(57)【要約】  本発明は、式（ＩＩＩ）の化合物（式中、Ｒは（Ｃ１−Ｃ８）−アルキルである。）、又は、その光学異性体の水素化反応を含む、アミノ酸誘導体の立体選択的製造方法に関する。引き続き、Ｌ−メシチルアラニン、又は、その光学異性体のＤ−メシチルアラニンを得るために水素化反応され、任意に、特にＦｍｏｃで、前記化合物に対してアミノ基保護反応が行われる。また、生成物自体としてＦｍｏｃ−Ｌ−又はＦｍｏｃ−Ｄ−メシチルアラニンが含まれ、治療又は生物学的な活性を有するペプチド又はペプチドアナログの製造における中間体として有用である。【化１】2011503226.tif 000025
2011503226.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物、又は、その光学異性体（Ｉ’）の実質的に純粋な光学異性体の立体選択的な製造方法であって；
【化１】
2011503226.tif 000014
［式中、Ｐは水素又はアミン保護基である］
以下のステップを含む立体選択的な製造方法：
ａ）式（ＩＩ）の化合物、又は、その光学異性体（ＩＩ’）を得るために、式（ＩＩＩ）の化合物、又は、その光学異性体（ＩＩＩ’）に対して水素化反応を行うステップ；
【化２】
2011503226.tif 000015
【化３】
2011503226.tif 000016
［式中、Ｒは（Ｃ１−Ｃ８）−アルキルである］
ｂ）式（Ｉ）の化合物、又は、その光学異性体（Ｉ’）を得るために、式（ＩＩ）の化合物、又は、その光学異性体（ＩＩ’）に対して加水分解反応を行い、任意に、前記化合物（Ｉ）、又は、その光学異性体（Ｉ’）［式中、Ｐは水素である］に対してアミノ基保護反応を行うステップ。
【請求項２】
Ｐが、９−フルオレニルメチルカルバメート（Ｆｍｏｃ）、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、アリル、４−メトキシベンジル、２，４−ジメトキシベンジル及びベンジルから成る群より選択される請求項１に記載の立体選択的な製造方法。
【請求項３】
前記水素化反応を行うステップが、触媒として金属又は金属錯体を用いて行われる請求項１又は２に記載の立体選択的な製造方法。
【請求項４】
前記加水分解反応が、塩基性媒体中で行われる請求項１〜３のいずれか１項に記載の立体選択的な製造方法。
【請求項５】
前記加水分解反応の塩基が、アルカリ金属の水酸化物である請求項４に記載の立体選択的な製造方法。
【請求項６】
式（ＩＩＩ）の化合物、又は、その光学異性体（ＩＩＩ’）を得るために、式（ＩＶ）の化合物、又は、その光学異性体（ＩＶ’）が、式Ｐ（Ｒ１）３［式中、Ｒ１は、（Ｃ１−Ｃ８）−アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）−シクロアルキル、任意に置換されたフェニル、任意に置換された（ＣＨ２）ｎ−フェニル（式中、ｎは１〜４の整数であり、ベンゼン環を有する基の置換基は、（Ｃ１−Ｃ８）−アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）−アルコキシル又はハロゲンから成る群より、独立して選択される）から成る群より、独立して選択される］のホスフィンと反応する請求項１〜５のいずれか１項に記載の立体選択的な製造方法；
【化４】
2011503226.tif 000017
【化５】
2011503226.tif 000018
［式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ’）、（ＩＶ）及び（ＩＶ’）中のＲは、（Ｃ１−Ｃ８）−アルキルである］。
【請求項７】
式（ＩＶ）の化合物、又は、（ＩＶ’）の化合物を得るために、式（Ｖ）の化合物、又は、その光学異性体（Ｖ’）が、アルカリ又はアルカリ土類金属アジドと反応する請求項６に記載の立体選択的な製造方法；
【化６】
2011503226.tif 000019
【化７】
2011503226.tif 000020
［式（ＩＶ）、（ＩＶ’）、（Ｖ）及び（Ｖ’）中のＲは、（Ｃ１−Ｃ８）−アルキルである］。
【請求項８】
式（Ｖ）の化合物、又は、その光学異性体（Ｖ’）を得るために、式（ＶＩ）の化合物、又は、その光学異性体（ＶＩ’）が、チオニルハロゲン化物と反応する請求項７に記載の立体選択的な製造方法；
【化８】
2011503226.tif 000021
【化９】
2011503226.tif 000022
［式（Ｖ）、（Ｖ’）、（ＶＩ）及び（ＶＩ’）中のＲは、（Ｃ１−Ｃ８）−アルキルである］。
【請求項９】
式（ＶＩ）の化合物、又は、式（ＶＩ’）の化合物を得るために、式（ＶＩＩ）の化合物に対して、適切なキラルリガンドを用いたシャープレス不斉ジヒドロキシ化反応が行われる請求項８に記載の立体選択的な製造方法；
【化１０】
2011503226.tif 000023
【化１１】
2011503226.tif 000024
［式（ＶＩ）、（ＶＩ’）及び（ＶＩＩ）中のＲは、アルキルである］。
【請求項１０】
前記適切なキラルリガンドが、式（ＶＩ）の化合物を得るヒドロキニン１，４−フタラジンジイルジエーテル（（ＤＨＱ）２ＰＨＡＬ）、又は、式（ＶＩ’）の化合物を得るヒドロキニジン１，４−フタラジンジイルジエーテル（（ＤＨＱＤ）２ＰＨＡＬ）から成る群より選択される請求項９に記載の立体選択的な製造方法。
【請求項１１】
Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−メシチルアラニン。
【請求項１２】
Ｆｍｏｃ−（Ｄ）−メシチルアラニン。
【請求項１３】
１つ以上のメシチルアラニン残基を有する固相におけるペプチドの製造方法であって、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−メシチルアラニン、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）−メシチルアラニン、Ｃｂｚ−（Ｌ）−メシチルアラニン、Ｃｂｚ−（Ｄ）−メシチルアラニン、アリル−（Ｌ）−メシチルアラニン、アリル−（Ｄ）−メシチルアラニン、４−メトキシベンジル−（Ｌ）−メシチルアラニン、４−メトキシベンジル−（Ｄ）−メシチルアラニン、２，４−ジメトキシベンジル−（Ｌ）−メシチルアラニン、２，４−ジメトキシベンジル−（Ｄ）−メシチルアラニン、ベンジル−（Ｌ）−メシチルアラニン、及び、ベンジル−（Ｄ）−メシチルアラニンから成る群より選択されるＮ−保護アミノ酸の使用が含まれる製造方法。
【請求項１４】
請求項１〜１０のいずれか１項の立体選択的な製造方法を行うことを含む、１つ以上のメシチルアラニン残基を有する固相におけるペプチドの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペプチドの製造に有用な、Ｌ−及びＤ−メシチルアラニンの立体選択的製造方法に関する。特に、本発明は、Ｆｍｏｃ基で保護されたＬ−又はＤ−メシチルアラニン及び該化合物自体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ペプチド薬は、約１０億米ドルの市場であり、医薬品有効成分の総売上高の約１％の売上高を示す。現在、市場には４０を超える合成ペプチドが存在し、５００を超える新しいペプチド分子が開発されている。
【０００３】
これらの化合物は、生物学的、治療的に興味深い特性を有するため、ペプチド類の化学は研究の非常に重要な領域である。同様に、非タンパク質性アミノ酸は、生物的、治療的活性を有する前記ペプチド類の中間体として、ますますより重要である。
【０００４】
薬の活性は、受容体との相互作用を示すことのできるその立体配座に依存すること、次にその立体配座は、ペプチド化合物の場合、その鎖に存在するアミノ酸に依存することが知られている。したがって、薬としてのそれらの活性を変える１つの方法は、生物的活性ペプチドの配列部分を形成するアミノ酸の立体配座固定アナログを導入することである。（例えば、非特許文献１及び２参照）
【０００５】
非天然アミノ酸の使用は、プロテアーゼでより分解し易い、対応するペプチド類の半減期を増加させる。また、いくつかのアミノ酸において、メシチル（２、４、６−トリメチルフェニル）を有するフェニル基での置換が、最も安定した立体配座異性体の配置を大きく変えることなく回転障壁を大幅に増加させることも記載されている（非特許文献３参照）。このメシチルアラニンを有するフェニルアラニンの置換によって、優れた生物活性を有するペプチドアナログ、例えば［Ｄ−ｈａｒ８］バソプレッシンのアナログ（非特許文献４）、鎮痛剤と血圧降下剤（特許文献１）、エンケファリンのアナログ（特許文献２）、ＬＨＲＨホルモン（特許文献３）及びフィブロイン配列を有するペプチド類などは製造された。これらのアナログの製造は、Ｂｏｃ保護基で保護されたアミノ酸をラセミ体に組込むことによって行われた。その後、得られたペプチド類はキラル固定相を備えたＨＰＬＣで分離された（非特許文献５）。
【０００６】
Ｌ−フェニルアラニンは、多くの天然ペプチドとタンパク質に自然に存在する天然アミノ酸である。メシチルアラニンは、いくつかのペプチドとペプチドアナログの製造に有用な非天然アミノ酸である。メシチルアラニンは、ラセミ体として製造され、調製的にではなく、分析的に分離された。しかしながら、恐らく、側鎖にメシチル基を有する鏡像異性的に純粋なアミノ酸を製造することが困難なために、現在までのところメシチルアラニンの使用はかなり稀である。
【０００７】
Ｅ．Ｍｅｄｉｎａらは、シャープレスエポキシ化とシャープレスアミノヒドロキシル化に基づくメシチルアミノ酸の合成について記載している（非特許文献６参照）。しかしながら、この合成には、産業レベルでの使用を妨げる重大な欠点がある。このような欠点の中でも、メシチルプロペノールのシャープレスエポキシ化の非常に低い転換率が際立っている。またアミノヒドロキシル化反応による粗生成物は、過度の残渣を除去するためにクロマトグラフされる必要がある。アセトアミドアクリル酸前駆体のエナンチオ選択性非対称触媒水素化法によるＬ−メシチルアラニン塩酸塩の合成についても記載されている（非特許文献７参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】欧州特許出願公開第０２１３４８１号明細書
【特許文献２】欧州特許出願公開第０１３６７２０号明細書
【特許文献３】欧州特許出願公開第００４９６２８号明細書
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】T. Osaka et al., Current Opinion in Chemical Biology 2002, vol. 6, pp. 809-815
【非特許文献２】D. R. Hodgson et al., Chem. Soc. Rev 2004, vol. 33, pp. 422-430
【非特許文献３】E Medina et al., Helv. Chim. Acta 2000, vol. 83, pp. 972-988
【非特許文献４】M. Zertova et al., Collect. Czech. Chem. Comun. 1993, vol. 58, pp. 2751
【非特許文献５】J.Hlavaceck et al., Collect. Czech. Chem. Comun., 1991, vol. 56, p. 2991
【非特許文献６】Helv. Chim. Acta 2000, vol. 83, pp. 972-988
【非特許文献７】T. Li et al., Chem. Pharm. Bull. 2006, vol. 54, pp. 873-877
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
現在の技術水準に照らし、これらの全ての文献の教示は、Ｌ−又はＤ−メシチルアミノ酸、特にＬ−又はＤ−メシチルアラニンを製造するための新しいプロセスの研究は、なお活発な分野であることを示している。Ｌ−又はＤ−メシチルアラニンは、優れた生物活性を有する様々なペプチドやペプチドアナログの製造に有用なアミノ酸であるが、このグループを含む鏡像異性的に純粋なアミノ酸を製造するための既存の製造方法が複雑であるために、現在まで、広範囲にわたっては使用されていなかった。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
発明者らはＬ−メシチルアラニンとＤ−メシチルアラニンの両方を立体選択的に製造するための、実用的で高収率な製造方法を発見した。
【発明の効果】
【００１２】
特に、その製造方法は保護されたＬ−又はＤ−メシチルアラニンを製造するのに適しており、また、ペプチドの固相合成に非常に適している。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
したがって、本発明の最初の態様は式（Ｉ）の化合物、又は、その光学異性体（Ｉ’）の実質的に純粋な光学異性体の立体選択的な製造方法を提供することである。
【００１４】
【化１】
2011503226.tif 000003
【００１５】
式中、Ｐは水素又はアミン保護基である。製造方法は、以下のステップを含む：
ａ）式（ＩＩ）の化合物、又は、その光学異性体（ＩＩ’）を得るために、式（ＩＩＩ）の化合物、又は、その光学異性体（ＩＩＩ’）に対して水素化反応を行う。式中、Ｒは（Ｃ１−Ｃ８）アルキルである；
【００１６】
【化２】
2011503226.tif 000004
【００１７】
【化３】
2011503226.tif 000005
【００１８】
ｂ）式（Ｉ）の化合物、又は、その光学異性体（Ｉ’）を得るために、式（ＩＩ）の化合物、又は、その光学異性体（ＩＩ’）に対して加水分解反応を行う。式中、Ｐは水素であり、任意に、前記化合物（Ｉ）、又は、その光学異性体（Ｉ’）に対してアミノ基保護反応を行う。
【００１９】
実質的に純粋な光学異性体とは、９５％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の前記光学異性体の光学異性体過剰率を有しているものと理解される。
【００２０】
好ましくは、Ｒは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである。特定の実施形態ではＲはメチルである。別の特定の実施形態ではＲはエチルである。
【００２１】
水素化のステップは、定量的収率で、完全な位置選択性によって行われる。水素化は、一般的な方法で、特に限定はされないが、例えば、金属又は金属錯体などの当業者に公知の触媒を用いて行われる。好ましくは、水素化反応の触媒は、ウィルキンソン触媒、クラブツリー触媒、ラネーニッケル触媒、無酸化状態でプロトン酸と結合した金属又は活性炭と結合した白金族の金属から成る群より選択される。より好ましくは、水素化反応の触媒は、活性炭と結合した白金族の金属であり、特に、パラジウム／活性炭（Ｐｄ／Ｃ）である。水素化反応のための水素源には、水素（Ｈ２）に加えて、特に限定はされないが、例えば、ヒドラジン、置換ヒドラジン、イソプロパノール又は蟻酸などの当業者に公知の全ての水素供与分子が含まれる。
【００２２】
加水分解は、塩基性又は酸性条件下で行われる。好適実施形態では、加水分解が塩基性媒体中で行われる。加水分解反応に塩基性媒体を提供する化合物には、当業者に公知のあらゆる塩基が含まれる。より好適な実施形態では、塩基はアルカリ金属水酸化物である。特定の実施形態では、アルカリ金属水酸化物はリチウム水酸化物である。
【００２３】
本発明の製造方法は異なる保護基を用いてＬ−メシチルアラニンとＤ−メシチルアラニンを保護することを可能にする。カルバメート、アミド、スルホンアミド、アリル、任意に置換されたベンジル；（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシル又はハロゲンから成る群より選択される置換基などの多くの適切なアミノ基保護基がある。最も適切な保護基は、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、アリル、４−メトキシベンジル、２，４−ジメトキシベンジル及びベンジルから選択されるが、これには限定されない。
【００２４】
好適実施形態では、保護基はＦｍｏｃである。最新技術における文献には、Ｆｍｏｃ、Ｃｂｚ、アリル、４−メトキシベンジル、２，４−ジメトキシベンジル又はベンジルによって保護されたＬ−メシチルアラニン又はＤ−メシチルアラニンについて記載しているものはない。既に公知の製造方法とは異なり、本発明の製造方法は、立体選択的に前記化合物を得ることを可能とするため、特に有利である。特定の実施形態では、前記アミノ酸からのその後のペプチドの製造において、保護基の脱保護や、ペプチドの樹脂からの脱固定に用いられる簡単で穏やかな反応条件に関連して、Ｆｍｏｃ基による保護はいくつかの利点を有している。Ｆｍｏｃでのアミノ基の保護を使用した固相ペプチド化学合成の戦略は、実験室規模及び生産規模の両方でのペプチド製造のために、群を抜いて最も広く使用される戦略である。
【００２５】
当該技術分野で公知の方法で、保護基を導入及び除去することができる。（参照：Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，（１９９９））。特別な条件は使用される保護基に依存する。特定の実施形態では、Ｆｍｏｃ基が使用されている場合には、適切な溶剤と有機又は無機の塩基の存在下で、Ｆｍｏｃ−Ｃｌ又はＦｍｏｃ−サクシニミジルとの反応によって、その後者を導入できる。脱保護基は温和な条件下で塩基との反応で行われる。脱保護基のための適切な塩基としては、特に限定はされないが、例えば、ピペリジン、モルフォリン、ジシクロヘキシルアミン、Ｋ２ＣＯ３、ＫＨＣＯ３など任意の有機又は無機の塩基が含まれる。
【００２６】
好適実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物、又は、その光学異性体（ＩＩＩ’）を得るために、式（ＩＶ）の化合物、又は、その光学異性体（ＩＶ’）は、前もって式Ｐ（Ｒ１）３のホスフィンと反応する。式中、Ｒ１は（Ｃ１−Ｃ８）−アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）−シクロアルキル、任意に置換されたフェニル、任意に置換された−（ＣＨ２）ｎ−フェニル（式中、ｎは１〜４の整数であり、ベンゼン環を有する基の置換基は、（Ｃ１−Ｃ８）−アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）−アルコキシル又はハロゲンから成る群より、独立して選択される）から成る群より、独立して選択される基である。式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ’）、（ＩＶ）及び（ＩＶ’）中のＲは（Ｃ１−Ｃ８）−アルキルである。
【００２７】
【化４】
2011503226.tif 000006
【００２８】
【化５】
2011503226.tif 000007
【００２９】
好ましくは、Ｒ１は等しく、ホスフィンは芳香族ホスフィンであり、より好ましくは、ホスフィンはトリフェニルホスフィンである。このステップは中程度の収率で行われるが、その化合物は、光学的に純粋な構造（キラルＨＰＬＣ分析により、光学純度＞９９％ｅｅ）で得られる。
【００３０】
別の好適実施形態では、式（ＩＶ）の化合物、又は、（ＩＶ’）の化合物を得るために、式（Ｖ）の化合物、又は、その光学異性体（Ｖ’）は、前もって無機アジドと反応する。式中、Ｒは（Ｃ１−Ｃ８）−アルキルである。好ましくは、無機アジドは、アルカリ又はアルカリ土類金属アジドから成る群より選択され、特に、それはアジ化ナトリウムである。
【００３１】
【化６】
2011503226.tif 000008
【００３２】
【化７】
2011503226.tif 000009
【００３３】
この反応は、通常、５０〜１５０℃の温度で行われ、より好ましくは、約１００℃の温度で行われる。亜硫酸環の開環が完全な位置選択性で、高収率で行われる。
【００３４】
別の好適実施形態では、式（Ｖ）の化合物、又は、その光学異性体（Ｖ’）を得るために、式（ＶＩ）の化合物、又は、その光学異性体（ＶＩ’）は、前もってチオニルハロゲン化物と反応する。式中、Ｒは（Ｃ１−Ｃ８）−アルキルである、好ましくは、チオニルハロゲン化物は塩化チオニルである。
【００３５】
【化８】
2011503226.tif 000010
【００３６】
【化９】
2011503226.tif 000011
【００３７】
別の好適実施形態では、式（ＶＩ）の化合物、又は、その光学異性体（ＶＩ’）を得るために、式（ＶＩＩ）の化合物は、前もってシャープレス不斉ジヒドロキシ化反応が行われる。式中、Ｒは（Ｃ１−Ｃ８）−アルキルである。
【００３８】
【化１０】
2011503226.tif 000012
【００３９】
シャープレス不斉ジヒドロキシ化（ＡＤ）は、ほぼ定量的収率で、ジヒドロエステル（ＶＩ）、又は、その光学異性体（ＶＩ’）を用いて行われ、光学的に純粋な構造（キラルＨＰＬＣ分析により、光学純度＞９９％ｅｅ）で得られる。通常、シャープレスジヒドロキシ化は、四酸化オスミウム又はオスミウム酸カリウム、キラルキニンリガンド及びＫ３Ｆｅ（ＣＮ）６もしくはＮ−メチルモルホリンＮ−オキシドなどの酸化剤の存在下で行われる。以下のステップでは、事前に精製することなく、得られた化合物を使用できる。適切なキラルリガンドには、ヒドロキニン１，４−フタラジンジイルジエーテル（（ＤＨＱ）２ＰＨＡＬ）又はヒドロキニジン１，４−フタラジンジイルジエーテル（（ＤＨＱＤ）２ＰＨＡＬ）が含まれるが、これに限定されない。その結果、（ＤＨＱ）２ＰＨＡＬを使用する場合には、化合物（ＶＩ）が得られ、（ＤＨＱＤ）２ＰＨＡＬを使用する場合には、化合物（ＶＩ’）が得られる。
【００４０】
下記スキームは出発製品（ＶＩＩａ）からの本発明の特定の実施形態を示す。
【００４１】
【化１１】
2011503226.tif 000013
【００４２】
化合物（Ｉａ）又は（Ｉｐ）の逆の立体配置のものが必要である場合、適切な構造の化合物から同様にこのプロセスが実施される。
【００４３】
ホーナー・ワズワース・エモンズ反応によってメシチルアルデヒドから出発化合物（ＶＩＩ）を容易に得ることができる。
【００４４】
本発明の２番目の態様は、化合物Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−メシチルアラニン及びＦｍｏｃ−（Ｄ）−メシチルアラニンを提供することであり、生物活性を有するペプチドとペプチドアナログを製造するための有用性を仲介する。
【００４５】
本発明のもう１つの態様は、１つ以上のメシチルアラニン残基を有する固相でペプチドを製造するための製造方法を提供することであり、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−メシチルアラニン、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）−メシチルアラニン、Ｃｂｚ−（Ｌ）−メシチルアラニン、Ｃｂｚ−（Ｄ）−メシチルアラニン、アリル−（Ｌ）−メシチルアラニン、アリル−（Ｄ）−メシチルアラニン、４−メトキシベンジル−（Ｌ）−メシチルアラニン、４−メトキシベンジル−（Ｄ）−メシチルアラニン、２，４−ジメトキシベンジル−（Ｌ）−メシチルアラニン、２，４−ジメトキシベンジル−（Ｄ）−メシチルアラニン、ベンジル−（Ｌ）−メシチルアラニン、ベンジル−（Ｄ）−メシチルアラニンから選択されるＮ−保護アミノ酸の使用が含まれる。
【００４６】
また、本発明の一部は、ペプチドを１つ以上のメシチルアラニン残基を有する固相で製造するための製造方法であり、本明細書で上記した式（Ｉ）の化合物、又は、その光学異性体（Ｉ’）の実質的に純粋な光学異性体を立体選択的に製造するための製造方法を行うことが含まれる。
【００４７】
本発明の製造方法は、鏡像異性的に純粋なＬ−及びＤ−メシチルアラニン誘導体を得ることを可能にするという事実のために特に有利であり、それは、優れた生物活性を有し、さらには、非天然アミノ酸を包含するという事実のためにより優れた安定性を有するペプチドとペプチドアナログを製造するための有用性を仲介する。実施例９〜１１に、固相でのペプチド合成におけるこれらの化合物の使用を例示する。
【００４８】
本発明の明細書と実施例の一部から、本発明の他の目的、利点及び特徴は、当業者に、ある程度理解されるであろう。明細書と特許請求の範囲を通して、「含む」という言葉とその変形語は、他の技術的特徴、添加物、組成又はステップを除外することを意図しない。
【００４９】
以下の実施例は、例示として提供され、本発明を限定することを意図しない。
【実施例】
【００５０】
以下の非限定的な実施例は、立体異性構造についての発明を示す。逆の立体配置が必要である場合、当業者にとって明らかであるように、適切な配置を有する化合物から出発し、同様の方法で本発明を実施できる。
【００５１】
旋光度は室温（２３℃）で測定した。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは内部標準としてテトラメチルシランを用い、４００ＭＨｚで得た。１３Ｃ  ＮＭＲは１００．６  ＭＨｚで得、溶媒シグナルを基準とした。星印でマークしたシグナルは回転異性体に相当する。
【００５２】
実施例１：エチル（２Ｒ，３Ｓ）−ジヒドロキシ−３−メシチルプロパン酸（ＶＩａ）の製造
７９０ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）の（ＤＨＱ）２ＰＨＡＬ、１００ｇ（３０２ｍｍｏｌ）のＫ３Ｆｅ（ＣＮ）６、４１．７ｇ（３０２ｍｍｏｌ）のＫ２ＣＯ３及び１４９ｍｇ（０．４０３ｍｍｏｌ）のＫ２ＯｓＯ４（ＯＨ）４を２Ｌの反応器に投入し、１ＬのＨ２Ｏ：ｔＢｕＯＨ（１：１）混合液で溶解した。次に、９．５ｇ（１００ｍｍｏｌ）のメタンスルホンアミドを加えた。１５分間攪拌を維持し、次に、２２．０ｇ（１００ｍｍｏｌ）のエチル３−メシチル−２−プロペノアートを加えた。反応混合物は４８時間室温で攪拌を維持した。４８時間経過後、Ｎａ２ＳＯ３（１８０ｇ）を加え、反応を停止した。２時間攪拌を維持し、最終的に、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１５０ｍＬ）を用いて水相を抽出した。すべての有機相を２Ｎ  ＫＯＨ水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で濃縮した。２４．３ｇ（収率９７％）の生成物（２Ｒ，３Ｓ）−ＶＩａが黄色の油状で得られた。［α］Ｄ＝−２４．７（ｃ０．９８，ＣＨＣｌ３），ＩＲ（フィルム）：ν  ｍａｘ３４４１（ｂ），２９７８，１７３３，１６１１，１１９０ｃｍ−１，１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：６．８０（ｓ，２Ｈ），５．１８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），４．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），４．０４（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），３．１８（ｂ，１Ｈ），２．８６（ｂ，１Ｈ），２．４０（ｓ，６Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ），１．００（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）ｐｐｍ．１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  １７３．０（ＣＯ），１３７．４（Ｃ），１３６．８（Ｃ），１３１．８（Ｃ），１３０．３（ＣＨ），７３．８（ＣＨ），７３．７（ＣＨ），６１．９（ＣＨ２），２１．０（ＣＨ３），２０．９（ＣＨ３），１３．７（ＣＨ３）ｐｐｍ．ＥＭ（ＣＩ-ＮＨ３）ｍ／ｚ：２７０．１［（Ｍ＋１８）＋，１００％］，２５２．１［（Ｍ）＋，６０％］，ＨＲＭＳ（ＣＩ＋）：Ｃ１４Ｈ２０Ｏ４計算値：２５２．１３６１，２５２．１３５７検出，ＨＰＬＣ：Ｃｈｉｒａｌｐａｃｋ−ＡＤ，ヘキサン／ｉ−ＰｒＯＨ  ９８：２，１ｍＬ／分，λ＝２５４ｎｍ，ｔＲ（Ｓ，Ｒ）＝４４分及びｔＲ（Ｒ，Ｓ）＝４１分。
【００５３】
実施例２：エチル（２Ｓ，３Ｒ）−ジヒドロキシ−３−メシチルプロパン酸（ＶＩ’ａ）の製造
９５％の収率でエチル（２Ｓ，３Ｒ）−ジヒドロキシ−３−メシチルプロパン酸を得るためにリガンド（ＤＨＱＤ）２ＰＨＡＬを用いて、同様のプロセスを行った。
【００５４】
実施例１のエチル（２Ｒ，３Ｓ）−ジヒドロキシ−３−メシチルプロパン酸と、実施例２のエチル（２Ｓ，３Ｒ）−ジヒドロキシ−３−メシチルプロパン酸の光学純度はいずれも＞９９％ｅｅであった。
【００５５】
実施例３：（４Ｒ，５Ｓ）−４−エトキシカルボニル−５−メシチル−１，３，２−ジオキサチオラン−２−オキシド（Ｖａ）の製造
２３．５ｇ（９３ｍｍｏｌ）のジオールエチル（２Ｒ，３Ｓ）−ジヒドロキシ−３−メシチルプロパン酸を１．４ＬのＣＨ２Ｃｌ２を用いて反応器で溶解した。次に、３８．９ｍＬ（２７９ｍｍｏｌ）のＮＥｔ３を加えた。反応混合物を０℃で冷却し、５分間攪拌を維持した。最後に、９．５ｍＬ（１３０．４ｍｍｏｌ）のＳＯＣｌ２を液滴で加え、０℃で１５分間攪拌を維持した。その後、３７０ｍＬのＥｔ２Ｏと３７０ｍＬの水を加えた。Ｅｔ２Ｏ（３×１５０ｍＬ）を用いて水相を抽出し、すべての有機相をＮａＣｌ飽和溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で濃縮した。（４Ｒ，５Ｓ）−Ｖａの亜硫酸塩が油状で定量的に得られた。［α］Ｄ＝−１８．８（ｃ１．００，ＣＨＣｌ３），ＩＲ（フィルム）：ν  ｍａｘ２９７９，１７４２，１２１６，１０３０ｃｍ−１，１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：６．９０（ｓ，２Ｈ），６．８９＊（ｓ，２Ｈ），６．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），５．９５＊（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０Ｈｚ），５．３５＊（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０Ｈｚ），４．９６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），４．３０（ｄｑ，２Ｈ，Ｊ＝２０及び７Ｈｚ），４．２２＊（ｍ，２Ｈ），２．４５＊（ｓ，６Ｈ），２．３７＊（ｓ，６Ｈ），２．２８（ｓ，６Ｈ），１．３１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），１．２２＊（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）ｐｐｍ．１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６８．０（ＣＯ），１６６．２（ＣＯ），１３９．９（Ｃ），１３９．８（Ｃ），１３８．４（Ｃ），１３８．２（Ｃ），１３１．０（ＣＨ），１３０．９（ＣＨ），１２５．６（Ｃ），１２２．６（Ｃ），８４．９（ＣＨ），８０．６（ＣＨ），８０．３（ＣＨ），７６．０（ＣＨ），６２．８（ＣＨ２），２１．０７（ＣＨ３），２１．０６（ＣＨ３），２０．５（ＣＨ３），２０．２（ＣＨ３），１４．２（ＣＨ３），１４．０（ＣＨ３）ｐｐｍ．ＥＭ（ＣＩ−ＮＨ３）ｍ／ｚ：３１５．６［（Ｍ＋１７）＋，１００％］，ＨＲＭＳ（ＣＩ＋）：Ｃ１４Ｈ１８Ｏ５Ｓ計算値：２９８．０８７５，２９８．０８７６検出。
【００５６】
実施例４：エチル（２Ｓ，３Ｓ）−３−アジド−２−ヒドロキシ−３−メシチルプロパン酸（ＩＶａ）の製造
１８．６ｇ（６２．９５ｍｍｏｌ）の（４Ｒ，５Ｓ）−４−エトキシカルボニル−５−メシチル−１，３，２−ジオキサチオラン−２−オキシドを３８６ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を用いて二口フラスコ中で溶解し、冷却剤を与え、８．２ｇ（１２５．９ｍｍｏｌ）のＮａＮ３を加えた。反応混合物を１００℃で１８時間加熱した。この時間の経過後、溶媒を減圧下で除去し、その結果得られた粗生成物を３１０ｍＬのＥｔ２Ｏ及び３１０ｍＬの２０％Ｈ２ＳＯ４溶液で溶解し、室温で一晩中攪拌を維持した。過剰量のＮａＨＣＯ３飽和溶液を加え、Ｅｔ２Ｏ（３×１５０ｍＬ）を用いて水相を抽出した。すべての有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で濃縮した。反応の粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２／ＮＥｔ３  ２．５％ｖ／ｖ，ヘキサン／ＡｃＯＥｔ）によって精製し、１３．６ｇ（収率７８％）の黄色の油状のアジドアルコール（２Ｓ，３Ｓ）−ＩＶａを得た。［α］Ｄ＝−１２６（ｃ０．７９５，ＣＨＣｌ３），ＩＲ（フィルム）：ν  ｍａｘ３４６８（ｂ），２９２４，２１０５，１７３７，１６１０，１２５７ｃｍ−１，１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：６．８８（ｓ，２Ｈ），５．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），４．４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７及び９Ｈｚ），４．３３（ｍ，２Ｈ），２．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），２．４３（ｓ，６Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）ｐｐｍ．１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７３．０（ＣＯ），１３８．４（Ｃ），１３７．６（Ｃ），１３０．６６（ＣＨ），１３０．５６（ＣＨ），１２８．６（Ｃ），７２．１（ＣＨ），６４．１（ＣＨ），６２．４（ＣＨ２），２１．０（ＣＨ３），２０．９（ＣＨ３），１４．２（ＣＨ３）ｐｐｍ．ＥＭ（ＣＩ−ＮＨ３）ｍ／ｚ：２９５．３［（Ｍ＋１８）＋，９０％］，ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ１４Ｈ１９Ｎ３Ｏ３Ｎａ計算値：３００．１３１５，３００．１３１８検出。
【００５７】
実施例５：エチル（２Ｒ，３Ｓ）−３−メシチル−アジリジン−２−カルボン酸（ＩＩＩａ）の製造
１３．０ｇ（４６．７２ｍｍｏｌ）のアジドアルコールエチル（２Ｓ，３Ｓ）−３−アジド−２−ヒドロキシ−３−メシチルプロパン酸をフラスコに投入し、２８２ｍＬのアセトニトリルで溶解し、次に、１２．２ｇ（４６．７２ｍｍｏｌ）のＰＰｈ３を加えた。反応混合物を室温で１時間、還流温度で６時間攪拌した。この時間の経過後、溶媒を減圧で除去し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２／ＮＥｔ３  ２．５％ｖ／ｖ，ヘキサン／ＡｃＯＥｔ）によって精製した。７．３２ｇ（収率６７％）のアジリジン（２Ｒ，３Ｓ）−ＩＩＩａを黄色の油として得た。［α］Ｄ＝−１３１（ｃ０．７９，ＣＨＣｌ３），ＩＲ（フィルム）：ν  ｍａｘ３２８１，２９７８，２９２２，１７２６，１２１８，１２０１ｃｍ−１，１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：６．８２（ｓ，２Ｈ），４．３１（ｍ，２Ｈ），３．１６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２Ｈｚ），２．５７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２Ｈｚ），２．３９（ｓ，６Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ），１．７８（ｂ，１Ｈ），１．３６（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）ｐｐｍ．１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７２．８（ＣＯ），１３７．８（Ｃ），１３７．３（Ｃ），１２９．０（ＣＨ），６１．８（ＣＨ２），３８．９（ＣＨ），３７．８（ＣＨ），２０．９（ＣＨ３），２０．０（ＣＨ３），１４．４（ＣＨ３）ｐｐｍ．ＥＭ（ＣＩ−ＮＨ３）ｍ／ｚ：２３３．０［（Ｍ）＋，２５％］，１４６．０［（Ｍ−８７）＋，１００％］，ＨＲＭＳ（ＣＩ＋）：Ｃ１４Ｈ１９ＮＯ２計算値：２３３．１４１６，２３３．１４１８検出，ＨＰＬＣ：Ｃｈｉｒａｌｐａｃｋ−ＩＡ．ヘプタン／ｉ−ＰｒＯＨ  ９５：５，１ｍＬ／分，λ＝２５４ｎｍ，ｔＲ（Ｓ，Ｒ）＝１９分及びｔＲ（Ｒ，Ｓ）＝１４分。エチル（２Ｒ，３Ｓ）−３−メシチル−アジリジン−２カルボン酸の光学純度は＞９９％ｅｅであった。
【００５８】
実施例６：（２Ｓ）−メシチルアラニンエチルエステル（ＩＩａ）の製造
９．９ｇ（４２．４２ｍｍｏｌ）のアジリジンエチル（２Ｒ，３Ｓ）−３−メシチル−アジリジン−２−カルボン酸を高圧反応器内で３００ｍＬのメタノールで溶解し、次に、９９０ｍｇのＰｄ／Ｃ及び１０ｍＬの酢酸（８４．８４ｍｍｏｌ）を加えた。この系を真空／窒素循環でパージし、反応器を４０バールで加圧した。室温で４８時間、反応混合物の攪拌を維持した。その後、セライト濾過によって触媒を除去し、その溶液を減圧下で濃縮した。黄色い固体状の化合物（ＩＩａ）を定量的に得た。Ｍｐ８１−８３℃，［α］Ｄ＝−２６．７（ｃ１．００，ＣＨＣｌ３），ＩＲ（フィルム）：ν  ｍａｘ２９１８，１７４２，１６１２，１４８３，１２２５，１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：６．８４（ｓ，２Ｈ），５．６１（ｂ，１Ｈ），４．１４（ｍ，２Ｈ），３．７７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４及び７．６Ｈｚ），３．０８（ｍ，２Ｈ），２．９４（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｓ，６Ｈ），２．２５（ｓ，３Ｈ），１．１８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）ｐｐｍ．１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１７８．９（ＣＯ），１３７．１（Ｃ），１３６．３（Ｃ），１３１．１（Ｃ），１２９．５（ＣＨ），１２９．５（ＣＨ），１２９．２（Ｃ），６１．４（ＣＨ２），５４．１（ＣＨ），３４．６（ＣＨ２），２４．９（ＣＨ３），２１．０（ＣＨ３），１９．８（ＣＨ３），１４．２（ＣＨ３）ｐｐｍ．ＥＭ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ：２３６．２［（Ｍ＋Ｈ）＋，１００％］，ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ１４Ｈ２２ＮＯ２計算値：２３６．１６４５，２３６．１６３７検出。
【００５９】
実施例７：（２Ｓ）−メシチルアラニン（Ｉａ）の製造
２．０ｇ（８．５０ｍｍｏｌ）のアミノエステル（２Ｓ）−メシチルアラニンエチルエステルをフラスコ中で５７ｍＬのジオキサンで溶解し、次に、７０ｍＬの２０％ＬｉＯＨ溶液を加えた。反応混合物を室温で２４時間攪拌した。最終的に、減圧下で溶媒を除去し、その水相を冷却し、１Ｍの塩酸でｐＨ７に調整した。濾過とその後の真空乾燥によって分離された結晶の沈殿物が認められた。１．３ｇ（収率８０％）のアミノ酸Ｉａが白い固体状で得られた。Ｍｐ：３１８−３２０℃，［α］Ｄ＝−８０（ｃ１．００，ＣＨ３ＯＨ），ＩＲ（フィルム）：ν  ｍａｘ３３００，２９７３，１７３０，１６０８，１４０９ｃｍ−１，１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：６．７５（ｓ，２Ｈ），３．２７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．８８（ｍ，１Ｈ），２．６５（ｍ，１Ｈ），２．１２（ｓ，６Ｈ），２．０５（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ．１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１８１．８（ＣＯ），１３７．８（Ｃ），１３６．４（Ｃ），１３２．２（Ｃ），１２８．９（ＣＨ），５６．２（ＣＨ），３４．３（ＣＨ２），１９．９（ＣＨ３），１９．４（ＣＨ３）ｐｐｍ．ＥＭ（ＣＩ＋）ｍ／ｚ：２０８．３［（Ｍ＋Ｈ）＋，１００％］，ＨＲＭＳ（ＣＩ＋）：Ｃ１２Ｈ１８ＮＯ２計算値：２０８．１３３７，２０８．１３３０検出，Ｃ２７Ｈ２７ＮＯ４分析、計算値：Ｃ  ７１．４６，Ｈ  ８．９９，Ｎ  ５．９５；Ｃ  ７１．３６，Ｈ  ８．６９，Ｎ  ６．３９検出。
【００６０】
実施例８：Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−メシチルアラニン（Ｉｐ）の製造
１．０８ｇ（５．２２ｍｍｏｌ）のアミノ酸Ｌ−メシチルアラニンをフラスコ中で１６ｍＬの１０％Ｎａ２ＣＯ３溶液で懸濁し、０℃で冷却した。次に、２４ｍＬのジオキサンに溶解したＦｍｏｃ−ＯＳｕ（２．６４ｇ，７．８３ｍｍｏｌ）溶液を液滴で加えた。反応混合物を室温で２０時間攪拌し、その後、水（２０ｍｌ）を加え、ヘキサン（３×２０ｍｌ）を用いて抽出した。得られた水相を０℃で冷却し、１Ｍの塩酸でｐＨ２に調整し、酢酸エチルを用いて抽出した。得られた有機相のグループをＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で溶媒を除去した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２／ＮＥｔ３  ２．５％ｖ／ｖ，ヘキサン／ＡｃＯＥｔ）によって精製し、白い固体として１．５ｇ（収率６８％）のＩｐが得られた。Ｍｐ：１８７−１８８℃，［α］Ｄ＝−２６．０４（ｃ１．００，ＣＨＣｌ３），ＩＲ（フィルム）：ν  ｍａｘ３３２１，２９６２，１７１３，１４５０，１２６５ｃｍ−１，１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．７４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．５１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．４０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．３０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），６．８３（ｓ，２Ｈ），５．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），４．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０及び８．４Ｈｚ），４．３０（ｍ，１Ｈ），４．１４（ｍ，１Ｈ），３．１８（ｍ，２Ｈ），２．３２（ｓ，６Ｈ），２．２１（ｓ，６Ｈ）ｐｐｍ．１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１７６．７（ＣＯ），１５６．０８（ＣＯ），１４４．０（Ｃ），１４１．５（Ｃ），１３７．２（Ｃ），１３６．６（Ｃ），１３０．０（Ｃ），１２９．６（Ｃ），１２９．５（ＣＨ），１２７．９（ＣＨ），１２７．３（ＣＨ），１２５．３（ＣＨ），１２０．２（ＣＨ），６７．４（ＣＨ２），５３．７（ＣＨ２），４７．３（ＣＨ），３２．５（ＣＨ２），２１．３（ＣＨ３），２０．４（ＣＨ３）ｐｐｍ．ＥＭ（ＣＩ−ＮＨ３）ｍ／ｚ：２０６．０９［（Ｍ−２３３）＋，８２％］，４３０．２［（Ｍ＋Ｈ）＋，５％］，ＨＲＭＳ（ＣＩ＋）：Ｃ２７Ｈ２８ＮＯ４計算値：４３０．２０２９；４３０．２０１８検出。Ｃ２７Ｈ２７ＮＯ４分析、計算値：Ｃ  ７５．５０，Ｈ  ６．３４，Ｎ  ３．２６；Ｃ  ７４．９４，Ｈ  ６．２１，Ｎ  ３．４１検出，ＨＰＬＣ：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ−ＡＤ，ヘプタン／ＥｔＯＨ／ＴＦＡ  ９５：５：０．２，１ｍＬ／分，λ＝２５４ｎｍ，ｔＲ（Ｄ）＝２０分，ｙｔＲ（Ｌ）＝２６分，Ｌ−Ｉｐの光学純度は＞９９％ｅｅであった。
【００６１】
同様に、適切な構造を有する化合物からＤ−Ｉｐ化合物を製造すると、＞９９％ｅｅの光学純度を有する生成物が得られた。
【００６２】
実施例９：トリペプチドＡｃ−（Ｄ−Ｍｓａ）−Ｖａｌ−ＮａＩ−ＮＨ２の製造
１００ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のリンクアミド樹脂をシリンジに供給した。それをＣＨ２ＣＬ２（５×１分）及びＤＭＦ（５×１分）で調整した。結合試薬としてジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＤＩ）、添加物としてヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を用いて、標準のＦｍｏｃ／ｔＢｕストラテジー法によって合成を行った。Ｆｍｏｃ−３−（１−ナフチル）−Ｌ−Ａｌａ−ＯＨ（Ｆｍｏｃ−Ｎａｌ）（７８．７５ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ，３ｅｑ）、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｖａｌ−ＯＨ（６１．２ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ，３ｅｑ）及びＦｍｏｃ−Ｄ−メシチルアラニン−ＯＨ（Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｍｓａ）（７７．４ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ，３ｅｑ）を用いて、アミノ酸の連続的な導入をニンヒドリンテストで確認した。３番目のアミノ酸を導入した後、ＤＭＦ中のピペリジン混合物を用いてＦｍｏｃ基を除去し、遊離のアミノ末端をＡｃ２Ｏ-ジイソプロピルジエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いてアセチル化した。最終的に、樹脂を濾過し、ＤＭＦ（５×１分）、ＣＨ２ＣＬ２（５×１分）及びメタノール（５×１分）を用いて十分に洗浄した。トリペプチドを切断するために、トリフルオロ酢酸−水−トリイソプロピルシラン（ＴＦＡ−Ｈ２Ｏ−ＴＩＳ）（９５：２．５：２．５）溶液で１時間処理し、濾過溶液を濃縮した。それを逆相クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ分析）とＥＭによって特性化した。９ステップの合成後、中間精製なしで得られた粗生成物は、３９％の純度であった。分取ＨＰＬＣ（勾配：２０−５０／１０分間、及び、５０−１００／１５分間）で精製し、３．４ｍｇのトリペプチドが８６％の純度（λ＝２２０ｎｍ）で得られた。ＨＰＬＣ−ＭＳ：ｔｒ（Ｈ２Ｏ  ０．１％ＨＣＯＯＨ；ＡＣＮ  ０．０７％ＨＣＯＯＨ）＝４．８３０分，ＥＳ＋：５４５．６５（ｃａｌｃ．Ｃ３２Ｈ４０Ｎ４Ｏ４，５４４．３０）。
【００６３】
実施例１０：トリペプチドＡｃ−（Ｄ−Ｍｓａ）−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の製造
１００ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のリンクアミド樹脂をシリンジに供給した。それをＣＨ２ＣＬ２（５×１分）及びＤＭＦ（５×１分）で調整した。結合試薬としてジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＤＩ）、添加物としてヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を用いて標準のＦｍｏｃ／ｔＢｕストラテジー法によって合成を行った。Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（８４．３３ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ，３ｅｑ）、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｖａｌ−ＯＨ（６１．２ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ，３ｅｑ）及びＦｍｏｃ−Ｄ−Ｍｓａ−ＯＨ（７７．４ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ，３ｅｑ）を用い、アミノ酸の連続的な導入をニンヒドリンテストで確認した。３番目のアミノ酸を導入した後、ＤＭＦ中のピペリジン混合物を用いてＦｍｏｃ基を除去し、遊離のアミノ末端をＡｃ２Ｏ-ジイソプロピルジエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いてアセチル化した。最終的に、樹脂をろ過し、ＤＭＦ（５×１分）、ＣＨ２ＣＬ２（５×１分）及びメタノール（５×１分）を用いて十分に洗浄した。トリペプチドを切断するために、トリフルオロ酢酸−水−トリイソプロピルシラン（ＴＦＡ−Ｈ２Ｏ−ＴＩＳ）（９５：２．５：２．５）溶液で１時間処理し、濾過溶液を濃縮した。それを逆相クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ分析）とＥＭによって特性化した。９ステップの合成後、中間精製なしで、得られた粗生成物は、５２％の純度であった。イオン交換カラム法で精製し、７．３ｍｇのトリペプチドが９６％の純度（λ＝２２０ｎｍ）で得られた。ＨＰＬＣ−ＭＳ：ｔｒ（Ｈ２Ｏ  ０．１％ＨＣＯＯＨ；ＡＣＮ  ０．０７％ＨＣＯＯＨ）＝３．８５６分，ＥＳ＋：４７６．５７（ｃａｌｃ．Ｃ２５Ｈ４１Ｎ５Ｏ４，４７５．３２）。
【００６４】
実施例１１：トリペプチドＡｃ−（Ｄ−Ｍｓａ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の製造
１００ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のリンクアミド樹脂をシリンジに供給した。それをＣＨ２ＣＬ２（５×１分）及びＤＭＦ（５×１分）で調整した。結合試薬としてジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＤＩ）、添加物としてヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を用いて標準のＦｍｏｃ／ｔＢｕストラテジー法によって合成を行った。Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（８４．３３ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ，３ｅｑ）、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ−ＯｔＢｕ−ＯＨ（７４．０７ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ，３ｅｑ）及びＦｍｏｃ−Ｄ−Ｍｓａ−ＯＨ（７７．４ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ，３ｅｑ）を用い、アミノ酸の連続的な導入をニンヒドリンテストで確認した。３番目のアミノ酸を導入した後、ＤＭＦ中のピペリジン混合物を用いてＦｍｏｃ基を除去し、遊離のアミノ末端をＡｃ２Ｏ-ジイソプロピルジエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いてアセチル化した。最終的に、樹脂をろ過し、ＤＭＦ（５×１分）、ＣＨ２ＣＬ２（５×１分）及びメタノール（５×１分）を用いて十分に洗浄した。トリペプチドを切断し、アミノ酸側鎖からＢｏｃ及びｔＢｕ保護基を除去するために、トリフルオロ酢酸−水−トリイソプロピルシラン（ＴＦＡ−Ｈ２Ｏ−ＴＩＳ）（９５：２．５：２．５）溶液で１時間処理し、濾過溶液を濃縮した。それを逆相クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ分析）とＥＭによって特性化した。９の合成段階後、中間精製なしで、得られた粗生成物は、７１％の純度であった。イオン交換カラム法で精製し、１７．０ｍｇのトリペプチドが９４％の純度（λ＝２２０ｎｍ）で得られた。ＨＰＬＣ−ＭＳ：ｔｒ（Ｈ２Ｏ  ０．１％ＨＣＯＯＨ；ＡＣＮ  ０．０７％ＨＣＯＯＨ）＝２．５４３分。ＥＳ＋：４９２．５８（ｃａｌｃ．Ｃ２４Ｈ３７Ｎ５Ｏ６，４９１．２７）。
【国際調査報告】
2011503226.tif 000026
2011503226.tif 000027
2011503226.tif 000028
2011503226.tif 000029
2011503226.tif 000030
2011503226.tif 000031