(57)【要約】  本明細書に記載されるのは、炎症性障害を治療するための方法である。この方法は、治療有効量の合成的に修飾されたフラーレンを、それを必要とする被験体に投与することを含む。
2011513400.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症性疾患を治療するための方法であって、治療有効量の式
Ｚｍ−Ｆ−Ｙｎ
の合成的に修飾されたフラーレンを、それを必要とする被験体に投与することを含む上記方法
［式中、Ｆは、式Ｃｐ又はＸ＠Ｃｐのフラーレンであり、前記フラーレンは、２つの対極、及びエクアトリアル領域を有し、
Ｃｐはｐ個の炭素原子を有するフラーレンケージを表し、Ｘ＠Ｃｐはケージ内部に化学基Ｘを有するそのようなフラーレンケージを表し、
Ｚ及びＹは、Ｃｐのそれぞれの対極近くに位置しており、
ｍ＝１〜５であり、Ｚは親水性、親油性、又は両親媒性化学的部分であり、
ｎ＝１〜５であり、Ｙは親油性化学的部分であり、
ｐ＝６０〜２００で、ｐは偶数であり、
Ｘは、存在する場合、任意選択で式Ｇｉ＝１〜３Ｈｋ＝３−ｉＮのトリニトリドの形態のフラーレン（Ｆ）内部の１つ又は複数の金属原子を表し、Ｇ及びＨは金属原子である］。
【請求項２】
ｐが６０から１２０までの偶数である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ｐが６０から９６までの偶数である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ｐが６０又は７０である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ｐが７０である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記合成的に修飾されたフラーレンが、前記極が扁長楕円体フラーレンの主軸の相対する末端に位置するように、主軸を有する扁長楕円体形のフラーレンである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記合成的に修飾されたフラーレンが、対極が相対する炭素環を通る軸により定義されるスフェロイドである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
炎症性疾患を治療するための方法であって、治療有効量の式
Ｚ（Ｃｐ）Ｙ
の合成的に修飾されたフラーレンを、それを必要とする被験体に投与することを含む上記方法
［式中、ｐ＝６０〜２００炭素、好ましくはｐ＝６０又は７０であり、Ｙは、その極で又はその近くで任意選択で連結基を通じてＣｐに共有結合している親油性部分であり、Ｚは、前記Ｙと反対の極で又はその近くで任意選択で連結基を通じてＣｐに共有結合している親油性部分、両親媒性部分、又は親水性部分である］。
【請求項９】
ＣｐがＣ７０である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
Ｚが親水性部分である、請求項８又は請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
合成的に修飾されたフラーレンが化合物５である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
炎症性疾患を治療するための方法であって、治療有効量の式
Ｚ’ｍ−Ｆ−Ｙ’ｎ
の合成的に修飾されたフラーレンを、それを必要とする被験体に投与することを含む上記方法
［式中、Ｆは、式Ｃｐ又はＸ＠Ｃｐのフラーレンであり、前記フラーレンは、２つの対極、及びエクアトリアル領域を有し、
Ｃｐはｐ個の炭素原子を有するフラーレンケージを表し、Ｘ＠Ｃｐはケージ内部に化学基Ｘを有するそのようなフラーレンケージを表し、
Ｚ’及びＹ’は、Ｃｐのそれぞれの対極近くに位置しており、
ｍ＝１〜５であり、Ｚ’は親水性、親油性、又は両親媒性化学的部分であり、
ｎ＝１〜５であり、Ｙ’は親水性又は両親媒性化学的部分であり、
ｐ＝６０〜２００で、ｐは偶数であり、
Ｘは、存在する場合、任意選択で式Ｇｉ＝１〜３Ｈｋ＝３−ｉＮのトリニトリドの形態のフラーレン（Ｆ）内部の１つ又は複数の金属原子を表し、Ｇ及びＨは金属原子である］。
【請求項１３】
ｐが６０から１２０までの偶数である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ｐが６０から９６までの偶数である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ｐが６０又は７０である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ｐが７０である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記合成的に修飾されたフラーレンが、前記極が扁長楕円体フラーレンの主軸の相対する末端に位置するように、主軸を有する扁長楕円体形のフラーレンである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
前記合成的に修飾されたフラーレンが、対極が相対する炭素環を通る軸により定義されるスフェロイドである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１９】
Ｚ’が、式Ａ’ｒＢを含み、式中、Ａ’は親水性、親油性又は両親媒性化学的部分であり、ｒ＝１〜４であり、Ｂは前記Ａ’をフラーレンに連結する化学リンカーであり、
Ｙ’が式ＤＥ’ｖを含み、式中、Ｅ’は親水性又は両親媒性化学的部分であり、ｖ＝１〜４であり、Ｄは化学的部分Ｙ’をフラーレンに連結する化学リンカーである、請求項１２に記載の方法。
【請求項２０】
炎症性疾患を治療するための方法であって、治療有効量の式
Ｚ’（Ｃｐ）Ｙ’
の合成的に修飾されたフラーレンを、それを必要とする被験体に投与することを含む上記方法
［式中、ｐ＝６０〜２００炭素、好ましくはｐ＝６０又は７０であり、Ｙ’は、その極で又はその近くで任意選択で連結基を通じてＣｐに共有結合している親水性又は両親媒性部分であり、Ｚ’は、前記Ｙ’と反対の極で又はその近くで任意選択で連結基を通じてＣｐに共有結合している親水性又は両親媒性部分である］。
【請求項２１】
（ａ）Ｚ’及びＹ’が両方とも両親媒性である、
（ｂ）Ｚ’及びＹ’が両方とも親水性である、
（ｃ）Ｚ’及びＹ’のうちの１つが両親媒性であり、もう１つが親水性である、
（ｄ）Ｚ’が親油性であり、Ｙ’が親水性である、又は
（ｅ）Ｚ’が親油性であり、Ｙ’が両親媒性である、
請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
Ｚ’及びＹ’が両方とも親水性である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
Ｃｐ＝Ｃ７０である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
合成的に修飾されたフラーレンが、化合物５、化合物１３、化合物１９、及びその組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
合成的に修飾されたフラーレンが、化合物７、化合物１０、化合物１２、及びその組合せからなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項２６】
炎症性障害が炎症性関節炎である、請求項１、８、１２、及び２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
炎症性関節炎が関節リウマチである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
被験体がヒトである、請求項１、８、１２、及び２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
炎症性疾患を治療するのに使用するための、式
Ｚｍ−Ｆ−Ｙｎ
の合成的に修飾されたフラーレン
［式中、Ｆは、式Ｃｐ又はＸ＠Ｃｐのフラーレンであり、前記フラーレンは、２つの対極、及びエクアトリアル領域を有し、
Ｃｐはｐ個の炭素原子を有するフラーレンケージを表し、Ｘ＠Ｃｐはケージ内部に化学基Ｘを有するそのようなフラーレンケージを表し、
Ｚ及びＹは、Ｃｐのそれぞれの対極近くに位置しており、
ｍ＝１〜５であり、Ｚは親水性、親油性、又は両親媒性化学的部分であり、
ｎ＝１〜５であり、Ｙは親油性化学的部分であり、
ｐ＝６０〜２００で、ｐは偶数であり、
Ｘは、存在する場合、任意選択で式Ｇｉ＝１〜３Ｈｋ＝３−ｉＮのトリニトリドの形態のフラーレン（Ｆ）内部の１つ又は複数の金属原子を表し、Ｇ及びＨは金属原子である］。
【請求項３０】
炎症性疾患を治療するための薬物の調製のための、式
Ｚｍ−Ｆ−Ｙｎ
の合成的に修飾されたフラーレン
［式中、Ｆは、式Ｃｐ又はＸ＠Ｃｐのフラーレンであり、前記フラーレンは、２つの対極、及びエクアトリアル領域を有し、
Ｃｐはｐ個の炭素原子を有するフラーレンケージを表し、Ｘ＠Ｃｐはケージ内部に化学基Ｘを有するそのようなフラーレンケージを表し、
Ｚ及びＹは、Ｃｐのそれぞれの対極近くに位置しており、
ｍ＝１〜５であり、Ｚは親水性、親油性、又は両親媒性化学的部分であり、
ｎ＝１〜５であり、Ｙは親油性化学的部分であり、
ｐ＝６０〜２００で、ｐは偶数であり、
Ｘは、存在する場合、任意選択で式Ｇｉ＝１〜３Ｈｋ＝３−ｉＮのトリニトリドの形態のフラーレン（Ｆ）内部の１つ又は複数の金属原子を表し、Ｇ及びＨは金属原子である］。
【請求項３１】
炎症性疾患を治療するのに使用するための、式
Ｚ’ｍ−Ｆ−Ｙ’ｎ
の合成的に修飾されたフラーレン
［式中、Ｆは、式Ｃｐ又はＸ＠Ｃｐのフラーレンであり、前記フラーレンは、２つの対極、及びエクアトリアル領域を有し、
Ｃｐはｐ個の炭素原子を有するフラーレンケージを表し、Ｘ＠Ｃｐはケージ内部に化学基Ｘを有するそのようなフラーレンケージを表し、
Ｚ’及びＹ’は、Ｃｐのそれぞれの対極近くに位置しており、
ｍ＝１〜５であり、Ｚ’は親水性、親油性、又は両親媒性化学的部分であり、
ｎ＝１〜５であり、Ｙ’は親水性又は両親媒性化学的部分であり、
ｐ＝６０〜２００で、ｐは偶数であり、
Ｘは、存在する場合、任意選択で式Ｇｉ＝１〜３Ｈｋ＝３−ｉＮのトリニトリドの形態のフラーレン（Ｆ）内部の１つ又は複数の金属原子を表し、Ｇ及びＨは金属原子である］。
【請求項３２】
炎症性疾患を治療するための薬物の調製のための、式
Ｚ’ｍ−Ｆ−Ｙ’ｎ
の合成的に修飾されたフラーレン
［式中、Ｆは、式Ｃｐ又はＸ＠Ｃｐのフラーレンであり、前記フラーレンは、２つの対極、及びエクアトリアル領域を有し、
Ｃｐはｐ個の炭素原子を有するフラーレンケージを表し、Ｘ＠Ｃｐはケージ内部に化学基Ｘを有するそのようなフラーレンケージを表し、
Ｚ’及びＹ’は、Ｃｐのそれぞれの対極近くに位置しており、
ｍ＝１〜５であり、Ｚ’は親水性、親油性、又は両親媒性化学的部分であり、
ｎ＝１〜５であり、Ｙ’は親水性又は両親媒性化学的部分であり、
ｐ＝６０〜２００で、ｐは偶数であり、
Ｘは、存在する場合、任意選択で式Ｇｉ＝１〜３Ｈｋ＝３−ｉＮのトリニトリドの形態のフラーレン（Ｆ）内部の１つ又は複数の金属原子を表し、Ｇ及びＨは金属原子である］。
【請求項３３】
Ｃ７０−テトラグリコール酸（化合物７）、Ｃ７０−テトライノシトール（化合物１０）、Ｃ７０−ＴＥＧ酸（化合物１２）、及びフェニルプロピオン酸−トリアゾール−混合マロネートアミド−Ｃ７０−ＴＥＧ−ＣＯＯＨ（化合物１９）からなる群から選択される化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書に記載される種々の実施形態は、炎症性障害を治療するためのフラーレンの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、病原体、損傷細胞、又は刺激物質などの有害な刺激に対する組織の複雑な生物学的応答である。しかし、抑制されないままになる炎症は、炎症性関節炎、関節リウマチ、枯草熱、及びアテローム性動脈硬化症などの、多数の障害をもたらすことがある。
【０００３】
炎症は、急性又は慢性のいずれかに分類することができる。急性炎症は、有害な刺激に対する身体の初期応答であり、血漿及び白血球の血液から損傷組織への移動の増加により達成される。生化学的事象のカスケードが、損傷組織内部の局所血管系、免疫系、及び種々の細胞を含めて、炎症応答を伝播し成熟させる。急性炎症は、血漿及び白血球による組織の浸潤による炎症の古典的徴候、すなわち、腫脹、発赤、苦痛、熱、及び機能喪失により特徴づけられる短期過程である。急性炎症は有害な刺激が存在する間起こり、刺激が取り除かれ、分解され、又は瘢痕（線維症）により囲まれると終わる。
【０００４】
慢性炎症として知られている長期炎症は、炎症部位に存在する細胞の型の進行性変化をもたらし、炎症過程からの組織の同時破壊及び治癒により特徴づけられる。慢性炎症は、同時発生の活動性炎症、組織破壊、及び修復の試みにより特徴づけられる病態である。慢性炎症は、上記の急性炎症の古典的徴候により特徴づけられることはない。或いは、慢性的炎症組織は、単核免疫細胞（単球、マクロファージ、リンパ球、及びプラズマ細胞）の浸潤、組織破壊、並びに治癒の試みにより特徴づけられ、この試みには血管新生及び線維症が含まれる。内在性の原因には、持続性急性炎症が挙げられる。外来性の原因は多様であり、細菌感染、シリカなどの化学薬品への長期の曝露、又は関節リウマチなどの自己免疫反応が挙げられる。
【０００５】
免疫系の細胞は、シグナルカスケードを使用して、実際の又は認知された障害に対するエスカレートする応答を開始する。シグナルカスケードが不適切に呼び起されると炎症応答は病原性になる。たとえば、自己免疫疾患は、免疫系が内在性の抗原に対する応答を開始する結果である。多くの抗炎症薬は、細胞内又は細胞間エフェクターを遮断することなどによってシグナルカスケードを阻害することにより機能する。たとえば、グルココルチコイドは、自然免疫抑制剤のコルチゾールを模倣して、転写レベルで遺伝子を遮断し、シクロオキシゲナーゼ阻害剤は、細胞内の内部シグナル分子を処理する酵素に結合し、阻害する小分子である。
【０００６】
フラーレン分子は、一般に６０から２００個の炭素原子の閉鎖ケージを含む炭素同素体位のファミリーであり、ケージの外面に結合している又はケージ内部に取り込まれている化学的部分も含むこともある。フラーレンは、中空球、楕円体又は管の形態になることができる。これまででもっとも一般的なフラーレンは、Ｃ６０バックミンスターフラーレン（ＩＵＰＡＣ名（Ｃ６０−Ｉｈ）［５，６］フラーレン）である。別のかなり一般的なバックミンスターフラーレンはＣ７０であるが、７２、７６、８４及び最大１００個の炭素原子のフラーレンまでも一般に得られる。フラーレン分子は、わずか２０の、又は５００以上の炭素原子を含有することができる。フラーレンは、炭素ケージ内部に、金属原子などの１つ若しくは複数の原子、又は他の小型の化学基を包み込んでいてよく、そのようなフラーレンは内包フラーレンと呼ばれることもある。フラーレンは、炭素ケージの表面に結合している化学官能基を含むように修飾又は誘導化されていることもある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本明細書に記載されるのは、治療有効量の合成的に修飾されたフラーレンを、それを必要とする被験体に投与することを含む、炎症性障害を治療するための方法である。
【０００８】
一実施形態では、炎症性障害は炎症性関節炎である。
【０００９】
別の実施形態では、炎症性障害は関節リウマチである。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１Ａ】フラーレン処置マウスにおける関節炎の減弱を示す図である。臨床指数を示す。
【図１Ｂ】フラーレン処置マウスにおける関節炎の減弱を示す図である。足首の厚みを示す。
【図２】対照及びフラーレン誘導体で処置されたマウスにおける１４日目のＴＮＦ−αの血清レベルを示す図である。
【図３】化合物５を作製するための例示的な合成スキームを示す図である。
【図４】Ｃ７０−テトラグリコール酸、化合物７を作製するための例示的な合成スキームを示す図である。
【図５】Ｃ７０−テトライノシトール、化合物１０を作製するための例示的な合成スキームを示す図である。
【図６】Ｃ７０−ＴＥＧ酸（ＴＴＡ）、化合物１２を作製するための例示的な合成スキームを示す図である。
【図７】任意の組合せの親水性、親油性又は両親媒性化学的部分で合成的に修飾されたフラーレンの追加の非限定的な例を示す図である。
【図８】任意の組合せの親水性、親油性又は両親媒性化学的部分で合成的に修飾されたフラーレンの追加の非限定的な例を示す図である。
【図９】任意の組合せの親水性、親油性又は両親媒性化学的部分で合成的に修飾されたフラーレンの追加の非限定的な例を示す図である。
【図１０】その親水基の１つとしてフェニルプロピオン酸基を有するＣ７０を作製するための例示的な合成スキームを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
この詳細な説明に従って、以下の定義が適用される。
【００１２】
本明細書で使用するように、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、明らかに文脈上他の方法で指示していない限り、複数の指示対象を含む。したがって、たとえば、「化合物」への言及は、複数のそのような化合物を含み、「投用量」への言及は、１つ又は複数の用量及び当業者には既知のその等価物などへの言及を含む。
【００１３】
用語「炎症性障害」又は「炎症性疾患」は、炎症に付随する異常に言及するために使用され、大きな群の障害を含む。炎症性障害は、急性炎症及び／又は慢性炎症に付随することがある。炎症性障害の例には、限定するものではないが、自己免疫疾患、炎症性関節炎、関節リウマチ、変形性関節炎、痛風性関節炎、肩腱炎若しくは骨液包炎、リウマチ性多発筋痛症、炎症性肺疾患、喘息、１型糖尿病、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性前立腺炎、糸球体腎炎、過敏症反応（たとえば、２型及び３型過敏症）、炎症性腸疾患（たとえば、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、骨盤内炎症性疾患、再灌流障害、移植片拒絶、血管炎、アレルギー反応、炎症性筋疾患（たとえば、皮膚筋炎、多発性筋炎及び封入体筋炎）、並びに白血球欠損症（たとえば、チェディアック東症候群及び慢性肉芽腫症）が挙げられる。
【００１４】
炎症性関節炎は、局在的な関節の炎症により関節炎が存在する状態を含む。関節リウマチは、一般に炎症性関節炎の一種と見なされているが、そのすべてが炎症及びその続発症によりある程度は損傷を受けている多くの関節を含む。ある種の実施形態では、本明細書に記載される炎症性障害は、関節リウマチを含むが、これに限定されることはない、炎症性関節炎である。
【００１５】
本明細書に記載される「フラーレン」又は「フラーレン分子」は、式Ｚｍ−Ｆ−Ｙｎの両親媒性又は親油性の合成的に修飾されたフラーレン、及び式Ｚ’ｍ−Ｆ−Ｙ’ｎの親水性又は両親媒性の合成的に修飾されたフラーレンを含む、本明細書に記載されるある種の合成的に修飾されたフラーレン分子のことである。フラーレンは、ケージの外面に結合し、且つ／又はケージ内部に取り込まれた化学的部分も含むことがある６０から２００個の炭素原子の閉鎖ケージを含む。
【００１６】
両親媒性又は親油性の合成的に修飾されたフラーレン分子は、２００８年３月３日に出願された同時係属の米国特許出願第２／０７３２３０号、米国特許出願公開第２００８−０２１３３２４−Ａ１号、表題「両親媒性又は親油性の極性官能基を持つフラーレン及びその使用（ＡＭＰＨＩＰＨＩＬＩＣ  ＯＲ  ＬＩＰＯＰＨＩＬＩＣ  ＰＯＬＡＲ  ＦＵＮＣＴＩＯＮＡＬＩＺＥＤ  ＦＵＬＬＥＲＥＮＥＳ  ＡＮＤ  ＴＨＥＩＲ  ＵＳＥＳ）」に記載されており、その開示全体は参照により本明細書に組み込まれている。
【００１７】
同時係属出願に記載されている両親媒性又は親油性の合成的に修飾されたフラーレン分子は、エクアトリアル帯及び２つの反対の極があって、アスペクト比≠１を有し、一方の極又は両極に付加体を含むフラーレンを含む。
【００１８】
一実施形態では、両親媒性又は親油性の合成的に修飾されたフラーレンは、式
Ｚｍ−Ｆ−Ｙｎ
を有する
［式中、Ｆは、式Ｃｐ又はＸ＠Ｃｐのフラーレンであり、前記フラーレンは、２つの対極、及びエクアトリアル領域を有し、
Ｃｐは、ｐ個の炭素原子を有するフラーレンケージを表し、Ｘ＠Ｃｐはケージ内部に化学基Ｘを有するそのようなフラーレンケージを表し、
Ｚ及びＹは、Ｃｐのそれぞれの対極近くに配置されており、
ｍ＝１〜５であり、Ｚは親水性、親油性又は両親媒性化学的部分であり、
ｎ＝１〜５であり、Ｙは親油性化学的部分であり、
ｐ＝６０〜２００で、ｐは偶数であり、
Ｘは、存在する場合、任意選択で式Ｇｉ＝１〜３Ｈｋ＝３−ｉＮのトリニトリドの形態のフラーレン（Ｆ）内部の１つ又は複数の金属原子を表し、Ｇ及びＨは金属原子である］。
【００１９】
例示的な変化量では、ｐは、６０から１２０までの偶数であり、ｐ＝６０〜９６がより一般的であり、ｐ＝６０又はｐ＝７０が好ましい。各化学的部分Ｚが式ＡｒＢで構成されており、Ａは親水性、親油性又は両親媒性化学的部分であり、ｒ＝１〜４であり、Ｂは前記Ａをフラーレンに連結させる化学リンカーであり、各化学的部分Ｙは式ＤＥｖで構成されており、Ｅは親油性化学的部分であり、ｖ＝１〜４であり、Ｄは親油性化学的部分をフラーレンに連結する化学リンカーである、合成的に修飾されるフラーレンを配置することができる。
【００２０】
両親媒性又は親油性の合成的に修飾されたフラーレンは、前記極が扁長楕円体フラーレンの主軸の反対の末端に位置するように、主軸を有する扁長楕円体形のフラーレンになることができる。或いは、フラーレンは、対極が反対の炭素環を通る軸により定義されるスフェロイドになることができる。分子が水媒体中で脂質二重層に接触している場合、Ｆのエクアトリアル領域が、リン脂質二重層内部に又はそれにごく接近して選択的に位置するように、Ｚ及びＹを形成することができる。分子は、伸長した配置で、約２．１から１５のアスペクト比及び約２ｎｍ未満の径を有するように形成することができる。そのような配置は、分子の脂質二重層への取込みには好ましい配置である。
【００２１】
別の実施形態では、両親媒性又は親油性の合成的に修飾されたフラーレン分子は、式Ｚ（Ｃｐ）Ｙを有し、式中、ｐ＝６０〜２００炭素、好ましくはｐ＝６０又は７０であり、Ｙは、任意選択でその極で又はその極の近くで連結基を通じてＣｐに共有結合している親油性部分であり、Ｚは、任意選択で前記Ｙの反対の極で又はその極の近くで連結基を通じてＣｐに共有結合している親油性部分、両親媒性部分、又は親水性部分であり、前記親油性部分Ｙは合成フラーレン分子を脂質膜に繋ぎ止めることができる。
【００２２】
別の実施形態では、両親媒性又は親油性の合成的に修飾されたフラーレン分子は、式Ｚ（Ｃｐ）Ｙを有し、式中、ｐ＝６０〜２００炭素、好ましくは、Ｐ＝６０又は７０であり、Ｙは、任意選択でその極で又はその極の近くで連結基を通じてＣｐに共有結合している親油性部分であり、Ｚは、任意選択で前記Ｙの反対の極で又はその極の近くで連結基を通じてＣｐに共有結合している親水性部分であり、前記親油性部分Ｙは合成フラーレン分子を脂質膜に繋ぎ止めることができる。
【００２３】
別の実施形態では、両親媒性又は親油性の合成的に修飾されたフラーレン分子は、式Ｚ（Ｃ７０）Ｙを有し、式中、Ｙは、任意選択でその極で又はその極の近くで連結基を通じてＣ７０に共有結合している親油性部分であり、Ｚは、任意選択で前記Ｙの反対の極で又はその極の近くで連結基を通じてＣ７０に共有結合している親油性部分、両親媒性部分、又は親水性部分であり、前記親油性部分Ｙは合成フラーレン分子を脂質膜に繋ぎ止めることができる。
【００２４】
別の実施形態では、両親媒性又は親油性の合成的に修飾されたフラーレン分子は、式Ｚ（Ｃ７０）Ｙを有し、式中、Ｙは、任意選択でその極で又はその極の近くで連結基を通じてＣｐに共有結合している親油性部分であり、Ｚは、任意選択で前記Ｙの反対の極で又はその極の近くで連結基を通じてＣｐに共有結合している親水性部分であり、前記親油性部分Ｙは合成フラーレン分子を脂質膜に繋ぎ止めることができる。
【００２５】
別の実施形態では、両親媒性又は親油性の合成的に修飾されたフラーレン分子は、式Ｚｍ−Ｆ−Ｙｎを有することができる
［式中、Ｆは式Ｃｐのフラーレンであり、ｐ＝６０〜２００炭素、好ましくはｐ＝６０又は７０を有し、
ｍ＝１〜５で、各Ｚは基ＡｒＢｓであり、ｒ＝１〜４、ｓ＝１〜４であり、Ａは、１つ又は複数のリンカーＢを通じてフラーレンに結合された１つ又は複数の親水性又は極性基であり、
ｎ＝１〜５で、各Ｙは基ＤｔＥｖであり、ｔ＝１〜４、ｖ＝１〜４で、Ｅは、１つ又は複数のリンカーＤを通じてフラーレンに結合された１つ又は複数の親油基であり、
Ｘ及びＹはＦの対極に又は対極の近くに位置している］。
【００２６】
ある種の実施形態では、両親媒性又は親油性の合成的に修飾されたフラーレンは、フラーレンのエクアトリアル帯近くのラジカル除去ゾーンがリン脂質二重層内部に又はそれにごく接近して位置するように、フラーレン分子を細胞のリン脂質二重層内部に位置させることができる幾何学的配置を有する。
【００２７】
複数のそのような合成的に修飾されたフラーレン分子は、リポソーム内などのリン脂質内で均一に分散させることができる。本明細書に記載される両親媒性フラーレン分子は、一般に、単独では小胞を形成しないが、小胞を形成するためには、膜形成リン脂質を１：１（脂質対フラーレン付加体）より大きいモル比で必要とする。
【００２８】
本明細書に記載される方法は、式
Ｚ’ｍ−Ｆ−Ｙ’ｎ
の親水性又は両親媒性の合成的に修飾されたフラーレンも包含する
［式中、Ｆは、式Ｃｐ又はＸ＠Ｃｐのフラーレンであり、前記フラーレンは、２つの対極、及びエクアトリアル領域を有し、
Ｃｐは、ｐ個の炭素原子を有するフラーレンケージを表し、Ｘ＠Ｃｐは、ケージ内部に化学基Ｘを有するそのようなフラーレンケージを表し、
Ｚ’及びＹ’は、Ｃｐのそれぞれの対極近くに位置しており、
ｍ＝１〜５であり、Ｚ’は親水性、親油性、又は両親媒性化学的部分であり、
ｎ＝１〜５であり、Ｙ’は親水性又は両親媒性化学的部分であり、
ｐ＝６０〜２００で、ｐは偶数であり、
Ｘは、存在する場合、任意選択で式Ｇｉ＝１〜３Ｈｋ＝３−ｉＮのトリニトリドの形態のフラーレン（Ｆ）内部の１つ又は複数の金属原子を表し、Ｇ及びＨは金属原子である］。
【００２９】
例示的な変化量では、ｐは６０から１２０までの偶数であり、ｐ＝６０〜９６がより一般的であり、ｐ＝６０又はｐ＝７０が好ましい。各化学的部分Ｚ’が式Ａ’ｒＢで構成されており、Ａ’は親水性、親油性又は両親媒性の化学的部分であり、ｒ＝１〜４であり、Ｂは前記Ａ’をフラーレンに連結する化学リンカーであり、各化学的部分Ｙ’は式ＤＥ’ｖで構成されており、Ｅ’は親水性又は両親媒性化学的部分であり、ｖ＝１〜４であり、Ｄは、化学的部分Ｙ’をフラーレンに連結する化学リンカーであるフラーレンを配置することができる。
【００３０】
別の実施形態では、親水性又は両親媒性の合成的に修飾されたフラーレン分子は、式Ｚ’（Ｃｐ）Ｙ’を有し、式中、ｐ＝６０〜２００炭素、好ましくはｐ＝６０又は７０であり、Ｙ’は、任意選択でその極で又はその極の近くで連結基を通じてＣｐに共有結合している親水性又は両親媒性部分であり、Ｚ’は、任意選択で前記Ｙ’の反対の極で又はその極の近くで連結基を通じてＣｐに共有結合している親水性又は両親媒性部分である。
【００３１】
例示的な実施形態では、Ｚ’とＹ’は両方が両親媒性であり、Ｚ’とＹ’は両方が親水性であり、又はＺ’とＹ’のうちの１つが両親媒性で、もう１つは親水性である。他の実施形態では、Ｚ’は親油性でＹ’は親水性又は両親媒性である。
【００３２】
別の実施形態では、親水性又は両親媒性の合成的に修飾されたフラーレン分子は、式Ｚ’（Ｃ７０）Ｙ’を有し、式中、Ｙ’は、任意選択でその極で又はその極の近くで連結基を通じてＣ７０に共有結合している親水性又は両親媒性部分であり、Ｚ’は、任意選択で前記Ｙ’の反対の極で又はその極の近くで連結基を通じてＣ７０に共有結合している親水性又は両親媒性部分である。
【００３３】
例示的な実施形態では、フラーレンは、化合物５（図３参照）又は化合物７（図４参照）などの、化合物５、１３、１９、７、１０及び１２のうちのいずれか１つ又は複数を含む。本例では、化合物５及び７はＣ７０を含む。他の実施形態では、フラーレンは、図面、たとえば、図７〜９に示される追加の化合物のうちの１つ又は複数を含む。
【００３４】
適切なフラーレンは、これと共に同時に出願された以下の同時係属ＰＣＴ出願にも記載されている：その開示全体が参照により本明細書に組み込まれている、代理人整理番号１０３４１３６−００００６２、表題「発毛を増強し刺激するためのフラーレンの使用（ＵＳＩＮＧ  ＦＵＬＬＥＲＥＮＥＳ  ＴＯ  ＥＮＨＡＮＣＥ  ＡＮＤ  ＳＴＩＭＵＬＡＴＥ  ＨＡＩＲ  ＧＲＯＷＴＨ）」、代理人整理番号１０３４１３６−００００６３、表題「フラーレンを投与することにより掻痒症を治療するための方法（ＭＥＴＨＯＤＳ  ＦＯＲ  ＴＲＥＡＴＩＮＧ  ＰＲＵＲＩＴＵＳ  ＢＹ  ＡＤＭＩＮＩＳＴＥＲＩＮＧ  ＦＵＬＬＥＲＥＮＥＳ）」、代理人整理番号１０３４１３６−００００６５、表題「動脈プラークの蓄積を抑制するための方法（ＭＥＴＨＯＤ  ＦＯＲ  ＩＮＨＩＢＩＴＩＮＧ  ＴＨＥ  ＢＵＩＬＤ−ＵＰ  ＯＦ  ＡＲＴＥＲＩＡＬ  ＰＬＡＱＵＥ）」、及び代理人整理番号１０３４１３６−００００６６、表題「フラーレンを投与することにより創傷を治療するための方法（ＭＥＴＨＯＤＳ  ＦＯＲ  ＴＲＥＡＴＩＮＧ  ＷＯＵＮＤＳ  ＢＹ  ＡＤＭＩＮＩＳＴＥＲＩＮＧ  ＦＵＬＬＥＲＥＮＥＳ）」。
【００３５】
「薬学的に許容可能な塩」とは、その塩が当技術分野でよく知られている種々の有機及び無機の対イオンに由来し、ほんの一例として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウムなど、並びに、分子が塩基性の官能基を含有する場合は、塩酸塩、臭化水素酸、酒石酸、メシル酸、酢酸、マレイン酸、シュウ酸などの有機又は無機酸の塩を含む、薬学的に許容可能なフラーレンの塩のことである。
【００３６】
用語「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」などは、一般に、目的の薬理学的生理学的効果を得ることを意味し、被験体が治療を受けている理由となる炎症状態の完全な除去の他にもどんな臨床的に又は定量的に測定可能な減少にも言及するために本明細書では使用される。「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、障害の発症を予防する又は障害の病態若しくは症状を変化させる目的で実施される治療介入のことである。したがって、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、治療処置と予防的又は防止的処置の両方のことである。「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、緩和療法として特定してもよい。さらに具体的には、炎症性障害を有する被験体を治療するために使用される本明細書に記載されるフラーレンは、障害を予防する（すなわち、障害に曝される若しくは罹りやすいが、まだ障害の症状を経験して若しくは示していない哺乳動物において、障害の発症若しくは出現を抑制し且つ／若しくは障害の臨床症状を発症させない）、障害を抑制する（すなわち、障害の発症若しくはその臨床症状を停止する若しくは抑える）、又は障害を軽減する（すなわち、障害若しくはその臨床症状を退行させる）治療有効量で提供される。治療を必要とする被験体には、すでに１つ又は複数の炎症性障害を有する被験体、並びに１つ又は複数の炎症性障害を予防するべきである被験体が挙げられる。
【００３７】
「それを必要とする被験体」とは、本明細書に記載される治療方法から利益を得ることができると考えられる任意の被験体又は個体のことである。ある種の実施形態では、それを必要とする被験体とは、１つ若しくは複数の炎症性障害の発症の傾向がある被験体、１つ若しくは複数の炎症性障害を有するがどんな臨床症状も示していない被験体、又は１つ若しくは複数の炎症性障害を有し前記１つ若しくは複数の炎症性障害の症状に苦しんでいる被験体である。「それを必要とする被験体」とは、哺乳動物などの脊椎動物である。哺乳動物には、ヒト、他の霊長類、齧歯動物（すなわち、マウス、ラット、及びハムスター）、家畜、スポーツ動物並びに愛玩動物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。一実施形態では、被験体はヒトなどの哺乳動物である。ある種の実施形態では、前記方法は実験動物に、獣医学的適用に、及び／又は疾患の動物モデルの開発に利用を見出す。
【００３８】
本明細書で使用されるように、被験体にフラーレンを「投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」又は「導入する（ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ）」という用語は、被験体にフラーレンを提供することを意味する。被験体へのフラーレンの投与方法には、全身投与（たとえば、静脈内注射、非経口内注射、吸入、経皮送達、経口送達、経鼻送達、直腸送達など）及び／又は局所投与（たとえば、標的組織への直接注射、カニューレを介した組織への送達、持続放出物質の埋め込みによる標的組織への送達、又はクリーム、ローションなどの局所的組成物を介した皮膚を通じた送達）、ポンプなどによる組織への送達、骨内、脳脊髄液でなどを含むが、これらに限定されるものではない、いくつかの都合のよい手段のいずれかが挙げられる。「経口送達」とは、薬学的に許容可能な担体及び／又は希釈剤でなど、経口剤型での投与のことである。経口送達は、薬物の経口摂取、並びに薬物の経口強制投与を含む。追加の投与様式には、口腔、舌下、膣内、皮下、筋肉内、又は皮内投与が挙げられる。
【００３９】
投与様式は、持続放出並びに／又は制御放出薬物送達製剤及び／若しくは装置を介した送達を含むことができる。「持続放出」とは、従来の薬物製剤の経口投与により実現される時間と比べて長期間にわたり体循環に薬物又はその活性代謝物を放出することである。「制御放出」とは、０次放出、すなわち、薬物が濃度とは無関係に長い時間をかけて放出することである。単回、複数、連続又は間欠投与を実施することができる。
【００４０】
一実施形態では、フラーレンを含む組成物は、関節リウマチなどの炎症性関節炎を有する被験体に経口投与される。別の実施形態では、フラーレンを含む組成物は、関節リウマチなどの炎症性関節炎を有する被験体の罹患関節に直接注入される。さらに別の実施形態では、フラーレンを含む組成物は、関節リウマチなどの炎症性関節炎を有する被験体の罹患関節の近位の皮膚に適用される局所製剤を介して投与される。
【００４１】
「治療有効量」又は「薬学的有効量」は、炎症性障害を治療するために被験体に投与される場合、前記障害に対するそのような治療を実施するのに十分であるフラーレンの量を意味する。したがって、「治療有効量」は、著しい有害作用を引き起こす可能性のある量を超えないうちに治療のために指示される量である。「治療有効量」は、フラーレンによって変化することになり、障害及びその重症度、並びに治療される被験体の年齢、体重、及び／又は臨床歴などの物理的及び生理的要因により決定されることにもなる。治療的処置の有効性を評価するための方法は、当業者には既知である。
【００４２】
投与される用量は、治療期間、投与頻度、宿主、並びに障害の性質及び重症度によって様々である。前記用量は、必要以上の量の実験をしなくても、当業者であれば決定することができる。フラーレンは、炎症性障害の目的の治療を提供するために、患者内に十分な投与量単位を確実に放出するのに十分な投与量濃度で投与される。活性成分は、約０．０１から約１００００ｎｇ／ｃｃのフラーレンのインビボ血漿濃度、たとえば、約０．０１から約１０００ｎｇ／ｃｃなどの、治療的又は予防的血液濃度を実現するように投与してもよい。「治療的又は予防的血液濃度」とは、処置動物における、疾患治療を実施する又は疾患の発症を妨げる若しくは疾患の重症度を軽減するのに十分な期間にわたり、薬物又はその活性代謝物の十分な濃度まで全身曝露することである。
【００４３】
たとえば、本明細書に記載される方法は、約０．０１から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日のフラーレン、約０．０１から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日のフラーレン、又は約３０ｍｇ／ｋｇ体重／日のフラーレンを提供する組成物を使用してもよい。しかし、提供される範囲から逸脱する投与量レベルも、所与の障害の治療に適している可能性があることは理解されるであろう。
【００４４】
フラーレンは、投与に適していればどんな形態でもよい。そのような投与可能な形態には、錠剤、緩衝錠剤、丸剤、カプセル、腸溶性カプセル、糖衣錠、カシェー、粉末、顆粒、エアロゾル、リポソーム、坐薬、クリーム、ローション、軟膏、皮膚用パッチ、非経口剤、トローチ剤、懸濁液、溶液及び乳濁液（水中油型若しくは油中水型）などの経口液剤、点眼液並びに注射液、又はその持続及び／若しくは制御放出型が挙げられる。望ましい用量は、持続注入により、又は持続及び／若しくは制御放出製剤により、一日中、一定間隔をおいて、数回増分して提供してもよく、ボーラス、舐剤又はペースト剤として提示してもよい。
【００４５】
「実際の投薬計画」とは、患者が従うのに実際的である薬物投与の計画のことである。ヒト患者では、経口投与薬のための実際的な投薬計画は、１０ｇ／日未満の凝集用量である可能性が高い。
【００４６】
一実施形態では、フラーレンを含む医薬組成物又は製剤は、１つ又は複数の薬学的に許容可能な担体と混合することにより調製される。必要ならば、他の生成物を添加して、フラーレンの保存を最大にし、又は特定の送達法を最適化してもよい。さらに、本方法は、炎症性障害の治療に適した他の薬物と組み合わせた、本明細書に記載されるフラーレンを含む併用組成物の使用を含む。
【００４７】
「薬学的に許容可能な担体」又は「希釈剤」は、一般に安全であり、生物学的にもその他の点でも望ましくないものではなく、有毒でも他の点でも許容できないものではなく妥当な利益／危険比と釣り合いがとれており、製剤の他の成分と適合性がある医薬組成物を調製するのに有用である担体を意味し、獣医学的用途にもヒト薬学的用途にも許容可能な担体を含む。本明細書及び特許請求の範囲において使用される「薬学的に許容可能な担体」は、１つのそのような担体と２つ以上のそのような担体の両方を含む。
【００４８】
「薬学的に許容可能な担体」には、フラーレンを含む組成物の医薬的投与と適合性のある、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌及び抗真菌生薬剤、等張性及び吸収遅延薬剤などが挙げられる。そのような担体又は希釈剤の例には、水、生理食塩水、リンゲル液及びブドウ糖液が挙げられるが、これらに限定されるものではない。医薬組成物の量は、医療専門家が決定する個々の患者に対する目的とする投与様式、及び安全量に基づく。
【００４９】
本開示は、炎症性疾患を治療するための本明細書に記載されるフラーレンのうちのいずれか１つ又は複数の使用に関する。本開示は、薬物、特に炎症性疾患を治療するための薬物を製造するための、本明細書に記載されるフラーレンのうちのいずれか１つ又は複数の使用にも関する。
【００５０】
本明細書で論じられる出版物は、本出願の出願日より前のその開示についてのみ提供される。本明細書において、本開示が、事前開示という理由でそのような出版物に先行する資格がないことを認めたものとして解釈されるべきではない。さらに、提示された公表日は実際の公表日とは異なることがあり、これは独立して確認する必要がある可能性がある。本明細書に引用されるすべての出版物、特許、特許出願及び他の参考文献は、参照により本明細書に組み込まれるものとする。
【００５１】
本開示は、そのある種の実施形態に関連して詳細に記載されているが、本開示の範囲から逸脱することなく、種々の変更を加えることが可能であり、同等のものを用いることが可能であることは当業者には明らかであろう。さらに、以下の例は、本明細書に記載される方法を例示するものであり、決して前述の開示を限定するものと見なされるべきではない。
【実施例】
【００５２】
（例１）
図３に描かれている両親媒性フラーレン誘導体（化合物５；図２ではＬｎＷ００４２と表示されている）の調製
ステップ１．ジドデシルマロネート（図３における化合物１）の合成
１０ｍｍｏｌｅのドデシルアルコールを３０ｍＬの乾燥ジクロロメタン（ＤＣＭ）に溶解し、これに１２ｍｍｏｌｅのトリエチルアミン（ＴＥＡ）を添加し、窒素雰囲気下で攪拌した。次に、５ｍｍｏｌｅのマロニルクロライドを１ｍｌの乾燥ＤＣＭに溶解し、１０分の時間内に上記溶液に液滴で添加した。マロニルクロライドの添加が完了すると、反応混合液を数時間攪拌し、ＴＬＣでモニターした。反応が完了すると、反応混合液を鹹水で２度洗浄し、混合有機相はＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、１〜２ｍＬまで濃縮した。シリカゲルを用いたフラッシュカラムを使用して、溶媒としてＤＣＭで生成物を精製した。収率：８５％。
【００５３】
ステップ２．Ｃ７０モノ付加体（図３における化合物２）の合成
８４０ｍｇ（１．０ｍｍｏｌｅ）のＣ７０を５０ｍＬのｏ−キシレンに溶解し、３分間超音波処理し、次に、４００ｍＬのトルエンを添加した。次に、１．０ｍｍｏｌｅのマロネート１を添加して、全混合液を攪拌し、これに１．０ｍｍｏｌｅのヨウ素（ＭＷ＝２５４Ｄａ）を添加した。１０分間攪拌した後、ＤＢＵ（２．５ｍｍｏｌｅ、ＭＷ＝１５１Ｄａ、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン）のトルエン溶液２０ｍＬを１５分の時間をかけて混合液に添加し、２時間攪拌した。反応の進行は、トルエン／ヘキサン比３：７のＴＬＣでモニターした。反応が完了すると、生成物は１０ｍＬまで濃縮し（乾固までではない）、３０ｍＬのヘキサンを添加して希釈した。次に、精製のために混合液をシリカゲルカラム上に充填した。トルエン／ヘキサン比３：７の溶媒混合液を使用して、未反応Ｃ７０（第１バンド）を、次に生成物（第２バンド）を溶出し、次にこれを回転蒸発させ、その後ＮＭＲ及びＭＡＬＤＩ−ＭＳ前に一晩真空下でポンピングした。収率：６０％。
【００５４】
ステップ３．化合物５の合成
１２７．８ｍｇ（０．１ｍｍｏｌｅ）のＣ７０モノ付加体２（ＭＷ＝１２７８）を６０ｍＬのトルエンに溶解した。次に、０．１ｍｍｏｌｅのマロネート４（例２の詳細な合成を参照）を添加し全混合液を攪拌し、これに０．１ｍｍｏｌｅのヨウ素（ＭＷ＝２５４Ｄａ）を添加した。１５分間攪拌した後、ＤＢＵ（０．２５ｍｍｏｌ、ＭＷ＝１５１Ｄａ）のトルエン溶液１０ｍＬを１０分の時間をかけて混合液に添加し、２時間攪拌した。反応の進行は、ＤＣＭ又はトルエン／ＥＡ（９８：２）のＴＬＣでモニターした。完了すると、混合液を１０ｍＬまで濃縮し（乾固までではない）、精製のためにシリカゲルカラム上に充填した。トルエンを使用して、先ず未反応Ｃ７０モノ付加体（第１バンド）を、次に生成物（第２バンド）を溶出し、次にこれを回転蒸発させ、その後ＮＭＲ及びＭＡＬＤＩ−ＭＳ前に一晩真空下でポンピングした。収率：６０％。得られたＡＬＭのｔ−ブチルエステルは、ＤＣＭとＴＦＡ（ｖ：ｖ  ３：１）に２０ｍｇ／ｍＬで溶解し、室温で６時間攪拌した。溶媒は一晩真空下で蒸発乾燥させ、最終生成物ＡＬＭを定量的に生成させ、これをＭＡＬＤＩ−ＭＳとＮＭＲにより特徴づけをした。
【００５５】
（例２）
図４に描かれたＣ７０−テトラグリコール酸（ＴＧＡ又は化合物７；図１では「ＬｎＷ００４８」と表示されている）の調製
ステップ１．ジ（ｔ−ブチルアセトキシ）マロネート（図４における化合物４）の合成
ジオキサン中のマロネート（４０．０ｍｍｏｌ、４．１６ｇ）の溶液に１１．１ｍＬのＴＥＡ（８０．０ｍｍｏｌ）を添加した。混合液を３０分間攪拌し、次に１２ｍＬのジオキサン中１１．８ｍＬ（８０．０ｍｍｏｌ）のｔ−ブチルブロモアセトートを添加し週末にかけて攪拌した。反応の進行は完了するまでＴＬＣでモニターした。沈殿物を濾過しエーテルで洗浄した。次に、濾液を鹹水で２度洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ＮＭＲ分析のために濃縮した。収率：７５％。
【００５６】
ステップ２．Ｃ７０テトラグリコール酸ｔ−ブチルエステル（図４における化合物６）の合成
８４０ｍｇ（１．０ｍｍｏｌｅ）のＣ７０を５０ｍＬのｏ−キシレンに溶解し、３分間超音波処理し、次に、２００ｍＬのトルエンを添加した。次に、２．０ｍｍｏｌｅのマロネート４を添加して、全混合液を攪拌し、これに２．０ｍｍｏｌｅのヨウ素を添加した。１０分間攪拌した後、ＤＢＵ（５．０ｍｍｏｌｅ、ＭＷ＝１５１Ｄａ、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン）のトルエン溶液２０ｍＬを１５分の時間をかけて混合液に添加し、８時間攪拌した。ＴＬＣを使用して反応の進行をモニターした。反応が完了すると、混合液を４０ｍＬまで濃縮し、精製のためにシリカゲルカラム上に充填した。トルエンを使用して、未反応Ｃ７０を除去し、次にＤＣＭを使用してモノ付加体を除去した。最後に、ＥＡとＤＣＭの混合液を使用して生成物を溶出し、これを回転蒸発させ、ＮＭＲ及びＭＡＬＤＩ−ＭＳのために一晩真空ポンピングした。収率：７０％。
【００５７】
ステップ３．Ｃ７０テトラグリコール酸（化合物７）の合成
ｔ−ブチルエステル前駆体６をＤＣＭに２０ｍｇ／ｍＬで溶解し、同量のＴＦＡを添加し、一晩攪拌した。ＴＦＡは蒸発により除去し水洗浄した。次に、ＤＣＭ層を乾燥させて、純粋なＴＧＡ生成物を得た。収率：定量的
【００５８】
（例３）
７Ｃ７０−テトライノシトール（図５における化合物１０）の調製
ステップ１．保護イノシトールマロネート（図５における化合物８）の合成
１０ｍｍｏｌｅの１，２；５，６−ビス−Ｏ−（１−メチルエチレン）−３−メチル−１Ｄ−カイロ−イノシトールを５０ｍＬの乾燥ＤＣＭに溶解し、これに１２ｍｍｏｌｅのＴＥＡを添加し、窒素下で攪拌した。次に、５ｍｍｏｌｅのマロニルクロライドを１ｍｌの乾燥ＤＣＭに溶解し、１０分の時間内に上記溶液に液滴で添加した。添加が完了すると、反応混合液を６時間攪拌した。完了すると、反応混合液を鹹水で２度洗浄し、混合有機相はＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し１〜２ｍＬまで濃縮した。シリカゲルを用いたフラッシュカラムを使用して、溶媒としてＤＣＭ中２０％ＥＡで生成物を精製した。生成物は無色の粘稠液であった。収率：５５％。プロトン及び炭素ＮＭＲでその構造を確認した。
【００５９】
ステップ２．保護されたＣ７０−テトライノシトール−アセタール（図５における化合物９）の合成
８４ｍｇ（０．１ｍｍｏｌｅ）のＣ７０を６０ｍＬのトルエンに溶解した。次に、０．２ｍｍｏｌｅのマロネート８を添加して、混合液を攪拌し、これに０．２ｍｍｏｌｅのヨウ素を添加した。１５分間攪拌した後、ＤＢＵ（０．５０ｍｍｏｌ）のトルエン溶液１０ｍＬを１０分の時間をかけて混合液に添加し、６時間攪拌した。反応が完了すると、反応混合液を１０ｍＬまで濃縮し、精製のためにシリカゲルカラム上に充填した。先ずＤＣＭを使用して、未反応Ｃ７０とそのモノ付加体を溶出させ、次に溶媒をＤＣＭ／ＥＡに変えて生成物を溶出し、これを回転蒸発させ、ＮＭＲ及びＭＡＬＤＩ−ＭＳの前に一晩真空下でポンピングした。
【００６０】
ステップ３．Ｃ７０−テトライノシトール（図５における化合物１０）の合成
５０ｍｇの得られたオクタキス−アセタール保護前駆体化合物９を、ジオキサン中４．０Ｍハイドロクロライド溶液２０ｍＬ中に溶解した。数滴の水を添加して３０時間攪拌した。完全な脱保護が実現された。溶媒を完全に除去し、一晩真空下で乾燥させて純粋な最終生成物を得、ＮＭＲ及びＭＡＬＤＩ−ＭＳでデータを確認した。
【００６１】
（例４）
Ｃ７０−ＴＥＧ酸（図６において化合物１２又はＴＴＡとして描かれている）の調製
ステップ１．ジ（ｔ−ブチルＴＥＧプロピオン酸）マロネート１１の合成
１０ｍｍｏｌｅのｔ−ブチル１２−ヒドロキシ−４，７，１０−トリオキサドデカノエートを５０ｍＬの乾燥ＤＣＭに溶解し、これに１２ｍｍｏｌｅのＴＥＡを添加し、窒素下で攪拌した。次に、５ｍｍｏｌｅのマロニルクロライドを１ｍｌの乾燥ＤＣＭに溶解し、液滴で１０分の時間内に上記溶液に添加した。添加が完了すると、反応混合液を４時間攪拌した。完了すると、反応混合液を鹹水で２度洗浄し、混合有機相はＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、１〜２ｍＬまで濃縮した。シリカゲルを用いたフラッシュカラムを使用して、溶媒としてＤＣＭ／ＥＡで生成物を精製した。収率：８５％。プロトン及び炭素ＮＭＲで構造を確認した。
【００６２】
ステップ２．Ｃ７０−ＴＥＧ酸１２の合成
８４ｍｇ（０．１ｍｍｏｌｅ）のＣ７０を６０ｍＬのトルエンに溶解した。次に、０．２ｍｍｏｌｅのマロネート１１を添加して、混合液を攪拌し、これに０．２ｍｍｏｌｅのヨウ素を添加した。１５分間攪拌した後、ＤＢＵ（０．５０ｍｍｏｌ）のトルエン溶液１０ｍＬを１０分の時間をかけて混合液に添加し、６時間攪拌した。反応が完了すると、反応混合液を１０ｍＬまで濃縮し、精製のためにシリカゲルカラム上に充填した。ＤＣＭを使用して、先ず未反応Ｃ７０とそのモノ付加体を溶出させ、次に溶媒をＤＣＭ／ＥＡに変えて生成物を溶出し、これを回転蒸発させ、ＮＭＲ及びＭＡＬＤＩ−ＭＳの前に一晩真空下でポンピングした。収率：７０％。得られたＣ７０ＴＥＧ酸のｔ−ブチルエステルは、ＤＣＭとＴＦＡ（ｖ：ｖ  ３：１）に２０ｍｇ／ｍＬで溶解し、室温で８時間攪拌した。溶媒は一晩真空下で蒸発乾燥させ、最終生成物Ｃ７０ＴＥＧ酸を定量的に生成させ、これをＭＡＬＤＩ−ＭＳとＮＭＲにより特徴づけをした。
【００６３】
（例５）
フェニルプロピオン酸−トリアゾール−混合マロネートアミド―Ｃ７０−ＴＥＧ―ＣＯＯＨ（化合物１９（図１０））の調製
ステップ１．２−（４−アジドメチルフェニル）−プロピオン酸（図１０における化合物１４）の合成
１，４−ジオキサン中の２−（４−ブロモメチルフェニル）−プロピオン酸（１．５ｇ）の溶液にＮａＮ３（５ｇ）と１５−クラウン−５（１００ｍｇ）を添加した。混合液を１６時間で８０℃まで加熱し、その後冷却した。溶媒は減圧下で除去し、残渣はシリカ上のクロマトグラフにかけ、純白ではない白色固体として、２−（４−アジドメチルフェニル）−プロピオン酸を生成した。
【００６４】
ステップ２．アセチレンマロネート（化合物１５）の調製
エトキシマロニルクロライドの別個の溶液に、トリエチルアミン及びプロパルギルアミンを等モル当量添加した。混合液を２０分間攪拌し、カラムクロマトグラフィーにより精製した。
【００６５】
ステップ３．トリアゾールプロピオン酸（化合物１６）の調製
アセチレンマロネート（１当量）、２−（４−アジドメチルフェニル）−プロピオン酸（１当量）、ＣｕＳＯ４（５ｍｏｌ％）、トリエチルアミン（５当量）、及びアスコルビン酸（５０ｍｏｌ％）の混合液を、文献に広く使用されている手順に従って１：１のＴＨＦ：水中で一晩攪拌した。溶媒は減圧下で除去し、残渣は酢酸エチルと水を使用して抽出した。酢酸エチル層は、カラムクロマトグラフィーによりさらに精製し、トリアゾール生成物を生成した。
【００６６】
ステップ４．ビス（ｔ−ブチルヒドロキシトリオキサドデカノエート（化合物１７）の調製
ビス（ｔ−ブチル１２−ヒドロキシ−４，７，１０−トリオキサドデカノエート）マロネートは、Ｉ２、ＤＢＵ、及びキシレン中のＣ７０を使用した反応により合成し、続いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
【００６７】
ステップ５．トリアゾールプロピオン酸マロンアミド（化合物１８）の調製
上記由来のＣ７０モノ付加体、Ｉ２、ＤＢＵ、及びトリアゾール含有マロンアミドを使用して、第２の付加体をＣ７０ケージに付加した。室温で窒素下での２０分間の反応後、反応液はシリカカラム上に注ぎ入れ、クロマトグラフィーにより精製した。
【００６８】
ステップ６．化合物１９の合成
最後に、ｔ−ブチルエステルの脱保護が、ＣＨ２Ｃｌ２中のトリフルオロ酢酸（１：１）との一晩の反応により実現された。揮発性物質は減圧下で除去され、生成物１９を生成した。
【００６９】
（例６）
マウス関節炎モデルにおけるフラーレン誘導体
疾患を誘導するため、１日目及び３日目に、Ｃ５７／Ｂ６（マウス５匹／檻／群）マウスに１００μｌの関節炎誘発性血清を腹腔内（ＩＰ）に注射した。フラーレン誘導体（２００〜２０００ｎｇ／１００μｌリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ））を、０日目、２日目、及びその後は１日おきにＩＰ注射した。対照として、１００μｌの無血清ＰＢＳを対照群に注射した。それぞれの足首の腫脹は、記載されている臨床指数に沿って測定した（Ｌｅｅ，ＤＭ，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００２  Ｓｅｐ６；２９７（５５８７）：１６８９−９２）。測定は、注射薬の正体を知らされていない職員により一日おきに実施された。１４日後、マウスを屠殺し、組織学的検査のために足首部分を取り出し、サイトカイン分析のために血清を得た。エラーバーはＳＥＭを表す。図１Ａでは、臨床指数は（足あたり）観察された炎症の和として示され、０＝炎症の証拠なし、１＝わずかな炎症（中足骨指骨関節、個々の指骨、又は局所的浮腫）、２＝腫脹が簡単に確認されるが、足の背側又は腹側表面のどちらかに局在している）、及び３＝足のすべての面の腫脹。最大スコア＝１２。図１Ｂでは、毎日の足首腫脹の測定値の和を示した。＊は、フラーレン無処置マウスと比べて、その日にフラーレン処置マウスに有意差が観察されたことを示している。
【００７０】
腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）は、炎症性関節炎の主媒介物質である。いくつかの臨床試験により、エタネルセプト（商標名ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）でＡｍｇｅｎとＷｙｅｔｈから共同販売されている）、インフリキシマブ（商標名ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）でＣｅｎｔｏｃｏｒから販売されている）、及びアダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）としてＡｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ、Ｕ．Ｓ．Ａ．から販売されている）などのＴＮＦ−α遮断薬が、炎症性関節炎に付随する病的状態を著しく軽減させることが明らかにされている。図２に見られるように、１４日目の血清中のＴＮＦ−αは、フラーレン誘導体で処置されたマウスでは著しく抑制されていた。これらの結果は、フラーレン誘導体が、おそらくＴＮＦ−αの抑制を通じて、炎症性関節炎を抑制できることを実証している。
【００７１】
注射に先立って、５は、１：２の比で卵ホスファチジルコリン（ＰＣ）を有するリポソームに取り込んだ。７は、ｐＨ７．４のＰＢＳ緩衝液に溶解した。
【００７２】
図１では、ＬＮＷ００４２は化合物５（たとえば、図３参照）のことであり、ＬＮＷ００４８は化合物７（たとえば、図４参照）のことである。
【００７３】
マウス関節炎モデルは、ヒトの関節リウマチの特徴を多く有する疾患の発症により特徴づけられる。図１及び２に見られるように、異なるフラーレン製剤が炎症性関節炎を抑制した。関節炎誘発性血清移行後、ＰＢＳ処置マウスは、臨床指数及び定量的足首腫脹測定値を使用して決定される典型的な臨床関節炎を示した。これとは対照的に、フラーレン誘導体で処置されたマウスは、臨床指数でも足首腫脹測定値でも共に著しい抑制を実証した。炎症は６日目から１４日目までに５によって著しく抑制された（ｐ＜０．０４）。１４日目、濃度２００ｎｇ／１００μｌ又は２０００ｎｇ／１００μｌの両方がｐ＜０．０００１であった。さらに、２００ｎｇ／１００μｌ  ７では、炎症は６日目から１２日まで著しく抑制され（ｐ＜０．０３）、２０００ｎｇ／１００μｌ  ７では、炎症は１０日目から１４日目まで著しく抑制された（ｐ＜０．０２）。
【００７４】
（例７）
培養マスト細胞におけるＴＮＦ−α抑制
マスト細胞（ＭＣ）は、免疫応答の構成要素である。したがって、ヒトマスト細胞の培養物を、異なるフラーレン誘導体の活性をスクリーニングするために使用して、動物モデルにおけるその潜在的活性を評価することができる。本例では、ヒト皮膚から抽出されたマスト細胞を培養した。培養物は幹細胞因子を有するＸ−ＶＩＶＯ１５（商標）培地で最長２ヶ月間維持し、１００％皮膚マスト細胞（「ＳＭＣ」）であった。
【００７５】
ＳＭＣは、新鮮な培養液（サイトカインなし）に懸濁し、フラーレン５（ＡＬＭ）、７（ＴＧＡ）、１０（テトライノシトール）、１２（ＴＴＡ）及び１９（プロピオン酸）と共に又はなしで、６％ＣＯ２インキュベータ中３７℃で一晩インキュベートした。次の日の朝、細胞を、６％ＣＯ２インキュベータ中３７℃で３０分間（β−ヘキソサミニダーゼ）又は一晩（サイトカインＧＭ−ＣＳＦ及びＴＮＦ−α）ＦｃεＲＩ  Ａｂ（１μｇ／ｍｌ）で刺激した。β−ヘキソサミニダーゼ放出の割合は、上清中のβ−ヘキソサミニダーゼの量を、上清と細胞沈渣中で検出される全量で割ることにより決定した。ＴＮＦ−α又はＧＭ−ＣＳＦ分泌は標準ＥＬＩＳＡにより測定した。一部の実験では、細胞由来の溶解物を、種々の抗体を使用したウェスタンブロット法のために調製した。
【００７６】
マスト細胞サイトカイン産生に対するフラーレンのインビトロ効果を評価するために、細胞をフラーレン誘導体と共に１６時間インキュベートし、次に、α−ＦｃεＲＩ  Ａｂで一晩刺激した。未処置のＭＣは、それぞれ、ほぼ９００ｐｇ／ｍｌと２００ｐｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦとＴＮＦ−αサイトカインを分泌した。図３（５）、図４（７又は「ＴＧＡ」）、図５（１０）、図６（１２）、図８（１３）及び図１０（１９）に描かれたフラーレン誘導体は、ＴＮＦ−α分泌を著しく抑制した。これらのうち、７及び１０は、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を６０％以上減少させた。ＴＮＦ−α放出はそれほど著しく減少することはなかったが、化合物７及び１０は３０％から４０％の間で検出可能な量を減少させた。これらの実験からの思いがけない結果は、テトライノシトール誘導体１０はマスト細胞の脱顆粒を抑制しなかったが、サイトカイン放出の遮断では強力であることを示していた。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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