(57)【要約】  本発明は、 微小血管障害、眼疾患、難聴、神経変性疾患及び障害、脊髄損傷並びに呼吸器の状態の処置に有用な、RTP801を標的とする化学修飾されたsiRNA化合物及びそれを含む医薬組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造：
５’          （Ｎ）x−Ｚ          ３’    （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）y−ｚ’’    ５’    （センス鎖）
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾でも修飾されていてもよいリボヌクレオチド、又は非通常部分であり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は独立して、それが存在する鎖の３’末端において共有結合で結合された１〜５個の連続したヌクレオチドであり；
ｚ’’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、（Ｎ’）ｙの
５’末端において共有結合で結合されたキャッピング部分であり；
それぞれｘ＝ｙ＝１９であり；
（Ｎ）ｘは、少なくとも１つの２’Ｏメチル糖修飾リボヌクレオチドを含み；
（Ｎ’）ｙは、３'末端又は３’末端から二番目の位置の少なくとも１つにおいてミラーヌクレオチドを含み；そして
（Ｎ）ｘの配列は、配列番号１６及び配列番号１２４３のいずれか１つにおいて示される］
を有する化合物。
【請求項２】
（Ｎ’）ｙにおいて３’末端におけるＮ’がミラーヌクレオチドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
（Ｎ’）ｙにおいて３’末端から二番目の位置におけるＮ’がミラーヌクレオチドである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
（Ｎ）ｘにおいて、リボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、そして（Ｎ）ｘの中央に位置するリボヌクレオチドは未修飾である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
（Ｎ）ｘは、３’末端で始まる少なくとも５つの交互の未修飾リボヌクレオチド及び２’Ｏメチル糖修飾リボヌクレオチド、そして全体で少なくとも９つの２’Ｏメチル糖修飾リボヌクレオチドを含み、そして残りの各Ｎは未修飾リボヌクレオチドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
（Ｎ）ｘにおいて、５’末端における１〜５個の連続したＮは２’Ｏメチル糖修飾リボヌクレオチドであり、そして残りのＮは未修飾リボヌクレオチドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
以下の構造：
５’          （Ｎ）x−Ｚ          ３’      （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）y−ｚ’’    ５’      （センス鎖）
［ここで、Ｎ及びＮ’はそれぞれ、未修飾でも修飾されていてもよいリボヌクレオチド、又は非通常部分であり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は独立して、それが存在する鎖の３’末端において共有結合で結合された１〜５個の連続したヌクレオチドであり；
ｚ’’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、（Ｎ’）ｙの５’末端において共有結合で結合されたキャッピング部分であり；
ｘ及びｙはそれぞれ独立して１８と４０との間の整数であり；
（Ｎ）ｘは少なくとも１つの２’Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドを含み；
（Ｎ’）ｙにおいて、１つ若しくはそれ以上の末端において又は１つ若しくはそれ以上の末端から二番目の位置から始まる、少なくとも２つの連続したリボヌクレオチドが、ミラーヌクレオチド又は２'−５'架橋ヌクレオチドであり；そして
（Ｎ'）ｙにおけるリボヌクレオチドの配列が、ＲＴＰ８０１遺伝子から転写されたｍＲＮＡにおける同一の長さの連続したリボヌクレオチドの配列と同一であり、そして（Ｎ）ｘの配列は（Ｎ'）ｙの配列と相補的である］
を有する化合物。
【請求項８】
（Ｎ）ｘの配列が、表Ａ〜Ｉのいずれか１つに存在するアンチセンス配列である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｚ及びＺ’が存在しない、請求項７または８に記載される化合物。
【請求項１０】
ｘ＝ｙ＝１９である、請求項７または８に記載される化合物。
【請求項１１】
（Ｎ）ｘにおいて、リボヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、そして（Ｎ）ｘの中央の位置に位置するリボヌクレオチドが未修飾であり；そして
（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで３’末端における少なくとも２つの連続したヌクレオチドがＬ−ＤＮＡヌクレオチドである、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
（Ｎ）ｘにおいて、リボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、そして（Ｎ）ｘの中央の位置に位置するリボヌクレオチドは未修飾であり；そして
（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで３’末端における少なくとも２つの連続したヌクレオチドは２’−５’架橋により共に結合される、
請求項７〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
（Ｎ）ｘにおいて、リボヌクレオチドは、修飾されたリボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、各修飾されたリボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルをその糖上に有するように修飾されており、そして（Ｎ）ｘの中央の位置に位置するリボヌクレオチドは未修飾であり；そして
（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで３’末端から二番目の位置から始まる少なくとも２つの連続したヌクレオチドは２’−５’架橋により共に結合される、
請求項７〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
（Ｎ’）ｙにおいて、３’末端における３つの連続したヌクレオチドが２’−５’架橋により共に結合される、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
化合物が、１つ又はそれ以上の末端においてリン酸化されているか又はリン酸化されていない、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物；及び薬学的に許容しうる担体を含む医薬組成物。
【請求項１７】
呼吸器障害、眼疾患、微小血管障害、聴覚障害、腎障害、虚血性状態、脊髄損傷、又は神経変性疾患より選択される疾患の処置における使用のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１８】
眼疾患が、黄斑変性、緑内障、糖尿病性網膜症及び糖尿病性黄斑浮腫からなる群より選択される、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
呼吸器障害が、ＣＯＰＤ、喘息、慢性気管支炎及び気腫からなる群より選択される、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２０】
微小血管障害が急性腎不全である、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２１】
神経変性疾患が、アルツハイマー病、ＡＬＳ及びパーキンソン病からなる群より選択される、請求項１７に記載の使用。
【請求項２２】
腎障害が、ＡＲＦ及びＤＧＦからなる群より選択される、請求項１７に記載の使用。
【請求項２３】
アポトーシス関連状態の処置における使用のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２４】
血管新生関連状態の処置における使用のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２５】
それを必要とする被験体において疾患又は状態の発生率又は重症度を処置又は予防するための方法であって、疾患若しくは状態及び／又はそれらに関連する症状が、呼吸器障害、眼疾患、腎障害、微小血管障害、聴覚障害、虚血性状態、脊髄損傷、又は神経変性疾患からなる群より選択され、請求項１６に記載の医薬組成物を疾患又は状態を処置するために有効な量で被験体に投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国仮特許出願第６１／０７０１８１号（これは参照によりその全体が本明細書に加入される）の優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、新規なｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチド、並びにＲＴＰ８０１を阻害する化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物、並びに呼吸器障害（肺障害を含む）、眼の疾患及び状態、難聴（ｈｅａｒｉｎｇ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓ）（聴覚損失を含む）、神経変性障害、脊髄損傷、微小血管障害、血管新生関連状態及びアポトーシス関連状態を処置するための化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＲＴＰ８０１
ＲＴＰ８０１遺伝子は本願譲受人により初めて報告された。本願譲受人に譲渡された特許文献１、特許文献２、及び特許文献３並びに関連特許（参照によりそれらの全体が本明細書に加入される）は、ＲＴＰ８０１ポリヌクレオチドおよびポリペプチド、ならびに該ポリペプチドに対する抗体を開示する。ＲＴＰ８０１は、ＶＥＧＦなどのような増殖因子とは独立して、低酸素誘導性の病理発生を調節し得る低酸素誘導因子−１（ＨＩＦ−１）のユニークな遺伝子標的である。本願譲受人が譲り受けた特許文献４、特許文献５及び特許文献６（参照によりそれらの全体が本明細書に加入される）は、ＲＴＰ８０１の阻害のための、ｓｉＲＮＡを含む化合物に関する。
【０００４】
本願譲受人は、ＲＴＰ８０１Ｌ（ＲＴＰ８０１−様）と称される、相違するが類似の遺伝子を発見しており、これはＲＴＰ８０１との組み合わせ治療において使用することができる（以下を参照のこと）。ＲＴＰ８０１Ｌに関するさらなる情報については、本願譲受人に譲渡された特許文献７（参照によりその全体が本明細書に加入される）を参照のこと。
【０００５】
以下の特許及び特許出願は、背景情報の諸相を示す：特許文献８、特許文献９、特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２、特許文献１３、特許文献１４及び特許文献１５。以下の刊行物は背景情報を示す：非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；及び非特許文献４。
【０００６】
ｓｉＲＮＡ及びＲＮＡ干渉
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡ−依存性遺伝子特異的転写後サイレンシングを含む現象である。この現象を研究して哺乳動物細胞を実験的に操作しようとする初期の試みは、長いｄｓＲＮＡ分子に応じて活性化される、活性で非特異的な抗ウイルス防御機構によって妨げられた（非特許文献５）。後に、２１ヌクレオチドのＲＮＡの合成二重鎖が、一般的な抗ウイルス防御機構を刺激することなく、哺乳動物細胞において遺伝子特異的ＲＮＡｉを媒介し得るということが発見された（非特許文献６及び非特許文献７）。結果として、短い二本鎖ＲＮＡである低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）が、遺伝子発現を阻害し、そして遺伝子機能を理解するために広く使用されている。
【０００７】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）（非特許文献８）又はマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）（非特許文献９及び非特許文献１０）により媒介される。植物における対応するプロセスは一般に、特異的転写後遺伝子サイレンシングと呼ばれ、そして真菌類ではクエリング（ｑｕｅｌｌｉｎｇ）と呼ばれる。
【０００８】
ｓｉＲＮＡは、内因性又は外因性の遺伝子／ｍＲＮＡの発現を下方調節又は抑制する（ｓｉｌｅｎｃｅｓ）（すなわち完全に又は部分的に阻害する）二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）である。ＲＮＡ干渉は、特定のｄｓＲＮＡ種が特異的なタンパク質複合体に入る能力に基づくものであり、その後そこで相補的な細胞のＲＮＡ（すなわちｍＲＮＡ）に標的化され、そのＲＮＡを特異的に分解又は切断する。従って、ＲＮＡ干渉応答は、一般的にＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と呼ばれる、ｓｉＲＮＡを含むエンドヌクレアーゼ複合体を特色とし、これがｓｉＲＮＡ二重鎖のアンチセンス鎖に相補的な配列を有する一本鎖ＲＮＡの切断を媒介する。標的ＲＮＡの切断は、ｓｉＲＮＡ二重鎖のアンチセンス鎖に相補的な領域の中央において起こり得る（非特許文献１１）。より詳細には、長鎖ｄｓＲＮＡが、ＩＩＩ型ＲＮＡｓｅ（ＤＩＣＥＲ、ＤＲＯＳＨＡなど、非特許文献１２及び非特許文献１３を参照のこと）により低分子（１７−２９ｂｐ）ｄｓＲＮＡフラグメント（低分子阻害（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ）ＲＮＡ又は「ｓｉＲＮＡ」とも呼ばれる）へと消化される。ＲＩＳＣタンパク質複合体は、これらのフラグメント及び相補ｍＲＮＡを認識する。プロセス全体は、標的ｍＲＮＡのエンドヌクレアーゼ切断で終わりとなる（非特許文献１４；非特許文献１５）。これらの用語及び提案された機構に関するさらなる情報については、例えば非特許文献１６；非特許文献１７及び特許文献１６を参照のこと。
【０００９】
研究により、ｓｉＲＮＡがインビボでヒトを含む哺乳動物において有効であり得るということが分かった。具体的には、Ｂｉｔｋｏらは、呼吸器多核体ウイルス（ＲＳＶ）ヌクレオカプシドＮ遺伝子に対して特定のｓｉＲＮＡが、鼻腔内投与された場合にマウスの処置において有効であるということを示した（非特許文献１８）。ｓｉＲＮＡの治療への応用の総説については、例えばＢａｒｉｋ（非特許文献１９）及びＣｈａｋｒａｂｏｒｔｙ（非特許文献２０）を参照のこと。さらに、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）を処置するためのＶＥＧＦ受容体１（ＶＥＧＦＲ１）を標的にした短いｓｉＲＮＡを用いた臨床研究が、ヒト患者において行われた（非特許文献２１）。治療剤としてのｓｉＲＮＡの使用に関するさらなる情報は、非特許文献２２；非特許文献２３；非特許文献２４において見られる。
【００１０】
化学修飾されたｓｉＲＮＡ
公知の遺伝子に対応するｓｉＲＮＡの選択及び合成は広く報告されている；（例えば非特許文献２５；非特許文献２６；非特許文献２７；非特許文献２８；非特許文献２９を参照のこと）。
【００１１】
修飾されたｓｉＲＮＡの使用、及び製造の例は、非特許文献３０；非特許文献３１；特許文献１７（ａｔｕｇｅｎ  ＡＧ）及び特許文献１８（Ｔｕｓｃｈｌら）において見られる。特許文献１９及び特許文献２０は、化学修飾されたオリゴマーを教示する。特許文献２１は、交互の（ａｌｔｅｒｎａｔｉｎｇ）未修飾リボヌクレオチド及び２’糖修飾リボヌクレオチドを有するオリゴマー化合物に関する。特許文献２２は、化学修飾されたヌクレオシド間連結を有するｄｓＲＮＡ化合物を記載する。
【００１２】
５’−ホスフェート部分を含めることにより、ショウジョウバエ胚においてｓｉＲＮＡの活性が増強されるということが示されており（非特許文献３２）、そして５’−ホスフェート部分を含めることは、ヒトＨｅＬａ細胞においてｓｉＲＮＡ機能のために必要である（非特許文献３３）。
【００１３】
Ａｍａｒｚｇｕｏｕｉら（非特許文献３４）は、ｓｉＲＮＡ活性が２’−Ｏ−メチル修飾の位置に依存することを示した。Ｈｏｌｅｎら（非特許文献３５）は、少数の２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオシドを有するｓｉＲＮＡが野生型と比較して良好な活性を示すが、その活性は２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオシドの数が増えるにつれて減少するということを報告する。Ｃｈｉｕ及びＲａｎａ（非特許文献３６）は、２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオシドをセンス鎖又はアンチセンス鎖に組み込むこと（完全に修飾された鎖）により、未修飾ｓｉＲＮＡと比較してｓｉＲＮＡ活性が大幅に減少するということを教示する。２’−Ｏ−メチル基をアンチセンス鎖上の５’−末端に配置することは、活性を大幅に制限すると報告されているが、アンチセンスの３’−末端において及びセンス鎖の両方の末端に配置することは許容される（非特許文献３７）。
【００１４】
本発明譲受人に譲渡された特許文献２３及び特許文献２４（参照によりそれらの全体が本明細書に加入される）は、化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物の製造において有用なモチーフを開示する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】米国特許第6,455,674号
【特許文献２】米国特許第6,555,667号
【特許文献３】米国特許第6,740,738号
【特許文献４】PCT特許出願第PCT/US2005/029236号
【特許文献５】PCT特許出願第PCT/US2007/001468号
【特許文献６】PCT特許出願第PCT/US2008/002483号
【特許文献７】PCT公開第ＷＯ2007/141796号
【特許文献８】ＷＯ2001/070979
【特許文献９】US 2003108871
【特許文献１０】US 2002119463
【特許文献１１】ＷＯ2004/018999
【特許文献１２】EP 1394274
【特許文献１３】ＷＯ2002/101075
【特許文献１４】ＷＯ2003/010205
【特許文献１５】ＷＯ2002/046465
【特許文献１６】PCT公開第WO01/36646号
【特許文献１７】PCT公開第ＷＯ2004/015107号
【特許文献１８】PCT公開第ＷＯ02/44321号
【特許文献１９】米国特許第5,898,031号
【特許文献２０】米国特許第6,107,094号
【特許文献２１】米国特許第7,452,987号
【特許文献２２】米国特許公開第2005/0042647号
【特許文献２３】PCT特許出願第PCT/IL2008/000248号
【特許文献２４】PCT特許出願第PCT/IL2008/001197号
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Shoshani, et al．Mol．Cel．Biol., Apr．2002, p．2283−2293
【非特許文献２】Brafman, et al． Invest Ophthalmol Vis Sci．2004．45(10):3796−805
【非特許文献３】Ellisen, et al． Molecular Cell, 2002．10:995−1005
【非特許文献４】Richard et al．J Biol．Chem．2000, 275(35)：26765−71
【非特許文献５】Gil et al., Apoptosis, 2000．5:107−114
【非特許文献６】Elbashir et al．Nature 2001, 411:494−498
【非特許文献７】Caplen et al．PNAS 2001, 98:9742−9747
【非特許文献８】Fire et al, Nature 1998, 391:806
【非特許文献９】Ambros V．Nature 2004, 431:350−355
【非特許文献１０】Bartel DP．Cell．2004 116(2):281−97
【非特許文献１１】Elbashir, et al.,Genes Dev., 2001, 15:188
【非特許文献１２】Bernstein et al., Nature, 2001, 409:363−6
【非特許文献１３】Lee et al., Nature, 2003, 425:415−9
【非特許文献１４】McManus and Sharp, Nature RevGenet, 2002, 3:737−47
【非特許文献１５】Paddison and Hannon, Curr Opin Mol Ther．2003, 5(3)：217−24
【非特許文献１６】Bernstein, et al., RNA．2001, 7(11):1509−21
【非特許文献１７】Nishikura, Cell．2001, 107(4):415−8
【非特許文献１８】Bitko, et al., Nat．Med．2005, 11(1):50−55
【非特許文献１９】Barik, Mol．Med 2005, 83：764−773
【非特許文献２０】Chakraborty,Current Drug Targets 2007 8(3):469−82
【非特許文献２１】Kaiser, Am J Ophthalmol．2006 142(4):660−8
【非特許文献２２】Durcan, 2008．Mol．Pharma．5(4):559−566
【非特許文献２３】Kim and Rossi, 2008．BioTechniques 44:613−616
【非特許文献２４】Grimm and Kay, 2007, JCI, 117(12):3633−41
【非特許文献２５】Ui−Tei et al., 2006．J Biomed Biotechnol．2006:65052
【非特許文献２６】Chalk et al., 2004．BBRC．319(1)：264−74
【非特許文献２７】Sioud ＆ Leirdal, 2004．Met．Mol Biol．252:457−69
【非特許文献２８】Levenkova et al., 2004, Bioinform．20(3):430−2
【非特許文献２９】Ui−Tei et al., 2004．NAR 32(3):936−48
【非特許文献３０】Braasch et al., 2003．Biochem., 42(26):7967−75
【非特許文献３１】Chiu et al., 2003, RNA, 9(9):1034−48
【非特許文献３２】Boutla, et al., 2001, Curr．Biol． 11:1776−1780
【非特許文献３３】Schwarz et al., 2002, Mol．Cell, 10:537−548
【非特許文献３４】Amarzguoui, et al., 2003, NAR, 31(2):589−595
【非特許文献３５】Holen et al, 2003, NAR, 31(9):2401−2407
【非特許文献３６】Chiu and Rana, 2003, RNA, 9:1034−1048
【非特許文献３７】Czauderna et al., 2003, NAR, 31(11), 2705−2716
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
あらゆるタイプの呼吸器障害（肺の障害を含む）、眼の疾患及び状態、難聴（聴覚損失を含む）、微小血管障害、神経変性疾患及び障害、脊髄損傷、血管新生関連状態及びアポトーシス関連状態は、世界中の何百万という人々に影響を及ぼしている。これらの疾患及び障害に罹患しているか又はこれらの疾患及び障害に感受性の被験体の処置において有用な新しい薬物及び新しい薬物標的を同定する必要性が存在する。
【００１８】
ＲＴＰ８０１遺伝子を阻害し、そして上述の疾患及び障害の処置において有用な、安定でかつ活性なｓｉＲＮＡ化合物は大きな治療的価値があるだろう。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
発明の要旨
本発明は、一局面において、ＲＴＰ８０１標的遺伝子の発現を阻害又は軽減する、新規な二本鎖の化学修飾されたオリゴヌクレオチドを提供する。本オリゴヌクレオチドは、微小血管障害、眼の疾患及び状態（例えば黄斑変性）、難聴（聴覚損失を含む）、呼吸器障害（肺の障害を含む）、神経変性障害、脊髄損傷、血管新生関連状態及びアポトーシス関連状態に罹患した被験体を処置するための医薬組成物の製造において有用である。
【００２０】
一局面において、本発明は新規なｓｉＲＮＡ分子を提供し、これはＲＴＰ８０１遺伝子を阻害し、そして種々の疾患及び適応症を処置するために使用することができる。
【００２１】
従って、一局面において、本発明は、以下の構造：
５’          （Ｎ）x−Ｚ        ３’      （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）y−ｚ’’  ５’      （センス鎖）
［ここで、Ｎ及びＮ’はそれぞれ、未修飾でも修飾されていてもよいリボヌクレオチド、又は非通常部分であり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は独立して、それが存在する鎖の３’末端において共有結合で結合された１〜５個の連続したヌクレオチドであり；
ｚ’’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、（Ｎ’）ｙの５’末端において共有結合で結合されたキャッピング部分であり；
ｘ及びｙはそれぞれ独立して１８と４０との間の整数であり；
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘの配列に対して実質的に相補的であり；
そして（Ｎ）ｘは、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡに対して実質的に相補的であるアンチセンスを含む］
を有するｓｉＲＮＡ化合物を提供する。
【００２２】
いくつかの実施態様において、本化合物はホスホジエステル結合を含む。好ましい実施態様において、（Ｎ）ｘは、修飾されたリボヌクレオチド及び未修飾リボヌクレオチドを含み、修飾されたリボヌクレオチドは各々その糖上に２’−Ｏ−メチルを有し、ここで（Ｎ）ｘの３’末端におけるＮは、修飾されたリボヌクレオチドであり、（Ｎ）ｘは、３’末端で始まる少なくとも５つの交互の（ａｌｔｅｒｎａｔｉｎｇ）修飾されたリボヌクレオチドを含み、そして全体で少なくとも９つの修飾されたリボヌクレオチドを含み、そして残りの各Ｎは未修飾リボヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙは、少なくとも１つのミラーヌクレオチド、又は２’−５’ヌクレオチド間ホスフェート結合により隣接するヌクレオチドに結合されたヌクレオチドを含む。
【００２３】
さらなる実施態様において、（Ｎ）ｘは、５’末端及び３’末端における各Ｎがそれらの糖残基において修飾されている交互の（ａｌｔｅｒｎａｔｉｎｇ）位置に修飾されたリボヌクレオチドを含み、かつ中央のリボヌクレオチド（例えば１９量体鎖における１０番目の位置のリボヌクレオチド）は未修飾である。
【００２４】
全ての構造について、いくつかの実施態様において、各々の連続したＮ又はＮ’を結合する共有結合は、ホスホジエステル結合である。種々の実施態様において、全ての共有結合はホスホジエステル結合である。
【００２５】
種々の実施態様において、ｘ＝ｙであり、そしてｘ及びｙはそれぞれ１９、２０、２１、２２又は２３である。いくつかの実施態様において、ｘ＝ｙ＝２１である。他の実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９である。
【００２６】
上記構造の一実施態様において、本化合物は、（Ｎ’）ｙの一方の末端又は両方の末端に少なくとも１つのミラーヌクレオチドを含む。種々の実施態様において、本化合物は、（Ｎ’）ｙにおいて２つの連続したミラーヌクレオチドを含み、１つは３’末端から二番目の位置にあり、そして１つは３’末端にある。１つの好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９であり、かつ（Ｎ’）ｙはＬ−デオキシリボヌクレオチドを１８番目の位置に含む。
【００２７】
いくつかの実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−リボヌクレオチド及びＬ−デオキシリボヌクレオチドから選択される。種々の実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−デオキシリボヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、ｙ＝１９であり、かつ（Ｎ’）ｙは、１〜１７及び１９番目の位置の未修飾リボヌクレオチド並びに３’末端から二番目の位置（１８番目の位置）のＬ−ＤＮＡからなる。他の実施態様において、ｙ＝１９であり、かつ（Ｎ’）ｙは、１〜１６及び１９番目の位置の未修飾リボヌクレオチド、並びに３’末端から二番目の位置における２つの連続した（１７及び１８番目の位置）Ｌ−ＤＮＡからなる。
【００２８】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘ及びその対応するセンス鎖（Ｎ’）ｙは、表Ａ〜Ｉに示され配列番号３〜３６２４で示されるオリゴヌクレオチド対のいずれか１つより選択される。特定の実施態様において、（Ｎ）ｘのヌクレオチド配列は、配列番号１６及び配列番号１２４３のいずれか１つで示される。
【００２９】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘにおいてリボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり（ａｌｔｅｒｎａｔｅ）、（Ｎ）ｘの中央に位置するリボヌクレオチドは未修飾である。
【００３０】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘは、３’末端で始まる少なくとも５つの交互の未修飾リボヌクレオチド及び２’Ｏメチル糖修飾リボヌクレオチドを含み、かつ全体で少なくとも９つの２’Ｏメチル糖修飾リボヌクレオチドを含み、そして残りの各Ｎは未修飾リボヌクレオチドである。
【００３１】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘにおいて５’末端における１〜５つの連続したＮは２’Ｏメチル糖修飾リボヌクレオチドであり、残りのＮは未修飾リボヌクレオチドである。
【００３２】
上記構造の別の実施態様において、（Ｎ’）ｙはさらに、１つ又は両方の末端に追加の（ｅｘｔｒａ）架橋で修飾された糖部分を含む１つ又はそれ以上のヌクレオチドを含む。本明細書において二環式ヌクレオチドとも呼ばれるこのようなヌクレオチドの非限定的な例は、ロックト核酸（ＬＮＡ）及びエチレン架橋核酸（ＥＮＡ）である。
【００３３】
上記構造の別の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、１つ又は両方の末端において２’−５’ホスホジエステル結合により隣のヌクレオチドに共に結合された少なくとも２つの連続したヌクレオチドを含む。特定の好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙにおいて３’末端から二番目のヌクレオチドは、２’−５’ホスホジエステル架橋で３’末端ヌクレオチドと連結されている。
【００３４】
特定の好ましい実施態様において、本発明の化合物は、平滑末端の（ｚ’’、Ｚ及びＺ’が存在しない）、二本鎖オリゴヌクレオチド構造で、ｘ＝ｙかつｘ＝１９又は２３であり、ここで（Ｎ’）ｙは、未修飾リボヌクレオチド［ここで３’末端における３つの連続したヌクレオチドは２つの２’−５’ホスホジエステル結合により共に結合される］；並びに交互の未修飾リボヌクレオチド及び２’−Ｏメチル糖修飾リボヌクレオチドのアンチセンス鎖（ＡＳ）を含む。
【００３５】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘも（Ｎ’）ｙも３’末端及び５’末端においてリン酸化されていない。他の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙのいずれか又は両方が３’末端においてリン酸化されている。
【００３６】
特定の実施態様において、上述の構造全てについて、化合物は平滑末端であり、例えばＺ及びＺ’の両方が存在しない。代替の実施態様において、本化合物は、少なくとも１つの３’オーバーハング及び又は（Ｎ’）ｙの５’末端において５’キャッピング部分を含み、ここでＺ又はＺ’又はｚ’’の少なくとも１つが存在する。Ｚ、Ｚ’及びｚ’’は独立して、１つ又はそれ以上の共有結合で連結された、修飾ヌクレオチド又は未修飾ヌクレオチドであり、例えば逆方向ｄＴ又はｄＡ；ｄＴ、ＬＮＡ、ミラーヌクレオチドなどである。いくつかの実施態様において、Ｚ及びＺ’はそれぞれ独立して、ｄＴ及びｄＴｄＴより選択される。特定の具体的な実施態様において、Ｚ及びＺ’は存在せず、ｚ’’は存在し、そして逆位（ｉｎｖｅｒｔｅｄ）デオキシ脱塩基（ｄｅｏｘｙａｂａｓｉｃ）部分からなる。
【００３７】
いくつかの実施態様において、ｓｉＲＮＡセンスオリゴヌクレオチド及びアンチセンスオリゴヌクレオチドは、表Ａ〜Ｉのいずれか１つに列挙され、配列番号３〜３６２４のいずれか１つに示される、センスオリゴヌクレオチド及び対応するアンチセンスオリゴヌクレオチドより選択される。
【００３８】
第二の局面において、本発明は、標的遺伝子発現を阻害するために有効な量の本発明の１つ又はそれ以上の化合物、及び薬学的に許容しうる担体を含む医薬組成物を提供し、ここで標的遺伝子はＲＴＰ８０１である。
【００３９】
別の局面において、本発明は、ＲＴＰ８０１の発現に関連する疾患若しくは障害、又はそれら疾患若しくは障害に関連する症状若しくは状態の処置を必要とする被験体の処置のための方法に関し、この方法は、この被験体にＲＴＰ８０１の発現を減少させるか又は阻害する量のｓｉＲＮＡを投与することを含む。好ましい実施態様において、ｓｉＲＮＡ化合物は、本発明の実施態様にしたがって化学修飾されている。
【００４０】
いくつかの実施態様において、本発明は、とりわけ、微小血管障害、眼の疾患及び状態、難聴（聴覚損失を含む）、呼吸器（肺を含む）障害、神経変性疾患又は障害、脊髄損傷、血管新生関連状態及びアポトーシス関連状態に罹患している被験体を処置する方法を提供し、この方法は、少なくとも１つのＲＴＰ８０１阻害剤を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む。
【００４１】
一実施態様において、呼吸器障害は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。従って、本発明は、ＣＯＰＤに罹患している被験体を処置する方法であって、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する、治療有効量の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物をこの被験体に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、呼吸器障害に罹患している被験体における回復の促進において有効である。
【００４２】
別の実施態様において、眼の障害は黄斑変性である。従って、本発明は、黄斑変性に罹患している被験体を処置する方法であって、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する、治療有効量の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物をこの被験体に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、黄斑変性に罹患している被験体における回復の促進において有効である。一実施態様において、黄斑変性は加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）である。
【００４３】
別の実施態様において、本発明は、微小血管障害に罹患している被験体を処置する方法であって、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する、治療有効量の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物をこの被験体に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、微小血管障害に罹患している被験体における回復の促進において有効である。一実施態様において、微小血管障害は糖尿病性網膜症である。
【００４４】
別の実施態様において、本発明は、難聴に罹患している被験体を処置する方法であって、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する、治療有効量の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物をこの被験体に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、難聴に罹患している被験体における回復の促進において有効である。一実施態様において、難聴は聴覚損失である。
【００４５】
さらなる実施態様において、本発明は、脊髄損傷に罹患している被験体を処置する方法であって、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する、治療有効量の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物をこの被験体に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、脊髄損傷に罹患している被験体における回復の促進において有効である。
【００４６】
さらなる実施態様において、本発明は、神経変性疾患又は障害に罹患している被験体を処置する方法であって、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する、治療有効量の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物をこの被験体に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、神経変性疾患又は障害に罹患している被験体において診断の時点で存在するレベルでの認知機能の安定化において有効である。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、神経変性疾患又は障害に罹患している被験体において診断の時点で存在するレベルでの運動機能の安定化において有効である。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、神経変性疾患又は障害に罹患している被験体における回復の促進において有効である。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、神経変性疾患又は障害に罹患している被験体において神経変性疾患又は障害の進行を遅らせることにおいて有効である。
【００４７】
さらなる実施態様において、本発明は、血管新生関連状態に罹患している被験体を処置する方法であって、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する、治療有効量の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物をこの被験体に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、血管新生関連状態に罹患している被験体における回復の促進において有効である。
【００４８】
さらなる実施態様において、本発明は、アポトーシス関連状態に罹患している被験体を処置する方法であって、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する、治療有効量の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物をこの被験体に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、アポトーシス関連状態に罹患している被験体における回復の促進において有効である。
【００４９】
本発明は、有利な特性を有し、そしてＲＮＡ干渉の機構によりＲＴＰ８０１遺伝子の発現を下方調節するために、いずれかの標的配列、特にＲＴＰ８０１遺伝子のｍＲＮＡ配列に対してｓｉＲＮＡに適用可能である、二本鎖の化学修飾されたオリゴヌクレオチドの新規な構造を提供する。本発明はまた、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子を含む医薬組成物、及び治療への応用においてそれらを使用する方法を提供する。
【００５０】
本発明は、公知の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を明示的に除外する。
【００５１】
記載されるであろう好ましい方法、材料、及び実施例は、説明のためのみのものであり、限定することを意図されない；本明細書に記載される材料及び方法と類似又は等価である材料及び方法は、本発明の実施又は試験において使用され得る。本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明、及び特許請求の範囲から明らかとなるだろう。
【００５２】
発明の詳細な説明
本発明は、その実施態様のいくつかにおいて、化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物、少なくとも１つの本発明の化合物を含む医薬組成物、並びにとりわけ眼疾患、呼吸器障害、神経変性障害、脊髄損傷、難聴及び微小血管障害に関連する症状及び徴候の緩和又は軽減のための方法を提供する。
【００５３】
理論に拘束されないが、本発明の発明者らは、ＲＴＰ８０１が種々の疾患状態及び障害に関与することを見いだしており、これら疾患状態及び障害としては、微小血管障害、眼疾患、神経変性疾患及び障害、呼吸器障害、難聴、血管新生関連状態及びアポトーシス関連状態並びに脊髄の損傷及び疾患が挙げられるが限定されず、そして上述の疾患及び障害のいずれかを処置するためにＲＴＰ８０１を阻害することは有益だろう。ＲＴＰ８０１を阻害する方法、ｓｉＲＮＡ分子及び組成物は、本明細書において詳細に考察されており、そして上記分子及び／又は組成物のいずれも、上記状態に罹患しているか又は上記状態に感受性である被験体の処置において有利に使用され得る。
【００５４】
従って、特定の局面において、本発明は、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現のインビボでの阻害において有用な、化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物及びそれを含む医薬組成物を提供する。
【００５５】
別の局面において、本発明は、微小血管障害、眼の疾患又は障害、難聴（聴覚損失を含む）、呼吸器（肺を含む）障害、神経変性疾患又は障害、脊髄損傷、血管新生関連状態及びアポトーシス関連状態に罹患しているか又は感受性の被験体を処置する方法を提供し、この方法は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡに標的化されてそれにハイブリダイズする本発明の少なくとも１つの化学修飾された低分子干渉ＲＮＡ（すなわちｓｉＲＮＡ）を含む医薬組成物を、ＲＮＡ干渉機構によりＲＴＰ８０１遺伝子の発現を下方調節するために十分な量で、被験体に投与することを含む。
【００５６】
特定の実施態様において、主題の化合物は、呼吸器障害、微小血管障害又は眼障害の処置のためにＲＴＰ８０１遺伝子の発現の阻害において有用である。処置される特定の疾患及び状態は、ＡＲＤＳ；ＣＯＰＤ；ＡＬＩ；気腫；糖尿病性ニューロパチー、ネフロパシー及び網膜症；ＤＭＥ及び他の糖尿病性状態；緑内障；ＡＭＤ；ＢＭＴ網膜症；脳卒中を含む虚血性状態；ＯＩＳ；パーキンソン病、アルツハイマー病、ＡＬＳのような神経変性障害；腎障害：ＡＲＦ、ＤＧＦ、移植拒絶反応；聴覚障害（ｈｅａｒｉｎｇ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）；脊髄損傷；口腔粘膜炎；ドライアイ症候群及び褥瘡である。
【００５７】
種々の実施態様において、本発明は、微小血管障害、眼疾患又は呼吸器障害に罹患している被験体を処置する方法を提供し、この方法は、それにより被験体を処置するために治療的に有効な量で、少なくとも１つの本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む。
【００５８】
種々の実施態様において、本方法は、治療有効用量の、ＲＴＰ８０１遺伝子を標的とする本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子を含む医薬組成物を、それにより患者を処置するための投薬量及び期間で被験体に投与することを含む。
【００５９】
本発明はさらに、微小血管障害、眼疾患、神経変性疾患、脊髄損傷、難聴又は呼吸器障害に罹患している被験体を処置する方法を提供し、この方法は、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子を含む医薬組成物を、被験体の回復を促進するために十分な投薬量及び期間で被験体に投与することを含む。眼疾患としては、とりわけ加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）のような黄斑変性が挙げられる。微小血管障害としては、とりわけ糖尿病性網膜症及び急性腎不全が挙げられる。呼吸器障害としては、とりわけ慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気腫、慢性気管支炎、喘息及び肺癌が挙げられる。神経変性障害としては、とりわけアルツハイマー病、パーキンソン病、ＡＬＳが挙げられる。種々の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、表Ａ〜Ｉのいずれか１つに示され、配列番号３〜３６２４のいずれか１つで示される、センスオリゴヌクレオチド及び対応するオリゴヌクレオチドから選択される、センスオリゴヌクレオチド及びアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。
【００６０】
従って、本発明はさらに、黄斑変性に罹患しているか又は黄斑変性に対して感受性の被験体を処置する方法を提供し、この方法は、治療有効量の本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物を被験体に投与することを含み、ここでこの化学修飾されたｓｉＲＮＡは、それにより患者を処置するように、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を減弱する。種々の実施態様において、少なくとも１つのｓｉＲＮＡは、表Ａ〜Ｉに示される配列（配列番号３〜３６２４）のいずれか１つと同一の配列を有する連続したヌクレオチドを含む。
【００６１】
本発明はさらに、ＣＯＰＤに罹患しているか又はＣＯＰＤに感受性の被験体を処置する方法を提供し、この方法は、治療有効量の少なくとも１つの本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物を被験体に投与することを含み、ここで化学修飾されたｓｉＲＮＡはそれにより患者を処置するようにＲＴＰ８０１遺伝子の発現を減弱する。種々の実施態様において、少なくとも１つのｓｉＲＮＡセンス鎖及びアンチセンス鎖は、表Ａ〜Ｉにおける配列番号３〜３６２４で示されるシーケンサー（ｓｅｑｕｅｎｃｅｒｓ）のいずれか１つから（ｆｏｒｍ）選択される。
【００６２】
本発明はさらに、糖尿病性網膜症に罹患しているか又は糖尿病性網膜症に感受性の被験体を処置する方法を提供し、この方法は、治療有効量の少なくとも１つの本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物を被験体に投与することを含み、ここで化学修飾されたｓｉＲＮＡはそれにより患者を処置するようにＲＴＰ８０１遺伝子の発現を減弱する。種々の実施態様において、少なくとも１つのｓｉＲＮＡセンス鎖及びアンチセンス鎖は、表Ａ〜Ｉにおける配列番号３〜３６２４で示されるシーケンサー（ｓｅｑｕｅｎｃｅｒｓ）のいずれか１つから（ｆｏｒｍ）選択される。
【００６３】
種々の実施態様において、神経変性障害は、運動失調のような運動の問題を引き起こす神経変性状態；並びに記憶に影響を及ぼし認知症に関連する状態から選択される。種々の実施態様において、神経変性障害は、パーキンソン病、ＡＬＳ（ルー・ゲーリック病）、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、ハンチントン病及び他のいずれかの疾患に誘発される認知症（例えばＨＩＶ関連認知症）から選択される。
【００６４】
さらなる実施態様において、本発明は、新規な化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物、それらを含む医薬組成物、及び虚血性状態又は低酸素性状態から生じる神経障害に関連する症状及び徴候の緩和又は軽減のための方法を提供する。このような状態の非限定的な例は、高血圧、高血圧性脳血管疾患、血栓又は塞栓の場合に発生する血管の狭窄又は閉塞、血管腫、血液疾患（ｂｌｏｏｄ  ｄｙｓｃｒａｓｉａｓ）、心停止又は心不全を含む心機能不全のあらゆる形態、全身性低血圧である。一実施態様において、神経障害は脳卒中である。別の実施態様において、神経障害はてんかんである。
【００６５】
好ましいｓｉＲＮＡ化合物のリストが表Ａ〜Ｉに提供される。１９量体、２１量体及び２３量体のｓｉＲＮＡの別々のリストは、ヒト遺伝子発現を標的とするための最良の配列として専用のアルゴリズムに従うそれらのスコアに基づいて優先順位を決められる。標的遺伝子を阻害する方法、分子及び組成物は、本明細書において詳細に考察され、そして上記分子及び／又は組成物のいずれも上記状態のいずれかに罹患している患者の処置において有利に使用される。表Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ及びＩは１９量体オリゴマーを示す。表Ｃ及びＦは２１量体オリゴマーを示す。表Ｇ及びＨは２３量体オリゴマーを示す。
【００６６】
定義
便宜上、明細書、実施例及び特許請求の範囲において使用される特定の用語をここで記載する。
【００６７】
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、そうでないという内容が明確に指示されていなければ、複数形を含むということに留意されるべきである。
【００６８】
本発明の局面又は実施態様がマーカッシュ群又は他の代替のグループ分け（ｇｒｏｕｐｉｎｇ）の表現で記載される場合、当業者は、本発明が、群のいずれかの個々の構成要素又は構成要素の部分群の表現で、それらによっても記載されるということを認識するだろう。
【００６９】
「阻害剤」は、遺伝子の発現又はこのような遺伝子の産物の活性を、所望の生物学的又は生理学的な効果を達成するために十分な程度まで減少させる（部分的又は完全に）ことができる化合物である。本明細書で使用される用語「阻害剤」は、ｓｉＲＮＡ阻害剤を指す。
【００７０】
「ｓｉＲＮＡ阻害剤」は、遺伝子の発現又はこのような遺伝子の産物の活性を、所望の生物学的又は生理学的な効果を達成するために十分な程度まで減少させることができる化合物である。本明細書で使用される用語「ｓｉＲＮＡ阻害剤」は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、合成ｓｈＲＮＡ；ｍｉＲＮＡのうちの１つ又はそれ以上を指す。阻害は、下方調節と呼ばれてもよく、ＲＮＡｉについてはサイレンシングと呼ばれてもよい。
【００７１】
本明細書で使用される用語「阻害する」は、遺伝子の発現又はこのような遺伝子の産物の活性を、所望の生物学的又は生理学的な効果を達成するために十分な程度まで減少させることを指す。阻害は、完全又は部分的のいずれかである。
【００７２】
本明細書で使用される標的遺伝子の「阻害」という用語は、遺伝子発現（転写又は翻訳）又は標的遺伝子のポリペプチド活性の阻害を意味し、ここで標的遺伝子はＲＴＰ８０１又はその変異体である。標的ｍＲＮＡ配列のポリヌクレオチド配列、又はｍＲＮＡ配列を有する標的遺伝子は、ＲＴＰ８０１のｍＲＮＡに対して、少なくとも７０％の同一性、より好ましくは８０％同一性、なおより好ましくは９０％又は９５％の同一性を有するｍＲＮＡ配列又はそのあらゆる相同な配列を指す。従って、本明細書に記載される変異、変更又は修飾を受けたＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡから誘導されたポリヌクレオチド配列は、本発明に包含される。用語「ｍＲＮＡポリヌクレオチド配列」、「ｍＲＮＡ配列」及び「ｍＲＮＡ」は交換可能に使用される。
【００７３】
本明細書で使用される用語「ポリヌクレオチド」及び「核酸」は交換可能に使用され得、そしてデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、及びリボ核酸（ＲＮＡ）を含むヌクレオチド配列を指す。これらの用語は、ヌクレオチド類似体から作製されたＲＮＡ又はＤＮＡのいずれかの類似体を、等価物として含むことが理解されるべきである。本出願全体を通して、ｍＲＮＡ配列は対応する遺伝子を表すように記載される。
【００７４】
「オリゴヌクレオチド」又は「オリゴマー」は、約２〜約５０のヌクレオチドのデオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド配列を指す。ＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオチドはそれぞれ独立して天然でも合成でもよく、修飾されていても未修飾でもよい。修飾には、オリゴヌクレオチド中の糖部分、塩基部分、及び又はヌクレオチド間連結に対する変化が含まれる。本発明の化合物は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾されたデオキシリボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド及びそれらの組み合わせを含む分子を包含する。
【００７５】
実質的に相補的とは、別の配列に対して約８４％より高い相補性を指す。例えば１９の塩基対からなる二重鎖領域において、１つのミスマッチは９４．７％の相補性となり、２つのミスマッチは約８９．５％の相補性となり、そして３つのミスマッチは約８４．２％の相補性となり、二重鎖領域を実質的に相補的にする。従って、実質的に同一は、別の配列に対して約８４％より高い同一性を指す。
【００７６】
「ヌクレオチド」は、天然でも合成でもよく、かつ又は修飾されていても未修飾でもよい、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドを包含するように意図される。修飾には、オリゴリボヌクレオチド中の糖部分、塩基部分及び又はリボヌクレオチド間の連結に対する変化が含まれる。本明細書で使用される用語「リボヌクレオチド」は、天然及び合成の、未修飾及び修飾されたリボヌクレオチドを包含する。修飾には、オリゴヌクレオチド中の糖部分、塩基部分及び／又はリボヌクレオチド間の連結に対する変化が含まれる。
【００７７】
ヌクレオチドは、天然に存在する塩基又は合成的に修飾された塩基から選択され得る。天然に存在する塩基としては、アデニン、グアニン、シトシン、チミン及びウラシルが挙げられる。ヌクレオチドの修飾された塩基としては、イノシン，  キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチル、２−プロピル及び他のアルキルアデニン類、５−ハロウラシル、５−ハロシトシン、６−アザシトシン及び６−アザチミン、プソイド（ｐｓｅｕｄｏ）ウラシル、４−チオウラシル（ｔｈｉｕｒａｃｉｌ）、８−ハロアデニン、８−アミノアデニン、８−チオールアデニン、８−チオールアルキルアデニン類、８−ヒドロキシルアデニン及び他の８−置換アデニン類、８−ハログアニン類、８−アミノグアニン、８−チオールグアニン、８−チオアルキルグアニン類、８−ヒドロキシルグアニン及び他の置換グアニン類、他のアザアデニン及びデアザアデニン類、他のアザグアニン及びデアザグアニン類、５−トリフルオロメチルウラシル及び５−トリフルオロシトシンが挙げられる。いくつかの実施態様において、オリゴマー中の１つ又はそれ以上のヌクレオチドがイノシンで置換される。
【００７８】
いくつかの実施例によれば、本発明は、未修飾ヌクレオチド及び修飾されたヌクレオチド並びに又は非通常（ｕｎｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ）部分を含む、阻害性オリゴヌクレオチド化合物を提供する。本化合物は、糖修飾、塩基修飾及びヌクレオチド間連結修飾からなる群より選択される少なくとも１つの修飾されたヌクレオチドを含み、そしてＤＮＡ、及びＬＮＡ（ロックト核酸）、ＥＮＡ（エチレン架橋核酸）、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、アラビノシド、ホスホノカルボキシレートヌクレオチド若しくはホスフィノカルボキシレートヌクレオチド（ＰＡＣＥ  ヌクレオチド）、ミラーヌクレオチド、又は６炭素糖を有するヌクレオチドのような修飾されたヌクレオチドを含み得る。
【００７９】
ヌクレオチド／オリゴヌクレオチドの全ての類似体又はヌクレオチド／オリゴヌクレオチドに対する全ての修飾は、上記類似体又は修飾がヌクレオチド／オリゴヌクレオチドの機能に実質的に不利な影響を及ぼさないという条件で、本発明とともに使用される。許容しうる修飾としては、糖部分の修飾、塩基部分の修飾、ヌクレオチド間連結における修飾及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【００８０】
糖修飾としては、糖残基の２’部分上の修飾が挙げられ、これは、とりわけ欧州特許ＥＰ  ０  ５８６  ５２０  Ｂ１又はＥＰ  ０  ６１８  ９２５  Ｂ１に記載されるような、アミノ、フルオロ、アルコキシ、例えばメトキシ、アルキル、アミノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、ＣＮ、ＣＦ、イミダゾール、カルボキシレート、チオエート、Ｃ1〜Ｃ10低級アルキル、置換低級アルキル、アルカアリール若しくはアラルキル、ＯＣＦ3、ＯＣＮ、Ｏ−、Ｓ−、若しくはＮ−アルキル；Ｏ−、Ｓ、若しくはＮ−アルケニル；ＳＯＣＨ3；ＳＯ2ＣＨ3；ＯＮＯ2；ＮＯ2、Ｎ3；ヘテロシクロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｚｙｃｌｏａｌｋｙｌ）；ヘテロシクロアルカアリール（ｈｅｔｅｒｏｚｙｃｌｏａｌｋａｒｙｌ）；アミノアルキルアミノ；ポリアルキルアミノ又は置換シリルを含む。
【００８１】
一実施態様において、ｓｉＲＮＡ化合物は、糖部分上の２’修飾（「２’糖修飾」）を含む少なくとも１つのリボヌクレオチドを含む。特定の実施態様において、本化合物は、２’Ｏ−アルキル又は２’−フルオロ又は２’Ｏ−アリル又はあらゆる他の２’修飾を、場合により交互の（ａｌｔｅｒｎａｔｅ）位置に含む。他の安定化する修飾もまた可能である（例えば末端修飾）。いくつかの実施態様において、好ましい２’Ｏ−アルキルは２’Ｏ−メチル（メトキシ）糖修飾である。
【００８２】
いくつかの実施態様において、オリゴヌクレオチドの骨格が修飾され、そしてホスフェート−Ｄ−リボース実体を含むが、チオホスフェート−Ｄ−リボース実体、トリエステル、チオエート、２’−５’架橋された骨格（５’−２’とも呼ばれる）、ＰＡＣＥなども含み得る。
【００８３】
本明細書で使用される用語「非対合ヌクレオチド類似体」は、塩基対合しない部分を含むヌクレオチド類似体を意味し、これらとしては：６デスアミノアデノシン（ネブラリン）、４−Ｍｅ−インドール、３−ニトロピロール、５−ニトロインドール、Ｄｓ、Ｐａ、Ｎ３−ＭｅリボＵ、Ｎ３−ＭｅリボＴ、Ｎ３−ＭｅｄＣ、Ｎ３−Ｍｅ−ｄＴ、Ｎ１−Ｍｅ−ｄＧ、Ｎ１−Ｍｅ−ｄＡ、Ｎ３−エチル−ｄＣ、Ｎ３−ＭｅｄＣが挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施態様において、塩基対合しないヌクレオチド類似体はリボヌクレオチドである。他の実施態様において、これはデオキシリボヌクレオチドである。さらに、１つ又はそれ以上のヌクレオチドの構造が根本的に変更されており、そして治療用又は実験用の試薬としてよりよく適しているポリヌクレオチド類似体が製造され得る。ヌクレオチド類似体の例は、ＤＮＡ（又はＲＮＡ）におけるデオキシリボース（又はリボース）ホスフェート骨格が、ペプチド中に見られるものと類似したポリアミド骨格と置き換えられているペプチド核酸（ＰＮＡ）である。ＰＮＡ類似体は、酵素分解に対して耐性であること、そしてインビボ及びインビトロで増強された安定性を有していることが示されている。オリゴヌクレオチドに対してなされ得る他の修飾としては、ポリマー骨格、環状骨格、非環状骨格、チオホスフェート−Ｄ−リボース骨格、トリエステル骨格、チオエート骨格、２’−５’架橋骨格、人工核酸、モルホリノ核酸、グリコール核酸（ＧＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、アラビノシド、及びミラーヌクレオシド（例えば、ベータ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドの代わりにベータ−Ｌ−デオキシリボヌクレオシド）が挙げられる。ＬＮＡヌクレオチドを含むｓｉＲＮＡ化合物の例はＥｌｍｅｎら（ＮＡＲ  ２００５、３３（１）：４３９−４４７）に開示される。
【００８４】
本発明の化合物は、１つ又はそれ以上の逆位（ｉｎｖｅｒｔｅｄ）ヌクレオチド、例えば逆位チミジン又は逆位アデニンを使用して合成することができる（例えばＴａｋｅｉ、ｅｔ  ａｌ．、２００２、ＪＢＣ  ２７７（２６）：２３８００−０６を参照のこと）。
【００８５】
他の修飾としては、オリゴヌクレオチドの５’及び／又は３’部分での末端修飾が挙げられ、これはキャッピング部分としても知られる。このような末端修飾は、ヌクレオチド、修飾されたヌクレオチド、脂質、ペプチド、糖及び逆位脱塩基部分から選択される。
【００８６】
本発明において「脱塩基ヌクレオチド」又は「脱塩基ヌクレオチド類似体」と呼ばれることもあるものは、より正確には、プソイド−ヌクレオチド又は非通常部分と呼ばれる。ヌクレオチドは核酸の単量体単位であり、リボース又はデオキシリボース糖、ホスフェート、及び塩基（ＤＮＡではアデニン、グアニン、チミン、又はシトシン；ＲＮＡではアデニン、グアニン、ウラシル、又はシトシン）からなる。修飾されたヌクレオチドは、糖、ホスフェート及び又は塩基の１つ又はそれ以上において修飾を含む。脱塩基プソイド−ヌクレオチドは塩基を欠いており、従って厳密にはヌクレオチドではない。
【００８７】
本明細書で使用される用語「キャッピング部分」は、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、２’Ｏアルキル修飾を含む修飾脱塩基リボース及び脱塩基デオキシリボース部分；逆位脱塩基リボース及び脱塩基デオキシリボース部分及びそれらの修飾；Ｃ６−イミノ−Ｐｉ；Ｌ−ＤＮＡ及びＬ−ＲＮＡを含むミラーヌクレオチド；５’Ｏ−Ｍｅヌクレオチド；及び４’，５’−メチレンヌクレオチドを含むヌクレオチド類似体；１−（β−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド；４’−チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド；５’−アミノ−アルキルホスフェート；１，３−ジアミノ−２−プロピルホスフェート、３−アミノプロピルホスフェート；６−アミノヘキシルホスフェート；１２−アミノドデシルホスフェート；ヒドロキシプロピルホスフェート；１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド；アルファ−ヌクレオチド；スレオ−ペントフラノシルヌクレオチド；非環状３’，４’−セコヌクレオチド；３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド；３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、５’−５’−逆位脱塩基部分；１，４−ブタンジオールホスフェート；５’−アミノ；及び架橋及び非架橋メチルホスホネート及び５’−メルカプト部分が挙げられる。
【００８８】
特定の好ましいキャッピング部分は、脱塩基リボース又は脱塩基デオキシリボース部分；逆位脱塩基リボース又は脱塩基デオキシリボース部分；Ｃ６−アミノ−Ｐｉ；Ｌ−ＤＮＡ及びＬ−ＲＮＡを含むミラーヌクレオチドである。
【００８９】
本明細書で使用される用語「非通常（ｕｎｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ）部分」は、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、デオキシリボヌクレオチド、修飾されたデオキシリボヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、塩基対合しないヌクレオチド類似体及び隣接するヌクレオチドに２’−５’ヌクレオチド間ホスフェート結合により結合されたヌクレオチド；ＬＮＡ及びエチレン架橋核酸を含む架橋核酸を指す。
【００９０】
脱塩基デオキシリボース部分としては、例えば脱塩基デオキシリボース−３’−ホスフェート；１，２−ジデオキシ−Ｄ−リボフラノース−３−ホスフェート；１，４−アンヒドロ−２−デオキシ−Ｄ−リビトール−３−ホスフェートが挙げられる。逆位脱塩基デオキシリボース部分としては、逆位デオキシリボ脱塩基；３’，５’逆位デオキシ脱塩基５’−ホスフェートが挙げられる。
【００９１】
「ミラー」ヌクレオチドは、天然に存在するか又は一般に使用されるヌクレオチドと逆のキラリティを有するヌクレオチド、すなわち天然に存在する（Ｄ−ヌクレオチド）の鏡像（Ｌ−ヌクレオチド）であり、ミラーリボヌクレオチドの場合にはＬ−ＲＮＡ、そして「ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ」とも呼ばれる。ヌクレオチドは、リボヌクレオチドでもデオキシリボヌクレオチドでもよく、そして少なくとも１つの糖、塩基及び又は骨格修飾をさらに含み得る（ｍｙ）。米国特許第６，５８６，２３８号を参照のこと。また、米国特許第６，６０２，８５８号は、少なくとも１つのＬ−ヌクレオチド置換を含む核酸触媒を開示する。ミラーヌクレオチドとしては、例えばＬ−ＤＮＡ（Ｌ−デオキシリボアデノシン−３’−ホスフェート（ミラーｄＡ）；Ｌ−デオキシリボシチジン−３’−ホスフェート（ミラーｄＣ）；Ｌ−デオキシリボグアノシン−３’−ホスフェート（ミラーｄＧ）；Ｌ−デオキシリボチミジン−３’−ホスフェート（鏡像ｄＴ））及びＬ−ＲＮＡ  （Ｌ−リボアデノシン−３’−ホスフェート（ミラーｒＡ）；Ｌ−リボシチジン−３’−ホスフェート（ミラーｒＣ）；Ｌ−リボグアノシン−３’−ホスフェート（ミラーｒＧ）；Ｌ−リボウラシル−３’−ホスフェート（ミラーｄＵ）が挙げられる。
【００９２】
修飾されたデオキシリボヌクレオチドとしては、例えば５’末端位置（位置番号１）におけるヌクレオチドとして有用であり得る５’ＯＭｅ  ＤＮＡ（５−メチル−デオキシリボグアノシン−３’−ホスフェート）；ＰＡＣＥ（デオキシリボアデニン３’ホスホノアセテート、デオキシリボシチジン３’ホスホノアセテート、デオキシリボグアノシン３’ホスホノアセテート、デオキシリボチミジン３’ホスホノアセテートが挙げられる。
【００９３】
架橋された核酸としては、ＬＮＡ（２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレン架橋核酸アデノシン３’モノホスフェート、２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレン架橋核酸５−メチル−シチジン３’モノホスフェート、２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレン架橋核酸グアノシン３’モノホスフェート、５−メチル−ウリジン（又はチミジン）３’モノホスフェート）；及びＥＮＡ（２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン架橋核酸アデノシン３’モノホスフェート、２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン架橋核酸５−メチル−シチジン３’モノホスフェート、２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン架橋核酸グアノシン３’モノホスフェート、５−メチル−ウリジン（又はチミジン）３’モノホスフェート）が挙げられる。
【００９４】
本発明のいくつかの実施態様において、好ましい非通常部分は、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、デオキシリボヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、及び２’−５’ヌクレオチド間ホスフェート結合により隣接するヌクレオチドに結合されたヌクレオチドである。
【００９５】
本発明の一局面によれば、本発明は、未修飾ヌクレオチド及び修飾されたヌクレオチドを含む阻害性オリゴヌクレオチド化合物を提供する。本化合物は、糖修飾、塩基修飾及びヌクレオチド間連結修飾からなる群より選択される少なくとも１つの修飾されたヌクレオチドを含み、そしてＤＮＡ、及びＬＮＡ（ロックト核酸）（ＥＮＡ（エチレン−架橋核酸を含む）；ＰＮＡ（ペプチド核酸）；アラビノシド；ＰＡＣＥ（ホスホノアセテート及びその誘導体）、ミラーヌクレオチド、又は六炭素糖を有するヌクレオチドのような修飾されたヌクレオチドを含み得る。
【００９６】
「ＲＴＰ８０１遺伝子」は、配列番号１で示されるＲＴＰ８０１コード配列のオープンリーディングフレーム、又は好ましくは少なくとも７０％の同一性、より好ましくは８０％の同一性、なおより好ましくは９０％若しくは９５％の同一性を有するその任意の相同配列を指す。これには、本明細書に記載される変異、変更又は修飾を受けた、配列番号１から誘導されるあらゆる配列が包含される。従って、好ましい実施態様において、ＲＴＰ８０１は、配列番号１に従う核酸配列によりコードされる。本発明の核酸が、好ましくは最初のストレッチ（ｓｔｒｅｔｃｈ）及び最初の鎖が典型的には本発明の核酸より短いというように、ＲＴＰ８０１をコードする核酸の一部に対して、それぞれ相補的及び同一であるだけであるということも本発明内である。また当然のことながら、ＲＴＰ８０１のアミノ酸配列に基づいて、そのようなアミノ酸配列をコードするいずれかの核酸配列を、当業者は遺伝暗号にもとづいて理解することができる。しかし、本発明の核酸の作用の仮定された様式に起因して、ＲＴＰ８０１をコードする核酸、好ましくはそのｍＲＮＡは、それぞれＲＴＰ８０１の発現を減少しようとする生物、組織及び／又は細胞に存在しているものであることが最も好ましい。
【００９７】
「ＲＴＰ８０１ポリペプチド」は、ＲＴＰ８０１遺伝子のポリペプチドを指し、そして本発明の目的のために、いずれかの生物、好ましくはヒト由来の、用語「ＲＴＰ７７９」、「ＲＥＤＤ１」、「ＤＤＩＴ４」、「ＦＬＪ２０５００」、「Ｄｉｇ２」、及び「ＰＲＦ１」、生物学的活性を保持しているそれらのスプライスバリアント及びそれらのフラグメント、並びにそれらに対して好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、なおより好ましくは少なくとも９０％又は９５％の相同性を有する相同体を含むことが理解される。さらに、この用語は、ＲＴＰ８０１コード配列における少数の変更、例えばとりわけ、結果としてのポリペプチドと天然に存在するＲＴＰ８０１との間で少数のアミノ酸の相違を生じ得る点変異、置換、欠失及び挿入から結果として得られるポリペプチドを包含すること理解される。ＲＴＰ８０１は、好ましくは配列番号２で示されるアミノ酸配列を有するか又は含む。当然のことながら、生物の種々の組織間で、及び１つの種の異なる生物間で、又は本発明の種々の実施態様において本発明の核酸が適用され得る異なる種間で、アミノ酸配列中に相違点が存在し得る。しかし、本明細書中に提供される技術的教示に基づいて、それぞれの配列を、本発明に従う核酸のいずれかを設計する場合に適宜考慮することができる。ＲＴＰ８０１の特定のフラグメントとしては、配列番号２に示される配列のアミノ酸１〜５０、５１〜１００、１０１〜１５０、１５１〜２００及び２０１〜２３２が挙げられる。ＲＴＰ８０１のさらなる特定のフラグメントとしては、配列番号２に示される配列のアミノ酸２５〜７４、７５〜１２４、１２５〜１７４、１７５〜２２４及び２２５〜２３２が挙げられる。
【００９８】
本明細書で使用されるＲＴＰ８０１は、特にＷＯ９９／０９０４６において記載される。ＲＴＰ８０１は、Ｓｈｏｓｈａｎｉ  ＴらによりＨＩＦ−１αの転写標的としても記載されていた（Ｓｈｏｓｈａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．、２００２、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、２２、２２８３−９３）。さらに、Ｅｌｌｉｓｅｎら（Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ、２００２．１０、９９５−１００５）は、ｐ５３依存性ＤＮＡ損傷応答遺伝子、及び上皮分化に関与するｐ６３依存性遺伝子とＲＴＰ８０１を同定した。また、ＲＴＰ８０１発現は、ｐ５３ファミリーメンバーｐ６３の組織特異的パターンを反映し、ＴＰ６３と類似して又はＴＰ６３に加えて有効であり、そして反応性酸素種の調節に関与する。それとは別に、ＲＴＰ８０１は、低酸素応答性転写因子である低酸素誘導因子１（ＨＩＦ−１）に応答性であり、そして典型的には、インビトロと虚血性脳卒中の動物モデルにおいてインビボの両方で、低酸素の間に上方調節される。ＲＴＰ８０１は、反応性酸素種（ＲＯＳ）の調節において機能すると思われる。ＲＯＳレベル及び酸化的ストレスに対する減少した感受性は、両方ともＲＴＰ８０１遺伝子の異所性発現後に増加する（Ｅｌｌｉｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．２００２、ｓｕｐｒａ；Ｓｈｏｓｈａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．２００２、前出）。好ましくは、ＲＴＰ８０１の産物は、好ましくは本明細書上記の特徴の少なくとも１つ、好ましく２つ又はそれ以上、そして最も好ましくはこれらの特徴のそれぞれ及びいずれかを示す生物学的に活性なＲＴＰ８０１タンパク質である。
【００９９】
本発明は、治療特性を有する新規な化学修飾されたオリゴヌクレオチド構造及びオリゴリボヌクレオチド構造に関する。特に、本発明は、化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を開示する。本発明のｓｉＲＮＡは、以下の利点の１つ又はそれ以上を有する新規な構造及び新規な修飾を有する：増加した活性又は減少した毒性又は減少したオフターゲット効果又は減少した免疫応答又は増加した安定性；本発明のｓｉＲＮＡの新規な修飾は、ＲＴＰ８０１遺伝子発現の防止又は減弱において有用な二本鎖ＲＮＡに有利に適用される。本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、糖修飾、塩基修飾、及びヌクレオチド間連結修飾からなる群より選択される少なくとも１つの修飾されたヌクレオチドを含む。
【０１００】
本発明はまた、ＲＴＰ８０１の発現を下方調節する化合物、特に新規な低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、及び種々の疾患及び病状の処置におけるこれら新規なｓｉＲＮＡの使用に関する。処置される特定の疾患及び状態としては、限定されないが、聴覚損失、急性腎不全（ＡＲＦ）、緑内障、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病性ネフロパシー及び他の微小血管障害、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）及び他の急性の肺及び呼吸器の損傷及び疾患（例えば慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））、肺移植後の虚血−再潅流障害、肺、肝臓、心臓、骨髄、膵臓、角膜及び腎臓の移植を含む臓器移植、脊髄損傷、褥瘡、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、ドライアイ症候群、神経変性障害、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病及びＡＬＳ、口腔粘膜炎が挙げられる。他の適応症としては、化学物質誘導腎毒性及び化学物質誘導神経毒性、例えばシスプラチン及びシスプラチン様化合物、アミノグリコシド類、ループ利尿薬、並びにヒドロキノン及びそれらの類似体により誘導される毒性が挙げられる。
【０１０１】
本発明において使用されるｓｉＲＮＡの製造において有用なセンスオリゴヌクレオチド及びアンチセンスオリゴヌクレオチドのリストを表Ａ〜Ｉに示し、これらは配列番号３〜３６２４を列挙する。２１量体又は２３量体のｓｉＲＮＡ配列はまた、本明細書に開示される１９量体配列の５’及び／又は３’伸長により生成することができる。このような伸長は、好ましくは対応するｍＲＮＡ配列に対して相補的である。
【０１０２】
ＲＴＰ８０１を阻害する、方法、化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子及びこれらの化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を含む医薬組成物は、本明細書において詳細に考察され、そして上記分子及び／又は組成物はいずれも、上記の状態のいずれかに罹患している被験体の処置において有利に使用される。
【０１０３】
本発明の発明者らは、異なるが関連している遺伝子、ＲＴＰ８０１Ｌ（「ＲＥＤＤ２」とも呼ばれる）を発見した。ＲＴＰ８０１ＬはＲＴＰ８０１に対して相同であり、そして酸化的ストレスに対して同様の様式で反応し；従って、ＲＴＰ８０１ＬはおそらくＲＴＰ８０１と類似したいくつかの機能を有する。
【０１０４】
理論に拘束されないが、ストレス誘導性の（低酸素、酸化的ストレス、熱ストレス、ＥＲストレスに反応する）タンパク質であるＲＴＰ８０１は、エネルギー不均衡（ｍｉｓｂａｌａｎｃｅ）に対する細胞応答の微調整において作用する因子である。そのようなものとして、これは、ストレス性の状態（例えば正常細胞の死を伴う疾患）に起因するアポトーシスから細胞を救出するべき場合、又はＲＴＰ８０１発現における変化に起因するストレス性状態に適応された細胞（例えば癌細胞）が殺傷されるべき場合のあらゆる疾患の処置に適した標的である。後者の場合、ＲＴＰ８０１は癌細胞に関する生存因子として見られ、そしてその阻害剤は単剤療法として又は化学療法若しくは放射線療法と組み合わせた感作薬として癌を処置し得る。
【０１０５】
「呼吸器障害におけるＲＴＰ８０１の生物学的効果」又は「呼吸器障害におけるＲＴＰ８０１の生物学的活性」は、呼吸器障害に罹患しているか又は呼吸器障害に冒されている被験体の処置におけるＲＴＰ８０１の効果を意味し、これは直接的でも間接的でもよく、そして理論に拘束されないが、低酸素又は過酸素状態により誘導される肺胞のアポトーシスに対するＲＴＰ８０１の効果が含まれる。間接的効果としては、限定されないが、アポトーシスを生じるシグナル伝達カスケードに関与するいくつかの分子の１つへのＲＴＰ８０１の結合、又はその分子に対する効果をＲＴＰ８０１が有することが挙げられる。
【０１０６】
「アポトーシス」は、いくつかの細胞メカニズムの活性化の結果生じる生理学的な種類の細胞死、すなわち細胞の機構により制御される死を指す。アポトーシスは、例えば外部トリガー（例えば、サイトカイン又は抗ＦＡＳ抗体）による細胞機構の活性化の結果（これが細胞死をもたらす）でも、内部シグナルによるものでもよい。用語「プログラム細胞死」はまた、「アポトーシス」と同義的に使用され得る。
【０１０７】
「アポトーシス関連疾患」又は「アポトーシス関連状態」は、その病因が、アポトーシスのプロセスに全体的に又は部分的に関連する疾患を指す。この疾患は、アポトーシスプロセスの機能不全により引き起こされても（例えば癌又は自己免疫疾患において）、又はアポトーシスプロセスの過剰な活性により引き起こされてもよい（例えば特定の神経変性疾患において）。ＲＴＰ８０１が関与する多くの疾患は、アポトーシス関連疾患である。例えば、アポトーシスは、萎縮型ＡＭＤの重要な機構であり、それにより光受容体及び色素上皮細胞のゆっくりとした萎縮が、主に網膜の中央（黄斑）領域で起こる。神経網膜アポトーシスはまた、糖尿病性網膜症における重要な機構である。
【０１０８】
「血管新生」は、それにより生存細胞、組織又は生物が新しい血管を形成するプロセスを指す。血管新生は、種々の状態の病因において中心的役割を果たす基本的な生物学的プロセスであり、そして癌、糖尿病性網膜症、及び黄斑変性のような疾患における死亡率及び罹患率の主要原因である（Ｆｏｌｋｍａｎ、１９９０、ＪＮＣＩ  ８２：４−６）。
【０１０９】
「血管新生関連状態」は、血管新生により、又は血管新生の増加／減少により、または（ｏｆ）その欠損により影響を受けると認識された病状又は疾患状態のいずれか１つを指し、これには将来血管新生と関連し得る状態が含まれる。このよううな状態の例としては、癌、網膜症、虚血、黄斑変性、角膜疾患、緑内障、糖尿病性網膜症、脳卒中、虚血性心疾患、潰瘍、強皮症（ｓｃｌｅｒａｄｏｍａ）、心筋梗塞、心筋血管新生、プラーク新生血管形成、虚血性四肢血管新生、狭心症、不安定狭心症、冠硬化症、閉塞性動脈硬化症、ベルジェ病、動脈塞栓、動脈血栓症、脳血管閉塞、脳梗塞、脳血栓症、脳塞栓症、炎症、糖尿病性新生血管形成、創傷治癒及び消化性潰瘍が挙げられる。
【０１１０】
「ＲＴＰ８０１阻害剤」は、ＲＴＰ８０１遺伝子又はＲＴＰ８０１遺伝子産物、特にヒトＲＴＰ８０１遺伝子又は遺伝子産物の活性を阻害することができるｓｉＲＮＡ化合物である。このような阻害剤は、ＲＴＰ８０１遺伝子の転写又は翻訳に影響を与える。いくつかの実施態様において、ＲＴＰ８０１阻害剤はＲＴＰ８０１プロモーターのｓｉＲＮＡ阻害剤である。ＲＴＰ８０１遺伝子の特異的な化学修飾されたｓｉＲＮＡ阻害剤が本明細書以下に示される。
【０１１１】
低酸素は、脳卒中、気腫及び梗塞のような極めて多くの疾患の病理機序における鍵となる要素として認識されており、準最適な（ｓｕｂ−ｏｐｔｉｍｕｍ）酸素利用率及び低酸素状態に対する組織損傷応答と関連する。成長の速い組織（腫瘍を含む）において、準最適な酸素利用率は、望ましくない血管新生により補われる。従って、少なくとも癌疾患の場合において、血管の成長は望ましくない。
【０１１２】
従って本発明の別の目的は、それぞれ血管の望ましくない成長及び血管新生を伴う疾患の処置のための組成物及び方法を提供することである。
【０１１３】
本発明は、インビボでＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害するための方法及び組成物を提供する。一般に、本方法は、オリゴリボヌクレオチド、特にＲＴＰ８０１遺伝子から転写されるｍＲＮＡを標的とする低分子干渉ＲＮＡ（すなわちｓｉＲＮＡ）を、ＲＮＡ干渉機構によりＲＴＰ８０１遺伝子の発現を下方調節するために十分な量で投与することを含む。特に、本方法は、疾患の処置のためにＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害するために使用することができる。本発明によれば、本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、種々の病理を処置するための薬物として使用される。特に、本方法は、本明細書において開示される疾患又は障害又は状態の処置のために発現を阻害するために使用することができる。
【０１１４】
本発明は、配列番号１に示されるポリヌクレオチド配列を有するｍＲＮＡに転写されるＲＴＰ８０１遺伝子の発現を下方調節する、化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物、及び１つ又はそれ以上のこのようなｓｉＲＮＡ化合物を含む医薬組成物を提供する。
【０１１５】
本発明のｓｉＲＮＡは、センス鎖がＲＴＰ８０１遺伝子のｍＲＮＡポリヌクレオチド配列の１８〜４０個の連続したヌクレオチドセグメントに実質的に相補的であり、そしてアンチセンス鎖がセンス鎖に実質的に相補的である、二重鎖オリゴリボヌクレオチドである。一般に、標的ｍＲＮＡ配列からのいくらかのずれ（ｄｅｖｉａｔｉｏｎ）は、ｓｉＲＮＡ活性を妥協することなく許容される（例えばＣｚａｕｄｅｒｎａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２００３、３１（１１）：２７０５−２７１６を参照のこと）。本発明のｓｉＲＮＡは、ｍＲＮＡを破壊して又は破壊することなく、転写後のレベルでＲＴＰ８０１遺伝子発現を阻害する。理論に拘束されないが、ｓｉＲＮＡは、ｍＲＮＡを特異的切断及び分解の標的とし、かつ／又は標的化されたメッセージからの翻訳を阻害する。
【０１１６】
いくつかの実施態様において、ｓｉＲＮＡは１つ又は両方の末端において平滑である。より具体的には、いくつかの実施態様において、ｓｉＲＮＡ  は、第一の鎖の５’末端及び第二の鎖の３’末端により規定される末端において、又は第一の鎖の３’末端及び第二の鎖の５’末端により規定される末端において平滑末端である。
【０１１７】
他の実施態様において、２本の鎖の少なくとも１つは、５’末端に少なくとも１つのヌクレオチドのオーバーハングを有し；このオーバーハングは、少なくとも１つのデオキシリボヌクレオチドを含む。これらの鎖の少なくとも１つはまた、場合により３’末端に少なくとも１つのヌクレオチドのオーバーハングを有する。このオーバーハングは、約１〜約５個のヌクレオチドからなる。
【０１１８】
ＲＮＡ二重鎖の長さは、約１８〜約４０リボヌクレオチド、好ましくは１９〜２３リボヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、各鎖（オリゴマー）の長さは、約１８〜約４０個の塩基、好ましくは１８〜２３個の塩基、そしてより好ましくは１９、２０又は２１個のリボヌクレオチドからなる群より独立して選択される。
【０１１９】
さらに、特定の好ましい実施態様において、上記第一の鎖と標的核酸との間の相補性は完全である。いくつかの実施態様において、これらの鎖は実質的に相補的であり、すなわち上記第一の鎖と標的核酸との間に１つ、２つ又は３つまでのミスマッチを有する。
【０１２０】
いくつかの実施態様において、ｓｉＲＮＡの第一の鎖の５’末端は、第二の鎖の３’末端に連結されているか、又は第一の鎖の３’末端が第二の鎖の５’末端に連結されており、この連結は、典型的に３〜１００ヌクレオチド、好ましくは約３〜約１０ヌクレオチドの長さを有する核酸リンカーを介する。
【０１２１】
本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、増加した活性、増加した安定性、減少した毒性、減少したオフターゲット効果、及び／又は減少した免疫応答の１つ又はそれ以上を付与する構造及び修飾を有する。本発明のｓｉＲＮＡ構造は、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現の防止又は減弱において有用な二本鎖ＲＮＡに有利に適用される。
【０１２２】
本発明はまた、種々の疾患及び病状の処置における化学修飾されたｓｉＲＮＡの使用に関する。処置される特定の疾患及び状態は、ＡＲＤＳ；ＣＯＰＤ；ＡＬＩ；気腫；糖尿病性ニューロパシー、ネフロパシー及び網膜症；ＤＭＥ及び他の糖尿病性状態；緑内障；ＡＭＤ；ＢＭＴ網膜症；脳卒中を含む虚血性状態；ＯＩＳ；パーキンソン病、アルツハイマー病、ＡＬＳのような神経変性障害；腎障害：ＡＲＦ、ＤＧＦ、移植拒絶；聴覚障害；脊髄損傷；口腔粘膜炎；ドライアイ症候群及び褥瘡である。本発明で使用されるｓｉＲＮＡのリストは、表Ａ−Ｉに提供される。表Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ及びＩは１９量体オリゴマーを示す。表Ｃ及びＦは２１量体オリゴマーを示す。表Ｇ及びＨは２３量体オリゴマーを示す。２１又は２３量体ｓｉＲＮＡ配列はまた、本明細書に開示される１９量体配列の５’及び／又は３’伸長によっても生成され得る。このような伸長は、好ましくは対応するｍＲＮＡ配列に対して相補的である。
【０１２３】
表Ａ−Ｃは、配列番号３〜３４４で示され、ＷＯ２００６／０２３５４４として公開されたＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２９２３６号において本発明の譲受人により開示された、オリゴヌクレオチド対を含む。表Ｄは、配列番号３４５〜４１２で示され、ＷＯ２００８／１０６１０２として公開されたＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００２４８３号において本発明の譲受人により開示された、オリゴヌクレオチド対を含む。
【０１２４】
ＲＴＰ８０１遺伝子を阻害する、本発明の方法、分子及び組成物は、本明細書で詳細に考察され、そして上記分子及び／又は組成物はいずれも、上記の状態の１つ又はそれ以上に罹患している被験体の処置において有利に使用される。
【０１２５】
本発明の局面又は実施態様がマーカッシュ群又は他の代替のグループ分けの表現で記載される場合、当業者は、本発明が、群のいずれかの個々の構成要素又は構成要素の部分群の表現で、それらによっても記載されるということを認識するだろう。
【０１２６】
ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチド
表Ａ〜Ｉは、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物の製造において有用な、センスオリゴヌクレオチド及び対応するアンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸配列を提供する。本発明にしたがうｓｉＲＮＡの製造において有用な、アンチセンスオリゴヌクレオチド及び対応するセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号３〜３６２４で示される。本明細書全体を通して、ヌクレオチドの位置は、１〜１９又は１〜２１又は１〜２３と番号を付けられ、そしてアンチセンスオリゴヌクレオチド又はセンスオリゴヌクレオチドの５’末端から数えられる。例えば、（Ｎ）ｘ上の位置１は、アンチセンスオリゴヌクレオチド鎖上の５’末端ヌクレオチドを指し、そして（Ｎ’）ｙ上の位置１は、センスオリゴヌクレオチド鎖上の５’末端ヌクレオチドを指す。
【０１２７】
本発明によれば、ｓｉＲＮＡ化合物は、構造（Ａ）〜（Ｐ）で示される以下の修飾の１つにしたがって、又はタンデムｓｉＲＮＡ若しくはＲＮＡｓｔａｒとして、化学的又は構造的に修飾される。
【０１２８】
一局面において、本発明は、構造（Ａ）：
（Ａ）    ５’          （Ｎ）x−Ｚ      ３’    （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）y        ５’    （センス鎖）
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド及び修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）x及び（Ｎ’）yはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
ｘ及びｙはそれぞれ独立して１８と４０との間の整数であり；
Ｚ及びＺ’はそれぞれ、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、それが存在する鎖の３’末端において共有結合で結合された１〜５個の連続したヌクレオチドであり；
（Ｎ’）yの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そしてここで（Ｎ）xの配列は、表Ｅ〜Ｉのいずれか１つに開示されるアンチセンス配列に対して実質的に同一なアンチセンス配列を含む］
として示される化合物を提供する。
【０１２９】
特定の実施態様において、本発明は、構造（Ｂ）：
（Ｂ）    ５’          （Ｎ）ｘ−Ｚ      ３’    アンチセンス鎖
３’    Ｚ−’（Ｎ’）ｙ        ５’    センス鎖
［ここで（Ｎ）x及び（Ｎ’）yはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が、共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合された未修飾リボヌクレオチド又は修飾されたリボヌクレオチドであるオリゴマーであり；
ｘ及びｙはそれぞれ１９、２１又は２３であり、そして（Ｎ）x及び（Ｎ’）yは完全に相補的であり、
Ｚ及びＺ’はそれぞれ、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、それが存在する鎖の３’末端において共有結合で結合された１〜５個の連続したヌクレオチドであり；
（Ｎ）x及び（Ｎ’）yのそれぞれにおいて、交互のリボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
（Ｎ’）yの配列は、（Ｎ）ｘと実質的に相補的な配列であり；そして
（Ｎ）xの配列は、表Ｅ〜Ｉのいずれか１つに開示されるアンチセンス配列と実質的に同一であるアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。
【０１３０】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）x及び（Ｎ’）yはそれぞれ独立して、３’末端及び５’末端においてリン酸化されているか又はリン酸化されていない。
【０１３１】
ｘ及びｙがそれぞれ１９又は２３である、特定の実施態様において、（Ｎ）xの５’末端及び３’末端における各Ｎは修飾されており；そして（Ｎ’）yの５’末端及び３’末端における各Ｎ’は未修飾である。
【０１３２】
ｘ及びｙがそれぞれ２１である、特定の実施態様において、（Ｎ）xの５’末端及び３’末端における各Ｎは未修飾であり；そして（Ｎ’）yの５’末端及び３’末端における各Ｎ’は修飾されている。
【０１３３】
特定の実施態様において、ｘ及びｙは１９であり、そしてｓｉＲＮＡは、  ２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチド（２’−ＯＭｅ）がアンチセンス鎖（Ｎ）xの１番目、３番目、５番目、７番目、９番目、１１番目、１３番目、１５番目、１７番目及び１９番目の位置に存在し、かつ２’−ＯＭｅ糖修飾リボヌクレオチドがセンス鎖（Ｎ’）yの２番目、４番目、６番目、８番目、１０番目、１２番目、１４番目、１６番目及び１８番目の位置に存在するように修飾される。
【０１３４】
いくつかの実施態様において、本発明は、構造（Ｃ）：
（Ｃ）    ５’            （Ｎ）ｘ−Ｚ      ３’    アンチセンス鎖
３’      Ｚ’−（Ｎ’）ｙ        ５’    センス鎖
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド及び修飾されたデオキシリボヌクレオチドから独立して選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したヌクレオチドが共有結合により隣のヌクレオチドに結合され、そしてｘ及びｙがそれぞれ１８と４０との間の整数であるオリゴマーであり；
（Ｎ）ｘにおいて、ヌクレオチドは未修飾であるか、又は（Ｎ）ｘは交互である修飾されたリボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとを含み；各々の修飾されたリボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルをその糖上に有するように修飾されており、そして（Ｎ）ｘの中央の位置に位置するリボヌクレオチドは修飾されているか又は未修飾であり、好ましくは未修飾であり；
（Ｎ’）ｙは、未修飾リボヌクレオチドを含み、末端又は末端から二番目の位置において１つの修飾されたヌクレオチドをさらに含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、ミラーヌクレオチド、二環式ヌクレオチド、２’−糖修飾ヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結から選択されるヌクレオチド間連結により隣接するヌクレオチドに結合されるヌクレオチドからなる群より選択され；
（Ｎ’）ｙにおいて１つより多くのヌクレオチドが修飾される場合、修飾されたヌクレオチドは連続していてもよく；
Ｚ及びＺ’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、それが結合しているいずれかのオリゴマーの３’末端において共有結合で結合された１〜５つのデオキシリボヌクレオチドであり；
（Ｎ’）yの配列は、（Ｎ）ｘに実質的に相補的な配列を含み；そしてここで（Ｎ）xの配列は、配列番号１で示される、ＲＴＰ８０１遺伝子のｍＲＮＡ中の約１８〜約４０個の連続したリボヌクレオチドに実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）xは、表Ａ〜Ｉのいずれか１つにおいて示されるアンチセンス配列に実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０１３５】
特定の実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９であり、そして（Ｎ）ｘにおいて、各々の修飾されたリボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルをその糖上に有するように修飾され、そして（Ｎ）ｘの中央に位置するリボヌクレオチドは未修飾である。従って、ｘ＝１９である化合物において、（Ｎ）ｘは、１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置において２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドを含む。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば５番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、８、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば６番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１５番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１４番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを１、２、３、７、９、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば５番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを１、２、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば６番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを１、２、３、５、７、９、１１、１３、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１５番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを１、２、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１４番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、７、９、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば５番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを１、２、４、６、７、９、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば５番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１４、１６、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１５位に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを１、２、３、５、７、９、１１、１３、１４、１６、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１５番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば７番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’Ｏ−Ｍｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば８番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば９位に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１０番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１１番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１２位に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’Ｏ−Ｍｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１３番目の位置に含み得る。
【０１３６】
さらに他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡと比較して少なくとも１つのヌクレオチドミスマッチを含む。特定の好ましい実施態様において、（Ｎ）ｘは、単一ヌクレオチドミスマッチを５、６、又は１４番目の位置に含む。構造（Ｃ）の一実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端及び３’末端のいずれか又は両方における少なくとも２つのヌクレオチドは、２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。特定の好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３であり；（Ｎ）ｘにおいて、ヌクレオチドは、修飾されたリボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、各々の修飾されたリボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルをその糖上に有するように修飾され、そして（Ｎ）ｘの中央に位置するリボヌクレオチドは未修飾であり；そして（Ｎ’）ｙの３’末端における３つのヌクレオチドは、２つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合される（本明細書において構造Ｉとして示される）。他の好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３であり；（Ｎ）ｘにおいて、ヌクレオチドは、修飾されたリボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、各々修飾されたリボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルをその糖上に有するように修飾されており、そして（Ｎ）ｘの中央に位置するリボヌクレオチドは未修飾であり；そして（Ｎ’）ｙの５’末端における４つの連続したヌクレオチドは、３つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。さらなる実施態様において、（Ｎ）ｙの中央位置に位置するさらなるヌクレオチドはその糖上で２’−Ｏ−メチルで修飾されていてもよい。別の好ましい実施態様において、（Ｎ）ｘにおいて、ヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル修飾リボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、そして（Ｎ’）ｙにおいて、５’末端における４つの連続したヌクレオチドは、３つの２’−５’ホスホジエステル結合で結合され、そして５’末端ヌクレオチド又は５’末端における２つ若しくは３つの連続したヌクレオチドは、３’−Ｏ−メチル修飾を含む。
【０１３７】
構造Ｃの特定の好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９であり、そして（Ｎ’）ｙにおいて、少なくとも１つの位置は脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を含み、好ましくは５つの位置が脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を含む。種々の実施態様において、以下の位置は、脱塩基又は逆位脱塩基を含む：１番目及び１６〜１９番目の位置、１５〜１９番目の位置、１〜２番目及び１７〜１９番目の位置、１〜３番目及び１８〜１９番目の位置、１〜４番目及び１９番目の位置並びに１〜５番目の位置。（Ｎ’）ｙはさらに、少なくとも１つのＬＮＡヌクレオチドを含み得る。
【０１３８】
構造Ｃの特定の好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９であり、そして（Ｎ’）ｙにおいて、少なくとも１つの位置におけるヌクレオチドは、ミラーヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、及び隣接するヌクレオチドに２’−５’ヌクレオチド間結合で結合されるヌクレオチドを含む。
【０１３９】
構造Ｃの特定の好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９であり、そして（Ｎ’）ｙはミラーヌクレオチドを含む。種々の実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−ＤＮＡヌクレオチドである。特定の実施態様において、Ｌ−ＤＮＡはＬ−デオキシリボシチジンである。いくつかの実施態様において、（Ｎ’）ｙはＬ−ＤＮＡを１８番目の位置に含む。他の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、Ｌ−ＤＮＡを１７及び１８番目の位置に含む。特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、Ｌ−ＤＮＡ置換を２番目の位置並びに１７及び１８番目の位置のうちの１つ又は両方に含む。特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙはさらに、５’−Ｏ−メチルＤＮＡのような５’末端キャップヌクレオチド、又はオーバーハングとして脱塩基又は逆位脱塩基部分を含む。
【０１４０】
さらに他の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、ＤＮＡを１５番目の位置に含み、そしてＬ−ＤＮＡを１７及び１８番目の位置のうち１つ又は両方に含む。その構造において、２番目の位置はさらに、Ｌ−ＤＮＡ又は脱塩基非通常部分を含み得る。
【０１４１】
ｘ＝ｙ＝２１である構造Ｃの他の実施態様が想定され、これらの実施態様において、上で考察された（Ｎ’）ｙに対する修飾は、１５、１６、１７、１８番目の位置の代わりに、２１量体については１７、１８、１９、２０番目上であり；同様に、１７番目及び１８番目のうち１つ又は両方における修飾は、２１量体については１９番目又は２０番目の位置のうち１つ又は両方である。１９量体における全ての修飾は、２１量体及び２３量体に同様に適応される。
【０１４２】
構造（Ｃ）の種々の実施態様によれば、（Ｎ’）ｙにおいて、３’末端における２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結で連結されている。１つの好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの３’末端における４つの連続したヌクレオチドは、３つの２’−５’ホスホジエステル結合で結合され、ここで２’−５’ホスホジエステル結合を形成する２’−５’ヌクレオチドの１つ又はそれ以上は、３’−Ｏ−メチル糖修飾をさらに含む。好ましくは、（Ｎ’）ｙの３’末端ヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル糖修飾を含む。構造Ｃの特定の好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９であり、そして（Ｎ’）ｙにおいて、１５、１６、１７、１８及び１９番目の位置における２つ又はそれ以上の連続したヌクレオチドは、隣接したヌクレオチドに２’−５’ヌクレオチド間結合により結合されるヌクレオチドを含む。種々の実施態様において、２’−５’ヌクレオチド間結合を形成するヌクレオチドは、３’デオキシリボースヌクレオチド又は３’メトキシヌクレオチドを含む。いくつかの実施態様において、（Ｎ’）ｙにおける１７及び１８番目の位置におけるヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間結合により結合される。他の実施態様において、（Ｎ’）ｙにおける１６〜１７番目、１７〜１８番目、又は１６〜１８番目の位置におけるヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間結合により結合される。
【０１４３】
特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、Ｌ−ＤＮＡを２番目の位置に含み、そして２’−５’ヌクレオチド間結合を１６〜１７番目、１７−１８番目、又は１６−１８番目の位置に含む。特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、１６〜１７番目、１７〜１８、又は１６〜１８番目の位置における２’−５’ヌクレオチド間結合、及び５’末端キャップヌクレオチドを含む。
【０１４４】
構造（Ｃ）の種々の実施態様によれば、（Ｎ’）ｙにおいて、いずれかの末端における２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４個の連続したヌクレオチド、又は５’末端及び３’末端のそれぞれにおける２〜８個の修飾されたヌクレオチドは独立して、ミラーヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−リボヌクレオチドである。他の実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−デオキシリボヌクレオチドである。ミラーヌクレオチドはさらに、糖若しくは塩基部分において、又はヌクレオチド間連結において修飾され得る。
【０１４５】
構造（Ｃ）の１つの好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの３’末端ヌクレオチド又は３’末端における２つ若しくは３つの連続したヌクレオチドはＬ−デオキシリボヌクレオチドである。
【０１４６】
構造（Ｃ）の他の実施態様において、（Ｎ’）ｙにおいて、いずれかの末端における２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４個の連続したリボヌクレオチド、又は５’末端及び３’末端のそれぞれにおける２〜８個の修飾されたヌクレオチドは独立して２’糖修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、２’糖修飾は、アミノ、フルオロ、アルコキシ又はアルキル部分の存在を含む。特定の実施態様において、２’糖修飾は、メトキシ部分（２’−ＯＭｅ）を含む。一連の好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における３つ、４つ又は５つの連続したヌクレオチドは２’−ＯＭｅ修飾を含む。別の好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの３’末端における３つの連続したヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含む。
【０１４７】
構造（Ｃ）のいくつかの実施態様において、（Ｎ’）ｙにおいて、いずれかにおける２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４個の連続したリボヌクレオチド、又は５’末端及び３’末端のそれぞれにおける２〜８個の修飾ヌクレオチドは、独立して二環式ヌクレオチドである。種々の実施態様において、二環式ヌクレオチドはロックト核酸（ＬＮＡ）又はＬＮＡ種（例えば２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）はＬＮＡ種である）である。
【０１４８】
種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは修飾されたヌクレオチドを５’末端又は３’末端及び５’末端の両方に含む。
【０１４９】
構造（Ｃ）のいくつかの実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端及び３’末端のいずれか又は両方における少なくとも２つのヌクレオチドは、Ｐ−エトキシ骨格修飾により結合される。特定の好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３であり；（Ｎ）ｘにおいて、ヌクレオチドは修飾されたリボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、各々の修飾されたリボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルをその糖上に有するように修飾されており、そして（Ｎ）ｘの中央位置に位置するリボヌクレオチドは未修飾であり；そして（Ｎ’）ｙの３’末端又は５’末端における４つの連続したヌクレオチドは、３つのＰ−エトキシ骨格修飾により連結されている。別の好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの３’末端又は５’末端における３つの連続したヌクレオチドは、２つのＰ−エトキシ骨格修飾により結合される。
【０１５０】
構造（Ｃ）のいくつかの実施態様において、（Ｎ’）ｙにおける５’末端及び３’末端のそれぞれにおける２、３、４、５、６、７又は８つの連続したリボヌクレオチドは、独立してミラーヌクレオチド、２’−５’ホスホジエステル結合により結合されたヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド又は二環式ヌクレオチドである。一実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端及び３’末端における修飾は同一である。１つの好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における４つの連続したヌクレオチドは、３つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合され、そして（Ｎ’）ｙの３’末端における３つの連続したヌクレオチドは、２つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。別の実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における修飾は、（Ｎ’）ｙの３’末端における修飾と異なる。１つの特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙの３’末端における修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。別の特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における３つの連続したヌクレオチドはＬＮＡヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙの３’末端における３つの連続したヌクレオチドは２つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。（Ｎ）ｘにおいてヌクレオチドは、修飾されたリボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、各々の修飾されたリボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルをその糖上に有するように修飾され、そして（Ｎ）ｘの中央に位置するリボヌクレオチドは未修飾であり、又は（Ｎ）ｘにおけるリボヌクレオチドは未修飾である。
【０１５１】
構造（Ｃ）の別の実施態様において、本発明は、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３であり；（Ｎ）ｘにおいてヌクレオチドは修飾されたリボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、各々の修飾されたリボヌクレオチドは、その糖上に２’−Ｏ−メチルを有するように修飾され、そして（Ｎ）ｘの中央に位置するリボヌクレオチドは未修飾であり；（Ｎ’）ｙの３’末端における３つのヌクレオチドは、２つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合され、そして（Ｎ’）ｙの５’末端における３つのヌクレオチドは、ＥＮＡのようなＬＮＡである、化合物を提供する。
【０１５２】
構造（Ｃ）の別の実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における５つの連続したヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル糖修飾を含み、そして（Ｎ’）ｙの３’末端における２つの連続したヌクレオチドはＬ−ＤＮＡである。
【０１５３】
さらに別の実施態様において、本発明は、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３であり；（Ｎ）ｘが未修飾リボヌクレオチドからなり；（Ｎ’）ｙの３’末端における３つの連続したヌクレオチドは、２つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合され、そして（Ｎ’）ｙの５’末端における３つの連続したヌクレオチドは、ＥＮＡのようなＬＮＡである、化合物を提供する。
【０１５４】
構造（Ｃ）の他の実施態様によれば、（Ｎ’）ｙにおいて５’末端若しくは３’末端ヌクレオチド、又はいずれかの末端における２、３、４、５若しくは６つの連続したヌクレオチド、又は５’末端及び３’末端のそれぞれにおける１〜４つの修飾されたヌクレオチドは、独立してホスホノカルボキシレートヌクレオチド又はホスフィノカルボキシレートヌクレオチド（ＰＡＣＥヌクレオチド）である。いくつかの実施態様において、ＰＡＣＥヌクレオチドはデオキシリボヌクレオチドである。いくつかの好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙにおいて５’末端及び３’末端のそれぞれにおける１又は２つの連続したヌクレオチドはＰＡＣＥヌクレオチドである。
【０１５５】
さらなる実施態様において、本発明は、構造（Ｄ）：
（Ｄ）      ５’            （Ｎ）ｘ−Ｚ      ３’    アンチセンス鎖
３’      Ｚ’−（Ｎ’）ｙ        ５’    センス鎖
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド又は修飾されたデオキシリボヌクレオチドから選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したヌクレオチドが共有結合により隣のヌクレオチドに結合され、そしてｘ及びｙがそれぞれ独立して１８と４０との間の整数である、オリゴマーであり；
（Ｎ）ｘは未修飾リボヌクレオチドを含み、さらに３’末端又は３’末端から二番目の位置に１つの修飾されたヌクレオチドを含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結から選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに連結されたヌクレオチドからなる群より選択され；
ここで（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含み、さらに５’末端又は５’末端から二番目の位置に１つの修飾されたヌクレオチドを含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドからなる群より選択され；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの各々において、修飾されたヌクレオチド及び未修飾ヌクレオチドは交互ではなく；
Ｚ及びＺ’はそれぞれ、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、それが結合しているいずれかのオリゴマーの３’末端において共有結合で結合された１〜５個のデオキシリボヌクレオチドであり；
（Ｎ’）yの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）xの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の約１８〜約４０個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）xは、表Ａ〜Ｉのいずれか１つにおいて示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０１５６】
構造（Ｄ）の一実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３であり；（Ｎ）ｘは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで２つの連続したヌクレオチドが３’末端において１つの２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されており；そして（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで５’末端において２つの連続したヌクレオチドが１つの２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されている。
【０１５７】
いくつかの実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３であり；（Ｎ）ｘは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで３’末端における３つの連続したヌクレオチドが２つの２’−５’ホスホジエステル結合により共に結合される；そして（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで５’末端における４つの連続したヌクレオチドが３つの２’−５’ホスホジエステル結合によりともに結合される（本明細書中で構造ＩＩとして示される）。
【０１５８】
構造（Ｄ）の種々の実施態様によれば、（Ｎ）ｘの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチド、及び（Ｎ’）ｙの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結で連結されている。
【０１５９】
構造（Ｄ）の好ましい実施態様によれば、（Ｎ’）ｙの５’末端における４つの連続したヌクレオチドは、３つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合され、そして（Ｎ’）ｘの３’末端における３つの連続したヌクレオチドは、２つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。（Ｎ’）ｙの５’末端における３つのヌクレオチド及び（Ｎ’）ｘの３’末端における２つのヌクレオチドはまた、３’−Ｏ−メチル修飾を含んでいてもよい。
【０１６０】
構造（Ｄ）の種々の実施態様によれば、（Ｎ）ｘの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したヌクレオチド、及び（Ｎ’）ｙの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立してミラーヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、ミラーはＬ−リボヌクレオチドである。他の実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−デオキシリボヌクレオチドである。
【０１６１】
構造（Ｄ）の他の実施態様において、（Ｎ）ｘの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチド及び（Ｎ’）ｙの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立して２’糖修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、２’糖修飾は、アミノ、フルオロ、アルコキシ又はアルキル部分を含む。特定の実施態様において、２’糖修飾は、メトキシ部分（２’−ＯＭｅ）を含む。
【０１６２】
構造（Ｄ）の１つの好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における５つの連続したヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル修飾を含み、そして（Ｎ’）ｘの３’末端における５つの連続したヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル修飾を含む。構造（Ｄ）の別の好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における１０個の連続したヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含み、そして（Ｎ’）ｘの３’末端における５つの連続したヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含む。構造（Ｄ）の別の好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における１３個の連続したヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含み、そして（Ｎ’）ｘの３’末端における５つの連続したヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含む。
【０１６３】
構造（Ｄ）のいくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチド、及び（Ｎ’）ｙの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立して二環式ヌクレオチドである。種々の実施態様において、二環式ヌクレオチドは、２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）のようなロックト核酸（ＬＮＡ）である。
【０１６４】
構造（Ｄ）の種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される修飾されたヌクレオチドを含み；
構造（Ｄ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される修飾されたヌクレオチドを含み；
同じ鎖の３’末端及び５’末端がそれぞれ修飾されたヌクレオチドを含む、いくつかの実施態様において、５’末端及び３’末端における修飾は同一である。別の実施態様において、５’末端における修飾は、同じ鎖の３’末端における修飾と異なる。１つの特定の実施態様において、５’末端における修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして同じ鎖の３’末端における修飾されたヌクレオチドは２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。
【０１６５】
構造（Ｄ）の１つの特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における５つの連続したヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含み、そして（Ｎ’）ｙの３’末端における２つの連続したヌクレオチドはＬ−ＤＮＡである。さらに、本化合物は、（Ｎ’）ｘの３’末端において５つの連続した２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチドをさらに含み得る。
【０１６６】
構造（Ｄ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは、（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドと異なる。例えば、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは２’糖修飾ヌクレオチドであり、（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結で連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結で連結されたヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドである。
【０１６７】
さらなる実施態様において、本発明は、構造（Ｅ）：
（Ｅ）    ５’            （Ｎ）ｘ−Ｚ      ３’    アンチセンス鎖
３’      Ｚ’−（Ｎ’）ｙ        ５’    センス鎖
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド又は修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したヌクレオチドが、共有結合により隣のヌクレオチドに結合され、そしてｘ及びｙがそれぞれ独立して、１８と４０との間の整数である、オリゴマーであり；
（Ｎ）ｘは未修飾リボヌクレオチドを含み、５’末端又は５’末端から二番目の位置において１つの修飾されたヌクレオチドをさらに含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドからなる群より選択され；
（Ｎ’）ｙは、未修飾リボヌクレオチドを含み、３’末端又は３’末端から二番目の位置において１つの修飾されたヌクレオチドをさらに含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドからなる群より選択され；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの各々において、修飾されたヌクレオチド及び未修飾ヌクレオチドは交互ではなく；
Ｚ及びＺ’はそれぞれ、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、それが結合しているいずれかのオリゴマーの３’末端において共有結合で結合される１〜５個のデオキシリボヌクレオチドであり；
（Ｎ’）yの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そしてここで（Ｎ）xの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の約１８〜約４０個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）xは、表Ａ〜Ｉのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０１６８】
特定の好ましい実施態様において、（Ｎ）ｘの５’末端における最末端のヌクレオチドは未修飾である。
【０１６９】
構造（Ｅ）の種々の実施態様によれば、（Ｎ）ｘの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる、好ましくは５’末端から二番目の位置から始まる、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチド、及び（Ｎ’）ｙの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結される。
【０１７０】
構造（Ｅ）の種々の実施態様によれば、（Ｎ）ｘの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる、好ましくは５’末端から二番目の位置から始まる、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したヌクレオチド、及び（Ｎ’）ｙの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したヌクレオチドは、独立してミラーヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、ミラーはＬ−リボヌクレオチドである。他の実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−デオキシリボヌクレオチドである。
【０１７１】
構造（Ｅ）の他の実施態様において、（Ｎ）ｘの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる、好ましくは５’末端から二番目の位置から始まる、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチド、及び（Ｎ’）ｙの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立して２’糖修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、２’糖修飾は、アミノ、フルオロ、アルコキシ又はアルキル部分を含む。特定の実施態様において、２’糖修飾はメトキシ部分（２’−ＯＭｅ）を含む。
【０１７２】
構造（Ｅ）のいくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる、好ましくは５’末端から二番目の位置から始まる、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチド、及び（Ｎ’）ｙの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立して二環式ヌクレオチドである。種々の実施態様において、二環式ヌクレオチドは、２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン−架橋核酸（ＥＮＡ）のようなロックト核酸（ＬＮＡ）である。
【０１７３】
構造（Ｅ）の種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、３’末端において又は３’末端及び５’末端のそれぞれにおいて、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結又はＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される修飾されたヌクレオチドを含む。
【０１７４】
構造（Ｅ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘは、５’末端又は３’末端及び５’末端のそれぞれにおいて、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される修飾されたヌクレオチドを含む。
【０１７５】
一実施態様において、同じ鎖の３’末端及び５’末端の両方が修飾されたヌクレオチドを含む場合、５’末端及び３’末端における修飾は同一である。別の実施態様において、５’末端における修飾は、同じ鎖の３’末端における修飾と異なる。１つの特定の実施態様において、５’末端における修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして同じ鎖の３’末端における修飾されたヌクレオチドは２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。
【０１７６】
構造（Ｅ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは、（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドと異なる。例えば、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは２’糖修飾ヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例において、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドである。
【０１７７】
さらなる実施態様において、本発明は、構造（Ｆ）：
（Ｆ）    ５’            （Ｎ）ｘ−Ｚ      ３’    アンチセンス鎖
３’      Ｚ’−（Ｎ’）ｙ        ５’    センス鎖
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド又は修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したヌクレオチドが、共有結合により隣のヌクレオチドに結合され、そしてｘ及びｙがそれぞれ独立して１８と４０との間の整数であるオリゴマーであり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ独立して、１つの修飾されたヌクレオチドを３’末端又は３’末端から二番目の位置に含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、Ｐ−アルコキシ骨格修飾若しくはＰＡＣＥ連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドからなる群より選択され；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙのそれぞれにおいて、修飾されたヌクレオチドと未修飾ヌクレオチドとは交互ではなく；
Ｚ及びＺ’はそれぞれ、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、それが結合しているいずれかのオリゴマーの３’末端に共有結合で結合された１〜５個のデオキシリボヌクレオチドであり；
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そしてここで（Ｎ）xの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の約１８〜約４０個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）xは、表Ａ〜Ｉのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一のアンチセンス配列を含む。
【０１７８】
構造（Ｆ）のいくつかの実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３であり；（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで３’末端における２つの連続したヌクレオチドは２つの連続したミラーデオキシリボヌクレオチドを含み；そして（Ｎ）ｘは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで３’末端における１つのヌクレオチドはミラーデオキシリボヌクレオチドを含む（構造ＩＩＩとして示される）。
【０１７９】
構造（Ｆ）の種々の実施態様によれば、独立して（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結される。
【０１８０】
構造（Ｆ）の好ましい実施態様によれば、（Ｎ’）ｙの３’末端における３つの連続したヌクレオチドは、２つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合され、そして（Ｎ’）ｘの３’末端における３つの連続したヌクレオチドは、２つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。
【０１８１】
構造（Ｆ）の種々の実施態様によれば、独立して（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したヌクレオチドは、独立してミラーヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−リボヌクレオチドである。他の実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−デオキシリボヌクレオチドである。
【０１８２】
構造（Ｆ）の他の実施態様において、独立して（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立して２’糖修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、２’糖修飾は、アミノ、フルオロ、アルコキシ又はアルキル部分を含む。特定の実施態様において、２’糖修飾はメトキシ部分（２’−ＯＭｅ）を含む。
【０１８３】
構造（Ｆ）のいくつかの実施態様において、独立して（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立して二環式ヌクレオチドである。種々の実施態様において、二環式ヌクレオチドは、２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン−架橋核酸（ＥＮＡ）のようなロックト核酸（ＬＮＡ）である。
【０１８４】
構造（Ｆ）の種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、３’末端又は３’末端及び５’末端の両方において、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される、修飾されたヌクレオチドを含む。
【０１８５】
構造（Ｆ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘは、３’末端又は３’末端及び５’末端のそれぞれにおいて、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される、修飾されたヌクレオチドを含む。
【０１８６】
一実施態様において、同じ鎖の３’末端及び５’末端がそれぞれ修飾されたヌクレオチドを含む場合、５’末端及び３’末端における修飾は同一である。別の実施態様において、５’末端における修飾は、同じ鎖の３’末端における修飾と異なる。１つの特定の実施態様において、５’末端における修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして同じ鎖の３’末端における修飾されたヌクレオチドは２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。
【０１８７】
構造（Ｆ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは、（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドと異なる。例えば、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは２’糖修飾ヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドである。
【０１８８】
さらなる実施態様において、本発明は、構造（Ｇ）
（Ｇ）    ５’          （Ｎ）ｘ−Ｚ      ３’    アンチセンス鎖
３’    Ｚ’−（Ｎ’）ｙ        ５’    センス鎖
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド又は修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
ここで（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したヌクレオチドが、共有結合により隣のヌクレオチドに結合され、そしてｘ及びｙがそれぞれ独立して、１８と４０との間の整数である、オリゴマーであり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ独立して、１つの修飾されたヌクレオチドを５’末端又は末端から二番目の位置に含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、Ｐ−アルコキシ骨格修飾若しくはＰＡＣＥ連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドからなる群より選択され；
（Ｎ）ｘについて、修飾されたヌクレオチドは好ましくは５’末端から二番目の位置にあり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの各々おいて、修飾されたヌクレオチドと未修飾ヌクレオチドとは交互ではなく；
Ｚ及びＺ’はそれぞれ、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、それが結合しているいずれかのオリゴマーの３’末端に共有結合で結合された１〜５個のデオキシリボヌクレオチドであり；
（Ｎ’）yの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そしてここで（Ｎ）xの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の約１８〜約４０個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）xは、表Ａ〜Ｉのいずれか１つにおいて示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０１８９】
構造（Ｇ）のいくつかの実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３である。
【０１９０】
構造（Ｇ）の種々の実施態様によれば、独立して（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチ
ド間連結により連結される。（Ｎ）ｘについては、修飾されたヌクレオチドは、好ましくは５’末端の末端から二番目の位置から始まる。
【０１９１】
構造（Ｇ）のの種々の実施態様によれば、独立して（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したヌクレオチドは、独立してミラーヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−リボヌクレオチドである。他の実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−デオキシリボヌクレオチドである。（Ｎ）ｘについて、修飾されたヌクレオチドは、好ましくは５’末端の末端から二番目の位置から始まる。
【０１９２】
構造（Ｇ）の他の実施態様において、独立して（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立して２’糖修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、２’糖修飾は、アミノ、フルオロ、アルコキシ又はアルキル部分を含む。特定の実施態様において、２’糖修飾はメトキシ部分（２’−ＯＭｅ）を含む。いくつかの好ましい実施態様において、連続した修飾されたヌクレオチドは、好ましくは（Ｎ）ｘの５’末端の末端から二番目の位置から始まる。
【０１９３】
構造（Ｇ）の１つの好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における５つの連続したリボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含み、そして（Ｎ’）ｘの５’末端の末端から二番目の位置における１つのリボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含む。構造（Ｇ）の別の好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における５つの連続したリボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含み、そして（Ｎ’）ｘの５’末端位置における２つの連続したリボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含む。
【０１９４】
構造（Ｇ）のいくつかの実施態様において、独立して（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、二環式ヌクレオチドである。種々の実施態様において、二環式ヌクレオチドは、２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン−架橋核酸（ＥＮＡ）のようなロックト核酸（ＬＮＡ）である。いくつかの好ましい実施態様において、連続した修飾されたヌクレオチドは、好ましくは（Ｎ）ｘの５’末端の末端から二番目の位置から始まる。
【０１９５】
構造（Ｇ）の種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、５’末端又は３’末端及び５’末端のそれぞれにおいて、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される、修飾されたヌクレオチドを含む。
【０１９６】
構造（Ｇ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘは、５’末端又は３’末端及び５’末端のそれぞれにおいて、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される、修飾されたヌクレオチドを含む。
【０１９７】
一実施態様において、同じ鎖の３’末端及び５’末端がそれぞれ修飾されたヌクレオチドを含む場合、５’末端及び３’末端における修飾は同一である。別の実施態様において、５’末端における修飾は同じ鎖の３’末端における修飾と異なる。１つの特定の実施態様において、５’末端における修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして同じ鎖の３’末端における修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。構造（Ｇ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは、（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドと異なる。例えば、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは２’糖修飾ヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドである。
【０１９８】
さらなる実施態様において、本発明は、構造（Ｈ）：
（Ｈ）    ５’            （Ｎ）ｘ−Ｚ      ３’    アンチセンス鎖
３’      Ｚ’−（Ｎ’）ｙ        ５’    センス鎖
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド又は修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したヌクレオチドが共有結合により隣のヌクレオチドに結合され、そしてｘ及びｙはそれぞれ独立して１８と４０との間の整数である、オリゴマーであり；
（Ｎ）ｘは未修飾リボヌクレオチドを含み、さらに１つの修飾されたヌクレオチドを３’末端若しくは３’末端から二番目の位置、又は５’末端若しくは５’末端から二番目の位置に含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドからなる群より選択され；
（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含み、さらに１つの修飾されたヌクレオチドを内部位置に含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドからなる群より選択され；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの各々において、修飾されたヌクレオチド及び未修飾ヌクレオチドは交互ではなく；
Ｚ及びＺ’はそれぞれ、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、それが結合しているいずれかのオリゴマーの３’末端において共有結合で結合された１〜５個のデオキシリボヌクレオチドであり；
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の約１８〜約４０個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｉのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０１９９】
構造（Ｈ）の一実施態様において、独立して（Ｎ）ｘの３’末端又は５’末端又は両方の末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立して２’糖修飾ヌクレオチド、二環式ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続した内部リボヌクレオチドは、独立して２’糖修飾ヌクレオチド、二環式ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、２’糖修飾は、アミノ、フルオロ、アルコキシ又はアルキル部分を含む。特定の実施態様において、２’糖修飾はメトキシ部分（２’−ＯＭｅ）を含む。
【０２００】
構造（Ｈ）の別の実施態様において、（Ｎ’）ｙの独立して３’末端若しくは５’末端の最末端の位置若しくは末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４個の連続したリボヌクレオチド、又は５’末端及び３’末端の各々における２〜８個の連続したヌクレオチドは、独立して２’糖修飾ヌクレオチド、二環式ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドであり、そして（Ｎ）ｘ中の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続した内部リボヌクレオチドは、独立して２’糖修飾ヌクレオチド、二環式ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドである。
【０２０１】
同じ鎖の３’末端及び５’末端がそれぞれ、修飾されたヌクレオチドを含む、一実施態様において、５’末端及び３’末端における修飾は同一である。別の実施態様において、５’末端における修飾は、同じ鎖の３’末端における修飾と異なる。１つの特定の実施態様において、５’末端における修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして同じ鎖の３’末端における修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。
【０２０２】
構造（Ｈ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは、（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドと異なる。例えば、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは２’糖修飾ヌクレオチドであり、（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドであり、（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドである。
【０２０３】
構造（Ｈ）の１つの好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９であり；（Ｎ’）ｙの９〜１１番目のヌクレオチド位置における３つの連続したリボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含み、そして（Ｎ’）ｘの３’末端位置における５つの連続したリボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含む。
【０２０４】
全ての上記の構造（Ａ）〜（Ｈ）について、種々の実施態様において、ｘ＝ｙであり、そしてｘ及びｙはそれぞれ、１９、２０、２１、２２及び２３からなる群より選択される整数（ａｎｄ  ｉｎｔｅｇｅｒ）である。特定の実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９である。他の実施態様において、ｘ＝ｙ＝２１である。さらなる実施態様において、本発明の化合物は、修飾されたリボヌクレオチドを交互の位置に含み、ここで（Ｎ）ｘの５’末端及び３’末端における各Ｎは、その糖残基において修飾されており、そして中央のリボヌクレオチドは未修飾である（例えば１９量体鎖における１０番目の位置、２１量体における１１番目の位置、及び２３量体鎖における１２番目の位置のリボヌクレオチド）。
【０２０５】
いくつかの実施態様において、ｘ＝ｙ＝２１であるか又はｘ＝ｙ＝２３である場合、１９量体における修飾の位置は、２１量体又は２３量体のオリゴヌクレオチドに適応されるが、ただしアンチセンス鎖の中央のヌクレオチドは好ましくは未修飾である。
【０２０６】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘも（Ｎ’）ｙも３’末端及び５’末端においてリン酸化されていない。他の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙのいずれか又は両方が３’末端においてリン酸化されている。さらに別の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙのいずれか又は両方が、切断可能でないホスフェート基を使用して３’末端においてリン酸化されている。さらに別の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙのいずれか又は両方が、切断可能なホスフェート基又は切断可能でないホスフェート基を使用して末端の５’末端位置においてリン酸化されている。いくつかの実施態様において、ｓｉＲＮＡ化合物は平滑末端であり、そして末端においてリン酸化されていない；しかし、１つ又は両方の３’末端においてリン酸化されたｓｉＲＮＡ化合物が、リン酸化されていない化合物と比較してインビボで類似の活性を有するということが比較実験により示された。
【０２０７】
特定の実施態様において、上述の構造の全てについて、ｓｉＲＮＡ化合物は平滑末端であり、例えばＺ及びＺ’の両方が存在しない。代替の実施態様において、本化合物は、少なくとも１つの３’オーバーハングを含み、ここでＺ又はＺ’のうち少なくとも１つが存在する。Ｚ及びＺ’は独立して、１つ又はそれ以上の共有結合で連結された修飾されたヌクレオチド又は未修飾ヌクレオチドを含む（例えば逆位ｄＴ又はｄＡ；ｄＴ、ＬＮＡ、ミラーヌクレオチドなど）。いくつかの実施態様において、Ｚ及びＺ’はそれぞれ独立して、ｄＴ及びｄＴｄＴより選択される。Ｚ及び／又はＺ’が存在するｓｉＲＮＡは、Ｚ及びＺ’が存在しないｓｉＲＮＡと類似の活性及び安定性を有する。
【０２０８】
特定の実施態様において、上述の構造の全てについて、ｓｉＲＮＡ化合物は、１つ又はそれ以上のホスホノカルボキシレートヌクレオチド及び／又はホスフィノカルボキシレートヌクレオチド（ＰＡＣＥヌクレオチド）を含む。いくつかの実施態様において、ＰＡＣＥヌクレオチドはデオキシリボヌクレオチドであり、そしてホスフィノカルボキシレートヌクレオチドはホスフィノアセテートヌクレオチドである。
【０２０９】
特定の実施態様において、上述の構造の全てについて、ｓｉＲＮＡ化合物は、架橋核酸又は二環式ヌクレオチドとも定義される、１つ又はそれ以上のロックト核酸（ＬＮＡ）を含む。好ましいロックト核酸は、２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレンヌクレオシド（ＥＮＡ）又は２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレンヌクレオシドである。ＬＮＡ及びＥＮＡヌクレオチドの他の例は、ＷＯ９８／３９３５２、ＷＯ００／４７５９９及びＷＯ９９／１４２２６（全て参照により本明細書に加入される）において開示される。
【０２１０】
特定の実施態様において、上述の構造の全てについて、本化合物は、１，５アンヒドロ−２−デオキシ−Ｄ−アルトリト−ヘキシトールとも定義される、１つ又はそれ以上のアルトリトールモノマー（ヌクレオチド）を含む（例えば、Ａｌｌａｒｔ、ｅｔ  ａｌ．、１９９８．Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  １７：１５２３−１５２６；Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ  ｅｔ  ａｌ．、１９９９．Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  １８：１３７１−１３７６；Ｆｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、２００７、ＮＡＲ  ３５（４）：１０６４−１０７４を参照のこと；全て本明細書中に参照により加入される）。
【０２１１】
本発明は、Ｎ及び／又はＮ’の各々がデオキシリボヌクレオチド（ｄ−Ａ、ｄ−Ｃ、ｄ−Ｇ、ｄ−Ｔ）である化合物を明示的に除外する。特定の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９個又はそれ以上のデオキシリボヌクレオチドを含み得る。特定の実施態様において、本発明は、各Ｎが未修飾リボヌクレオチドであり、そして３’末端ヌクレオチド又は（Ｎ’）ｙの３’末端における２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４個の連続したヌクレオチドがデオキシリボヌクレオチドである化合物を提供する。さらに他の実施態様において、Ｎはそれぞれ未修飾リボヌクレオチドであり、そして５’末端ヌクレオチド又は（Ｎ’）ｙの５’末端における２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４個の連続したヌクレオチドはデオキシリボヌクレオチドである。さらなる実施態様において、（Ｎ）ｘの５’末端ヌクレオチド又は５’末端における２、３、４、５、６、７、８、若しくは９個の連続したヌクレオチド、及び３’末端における１、２、３、４、５、若しくは６個の連続したヌクレオチドはデオキシリボヌクレオチドであり、そしてＮ’はそれぞれ未修飾リボヌクレオチドである。なおさらなる実施態様において、（Ｎ）ｘは、未修飾リボヌクレオチド及び独立して５’末端及び３’末端の各々において、１又は２、３又は４個の連続したデオキシリボヌクレオチド、並びに内部位置において、１又は２、３、４、５又は６個の連続したデオキシリボヌクレオチドを含み；そしてＮ’はそれぞれ未修飾リボヌクレオチドである。特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙの３’末端ヌクレオチド又は３’末端における２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４個の連続したヌクレオチド、及び（Ｎ）ｘの末端５’ヌクレオチド又は５’末端における２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４個の連続したヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチドである。本発明は、Ｎ及び／又はＮ’の各々がデオキシリボヌクレオチドである化合物を除外する。いくつかの実施態様において、５’末端ヌクレオチドのＮ又は２若しくは３個の連続したＮ、及び１、２、若しくは３個のＮ’は、デオキシリボヌクレオチドである。活性ＤＮＡ／ＲＮＡ  ｓｉＲＮＡキメラの特定の例は、米国特許公開第２００５／０００４０６４号、及びＵｉ−Ｔｅｉ、２００８（ＮＡＲ  ３６（７）：２１３６−２１５１）（本明細書にそれらの全体が参照により加入される）において開示される。
【０２１２】
そうではないと記載されていなければ、本明細書において考察される構造の好ましい実施態様において、各々の連続したＮ及びＮ’の間の共有結合はホスホジエステル結合である。
【０２１３】
共有結合は、１つのヌクレオチドモノマーを隣接したヌクレオチドモノマーに連結するヌクレオチド間連結を指す。共有結合としては、例えば、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合、Ｐ−アルコキシ結合、Ｐ−カルボキシ結合などが挙げられる。ＲＮＡ及びＤＮＡの通常のヌクレオシド間連結は３’−５’ホスホジエステル連結である。特定の好ましい実施態様において、共有結合はホスホジエステル結合である。共有結合は、とりわけＷＯ２００４／０４１９２４に開示されるもののような、リンを含有しないヌクレオシド間連結である。そうではないと記載されていなければ、本明細書において考察される構造の好ましい実施態様において、各々の連続したＮ及びＮ’の間の共有結合はホスホジエステル結合である。
【０２１４】
上記の構造の全てについて、いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘのオリゴヌクレオチド配列は、（Ｎ’）ｙのオリゴヌクレオチド配列に対して完全に相補的である。他の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙは実施的に相補的である。特定の実施態様において、（Ｎ）ｘは、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡに対して完全に相補的である。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡに対して実質的に相補的である。
【０２１５】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘも（Ｎ’）ｙも３’末端及び５’末端においてリン酸化されていない。他の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙのいずれか又は両方が、３’末端においてリン酸化されている（３’Ｐｉ）。さらに別の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙのいずれか又は両方が、３’末端において、切断可能でないホスフェート基でリン酸化されている。さらに別の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙのいずれか又は両方が、終端の２’末端位置において、切断可能なホスフェート基又は切断可能でないホスフェート基を使用してリン酸化されている。さらに、本発明の阻害性核酸分子は、１つ若しくはそれ以上のギャップ及び／又は１つ若しくはそれ以上のニック及び／又は１つ又はそれ以上のミスマッチを含み得る。理論に拘束されることを望まないが、ギャップ、ニック及びミスマッチは、ＤＩＣＥＲ、ＤＲＯＳＨＡ又はＲＩＳＣのような内因性細胞機構によりその阻害性成分へとより容易にプロセシングされ得るように、核酸／ｓｉＲＮＡを部分的に不安定化するという利点を有する。
【０２１６】
本発明の文脈において、核酸におけるギャップは、１つの鎖中の１つ又はそれ以上の内部ヌクレオチドが存在しないことを指し、一方、核酸におけるニックは、１つの鎖中の２つの隣接したヌクレオチド間にヌクレオチド間連結が存在しないことを指す。本発明の分子はいずれも、１つ若しくはそれ以上のギャップ及び／又は１つ若しくはそれ以上のニックを含んでいてもよい。
【０２１７】
一局面において、本発明は、構造（Ｉ）：
（Ｉ）    ５’          （Ｎ）ｘ−Ｚ            ３’  （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）ｙ−ｚ’’      ５’  （センス鎖）
［ここで、Ｎ及びＮ’はそれぞれ、未修飾でも修飾されていてもよいリボヌクレオチド、又は非通常部分であり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、独立してそれが存在する鎖の３’末端に共有結合で結合された１〜５個の連続したヌクレオチドであり；
ｚ’’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、（Ｎ’）ｙの５’末端に共有結合で結合されたキャッピング部分であり；
ｘ＝１８〜２７であり；
ｙ＝１８〜２７であり；
（Ｎ）ｘは、  修飾されたリボヌクレオチド及び未修飾リボヌクレオチドを含み、各々の修飾されたリボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチルをその糖上に有し、ここで（Ｎ）ｘの３’末端におけるＮは、修飾されたリボヌクレオチドであり、（Ｎ）ｘは、３’末端から始まる少なくとも５つの交互の修飾されたリボヌクレオチドを含み、そして全体で少なくとも９つの修飾されたリボヌクレオチドを含み、そして残りの各Ｎは未修飾リボヌクレオチドであり；
（Ｎ’）ｙにおいて、少なくとも１つの非通常部分が存在し、この非通常部分は脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、修飾されたデオキシリボヌクレオチド又は未修飾デオキシリボヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、及び２’−５’ヌクレオチド間ホスフェート結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドであり得；そして
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の１８〜２７個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｉのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一のアンチセンス配列を含む。
【０２１８】
いくつかの実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９である。他の実施態様において、ｘ＝ｙ＝２１である。いくつかの実施態様において、少なくとも１つの非通常部分が（Ｎ’）ｙ中の１５、１６、１７、又は１８番目の位置に存在する。いくつかの実施態様において、非通常部分は、ミラーヌクレオチド、脱塩基リボース部分及び脱塩基デオキシリボース部分より選択される。いくつかの好ましい実施態様において、非通常部分はミラーヌクレオチドであり、好ましくはＬ−ＤＮＡ部分である。いくつかの実施態様において、Ｌ−ＤＮＡ部分は、１７番目の位置、１８番目の位置又は１７番目及び１８番目の位置に存在する。
【０２１９】
他の実施態様において、非通常部分は脱塩基部分である。種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは少なくとも５つの脱塩基リボース部分又は脱塩基デオキシリボース部分を含む。
【０２２０】
さらに他の実施態様において、（Ｎ’）ｙは少なくとも５つの脱塩基リボース部分又は脱塩基デオキシリボース部分を含み、少なくとも１つのＮ’はＬＮＡである。
【０２２１】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘは９つの交互の修飾されたリボヌクレオチドを含む。構造（Ｉ）の他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、９つの交互の修飾されたリボヌクレオチドを含み、さらに２’Ｏ修飾ヌクレオチドを２番目の位置に含む。いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを奇数番目、１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９番目の位置に含む。他の実施態様において、（Ｎ）ｘはさらに、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２番目の位置及び１８番目の位置の一方又は両方に含む。さらに他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７、１９番目の位置に含む。
【０２２２】
種々の実施態様において、ｚ’’は存在し、そして脱塩基リボース部分、デオキシリボース部分；逆位脱塩基リボース部分、デオキシリボース部分；Ｃ６−アミノ−Ｐｉ；ミラーヌクレオチドより選択される。
【０２２３】
別の局面において、本発明は、以下に示される構造（Ｊ）：
（Ｊ）    ５’          （Ｎ）ｘ−Ｚ          ３’    （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）ｙ−ｚ’’    ５’    （センス鎖）
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾でも修飾されていてもよいリボヌクレオチド、又は非通常部分であり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は独立して、それが存在する鎖の３’末端に共有結合で結合された１〜５個の連続したヌクレオチドであり；
ｚ’’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、（Ｎ’）ｙの５’末端に共有結合で結合されたキャッピング部分であり；
ｘ＝１８〜２７であり；
ｙ＝１８〜２７であり；
（Ｎ）ｘは、修飾されたリボヌクレオチド又は未修飾リボヌクレオチド、及び場合により少なくとも１つの非通常部分を含み；
（Ｎ’）ｙにおいて、少なくとも１つの非通常部分が存在し、この非通常部分は、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、修飾されたデオキシリボヌクレオチド若しくは未修飾デオキシリボヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、塩基対合しないヌクレオチド類似体、又は２’−５’ヌクレオチド間ホスフェート結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドであり得；そして
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の１８〜２７個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｉのいずれか１つにおいて示されるアンチセンス配列と実質的に同一であるアンチセンス配列を含む。
【０２２４】
いくつかの実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９である。他の実施態様において、ｘ＝ｙ＝２１である。いくつかの好ましい実施態様において、（Ｎ）ｘは、修飾されたリボヌクレオチド及び未修飾リボヌクレオチド、並びに少なくとも１つの非通常部分を含む。
【０２２５】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘにおいて３’末端におけるＮは修飾されたリボヌクレオチドであり、そして（Ｎ）ｘは少なくとも８個の修飾されたリボヌクレオチドを含む。他の実施態様において、少なくとも８つの修飾されたリボヌクレオチドのうち少なくとも５つは交互であり３’末端から始まる。いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５番目の位置のうち１つにおいて脱塩基部分を含む。
【０２２６】
いくつかの実施態様において、（Ｎ’）ｙ中の少なくとも１つの非通常部分は１５、１６、１７、又は１８番目の位置に存在する。いくつかの実施態様において、非通常部分は、ミラーヌクレオチド、脱塩基リボース部分及び脱塩基デオキシリボース部分より選択される。いくつかの好ましい実施態様において、非通常部分はミラーヌクレオチドであり、好ましくはＬ−ＤＮＡ部分である。いくつかの実施態様において、Ｌ−ＤＮＡ部分は１７番目の位置、１８番目の位置又は１７番目及び１８番目の位置に存在する。他の実施態様において、（Ｎ’）ｙ中の少なくとも１つの非通常部分は脱塩基リボース部分又は脱塩基デオキシリボース部分である。
【０２２７】
さらに別の局面において、本発明は、以下に示される構造（Ｋ）：
（Ｋ）    ５’            （Ｎ）x−Ｚ            ３’  （アンチセンス鎖）
３’      Ｚ’−（Ｎ’）y−ｚ’’      ５’  （センス鎖）
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾でも修飾されていてもよいリボヌクレオチド、又は非通常部分であり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙは、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は独立して、それが存在する鎖の３’末端に共有結合で結合された１〜５個の連続したヌクレオチドであり；
ｚ’’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は（Ｎ’）ｙの５’末端に共有結合で結合されたキャッピング部分であり；
ｘ＝１８〜２７であり；
ｙ＝１８〜２７であり；
（Ｎ）ｘは、修飾されたリボヌクレオチド又は未修飾リボヌクレオチド及び非通常部分の組み合わせを含み、任意の修飾されたリボヌクレオチドはその糖上に２’−Ｏ−メチルを有し；
（Ｎ’）ｙは、修飾されたリボヌクレオチド又は未修飾リボヌクレオチド、及び場合により非通常部分を含み、任意の修飾されたリボヌクレオチドはその糖上に２’ＯＭｅを有し；
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の１８〜２７個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｉのいずれか１つにおいて示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０２２８】
いくつかの実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９である。他の実施態様において、ｘ＝ｙ＝２１である。いくつかの好ましい実施態様において、少なくとも１つの非通常部分が（Ｎ）ｘ中に存在し、そしてこれは脱塩基リボース部分又は脱塩基デオキシリボース部分である。他の実施態様において、少なくとも１つの非通常部分が（Ｎ）ｘ中に存在し、これは塩基対合しないヌクレオチド類似体である。種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含む。いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘは、少なくとも５つ
の脱塩基リボース部分若しくは脱塩基デオキシリボース部分又はそれらの組み合わせを含む。特定の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び／又は（Ｎ’）ｙは、（Ｎ’）ｙ及び／又は（Ｎ）ｘ中の対応する修飾されたリボヌクレオチド又は未修飾リボヌクレオチドと塩基対合しない、修飾されたリボヌクレオチドを含む。
【０２２９】
種々の実施態様において、本発明は、構造（Ｌ）：
（Ｌ）  ５’            （Ｎ）x−Ｚ      ３’  （アンチセンス鎖）
３’      Ｚ’−（Ｎ’）y        ５’  （センス鎖）
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド及び修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）x及び（Ｎ’）yはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が、共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は存在せず；
ｘ＝ｙ＝１９であり；
（Ｎ’）ｙにおいて、１５、１６、１７、１８及び１９番目の位置のうち少なくとも１つにおけるヌクレオチドは、脱塩基非通常部分、ミラーヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド及び２’−５’ヌクレオチド間結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択されるヌクレオチドを含み；
（Ｎ）ｘは、交互の修飾されたリボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとを含み、各々の修飾されたリボヌクレオチドは、その糖上に２’−Ｏ−メチルを有するように修飾され、そして（Ｎ）ｘの中央の位置に位置するリボヌクレオチドは、修飾されているか又は未修飾であり、好ましくは未修飾であり；そして
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の１８〜２７個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
で示されるｓｉＲＮＡを提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｉのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０２３０】
構造（Ｌ）のいくつかの実施態様において、（Ｎ’）ｙにおいて１７番目及び１８番目の位置の一方又は両方におけるヌクレオチドは、脱塩基非通常部分、ミラーヌクレオチド及び２’−５’ヌクレオチド間結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される修飾されたヌクレオチドを含む。いくつかの実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−ＤＮＡ及びＬ−ＲＮＡより選択される。種々の実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−ＤＮＡである。
【０２３１】
種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは修飾されたヌクレオチドを１５番目の位置に含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、ミラーヌクレオチド及びデオキシリボヌクレオチドより選択される。
【０２３２】
特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、修飾されたヌクレオチド又はプソイドヌクレオチドを２番目の位置にさらに含み、ここでプソイドヌクレオチドは脱塩基非通常部分であってもよく、そして修飾されたヌクレオチドは場合によりミラーヌクレオチドである。
【０２３３】
種々の実施態様において、アンチセンス鎖（Ｎ）ｘは、２’Ｏ−Ｍｅ修飾リボヌクレオチドを奇数番目の位置（５’から３’へ；１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９番目）に含む。いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’Ｏ−Ｍｅ修飾リボヌクレオチドを２番目及び１８番目の位置の一方又は両方にさらに含む。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７、１９番目の位置に含む。
【０２３４】
構造（Ｌ）の他の実施態様は、ｘ＝ｙ＝２１である場合を想定する；これらの実施態様において、上で考察される（Ｎ’）ｙに関する修飾は、１７番目及び１８番目の位置である代わりに、２１量体オリゴヌクレオチドについて１９番目及び２０番目の位置であり；同様に１５、１６、１７、１８又は１９番目の位置における修飾は、２１量体オリゴヌクレオチドについては１７、１８、１９、２０又は２１番目の位置である。アンチセンス鎖上の２’ＯＭｅ修飾は同様に適応される。いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを奇数番目の位置（２１量体オリゴヌクレオチドについて、５’から３’へ；１、３、５、７、９、１２、１４、１６、１８、２０番目の位置［１１番目の位置におけるヌクレオチドは未修飾］）に含む。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを、２１量体オリゴヌクレオチドについて２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０番目の位置［１１番目の位置におけるヌクレオチドは未修飾］に含む。
【０２３５】
いくつかの実施態様において、（Ｎ’）ｙは、５’末端キャップヌクレオチドをさらに含む。種々の実施態様において、末端キャップ部分は、脱塩基非通常部分、逆位脱塩基非通常部分、Ｌ−ＤＮＡヌクレオチド、及びＣ６−イミンホスフェート（ホスフェートを末端に有するＣ６アミノリンカー）より選択される。
【０２３６】
他の実施態様において、本発明は、以下に示される構造（Ｍ）：
（Ｍ）    ５’          （Ｎ）x−Ｚ      ３’  （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）y        ５’  （センス鎖）
［ここで、Ｎ及びＮ’はそれぞれ、プソイド−ヌクレオチド及びヌクレオチドより選択され；
各ヌクレオチドは、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド及び修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択され；
（Ｎ）x及び（Ｎ’）yはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は存在せず；ここでｘ＝１８〜２７であり；
ｙ＝１８〜２７であり；
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の１８〜２７個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｉのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０２３７】
他の実施態様において、本発明は、以下に示される構造（Ｎ）：
（Ｎ）      ５’          （Ｎ）x−Ｚ      ３’  （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）y        ５’  （センス鎖）
［ここで、Ｎ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド及び修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）x及び（Ｎ’）yはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が、共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は存在せず；
ｘ及びｙはそれぞれ独立して、１８と４０との間の整数であり；
（Ｎ）ｘ、（Ｎ’）ｙ又は（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙは、二本鎖化合物において（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙが１５個未満の塩基対を形成するように、塩基対合しない修飾されたヌクレオチドを含み；そしてここで（Ｎ’）ｙの配列は（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の１８〜４０個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する二本鎖化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｉのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０２３８】
他の実施態様において、本発明は、以下に示される構造（Ｏ）：
（Ｏ）    ５’          （Ｎ）x−Ｚ      ３’  （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）y        ５’  （センス鎖）
［Ｎはそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド及び修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
Ｎ’はそれぞれ、六員糖ヌクレオチド、七員糖ヌクレオチド、モルホリノ部分、ペプチド核酸及びそれらの組み合わせより選択されるヌクレオチド類似体であり；
（Ｎ）x及び（Ｎ’）yはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は存在せず；
ｘ及びｙはそれぞれ独立して、１８と４０と間の整数であり；
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の１８〜２７個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｉのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０２３９】
他の実施態様において、本発明は、以下に示される構造（Ｐ）：
（Ｐ）    ５’          （Ｎ）x−Ｚ      ３’  （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）y        ５’  （センス鎖）
［ここで、Ｎ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド及び修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）x及び（Ｎ’）yはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は存在せず
ｘ及びｙはそれぞれ独立して、１８と４０との間の整数であり；
（Ｎ）ｘ若しくは（Ｎ’）ｙの内部位置中のＮ若しくはＮ’のうちの１つ、又は（Ｎ）ｘ若しくは（Ｎ’）ｙの末端位置における１つ若しくはそれ以上のＮ若しくはＮ’は、脱塩基部分又は２’修飾されたヌクレオチドを含み；
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の１８〜２７個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｉのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０２４０】
種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、１５番目の位置に修飾されたヌクレオチドを含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、ミラーヌクレオチド及びデオキシリボヌクレオチドより選択される。
【０２４１】
特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、修飾されたヌクレオチドを２番目の位置にさらに含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、ミラーヌクレオチド及び脱塩基非通常部分より選択される。
【０２４２】
種々の実施態様において、アンチセンス鎖（Ｎ）ｘは、２’Ｏ−Ｍｅ修飾リボヌクレオチドを奇数番目の位置（５’から３’へ；１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９番目の位置）に含む。いくつかの実施態様において、（Ｎ）Xは、２’Ｏ−Ｍｅ修飾リボヌクレオチドを２番目及び１８番目の位置の一方又は両方にさらに含む。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７、１９番目の位置に含む。
【０２４３】
本発明により提供されるさらなる新規な分子は、連続したヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドであり、ここでこのようなヌクレオチドの第一のセグメントは第一の阻害性ＲＮＡ分子をコードし、このようなヌクレオチドの第二のセグメントは第二の阻害性ＲＮＡ分子をコードし、そしてこのようなヌクレオチドの第三のセグメントは、第三の阻害性ＲＮＡ分子をコードする。第一、第二、及び第三のセグメントはそれぞれ、二本鎖ＲＮＡの１つの鎖を含み得、そして第一、第二及び第三のセグメントは、リンカーにより一緒に結合され得る。さらに、オリゴヌクレオチドは、１つ又はそれ以上のリンカーにより一緒に結合された３つの二本鎖セグメントを含み得る。
【０２４４】
従って、本発明により提供される１つの分子は、３つの阻害性ＲＮＡ分子をコードする連続したヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドであり；上記オリゴヌクレオチドは、３つの二本鎖アームが、本明細書で以前に示されたリンカーのいずれかのようなリンカー１つ又はそれ以上により一緒に連結されるように、３本鎖構造を有し得る。この分子は、「星（ｓｔａｒ）」様構造を形成し、そしてこれはまた、本明細書でＲＮＡｓｔａｒとも呼ばれ得る。このような構造は、本発明の譲受人が譲り受けたＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２００７／０９１２６９号（その全体が参照により本明細書に加入される）に開示される。
【０２４５】
上記三本鎖のオリゴヌクレオチドは、以下の一般構造を有するオリゴリボヌクレオチドであり得る：
５’  オリゴ１（センス）  リンカーＡ  オリゴ２（センス）  ３’
３’  オリゴ１  （アンチセンス）  リンカーＢ  オリゴ３（センス）  ５’
３’  オリゴ３（アンチセンス）  リンカーＣ  オリゴ２  （アンチセンス）  ５’
又は
５’  オリゴ１（センス）  リンカーＡ  オリゴ２  （アンチセンス）  ３’
３’  オリゴ１  （アンチセンス）  リンカーＢ  オリゴ３（センス）  ５’
３’  オリゴ３  （アンチセンス）  リンカーＣ  オリゴ２（センス）  ５’
又は
５’  オリゴ１（センス）  リンカーＡ  オリゴ３  （アンチセンス）  ３’
３’  オリゴ１  （アンチセンス）  リンカーＢ  オリゴ２（センス）  ５’
５’  オリゴ３（センス）  リンカーＣ  オリゴ２（アンチセンス）  ３’
［ここで、リンカーＡ、リンカーＢ又はリンカーＣのうち１つ又はそれ以上が存在し；鎖の極性及び分子の全体構造が残っている限り、２つ又はそれ以上のオリゴヌクレオチドと１つ又はそれ以上のリンカーＡ〜Ｃのいずれの組み合わせも可能である。さらに、２つ又はそれ以上のリンカーＡ〜Ｃが存在する場合、それらは同一でも異なっていてもよい。］
【０２４６】
従って、三重アーム構造が形成され、ここで各アームは、センス鎖及び相補的なアンチセンス鎖（すなわち、オリゴ１センスに対してオリゴ１アンチセンス塩基対など）を含む。三重アーム構造は三本鎖であってもよく、これにより各アームは塩基対合を有する。
【０２４７】
さらに、上記の三本鎖構造は、１つ又はそれ以上の鎖においてリンカーの代わりにギャップを有し得る。このような１つのギャップを有する分子は、技術的には四本鎖であり、三本鎖ではなく；さらなるギャップ又はニックの挿入は、さらなる鎖を有する分子をもたらす。本発明の発明者らにより得られた予備的な結果は、上記のギャップを有する分子が、類似しているがギャップのない分子よりも、ＲＴＰ８０１標的遺伝子の阻害においてより活性であるということを示した。
【０２４８】
いくつかの実施態様において、本発明の新規なｓｉＲＮＡ化合物のアンチセンス鎖もセンス鎖も、３’末端及び５’末端においてリン酸化されていない。他の実施態様において、アンチセンス鎖及びセンス鎖のいずれか又は両方が、３’末端においてリン酸化されている。さらに別の実施態様において、アンチセンス鎖及びセンス鎖のいずれか又は両方が、切断可能でないホスフェート基を使用して３’末端においてリン酸化されている。さらに別の実施態様において、アンチセンス鎖及びセンス鎖のいずれか又は両方が、切断可能なホスフェート基又は切断可能でないホスフェート基を使用して、末端の５’末端位置においてリン酸化されている。さらに別の実施態様において、アンチセンス鎖及びセンス鎖のいずれか又は両方が、切断可能なホスフェート基又は切断可能でないホスフェート基を使用して末端の２’末端位置においてリン酸化されている。いくつかの実施態様において、ｓｉＲＮＡ化合物は平滑末端であり、そして末端においてリン酸化されていない；しかし、比較実験により、３’末端の一方又は両方においてリン酸化されたｓｉＲＮＡ化合物が、リン酸化されていない化合物と比較してインビボで同様の活性を有することが示された。
【０２４９】
本明細書に開示される修飾／構造のいずれかを有する本発明に開示される任意のｓｉＲＮＡ配列を製造することができる。配列と構造との組み合わせは新規であり、そして本明細書に開示される状態の処置において使用することができる。
【０２５０】
そうではないと示されていなければ、本明細書において考察される構造の好ましい実施態様において、各々の連続したＮ及びＮ’の間の共有結合はホスホジエステル結合である。
【０２５１】
上記の構造の全てについて、いくつかの実施態様において、アンチセンス鎖のオリゴヌクレオチド配列は、センスのオリゴヌクレオチド配列に対して完全に相補的である。他の実施態様において、アンチセンス鎖及びセンス鎖は実質的に相補的である。特定の実施態様において、アンチセンス鎖はＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡに対して完全に相補的である。他の実施態様において、アンチセンス鎖はＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡに対して実施的に相補的である。好ましくはアンチセンス鎖の配列は、表Ａ〜Ｉのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一である。
【０２５２】
いくつかの実施態様において、本発明は、表Ｅ〜Ｉのいずれか１つにおいて開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。いくつかの実施態様において、発現ベクターは、アンチセンスオリゴヌクレオチドに対して相補性を有するセンスオリゴヌクレオチドをさらに含む。種々の実施態様において、本発明はさらに、表Ｅ〜Ｉのいずれか１つにおいて開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む発現ベクターを含む細胞を提供する。本発明はさらに、表Ｅ〜Ｉのいずれか１つにおいて開示されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む発現ベクターを含む細胞で発現されたｓｉＲＮＡ、上記ｓｉＲＮＡを含む医薬組成物、並びに本明細書において開示される疾患及び障害のいずれか１つの処置のためのそれらの使用を提供する。
【０２５３】
他の実施態様において、本発明は、表Ｅ〜Ｉのいずれか１つにおいて開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む第一の発現ベクター、及び第一の発現ベクターに含まれるアンチセンスオリゴヌクレオチドに対して相補性を有するセンスオリゴヌクレオチドを含む第二の発現ベクターを提供する。種々の実施態様において、本発明はさらに、表Ｅ〜Ｉのいずれか１つにおいて開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む第一の発現ベクター、及び第一の発現ベクターに含まれるアンチセンスオリゴヌクレオチドに対して相補性を有するセンスオリゴヌクレオチドを含む第二の発現ベクターを含む細胞を提供する。本発明はさらに、このような第一の発現ベクター及び第二の発現ベクターを含む細胞において発現されたｓｉＲＮＡ、このｓｉＲＮＡを含む医薬組成物、並びに本明細書において開示される疾患及び障害のいずれか１つの処置のためのそれらの使用を提供する。
【０２５４】
ｓｉＲＮＡ合成
専用のアルゴリズム及び本明細書に開示されるＲＴＰ８０１遺伝子の公知の配列を使用して、多くの可能性があるｓｉＲＮＡの配列が生成される。上記の明細書に従うｓｉＲＮＡ分子は、本質的には本明細書に記載されるように製造される。
【０２５５】
本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、リボ核酸（又はデオキシリボ核酸）オリゴヌクレオチドの合成のための、当該分野で周知である方法のいずれかにより合成される。このような合成は、とりわけ、Ｂｅａｕｃａｇｅ  ａｎｄ  Ｉｙｅｒ、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９２；４８：２２２３−２３１１；Ｂｅａｕｃａｇｅ  ａｎｄ  Ｉｙｅｒ、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９３；４９：６１２３−６１９４及びＣａｒｕｔｈｅｒｓ、ｅｔ．ａｌ．、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９８７；１５４：２８７−３１３において記載され；チオエートの合成は、とりわけ、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８５；５４：３６７−４０２に記載され、ＲＮＡ分子の合成は、Ｓｐｒｏａｔ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  ２００５  Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ  Ｐ．編；Ｋａｐ．２：１７−３１に記載され、そしてそれぞれの下流のプロセスは、とりわけ、Ｐｉｎｇｏｕｄ  ｅｔ  ａｌ．、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  １９８９  Ｏｌｉｖｅｒ  Ｒ．Ｗ．Ａ．編；Ｋａｐ．７：１８３−２０８に記載される。
【０２５６】
他の合成手順は当該分野で公知であり、例えばＵｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．、１９８７、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１０９、７８４５；Ｓｃａｒｉｎｇｅ  ｅｔ  ａｌ．、１９９０、ＮＡＲ．、１８、５４３３；Ｗｉｎｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．、１９９５、ＮＡＲ．２３、２６７７−２６８４；及びＷｉｎｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．、１９９７、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．、７４、５９に記載される手順は、一般的な核酸の保護基及びカップリング基、例えば５’末端におけるジメトキシトリチル、及び３’末端におけるホスホラミダイトを利用し得る。修飾された（例えば２’−Ｏ−メチル化した）ヌクレオチド及び未修飾ヌクレオチドは必要に応じて組み込まれる。
【０２５７】
本発明のオリゴヌクレオチドは、別々に合成し、そして例えばライゲーションにより（Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．、１９９２、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６、９９２３；Ｄｒａｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、国際特許公開第ＷＯ９３／２３５６９号；Ｓｈａｂａｒｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．、１９９１、ＮＡＲ  １９、４２４７；Ｂｅｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、１９９７、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、１６、９５１；Ｂｅｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、１９９７、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．８、２０４）、又は合成及び／若しくは脱保護後のハイブリダイゼーションにより、合成後に一緒に結合することができる。
【０２５８】
市販の機器（とりわけＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓより入手可能）を使用することができることに注意する；オリゴヌクレオチドは、本明細書において開示される配列にしたがって製造される。化学的に合成されたフラグメントのオーバーラップしている対は、当該分野で周知の方法（例えば、米国特許第６，１２１，４２６号を参照のこと）を使用して連結することができる。鎖を別々に合成し、次いでチューブ内で互いにアニーリングさせる。次いで、二本鎖ｓｉＲＮＡを、（例えばそれらの一方が過剰であるために）アニーリングされなかった一本鎖オリゴヌクレオチドとＨＰＬＣにより分離する。本発明のｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡフラグメントに関して、２つ又はそれ以上のこのような配列を、本発明における使用のために合成して一緒に連結することができる。
【０２５９】
本発明の化合物はまた、例えば米国特許公開第２００４／００１９００１号に記載されるように、タンデム合成方法論により合成することもでき、ここで両方のｓｉＲＮＡ鎖は、切断可能なリンカーにより隔てられた単一の連続したオリゴヌクレオチドフラグメント又は鎖として合成され、続いてこれを切断して別々のｓｉＲＮＡフラグメント又は鎖を得、これがハイブリダイズしてｓｉＲＮＡ二重鎖の精製を可能とする。このリンカーは、ポリヌクレオチドリンカー又は非ヌクレオチドリンカーより選択される。
【０２６０】
医薬組成物
本発明の化合物をそのままの化学物質として投与することは可能であるが、それらを医薬組成物として提示することが好ましい。従って、本発明は、１つ又はそれ以上の本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物；及び薬学的に許容しうる担体を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様において、医薬組成物は、２つ又はそれ以上の本発明の新規なｓｉＲＮＡ化合物を含む。
【０２６１】
本発明はさらに、ＲＴＰ８０１遺伝子を阻害するために有効な量の、１つ又はそれ以上の本発明の化合物に共有結合で又は非共有結合で結合された少なくとも１つの本発明の化合物：及び薬学的に許容しうる担体を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様において、ｓｉＲＮＡ化合物は、内因性細胞複合体により細胞内でプロセシングされて１つ又はそれ以上の本発明のオリゴリボヌクレオチドを生じる。
【０２６２】
本発明はさらに、薬学的に許容しうる担体、及び１つ又はそれ以上の本発明の化学修飾されたａｓｉＲＮＡ化合物を、ＲＴＰ８０１遺伝子の細胞における発現を阻害するために有効な量で含む医薬組成物を提供し、この化合物は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡの配列に対して実施的に相補的な配列を含む。
【０２６３】
いくつかの実施態様において、本発明に従うｓｉＲＮＡ化合物は、医薬組成物における主要な活性成分である。他の実施態様において、本発明に従うｓｉＲＮＡ化合物は、２つ又はそれ以上のｓｉＲＮＡを含有する医薬組成物の活性成分のうちの１つであり、該医薬組成物はさらに、ＲＴＰ８０１遺伝子を標的とする１つ又はそれ以上のさらなるｓｉＲＮＡ分子から成っている。他の実施態様において、本発明に従うｓｉＲＮＡ化合物は、２つ又はそれ以上のｓｉＲＮＡを含有する医薬組成物の活性成分のうちの１つであり、該医薬組成物はさらに、１つ又はそれ以上のさらなる遺伝子を標的とする１つ又はそれ以上のさらなるｓｉＲＮＡ分子から成っている。いくつかの実施態様において、２つ又はそれ以上の本発明のｓｉＲＮＡ化合物によるＲＴＰ８０１遺伝子の同時阻害は、本明細書において開示される疾患の処置に関して相加効果又は相乗効果をもたらす。いくつかの実施態様において、ＲＴＰ８０１遺伝子及び上記さらなる遺伝子の同時阻害は、本明細書において開示される疾患の処置に関して相加効果又は相乗効果をもたらす。
【０２６４】
いくつかの実施態様において、本明細書において開示されるｓｉＲＮＡ化合物は、本明細書において開示される疾患の処置に対して増強された標的化を達成するために、標的細胞で発現される細胞表面内部移行性（ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｂｌｅ）分子に対する抗体又はアプタマーに（共有結合又は非共有結合で）連結又は結合される。１つの特定の実施態様において、抗Ｆａｓ抗体（好ましくは中和抗体）を、本発明のｓｉＲＮＡ化合物と（共有結合又は非共有結合で）組み合わせる。種々の実施態様において、リガンド／抗体のように作用するアプタマーを、本発明のｓｉＲＮＡ化合物と（共有結合又は非共有結合で）組み合わせる。
【０２６５】
ＲＮＡ干渉
ＲＮＡｉ現象に関連する多数のＰＣＴ出願が、最近公開された。これらには：ＰＣＴ公開ＷＯ００／４４８９５；ＰＣＴ公開ＷＯ００／４９０３５；ＰＣＴ公開ＷＯ００／６３３６４；ＰＣＴ公開ＷＯ０１／３６６４１；ＰＣＴ公開ＷＯ０１／３６６４６；ＰＣＴ公開ＷＯ９９／３２６１９；ＰＣＴ公開ＷＯ００／４４９１４；ＰＣＴ公開ＷＯ０１／２９０５８；及びＰＣＴ公開ＷＯ０１／７５１６４が含まれる。
【０２６６】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、細胞質タンパク質複合体に入り、次いでここで相補的細胞ＲＮＡに標的化され、そして特異的にそれを分解する、ｄｓＲＮＡ種の能力に基づく。ＲＮＡ干渉応答は、一般的にＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と呼ばれる、ｓｉＲＮＡを含むエンドヌクレアーゼ複合体を特色とし、これがｓｉＲＮＡ二重鎖のアンチセンス鎖に相補的な配列を有する一本鎖ＲＮＡの切断を媒介する。標的ＲＮＡの切断は、ｓｉＲＮＡ二重鎖のアンチセンス鎖に相補的な領域の中央において起こり得る（Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．、２００１、１５（２）：１８８−２００）。より詳細には、長鎖ｄｓＲＮＡが、ＩＩＩ型ＲＮＡｓｅ（ＤＩＣＥＲ、ＤＲＯＳＨＡなど；Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ、２００１、４０９（６８１８）：３６３−６；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ、２００３、４２５（６９５６）：４１５−９を参照のこと）により低分子（１７−２９ｂｐ）ｄｓＲＮＡフラグメント（低分子阻害（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ）ＲＮＡ又は「ｓｉＲＮＡ」とも呼ばれる）へと消化される。ＲＩＳＣタンパク質複合体は、これらのフラグメント及び相補ｍＲＮＡを認識する。プロセス全体は、標的ｍＲＮＡのエンドヌクレアーゼ切断で終わりとなる（ＭｃＭａｎｕｓ  ＆  Ｓｈａｒｐ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ遺伝子ｔ、２００２、３（１０）：７３７−４７；Ｐａｄｄｉｓｏｎ  ＆  Ｈａｎｎｏｎ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２００３、５（３）：２１７−２４）。（これらの用語及び提案された機構に関するさらなる情報については、例えばＢｅｒｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．、ＲＮＡ  ２００１、７（１１）：１５０９−２１；Ｎｉｓｈｉｋｕｒａ、Ｃｅｌｌ  ２００１、１０７（４）：４１５−８  及びＰＣＴ公開ＷＯ０１／３６６４６を参照のこと）。
【０２６７】
公知の遺伝子に対応するｓｉＲＮＡの選択及び合成は、広く報告されている；例えば、Ｕｉ−Ｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００６；２００６：６５０５２；  Ｃｈａｌｋ  ｅｔ  ａｌ．、  ＢＢＲＣ．２００４、３１９（１）：２６４−７４；Ｓｉｏｕｄ  ＆  Ｌｅｉｒｄａｌ、Ｍｅｔ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．；２００４、２５２：４５７−６９；Ｌｅｖｅｎｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍ．２００４、２０（３）：４３０−２；Ｕｉ−Ｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．２００４、３２（３）：９３６−４８を参照のこと。修飾されたｓｉＲＮＡの使用、製造の例については、Ｂｒａａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２００３、４２（２６）：７９６７−７５；Ｃｈｉｕ  ｅｔ  ａｌ．、ＲＮＡ、２００３、９（９）：１０３４−４８；ＰＣＴ公開ＷＯ２００４／０１５１０７（Ａｔｕｇｅｎ）；ＷＯ０２／４４３２１（Ｔｕｓｃｈｌ  ｅｔ  ａｌ）、及び米国特許第５，８９８，０３１号及び同第６，１０７，０９４号を参照のこと。
【０２６８】
送達
本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、化合物自体として（すなわち裸のｓｉＲＮＡとして）又は薬学的に許容しうる塩として投与することができ、そして単独で、又は１つ又はそれ上の薬学的に許容しうる担体、溶媒、希釈剤、賦形剤、アジュバント及びビヒクルと組み合わせた活性成分として投与される。いくつかの実施態様において、本発明のｓｉＲＮＡ分子は、担体又は希釈剤とともに製造された裸の分子の直接適用により標的組織に送達される。
【０２６９】
用語「裸のｓｉＲＮＡ」は、細胞への進入を補助、促進するか容易にするように作用するどんな送達ビヒクル（ウイルス配列、ウイルス粒子、リポソーム製剤、リポフェクチン又は沈殿剤などを含む）も含まない、ｓｉＲＮＡ分子を指す。例えば、ＰＢＳ中のｓｉＲＮＡは「裸のｓｉＲＮＡ」である。
【０２７０】
薬学的に許容しうる担体、溶媒、希釈剤、賦形剤、アジュバント及びビヒクル、さらには移植担体は、一般に、本発明の活性なｓｉＲＮＡ化合物と反応しない不活性な非毒性の固形又は液体のフィラー、希釈剤又はカプセル化材料を指し、そしれこれらには、リポソーム及びミクロスフェアが含まれる。組成物をリポソームで製剤化することは吸収に有利になり得る。さらに、組成物はペルフルブロンのようなＰＦＣ液を含んでいてもよく、そして組成物は、本発明の化合物とポリエチレンイミン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｍｅｉｍｉｎｅ）（ＰＥＩ）との複合体として製剤化されてもよい。本発明において有用な送達系の例としては、米国特許第５，２２５，１８２号；同第５，１６９，３８３号；同第５，１６７，６１６号；同第４，９５９，２１７号；同第４，９２５，６７８号；同第４，４８７，６０３号；同第４，４８６，１９４号；同第４，４４７，２３３号；同第４，４４７，２２４号；同第４，４３９，１９６号；及び同第４，４７５，１９６号が挙げられる。多くのこのようなインプラント、送達系、及びモジュールは当業者に周知である。本発明の１つの特定の実施態様において、局所製剤及び経皮製剤が選択される。
【０２７１】
従って、いくつかの実施態様において、本発明のｓｉＲＮＡ分子は、リポソーム製剤及びリポフェクチン製剤などで送達され、そして当業者に周知の方法により製造され得る。このような方法は、例えば、米国特許第５，５９３，９７２号、同第５，５８９，４６６号、及び同第５，５８０，８５９号（これらは本明細書に参照により加入される）に記載される。
【０２７２】
哺乳動物細胞へのｓｉＲＮＡの増強され改善された送達を特に目指した送達系が開発されている（例えば、Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔ．５３９：１１１−１１４（２００３）、Ｘｉａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０：１００６−１０１０（２００２）、Ｒｅｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌ．Ｖｉｓｉｏｎ  ９：２１０−２１６（２００３）、Ｓｏｒｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３２７：７６１−７６６（２００３）、Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔ．Ｇｅｎ．３２：１０７−１０８（２００２）及びＳｉｍｅｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．、ＮＡＲ  ３１、１１：２７１７−２７２４（２００３）を参照のこと）。近年ｓｉＲＮＡは、霊長類における遺伝子発現の阻害に首尾よく使用されている；（詳細については、例えばＴｏｌｅｎｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．、Ｒｅｔｉｎａ  ２００４．２４（１）：１３２−１３８を参照のこと）。
【０２７３】
本発明の化合物の改善された送達のためのさらなる製剤としては、非製剤化合物、コレステロールに共有結合で結合された化合物、及び標的化抗体に結合された化合物を挙げることができる（Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡｓ  ｖｉａ  ｃｅｌｌ−ｓｕｒｆａｃｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５．２３（６）：７０９−１７）。コレステロール接合ｓｉＲＮＡ（並びに他のステロイド接合ｓｉＲＮＡ及び脂質接合ｓｉＲＮＡ）を送達に使用することができる（例えばＳｏｕｔｓｃｈｅｋ  ｅｔ  ａｌ  Ｎａｔｕｒｅ．２００４．４３２：１７３−１７７；及びＬｏｒｅｎｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００４．１４：４９７５−４９７７を参照のこと）。
【０２７４】
裸のｓｉＲＮＡ又は本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物は、適切な医療行為に従って、個々の患者の臨床状態、処置しようとする疾患、投与の部位及び方法、投与のスケジュール、患者の年齢、性別、体重並びに医師に公知の他の因子を考慮して、投与及び服用される。
【０２７５】
従って、本明細書での目的のための「治療有効用量」は、当該分野で知られているような考察により決定される。用量は、改善された生存率若しくはより速い回復、又は症状の改善若しくは解消、及び当業者により適切な基準として選択されるような他の指標を含むがこれらに限定されない改善を達成するように有効でなければならない。本発明のｓｉＲＮＡは、単回用量又は複数回用量で投与することができる。
【０２７６】
一般に、ヒトに対する化合物の活性用量は、１〜４週又はそれ以上の期間に１日あたり１用量又は１日あたり２回若しくは３回若しくはそれ以上のレジメンでの、１日あたり体重１ｋｇあたり１ｎｇから約２０〜１００ｍｇの範囲、好ましくは１日あたり体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇから約２〜１０ｍｇの範囲である。
【０２７７】
本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、従来の投与経路のいずれかで投与することができる。化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、経口、皮下又は静脈内、動脈内、筋内、腹腔内、眼内、経鼓膜（ｔｒａｎｓｔｙｍｐａｎｉｃ）及び鼻腔内投与を含む非経口で、さらに髄腔内及び注入技術により投与される。化合物のインプラントも有用である。
【０２７８】
液状形態は、侵襲性投与、例えば注射のため、又は外用もしくは局所投与のために製造される。用語注射は、皮下、経皮、静脈内、筋内、髄腔内、眼内、経鼓膜及び他の親（ｐａｒｅｎｔａｌ）投与経路を含む。液状組成物としては、有機共溶媒を含む水性液剤及び有機共溶媒を含まない水性液剤、水性又は油性の懸濁剤、食用油、さらには同様の製薬用ビヒクルを用いた乳剤が挙げられる。特定の実施態様において、投与は、静脈内投与を含む。いくつかの実施態様において、本発明の化合物は、耳への局所投与用の点耳剤として製剤化される。いくつかの実施態様において、本発明の化合物は、眼の表面への局所投与用の点眼剤として製剤化される。本発明の化合物の投与に関するさらなる情報は、Ｔｏｌｅｎｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．、Ｒｅｔｉｎａ  ２００４．２４：１３２−１３８；及びＲｅｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｖｉｓｉｏｎ、２００３．９：２１０−２１６に見いだされ得る。
【０２７９】
さらに、特定の実施態様において、本発明の新規な処置における使用のための組成物は、例えば鼻腔内投与のための、エアゾール剤として形成される。特定の実施態様において、本発明の新規な処置における使用のための組成物は、例えば鼻腔内滴注用の点鼻剤として形成される。
【０２８０】
本発明の治療用組成物は、好ましくは、これらの組成物／化合物を含有するエアゾール剤の吸入により、又は上記組成物の鼻腔内若しくは気管内滴注により、肺に投与される。医薬組成物の肺送達に関するさらなる情報については、Ｗｅｉｓｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １９９９．１０：２２８７−２２９３；Ｄｅｎｓｍｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  １９９９．１：１８０−１８８；Ｇａｕｔａｍ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２００１．３：５５１−５５６；及びＳｈａｈｉｗａｌａ  ＆  Ｍｉｓｒａ、ＡＡＰＳ  ＰｈａｒｍＳｃｉＴｅｃｈ  ２００４．２４；６（３）：Ｅ４８２−６を参照のこと。さらに、ｓｉＲＮＡの呼吸器用製剤は、米国特許出願公開第２００４／００６３６５４号に記載される。ｓｉＲＮＡの呼吸器用製剤は、米国特許出願公開第２００４／００６３６５４号に記載される。
【０２８１】
特定の実施態様において、経口組成物（例えば、錠剤、懸濁剤、液剤）は、口腔粘膜炎の処置のためのうがい薬に適した経口組成物のように、口腔への局所送達に有効であり得る。
【０２８２】
特定の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、腎障害、例えば急性腎不全（ＡＲＦ）、臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）の処置のための腎臓への送達ための静脈内投与用に製剤化される。腎近位尿細管における標的細胞への本発明のｓｉＲＮＡ化合物の送達は、ＡＲＦ及びＤＧＦの処置において特に有効であることに注意する。理論に拘束されないが、このことは、通常、ｓｉＲＮＡ分子が腎近位尿細管の細胞を経由して身体から排出されるという事実に起因するかもしれない。従って、裸のｓｉＲＮＡ分子は、ＡＲＦ及びＤＧＦにおける治療のために標的化された細胞に集中する。
【０２８３】
脳への化合物の送達は、とりわけ、神経外科的インプラント、血液脳関門破壊（ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ）、脂質媒介輸送、担体媒介流入又は流出、血漿タンパク質媒介輸送、受容体媒介経細胞輸送、吸収剤媒介経細胞輸送、血液脳関門における神経ペプチド輸送、及び薬物標的化のための遺伝子改変「トロイの木馬」のような、いくつかの方法により達成される。上記の方法は、例えば「Ｂｒａｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ：ｔｈｅ  ｆｕｔｕｒｅ  ｏｆ  ｂｒａｉｎ  ｄｒｕｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」、Ｗ．Ｍ．Ｐａｒｄｒｉｄｇｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ  （２００１）に記載されるように行われる。
【０２８４】
さらに、特定の実施態様において、本発明の新規な処置における使用のための組成物は、エアゾール剤として、例えば鼻腔内投与用に形成される。
【０２８５】
ＣＮＳ疾患の処置のための鼻腔内送達は、米国特許出願公開第２００６００３９８９号及びＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００４／００２４０２号及び同第ＷＯ２００５／１０２２７５号に記載されるように、ガランタミン及び種々の塩並びにガランタミンの誘導体のような、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤を用いて達成されている。例えば点鼻剤の鼻腔内滴注による、ＣＮＳ疾患の処置のための核酸の鼻腔内送達は、例えばＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００７／１０７７８９号に記載されている。
【０２８６】
処置方法
一局面において、本発明は、ＲＴＰ８０１に関連する障害に罹患している被験体を処置する方法に関し、この方法は、被験体に治療有効量の本発明のｓｉＲＮＡを投与することを含む。好ましい実施態様において、処置される被験体は温血動物、特にヒトを含む哺乳動物である。
【０２８７】
「被験体を処置する」は、疾患に関連する症状を寛解させるため、疾患の重症度を軽くするか若しくは疾患を治癒するため、又は疾患の発症を防止するために有効な治療物質を被験体に投与することを指す。「処置」は、治療的処置及び予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）若しくは予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）な手段の両方を指し、ここで目的は障害を予防するか、障害の症状を減少させることである。処置を必要とするものには、既に疾患又は状態を経験したもの、疾患又は状態になりやすいもの、及び疾患又は状態を予防しようとするものが含まれる。本発明の化合物は、疾患又は状態の発症前、間、又は後に投与される。
【０２８８】
「治療有効用量」は、改善された生存率、より速い回復、又は症状の改善若しくは解消、及び当業者により適切な決定基準として選択されるような他の指標を含むがこれらに限定されない、被験体又はその生理系における改善を達成するために有効である、医薬化合物又は医薬組成物の量を指す。
【０２８９】
本明細書に開示され、本発明に含まれる疾患の処置方法は、さらなるＲＴＰ８０１阻害剤、以下に詳述されるような活性成分（例えばｓｉＲＮＡ）の薬理特性を改善する物質、又は本明細書で上述された疾患及び障害（例えばとりわけ黄斑変性、ＣＯＰＤ、ＡＲＦ、ＤＲ）のいずれかに罹患しているか若しくは感受性である被験体の処置において有効であることが知られているさらなる化合物と、併用して又は組み合わせて、ＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ阻害剤を投与することを含み得る。従って本発明は、別の局面において、少なくとも１つのさらなる治療活性薬剤との、本発明の治療用ｓｉＲＮＡ化合物の組み合わせを提供する。「併用して（ｉｎ  ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ）」又は「組み合わせて（ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ）」は、前に、同時に、又は後に、を意味する。従って、このような組み合わせの個々の構成要素は、同じ医薬製剤化又は別々の医薬製剤から順次又は同時のどちらで投与してもよい。典型的な組み合わせ治療に関するさらなる詳細を以下に示す。
【０２９０】
「呼吸器障害」は、とりわけ、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気腫、慢性気管支炎、喘息及び肺癌を含む全ての種類の肺障害を含むがこれらに限定されない、呼吸器系の状態、疾患又は症状を指す。気腫及び慢性気管支炎は、ＣＯＰＤの一部として又は独立して発生し得る。
【０２９１】
「微小血管障害」は、微細な毛細血管とリンパ管に影響を及ぼす任意の状態、特に血管攣縮性疾患、血管炎性疾患およびリンパ管閉塞性疾患を指す。微小血管障害の例としては、とりわけ：眼の障害、たとえば一過性黒内障（塞栓性またはＳＬＥ続発性）、抗リン脂質抗体症候群（ａｐｌａ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、Ｐｒｏｔ  ＣＳおよびＡＴＩＩＩ欠乏症、静注薬使用に起因する微小血管病変、タンパク異常血症、側頭動脈炎、前部虚血性視神経症、（原発性または自己免疫疾患に続発性の）視神経炎、緑内障、フォンヒッペル・リンダウ症候群、角膜疾患、角膜移植拒絶反応白内障（ｃｏｒｎｅａｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｃａｔａｒａｃｔｓ）、イールズ病、霜状分枝血管炎、輪状バックリング手術（ｅｎｃｉｒｃｌｉｎｇ  ｂｕｃｋｌｉｎｇ  ｏｐｅｒａｔｉｏｎ）、毛様体扁平部炎を含むブドウ膜炎、脈絡膜黒色腫、脈絡膜血管腫、視神経形成不全；網膜の状態、例えば網膜動脈閉塞、網膜静脈閉塞、未熟児網膜症、ＨＩＶ網膜症、プルチャーの網膜症、全身性血管炎および自己免疫疾患の網膜症、糖尿病性網膜症、高血圧性網膜症、放射線網膜症、網膜動脈分枝閉塞または網膜静脈分枝閉塞、特発性網膜血管炎、動脈瘤、視神経網膜炎、網膜塞栓形成、急性網膜壊死、バードショット網膜脈絡膜症（ｂｉｒｄｓｈｏｔ  ｒｅｔｉｎｏｃｈｏｒｏｉｄｏｐａｔｈｙ）、長期的網膜剥離；全身性の状態、例えば真性糖尿病、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、糖尿病関連微小血管病変（本明細書中に詳述されるような）、過粘稠度症候群、大動脈弓症候群および眼虚血症候群、頚動脈海綿静脈洞瘻、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、ＳＳ−Ａ自己抗体を伴なう細動脈炎、急性多病巣性出血性血管炎（ａｃｕｔｅ  ｍｕｌｔｉｆｏｃａｌ  ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ  ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）、感染に起因する血管炎、ベーチェット病に起因する血管炎、サルコイドーシス、凝固障害、ニューロパシー、ネフロパシー、腎臓の微小血管疾患、ならびに虚血性微小血管状態が挙げられる。
【０２９２】
微小血管障害は、血管新生的要素を含み得る。用語「血管新生障害」は、血管の形成（新生血管形成）が患者に有害である状態を指す。眼の新生血管形成の例としては：網膜疾患（糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、慢性緑内障、網膜剥離、および鎌状赤血球網膜症）；虹彩血管新生（ｒｕｂｅｏｓｉｓ  ｉｒｉｔｉｓ）；増殖性硝子体網膜症；炎症性疾患；慢性ブドウ膜炎；腫瘍（網膜芽腫、偽神経膠腫、および黒色腫）；フックス紅彩異色性虹彩毛様体炎（Ｆｕｃｈｓ'  ｈｅｔｅｒｏｃｈｒｏｍｉｃ  ｉｒｉｄｏｃｙｃｌｉｔｉｓ）；新生血管緑内障；角膜血管新生（虹彩の炎症性、移植、および発達性の形成不全）；水晶体切除術と併せた硝子体切除術後の新生血管形成、血管疾患（網膜虚血、脈絡膜血管不全、脈絡膜血栓、および頸動脈虚血）；視神経の新生血管形成；ならびに眼の穿通または挫傷性の（ｃｏｎｔｕｓｉｖｅ）眼外傷に起因する新生血管形成が挙げられる。これら全ての血管新生状態は、本発明の化合物および薬学的組成物を用いて処置され得る。
【０２９３】
「眼の疾患」は、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、滲出型および萎縮型ＡＭＤ、眼ヒストプラスマ症候群、網膜色素線条症（ａｎｇｉｏｄ  ｓｔｒｅａｋｓ）、ブルッフ膜における破裂、近視性変性、眼腫瘍、網膜変性疾患、および網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）を含むいずれかの状態を含むがこれらに限定されない眼の状態、疾患、または症候群を指す。本明細書中に開示される、本発明の方法により処置され得るいくつかの状態、例えばＤＲは、本明細書中に示される定義の下では微小血管障害および眼疾患のいずれか、またはその両方とされている。
【０２９４】
より詳細には、本発明は、成人呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；急性肺傷害（ＡＬＩ）；気腫；糖尿病性ニューロパシー、ネフロパシー及び網膜症；糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）及び他の糖尿病性状態；緑内障；加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）；骨髄移植（ＢＭＴ）網膜症；虚血性状態；眼の虚血性症候群（ＯＩＳ）；腎障害：急性腎不全（ＡＲＦ）、臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）、移植拒絶反応；聴覚障害（聴覚損失を含む）；脊髄損傷；口腔粘膜炎；ドライアイ症候群及び褥瘡；虚血性又は低酸素状態から生じる神経障害、例えば高血圧、高血圧性脳血管疾患、血栓又は塞栓の場合に起こるような−血管の狭窄又は閉塞、血管腫、血液疾患（ｂｌｏｏｄ  ｄｙｓｃｒａｓｉａｓ）、心停止又は心不全を含む心機能不全のいずれかの形態、全身性低血圧；脳卒中、てんかん、限定されないがパーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、ルー・ゲーリック病）、アルツハイマー病、ハンチントン病及び他のいずれかの疾患により誘導される認知症（例えばＨＩＶ関連認知症）を含む、神経変性障害に罹患しているか又はこれらに感受性である被験体の処置において有用な方法及び組成物を提供する。
【０２９５】
さらに、本発明は、コントロールと比較して少なくとも５０％、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を下方調節する方法を提供し、この方法は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡを１つ又はそれ以上の本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物と接触させることを含む。
【０２９６】
一実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は哺乳動物ＲＴＰ８０１遺伝子を下方調節し、それにより、この下方調節は、遺伝子機能の下方調節、ポリペプチドの下方調節及びｍＲＮＡ発現の下方調節を含む群より選択される。
【０２９７】
本発明は、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を、コントロールと比較して少なくとも４０％、好ましくは５０％、６０％又は７０％、より好ましくは７５％、８０％又は９０％阻害する方法を提供し、この方法は、ＲＴＰ８０１遺伝子のｍＲＮＡ転写物を１つ又はそれ以上の本発明のｓｉＲＮＡ化合物と接触させることを含む。
【０２９８】
一実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、ＲＴＰ８０１ポリペプチドを阻害し、それによりこの阻害は、機能の阻害（これは、例えばとりわけ酵素アッセイ又は天然の遺伝子／ポリペプチドの既知の相互作用物質を用いる結合アッセイにより試験される）、ＲＴＰ８０１タンパク質の阻害（これは、例えばとりわけ、ウエスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ又は免疫沈降法により試験される）及びＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ発現の阻害（これは、例えばとりわけ、ノーザンブロット法、定量的ＲＴ−ＰＣＲ、インサイチュハイブリダイゼーション又はマイクロアレイハイブリダイゼーションにより試験される）を含む群より選択される。
【０２９９】
一実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、ＲＴＰ８０１遺伝子又はポリペプチドを下方調節しており、それによりこの下方調節は、機能の下方調節（これは、例えばとりわけ、酵素アッセイ又は天然の遺伝子／ポリペプチドの既知の相互作用物質を用いる結合アッセイにより試験される）、タンパク質の下方調節（これは、例えばとりわけ、ウエスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ又は免疫沈降法により試験される）、及びＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ発現の下方調節（これは、例えばとりわけ、ノーザンブロット法、定量的ＲＴ−ＰＣＲ、インサイチュハイブリダイゼーション又はマイクロアレイハイブリダイゼーションにより試験される）を含む群より選択される。
【０３００】
さらなる実施態様において、本発明は、上昇したレベルの哺乳動物ＲＴＰ８０１遺伝子を伴う任意の疾患又は障害に罹患しているか又は感受性である被験体を処置する方法を提供し、この方法は、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物又は組成物を、治療有効用量で被験体に投与し、それにより被験体を処置することを含む。
【０３０１】
本発明は、哺乳動物ＲＴＰ８０１遺伝子の発現の阻害が有益である以下の疾患又は状態の処置における、哺乳動物ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を下方調節する化合物特に新規な低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡｓ）の使用、に関する：ＡＲＤＳ；ＣＯＰＤ；ＡＬＩ；気腫；糖尿病性ニューロパシー、ネフロパシー及び網膜症；ＤＭＥ及び他の糖尿病性状態；緑内障；ＡＭＤ；ＢＭＴ網膜症；脳卒中を含む虚血性状態；ＯＩＳ；神経変性障害、例えばパーキンソン病、アルツハイマー病、ＡＬＳ；腎障害：ＡＲＦ、ＤＧＦ、移植拒絶反応；聴覚障害；脊髄損傷；口腔粘膜炎；ドライアイ症候群及び褥瘡。
【０３０２】
哺乳動物ＲＴＰ８０１遺伝子又はポリペプチドを阻害する、方法、新規な化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子、及び該ｓｉＲＮＡ化合物を含む医薬組成物が、本明細書において詳細に考察され、そして上記ｓｉＲＮＡ分子及び／又は医薬組成物のいずれかは、上記の状態のいずれかに罹患しているか又は感受性である被験体の処置において有利に使用される。公知の化合物が本発明から除外されることは、明確に理解されるべきである。公知の化合物及び組成物を使用する新規な処置方法は、本発明の範囲内である。
【０３０３】
本発明の方法は、治療有効量の、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を下方調節する１つ又はそれ以上の本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を投与することを含む。
【０３０４】
「毒物への曝露」は、毒物を哺乳動物に使用可能にするか又は哺乳動物と接触させることを意味する。毒物は、神経系に対して毒性であり得る。毒物への曝露は、直接投与により、例えば食物、医薬品、若しくは治療剤（例えば  化学療法剤）の摂取若しくは投与により、偶発的な混入により、又は環境曝露、例えば、空気中若しくは水の曝露により起こり得る。
【０３０５】
他の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物及び方法は、被験体における他の疾患及び状態の発生又は重症度を処置又は予防するために有用である。これらの疾患及び状態としては、限定されないが、脳卒中及び脳卒中様の状況（例えば脳、腎臓、心臓の不全）、神経細胞死、再潅流を伴うか伴わない脳損傷、慢性変性疾患、例えば神経変性疾患（ハンチントン病を含む）、多発性硬化症、球脊髄性萎縮症（ｓｐｉｎｏｂｕｌｂａｒ  ａｔｒｏｐｈｙ）、プリオン病、及び外傷性脳損傷（ＴＢＩ）に起因するアポトーシスが挙げられる。さらなる実施態様において、本発明の化合物及び方法は、神経保護、及び又は脳保護を提供することに関する。
【０３０６】
本発明はまた、医薬組成物を製造する方法を提供し、この方法は：
１つ又はそれ以上の本発明の二本鎖の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を供給すること；及び
該化合物を薬学的に許容しうる担体と混合すること、
を含む。
【０３０７】
好ましい実施態様において、医薬組成物の製造において使用されるｓｉＲＮＡ化合物は、薬学的に有効な用量で担体と混合される。特定の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、ステロイド、又は脂質、又は別の適切な分子、例えばコレステロールに結合される。
【０３０８】
組み合わせ治療
本明細書に開示される疾患を処置する方法は、本発明の新規な化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を、さらなるＲＴＰ８０１阻害剤、化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物の薬理特性を改善する物質、又は本明細書で上述された疾患及び障害（微小血管障害、眼の疾患及び状態（例えば黄斑変性）、難聴（聴覚損失を含む）、呼吸器障害、神経変性障害、脊髄損傷、血管新生関連状態及びアポトーシス関連状態）のいずれかに罹患しているか感受性である被験体の処置において有効であることが公知であるさらなる化合物と、併用して又は組み合わせて投与することを含む。
【０３０９】
従って本発明は、別の局面において本発明の治療用ｓｉＲＮＡ化合物と少なくとも１つのさらなる治療活性薬剤との組み合わせを含む医薬組成物を提供する。「と併用して」又は「と組み合わせて」は、前に、同時に、又は後にを意味する。従って、このような組み合わせの個々の構成要素は、同じか又は別々の医薬製剤から、順次又は同時のいずれかで投与される。
【０３１０】
微小血管障害、眼の疾患及び状態（例えば黄斑変性）、難聴（聴覚損失を含む）、呼吸器障害、神経変性障害（例えば脊髄損傷）、血管新生関連状態及びアポトーシス関連状態を処置するための公知の処置を、新規な化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物及び本明細書に記載される療法と併用して含む組み合わせ治療は、本発明の一部であるとみなされる。
【０３１１】
従って、本発明の別の局面において、ＲＴＰ８０１活性の阻害が有益である状態の処置において、さらなる薬学的に有効な化合物が、本発明の医薬組成物と併用して投与される。さらに、本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、上記の状態を処置するための第二の治療活性化合物との補助的療法としての使用のための医薬品の製造において使用される。本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物と組み合わせた使用のための公知の第二の治療剤の適切な用量は、当業者により容易に理解される。
【０３１２】
いくつかの実施態様において、上で言及された組み合わせは、単一の医薬製剤の形態での使用について示される。
【０３１３】
本発明の薬学的に活性なｓｉＲＮＡ化合物のいずれか１つを含む医薬組成物の投与は、当業者により決定されるように、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内又は脳内を含む多くの公知の投与経路のいずれかにより行われる。特殊化された製剤を使用して、経口で、又は吸入により、又は鼻腔内滴注により組成物を投与することが可能である。
【０３１４】
「と併用して」は、さらなる薬学的に有効な化合物を、本発明の医薬組成物の投与の前に、本発明の医薬組成物の投与と同時に、又は本発明の医薬組成物の投与の後に投与することを意味する。従って、上で言及されるこのような組み合わせの個々の構成要素を、同じか又は別々の医薬製剤から、順次又は同時のいずれかで投与することができる。本発明のｓｉＲＮＡ化合物の場合のように、第二の治療剤は、任意の適切な経路、例えば経口、頬腔、吸入、舌下、直腸、膣、経尿道、鼻腔、局所、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ）（すなわち経皮吸収（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ））、又は非経口（静脈内、筋内、皮下、及び冠内）投与により、投与することができる。
【０３１５】
いくつかの実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物及び第二の治療剤は、同じ経路により、単一の組成物か２つ又はそれ以上の異なる医薬組成物としてのいずれかで提供されて、投与される。しかし、他の実施態様において、本発明の新規なｓｉＲＮＡ化合物及び第二の治療剤どちらについても異なる投与経路が可能である。当業者は、単独でも組み合わせのどちらでも、各治療剤についての投与の最良の形態を認識する。
【０３１６】
種々の実施態様において、本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、医薬組成物中の主な活性成分である。
【０３１７】
別の局面において、本発明は、２つ又はそれ以上のｓｉＲＮＡ分子を含む、本明細書において記述される疾患及び状態のいずれかの処置のための、医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様において、２つ若しくはそれ以上のｓｉＲＮＡ分子又はそれら分子を含む製剤は、等しい活性又はそうでなければ有益な活性を生じる量で医薬組成物において混合される。特定の実施態様において、２つ又はそれ以上のｓｉＲＮＡ分子は、共有結合若しくは非共有結合で結合されているか、又は２〜１００、好ましくは２〜５０若しくは２〜３０個のヌクレオチドの長さの範囲の核酸リンカーにより一緒に結合されている。一実施態様において、２つ又はそれ以上のｓｉＲＮＡ分子は、ＲＴＰ８０１に対してｍＲＮＡを標的とする。いくつかの実施態様において、２つ又はそれ以上のｓｉＲＮＡ化合物のうち少なくとも１つがＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡを標的とする。いくつかの実施態様において、少なくとも１つのｓｉＲＮＡ化合物は、表Ａ〜Ｉのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。いくつかの実施態様において、ｓｉＲＮＡセンスオリゴヌクレオチド及びアンチセンスオリゴヌクレオチドは、表Ａ〜Ｉのいずれか１つにおいて示され、配列番号３〜３６２４で示される、センスオリゴヌクレオチド及び対応するアンチセンスオリゴヌクレオチドより選択される。
【０３１８】
いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、１つ又はそれ以上のさらなる遺伝子を標的とする、１つ又はそれ上のさらなるｓｉＲＮＡ分子をさらに含む。いくつかの実施態様において、上記さらなる遺伝子の同時阻害は、本明細書において開示される疾患の処置に、相加的又は相乗的な効果をもたらす。
【０３１９】
本発明に従う処置レジメンは、本明細書において開示される状態の有害事象からの患者の機能的回復が改善されるように、投与様式、投与のタイミング、及び投薬量の観点で実行される。
【０３２０】
処置しようとする状態
微小血管障害
微小血管障害には、主として微視的な毛細血管及びリンパ管に影響を与え、従って直接的な外科的処置の範囲外である広範な状態の群が含まれる。微小血管疾患は、血管攣縮性、血管炎及びリンパ管閉塞性におおまかに分類することができる。さらに、公知の血管状態の多くは、それらに対する微小血管性の要素を有する。
【０３２１】
血管攣縮性疾患
血管攣縮性疾患は、比較的一般的な状態の一群であり、未知の理由から、末梢血管収縮反射が高感受性である。これにより、不適切な血管収縮及び組織虚血が、組織損失の時点まで生じる。血管攣縮性の症状は、通常は温度又は振動機械の使用に関連するが、他の状態に続発し得る。
【０３２２】
血管炎性疾患
血管炎性疾患は、微小循環における原発性の炎症性プロセスを含む疾患である。血管炎は、通常、自己免疫障害又は結合組織障害の構成要素であり、一般的には外科的処置に適していないが、症状が重症である場合には、免疫抑制的な処置を必要とする。
【０３２３】
リンパ管閉塞性疾患
下肢又は上肢の慢性的な膨張（リンパ浮腫）は、末梢リンパ管閉塞の結果である。これは比較的稀な状態であり、多数の原因があり、遺伝性のことも後天性のこともある。処置の柱は正確に適合する圧縮帯及び間欠的圧迫装置の使用である。
【０３２４】
糖尿病に関連する微小血管病理
糖尿病は、失明の主な原因であり、切断及び不能症の一番の原因であり、そして最も頻繁に発生する慢性の小児期の疾患のうちの１つである。糖尿病はまた、米国において末期腎疾患の主な原因であり、他の腎疾患と比較して３１％の罹患率である。糖尿病はまた、腎臓移植に関して最も頻繁な徴候であり、全移植の２２％を占める。
【０３２５】
一般に、糖尿病性合併症は、微小血管疾患又は大血管疾患におおまかに分類することができる。微小血管合併症には、ニューロパシー（神経障害）、ネフロパシー（腎臓疾患）及び視覚障害（例えば、網膜症、緑内障、白内障及び角膜疾患）が含まれる。網膜、糸球体、及び神経脈管において、同様の病態生理学的特徴が糖尿病特異的微小血管疾患を特徴付ける。
（さらなる情報については、Ｌａｒｓｅｎ：Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１０ｔｈ  ｅｄ．、２００３  Ｅｌｓｅｖｉｅｒを参照のこと）。
【０３２６】
ニューロパシー
ニューロパシーは、全ての末梢神経：痛覚線維、運動ニューロン、自律神経に影響を及ぼし、従って必然的に、全ての器官および系に影響を及ぼし得る。影響を受ける器官系および一部器官に基づいていくつかの異なる症候群が存在するが、これらは決して限定的というわけではない。患者は、感覚運動性と自律神経性のニューロパシー、または他のあらゆる組み合わせを有し得る。ニューロパシーの、代謝性の原因の理解が進歩しているにもかかわらず、これらの病理学的プロセスを妨げることを目的とする処置は、副作用および効能不足により限界がある。従って、処置は対症療法的であり、根本的な問題に取り組むものではない。感覚運動性ニューロパシーにより引き起こされる疼痛に対する薬剤には、三環系抗うつ  薬（ＴＣＡ）、セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）、および抗てんかん薬（ＡＥＤ）が含まれる。これらの薬剤の中に、糖尿病性ニューロパシーを引き起こす病理学的プロセスを逆転させるものや、この病気の過酷な過程を変更させるものはない。
【０３２７】
糖尿病性ニューロパシー
糖尿病性ニューロパシーは、真性糖尿病に関連するニューロパシー性障害（末梢神経損傷）である。これらの状態は、通常、神経に供給する微小血管（神経脈管）を含む糖尿病性微小血管損傷に起因する。糖尿病性ニューロパシーに関連し得る比較的一般的な状態には、第三脳神経麻痺；単ニューロパシー；多発性単ニューロパシー；糖尿病性筋萎縮症；有痛性多発ニューロパシー；自律神経ニューロパシー；及び胸腹部ニューロパシー並びに最も一般的な形態である、末梢性ニューロパシー（これは主に、足及び下肢に影響を及ぼす）が含まれる。糖尿病性ニューロパシーの発生に関与する４つの因子がある：微小血管疾患、終末糖化産物（ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｅｄ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、タンパク質キナーゼＣ、及びポリオール経路。
【０３２８】
糖尿病性虚血肢及び糖尿病性足部潰瘍
糖尿病及び圧力は、微小血管循環を損なって下肢の皮膚に変化を生じ得、これが今度は潰瘍の形成及びその後の感染をもたらし得る。微小血管の変化は四肢の筋肉の微小血管障害をもたらし、さらには末梢性虚血を発生する素因及び虚血性事象に対する減少した血管新生代償性応答をもたらす。微小血管病理は、末梢血管疾患（ＰＶＤ）（又は末梢動脈疾患（ＰＡＤ）又は下肢動脈疾患（ＬＥＡＤ）−大血管合併症−アテローム性動脈硬化症に起因する脚部における動脈の狭小化を悪化させる。ＰＶＤは糖尿病の初期に発生し、より重症で広汎性であり、そしてしばしば脚、眼、及び腎臓に影響を及ぼす介入性の微小循環の問題を含む。
【０３２９】
足潰瘍および壊疽は、頻発するＰＡＤの合併性状態である。感覚損傷を伴う同時発症性の末梢ニューロパシーは、外傷、潰瘍化、および感染に対する足の感受性を高める。糖尿病におけるＰＡＤの進行は、末梢ニューロパシーおよび疼痛および外傷に対する足および下肢の無感覚のような併存疾患により悪化する。循環が損なわれ感覚が損なわれることによって、潰瘍形成および感染が起こる。骨髄炎および壊疽まで進行すれば、切断術が必要となるかもしれない。糖尿病を有する人々は、非糖尿病の人々の最大２５倍、下肢切断術を受ける可能性が高く、足潰瘍およびその後の肢喪失を防止する必要性を強調するものである（さらなる情報については、Ａｍ．Ｊ．Ｓｕｒｇｅｒｙ、１８７；５  Ｓｕｐｐｌ  １、Ｍａｙ  １、２００４を参照のこと）。
【０３３０】
糖尿病における冠微小血管の機能障害
糖尿病における組織病理学と微小循環機能障害の間の相関は、古い実験的研究および剖検から周知であり、基底膜の肥厚化、血管周囲の線維症、血管の疎化（ｒａｒｅｆｉｃａｔｉｏｎ）、および毛細血管からの出血がしばしば認められる。最近の論文は病理と眼の微小血管機能障害の間の相関を実証している（Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２００３；２８５）が、これらのデータをインビボで確認するのは依然として困難である。しかし、多くの臨床研究は、顕性の糖尿病だけでなく代謝制御障害もまた、冠微小循環に影響し得ることを示している（Ｈｙｐｅｒｔ  Ｒｅｓ  ２００２；２５：８９３）。Ｓａｍｂｕｃｅｔｉら（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００１；１０４：１１２９）は、梗塞に関係する動脈の再開口が成功した後の患者における微小血管の機能障害の持続について示しており、そしてこれは、これらの患者における心血管の有病率および死亡率の増加を説明し得る。有病率および死亡率は梗塞に関係する動脈の再開口それ自体には関連しないが、ＴＩＭＩフロー＋／−心筋内微細血管濃染（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｂｌｕｓｈ）に大いに依存するという証拠が、大規模な短期の再灌流研究から蓄積されている（Ｓｔｏｎｅ  ２００２；Ｆｅｌｄｍａｎｎ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００３）。Ｈｅｒｒｍａｎｎは、とりわけ、冠微小循環の完全性がこの状況で最も重要な臨床的かつ予後的因子であろうということを示した（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００１）。防護デバイス（ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｄｅｖｉｃｅｓ）の中立的な効果（ＴＩＭＩフロー、ＳＴ解像度、またはＭＡＣＥに関連する変化がない）は、微小循環の機能不全が重要な予後決定因子であることを示し得る。冠微小血管の機能障害は非閉塞性の冠動脈疾患（ＣＡＤ）においても重要な役割を果たすという証拠が蓄積されつつある。冠内皮の機能障害は、依然としてこれらの患者における強力な予後の予測因子である。
【０３３１】
糖尿病性ネフロパシー（糖尿病を有する患者における腎機能障害）
糖尿病性ネフロパシーは、ミクロアルブミン尿（微小血管疾患の影響）、蛋白尿、および末期腎疾患（ＥＳＲＤ）を含む。糖尿病は、腎不全の最も一般的な原因であり、新たな症例の４０パーセントより多くを占める。薬物および食事で糖尿病を管理できる場合でさえも、この疾患はネフロパシーおよび腎不全を引き起こし得る。大部分の糖尿病患者は、腎不全を引き起こすほど重度のネフロパシーを発症しない。米国においては約１，６００万人が糖尿病を有し、約１００，０００人が糖尿病の結果としての腎不全を有する。
【０３３２】
糖尿病性網膜症
世界保健機関によれば、糖尿病性網膜症は、労働年齢の成人における失明の最大の原因であり、糖尿病患者における失明の最大の原因である。米国糖尿病協会  （Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）は、米国におよそ１８００万人の糖尿病患者がおり、米国において毎年およそ１３０万例が新たに糖尿病と診断されていることを報告している。米国失明防止協会（Ｐｒｅｖｅｎｔ  Ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ  Ａｍｅｒｉｃａ）および国立眼病研究所（ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｙｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）は、米国において、５３０万を超える１８歳以上の人々が糖尿病性網膜症を有していると見積もっている。
【０３３３】
糖尿病性網膜症は、慢性的な高血糖により引き起こされる網膜血管系の進行性の機能障害と定義される。糖尿病性網膜症の鍵となる特徴には、微細動脈瘤、網膜出血、網膜の脂質滲出物、綿状白斑、毛細血管不灌流（ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ｎｏｎｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）、黄斑浮腫、および新生血管形成が含まれる。関連する特徴には、硝子体出血、網膜剥離、血管新生緑内障、早期白内障、および脳神経麻痺が含まれる。
【０３３４】
特に、アポトーシスが、グリア細胞、例えばミュラー細胞および星状細胞に局在し、ＳＴＺ誘導糖尿病ラットモデルにおいては１ヶ月間の糖尿病の間に起きることが示されている。これらの事象の原因は、ジアシルグリセロール／ＰＫＣ経路の活性化、酸化ストレス、および非酵素的グリコシル化を含む多因子性である。これらの事象の組み合わせは網膜を低酸素状態にし、最終的には糖尿病性網膜症を発症させる。網膜虚血と糖尿病性網膜における初期の変化の間の一つの考えられる関係は、ＶＥＧＦ等の成長因子の低酸素誘導性の産生である。この低酸素反応の主調節因子（ｍａｓｔｅｒ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）は、低酸素誘導因子−１（ＨＩＦ−１）と同定されており、これは細胞の増殖および血管新生を調節する遺伝子を制御する。ＲＴＰ８０１は、低酸素反応性転写因子  低酸素誘導因子１（ＨＩＦ−１）に反応性であり、典型的には低酸素の間にインビトロ及びインビボの両方で虚血発作の動物モデルにおいて上方調節される。
【０３３５】
糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）
米国失明防止協会（Ｐｒｅｖｅｎｔ  Ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ  Ａｍｅｒｉｃａ）及び国立眼病研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｙｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）は、米国において、５３０万を超える１８歳以上の人々が糖尿病性網膜症を有し、ＤＭＥを有する約５００，０００人が含まれると見積もっている。ＣＤＣは、米国において毎年およそ７５，０００例の新規ＤＭＥ症例が出ていると見積もっている。
【０３３６】
ＤＭＥは、網膜の血管に影響を及ぼす疾患である、糖尿病性網膜症の合併症である。糖尿病性網膜症は、網膜において、網膜の肥厚化および浮腫、出血、血流の妨げ、血管からの流体の過剰な漏出、ならびに最終段階では異常な血管の増殖を含む多数の異常を引き起こす。この血管の増殖は、大規模な出血および重度の網膜損傷を引き起こし得る。糖尿病性網膜症の血管漏出により黄斑の膨脹が起きる場合は、ＤＭＥと称される。ＤＭＥの主要な症状は中心視の喪失である。ＤＭＥに関連する危険因子には、十分に制御されない血中グルコースレベル、高血圧、体液貯留を引き起こす異常な腎機能、高いコレステロールレベル、およびその他の一般的な全身的因子が含まれる。
【０３３７】
腎臓の微小血管疾患
腎臓は、全身および腎臓の微小血管系に影響を及ぼす多くの目立たない臨床病理状態に関与する。これらの状態の一部は、内皮細胞に対する原発性の傷害により特徴付けられる、例えば：溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）および血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）。ＨＵＳおよびＴＴＰは、密接に関連する疾患であり、細血管異常性溶血性貧血および様々な器官機能障害によって特徴付けられる。伝統的に、ＨＵＳの診断は、腎不全がその症候群の優勢な特徴である場合になされ、これは子供に多い。成人においては、神経学的機能障害が支配的な場合が多く、その場合その症候群はＴＴＰと称される。血栓性微小血管症は、両方の症候群の根底にある病理学的病変であり、ＨＵＳまたはＴＴＰのいずれかを有する患者における臨床的および研究的所見はかなりの程度まで重複する。このため、一部の研究者は、この二つの症候群を、単一の疾患実体の連続体（ｃｏｎｔｉｎｕｕｍ）と考えている。
【０３３８】
病因論：実験データは、内皮細胞の損傷がＨＵＳ／ＴＴＰの病因における中心的事象であることを強く示唆している。内皮の損傷は、局所的な血管内凝固、フィブリン沈着、ならびに血小板の活性化および凝集を含む事象のカスケードを開始させる。その最終的な結果は、様々な形態のＨＵＳ／ＴＴＰ症候群に共通の血栓性微小血管症の病理組織学的所見である。ＨＵＳ／ＴＴＰを未処置のまま放置すると、死亡率は９０％に達する。支持療法−透析、降圧薬投薬、輸血、および神経学的合併症の管理を含む−は、ＨＵＳ／ＴＴＰ患者の生存率の向上に寄与する。下痢を伴う典型的なＨＵＳの処置において、十分な体液平衡および腸管安静が重要である。
【０３３９】
放射線腎炎
２５００ｒａｄを超える腎照射の長期的な結果は、５つの臨床上の症候群に分けることができる：
（ｉ）患者のおよそ４０％において、６〜１３ヶ月の潜伏期間の後に急性放射線腎炎が発症する。これは、臨床的には、高血圧、蛋白尿、浮腫、および進行性腎不全の突然の発症により特徴付けられ、ほどんどの症例において末期腎をもたらす。
（ｉｉ）慢性放射線腎炎は、逆に、最初の傷害の後、１８ヶ月から１４年の間で変動する潜伏期間を有する。この疾患は発現の面で潜伏性であり、高血圧、蛋白尿、および腎機能の漸進的喪失により特徴付けられる。
（ｉｉｉ）第三の症候群は、放射線被爆から５〜１９年後に正常な腎機能での良性蛋白尿として発現する。
（ｉｖ）第四の患者グループは、２〜５年後に良性の高血圧のみを示し、変りやすい蛋白尿を有し得る。後期の悪性高血圧は、慢性放射線腎炎または良性高血圧のいずれかを有する患者において、照射から１８ヶ月〜１１年後に発症する。罹患した腎臓の除去により高血圧は逆転する。その後の腎血管性高血圧を伴なう、腎動脈に対する放射線誘導損傷が報告されている。
（ｖ）急性放射線腎炎に類似する腎機能不全の症候群は、全身照射法（ＴＢＩ）による処置を受けた骨髄移植（ＢＭＴ）患者において観察されている。
【０３４０】
放射線照射は、照射後初期の段階で内皮の機能障害を引き起こすが血管平滑筋細胞は傷つけない。放射線照射はＤＮＡを直接的に損傷し、糸球体毛細血管および細管においてこれらの細胞の再生を減少させ基底膜を露出（ｄｅｎｕｄｅｍｅｎｔ）させる。他の腎疾患において、腎臓の微小血管系は、自己免疫障害、例えば全身性硬化症（強皮症）に関与する。全身性硬化症における腎臓の関与は、穏やかに進行する慢性腎疾患としてまたは強皮症腎クリーゼ（ＳＲＣ）として顕われ、悪性高血圧および急性高窒素血症により特徴付けられる。ＳＲＣは、腎臓におけるレイノー様現象により引き起こされると仮定されている。重度の血管痙攣は、皮質虚血ならびにレニンおよびアンギオテンシンＩＩの高産生を引き起こし、これはさらに  腎血管収縮を永続させる。ホルモンの変化（妊娠）、肉体的および情動的なストレス、または低温は、レイノー様動脈血管痙攣を誘発し得る。
【０３４１】
腎臓の微小循環はまた鎌状赤血球症において影響を受け、これに対して腎臓は、直細血管における酸素の逆流移動の結果として腎髄質の深血管において生じた低酸素圧が原因で特に影響を受け易い。より小さな腎動脈および小動脈もまた、大血管壁から遊離したコレステロール含有物による血栓塞栓性傷害の部位であり得る。
【０３４２】
網膜微小血管症（ＡＩＤＳ網膜症）
網膜微小血管症（Ｒｅｔｉｎａｌ  ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌｏｐａｔｈｙ）は、ＡＩＤＳ患者の１００％で見られ、網膜内出血、微細動脈瘤、ロート斑、綿状白斑（神経線維層の微小梗塞）、および血管周囲鞘形成（ｐｅｒｉｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｈｅａｔｈｉｎｇ）により特徴付けられる。この網膜症の病因は不明であるが、循環中の免疫複合体、細胞傷害性物質の局所的放出、異常な血液レオロジー、および内皮細胞のＨＩＶ感染に起因すると考えられている。ＡＩＤＳ網膜症は、現在多く見られるので、糖尿病も高血圧も有さないがＨＩＶの危険性を有する患者に綿状白斑があれば、医師はウイルス試験を考慮しようとするはずである。ＡＩＤＳ網膜症に対する特別な処置は存在しないが、それが継続的に存在すれば、医師はＨＩＶ治療の有効性および患者のコンプライアンスを見直そうとするかもしれない。
【０３４３】
骨髄移植（ＢＭＴ）網膜症
骨髄移植網膜症は１９８３年に最初に報告された。この疾患は、典型的にはＢＭＴ後６ヶ月以内に起こるが、最も遅くて６２ヶ月後に起こり得る。糖尿病および高血圧のような危険因子は、虚血性微小血管症を増悪することによってＢＭＴ網膜症の発症を促進させ得る。ＢＭＴ網膜症の発症の、年齢、性別、または人種についての傾向は知られていない。患者は視力低下および／または視野欠損を示す。後区（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｓｅｇｍｅｎｔ）の所見は典型的には両側性・対称性のものである。臨床症状発現には、複数の綿状白斑、毛細血管拡張、微細動脈瘤、黄斑浮腫、硬性白斑、および網膜出血が含まれる。フルオレセイン血管造影法は、毛細血管不灌流および脱落、網膜内微小血管異常、微細動脈瘤、および黄斑浮腫を示す。ＢＭＴ網膜症の正確な病因は解明されていないが、いくつかの要因：シクロスポリン毒性、全身照射（ＴＢＩ）、および化学療法剤による影響を受けるようである。シクロスポリンは、移植片対宿性免疫反応を抑制する強力な免疫調節剤である。これは内皮細胞の傷害および神経学的な副作用を引き起す可能性があり、結果として、ＢＭＴ網膜症の原因であると示唆されている。しかしＢＭＴ網膜症は、シクロスポリン非使用下でも発症し得、シクロスポリンが自己または同系骨髄レシピエントにおいてＢＭＴ網膜症を引き起こすことは示されていない。従って、シクロスポリンだけが、ＢＭＴ網膜症の原因ではないようである。全身照射（ＴＢＩ）もまた、ＢＭＴ網膜症の原因であると指摘されている。放射線は網膜微小血管系を傷つけ、虚血性血管症を引き起こす。
【０３４４】
他の眼障害
緑内障
緑内障は世界中で失明の主な原因である。世界中で約６６８０万人の人々がこれに冒されている。毎年少なくとも１２，０００人の米国人がこの疾患により失明している（Ｋａｈｎ  ａｎｄ  Ｍｉｌｔｏｎ、Ａｍ  Ｊ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１９８０、１１１（６）：７６９−７６）。緑内障は、主として眼内圧（ＩＯＰ）亢進に起因する視神経乳頭における軸索の変性を特徴とする。原発性開放隅角緑内障（ＰＯＡＧ）として知られる、緑内障の最も一般的な形態の一つは、線維柱帯網（ＴＭ）における房水流出の抵抗増加が、ＩＯＰ上昇、そして最終的に視神経損傷を引き起こすことに起因する。緑内障の他の主要な型は閉塞隅角緑内障、正常眼圧緑内障及び小児緑内障である。これらもまた、眼内圧（ＩＯＰ）（すなわち眼の内側の圧力）の増加で特徴づけられる。正常ＩＯＰにもかかわらず視神経損傷が発生した場合、これは正常眼圧緑内障と呼ばれる。続発緑内障は、別の疾患が眼圧増加を引き起こすか眼圧増加に寄与して視神経損傷及び視力喪失をもたらしている場合を指す。  Ｍｕｃｋｅ（ＩＤｒｕｇｓ  ２００７、１０（１）：３７−４１）は、眼疾患、例えば加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）及び緑内障の処置のための種々の標的に対するｓｉＲＮＡを含む、現在の治療法を概説している。
【０３４５】
黄斑変性
米国における６５歳以上の個体における最高矯正視力の低下の最も多い原因は、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）として知られている網膜障害である。ＡＭＤが進行するにつれて、この疾患は鮮明な中心視の喪失により特徴付けられる。ＡＭＤによる影響を受ける眼の領域は、黄斑（主として光受容細胞で構成される網膜の中心の小さな領域）である。ＡＭＤ患者の約８５％〜９０％を占める、いわゆる「萎縮型」ＡＭＤは、眼の色素の分布の変化、光受容器の喪失、および全体的な細胞の萎縮による網膜機能の減弱化を伴う。いわゆる「滲出型」ＡＭＤは、網膜下領域における血塊又は瘢痕をもたらす異常な脈絡膜血管の増殖を伴う。従って、滲出型ＡＭＤの発症は、神経網膜下での異常な脈絡膜血管新生網の形成（脈絡膜新生血管形成、ＣＮＶ）が原因で起こる。新しく形成された血管は非常に漏出を起こし易い。このため網膜下液および血液が蓄積され、視界の明瞭さが失われる。最終的に、脈絡膜および網膜を含む大円板状の瘢痕が形成されるので、関係する領域において機能的な網膜が完全に失われる。萎縮型ＡMＤ患者は、悪化するものの視力を維持する場合があるが、滲出型ＡＭＤはしばしば失明という結果となる（Ｈａｍｄｉ  ＆  Ｋｅｎｎｅｙ、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ｅ３０５−３１４、Ｍａｙ  ２００３）。ＣＮＶは滲出型ＡＭＤにおいてだけでなく、他の眼の病変、例えば眼ヒストプラスマ症候群、網膜色素線条症（ａｎｇｉｏｄ  ｓｔｒｅａｋｓ）、ブルッフ膜における断裂、近視性変性、眼の腫瘍、および一部の網膜変性疾患においても発生する。
【０３４６】
眼虚血性症候群
眼虚血性症候群（ＯＩＳ）に罹患している患者は、一般的に、５０代〜８０代の範囲の高齢者である。男性は女性の二倍の頻度で罹患する。ごくわずかな患者のみが無症候性である。症例の９０％において診察時に視力低下が生じており、患者の４０％は眼の痛みを伴う。一過性の虚血性発作または一過性黒内障の付随または前駆病歴（ａｎｔｅｃｅｄｅｎｔ  ｈｉｓｔｏｒｙ）も存在し得る。患者はまた、診察時に深刻な既知または未知の全身性疾患を有する。最も一般的に見られる全身性疾患は高血圧、糖尿病、虚血性心疾患、脳卒中、および末梢血管疾患である。多くはないが、患者は、巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ）の結果としてＯＩＳを発現する。
【０３４７】
症例の８０％で片側性の所見が見られる。一般的な所見には、進行した片側白内障（ａｄｖａｎｃｅｄ  ｕｎｉｌａｔｅｒａｌ  ｃａｔａｒａｃｔ）、前区炎症（ａｎｔｅｒｉｏｒ  ｓｅｇｍｅｎｔ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）、無症候性前房反応、黄斑浮腫、拡張しているが蛇行していない網膜静脈、中間周辺部（ｍｉｄ−ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ）の点状出血および斑状出欠、綿状白斑、滲出物、ならびに円板および網膜の新生血管形成が含まれ得る。自然発生的な動脈の拍動、眼内圧亢進、ならびに血管新生緑内障（ＮＶＧ）を伴う虹彩および隅角（ａｎｇｌｅ）の新生血管形成も存在し得る。患者は前眼部の新生血管形成を示し得るが、毛様体への動脈灌流の低下から低眼圧が起こり得る。時折、網膜に塞栓（ホレンホースト斑）が見られる。
【０３４８】
ドライアイ症候群
ドライアイ症候群は、通常、眼を潤す涙膜の産生の減少に起因する一般的な問題である。大部分のドライアイ患者は、不快症状を経験し、失明を経験することはないが；重症な症例では、角膜が損傷したり感染したりすることがある。湿潤点滴剤（人工涙液）が処置に使用され得るが、より重症な症例には潤滑（ｌｕｂｒｉｃａｔｉｎｇ）軟膏が役立ち得る。
【０３４９】
さらなる眼の障害
本発明の分子及び組成物により処置され得るさらなる障害としては、脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）の全ての型が挙げられ、これは滲出型ＡＭＤにおいてだけでなく、他の眼ヒストプラスマ症候群、網膜色素線条症（ａｎｇｉｏｄ  ｓｔｒｅａｋｓ）、ブルッフ膜における破裂、近視性変性、眼の腫瘍、および一部の網膜変性疾患
のような他の眼病理においても起こる。
【０３５０】
耳障害
聴覚損失
種々の実施態様において、本発明の新規な化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、聴覚損失の種々の状態に適用される。理論に拘束されないが、聴覚損失は、アポトーシス性の内有毛細胞損傷又は損失に起因し得（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２００３．１２０：１９１−２０５；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２３（（２４）：８５９６−８６０７）、この損傷又は損失は、感染、機械的損傷、大きな音（騒音）、加齢（老人性難聴）、又は化学物質誘導耳毒性により引き起こされる。
【０３５１】
本発明の文脈における「耳毒（ｏｔｏｔｏｘｉｎ）」は、その化学的作用により、聴覚に関連する神経系の音受容器（ｓｏｕｎｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ）構成要素の活性を損傷するか、障害するか、又は阻害し、次いでこれにより聴覚（及び／又は平衡）を損なう物質を意味する。本発明の文脈において、耳毒性には、内有毛細胞に対する有害な影響が含まれる。耳毒には、抗悪性腫瘍薬、サリチラート類、ループ利尿薬、キニン類、及びアミノグリコシド抗生物質を含む治療薬、食物又は医薬品中の汚染物質、並びに環境又は産業汚染物質が含まれる。典型的には、処置は、特に治療薬の投与から生じるか、治療薬の投与から生じると予測される耳毒性を予防又は低減するために行われる。好ましくは、本発明の新規な化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を含む治療上有効な組成物は、耳毒性効果を予防又は低減するために曝露の直後に与えられる。より好ましくは、処置は、予防的に提供されるか、耳毒性医薬品若しくは耳毒への曝露の前に、又は耳毒性医薬品若しくは耳毒への曝露と同時に、本発明の医薬組成物を投与することにより提供される。
【０３５２】
難聴及び平衡障害の説明及び診断に関連する、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ、１４版、（１９８２）、Ｍｅｒｃｋ  Ｓｈａｒｐ  ＆  Ｄｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｎ．Ｊ．の第１９６、１９７、１９８及び１９９章、並びに最新の１６版における対応する章（第２０７及び２１０章を含む）は、参照により本明細書に加入される。
【０３５３】
従って、一局面において、本発明は、難聴、聴覚障害又は平衡失調、好ましくは耳毒誘導聴覚状態を予防、低減又は処置するために、このような処置を必要としている哺乳動物に、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を投与することにより、哺乳動物（好ましくはヒト）を処置するための、方法、新規な化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物及び医薬組成物を提供する。本発明の一実施態様は、耳毒性が治療有効量の耳毒性医薬品の投与により生じる聴覚障害又は難聴を処置するための方法である。典型的な耳毒性薬物は、化学療法薬、例えば抗悪性腫瘍薬、及び抗生物質である。他の可能な候補には、ループ利尿薬、キニン類又はキニン様化合物、及びサリチラート又はサリチラート様化合物が含まれる。
【０３５４】
耳毒性は、抗生物質投与の用量制限副作用である。１週間より長い間１日あたり１グラムを投与された患者の４〜１５％が測定可能な聴覚損失を発症し、これはゆっくりと悪化し、そして処置が続けば完全な永久の聴覚損失になり得る。耳毒性アミノグリコシド抗生物質としては、限定されないが、ナオマイシン、パロモマイシン、リボスタマイシン、リビドマイシン、カナマイシン、アミカシン、トブラマイシン、バイオマイシン、ゲンタマイシン、シソマイシン、ネチルマイシン、ストレプトマイシン、ジベカシン、フォーチミシン、及びジヒドロストレプトマイシン、又はこれらの組み合わせが挙げられる。重大な毒性、特に耳毒性及び腎毒性を有することが知られている特定の抗生物質としては、ネオマイシンＢ、カナマイシンＡ、カナマイシンＢ、ゲンタマイシンＣ１、ゲンタマイシンＣ１ａ、及びゲンタマイシンＣ２などが挙げられ、これらはこのような抗菌剤の有用性を減少させる（Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、６ｔｈ  ｅｄ．、Ａ．Ｇｏｏｄｍａｎ  Ｇｉｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．、ｅｄｓ；Ｍａｃｍｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐｐ．１１６９−７１（１９８０）を参照のこと）。
【０３５５】
耳毒性はまた、抗がん剤に関する重大な用量制限副作用である。耳毒性新生物薬（ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ａｇｅｎｔｓ）としては、限定されないが、ビンクリスチン、ビンブラスチン、シスプラチン及びシスプラチン様化合物、並びにタキソール及びタキソール様化合物が挙げられる。シスプラチン様化合物としては、とりわけ白金ベースの化学療法薬であるカルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、テトラプラチン（ｔｅｔｒａｐｌａｔｉｎ）、オキサリプラチン、アロプラチン及びトランスプラチンが挙げられる。
【０３５６】
耳毒性副作用を有することが知られている利尿薬、特に「ループ」利尿薬としては、限定されないが、フロセミド、エタクリル酸（ｅｔｈａｃｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）、及び水銀剤が挙げられる。
【０３５７】
耳毒性キニン類としては、限定されないが、マラリアの処置において典型的に使用されるキニンの合成代用物が挙げられる。
【０３５８】
アスピリンのようなサリチラート類は、それらの抗炎症性、鎮痛性、解熱性及び抗血栓性作用のために最も一般的に使用される治療薬である。残念ながら、これらも耳毒性副作用を有する。これらはしばしば耳鳴（ｔｉｎｎｉｔｕｓ）（「耳鳴り（ｒｉｎｇｉｎｇ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅａｒｓ）」）及び一時的な聴覚損失をもたらす。さらに、薬物が長期間高用量で使用される場合、難聴が持続するようになりそして不可逆的になり得る。
【０３５９】
いくつかの実施態様において、本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、耳毒と同時投与（ｃｏ−ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ）される。例えば、改善された方法が、アミノグリコシド抗生物質の投与による哺乳動物の感染の処置のために提供され、この改善は、治療有効量の、１つ又はそれ以上の、ＲＴＰ８０１の発現を下方調節する本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を、このような処置を必要とする患者に投与して、抗生物質に関連する耳毒誘導難聴を低減するか予防することを含む。本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、好ましくは内耳内に局所投与される。
【０３６０】
本発明の方法、化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物及び医薬組成物はまた、音響性外傷又は機械的外傷、好ましくは内有毛細胞の損失をもたらす音響性外傷又は機械的外傷の処置において有効である。より重症の曝露では、損傷は隣接する支持細胞の損失からコルチ器官の完全な破壊まで進行し得る。感覚細胞の死は、進行性ウォラー変性及び一次聴神経線維の損失をもたらし得る。本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、極度に大きな音への１回の曝露により引き起こされたか、又は８５デシベルより大きな音への毎日の長期間の曝露後に引き起こされる音響外傷の処置において有用である。本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、例えば、電子装置を内耳に挿入した結果生じた機械的な内耳外傷の処置において有用である。本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、手術に伴う内有毛細胞への損傷を防止するか又は最小にする。
【０３６１】
別の型の聴覚損失は老人性難聴であり、これは、大部分の個体において加齢とともに徐々に生じる聴覚損失である。６５歳と７５歳の間の成人の約３０−３５パーセント、並びに７５歳及びそれ以上の人々の４０〜５０パーセントが聴覚損失を経験する。本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、老人性難聴に関連する内耳障害及び難聴の発生率及び／又は重症度を予防、低減又は処置する。
【０３６２】
肺（Ｌｕｎｄ）疾患及び障害
肺損傷及び呼吸器障害
種々の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、急性肺損傷、特に虚血／再潅流傷害又は酸化的ストレスに起因する状態の発生率又は重症度を処置又は予防するため、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を処置するために有用である。
【０３６３】
急性肺損傷の非限定的な例としては、コロナウイルス感染症又は内毒素に起因する急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）及び肺移植に関連する虚血再潅流傷害が挙げられる。
【０３６４】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、１６００万人を超える米国人に影響を与えており、米国内で四番目に高い死因である。喫煙が、この衰弱性疾患の最も大きな  発症原因であるが、他の環境要因も排除することはできない（Ｐｅｔｔｙ  ＴＬ．２００３．Ｃｌｉｎ．Ｃｏｒｎｅｒｓｔｏｎｅ、５−１０）。
【０３６５】
肺気腫はＣＯＰＤの主な症状発現である。終末細気管支に対して遠位にある末梢気腔の恒久的な破壊が、気腫の特徴である（Ｔｕｄｅｒ，ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、２９：８８−９７；２００３．）。気腫はまた、細気管支および肺胞構造におけるマクロファージおよび好中球のような炎症細胞の蓄積によっても特徴付けられる（Ｐｅｔｔｙ，２００３）。
【０３６６】
気腫の病因は複雑かつ多因子的である。ヒトにおいては、炎症細胞によって産生されるプロテアーゼの阻害剤、例えばアルファ１−アンチトリプシンの欠損が、プロテアーゼ／アンチプロテアーゼの不均衡に寄与し、それにより喫煙（ＣＳ）誘発型の気腫において肺胞細胞外マトリクスの破壊に有利に働くことが示されている（Ｅｒｉｋｓｓｏｎ、Ｓ．１９６４．Ａｃｔａ  Ｍｅｄ  Ｓｃａｎｄ  １７５：１９７−２０５．Ｊｏｏｓ、Ｌ．、Ｐａｒｅ、Ｐ．Ｄ．、ａｎｄ  Ｓａｎｄｆｏｒｄ、Ａ．Ｊ．２００２．Ｓｗｉｓｓ  Ｍｅｄ
Ｗｋｌｙ  １３２：２７−３７）。マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）が実験的な気腫において中心的役割を果たすことが、ＣＳの慢性的吸引によって引き起こされた気腫に対するマクロファージメタロエラスターゼノックアウトマウスの耐性によって実証されている（Ｈａｕｔａｍａｋｉ、ｅｔ  ａｌ：Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｅｌａｓｔａｓｅ  ｆｏｒ  ｃｉｇａｒｅｔｔｅ  ｓｍｏｋｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｅｍｐｈｙｓｅｍａ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７７：２００２−２００４）。さらに、トランスジェニックマウスにおけるインターロイキン−１３の肺での過剰発現は、ＭＭＰおよびカテプシン依存性の気腫を引き起こす（Ｚｈｅｎｇ、Ｔ．、ｅｔ  ａｌ  ２０００．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １０６：１０８１−１０９３）。酸化的ストレス及びアポトーシスは相互作用して、血管内皮増殖因子遮断に起因する気腫を引き起こす（Ｔｕｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、２９：８８−９７；２００３．；Ｙｏｋｏｈｏｒｉ  Ｎ、ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｓｔ．２００４  Ｆｅｂ；１２５（２）：６２６−３２．；Ａｏｓｈｉｂａ  Ｋ、ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２００３  Ｍａｙ；２８（５）：５５５−６２．）。吸入されたタバコの煙からの反応性酸素種（ＲＯＳ）と炎症細胞により内因的に形成されたものの両方が、肺内酸化体負荷の増加に寄与する。
【０３６７】
ＣＯＰＤの病因に関するさらなる病原因子は、気腫患者の肺において観察されるＶＥＧＦおよびＶＥＧＦＲＩＩの発現の減少である（Ｙａｓｕｎｏｒｉ  Ｋａｓａｈａｒａ、ｅｔ  ａｌ．  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．Ｖｏｌ  １６３．ｐｐ  ７３７−７４４、２００１）。さらに、化学的ＶＥＧＦＲ阻害剤を使用したＶＥＧＦシグナル伝達の阻害は、肺胞中隔内皮（ａｌｖｅｏｌａｒ  ｓｅｐｔａｌ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ）をもたらし、次いでおそらく肺胞内での両方の型の細胞の密接な構造的／機能的な関連の破壊に起因して、上皮細胞アポトーシスをもたらす（Ｙａｓｕｎｏｒｉ  Ｋａｓａｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０６：１３１１−１３１９  （２０００）；Ｖｏｅｌｋｅｌ  ＮＦ、Ｃｏｏｌ  ＣＤ、Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ  Ｓｕｐｐｌ．２００３．４６：２８ｓ−３２ｓ）。
【０３６８】
種々の実施態様において、呼吸器障害の処置のための医薬組成物は、以下の化合物の組み合わせからなり得る：以下の遺伝子の１つ又はそれ以上を標的とするｓｉＲＮＡ化合物と組み合わせれた本発明の化学修飾されたＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ化合物：エラスターゼ、マトリックスメタロプロテアーゼ、ホスホリパーゼ、カスパーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、及びセラミド合成酵素。
【０３６９】
急性呼吸促迫症候群
急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）は、呼吸促迫症候群（ＲＤＳ）又は成人呼吸促迫症候群（乳児呼吸促迫症候群ＩＲＤＳと対比して）としても知られており、肺への種々の形態の損傷に対する重大な反応である。これは、増加した透過性の肺水腫を生じる最も重要な障害である。
【０３７０】
ＡＲＤＳは、種々の直接的及び間接的な傷害により引き起こされる重篤な肺疾患である。これは、炎症、低酸素血を引き起こし、そして頻繁に多臓器不全を生じる炎症メディエーターの同時全身放出を伴うガス交換不全をもたらす、肺実質の炎症により特徴づけられる。この状態は生命にかかわり、そしてしばしば致死的であり、通常は人工呼吸及び集中治療室への入院を必要とする。より重症度が低い形態は  急性肺傷害（ＡＬＩ）と呼ばれる。
【０３７１】
肺癌
肺癌は、通常、肺の空気の通り道の壁の細胞において発生する。これは世界中の全ての癌のうち最も致死的であり、毎年最高で３００万人の死亡原因である。２つの主要な型は、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）及び非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。これらの型は、細胞の形態学に基づいて診断される。非小細胞肺癌において、標準的な処置の結果は、大部分の局在化した癌を除いて悪い。外科手術はこの疾患には最も治癒可能性が高い治療の選択肢であり；放射線療法は、少数の患者でのみ治癒をもたらし得、そして大部分の患者では寛解をもたらし得る。補助的化学療法は、ＮＳＣＬＣの切除とともに患者にさらなる利益をもたらし得る。進行期の疾患において、化学療法は、生存期間中央値において緩やかな改善を示すが、全体での生存は低い。化学療法は、疾患に関連する症状において短期の改善をもらした。肺における他の癌の形態は、原発癌の転位に起因する二次的な癌である。本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、肺組織における転位を含む肺癌の処置において有用である。
【０３７２】
腎臓の疾患及び障害
本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、本明細書以下に開示されるような、腎臓に影響を及ぼす種々の疾患及び障害の処置又は予防において有用である。
【０３７３】
急性腎不全（ＡＲＦ）
種々の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、腎障害、特に、手術後の患者、腎移植患者における虚血に起因する急性腎不全（ＡＲＦ）、及びシスプラチン投与のような化学療法処置に起因する急性腎不全又は敗血症関連急性腎不全を処置するために使用される。
【０３７４】
ＡＲＦは、微小血管疾患又は大血管疾患により引き起こされ得る（大腎動脈閉塞（ｍａｊｏｒ  ｒｅｎａｌ  ａｒｔｅｒｙ  ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ）又は重篤な腹大動脈疾患）。古典的な微小血管疾患は、しばしば微小血管症性溶血、及び糸球体毛細血管の血栓又は閉塞に起因して起こる急性腎不全を示し、しばしば血小板減少を伴う。これらの疾患の典型的な例としては以下が挙げられる：
ａ）  血栓性血小板減少性紫斑病−血栓性血小板減少性紫斑病における古典的な五徴（ｐｅｎｔａｄ）としては、発熱、神経学的な変化、腎不全、微小血管症性溶血性貧血及び血小板減少症が挙げられる。
ｂ）  溶血性尿毒症症候群−溶血性尿毒症症候群は、血栓性血小板減少性紫斑病と似ているが、神経学的な変化は示さない。
ｃ）  ＨＥＬＬＰ症候群（溶血、高い肝臓酵素及び低い血小板）。ＨＥＬＬＰ症候群は、トランスアミナーゼの上昇を含めて妊婦において発生する溶血性尿毒性症候群の１つの型である。
【０３７５】
急性腎不全は、あらゆる医学的状態で発生し得るが、大部分は入院中に患う。この状態は、入院患者の５パーセントで発生し、そして入院患者の約０．５パーセントは透析を必要とする。主に、罹患した患者がすでに老齢であり、さらに合併した状態を有しているという理由で、過去４０年にわたって急性腎不全についての生存率は改善していない。感染は急性腎不全患者における死亡の７５パーセントを占め、そして心臓−呼吸器合併症は、二番目によくある死因である。腎不全の重症度に依存して、死亡率は７パーセントから最高８０パーセントにまで及び得る。急性腎不全は、３つのカテゴリーに分類することができる：腎前性、内因性及び腎後性ＡＲＦ。内因性ＡＲＦは、４つのカテゴリーに細分される：尿細管疾患、糸球体疾患、血管疾患（微小血管を含む）及び間質性疾患。
【０３７６】
本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物の好ましい使用は、重大な心臓手術又は血管手術を受ける高リスク患者における急性腎不全の予防のためである。急性腎不全を発症する危険性が高い患者は、種々のスコアリング方法、例えばクリーブランドクリニックアルゴリズム又は米国の大学病院（ＵＳ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｈｏｓｐｉｔａｌｓ）により開発されたもの（ＱＭＭＩ）、及び退役軍人局病院（Ｖｅｔｅｒａｎｓ’  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）により開発されたもの（ＣＩＣＳＳ）を使用して同定することができる。
【０３７７】
別の好ましい実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、腎毒素、例えば利尿薬、β−遮断薬、血管拡張薬、ＡＣＥ阻害剤、シクロスポリン、アミノグリコシド抗生物質（例えばゲンタマイシン）、アンホテリシンＢ、シスプラチン、造影剤、免疫グロブリン、マンニトール、ＮＳＡＩＤ（例えばアスピリン、イブプロフェン、ジクロフェナク）、シクロホスファミド、メトトレキサート、アシクロビル、ポリエチレングリコール、β−ラクタム抗生物質、バンコマイシン、リファンピシン、スルホンアミド類、シプロフロキサシン、ラニチジン、シメチジン、フロセミド、チアジド類、フェニトイン、ペニシラミン、リチウム塩、フルオリド、デメクロサイクリン、ホスカルネット、アリストロキン酸により引き起こされる損傷を処置又は予防するために使用される。
【０３７８】
本発明のさらなる実施態様において、ＡＲＦの処置のための医薬組成物は、以下の治療剤の組み合わせより選択される薬剤を含む：
１）  本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ及びｐ５３  ｓｉＲＮＡ二量体；
２）  本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ及びＦａｓ  ｓｉＲＮＡ二量体；
３）  本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ及びＢａｘ  ｓｉＲＮＡ二量体；
４）  本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ及びｐ５３  ｓｉＲＮＡ及びＦａｓ  ｓｉＲＮＡ三量体；
５）  本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ及びＢａｘ  ｓｉＲＮＡ二量体；
６）  本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ及びＮｏｘａ  ｓｉＲＮＡ二量体；
７）  本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ及びＰｕｍａ  ｓｉＲＮＡ二量体；
８）  本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ（ＲＥＤＤ１）及びＲＴＰ８０１Ｌ（ＲＥＤＤ２）  ｓｉＲＮＡ二量体；並びに
９）  三量体又はポリマーを形成する（すなわち、３つのｓｉＲＮＡをコードするタンデム分子）本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ、Ｆａｓ  ｓｉＲＮＡ及びＲＴＰ８０１Ｌ  ｓｉＲＮＡ、ｐ５３  ｓｉＲＮＡ、Ｂａｘ  ｓｉＲＮＡ、Ｎｏｘａ  ｓｉＲＮＡ又はＰｕｍａ  ｓｉＲＮＡ。
【０３７９】
進行性腎疾患
進行性腎疾患は微小血管系の進行性の喪失により特徴付けられるという証拠が存在する。微小血管系の喪失は、糸球体および尿細管間質の瘢痕化の進行と直接相関する。このメカニズムは、部分的に、内皮の増殖反応の減少により媒介され、この毛細血管修復における障害は、腎臓における血管新生因子（血管内皮増殖因子）および抗血管新生因子（トロンボスポンジン１）の両方の局所的発現の変化により媒介される。血管新生増殖因子のバランスの変化は、マクロファージ関連サイトカイン（インターロイキン−１β）および血管作動性メディエーターの両方によって媒介される。最後に、血管新生および／または毛細血管修復の刺激が腎機能を安定化させ進行を遅らせ得ることならびにこの利益がＢＰまたは蛋白尿に対する効果とは独立して生じるという興味深い証拠が存在する（さらなる情報については、Ｂｒｅｎｎｅｒ  ＆  Ｒｅｃｔｏｒ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｋｉｄｎｅｙ、７ｔｈ  ｅｄ．、２００４、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ：Ｃｈ  ３３．Ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｋｉｄｎｅｙ；及びＴｉｗａｒｉ  ａｎｄ  Ｖｉｋｒａｎｔ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｄｉａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０００．５（１）：４４−５４を参照のこと）。
【０３８０】
ＣＮＳ疾患及び障害
本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、本明細書以下に開示されるように、中枢神経系（ＣＮＳ）に影響を及ぼす種々の疾患及び障害の処置又は予防において有用である。
【０３８１】
脊髄損傷
脊髄損傷又はミエロパシーは、感覚及び／又は運動性の損失を生じる脊髄の障害である。脊髄損傷の２つの最も一般的な型は、外傷及び疾患に起因するものである。外傷性損傷は、しばしば自動車事故、落下、銃撃、潜水事故などに起因する。脊髄を冒し得る疾患としては、ポリオ、二分脊椎症、腫瘍、及びフリートライヒ運動失調が挙げられる。
【０３８２】
種々の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、脊髄損傷、特に、自動車事故、落下、スポーツ損傷、産業事故、銃創により引き起こされる脊髄外傷、脊椎の弱化（例えば関節リウマチ又は骨粗しょう症により）により又は通常の加齢過程に起因して脊髄を保護している脊柱管が狭くなりすぎた場合（脊柱管狭窄）に引き起こされる脊髄外傷、脊髄が引っ張られるか、横へ押されるか、又は圧迫された場合に起きる直接的な損傷、脊髄の内側又は脊髄の外側（しかし脊柱管内ではない）での出血、流体蓄積、及び膨張の後の脊髄に対する損傷により引き起こされる損傷を処置又は予防するために使用される。本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物はまた、ポリオ又は二分脊椎症のような疾患に起因する脊髄損傷により引き起こされる損傷を処置又は予防するためにも使用される。
【０３８３】
脳卒中後認知症
脳卒中後に約２５％の人々が認知症を有し、他の多くはその後５〜１０年にわたって認知症を発症する。さらに、多くの個体が、彼らのより高次の脳機能（例えば、計画スキル及び情報処理のスピード）のわずかな障害をより多く経験し、そしてその後に認知症を発症する危険性が非常に高い。この過程における脳の深部での非常に小さい脳卒中（微小血管疾患と呼ばれる）は、脳卒中後認知症に特異的な脳萎縮の同定されるパターンに至る過程において必須であると思われる。
【０３８４】
神経変性疾患
神経変性疾患は、ＣＮＳ（脳及び／又は脊髄）の細胞が失われる状態である。ＣＮＳ細胞は、全体として容易に再生されないので、過剰な損傷は破壊的であり得る。神経変性疾患は、ニューロン又はそれらのミエリン鞘の変質に起因し、これはやがて機能障害及び能力障害をもたらす。これらはおおざっぱに表現型の影響によって２つのグループに分けられるが、これらは相互排除的ではない：動作に影響を及ぼす状態、例えば運動失調；並びに記憶に影響を及ぼし認知症に関連した状態。神経変性疾患の非限定的な例は、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、ルー・ゲーリック病としても知られる）、ハンチントン病、レビー小体型認知症及びパーキンソン病である。
【０３８５】
別の型の神経変性疾患には、ミスフォールドしたタンパク質、又はプリオンにより引き起こされる疾患が含まれる。ヒトにおけるプリオン病の非限定的な例は、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）及び異型ＣＪＤ（狂牛病）である。
【０３８６】
脳の虚血
外傷及び脳卒中のような脳損傷は、欧米諸国において死亡及び身体障害の主要な原因の一つである。
【０３８７】
外傷性脳損傷（ＴＢＩ）は、現代社会において入院及び身体障害の最も深刻な理由の一つである。臨床経験により、ＴＢＩは損傷直後に生じる一次的ダメージ、及び損傷後数日間の間に生じる二次的ダメージに分類され得るということが示された。ＴＢＩの現在の治療は外科的であるか、あるいは対処療法のいずれかである。
【０３８８】
脳血管疾患
脳血管疾患は、主に生涯のうち中年及び晩年に起きる。これらは米国で毎年約２００，０００人の死亡、さらには重大な神経障害を引き起こす。脳卒中の発生率は年齢とともに増加し、そして人口の急増している部分である多くの老人が患う。これらの疾患は、虚血−梗塞又は頭蓋内出血のいずれかを引き起こす。
【０３８９】
脳卒中
脳卒中は、中断された血液供給の結果として起こる急性神経損傷であり、脳に対する侵襲を生じる。大部分の脳血管疾患は、限局的な神経異常の突発として現れる。この侵襲は固定されたままになり得、又は好転することもあれば徐々に悪化することもあり、通常は虚血病巣の中心において非可逆的なニューロンのダメージをもたらすが、一方で周辺部における神経機能障害は処置可能かつ／又は可逆性であり得る。長期の虚血は明白な組織壊死を生じる。その後に２〜４日にわたって脳水腫が続き、進行する。梗塞の領域が大きい場合、水腫は、その付帯する結果全てを伴って腫瘤効果を生じ得る。
【０３９０】
神経保護薬が周辺部のニューロンを死滅から救うために開発されているが、今までのところ有効であると判明したものはない。
【０３９１】
神経組織に対するダメージは、重篤な能力障害及び死をもたらし得る。ダメージの程度は、主として損傷を受けた組織の位置及び程度により影響を受ける。急性の侵襲に応じて活性化された内因性カスケードは、機能的帰結において役割を果たす。ダメージを最小にし、限定しかつ／又は逆転させようとする努力は、臨床結果を軽減する高い可能性を有している。
【０３９２】
種々の実施態様において、ＭＤ、ＤＲ及び脊髄損傷の処置のための医薬組成物は、以下の化合物の組み合わせからなり得る：
１）  ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡ、ＶＥＧＦ−Ｒ１  ｓｉＲＮＡ、ＶＥＧＦ  Ｒ２  ｓｉＲＮＡ、ＰＫＣベータｓｉＲＮＡ、ＭＣＰ１  ｓｉＲＮＡ、ｅＮＯＳ  ｓｉＲＮＡ、ＫＬＦ２  ｓｉＲＮＡ、ＲＴＰ８０１Ｌ  ｓｉＲＮＡのいずれかと組み合わせた本発明の化学修飾されたＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ（物理的に混合されるかタンデム分子でのいずれか）；２）  上のリストのｓｉＲＮＡのうち２つ又はそれ以上と組み合わせた本発明の化学修飾されたＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ（物理的に混合されるか若しくは３つのｓｉＲＮＡをコードするタンデム分子で、又はそれらの組み合わせ）。
【０３９３】
臓器移植
種々の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、肺、肝臓、心臓、骨、膵臓、腸、皮膚、血管、心臓弁、骨及び腎臓の移植を含む臓器移植後の障害（再潅流障害を含む）を処置又は予防するために有用である。
【０３９４】
用語「臓器移植」は、とりわけ以下の肺、腎臓、心臓、皮膚、静脈、骨、軟骨、肝臓の移植を含む臓器のいずれか１つ又はそれ以上の移植を包含するよう意図される。異種移植は特定の状況において考慮され得るが、通常は同種移植が好ましい。  自家移植には、骨髄、皮膚、骨、軟骨及び又は血管の移植が考慮され得る。
【０３９５】
本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、潅流障害（ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｉｎｊｕｒｙ）を寛解、処置又は予防することを含む、臓器移植の有害作用を経験している被験体の処置において特に有用である。
【０３９６】
臓器移植については、ドナー若しくはレシピエントのいずれか、又は両方が本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物又は少なくとも１つの本発明のｓｉＲＮＡ化合物を含む医薬組成物で処置され得る。従って、本発明は、臓器ドナー又は臓器レシピエントを処置する方法に関し、この方法は、臓器ドナー又は臓器レシピエントに治療有効量の少なくとも１つの本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を投与する工程を含む。
【０３９７】
本発明はさらに、有効量の少なくとも１つの本発明のｓｉＲＮＡ化合物と臓器を接触させることを含む、臓器を保存するための方法に関する。手術の間及び／又は被験体から臓器を取り出した後に臓器の障害（特に再潅流障害）を低減又は予防するための方法もまた提供され、この方法は、臓器を臓器保存溶液中に置くことを含み、ここで該溶液は、少なくとも１つの本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を含む。
【０３９８】
臓器移植後臓器機能障害
臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）は、腎臓移植の手術直後の期間の最も一般的な合併症であり、悪い移植結果を生じる（Ｍｏｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ．１９９９．Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１４（４）：９３０−３５）。ＤＧＦの発生率及び定義は移植センターによって変わるが、その重大性は不変である：長期にわたる入院、さらなる侵襲的手技、並びに患者及び医療システムに対するさらなる費用。
【０３９９】
移植片拒絶は、移植片破壊の開始に依存して３つの部分集合に分類されている：（ｉ）  超急性拒絶反応は、通常最初の４８時間以内の非常に早期の移植片破壊に対して適用される用語である；（ｉｉ）  急性拒絶反応は、移植後数日から数ヶ月又は数年での開始を有し、体液性及び／又は細胞性のメカニズムを含み得る；（ｉｉｉ）  慢性拒絶反応は、アロ反応性免疫応答に関連する。
【０４００】
急性肺移植拒絶反応
急性同種移植拒絶反応は、免疫抑制薬物療法の進歩にもかかわらず、依然として  肺移植における重大な問題のままである。拒絶反応、並びに最終的には早期罹患率及び死亡率は、虚血−再潅流（Ｉ／Ｒ）障害及び低酸素障害に起因し得る。
【０４０１】
他の疾患及び状態
他の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、限定されないがとりわけ、制御不能な病的細胞増殖に関連する疾患又は障害、例えば癌、乾癬、自己免疫疾患を含む他の疾患及び状態の発生率又は重症度を処置又は予防するために有用である。「癌」又は「腫瘍」は、制御不能な異常細胞の増殖する腫瘤を指す。これらの用語には、原発腫瘍（良性でも悪性でもよい）に加えて、二次性腫瘍、又は身体内の他の部位に広がった転位の両方が含まれる。癌型の疾患の例としては、とりわけ：癌腫（例えば：乳房、結腸及び肺）、白血病（例えばＢ細胞白血病）、リンパ腫（例えばＢ細胞リンパ腫）、芽腫（例えば神経芽腫）及び黒色種が挙げられる。
【０４０２】
さらなる実施態様において、本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、神経保護を提供すること、又は脳保護を提供すること、又は自己免疫疾患及び移植拒絶反応に関連する細胞傷害性Ｔ細胞及びナチュラルキラー細胞媒介アポトーシスを予防及び／若しくは処置すること、又は心不全、心筋症、心臓のウイルス感染若しくは細菌感染、心筋虚血、心筋梗塞、及び心筋虚血、冠動脈バイパス移植を含む心臓細胞の細胞死を予防すること、又は例えば化学療法若しくはＨＩＶ治療の結果としてのミトコンドリア薬物毒性を予防及び／若しくは処置すること、ウイルス感染若しくは細菌感染の間の細胞死を予防すること、又は炎症若しくは炎症性疾患、炎症性腸疾患、敗血症及び敗血症性ショックを予防及び／若しくは処置すること、又は卵胞から卵母細胞の段階、卵母細胞から成熟卵の段階及び精子の細胞死を予防すること（例えば、凍結及び卵巣組織の移植、人工受精の方法）、化学療法後の哺乳動物、特にヒト哺乳動物において受精能を維持すること、又は黄斑変性を予防及び／若しくは処置すること、又は急性肝炎、慢性活動性肝炎、Ｂ型肝炎、及びＣ型肝炎を予防及び／若しくは処置すること、又は脱毛（例えば、男性型脱毛症に起因する脱毛、又は放射線、化学療法若しくは精神的ストレスに起因する脱毛）を予防すること、又は皮膚ダメージ（それにより、皮膚ダメージは、高レベルの放射線、熱、化学物質、日光、又は火傷及び自己免疫疾患に起因し得る）を処置若しくは寛解すること、又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）における骨髄細胞の細胞死を予防すること、膵炎を処置すること、関節リウマチ、乾癬、糸球体腎炎、アテローム性動脈硬化症、及び移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を処置すること、又は網膜周皮細胞アポトーシス、虚血に起因する網膜ダメージ、糖尿病性網膜症を処置すること、又はアポトーシス細胞死の増加に関連するいずれかの疾患状態を処置することを対象とする。
【０４０３】
他の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、患者における他の疾患及び状態の発生率又は重症度を処置又は予防するために有用である。これらの疾患及び状態には、脳卒中及び脳卒中様の状況（例えば脳不全、腎不全、心不全）、神経細胞死、再潅流問題を伴うか伴わない脳損傷が含まれる。
【０４０４】
口腔粘膜炎
口腔粘膜炎（口内炎とも呼ばれる）は、化学療法及び放射線療法レジメンの一般的な衰弱性の副作用であり、これは口及び咽喉の紅斑及び有痛性の潰瘍性病変として現れる。摂食、飲水、嚥下、及び会話のような日常的な活動が、重症の口腔粘膜炎を有する被験体には困難であるか又は不可能になり得る。対処療法には、鎮痛薬の投与及び局所的な洗浄が含まれる。
【０４０５】
虚血性状態及び再潅流障害
虚血傷害は、酸素欠乏による細胞傷害の最も一般的な臨床発現である。虚血傷害を研究するための最も有用なモデルは、器官の終動脈（例えば冠動脈）のうちの１つを完全に閉塞させること、及びその動脈により供給される領域における組織（例えば心筋）を調べることを含む。虚血の間に、多様な細胞系において複雑な病理的変化が起きる。特定の時点まで、異なる型の細胞によって変わる期間の間、傷害は修復を受けやすい可能性が有り、そして酸素及び代謝物質が血流の復旧により再び利用可能にされた場合、影響を受けた細胞は回復し得る。虚血持続時間がさらに続くと、進行中の損傷メカニズムが絶え間なく進行するために、細胞構造は悪化し続ける。時間とともに、細胞のエネルギー機構−ミトコンドリアの酸化的発電所（ｐｏｗｅｒｈｏｕｓｅ）及び解糖系−は、回復不能なダメージを受け、そして血流の回復（再潅流）が損傷した細胞を救うことはできない。たとえ細胞のエネルギー機構が無傷なままであったとしても、ゲノム又は細胞膜に対する回復不能なダメージは、再潅流にもかかわらず致死的結果を確実にする。この不可逆的な傷害は、通常は壊死として現れるが、アポトーシスも役割を果たし得る。特定の状況下では、以前は虚血になっていたが死滅していない細胞への血流が回復される場合、しばしば傷害は逆説的に悪化し、加速されたペースで進行する−これが再潅流障害である。
【０４０６】
他の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、虚血及び適切な血流の欠如に関連する疾患、例えば心筋梗塞（ＭＩ）及び脳卒中の発生率又は重症度を処置又は予防するために有用であり、これらが提供される。
【０４０７】
再潅流障害は、種々の状態において、特に、血管形成術、心臓手術又は血栓溶解を含むがこれらに限定されない医療行為の間；臓器移植；形成外科手術の結果として；重症の区画症候群の間；切断された肢の再付着の間；多臓器不全症候群の結果として；脳卒中又は脳外傷の結果として脳において；褥瘡、静脈性潰瘍及び糖尿病性潰瘍のような慢性の創傷と関連して；骨格筋虚血又は肢移植の間；腸間膜虚血又は急性虚血性腸疾患の結果として；肺高血圧、低酸素血、及び非心原性肺水腫をもたらす、胴体下部（ｌｏｗｅｒ  ｔｏｒｓｏ）虚血の結果としての呼吸不全；腎臓移植、大手術、外傷及び敗血症ショック、さらには出血性ショックの後に観察される急性腎不全；敗血症；急性緑内障、糖尿病性網膜症、高血圧性網膜症、及び網膜血管閉塞のような多数の眼疾患において視力喪失をもたらす、急性血管閉塞の結果として起きる網膜虚血；蝸牛虚血；頭部及び頸部の異常についての微小血管手術における皮弁不全（ｆｌａｐ  ｆａｉｌｕｒｅ）；レイノー現象及び強皮症における関連する指の虚血性病変；脊髄損傷；血管手術；外傷性横紋筋融解症（圧挫症候群）；並びにミオグロビン尿症において起こり得る。
【０４０８】
さらに、虚血／再潅流は以下の状態に関与し得る：高血圧、高血圧性脳血管疾患、動脈瘤の破裂、血栓又は塞栓の場合に起こるような−血管の狭窄又は閉塞、血管腫、血液疾患、心停止又は心不全を含む心機能不全のいずれかの形態、全身性低血圧、心停止、心臓性ショック、敗血性ショック、脊髄外傷、頭部外傷、けいれん、腫瘍からの出血；並びに脳卒中、パーキンソン病、てんかん、抑うつ、ＡＬＳ、アルツハイマー病、ハンチントン病及びあらゆる他の疾患に誘導される認知症（例えばＨＩＶ誘導認知症）のような疾患。
【０４０９】
さらに、虚血性エピソードは、頭部又は脊椎への打撃の結果のように、中枢神経系に対する機械的損傷により引き起こされ得る。外傷は、頭部、頸部、又は脊柱のいずれかの部位又は付属物（ａｐｐｕｒｔｅｎａｎｔ）との異物の外傷性接触から生じ得るような、擦過傷、切開、挫傷、穿刺、圧迫などの組織侵襲を含み得る。外傷性損傷の他の形態は、不適切な体液の蓄積（例えば、正常な脳脊髄液又は硝子体液の産生、代謝回転、若しくは体積調節の遮断若しくは機能不全、又は硬膜下若しくは頭蓋内（ｉｎｔｒａｃａｒｎｉａｌ）血腫若しくは水腫）によるＣＮＳ組織の狭窄又は圧迫から生じ得る。同様に、外傷性の狭窄又は圧迫は、異常組織の塊、例えば転移腫瘍又は原発腫瘍の存在から生じ得る。
【０４１０】
褥瘡
褥瘡または圧迫潰瘍は、継続的な圧迫（通常はベッドまたは車椅子によるもの）により、身体の脆弱な部分、特に殿部、股関節部、および踵の皮膚への循環が遮断された場合に生じる損傷した皮膚および組織の領域である。適切な血流の欠如は、影響を受ける組織の虚血性壊死および潰瘍化をもたらす。褥瘡は、感覚が減退したもしくは無感覚の患者または衰弱、やつれた、麻痺状態の、もしくは長期間寝たきりの患者において最も頻繁に起こる。仙骨、坐骨、大転子、外果、および踵の組織が特に影響を受け易く；他の部位も患者の姿勢によっては含まれ得る。
【０４１１】
褥瘡は、通常非常にゆっくりとしか治癒しない創傷であり、特にこのような場合、当然ながら、改善されたより迅速な治療法が、患者にとって非常に重要である。さらに、このような創傷を患った患者の処置に関する費用は、治療法が改善されより迅速に行われるようになった場合、大いに抑えられる。
【０４１２】
本明細書において開示される上記の全ての疾患及び効能に加えて、ＭＩのような本明細書において記載される他の疾患及び状態もまた、本発明の化合物により処置され得る。上記の状態のいずれも、共同譲渡された（ｃｏ−ａｓｓｉｇｎｅｄ）ＰＣＴ公開第ＷＯ２００６／０２３５４４号及び同第ＷＯ２００７／０８４６８４号に開示されるｓｉＲＮＡのいずれかを含む組成物により処置され得る。上述の疾患及び障害を処置するための新しい効果的な治療は、高い治療的価値があるものだろう。
【０４１３】
さらに、本発明の化学修飾されたＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡは、本明細書に開示される疾患の処置のために増強された標的化を達成するため、以下に従って抗体に（共有結合又は非共有結合で）連結され得る：
ＡＲＦ：抗Ｆａｓ抗体（好ましくは中和抗体）。
黄斑変性、糖尿病性網膜症、脊髄損傷：抗Ｆａｓ抗体、抗ＭＣＰ１抗体、抗ＶＥＧＦＲ１及び抗ＶＥＧＦＲ２抗体。抗体は好ましくは中和抗体であるべきである。
【０４１４】
本発明は、説明に役立つやり方で記載されており、そして当然のことながら、使用される用語は、限定ではなく本来の説明の言葉の範疇にあることを意図される。
【０４１５】
明らかに、本発明の多くの改変及び変形が、上記の教示を考慮すれば可能である。従って、当然のことながら、添付の特許請求の範囲内で、本発明は具体的に記載されるものと別のやり方で実施され得る。
【０４１６】
本出願全体を通して、米国特許を含む種々の刊行物が著者及び年及び特許番号で参照される。これらの刊行物及び特許及び特許出願の開示は、それら全体として、本発明が属する技術分野の技術水準をより十分に記載するために、本出願に参照により加入される。
【０４１７】
本発明は、実施例を参照して以下で詳細に説明されるが、それらに限定するとは解釈されるべきではない。
【０４１８】
本明細書におけるいずれの文献の引用も、そのような文献が関連する従来技術
又は本出願のいずれかの請求項の特許性に対して考慮される材料であると是認することを意図されない。いずれの文献の内容又は日付に関する記述も、出願時に出願人に入手可能な情報に基づくものであり、上記記述の正確性に関する是認を構成するものではない。
【実施例】
【０４１９】
さらに詳述しなくとも、当業者は前出の記載を使用して、本発明をその最大限まで利用することができると考えられる。従って、以下の好ましい特定の実施態様は、一例にすぎず、特許請求された発明をいかなるようにも限定しないと解釈されるべきである。
【０４２０】
本明細書に具体的に記載されていない当該分野で公知の標準的な分子生物学プロトコルは、概してＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ−Ｙｏｒｋ  （１９８９、１９９２）、及びＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ  （１９８８）、及びＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ  （１９８９）及びＰｅｒｂａｌ、Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８８）、及びＷａｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ及びＢｉｒｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ  （ｅｄｓ）  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ、Ｖｏｌｓ．１−４  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９９８）におけるように、並びに米国特許第４，６６６，８２８号；同第４，６８３，２０２号；同第４，８０１，５３１号；同第５，１９２，６５９号及び同第５，２７２，０５７に記載される方法論におけるように本質的に理解され、そしてこれらは参照により本明細書に加入される。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を、一般的にＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ  （１９９０）におけるように行った。フローサイトメトリーと組み合わせたインサイチュ（細胞における）ＰＣＲを、特定のＤＮＡ及びｍＲＮＡ配列を含有する細胞の検出のために使用することができる（Ｔｅｓｔｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．、１９９６、Ｂｌｏｏｄ  ８７：３８２２．）。ＲＴ−ＰＣＲを行うための方法も当該分野で周知である。
【０４２１】
細胞培養
ＨｅＬａ細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）を、Ｃｚａｕｄｅｒｎａら（Ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２００３．３１、６７０−８２）に記載されるように培養した。
ヒトケラチノサイトを、１０％ＦＣＳを含有するダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中３７℃にて培養した。
マウス細胞株Ｂ１６Ｖ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）を、１０％ＦＣＳを含有するダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中３７℃にて培養した。培養条件はＭｅｔｈｏｄｓ  Ｆｉｎｄ  Ｅｘｐ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９７  Ｍａｙ；１９（４）：２３１−９に記載されるとおりであった。
各場合において、１ウェルあたり約５０，０００個の細胞の密度で本明細書に記載される実験にかけて、そして本発明の二本鎖核酸は２０ｎＭの濃度で加え、これにより二本鎖核酸を、以下に記載されるような専用の脂質（ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅTM）１μｇ／ｍｌを使用して複合体化させた。
【０４２２】
低酸素様状態の誘導
低酸素様状態を誘導するために、以下のように細胞をＣｏＣｌ２で処理した：ｓｉＲＮＡトランスフェクションを、１０−ｃｍプレート（３０−５０％コンフルエンシー）でＣｚａｕｄｅｒｎａ  ｅｔ  ａｌ．、２００３（前出）に記載されるように行った。手短には、無血清培地中のあらかじめ形成したＧＢ及び脂質の１０ｘ濃縮複合体を完全培地中の細胞に加えることにより、ｓｉＲＮＡをトランスフェクトした。総トランスフェクション体積は１０ｍｌであった。別の記載がなければ、最終脂質濃度は１．０μｇ／ｍｌであり；最終ｓｉＲＮＡ濃度は２０ｎＭであった。低酸素応答の誘導を、ＣｏＣｌ2（１００μＭ）を、溶解の２４時間前に組織培地に直接加えることにより行った。
【０４２３】
実施例１：ｓｉＲＮＡ化合物の製造及び試験
ｓｉＲＮＡ  オリゴヌクレオチドの選択
専用のアルゴリズム及び遺伝子ＲＴＰ８０１の公知の配列（配列番号１）を使用して、多くの可能性のあるｓｉＲＮＡの配列を生成した。このアルゴリズムに加えて、いくつかの２３量体オリゴマー配列を、１９量体配列の５’及び／又は３’伸長により生成した。この方法を使用して生成された配列は、対応するｍＲＮＡ配列に対して完全に相補的である。上記記述に従うｓｉＲＮＡ分子は、本質的に本明細書に記載されるように製造した。表Ａ〜Ｉ  配列番号３〜３６２４は、ＲＴＰ８０１を標的とするｓｉＲＮＡ化合物の製造において有用であるセンスオリゴヌクレオチド及びアンチセンスオリゴヌクレオチドを示す。一般に、インビトロ試験のために選択された特定の配列を有するｓｉＲＮＡは、ヒト及び少なくとも２つ目の種、例えばラット又はウサギに対して特異的である。表Ａ〜Ｉにおいて、以下の略号は異種間の活性に関して使用される：Ｃｈｎ−チンチラ；Ｃｙｎ−カニクイザル；ＧＰ−モルモット；Ｒｂ−ウサギ；Ｍｓ−マウス；Ｍｎｋ−サル；Ｃｈｍｐ−チンパンジー。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、本明細書以下で記載されるいずれかの方法により合成した。
【０４２４】
インビトロデータ
本発明の特定のｓｉＲＮＡ化合物を用いて得られた活性及び安定性の結果を本明細書以下に示す。１ウェルあたり約１．５〜２ｘ１０５の細胞（ヒト遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡについてはＨｅＬａ細胞又は２９３Ｔ細胞、そしてラット／マウス遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡについてはＮＲＫ５２細胞又はＮＭＵＭＧ細胞）を、６ウェルプレートにおいて播種した（７０〜８０％コンフルエント）。
２４時間（ｈ）後に、ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅTM  ２０００試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎｅ）を使用して最終濃度５００ｐＭ、５ｎＭ、２０ｎＭ又は４０ｎＭでｓｉＲＮＡオリゴで細胞をトランスフェクトした。これらの細胞を３７℃でＣＯ2インキュベータにおいて７２ｈインキュベートした。
細胞トランスフェクションについてのポジティブコントロールとして、ＰＴＥＮ−Ｃｙ３標識ｓｉＲＮＡオリゴを使用した。ｓｉＲＮＡ活性についてのネガティブコントロールとしてＧＦＰ  ｓｉＲＮＡオリゴを使用した。
トランスフェクションの約７２ｈ後に、細胞を採取し、そしてＲＮＡを細胞から抽出した。
【０４２５】
ｓｉＲＮＡ化合物
表Ａ〜Ｉは、本発明のｓｉＲＮＡ配列を詳述しており、これらは本明細書に開示される修飾／構造のいずれかと組み合わされて新規なＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ化合物を生成し得る。
【０４２６】
以下の表１〜２は、種々の構造のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡを用いて達成されたインビトロ活性及び安定性の結果を詳述する：
【０４２７】
【表１】
2011517404.tif 000002
【０４２８】
【表２】
2011517404.tif 000003
【０４２９】
【表３】
2011517404.tif 000004
【０４３０】
【表４】
2011517404.tif 000005
【０４３１】
【表５】
2011517404.tif 000006
【０４３２】
本明細書以下の表３は、本発明のｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチド（ｏｌｏｇｏｎｕｌｃｏｅｉｔｄｅｓ）の製造において利用される修飾されたヌクレオチド／非通常部分のコードを示す。
【０４３３】
【表６】
2011517404.tif 000007
【０４３４】
【表７】
2011517404.tif 000008
【０４３５】
実施例２：急性腎不全（ＡＲＦ）のモデル系
ＡＲＦは、数日以内に起きる腎機能の急速な悪化を特徴とする臨床的な症候群である。理論に拘束されないが、急性腎臓損傷は、大きな心臓手術のような大手術を受けた患者における腎臓虚血−再潅流障害のような、腎臓虚血−再潅流障害の結果であり得る。ＡＲＦの主要な特徴は、糸球体濾過率（ＧＦＲ）の急激な低下であり、廃棄物（尿素、クレアチニン）の停留を生じる。最近の研究は、ＡＲＦの大部分のヒトの症例において、腎組織におけるアポトーシスが顕著であることを支持する。アポトーシス細胞死の主な部位は遠位ネフロンである。虚血傷害の初期段階の間、アクチン細胞骨格の完全性が失われることにより、刷子縁の損失、細胞接着点の損失、及びその後の下にある基層からの細胞の遊離とともに、上皮が平坦化する。
活性ｓｉＲＮＡ化合物の試験を、虚血−再潅流誘導ＡＲＦの動物モデルを使用して行った。
【０４３６】
虚血−再潅流誘導ＡＲＦに対する保護
虚血−再潅流障害を、４５分両側腎臓動脈をクランプし、そしてその後クランプを解放して２４時間再潅流させた後、ラットにおいて誘導した。ｓｉＲＮＡ化合物１２ｍｇ／ｋｇを、クランプの３０分前及び４時間後に頸静脈に注射した。ＡＲＦの進行は、手術の前（ベースライン）及び２４時間後に血清クレアチニンレベルを測定することによりモニタリングした。実験の最後に、温ＰＢＳ、続いて４％パラホルムアルデヒドを、大腿留置ラインを介してラットに潅流した。左腎臓を外科的に取り出し、そしてその後の組織学的分析のために４％パラホルムアルデヒド中に保存した。急性腎不全は、しばしばクレアチニンレベルのベースラインからの急激な増加として定義される。１ｄＬあたり少なくとも０．５  ｍｇ又は１Ｌあたり４４．２μｍｏｌの血清クレアチニンの増加は、急性腎不全の指標と考えられている。血清クレアチニンを、手術前の０時の時点及びＡＲＦ手術の２４時間後に測定した。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物を、上記のモデル系で試験し、そして虚血再潅流に対して保護的であることがわかった。
さらに、ＡＲＦの処置についての活性ｓｉＲＮＡの試験は、敗血症誘導ＡＲＦを使用して行ってもよい。
敗血症誘導ＡＲＦの２つの予測動物モデルが、Ｍｉｙａｊｉ  ｅｔ  ａｌ．、２００３、ｅｔｈｙｌ  ｐｙｒｕｖａｔｅ  ｄｅｃｒｅａｓｅｓ  ｓｅｐｓｉｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｃｕｔｅ  ｒｅｎａｌ  ｆａｉｌｕｒｅ  ａｎｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｏｒｇａｎ  ｄａｍａｇｅ  ｉｎ  ａｇｅｄ  ｍｉｃｅ、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．Ｎｏｖ；６４（５）：１６２０−３１により記載される。これら２つのモデルは、マウス、好ましくは老齢マウスにおけるリポ多糖投与及び腸管穿孔である。
【０４３７】
実施例３：褥瘡又は圧迫潰瘍のモデル系
糖尿病性潰瘍を含む褥瘡または圧迫潰瘍は、継続的な圧迫（通常はベッドまたは車椅子によるもの）により、身体の脆弱な部分、特に殿部、股関節部、および踵の皮膚への循環が遮断された場合に生じる損傷した皮膚および組織の領域である。適切な血流の欠如は、影響を受ける組織の虚血性壊死および潰瘍化をもたらす。褥瘡は、感覚が減退したもしくは無感覚の患者または衰弱、やつれた、麻痺状態の、もしくは長期間寝たきりの患者において最も頻繁に起こる。仙骨、坐骨、大転子、外果、および踵の組織が特に影響を受け易く；他の部位も患者の姿勢によっては含まれ得る。
褥瘡、潰瘍及び同様の創傷を処置するための本発明の活性な阻害剤（例えばｓｉＲＮＡ化合物）の試験は、Ｒｅｉｄ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１１６：１７２−１８０、２００４に記載されるマウスモデルにおいて行った。
さらなるウサギモデルは、Ｍｕｓｔｏｅ  ｅｔ  ａｌ、ＪＣＩ、１９９１．８７（２）：６９４−７０３；Ａｈｎ  ａｎｄ  Ｍｕｓｔｏｅ、Ａｎｎ  Ｐｌ  Ｓｕｒｇ、１９９１．２４（１）：１７−２３により記載され、そして本発明のｓｉＲＮＡ化合物を試験するために使用した。本発明のｓｉＲＮＡ化合物を動物モデルで試験し、ここでこれらのｓｉＲＮＡ化合物が褥瘡及び潰瘍を処置及び予防することが示された。
【０４３８】
実施例４：慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）のモデル系
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、終末細気管支に対して遠位にある末梢気腔の恒久的な破壊である気腫により主に特徴づけられる。気腫はまた、細気管支および肺胞構造におけるマクロファージおよび好中球のような炎症細胞の蓄積によっても特徴付けられる。気腫及び慢性気管支炎はＣＯＰＤの一部として発生することも、独立して発生することもある。
ＣＯＰＤ／気腫／慢性気管支炎の処置についての本発明の活性な阻害剤（例えばｓｉＲＮＡ）の試験を、以下に開示されるような動物モデルで行った：
Ｓｔａｒｃｈｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ、１９８９．Ｌａｂ．Ａｎｉｍａｌｓ、２３：２３４−２４０；Ｐｅｎｇ、ｅｔ  ａｌ．、２００４．；Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ、  １６９：１２４５−１２５１；Ｊｅｙａｓｅｅｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．、２００４．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、７２：７２４７−５６。さらなるモデルは、本出願の譲受人に譲渡されたＰＣＴ特許公開第ＷＯ２００６／０２３５４４号（参照により本出願に加入される）に記載される。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物をこれらの動物モデルで試験し、これによりこれらのｓｉＲＮＡ化合物が気腫、慢性気管支炎及びＣＯＰＤを処置及び／又は予防することが示された。
【０４３９】
実施例５：脊髄損傷のモデル系
脊髄損傷又はミエロパシーは、感覚及び／又は運動性の損失を生じる脊髄の障害である。脊髄損傷の２つの最も一般的な型は、外傷及び疾患に起因するものである。外傷性損傷は、とりわけ自動車事故、落下、銃撃、潜水事故などに起因し得、脊髄を冒し得る疾患としては、ポリオ、二分脊椎症、腫瘍、及びフリートライヒ運動失調が挙げられる。
ラットに２つの異なる用量のＣｙ３標識ｓｉＲＮＡ（１μｇ／μｌ、１０μｇ／μｌ）を注射し、そして屠殺の前１日間及び３日間放置した。組織学的分析は、多くの長い繊維状輪郭（ｐｒｏｆｉｌｅｓ）が標識されたｓｉＲＮＡを吸収し、他の突起（ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ）及び細胞体も同様であることを示した。ＭＡＰ２に対する抗体を用いた免疫染色により、樹状突起、及び運動ニューロンを含むニューロンの細胞体への標識の取り込みが同定された。星状細胞又はマクロファージに特異的な他の抗体を用いた染色により、ニューロンと比較してＣｙ３標識ｓｉＲＮＡのより低い取り込みが明らかになった。これらの結果は、損傷した脊髄に注入されたｓｉＲＮＡ分子が、運動ニューロンを含むニューロンの細胞体及び樹状突起まで到達することを示している。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物をこの動物モデルで試験し、これにより、これらのｓｉＲＮＡ化合物が脊髄損傷後の機能回復を促進し、従って脊髄損傷を処置するために使用され得るということが示された。
【０４４０】
実施例６：緑内障のモデル系
緑内障の処置又は予防についての本発明の活性な阻害剤の試験を、例えばＰｅａｓｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｇｌａｕｃｏｍａ、２００６、１５（６）：５１２−９により記載されるように動物モデルにおいて行った（実験的緑内障を有するラット及び正常なマウスにおけるＴｏｎｏＬａｂ及びＴｏｎｏＰｅｎ眼圧計の圧測定較正及び比較）。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物をこの動物モデルで試験し、ここでこれらのｓｉＲＮＡ化合物が緑内障を処置及び／又は予防するということが実証された。
【０４４１】
実施例７：ラットにおける肺移植後の虚血／再潅流障害のモデル系
肺移植後の虚血／再潅流障害又は低酸素性障害の処置又は予防についての本発明の活性阻害剤の試験を、例えばＭｉｚｏｂｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４．Ｊ．Ｈｅａｒｔ  Ｌｕｎｇ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、２３：８８９−９３；Ｈｕａｎｇ、ｅｔ  ａｌ．、１９９５．Ｊ．Ｈｅａｒｔ  Ｌｕｎｇ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１４：Ｓ４９；Ｍａｔｓｕｍｕｒａ、ｅｔ  ａｌ．、１９９５．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５９：１５０９−１５１７；Ｗｉｌｋｅｓ、ｅｔ  ａｌ．、１９９９．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６７：８９０−８９６；Ｎａｋａ、ｅｔ  ａｌ．、１９９６．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、７９：７７３−７８３により記載されるように、１つ又はそれ以上の実験動物モデルにおいて行った。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物をこれらの動物モデルで試験し、これにより、これらのｓｉＲＮＡ化合物が肺移植後の虚血−再潅流を処置及び／又は予防し、従って移植手術と併用して使用され得るということが示された。
【０４４２】
実施例８：急性呼吸促迫症候群のモデル系
急性呼吸促迫症候群の処置についての本発明の活性阻害剤の試験を、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ（Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｓｃｉ．２００３；１０（６  Ｐｔ  １）：５８８−９２）により記載される動物モデルにおいて行った。本発明のｓｉＲＮＡ化合物をこの動物モデルにおいて試験し、これによりこれらのｓｉＲＮＡが急性呼吸促迫症候群を処置及び／又は予防し、従ってこの状態を処置するために使用され得るということが示された。
【０４４３】
実施例９：聴覚損失状態のモデル系
（ｉ）耳の正円窓への局所投与後の蝸牛におけるＣｙ３−ＰＴＥＮ  ｓｉＲＮＡの分布
Ｃｙ３−ＰＴＥＮ  ｓｉＲＮＡ（合計０．３〜０．４μｇ）の１μｇ／１００μｌのＰＢＳ溶液を、チンチラの正円窓に投与した。処置された蝸牛内のＣｙ３で標識された細胞を、チンチラの屠殺後に、ｓｉＲＮＡ正円窓投与後２４〜４８時間に分析した。蝸牛内の標識のパターンは、２４時間後と４８時間後で同様であり、そして蝸牛の底回転、蝸牛の中回転及び蝸牛の頂回転における標識も含んでいた。Ｃｙ３−ＰＴＥＮ  ｓｉＲＮＡの鼓室階への投与は、主に蝸牛の底回転及び蝸牛の中回転における標識を示した。Ｃｙ３シグナルは、Ｃｙ３−ＰＴＥＮ  ｓｉＲＮＡの投与の１５日後まで持続した。本発明のｓｉＲＮＡ化合物をこの動物モデルで試験し、これにより、これらのｓｉＲＮＡ化合物の蝸牛の底回転、中回転及び頂回転までの有意な浸透が存在すること、並びにこれらの化合物が聴覚損失の処置において使用され得ることが示された。
（ｉｉ）  カルボプラチン誘導又はシスプラチン誘導蝸牛有毛細胞死のチンチラモデル
生理食塩水中の特定のｓｉＲＮＡを各動物の左耳に直接投与することにより、チンチラを前処置した。プラセボとして生理食塩水を各動物の右耳に投与した。本発明の特定のｓｉＲＮＡ化合物の投与の２日後に、これら動物をカルボプラチン（７５ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）又はシスプラチン（３０分にわたる１３ｍｇ／ｋｇの腹腔内注入）で処置した。チンチラを屠殺した後（カルボプラチン処置の２週後）、内有毛細胞（ＩＨＣ）及び外有毛細胞（ＯＨＣ）の死んだ細胞の％を左耳（ｓｉＲＮＡ処置）及び右耳（生理食塩水処置）において計算した。内有毛細胞（ＩＨＣ）及び外有毛細胞（ＯＨＣ）の死んだ細胞の％は右耳（生理食塩水処置）よりも左耳（ｓｉＲＮＡ処置）において低いと算出された。
（ｉｉｉ）  音響誘導蝸牛有毛細胞死のチンチラモデル
音響性外傷モデルにおける特定のｓｉＲＮＡの活性をチンチラで検討した。これらの動物を４ｋＨｚを中心とした騒音のオクターブバンドに２．５時間１０５ｄＢで曝露した。騒音に曝露されたチンチラの左耳を、生理食塩水約１０μＬ中のｓｉＲＮＡ  ３０μｇで前処置した（音響性外傷の４８時間前）；右耳は、ビヒクル（生理食塩水）で前処置した。複合活動電位（ＣＡＰ）は、蝸牛から伝達される神経活動を測定するための簡便で信頼できる電気生理学的方法である。音響刺激（例えばクリック音又はトーンバースト）が突然出された場合に生成される局所電場電位を検出するために、蝸牛の底部付近に電極を配置することによりＣＡＰを記録した。各耳の機能的状態を、音響性外傷の２．５週後に評価した。特に、ｓｉＲＮＡで処置した耳における閾値が未処置（生理食塩水）の耳よりも低い（より良い）か否かを決定するために、正円窓から記録された複合活動電位の平均閾値（ｍｅａｎ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）を、音響性外傷の２．５週後に決定した。さらに、内有毛細胞及び外有毛細胞の損失の量を、ｓｉＲＮＡで処置した耳及びコントロールの耳で決定した。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物をこの動物モデルで試験し、これによりｓｉＲＮＡで処置した耳における閾値が、未処置（生理食塩水）の耳よりも低い（より良い）ことが示された。さらに、内有毛細胞及び外有毛細胞の損失の量は、コントロールの耳よりもｓｉＲＮＡで処置した耳において少なかった。
【０４４４】
実施例１０−黄斑変性に関連するモデル系
本発明の化合物を、以下の脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）の動物モデルにおいて試験した。滲出型ＡＭＤのこの特徴は、レーザー処置によりモデル動物において誘導された。
【０４４５】
Ａ）マウスモデル
脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）誘導：滲出型ＡＭＤの特徴である脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）を、レーザー光凝固（５３２ｎｍ、２００ｍＷ、１００ｍｓ、７５μｍ）  （ＯｃｕＬｉｇｈｔ  ＧＬ、Ｉｒｉｄｅｘ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ）を、各マウスの両眼に薬物群の割り当てに対して単独で個々にマスキングする（ｓｉｎｇｌｅ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ  ｍａｓｋｅｄ）ことにより０日目に誘発した。標準化されたやり方で、細隙灯送達システム及びコンタクトレンズとしてのカバーガラスを使用して、レーザースポットを視神経周辺に当てた。
評価
評価のために、眼から眼球除去して４％パラホルムアルデヒドで３０分間４℃で固定した。神経感覚網膜を剥離し、そして視神経から切断した。残ったＲＰＥ−脈絡膜−強膜複合体を、Ｉｍｍｕ−Ｍｏｕｎｔ  （Ｖｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ  Ｍｏｕｎｔｉｎｇ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｖｅｃｔｏｒ）でフラットマウントにし、そしてカバーグラスで覆った。フラットマウントを走査型レーザー共焦点顕微鏡（ＴＣＳ  ＳＰ、Ｌｅｉｃａ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で調べた。青色アルゴンレーザーで励起することにより血管を可視化した。ＣＮＶ関連蛍光の面積を、Ｌｅｉｃａ  ＴＣＳ  ＳＰソフトウエアを使用してコンピュータ画像解析により測定した。各水平断面における蛍光面積全体の総和ＣＮＶの体積についての指標として使用した。
【０４４６】
Ｂ）非ヒト霊長類モデル
ＣＮＶ誘導：脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）を、雄性カニクイザルにおいて投薬前に両目の黄斑周囲（ｐｅｒｉｍａｃｕｌａｒ）レーザー処置により誘導した。おおよそのレーザーパラメータは以下のとおりである：スポット寸法：直径５０−１００μｍ；レーザー出力：３００−７００ミリワット；照射時間：０．１秒。
処置：レーザー処置の直後に、全ての動物の両目に単回硝子体内注射を行った。左目にＲＴＰ８０１に対する合成安定化ｓｉＲＮＡを投与し、一方反対側の目にはＰＢＳ（ビヒクル）を投与した。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物を、上記の黄斑変性動物モデルにおいて試験し、これにおいてＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ分子が黄斑変性の処置において有効であることが示された。
【０４４７】
実施例１１−微小血管障害に関するモデル系
本発明の化合物を、以下に記載されるような微小血管障害の一連の動物モデルにおいて試験した。
【０４４８】
１．糖尿病性網膜症
ＲＴＰ８０１は、インビトロで神経細胞アポトーシス及び反応性酸素種の生成を促進する。本発明の譲受人はまた、未熟児網膜症（ＲＯＰ）のモデルに供したＲＴＰ８０１ノックアウト（ＫＯ）マウスにおいて、ＶＥＧＦの増加にも関わらず低酸素条件下で病的血管新生ＮＶが減少し、一方でこの遺伝子の欠損は生理的新生児網膜ＮＶに影響を及ぼさなかった。さらにこのモデルにおいて、ＲＴＰ８０１の欠損はまた、低酸素神経細胞アポトーシス及び過酸素血管閉塞に対して保護的であった。
【０４４９】
実験１
ＲＴＰ８０１  ＫＯ及びＣ５７／１２９ｓｖ野生型（ＷＴ）同腹子マウスにおいてＳＴＺの腹腔内注射により糖尿病を誘導した。４週間後、ＥＲＧ（単一白色フラッシュ、１．４ｘ１０＾４ｆｔｃ、５ｍｓ）を１時間の暗順応後に左目から得た。ＲＶＰを、エバンスブルーアルブミン浸透技術を使用して両目から評価した。
【０４５０】
実験２
対応する遺伝的背景を有するＲＴＰ８０１ノックアウトマウス及びコントロール野生型マウスにおいて糖尿病を誘導した。糖尿病誘導のために、ストレプトゾトシン（終夜断食の後２日間、ＳＴＺ  ９０ｍｇ／ｋｇ／日）を注射した。動物の生理機能を、血中グルコース、体重、及びヘマトクリットの変化について研究の間モニタリングした。ビヒクルを注射したマウスがコントロールの役目を果たした。適切な動物を、抗ＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ又は抗ＧＦＰコントロールｓｉＲＮＡの硝子体内注射により処置した。
【０４５１】
網膜血管漏出を、動物に対してエバンスブルー（ＥＢ）染料技術を使用して測定した。マウスは、エバンスブルー（ＥＢ）測定の前に右頚静脈にカテーテルを移植されていた。各動物の両目における網膜浸透性測定は、標準的なエバンスブループロトコルにしたがった。
【０４５２】
未熟児網膜症
未熟児網膜症を、試験動物を低酸素状態及び過酸素状態に曝露することにより誘導し、続いて網膜に対する効果を試験した。ＲＴＰ８０１  ＫＯマウスが未熟児網膜症から保護されるという結果が示され、それによりＲＴＰ８０１阻害の保護効果が確認された。
【０４５３】
心筋梗塞
心筋梗塞を、マウスにおいて左冠動脈前下行枝の、短期及び長期の結紮により誘導した。
【０４５４】
微小血管虚血性状態
虚血性状態を評価する動物モデルには以下が含まれる：
１．閉鎖性頭部外傷（ＣＨＩ）−実験的ＴＢＩは、神経系及び神経代謝（ｎｅｕｒｏｍｅｔａｂｏｌｉｃ）カスケードに寄与する一連の事象を生じ、これらは行動の欠損の度合い及び程度に関連する。中前頭（ｍｉｄｃｏｒｏｎａｌ）面における左半球を覆う露出された頭蓋上に、前に置いた（ｐｒｅｆｉｘｅｄ）高さ（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ  １３、５５７、１９９６）からおもりを自由落下させながら、麻酔下でＣＨＩを誘導した。
２．一過性の中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）−９０〜１２０分の一過性の限局的な虚血を、成体雄性スプラーグドーリーラット（３００−３７０グラム）において行った。使用した方法は、腔内縫合ＭＣＡＯ  （Ｌｏｎｇａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｓｔｒｏｋｅ、３０、８４、１９８９、ａｎｄ  Ｄｏｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．７２、７６５、１９９９）である。換言すると、ハロタン麻酔下で、ポリ−Ｌ−リジンでコーティングされた３−０−ナイロン縫合材料を、外頚動脈における穴を通して右内頚動脈（ＩＣＡ）に挿入した。このナイロン糸をＩＣＡを右ＭＣＡ起点（２０−２３ｍｍ）に押し入れた。９０〜１２０分後にこの糸を引き抜き、この動物を縫合して回復させた。
３．持続的中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）−閉塞は持続的であり、片側−ＭＣＡの電気凝固により片側に誘導される。両方の方法が、脳皮質の同じ側の限局性脳虚血をもたらし、反対側は無傷なままである（コントロール）。左ＭＣＡを、ラットについてＴａｍｕｒａ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．、Ｊ  Ｃｅｒｅｂ  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ．１９８１；１：５３−６０により記載されるように、側頭開頭術により露出した。ＭＣＡ及びそのレンズ核線条体動脈（ｌｅｎｔｉｃｕｌｏｓｔｒｉａｔａｌ）分岐部を、嗅索の内側縁に対して近位にミクロバイポーラ（ｍｉｃｒｏｂｉｐｏｌａｒ）凝固で閉塞させた。傷を縫合し、そして動物を２６℃〜２８℃に温めた室内のそれらの飼育ケージに戻した。動物の温度を常に自動サーモスタットで維持した。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物を、上記の微小血管状態の動物モデルで試験し、これにおいて、ＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ分子が微小血管状態の症状を寛解することが示された。
【０４５５】
実施例１２：神経変性疾患及び障害のためのモデル系
Ｉ．アルツハイマー病のＡＰＰトランスジェニックマウスモデルにおける本発明のｓｉＲＮＡ化合物の鼻腔内投与の有効性の評価
動物及び処置。この研究は、アルツハイマー病のモデルである、１１月齢の２４匹のＡＰＰ  ［Ｖ７１７Ｉ］トランスジェニックマウス（雌性）（Ｍｏｅｃｈａｒｓ  Ｄ．ｅｔ
ａｌ．、ＥＭＢＯ  Ｊ．１５（６）：１２６５−７４、１９９６；Ｍｏｅｃｈａｒｓ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．９１（３）：８１９−３０）を含み、これを無作為に２つの等しいグループに分けた（グループＩ及びグループＩＩ）。
動物にｓｉＲＮＡ（２００〜４００ｕｇ／マウス、グループＩ）及びビヒクル（グループＩＩ）を週に２〜３回鼻腔内投与して３ヶ月の間処置した。
終了。マウスを屠殺した；脳を解剖し、一方の半球を組織学のために処理し、そしてもう一方の半球を輸送のために凍結した。
評価。以下の組織学的分析を行った：
１．抗Ａβ染色及び定量（４スライド／マウス）：
２．Ｔｈｉｏ  Ｓ染色及び定量（４スライド／マウス）：
３．ＣＤ４５染色及び定量（４スライド／マウス）：
４．ＧＦＡＰ（星状細胞増加）染色及び定量。
【０４５６】
ＩＩ．アルツハイマー病のＢＡＣＥ−トランスジェニックマウスモデルにおける特定のｓｉＲＮＡの鼻腔内投与の有効性の評価
目的。この研究の目的は、アルツハイマー病についてのＢＡＣＥ−トランスジェニックマウスモデルにおける本発明の特定のｓｉＲＮＡ化合物の鼻腔内送達の有効性を試験することである。
動物及び処置。この研究は、２０匹の４月齢のＢＡＣＥ−１トランスジェニックマウス（雌性／雄性）を含み、これらを２つの等しいグループに無作為に分けた。ｓｉＲＮＡ処置を４月齢目に開始した。本発明のｓｉＲＮＡ化合物を鼻腔内投与した。
評価。
１．行動試験。動物を定期的な行動分析にかけることにより行動的な変化について全ての動物をモニタリング及び試験した。モーリス水迷路における空間学習及び記憶を使用した。
２．脳生化学。各グループの５匹のマウスの脳を生化学分析にかけた。ＢＡＣＥ、ＡＰＰ、ＣＴＦ及びＡβのウェスタンブロット分析を行った。ＢＡＣＥ酵素活性についてのアッセイを行った。
３．免疫組織化学。各グループにおける５匹のマウスの左脳半球（ｈｅｍｉｂｒａｉｎ）を免疫組織化学分析にかけた。ＢＡＣＥ、ＡＰＰ及びＣＴＦの発現レベルを決定した。
４．ｑＰＣＲによる遺伝子ノックダウンの分析を各グループの５匹のマウスの右脳半球で行った。
【０４５７】
ＩＩＩ．ＡＬＳのマウスモデルにおけるｓｉＲＮＡの鼻腔内投与の有効性の評価
目的。ＡＬＳの変異体ＳＯＤ１G93Aマウスモデルにおける本発明のｓｉＲＮＡ化合物の有効性を調べること。
動物及び処置。以下の実験グループを疾患進行及び寿命を調べるために使用した：
１．グループ１−ミスマッチｓｉＲＮＡ−野生型（ｎ＝１０）及びＳＯＤ１G93Aマウス（ｎ＝１０）
２．グループ２−本発明のｓｉＲＮＡ−野生型（ｎ＝１０）及びＳＯＤ１G93Aマウス（ｎ＝１０）
３．グループ３−未処置コントロール−野生型（ｎ＝１０）及びＳＯＤ１G93Aマウス（ｎ＝１０）
各実験グループは性別を一致させており（５雄性、５雌性）、そして  少なくとも３つの異なる同腹仔からの同腹仔を含む。この設計は、少数の同腹仔のみからのマウス、又は高い割合の雌性ＳＯＤ１G93Aマウス（これらのマウスは雄性マウスよりも３〜４日長く生きるので）を含むマウスグループからのマウスを使用することにより偏向を減らす。
ｓｉＲＮＡの投与。ｓｉＲＮＡの投与経路は鼻腔内滴注であり、週に二回の投与を３０日齢から開始した。
【０４５８】
疾患進行の分析。処置されたマウス及び未処置のマウスにおける行動及び筋電図（ＥＭＧ）分析を、疾患の開始及び進行をモニタリングするために行った。ｓｉＲＮＡ処置の開始前にマウスを予備試験し、その後毎週評価した。全ての結果を統計学的に比較した。以下の試験を行った：
１．水層遊泳試験：この試験は、後肢運動機能の変化の検出において特に感受性である（Ｒａｏｕｌ  ｅｔ  ａｌ．、２００５．Ｎａｔ  Ｍｅｄ．１１、４２３−４２８；Ｔｏｗｎｅ  ｅｔ  ａｌ、２００８．Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．１６：１０１８−１０２５）。
２．筋電図：ＥＭＧ評価を、後肢の腓腹筋において行い、ここで複合筋活動電位（ＣＭＡＰ）を記録した（Ｒａｏｕｌ  ｅｔ  ａｌ．、２００５．前出）。
３．体重：ＳＯＤ１G93Aマウスの体重は疾患進行の間に有意に減少するので、マウスの体重を毎週記録した（Ｋｉｅｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．、２００７．ＰＮＡＳ  Ｕ  Ｓ  Ａ．１０４、２０６０６−２０６１１）。
【０４５９】
寿命の評価。処置されたマウス及び未処置のマウスについての寿命日数を記録し、そして統計学的に比較して、ｓｉＲＮＡ処置が寿命に対して有意な効果を有するか否かを決定した。十分に定義された疾患終点において、体重を＞２０％失った場合、及び２０秒足らずのうちに起き上がることができない場合にマウスを屠殺した。全ての結果を統計学的に比較した。
【０４６０】
死後組織病理学。疾患終点において、マウスを終末的に麻酔し、そして脊髄及び後肢筋組織を組織学的分析及び生化学的分析のために採取した。
【０４６１】
運動ニューロン生存試験。腹髄の横断面をクリオスタットを使用して切断し、ガロシアニン、ニッスル染色を用いて染色した。これらの切片から、腹髄における運動ニューロンの数を計数し（Ｋｉｅｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．、２００７．ｓｕｐｒａ）、ｓｉＲＮＡ処置がＳＯＤ１G93Aマウスにおいて運動ニューロン変性を防止するか否かを決定した。
【０４６２】
脊髄組織病理学試験。ＳＯＤ１G93Aマウスにおける運動ニューロン変性は、アストログリオーシス及び小グリア細胞の活性化を生じる。ここでは、腹髄の横断面を使用して、星状細胞及び小グリア細胞の活性化を免疫細胞化学を使用して試験し、ｓｉＲＮＡ処置がそれらの活性化を低減または防止するか否かを決定した。
【０４６３】
筋組織学試験。後肢筋脱神経及び萎縮は、ＳＯＤ１G93Aマウスにおいて運動ニューロン変性の結果として生じた。疾患終点において、個々の後肢筋（腓腹筋、ヒラメ筋、前脛骨筋、長趾（ｄｉｇｉｔｏｒｉｕｍ）伸筋）の重量を記録し、そして処置マウスと未処置マウスの間で比較した。次いで筋肉を組織学的に処理し、運動終板脱神経及び筋萎縮を調べた（Ｋｉｅｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．、２００５．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１６９、５６１−５６７）。
【０４６４】
本発明の化合物を試験するために使用されるモデル系に関するさらなる詳細については、本発明の譲受人に共同譲渡又は譲渡された、国際特許公開第ＷＯ０６／０２３５４４Ａ２号、同第ＷＯ２００６／０３５４３４号及び同第ＷＯ２００７／０８４６８４Ａ２号（それらの全体が参照により本明細書に加入される）を参照のこと。
【０４６５】
本発明のｓｉＲＮＡ化合物を、神経変性状態の上記動物モデルにおいて試験し、ここでＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ分子が神経変性疾患の症状を寛解させることが示された。
【０４６６】
【表８】
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【０４６７】
【表９】
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【０４６８】
【表１０】
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【０４６９】
【表１１】
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【０４７０】
【表１２】
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【０４７１】
【表１３】
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【０４７２】
【表１４】
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【０４７３】
【表１５】
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【０４７４】
【表１６】
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【０４７５】
【表１７】
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【０４７６】
【表１８】
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【０４７７】
【表１９】
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【０４７８】
【表２０】
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【０４７９】
【表２１】
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【０４８０】
【表２２】
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【０４８１】
【表２３】
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【０４８２】
【表２４】
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【０４８３】
【表２５】
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【０４８４】
【表２６】
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【０４８５】
【表２７】
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【０４８６】
【表２８】
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【０４８７】
【表２９】
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【０４８８】
【表３０】
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【０４８９】
【表３１】
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【０４９０】
【表３２】
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【０４９１】
【表３３】
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【０４９２】
【表３４】
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【０４９３】
【表３５】
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【０４９４】
【表３６】
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【０４９５】
【表３７】
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【０４９６】
【表３８】
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【０４９７】
【表３９】
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【０４９８】
【表４０】
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【０４９９】
【表４１】
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【０５００】
【表４２】
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【０５０１】
【表４３】
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【０５０２】
【表４４】
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【０５０３】
【表４５】
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【０５０４】
【表４６】
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【０５０５】
【表４７】
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【０５０６】
【表４８】
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【０５０７】
【表４９】
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【０５０８】
【表５０】
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【０５０９】
【表５１】
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【０５１０】
【表５２】
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【０５１１】
【表５３】
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【０５１２】
【表５４】
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【０５１３】
【表５５】
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【０５１４】
【表５６】
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【０５１５】
【表５７】
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【０５１６】
【表５８】
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【０５１７】
【表５９】
2011517404.tif 000060
【０５１８】
【表６０】
2011517404.tif 000061
【０５１９】
【表６１】
2011517404.tif 000062
【０５２０】
【表６２】
2011517404.tif 000063
【０５２１】
【表６３】
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【０５２２】
【表６４】
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【０５２３】
【表６５】
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【０５２４】
【表６６】
2011517404.tif 000067
【０５２５】
【表６７】
2011517404.tif 000068
【０５２６】
【表６８】
2011517404.tif 000069
【０５２７】
【表６９】
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【０５２８】
【表７０】
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【０５２９】
【表７１】
2011517404.tif 000072
【０５３０】
【表７２】
2011517404.tif 000073
【０５３１】
【表７３】
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【０５３２】
【表７４】
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【０５３３】
【表７５】
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【０５３４】
【表７６】
2011517404.tif 000077
【０５３５】
【表７７】
2011517404.tif 000078
【０５３６】
【表７８】
2011517404.tif 000079
【０５３７】
【表７９】
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【０５３８】
【表８０】
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【配列表】
2011517404000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成22年12月16日(2010.12.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国仮特許出願第６１／０７０１８１号（これは参照によりその全体が本明細書に加入される）の優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、新規なｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチド、並びにＲＴＰ８０１を阻害する化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物、並びに呼吸器障害（肺障害を含む）、眼の疾患及び状態、難聴（ｈｅａｒｉｎｇ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓ）（聴覚損失を含む）、神経変性障害、脊髄損傷、微小血管障害、血管新生関連状態及びアポトーシス関連状態を処置するための化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＲＴＰ８０１
ＲＴＰ８０１遺伝子は本願譲受人により初めて報告された。本願譲受人に譲渡された特許文献１、特許文献２、及び特許文献３並びに関連特許（参照によりそれらの全体が本明細書に加入される）は、ＲＴＰ８０１ポリヌクレオチドおよびポリペプチド、ならびに該ポリペプチドに対する抗体を開示する。ＲＴＰ８０１は、ＶＥＧＦなどのような増殖因子とは独立して、低酸素誘導性の病理発生を調節し得る低酸素誘導因子−１（ＨＩＦ−１）のユニークな遺伝子標的である。本願譲受人が譲り受けた特許文献４、特許文献５及び特許文献６（参照によりそれらの全体が本明細書に加入される）は、ＲＴＰ８０１の阻害のための、ｓｉＲＮＡを含む化合物に関する。
【０００４】
本願譲受人は、ＲＴＰ８０１Ｌ（ＲＴＰ８０１−様）と称される、相違するが類似の遺伝子を発見しており、これはＲＴＰ８０１との組み合わせ治療において使用することができる（以下を参照のこと）。ＲＴＰ８０１Ｌに関するさらなる情報については、本願譲受人に譲渡された特許文献７（参照によりその全体が本明細書に加入される）を参照のこと。
【０００５】
以下の特許及び特許出願は、背景情報の諸相を示す：特許文献８、特許文献９、特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２、特許文献１３、特許文献１４及び特許文献１５。以下の刊行物は背景情報を示す：非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；及び非特許文献４。
【０００６】
ｓｉＲＮＡ及びＲＮＡ干渉
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡ−依存性遺伝子特異的転写後サイレンシングを含む現象である。この現象を研究して哺乳動物細胞を実験的に操作しようとする初期の試みは、長いｄｓＲＮＡ分子に応じて活性化される、活性で非特異的な抗ウイルス防御機構によって妨げられた（非特許文献５）。後に、２１ヌクレオチドのＲＮＡの合成二重鎖が、一般的な抗ウイルス防御機構を刺激することなく、哺乳動物細胞において遺伝子特異的ＲＮＡｉを媒介し得るということが発見された（非特許文献６及び非特許文献７）。結果として、短い二本鎖ＲＮＡである低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）が、遺伝子発現を阻害し、そして遺伝子機能を理解するために広く使用されている。
【０００７】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）（非特許文献８）又はマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）（非特許文献９及び非特許文献１０）により媒介される。植物における対応するプロセスは一般に、特異的転写後遺伝子サイレンシングと呼ばれ、そして真菌類ではクエリング（ｑｕｅｌｌｉｎｇ）と呼ばれる。
【０００８】
ｓｉＲＮＡは、内因性又は外因性の遺伝子／ｍＲＮＡの発現を下方調節又は抑制する（ｓｉｌｅｎｃｅｓ）（すなわち完全に又は部分的に阻害する）二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）である。ＲＮＡ干渉は、特定のｄｓＲＮＡ種が特異的なタンパク質複合体に入る能力に基づくものであり、その後そこで相補的な細胞のＲＮＡ（すなわちｍＲＮＡ）に標的化され、そのＲＮＡを特異的に分解又は切断する。従って、ＲＮＡ干渉応答は、一般的にＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と呼ばれる、ｓｉＲＮＡを含むエンドヌクレアーゼ複合体を特色とし、これがｓｉＲＮＡ二重鎖のアンチセンス鎖に相補的な配列を有する一本鎖ＲＮＡの切断を媒介する。標的ＲＮＡの切断は、ｓｉＲＮＡ二重鎖のアンチセンス鎖に相補的な領域の中央において起こり得る（非特許文献１１）。より詳細には、長鎖ｄｓＲＮＡが、ＩＩＩ型ＲＮＡｓｅ（ＤＩＣＥＲ、ＤＲＯＳＨＡなど、非特許文献１２及び非特許文献１３を参照のこと）により低分子（１７−２９ｂｐ）ｄｓＲＮＡフラグメント（低分子阻害（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ）ＲＮＡ又は「ｓｉＲＮＡ」とも呼ばれる）へと消化される。ＲＩＳＣタンパク質複合体は、これらのフラグメント及び相補ｍＲＮＡを認識する。プロセス全体は、標的ｍＲＮＡのエンドヌクレアーゼ切断で終わりとなる（非特許文献１４；非特許文献１５）。これらの用語及び提案された機構に関するさらなる情報については、例えば非特許文献１６；非特許文献１７及び特許文献１６を参照のこと。
【０００９】
研究により、ｓｉＲＮＡがインビボでヒトを含む哺乳動物において有効であり得るということが分かった。具体的には、Ｂｉｔｋｏらは、呼吸器多核体ウイルス（ＲＳＶ）ヌクレオカプシドＮ遺伝子に対して特定のｓｉＲＮＡが、鼻腔内投与された場合にマウスの処置において有効であるということを示した（非特許文献１８）。ｓｉＲＮＡの治療への応用の総説については、例えばＢａｒｉｋ（非特許文献１９）及びＣｈａｋｒａｂｏｒｔｙ（非特許文献２０）を参照のこと。さらに、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）を処置するためのＶＥＧＦ受容体１（ＶＥＧＦＲ１）を標的にした短いｓｉＲＮＡを用いた臨床研究が、ヒト患者において行われた（非特許文献２１）。治療剤としてのｓｉＲＮＡの使用に関するさらなる情報は、非特許文献２２；非特許文献２３；非特許文献２４において見られる。
【００１０】
化学修飾されたｓｉＲＮＡ
公知の遺伝子に対応するｓｉＲＮＡの選択及び合成は広く報告されている；（例えば非特許文献２５；非特許文献２６；非特許文献２７；非特許文献２８；非特許文献２９を参照のこと）。
【００１１】
修飾されたｓｉＲＮＡの使用、及び製造の例は、非特許文献３０；非特許文献３１；特許文献１７（ａｔｕｇｅｎ  ＡＧ）及び特許文献１８（Ｔｕｓｃｈｌら）において見られる。特許文献１９及び特許文献２０は、化学修飾されたオリゴマーを教示する。特許文献２１は、交互の（ａｌｔｅｒｎａｔｉｎｇ）未修飾リボヌクレオチド及び２’糖修飾リボヌクレオチドを有するオリゴマー化合物に関する。特許文献２２は、化学修飾されたヌクレオシド間連結を有するｄｓＲＮＡ化合物を記載する。
【００１２】
５’−ホスフェート部分を含めることにより、ショウジョウバエ胚においてｓｉＲＮＡの活性が増強されるということが示されており（非特許文献３２）、そして５’−ホスフェート部分を含めることは、ヒトＨｅＬａ細胞においてｓｉＲＮＡ機能のために必要である（非特許文献３３）。
【００１３】
Ａｍａｒｚｇｕｏｕｉら（非特許文献３４）は、ｓｉＲＮＡ活性が２’−Ｏ−メチル修飾の位置に依存することを示した。Ｈｏｌｅｎら（非特許文献３５）は、少数の２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオシドを有するｓｉＲＮＡが野生型と比較して良好な活性を示すが、その活性は２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオシドの数が増えるにつれて減少するということを報告する。Ｃｈｉｕ及びＲａｎａ（非特許文献３６）は、２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオシドをセンス鎖又はアンチセンス鎖に組み込むこと（完全に修飾された鎖）により、未修飾ｓｉＲＮＡと比較してｓｉＲＮＡ活性が大幅に減少するということを教示する。２’−Ｏ−メチル基をアンチセンス鎖上の５’−末端に配置することは、活性を大幅に制限すると報告されているが、アンチセンスの３’−末端において及びセンス鎖の両方の末端に配置することは許容される（非特許文献３７）。
【００１４】
本発明譲受人に譲渡された特許文献２３及び特許文献２４（参照によりそれらの全体が本明細書に加入される）は、化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物の製造において有用なモチーフを開示する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】米国特許第6,455,674号
【特許文献２】米国特許第6,555,667号
【特許文献３】米国特許第6,740,738号
【特許文献４】PCT特許出願第PCT/US2005/029236号
【特許文献５】PCT特許出願第PCT/US2007/001468号
【特許文献６】PCT特許出願第PCT/US2008/002483号
【特許文献７】PCT公開第ＷＯ2007/141796号
【特許文献８】ＷＯ2001/070979
【特許文献９】US 2003108871
【特許文献１０】US 2002119463
【特許文献１１】ＷＯ2004/018999
【特許文献１２】EP 1394274
【特許文献１３】ＷＯ2002/101075
【特許文献１４】ＷＯ2003/010205
【特許文献１５】ＷＯ2002/046465
【特許文献１６】PCT公開第WO01/36646号
【特許文献１７】PCT公開第ＷＯ2004/015107号
【特許文献１８】PCT公開第ＷＯ02/44321号
【特許文献１９】米国特許第5,898,031号
【特許文献２０】米国特許第6,107,094号
【特許文献２１】米国特許第7,452,987号
【特許文献２２】米国特許公開第2005/0042647号
【特許文献２３】PCT特許出願第PCT/IL2008/000248号
【特許文献２４】PCT特許出願第PCT/IL2008/001197号
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Shoshani, et al．Mol．Cel．Biol., Apr．2002, p．2283−2293
【非特許文献２】Brafman, et al． Invest Ophthalmol Vis Sci．2004．45(10):3796−805
【非特許文献３】Ellisen, et al． Molecular Cell, 2002．10:995−1005
【非特許文献４】Richard et al．J Biol．Chem．2000, 275(35)：26765−71
【非特許文献５】Gil et al., Apoptosis, 2000．5:107−114
【非特許文献６】Elbashir et al．Nature 2001, 411:494−498
【非特許文献７】Caplen et al．PNAS 2001, 98:9742−9747
【非特許文献８】Fire et al, Nature 1998, 391:806
【非特許文献９】Ambros V．Nature 2004, 431:350−355
【非特許文献１０】Bartel DP．Cell．2004 116(2):281−97
【非特許文献１１】Elbashir, et al.,Genes Dev., 2001, 15:188
【非特許文献１２】Bernstein et al., Nature, 2001, 409:363−6
【非特許文献１３】Lee et al., Nature, 2003, 425:415−9
【非特許文献１４】McManus and Sharp, Nature RevGenet, 2002, 3:737−47
【非特許文献１５】Paddison and Hannon, Curr Opin Mol Ther．2003, 5(3)：217−24
【非特許文献１６】Bernstein, et al., RNA．2001, 7(11):1509−21
【非特許文献１７】Nishikura, Cell．2001, 107(4):415−8
【非特許文献１８】Bitko, et al., Nat．Med．2005, 11(1):50−55
【非特許文献１９】Barik, Mol．Med 2005, 83：764−773
【非特許文献２０】Chakraborty,Current Drug Targets 2007 8(3):469−82
【非特許文献２１】Kaiser, Am J Ophthalmol．2006 142(4):660−8
【非特許文献２２】Durcan, 2008．Mol．Pharma．5(4):559−566
【非特許文献２３】Kim and Rossi, 2008．BioTechniques 44:613−616
【非特許文献２４】Grimm and Kay, 2007, JCI, 117(12):3633−41
【非特許文献２５】Ui−Tei et al., 2006．J Biomed Biotechnol．2006:65052
【非特許文献２６】Chalk et al., 2004．BBRC．319(1)：264−74
【非特許文献２７】Sioud ＆ Leirdal, 2004．Met．Mol Biol．252:457−69
【非特許文献２８】Levenkova et al., 2004, Bioinform．20(3):430−2
【非特許文献２９】Ui−Tei et al., 2004．NAR 32(3):936−48
【非特許文献３０】Braasch et al., 2003．Biochem., 42(26):7967−75
【非特許文献３１】Chiu et al., 2003, RNA, 9(9):1034−48
【非特許文献３２】Boutla, et al., 2001, Curr．Biol． 11:1776−1780
【非特許文献３３】Schwarz et al., 2002, Mol．Cell, 10:537−548
【非特許文献３４】Amarzguoui, et al., 2003, NAR, 31(2):589−595
【非特許文献３５】Holen et al, 2003, NAR, 31(9):2401−2407
【非特許文献３６】Chiu and Rana, 2003, RNA, 9:1034−1048
【非特許文献３７】Czauderna et al., 2003, NAR, 31(11), 2705−2716
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
あらゆるタイプの呼吸器障害（肺の障害を含む）、眼の疾患及び状態、難聴（聴覚損失を含む）、微小血管障害、神経変性疾患及び障害、脊髄損傷、血管新生関連状態及びアポトーシス関連状態は、世界中の何百万という人々に影響を及ぼしている。これらの疾患及び障害に罹患しているか又はこれらの疾患及び障害に感受性の被験体の処置において有用な新しい薬物及び新しい薬物標的を同定する必要性が存在する。
【００１８】
ＲＴＰ８０１遺伝子を阻害し、そして上述の疾患及び障害の処置において有用な、安定でかつ活性なｓｉＲＮＡ化合物は大きな治療的価値があるだろう。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
発明の要旨
本発明は、一局面において、ＲＴＰ８０１標的遺伝子の発現を阻害又は軽減する、新規な二本鎖の化学修飾されたオリゴヌクレオチドを提供する。本オリゴヌクレオチドは、微小血管障害、眼の疾患及び状態（例えば黄斑変性）、難聴（聴覚損失を含む）、呼吸器障害（肺の障害を含む）、神経変性障害、脊髄損傷、血管新生関連状態及びアポトーシス関連状態に罹患した被験体を処置するための医薬組成物の製造において有用である。
【００２０】
一局面において、本発明は新規なｓｉＲＮＡ分子を提供し、これはＲＴＰ８０１遺伝子を阻害し、そして種々の疾患及び適応症を処置するために使用することができる。
【００２１】
従って、一局面において、本発明は、以下の構造：
５’          （Ｎ）x−Ｚ        ３’      （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）y−ｚ’’  ５’      （センス鎖）
［ここで、Ｎ及びＮ’はそれぞれ、未修飾でも修飾されていてもよいリボヌクレオチド、又は非通常部分であり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は独立して、それが存在する鎖の３’末端において共有結合で結合された１〜５個の連続したヌクレオチドであり；
ｚ’’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、（Ｎ’）ｙの５’末端において共有結合で結合されたキャッピング部分であり；
ｘ及びｙはそれぞれ独立して１８と４０との間の整数であり；
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘの配列に対して実質的に相補的であり；
そして（Ｎ）ｘは、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡに対して実質的に相補的であるアンチセンスを含む］
を有するｓｉＲＮＡ化合物を提供する。
【００２２】
いくつかの実施態様において、本化合物はホスホジエステル結合を含む。好ましい実施態様において、（Ｎ）ｘは、修飾されたリボヌクレオチド及び未修飾リボヌクレオチドを含み、修飾されたリボヌクレオチドは各々その糖上に２’−Ｏ−メチルを有し、ここで（Ｎ）ｘの３’末端におけるＮは、修飾されたリボヌクレオチドであり、（Ｎ）ｘは、３’末端で始まる少なくとも５つの交互の（ａｌｔｅｒｎａｔｉｎｇ）修飾されたリボヌクレオチドを含み、そして全体で少なくとも９つの修飾されたリボヌクレオチドを含み、そして残りの各Ｎは未修飾リボヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙは、少なくとも１つのミラーヌクレオチド、又は２’−５’ヌクレオチド間ホスフェート結合により隣接するヌクレオチドに結合されたヌクレオチドを含む。
【００２３】
さらなる実施態様において、（Ｎ）ｘは、５’末端及び３’末端における各Ｎがそれらの糖残基において修飾されている交互の（ａｌｔｅｒｎａｔｉｎｇ）位置に修飾されたリボヌクレオチドを含み、かつ中央のリボヌクレオチド（例えば１９量体鎖における１０番目の位置のリボヌクレオチド）は未修飾である。
【００２４】
全ての構造について、いくつかの実施態様において、各々の連続したＮ又はＮ’を結合する共有結合は、ホスホジエステル結合である。種々の実施態様において、全ての共有結合はホスホジエステル結合である。
【００２５】
種々の実施態様において、ｘ＝ｙであり、そしてｘ及びｙはそれぞれ１９、２０、２１、２２又は２３である。いくつかの実施態様において、ｘ＝ｙ＝２１である。他の実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９である。
【００２６】
上記構造の一実施態様において、本化合物は、（Ｎ’）ｙの一方の末端又は両方の末端に少なくとも１つのミラーヌクレオチドを含む。種々の実施態様において、本化合物は、（Ｎ’）ｙにおいて２つの連続したミラーヌクレオチドを含み、１つは３’末端から二番目の位置にあり、そして１つは３’末端にある。１つの好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９であり、かつ（Ｎ’）ｙはＬ−デオキシリボヌクレオチドを１８番目の位置に含む。
【００２７】
いくつかの実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−リボヌクレオチド及びＬ−デオキシリボヌクレオチドから選択される。種々の実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−デオキシリボヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、ｙ＝１９であり、かつ（Ｎ’）ｙは、１〜１７及び１９番目の位置の未修飾リボヌクレオチド並びに３’末端から二番目の位置（１８番目の位置）のＬ−ＤＮＡからなる。他の実施態様において、ｙ＝１９であり、かつ（Ｎ’）ｙは、１〜１６及び１９番目の位置の未修飾リボヌクレオチド、並びに３’末端から二番目の位置における２つの連続した（１７及び１８番目の位置）Ｌ−ＤＮＡからなる。
【００２８】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘ及びその対応するセンス鎖（Ｎ’）ｙは、表Ａ〜Ｈに示され配列番号３〜３５５６で示されるオリゴヌクレオチド対のいずれか１つより選択される。特定の実施態様において、（Ｎ）ｘのヌクレオチド配列は、配列番号１６及び配列番号１１７５のいずれか１つで示される。
【００２９】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘにおいてリボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり（ａｌｔｅｒｎａｔｅ）、（Ｎ）ｘの中央に位置するリボヌクレオチドは未修飾である。
【００３０】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘは、３’末端で始まる少なくとも５つの交互の未修飾リボヌクレオチド及び２’Ｏメチル糖修飾リボヌクレオチドを含み、かつ全体で少なくとも９つの２’Ｏメチル糖修飾リボヌクレオチドを含み、そして残りの各Ｎは未修飾リボヌクレオチドである。
【００３１】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘにおいて５’末端における１〜５つの連続したＮは２’Ｏメチル糖修飾リボヌクレオチドであり、残りのＮは未修飾リボヌクレオチドである。
【００３２】
上記構造の別の実施態様において、（Ｎ’）ｙはさらに、１つ又は両方の末端に追加の（ｅｘｔｒａ）架橋で修飾された糖部分を含む１つ又はそれ以上のヌクレオチドを含む。本明細書において二環式ヌクレオチドとも呼ばれるこのようなヌクレオチドの非限定的な例は、ロックト核酸（ＬＮＡ）及びエチレン架橋核酸（ＥＮＡ）である。
【００３３】
上記構造の別の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、１つ又は両方の末端において２’−５’ホスホジエステル結合により隣のヌクレオチドに共に結合された少なくとも２つの連続したヌクレオチドを含む。特定の好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙにおいて３’末端から二番目のヌクレオチドは、２’−５’ホスホジエステル架橋で３’末端ヌクレオチドと連結されている。
【００３４】
特定の好ましい実施態様において、本発明の化合物は、平滑末端の（ｚ’’、Ｚ及びＺ’が存在しない）、二本鎖オリゴヌクレオチド構造で、ｘ＝ｙかつｘ＝１９又は２３であり、ここで（Ｎ’）ｙは、未修飾リボヌクレオチド［ここで３’末端における３つの連続したヌクレオチドは２つの２’−５’ホスホジエステル結合により共に結合される］；並びに交互の未修飾リボヌクレオチド及び２’−Ｏメチル糖修飾リボヌクレオチドのアンチセンス鎖（ＡＳ）を含む。
【００３５】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘも（Ｎ’）ｙも３’末端及び５’末端においてリン酸化されていない。他の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙのいずれか又は両方が３’末端においてリン酸化されている。
【００３６】
特定の実施態様において、上述の構造全てについて、化合物は平滑末端であり、例えばＺ及びＺ’の両方が存在しない。代替の実施態様において、本化合物は、少なくとも１つの３’オーバーハング及び又は（Ｎ’）ｙの５’末端において５’キャッピング部分を含み、ここでＺ又はＺ’又はｚ’’の少なくとも１つが存在する。Ｚ、Ｚ’及びｚ’’は独立して、１つ又はそれ以上の共有結合で連結された、修飾ヌクレオチド又は未修飾ヌクレオチドであり、例えば逆方向ｄＴ又はｄＡ；ｄＴ、ＬＮＡ、ミラーヌクレオチドなどである。いくつかの実施態様において、Ｚ及びＺ’はそれぞれ独立して、ｄＴ及びｄＴｄＴより選択される。特定の具体的な実施態様において、Ｚ及びＺ’は存在せず、ｚ’’は存在し、そして逆位（ｉｎｖｅｒｔｅｄ）デオキシ脱塩基（ｄｅｏｘｙａｂａｓｉｃ）部分からなる。
【００３７】
いくつかの実施態様において、ｓｉＲＮＡセンスオリゴヌクレオチド及びアンチセンスオリゴヌクレオチドは、表Ａ〜Ｈのいずれか１つに列挙され、配列番号３〜３５５６のいずれか１つに示される、センスオリゴヌクレオチド及び対応するアンチセンスオリゴヌクレオチドより選択される。
【００３８】
第二の局面において、本発明は、標的遺伝子発現を阻害するために有効な量の本発明の１つ又はそれ以上の化合物、及び薬学的に許容しうる担体を含む医薬組成物を提供し、ここで標的遺伝子はＲＴＰ８０１である。
【００３９】
別の局面において、本発明は、ＲＴＰ８０１の発現に関連する疾患若しくは障害、又はそれら疾患若しくは障害に関連する症状若しくは状態の処置を必要とする被験体の処置のための方法に関し、この方法は、この被験体にＲＴＰ８０１の発現を減少させるか又は阻害する量のｓｉＲＮＡを投与することを含む。好ましい実施態様において、ｓｉＲＮＡ化合物は、本発明の実施態様にしたがって化学修飾されている。
【００４０】
いくつかの実施態様において、本発明は、とりわけ、微小血管障害、眼の疾患及び状態、難聴（聴覚損失を含む）、呼吸器（肺を含む）障害、神経変性疾患又は障害、脊髄損傷、血管新生関連状態及びアポトーシス関連状態に罹患している被験体を処置する方法を提供し、この方法は、少なくとも１つのＲＴＰ８０１阻害剤を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む。
【００４１】
一実施態様において、呼吸器障害は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。従って、本発明は、ＣＯＰＤに罹患している被験体を処置する方法であって、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する、治療有効量の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物をこの被験体に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、呼吸器障害に罹患している被験体における回復の促進において有効である。
【００４２】
別の実施態様において、眼の障害は黄斑変性である。従って、本発明は、黄斑変性に罹患している被験体を処置する方法であって、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する、治療有効量の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物をこの被験体に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、黄斑変性に罹患している被験体における回復の促進において有効である。一実施態様において、黄斑変性は加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）である。
【００４３】
別の実施態様において、本発明は、微小血管障害に罹患している被験体を処置する方法であって、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する、治療有効量の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物をこの被験体に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、微小血管障害に罹患している被験体における回復の促進において有効である。一実施態様において、微小血管障害は糖尿病性網膜症である。
【００４４】
別の実施態様において、本発明は、難聴に罹患している被験体を処置する方法であって、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する、治療有効量の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物をこの被験体に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、難聴に罹患している被験体における回復の促進において有効である。一実施態様において、難聴は聴覚損失である。
【００４５】
さらなる実施態様において、本発明は、脊髄損傷に罹患している被験体を処置する方法であって、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する、治療有効量の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物をこの被験体に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、脊髄損傷に罹患している被験体における回復の促進において有効である。
【００４６】
さらなる実施態様において、本発明は、神経変性疾患又は障害に罹患している被験体を処置する方法であって、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する、治療有効量の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物をこの被験体に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、神経変性疾患又は障害に罹患している被験体において診断の時点で存在するレベルでの認知機能の安定化において有効である。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、神経変性疾患又は障害に罹患している被験体において診断の時点で存在するレベルでの運動機能の安定化において有効である。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、神経変性疾患又は障害に罹患している被験体における回復の促進において有効である。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、神経変性疾患又は障害に罹患している被験体において神経変性疾患又は障害の進行を遅らせることにおいて有効である。
【００４７】
さらなる実施態様において、本発明は、血管新生関連状態に罹患している被験体を処置する方法であって、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する、治療有効量の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物をこの被験体に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、血管新生関連状態に罹患している被験体における回復の促進において有効である。
【００４８】
さらなる実施態様において、本発明は、アポトーシス関連状態に罹患している被験体を処置する方法であって、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する、治療有効量の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物をこの被験体に投与することを含む方法を提供する。特定の実施態様において、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子によるＲＴＰ８０１遺伝子の阻害は、アポトーシス関連状態に罹患している被験体における回復の促進において有効である。
【００４９】
本発明は、有利な特性を有し、そしてＲＮＡ干渉の機構によりＲＴＰ８０１遺伝子の発現を下方調節するために、いずれかの標的配列、特にＲＴＰ８０１遺伝子のｍＲＮＡ配列に対してｓｉＲＮＡに適用可能である、二本鎖の化学修飾されたオリゴヌクレオチドの新規な構造を提供する。本発明はまた、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子を含む医薬組成物、及び治療への応用においてそれらを使用する方法を提供する。
【００５０】
本発明は、公知の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を明示的に除外する。
【００５１】
記載されるであろう好ましい方法、材料、及び実施例は、説明のためのみのものであり、限定することを意図されない；本明細書に記載される材料及び方法と類似又は等価である材料及び方法は、本発明の実施又は試験において使用され得る。本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明、及び特許請求の範囲から明らかとなるだろう。
【００５２】
発明の詳細な説明
本発明は、その実施態様のいくつかにおいて、化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物、少なくとも１つの本発明の化合物を含む医薬組成物、並びにとりわけ眼疾患、呼吸器障害、神経変性障害、脊髄損傷、難聴及び微小血管障害に関連する症状及び徴候の緩和又は軽減のための方法を提供する。
【００５３】
理論に拘束されないが、本発明の発明者らは、ＲＴＰ８０１が種々の疾患状態及び障害に関与することを見いだしており、これら疾患状態及び障害としては、微小血管障害、眼疾患、神経変性疾患及び障害、呼吸器障害、難聴、血管新生関連状態及びアポトーシス関連状態並びに脊髄の損傷及び疾患が挙げられるが限定されず、そして上述の疾患及び障害のいずれかを処置するためにＲＴＰ８０１を阻害することは有益だろう。ＲＴＰ８０１を阻害する方法、ｓｉＲＮＡ分子及び組成物は、本明細書において詳細に考察されており、そして上記分子及び／又は組成物のいずれも、上記状態に罹患しているか又は上記状態に感受性である被験体の処置において有利に使用され得る。
【００５４】
従って、特定の局面において、本発明は、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現のインビボでの阻害において有用な、化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物及びそれを含む医薬組成物を提供する。
【００５５】
別の局面において、本発明は、微小血管障害、眼の疾患又は障害、難聴（聴覚損失を含む）、呼吸器（肺を含む）障害、神経変性疾患又は障害、脊髄損傷、血管新生関連状態及びアポトーシス関連状態に罹患しているか又は感受性の被験体を処置する方法を提供し、この方法は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡに標的化されてそれにハイブリダイズする本発明の少なくとも１つの化学修飾された低分子干渉ＲＮＡ（すなわちｓｉＲＮＡ）を含む医薬組成物を、ＲＮＡ干渉機構によりＲＴＰ８０１遺伝子の発現を下方調節するために十分な量で、被験体に投与することを含む。
【００５６】
特定の実施態様において、主題の化合物は、呼吸器障害、微小血管障害又は眼障害の処置のためにＲＴＰ８０１遺伝子の発現の阻害において有用である。処置される特定の疾患及び状態は、ＡＲＤＳ；ＣＯＰＤ；ＡＬＩ；気腫；糖尿病性ニューロパチー、ネフロパシー及び網膜症；ＤＭＥ及び他の糖尿病性状態；緑内障；ＡＭＤ；ＢＭＴ網膜症；脳卒中を含む虚血性状態；ＯＩＳ；パーキンソン病、アルツハイマー病、ＡＬＳのような神経変性障害；腎障害：ＡＲＦ、ＤＧＦ、移植拒絶反応；聴覚障害（ｈｅａｒｉｎｇ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）；脊髄損傷；口腔粘膜炎；ドライアイ症候群及び褥瘡である。
【００５７】
種々の実施態様において、本発明は、微小血管障害、眼疾患又は呼吸器障害に罹患している被験体を処置する方法を提供し、この方法は、それにより被験体を処置するために治療的に有効な量で、少なくとも１つの本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む。
【００５８】
種々の実施態様において、本方法は、治療有効用量の、ＲＴＰ８０１遺伝子を標的とする本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子を含む医薬組成物を、それにより患者を処置するための投薬量及び期間で被験体に投与することを含む。
【００５９】
本発明はさらに、微小血管障害、眼疾患、神経変性疾患、脊髄損傷、難聴又は呼吸器障害に罹患している被験体を処置する方法を提供し、この方法は、本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子を含む医薬組成物を、被験体の回復を促進するために十分な投薬量及び期間で被験体に投与することを含む。眼疾患としては、とりわけ加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）のような黄斑変性が挙げられる。微小血管障害としては、とりわけ糖尿病性網膜症及び急性腎不全が挙げられる。呼吸器障害としては、とりわけ慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気腫、慢性気管支炎、喘息及び肺癌が挙げられる。神経変性障害としては、とりわけアルツハイマー病、パーキンソン病、ＡＬＳが挙げられる。種々の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、表Ａ〜Ｈのいずれか１つに示され、配列番号３〜３５５６のいずれか１つで示される、センスオリゴヌクレオチド及び対応するオリゴヌクレオチドから選択される、センスオリゴヌクレオチド及びアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。
【００６０】
従って、本発明はさらに、黄斑変性に罹患しているか又は黄斑変性に対して感受性の被験体を処置する方法を提供し、この方法は、治療有効量の本発明の少なくとも１つの化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物を被験体に投与することを含み、ここでこの化学修飾されたｓｉＲＮＡは、それにより患者を処置するように、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を減弱する。種々の実施態様において、少なくとも１つのｓｉＲＮＡは、表Ａ〜Ｈに示される配列（配列番号３〜３５５６）のいずれか１つと同一の配列を有する連続したヌクレオチドを含む。
【００６１】
本発明はさらに、ＣＯＰＤに罹患しているか又はＣＯＰＤに感受性の被験体を処置する方法を提供し、この方法は、治療有効量の少なくとも１つの本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物を被験体に投与することを含み、ここで化学修飾されたｓｉＲＮＡはそれにより患者を処置するようにＲＴＰ８０１遺伝子の発現を減弱する。種々の実施態様において、少なくとも１つのｓｉＲＮＡセンス鎖及びアンチセンス鎖は、表Ａ〜Ｈにおける配列番号３〜３５５６で示されるシーケンサー（ｓｅｑｕｅｎｃｅｒｓ）のいずれか１つから（ｆｏｒｍ）選択される。
【００６２】
本発明はさらに、糖尿病性網膜症に罹患しているか又は糖尿病性網膜症に感受性の被験体を処置する方法を提供し、この方法は、治療有効量の少なくとも１つの本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物を被験体に投与することを含み、ここで化学修飾されたｓｉＲＮＡはそれにより患者を処置するようにＲＴＰ８０１遺伝子の発現を減弱する。種々の実施態様において、少なくとも１つのｓｉＲＮＡセンス鎖及びアンチセンス鎖は、表Ａ〜Ｈにおける配列番号３〜３５５６で示されるシーケンサー（ｓｅｑｕｅｎｃｅｒｓ）のいずれか１つから（ｆｏｒｍ）選択される。
【００６３】
種々の実施態様において、神経変性障害は、運動失調のような運動の問題を引き起こす神経変性状態；並びに記憶に影響を及ぼし認知症に関連する状態から選択される。種々の実施態様において、神経変性障害は、パーキンソン病、ＡＬＳ（ルー・ゲーリック病）、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、ハンチントン病及び他のいずれかの疾患に誘発される認知症（例えばＨＩＶ関連認知症）から選択される。
【００６４】
さらなる実施態様において、本発明は、新規な化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物、それらを含む医薬組成物、及び虚血性状態又は低酸素性状態から生じる神経障害に関連する症状及び徴候の緩和又は軽減のための方法を提供する。このような状態の非限定的な例は、高血圧、高血圧性脳血管疾患、血栓又は塞栓の場合に発生する血管の狭窄又は閉塞、血管腫、血液疾患（ｂｌｏｏｄ  ｄｙｓｃｒａｓｉａｓ）、心停止又は心不全を含む心機能不全のあらゆる形態、全身性低血圧である。一実施態様において、神経障害は脳卒中である。別の実施態様において、神経障害はてんかんである。
【００６５】
好ましいｓｉＲＮＡ化合物のリストが表Ａ〜Ｈに提供される。１９量体、２１量体及び２３量体のｓｉＲＮＡの別々のリストは、ヒト遺伝子発現を標的とするための最良の配列として専用のアルゴリズムに従うそれらのスコアに基づいて優先順位を決められる。標的遺伝子を阻害する方法、分子及び組成物は、本明細書において詳細に考察され、そして上記分子及び／又は組成物のいずれも上記状態のいずれかに罹患している患者の処置において有利に使用される。表Ａ、Ｂ、Ｄ及びＨは１９量体オリゴマーを示す。表Ｃ及びＥは２１量体オリゴマーを示す。表Ｆ及びＧは２３量体オリゴマーを示す。
【００６６】
定義
便宜上、明細書、実施例及び特許請求の範囲において使用される特定の用語をここで記載する。
【００６７】
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、そうでないという内容が明確に指示されていなければ、複数形を含むということに留意されるべきである。
【００６８】
本発明の局面又は実施態様がマーカッシュ群又は他の代替のグループ分け（ｇｒｏｕｐｉｎｇ）の表現で記載される場合、当業者は、本発明が、群のいずれかの個々の構成要素又は構成要素の部分群の表現で、それらによっても記載されるということを認識するだろう。
【００６９】
「阻害剤」は、遺伝子の発現又はこのような遺伝子の産物の活性を、所望の生物学的又は生理学的な効果を達成するために十分な程度まで減少させる（部分的又は完全に）ことができる化合物である。本明細書で使用される用語「阻害剤」は、ｓｉＲＮＡ阻害剤を指す。
【００７０】
「ｓｉＲＮＡ阻害剤」は、遺伝子の発現又はこのような遺伝子の産物の活性を、所望の生物学的又は生理学的な効果を達成するために十分な程度まで減少させることができる化合物である。本明細書で使用される用語「ｓｉＲＮＡ阻害剤」は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、合成ｓｈＲＮＡ；ｍｉＲＮＡのうちの１つ又はそれ以上を指す。阻害は、下方調節と呼ばれてもよく、ＲＮＡｉについてはサイレンシングと呼ばれてもよい。
【００７１】
本明細書で使用される用語「阻害する」は、遺伝子の発現又はこのような遺伝子の産物の活性を、所望の生物学的又は生理学的な効果を達成するために十分な程度まで減少させることを指す。阻害は、完全又は部分的のいずれかである。
【００７２】
本明細書で使用される標的遺伝子の「阻害」という用語は、遺伝子発現（転写又は翻訳）又は標的遺伝子のポリペプチド活性の阻害を意味し、ここで標的遺伝子はＲＴＰ８０１又はその変異体である。標的ｍＲＮＡ配列のポリヌクレオチド配列、又はｍＲＮＡ配列を有する標的遺伝子は、ＲＴＰ８０１のｍＲＮＡに対して、少なくとも７０％の同一性、より好ましくは８０％同一性、なおより好ましくは９０％又は９５％の同一性を有するｍＲＮＡ配列又はそのあらゆる相同な配列を指す。従って、本明細書に記載される変異、変更又は修飾を受けたＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡから誘導されたポリヌクレオチド配列は、本発明に包含される。用語「ｍＲＮＡポリヌクレオチド配列」、「ｍＲＮＡ配列」及び「ｍＲＮＡ」は交換可能に使用される。
【００７３】
本明細書で使用される用語「ポリヌクレオチド」及び「核酸」は交換可能に使用され得、そしてデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、及びリボ核酸（ＲＮＡ）を含むヌクレオチド配列を指す。これらの用語は、ヌクレオチド類似体から作製されたＲＮＡ又はＤＮＡのいずれかの類似体を、等価物として含むことが理解されるべきである。本出願全体を通して、ｍＲＮＡ配列は対応する遺伝子を表すように記載される。
【００７４】
「オリゴヌクレオチド」又は「オリゴマー」は、約２〜約５０のヌクレオチドのデオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド配列を指す。ＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオチドはそれぞれ独立して天然でも合成でもよく、修飾されていても未修飾でもよい。修飾には、オリゴヌクレオチド中の糖部分、塩基部分、及び又はヌクレオチド間連結に対する変化が含まれる。本発明の化合物は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾されたデオキシリボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド及びそれらの組み合わせを含む分子を包含する。
【００７５】
実質的に相補的とは、別の配列に対して約８４％より高い相補性を指す。例えば１９の塩基対からなる二重鎖領域において、１つのミスマッチは９４．７％の相補性となり、２つのミスマッチは約８９．５％の相補性となり、そして３つのミスマッチは約８４．２％の相補性となり、二重鎖領域を実質的に相補的にする。従って、実質的に同一は、別の配列に対して約８４％より高い同一性を指す。
【００７６】
「ヌクレオチド」は、天然でも合成でもよく、かつ又は修飾されていても未修飾でもよい、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドを包含するように意図される。修飾には、オリゴリボヌクレオチド中の糖部分、塩基部分及び又はリボヌクレオチド間の連結に対する変化が含まれる。本明細書で使用される用語「リボヌクレオチド」は、天然及び合成の、未修飾及び修飾されたリボヌクレオチドを包含する。修飾には、オリゴヌクレオチド中の糖部分、塩基部分及び／又はリボヌクレオチド間の連結に対する変化が含まれる。
【００７７】
ヌクレオチドは、天然に存在する塩基又は合成的に修飾された塩基から選択され得る。天然に存在する塩基としては、アデニン、グアニン、シトシン、チミン及びウラシルが挙げられる。ヌクレオチドの修飾された塩基としては、イノシン，  キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチル、２−プロピル及び他のアルキルアデニン類、５−ハロウラシル、５−ハロシトシン、６−アザシトシン及び６−アザチミン、プソイド（ｐｓｅｕｄｏ）ウラシル、４−チオウラシル（ｔｈｉｕｒａｃｉｌ）、８−ハロアデニン、８−アミノアデニン、８−チオールアデニン、８−チオールアルキルアデニン類、８−ヒドロキシルアデニン及び他の８−置換アデニン類、８−ハログアニン類、８−アミノグアニン、８−チオールグアニン、８−チオアルキルグアニン類、８−ヒドロキシルグアニン及び他の置換グアニン類、他のアザアデニン及びデアザアデニン類、他のアザグアニン及びデアザグアニン類、５−トリフルオロメチルウラシル及び５−トリフルオロシトシンが挙げられる。いくつかの実施態様において、オリゴマー中の１つ又はそれ以上のヌクレオチドがイノシンで置換される。
【００７８】
いくつかの実施例によれば、本発明は、未修飾ヌクレオチド及び修飾されたヌクレオチド並びに又は非通常（ｕｎｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ）部分を含む、阻害性オリゴヌクレオチド化合物を提供する。本化合物は、糖修飾、塩基修飾及びヌクレオチド間連結修飾からなる群より選択される少なくとも１つの修飾されたヌクレオチドを含み、そしてＤＮＡ、及びＬＮＡ（ロックト核酸）、ＥＮＡ（エチレン架橋核酸）、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、アラビノシド、ホスホノカルボキシレートヌクレオチド若しくはホスフィノカルボキシレートヌクレオチド（ＰＡＣＥ  ヌクレオチド）、ミラーヌクレオチド、又は６炭素糖を有するヌクレオチドのような修飾されたヌクレオチドを含み得る。
【００７９】
ヌクレオチド／オリゴヌクレオチドの全ての類似体又はヌクレオチド／オリゴヌクレオチドに対する全ての修飾は、上記類似体又は修飾がヌクレオチド／オリゴヌクレオチドの機能に実質的に不利な影響を及ぼさないという条件で、本発明とともに使用される。許容しうる修飾としては、糖部分の修飾、塩基部分の修飾、ヌクレオチド間連結における修飾及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【００８０】
糖修飾としては、糖残基の２’部分上の修飾が挙げられ、これは、とりわけ欧州特許ＥＰ  ０  ５８６  ５２０  Ｂ１又はＥＰ  ０  ６１８  ９２５  Ｂ１に記載されるような、アミノ、フルオロ、アルコキシ、例えばメトキシ、アルキル、アミノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、ＣＮ、ＣＦ、イミダゾール、カルボキシレート、チオエート、Ｃ1〜Ｃ10低級アルキル、置換低級アルキル、アルカアリール若しくはアラルキル、ＯＣＦ3、ＯＣＮ、Ｏ−、Ｓ−、若しくはＮ−アルキル；Ｏ−、Ｓ、若しくはＮ−アルケニル；ＳＯＣＨ3；ＳＯ2ＣＨ3；ＯＮＯ2；ＮＯ2、Ｎ3；ヘテロシクロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｚｙｃｌｏａｌｋｙｌ）；ヘテロシクロアルカアリール（ｈｅｔｅｒｏｚｙｃｌｏａｌｋａｒｙｌ）；アミノアルキルアミノ；ポリアルキルアミノ又は置換シリルを含む。
【００８１】
一実施態様において、ｓｉＲＮＡ化合物は、糖部分上の２’修飾（「２’糖修飾」）を含む少なくとも１つのリボヌクレオチドを含む。特定の実施態様において、本化合物は、２’Ｏ−アルキル又は２’−フルオロ又は２’Ｏ−アリル又はあらゆる他の２’修飾を、場合により交互の（ａｌｔｅｒｎａｔｅ）位置に含む。他の安定化する修飾もまた可能である（例えば末端修飾）。いくつかの実施態様において、好ましい２’Ｏ−アルキルは２’Ｏ−メチル（メトキシ）糖修飾である。
【００８２】
いくつかの実施態様において、オリゴヌクレオチドの骨格が修飾され、そしてホスフェート−Ｄ−リボース実体を含むが、チオホスフェート−Ｄ−リボース実体、トリエステル、チオエート、２’−５’架橋された骨格（５’−２’とも呼ばれる）、ＰＡＣＥなども含み得る。
【００８３】
本明細書で使用される用語「非対合ヌクレオチド類似体」は、塩基対合しない部分を含むヌクレオチド類似体を意味し、これらとしては：６デスアミノアデノシン（ネブラリン）、４−Ｍｅ−インドール、３−ニトロピロール、５−ニトロインドール、Ｄｓ、Ｐａ、Ｎ３−ＭｅリボＵ、Ｎ３−ＭｅリボＴ、Ｎ３−ＭｅｄＣ、Ｎ３−Ｍｅ−ｄＴ、Ｎ１−Ｍｅ−ｄＧ、Ｎ１−Ｍｅ−ｄＡ、Ｎ３−エチル−ｄＣ、Ｎ３−ＭｅｄＣが挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施態様において、塩基対合しないヌクレオチド類似体はリボヌクレオチドである。他の実施態様において、これはデオキシリボヌクレオチドである。さらに、１つ又はそれ以上のヌクレオチドの構造が根本的に変更されており、そして治療用又は実験用の試薬としてよりよく適しているポリヌクレオチド類似体が製造され得る。ヌクレオチド類似体の例は、ＤＮＡ（又はＲＮＡ）におけるデオキシリボース（又はリボース）ホスフェート骨格が、ペプチド中に見られるものと類似したポリアミド骨格と置き換えられているペプチド核酸（ＰＮＡ）である。ＰＮＡ類似体は、酵素分解に対して耐性であること、そしてインビボ及びインビトロで増強された安定性を有していることが示されている。オリゴヌクレオチドに対してなされ得る他の修飾としては、ポリマー骨格、環状骨格、非環状骨格、チオホスフェート−Ｄ−リボース骨格、トリエステル骨格、チオエート骨格、２’−５’架橋骨格、人工核酸、モルホリノ核酸、グリコール核酸（ＧＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、アラビノシド、及びミラーヌクレオシド（例えば、ベータ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドの代わりにベータ−Ｌ−デオキシリボヌクレオシド）が挙げられる。ＬＮＡヌクレオチドを含むｓｉＲＮＡ化合物の例はＥｌｍｅｎら（ＮＡＲ  ２００５、３３（１）：４３９−４４７）に開示される。
【００８４】
本発明の化合物は、１つ又はそれ以上の逆位（ｉｎｖｅｒｔｅｄ）ヌクレオチド、例えば逆位チミジン又は逆位アデニンを使用して合成することができる（例えばＴａｋｅｉ、ｅｔ  ａｌ．、２００２、ＪＢＣ  ２７７（２６）：２３８００−０６を参照のこと）。
【００８５】
他の修飾としては、オリゴヌクレオチドの５’及び／又は３’部分での末端修飾が挙げられ、これはキャッピング部分としても知られる。このような末端修飾は、ヌクレオチド、修飾されたヌクレオチド、脂質、ペプチド、糖及び逆位脱塩基部分から選択される。
【００８６】
本発明において「脱塩基ヌクレオチド」又は「脱塩基ヌクレオチド類似体」と呼ばれることもあるものは、より正確には、プソイド−ヌクレオチド又は非通常部分と呼ばれる。ヌクレオチドは核酸の単量体単位であり、リボース又はデオキシリボース糖、ホスフェート、及び塩基（ＤＮＡではアデニン、グアニン、チミン、又はシトシン；ＲＮＡではアデニン、グアニン、ウラシル、又はシトシン）からなる。修飾されたヌクレオチドは、糖、ホスフェート及び又は塩基の１つ又はそれ以上において修飾を含む。脱塩基プソイド−ヌクレオチドは塩基を欠いており、従って厳密にはヌクレオチドではない。
【００８７】
本明細書で使用される用語「キャッピング部分」は、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、２’Ｏアルキル修飾を含む修飾脱塩基リボース及び脱塩基デオキシリボース部分；逆位脱塩基リボース及び脱塩基デオキシリボース部分及びそれらの修飾；Ｃ６−イミノ−Ｐｉ；Ｌ−ＤＮＡ及びＬ−ＲＮＡを含むミラーヌクレオチド；５’Ｏ−Ｍｅヌクレオチド；及び４’，５’−メチレンヌクレオチドを含むヌクレオチド類似体；１−（β−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド；４’−チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド；５’−アミノ−アルキルホスフェート；１，３−ジアミノ−２−プロピルホスフェート、３−アミノプロピルホスフェート；６−アミノヘキシルホスフェート；１２−アミノドデシルホスフェート；ヒドロキシプロピルホスフェート；１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド；アルファ−ヌクレオチド；スレオ−ペントフラノシルヌクレオチド；非環状３’，４’−セコヌクレオチド；３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド；３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、５’−５’−逆位脱塩基部分；１，４−ブタンジオールホスフェート；５’−アミノ；及び架橋及び非架橋メチルホスホネート及び５’−メルカプト部分が挙げられる。
【００８８】
特定の好ましいキャッピング部分は、脱塩基リボース又は脱塩基デオキシリボース部分；逆位脱塩基リボース又は脱塩基デオキシリボース部分；Ｃ６−アミノ−Ｐｉ；Ｌ−ＤＮＡ及びＬ−ＲＮＡを含むミラーヌクレオチドである。
【００８９】
本明細書で使用される用語「非通常（ｕｎｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ）部分」は、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、デオキシリボヌクレオチド、修飾されたデオキシリボヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、塩基対合しないヌクレオチド類似体及び隣接するヌクレオチドに２’−５’ヌクレオチド間ホスフェート結合により結合されたヌクレオチド；ＬＮＡ及びエチレン架橋核酸を含む架橋核酸を指す。
【００９０】
脱塩基デオキシリボース部分としては、例えば脱塩基デオキシリボース−３’−ホスフェート；１，２−ジデオキシ−Ｄ−リボフラノース−３−ホスフェート；１，４−アンヒドロ−２−デオキシ−Ｄ−リビトール−３−ホスフェートが挙げられる。逆位脱塩基デオキシリボース部分としては、逆位デオキシリボ脱塩基；３’，５’逆位デオキシ脱塩基５’−ホスフェートが挙げられる。
【００９１】
「ミラー」ヌクレオチドは、天然に存在するか又は一般に使用されるヌクレオチドと逆のキラリティを有するヌクレオチド、すなわち天然に存在する（Ｄ−ヌクレオチド）の鏡像（Ｌ−ヌクレオチド）であり、ミラーリボヌクレオチドの場合にはＬ−ＲＮＡ、そして「ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ」とも呼ばれる。ヌクレオチドは、リボヌクレオチドでもデオキシリボヌクレオチドでもよく、そして少なくとも１つの糖、塩基及び又は骨格修飾をさらに含み得る（ｍｙ）。米国特許第６，５８６，２３８号を参照のこと。また、米国特許第６，６０２，８５８号は、少なくとも１つのＬ−ヌクレオチド置換を含む核酸触媒を開示する。ミラーヌクレオチドとしては、例えばＬ−ＤＮＡ（Ｌ−デオキシリボアデノシン−３’−ホスフェート（ミラーｄＡ）；Ｌ−デオキシリボシチジン−３’−ホスフェート（ミラーｄＣ）；Ｌ−デオキシリボグアノシン−３’−ホスフェート（ミラーｄＧ）；Ｌ−デオキシリボチミジン−３’−ホスフェート（鏡像ｄＴ））及びＬ−ＲＮＡ  （Ｌ−リボアデノシン−３’−ホスフェート（ミラーｒＡ）；Ｌ−リボシチジン−３’−ホスフェート（ミラーｒＣ）；Ｌ−リボグアノシン−３’−ホスフェート（ミラーｒＧ）；Ｌ−リボウラシル−３’−ホスフェート（ミラーｄＵ）が挙げられる。
【００９２】
修飾されたデオキシリボヌクレオチドとしては、例えば５’末端位置（位置番号１）におけるヌクレオチドとして有用であり得る５’ＯＭｅ  ＤＮＡ（５−メチル−デオキシリボグアノシン−３’−ホスフェート）；ＰＡＣＥ（デオキシリボアデニン３’ホスホノアセテート、デオキシリボシチジン３’ホスホノアセテート、デオキシリボグアノシン３’ホスホノアセテート、デオキシリボチミジン３’ホスホノアセテートが挙げられる。
【００９３】
架橋された核酸としては、ＬＮＡ（２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレン架橋核酸アデノシン３’モノホスフェート、２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレン架橋核酸５−メチル−シチジン３’モノホスフェート、２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレン架橋核酸グアノシン３’モノホスフェート、５−メチル−ウリジン（又はチミジン）３’モノホスフェート）；及びＥＮＡ（２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン架橋核酸アデノシン３’モノホスフェート、２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン架橋核酸５−メチル−シチジン３’モノホスフェート、２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン架橋核酸グアノシン３’モノホスフェート、５−メチル−ウリジン（又はチミジン）３’モノホスフェート）が挙げられる。
【００９４】
本発明のいくつかの実施態様において、好ましい非通常部分は、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、デオキシリボヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、及び２’−５’ヌクレオチド間ホスフェート結合により隣接するヌクレオチドに結合されたヌクレオチドである。
【００９５】
本発明の一局面によれば、本発明は、未修飾ヌクレオチド及び修飾されたヌクレオチドを含む阻害性オリゴヌクレオチド化合物を提供する。本化合物は、糖修飾、塩基修飾及びヌクレオチド間連結修飾からなる群より選択される少なくとも１つの修飾されたヌクレオチドを含み、そしてＤＮＡ、及びＬＮＡ（ロックト核酸）（ＥＮＡ（エチレン−架橋核酸を含む）；ＰＮＡ（ペプチド核酸）；アラビノシド；ＰＡＣＥ（ホスホノアセテート及びその誘導体）、ミラーヌクレオチド、又は六炭素糖を有するヌクレオチドのような修飾されたヌクレオチドを含み得る。
【００９６】
「ＲＴＰ８０１遺伝子」は、配列番号１で示されるＲＴＰ８０１コード配列のオープンリーディングフレーム、又は好ましくは少なくとも７０％の同一性、より好ましくは８０％の同一性、なおより好ましくは９０％若しくは９５％の同一性を有するその任意の相同配列を指す。これには、本明細書に記載される変異、変更又は修飾を受けた、配列番号１から誘導されるあらゆる配列が包含される。従って、好ましい実施態様において、ＲＴＰ８０１は、配列番号１に従う核酸配列によりコードされる。本発明の核酸が、好ましくは最初のストレッチ（ｓｔｒｅｔｃｈ）及び最初の鎖が典型的には本発明の核酸より短いというように、ＲＴＰ８０１をコードする核酸の一部に対して、それぞれ相補的及び同一であるだけであるということも本発明内である。また当然のことながら、ＲＴＰ８０１のアミノ酸配列に基づいて、そのようなアミノ酸配列をコードするいずれかの核酸配列を、当業者は遺伝暗号にもとづいて理解することができる。しかし、本発明の核酸の作用の仮定された様式に起因して、ＲＴＰ８０１をコードする核酸、好ましくはそのｍＲＮＡは、それぞれＲＴＰ８０１の発現を減少しようとする生物、組織及び／又は細胞に存在しているものであることが最も好ましい。
【００９７】
「ＲＴＰ８０１ポリペプチド」は、ＲＴＰ８０１遺伝子のポリペプチドを指し、そして本発明の目的のために、いずれかの生物、好ましくはヒト由来の、用語「ＲＴＰ７７９」、「ＲＥＤＤ１」、「ＤＤＩＴ４」、「ＦＬＪ２０５００」、「Ｄｉｇ２」、及び「ＰＲＦ１」、生物学的活性を保持しているそれらのスプライスバリアント及びそれらのフラグメント、並びにそれらに対して好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、なおより好ましくは少なくとも９０％又は９５％の相同性を有する相同体を含むことが理解される。さらに、この用語は、ＲＴＰ８０１コード配列における少数の変更、例えばとりわけ、結果としてのポリペプチドと天然に存在するＲＴＰ８０１との間で少数のアミノ酸の相違を生じ得る点変異、置換、欠失及び挿入から結果として得られるポリペプチドを包含すること理解される。ＲＴＰ８０１は、好ましくは配列番号２で示されるアミノ酸配列を有するか又は含む。当然のことながら、生物の種々の組織間で、及び１つの種の異なる生物間で、又は本発明の種々の実施態様において本発明の核酸が適用され得る異なる種間で、アミノ酸配列中に相違点が存在し得る。しかし、本明細書中に提供される技術的教示に基づいて、それぞれの配列を、本発明に従う核酸のいずれかを設計する場合に適宜考慮することができる。ＲＴＰ８０１の特定のフラグメントとしては、配列番号２に示される配列のアミノ酸１〜５０、５１〜１００、１０１〜１５０、１５１〜２００及び２０１〜２３２が挙げられる。ＲＴＰ８０１のさらなる特定のフラグメントとしては、配列番号２に示される配列のアミノ酸２５〜７４、７５〜１２４、１２５〜１７４、１７５〜２２４及び２２５〜２３２が挙げられる。
【００９８】
本明細書で使用されるＲＴＰ８０１は、特にＷＯ９９／０９０４６において記載される。ＲＴＰ８０１は、Ｓｈｏｓｈａｎｉ  ＴらによりＨＩＦ−１αの転写標的としても記載されていた（Ｓｈｏｓｈａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．、２００２、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、２２、２２８３−９３）。さらに、Ｅｌｌｉｓｅｎら（Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ、２００２．１０、９９５−１００５）は、ｐ５３依存性ＤＮＡ損傷応答遺伝子、及び上皮分化に関与するｐ６３依存性遺伝子とＲＴＰ８０１を同定した。また、ＲＴＰ８０１発現は、ｐ５３ファミリーメンバーｐ６３の組織特異的パターンを反映し、ＴＰ６３と類似して又はＴＰ６３に加えて有効であり、そして反応性酸素種の調節に関与する。それとは別に、ＲＴＰ８０１は、低酸素応答性転写因子である低酸素誘導因子１（ＨＩＦ−１）に応答性であり、そして典型的には、インビトロと虚血性脳卒中の動物モデルにおいてインビボの両方で、低酸素の間に上方調節される。ＲＴＰ８０１は、反応性酸素種（ＲＯＳ）の調節において機能すると思われる。ＲＯＳレベル及び酸化的ストレスに対する減少した感受性は、両方ともＲＴＰ８０１遺伝子の異所性発現後に増加する（Ｅｌｌｉｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．２００２、ｓｕｐｒａ；Ｓｈｏｓｈａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．２００２、前出）。好ましくは、ＲＴＰ８０１の産物は、好ましくは本明細書上記の特徴の少なくとも１つ、好ましく２つ又はそれ以上、そして最も好ましくはこれらの特徴のそれぞれ及びいずれかを示す生物学的に活性なＲＴＰ８０１タンパク質である。
【００９９】
本発明は、治療特性を有する新規な化学修飾されたオリゴヌクレオチド構造及びオリゴリボヌクレオチド構造に関する。特に、本発明は、化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を開示する。本発明のｓｉＲＮＡは、以下の利点の１つ又はそれ以上を有する新規な構造及び新規な修飾を有する：増加した活性又は減少した毒性又は減少したオフターゲット効果又は減少した免疫応答又は増加した安定性；本発明のｓｉＲＮＡの新規な修飾は、ＲＴＰ８０１遺伝子発現の防止又は減弱において有用な二本鎖ＲＮＡに有利に適用される。本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、糖修飾、塩基修飾、及びヌクレオチド間連結修飾からなる群より選択される少なくとも１つの修飾されたヌクレオチドを含む。
【０１００】
本発明はまた、ＲＴＰ８０１の発現を下方調節する化合物、特に新規な低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、及び種々の疾患及び病状の処置におけるこれら新規なｓｉＲＮＡの使用に関する。処置される特定の疾患及び状態としては、限定されないが、聴覚損失、急性腎不全（ＡＲＦ）、緑内障、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病性ネフロパシー及び他の微小血管障害、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）及び他の急性の肺及び呼吸器の損傷及び疾患（例えば慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））、肺移植後の虚血−再潅流障害、肺、肝臓、心臓、骨髄、膵臓、角膜及び腎臓の移植を含む臓器移植、脊髄損傷、褥瘡、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、ドライアイ症候群、神経変性障害、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病及びＡＬＳ、口腔粘膜炎が挙げられる。他の適応症としては、化学物質誘導腎毒性及び化学物質誘導神経毒性、例えばシスプラチン及びシスプラチン様化合物、アミノグリコシド類、ループ利尿薬、並びにヒドロキノン及びそれらの類似体により誘導される毒性が挙げられる。
【０１０１】
本発明において使用されるｓｉＲＮＡの製造において有用なセンスオリゴヌクレオチド及びアンチセンスオリゴヌクレオチドのリストを表Ａ〜Ｈに示し、これらは配列番号３〜３５５６を列挙する。２１量体又は２３量体のｓｉＲＮＡ配列はまた、本明細書に開示される１９量体配列の５’及び／又は３’伸長により生成することができる。このような伸長は、好ましくは対応するｍＲＮＡ配列に対して相補的である。
【０１０２】
ＲＴＰ８０１を阻害する、方法、化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子及びこれらの化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を含む医薬組成物は、本明細書において詳細に考察され、そして上記分子及び／又は組成物はいずれも、上記の状態のいずれかに罹患している被験体の処置において有利に使用される。
【０１０３】
本発明の発明者らは、異なるが関連している遺伝子、ＲＴＰ８０１Ｌ（「ＲＥＤＤ２」とも呼ばれる）を発見した。ＲＴＰ８０１ＬはＲＴＰ８０１に対して相同であり、そして酸化的ストレスに対して同様の様式で反応し；従って、ＲＴＰ８０１ＬはおそらくＲＴＰ８０１と類似したいくつかの機能を有する。
【０１０４】
理論に拘束されないが、ストレス誘導性の（低酸素、酸化的ストレス、熱ストレス、ＥＲストレスに反応する）タンパク質であるＲＴＰ８０１は、エネルギー不均衡（ｍｉｓｂａｌａｎｃｅ）に対する細胞応答の微調整において作用する因子である。そのようなものとして、これは、ストレス性の状態（例えば正常細胞の死を伴う疾患）に起因するアポトーシスから細胞を救出するべき場合、又はＲＴＰ８０１発現における変化に起因するストレス性状態に適応された細胞（例えば癌細胞）が殺傷されるべき場合のあらゆる疾患の処置に適した標的である。後者の場合、ＲＴＰ８０１は癌細胞に関する生存因子として見られ、そしてその阻害剤は単剤療法として又は化学療法若しくは放射線療法と組み合わせた感作薬として癌を処置し得る。
【０１０５】
「呼吸器障害におけるＲＴＰ８０１の生物学的効果」又は「呼吸器障害におけるＲＴＰ８０１の生物学的活性」は、呼吸器障害に罹患しているか又は呼吸器障害に冒されている被験体の処置におけるＲＴＰ８０１の効果を意味し、これは直接的でも間接的でもよく、そして理論に拘束されないが、低酸素又は過酸素状態により誘導される肺胞のアポトーシスに対するＲＴＰ８０１の効果が含まれる。間接的効果としては、限定されないが、アポトーシスを生じるシグナル伝達カスケードに関与するいくつかの分子の１つへのＲＴＰ８０１の結合、又はその分子に対する効果をＲＴＰ８０１が有することが挙げられる。
【０１０６】
「アポトーシス」は、いくつかの細胞メカニズムの活性化の結果生じる生理学的な種類の細胞死、すなわち細胞の機構により制御される死を指す。アポトーシスは、例えば外部トリガー（例えば、サイトカイン又は抗ＦＡＳ抗体）による細胞機構の活性化の結果（これが細胞死をもたらす）でも、内部シグナルによるものでもよい。用語「プログラム細胞死」はまた、「アポトーシス」と同義的に使用され得る。
【０１０７】
「アポトーシス関連疾患」又は「アポトーシス関連状態」は、その病因が、アポトーシスのプロセスに全体的に又は部分的に関連する疾患を指す。この疾患は、アポトーシスプロセスの機能不全により引き起こされても（例えば癌又は自己免疫疾患において）、又はアポトーシスプロセスの過剰な活性により引き起こされてもよい（例えば特定の神経変性疾患において）。ＲＴＰ８０１が関与する多くの疾患は、アポトーシス関連疾患である。例えば、アポトーシスは、萎縮型ＡＭＤの重要な機構であり、それにより光受容体及び色素上皮細胞のゆっくりとした萎縮が、主に網膜の中央（黄斑）領域で起こる。神経網膜アポトーシスはまた、糖尿病性網膜症における重要な機構である。
【０１０８】
「血管新生」は、それにより生存細胞、組織又は生物が新しい血管を形成するプロセスを指す。血管新生は、種々の状態の病因において中心的役割を果たす基本的な生物学的プロセスであり、そして癌、糖尿病性網膜症、及び黄斑変性のような疾患における死亡率及び罹患率の主要原因である（Ｆｏｌｋｍａｎ、１９９０、ＪＮＣＩ  ８２：４−６）。
【０１０９】
「血管新生関連状態」は、血管新生により、又は血管新生の増加／減少により、または（ｏｆ）その欠損により影響を受けると認識された病状又は疾患状態のいずれか１つを指し、これには将来血管新生と関連し得る状態が含まれる。このよううな状態の例としては、癌、網膜症、虚血、黄斑変性、角膜疾患、緑内障、糖尿病性網膜症、脳卒中、虚血性心疾患、潰瘍、強皮症（ｓｃｌｅｒａｄｏｍａ）、心筋梗塞、心筋血管新生、プラーク新生血管形成、虚血性四肢血管新生、狭心症、不安定狭心症、冠硬化症、閉塞性動脈硬化症、ベルジェ病、動脈塞栓、動脈血栓症、脳血管閉塞、脳梗塞、脳血栓症、脳塞栓症、炎症、糖尿病性新生血管形成、創傷治癒及び消化性潰瘍が挙げられる。
【０１１０】
「ＲＴＰ８０１阻害剤」は、ＲＴＰ８０１遺伝子又はＲＴＰ８０１遺伝子産物、特にヒトＲＴＰ８０１遺伝子又は遺伝子産物の活性を阻害することができるｓｉＲＮＡ化合物である。このような阻害剤は、ＲＴＰ８０１遺伝子の転写又は翻訳に影響を与える。いくつかの実施態様において、ＲＴＰ８０１阻害剤はＲＴＰ８０１プロモーターのｓｉＲＮＡ阻害剤である。ＲＴＰ８０１遺伝子の特異的な化学修飾されたｓｉＲＮＡ阻害剤が本明細書以下に示される。
【０１１１】
低酸素は、脳卒中、気腫及び梗塞のような極めて多くの疾患の病理機序における鍵となる要素として認識されており、準最適な（ｓｕｂ−ｏｐｔｉｍｕｍ）酸素利用率及び低酸素状態に対する組織損傷応答と関連する。成長の速い組織（腫瘍を含む）において、準最適な酸素利用率は、望ましくない血管新生により補われる。従って、少なくとも癌疾患の場合において、血管の成長は望ましくない。
【０１１２】
従って本発明の別の目的は、それぞれ血管の望ましくない成長及び血管新生を伴う疾患の処置のための組成物及び方法を提供することである。
【０１１３】
本発明は、インビボでＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害するための方法及び組成物を提供する。一般に、本方法は、オリゴリボヌクレオチド、特にＲＴＰ８０１遺伝子から転写されるｍＲＮＡを標的とする低分子干渉ＲＮＡ（すなわちｓｉＲＮＡ）を、ＲＮＡ干渉機構によりＲＴＰ８０１遺伝子の発現を下方調節するために十分な量で投与することを含む。特に、本方法は、疾患の処置のためにＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害するために使用することができる。本発明によれば、本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、種々の病理を処置するための薬物として使用される。特に、本方法は、本明細書において開示される疾患又は障害又は状態の処置のために発現を阻害するために使用することができる。
【０１１４】
本発明は、配列番号１に示されるポリヌクレオチド配列を有するｍＲＮＡに転写されるＲＴＰ８０１遺伝子の発現を下方調節する、化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物、及び１つ又はそれ以上のこのようなｓｉＲＮＡ化合物を含む医薬組成物を提供する。
【０１１５】
本発明のｓｉＲＮＡは、センス鎖がＲＴＰ８０１遺伝子のｍＲＮＡポリヌクレオチド配列の１８〜４０個の連続したヌクレオチドセグメントに実質的に相補的であり、そしてアンチセンス鎖がセンス鎖に実質的に相補的である、二重鎖オリゴリボヌクレオチドである。一般に、標的ｍＲＮＡ配列からのいくらかのずれ（ｄｅｖｉａｔｉｏｎ）は、ｓｉＲＮＡ活性を妥協することなく許容される（例えばＣｚａｕｄｅｒｎａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２００３、３１（１１）：２７０５−２７１６を参照のこと）。本発明のｓｉＲＮＡは、ｍＲＮＡを破壊して又は破壊することなく、転写後のレベルでＲＴＰ８０１遺伝子発現を阻害する。理論に拘束されないが、ｓｉＲＮＡは、ｍＲＮＡを特異的切断及び分解の標的とし、かつ／又は標的化されたメッセージからの翻訳を阻害する。
【０１１６】
いくつかの実施態様において、ｓｉＲＮＡは１つ又は両方の末端において平滑である。より具体的には、いくつかの実施態様において、ｓｉＲＮＡ  は、第一の鎖の５’末端及び第二の鎖の３’末端により規定される末端において、又は第一の鎖の３’末端及び第二の鎖の５’末端により規定される末端において平滑末端である。
【０１１７】
他の実施態様において、２本の鎖の少なくとも１つは、５’末端に少なくとも１つのヌクレオチドのオーバーハングを有し；このオーバーハングは、少なくとも１つのデオキシリボヌクレオチドを含む。これらの鎖の少なくとも１つはまた、場合により３’末端に少なくとも１つのヌクレオチドのオーバーハングを有する。このオーバーハングは、約１〜約５個のヌクレオチドからなる。
【０１１８】
ＲＮＡ二重鎖の長さは、約１８〜約４０リボヌクレオチド、好ましくは１９〜２３リボヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、各鎖（オリゴマー）の長さは、約１８〜約４０個の塩基、好ましくは１８〜２３個の塩基、そしてより好ましくは１９、２０又は２１個のリボヌクレオチドからなる群より独立して選択される。
【０１１９】
さらに、特定の好ましい実施態様において、上記第一の鎖と標的核酸との間の相補性は完全である。いくつかの実施態様において、これらの鎖は実質的に相補的であり、すなわち上記第一の鎖と標的核酸との間に１つ、２つ又は３つまでのミスマッチを有する。
【０１２０】
いくつかの実施態様において、ｓｉＲＮＡの第一の鎖の５’末端は、第二の鎖の３’末端に連結されているか、又は第一の鎖の３’末端が第二の鎖の５’末端に連結されており、この連結は、典型的に３〜１００ヌクレオチド、好ましくは約３〜約１０ヌクレオチドの長さを有する核酸リンカーを介する。
【０１２１】
本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、増加した活性、増加した安定性、減少した毒性、減少したオフターゲット効果、及び／又は減少した免疫応答の１つ又はそれ以上を付与する構造及び修飾を有する。本発明のｓｉＲＮＡ構造は、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現の防止又は減弱において有用な二本鎖ＲＮＡに有利に適用される。
【０１２２】
本発明はまた、種々の疾患及び病状の処置における化学修飾されたｓｉＲＮＡの使用に関する。処置される特定の疾患及び状態は、ＡＲＤＳ；ＣＯＰＤ；ＡＬＩ；気腫；糖尿病性ニューロパシー、ネフロパシー及び網膜症；ＤＭＥ及び他の糖尿病性状態；緑内障；ＡＭＤ；ＢＭＴ網膜症；脳卒中を含む虚血性状態；ＯＩＳ；パーキンソン病、アルツハイマー病、ＡＬＳのような神経変性障害；腎障害：ＡＲＦ、ＤＧＦ、移植拒絶；聴覚障害；脊髄損傷；口腔粘膜炎；ドライアイ症候群及び褥瘡である。本発明で使用されるｓｉＲＮＡのリストは、表Ａ〜Ｈに提供される。表Ａ、Ｂ、Ｄ及びＨは１９量体オリゴマーを示す。表Ｃ及びＥは２１量体オリゴマーを示す。表Ｆ及びＧは２３量体オリゴマーを示す。２１又は２３量体ｓｉＲＮＡ配列はまた、本明細書に開示される１９量体配列の５’及び／又は３’伸長によっても生成され得る。このような伸長は、好ましくは対応するｍＲＮＡ配列に対して相補的である。
【０１２３】
表Ａ〜Ｃは、配列番号３〜３４４で示され、ＷＯ２００６／０２３５４４として公開されたＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２９２３６号において本発明の譲受人により開示された、オリゴヌクレオチド対を含む。
【０１２４】
ＲＴＰ８０１遺伝子を阻害する、本発明の方法、分子及び組成物は、本明細書で詳細に考察され、そして上記分子及び／又は組成物はいずれも、上記の状態の１つ又はそれ以上に罹患している被験体の処置において有利に使用される。
【０１２５】
本発明の局面又は実施態様がマーカッシュ群又は他の代替のグループ分けの表現で記載される場合、当業者は、本発明が、群のいずれかの個々の構成要素又は構成要素の部分群の表現で、それらによっても記載されるということを認識するだろう。
【０１２６】
ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチド
表Ａ〜Ｈは、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物の製造において有用な、センスオリゴヌクレオチド及び対応するアンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸配列を提供する。本発明にしたがうｓｉＲＮＡの製造において有用な、アンチセンスオリゴヌクレオチド及び対応するセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号３〜３５５６で示される。本明細書全体を通して、ヌクレオチドの位置は、１〜１９又は１〜２１又は１〜２３と番号を付けられ、そしてアンチセンスオリゴヌクレオチド又はセンスオリゴヌクレオチドの５’末端から数えられる。例えば、（Ｎ）ｘ上の位置１は、アンチセンスオリゴヌクレオチド鎖上の５’末端ヌクレオチドを指し、そして（Ｎ’）ｙ上の位置１は、センスオリゴヌクレオチド鎖上の５’末端ヌクレオチドを指す。
【０１２７】
本発明によれば、ｓｉＲＮＡ化合物は、構造（Ａ）〜（Ｐ）で示される以下の修飾の１つにしたがって、又はタンデムｓｉＲＮＡ若しくはＲＮＡｓｔａｒとして、化学的又は構造的に修飾される。
【０１２８】
一局面において、本発明は、構造（Ａ）：
（Ａ）    ５’          （Ｎ）x−Ｚ      ３’    （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）y        ５’    （センス鎖）
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド及び修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）x及び（Ｎ’）yはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
ｘ及びｙはそれぞれ独立して１８と４０との間の整数であり；
Ｚ及びＺ’はそれぞれ、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、それが存在する鎖の３’末端において共有結合で結合された１〜５個の連続したヌクレオチドであり；
（Ｎ’）yの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そしてここで（Ｎ）xの配列は、表Ｄ〜Ｈのいずれか１つに開示されるアンチセンス配列に対して実質的に同一なアンチセンス配列を含む］
として示される化合物を提供する。
【０１２９】
特定の実施態様において、本発明は、構造（Ｂ）：
（Ｂ）    ５’          （Ｎ）ｘ−Ｚ      ３’    アンチセンス鎖
３’    Ｚ−’（Ｎ’）ｙ        ５’    センス鎖
［ここで（Ｎ）x及び（Ｎ’）yはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が、共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合された未修飾リボヌクレオチド又は修飾されたリボヌクレオチドであるオリゴマーであり；
ｘ及びｙはそれぞれ１９、２１又は２３であり、そして（Ｎ）x及び（Ｎ’）yは完全に相補的であり、
Ｚ及びＺ’はそれぞれ、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、それが存在する鎖の３’末端において共有結合で結合された１〜５個の連続したヌクレオチドであり；
（Ｎ）x及び（Ｎ’）yのそれぞれにおいて、交互のリボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
（Ｎ’）yの配列は、（Ｎ）ｘと実質的に相補的な配列であり；そして
（Ｎ）xの配列は、表Ｄ〜Ｈのいずれか１つに開示されるアンチセンス配列と実質的に同一であるアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。
【０１３０】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）x及び（Ｎ’）yはそれぞれ独立して、３’末端及び５’末端においてリン酸化されているか又はリン酸化されていない。
【０１３１】
ｘ及びｙがそれぞれ１９又は２３である、特定の実施態様において、（Ｎ）xの５’末端及び３’末端における各Ｎは修飾されており；そして（Ｎ’）yの５’末端及び３’末端における各Ｎ’は未修飾である。
【０１３２】
ｘ及びｙがそれぞれ２１である、特定の実施態様において、（Ｎ）xの５’末端及び３’末端における各Ｎは未修飾であり；そして（Ｎ’）yの５’末端及び３’末端における各Ｎ’は修飾されている。
【０１３３】
特定の実施態様において、ｘ及びｙは１９であり、そしてｓｉＲＮＡは、２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチド（２’−ＯＭｅ）がアンチセンス鎖（Ｎ）xの１番目、３番目、５番目、７番目、９番目、１１番目、１３番目、１５番目、１７番目及び１９番目の位置に存在し、かつ２’−ＯＭｅ糖修飾リボヌクレオチドがセンス鎖（Ｎ’）yの２番目、４番目、６番目、８番目、１０番目、１２番目、１４番目、１６番目及び１８番目の位置に存在するように修飾される。
【０１３４】
いくつかの実施態様において、本発明は、構造（Ｃ）：
（Ｃ）    ５’            （Ｎ）ｘ−Ｚ      ３’    アンチセンス鎖
３’      Ｚ’−（Ｎ’）ｙ        ５’    センス鎖
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド及び修飾されたデオキシリボヌクレオチドから独立して選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したヌクレオチドが共有結合により隣のヌクレオチドに結合され、そしてｘ及びｙがそれぞれ１８と４０との間の整数であるオリゴマーであり；
（Ｎ）ｘにおいて、ヌクレオチドは未修飾であるか、又は（Ｎ）ｘは交互である修飾されたリボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとを含み；各々の修飾されたリボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルをその糖上に有するように修飾されており、そして（Ｎ）ｘの中央の位置に位置するリボヌクレオチドは修飾されているか又は未修飾であり、好ましくは未修飾であり；
（Ｎ’）ｙは、未修飾リボヌクレオチドを含み、末端又は末端から二番目の位置において１つの修飾されたヌクレオチドをさらに含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、ミラーヌクレオチド、二環式ヌクレオチド、２’−糖修飾ヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結から選択されるヌクレオチド間連結により隣接するヌクレオチドに結合されるヌクレオチドからなる群より選択され；
（Ｎ’）ｙにおいて１つより多くのヌクレオチドが修飾される場合、修飾されたヌクレオチドは連続していてもよく；
Ｚ及びＺ’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、それが結合しているいずれかのオリゴマーの３’末端において共有結合で結合された１〜５つのデオキシリボヌクレオチドであり；
（Ｎ’）yの配列は、（Ｎ）ｘに実質的に相補的な配列を含み；そしてここで（Ｎ）xの配列は、配列番号１で示される、ＲＴＰ８０１遺伝子のｍＲＮＡ中の約１８〜約４０個の連続したリボヌクレオチドに実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）xは、表Ａ〜Ｈのいずれか１つにおいて示されるアンチセンス配列に実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０１３５】
特定の実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９であり、そして（Ｎ）ｘにおいて、各々の修飾されたリボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルをその糖上に有するように修飾され、そして（Ｎ）ｘの中央に位置するリボヌクレオチドは未修飾である。従って、ｘ＝１９である化合物において、（Ｎ）ｘは、１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置において２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドを含む。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば５番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、８、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば６番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１５番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１４番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを１、２、３、７、９、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば５番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを１、２、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば６番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを１、２、３、５、７、９、１１、１３、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１５番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを１、２、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１４番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、７、９、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば５番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを１、２、４、６、７、９、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば５番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１４、１６、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１５位に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを１、２、３、５、７、９、１１、１３、１４、１６、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１５番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば７番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’Ｏ−Ｍｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば８番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば９位に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１０番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１１番目の位置に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１２位に含み得る。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’Ｏ−Ｍｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１５、１７及び１９番目の位置に含み、そしてさらに、少なくとも１つの脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を例えば１３番目の位置に含み得る。
【０１３６】
さらに他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡと比較して少なくとも１つのヌクレオチドミスマッチを含む。特定の好ましい実施態様において、（Ｎ）ｘは、単一ヌクレオチドミスマッチを５、６、又は１４番目の位置に含む。構造（Ｃ）の一実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端及び３’末端のいずれか又は両方における少なくとも２つのヌクレオチドは、２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。特定の好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３であり；（Ｎ）ｘにおいて、ヌクレオチドは、修飾されたリボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、各々の修飾されたリボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルをその糖上に有するように修飾され、そして（Ｎ）ｘの中央に位置するリボヌクレオチドは未修飾であり；そして（Ｎ’）ｙの３’末端における３つのヌクレオチドは、２つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合される（本明細書において構造Ｉとして示される）。他の好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３であり；（Ｎ）ｘにおいて、ヌクレオチドは、修飾されたリボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、各々修飾されたリボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルをその糖上に有するように修飾されており、そして（Ｎ）ｘの中央に位置するリボヌクレオチドは未修飾であり；そして（Ｎ’）ｙの５’末端における４つの連続したヌクレオチドは、３つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。さらなる実施態様において、（Ｎ）ｙの中央位置に位置するさらなるヌクレオチドはその糖上で２’−Ｏ−メチルで修飾されていてもよい。別の好ましい実施態様において、（Ｎ）ｘにおいて、ヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル修飾リボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、そして（Ｎ’）ｙにおいて、５’末端における４つの連続したヌクレオチドは、３つの２’−５’ホスホジエステル結合で結合され、そして５’末端ヌクレオチド又は５’末端における２つ若しくは３つの連続したヌクレオチドは、３’−Ｏ−メチル修飾を含む。
【０１３７】
構造Ｃの特定の好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９であり、そして（Ｎ’）ｙにおいて、少なくとも１つの位置は脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を含み、好ましくは５つの位置が脱塩基又は逆位脱塩基非通常部分を含む。種々の実施態様において、以下の位置は、脱塩基又は逆位脱塩基を含む：１番目及び１６〜１９番目の位置、１５〜１９番目の位置、１〜２番目及び１７〜１９番目の位置、１〜３番目及び１８〜１９番目の位置、１〜４番目及び１９番目の位置並びに１〜５番目の位置。（Ｎ’）ｙはさらに、少なくとも１つのＬＮＡヌクレオチドを含み得る。
【０１３８】
構造Ｃの特定の好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９であり、そして（Ｎ’）ｙにおいて、少なくとも１つの位置におけるヌクレオチドは、ミラーヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、及び隣接するヌクレオチドに２’−５’ヌクレオチド間結合で結合されるヌクレオチドを含む。
【０１３９】
構造Ｃの特定の好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９であり、そして（Ｎ’）ｙはミラーヌクレオチドを含む。種々の実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−ＤＮＡヌクレオチドである。特定の実施態様において、Ｌ−ＤＮＡはＬ−デオキシリボシチジンである。いくつかの実施態様において、（Ｎ’）ｙはＬ−ＤＮＡを１８番目の位置に含む。他の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、Ｌ−ＤＮＡを１７及び１８番目の位置に含む。特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、Ｌ−ＤＮＡ置換を２番目の位置並びに１７及び１８番目の位置のうちの１つ又は両方に含む。特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙはさらに、５’−Ｏ−メチルＤＮＡのような５’末端キャップヌクレオチド、又はオーバーハングとして脱塩基又は逆位脱塩基部分を含む。
【０１４０】
さらに他の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、ＤＮＡを１５番目の位置に含み、そしてＬ−ＤＮＡを１７及び１８番目の位置のうち１つ又は両方に含む。その構造において、２番目の位置はさらに、Ｌ−ＤＮＡ又は脱塩基非通常部分を含み得る。
【０１４１】
ｘ＝ｙ＝２１である構造Ｃの他の実施態様が想定され、これらの実施態様において、上で考察された（Ｎ’）ｙに対する修飾は、１５、１６、１７、１８番目の位置の代わりに、２１量体については１７、１８、１９、２０番目上であり；同様に、１７番目及び１８番目のうち１つ又は両方における修飾は、２１量体については１９番目又は２０番目の位置のうち１つ又は両方である。１９量体における全ての修飾は、２１量体及び２３量体に同様に適応される。
【０１４２】
構造（Ｃ）の種々の実施態様によれば、（Ｎ’）ｙにおいて、３’末端における２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結で連結されている。１つの好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの３’末端における４つの連続したヌクレオチドは、３つの２’−５’ホスホジエステル結合で結合され、ここで２’−５’ホスホジエステル結合を形成する２’−５’ヌクレオチドの１つ又はそれ以上は、３’−Ｏ−メチル糖修飾をさらに含む。好ましくは、（Ｎ’）ｙの３’末端ヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル糖修飾を含む。構造Ｃの特定の好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９であり、そして（Ｎ’）ｙにおいて、１５、１６、１７、１８及び１９番目の位置における２つ又はそれ以上の連続したヌクレオチドは、隣接したヌクレオチドに２’−５’ヌクレオチド間結合により結合されるヌクレオチドを含む。種々の実施態様において、２’−５’ヌクレオチド間結合を形成するヌクレオチドは、３’デオキシリボースヌクレオチド又は３’メトキシヌクレオチドを含む。いくつかの実施態様において、（Ｎ’）ｙにおける１７及び１８番目の位置におけるヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間結合により結合される。他の実施態様において、（Ｎ’）ｙにおける１６〜１７番目、１７〜１８番目、又は１６〜１８番目の位置におけるヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間結合により結合される。
【０１４３】
特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、Ｌ−ＤＮＡを２番目の位置に含み、そして２’−５’ヌクレオチド間結合を１６〜１７番目、１７−１８番目、又は１６−１８番目の位置に含む。特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、１６〜１７番目、１７〜１８、又は１６〜１８番目の位置における２’−５’ヌクレオチド間結合、及び５’末端キャップヌクレオチドを含む。
【０１４４】
構造（Ｃ）の種々の実施態様によれば、（Ｎ’）ｙにおいて、いずれかの末端における２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４個の連続したヌクレオチド、又は５’末端及び３’末端のそれぞれにおける２〜８個の修飾されたヌクレオチドは独立して、ミラーヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−リボヌクレオチドである。他の実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−デオキシリボヌクレオチドである。ミラーヌクレオチドはさらに、糖若しくは塩基部分において、又はヌクレオチド間連結において修飾され得る。
【０１４５】
構造（Ｃ）の１つの好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの３’末端ヌクレオチド又は３’末端における２つ若しくは３つの連続したヌクレオチドはＬ−デオキシリボヌクレオチドである。
【０１４６】
構造（Ｃ）の他の実施態様において、（Ｎ’）ｙにおいて、いずれかの末端における２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４個の連続したリボヌクレオチド、又は５’末端及び３’末端のそれぞれにおける２〜８個の修飾されたヌクレオチドは独立して２’糖修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、２’糖修飾は、アミノ、フルオロ、アルコキシ又はアルキル部分の存在を含む。特定の実施態様において、２’糖修飾は、メトキシ部分（２’−ＯＭｅ）を含む。一連の好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における３つ、４つ又は５つの連続したヌクレオチドは２’−ＯＭｅ修飾を含む。別の好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの３’末端における３つの連続したヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含む。
【０１４７】
構造（Ｃ）のいくつかの実施態様において、（Ｎ’）ｙにおいて、いずれかにおける２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４個の連続したリボヌクレオチド、又は５’末端及び３’末端のそれぞれにおける２〜８個の修飾ヌクレオチドは、独立して二環式ヌクレオチドである。種々の実施態様において、二環式ヌクレオチドはロックト核酸（ＬＮＡ）又はＬＮＡ種（例えば２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）はＬＮＡ種である）である。
【０１４８】
種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは修飾されたヌクレオチドを５’末端又は３’末端及び５’末端の両方に含む。
【０１４９】
構造（Ｃ）のいくつかの実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端及び３’末端のいずれか又は両方における少なくとも２つのヌクレオチドは、Ｐ−エトキシ骨格修飾により結合される。特定の好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３であり；（Ｎ）ｘにおいて、ヌクレオチドは修飾されたリボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、各々の修飾されたリボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルをその糖上に有するように修飾されており、そして（Ｎ）ｘの中央位置に位置するリボヌクレオチドは未修飾であり；そして（Ｎ’）ｙの３’末端又は５’末端における４つの連続したヌクレオチドは、３つのＰ−エトキシ骨格修飾により連結されている。別の好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの３’末端又は５’末端における３つの連続したヌクレオチドは、２つのＰ−エトキシ骨格修飾により結合される。
【０１５０】
構造（Ｃ）のいくつかの実施態様において、（Ｎ’）ｙにおける５’末端及び３’末端のそれぞれにおける２、３、４、５、６、７又は８つの連続したリボヌクレオチドは、独立してミラーヌクレオチド、２’−５’ホスホジエステル結合により結合されたヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド又は二環式ヌクレオチドである。一実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端及び３’末端における修飾は同一である。１つの好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における４つの連続したヌクレオチドは、３つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合され、そして（Ｎ’）ｙの３’末端における３つの連続したヌクレオチドは、２つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。別の実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における修飾は、（Ｎ’）ｙの３’末端における修飾と異なる。１つの特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙの３’末端における修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。別の特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における３つの連続したヌクレオチドはＬＮＡヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙの３’末端における３つの連続したヌクレオチドは２つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。（Ｎ）ｘにおいてヌクレオチドは、修飾されたリボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、各々の修飾されたリボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルをその糖上に有するように修飾され、そして（Ｎ）ｘの中央に位置するリボヌクレオチドは未修飾であり、又は（Ｎ）ｘにおけるリボヌクレオチドは未修飾である。
【０１５１】
構造（Ｃ）の別の実施態様において、本発明は、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３であり；（Ｎ）ｘにおいてヌクレオチドは修飾されたリボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、各々の修飾されたリボヌクレオチドは、その糖上に２’−Ｏ−メチルを有するように修飾され、そして（Ｎ）ｘの中央に位置するリボヌクレオチドは未修飾であり；（Ｎ’）ｙの３’末端における３つのヌクレオチドは、２つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合され、そして（Ｎ’）ｙの５’末端における３つのヌクレオチドは、ＥＮＡのようなＬＮＡである、化合物を提供する。
【０１５２】
構造（Ｃ）の別の実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における５つの連続したヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル糖修飾を含み、そして（Ｎ’）ｙの３’末端における２つの連続したヌクレオチドはＬ−ＤＮＡである。
【０１５３】
さらに別の実施態様において、本発明は、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３であり；（Ｎ）ｘが未修飾リボヌクレオチドからなり；（Ｎ’）ｙの３’末端における３つの連続したヌクレオチドは、２つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合され、そして（Ｎ’）ｙの５’末端における３つの連続したヌクレオチドは、ＥＮＡのようなＬＮＡである、化合物を提供する。
【０１５４】
構造（Ｃ）の他の実施態様によれば、（Ｎ’）ｙにおいて５’末端若しくは３’末端ヌクレオチド、又はいずれかの末端における２、３、４、５若しくは６つの連続したヌクレオチド、又は５’末端及び３’末端のそれぞれにおける１〜４つの修飾されたヌクレオチドは、独立してホスホノカルボキシレートヌクレオチド又はホスフィノカルボキシレートヌクレオチド（ＰＡＣＥヌクレオチド）である。いくつかの実施態様において、ＰＡＣＥヌクレオチドはデオキシリボヌクレオチドである。いくつかの好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙにおいて５’末端及び３’末端のそれぞれにおける１又は２つの連続したヌクレオチドはＰＡＣＥヌクレオチドである。
【０１５５】
さらなる実施態様において、本発明は、構造（Ｄ）：
（Ｄ）      ５’            （Ｎ）ｘ−Ｚ      ３’    アンチセンス鎖
３’      Ｚ’−（Ｎ’）ｙ        ５’    センス鎖
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド又は修飾されたデオキシリボヌクレオチドから選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したヌクレオチドが共有結合により隣のヌクレオチドに結合され、そしてｘ及びｙがそれぞれ独立して１８と４０との間の整数である、オリゴマーであり；
（Ｎ）ｘは未修飾リボヌクレオチドを含み、さらに３’末端又は３’末端から二番目の位置に１つの修飾されたヌクレオチドを含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結から選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに連結されたヌクレオチドからなる群より選択され；
ここで（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含み、さらに５’末端又は５’末端から二番目の位置に１つの修飾されたヌクレオチドを含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドからなる群より選択され；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの各々において、修飾されたヌクレオチド及び未修飾ヌクレオチドは交互ではなく；
Ｚ及びＺ’はそれぞれ、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、それが結合しているいずれかのオリゴマーの３’末端において共有結合で結合された１〜５個のデオキシリボヌクレオチドであり；
（Ｎ’）yの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）xの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の約１８〜約４０個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）xは、表Ａ〜Ｈのいずれか１つにおいて示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０１５６】
構造（Ｄ）の一実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３であり；（Ｎ）ｘは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで２つの連続したヌクレオチドが３’末端において１つの２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されており；そして（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで５’末端において２つの連続したヌクレオチドが１つの２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されている。
【０１５７】
いくつかの実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３であり；（Ｎ）ｘは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで３’末端における３つの連続したヌクレオチドが２つの２’−５’ホスホジエステル結合により共に結合される；そして（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで５’末端における４つの連続したヌクレオチドが３つの２’−５’ホスホジエステル結合によりともに結合される（本明細書中で構造ＩＩとして示される）。
【０１５８】
構造（Ｄ）の種々の実施態様によれば、（Ｎ）ｘの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチド、及び（Ｎ’）ｙの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結で連結されている。
【０１５９】
構造（Ｄ）の好ましい実施態様によれば、（Ｎ’）ｙの５’末端における４つの連続したヌクレオチドは、３つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合され、そして（Ｎ’）ｘの３’末端における３つの連続したヌクレオチドは、２つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。（Ｎ’）ｙの５’末端における３つのヌクレオチド及び（Ｎ’）ｘの３’末端における２つのヌクレオチドはまた、３’−Ｏ−メチル修飾を含んでいてもよい。
【０１６０】
構造（Ｄ）の種々の実施態様によれば、（Ｎ）ｘの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したヌクレオチド、及び（Ｎ’）ｙの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立してミラーヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、ミラーはＬ−リボヌクレオチドである。他の実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−デオキシリボヌクレオチドである。
【０１６１】
構造（Ｄ）の他の実施態様において、（Ｎ）ｘの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチド及び（Ｎ’）ｙの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立して２’糖修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、２’糖修飾は、アミノ、フルオロ、アルコキシ又はアルキル部分を含む。特定の実施態様において、２’糖修飾は、メトキシ部分（２’−ＯＭｅ）を含む。
【０１６２】
構造（Ｄ）の１つの好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における５つの連続したヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル修飾を含み、そして（Ｎ’）ｘの３’末端における５つの連続したヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル修飾を含む。構造（Ｄ）の別の好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における１０個の連続したヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含み、そして（Ｎ’）ｘの３’末端における５つの連続したヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含む。構造（Ｄ）の別の好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における１３個の連続したヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含み、そして（Ｎ’）ｘの３’末端における５つの連続したヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含む。
【０１６３】
構造（Ｄ）のいくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチド、及び（Ｎ’）ｙの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立して二環式ヌクレオチドである。種々の実施態様において、二環式ヌクレオチドは、２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）のようなロックト核酸（ＬＮＡ）である。
【０１６４】
構造（Ｄ）の種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される修飾されたヌクレオチドを含み；
構造（Ｄ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される修飾されたヌクレオチドを含み；
同じ鎖の３’末端及び５’末端がそれぞれ修飾されたヌクレオチドを含む、いくつかの実施態様において、５’末端及び３’末端における修飾は同一である。別の実施態様において、５’末端における修飾は、同じ鎖の３’末端における修飾と異なる。１つの特定の実施態様において、５’末端における修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして同じ鎖の３’末端における修飾されたヌクレオチドは２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。
【０１６５】
構造（Ｄ）の１つの特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における５つの連続したヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含み、そして（Ｎ’）ｙの３’末端における２つの連続したヌクレオチドはＬ−ＤＮＡである。さらに、本化合物は、（Ｎ’）ｘの３’末端において５つの連続した２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチドをさらに含み得る。
【０１６６】
構造（Ｄ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは、（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドと異なる。例えば、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは２’糖修飾ヌクレオチドであり、（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結で連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結で連結されたヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドである。
【０１６７】
さらなる実施態様において、本発明は、構造（Ｅ）：
（Ｅ）    ５’            （Ｎ）ｘ−Ｚ      ３’    アンチセンス鎖
３’      Ｚ’−（Ｎ’）ｙ        ５’    センス鎖
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド又は修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したヌクレオチドが、共有結合により隣のヌクレオチドに結合され、そしてｘ及びｙがそれぞれ独立して、１８と４０との間の整数である、オリゴマーであり；
（Ｎ）ｘは未修飾リボヌクレオチドを含み、５’末端又は５’末端から二番目の位置において１つの修飾されたヌクレオチドをさらに含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドからなる群より選択され；
（Ｎ’）ｙは、未修飾リボヌクレオチドを含み、３’末端又は３’末端から二番目の位置において１つの修飾されたヌクレオチドをさらに含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドからなる群より選択され；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの各々において、修飾されたヌクレオチド及び未修飾ヌクレオチドは交互ではなく；
Ｚ及びＺ’はそれぞれ、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、それが結合しているいずれかのオリゴマーの３’末端において共有結合で結合される１〜５個のデオキシリボヌクレオチドであり；
（Ｎ’）yの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そしてここで（Ｎ）xの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の約１８〜約４０個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）xは、表Ａ〜Ｈのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０１６８】
特定の好ましい実施態様において、（Ｎ）ｘの５’末端における最末端のヌクレオチドは未修飾である。
【０１６９】
構造（Ｅ）の種々の実施態様によれば、（Ｎ）ｘの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる、好ましくは５’末端から二番目の位置から始まる、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチド、及び（Ｎ’）ｙの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結される。
【０１７０】
構造（Ｅ）の種々の実施態様によれば、（Ｎ）ｘの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる、好ましくは５’末端から二番目の位置から始まる、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したヌクレオチド、及び（Ｎ’）ｙの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したヌクレオチドは、独立してミラーヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、ミラーはＬ−リボヌクレオチドである。他の実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−デオキシリボヌクレオチドである。
【０１７１】
構造（Ｅ）の他の実施態様において、（Ｎ）ｘの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる、好ましくは５’末端から二番目の位置から始まる、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチド、及び（Ｎ’）ｙの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立して２’糖修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、２’糖修飾は、アミノ、フルオロ、アルコキシ又はアルキル部分を含む。特定の実施態様において、２’糖修飾はメトキシ部分（２’−ＯＭｅ）を含む。
【０１７２】
構造（Ｅ）のいくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる、好ましくは５’末端から二番目の位置から始まる、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチド、及び（Ｎ’）ｙの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立して二環式ヌクレオチドである。種々の実施態様において、二環式ヌクレオチドは、２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン−架橋核酸（ＥＮＡ）のようなロックト核酸（ＬＮＡ）である。
【０１７３】
構造（Ｅ）の種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、３’末端において又は３’末端及び５’末端のそれぞれにおいて、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結又はＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される修飾されたヌクレオチドを含む。
【０１７４】
構造（Ｅ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘは、５’末端又は３’末端及び５’末端のそれぞれにおいて、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される修飾されたヌクレオチドを含む。
【０１７５】
一実施態様において、同じ鎖の３’末端及び５’末端の両方が修飾されたヌクレオチドを含む場合、５’末端及び３’末端における修飾は同一である。別の実施態様において、５’末端における修飾は、同じ鎖の３’末端における修飾と異なる。１つの特定の実施態様において、５’末端における修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして同じ鎖の３’末端における修飾されたヌクレオチドは２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。
【０１７６】
構造（Ｅ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは、（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドと異なる。例えば、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは２’糖修飾ヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例において、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドである。
【０１７７】
さらなる実施態様において、本発明は、構造（Ｆ）：
（Ｆ）    ５’            （Ｎ）ｘ−Ｚ      ３’    アンチセンス鎖
３’      Ｚ’−（Ｎ’）ｙ        ５’    センス鎖
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド又は修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したヌクレオチドが、共有結合により隣のヌクレオチドに結合され、そしてｘ及びｙがそれぞれ独立して１８と４０との間の整数であるオリゴマーであり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ独立して、１つの修飾されたヌクレオチドを３’末端又は３’末端から二番目の位置に含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、Ｐ−アルコキシ骨格修飾若しくはＰＡＣＥ連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドからなる群より選択され；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙのそれぞれにおいて、修飾されたヌクレオチドと未修飾ヌクレオチドとは交互ではなく；
Ｚ及びＺ’はそれぞれ、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、それが結合しているいずれかのオリゴマーの３’末端に共有結合で結合された１〜５個のデオキシリボヌクレオチドであり；
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そしてここで（Ｎ）xの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の約１８〜約４０個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）xは、表Ａ〜Ｈのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一のアンチセンス配列を含む。
【０１７８】
構造（Ｆ）のいくつかの実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３であり；（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで３’末端における２つの連続したヌクレオチドは２つの連続したミラーデオキシリボヌクレオチドを含み；そして（Ｎ）ｘは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで３’末端における１つのヌクレオチドはミラーデオキシリボヌクレオチドを含む（構造ＩＩＩとして示される）。
【０１７９】
構造（Ｆ）の種々の実施態様によれば、独立して（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結される。
【０１８０】
構造（Ｆ）の好ましい実施態様によれば、（Ｎ’）ｙの３’末端における３つの連続したヌクレオチドは、２つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合され、そして（Ｎ’）ｘの３’末端における３つの連続したヌクレオチドは、２つの２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。
【０１８１】
構造（Ｆ）の種々の実施態様によれば、独立して（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したヌクレオチドは、独立してミラーヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−リボヌクレオチドである。他の実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−デオキシリボヌクレオチドである。
【０１８２】
構造（Ｆ）の他の実施態様において、独立して（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立して２’糖修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、２’糖修飾は、アミノ、フルオロ、アルコキシ又はアルキル部分を含む。特定の実施態様において、２’糖修飾はメトキシ部分（２’−ＯＭｅ）を含む。
【０１８３】
構造（Ｆ）のいくつかの実施態様において、独立して（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの３’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立して二環式ヌクレオチドである。種々の実施態様において、二環式ヌクレオチドは、２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン−架橋核酸（ＥＮＡ）のようなロックト核酸（ＬＮＡ）である。
【０１８４】
構造（Ｆ）の種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、３’末端又は３’末端及び５’末端の両方において、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される、修飾されたヌクレオチドを含む。
【０１８５】
構造（Ｆ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘは、３’末端又は３’末端及び５’末端のそれぞれにおいて、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される、修飾されたヌクレオチドを含む。
【０１８６】
一実施態様において、同じ鎖の３’末端及び５’末端がそれぞれ修飾されたヌクレオチドを含む場合、５’末端及び３’末端における修飾は同一である。別の実施態様において、５’末端における修飾は、同じ鎖の３’末端における修飾と異なる。１つの特定の実施態様において、５’末端における修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして同じ鎖の３’末端における修飾されたヌクレオチドは２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。
【０１８７】
構造（Ｆ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは、（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドと異なる。例えば、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは２’糖修飾ヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドである。
【０１８８】
さらなる実施態様において、本発明は、構造（Ｇ）
（Ｇ）    ５’          （Ｎ）ｘ−Ｚ      ３’    アンチセンス鎖
３’    Ｚ’−（Ｎ’）ｙ        ５’    センス鎖
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド又は修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
ここで（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したヌクレオチドが、共有結合により隣のヌクレオチドに結合され、そしてｘ及びｙがそれぞれ独立して、１８と４０との間の整数である、オリゴマーであり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ独立して、１つの修飾されたヌクレオチドを５’末端又は末端から二番目の位置に含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、Ｐ−アルコキシ骨格修飾若しくはＰＡＣＥ連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドからなる群より選択され；
（Ｎ）ｘについて、修飾されたヌクレオチドは好ましくは５’末端から二番目の位置にあり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの各々おいて、修飾されたヌクレオチドと未修飾ヌクレオチドとは交互ではなく；
Ｚ及びＺ’はそれぞれ、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、それが結合しているいずれかのオリゴマーの３’末端に共有結合で結合された１〜５個のデオキシリボヌクレオチドであり；
（Ｎ’）yの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そしてここで（Ｎ）xの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の約１８〜約４０個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）xは、表Ａ〜Ｈのいずれか１つにおいて示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０１８９】
構造（Ｇ）のいくつかの実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９又はｘ＝ｙ＝２３である。
【０１９０】
構造（Ｇ）の種々の実施態様によれば、独立して（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結される。（Ｎ）ｘについては、修飾されたヌクレオチドは、好ましくは５’末端の末端から二番目の位置から始まる。
【０１９１】
構造（Ｇ）のの種々の実施態様によれば、独立して（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したヌクレオチドは、独立してミラーヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−リボヌクレオチドである。他の実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−デオキシリボヌクレオチドである。（Ｎ）ｘについて、修飾されたヌクレオチドは、好ましくは５’末端の末端から二番目の位置から始まる。
【０１９２】
構造（Ｇ）の他の実施態様において、独立して（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立して２’糖修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、２’糖修飾は、アミノ、フルオロ、アルコキシ又はアルキル部分を含む。特定の実施態様において、２’糖修飾はメトキシ部分（２’−ＯＭｅ）を含む。いくつかの好ましい実施態様において、連続した修飾されたヌクレオチドは、好ましくは（Ｎ）ｘの５’末端の末端から二番目の位置から始まる。
【０１９３】
構造（Ｇ）の１つの好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における５つの連続したリボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含み、そして（Ｎ’）ｘの５’末端の末端から二番目の位置における１つのリボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含む。構造（Ｇ）の別の好ましい実施態様において、（Ｎ’）ｙの５’末端における５つの連続したリボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含み、そして（Ｎ’）ｘの５’末端位置における２つの連続したリボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含む。
【０１９４】
構造（Ｇ）のいくつかの実施態様において、独立して（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの５’末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、二環式ヌクレオチドである。種々の実施態様において、二環式ヌクレオチドは、２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン−架橋核酸（ＥＮＡ）のようなロックト核酸（ＬＮＡ）である。いくつかの好ましい実施態様において、連続した修飾されたヌクレオチドは、好ましくは（Ｎ）ｘの５’末端の末端から二番目の位置から始まる。
【０１９５】
構造（Ｇ）の種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、５’末端又は３’末端及び５’末端のそれぞれにおいて、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される、修飾されたヌクレオチドを含む。
【０１９６】
構造（Ｇ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘは、５’末端又は３’末端及び５’末端のそれぞれにおいて、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される、修飾されたヌクレオチドを含む。
【０１９７】
一実施態様において、同じ鎖の３’末端及び５’末端がそれぞれ修飾されたヌクレオチドを含む場合、５’末端及び３’末端における修飾は同一である。別の実施態様において、５’末端における修飾は同じ鎖の３’末端における修飾と異なる。１つの特定の実施態様において、５’末端における修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして同じ鎖の３’末端における修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。構造（Ｇ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは、（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドと異なる。例えば、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは２’糖修飾ヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドである。
【０１９８】
さらなる実施態様において、本発明は、構造（Ｈ）：
（Ｈ）    ５’            （Ｎ）ｘ−Ｚ      ３’    アンチセンス鎖
３’      Ｚ’−（Ｎ’）ｙ        ５’    センス鎖
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド又は修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したヌクレオチドが共有結合により隣のヌクレオチドに結合され、そしてｘ及びｙはそれぞれ独立して１８と４０との間の整数である、オリゴマーであり；
（Ｎ）ｘは未修飾リボヌクレオチドを含み、さらに１つの修飾されたヌクレオチドを３’末端若しくは３’末端から二番目の位置、又は５’末端若しくは５’末端から二番目の位置に含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドからなる群より選択され；
（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含み、さらに１つの修飾されたヌクレオチドを内部位置に含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、二環式ヌクレオチド、２’糖修飾ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合、Ｐ−アルコキシ連結若しくはＰＡＣＥ連結より選択されるヌクレオチド間連結により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドからなる群より選択され；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙの各々において、修飾されたヌクレオチド及び未修飾ヌクレオチドは交互ではなく；
Ｚ及びＺ’はそれぞれ、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、それが結合しているいずれかのオリゴマーの３’末端において共有結合で結合された１〜５個のデオキシリボヌクレオチドであり；
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の約１８〜約４０個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｈのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０１９９】
構造（Ｈ）の一実施態様において、独立して（Ｎ）ｘの３’末端又は５’末端又は両方の末端の最末端の位置又は末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続したリボヌクレオチドは、独立して２’糖修飾ヌクレオチド、二環式ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続した内部リボヌクレオチドは、独立して２’糖修飾ヌクレオチド、二環式ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、２’糖修飾は、アミノ、フルオロ、アルコキシ又はアルキル部分を含む。特定の実施態様において、２’糖修飾はメトキシ部分（２’−ＯＭｅ）を含む。
【０２００】
構造（Ｈ）の別の実施態様において、（Ｎ’）ｙの独立して３’末端若しくは５’末端の最末端の位置若しくは末端から二番目の位置から始まる２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４個の連続したリボヌクレオチド、又は５’末端及び３’末端の各々における２〜８個の連続したヌクレオチドは、独立して２’糖修飾ヌクレオチド、二環式ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドであり、そして（Ｎ）ｘ中の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４個の連続した内部リボヌクレオチドは、独立して２’糖修飾ヌクレオチド、二環式ヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、アルトリトールヌクレオチド、又は２’−５’ホスホジエステル結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドである。
【０２０１】
同じ鎖の３’末端及び５’末端がそれぞれ、修飾されたヌクレオチドを含む、一実施態様において、５’末端及び３’末端における修飾は同一である。別の実施態様において、５’末端における修飾は、同じ鎖の３’末端における修飾と異なる。１つの特定の実施態様において、５’末端における修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして同じ鎖の３’末端における修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ホスホジエステル結合により結合される。
【０２０２】
構造（Ｈ）の種々の実施態様において、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは、（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドと異なる。例えば、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは２’糖修飾ヌクレオチドであり、（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドであり、そして（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドである。別の例では、（Ｎ）ｘ中の修飾されたヌクレオチドは、２’−５’ヌクレオチド間連結により連結されたヌクレオチドであり、（Ｎ’）ｙ中の修飾されたヌクレオチドはミラーヌクレオチドである。
【０２０３】
構造（Ｈ）の１つの好ましい実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９であり；（Ｎ’）ｙの９〜１１番目のヌクレオチド位置における３つの連続したリボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含み、そして（Ｎ’）ｘの３’末端位置における５つの連続したリボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾を含む。
【０２０４】
全ての上記の構造（Ａ）〜（Ｈ）について、種々の実施態様において、ｘ＝ｙであり、そしてｘ及びｙはそれぞれ、１９、２０、２１、２２及び２３からなる群より選択される整数（ａｎｄ  ｉｎｔｅｇｅｒ）である。特定の実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９である。他の実施態様において、ｘ＝ｙ＝２１である。さらなる実施態様において、本発明の化合物は、修飾されたリボヌクレオチドを交互の位置に含み、ここで（Ｎ）ｘの５’末端及び３’末端における各Ｎは、その糖残基において修飾されており、そして中央のリボヌクレオチドは未修飾である（例えば１９量体鎖における１０番目の位置、２１量体における１１番目の位置、及び２３量体鎖における１２番目の位置のリボヌクレオチド）。
【０２０５】
いくつかの実施態様において、ｘ＝ｙ＝２１であるか又はｘ＝ｙ＝２３である場合、１９量体における修飾の位置は、２１量体又は２３量体のオリゴヌクレオチドに適応されるが、ただしアンチセンス鎖の中央のヌクレオチドは好ましくは未修飾である。
【０２０６】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘも（Ｎ’）ｙも３’末端及び５’末端においてリン酸化されていない。他の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙのいずれか又は両方が３’末端においてリン酸化されている。さらに別の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙのいずれか又は両方が、切断可能でないホスフェート基を使用して３’末端においてリン酸化されている。さらに別の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙのいずれか又は両方が、切断可能なホスフェート基又は切断可能でないホスフェート基を使用して末端の５’末端位置においてリン酸化されている。いくつかの実施態様において、ｓｉＲＮＡ化合物は平滑末端であり、そして末端においてリン酸化されていない；しかし、１つ又は両方の３’末端においてリン酸化されたｓｉＲＮＡ化合物が、リン酸化されていない化合物と比較してインビボで類似の活性を有するということが比較実験により示された。
【０２０７】
特定の実施態様において、上述の構造の全てについて、ｓｉＲＮＡ化合物は平滑末端であり、例えばＺ及びＺ’の両方が存在しない。代替の実施態様において、本化合物は、少なくとも１つの３’オーバーハングを含み、ここでＺ又はＺ’のうち少なくとも１つが存在する。Ｚ及びＺ’は独立して、１つ又はそれ以上の共有結合で連結された修飾されたヌクレオチド又は未修飾ヌクレオチドを含む（例えば逆位ｄＴ又はｄＡ；ｄＴ、ＬＮＡ、ミラーヌクレオチドなど）。いくつかの実施態様において、Ｚ及びＺ’はそれぞれ独立して、ｄＴ及びｄＴｄＴより選択される。Ｚ及び／又はＺ’が存在するｓｉＲＮＡは、Ｚ及びＺ’が存在しないｓｉＲＮＡと類似の活性及び安定性を有する。
【０２０８】
特定の実施態様において、上述の構造の全てについて、ｓｉＲＮＡ化合物は、１つ又はそれ以上のホスホノカルボキシレートヌクレオチド及び／又はホスフィノカルボキシレートヌクレオチド（ＰＡＣＥヌクレオチド）を含む。いくつかの実施態様において、ＰＡＣＥヌクレオチドはデオキシリボヌクレオチドであり、そしてホスフィノカルボキシレートヌクレオチドはホスフィノアセテートヌクレオチドである。
【０２０９】
特定の実施態様において、上述の構造の全てについて、ｓｉＲＮＡ化合物は、架橋核酸又は二環式ヌクレオチドとも定義される、１つ又はそれ以上のロックト核酸（ＬＮＡ）を含む。好ましいロックト核酸は、２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレンヌクレオシド（ＥＮＡ）又は２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレンヌクレオシドである。ＬＮＡ及びＥＮＡヌクレオチドの他の例は、ＷＯ９８／３９３５２、ＷＯ００／４７５９９及びＷＯ９９／１４２２６（全て参照により本明細書に加入される）において開示される。
【０２１０】
特定の実施態様において、上述の構造の全てについて、本化合物は、１，５アンヒドロ−２−デオキシ−Ｄ−アルトリト−ヘキシトールとも定義される、１つ又はそれ以上のアルトリトールモノマー（ヌクレオチド）を含む（例えば、Ａｌｌａｒｔ、ｅｔ  ａｌ．、１９９８．Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  １７：１５２３−１５２６；Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ  ｅｔ  ａｌ．、１９９９．Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  １８：１３７１−１３７６；Ｆｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、２００７、ＮＡＲ  ３５（４）：１０６４−１０７４を参照のこと；全て本明細書中に参照により加入される）。
【０２１１】
本発明は、Ｎ及び／又はＮ’の各々がデオキシリボヌクレオチド（ｄ−Ａ、ｄ−Ｃ、ｄ−Ｇ、ｄ−Ｔ）である化合物を明示的に除外する。特定の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９個又はそれ以上のデオキシリボヌクレオチドを含み得る。特定の実施態様において、本発明は、各Ｎが未修飾リボヌクレオチドであり、そして３’末端ヌクレオチド又は（Ｎ’）ｙの３’末端における２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４個の連続したヌクレオチドがデオキシリボヌクレオチドである化合物を提供する。さらに他の実施態様において、Ｎはそれぞれ未修飾リボヌクレオチドであり、そして５’末端ヌクレオチド又は（Ｎ’）ｙの５’末端における２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４個の連続したヌクレオチドはデオキシリボヌクレオチドである。さらなる実施態様において、（Ｎ）ｘの５’末端ヌクレオチド又は５’末端における２、３、４、５、６、７、８、若しくは９個の連続したヌクレオチド、及び３’末端における１、２、３、４、５、若しくは６個の連続したヌクレオチドはデオキシリボヌクレオチドであり、そしてＮ’はそれぞれ未修飾リボヌクレオチドである。なおさらなる実施態様において、（Ｎ）ｘは、未修飾リボヌクレオチド及び独立して５’末端及び３’末端の各々において、１又は２、３又は４個の連続したデオキシリボヌクレオチド、並びに内部位置において、１又は２、３、４、５又は６個の連続したデオキシリボヌクレオチドを含み；そしてＮ’はそれぞれ未修飾リボヌクレオチドである。特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙの３’末端ヌクレオチド又は３’末端における２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４個の連続したヌクレオチド、及び（Ｎ）ｘの末端５’ヌクレオチド又は５’末端における２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４個の連続したヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチドである。本発明は、Ｎ及び／又はＮ’の各々がデオキシリボヌクレオチドである化合物を除外する。いくつかの実施態様において、５’末端ヌクレオチドのＮ又は２若しくは３個の連続したＮ、及び１、２、若しくは３個のＮ’は、デオキシリボヌクレオチドである。活性ＤＮＡ／ＲＮＡ  ｓｉＲＮＡキメラの特定の例は、米国特許公開第２００５／０００４０６４号、及びＵｉ−Ｔｅｉ、２００８（ＮＡＲ  ３６（７）：２１３６−２１５１）（本明細書にそれらの全体が参照により加入される）において開示される。
【０２１２】
そうではないと記載されていなければ、本明細書において考察される構造の好ましい実施態様において、各々の連続したＮ及びＮ’の間の共有結合はホスホジエステル結合である。
【０２１３】
共有結合は、１つのヌクレオチドモノマーを隣接したヌクレオチドモノマーに連結するヌクレオチド間連結を指す。共有結合としては、例えば、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合、Ｐ−アルコキシ結合、Ｐ−カルボキシ結合などが挙げられる。ＲＮＡ及びＤＮＡの通常のヌクレオシド間連結は３’−５’ホスホジエステル連結である。特定の好ましい実施態様において、共有結合はホスホジエステル結合である。共有結合は、とりわけＷＯ２００４／０４１９２４に開示されるもののような、リンを含有しないヌクレオシド間連結である。そうではないと記載されていなければ、本明細書において考察される構造の好ましい実施態様において、各々の連続したＮ及びＮ’の間の共有結合はホスホジエステル結合である。
【０２１４】
上記の構造の全てについて、いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘのオリゴヌクレオチド配列は、（Ｎ’）ｙのオリゴヌクレオチド配列に対して完全に相補的である。他の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙは実施的に相補的である。特定の実施態様において、（Ｎ）ｘは、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡに対して完全に相補的である。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡに対して実質的に相補的である。
【０２１５】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘも（Ｎ’）ｙも３’末端及び５’末端においてリン酸化されていない。他の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙのいずれか又は両方が、３’末端においてリン酸化されている（３’Ｐｉ）。さらに別の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙのいずれか又は両方が、３’末端において、切断可能でないホスフェート基でリン酸化されている。さらに別の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙのいずれか又は両方が、終端の２’末端位置において、切断可能なホスフェート基又は切断可能でないホスフェート基を使用してリン酸化されている。さらに、本発明の阻害性核酸分子は、１つ若しくはそれ以上のギャップ及び／又は１つ若しくはそれ以上のニック及び／又は１つ又はそれ以上のミスマッチを含み得る。理論に拘束されることを望まないが、ギャップ、ニック及びミスマッチは、ＤＩＣＥＲ、ＤＲＯＳＨＡ又はＲＩＳＣのような内因性細胞機構によりその阻害性成分へとより容易にプロセシングされ得るように、核酸／ｓｉＲＮＡを部分的に不安定化するという利点を有する。
【０２１６】
本発明の文脈において、核酸におけるギャップは、１つの鎖中の１つ又はそれ以上の内部ヌクレオチドが存在しないことを指し、一方、核酸におけるニックは、１つの鎖中の２つの隣接したヌクレオチド間にヌクレオチド間連結が存在しないことを指す。本発明の分子はいずれも、１つ若しくはそれ以上のギャップ及び／又は１つ若しくはそれ以上のニックを含んでいてもよい。
【０２１７】
一局面において、本発明は、構造（Ｉ）：
（Ｉ）    ５’          （Ｎ）ｘ−Ｚ            ３’  （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）ｙ−ｚ’’      ５’  （センス鎖）
［ここで、Ｎ及びＮ’はそれぞれ、未修飾でも修飾されていてもよいリボヌクレオチド、又は非通常部分であり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、独立してそれが存在する鎖の３’末端に共有結合で結合された１〜５個の連続したヌクレオチドであり；
ｚ’’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、（Ｎ’）ｙの５’末端に共有結合で結合されたキャッピング部分であり；
ｘ＝１８〜２７であり；
ｙ＝１８〜２７であり；
（Ｎ）ｘは、  修飾されたリボヌクレオチド及び未修飾リボヌクレオチドを含み、各々の修飾されたリボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチルをその糖上に有し、ここで（Ｎ）ｘの３’末端におけるＮは、修飾されたリボヌクレオチドであり、（Ｎ）ｘは、３’末端から始まる少なくとも５つの交互の修飾されたリボヌクレオチドを含み、そして全体で少なくとも９つの修飾されたリボヌクレオチドを含み、そして残りの各Ｎは未修飾リボヌクレオチドであり；
（Ｎ’）ｙにおいて、少なくとも１つの非通常部分が存在し、この非通常部分は脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、修飾されたデオキシリボヌクレオチド又は未修飾デオキシリボヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、及び２’−５’ヌクレオチド間ホスフェート結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドであり得；そして
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の１８〜２７個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｈのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一のアンチセンス配列を含む。
【０２１８】
いくつかの実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９である。他の実施態様において、ｘ＝ｙ＝２１である。いくつかの実施態様において、少なくとも１つの非通常部分が（Ｎ’）ｙ中の１５、１６、１７、又は１８番目の位置に存在する。いくつかの実施態様において、非通常部分は、ミラーヌクレオチド、脱塩基リボース部分及び脱塩基デオキシリボース部分より選択される。いくつかの好ましい実施態様において、非通常部分はミラーヌクレオチドであり、好ましくはＬ−ＤＮＡ部分である。いくつかの実施態様において、Ｌ−ＤＮＡ部分は、１７番目の位置、１８番目の位置又は１７番目及び１８番目の位置に存在する。
【０２１９】
他の実施態様において、非通常部分は脱塩基部分である。種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは少なくとも５つの脱塩基リボース部分又は脱塩基デオキシリボース部分を含む。
【０２２０】
さらに他の実施態様において、（Ｎ’）ｙは少なくとも５つの脱塩基リボース部分又は脱塩基デオキシリボース部分を含み、少なくとも１つのＮ’はＬＮＡである。
【０２２１】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘは９つの交互の修飾されたリボヌクレオチドを含む。構造（Ｉ）の他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、９つの交互の修飾されたリボヌクレオチドを含み、さらに２’Ｏ修飾ヌクレオチドを２番目の位置に含む。いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを奇数番目、１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９番目の位置に含む。他の実施態様において、（Ｎ）ｘはさらに、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２番目の位置及び１８番目の位置の一方又は両方に含む。さらに他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７、１９番目の位置に含む。
【０２２２】
種々の実施態様において、ｚ’’は存在し、そして脱塩基リボース部分、デオキシリボース部分；逆位脱塩基リボース部分、デオキシリボース部分；Ｃ６−アミノ−Ｐｉ；ミラーヌクレオチドより選択される。
【０２２３】
別の局面において、本発明は、以下に示される構造（Ｊ）：
（Ｊ）    ５’          （Ｎ）ｘ−Ｚ          ３’    （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）ｙ−ｚ’’    ５’    （センス鎖）
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾でも修飾されていてもよいリボヌクレオチド、又は非通常部分であり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は独立して、それが存在する鎖の３’末端に共有結合で結合された１〜５個の連続したヌクレオチドであり；
ｚ’’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、（Ｎ’）ｙの５’末端に共有結合で結合されたキャッピング部分であり；
ｘ＝１８〜２７であり；
ｙ＝１８〜２７であり；
（Ｎ）ｘは、修飾されたリボヌクレオチド又は未修飾リボヌクレオチド、及び場合により少なくとも１つの非通常部分を含み；
（Ｎ’）ｙにおいて、少なくとも１つの非通常部分が存在し、この非通常部分は、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、修飾されたデオキシリボヌクレオチド若しくは未修飾デオキシリボヌクレオチド、ミラーヌクレオチド、塩基対合しないヌクレオチド類似体、又は２’−５’ヌクレオチド間ホスフェート結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドであり得；そして
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の１８〜２７個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｈのいずれか１つにおいて示されるアンチセンス配列と実質的に同一であるアンチセンス配列を含む。
【０２２４】
いくつかの実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９である。他の実施態様において、ｘ＝ｙ＝２１である。いくつかの好ましい実施態様において、（Ｎ）ｘは、修飾されたリボヌクレオチド及び未修飾リボヌクレオチド、並びに少なくとも１つの非通常部分を含む。
【０２２５】
いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘにおいて３’末端におけるＮは修飾されたリボヌクレオチドであり、そして（Ｎ）ｘは少なくとも８個の修飾されたリボヌクレオチドを含む。他の実施態様において、少なくとも８つの修飾されたリボヌクレオチドのうち少なくとも５つは交互であり３’末端から始まる。いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５番目の位置のうち１つにおいて脱塩基部分を含む。
【０２２６】
いくつかの実施態様において、（Ｎ’）ｙ中の少なくとも１つの非通常部分は１５、１６、１７、又は１８番目の位置に存在する。いくつかの実施態様において、非通常部分は、ミラーヌクレオチド、脱塩基リボース部分及び脱塩基デオキシリボース部分より選択される。いくつかの好ましい実施態様において、非通常部分はミラーヌクレオチドであり、好ましくはＬ−ＤＮＡ部分である。いくつかの実施態様において、Ｌ−ＤＮＡ部分は１７番目の位置、１８番目の位置又は１７番目及び１８番目の位置に存在する。他の実施態様において、（Ｎ’）ｙ中の少なくとも１つの非通常部分は脱塩基リボース部分又は脱塩基デオキシリボース部分である。
【０２２７】
さらに別の局面において、本発明は、以下に示される構造（Ｋ）：
（Ｋ）    ５’            （Ｎ）x−Ｚ            ３’  （アンチセンス鎖）
３’      Ｚ’−（Ｎ’）y−ｚ’’      ５’  （センス鎖）
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾でも修飾されていてもよいリボヌクレオチド、又は非通常部分であり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙは、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は独立して、それが存在する鎖の３’末端に共有結合で結合された１〜５個の連続したヌクレオチドであり；
ｚ’’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は（Ｎ’）ｙの５’末端に共有結合で結合されたキャッピング部分であり；
ｘ＝１８〜２７であり；
ｙ＝１８〜２７であり；
（Ｎ）ｘは、修飾されたリボヌクレオチド又は未修飾リボヌクレオチド及び非通常部分の組み合わせを含み、任意の修飾されたリボヌクレオチドはその糖上に２’−Ｏ−メチルを有し；
（Ｎ’）ｙは、修飾されたリボヌクレオチド又は未修飾リボヌクレオチド、及び場合により非通常部分を含み、任意の修飾されたリボヌクレオチドはその糖上に２’ＯＭｅを有し；
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の１８〜２７個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｈのいずれか１つにおいて示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０２２８】
いくつかの実施態様において、ｘ＝ｙ＝１９である。他の実施態様において、ｘ＝ｙ＝２１である。いくつかの好ましい実施態様において、少なくとも１つの非通常部分が（Ｎ）ｘ中に存在し、そしてこれは脱塩基リボース部分又は脱塩基デオキシリボース部分である。他の実施態様において、少なくとも１つの非通常部分が（Ｎ）ｘ中に存在し、これは塩基対合しないヌクレオチド類似体である。種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含む。いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘは、少なくとも５つの脱塩基リボース部分若しくは脱塩基デオキシリボース部分又はそれらの組み合わせを含む。特定の実施態様において、（Ｎ）ｘ及び／又は（Ｎ’）ｙは、（Ｎ’）ｙ及び／又は（Ｎ）ｘ中の対応する修飾されたリボヌクレオチド又は未修飾リボヌクレオチドと塩基対合しない、修飾されたリボヌクレオチドを含む。
【０２２９】
種々の実施態様において、本発明は、構造（Ｌ）：
（Ｌ）  ５’            （Ｎ）x−Ｚ      ３’  （アンチセンス鎖）
３’      Ｚ’−（Ｎ’）y        ５’  （センス鎖）
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド及び修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）x及び（Ｎ’）yはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が、共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は存在せず；
ｘ＝ｙ＝１９であり；
（Ｎ’）ｙにおいて、１５、１６、１７、１８及び１９番目の位置のうち少なくとも１つにおけるヌクレオチドは、脱塩基非通常部分、ミラーヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド及び２’−５’ヌクレオチド間結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択されるヌクレオチドを含み；
（Ｎ）ｘは、交互の修飾されたリボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとを含み、各々の修飾されたリボヌクレオチドは、その糖上に２’−Ｏ−メチルを有するように修飾され、そして（Ｎ）ｘの中央の位置に位置するリボヌクレオチドは、修飾されているか又は未修飾であり、好ましくは未修飾であり；そして
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の１８〜２７個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
で示されるｓｉＲＮＡを提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｈのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０２３０】
構造（Ｌ）のいくつかの実施態様において、（Ｎ’）ｙにおいて１７番目及び１８番目の位置の一方又は両方におけるヌクレオチドは、脱塩基非通常部分、ミラーヌクレオチド及び２’−５’ヌクレオチド間結合により隣接したヌクレオチドに結合されたヌクレオチドより選択される修飾されたヌクレオチドを含む。いくつかの実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−ＤＮＡ及びＬ−ＲＮＡより選択される。種々の実施態様において、ミラーヌクレオチドはＬ−ＤＮＡである。
【０２３１】
種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは修飾されたヌクレオチドを１５番目の位置に含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、ミラーヌクレオチド及びデオキシリボヌクレオチドより選択される。
【０２３２】
特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、修飾されたヌクレオチド又はプソイドヌクレオチドを２番目の位置にさらに含み、ここでプソイドヌクレオチドは脱塩基非通常部分であってもよく、そして修飾されたヌクレオチドは場合によりミラーヌクレオチドである。
【０２３３】
種々の実施態様において、アンチセンス鎖（Ｎ）ｘは、２’Ｏ−Ｍｅ修飾リボヌクレオチドを奇数番目の位置（５’から３’へ；１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９番目）に含む。いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’Ｏ−Ｍｅ修飾リボヌクレオチドを２番目及び１８番目の位置の一方又は両方にさらに含む。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７、１９番目の位置に含む。
【０２３４】
構造（Ｌ）の他の実施態様は、ｘ＝ｙ＝２１である場合を想定する；これらの実施態様において、上で考察される（Ｎ’）ｙに関する修飾は、１７番目及び１８番目の位置である代わりに、２１量体オリゴヌクレオチドについて１９番目及び２０番目の位置であり；同様に１５、１６、１７、１８又は１９番目の位置における修飾は、２１量体オリゴヌクレオチドについては１７、１８、１９、２０又は２１番目の位置である。アンチセンス鎖上の２’ＯＭｅ修飾は同様に適応される。いくつかの実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを奇数番目の位置（２１量体オリゴヌクレオチドについて、５’から３’へ；１、３、５、７、９、１２、１４、１６、１８、２０番目の位置［１１番目の位置におけるヌクレオチドは未修飾］）に含む。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを、２１量体オリゴヌクレオチドについて２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０番目の位置［１１番目の位置におけるヌクレオチドは未修飾］に含む。
【０２３５】
いくつかの実施態様において、（Ｎ’）ｙは、５’末端キャップヌクレオチドをさらに含む。種々の実施態様において、末端キャップ部分は、脱塩基非通常部分、逆位脱塩基非通常部分、Ｌ−ＤＮＡヌクレオチド、及びＣ６−イミンホスフェート（ホスフェートを末端に有するＣ６アミノリンカー）より選択される。
【０２３６】
他の実施態様において、本発明は、以下に示される構造（Ｍ）：
（Ｍ）    ５’          （Ｎ）x−Ｚ      ３’  （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）y        ５’  （センス鎖）
［ここで、Ｎ及びＮ’はそれぞれ、プソイド−ヌクレオチド及びヌクレオチドより選択され；
各ヌクレオチドは、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド及び修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択され；
（Ｎ）x及び（Ｎ’）yはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は存在せず；ここでｘ＝１８〜２７であり；
ｙ＝１８〜２７であり；
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の１８〜２７個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｈのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０２３７】
他の実施態様において、本発明は、以下に示される構造（Ｎ）：
（Ｎ）      ５’          （Ｎ）x−Ｚ      ３’  （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）y        ５’  （センス鎖）
［ここで、Ｎ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド及び修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）x及び（Ｎ’）yはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が、共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は存在せず；
ｘ及びｙはそれぞれ独立して、１８と４０との間の整数であり；
（Ｎ）ｘ、（Ｎ’）ｙ又は（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙは、二本鎖化合物において（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙが１５個未満の塩基対を形成するように、塩基対合しない修飾されたヌクレオチドを含み；そしてここで（Ｎ’）ｙの配列は（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の１８〜４０個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する二本鎖化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｈのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０２３８】
他の実施態様において、本発明は、以下に示される構造（Ｏ）：
（Ｏ）    ５’          （Ｎ）x−Ｚ      ３’  （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）y        ５’  （センス鎖）
［Ｎはそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド及び修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
Ｎ’はそれぞれ、六員糖ヌクレオチド、七員糖ヌクレオチド、モルホリノ部分、ペプチド核酸及びそれらの組み合わせより選択されるヌクレオチド類似体であり；
（Ｎ）x及び（Ｎ’）yはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は存在せず；
ｘ及びｙはそれぞれ独立して、１８と４０と間の整数であり；
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の１８〜２７個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｈのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０２３９】
他の実施態様において、本発明は、以下に示される構造（Ｐ）：
（Ｐ）    ５’          （Ｎ）x−Ｚ      ３’  （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）y        ５’  （センス鎖）
［ここで、Ｎ及びＮ’はそれぞれ、未修飾リボヌクレオチド、修飾されたリボヌクレオチド、未修飾デオキシリボヌクレオチド及び修飾されたデオキシリボヌクレオチドより選択されるヌクレオチドであり；
（Ｎ）x及び（Ｎ’）yはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は存在せず
ｘ及びｙはそれぞれ独立して、１８と４０との間の整数であり；
（Ｎ）ｘ若しくは（Ｎ’）ｙの内部位置中のＮ若しくはＮ’のうちの１つ、又は（Ｎ）ｘ若しくは（Ｎ’）ｙの末端位置における１つ若しくはそれ以上のＮ若しくはＮ’は、脱塩基部分又は２’修飾されたヌクレオチドを含み；
（Ｎ’）ｙの配列は、（Ｎ）ｘに対して実質的に相補的な配列であり；そして（Ｎ）ｘの配列は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ中の１８〜２７個の連続したリボヌクレオチドに対して実質的に相補的なアンチセンス配列を含む］
を有する化合物を提供する。好ましくは、（Ｎ）ｘは、表Ａ〜Ｈのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。
【０２４０】
種々の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、１５番目の位置に修飾されたヌクレオチドを含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、ミラーヌクレオチド及びデオキシリボヌクレオチドより選択される。
【０２４１】
特定の実施態様において、（Ｎ’）ｙは、修飾されたヌクレオチドを２番目の位置にさらに含み、ここで修飾されたヌクレオチドは、ミラーヌクレオチド及び脱塩基非通常部分より選択される。
【０２４２】
種々の実施態様において、アンチセンス鎖（Ｎ）ｘは、２’Ｏ−Ｍｅ修飾リボヌクレオチドを奇数番目の位置（５’から３’へ；１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９番目の位置）に含む。いくつかの実施態様において、（Ｎ）Xは、２’Ｏ−Ｍｅ修飾リボヌクレオチドを２番目及び１８番目の位置の一方又は両方にさらに含む。他の実施態様において、（Ｎ）ｘは、２’ＯＭｅ修飾リボヌクレオチドを２、４、６、８、１１、１３、１５、１７、１９番目の位置に含む。
【０２４３】
本発明により提供されるさらなる新規な分子は、連続したヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドであり、ここでこのようなヌクレオチドの第一のセグメントは第一の阻害性ＲＮＡ分子をコードし、このようなヌクレオチドの第二のセグメントは第二の阻害性ＲＮＡ分子をコードし、そしてこのようなヌクレオチドの第三のセグメントは、第三の阻害性ＲＮＡ分子をコードする。第一、第二、及び第三のセグメントはそれぞれ、二本鎖ＲＮＡの１つの鎖を含み得、そして第一、第二及び第三のセグメントは、リンカーにより一緒に結合され得る。さらに、オリゴヌクレオチドは、１つ又はそれ以上のリンカーにより一緒に結合された３つの二本鎖セグメントを含み得る。
【０２４４】
従って、本発明により提供される１つの分子は、３つの阻害性ＲＮＡ分子をコードする連続したヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドであり；上記オリゴヌクレオチドは、３つの二本鎖アームが、本明細書で以前に示されたリンカーのいずれかのようなリンカー１つ又はそれ以上により一緒に連結されるように、３本鎖構造を有し得る。この分子は、「星（ｓｔａｒ）」様構造を形成し、そしてこれはまた、本明細書でＲＮＡｓｔａｒとも呼ばれ得る。このような構造は、本発明の譲受人が譲り受けたＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２００７／０９１２６９号（その全体が参照により本明細書に加入される）に開示される。
【０２４５】
上記三本鎖のオリゴヌクレオチドは、以下の一般構造を有するオリゴリボヌクレオチドであり得る：
５’  オリゴ１（センス）  リンカーＡ  オリゴ２（センス）  ３’
３’  オリゴ１  （アンチセンス）  リンカーＢ  オリゴ３（センス）  ５’
３’  オリゴ３（アンチセンス）  リンカーＣ  オリゴ２  （アンチセンス）  ５’
又は
５’  オリゴ１（センス）  リンカーＡ  オリゴ２  （アンチセンス）  ３’
３’  オリゴ１  （アンチセンス）  リンカーＢ  オリゴ３（センス）  ５’
３’  オリゴ３  （アンチセンス）  リンカーＣ  オリゴ２（センス）  ５’
又は
５’  オリゴ１（センス）  リンカーＡ  オリゴ３  （アンチセンス）  ３’
３’  オリゴ１  （アンチセンス）  リンカーＢ  オリゴ２（センス）  ５’
５’  オリゴ３（センス）  リンカーＣ  オリゴ２（アンチセンス）  ３’
［ここで、リンカーＡ、リンカーＢ又はリンカーＣのうち１つ又はそれ以上が存在し；鎖の極性及び分子の全体構造が残っている限り、２つ又はそれ以上のオリゴヌクレオチドと１つ又はそれ以上のリンカーＡ〜Ｃのいずれの組み合わせも可能である。さらに、２つ又はそれ以上のリンカーＡ〜Ｃが存在する場合、それらは同一でも異なっていてもよい。］
【０２４６】
従って、三重アーム構造が形成され、ここで各アームは、センス鎖及び相補的なアンチセンス鎖（すなわち、オリゴ１センスに対してオリゴ１アンチセンス塩基対など）を含む。三重アーム構造は三本鎖であってもよく、これにより各アームは塩基対合を有する。
【０２４７】
さらに、上記の三本鎖構造は、１つ又はそれ以上の鎖においてリンカーの代わりにギャップを有し得る。このような１つのギャップを有する分子は、技術的には四本鎖であり、三本鎖ではなく；さらなるギャップ又はニックの挿入は、さらなる鎖を有する分子をもたらす。本発明の発明者らにより得られた予備的な結果は、上記のギャップを有する分子が、類似しているがギャップのない分子よりも、ＲＴＰ８０１標的遺伝子の阻害においてより活性であるということを示した。
【０２４８】
いくつかの実施態様において、本発明の新規なｓｉＲＮＡ化合物のアンチセンス鎖もセンス鎖も、３’末端及び５’末端においてリン酸化されていない。他の実施態様において、アンチセンス鎖及びセンス鎖のいずれか又は両方が、３’末端においてリン酸化されている。さらに別の実施態様において、アンチセンス鎖及びセンス鎖のいずれか又は両方が、切断可能でないホスフェート基を使用して３’末端においてリン酸化されている。さらに別の実施態様において、アンチセンス鎖及びセンス鎖のいずれか又は両方が、切断可能なホスフェート基又は切断可能でないホスフェート基を使用して、末端の５’末端位置においてリン酸化されている。さらに別の実施態様において、アンチセンス鎖及びセンス鎖のいずれか又は両方が、切断可能なホスフェート基又は切断可能でないホスフェート基を使用して末端の２’末端位置においてリン酸化されている。いくつかの実施態様において、ｓｉＲＮＡ化合物は平滑末端であり、そして末端においてリン酸化されていない；しかし、比較実験により、３’末端の一方又は両方においてリン酸化されたｓｉＲＮＡ化合物が、リン酸化されていない化合物と比較してインビボで同様の活性を有することが示された。
【０２４９】
本明細書に開示される修飾／構造のいずれかを有する本発明に開示される任意のｓｉＲＮＡ配列を製造することができる。配列と構造との組み合わせは新規であり、そして本明細書に開示される状態の処置において使用することができる。
【０２５０】
そうではないと示されていなければ、本明細書において考察される構造の好ましい実施態様において、各々の連続したＮ及びＮ’の間の共有結合はホスホジエステル結合である。
【０２５１】
上記の構造の全てについて、いくつかの実施態様において、アンチセンス鎖のオリゴヌクレオチド配列は、センスのオリゴヌクレオチド配列に対して完全に相補的である。他の実施態様において、アンチセンス鎖及びセンス鎖は実質的に相補的である。特定の実施態様において、アンチセンス鎖はＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡに対して完全に相補的である。他の実施態様において、アンチセンス鎖はＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡに対して実施的に相補的である。好ましくはアンチセンス鎖の配列は、表Ａ〜Ｈのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一である。
【０２５２】
いくつかの実施態様において、本発明は、表Ｄ〜Ｈのいずれか１つにおいて開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。いくつかの実施態様において、発現ベクターは、アンチセンスオリゴヌクレオチドに対して相補性を有するセンスオリゴヌクレオチドをさらに含む。種々の実施態様において、本発明はさらに、表Ｄ〜Ｈのいずれか１つにおいて開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む発現ベクターを含む細胞を提供する。本発明はさらに、表Ｄ〜Ｈのいずれか１つにおいて開示されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む発現ベクターを含む細胞で発現されたｓｉＲＮＡ、上記ｓｉＲＮＡを含む医薬組成物、並びに本明細書において開示される疾患及び障害のいずれか１つの処置のためのそれらの使用を提供する。
【０２５３】
他の実施態様において、本発明は、表Ｄ〜Ｈのいずれか１つにおいて開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む第一の発現ベクター、及び第一の発現ベクターに含まれるアンチセンスオリゴヌクレオチドに対して相補性を有するセンスオリゴヌクレオチドを含む第二の発現ベクターを提供する。種々の実施態様において、本発明はさらに、表Ｄ〜Ｈのいずれか１つにおいて開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む第一の発現ベクター、及び第一の発現ベクターに含まれるアンチセンスオリゴヌクレオチドに対して相補性を有するセンスオリゴヌクレオチドを含む第二の発現ベクターを含む細胞を提供する。本発明はさらに、このような第一の発現ベクター及び第二の発現ベクターを含む細胞において発現されたｓｉＲＮＡ、このｓｉＲＮＡを含む医薬組成物、並びに本明細書において開示される疾患及び障害のいずれか１つの処置のためのそれらの使用を提供する。
【０２５４】
ｓｉＲＮＡ合成
専用のアルゴリズム及び本明細書に開示されるＲＴＰ８０１遺伝子の公知の配列を使用して、多くの可能性があるｓｉＲＮＡの配列が生成される。上記の明細書に従うｓｉＲＮＡ分子は、本質的には本明細書に記載されるように製造される。
【０２５５】
本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、リボ核酸（又はデオキシリボ核酸）オリゴヌクレオチドの合成のための、当該分野で周知である方法のいずれかにより合成される。このような合成は、とりわけ、Ｂｅａｕｃａｇｅ  ａｎｄ  Ｉｙｅｒ、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９２；４８：２２２３−２３１１；Ｂｅａｕｃａｇｅ  ａｎｄ  Ｉｙｅｒ、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９３；４９：６１２３−６１９４及びＣａｒｕｔｈｅｒｓ、ｅｔ．ａｌ．、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９８７；１５４：２８７−３１３において記載され；チオエートの合成は、とりわけ、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８５；５４：３６７−４０２に記載され、ＲＮＡ分子の合成は、Ｓｐｒｏａｔ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  ２００５  Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ  Ｐ．編；Ｋａｐ．２：１７−３１に記載され、そしてそれぞれの下流のプロセスは、とりわけ、Ｐｉｎｇｏｕｄ  ｅｔ  ａｌ．、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  １９８９  Ｏｌｉｖｅｒ  Ｒ．Ｗ．Ａ．編；Ｋａｐ．７：１８３−２０８に記載される。
【０２５６】
他の合成手順は当該分野で公知であり、例えばＵｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．、１９８７、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１０９、７８４５；Ｓｃａｒｉｎｇｅ  ｅｔ  ａｌ．、１９９０、ＮＡＲ．、１８、５４３３；Ｗｉｎｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．、１９９５、ＮＡＲ．２３、２６７７−２６８４；及びＷｉｎｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．、１９９７、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．、７４、５９に記載される手順は、一般的な核酸の保護基及びカップリング基、例えば５’末端におけるジメトキシトリチル、及び３’末端におけるホスホラミダイトを利用し得る。修飾された（例えば２’−Ｏ−メチル化した）ヌクレオチド及び未修飾ヌクレオチドは必要に応じて組み込まれる。
【０２５７】
本発明のオリゴヌクレオチドは、別々に合成し、そして例えばライゲーションにより（Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．、１９９２、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６、９９２３；Ｄｒａｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、国際特許公開第ＷＯ９３／２３５６９号；Ｓｈａｂａｒｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．、１９９１、ＮＡＲ  １９、４２４７；Ｂｅｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、１９９７、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、１６、９５１；Ｂｅｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、１９９７、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．８、２０４）、又は合成及び／若しくは脱保護後のハイブリダイゼーションにより、合成後に一緒に結合することができる。
【０２５８】
市販の機器（とりわけＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓより入手可能）を使用することができることに注意する；オリゴヌクレオチドは、本明細書において開示される配列にしたがって製造される。化学的に合成されたフラグメントのオーバーラップしている対は、当該分野で周知の方法（例えば、米国特許第６，１２１，４２６号を参照のこと）を使用して連結することができる。鎖を別々に合成し、次いでチューブ内で互いにアニーリングさせる。次いで、二本鎖ｓｉＲＮＡを、（例えばそれらの一方が過剰であるために）アニーリングされなかった一本鎖オリゴヌクレオチドとＨＰＬＣにより分離する。本発明のｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡフラグメントに関して、２つ又はそれ以上のこのような配列を、本発明における使用のために合成して一緒に連結することができる。
【０２５９】
本発明の化合物はまた、例えば米国特許公開第２００４／００１９００１号に記載されるように、タンデム合成方法論により合成することもでき、ここで両方のｓｉＲＮＡ鎖は、切断可能なリンカーにより隔てられた単一の連続したオリゴヌクレオチドフラグメント又は鎖として合成され、続いてこれを切断して別々のｓｉＲＮＡフラグメント又は鎖を得、これがハイブリダイズしてｓｉＲＮＡ二重鎖の精製を可能とする。このリンカーは、ポリヌクレオチドリンカー又は非ヌクレオチドリンカーより選択される。
【０２６０】
医薬組成物
本発明の化合物をそのままの化学物質として投与することは可能であるが、それらを医薬組成物として提示することが好ましい。従って、本発明は、１つ又はそれ以上の本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物；及び薬学的に許容しうる担体を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様において、医薬組成物は、２つ又はそれ以上の本発明の新規なｓｉＲＮＡ化合物を含む。
【０２６１】
本発明はさらに、ＲＴＰ８０１遺伝子を阻害するために有効な量の、１つ又はそれ以上の本発明の化合物に共有結合で又は非共有結合で結合された少なくとも１つの本発明の化合物：及び薬学的に許容しうる担体を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様において、ｓｉＲＮＡ化合物は、内因性細胞複合体により細胞内でプロセシングされて１つ又はそれ以上の本発明のオリゴリボヌクレオチドを生じる。
【０２６２】
本発明はさらに、薬学的に許容しうる担体、及び１つ又はそれ以上の本発明の化学修飾されたａｓｉＲＮＡ化合物を、ＲＴＰ８０１遺伝子の細胞における発現を阻害するために有効な量で含む医薬組成物を提供し、この化合物は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡの配列に対して実施的に相補的な配列を含む。
【０２６３】
いくつかの実施態様において、本発明に従うｓｉＲＮＡ化合物は、医薬組成物における主要な活性成分である。他の実施態様において、本発明に従うｓｉＲＮＡ化合物は、２つ又はそれ以上のｓｉＲＮＡを含有する医薬組成物の活性成分のうちの１つであり、該医薬組成物はさらに、ＲＴＰ８０１遺伝子を標的とする１つ又はそれ以上のさらなるｓｉＲＮＡ分子から成っている。他の実施態様において、本発明に従うｓｉＲＮＡ化合物は、２つ又はそれ以上のｓｉＲＮＡを含有する医薬組成物の活性成分のうちの１つであり、該医薬組成物はさらに、１つ又はそれ以上のさらなる遺伝子を標的とする１つ又はそれ以上のさらなるｓｉＲＮＡ分子から成っている。いくつかの実施態様において、２つ又はそれ以上の本発明のｓｉＲＮＡ化合物によるＲＴＰ８０１遺伝子の同時阻害は、本明細書において開示される疾患の処置に関して相加効果又は相乗効果をもたらす。いくつかの実施態様において、ＲＴＰ８０１遺伝子及び上記さらなる遺伝子の同時阻害は、本明細書において開示される疾患の処置に関して相加効果又は相乗効果をもたらす。
【０２６４】
いくつかの実施態様において、本明細書において開示されるｓｉＲＮＡ化合物は、本明細書において開示される疾患の処置に対して増強された標的化を達成するために、標的細胞で発現される細胞表面内部移行性（ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｂｌｅ）分子に対する抗体又はアプタマーに（共有結合又は非共有結合で）連結又は結合される。１つの特定の実施態様において、抗Ｆａｓ抗体（好ましくは中和抗体）を、本発明のｓｉＲＮＡ化合物と（共有結合又は非共有結合で）組み合わせる。種々の実施態様において、リガンド／抗体のように作用するアプタマーを、本発明のｓｉＲＮＡ化合物と（共有結合又は非共有結合で）組み合わせる。
【０２６５】
ＲＮＡ干渉
ＲＮＡｉ現象に関連する多数のＰＣＴ出願が、最近公開された。これらには：ＰＣＴ公開ＷＯ００／４４８９５；ＰＣＴ公開ＷＯ００／４９０３５；ＰＣＴ公開ＷＯ００／６３３６４；ＰＣＴ公開ＷＯ０１／３６６４１；ＰＣＴ公開ＷＯ０１／３６６４６；ＰＣＴ公開ＷＯ９９／３２６１９；ＰＣＴ公開ＷＯ００／４４９１４；ＰＣＴ公開ＷＯ０１／２９０５８；及びＰＣＴ公開ＷＯ０１／７５１６４が含まれる。
【０２６６】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、細胞質タンパク質複合体に入り、次いでここで相補的細胞ＲＮＡに標的化され、そして特異的にそれを分解する、ｄｓＲＮＡ種の能力に基づく。ＲＮＡ干渉応答は、一般的にＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と呼ばれる、ｓｉＲＮＡを含むエンドヌクレアーゼ複合体を特色とし、これがｓｉＲＮＡ二重鎖のアンチセンス鎖に相補的な配列を有する一本鎖ＲＮＡの切断を媒介する。標的ＲＮＡの切断は、ｓｉＲＮＡ二重鎖のアンチセンス鎖に相補的な領域の中央において起こり得る（Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．、２００１、１５（２）：１８８−２００）。より詳細には、長鎖ｄｓＲＮＡが、ＩＩＩ型ＲＮＡｓｅ（ＤＩＣＥＲ、ＤＲＯＳＨＡなど；Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ、２００１、４０９（６８１８）：３６３−６；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ、２００３、４２５（６９５６）：４１５−９を参照のこと）により低分子（１７−２９ｂｐ）ｄｓＲＮＡフラグメント（低分子阻害（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ）ＲＮＡ又は「ｓｉＲＮＡ」とも呼ばれる）へと消化される。ＲＩＳＣタンパク質複合体は、これらのフラグメント及び相補ｍＲＮＡを認識する。プロセス全体は、標的ｍＲＮＡのエンドヌクレアーゼ切断で終わりとなる（ＭｃＭａｎｕｓ  ＆  Ｓｈａｒｐ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ遺伝子ｔ、２００２、３（１０）：７３７−４７；Ｐａｄｄｉｓｏｎ  ＆  Ｈａｎｎｏｎ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２００３、５（３）：２１７−２４）。（これらの用語及び提案された機構に関するさらなる情報については、例えばＢｅｒｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．、ＲＮＡ  ２００１、７（１１）：１５０９−２１；Ｎｉｓｈｉｋｕｒａ、Ｃｅｌｌ  ２００１、１０７（４）：４１５−８  及びＰＣＴ公開ＷＯ０１／３６６４６を参照のこと）。
【０２６７】
公知の遺伝子に対応するｓｉＲＮＡの選択及び合成は、広く報告されている；例えば、Ｕｉ−Ｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００６；２００６：６５０５２；  Ｃｈａｌｋ  ｅｔ  ａｌ．、ＢＢＲＣ．２００４、３１９（１）：２６４−７４；Ｓｉｏｕｄ  ＆  Ｌｅｉｒｄａｌ、Ｍｅｔ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．；２００４、２５２：４５７−６９；Ｌｅｖｅｎｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍ．２００４、２０（３）：４３０−２；Ｕｉ−Ｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．２００４、３２（３）：９３６−４８を参照のこと。修飾されたｓｉＲＮＡの使用、製造の例については、Ｂｒａａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２００３、４２（２６）：７９６７−７５；Ｃｈｉｕ  ｅｔ  ａｌ．、ＲＮＡ、２００３、９（９）：１０３４−４８；ＰＣＴ公開ＷＯ２００４／０１５１０７（Ａｔｕｇｅｎ）；ＷＯ０２／４４３２１（Ｔｕｓｃｈｌ  ｅｔ  ａｌ）、及び米国特許第５，８９８，０３１号及び同第６，１０７，０９４号を参照のこと。
【０２６８】
送達
本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、化合物自体として（すなわち裸のｓｉＲＮＡとして）又は薬学的に許容しうる塩として投与することができ、そして単独で、又は１つ又はそれ上の薬学的に許容しうる担体、溶媒、希釈剤、賦形剤、アジュバント及びビヒクルと組み合わせた活性成分として投与される。いくつかの実施態様において、本発明のｓｉＲＮＡ分子は、担体又は希釈剤とともに製造された裸の分子の直接適用により標的組織に送達される。
【０２６９】
用語「裸のｓｉＲＮＡ」は、細胞への進入を補助、促進するか容易にするように作用するどんな送達ビヒクル（ウイルス配列、ウイルス粒子、リポソーム製剤、リポフェクチン又は沈殿剤などを含む）も含まない、ｓｉＲＮＡ分子を指す。例えば、ＰＢＳ中のｓｉＲＮＡは「裸のｓｉＲＮＡ」である。
【０２７０】
薬学的に許容しうる担体、溶媒、希釈剤、賦形剤、アジュバント及びビヒクル、さらには移植担体は、一般に、本発明の活性なｓｉＲＮＡ化合物と反応しない不活性な非毒性の固形又は液体のフィラー、希釈剤又はカプセル化材料を指し、そしれこれらには、リポソーム及びミクロスフェアが含まれる。組成物をリポソームで製剤化することは吸収に有利になり得る。さらに、組成物はペルフルブロンのようなＰＦＣ液を含んでいてもよく、そして組成物は、本発明の化合物とポリエチレンイミン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｍｅｉｍｉｎｅ）（ＰＥＩ）との複合体として製剤化されてもよい。本発明において有用な送達系の例としては、米国特許第５，２２５，１８２号；同第５，１６９，３８３号；同第５，１６７，６１６号；同第４，９５９，２１７号；同第４，９２５，６７８号；同第４，４８７，６０３号；同第４，４８６，１９４号；同第４，４４７，２３３号；同第４，４４７，２２４号；同第４，４３９，１９６号；及び同第４，４７５，１９６号が挙げられる。多くのこのようなインプラント、送達系、及びモジュールは当業者に周知である。本発明の１つの特定の実施態様において、局所製剤及び経皮製剤が選択される。
【０２７１】
従って、いくつかの実施態様において、本発明のｓｉＲＮＡ分子は、リポソーム製剤及びリポフェクチン製剤などで送達され、そして当業者に周知の方法により製造され得る。このような方法は、例えば、米国特許第５，５９３，９７２号、同第５，５８９，４６６号、及び同第５，５８０，８５９号（これらは本明細書に参照により加入される）に記載される。
【０２７２】
哺乳動物細胞へのｓｉＲＮＡの増強され改善された送達を特に目指した送達系が開発されている（例えば、Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔ．５３９：１１１−１１４（２００３）、Ｘｉａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０：１００６−１０１０（２００２）、Ｒｅｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌ．Ｖｉｓｉｏｎ  ９：２１０−２１６（２００３）、Ｓｏｒｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３２７：７６１−７６６（２００３）、Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔ．Ｇｅｎ．３２：１０７−１０８（２００２）及びＳｉｍｅｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．、ＮＡＲ  ３１、１１：２７１７−２７２４（２００３）を参照のこと）。近年ｓｉＲＮＡは、霊長類における遺伝子発現の阻害に首尾よく使用されている；（詳細については、例えばＴｏｌｅｎｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．、Ｒｅｔｉｎａ  ２００４．２４（１）：１３２−１３８を参照のこと）。
【０２７３】
本発明の化合物の改善された送達のためのさらなる製剤としては、非製剤化合物、コレステロールに共有結合で結合された化合物、及び標的化抗体に結合された化合物を挙げることができる（Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡｓ  ｖｉａ  ｃｅｌｌ−ｓｕｒｆａｃｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５．２３（６）：７０９−１７）。コレステロール接合ｓｉＲＮＡ（並びに他のステロイド接合ｓｉＲＮＡ及び脂質接合ｓｉＲＮＡ）を送達に使用することができる（例えばＳｏｕｔｓｃｈｅｋ  ｅｔ  ａｌ  Ｎａｔｕｒｅ．２００４．４３２：１７３−１７７；及びＬｏｒｅｎｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００４．１４：４９７５−４９７７を参照のこと）。
【０２７４】
裸のｓｉＲＮＡ又は本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡを含む医薬組成物は、適切な医療行為に従って、個々の患者の臨床状態、処置しようとする疾患、投与の部位及び方法、投与のスケジュール、患者の年齢、性別、体重並びに医師に公知の他の因子を考慮して、投与及び服用される。
【０２７５】
従って、本明細書での目的のための「治療有効用量」は、当該分野で知られているような考察により決定される。用量は、改善された生存率若しくはより速い回復、又は症状の改善若しくは解消、及び当業者により適切な基準として選択されるような他の指標を含むがこれらに限定されない改善を達成するように有効でなければならない。本発明のｓｉＲＮＡは、単回用量又は複数回用量で投与することができる。
【０２７６】
一般に、ヒトに対する化合物の活性用量は、１〜４週又はそれ以上の期間に１日あたり１用量又は１日あたり２回若しくは３回若しくはそれ以上のレジメンでの、１日あたり体重１ｋｇあたり１ｎｇから約２０〜１００ｍｇの範囲、好ましくは１日あたり体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇから約２〜１０ｍｇの範囲である。
【０２７７】
本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、従来の投与経路のいずれかで投与することができる。化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、経口、皮下又は静脈内、動脈内、筋内、腹腔内、眼内、経鼓膜（ｔｒａｎｓｔｙｍｐａｎｉｃ）及び鼻腔内投与を含む非経口で、さらに髄腔内及び注入技術により投与される。化合物のインプラントも有用である。
【０２７８】
液状形態は、侵襲性投与、例えば注射のため、又は外用もしくは局所投与のために製造される。用語注射は、皮下、経皮、静脈内、筋内、髄腔内、眼内、経鼓膜及び他の親（ｐａｒｅｎｔａｌ）投与経路を含む。液状組成物としては、有機共溶媒を含む水性液剤及び有機共溶媒を含まない水性液剤、水性又は油性の懸濁剤、食用油、さらには同様の製薬用ビヒクルを用いた乳剤が挙げられる。特定の実施態様において、投与は、静脈内投与を含む。いくつかの実施態様において、本発明の化合物は、耳への局所投与用の点耳剤として製剤化される。いくつかの実施態様において、本発明の化合物は、眼の表面への局所投与用の点眼剤として製剤化される。本発明の化合物の投与に関するさらなる情報は、Ｔｏｌｅｎｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．、Ｒｅｔｉｎａ  ２００４．２４：１３２−１３８；及びＲｅｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｖｉｓｉｏｎ、２００３．９：２１０−２１６に見いだされ得る。
【０２７９】
さらに、特定の実施態様において、本発明の新規な処置における使用のための組成物は、例えば鼻腔内投与のための、エアゾール剤として形成される。特定の実施態様において、本発明の新規な処置における使用のための組成物は、例えば鼻腔内滴注用の点鼻剤として形成される。
【０２８０】
本発明の治療用組成物は、好ましくは、これらの組成物／化合物を含有するエアゾール剤の吸入により、又は上記組成物の鼻腔内若しくは気管内滴注により、肺に投与される。医薬組成物の肺送達に関するさらなる情報については、Ｗｅｉｓｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １９９９．１０：２２８７−２２９３；Ｄｅｎｓｍｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  １９９９．１：１８０−１８８；Ｇａｕｔａｍ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２００１．３：５５１−５５６；及びＳｈａｈｉｗａｌａ  ＆  Ｍｉｓｒａ、ＡＡＰＳ  ＰｈａｒｍＳｃｉＴｅｃｈ  ２００４．２４；６（３）：Ｅ４８２−６を参照のこと。さらに、ｓｉＲＮＡの呼吸器用製剤は、米国特許出願公開第２００４／００６３６５４号に記載される。ｓｉＲＮＡの呼吸器用製剤は、米国特許出願公開第２００４／００６３６５４号に記載される。
【０２８１】
特定の実施態様において、経口組成物（例えば、錠剤、懸濁剤、液剤）は、口腔粘膜炎の処置のためのうがい薬に適した経口組成物のように、口腔への局所送達に有効であり得る。
【０２８２】
特定の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、腎障害、例えば急性腎不全（ＡＲＦ）、臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）の処置のための腎臓への送達ための静脈内投与用に製剤化される。腎近位尿細管における標的細胞への本発明のｓｉＲＮＡ化合物の送達は、ＡＲＦ及びＤＧＦの処置において特に有効であることに注意する。理論に拘束されないが、このことは、通常、ｓｉＲＮＡ分子が腎近位尿細管の細胞を経由して身体から排出されるという事実に起因するかもしれない。従って、裸のｓｉＲＮＡ分子は、ＡＲＦ及びＤＧＦにおける治療のために標的化された細胞に集中する。
【０２８３】
脳への化合物の送達は、とりわけ、神経外科的インプラント、血液脳関門破壊（ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ）、脂質媒介輸送、担体媒介流入又は流出、血漿タンパク質媒介輸送、受容体媒介経細胞輸送、吸収剤媒介経細胞輸送、血液脳関門における神経ペプチド輸送、及び薬物標的化のための遺伝子改変「トロイの木馬」のような、いくつかの方法により達成される。上記の方法は、例えば「Ｂｒａｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ：ｔｈｅ  ｆｕｔｕｒｅ  ｏｆ  ｂｒａｉｎ  ｄｒｕｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」、Ｗ．Ｍ．Ｐａｒｄｒｉｄｇｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ  （２００１）に記載されるように行われる。
【０２８４】
さらに、特定の実施態様において、本発明の新規な処置における使用のための組成物は、エアゾール剤として、例えば鼻腔内投与用に形成される。
【０２８５】
ＣＮＳ疾患の処置のための鼻腔内送達は、米国特許出願公開第２００６００３９８９号及びＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００４／００２４０２号及び同第ＷＯ２００５／１０２２７５号に記載されるように、ガランタミン及び種々の塩並びにガランタミンの誘導体のような、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤を用いて達成されている。例えば点鼻剤の鼻腔内滴注による、ＣＮＳ疾患の処置のための核酸の鼻腔内送達は、例えばＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００７／１０７７８９号に記載されている。
【０２８６】
処置方法
一局面において、本発明は、ＲＴＰ８０１に関連する障害に罹患している被験体を処置する方法に関し、この方法は、被験体に治療有効量の本発明のｓｉＲＮＡを投与することを含む。好ましい実施態様において、処置される被験体は温血動物、特にヒトを含む哺乳動物である。
【０２８７】
「被験体を処置する」は、疾患に関連する症状を寛解させるため、疾患の重症度を軽くするか若しくは疾患を治癒するため、又は疾患の発症を防止するために有効な治療物質を被験体に投与することを指す。「処置」は、治療的処置及び予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）若しくは予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）な手段の両方を指し、ここで目的は障害を予防するか、障害の症状を減少させることである。処置を必要とするものには、既に疾患又は状態を経験したもの、疾患又は状態になりやすいもの、及び疾患又は状態を予防しようとするものが含まれる。本発明の化合物は、疾患又は状態の発症前、間、又は後に投与される。
【０２８８】
「治療有効用量」は、改善された生存率、より速い回復、又は症状の改善若しくは解消、及び当業者により適切な決定基準として選択されるような他の指標を含むがこれらに限定されない、被験体又はその生理系における改善を達成するために有効である、医薬化合物又は医薬組成物の量を指す。
【０２８９】
本明細書に開示され、本発明に含まれる疾患の処置方法は、さらなるＲＴＰ８０１阻害剤、以下に詳述されるような活性成分（例えばｓｉＲＮＡ）の薬理特性を改善する物質、又は本明細書で上述された疾患及び障害（例えばとりわけ黄斑変性、ＣＯＰＤ、ＡＲＦ、ＤＲ）のいずれかに罹患しているか若しくは感受性である被験体の処置において有効であることが知られているさらなる化合物と、併用して又は組み合わせて、ＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ阻害剤を投与することを含み得る。従って本発明は、別の局面において、少なくとも１つのさらなる治療活性薬剤との、本発明の治療用ｓｉＲＮＡ化合物の組み合わせを提供する。「併用して（ｉｎ  ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ）」又は「組み合わせて（ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ）」は、前に、同時に、又は後に、を意味する。従って、このような組み合わせの個々の構成要素は、同じ医薬製剤化又は別々の医薬製剤から順次又は同時のどちらで投与してもよい。典型的な組み合わせ治療に関するさらなる詳細を以下に示す。
【０２９０】
「呼吸器障害」は、とりわけ、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気腫、慢性気管支炎、喘息及び肺癌を含む全ての種類の肺障害を含むがこれらに限定されない、呼吸器系の状態、疾患又は症状を指す。気腫及び慢性気管支炎は、ＣＯＰＤの一部として又は独立して発生し得る。
【０２９１】
「微小血管障害」は、微細な毛細血管とリンパ管に影響を及ぼす任意の状態、特に血管攣縮性疾患、血管炎性疾患およびリンパ管閉塞性疾患を指す。微小血管障害の例としては、とりわけ：眼の障害、たとえば一過性黒内障（塞栓性またはＳＬＥ続発性）、抗リン脂質抗体症候群（ａｐｌａ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、Ｐｒｏｔ  ＣＳおよびＡＴＩＩＩ欠乏症、静注薬使用に起因する微小血管病変、タンパク異常血症、側頭動脈炎、前部虚血性視神経症、（原発性または自己免疫疾患に続発性の）視神経炎、緑内障、フォンヒッペル・リンダウ症候群、角膜疾患、角膜移植拒絶反応白内障（ｃｏｒｎｅａｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｃａｔａｒａｃｔｓ）、イールズ病、霜状分枝血管炎、輪状バックリング手術（ｅｎｃｉｒｃｌｉｎｇ  ｂｕｃｋｌｉｎｇ  ｏｐｅｒａｔｉｏｎ）、毛様体扁平部炎を含むブドウ膜炎、脈絡膜黒色腫、脈絡膜血管腫、視神経形成不全；網膜の状態、例えば網膜動脈閉塞、網膜静脈閉塞、未熟児網膜症、ＨＩＶ網膜症、プルチャーの網膜症、全身性血管炎および自己免疫疾患の網膜症、糖尿病性網膜症、高血圧性網膜症、放射線網膜症、網膜動脈分枝閉塞または網膜静脈分枝閉塞、特発性網膜血管炎、動脈瘤、視神経網膜炎、網膜塞栓形成、急性網膜壊死、バードショット網膜脈絡膜症（ｂｉｒｄｓｈｏｔ  ｒｅｔｉｎｏｃｈｏｒｏｉｄｏｐａｔｈｙ）、長期的網膜剥離；全身性の状態、例えば真性糖尿病、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、糖尿病関連微小血管病変（本明細書中に詳述されるような）、過粘稠度症候群、大動脈弓症候群および眼虚血症候群、頚動脈海綿静脈洞瘻、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、ＳＳ−Ａ自己抗体を伴なう細動脈炎、急性多病巣性出血性血管炎（ａｃｕｔｅ  ｍｕｌｔｉｆｏｃａｌ  ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ  ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）、感染に起因する血管炎、ベーチェット病に起因する血管炎、サルコイドーシス、凝固障害、ニューロパシー、ネフロパシー、腎臓の微小血管疾患、ならびに虚血性微小血管状態が挙げられる。
【０２９２】
微小血管障害は、血管新生的要素を含み得る。用語「血管新生障害」は、血管の形成（新生血管形成）が患者に有害である状態を指す。眼の新生血管形成の例としては：網膜疾患（糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、慢性緑内障、網膜剥離、および鎌状赤血球網膜症）；虹彩血管新生（ｒｕｂｅｏｓｉｓ  ｉｒｉｔｉｓ）；増殖性硝子体網膜症；炎症性疾患；慢性ブドウ膜炎；腫瘍（網膜芽腫、偽神経膠腫、および黒色腫）；フックス紅彩異色性虹彩毛様体炎（Ｆｕｃｈｓ'  ｈｅｔｅｒｏｃｈｒｏｍｉｃ  ｉｒｉｄｏｃｙｃｌｉｔｉｓ）；新生血管緑内障；角膜血管新生（虹彩の炎症性、移植、および発達性の形成不全）；水晶体切除術と併せた硝子体切除術後の新生血管形成、血管疾患（網膜虚血、脈絡膜血管不全、脈絡膜血栓、および頸動脈虚血）；視神経の新生血管形成；ならびに眼の穿通または挫傷性の（ｃｏｎｔｕｓｉｖｅ）眼外傷に起因する新生血管形成が挙げられる。これら全ての血管新生状態は、本発明の化合物および薬学的組成物を用いて処置され得る。
【０２９３】
「眼の疾患」は、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、滲出型および萎縮型ＡＭＤ、眼ヒストプラスマ症候群、網膜色素線条症（ａｎｇｉｏｄ  ｓｔｒｅａｋｓ）、ブルッフ膜における破裂、近視性変性、眼腫瘍、網膜変性疾患、および網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）を含むいずれかの状態を含むがこれらに限定されない眼の状態、疾患、または症候群を指す。本明細書中に開示される、本発明の方法により処置され得るいくつかの状態、例えばＤＲは、本明細書中に示される定義の下では微小血管障害および眼疾患のいずれか、またはその両方とされている。
【０２９４】
より詳細には、本発明は、成人呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；急性肺傷害（ＡＬＩ）；気腫；糖尿病性ニューロパシー、ネフロパシー及び網膜症；糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）及び他の糖尿病性状態；緑内障；加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）；骨髄移植（ＢＭＴ）網膜症；虚血性状態；眼の虚血性症候群（ＯＩＳ）；腎障害：急性腎不全（ＡＲＦ）、臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）、移植拒絶反応；聴覚障害（聴覚損失を含む）；脊髄損傷；口腔粘膜炎；ドライアイ症候群及び褥瘡；虚血性又は低酸素状態から生じる神経障害、例えば高血圧、高血圧性脳血管疾患、血栓又は塞栓の場合に起こるような−血管の狭窄又は閉塞、血管腫、血液疾患（ｂｌｏｏｄ  ｄｙｓｃｒａｓｉａｓ）、心停止又は心不全を含む心機能不全のいずれかの形態、全身性低血圧；脳卒中、てんかん、限定されないがパーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、ルー・ゲーリック病）、アルツハイマー病、ハンチントン病及び他のいずれかの疾患により誘導される認知症（例えばＨＩＶ関連認知症）を含む、神経変性障害に罹患しているか又はこれらに感受性である被験体の処置において有用な方法及び組成物を提供する。
【０２９５】
さらに、本発明は、コントロールと比較して少なくとも５０％、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を下方調節する方法を提供し、この方法は、ＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡを１つ又はそれ以上の本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物と接触させることを含む。
【０２９６】
一実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は哺乳動物ＲＴＰ８０１遺伝子を下方調節し、それにより、この下方調節は、遺伝子機能の下方調節、ポリペプチドの下方調節及びｍＲＮＡ発現の下方調節を含む群より選択される。
【０２９７】
本発明は、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を、コントロールと比較して少なくとも４０％、好ましくは５０％、６０％又は７０％、より好ましくは７５％、８０％又は９０％阻害する方法を提供し、この方法は、ＲＴＰ８０１遺伝子のｍＲＮＡ転写物を１つ又はそれ以上の本発明のｓｉＲＮＡ化合物と接触させることを含む。
【０２９８】
一実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、ＲＴＰ８０１ポリペプチドを阻害し、それによりこの阻害は、機能の阻害（これは、例えばとりわけ酵素アッセイ又は天然の遺伝子／ポリペプチドの既知の相互作用物質を用いる結合アッセイにより試験される）、ＲＴＰ８０１タンパク質の阻害（これは、例えばとりわけ、ウエスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ又は免疫沈降法により試験される）及びＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ発現の阻害（これは、例えばとりわけ、ノーザンブロット法、定量的ＲＴ−ＰＣＲ、インサイチュハイブリダイゼーション又はマイクロアレイハイブリダイゼーションにより試験される）を含む群より選択される。
【０２９９】
一実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、ＲＴＰ８０１遺伝子又はポリペプチドを下方調節しており、それによりこの下方調節は、機能の下方調節（これは、例えばとりわけ、酵素アッセイ又は天然の遺伝子／ポリペプチドの既知の相互作用物質を用いる結合アッセイにより試験される）、タンパク質の下方調節（これは、例えばとりわけ、ウエスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ又は免疫沈降法により試験される）、及びＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡ発現の下方調節（これは、例えばとりわけ、ノーザンブロット法、定量的ＲＴ−ＰＣＲ、インサイチュハイブリダイゼーション又はマイクロアレイハイブリダイゼーションにより試験される）を含む群より選択される。
【０３００】
さらなる実施態様において、本発明は、上昇したレベルの哺乳動物ＲＴＰ８０１遺伝子を伴う任意の疾患又は障害に罹患しているか又は感受性である被験体を処置する方法を提供し、この方法は、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物又は組成物を、治療有効用量で被験体に投与し、それにより被験体を処置することを含む。
【０３０１】
本発明は、哺乳動物ＲＴＰ８０１遺伝子の発現の阻害が有益である以下の疾患又は状態の処置における、哺乳動物ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を下方調節する化合物特に新規な低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡｓ）の使用、に関する：ＡＲＤＳ；ＣＯＰＤ；ＡＬＩ；気腫；糖尿病性ニューロパシー、ネフロパシー及び網膜症；ＤＭＥ及び他の糖尿病性状態；緑内障；ＡＭＤ；ＢＭＴ網膜症；脳卒中を含む虚血性状態；ＯＩＳ；神経変性障害、例えばパーキンソン病、アルツハイマー病、ＡＬＳ；腎障害：ＡＲＦ、ＤＧＦ、移植拒絶反応；聴覚障害；脊髄損傷；口腔粘膜炎；ドライアイ症候群及び褥瘡。
【０３０２】
哺乳動物ＲＴＰ８０１遺伝子又はポリペプチドを阻害する、方法、新規な化学修飾されたｓｉＲＮＡ分子、及び該ｓｉＲＮＡ化合物を含む医薬組成物が、本明細書において詳細に考察され、そして上記ｓｉＲＮＡ分子及び／又は医薬組成物のいずれかは、上記の状態のいずれかに罹患しているか又は感受性である被験体の処置において有利に使用される。公知の化合物が本発明から除外されることは、明確に理解されるべきである。公知の化合物及び組成物を使用する新規な処置方法は、本発明の範囲内である。
【０３０３】
本発明の方法は、治療有効量の、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を下方調節する１つ又はそれ以上の本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を投与することを含む。
【０３０４】
「毒物への曝露」は、毒物を哺乳動物に使用可能にするか又は哺乳動物と接触させることを意味する。毒物は、神経系に対して毒性であり得る。毒物への曝露は、直接投与により、例えば食物、医薬品、若しくは治療剤（例えば  化学療法剤）の摂取若しくは投与により、偶発的な混入により、又は環境曝露、例えば、空気中若しくは水の曝露により起こり得る。
【０３０５】
他の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物及び方法は、被験体における他の疾患及び状態の発生又は重症度を処置又は予防するために有用である。これらの疾患及び状態としては、限定されないが、脳卒中及び脳卒中様の状況（例えば脳、腎臓、心臓の不全）、神経細胞死、再潅流を伴うか伴わない脳損傷、慢性変性疾患、例えば神経変性疾患（ハンチントン病を含む）、多発性硬化症、球脊髄性萎縮症（ｓｐｉｎｏｂｕｌｂａｒ  ａｔｒｏｐｈｙ）、プリオン病、及び外傷性脳損傷（ＴＢＩ）に起因するアポトーシスが挙げられる。さらなる実施態様において、本発明の化合物及び方法は、神経保護、及び又は脳保護を提供することに関する。
【０３０６】
本発明はまた、医薬組成物を製造する方法を提供し、この方法は：
１つ又はそれ以上の本発明の二本鎖の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を供給すること；及び
該化合物を薬学的に許容しうる担体と混合すること、
を含む。
【０３０７】
好ましい実施態様において、医薬組成物の製造において使用されるｓｉＲＮＡ化合物は、薬学的に有効な用量で担体と混合される。特定の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、ステロイド、又は脂質、又は別の適切な分子、例えばコレステロールに結合される。
【０３０８】
組み合わせ治療
本明細書に開示される疾患を処置する方法は、本発明の新規な化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を、さらなるＲＴＰ８０１阻害剤、化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物の薬理特性を改善する物質、又は本明細書で上述された疾患及び障害（微小血管障害、眼の疾患及び状態（例えば黄斑変性）、難聴（聴覚損失を含む）、呼吸器障害、神経変性障害、脊髄損傷、血管新生関連状態及びアポトーシス関連状態）のいずれかに罹患しているか感受性である被験体の処置において有効であることが公知であるさらなる化合物と、併用して又は組み合わせて投与することを含む。
【０３０９】
従って本発明は、別の局面において本発明の治療用ｓｉＲＮＡ化合物と少なくとも１つのさらなる治療活性薬剤との組み合わせを含む医薬組成物を提供する。「と併用して」又は「と組み合わせて」は、前に、同時に、又は後にを意味する。従って、このような組み合わせの個々の構成要素は、同じか又は別々の医薬製剤から、順次又は同時のいずれかで投与される。
【０３１０】
微小血管障害、眼の疾患及び状態（例えば黄斑変性）、難聴（聴覚損失を含む）、呼吸器障害、神経変性障害（例えば脊髄損傷）、血管新生関連状態及びアポトーシス関連状態を処置するための公知の処置を、新規な化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物及び本明細書に記載される療法と併用して含む組み合わせ治療は、本発明の一部であるとみなされる。
【０３１１】
従って、本発明の別の局面において、ＲＴＰ８０１活性の阻害が有益である状態の処置において、さらなる薬学的に有効な化合物が、本発明の医薬組成物と併用して投与される。さらに、本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、上記の状態を処置するための第二の治療活性化合物との補助的療法としての使用のための医薬品の製造において使用される。本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物と組み合わせた使用のための公知の第二の治療剤の適切な用量は、当業者により容易に理解される。
【０３１２】
いくつかの実施態様において、上で言及された組み合わせは、単一の医薬製剤の形態での使用について示される。
【０３１３】
本発明の薬学的に活性なｓｉＲＮＡ化合物のいずれか１つを含む医薬組成物の投与は、当業者により決定されるように、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内又は脳内を含む多くの公知の投与経路のいずれかにより行われる。特殊化された製剤を使用して、経口で、又は吸入により、又は鼻腔内滴注により組成物を投与することが可能である。
【０３１４】
「と併用して」は、さらなる薬学的に有効な化合物を、本発明の医薬組成物の投与の前に、本発明の医薬組成物の投与と同時に、又は本発明の医薬組成物の投与の後に投与することを意味する。従って、上で言及されるこのような組み合わせの個々の構成要素を、同じか又は別々の医薬製剤から、順次又は同時のいずれかで投与することができる。本発明のｓｉＲＮＡ化合物の場合のように、第二の治療剤は、任意の適切な経路、例えば経口、頬腔、吸入、舌下、直腸、膣、経尿道、鼻腔、局所、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ）（すなわち経皮吸収（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ））、又は非経口（静脈内、筋内、皮下、及び冠内）投与により、投与することができる。
【０３１５】
いくつかの実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物及び第二の治療剤は、同じ経路により、単一の組成物か２つ又はそれ以上の異なる医薬組成物としてのいずれかで提供されて、投与される。しかし、他の実施態様において、本発明の新規なｓｉＲＮＡ化合物及び第二の治療剤どちらについても異なる投与経路が可能である。当業者は、単独でも組み合わせのどちらでも、各治療剤についての投与の最良の形態を認識する。
【０３１６】
種々の実施態様において、本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、医薬組成物中の主な活性成分である。
【０３１７】
別の局面において、本発明は、２つ又はそれ以上のｓｉＲＮＡ分子を含む、本明細書において記述される疾患及び状態のいずれかの処置のための、医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様において、２つ若しくはそれ以上のｓｉＲＮＡ分子又はそれら分子を含む製剤は、等しい活性又はそうでなければ有益な活性を生じる量で医薬組成物において混合される。特定の実施態様において、２つ又はそれ以上のｓｉＲＮＡ分子は、共有結合若しくは非共有結合で結合されているか、又は２〜１００、好ましくは２〜５０若しくは２〜３０個のヌクレオチドの長さの範囲の核酸リンカーにより一緒に結合されている。一実施態様において、２つ又はそれ以上のｓｉＲＮＡ分子は、ＲＴＰ８０１に対してｍＲＮＡを標的とする。いくつかの実施態様において、２つ又はそれ以上のｓｉＲＮＡ化合物のうち少なくとも１つがＲＴＰ８０１  ｍＲＮＡを標的とする。いくつかの実施態様において、少なくとも１つのｓｉＲＮＡ化合物は、表Ａ〜Ｈのいずれか１つに示されるアンチセンス配列と実質的に同一なアンチセンス配列を含む。いくつかの実施態様において、ｓｉＲＮＡセンスオリゴヌクレオチド及びアンチセンスオリゴヌクレオチドは、表Ａ〜Ｈのいずれか１つにおいて示され、配列番号３〜３５５６で示される、センスオリゴヌクレオチド及び対応するアンチセンスオリゴヌクレオチドより選択される。
【０３１８】
いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、１つ又はそれ以上のさらなる遺伝子を標的とする、１つ又はそれ上のさらなるｓｉＲＮＡ分子をさらに含む。いくつかの実施態様において、上記さらなる遺伝子の同時阻害は、本明細書において開示される疾患の処置に、相加的又は相乗的な効果をもたらす。
【０３１９】
本発明に従う処置レジメンは、本明細書において開示される状態の有害事象からの患者の機能的回復が改善されるように、投与様式、投与のタイミング、及び投薬量の観点で実行される。
【０３２０】
処置しようとする状態
微小血管障害
微小血管障害には、主として微視的な毛細血管及びリンパ管に影響を与え、従って直接的な外科的処置の範囲外である広範な状態の群が含まれる。微小血管疾患は、血管攣縮性、血管炎及びリンパ管閉塞性におおまかに分類することができる。さらに、公知の血管状態の多くは、それらに対する微小血管性の要素を有する。
【０３２１】
血管攣縮性疾患
血管攣縮性疾患は、比較的一般的な状態の一群であり、未知の理由から、末梢血管収縮反射が高感受性である。これにより、不適切な血管収縮及び組織虚血が、組織損失の時点まで生じる。血管攣縮性の症状は、通常は温度又は振動機械の使用に関連するが、他の状態に続発し得る。
【０３２２】
血管炎性疾患
血管炎性疾患は、微小循環における原発性の炎症性プロセスを含む疾患である。血管炎は、通常、自己免疫障害又は結合組織障害の構成要素であり、一般的には外科的処置に適していないが、症状が重症である場合には、免疫抑制的な処置を必要とする。
【０３２３】
リンパ管閉塞性疾患
下肢又は上肢の慢性的な膨張（リンパ浮腫）は、末梢リンパ管閉塞の結果である。これは比較的稀な状態であり、多数の原因があり、遺伝性のことも後天性のこともある。処置の柱は正確に適合する圧縮帯及び間欠的圧迫装置の使用である。
【０３２４】
糖尿病に関連する微小血管病理
糖尿病は、失明の主な原因であり、切断及び不能症の一番の原因であり、そして最も頻繁に発生する慢性の小児期の疾患のうちの１つである。糖尿病はまた、米国において末期腎疾患の主な原因であり、他の腎疾患と比較して３１％の罹患率である。糖尿病はまた、腎臓移植に関して最も頻繁な徴候であり、全移植の２２％を占める。
【０３２５】
一般に、糖尿病性合併症は、微小血管疾患又は大血管疾患におおまかに分類することができる。微小血管合併症には、ニューロパシー（神経障害）、ネフロパシー（腎臓疾患）及び視覚障害（例えば、網膜症、緑内障、白内障及び角膜疾患）が含まれる。網膜、糸球体、及び神経脈管において、同様の病態生理学的特徴が糖尿病特異的微小血管疾患を特徴付ける。
（さらなる情報については、Ｌａｒｓｅｎ：Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１０ｔｈ  ｅｄ．、２００３  Ｅｌｓｅｖｉｅｒを参照のこと）。
【０３２６】
ニューロパシー
ニューロパシーは、全ての末梢神経：痛覚線維、運動ニューロン、自律神経に影響を及ぼし、従って必然的に、全ての器官および系に影響を及ぼし得る。影響を受ける器官系および一部器官に基づいていくつかの異なる症候群が存在するが、これらは決して限定的というわけではない。患者は、感覚運動性と自律神経性のニューロパシー、または他のあらゆる組み合わせを有し得る。ニューロパシーの、代謝性の原因の理解が進歩しているにもかかわらず、これらの病理学的プロセスを妨げることを目的とする処置は、副作用および効能不足により限界がある。従って、処置は対症療法的であり、根本的な問題に取り組むものではない。感覚運動性ニューロパシーにより引き起こされる疼痛に対する薬剤には、三環系抗うつ  薬（ＴＣＡ）、セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）、および抗てんかん薬（ＡＥＤ）が含まれる。これらの薬剤の中に、糖尿病性ニューロパシーを引き起こす病理学的プロセスを逆転させるものや、この病気の過酷な過程を変更させるものはない。
【０３２７】
糖尿病性ニューロパシー
糖尿病性ニューロパシーは、真性糖尿病に関連するニューロパシー性障害（末梢神経損傷）である。これらの状態は、通常、神経に供給する微小血管（神経脈管）を含む糖尿病性微小血管損傷に起因する。糖尿病性ニューロパシーに関連し得る比較的一般的な状態には、第三脳神経麻痺；単ニューロパシー；多発性単ニューロパシー；糖尿病性筋萎縮症；有痛性多発ニューロパシー；自律神経ニューロパシー；及び胸腹部ニューロパシー並びに最も一般的な形態である、末梢性ニューロパシー（これは主に、足及び下肢に影響を及ぼす）が含まれる。糖尿病性ニューロパシーの発生に関与する４つの因子がある：微小血管疾患、終末糖化産物（ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｅｄ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、タンパク質キナーゼＣ、及びポリオール経路。
【０３２８】
糖尿病性虚血肢及び糖尿病性足部潰瘍
糖尿病及び圧力は、微小血管循環を損なって下肢の皮膚に変化を生じ得、これが今度は潰瘍の形成及びその後の感染をもたらし得る。微小血管の変化は四肢の筋肉の微小血管障害をもたらし、さらには末梢性虚血を発生する素因及び虚血性事象に対する減少した血管新生代償性応答をもたらす。微小血管病理は、末梢血管疾患（ＰＶＤ）（又は末梢動脈疾患（ＰＡＤ）又は下肢動脈疾患（ＬＥＡＤ）−大血管合併症−アテローム性動脈硬化症に起因する脚部における動脈の狭小化を悪化させる。ＰＶＤは糖尿病の初期に発生し、より重症で広汎性であり、そしてしばしば脚、眼、及び腎臓に影響を及ぼす介入性の微小循環の問題を含む。
【０３２９】
足潰瘍および壊疽は、頻発するＰＡＤの合併性状態である。感覚損傷を伴う同時発症性の末梢ニューロパシーは、外傷、潰瘍化、および感染に対する足の感受性を高める。糖尿病におけるＰＡＤの進行は、末梢ニューロパシーおよび疼痛および外傷に対する足および下肢の無感覚のような併存疾患により悪化する。循環が損なわれ感覚が損なわれることによって、潰瘍形成および感染が起こる。骨髄炎および壊疽まで進行すれば、切断術が必要となるかもしれない。糖尿病を有する人々は、非糖尿病の人々の最大２５倍、下肢切断術を受ける可能性が高く、足潰瘍およびその後の肢喪失を防止する必要性を強調するものである（さらなる情報については、Ａｍ．Ｊ．Ｓｕｒｇｅｒｙ、１８７；５  Ｓｕｐｐｌ  １、Ｍａｙ  １、２００４を参照のこと）。
【０３３０】
糖尿病における冠微小血管の機能障害
糖尿病における組織病理学と微小循環機能障害の間の相関は、古い実験的研究および剖検から周知であり、基底膜の肥厚化、血管周囲の線維症、血管の疎化（ｒａｒｅｆｉｃａｔｉｏｎ）、および毛細血管からの出血がしばしば認められる。最近の論文は病理と眼の微小血管機能障害の間の相関を実証している（Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２００３；２８５）が、これらのデータをインビボで確認するのは依然として困難である。しかし、多くの臨床研究は、顕性の糖尿病だけでなく代謝制御障害もまた、冠微小循環に影響し得ることを示している（Ｈｙｐｅｒｔ  Ｒｅｓ  ２００２；２５：８９３）。Ｓａｍｂｕｃｅｔｉら（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００１；１０４：１１２９）は、梗塞に関係する動脈の再開口が成功した後の患者における微小血管の機能障害の持続について示しており、そしてこれは、これらの患者における心血管の有病率および死亡率の増加を説明し得る。有病率および死亡率は梗塞に関係する動脈の再開口それ自体には関連しないが、ＴＩＭＩフロー＋／−心筋内微細血管濃染（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｂｌｕｓｈ）に大いに依存するという証拠が、大規模な短期の再灌流研究から蓄積されている（Ｓｔｏｎｅ  ２００２；Ｆｅｌｄｍａｎｎ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００３）。Ｈｅｒｒｍａｎｎは、とりわけ、冠微小循環の完全性がこの状況で最も重要な臨床的かつ予後的因子であろうということを示した（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００１）。防護デバイス（ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｄｅｖｉｃｅｓ）の中立的な効果（ＴＩＭＩフロー、ＳＴ解像度、またはＭＡＣＥに関連する変化がない）は、微小循環の機能不全が重要な予後決定因子であることを示し得る。冠微小血管の機能障害は非閉塞性の冠動脈疾患（ＣＡＤ）においても重要な役割を果たすという証拠が蓄積されつつある。冠内皮の機能障害は、依然としてこれらの患者における強力な予後の予測因子である。
【０３３１】
糖尿病性ネフロパシー（糖尿病を有する患者における腎機能障害）
糖尿病性ネフロパシーは、ミクロアルブミン尿（微小血管疾患の影響）、蛋白尿、および末期腎疾患（ＥＳＲＤ）を含む。糖尿病は、腎不全の最も一般的な原因であり、新たな症例の４０パーセントより多くを占める。薬物および食事で糖尿病を管理できる場合でさえも、この疾患はネフロパシーおよび腎不全を引き起こし得る。大部分の糖尿病患者は、腎不全を引き起こすほど重度のネフロパシーを発症しない。米国においては約１，６００万人が糖尿病を有し、約１００，０００人が糖尿病の結果としての腎不全を有する。
【０３３２】
糖尿病性網膜症
世界保健機関によれば、糖尿病性網膜症は、労働年齢の成人における失明の最大の原因であり、糖尿病患者における失明の最大の原因である。米国糖尿病協会  （Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）は、米国におよそ１８００万人の糖尿病患者がおり、米国において毎年およそ１３０万例が新たに糖尿病と診断されていることを報告している。米国失明防止協会（Ｐｒｅｖｅｎｔ  Ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ  Ａｍｅｒｉｃａ）および国立眼病研究所（ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｙｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）は、米国において、５３０万を超える１８歳以上の人々が糖尿病性網膜症を有していると見積もっている。
【０３３３】
糖尿病性網膜症は、慢性的な高血糖により引き起こされる網膜血管系の進行性の機能障害と定義される。糖尿病性網膜症の鍵となる特徴には、微細動脈瘤、網膜出血、網膜の脂質滲出物、綿状白斑、毛細血管不灌流（ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ｎｏｎｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）、黄斑浮腫、および新生血管形成が含まれる。関連する特徴には、硝子体出血、網膜剥離、血管新生緑内障、早期白内障、および脳神経麻痺が含まれる。
【０３３４】
特に、アポトーシスが、グリア細胞、例えばミュラー細胞および星状細胞に局在し、ＳＴＺ誘導糖尿病ラットモデルにおいては１ヶ月間の糖尿病の間に起きることが示されている。これらの事象の原因は、ジアシルグリセロール／ＰＫＣ経路の活性化、酸化ストレス、および非酵素的グリコシル化を含む多因子性である。これらの事象の組み合わせは網膜を低酸素状態にし、最終的には糖尿病性網膜症を発症させる。網膜虚血と糖尿病性網膜における初期の変化の間の一つの考えられる関係は、ＶＥＧＦ等の成長因子の低酸素誘導性の産生である。この低酸素反応の主調節因子（ｍａｓｔｅｒ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）は、低酸素誘導因子−１（ＨＩＦ−１）と同定されており、これは細胞の増殖および血管新生を調節する遺伝子を制御する。ＲＴＰ８０１は、低酸素反応性転写因子  低酸素誘導因子１（ＨＩＦ−１）に反応性であり、典型的には低酸素の間にインビトロ及びインビボの両方で虚血発作の動物モデルにおいて上方調節される。
【０３３５】
糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）
米国失明防止協会（Ｐｒｅｖｅｎｔ  Ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ  Ａｍｅｒｉｃａ）及び国立眼病研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｙｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）は、米国において、５３０万を超える１８歳以上の人々が糖尿病性網膜症を有し、ＤＭＥを有する約５００，０００人が含まれると見積もっている。ＣＤＣは、米国において毎年およそ７５，０００例の新規ＤＭＥ症例が出ていると見積もっている。
【０３３６】
ＤＭＥは、網膜の血管に影響を及ぼす疾患である、糖尿病性網膜症の合併症である。糖尿病性網膜症は、網膜において、網膜の肥厚化および浮腫、出血、血流の妨げ、血管からの流体の過剰な漏出、ならびに最終段階では異常な血管の増殖を含む多数の異常を引き起こす。この血管の増殖は、大規模な出血および重度の網膜損傷を引き起こし得る。糖尿病性網膜症の血管漏出により黄斑の膨脹が起きる場合は、ＤＭＥと称される。ＤＭＥの主要な症状は中心視の喪失である。ＤＭＥに関連する危険因子には、十分に制御されない血中グルコースレベル、高血圧、体液貯留を引き起こす異常な腎機能、高いコレステロールレベル、およびその他の一般的な全身的因子が含まれる。
【０３３７】
腎臓の微小血管疾患
腎臓は、全身および腎臓の微小血管系に影響を及ぼす多くの目立たない臨床病理状態に関与する。これらの状態の一部は、内皮細胞に対する原発性の傷害により特徴付けられる、例えば：溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）および血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）。ＨＵＳおよびＴＴＰは、密接に関連する疾患であり、細血管異常性溶血性貧血および様々な器官機能障害によって特徴付けられる。伝統的に、ＨＵＳの診断は、腎不全がその症候群の優勢な特徴である場合になされ、これは子供に多い。成人においては、神経学的機能障害が支配的な場合が多く、その場合その症候群はＴＴＰと称される。血栓性微小血管症は、両方の症候群の根底にある病理学的病変であり、ＨＵＳまたはＴＴＰのいずれかを有する患者における臨床的および研究的所見はかなりの程度まで重複する。このため、一部の研究者は、この二つの症候群を、単一の疾患実体の連続体（ｃｏｎｔｉｎｕｕｍ）と考えている。
【０３３８】
病因論：実験データは、内皮細胞の損傷がＨＵＳ／ＴＴＰの病因における中心的事象であることを強く示唆している。内皮の損傷は、局所的な血管内凝固、フィブリン沈着、ならびに血小板の活性化および凝集を含む事象のカスケードを開始させる。その最終的な結果は、様々な形態のＨＵＳ／ＴＴＰ症候群に共通の血栓性微小血管症の病理組織学的所見である。ＨＵＳ／ＴＴＰを未処置のまま放置すると、死亡率は９０％に達する。支持療法−透析、降圧薬投薬、輸血、および神経学的合併症の管理を含む−は、ＨＵＳ／ＴＴＰ患者の生存率の向上に寄与する。下痢を伴う典型的なＨＵＳの処置において、十分な体液平衡および腸管安静が重要である。
【０３３９】
放射線腎炎
２５００ｒａｄを超える腎照射の長期的な結果は、５つの臨床上の症候群に分けることができる：
（ｉ）患者のおよそ４０％において、６〜１３ヶ月の潜伏期間の後に急性放射線腎炎が発症する。これは、臨床的には、高血圧、蛋白尿、浮腫、および進行性腎不全の突然の発症により特徴付けられ、ほどんどの症例において末期腎をもたらす。
（ｉｉ）慢性放射線腎炎は、逆に、最初の傷害の後、１８ヶ月から１４年の間で変動する潜伏期間を有する。この疾患は発現の面で潜伏性であり、高血圧、蛋白尿、および腎機能の漸進的喪失により特徴付けられる。
（ｉｉｉ）第三の症候群は、放射線被爆から５〜１９年後に正常な腎機能での良性蛋白尿として発現する。
（ｉｖ）第四の患者グループは、２〜５年後に良性の高血圧のみを示し、変りやすい蛋白尿を有し得る。後期の悪性高血圧は、慢性放射線腎炎または良性高血圧のいずれかを有する患者において、照射から１８ヶ月〜１１年後に発症する。罹患した腎臓の除去により高血圧は逆転する。その後の腎血管性高血圧を伴なう、腎動脈に対する放射線誘導損傷が報告されている。
（ｖ）急性放射線腎炎に類似する腎機能不全の症候群は、全身照射法（ＴＢＩ）による処置を受けた骨髄移植（ＢＭＴ）患者において観察されている。
【０３４０】
放射線照射は、照射後初期の段階で内皮の機能障害を引き起こすが血管平滑筋細胞は傷つけない。放射線照射はＤＮＡを直接的に損傷し、糸球体毛細血管および細管においてこれらの細胞の再生を減少させ基底膜を露出（ｄｅｎｕｄｅｍｅｎｔ）させる。他の腎疾患において、腎臓の微小血管系は、自己免疫障害、例えば全身性硬化症（強皮症）に関与する。全身性硬化症における腎臓の関与は、穏やかに進行する慢性腎疾患としてまたは強皮症腎クリーゼ（ＳＲＣ）として顕われ、悪性高血圧および急性高窒素血症により特徴付けられる。ＳＲＣは、腎臓におけるレイノー様現象により引き起こされると仮定されている。重度の血管痙攣は、皮質虚血ならびにレニンおよびアンギオテンシンＩＩの高産生を引き起こし、これはさらに  腎血管収縮を永続させる。ホルモンの変化（妊娠）、肉体的および情動的なストレス、または低温は、レイノー様動脈血管痙攣を誘発し得る。
【０３４１】
腎臓の微小循環はまた鎌状赤血球症において影響を受け、これに対して腎臓は、直細血管における酸素の逆流移動の結果として腎髄質の深血管において生じた低酸素圧が原因で特に影響を受け易い。より小さな腎動脈および小動脈もまた、大血管壁から遊離したコレステロール含有物による血栓塞栓性傷害の部位であり得る。
【０３４２】
網膜微小血管症（ＡＩＤＳ網膜症）
網膜微小血管症（Ｒｅｔｉｎａｌ  ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌｏｐａｔｈｙ）は、ＡＩＤＳ患者の１００％で見られ、網膜内出血、微細動脈瘤、ロート斑、綿状白斑（神経線維層の微小梗塞）、および血管周囲鞘形成（ｐｅｒｉｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｈｅａｔｈｉｎｇ）により特徴付けられる。この網膜症の病因は不明であるが、循環中の免疫複合体、細胞傷害性物質の局所的放出、異常な血液レオロジー、および内皮細胞のＨＩＶ感染に起因すると考えられている。ＡＩＤＳ網膜症は、現在多く見られるので、糖尿病も高血圧も有さないがＨＩＶの危険性を有する患者に綿状白斑があれば、医師はウイルス試験を考慮しようとするはずである。ＡＩＤＳ網膜症に対する特別な処置は存在しないが、それが継続的に存在すれば、医師はＨＩＶ治療の有効性および患者のコンプライアンスを見直そうとするかもしれない。
【０３４３】
骨髄移植（ＢＭＴ）網膜症
骨髄移植網膜症は１９８３年に最初に報告された。この疾患は、典型的にはＢＭＴ後６ヶ月以内に起こるが、最も遅くて６２ヶ月後に起こり得る。糖尿病および高血圧のような危険因子は、虚血性微小血管症を増悪することによってＢＭＴ網膜症の発症を促進させ得る。ＢＭＴ網膜症の発症の、年齢、性別、または人種についての傾向は知られていない。患者は視力低下および／または視野欠損を示す。後区（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｓｅｇｍｅｎｔ）の所見は典型的には両側性・対称性のものである。臨床症状発現には、複数の綿状白斑、毛細血管拡張、微細動脈瘤、黄斑浮腫、硬性白斑、および網膜出血が含まれる。フルオレセイン血管造影法は、毛細血管不灌流および脱落、網膜内微小血管異常、微細動脈瘤、および黄斑浮腫を示す。ＢＭＴ網膜症の正確な病因は解明されていないが、いくつかの要因：シクロスポリン毒性、全身照射（ＴＢＩ）、および化学療法剤による影響を受けるようである。シクロスポリンは、移植片対宿性免疫反応を抑制する強力な免疫調節剤である。これは内皮細胞の傷害および神経学的な副作用を引き起す可能性があり、結果として、ＢＭＴ網膜症の原因であると示唆されている。しかしＢＭＴ網膜症は、シクロスポリン非使用下でも発症し得、シクロスポリンが自己または同系骨髄レシピエントにおいてＢＭＴ網膜症を引き起こすことは示されていない。従って、シクロスポリンだけが、ＢＭＴ網膜症の原因ではないようである。全身照射（ＴＢＩ）もまた、ＢＭＴ網膜症の原因であると指摘されている。放射線は網膜微小血管系を傷つけ、虚血性血管症を引き起こす。
【０３４４】
他の眼障害
緑内障
緑内障は世界中で失明の主な原因である。世界中で約６６８０万人の人々がこれに冒されている。毎年少なくとも１２，０００人の米国人がこの疾患により失明している（Ｋａｈｎ  ａｎｄ  Ｍｉｌｔｏｎ、Ａｍ  Ｊ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１９８０、１１１（６）：７６９−７６）。緑内障は、主として眼内圧（ＩＯＰ）亢進に起因する視神経乳頭における軸索の変性を特徴とする。原発性開放隅角緑内障（ＰＯＡＧ）として知られる、緑内障の最も一般的な形態の一つは、線維柱帯網（ＴＭ）における房水流出の抵抗増加が、ＩＯＰ上昇、そして最終的に視神経損傷を引き起こすことに起因する。緑内障の他の主要な型は閉塞隅角緑内障、正常眼圧緑内障及び小児緑内障である。これらもまた、眼内圧（ＩＯＰ）（すなわち眼の内側の圧力）の増加で特徴づけられる。正常ＩＯＰにもかかわらず視神経損傷が発生した場合、これは正常眼圧緑内障と呼ばれる。続発緑内障は、別の疾患が眼圧増加を引き起こすか眼圧増加に寄与して視神経損傷及び視力喪失をもたらしている場合を指す。  Ｍｕｃｋｅ（ＩＤｒｕｇｓ  ２００７、１０（１）：３７−４１）は、眼疾患、例えば加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）及び緑内障の処置のための種々の標的に対するｓｉＲＮＡを含む、現在の治療法を概説している。
【０３４５】
黄斑変性
米国における６５歳以上の個体における最高矯正視力の低下の最も多い原因は、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）として知られている網膜障害である。ＡＭＤが進行するにつれて、この疾患は鮮明な中心視の喪失により特徴付けられる。ＡＭＤによる影響を受ける眼の領域は、黄斑（主として光受容細胞で構成される網膜の中心の小さな領域）である。ＡＭＤ患者の約８５％〜９０％を占める、いわゆる「萎縮型」ＡＭＤは、眼の色素の分布の変化、光受容器の喪失、および全体的な細胞の萎縮による網膜機能の減弱化を伴う。いわゆる「滲出型」ＡＭＤは、網膜下領域における血塊又は瘢痕をもたらす異常な脈絡膜血管の増殖を伴う。従って、滲出型ＡＭＤの発症は、神経網膜下での異常な脈絡膜血管新生網の形成（脈絡膜新生血管形成、ＣＮＶ）が原因で起こる。新しく形成された血管は非常に漏出を起こし易い。このため網膜下液および血液が蓄積され、視界の明瞭さが失われる。最終的に、脈絡膜および網膜を含む大円板状の瘢痕が形成されるので、関係する領域において機能的な網膜が完全に失われる。萎縮型ＡMＤ患者は、悪化するものの視力を維持する場合があるが、滲出型ＡＭＤはしばしば失明という結果となる（Ｈａｍｄｉ  ＆  Ｋｅｎｎｅｙ、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ｅ３０５−３１４、Ｍａｙ  ２００３）。ＣＮＶは滲出型ＡＭＤにおいてだけでなく、他の眼の病変、例えば眼ヒストプラスマ症候群、網膜色素線条症（ａｎｇｉｏｄ  ｓｔｒｅａｋｓ）、ブルッフ膜における断裂、近視性変性、眼の腫瘍、および一部の網膜変性疾患においても発生する。
【０３４６】
眼虚血性症候群
眼虚血性症候群（ＯＩＳ）に罹患している患者は、一般的に、５０代〜８０代の範囲の高齢者である。男性は女性の二倍の頻度で罹患する。ごくわずかな患者のみが無症候性である。症例の９０％において診察時に視力低下が生じており、患者の４０％は眼の痛みを伴う。一過性の虚血性発作または一過性黒内障の付随または前駆病歴（ａｎｔｅｃｅｄｅｎｔ  ｈｉｓｔｏｒｙ）も存在し得る。患者はまた、診察時に深刻な既知または未知の全身性疾患を有する。最も一般的に見られる全身性疾患は高血圧、糖尿病、虚血性心疾患、脳卒中、および末梢血管疾患である。多くはないが、患者は、巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ）の結果としてＯＩＳを発現する。
【０３４７】
症例の８０％で片側性の所見が見られる。一般的な所見には、進行した片側白内障（ａｄｖａｎｃｅｄ  ｕｎｉｌａｔｅｒａｌ  ｃａｔａｒａｃｔ）、前区炎症（ａｎｔｅｒｉｏｒ  ｓｅｇｍｅｎｔ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）、無症候性前房反応、黄斑浮腫、拡張しているが蛇行していない網膜静脈、中間周辺部（ｍｉｄ−ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ）の点状出血および斑状出欠、綿状白斑、滲出物、ならびに円板および網膜の新生血管形成が含まれ得る。自然発生的な動脈の拍動、眼内圧亢進、ならびに血管新生緑内障（ＮＶＧ）を伴う虹彩および隅角（ａｎｇｌｅ）の新生血管形成も存在し得る。患者は前眼部の新生血管形成を示し得るが、毛様体への動脈灌流の低下から低眼圧が起こり得る。時折、網膜に塞栓（ホレンホースト斑）が見られる。
【０３４８】
ドライアイ症候群
ドライアイ症候群は、通常、眼を潤す涙膜の産生の減少に起因する一般的な問題である。大部分のドライアイ患者は、不快症状を経験し、失明を経験することはないが；重症な症例では、角膜が損傷したり感染したりすることがある。湿潤点滴剤（人工涙液）が処置に使用され得るが、より重症な症例には潤滑（ｌｕｂｒｉｃａｔｉｎｇ）軟膏が役立ち得る。
【０３４９】
さらなる眼の障害
本発明の分子及び組成物により処置され得るさらなる障害としては、脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）の全ての型が挙げられ、これは滲出型ＡＭＤにおいてだけでなく、他の眼ヒストプラスマ症候群、網膜色素線条症（ａｎｇｉｏｄ  ｓｔｒｅａｋｓ）、ブルッフ膜における破裂、近視性変性、眼の腫瘍、および一部の網膜変性疾患
のような他の眼病理においても起こる。
【０３５０】
耳障害
聴覚損失
種々の実施態様において、本発明の新規な化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、聴覚損失の種々の状態に適用される。理論に拘束されないが、聴覚損失は、アポトーシス性の内有毛細胞損傷又は損失に起因し得（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２００３．１２０：１９１−２０５；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２３（（２４）：８５９６−８６０７）、この損傷又は損失は、感染、機械的損傷、大きな音（騒音）、加齢（老人性難聴）、又は化学物質誘導耳毒性により引き起こされる。
【０３５１】
本発明の文脈における「耳毒（ｏｔｏｔｏｘｉｎ）」は、その化学的作用により、聴覚に関連する神経系の音受容器（ｓｏｕｎｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ）構成要素の活性を損傷するか、障害するか、又は阻害し、次いでこれにより聴覚（及び／又は平衡）を損なう物質を意味する。本発明の文脈において、耳毒性には、内有毛細胞に対する有害な影響が含まれる。耳毒には、抗悪性腫瘍薬、サリチラート類、ループ利尿薬、キニン類、及びアミノグリコシド抗生物質を含む治療薬、食物又は医薬品中の汚染物質、並びに環境又は産業汚染物質が含まれる。典型的には、処置は、特に治療薬の投与から生じるか、治療薬の投与から生じると予測される耳毒性を予防又は低減するために行われる。好ましくは、本発明の新規な化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を含む治療上有効な組成物は、耳毒性効果を予防又は低減するために曝露の直後に与えられる。より好ましくは、処置は、予防的に提供されるか、耳毒性医薬品若しくは耳毒への曝露の前に、又は耳毒性医薬品若しくは耳毒への曝露と同時に、本発明の医薬組成物を投与することにより提供される。
【０３５２】
難聴及び平衡障害の説明及び診断に関連する、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ、１４版、（１９８２）、Ｍｅｒｃｋ  Ｓｈａｒｐ  ＆  Ｄｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｎ．Ｊ．の第１９６、１９７、１９８及び１９９章、並びに最新の１６版における対応する章（第２０７及び２１０章を含む）は、参照により本明細書に加入される。
【０３５３】
従って、一局面において、本発明は、難聴、聴覚障害又は平衡失調、好ましくは耳毒誘導聴覚状態を予防、低減又は処置するために、このような処置を必要としている哺乳動物に、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を投与することにより、哺乳動物（好ましくはヒト）を処置するための、方法、新規な化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物及び医薬組成物を提供する。本発明の一実施態様は、耳毒性が治療有効量の耳毒性医薬品の投与により生じる聴覚障害又は難聴を処置するための方法である。典型的な耳毒性薬物は、化学療法薬、例えば抗悪性腫瘍薬、及び抗生物質である。他の可能な候補には、ループ利尿薬、キニン類又はキニン様化合物、及びサリチラート又はサリチラート様化合物が含まれる。
【０３５４】
耳毒性は、抗生物質投与の用量制限副作用である。１週間より長い間１日あたり１グラムを投与された患者の４〜１５％が測定可能な聴覚損失を発症し、これはゆっくりと悪化し、そして処置が続けば完全な永久の聴覚損失になり得る。耳毒性アミノグリコシド抗生物質としては、限定されないが、ナオマイシン、パロモマイシン、リボスタマイシン、リビドマイシン、カナマイシン、アミカシン、トブラマイシン、バイオマイシン、ゲンタマイシン、シソマイシン、ネチルマイシン、ストレプトマイシン、ジベカシン、フォーチミシン、及びジヒドロストレプトマイシン、又はこれらの組み合わせが挙げられる。重大な毒性、特に耳毒性及び腎毒性を有することが知られている特定の抗生物質としては、ネオマイシンＢ、カナマイシンＡ、カナマイシンＢ、ゲンタマイシンＣ１、ゲンタマイシンＣ１ａ、及びゲンタマイシンＣ２などが挙げられ、これらはこのような抗菌剤の有用性を減少させる（Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、６ｔｈ  ｅｄ．、Ａ．Ｇｏｏｄｍａｎ  Ｇｉｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．、ｅｄｓ；Ｍａｃｍｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐｐ．１１６９−７１（１９８０）を参照のこと）。
【０３５５】
耳毒性はまた、抗がん剤に関する重大な用量制限副作用である。耳毒性新生物薬（ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ａｇｅｎｔｓ）としては、限定されないが、ビンクリスチン、ビンブラスチン、シスプラチン及びシスプラチン様化合物、並びにタキソール及びタキソール様化合物が挙げられる。シスプラチン様化合物としては、とりわけ白金ベースの化学療法薬であるカルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、テトラプラチン（ｔｅｔｒａｐｌａｔｉｎ）、オキサリプラチン、アロプラチン及びトランスプラチンが挙げられる。
【０３５６】
耳毒性副作用を有することが知られている利尿薬、特に「ループ」利尿薬としては、限定されないが、フロセミド、エタクリル酸（ｅｔｈａｃｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）、及び水銀剤が挙げられる。
【０３５７】
耳毒性キニン類としては、限定されないが、マラリアの処置において典型的に使用されるキニンの合成代用物が挙げられる。
【０３５８】
アスピリンのようなサリチラート類は、それらの抗炎症性、鎮痛性、解熱性及び抗血栓性作用のために最も一般的に使用される治療薬である。残念ながら、これらも耳毒性副作用を有する。これらはしばしば耳鳴（ｔｉｎｎｉｔｕｓ）（「耳鳴り（ｒｉｎｇｉｎｇ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅａｒｓ）」）及び一時的な聴覚損失をもたらす。さらに、薬物が長期間高用量で使用される場合、難聴が持続するようになりそして不可逆的になり得る。
【０３５９】
いくつかの実施態様において、本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、耳毒と同時投与（ｃｏ−ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ）される。例えば、改善された方法が、アミノグリコシド抗生物質の投与による哺乳動物の感染の処置のために提供され、この改善は、治療有効量の、１つ又はそれ以上の、ＲＴＰ８０１の発現を下方調節する本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を、このような処置を必要とする患者に投与して、抗生物質に関連する耳毒誘導難聴を低減するか予防することを含む。本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、好ましくは内耳内に局所投与される。
【０３６０】
本発明の方法、化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物及び医薬組成物はまた、音響性外傷又は機械的外傷、好ましくは内有毛細胞の損失をもたらす音響性外傷又は機械的外傷の処置において有効である。より重症の曝露では、損傷は隣接する支持細胞の損失からコルチ器官の完全な破壊まで進行し得る。感覚細胞の死は、進行性ウォラー変性及び一次聴神経線維の損失をもたらし得る。本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、極度に大きな音への１回の曝露により引き起こされたか、又は８５デシベルより大きな音への毎日の長期間の曝露後に引き起こされる音響外傷の処置において有用である。本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、例えば、電子装置を内耳に挿入した結果生じた機械的な内耳外傷の処置において有用である。本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、手術に伴う内有毛細胞への損傷を防止するか又は最小にする。
【０３６１】
別の型の聴覚損失は老人性難聴であり、これは、大部分の個体において加齢とともに徐々に生じる聴覚損失である。６５歳と７５歳の間の成人の約３０−３５パーセント、並びに７５歳及びそれ以上の人々の４０〜５０パーセントが聴覚損失を経験する。本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、老人性難聴に関連する内耳障害及び難聴の発生率及び／又は重症度を予防、低減又は処置する。
【０３６２】
肺（Ｌｕｎｄ）疾患及び障害
肺損傷及び呼吸器障害
種々の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、急性肺損傷、特に虚血／再潅流傷害又は酸化的ストレスに起因する状態の発生率又は重症度を処置又は予防するため、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を処置するために有用である。
【０３６３】
急性肺損傷の非限定的な例としては、コロナウイルス感染症又は内毒素に起因する急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）及び肺移植に関連する虚血再潅流傷害が挙げられる。
【０３６４】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、１６００万人を超える米国人に影響を与えており、米国内で四番目に高い死因である。喫煙が、この衰弱性疾患の最も大きな  発症原因であるが、他の環境要因も排除することはできない（Ｐｅｔｔｙ  ＴＬ．２００３．Ｃｌｉｎ．Ｃｏｒｎｅｒｓｔｏｎｅ、５−１０）。
【０３６５】
肺気腫はＣＯＰＤの主な症状発現である。終末細気管支に対して遠位にある末梢気腔の恒久的な破壊が、気腫の特徴である（Ｔｕｄｅｒ，ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、２９：８８−９７；２００３．）。気腫はまた、細気管支および肺胞構造におけるマクロファージおよび好中球のような炎症細胞の蓄積によっても特徴付けられる（Ｐｅｔｔｙ，２００３）。
【０３６６】
気腫の病因は複雑かつ多因子的である。ヒトにおいては、炎症細胞によって産生されるプロテアーゼの阻害剤、例えばアルファ１−アンチトリプシンの欠損が、プロテアーゼ／アンチプロテアーゼの不均衡に寄与し、それにより喫煙（ＣＳ）誘発型の気腫において肺胞細胞外マトリクスの破壊に有利に働くことが示されている（Ｅｒｉｋｓｓｏｎ、Ｓ．１９６４．Ａｃｔａ  Ｍｅｄ  Ｓｃａｎｄ  １７５：１９７−２０５．Ｊｏｏｓ、Ｌ．、Ｐａｒｅ、Ｐ．Ｄ．、ａｎｄ  Ｓａｎｄｆｏｒｄ、Ａ．Ｊ．２００２．Ｓｗｉｓｓ  Ｍｅｄ  Ｗｋｌｙ  １３２：２７−３７）。マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）が実験的な気腫において中心的役割を果たすことが、ＣＳの慢性的吸引によって引き起こされた気腫に対するマクロファージメタロエラスターゼノックアウトマウスの耐性によって実証されている（Ｈａｕｔａｍａｋｉ、ｅｔ  ａｌ：Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｅｌａｓｔａｓｅ  ｆｏｒ  ｃｉｇａｒｅｔｔｅ  ｓｍｏｋｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｅｍｐｈｙｓｅｍａ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７７：２００２−２００４）。さらに、トランスジェニックマウスにおけるインターロイキン−１３の肺での過剰発現は、ＭＭＰおよびカテプシン依存性の気腫を引き起こす（Ｚｈｅｎｇ、Ｔ．、ｅｔ  ａｌ  ２０００．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １０６：１０８１−１０９３）。酸化的ストレス及びアポトーシスは相互作用して、血管内皮増殖因子遮断に起因する気腫を引き起こす（Ｔｕｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、２９：８８−９７；２００３．；Ｙｏｋｏｈｏｒｉ  Ｎ、ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｓｔ．２００４  Ｆｅｂ；１２５（２）：６２６−３２．；Ａｏｓｈｉｂａ  Ｋ、ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２００３  Ｍａｙ；２８（５）：５５５−６２．）。吸入されたタバコの煙からの反応性酸素種（ＲＯＳ）と炎症細胞により内因的に形成されたものの両方が、肺内酸化体負荷の増加に寄与する。
【０３６７】
ＣＯＰＤの病因に関するさらなる病原因子は、気腫患者の肺において観察されるＶＥＧＦおよびＶＥＧＦＲＩＩの発現の減少である（Ｙａｓｕｎｏｒｉ  Ｋａｓａｈａｒａ、ｅｔ  ａｌ．  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．Ｖｏｌ  １６３．ｐｐ  ７３７−７４４、２００１）。さらに、化学的ＶＥＧＦＲ阻害剤を使用したＶＥＧＦシグナル伝達の阻害は、肺胞中隔内皮（ａｌｖｅｏｌａｒ  ｓｅｐｔａｌ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ）をもたらし、次いでおそらく肺胞内での両方の型の細胞の密接な構造的／機能的な関連の破壊に起因して、上皮細胞アポトーシスをもたらす（Ｙａｓｕｎｏｒｉ  Ｋａｓａｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０６：１３１１−１３１９  （２０００）；Ｖｏｅｌｋｅｌ  ＮＦ、Ｃｏｏｌ  ＣＤ、Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ  Ｓｕｐｐｌ．２００３．４６：２８ｓ−３２ｓ）。
【０３６８】
種々の実施態様において、呼吸器障害の処置のための医薬組成物は、以下の化合物の組み合わせからなり得る：以下の遺伝子の１つ又はそれ以上を標的とするｓｉＲＮＡ化合物と組み合わせれた本発明の化学修飾されたＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ化合物：エラスターゼ、マトリックスメタロプロテアーゼ、ホスホリパーゼ、カスパーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、及びセラミド合成酵素。
【０３６９】
急性呼吸促迫症候群
急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）は、呼吸促迫症候群（ＲＤＳ）又は成人呼吸促迫症候群（乳児呼吸促迫症候群ＩＲＤＳと対比して）としても知られており、肺への種々の形態の損傷に対する重大な反応である。これは、増加した透過性の肺水腫を生じる最も重要な障害である。
【０３７０】
ＡＲＤＳは、種々の直接的及び間接的な傷害により引き起こされる重篤な肺疾患である。これは、炎症、低酸素血を引き起こし、そして頻繁に多臓器不全を生じる炎症メディエーターの同時全身放出を伴うガス交換不全をもたらす、肺実質の炎症により特徴づけられる。この状態は生命にかかわり、そしてしばしば致死的であり、通常は人工呼吸及び集中治療室への入院を必要とする。より重症度が低い形態は  急性肺傷害（ＡＬＩ）と呼ばれる。
【０３７１】
肺癌
肺癌は、通常、肺の空気の通り道の壁の細胞において発生する。これは世界中の全ての癌のうち最も致死的であり、毎年最高で３００万人の死亡原因である。２つの主要な型は、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）及び非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。これらの型は、細胞の形態学に基づいて診断される。非小細胞肺癌において、標準的な処置の結果は、大部分の局在化した癌を除いて悪い。外科手術はこの疾患には最も治癒可能性が高い治療の選択肢であり；放射線療法は、少数の患者でのみ治癒をもたらし得、そして大部分の患者では寛解をもたらし得る。補助的化学療法は、ＮＳＣＬＣの切除とともに患者にさらなる利益をもたらし得る。進行期の疾患において、化学療法は、生存期間中央値において緩やかな改善を示すが、全体での生存は低い。化学療法は、疾患に関連する症状において短期の改善をもらした。肺における他の癌の形態は、原発癌の転位に起因する二次的な癌である。本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、肺組織における転位を含む肺癌の処置において有用である。
【０３７２】
腎臓の疾患及び障害
本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、本明細書以下に開示されるような、腎臓に影響を及ぼす種々の疾患及び障害の処置又は予防において有用である。
【０３７３】
急性腎不全（ＡＲＦ）
種々の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、腎障害、特に、手術後の患者、腎移植患者における虚血に起因する急性腎不全（ＡＲＦ）、及びシスプラチン投与のような化学療法処置に起因する急性腎不全又は敗血症関連急性腎不全を処置するために使用される。
【０３７４】
ＡＲＦは、微小血管疾患又は大血管疾患により引き起こされ得る（大腎動脈閉塞（ｍａｊｏｒ  ｒｅｎａｌ  ａｒｔｅｒｙ  ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ）又は重篤な腹大動脈疾患）。古典的な微小血管疾患は、しばしば微小血管症性溶血、及び糸球体毛細血管の血栓又は閉塞に起因して起こる急性腎不全を示し、しばしば血小板減少を伴う。これらの疾患の典型的な例としては以下が挙げられる：
ａ）  血栓性血小板減少性紫斑病−血栓性血小板減少性紫斑病における古典的な五徴（ｐｅｎｔａｄ）としては、発熱、神経学的な変化、腎不全、微小血管症性溶血性貧血及び血小板減少症が挙げられる。
ｂ）  溶血性尿毒症症候群−溶血性尿毒症症候群は、血栓性血小板減少性紫斑病と似ているが、神経学的な変化は示さない。
ｃ）  ＨＥＬＬＰ症候群（溶血、高い肝臓酵素及び低い血小板）。ＨＥＬＬＰ症候群は、トランスアミナーゼの上昇を含めて妊婦において発生する溶血性尿毒性症候群の１つの型である。
【０３７５】
急性腎不全は、あらゆる医学的状態で発生し得るが、大部分は入院中に患う。この状態は、入院患者の５パーセントで発生し、そして入院患者の約０．５パーセントは透析を必要とする。主に、罹患した患者がすでに老齢であり、さらに合併した状態を有しているという理由で、過去４０年にわたって急性腎不全についての生存率は改善していない。感染は急性腎不全患者における死亡の７５パーセントを占め、そして心臓−呼吸器合併症は、二番目によくある死因である。腎不全の重症度に依存して、死亡率は７パーセントから最高８０パーセントにまで及び得る。急性腎不全は、３つのカテゴリーに分類することができる：腎前性、内因性及び腎後性ＡＲＦ。内因性ＡＲＦは、４つのカテゴリーに細分される：尿細管疾患、糸球体疾患、血管疾患（微小血管を含む）及び間質性疾患。
【０３７６】
本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物の好ましい使用は、重大な心臓手術又は血管手術を受ける高リスク患者における急性腎不全の予防のためである。急性腎不全を発症する危険性が高い患者は、種々のスコアリング方法、例えばクリーブランドクリニックアルゴリズム又は米国の大学病院（ＵＳ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｈｏｓｐｉｔａｌｓ）により開発されたもの（ＱＭＭＩ）、及び退役軍人局病院（Ｖｅｔｅｒａｎｓ’  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）により開発されたもの（ＣＩＣＳＳ）を使用して同定することができる。
【０３７７】
別の好ましい実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、腎毒素、例えば利尿薬、β−遮断薬、血管拡張薬、ＡＣＥ阻害剤、シクロスポリン、アミノグリコシド抗生物質（例えばゲンタマイシン）、アンホテリシンＢ、シスプラチン、造影剤、免疫グロブリン、マンニトール、ＮＳＡＩＤ（例えばアスピリン、イブプロフェン、ジクロフェナク）、シクロホスファミド、メトトレキサート、アシクロビル、ポリエチレングリコール、β−ラクタム抗生物質、バンコマイシン、リファンピシン、スルホンアミド類、シプロフロキサシン、ラニチジン、シメチジン、フロセミド、チアジド類、フェニトイン、ペニシラミン、リチウム塩、フルオリド、デメクロサイクリン、ホスカルネット、アリストロキン酸により引き起こされる損傷を処置又は予防するために使用される。
【０３７８】
本発明のさらなる実施態様において、ＡＲＦの処置のための医薬組成物は、以下の治療剤の組み合わせより選択される薬剤を含む：
１）  本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ及びｐ５３  ｓｉＲＮＡ二量体；
２）  本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ及びＦａｓ  ｓｉＲＮＡ二量体；
３）  本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ及びＢａｘ  ｓｉＲＮＡ二量体；
４）  本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ及びｐ５３  ｓｉＲＮＡ及びＦａｓ  ｓｉＲＮＡ三量体；
５）  本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ及びＢａｘ  ｓｉＲＮＡ二量体；
６）  本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ及びＮｏｘａ  ｓｉＲＮＡ二量体；
７）  本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ及びＰｕｍａ  ｓｉＲＮＡ二量体；
８）  本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ（ＲＥＤＤ１）及びＲＴＰ８０１Ｌ（ＲＥＤＤ２）  ｓｉＲＮＡ二量体；並びに
９）  三量体又はポリマーを形成する（すなわち、３つのｓｉＲＮＡをコードするタンデム分子）本発明のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ、Ｆａｓ  ｓｉＲＮＡ及びＲＴＰ８０１Ｌ  ｓｉＲＮＡ、ｐ５３  ｓｉＲＮＡ、Ｂａｘ  ｓｉＲＮＡ、Ｎｏｘａ  ｓｉＲＮＡ又はＰｕｍａ  ｓｉＲＮＡ。
【０３７９】
進行性腎疾患
進行性腎疾患は微小血管系の進行性の喪失により特徴付けられるという証拠が存在する。微小血管系の喪失は、糸球体および尿細管間質の瘢痕化の進行と直接相関する。このメカニズムは、部分的に、内皮の増殖反応の減少により媒介され、この毛細血管修復における障害は、腎臓における血管新生因子（血管内皮増殖因子）および抗血管新生因子（トロンボスポンジン１）の両方の局所的発現の変化により媒介される。血管新生増殖因子のバランスの変化は、マクロファージ関連サイトカイン（インターロイキン−１β）および血管作動性メディエーターの両方によって媒介される。最後に、血管新生および／または毛細血管修復の刺激が腎機能を安定化させ進行を遅らせ得ることならびにこの利益がＢＰまたは蛋白尿に対する効果とは独立して生じるという興味深い証拠が存在する（さらなる情報については、Ｂｒｅｎｎｅｒ  ＆  Ｒｅｃｔｏｒ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｋｉｄｎｅｙ、７ｔｈ  ｅｄ．、２００４、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ：Ｃｈ  ３３．Ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｋｉｄｎｅｙ；及びＴｉｗａｒｉ  ａｎｄ  Ｖｉｋｒａｎｔ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｄｉａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０００．５（１）：４４−５４を参照のこと）。
【０３８０】
ＣＮＳ疾患及び障害
本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、本明細書以下に開示されるように、中枢神経系（ＣＮＳ）に影響を及ぼす種々の疾患及び障害の処置又は予防において有用である。
【０３８１】
脊髄損傷
脊髄損傷又はミエロパシーは、感覚及び／又は運動性の損失を生じる脊髄の障害である。脊髄損傷の２つの最も一般的な型は、外傷及び疾患に起因するものである。外傷性損傷は、しばしば自動車事故、落下、銃撃、潜水事故などに起因する。脊髄を冒し得る疾患としては、ポリオ、二分脊椎症、腫瘍、及びフリートライヒ運動失調が挙げられる。
【０３８２】
種々の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、脊髄損傷、特に、自動車事故、落下、スポーツ損傷、産業事故、銃創により引き起こされる脊髄外傷、脊椎の弱化（例えば関節リウマチ又は骨粗しょう症により）により又は通常の加齢過程に起因して脊髄を保護している脊柱管が狭くなりすぎた場合（脊柱管狭窄）に引き起こされる脊髄外傷、脊髄が引っ張られるか、横へ押されるか、又は圧迫された場合に起きる直接的な損傷、脊髄の内側又は脊髄の外側（しかし脊柱管内ではない）での出血、流体蓄積、及び膨張の後の脊髄に対する損傷により引き起こされる損傷を処置又は予防するために使用される。本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物はまた、ポリオ又は二分脊椎症のような疾患に起因する脊髄損傷により引き起こされる損傷を処置又は予防するためにも使用される。
【０３８３】
脳卒中後認知症
脳卒中後に約２５％の人々が認知症を有し、他の多くはその後５〜１０年にわたって認知症を発症する。さらに、多くの個体が、彼らのより高次の脳機能（例えば、計画スキル及び情報処理のスピード）のわずかな障害をより多く経験し、そしてその後に認知症を発症する危険性が非常に高い。この過程における脳の深部での非常に小さい脳卒中（微小血管疾患と呼ばれる）は、脳卒中後認知症に特異的な脳萎縮の同定されるパターンに至る過程において必須であると思われる。
【０３８４】
神経変性疾患
神経変性疾患は、ＣＮＳ（脳及び／又は脊髄）の細胞が失われる状態である。ＣＮＳ細胞は、全体として容易に再生されないので、過剰な損傷は破壊的であり得る。神経変性疾患は、ニューロン又はそれらのミエリン鞘の変質に起因し、これはやがて機能障害及び能力障害をもたらす。これらはおおざっぱに表現型の影響によって２つのグループに分けられるが、これらは相互排除的ではない：動作に影響を及ぼす状態、例えば運動失調；並びに記憶に影響を及ぼし認知症に関連した状態。神経変性疾患の非限定的な例は、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、ルー・ゲーリック病としても知られる）、ハンチントン病、レビー小体型認知症及びパーキンソン病である。
【０３８５】
別の型の神経変性疾患には、ミスフォールドしたタンパク質、又はプリオンにより引き起こされる疾患が含まれる。ヒトにおけるプリオン病の非限定的な例は、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）及び異型ＣＪＤ（狂牛病）である。
【０３８６】
脳の虚血
外傷及び脳卒中のような脳損傷は、欧米諸国において死亡及び身体障害の主要な原因の一つである。
【０３８７】
外傷性脳損傷（ＴＢＩ）は、現代社会において入院及び身体障害の最も深刻な理由の一つである。臨床経験により、ＴＢＩは損傷直後に生じる一次的ダメージ、及び損傷後数日間の間に生じる二次的ダメージに分類され得るということが示された。ＴＢＩの現在の治療は外科的であるか、あるいは対処療法のいずれかである。
【０３８８】
脳血管疾患
脳血管疾患は、主に生涯のうち中年及び晩年に起きる。これらは米国で毎年約２００，０００人の死亡、さらには重大な神経障害を引き起こす。脳卒中の発生率は年齢とともに増加し、そして人口の急増している部分である多くの老人が患う。これらの疾患は、虚血−梗塞又は頭蓋内出血のいずれかを引き起こす。
【０３８９】
脳卒中
脳卒中は、中断された血液供給の結果として起こる急性神経損傷であり、脳に対する侵襲を生じる。大部分の脳血管疾患は、限局的な神経異常の突発として現れる。この侵襲は固定されたままになり得、又は好転することもあれば徐々に悪化することもあり、通常は虚血病巣の中心において非可逆的なニューロンのダメージをもたらすが、一方で周辺部における神経機能障害は処置可能かつ／又は可逆性であり得る。長期の虚血は明白な組織壊死を生じる。その後に２〜４日にわたって脳水腫が続き、進行する。梗塞の領域が大きい場合、水腫は、その付帯する結果全てを伴って腫瘤効果を生じ得る。
【０３９０】
神経保護薬が周辺部のニューロンを死滅から救うために開発されているが、今までのところ有効であると判明したものはない。
【０３９１】
神経組織に対するダメージは、重篤な能力障害及び死をもたらし得る。ダメージの程度は、主として損傷を受けた組織の位置及び程度により影響を受ける。急性の侵襲に応じて活性化された内因性カスケードは、機能的帰結において役割を果たす。ダメージを最小にし、限定しかつ／又は逆転させようとする努力は、臨床結果を軽減する高い可能性を有している。
【０３９２】
種々の実施態様において、ＭＤ、ＤＲ及び脊髄損傷の処置のための医薬組成物は、以下の化合物の組み合わせからなり得る：
１）  ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡ、ＶＥＧＦ−Ｒ１  ｓｉＲＮＡ、ＶＥＧＦ  Ｒ２  ｓｉＲＮＡ、ＰＫＣベータｓｉＲＮＡ、ＭＣＰ１  ｓｉＲＮＡ、ｅＮＯＳ  ｓｉＲＮＡ、ＫＬＦ２  ｓｉＲＮＡ、ＲＴＰ８０１Ｌ  ｓｉＲＮＡのいずれかと組み合わせた本発明の化学修飾されたＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ（物理的に混合されるかタンデム分子でのいずれか）；２）  上のリストのｓｉＲＮＡのうち２つ又はそれ以上と組み合わせた本発明の化学修飾されたＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ（物理的に混合されるか若しくは３つのｓｉＲＮＡをコードするタンデム分子で、又はそれらの組み合わせ）。
【０３９３】
臓器移植
種々の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、肺、肝臓、心臓、骨、膵臓、腸、皮膚、血管、心臓弁、骨及び腎臓の移植を含む臓器移植後の障害（再潅流障害を含む）を処置又は予防するために有用である。
【０３９４】
用語「臓器移植」は、とりわけ以下の肺、腎臓、心臓、皮膚、静脈、骨、軟骨、肝臓の移植を含む臓器のいずれか１つ又はそれ以上の移植を包含するよう意図される。異種移植は特定の状況において考慮され得るが、通常は同種移植が好ましい。  自家移植には、骨髄、皮膚、骨、軟骨及び又は血管の移植が考慮され得る。
【０３９５】
本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、潅流障害（ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｉｎｊｕｒｙ）を寛解、処置又は予防することを含む、臓器移植の有害作用を経験している被験体の処置において特に有用である。
【０３９６】
臓器移植については、ドナー若しくはレシピエントのいずれか、又は両方が本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物又は少なくとも１つの本発明のｓｉＲＮＡ化合物を含む医薬組成物で処置され得る。従って、本発明は、臓器ドナー又は臓器レシピエントを処置する方法に関し、この方法は、臓器ドナー又は臓器レシピエントに治療有効量の少なくとも１つの本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を投与する工程を含む。
【０３９７】
本発明はさらに、有効量の少なくとも１つの本発明のｓｉＲＮＡ化合物と臓器を接触させることを含む、臓器を保存するための方法に関する。手術の間及び／又は被験体から臓器を取り出した後に臓器の障害（特に再潅流障害）を低減又は予防するための方法もまた提供され、この方法は、臓器を臓器保存溶液中に置くことを含み、ここで該溶液は、少なくとも１つの本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物を含む。
【０３９８】
臓器移植後臓器機能障害
臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）は、腎臓移植の手術直後の期間の最も一般的な合併症であり、悪い移植結果を生じる（Ｍｏｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ．１９９９．Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１４（４）：９３０−３５）。ＤＧＦの発生率及び定義は移植センターによって変わるが、その重大性は不変である：長期にわたる入院、さらなる侵襲的手技、並びに患者及び医療システムに対するさらなる費用。
【０３９９】
移植片拒絶は、移植片破壊の開始に依存して３つの部分集合に分類されている：（ｉ）  超急性拒絶反応は、通常最初の４８時間以内の非常に早期の移植片破壊に対して適用される用語である；（ｉｉ）  急性拒絶反応は、移植後数日から数ヶ月又は数年での開始を有し、体液性及び／又は細胞性のメカニズムを含み得る；（ｉｉｉ）  慢性拒絶反応は、アロ反応性免疫応答に関連する。
【０４００】
急性肺移植拒絶反応
急性同種移植拒絶反応は、免疫抑制薬物療法の進歩にもかかわらず、依然として  肺移植における重大な問題のままである。拒絶反応、並びに最終的には早期罹患率及び死亡率は、虚血−再潅流（Ｉ／Ｒ）障害及び低酸素障害に起因し得る。
【０４０１】
他の疾患及び状態
他の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、限定されないがとりわけ、制御不能な病的細胞増殖に関連する疾患又は障害、例えば癌、乾癬、自己免疫疾患を含む他の疾患及び状態の発生率又は重症度を処置又は予防するために有用である。「癌」又は「腫瘍」は、制御不能な異常細胞の増殖する腫瘤を指す。これらの用語には、原発腫瘍（良性でも悪性でもよい）に加えて、二次性腫瘍、又は身体内の他の部位に広がった転位の両方が含まれる。癌型の疾患の例としては、とりわけ：癌腫（例えば：乳房、結腸及び肺）、白血病（例えばＢ細胞白血病）、リンパ腫（例えばＢ細胞リンパ腫）、芽腫（例えば神経芽腫）及び黒色種が挙げられる。
【０４０２】
さらなる実施態様において、本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、神経保護を提供すること、又は脳保護を提供すること、又は自己免疫疾患及び移植拒絶反応に関連する細胞傷害性Ｔ細胞及びナチュラルキラー細胞媒介アポトーシスを予防及び／若しくは処置すること、又は心不全、心筋症、心臓のウイルス感染若しくは細菌感染、心筋虚血、心筋梗塞、及び心筋虚血、冠動脈バイパス移植を含む心臓細胞の細胞死を予防すること、又は例えば化学療法若しくはＨＩＶ治療の結果としてのミトコンドリア薬物毒性を予防及び／若しくは処置すること、ウイルス感染若しくは細菌感染の間の細胞死を予防すること、又は炎症若しくは炎症性疾患、炎症性腸疾患、敗血症及び敗血症性ショックを予防及び／若しくは処置すること、又は卵胞から卵母細胞の段階、卵母細胞から成熟卵の段階及び精子の細胞死を予防すること（例えば、凍結及び卵巣組織の移植、人工受精の方法）、化学療法後の哺乳動物、特にヒト哺乳動物において受精能を維持すること、又は黄斑変性を予防及び／若しくは処置すること、又は急性肝炎、慢性活動性肝炎、Ｂ型肝炎、及びＣ型肝炎を予防及び／若しくは処置すること、又は脱毛（例えば、男性型脱毛症に起因する脱毛、又は放射線、化学療法若しくは精神的ストレスに起因する脱毛）を予防すること、又は皮膚ダメージ（それにより、皮膚ダメージは、高レベルの放射線、熱、化学物質、日光、又は火傷及び自己免疫疾患に起因し得る）を処置若しくは寛解すること、又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）における骨髄細胞の細胞死を予防すること、膵炎を処置すること、関節リウマチ、乾癬、糸球体腎炎、アテローム性動脈硬化症、及び移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を処置すること、又は網膜周皮細胞アポトーシス、虚血に起因する網膜ダメージ、糖尿病性網膜症を処置すること、又はアポトーシス細胞死の増加に関連するいずれかの疾患状態を処置することを対象とする。
【０４０３】
他の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、患者における他の疾患及び状態の発生率又は重症度を処置又は予防するために有用である。これらの疾患及び状態には、脳卒中及び脳卒中様の状況（例えば脳不全、腎不全、心不全）、神経細胞死、再潅流問題を伴うか伴わない脳損傷が含まれる。
【０４０４】
口腔粘膜炎
口腔粘膜炎（口内炎とも呼ばれる）は、化学療法及び放射線療法レジメンの一般的な衰弱性の副作用であり、これは口及び咽喉の紅斑及び有痛性の潰瘍性病変として現れる。摂食、飲水、嚥下、及び会話のような日常的な活動が、重症の口腔粘膜炎を有する被験体には困難であるか又は不可能になり得る。対処療法には、鎮痛薬の投与及び局所的な洗浄が含まれる。
【０４０５】
虚血性状態及び再潅流障害
虚血傷害は、酸素欠乏による細胞傷害の最も一般的な臨床発現である。虚血傷害を研究するための最も有用なモデルは、器官の終動脈（例えば冠動脈）のうちの１つを完全に閉塞させること、及びその動脈により供給される領域における組織（例えば心筋）を調べることを含む。虚血の間に、多様な細胞系において複雑な病理的変化が起きる。特定の時点まで、異なる型の細胞によって変わる期間の間、傷害は修復を受けやすい可能性が有り、そして酸素及び代謝物質が血流の復旧により再び利用可能にされた場合、影響を受けた細胞は回復し得る。虚血持続時間がさらに続くと、進行中の損傷メカニズムが絶え間なく進行するために、細胞構造は悪化し続ける。時間とともに、細胞のエネルギー機構−ミトコンドリアの酸化的発電所（ｐｏｗｅｒｈｏｕｓｅ）及び解糖系−は、回復不能なダメージを受け、そして血流の回復（再潅流）が損傷した細胞を救うことはできない。たとえ細胞のエネルギー機構が無傷なままであったとしても、ゲノム又は細胞膜に対する回復不能なダメージは、再潅流にもかかわらず致死的結果を確実にする。この不可逆的な傷害は、通常は壊死として現れるが、アポトーシスも役割を果たし得る。特定の状況下では、以前は虚血になっていたが死滅していない細胞への血流が回復される場合、しばしば傷害は逆説的に悪化し、加速されたペースで進行する−これが再潅流障害である。
【０４０６】
他の実施態様において、本発明の化学修飾されたｓｉＲＮＡ化合物は、虚血及び適切な血流の欠如に関連する疾患、例えば心筋梗塞（ＭＩ）及び脳卒中の発生率又は重症度を処置又は予防するために有用であり、これらが提供される。
【０４０７】
再潅流障害は、種々の状態において、特に、血管形成術、心臓手術又は血栓溶解を含むがこれらに限定されない医療行為の間；臓器移植；形成外科手術の結果として；重症の区画症候群の間；切断された肢の再付着の間；多臓器不全症候群の結果として；脳卒中又は脳外傷の結果として脳において；褥瘡、静脈性潰瘍及び糖尿病性潰瘍のような慢性の創傷と関連して；骨格筋虚血又は肢移植の間；腸間膜虚血又は急性虚血性腸疾患の結果として；肺高血圧、低酸素血、及び非心原性肺水腫をもたらす、胴体下部（ｌｏｗｅｒ  ｔｏｒｓｏ）虚血の結果としての呼吸不全；腎臓移植、大手術、外傷及び敗血症ショック、さらには出血性ショックの後に観察される急性腎不全；敗血症；急性緑内障、糖尿病性網膜症、高血圧性網膜症、及び網膜血管閉塞のような多数の眼疾患において視力喪失をもたらす、急性血管閉塞の結果として起きる網膜虚血；蝸牛虚血；頭部及び頸部の異常についての微小血管手術における皮弁不全（ｆｌａｐ  ｆａｉｌｕｒｅ）；レイノー現象及び強皮症における関連する指の虚血性病変；脊髄損傷；血管手術；外傷性横紋筋融解症（圧挫症候群）；並びにミオグロビン尿症において起こり得る。
【０４０８】
さらに、虚血／再潅流は以下の状態に関与し得る：高血圧、高血圧性脳血管疾患、動脈瘤の破裂、血栓又は塞栓の場合に起こるような−血管の狭窄又は閉塞、血管腫、血液疾患、心停止又は心不全を含む心機能不全のいずれかの形態、全身性低血圧、心停止、心臓性ショック、敗血性ショック、脊髄外傷、頭部外傷、けいれん、腫瘍からの出血；並びに脳卒中、パーキンソン病、てんかん、抑うつ、ＡＬＳ、アルツハイマー病、ハンチントン病及びあらゆる他の疾患に誘導される認知症（例えばＨＩＶ誘導認知症）のような疾患。
【０４０９】
さらに、虚血性エピソードは、頭部又は脊椎への打撃の結果のように、中枢神経系に対する機械的損傷により引き起こされ得る。外傷は、頭部、頸部、又は脊柱のいずれかの部位又は付属物（ａｐｐｕｒｔｅｎａｎｔ）との異物の外傷性接触から生じ得るような、擦過傷、切開、挫傷、穿刺、圧迫などの組織侵襲を含み得る。外傷性損傷の他の形態は、不適切な体液の蓄積（例えば、正常な脳脊髄液又は硝子体液の産生、代謝回転、若しくは体積調節の遮断若しくは機能不全、又は硬膜下若しくは頭蓋内（ｉｎｔｒａｃａｒｎｉａｌ）血腫若しくは水腫）によるＣＮＳ組織の狭窄又は圧迫から生じ得る。同様に、外傷性の狭窄又は圧迫は、異常組織の塊、例えば転移腫瘍又は原発腫瘍の存在から生じ得る。
【０４１０】
褥瘡
褥瘡または圧迫潰瘍は、継続的な圧迫（通常はベッドまたは車椅子によるもの）により、身体の脆弱な部分、特に殿部、股関節部、および踵の皮膚への循環が遮断された場合に生じる損傷した皮膚および組織の領域である。適切な血流の欠如は、影響を受ける組織の虚血性壊死および潰瘍化をもたらす。褥瘡は、感覚が減退したもしくは無感覚の患者または衰弱、やつれた、麻痺状態の、もしくは長期間寝たきりの患者において最も頻繁に起こる。仙骨、坐骨、大転子、外果、および踵の組織が特に影響を受け易く；他の部位も患者の姿勢によっては含まれ得る。
【０４１１】
褥瘡は、通常非常にゆっくりとしか治癒しない創傷であり、特にこのような場合、当然ながら、改善されたより迅速な治療法が、患者にとって非常に重要である。さらに、このような創傷を患った患者の処置に関する費用は、治療法が改善されより迅速に行われるようになった場合、大いに抑えられる。
【０４１２】
本明細書において開示される上記の全ての疾患及び効能に加えて、ＭＩのような本明細書において記載される他の疾患及び状態もまた、本発明の化合物により処置され得る。上記の状態のいずれも、共同譲渡された（ｃｏ−ａｓｓｉｇｎｅｄ）ＰＣＴ公開第ＷＯ２００６／０２３５４４号及び同第ＷＯ２００７／０８４６８４号に開示されるｓｉＲＮＡのいずれかを含む組成物により処置され得る。上述の疾患及び障害を処置するための新しい効果的な治療は、高い治療的価値があるものだろう。
【０４１３】
さらに、本発明の化学修飾されたＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡは、本明細書に開示される疾患の処置のために増強された標的化を達成するため、以下に従って抗体に（共有結合又は非共有結合で）連結され得る：
ＡＲＦ：抗Ｆａｓ抗体（好ましくは中和抗体）。
黄斑変性、糖尿病性網膜症、脊髄損傷：抗Ｆａｓ抗体、抗ＭＣＰ１抗体、抗ＶＥＧＦＲ１及び抗ＶＥＧＦＲ２抗体。抗体は好ましくは中和抗体であるべきである。
【０４１４】
本発明は、説明に役立つやり方で記載されており、そして当然のことながら、使用される用語は、限定ではなく本来の説明の言葉の範疇にあることを意図される。
【０４１５】
明らかに、本発明の多くの改変及び変形が、上記の教示を考慮すれば可能である。従って、当然のことながら、添付の特許請求の範囲内で、本発明は具体的に記載されるものと別のやり方で実施され得る。
【０４１６】
本出願全体を通して、米国特許を含む種々の刊行物が著者及び年及び特許番号で参照される。これらの刊行物及び特許及び特許出願の開示は、それら全体として、本発明が属する技術分野の技術水準をより十分に記載するために、本出願に参照により加入される。
【０４１７】
本発明は、実施例を参照して以下で詳細に説明されるが、それらに限定するとは解釈されるべきではない。
【０４１８】
本明細書におけるいずれの文献の引用も、そのような文献が関連する従来技術
又は本出願のいずれかの請求項の特許性に対して考慮される材料であると是認することを意図されない。いずれの文献の内容又は日付に関する記述も、出願時に出願人に入手可能な情報に基づくものであり、上記記述の正確性に関する是認を構成するものではない。
【実施例】
【０４１９】
さらに詳述しなくとも、当業者は前出の記載を使用して、本発明をその最大限まで利用することができると考えられる。従って、以下の好ましい特定の実施態様は、一例にすぎず、特許請求された発明をいかなるようにも限定しないと解釈されるべきである。
【０４２０】
本明細書に具体的に記載されていない当該分野で公知の標準的な分子生物学プロトコルは、概してＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ−Ｙｏｒｋ  （１９８９、１９９２）、及びＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ  （１９８８）、及びＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ  （１９８９）及びＰｅｒｂａｌ、Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８８）、及びＷａｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ及びＢｉｒｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ  （ｅｄｓ）  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ、Ｖｏｌｓ．１−４  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９９８）におけるように、並びに米国特許第４，６６６，８２８号；同第４，６８３，２０２号；同第４，８０１，５３１号；同第５，１９２，６５９号及び同第５，２７２，０５７に記載される方法論におけるように本質的に理解され、そしてこれらは参照により本明細書に加入される。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を、一般的にＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ  （１９９０）におけるように行った。フローサイトメトリーと組み合わせたインサイチュ（細胞における）ＰＣＲを、特定のＤＮＡ及びｍＲＮＡ配列を含有する細胞の検出のために使用することができる（Ｔｅｓｔｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．、１９９６、Ｂｌｏｏｄ  ８７：３８２２．）。ＲＴ−ＰＣＲを行うための方法も当該分野で周知である。
【０４２１】
細胞培養
ＨｅＬａ細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）を、Ｃｚａｕｄｅｒｎａら（Ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２００３．３１、６７０−８２）に記載されるように培養した。
ヒトケラチノサイトを、１０％ＦＣＳを含有するダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中３７℃にて培養した。
マウス細胞株Ｂ１６Ｖ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）を、１０％ＦＣＳを含有するダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中３７℃にて培養した。培養条件はＭｅｔｈｏｄｓ  Ｆｉｎｄ  Ｅｘｐ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９７  Ｍａｙ；１９（４）：２３１−９に記載されるとおりであった。
各場合において、１ウェルあたり約５０，０００個の細胞の密度で本明細書に記載される実験にかけて、そして本発明の二本鎖核酸は２０ｎＭの濃度で加え、これにより二本鎖核酸を、以下に記載されるような専用の脂質（ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅTM）１μｇ／ｍｌを使用して複合体化させた。
【０４２２】
低酸素様状態の誘導
低酸素様状態を誘導するために、以下のように細胞をＣｏＣｌ２で処理した：ｓｉＲＮＡトランスフェクションを、１０−ｃｍプレート（３０−５０％コンフルエンシー）でＣｚａｕｄｅｒｎａ  ｅｔ  ａｌ．、２００３（前出）に記載されるように行った。手短には、無血清培地中のあらかじめ形成したＧＢ及び脂質の１０ｘ濃縮複合体を完全培地中の細胞に加えることにより、ｓｉＲＮＡをトランスフェクトした。総トランスフェクション体積は１０ｍｌであった。別の記載がなければ、最終脂質濃度は１．０μｇ／ｍｌであり；最終ｓｉＲＮＡ濃度は２０ｎＭであった。低酸素応答の誘導を、ＣｏＣｌ2（１００μＭ）を、溶解の２４時間前に組織培地に直接加えることにより行った。
【０４２３】
実施例１：ｓｉＲＮＡ化合物の製造及び試験
ｓｉＲＮＡ  オリゴヌクレオチドの選択
専用のアルゴリズム及び遺伝子ＲＴＰ８０１の公知の配列（配列番号１）を使用して、多くの可能性のあるｓｉＲＮＡの配列を生成した。このアルゴリズムに加えて、いくつかの２３量体オリゴマー配列を、１９量体配列の５’及び／又は３’伸長により生成した。この方法を使用して生成された配列は、対応するｍＲＮＡ配列に対して完全に相補的である。上記記述に従うｓｉＲＮＡ分子は、本質的に本明細書に記載されるように製造した。表Ａ〜Ｈ  配列番号３〜３５５６は、ＲＴＰ８０１を標的とするｓｉＲＮＡ化合物の製造において有用であるセンスオリゴヌクレオチド及びアンチセンスオリゴヌクレオチドを示す。一般に、インビトロ試験のために選択された特定の配列を有するｓｉＲＮＡは、ヒト及び少なくとも２つ目の種、例えばラット又はウサギに対して特異的である。表Ａ〜Ｈにおいて、以下の略号は異種間の活性に関して使用される：Ｃｈｎ−チンチラ；Ｃｙｎ−カニクイザル；ＧＰ−モルモット；Ｒｂ−ウサギ；Ｍｓ−マウス；Ｍｎｋ−サル；Ｃｈｍｐ−チンパンジー。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、本明細書以下で記載されるいずれかの方法により合成した。
【０４２４】
インビトロデータ
本発明の特定のｓｉＲＮＡ化合物を用いて得られた活性及び安定性の結果を本明細書以下に示す。１ウェルあたり約１．５〜２ｘ１０５の細胞（ヒト遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡについてはＨｅＬａ細胞又は２９３Ｔ細胞、そしてラット／マウス遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡについてはＮＲＫ５２細胞又はＮＭＵＭＧ細胞）を、６ウェルプレートにおいて播種した（７０〜８０％コンフルエント）。
２４時間（ｈ）後に、ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅTM  ２０００試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎｅ）を使用して最終濃度５００ｐＭ、５ｎＭ、２０ｎＭ又は４０ｎＭでｓｉＲＮＡオリゴで細胞をトランスフェクトした。これらの細胞を３７℃でＣＯ2インキュベータにおいて７２ｈインキュベートした。
細胞トランスフェクションについてのポジティブコントロールとして、ＰＴＥＮ−Ｃｙ３標識ｓｉＲＮＡオリゴを使用した。ｓｉＲＮＡ活性についてのネガティブコントロールとしてＧＦＰ  ｓｉＲＮＡオリゴを使用した。
トランスフェクションの約７２ｈ後に、細胞を採取し、そしてＲＮＡを細胞から抽出した。
【０４２５】
ｓｉＲＮＡ化合物
表Ａ〜Ｈは、本発明のｓｉＲＮＡ配列を詳述しており、これらは本明細書に開示される修飾／構造のいずれかと組み合わされて新規なＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ化合物を生成し得る。
【０４２６】
以下の表１〜２は、種々の構造のＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡを用いて達成されたインビトロ活性及び安定性の結果を詳述する：
【０４２７】
【表１】
2011517404.tif 000082
【０４２８】
【表２】
2011517404.tif 000083
【０４２９】
【表３】
2011517404.tif 000084
【０４３０】
【表４】
2011517404.tif 000085
【０４３１】
【表５】
2011517404.tif 000086
【０４３２】
本明細書以下の表３は、本発明のｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチド（ｏｌｏｇｏｎｕｌｃｏｅｉｔｄｅｓ）の製造において利用される修飾されたヌクレオチド／非通常部分のコードを示す。
【０４３３】
【表６】
2011517404.tif 000087
【０４３４】
【表７】
2011517404.tif 000088
【０４３５】
実施例２：急性腎不全（ＡＲＦ）のモデル系
ＡＲＦは、数日以内に起きる腎機能の急速な悪化を特徴とする臨床的な症候群である。理論に拘束されないが、急性腎臓損傷は、大きな心臓手術のような大手術を受けた患者における腎臓虚血−再潅流障害のような、腎臓虚血−再潅流障害の結果であり得る。ＡＲＦの主要な特徴は、糸球体濾過率（ＧＦＲ）の急激な低下であり、廃棄物（尿素、クレアチニン）の停留を生じる。最近の研究は、ＡＲＦの大部分のヒトの症例において、腎組織におけるアポトーシスが顕著であることを支持する。アポトーシス細胞死の主な部位は遠位ネフロンである。虚血傷害の初期段階の間、アクチン細胞骨格の完全性が失われることにより、刷子縁の損失、細胞接着点の損失、及びその後の下にある基層からの細胞の遊離とともに、上皮が平坦化する。
活性ｓｉＲＮＡ化合物の試験を、虚血−再潅流誘導ＡＲＦの動物モデルを使用して行った。
【０４３６】
虚血−再潅流誘導ＡＲＦに対する保護
虚血−再潅流障害を、４５分両側腎臓動脈をクランプし、そしてその後クランプを解放して２４時間再潅流させた後、ラットにおいて誘導した。ｓｉＲＮＡ化合物１２ｍｇ／ｋｇを、クランプの３０分前及び４時間後に頸静脈に注射した。ＡＲＦの進行は、手術の前（ベースライン）及び２４時間後に血清クレアチニンレベルを測定することによりモニタリングした。実験の最後に、温ＰＢＳ、続いて４％パラホルムアルデヒドを、大腿留置ラインを介してラットに潅流した。左腎臓を外科的に取り出し、そしてその後の組織学的分析のために４％パラホルムアルデヒド中に保存した。急性腎不全は、しばしばクレアチニンレベルのベースラインからの急激な増加として定義される。１ｄＬあたり少なくとも０．５  ｍｇ又は１Ｌあたり４４．２μｍｏｌの血清クレアチニンの増加は、急性腎不全の指標と考えられている。血清クレアチニンを、手術前の０時の時点及びＡＲＦ手術の２４時間後に測定した。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物を、上記のモデル系で試験し、そして虚血再潅流に対して保護的であることがわかった。
さらに、ＡＲＦの処置についての活性ｓｉＲＮＡの試験は、敗血症誘導ＡＲＦを使用して行ってもよい。
敗血症誘導ＡＲＦの２つの予測動物モデルが、Ｍｉｙａｊｉ  ｅｔ  ａｌ．、２００３、ｅｔｈｙｌ  ｐｙｒｕｖａｔｅ  ｄｅｃｒｅａｓｅｓ  ｓｅｐｓｉｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｃｕｔｅ  ｒｅｎａｌ  ｆａｉｌｕｒｅ  ａｎｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｏｒｇａｎ  ｄａｍａｇｅ  ｉｎ  ａｇｅｄ  ｍｉｃｅ、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．Ｎｏｖ；６４（５）：１６２０−３１により記載される。これら２つのモデルは、マウス、好ましくは老齢マウスにおけるリポ多糖投与及び腸管穿孔である。
【０４３７】
実施例３：褥瘡又は圧迫潰瘍のモデル系
糖尿病性潰瘍を含む褥瘡または圧迫潰瘍は、継続的な圧迫（通常はベッドまたは車椅子によるもの）により、身体の脆弱な部分、特に殿部、股関節部、および踵の皮膚への循環が遮断された場合に生じる損傷した皮膚および組織の領域である。適切な血流の欠如は、影響を受ける組織の虚血性壊死および潰瘍化をもたらす。褥瘡は、感覚が減退したもしくは無感覚の患者または衰弱、やつれた、麻痺状態の、もしくは長期間寝たきりの患者において最も頻繁に起こる。仙骨、坐骨、大転子、外果、および踵の組織が特に影響を受け易く；他の部位も患者の姿勢によっては含まれ得る。
褥瘡、潰瘍及び同様の創傷を処置するための本発明の活性な阻害剤（例えばｓｉＲＮＡ化合物）の試験は、Ｒｅｉｄ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１１６：１７２−１８０、２００４に記載されるマウスモデルにおいて行った。
さらなるウサギモデルは、Ｍｕｓｔｏｅ  ｅｔ  ａｌ、ＪＣＩ、１９９１．８７（２）：６９４−７０３；Ａｈｎ  ａｎｄ  Ｍｕｓｔｏｅ、Ａｎｎ  Ｐｌ  Ｓｕｒｇ、１９９１．２４（１）：１７−２３により記載され、そして本発明のｓｉＲＮＡ化合物を試験するために使用した。本発明のｓｉＲＮＡ化合物を動物モデルで試験し、ここでこれらのｓｉＲＮＡ化合物が褥瘡及び潰瘍を処置及び予防することが示された。
【０４３８】
実施例４：慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）のモデル系
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、終末細気管支に対して遠位にある末梢気腔の恒久的な破壊である気腫により主に特徴づけられる。気腫はまた、細気管支および肺胞構造におけるマクロファージおよび好中球のような炎症細胞の蓄積によっても特徴付けられる。気腫及び慢性気管支炎はＣＯＰＤの一部として発生することも、独立して発生することもある。
ＣＯＰＤ／気腫／慢性気管支炎の処置についての本発明の活性な阻害剤（例えばｓｉＲＮＡ）の試験を、以下に開示されるような動物モデルで行った：
Ｓｔａｒｃｈｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ、１９８９．Ｌａｂ．Ａｎｉｍａｌｓ、２３：２３４−２４０；Ｐｅｎｇ、ｅｔ  ａｌ．、２００４．；Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ、１６９：１２４５−１２５１；Ｊｅｙａｓｅｅｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．、２００４．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、７２：７２４７−５６。さらなるモデルは、本出願の譲受人に譲渡されたＰＣＴ特許公開第ＷＯ２００６／０２３５４４号（参照により本出願に加入される）に記載される。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物をこれらの動物モデルで試験し、これによりこれらのｓｉＲＮＡ化合物が気腫、慢性気管支炎及びＣＯＰＤを処置及び／又は予防することが示された。
【０４３９】
実施例５：脊髄損傷のモデル系
脊髄損傷又はミエロパシーは、感覚及び／又は運動性の損失を生じる脊髄の障害である。脊髄損傷の２つの最も一般的な型は、外傷及び疾患に起因するものである。外傷性損傷は、とりわけ自動車事故、落下、銃撃、潜水事故などに起因し得、脊髄を冒し得る疾患としては、ポリオ、二分脊椎症、腫瘍、及びフリートライヒ運動失調が挙げられる。
ラットに２つの異なる用量のＣｙ３標識ｓｉＲＮＡ（１μｇ／μｌ、１０μｇ／μｌ）を注射し、そして屠殺の前１日間及び３日間放置した。組織学的分析は、多くの長い繊維状輪郭（ｐｒｏｆｉｌｅｓ）が標識されたｓｉＲＮＡを吸収し、他の突起（ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ）及び細胞体も同様であることを示した。ＭＡＰ２に対する抗体を用いた免疫染色により、樹状突起、及び運動ニューロンを含むニューロンの細胞体への標識の取り込みが同定された。星状細胞又はマクロファージに特異的な他の抗体を用いた染色により、ニューロンと比較してＣｙ３標識ｓｉＲＮＡのより低い取り込みが明らかになった。これらの結果は、損傷した脊髄に注入されたｓｉＲＮＡ分子が、運動ニューロンを含むニューロンの細胞体及び樹状突起まで到達することを示している。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物をこの動物モデルで試験し、これにより、これらのｓｉＲＮＡ化合物が脊髄損傷後の機能回復を促進し、従って脊髄損傷を処置するために使用され得るということが示された。
【０４４０】
実施例６：緑内障のモデル系
緑内障の処置又は予防についての本発明の活性な阻害剤の試験を、例えばＰｅａｓｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｇｌａｕｃｏｍａ、２００６、１５（６）：５１２−９により記載されるように動物モデルにおいて行った（実験的緑内障を有するラット及び正常なマウスにおけるＴｏｎｏＬａｂ及びＴｏｎｏＰｅｎ眼圧計の圧測定較正及び比較）。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物をこの動物モデルで試験し、ここでこれらのｓｉＲＮＡ化合物が緑内障を処置及び／又は予防するということが実証された。
【０４４１】
実施例７：ラットにおける肺移植後の虚血／再潅流障害のモデル系
肺移植後の虚血／再潅流障害又は低酸素性障害の処置又は予防についての本発明の活性阻害剤の試験を、例えばＭｉｚｏｂｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４．Ｊ．Ｈｅａｒｔ  Ｌｕｎｇ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、２３：８８９−９３；Ｈｕａｎｇ、ｅｔ  ａｌ．、１９９５．Ｊ．Ｈｅａｒｔ  Ｌｕｎｇ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１４：Ｓ４９；Ｍａｔｓｕｍｕｒａ、ｅｔ  ａｌ．、１９９５．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５９：１５０９−１５１７；Ｗｉｌｋｅｓ、ｅｔ  ａｌ．、１９９９．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６７：８９０−８９６；Ｎａｋａ、ｅｔ  ａｌ．、１９９６．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、７９：７７３−７８３により記載されるように、１つ又はそれ以上の実験動物モデルにおいて行った。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物をこれらの動物モデルで試験し、これにより、これらのｓｉＲＮＡ化合物が肺移植後の虚血−再潅流を処置及び／又は予防し、従って移植手術と併用して使用され得るということが示された。
【０４４２】
実施例８：急性呼吸促迫症候群のモデル系
急性呼吸促迫症候群の処置についての本発明の活性阻害剤の試験を、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ（Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｓｃｉ．２００３；１０（６  Ｐｔ  １）：５８８−９２）により記載される動物モデルにおいて行った。本発明のｓｉＲＮＡ化合物をこの動物モデルにおいて試験し、これによりこれらのｓｉＲＮＡが急性呼吸促迫症候群を処置及び／又は予防し、従ってこの状態を処置するために使用され得るということが示された。
【０４４３】
実施例９：聴覚損失状態のモデル系
（ｉ）耳の正円窓への局所投与後の蝸牛におけるＣｙ３−ＰＴＥＮ  ｓｉＲＮＡの分布
Ｃｙ３−ＰＴＥＮ  ｓｉＲＮＡ（合計０．３〜０．４μｇ）の１μｇ／１００μｌのＰＢＳ溶液を、チンチラの正円窓に投与した。処置された蝸牛内のＣｙ３で標識された細胞を、チンチラの屠殺後に、ｓｉＲＮＡ正円窓投与後２４〜４８時間に分析した。蝸牛内の標識のパターンは、２４時間後と４８時間後で同様であり、そして蝸牛の底回転、蝸牛の中回転及び蝸牛の頂回転における標識も含んでいた。Ｃｙ３−ＰＴＥＮ  ｓｉＲＮＡの鼓室階への投与は、主に蝸牛の底回転及び蝸牛の中回転における標識を示した。Ｃｙ３シグナルは、Ｃｙ３−ＰＴＥＮ  ｓｉＲＮＡの投与の１５日後まで持続した。本発明のｓｉＲＮＡ化合物をこの動物モデルで試験し、これにより、これらのｓｉＲＮＡ化合物の蝸牛の底回転、中回転及び頂回転までの有意な浸透が存在すること、並びにこれらの化合物が聴覚損失の処置において使用され得ることが示された。
（ｉｉ）  カルボプラチン誘導又はシスプラチン誘導蝸牛有毛細胞死のチンチラモデル
生理食塩水中の特定のｓｉＲＮＡを各動物の左耳に直接投与することにより、チンチラを前処置した。プラセボとして生理食塩水を各動物の右耳に投与した。本発明の特定のｓｉＲＮＡ化合物の投与の２日後に、これら動物をカルボプラチン（７５ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）又はシスプラチン（３０分にわたる１３ｍｇ／ｋｇの腹腔内注入）で処置した。チンチラを屠殺した後（カルボプラチン処置の２週後）、内有毛細胞（ＩＨＣ）及び外有毛細胞（ＯＨＣ）の死んだ細胞の％を左耳（ｓｉＲＮＡ処置）及び右耳（生理食塩水処置）において計算した。内有毛細胞（ＩＨＣ）及び外有毛細胞（ＯＨＣ）の死んだ細胞の％は右耳（生理食塩水処置）よりも左耳（ｓｉＲＮＡ処置）において低いと算出された。
（ｉｉｉ）  音響誘導蝸牛有毛細胞死のチンチラモデル
音響性外傷モデルにおける特定のｓｉＲＮＡの活性をチンチラで検討した。これらの動物を４ｋＨｚを中心とした騒音のオクターブバンドに２．５時間１０５ｄＢで曝露した。騒音に曝露されたチンチラの左耳を、生理食塩水約１０μＬ中のｓｉＲＮＡ  ３０μｇで前処置した（音響性外傷の４８時間前）；右耳は、ビヒクル（生理食塩水）で前処置した。複合活動電位（ＣＡＰ）は、蝸牛から伝達される神経活動を測定するための簡便で信頼できる電気生理学的方法である。音響刺激（例えばクリック音又はトーンバースト）が突然出された場合に生成される局所電場電位を検出するために、蝸牛の底部付近に電極を配置することによりＣＡＰを記録した。各耳の機能的状態を、音響性外傷の２．５週後に評価した。特に、ｓｉＲＮＡで処置した耳における閾値が未処置（生理食塩水）の耳よりも低い（より良い）か否かを決定するために、正円窓から記録された複合活動電位の平均閾値（ｍｅａｎ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）を、音響性外傷の２．５週後に決定した。さらに、内有毛細胞及び外有毛細胞の損失の量を、ｓｉＲＮＡで処置した耳及びコントロールの耳で決定した。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物をこの動物モデルで試験し、これによりｓｉＲＮＡで処置した耳における閾値が、未処置（生理食塩水）の耳よりも低い（より良い）ことが示された。さらに、内有毛細胞及び外有毛細胞の損失の量は、コントロールの耳よりもｓｉＲＮＡで処置した耳において少なかった。
【０４４４】
実施例１０−黄斑変性に関連するモデル系
本発明の化合物を、以下の脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）の動物モデルにおいて試験した。滲出型ＡＭＤのこの特徴は、レーザー処置によりモデル動物において誘導された。
【０４４５】
Ａ）マウスモデル
脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）誘導：滲出型ＡＭＤの特徴である脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）を、レーザー光凝固（５３２ｎｍ、２００ｍＷ、１００ｍｓ、７５μｍ）  （ＯｃｕＬｉｇｈｔ  ＧＬ、Ｉｒｉｄｅｘ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ）を、各マウスの両眼に薬物群の割り当てに対して単独で個々にマスキングする（ｓｉｎｇｌｅ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ  ｍａｓｋｅｄ）ことにより０日目に誘発した。標準化されたやり方で、細隙灯送達システム及びコンタクトレンズとしてのカバーガラスを使用して、レーザースポットを視神経周辺に当てた。
評価
評価のために、眼から眼球除去して４％パラホルムアルデヒドで３０分間４℃で固定した。神経感覚網膜を剥離し、そして視神経から切断した。残ったＲＰＥ−脈絡膜−強膜複合体を、Ｉｍｍｕ−Ｍｏｕｎｔ  （Ｖｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ  Ｍｏｕｎｔｉｎｇ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｖｅｃｔｏｒ）でフラットマウントにし、そしてカバーグラスで覆った。フラットマウントを走査型レーザー共焦点顕微鏡（ＴＣＳ  ＳＰ、Ｌｅｉｃａ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で調べた。青色アルゴンレーザーで励起することにより血管を可視化した。ＣＮＶ関連蛍光の面積を、Ｌｅｉｃａ  ＴＣＳ  ＳＰソフトウエアを使用してコンピュータ画像解析により測定した。各水平断面における蛍光面積全体の総和ＣＮＶの体積についての指標として使用した。
【０４４６】
Ｂ）非ヒト霊長類モデル
ＣＮＶ誘導：脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）を、雄性カニクイザルにおいて投薬前に両目の黄斑周囲（ｐｅｒｉｍａｃｕｌａｒ）レーザー処置により誘導した。おおよそのレーザーパラメータは以下のとおりである：スポット寸法：直径５０−１００μｍ；レーザー出力：３００−７００ミリワット；照射時間：０．１秒。
処置：レーザー処置の直後に、全ての動物の両目に単回硝子体内注射を行った。左目にＲＴＰ８０１に対する合成安定化ｓｉＲＮＡを投与し、一方反対側の目にはＰＢＳ（ビヒクル）を投与した。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物を、上記の黄斑変性動物モデルにおいて試験し、これにおいてＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ分子が黄斑変性の処置において有効であることが示された。
【０４４７】
実施例１１−微小血管障害に関するモデル系
本発明の化合物を、以下に記載されるような微小血管障害の一連の動物モデルにおいて試験した。
【０４４８】
１．糖尿病性網膜症
ＲＴＰ８０１は、インビトロで神経細胞アポトーシス及び反応性酸素種の生成を促進する。本発明の譲受人はまた、未熟児網膜症（ＲＯＰ）のモデルに供したＲＴＰ８０１ノックアウト（ＫＯ）マウスにおいて、ＶＥＧＦの増加にも関わらず低酸素条件下で病的血管新生ＮＶが減少し、一方でこの遺伝子の欠損は生理的新生児網膜ＮＶに影響を及ぼさなかった。さらにこのモデルにおいて、ＲＴＰ８０１の欠損はまた、低酸素神経細胞アポトーシス及び過酸素血管閉塞に対して保護的であった。
【０４４９】
実験１
ＲＴＰ８０１  ＫＯ及びＣ５７／１２９ｓｖ野生型（ＷＴ）同腹子マウスにおいてＳＴＺの腹腔内注射により糖尿病を誘導した。４週間後、ＥＲＧ（単一白色フラッシュ、１．４ｘ１０＾４ｆｔｃ、５ｍｓ）を１時間の暗順応後に左目から得た。ＲＶＰを、エバンスブルーアルブミン浸透技術を使用して両目から評価した。
【０４５０】
実験２
対応する遺伝的背景を有するＲＴＰ８０１ノックアウトマウス及びコントロール野生型マウスにおいて糖尿病を誘導した。糖尿病誘導のために、ストレプトゾトシン（終夜断食の後２日間、ＳＴＺ  ９０ｍｇ／ｋｇ／日）を注射した。動物の生理機能を、血中グルコース、体重、及びヘマトクリットの変化について研究の間モニタリングした。ビヒクルを注射したマウスがコントロールの役目を果たした。適切な動物を、抗ＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ又は抗ＧＦＰコントロールｓｉＲＮＡの硝子体内注射により処置した。
【０４５１】
網膜血管漏出を、動物に対してエバンスブルー（ＥＢ）染料技術を使用して測定した。マウスは、エバンスブルー（ＥＢ）測定の前に右頚静脈にカテーテルを移植されていた。各動物の両目における網膜浸透性測定は、標準的なエバンスブループロトコルにしたがった。
【０４５２】
未熟児網膜症
未熟児網膜症を、試験動物を低酸素状態及び過酸素状態に曝露することにより誘導し、続いて網膜に対する効果を試験した。ＲＴＰ８０１  ＫＯマウスが未熟児網膜症から保護されるという結果が示され、それによりＲＴＰ８０１阻害の保護効果が確認された。
【０４５３】
心筋梗塞
心筋梗塞を、マウスにおいて左冠動脈前下行枝の、短期及び長期の結紮により誘導した。
【０４５４】
微小血管虚血性状態
虚血性状態を評価する動物モデルには以下が含まれる：
１．閉鎖性頭部外傷（ＣＨＩ）−実験的ＴＢＩは、神経系及び神経代謝（ｎｅｕｒｏｍｅｔａｂｏｌｉｃ）カスケードに寄与する一連の事象を生じ、これらは行動の欠損の度合い及び程度に関連する。中前頭（ｍｉｄｃｏｒｏｎａｌ）面における左半球を覆う露出された頭蓋上に、前に置いた（ｐｒｅｆｉｘｅｄ）高さ（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ  １３、５５７、１９９６）からおもりを自由落下させながら、麻酔下でＣＨＩを誘導した。
２．一過性の中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）−９０〜１２０分の一過性の限局的な虚血を、成体雄性スプラーグドーリーラット（３００−３７０グラム）において行った。使用した方法は、腔内縫合ＭＣＡＯ  （Ｌｏｎｇａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｓｔｒｏｋｅ、３０、８４、１９８９、ａｎｄ  Ｄｏｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．７２、７６５、１９９９）である。換言すると、ハロタン麻酔下で、ポリ−Ｌ−リジンでコーティングされた３−０−ナイロン縫合材料を、外頚動脈における穴を通して右内頚動脈（ＩＣＡ）に挿入した。このナイロン糸をＩＣＡを右ＭＣＡ起点（２０−２３ｍｍ）に押し入れた。９０〜１２０分後にこの糸を引き抜き、この動物を縫合して回復させた。
３．持続的中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）−閉塞は持続的であり、片側−ＭＣＡの電気凝固により片側に誘導される。両方の方法が、脳皮質の同じ側の限局性脳虚血をもたらし、反対側は無傷なままである（コントロール）。左ＭＣＡを、ラットについてＴａｍｕｒａ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．、Ｊ  Ｃｅｒｅｂ  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ．１９８１；１：５３−６０により記載されるように、側頭開頭術により露出した。ＭＣＡ及びそのレンズ核線条体動脈（ｌｅｎｔｉｃｕｌｏｓｔｒｉａｔａｌ）分岐部を、嗅索の内側縁に対して近位にミクロバイポーラ（ｍｉｃｒｏｂｉｐｏｌａｒ）凝固で閉塞させた。傷を縫合し、そして動物を２６℃〜２８℃に温めた室内のそれらの飼育ケージに戻した。動物の温度を常に自動サーモスタットで維持した。
本発明のｓｉＲＮＡ化合物を、上記の微小血管状態の動物モデルで試験し、これにおいて、ＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ分子が微小血管状態の症状を寛解することが示された。
【０４５５】
実施例１２：神経変性疾患及び障害のためのモデル系
Ｉ．アルツハイマー病のＡＰＰトランスジェニックマウスモデルにおける本発明のｓｉＲＮＡ化合物の鼻腔内投与の有効性の評価
動物及び処置。この研究は、アルツハイマー病のモデルである、１１月齢の２４匹のＡＰＰ  ［Ｖ７１７Ｉ］トランスジェニックマウス（雌性）（Ｍｏｅｃｈａｒｓ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．、ＥＭＢＯ  Ｊ．１５（６）：１２６５−７４、１９９６；Ｍｏｅｃｈａｒｓ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．９１（３）：８１９−３０）を含み、これを無作為に２つの等しいグループに分けた（グループＩ及びグループＩＩ）。
動物にｓｉＲＮＡ（２００〜４００ｕｇ／マウス、グループＩ）及びビヒクル（グループＩＩ）を週に２〜３回鼻腔内投与して３ヶ月の間処置した。
終了。マウスを屠殺した；脳を解剖し、一方の半球を組織学のために処理し、そしてもう一方の半球を輸送のために凍結した。
評価。以下の組織学的分析を行った：
１．抗Ａβ染色及び定量（４スライド／マウス）：
２．Ｔｈｉｏ  Ｓ染色及び定量（４スライド／マウス）：
３．ＣＤ４５染色及び定量（４スライド／マウス）：
４．ＧＦＡＰ（星状細胞増加）染色及び定量。
【０４５６】
ＩＩ．アルツハイマー病のＢＡＣＥ−トランスジェニックマウスモデルにおける特定のｓｉＲＮＡの鼻腔内投与の有効性の評価
目的。この研究の目的は、アルツハイマー病についてのＢＡＣＥ−トランスジェニックマウスモデルにおける本発明の特定のｓｉＲＮＡ化合物の鼻腔内送達の有効性を試験することである。
動物及び処置。この研究は、２０匹の４月齢のＢＡＣＥ−１トランスジェニックマウス（雌性／雄性）を含み、これらを２つの等しいグループに無作為に分けた。ｓｉＲＮＡ処置を４月齢目に開始した。本発明のｓｉＲＮＡ化合物を鼻腔内投与した。
評価。
１．行動試験。動物を定期的な行動分析にかけることにより行動的な変化について全ての動物をモニタリング及び試験した。モーリス水迷路における空間学習及び記憶を使用した。
２．脳生化学。各グループの５匹のマウスの脳を生化学分析にかけた。ＢＡＣＥ、ＡＰＰ、ＣＴＦ及びＡβのウェスタンブロット分析を行った。ＢＡＣＥ酵素活性についてのアッセイを行った。
３．免疫組織化学。各グループにおける５匹のマウスの左脳半球（ｈｅｍｉｂｒａｉｎ）を免疫組織化学分析にかけた。ＢＡＣＥ、ＡＰＰ及びＣＴＦの発現レベルを決定した。
４．ｑＰＣＲによる遺伝子ノックダウンの分析を各グループの５匹のマウスの右脳半球で行った。
【０４５７】
ＩＩＩ．ＡＬＳのマウスモデルにおけるｓｉＲＮＡの鼻腔内投与の有効性の評価
目的。ＡＬＳの変異体ＳＯＤ１G93Aマウスモデルにおける本発明のｓｉＲＮＡ化合物の有効性を調べること。
動物及び処置。以下の実験グループを疾患進行及び寿命を調べるために使用した：
１．グループ１−ミスマッチｓｉＲＮＡ−野生型（ｎ＝１０）及びＳＯＤ１G93Aマウス（ｎ＝１０）
２．グループ２−本発明のｓｉＲＮＡ−野生型（ｎ＝１０）及びＳＯＤ１G93Aマウス（ｎ＝１０）
３．グループ３−未処置コントロール−野生型（ｎ＝１０）及びＳＯＤ１G93Aマウス（ｎ＝１０）
各実験グループは性別を一致させており（５雄性、５雌性）、そして  少なくとも３つの異なる同腹仔からの同腹仔を含む。この設計は、少数の同腹仔のみからのマウス、又は高い割合の雌性ＳＯＤ１G93Aマウス（これらのマウスは雄性マウスよりも３〜４日長く生きるので）を含むマウスグループからのマウスを使用することにより偏向を減らす。
ｓｉＲＮＡの投与。ｓｉＲＮＡの投与経路は鼻腔内滴注であり、週に二回の投与を３０日齢から開始した。
【０４５８】
疾患進行の分析。処置されたマウス及び未処置のマウスにおける行動及び筋電図（ＥＭＧ）分析を、疾患の開始及び進行をモニタリングするために行った。ｓｉＲＮＡ処置の開始前にマウスを予備試験し、その後毎週評価した。全ての結果を統計学的に比較した。以下の試験を行った：
１．水層遊泳試験：この試験は、後肢運動機能の変化の検出において特に感受性である（Ｒａｏｕｌ  ｅｔ  ａｌ．、２００５．Ｎａｔ  Ｍｅｄ．１１、４２３−４２８；Ｔｏｗｎｅ  ｅｔ  ａｌ、２００８．Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．１６：１０１８−１０２５）。
２．筋電図：ＥＭＧ評価を、後肢の腓腹筋において行い、ここで複合筋活動電位（ＣＭＡＰ）を記録した（Ｒａｏｕｌ  ｅｔ  ａｌ．、２００５．前出）。
３．体重：ＳＯＤ１G93Aマウスの体重は疾患進行の間に有意に減少するので、マウスの体重を毎週記録した（Ｋｉｅｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．、２００７．ＰＮＡＳ  Ｕ  Ｓ  Ａ．１０４、２０６０６−２０６１１）。
【０４５９】
寿命の評価。処置されたマウス及び未処置のマウスについての寿命日数を記録し、そして統計学的に比較して、ｓｉＲＮＡ処置が寿命に対して有意な効果を有するか否かを決定した。十分に定義された疾患終点において、体重を＞２０％失った場合、及び２０秒足らずのうちに起き上がることができない場合にマウスを屠殺した。全ての結果を統計学的に比較した。
【０４６０】
死後組織病理学。疾患終点において、マウスを終末的に麻酔し、そして脊髄及び後肢筋組織を組織学的分析及び生化学的分析のために採取した。
【０４６１】
運動ニューロン生存試験。腹髄の横断面をクリオスタットを使用して切断し、ガロシアニン、ニッスル染色を用いて染色した。これらの切片から、腹髄における運動ニューロンの数を計数し（Ｋｉｅｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．、２００７．ｓｕｐｒａ）、ｓｉＲＮＡ処置がＳＯＤ１G93Aマウスにおいて運動ニューロン変性を防止するか否かを決定した。
【０４６２】
脊髄組織病理学試験。ＳＯＤ１G93Aマウスにおける運動ニューロン変性は、アストログリオーシス及び小グリア細胞の活性化を生じる。ここでは、腹髄の横断面を使用して、星状細胞及び小グリア細胞の活性化を免疫細胞化学を使用して試験し、ｓｉＲＮＡ処置がそれらの活性化を低減または防止するか否かを決定した。
【０４６３】
筋組織学試験。後肢筋脱神経及び萎縮は、ＳＯＤ１G93Aマウスにおいて運動ニューロン変性の結果として生じた。疾患終点において、個々の後肢筋（腓腹筋、ヒラメ筋、前脛骨筋、長趾（ｄｉｇｉｔｏｒｉｕｍ）伸筋）の重量を記録し、そして処置マウスと未処置マウスの間で比較した。次いで筋肉を組織学的に処理し、運動終板脱神経及び筋萎縮を調べた（Ｋｉｅｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．、２００５．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１６９、５６１−５６７）。
【０４６４】
本発明の化合物を試験するために使用されるモデル系に関するさらなる詳細については、本発明の譲受人に共同譲渡又は譲渡された、国際特許公開第ＷＯ０６／０２３５４４Ａ２号、同第ＷＯ２００６／０３５４３４号及び同第ＷＯ２００７／０８４６８４Ａ２号（それらの全体が参照により本明細書に加入される）を参照のこと。
【０４６５】
本発明のｓｉＲＮＡ化合物を、神経変性状態の上記動物モデルにおいて試験し、ここでＲＴＰ８０１  ｓｉＲＮＡ分子が神経変性疾患の症状を寛解させることが示された。
【０４６６】
【表８】
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【０４６７】
【表９】
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【０４６８】
【表１０】
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【０４６９】
【表１１】
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【０４７０】
【表１２】
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【０４７１】
【表１３】
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【０４７２】
【表１４】
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【０４７３】
【表１５】
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【０４７４】
【表１６】
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【０４７５】
【表１７】
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【０４７６】
【表１８】
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【０４７７】
【表１９】
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【０４７８】
【表２０】
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【０４７９】
【表２１】
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【０４８０】
【表２２】
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【０４８１】
【表２３】
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【０４８２】
【表２４】
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【０４８３】
【表２５】
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【０４８４】
【表２６】
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【０４８５】
【表２７】
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【０４８６】
【表２８】
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【０４８７】
【表２９】
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【０４８８】
【表３０】
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【０４８９】
【表３１】
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【０４９０】
【表３２】
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【０４９１】
【表３３】
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【０４９２】
【表３４】
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【０４９３】
【表３５】
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【０４９４】
【表３６】
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【０４９５】
【表３７】
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【０４９６】
【表３８】
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【０４９７】
【表３９】
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【０４９８】
【表４０】
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【０４９９】
【表４１】
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【０５００】
【表４２】
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【０５０１】
【表４３】
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【０５０２】
【表４４】
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【０５０３】
【表４５】
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【０５０４】
【表４６】
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【０５０５】
【表４７】
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【０５０６】
【表４８】
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【０５０７】
【表４９】
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【０５０８】
【表５０】
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【表５１】
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【表５２】
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【表５３】
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【表５４】
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【表５５】
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【表５６】
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【０５１５】
【表５７】
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【表５８】
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【表６０】
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【０５１９】
【表６１】
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【０５２０】
【表６２】
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【０５２１】
【表６３】
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【０５２２】
【表６４】
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【０５２３】
【表６５】
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【表６６】
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【０５２５】
【表６７】
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【０５２６】
【表６８】
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【表６９】
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【０５２８】
【表７０】
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【０５２９】
【表７１】
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【０５３０】
【表７２】
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【０５３１】
【表７３】
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【０５３２】
【表７４】
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【０５３３】
【表７５】
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【０５３４】
【表７６】
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【表７７】
2011517404.tif 000158
【０５３６】
【表７８】
2011517404.tif 000159
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造：
５’          （Ｎ）x−Ｚ          ３’    （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）y−ｚ’’    ５’    （センス鎖）
［ここでＮ及びＮ’はそれぞれ、未修飾でも修飾されていてもよいリボヌクレオチド、又は非通常部分であり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は独立して、それが存在する鎖の３’末端において共有結合で結合された１〜５個の連続したヌクレオチドであり；
ｚ’’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、（Ｎ’）ｙの
５’末端において共有結合で結合されたキャッピング部分であり；
それぞれｘ＝ｙ＝１９であり；
（Ｎ）ｘは、少なくとも１つの２’Ｏメチル糖修飾リボヌクレオチドを含み；
（Ｎ’）ｙは、３'末端又は３’末端から二番目の位置の少なくとも１つにおいてミラーヌクレオチドを含み；そして
（Ｎ）ｘの配列は、配列番号１６及び配列番号１１７５のいずれか１つにおいて示される］
を有する化合物。
【請求項２】
（Ｎ’）ｙにおいて３’末端におけるＮ’がミラーヌクレオチドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
（Ｎ’）ｙにおいて３’末端から二番目の位置におけるＮ’がミラーヌクレオチドである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
（Ｎ）ｘにおいて、リボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、そして（Ｎ）ｘの中央に位置するリボヌクレオチドは未修飾である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
（Ｎ）ｘは、３’末端で始まる少なくとも５つの交互の未修飾リボヌクレオチド及び２’Ｏメチル糖修飾リボヌクレオチド、そして全体で少なくとも９つの２’Ｏメチル糖修飾リボヌクレオチドを含み、そして残りの各Ｎは未修飾リボヌクレオチドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
（Ｎ）ｘにおいて、５’末端における１〜５個の連続したＮは２’Ｏメチル糖修飾リボヌクレオチドであり、そして残りのＮは未修飾リボヌクレオチドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
以下の構造：
５’          （Ｎ）x−Ｚ          ３’      （アンチセンス鎖）
３’    Ｚ’−（Ｎ’）y−ｚ’’    ５’      （センス鎖）
［ここで、Ｎ及びＮ’はそれぞれ、未修飾でも修飾されていてもよいリボヌクレオチド、又は非通常部分であり；
（Ｎ）ｘ及び（Ｎ’）ｙはそれぞれ、各々の連続したＮ又はＮ’が共有結合により隣のＮ又はＮ’に結合されたオリゴヌクレオチドであり；
Ｚ及びＺ’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は独立して、それが存在する鎖の３’末端において共有結合で結合された１〜５個の連続したヌクレオチドであり；
ｚ’’は、存在していても存在していなくてもよいが、存在する場合は、（Ｎ’）ｙの５’末端において共有結合で結合されたキャッピング部分であり；
ｘ及びｙはそれぞれ独立して１８と４０との間の整数であり；
（Ｎ）ｘは少なくとも１つの２’Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドを含み；
（Ｎ’）ｙにおいて、１つ若しくはそれ以上の末端において又は１つ若しくはそれ以上の末端から二番目の位置から始まる、少なくとも２つの連続したリボヌクレオチドが、ミラーヌクレオチド又は２'−５'架橋ヌクレオチドであり；そして
（Ｎ'）ｙにおけるリボヌクレオチドの配列が、ＲＴＰ８０１遺伝子から転写されたｍＲＮＡにおける同一の長さの連続したリボヌクレオチドの配列と同一であり、そして（Ｎ）ｘの配列は（Ｎ'）ｙの配列と相補的である］
を有する化合物。
【請求項８】
（Ｎ）ｘの配列が、表Ａ〜Ｈのいずれか１つに存在するアンチセンス配列である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｚ及びＺ’が存在しない、請求項７または８に記載される化合物。
【請求項１０】
ｘ＝ｙ＝１９である、請求項７または８に記載される化合物。
【請求項１１】
（Ｎ）ｘにおいて、リボヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、そして（Ｎ）ｘの中央の位置に位置するリボヌクレオチドが未修飾であり；そして
（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで３’末端における少なくとも２つの連続したヌクレオチドがＬ−ＤＮＡヌクレオチドである、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
（Ｎ）ｘにおいて、リボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、そして（Ｎ）ｘの中央の位置に位置するリボヌクレオチドは未修飾であり；そして
（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで３’末端における少なくとも２つの連続したヌクレオチドは２’−５’架橋により共に結合される、
請求項７〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
（Ｎ）ｘにおいて、リボヌクレオチドは、修飾されたリボヌクレオチドと未修飾リボヌクレオチドとの間で交互であり、各修飾されたリボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルをその糖上に有するように修飾されており、そして（Ｎ）ｘの中央の位置に位置するリボヌクレオチドは未修飾であり；そして
（Ｎ’）ｙは未修飾リボヌクレオチドを含み、ここで３’末端から二番目の位置から始まる少なくとも２つの連続したヌクレオチドは２’−５’架橋により共に結合される、
請求項７〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
（Ｎ’）ｙにおいて、３’末端における３つの連続したヌクレオチドが２’−５’架橋により共に結合される、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
化合物が、１つ又はそれ以上の末端においてリン酸化されているか又はリン酸化されていない、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物；及び薬学的に許容しうる担体を含む医薬組成物。
【請求項１７】
呼吸器障害、眼疾患、微小血管障害、聴覚障害、腎障害、虚血性状態、脊髄損傷、又は神経変性疾患より選択される疾患の処置における使用のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１８】
眼疾患が、黄斑変性、緑内障、糖尿病性網膜症及び糖尿病性黄斑浮腫からなる群より選択される、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
呼吸器障害が、ＣＯＰＤ、喘息、慢性気管支炎及び気腫からなる群より選択される、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２０】
微小血管障害が急性腎不全である、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２１】
神経変性疾患が、アルツハイマー病、ＡＬＳ及びパーキンソン病からなる群より選択される、請求項１７に記載の使用。
【請求項２２】
腎障害が、ＡＲＦ及びＤＧＦからなる群より選択される、請求項１７に記載の使用。
【請求項２３】
アポトーシス関連状態の処置における使用のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２４】
血管新生関連状態の処置における使用のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２５】
それを必要とする被験体において疾患又は状態の発生率又は重症度を処置又は予防するための方法であって、疾患若しくは状態及び／又はそれらに関連する症状が、呼吸器障害、眼疾患、腎障害、微小血管障害、聴覚障害、虚血性状態、脊髄損傷、又は神経変性疾患からなる群より選択され、請求項１６に記載の医薬組成物を疾患又は状態を処置するために有効な量で被験体に投与することを含む、方法。
【国際調査報告】
2011517404.tif 000160
2011517404.tif 000161