前記重鎖可変領域ＣＤＲ３配列のいずれかが、配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列および配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列と共に重鎖可変領域に存在する、（ｈ）に記載の方法；
（ｊ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１６に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１８に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ３をその軽鎖可変領域に含む、（ｈ）または（ｉ）に記載の方法；
（ｋ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１９、５４および５５のいずれかに示されているアミノ酸配列を、その軽鎖可変領域にさらに含む、（ｊ）に記載の方法；
（ｌ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号２０〜３３、５２または５３のいずれかに示されているアミノ酸配列をその重鎖可変領域に含む、（ｈ）または（ｉ）に記載の方法；
（ｍ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１６に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号１８に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３をその軽鎖可変領域に含み、配列番号１４に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、配列番号１５に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２領域、および配列番号１〜１３または５６のいずれかに示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３領域をその重鎖可変領域に含む、（ｈ）〜（ｌ）のいずれかに記載の方法；
（ｎ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号３４に示されている軽鎖アミノ酸配列、および配列番号３５〜４８のいずれかに示されている重鎖アミノ酸配列を含む、（ｈ）〜（ｍ）のいずれかに記載の方法；
（ｏ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１〜４８および／または５２〜５６のいずれかに示されているそれぞれのアミノ酸配列と少なくとも７０％の相同性を保有するアミノ酸配列を含む、（ｈ）〜（ｎ）のいずれかに記載の方法；相同性は、ベクターＮＴＩ（ＩｎｆｏｒＭａｘ（商標）、メリーランド州、アメリカ合衆国）などの標準的配列アラインメントプログラムにより決定される。そのようなプログラムでは、整列させた配列をアミノ酸毎に比較し、比較について種々のレベルの厳密性を設定することができる（例えば、同一アミノ酸、保存的アミノ酸置換など）。この用語が本明細書中で使用される場合、問題の２つのアミノ酸は、各々が同じ化学的クラス、つまり酸性、無極性、無荷電の極性、および塩基性に属する場合、互いの「保存的置換」であるとみなされる。非限定的な例では、無極性アミノ酸のクラスに属する２つの異なるアミノ酸は、これらの２つのアミノ酸が同一でない場合でも、互いの「保存的置換」とみなされることになるが、一方が無極性アミノ酸であり、他方が塩基性アミノ酸である場合は、互いの「保存的置換」とはみなされないだろう。「Molecular Biology of the Cell」、第４版（２００２年）、Alberts、Johnson、Lewis、Raff、Roberts、およびWalter著のパネル３．１では、アミノ酸が、４つの主な群：酸性、無極性、無荷電極性、および塩基性に分類されている。そのような分類は、特定のアミノ酸が問題の別のアミノ酸の保存的置換であるかどうかを本発明のために決定する目的で使用することができる。
（ｐ）該ＩＬ−１７中和化合物が、ポリペプチド、ペプチド模倣物質、核酸、または低分子である、本発明の第１の態様に記載のまたは（ａ）〜（ｏ）のいずれかに記載の方法；
（ｑ）該ポリペプチドが、ＩＬ−１７またはＩＬ−１７受容体に結合する抗体またはその機能的断片であり、好ましくは、該抗体がモノクローナル抗体またはその機能的断片である、（ｐ）に記載の方法；
（ｒ）該抗体がヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片である（ｑ）に記載の方法；
（ｓ）該炎症性疾患が、関節リウマチ（ＲＡ）（ＴＮＦアルファ中和剤による治療に抵抗性のＲＡを含む）、喘息、多発性硬化症（ＭＳ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、ブドウ膜炎、黄斑変性症、大腸炎、乾癬、ウォーラー変性、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、急性冠動脈症候群、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、再発性多発性軟骨炎（ＲＰ）、急性または慢性肝炎、整形外科インプラントの失敗、糸球体腎炎、狼瘡、または別の自己免疫障害である、本発明の第１の態様に記載のまたは（ａ）〜（ｒ）のいずれかに記載の方法。
【００１５】
本発明の第２の態様は、腫瘍性疾患に罹患している対象における該腫瘍性疾患を治療するための方法であって、ＧＭ−ＣＳＦ中和化合物およびＩＬ−１７中和化合物を投与することを含む方法に関する。本化合物は、当業者に周知のパラメーターに応じて、１つの組成物の一部であってもよく、または別々の医薬品であってもよい。
【００１６】
第２の態様による本方法の好ましい実施形態は、下記の通りである：
（ａ）該ＧＭ−ＣＳＦ中和化合物が、該ＩＬ−１７中和化合物の前にまたはその後で該対象に投与される方法、または両化合物が同時に投与される方法；
（ｂ）該治療対象が上記で定義した動物である、本発明の第２の態様に記載のまたは（ａ）に記載の方法。好ましくは、該対象はヒトまたは非ヒト霊長類である；
（ｃ）該ＧＭ−ＣＳＦ中和化合物が、ポリペプチド、ペプチド模倣物質、核酸、または低分子である、本発明の第２の態様に記載のまたは（ａ）もしくは（ｂ）に記載の方法；
（ｄ）該ポリペプチドが、ＧＭ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦ受容体に結合する抗体またはその機能的断片であり、好ましくは該抗体がモノクローナル抗体またはその機能的断片である、（ｃ）に記載の方法；
（ｅ）該抗体がヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片である、（ｄ）に記載の方法；
（ｆ）該抗体またはその機能的断片が、ヒトおよび非ヒト霊長類ＧＭ−ＣＳＦのエピトープに結合する、（ｄ）または（ｅ）に記載の方法。該エピトープは、好ましくはヒトおよび非ヒト霊長類ＧＭ−ＣＳＦの不連続エピトープであり、該エピトープは、好ましくはアミノ酸２３〜２７（ＲＲＬＬＮ）および／またはアミノ酸６５〜７７（ＧＬＲ／ＱＧＳＬＴＫＬＫＧＰＬ）を含む；
（ｇ）前記不連続エピトープが、アミノ酸２８〜３１（ＬＳＲＤ）、アミノ酸３２〜３３（ＴＡ）、および／またはアミノ酸２１〜２２（ＥＡ）をさらに含む、（ｆ）に記載の方法；
（ｈ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１〜１３または５６に示されているアミノ酸配列のいずれかを含むＣＤＲ３をその重鎖可変領域に含む、（ｅ）、（ｆ）、および（ｇ）のいずれかに記載の方法；
（ｉ）前記重鎖可変領域ＣＤＲ３配列のいずれかが、配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列および配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列と共に重鎖可変領域に存在する、（ｈ）に記載の方法；
（ｊ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１６に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１８に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ３をその軽鎖可変領域に含む、（ｈ）または（ｉ）に記載の方法；
（ｋ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１９、５４および５５のいずれかに示されているアミノ酸配列を、その軽鎖可変領域にさらに含む、（ｊ）に記載の方法；
（ｌ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号２０〜３３、５２または５３のいずれかに示されているアミノ酸配列をその重鎖可変領域に含む、（ｈ）または（ｉ）に記載の方法；
（ｍ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１６に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号１８に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３をその軽鎖可変領域に含み、配列番号１４に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、配列番号１５に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２領域、および配列番号１〜１３または５６のいずれかに示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３をその重鎖可変領域に含む、（ｈ）〜（ｌ）のいずれかに記載の方法；
（ｎ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号３４に示されている軽鎖アミノ酸配列、および配列番号３５〜４８のいずれかに示されている重鎖アミノ酸配列を含む、（ｈ）〜（ｍ）のいずれかに記載の方法；
（ｏ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１〜４８および／または５２〜５６のいずれかに示されているそれぞれのアミノ酸配列と少なくとも７０％の相同性を保有するアミノ酸配列を含む、（ｈ）〜（ｎ）のいずれかに記載の方法。相同性は、本発明の第１の態様、実施形態（ｏ）に関する前述の段落のように本明細書中で定義されている；
（ｐ）該ＩＬ−１７中和化合物が、ポリペプチド、ペプチド模倣物質、核酸、または低分子である、本発明の第２の態様に記載のまたは（ａ）〜（ｏ）のいずれかに記載の方法；
（ｑ）該ポリペプチドが、ＩＬ−１７またはＩＬ−１７受容体に結合する抗体またはその機能的断片であり、好ましくは、該抗体がモノクローナル抗体またはその機能的断片である、（ｐ）に記載の方法；
（ｒ）該抗体がヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片である、（ｑ）に記載の方法；
（ｓ）前記腫瘍性疾患が癌である、本発明の第２の態様に記載のまたは（ａ）〜（ｒ）のいずれかに記載の方法； 
（ｔ）前記癌が、白血病、多発性骨髄腫、胃癌または皮膚癌である、（ｓ）に記載の方法。
【００１７】
本発明の第３の態様は、ヒトおよび／または獣医学に使用するための、特にヒトおよび／または上記で定義した動物の炎症性疾患または腫瘍性疾患を治療するための医薬組成物である。該組成物は、ＧＭ−ＣＳＦ中和化合物（簡潔には、ＧＭ−ＣＳＦ阻害性化合物）およびＩＬ−１７中和化合物（簡潔には：ＩＬ−１７阻害性化合物）を含む。本発明の第３の態様による組成物の好ましい実施形態は、以下の通りである。
（ａ）該ＧＭ−ＣＳＦ阻害性化合物が、ポリペプチド、ペプチド模倣物質、核酸、または低分子である組成物；
（ｂ）該ポリペプチドが、ＧＭ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦ受容体に結合する抗体またはその機能的断片であり、好ましくは該抗体がモノクローナル抗体またはその機能的断片である、（ａ）に記載の組成物；
（ｃ）該抗体またはその機能的断片がヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片である、（ｂ）に記載の組成物；
（ｄ）該抗体またはその機能的断片が、ヒトおよび非ヒト霊長類ＧＭ−ＣＳＦのエピトープに結合する、（ｂ）または（ｃ）に記載の組成物。該エピトープは、好ましくはヒトおよび非ヒト霊長類ＧＭ−ＣＳＦの不連続エピトープであり、該エピトープは、好ましくはアミノ酸２３〜２７（ＲＲＬＬＮ）および／またはアミノ酸６５〜７７（ＧＬＲ／ＱＧＳＬＴＫＬＫＧＰＬ）を含む；
（ｅ）前記不連続エピトープが、アミノ酸２８〜３１（ＬＳＲＤ）、アミノ酸３２〜３３（ＴＡ）、および／またはアミノ酸２１〜２２（ＥＡ）をさらに含む、（ｄ）に記載の組成物；
（ｆ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１〜１３または５６に示されているアミノ酸配列のいずれかを含むＣＤＲ３をその重鎖可変領域に含む、（ｃ）、（ｄ）および（ｅ）のいずれかに記載の組成物；
（ｇ）前記重鎖可変領域ＣＤＲ３配列のいずれかが、配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列および配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列と共に重鎖可変領域に存在する、（ｆ）に記載の組成物；
（ｈ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１６に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１８に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ３をその軽鎖可変領域に含む、（ｆ）または（ｇ）に記載の組成物；
（ｉ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１９、５４および５５のいずれかに示されているアミノ酸配列をその軽鎖可変領域にさらに含む、（ｈ）に記載の組成物；
（ｊ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号２０〜３３、５２または５３のいずれかに示されているアミノ酸配列をその重鎖可変領域に含む、（ｆ）または（ｇ）に記載の組成物；
（ｋ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１６に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号１８に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３をその軽鎖可変領域に含み、配列番号１４に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、配列番号１５に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２領域、および配列番号１〜１３または５６のいずれかに示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３をその重鎖可変領域に含む、（ｆ）〜（ｊ）のいずれかに記載の組成物；
（ｌ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号３４に示されている軽鎖アミノ酸配列、および配列番号３５〜４８のいずれかに示されている重鎖アミノ酸配列を含む、（ｆ）〜（ｋ）のいずれかに記載の組成物；
（ｍ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１〜４８および／または５２〜５６のいずれかに示されているそれぞれのアミノ酸配列と少なくとも７０％の相同性を保有するアミノ酸配列を含む、（ｆ）〜（ｌ）のいずれかに記載の組成物。相同性は、本発明の第１の態様、実施形態（ｏ）に関する前述の段落のように本明細書中で定義されている；
（ｎ）該ＩＬ−１７Ｆ阻害性化合物が、ポリペプチド、ペプチド模倣物質、核酸、または低分子である、（ａ）〜（ｍ）のいずれかに記載の組成物；
（ｏ）該ポリペプチドが、ＩＬ−１７またはＩＬ−１７受容体に結合する抗体またはその機能的断片であり、好ましくは、該抗体がモノクローナル抗体またはその機能的断片である、（ｎ）に記載の組成物；
（ｐ）該抗体またはその機能的断片がそれぞれヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片である、（ｏ）に記載の組成物；
（ｑ）前記組成物が、炎症性疾患および／または腫瘍性疾患の治療用であり、具体的には、該炎症性疾患が、関節リウマチ（ＲＡ）（ＴＮＦアルファ中和剤による治療に抵抗性のＲＡを含む）、喘息、多発性硬化症（ＭＳ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、ブドウ膜炎、黄斑変性症、大腸炎、乾癬、ウォーラー変性、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、急性冠動脈症候群、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、再発性多発性軟骨炎（ＲＰ）、急性または慢性肝炎、整形外科インプラントの失敗、糸球体腎炎、狼瘡、もしくは自己免疫障害であり、かつ／または該腫瘍性疾患が、白血病、多発性骨髄腫、胃癌、もしくは皮膚癌などの癌であり、かつ／または前記腫瘍性疾患が、白血病、多発性骨髄腫、胃癌、もしくは皮膚癌などの癌である、（ａ）〜（ｐ）のいずれかに記載の組成物。
【００１８】
本出願が出願される法律体系に応じて、本発明の第４の態様は、上記でさらに詳述したように、炎症性疾患および腫瘍性疾患治療用の医薬品の製造におけるＧＭ−ＣＳＦ阻害性化合物およびＩＬ−１７阻害性化合物の併用使用であってもよい。したがって、本発明の第４の態様の好ましい実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦ阻害性化合物およびＩＬ−１７阻害性化合物を含む医薬品は、（ｉ）まずＧＭ−ＣＳＦ阻害性化合物、次にＩＬ−１７阻害性化合物を、（ｉｉ）まずＩＬ−１７阻害性化合物、次にＧＭ−ＣＳＦ−阻害性化合物を、（ｉｉｉ）ＧＭ−ＣＳＦ阻害性化合物およびＩＬ−１７阻害性化合物を同時に投与するために製剤化することができる。したがって、２つの化合物は、当業者に周知のパラメーターに応じて、１つの組成物の一部であってもよく、または別々の医薬品であってもよい。
【００１９】
代替として、第５の態様は、上記で詳述した疾患のいずれかの治療に使用するためのＧＭ−ＣＳＦ阻害性化合物およびＩＬ−１７阻害性化合物であってもよい。やはり、本化合物の投与は、任意の順序で順次行ってもよく、または同時に行ってもよい。同様に、本化合物は、当業者に周知のパラメーターに応じて、１つの組成物の一部であってもよく、または別々の医薬品であってもよい。
【００２０】
医薬品の製造でＧＭ−ＣＳＦ阻害性化合物およびＩＬ−１７阻害性化合物を使用する場合、ならびに該疾患のいずれかの治療で使用するＧＭ−ＣＳＦ阻害性化合物およびＩＬ−１７阻害性化合物の場合における好ましい実施形態は、下記の通りである。
（ａ）治療される対象は上記で定義されている；
（ｂ）該ＧＭ−ＣＳＦ阻害性化合物は、ポリペプチド、ペプチド模倣物質、核酸、または低分子である；
（ｃ）（ｂ）に記載のポリペプチドは、ＧＭ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦ受容体に結合する抗体またはその機能的断片であり、好ましくは、該抗体は、モノクローナル抗体またはその機能的断片である。
（ｄ）（ｃ）で定義されている抗体またはその機能的断片は、ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片である；
（ｅ）該抗体またはその機能的断片は、ヒトおよび非ヒト霊長類ＧＭ−ＣＳＦのエピトープに結合する。該エピトープは、好ましくはヒトおよび非ヒト霊長類ＧＭ−ＣＳＦの不連続エピトープであり、該エピトープは、好ましくはアミノ酸２３〜２７（ＲＲＬＬＮ）および／またはアミノ酸６５〜７７（ＧＬＲ／ＱＧＳＬＴＫＬＫＧＰＬ）を含む。
（ｆ）不連続エピトープは、アミノ酸２８〜３１（ＬＳＲＤ）、アミノ酸３２〜３３（ＴＡ）、および／またはアミノ酸２１〜２２（ＥＡ）をさらに含む；
（ｇ）（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）のいずれかに記載のヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片は、配列番号１〜１３または５６に示されているアミノ酸配列のいずれかを含むＣＤＲ３をその重鎖可変領域に含む；
（ｈ）前記重鎖可変領域ＣＤＲ３配列のいずれかが、配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列および配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列と共に重鎖可変領域に存在する、実施形態（ｇ）；
（ｉ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１６に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１８に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ３をその軽鎖可変領域に含む、実施形態（ｈ）または（ｇ）；
（ｊ）（ｉ）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片は、配列番号１９、５４および５５のいずれかに示されているアミノ酸配列をその軽鎖可変領域にさらに含む；
（ｋ）実施形態（ｈ）または（ｇ）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片は、配列番号２０〜３３、５２または５３のいずれかに示されているアミノ酸配列をその重鎖可変領域に含む；
（ｌ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１６に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号１８に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３をその軽鎖可変領域に含み、配列番号１４に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、配列番号１５に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２領域、および配列番号１〜１３または５６のいずれかに示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３をその重鎖可変領域に含む、実施形態（ｇ）〜（ｋ）のいずれか；
（ｍ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号３４に示されている軽鎖アミノ酸配列、および配列番号３５〜４８のいずれかに示されている重鎖アミノ酸配列を含む、実施形態（ｇ）〜（ｌ）のいずれか；
（ｎ）該ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片が、配列番号１〜４８および／または５２〜５６のいずれかに示されているそれぞれのアミノ酸配列と少なくとも７０％の相同性を保有するアミノ酸配列を含む、実施形態（ｇ）〜（ｍ）のいずれか。相同性は、ベクターＮＴＩ（ＩｎｆｏｒＭａｘ（商標）、メリーランド州、アメリカ合衆国）などの標準的配列アラインメントプログラムにより決定される。そのようなプログラムでは、整列した配列をアミノ酸毎に比較し、比較について種々のレベルの厳密性を設定することができる（例えば、同一アミノ酸、保存的アミノ酸置換など）。この用語が本明細書中で使用される場合、問題の２つのアミノ酸は、各々が同じ化学的クラス、つまり酸性、無極性、無荷電極性、および塩基性に属する場合、互いの「保存的置換」であるとみなされる。非限定的な例では、無極性アミノ酸のクラスに属する２つの異なるアミノ酸は、これらの２つのアミノ酸が同一でない場合でも、互いの「保存的置換」とみなされることになるが、一方が無極性アミノ酸であり、他方が塩基性アミノ酸である場合は、互いの「保存的置換」とはみなされないだろう。「Molecular Biology of the Cell」、第４版（２００２年）、Alberts、Johnson、Lewis、Raff、Roberts、およびWalter著のパネル３．１では、アミノ酸が、４つの主な群：酸性、無極性、無荷電極性、および塩基性に分類されている。そのような分類は、特定のアミノ酸が、問題の別のアミノ酸の保存的置換であるかどうかを本発明のために決定する目的で使用することができる。
（ｏ）該ＩＬ−１７阻害性化合物が、ポリペプチド、ペプチド模倣物質、核酸、または低分子である、実施形態（ａ）〜（ｎ）のいずれか；
（ｐ）（ｏ）に記載のポリペプチドは、ＩＬ−１７またはＩＬ−１７受容体に結合する抗体またはその機能的断片であり、好ましくは、該抗体はモノクローナル抗体またはその機能的断片である；
（ｑ）（ｐ）に記載の抗体またはその機能的断片は、ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片である； 
（ｒ）該炎症性疾患は、関節リウマチ（ＲＡ）（ＴＮＦアルファ中和剤による治療に抵抗性のＲＡを含む）、喘息、多発性硬化症（ＭＳ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、ブドウ膜炎、黄斑変性症、大腸炎、乾癬、ウォーラー変性、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、急性冠動脈症候群、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、再発性多発性軟骨炎（ＲＰ）、急性または慢性肝炎、整形外科インプラントの失敗、糸球体腎炎、狼瘡、または自己免疫障害であり；かつ／または該腫瘍性疾患は、白血病、多発性骨髄腫、胃癌または皮膚癌などの癌である。
【００２１】
上記で言及したように、「ＩＬ−１７」という用語は、本出願中で使用される場合、６つのメンバー、ＩＬ−１７Ａ〜ＩＬ−１７Ｆからなる、後天性免疫系のサイトカインのファミリーを指す。この用語の定義は、生理学上、例えばＣＤ４＋Ｔ細胞で発現されることが報告されているＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆなどのヘテロ二量体も含む。本発明により中和されるＩＬ−１７ファミリーの特に好ましい群は、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ｄを含む。より好ましくは、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの効果は、本発明により中和される。ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ｄからなる群が好ましいため、ＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７Ｒ）の亜群のシグナル伝達、つまりＩＬ−１７ＲＡ、ＩＬ−１７ＲＢおよびＩＬ−１７ＲＣ、より好ましくはＩＬ−１７ＲＡおよびＩＬ−１７ＲＣのシグナル伝達を中和／阻害することも好ましい。
【００２２】
「特異的に結合する」という用語、または「特異的結合」、「特異的に結合した」、「特異的結合剤」などの関連表現は、本明細書中で使用される場合、複数の異なる抗原のプールから潜在的な結合パートナーＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−１７だけに結合または著しく結合するような程度に、ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−１７と、ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−１７とは異なる任意の数の他の潜在的な抗原とを区別する、ＧＭ−ＣＳＦ阻害性化合物／ＩＬ−１７阻害性化合物、および好ましくはヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片（上記で定義したような）の能力を指す。本発明の意図としては、複数の等しく接近可能な異なる抗原のプール中から、ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−１７が、潜在的な結合パートナーとして、ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−１７とは異なる任意の他の抗原より少なくとも１０倍、好ましくは５０倍、最も好ましくは１００倍以上の頻度で（動力学的意味で）結合している場合、ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−１７は、「著しく」結合している。そのような動力学的測定はＢｉａｃｏｒｅ装置で実施することができる。
【００２３】
本明細書中で使用される場合、「中和」、「中和剤」、「中和している」、およびその文法的関連変形は、ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−１７の生物学的効果（複数可）の部分的または完全な減衰を指す。ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−１７の生物学的効果（複数可）のそのような部分的または完全な減衰は、例えば細胞内シグナル伝達に見られるようなシグナル伝達、細胞増殖または可溶性物質の放出、細胞内遺伝子活性化の上方または下方制御、例えばＧＭ−ＣＳＦ以外のリガンドの表面受容体の発現に帰着する制御などの、ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−１７媒介性プロセスの修飾、中断および／または抑止から生じる。当業者であれば理解するように、ある薬剤、例えば問題の抗体またはその機能的断片が、中和剤として分類されるかどうかを決定するための様式は複数存在する。一例としては、これは、標準的ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験を一般的に以下のように実施することにより達成することができる：第１の増殖実験では、その増殖の程度がＧＭ−ＣＳＦの活性に依存することが知られている細胞株を、ＧＭ−ＣＳＦの濃度を変えて一連の試料中でインキュベートし、インキュベーション後、細胞株の増殖の程度を測定する。この測定から、細胞の最大半量増殖を可能にするＧＭ−ＣＳＦの濃度が決定される。その後、第１の増殖実験で使用したのと同数の細胞、上記で決定したＧＭ−ＣＳＦ濃度、およびこの時点で、ＧＭ−ＣＳＦの中和剤であることが疑われる様々な濃度の抗体またはその機能的断片を一連の試料の各々で使用して、第２の増殖実験を実施する。細胞増殖を再び測定して、最大半量増殖阻害を実施するのに十分な抗体またはその機能的断片の濃度を決定する。得られる増殖阻害対抗体（またはその機能的断片）濃度のグラフはシグモイド形状であり、抗体（またはその機能的断片）濃度が増加すると共に細胞増殖が減少する結果となり、ひいてはある程度の抗体依存性増殖阻害が達成され、つまりＧＭ−ＣＳＦ活性はある程度中和された。そのような場合、抗体またはその機能的断片は、本発明が意図する「中和剤」と考えることができる。その増殖の程度がＧＭ−ＣＳＦ活性に依存することが知られている細胞株の一例は、Kitamura, T. et al. (1989). J Cell Physiol 140, 323-34に記載されているようなＴＦ−１細胞株である。
【００２４】
当業者であれば理解するように、細胞増殖の程度は、ＧＭ−ＣＳＦの中和能力を確立することができる唯一のパラメーターではない。例えば、その分泌レベルがＧＭ−ＣＳＦに依存するシグナル伝達分子（例えば、サイトカイン）のレベル測定を使用して、疑わしいＧＭ−ＣＳＦ中和剤（ＧＭ−ＣＳＦ阻害性化合物）を同定することができる。ＩＬ−１７阻害性化合物の中和効果を検証するための対応する細胞実験の設定は、当業者に公知である。
【００２５】
問題の抗体またはその機能的断片がＧＭ−ＣＳＦ活性の中和剤であるかどうかを決定するために使用することができる細胞株の他の例には、ＡＭＬ−１９３（Lange, B. et al. (1987). Blood 70, 192-9）；ＧＦ−Ｄ８（Rambaldi, A. et al. (1993). Blood 81, 1376-83）；ＧＭ／ＳＯ（Oez, S. et al. (1990). Experimental Hematology 18, 1108-11）；ＭＯ７Ｅ（Avanzi, G. C. et al. (1990). Journal of Cellular Physiology 145, 458-64）；ＴＡＬＬ−１０３（Valtieri, M. et al. (1987). Journal of Immunology 138, 4042-50）；ＵＴ−７（Komatsu, N. et al. (1991). Cancer Research 51, 341-8）が含まれる。問題の化合物、例えば抗体またはその機能的断片がＩＬ−１７活性の中和剤であるかどうかを決定するために使用することができる細胞株／細胞に基づくアッセイの例には、ＩＬ−１７タンパク質のＢＥＡＳ−２Ｂ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ（ＢＥＡＳ−２Ｂ、ヒト気管支上皮細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−９６０９）または線維芽細胞からの標準的ＩＬ−６放出アッセイ（Yao et al., 1995, Journal of Immunology, 155, 5483-5486）が含まれる。
【００２６】
本発明に従って、それぞれＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１７の阻害／中和を、これらのサイトカインに対する受容体を保有する細胞の外部または前記細胞の内部のいずれでも実施できることが理解される。したがって、化合物によるＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１７の阻害／中和は、その特異的受容体に対するＧＭ−ＣＳＦまたはＩＬ−１７結合の阻害もしくは防止、またはその受容体に対するサイトカイン結合により誘導される細胞内シグナルの阻害のいずれであってもよい。ＩＬ−１７シグナルの細胞内作用性阻害剤／中和剤用の例には、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ、ＭＡＰＫ  ｐ３８、ＮＦ−ｋａｐｐａＢまたはＪＮＫの阻害剤を含む、細胞内シグナル経路を阻止する化合物が含まれる。
【００２７】
本明細書の上記で定義されているように、ＧＭ−ＣＳＦまたはＩＬ−１７の阻害剤は、ポリペプチド、ペプチド模倣物質、核酸分子、および低分子からなる群から選択することができる。「ポリペプチド」という用語は、本明細書中で使用される場合、３０個を超えるアミノ酸からなる１群の分子を記述する。本発明によれば、上記１群のポリペプチドは、単一のポリペプチドまたは複数のポリペプチドからなる「タンパク質」を含む。「ポリペプチド」という用語は、これらの断片が３０個を超えるアミノ酸からなる限り、タンパク質の断片も記述する。ポリペプチドが、二量体、三量体およびより高次のオリゴマーなどの多量体を形成していてもよい、つまり複数のポリペプチド分子からなっていてもよいことは、当技術分野で周知である。そのような多量体も「ポリペプチド」という用語の定義に含まれる。そのような二量体、三量体などを形成するポリペプチド分子は、同一であってもよくまたは異なっていてもよい。したがって、そのような多量体の対応する高次構造は、ホモ二量体またはヘテロ二量体、ホモ三量体またはヘテロ三量体などである。ヘテロ多量体の例は、抗体分子であり、それは、その天然に存在する形態では、２つの同一の軽ポリペプチド鎖および２つの同一の重ポリペプチド鎖からなる。「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、天然または非天然修飾ポリペプチド／タンパク質も指し、上記修飾は、例えばグリコシル化、アセチル化およびリン酸化などのような翻訳後修飾によって実施される。そのような修飾は当技術分野で周知である。
【００２８】
「低分子」という用語は、１０００ダルトン未満、好ましくは３００〜７００ダルトンの分子量を有する１群の薬物化合物を定義する。対応する低分子は、少なくとも部分的にランダム化されたペプチドライブラリーに由来する場合がある。本発明に従って好適な低分子のライブラリーは当技術分野で周知であり、かつ／または販売業者から購入することができる。
【００２９】
「核酸」という用語は、本発明の場面では、リン酸、糖、ならびにプリンおよびピリミジン塩基の多重繰り返し単位からなる巨大分子を定義する。これらの分子の実施形態には、ＤＮＡ、ＲＮＡおよびＰＮＡが含まれる。核酸の特に好ましい実施形態は、本発明の場面ではアプタマーである。アプタマーとは、他の分子に結合するそれらの能力に基づいてランダムなプールから選択されたＤＮＡまたはＲＮＡ分子である。核酸、タンパク質、低分子有機化合物に、また生物全体にも結合するアプタマーが選択されている。
【００３０】
「ペプチド模倣物質（peptidomimetic）」という用語は、ペプチドを模倣するように設計された小型タンパク質様の鎖を記述する。このタイプの分子は、分子の特性を変更するために既存ペプチドを修飾することにより人為的に導出される。例えば、親の既存ペプチドを修飾して、分子の安定性または生物活性を変更する。これらの修飾は、骨格の変更および非天然アミノ酸の組み込みを含む。
【００３１】
「ＧＭ−ＣＳＦ受容体」という用語は、ＧＭ−ＣＳＦの生理学的な細胞表面受容体を指し、当技術分野では、ＣＤ１１６と共通ベータ（βｃ）サブユニットとのヘテロマーとして記述されている。「ＩＬ−１７受容体」という用語は、ＩＬ−１７の様々なアイソフォームの生理学的な細胞表面受容体のファミリーを指す。このファミリーは、現在のところ、特にアイソフォームＩＬ−１７ＲＡ、ＩＬ−１７ＲＢ、ＩＬ−１７ＲＣ、ＩＬ−１７ＲＤおよびＩＬ−１７ＲＥを含む。
【００３２】
中和ペプチドの好ましい実施形態は、抗体（またはその機能的断片）、より好ましくはヒト化抗体（またはその機能的断片）である。抗体を産生するための技術は、当技術分野で周知であり、例えばHarlow and Lane "Antibodies, A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988およびHarlow and Lane "Using Antibodies: A Laboratory Manual" Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999に記載されている。「抗体」という用語は、異なるクラス（つまり、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥ）およびサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２などのような）の免疫グロブリン（Ｉｇ）を含む。抗体の誘導体は、本発明の意図する抗体という用語の定義の範囲内であり、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、ファルネシル化、ヒドロキシル化、メチル化またはエステル化のような、そのような分子の修飾を含む。
【００３３】
非ヒトおよびヒト抗体またはその機能的断片（ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１７の両方に対して特異性を有する）は、好ましくはモノクローナルである。モノクローナルであるヒト抗体を調製するのは特に難しい。マウスＢ細胞と不死化細胞株との融合体とは対照的に、ヒトＢ細胞と不死化細胞株との融合体は生存可能ではない。したがって、ヒトモノクローナル抗体は、抗体技術の分野に存在すると一般的に認識されている重大な技術的障害を克服した結果である。抗体のモノクローナル的性質は、そのような抗体がよく特徴付けられており再現性よく作製および精製することができる単一の均質な分子種として存在することになるため、その抗体を治療薬としての使用に特に好適なものにする。これらの要因は、その生物活性を高レベルの精度で予測することができる産物をその結果としてもたらし、そのような分子のヒトに対する治療的投与の規制認可を獲得しようとする場合に非常に重要である。
【００３４】
モノクローナル抗体（または対応する機能的断片）は、ヒト抗体（または対応する機能的断片）であることが特に好ましい。ヒトに対する治療的投与を目的とした抗体剤（antibody agent）を企図する場合、抗体がヒト由来であることは非常に有利である。ヒト患者への投与後、ヒト抗体またはその機能的断片は、患者の免疫系による強力な免疫原性応答を誘発する可能性がほとんどなく、つまり非ヒトタンパク質である外来性物質とは認識されないだろう。これは、本来なら治療用抗体の活性を遮断し、かつ／または患者体内からの治療用抗体の除去を加速させ、それによって治療用抗体が所望の治療効果を発揮するのを妨げる、治療用抗体に対する宿主抗体、つまり患者抗体が産生されないことを意味する。
【００３５】
「ヒト」抗体という用語は、本明細書中で使用される場合、いずれかの特異性を有する抗体またはその機能的断片が、ヒト生殖系抗体レパートリーに含有されているアミノ酸配列（１つまたは複数）を含むことを意味すると理解される。したがって、本明細書中で定義する場合、抗体またはその断片は、（ａ）それがヒト生殖系アミノ酸配列（複数可）からなる場合、つまり問題の抗体またはその機能的断片のアミノ酸配列（複数可）が、発現されたヒト生殖系アミノ酸配列（複数可）と同一である場合に、ヒトとみなすことができる。抗体またはその機能的断片は、その（それらの）最も近いヒト生殖系配列（複数可）からの逸脱（複数可）が、体細胞超変異の痕跡によりわずかに予測される可能性のある配列（１つまたは複数）からなる場合も、ヒトであるとみなすことができる。加えて、多数の非ヒト哺乳類、例えばマウスおよびラットなどのげっ歯動物の抗体は、発現されたヒト抗体レパートリーにも同様に存在することを予測することができるＶＨ  ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。発現されたヒトレパートリーに存在することが予測できるヒトまたは非ヒト由来の任意のそのような配列（複数可）も、本発明の目的では「ヒト」とみなされるだろう。
【００３６】
本発明の好ましい実施形態によれば、医薬目的に使用されるヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片は、ヒトと少なくとも１つのサル種との両者間で交差反応性を示す。同じ種間交差反応性は、ＧＭ−ＣＳＦおよび／またはＩＬ−１７の他の全ての（非抗体または非抗体由来の）中和／阻害性化合物の場合も好ましい。医薬品は、通常、規制認可前に多数の試験を通らなければならず、それらの試験のうちのある初期試験には非ヒト動物種が関与することになるため、そのような交差反応性抗体は非常に有用である。そのような試験を実施する際に、ヒトと高度な遺伝的類似性を有する種を非ヒト種として使用することは一般的に望ましい。なぜならそのようにして得られる結果は、一般的に、ヒトと同じ分子を投与する場合に予測できる対応する結果を高度に予測することになるからである。しかしながら、動物実験に基づくそのような予測能力は、分子の比較可能性に少なくとも部分的に応じており、同じ治療用分子をヒトおよび動物モデルに投与することができる場合、種間交差反応性のため、この能力は非常に高い。その実施形態のように、ある抗体分子が、ヒトと別の近縁種とで同一の抗原に対して交差反応性であれば、その同一抗体分子を使用して、ヒトおよびこの近縁種、例えば上記で言及したサル種で試験を実施することができる。これにより、試験自体の効率性、ならびに治療上の見地から最終的な目的種であるヒトにおけるそのような抗体の挙動に関するそのような試験により可能となる予測能力を両方とも増加させる。同じことが、抗体ではない（または抗体由来ではない）中和／阻害性化合物を用いる代替的な実施形態に当てはまる。
【００３７】
本発明のさらなる実施形態によれば、ヒトモノクローナル抗体はＩｇＧ抗体であってもよい。ＩｇＧは、高度に特異的な抗原認識および結合に関与する可変抗体領域だけでなく、通常は内因的に産生された抗体に存在し、ある場合には１つまたは複数の部位での糖による修飾までも存在する重および軽抗体ポリペプチド鎖の定常領域も含む。そのようなグリコシル化は、一般的にＩｇＧ形態の特徴であり、これら定常領域の部分は、ｉｎ  ｖｉｖｏで種々のエフェクター機能を誘発することが知られている完全抗体のいわゆるＦｃ領域を形成する。加えて、Ｆｃ領域はＦｃ受容体へのＩｇＧの結合を媒介し、したがってｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を長期化し、ならびにＦｃ受容体の存在が増加した部位、例えば炎症組織へのＩｇＧ誘導を容易にする。有利には、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体であり、それらの形態が好ましいのは、それらの作用機構がｉｎ  ｖｉｖｏで特によく理解および特徴付けられているためである。これは、特にＩｇＧ１抗体の場合に当てはまる。
【００３８】
本発明のさらなる実施形態によれば、ヒトモノクローナル抗体の機能的断片は、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、Ｆｖ、ＶＨＨ抗体、ダイアボディ、タンデムダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはＦ（ａｂ）２であってもよい。これらの形態は、一般的に２つのサブクラス、すなわち単一のポリペプチド鎖からなるもの、および少なくとも２つのポリペプチド鎖を含むものに分類することができる。前者のサブクラスのメンバーには、ｓｃＦｖ（ポリペプチドリンカーで結合されて単一のポリペプチド鎖となった１つのＶＨ領域および１つのＶＬ領域を含む）；ＶＨＨ抗体（単一のＶＨ領域を含む）などの単一ドメイン抗体（単一の抗体可変領域を含む）が含まれる。後者のサブクラスのメンバーには、Ｆｖ（１つのＶＨ領域および１つのＶＬ領域を、非共有結合で互いに結合している別々のポリペプチド鎖として含む）；ダイアボディ（非共有結合で結合している２つのポリペプチド鎖を含み、ポリペプチド鎖の各々が２つの抗体可変領域、通常は１つのポリペプチド鎖当たり１つのＶＨおよび１つのＶＬを含み、二価抗体分子が生じるように２つのポリペプチド鎖が頭−尾の高次構造に配置されている）；タンデムダイアボディ（共有結合で結合されており、上述のダイアボディの２倍大型のホモ二量体を形成し、２つの異なる特異性を有する４つの免疫グロブリン可変領域、ＶＨおよびＶＬ領域を含む二重特異的単鎖Ｆｖ抗体）；Ｆａｂ（それ自体がＶＬ領域および軽鎖定常領域全体を含む抗体軽鎖全体を１つのポリペプチド鎖として含み、完全なＶＨ領域および重鎖定常領域の一部を含む抗体重鎖の一部を別のポリペプチド鎖として含み、前記２つのポリペプチド鎖が、鎖間ジスルフィド結合により分子間で結合されている）；Ｆａｂ’（追加的な還元ジスルフィド結合が抗体重鎖に含まれていること以外は、上記Ｆａｂと同様）；およびＦ（ａｂ）２（２つのＦａｂ’分子を含み、各Ｆａｂ’分子が鎖間ジスルフィド結合によりそれぞれ他方のＦａｂ’分子に結合されている）が含まれる。一般的に、上記に記載されているタイプの機能的抗体断片は、例えば、直面する特定の事態に対する治療的投与に望まれる抗体の薬物動態特性に合わせて作製する際に大きな柔軟性をもたらす。例えば、血管新生が不良であることが知られている組織（例えば、関節）を治療する場合、組織透過性の程度を増加させるために、投与する抗体のサイズを低減することが望ましい場合がある。ある環境下では、治療用抗体が体内から除去される速度を増加させることが望ましい場合もあり、一般的に前記速度は、投与する抗体のサイズを減少させることにより加速することができる。抗体断片は、本発明の場面では、断片が親抗体のエピトープ／標的の特異的結合特性を維持している限り、つまり断片がＧＭ−ＣＳＦまたはＩＬ−１７にそれぞれ特異的に結合する限り、機能的抗体断片と定義される。
【００３９】
本発明のさらなる実施形態によれば、前記ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片は、一価性単一特異的形態；多価性単一特異的形態、特に二価性単一特異的形態；または多価性多重特異的形態、特に二価性二重特異的形態で存在してもよい。一般的に、上記に記載されているような完全ヒトＩｇＧなどの多価性単一特異的抗体、特に二価性単一特異的抗体は、そのような抗体により行われる中和が、親和性効果（avidity effect）、つまり同じ抗原、本明細書中ではＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−１７の複数の分子に対する同一抗体による結合により強化されるという治療上の利点をもたらすことができる。いくつかの一価性単一特異的形態の抗体断片は、上記で記載されている（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ＶＨＨまたは単一ドメイン抗体）。ヒトモノクローナル抗ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−１７抗体の多価性多重特異的形態、特に二価性二重特異的形態は、１つの結合アームが非ヒト霊長類ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−１７に結合し、その抗体の他方の結合アームがＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−１７とは異なる別の抗原に結合する完全ＩｇＧを含むことができる。さらなる多価性多重特異的形態、特に二価性二重特異的形態は、有利には、ヒト単鎖二重特異性抗体、つまり当技術分野で一般的に知られているように（例えば、抗ＣＤ１９×抗ＣＤ３二重特異的単鎖抗体については、国際公開第９９／５４４４０号パンフレットを参照）、短い挿入ポリペプチドスペーサーによって結合されて１つの連続したポリペプチド鎖になっている上記に記載されているような２つのｓｃＦｖ実体を含む組換えヒト抗体構築体であってもよい。本明細書では、二重特異的単鎖抗体内に含まれる二重特異的単鎖抗体の１つのｓｃＦｖ部分は、上記に示されているようなＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−１７に特異的に結合し、この二重特異的単鎖抗体の他のｓｃＦｖ部分はそれぞれ、治療上有益であると判明している別の抗原に結合するだろう。好ましい代替形態では、二重特異的単鎖抗体は、上記に示されているようなＧＭ−ＣＳＦに特異的に結合し、この二重特異的単鎖抗体の他のｓｃＦｖ部分はそれぞれ、ＩＬ−１７に結合するだろう。
【００４０】
さらなる実施形態によれば、阻害性ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片は、例えば有機ポリマー、例えばポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）および／またはポリビニルピロリドン（「ＰＶＰ」）の１つまたは複数の分子で誘導体化されていてもよい。当技術分野で知られているように、そのような誘導体化は、抗体またはその機能的断片の薬力学的特性の調節に有利であり得る。システインアミノ酸のスルフヒドリル基により部位特異的な様式で抗体またはその機能的断片と結合可能な、ＰＥＧ−マレイミドとして誘導体化されたＰＥＧ分子が特に好ましい。これらのうち、分岐または直鎖状の２０ｋＤおよび／または４０ｋＤのＰＥＧ−マレイミドが特に好ましい。ｓｃＦｖ断片などのより小型のヒト抗ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−１７抗体断片の有効分子量を、ＰＥＧ、特にＰＥＧ−マレイミドの１つまたは複数の分子を後者に結合させることによって増加させることが特に有利であり得る。
【００４１】
本明細書中で使用される場合、ヒトおよび非ヒト霊長類ＧＭ−ＣＳＦの付番は、成熟ＧＭ−ＣＳＦ、つまりその１７個アミノ酸のシグナル配列を有していないＧＭ−ＣＳＦ（上記に記載されているヒトおよび非ヒト霊長類種の両方の成熟ＧＭ−ＣＳＦの全長は、１２７個のアミノ酸である）の付番を指す。ヒトＧＭ−ＣＳＦ（配列番号５７）およびテナガザルＧＭ−ＣＳＦ（配列番号５８）の配列は、以下の通りである：
【化１】
0005771140.tif 000002
例えば、アカゲザル（配列番号５９）およびカニクイザル（配列番号６０）などのマカク科サルの特定のメンバーのＧＭ−ＣＳＦの配列は、以下の通りである：
【化２】
0005771140.tif 000003
【００４２】
上記に記載されているようなヒトモノクローナル抗体（またはその機能的断片）が結合する最小限のエピトープ、有利には不連続エピトープは、上記のＧＭ−ＣＳＦ配列中太字体で示されている。本明細書中で使用される場合、「不連続エピトープ」という用語は、所与のポリペプチド鎖、本明細書では成熟ヒトおよび非ヒト霊長類ＧＭ−ＣＳＦ内にある、抗体と同時におよび特異的に結合する少なくとも２つの隣接していないアミノ酸配列伸長であると理解されるべきである。この定義によれば、そのような同時的および特異的結合は、線形のＧＭ−ＣＳＦポリペプチドの結合であってもよい。本明細書では、上記の太字体で示されている２つの配列が、例えば、おおよそ平行して互いに接近して並んでいる伸長ループを形成している成熟ＧＭ−ＣＳＦポリペプチドが想定され得る。この状態で、それらは、特異的におよび同時に抗体断片と結合する。この定義によれば、上記に示されている成熟ＧＭ−ＣＳＦの２つの配列伸長の同時的特異的結合は、立体構造エピトープに結合する抗体の形態をとっている場合もある。本明細書では、成熟ＧＭ−ＣＳＦは、それが通常ｉｎ  ｖｉｖｏで存在するような、その三次立体構造を既に形成している。この三次立体構造では、成熟ＧＭ−ＣＳＦのポリペプチド鎖は、上記に示されている２つの配列伸長を、例えば成熟して折りたたまれたＧＭ−ＣＳＦの特定領域の外側表面上で空間的に接近させるような様式で折りたたまれており、その後２つの配列伸長は、周囲のポリペプチド配列の状況下で、その三次元立体構造により認識される。
【００４３】
好ましいヒトモノクローナル抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体またはその機能的断片は、以下を含むものである：配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号１に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ３配列；または配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号２に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ３配列；または配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号３に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ３配列；または配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ３配列；または配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ３配列；または配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号６に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ３配列；または配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号７に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ３配列；または配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号８に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ３配列；または配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号９に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ３配列；または配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号１０に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ３配列；または配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号１１に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ３配列；または配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号１２に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ３配列；または配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号１３に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ３配列；または配列番号１４に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、配列番号１５に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号５６に示されている重鎖可変領域ＣＤＲ３配列。
【００４４】
さらにより好ましくは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列の上記１４の組合せのいずれかが、配列番号１６に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１８に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ３をその軽鎖可変領域にさらに含むヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片に存在する。
【００４５】
さらなる実施形態によれば、阻害性ヒトモノクローナル抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体またはその機能的断片は、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を、その軽鎖可変領域に含む。ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号５２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号５３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域が好ましい。
【００４６】
さらなる実施形態によれば、阻害性ヒトモノクローナル抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体またはその機能的断片は、配列番号５４に示されているアミノ酸配列を、その軽鎖可変領域に含む。ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片、配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号５２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号５３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域が好ましい。
【００４７】
さらなる実施形態によれば、阻害性ヒトモノクローナル抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体またはその機能的断片は、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を、その軽鎖可変領域に含む。ヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号５２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；またはヒトモノクローナル抗体もしくはその機能的断片、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号５３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域が好ましい。
【００４８】
好ましい阻害性ヒトモノクローナル抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体またはその機能的断片は、配列番号１６に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２領域、および配列番号１８に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３をその軽鎖可変領域に含み、配列番号１４に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、配列番号１５に示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ２領域、および配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または５６のいずれかに示されているアミノ酸配列を有するＣＤＲ３をその重鎖可変領域に含む。
【００４９】
さらに好ましい実施形態では、抗体は、配列番号３４に示されているアミノ酸配列をその軽鎖に、配列番号３５に示されているアミノ酸配列をその重鎖に含み；または配列番号３４に示されているアミノ酸配列をその軽鎖に、配列番号３６に示されているアミノ酸配列をその重鎖に含み；または配列番号３４に示されているアミノ酸配列をその軽鎖に、配列番号３７に示されているアミノ酸配列をその重鎖に含み；または配列番号３４に示されているアミノ酸配列をその軽鎖に、配列番号３８に示されているアミノ酸配列をその重鎖に含み；または配列番号３４に示されているアミノ酸配列をその軽鎖に、配列番号３９に示されているアミノ酸配列をその重鎖に含み；または配列番号３４に示されているアミノ酸配列をその軽鎖に、配列番号４０に示されているアミノ酸配列をその重鎖に含み；または配列番号３４に示されているアミノ酸配列をその軽鎖に、配列番号４１に示されているアミノ酸配列をその重鎖に含み；または配列番号３４に示されているアミノ酸配列をその軽鎖に、配列番号４２に示されているアミノ酸配列をその重鎖に含み；または配列番号３４に示されているアミノ酸配列をその軽鎖に、配列番号４３に示されているアミノ酸配列をその重鎖に含み；または配列番号３４に示されているアミノ酸配列をその軽鎖に、配列番号４４に示されているアミノ酸配列をその重鎖に含み；または配列番号３４に示されているアミノ酸配列をその軽鎖に、配列番号４５に示されているアミノ酸配列をその重鎖に含み；または配列番号３４に示されているアミノ酸配列をその軽鎖に、配列番号４６に示されているアミノ酸配列をその重鎖に含み；または配列番号３４に示されているアミノ酸配列をその軽鎖に、配列番号４７に示されているアミノ酸配列をその重鎖に含み；または配列番号３４に示されているアミノ酸配列をその軽鎖に、配列番号４８に示されているアミノ酸配列をその重鎖に含む。
【００５０】
上記の好ましい実施形態は、非ヒト霊長類およびヒトＧＭ−ＣＳＦの活性の中和剤として特に有利なヒトモノクローナル抗体分子および／またはその機能的断片を提供する。これら特に好ましい実施形態によるヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片は、いくつかの理由で非常に有利である。
【００５１】
第１に、それらは、非ヒト霊長類およびヒトＧＭ−ＣＳＦを高度に特異的に認識する。すなわち、これら特に好ましい実施形態による結合分子は、非ヒト霊長類ＧＭ−ＣＳＦと他の非ヒト霊長類コロニー刺激因子（例えば、非ヒト霊長類Ｇ−ＣＳＦおよびＭ−ＣＳＦ）との混合物から、非ヒト霊長類ＧＭ−ＣＳＦを高度に識別する一方で、同じ環境中の他のコロニー刺激因子は認識されない。同じことは、必要な変更を加えるとヒトＧＭ−ＣＳＦに当てはまる。これは、これら実施形態によるヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片は、ヒトに投与されると、所望の標的だけに特異的に結合しそれを中和するが、他の所望でない標的には結合も中和もしないと予想されることを意味する。最終的に、これは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの治療の作用様式に関する高度の予測性へとつながる。
【００５２】
第２に、これら特に好ましい実施形態による結合剤は、非ヒト霊長類およびヒトＧＭ−ＣＳＦと非常に高度な親和性で結合する。約４×１０−９Ｍから低くは約０．０４×１０−９ＭまでのＫＤ値が、このクラスの分子で観察され、後者の値は約４０ｐＭに相当した。水溶媒中のそのような分子の動力学的結合速度は主として拡散制御されており、したがって局所的拡散条件が生理学的条件下で可能にする速度を超えて向上することはあり得ないため、この低いＫＤは、最も高度な親和性抗体結合剤の場合およそ１０−５ｓ−１である動力学的解離速度ｋｏｆｆの結果として主に生じる。これは、一方ではこれら実施形態のいずれかによるヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片と、他方ではＧＭ−ＣＳＦとの間の複合体がいったん形成されると、複合体は直ちには、少なくとも急速には分離しないことを意味する。生物活性の中和剤として意図されている結合分子の場合、所望の中和効果は、通常、その生物活性が中和される分子（本明細書では、非ヒト霊長類およびヒトＧＭ−ＣＳＦ）が中和結合分子と結合したままである限り続くため、これらの特徴は非常に有利である。したがって、その意図した標的に長期間結合したままである中和分子は、それに応じて長期間中和し続けることになる。
【００５３】
非ヒト霊長類およびヒトＧＭ−ＣＳＦに対するヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片の高度な結合親和性は、さらなる利点を有する。通常、抗体またはその機能的断片は、サイズ依存的な様式で患者の血流から除去され、より小さな分子はより大きなものより早く排泄および除去されるだろう。２つのポリペプチド、抗体または抗体断片および結合したＧＭ−ＣＳＦの複合体は、抗体単独より明らかに大型であるため、上記で言及した低いｋｏｆｆは、治療的中和剤が、ＧＭ−ＣＳＦと結合していなかった場合に排泄および除去されるよりよりゆっくりと患者の体内から排泄および除去されるという効果を有する。したがって、中和活性の強度だけでなくその期間もｉｎ  ｖｉｖｏで増加される。
【００５４】
上記の実施形態による結合剤について決定された中和活性は、驚くほど高い。本明細書の下記でより詳細に記載されるように、ＧＭ−ＣＳＦ中和活性を、ＴＦ−１増殖阻害アッセイを使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで測定した（Kitamura, T. et al. (1989). J Cell Physiol 140, 323-34）。中和能力の指標として、ＩＣ５０値を測定した。ＩＣ５０は、ＴＦ−１細胞増殖の最大半量阻害を誘発するのに必要なこれら実施形態のいずれかによるヒトモノクローナル抗体またはその機能的断片の濃度を表す。上記で指定したヒトモノクローナル抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体またはその機能的断片の場合、およそ３×１０−１０Ｍ、つまり約０．３ｎＭのＩＣ５０値が決定された。したがって、該結合分子は、非ヒト霊長類およびヒトＧＭ−ＣＳＦの活性の非常に強力な中和剤である。
【００５５】
要約すると、したがって、ヒトモノクローナル抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体またはその機能的断片は、所望の抗原に対する高度の識別力を示し、この抗原と非常に強固に長期間結合し、それらが結合したままである長期間にわたって非常に強力な中和活性を示す。同時に、結合剤−抗原複合体の長期持続性は、体内からのこの結合剤の除去を遅延させ、それによりｉｎ  ｖｉｖｏでの所望の治療効果の持続期間を延長する。
【００５６】
同様の考察が、中和／阻害性モノクローナル抗−ＩＬ−１７抗体にも適用される。
【００５７】
本発明によれば、「医薬組成物」という用語は、患者、好ましくはヒト患者に投与するための組成物に関する。好ましくは、医薬組成物は、担体、安定化剤および／または賦形剤の好適な製剤を含む。好ましい実施形態では、医薬組成物は、非経口、経皮、腔内、動脈内、髄腔内および／もしくは鼻腔内投与、または組織への直接注射による投与用の組成物を含む。前記組成物を点滴または注射により患者に投与することが特に想起される。好適な組成物の投与は、様々な方法により、例えば静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、局所的または皮内投与により達成することができる。本発明の組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含むことができる。好適な薬学的担体の例は当技術分野で周知であり、それらには、リン酸緩衝生理食塩水、水、油／水乳濁剤などの乳濁剤、種々のタイプの湿潤剤、無菌液、リポソームなどが含まれる。そのような担体を含む組成物は、周知の従来法により製剤化することができる。これらの医薬組成物は、好適な用量で対象に投与することができる。投与計画は、主治医および臨床的要因により決定されるだろう。医学技術において周知であるように、任意のある患者用の用量は、患者の大きさ、体表面積、年齢、投与される特定の化合物、性別、投与時間および投与経路、全体的健康、および同時に投与されている他の薬物を含む多数の要因に依存する。非経口投与用の調製物には、無菌の水溶液または非水性溶液、懸濁剤、および乳濁剤が含まれる。非水溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルなどの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルである。水性担体には、生理食塩水および緩衝化媒質を含む水、アルコール溶液／水溶液、乳濁剤または懸濁剤が含まれる。非経口媒体には、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸化リンゲル、または固定油が含まれる。静脈内媒体には、体液および栄養補給剤、ならびに電解質補給剤など（リンゲルデキストロースに基づくものなど）が含まれる。例えば、抗菌剤、酸化防止剤、キレート剤、不活性ガスなどの保存剤および他の添加剤も存在していてよい。加えて、本発明による医薬組成物は、例えば、好ましくはヒト由来の血清アルブミンまたは免疫グロブリンのような、タンパク質性担体を含んでいてもよい、本発明による医薬組成物は、上記に記載されている化合物に加えて、医薬組成物の使用目的に応じてさらなる生理活性剤を含んでいてもよいことが想起される。そのような薬剤は、胃腸系に作用する薬物、細胞増殖抑制薬として作用する薬物、高尿酸血症を予防する薬物、免疫反応を阻害する薬物（例えば、コルチコステロイド）、炎症応答を調節する薬物、循環系に作用する薬物、および／または当技術分野で公知のサイトカインなどの薬剤であってもよい。
【００５８】
本明細書中で定義されている医薬組成物の生物活性は、以下の例、国際公開第９９／５４４４０号明細書に、またはSchlerethら（Cancer Immunol. Immunother. 20 (2005), 1-12）に記載されているように、例えば、細胞毒性アッセイにより決定することができる。「効能」または「ｉｎ  ｖｉｖｏ効能」は、本明細書中で使用される場合、例えば、標準的なＮＣＩ応答基準を使用した、本発明の医薬組成物による治療に対する応答を指す。本発明による医薬組成物を使用する治療の成功またはｉｎ  ｖｉｖｏ効能は、その意図する目的での組成物の有効性、つまり組成物がその所望の効果、つまり病的細胞、例えば腫瘍細胞の枯渇を引き起こす能力を指す。ｉｎ  ｖｉｖｏ効能は、これらに限定されないが、白血球計数、分化（differentials）、蛍光活性化細胞選別、骨髄穿刺を含む、それぞれの疾病について確立されている標準的方法によりモニターすることができる。加えて、種々の疾患特異的な臨床化学パラメーターおよび他の確立されている標準的方法を使用することができる。さらに、コンピューター断層撮影法、Ｘ線、核磁気共鳴断層撮影法（例えば、国立癌研究所の基準に基づく応答評価のため）、陽電子放射形断層撮影走査、白血球計数法、交差法、蛍光活性化細胞選別法、骨髄穿刺法、リンパ節生検／組織検査、および種々のリンパ腫特異的な臨床化学パラメーター（例えば、乳酸脱水素酵素）、ならびに他の確立されている標準的方法を使用することができる。
【００５９】
本発明による医薬組成物など、薬物の開発における別の主要な課題は、薬物動態特性を予測可能に調節することである。この目的のため、薬物候補の薬物動態特性、つまり特定の薬物が所与の状態を治療する能力に影響を与える薬物動態パラメーターの特性を確立する。ある疾病を治療するための薬物の能力に影響を及ぼす薬物の薬物動態パラメーターには、これらに限定されないが、半減期、分布容積、肝臓初回通過代謝および血清結合度が含まれる。所与の薬剤の効能は、上記で言及したパラメーターの各々により影響を受ける場合がある。
【００６０】
「半減期」とは、投与した薬物の５０％が生物学的プロセス、例えば代謝、排泄などにより排泄される時間を意味する。
【００６１】
「肝臓初回通過代謝」とは、肝臓と最初に接触する際に、つまり薬物が最初に肝臓を通過する間に薬物が代謝される傾向を意味する。
【００６２】
「分布容積」とは、例えば、細胞内および細胞外空間、組織ならびに器官などのような体内の種々のコンパートメントの至る所で薬物が滞留する度合い、およびこれらのコンパートメント内の薬物の分布を意味する。
【００６３】
「血清結合の度合い」とは、薬物がアルブミンなどの血清タンパク質と相互作用および結合して、薬物の生物活性の低減または喪失へつながる傾向を意味する。
【００６４】
薬物動態パラメーターには、投与される所定量の薬物に関する、バイオアベイラビリティー、遅延時間（Ｔｌａｇ）、Ｔｍａｘ、吸収速度、より多くの発症、および／またはＣｍａｘも含まれる。
【００６５】
「バイオアベイラビリティー」とは、血液コンパートメントにおける薬物の量を意味する。
【００６６】
「遅延時間」とは、薬物の投与と、血液または血漿中でのその検出および可測性との間の時間的遅れを意味する。
【００６７】
「Ｔｍａｘ」とは、薬物の血中濃度が最大に到達した時間であり、「Ｃｍａｘ」とは、所与の薬物で最大限に得られる血中濃度である。その生物学的効果に必要な薬物の血中または組織内濃度に達するまでの時間は、全てのパラメーターにより影響を受ける。
【００６８】
「毒性」という用語は、本明細書中で使用される場合、有害事象または重篤な有害事象を起こす薬物の毒性作用を指す。これらの副作用は、一般的に、薬物の耐容性の欠如および／または投与後の局所的耐性の欠如を指す場合がある。毒性には、薬物により引き起こされる催奇形作用または発癌作用が含まれる場合がある。
【００６９】
「安全性」、「ｉｎ  ｖｉｖｏ安全性」、または「耐容性」という用語は、本明細書中で使用される場合、投与後（局所的耐性）およびより長い薬物適用期間中に重篤な有害事象を直接的に誘導しない薬物の投与を定義する。「安全性」、「ｉｎ  ｖｉｖｏ安全性」、または「耐容性」は、例えば、治療期間中および追跡期間中に定期的な間隔で評価することができる。測定には、臨床評価、例えば器官所見、および検査所見異常のスクリーニングが含まれる。臨床評価を実施して、正常所見からの逸脱を、ＮＣＩ−ＣＴＣおよび／またはＭｅｄＤＲＡ基準に従って記録／コード化する。器官所見には、例えば有害事象共通用語基準ｖ３．０（ＣＴＣＡＥ）などの示されているアレルギー／免疫学、血液／骨髄、心不整脈、凝血などの基準が含まれ得る。試験することができる検査パラメーターには、例えば、血液学、臨床化学、凝固特性、ならびに尿検査、ならびに血清、血漿、リンパ液または髄液などの他の体液の検査が含まれていてもよい。このように、安全性は、例えば、理学的検査、画像化技術（例えば、超音波、Ｘ線、ＣＴスキャン、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、技術的装置（例えば、心電図）を用いた他の測定、生命徴候により、検査パラメーターの測定および有害事象の記録により、評価することができる。「有効で無毒性の用量」という用語は、本明細書中で使用される場合、病的細胞の枯渇、腫瘍消失、腫瘍収縮、または疾患の安定化を引き起こすほど十分に高用量であるが、大きな毒性作用を示さないかまたは本質的に示さない、本明細書中で定義されている二重特異的単鎖抗体の耐性用量を指す。そのような有効で無毒性の用量は、例えば、当技術分野で記述されている用量漸増研究により決定することができ、重篤な有害副作用を誘発する用量未満（用量制限毒性、ＤＬＴ）であるべきである。
【００７０】
本出願は以下に示すいくつかの図面を含む。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１】慢性ＳＣＷ炎症における関節腫脹に対する、ＧＭ−ＣＳＦを中和するｍＡｂ  ２２Ｅ９（Ａ）、ＩＬ−１βを中和するｍＡｂ１４００．２４．１７（Ｂ）、およびＴＮＦαアンタゴニストエタネルセプト（Ｃ）による治療効果を表す図である。方法に記載されているように関節炎を誘導した。１４、１７、２１、および２４日目に、用量３００μｇとして治療をｉ．ｐで与えた。炎症は、膝への９９ｍＴｃ取り込みにより測定し、右（関節炎膝）／左（ＰＢＳ対照膝）比として表した。１．１０を超える比率を関節腫脹とみなす。マン−ホイットニーＵ検定（＊０．０５＞ｐ＞０．０１；＊＊０．０１＞ｐ＞０．００１）；１群当たりｎ＝７で群を比較した。
【図２】滑膜への炎症細胞の流入（Ａ）、および軟骨傷害（Ｂ）に対する、ＧＭ−ＣＳＦを中和するｍＡｂ（２２Ｅ９  ｍＡｂ）、ＩＬ−１βを中和するｍＡｂ（１４００．２４．１７）、およびＴＮＦαアンタゴニストエタネルセプトによる治療効果を表す図である。方法に記載されているように疾患を誘導し治療した。マウスを２８日目に安楽死させ、組織学的切片を調製し、視覚的にスコア化した。マン−ホイットニーＵ検定、ｎ＝７により、群を対照治療と比較した。
【図３】ＧＭ−ＣＳＦを中和するｍＡｂ（２２Ｅ９）（Ａ）、α−ＩＬ−１β  ｍＡｂ（１４００．２４．１７）（Ｂ）、ＴＮＦαアンタゴニストエタネルセプト（Ｃ）、および対照ｍＡｂ（Ｄ）で治療した慢性ＳＣＷ関節炎を有するマウスの代表的な膝のマイクロ写真を表す図である。初回ＳＣＷ関節炎誘導後２８日目に切片を作製し、サフラニンＯ／ファストグリーンで染色した。Ｐ＝膝蓋骨；Ｆ＝大腿骨；Ｃ＝軟骨。（Ａ）および（Ｂ）では軟骨が良好に保存されており、（Ｃ）および（Ｄ）では軟骨プロテオグリカン減少および侵食があることに留意されたい。元の拡大率は２００×であった。
【図４】ＳＣＷ関節炎の初回誘導後２１日目に確立された膝蓋骨の１時間培養からの上清中のＬｕｍｉｎｅｘビーズにより測定した局所的ＩＬ−１β（Ａ）およびＫＣ（Ｇｒｏα等価物）（Ｂ）のレベルを表す図である。図１の説明文に記載されているように、治療を実施した。
【図５】対照抗体または抗ＧＭ−ＣＳＦで治療した野生型およびＩＬ−１７Ｒ欠損マウスの慢性ＳＣＷ誘導性関節炎を表す図である。（Ａ）野生型（ＷＴ）およびＩＬ−１７Ｒ−／−マウスの関節腫脹。上記に示されているように、ＷＴマウスにおける２２、２３、および２８日目の対照治療および抗ＧＭ−ＣＳＦ治療マウス間で関節腫脹に有意差が見出された。（Ｂ）２８日目の関節炎および軟骨プロテオグリカン（ＰＧ）破壊。（Ｃ）対照抗体で処理したＷＴマウスの膝蓋骨および大腿骨の軟骨層における軟骨損傷（侵食および軟骨死）。（Ｄ）抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体で治療したＩＬ−１７Ｒ−／−マウスにおける軟骨損傷の低減。（Ｅ）対照抗体で治療したＷＴマウスの膝蓋骨および大腿骨の軟骨層における軟骨ＰＧ減少。（Ｆ）抗ＧＭ−ＣＳＦで治療したＩＬ−１７Ｒ−／−マウスにおける軟骨ＰＧ減少。詳細については図３を参照されたい。データは、１群当たり少なくとも６匹のマウスの平均±ＳＤとして表されている。実験をもう一度繰り返し、同様の結果を得た。＊Ｐ＜０．０１、対照抗体で治療したＷＴ対照マウスとの比較、＊＊Ｐ＜０．０１、抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体で治療したＩＬ−１７Ｒ−／−マウスとの比較、マン−ホイットニーＵ検定。
【図６】治療開始後１０日間追跡したコラーゲン誘導性関節炎を有するマウスの肉眼的スコアを表す図である。関節炎の初発症状の出現時に（図６の１日目に対応する）、（ｉ）抗ＩＬ１７モノクローナル抗体：ｍＡｂ４２１  １．５ｍｇ／ｋｇ単独の単一単回投与、（ｉｉ）抗ＧＭ−ＣＳＦモノクローナル抗体２２Ｅ９  ３ｍｇ／ｋｇ単独、または（ｉｉｉ）ｍＡｂ４２１  １．５ｍｇ／ｋｇおよび２２Ｅ９  ３ｍｇ／ｋｇの組合せにより、マウスをｉ．ｖ．で治療した（やはり図６の１日目）。２２Ｅ９の使用によるＧＭ−ＣＳＦ中和と組み合わせたｍＡｂ４２１によるＩＬ−１７の阻止は、コラーゲン誘導性関節炎の臨床スコアを有意に低減したが、ｍＡｂ４２１または２２Ｅ９単独による治療は、疾患重症度を有意には減少させなかった。マウスの関節炎症状は、デキサメタゾン（２ｍｇ／ｋｇ、陽性対照）の腹腔内投与の２〜３日後に消失した。ＩｇＧ２Ａ抗体（アイソタイプ対照）を陰性対照として使用した。結果は、ｎ＝９〜１０匹マウス／群の平均＋ＳＥＭである。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、ＩｇＧ２Ａアイソタイプ陰性対照処理マウスとの対比、一元配置ＡＮＯＶＡおよびダネット多重比較検定により決定した。
【図７】２２Ｅ９  ３ｍｇ／ｋｇ（Ａ）、ｍＡｂ４２１  １．５ｍｇ／ｋｇ（Ｂ）、２２Ｅ９  ３ｍｇ／ｋｇおよびｍＡｂ  ４２１  １．５ｍｇ／ｋｇの組合せ（Ｃ）、またはアイソタイプ対照（Ｄ）を単回投与した１０日後の代表的な関節切片を表す図である。関節を４％ホルマリンで固定し、脱灰し、薄切し、ヘマトキシリン／エオシンで染色した。アイソタイプ対照ラットＩｇＧ２ａを投与したマウス（図７Ｄ）は、滑膜にはなはだしい細胞浸潤を有する顕著な関節炎（＊）、および軟骨侵食および硬骨侵食による関節破壊（↑）を示す。２２Ｅ９、３ｍｇ／ｋｇ（図７Ａ）またはｍＡｂ  ４２１、１．５ｍｇ／ｋｇ（図７Ｂ）の用量を投与したわずかに重症度が低いマウスも、重症炎症および関節破壊を示すが、ｍＡｂ４２１  １．５ｍｇ／ｋｇと一緒の２２Ｅ９  ３ｍｇ／ｋｇの併用治療の単回投与を受けたマウスは、非常に著しい炎症の低減（＊）（図７Ｃ）、および図７Ｃの（↑）で示されている正常な軟骨表面付近での関節完全性の良好な保存を示す。
【発明を実施するための形態】
【００７２】
当業者であれば、以下の実験の詳細により本発明の要点を完全に理解できるだろう。
【００７３】
動物
雄Ｃ５７Ｂｌ／６マウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ社（スルツフェルド、ドイツ）から取得した。ＩＬ−１７Ｒ欠損マウスは、Ｊ．Ｐｅｓｃｈｏｎ氏、アムジェン、シアトル、ワシントン州、アメリカ合衆国の好意により提供されたものである。マウスをフィルタートップケージに収容し、水および餌は自由に与えた。マウスは、１０〜１２週齢で使用した。動物の取扱いは全て、施設倫理委員会により承認されていた。
【００７４】
ＳＣＷの調製およびＳＣＷ関節炎の誘導
化膿連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）Ｔ１２生物を、トッド−ヒューウィットブロスで終夜培養した。van den Broek et al., Am J Pathol 133(1), 139-149 (1988)に記載されているように、細胞壁を調製した。得られた１０，０００×ｇ上清を、実験全体で使用した。調製物には、１１％ムラミン酸が含有されていた。６μｌリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中２５μｇのＳＣＷ（ラムノース内容物）を、Joosten et al., Ann Rheum Dis 59(3),196-205 (2000)に記載されているように、未処理マウスの右膝関節に関節内（ｉ．ａ．）注射することにより、片側関節炎を誘導した。連鎖球菌細胞壁（ＳＣＷ）誘導性慢性関節炎を引き起こすために、右膝関節へのｉ．ａ．注射を、０、７、１４、および２１日目に実施した。これらの反復注射により、慢性関節炎が生じる。対照として、ＰＢＳを左膝関節に注射した。
【００７５】
試薬および治療プロトコール
ＧＭ−ＣＳＦを、ラットｍＡｂ  ２２Ｅ９（ＭＭ５００ＣＳ、Ｐｅｒｂｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ社製、ボン、ドイツ）を使用して中和した。エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）；Ｗｙｅｔｈ  Ｐｈａｒｍａ社製、ミュンスター、ドイツ）を、ＴＮＦα遮断に使用した。いくつかの研究により、ＣＩＡを含む様々なマウスモデルにおいて、このヒト可溶性ＴＮＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質の有効性が報告されている。ラットＩｇＧ２ａアイソタイプ対照（ＢＬＤ−４００５１６−バルク、Ｂｉｏｚｏｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ社製、エヒング、ドイツ）およびＨｕｍｉｒａ（登録商標）（アボット社製、ウィースバーデン−デンケンハイム、ドイツ）をアイソタイプ対照として使用した。ＩＬ−１βを、ラット抗マウスＩＬ−１β  ｍＡｂ  １４００．２４．１７（ＭＭ４２５、Ｐｅｒｂｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ社製、ボン、ドイツ）で中和した。治療は全て３００μｇの用量で腹腔内投与し、４回：ｉ）３回目の再活性化（１４日目）の２時間前、ｉｉ）１７日目、ｉｉｉ）４回目の再活性化の２時間前（２１日目）、およびｉｖ）最初の疾患誘導後の２４日目に投与した。
【００７６】
関節腫脹の測定
ＳＣＷ関節炎期間中の関節腫脹を、Kruijsen et al., Agents Actions 11(6-7),640-2 (1981)に記載されている９９ｍＴｃ取り込み法により定量化した。この有効な方法では、局所的な血流増加および組織腫脹による、炎症部位における放射性同位体の蓄積を外部ガンマ線放射計数で測定する。腫脹の重症度を、左（対照）膝関節に対する右（炎症）の９９ｍＴｃ取り込み比として表す。１．１０を超える値を全て、関節腫脹とみなした。
【００７７】
サイトカインおよびケモカイン測定
ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＲＡＮＴＥＳ、ＫＣ、およびＭＩＰ−１αを含むいくつかのサイトカインおよびケモカインのレベルを、膝蓋骨洗い出しで決定した。膝蓋骨を周囲の滑液膜組織と共に炎症膝関節から単離し、０．１％ＢＳＡを含有するＲＰＭＩ  １６４０培地で（２００μｌ／膝蓋骨）Joosten et al., J Immunol 165(11), 6553-8 (2000)に以前に記載されているように室温で１時間培養した。その後、上清を回収し、１０００×ｇで５分間遠心分離した。サイトカインおよびケモカインのレベルを、Ｌｕｍｉｎｅｘ多重検体技術を使用して決定した。本発明者らは、ＢｉｏＲａｄ社製（ミュンヘン、ドイツ）のＢｉｏＰｌｅｘシステムを、多重サイトカインおよびケモカインキットと組み合わせて使用した。
【００７８】
組織学的分析
マウスを２８日目に頸椎脱臼で屠殺した。膝関節全体を摘出し、４％ホルムアルデヒドで７日間固定し、その後５％ギ酸で脱灰し、パラフィン包埋用に処理した。組織切片（７μｍ）を、ヘマトキシリン／エオシン（Ｈ／Ｅ）またはサフラニンＯ／ファストグリーン（ＳＯ）で染色した。膝関節の組織病理学的変化を、１４０μｍ間隔の５つの半連続切片上の膝蓋骨／大腿骨領域でスコア化した。スコア化は、２人の異なる観察者により以下のパラメーターを使用してコード化スライドで行われた。Ｈ／Ｅで染色したスライドでは、滑膜表層に浸潤した細胞の量を０〜３でスコア化した。ＳＯ染色スライドでは、軟骨損傷を０〜３のスケールでスコア化した。
【００７９】
統計分析
実験群間の差異を、マン−ホイットニーＵ検定を使用し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ４ソフトウェアを使用して検定した。有意性のリードアウトを以下のようにグループ化した：＊＝０．０５＞ｐ＞０．０１；＊＊０．０１＞ｐ＞０．００１；および＊＊＊＝ｐ＜０．００１。
【００８０】
以下の実施例により、同様にして、当業者は本発明の要点を完全に理解できるだろう。
【実施例１】
【００８１】
全身性ＧＭ−ＣＳＦ中和は、慢性ＳＣＷモデルの関節腫脹を減少させる
Ｃ５７Ｂｌ／６マウスのＳＣＷ関節炎の慢性期中に、ＧＭ−ＣＳＦ（ｍＡｂ  ２２Ｅ９）、ＴＮＦα（エタネルセプト）、またはＩＬ−１β（ｍＡｂ  １４００．２４．１７）を中和する生物製剤による治療後の関節腫脹に対する効果を、膝関節への９９ｍＴｃ取り込みの差異により、１５、１６、２２、２３、および２８日目で調査した。結果を、ＳＣＷ注射関節炎膝とＰＢＳ注射対照膝との間の９９ｍＴｃ取り込み比として表した。
【００８２】
ＧＭ−ＣＳＦ中和抗体の全身性投与は、１６、２２、２３および２８日目に関節腫脹を強力および有意に減少させ、ｐ値は、それぞれ０．０１８、０．００４、０．００４および０．００２であった（図１Ａ）。ＩＬ−β中和も関節腫脹を減少させたが、対照膝に対する膝の９９ｍＴｃ取り込みの有意な減少は、２２日目（ｐ＝０．０１１）および２３日目（ｐ＝０．００１）にしか見られなかった（図１Ｂ）。予想通り、ヒトならびにマウスＴＮＦαを中和することができるエタネルセプトによるＴＮＦα遮断は、慢性ＳＣＷモデルの関節腫脹に対する効果を示さなかった（図１Ｃ）。対照的に、エタネルセプトは、この疾患モデルの急性期に活性のあることが以前に示されている。したがって、慢性ＳＣＷ関節炎期間中のＧＭ−ＣＳＦの中和は、ＩＬ−１βの中和より強力であると考えられ、その効果は、２８日目（つまり、抗体の最終投与の４日後）まで持続した。第２の独立した研究により、慢性ＳＣＷモデルにおける関節腫脹の減少に対するＧＭ−ＣＳＦ中和の効能が確認された。
【実施例２】
【００８３】
ＧＭ−ＣＳＦ中和は、炎症細胞の滑膜への流入および軟骨損傷を低減する
異なる群のマウスの関節に由来する組織病理学的切片を、２８日目の実験終了後に調製した。滑膜への炎症細胞流入の範囲および軟骨損傷の評価を、盲検Ｈ／ＥおよびＳＯ染色組織切片で、２人の研究者により独立してスコア化した。
【００８４】
３つの治療全て、ｍＡｂ  ２２Ｅ９によるＧＭ−ＣＳＦ中和、ｍＡｂ  １４００．２４．１７によるＩＬ−１β中和、およびエタネルセプトによるＴＮＦα遮断は、滑膜への炎症細胞流入を有意に低減するという点で有効であった（図２Ａ）。ＴＮＦα遮断は、有意に効果的であったが、ＧＭ−ＣＳＦまたはＩＬ−１β中和ほど強力でないと考えられた。対照と比べたｐ値は、それぞれ０．０４２、０．００４、および０．００１であった。さらに、エタネルセプト治療マウスの膝関節の炎症細胞流入が低減したにもかかわらず、軟骨完全性は保存されなかった（図２Ｂ）。対照的に、ＧＭ−ＣＳＦ中和により、軟骨損傷が有意に保護された（ｐ＝０．０２；ｍＡｂ  ２２Ｅ９対アイソタイプ対照ｍＡｂ）（図２Ｂ）。以前に報告されているように、ＩＬ−１β中和は、軟骨の損傷を保護するという点で非常に強力であった（ｐ＝０．００４、抗ＩＬ−１β対対照；図２Ｂ）。
【００８５】
軟骨完全性に対する種々の治療の影響は、３つの治療群の各々の１匹の代表的なマウスに由来する膝関節のサフラニンＯ／ファストグリーン染色のマイクロ写真を示す図３に例示されている。ｍＡｂ  ２２Ｅ９で治療したマウスで観察された強い軟骨染色および良好な組織保存（図３Ａ）は、軟骨完全性の保護に対するＧＭ−ＣＳＦ中和の効果を強調する。対照的に、アイソタイプ対照抗体を投与したマウスに由来する軟骨（図３Ｄ）は、プロテオグリカン、関節軟骨の主成分の１つが減少したことを実証する破壊的な侵食および染色強度の減少を示す。同様に、プロテオグリカンの減少および軟骨損傷の増加は、エタネルセプト治療マウスで見られる（図３Ｃ）。これは、ＴＮＦαの独立性を示す関節炎の慢性ＳＣＷモデルでの初期研究と一致している。ＩＬ−１βは、関節炎の実験モデルにおいて軟骨に顕著な破壊的効果を示すことが知られている。したがって、抗体によるＩＬ−１βの中和は、本発明者らの本研究において、軟骨に対する顕著な保護効果を示す（図３Ｂ）。
【実施例３】
【００８６】
ＧＭ−ＣＳＦ中和は、膝関節でのＩＬ−１βおよびＫＣの産生を低減する
ＧＭ−ＣＳＦの保護効果およびＩＬ−１βとのその関係性をより良好に理解するために、本発明者らは、膝蓋骨洗い出しでの様々なサイトカインおよびケモカインの濃度を調査した。非罹患対照膝（左）でのレベルは以前の実験で検出限界未満であることが繰り返して見出されたため、関節炎（右）膝だけを分析した。
【００８７】
ｍＡｂ  ２２Ｅ９によるＧＭ−ＣＳＦ中和の結果、アイソタイプ対照抗体治療を受けたマウスの関節で検出されたレベルと比較して、局所ＩＬ−１βが有意に低減した（ｐ＝０．０４２；２２Ｅ９治療対対照）（図４）。エタネルセプトによるＴＮＦα遮断は、関節中のＩＬ−１βレベルに影響を与えなかったが（図４）、予想通り、ＩＬ−１β中和ｍＡｂを投与したマウスでは、ＩＬ−１βレベルは基線に近かった。ケモカインＫＣ（マウス、ＧＲＯ−α）のレベルは、３つの治療全てにより関節炎膝関節中で有意に低減した（２２Ｅ９対対照の場合、ｐ＝０．００４７；エタネルセプト対対照の場合、ｐ＝０．０００７；抗ＩＬ−１β対対照の場合、ｐ＝０．００７）。ＩＬ−６およびＲＡＮＴＥＳの局所的レベルは、調査した治療のいずれによっても影響を受けなかった（データ非表示）。ＩＬ−２、ＴＮＦαおよびＧＭ−ＣＳＦのレベルは、アッセイの検出限界未満、例えば１０ｐｇ／ｍｌ未満であった。
【実施例４】
【００８８】
ＩＬ−１７シグナル伝達の非存在下でのＧＭ−ＣＳＦ中和は、軟骨破壊に対する保護効果を増強する
ＧＭ−ＣＳＦ中和は、関節腫脹を低下させ軟骨を損傷から保護し、効能はＩＬ−１β中和で観察された効能と類似していた。その後、慢性ＳＣＷ関節炎に抗ＧＭ−ＣＳＦ  ｍＡｂを用いた同様の研究を、ＩＬ−１７Ｒを欠損しているマウスで実施した。ＩＬ−１７Ｒ欠損により、慢性ＳＣＷ関節炎期間中の関節腫脹および軟骨破壊の抑制が生じる（図５Ａ）。この関節炎モデルでのＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１７シグナル伝達の両方の併用標的化により、関節腫脹の強力な増強された抑制が生じた（図５Ａ）。抗ＧＭ−ＳＣＦ治療ならびにＩＬ−１７Ｒ欠失の両方により、細胞流入が低減したが、併用標的化では、関節炎は有意に低下しなかった（図５Ｂ）。しかしながら、興味深いことには、プロテオグリカン枯渇および軟骨損傷（軟骨細胞死および侵食）は、抗ＧＭ−ＣＳＦで治療したＩＬ−１７Ｒ欠損マウスで有意に低減された（図５Ｂ〜Ｅ）。これらの結果は、Ｔ細胞サイトカインＩＬ−１７をさらに標的化することで、抗ＧＭ−ＣＳＦの軟骨に対する保護効果をさらに増強することができることを実証する。
【実施例５】
【００８９】
ヒトの慢性ＲＡ後期段階において典型的なように、慢性再発性ＳＣＷ関節炎マウスモデルは、重症の関節破壊を特徴とする。ＣＩＡマウスモデルおよび急性ＳＣＷ関節炎モデルで観察されるものとは対照的に、ＴＮＦα中和は、ＩＬ−１βが主な病原性役割を果たすと考えられる慢性ＳＣＷ関節炎の制御にはもはや有効ではない（７２）。慢性ＳＣＷ関節炎での軟骨破壊におけるＩＬ−１βのＴＮＦα依存性の重要な役割は、本発明者らの研究で確認されている。
【００９０】
ＧＭ−ＣＳＦ遮断をこの特定モデルで最初に研究し、３００μｇの用量の抗体を疾患慢性期に腹腔内投与すると、ＳＣＷを注射した膝の関節腫脹および軟骨破壊に対する顕著な阻害効果を示すことを見出した。これは、ヒトでの約１ｍｇ／ｋｇの抗体用量（非比例的補正後）と等しい用量の抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体が、マウスでは、関節炎膝関節中のＧＭ−ＣＳＦレベルを補正するのに十分であることを実証する。慢性関節炎モデルでのＧＭ−ＣＳＦ中和の治療効能は顕著であった。関節腫脹は、抗ＩＬ−１β治療よりも抗ＧＭ−ＣＳＦにより良好に制御されたが、ＴＮＦα遮断は効果がなかった。異常なＴＮＦα産生は、その中和が炎症細胞の流入およびＫＣケモカインレベルに対して効果を示したため、依然として慢性ＳＣＷ関節炎においていくつかの役割を果たしている可能性がある。しかしながら、この慢性疾患の駆動におけるＴＮＦαの役割は、疾患の急性期とは対照的に、他の関節炎マウスモデルとは対照的に減少した。軟骨保護に関して、抗ＧＭ−ＣＳＦおよび抗ＩＬ−１β治療の両方は非常に有効であった。ＧＭ−ＣＳＦ作用とＩＬ−１作用との相互依存性は、関節炎の別のモデルで以前に報告されている。ｍＢＳＡ注射後のＩＬ−１誘導性関節炎のこのモデルでは、ＧＭ−ＣＳＦは、圧倒的な病原性役割を果たす。ＧＭ−ＣＳＦ  ＫＯマウスにおけるようなＧＭ−ＣＳＦの非存在、またはＷＴ動物におけるＧＭ−ＣＳＦ中和は、関節炎を顕著に低減した。しかしながら、その中和が、関節炎関節のＩＬ−１βレベルを低減させたため、慢性ＳＣＷ関節炎期間中、ＧＭ−ＣＳＦはＩＬ−１βの上流で作用すると考えられる。活性化マクロファージおよび他のＧＭ−ＣＳＦに刺激された免疫細胞によるＩＬ−１産生のこのような低減は、抗ＧＭ−ＣＳＦ治療が本発明者らのモデルの軟骨に対して保護効果を示した理由も説明することができる。急性ＳＣＷモデルにおいて、本発明者らは、抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体はＩＬ−１βレベルを低減することができるが、ＴＮＦα遮断薬エタネルセプトはＩＬ−１βレベルを低減することができないことも見出した。ＲＡのＣＩＡマウスモデルでは、ＧＭ−ＣＳＦ遮断が、ＩＬ−１βおよびＴＮＦαのレベルを両方とも、非常に著しい様式で低減した。
【００９１】
ＧＭ−ＣＳＦ発現は、転写因子ＮＦ−ｋａｐｐａＢなどの活性化を介して、ＴＮＦαおよびＩＬ−１βなどの炎症性サイトカインにより、種々の免疫細胞で急性誘導されるが、サイトカインの階層性は、炎症の後期段階で逆転し、ＧＭ−ＣＳＦがＴＮＦαおよびＩＬ−１β、恐らくは他のサイトカインおよびケモカインの産生を引き継ぐ。関節炎組織でＴＮＦαおよびＩＬ−１βを阻害すると同時に、ＧＭ−ＣＳＦ遮断は、顆粒球、好中球、マクロファージなどのＧＭ−ＣＳＦ依存性免疫細胞の活性および生存を低減させる能力も有する。ＧＭ−ＣＳＦがＩＬ−１βおよびＴＮＦαの発現を直接的に誘導するだけでなく、協調的抗アポトーシス作用および先天性免疫系の複数細胞の持続的活性化を引き起こし、それによりＩＬ−１βおよびＴＮＦαの産生を間接的に増強することも考えられる。細胞周期および生存に対するそのような効果は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＧＭ−ＣＳＦ中和により、関節炎関節の全体的な細胞充実性ならびに細胞周期中にある細胞数の顕著な低減が生じるｍＢＳＡ関節炎モデルで実証された。
【実施例６】
【００９２】
ＷＴ動物において慢性ＳＣＷ関節炎期間中にＧＭ−ＣＳＦを阻止することに加えて、ＩＬ−１７Ｒ欠損マウスでの実験も実施した。ＩＬ−１７は、Ｔｈ１７細胞により産生され、この細胞はＴＮＦαおよびＧＭ−ＣＳＦを同時に産生することができる。ＴＮＦαの存在下で、ＩＬ−１７は、滑膜細胞を刺激してＧＭ−ＣＳＦの産生を開始させ、ＧＭ−ＣＳＦの上流でＩＬ−１７が役割を果たしていることを示唆する。他方では、ＬＰＳにより刺激されたＧＭ−ＣＳＦ処理骨髄細胞は、ＩＬ−１７産生Ｔｈ１７細胞の重要な生存因子であるＩＬ−２３を産生する。本発明の以前は、ＩＬ−１７およびＧＭ−ＣＳＦの併用阻止は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで研究されていなかった。本発明者らの本研究は、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１７経路両方の同時遮断の結果、単一経路の遮断と比べて優位に関節腫脹が抑制され、軟骨破壊に対する保護が高まったことを初めて示した。これら２つのサイトカインが、ＲＡ患者の滑膜によるサイトカイン産生と、骨関節炎軟骨でのＰＧＥ２およびＮＯ産生とに対する相乗効果を有することが以前に示されているため、軟骨に対するこの強力な効果は、ＩＬ−１７と（ＧＭ−ＣＳＦ誘導性）ＩＬ−１βとの間の相乗効果により説明することができる。本研究および従来の研究は、ＧＭ−ＣＳＦの中和が、ヒトＲＡ患者、ＴＮＦα遮断にもはや応答しない、または最初から応答しない患者にも治療能力を有する可能性があるということを強く表している。加えて、本研究は、抗ＩＬ−１７治療と組み合わせた抗ＧＭ−ＣＳＦが、ＲＡならびに他の自己免疫性および炎症性疾患の状況において、顕著な治療効果を示すことを実証する。
【実施例７】
【００９３】
コラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）は、軟骨コラーゲンＩＩ型（ＣＩＩ）に対するＴ細胞および抗体媒介性の自己免疫応答性に基づく広く受け入れられている関節炎マウスモデルである。このモデルは、いくつかの臨床的、組織病理学的、および免疫学的な特徴をヒトＲＡと共有しており、滑膜炎症ならびにその後の重篤な軟骨および硬骨侵食を主な特徴とする。本明細書に記載されている本研究の目的は、ＣＩＡマウスモデル系におけるＧＭ−ＣＳＦ中和化合物およびＩＬ−１７中和化合物の併用投与の治療効能の評価であった。特に、（ｉ）抗ＩＬ−１７モノクローナル抗体（ｍＡｂ  ４２１）単独、（ｉｉ）抗ＧＭ−ＣＳＦモノクローナル抗体（ｍＡｂ  ２２Ｅ９）単独、および（ｉｉｉ）両抗体の組合せによるマウスの治療効果を、ＣＩＡの発症後に陰性対照（ＩｇＧ２Ａ）および陽性対照（デキサメタゾン）と比較して研究した。抗ＩＬ−１７抗体ｍＡｂ４２１は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社から取得し、ｍＡｂ  ２２Ｅ９はＰｅｒｂｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ社から取得した。ラットＩｇＧ２ａアイソタイプ対照抗体は、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社から取得した。抗体は全て−８０℃で保管した。デキサメタゾンは、Ｃｅｎｔｒａｆａｒｍ社から取得し、室温で保管した。化合物は全て投与用無菌ＰＢＳで希釈した。
【００９４】
上記で示されている化合物によるＣＩＡマウスの治療効果を、７週間の研究計画で研究した。０日目に、雄ＤＢＡ／１Ｊマウスを、イソフルラン麻酔下で１００μｇのウシＣＩＩを用いて尾基部で免疫した。２１日目に、マウスは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に溶解された１００μｇＣＩＩの腹腔内追加免疫注射を受け、関節炎の発症は、この追加免疫注射の数日後に生じた。０．０５Ｍ酢酸中２ｍｇ／ｍｌの濃度のウシＩＩ型コラーゲン（ＣＩＩ）を、等容積のフロイント完全アジュバント（２ｍｇ／ｍｌの結核菌（Mycobacterium tuberculosis）菌株Ｈ３７Ｒａ）で乳化した。関節炎の初発症状（スコアは０．２５以上）時に、マウスを、下記に列挙されている様々な実験群に順次割当て、さらに１０日の研究期間中観察した。
【００９５】
マウスは、指または足の他の部分に発赤および／または腫脹の著しい変化が認められた際に、関節炎を有するとみなした。各足の関節炎を、R. Smeets et al, Arthritis Rheum 2003に記載されているように、１本の足当たり０〜２のスコアで１匹の動物当たり最大８のスコア（関節炎症状を有する４本の足、各足２までのスケール）を使用して視覚的にスコア化した：０＝炎症なし、１＝軽度の炎症、１．５＝顕著な炎症、および２＝重篤な炎症。スコア化は、実験群に関する知識のない独立した観察者により２１日目から４５日目まで１週当たり３回実施した。
【００９６】
抗体を、関節炎症状の発症時に単回単一用量で投与した。２ｍｇ／ｋｇの用量のデキサメタゾンを、腹腔内で１週当たり３回（月曜日、水曜日、および金曜日）投与した。研究の３５日目までにいかなる関節炎症状も示していなかったマウスを、不応答動物とみなし、さらなる研究分析から除外した。
【００９７】
以前の実験結果に基づいて、本研究用の用量を、１．５ｍｇ／ｋｇ  ｍＡｂ４２１に設定した。抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体２２Ｅ９の場合、用量は３ｍｇ／ｋｇに設定した。これらの用量を使用して本研究を実施し、コラーゲン誘導性関節炎期間中のＩＬ−１７およびＧＭ−ＣＳＦの併用阻止の効果を評価した。デキサメタゾンを陽性対照として使用し、ラットＩｇＧ２ａ抗体を陰性対照として使用した。加えて、本研究は、全てが表示されている用量の抗ＩＬ−１７（ｍＡｂ４２１）、抗ＧＭ−ＣＳＦ（２２Ｅ９）、およびそれらの組合せによる治療用の実験群を含んでいた。
【００９８】
実験群
ｍＡｂ４２１  １．５ｍｇ／ｋｇ＋ラットＩｇＧ２ａ  ３ｍｇ／ｋｇ（合計４．５ｍｇ／ｋｇ）
２２Ｅ９  ３ｍｇ／ｋｇ＋ラットＩｇＧ２ａ  １．５ｍｇ／ｋｇ
ｍＡｂ４２１  １．５ｍｇ／ｋｇ＋２２Ｅ９  ３ｍｇ／ｋｇ
ラットＩｇＧ２ａ  １５ｍｇ／ｋｇ
デキサメタゾン  ２ｍｇ／ｋｇ
【００９９】
図６に示されているように、２２Ｅ９の使用によるＧＭ−ＣＳＦの中和と組み合わせたｍＡｂ４２１によるＩＬ−１７の中和は、コラーゲン誘導性関節炎の臨床スコアを有意に低減した。対照的に、ｍＡｂ４２１または２２Ｅ９単独による治療は、疾患重症度を有意には減少させなかった。関節炎症状は、デキサメタゾン（２ｍｇ／ｋｇ、陽性対照）の腹腔内投与の２〜３日後に消失した。ＩｇＧ２Ａ抗体で治療したマウス（陰性対照）は、関節炎重症度の明らかな進行を示した。
【０１００】
組織病理学的分析では、正面および後足（左および右；４つの試料／マウス）が摘出された。４％ホルムアルデヒド溶液で足を固定した。ＥＤＴＡまたは標準的脱灰溶液中で３日間脱灰した後、足をパラフィン（ｐａｒａｐｌａｓｔ（登録商標））に包埋し、Ｈ＆Ｅで染色し、光学顕微鏡で評価した。組織学的評価は、足の遠位関節（足根／手根および指）に限定されていた。
【０１０１】
組織学的評価により、肢（手根／足根、指）のより低部の関節の慢性関節炎に亜急性が明らかになった。関節炎は、滑膜の肥厚化（滑膜過形成）、関節内滲出液、および主に関節嚢での顕著な混合細胞浸潤により特徴付けられた。顕著な場合は、結合組織および腱でも炎症細胞反応が見られた。加えて、より慢性の場合、線維組織および主に単核細胞からなる典型的な肉芽粗織が観察された。遠位関節の軟骨の浸食変化も見られた。ほとんどの場合、複数の関節が罹患した（多発関節炎）。図７は、２２Ｅ９  ３ｍｇ／ｋｇ（Ａ）、ｍＡｂ４２１  １．５ｍｇ／ｋｇ（Ｂ）、２２Ｅ９  ３ｍｇ／ｋｇおよびｍＡｂ  ４２１  １．５ｍｇ／ｋｇの組合せ（Ｃ）、またはアイソタイプ対照１５ｍｇ／ｋｇ（Ｄ）を単回投与した１０日後の代表的な関節切片を示す。関節を４％ホルマリンで固定し、脱灰し、薄切し、ヘマトキシリン／エオシンで染色した。アイソタイプ対照を投与したマウス（図７Ｄ）は、滑膜にはなはだしい細胞浸潤を有する顕著な関節炎、および軟骨侵食および硬骨侵食による関節破壊を示した。２２Ｅ９、３ｍｇ／ｋｇ（図７Ａ）またはｍＡｂ  ４２１、１．５ｍｇ／ｋｇ（図７Ｂ）を投与したわずかに重症度が低いマウスも、重症炎症および関節破壊を示したが、ｍＡｂ４２１  １．５ｍｇ／ｋｇと一緒の２２Ｅ９  ３ｍｇ／ｋｇの併用治療の単回投与を受けたマウスは、非常に著しい炎症の低減、および正常な軟骨表面付近での関節完全性の良好な保存を示した（図７Ｃ）。その結果、関節炎を有するほとんどの症例が、陰性対照群（ラットＩｇＧ２Ａ）で見られた。デキサメタゾン（陽性対照）を投与した２〜３日後では関節炎を検出することができなかった。ｍＡｂ４２１もしくはｍＡｂ  ２２Ｅ９単独でまたは組合せで治療したＣＩＡマウスを陰性対照と比較すると、関節炎の発症および重症度に関する最も良好な結果は、ｍＡｂ２２Ｅ９と組み合わせたｍＡｂ４２１により治療した群で見られた。
【０１０２】
結論
本発明者らは、２つの異なる関節炎モデル系、つまり（ｉ）ＴＮＦα非依存性の慢性ＳＣＷ関節炎モデル、および（ｉｉ）ＴＮＦα依存性ＣＩＡモデルにおけるＧＭ−ＣＳＦ中和の治療的効能を探究した。加えて、本発明者らは、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１７経路を阻害することにより、先天性免疫および適応免疫を両方とも阻止する効果を研究した。これは、ＩＬ−１７受容体の遺伝子欠損マウス（ＩＬ−１７Ｒ−ＫＯマウス）においてＧＭ−ＣＳＦを中和することにより、またはＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１７を中和するモノクローナル抗体による併用治療により実施された。本発明者らは、驚くべきことに、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１７経路の併用遮断により、非常に効率的な様式で両タイプの炎症性疾患を治療することができることを観察した。ＣＩＡモデルでは、ＧＭ−ＣＳＦ阻害性化合物およびＩＬ−１７阻害性化合物の併用投与は、コラーゲン誘導性関節炎の臨床スコアを有意に低減させたが、ＧＭ−ＣＳＦ阻害性化合物またはＩＬ−１７阻害性化合物単独による治療は、関節炎の重症度を有意には減少させなかった。加えて、詳細な組織学的分析から、軟骨および硬骨の関節炎および関節破壊に対する併用療法の相乗効果が実証された。このように、両経路の併用遮断は、その結果として炎症および関節破壊からの非常に効率的な保護をもたらした。これらの結果は、ごく最近まで、ＧＭ−ＣＳＦがＩＬ−１７の下流にあると仮定されていたため、特に驚くべきことである（例えば、Kawaguchi M. et al., J. Allergy Clin. Immunol. 114 (2004), 444-450；Starnes T. et al., The Journal of Immunology 169 (2002), 642-646; Laan M. et al., Eur. Respir. J. 21 (2003), 387-393を参照）。したがって、相加効果または相乗効果を、これら２つの経路の遮断を併用する治療から予測することはできなかった。本出願は、ＩＬ−１７およびＧＭ−ＣＳＦの併用阻止の有利な効果をｉｎ  ｖｉｖｏで初めて実証するものである。ＩＬ−１７およびＧＭ−ＣＳＦ経路両方の同時遮断の結果、単一経路の遮断と比べて優位に関節腫脹が抑制され、軟骨破壊に対する保護が高まった。本明細書で示されているデータは、抗ＩＬ−１７治療と組み合わせた抗ＧＭ−ＣＳＦが、ＲＡだけでなく、本明細書の上記で定義されているような他の自己免疫疾患および炎症性疾患の状況でも顕著な治療効果を示すことを強く表している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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