(57)【要約】  本発明は、凍結乾燥サイクルのロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）を評価し、最適化する方法を提供する。特に、本発明は、比較的少数のパラメータを変更することによって、様々な凍結乾燥プロセス偏りに対するサイクルのロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）の迅速な評価を提供する。    【図１】 2011526356.tif 000006
2011526356.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
凍結乾燥サイクルのロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）を評価する方法であって、
（１）対照サイクルを決定するステップ、
（２）ある数の偏り駆動型サイクル(ｄｅｖｉａｔｉｏｎ−ｄｒｉｖｅｎ  ｃｙｃｌｅ)を実行するステップであって、前記偏り駆動型サイクル(ｄｅｖｉａｔｉｏｎ−ｄｒｉｖｅｎ  ｃｙｃｌｅ)の数が９未満であるステップ、
（３）実行された各偏り駆動型サイクル(ｄｅｖｉａｔｉｏｎ−ｄｒｉｖｅｎ  ｃｙｃｌｅ)からの凍結乾燥生成物を対照サイクルの凍結乾燥生成物と比較するステップ、および
（４）ステップ（３）からの比較結果に基づいて凍結乾燥サイクルのロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）を評価するステップ
を含む方法。
【請求項２】
前記偏り駆動型サイクル(ｄｅｖｉａｔｉｏｎ−ｄｒｉｖｅｎ  ｃｙｃｌｅ)の数が２である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ステップ（３）が、前記凍結乾燥生成物の分解速度を比較することを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記分解速度が、安定性表示アッセイによって決定される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記分解速度が、サイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥ−ＨＰＬＣ）によって決定される、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
ステップ（３）が、前記凍結乾燥生成物のケーク品質を比較することを含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ケーク品質が、水分測定および／または粉体変調示差走査熱量測定（ＭＤＳＣ）によって決定される、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ステップ（１）が、対照凍結乾燥サイクルを最適化することを含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記偏り駆動型サイクル(ｄｅｖｉａｔｉｏｎ−ｄｒｉｖｅｎ  ｃｙｃｌｅ)が、１種または複数の生成物パラメータを変更するように設計されている、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記１種または複数の生成物パラメータが、生成物温度を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記１種または複数の生成物パラメータが、生成物の残留水分を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記偏り駆動型サイクルが、棚温度、圧力、乾燥時間、およびそれらの組合せからなる群から選択されるプログラム可能なサイクルパラメータからの偏りを有するサイクルを含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記偏り駆動型サイクルが、一次乾燥中の棚温度または圧力の上昇、棚温度、圧力、または時間の低減に起因する不十分な一次乾燥の維持、短縮した二次乾燥時間、棚温度を低下させた二次乾燥、およびそれらの組合せからなる群から選択されるパラメータからの偏りを有するサイクルを含む、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記偏り駆動型サイクル(ｄｅｖｉａｔｉｏｎ−ｄｒｉｖｅｎ  ｃｙｃｌｅ)が、対照サイクルに比べて生成物温度を上昇させるために、一次乾燥中に上昇した棚温度または圧力を有するサイクルを含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
一次乾燥中に上昇した生成物温度が、対照サイクルでの一次乾燥中の最適化生成物温度を４〜１０℃上回る、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記偏り駆動型サイクル(ｄｅｖｉａｔｉｏｎ−ｄｒｉｖｅｎ  ｃｙｃｌｅ)が、一次乾燥ステップを改変または著しく変更したサイクルを含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記偏り駆動型サイクルが、二次乾燥ステップと同じ温度で行う一次乾燥を有するサイクルを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記偏り駆動型サイクルが、一次乾燥を省略したサイクルを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
増加した残留水分が、１．２〜４．５％水分の範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
増加した残留水分が、１．５〜３％水分の範囲である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記偏り駆動型サイクル(ｄｅｖｉａｔｉｏｎ−ｄｒｉｖｅｎ  ｃｙｃｌｅ)が、対照サイクルに比べて残留水分が増加したサイクルを含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記対照サイクル(ｄｅｖｉａｔｉｏｎ−ｄｒｉｖｅｎ  ｃｙｃｌｅ)が、０〜２％の残留水分を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記対照サイクル(ｄｅｖｉａｔｉｏｎ−ｄｒｉｖｅｎ  ｃｙｃｌｅ)が、０〜１％の残留水分を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記偏り駆動型サイクル(ｄｅｖｉａｔｉｏｎ−ｄｒｉｖｅｎ  ｃｙｃｌｅ)が、短縮した二次乾燥時間を有するサイクルを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記偏り駆動型サイクル(ｄｅｖｉａｔｉｏｎ−ｄｒｉｖｅｎ  ｃｙｃｌｅ)が、二次乾燥の維持を省略したサイクルを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記偏り駆動型サイクル(ｄｅｖｉａｔｉｏｎ−ｄｒｉｖｅｎ  ｃｙｃｌｅ)が、一次乾燥の完了時に停止させるサイクルを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記偏り駆動型サイクル(ｄｅｖｉａｔｉｏｎ−ｄｒｉｖｅｎ  ｃｙｃｌｅ)が、二次乾燥中に低下した棚温度を有するサイクルを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２８】
前記凍結乾燥サイクル(ｄｅｖｉａｔｉｏｎ−ｄｒｉｖｅｎ  ｃｙｃｌｅ)が、タンパク質のために開発されている、請求項１から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記タンパク質が、抗体もしくはその断片、成長因子、凝固因子、サイトカイン、融合タンパク質、医薬原薬、ワクチン、酵素、またはＳｍａｌｌ  Ｍｏｄｕｌａｒ  ＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（ＳＭＩＰ（商標））である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗体が、モノクローナル抗体または単一ドメイン抗体である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
請求項１に記載の方法を使用して凍結乾燥サイクルのロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）を評価するステップを含む、製造用の凍結乾燥サイクルを決定する方法。
【請求項３２】
請求項１から３１のいずれか一項に記載の方法によって評価した凍結乾燥サイクルを実行することを含む、凍結乾燥生成物を製造する方法。
【請求項３３】
請求項１から３２のいずれか一項に記載の方法によって評価した凍結乾燥サイクルを実行することを含む、早期臨床段階プロセスのための凍結乾燥生成物を提供する方法。
【請求項３４】
請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法を使用して、製造中のプロセス偏りの潜在的な生成物に対する影響を評価する方法。
【請求項３５】
請求項１から３４のいずれか一項に記載の方法を使用して、生成物製造用の凍結乾燥装置を評価する方法。
【請求項３６】
請求項１から３５のいずれか一項に記載の方法によって評価した凍結乾燥サイクルを使用して製造する凍結乾燥医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００８年６月２６日出願の米国仮特許出願第６１／０７６，１２９号に対する優先権を主張し、参照によりその全体を本明細書に援用する。
【背景技術】
【０００２】
凍結乾燥またはフリーズドライは、医薬品業界において生物材料および医薬材料の保存に広く使用されているプロセスである。凍結乾燥において、材料中に存在する水は、凍結ステップ中に氷に変化し、次いで、一次乾燥ステップ中に低圧条件下で直接昇華することによって材料から除去される。しかし、凍結中にすべての水が氷に変化するわけではない。水の一部は、例えば製剤成分および／または有効成分を含有する固体マトリックス中に閉じ込められている。マトリックス内の過剰な結合水は、二次乾燥ステップ中に所望の残留水分レベルまで減少させることができる。すべての凍結乾燥ステップ、すなわち凍結、一次乾燥、および二次乾燥により、最終生成物の性質が決定される。
【０００３】
現在の凍結乾燥のロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）方策は、種々のパラメータの要因設計、または統計学的に設計された実験を組み込んだものであり、一般に、様々なパラメータまたはパラメータの組合せを各々変化させる１２〜１５種のサイクルを含む。これは、非常に材料集約的な時間のかかるプロセスである。
【０００４】
一般に、凍結乾燥サイクルのロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）は、商業的凍結乾燥サイクルの後期段階の開発、検証、および支援向けの項目である。対照的に、臨床段階の材料は、より短い時間枠で、希にしか製造されない。入手できる材料は限られており、製造されるロット数が少ないので、バッチがなくなると臨床プログラムの費用がかかるために、ロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）は臨床段階の製品にとっても同様に重要である可能性がある。さらに、実験室用凍結乾燥サイクルを評価するための計画スケジュールおよび材料入手可能性は、ロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）への対処を目標とすることが好ましい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、凍結乾燥サイクルのロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）を評価するための新規で進歩性のある手法を提供する。特に、本発明は、少数のパラメータ（例えば、２種のパラメータ）を変更し、これらの変更に対する生成物の反応を監視するだけで、多種多様なプロセス偏りに対する凍結乾燥サイクルのロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）の迅速な評価を提供する。したがって、本発明は、特に早期段階の臨床製品に関して、現在の時間のかかる材料集約的な方法よりも優れた、顕著な改良および利点を提供する。
【０００７】
一態様では、本発明は、（１）対照サイクルを決定するステップ、（２）ある数の偏り駆動型（ｄｅｖｉａｔｉｏｎ−ｄｒｉｖｅｎ）サイクルを実行するステップであって、この偏り駆動型サイクルの数が９未満（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８サイクル）であるステップ、（３）実行された各偏り駆動型サイクルからの凍結乾燥生成物を対照サイクルの凍結乾燥生成物と比較するステップ、および（４）ステップ（３）からの比較結果に基づいて凍結乾燥サイクルのロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）を評価するステップを包含する、凍結乾燥サイクルのロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）を評価する方法を提供する。
【０００８】
いくつかの実施形態では、ステップ（１）は、対照凍結乾燥サイクルを最適化することを包含する。いくつかの実施形態では、偏り駆動型サイクルの数は２である。
【０００９】
いくつかの実施形態では、ステップ（３）は、凍結乾燥生成物の分解速度を比較することを包含する。いくつかの実施形態では、分解速度は、安定性表示アッセイによって決定される。いくつかの実施形態では、分解速度は、サイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥ−ＨＰＬＣ）によって決定される。
【００１０】
いくつかの実施形態では、ステップ（３）は、凍結乾燥生成物のケーク品質を比較することを包含する。いくつかの実施形態では、ケーク品質は、水分測定および／または粉体変調示差走査熱量測定（ＭＤＳＣ）によって決定される。
【００１１】
いくつかの実施形態では、偏り駆動型サイクルは、１種または複数の生成物パラメータを変更するように設計されている。いくつかの実施形態では、１種または複数の生成物パラメータは、生成物温度を包含する。いくつかの実施形態では、１種または複数の生成物パラメータは、生成物の残留水分を包含する。
【００１２】
いくつかの実施形態では、偏り駆動型サイクルは、棚温度、圧力、乾燥時間、およびそれらの組合せからなる群から選択されるプログラム可能なサイクルパラメータからの偏りを有するサイクルを包含する。
【００１３】
いくつかの実施形態では、偏り駆動型サイクルは、一次乾燥中の棚温度または圧力の上昇、棚温度、圧力、または時間の低減に起因する不十分な一次乾燥の維持、短縮した二次乾燥時間、棚温度を低下させた二次乾燥、およびそれらの組合せからなる群から選択されるパラメータからの偏りを有するサイクルを包含する。
【００１４】
いくつかの実施形態では、偏り駆動型サイクルは、対照サイクルに比べて生成物温度を上昇させるために、一次乾燥中に上昇した棚温度または圧力を有するサイクルを包含する。いくつかの実施形態では、一次乾燥中の上昇した生成物温度は、対照サイクルでの一次乾燥中の最適化生成物温度を４〜１０℃上回る。
【００１５】
いくつかの実施形態では、偏り駆動型サイクルは、一次乾燥ステップを改変または著しく変更したサイクルを包含する。いくつかの実施形態では、偏り駆動型サイクルは、二次乾燥ステップと同じ温度で行う一次乾燥を有するサイクルを包含する。いくつかの実施形態では、偏り駆動型サイクルは、一次乾燥を省略したサイクルを包含する。
【００１６】
いくつかの実施形態では、偏り駆動型サイクルは、対照サイクルに比べて残留水分が増加したサイクルを包含する。いくつかの実施形態では、増加した残留水分は、１．２〜４．５％水分の範囲である。いくつかの実施形態では、増加した残留水分は、１．５〜３％水分の範囲である。いくつかの実施形態では、対照サイクルは、０〜２％の残留水分を包含する。いくつかの実施形態では、対照サイクルは、０〜１％の残留水分を包含する。
【００１７】
いくつかの実施形態では、偏り駆動型サイクルは、短縮した二次乾燥時間を有するサイクルを包含する。いくつかの実施形態では、偏り駆動型サイクルは、二次乾燥の維持を省略したサイクルを包含する。いくつかの実施形態では、偏り駆動型サイクルは、一次乾燥の完了時に停止させるサイクルを包含する。いくつかの実施形態では、偏り駆動型サイクルは、二次乾燥中に低下した棚温度を有するサイクルを包含する。
【００１８】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、タンパク質を凍結乾燥するために開発されている。いくつかの実施形態では、適切なタンパク質として、抗体（例えば、モノクローナル抗体）またはその断片、成長因子、凝固因子、サイトカイン、融合タンパク質、医薬原薬、ワクチン、酵素、Ｓｍａｌｌ  Ｍｏｄｕｌａｒ  ＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（商標）（ＳＭＩＰ（商標））が挙げられる。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、完全ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、ＳｃＦｖ、単一ドメイン抗体（例えば、サメの単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲまたはその断片））、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体を包含するがそれらだけに限らない抗体または抗体断片を凍結乾燥するために開発されている。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、モノクローナル抗体を凍結乾燥するために開発されている。本発明の方法はまた、いくつか例を挙げると、核酸（例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ、またはＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッド、アプタマー）、化学化合物、低分子、天然物のためにも開発することができる。
【００１９】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の様々な方法を使用して凍結乾燥サイクルのロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）を評価するステップを包含する、製造用の凍結乾燥サイクルを決定する方法を提供する。
【００２０】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の様々な方法によって評価された凍結乾燥サイクルを実行することを包含する、凍結乾燥生成物を製造する方法を提供する。
【００２１】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の様々な方法によって評価した凍結乾燥サイクルを実行することを包含する、例えば、早期臨床段階プロセスのための凍結乾燥生成物を提供する方法を提供する。
【００２２】
さらに、本発明の方法は、製造中のプロセス偏りの潜在的な生成物に対する影響を評価するのに使用することができる。本発明の方法はまた、生成物製造用の凍結乾燥装置を評価するのに使用することもできる。
【００２３】
本発明はさらに、本発明による方法で評価した凍結乾燥サイクルを使用して製造する凍結乾燥医薬品を提供する。
【００２４】
本出願で使用する用語「約（ａｂｏｕｔ）」および「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、同等のものとして使用する。本出願で使用する約（ａｂｏｕｔ／ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）を伴うまたは伴わない任意の数字は、当業者によって理解される任意の通常の変動を包含することを意味する。例えば、対象の値の正常な変動としては、別段の指示がない、または文脈から明白でない限り、規定の基準値のいずれの方向（超または未満）にしても、２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、それ未満内にある一連の値を挙げることができる（このような数があり得る値の１００％を超える場合を除く）。
【００２５】
本発明の他の特徴、目的、および利点は、以下の詳細な説明において明らかである。しかし、この詳細な説明は、本発明の実施形態を示しているが、限定ではなく例示としてのみ提供するものであることを理解されたい。本発明の範囲内の様々な変更および改変は、詳細な説明から当業者には明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
図は、限定のためではなく、例示の目的だけのものである。
【００２７】
【図１】典型的な対照凍結乾燥サイクルを示す図である。
【図２】典型的な積極的凍結乾燥サイクルを示す図である。
【図３】積極的凍結乾燥サイクルと対照凍結乾燥サイクルとの間の一次乾燥温度プロフィールの典型的な比較を示す図である。
【図４】積極的サイクルが崩壊温度より低い状態を維持した場合の典型的な凍結乾燥ケークの外観を示す図である。
【図５】凍結乾燥分子Ｉ：部分的崩壊ケーク（積極的サイクル、左のバイアル）と損傷のないケーク（ベースラインサイクル、右のバイアル）に関するケーク外観の典型的な比較を示す図である。
【図６】典型的な高水分凍結乾燥サイクルを示す図である。
【図７】高水分凍結乾燥サイクルと対照凍結乾燥サイクルとの間の典型的な一次乾燥温度プロフィールの比較を示す図である。
【図８】典型的な熱電対オーバーレイ温度および予測温度を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明は、凍結乾燥サイクルのロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）を評価するための新規で進歩性のある方法を提供する。とりわけ、本発明は、少数のパラメータ（例えば、２種のパラメータ）を変更し、これらの変更に対する生成物の反応を監視するだけで、多種多様なプロセス偏りに対するサイクルのロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）の迅速な評価を提供する。
【００２９】
いくつかの実施形態では、本発明は、少数の偏り駆動型サイクルを効果的に設計し、実行し、各偏り駆動型サイクルからの凍結乾燥生成物を適切な対照または目標サイクルからの凍結乾燥生成物と比較することによって、凍結乾燥サイクルのロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）を評価する方法を提供する。
【００３０】
本明細書では、対照サイクルは、製造へのスケールアップのための目標サイクルを表す。一般に、安定性は、対照または目標サイクルを使用して凍結乾燥された材料のために設けられている。例えば、対照サイクルは、一般に、生成物を安定に凍結乾燥させるのに、ある温度（例えば、崩壊温度）よりかなり低く設計されている。
【００３１】
一般に、対照サイクルは、実験室においてフリーズドライプロセスを最適化するように設計されている。いくつかの実施形態では、最適なフリーズドライプロセスは、最小の費用で最高のタンパク質安定性を実現するプロセスである。一般に、対照サイクルの規定は、凍結、一次乾燥、および二次乾燥を包含するフリーズドライの様々な対照可能な段階の最適化を必要とする。例えば、対照サイクルの規定は、最適な冷却速度、凍結の温度および時間、目標生成物温度、チャンバー圧、棚温度、加熱速度およびチャンバー圧を包含する二次乾燥加熱条件、その棚温度および二次乾燥時間、ならびに残留水分を決定することを含む。対象の特定材料に適した対照サイクルは、当技術分野で公知の様々な方法によって決定することができる。例えば、典型的な方法および原理は、Ｔａｎｇら、（２００４）「Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｆｒｅｅｚｅ−Ｄｒｙｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｄｖｉｃｅ」、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２１：１９１〜２００に記載され、その内容を参照により本明細書に援用する。
【００３２】
製造のために対照サイクルをスケールアップしても、プロセス公差もばらつきも生じることはないであろう。凍結乾燥中、プロセスパラメータは、時にはかなりの期間、往々にして設定点から外れる。したがって、偏り駆動型サイクルは、凍結乾燥プロセスおよび生成物におけるこうした偏りの影響を評価するために開発されている。本明細書では、用語「偏り駆動型サイクル」は、生成物またはフリーズドライプロセスの、１種または複数のパラメータを変更するように設計された任意の凍結乾燥サイクルを指す。いくつかの実施形態では、偏り駆動型サイクルは、生成物温度または生成物残留水分を包含するがそれらだけに限らない１種または複数の生成物パラメータを変更するように開発されている。いくつかの実施形態では、偏り駆動型サイクルは、棚温度、圧力（例えば、チャンバー圧）、乾燥時間、一次乾燥終点、昇華速度、二次乾燥条件（例えば、加熱速度、チャンバー圧、棚温度、乾燥時間）を包含するがそれらだけに限らないプログラム可能なサイクルパラメータを変更するように開発されている。
【００３３】
いくつかの実施形態では、適切な偏り駆動型サイクルは、一次乾燥中に上昇した棚温度または圧力を有することができる。いくつかの実施形態では、適切な偏り駆動型サイクルは、棚温度、圧力、または時間の低減による不十分な一次乾燥の維持を有することができる。いくつかの実施形態では、適切な偏り駆動型サイクルは、短縮した二次乾燥時間、または低下した棚温度を有する二次乾燥を有することができる。いくつかの実施形態では、適切な偏り駆動型サイクルは、対照サイクルに比べて生成物温度を上昇させるために（例えば、対照サイクルでの一次乾燥中の最適化生成物温度を４〜１０℃上回る）、一次乾燥中に上昇した棚温度または圧力を有することができる。いくつかの実施形態では、偏り駆動型サイクルは、改変または著しく変更した一次乾燥ステップを有することができる。例えば、偏り駆動型サイクルは、二次乾燥ステップと同じ温度で行う一次乾燥を有することができる。いくつかの実施形態では、偏り駆動型サイクルは、一次乾燥を完全に省略することができる。
【００３４】
実施例の項に記載する非限定的な例として、本発明は、３種のサイクル、例えば、（１）対照サイクル、（２）積極的乾燥サイクル、および（３）高水分サイクルを実行して、凍結乾燥のロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）を評価することができた。積極的サイクルは、すべての乾燥を、２５〜３０℃、１００ｍＴｏｒｒのプロセス条件、すなわち目標二次条件で行なった。高水分サイクルは、水分結果が対照サイクルで観察されるより十分に高くなるように、一次乾燥の終結時（棚温度０℃）に停止させた。この３種のサイクルの例を、図１、２、および６に示している。積極的サイクルは、一次乾燥の維持を省略し、二次乾燥条件下ですべての凍結乾燥を行う。これによって、はるかに速く、より高温な乾燥になる。高水分サイクルは、二次乾燥の維持を省略することによって、水分量が上昇した材料、すなわち、予想されるより大規模な製造サイクルより高水分な材料を生じる。
【００３５】
一般に、凍結乾燥生成物は、ケークの品質および外観、生成物の品質分析、復元時間、復元の質、高分子量、水分、ならびにガラス転移温度に基づいて評価することができる。例えば、ケークの品質分析としては、水分測定および粉体ｍＤＳＣが挙げられる。一般に、生成物の品質分析としては、サイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥ−ＨＰＬＣ）、カチオン交換−ＨＰＬＣ（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）、Ｘ線回折（ＸＲＤ）、変調示差走査熱量測定（ｍＤＳＣ）、および当業者に公知の他の手段を包含するがそれらだけに限らない方法を使用する生成物分解速度分析が挙げられる。
【００３６】
本発明の方法は、タンパク質、ペプチド、核酸（例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ、またはＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッド、アプタマー）、化学化合物、小分子、原薬、天然物を包含するがそれらだけに限らない任意の材料のために開発されたどんな凍結乾燥サイクルの評価にも利用することができる。いくつかの実施形態では、本発明は、抗体（例えば、モノクローナル抗体）またはその断片、成長因子、凝固因子、サイトカイン、融合タンパク質、医薬原薬、ワクチン、酵素、Ｓｍａｌｌ  Ｍｏｄｕｌａｒ  ＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（商標）（ＳＭＩＰｓ）を包含するがそれらだけに限らないタンパク質に適した凍結乾燥サイクルの評価または決定に利用する。いくつかの実施形態では、本発明は、完全ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、ＳｃＦｖ、単一ドメイン抗体（例えば、サメの単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲまたはその断片））、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体を包含するがそれらだけに限らない抗体または抗体断片に適した凍結乾燥サイクルの評価または決定に利用する。
【００３７】
一般に、凍結乾燥される材料は、液体製剤で調製する。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、タンパク質製剤のために開発されている。いくつかの実施形態では、適切なタンパク質製剤は、対象のタンパク質を約１μｇ／ｍｌ〜１５０ｍｇ／ｍｌ（例えば、約１μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ〜１ｍｇ／ｍｌ、約２５μｇ／ｍｌ〜１ｍｇ／ｍｌ、約２５μｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜２５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ〜７５ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ）の範囲の濃度で含有する。いくつかの実施形態では、適切なタンパク質製剤は、対象のタンパク質を約１μｇ／ｍｌ、約２５μｇ／ｍｌ、約５０μｇ／ｍｌ、約７５μｇ／ｍｌ、約１００μｇ／ｍｌ、約１５０μｇ／ｍｌ、約２００μｇ／ｍｌ、約２５０μｇ／ｍｌ、約５００μｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約７５ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度で含有する。いくつかの実施形態では、適切なタンパク質製剤は、ショ糖、グリシン、塩化ナトリウム、ラクトース、およびマンニトールからなる群から選択される増量剤、ショ糖、トレハロース、アルギニン、およびソルビトールからなる群から選択される安定化剤、ならびに／またはトリス、ヒスチジン、クエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、およびコハク酸塩からなる群から選択される緩衝剤を含有する。
【００３８】
凍結乾燥は、チューブ、バッグ、ボトル、トレー、バイアル（例えば、ガラスバイアル）、または任意の他の適切な容器などの容器中で行うことができる。容器は、使い捨てでもよい。対照された凍結および／または解凍はまた、大規模でも小規模でも行うことができる。
【００３９】
本発明の方法は、商用規模凍結乾燥機、パイロット規模凍結乾燥機、または実験室規模凍結乾燥機などの様々な凍結乾燥機のために開発された凍結乾燥サイクルの評価に使用することができる。
【００４０】
上記の実施形態および以下の実施例は、限定ではなく例示として提供するものであることを理解されたい。本発明による凍結乾燥サイクルのロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）方策は、一般に任意の分子（例えば、タンパク質）に適用することができる。例えば、以下の実施例で使用する分子Ａ〜Ｉは、任意のタンパク質、抗体、核酸、化学化合物、ワクチン、酵素、小分子、または他の任意のタイプの分子とすることができる。本発明の範囲内の様々な変更および改変は、本発明の説明から当業者には明らかになるであろう。
【実施例】
【００４１】
（実施例１）
製剤および生成物評価
凍結乾燥前の液体状態の典型的な製剤は、約１０ｍＭヒスチジン、５％ショ糖、＋／−１０ｍＭメチオニン、＋／−０．０１％ポリソルベート８０、および約５０ｍｇ／ｍＬの候補タンパク質を含有する。この液体製剤を適切な容器／閉鎖系に分配した。この実施例では、Ｗｅｓｔ製２０ｍｍ凍結乾燥ストッパー（オートクレーブ滅菌および乾燥済み）を備えた５ｍＬ容のＷｅｓｔ製管状バイアル（洗浄およびオートクレーブ滅菌済み）を使用した。
【００４２】
凍結乾燥生成物の評価としては、ケーク品質および生成物品質の２種類の分析が挙げられる。ケーク品質には、水分測定および粉体ｍＤＳＣが含まれる。一次生成物の品質アッセイは、これらの凍結乾燥生成物に関して最も感度のよい安定性表示アッセイであることが示されているＳＥ−ＨＰＬＣとした。さらに、物質移動に対するケーク耐性、およびパイロット規模の凍結乾燥機内の予想される生成物温度プロフィールを評価するために、生成物の熱電対データを、熱移動モデルを使用して分析した。試験したすべてのタンパク質に関して、高分子量生成物が最も安定性を示すアッセイ生成物であることから、保存の関数として監視した。凍結乾燥後の水分は、Ｋａｒｌ  Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定で測定した。Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ−Ｑ１０００（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、ニューキャッスル、デラウェア州）を、変調モードにおける準大気（ｓｕｂ  ａｍｂｉｅｎｔ）および粉体のガラス転移温度測定に使用した。
【００４３】
フリーズドライ顕微鏡法を行うために、Ｐａｘ−ＩＴ画像コレクションソフトウェアを利用するＬｉｎｋａｍ製冷却ステージを使用した。凍結プロトコルは、凍結乾燥用凍結プロフィールを模倣した。昇華中、温度設定点は、次の設定点に進む前に最低１５分間維持した。
【００４４】
凍結させた生成物をｍＤＳＣで評価した。これらの製剤は、一般に、２つのガラス転移を示し、１つは−２８℃〜−２５℃で測定され、もう１つは多くの場合−１２℃〜−８℃の間に観察された。フリーズドライ顕微鏡法によって、崩壊は、通常、−１８℃〜−１５℃の温度範囲に観察される。
【００４５】
（実施例２）
対照サイクルの規定
目標サイクルは、臨界（しばしば崩壊）温度よりかなり低い温度で生成物の凍結乾燥を起こすように規定した。このサイクルの一例を図１に示す。分析結果は、初期状態（水分、およびガラス転移温度、Ｔｇ）および加速保存状態（高分子量物質の増加（△％ＨＭＷ）、これらの凍結乾燥生成物の分解の主経路を監視するため）に関して表１に示す。凍結乾燥後に監視したさらなる生成物特性、ケーク外観、復元時間、および復元の質に関して試料を検査した。また、ＦＴＩＲによる二次構造評価もｔ＝０の試料のいくつかで行なった。
【００４６】
これらの場合のすべてにおいて、冷蔵条件（推奨保存温度）下で適切な保存安定性が実証された。加速保存条件として５０℃（タンパク質ＨおよびＩでは４０℃）を使用したのは、比較目的で分解をより迅速に観察するためである。確定済みの許容可能な安定性プロフィールに基づいた対照サイクル中の生成物温度プロフィールは、製造へのスケールアップのための目標である。
【００４７】
【表１】
2011526356.tif 000003
【００４８】
（実施例３）
積極的条件の評価
積極的サイクルの目的は、棚温度を二次乾燥設定点に上昇させることによって、一次乾燥中に生成物温度を著しく上昇させることである。この一例を図２に示す。図３は、２種の異なる対照サイクル（桃色線と青色線）および積極的サイクル（緑色線）で凍結乾燥させた材料の一次乾燥温度プロフィールの間の差を示す。この場合、積極的サイクルは、生成物温度を対照サイクルより５〜７℃上昇させる。
【００４９】
積極的サイクルからの生成物を対照材料（ｃｏｎｔｒｏｌ  ｍａｔｅｒｉａｌ）と比較した分析結果を表２に示す。初期水分、初期ガラス転移温度、および加速温度保存後の高分子量増加に関して、すべての分子が同程度の結果を示した。積極的サイクルおよび対照サイクルで凍結乾燥された材料間の同程度の安定性プロフィールは、一次乾燥中の生成物温度に適した設計領域を規定するものである。
【００５０】
【表２】
2011526356.tif 000004
【００５１】
この方策の積極的乾燥によって、実測崩壊温度よりわずかに低い温度で凍結乾燥された生成物もあれば、わずかに高い温度で凍結乾燥されたものもあった。図４は、生成物が積極的サイクル中に崩壊温度より低い温度で残存した一例（表２のＡ）を示しており、崩壊の視覚的形跡はない。対照的に、図５は、Ｉの積極的サイクル中にバイアルの底に部分的崩壊が観察されたケースを示している。このケースでは、生成物は凍結乾燥中にわずかに崩壊温度を超えたが、水分および高分子量プロフィールは対照サイクルのものと同一であった。
【００５２】
（実施例４）
残留水分上昇の評価
崩壊（肉眼または顕微鏡で）に頻繁に関係した影響は、残留水分の増加である。目標サイクルまたは積極的サイクルによって生成された生成物より著しく高い水分を有する生成物の適合性を評価するために、一次乾燥の終結時で打ち切る第３のサイクルを実行した（図６）。一次乾燥の終結まで、すべてのサイクルパラメータは対照サイクルと同一とした。結果として、生成物熱電対プロフィールはまた、高水分サイクル（茶色線）と対照サイクルとの間で同等であった（図７）。
【００５３】
（実施例５）
凍結乾燥後の評価
凍結乾燥の後、ケーク外観、復元時間、復元の質、高分子量、水分、およびガラス転移温度に関して試料を検査した。ｔ＝０の試料のいくつかに関して、ＦＴＩＲによる二次構造評価も行なった。
【００５４】
凍結乾燥直後の分析に加えて、この材料を、先の２サイクルからの材料と同じ高温保存試験に加えた。このデータの結果を表３に要約する。予想通り、これらの材料はすべて、対照サイクルおよび積極的サイクルからの材料よりも有意に高い水分結果であり、それによって、乾燥粉体ガラス転移温度の低下がもたらされる。ほぼすべての場合に、高水分材料のガラス転移温度は、保存条件の１５℃以内であり、安定性結果に不都合をきたすことはなかった。
【００５５】
【表３】
2011526356.tif 000005
【００５６】
得られた材料を、短期間の高温安定性試験に関して比較した。検査した９種の候補タンパク質はすべて、安定サイクルの期間にわたって３サイクル間で同等の分解を示した。高分子量生成物は、保存中の候補タンパク質に関する最も重要な分解物である。表３は、初期の水分およびガラス転移値、ならびに５０℃で４週間（またはタンパク質ＨおよびＩの場合、４０℃で３カ月）後の高分子量の増加を示している。
【００５７】
（実施例６）
スケールアップ
これらのタンパク質分子の製造で使用されるパイロット規模の凍結乾燥機は、これまで、熱移動および昇華能力の点で特性決定されている（例えば、Ｔｃｈｅｓｓａｌｏｖ、Ｄｉｘｏｎ、Ｗａｒｎｅ、２００７、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｓｃａｌｅ−Ｕｐ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ、１０（３）：８８〜９２を参照）。さらに、物質移動への耐性に対する、より低粒子環境に起因するさらなる過冷却の影響が定量化されている（最悪のケースを推定したとして）。この情報は、単純化した熱および物質の移動モデルを適用して、適切なパイロット用凍結乾燥サイクルを規定し、プロセス公差を推定することを考慮している（例えば、Ｐｉｋａｌ、１９８５、Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｄａｔａ  ｉｎ  Ｆｒｅｅｚｅ  Ｄｒｙｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｈｅａｔ  ａｎｄ  Ｍａｓｓ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｒｅｅｚｅ  Ｄｒｙｉｎｇ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、３９（３）：１１５〜１３８を参照）。実験室規模の試験（生成物の情報を提供）および凍結乾燥機の特性評価（装置の限界を提供）からの結果に基づき、クオリティバイデザイン（Ｑｕａｌｉｔｙ  ｂｙ  Ｄｅｓｉｇｎ）の原理を使用して、操作領域（ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  ｓｐａｃｅ）をパイロット規模凍結乾燥機において規定することができる（例えば、Ｎａｉｌ、Ｓｅａｒｌｅｓ．２００８．Ｅｌｅｍｅｎｔｓ  ｏｆ  Ｑｕａｌｉｔｙ  ｂｙ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｓｃａｌｅ−Ｕｐ  ｏｆ  Ｆｒｅｅｚｅ−Ｄｒｉｅｄ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｓ．ＢｉｏＰｈａｒｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ：４４〜５２を参照）。図８は、４種の実験室用サイクル（青色線、桃色線、暗青緑色線、および緑色線）、１種のパイロット用サイクル（橙色線）の一次乾燥熱電対記録、およびモデル化結果を示している。
【００５８】
ケーク耐性および実測熱移動係数の増加に基づいて、予想されるバイアル端（ｅｄｇｅｖｉａｌ）の温度プロフィール（実測熱電対の代表）を上記の青色正方形として示す。これらの結果は、橙色の実測熱電対データと非常に密接に合致する。パイロット用バイアル（Ｐｉｌｏｔ  ｃｅｎｔｅｒ  ｖｉａｌｓ）の中心に関して熱移動を改変すると、黄色ひし形が得られ、これは、実験室用熱電対データ（予備安全性評価の作成に使用）と非常によく合致する（例えば、Ｔｃｈｅｓｓａｌｏｖ、Ｗａｒｎｅ．２００８．Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ：ｃｙｃｌｅ  ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｃｅｓｓ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅｓ，ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  ｓｃａｌｅ  ｕｐ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ（３）：７６〜８３を参照）。
【００５９】
紫色ひし形は、一次乾燥偏りが＋５℃棚温度および＋２０ｍＴｏｒｒチャンバー圧の場合の算出パイロット用端部（Ｐｉｌｏｔ  ｅｄｇｅ）熱電対プロフィールを表した。この偏りは、許容されるプロセス公差を逸脱しており、９年を超える製造経験で観察されたいずれのものよりも大きい。この最悪のケースの生成物の温度データは、積極的サイクルの熱電対プロフィールに非常によく合致する。
【００６０】
（実施例７）
プロセス偏りの適用
次の典型的なタイプの偏りは、この方策で容易に対応することができる。
１．一次乾燥中の棚温度または圧力の上昇（例えば、積極的サイクル）。
２．棚温度、圧力、または時間の低減による不十分な一次乾燥維持（例えば、積極的サイクルは、二次乾燥条件で一次乾燥を行うか、または一次乾燥の維持を完全に省略）。
３．二次乾燥時間の尚早な終了、または棚温度の目標未達成（例えば、高水分サイクルは、二次乾燥維持を完全に省略）。
４．上記のいずれかの一時的／短期的発生。
【００６１】
これらの偏りは、生成物温度の点から対処される。生成物温度に対するプロセス偏りの影響を確認することによって、適切な生成物品質評価を、（１）モデル化の結果、および（２）２種の実行した偏り駆動型サイクルとの比較に基づいて確立することができる。上記の条件は観察される製造プロセス偏りをすべて包含するので、凍結乾燥サイクル偏りが、単一バッチの損失または遅延リリースをまねくことはない。
【００６２】
試験した全分子に関して、５０℃で４週間後の全サイクル間の安定性プロフィールを比較する。これは、プロセス偏りだけでなく水分仕様も正当化する助けとなる。主なガラス転移温度は、全サイクルの保存温度より十分に高い。高水分試料のガラス転移温度は、含水量増加のために、予想通り他のものより低い。高水分試料はガラス転移温度が保存温度に時として接近しているが、これは安定性に著しく影響を及ぼすようには思われなかった。積極的サイクル中の生成物温度の摂動が製造中に予想される偏りよりはるかに大きいことから、製造偏りが生じた場合には、生成物の品質は正当化される。今までのところ、本発明による方策を９種の異なる分子に関して実施し、結果は一貫していた。これらの方策を使用して、これらの候補タンパク質の臨床用製造で起こる製造偏りを評価した。
【００６３】
均等物
前述の記載は、本発明のいくつかの非限定的な実施形態を説明するものである。当業者なら、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態の多くの均等物を理解し、または日常的な実験を使用するだけで確認することができよう。以下の特許請求の範囲に定義される本発明の精神または範囲から逸脱することなく、本記載への様々な変更および改変を行い得ることは、当業者なら理解するであろう。
【００６４】
特許請求の範囲では、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」などの冠詞は、反対であることの指示がない、または特に文脈から明白でない限り、１または１より多いことを意味することができる。グループのうちの１つまたは複数のメンバーの間に「または（ｏｒ）」を包含する特許請求の範囲または説明は、反対であることの指示がない、または特に文脈から明白でない限り、グループメンバーのうちの１つ、複数、またはすべてが所与の生成物またはプロセスに存在し、使用され、またはその他の方法で関連する場合に満足するものと考えられる。本発明は、グループのちょうど１メンバーが所与の生成物またはプロセスに存在し、使用され、またはその他の方法で関連する実施形態を包含する。本発明はまた、グループメンバーの複数またはすべてが所与の生成物またはプロセスに存在し、使用され、またはその他の方法で関連する実施形態を包含する。さらに、本発明が、請求項の一項もしくは複数または説明の関連する部分からの１つまたは複数の限定、構成要素、条項、記述用語などが別の請求項に導入されるすべての変更、組合せ、および並べ替えを包含することを理解されたい。例えば、別の請求項に従属する任意の請求項が、同一の基礎とする請求項に従属する任意の他の請求項に見出される１つまたは複数の限定を包含するように改変することができる。さらに、特許請求の範囲が組成物を列挙する場合、別段の指示がない限り、または矛盾もしくは不一致が発生することが当業者に明らかではない限り、本明細書に開示する目的のいずれのためにもこの組成物を使用する方法が包含され、本明細書に開示する作製方法のいずれかまたは当技術分野で公知の他の方法に従ってこの組成物を作製する方法が包含されることを理解されたい。さらに、本発明は、本明細書に開示する組成物を調製する方法のいずれかに従って作製された組成物を包含する。
【００６５】
構成要素がリストとして（例えば、マーカッシュグループ様式で）提示される場合、構成要素の各部分グループ（ｓｕｂｇｒｏｕｐ）もまた開示され、任意の構成要素（複数も可）がグループから除去され得ることを理解されたい。また、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」が、開放（ｏｐｅｎ）であることを意図し、追加の構成要素またはステップの包含を許容することに留意されたい。一般的に、本発明または本発明の態様が特定の構成要素、特徴、ステップなどを含むと称される場合、本発明の特定の実施形態または本発明の態様が、こうした構成要素、特徴、ステップなどからなる、または本質的にそれらからなることを理解されたい。簡略化のために、これらの実施形態は、本明細書において具体的に正確に（ｉｎ  ｈａｅｃ  ｖｅｒｂａ）示されてはいない。したがって、１つまたは複数の構成要素、特徴、ステップなどを含む本発明の各実施形態に関して、本発明はまた、これらの構成要素、特徴、ステップなどからなる、または本質的にそれらからなる実施形態も提供する。
【００６６】
範囲が示される場合、終点は包含される。さらに、別段の指示がない、または特に文脈および／もしくは当業者の理解から明白でない限り、範囲として表現される値は、文脈上そうでないことが明白に要求されない限り、本発明の種々の実施形態において言及した範囲内の、範囲の下限の単位の１０分の１までの、任意の具体的な値とみなすことができることを理解されたい。別段の指示がない、または特に文脈および／もしくは当業者の理解から明白でない限り、範囲として表現される値は、所与の範囲内の任意の部分範囲とみなすことができ、この部分範囲の終点は、範囲の下限の単位の１０分の１と同程度の精度まで表現されることを理解されたい。
【００６７】
さらに、本発明の任意の特定の実施形態が、請求項のいずれか一項または複数から明確に除外され得ることを理解されたい。本発明の組成物および／または方法の任意の実施形態、構成要素、特徴、適用、または態様は、いずれか一項または複数の請求項から除外することができる。簡潔さのために、１つまたは複数の構成要素、特徴、目的、または態様が除外された実施形態のすべては、本明細書に明確には示されない。
【００６８】
参照による援用
本出願に引用される刊行物および特許文書はすべて、各個々の刊行物または特許文書の内容が本明細書に援用される場合と同じ程度に、すべての目的でそれら全体が本明細書に参照により援用される。
【図１】
2011526356.tif 000007
【図２】
2011526356.tif 000008
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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