(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）  式（Ｉ）
【化１】
0005671457.tif 000013
（式中、ＲＡは炭化水素基であり、場合により、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＲ’２、−ＣＯＯＲ’、−ＣＯＮＲ’、−ＣＨＯで置換されていてもよく、Ｒ’はＨもしくはＣ１−３アルキルであり、ＲＡは式（Ｉ）の繰り返し単位が親水性であるように選択する）の繰り返し単位からなる少なくとも一つのポリ（２−オキサゾリン）ブロックＡ；および式（ＩＩ）
【化２】
0005671457.tif 000014
（式中、ＲＢは炭化水素基であり、場合により、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＲ”２、−ＣＯＯＲ”、−ＣＯＮＲ”、−ＣＨＯで置換されていてもよく、Ｒ”はＨ、アルキルもしくはアルケニルであり、ＲＢは式（ＩＩ）の繰り返し単位が式（Ｉ）の繰り返し単位よりもより疎水性であるように選択する）の繰り返し単位からなる少なくとも一つのポリ（２−オキサゾリン）ブロックＢ
を含む少なくとも一つのブロックコポリマーと；
（ｂ）  活性剤として１種以上の薬物と
を含み、前記少なくとも一つのコポリマーが、活性剤を配合するミセルを形成する、医薬組成物または診断用組成物。
【請求項２】
ＲＡは、各出現に独立して、メチルおよびエチルから選択され、場合により、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＲ’２、−ＣＯＯＲ’、−ＣＯＮＲ’、−ＣＨＯで置換されてもよく、Ｒ’はＨもしくはＣ１−３アルキルであり、ＲＢはＣ３−２０炭化水素基から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ＲＡは、各出現に独立して、メチルおよびエチルから選択され、ＲＢはＣ４−６アルキル基から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
少なくとも一つのブロックＡはポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）またはポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）ブロックであり、少なくとも一つのブロックＢはポリ（２−ブチル−２−オキサゾリン）ブロックである、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
ブロックコポリマーがＡＢもしくはＢＡジブロックコポリマーまたはＡＢＡもしくはＢＡＢトリブロックコポリマーである、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
少なくとも一つの活性剤が疎水性活性剤である、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
活性剤（単一もしくは複数種）対コポリマー（単一もしくは複数種）の重量比が１：１０〜１：１の範囲である、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
ミセルの寸法が５〜５００ｎｍである、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
活性剤とブロックコポリマーとの合計重量に対する活性剤もしくは薬物の重量の比率が１０％またはそれ以上である、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、活性化合物、特に、疎水性活性化合物を、これらの化合物の可溶化を助けるデリバリーシステムと共に含有する組成物および製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
最も強力な薬物および薬物候補の多くは水溶性でない。水への溶解度がおおよそ１μｇ／ｍｌＬのパクリタキセル（ＰＴＸ）のような溶解性の低い製剤は、ドラッグデリバリーにおける大きな課題が依然としてある（Ｈｕｈ，Ｋ．Ｍ．等、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １２６，１２２−１２９（２００８）；Ｄａｂｈｏｌｋａｒ，Ｒ．Ｄ．等、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．３１５，１４８−１５７（２００６）；Ｙａｎｇ，Ｔ．等、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．３３８，３１７−３２６（２００７）；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．，Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ．Ｓｃｉ  ６１，２５４９−２５５９（２００４）；Ｈａａｇ，Ｒ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．  ４３，２７８−２８２（２００４））。ＰＴＸの現在の臨床用製剤（ＴａｘｏｌＲ）は、１％ｗ／ｗ未満の活性薬を含有するが、しかし９９％ｗ／ｗの賦形剤は患者に対して少なからぬ副作用をもたらすことが知られている。同様の問題が、プラント保護等のようなその他の技術的領域における活性剤においても出くわす。活性剤を可溶化させるか、または分散させる種々の方法が開発されてきている。伝統的な方法は、典型的には、溶剤、界面活性剤またはキレート剤の使用に基づく。これらの方法には、賦形剤の毒性、水性媒体中の製剤の限られた安定性、特に稀釈時、または困難な製剤手順に関連する一つ以上の欠点がある。
【０００３】
さらに、最近、リポゾーム類（Ｗｕ，Ｊ．等、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．３１６、１４８−１５３（２００６））、ミクロ粒子およびナノ粒子（Ｄｅｓａｉ，Ｎ．Ｐ．等、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ  １９，８９９−９０９（２００８））ならびにポリマーミセル類（Ｈｕｈ，Ｋ．Ｍ．等、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓe  １２６，１２２−１２９（２００８）；Ｋｏｎｎｏ，Ｔ．等、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔ．Ｒｅｓ．、Ｐａｒｔ  Ａ、６５Ａ，２１０−２１５（２００２）；Ｋｉｍ，Ｓ．Ｃ．等、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ７２，１９１−２０２（２００１））を、可溶化／薬物デリバリーシステムとして集中的に研究され、各アプローチは利点および欠点を有する。ポリマーミセル類の一主要制限は添加能力および可溶化できる薬物の総量である。米国特許出願２００４０１８５１０１号明細書は、水性媒体に疎水性薬物を可溶化させる能力を持つポリマー組成物を開示する。しかし、これらの組成物の添加能力は、パクリタキセルについて、例えば、＜１０％（ｗ／ｗ）、またはシクロスポリンＡについて１％（ｗ／ｗ）未満の添加能力に制限される。
【０００４】
ポリ（２−オキサゾリン）類は、最近、生物医学応用について相当の注意を引いてきた。特に興味のあるものは、親水性ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン（ＰＭｅＯｘ）およびポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）（ＰＥｔＯｘ）である。それらは秘匿性(stealth)（Ｚａｌｉｐｓｋｙ，Ｓ．等、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ，８５，１３３−１３７（１９９６）；Ｗｏｏｄｌｅ，Ｍ．Ｃ．等、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．５，４９４−４９６（１９９４））およびタンパク質反発作用(protein repellent effects)（Ｋｏｎｒａｄｉ，Ｒ．等、Ｌａｎｇｍｕｉｒ  ２４，６１３−６１６（２００８））を示し、ポリ（エチレングリコール）（注射可能な薬物デリバリーシステムについて慣用的に使用されるポリマー）に類似する迅速腎クリアランスを受ける（Ｇａｅｒｔｎｅｒ，Ｆ．Ｃ．等、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １１９，２１９−３００（２００７）ので興味がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、活性剤、特に疎水性活性剤を効率的に可溶化させおよび／または製剤化させるデリバリーシステムを含有する組成物を提供することにある。特に、前記組成物は簡単に製造でき、目的活性剤のために高添加能力を与えるべきである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
この課題を解決するために、本発明は、
（ａ）  式（Ｉ）
【０００７】
【化１】
0005671457.tif 000002
【０００８】
（式中、ＲＡは炭化水素基であり、場合により、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＲ’２、−ＣＯＯＲ’、−ＣＯＮＲ’、−ＣＨＯで置換されていてもよく、Ｒ’はＨもしくはＣ１−３アルキルであり、ＲＡは式（Ｉ）の繰り返し単位が親水性であるように選択する）の繰り返し単位および式（ＩＩ）
【０００９】
【化２】
0005671457.tif 000003
【００１０】
（式中、ＲＢは炭化水素基であり、場合により、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＲ”２、−ＣＯＯＲ”、−ＣＯＮＲ”、−ＣＨＯで置換されていてもよく、Ｒ”はＨ、アルキルもしくはアルケニルであり、ＲＢは式（ＩＩ）の繰り返し単位が式（Ｉ）の繰り返し単位よりもより疎水性であるように選択する）の繰り返し単位
を含む少なくとも一つのコポリマーと；
（ｂ）  １種以上の活性剤
を含む組成物を提供する。
【００１１】
さらに、本発明は、上記定義した通りの選択したコポリマーを提供する。本発明の組成物は、医薬応用、診断応用（獣医応用を含む）およびプラント保護を含む種々の技術分野に使用できる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１−１】図１−１は、２５℃における本発明との関連で使用される一定のコポリマーの濃度依存性のピレン溶液の蛍光強度およびＩ１／Ｉ３比を示す。
【図１−２】図１−２は、２５℃における本発明との関連で使用される一定のコポリマーの濃度依存性のピレン溶液の蛍光強度およびＩ１／Ｉ３比を示す。
【図２−１】図２−１は、薄膜法を使用する両親媒性コポリマーとのＰＴＸの可溶性の結果を示す。
【図２−２】図２−２は、薄膜法を使用する両親媒性コポリマーとのＰＴＸの可溶性の結果を示す。
【図３−１】図３−１は、本発明の組成物により形成された薬物添加ミセルの動的光散乱測定結果を示す。
【図３−２】図３−２は、本発明の組成物により形成された薬物添加ミセルの動的光散乱測定結果を示す。
【図４−１】図４−１は種々の細胞系における本発明との関連で使用されるポリマー類の細胞毒性についてのアッセイ結果を示す。
【図４−２】図４−２は種々の細胞系における本発明との関連で使用されるポリマー類の細胞毒性についてのアッセイ結果を示す。
【図４−３】図４−３は種々の細胞系における本発明との関連で使用されるポリマー類の細胞毒性についてのアッセイ結果を示す。
【図５−１】図５−１は本発明にしたがう組成物の多剤耐性ＭＣＦ７／ＡＤＲ細胞のパクリタキセル用量依存生存率を示す。
【図５−２】図５−２は本発明にしたがう組成物の多剤耐性ＭＣＦ７／ＡＤＲ細胞のパクリタキセル用量依存生存率を示す。
【図６−１】図６−１は本発明および市販製品にしたがう組成物と陰性対照、処置を比較するマウスにおける相対腫瘍重量（Ａ）および腫瘍抑制率として示す。
【図６−２】図６−２は本発明および市販製品にしたがう組成物と陰性対照、処置を比較するマウスにおける相対腫瘍重量（Ａ）および腫瘍抑制率として示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
上記したように、式（Ｉ）の単位において、ＲＡは炭化水素基であり、場合により、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＲ’２、−ＣＯＯＲ’、−ＣＯＮＲ’、−ＣＨＯで置換されていてもよく、Ｒ’はＨもしくはＣ１−３アルキルであり、ＲＡは式（Ｉ）の繰り返し単位が親水性であるように選択する。
【００１４】
好ましくは、ＲＡは、Ｃ１−８炭化水素基、好ましくは、Ｃ１−６炭化水素基、より好ましくは、Ｃ１−３炭化水素基、特に、Ｃ１−２炭化水素基であり、その総ては場合により置換できる。好適な炭化水素基はアルキル基である。
【００１５】
理解され得るように、上記定義した通りの式（Ｉ）の単位の親水性特性は、ＲＡの炭化水素基の大きさに依存する。メチルやエチルのような、小さな炭化水素基を選択する場合、得られるＲＡ基（無置換もしくは上記置換基で置換された）は、常に親水性である。大きな炭化水素基を選択する場合、置換基の存在は、式（Ｉ）の単位に追加の極性を導入するのに利点があり得る。したがって、好ましくは、各出現に独立して、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、ＣＯＯＨ、−ＮＲ’２、−ＣＯＯＲ’、−ＣＯＮＲ’、−ＣＨＯで場合により置換されたメチルおよびエチルから選択され、Ｒ’はＨもしくはＣ１−３アルキルであり、そして、特に好ましくは、ＲＡはメチルまたはエチルから選択される。
【００１６】
式（ＩＩ）の単位では、ＲＢは炭化水素基であり、場合により、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＲ”２、−ＣＯＯＲ”、−ＣＯＮＲ”、−ＣＨＯで置換されていてもよく、Ｒ”はＨ、アルキルもしくはアルケニルであり、ＲＢは式（ＩＩ）の繰り返し単位が式（Ｉ）の繰り返し単位よりもより疎水性であるように選択する。Ｒ”がアルキルまたはアリールである場合、好ましくは、Ｃ１−８またはアリール基である。ハロゲン置換基（存在する場合）は、好ましくは、ＣｌおよびＦから選択される。
【００１７】
好ましくは、ＲＢは、Ｃ３−２０炭化水素基、好ましくは、Ｃ３−１２炭化水素基、より好ましくは、Ｃ３−６炭化水素基、特に、Ｃ４−６炭化水素基から選択され、その総てが任意に置換され得る。しかし、炭化水素基が置換基を有しないほうがさらに好ましい。
【００１８】
炭化水素基として好適なものは、アルキル基、アリール基もしくはアルカリール基のような脂肪族基または芳香族基である。プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルもしくはノニルのようなアルキル基がより好ましく、Ｃ４−６アルキル基、すなわち、ブチル、ペンチル、ヘキシルがさらに好ましく、ブチル基が特に好ましく、特にｎ−ブチルが好ましい。
【００１９】
本明細書中で使用する「親水性」および「疎水性」という用語は、当業界で良く認識された意味を有する。「親水性」は、水性環境に対して物質または部分の好ましさを指す。すなわち、親水性物質または親水性部分は、炭化水素のような非−極性溶媒よりも水に容易に溶解するか水により容易に湿潤される。「疎水性」は、無極環境に対しての好ましさ、すなわち、疎水性物質または疎水性部分は、水によるよりも、炭化水素のような非極溶媒中により容易に溶解されるか非極溶媒により容易に湿潤される。「両親媒性」という用語は、界面活性剤にしばしば見られるような、一つの化合物中に親水性部分と、それより弱い親水性部分もしくはより強い疎水性部分との同時存在を示す。その程度まで、本発明との関連で使用されるコポリマー類は、当該コポリマー類が親水性部分と、それより低い親水性／より強い疎水性である部分とをそれぞれ有するので、本明細書中では、両親媒性コポリマー類としても称する。
【００２０】
必要な場合、すなわち、式（ＩＩ）の特定の単位が一定の式（Ｉ）の単位よりもより疎水性であるＲＡおよびＲＢの化学構造から容易に分からない場合、例えば、各々の単位の比較用ホモポリマーを製造し、同じ条件下でそれらのｌｏｇＰを決定することにより、明らかにすることができる。慣用的に知られているように、ｌｏｇＰ値は、水およびｎ−オクタノール間の種Ａに対して観察される分配係数の対数である。特に、種Ａの分配係数Ｐは比Ｐ＝［Ａ］n-octanol／［Ａ］water として定義される。式中、［Ａ］は各相中のＡの濃度を示す。より親水性物質は、水中でより高い濃度を示す。典型的には、水およびオクタノールの量は測定のため等しい。
【００２１】
好適な実施態様では、式（Ｉ）の単位よりもより疎水性である式（ＩＩ）の単位を与えるＲＢの正しい選択を、以下に詳細に開示する手順にしたがって、これらの単位を含有するコポリマーの臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を決定することにより確認することができる。ＣＭＣを観察できる場合、式（Ｉ）の単位の親水性特性および式（ＩＩ）の単位のより高い疎水性／より低い親水性特性に関する要件を確実に達成できる。
【００２２】
式（Ｉ）の単位が親水性であり、式（ＩＩ）の単位が式（Ｉ）の単位よりもより疎水性あるという要件も、その構造から明らかなように、ＲＡおよびＲＢの下記の好適な実施態様の可能な組み合わせについて確実に達成され得る。すなわち、ＲＡは、好ましくは、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＲ’、−ＣＯＮＲ’、−ＣＨＯで場合により置換されても良いメチルおよびエチルから選択され、ここで、Ｒ’はＨもしくはＣ１−３アルキルであり、そして、特に、好ましくは、ＲＡはメチルまたはエチルから選択され、そしてＲＢは、無置換Ｃ３−２０炭化水素基、好ましくは、Ｃ３−１２炭化水素基、より好ましくは、Ｃ３−６炭化水素基、特に、Ｃ４−６炭化水素から選択され、ここで、好適な炭化水素基は脂肪族基または芳香族基から選択され、例えば、アルキル基、アリール基もしくはアルカリール基である。より好適なものはアルキル基であり、例えば、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルまたはノニルであり、さらにより好適なものは、Ｃ４−６アルキル基であり、すなわち、ブチル、ペンチル、ヘキシルであり、特に好適なものは、ブチルであり、特に、ｎ−ブチルである。
【００２３】
本願において水性環境、水性媒体、水性溶液等への言及は、溶媒の総量の５０％（ｖ／ｖ）またはそれ以上、好ましくは、７０％またはそれ以上、より好ましくは、９０％またはそれ以上、そして、特に、実質的に１００％が水である、溶媒系を意味する。
【００２４】
上記式（Ｉ）および（ＩＩ）の繰り返し単位を含むコポリマーは、２−置換２−オキサゾリン類（または、ＩＵＰＡＣ命名法にしたがって、２−置換４，５−ジヒドロオキサゾール類）の開環重合により都合良く製造できる。したがって、本発明との関連で使用されるポリマー類は、ポリ（２−オキサゾリン）類としても称する。
【００２５】
本発明のコポリマーは、上記繰り返し単位（Ｉ）および（ＩＩ）に加えてその他の繰り返し単位を含むことができる。しかし、総ての繰り返し単位の主要部分、すなわち、繰り返し単位の総数を基準に、５０％を超える、より好ましくは、７５％を超える、さらに好ましくは、９０％を超える、そして特に好ましくは、１００％が、上記定義した式（Ｉ）および（ＩＩ）の繰り返し単位であるのが好適である。コポリマー中に含まれる式（ＩＩ）の繰り返し単位の総てが、コポリマー中に含まれる式（Ｉ）の繰り返し単位のいずれかよりもより疎水性であるということが了解されよう。
【００２６】
繰り返し単位数に関して、繰り返し単位（Ｉ）対繰り返し単位（ＩＩ）の比は、典型的には、２０：１〜１：２の範囲、好ましくは、１０：１〜１：１、そしてより好ましくは、７：１〜３：１の範囲である。
【００２７】
上記繰り返し単位（Ｉ）および（ＩＩ）の配置に関して、本発明のコポリマー類はランダムコポリマー類、同じタイプの重合化単位のセグメント（すなわち、式（Ｉ）の単位のセグメントおよび／または式（ＩＩ）の単位のセグメント）を含有するコポリマー類、グラジエントコポリマー類またはブロックコポリマー類であることができる。ブロックコポリマー類が特に好ましい。
【００２８】
「ブロックコポリマー」という用語は、本明細書中では、当業界で確立された意味にしたがって使用し、確定されたタイプの繰り返し単位がブロック状で構成された、すなわち、同じタイプの繰り返し単位が互いに順次隣接されて重合化されているものであり、例えば、異なるタイプの繰り返し単位をランダムに配列するのと異なる。言い換えれば、さらに以下で検討するブロックＡおよびＢのような、ブロックコポリマーのブロックが、同一のまたは一定の共通する特性を有するモノマーの重合により得られる、それ自身ポリマーを表す。
【００２９】
本発明で使用するブロックコポリマーは、上記定義した式（Ｉ）の繰り返し単位からなる少なくとも一つのポリ（２−オキサゾリン）ブロックＡ（個々の単位の存在のため、親水性である）、および上記定義した式（ＩＩ）の繰り返しからなる少なくとも一つのポリ（２−オキサゾリン）ブロックＢ（個々の単位の存在のため、ブロックＡよりも疎水性である）を含む。
【００３０】
本発明のブロックコポリマーは、少なくとも一つの親水性部分（ブロックＡ）および少なくとも一つのそれより低い親水性部分もしくはより疎水性部分（ブロックＢ）の存在のため両親媒コポリマーと称することができる。
【００３１】
好ましくは、ブロックコポリマーの少なくとも一つのブロックＡ、より好ましくは、多数存在の場合に総てのブロックＡが、式（ＩＩ）：
【００３２】
【化３】
0005671457.tif 000004
【００３３】
により表され、式中、ＲＡはメチル基またはエチル基、好ましくは、メチル基であり、ｎはブロックＡ内の繰り返し単位数を表す。ｎは、好ましくは、５またはそれ以上の整数、より好ましくは、１０またはそれ以上、そして特に２０またはそれ以上を表す。ｎは、一般に、３００以下、好ましくは、２００以下、より好ましくは、１００以下、そして特に５０以下である。
【００３４】
好ましくは、ブラックコポリマーの少なくとも一つのブロックＢ、より好ましくは、多数存在の場合に総てのブロックＢが、式（ＩＩＩ）：
【００３５】
【化４】
0005671457.tif 000005
【００３６】
により表され、式中、ＲＢはＣ３−２０炭化水素基、好ましくは、Ｃ３−１２炭化水素基、より好ましくは、Ｃ３−６炭化水素基、そして、特にＣ４−５炭化水素基である。炭化水素基として好ましい基は、アルキル基、アリール基またはアルカリール基のような脂肪族基または芳香族基である。より好ましい基は、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルもしくはノニルのようなアルキル基であり、さらにより好ましくは、Ｃ４−６アルキル基、すなわち、ブチル、ペンチル、ヘキシルであり、特に好ましい基はブチル基、特に、ｎ−ブチルである。変数ｎは、好ましくは、５またはそれ以上、より好ましくは１０またはそれ以上である。ｎは、一般に、３００以下、好ましくは、２００以下、１００以下、そしてより好ましくは５０以下である。
【００３７】
本発明との関連でドラッグデリバリーシステムとして使用されるブロックコポリマーは、上記定義した、少なくとも一つのブロックＡおよび少なくとも一つのブロックＢを含有する。当該ブロックコポリマーは、ＡまたはＢと異なる１種以上の追加のブロックを含むことができる。しかし、該ブロックコポリマーは、上記定義の分類に入るブロックのみを含有するのが好ましく、上記ＡおよびＢの定義が好ましい。より好ましくは、ブロックコポリマーの総ての繰り返し単位が上記式（Ｉ）または（ＩＩ）の繰り返し単位である。
【００３８】
本発明との関連で、使用されるコポリマーのブロックＡおよびＢの配列に関して、コポリマーの好適な構造は、（ＡＢ）ｍもしくは（ＢＡ）ｍ（ｍは１、２または３）として、ＡＢＡとして、あるいはＢＡＢとして表すことができる。ブロックコポリマーはＡＢもしくはＢＡジブロックコポリマーまたはＡＢＡトリブロックコポリマーがより好適である。
【００３９】
したがって、本発明の特に好適な実施態様では、ブロックコポリマーのポリマー実体は、ポリマー化２−メチル−２−オキサゾリンまたは２−エチル−２−オキサゾリン（本明細書中では「ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）ブロック」または「ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）ブロック」とも称する）からなるＡブロックおよびポリマー化２−（Ｃ４−６アルキル）−２−オキサゾリンからなるＢブロックからなる。さらにより好適には、ポリマー化２−メチル−２−オキサゾリンまたはからなる２−エチル−２−オキサゾリンからなるＡブロックおよびポリマー化２−ブチル−２−オキサゾリン（「ポリ（２−ブチル−２−オキサゾリン）ブロック」とも称する）からなるＢブロックを有するコポリマーのようなものである。さらに、上述構成のＡＢまたはＡＢＡジ−もしくはトリ−ブロック−コポリマーが好適である。
【００４０】
本発明との関連で使用されるコポリマー類はゲル透過クロマトグラフィーで測定して、好ましくは、３〜３０の数平均分子量（Ｍｎ）、より好ましくは４〜２５、そして特に、６０〜２０ｋｇ／モルの数平均分子量を示す。多分散指数（ＰＤＩ＝Ｍｗ／Ｍｎ、ここでＭｗは重量平均分子量である）は、典型的には１．３未満であり、好ましくは、１．２５未満、そして１．００１程度の低さであることができる。
【００４１】
組み合わせ、例えば、２種以上の異なるコポリマーの混合物もしくはブレンドを含む組成物も本発明に包含され、例えば、異なる基ＲＡおよびまたはＲＢを含有するコポリマーの組み合わせ、あるいはそれらの繰り返し単位の異なる配列を示すコポリマーの組み合わせ、例えば、ランダムポリマーとブロックコポリマーとの組み合わせである。
【００４２】
本発明との関連で使用されるコポリマーは、当業界で公知の重合方法により製造できる。例えば、ポリ（２−オキサゾリン）類をリビングカチオン性開環重合により製造できる。ランダムコポリマー類、グラジエントコポリマー類およびブロックコポリマー類の製造は、Ｒ．ＬｕｘｅｎｈｏｆｅｒおよびＲ．Ｊｏｒｄａｎ，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ３９，３５０９−３５１６（２００６），Ｔ．Ｂｏｎｎｅ等，Ｃｏｌｌｏｉｄ．Ｐｏｌｙｍ．Ｓｃｉ．，２８２，８３３−８４３（２００４）またはＴ．Ｂｏｎｎｅ等，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．２００８，１４０２−１４０８，（２００７）により詳細に記載されている。
【００４３】
本発明では、組成物中に含有されている活性剤（または活性化合物）に関して、当該組成物は、水難溶性活性剤、好ましくは，疎水性活性剤、または水不溶性活性剤の製剤に特に適していることが了解されよう。したがって、活性剤が、水，例えば、イオン交換水中、２０℃で、１ｍｇ／ｍｌ未満、好ましくは、０．１ｍｇ／ｍｌ未満、またはさらに０．０１ｍｇ／ｍｌ未満の溶解度、そして特に０．００１ｍｇ／ｍｌ未満の溶解度を示すのが好ましい。好ましくは、この制限的溶解度は、ｐＨ範囲が４〜１０である水に示される。
【００４４】
本発明との関連で使用する活性剤（または活性化合物）は、好ましくは、生物活性剤（または生物活性化合物）であり、療法に（すなわち、薬物）、または診断に、殺真菌剤、殺菌剤、殺虫剤もしくは除草剤、植物ホルモンのような植物もしくは作物保護の分野に適する別のいずれかの化合物、または家畜用活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書で使用されている通り、「活性剤」という用語は、薬物または植物保護剤の開発において可能性のある候補としてスクリーニングされている化合物も含む。その程度まで、本発明は関心の目標と，典型的には、生物学的目標、例えば、タンパク質一般、スクリーニング試験における酵素もしくはレセプターと、相互作用する活性化合物の検出法も、本発明の組成物に活性化合物を配合することおよびスクリーニング試験に当該組成物を処理することを含んで、さらに包含する。
【００４５】
生物活性剤の特定の例には次に述べるようなカテゴリーがあるが，これらに限定されない。該カテゴリーには、シナプス結合位および神経効果結合位に作用する薬物、中枢神経系に作用する薬物、炎症反応に影響を与える薬物、体液の組成に影響を与える薬物、腎機能および電解質代謝に影響を与える薬物、心臓血管薬、胃腸機能に影響を与える薬物、子宮運動性に影響を与える薬物、過剰増殖性疾病，特に癌のための化学療法剤、寄生虫感染のための化学療法剤、微生物疾病のための化学療法剤、抗新生物剤、免疫抑制剤、死血(die blood)および血液形成器官に影響を与える薬物、ホルモン類およびホルモンアンタゴニスト、皮膚科学薬剤、重金属アンタゴニスト、ビタミン類および栄養剤、ワクチン類、オリゴヌクレオチド類、ならびに遺伝子治療剤等がある。本発明で使用するのに適しているとして挙げることのできる特定の薬物には、アンホテリシンＢ、ニフェジピン、グリセオフルビン、パクリタキセルおよびドセタクセルを含むタキサン類、ドキソルビシン、ダウノマイシン、インドメタシン、イブプロフェン、エトポシド、シクロスポリンＡ、ビタミンＥ、およびテストステロン等があり、特に、パクリタキセル、シクロスポリンＡおよびアンホテリシンＢがある。上述したように、特定の利用性は、水不溶性と考えられる活性剤について本発明により示される。
【００４６】
例えば、二種の薬物のような二種以上の活性剤の混合物またはブレンドのような組み合わせを含む組成物も本発明に包含されることが了解されよう。
【００４７】
本発明の組成物において前記コポリマーが凝集体を形成することが一般に好ましく、さらに、この凝集体が、コポリマー凝集体が活性剤を包含するように形成されるのが好ましい。該凝集体の特に好適な形体はミセルである。本明細書中で言及するミセルは、一般に、両親媒コポリマー類の凝集体であり、コポリマーの親水性部分により形成された親水性コロナを与え、ミセルの内部に該両親媒コポリマーの疎水性部分を封鎖する。ミセル形成に特に適しているコポリマー類は、好適な実施態様のコポリマーとして上述したブロックコポリマー類である。本発明のミセルは、三次元で存在する。一般に、ミセルは、水性溶液の構成両親媒分子の濃度が一定値を超えたときに形成される。この、一定値を臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）と称し、ピレンのような蛍光プローブを使用することにより決定することができ、該ＣＭＣ値を超えて形成されたミセルの疎水性コア中に分配する。より特定的には、本発明のミセルは、例えば、親水性、好ましくは水性溶液中の両親媒ブロックコポリマーの自己凝集により形成する。ミセルの形成時、前記両親媒コポリマーの親水性領域は周囲の溶媒と接触状態であり、一方、疎水性領域はミセルの中心に向いている。本発明との関連で、ミセルの中心は、典型的には疎水性活性剤を組み込む。ミセルは、寸法がナノメーター範囲でありポリマーから構成されているので、「ポリマーナノ粒子」と称することもできる。
【００４８】
本発明との関連で使用するコポリマー類、特に、ブロックコポリマー類は、典型的には、２５０ｍｇ／Ｌよりも小さい低ＣＭＣを示す。ＣＭＣは、通常、５〜１５０ｍｇ／Ｌの範囲、さらに、５〜１００ｍｇ／Ｌの範囲である。
【００４９】
凝集体、特にミセルの変動できる大きさは、使用するコポリマーの分子量、または添加する薬物のような因子に依存して、本発明の医薬組成物により形成できる。通常、好適なものは５〜５００ｎｍの寸法範囲内の凝集体またはミセルである。しかし、動的光散乱により決定して、有利に、５〜１００もしくは１０〜５０ｎｍ、またはさらに１０〜３０ｎｍの範囲の寸法の凝集体またはミセルを形成することが可能であり、これらの寸法範囲は静脈内投与に特に適している。有利に、ミセルは、典型的には、狭い粒度分布を有する（ＰＤＩ≦０．２または≦０．１）。
【００５０】
典型的には、凝集体、特にミセルは、水中もしくは水性媒体中で形成する。したがって、本発明の組成物の凝集体、特にミセルは、例えば、薄層溶解法により形成できる。この方法では、コポリマーおよび活性剤を、アセトニトリルやジメチルスルホキシドのような共通の溶媒に溶解させる。溶媒の除去（例えば、不活性ガス流、緩和な加熱および／または減圧の適用）後、コポリマーおよび活性剤により形成したフィルムを、水中もしくは水性溶媒中に容易に溶解することができ、上昇させた温度で調整(tempered)できる。フィルムを溶解させるとき、凝集体、特にミセルが形成する。凝集体の安定性は、得られた溶液を乾燥させ、粉末を形成させて可能となる。例えば、凝集体は、通常、凍結保護物質を用いる必要性なく凍結乾燥でき、添加容量または粒子完全性を妥協することなく水中もしくは水性溶液中で再構成できる。
【００５１】
上述したコポリマーの使用の結果として、本発明の組成物は、典型的には、水にもしくは水性溶液に可溶な凝集体を形成し、当該凝集体は室温および高温(elevated temperatures)、特に４０℃以下の温度で少なくとも１２時間安定であり、概して動物にそして特にヒトに当該組成物の非経口投与が可能である。
【００５２】
本発明の組成物における活性剤（単味もしくは複数）対コポリマー（１種もしくは複数）の重量比は、典型的には、１：２０もしくはそれより高い、例えば、１：１０より高い。好ましくは、該重量比は、少なくとも１：９、より好ましくは、少なくとも２：８、さらにより好ましくは、少なくとも３：７、そして最も好ましく、４：６である。通常、１：１もしくはそれ以下であり、必要な場合、８：１０もしくはそれ以下である。
【００５３】
本発明の組成物は、有利に、１０％またはそれ以上、好ましくは、２５％またはそれ以上、より好ましくは、３０％、もしくはさらにより好ましくは３５％もしくはそれ以上、特に４０％もしくはそれ以上の活性剤添加もしくは薬物添加（すなわち、活性剤もしくは薬物対活性剤とブロックコポリマーとの総計の重量比；％表示）を達成できる。特に驚いたことに、充分な水可溶性が、例えば、パクリタキセルのような、１０μｇ／ｍＬ未満、さらに５μｇ／ｍＬ未満の溶解度を持つ活性剤でさえ前記のような高薬物添加を有する本発明の組成物について究極的に達成できる。したがって、例えば、本発明の組成物は、水中もしくは水性溶液中７ｍｇ／ｍＬを超えるパクリタキセル、特に８ｍｇ／ｍＬ以上のパクリタキセルの可溶化を可能にする。
【００５４】
疎水性活性剤についても高い容量が、本発明の医薬組成物のピレン蛍光分光から得られる通常でない値と同時に起こる。ピレンの蛍光発光スペクトルにおけるＩ１およびＩ３バンドの比は、ピレンプローブ環境の極性の尺度である（Ｋ．Ｋａｌａｙａｎａｓｕｎｄａｒａｍ，Ｊ．Ｋ．Ｔｈｏｍａｓ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９７７，９９，２０３９−２０４４）。水性もしくは類似の極性環境では、この比は典型的には１．６〜１．９の間に見出される（Ｋ．Ｗ．Ｓｔｒｅｅｔ，Ｊｒ．Ｗ．Ｗ．Ａｃｒｅｅ，Ｊｒ．Ａｎａｌｙｓｔ  １９８６，１１１，１１９７−１２０１）。ポリマーミセルの存在では、ピレンに対して低い極性環境が得られ、Ｉ１／Ｉ３比は、普通、全蛍光強度の増加に付随して減少する。全く驚いたことに、本明細書中に記載するコポリマー類そして特にブロックコポリマー類に関して、Ｉ１／Ｉ３比は２．０を超え、好ましくは、２．１を超え、さらに２．２、例えば、最高２．３５の値に上昇するので、逆が観察された。
【００５５】
上記したコポリマー類そして特にブロックコポリマー類について観察された高可溶性効率のため、コポリマーん含量が、１ｍｇ／ｍＬ程度の低さ、好ましくは、２ｍｇ／ｍＬ濃度から１００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは、５０ｍｇ／ｍＬまたは２０ｍｇ／ｍＬの濃度までの範囲の場合、通常、水性溶液の形態の本発明の組成物、特に、医薬組成物に充分である。コポリマー類は生物学的適応性、すなわち、非毒性であり、迅速腎クリアランスを受けるので、高濃度は重要でないが、しかし、通常、要求されない。現在、市場にある疎水性薬物の製剤に比べて、これにより、可溶化剤量の顕著な減少を可能にし、対象が薬物を非経口で受け、したがって、健康作用の悪影響の危険性を減少させる。
【００５６】
実際のところ、本明細書中に記載するブロックコポリマーは、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ／エタノール（ＣｒＥＬ）およびＡｂｒａｘａｎｅＴＭ、それぞれと比較して、おおよそ１００倍および９倍ほど、同量のパクリタキセルを可溶化させるのに必要な賦形剤の量を減少させることができる。
【００５７】
さらに、添加効率（すなわち、（可溶化した活性剤の量／最初添加した活性剤の量）＊１００％）が１００％であることができ、通常、本発明の組成物について非常に高い（＞８０％）。これは、高添加効率が、生産経費の減少のため商業的応用に重要性を有するので、顕著な利点である。
【００５８】
上記説明したように、本発明のコポリマー類は、水難溶性である活性剤、好ましくは、疎水性活性剤または水不溶性活性剤の溶解度を増加させるのに使用でき、すなわち、それらはこれらの化合物の可溶化剤として作用することができる。
【００５９】
結果として、一実施態様では、本発明の組成物は水をさらに含有し、水性溶液、エマルションまたは懸濁液を形成し、特に好ましくは、当該組成物は活性剤およびコポリマーの水性溶液である。「溶液」という用語は、この特定の関係において、水中ミセルにより形成され得るので、コロイド溶液を含むことが了解されよう。しかし、本発明との関連で使用されるコポリマー類は、該組成物が、活性剤の活性および安定性に妥協することなく、そして凍結保護物質の必要なく凍結乾燥できるので、粉末、特に凍結乾燥粉末は、本発明の組成物の別の好適な実施態様を形成する。これらの粉末は、水中または水性溶液中で都合良く再構成できる。
【００６０】
したがって、本明細書中で記載したポリ（２−オキサゾリン）系コポリマー類は、例えば、パクリタキセル、シクロスポリンＡおよびアンホテリシンＢのような疎水性で構造的に様々な薬物に対しても多様な高容量ドラッグデリバリーシステムとして作用できる。
【００６１】
本発明の別の実施態様は下記の項目で概要する。
【００６２】
１．医薬組成物であって、
（ａ）少なくとも一つのブロックＡおよび少なくとも一つのブロックＢを含む少なくとも一つの生物学的適応性水溶性両親媒ブロックコポリマーであり、Ａは親水性ポリ（２−オキサゾリン）類から選択される親水性ポリマーであり、Ｂは両親媒性もしくは疎水性ポリ（２−オキサゾリン）類から選択される、および
（ｂ）疎水性生物活性化合物
を含み、水中または水性溶液中で可溶性凝集体を形成し、当該凝集体は室温および高温、特に４０℃未満の温度で少なくとも１２時間安定であり、一般に動物そして特にヒトに前記組成物の非経口投与できる、前記医薬組成物。
【００６３】
２．  １に記載の医薬組成物であって、Ｂが下式（ＩＩＩ）
【００６４】
【化５】
0005671457.tif 000006
【００６５】
の構造により表され、式中、ＲＢは疎水性側鎖（飽和脂肪族鎖、不飽和脂肪族鎖、飽和脂肪族環もしくは不飽和脂肪族環またはその混合物を含む）であり、ｎは１〜３００から選択される。
【００６６】
３．  １または２に記載の医薬組成物であって、疎水性生物活性化合物は、ペプチド類、ペプトイド類、ポリエン類、マクロサイクル類、グリコシド類、テルペン類、テルペノイド類、脂肪族化合物類および芳香族類およびそれらの誘導体類ならびにその他の化合物を含み、４〜１０のｐＨ範囲の水中または水性媒体中で、１ｍｇ／ｍＬ未満、好ましくは、１００μｇ／ｍＬ未満、さらにより好ましくは、５０μｇ／ｍＬ未満、そして最も好ましくは、１０μｇ／ｍＬ未満の溶解度を有する。
【００６７】
４．  １〜３のいずれかに記載の医薬組成物であって、疎水性生物活性化合物は、アンホテリシンＢ、ニフェジピン、グリセオフラビン、パクリタキセル、ドコルビシン、ダウノマイシン、インドメタシン、イブプロフェン、エトポシドおよびシクロスポリンＡから選択される。
【００６８】
５．  １〜３のいずれかに記載の医薬組成物であって、疎水性生物活性化合物はパクリタキセルである。
【００６９】
６．  １〜５のいずれかに記載の医薬組成物であって、ＡＢブロックコポリマーは、安定なもしくは不安定な結合を介して結合し、（ＡＢ）ｍとして示すことができる化合物を形成し、式中、ｍは２〜１００の範囲であり、例えば、線状もしくは星様ブロックコポリマー類、グラフトブロックコポリマー類、デンドリマー系もしくは超分岐ブロックコポリマー類を形成する。
【００７０】
７．  ２〜６のいずれかに記載の医薬組成物であって、疎水性側鎖Ｒは３−６個の炭素原子を含む。
【００７１】
８．  １〜７のいずれかに記載の医薬組成物であって、両親媒ブロックコポリマーは、２−ブチル−２−オキサゾリンから誘導される繰り返し単位の部分もしくは全部を構成するブロックを含む。
【００７２】
９．  １〜８のいずれかに記載の医薬組成物であって、親水性ポリオキサゾリンは、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）またはポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）から選択される。
【００７３】
１０．  １〜９のいずれかに記載の医薬組成物であって、水溶性媒体中の凝集体は、５−２００ｎｍ、好ましくは、１０−１００ｎｍの範囲の寸法である。
【００７４】
１１．  １〜１０のいずれかに記載の医薬組成物であって、疎水性生物活性化合物および両親媒ブロックコポリマーを、少なくとも１：９、好ましくは、２：８、より好ましくは、３：７、そして、最も好ましくは４．６の重量比で含む。
【００７５】
配合しようとする生物活性剤類／化合物類に関して本発明の好適な実施態様を形成する医薬組成物固有の多様性のため、当該組成物は、癌、神経変性疾患、肝胆汁性疾患、循環器疾患または肺疾患のような広範囲の疾患や障害の治療または防止に適していることが了解されよう。本発明は、これらの疾患のいずれかの治療または防止のための医薬組成物の製造に上記定義したブロックコポリマーの使用をも包含する。さらに、本発明の組成物の診断応用にも使用できる。
【００７６】
本発明では、「癌」という用語は、細胞の制御できない分化や、侵入により隣接する組織内に直接増殖するか、あるいは転移（癌細胞が血流またはリンパ系により移動する）により距離のある部位に内移植するかのいずれかで拡がるこれらの能力により特徴付けられる疾病や障害の類を指す。
【００７７】
本発明では、「神経変性疾患」という用語は、ニューロンが悪化し、ニューロン（少数神経幹細胞を除く）を再生する身体に能力がないため、例えば、脳や脊髄の細胞が適切に再生できない疾患や障害の類を指す。症状は病気に冒された個人の運動失調や認知症を包含する。
【００７８】
本発明では、「胃腸疾患および肝胆汁疾患」という用語は、肝臓、胆嚢および胆管に影響を与える疾患や障害に関する。このような疾患または障害には、例えば、肝硬変、肝炎、ウイルス誘発性肝炎、肝腫瘍、脂肪肝、多嚢胞肝、クーロン病、潰瘍性大腸炎、胆管癌等がある。
【００７９】
本発明では、「循環器疾患」という用語は、心臓および／または血管に関連する疾患や障害に関する。
【００８０】
本発明では、「肺疾患」という用語は、呼吸系に影響を与える疾患に関し、肺の内外の低速度の障害、すなわち妨げや肺の機能容積の制限、すなわち減少症状に分類できる。このような疾患には、例えば、喘息、気管支炎、石綿症、線維症、肺癌、肺炎、肺浮腫および肺高血圧症等がある。
【００８１】
本発明の医薬組成物は、任意に１種以上の別の薬学的に許容できる賦形剤、例えば、キャリヤー、稀釈剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、着色剤、顔料、安定化剤、防腐剤、および／または抗酸化剤と共に製剤化できる。
【００８２】
医薬組成物は、当業者に公知の技術、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２０版で公開された技術により製剤化できる。該医薬組成物は、経口投与または非経口投与（例えば、筋肉内、静脈内、皮下、皮内、動脈内、直腸内、局所、肺内もしくは膣内）用の剤型に製剤化できる。経口投与用剤型には、再構成のためのコーティング錠剤および非コーティング錠剤、ゼラチン軟カプセル剤、ゼラチン硬カプセル剤、ロゼンジ剤、トローチ剤、溶液剤、エマルション剤、サスペンション剤、シロップ剤、エリキシル剤、粉末剤、および顆粒剤等があり、分散性粉末剤および顆粒剤、薬用ガム剤、チューイング錠剤および発泡錠剤等がある。非経口用剤型には、再構成のための溶液剤、エマルション剤、サスペンション剤、分散剤ならびに粉末剤および顆粒剤等がある。エマルション剤が非経口投与のための好適剤型である。直腸用および膣用投与のための剤型には、坐剤およびオブラ剤(ovula)等がある。肺投与／肺デリバリーのための剤型は、吸入および吹送により投与、例えば、定量用量吸入器により投与できる。局所投与のための剤型には、クリーム剤、ゲル剤、軟膏剤(ointments, salves)、パッチ剤および経皮デリバリーシステム等がある。
【００８３】
本発明の医薬組成物は、全身的／末梢的または所望の作用する部位の任意の都合の良い投与経路により対象に投与でき、当該投与経路には、一以上の、経口（例えば、錠剤、カプセル剤、または摂取可能な溶液として）、局所（例えば、経皮剤、経鼻剤、経眼剤、経口腔剤、および舌下剤）、非経口（例えば、注射技術もしくは輸液技術を使用して、そして、例えば、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、動脈内、心臓内、くも膜下内、随腔内、包嚢内、被膜内、眼窩内、腹腔内、気管内、表皮下、関節内、くも膜下、または胸骨等に注射により、皮下もしくは筋肉内にデポー剤の移植により）、肺（例、口もしくは鼻を介してエアゾールを使用して吸入もしくは吸い込み療法により）、胃腸、子宮内、眼内、皮下、眼科（硝子体もしくは前房内を含む）、直腸、および膣等があるがこれらに限定されない。経口および非経口、特に、静脈内投与は、本発明の組成物が、疎水性活性剤を使用するときでもこれらの経路に充分な可溶性とバイオアビリティーを与えるので、通常好適である。
【００８４】
医薬組成物が非経口的に投与される場合、このような投与の例には、一以上の、静脈内、動脈内、腹腔内、髄腔内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内または皮下内に、点滴技術を使用化合物もしくは医薬組成物を投与することおよび／または点滴技術を使用して投与する等がある。非経口投与に対して、化合物は無菌水性溶液の形態で使用するのが最も良く、当該無菌水性溶液はその他の物質、例えば、該溶液を血液と等張させるのに足る塩類またはグルコースを含有することができる。水性溶液は、必要の場合、適切に緩衝化（好ましくは、３〜９のｐＨに）すべきである。滅菌状態下の適切な非経口製剤の製造は、当業者に周知の標準薬学技術により容易に達成される。
【００８５】
医薬組成物は、経口的に、錠剤、カプセル剤、卵型経口剤、エルキシル剤、溶液剤もしくはサスペンション剤の形態で投与することもでき、これらの経口剤は芳香剤もしくは着色剤を、速効、遅延、修正、徐放、パルスもしくは制御放出応用のために含有させることができる。
【００８６】
錠剤は、マイクロクリスタリンセルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸水素カルシウムおよびグリシンのような賦形剤、澱粉（好ましくは、コーン、ポテトもしくはタピオカ澱粉）、グリコール酸でん粉ナトリウム、クロスカルメロースナトリウムおよび一定の複合ケイ酸塩のような崩壊剤、ならびにポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、スクロース、ゼラチンおよびアカシアのような顆粒バインダーを含有できる。さらに、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリルおよびタルクのような滑沢剤も含有できる。同様な種類の固体組成物はゼラチンカプセル剤中の充填剤として使用することもできる。これに関し、好適な賦形剤にには、ラクトース、澱粉、セルロース、ミルクシュガーまたは高分子量ポリエチレングリコール類等がある。水性サスペンション剤および／またはエリキシル剤について、薬剤を、種々の甘味剤もしくは芳香剤、着色剤または染料と、乳化剤および／または懸濁化剤と、および水、エタノール、プロピレングリコールおよびグリセリンおよびそれらの組み合わせのような稀釈剤と組み合わせることもできる。
【００８７】
あるいは、医薬組成物は、坐剤またはペッサリーの形態で投与でき、またはゲル剤、ヒドロゲル剤、ローション剤、溶液剤、クリーム剤、軟膏剤もしくは粉剤の形態で局所的に塗布できる。本発明の組成物は、例えば、皮膚用パッチ剤の使用により、皮膚投与もしくは経皮投与もできる。
【００８８】
医薬組成物は、肺経路、直腸経路、または眼経路によっても投与できる。眼科用途について、等張、ｐＨ調整、滅菌生理食塩水のマイクロ化サスペンション剤、または、好ましくは、等張、ｐＨ調整、滅菌生理食塩水の溶液剤として、場合により、塩化ベンジルコニウムのような防腐剤と組み合わせて医薬組成物を製剤化することができる。あるいは、
医薬組成物は、ペトロラタムのような軟膏に製剤化できる。
【００８９】
皮膚に対する局所応用について、医薬組成物は、例えば、１種以上の次の、鉱油、液体ペトロラタム、ホワイトペトロラタム、プロピレングリコール、乳化性ワックスおよび水と混合物中に懸濁もしくは溶解させた活性化合物を含有する適切な軟膏として製剤化できる。あるいは、医薬組成物は、例えば、１種以上の次の、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリエチレングリコール、液体パラフィン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水の混合物と混合物中に懸濁もしくは溶解させた活性化合物を含有する適切なローションまたはクリームとして製剤化できる。
【００９０】
本発明の組成物により与えられる有利な可溶化効果に鑑み、医薬組成物は、好ましくは、水中の生物活性成分の溶解性を要求する投与形態および／または投与モードで投与されることが了解されよう。
【００９１】
典型的には、医師は、個々の対象に最も適した医薬組成物の実際の投与形態を決定し得る。特定の個対象の特定の用量および投与回数は、治療もしくは予防しようとする障害もしくは疾病、使用する特定の生物活性化合物、代謝安定性およびその化合物の作用の長さ、年齢、体重、総体的な健康、性、ダイエット、投与モードおよび時間、排泄速度、薬物組み合わせ、特定症状の重篤度、治療を受ける個対象を含む種々の因子を変動させることができ、これらの因子に依存し得る。
【００９２】
ヒト（体重約７０ｋｇ）に投与するための本発明の組成物の提案される非限定的服用量は、単位服用量当たり活性剤（すなわち、薬物）の重量を基準に０．１μｇ〜１０ｇ、好ましくは、０．１ｍｇ〜０．５ｇである。単位服用量は、例えば、１〜４倍／日投与できる。服用量は投与経路に依存する。服用量は、患者／対象の年齢および体重、ならびに治療しようとする症状の重篤度に依存して用量に日常的変動させる必要性のあることが了解されよう。正確な服用量および投与経路は、関与医師または獣医師の裁量に最終的にまかされる。
【００９３】
本発明の組成物が投与される、治療または防止の必要な対象のような対象または患者は一般に哺乳類である。本発明との関連で、経済的または農学的に重要であるヒトの他の哺乳類が治療されるのは特に予測される。農学的に重要な動物の非制限的例は、羊、ウシおよびブタであるが、例えば、猫や犬は経済的に重要な動物であると考えられる。好ましくは、対象／患者はヒトである。
【００９４】
本明細書中で使用する「障害または疾病の治療」という用語は当業界で周知である。「障害または疾病の治療」は、障害または疾病が患者／対象の診断をしたことを包含する。障害または疾病を患っていると推測される患者／対象は、典型的には、当業者が特定の病状に容易にあると考えることができる特定の臨床および／または病的症状を示す（すなわち、障害または疾病を診断）。
【００９５】
「障害または疾病の治療」は、例えば、障害または疾病の進行の停止（例、症状の悪化なし）か、あるいは障害または疾病の進行の遅延（進行の停止の場合一時的性質のみを有する）をもたらし得る。「障害または疾病の治療」は、障害または疾病を患う対象／患者の部分的反応（例、症状の改善）または完全反応（例、症状の消失）ももたらし得る。障害または疾病の「改善」は、例えば、障害または疾病の進行の停止か、あるいは障害または疾病の進行の遅延をもたらし得る。このような部分または完全反応は、続いて再発であり得る。対象／患者は、治療に対する反応（例、上記本明細書で述べたように典型反応）の広範囲を経験することが了解できよう。障害または疾病の治療は、とりわけ、治癒治療（好ましくは、完全反応をもたらし、究極的に障害または疾病の治癒をもたらす）および緩和治療（症状軽減を含む）を含み得る。
【００９６】
本明細書で使用する「障害または疾病の防止」という用語も当業界で周知である。例えば、本明細書中で定義した障害または疾病を患う傾向が推測される患者／対象は、特に、障害または疾病の防止によって利益を受け得る。前記対象／患者は、障害または疾病にかかりやすいか病気に対する素因があり、遺伝性素因を含むがこれに限定されない。かかる素因は、例えば、遺伝子マーカーまたは表現型指標(phenotypic indicators)を使用する標準的アッセイにより決定できる。本発明により防止しようとする障害または疾病は診断されず、または前記患者／対象に診断できない（例えば、前記患者／対象は臨床的もしくは病的症状を全く示さない）ことが了解されよう。したがって、「防止」という用語は、臨床および／または病的症状が診断されもしくは決定されるまたは関与医師により診断もしくは決定される前の、本発明の化合物の使用を含む。
【００９７】
本明細書中で、学術論文および特許文献を含む多くの書類を引用する。これらの書類の開示は、本発明の特許性に関連すると考えられないが、その全体を参照として本明細書に含める。さらに詳細には、総ての言及書類は、各個々の書類が参照により含もうとする特定的および個々に表示されると同程度まで本明細書中に参照として含める。
【実施例】
【００９８】
下記の実施例では、本発明をさらに詳細に例証する。ここで開示する実施態様は、本発明の範囲の制限として意図していないことは了解されよう。
【００９９】
１．一般材料および方法
ポリマー類の製造のための総ての物質は、Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）およびＡｃｒｏｓ（Ｇｅｅｌ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）から購入し、特記しない限りそのまま使用した。２−ブチル−２−オキサゾリン（ＢｕＯｘ）は、最近記載された通りにして製造した（Ｈｕｂｅｒ，ＳおよびＪｏｒｄａｎ，Ｒ．，Ｃｏｌｌｏｉｄ  Ｐｏｌｙｍ．Ｓｃｉ．２８６，３９５−４０２（２００８））。ポリマー製造のためのメチルトリフルオロメチルスルホネート（ＭｅＯＴｆ）、２−メチル−２−オキサゾリン（ＭｅＯｘ）、２−エチル−２−オキサゾリン（ＥｔＯｘ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）およびその他の溶媒は、乾燥窒素雰囲気下ＣａＨ２上、還流により乾燥し、続いて使用前に蒸留した。室温で、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＩＩＩ  ４００、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＲＸ  ３００またはＢｒｕｋｅｒ  ＡＣ  ２５０に、ＮＭＲスペクトルを記録した。このスペクトルを溶媒信号（ＣＤＣｌ３  ７．２６ｐｐｍ，Ｄ２Ｏ  ４．６７ｐｐｍ）を使用して調節した(calibrated)。ゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）をＷａｔｅｒｓ装置（ｐｕｍｐ．ｍｏｄ．５１０，ＲＩ−検出器  ｍｏｄ．４１０，予備カラムＰＬｇｅｌおよび２本のＰＬ  Ｒｅｓｉｐｏｒｅカラム（３μｍ，３００×７．５ｍｍ））で、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセタミド（ＤＭＡｃ）（７５ｍｍｏｌ／Ｌ  ＬｉＢｒ，８０℃、１ｍＬ／ｍｉｎ）を稀釈剤として用い、ＰＭＭＡ標準に対して調節した。動的光散乱を、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ−ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）を使用して室温で行った。
【０１００】
２．合成手順
前述した手順にしたがって重合手順および仕上げ手順を行った（Ｌｕｘｅｎｈｏｆｅｒ，Ｒ．およびＪｏｒｄａｎ，Ｒ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ３９，３５０９−３５１６（２００６）；Ｂｏｎｎｅ，Ｔ．Ｂ．等，Ｃｏｌｌｏｉｄ  Ｐｏｌｙｍ．  Ｓｃｉ．２８２，８３３−８４３（２００４））。
【０１０１】
メチル−Ｐ［ＭｅＯｘ２７−ｂ−ＢｕＯｘ１２−ｂ−ＭｅＯｘ２７］−ピペリジン（Ｐ１）の典型的な製造は次のようにして行った（ここで、「メチル」はポリマーが末端メチル基を有することを示し、「Ｐ」はかっこ内の部分がポリマー部分であることを示し、「ＭｅＯｘ」は、２−メチル−２−オキサゾリン誘導ポリマー単位を表し、添え字は個々のポリマーブロック中の単位数を表し、「ｂ」は新しいブロックの開始を表し、「ＢｕＯｘ］は２−ブチル−２−オキサゾリン誘導ポリマー単位を表し、そしてピペリジンはポリマー鎖の他の末端記基である）。
【０１０２】
乾燥および不活性条件下、３２．２ｍｇ（０．２ミリモル、１ｅｑ）のメチルトリフルオロメチルスルホネート（メチルトリフレート、ＭｅＯＴｆ）および４４０ｍｇ（５．１７ミリモル、２６ｅｑ）の２−メチル−２−オキサゾリン（ＭｅＯｘ）を３ｍＬ乾燥アセトニトリル中に室温で溶解させた。得られた混合物を１５分間マイクロ波照射（１５０Ｗ最大、１３０℃）に付した。室温に冷却した後、第２ブロック用のモノマー、２−ブチル−２−オキサゾリン（２５６ｍｇ、２．０１ミリモル、１０ｅｑ）を加え、得られた混合物を第１ブロックと同様にして照射した。４４２ｍｇ（５．１９ミリモル、２６ｅｑ）を用いて第３ブロックのために手順を繰り返した。最後に、室温で０．１ｍＬピペリジン（１．０１ミリモル、５ｅｑ）を添加することによりＰ１を終了させた。一夜攪拌後、Ｋ２ＣＯ３を添加し、得られた混合物を数時間攪拌させた。濾過後、溶媒を除去し、残渣に３ｍＬのクロロホルムを加えた。冷ジエチルエーテル（ポリマー溶液量の約１０倍）からの沈殿後、遠心分離により生成物を得た。沈殿を３回行い、水から凍結乾燥後、無色粉末としてポリマーを得た（７９２ｍｇ、６７％、Ｍｔｈ＝５．８ｋｇ／モル）。ＧＰＣ（ＤＭＡｃ）：Ｍｎ＝８．５ｋｇ／モル（ＰＤＩ  １．２１）；
【０１０３】
【数１】
0005671457.tif 000007
【０１０４】
メチル−Ｐ［ＭｅＯｘ３７−ｂ−ＢｕＯｘ２３−ｂ−ＭｅＯｘ３７］−ピペリジン（Ｐ２）の製造
２４ｍｇＭｅＯＴｆ（０．１４６ミリモル、１ｅｑ）、３３３ｍｇＭｅＯｘ（３．９１ミリモル、２７ｅｑ、第１ブロック）、２８６ｍｇＢｕＯｘ（２．２５ミリモル、１５ｅｑ、第２ブロック）および３３３ｍｇＭｅＯｘ（３．９１ミリモル、２７ｅｑ、第３ブロック）および末端用試薬として８０μＬのピペリジンを使用してＰ２を得た。無色固体として生成物を得た（７９５ｍｇ、８３％、Ｍｔｈ＝６．６ｋｇ／モル）。
【０１０５】
【数２】
0005671457.tif 000008
【０１０６】
メチル−Ｐ［ＭｅＯｘ３６−ｂ−ＢｕＯｘ３０−ｂ−ＭｅＯｘ３６］−ピペリジン（Ｐ３）の製造
２４．７ｍｇメチルトリフレート（０．１５０ミリモル、１ｅｑ）および３３４ｍｇ２−メチル−２−オキサゾリン（３．９ミリモル、２６ｅｑ、第１ブロック）を使用して、Ｐ３を製造した。反応混合物のアリコット１３６ｍｇ（５％ｗ／ｗ）を、ＮＭＲおよびＧＰＣを用いて第１ブロックを分析するために取り出した。第２ブロック（３６４．４ｍｇＢｕＯｘ；２．８７ミリモル、２０ｅｑ、１０％ｗ／ｗ分析した）後、同じ手順を行った。ブロック３（３０６．９ｍｇＭｅＯｘ；３．６ミリモル、２８ｅｑ）を加え、８０μＬピペリジンを使用して終了させ、無色固体として生成物を得た（５９８ｍｇ、６５％、Ｍｔｈ＝６．６ｋｇ／モル）。
【０１０７】
【数３】
0005671457.tif 000009
【０１０８】
メチル−Ｐ［ＥｔＯｘ５０−ｂ−ＢｕＯｘ１９］−ピペラジン（Ｐ４）の製造
１０ｍｇＭｅＯＴｆ（６１μモル、１ｅｑ）、３２１ｍｇ２−エチル−２−オキサゾリン（ＥｔＯｘ、３．２４ミリモル、５３ｅｑ、第１ブロック）および１５７ｍｇＢｕＯｘ（１．２３ミリモル、２０ｅｑ、第２ブロック）、そして末端試薬として１５０ｍｇピペラジンを使用してＰ４を製造した。沈殿のため、シクロヘキサンおよびジエチルエーテル（５０／５０、ｖ／ｖ）の溶媒混合物を使用した。無色固体として生成物を得た（収量０．３６ｇ、７７％、Ｍｔｈ＝７．８ｋｇ／モル）。
【０１０９】
【数４】
0005671457.tif 000010
【０１１０】
３．ピレン蛍光測定
標準的手順を使用してＣＭＣを決定した。要するに、アセトン（２．５ミリモル）のピレン溶液をバイアルに加え、溶媒を蒸発させた。アッセイバッファ中に適当な濃度のポリマー溶液をバイアルに加え、その結果、５×１０−７モルのピレン最終濃度を得た。溶液を２５℃でインキュベート（＞２時間）し、ピラン蛍光スペクトルをＦｌｕｏｒｏｌｏｇ３（ＨｏｒｉｂａＪｏｂｉｎＹｖｏｎ）λｅｘ＝３３３ｎｍ、λｅｍ＝３６０〜４００ｎｍ、スリッド幅(slidwidth)ｅｘ＝スリッド幅（ｅｍ）＝１ｎｍ、ステップ幅０．５ｎｍを使用して記録した。典型的には、各データ点の５スペクトルを平均し（積分時間０．１秒、必要の場合０．２秒積分を用いて１０スペクトル）、蛍光強度の急増が観察される場合、ＣＭＣが推定される。さらに、Ｉ１バンドの蛍光強度をＩ３バンドの強度と比較した。Ｉ３バンドは、ピレンプローブ環境の極性の概算を与える。エクシマーバンド形成は観察されなかった。
【０１１１】
このアプローチを使用して、各々１００ｍｇ／Ｌ（１５μＭ、Ｐ１）、２０ｍｇ／Ｌ（２．７μＭ、Ｐ２）、７ｍｇ／Ｌ（１μＭ、Ｐ３）〜６ｍｇ／Ｌ（０．７μＭ、Ｐ４）の範囲の低い臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を見出した（図１参照）。
【０１１２】
図１は、蛍光強度および２５℃で本発明の関連で使用した通りブロックコポリマーの濃度依存性におけるピレン溶液（リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中５×１０−７Ｍ）のＩ１／Ｉ３を示す。
【０１１３】
４．薬物可溶化研究
４．１  パクリタキセル（ＰＴＸ）可溶性
薬物−ポリマー溶液を、薄膜法を使用して調製した。適量のポリマーおよびＰＴＸ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，オーダー番号Ｔ７１９１）（ＡＣＮまたはエタノール中のストック溶液５〜８ｍｇ／ｍＬ）を、交互に最小量のＡＣＮまたはエタノール中に溶解させた。完全に溶媒を除去させた後、固体ポリマー−薬物フィルムを、アッセイ緩衝液または脱イオン水に入れた。例えば、手順を以下に示す。
【０１１４】
穏やかに温めながら空気流中で溶媒を除き、得られたフィルムを少なくとも３時間０．２ミリバールに付し、最終的に存在する残留溶媒を除いた。続いて、２００μｌのアッセイ緩衝液（１２２ミリモルＮａＣｌ、２５ミリモルＮａ２ＣＯ３、１０ミリモルＨＥＰＥＳ、１０ミリモルグルコース、３ミリモルＫＣｌ、１．４ミリモルＣａＣｌおよび０．４ミリモルＫ２ＨＰＯ４を含有する水性溶液、ｐＨ７．４）を加え、最終ポリマー濃度を得た。５０〜６０℃で典型的には５〜１０分間溶液をインキュベートすることにより、より高い濃度のＰＴＸ可溶化を促進させた。ＨＰＬＣシリンジフィルター（０．４５μｍ細孔サイズ）により澄明溶液を濾過して、ＨＰＬＣ分析に付した（下記参照）。フィルム形成前に共通溶媒として相対的に毒性のＡＣＮをより穏和なＥｔＯＨと置換しても添加効率を減じなかった。
【０１１５】
４、７および１０ｍｇ／ｍＬのＰＴＸを１０ｍｇ／ｍＬのＰ２で可溶化を試みた。７ｍｈ／ｍＬ  ＰＴＸ濃度まで、短時間穏和加熱（約４０℃）後、澄明溶液を得た。これらの条件下、ＰＴＸの可溶化が完全であり、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により確認された（図２Ａ参照）。
【０１１６】
１０ｍｇ／ｍＬ  ＰＴＸのみ、３０分６０℃加熱した後でも未溶解の透明結晶がいくらか残った。しかし、それでも８．２ｍｇ／ｍＬの多量のＰＴＸが可溶化し、水相に見出された。換言すれば、得たれた製剤は少なくとも４０重量％ＰＴＸからなる。同様の結果が、ＢｕＯｘブロック中にわずか１２単位しか有しないＰ１を含む他のポリマーで得られた（図２Ｂ参照）。
【０１１７】
２ｍｇ／ｍＬ程度の低さのポリマー濃度でさえ、卓越した添加効率および約３０重量％の総薬物添加を得た（参照図２Ｃ、Ｄ）。したがって、本発明との関連で使用されるブロックコポリマー類は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ／エタノール（ＣｒＥＬ）およびＡｂｒａｘａｎｅＴＭと比較して、それぞれ、約１００倍および９倍、ＰＴＸを可溶化させるのに必要な賦形剤の量を減らすことができる。
【０１１８】
図２は、薄膜法を使用して、両親媒ブロックコポリマー類を用いてＰＴＸを可溶化させた結果を示す。異なるポリマーおよび目標ＰＴＸ濃度を使用し、ＰＴＸのＡ〜Ｄの溶液濃度（棒）および添加効率（交叉円）であり：Ａ）Ｐ２（１０ｍｇ／ｍＬ）およびＰＴＸ（４ｍｇ／ｍＬ、７ｍｇ／ｍＬおよび１０ｍｇ／ｍｌ）；Ｂ）Ｐ１〜Ｐ４（１０ｍｇ／ｍＬ）およびＰＴＸ  ４ｍｇ／ｍＬ；Ｃ）Ｐ３（２ｍｇ／ｍＬ）およびＰＴＸ（１００μｇ／ｍＬ、５００μｇ／ｍＬおよび１ｍｇ／ｍＬ）；Ｄ）Ｐ１〜Ｐ３（２ｍｇ／ｍＬ）およびＰＴＸ（５００μｇ／ｍＬ）である。
【０１１９】
データを平均（ｎ＝３、ただし、Ｃ：１ｍｇ／ｍＬ  ＰＴＸはｎ＝１であり、Ｂ：Ｐ４はｎ＝２である）±ＳＥＭとして示す。
【０１２０】
４．２  シクロスポリンＡの可溶化
薄膜法を使用してシクロスポリンＡ（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ、オーダー番号３８０−００２−Ｇ００１）の可溶化を行った。Ｐ２およびシクロスポリンＡを使用して、澄明で且つ安定な溶液を得た。
【０１２１】
４．３  アンホテシリンＢの可溶化
透析による溶媒交換を使用して、アンホテシリンＢとＰ２との可溶化を行った。Ｐ２（１０．２ｍｇ）およびアンホテシリンＢ三水和物（２．１ｍｇ、Ｒｉｅｄｅｌ−ｄｅ  Ｈａｅｎ、Ｓｅｅｌｚｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ、オーダー番号４６００６）を２５０μＬジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解させ、澄明で黄色溶液を得た。総計で７５０μＬの脱イオン水を加えたが、１００μＬ後、混合物は濁った。得られた混合物を透析袋（ＭＷＣＯ  ３５００ｇ／モル）中に移した。溶液を２Ｌ脱イオン水に対して透析した（２時間、４時間および２２時間で水を交換した）。総計５０時間後、懸濁液（４ｍＬ）を透析袋から回収した。５００μＬアリコットを濾過し（０．４５μｍ）、粒子を除き、澄明黄色溶液を凍結乾燥させ、１ｍｇの黄色泡状固体を得た。残渣を２００μＬ  ＤＭＳＯ中に溶解させ、アンホテシリンＢを、４１０ｎｍにおける吸光度を使用して、分光光度法で定量した。透析溶液は３６６μｇのアンホテシリンＢ（Ｐ２に関して１８％（ｗ／ｗ））を含有した。別の１ｍＬアリコットを凍結乾燥し（２．２ｍｇ黄色発泡体）、続いて、１００μＬ脱イオン水に溶解させた。ポリマー−薬物発泡体は迅速且つ完全に溶解し、低粘度の強黄色溶液を得た。したがって、凍結保護物質を必要としないで、３．７ｍｇ／ｍＬのアンホテシリンＢが、１８．３ｍｇ／ｍＬのＰ２のみを使用して可溶化できた。同じプロトコルを使用して、アンホテシリンＢの水溶解度を、約０．４μｇ／ｍＬであると決定した。
【０１２２】
４．４  薬物可溶化のＨＰＬＣ分析
ＨＰＬＣ分析を、等張条件下、ＳＣＬ−１０Ａシステムコントローラー、ＳＩＬ−１０Ａ自動注入器、ＳＰＤ−１０ＡＶ  ＵＶ検出器、および２基のＬＣ−１０ＡＴポンプを含むＳｉｍａｄｚｕ装置を使用して行った。固定相としてＮｕｃｌｅｏｓｉｌ  Ｃ１８−５μカラムを使用し（２５０ｍｍ×４ｍｍ）、移動相としてアセトニトリル／水混合物（５５／４５（ｖ／ｖ））を適用した。検出は２２０ｎｍで行った。ポリマー溶液中のＰＴＸの量を、アセトニトリルに溶解した既知量のＰＴＸを用いて得た較正曲線を使用して計算し、分析をした。
【０１２３】
上述したプロトコルを使用して得たシクロスポリンＡ溶液のＨＰＬＣ分析を、移動相としてアセトニトリル／水混合物（９０／１０（ｖ／ｖ））を７０℃で使用して行った。５ｍｇ／ｍＬのＰ２に関して、１．０３ｍｇ／ｍＬのシクロスポリンＡが可溶化できた。これは、８２％添加効率および１７％添加（ｗ／ｗ）に相当した。したがって、シクロスポリンＡ溶解度の約１２０倍増加がＰ２を使用して達成した。
【０１２４】
４．５  ミセル特性化
動的光散乱により決定して、薬物添加ミセルは非常に小さいことが見出され（ｒｈ＝１２〜２２ｎｍ）、狭い寸法分布（ＰＤ≒０．０４〜０．１２）を示す。図３は、Ｐ１およびＰ２（１０ｍｇ／ｍＬ）の薬物添加ミセル（それぞれ、４ｍｇ／ｍＬ  ＰＴＸ）の動的光散乱の結果を示す。
【０１２５】
５．細胞毒性アッセイ：ＭＴＴ
ＭＣＦ７／ＡＤＲ（ドキソルビシンを用いた選択による、ヒト乳癌細胞系、ＭＣＦ７（ＡＴＣＣ  ＨＴ−Ｂ２２）から誘導）を、Ｙ．Ｌ．Ｌｅｅ（Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｂｅａｕｍｏｎｔ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ、Ｒｏｙａｌ  Ｏａｋ、ＭＩ）により提供された。１０％熱不活性ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および別記した１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＥＥＭ）中に細胞を維持した。Ｇｉｂｃｏ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）から総ての組織物質培地を得た。
【０１２６】
９６ウエルプレート中にＭＣＦ７／ＡＤＲを播種し（１０４細胞／ウエル）、２４時間再付着させた。処理溶液を、培地（１０％ＦＢＳ、２５ミリモルＨＥＰＥＳおよびペニシリン／ストレプトマイシンで補足した、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＥＥＭ））を用いて適当に稀釈することにより、アッセイ緩衝液（１２２ミリモルＮａＣｌ、２５ミリモルＮａＨＣＯ３、１０ミリモルグルコース、１０ミリモルＨＥＰＥＳ、３ミリモルＫＣｌ、１．２ミリモルＭｇＳＯ４、１．４ミリモルＣａＣｌ２、および０．４ミリモルＫ２ＨＰＯ４を含有、ｐＨ７．４）中の１ｍｇ／ｍＬポリマーストック溶液から調製した。２００μＬの処理溶液を用いて４８時間細胞をインキュベートした。処理溶液を廃棄後、ＰＢＳを用いて細胞を３回洗浄した。ＦＢＳ不含ＤＭＥＭ（１００μＬ／ウエル）ならびにＰＢＳ中２５μＬの３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ、ＵＳＡ）を加え、３７℃で２時間細胞をインキュベートした。続いて、培地を廃棄し、１００μＬの溶媒（水中、２５％（ｖ／ｖ）ＤＭＦ、２０％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ）で置換した。一夜かけてパープルホルマザン生成物を溶解させ、５７０ｎｍの吸光度をプレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ５、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｓｅｓ）を使用して得た。陽性対照は培地のみで処理した細胞であり；陰性対照は細胞なしのウエルである。４個のウエルで各濃度を繰り返し、結果を平均±ＳＥＭとして表現した。
【０１２７】
図４は、多剤耐性（ＭＣＦ７／ＡＤＲ、Ａ）および非−耐性（ＭＣＦ７、Ｂ）ヒトアデノカルチノーマ細胞およびＭａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞におけるＰ１〜Ｐ４の、２４時間（Ａ）および２時間（Ｂ、Ｃ）インキュベート後の細胞毒性についてのアッセイ結果を示す。データは平均±ＳＥＭとして表現した。Ｐ１〜Ｐ４単独は２０ｍｇ／ｍＬまでの濃度で、異なる細胞系を使用する２４時間インキュベートで非毒性であることが見出された。
【０１２８】
通常のポリマー類(plain polymers)と対照的に、ヒトおよびネズミ腫瘍細胞系に関して、ＰＴＸ−添加ミセルは、顕著な濃度依存性毒性を示した（図５Ａ）。例えば、ＰＴＸ−添加Ｐ２、Ｐ３およびＰ４について２４時間インキュベート後、耐性細胞系（ＭＣＦ７／ＡＤＲ）を使用して、１０μＭ範囲のＩＣ５０値を観察した。市販ＣｒＥＬ−ＰＴＸ製剤を対照として使用し、匹敵する増殖抑制をもたらした。ＰＴＸ−添加ミセルは凍結保護物質を必要としないで凍結乾燥でき、薬物添加、粒度またはインビトロ薬物効率を妥協しないで水または生理食塩水中に簡単に再分散できる（図５Ｂ）。
【０１２９】
図５は、多剤耐性ＭＣＦ７／ＡＤＲ細胞のパクリタキセル用量依存性生存率を示す。Ａ）Ｐ２およびＰ３製剤化ＰＴＸの比較が、２４時間インキュベート後キャリヤー物質の依存性の細胞生存率に著しい差がないことを示す。Ｂ）凍結乾燥および脱イオン水で再構成後、Ｐ４についての例でパクリタキセル活性に変化がないことが観察される。データを平均（ｎ＝３）±ＳＥＭとして表す。
【０１３０】
６．動物研究
総ての実験を、雌性Ｃ５７／ＢＩ／６マウス１１〜１２週齢（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＮＹ）を使用して行った。動物を５匹／ケージに入れ、空気フィルターカバー、光（１２時間明／暗サイクル）および温度制御（２２Ｆ１８Ｃ）環境下に維持した。動物に関する総ての操作を滅菌ラミナーフード下で行った。食餌および水を自由に与えた。国立衛生研究所により示されたＰｒｉｎｃｅｐｌｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅにしたがって動物を処理し、プロトコルは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｎｅｂａｒａｓｋａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＣｅｎｔｅｒのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅにより承認された。Ｌｅｗｉｓ肺癌細胞（ＬＬＣ  ３Ｔ）をＴ７５フラスコ中で増殖させ、ＨＢＳＳで採集した。細胞懸濁液（１×１０６／動物）を右脇腹に５０μＬの量を皮下注射した。腫瘍出現後、腫瘍寸法を記録し（１日）、１０ｍｇ／ｋｇ  ＰＴＸの用量で、１、４および７日に１００μＬの量を注射した。
【０１３１】
ＰＴＸ−添加ミセルのインビボ抗腫瘍作用を、皮下Ｌｅｗｉｓ肺癌腫瘍を持つＣ５７／ＢＩ／６マウスで試験した（図６）。市販（ＣｒＥＩ）および再構成ポリ（２−オキサゾリン）製剤（Ｐ２−ＰＴＸ）双方が、わずか１回の注射後、全身腫瘍組織量を顕著に（ｐ＜０．０５）減少させた（４日、それぞれ、腫瘍抑制率＝７２％および６３％）。Ｐ２−ＰＴＸ処理動物における腫瘍は、１１日〜２５日間市販製品で処理した動物よりも顕著に小さいままであった（ｐ＜０．０５）。この期間のＰ２−ＰＴＸによる腫瘍抑制率が約７０％であり、これと比較してＣｒＥＩ群の腫瘍抑制率が５０〜６０％であったことを見出した。しかし、２８日後、Ｐ２−ＰＴＸ処方動物の全身腫瘍組織量の鋭い増加が観察され、両処理群とも同じ腫瘍抑制率であることが見出された。
【０１３２】
図６Ａ）は、陰性対照（生理食塩水、Ｐ２単独）、ＰＯｘ可溶化ＰＴＸで処理（Ｐ２−ＰＴＸ）および同ＰＴＸ用量（１０ｍｇ／ｋｇ）の市販製品（ＣｒＥＩ）を比較する、Ｃ５７／ＢＩ／６マウスの皮下Ｌｅｗｉｓ肺癌腫瘍の相対腫瘍量を示す。矢印は注射の時を示す。Ｂ）Ｐ２、Ｐ２−ＰＴＸおよび市販ＣｒＥＩの腫瘍抑制率。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）として表す。図６Ｂは、異なる時点での、Ｐ２、Ｐ２−ＰＴＸおよび市販ＣｒＥＩ処理群の計算腫瘍抑制率を示す。
以下に、出願時の特許請求の範囲の記載を示す。
［請求項１］
（ａ）  式（Ｉ）
【化１】
0005671457.tif 000011
（式中、ＲＡは炭化水素基であり、場合により、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＲ’２、−ＣＯＯＲ’、−ＣＯＮＲ’、−ＣＨＯで置換されていてもよく、Ｒ’はＨもしくはＣ１−３アルキルであり、ＲＡは式（Ｉ）の繰り返し単位が親水性であるように選択する）の繰り返し単位；および式（ＩＩ）
【化２】
0005671457.tif 000012
（式中、ＲＢは炭化水素基であり、場合により、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＲ”２、−ＣＯＯＲ”、−ＣＯＮＲ”、−ＣＨＯで置換されていてもよく、Ｒ”はＨ、アルキルもしくはアルケニルであり、ＲＢは式（ＩＩ）の繰り返し単位が式（Ｉ）の繰り返し単位よりもより疎水性であるように選択する）の繰り返し単位
を含む少なくとも一つのコポリマーと；
（ｂ）  １種以上の活性剤と
を含む組成物。
［請求項２］
ＲＡは、各出現に独立して、メチルおよびエチルから選択され、場合により、−ＯＨ、−ＳＨ、ＣＯＯＨ、−ＮＲ’２、−ＣＯＯＲ’、−ＣＯＮＲ’、−ＣＨＯで置換されてもよく、Ｒ’はＨもしくはＣ１−３アルキルであり、ＲＢはＣ３−２０炭化水素基から選択される、請求項１に記載の組成物。
［請求項３］
ＲＡは、各出現に独立して、メチルおよびエチルから選択され、ＲＢはＣ４−６アルキル基から選択される、請求項１に記載の組成物。
［請求項４］
コポリマーが、請求項１〜３のいずれかで定義した式（Ｉ）の繰り返し単位からなる少なくとも一つのポリ（２−オキサゾリン）ブロックＡおよび請求項１〜３のいずれかで定義した式（ＩＩ）の繰り返し単位からなる少なくとも一つのポリ（２−オキサゾリン）ブロックＢを含むブロックコポリマーである、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
［請求項５］
少なくとも一つのブロックＡはポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）またはポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）ブロックであり、少なくとも一つのブロックＢはポリ（２−ブチル−２−オキサゾリン）ブロックである、請求項４に記載の組成物。
［請求項６］
ブロックコポリマーがＡＢもしくはＢＡジブロックコポリマーまたはＡＢＡもしくはＢＡＢトリブロックコポリマーである、請求項４または５に記載の組成物。
［請求項７］
少なくとも一つの活性剤が疎水性活性剤である、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
［請求項８］
少なくとも一つのコポリマーが、活性剤を配合するミセルを形成する、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
［請求項９］
活性剤（単味もしくは複数種）対コポリマー（単一もしくは複数種）の重量比が１：１０〜１：１の範囲である、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
［請求項１０］
ミセルの寸法が５〜５００ｎｍである、請求項８または９に記載の組成物。
［請求項１１］
活性剤とブロックコポリマーとの合計重量に対する活性剤もしくは薬物の重量の比率が１０％またはそれ以上である、請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
［請求項１２］
活性剤として薬物を含有する医薬組成物または診断用組成物である、請求項１〜１１のいずれかに記載の組成物。
［請求項１３］
ＲＡをメチルおよびエチルから選択する上記定義した通りの式（Ｉ）の繰り返し単位およびＲＢがブチルである上記定義した通りの式（ＩＩ）の繰り返し単位を含むコポリマー。
［請求項１４］
ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）またはポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）から選択される少なくとも一つのブロックＡ、およびポリ（２−（Ｃ４−６）アルキル−２−オキサゾリン）から選択される少なくとも一つのブロックＢを含むブロックコポリマーである、請求項１３に記載のコポリマー。
［請求項１５］
プラント保護用組成物として、請求項１〜１１のいずれかに記載の組成物の使用。
［請求項１６］
水中または水性溶液中に活性剤を可溶化させるための、請求項１〜６、１３または１４のいずれかに記載のコポリマーの使用。
［請求項１７］
活性化合物の検出方法であって、当該化合物がスクリーニング試験において関心目標と相互作用し、当該方法は、活性化合物を請求項１〜１１のいずれかに記載の組成物に配合する工程および得られた組成物を該スクリーニング試験に付す工程を含む、前記検出方法。
［請求項１８］
治療または防止の必要な対象に請求項１２に記載の医薬組成物を投与することを含む、障害または疾病を治療または防止する方法。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６−１】
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【図６−２】
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