(57)【要約】ＰＩ３Ｋδ活性を選択的に阻害する化合物を含めた、ＰＩ３Ｋδ活性を阻害する化合物が開示される。この化合物を使用して、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼδアイソフォーム（ＰＩ３Ｋδ）活性を阻害する方法、ならびにＰＩ３Ｋδが白血球機能において役割を果たす、免疫の障害および炎症などの疾患を治療する方法も開示される。本発明の別の態様は、好中球によって媒介される医学的状態を治療する方法であって、その必要のある哺乳動物に、好中球中のホスファチジルイノシトール３−キナーゼδ（ＰＩ３Ｋδ）活性を選択的に阻害する、治療有効量の化合物を投与するステップを含む方法を提供することである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化４１】
2011503193.tif 000045
［式中、Ｕ、Ｖ、Ｗ、およびＺは、独立して、ＣＲａ、Ｎ、ＮＲｂ、およびＯからなる群から選択され、
またはＵ、Ｖ、Ｗ、およびＺのうちの少なくとも１つはＮであり、Ｕ、Ｖ、Ｗ、およびＺのうちのその他は、ＣＲａ、ＮＲｂ、Ｓ、およびＯからなる群から選択され、
Ｕ、Ｖ、Ｗ、およびＺのうちのすべてではないが少なくとも１つはＣＲａと異なり；
Ａは、環員として少なくとも２つの窒素原子を含有する、場合により置換された単環式もしくは二環式の環系であり、前記系の少なくとも１つの環は芳香族であり；
Ｘは、Ｃ（Ｒｃ）２、Ｃ（Ｒｃ）２Ｃ（Ｒｃ）２、ＣＨ２ＣＨＲｃ、ＣＨＲｃＣＨＲｃ、ＣＨＲｃＣＨ２、ＣＨ＝Ｃ（Ｒｃ）、Ｃ（Ｒｃ）＝Ｃ（Ｒｃ）、およびＣ（Ｒｃ）＝ＣＨからなる群から選択され；
Ｙは、なし（すなわち、結合）、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＨ、Ｎ（Ｒｃ）、Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、およびＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｓからなる群から選択され；
Ｒ１は、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜１０アルキル、置換または非置換のＣ２〜１０アルケニル、置換または非置換のＣ２〜１０アルキニル、置換または非置換のＣ１〜６ペルフルオロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、置換または非置換のＣ１〜４アルキレンＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアリールＣ１〜４アルキレンＯＲｅ、置換または非置換のヘテロアリールＣ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、置換または非置換のヘテロアリールＣ１〜４アルキレンＯＲｅ、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロアリール、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンアリール、置換または非置換のアリールＣ１〜６アルキル、アリールＣ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜４アルキレンアリール、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜４アルキレンヘテロアリール、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ヘテロアリール、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｄ）２、Ｃ１〜６アルキレンＯＲｄ、Ｃ１〜４アルキレンＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ１〜４アルキレンＯＣ１〜４アルキレンＯＲｄ、Ｃ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、およびＣ１〜４アルキレンＯＣ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄからなる群から選択され；
Ｒａは、独立して、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜６アルキル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、Ｃ１〜３アルキレンアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のヘテロアリールＣ１〜３アルキル、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロアリール、ハロ、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、ＮＯ２、ＯＲｅ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｎ（Ｒｄ）２、ＣＮ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｄ、アリールＯＲｅ、ＮＲｄＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜３アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、アリールＯＣ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、アリールＯＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、ＯＣ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、Ｃ１〜４アルキレンＯＣ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＳＯ２Ｒｄ、Ｃ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ２〜６アルケニレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＣ１〜４アルキレンＯＲｅ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＣ１〜４アルキレンヘテロアリール、ＯＣ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、ＯＣ１〜４アルキレンＣＨ（ＯＲｅ）ＣＨ２Ｎ（Ｒｄ）２、ＯＣ１〜４アルキレンヘテロアリール、ＯＣ２〜４アルキレンＯＲｅ、ＯＣ２〜４アルキレンＮＲｄＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、ＮＲａＣ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、ＮＲａＣ＝Ｏ）Ｒｄ、ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｄ）２、Ｎ（ＳＯ２Ｃ１〜４アルキル）２、ＮＲａ（ＳＯ２Ｃ１〜４アルキル）、ＳＯ２Ｎ（Ｒｄ）２、ＯＳＯ２ＣＦ３、Ｃ１〜３アルキレンアリール、Ｃ１〜４アルキレンヘテロアリール、Ｃ１〜６アルキレンＯＲｅ、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｄ）２、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜３アルキレンアリール、アリールＯＣ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、アリールＯＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜３アルキレンＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜３アルキレンヘテロアリール、ＯＣ１〜４アルキレンＯＣ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１〜４アルキレンヘテロアリール、およびＮＨＣ（＝Ｏ）ハロＣ１〜６アルキルからなる群から選択され；
Ｒｂは、なし、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜６アルキル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアリールＣ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキレンアリール、置換または非置換のヘテロアリール、ヘテロアリールＣ１〜３アルキル、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロアリール、Ｃ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｄ、アリールＯＲｅ、アリールＯＣ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、アリールＯＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、Ｃ１〜４アルキレンＯＣ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＳＯ２Ｒｄ、Ｃ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ２〜６アルケニレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＣ１〜４アルキレンＯＲｅ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＣ１〜４アルキレンヘテロアリール、ＳＯ２Ｎ（Ｒｄ）２、Ｃ１〜３アルキレンアリール、Ｃ１〜４アルキレンヘテロアリール、Ｃ１〜６アルキレンＯＲｅ、Ｃ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｄ）２、アリールＯＣ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、アリールＯＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、およびＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜４アルキレンヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｒｃは、独立して、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜１０アルキル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、置換または非置換のＣ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロＣ１〜３アルキル、置換または非置換のアリールヘテロＣ１〜３アルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアリールＣ１〜３アルキル、置換または非置換のヘテロアリールＣ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキレンアリール、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロアリール、Ｃ（＝Ｏ）Ｒｄ、およびＣ（＝Ｏ）ＯＲｄからなる群から選択され、
または同じ原子上もしくは隣接する結合した原子上の２つのＲｃは、環化することによって３〜８環員を有する環を形成することができ、前記環は場合により置換されており、環員としてＮＲｄ、ＯおよびＳから選択される最大２個のヘテロ原子を含むことができ；
Ｒｄは、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜１０アルキル、置換または非置換のＣ２〜１０アルケニル、置換または非置換のＣ２〜１０アルキニル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンＮ（Ｒｅ）２、アリール、置換または非置換のアリールＣ１〜３アルキル、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のヘテロアリールＣ１〜３アルキル、および置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロアリールからなる群から選択され；
または２つのＲｄ基は、これらが結合している窒素と一緒になって、Ｎ、ＯもしくはＳである第２のヘテロ原子を場合により含有する、５員環もしくは６員環を形成し；
Ｒｅは、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜６アルキル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択され、
または２つのＲｅ基は、これらが結合している窒素と一緒になって、Ｎ、ＯもしくはＳである第２のヘテロ原子を場合により含有する、５員環もしくは６員環を形成し；
前記Ａ、Ｒ１、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄは、独立して、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ３〜８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１〜６アルキレンＯＲｅ、Ｃ１〜４アルキレンＮ（Ｒｅ）２、アリール、Ｃ１〜３アルキレンアリール、ヘテロアリール、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｅ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｅ、ハロ、ＣＮ、ＣＦ３、ＮＯ２、Ｎ（Ｒｅ）２、ＯＲｅ、ＯＣ１〜６ペルフルオロアルキル、ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｅ）２、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｅ）２、ＳＲｅ、ＳＯ２Ｒｅ、ＳＯ３Ｒｅ、オキソ（＝Ｏ）、およびＣＨＯからなる群から選択される１〜３個の置換基で場合により置換されており；  
ｎは、０または１である］；または
その薬学的に許容できる塩。
【請求項２】
ｎが０であり、Ｖ、Ｗ、およびＺのうちの１つがＮＲｂである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ｎが０であり、Ｖ、Ｗ、およびＺのうちの１つがＯである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ｎが０であり、Ｖ、Ｗ、およびＺのうちの１つがＳである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ｎが１であり、Ｖ、Ｗ、Ｕ、およびＺのうちの１つがＮであり、その他がＣＲａである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
ｎが１であり、Ｖ、Ｗ、Ｕ、およびＺのうちの２つがＮであり、その他がＣＲａである、式（Ｉ）の化合物。
【請求項７】
Ａが場合により置換された二環式の芳香族基である、請求項１から６のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】
Ａがピリミジン環またはピリミジノン環を含み、Ａが最大３個の置換基によって場合により置換されている、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ１がフェニル、ヘテロアリールおよびＣ３〜８シクロアルキルからなる群から選択される、場合により置換された環である、請求項７または８に記載の化合物。
【請求項１０】
ＸがＣ（Ｒｃ）２である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｙが結合、ＮＨまたはＳである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１２】
ＸがＣＨ２またはＣ（Ｒｃ）Ｈであり、ＲｃがＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項１０または１１に記載の化合物。
【請求項１３】
ＸがＣ（Ｒｃ）Ｈであり、Ｓ配置にある、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
ＸおよびＹが一緒に環化することによって、以下の式の環を形成する、請求項９に記載の化合物。
【化４２】
2011503193.tif 000046
【請求項１５】
Ａがハロ、ＮＨ２、ＮＨＭｅ、ＮＭｅ２、ＯＨ、ＳＭｅ、およびＭｅから選択される、最大３個の置換基で場合により置換されたプリン基である、請求項１から１４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６】
ＸがＣＨＭｅまたはＣＨＥｔである、請求項１から１３のいずれかに記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ１が、ハロ、ＯＲｅ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、アリール、Ｃ３〜８ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、ＣＦ３、ＮＯ２、Ｎ（Ｒｅ）２、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｅ、ＳＯ２Ｎ（Ｒａ）２、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｅ）２、Ｃ１〜４アルキレンＮ（Ｒｅ）２、ＯＣ１〜４ペルフルオロアルキル、オキソ、およびＣＨＯからなる群から選択される１〜３個の置換基で場合により置換されたフェニルである、請求項１５または請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
少なくとも１つの薬学的に許容できる賦形剤と混合された、請求項１から１７のいずれかに記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項１９】
白血球機能を混乱させる方法であって、前記白血球を、有効量の請求項１に記載の化合物と接触させるステップを含む方法。
【請求項２０】
白血病と診断された対象を治療するための方法であって、有効量の請求項１から１７のいずれかに記載の化合物を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項２１】
リンパ腫と診断された対象を治療するための方法であって、有効量の請求項１から１７のいずれかに記載の化合物を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項２２】
免疫学的障害と診断された対象を治療するための方法であって、有効量の請求項１から１７のいずれかに記載の化合物を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項２３】
前記免疫学的障害が喘息、関節リウマチ、多発性硬化症およびループスから選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
高血圧と診断された対象を治療するための方法であって、有効量の請求項１から１７のいずれかに記載の化合物を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項２５】
癌または肉腫と診断された対象を治療するための方法であって、有効量の請求項１から１７のいずれかに記載の化合物を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項２６】
骨吸収障害と診断された対象を治療するための方法であって、有効量の請求項１から１７のいずれかに記載の化合物を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項２７】
ホスファチジルイノシトール３−キナーゼδポリペプチドのキナーゼ活性を阻害する方法であって、前記ポリペプチドを請求項１に記載の化合物と接触させるステップを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般に、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）酵素、より詳細には、ＰＩ３Ｋδ活性の選択的阻害剤、およびそのような阻害剤を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
３’−リン酸化ホスホイノシチドを介する細胞シグナル伝達は、様々な細胞過程、例えば、悪性形質転換、成長因子シグナル伝達、炎症、および免疫に関係している（概説については、Ｒａｍｅｈら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２７４巻：８３４７〜８３５０頁（１９９９年）を参照されたい）。これらのリン酸化シグナル伝達産物の生成に関与する酵素は、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３−キナーゼ；ＰＩ３Ｋ）である。ＰＩ３Ｋは、ウイルス性オンコプロテイン、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）をリン酸化する成長因子受容体チロシンキナーゼ、およびイノシトール環の３’−ヒドロキシルでのそのリン酸化誘導体に関連する活性として最初に同定された（Ｐａｎａｙｏｔｏｕら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２巻：３５８〜６０頁（１９９２年））。
【０００３】
ＰＩ３キナーゼ活性化の一次産物であるホスファチジルイノシトール−３，４，５−三リン酸（ＰＩＰ３）のレベルは、様々なアゴニストで細胞を処理すると増大する。したがって、ＰＩ３キナーゼ活性化は、細胞成長、分化、およびアポトーシスを含めた様々な細胞応答に関与すると考えられている（Ｐａｒｋｅｒら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、５巻：５７７〜９９頁（１９９５年）；Ｙａｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６７巻：２００３〜０５頁（１９９５年））。ＰＩ３キナーゼ活性化の後に産生されるリン酸化脂質の下流標的は十分に特徴づけられていないが、新たに現れている証拠は、プレクストリン相同ドメイン含有タンパク質、およびＦＹＶＥフィンガードメイン含有タンパク質は、様々なホスファチジルイノシトール脂質に結合しているとき活性化されることを示す（Ｓｔｅｒｎｍａｒｋら、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ、１１２巻：４１７５〜８３頁（１９９９年）；Ｌｅｍｍｏｎら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、７巻：２３７〜４２頁（１９９７年））。インビトロで、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）のいくつかのアイソフォームは、ＰＩＰ３によって直接活性化され、ＰＫＣ関連プロテインキナーゼ、ＰＫＢは、ＰＩ３キナーゼによって活性化されることが示された（Ｂｕｒｇｅｒｉｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ、３７６巻：５９９〜６０２頁（１９９５年））。
【０００４】
現在、ＰＩ３キナーゼ酵素ファミリーは、その基質特異性に基づいて３つのクラスに分けられている。クラスＩのＰＩ３Ｋは、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルイノシトール−４−ホスフェート、およびホスファチジルイノシトール−４，５−ビホスフェート（ＰＩＰ２）をリン酸化することによって、それぞれ、ホスファチジルイノシトール−３−ホスフェート（ＰＩＰ）、ホスファチジルイノシトール−３，４−ビホスフェート、およびホスファチジルイノシトール−３，４，５−トリホスフェートを生成することができる。クラスＩＩのＰＩ３Ｋは、ＰＩおよびホスファチジルイノシトール−４−ホスフェートをリン酸化する一方で、クラスＩＩＩのＰＩ３Ｋは、ＰＩのみをリン酸化することができる。
【０００５】
ＰＩ３キナーゼの最初の精製および分子クローニングにより、これは、ｐ８５およびｐ１１０サブユニットからなるヘテロ二量体であることが明らかになった（Ｏｔｓｕら、Ｃｅｌｌ、６５巻：９１〜１０４頁（１９９１年）；Ｈｉｌｅｓら、Ｃｅｌｌ、７０巻：４１９〜２９頁（１９９２年））。その時以来、４つの異なるクラスＩのＰＩ３Ｋが同定され、ＰＩ３Ｋα、β、δ、およびγと指定されており、それぞれは、異なる１１０ｋＤａの触媒サブユニットおよび調節サブユニットからなる。より具体的には、触媒サブユニットのうちの３つ、すなわち、ｐ１１０α、ｐ１１０β、およびｐ１１０γは、それぞれ同じ調節サブユニット、ｐ８５と相互作用し、一方、ｐ１１０γは、異なる調節サブユニット、ｐ１０１と相互作用する。以下に説明するように、ヒトの細胞および組織におけるこれらのＰＩ３Ｋのそれぞれの発現パターンも異なる。一般に、ＰＩ３キナーゼの細胞機能についての豊富な情報が蓄積されてきているが、個々のアイソフォームによって果たされる役割は、大部分は未知である。
【０００６】
ウシｐ１１０αのクローニングが記載されている。このタンパク質は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのタンパク質：Ｖｐｓ３４ｐ、液胞タンパク質のプロセシングに関与するタンパク質に関係するとして同定された。組換え型のｐ１１０α産物も、ｐ８５αと結合することによって、形質移入されたＣＯＳ−１細胞におけるＰＩ３Ｋ活性を生じることが示された。Ｈｉｌｅｓら、Ｃｅｌｌ、７０巻、４１９〜２９頁（１９９２年）を参照されたい。
【０００７】
ｐ１１０βと指定された第２のヒトｐ１１０アイソフォームのクローニングは、Ｈｕら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、１３巻：７６７７〜８８頁（１９９３年）に記載されている。このアイソフォームは、細胞中でｐ８５と結合し、遍在的に発現されると言われているが、これは、ｐ１１０β  ｍＲＮＡは、多数のヒト組織およびマウス組織において、ならびにヒト臍帯静脈内皮細胞、ジャーカットヒト白血病Ｔ細胞、２９３ヒト胚の腎細胞、マウス３Ｔ３線維芽細胞、ＨｅＬａ細胞、およびＮＢＴ２ラット膀胱癌細胞において見出されるためである。そのような広い発現は、ｐ１１０βアイソフォームは、シグナル伝達経路において明らかに重要であることを示す。
【０００８】
ＰＩ３キナーゼのｐ１１０δアイソフォームの同定は、Ｃｈａｎｔｒｙら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２７２巻：１９２３６〜４１頁（１９９７年）に記載されている。ヒトｐ１１０δアイソフォームは、組織に制限された様式で発現されることが観察された。これは、リンパ球およびリンパ組織中で高濃度で発現され、このタンパク質は、免疫系におけるＰＩ３キナーゼ媒介シグナル伝達において役割を果たすことができることを示している。Ｐ１１０δアイソフォームに関する詳細は、特許文献１、特許文献２、および特許文献３にも見出すことができ、それぞれ参照により本明細書に組み込まれている。Ｖａｎｈａｅｓｅｂｒｏｅｃｋら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、９４巻：４３３０〜５頁（１９９７年）、および特許文献４も参照されたい。
【０００９】
ＰＩ３Ｋα、β、およびδサブタイプのそれぞれにおいて、ｐ８５サブユニットは、標的タンパク質における、そのＳＨ２ドメインのリン酸化チロシン残基（適切な配列関係中に存在する）との相互作用によって、ＰＩ３キナーゼを原形質膜に局在させるように作用する（Ｒａｍｅｈら、Ｃｅｌｌ、８３巻：８２１〜３０頁（１９９５年））。ｐ８５の２つのアイソフォーム、すなわち、遍在的に発現されるｐ８５α、ならびに脳およびリンパ組織中に主に見出されるｐ８５βが同定された（Ｖｏｌｉｎｉａら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、７巻：７８９〜９３頁（１９９２年））。ｐ８５サブユニットがＰＩ３キナーゼｐ１１０α、β、またはδ触媒サブユニットに結合することが、これらの酵素の触媒活性および安定性のために必要であると思われる。さらに、Ｒａｓタンパク質の結合もＰＩ３−キナーゼ活性を上方制御する。
【００１０】
ｐ１１０γのクローニングにより、酵素のＰＩ３Ｋファミリー内のなおさらなる複雑性が明らかになった（Ｓｔｏｙａｎｏｖら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６９巻：６９０〜９３頁（１９９５年））。ｐ１１０γアイソフォームは、ｐ１１０αおよびｐ１１０βと密接に関係するが（触媒ドメインにおいて４５〜４８％の同一性）、述べたように、標的化サブユニットとしてｐ８５を利用しない。代わりに、ｐ１１０γは、そのアミノ末端付近に「プレクストリン相同性ドメイン」と呼ばれる追加のドメインを含有する。このドメインは、ｐ１１０γとヘテロ三量体Ｇタンパク質のβγサブユニットとの相互作用を可能にし、この相互作用は、その活性を調節するように思われる。
【００１１】
ＰＩ３Ｋγに対するｐ１０１調節サブユニットは、ブタにおいて最初にクローン化され、ヒトオルソログが引き続いて同定された（Ｋｒｕｇｍａｎｎら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２７４巻：１７１５２〜８頁（１９９９年））。ｐ１０１のＮ末端領域とｐ１１０γのＮ末端領域との相互作用は、上述したＧβγを通じたＰＩ３Ｋγ活性化にとって極めて重要であると思われる。
【００１２】
構造的に活性なＰＩ３Ｋポリペプチドは、特許文献５に記載されている。この刊行物では、キメラ融合タンパク質の調製物が開示されており、この調製物において、ＳＨ２間（ｉＳＨ２）領域として公知であるｐ８５の１０２残基断片が、マウスｐ１１０のＮ末端にリンカー領域を介して融合している。このｐ８５  ｉＳＨ２ドメインは、無傷のｐ８５に匹敵する様式でＰＩ３Ｋ活性を明らかに活性化することができる（Ｋｌｉｐｐｅｌら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、１４巻：２６７５〜８５頁（１９９４年））。
【００１３】
したがって、ＰＩ３キナーゼは、そのアミノ酸同一性、またはその活性によって定義することができる。この増大しつつある遺伝子ファミリーの追加のメンバーには、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＶｐｓ３４  ＴＯＲ１、ＴＯＲ２（ならびに、ＦＲＡＰおよびｍＴＯＲなどのその哺乳動物相同体）、毛細血管拡張性運動失調遺伝子産物（ＡＴＲ）、ならびにＤＮＡ依存性プロテインキナーゼ（ＤＮＡ−ＰＫ）の触媒サブユニットを含めたより遠縁の脂質ならびにプロテインキナーゼが含まれる。一般に、Ｈｕｎｔｅｒ、Ｃｅｌｌ、８３巻：１〜４頁（１９９５）を参照されたい。
【００１４】
ＰＩ３キナーゼはまた、白血球活性化のいくつかの局面に関与していると思われる。ｐ８５結合性ＰＩ３キナーゼ活性は、ＣＤ２８の細胞質ドメインに物理的に関連することが示されており、これは、抗原に対する応答におけるＴ細胞の活性にとって重要な共刺激分子である（Ｐａｇｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６９巻：３２７〜２９頁（１９９４年）；Ｒｕｄｄ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、４巻：５２７〜３４頁（１９９６年））。ＣＤ２８を介したＴ細胞の活性化は、抗原による活性化に対する閾値を下げ、増殖反応の規模および継続時間を増大させる。これらの効果は、重要なＴ細胞成長因子である、インターロイキン−２（ＩＬ２）を含めたいくつかの遺伝子の転写の増大に関連する（Ｆｒａｓｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５１巻：３１３〜１６頁（１９９１年））。ＣＤ２８が、ＰＩ３キナーゼともはや相互作用することができないようなＣＤ２８の突然変異により、ＩＬ２産生の開始の失敗に至り、Ｔ細胞活性化におけるＰＩ３キナーゼについての極めて重要な役割を示している。
【００１５】
酵素のファミリーの個々のメンバーに対する特定の阻害剤は、各酵素の解読機能についての貴重はツールを提供する。２つの化合物、すなわちＬＹ２９４００２およびワートマニンは、ＰＩ３キナーゼ阻害剤として広く使用されている。しかし、これらの化合物は、非特異的ＰＩ３Ｋ阻害剤であり、その理由はこれらが、クラスＩのＰＩ３キナーゼの４つのメンバーを区別しないためである。例えば、様々なクラスＩのＰＩ３キナーゼのそれぞれに対するワートマニンのＩＣ５０値は、１〜１０ｎＭの範囲である。同様に、これらのＰＩ３キナーゼのそれぞれに対するＬＹ２９４００２についてのＩＣ５０値は、約１μＭである。（Ｆｒｕｍａｎら、Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、６７巻：４８１〜５０７頁（１９９８年））。したがって、個々のクラスＩのＰＩ３キナーゼの役割を研究することにおける、これらの化合物の有用性は限られている。
【００１６】
【化１】
2011503193.tif 000002
ワートマニンを使用した研究に基づくと、ＰＩ３キナーゼ機能は、Ｇタンパク質共役受容体を通じた白血球シグナル伝達のいくつかの局面についても必要とされるという証拠が存在する（Ｔｈｅｌｅｎら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、９１巻：４９６０〜６４頁（１９９４年））。さらに、ワートマニンおよびＬＹ２９４００２は、好中球移動およびスーパーオキシド放出を遮断することが示された。しかし、これらの化合物は、ＰＩ３Ｋの様々なアイソフォームを区別しないので、どの特定の１つまたは複数のＰＩ３Ｋアイソフォームがこれらの現象に関与しているかが不明確なままである。
【００１７】
最近の刊行物は、ＰＩ３Ｋδについての選択的阻害剤が公知であり、これらは、ある特定の型の障害を治療することができることを実証している。ＰＩ３Ｋδの選択的阻害剤は、例えば、特許文献６；特許文献７；特許文献８；および特許文献９、ならびに公開された特許文献１０、ならびに特許文献１１、特許文献１２、および特許文献１３に開示されている。
【００１８】
特許文献１２には、ＰＩ３Ｋδの選択的阻害剤が開示され、これらは、癌および肉腫などの固形腫瘍、ならびに血管系またはリンパ細網系を伴う癌、骨髄腫および白血病などのリンパ腫および血液癌を治療するのに有用であることが示されている。これは、ＰＩ３Ｋδの選択的阻害剤は、腫瘍増殖速度および血管新生を著しく低減し、放射線療法と併用すると、ＰＩ３Ｋδ阻害剤は、腫瘍血管系発生を低減することに関して顕著な相乗効果を有したことを実証している。したがって、本発明の化合物は、血管新生を阻害することによって腫瘍を治療するのに有用であり、これらは、他の腫瘍治療と併用することによって、相乗効果をもたらすことができる。
【００１９】
Ｐｕｒｉ、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｅｎｚ．  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、２巻、１４７〜６１頁（２００６年）には、通常の造血細胞の増殖に影響することのない、選択的ＰＩ３Ｋδ阻害剤による急性骨髄性白血病細胞増殖の阻害が開示されている。これには、そのような阻害剤は、高血圧の動物モデルにおいて有効であるという証拠も記載されている。
【００２０】
Ｌｅｅら、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．、２０巻、４５５〜６５頁（２００６年）には、ＰＩ３Ｋδの阻害により、マウス喘息モデルにおいてアレルギー性気道炎症および応答性亢進が減弱するという証拠が記載されており、ＰＩ３Ｋδの選択的阻害剤は、喘息およびアレルギー反応、ならびに免疫不全を治療するのに有用であることを実証している。Ｂｉｌｌｏｔｔｅｔら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １〜１２頁（２００６年）には、ＰＩ３Ｋδの小分子阻害剤は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）培養において細胞増殖を阻害し、ＡＭＬ細胞に対する、広く使用されているＡＭＬ化学療法剤ＶＰ１６の細胞毒性効果を増強したことが報告されている。したがってこれは、選択的なＰＩ３Ｋδ阻害剤は、造血癌を治療するのに有用であり、他の治療剤と相乗的であることを実証する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２１】
【特許文献１】米国特許第５，８５８，７５３号明細書
【特許文献２】米国特許第５，８２２，９１０号明細書
【特許文献３】米国特許第５，９８５，５８９号明細書
【特許文献４】国際公開第９７／４６６８８号
【特許文献５】国際公開第９６／２５４８８号
【特許文献６】米国特許第６，５１８，２７７号明細書
【特許文献７】米国特許第６，６６７，３００号明細書
【特許文献８】米国特許第６，９４９，５３５号明細書
【特許文献９】米国特許第６，８００，６２０号明細書
【特許文献１０】米国特許出願公開第２００６／０１０６０３８号明細書
【特許文献１１】国際公開第２００５／１１３５５４号
【特許文献１２】国際公開第２００５／１１２９３５号
【特許文献１３】国際公開第２００５／１１３５５６号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
いくつかの選択的なＰＩ３Ｋδ阻害剤がこのように公知であるが、癌などの増殖性障害、ならびに過剰または破壊性の免疫反応、例えば、喘息、関節リウマチ、多発性硬化症、およびループスなどを治療するのに有用な追加の治療剤についての必要性が残っている。本発明は、ＰＩ３Ｋδの強力な阻害剤であり、δアイソフォームに対して非常に選択的であり、ＰＩ３Ｋの他のアイソフォームに対して活性がはるかに小さい新規の化合物を提供する。これらの化合物は、リンパ腫、白血病、および過剰な免疫応答障害を含めた、造血細胞、特にリンパ球および白血球の過剰な活性、蓄積または産生と関連した障害を治療するのに有用である。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明の一態様は、ヒトＰＩ３Ｋδの生物活性を阻害することができる化合物を提供することである。本発明の別の態様は、他のＰＩ３Ｋアイソフォームと比較して選択的にＰＩ３Ｋδを阻害し、良好なバイオアベイラビリティーを有する化合物を提供することである。本発明のさらに別の態様は、ヒトＰＩ３Ｋδ活性を選択的に調節する方法を提供し、それによってＰＩ３Ｋδ機能または機能不全によって媒介される疾患の医療を促進することである。本発明のさらに別の態様は、ヒトＰＩ３Ｋδの機能を特徴づける方法を提供することである。
【００２４】
本発明の別の態様は、白血球機能を混乱させる方法であって、白血球を、白血球中のホスファチジルイノシトール３−キナーゼδ（ＰＩ３Ｋδ）活性を選択的に阻害する化合物と接触させるステップを含む方法を提供することである。白血球は、好中球、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、および好塩基球からなる群から選択される細胞を含むことができる。
【００２５】
例えば、白血球が好中球を含む場合では、この方法は、刺激性（ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ）スーパーオキシド放出、刺激性エキソサイトーシス、および走化性移動からなる群から選択される、少なくとも１つの好中球機能を混乱させるステップを含む。この方法は、好中球による細菌貪食または殺菌を実質的に混乱させないことが好ましい。白血球がＢリンパ球を含む場合では、この方法は、Ｂリンパ球の増殖、またはＢリンパ球による抗体産生を混乱させるステップを含む。白血球がＴリンパ球を含む場合では、この方法は、Ｔリンパ球の増殖を混乱させるステップを含む。白血球が好塩基球を含む場合では、この方法は、好塩基球によるヒスタミン放出を混乱させるステップを含む。
【００２６】
本方法では、ＰＩ３Ｋδ阻害剤は選択的であることが好適である。ＰＩ３Ｋδ阻害剤は、生化学アッセイ法において、他のタイプＩのＰＩ３Ｋアイソフォームと比べて、ＰＩ３Ｋδの阻害に関して少なくとも約１０倍選択的であることが好適である。この化合物は、生化学アッセイ法において、他のタイプＩのＰＩ３Ｋアイソフォームと比べて、ＰＩ３Ｋδの阻害に関して少なくとも約２０倍選択的であることが好ましく、３０倍選択的であることがより好ましい。いくつかの実施形態では、この化合物は、生化学アッセイ法において、ＰＩ３Ｋαと比べて、ＰＩ３Ｋδの阻害に関して少なくとも５０倍選択的である。
【００２７】
本発明の化合物は、ＰＩ３Ｋδ活性を阻害することができ、構造式（Ｉ）を有し：
【００２８】
【化２】
2011503193.tif 000003
［式中、Ｕ、Ｖ、Ｗ、およびＺは、独立して、ＣＲａ、Ｎ、ＮＲｂ、およびＯからなる群から選択され、
またはＵ、Ｖ、Ｗ、およびＺのうちの少なくとも１つはＮであり、Ｕ、Ｖ、Ｗ、およびＺのうちのその他は、ＣＲａ、ＮＲｂ、Ｓ、およびＯからなる群から選択され、
Ｕ、Ｖ、Ｗ、およびＺのうちのすべてではないが少なくとも１つはＣＲａと異なり；
Ａは、環員として少なくとも２つの窒素原子を含有する、場合により置換された単環式もしくは二環式の環系であり、系の少なくとも１つの環は芳香族であり；
Ｘは、Ｃ（Ｒｃ）２、Ｃ（Ｒｃ）２Ｃ（Ｒｃ）２、ＣＨ２ＣＨＲｃ、ＣＨＲｃＣＨＲｃ、ＣＨＲｃＣＨ２、ＣＨ＝Ｃ（Ｒｃ）、Ｃ（Ｒｃ）＝Ｃ（Ｒｃ）、およびＣ（Ｒｃ）＝ＣＨからなる群から選択され；
Ｙは、なし（すなわち、結合）、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＨ、Ｎ（Ｒｃ）、Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、およびＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｓからなる群から選択され；
Ｒ１は、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜１０アルキル、置換または非置換のＣ２〜１０アルケニル、置換または非置換のＣ２〜１０アルキニル、置換または非置換のＣ１〜６ペルフルオロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、置換または非置換のＣ１〜４アルキレンＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアリールＣ１〜４アルキレンＯＲｅ、置換または非置換のヘテロアリールＣ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、置換または非置換のヘテロアリールＣ１〜４アルキレンＯＲｅ、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロアリール、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンアリール、置換または非置換のアリールＣ１〜６アルキル、アリールＣ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜４アルキレンアリール、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜４アルキレンヘテロアリール、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ヘテロアリール、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｄ）２、Ｃ１〜６アルキレンＯＲｄ、Ｃ１〜４アルキレンＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ１〜４アルキレンＯＣ１〜４アルキレンＯＲｄ、Ｃ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、およびＣ１〜４アルキレンＯＣ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄからなる群から選択され；
Ｒａは、独立して、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜６アルキル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、Ｃ１〜３アルキレンアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のヘテロアリールＣ１〜３アルキル、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロアリール、ハロ、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、ＮＯ２、ＯＲｅ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｎ（Ｒｄ）２、ＣＮ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｄ、アリールＯＲｅ、ＮＲｄＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜３アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、アリールＯＣ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、アリールＯＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、ＯＣ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、Ｃ１〜４アルキレンＯＣ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＳＯ２Ｒｄ、Ｃ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ２〜６アルケニレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＣ１〜４アルキレンＯＲｅ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＣ１〜４アルキレンヘテロアリール、ＯＣ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、ＯＣ１〜４アルキレンＣＨ（ＯＲｅ）ＣＨ２Ｎ（Ｒｄ）２、ＯＣ１〜４アルキレンヘテロアリール、ＯＣ２〜４アルキレンＯＲｅ、ＯＣ２〜４アルキレンＮＲｄＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、ＮＲａＣ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、ＮＲａＣ＝Ｏ）Ｒｄ、ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｄ）２、Ｎ（ＳＯ２Ｃ１〜４アルキル）２、ＮＲａ（ＳＯ２Ｃ１〜４アルキル（ａｌｋｌ））、ＳＯ２Ｎ（Ｒｄ）２、ＯＳＯ２ＣＦ３、Ｃ１〜３アルキレンアリール、Ｃ１〜４アルキレンヘテロアリール（ａｌｋｙｌｅｎｅｅｔｅｒｏａｒｙｌ）、Ｃ１〜６アルキレンＯＲｅ、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｄ）２、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜３アルキレンアリール、アリールＯＣ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、アリールＯＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜３アルキレンＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜３アルキレンヘテロアリール、ＯＣ１〜４アルキレン（ａｌｋｌｅｎｅ）ＯＣ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１〜４アルキレンヘテロアリール、およびＮＨＣ（＝Ｏ）ハロＣ１〜６アルキルからなる群から選択され；
Ｒｂは、なし、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜６アルキル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８ヘテロシクロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｏｌｋｙｌ）、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアリールＣ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキレンアリール、置換または非置換のヘテロアリール、ヘテロアリールＣ１〜３アルキル、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロアリール、Ｃ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｄ、アリールＯＲｅ、アリールＯＣ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、アリールＯＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、Ｃ１〜４アルキレンＯＣ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＳＯ２Ｒｄ、Ｃ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ２〜６アルケニレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＣ１〜４アルキレンＯＲｅ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＣ１〜４アルキレンヘテロアリール、ＳＯ２Ｎ（Ｒｄ）２、Ｃ１〜３アルキレンアリール、Ｃ１〜４アルキレンヘテロアリール、Ｃ１〜６アルキレンＯＲｅ、Ｃ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｄ）２、アリールＯＣ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、アリールＯＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、およびＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜４アルキレンヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｒｃは、独立して、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜１０アルキル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、置換または非置換のＣ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロＣ１〜３アルキル、置換または非置換のアリールヘテロＣ１〜３アルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアリールＣ１〜３アルキル、置換または非置換のヘテロアリールＣ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキレンアリール、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロアリール、Ｃ（＝Ｏ）Ｒｄ、およびＣ（＝Ｏ）ＯＲｄからなる群から選択され、
または同じ原子上もしくは隣接する結合した原子上の２つのＲｃは、環化することによって３〜８環員を有する環を形成することができ、この環は場合により置換されており、環員としてＮＲｄ、ＯおよびＳから選択される最大２個のヘテロ原子を含むことができ；
Ｒｄは、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜１０アルキル、置換または非置換のＣ２〜１０アルケニル、置換または非置換のＣ２〜１０アルキニル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンＮ（Ｒｅ）２、アリール、置換または非置換のアリールＣ１〜３アルキル、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のヘテロアリールＣ１〜３アルキル、および置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロアリールからなる群から選択され；
または２つのＲｄ基は、これらが結合している窒素と一緒になって、Ｎ、ＯもしくはＳである第２のヘテロ原子を場合により含有する、５員環もしくは６員環を形成し；
Ｒｅは、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜６アルキル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択され、
または２つのＲｅ基は、これらが結合している窒素と一緒になって、Ｎ、ＯもしくはＳである第２のヘテロ原子を場合により含有する、５員環もしくは６員環を形成し；
前記Ａ、Ｒ１、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄは、独立して、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ３〜８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１〜６アルキレンＯＲｅ、Ｃ１〜４アルキレンＮ（Ｒｅ）２、アリール、Ｃ１〜３アルキレンアリール、ヘテロアリール、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｅ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｅ、ハロ、ＣＮ、ＣＦ３、ＮＯ２、Ｎ（Ｒｅ）２、ＯＲｅ、ＯＣ１〜６ペルフルオロアルキル（ｐｅｒｆｌｕｏｒａｌｋｙｌ）、ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｅ）２、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｅ）２、ＳＲｅ、ＳＯ２Ｒｅ、ＳＯ３Ｒｅ、オキソ（＝Ｏ）、およびＣＨＯからなる群から選択される１〜３個の置換基で場合により置換されており；
ｎは、０または１である］；または
その薬学的に許容できる塩、もしくはプロドラッグ、もしくは溶媒和物（例えば、水和物）である。
【００２９】
本発明の別の態様は、好中球によって媒介される医学的状態を治療する方法であって、その必要のある哺乳動物に、好中球中のホスファチジルイノシトール３−キナーゼδ（ＰＩ３Ｋδ）活性を選択的に阻害する、治療有効量の化合物を投与するステップを含む方法を提供することである。この方法によって治療することができる例示的な医学的状態には、刺激性スーパーオキシド放出、刺激性エキソサイトーシス、および走化性移動からなる群から選択される望ましくない好中球機能を特徴とする状態が含まれる。この方法によって、好中球による食作用活性または殺菌は、実質的に阻害されないことが好ましい。
【００３０】
本発明のさらに別の態様は、破骨細胞の機能を混乱させる方法であって、破骨細胞を、破骨細胞中のＰＩ３Ｋδ活性を選択的に阻害する化合物と接触させるステップを含む方法を提供することである。この方法によれば、この化合物は、骨に優先的に結合する部分を含む。
【００３１】
本発明の別の態様は、骨吸収障害を回復させる必要のある哺乳動物において、骨吸収障害を回復させる方法であって、この哺乳動物に、哺乳動物の破骨細胞中のＰＩ３Ｋδ活性を阻害する、治療有効量の化合物を投与するステップを含む方法を提供することである。この方法による治療に適用できる好適な骨吸収障害は、骨粗鬆症である。
【００３２】
本発明の別の態様は、過剰な免疫応答または望まれない免疫応答を回復させる必要のある哺乳動物において、過剰な免疫応答または望まれない免疫応答を回復させる方法であって、この哺乳動物に、哺乳動物の破骨細胞中のＰＩ３Ｋδ活性を阻害する、治療有効量の化合物を投与するステップを含む方法を提供することである。式（Ｉ）の化合物を用いて治療可能な過剰な免疫応答または望まれない免疫応答の例として、それだけに限らないが、喘息、関節リウマチ、エリテマトーデス、および多発性硬化症が挙げられる。他のそのような障害として、障害、例えば、自己免疫性甲状腺炎、多発性硬化症、いくつかの型の糖尿病、およびレイノー症候群など；移植片拒絶障害、例えば、ＧＶＨＤおよび同種移植拒絶反応など；慢性糸球体腎炎；炎症性腸疾患、例えば、慢性炎症性腸疾患（ＣＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、および壊死性全腸炎など；炎症性皮膚疾患、例えば接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、またはじん麻疹など；感染による発熱および筋肉痛が挙げられる。
【００３３】
本発明のさらに別の態様は、造血起源の癌細胞の成長または増殖を阻害する方法であって、癌細胞を、癌細胞中のＰＩ３Ｋδ活性を選択的に阻害する化合物と接触させるステップを含む方法を提供することである。この方法は、リンパ腫、多発性骨髄腫、および白血病からなる群から選択される癌の成長または増殖を阻害することにおいて有利となり得る。
【００３４】
本発明の別の態様は、ＰＩ３Ｋδポリペプチドのキナーゼ活性を阻害する方法であって、ＰＩ３Ｋδポリペプチドを、構造式（Ｉ）を有する化合物と接触させるステップを含む方法を提供することである。
【００３５】
本発明のさらに別の態様は、白血球機能を混乱させる方法であって、白血球を、構造式（Ｉ）を有する化合物と接触させるステップを含む方法を提供することである。
【００３６】
本発明の別の態様は、生化学的アッセイ法および細胞に基づくアッセイ法においてＰＩ３Ｋδ活性を阻害し、ＰＩ３Ｋδ活性が過剰であるか、望ましくない医学的状態を治療することにおいて治療上の利点を示す、構造式（Ｉ）を有する化合物を提供することである。
【００３７】
本発明のこれらおよび他の態様および利点は、選択された実施形態の以下の詳細な説明から明らかとなり、これらを本発明の範囲を限定することなく、本発明の理解を高めるために提供する。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
本発明は、ＰＩ３Ｋδの活性を選択的に阻害する化合物を提供する。本発明は、細胞、特に白血球、破骨細胞、および癌細胞中のＰＩ３Ｋδアイソザイムの活性を選択的に調節する方法を含めた、ＰＩ３Ｋδ活性を阻害する方法をさらに提供する。この方法には、インビトロ、インビボ、およびエクスビボでの適用が含まれる。
【００３９】
臨床状況においてＰＩ３Ｋδ活性を選択的に調節する方法の特定の利点は、ＰＩ３Ｋδ活性によって媒介される疾患または障害を回復させることである。したがって、過剰または不適切なＰＩ３Ｋδ活性を特徴とする疾患または障害の治療は、ＰＩ３Ｋδの選択的モジュレーターを投与することによって治療することができる。
【００４０】
さらに、本発明は、選択的なＰＩ３Ｋδ阻害剤を含む医薬組成物を提供する。選択的なＰＩ３Ｋδ阻害剤化合物（または、この化合物を含む医薬組成物）、およびこの化合物を使用するための指示書を含む製品も提供される。本発明の他の方法は、アイソザイムの生理的役割のさらなる特徴づけを可能にすることを含む。
【００４１】
本明細書に記載される方法は、インビトロ、インビボ、またはエクスビボの細胞を含めた細胞中のＰＩ３Ｋδの活性を選択的に阻害し、好ましくは特異的に阻害する化合物を使用して恩恵を得る。本発明の方法によって処置される細胞には、内因性のＰＩ３Ｋδを発現するものが含まれ、ここで内因性は、細胞が、ＰＩ３Ｋδポリペプチドまたはその生物学的に活性な断片をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを細胞中に組換え導入することなく、ＰＩ３Ｋδを発現することを示す。本方法は、外因性のＰＩ３Ｋδを発現する細胞の使用も包含し、ここでＰＩ３Ｋδまたはその生物学的に活性な断片をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドが、組換え手順を使用して細胞中に導入されている。
【００４２】
細胞は、インビボ、すなわち、生存対象、例えば、ヒトを含めた哺乳動物中とすることができ、ＰＩ３Ｋδ阻害剤を治療的に使用することによって、対象中のＰＩ３Ｋδ活性を阻害することができる。あるいは、細胞は、エクスビボ法またはインビトロ法のために、別々の細胞として、または組織中で単離することができる。本発明によって包含されるインビトロ法は、ＰＩ３Ｋδ酵素またはその生物学的に活性な断片を、本発明の阻害剤化合物と接触させるステップを含むことができる。ＰＩ３Ｋδ酵素は、精製および単離された酵素を含むことができ、酵素は、天然源（例えば、組換え技術によって改変することなくＰＩ３Ｋδポリペプチドを通常発現する細胞もしくは組織）から単離され、または外因性酵素を発現させるために組換え技法によって改変された細胞から単離される。
【００４３】
用語「選択的なＰＩ３Ｋδ阻害剤」は、本明細書で使用する場合、ＰＩ３Ｋファミリーの他のアイソザイムより有効にＰＩ３Ｋδアイソザイムを阻害する化合物を指す。「選択的なＰＩ３Ｋδ阻害剤」化合物は、従来より一般的にＰＩ３Ｋ阻害剤と称される化合物、例えば、ワートマニンまたはＬＹ２９４００２よりＰＩ３Ｋδに関して選択的であると理解される。同時に、ワートマニンおよびＬＹ２９４００２は、「非選択的なＰＩ３Ｋ阻害剤」とみなされる。さらに、本発明の化合物は、ＰＩ３Ｋδの発現または活性を選択的に負に制御し、本発明の治療法において使用するのに許容できる薬理学的特性を有する。
【００４４】
酵素活性（または他の生物活性）の阻害剤としての化合物の相対的効力は、それぞれの化合物が既定の程度に活性を阻害する濃度を求め、次いで結果を比較することによって確立することができる。一般に、好適な判定は、生化学アッセイ法において活性を５０％阻害する濃度、すなわち、５０％阻害濃度、すなわち「ＩＣ５０」である。ＩＣ５０判定は、当技術分野で公知の従来の技法を使用して実現することができる。一般に、ＩＣ５０は、試験中の様々な濃度の阻害剤の存在下で、所与の酵素の活性を測定することによって求めることができる。次いで、実験的に得られた酵素活性の値は、使用される阻害剤濃度に対してプロットされる。５０％の酵素活性（いずれの阻害剤も存在しない状態での活性と比較した場合）を示す阻害剤の濃度が、ＩＣ５０値として採用される。類似して、他の阻害濃度を、活性の適切な判定によって定義することができる。例えば、いくつかの状況において、９０％阻害濃度、すなわち、ＩＣ９０を確立することが望ましい場合がある。
【００４５】
本発明の化合物は、約１０μＭ以下のＰＩ３Ｋδに対してＩＣ５０値を示す。いくつかの実施形態において、化合物は、５μＭ未満のＰＩ３Ｋδに対してＩＣ５０を有する。他の実施形態では、この化合物は、１μｍ未満、例えば、１ｎｍに下がってまでのＰＩ３Ｋδに対するＩＣ５０を有する。
【００４６】
したがって、「選択的なＰＩ３Ｋδ阻害剤」は代わりに、他のクラスＩのＰＩ３Ｋファミリーメンバーのいずれか、またはすべてに対する５０％阻害濃度（ＩＣ５０）より、少なくとも１０分の１、好ましくは少なくとも２０分の１、より好ましくは少なくとも３０分の１低い、ＰＩ３Ｋδに対するＩＣ５０値を示す化合物を指すと理解することができる。用語「特異的なＰＩ３Ｋδ阻害剤」は、他のＰＩ３ＫクラスＩファミリーメンバーのいずれか、またはすべてに対するＩＣ５０より、少なくとも５０分の１、好ましくは少なくとも１００分の１、より好ましくは少なくとも２００分の１、さらにより好ましくは少なくとも５００分の１低い、ＰＩ３Ｋδに対するＩＣ５０を示す選択的なＰＩ３Ｋδ阻害剤化合物を指すと理解することができる。
【００４７】
したがって、最も好適な本発明の化合物は、ＰＩ３Ｋδに対して低いＩＣ５０値を有し（すなわち、強力な阻害剤である）、他のＰＩ３Ｋアイソフォームと比較して、ＰＩ３Ｋδを阻害することに関して選択的である。
【００４８】
一実施形態では、本発明は、白血球機能を阻害する方法を提供する。より詳細には、本発明は、好中球ならびにＴリンパ球およびＢリンパ球の機能を阻害または抑制する方法を提供する。好中球に関して、ＰＩ３Ｋδ活性の阻害により、好中球の機能が阻害されることが予想外に見出された。例えば、本発明の化合物は、古典的な好中球機能、例えば、刺激性スーパーオキシド放出、刺激性エキソサイトーシス、および走化性移動などの阻害を誘発することが観察された。しかし、本発明の方法により、好中球の他の機能に実質的に影響することなく、これらの細胞のある特定の機能の抑制が可能になることがさらに観察された。例えば、好中球による細菌の食作用は、本発明の選択的なＰＩ３Ｋδ阻害剤化合物によって実質的に阻害されないことが観察された。
【００４９】
したがって、本発明は、細菌の食作用を実質的に阻害することなく、好中球機能を阻害する方法を含む。本方法によって阻害するのに適した好中球機能には、ＰＩ３Ｋδの活性または発現によって媒介される任意の機能が含まれる。そのような機能として、限定することなく、刺激性スーパーオキシド放出、刺激性エキソサイトーシスまたは脱顆粒、走化性移動、血管内皮への接着（例えば、好中球の連結／回転、好中球活性の誘発、および／もしくは好中球の内皮へのラッチング（ｌａｔｃｈｉｎｇ））、経壁血管外遊出、または内皮を介した周辺組織への遊出が挙げられる。一般に、これらの機能は、「炎症性機能」と一括して呼ぶことができるが、その理由はこれらが、炎症に対する好中球応答に一般に関係するためである。好中球の炎症性機能は、これらの細胞によって示される殺菌機能、例えば、細菌の食作用および殺害と区別することができる。したがって、本発明は、好中球の１つまたは複数の炎症性機能が、異常であるか、望ましくない疾患状態を治療する方法をさらに含む。
【００５０】
ＰＩ３Ｋδが、Ｂ細胞およびＴ細胞を含めたリンパ球の刺激性増殖において役割を果たすことがさらに立証された。さらに、ＰＩ３Ｋδは、Ｂ細胞による抗体の刺激性分泌において役割を果たすと思われる。本発明の選択的なＰＩ３Ｋδ阻害剤化合物を使用することによって、これらの現象を、ＰＩ３Ｋδの阻害によって阻止することができることを立証した。したがって、本発明は、リンパ球増殖を阻害する方法、およびＢリンパ球による抗体産生を阻害する方法を含む。本発明によって可能になる他の方法には、これらのリンパ球機能の１つまたは複数が異常であるか、望ましくない疾患状態を治療する方法が含まれる。
【００５１】
ＰＩ３Ｋδ活性を選択的または特異的に阻害することによって、ＰＩ３Ｋδ媒介性疾患の治療を促進する一方で、一般に、他のクラスＩのＰＩ３キナーゼの活性の同時阻害に関連する合併症を低減または排除することができることがこれまでに判定された。この実施形態を例示するために、本発明の方法は、他のＰＩ３Ｋアイソフォームと比べて、ＰＩ３Ｋδの選択的な阻害を示すことが見出された化合物のクラスのメンバーを使用して実践することができる。
【００５２】
本発明の方法は、一般的な構造式（Ｉ）を有する化合物を使用して実践することができる。好適な方法では、他のＰＩ３Ｋアイソフォームと比べて、少なくとも１０倍選択的なＰＩ３Ｋδの阻害を示すことが判定された化合物が使用される。
【００５３】
例えば、この方法は、以下の化合物を使用して実践することができる：
６−［１−（６−アミノ−プリン−９−イル）−エチル］−３−ブロモ−１−メチル−５−フェニル−１，５−ジヒドロ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン；
３−ブロモ−１−メチル−５−フェニル−６−［（１−（９Ｈ−プリン−６−イルスルファニル）−エチル］−１，５−ジヒドロ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン；
３−メチル−５−フェニル−６−（９Ｈ−プリン−６−イルスルファニルメチル）−５Ｈ−イソオキサゾロ［５，４−ｄ］ピリミジン−４−オン；
６−（６−アミノ−プリン−６−イルメチル）−３−メチル−５−フェニル−５Ｈ−イソオキサゾロ［５，４−ｄ］ピリミジン−４−オン；
２−［１−（４−アミノ−ベンゾイミダゾール−１−イル）−エチル］−３−フェニル−３Ｈ−ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン；
３−フェニル−２−［１−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）−エチル］−３Ｈ−ピリド［３，２−ｄ］−ピリミジン−４−オン；
およびこれらの混合物。
【００５４】
不斉中心を有する構造式（Ｉ）の化合物については、この方法は、化合物のラセミ混合物、または特定の鏡像異性体を使用して実践してもよい。ＲｃがＨではない場合のＣＨＲｃなど、Ｘが不斉中心を表す場合、Ｓ鏡像異性体は時に好適である。
【００５５】
本発明の方法を、ＰＩ３Ｋδ阻害活性を示す化合物のクラスのメンバーを使用して実践し、それによって、ＰＩ３Ｋδ活性によって媒介される疾患におけるＰＩ３Ｋδ活性の阻害を促進することができる。特に、本発明の方法は、一般的な構造式（Ｉ）を有する化合物：
【００５６】
【化３】
2011503193.tif 000004
［式中、Ｕ、Ｖ、Ｗ、およびＺは、独立して、ＣＲａ、Ｎ、ＮＲｂ、およびＯからなる群から選択され、
またはＵ、Ｖ、Ｗ、およびＺのうちの少なくとも１つはＮであり、Ｕ、Ｖ、Ｗ、およびＺのうちのその他は、ＣＲａ、ＮＲｂ、Ｓ、およびＯからなる群から選択され、
Ｕ、Ｖ、Ｗ、およびＺのうちのすべてではないが少なくとも１つはＣＲａと異なり；
Ａは、環員として少なくとも２つの窒素原子を含有する、場合により置換された単環式もしくは二環式の環系であり、系の少なくとも１つの環は芳香族であり；
Ｘは、Ｃ（Ｒｃ）２、Ｃ（Ｒｃ）２Ｃ（Ｒｃ）２、ＣＨ２ＣＨＲｃ、ＣＨＲｃＣＨＲｃ、ＣＨＲｃＣＨ２、ＣＨ＝Ｃ（Ｒｃ）、Ｃ（Ｒｃ）＝Ｃ（Ｒｃ）およびＣ（Ｒｃ）＝ＣＨからなる群から選択され；
Ｙは、なし（すなわち、結合）、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＨ、Ｎ（Ｒｃ）、Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、およびＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｓからなる群から選択され；
Ｒ１は、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜１０アルキル、置換または非置換のＣ２〜１０アルケニル、置換または非置換のＣ２〜１０アルキニル、置換または非置換のＣ１〜６ペルフルオロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、置換または非置換のＣ１〜４アルキレンＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアリールＣ１〜４アルキレンＯＲｅ、置換または非置換のヘテロアリールＣ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、置換または非置換のヘテロアリールＣ１〜４アルキレンＯＲｅ、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロアリール、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンアリール、置換または非置換のアリールＣ１〜６アルキル、アリールＣ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜４アルキレンアリール、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜４アルキレンヘテロアリール、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ヘテロアリール、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｄ）２、Ｃ１〜６アルキレンＯＲｄ、Ｃ１〜４アルキレンＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ１〜４アルキレンＯＣ１〜４アルキレンＯＲｄ、Ｃ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、およびＣ１〜４アルキレンＯＣ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄからなる群から選択され；
Ｒａは、独立して、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜６アルキル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、Ｃ１〜３アルキレンアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のヘテロアリールＣ１〜３アルキル、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロアリール、ハロ、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、ＮＯ２、ＯＲｅ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｎ（Ｒｄ）２、ＣＮ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｄ、アリールＯＲｅ、ＮＲｄＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜３アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、アリールＯＣ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、アリールＯＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、ＯＣ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、Ｃ１〜４アルキレンＯＣ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＳＯ２Ｒｄ、Ｃ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ２〜６アルケニレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＣ１〜４アルキレンＯＲｅ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＣ１〜４アルキレンヘテロアリール、ＯＣ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、ＯＣ１〜４アルキレンＣＨ（ＯＲｅ）ＣＨ２Ｎ（Ｒｄ）２、ＯＣ１〜４アルキレンヘテロアリール、ＯＣ２〜４アルキレンＯＲｅ、ＯＣ２〜４アルキレンＮＲｄＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、ＮＲａＣ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、ＮＲａＣ＝Ｏ）Ｒｄ、ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｄ）２、Ｎ（ＳＯ２Ｃ１〜４アルキル）２、ＮＲａ（ＳＯ２Ｃ１〜４アルキル）、ＳＯ２Ｎ（Ｒｄ）２、ＯＳＯ２ＣＦ３、Ｃ１〜３アルキレンアリール、Ｃ１〜４アルキレンヘテロアリール、Ｃ１〜６アルキレンＯＲｅ、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｄ）２、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜３アルキレンアリール、アリールＯＣ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、アリールＯＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜３アルキレンＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜３アルキレンヘテロアリール、ＯＣ１〜４アルキレンＯＣ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１〜４アルキレンヘテロアリール、およびＮＨＣ（＝Ｏ）ハロＣ１〜６アルキルからなる群から選択され；
Ｒｂは、なし、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜６アルキル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアリールＣ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキレンアリール、置換または非置換のヘテロアリール、ヘテロアリールＣ１〜３アルキル、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロアリール、Ｃ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｄ、アリールＯＲｅ、アリールＯＣ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、アリールＯＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、Ｃ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、Ｃ１〜４アルキレンＯＣ１〜４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｄ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＳＯ２Ｒｄ、Ｃ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ２〜６アルケニレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＣ１〜４アルキレンＯＲｅ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｄＣ１〜４アルキレンヘテロアリール、ＳＯ２Ｎ（Ｒｄ）２、Ｃ１〜３アルキレンアリール、Ｃ１〜４アルキレンヘテロアリール、Ｃ１〜６アルキレンＯＲｅ、Ｃ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｄ）２、アリールＯＣ１〜３アルキレンＮ（Ｒｄ）２、アリールＯＣ（＝Ｏ）Ｒｄ、およびＣ（＝Ｏ）Ｃ１〜４アルキレンヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｒｃは、独立して、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜１０アルキル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、置換または非置換のＣ１〜４アルキレンＮ（Ｒｄ）２、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロＣ１〜３アルキル、置換または非置換のアリールヘテロＣ１〜３アルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアリールＣ１〜３アルキル、置換または非置換のヘテロアリールＣ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキレンアリール、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロアリール、Ｃ（＝Ｏ）Ｒｄ、およびＣ（＝Ｏ）ＯＲｄからなる群から選択され、
または同じ原子上もしくは隣接する結合した原子上の２つのＲｃは、環化することによって３〜８環員を有する環を形成することができ、この環は場合により置換されており、環員としてＮＲｄ、ＯおよびＳから選択される最大２個のヘテロ原子を含むことができ；
Ｒｄは、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜１０アルキル、置換または非置換のＣ２〜１０アルケニル、置換または非置換のＣ２〜１０アルキニル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンＮ（Ｒｅ）２、アリール、置換または非置換のアリールＣ１〜３アルキル、置換または非置換のＣ１〜３アルキレンアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のヘテロアリールＣ１〜３アルキル、および置換または非置換のＣ１〜３アルキレンヘテロアリールからなる群から選択され；
または２つのＲｄ基は、これらが結合している窒素と一緒になって、Ｎ、ＯもしくはＳである第２のヘテロ原子を場合により含有する、５員環もしくは６員環を形成し；
Ｒｅは、Ｈ、置換または非置換のＣ１〜６アルキル、置換または非置換のＣ３〜８シクロアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のヘテロアリールからなる群から選択され
または２つのＲｅ基は、これらが結合している窒素と一緒になって、Ｎ、ＯもしくはＳである第２のヘテロ原子を場合により含有する、５員環もしくは６員環を形成し；
前記Ａ、Ｒ１、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄは、独立して、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ３〜８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１〜６アルキレンＯＲｅ、Ｃ１〜４アルキレンＮ（Ｒｅ）２、アリール、Ｃ１〜３アルキレンアリール、ヘテロアリール、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｅ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｅ、ハロ、ＣＮ、ＣＦ３、ＮＯ２、Ｎ（Ｒｅ）２、ＯＲｅ、ＯＣ１〜６ペルフルオロアルキル、ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｅ）２、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｅ）２、ＳＲｅ、ＳＯ２Ｒｅ、ＳＯ３Ｒｅ、オキソ（＝Ｏ）、およびＣＨＯからなる群から選択される１〜３個の置換基で場合により置換されており；
ｎは、０または１である］；または
その薬学的に許容できる塩、もしくはプロドラッグ、もしくは溶媒和物（例えば、水和物）を使用して実践することができる。
【００５７】
本発明の化合物は、ＰＩ３Ｋδ活性の選択的阻害剤である。この化合物は、生化学アッセイ法においてＰＩ３Ｋδの阻害を示し、細胞に基づくアッセイ法においてＰＩ３Ｋδ発現細胞の機能を選択的に混乱させる。本明細書に記載されるように、本化合物は、好中球および他の白血球中のある特定の機能、ならびに破骨細胞の機能を阻害する能力を実証した。
【００５８】
本明細書で使用する場合、用語「アルキル」は、指定された数の炭素原子を含有する直鎖もしくは分岐の炭化水素基、または環式炭化水素基、一般にメチル、エチル、ならびに直鎖および分岐のプロピルおよびブチル基、ならびにシクロプロピル、シクロペンチルおよびシクロヘキシル基、ならびに直鎖、分岐鎖および環式の基の組合せ、例えば、シクロプロピルメチルおよびノルボルニルとして定義される。炭化水素基は、最大１６個の炭素原子、好ましくは１〜８個の炭素原子を含有することができる。用語「アルキル」は、環式、二環式、および「架橋アルキル（ｂｒｉｄｇｅｄ  ａｌｋｙｌ）」、すなわち、Ｃ６〜Ｃ１６二環式もしくは多環式炭化水素基、例えば、ノルボルニル、アダマンチル、ビシクロ［２．２．２］オクチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、ビシクロ［３．２．１］オクチル、またはデカヒドロナフチルを含む。用語「シクロアルキル」は、環式のＣ３〜Ｃ８炭化水素基、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロヘキシル、およびシクロペンチルとして定義される。
【００５９】
用語「アルケニル」は、炭化水素基が少なくとも１つの炭素間二重結合を含有することを除いて「アルキル」とまったく同様に定義される。用語「アルキニル」は、炭化水素基が少なくとも１つの炭素間三重結合を含有することを除いて「アルキル」とまったく同様に定義される。「シクロアルケニル」は、少なくとも１つの炭素間二重結合が環内に存在することを除いて、シクロアルキルと同様に定義される。
【００６０】
用語「ペルフルオロアルキル」は、各水素原子が、フッ素で置換されているアルキル基として定義される。
【００６１】
用語「アルキレン」は、置換基を有するアルキル基として定義され、例えば、用語「Ｃ１〜３アルキレンアリール」は、１〜３個の炭素原子を含有し、アリール基で置換されたアルキル基を指す。同様に、「アルキレン」は、別の基の記述を伴うことなく使用されるとき、二価のアルキル基を指すことができ、これは、２つの他の構造的な特徴を一緒に連結することができ、例えば、ＣＨ２および（ＣＨ２）３は、１炭素および３炭素のアルキレン基である。
【００６２】
用語「ハロ」または「ハロゲン」は、フッ素、臭素、塩素、およびヨウ素を含むことが本明細書で定義される。多くの場合、フルオロまたはクロロが好適である。
【００６３】
用語「ハロアルキル」は、１つまたは複数のハロ置換基、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、またはこれらの組合せで置換されたアルキル基として本明細書で定義される。同様に、「ハロシクロアルキル」は、１つまたは複数のハロ置換基を有するシクロアルキル基として定義される。
【００６４】
用語「アリール」は、単独または組合せで、単環式または多環式の芳香族基、好ましくは、単環式または二環式の芳香族基、例えば、フェニルまたはナフチルとして本明細書で定義される。別段の指定のない限り、「アリール」基は非置換であってもよく、または例えば、１つもしくは複数の、特に、１〜３個のハロ、アルキル、フェニル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、およびアルキルスルホニルで置換されてもよい。例示的なアリール基として、フェニル、ナフチル、ビフェニル、テトラヒドロナフチル、クロロフェニル、フルオロフェニル、アミノフェニル、メチルフェニル、メトキシフェニル、トリフルオロメチルフェニル、ニトロフェニル、カルボキシフェニルなどが挙げられる。用語「アリールＣ１〜６アルキル」および「ヘテロアリールＣ１〜６アルキル」は、Ｃ１〜６アルキル置換基を有するアリールまたはヘテロアリール基として定義される。
【００６５】
用語「ヘテロアリール」は、１つまたは２つの芳香環を含有し、芳香環中に少なくとも１個の窒素、酸素、または硫黄原子を含有する単環式または二環式の環系として本明細書で定義され、これは、非置換であってもよく、または例えば、１つもしくは複数の、特に、１〜３個の置換基、例えば、ハロ、アルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、およびアルキルスルホニルなどで置換されてもよい。ヘテロアリール基の例として、チエニル、フリル、ピリジル、オキサゾリル、キノリル、イソキノリル、インドリル、トリアゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、イミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ピラジニル、ピリミジニル、チアゾリル、およびチアジアゾリルが挙げられる。
【００６６】
用語「Ｃ３〜８ヘテロシクロアルキル」は、酸素、窒素、および硫黄からなる群から選択される、１つまたは複数のヘテロ原子を含有する単環式の環系として定義される。「Ｃ３〜８ヘテロシクロアルキル」基は、環に結合したオキソ基（＝Ｏ）も含有することができる。「Ｃ３〜８ヘテロシクロアルキル」基の非限定例として、１，３−ジオキソラン、２−ピラゾリン、ピラゾリジン、ピロリジン、ピペラジン、ピロリン、２Ｈ−ピラン、４Ｈ−ピラン、モルホリン、チオホリン（ｔｈｉｏｐｈｏｌｉｎｅ）、ピペリジン、１，４−ジチアン、および１，４−ジオキサンが挙げられる。
【００６７】
用語「ヒドロキシ」は−ＯＨとして定義される。
【００６８】
用語「アルコキシ」−ＯＲとして定義され、式中、ＲはＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたはＣ２〜Ｃ８アルキニルであり、それぞれのアルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、場合により置換されている。
【００６９】
用語「アルコキシアルキル」は、水素がアルコキシ基によって置換されているアルキル基として定義される。用語「（アルキルチオ）アルキル」は、酸素原子ではなく硫黄原子が存在することを除いて、アルコキシアルキルと同様に定義される。
【００７０】
用語「ヒドロキシアルキル」は、アルキル基に付加したヒドロキシ基として定義される。
【００７１】
用語「アミノ」は、−ＮＨ２として定義され、用語「アルキルアミノ」は−ＮＲ２として定義され、式中、少なくとも１つのＲはアルキルであり、第２のＲはアルキルまたは水素である。
【００７２】
用語「アシルアミノ」は、ＲＣ（＝Ｏ）Ｎとして定義され、式中、Ｒはアルキルまたはアリールである。
【００７３】
用語「アルキルチオ」は、−ＳＲとして定義され、式中、Ｒはアルキルである。
【００７４】
用語「アルキルスルフィニル」は、Ｒ−ＳＯとして定義され、式中、Ｒはアルキルである。
【００７５】
用語「アルキルスルホニル」は、Ｒ−ＳＯ２として定義され、式中、Ｒはアルキルである。
【００７６】
用語「アミノ」は、−ＮＨ２として定義され、用語「アルキルアミノ」は、−ＮＲ２として定義され、式中、少なくとも１つのＲは、アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり、第２のＲは、アルキル、アルケニル、アルキニルまたは水素である。
【００７７】
用語「アシルアミノ」は、ＲＣ（＝Ｏ）Ｎとして定義され、式中、Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアリール、ヘテロアリール、またはヘテロシリル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｙｌ）である。
【００７８】
用語「ニトロ」は、−ＮＯ２として定義される。
【００７９】
用語「トリフルオロメチル」は、−ＣＦ３として定義される。
【００８０】
用語「トリフルオロメトキシ」は、−ＯＣＦ３として定義される。
【００８１】
用語「シアノ」は、−ＣＮとして定義される。
【００８２】
アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、置換が化学的に理にかなう程度に置換されていることが多い。一般的な置換基として、それだけに限らないが、ハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ、＝ＮＲ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ２、ＯＯＣＲ、ＣＯＲ、およびＮＯ２が挙げられ、式中、各Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アシル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、またはＣ５〜Ｃ１０ヘテロアリールであり、各Ｒは、ハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ’、＝ＮＲ’、ＯＲ’、ＮＲ’２、ＳＲ’、ＳＯ２Ｒ’、ＳＯ２ＮＲ’２、ＮＲ’ＳＯ２Ｒ’、ＮＲ’ＣＯＮＲ’２、ＮＲ’ＣＯＯＲ’、ＮＲ’ＣＯＲ’、ＣＮ、ＣＯＯＲ’、ＣＯＮＲ’２、ＯＯＣＲ’、ＣＯＲ’、およびＮＯ２で場合により置換されており、式中、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アシル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ６〜Ｃ１０アリールまたはＣ５〜Ｃ１０ヘテロアリールである。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基はまた、Ｃ１〜Ｃ８アシル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ６〜Ｃ１０アリールまたはＣ５〜Ｃ１０ヘテロアリールによって置換されてもよく、そのそれぞれは、特定の基について適切である置換基によって置換されてもよい。
【００８３】
アリール部分およびヘテロアリール部分は、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ５〜Ｃ１２アリール、Ｃ１〜Ｃ８アシル、およびこれらのヘテロ型（ｈｅｔｅｒｏｆｏｒｍ）を含めた様々な置換基で置換されてもよく、そのそれぞれは、それ自体さらに置換されてもよく、アリール部分およびヘテロアリール部分についての他の置換基として、ハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ２、ＯＯＣＲ、ＣＯＲ、およびＮＯ２が挙げられ、式中、各Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、Ｃ５〜Ｃ１０ヘテロアリール、Ｃ７〜Ｃ１２アリールアルキル、またはＣ６〜Ｃ１２ヘテロアリールアルキルであり、各Ｒは、アルキル基について上述したように場合により置換されている。アリールまたはヘテロアリール基上の置換基はもちろん、そのような置換基のそれぞれの型、または置換基のそれぞれの成分について適当である場合、本明細書に記載された基でさらに置換されてもよい。したがって、例えば、アリールアルキル置換基は、アリール基について一般的である場合、本明細書に記載された置換基で、アリール部分上で置換されてもよく、これは、アルキル基について一般的または適当である場合、本明細書に記載された置換基で、アルキル部分上でさらに置換されてもよい。
【００８４】
「ヘテロ型」は、本明細書で使用する場合、修飾されたアルキル、アルケニル、アリールなどを指し、Ｎ、ＯおよびＳから選択される、少なくとも１個のヘテロ原子が、記述されている炭化水素基中の少なくとも１個の炭素原子に取って代わる。
【００８５】
式（Ｉ）の化合物の好適な実施形態では、Ｘが、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ（ＣＨ３）、ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）、およびＣ（ＣＨ３）２からなる群から選択される。さらなる好適な実施形態では、Ｙは、なし（すなわち、Ｙがなく、したがってこれはＸとＡの間の結合を表す）、Ｓ、およびＮＨからなる群から選択される。
【００８６】
ＸがＣＨ（ＣＨ３）またはＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）であるなど、Ｘが不斉炭素を含有する場合、ＸのＳ鏡像異性体を使用することが好ましいことが多い。他の実施形態では、Ｒ鏡像異性体を使用することができる。
【００８７】
いくつかの実施形態では、ＸはＣＨＲｃまたはＣＨＲｃＣＨＲｃであり、ＹはＮＲｃであり、Ｒｃ基のうちの２つは環化して環を形成する。そのような実施形態においてＸがキラルである場合、ある特定の実施形態では、Ｓ鏡像異性体が好適であることが多く、いくつかの実施形態では、Ｒ鏡像異性体が好適である。いくつかのそのような実施形態では、−Ｘ−Ｙ−が一緒になって、以下のような環を表すことができる。
【００８８】
【化４】
2011503193.tif 000005
Ａ環は、単環式であっても二環式であってもよい。単環式のＡ環系は芳香族である。二環式のＡ環系は、少なくとも１つの芳香環を含有するが、両方の環が芳香族であってもよい。Ａ環系の例として、それだけに限らないが、イミダゾリル、ピラゾリル、１，２，３−トリアゾリル、ピリジジニル、ピリミジニル、ピラジニル、１，３，５−トリアジニル、プリニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、１，８−ナフチリジニル、プテリジニル、１Ｈ−インダゾリル、およびベンゾイミダゾリルが挙げられる。Ａのいくつかの好適な実施形態は、少なくとも１つのピリミジン環を含み、例えば、これらには、プリンおよびプテリジン環系、ならびにイミダゾールピリミジン、ピラゾロピリミジン、およびピロロピリミジンが含まれる。
【００８９】
構造式（Ｉ）のいくつかの好適な化合物では、Ａは、以下のものからなる基から選択される、場合により置換された環系によって表される。
【００９０】
【化５】
2011503193.tif 000006
【００９１】
【化６】
2011503193.tif 000007
Ａ環系は、Ｎ（Ｒｅ）２、ハロ、Ｃ１〜３ハロアルキル、Ｃ１〜３アルキル、Ｓ（Ｃ１〜３アルキル）、およびＯＲｅからなる群から選択される、１〜３個、好ましくは１個または２個の置換基で場合により置換されてもよい。特定の置換基として、それだけに限らないが、ＮＨ２、ＮＨ（ＣＨ３）、Ｎ（ＣＨ３）２、ＮＨＣＨ２Ｃ６Ｈ５、ＮＨ（Ｃ２Ｈ５）、Ｃｌ、Ｆ、ＣＨ３、ＣＦ３、ＳＣＨ３、およびＯＨが挙げられる。
【００９２】
特に好適なＡ環には以下のものが含まれる
【００９３】
【化７】
2011503193.tif 000008
以下の環系について、
【００９４】
【化８】
2011503193.tif 000009
好適な実施形態では、ｎは０である。好適な環系の例として、それだけに限らないが、以下のものが挙げられる。
【００９５】
【化９】
2011503193.tif 000010
【００９６】
【化１０】
2011503193.tif 000011
環系は非置換であり（すなわち、ＲａおよびＲｂはヒドロである）、またはこれらは、アリールもしくはヘテロアリール基について適当な置換基、好ましくはＣ１〜６アルキル、ハロ、Ｃ１〜６アルコキシ、ＣＦ３、Ｃ３〜８シクロアルキル、アリール、もしくはヘテロアリールのうちの１つもしくは複数で置換されてもよい。Ｖ、Ｗ、およびＺを含有する環が置換されている場合、１つまたは２つの置換基によって置換されていることが多い。いくつかの実施形態では、置換基は、Ｖによって表される原子上にあり、いくつかの実施形態では、これは、Ｗによって表される原子上にある。
【００９７】
好適な実施形態では、式（Ｉ）中のＲ１は、場合により置換されたＣ１〜６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ３〜８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１〜４アルキレンＣ３〜８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１〜４アルキレンシクロアルキル、およびＣ１〜４アルキレンアリールからなる群から選択される。特定のＲ１基として、それだけに限らないが、場合により置換された形態の以下のものが挙げられる。
【００９８】
【化１１】
2011503193.tif 000012
【００９９】
【化１２】
2011503193.tif 000013
Ｒ１基は、１〜３個の置換基、例えば、ハロ、ＯＲｅ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、アリール、Ｃ３〜８ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、Ｃ１〜４アルキレンＯＲｅ、ＣＦ３、ＮＯ２、Ｎ（Ｒｅ）２、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｅ、ＳＯ２Ｎ（Ｒｅ）２、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ、Ｃ１〜４アルキレンＮ（Ｒｅ）２、ＯＣ１〜４ペルフルオロアルキル、オキソ、およびＣＨＯで置換されてもよい。Ｒ１基についての具体的な置換基として、それだけに限らないが、Ｃｌ、Ｆ、ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、（ＣＨ２）３Ｎ（ＣＨ３）２、ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、Ｃ６Ｈ５、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＯ２Ｈが挙げられる。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、フェニル基、ヘテロアリール基、またはＣ３〜８シクロアルキルまたはＣ３〜８ヘテロシクロアルキルであることが好ましく、そのそれぞれは、非置換であるか、最大３個の置換基で置換されている。
【０１００】
本明細書で使用する場合、ピリミジン−４−オン環状構造は、５，６−縮合二環式または６，６−縮合二環式の系とすることができ、環状構造の以下の番号付けが便宜上使用される。
【０１０１】
【化１３】
2011503193.tif 000014
プリン環状構造が、式（Ｉ）中の基Ａとして場合によって存在し、便宜上、その環状構造の番号付けは以下の通りである。
【０１０２】
【化１４】
2011503193.tif 000015
Ａがプリンを表す場合、これは、プリンの位置９でＹに場合により結合しており、これは、プリンの位置６で場合により結合している。Ａが、プリン環の位置６でＹに結合しているとき、Ｙは、Ｓ、ＮＨまたはＮＲｃを表すことが多く、プリン基は、例えば、アミンによって位置９でさらに置換されていることが多い。
【０１０３】
生物系は、化合物の絶対立体化学的性質に対して非常に感度のよい活性を示すことができることが一般に認められている。Ｅ．Ｊ．  Ａｒｉｅｎｓ、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、６巻：４５１〜４６６頁（１９８６年）；Ｅ．Ｊ．  Ａｒｉｅｎｓ、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、７巻：３６７〜３８７頁（１９８７年）；  Ｋ．Ｗ．  Ｆｏｗｌｅｒ、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｓｔｅｒｅｏｉｓｏｍｅｒｓ：  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｒｕｇｓ、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｄｏｎａｌｄ  Ｐ．  Ｓｍｉｔｈ編、３５〜６３頁（１９８９年）；およびＳ．Ｃ．  Ｓｔｉｎｓｏｎ、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｎｅｗｓ、７５巻：３８〜７０頁（１９９７年）を参照されたい。
【０１０４】
したがって、本発明は、不斉中心を有する構造式（Ｉ）の化合物のすべての可能な立体異性体および幾何異性体を含み、ラセミ化合物だけでなく、光学的に活性な異性体も同様に含む。
【０１０５】
構造式（Ｉ）の化合物が、単一の鏡像異性体として望まれる場合、これは、最終生成物の分割、または異性体的に（ｉｓｏｍｅｒｉｃａｌｌｙ）純粋な出発材料からの、もしくはキラルな補助試薬を使用した立体特異的な合成によって得ることができる。例えば、Ｚ．  Ｍａら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ、８巻（６号）、８８３〜８８８頁（１９９７年）を参照されたい。最終生成物、中間体、または出発材料の分割は、当技術分野で公知である任意の適当な方法によって実現することができる。特定の立体異性体は、ＰＩ３Ｋδのキナーゼ活性を阻害する優れた能力を示す。
【０１０６】
用語「プロドラッグ」は、本明細書で使用する場合、例えば、加水分解によって、インビボで急速に変換されて構造式（Ｉ）または（ＩＩ）を有する化合物になる化合物を指す。プロドラッグの設計は、一般に、Ｈａｒｄｍａら（編）、Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、９版、１１〜１６頁（１９９６年）に論じられている。プロドラッグの徹底的な考察は、Ｈｉｇｕｃｈｉら、Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、１４巻、ＡＳＣＤ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ、およびＲｏｃｈｅ（編）、「Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ」、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ（１９８７）に提供されている。
【０１０７】
簡単に言えば、薬物の投与の後に、体からの排除、または何らかの生体内変換が続き、それによって薬物の生物活性が低減または排除される。あるいは、生体内変換プロセスにより、最初に投与された薬物と比較してそれ自体より活性であるか、等しく活性である代謝的な副生成物が導かれる場合がある。これらの生体内変換プロセスの理解が増すことにより、いわゆる「プロドラッグ」の設計が可能になり、これは、生体内変換の後、その変化した状態においてより生理的に活性となる。したがって、プロドラッグは、生物学的に活性な代謝産物に変換される薬理学的に不活性な化合物を包含する。
【０１０８】
例えば、プロドラッグは、例えば、エステルまたはアミド連結の加水分解を通じて薬理学的に活性な形態に変換され、それによって、得られる生成物上に官能基を導入または露出することができる。プロドラッグは、内因性化合物と反応することによって、化合物の薬理学的特性をさらに増強する、例えば循環半減期を増加させる水溶性コンジュゲートを形成するように設計することができる。あるいは、プロドラッグは、例えば、グルクロン酸、スルフェート、グルタチオン、アミノ酸、またはアセテートと、官能基上で共有結合性修飾を起こすように設計することができる。得られたコンジュゲートは、不活化し、尿中に排泄するか、親化合物より強力にすることができる。高分子量コンジュゲートはまた、胆汁中に排泄し、酵素切断を施し、循環中に復帰させ、それによって最初に投与された化合物の生物学的半減期を有効に増加させることができる。
【０１０９】
ＰＩ３Ｋδ活性の負の調節因子を同定する方法
ＰＩ３Ｋδタンパク質、ならびに生物活性を有するその断片を、任意の様々な薬物スクリーニング技法で、想定される負の調節因子化合物をスクリーニングするのに使用することができる。ＰＩ３Ｋδの負の調節因子は、ＰＩ３Ｋδの、その生物学的機能のいずれかを実施する能力を縮小し、または無効にする化合物である。そのような化合物の例は、ＰＩ３Ｋδポリペプチドのホスファチジルイノシトールをリン酸化し、または細胞内で適切な構造を標的にする能力を減少させる作用剤である。ＰＩ３Ｋδ活性を負に調節する化合物の選択性は、ＰＩ３Ｋδに対するその活性を、他のタンパク質に対するその活性と比較することによって評価することができる。選択的な負の調節因子には、例えば、ＰＩ３Ｋδポリペプチドに特異的に結合する抗体および他のタンパク質またはペプチド、ＰＩ３Ｋδポリペプチドに特異的に結合するオリゴヌクレオチド、ならびにＰＩ３Ｋδポリペプチドと特異的に相互作用する他の非ペプチド化合物（例えば、単離された有機分子または合成有機分子）が含まれる。負の調節因子には、上述した通りであるが、ＰＩ３Ｋδポリペプチドの特定の結合パートナーと相互作用する化合物も含まれる。
【０１１０】
ＰＩ３Ｋδの選択的な負の調節因子の開発に現在好適な標的として、例えば、以下のものが挙げられる：
（１）細胞内で他のタンパク質に接触し、かつ／またはＰＩ３Ｋδを局在化させるＰＩ３Ｋδポリペプチドの細胞質領域；
（２）特定の結合パートナーを結合するＰＩ３Ｋδポリペプチドの領域；
（３）基質を結合するＰＩ３Ｋδポリペプチドの領域；
（４）調節シグナルに対して活性部位と直接相互作用することができるか、またはできないＰＩ３Ｋδポリペプチドのアロステリック調節部位；
（５）多量体化を媒介するＰＩ３Ｋδポリペプチドの領域。
【０１１１】
例えば、モジュレーターの開発のための１つの対象は、ｐ１１０δ部分の活性化および／または細胞内局在化に関与することができる、ｐ８５とｐ１１０δの同定された調節相互作用である。さらなる他の選択的なモジュレーターには、特定の調節ヌクレオチド配列またはＰＩ３Ｋδをコードするヌクレオチド配列を認識するものが含まれる。ＰＩ３Ｋδ活性のモジュレーターは、異常なＰＩ３Ｋδ活性が関与する広範囲の疾患および生理的状態の治療において、治療上有効となり得る。
【０１１２】
したがって、本発明は、ＰＩ３Ｋδポリペプチドの阻害剤としての試験化合物の効力を特徴づける方法であって、（ａ）試験化合物の存在下でＰＩ３Ｋδポリペプチドの活性を測定するステップと；（ｂ）試験化合物の存在下でのＰＩ３Ｋδポリペプチドの活性を、等価な量の参照化合物（例えば、本発明のＰＩ３Ｋδ阻害剤化合物）の存在下でのＰＩ３Ｋδポリペプチドの活性と比較するステップとを含み、参照物の存在下より、試験化合物の存在下でのＰＩ３Ｋδポリペプチドの活性が低いことは、試験化合物が、参照化合物より強力な阻害剤であることを示し、参照物の存在下より、試験化合物の存在下でのＰＩ３Ｋδポリペプチドの活性が高いことは、試験化合物が、参照化合物より作用の弱い阻害剤であることを示す方法を提供する。
【０１１３】
本発明は、ＰＩ３Ｋδポリペプチドの阻害剤としての試験化合物の効力を特徴づける方法であって、（ａ）参照阻害率（ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ  ｏｆ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）によって、ＰＩ３Ｋδポリペプチドの活性を阻害する対照化合物（例えば、本発明のＰＩ３Ｋδ阻害剤化合物）の量を求め、それによって対照化合物についての参照阻害量（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ａｍｏｕｎｔ）を定義するステップと；（ｂ）参照阻害率によって、ＰＩ３Ｋδポリペプチドの活性を阻害する試験化合物の量を求め、それによって試験化合物についての参照阻害量を定義するステップと；（ｃ）試験化合物についての参照阻害量を、対象化合物についての参照阻害量と比較するステップとを含み、対照化合物より、試験化合物についての参照阻害量が低いことは、試験化合物が、対照化合物より強力な阻害剤であることを示し、対照化合物より、試験化合物についての参照阻害量が高いことは、試験化合物が、対象化合物より作用の弱い阻害剤であることを示す方法をさらに提供する。一態様では、この方法は、ＰＩ３Ｋδポリペプチドの活性を５０％、６０％、７０％、または８０％阻害する化合物の量である参照阻害量を使用する。別の態様では、この方法は、ＰＩ３Ｋδポリペプチドの活性を９０％、９５％、または９９％阻害する化合物の量である参照阻害量を使用する。これらの方法は、インビトロ生化学アッセイ法、インビトロの細胞に基づくアッセイ法、またはインビボアッセイ法において化合物の参照阻害量を求めるステップを含む。
【０１１４】
本発明は、ＰＩ３Ｋδ活性の負の調節因子を同定する方法であって、（ｉ）試験化合物の存在下および非存在下でＰＩ３Ｋδポリペプチドの活性を測定するステップと、（ｉｉ）ＰＩ３Ｋδ活性を減少させ、ＰＩ３Ｋδへの結合を、本発明の化合物と競合する試験化合物を負の調節因子として同定するステップとを含む方法をさらに提供する。さらに、本発明は、ＰＩ３Ｋδ活性を阻害する化合物を同定するための方法であって、（ｉ）ＰＩ３Ｋδポリペプチドを、試験化合物の存在下および非存在下で本発明の化合物と接触させるステップと、（ｉｉ）試験化合物をＰＩ３Ｋδ活性の負の調節因子として同定するステップとを含み、この化合物は、ＰＩ３Ｋδへの結合を本発明の化合物と競合する方法を提供する。したがって、本発明は、ＰＩ３Ｋδ活性の候補の負の調節因子をスクリーニングし、かつ／または候補のそのような負の調節因子の作用機序を確認するための方法を提供する。そのような方法は、他のＰＩ３Ｋアイソフォームに対して並行して使用することによって、アイソフォームすべてにわたって、および／または本発明の化合物と比べて、試験化合物の比較上の活性を確立することができる。
【０１１５】
これらの方法では、ＰＩ３Ｋδポリペプチドは、キナーゼ活性を示すｐ１１０δの断片、すなわち、ｐ１１０δの触媒部位を含む断片とすることができる。あるいは、ＰＩ３Ｋδポリペプチドは、ｐ８５のｐ１１０δ結合ドメイン由来の断片とすることができ、ＰＩ３Ｋδのアロステリックモジュレーターを同定するための方法を提供する。この方法は、内因的にまたは外因的に、ＰＩ３Ｋδまたはそのサブユニットを発現する細胞を発現する細胞中で使用することができる。したがって、そのような方法において使用されるポリペプチドは、溶液中で遊離していても、固体支持体に付着しても、細胞表面上にディスプレイされるように修飾されていても、または細胞内に位置していてもよい。その場合、活性の調節、またはＰＩ３Ｋδポリペプチドと試験されている作用剤との間の結合複合体の形成は測定することができる。
【０１１６】
ヒトＰＩ３Ｋポリペプチドは、受容体−リガンド相互作用を調査するためのメラニン保有細胞アッセイシステム、酵母に基づくアッセイシステム、および哺乳動物細胞発現システムを含めた、当技術分野で公知であり、実践されている方法による、生化学的、または細胞に基づくハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）アッセイ法に適用できる。概説については、Ｊａｙａｗｉｃｋｒｅｍｅら、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、８巻：６２９〜３４頁（１９９７年）を参照されたい。自動ＨＴＳアッセイ法および小型化ＨＴＳアッセイ法も例えば、Ｈｏｕｓｔｏｎら、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、８巻：７３４〜４０頁（１９９７年）に記載されているように包含される。
【０１１７】
そのようなＨＴＳアッセイ法は、化合物のライブラリーをスクリーニングすることによって、所望の特性を示す特定の化合物を同定するのに使用される。化学的ライブラリー、天然産物ライブラリー、およびランダムな、または設計されたオリゴペプチド、オリゴヌクレオチド、または他の有機化合物を含むコンビナトリアルライブラリーを含めた、化合物の任意のライブラリーを使用することができる。化学的ライブラリーは、公知の化合物、公知の化合物の独自の構造的類似体、または天然産物のスクリーニングから同定された化合物を含むことができる。
【０１１８】
天然産物ライブラリーは、天然源、一般に、微生物、動物、植物、または海洋生物から単離された物質のコレクションである。天然産物は、微生物の発酵、その後の発酵ブロスの単離および抽出によって、あるいは微生物または組織（植物もしくは動物）自体からの直接抽出によって、その供給源から単離される。天然産物ライブラリーは、ポリケチド、非リボソームペプチド、およびそのバリアント（天然に存在しないバリアントを含む）を含む。概説については、Ｃａｎｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８２巻：６３〜６８頁（１９９８年）を参照されたい。
【０１１９】
コンビナトリアルライブラリーは、多数の関連化合物、例えばペプチド、オリゴヌクレオチド、または混合物としての他の有機化合物などからなる。そのような化合物は、従来の自動合成プロトコール、ＰＣＲ、クローニング、または独自の合成方法によって設計および調製するのに、相対的に簡単明瞭である。ペプチドおよびオリゴヌクレオチドコンビナトリアルライブラリーが特に興味深い。
【０１２０】
対象とするさらに他のライブラリーとして、ペプチド、タンパク質、ペプチド模倣体（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）、マルチパラレル（ｍｕｌｔｉｐａｒａｌｌｅｌ）合成コレクション、組換え、およびポリペプチドライブラリーが挙げられる。コンビナトリアル化学の概説、およびそれによって作成されたライブラリーについては、Ｍｙｅｒｓ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、８巻：７０１〜０７頁（１９９７年）を参照されたい。
【０１２１】
ＰＩ３Ｋδ活性の阻害剤の治療用途
本発明は、治療的または予防的にＰＩ３Ｋδ活性を選択的または特異的に阻害するための方法を提供する。この方法は、ＰＩ３Ｋδ活性の選択的または特異的な阻害剤を、そのために有効な量で投与するステップを含む。この方法は、症状または病理が、ＰＩ３Ｋδの発現または活性によって媒介される任意の状態であるか、この状態を受けやすくなり得るヒトまたは動物を治療するのに使用することができる。
【０１２２】
「治療すること」は、本明細書で使用する場合、障害にかかりやすい場合があるが、まだ障害を有すると診断されていない動物において障害が起こることを防止すること；障害を阻害すること、すなわち、その発症を抑止すること；障害を軽減すること、すなわち、その後退を引き起こすこと；または障害を回復させること、すなわち、障害に関連する症状の重症度を低減することを指す。「障害」は、限定することなく、医学的障害、疾患、病状、症候群などを包含するものとする。
【０１２３】
本発明の方法は、動物対象、好ましくは哺乳動物、より好ましくは霊長類、およびさらにより好ましくはヒトを治療する様々な様式を包含する。治療することができる哺乳動物の中では、例えば、イヌおよびネコを含めたコンパニオンアニマル（ペット）；ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、およびヤギを含めた家畜；ラット、マウス、ウサギ、モルモット、および非ヒト霊長類を含めた実験動物；ならびに動物園検体である。非哺乳動物には、例えば、トリ、魚、爬虫類、および両生類が含まれる。
【０１２４】
本発明の方法は、炎症性障害を有するか、炎症性障害を受けやすくなり得る対象を、治療的または予防的に処置するのに使用することができる。本発明の一態様は、炎症過程の局面を媒介することにおけるＰＩ３Ｋδの関与に由来する。いずれの理論によっても束縛されることを意図することなく、炎症は、白血球（例えば、好中球またはリンパ球）活性化および走化性移動によって一般に媒介されるプロセスを伴うため、ならびにＰＩ３Ｋδは、そのような現象を媒介することができるため、ＰＩ３Ｋδのアンタゴニストは、炎症と関連する傷害を抑制するのに使用することができると理論化される。
【０１２５】
「炎症性障害」は、本明細書で使用する場合、過剰な、または未制御の炎症反応が、過剰な炎症症状、宿主組織損傷、または組織機能の喪失に導く任意の疾患、障害、または症候群を指す。「炎症性障害」は、白血球の流入および／または好中球走化性によって媒介される病的な状態も指す。
【０１２６】
「炎症」は、本明細書で使用する場合、傷害因子および傷害組織の両方を破壊、希釈、囲繞（隔離）するのに役割を果たす、組織の傷害または破壊によって誘発される局部的、保護的応答を指す。炎症は、白血球の流入および／または好中球走化性と関連する。炎症は、病原体およびウイルスの感染、ならびに、非感染性手段、例えば、心筋梗塞または発作後の外傷または再灌流、外来抗原に対する免疫応答、および自己免疫応答などから生じ得る。したがって、本発明に適用できる炎症性傷害は、特異的な防御系の反応、ならびに非特異的な防御系の反応に関連する傷害を包含する。
【０１２７】
本明細書で使用する場合、用語「特異的な防御系」は、特異的抗原の存在に反応する免疫系の構成要素を指す。特異的な防御系の応答から生じる炎症の例には、外来抗原に対する古典的な応答、自己免疫疾患、およびＴ細胞によって媒介される遅延型過敏応答が含まれる。慢性炎症疾患、固体移植組織および固体移植器官、例えば、腎臓移植および骨髄移植の拒絶反応、ならびに移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）は、特異的な防御系の炎症反応のさらなる例である。
【０１２８】
用語「非特異的な防御系」は、本明細書で使用する場合、免疫記憶ができない白血球（例えば、顆粒球、およびマクロファージ）によって媒介される炎症性障害を指す。非特異的な防御系の反応から少なくともある程度生じる炎症の例として、成人（急性）呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）または多臓器傷害症候群などの状態に関連する炎症；再灌流傷害；急性糸球体腎炎；反応性関節炎；急性炎症性成分を有する皮膚疾患；発作などの急性化膿性髄膜炎または他の中枢神経系炎症性障害；熱傷；炎症性腸疾患；顆粒球輸血関連症候群；およびサイトカイン誘発性毒性が挙げられる。
【０１２９】
「自己免疫疾患」は、本明細書で使用する場合、組織傷害が、体自体の成分に対する体液性または細胞媒介性応答に関連する、任意の群の障害を指す。「アレルギー性疾患」は、本明細書で使用する場合、アレルギーから生じる任意の症状、組織損傷、または組織機能の喪失を指す。「関節炎疾患」は、本明細書で使用する場合、様々な病因に起因する関節の炎症性病変を特徴とする任意の疾患を指す。「皮膚炎」は、本明細書で使用する場合、様々な病因に起因する皮膚の炎症を特徴とする皮膚疾患の任意の大きいファミリーを指す。「移植片拒絶」は、本明細書で使用する場合、移植組織および周囲組織の機能の喪失、疼痛、腫張、白血球増多症、および血小板減少症を特徴とする、臓器または細胞（例えば、骨髄）などの移植組織に対して向けられた任意の免疫反応を指す。
【０１３０】
本発明の治療法には、炎症細胞活性化と関連する障害を治療するための方法が含まれる。「炎症細胞活性化」は、炎症細胞（それだけに限らないが、単球、マクロファージ、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、顆粒球（すなわち、多形核白血球、例えば好中球、好塩基球、および好酸球など）、肥満細胞、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、および内皮細胞を含む）における、増殖性細胞応答の刺激（それだけに限らないが、サイトカイン、抗原、もしくは自己抗体を含む）、可溶性メディエーター（それだけに限らないが、サイトカイン、酸素ラジカル、酵素、プロスタノイド、もしくは血管作用性アミンを含む）の産生、または新規もしくは増加した数のメディエーター（それだけに限らないが、主要な組織適合性抗原もしくは細胞接着分子を含む）の細胞表面発現による誘発を指す。これらの細胞におけるこれらの細胞型の１つまたは組合せの活性化は、炎症性障害の開始、永続化、または増悪の一因となり得ることが当業者によって理解されるであろう。
【０１３１】
本発明の化合物は、好中球によるスーパーオキシド放出を阻害することが見出された。スーパーオキシドは、細胞殺害の機構として、感染のシグナルを含めた任意の様々な刺激に応答して、好中球によって放出される。例えば、スーパーオキシド放出は、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）によって誘発されることが公知であり、この因子は、リポ多糖（ＬＰＳ）などの細菌性細胞壁成分と接触すると、マクロファージ、肥満細胞、およびリンパ球によって放出される。ＴＮＦαは、炎症過程の極めて強力で無差別のアクチベーターであり、好中球および様々な他の細胞型の活性化、白血球／内皮細胞接着の誘発、発熱、ＭＨＣクラスＩ産生の増強、および血管新生の刺激に関与している。あるいは、スーパーオキシド放出は、ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ（ｆＭＬＰ）、またはホルミル化メチオニンによってＮ末端でブロックされた他のペプチドによって刺激することができる。そのようなペプチドは、通常真核生物において見出されないが、基本的に細菌の特性であり、免疫系に対して細菌の存在を知らせる。ｆＭＬＰ受容体を発現する白血球、例えば、好中球およびマクロファージは、刺激されることによって、感染の部位に向けて、これらのペプチドの勾配（ｇｒａｄｉｅｎｔ）を上って遊走する（すなわち、走化性）。本明細書で実証されるように、本発明の化合物は、ＴＮＦαまたはｆＭＬＰに応答した好中球による、刺激性スーパーオキシド放出を阻害する。刺激性エキソサイトーシスおよび有向走化性移動（ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ）を含めた好中球の他の機能も、本発明のＰＩ３Ｋδ阻害剤によって阻害されることが示された。したがって、本発明の化合物は、これらの好中球機能のいずれか、またはすべてによって媒介される、炎症性障害などの障害を治療することにおいて有用であることを予期することができる。
【０１３２】
本発明は、関節炎疾患、例えば、関節リウマチ、単関節関節炎、骨関節炎、痛風関節炎、脊椎炎など；ベーチェット病；敗血症（ｓｅｐｓｉｓ），敗血症ショック、内毒素ショック、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、および毒素ショック症候群；敗血症（ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、外傷、または出血に続発する多臓器傷害症候群；眼障害、例えば、アレルギー性結膜炎、春季結膜炎、ブドウ膜炎、および甲状腺関連眼障害など；好酸球性肉芽腫；肺または呼吸器の障害、例えば、喘息、慢性気管支炎、アレルギー性鼻炎、ＡＲＤＳ、慢性肺炎症疾患（例えば、慢性閉塞性肺疾患）、珪肺症、肺サルコイドーシス、胸膜炎、肺胞炎、血管炎、気腫、肺炎、気管支拡張症、および肺酸素毒性など；心筋、脳、または四肢の再灌流傷害；線維症、例えば、嚢胞性線維症など；ケロイド形成または瘢痕組織形成；アテローム性動脈硬化症；自己免疫疾患、例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎、多発性硬化症、一部の形態の糖尿病、およびレイノー症候群など；移植片拒絶障害、例えば、ＧＶＨＤおよび同種移植拒絶反応など；慢性の糸球体腎炎；炎症性腸疾患、例えば、慢性炎症性腸疾患（ＣＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、および壊死性全腸炎など；炎症性皮膚疾患、例えば、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、またはじん麻疹など；感染による発熱および筋肉痛；中枢神経系または末梢神経系炎症性障害、例えば、髄膜炎、脳炎、および軽微な外傷による脳または脊髄損傷など；シェーグレン症候群；白血球血管外遊出を伴う疾患；アルコール性肝炎；細菌性肺炎；抗原抗体複合体媒介性疾患；循環血液量減少性ショック；Ｉ型糖尿病；急性および遅延型過敏症；白血球悪液質および転移による疾患状態；熱傷；顆粒球輸血関連症候群；ならびにサイトカイン誘発性毒性などの疾患を治療する方法を可能にする。
【０１３３】
この方法は、再灌流傷害、すなわち、組織または臓器が、虚血の期間の後に再灌流を経験する状態から生じる傷害であるか、この傷害を受けやすくなり得る対象を治療することにおいて有用性を有することができる。用語「虚血」は、動脈血の流入の閉塞による局所組織貧血を指す。一過性虚血の後の再灌流は、患部における血管の内皮を通じた好中球の活性化および遊出を特徴的にもたらす。活性化好中球の蓄積により、次に反応性の酸素代謝産物が生成され、これは、関わった組織または臓器のコンポーネントに損傷を与える。この「再灌流傷害」の現象は、血管発作（全体的虚血および局所的虚血を含む）、出血性ショック、心筋虚血または心筋梗塞、臓器移植、ならびに脳血管れん縮などの状態に一般に関連する。例えば、再灌流傷害は、心臓バイパス処置の終結時、または心臓が一旦血液を受け入れるのを妨げられ、再灌流し始める場合の心停止の間に起こる。ＰＩ３Ｋδ活性の阻害によりそのような状態における再灌流傷害の量が低減すると予期される。
【０１３４】
神経系に関して、全体的虚血は、脳全体への血流がある期間止まるとき起こる。全体的虚血は、心停止から生じ得る。局所的虚血は、脳の一部が、その通常の血液供給を奪われるとき起こる。局所的虚血は、脳血管の血栓塞栓性（ｔｈｒｏｍｂｏｅｍｂｏｌｙｔｉｃ）閉塞、外傷性頭部損傷、浮腫、または脳腫瘍から生じる場合がある。一過性であっても、全体的および局所的虚血の両方は、広範な神経細胞損傷を引き起こす場合がある。神経組織損傷は、虚血の開始後数時間、または数日さえかけて起こるが、一部の永続的な神経組織損傷は、脳への血流が停止して最初の数分後に発生し得る。
【０１３５】
虚血は、アテローム性動脈硬化症、血栓、またはれん縮の結果として冠動脈がふさがれた、心筋梗塞および他の心血管障害中の心臓においても起こり得る。したがって、本発明は、哺乳動物において、心臓組織損傷、特に、心虚血から生じ、または再灌流傷害によって引き起こされる損傷を治療するのに有用であると考えられる。
【０１３６】
別の態様では、本発明の選択的なＰＩ３Ｋδ阻害剤は、骨の疾患、特に、破骨細胞機能が異常であるか、望ましくない疾患を治療する方法において使用することができる。以下に示すように、本発明の化合物は、破骨細胞機能をインビトロで阻害する。したがって、そのような化合物および他のＰＩ３Ｋδ選択的阻害剤を使用することは、骨粗鬆症、パジェット病、および関連した骨吸収障害を治療することにおいて価値のあることになり得る。
【０１３７】
さらなる態様では、本発明は、造血起源の癌細胞、好ましくはリンパ系起源の癌細胞、より好ましくはＢリンパ球またはＢリンパ球前駆体に関連し、または由来する癌細胞の成長または増殖を阻害するために、ＰＩ３Ｋδ阻害性化合物を使用する方法を含む。本発明の方法を使用した治療に適用できる癌として、限定することなく、リンパ腫、例えば、リンパ系組織および細網内皮性組織の悪性新生物、例えば、バーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ球性リンパ腫など；多発性骨髄腫；白血病、例えば、リンパ球性白血病、慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ））白血病などが含まれる。好適な実施形態では、本ＰＩ３Ｋδ阻害性化合物は、慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ））白血病細胞の成長または増殖を阻害または制御するのに使用することができる。
【０１３８】
別の態様では、本発明は、好塩基球および／または肥満細胞の機能を抑制し、それによって過剰であるか、望ましくない好塩基球および／または肥満細胞活性を特徴とする疾患または障害の治療を可能にする方法を含む。この方法によれば、本化合物は、好塩基球および／または肥満細胞におけるＰＩ３Ｋδの発現または活性を選択的に阻害するのに使用することができる。この方法は、好塩基球および／または肥満細胞による刺激性ヒスタミン放出を阻害するのに十分な量でＰＩ３Ｋδ阻害剤を使用することが好ましい。したがって、本選択的なＰＩ３Ｋδ阻害剤を使用することは、ヒスタミン放出を特徴とする疾患、すなわち、障害、例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、ＡＲＤＳ、気腫、および関連した障害などを含めたアレルギー性障害を治療することにおいて価値のあることになり得る。
【０１３９】
ＰＩ３Ｋδ活性の阻害剤の医薬組成物
本発明の化合物は、純粋の化学物質として投与することができるが、医薬組成物または製剤の形態で化合物を投与することが一般的であり、好ましい。したがって、本発明は、ＰＩ３Ｋδ活性のモジュレーターとして活性である化学的または生物学的化合物（「作用剤」）、および生体適合性の医薬担体、補助剤、またはビヒクルを含む医薬組成物も提供する。この組成物は、唯一の活性部分として、または他の作用剤と組み合わせた作用剤、例えば、賦形剤（複数も）または他の薬学的に許容できる担体と混合したオリゴ−もしくはポリヌクレオチド、オリゴ−もしくはポリペプチド、薬物、またはホルモンなどを含むことができる。担体および他の成分は、製剤の他の成分と適合性であり、そのレシピエントに有害でない場合、薬学的に許容できるとみなすことができる。
【０１４０】
医薬組成物の製剤および投与のための技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ，  Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９０年に見出すことができる。本発明の医薬組成物は、任意の従来方法、例えば、混合、溶解、顆粒化、糖衣丸製造、ゲル状化、乳化、カプセル化、封入、溶融スピニング、噴霧乾燥、または凍結乾燥プロセスを使用して製造することができる。最適な医薬製剤は、投与経路および所望の投与量に応じて当業者によって決定することができる。そのような製剤は、投与される作用剤の物理的状態、安定性、インビボ放出速度、およびインビボクリアランス速度に影響し得る。治療されている条件に応じて、これらの医薬組成物は、全身的または局所的に処方および投与することができる。
【０１４１】
医薬組成物は、適当な薬学的に許容できる担体を含有するように製剤化され、場合により、活性化合物を加工して薬学的に使用することができる製剤にするのを促進する賦形剤および助剤を含むことができる。投与様式により、一般に担体の性質が決まる。例えば、非経口投与用製剤は、水溶性形態での活性化合物の水溶液を含むことができる。非経口投与に適した担体は、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、および他の生理的に適合性の溶液の中から選択することができる。非経口投与に好適な担体は、生理的に適合性の緩衝液、例えば、ハンクス液、リンガー液、または生理的緩衝食塩水などである。組織または細胞投与については、浸透される特定の障壁に適切な浸透剤が製剤中に使用される。そのような浸透剤は、一般に当技術分野において公知である。タンパク質を含む製剤については、製剤は、安定化物質、例えば、ポリオール（例えば、スクロース）および／または界面活性剤（例えば、非イオン性界面活性剤）などを含むことができる。
【０１４２】
あるいは、非経口用途のための製剤は、適切な油性注入懸濁液として調製された、活性化合物の分散系または懸濁液を含むことができる。適当な親油性溶媒またはビヒクルとして、ゴマ油などの脂肪油、および合成の脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルもしくはトリグリセリドなど、またはリポソームが挙げられる。水性注入懸濁液は、懸濁液の粘度を増大させる物質、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、またはデキストランなどを含有することができる。場合により、懸濁液はまた、化合物の溶解度を増大させる適当な安定剤または作用剤を含有することによって、非常に濃縮された溶液の調製を可能にすることができる。活性作用剤のｐＨ感受性の可溶化および／または徐放をもたらす水性ポリマー、例えば、Ｒｏｈｍ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｉｎｃ．（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）から入手可能なＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）シリーズなどのメタクリル酸ポリマーも、コーティングまたはマトリックス構造として使用することができる。エマルジョン、例えば、水中油型および油中水型分散系も使用し、乳化剤または分散剤（表面活性物質；界面活性剤）によって場合により安定化することができる。懸濁液は、懸濁剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレン（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｌｙｅｎｅ）ソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、トラガカントゴム、ならびにこれらの混合物などを含有することができる。
【０１４３】
活性作用剤を含有するリポソームも、非経口投与のために使用することができる。リポソームは一般に、リン脂質または他の脂質物質に由来する。リポソーム形態中の組成物も、他の成分、例えば、安定剤、保存剤、賦形剤などを含有することができる。好適な脂質には、リン脂質およびホスファチジルコリン（レシチン）が含まれ、ともに天然および合成である。リポソームを形成する方法は、当技術分野で公知である。例えば、Ｐｒｅｓｃｏｔｔ（編）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、ＸＩＶ巻、３３頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９７６年）を参照されたい。
【０１４４】
経口投与に適した投与量で作用剤を含む医薬組成物は、当技術分野で周知である薬学的に許容できる担体を使用して製剤化することができる。経口投与用に処方される製剤は、錠剤、ピル、カプセル、カシェ剤、糖衣丸、ロゼンジ、液体、ゲル、シロップ、スラリー、エリキシル剤、懸濁液、または散剤の形態であることができる。例えば、経口用途のための医薬製剤は、活性化合物を固体賦形剤と混合し、場合により得られた混合物を粉砕し、錠剤または糖衣丸コアを得るために、必要に応じて適当な助剤を添加した後、顆粒の混合物を加工することによって得ることができる。経口製剤は、非経口用途について記載されたものと種類が同様の液体担体、例えば、緩衝水溶液、懸濁液などを使用することができる。
【０１４５】
好適な経口製剤には、錠剤、糖衣丸、およびゼラチンカプセルが含まれる。これらの製剤は、１つまたは複数の賦形剤を含有することができ、これには、限定することなく、以下のものが含まれる：
ａ）希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含めた糖など；
ｂ）結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、トウモロコシ、コムギ、米、ジャガイモなどに由来するデンプンなど；
ｃ）セルロース物質、例えば、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなど、ゴム、例えば、アラビアゴムおよびトラガカントゴムなど、ならびにタンパク質、例えば、ゼラチンおよびコラーゲンなど；
ｄ）崩壊剤または可溶化剤、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、デンプン、寒天、アルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムなどのその塩、または発泡性組成物など；
ｅ）滑剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸またはそのマグネシウム塩もしくはカルシウム塩、およびポリエチレングリコールなど；
ｆ）香味剤および甘味料；
ｇ）例えば、生成物を同定するため、または活性化合物の量（投与量）を特徴づけるための着色剤または顔料；ならびに
ｈ）他の成分、例えば、保存剤、安定剤、膨張剤、乳化剤、溶液プロモーター、浸透圧を調節するための塩、および緩衝液など。
【０１４６】
ゼラチンカプセルには、ゼラチンで作製された押し込み型カプセル、ならびにゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールなどのコーティングで作製されたソフトな密封カプセルが含まれる。押し込み型カプセルは、充填剤、結合剤、滑剤、および／または安定剤などと混合された活性成分（複数も）を含有することができる。ソフトカプセルでは、活性化合物は、安定剤の有無にかかわらず、適当な流体、例えば、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコール中に溶解または懸濁させることができる。糖衣丸コアは、濃縮された糖溶液などの適当なコーティングとともに提供することができ、この溶液は、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適当な有機溶媒または溶媒混合物も含有することができる。
【０１４７】
医薬組成物は、活性作用剤の塩として提供することができる。塩は、対応する遊離酸形態または遊離塩基形態より、水性または他のプロトン性溶媒中で可溶性である。薬学的に許容できる塩は、当技術分野で周知である。酸性部分を含有する化合物は、適当な陽イオンと薬学的に許容できる塩を形成することができる。適当な薬学的に許容できる陽イオンには、例えば、アルカリ金属（例えば、ナトリウムまたはカリウム）陽イオン、およびアルカリ土類（例えば、カルシウムまたはマグネシウム）陽イオンが含まれる。
【０１４８】
塩基性部分を含有する構造式（Ｉ）の化合物は、適当な酸と薬学的に許容できる酸付加塩を形成することができる。例えば、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ、６６巻：１頁（１９７７年）には、薬学的に許容できる塩が詳細に記載されている。塩は、本発明の化合物の最終の単離および精製の間にインサイツで、または遊離塩基官能基を適当な酸と反応させることによって別々に調製することができる。
【０１４９】
代表的な酸付加塩として、それだけに限らないが、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩（ｃａｍｐｈｏｒｏｌｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩（イソチオン酸塩）、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩または硫酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、リン酸塩またはリン酸水素塩、グルタミン酸塩、炭酸水素塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびウンデカン酸塩が挙げられる。薬学的に許容できる酸付加塩を形成するのに使用することができる酸の例として、限定することなく、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、およびリン酸など、ならびに有機酸、例えば、シュウ酸、マレイン酸、コハク酸、およびクエン酸などが挙げられる。
【０１５０】
塩基性付加塩は、本発明の化合物の最終の単離および精製の間にインサイチュで調製するか、カルボン酸含有部分を、薬学的に許容できる金属陽イオンの水酸化物、炭酸塩、もしくは炭酸水素塩などの適当な塩基、あるいはアンモニアまたは有機の１級、２級、もしくは３級アミンと反応させることによって別々に調製することができる。薬学的に許容できる塩基性付加塩として、それだけに限らないが、アルカリ金属またはアルカリ土類金属に基づく陽イオン、例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、およびアルミニウム塩など、ならびにアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、エチルアンモニウム、ジエチルアンモニウム、トリエチルアンモニウムなどを含めた無毒性の４級アンモニウムおよびアミン陽イオンが挙げられる。塩基付加塩の形成に有用な他の代表的な有機アミンには、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリジン、ピペラジンなどが含まれる。
【０１５１】
塩基性の窒素含有基は、低級アルキルハライド、例えば、メチル、エチル、プロピル、およびブチル塩化物、臭化物およびヨウ化物など；ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミル硫酸塩のようなジアルキル硫酸塩；長鎖アルキルハライド、例えば、デシル、ラウリル、ミリスチル、およびステアリル塩化物、臭化物、およびヨウ化物など；アリールアルキルハライド、例えば、ベンジルおよびフェネチル臭化物など；ならびに他のものなどの作用剤で四級化することができる。改良された溶解度または分散性を有する生成物がそれによって得られる。
【０１５２】
前述を踏まえると、本明細書に現れる本発明の化合物へのいずれの言及も、構造式（Ｉ）の化合物、ならびにその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、４級の誘導体、およびプロドラッグを含むことが意図される。
【０１５３】
薬学的に許容できる担体中で製剤化される本発明の化合物を含む組成物を、調製し、適切な容器中に入れ、指定された条件の治療のためにラベルで表示することができる。したがって、本発明の化合物の剤形、および化合物を使用するための指示書を含むラベルを含む容器などの製品も企図される。キットも企図される。例えば、キットは、医薬組成物の剤形、および医学的状態の治療において組成物を使用するための指示書を含む添付文書を含むことができる。いずれの場合でも、ラベル上に示される条件は、炎症性障害、癌などの治療を含むことができる。
【０１５４】
ＰＩ３Ｋδ活性の阻害剤の投与方法
ＰＩ３Ｋδ活性の阻害剤を含む医薬組成物は、非経口および経腸の技法を含めた任意の従来方法によって対象に投与することができる。非経口投与様式には、組成物が、消化管を通る以外の経路、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、髄内、筋肉内、関節内、クモ膜下、および脳室内注入によって投与されるものが含まれる。経腸投与様式には、例えば、経口（頬側および舌下を含む）および直腸投与が含まれる。経上皮投与様式には、例えば、経粘膜投与および経皮投与が含まれる。経粘膜投与として、例えば、経腸投与ならびに経鼻、吸入、および深肺投与；膣投与；ならびに直腸投与が挙げられる。経皮投与には、例えば、パッチおよびイオン導入デバイス、ならびにペースト、軟膏（ｓａｌｖｅ）、または軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）の局所適用を含めた受動的または能動的な経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）または経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）様式が含まれる。非経口投与は、高圧技法、例えば、ＰＯＷＤＥＲＪＥＣＴ（登録商標）を使用して実現することもできる。
【０１５５】
外科的技法には、デポー（リザーバー）構成物、浸透圧ポンプなどの移植が含まれる。炎症を治療するのに好適な投与経路は、関節炎などの局部的障害に対する局所（ｌｏｃａｌ）もしくは局所（ｔｏｐｉｃａｌ）送達、または分散型（ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ）障害に対する全身送達、例えば、再灌流傷害、もしくは敗血症などの全身状態に対する静脈内送達とすることができる。気道を伴うもの、例えば、慢性閉塞性肺疾患、喘息、および気腫を含めた他の疾患については、投与は、噴霧、エアロゾル、散剤などの吸入または深肺投与によって実現することができる。
【０１５６】
新生物疾患、特に白血病、および他の分散型癌の治療については、非経口投与が一般に好適である。非経口投与後の体内分布を最適化するための化合物の製剤が望ましいであろう。ＰＩ３Ｋδ阻害剤化合物は、化学療法、放射線療法、および／または手術の前、間、または後に投与することができる。
【０１５７】
さらに、ＰＩ３Ｋδ阻害剤化合物の治療指数は、細胞を癌細胞として識別するマーカーを発現する癌細胞への標的送達のために、化合物を修飾または誘導体化することによって高めることができる。例えば、以前に記載されているように、癌細胞に選択的または特異的であるマーカーを認識する抗体に化合物を連結することができ、その結果、この化合物は、この細胞の近傍に運ばれることによってその効果を局所的に発揮する（例えば、Ｐｉｅｔｅｒｓｚら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ、１２９巻：５７頁（１９９２年）；Ｔｒａｉｌら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６１巻：２１２頁（１９９３年）；およびＲｏｗｌｉｎｓｏｎ−Ｂｕｓｚａら、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｏｎｃｏｌ、４巻：１１４２頁（１９９２年）を参照されたい）。これらの化合物の腫瘍指向性送達は、とりわけ、放射線療法または化学療法から生じ得る潜在的な非特異的毒性を最小限にすることによって、治療上の利点を高める。別の態様では、ＰＩ３Ｋδ阻害剤化合物および放射性同位体または化学療法剤は、同じ抗腫瘍抗体に結合することができる。
【０１５８】
骨吸収障害または破骨細胞媒介性障害の治療については、ＰＩ３Ｋδ阻害剤は、任意の適当な方法によって送達することができる。関節内注入などによる局所的投与が望ましい場合がある。場合によっては、化合物を骨に向けることができる部分に、化合物を結合することが望ましくなり得る。例えば、ＰＩ３Ｋδ阻害剤を、骨の主要な成分であるヒドロキシアパタイトに対して高い親和性を有する化合物に結合することができる。これは、例えば、エストロゲンを骨に標的送達するために開発されたテトラサイクリン−カップリング法に適応させることによって実現することができる（Ｏｒｍｅら、Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ、４巻（１１号）：１３７５〜８０頁（１９９４年））。
【０１５９】
中枢神経系標的を調節することにおいて治療上有効であるために、本発明の方法で使用される作用剤は、末梢性に投与される場合、血液脳関門を容易に貫通するべきである。しかし、血液脳関門を貫通することができない化合物は、静脈内経路によって依然として有効に投与することができる。
【０１６０】
上述したように、作用剤自体および作用剤の製剤の特徴は、投与される作用剤の物理的状態、安定性、インビボ放出速度、およびインビボクリアランス速度に影響し得る。そのような薬物動態学的および薬力学的情報は、前臨床インビトロおよびインビボ試験を通じて収集し、後に臨床試験過程の間にヒトにおいて確認することができる。したがって、本発明の方法で使用される任意の化合物について、治療有効用量は、生化学的および／または細胞に基づくアッセイ法から最初に推定することができる。次いで、投与量を動物モデルにおいて処方することによって、ＰＩ３Ｋδの発現または活性を調節する望ましい血中濃度範囲を実現することができる。ヒト試験が行われるにつれて、様々な疾患および病状のための治療の適切な投与量レベルおよび継続時間に関するさらなる情報が現れる。
【０１６１】
そのような化合物の毒性および治療効果は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死性の用量）、およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効な用量）を求めるための、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって求めることができる。有毒作用と治療効果の間の用量比は「治療指数」であり、これは一般に比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表される。大きい治療指数を示す、すなわち、有毒用量が有効用量より実質的に高い化合物が好適である。そのような細胞培養アッセイ法および追加の動物試験から得られるデータを、ヒトに使用するための様々な投与量を処方することにおいて使用することができる。そのような化合物の投与量は、ほとんど、またはまったく毒性を有さないＥＤ５０を含む様々な血中濃度内にあることが好ましい。
【０１６２】
本発明によれば、投与のタイミングおよび順序を調節する任意の有効な投与レジメンを使用することができる。作用剤の用量は、有効量の作用剤を含む薬学的投与量単位を含むことが好ましい。本明細書で使用する場合、「有効量」は、１つまたは複数の薬学的投与量単位の投与を通じて、ＰＩ３Ｋδの発現もしくは活性を調節し、かつ／または対象の生理的パラメータの測定可能な変化を引き出すのに十分な量を指す。
【０１６３】
ヒト対象についての例示的な投与量レベルは、体重１キログラム当たり活性作用剤約０．００１ミリグラム（ｍｇ／ｋｇ）から約１０００ｍｇ／ｋｇの水準である。一般に、活性作用剤の投与量単位は、例えば、指示、投与経路、および病状の重症度に応じて、約０．０１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、好ましくは約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇを含む。投与経路に応じて、適当な用量は、体重、体表面積、または臓器サイズによって計算することができる。最終的な投与量レジメンは、薬物の作用を調節する様々な要因、例えば、化合物の比放射能、疾患状態の素性および重症度、患者の応答性、患者の年齢、状態、体重、性別、および飲食物、ならびに任意の感染の重症度を考慮して、適正な医療行為に照らして主治医によって決定される。考慮に入れることができる追加の要因には、投与の時間および頻度、薬物の組合せ、反応感度、ならびに療法に対するトレランス／応答が含まれる。本明細書に述べた製剤のいずれかを伴う治療に適切な投与量のさらなる洗練は、特に、開示された投与量情報およびアッセイ法、ならびにヒト臨床試験において観察された薬物動態学的なデータを踏まえると、過度の実験を伴うことなく、当業者によって日常的に行われる。適切な投与量は、用量応答データと一緒に、体液または他の試料中の作用剤の濃度を求めるための確立されたアッセイ法を使用して確認することができる。
【０１６４】
投薬の頻度は、作用剤の薬物動態学的パラメータ、および投与経路に依存する。投与量および投与が調節されることによって、十分なレベルの活性部分が提供され、または所望の効果が維持される。したがって、医薬組成物は、作用剤の所望の最低レベルを維持するために、必要に応じて、単一用量、複数の別々の用量、持続注入、徐放デポー、またはこれらの組合せで投与することができる。短時間作用型の医薬組成物（すなわち、短い半減期）は、１日に１回、または１日に１回超（例えば、１日に２回、３回、もしくは４回）投与することができる。長時間作用型医薬組成物は、３〜４日毎、毎週、または２週間毎に１回投与することができる。ポンプ、例えば、皮下、腹腔内、または硬膜下ポンプなどを、持続注入のために使用することができる。
【０１６５】
以下の実施例は、本発明の理解をさらに助け、この実施例が関係する、当業者に周知の従来方法、例えば、ベクターおよびプラスミドの構築、そのようなベクターおよびプラスミド中へのポリペプチドをコードする遺伝子の挿入、または宿主細胞中へのベクターおよびプラスミドの導入の理解を前提とするために提供される。そのような方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９年）、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．（１９９４年）；およびＡｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、４版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．（１９９９年）を含めた多数の刊行物に詳細に記載されている。以下に記載される特定の物質および条件は、本発明の特定の態様を例示することが意図されており、これらの妥当な範囲を限定すると解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１６６】
（実施例１）
組換え型ＰＩ３Ｋα、β、およびδの調製および精製
ｐ１１０触媒サブユニットおよびｐ８５調節サブユニットからなる組換え型ＰＩ３Ｋヘテロ二量体複合体を、ＢＡＣ−ＴＯ−ＢＡＣ（登録商標）ＨＴバキュロウイルス発現系（ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ）を使用して過剰発現させ、次いで生化学アッセイ法で使用するために精製した。４つのクラスＩのＰＩ３キナーゼを、以下のようにバキュロウイルスベクター中にクローン化した：
ｐ１１０δ：ＦＬＡＧ（登録商標）タグ化型のヒトｐ１１０δ（配列番号１）（Ｃｈａｎｔｒｙら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２７２巻：１９２３６〜４１頁（１９９７年）を参照されたい）を、標準的な組換えＤＮＡ技法を使用して、昆虫細胞発現ベクターｐＦａｓｔｂａｃ  ＨＴｂ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）のＢａｍＨ１−Ｘｂａ１部位中にサブクローニングし、その結果クローンは、このベクターのＨｉｓタグとインフレームであった。ＦＬＡＧ（登録商標）系は、米国特許第４，７０３，００４号；同第４，７８２，１３７号；同第４，８５１，３４１号；および同第５，０１１，９１２号に記載されており、試薬は、Ｅａｓｔｍａｎ  Ｋｏｄａｋ  Ｃｏ．から入手可能である。
【０１６７】
ｐ１１０α：上述した、ｐ１１０δについて使用した方法と同様に、ＦＬＡＧ（登録商標）タグ化型のｐ１１０α（Ｖｏｌｉｎｉａら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ、２４巻（３号）：４２７〜４７７頁（１９９４年）を参照されたい）を、ｐＦａｓｔｂａｃ  ＨＴｂ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）のＢａｍＨ１−ＨｉｎｄＩＩＩ部位にサブクローニングし、その結果クローンは、ベクターのＨｉｓタグとインフレームであった。
【０１６８】
ｐ１１０β：ｐ１１０β（Ｈｕら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、１３巻：７６７７〜８８頁（１９９３年）を参照されたい）クローンを、以下のプライマーを使用して製造者のプロトコールに従って、ヒトＭＡＲＡＴＨＯＮ（登録商標）Ｒｅａｄｙ脾臓ｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ  ＣＡ）から増幅した：
【０１６９】
【化１５】
2011503193.tif 000016
５’プライマーを構築することによって、ｐ１１０β配列とインフレームでＦＬＡＧ（登録商標）タグを収めた。増幅後、ＦＬＡＧ（登録商標）−ｐ１１０β配列を、標準的な組換え技法を使用して、ｐＦａｓｔｂａｃ  ＨＴａ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）のＥｃｏＲ１−Ｎｏｔ１部位中にサブクローニングし、その結果クローンは、このベクターのＨｉｓタグとインフレームであった。
【０１７０】
ｐ１１０γ：ｐ１１ｏγ  ｃＤＮＡ（Ｓｔｏｙａｎｏｖら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６９巻：６９０〜９３頁（１９９５年）を参照されたい）を、以下のプライマーを使用して製造者のプロトコールに従って、ヒトＭａｒａｔｈｏｎ  Ｒｅａｄｙ脾臓ｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）から増幅した：
【０１７１】
【化１６】
2011503193.tif 000017
引き続いて、ＦＬＡＧ（登録商標）タグを、ｐ１１０γ配列の５’末端に結合し、標準的な組換えＤＮＡ技法を使用して、ｐＦａｓｔｂａｃ  ＨＴｂ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）のＢａｍＨ１−Ｓｐｅ１部位にクローン化し、ＦＬＡＧ（登録商標）−１１０γ配列は、ベクターのＨｉｓタグとインフレームであった。
【０１７２】
ｐ８５α：ＦＬＡＧ（登録商標）タグ化ｐ８５  ｃＤＮＡ（Ｓｋｏｌｎｉｋら、Ｃｅｌｌ、６５巻：８３〜８９頁（１９９１年）を参照されたい）のＢａｍＨ１−ＥｃｏＲ１断片を、ベクターｐＦａｓｔｂａｃ  ｄｕａｌ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）のＢａｍＨ１−ＥｃｏＲ１部位中にサブクローニングした。
【０１７３】
上記クローンを含有する組換え型のバキュロウイルスを、製造者の推奨プロトコール（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して作製した。Ｈｉｓタグ化ｐ１１０α、ｐ１１０β、またはｐ１１０δ触媒サブユニットおよびｐ８５サブユニットを発現するバキュロウイルスを、Ｓｆ２１昆虫細胞中に同時感染させた。ヘテロ二量体の酵素複合体を濃縮するために、ｐ８５サブユニットを発現する過剰量のバキュロウイスルを感染させ、ｐ８５と複合体形成したＨｉｓタグ化ｐ１１０触媒サブユニットを、ニッケル親和性カラム上で精製した。ｐ１１０γは、ｐ８５と結合しないので、Ｓｆ２１細胞を、Ｈｉｓタグ化ｐ１１０γのみを発現する組換え型のバキュロウイルスで感染させた。代替の手法では、ｐ１０１をバキュロウイルス中にクローン化することによって、その好適な結合パートナーであるｐ１１０γとの同時発現を可能にすることができる。
【０１７４】
感染して７２時間後のＳｆ２１細胞（３リットル）を収集し、Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザーを使用して、低張性緩衝液（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ、ｐＨ７．８、５ｍＭのＫＣｌ、完全なプロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）中でホモジナイズした。ホモジネートを１０００×ｇで１５分間遠心分離した。上清を１０，０００×ｇで２０分間さらに遠心分離し、その後に１００，０００×ｇで６０分間超遠心分離した。可溶性画分を、５０ｍｌの緩衝液Ａ（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ、ｐＨ７．８、０．５ＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのイミダゾール）で平衡化した、１０ｍＬのＨＩＴＲＡＰ（登録商標）ニッケル親和性カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）上に直ちに装填した。カラムを緩衝液Ａを用いて広範に洗浄し、１０〜５００ｍＭのイミダゾールの線形勾配を用いて溶出した。遊離ｐ８５サブユニットを洗浄ステップの間にカラムから取り出し、ヘテロ二量体の酵素複合体のみを２５０ｍＭのイミダゾールで溶出した。ニッケル画分のアリコートを、１０％のＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって分析し、ＳＹＰＲＯ（登録商標）Ｒｅｄ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，  Ｉｎｃ．、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）で染色し、ＳＴＯＲＭ（登録商標）ＰｈｏｓｐｈｏＩｍａｇｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）で定量化した。活性画分をプールし、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ、ｐＨ７．５、５０ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのジチオトレイトール（ＤＴＴ）を含有する緩衝液Ｂを用いて予め平衡化した５ｍＬのＨｉ−ｔｒａｐヘパリンカラム上に直接装填した。カラムを５０ｍＬの緩衝液Ｂを用いて洗浄し、０．０５〜２ＭのＮａＣｌの線形勾配を用いて溶出した。ＰＩ３Ｋ酵素複合体を含有する１つのピークが、０．８ＭのＮａＣｌで溶出した。ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル解析は、精製されたＰＩ３Ｋ酵素画分は、ｐ１１０およびｐ８５サブユニットの１：１化学量論の複合体を含有することを示した。ヘパリンクロマトグラフィーの間の酵素複合体のタンパク質プロファイルは、脂質キナーゼ活性のプロファイルに対応した。活性画分をプールし、液体窒素下で凍結させた。
【０１７５】
（実施例２）
ＰＩ３Ｋδのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）および選択性アッセイ法
独自の化学的ライブラリーのハイスループットスクリーニングを実施することによって、ＰＩ３Ｋδ活性の候補阻害剤を同定した。ＰＩ３Ｋδは、ＰＩＰ２脂質イノシトール環のＤ３’位置で、γ−［３２Ｐ］ＡＴＰからＰＩＰ２／ＰＳリポソームへのリン酸転移を触媒する。この反応はＭｇＣｌ２に依存し、３０ｍＭのＥＤＴＡを含有するｐＨ８．０の高モル濃度のリン酸カリウム緩衝液中でクエンチされる。スクリーニングにおいて、この反応を、ライブラリー化合物の存在または非存在下で実施する。反応生成物（およびすべての非標識の生成物）を９６ウェルのプリウェットしたＰＶＤＦフィルタープレートに移し、濾過し、高モル濃度リン酸カリウムで洗浄した。シンチラントを乾燥したウェルに添加し、取り込まれた放射能を定量化した。
【０１７６】
アッセイ作業の大部分は、ＢＩＯＭＥＫ（登録商標）１０００ロボットワークステーション（Ｂｅｃｋｍａｎ）を使用して実施し、すべてのプレートは、Ｗａｌｌａｃ液体シンチレーションプレートカウンタープロトコールを使用して読み取った。
【０１７７】
基質および酵素の３Ｘアッセイ原料を作製し、トラフ（ロボットアッセイ用）、または９６ウェルのＶ底ポリプロピレンプレート（マニュアルアッセイ用）に貯蔵した。試薬は、室温で少なくとも３時間安定であった。
【０１７８】
ＨＴＳ用の３Ｘ基質は、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４中に０．６ｍＭのＮａ２ＡＴＰ、０．１０ｍＣｉ／ｍＬのγ−［３２Ｐ］ＡＴＰ（ＮＥＮ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ）、６μＭのＰＩＰ２／ＰＳリポソーム（Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，  Ｉｎｃ．、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）を含有していた。
【０１７９】
ＨＴＳ用の３Ｘ酵素原料は、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４中に１．８ｎＭのＰＩ３Ｋδ、１５０μｇ／ｍＬのウマＩｇＧ（安定剤としてのみ使用した）、１５ｍＭのＭｇＣｌ２、３ｍＭのＤＴＴを含有していた。
【０１８０】
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中の化学的ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）ライブラリー試料（それぞれ、２２化合物のプールを含有する）を２回蒸留水中で１８．７５μＭまたは３７．８μＭに希釈し、２０μＬの希釈液を、９６ウェルポリプロピレンプレートのウェル中に配置し、アッセイした。負の阻害剤対照（または正の酵素対照）は、水で希釈したＤＭＳＯであり、正の阻害剤対照は、５０％および１００％の阻害をもたらすのに十分なＬＹ２９４００２の濃度を使用した。
【０１８１】
２０μＬのプールした化学的ライブラリー希釈液に、２０μＬの３Ｘ基質を添加した。反応は、２０μＬの３Ｘ酵素を用いて開始し、室温で１０分間インキュベートした。この希釈液は、反応体積中で、２００μＭの最終濃度のＡＴＰを確立した。反応を、１５０μＬのクエンチ緩衝液（１．０Ｍのリン酸カリウムｐＨ８．０、３０ｍＭのＥＤＴＡ）を用いて停止した。次いで、クエンチした溶液の一部（１８０μＬ）を、ＰＶＤＦフィルタープレート（１００％のメタノール、水、および最終的に１．０Ｍのリン酸カリウム（ｐＨ８．０）洗浄緩衝液の連続した２００μＬの洗浄でプリウェットしたＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＃ＭＡＩＰ  ＮＯＢ）に移した。
【０１８２】
ＰＶＤＦフィルタープレートを適度な真空（２〜５ｍｍＨｇ）下で吸引し、５×２００μＬの洗浄緩衝液を用いて洗浄し、次いで吸引によって乾燥させた。引き続いてフィルターをブロットし、完全に空気乾燥させ、１ウェル当たり５０μＬのＥｃｏｓｃｉｎｔシンチレーションカクテルを加えたＷａｌｌａｃ計数カセット中に挿入した。取り込まれた放射能を定量化し、酵素陽性対照（１００％に設定）に対して正規化した後、データを分析することによって、５０％阻害値での曲線の交点を識別して阻害剤についてのＩＣ５０値を推定した。阻害剤は、ＰＩ３ＫαおよびＰＩ３Ｋβに対する選択性アッセイ法にもかけた（実施例９におけるアッセイプロトコールを参照されたい）。
【０１８３】
選択性アッセイ法から、本発明の化合物は、３ＰＩＫδの強力で選択的な阻害剤であることが見出された。例えば、上述したように、ＰＩ３キナーゼ阻害剤ＬＹ２９４００２（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）は、試験した様々なＰＩ３キナーゼアイソフォームの中で有意な選択性を有さない。本発明者らのアッセイ条件下で、ＬＹ２９４００２は、ＰＩ３キナーゼのすべての３つのアイソフォームを阻害し、ＩＣ５０は、０．３〜１μＭであった。本化合物は、δアイソフォームより、少なくとも１０分の１作用の弱いα、β、およびγアイソフォームの阻害剤である。これらの結果は、本発明の化合物は、ＰＩ３Ｋδ活性を選択的に阻害する能力を有することを示す。
【０１８４】
（実施例３〜７）
ＰＩ３Ｋδは、白血球中でかなりのレベルで発現されるので、白血球機能に対するＰＩ３Ｋδ選択的阻害剤の効果を研究することは重要である。したがって、いくつかの型の白血球中のＰＩ３Ｋδ阻害の効果を試験した。好中球を試験することによって、ＰＩ３Ｋδの選択的阻害が誘発し得る効果を求めた（以下の実施例３）。ＰＩ３Ｋδ活性の選択的阻害は、活性化好中球に特徴的ないくつかの、しかしすべてではない機能の阻害に有意に関連すると思われることが意外にも見出された。さらに、Ｂ細胞およびＴ細胞の機能に対するＰＩ３Ｋδ阻害の効果も試験した（以下の実施例４〜５）。さらに、ＰＩ３Ｋδは、破骨細胞中でも発現されるので、これらの特殊化された細胞の機能に対するＰＩ３Ｋδ阻害の効果を試験した（以下の実施例６）。好塩基球機能に対するＰＩ３Ｋδの効果も試験した（以下の実施例７）。
【０１８５】
（実施例３）
好中球機能におけるＰＩ３Ｋδの役割の特徴づけ
好中球機能、例えば、スーパーオキシド生成、エラスターゼエキソサイトーシス、走化性、および殺菌などに対する本発明のＰＩ３Ｋδ阻害剤の効果を試験することができる。
【０１８６】
Ａ．ヒト血液由来の好中球の調製
健康な志願者に由来するヘパリン化血のアリコート（８ｍＬ）を、７．３％のＦＩＣＯＬＬ（登録商標）（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）および１５．４％のＨＹＰＡＱＵＥ（登録商標）（Ｓｉｇｍａ）の３ｍＬのクッション上に層状に積み重ね、卓上遠心分離機（Ｂｅｃｋｍａｎ）を用いて、９００ｒｐｍで、室温で３０分間遠心分離した。ＦＩＣＯＬＬ（登録商標）−ＨＹＰＡＱＵＥ（登録商標）クッションのすぐ上の好中球に富むバンドを収集し、０．１％のゼラチンを含有するハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）を用いて洗浄した。残留する赤血球を、０．２％のＮａＣｌを用いた低張性溶解によって除去した。この好中球調製物を、０．１％のゼラチンを含有するＨＢＳＳを用いて２回洗浄し、直ちに使用した。
【０１８７】
Ｂ．好中球に由来するスーパーオキシド産生の測定
スーパーオキシド産生は、好中球活性化の特徴の１つである。様々なアクチベーターが、好中球によるスーパーオキシド産生を増強する。３つの異なるアゴニスト：すなわち、それぞれ別々のクラスのアクチベーターを表す、ＴＮＦ１α、ＩｇＧ、およびｆＭＬＰによるスーパーオキシド産生に対する本ＰＩ３Ｋδ阻害剤の効果を測定する。好中球によって産生されるスーパーオキシドは、Ｇｒｅｅｎら、（１４．５．１〜１４．５．１１頁、補遺１２、Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（Ｃｏｌｌｉｇａｎら編）（１９９４年））によって記載された方法の修飾によりチトクロムＣを還元した際の吸光度の変化をモニターすることによって以下のように測定する。９６ウェルプレートの個々のウェルを、ヒトフィブリノーゲンまたはＩｇＧの２ｍｇ／ｍＬの溶液５０μＬを用いて４℃で一晩コーティングする。ウェルをＰＢＳを用いて洗浄し、以下の試薬を各ウェルに添加した：ＨＢＳＳまたはスーパーオキシドジスムターゼ（１ｍｇ／ｍＬ）５０μＬ、ＨＢＳＳまたはＴＮＦ１α（５０ｎｇ／ｍＬ）５０μＬ、チトクロムＣ（２．７ｍｇ／ｍＬ）５０μＬ、および精製したヒト好中球懸濁液（２×１０６細胞／ｍＬ）１００μＬ。プレートを２００ｒｐｍで２分間遠心し、５５０ｎｍでの吸光度を２時間モニターした。産生されたスーパーオキシドの相対量を測定するために、スーパーオキシドジスムターゼ含有ウェルから得た値をすべてから減じ、いずれの阻害剤も含まないウェルから得た値に対して正規化する。
【０１８８】
本発明の化合物は、好中球よるＴＮＦ誘発性スーパーオキシド産生を、濃度依存様式で阻害する。さらに、ＩｇＧによって誘発されるスーパーオキシド産生は、本発明の化合物によって有意に阻害されなかった。
【０１８９】
別の強力な誘発物質である、細菌性ペプチドホルミル化−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ（ｆＭＬＰ）によって誘発されるスーパーオキシド産生に対する本発明の化合物の効果も試験することができる。ＴＮＦ誘発性スーパーオキシド産生のように、ｆＭＬＰ誘発性スーパーオキシド産生も、本発明の化合物によって阻害される。これらの結果は、本発明のＰＩ３Ｋδ阻害剤化合物は、好中球によるスーパーオキシド産生の刺激特異的誘発を防止することができることを示し、ＰＩ３Ｋδがこのプロセスに関与していることを示す。
【０１９０】
Ｃ．好中球に由来するエラスターゼエキソサイトーシスの測定
スーパーオキシド産生に加えて、活性化好中球はまた、炎症の間の組織および軟骨の破壊に関与するいくつかのプロテアーゼを放出することによって応答した。プロテアーゼ放出の徴候として、エラスターゼエキソサイトーシスに対する本化合物の効果を測定する。エラスターゼエキソサイトーシスを、Ｏｓｓａｎｎａら（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ、７７巻：１９３９〜１９５１頁（１９８６年））により記載された手順の修飾によって以下のように定量化する。精製したヒト好中球（０．２×１０６）（ＤＭＳＯまたはＤＭＳＯ中の本化合物の連続希釈液で処理した）を、０．０１ｍｇ／ｍＬのサイトカラシンＢ、１．０μＭのアジ化ナトリウム（ＮａＮ３）、５μｇ／ｍＬのＬ−メチオニン、および１μＭのｆＭＬＰを含有するＰＢＳ中のｆＭＬＰを用いて、９６ウェルプレート内で、３７℃で９０分間刺激する。インキュベーション期間の終わりに、プレートを１０００ｒｐｍで５分間遠心し、上清９０μＬをエラスターゼ基質ペプチド、ＭｅＯ−ｓｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ｐＮＡ（式中ＭｅＯ−ｓｕｃ＝メトキシ−スクシニル；ｐＮＡ＝ｐ−ニトロアニリド）（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）の１０ｍＭの溶液１０μＬに移す。９６ウェルプレートリーダー内で４１０ｎｍでの吸光度を２時間モニターする。エキソサイトーシスされたエラスターゼの相対量を測定するために、すべての吸光度値を、いずれの阻害剤も含まない値に対して正規化する。本発明のＰＩ３Ｋδ阻害剤化合物は、ｆＭＬＰ誘発性エラスターゼエキソサイトーシスを有意に阻害し、用量依存様式でそのように阻害する。
【０１９１】
Ｄ．ｆＭＬＰ誘発性ヒト好中球遊走の測定
好中球は、組織を通じて遊走する固有の能力を有し、炎症または組織傷害の部位に到達する最初の細胞型の１つである。ｆＭＬＰの濃度勾配に向かった好中球遊走に対する本化合物の効果を測定する。遊走アッセイ法を実施する前の日に、６ウェルプレートを、組換え型ＩＣＡＭ−１／Ｆｃ融合タンパク質（Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｖｉｅｒｅｎら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、３巻：６８３〜６９０頁（１９９５年））（炭酸水素塩緩衝液中２５μｇ／ｍＬ、ｐＨ９．３）を用いてコーティングし、４℃で一晩放置する。洗浄後、０．５％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むＲＰＭＩ−１６４０中の１％アガロース溶液を、阻害剤を含むウェルまたは含まないウェルに添加し、プレートを冷蔵庫内に配置した後、ゲル化アガロース中に孔を開けることによってプラークを作り出す（１ウェル当たり６つの周辺の孔に囲繞された１つの中央の孔）。
【０１９２】
ヒト好中球を上述したように得、５×１０６細胞／ｍＬで０．５％のＢＳＡを補充したＲＰＭＩ媒質中に再懸濁する。等しい体積の好中球懸濁液および媒質（ＤＭＳＯまたはＤＭＳＯ中の試験化合物の連続希釈液を含む）を合わせた後、好中球を周辺の孔中にアリコートし、中央の孔にｆＭＬＰ（５μＭ）を入れる。プレートを５％のＣＯ２の存在下で、３７℃で４時間インキュベートした後、Ｄ−ＰＢＳ中の１％のグルタルアルデヒド溶液を添加することによって遊走を終結させる。アガロース層を除いた後、ウェルを蒸留水で洗浄し、乾燥させる。
【０１９３】
ＮＩＨ  １．６１プログラムを使用して、Ｎｉｋｏｎ  ＤＩＡＰＨＯＴ（登録商標）倒立顕微鏡（１倍対物レンズ）ビデオワークステーションで好中球遊走の分析を行う。Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  ＥｘｃｅｌおよびＴａｂｌｅ  Ｃｕｒｖｅ  ４（ＳＳＰＳ  Ｉｎｃ．、Ｃｈｉｃａｇｏ  ＩＬ）プログラムを使用して、それぞれの試験した条件について遊走指数を得る。遊走指数は、１細胞当たりの遊走した好中球の数対遊走の正味の距離を表す曲線の下の面積として定義される。
【０１９４】
本発明のＰＩ３Ｋδ阻害剤化合物は、好中球遊走に対する効果を有し、この活性を用量依存様式で阻害する。
【０１９５】
Ｅ．好中球の殺菌能力の測定
本発明のＰＩ３Ｋδ阻害剤化合物が、ある特定の好中球機能に影響することを考えれば、この化合物が、好中球媒介性殺菌に影響するかどうかは興味深い。好中球媒介性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ殺害に対する化合物の効果を、ＣｌａｒｋおよびＮａｕｓｅｅｆ（７．２３．４〜７．２３．６頁、２巻、補遺６、Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（Ｃｏｌｌｉｇａｎら編）（１９９４年））によって記載された方法に従って試験した。精製したヒト好中球（５×１０６細胞／ｍＬ）（ＤＭＳＯまたはＤＭＳＯ中の本化合物の連続希釈液で処理した）を自己血清と混合する。一晩成長したＳ．  ａｕｒｅｕｓ細胞を洗浄し、ＨＢＳＳ中に再懸濁させ、１０：１の比で、血清でオプソニン化した好中球に添加した。３７℃で２０分間インキュベーションすることによって、食作用によって細菌を好中球に内部移行させる。内部移行しなかった細菌を、３７℃で５分間、１０単位／ｍＬのリソスタフィンによって殺し、全混合物を３７℃で回転する。最大９０分まで様々な時間で試料を回収し、好中球を水で希釈することによって溶解させた。トリプチカーゼ−ソイ−寒天プレート上に適切な希釈液を蒔き、一晩成長させた後、Ｓ．  ａｕｒｅｕｓコロニーをカウントすることによって、生存可能な細菌をカウントする。
【０１９６】
Ｓ．  ａｕｒｅｕｓの好中球媒介性殺害は、ＤＭＳＯ（対照）で処理した試料および本化合物で処理した試料において同様である。したがって、ＰＩ３Ｋδ阻害剤は、Ｓ．  ａｕｒｅｕｓを殺害する好中球の能力に有意に影響せず、ＰＩ３Ｋδは、好中球機能のこの経路に関与していないことを示す。
【０１９７】
（実施例４）
Ｂリンパ球機能におけるＰＩ３Ｋδの役割の特徴づけ
古典的な指標、例えば、抗体産生および特異的な刺激誘発性増殖などを含めたＢ細胞機能に対するＰＩ３キナーゼ阻害剤の効果も試験する。
【０１９８】
Ａ．ヒト末梢血由来のＢ細胞の調製および刺激
健康な志願者に由来するヘパリン化血（２００ｍＬ）を等しい体積のＤ−ＰＢＳと混合し、１０×１０ｍＬのＦＩＣＯＬＬ−ＰＡＱＵＥ（登録商標）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）上に層状に積み重ね、１６００ｒｐｍで、室温で３０分間遠心分離する。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＦＩＣＯＬＬ（登録商標）／血清界面から収集し、１０ｍＬのウシ胎児血清（ＦＢＳ）上に被せ、８００ｒｐｍで１０分間遠心分離することによって血小板を除去する。洗浄後、ＤＹＮＡＬ（登録商標）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｉｘ（Ｂ細胞キット）（Ｄｙｎａｌ  Ｃｏｒｐ．、Ｌａｋｅ  Ｓｕｃｃｅｓｓ、ＮＹ）を用いて、４〜８℃で２０分間、細胞をインキュベートする。非結合抗体を除去した後、ＰＢＬを、抗マウスＩｇＧでコーティングされた磁気ビーズ（Ｄｙｎａｌ）と、穏やかに振盪しながら４〜８℃で２０分間混合し、その後、磁気ビーズ分離器で、標識された非Ｂ細胞を排除する。この手順をもう一度繰り返す。Ｂ細胞を１０％のＦＢＳを含むＲＰＭＩ−１６４０中に再懸濁し、さらに使用するまで氷上で保持する。
【０１９９】
Ｂ．ヒトＢ細胞による抗体産生の測定
抗体産生を試験するために、Ｂ細胞を、５０〜７５×１０３細胞／ウェルで、阻害剤を含む９６ウェルプレートまたは阻害剤を含まない９６ウェルプレート中にアリコートし、これにＩＬ−２（１００Ｕ／ｍＬ）およびＰＡＮＳＯＲＢＩＮ（登録商標）（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  細胞（１：９０，０００）を添加した。２４〜３６時間後に培地の一部を除去し、新鮮な培地（阻害剤を含む、または含まない）およびＩＬ−２を添加する。ＣＯ２インキュベーターの存在下で、３７℃でさらに７日間培養物をインキュベートする。それぞれの条件（３通りで）からの試料を取り出し、ＥＬＩＳＡによって測定した場合のＩｇＧおよびＩｇＭについて分析する。簡単に言えば、ＩＭＭＵＬＯＮ（登録商標）４  ９６ウェルプレートを、炭酸水素塩緩衝液中の１５０ｎｇ／ｍＬのロバ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ  ＰＡ）、または２μｇ／ｍＬのロバ抗ヒトＩｇＧ＋ＩｇＭ（Ｈ＋Ｌ）（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を用いてコーティングし（５０μＬ／ウェル）、４℃で一晩放置する。０．１％のＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０（ＰＢＳＴ）（３５０μＬ／ウェル）を含有するリン酸緩衝食塩水を用いて３回洗浄し、ＰＢＳＴ（１００μＬ／ウェル）中の３％のヤギ血清を用いて、室温で１時間ブロックした後、ＰＢＳＴで希釈したＢ細胞使用済み培地（Ｂ  ｃｅｌｌ  ｓｐｅｎｔ  ｍｅｄｉａ）の試料（１００μＬ／ウェル）を添加する。ＩｇＧプレートについては、希釈範囲は、１：５００〜１：１００００であり、ＩｇＭについては１：５０〜１：１０００である。１時間後に、ビオチン結合抗ヒトＩｇＧ（１００ｎｇ／ｍＬ）または抗ヒトＩｇＭ（２００ｎｇ／ｍＬ）（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）に３０分間、その後ストレプトアビジン−ＨＲＰ（１：２００００）に３０分間、最終的にＨ２Ｏ２（１：１００００）を含むＴＭＢ溶液（１：１００）に５分間プレートを曝し、工程間にＰＢＳＴで３回洗浄する。色展開（Ｃｏｌｏｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）をＨ２ＳＯ４溶液によって停止し、ＥＬＩＳＡプレートリーダーでプレートを読み取った。
【０２００】
本発明の化合物は抗体産生を阻害した。
【０２０１】
Ｃ．細胞表面ＩｇＭ刺激に応答したＢ細胞増殖の測定
上記実験において、Ｂ細胞を、ＰＡＮＳＯＲＢＩＮ（登録商標）を使用して刺激する。Ｂ細胞が、抗ＩｇＭ抗体を使用してその細胞表面ＩｇＭを通じて刺激される場合の、Ｂ細胞増殖応答に対する本発明の化合物の効果も測定した。マウス脾細胞（Ｂａｌｂ／ｃ）を、１０％のＦＢＳ／ＲＰＭＩ中、１ウェル当たり２×１０５細胞で、９６ウェルマイクロタイタープレートに蒔く。完全培地中の適切な希釈の試験阻害剤を細胞に添加し、プレートを３０〜６０分間インキュベートした後、刺激を加える。試験阻害剤を用いてプレインキュベーションした後、マウスＩｇＭのμ鎖に特異的なヤギ抗体のＦ（ａｂ’）調製物を、２５μｇ／ｍＬの最終濃度でウェルに添加する。プレートを３７℃で３日間インキュベートし、１μＣｉの［３Ｈ］−チミジンをそれぞれのウェルに添加し、最後に４時間培養する。プレートを繊維フィルター上に回収し、洗浄し、βカウンター（Ｍａｔｒｉｘ９６、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．、Ｄｏｗｎｅｒｓ  Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ）を使用して放射標識の取込みを求め、１分当たりのカウント（ＣＰＭ）で表す。
【０２０２】
本発明の化合物は、抗ＩｇＭ刺激性Ｂ細胞増殖を、用量依存様式で阻害する。本発明の化合物はＢ細胞増殖を阻害するので、これらの化合物および他のＰＩ３Ｋδ阻害剤は、臨床状況におけるＢ細胞の望ましくない増殖を抑制するのに使用することができることが想定される。例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍において、分化の様々な段階のＢ細胞は、未制御の増殖を示す。上記に示した結果に基づいて、ＰＩ３Ｋδ選択的阻害剤は、そのような細胞の成長を制御、限定、または阻害するのに使用することができると推論することができる。
【０２０３】
（実施例５）
Ｔリンパ球機能におけるＰＩ３Ｋδの役割の特徴づけ
ＣＤ３＋ＣＤ２８の同時刺激に応答したＴ細胞増殖を測定する。製造者のプロトコール（Ｄｙｎａｌ）に従って、抗体をコーティングした磁気ビーズを使用して、負の選択により健康なヒト血液からＴ細胞を精製し、ＲＰＭＩ中に再懸濁する。細胞を、ＤＭＳＯまたはＤＭＳＯ中の本化合物の連続希釈液で処理し、ヤギ抗マウスＩｇＧでプレコーティングした９６ウェルプレート上に１×１０５細胞／ウェルで蒔く。次いで、マウスモノクローナル抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体を、それぞれ０．２ｎｇ／ｍＬおよび０．２μｇ／ｍＬで各ウェルに添加する。プレートを３７℃で２４時間インキュベートし、［３Ｈ］−チミジン（１μＣｉ／ウェル）を添加する。さらに１８時間インキュベーションした後、細胞を自動細胞ハーベスターで回収し、洗浄し、取り込まれた放射能を定量化する。
【０２０４】
本ＰＩ３Ｋδ阻害剤化合物は、Ｔ細胞の抗ＣＤ３−および抗ＣＤ２８誘発性増殖を阻害したが、効果は、Ｂ細胞に対する効果、または好中球のいくつかの機能に対する効果ほど強くない。
【０２０５】
（実施例６）
破骨細胞機能におけるＰＩ３Ｋδの役割の特徴づけ
破骨細胞に対する本ＰＩ３Ｋδ阻害剤化合物の効果を分析するために、マウス骨髄細胞を単離し、血清含有培地（１０％の熱不活化したＦＢＳを含むαＭＥＭ；Ｓｉｇｍａ）中で、この細胞をマクロファージコロニー刺激因子−１（ｍＣＳＦ−１）およびオステオプロテジェリンリガンド（ＯＰＧＬ）で３日間処理することによって、破骨細胞に分化させる。破骨細胞が発生していた４日目に、培地を除去し、細胞を回収する。成長培地、すなわち、１％の血清ならびに５５μｇ／ｍＬのＯＰＧＬおよび１０ｎｇ／ｍＬのｍＣＳＦ−１を含む２％のＢＳＡを含有するαＭＥＭ中で、１０５細胞／ウェルで象牙質片上に破骨細胞を蒔く。３時間後に、オステオポンチン（２５μｇ／ｍＬ）およびＰＩ３Ｋ阻害剤（１００ｎＭ）を含む、または含まない、１％の血清および１％のＢＳＡに、培地を交換する。２４時間毎に新鮮なオステオポンチンおよび阻害剤で培地を交換する。７２時間で、培地を除去し、象牙質表面を水で洗浄することによって細胞残骸を除去し、酸ヘマトキシリンを用いて染色する。過剰の染料を洗浄し、共焦点顕微鏡法を使用してピット深を定量化する。
【０２０６】
本ＰＩ３キナーゼ阻害剤は、破骨細胞機能に対する阻害性効果があった。非特異的な阻害剤であるＬＹ２９４００２およびワートマニンの両方は、破骨細胞活性を阻害した。しかし、本ＰＩ３Ｋδ阻害剤化合物は、より大きい効果を有し、場合によっては、破骨細胞活性をほとんど完全に阻害した。
【０２０７】
（実施例７）
好塩基球機能におけるＰＩ３Ｋδの役割の特徴づけ
一般に、Ｍｉｕｒａら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６２巻：４１９８〜２０６頁（１９９９年）に記載されている方法に従って、従来のヒスタミン放出アッセイ法を使用して、好塩基球機能に対する本発明の化合物の効果の評価を試験する。簡単に言えば、０．１ｎＭ〜１，０００ｎＭのいくつかの濃度の試験化合物とともに３７℃で１０分間、濃縮された好塩基球をプレインキュベートする。次いで、ポリクローナルヤギ抗ヒトＩｇＥ（０．１μｇ／ｍＬ）またはｆＭＬＰを添加し、さらに３０分間インキュベートさせる。上清中に放出されるヒスタミンを、自動蛍光定量的技法を使用して測定する。
【０２０８】
好塩基球が抗ＩｇＥで刺激される場合、ヒスタミン放出の用量依存的減少が本化合物について観察された。ヒスタミン放出のこの抑制は、１，０００ｎＭで本質的に１００％であった。好塩基球がｆＭＬＰで刺激される場合、本化合物はいずれの効果も誘発しなかった。比較のために、非選択的なＰＩ３Ｋ阻害剤ＬＹ２９４００２を０．１ｎＭおよび１０，０００ｎＭで試験し、最高濃度で１００％に近いヒスタミンの阻害を示す。
【０２０９】
これは、ＰＩ３Ｋδ活性の本阻害剤は、アレルギーのメディエーターの１つであるヒスタミンの放出を抑制するのに使用することができることを示す。様々なＰＩ３キナーゼの活性が、多くの細胞型におけるタンパク質輸送、分泌、およびエキソサイトーシスに必要とされるので、上記のことは、肥満細胞などの他の細胞によるヒスタミン放出も、ＰＩ３キナーゼδ選択的阻害剤によって混乱させることができることを示す。
【０２１０】
化学合成の例
本発明の化合物の具体的な非限定的な例を、これらの合成のための例示的および一般的経路とともに以下に提供する。合成の化学反応の一般的原理に従って必要である場合、保護基を使用することができることが、当技術分野において理解される。これらの保護基は、当業者に直ちに明らかな、塩基性、酸性、または水素化分解条件下で、合成の最終ステップにおいて通常除去される。任意の化学的官能性の適切な操作および保護を使用することによって、本明細書に具体的に示されていない構造式（Ｉ）の化合物の合成は、以下に示すスキームに類似した方法によって実現することができる。
【０２１１】
別段の記述のない限り、すべての出発材料は、市販の供給業者から得、さらに精製することなく使用した。すべての反応およびクロマトグラフィー画分は、２５０ｍｍのシリカゲルプレート上で薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって分析し、紫外（ＵＶ）光、またはヨウ素（Ｉ２）染色を用いて視覚化した。生成物および中間体は、フラッシュクロマトグラフィーまたは逆相高速液体クロマトグラフィーによって精製した。
【０２１２】
合成例において以下の略語を使用する：ａｑ（水）、ＲＴ（室温）、Ｈ２Ｏ（水）、ＨＣｌ（塩酸）、ＭｅＯＨ（メタノール）、ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）、Ｋ２ＣＯ３（炭酸カリウム）、ＳＯＣｌ２（塩化チオニル）、ＣＨ２Ｃｌ２（塩化メチレン）、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）、ＡｃＯＨ（酢酸）、ＫＯＡｃ（酢酸カリウム）、ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）、ＨＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＰＯＣｌ３（オキシ塩化リン）、ＮＢＳ（Ｎ−ブロモスクシンアミド）、ＣＨ３ＣＮ（アセトニトリル）、ＤＩＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）、およびＮＨ３（アンモニア）。
【０２１３】
一般的な手順
本発明の化合物は、以下のスキームおよび例によって調製することができる。本発明の化合物を作製するために当業者によって容易に適応することができる追加の方法および例は、国際公開第２００５／１１３５５４号ならびに代理人整理番号６１６０８−３０００１００下で２００６年１１月１３日に出願された、Ｗｈｉｔｅらによる「ＴＨＩＥＮＯＰＹＲＩＭＩＤＩＮＯＮＥＳ  ＦＯＲ  ＴＲＥＡＴＭＥＮＴ  ＯＦ  ＩＮＦＬＡＭＭＡＴＯＲＹ  ＤＩＳＯＲＤＥＲＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲＳ」という表題の米国仮出願；米国特許第６，５１８，２７７号；同第６，６６７，３００号；同第６，９４９，５３５号；および同第６，８００，６２０号、ならびに公開された米国特許出願第２００６／０１０６０３８号に開示されている。
【０２１４】
スキーム１
【０２１５】
【化１７】
2011503193.tif 000018
スキーム２
【０２１６】
【化１８】
2011503193.tif 000019
スキーム３
【０２１７】
【化１９】
2011503193.tif 000020
スキーム４
【０２１８】
【化２０】
2011503193.tif 000021
スキーム５
【０２１９】
【化２１】
2011503193.tif 000022
スキーム６
【０２２０】
【化２２】
2011503193.tif 000023
【０２２１】
【化２３】
2011503193.tif 000024
Ａ３：１−メチル−５−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸フェニルアミド。トルエン（１０ｍＬ）中の市販の１−メチル−５−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（２．５ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＦ（３滴）で処理し、その後に塩化チオニル（５．３ｍＬ、７３．０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を還流した状態で１６時間加熱し、室温に冷却した。次いで冷却した溶液を回転蒸発によって濃縮することによって残留物を得た。この残留物をジオキサン（１０ｍＬ）中に溶解させ、次いでジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）（７．６ｍＬ、４３．８ｍｍｏｌ）で処理し、その後にアニリン（１．６７ｍＬ、１８．３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で１６時間撹拌したままにし、次いでＨ２Ｏ（７５ｍＬ）で処理した。黄色沈殿物が形成し、これをフリットガラス漏斗を通して濾過することによって収集した。沈殿物を真空乾燥器内で、５０℃で２．５時間乾燥させた。黄色固体として回収された純粋な生成物。ＬＣ／ＭＳ  （ＡＰ−ＥＳＩ、ＡｃＯＨ  ０．０５％）  ｍ／ｚ  ２４７  （ＭＨ＋）。
【０２２２】
【化２４】
2011503193.tif 000025
Ａ４：５−アミノ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸フェニルアミド。酢酸（２５ｍＬ）中の１−メチル−５−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸フェニルアミド（１．５ｇ、６．０９ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で亜鉛末（２．３９ｇ、３６．５ｍｍｏｌ）で処理した。得られた混合物を室温で２０分間撹拌したままにし、次いで、濾紙を通して濾過した。濾液を回転蒸発により濃縮することによって残留物を得、これを塩化メチレン（２０ｍＬ）中に溶解させた。次いでこの溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した（１×３５ｍＬ）。酢酸エチル（７５ｍＬ）を添加し、その後に飽和塩化ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）を添加した。有機層を抽出し、水層を酢酸エチル（３×７５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出液を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、回転蒸発によって濃縮することによって、淡白色固体として生成物を得た。ＬＣ／ＭＳ  （ＡＰ−ＥＳＩ、ＡｃＯＨ  ０．０５％）  ｍ／ｚ  ２１７  （ＭＨ＋）。
【０２２３】
【化２５】
2011503193.tif 000026
Ａ５：Ｎ−（２−メチル−４−フェニルカルバモイル（ｐｈｅｎｙｌｃａｒｂｏｍｏｙｌ）−２Ｈ−ピラゾロ−３−イル）−プロピオンイミド酸メチルエステル。５−アミノ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸フェニルアミド（１．１ｇ、５．０９ｍｍｏｌ）のオルトプロピオン酸トリメチル溶液を酢酸（１０滴）で処理し、得られた溶液を１００℃で１８時間加熱した。反応混合物を回転蒸発によって濃縮し、次いで酢酸エチル（２５ｍＬ）中に溶解させた。次いでこの溶液を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１×２５ｍＬ）、およびＨ２Ｏ（１×２５ｍＬ）で洗浄した。有機抽出液を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、回転蒸発によって濃縮することによって残留物を得、これをヘキサン（５ｍＬ）で処理した。沈殿物が形成し、これを濾紙を通して濾過することによって収集した。さらに精製することなく白色固体として回収された純粋な生成物。ＬＣ／ＭＳ  （ＡＰ−ＥＳＩ，ＡｃＯＨ  ０．０５％）  ｍ／ｚ  ２８７  （ＭＨ＋）。
【０２２４】
【化２６】
2011503193.tif 000027
Ａ６：６−エチル−１−メチル−５−フェニル−１，５−ジヒドロ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン。オルトプロピオン酸トリメチル（５ｍＬ）中のＮ−（２−メチル−４−フェニルカルバモイル−２Ｈ−ピラゾロ−３−イル）−プロピオンイミド酸メチルエステル（７６０ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ）の溶液を、を室温で、酢酸（０．３０ｍＬ）で処理した。得られた溶液を還流した状態で４日間加熱した。反応物を室温に冷却させると、白色沈殿物が形成した。この反応混合物を、濾紙を通して濾過し、生成物を黄褐色固体として回収した。ＬＣ／ＭＳ  （ＡＰ−ＥＳＩ，  ＡｃＯＨ  ０．０５％）  ｍ／ｚ  ２５５  （ＭＨ＋）。
【０２２５】
【化２７】
2011503193.tif 000028
Ａ７：３−ブロモ−６−（１−ブロモ−エチル）−１−メチル−５−フェニル−１，５−ジヒドロ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン。一般的な手順。酢酸（１１ｍＬ）中の６−エチル−１−メチル−５−フェニル−１，５−ジヒドロ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オンの溶液を、酢酸カリウム（１．３５ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）で処理し、その後に臭素（０．７０４ｍＬ、１３．７ｍｌ）をゆっくり添加し、得られた混合物を１００℃で７時間加熱した。出発材料がＬＣ／ＭＳによって完全に消滅した後、反応混合物を１：１の飽和したチオ硫酸ナトリウム／酢酸エチル（２０ｍＬ）の撹拌混合物中に注いだ。水層を分離し、有機層をＨ２０（１×５０ｍＬ）で洗浄した。次いで有機抽出液を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、回転蒸発によって濃縮することによって、淡白色固体として粗生成物（８６４ｍｇ）を得た。ＨＰＬＣ（Ｃ−１８  Ｖｙｄａｃカラム  ５．０×２５ｃｍ、０．０５％のＣＨＣＯ２Ｈを含有する１０〜２０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２０）によって精製し、引き続いて凍結乾燥させることによって、白色固体として精製生成物を得た。ＬＣ／ＭＳ  （ＡＰ−ＥＳＩ，  ＡｃＯＨ  ０．０５％）  ｍ／ｚ  ４１３  （ＭＨ＋）。
【０２２６】
【化２８】
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Ｃ２：５−アミノ−３−メチル−イソオキサゾール−４−カルボン酸フェニルアミド。ピリジン（２．５ｍＬ）中の市販の５−アミノ−３−メチル−イソオキサゾール−４−カルボン酸（２００ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）およびアニリン（３２１μＬ、３．５２ｍｍｏｌ）の溶液を−２０℃に冷却し、次いでオキシ塩化リン（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓ  ｏｘｙｃｈｌｏｒｉｄｅ）（１６４μＬ、１．７６ｍｍｏｌ）で処理した。−２０℃で２５分後、反応混合物を室温に１６時間加温させた。この反応混合物をＨ２Ｏ（３０ｍＬ）で処理し、水層を酢酸エチル（２×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出液を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、回転蒸発により濃縮することによって粗生成物を得た。ＨＰＬＣ（Ｃ−１８  Ｖｙｄａｃカラム  ５．０×２５ｃｍ、０．０５％のＡｃＯＨを含有する１０〜２０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２０）によって精製し、引き続いて凍結乾燥することによって白色固体として精製生成物を得た。ＬＣ／ＭＳ  （ＡＰ−ＥＳＩ，  ＡｃＯＨ  ０．０５％）  ｍ／ｚ  ２１８  （ＭＨ＋）。
【０２２７】
【化２９】
2011503193.tif 000030
Ｃ３：５−（２−クロロ−アセチルアミノ）−３−メチル−イソオキサゾール−４−カルボン酸フェニルアミド。塩化メチレン（２ｍｌ）中の５−アミノ−３−メチル−イソオキサゾール−４−カルボン酸フェニルアミド（１０３ｍｇ、０．４７４ｍｍｏｌ）の溶液を、塩化クロロアセチル（３７μＬ、０．４７４ｍｍｏｌ）で処理し、室温で１６時間撹拌した。次いでこの溶液をＤＩＥＡ（８３ｍＬ、０．４７４ｍｍｏｌ）で処理した。２０分後に、この反応混合物を、追加の等量の塩化クロロアセチル（３７μＬ、０．４７４ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（８３ｍＬ、０．４７４ｍｍｏｌ）で処理した。この溶液を室温で４５分間撹拌したままにし、次いで１ＮのＨＣｌ（５ｍＬ）で処理した。水相を酢酸エチル（１×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、回転蒸発により濃縮することによって粗生成物を得た。ＨＰＬＣ（Ｃ−１８  Ｖｙｄａｃカラム  ５．０×２５ｃｍ、０．０５％のＣＨＣＯ２Ｈを含有する１０〜２０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２０）によって精製し、引き続いて凍結乾燥することによって、白色固体として精製生成物を得た。ＬＣ／ＭＳ  （ＡＰ−ＥＳＩ，  ＡｃＯＨ  ０．０５％）  ｍ／ｚ  ２９４  （ＭＨ＋）。
【０２２８】
【化３０】
2011503193.tif 000031
Ｃ４：６−クロロメチル−３−メチル−５−フェニル−５Ｈ−イソオキサゾロ［５，４−ｄ］ピリミジン−４−オン。オキシ塩化リン（７ｍＬ）中の５−（２−クロロ−アセチルアミノ）−３−メチル−イソオキサゾール−４−カルボン酸フェニルアミド（４５ｍｇ、０．１５３ｍｍｏｌ）の溶液を、封管中で、１３０℃で１時間４０分間加熱した。次いで反応混合物を回転蒸発により濃縮することによって、黄褐色残留物を得た。残留物を酢酸エチル（１０ｍＬ）中に溶解させ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）で処理した。有機層を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、回転蒸発により濃縮することによって、精製することなく純粋な生成物を得た。ＬＣ／ＭＳ  （ＡＰ−ＥＳＩ，  ＡｃＯＨ  ０．０５％）  ｍ／ｚ  ２７６  （ＭＨ＋）。
【０２２９】
【化３１】
2011503193.tif 000032
Ｆ２：３−アミノ−ピリジン−２−カルボン酸フェニルアミド。ピリジン（５５ｍＬ）中の３−アミノピコリン酸（２．０ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に、ＤＩＥＡ（１０液）を添加した。注：出発材料はあまり可溶性ではなかった。加熱および超音波処理によって溶解度を増大させる試みにより、わずかに溶解度が改善した。アニリン（３．３ｍＬ、３６．２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を−２０℃に冷却した。１０分後に、ＰＯＣｌ３および反応物を４時間撹拌したままにした。水（５０ｍＬ）を添加し、反応混合物を１８時間撹拌したままにした。次いでこの反応混合物を、センタードガラス漏斗（ｃｅｎｔｅｒｅｄ  ｇｌａｓｓ  ｆｕｎｎｅｌ）を通して濾過し、濾液をジクロロメタン（２×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出液を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２×２００ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１×２００ｍＬ）で洗浄した。次いで有機抽出液を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮することによって粗生成物を得た。１時間にわたって３０ｍＬ／分で、ジクロロメタン中の１〜２％の酢酸エチルで溶出するＩＳＣＯ自動システムで精製することにより、純粋な生成物を得た。ＬＣ／ＭＳ  （ＡＰ−ＥＳＩ，  ＡｃＯＨ  ０．０５％）  ｍ／ｚ  ２１４  （ＭＨ＋）。
【０２３０】
【化３２】
2011503193.tif 000033
Ｆ３：３−（２−クロロ−プロピオニルアミノ）−ピリジン−２−カルボン酸フェニルアミド。０℃で、３−アミノ−ピリジン−２−カルボン酸フェニルアミド（４５７ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液に、２−塩化クロロプロピオニル（０．２１２ｍＬ、２．１４ｍｍｏｌ）を添加した。４０分後に、反応混合物をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で処理した。水層を分離し、ジクロロメタン（１×１５ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮することによって、さらに精製することなく、薄灰色固体として生成物を得た。ＬＣ／ＭＳ  （ＡＰ−ＥＳＩ，  ＡｃＯＨ  ０．０５％）  ｍ／ｚ  ３０４  （ＭＨ＋）。
【０２３１】
【化３３】
2011503193.tif 000034
Ｆ４：２−（１−クロロ−エチル）−３−フェニル−３Ｈ−ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン。オキシ塩化リン（５ｍＬ）中の３−（２−クロロ−プロピオニルアミノ）−ピリジン−２−カルボン酸フェニルアミド（６２５ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ）の溶液を、封管中で、１２５℃で４８時間加熱し、次いで室温に冷却し、濃縮することによって残留物を得た。この残留物を酢酸エチル／ジクロロメタン（ｄｉｃｈｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ）（２：１、３０ｍＬ）中に溶解させ、次いで飽和炭酸水素ナトリウム溶液（１×５０ｍＬ）、その後にＨ２Ｏ（１×５０ｍＬ）で洗浄した。次いで有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮することによって粗生成物を得た。１時間にわたって３０ｍＬ／分で、ジクロロメタン中の５〜１０％のメタノールで溶出するＩＳＣＯ自動システムで未精製物質を精製することにより、純粋な生成物を得た。ＬＣ／ＭＳ  （ＡＰ−ＥＳＩ，  ＡｃＯＨ  ０．０５％）  ｍ／ｚ  ２８６  （ＭＨ＋）。
【０２３２】
【化３４】
2011503193.tif 000035
Ｆ５：２−（１−アミノ−エチル）−３−フェニル−３Ｈ−ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン。２−（１−クロロ−エチル）−３−フェニル−３Ｈ−ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン（３０４ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）の７ＮのＮＨ３／ＭｅＯＨ溶液を、封管中で、８５℃で２６．５時間加熱し、次いで室温に冷却し、濃縮することによって生成物を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰ−ＥＳＩ，ＡｃＯＨ  ０．０５％）  ｍ／ｚ  ２６７（ＭＨ＋）。
【０２３３】
【化３５】
2011503193.tif 000036
化合物１：６−［１−（６−アミノ−プリン−９−イル）−エチル］−３−ブロモ−１−メチル−５−フェニル−１，５−ジヒドロ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン。一般的な手順。ＤＭＦ（２ｍＬ）中の３−ブロモ−６−（１−ブロモ−エチル）−１−メチル−５−フェニル−１，５−ジヒドロ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン（４５ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を、アデニン（１５ｍｇ、０．１１１ｍｍｏｌ）で処理し、その後に炭酸カリウム（１５ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で１６時間撹拌し、飽和塩化ナトリウム水溶液（５ｍＬ）を添加することによってクエンチし、これにより白色沈殿物を得た。濾過後、生成物を白色固体として得た：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．２６（見かけ上、微細なｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（見かけ上、微細なｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｍ，２Ｈ），７．４４（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝７．３，１Ｈ），５．４３（ｑ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（見かけ上、微細なｄ，Ｊ＝１．８，３Ｈ），１．７０（ｄ，Ｊ＝７．０，３Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ＡＰ−ＥＳＩ，ＡｃＯＨ０．０５％）ｍ／ｚ４６８（ＭＨ＋）。
【０２３４】
【化３６】
2011503193.tif 000037
化合物２：３−ブロモ−１−メチル−５−フェニル−６−［１−（９Ｈ−プリン−６−イルスルファニル）−エチル］−１，５−ジヒドロ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン。化合物１について記載した一般的な手順に従って、ＤＭＦ（２ｍＬ）中の３−ブロモ−６−（１−ブロモ−エチル）−１−メチル−５−フェニル−１，５−ジヒドロ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン（２５ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の撹拌した溶液を、６−メルカプトプリン一水和物（１１ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）で処理し、その後に炭酸カリウム（９ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を添加した。生成物を黄色固体として得た：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４２（ｓ，１Ｈ），８．３８（微細なｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），７．３２（ｍ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝８．１，１Ｈ），７．０８（ｔ，Ｊ＝７．７，１Ｈ），５．０８（ｑ，Ｊ＝７．２，１Ｈ），３．９２（見かけ上、微細なｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），１．６８（ｄ，Ｊ＝６．８，３Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ＡＰ−ＥＳＩ，ＡｃＯＨ０．０５％）ｍ／ｚ４８５（ＭＨ＋）。
【０２３５】
【化３７】
2011503193.tif 000038
化合物４：３−メチル−５−フェニル−６−（９Ｈ−プリン−６−イルスルファニルメチル）−５Ｈ−イソオキサゾロ［５，４−ｄ］ピリミジン−４−オン。化合物１について記載した一般的な手順に従って、ＤＭＦ（５００μＬ）中の６−クロロメチル−３−メチル−５−フェニル−５Ｈ−イソオキサゾロ［５，４−ｄ］ピリミジン−４−オン（２０ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）の撹拌した溶液を、６−メルカプトプリン一水和物（１２．５ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）で処理し、その後に炭酸カリウム（１０ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）を添加した。未精製の反応混合物を、ＨＰＬＣ（Ｃ−１８  Ｌｕｎａカラム  １×１８ｍｍ、０．０５％のＣＨＣＯ２Ｈを含有する１０〜２０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）によって精製した。凍結乾燥後に、生成物を綿毛状の白色固体として得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．５５（ｓ，１Ｈ），８．４５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．５５（ｍ，５Ｈ），４．４０（ｓ，２Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ＡＰ−ＥＳＩ，ＡｃＯＨ０．０５％）ｍ／ｚ（ＭＨ＋）３９２。
【０２３６】
【化３８】
2011503193.tif 000039
化合物５：６−（６−アミノ−プリン−９−イルメチル）−３−メチル−５−フェニル−５Ｈ−イソオキサゾロ［５，４−ｄ］ピリミジン−４−オン。化合物１について記載した一般的な手順に従って、ＤＭＦ（５００μＬ）中の６−クロロメチル−３−メチル−５−フェニル−５Ｈ−イソオキサゾロ［５，４−ｄ］ピリミジン−４−オン（２０ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）の撹拌した溶液を、アデニン（１０ｍｇ、０．１１１ｍｍｏｌ）で処理し、その後に、炭酸カリウム（１５ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）を添加した。未精製の反応混合物を、ＨＰＬＣ（Ｃ−１８  Ｌｕｎａカラム  １×１８ｍｍ、０．０５％のＣＨＣＯ２Ｈを含有する１０〜２０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２０）によって精製した。凍結乾燥後に、生成物を綿毛状の白色固体として得た：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．２５（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｓ，１Ｈ），７．６３（ｍ，５Ｈ），５．１４（ｓ，２Ｈ），２．４７（ｓ，３Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ＡＰ−ＥＳＩ，ＡｃＯＨ０．０５％）ｍ／ｚ（ＭＨ＋）３７５。
【０２３７】
【化３９】
2011503193.tif 000040
化合物１１：２−［１−（４−アミノ−ベンゾイミダゾール−１−イル）−エチル］−３−フェニル−３Ｈ−ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン。ＤＭＦ（５００μＬ）中の２−（１−クロロ−エチル）−３−フェニル−３Ｈ−ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン（９４ｍｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、アデニン（６６ｍｇ、０．４９４ｍｍｏｌ）を添加し、その後に炭酸カリウム（４５ｍｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）を添加した。次いで得られた混合物を８０℃で１時間加熱し、室温に冷却し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）で処理した。得られた混合物を濃縮することによって粗生成物を得、次いでこれを、ＨＰＬＣ（Ｃ−１８  Ｌｕｎａカラム  ２５０×２１．２０ｍｍ、０．０５％のＣＦ３ＣＯ２Ｈを含有する１０〜２０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）によって精製した。凍結乾燥後に、生成物を白色固体として得た：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．８３（ｍ，１Ｈ），８．４５（微細なｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（微細なｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｍ，１Ｈ），７．８５（ｍ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），１．７７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ（ＡＰ−ＥＳＩ，ＡｃＯＨ０．０５％）ｍ／ｚ３８５（ＭＨ＋）。
【０２３８】
【化４０】
2011503193.tif 000041
化合物１２：３−フェニル−２−［１−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）−エチル］−３Ｈ−ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン。エタノール（１ｍＬ）中の２−（１−アミノ−エチル）−３−フェニル−３Ｈ−ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン（３２８ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）の溶液に、６−ブロモプリン（２４５ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（４２９μＬ、２．４６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を８５℃で２４時間加熱し、室温に冷却し、濃縮することによって粗生成物を得た。次いで未精製物質を、ＨＰＬＣ（Ｃ−１８  Ｌｕｎａカラム  ２５０×２１．２０ｍｍ、０．０５％のＣＦ３ＣＯ２Ｈを含有する１０〜２０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）によって精製した。凍結乾燥後に生成物を得た。ＬＣ／ＭＳ  （ＡＰ−ＥＳＩ，  ＡｃＯＨ  ０．０５％）  ｍ／ｚ  ３８５  （ＭＨ＋）。
【０２３９】
（実施例９）
ＰＩ３Ｋの効力、選択性、およびバイオアベイラビリティーの生化学アッセイ法
２０μＭのＡＴＰを使用する生化学アッセイ法
上記実施例２に記載された方法を使用して、ＰＩ３Ｋδに対する阻害活性および効力、ならびに他のクラスＩのＰＩ３Ｋアイソザイムに対するＰＩ３Ｋδについての選択性について、本発明の化合物を試験した。ＰＩ３Ｋα（「α」）、ＰＩ３Ｋβ（「β」）、ＰＩ３γ（「γ」）、およびＰＩ３Ｋδ（「δ」）について、ＩＣ５０値（μＭ）を示す。化合物の選択性を例示するために、ＰＩ３Ｋδと比べたＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、およびＰＩ３Ｋγについての化合物のＩＣ５０値の比を、それぞれ「α／δ比」、「β／δ比」、および「γ／δ比」として示す。
【０２４０】
最初の選択性アッセイ法は、放射標識検出のために１００μＬのＥｃｏｓｃｉｎｔを使用することを除いて、実施例２における選択性アッセイプロトコールとまったく同様に行った。引き続く選択性アッセイ法は、３Ｘ基質原料が０．０５ｍＣｉ／ｍＬのγ［３２Ｐ］ＡＴＰおよび３ｍＭのＰＩＰ２を含有したことを除いて、同じ３Ｘ基質原料を使用して同様に行った。引き続く選択性アッセイ法はまた、３Ｘ酵素原料が、ここでは３ｎＭの任意の所与のＰＩ３Ｋアイソフォームを含有したことを除いて、同じ３Ｘ酵素原料を使用した。
【０２４１】
すべての選択性アッセイ法について、試験化合物を検量し、１００％のＤＭＳＯ中の１０〜５０ｍＭの原料中に溶解させ（そのそれぞれの溶解度に応じて）、−２０℃で貯蔵した。化合物を解凍し（室温または３７℃）、希釈して水中で３００μＭにし、これから水中への３倍希釈系列を行った。これらの希釈液から酵素（正の）対照、および酵素なし（バックグラウンド）対照のために使用した水のブランクとともにアッセイウェル中に２０μＬを添加した。アッセイ法の残りは、実施例２における選択性アッセイプロトコールに従って本質的に行った。
【０２４２】
（実施例１０）
ＰＩ３Ｋδ活性の阻害剤についての細胞に基づくアッセイデータ
上記の実施例３に記載した方法を使用して、本発明の化合物を、好中球（ＰＭＮ）エラスターゼ放出のアッセイ法における阻害活性および効力について試験した。
【０２４３】
本発明の化合物を試験し、ＰＩ３Ｋδの選択的阻害剤であることを示した。選択した化合物についてのインビトロの活性データとともに、本発明の範囲内の具体的な化合物の一部を表１に示す。
【０２４４】
【表１−１】
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【０２４５】
【表１−２】
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【０２４６】
【表１−３】
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明確さと理解の目的で、ある特定の実施形態に具体的に言及して本発明を説明してきたが、本発明が以下に示す特許請求の範囲において定義されるように、本発明の範囲内でさらなる変更および改変を実践することができることが当業者に明らかになる。したがって、特許請求の範囲において具体的に列挙したもの以外に、本発明に対していかなる限定も行われるべきではない。
【国際調査報告】
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