(57)【要約】  本発明は、ヒトIL-23に対する抗原結合タンパク質、それを含む医薬組成物、ならびに炎症性疾患、例えば関節リウマチ（RA）の治療および／または予防におけるかかる抗原結合タンパク質の使用に関する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトIL-23と結合し、かつ配列番号３、配列番号４、配列番号７３、配列番号７４、配列番号９５もしくは配列番号１００のCDRH3、またはCDRH3に1もしくは2もしくは3個のアミノ酸置換を含有するその変異体、を含む抗原結合タンパク質。
【請求項２】
以下のCDR：
CDRH1：配列番号１
CDRH2：配列番号２
CDRH3：配列番号４
CDRL1：配列番号５
CDRL2：配列番号６
CDRL3：配列番号７
を含む、請求項１に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項３】
請求項１または２に記載の抗原結合タンパク質と同じエピトープに結合し、かつヒトIL-23を中和する抗原結合タンパク質。
【請求項４】
ヒトIL-23およびカニクイザルIL-23の両方を中和する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項５】
ヒトIL-23を中和するが、ヒトIL-12を中和しない、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項６】
抗体である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項７】
ヒト化抗体またはキメラ抗体である、請求項６に記載の抗体。
【請求項８】
請求項１または２に記載の抗原結合タンパク質と競合し、かつヒトIL-23を中和する抗原結合タンパク質。
【請求項９】
IgGアイソタイプの抗体である、請求項６に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１０】
ヒト抗体定常領域がIgG1である、請求項９に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１１】
配列番号１６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４および配列番号１１５から選択されるVHドメインと、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号９６、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２および配列番号１２３から選択されるVLドメインとを含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１２】
Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニ抗体、ミニボディ、単離されたVH、単離されたVLまたはdAbを含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
【請求項１３】
該抗体のADCCおよび／または補体活性化が低減されるように変異型Fc領域を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１４】
第１および第２のベクターを含む形質転換またはトランスフェクトされた組換え宿主細胞であって、第１のベクターが請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターが請求項１〜１３のいずれか１項に記載の軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む、上記宿主細胞。
【請求項１５】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１６】
免疫系媒介性炎症、例えば乾癬、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、神経変性疾患、例えば多発性硬化症、好中球駆動性疾患、例えばCOPD、ヴェグナー血管炎、嚢胞性線維症、シェーグレン症候群、慢性移植片拒絶、1型糖尿病移植片対宿主病、喘息、アレルギー性疾患、アトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、アレルギー性鼻炎；甲状腺炎、脊椎関節炎、強直性脊椎炎、ブドウ膜炎、多発性軟骨炎または強皮症を含む他の自己免疫性疾患に罹患したヒト患者の治療方法であって、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質の治療有効量を投与するステップを含む方法。
【請求項１７】
免疫系媒介性炎症、例えば乾癬、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、神経変性疾患、例えば多発性硬化症、好中球駆動性疾患、例えばCOPD、ヴェグナー血管炎、嚢胞性線維症、シェーグレン症候群、慢性移植片拒絶、1型糖尿病移植片対宿主病、喘息、アレルギー性疾患、アトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、アレルギー性鼻炎；甲状腺炎、脊椎関節炎、強直性脊椎炎、ブドウ膜炎、多発性軟骨炎または強皮症を含む他の自己免疫性疾患の治療または予防のための医薬の製造における、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質の使用。
【請求項１８】
免疫系媒介性炎症、例えば乾癬、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、神経変性疾患、例えば多発性硬化症、好中球駆動性疾患、例えばCOPD、ヴェグナー血管炎、嚢胞性線維症、シェーグレン症候群、慢性移植片拒絶、1型糖尿病移植片対宿主病、喘息、アレルギー性疾患、アトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、アレルギー性鼻炎；甲状腺炎、脊椎関節炎、強直性脊椎炎、ブドウ膜炎、多発性軟骨炎または強皮症を含む他の自己免疫性疾患の治療または予防に使用するための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗原結合タンパク質、具体的にはインターロイキン23（IL-23）に結合し、その活性を中和する抗体、かかる抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、上記抗原結合タンパク質を含む医薬組成物、ならびに炎症に関連する疾患、例えば関節リウマチ（RA）の治療および／または予防における該抗原結合タンパク質の使用に関する。本発明の別の態様、目的および利点は、以下の説明から明らかになるであろう。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン23（IL-23）は、IL-12ヘテロダイマーサイトカインファミリーのメンバーであり、IL12およびIl-23に共通のp40鎖と、IL-23に固有のp19鎖を含む。IL-12は、p40とそのパートナーp35（これはIL-12に固有である）のヘテロダイマーである。
【０００３】
IL-12p35が、分泌にIL-12p40を必要とすることを証明した以前の研究と同様に、p19の分泌は、p40とパートナー形成するその能力に依存することも明らかにされた（Oppmannら、715〜25）。エプスタイン-バーウイルス誘導分子3（EBI3）とパートナー形成するp28サブユニットからなる別のIL-12ファミリーメンバーは、IL-27と呼ばれている（Pflanzら、Immunity. 16.6 (2002): 779-90）。
【０００４】
様々なクラスの病原体を識別する先天性能力（大きなクラスの病原体間で共有されている保守的分子パターンの認識による）は、抗原特異的TおよびB細胞の選択、活性化および増殖に対する適応応答を適合させるのに用いる適切な情報を提供する。多種多様な病原体に応答して抗原提示細胞（APC）により産生されるサイトカインIL-12、IL-23およびIL-27は、これらの応答を形作る重要な調節分子である。
【０００５】
それぞれが産生したサイトカインに基づいて2つのサブグループ（Th1および Th2と呼ばれる）に細分することができるマウスCD4+ Tヘルパー細胞クローンの特性を説明する1986年のMosmann & Coffmanの有力な研究（Mosmannら、J.Immunol. 175.1 (2005): 5-14）により、感染またはワクチン接種時に誘発された異なるタイプの免疫応答についての基準が提供された。適切なTh1またはTh2免疫応答の誘発の結果は、マウスモデルだけではなく、ヒトの疾患転帰においても重大である。従って、IFNg産生を特徴とするTh1 CD4+ T細胞は、ヒトの疾患およびin vivo動物モデルの両方において、らい菌（Mycobactoerium leprae）、結核菌（Mycobacterium tuberculosis）およびドノバンリーシュマニア（leshmania donovani）などの生物により引き起こされる細胞内感染の適切な抑制に重要である。対照的に、IL4、IL5およびIL13サイトカインの産生を特徴とするTh2 CD4+ T細胞の選択的誘導は、喘息およびアレルギー性鼻炎などのIgE関連アレルギー性反応と同様、ある種の蠕虫感染からの防御にも関連している。マウスモデルにおいて、細胞内病原体に感染しやすいマウス（優勢なTh2免疫応答のために）は、IL-12の適切な投与により耐性にすることができ、逆に、耐性マウスを中和抗p40抗体の投与により感染しやすくすることができた。このような研究から、IL-12は、Th1細胞の分化に関与する極めて重要なサイトカインであることが確認された。
【０００６】
実際に、長年にわたり、IL-12により誘導されたTh1 CD4+ T細胞は、中和p40抗体またはp40ノックアウトマウスの使用に基づく極めて多様な自己免疫疾患、例えば実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）、コラーゲン誘導性関節炎（CIA）、炎症性大腸炎および自己免疫性ブドウ膜炎などの誘発に関連すると考えられた。このような疾患は、高レベルのIFNγ（始原型Th1サイトカイン）を特徴とするが、自己免疫性炎症におけるこのサイトカインの実際の役割はよくわかっていない。これは、EAEの際の中枢神経系（CNS）炎症におけるp40およびIFNγの役割により説明することができる。IFNγまたはIFNγ媒介型シグナル伝達が欠失した動物（ifn-、ifnr-、およびstat1欠失マウス）は、依然として罹患しやすいままであり、疾患の発症がより速く、より重症の病態を伴った（Langrishら、Immunol.Rev. 202 (2004): 96-105；Langrishら、J.Exp.Med. 201.2 (2005): 233-40；Mosmannら、5-14）。p40抗体を用いた処置により、 EAEの発症が阻害された。同様の観察結果がCIAモデルについても記載されている。p40中和抗体で処置すると、疾患は予防されたが、IFNγシグナル伝達経路の非存在により、疾患の重症度が増大した。さらに、IL-12 p35欠失動物は、EAEに極めて罹患しやすかったが、このことは、p40のさらに別の役割、すなわち、IL-12に対する別のp40サイトカインを示唆するものである。
【０００７】
IL-23の同定と、IL-12 p40鎖がこれら2つのサイトカインにより共有されているという認識は、自己免疫応答の伝播においてp40は必要であるが、他のTh1前炎症性サイトカインは必要ではないことに見とめられる不均衡を説明している。この仮定は、p19欠失動物を用いた研究において確認されている。こうした動物は、p40欠失動物と同様に、EAEおよびCIAに対して完全に耐性である。さらに、IL-23（ただし、IL-12ではない）の存在下で記憶T細胞を刺激すると、IL-17の産生が起こるという知見は、エフェクターT細胞機能の調節におけるIL-23のユニークな役割の証拠を提供するものであった。遺伝子発現研究などのさらに別の研究から、IL-23依存的CD4+ T細胞集団が、IL-12誘導Th1細胞とは異なるプロフィールを呈示したことが明らかにされた。これに続くin vivo研究では、ナイーブなレシピエントへの適合移植後に疾患を誘発するわずか105個のCNS抗原特異的IL-17産生CD4+ T細胞で、EAEにおけるIL-23駆動性IL-17産生細胞の役割が証明されている（Langrishら、233-40）。IL-23欠失マウス（p19-/-）は、CIAに対して耐性であり、これは、骨異化作用において主要な役割を有するサイトカインであるIL-17を産生するCD4+ T細胞の欠失と相関している（Murphyら、 J.Exp.Med. 198.12 (2003): 1951-57）。IL-10欠失マウスにおける自発性腸炎の発現は、IL-23p19欠失マウスと交雑すると、完全に阻止されるが、このことは、腸炎の誘発におけるこのサイトカインの不可欠な役割を証明している（Yenら、J.Clin.Invest 116.5 (2006): 1310-16）。IL-23/IL-17免疫系の役割に関する近年の知見は自己免疫性炎症におけるその役割を説明するものであるが、IFNγシグナル伝達欠失マウスに観察される増悪した疾患については説明することができない。このような観察結果は、IFNγ（またはIFNγ媒介性シグナル伝達）がIL-23の作用を相殺するための調節系の一部であることを確かに示唆している。
【０００８】
ヒトCD4+ T細胞を用いた近年の研究もまた、CD4+ IL17産生T細胞の分化または維持におけるIL-23の役割を示しており（Wilsonら、Nature Immunology (2007) 8 950-957）、この研究では、IL-23R陽性T細胞は、IL-23R陰性細胞より高レベルの量のIL 17Aを産生することができた。また、免疫組織化学分析でも、乾癬に罹患した患者の生検からの非病変皮膚に比べ、病変皮膚において樹状細胞によるIL-23 p19の発現増大が明らかにされている。
【０００９】
IL-23経路のターゲティングを正当とする別の証拠は、IL-23経路と、関連する一塩基性多型（SNP）をいくつかの炎症性疾患の危険因子として確認したゲノムワイド関連解析研究から明らかになった。IL-12/IL-23経路は、2つの乾癬感受性遺伝子IL12BおよびIL-23Rの同定により、乾癬への関与が示された（Cargillら、Am.J.Hum.Genet. 80.2 (2007): 273-90）。また、同様の研究でも、クローン病からの強力な防御を賦与するIL-23R の稀有なコード変異体が同定されている（Duerrら、Science 314.5804 (2006): 1461-63）。こうした知見は、多数の以前確認された遺伝子座（IL-23内のSNPなど）での関連を同様に観察したWellcome Trust case Control Consortiumにより英国の集団において確認されている。成人集団においてクローン病からの防御を賦与するR381Q SNPの稀有な対立遺伝子は、小児において炎症性腸疾患（IBD）と負に関連しており、このことは、IL-23炎症性経路の役割を小児クローン病にまで拡大している（Dubinskyら、Inflamm.Bowel.Dis. 13.5 (2007): 511-15）。
【００１０】
感受性変異体が同定され、クローン病、乾癬ならびにその他の自己免疫性炎症性障害におけるIL-23R経路の役割の理解が深まれば、この経路をターゲティングする治療的介入が改善されるに違いない。これを支持するものとして、IL-12、IL-23が共有するサブユニットp40に対するモノクローナル抗体は、活性クローン病患者において臨床応答および寛解を誘導した（Mannonら、N.Engl.J.Med. 351.20 (2004): 2069-79）が、これは、乾癬における治療効果を証明するものである（Gottliebら、Curr.Med.Res.Opin. 23.5 (2007): 1081-92; Kruegerら、N.Engl.J.Med. 356.6 (2007): 580-92）。抗p40 mAbを用いた乾癬患者における初期の試験では、心筋梗塞などの重篤な有害事象がみられた（Kruegerら、580-92）が、別の試験では、そのような証拠は一切なかった（Gottliebら、1081-92）。しかし、IL-23R経路の特異的ブロッキングは、防御応答をまったく損なうことなく、器官特異的炎症のブロッキングに有効でありうると仮定されている（McKenzie, Trends Immunol. 27.1 (2006): 17-23）。
【００１１】
当分野において、いくつかの抗IL-23特異的mAbが記載されている。このようなものとして、IL-23のp19サブユニットの特異的部分に結合するmAb（WO 2007/024846号、WO 2007/005955号）、またはIL-23p40特異的配列に結合するが、IL12のp40サブユニットには結合しないmAb（US 2005/0137385 A1）が挙げられる。加えて、p40（IL12およびIL-23に共通）に結合し、IL12およびIL-23の両方を中和するmAbは、乾癬（Gottliebら、Current Med. Res.& Op 23 (2007): 1081-1092）およびクローン病（Mannonら、N. Eng. J. Med 351 (2004): 2069-2079）において臨床効果を示している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
抗IL-23抗体を提供する技術にもかかわらず、治療に有用な抗原結合タンパク質、例えばヒトIL-23に結合して、その活性を阻害するモノクローナル抗体を単離および開発することは依然として極めて望ましい目標である。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
前述した疾患／障害の治療のための抗原結合タンパク質が、本発明により提供され、これについて以下に詳しく説明する。
【００１４】
本発明は、IL-23に結合する抗原結合タンパク質、例えばIL-23に結合する抗体を提供する。本発明のいくつかの実施形態は、マウスモノクローナル抗体（mAb）8C9 2H6に関連する、またはこれに由来するモノクローナル抗体（mAb）を含む。8C9 2H6重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号8として提供される。8C9 2H6軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号10として提供される。
【００１５】
本発明の重鎖可変領域（VH）は、以下のCDR（Kabatにより定義される通り）を含む：
本発明の重鎖可変領域のCDRは、以下のCDR：
【表１】
2011501738.tif 000002
【００１６】
または配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号９５、配列番号９８、配列番号９９および配列番号１００に示される別のCDR
を含みうる。
【００１７】
本発明の軽鎖可変領域は、以下のCDR（Kabatにより定義される通り）：
2011501738.tif 000003
【００１８】
または配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号１０１および配列番号１０２に示される別のCDR
を含む。
【００１９】
一実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、軽鎖可変領域と対形成することにより、ヒトIL-23に結合して、ヒトIL-23の活性を中和する抗原結合Fvユニットを形成する、配列番号３、配列番号４、配列番号７３、配列番号７４、配列番号９５および配列番号１００からなるリストより選択されるCDRH3を含有する重鎖可変領域を含む。この実施形態の一態様では、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号２、配列番号７２、配列番号９８および配列番号９９からなるリストより選択されるCDRH2は、重鎖可変領域にも存在する。別の態様では、抗原結合Fvユニットは、10nM以下、さらに具体的には約2nM以下、例えば約0.8nM〜2nM、1nM以下、または100pM以下の高いアフィニティー（Biacoreにより測定した場合）でヒトIL-23に結合する。一つのこのような実施形態において、これは、例えば実施例５に記載のように、抗原結合Fvユニットをバイオセンサーチップに捕捉して、Biacoreにより測定する。
【００２０】
本発明の重鎖可変領域は、軽鎖可変領域と一緒に、従来の免疫グロブリン様式（例えばヒトIgG、IgA、IgMなど）の形にして、ヒトIL-23への結合を可能にすることもできるし、またはヒトIL-23に結合するいずれか他の「抗体様」形態（例えば一本鎖Fv、ダイアボディ、Tandabs（商標）など（それ以外の「抗体」形態の概要については、HolligerおよびHudson, Nature Biotechnology, 2005, 第23巻、第9号、1126-1136を参照））を形成することもできる。
【００２１】
本発明の抗原結合タンパク質には、配列番号８および配列番号１０に記載される可変領域を有するマウス抗体、またはその非マウス同等物、例えばラット、ヒト、キメラもしくはヒト化変異体などが含まれる。
【００２２】
本発明の抗原結合タンパク質に関連して、本明細書において使用される「ヒトIL-23に結合する」という用語は、抗原結合タンパク質が、ヒトIL-23（以後hIL-23と称する）には結合するが、IL-12のような他のヒトタンパク質には結合しないか、または結合が有意ではないことを意味する。具体的に、本発明の抗原結合タンパク質は、Biacoreアッセイ（例えば実施例５に記載のBiacoreアッセイ）においてヒトIL-23に結合するのがみられるが、同等のBiacoreアッセイにおいてヒトIL-12には結合しないか、または有意に結合しないことから、本発明の抗原結合タンパク質は、ヒトIL-23に結合する。しかし、この用語は、本発明のいくつかの抗原結合タンパク質が、他の種由来のIL-23、例えばカニクイザルIL-23と交差反応性であってもよいということを除外するわけではない。
【００２３】
本明細書で使用される用語「抗原結合タンパク質」とは、ヒトIL-23に結合して、これを中和することができる抗体、抗体フラグメントおよびその他のタンパク質構築物を指す。
【００２４】
本発明の別の態様では、抗原結合タンパク質、例えばヒトIL-23に結合し、配列番号３に示される配列の変異体であるCDRH3を含む抗体であって、上記変異体のCDRH3は、配列番号３において対応する位置にある残基とは異なっており、例えば配列番号３の最初の残基（システイン）が、異なるアミノ酸、例えば配列番号４もしくは配列番号７３もしくは配列番号７４の配列を有するCDRに置換されている、および／または例えば配列番号３の8番目の残基（バリン）が、異なるアミノ酸に、例えば配列番号９５に示されるように置換されている、上記抗原結合タンパク質が提供される。従って、一態様において、CDRH3の変異体は、例えば位置1または位置8で、配列番号３のCDRH3とは異なる1個の残基を有し、例えばCDRH3の位置1のアミノ酸残基は、システイン、セリン、アラニンおよびバリンから選択され、例えばCDRH3の位置8のアミノ酸残基は、バリンおよびメチオニンから選択される。別の態様では、CDRH3の変異体は、例えば配列番号９５に示されるように、位置1および8の両方に置換を含む。
【００２５】
本発明のさらに別の態様では、CDRH3は、配列番号３に示される配列の変異体を含み、この変異体のCDRH3内の1、2もしくは3個の残基は配列番号３において対応する位置の残基とは異なり、配列番号３の4番目の残基（イソロイシン）が、異なるアミノ酸に、例えば配列番号１００の配列を有するCDRに置換されており、例えばCDRH3の位置4のアミノ酸残基は、トレオニンであってもよい。さらに、このような変異体はまた、位置1および8で、前記置換の一方または両方を含んでいてもよい。
【００２６】
一態様において、本発明の抗原結合タンパク質、例えば抗体は、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号２、配列番号７２、配列番号９８もしくは配列番号９９に示されるCDRH2と、配列番号３、配列番号４、配列番号７３、配列番号７４、配列番号９５もしくは配列番号１００に示されるCDRH3と、配列番号５、配列番号７５もしくは配列番号１０１に示されるCDRL1と、配列番号６、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０もしくは配列番号１０２に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含む。一つのこのような実施形態において、抗原結合タンパク質、例えば抗体は、以下のCDRを含む：
CDRH1：配列番号１
CDRH2：配列番号２
CDRH3：配列番号４
CDRL1：配列番号５
CDRL2：配列番号６
CDRL3：配列番号７。
【００２７】
本発明の別の態様では、抗原結合タンパク質、例えば、ヒトIL-23に結合し、かつ以下に示すCDR：
CDRH1：配列番号１
CDRH2：配列番号２
CDRH3：配列番号４
CDRL1：配列番号５
CDRL2：配列番号６および
CDRL3：配列番号７、
またはこれらCDRのいずれか１以上の変異体であって、この変異体の各CDR配列において1、2個の残基もしくは3個までの残基が、前記配列番号において対応する位置の残基とは異なるCDR、例えば、配列番号３、配列番号７２、配列番号９８、配列番号９９、配列番号７３、配列番号７４、配列番号９５、配列番号１００、配列番号７５、配列番号１０１、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０および配列番号１０２に示されるCDRを含む抗体が提供される。
【００２８】
本明細書において、抗体配列中のアミノ酸残基は、Kabatスキームに従って番号が付けられている。同様に、「CDR」、「CDRL1」、「CDRL2」、「CDRL3」、「CDRH1」、「CDRH2」、「CDRH3」といった用語は、Kabatら; "Sequences of proteins of Immunological Interest" NIH, 1987に記載のKabatの番号付け方式に従う。
【００２９】
本発明の別の態様では、配列番号１６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４または配列番号１１５に示される配列を有するVHドメインと；配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号９６、配列番号９７、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２または配列番号１２３に示される配列を有するVLドメインとを含む、抗原結合タンパク質、例えばヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。VHおよびVL配列のこのリストは、いずれか個別のVH配列といずれか個別のVL配列のあらゆる可能な組合せを具体的に開示することを意図するものである。
【００３０】
本発明の重鎖可変領域は、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号２、配列番号７２、配列番号９８もしくは配列番号９９に示されるCDRH2と、配列番号３、配列番号４、配列番号７３、配列番号７４、配列番号９５もしくは配列番号１００に示されるCDRH3を含みうる。例えば、本発明の重鎖可変領域は、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号２に示されるCDRH2と、配列番号３に示されるCDRH3を含みうる。あるいは、これは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号２に示されるCDRH2と、配列番号４に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号２に示されるCDRH2と、配列番号７３に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号２に示されるCDRH2と、配列番号７４に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号７２に示されるCDRH2と、配列番号３に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号７２に示されるCDRH2と、配列番号４に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号７２に示されるCDRH2と、配列番号７３に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号７２に示されるCDRH2と、配列番号７４に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号２に示されるCDRH2と、配列番号９５に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号７２に示されるCDRH2と、配列番号９５に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号９８に示されるCDRH2と、配列番号３に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号９８に示されるCDRH2と、配列番号４に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号９８に示されるCDRH2と、配列番号７３に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号９８に示されるCDRH2と、配列番号７４に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号９８に示されるCDRH2と、配列番号９５に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号９８に示されるCDRH2と、配列番号１００に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号９９に示されるCDRH2と、配列番号３に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号９９に示されるCDRH2と、配列番号４に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号９９に示されるCDRH2と、配列番号７３に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号９９に示されるCDRH2と、配列番号７４に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号９９に示されるCDRH2と、配列番号９５に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号９９に示されるCDRH2と、配列番号１００に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号２に示されるCDRH2と、配列番号１００に示されるCDRH3を含みうる；またはこれは、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号７２に示されるCDRH2と、配列番号１００に示されるCDRH3を含みうる。
【００３１】
本発明の軽鎖可変領域は、配列番号５、配列番号７５もしくは配列番号１０１に示されるCDRL1と、配列番号６、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０もしくは配列番号１０２に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる。例えば、本発明の軽鎖可変領域は、配列番号５に示されるCDRL1と、配列番号６に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号５に示されるCDRL1と、配列番号７６に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号５に示されるCDRL1と、配列番号７７に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号５に示されるCDRL1と、配列番号７８に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号５に示されるCDRL1と、配列番号７９に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号５に示されるCDRL1と、配列番号８０に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号７５に示されるCDRL1と、配列番号６に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号７５に示されるCDRL1と、配列番号７６に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号７５に示されるCDRL1と、配列番号７７に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号７５に示されるCDRL1と、配列番号７８に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号７５に示されるCDRL1と、配列番号７９に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号７５に示されるCDRL1と、配列番号８０に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号１０１に示されるCDRL1と、配列番号６に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号１０１に示されるCDRL1と、配列番号７６に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号１０１に示されるCDRL1と、配列番号７７に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号１０１に示されるCDRL1と、配列番号７８に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号１０１に示されるCDRL1と、配列番号７９に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号１０１に示されるCDRL1と、配列番号８０に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号１０１に示されるCDRL1と、配列番号１０２に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号５に示されるCDRL1と、配列番号１０２に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる；またはこれは、配列番号７５に示されるCDRL1と、配列番号１０２に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含みうる。
【００３２】
これら重鎖可変領域のいずれかを軽鎖可変領域のいずれと組み合わせてもよく、例えば本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号１に示されるCDRH1と、配列番号２、配列番号７２、配列番号９８もしくは配列番号９９に示されるCDRH2と、配列番号４、配列番号７３もしくは配列番号７４に示されるCDRH3を含む重鎖可変領域と、配列番号７５もしくは配列番号１０１に示されるCDRL1と、配列番号６もしくは配列番号７６に示されるCDRL2と、配列番号7に示されるCDRL3を含む軽鎖可変領域とを組み合わせて含みうる。
【００３３】
本発明の重鎖可変領域のいずれかを好適なヒト定常領域、例えば配列番号９２に示されるものと組み合わせて、全長重鎖を得ることもできる。また、本発明の軽鎖可変領域のいずれかを好適なヒト定常領域、例えば配列番号９１に示されるものと組み合わせて、全長軽鎖を得ることもできる。
【００３４】
本発明の重鎖可変領域構築物は、軽鎖と対形成させて、ヒトIL-23結合ユニット（Fv）を任意の形態、例えば、従来のIgG抗体形態を形成することができる。本発明のVH構築物を含む全長（FL）重鎖配列の例として、配列番号２６、６０、６２、６４および６６が挙げられる。
【００３５】
本発明の重鎖可変領域配列と共にFvを形成する軽鎖可変領域配列は、このFvをヒトIL-23に結合させることができる任意の配列であってよい。本発明のVH構築物を含む全長（FL）軽鎖配列の例として、配列番号２８、３０、３２、３４、６８、７０、９３および９４が挙げられる。
【００３６】
具体的な実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質は、以下の可変領域対を含む：
A3M0（配列番号１６＋配列番号１８）
A3M1（配列番号１６＋配列番号２０）
A3N1（配列番号１６＋配列番号２２）
A3N2（配列番号１６＋配列番号２４）
A7M3（配列番号５２＋配列番号５６）
A10M3（配列番号５４＋配列番号５６）
A3M4（配列番号１６＋配列番号５８）
A5M0（配列番号４８＋配列番号１８）
A6M0（配列番号５０＋配列番号１８）
A8M3（配列番号８１＋配列番号５６）
A9M3（配列番号８２＋配列番号５６）
A10.5M3（配列番号８５＋配列番号５６）
A11M3（配列番号８３＋配列番号５６）
A12M3（配列番号８４＋配列番号５６）
A11.5M3（配列番号８６＋配列番号５６）
A12.5M3（配列番号８７＋配列番号５６）
A8M4（配列番号８１＋配列番号５８）
A9M4（配列番号８２＋配列番号５８）
A10.5M4（配列番号８５＋配列番号５８）
A11M4（配列番号８３＋配列番号５８）
A11.5M4（配列番号８６＋配列番号５８）
A12M4（配列番号８４＋配列番号５８）
A12.5M4（配列番号８７＋配列番号５８）
A13M4（配列番号８８＋配列番号５８）
A14M4（配列番号８９＋配列番号５８）
A15M4（配列番号９０＋配列番号５８）
A3M12（配列番号１６＋配列番号１２１）
A3M13（配列番号２６＋配列番号８８）
A23M4（配列番号１１０＋配列番号５８）
A10.5M14（配列番号８５＋配列番号１２３）
A24M4（配列番号１１１＋配列番号５８）。
【００３７】
別の実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質、例えば抗体は、以下の全長配列を含む：
A3M0（配列番号２６＋配列番号２８）
A3M1（配列番号２６＋配列番号３０）
A3N1（配列番号２６＋配列番号３２）
A3N2（配列番号２６＋配列番号３４）
A5M0（配列番号６０＋配列番号２８）
A6M0（配列番号６２＋配列番号２８）
A7M3（配列番号６４＋配列番号６８）
A3M4（配列番号２６＋配列番号７０）
A3M5（配列番号２６＋配列番号９３）
A3M6（配列番号２６＋配列番号９４）
A5M4（配列番号６０＋配列番号７０）
A6M4（配列番号６２＋配列番号７０）
A7M4（配列番号６４＋配列番号７０）
A10M4（配列番号６６＋配列番号７０）
A10M3（配列番号６６＋配列番号６８）。
【００３８】
一実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質は、IL-23に結合することができ、また、1または複数のTH17型サイトカイン、例えばIL-17、IL-22、もしくはIL-21に結合することもできる、1または複数の本発明のCDRを含む多重特異的抗体であってもよい。一つのこのような実施形態では、CDRH3、または本明細書で定義した抗原結合タンパク質を含み、IL-17、IL-22もしくはIL-21に結合することができるさらに別の抗原結合部位も含む、多重特異的抗体が提供される。本発明の抗原結合タンパク質の一例は、1または複数のTH17型サイトカイン、例えばIL-17、IL-22もしくはIL-21に対する特異性を有する1または複数のエピトープ結合ドメインに連結した、本明細書に定義されるCDRH3を含む、IL-23特異的抗体である。
【００３９】
本明細書で使用される「ドメイン」という用語は、残りのタンパク質とは独立の三次構造を有する、ある折りたたみタンパク質構造を指す。一般に、ドメインは、タンパク質の個別の機能特性に関連し、多くの場合、残りのタンパク質および／またはドメインの機能を損なうことなく、付加、除去、または他のタンパク質に転移させたりすることができる。「単一抗体可変ドメイン」は、抗体可変ドメインに特徴的な配列を含む折りたたみポリペプチドドメインである。従って、このようなものとして、完全抗体可変ドメインおよび修飾可変ドメイン、例えば、1以上のループが、抗体可変ドメインに特徴的ではない配列で置換されているもの、あるいは切断されている、またはNもしくはC末端伸長を含む抗体可変ドメイン、ならびに少なくとも全長ドメインの結合活性および特異性を保持する可変ドメインの折りたたみフラグメントが挙げられる。
【００４０】
本明細書で使用される「免疫グロブリン単一可変ドメイン」という用語は、別のV領域またはドメインとは独立に、抗原またはエピトープに特異的に結合する抗体可変ドメイン（VH、VHH、VL）を指す。免疫グロブリン単一可変ドメインは、他の異なる可変ドメイン領域または可変ドメインと一緒に、ある形態（例えばホモまたはヘテロ多量体）で存在することができ、この場合、単一免疫グロブリン可変ドメインによる抗原結合に、他の領域またはドメインは必要ではない（すなわち、免疫グロブリン単一可変ドメインは、他の可変ドメインとは独立に、抗原に結合する）。「ドメイン抗体」または「dAb」は、本明細書でその用語が使用されているように、抗原に結合することができる「免疫グロブリン単一可変ドメイン」と同じである。免疫グロブリン単一可変ドメインは、ヒト抗体可変ドメインでよいが、その他の種に由来する単一抗体可変ドメイン、例えばげっ歯類（例えばWO 00/29004号に開示されている通り）、テンジクザメおよびラクダ科VHH dAbも含む。ラクダ科VHHは、軽鎖が天然に欠失した重鎖抗体を産生する種、例えばラクダ、ラマ、アルパカ、ヒトコブラクダ、およびグアナコなどに由来する免疫グロブリン単一可変ドメインポリペプチドである。このようなVHHドメインは、当分野で利用可能な標準的技術に従い、ヒト化してもよく、こうしたドメインもやはり本発明の「ドメイン抗体」であるとみなされる。本明細書で使用される「VH」はラクダ科VHHドメインを含む。
【００４１】
用語「エピトープ結合ドメイン」は、別のV領域またはドメインとは独立に、抗原またはエピトープに特異的に結合するドメインを指し、これは、ドメイン抗体でもよいし、あるいは、CTLA-4、リポカリン、SpA、Affibody、アビマー、GroEI、トランスフェリン、GroESおよびフィブロネクチン／アドネクチンからなる群より選択されるスカフォールドの誘導体であるドメインでもよく、これらは、天然リガンド以外のリガンドへの結合を達成する目的で、タンパク質工学に付されたものである。
【００４２】
本明細書で用いられる「抗原結合部位」という用語は、抗原に特異的に結合することができる抗原結合タンパク質上の部位を指し、これは、単一ドメイン、例えばエピトープ結合ドメイン、または一本鎖Fv（ScFv）ドメインでもよいし、あるいは、標準的抗体に見いだすことができるような対形成VH/VLドメインでもよい。
【００４３】
本発明のさらに別の態様は、薬学的に許容される希釈剤または担体と一緒に、本発明の抗原結合タンパク質を含む医薬組成物を提供する。
【００４４】
別の態様では、本発明は、ヒトにおける、免疫系媒介性炎症に関連する疾患または障害、例えば乾癬、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、神経変性疾患、例えば多発性硬化症、好中球駆動性疾患、例えばCOPD、ヴェグナー血管炎、嚢胞性線維症、シェーグレン症候群、慢性移植片拒絶、1型糖尿病移植片対宿主病、喘息、アレルギー性疾患、アトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、その他の自己免疫疾患、例えば甲状腺炎、脊椎関節炎、強直性脊椎炎、ブドウ膜炎、多発性軟骨炎または強皮症の治療または予防方法であって、それを必要とするヒトに、有効量の本発明の抗原結合タンパク質を投与することを含む方法を提供する。一実施形態では、障害は関節リウマチである。
【００４５】
別の態様では、本発明は、免疫系媒介性炎症、例えば乾癬、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、神経変性疾患、例えば多発性硬化症、好中球駆動性疾患、例えばCOPD、ヴェグナー血管炎、嚢胞性線維症、シェーグレン症候群、慢性移植片拒絶、1型糖尿病移植片対宿主病、喘息、アレルギー性疾患、アトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、その他の自己免疫疾患、例えば甲状腺炎、脊椎関節炎、強直性脊椎炎、ブドウ膜炎、多発性軟骨炎または強皮症の治療または予防のための医薬の調製における本発明の抗原結合タンパク質の使用を提供する。一実施形態では、障害は関節リウマチである。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】精製キメラ8C92H6 HC1LC1がヒトIL-23に結合する能力を示す図である。
【図１Ａ】精製キメラ8C92H6 HC1LC1がヒトIL-23に結合する能力を示す図である。
【図１Ｂ】精製キメラ8C92H6 HC1LC1がヒトIL-23に結合する能力を示す図である。
【図２】組織培養上清キメラ8C92H6 HC1LC1がヒトIL-23に結合する能力を示す図である。
【図３】組織培養上清ヒト化mAbがヒトIL-23に結合する能力を示す図である。
【図３Ａ】精製ヒト化mAbがヒトIL-23に結合する能力を示す図である。
【図４】精製キメラ8C92H6 HC1LC1が、ヒトIL-23とヒトIL-23Rの結合を阻害する能力を示す図である。
【図４Ａ】精製キメラ8C92H6 HC1LC1が、ヒトIL-23とヒトIL-23Rの結合を阻害する能力を示す図である。
【図４Ｂ】精製キメラ8C92H6 HC1LC1が、カニクイザルIL-23とヒトIL-23Rの結合を阻害する能力を示す図である。
【図５】キメラ8C92H6 HC1LC1を含む組織培養上清が、ヒトIL-23とヒトIL-23Rの結合を阻害する能力を示す図である。
【図６】組織培養上清ヒト化mAbが、ヒトIL-23とヒトIL-23Rの結合を阻害する能力を示す図である。
【図６Ａ】精製ヒト化mAbが、ヒトIL-23とヒトIL-23Rの結合を阻害する能力を示す図である。
【図６Ｂ】精製ヒト化mAbが、カニクイザルIL-23とヒトIL-23Rの結合を阻害する能力を示す図である。
【図６Ｃ】精製ヒト化mAbが、ヒトIL-23とヒトIL-23Rの結合を阻害する能力を示す図である。
【図７】Ａ：IL-23マウス8C92H6 mAbが、ヒトIL-23とIL-23受容体の結合を阻害することを示す図である。Ｂ：IL-23マウス8C92H6 mAbが、カニクイザルIL-23とIL-23受容体の結合を阻害することを示す図である。Ｃ：抗IL-23 mAbが、組換えヒトIL-12とIL-12Rβ1単独の結合、または組換えヒトIL-12とIL-12Rβ1およびIL-12Rβ2の組合せの結合をいずれも阻害しなかったことを示す図である。
【図８】抗IL-23 mAbが、ヒト組換えIL-23とのインキュベーション後の脾細胞からのマウスIL-17の産生を阻害する能力を示す図である。
【図８Ａ】抗IL-23 mAbが、ヒト組換えIL-23とのインキュベーション後の脾細胞からのマウスIL-17の産生を阻害する能力を示す図である。
【図８Ｂ】抗IL-23 mAbが、ヒト組換えIL-23とのインキュベーション後の脾細胞からのマウスIL-17の産生を阻害する能力を示す図である。
【図８Ｃ】抗IL-23 mAbが、ヒト組換えIL-23とのインキュベーション後の脾細胞からのマウスIL-17の産生を阻害する能力を示す図である。
【図９】抗IL-23 mAbが、マウス脾細胞からのIL-23駆動性IL-22産生を阻害する能力を示す図であり、マウス抗体または対照IgGと一緒にインキュベートした場合の、脾細胞におけるIL-22の測定量を示す。
【図９Ａ】抗IL-23 mAbが、マウス脾細胞からのIL-23駆動性IL-22産生を阻害する能力を示す図であり、このアッセイにおけるIL-22の阻害（％）を示し、マウス抗体を表す。
【図９Ｂ】抗IL-23 mAbが、マウス脾細胞からのIL-23駆動性IL-22産生を阻害する能力を示す図であり、このアッセイにおけるIL-22の阻害（％）を示し、ヒト化抗体A3M0を表す。
【図９Ｃ】抗IL-23 mAbが、マウス脾細胞からのIL-23駆動性IL-22産生を阻害する能力を示す図であり、このアッセイにおけるIL-22の阻害（％）を示し、キメラ抗体を表す。
【図１０】本発明の抗IL-23 mAbがNK92細胞からのIL-12駆動性IFNγ産生に何の影響も与えなかったことを示す。
【図１１】マウスmAb(8C92H6)、キメラmAb(HC1LC1)、およびヒト化mAb(A3M0)が、内因性ヒトIL-23を中和し、ヒトIL-23とヒトIL-23受容体の結合を阻害したことを示す。
【図１２】8C92H6、HC1LC1およびA3M0が、ヒト血清においてその活性を保持し、内因性ヒトIL-23とヒトIL-23受容体の結合を阻害することを示す。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
本発明の態様および利点を、詳細な説明およびその好ましい実施形態においてさらに説明する。
【００４８】
一実施形態では、本発明は、CDRH3（配列番号３、配列番号４、配列番号７３、配列番号７４、配列番号９５または配列番号１００）を含む抗体と競合する抗原結合タンパク質を提供し、例えば、本発明の抗原結合タンパク質は、例えばIL-23とIL-23Rの結合の阻害（ELISA）（例えば実施例６に記載のように）、または脾細胞によるIL-17もしくはIL-22産生の阻害（例えば実施例７に記載のバイオアッセイ）により決定した場合に、hIL-23との結合およびその中和について、以下：
CDRH1：配列番号１
CDRH2：配列番号２
CDRH3：配列番号４
CDRL1：配列番号５
CDRL2：配列番号６および
CDRL3：配列番号７
を含む抗体と競合する。一実施形態では、競合する抗体は、A3M0（配列番号２６、配列番号２８）と競合するものである。
【００４９】
別の実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質は、CDRH3（配列番号３、配列番号４、配列番号７３、配列番号７４、配列番号９５または配列番号１００）を含む抗体、例えば以下：
CDRH1：配列番号１
CDRH2：配列番号２
CDRH3：配列番号４
CDRL1：配列番号５
CDRL2：配列番号６および
CDRL3：配列番号７
を含む抗体、と同じエピトープに結合するものである。
【００５０】
一実施形態では、競合する抗原結合タンパク質は、A3M0（配列番号２６、配列番号２８）と同じエピトープに結合するものである。エピトープは、当業者には周知の方法、例えばヒトp19（配列番号３７）の配列に対応するペプチドライブラリー（各ペプチドは14個のアミノ酸残基を含み、各ペプチドの配列は重複ペプチドを有する）を用いたペプチドマッピングにより決定することができる。コンホメーションおよび／または不連続エピトープは、公知の方法、例えばCLIPS（商標）（Pepscan Systems）により確認することができる。
【００５１】
発明の詳細な説明
本発明の抗原結合タンパク質は、天然抗体またはその機能的フラグメントもしくは同等物の構造に形成することができる、本発明の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含みうる。従って、本発明の抗原結合タンパク質は、適切な軽鎖と対形成したとき、全長抗体、(Fab)2フラグメント、Fabフラグメント、もしくはその同等物（例えばscFV、バイボディ、トリボディまたはテトラボディ、Tandabsなど）に形成される本発明のVH領域を含んでもよい。抗体は、IgG1、IgG2、IgG3もしくはIgG4；またはIgM；IgA、IgEもしくはIgDまたはこれらの改変型変異体でよい。それに応じて、抗体重鎖の定常ドメインを選択することができる。軽鎖定常ドメインは、κまたはλ定常ドメインとすることができる。さらに、抗原結合タンパク質は、すべてのクラスの改変体、例えば、IgG二量体、もはやFc受容体に結合しない、またはC1q結合を媒介しないFc突然変異体を含んでもよい。抗原結合タンパク質はまた、抗原結合領域および非免疫グロブリン領域を含む、WO86/01533号に記載のタイプのキメラ抗体であってもよい。
【００５２】
定常領域は、要求されるあらゆる機能性に応じて選択される。IgG1は、補体との結合を介して細胞溶解能力を示すことができ、および／またはADCC（抗体依存性細胞傷害性）を媒介する。非細胞傷害性ブロッキング抗体が必要であれば、IgG4が好ましいだろう。しかし、IgG4抗体は、産生に不安定性を示す可能性があるため、一般にさらに安定なIgG1を改変するのがより好ましいと考えられる。提案される改変は、欧州特許EP0307434に記載されており、例えば位置235および237での突然変異が挙げられる。従って、本発明は、本発明の抗原結合タンパク質、例えば抗体の細胞溶解性または非細胞溶解性形態を提供する。
【００５３】
いくつかの形態では、本発明の抗体は、本明細書に記載する重鎖可変領域のいずれかを有する全長（例えばH2L2四量体）細胞溶解性または非細胞溶解性IgG1抗体である。
【００５４】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の軽鎖および重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを提供する。
【００５５】
ヘテロダイマーサイトカインIL-23の受容体は、IL-12Rβ1と、新規サイトカイン受容体サブユニットのIL-23Rから構成される。Parham, C.ら、J. Immunol. 168 (11), 5699-5708 (2002)（配列番号４７）。
【００５６】
本発明の抗原結合タンパク質に関連して、本明細書において使用される用語「中和する」またはその文法上の変化形は、本発明の抗原結合タンパク質の存在下で、IL-23の生物活性が、このような抗原結合タンパク質の非存在下でのIL-23活性と比べて、全体的にまたは部分的に低下することを意味する。中和は、限定されるものではないが、リガンド結合のブロッキング、リガンドの受容体活性化の阻止、IL-23受容体の下方調節、またはエフェクター機能への影響の1以上に起因しうる。中和のレベルは、いくつかの方法で、例えば以下の実施例に記載のアッセイを用いて、例えばIL-23とIL-23受容体との結合の阻害を測定するアッセイで測定することができ、このようなアッセイは、例えば実施例６に記載のように実施することができる。このアッセイにおいてIL-23の中和は、中和抗原結合タンパク質の存在下でのIL-23とその受容体との結合の減少を評価することによって測定される。
【００５７】
中和のレベルはまた、例えば、例として実施例７に記載のように実施することができるIL-17産生アッセイで、測定することができる。このアッセイにおいてIL-23の中和は、中和抗原結合タンパク質の存在下でのIL-17の産生の阻害を評価することによって測定される。
【００５８】
中和を評価する他の方法、例えば、中和抗原結合タンパク質の存在下でのIL-23とその受容体との結合の減少を評価することによる方法は、当分野で公知であり、そのようなものとして、例えばBiacoreアッセイが挙げられる。
【００５９】
本発明の別の態様では、本明細書において例示した抗体と少なくとも実質的に同等の中和活性を有する抗原結合タンパク質、例えば、実施例６、７および１１にそれぞれ記載するIL-23/IL-23受容体中和アッセイまたはIL-17/IL-22産生アッセイ、またはpSTAT3シグナル伝達の阻害アッセイにおいてA3M1、A3N1、A3N2またはA3M0の中和活性を保持する抗原結合タンパク質が提供される。
【００６０】
用語Fv、Fc、Fd、Fab、もしくはF(ab)2は、標準的な意味で用いられる（例えば、Harlowら、Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)を参照されたい）。
【００６１】
「キメラ抗体」とは、ドナー抗体由来の天然の可変領域（軽鎖および重鎖）と、それと結合した、アクセプター抗体由来の軽鎖および重鎖定常領域を含む、ある種の操作された抗体を指す。
【００６２】
「ヒト化抗体」とは、非ヒトドナー免疫グロブリンに由来するCDRを有し、分子の残りの免疫グロブリン由来部分は1種（または複数）のヒト免疫グロブリンに由来する、ある種の操作された抗体を指す。さらに、フレームワークサポート残基を改変して結合親和性を保存することができる（例えば、Queenら, Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989)；Hodgsonら, Bio/Technology, 9:421 (1991)を参照されたい）。好適なヒトアクセプター抗体は、慣用のデータベース、例えばKABAT（登録商標）データベース、Los AlamosデータベースおよびSwiss Proteinデータベースから、ドナー抗体のヌクレオチドおよびアミノ酸配列との相同性によって選択されたものでよい。ドナー抗体のフレームワーク領域との（アミノ酸基準での）相同性を特徴とするヒト抗体は、ドナーCDRの挿入のための重鎖定常領域および／または重鎖可変フレームワーク領域を提供するのに好適である。軽鎖定常または可変フレームワーク領域を提供することができる好適なアクセプター抗体も同様にして選択することができる。アクセプター抗体の重鎖および軽鎖は、同じアクセプター抗体を起原とする必要がないことに留意すべきである。従来の技術には、そのようなヒト化抗体を作製するためのいくつかの方法が記載されている。例えば欧州特許EP-A-0239400およびEP-A-054951を参照されたい。
【００６３】
用語「ドナー抗体」とは、改変された免疫グロブリンコード領域を取得して、ドナー抗体に特徴的な抗原特異性および中和活性を有する改変された抗体の発現が生じるように、第1の免疫グロブリンパートナーに、その可変領域、CDR、またはその機能的フラグメントもしくは類似体のアミノ酸配列を提供する抗体（モノクローナルおよび／または組換え）を指す。
【００６４】
用語「アクセプター抗体」とは、第1の免疫グロブリンパートナーに、その重鎖および／または軽鎖フレームワーク領域、ならびに／あるいはその重鎖および／または軽鎖定常領域をコードするアミノ酸配列のすべて（または任意の部分であるが、いくつかの実施形態ではすべて）を提供する、ドナー抗体とは異種の抗体（モノクローナルおよび／または組換え）を指す。いくつかの実施形態では、ヒト抗体はアクセプター抗体である。
【００６５】
「CDR」は、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の超可変領域である抗体の相補性決定領域アミノ酸配列と定義されている。例えば、Kabatら, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第4版、U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)を参照されたい。免疫グロブリンの可変部分には、3つの重鎖CDRと3つの軽鎖CDR（すなわちCDR領域）がある。従って、本明細書で使用される「CDR」とは、3つの重鎖CDRのすべて、または3つの軽鎖CDRのすべて（あるいは必要に応じて、すべての重鎖CDRとすべての軽鎖CDR）を指す。抗体の構造およびタンパク質折りたたみは、他の残基が抗原結合領域の一部分とみなされることを意味し、これは当業者によってそのように理解されている。例えばChothiaら、(1989) Conformations of immunoglobulin hypervariable domains; Nature 342, p877-883を参照されたい。
【００６６】
本発明の抗原結合タンパク質、例えば抗体は、本発明の抗原結合タンパク質のコード配列を含む発現ベクターを用いた宿主細胞のトランスフェクションにより作製することができる。発現ベクターまたは組換えプラスミドは、これらの抗原結合タンパク質のコード配列を、宿主細胞における複製および発現、あるいは／ならびに宿主細胞からの分泌を制御することができる慣用の調節制御配列と機能的に結合した状態で配置することにより作製される。調節配列としては、プロモーター配列、例えばCMVプロモーター、ならびにその他の公知の抗体から誘導することができるシグナル配列が挙げられる。同様に、相補性抗原結合タンパク質軽鎖または重鎖をコードするDNA配列を有する第2の発現ベクターを作製することができる。いくつかの実施形態では、この第2発現ベクターは、コード配列および選択マーカーが関与する範囲を除いて、各ポリペプチド鎖が機能的に発現することを可能な限り確実にするように、第1ベクターと同一である。あるいは、抗原結合タンパク質の重鎖および軽鎖コード配列は単一のベクター上に存在していてもよい。
【００６７】
選択した宿主細胞は、第1および第2ベクターの両方を用いた慣用の技術により同時トランスフェクトする（または単一のベクターにより単にトランスフェクトする）ことによって、組換えまたは合成軽鎖および重鎖のいずれも含む、本発明のトランスフェクト宿主細胞を作出する。次に、トランスフェクト細胞を慣用の技術により培養することによって、本発明の操作された抗原結合タンパク質を作製する。適切なアッセイ、例えばELISAまたはRIAにより、組換え重鎖および／または軽鎖の両方との結合を含む抗原結合タンパク質を培養物からスクリーニングする。同様の慣用の技術を用いて、他の抗原結合タンパク質を構築することも可能である。
【００６８】
本発明の方法および組成物の構築に用いられるクローニングおよびサブクローニングステップに好適なベクターは、当業者が選択することができる。例えば、慣用のpUCシリーズのクローニングベクターを用いることができる。1つのベクター、pUC19は、Amersham（英国バッキンガムシア）またはPharmacia（スェーデン、ウプサラ）などの供給業者から市販されている。さらに、容易に複製することができ、大量のクローニング部位と選択遺伝子（例えば、抗生物質耐性遺伝子）を有し、しかも容易に操作することができる任意のベクターをクローニングに用いてもよい。従って、クローニングベクターの選択は本発明における制限要素ではない。
【００６９】
発現ベクターはまた、異種DNA配列の発現を増幅するのに適した遺伝子、例えば哺乳動物ジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子（DHFR）を特徴とするものでもよい。その他の好ましいベクター配列として、ポリAシグナル配列、例えばウシ成長ホルモン（BGH）およびβグロビンプロモーター配列（betaglopro）が挙げられる。本明細書で有用な発現ベクターは、当業者には周知の技術により合成することができる。
【００７０】
このようなベクターの構成要素、例えばレプリコン、選択遺伝子、エンハンサー、プロモーター、シグナル配列などは、商業的または天然の供給源から取得することもできるし、あるいは選択した宿主における組換えDNAの発現および／またはその産物の分泌を指令するのに用いる公知の手順により合成することもできる。また、その他の適切な発現ベクターもこの目的のために選択することができ、哺乳動物、細菌、昆虫、酵母および真菌発現のための多種のベクターが当分野で公知である。
【００７１】
本発明はまた、本発明の抗原結合タンパク質のコード配列を含む組換えプラスミドでトランスフェクトした細胞系も含む。クローニングおよびこれらクローニングベクターの他の操作に有用な宿主細胞も慣用的である。しかし、様々な大腸菌株からの細胞を、クローニングベクターの複製、ならびに本発明の抗原結合タンパク質の構築におけるその他のステップに用いてもよい。
【００７２】
本発明の抗原結合タンパク質の発現に好適な宿主細胞または細胞系として、哺乳動物細胞、例えばNS0、Sp2/0、CHO（例えば、DG44）、COS、HEK、線維芽細胞（例えば3T3）、および骨髄腫細胞が挙げられ、例えばこの抗原結合タンパク質をCHOまたは骨髄腫細胞において発現させることができる。ヒト細胞を用いてもよく、従って、分子をヒトグリコシル化パターンで修飾することができる。あるいは、その他の真核生物細胞系を使用してもよい。好適な哺乳動物宿主細胞の選択と、形質転換、培養、増幅、スクリーニングおよび産物生産ならびに精製の方法は当分野で公知である。例えば、前掲のSambrookらを参照されたい。
【００７３】
細菌細胞が、本発明の組換えFabまたは他の実施形態の発現に適した宿主細胞として有用であることは明らかであろう（例えば、Pluckthun, A., Immunol. Rev., 130:151-188 (1992)を参照）。しかし、細菌細胞において発現させたタンパク質が、折りたたまれていない、もしくは正常に折りたたまれていない形態となる、または非グリコシル化形態となる傾向があるため、細菌細胞において産生されたいずれの組換えFabも、抗原結合能力の保持についてスクリーニングする必要があるだろう。細菌細胞により発現させた分子が正常に折りたたまれた形態で産生されれば、その細菌細胞は、望ましい宿主と言えるだろう。あるいは、別の実施形態では、この分子を細菌宿主において発現させた後、再生させることができる。例えば、発現に用いられる様々な大腸菌株が、生物工学の分野で宿主細胞としてよく知られている。また、枯草菌、ストレプトミセス属細菌、その他の桿菌の様々な菌株を本方法に使用してもよい。
【００７４】
所望であれば、当業者には周知の酵母菌株、ならびに昆虫細胞、例えばショウジョウバエおよび鱗翅類、ならびにウイルス発現系も同様に、宿主細胞として利用可能である。例えば、Millerら、Genetic Engineering, 8:277-298, Plenum Press (1986)およびその中の参照文献を参照されたい。
【００７５】
ベクターを構築することができる一般的方法、本発明の宿主細胞を作製するのに必要なトランスフェクション方法、およびこのような宿主細胞から本発明の抗原結合タンパク質を産生させるのに必要な培養方法は、すべて慣用的技術である。典型的には、本発明の培養方法は、通常、細胞を無血清で懸濁液中で培養することによる、無血清培養方法である。同様に、本発明の抗原結合タンパク質は、産生後、当分野の標準的方法に従い、細胞培養内容物から精製することができ、このような方法として、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティーカラム、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などが挙げられる。こうした技術は当業者の技術の範囲内であり、本発明を限定するものではない。例えば、改変型抗体の作製は、WO 99/58679号およびWO 96/16990号に記載されている。
【００７６】
さらに別の抗原結合タンパク質の発現方法は、米国特許第4,873,316号に記載されているようなトランスジェニック動物での発現を使用するものである。これは、動物のカゼインプロモーターを用いた発現系に関するものであり、このプロモーターを遺伝子導入で哺乳動物に組み込むと、雌の乳汁中に所望の組換えタンパク質を産生させることができる。
【００７７】
本発明のさらに別の態様では、本発明の抗体を作製する方法であって、本発明の抗体の軽鎖および／または重鎖をコードするベクターで形質転換またはトランスフェクトした宿主細胞を培養するステップと、これにより産生された抗体を回収するステップを含む方法が提供される。
【００７８】
本発明において、ヒトIL-23に結合し、その活性を中和する本発明の抗IL-23抗体を作製する方法であって、以下：
（a）抗体の重鎖をコードする第1ベクターを用意するステップ；
（b）抗体の軽鎖をコードする第2ベクターを用意するステップ；
（c）上記第1ベクターおよび第2ベクターで哺乳動物宿主細胞（例：CHO）を形質転換するステップ；
（d）培地に宿主細胞からの抗体の分泌を導くような条件下で、上記ステップ（c）の宿主細胞を培養するステップ；
（e）上記ステップ（d）の分泌抗体を回収するステップ
を含む方法が提供される。
【００７９】
所望の方法により発現させた後、適切なアッセイの使用により、抗体をin vitro活性について試験する。現在慣用のELISAアッセイフォーマットを使用して、抗体とIL-23の質的および量的結合を評価する。さらに、通常のクリアランス機構にも拘わらず体内における抗体の持続性を評価する目的で後に実施されるヒト臨床試験の前に、前記以外のin vitroアッセイを用いて中和効力を確認してもよい。
【００８０】
治療の投薬量および期間は、ヒトの循環における本発明の分子の相対持続時間に関連し、患者の治療状態および一般的健康状態に応じて、当業者が調節することができる。最大限の治療効果を達成するために、長期間にわたり（例えば、4〜6ヵ月）、投薬を繰り返す（例えば、週1回または2週に1回）ことが必要であると考えられる。
【００８１】
本発明の治療薬の投与方法は、宿主に薬剤を送達する任意の好適な経路でよい。本発明の抗原結合タンパク質、および医薬組成物は、非経口投与、すなわち、皮下（s.c.）、鞘内、腹腔内、筋肉内（i.m.）、静脈内（i.v.）、または鼻内投与に特に有用である。
【００８２】
本発明の治療薬は、薬学的に許容される担体中に、活性成分として有効量の本発明の抗原結合タンパク質を含む医薬組成物として調製することができる。本発明の予防薬においては、すぐに注射できる形態で、好ましくは生理学的pHに緩衝化された、抗原結合タンパク質を含む水性懸濁液または水溶液が好ましい。非経口投与のための組成物は、一般に、薬学的に許容される担体、好ましくは水性担体に溶解させた本発明の抗原結合タンパク質の溶液、またはそのカクテルを含む。様々な水性担体、例えば、0.9％生理食塩水、0.3％グリシンなどを用いることができる。これらの溶液は、滅菌にし、一般的に粒状物質を含まないようにすることができる。これらの溶液は、慣用で、公知の滅菌技術（例えば、濾過）により滅菌することができる。この組成物は、生理学的条件に近似させるのに必要な薬学的に許容される補助物質、例えばpH調節剤および緩衝剤などを含みうる。このような医薬製剤中の本発明の抗原結合タンパク質の濃度は、広範に変動しうる、すなわち、約0.5％未満、通常約1％または少なくとも約1％から、15もしくは20重量％の高濃度まで変動しうるため、選択した具体的投与方法に応じ、主に液体量、粘度などに基づいて選択する。
【００８３】
従って、筋内注射用の本発明の医薬組成物は、1 mLの滅菌緩衝水と、約1 ng〜約100 mg、例えば約50 ng〜約30 mg、またはさらに好ましくは約5 mg〜約25 mgの本発明の抗原結合タンパク質、例えば抗体を含むように調製することができる。同様に、静脈内注入用の本発明の医薬組成物は、約250 mlの滅菌リンガー液と、リンガー液ml当たり、約1 mg〜約30 mg、好ましくは5 mg〜約25 mgの本発明の抗原結合タンパク質を含むように調製することができる。非経口投与が可能な組成物を調製する実際の方法は当業者には周知であるか、または明らかであり、例えば、Remington's Pharmaceutical Science, 第15版、Mack Publishing Company（ペンシルバニア州イーストン）にさらに詳細に記載されている。本発明の静脈内投与が可能な抗原結合タンパク質製剤の調製については、Lasmar U and Parkins D “The formulation of Biopharmaceutical products”, Pharma. Sci.Tech.today, 第129-137頁, 第3巻 (2000年4月3日), Wang, W “Instability, stabilisation and formulation of liquid protein pharmaceuticals”, Int. J. Pharm 185 (1999) 129-188, Stability of Protein Pharmaceuticals Part A and B Ahern T.J.編, Manning M.C., ニューヨーク州ニューヨーク:Plenum Press (1992), Akers,M.J. “Excipient-Drug interactions in Parenteral Formulations”, J.Pharm Sci 91 (2002) 2283-2300, Imamura, Kら、“Effects of types of sugar on stabilization of Protein in the dried state", J Pharm Sci 92 (2003) 266-274,Izutsu, K kojima, S. "Excipient crystalinity and its protein-structure-stabilizing effect during freeze-drying", J Pharm. Pharmacol, 54 (2002) 1033-1039, Johnson, R, "Mannitol-sucrose mixtures-versatile formulations for protein lyophilization", J. Pharm. Sci, 91 (2002) 914-922を参照されたい。
【００８４】
Ha,E Wang W, Wang Y.j. “Peroxide formation in polysorbate 80 and protein stability”, J. Pharm Sci, 91, 2252-2264,(2002)（その全文は参照として本明細書に組み込むものとする）は、特に参照されたい。
【００８５】
本発明の治療薬は、医薬製剤で提供される場合、単位用量剤形であるのが好ましい。適切な治療有効用量は、当業者により容易に決定される。患者に好適な用量は、その体重に応じて計算することができ、例えば好適な用量は、0.1〜20mg/kg、例えば1〜20mg/kg、例えば10〜20mg/kg、または例えば1〜15mg/kg、例えば10〜15mg/kgの範囲でよい。ヒトにおける関節リウマチ、乾癬、IBD、多発性硬化症またはSLEのような病状を効果的に治療するために、好適な用量は、0.1〜1,000 mg、例えば0.1〜500 mg、例えば500 mg、例えば0.1〜100 mg、または0.1〜80 mg、または0.1〜60 mg、または0.1〜40 mg、または例えば1〜100 mg、または1〜50 mgの範囲内の本発明の抗原結合タンパク質でよく、これは、非経口、例えば皮下、静脈内もしくは筋内投与することができる。このような用量は、必要であれば、医師により適宜選択される適当な時間間隔で繰り返し投与することができる。
【００８６】
本明細書に記載の抗原結合タンパク質は、保存のために凍結乾燥して、使用前に、好適な担体で再構成することができる。この技術は、慣用の免疫グロブリンについて有効であることがわかっており、当分野で公知の凍結乾燥および再構成技術を用いることができる。
【００８７】
別の態様では、本発明は、以下のような免疫系媒介性炎症、例えば乾癬、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、神経変性疾患、例えば多発性硬化症、好中球駆動性疾患、例えばCOPD、ヴェグナー血管炎、嚢胞性線維症、シェーグレン症候群、慢性移植片拒絶、1型糖尿病移植片対宿主病、喘息、アレルギー性疾患、例えばアトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、およびその他の自己免疫性疾患、例えば甲状腺炎、脊椎関節炎、強直性脊椎炎、ブドウ膜炎、多発性軟骨炎または強皮症の治療または予防のための、本発明の抗原結合タンパク質またはその機能的フラグメントと、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、前記障害は関節リウマチである。
【００８８】
さらに別の態様では、本発明は、免疫系媒介性炎症、例えば乾癬、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、神経変性疾患、例えば多発性硬化症、好中球駆動性疾患、例えばCOPD、ヴェグナー血管炎、嚢胞性線維症、シェーグレン症候群、慢性移植片拒絶、1型糖尿病移植片対宿主病、喘息、アレルギー性疾患、例えばアトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、およびその他の自己免疫性疾患、例えば甲状腺炎、脊椎関節炎、強直性脊椎炎、ブドウ膜炎、多発性軟骨炎または強皮症のための、本発明の抗原結合タンパク質と、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、前記障害は関節リウマチ関節である。
【００８９】
本明細書に記載する配列（配列番号８〜配列番号３５、配列番号４８〜配列番号７１、配列番号８１〜配列番号９０、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９６、配列番号９７および配列番号１０３〜配列番号１２３）は、本明細書に記載する配列と実質的に同一、例えば少なくとも90％同一の配列、例えば少なくとも91％同一、または少なくとも92％同一、または少なくとも93％同一、または少なくとも94％同一、または少なくとも95％同一、または少なくとも96％同一、または少なくとも97％同一、または少なくとも98％同一、または少なくとも99％同一の配列を含むことは理解されよう。
【００９０】
核酸について、用語「実質的同一性」とは、2つの核酸、またはその指定配列が、これらを最適にアラインメントして、比較したとき、適切なヌクレオチドの挿入または欠失を行って、該ヌクレオチドの少なくとも約80％、通常、該ヌクレオチドの少なくとも約90％〜95％、さらに好ましくは該ヌクレオチドの少なくとも98％〜99.5％で同一であることを意味する。これ以外に、実質的同一性は、セグメントが、選択的ハイブリダイゼーション条件下で、鎖の相補体とハイブリダイズする場合にも存在する。
【００９１】
ヌクレオチドおよびアミノ酸配列について、用語「同一（の）」とは、これらを適切な挿入または欠失を行って最適にアラインメントして、比較したときの、2つの核酸またはアミノ酸配列間の同一性の程度を示す。これ以外に、実質的同一性は、DNAセグメントが、選択的ハイブリダイゼーション条件下で、鎖の相補体とハイブリダイズする場合にも存在する。
【００９２】
2つの配列の同一性（％）は、2つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要があるギャップ数および各ギャップの長さを考慮に入れて、これら配列が共有する同一位置の数の関数（すなわち、同一性（％）＝同一位置の数／位置の総数×100）である。配列の比較、ならびに2つの配列の同一性（％）の決定は、以下の非制限的実施例に記載するように、数学的アルゴリズムを用いて達成することができる。
【００９３】
2つのヌクレオチド配列の同一性（％）は、GCGソフトウエアパッケージ中のGAPプログラムを使用し、NWSgapdna. CMPマトリックスを用いて、ギャップ加重40、50、60、70もしくは80、ならびにギャップ長加重１、2、3、4、5もしくは6として決定することができる。また、2つのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の同一性（％）は、ALIGNプログラム（バージョン2.0）に組み込まれているE. MeyersおよびW. Miller（Comput. Appl. Biosci., 4:11-17 (1988)）のアルゴリズムを使用し、PAM120加重残基表を用いて、 ギャップ長ペナルティー12およびギャップペナルティー4として決定することもできる。さらに、2つのアミノ酸配列の同一性（％）は、GCGソフトウエアパッケージ中のGAPプログラムに組み込まれているNeedlemanおよびWunsch（J. Mol. Biol. 48:444-453 (1970)）を用いて、Blossum 62マトリックスまたはPAM250マトリックスのいずれかを使用し、ギャップ加重16、14、12、10、8、6もしくは4およびギャップ長加重1、2、3、4、5もしくは6として決定することもできる。
【００９４】
例として、本発明のポリヌクレオチド配列は、配列番号１７の基準配列と同一である、すなわち100％同一であってもよいし、または基準配列と比較して特定の整数個のヌクレオチド改変を含んでもよい。このような改変は、少なくとも1個のヌクレオチド欠失、置換、例えばトランジションおよびトランスバージョン、または挿入からなる群より選択され、ここで上記改変は、基準ヌクレオチド配列の5’もしくは3’末端位置、またはこれら末端位置の間のどの位置で起こっていてもよく、基準配列におけるヌクレオチドの間に個別に散在してもよいし、または基準配列内に1以上の隣接した群として散在していてもよい。ヌクレオチド改変の数は、配列番号１７におけるヌクレオチドの総数に、同一性（％）の百分率を表す数値（100で割ったもの）を掛けた後、配列番号１７におけるヌクレオチド総数からその積を引くことにより決定される。すなわち、
nn≦xn−（xn・y）
〔式中、nnはヌクレオチド改変の数であり、xnは配列番号１７におけるヌクレオチドの総数であり、yは、50％については0.50、60％については0.60、70％については0.70、80％については0.80、85％については0.85、90％については0.90、95％については0.95、97％については0.97または100％については1.00であり、xnとyの整数ではない積は、xnから引く前に最も近い整数に切り捨てる〕。配列番号１７のポリヌクレオチド配列の改変は、このコード配列においてナンセンス、ミスセンスまたはフレームシフト突然変異を生み出す可能性があり、これによってその改変後のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが変化しうる。
【００９５】
同様に、別の例では、本発明のポリペプチド配列は、配列番号１６によってコードされる基準配列と同一である、すなわち100％同一であってもよいし、または同一性（％）が100％より低くなるように、基準配列と比較して特定の整数個のアミノ酸改変を含んでもよい。このような改変は、少なくとも1個のアミノ酸欠失、置換、例えば保存的および非保存的置換、または挿入からなる群より選択され、ここで上記改変は、基準ポリペプチド配列のアミノもしくはカルボキシ末端位置、またはこれら末端位置の間のどの位置で起こっていてもよく、基準配列におけるアミノ酸の間に個別に散在してもよいし、または基準配列内に1以上の隣接した群として散在していてもよい。所与の同一性（％）についてのアミノ酸改変の数は、配列番号１６によりコードされるポリペプチド配列におけるアミノ酸の総数に、同一性（％）の百分率を表す数値（100で割ったもの）を掛けた後、配列番号１６によりコードされるポリペプチド配列におけるアミノ酸の総数からその積を引くことによって決定される。すなわち、
na≦xa−（xa・y）
〔式中、naはアミノ酸改変の数であり、xaは配列番号１６によりコードされるポリペプチド配列におけるアミノ酸の総数であり、yは、例えば70％については0.70、80％については0.80、85％については0.85であり、xaとyの整数ではない積は、xaから引く前に最も近い整数に切り捨てる〕。
【実施例】
【００９６】
以下の実施例は本発明を説明するが、本発明を限定するものではない。
【００９７】
[実施例１]
組換えマウス、キメラおよびヒト化抗IL-23抗体の構築
ヒトIL-23を用いたマウスの免疫により、マウスmAbを産生させた。応答動物から脾臓を採取し、骨髄腫細胞に融合して、ハイブリドーマを作製した。ハイブリドーマ上清材料を結合についてスクリーニングした。目的のハイブリドーマを、標準的技術を用いてモノクローン化した。この実施例で用いたマウス抗体（8C9 2H6）をRT-PCRにより分析したところ、2つの重鎖と1つの軽鎖の存在が明らかになった。両方の組合せ（HC1LC1とHC2LC1）をキメラmAbの形態に構築した。このハイブリドーマから産生され、以下の実験で用いる8C92H6マウスmAbの主要活性結合ドメインは、配列番号８および配列番号１０に示される可変領域を含むと考えられる。
【００９８】
キメラ構築物は、マウスハイブリドーマ細胞系からのRNAを用いたRT-PCRによりマウスVHおよびVL構築物を作製することにより構築した。RT-PCR産物はまず、配列決定のためのベクターにクローニングした後、制限部位ならびにヒトシグナル配列（配列番号３６）を含むオリゴヌクレオチドを用いて、可変領域をRldおよびRln哺乳動物発現ベクターにクローニングした。これらの発現ベクターはヒト定常領域を含んでいた。ヒト定常領域も含むpTTベクターを用いて、別の構築物を作製した。
【００９９】
RldおよびRln哺乳動物発現ベクターへのクローニングのための制限部位ならびにヒトシグナル配列を含む、重複オリゴヌクレオチドの組み立てにより、ヒト化VHおよびVL構築物を新たに作製した。Hind IIIおよびSpe I制限部位を導入して、ヒトγ1定常領域を含むRldへのクローニングのためのシグナル配列（配列番号３６）を含むVHドメインを形成した（frame）。Hind IIIおよびBsiWI制限部位を導入して、ヒトκ定常領域を含むRlnへのクローニングのためのシグナル配列（配列番号３６）を含むVLドメインを形成した(frame)。ヒト定常領域も含むpTTベクターを用いて、別の構築物を作製した。必要な場合には、部位指定突然変異誘発（SDM）を用いて、様々なヒト化構築物を作製した。
【０１００】
ヒト化：
マウス軽鎖可変ドメインは、位置46のロイシンが存在しないことと、位置69の後から始まる8個のアミノ酸（RSPFGNQL）が挿入されているために、配列および構造の両方で極めて特異である。文献およびcDNAデータベースを調べることにより、関連するマウス軽鎖可変領域のただ１つのレポートを確認した。この軽鎖をヒト化すると、位置46のロイシンは、マウス配列から欠失する。このモチーフをヒト化軽鎖に転移させた。
【０１０１】
ヒト化の過程で、いくつかの変更をマウス配列に実施した。これらの変更は以下を含む：
マウスCDRH3（配列番号３）のシステインをセリン、アラニンまたはバリンに置換し、別のヒト化CDRH3（配列番号４、７３、７４）とした。
【０１０２】
さらに、いくつかの別のCDR配列を配列番号７２〜８０、配列番号９５および配列番号９８〜１０２に記載のように構築した。
【０１０３】
ヒト化重鎖A3（配列番号１６）
CDR移植のために好適なフレームワークを選択し、3つの復帰突然変異を位置27、30および95で実施した。
【０１０４】
ヒト化軽鎖M0（配列番号１８）
CDR移植のために好適なフレームワークを選択した。L46の欠失を実施した。
【０１０５】
ヒト化軽鎖M1（配列番号２０）
CDR移植のために好適なフレームワークを選択した。L46の欠失を実施した。さらに、復帰突然変異を位置59、64、68、69、70で実施し、位置69と位置70の間にRSPFGNQLの挿入を行った。
【０１０６】
ヒト化軽鎖N1（配列番号２２）
CDR移植のために好適なフレームワークを選択した。L46の欠失を実施した。さらに、復帰突然変異を位置59、64、68、69、70で実施し、位置69と位置70の間にRSPFGNQLの挿入を行った。
【０１０７】
ヒト化軽鎖N2（配列番号２４）
CDR移植のために好適なフレームワークを選択した。L46の欠失を実施した。さらに、復帰突然変異を位置59と位置64で実施した。
【０１０８】
同様の方法により、配列番号４８、５０、５２、５４、５６、５８、８１〜９０、９６、９７および１０３〜１２３に記載するいくつかの別のヒト化変異体を作製した。
【０１０９】
［実施例２］
CHO細胞における抗体の発現
それぞれ重鎖および軽鎖をコードするRldおよびRlnプラスミドをCHO細胞に一過性に共トランスフェクトし、スモールスケールまたはラージスケールで発現させて、抗体を産生させた。あるいは、同じプラスミドをエレクトロポレーションによりCHO細胞に共トランスフェクトし、ヌクレオシドを含まない培地を用いて、適切な抗体を発現する細胞の安定なポリクローナル集団を選択した。いくつかのアッセイでは、組織培養上清から直接に抗体を評価した。別のアッセイでは、組換え抗体を回収し、プロテインAセファロース上でのアフィニティークロマトフラフィーにより精製した。
【０１１０】
このような抗体の構築および発現のさらに詳細な項目は、WO2007/080174号およびWO2007/068750号に記載される一般的方法に従い実施した。
【０１１１】
HEK 293 6E細胞における抗体の発現
それぞれ重鎖および軽鎖をコードするpTTプラスミドをHEK 293 6E細胞に一過性に共トランスフェクトし、スモールスケールまたはラージスケールで発現させて、抗体を産生させた。いくつかのアッセイでは、組織培養上清から直接に抗体を評価した。別のアッセイでは、組換え抗体を回収し、プロテインAセファロース上でのアフィニティークロマトフラフィーにより精製した。
【０１１２】
符号（すなわち、A3M0、A3M1、A3N1、A3N2、HC1LC1）で抗体を称する場合には、第1および第2プラスミドの共トランスフェクションおよび発現により作製されたmAbを指し、例えば、「A3M0」は、好適な細胞系において、A3配列を含むプラスミドと、M0配列を含むプラスミドの共トランスフェクションにより作製されたmAbを指す。
【０１１３】
［実施例３］
マウス抗IL-23抗体のBiacore解析
アミンカップリング化学を用いて、CM5センサーチップに抗マウスIgGを固定化した。抗IL-23ハイブリドーマ抗体サンプルを表面に注入し、マウスmAbを捕捉した。続いて、組換えヒトIL-23、組換えカニクイザルIL-23または組換えヒトIL-12を5つの異なる濃度（0nM〜91nMの範囲）で捕捉抗体表面に流すことにより、結合センサーグラムを取得した。抗体および抗原注入後の表面の再生は、0.1Mリン酸を3分にわたり注入することにより実施した。抗マウスIgGセンサーチップ表面へのバッファー注入によるすべてのセンサーグラムで二重参照（double referencing）を用いた。実験は、HBS-EPバッファー中で25℃にて実施した。得られたセンサーグラムデータは、Biacore 3000機器付属のBiaevaluationソフトウエア内に組み込まれている1:1結合モデルを用いて解析した。表２に示すデータは、組織培養フラスコから回収したハイブリドーマ上清を用いて得たものである。
【表２】
2011501738.tif 000004
【０１１４】
［実施例４］
抗IL-23キメラmAbおよびヒト化mAbとヒトIL-23との結合
キメラmAbおよびヒト化mAbとヒトIL-23との結合活性を決定するために、これらmAbをサンドイッチELISAにより評価した。
【０１１５】
プレートを1μg/希釈剤（重炭酸塩バッファー）の抗ヒトIL-12でコートした。50μl/ウェルのこの混合物を4℃で一晩インキュベートした。次に、0.05％ Tween 20を含むTris緩衝生理食塩水（TBST）でプレートを2回洗浄した。 1％BSA TBST 100μl/ウェルでプレートを室温にて少なくとも1時間ブロッキングした。次に、プレートをTris緩衝生理食塩水＋0.05％ Tween 20（TBST）で2回洗浄した。様々な濃度の抗体を一定濃度のIL-23と一緒に、個別プレートにおいて室温で1時間インキュベートした。50μlの各混合物をアッセイプレートに移し、室温で1時間インキュベートした。次に、これらをTris緩衝生理食塩水＋0.05％ Tween 20（TBST）で2回洗浄した。結合mAbを、1％BSA TBSTで1/1000希釈したヤギ抗ヒトIgGγ鎖HRP（Sigma A6029）により検出した。50μl/ウェルの検出抗体を添加し、室温で1時間インキュベートした。次に、プレートをTris緩衝生理食塩水＋0.05％ Tween 20（TBST）で3回洗浄した。o-フェニレンジアミン二塩酸塩（OPD）を20mlのH2Oで再構成した後、50μl/ウェルを添加して、室温で20分インキュベートした。25μl/ウェルの3M H2SO4を添加した。SOftmaxPRO versamaxプレートリーダーを用いて、OD490nmでプレートを読み取った。結果を図１、２および３に示す。
【０１１６】
これを、以下に示す最適化アッセイ条件と、別の調製物からの抗IL-23抗体材料を用いて繰り返した。その結果を図１Ａ、１Ｂおよび３Ａに示す。図１Ａ、１Ｂおよび３Ａに示すデータは、従って、図１、２および３に示すデータより正確であると考えられる。図１Ａに示す8C92H6 HC1LC1の結合プロフィールは、図１Ｂに示すものとは異なるが、この結合プロフィールの相違の理由は分かっていない。
【０１１７】
最適化アッセイ条件：プレートを2μg/希釈剤（リン酸緩衝生理食塩水）の抗ヒトIL-12でコートした。50μl/ウェルのこの混合物を4℃で一晩インキュベートした。次に、0.05％ Tween 20を含むリン酸緩衝生理食塩水（PBST）でプレートを3回洗浄した。4％脱脂粉乳（Fluka BioChemika #70166）PBS 200μl/ウェルで、プレートを室温で少なくとも1時間ブロッキングした。次に、プレートをリン酸緩衝生理食塩水＋0.05％ Tween 20（PBST）で3回洗浄した。様々な濃度の抗体を一定濃度のIL-23と一緒に、個別プレート中で室温にて1時間インキュベートした。50μlの各混合物をアッセイプレートに移し、室温で1時間インキュベートした。次に、これらをリン酸緩衝生理食塩水＋0.05％ Tween 20（PBST）で3回洗浄した。結合mAbを、4％脱脂粉乳（Fluka BioChemika #70166）PBSで1/3000希釈したヤギ抗ヒトIgGγ鎖HRP（Serotec STAR 106P）により検出した。50μl/ウェルの検出抗体を添加し、室温で1時間インキュベートした。次に、プレートをリン酸緩衝生理食塩水＋0.05％ Tween 20（PBST）で3回洗浄した。50μl/ウェルのTMBをプレートに添加して、室温で10分インキュベートした。50μl/ウェルの1M H2SO4を添加した。SOftmaxPRO versamaxプレートリーダーを用いて、OD450nmでプレートを読み取った。
【０１１８】
図１、１Ａおよび１Ｂは、精製キメラ8C92H6 HC1LC1がヒトIL-23に結合する能力を示す。
【０１１９】
図２は、組織培養上清キメラ8C92H6 HC1LC1がヒトIL-23に結合する能力を示す。
【０１２０】
図３は、組織培養上清ヒト化mAbがヒトIL-23に結合する能力を示す。
【０１２１】
図３Ａは、精製ヒト化mAbがヒトIL-23に結合する能力を示す。
【０１２２】
すべてのサンプルは二つ組（duplicate）で実施し、各二つ組の平均値を示す。さらに、上清材料を用いたアッセイは、組織培養上清の異なる調製物を用いて2回実施し、代表的結果を示す。
【０１２３】
［実施例５］
抗IL-23キメラmAbおよびヒト化mAbのBiacore解析
プロテインAまたは抗ヒトIgG（Biacore BR-1008-39）を、製造者の指示に従い第一級アミンカップリングによりBiacore CM5チップに固定化した。抗IL-23抗体をこの表面に捕捉し、安定化の時間を置いた後、抗体捕捉表面にIL-13を通過させて、結合センサーグラムを取得した。2パルスの100mMリン酸を使用して再生を達成した。これは、捕捉抗体を除去するが、プロテインA／抗ヒトIgG表面が、続く結合事象で抗体を捕捉する能力に有意に影響するものではなかった。すべての実験は、捕捉抗体表面へのバッファー注入で二重参照した。動力学を作成するのにどの機械を使用したかに応じて、Biacore 3000またはT100付属のソフトウエアを使用し、1:1モデルを用いてデータを解析した。解析は、HBS-EPバッファーを用いて、25℃で実施した。表３〜６に示すデータは、別に記載のない限り、目的の抗体を一過性発現するCHO細胞の組織培養上清について得られたものである。データは、様々な濃度のIL-23（256、64、16、4、1および0.25nM）を用いて得られた。ヒト化変異体について示したデータは、いくつかの実験の代表的なものである。キメラmAb（8C92H6.HC1LC1）は、各実験で1回しか実施しなかったため、このmAbについて示したデータはその1回の実施から得たものである。
【表３】
2011501738.tif 000005
【０１２４】
3種の濃度（100、10および1nM）のIL-23を用いて、Biacore 3000で取得したデータ
【表４】
2011501738.tif 000006
【０１２５】
10種の濃度（128、64、32、16、8、4、2、1、0.5および0.25n）のIL-23を用いて、T100で取得したデータ
【表５】
2011501738.tif 000007
【０１２６】
4種の濃度（256、64、16および4nM）のIL-23を用いて、Biacore 3000で取得したデータ
【表６】
2011501738.tif 000008
【０１２７】
5種の濃度（256、64、16、4および1nM）のIL-23を用いて、T100で取得したデータ
［実施例５Ａ］
精製キメラmAbおよびヒト化mAbのBiacore解析
これは、実施例５を実質的に繰り返すが、別のIL-23供給源を用いる。
【０１２８】
CM5チップ上の捕捉表面を用いて、Biacore解析を実施した。抗ヒトIgG（BR-1008-39）を捕捉剤として用いた。抗ヒトIgGを第一級アミンカップリングによりCM5バイオセンサーチップに結合させた。ヒト化抗体をこの固定化表面に捕捉し、この捕捉表面に所定濃度のIL-23を通過させた。二重参照（double referencing）のために、捕捉抗体表面へのバッファーの注入を使用した。3 M MgCl2を用いて各IL-23を注入後、捕捉表面を再生した。この再生は、捕捉抗体を除去するが、次のサイクルで上記表面が抗体を捕捉する能力に有意に影響するものではなかった。T100 Biacore機械を用いてデータを取得した。すべての実験は、HBS EPを用いて、25℃で実施した。上記機械付属の、1:1結合モデルに適合させたソフトウエアを用いて、データを解析した。表７および８は、8C92H6.HC1LC1キメラと、選択したヒト化変異体について2つの個別の実験で実施したIL-23結合解析を詳細に示す。表７および８に示すデータは、精製された抗体サンプルから得たものである。ヒト化変異体について示したデータは、いくつかの実験の代表的なものである。キメラmAb（8C9H6.HC1LC1）は、各実験で1回しか実施しなかったため、このmAbについて示したデータはその1回の実施から得たものである。表８Ａは、比較の目的で、同じBiacore実験からの組織培養上清（A3M0など）からのデータを示す。
【表７】
2011501738.tif 000009
【０１２９】
【表８】
2011501738.tif 000010
【０１３０】
【表８Ａ】
2011501738.tif 000011
【０１３１】
［実施例６］
抗IL-23 mAb（マウス、キメラおよびヒト化）の存在下でのIL-23とIL-23受容体の結合の阻害
抗IL-23 mAbがIL-23特異的中和抗体であることを証明するために、IL-12（またはIL-23）とIL-12Rβ1の結合の阻害と比べ、IL-23とIL-23受容体の結合の選択的阻害について、マウスmAbを試験した。
【０１３２】
抗IL-23マウス8C92H6 mAbを以下のアッセイで試験した。プレート上に1種類の受容体を用いる場合、組換えヒトIL-23受容体（R&D systems 1400-IR-050）またはIL-12Rβ1（R&D systems 839-B1-100）またはIL-12Rβ2（R&D systems 1959-B2-050）を濃度1μg/mlで96ウェルプレートにコートした。L-12Rβ1とβ2の両者を組み合わせる場合には、どちらも0.5μg/mlに希釈した後、プレートにコートした。0.05％Tween 20を含むPBSでプレートを洗浄した後、1％BSAを含むPBSでブロッキングした。50ng/mlのヒトもしくはカニクイザルIL-23またはヒトIL-12（R&D systems 219-IL-025）を、同量の精製抗体材料を滴定しながら1時間プレインキュベートした後、プレコートしたプレートに添加した。ビオチン化抗ヒトIL12（R&D systems BAF-219）、次いでストレプトアビジン-HRP（GE Healthcare RPN 4401）を用いて、検出を実施した。
【０１３３】
図７に示すように、IL-23マウス8C92H6 mAbは、ヒトIL-23とIL-23受容体の結合を阻害し（図７Ａ）、また、カニクイザルIL-23とIL-23受容体の結合も阻害することができる（図７Ｂ）。これとは対照的に、抗IL-23 mAbは、組換えヒトIL-12とIL-12Rβ1単独の結合、または組換えヒトIL-12とIL-12Rβ1およびIL-12Rβ2の組合せの結合をいずれも阻害しなかった（図７Ｃ）。データは、無関連の対照IgG（阻害率0％）と比較した、中和mAbで処理した条件下でのIL-23とIL-23Rの結合の阻害率（％）を示す。
【０１３４】
キメラmAbおよびヒト化mAbを、それらがヒトIL-23とヒトIL-23受容体の結合、およびカニクイザルIL-23とヒトIL-23受容体の結合を中和する能力について評価した。プレートを1μg/希釈剤（重炭酸塩バッファー）のヒトIL-23R Fcキメラでコートした。50μl/ウェルのこの混合物を4℃で一晩インキュベートした。次に、0.05％ Tween 20を含むTris緩衝生理食塩水（TBST）で、プレートを2回洗浄した。1％BSA TBST 100μl/ウェルで、プレートを室温で少なくとも1時間ブロッキングした。続いて、0.05％ Tween 20を含むTris緩衝生理食塩水（TBST）でプレートを2回洗浄した。様々な濃度の抗体を一定濃度のIL-23と一緒に、個別プレートにおいて室温で1時間インキュベートした。50μlの各混合物をアッセイプレートに移し、室温で1時間インキュベートした。次に、これらを0.05％ Tween 20含有Tris緩衝生理食塩水（TBST）で2回洗浄した。結合IL-23を、1％BSA TBSTで100ng/mlに希釈した抗ヒトIL12ビオチン標識Ab（R&D systems BAF219）により検出した。50μl/ウェルのビオチン化抗体を添加して、室温で1時間インキュベートした。続いて、0.05％ Tween 20を含むTris緩衝生理食塩水（TBST）でプレートを2回洗浄した。ExtrAvidin-Peroxidase（Sigma E2886）を1％BSA TBSTで1/1000希釈して、50 μl/ウェルをプレートに添加した。次に、0.05％ Tween 20を含むTris緩衝生理食塩水（TBST）でプレートを3回洗浄した。H2Oで再構成した50μl/ウェルのOPD（Sigma P9187）をプレートに添加して、室温で20分インキュベートした。OPDをすでに含むウェルに、25μl/ウェルの3M H2SO4を添加した。SOftmaxPRO versamaxプレートリーダーを用いて、OD490nmでプレートを読み取った。結果を図４、５および６に示す。
【０１３５】
これを、以下に記載する最適化アッセイ条件と、先のアッセイで用いたものとは別の調製物からの抗IL-23抗体材料を用いて繰り返し、その結果を図４Ａおよび４Ｂ、ならびに図６Ａ、６Ｂおよび６Ｃに示す。従って、図４Ａおよび４Ｂ、ならびに図６Ａ、６Ｂおよび６Ｃに示すデータは、図４、５および６に示すデータより正確であると考えられる。
【０１３６】
最適化プロトコル：1μg/希釈剤（リン酸緩衝生理食塩水）のヒトIL-23R  Fcキメラでプレートをコートした。 50μl/ウェルのこの混合物を4℃で一晩インキュベートした。次に、0.05％ Tween 20を含むリン酸緩衝生理食塩水（PBST）で、プレートを3回洗浄した。4％脱脂粉乳（Fluka BioChemika #70166）PBST 100μl/ウェルで、プレートを室温で少なくとも1時間ブロッキングした。続いて、プレートをリン酸緩衝生理食塩水＋0.05％ Tween 20（PBST）で3回洗浄した。様々な濃度の抗体を一定濃度のIL-23と一緒に、個別プレート中で室温にて1時間インキュベートした。50μlの各混合物をアッセイプレートに移し、室温で1時間インキュベートした。次に、これらをリン酸緩衝生理食塩水＋0.05％ Tween 20（PBST）で3回洗浄した。結合IL-23を、4％脱脂粉乳（Fluka BioChemika #70166）PBSTで100ng/mlに希釈した抗ヒトIL12ビオチン標識Ab（R&D systems BAF219）により検出した。50μl/ウェルのビオチン化抗体を添加し、室温で1時間インキュベートした。次に、プレートをリン酸緩衝生理食塩水＋0.05％ Tween 20（PBST）で3回洗浄した。SA HRP（GE healthcare RPN4401）を4％脱脂粉乳（Fluka BioChemika #70166）PBSで1/4000希釈し、50μl/ウェルをプレートに添加した。続いて、プレートをリン酸緩衝生理食塩水＋0.05％ Tween 20（PBST）で3回洗浄した。50μl/ウェルのTMBをプレートに添加して、室温で15分インキュベートした。すでにTMBを含むウェルに、25μl/ウェルの3M H2SO4を添加した。SOftmaxPRO versamaxプレートリーダーを用いて、OD450nmでプレートを読み取った。
【０１３７】
図４および４Ａは、精製キメラ8C92H6 HC1LC1がヒトIL-23とヒトIL-23Rの結合を阻害する能力を示す。
【０１３８】
図４Ｂは、精製キメラ8C92H6 HC1LC1がカニクイザルIL-23とヒトIL-23Rの結合を阻害する能力を示す。
【０１３９】
図５は、キメラ8C92H6 HC1LC1を含む組織培養上清がヒトIL-23とヒトIL-23Rの結合を阻害する能力を示す。
【０１４０】
図６は、組織培養上清ヒト化mAbがヒトIL-23とヒトIL-23Rの結合を阻害する能力を示す。
【０１４１】
図６Ａおよび図６Ｃは、精製ヒト化mAbがヒトIL-23とヒトIL-23Rの結合を阻害する能力を示す。
【０１４２】
図６Ｂは、精製ヒト化mAbがカニクイザルIL-23とヒトIL-23Rの結合を阻害する能力を示す。
【０１４３】
すべてのサンプルは二つ組（duplicate）で実施し、各二つ組の平均値を示す。さらに、上清材料を用いたアッセイは、異なる組織培養上清の調製物を用いて2回実施し、代表的結果を示す。
【０１４４】
組織培養上清中のヒト化抗体A3M4、A5M4、A6M4、A7M4、A8M4、A9M4、A10M4、A11M4、A12M4、A10.5M4、A11.5M4、A12.5M4、A10.5M3、A11.5M3、A12.5M3、A10M3、A11M3およびA12M3もこのアッセイで試験した。これら抗体はすべて、ヒトIL-23とヒトIL-23Rの結合を中和し、IC50値は0.14nM〜0.57nMの範囲であった（データは示していない）。
【０１４５】
［実施例７］
抗IL-23マウスmAbおよびヒト化mAbによるIL-23生物活性の阻害
新しく単離したマウス脾細胞を組換えヒトIL-23単独で処理するか、またはIL-23 mAbを滴定しながらプレインキュベートした後、この処理をした。3日の培養後、細胞上清を回収し、IL-17またはIL-22 ELISA duo set（R&D systems）を用いて、ELISAによりアッセイした。
【０１４６】
抗IL-23 mAbが、ヒト組換えIL-23とのインキュベーション後の脾細胞からのマウスIL-17の産生を阻害する能力を図８、図８Ａ、図８Ｂおよび図８Ｃに示す。
【０１４７】
マウス抗体は、3種の異なる供給源由来のIL-23を用いて、阻害について試験した。一つの例を図８に示す。別の実験では、図８Ａ〜図８Ｃに示すように、マウスmAbをキメラ抗体およびヒト化変異体（A3M0）と比較した。これらの抗体は、ヒト組換えIL-23とのインキュベーション後の脾細胞からのマウスIL-17の産生を阻害した。
【０１４８】
データ（Grafitを用いてプロットした）は、無関連のIgGを含む条件で産生されたIL-17のレベル（すなわち、阻害0％）と比較した、中和mAbを用いて得られた阻害率（％）を示す。
【０１４９】
図９、図９Ａ、図９Ｂおよび図９Ｃは、抗IL-23 mAbが、マウス脾細胞からのIL-23駆動性IL-22産生を阻害する能力を示す。
【０１５０】
図９は、マウス抗体または対照IgGと一緒にインキュベートした場合の、脾細胞におけるIL-22の測定量を示す。
【０１５１】
図９Ａ〜図９Ｃは、このアッセイにおけるIL-22産生の阻害（％）を示す。図９Ａはマウス抗体を表し、図９Ｂはヒト化抗体A3M0を表し、また図９Ｃはキメラ抗体を表す。
【０１５２】
［実施例８］
NK92細胞からのIL-12誘導性IFNγ産生を阻害する能力についての抗IL-23 mAbと抗IL-12/23 p40 mAbの比較
ナチュラルキラー細胞系、NK92（ATCC#CRL-2407）をATCCガイドラインに従い増殖させた。この細胞系は、用量依存的にIL-12に応答してIFNγを分泌する。ウェル当たり4 x 104個の細胞を、培地もしくは1ngのIL-12（Peprotech）単独の存在下で、または細胞に添加する前に、精製抗体材料を滴定しながら室温で1時間プレインキュベートしておいたIL-12と一緒に、3日培養した。細胞培養上清を採取し、3日の培養後に解析して、抗ヒトIFNγ抗体対（Biosource）を用いて製造者の指示に従いIFNγ含量を定量した。簡単に説明すると、抗ヒトIFNγ捕捉mAbを96ウェルの平底Nunc Maxisorp（商標）プレートにコートした。プレートを1％BSAでブロッキングした後、サンプルを添加した。ビオチン化検出mAb（Biosource）、続いてストレプトアビジン-HRPおよびTMB基質を用いて、検出を実施した。IL-12単独で得られた値を陽性対照として、また、培地単独で得られたものを陰性対照として用いた。
【０１５３】
本発明の抗IL-23 mAbは、NK92細胞からのIL-12駆動性IFNγ産生に何の影響も与えなかった（図１０参照）。これは、本発明の抗IL-23 mAbがIL-12とその受容体の結合を阻害しないことを証明するものであり、従って、この抗体が、IL12とIL-23に共通ではないエピトープを認識することを示唆している。
【０１５４】
［実施例９］
抗IL-23 mAb（マウス、キメラおよびヒト化）による内因性ヒトIL-23とIL-23受容体の結合の阻害
8C92H6マウス親、キメラ抗体HC1LC1、およびヒト化変異体A3M0を、これらが、内因性ヒトIL-23とヒトIL-23受容体の結合を中和する能力について評価した。
【０１５５】
内因性ヒトIL-23を刺激樹状細胞から作製した。簡単に説明すると、末梢血液単核細胞から負の選択により精製された単球をGMCSF/IL-4の存在下で5日間培養した。この後、細胞を洗浄してから、CD40Lおよびザイモサンで刺激した。さらに24時間後、上清を細胞から回収して、IL-23含量の評価（ELISA）および受容体中和アッセイでの使用まで保存した。
【０１５６】
組換えヒトIL-23受容体（R&D systems 1400-IR-050）を96ウェルプレートに濃度1μg/mlでコートした。最終濃度3.5ng/mlの内因性ヒトIL-23を、精製抗体材料を滴定しながら1時間プレインキュベートした後、プレコートしたプレートに添加した。ビオチン化抗ヒトIL12（R&D systems BAF-219）、続いて、ストレプトアビジン-HRP（GE Healthecare RPN 4401）を用いて、検出を実施した。この中和ELISAでは、1％BSAを用いた。
【０１５７】
マウスmAb(8C92H6)、キメラmAb(HC1LC1)、およびヒト化mAb(A3M0)は、内因性ヒトIL-23を中和し、ヒトIL-23とヒトIL-23受容体の結合を阻害した。代表的データを図１１に示す。
【０１５８】
［実施例１０］
抗IL-23 mAbによる、25％AB型血清の存在下での内因性ヒトIL-23とIL-23受容体の結合の阻害
組換えヒトIL-23受容体（R&D systems 1400-IR-050）を96ウェルプレートに濃度1μg/mlでコートした。最終濃度5 ng/mlの内因性ヒトIL-23を、精製mAbを滴定しながらプレインキュベートした後、プレコートしたプレートに添加した。ビオチン化抗ヒトIL12（R&D systems BAF-219）、続いてストレプトアビジン-HRP（GE Healthecare RPN 4401）を用いて、検出を実施した。中和ELISAでは、25％ヒトプールAB型血清を用いた。
【０１５９】
8C92H6、HC1LC1およびA3M0は、ヒト血清においてその活性を保持し、内因性ヒトIL-23とヒトIL-23受容体の結合を阻害する。代表的データを図１２に示す。
【０１６０】
［実施例１１］
抗IL-23 mAbによる、ヒト細胞における内因性受容体複合体を介したIL-23駆動性pSTAT3シグナル伝達の阻害
内因性受容体複合体を介したIL-23駆動性pSTAT3シグナル伝達を、このアッセイにおいて、DBヒトリンパ腫細胞系（ATCC CCRL-2289）におけるSTAT3のリン酸化の定量により測定する。この細胞系は、mRNAレベル（Taqman）でのIL-23RおよびIL12β1発現ならびに細胞表面受容体発現について細胞系をスクリーニングすることにより、同定した（フローサイトメトリー、データは示していない）。DB細胞は、STAT3リン酸化によりモニタリングされるように、用量依存的にヒトIL-23に応答する。
【０１６１】
ヒトIL-23（R&D systems 1290-IL）50ng/mlを様々な濃度の精製抗体材料と一緒に室温で30分プレインキュベートした。次に、IL-23/抗体混合物を1.25 x 106個のDB細胞に室温で10分かけて添加した後、細胞を採取し、最終濃度1Xで溶解バッファー（Cell Signaling）において氷上で溶解させた。これら溶解物におけるホスホ-STAT3の発現をイムノアッセイ（Mesoscale Discovery kit K110-DID2）により定量した。IC50値は、3つの独立した実験でアッセイした3回の生物学的反復試験（replicate）についてのデータを示す。A5M0、A6M0、A7M3、A8M3およびA9M3についてのIC50値は、2つの独立した実験でアッセイした3回の生物学的反復試験（replicate）についてのデータを示す。
【０１６２】
IC50値は、親抗体8C92H6、キメラ抗体HC1LC1、ならびにヒト化抗体A3M0、A5M0、A6M0、A7M3、A8M3およびA9M3について決定した。示すデータは、Grafitを用いて計算した独立したアッセイからのIC50平均値である（表９）。すべての抗体がIL-23により誘導されたSTAT3のリン酸化を阻害した。陰性対照mAbは、このアッセイにおいてリン酸化STAT3のレベルにまったく影響を与えなかった（データは示していない）。
【表９】
2011501738.tif 000012
【０１６３】
【表１０】
2011501738.tif 000013
【０１６４】
2011501738.tif 000014
【０１６５】
2011501738.tif 000015
【０１６６】
配列
配列番号1
SYGIT
配列番号2
ENYPRSGNTYYNEKFKG
配列番号3 
CEFISTVVAPYYYALDY
配列番号4
SEFISTVVAPYYYALDY
配列番号5 
KASKKVTIFGSISALH
配列番号6
NGAKLES
配列番号7
LQNKEVPYT
配列番号8
QVQLQQSGAELARPGTSVKLSCKASGYTFTSYGITWVKQRTGQGLEWIGE
NYPRSGNTYYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYFCARCE
FISTVVAPYYYALDYWGQGTSVTVSS
配列番号9
CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGCGAGGCCTGGGACTTC
AGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGCTATGGTA
TAACCTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGAG
AATTATCCTAGAAGTGGTAATACTTACTACAATGAGAAATTCAAGGGCAA
GGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCGTACATGGAGCTCC
GCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGATGCGAA
TTTATTAGTACGGTAGTAGCTCCCTATTACTATGCTCTGGACTACTGGGG
TCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA
配列番号10
DIVLTQSPASLAVSLGQKATISCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPK
LIYNGAKLESGVSARFSDSGSQNRSPFGNQLSFTLTIDPVEADDAATYYC
LQNKEVPYTFGGGTKLEIK
配列番号11
GACATTGTACTAACCCAATCTCCAGCATCTTTGGCTGTGTCTCTAGGGCA
GAAGGCCACCATCTCCTGCAAGGCCAGCAAAAAAGTCACTATATTTGGCT
CTATAAGTGCTCTGCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAA
CTCATCTATAATGGAGCCAAACTAGAATCTGGGGTCAGTGCCAGGTTCAG
TGACAGTGGGTCTCAGAACCGCTCACCATTTGGAAATCAGCTCAGCTTCA
CCCTCACCATTGATCCTGTGGAGGCTGATGATGCAGCAACCTATTACTGT
CTGCAAAATAAAGAGGTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGA
AATAAAA
配列番号12
QVQLQQSGAELARPGTSVKLSCKASGYTFTSYGITWVKQRTGQGLEWIGE
NYPRSGNTYYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYFCARCE
FISTVVAPYYYALDYWGQGTSLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA
ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPS
SSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSV
FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK
PREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK
GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN
YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS
LSLSPGK
配列番号13
CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGCGAGGCCTGGGACTTC
AGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGCTATGGTA
TAACCTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGAG
AATTATCCTAGAAGTGGTAATACTTACTACAATGAGAAATTCAAGGGCAA
GGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCGTACATGGAGCTCC
GCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGATGCGAA
TTTATTAGTACGGTAGTAGCTCCCTATTACTATGCTCTGGACTACTGGGG
TCAAGGAACCTCACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCA
GCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCC
GCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTC
CTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGC
TGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGC
AGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAG
CAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCC
ACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTG
TTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCC
CGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGA
AGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAG
CCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGAC
CGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGT
CCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAG
GGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGA
GCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACC
CCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAAC
TACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTA
CAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCA
GCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGC
CTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号14
DIVLTQSPASLAVSLGQKATISCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPK
LIYNGAKLESGVSARFSDSGSQNRSPFGNQLSFTLTIDPVEADDAATYYC
LQNKEVPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN
FYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEK
HKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号15
GACATTGTACTAACCCAATCTCCAGCATCTTTGGCTGTGTCTCTAGGGCA
GAAGGCCACCATCTCCTGCAAGGCCAGCAAAAAAGTCACTATATTTGGCT
CTATAAGTGCTCTGCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAA
CTCATCTATAATGGAGCCAAACTAGAATCTGGGGTCAGTGCCAGGTTCAG
TGACAGTGGGTCTCAGAACCGCTCACCATTTGGAAATCAGCTCAGCTTCA
CCCTCACCATTGATCCTGTGGAGGCTGATGATGCAGCAACCTATTACTGT
CTGCAAAATAAAGAGGTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGA
AATAAAACGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCG
ATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAAC
TTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCA
GAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCA
CCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAG
CACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGT
GACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
配列番号16
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGE
NYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSE
FISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号17
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCTCCAG
CGTGAAGGTGAGCTGCAAAGCCTCAGGCTACACCTTCACCAGCTACGGCA
TCACTTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGAGAG
AACTACCCCAGGAGCGGCAACACCTACTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAG
GGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAGCTGA
GCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACTACTGCGCCAGGAGCGAG
TTCATCAGCACCGTCGTGGCCCCCTACTACTACGCCCTCGACTATTGGGG
CCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号18
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPK
LIYNGAKLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPY
TFGGGTKVEIK
配列番号19
GACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTCGCTGTGAGCCTGGGCGA
GAGGGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTCACCATCTTCGGCA
GCATCTCCGCCCTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGACAGCCCCCCAAG
CTGATCTACAACGGCGCCAAGCTGGAGAGCGGCGTGCCCGACAGGTTTAG
CGGCAGCGGCAGCGGCACAGACTTCACCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGG
CCGAAGACGTGGCCGTGTACTACTGCCTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTAC
ACCTTCGGCGGGGGCACCAAAGTGGAGATCAAG
配列番号20
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPK
LIYNGAKLESGVSDRFSDSGSQNRSPFGNQLSFTLTISSLQAEDVAVYYC
LQNKEVPYTFGGGTKVEIK
配列番号21
GACATCGTGATGACTCAGTCTCCCGACAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGA
GAGGGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTGACCATCTTCGGGA
GCATCTCCGCCCTGCACTGGTATCAGCAGAAACCCGGACAGCCCCCCAAG
CTGATCTACAACGGCGCCAAGCTGGAAAGCGGCGTGAGCGACAGGTTCAG
CGATAGCGGCAGCCAGAACAGGAGCCCTTTCGGCAACCAGCTGAGCTTCA
CCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGGCCGAGGACGTCGCAGTGTACTACTGC
CTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTACACCTTTGGCGGCGGCACCAAGGTGGA
GATTAAG
配列番号22
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASKKVTIFGSISALHWYLQKPGQPPQ
LIYNGAKLESGVSDRFSDSGSQNRSPFGNQLSFTLKISRVEAEDVGVYYC
LQNKEVPYTFGGGTKVEIK
配列番号23
GATATCGTGATGACCCAGACCCCCCTGAGCCTGAGCGTGACTCCAGGCCA
GCCCGCCAGCATCAGCTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTGACCATCTTCGGCA
GCATTAGCGCCCTCCACTGGTACCTGCAGAAACCCGGGCAGCCCCCCCAG
CTGATCTATAACGGCGCTAAGCTGGAGAGCGGCGTGTCCGACAGGTTCAG
CGACTCTGGAAGCCAGAACAGGAGCCCCTTCGGCAACCAGCTGAGCTTCA
CCCTGAAGATCAGCAGGGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGC
CTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTACACCTTCGGAGGCGGCACCAAGGTCGA
GATCAAG
配列番号24
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASKKVTIFGSISALHWYLQKPGQPPQ
LIYNGAKLESGVSDRFSDSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCLQNKEVPY
TFGGGTKVEIK
配列番号25
GACATCGTGATGACCCAGACTCCCCTGTCCCTGAGCGTGACCCCCGGACA
GCCCGCCAGCATCAGCTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTGACCATCTTCGGCA
GCATCAGCGCCCTGCACTGGTACCTCCAGAAGCCCGGGCAGCCCCCACAG
CTGATCTACAACGGCGCCAAGCTGGAGAGCGGCGTGAGCGACAGGTTCTC
TGATAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATTAGCAGGGTGGAGG
CCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCCTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTAC
ACCTTCGGCGGCGGCACCAAAGTCGAGATCAAG
配列番号26
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGE
NYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSE
FISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAA
LGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS
SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVF
LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP
REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG
QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY
KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL
SLSPGK
配列番号27
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCTCCAG
CGTGAAGGTGAGCTGCAAAGCCTCAGGCTACACCTTCACCAGCTACGGCA
TCACTTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGAGAG
AACTACCCCAGGAGCGGCAACACCTACTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAG
GGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAGCTGA
GCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACTACTGCGCCAGGAGCGAG
TTCATCAGCACCGTCGTGGCCCCCTACTACTACGCCCTCGACTATTGGGG
CCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCG
TGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCC
CTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTG
GAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGC
AGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGC
AGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAA
CACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACA
CCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTC
CTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGA
GGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGT
TCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCC
AGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGT
GCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCA
ACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGC
CAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCT
GACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCA
GCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTAC
AAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAG
CAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCT
GCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTG
AGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号28
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPK
LIYNGAKLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPY
TFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKV
QWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEV
THQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号29
GACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTCGCTGTGAGCCTGGGCGA
GAGGGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTCACCATCTTCGGCA
GCATCTCCGCCCTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGACAGCCCCCCAAG
CTGATCTACAACGGCGCCAAGCTGGAGAGCGGCGTGCCCGACAGGTTTAG
CGGCAGCGGCAGCGGCACAGACTTCACCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGG
CCGAAGACGTGGCCGTGTACTACTGCCTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTAC
ACCTTCGGCGGGGGCACCAAAGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCC
CAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCG
CCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTG
CAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGT
GACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGA
CCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTG
ACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGA
GTGC
配列番号30
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPK
LIYNGAKLESGVSDRFSDSGSQNRSPFGNQLSFTLTISSLQAEDVAVYYC
LQNKEVPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN
FYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEK
HKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号31
GACATCGTGATGACTCAGTCTCCCGACAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGA
GAGGGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTGACCATCTTCGGGA
GCATCTCCGCCCTGCACTGGTATCAGCAGAAACCCGGACAGCCCCCCAAG
CTGATCTACAACGGCGCCAAGCTGGAAAGCGGCGTGAGCGACAGGTTCAG
CGATAGCGGCAGCCAGAACAGGAGCCCTTTCGGCAACCAGCTGAGCTTCA
CCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGGCCGAGGACGTCGCAGTGTACTACTGC
CTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTACACCTTTGGCGGCGGCACCAAGGTGGA
GATTAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCG
ATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAAC
TTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCA
GAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCA
CCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAG
CACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGT
GACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
配列番号32
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASKKVTIFGSISALHWYLQKPGQPPQ
LIYNGAKLESGVSDRFSDSGSQNRSPFGNQLSFTLKISRVEAEDVGVYYC
LQNKEVPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN
FYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEK
HKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号33
GATATCGTGATGACCCAGACCCCCCTGAGCCTGAGCGTGACTCCAGGCCA
GCCCGCCAGCATCAGCTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTGACCATCTTCGGCA
GCATTAGCGCCCTCCACTGGTACCTGCAGAAACCCGGGCAGCCCCCCCAG
CTGATCTATAACGGCGCTAAGCTGGAGAGCGGCGTGTCCGACAGGTTCAG
CGACTCTGGAAGCCAGAACAGGAGCCCCTTCGGCAACCAGCTGAGCTTCA
CCCTGAAGATCAGCAGGGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGC
CTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTACACCTTCGGAGGCGGCACCAAGGTCGA
GATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCG
ATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAAC
TTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCA
GAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCA
CCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAG
CACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGT
GACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
配列番号34
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASKKVTIFGSISALHWYLQKPGQPPQ
LIYNGAKLESGVSDRFSDSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCLQNKEVPY
TFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKV
QWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEV
THQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号35
GACATCGTGATGACCCAGACTCCCCTGTCCCTGAGCGTGACCCCCGGACA
GCCCGCCAGCATCAGCTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTGACCATCTTCGGCA
GCATCAGCGCCCTGCACTGGTACCTCCAGAAGCCCGGGCAGCCCCCACAG
CTGATCTACAACGGCGCCAAGCTGGAGAGCGGCGTGAGCGACAGGTTCTC
TGATAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATTAGCAGGGTGGAGG
CCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCCTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTAC
ACCTTCGGCGGCGGCACCAAAGTCGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCC
CAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCG
CCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTG
CAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGT
GACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGA
CCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTG
ACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGA
GTGC
配列番号36
MGWSCIILFLVATATGVHS
配列番号37
MLGSRAVMLLLLLPWTAQGRAVPGGSSPAWTQCQQLSQKLCTLAWSAHPLV
GHMDLREEGDEETTNDVPHIQCGDGCDPQGLRDNSQFCLQRIHQGLIFYEK
LLGSDIFTGEPSLLPDSPVGQLHASLLGLSQLLQPEGHHWETQQIPSLSPS
QPWQRLLLRFKILRSLQAFVAVAARVFAHGAATLSP
配列番号38
ATGCTGGGGAGCAGAGCTGTAATGCTGCTGTTGCTGCT
GCCCTGGACAGCTCAGGGCAGAGCTGTGCCTGGGGGCAGCAGCCCTGCCTG
GACTCAGTGCCAGCAGCTTTCACAGAAGCTCTGCACACTGGCCTGGAGTGC
ACATCCACTAGTGGGACACATGGATCTAAGAGAAGAGGGAGATGAAGAGAC
TACAAATGATGTTCCCCATATCCAGTGTGGAGATGGCTGTGACCCCCAAGG
ACTCAGGGACAACAGTCAGTTCTGCTTGCAAAGGATCCACCAGGGTCTGAT
TTTTTATGAGAAGCTGCTAGGATCGGATATTTTCACAGGGGAGCCTTCTCT
GCTCCCTGATAGCCCTGTGGGCCAGCTTCATGCCTCCCTACTGGGCCTCAG
CCAACTCCTGCAGCCTGAGGGTCACCACTGGGAGACTCAGCAGATTCCAAG
CCTCAGTCCCAGCCAGCCATGGCAGCGTCTCCTTCTCCGCTTCAAAATCCT
TCGCAGCCTCCAGGCCTTTGTGGCTGTAGCCGCCCGGGTCTTTGCCCATGG
AGCAGCAACCCTGAGTCCC
配列番号39
MCHQQLVISWFSLVFLASPLVAIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCD
TPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLL
LLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLT
FSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEE
SLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVS
WEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASI
SVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS
配列番号40
ATGTGTCAC
CAGCAGTTGGTCATCTCTTGGTTTTCCCTGGTTTTTCTGGCATCTCCCCTC
GTGGCCATATGGGAACTGAAGAAAGATGTTTATGTCGTAGAATTGGATTGG
TATCCGGATGCCCCTGGAGAAATGGTGGTCCTCACCTGTGACACCCCTGAA
GAAGATGGTATCACCTGGACCTTGGACCAGAGCAGTGAGGTCTTAGGCTCT
GGCAAAACCCTGACCATCCAAGTCAAAGAGTTTGGAGATGCTGGCCAGTAC
ACCTGTCACAAAGGAGGCGAGGTTCTAAGCCATTCGCTCCTGCTGCTTCAC
AAAAAGGAAGATGGAATTTGGTCCACTGATATTTTAAAGGACCAGAAAGAA
CCCAAAAATAAGACCTTTCTAAGATGCGAGGCCAAGAATTATTCTGGACGT
TTCACCTGCTGGTGGCTGACGACAATCAGTACTGATTTGACATTCAGTGTC
AAAAGCAGCAGAGGCTCTTCTGACCCCCAAGGGGTGACGTGCGGAGCTGCT
ACACTCTCTGCAGAGAGAGTCAGAGGGGACAACAAGGAGTATGAGTACTCA
GTGGAGTGCCAGGAGGACAGTGCCTGCCCAGCTGCTGAGGAGAGTCTGCCC
ATTGAGGTCATGGTGGATGCCGTTCACAAGCTCAAGTATGAAAACTACACC
AGCAGCTTCTTCATCAGGGACATCATCAAACCTGACCCACCCAAGAACTTG
CAGCTGAAGCCATTAAAGAATTCTCGGCAGGTGGAGGTCAGCTGGGAGTAC
CCTGACACCTGGAGTACTCCACATTCCTACTTCTCCCTGACATTCTGCGTT
CAGGTCCAGGGCAAGAGCAAGAGAGAAAAGAAAGATAGAGTCTTCACGGAC
AAGACCTCAGCCACGGTCATCTGCCGCAAAAATGCCAGCATTAGCGTGCGG
GCCCAGGACCGCTACTATAGCTCATCTTGGAGCGAATGGGCATCTGTGCCC
TGCAGT
配列番号41
MWPPGSASQPPPSPAAATGLHPAARPVSLQCRLSMCPARSLLLVATLVLLD
HLSLARNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEE
IDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFM
MALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQAL
NFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS
配列番号42
ATGTGGCCCCCTGGGTCAGCCTCCCAGCCACCGCCCTCAC
CTGCCGCGGCCACAGGTCTGCATCCAGCGGCTCGCCCTGTGTCCCTGCAGT
GCCGGCTCAGCATGTGTCCAGCGCGCAGCCTCCTCCTTGTGGCTACCCTGG
TCCTCCTGGACCACCTCAGTTTGGCCAGAAACCTCCCCGTGGCCACTCCAG
ACCCAGGAATGTTCCCATGCCTTCACCACTCCCAAAACCTGCTGAGGGCCG
TCAGCAACATGCTCCAGAAGGCCAGACAAACTCTAGAATTTTACCCTTGCA
CTTCTGAAGAGATTGATCATGAAGATATCACAAAAGATAAAACCAGCACAG
TGGAGGCCTGTTTACCATTGGAATTAACCAAGAATGAGAGTTGCCTAAATT
CCAGAGAGACCTCTTTCATAACTAATGGGAGTTGCCTGGCCTCCAGAAAGA
CCTCTTTTATGATGGCCCTGTGCCTTAGTAGTATTTATGAAGACTTGAAGA
TGTACCAGGTGGAGTTCAAGACCATGAATGCAAAGCTTCTGATGGATCCTA
AGAGGCAGATCTTTCTAGATCAAAACATGCTGGCAGTTATTGATGAGCTGA
TGCAGGCCCTGAATTTCAACAGTGAGACTGTGCCACAAAAATCCTCCCTTG
AAGAACCGGATTTTTATAAAACTAAAATCAAGCTCTGCATACTTCTTCATG
CTTTCAGAATTCGGGCAGTGACTATTGATAGAGTGATGAGCTATCTGAATG
CTTCC
配列番号43
MLGSRAVMLLLLLSWTAQGRAVPGGSSPAWAQCQQLSQKLCTLAWSAHPLV
GHMDLREEGDEETTNDVPHIQCGDGCDPQGLRDNSQFCLQRIRQGLIFYEK
LLGSDIFTGEPSLLPDSPVGQLHASLLGLSQLLQPEGHHWETQQIPSPSPS
QPWQRLLLRFKILRSLQAFVAVAARVFAHGAATLSP
配列番号44
ATGCTGGGGAGCAGAGCTGTAATGCTGCTGTTGCTGCTGTCCTGGACAGCT
CAGGGCAGGGCTGTGCCTGGGGGCAGCAGCCCTGCCTGGGCTCAGTGCCAG
CAGCTTTCACAGAAGCTCTGCACACTGGCCTGGAGTGCACATCCACTAGTG
GGACACATGGATCTAAGAGAAGAGGGAGATGAAGAGACTACAAATGATGTT
CCCCATATCCAGTGTGGAGATGGCTGTGACCCCCAAGGACTCAGGGACAAC
AGTCAGTTCTGCTTGCAAAGGATTCGCCAGGGTCTGATTTTTTACGAGAAG
CTACTGGGATCGGATATTTTCACAGGGGAGCCTTCTCTGCTGCCTGATAGC
CCTGTGGGCCAGCTTCATGCCTCCCTACTGGGCCTCAGCCAACTCCTGCAG
CCTGAGGGTCACCACTGGGAGACTCAGCAGATTCCAAGCCCCAGTCCCAGC
CAGCCATGGCAGCGCCTCCTTCTCCGCTTCAAAATCCTTCGCAGCCTCCAG
GCCTTTGTGGCTGTAGCTGCCCGGGTCTTTGCCCATGGAGCAGCAACCCTG
AGTCCC
配列番号45
MCHQQLVISWFSLVFLASPLMAIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCD
TPEEDGITWTLDQSGEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEALSHSLL
LLHKKEDGIWSTDVLKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLT
FSVKSSRGSSNPQGVTCGAVTLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEE
RLPIEVMVDAIHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVS
WEYPDTWSTPHSYFSLTFCIQVQGKSKREKKDRIFTDKTSATVICRKNASF
SVQAQDRYYSSSWSEWASVPCS
配列番号46
ATGTGTCACCAGCAGCTGGTCATCTCTTGGTTTTCCCTGGTTTTTCTGGCA
TCTCCCCTCATGGCCATATGGGAACTGAAGAAAGACGTTTATGTTGTAGAA
TTGGACTGGTACCCGGATGCCCCTGGAGAAATGGTGGTCCTCACCTGTGAC
ACCCCTGAAGAAGATGGTATCACCTGGACCTTGGACCAGAGTGGTGAGGTC
TTAGGCTCTGGCAAAACCCTGACCATCCAAGTCAAAGAGTTTGGAGATGCT
GGCCAGTACACCTGTCACAAAGGAGGCGAGGCTCTAAGCCATTCACTCCTG
CTGCTTCACAAAAAGGAAGATGGAATTTGGTCCACTGATGTTTTAAAGGAC
CAGAAAGAACCCAAAAATAAGACCTTTCTAAGATGCGAGGCCAAAAATTAT
TCTGGACGTTTCACCTGCTGGTGGCTGACGACAATCAGTACTGATCTGACA
TTCAGTGTCAAAAGCAGCAGAGGCTCTTCTAACCCCCAAGGGGTGACGTGT
GGAGCCGTTACACTCTCTGCAGAGAGGGTCAGAGGGGACAATAAGGAGTAT
GAGTACTCAGTGGAGTGCCAGGAGGACAGTGCCTGCCCAGCCGCTGAGGAG
AGGCTGCCCATTGAGGTCATGGTGGATGCCATTCACAAGCTCAAGTATGAA
AACTACACCAGCAGCTTCTTCATCAGGGACATCATCAAACCCGACCCACCC
AAGAACTTGCAGCTGAAGCCATTAAAGAATTCTCGGCAGGTGGAGGTCAGC
TGGGAGTACCCTGACACCTGGAGTACTCCACATTCCTACTTCTCCCTGACA
TTCTGCATCCAGGTCCAGGGCAAGAGCAAGAGAGAAAAGAAAGATAGAATC
TTCACAGACAAGACCTCAGCCACGGTCATCTGCCGCAAAAATGCCAGCTTT
AGCGTGCAGGCCCAGGACCGCTACTATAGCTCATCTTGGAGCGAATGGGCA
TCTGTGCCCTGCAGT
配列番号47
MNQVTIQWDAVIALYILFSWCHGGITNINCSGHIWVEPATIFKMGMNISIYCQAAIKNCQPRKLHFYKNGIKERFQITRINKTTARLWYKNFLEPHASMYCTAECPKHFQETLICGKDISSGYPPDIPDEVTCVIYEYSGNMTCTWNAGKLTYIDTKYVVHVKSLETEEEQQYLTSSYINISTDSLQGGKKYLVWVQAANALGMEESKQLQIHLDDIVIPSAAVISRAETINATVPKTIIYWDSQTTIEKVSCEMRYKATTNQTWNVKEFDTNFTY                     VQQSEFYLEPNIKYVFQVRCQETGKRYWQPWSSLFFHKTPETVPQVTSKAFQHDTWNSGLTVASISTGHLTSDNRGDIGLLLGMIVFAVMLSILSLIGIFNRSFRTGIKRRILLLIPKWLYEDIPNMKNSNVVKMLQENSELMNNNSSEQVLYVDPMITEIKEIFIPEHKPTDYKKENTGPLETRDYPQNSLFDNTTVVYIPDLNTGYKPQISNFLPEGSHLSNNNEITSLTLKPPVDSLDSGNNPRLQKHPNFAFSVSSVNSLSNTIFLGELSLILNQGECSSPDIQNSVEEETTMLLENDSPSETIPEQTLLPDEFVSCLGIVNEELPSINTYFPQNILESHFNRISLLEK
配列番号48
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGENYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号49
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCTCCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAAGCCTCAGGCTACACCTTCACCAGCTACGGCATCACTTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGAGAGAACTACCCCAGGAGCGGCAACACCTACTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACTACTGCGCCAGGGCTGAGTTCATCAGCACCGTCGTGGCCCCCTACTACTACGCCCTCGACTATTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号50
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGENYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号51
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCTCCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAAGCCTCAGGCTACACCTTCACCAGCTACGGCATCACTTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGAGAGAACTACCCCAGGAGCGGCAACACCTACTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACTACTGCGCCAGGGTGGAGTTCATCAGCACCGTCGTGGCCCCCTACTACTACGCCCTCGACTATTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号52
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGEDYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号53
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCTCCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAAGCCTCAGGCTACACCTTCACCAGCTACGGCATCACTTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGAGAGGACTACCCCAGGAGCGGCAACACCTACTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACTACTGCGCCAGGAGCGAGTTCATCAGCACCGTCGTGGCCCCCTACTACTACGCCCTCGACTATTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号54
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYGITWVRQAPGQGLEWMGENYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAMYYCARSEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号55
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCTCCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAAGCCTCAGGCTACACCTTCGCCAGCTACGGCATCACTTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGAGAGAACTACCCCAGGAGCGGCAACACCTACTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTATGTACTACTGCGCCAGGAGCGAGTTCATCAGCACCGTCGTGGCCCCCTACTACTACGCCCTCGACTATTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号56
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSTSALHWYQQKPGQPPKLIYNGAKLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPYTFGGGTKVEIK
配列番号57
GACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTCGCTGTGAGCCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTCACCATCTTCGGCAGCACCTCCGCCCTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGACAGCCCCCCAAGCTGATCTACAACGGCGCCAAGCTGGAGAGCGGCGTGCCCGACAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACAGACTTCACCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGGCCGAAGACGTGGCCGTGTACTACTGCCTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTACACCTTCGGCGGGGGCACCAAAGTGGAGATCAAG
配列番号58
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSTSALHWYQQKPGQPPKLIYNGAKPESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPYTFGGGTKVEIK
配列番号59
GACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTCGCTGTGAGCCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTCACCATCTTCGGCAGCACCTCCGCCCTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGACAGCCCCCCAAGCTGATCTACAACGGCGCCAAGCCCGAGAGCGGCGTGCCCGACAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACAGACTTCACCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGGCCGAAGACGTGGCCGTGTACTACTGCCTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTACACCTTCGGCGGGGGCACCAAAGTGGAGATCAAG
配列番号60
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGENYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号61
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCTCCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAAGCCTCAGGCTACACCTTCACCAGCTACGGCATCACTTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGAGAGAACTACCCCAGGAGCGGCAACACCTACTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACTACTGCGCCAGGGCTGAGTTCATCAGCACCGTCGTGGCCCCCTACTACTACGCCCTCGACTATTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号62
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGENYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号63
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCTCCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAAGCCTCAGGCTACACCTTCACCAGCTACGGCATCACTTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGAGAGAACTACCCCAGGAGCGGCAACACCTACTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACTACTGCGCCAGGGTGGAGTTCATCAGCACCGTCGTGGCCCCCTACTACTACGCCCTCGACTATTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号64
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGEDYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号65
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCTCCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAAGCCTCAGGCTACACCTTCACCAGCTACGGCATCACTTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGAGAGGACTACCCCAGGAGCGGCAACACCTACTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACTACTGCGCCAGGAGCGAGTTCATCAGCACCGTCGTGGCCCCCTACTACTACGCCCTCGACTATTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号66
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYGITWVRQAPGQGLEWMGENYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAMYYCARSEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号67
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCTCCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAAGCCTCAGGCTACACCTTCGCCAGCTACGGCATCACTTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGAGAGAACTACCCCAGGAGCGGCAACACCTACTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTATGTACTACTGCGCCAGGAGCGAGTTCATCAGCACCGTCGTGGCCCCCTACTACTACGCCCTCGACTATTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号68
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSTSALHWYQQKPGQPPKLIYNGAKLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号69
GACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTCGCTGTGAGCCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTCACCATCTTCGGCAGCACCTCCGCCCTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGACAGCCCCCCAAGCTGATCTACAACGGCGCCAAGCTGGAGAGCGGCGTGCCCGACAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACAGACTTCACCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGGCCGAAGACGTGGCCGTGTACTACTGCCTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTACACCTTCGGCGGGGGCACCAAAGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
配列番号70
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSTSALHWYQQKPGQPPKLIYNGAKPESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号71
GACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTCGCTGTGAGCCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCAAGAAGGTCACCATCTTCGGCAGCACCTCCGCCCTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGACAGCCCCCCAAGCTGATCTACAACGGCGCCAAGCCCGAGAGCGGCGTGCCCGACAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACAGACTTCACCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGGCCGAAGACGTGGCCGTGTACTACTGCCTGCAGAACAAGGAGGTGCCCTACACCTTCGGCGGGGGCACCAAAGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
配列番号72
EDYPRSGNTYYNEKFKG
配列番号73
AEFISTVVAPYYYALDY
配列番号74
VEFISTVVAPYYYALDY
配列番号75
KASKKVTIFGSTSALH
配列番号76
NGAKPES
配列番号77
DGAKLES
配列番号78
QGAKLES
配列番号79
DGAKPES
配列番号80
QGAKPES
配列番号81
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGEDYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号82
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGEDYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号83
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYGITWVRQAPGQGLEWMGENYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAMYYCARAEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号84
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYGITWVRQAPGQGLEWMGENYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAMYYCARVEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号85
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYGITWVRQAPGQGLEWMGENYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号86
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYGITWVRQAPGQGLEWMGENYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号87
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYGITWVRQAPGQGLEWMGENYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号88
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYGITWVRQAPGQGLEWMGEDYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号89
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYGITWVRQAPGQGLEWMGEDYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号90
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYGITWVRQAPGQGLEWMGEDYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVEFISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号91
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QWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEV
THQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号92
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配列番号93
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配列番号94
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPKLIYQGAKLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号95
SEFISTVMAPYYYALDY
配列番号96
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPKLIYDGAKLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPYTFGGGTKVEIK
配列番号97
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPKLIYQGAKLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPYTFGGGTKVEIK
配列番号98
ENYPRSGNIYYNEKFKG
配列番号99
ENYPRSGNTYYNEKFRG
配列番号100
SEFTSTVVAPYYYALDY
配列番号101
KASKKVTIYGSTSALH
配列番号102
NSAKLES
配列番号103
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NYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSE
FISTVMAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号104
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DYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSGLRSEDTAVYYCARSE
FISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号105
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NYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSE
FISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号106
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYGITWVRQAPGQGLEWMGE
NYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAAYYCARSE
FISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号107
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NYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSE
FISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号108
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGE
NYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSE
FISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号109
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVNCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGE
NYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSE
FISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号110
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGE
NYPRSGNTYYNEKFRGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSE
FISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号111
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGE
NYPRSGNIYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSE
FISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号112
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGE
NYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSGLRSEDTAVYYCARSE
FISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号113
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYGITWVRQAPGQGLEWMGE
NYPRSGNTYYNEKFRGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSE
FISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号114
QVQLVQSSAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYGITWVRQAPGQGLEWMGE
NYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSE
FTSTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号115
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYGITWVRQAPGQGLEWMGE
NYPRSGNTYYNEKFKGRVTITADKSTGTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSE
FISTVVAPYYYALDYWGQGTLVTVSS
配列番号116
DIVMTQSPDSLVVSLGERATINCKASKKVTIFGSTSALHWYQQKPGQPPK
LIYNGAKLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPY
TFGGGTKVEIK
配列番号117
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPK
LVYNGAKLESGVPDRFSGSGSGADFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPY
TFGGGTKVEIK
配列番号118
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSISALHWYQQRPGQPPK
LIYNGAKLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPY
TFGGGTKVEIK
配列番号119
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPK
LIYNGAKLESGVPGRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPY
TFGGGTKVEIK
配列番号120
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSISALHWYQQKPGQPPK
LIYNSAKLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPY
TFGGGTKVEIK
配列番号121
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIYGSTSALHWYQQKPGQPPK
LIYNGAKPESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPY
TFGGGTKVEIK
配列番号122
DIVMTQSPDSLAVSLGERATISCKASKKVTIFGSTSALHWYQQKPGQPPK
LIYNGAKPESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPY
TFGGGTKVEIK
配列番号123
GIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASKKVTIFGSTSALHWYQQKPGQPPK
LIYNGAKLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQNKEVPY
TFGGGTKVEIK
【図１】
2011501738.tif 000016
【図１Ａ】
2011501738.tif 000017
【図１Ｂ】
2011501738.tif 000018
【図２】
2011501738.tif 000019
【図３】
2011501738.tif 000020
【図３Ａ】
2011501738.tif 000021
【図４】
2011501738.tif 000022
【図４Ａ】
2011501738.tif 000023
【図４Ｂ】
2011501738.tif 000024
【図５】
2011501738.tif 000025
【図６】
2011501738.tif 000026
【図６Ａ】
2011501738.tif 000027
【図６Ｂ】
2011501738.tif 000028
【図６Ｃ】
2011501738.tif 000029
【図７】
2011501738.tif 000030
【図８】
2011501738.tif 000031
【図８Ａ】
2011501738.tif 000032
【図８Ｂ】
2011501738.tif 000033
【図８Ｃ】
2011501738.tif 000034
【図９】
2011501738.tif 000035
【図９Ａ】
2011501738.tif 000036
【図９Ｂ】
2011501738.tif 000037
【図９Ｃ】
2011501738.tif 000038
【図１０】
2011501738.tif 000039
【図１１】
2011501738.tif 000040
【図１２】
2011501738.tif 000041
【配列表】
2011501738000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成22年6月15日(2010.6.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2011501738000001.app
【国際調査報告】
2011501738.tif 000065
2011501738.tif 000066
2011501738.tif 000067