(57)【要約】  特定の実施形態において、炎症性疾患を処置するための方法が開示されている。幾つかの実施形態において、この方法は、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４との結合、及び／又は、（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、（ｉｉｉ）ホモ多量体を形成するＭＩＦの能力、又は、これらの組み合わせを抑制する活性薬剤を投与する工程を備える。【選択図】図１ａ、及び、図１ｂ
2011515416.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＭＩＦ媒介性疾患を処置する方法であって、
前記方法は、処置上効果的な量の抗体を、それを必要とする個体に投与する工程を備え、
前記抗体は、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合、（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、（ｉｉｉ）ホモ多量体を形成するＭＩＦの能力、（ｉｖ）ＭＩＦのＣＤ７４との結合、又は、これらの組み合わせを抑制することを特徴とする方法。
【請求項２】
前記抗体が、ＭＩＦのＮ−ループモチーフの全て又は一部と、特異的に結合するか、又は、競合することを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記抗体が、ＭＩＦの偽ＥＬＲ及びＮ−ループモチーフの全て又は一部と、特異的に結合することを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記抗体が、抗ＣＸＣＲ２抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＭＩＦ抗体、ＭＩＦのＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合する抗体、偽ＥＬＲモチーフ及びＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合する抗体、ＭＩＦとＣＸＣＲ２の結合を抑制する抗体、ＭＩＦとＣＸＣＲ４の結合を抑制する抗体、及び、ＭＩＦとＪＡＢ−１の結合を抑制する抗体、ＭＩＦとＣＤ７４の結合を抑制する抗体、以下のペプチド配列、ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する抗体、以下のペプチド配列、ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する抗体、以下のペプチド配列、ＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬＨＳＩの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する抗体、又は、これらの組み合わせ、から選択されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記抗体が、抗ＣＸＣＲ４抗体７０１、７０８、７１６、７１７、７１８、１２Ｇ５、及び、４Ｇ１０；抗ＭＩＦ抗体ＩＩＤ．９、ＩＩＩＤ．９、ＸＩＦ７、Ｉ３１、ＩＶ２．２、ＸＩ１７、ＸＩＶ１４．３、ＸＩＩ１５．６、及び、ＸＩＶ１５．４；又は、これらの組み合わせから選択されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項６】
マクロファージの泡沫細胞への転換が、本明細書に開示される抗体の投与を受けて抑制されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項７】
心筋細胞のアポトーシスが、本明細書に開示される抗体の投与を受けて抑制されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項８】
浸潤マクロファージのアポトーシスが、本明細書に開示される抗体の投与を受けて抑制されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項９】
腹部大動脈瘤の形成が、本明細書に開示される抗体の投与を受けて抑制されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１０】
腹部大動脈瘤の直径が、本明細書に開示される抗体の投与を受けて減少することを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１１】
動脈瘤中の構造タンパク質が、本明細書に開示される抗体の投与を受けて再発生することを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１２】
第２の活性薬剤を同時投与する工程をさらに備えることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１３】
ナイアシン、フィブラート、スタチン、アポＡ−Ｉペプチド模倣薬（例えば、ＤＦ−４、ノバルティス社)、アポＡ−Ｉ転写上方制御剤、ＡＣＡＴインヒビター、ＣＥＴＰ修飾剤、糖タンパク質（ＧＰ）ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体アンタゴニスト、Ｐ２Ｙ１２受容体アンタゴニスト、Ｌｐ−ＰＬＡ２−インヒビター、抗ＴＮＦ剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−２受容体アンタゴニスト、細胞毒性薬剤、免疫調節剤、抗生物質、Ｔ細胞共刺激遮断薬、障害を改善する抗リウマチ薬、Ｂ細胞除去剤、免疫抑制剤、抗リンパ球抗体、アルキル化剤、抗代謝産物、植物性アルカロイド、テルペノイド、トポイソメラーゼインヒビター、抗腫瘍抗生物質、モノクローナル抗体、ホルモン療法、又は、これらの組み合わせを同時投与する工程をさらに備えることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１４】
前記疾患が、アテローム性動脈硬化、腹部大動脈瘤、急性散在性脳脊髄炎、もやもや病、高安病、急性冠症候群、心臓同種移植片血管障害、肺炎症、急性呼吸促迫症候群、肺線維症、アジソン病、強直性脊椎炎、抗リン質抗体症候群、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、水疱性類天疱瘡、シャーガス病、慢性閉塞性肺疾患、セリアック病、皮膚筋炎、１型糖尿病、２型糖尿病、子宮内膜症、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、間質性膀胱炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、メタボリックシンドローム、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋炎、ナルコレプシー、肥満症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、関節リウマチ、統合失調症、強皮症、シェーグレン症候群、血管炎、白斑、ウェゲナー肉芽腫症、アレルギー性鼻炎、前立腺癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、乳癌、黒色腫、胃癌、結腸直腸癌、脳癌、転移性骨疾患、膵癌、リンパ腫、鼻茸、消化器癌、潰瘍性大腸炎、クローン病、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病、感染性腸炎、分類不能大腸炎、炎症性肝疾患、エンドトキシン・ショック、敗血症性ショック、リウマチ性脊椎炎、強直性脊椎炎、痛風性関節炎、リウマチ性多発筋痛症、アルツハイマー病、パーキンソン病、てんかん、エイズ認知症、喘息、成人呼吸窮迫症候群、気管支炎、嚢胞性線維症、急性白血球媒介性肺損傷、遠位直腸炎、ウェゲナー肉芽腫症、線維筋痛症、気管支炎、ブドウ膜炎、結膜炎、乾癬、湿疹、皮膚炎、平滑筋増殖性疾患、髄膜炎、帯状疱疹、脳炎、腎炎、結核、網膜炎、アトピー性皮膚炎、膵炎、歯周歯肉炎、凝固壊死、液化壊死、フィブリノイド壊死、新生内膜過形成、心筋梗塞、脳卒中、移植臓器拒絶反応、又は、これらの組み合わせであることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１５】
ＭＩＦ媒介性疾患を処置するための医薬組成物であって、
前記医薬組成物が、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４との結合、及び／又は、（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、（ｉｉｉ）ホモ多量体を形成するＭＩＦの能力、又は、これらの組み合わせを抑制する抗体を備えることを特徴とする医薬組成物。
【請求項１６】
前記抗体が、ＭＩＦのＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合することを特徴とする請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】
前記抗体が、ＭＩＦの偽ＥＬＲ及びＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合することを特徴とする請求項１５記載の組成物。
【請求項１８】
前記抗体は、抗ＣＸＣＲ２抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＭＩＦ抗体、ＭＩＦのＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合する抗体、偽ＥＬＲ及びＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合する抗体、ＭＩＦとＣＸＣＲ２の結合を抑制する抗体、ＭＩＦとＣＸＣＲ４の結合を抑制する抗体、ＭＩＦとＪＡＢ−１の結合を抑制する抗体、ＭＩＦとＣＤ７４の結合を抑制する抗体、以下のペプチド配列、ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する抗体、以下のペプチド配列、ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する抗体、以下のペプチド配列、ＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬＨＳＩの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する抗体、又は、これらの組み合わせ、から選択されることを特徴とする請求項１５記載の組成物。
【請求項１９】
前記抗体が、抗ＣＸＣＲ４抗体７０１、７０８、７１６、７１７、７１８、１２Ｇ５、及び、４Ｇ１０；抗ＭＩＦ抗体ＩＩＤ．９、ＩＩＩＤ．９、ＸＩＦ７、Ｉ３１、ＩＶ２．２、ＸＩ１７、ＸＩＶ１４．３、ＸＩＩ１５．６、及び、ＸＩＶ１５．４；又は、これらの組み合わせ、から選択されることを特徴とする請求項１５記載の組成物。
【請求項２０】
第２の活性薬剤をさらに備えることを特徴とする請求項１５記載の組成物。
【請求項２１】
ナイアシン、フィブラート、スタチン、アポＡ−Ｉペプチド模倣薬（例えば、ＤＦ−４、ノバルティス社)、アポＡ−Ｉ転写上方制御剤、ＡＣＡＴインヒビター、ＣＥＴＰ修飾剤、糖タンパク質（ＧＰ）ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体アンタゴニスト、Ｐ２Ｙ１２受容体アンタゴニスト、Ｌｐ−ＰＬＡ２−インヒビター、抗ＴＮＦ剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−２受容体アンタゴニスト、細胞毒性薬剤、免疫調節剤、抗生物質、Ｔ細胞共刺激遮断薬、障害を改善する抗リウマチ薬、Ｂ細胞除去剤、免疫抑制剤、抗リンパ球抗体、アルキル化剤、抗代謝産物、植物性アルカロイド、テルペノイド、トポイソメラーゼインヒビター、抗腫瘍抗生物質、モノクローナル抗体、ホルモン療法、又は、これらの組み合わせをさらに備えることを特徴とする請求項１５記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国仮特許出願第６１／０３８，３８１号（出願日：２００８年３月２０日）、米国仮特許出願第６１／０３９，３７１号（出願日：２００８年３月２５日）、米国仮特許出願第６１／０４５，８０７号（出願日：２００８年４月１７日）、及び、米国仮特許出願第６１／１２１，０９５号（出願日：２００８年１２月９日）の優先権を主張するものであり、これらの出願は、全体として参照されることによって本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
特定の炎症性疾患は、影響を受けた組織へのリンパ球の移動によって部分的に特徴付けられる。リンパ球の移動は、組織の損傷を誘発するとともに、炎症性疾患を悪化させる。多くのリンパ球は、影響を受けた組織に対するＭＩＦの勾配に従う。一般的に、ＭＩＦは、白血球上のＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４受容体と相互に作用することによって、白血球の移動を誘発するとともに維持する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
特定の実施形態において、本明細書に開示されるＭＩＦ媒介性疾患を処置する方法は、処置上効果的な量の抗体を、それを必要とする個体に投与する工程を備え、この抗体は、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合、（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、（ｉｉｉ）ホモ多量体を形成するＭＩＦの能力、（ｉｖ）ＭＩＦのＣＤ７４との結合、又は、これらの組み合わせを抑制する。幾つかの実施形態において、抗体は、ＭＩＦの偽ＥＬＲモチーフの全て又は一部と特異的に結合する。幾つかの実施形態において、抗体は、ＭＩＦのＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合する。幾つかの実施形態において、抗体は、ＭＩＦの偽ＥＬＲモチーフ及びＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合する。幾つかの実施形態において、抗体は、抗ＣＸＣＲ２抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＭＩＦ抗体、ＭＩＦの偽ＥＬＲモチーフの全て又は一部と特異的に結合する抗体、ＭＩＦのＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合する抗体、ＭＩＦの偽ＥＬＲモチーフ及びＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合する抗体、ＭＩＦとＣＸＣＲ２の結合を抑制する抗体、ＭＩＦとＣＸＣＲ４の結合を抑制する抗体、及び、ＭＩＦとＪＡＢ−１の結合を抑制する抗体、ＭＩＦとＣＤ７４の結合を抑制する抗体、以下のペプチド配列、ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する抗体、以下のペプチド配列、ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する抗体、以下のペプチド配列、ＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬＨＳＩの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する抗体、又は、これらの組み合わせ、から選択される。幾つかの実施形態において、抗体は、抗ＣＸＣＲ４抗体：７０１、７０８、７１６、７１７、７１８、１２Ｇ５、及び、４Ｇ１０；抗ＭＩＦ抗体：ＩＩＤ．９、ＩＩＩＤ．９、ＸＩＦ７、Ｉ３１、ＩＶ２．２、ＸＩ１７、ＸＩＶ１４．３、ＸＩＩ１５．６、及びＸＩＶ１５．４；又は、これらの組み合わせから選択される。幾つかの実施形態において、マクロファージの泡沫細胞への転換は、本明細書に開示される抗体の投与を受けて抑制される。幾つかの実施形態において、心筋細胞のアポトーシスは、本明細書に開示される抗体の投与を受けて抑制される。幾つかの実施形態において、浸潤マクロファージのアポトーシスは、本明細書に開示される抗体の投与を受けて抑制される。幾つかの実施形態において、腹部大動脈瘤の形成は、本明細書に開示される抗体の投与を受けて抑制される。幾つかの実施形態において、腹部大動脈瘤の直径は、本明細書に開示される抗体の投与を受けて減少する。幾つかの実施形態において、動脈瘤中の構造タンパク質は、本明細書に開示される抗体の投与を受けて再発生する。幾つかの実施形態において、この方法は、第２活性薬剤を同時投与する工程をさらに備える。幾つかの実施形態において、この方法は、ナイアシン、フィブラート、スタチン、アポＡ−Ｉペプチド模倣薬（例えば、ＤＦ−４、ノバルティス社)、アポＡ−Ｉ転写上方制御剤（up-regulator）、ＡＣＡＴインヒビター、ＣＥＴＰ修飾剤（CETP modulator）、糖タンパク質（ＧＰ）ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体アンタゴニスト、Ｐ２Ｙ１２受容体アンタゴニスト、Ｌｐ−ＰＬＡ２−インヒビター、抗ＴＮＦ剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−２受容体アンタゴニスト、細胞毒性薬剤、免疫調節剤、抗生物質、Ｔ細胞共刺激遮断薬（co-stimulatory blocker）、障害を改善する（disorder-modifying）抗リウマチ薬、Ｂ細胞除去剤、免疫抑制剤、抗リンパ球抗体、アルキル化剤、抗代謝産物、植物性アルカロイド、テルペノイド、トポイソメラーゼインヒビター、抗腫瘍抗生物質、モノクローナル抗体、ホルモン療法、又は、これらの組み合わせを同時投与する工程をさらに備える。幾つかの実施形態において、ＭＩＦ媒介性疾患は、アテローム性動脈硬化、腹部大動脈瘤、急性散在性脳脊髄炎、もやもや病、高安病、急性冠症候群、心臓同種移植片血管障害（Cardiac-allograft vasculopathy）、肺炎症、急性呼吸促迫症候群、肺線維症、アジソン病、強直性脊椎炎、抗リン質抗体症候群、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、水疱性類天疱瘡、シャーガス病、慢性閉塞性肺疾患、セリアック病、皮膚筋炎、１型糖尿病、２型糖尿病、子宮内膜症、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病;、特発性血小板減少性紫斑病、間質性膀胱炎;、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、メタボリックシンドローム、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋炎、ナルコレプシー、肥満症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、関節リウマチ、統合失調症、強皮症、シェーグレン症候群、血管炎、白斑、ウェゲナー肉芽腫症、アレルギー性鼻炎、前立腺癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、乳癌、黒色腫、胃癌、結腸直腸癌、脳癌、転移性骨疾患、膵癌、リンパ腫、鼻茸、消化器癌、潰瘍性大腸炎、クローン病、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病、感染性腸炎、分類不能大腸炎、炎症性肝疾患、エンドトキシン・ショック、敗血症性ショック、リウマチ性脊椎炎、強直性脊椎炎、痛風性関節炎、リウマチ性多発筋痛症、アルツハイマー病、パーキンソン病、てんかん、エイズ認知症、喘息、成人呼吸窮迫症候群、気管支炎、嚢胞性線維症、急性白血球媒介性肺損傷（Acute leukocyte-mediated lung injury）、遠位直腸炎（Distal proctitis）、ウェゲナー肉芽腫症、線維筋痛症、気管支炎、嚢胞性線維症、ブドウ膜炎、結膜炎、乾癬、湿疹、皮膚炎、平滑筋増殖性疾患、髄膜炎、帯状疱疹、脳炎、腎炎、結核、網膜炎、アトピー性皮膚炎、膵炎、歯周歯肉炎（Periodontal gingivitis）、凝固壊死、液化壊死、フィブリノイド壊死、新生内膜過形成、心筋梗塞、脳卒中、移植臓器拒絶反応、又は、これらの組み合わせである。幾つかの実施形態において、疾患は、腹部大動脈瘤である。幾つかの実施形態において、疾患は、アテローム性動脈硬化である。 
【０００４】
特定の実施形態において、本明細書に開示されるＭＩＦ媒介性疾患を処置するための医薬組成物は、抗体を備え、この抗体は、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４との結合、 （ｉｉ）ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、（ｉｉｉ）ホモ多量体を形成するＭＩＦの能力、又は、これらの組み合わせを抑制する。幾つかの実施形態において、抗体は、ＭＩＦの偽ＥＬＲモチーフの全て又は一部と特異的に結合する。幾つかの実施形態において、抗体は、ＭＩＦのＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合する。幾つかの実施形態において、抗体は、ＭＩＦの偽ＥＬＲモチーフ及びＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合する。幾つかの実施形態において、抗体は、抗ＣＸＣＲ２抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＭＩＦ抗体、ＭＩＦの偽ＥＬＲモチーフの全て又は一部と特異的に結合する抗体、ＭＩＦのＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合する抗体、偽ＥＬＲモチーフ及びＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合する抗体、ＭＩＦとＣＸＣＲ２の結合を抑制する抗体、ＭＩＦとＣＸＣＲ４の結合を抑制する抗体、ＭＩＦとＪＡＢ−１の結合を抑制する抗体、ＭＩＦとＣＤ７４の結合を抑制する抗体、以下のペプチド配列、ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する抗体、以下のペプチド配列、ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する抗体、以下のペプチド配列、ＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬＨＳＩの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する抗体、又は、これらの組み合わせ、から選択される。幾つかの実施形態において、抗体は、抗ＣＸＣＲ４抗体７０１、７０８、７１６、７１７、７１８、１２Ｇ５、及び、４Ｇ１０；抗ＭＩＦ抗体ＩＩＤ．９、ＩＩＩＤ．９、ＸＩＦ７、Ｉ３１、ＩＶ２．２、ＸＩ１７、ＸＩＶ１４．３、ＸＩＩ１５．６、及び、ＸＩＶ１５．４；又は、これらの組み合わせ、から選択される。幾つかの実施形態において、組成物は、第２活性薬剤をさらに備える。幾つかの実施形態において、組成物は、ナイアシン、フィブラート、スタチン、アポＡ−Ｉペプチド模倣薬（例えば、ＤＦ−４、ノバルティス社)、アポＡ−Ｉ転写上方制御剤、ＡＣＡＴインヒビター、ＣＥＴＰ修飾剤、糖タンパク質（ＧＰ）ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体アンタゴニスト、Ｐ２Ｙ１２受容体アンタゴニスト、Ｌｐ−ＰＬＡ２−インヒビター、抗ＴＮＦ剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−２受容体アンタゴニスト、細胞毒性薬剤、免疫調節剤、抗生物質、Ｔ細胞共刺激遮断薬、障害を改善する抗リウマチ薬、Ｂ細胞除去剤、免疫抑制剤、抗リンパ球抗体、アルキル化剤、抗代謝産物、植物性アルカロイド、テルペノイド、トポイソメラーゼインヒビター、抗腫瘍抗生物質、モノクローナル抗体、ホルモン療法、又は、これらの組み合わせをさらに備える。
【０００５】
本発明の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲で詳細に説明されている。本発明の特徴及び利点は、典型的な実施形態を説明する以下の詳細な記載を参照することにより、よりよく理解される。これらの実施形態において、本発明の原則が用いられ、添付の図面は以下のとおりである。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１ａ】ＭＩＦ誘発性単核細胞の阻止が、ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４によって媒介されることを示す。ヒトの大動脈内皮細胞 （ＨＡｏＥＣ）、ＩＣＡＭ−１（ＣＨＯ／ＩＣＡＭ−１）を安定して発現するＣＨＯ細胞、及び、マウスの微小血管内皮細胞（ＳＶＥＣ）は、図の如く、ＭＩＦ（ＭＩＦに対する抗体、ＣＸＣＬ１及びＣＸＣＬ８に対する抗体、又は、アイソタイプ対照群とともに）、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、又は、ＣＸＣＬ１２を用いて、又は、用いずに、２時間、プレインキュベートした。単核細胞は、図の如く、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、β２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ７４、又は、アイソタイプ対照群に対する抗体で３０分間事前処理されたか、又は、百日咳毒素（ＰＴＸ）で２時間事前処理された。（ａ）ＨＡｏＥＣは、主にヒトの単球で灌流された。データは、３−８の独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．を示す。
【図１ｂ】ＭＩＦ誘発性単核細胞の阻止が、ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４によって媒介されることを示す。ヒトの大動脈内皮細胞 （ＨＡｏＥＣ）、ＩＣＡＭ−１（ＣＨＯ／ＩＣＡＭ−１）を安定して発現するＣＨＯ細胞、及び、マウスの微小血管内皮細胞（ＳＶＥＣ）は、図の如く、ＭＩＦ（ＭＩＦに対する抗体、ＣＸＣＬ１及びＣＸＣＬ８に対する抗体、又は、アイソタイプ対照群とともに）、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、又は、ＣＸＣＬ１２を用いて、又は、用いずに、２時間、プレインキュベートした。単核細胞は、図の如く、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、β２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ７４、又は、アイソタイプ対照群に対する抗体で３０分間事前処理されたか、又は、百日咳毒素（ＰＴＸ）で２時間事前処理された。（ｂ）ＭＩＦに対する抗体を用いる免疫蛍光法は、２時間の事前処理後、ＨＡｏＥＣ及びＣＨＯ／ＩＣＡＭ−１細胞上のＭＩＦ（緑色）の表面提示（surface presentation）を明らかにしたが、３０分の事前処理後では明らかにしなかった（図示されず）。対照的に、ＭＩＦは、バッファ処理された細胞（対照群）にはなかった。スケールバー、１００μｍ。
【図１ｃ】ＭＩＦ誘発性単核細胞の阻止が、ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４によって媒介されることを示す。ヒトの大動脈内皮細胞 （ＨＡｏＥＣ）、ＩＣＡＭ−１（ＣＨＯ／ＩＣＡＭ−１）を安定して発現するＣＨＯ細胞、及び、マウスの微小血管内皮細胞（ＳＶＥＣ）は、図の如く、ＭＩＦ（ＭＩＦに対する抗体、ＣＸＣＬ１及びＣＸＣＬ８に対する抗体、又は、アイソタイプ対照群とともに）、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、又は、ＣＸＣＬ１２を用いて、又は、用いずに、２時間、プレインキュベートした。単核細胞は、図の如く、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、β２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ７４、又は、アイソタイプ対照群に対する抗体で３０分間事前処理されたか、又は、百日咳毒素（ＰＴＸ）で２時間事前処理された。（ｃ）ＣＨＯ／ＩＣＡＭ−１細胞は、ＭｏｎｏＭａｃ６細胞で灌流された。ベクタートランスフェクトしたＣＨＯ細胞とのバックグラウンド結合は、差し引かれた。データは、３−８の独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．を示す。
【図１ｄ】ＭＩＦ誘発性単核細胞の阻止が、ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４によって媒介されることを示す。ヒトの大動脈内皮細胞 （ＨＡｏＥＣ）、ＩＣＡＭ−１（ＣＨＯ／ＩＣＡＭ−１）を安定して発現するＣＨＯ細胞、及び、マウスの微小血管内皮細胞（ＳＶＥＣ）は、図の如く、ＭＩＦ（ＭＩＦに対する抗体、ＣＸＣＬ１及びＣＸＣＬ８に対する抗体、又は、アイソタイプ対照群とともに）、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、又は、ＣＸＣＬ１２を用いて、又は、用いずに、２時間、プレインキュベートした。単核細胞は、図の如く、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、β２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ７４、又は、アイソタイプ対照群に対する抗体で３０分間事前処理されたか、又は、百日咳毒素（ＰＴＸ）で２時間事前処理された。（ｄ）ＣＨＯ／ＩＣＡＭ−１細胞は、ＭｏｎｏＭａｃ６細胞で灌流された。ベクタートランスフェクトしたＣＨＯ細胞とのバックグラウンド結合は、差し引かれた。データは、３−８の独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．を示す。
【図１ｅ】ＭＩＦ誘発性単核細胞の阻止が、ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４によって媒介されることを示す。ヒトの大動脈内皮細胞 （ＨＡｏＥＣ）、ＩＣＡＭ−１（ＣＨＯ／ＩＣＡＭ−１）を安定して発現するＣＨＯ細胞、及び、マウスの微小血管内皮細胞（ＳＶＥＣ）は、図の如く、ＭＩＦ（ＭＩＦに対する抗体、ＣＸＣＬ１及びＣＸＣＬ８に対する抗体、又は、アイソタイプ対照群とともに）、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、又は、ＣＸＣＬ１２を用いて、又は、用いずに、２時間、プレインキュベートした。単核細胞は、図の如く、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、β２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ７４、又は、アイソタイプ対照群に対する抗体で３０分間事前処理されたか、又は、百日咳毒素（ＰＴＸ）で２時間事前処理された。（ｅ）ＨＡｏＥＣｓは、Ｔ細胞で灌流された。データは、３−８の独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．を示す。
【図１ｆ】ＭＩＦ誘発性単核細胞の阻止が、ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４によって媒介されることを示す。ヒトの大動脈内皮細胞 （ＨＡｏＥＣ）、ＩＣＡＭ−１（ＣＨＯ／ＩＣＡＭ−１）を安定して発現するＣＨＯ細胞、及び、マウスの微小血管内皮細胞（ＳＶＥＣ）は、図の如く、ＭＩＦ（ＭＩＦに対する抗体、ＣＸＣＬ１及びＣＸＣＬ８に対する抗体、又は、アイソタイプ対照群とともに）、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、又は、ＣＸＣＬ１２を用いて、又は、用いずに、２時間、プレインキュベートした。単核細胞は、図の如く、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、β２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ７４、又は、アイソタイプ対照群に対する抗体で３０分間事前処理されたか、又は、百日咳毒素（ＰＴＸ）で２時間事前処理された。（ｆ）ＣＨＯ／ＩＣＡＭ−１細胞は、ジャーカットＴ細胞で灌流された。ベクタートランスフェクトしたＣＨＯ細胞とのバックグラウンド結合は、差し引かれた。データは、３−８の独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．を示す。
【図１ｇ】ＭＩＦ誘発性単核細胞の阻止が、ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４によって媒介されることを示す。ヒトの大動脈内皮細胞 （ＨＡｏＥＣ）、ＩＣＡＭ−１（ＣＨＯ／ＩＣＡＭ−１）を安定して発現するＣＨＯ細胞、及び、マウスの微小血管内皮細胞（ＳＶＥＣ）は、図の如く、ＭＩＦ（ＭＩＦに対する抗体、ＣＸＣＬ１及びＣＸＣＬ８に対する抗体、又は、アイソタイプ対照群とともに）、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、又は、ＣＸＣＬ１２を用いて、又は、用いずに、２時間、プレインキュベートした。単核細胞は、図の如く、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、β２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ７４、又は、アイソタイプ対照群に対する抗体で３０分間事前処理されたか、又は、百日咳毒素（ＰＴＸ）で２時間事前処理された。（ｇ）ＣＨＯ／ＩＣＡＭ−１細胞は、ジャーカットＣＸＣＲ２トランスフェクタント又はベクター対照群で灌流された。ベクタートランスフェクトしたＣＨＯ細胞とのバックグラウンド結合は、差し引かれた。データは、３−８の独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．を示す。
【図１ｈ】ＭＩＦ誘発性単核細胞の阻止が、ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４によって媒介されることを示す。ヒトの大動脈内皮細胞 （ＨＡｏＥＣ）、ＩＣＡＭ−１（ＣＨＯ／ＩＣＡＭ−１）を安定して発現するＣＨＯ細胞、及び、マウスの微小血管内皮細胞（ＳＶＥＣ）は、図の如く、ＭＩＦ（ＭＩＦに対する抗体、ＣＸＣＬ１及びＣＸＣＬ８に対する抗体、又は、アイソタイプ対照群とともに）、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、又は、ＣＸＣＬ１２を用いて、又は、用いずに、２時間、プレインキュベートした。単核細胞は、図の如く、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、β２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ７４、又は、アイソタイプ対照群に対する抗体で３０分間事前処理されたか、又は、百日咳毒素（ＰＴＸ）で２時間事前処理された。（ｈ）マウスのＳＶＥＣは、ＣＸＣＲ４アンタゴニストＡＭＤ３４６５の存在下で、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、又は、ＣＸＣＲ３を安定して発現するＬ１．２トランスフェクタントで、及び、内因性ＣＸＣＲ４のみを発現する対照群で、灌流された。阻止は、細胞／ｍｍ２として、又は、対照細胞の接着の割合として、定量化される。データは、４つの実験のうち１つの代表的な実験の結果である。
【０００７】
【図２ａ】ＭＩＦ誘発性単核細胞の走化性がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４によって媒介されることを示す。主なヒトの単球（ａ−ｅ）、ＣＤ３＋Ｔ細胞（ｆ）、及び、好中球（ｇ、ｈ）は、ＭＩＦの存在下又は不在下で、遊走分析（transmigration analysis）に個々にかけられた。ＣＣＬ２（ａ）、ＣＸＣＬ８（ａ、ｇ、ｈ）及び、ＣＸＣＬ１２（ｆ）は、陽性対照群として機能したか、又は、ＭＩＦ（又は、ＣＸＣＬ８による、ｈ）による脱感作を検査するために用いられた。単球（ａ）上のＭＩＦ、ＣＣＬ２、及び、ＣＸＣＬ８の走化性効果、又は、好中球（ｇ）上のＭＩＦの効果は、円錐形の用量反応曲線に従った。ａ、及び、ｆ−ｈのデータは、走化指数として表現され；ｃのデータは、対照群のパーセントとして表現され；さらに、ｂ、ｄ、及び、ｅのデータは、入力のパーセントとして表現される。データは、４−１０の独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．を示し、２つの独立した実験の平均値である、パネルａ、ｃ、及びｇと、ｂの煮沸したＭＩＦ、及び、ｂとｅの抗体のみの対照群を除く。
【図２ｂ】ＭＩＦ誘発性単核細胞の走化性がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４によって媒介されることを示す。主なヒトの単球（ａ−ｅ）、ＣＤ３＋Ｔ細胞（ｆ）、及び、好中球（ｇ、ｈ）は、ＭＩＦの存在下又は不在下で、遊走分析（transmigration analysis）に個々にかけられた。ＭＩＦ誘発性の単球の走化は、ＭＩＦに対する抗体、煮沸（ｂ）、又は、示された濃度のＭＩＦ（上部チャンバー内；ｃ）によって、阻害された。ａ、及び、ｆ−ｈのデータは、走化指数として表現され；ｃのデータは、対照群のパーセントとして表現され；さらに、ｂ、ｄ、及び、ｅのデータは、入力のパーセントとして表現される。データは、４−１０の独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．を示し、２つの独立した実験の平均値である、パネルａ、ｃ、及びｇと、ｂの煮沸したＭＩＦ、及び、ｂとｅの抗体のみの対照群を除く。
【図２ｃ】ＭＩＦ誘発性単核細胞の走化性がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４によって媒介されることを示す。主なヒトの単球（ａ−ｅ）、ＣＤ３＋Ｔ細胞（ｆ）、及び、好中球（ｇ、ｈ）は、ＭＩＦの存在下又は不在下で、遊走分析（transmigration analysis）に個々にかけられた。ＭＩＦ誘発性の単球の走化は、ＭＩＦに対する抗体、煮沸（ｂ）、又は、示された濃度のＭＩＦ（上部チャンバー内；ｃ）によって、阻害された。ａ、及び、ｆ−ｈのデータは、走化指数として表現され；ｃのデータは、対照群のパーセントとして表現され；さらに、ｂ、ｄ、及び、ｅのデータは、入力のパーセントとして表現される。データは、４−１０の独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．を示し、２つの独立した実験の平均値である、パネルａ、ｃ、及びｇと、ｂの煮沸したＭＩＦ、及び、ｂとｅの抗体のみの対照群を除く。
【図２ｄ】ＭＩＦ誘発性単核細胞の走化性がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４によって媒介されることを示す。主なヒトの単球（ａ−ｅ）、ＣＤ３＋Ｔ細胞（ｆ）、及び、好中球（ｇ、ｈ）は、ＭＩＦの存在下又は不在下で、遊走分析（transmigration analysis）に個々にかけられた。（ｄ）ＭＩＦ誘発性の走化は、百日咳毒素要素Ａ及びＢ（ＰＴＸ Ａ＋Ｂ）、ＰＴＸ要素Ｂのみ、又は、Ｌｙ２９４００２を用いる処置から分かるように、Ｇ□ｉ／ホスホイノシチド−３−キナーゼシグナル伝達によって媒介された。ａ、及び、ｆ−ｈのデータは、走化指数として表現され；ｃのデータは、対照群のパーセントとして表現され；さらに、ｂ、ｄ、及び、ｅのデータは、入力のパーセントとして表現される。データは、４−１０の独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．を示し、２つの独立した実験の平均値である、パネルａ、ｃ、及びｇと、ｂの煮沸したＭＩＦ、及び、ｂとｅの抗体のみの対照群を除く。
【図２ｅ】ＭＩＦ誘発性単核細胞の走化性がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４によって媒介されることを示す。主なヒトの単球（ａ−ｅ）、ＣＤ３＋Ｔ細胞（ｆ）、及び、好中球（ｇ、ｈ）は、ＭＩＦの存在下又は不在下で、遊走分析（transmigration analysis）に個々にかけられた。（ｅ）ＭＩＦ誘発性の単球の走化は、ＣＤ７４、又は、ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２に対する抗体によって遮断された。ａ、及び、ｆ−ｈのデータは、走化指数として表現され；ｃのデータは、対照群のパーセントとして表現され；さらに、ｂ、ｄ、及び、ｅのデータは、入力のパーセントとして表現される。データは、４−１０の独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．を示し、２つの独立した実験の平均値である、パネルａ、ｃ、及びｇと、ｂの煮沸したＭＩＦ、及び、ｂとｅの抗体のみの対照群を除く。
【図２ｆ】ＭＩＦ誘発性単核細胞の走化性がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４によって媒介されることを示す。主なヒトの単球（ａ−ｅ）、ＣＤ３＋Ｔ細胞（ｆ）、及び、好中球（ｇ、ｈ）は、ＭＩＦの存在下又は不在下で、遊走分析（transmigration analysis）に個々にかけられた。（ｆ）ＭＩＦによって誘発されたＴ細胞の走化は、ＭＩＦ及びＣＸＣＲ４に対する抗体によって遮断された。ａ、及び、ｆ−ｈのデータは、走化指数として表現され；ｃのデータは、対照群のパーセントとして表現され；さらに、ｂ、ｄ、及び、ｅのデータは、入力のパーセントとして表現される。データは、４−１０の独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．を示し、２つの独立した実験の平均値である、パネルａ、ｃ、及びｇと、ｂの煮沸したＭＩＦ、及び、ｂとｅの抗体のみの対照群を除く。
【図２ｇ】ＭＩＦ誘発性単核細胞の走化性がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４によって媒介されることを示す。主なヒトの単球（ａ−ｅ）、ＣＤ３＋Ｔ細胞（ｆ）、及び、好中球（ｇ、ｈ）は、ＭＩＦの存在下又は不在下で、遊走分析（transmigration analysis）に個々にかけられた。（ｇ）好中球の走化は、ＭＩＦによって誘発された。ａ、及び、ｆ−ｈのデータは、走化指数として表現され；ｃのデータは、対照群のパーセントとして表現され；さらに、ｂ、ｄ、及び、ｅのデータは、入力のパーセントとして表現される。データは、４−１０の独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．を示し、２つの独立した実験の平均値である、パネルａ、ｃ、及びｇと、ｂの煮沸したＭＩＦ、及び、ｂとｅの抗体のみの対照群を除く。
【図２ｈ】ＭＩＦ誘発性単核細胞の走化性がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４によって媒介されることを示す。主なヒトの単球（ａ−ｅ）、ＣＤ３＋Ｔ細胞（ｆ）、及び、好中球（ｇ、ｈ）は、ＭＩＦの存在下又は不在下で、遊走分析（transmigration analysis）に個々にかけられた。（ｈ）ＣＸＣＬ8−誘発性の好中球走化に対するＭＩＦ誘発性の好中球走化、ＣＸＣＲ２又はＣＸＣＲ１に対する抗体の効果、及び、ＭＩＦによるＣＸＣＬ８の脱感作。ａ、及び、ｆ−ｈのデータは、走化指数として表現され；ｃのデータは、対照群のパーセントとして表現され；さらに、ｂ、ｄ、及び、ｅのデータは、入力のパーセントとして表現される。データは、４−１０の独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．を示し、２つの独立した実験の平均値である、パネルａ、ｃ、及びｇと、ｂの煮沸したＭＩＦ、及び、ｂとｅの抗体のみの対照群を除く。
【０００８】
【図３ａ】ＭＩＦが急速なインテグリン活性化及びカルシウムのシグナル伝達を引き起こすということを示す。（ａ）ヒトの大動脈内皮細胞が、ＭＩＦ又はＴＮＦ−αを用いて２時間刺激された。ＣＸＣＬ１及びＣＸＣＬ８のｍＲＮＡは、リアルタイムＰＣＲによって分析されるとともに、対照群に基準化された。上澄み由来のＣＸＣＬ８は、ＥＬＩＳＡ（ｎ＝繰り返し行われた３つの独立した実験）によって査定された。
【図３ｂ】ＭＩＦが急速なインテグリン活性化及びカルシウムのシグナル伝達を引き起こすということを示す。（ｂ）ＭｏｎｏＭａｃ６細胞は、ＭＩＦ又はＣＸＣＬ８を用いて１分間、直接的に刺激され、ＣＨＯ／ＩＣＡＭ−１細胞上で、５分間（８つの独立した実験平均値±ｓ．ｄ．）灌流された。
【図３ｃ】ＭＩＦが急速なインテグリン活性化及びカルシウムのシグナル伝達を引き起こすということを示す。（ｃ）ＭｏｎｏＭａｃ６細胞は、ＭＩＦを用いて示された回数刺激された。ＬＦＡ−１活性化（３２７ｃ抗体によって検知された）は、ＦＡＣＳＡｒｉａによって観察され、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の増加として表現された。ｃ−ｅの阻止データは、５つの独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．である。
【図３ｄ】ＭＩＦが急速なインテグリン活性化及びカルシウムのシグナル伝達を引き起こすということを示す。（ｄ）ｃのように、主な単球を別にすれば；データは、Ｍｇ２＋／ＥＧＴＡによる最大活性化に対して表現される。ｃ−ｅの阻止データは、５つの独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．である。
【図３ｅ】ＭＩＦが急速なインテグリン活性化及びカルシウムのシグナル伝達を引き起こすということを示す。（ｅ）ＭｏｎｏＭａｃ６細胞は、α４インテグリン、ＣＤ７４、又は、ＣＸＣＲ２に対する抗体で事前処理され、ＭＩＦで１分間刺激され、ＶＣＡＭ−１．Ｆｃ上で５分間灌流された。接着は、対照群のパーセントとして表現される。ｃ−ｅの阻止データは、５つの独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．である。
【図３ｆ】ＭＩＦが急速なインテグリン活性化及びカルシウムのシグナル伝達を引き起こすということを示す。（ｆ）Ｆｌｕｏ−４ ＡＭ−標識された好中球におけるカルシウムトランジェントは、ＭＩＦ、ＣＸＣＬ８、又は、ＣＸＣＬ７によって刺激された。カルシウム由来のＭＦＩは、ＦＡＣＳＡｒｉａによって、０−２４０秒、記録された。脱感作のため、複数の刺激が、刺激作用前に１２０秒間加えられた。図示された跡は、４つの独立した実験を表す。
【図３ｇ】ＭＩＦが急速なインテグリン活性化及びカルシウムのシグナル伝達を引き起こすということを示す。（ｇ）Ｌ１．２−ＣＸＣＲ２トランスフェクタントにおいて、示された濃度で、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ７、又は、ＭＩＦによって引き起こされたカルシウム流入の用量反応曲線。データは、基準値のＭＦＩとピークのＭＦＩ（４−８の独立した実験の平均値±ｓ．ｄ．）との差として表現される。
【０００９】
【図４ａ】ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４とのＭＩＦの相互作用、及び、ＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の形成を示す。ＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２トランスフェクタント（ａ）又はＣＸＣＲ４を有しているジャーカットＴ細胞（ｃ）は、ＭＩＦ又は低温の同族リガンド（平均値±ｓ．ｄ．，ｎ＝６−１０）による［Ｉ１２５］ＣＸＣＬ８（ａ）又は［Ｉ１２５］ＣＸＣＬ１２（ｃ）の競合作用を分析する受容体結合アッセイにかけられた。
【図４ｂ】ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４とのＭＩＦの相互作用、及び、ＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の形成を示す。（ｂ）図のような、ＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２又はＲＡＷ２６４．７−ＣＸＣＲ２トランスフェクタント（挿入図は代表的なヒストグラムを示す）における、ＭＩＦ−及びＣＸＣＬ８−誘発性のＣＸＣＲ２の内在化；表面のＣＸＣＲ２発現のＦＡＣＳ分析（バッファの割合（Ｃｏｎ）、平均値±ｓ．ｄ．，ｎ＝５）によって査定される。
【図４ｃ】ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４とのＭＩＦの相互作用、及び、ＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の形成を示す。ＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２トランスフェクタント（ａ）又はＣＸＣＲ４を有しているジャーカットＴ細胞（ｃ）は、ＭＩＦ又は低温の同族リガンド（平均値±ｓ．ｄ．，ｎ＝６−１０）による［Ｉ１２５］ＣＸＣＬ８（ａ）又は［Ｉ１２５］ＣＸＣＬ１２（ｃ）の競合作用を分析する受容体結合アッセイにかけられた。
【図４ｄ】ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４とのＭＩＦの相互作用、及び、ＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の形成を示す。（ｄ）ｂ（平均値±ｓ．ｄ．,ｎ＝４−６）におけるように、ジャーカットＴ細胞におけるＭＩＦ−及びＣＸＣＬ１２−誘発性ＣＸＣＲ４の内在化。
【図４ｅ】ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４とのＭＩＦの相互作用、及び、ＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の形成を示す。（ｅ）ＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２トランスフェクタント又はＦＡＣＳにより分析されたベクター対照群に対するフルオレセイン−ＭＩＦの結合。挿入図は、ベクター対照群に対して、ＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２トランスフェクタントからストレプトアビジン（ＳＡｖ）をプルダウン後に、ＣＸＣＲ２に対する抗体を用いて、ウエスタンブロットによって査定されたＣＸＣＲ２とのビオチン−ＭＩＦの結合を示す。データは、３つの独立した実験を示す（ｅ−ｈ）。
【図４ｆ】ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４とのＭＩＦの相互作用、及び、ＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の形成を示す。（ｆ）ＲＡＷ２６４．７−ＣＸＣＲ２トランスフェクタントにおける、ＣＸＣＲ２及びＣＤ７４（橙黄色の重なり）の共存は、ＣＸＣＲ２、ＣＤ７４、及び、核（ヘキスト社）に関して着色を行い、蛍光顕微鏡（上部）又は共焦点レーザー走査顕微鏡（下部）によって分析された。スケールバー，１０μｍ。データは、３つの独立した実験を示す（ｅ−ｈ）。
【図４ｇ】ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４とのＭＩＦの相互作用、及び、ＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の形成を示す。（ｇ） Ｈｉｓタグを付けたＣＤ７４を発現するＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２トランスフェクタントのＣＨＡＰＳＯ−抽出物におけるＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の免疫共沈降。抗Ｈｉｓ免疫沈降（ＩＰ）の後に、抗ＣＸＣＲ２又は抗Ｈｉｓ−ＣＤ７４のウエスタンブロット法（ＷＢ；上部）が続き、又は、抗ＣＸＣＲ２免疫沈降の後に、抗Ｈｉｓ−ＣＤ７４又は抗ＣＸＣＲ２のウェスタンブロット法（下部）が続いた。対照群：免疫沈降を含まない可溶化液、又は、ビーズのみ。データは、３つの独立した実験を示す（ｅ−ｈ）。
【図４ｈ】ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４とのＭＩＦの相互作用、及び、ＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の形成を示す。（ｈ）Ｌ１．２−ＣＸＣＲ２トランスフェクタントに関して、ｇのように。Ｌ１．２−ＣＸＣＲ２トランスフェクタントからの抗ＣＸＣＲ２免疫沈降の後に、抗ＣＤ７４又は抗ＣＸＣＲ２のウェスタンブロット法（上部）が続いた。アイソタイプＩｇＧ又はＣＸＣＲ２−陰性Ｌ１．２−細胞（下部）を伴う免疫沈降は、対照群として機能した。データは、３つの独立した実験を示す（ｅ−ｈ）。
【００１０】
【図５ａ】インビボのＣＸＣＲ２を介した、ＭＩＦ誘発性のアテローム生成及び微小血管の炎症、及び、ＭＩＦの効果が、プラークの退縮を遮断することを示す。（ａ）インビボの管腔への単球接着、及び、未変性の大動脈基部における病変マクロファージ内容物への単球接着は、固形飼料を食餌として３０週間与えたＭｉｆ＋／＋Ｌｄｌｒ−／、及び、Ｍｉｆ−／Ｌｄｌｒ／−マウス（ｎ＝４）において決定された。代表的な画像が示される。矢印は、管腔表面に接着した単球を示す。スケールバー、１００μｍ。
【図５ｂ】インビボのＣＸＣＲ２を介した、ＭＩＦ誘発性のアテローム生成及び微小血管の炎症、及び、ＭＩＦの効果が、プラークの退縮を遮断することを示す。（ｂ、ｃ）ＭＩＦ誘発性ＣＸＣＲ２−依存性白血球のインビボでの動員への暴露。ＭＩＦの以下の陰嚢内注射、精巣挙筋の微小血管系は、生体顕微鏡検査によって、視覚化された。遮断ＣＸＣＲ２抗体による事前処理は、ＩｇＧ対照群（ｎ＝４）と比較して、接着及び遊走を阻害した。
【図５ｃ】インビボのＣＸＣＲ２を介した、ＭＩＦ誘発性のアテローム生成及び微小血管の炎症、及び、ＭＩＦの効果が、プラークの退縮を遮断することを示す。（ｂ、ｃ）ＭＩＦ誘発性ＣＸＣＲ２−依存性白血球のインビボでの動員への暴露。ＭＩＦの以下の陰嚢内注射、精巣挙筋の微小血管系は、生体顕微鏡検査によって、視覚化された。遮断ＣＸＣＲ２抗体による事前処理は、ＩｇＧ対照群（ｎ＝４）と比較して、接着及び遊走を阻害した。
【図５ｄ】インビボのＣＸＣＲ２を介した、ＭＩＦ誘発性のアテローム生成及び微小血管の炎症、及び、ＭＩＦの効果が、プラークの退縮を遮断することを示す。（ｄ）ＭＩＦ又は賦形剤の腹腔内注射が、野生型の、ただし、Ｉｌ８ｒｂ−／ではない骨髄で再構成された野生型マウス（ｎ＝３）における好中球動員を誘発した。
【図５ｅ】インビボのＣＸＣＲ２を介した、ＭＩＦ誘発性のアテローム生成及び微小血管の炎症、及び、ＭＩＦの効果が、プラークの退縮を遮断することを示す。（ｅ−ｈ）ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２ではない遮断ＭＩＦは、進行性の動脈硬化性プラークの退縮及び安定化をもたらすことになる。アポｅ−／マウスは、１２週間、高脂肪食を与えられ、その後、ＭＩＦ、ＣＸＣＬ１、又は、ＣＸＣＬ１２に対する抗体、もしくは、ビヒクル（対照群）で、さらに４週間、（ｎ＝６−１０のマウス）処理された。大動脈基部のプラークは、オイルレッドＯを用いて染色された。代表的な画像は、ｅ（スケールバー、５００μｍ）に示される。ｆのデータは、ベースライン時（１２週）及び１６週後のプラーク面積を示す。ＭＯＭＡ−２＋ マクロファージの相対的含量は、ｇに示され、ｈのセクションごとのＣＤ３＋Ｔ細胞の数。データは平均値±ｓ．ｄ．を表す。
【図５ｆ】インビボのＣＸＣＲ２を介した、ＭＩＦ誘発性のアテローム生成及び微小血管の炎症、及び、ＭＩＦの効果が、プラークの退縮を遮断することを示す。（ｅ−ｈ）ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２ではない遮断ＭＩＦは、進行性の動脈硬化性プラークの退縮及び安定化をもたらすことになる。アポｅ−／マウスは、１２週間、高脂肪食を与えられ、その後、ＭＩＦ、ＣＸＣＬ１、又は、ＣＸＣＬ１２に対する抗体、もしくは、ビヒクル（対照群）で、さらに４週間、（ｎ＝６−１０のマウス）処理された。大動脈基部のプラークは、オイルレッドＯを用いて染色された。代表的な画像は、ｅ（スケールバー、５００μｍ）に示される。ｆのデータは、ベースライン時（１２週）及び１６週後のプラーク面積を示す。ＭＯＭＡ−２＋ マクロファージの相対的含量は、ｇに示され、ｈのセクションごとのＣＤ３＋Ｔ細胞の数。データは平均値±ｓ．ｄ．を表す。
【図５ｇ】インビボのＣＸＣＲ２を介した、ＭＩＦ誘発性のアテローム生成及び微小血管の炎症、及び、ＭＩＦの効果が、プラークの退縮を遮断することを示す。（ｅ−ｈ）ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２ではない遮断ＭＩＦは、進行性の動脈硬化性プラークの退縮及び安定化をもたらすことになる。アポｅ−／マウスは、１２週間、高脂肪食を与えられ、その後、ＭＩＦ、ＣＸＣＬ１、又は、ＣＸＣＬ１２に対する抗体、もしくは、ビヒクル（対照群）で、さらに４週間、（ｎ＝６−１０のマウス）処理された。大動脈基部のプラークは、オイルレッドＯを用いて染色された。代表的な画像は、ｅ（スケールバー、５００μｍ）に示される。ｆのデータは、ベースライン時（１２週）及び１６週後のプラーク面積を示す。ＭＯＭＡ−２＋ マクロファージの相対的含量は、ｇに示され、ｈのセクションごとのＣＤ３＋Ｔ細胞の数。データは平均値±ｓ．ｄ．を表す。
【図５ｈ】インビボのＣＸＣＲ２を介した、ＭＩＦ誘発性のアテローム生成及び微小血管の炎症、及び、ＭＩＦの効果が、プラークの退縮を遮断することを示す。（ｅ−ｈ）ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２ではない遮断ＭＩＦは、進行性の動脈硬化性プラークの退縮及び安定化をもたらすことになる。アポｅ−／マウスは、１２週間、高脂肪食を与えられ、その後、ＭＩＦ、ＣＸＣＬ１、又は、ＣＸＣＬ１２に対する抗体、もしくは、ビヒクル（対照群）で、さらに４週間、（ｎ＝６−１０のマウス）処理された。大動脈基部のプラークは、オイルレッドＯを用いて染色された。代表的な画像は、ｅ（スケールバー、５００μｍ）に示される。ｆのデータは、ベースライン時（１２週）及び１６週後のプラーク面積を示す。ＭＯＭＡ−２＋ マクロファージの相対的含量は、ｇに示され、ｈのセクションごとのＣＤ３＋Ｔ細胞の数。データは平均値±ｓ．ｄ．を表す。
【００１１】
【図６】アテローム発生内容物におけるＭＩＦの細胞機構を示す。ＭＩＦの発現は、様々なプロアテローム生成性刺激（proatherogenic stimuli）、例えば、酸化ＬＤＬ（又は、ｏｘＬＤＬ）もしくはアンジオテンシンＩＩ（ＡＴＩＩ）によって、血管壁の細胞及び内膜マクロファージ内で誘発される。その後、ＭＩＦは、内皮細胞接着分子（例えば、血管［ＶＣＡＭ−１］及び細胞内［ＩＣＡＭ−１］接着分子）及びケモカイン（例えば、ＣＣＬ２）を上方制御するとともに、そのヘプタヘリカル（heptahelical）（ケモカイン）受容体ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介して結合およびシグナル伝達することによって、それぞれのインテグリン受容体（例えば、ＬＦＡ−１及びＶＬＡ−４）の直接的な活性化を引き起こす。このことは、単核細胞（単球及びＴ細胞）の動員と、マクロファージの泡沫細胞への転換とを伴い、アポトーシスを抑制するとともにＳＭＣの遊走及び増殖を調節する（例えば、 損なう）。ＭＭＰ及びカテプシンを誘発することによって、ＭＩＦは、エラスチンとコラーゲンの分解を促進し、究極的には、不安定なプラークへの進行を招く。ＲＯＳは、活性酸素種；ＰＤＧＦ−ＢＢ、血小板由来の成長因子−ＢＢを示す。
【００１２】
【図７】機能的なＭＩＦ受容体複合体を介したシグナル伝達を示す。ＭＩＦは、サイトカイン産生を制御することによってその機能を無効化するグルココルチコイドによって誘発されるとともに、そのエンドサイトーシス後に、ＭＡＰＫシグナル伝達を下方制御し、細胞の酸化還元ホメオスタシスを調節することによって、細胞内タンパク質、すなわち、ＪＡＢ−１と相互作用可能となる。 幾つかの実施形態において、細胞内ＭＩＦは、細胞表面タンパク質ＣＤ７４（インバリアント鎖Ｉｉ）と結合する。ＣＤ７４は、シグナル伝達細胞内ドメインを欠いているが、プロテオグリカンＣＤ４４と相互作用するとともにＣＤ４４を介してシグナル伝達を仲介することによって、Ｓｒｃ−ファミリーＲＴＫ及びＭＡＰＫ／細胞内シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）の活性化を誘発する、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路を活性化する、又は、ｐ５３−依存性のアポトーシス抑制を開始する。ＭＩＦは、同様に、Ｇタンパク質共役型ケモカイン受容体（ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４）のみを介して結合するとともにシグナルを伝達する。付属結合を可能にする、ＣＤ７４を用いたＣＸＣＲ２の複合体形成は、ＧＰＣＲの活性化、及び、ＧＰＣＲ−ＲＴＫ様のシグナル伝達複合体の形成を促進することによって、カルシウムの流入と急速なインテグリンの活性化を引き起こす。
【００１３】
【図８】心筋病変におけるＭＩＦの効果を示す。虚血再灌流の内容物において、敗血症における低酸素、活性酸素種（ＲＯＳ）、及び、エンドトキシン（例えば、リポ多糖［ＬＰＳ］）は、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）依存性機構を介して、心筋細胞からのＭＩＦの分泌を誘発し、心筋細胞のアポトーシスの一因となる細胞内シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）の活性化をもたらす。ＭＩＦは、生存している心筋細胞、又は、処置上の注入に用いられる内皮前駆細胞（例えば、ｅＥＰＣ）によって発現されるが、幾つかの実施形態において、ＭＩＦは、ＭＡＰＫとＰＩ３Ｋの活性化を要求して、その受容体ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介して血管形成を促進する。
【００１４】
【図９ａ】ＣＸＣＲ２による付随干渉を伴わないＣＸＣＲ４による干渉が、アテローム性動脈硬化を悪化させることを示す。高脂肪食を与えられるアポｅ−／−マウスは、１２週間（ｎ＝各々６）、浸透圧ミニポンプを介して、賦形剤（対照群）又はＡＭＤ３４６５で継続的に処理された。動脈硬化性プラークは、オイルレッドＯで染色後、大動脈基部（図１４ａ）、及び、胸腹部大動脈（図１４ｂ）で定量化された。好中球の相対数は、指示された時点の末梢血中のフローサイトメトリー分析、又は、標準的なサイトメトリーによって、決定された。
【図９ｂ】ＣＸＣＲ２による付随干渉を伴わないＣＸＣＲ４による干渉が、アテローム性動脈硬化を悪化させることを示す。高脂肪食を与えられるアポｅ−／−マウスは、１２週間（ｎ＝各々６）、浸透圧ミニポンプを介して、賦形剤（対照群）又はＡＭＤ３４６５で継続的に処理された。動脈硬化性プラークは、オイルレッドＯで染色後、大動脈基部（図１４ａ）、及び、胸腹部大動脈（図１４ｂ）で定量化された。好中球の相対数は、指示された時点の末梢血中のフローサイトメトリー分析、又は、標準的なサイトメトリーによって、決定された。
【図９ｃ】ＣＸＣＲ２による付随干渉を伴わないＣＸＣＲ４による干渉が、アテローム性動脈硬化を悪化させることを示す。高脂肪食を与えられるアポｅ−／−マウスは、１２週間（ｎ＝各々６）、浸透圧ミニポンプを介して、賦形剤（対照群）又はＡＭＤ３４６５で継続的に処理された。動脈硬化性プラークは、オイルレッドＯで染色後、大動脈基部（図１４ａ）、及び、胸腹部大動脈（図１４ｂ）で定量化された。好中球の相対数は、指示された時点の末梢血中のフローサイトメトリー分析、又は、標準的なサイトメトリーによって、決定された。
【００１５】
【図１０】ＭＩＦ三量体の結晶構造を示す。偽のＥＬＲドメインは、三量体内に環を形成するが、一方で、Ｎ−ループドメインは、偽のＥＬＲ環から外側に延出する。
【００１６】
【図１１】Ｎ−ループドメイン及び偽のＥＬＲドメインに対応する配列を示すよう注釈を付けた、ＭＩＦのヌクレオチド配列を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
特定の実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介してシグナル伝達を行うＭＩＦを抑制する方法が、本明細書で開示されている。幾つかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介するＭＩＦのシグナル伝達は、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４というＭＩＦの結合ドメインを抗体で占有することによって抑制される。幾つかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介するＭＩＦのシグナル伝達は、ＭＩＦ上のドメインを占有、遮蔽、又は、それ以外に破壊することによって抑制される。幾つかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介するＭＩＦのシグナル伝達は、ＭＩＦ上のドメインを抗体で占有、遮蔽、又は、それ以外に破壊すること、及び、それによって、ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４のＭＩＦとの結合を破壊することによって抑制される。幾つかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介するＭＩＦのシグナル伝達は、ＭＩＦ上のドメインを抗体で占有、遮蔽、又は、それ以外に破壊すること、及び、それによって、ＭＩＦの三量体形成を破壊することによって抑制される。
【００１８】
従来技術は抗ＭＩＦ抗体を教示するが、白血球の相互作用に関してＭＩＦの特定の部分が他の部分よりもさらに重要であるという認識を欠いている。本明細書で解決される課題は、白血球走化性に重要なＭＩＦの選択的な部分を結合する抗体の識別と産生である。
【００１９】
さらに、従来技術は、抗ＣＸＣＲ２及び抗ＣＸＣＲ４抗体を教示する。しかしながら、このような受容体は、同様に、他のリガンド（例えば、ＩＬ−８／ＣＸＣＬ８、ＧＲＯｂｅｔａ／ＣＸＣＬ２、及び／又は、ストロマ細胞由来因子−１ａ（ＳＤＦ−１ａ）／ＣＸＣＬ１２）との相互作用に関与する。このような相互作用が抑制されると、往々にして有害な副作用が生じる。本明細書で解決される課題は、ＭＩＦとの相互作用を選択的に抑制する抗ＣＸＣＲ２及び抗ＣＸＣＲ４抗体を設計するという従来技術の失敗である。
【００２０】
特定の定義
「個体」、「被検体」、又は、「患者」という用語は、交互に用いられる。本明細書で用いられるように、これらの用語は、任意の哺乳動物（すなわち、分類学的分類動物界内の任意の目、群、及び、属の種：脊索動物：脊椎動物：哺乳類）を意味する。幾つかの実施形態において、哺乳動物は、ヒトである。幾つかの実施形態において、哺乳動物は非ヒトである。幾つかの実施形態において、哺乳動物は、分類学目：霊長目（例えば、キツネザル、ロリス（lorids）、ガラゴ属、メガネザル、猿、類人猿、及び、ヒト）；齧歯目（例えば、マウス、ラット、リス、シマリス、及び、ホリネズミ）：ウサギ目（例えば、ノウサギ、ウサギ、及び、ナキウサギ）；ハリネズミ目（erinaceomorpha）（例えば、ハリネズミ及びジムヌラ（gymnures））；トガリネズミ目（例えば、トガリネズミ、モグラ、及び、ソレノドン）；翼手目（例えば、コウモリ）；クジラ目（例えば、クジラ、イルカ、及び、ネズミイルカ）；食肉目（例えば、ネコ、ライオン、及び、他のネコ亜目；イヌ、クマ、イタチ、及び、アザラシ）；奇蹄目（例えば、ウマ、シマウマ、バク、及び、サイ）；偶蹄目（例えば、ブタ、ラクダ、ウシ、及び、シカ）；長鼻目（例えば、ゾウ）；海牛目（例えば、マナティー、ジュゴン、及び、海牛）；哺乳綱異節上目被甲目（cingulata）（例えば、アルマジロ）；有毛目（例えば、アリクイ、及び、ナマケモノ）；有袋類オポッサム目（didelphimorphia）（例えば、アメリカオポッサム（american opossums））；ケノレステス目（paucituberculata）（例えば、ケノレステス（shrew opossums）；ミクロビオテリウム目（例えば、チロエオポッサム（Monito del Monte）；フクロモグラ目（notoryctemorphia）（例えば、フクロモグラ）；フクロネコ目（dasyuromorphia）（例えば、肉食性有袋類（marsupial carnivores）；バンディクート目（例えば、バンディクート、及び、ビルビー）；又はカンガルー目（例えば、ウォンバット、コアラ、フクロネズミ、モモンガ（gliders）、カンガルー、ワラルー、及び、ワラビー）の一員である。幾つかの実施形態において、動物は、爬虫類（すなわち、分類学的分類動物界内の任意の目、群、及び、属の種：脊索動物：脊椎動物：爬虫類）である。幾つかの実施形態において、動物は、鳥類（すなわち、動物界：脊索動物：脊椎動物：鳥類）である。いかなる用語も、医療従事者（例えば、医師、正看護師、上級看護師、医師助手、高齢者、又は、ホスピス従事者）による監督によって特徴づけられる状況を必要とせず、又、この状況に限定されない。
【００２１】
「抗原」という用語は、抗体の生成を誘発することができる物質のことを言う。幾つかの実施形態において、抗原は、抗体の可変領域と特異的に結合する物質である。
【００２２】
「抗体（antibody、及び、antibodies）」という用語は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二重特異性抗体、多特異的抗体、移植抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、合成抗体、キメラ抗体、ラクダ化抗体（camelized antibody）、１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、１本鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、細胞内発現抗体（intrabody）、及び、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、そして、上記のいずれかの抗原結合フラグメントのことを言う。特に、抗体は、免疫グロブリン分子、及び、免疫グロブリン分子の免疫学的に活性のフラグメント、すなわち、抗原結合部位を含む分子を有する。免疫グロブリンは、重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、異なるクラスに割り当て可能である。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖の定常ドメイン（Ｆｃ）は、それぞれ、α、Δ、ε、γ、及び、μと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元配置は、周知である。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及び、ＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及び、ＩｇＡ２）、又は、サブクラスのものである。「抗体」及び「免疫グロブリン」という用語は、もっとも広い意味において交互に用いられる。幾つかの実施形態において、抗体は、より大きな分子の一部であり、１以上の他のタンパク質又はペプチドと抗体の共有結合性又は非共有結合性会合によって形成される。
【００２３】
抗体に関して、「可変ドメイン」という用語は、 その特定の抗原に関して各々の特定の抗体の結合及び特異性に用いられる抗体の可変ドメインのことを言う。しかしながら、この可変性は、抗体の可変ドメイン全体に等しく分布されるわけではない。むしろ、それは、軽鎖及び重鎖の可変ドメイン内の超可変領域（ＣＤＲとしても知られている）と呼ばれる３つのセグメントで濃縮される。可変ドメインのより高度に保存された部分は、「フレームワーク領域」又は「ＦＲ」と呼ばれる。無修飾の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ４つのＦＲ（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及び、ＦＲ４）を含み、ループ結合を形成する３つのＣＤＲが散在したβシート配置をしており、幾つかの場合、βシート構造部分の形をしている。各々の鎖のＣＤＲは、ＦＲによってきわめて接近して共に結びついており、他の鎖からのＣＤＲを用いて、抗体の抗原結合部位の形成の一員となる（Kabat et al., Sequences of proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991), pages 647-669を参照されたい）。
【００２４】
「超可変領域」、及び、「ＣＤＲ」という用語は、本明細書で用いられる際は、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基のことを言う。ＣＤＲは、１つの抗原に補完的に結合する３つの配列領域からのアミノ酸残基を備え、ＶＨ及びＶＬ鎖の各々に関してＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び、ＣＤＲ３として知られている。文献「Kabat et al., Sequences of proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))」に従って、軽鎖の可変ドメインにおいて、ＣＤＲは、典型的には、およそ残基２４−３４（ＣＤＲＬ１）、５０−５６（ＣＤＲＬ２）、及び、８９−９７（ＣＤＲＬ３）に対応し、及び、重鎖の可変ドメインにおいて、ＣＤＲは、典型的には、およそ残基３１−３５（ＣＤＲＨ１）、５０−６５（ＣＤＲＨ２）、及び、９５−１０２（ＣＤＲＨ３）に対応する。異なる抗体のＣＤＲは、挿入を含むことが可能であるため、アミノ酸の番号付けが異なることを理解されたい。カバットによる番号付けシステムは、特定の残基（例えば、軽鎖のＣＤＲＬ１の２７Ａ、２７Ｂ、２７Ｃ、２７Ｄ、２７Ｅ、及び、２７Ｆ）に付された文字を用いる番号付け体系（a numbering scheme）を用いて上記のような挿入を明らかにすることで、異なる抗体間の番号付けにおける任意の挿入を反映する。あるいは、文献「Chothia and Lesk, J. Mol. Biol., 196: 901-917 (1987)」に従って、軽鎖の可変ドメインにおいて、ＣＤＲは、典型的には、およそ残基２６−３２（ＣＤＲＬ１）、５０−５２（ＣＤＲＬ２）、及び、９１−９６（ＣＤＲＬ３）に対応し、重鎖の可変ドメインにおいて、ＣＤＲは、典型的には、およそ残基２６−３２（ＣＤＲＨ１）、５３−５５（ＣＤＲＨ２）、及び、９６−１０１（ＣＤＲＨ３）に対応する。
【００２５】
本明細書で用いられるように、「フレームワーク領域」、又は、「ＦＲ」という用語は、抗原結合ポケット又は溝の一部を形成するフレームワークアミノ酸残基のことを言う。幾つかの実施形態において、フレームワーク残基は、抗原結合ポケット又は溝の一部であるループを形成し、ループ内のアミノ酸残基は、抗原に接触する又はしないこともある。フレームワーク領域は、一般的にＣＤＲ間に領域を備える。文献「Kabat et al., Sequences of proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Betheｓ．ｄ．a, Md. (1991))」に従って、軽鎖の可変ドメインにおいて、ＦＲは、典型的には、およそ残基０−２３（ＦＲＬ１）、３５−４９（ＦＲＬ２）、５７−８８（ＦＲＬ３）、及び、９８−１０９に対応し、重鎖の可変ドメインにおいて、ＦＲは、典型的には、およそ残基０−３０（ＦＲＨ１）、３６−４９（ＦＲＨ２）、６６−９４（ＦＲＨ３）、及び、１０３−１３３に対応する。軽鎖に対するカバットによる番号付けが先に議論されているように、重鎖も同様に、同じやり方で挿入を明らかにする（例えば、重鎖におけるＣＤＲＨ１の３５Ａ、３５Ｂ）。あるいは、文献「Chothia and Lesk, J. Mol. Biol., 196: 901-917 (1987))」に従って、軽鎖の可変ドメインにおいて、ＦＲは、典型的には、およそ残基０−２５（ＦＲＬ１）、３３−４９（ＦＲＬ２）、５３−９０（ＦＲＬ３）、及び、９７−１０９（ＦＲＬ４）に対応し、重鎖の可変ドメインにおいて、ＦＲは、典型的には、およそ残基０−２５（ＦＲＨ１）、３３−５２（ＦＲＨ２）、５６−９５（ＦＲＨ３）、及び、１０２−１１３（ＦＲＨ４）に対応する。
【００２６】
ＦＲのループアミノ酸は、抗体重鎖及び／又は抗体軽鎖の三次元構造を観察することによって、査定及び測定可能である。三次元構造は、溶媒接触可能なアミノ酸の位置に関して分析可能である。これは、上記のような位置が、抗体の可変ドメインで、ループを形成及び／又は抗原接着を提供しやすいためである。溶媒接触可能な位置の幾つかは、アミノ酸配列の多様性を容認可能であり、それ以外の位置（例えば、構造的位置）は、一般的に、それほど多様化しない。抗体の可変ドメインの三次元構造は、結晶構造、又は、タンパク質モデリングに由来することが可能である。
【００２７】
抗体の定常ドメイン（Ｆｃ）は、抗体の抗原との結合には直接的には関与していないが、むしろ、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）との相互作用を介した抗体依存性の細胞毒性への抗体の関与といった様々なエフェクター機能を示す。Ｆｃドメインは、同様に、患者への投与を伴う循環における抗体のバイオアベイラビリティを増加させることができる。
【００２８】
任意の脊椎動物種からの抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、カッパ又は（“κ”）、及び、ラムダ又は（“λ”）と呼ばれる２つの明らかに異なるタイプの一方に割り当てることができ、これら２つのタイプは、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいている。
【００２９】
抗体の文脈における「誘導体」という用語は、アミノ酸残基の置換、欠失、又は、添加の導入により変質したアミノ酸配列を備える抗体のことを言う。「誘導体」という用語は、同様に、任意のタイプの分子の抗体との共役結合によって、修飾された抗体のことを言う。例えば、幾つかの実施形態において、抗体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、基の保護／遮断による誘導体化、タンパク質切断、細胞リガンド及び／又は他のタンパク質との結合などによって、修飾される。幾つかの実施形態において、抗体及びその誘導体は、適切な技術を用いる化学修飾によって生成される。この技術は、特定の化学的開裂、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などを含むが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、抗体の誘導体は、それが由来した抗体と類似の又は同一の機能を有する。
【００３０】
「完全長抗体」、「無傷（intact）抗体」、及び、「全抗体」という用語は、本明細書で交互に用いられ、その実質的に無傷の形状の抗体のことを言い、以下に定義される抗体フラグメントのことではない。このような用語は、特に、Ｆｃ領域を含む重鎖を有する抗体のことを言う。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される抗体の変異形は、完全長抗体である。幾つかの実施形態において、完全長抗体は、ヒトであり、ヒト化しており、キメラであり、及び／又は、親和性が成熟している。
【００３１】
「親和性成熟」抗体は、その１以上のＣＤＲにおいて１以上の変質を有する抗体であり、この変質は、１以上の変質を有さない親抗体と比較して、抗原に関する抗体の親和性の改善をもたらす。好適な親和性成熟抗体は、標的抗原に対する単量体の親和性又はピコモルの親和性すら有する。親和性成熟抗体は、適切な手順によって生成される。例えば、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）のドメインシャッフリングによる親和性成熟について記載した文献「Marks et al., (1992) Biotechnology 10:779-783」を参考にされたい。ＣＤＲ及び／又はフレームワーク残基のランダム変異誘発は、例えば、以下の文献「Barbas, et al. (1994) Proc. Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813」、「Shier et al., (1995) Gene 169:147-155」、「Yelton et al., 1995, J. Immunol. 155:1994-2004」、「Jackson et al., 1995, J. Immunol. 154(7):3310-9」、及び、「Hawkins et al, (19920, J. Mol. Biol. 226:889-896)」 に記載されている。
【００３２】
「結合フラグメント」、「機能フラグメント」、「抗体フラグメント」、又は、「抗原結合フラグメント」との用語は、明細書及び特許請求の範囲で無傷抗体分子の一部又はフラグメントを意味するように本明細書で用いられ、好ましくは、そのフラグメントは、抗原結合機能を維持する。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ（ＶＨ及びＣＨ１ドメイン）、Ｆｄ’、及び、Ｆｖ（抗体の単一アームのＶＬ 及びＶＨ ドメイン）フラグメント、二重特異性抗体、線状抗体（Zapata et al. (1995) タンパク質 Eng. 10: 1057）、 可変軽鎖（ＶＬ）、可変重鎖（ＶＨ）、一本鎖抗体分子、一本鎖結合ポリペプチド、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ２（鎖における２つのｓｃＦｖ分子の頭尾のタンデム結合）、二価ｓｃＦｖ、四価ｓｃＦｖ、半抗体、ｄＡｂフラグメント、可変ＮＡＲドメイン、及び、抗体フラグメントから形成された二重特異性抗体又は多特異性抗体（例えば、二重特異性Ｆａｂ２、及び、三重特異性Ｆａｂ３など）を含む。
【００３３】
「Ｆａｂ」フラグメントは、典型的には、抗体のパパイン分解によって生成され、この分解は、２つの同一の抗原結合フラグメントの生成をもたらし、各々の抗原結合フラグメントは、単一の抗原結合部位と残基「Ｆｃ」フラグメントを有する。ペプシン処置は、抗原と架橋結合可能な２つの抗原結合部位を有するＦ（ａｂ’）２フラグメントをもたらす。「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び結合部位を含む最小の抗体フラグメントである。二本鎖Ｆｖ種において、この領域は、密接した非共有結合性会合における重鎖及び軽鎖の可変ドメインの二量体からなる。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）種において、重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、軽鎖及び重鎖が二本鎖のＦｖ種のそれと類似した二量体構造において結合するように、可動性のペプチドリンカーによって共役結合している。各々の可変ドメインの３つのＣＤＲがＶＨ−ＶＬ二量体の表面上で抗原結合部位を定義するよう相互作用するのは、この配置においてである。集合的に、６つのＣＤＲは、抗体に対して抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は、抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを備える半Ｆｖ）でさえ、結合部位全体よりも通常は親和性が低いものの、抗原を認識するとともに結合させる能力を有する。
【００３４】
Ｆａｂフラグメントは、同様に、軽鎖の定常ドメインと、重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂフラグメントは、抗体ヒンジ領域からの１以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端で２、３の残基を加えることによって、Ｆａｂ’フラグメントと異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、本明細書では、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有するＦａｂ’の名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、もともとは、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントのペアとして生成された。抗体フラグメントの他の化学的結合も適切である。モノクローナルＡｂから様々なフラグメントを生成する方法は、例えば、文献「Plueckthun, 1992, Immunol. Rev. 130:152-188」を含む。
【００３５】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含む抗体フラグメントのことを言う。この領域は、密接した非共有結合性会合における重鎖及び軽鎖の可変ドメインの二量体からなる。各々の可変ドメインの３つのＣＤＲがＶＨ−ＶＬ二量体の表面上で抗原結合部位を定義するよう相互作用するのは、この配置においてである。集合的に、各々のＶＨ及びＶＬ鎖からの１以上のＣＤＲの組み合わせは、抗体に対して抗原結合特異性を付与する。例えば、レシピエント抗体又はその抗原結合フラグメントのＶＨ及びＶＬ鎖に伝達される際に、ＣＤＲＨ３及びＣＤＲＬ３は、抗体に対して抗原結合特異性を付与するに十分な程存在し、このＣＤＲの組み合わせは本明細書に記載の任意の技術を用いて、結合、親和性などについて検査可能であるということを理解されたい。単一の可変ドメイン（又は、抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを備える半Ｆｖ）でさえ、第２の可変ドメインと組み合わされる際の親和性は低くなりがちではあるものの、抗原を認識するとともに結合させる能力を有する。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン（ＶＬ及びＶＨ）は、別々の遺伝子によってコードされるが、ＶＬ及びＶＨ領域が一価分子を形成するために対合する一本のタンパク質鎖としてこの２つのドメインを作ることが可能な合成リンカーによる組み換え方法を用いて、この２つのドメインは結合可能である（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている（Bird et al. (1988) Science 242:423-426; Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; and Osbourn et al. (1998) Nat. Biotechnol. 16:778)。このようなｓｃＦｖは、同様に、抗体の「抗原結合部位」という用語の範囲内に包含されることを意図している。特定のｓｃＦｖの任意のＶＨ及びＶＬ配列は、完全なＩｇ（例えば、ＩｇＧ）分子又は他のアイソタイプをコードする発現ベクターを発生させるために、Ｆｃ領域のｃＤＮＡ又はゲノム配列と結合可能である。ＶＨ及びＶＬは、同様に、タンパク質化学又は組み換えＤＮＡ技術のいずれかを用いて、ＩｇのＦａｂ、Ｆｖ、又は、他のフラグメントを発生させる際に使用可能である。
【００３６】
「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを備え、このようなドメインは、一本鎖ポリペプチド中に存在する。幾つかの実施形態において、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨ及びＶＬ間にポリペプチドリンカーをさらに備え、このリンカーによって、ｓＦｖは抗原結合に好適な構造を形成可能である。ｓＦｖの再検討に関しては、
例えば、文献「Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)」を参照されたい。
【００３７】
「アビマー（Avimer、商標）」という用語は、抗体及び抗体フラグメントとは無関係の、ヒト由来の処置用のタンパク質のクラスのことを言い、Ａ−ドメイン（同様に、クラスＡモジュール、補体型繰り返し体（complement type repeat）、又は、ＬＤＬ−受容体クラスＡドメイン）と呼ばれる複数のモジュラー及び再利用可能な結合ドメインからなる。このようなドメインは、インビトロのエキソン・シャッフリング及びファージディスプレイによって、ヒトの細胞内受容体ドメインから生じた（Silverman et al., 2005, Nat. Biotechnol. 23:1493-1494; Silverman et al., 2006, Nat. Biotechnol. 24:220）。結果として生じたタンパク質は、単一のエピトープ結合タンパク質と比較して、改善された親和性（幾つかの場合、サブナノモル）及び特異性を示す多重の独立した結合ドメインを含むことが可能である。例えば、米国公開特許公報第２００５／０２２１３８４号、第２００５／０１６４３０１、２００５／００５３９７３号、及び、第２００５／００８９９３２号、第２００５／００４８５１２号、及び、第２００４／０１７５７５６号を参照されたい。各文献とも本明細書において参照することにより全体として組み込まれるものとする。
【００３８】
知られている２１７ヒトのＡ−ドメインは、〜３５のアミノ酸（〜４ｋＤａ）を備え、ドメインは、平均して５つのアミノ酸の長さのリンカーによって分離される。天然のＡ−ドメインは、主に、カルシウム結合及びジスルフィド形成によって媒介される均一で安定した構造へと迅速かつ効率的に折り畳まれる。わずか１２のアミノ酸の保存された骨格モチーフは、この共通構造として必要とされる。最終的な結果は、多重ドメインを含む一本鎖タンパク質であり、このドメインの各々は別々の機能を表す。このタンパク質の各々のドメインは特異的に結合し、各々のドメインのエネルギー的寄与は相加的である。このようなタンパク質は、アビディティー多量体（avidity multimers）からアビマー（Avimer、商標）と呼ばれる。
【００３９】
「二重特異性抗体」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体フラグメントのことを言い、そのフラグメントは、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）における軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と結合した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を備える。短すぎるために同じ鎖の２つのドメイン間での対合ができないリンカーを用いることによって、ドメインは、別の鎖の相補的なドメインと対合するとともに２つの抗原結合部位を形成するよう強いられる。二重特異性抗体は、例えば、欧州特許公報第４０４，０９７号、国際公開公報第９３／１１１６１号、及び、文献「Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444 6448 (1993).」にさらに詳細に記載されている。
【００４０】
抗原結合ポリペプチドは、同様に、例えば、ラクダ科の動物及びサメからの抗体などの重鎖二量体を含む。ラクダ科の動物及びサメの抗体は、Ｖ様及びＣ様ドメイン（いずれも軽鎖を有していない）の２つの鎖のホモ二量体の組み合わせを備える。ラクダ科の動物における重鎖二量体ＩｇＧのＶＨ領域は、軽鎖との疎水的相互作用を行う必要がないため、通常軽鎖と接触する重鎖の領域は、ラクダ科の動物において親水性のアミノ酸残基に変化する。重鎖二量体ＩｇＧのＶＨドメインは、ＶＨＨドメインと呼ばれる。サメのＩｇ−ＮＡＲは、可変ドメイン（Ｖ−ＮＡＲドメインと呼ばれる）のホモ二量体と、５つのＣ様定常ドメイン（Ｃ−ＮＡＲドメイン）とを備える。ラクダ科の動物において、抗体レパートリーの多様性は、ＶＨ又はＶＨＨ領域中のＣＤＲ１、２、及び、３によって決定される。ラクダのＶＨＨ領域におけるＣＤＲ３は、平均して１６のアミノ酸という比較的長い全長によって特徴づけられる（Muyldermans et al., 1994, Protein Engineering 7(9): 1129）。これは、多くの他の種の抗体のＣＤＲ３領域とは対照的である。例えば、マウスのＶＨのＣＤＲ３は、平均して９のアミノ酸を有する。ラクダ科の動物由来の抗体の可変領域のライブラリーは、ラクダ科の動物の可変領域のインビボでの多様性を維持するものであるが、例えば、米国特許公報第20050037421号で開示された方法によって作られることができる。
【００４１】
「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に類似する抗体の集団から獲得された抗体のことを言い、すなわち、この集団を備える個別の抗体は、少量存在すると考えられ得る自然発生突然変異を除けば、同一である。幾つかの実施形態において、モノクローナル抗体は、例えば、文献「Koehler and Milstein (1975) Nature 256:495」に最初に記載されたハイブリドーマ法、又は、米国特許第４，８１６，５６７号に記載の組み換え方法によって、作られることができる。幾つかの実施形態において、モノクローナル抗体は、文献「Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991)」、「Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)」に記載の技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーから単離される。 
【００４２】
本明細書の抗体は、モノクローナル、ポリクローナル、組換え体、キメラ、ヒト化、二重特異性、移植、ヒト、及び、ヒトにおいて任意の手段を用いて免疫原性が低くなるよう変質させた抗体を含む、これらのフラグメントを含む。したがって、例えば、本明細書に記載のモノクローナル抗体及びフラグメントなどは、「キメラ」抗体、及び、「ヒト化」抗体を含む。一般的に、キメラ抗体は、特別な種由来の又は特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一又は類似の重鎖及び／又は軽鎖の一部を備える一方で、鎖の残りの部分は、所望の生物活性を示す限りにおいて、別の種由来の又は別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一又は類似する（米国特許第４，８１６，５６７号、文献「Morrison et al. Proc. Natl Acad. Sci. 81:6851-6855 (1984)」）。例えば、幾つかの実施形態において、キメラ抗体は、マウス由来の可変領域、及び、ヒト由来の定常領域を含み、ヒトにおいて、定常領域は、ヒトＩｇＧ２及びヒトＩｇＧ４の双方と類似する配列を含む。
【００４３】
非ヒト（例えば、ネズミの）抗体又はフラグメントの「ヒト化」形状は、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又は、それらのフラグメント（抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は、他の抗原結合配列）であり、これらは、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含む。ヒト化抗体は、移植抗体又はＣＤＲ移植抗体を備え、非ヒト動物由来の１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列の一部又は全ては、元々の非ヒト抗体の所望の結合特異性及び／又は親和性を維持しながら、ヒト抗体の適切な位置へと移植される。幾つかの実施形態において、対応する非ヒト残基は、ヒトの免疫グロブリンＦｖフレームワーク残基を置換する。幾つかの実施形態において、ヒト化抗体は、移入されたＣＤＲ又はフレームワーク配列内のいずれのレシピエント抗体にも見られない残基を備える。このような修飾は、抗体の能力をさらに改善するとともに最適化するためになされる。幾つかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインのほぼ全てを備え、この可変領域において、ＣＤＲ領域の全て又はほぼ全てが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、ＦＲ領域の全て又はほぼ全てが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域に対応する。さらに詳細については、例えば、文献「Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986)」、「Reichmann et al., Nature 332: 323-329 (1988)」、「Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2: 593-596 (1992)」を参照されたい。
【００４４】
本明細書で用いられているように、「親和性」という用語は、２つの薬剤の可逆的結合の平衡定数のことを言い、Ｋｄと表現される。エピトープに対する抗体の親和性などのリガンドとの結合タンパク質の親和性は、例えば、約１００ナノモル（ｎＭ）から約０．１ｎＭ、約１００ｎＭから約１ピコモル（ｐＭ）、又は、約１００ｎＭから約１フェムトモル（ｆＭ）であってもよい。本明細書で用いられるように、「アビディティー」という用語は、希釈後の分離に対する２以上の薬剤の複合体の耐性のことを言う。
【００４５】
「特異的に結合する」という表現は、抗体又は他の結合分子と、タンパク質又はポリペプチド又はエピトープとの相互作用のことを言い、典型的には、所望の標的を認識するとともに高親和性を以って所望の標的と検出可能な程度に特異的に結合する抗体又は他の結合分子のことを言う。
【００４６】
好ましくは、指定された条件下又は生理的条件下で、特異的な抗体又は結合分子は、特別なポリペプチド、タンパク質、又は、エピトープと結合するが、検体中に存在する他の分子とは、莫大な量又は望ましくない量では結合しない。言い換えれば、特定の抗体又は結合分子は、標的でない抗原及び／又はエピトープと好ましくない交差反応を行わない。様々なイムノアッセイ様式（immunoassay formats）は、特別なポリペプチドと免疫活性であるとともに、好ましい特異性を有する抗体又は他の結合分子を選択するために用いられる。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ（表面プラズモン共鳴）、フローサイトメトリー、及び、ラジオイムノアッセイは、所望の免疫反応性及び特異性を有するモノクローナル抗体を選択するために用いられる。イムノアッセイ様式、及び、免疫反応性と特異性とを測定又は査定するために用いられる条件についての記載については、文献「Harlow, 1988, Antibody, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, New York （以後、“Harlow”とする）」を参照されたい。
【００４７】
「選択的結合」、「選択性」などは、それ以外と比較して、１つの分子と相互作用する抗体を優先することを言う。好ましくは、抗体、特に修飾薬とタンパク質との間の相互作用は、特異的であるとともに選択的である。幾つかの実施形態において、抗体は、他の望ましくない標的に結合することなく、２つの特徴的であるが同じ標的を、「特異的に結合」及び「選択的に結合」させるために設計される。
【００４８】
「エピトープ」又は「結合部位」は、抗体又はそれらの抗原結合フラグメントによって、「優先的に結合される」、又は、「特異的に結合される」アミノ酸配列又は複数のアミノ酸配列である。エピトープは、線状のペプチド配列（すなわち、「連続的」）、又は、非隣接のアミノ酸配列（すなわち、「高次構造」又は「非連続」）からなり得る。本明細書に記載の抗体、又は、その抗原結合フラグメントによって認識されるエピトープは、当業者に周知のペプチドマッピング及び配列解析技術によって測定可能である。
【００４９】
「ポリペプチド」、又は、「ペプチド」、及び、「タンパク質」という用語は、本明細書では交互に用いられ、アミノ酸残基ポリマーのことを言う。この用語は、天然に存在するアミノ酸ポリマーだけでなく、１以上のアミノ酸残基が天然に存在しないアミノ酸、例えば、アミノ酸アナログであるアミノ酸ポリマーにも適用される。この用語は、完全長タンパク質（すなわち、抗原）を含む任意の長さのアミノ酸鎖を包含し、アミノ酸残基は、共役ペプチド結合で結合している。
【００５０】
「単離した」及び「精製した」という用語は、実質的に又は本質的に自然環境から取り除かれた又は自然環境で濃縮された物質のことを言う。例えば、単離した核酸は、被検体において、通常隣接する核酸の少なくとも幾つかから、又は、他の核酸又は化合物（タンパク質、脂質など）から分離されたものである。他の例において、ポリペプチドは、実質的に自然環境から取り除かれるか、又は、自然環境で濃縮されると、精製される。核酸及びタンパク質の精製方法及び単離方法は、立証された方法論である。例えば、抗体は、培養上清又は飽和硫酸アンモニウム調製による上記の腹水、オイグロブリン調製方法、カプロン酸方法、カプリル酸方法、イオン交換クロマトグラフィー（ＤＥＡＥ又はＤＥ５２）、又は、抗Ｉｇカラム又はタンパク質Ａ、Ｇ、又はＬカラムを用いる親和性クロマトグラフィーから、単離及び精製可能である。「実質的に」の実施形態は、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は、少なくとも９９％を含む。
【００５１】
「処置（treat）（treating）（treatment）」という用語、及び、本明細書に記載の他の文法上等しい表現は、症状を緩和、抑制、又は、減少すること、疾患又は疾病の重篤な症状を減少または抑制すること、疾患又は疾病の症状の発生率を減少させること、疾患又は疾病の症状の処置の予防的処置、疾患又は疾病の症状の再発生を減少又は抑制すること、疾患又は疾病の症状を予防すること、疾患又は疾病の症状の発現を遅らせること、疾患又は疾病の症状の再発生を遅らせること、疾患又は疾病の症状を和らげること又は改善すること、症状の基礎的な代謝の原因を改善すること、疾患又は疾病を抑制すること、例えば、疾患又は疾病の発症を阻止させること、疾患又は疾病を取り除くこと、疾患又は疾病の退行を引き起こすこと、疾患又は疾病によって引き起こされた状態を取り除くこと、又は、疾患又は疾病症状を止めることを含む。この用語は、処置上の効果を達成することをさらに含む。処置上の効果とは、改善が個体で観察されるような、処置される基礎的障害の根絶又は回復、及び／又は、基礎的障害と関連する１以上の生理学的症状の根絶又は回復を意味する。
【００５２】
「予防（prevent）（preventing）（prevention）」という用語、及び、本明細書で用いられる他の文法上等しい表現は、さらなる症状を予防すること、症状の基礎的な代謝の原因を予防すること、疾患又は疾病を抑制すること、例えば、疾患又は疾病の発症を阻止させることを含むとともに、予防法を含むように意図されている。この用語は、予防的効果を達成することをさらに含む。予防的効果のために、組成物は、特別な疾患を発症させるリスクのある個体、疾患の１以上の生理学的症状を報告する個体、又は、その疾患の再発のリスクのある個体に、任意で投与される。
【００５３】
本明細書で用いられる「効果的な量」又は「処置上効果的な量」との用語は、所望の結果を達成する、投与される少なくとも１つの薬剤の十分な量のことを言い、この結果とは、例えば、処置される疾患又は疾病の１以上の症状を、ある程度、取り除くことである。特定の例において、結果は、疾患の兆候、症状、又は、原因の減少及び／又は軽減、あるいは、生命システムの任意の他の所望の変質である。特定の例において、結果は、少なくとも１つの異常な増殖細胞、すなわち、癌幹細胞中のアポトーシスの成長、破壊、誘発を減少させることである。特定の例において、処置に用いるための「効果的な量」とは、疾患を臨床的に著しく減少させるのに必要な本明細書に記載の薬剤を含む組成物の量である。任意の個体の場合に適切な「効果的な」量は、用量増加研究などの任意の適切な技術を用いて、測定される。
【００５４】
本明細書で用いられる「投与（administer）、（administering）、（administration）」という用語などは、所望の生物学的作用部位への薬剤又は組成物の送達を可能にするために用いられる方法のことを言う。このような方法は、経口経路、十二指腸内経路、非経口注射（静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、血管内、又は、点滴を含む）、局所及び直腸の投与を含むが、これらに限定されない。本明細書に記載の薬剤及び方法を任意で用いる投与技術は、例えば、文献「Goodman and Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, current ed.」、「Pergamon；and Remington's, Pharmaceutical Sciences (current edition), Mack Publishing Co., Easton, Pa.」で挙げられているものを含む。特定の実施形態において、本明細書に記載の薬剤及び組成物は、経口投与される。
【００５５】
本明細書で用いられる「薬学的に許容可能な」との用語は、本明細書に記載の薬剤の生物学的活性又は特性を無効化しない、比較的毒性のない物質（すなわち、物質の毒性は物質の効果を著しく上回る）のことを言う。幾つかの例において、薬学的に許容可能な物質は、重大な望ましくない生物学的作用を引き起こすことなく、又は、その物質が含まれる組成物の任意の化合物と有害な方法で著しく相互作用することなく、個体に投与される。
【００５６】
マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）
幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、ＭＩＦの活動を（部分的又は全て）抑制する。特定の例において、ＭＩＦは炎症誘発性サイトカインである。特定の例において、ＭＩＦは、感染症、炎症、又は、組織損傷に反応して、活性化免疫細胞（例えば、リンパ球（Ｔ細胞））によって分泌される。特定の例において、ＭＩＦは、視床下部・下垂体・副腎系が刺激されるとすぐに、脳下垂体前葉から分泌される。特定の例において、ＭＩＦは、膵β細胞からインスリンとともに分泌され、インスリンの放出を刺激する自己分泌因子として機能する。特定の例において、ＭＩＦは、受容体ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、及び、ＣＤ７４のリガンドである。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、及び／又は、ＣＤ７４の活動を（部分的又は全て）抑制する。
【００５７】
特定の例において、ＭＩＦは、ＭＩＦの勾配に沿って、白血球（例えば、リンパ球、顆粒球、単球／マクロファージ、及び、ＴＨ−１７細胞）のそばで走化性を誘発する。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、ＭＩＦの勾配に沿って走化性を抑制するか、又は、ＭＩＦの勾配に沿って走化性を低下させる。特定の例において、ＭＩＦは、感染症、炎症、又は、組織損傷部位に対する白血球（例えば、リンパ球、顆粒球、単球／マクロファージ、及び、ＴＨ−１７細胞）の走化性を誘発する。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、感染症、炎症、又は、組織損傷部位に対する白血球の走化性を抑制又は低下させる。特定の例において、ＭＩＦの勾配に沿った白血球 （例えば、リンパ球、顆粒球、単球／マクロファージ、及び、ＴＨ−１７細胞）の走化性は、感染症、炎症、又は、組織損傷部位における炎症をもたらすことになる。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、感染症、炎症、又は、組織損傷部位における炎症を処置する。特定の例において、ランテスに沿った単球の走化性は、損傷又は炎症部位における単球阻止（arrest）（すなわち、上皮上の単球の蒸着）をもたらすことになる。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、損傷又は炎症部位における単球阻止を抑制又は低下させる。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、リンパ球性疾患を抑制・処置する。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、顆粒球媒介性の疾患を処置する。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、マクロファージ媒介性の疾患を処置する。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、Ｔｈ−１７媒介性の疾患を処置する。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、膵β細胞媒介性の疾患を処置する。
【００５８】
特定の例において、ＭＩＦは、グルココルチコイド、グルココルチコイド療法を必要とする多くの疾患に関連するアテローム性動脈硬化の促進に関与する機構によって、誘導可能である。したがって、幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組成物及び方法は、グルココルチコイドによるＭＩＦの発現の誘発を抑制する。
【００５９】
特定の例において、ヒトのＭＩＦポリペプチドは、細胞発生帯２２ｑ１１．２３．の染色体２２上に位置するヌクレオチド配列によってコードされる。特定の例において、ＭＩＦタンパク質は、１２．３ｋＤａタンパク質である。特定の例において、ＭＩＦタンパク質は、１１５のアミノ酸の３つのポリペプチドを備えるホモ三量体である。特定の例において、ＭＩＦタンパク質は、ケモカインで見られるＥＬＲモチーフを模倣する偽ＥＬＲモチーフを備える。特定の例において、偽ＥＬＲモチーフは、近接しないが適切に配された２つの残基（Ａｒｇ１２及びＡｓｐ４５、図１１参照）を備える。幾つかの実施形態において、偽ＥＬＲモチーフは、アミノ酸１２からアミノ酸４５（この番号付けは、最初のメチオニン残基を含む）からのアミノ酸配列を備える。これは、最初のメチオニン残基を数に入れられていないアミノ酸１１からアミノ酸４４の偽ＥＬＲモチーフと等しい。（このような例において、偽ＥＬＲモチーフはＡｒｇ１１及びＡｓｐ４４を備える）。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４と偽ＥＬＲモチーフとの結合を抑制することによって、ＭＩＦ媒介性の疾患を処置する。
【００６０】
特定の例において、ＭＩＦタンパク質は、１０−から２０−残基のＮ末端ループモチーフ（Ｎ−ループ）を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループは、ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４受容体との結合を媒介する。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、ＭＩＦ（すなわち、Ｌ４７ Ｍ４８ Ａ４９ Ｆ５０ Ｇ５１ Ｇ５２ Ｓ５３ Ｓ５４ Ｅ５５ Ｐ５６；図１１参照）の配列残基（４７−５６）を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４５−６０を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４４−６１を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４３−６２を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４２−６３を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４１−６４を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４０−６５を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４６−５９を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４７−５９を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４８−５９を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸５０−５９を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４７−５８を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４７−５７を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４７−５６を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４８−５８を備える。幾つかの実施形態において、Ｎ−ループモチーフは、アミノ酸４８−５７を備える。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、Ｎ−ループモチーフのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合を抑制することによって、ＭＩＦ媒介性の疾患を処置する。
【００６１】
幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、（１）Ｎ−ループモチーフのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合、及び、（２）偽ＥＬＲモチーフのＣＸＣＲ２及び／又は ＣＸＣＲ４との結合を抑制することによって、ＭＩＦ媒介性の疾患を処置する。
【００６２】
特定の例において、ＣＤ７４は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）を活性化し、ＣＸＣＲ２を活性化し、及び／又は、このような分子と結合してシグナル伝達複合体を形成する。したがって、幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、ＣＤ７４によりＧＰＣＲ又はＣＸＣＲ２の活性を抑制することによって、ＭＩＦ媒介性の疾患を処置する。
【００６３】
特定の例において、ＭＩＦは、内皮細胞、ＳＭＣ、単核細胞、及び／又は、動脈損傷を伴うマクロファージによって発現される。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、内皮細胞、ＳＭＣ、単核細胞、及び／又は、動脈損傷を伴うマクロファージによるＭＩＦの発現を抑制する。特定の例において、ＭＩＦは、内皮細胞、ＳＭＣ、単核細胞、酸化低密度リポタンパク質（ｏｘＬＤＬ）、ＣＤ４０リガンド、アンジオテンシンＩＩ、又はこれらの組み合わせへの暴露を伴うマクロファージ、によって発現される。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、内皮細胞、ＳＭＣ、単核細胞、及び／又は、酸化低密度リポタンパク質、ＣＤ４０リガンド、アンジオテンシンＩＩ、又はこれらの組み合わせへの暴露を伴うマクロファージ、によるＭＩＦの発現を抑制する。
【００６４】
特定の例において、ＭＩＦは、内皮細胞中のＣＣＬ２、ＴＮＦ、及び／又は、ＩＣＡＭ−１の発現を誘発する。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、内皮細胞中のＣＣＬ２、ＴＮＦ、及び／又は、ＩＣＡＭ−１のＭＩＦ誘発性の発現を抑制する。
【００６５】
特定の例において、ＭＩＦは、ＳＭＣ中のＭＭＰ及びカテプシンの発現を誘発する。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、ＳＭＣ中のＭＭＰ及びカテプシンのＭＩＦ誘発性の発現を抑制する。
【００６６】
特定の例において、ＭＩＦは、ＣＸＣＲ２又はＣＸＣＲ４を介してカルシウム流入を引き起こし、インテグリンの急速な活性化を誘発し、ＭＡＰＫの活性化を誘発し、及び、単球及びＴ細胞のＧαｉ−及びインテグリン依存性の阻止及び走化性を媒介する（図２及び３）。したがって、幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、単球及び／又はＴ細胞へのカルシウム流入を抑制し、ＭＡＰＫの活性化を抑制し、インテグリンの活性化を抑制し、単球及びＴ細胞のＧαｉ−及びインテグリン依存性の阻止、又は、これらの組み合わせを抑制する。
【００６７】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、抗ＣＸＣＲ２抗体；抗ＣＸＣＲ４抗体；抗ＭＩＦ抗体；又は、これらの組み合わせを備える。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される抗体は、ＭＩＦの偽ＥＬＲモチーフと結合することによって、ＭＩＦのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合を抑制する。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される抗体は、ＭＩＦのＮ−ループモチーフと結合することによって、ＭＩＦのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合を抑制する。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される抗体は、ＭＩＦのＮ−ループモチーフと偽ＥＬＲモチーフとの双方と同時に結合することによって、ＭＩＦのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合を抑制する。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される抗体は、抗ＭＩＦ抗体である。
【００６８】
特定の例において、ＭＩＦによって誘発される単球動員は、ＭＩＦ−結合タンパク質ＣＤ７４を含む。特定の例において、ＭＩＦ−結合タンパク質ＣＤ７４は、カルシウム流入、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）の活性化、又は、Ｇαｉ−依存性のインテグリン活性化を誘発する（図７）。幾つかの実施形態において、本発明は、必要としている個体において、ＭＩＦ媒介性のＭＡＰＫキナーゼ活性化を抑制する方法を備える。幾つかの実施形態において、本発明は、必要としている個体において、ＭＩＦ媒介性のＧαｉ−依存性のインテグリン活性化を抑制する方法を備える。
【００６９】
特定の例において、ＣＤ７４を介したＭＩＦ誘発性のシグナル伝達は、ＣＤ４４及びＳｒｃキナーゼを含む。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、ＣＤ７４−媒介性のＳｒｃキナーゼの活性化を抑制する。
【００７０】
特定の例において、エンドサイトーシスによって取り込まれたＭＩＦは、ＪＡＢ−１と直接的に相互作用する。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、ＭＩＦのエンドサイトーシスを抑制する。
【００７１】
特定の例において、アレスチンは、ＭＩＦの内在化を媒介するクラスリン被覆小胞に対するＧタンパク質共役受容体の動員を促進する。したがって、幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、アレスチンアンタゴニストをさらに備える。ＧＰＣＲへの結合を抑制する薬剤の例は、カルベジロール、イソプレナリン、イソプロテレノール、ホルモテロール、シマテロール、クレンブテロール、Ｌ−エピネフリン、スピノフィリン、及び、サルメテロールを備える。
【００７２】
特定の例において、ＭＩＦのユビキチン化は、（部分的又は全体的のいずれかで）ＭＩＦの急速な内在化とその後の分解をもたらすことになる。したがって、幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、ＭＩＦのユビキチン化を抑制する工程をさらに備える。ユビキチン化を抑制する薬剤の例としては、ＰＹＲ−４１、及び、関連するピラゾンを含むが、これらに限定されない。
【００７３】
特定の例において、ＭＩＦは、クラスリン依存性エンドサイトーシスを用いて細胞内に入る。したがって、幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、ＭＩＦのクラスリン依存性エンドサイトーシスを抑制する工程をさらに備える。
【００７４】
特定の例において、ＭＩＦは、 ＭＡＰＫシグナル伝達を負に制御するか、又は、ＪＡＢ−１を介する細胞酸化還元ホメオスタシスを制御することによって、細胞の機能を調節する。特定の例において、ＭＩＦは、ｐ５３の発現を下方制御する。特定の例において、ｐ５３の発現のＭＩＦによる下方制御は、マクロファージのアポトーシス及び生存期間の延長を抑制する。したがって、幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、マクロファージのＭＩＦ調整された生存を抑制する。
【００７５】
特定の例において、ＭＩＦは、不安定プラークにおいて、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−９を誘発する。特定の例において、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−９の不安定プラークへの導入は、（部分的又は全体的のいずれかで）コラーゲンの分解、線維性被膜の弱体化、及び、プラークの不安定化をもたらすことになる。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、（部分的又は全体的のいずれかで）コラーゲンの分解、線維性被膜の弱体化、及び、プラークの不安定化を抑制する。
【００７６】
ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介するＭＩＦシグナル伝達のインヒビター
特定の実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介するＭＩＦシグナル伝達を抑制する方法が本明細書で開示される。幾つかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介するＭＩＦシグナル伝達は、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ結合ドメイン（すなわち、ＧＰＣＲアンタゴニスト手法）を抗体で占有することによって抑制される。幾つかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介するＭＩＦのシグナル伝達は、ＭＩＦ上のドメインを占有、遮蔽、又は、それ以外に破壊することによって抑制される（すなわち、サイトカインインヒビター手法）。幾つかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介するＭＩＦのシグナル伝達は、ＭＩＦ上のドメインを抗体で占有、遮蔽、又は、それ以外に破壊すること、及び、それによって、ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４のＭＩＦとの結合を破壊することによって抑制される。幾つかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介するＭＩＦのシグナル伝達は、ＭＩＦ上のドメインを抗体で占有、遮蔽、又は、それ以外に破壊すること、及び、それによって、ＭＩＦの三量体形成を破壊することによって抑制される。特定の例において、ＭＩＦ上のドメインを占有、遮蔽、又は、それ以外に破壊することは、他のアゴニスト／リガンド（例えば、ＩＬ−８／ＣＸＣＬ８、ＧＲＯｂｅｔａ／ＣＸＣＬ２及び／又はストロマ細胞由来因子−１ａ（ＳＤＦ−１ａ）／ＣＸＣＬ１２）によって媒介されるＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４シグナル伝達には影響を与えない。
【００７７】
ＭＩＦドメイン破壊剤
幾つかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介するＭＩＦのシグナル伝達は、ＭＩＦ上のドメインを占有、遮蔽、又は、それ以外に破壊することによって抑制される（例えば、Ｎ−ループ及び／又は偽ＥＬＲモチーフ)。幾つかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介するＭＩＦのシグナル伝達は、ＭＩＦ上のドメインを抗体で占有、遮蔽、又は、それ以外に破壊すること、及び、それによって、ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４のＭＩＦとの結合を破壊することによって抑制される。幾つかの実施形態において、抗体は、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４との結合、及び／又は、（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、又は、（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）の任意の組み合わせ、を抑制する。特定の例において、ＭＩＦ上のドメインを占有、遮蔽、又は、それ以外に破壊することは、他のアゴニスト／リガンド（例えば、ＩＬ−８／ＣＸＣＬ８、ＧＲＯｂｅｔａ／ＣＸＣＬ２及び／又はストロマ細胞由来因子−１ａ（ＳＤＦ−１ａ）／ＣＸＣＬ１２）によって媒介されるＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４シグナル伝達には影響を与えない。
【００７８】
特定の例において、Ｎ末端の細胞内ドメインは、第１及び／又は第２の細胞外ループと同様に、ＭＩＦとのリガンド結合のメディエーターである。幾つかの実施形態において、抗体は、ＭＩＦの偽ＥＬＲモチーフと結合することによって、ＭＩＦのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合を抑制する。幾つかの実施形態において、抗体は、ＭＩＦのＮ−ループモチーフと結合することによって、ＭＩＦのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合を抑制する。幾つかの実施形態において、抗体は、必須残基を調節する、及び／又は、受容体又は基質の相互作用を防止するＭＩＦ中の高次構造変化を引き起こす。幾つかの実施形態において、抗体は、ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４の結合及びシグナル伝達について関連のあるモチーフを妨げる。
【００７９】
ＭＩＦ三量体形成破壊剤
特定の実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介するＭＩＦのシグナル伝達を抑制する方法が本明細書で開示される。幾つかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介するＭＩＦのシグナル伝達は、ＭＩＦ上のドメインを占有、遮蔽、又は、それ以外に破壊することによって抑制される。幾つかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介するＭＩＦのシグナル伝達は、ＭＩＦ上のドメインを抗体で占有、遮蔽、又は、それ以外に破壊すること、及び、それによって、ＭＩＦの三量体形成を破壊することによって抑制される。幾つかの実施形態において、ホモ三量体を形成するＭＩＦペプチドの能力を低下させることは、受容体（例えば、ＣＸＣＲ２、又は、ＣＸＣＲ４）と結合するＭＩＦの能力を（部分的又は全体的に）破壊する。特定の例において、ＭＩＦ上のドメインを占有、遮蔽、又は、それ以外に破壊することは、他のアゴニスト／リガンド（例えば、ＩＬ−８／ＣＸＣＬ８、ＧＲＯｂｅｔａ／ＣＸＣＬ２及び／又はストロマ細胞由来因子−１ａ（ＳＤＦ−１ａ）／ＣＸＣＬ１２））によって媒介されるＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４シグナル伝達には影響を与えない。
【００８０】
特定の例において、ＭＩＦは、３つのＭＩＦポリペプチド配列（すなわち、三量体）を備える。特定の例において、各々のＭＩＦポリペプチドの偽ＥＬＲモチーフは、三量体の環を形成する。特定の例において、各々のＭＩＦポリペプチドのＮ−ループモチーフは、偽のＥＬＲ環から外側に延出する（図１０を参照）。特定の例において、三量体を破壊すると、その標的受容体へのＭＩＦの高親和性結合が破壊される。特定の例において、１つのサブユニットの残基３８−４４（β−２鎖）は、第２のサブユニットの残基４８−５０（β−３鎖）と相互作用する。特定の例において、１つのサブユニットの残基９６−１０２（β−５鎖）は、第２のサブユニットの残基１０７−１０９（β−６鎖）と相互作用する。特定の例において、Ｎ７３ Ｒ７４ Ｓ７７ Ｋ７８ Ｃ８１によって形成される１つのサブユニット上のドメインは、第２のサブユニットのＮ１１１ Ｓ１１２ Ｔ１１３と相互作用する。
【００８１】
幾つかの実施形態において、抗ＭＩＦ抗体は、ＭＩＦのアミノ酸残基３８−４４（β−２鎖）のいずれか又は全てに由来するか、及び／又は、ＭＩＦのアミノ酸残基３８−４４（β−２鎖）のいずれか又は全てと特異的に結合する。幾つかの実施形態において、抗ＭＩＦ抗体は、ＭＩＦのアミノ酸残基４８−５０（β−３鎖）のいずれか又は全てに由来するか、及び／又は、ＭＩＦのアミノ酸残基４８−５０（β−３鎖）のいずれか又は全てと特異的に結合する。幾つかの実施形態において、抗ＭＩＦ抗体は、ＭＩＦのアミノ酸残基９６−１０２（β−５鎖）のいずれか又は全てに由来するか、及び／又は、ＭＩＦのアミノ酸残基９６−１０２（β−５鎖）のいずれか又は全てと特異的に結合する。幾つかの実施形態において、抗ＭＩＦ抗体は、ＭＩＦのアミノ酸残基１０７−１０９（β−６鎖）のいずれか又は全てに由来するか、及び／又は、ＭＩＦのアミノ酸残基１０７−１０９（β−６鎖）のいずれか又は全てと特異的に結合する。幾つかの実施形態において、抗ＭＩＦ抗体は、ＭＩＦのアミノ酸残基Ｎ７３、Ｒ７４、Ｓ７７、Ｋ７８、及び、Ｃ８１のいずれか又は全てに由来するか、及び／又は、ＭＩＦのアミノ酸残基Ｎ７３、Ｒ７４、Ｓ７７、Ｋ７８、及び、Ｃ８１のいずれか又は全てと特異的に結合する。幾つかの実施形態において、抗ＭＩＦ抗体は、ＭＩＦのアミノ酸残基Ｎ１１１、Ｓ１１２、及び、Ｔ１１３のいずれか又は全てに由来するか、及び／又は、ＭＩＦのアミノ酸残基Ｎ１１１、Ｓ１１２、及び、Ｔ１１３のいずれか又は全てと特異的に結合する。
【００８２】
抗体 
特定の実施形態において、必要としている個体において、ＭＩＦ媒介性疾患を処置する方法が本明細書で開示される。幾つかの実施形態において、この方法は、処置上効果的な量の抗ＣＸＣＲ２抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＭＩＦ抗体、又は、これらの組み合わせを投与する工程を備える。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、抗ＣＸＣＲ２抗体を備える。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、抗ＣＸＣＲ４抗体を備える。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、抗ＭＩＦ抗体を備える。
【００８３】
幾つかの実施形態において、抗体は、ＭＩＦの偽ＥＬＲモチーフの全て又は一部と特異的に結合する抗体である。幾つかの実施形態において、抗体が結合するＭＩＦの偽ＥＬＲモチーフの一部は、ＭＩＦ三量体の外側に露出するか、又はＭＩＦの外側にある偽ＥＬＲモチーフの一部である。幾つかの実施形態において、抗体は、以下のペプチド配列、 ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する。幾つかの実施形態において、抗体は、アミノ酸１１からアミノ酸４４（h配列ID No. 1を参照）までのアミノ酸配列の全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する。
【００８４】
幾つかの実施形態において、抗体は、ＭＩＦのＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合する抗体である。幾つかの実施形態において、抗体が結合するＭＩＦのＮ−ループモチーフの一部は、ＭＩＦ三量体の外側に露出するか、又はＭＩＦの外側にあるＮ−ループモチーフの一部である。幾つかの実施形態において、抗体は、以下のペプチド配列、ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する。幾つかの実施形態において、抗体は、アミノ酸４０からアミノ酸６５（配列ID No. 1を参照）までのアミノ酸配列の全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する。
【００８５】
幾つかの実施形態において、抗体は、ＭＩＦの偽ＥＬＲモチーフの全て又は一部と、ＭＩＦのＮ−ループモチーフの全て又は一部とに特異的に結合する抗体である。幾つかの実施形態において、抗体によって結合されるＭＩＦのＮ−ループ及び偽ＥＬＲモチーフの一部は、ＭＩＦ三量体の外側に露出するか、又はＭＩＦの外側にある一部である。幾つかの実施形態において、抗体は、以下のペプチド配列、ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する。幾つかの実施形態において、抗体は、アミノ酸１１からアミノ酸６５（配列ID No. 1を参照）までのアミノ酸配列の全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する。
【００８６】
幾つかの実施形態において、抗体は、ＭＩＦのＣＸＣＲ２結合ドメインと特異的に結合する。
【００８７】
幾つかの実施形態において、抗体は、ＭＩＦのＣＸＣＲ４結合ドメインと特異的に結合する。
【００８８】
幾つかの実施形態において、抗体は、ＭＩＦ三量体の形成を抑制する。
【００８９】
幾つかの実施形態において、抗体は、抗ＣＤ７４抗体である。幾つかの実施形態において、抗体は、ＭＩＦのＣＤ７４との結合を抑制する。幾つかの実施形態において、抗ＣＤ７４抗体は、Ｍ−Ｂ７４１（Pharmingen）であるか、Ｍ−Ｂ７４１（Pharmingen）に由来する。
【００９０】
幾つかの実施形態において、抗体は、抗Ｊａｂ−１抗体である。幾つかの実施形態において、抗体は、ＭＩＦのＪＡＢ−１との結合を抑制する。幾つかの実施形態において、抗体は、アミノ酸５０からアミノ酸６５（配列ID No. 1を参照）までのアミノ酸配列の全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する。幾つかの実施形態において、抗体は、以下のペプチド配列、ＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬＨＳＩの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも１つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合する。
【００９１】
幾つかの実施形態において、抗体は、抗ＣＸＣＲ２抗体である。幾つかの実施形態において、抗体アンタゴニストは、モノクローナル抗体である。幾つかの実施形態において、抗体アンタゴニストは、ポリクローナル抗体である。幾つかの実施形態において、抗体アンタゴニストは、ＣＸＣＲ２抗体、クローン４８３１１．２１１；ＣＸＣＲ２抗体、クローン５Ｅ８／ＣＸＣＲ２；ＣＸＣＲ２抗体、クローン１９；又は、これらの誘導体から選択される。
【００９２】
幾つかの実施形態において、抗体は、ＣＸＣＲ４抗体、クローン７０１；ＣＸＣＲ４抗体、クローン７０８；ＣＸＣＲ４抗体、クローン７１６；ＣＸＣＲ４抗体、クローン７１７；ＣＸＣＲ４抗体、クローン７１８；ＣＸＣＲ４抗体、クローン１２Ｇ５；ＣＸＣＲ４抗体、クローン４Ｇ１０；又は、これらの組み合わせから選択される抗ＣＸＣＲ４抗体である。
【００９３】
幾つかの実施形態において、抗体は、ＭＩＦ抗体、クローンＩＩＤ.９；ＭＩＦ抗体、クローンＩＩＩＤ.９；ＭＩＦ抗体、クローンＸＩＦ７；ＭＩＦ抗体、クローンＩ３１；ＭＩＦ抗体、クローンＩＶ２．２；ＭＩＦ抗体、クローンＸＩ７；ＭＩＦ 抗体、クローンＸＩＩ１５．６；ＭＩＦ抗体、クローンＸＩＶ１５．４；又は、これらの組み合わせから選択される抗ＭＩＦ抗体である。
【００９４】
モノクローナル抗体産生
幾つかの実施形態において、本明細書で開示されるペプチドに対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、ハイブリドーマを用いることによって産生される。特定の例において、ハイブリドーマは、不死化抗体産生細胞である。幾つかの実施形態において、実験動物（例えば、マウス又はウサギ）は、抗原を接種される。幾つかの実施形態において、実験動物の脾臓からＢ細胞が抽出される。幾つかの実施形態において、ハイブリドーマは、（１）抽出されたＢ細胞を、（２）骨髄腫細胞（すなわち、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ陰性（negative）の不死化骨髄腫細胞）と融合することによって発生する。幾つかの実施形態において、Ｂ細胞及び骨髄腫細胞は、一緒に培養されるとともに、細胞膜をより浸透性のあるものにする薬剤（例えば、ＰＥＧ）に暴露される。
【００９５】
幾つかの実施形態において、培養物は、複数のハイブリドーマ、複数の骨髄腫細胞、及び、複数のＢ細胞を備える。幾つかの実施形態において、細胞は、ハイブリドーマ用に選択する培養条件にさらされる（例えば、ＨＡＴ培地による培養）。
【００９６】
幾つかの実施形態において、個体のハイブリドーマ（すなわち、クローン）は、単離されて培養される。幾つかの実施形態において、ハイブリドーマは実験動物に注入される（例えば、ウサギ又はラット）。幾つかの実施形態において、ハイブリドーマは、細胞培養で培養される。
【００９７】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、ヒト化モノクローナル抗体を備える。幾つかの実施形態において、ヒト化モノクローナル抗体は、ヒト起源の重鎖及び軽鎖の定常領域と、マウス起源の様々な領域を備える。
【００９８】
幾つかの実施形態において、ヒト化抗体を含むヒト化免疫グロブリンは、遺伝子工学によって構築される。幾つかの実施形態において、ヒト化免疫グロブリンは、特定のヒト免疫グロブリン鎖（すなわち、受容体又はレシピエント）のフレームワークと同一のフレームワークと、非ヒト（供与体）免疫グロブリン鎖の３つのＣＤＲとを備える。幾つかの実施形態において、ヒト化免疫グロブリン鎖のフレームワーク内のアミノ酸の限定された数は、受容体内よりも供与体の方の当該配置にあるアミノ酸と同じになるよう同定されるとともに選択される。 
【００９９】
幾つかの実施形態において、フレームワークは、ヒト化される供与体の免疫グロブリンと相同の特別なヒト免疫グロブリンから用いられる。例えば、データバンク中のヒトの重鎖（又は、軽鎖）の可変領域に対して、マウスの重鎖（又は、軽鎖）の可変領域の配列を比較することによって（例えば、全米国立生物医学研究基金（the National Biomedical Research Foundation）のタンパク質分析リソース、又は、全米バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）のタンパク質配列データベース）、様々なヒト領域への相同性は、約４０％乃至約６０％、約７０％、約８０％、又はそれ以上、大きく変化することがあることが示された。供与体免疫グロブリンの重鎖可変領域にもっとも相同するヒトの重鎖可変領域のひとつを、受容体免疫グロブリンとして選択することによって、供与体免疫グロブリンからヒト化免疫グロブリンに変化するアミノ酸は少なくなる。供与体免疫グロブリンの軽鎖可変領域ともっとも相同するヒトの軽鎖可変領域のひとつを、受容体免疫グロブリンとして選択することによって、免疫グロブリンからヒト化免疫グロブリンに変化するアミノ酸は少なくなる。 
【０１００】
幾つかの実施形態において、ヒト化免疫グロブリンは、 同じヒト抗体からの軽鎖及び重鎖を受容体配列として備える。幾つかの実施形態において、ヒト化免疫グロブリンは、異なるヒト抗体生殖系列配列からの軽鎖及び重鎖を受容体配列として備える。すなわち、このような組み合わせが用いられると、ＶＨとＶＬが所望のエピトープに結合するかどうかを、従来のアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）を用いて容易に測定可能である。幾つかの実施形態において、取り込まれる軽鎖及び重鎖可変領域配列が全体として供与体の軽鎖及び重鎖可変領域配列にもっとも相同するヒト抗体が選択される。幾つかの実施形態において、ヒト化免疫グロブリン鎖のフレームワークにおける少数のアミノ酸を、受容体よりもむしろ供与体の配置におけるアミノ酸と同じものとして選択することによって、高親和性が達成される。
【０１０１】
フレームワーク領域を修正する任意の適切な方法が本明細書で熟慮される。幾つかの実施形態において、変化する関連のフレームワークアミノ酸は、供与体分子と受容体分子との間のアミノ酸フレームワーク残基の違いに基づいて選択される。幾つかの実施形態において、変化するアミノ酸位置は、ＣＤＲの高次構造（例えば、標準的なフレームワーク残基は、ＣＤＲの高次構造及び／又は構造に重要である）に重要であるか又は関与すると知られている残基である。幾つかの実施形態において、変化する関連のフレームワークアミノ酸は、特別なフレームワーク位置（例えば、サブファミリーの範囲内で他のフレームワーク配列と選択されたフレームワーク配列とを比較することによって、特定の位置又は複数の位置で少ない頻度で発生する残基を明らかにすることが可能である）におけるアミノ酸残基の頻度に基づいて選択される。幾つかの実施形態において、変化する関連のフレームワークアミノ酸は、ＣＤＲとの近さに基づいて選択される。幾つかの実施形態において、変化する関連のフレームワーク アミノ酸は、知られている又は予測される抗−ＣＤＲ界面への近接に基づいて選択されるか、又は、ＣＤＲ活動を調節することが予測される。幾つかの実施形態において、変化する関連のフレームワークアミノ酸は、重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）可変領域界面間の接触を形成することが知られている又は予測されるフレームワーク残基である。幾つかの実施形態において、変化する関連のフレームワークアミノ酸は、溶媒に近づきにくいフレームワーク残基である。
【０１０２】
幾つかの実施形態において、選択された配置の幾つか又は全てにおけるアミノ酸変化は、受容体可変領域フレームワークと供与体ＣＤＲに対してコード化核酸に組み込まれる。幾つかの実施形態において、変化したフレームワーク又はＣＤＲ配列は、個別に作られて試験されるか、又は、経時的もしくは同時に組み合わされて試験される。
【０１０３】
幾つかの実施形態において、任意の又は全ての変化した位置における可変性は、全ての２０の自然発生アミノ酸又は機能的に等価なもの及びそれらのアナログを含む、数個から複数の異なるアミノ酸残基である。幾つかの実施形態において、非自然発生アミノ酸が検討される。
【０１０４】
幾つかの実施形態において、ヒト化抗体配列は、ベクターにクローン化される。幾つかの実施形態において、任意の適切なベクターが用いられる。幾つかの実施形態において、ベクターは、プラスミド、必要に応じて、ウィルス、例えば、「ファージ」、又は、「ファージミド」である。詳細については、例えば、文献「Molecular Cloning: a Laboratory Manual: 2nd edition, Sambrook et al., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press」を参照されたい。例えば、核酸構築物、変異原生、配列決定、ＤＮＡの細胞への導入及び遺伝子発現、タンパク質の解析の準備において、核酸の操作に関して知られている多くの技術及びプロトコルは、文献「Short Protocols in Molecular Biology, Second Edition, Ausubel et al. eds., John Wiley & Sons, 1992」に詳細に記載されている。文献「Sambrook et al. and Ausubel et al.」の開示内容は、開示目的として参照することにより本明細書に組み込まれるものとする。
【０１０５】
幾つかの実施形態において、任意の適切な宿主細胞は、ヒト化抗体配列を発現するベクターによって形質転換する。幾つかの実施形態において、宿主細胞はバクテリア、哺乳動物細胞、酵母、及び、バキュロウィルス系である。大腸菌などの原核細胞における抗体及び抗体フラグメントの発現は、当該技術で十分に確立されている。検討のために、例えば、文献「Plueckthun, A. Bio/Technology 9: 545-551 (1991)」を参照されたい。培養下の真核細胞における発現も、本明細書に記載の抗体及び抗体結合フラグメントの産生のための１つのオプションとして、当業者には利用可能である。最新の検討として、例えば、文献「Raff, M.E. (1993) Curr. Opinion Biotech. 4: 573-576」、「Trill J.J. et al. (1995) Curr. Opinion Biotech 6: 553-560」を参照されたい。夫々の文献は、開示目的として参照されることによって、本明細書に組み込まれるものとする。
【０１０６】
幾つかの実施形態において、哺乳動物の発現系が用いられる。幾つかの実施形態において、保有動物の発現系は、ジヒドロ葉酸還元酵素（「ｄｈｆｒ−」）チャイニーズハムスター卵巣細胞である。幾つかの実施形態において、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞は、所望のヒト化抗体をコードする遺伝子とともに、機能的ＤＨＦＲ遺伝子を含む発現ベクターでトランスフェクトする。
【０１０７】
幾つかの実施形態において、ＤＮＡは、任意の適切な方法によって形質転換する。真核細胞に関して、任意の技術は、例えば、リン酸カルシウム形質転換、ＤＥＡＥデキストラン、電気穿孔法、レトロウィルス又は他のウィルス、例えば、ワクシニア、又は、例えば、昆虫細胞用のバキュロウィルスなどを用いるリポソーム媒介性トランスフェクション及び形質導入を含む。バクテリア細胞に関して、適切な技術は、例えば、塩化カルシウムの形質転換、電気穿孔法、及び、バクテリオファージを用いるトランスフェクションを含む。
【０１０８】
幾つかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするＤＮＡ配列は、クローン化するよりも合成して用意される。幾つかの実施形態において、ＤＮＡ配列は、抗体又は抗原結合フラグメントアミノ酸配列に適切なコドンで設計される。一般的に、配列が発現に用いられる場合、所望の宿主に対して好適なコドンが選択される。幾つかの実施形態において、完全な配列は、標準的な手法によって用意された重複しているオリゴヌクレオチドから構築され、完全なコード配列を構築する。例えば、文献「Edge, Nature, 292:756 (1981); Nambair et al., Science, 223:129 (1984)」、「Jay et al., J. Biol. Chem., 259:6311 (1984)」を参照されたい。文献の各々は、開示目的で参照されることによって本明細書に組み込まれるものとする。
【０１０９】
株化細胞
特定の実施形態において、ヒトＣＤ７４に加えて、組み換えヒトＣＸＣＲ４を発現する株化細胞が本明細書で開示される。幾つかの実施形態において、ヒトＣＤ７４に加えて、組み換えヒトＣＸＣＲ４を発現する株化細胞は、ヒト株化細胞である（例えば、ＨＥＫ２９３）。幾つかの実施形態において、ヒトＣＤ７４に加えて、組み換えヒトＣＸＣＲ４を発現する株化細胞は、非ヒト株化細胞である（例えば、ＣＨＯ）。
【０１１０】
炎症
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、ＭＩＦ媒介性疾患を処置する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、炎症を処置する（例えば、急性又は慢性）。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、（部分的又は全体的のいずれかで）感染症に由来する炎症を処置する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、（部分的又は全体的のいずれかで）組織への損傷（例えば、火傷、凍傷、細胞毒性薬への暴露、又は、外傷による）に由来する炎症を処置する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、（部分的又は全体的のいずれかで）自己免疫障害に由来する炎症を処置する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、（部分的又は全体的のいずれかで）異物の存在（例えば、破片）に由来する炎症を処置する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、毒素及び／又は化学性刺激物の暴露に由来する炎症を処置する。
【０１１１】
本明細書で用いられているように、「急性炎症」とは、数分から数時間のうちに発症することで特徴付けられる炎症のことを言い、ひとたび刺激が取り除かれると治まる（例えば、感染病原体は、免疫応答又は処置薬の投与によって死滅し、異物が免疫応答又は抽出によって取り除かれるか、又は、損傷した組織が治癒した）。短時間の急性炎症は、半減期の短いほとんどの炎症性メディエーターに由来する。
【０１１２】
特定の例において、急性炎症は、白血球活性化（例えば、樹状細胞、内皮細胞、及び、マスト細胞）から始まる。特定の例において、白血球は炎症性メディエーター（例えば、ヒスタミン、プロテオグリカン、セリンプロテアーゼ、エイコサノイド、及び、サイトカイン）を放出する。特定の例において、炎症性メディエーターは、（部分的又は全体的のいずれかで）炎症に関連する症状をもたらすことになる。例えば、特定の例において、炎症性メディエーターは、 後毛細管細静脈を拡張させるとともに、血管透過性を増加させる。特定の例において、血管拡張の後に続く血流の増加は（部分的又は全体的のいずれかで）発赤及び熱をもたらす。特定の例において、血管の増加した透過性は、浮腫の原因となる組織への血漿の滲出をもたらすことになる。特定の例において、後者は、白血球が走化性勾配に沿って炎症刺激物の部位へ遊走することを可能にする。さらに、特定の例において、血管に対する構造的な変化（例えば、毛細管及び細静脈）が起こる。特定の例において、構造変化は、（部分的又は全体的のいずれで）単球及び／又はマクロファージによって誘発される。特定の例において、構造変化は、血管リモデリング、及び、血管形成を含むが、これらに限定されない。特定の例において、血管形成は、増加した白血球の輸送が可能となることによって、慢性的な炎症の維持に関与する。さらに、 特定の例において、ヒスタミン及びブラジキニンは、かゆみ及び／又は疼痛の原因となる神経終末を刺激する。
【０１１３】
特定の例において、慢性的な炎症は、持続性の刺激物（例えば、持続性の急性炎症、バクテリア感染症（例えば、結核菌による）、化学薬品（例えば、シリカ、又は、タバコの煙）への長期的な暴露、及び、自己免疫反応（例えば、関節リウマチ））の存在に由来する。特定の例において、持続性の刺激物は、絶え間ない炎症（例えば、単球の絶え間ない動員、及び、マクロファージの増殖による）をもたらすことになる。特定の例において、絶え間ない炎症は、さらに組織を損傷し、この組織損傷は単核細胞のさらなる動員をもたらすことで、炎症を維持するとともに悪化させる。特定の例において、炎症に対する生理的反応は、血管形成及び線維症をさらに含む。
【０１１４】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、炎症に関連する疾患（すなわち、炎症性疾患）を処置する。炎症性疾患は、アテローム性動脈硬化；腹部大動脈瘤；急性散在性脳脊髄炎；もやもや病；高安病；急性冠症候群；心臓同種移植片血管障害；肺炎症；急性呼吸促迫症候群；肺線維症；アジソン病；強直性脊椎炎；抗リン脂質抗体症候群；自己免疫性溶血性貧血；自己免疫性肝炎；自己免疫性内耳疾患；水疱性類天疱瘡；シャーガス病；慢性閉塞性肺疾患；セリアック病；皮膚筋炎；１型糖尿病；２型糖尿病；子宮内膜症；グッドパスチャー症候群；グレーブス病；ギラン・バレー症候群；橋本病；特発性血小板減少性紫斑病；間質性膀胱炎；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；メタボリックシンドローム；多発性硬化症；重症筋無力症；心筋炎, ナルコレプシー；肥満症；尋常性天疱瘡；悪性貧血；多発性筋炎；原発性胆汁性肝硬変；関節リウマチ；統合失調症；強皮症；シェーグレン症候群；血管炎；白斑；ウェゲナー肉芽腫症；アレルギー性鼻炎；前立腺癌；非小細胞肺癌；卵巣癌；乳癌；黒色腫；胃癌；結腸直腸癌；脳癌；転移性骨疾患；膵癌；リンパ腫；鼻茸；消化器癌；潰瘍性大腸炎；クローン病；コラーゲン蓄積大腸炎；リンパ球性大腸炎；虚血性腸炎；空置大腸炎；ベーチェット病；感染性腸炎；分類不能大腸炎；炎症性肝疾患、エンドトキシン・ショック、敗血症性ショック、リウマチ性脊椎炎、強直性脊椎炎、痛風性関節炎、リウマチ性多発筋痛症、アルツハイマー病、パーキンソン病、てんかん、エイズ認知症、喘息、成人呼吸窮迫症候群、気管支炎、嚢胞性線維症、急性白血球媒介性肺損傷、遠位直腸炎、ウェゲナー肉芽腫症、線維筋痛症、気管支炎、嚢胞性線維症、ブドウ膜炎、結膜炎、乾癬、湿疹、皮膚炎、平滑筋増殖性疾患、髄膜炎、帯状疱疹、脳炎、腎炎、結核、網膜炎、アトピー性皮膚炎、膵炎、歯周歯肉炎、凝固壊死、液化壊死、フィブリノイド壊死、新生内膜過形成、心筋梗塞；脳卒中；移植臓器拒絶反応；又は、これらの組み合わせを含むが、これらに限定されるわけではない。
【０１１５】
アテローム性動脈硬化
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、アテローム性動脈硬化を処置する。本明細書で用いられるように、「アテローム性動脈硬化」とは、動脈壁の炎症を意味し、アテローム発生（例えば、脂質沈着、内膜中膜厚化（intima-media thickening）、及び、単球による内膜下浸潤（subintimal infiltration））の全段階、及び、全ての動脈硬化病変（例えば、Ｉ型病変からＶＩＩＩ型病変まで）を含む。特定の例において、アテローム性動脈硬化は、マクロファージの蓄積に（一部又は全て）由来する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、マクロファージの蓄積を防ぎ、蓄積したマクロファージの数を減らし、及び／又は、マクロファージが蓄積する速度を低下させる。特定の例において、アテローム性動脈硬化は、酸化ＬＤＬの存在に（一部又は全て）由来する。特定の例において、酸化ＬＤＬは、動脈壁に損傷を与える。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、動脈壁への酸化ＬＤＬ−誘発性損傷を防ぎ、酸化ＬＤＬによって損傷を受ける動脈壁部分を減少させ、動脈壁への損傷の重症度を軽減する、及び／又は、動脈壁が酸化ＬＤＬによって損傷を受ける速度を低下させる。特定の例において、単球は、損傷を受けた動脈壁に反応する（すなわち、走化性勾配を伴う）。特定の例において、単球はマクロファージを分化させる。特定の例において、マクロファージは、酸化ＬＤＬを取り込む（取り込まれたＬＤＬを有するマクロファージ等の細胞は、「泡沫細胞」と呼ばれる）。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、泡沫細胞の形成を防ぎ、泡沫細胞の数を減少させ、及び／又は、泡沫細胞が形成される速度を低下させる。特定の例において、泡沫細胞は死んだ後に破裂する。特定の例において、泡沫細胞の破裂は、酸化コレステロールを動脈壁へ堆積させる。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、動脈壁へ堆積した酸化コレステロールの沈着を防ぎ、動脈壁へ堆積した酸化コレステロールの数を減少させ、及び／又は、酸化コレステロールが動脈壁に堆積する速度を低下させる。特定の例において、動脈壁には、酸化ＬＤＬにより引き起こされた損傷によって炎症が生じる。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、動脈壁の炎症を防ぎ、炎症を起こす動脈壁部分を減少させ、及び／又は、炎症の重症度を軽減する。特定の例において、動脈壁の炎症は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）−２、ＣＤ４０リガンド、及び、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α（一部又は全体のいずれか）の発現をもたらすことになる。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）−２、ＣＤ４０リガンド、及び、腫瘍壊死因子 （ＴＮＦ）−αの発現を防ぎ、又は、発現したマトリクスメタロプロテイナーゼ （ＭＭＰ）−２、ＣＤ４０リガンド、及び、腫瘍壊死因子 （ＴＮＦ）−αの量を減少させる。特定の例において、炎症面積上を覆う硬質の覆いを形成する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、硬質の覆いの形成を防ぎ、硬質の覆いによって影響を受ける動脈壁部分を減少させ、及��／又は、硬質の覆いが形成される速度を低下させる。特定の例において、細胞の覆いは動脈を狭窄する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、動脈狭窄を防ぎ、動脈が狭窄する部分を減少させ、狭窄の重症度を軽減し、及び／又は、動脈が狭窄する速度を低下させる。
【０１１６】
特定の例において、動脈硬化性プラークは、（一部又は全て）狭窄症（すなわち、血管の狭窄）をもたらす。特定の例において、狭窄症は、（一部又は全て）血流の減少をもたらす。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、狭窄症及び／又は再狭窄症を処置する。特定の例において、経皮的インターベンション（例えば、バルーン血管形成術又はステント挿入）による狭窄症の動脈硬化病変の機械的損傷は、新生内膜過形成の発症を誘発する。特定の例において、血管壁の急性損傷は、血管内壁中のＳＭＣのアポトーシスだけでなく、急性の内皮露出及び血小板粘着を誘発する。特定の例において、損傷に反応して内膜層内で表現型の独特なＳＭＣが蓄積することは、動脈血管壁の統合性を回復させるが、その後、血管の進行性狭窄を招くことになる。特定の例において、単球の動員は、さらなる持続性及び慢性の炎症反応を引き起こす。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び組成物は、表現型の独特なＳＭＣの内膜層内での蓄積を抑制する。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び組成物は、バルーン血管形成術又はステント挿入によって処置される個体において、表現型の独特なＳＭＣの内膜層内での蓄積を抑制する。
【０１１７】
特定の例において、動脈硬化性プラークの破裂は、組織に対する梗塞（例えば、心筋梗塞又は脳卒中）を（一部又は全て）もたらす。特定の例において、心筋のＭＩＦ発現は、急性の心筋虚血障害の後に、生存している心筋細胞及びマクロファージにおいて上方制御される。特定の例において、低酸素症及び酸化ストレスは、異型タンパク質キナーゼＣ−依存性排出メカニズムを介して、心筋細胞からＭＩＦの分泌を誘発するとともに、細胞外シグナル制御キナーゼの活性化をもたらす。特定の例において、ＭＩＦの血清中濃度の増加は、急性心筋梗塞を有する個体で検知される。特定の例において、ＭＩＦは、梗塞領域のマクロファージ蓄積、及び、梗塞の間の筋細胞誘発性損傷の炎症性を促進する役割に関与する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、梗塞を処置する。特定の例において、再灌流傷害は梗塞を伴う。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、再灌流傷害を処置する。
【０１１８】
幾つかの実施形態において、本明細書で開示される抗体は、動脈硬化性プラークを識別及び／又は位置づけるために投与される。幾つかの実施形態において、抗体は、画像化のために標識される。幾つかの実施形態において、抗体は、医療画像のために標識化される。幾つかの実施形態において、抗体は、放射線画像（radio-imaging）、ＰＥＴ画像、ＭＲＩ画像、及び、蛍光画像のために標識化される。幾つかの実施形態において、抗体は、高濃度のＭＩＦを伴う循環器系部分に局在化させる。幾つかの実施形態において、高濃度ＭＩＦを伴う循環器系部分は、動脈硬化性プラークである。幾つかの実施形態において、標識抗体は、任意の適切な方法（例えば、ガンマカメラ、ＭＲＩ、ＰＥＴスキャナー、Ｘ線コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、機能的磁気共鳴画像法（ｆＭＲＩ）、及び、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）を用いることによって）によって検知される。
【０１１９】
腹部大動脈瘤
特定の例において、動脈硬化性プラークは、（一部又は全て）動脈瘤の発症をもたらす。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、動脈瘤を処置するために投与される。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、腹部大動脈瘤（「ＡＡＡ」）を処置するために投与される。本明細書で用いられるように、「腹部大動脈瘤」は、通常の動脈直径よりも少なくとも５０％増加していることで特徴付けられる、腹部大動脈の限局性の拡張である。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、腹部大動脈の拡張を減少させる。
【０１２０】
特定の例において、腹部大動脈瘤は、（一部又は全て）構造タンパク質（例えば、エラスチン及びコラーゲン）の分解に由来する。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、一部又は全て、構造タンパク質（例えば、エラスチン及びコラーゲン）の分解を抑制する。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、構造タンパク質（例えば、エラスチン及びコラーゲン）の再生を促進する。特定の例において、構造タンパク質の分解は、活性化ＭＭＰによって引き起こされる。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、一部又は全て、ＭＭＰの活性化を抑制する。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される組成物及び／又は方法は、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−９、又は、ＭＭＰ−１２の上方制御を抑制する。特定の例において、ＭＭＰは、白血球（例えば、マクロファージ及び好中球）による腹部大動脈部分の浸潤を伴って活性化される。
【０１２１】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、白血球の浸潤を低下させる。特定の例において、ＭＩＦは初期の腹部大動脈瘤で上方制御される。特定の例において、白血球は、ＡＡＡ（例えば、動脈硬化性プラーク、感染症、嚢胞性中膜壊死、動脈炎、外傷、偽の動脈瘤を生成する吻合破壊の影響を受けた大動脈部分）の発症に影響を受けやすい腹部大動脈部分へのＭＩＦ勾配を伴う。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、一部又は全て、ＭＩＦの活動を抑制する。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、一部又は全て、マクロファージ及び好中球に対してケモカインとして機能するＭＩＦの能力を抑制する。
【０１２２】
幾つかの実施形態において、本明細書で開示される抗体は、それを必要としている個体のＡＡＡを同定する及び／又は位置づけるために投与される。幾つかの実施形態において、それを必要としている個体は、ＡＡＡを発症させる１以上の危険因子を示している（例えば、年齢が６０歳以上；男性；喫煙；高血圧；高血清コレステロール；糖尿病；アテローム性動脈硬化）。幾つかの実施形態において、抗体は、画像化のために標識化される。幾つかの実施形態において、抗体は、医療画像のために標識化される。幾つかの実施形態において、抗体は、放射線画像（radio-imaging）、ＰＥＴ画像、ＭＲＩ画像、及び、蛍光画像のために標識化される。幾つかの実施形態において、抗体は、高濃度ＭＩＦを伴う循環器系部分に局在化する。幾つかの実施形態において、高濃度ＭＩＦを伴う循環器系部分は、ＡＡＡである。幾つかの実施形態において、標識化された抗体は、任意の適切な方法（例えば、ガンマカメラ、ＭＲＩ、ＰＥＴスキャナー、Ｘ線コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、機能的磁気共鳴画像法（ｆＭＲＩ）、及び、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）を用いることによって）によって検知される。
【０１２３】
様々な障害
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、Ｔ細胞媒介性自己免疫障害を処置する。特定の例において、Ｔ細胞媒介性自己免疫障害は、それ自体に対するＴ細胞媒介性免疫応答によって特徴づけられる（例えば、天然細胞及び組織）。Ｔ細胞媒介性自己免疫障害の例としては、大腸炎、多発性硬化症、関節炎、関節リウマチ、変形性関節症、若年性関節炎、乾癬性関節炎、急性膵炎、慢性膵炎、糖尿病、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ又はＩ型糖尿病）、膵島炎、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、自己免疫性溶血性貧血症候群（autoimmune hemolytic syndromes）、自己免疫性肝炎、自己免疫性神経障害、自己免疫性卵巣不全（autoimmune ovarian failure）、自己免疫性精巣炎、自己免疫性血小板減少症、反応性関節炎、強直性脊椎炎、シリコーン・インプラントに関連した自己免疫性疾患、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、血管炎症候群（例えば、巨細胞性動脈炎、ベーチェット病＆ウェゲナー肉芽腫症）、白斑、自己免疫性疾患の第２の血液学的兆候（例えば、貧血）、薬物誘発性自己免疫、橋本甲状腺炎、下垂体炎、突発性血小板減少性紫斑病、金属誘発性自己免疫、重症筋無力症、天疱瘡、自己免疫性聴覚消失（例えば、メニエール病）、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ＨＩＶ関連性自己免疫症候群、及び、ギラン−バレー症候群が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２４】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、疼痛を処置する。疼痛には、急性疼痛、急性の炎症性疼痛、慢性の炎症性疼痛、及び、神経因性疼痛が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２５】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、過敏症を処置する。本明細書で用いられるように、「過敏症」とは、好ましくない免疫系反応のことを言う。過敏症は、４つの分類に分けられる。Ｉ型過敏症は、アレルギー（例えば、アトピー、アナフィラキシー、又は、喘息）を含む。ＩＩ型過敏症は、細胞傷害性／抗体媒介性（例えば、自己免疫性溶血性貧血、血小板減少症、胎児赤芽球症、又は、グッドパスチャー症候群）である。ＩＩＩ型過敏症は、免疫複合体病（例えば、血清病、アルサス反応、又は、ＳＬＥ）である。ＩＶ型過敏症は、遅発性過敏症（ＤＴＨ）、細胞性免疫記憶応答、及び、抗体非依存性（例えば、接触性皮膚炎、ツベルクリン反応検査、又は、慢性的な移植拒絶反応）である。
【０１２６】
本明細書で用いられるように、「アレルギー」とは、ＩｇＥによる肥満細胞及び好塩基球の過剰な活性化によって特徴づけられる疾患である。特定の例において、ＩｇＥによる肥満細胞及び好塩基球の過剰な活性化は、（部分的又は全体のいずれか）炎症反応をもたらす。特定の例において、この炎症反応は、局所的である。特定の例において、炎症反応は、気道狭窄をもたらす（すなわち、気管支収縮）。特定の例において、炎症反応は、鼻の炎症をもたらす（すなわち、鼻炎）。特定の例において、炎症反応は、全身性である（すなわち、アナフィラキシー）。
【０１２７】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、血管形成を処置する。本明細書で用いられるように、「血管形成」は、新しい血管の形成のことを言う。特定の例において、血管形成は慢性炎症を伴って生じる。特定の例において、血管形成は、単球及び／又はマクロファージによって誘発される。幾つかの実施形態において、本明細書で開示される方法及び／又は組成物は、血管形成を抑制する。特定の例において、ＭＩＦは、内皮前駆細胞で発現される。特定の例において、ＭＩＦは、腫瘍関連の新生脈管構造において発現される。
【０１２８】
幾つかの実施形態において、本発明は、腫瘍形成を処置する方法を備える。特定の例において、腫瘍細胞は炎症反応を誘発する。特定の例において、腫瘍細胞に対する炎症反応の一部は血管形成である。特定の例において、血管形成は、腫瘍形成の発症を促進する。幾つかの実施形態において、腫瘍形成は、血管肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、及び、他の肉腫、乳癌、盲腸癌、結腸癌、肺癌、卵巣癌、咽頭癌、直腸Ｓ状部癌、膵癌、腎癌、子宮内膜癌、胃癌、肝癌、頭頸部癌、乳癌、及び、他の癌、ホジキンリンパ腫及び他のリンパ腫、悪性黒色腫又は他の黒色腫、耳下腺腫瘍、慢性リンパ性白血病及び他の白血病、星状細胞腫、神経膠腫、血管腫、網膜芽細胞腫、神経芽細胞腫、聴神経腫瘍、神経線維腫、トラコーマ、及び、化膿性肉芽腫である。
【０１２９】
幾つかの実施形態において、本明細書で開示される、血管新生を促進する方法は、ＭＩＦ又はＭＩＦアナログを前記個体に投与する工程を備える。
【０１３０】
本明細書で用いられるように、「敗血症」とは、全身炎症によって特徴づけられる疾患である。特定の例において、ＭＩＦの発現及び活性を抑制することは、敗血症にかかった個体の生存率を高める。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、敗血症を処置する。特定の例において、敗血症は、（部分的又は全体のいずれか）心筋機能不全（例えば、心筋機能不全）をもたらす。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、敗血症由来の心筋機能不全を処置する（例えば、心筋機能不全）。
【０１３１】
特定の例において、ＭＩＦは、心臓におけるキナーゼ活性化及びリン酸化（すなわち、心機能低下の指標）を誘発する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、敗血症由来の心筋機能不全（例えば、心筋機能不全）を処置する。
【０１３２】
特定の例において、ＬＰＳは、ＭＩＦの発現を誘発する。特定の例において、ＭＩＦは、敗血症の間にエンドトキシンによって誘発され、心筋の炎症反応、心筋細胞のアポトーシス、及び、心機能不全の開始因子として機能する（図８）。
【０１３３】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、エンドトキシン暴露に由来する心筋の炎症反応を抑制する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、エンドトキシン暴露に由来する心筋細胞のアポトーシスを抑制する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、エンドトキシン暴露に由来する心機能不全を抑制する。
【０１３４】
特定の例において、ＭＩＦの抑制は、（部分的又は全体のいずれか）生存因子（例えば、Ｂｃｌ−２、Ｂａｘ、及び、ｐｈｏｓｐｈｏ−Ａｋｔ）の著しい増加をもたらすとともに、心筋細胞の生存及び心筋機能の改善をもたらす。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、Ｂｃｌ−２、Ｂａｘ、又は、ｐｈｏｓｐｈｏ−Ａｋｔの発現を増加させる。
【０１３５】
特定の例において、ＭＩＦは、火傷に関連する組織損傷又は主要な組織損傷後の遅発型及び遅延性の心機能低下を媒介する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、火傷後の遅延性の心機能低下を処置する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、主要な組織損傷後の遅延性の心機能低下を処置する。
【０１３６】
特定の例において、ＭＩＦは、敗血症の間、肺から放出される。
【０１３７】
特定の例において、ＭＩＦの抗体中和は、自己免疫性心筋炎の発症を抑制するとともに、自己免疫性心筋炎の重症度を軽減する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び／又は組成物は、自己免疫性心筋炎を処置する。
【０１３８】
併用
特定の実施形態において、心血管系の疾患を調節するために本明細書で開示される方法及び医薬組成物は、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４との結合、及び／又は、（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、（ｉｉｉ）ホモ多量体を形成するＭＩＦの能力、又は、これらの組み合わせを抑制する（ａ）抗体と、（ｂ）第２の活性薬剤との相乗的な組み合わせを備える。
【０１３９】
特定の実施形態において、心血管系の疾患を調節するために本明細書で開示される方法及び医薬組成物は、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４との結合、及び／又は、（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、（ｉｉｉ）ホモ多量体を形成するＭＩＦの能力、又は、これらの組み合わせを抑制する（ａ）抗体と、（ｂ）その１つの要素が炎症である疾患を治療する薬剤から選択される第２の活性薬剤との相乗的な組み合わせを備える。
【０１４０】
特定の実施形態において、心血管系の疾患を調節するために本明細書で開示される方法及び医薬組成物は、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４との結合、及び／又は、（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、（ｉｉｉ）ホモ多量体を形成するＭＩＦの能力、又は、これらの組み合わせを抑制する（ａ）抗体と、（ｂ）その副作用が好ましくない炎症である薬剤から選択される第２の活性薬剤との相乗的な組み合わせを備える。特定の例において、スタチン（例えば、アトルバスタチン、ロバスタチン、及び、シンバスタチン）は炎症を誘発する。特定の例において、スタチンの投与は、（一部又は全て）筋炎をもたらす。
【０１４１】
本明細書で用いられるように、「医薬組成物」、「追加治療を実施する」、「追加治療薬を投与する」などの用語は、１以上の活性成分の混合又は併用に由来する薬物療法のことを言い、活性成分の定型的な及び非定型的な併用の双方を含む。「定型的な併用」との用語は、本明細書に記載の薬剤の少なくとも１つ、及び、少なくとも１つの助剤（co-agent）の双方が、単一体又は単一容量の形状で同時に個体に投与されることを意味する。「非定型的な併用」とは、本明細書に記載の薬剤の少なくとも１つ、及び、少なくとも１つの助剤（co-agent）の双方が、別々の存在として、同時に、併用して、又は、中断期間をおいて別々に、個体に投与されることを意味し、このような投与は、個体の身体において、効果的なレベルの２つ以上の薬剤を提供する。幾つかの例において、助剤は、一度又は一定期間投与され、その後、薬剤が一度又は一定期間投与される。他の例において、助剤は、一定期間投与され、その後、助剤と薬剤の双方の投与を含む治療が実施される。さらに他の実施形態において、薬剤は、一度又は一定期間投与され、その後、助剤が、一度又は一定期間投与される。このような投与は、同様に、例えば、３つ以上の活性成分の投与などのカクテル療法にも応用される。
【０１４２】
本明細書で用いられるように、「同時投与」、「併用投与」という用語、及び、文法上等しい言葉は、選択された治療薬の単一個体への投与を包含することを意味するとともに、同一の又は異なる投与経路によって、あるいは、同一の又は異なる時間で、薬剤が投与される処置レジメを含むよう意図されている。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の薬剤は、他の薬剤とともに同時投与される。このような用語は、薬剤及び／又はその代謝物が同時に動物内に存在するように、２つ以上の薬剤の動物への投与を包含する。このような用語は、別々の組成物における同時投与、別々の組成物における異なる時間での投与、及び／又は、両方の薬剤が存在する組成物における投与を含む。したがって、幾つかの実施形態において、本明細書に記載の薬剤、及び、他の薬剤は、単一組成物で投与される。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の薬剤、及び、他の薬剤は、組成物において混合される。
【０１４３】
併用処置又は予防法が検討される場合、本明細書に記載の薬剤が併用の特別な性質によって限定されることを意図したものではない。例えば、本明細書に記載の薬剤は、化学混成物（chemical hybrids）だけでなく、単一の混合物として併用して任意で投与される。後者の一例は、標的の担体又は活性医薬品（an active pharmaceutical）と共役結合する薬剤である。共役結合は、市販の架橋剤の使用などの多くの手法で達成可能であるが、これに限定されない。さらに、併用処置は、任意で別々に又は同時に実施される。
【０１４４】
幾つかの実施形態において、（ａ）本明細書で開示される抗体と、（ｂ）第２の活性薬剤との同時投与により、医療専門家が、炎症性疾患薬の規定の用量を増やすことが（一部又は全て）可能となる。特定の例において、スタチン−誘発性筋炎は、用量依存性である。幾つかの実施形態において、活性薬剤を処方することにより、医療専門家がスタチンの規定の用量を増やすことが（一部又は全て）可能となる。
【０１４５】
幾つかの実施形態において、（ａ）抗体と、（ｂ）第２の活性薬剤の同時投与により、（一部又は全て）医療専門家が、第２活性薬剤を処方することが可能となる（すなわち、同時投与が炎症性疾患薬を助ける）。
【０１４６】
幾つかの実施形態において、第２の活性薬剤は、間接的な手段（例えば、ＣＥＴＰ抑制）によってＨＤＬレベルを標的とする活性薬剤である。幾つかの実施形態において、非選択的なＨＤＬ療法を、本明細書で開示される抗体、（２）ＲＡＮＴＥＳ及び血小板第４因子との間の相互作用の修飾薬、又は、（３）これらの組み合わせ、と併用することによって、間接的な手段によりＨＤＬレベルを標的とする第２の活性薬剤を、さらに効果的な治療へと変換させる。
【０１４７】
幾つかの実施形態において、第２の活性薬剤は、炎症の修飾薬の前後、又は同時に、投与される。
【０１４８】
薬物療法
幾つかの実施形態において、第２の活性薬剤は、ナイアシン、フィブラート系薬剤、スタチン、アポＡ−Ｉ模倣ペプチド（例えば、ＤＦ−４、ノバルティス社）、アポＡ−Ｉ転写上方制御剤、ＡＣＡＴインヒビター、ＣＥＴＰ修飾剤、糖タンパク質（ＧＰ）ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体アンタゴニスト、Ｐ２Ｙ１２受容体アンタゴニスト、Ｌｐ−ＰＬＡ２−インヒビター、抗ＴＮＦ剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−２受容体アンタゴニスト、細胞毒性薬剤、免疫調節剤、抗生物質、Ｔ細胞共刺激遮断薬、障害を改善する抗リウマチ薬、Ｂ細胞除去剤、免疫抑制剤、抗リンパ球抗体、アルキル化剤、抗代謝産物、植物性アルカロイド、テルペノイド、トポイソメラーゼインヒビター、抗腫瘍抗生物質、モノクローナル抗体、ホルモン療法（例えば、アロマターゼ阻害薬）、又は、これらの組み合わせである。
【０１４９】
幾つかの実施形態において、第２の活性薬剤は、ナイアシン；ベザフィブラート；シプロフィブラート；クロフィブラート；ゲムフィブロジル；フェノフィブラート；ＤＦ４（Ａｃ−Ｄ−Ｗ−Ｆ−Ｋ−Ａ−Ｆ−Ｙ−Ｄ−Ｋ−Ｖ−Ａ−Ｅ−Ｋ−Ｆ−Ｋ−Ｅ−Ａ−Ｆ−ＮＨ２）；ＤＦ５；ＲＶＸ−２０８（Ｒｅｓｖｅｒｌｏｇｉｘ）；アバシミベ（avasimibe）；パクチミベ硫酸塩（pactimibe sulfate）（ＣＳ−５０５）；ＣＩ−１０１１(2,6-ジイソプロピルフェニル[(2,4,6-トリイソプロピルフェニル)アセチル]スルファミン酸)；ＣＩ−９７６ (2,2-ジメチル-N-(2,4,6-トリメトキシフェニル)ドデカンアミド)；ＶＵＬＭ１４５７(1-(2,6-ジイソプロピルフェニル)-3-[4-(4'-ニトロフェニルチオ)フェニル]尿素)；ＣＩ−９７６(2,2-ジメチル-N-(2,4,6-トリメトキシフェニル)ドデカンアミド)；Ｅ−５３２４ (n-ブチル-N'-(2-(3-(5-エチル-4-フェニル-1H-イミダゾル1-イル)プロポキシ)-6-メチルフェニル)尿素)；ＨＬ−００４(N-(2,6-ジイソプロピルフェニル)テトラデシルチオアセタミド)；ＫＹ−４５５(N-(4,6-ジメチル-1-ペンチルインドリン-7-イル)-2,2-ジメチルプロパンアミド)；ＦＹ−０８７(N-[2-[N'-ペンチル-(6,6-ジメチル-2,4-ヘプタジイニル)アミノ]エチル]-(2-メチル-1-ナフチル-チオ)アセトアミド)：ＭＣＣ−１４７（三菱製薬）；Ｆ １２５１１ ((S)-2',3',5'-トリメチル-4'-ヒドロキシ-α-ドデシルチオアセトアニリド)；ＳＭＰ−５００ （住友製薬）；ＣＬ ２７７０８２(2,4-ジフルオロ-フェニル-N[[4-(2,2-ジメチルプロピル)フェニル]メチル]-N-(ヘプチル)尿素)；ｆ−１３９４((1s,2s)-2-[3-(2,2-ジメチルプロピル)-3-ノニルウレイド]アミノシクロヘキサン-1-イル 3-[N-(2,2,5,5-テトラメチル-1,3-ジオキサン-4-カルボニル)アミノ]プロピオン酸)；ＣＰ− １１３８１８(N-(2,4-ビス(メチルチオ)-6-メチルピリジン-3-イル)-2-(ヘキシルチオ)デカン酸アミド)；ＹＭ−７５０；トルセトラピブ；アナセトラピブ；ＪＴＴ−７０５(日本たばこ産業／ロシュ社)；アブシキシマブ；エプチフィバチド；チロフィバン；ロキシフィバン；バリアビリン；ＸＶ ４５９ (N(3)-(2-(3-(4-ホルムアミジノフェニル)イソキサゾリン-5-イル)アセチル)-N(2)-(1-ブチルオキシカルボニル)-2,3-ジアミノプロピオン酸)；ＳＲ １２１５６６Ａ(3-[N-{4-[4-(アミノイミノメチル)フェニル]-1,3-チアゾル2-イル}-N-(1-カルボキシメチルピぺリド（carboxymethylpiperid）-4-イル)アミノプロピオン酸、三塩酸塩)；ＦＫ４１９((S)-2-アセチルアミノ-3-[(R)-[1-[3-(ピペリジン-4-イル)プロピオニル]ピペリジン-3-イルカルボニル]アミノ]プロピオン酸三水和物（trihydrate）)；クロピドグレル；プラスグレル；カングレロール；ＡＺＤ６１４０（アストラゼネカ）；ＭＲＳ ２３９５(2,2-ジメチル-プロピオン酸 3-(2-クロロ-6-メチルアミノプリン-9-イル)-2-(2,2-ジメチル-プロピオニルオキシメチル)-プロピルエステル)；ＢＸ ６６７(Berlex Biosciences社)；ＢＸ ０４８(Berlex Biosciences社)；ダラプラディブ（ＳＢ ４８０８４８）；ＳＢ−４３５４９５（グラクソスミスクライン社）；ＳＢ−２２２６５７（グラクソスミスクライン社）；ＳＢ−２５３５１４（グラクソスミスクライン社）；アレファセプト、エファリズマブ、メトトレキサート、アシトレチン、イソトレチノイン、ヒドロキシ尿素、ミコフェノール酸モフェチル、スルファサラジン、6-チオグアニン、ドボネックス、タクロネックス、ベタメタゾン、タザロテン、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、エタネルセプト、アダリムマブ、インフリキシマブ、アバタセプト、リツキシマブ、トラスツズマブ、抗ＣＤ４５モノクローナル抗体ＡＨＮ−１２（ＮＣＩ）、ヨード−１３１抗Ｂ１抗体（Corixa Corp.）、抗ＣＤ６６モノクローナル抗体ＢＷ ２５０／１８３（ＮＣＩ、Southampton General Hospital）、抗ＣＤ４５モノクローナル抗体（NCI, Baylor College of Medicine）、抗体抗ａｎｂ３インテグリン（ＮＣＩ）、ＢＩＷ−８９６２（BioWa Inc.）、抗体ＢＣ８（ＮＣＩ）、抗体ｍｕＪ５９１（ＮＣＩ）、インジウムＩｎ １１１モノクローナル抗体ＭＮ−１４（ＮＣＩ）、イットリウムＹ ９０モノクローナル抗体ＭＮ−１４（ＮＣＩ）、Ｆ１０５モノクローナル抗体（ＮＩＡＩＤ）、モノクローナル抗体ＲＡＶ１２（Raven Biotechnologies社）、ＣＡＴ−１９２（ヒト抗ＴＧＦ−β１モノクローナル抗体、ジェンザイム社）、抗体３Ｆ８（ＮＣＩ）、１７７Ｌｕ−Ｊ５９１（Weill Medical College of Cornell University）、ＴＢ−４０３（BioInvent International AB社）、アナキンラ、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、レフルノミド、Ｄペニシラミン、アミトリプチリン、又は、ノルトリプチリン、クロラムブシル、ナイトロジェンマスタード、プラステロン、ＬＪＰ３９４（アベチムスナトリウム）、ＬＪＰ １０８２（La Jolla Pharmaceutical社）、エクリズマブ、ベリムマブ（belibumab）、ｒｈｕＣＤ４０Ｌ（ＮＩＡＩＤ）、エピラツズマブ、シロリムス、タクロリムス、ピメクロリムス、サリドマイド、抗胸腺細胞グロブリン−ウマ（Atgam, Pharmacia Upjohn社）、抗胸腺細胞グロブリン−ウサギ（サイモグロブリン、ジェンザイム社）、ムロモナブ−ＣＤ３（FDA Office of Orphan Products development）、バシリキシマブ、ダクリズマブ、リルゾール、クラドリビン、ナタリズマブ、インターフェロンβ−１ｂ、インターフェロンβ−１ａ、チザニジン、バクロフェン、メサラジン、アサコール、ペンタサ、メサラミン、バルサラジド、オルサラジン、６−メルカプトプリン、ＡＩＮ４５７（抗ＩＬ−１７モノクローナル抗体、ノバルティス社）、テオフィリン、Ｄ２Ｅ７（Knoll Pharmaceuticals社のヒト抗ＴＮＦｍＡｂ）、メポリズマブ（抗ＩＬ―５抗体、ＳＢ ２４０５６３）、カナキヌマブ（抗ＩＬ−１β抗体、ＮＩＡＭＳ）、抗ＩＬ−２受容体抗体（ダクリズマブ、ＮＨＬＢＩ）、ＣＮＴＯ ３２８（抗ＩＬ−６モノクローナル抗体、Centocor社）、ＡＣＺ８８５（完全なヒト抗インターロイキン−１βモノクローナル抗体、ノバルティス社）、ＣＮＴＯ １２７５（完全なヒト抗ＩＬ−１２モノクローナル抗体、Centocor社）、(3S)-N-ヒドロキシ-4-({4-[(4-ヒドロキシ-2-ブチニル)オキシ]フェニル}スルホニル)-2,2-ジメチル-3-チオモルホリンカルボキサミド（アプラタスタット（apratastat））、ゴリムマブ（ＣＮＴＯ １４８）、オネルセプト、ＢＧ９９２４（Biogen Idec社）、セルトリズマブペゴール（CDP870、UCB Pharma社）、ＡＺＤ９０５６（アストラゼネカ社）、 ＡＺＤ５０６９（アストラゼネカ社）、ＡＺＤ９６６８（アストラゼネカ社）、ＡＺＤ７９２８（アストラゼネカ社）、ＡＺＤ２９１４（アストラゼネカ社）、ＡＺＤ６０６７（アストラゼネカ社）、ＡＺＤ３３４２（アストラゼネカ社）、ＡＺＤ８３０９（アストラゼネカ社）、[(1R)-3-メチル-1-({(2S)-3-フェニル-2-[(ピラジン-2-イルカルボニル)アミノ] プロパノイル}アミノ)ブチル] ボロン酸（ボルテゾミブ）、ＡＭＧ−７１４、（抗ＩＬ１５ヒトモノクローナル抗体、アムジェン社）、ＡＢＴ−８７４（抗ＩＬ−１２モノクローナル抗体、Abbott Labs）、ＭＲＡ（トシリズマブ、抗ＩＬ−６受容体モノクローナル抗体、中外製薬）、ＣＡＴ−３５４（ヒト抗インターロイキン−１３モノクローナル抗体、Cambridge Antibody Technology, MedImmune）、アスピリン、サリチル酸、ゲンチシン酸、サリチル酸コリンマグネシウム（choline magnesium salicylate）、サリチル酸コリン、サリチル酸コリンマグネシウム、サリチル酸コリン、サリチル酸マグネシウム、サリチル酸ナトリウム、ジフルニサル、カプロフェン、フェノプロフェン、フェノプロフェンカルシウム、フルロビプロフェン（flurobiprofen）、イブプロフェン、ケトプロフェン、ナブトン（nabutone）、ケトロラク（ketolorac）、ケトロラクトロメタミン、ナプロキセン、オキサプロジン、ジクロフェナク、エトドラク、インドメタシン、スリンダク、トルメチン、メクロフェナム酸、メクロフェナム酸ナトリウム、メフェナム酸、ピロキシカム、メロキシカム、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、パレコキシブ、エトリコキシブ、ルミラコキシブ、ＣＳ−５０２（三共）、ＪＴＥ−５２２（日本たばこ産業）、Ｌ−７４５，３３７(Almirall社)、ＮＳ３９８（シグマ社）、ベタメタゾン（セレストン）、プレドニゾン(Deltasone)、アルクロメタゾン、アルドステロン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デオキシコルチコステロン、デソニド、デスオキシメタゾン、デスオキシコルトン、デキサメタゾン、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルドロコルチゾン、フルドロキシコルチド、フルメタゾン、フルニソリド、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルトロン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、フルチカゾン、ホルモコータル、ホルモテロール、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンアセポン酸エステル、ヒドロコルチゾンブテプレート、ヒドロコルチゾン酪酸エステル、ロテプレドノール、メドリゾン、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、フロ酸モメタゾン、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、ウロベタゾール；シスプラチン；カルボプラチン；オキサリプラチン；メクロレタミン；シクロホスファミド；クロラムブシル；ビンクリスチン；ビンブラスチン；ビノレルビン；ビンデシン；アザチオプリン；メルカプトプリン；フルダラビン；ペントスタチン；クラドリビン；５−フルオロウラシル（５ＦＵ）；フロクスウリジン（ＦＵＤＲ）；シトシンアラビノシド；メトトレキサート；トリメトプリム；ピリメタミン；ペメトレキセド；パクリタキセル；ドセタキセル；エトポシド；テニポシド；イリノテカン；トポテカン；アムサクリン；エトポシド；エトポシドリン酸塩；テニポシド；ダクチノマイシン；ドキソルビシン；ダウノルビシン；バルルビシン（valrubicine）；イダルビシン；エピルビシン；ブレオマイシン；プリカマイシン；マイトマイシン；トラスツズマブ；セツキシマブ；リツキシマブ；ベバシズマブ；フィナステリド；ゴセレリン；アミノグルテチミド；アナストロゾール；レトロゾール；ボロゾール；エキセメスタン；4-アンドロステン-3,6,17-トリオン("6-オキソ"；1,4,6-アンドロスタトリエン-3,17-ジオン(ATD)；ホルメスタン；テストラクトン；ファドロゾール；ミラツズマブ；ドキソルビシンと共役したミラツズマブ；又は、これらの組み合わせである。
【０１５０】
遺伝子治療
特定の実施形態において、本明細書で開示される炎症性疾患を調節するための組成物は、（ａ）本明細書で開示される抗体と、（ｂ）遺伝子治療との併用を備える。特定の実施形態において、本明細書で開示される炎症性疾患を調節するための方法は、（ａ）本明細書で開示される抗体と、（ｂ）遺伝子治療との併用を同時に実施する工程を備える。
【０１５１】
幾つかの実施形態において、遺伝子治療は、それを必要としている個体の血液中の脂質及び／又はリポタンパク質（例えば、ＨＤＬ）の濃度を調節する工程を備える。幾つかの実施形態において、血液中の脂質及び／又はリポタンパク質（例えば、ＨＤＬ）の濃度を調節する工程は、それを必要としている個体にＤＮＡをトランスフェクトする工程を備える。幾つかの実施形態において、ＤＮＡは、アポＡＩ遺伝子、ＬＣＡＴ遺伝子、ＬＤＬ遺伝子、Ｉｌ−４遺伝子、ＩＬ−１０遺伝子、ＩＬ−Ｉｒａ遺伝子、ガレクチン−３遺伝子、又は、これらの組み合わせをコードする。幾つかの実施形態において、ＤＮＡは、幹細胞にトランスフェクトされる。
【０１５２】
幾つかの実施形態において、ＤＮＡは、超音波を用いて肝細胞にトランスフェクトされる。超音波を用いたアポＡＩＤＮＡのトランスフェクトに関連する技術を開示するために、米国特許第７，２１１，２４８号を参照されたい。この文献は、開示目的のために参照することによって本発明に組み込まれるものとする。
【０１５３】
幾つかの実施形態において、個体は、ヒト遺伝子（「遺伝子ベクター」）を運ぶように操作されたベクターを投与される。ＬＤＬ遺伝子を形成するための技術を開示するために、米国特許第６，７８４，１６２号を参照されたい。この文献は、開示目的のために参照することによって本明細書に組み込まれるものとする。幾つかの実施形態において、遺伝子ベクターは、レトロウィルスである。幾つかの実施形態において、遺伝子ベクターは、レトロウィルスではない（例えば、アデノウィルス；レンチウィルス；又は、METAFECTENE、SUPERFECT（登録商標）、EFFECTENE（登録商標）、又は、MIRUS TRANSITなどの重合体送達システム（polymeric delivery system）である）。特定の例において、レトロウィルス、アデノウィルス、又は、レンチウィルスは、その能力が失われるように突然変異を有している。
【０１５４】
幾つかの実施形態において、ベクターは、インビボで（すなわち、ベクターが直接的に個体に、例えば、肝細胞に注入される）、エクスビボで（すなわち、個体の細胞がインビトロで成長し、遺伝子ベクターで形質導入され、担体に埋め込まれ、その後、個体に移植された）、又は、それらの組み合わせで、投与される。
【０１５５】
特定の例において、遺伝子ベクターの投与後、遺伝子ベクターは、投与部位（例えば、肝臓）の細胞に感染する。特定の例において、遺伝子配列は、個体のゲノムに組み込まれる（例えば、遺伝子ベクターがレトロウィルスの場合）。特定の例において、 この治療は、定期的に再実施される（例えば、遺伝子ベクターがレトロウィルスの場合）。幾つかの実施形態において、この治療は、毎年再実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、半年ごとに再実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約６０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約５０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約４５ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約４０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約３５ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約３０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再実施される。
【０１５６】
ＲＮＡｉ治療
特定の実施形態において、本明細書で開示される炎症性疾患を調節するための組成物は、 （ａ）本明細書で開示される抗体と、（ｂ）ＭＩＦ媒介性疾患（「標的遺伝子」）の発症及び／又は進行に関与する遺伝子の発現を阻止させるよう設計されたＲＮＡｉ分子との組み合わせを備える。特定の実施形態において、本明細書で開示される炎症性疾患を調節するための方法は、（ａ）本明細書で開示される抗体と、（ｂ）ＭＩＦ媒介性疾患（「標的遺伝子」）の発症及び／又は進行に関与する遺伝子の発現を阻止させるよう設計されたＲＮＡｉ分子とを併用して投与する工程を備える。幾つかの実施形態において、標的遺伝子は、アポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）、熱ショックタンパク質１１０（Ｈｓｐ １１０）、プロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン９（Subtilisin Kexin 9）（Ｐｃｓｋ９）、ＣｙＤ１、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、心房性ナトリウム利尿ペプチド受容体Ａ（ＮＰＲＡ）、ＧＡＴＡ−３、Ｓｙｋ、ＶＥＧＦ、ＭＩＰ−２、ＦａｓＬ、ＤＤＲ−１、Ｃ５ａＲ、ＡＰ−１、又は、これらの組み合わせである。
【０１５７】
幾つかの実施形態において、標的遺伝子は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）によって、発現を抑制される。幾つかの実施形態において、（ＲＮＡｉ）治療は、ｓｉＲＮＡ分子の使用を備える。幾つかの実施形態において、発現が抑制される（例えば、アポＢ、Ｈｓｐ １１０、及び、Ｐｃｓｋ９）遺伝子のｍＲＮＡ配列に相補的な配列を有する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子は、（例えば、ＰＣＲによって）発生する。幾つかの実施形態において、発現を抑制される遺伝子のｍＲＮＡ配列に相補的な配列を有する２０−２５ｂｐ ｓｉＲＮＡ分子が発生する。幾つかの実施形態において、２０−２５ｂｐ ｓｉＲＮＡ分子は、各鎖の３’末端上で２−５ ｂｐのオーバーハング、及び、５’リン酸末端及び３’ヒドロキシ末端を有する。幾つかの実施形態において、２０−２５ｂｐ ｓｉＲＮＡ分子は、平滑末端を有する。ＲＮＡ配列を発生させる技術に関しては、文献「Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989)」、「Molecular Cloning: A Laboratory Manual, third edition (Sambrook and Russel, 2001)」（共に本明細書では「Sambrook」と呼ぶ）、「Current Protocols in Molecular Biology (F. M. Ausubel et al., eds., 1987, including supplements through 2001)」、「Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry John Wiley & Sons, Inc., New York, 2000 」を参照されたい。これらの文献は、開示目的のために参照することによって本明細書に組み込まれるものとする。
【０１５８】
幾つかの実施形態においてｓｉＲＮＡ分子は、標的遺伝子に対して「完全に相補的」（すなわち、１００％相補的）である。幾つかの実施形態において、アンチセンス分子は、標的遺伝子に対して「ほとんど相補的」（例えば、９９％、９８%、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８５％、８０％、７５％、又は、７０％相補的）である。幾つかの実施形態において、１ ｂｐのミスマッチ、２ ｂｐのミスマッチ、３ ｂｐのミスマッチ、４ ｂｐのミスマッチ、又は、５ ｂｐのミスマッチがある。
【０１５９】
特定の例において、ｄｓＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ分子の投与後、投与部位の細胞（例えば、肝臓及び／又は小腸の細胞）は、ｄｓＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ分子で形質転換する。形質転換を伴う特定の例において、ｄｓＲＮＡ分子は、約２０−２５ ｂｐの複数のフラグメントへ切断されることによって、ｓｉＲＮＡ分子を産生する。特定の例において、フラグメントは、各鎖の３’末端上で約２ｂｐのオーバーハングを有する。
【０１６０】
特定の例において、ｓｉＲＮＡ分子は、ＲＮＡ誘発性のサイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）によって、２つの鎖（ガイド鎖、及び、抗ガイド鎖）に分けられる。特定の例において、ガイド鎖は、ＲＩＳＣの触媒成分（すなわち、アルゴノート）に組み込まれる。特定の例において、ガイド鎖は、相補的ＲＢ１ ｍＲＮＡ配列と特異的に結合する。特定の例において、ＲＩＳＣは、発現が抑制される遺伝子のｍＲＮＡ配列を切断する。特定の例において、発現が抑制される遺伝子の発現は、下方制御される。
【０１６１】
幾つかの実施形態において、標的遺伝子のｍＲＮＡ配列に対して相補的な配列は、ベクターに組み込まれる。幾つかの実施形態において、配列は、２つのプロモーター間に配される。幾つかの実施形態において、この２つのプロモーターは、逆の方向に方向づけられる。幾つかの実施形態において、ベクターは、細胞と接触する。特定の例において、細胞は、ベクターで形質転換する。形質転換を伴う特定の例において、配列のセンス及びアンチセンス鎖が発生する。特定の例において、センス及びアンチセンス鎖は、ハイブリッド形成することによって、ｓｉＲＮＡ分子へ切断されるｄｓＲＮＡ分子を形成する。特定の例において、鎖がハイブリッド形成することによって、ｓｉＲＮＡ分子を形成する。幾つかの実施形態において、ベクターはプラスミドである（例えば、ｐＳＵＰＥＲ；ｐＳＵＰＥＲ.ｎｅｏ；ｐＳＵＰＥＲ.ｎｅｏ＋ｇｆｐ）。
【０１６２】
幾つかの実施形態において、ｓｉＲＮＡ分子は、インビボで（すなわち、ベクターは、個体に、例えば、肝細胞、又は、小腸、又は、血流に直接的に注入される）で投与される。
【０１６３】
幾つかの実施形態において、ｓｉＲＮＡ分子は、送達媒体（delivery vehicle）（例えば、リポソーム、生分解性高分子、シクロデキストリン、ＰＬＧＡ微粒子、ＰＬＣＡ微粒子、生分解性ナノ粒子、生体接着微粒子、又は、タンパク質性ベクター）、担体及び希釈物、及び、他の薬学的に許容可能な賦形剤で処方される。核酸分子をそれを必要としている個体に処方及び投与する方法に関しては、文献「Akhtar et al., 1992, Trends Cell Bio., 2, 139; Delivery Strategies for Antisense Oligonucleotide Therapeutics, ed. Akhtar, 1995」、「Maurer et al., 1999, Mol. Membr. Biol., 16, 129-140」、「Hofland and Huang, 1999, Handb. Exp. Pharmacol., 137, 165-192」、「Lee et al., 2000, ACS Symp. Ser., 752, 184-192」、米国特許第６，３９５，７１３号（Beigelman et al.）、国際公開公報９４／０２５９５号（Sullivan et al.）、文献「Gonzalez et al., 1999, Bioconjugate Chem., 10, 1068-1074」、国際公開公報０３／４７５１８号及び０３／４６１８５号（Wang et al.）、米国特許第６，４４７，７９６号、米国公開特許公報第２００２１３０４３０号、国際公開公報第００／５３７２２号（O'Hare and Normand）、及び、米国公開特許公報第２００３００７７８２９号、米国仮特許出願第６０／６７８，５３１号を参照されたい。これら文献はすべて、開示目的のために、参照することによって本明細書に組み込まれるものとする。
【０１６４】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載のｓｉＲＮＡ分子は、任意の適切な手法で肝臓に投与される（例えば、文献「Wen et al., 2004, World J Gastroenterol., 10, 244-9」、「Murao et al., 2002, Pharm Res., 19, 1808-14」、「Liu et al., 2003, Gene Ther., 10, 180-7」、「Hong et al., 2003, J Pharm Pharmacol., 54, 51-8」、「Herrmann et al., 2004, Arch Virol., 149, 1611-7」、及び、「Matsuno et al., 2003, Gene Ther., 10, 1559-66)」を参照）。
【０１６５】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載のｓｉＲＮＡ分子は、イオン泳動的に、例えば、特定の組織又はコンパートメント（例えば、肝臓又は小腸）に投与される。イオン泳動送達の非限定的な例は、例えば、国際公開公報０３／０４３６８９号、及び、国際公開公報０３／０３０９８９号に記載されており、これらは開示目的のために参照することによって本明細書に組み込まれるものとする。
【０１６６】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載のｓｉＲＮＡ分子は、全身的（すなわち、血流中のｓｉＲＮＡ分子のインビボ体内吸収又は蓄積と、その後の全身への分布）に投与される。全身投与のために検討される投与経路は、静脈内、皮下、門脈、腹腔内、及び、筋肉内を含むが、これらに限定されない。このような投与経路の各々は、本発明のｓｉＲＮＡ分子を、到達可能な病変組織（例えば、肝臓）にさらす。
【０１６７】
特定の例において、治療は、定期的に再度実施される必要がある。幾つかの実施形態において、この治療は毎年、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、半年ごとに再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、毎月、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、毎週、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約６０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約５０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約４５ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約４０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約３５ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約３０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。
【０１６８】
アポＢ及び／又はＨｓｐ１１０の発現を抑制することに関する技術の開示については、米国公開公報第２００７／０２９３４５１号を参照。これはこのような開示のために参照することにより本明細書に組み込まれる。Ｐｃｓｋ９の発現を抑制することに関する技術の開示については、米国公開公報第２００７／０１７３４７３号を参照。これはこのような開示のために参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０１６９】
アンチセンス治療
特定の実施形態において、本明細書中に開示されるのは、炎症性疾患を調節するための組成物であり、この組成物は（ａ）本明細書中に開示される抗体、及び、（ｂ）ＭＩＦ媒介性疾患（「標的配列」）の発症及び／又は進行に関与するＤＮＡ又はＲＮＡ配列の発現及び／又は活性を抑制するよう設計されたアンチセンス分子、の組合せを備える。特定の実施形態において、本明細書中に開示されるのは、炎症性疾患を調節するための方法であり、この方法は、（ａ）本明細書中に開示される抗体、及び、（ｂ）ＭＩＦ媒介性疾患（「標的配列」）の発症及び／又は進行に関与するＤＮＡ又はＲＮＡ配列の発現及び／又は活性を抑制するよう設計されたアンチセンス分子、を同時投与する工程を備える。幾つかの実施形態において、標的配列の発現及び／又は活性を抑制する工程は、標的配列に相補的なアンチセンス分子の使用を備える。幾つかの実施形態において、標的配列はマイクロＲＮＡ−１２２（ｍｉＲＮＡ−１２２又はｍＲＮＡ−１２２）、分泌型ホスホリパーゼＡ２（ｓＰＬＡ２）、細胞内接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）、ＧＡＴＡ−３、ＮＦ−κＢ、Ｓｙｋ、又はこれらの組合せである。特定の例において、ｍｉＲＮＡ−ｌ２２の発現及び／又は活性を抑制することは、血液中のコレステロール及び／又は脂質濃度の減少を（部分的に又は完全に）もたらす。
【０１７０】
幾つかの実施形態において、標的配列に相補的なアンチセンス分子が（例えば、ＰＣＲによって）産生される。幾つかの実施形態において、アンチセンス分子は約１５から約３０のヌクレオチドである。幾つかの実施形態において、アンチセンス分子は約１７から約２８のヌクレオチドである。幾つかの実施形態において、アンチセンス分子は約１９から約２６のヌクレオチドである。幾つかの実施形態において、アンチセンス分子は約約２１から約２４のヌクレオチドである。ＲＮＡ配列の産生の技術は、文献「Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989)」、及び、「Molecular Cloning: A Laboratory Manual, third edition (Sambrook and Russel, 2001)」共に本明細書中に「Sambrook」と称される); 文献「Current Protocols in Molecular Biology (F. M. Ausubel et al., eds., 1987), (2001までの補足を含む)」; 文献「Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry John Wiley & Sons, Inc., New York, 2000）」を参照。なおこれらはこのような開示のため参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０１７１】
幾つかの実施形態において、アンチセンス分子は一本鎖、二本鎖、環状、又はヘアピンである。幾つかの実施形態において、アンチセンス分子は構造要素を含有する（例えば、インターナル（internal）又はターミナル（terminal）バルジ若しくはループ）。
【０１７２】
幾つかの実施形態において、アンチセンス分子は、標的配列に対して「完全に相補的」（すなわち、１００％相補的）である。幾つかの実施形態において、アンチセンス分子は、標的ＲＮＡ配列に対して「ほとんど相補的」（例えば、９９％、９８%、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８５％、８０％、７５％、又は、７０％相補的）である。幾つかの実施形態において、１ ｂｐのミスマッチ、２ ｂｐのミスマッチ、３ ｂｐのミスマッチ、４ ｂｐのミスマッチ、又は、５ ｂｐのミスマッチがある。
【０１７３】
幾つかの実施形態において、アンチセンス分子は標的配列にハイブリッド形成する。本明細書中に用いられる「ハイブリッド形成する」とは、アンチセンス分子のヌクレオチドと、標的配列の対応するヌクレオチドとの対合を意味する。特定の例において、ハイブリダイゼーションは、対合を成すヌクレオチド間の１もしくはそれより多い水素結合（例えばワトソン−クリック、フーグスティーン又は逆（reversed）フーグスティーン水素結合）の形成を含む。
【０１７４】
特定の例において、ハイブリッド形成することは、ＲＮＡ配列の分解、切断及び／又は隔離を（部分的に又は完全に）もたらす。
【０１７５】
幾つかの実施形態において、ｓｉＲＮＡ分子は、送達媒体（delivery vehicle）（例えば、リポソーム、生分解性高分子、シクロデキストリン、ＰＬＧＡ微粒子、ＰＬＣＡ微粒子、生分解性ナノ粒子、生体接着微粒子、又は、タンパク質性ベクター）、担体及び希釈物、及び、他の薬学的に許容可能な賦形剤で処方される。核酸分子をそれを必要としている個体に処方及び投与する方法に関しては、文献「Akhtar et al., 1992, Trends Cell Bio., 2, 139; Delivery Strategies for Antisense Oligonucleotide Therapeutics, ed. Akhtar, 1995」、文献「Maurer et al., 1999, Mol. Membr. Biol., 16, 129-140」、文献「Hofland and Huang, 1999, Handb. Exp. Pharmacol., 137, 165-192」、文献「Lee et al., 2000, ACS Symp. Ser., 752, 184-192」、米国特許第６，３９５，７１３号（Beigelman et al.）、国際公開公報９４／０２５９５号（Sullivan et al.）、文献「Gonzalez et al., 1999, Bioconjugate Chem., 10, 1068-1074」、国際公開公報第ＷＯ０３／４７５１８号及び第ＷＯ０３／４６１８５号（Wang et al.）、米国特許第６，４４７，７９６号、米国公開特許公報第２００２１３０４３０号、国際公開公報第ＷＯ００／５３７２２号（O'Hare and Normand）、及び、米国公開特許公報第２００３００７７８２９号、米国仮特許出願第６０／６７８，５３１号を参照されたい。これらの文献はすべて、開示目的のために、参照することによって本明細書に組み込まれるものとする。
【０１７６】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載のｓｉＲＮＡ分子は、任意の適切な手法で肝臓に投与される（例えば、文献「Wen et al., 2004, World J Gastroenterol., 10, 244-9」、文献「Murao et al., 2002, Pharm Res., 19, 1808-14」、文献「Liu et al., 2003, Gene Ther., 10, 180-7」、文献「Hong et al., 2003, J Pharm Pharmacol., 54, 51-8」、文献「Herrmann et al., 2004, Arch Virol., 149, 1611-7」、及び、文献「Matsuno et al., 2003, Gene Ther., 10, 1559-66)」を参照）。
【０１７７】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載のｓｉＲＮＡ分子は、イオン泳動的に、例えば、特定の組織又はコンパートメント（例えば、肝臓又は小腸）に投与される。イオン泳動送達の非限定的な例は、例えば、国際公開公報ＷＯ第０３／０４３６８９号、及び、国際公開公報ＷＯ第０３／０３０９８９号に記載されており、これらは開示目的のために参照することによって本明細書に組み込まれるものとする。
【０１７８】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載のｓｉＲＮＡ分子は、全身的（すなわち、血流中のｓｉＲＮＡ分子のインビボ体内吸収又は蓄積と、その後の全身への分布）に投与される。全身投与のために検討される投与経路は、静脈内、皮下、門脈、腹腔内、及び、筋肉内を含むが、これらに限定されない。このような投与経路の各々は、本発明のｓｉＲＮＡ分子を、到達可能な病変組織（例えば、肝臓）にさらす。
【０１７９】
特定の例において、治療は、定期的に再度実施される必要がある。幾つかの実施形態において、この治療は毎年、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、半年ごとに再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、毎月、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、毎週、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約６０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約５０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約４５ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約４０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約３５ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約３０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。
【０１８０】
ｍｉＲＮＡ−１２２の発現を抑制することに関する技術の開示については、国際公開公報第０７／０２７７７５号Ａ２を参照。これはこのような開示のために参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０１８１】
装置を介した治療
幾つかの実施形態において、装置を介した戦略は、それを必要としている個体内のＨＤＬ分子から脂質を除去すること（脱脂（delipification））、それを必要としている個体の血液又は血漿からＬＤＬ分子を除去すること（脱脂（delipification））、あるいはそれらの組合せを備える。それを必要としている個体のＨＤＬ分子から脂質を除去する技術、及びそれを必要とする血液又は血漿からＬＤＬ分子を除去するための技術の開示については、米国公開公報第２００８／０２３０４６５号を参照。なおこれはそれらの開示のために参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０１８２】
特定の例において、脱脂治療（delipification therapy）は定期的に再実施される必要が生じる。幾つかの実施形態において、脱脂治療（delipification therapy）は毎年再実施される。幾つかの実施形態において、脱脂治療（delipification therapy）は半年ごとに再実施される。幾つかの実施形態において、脱脂治療（delipification therapy）は毎月再実施される。幾つかの実施形態において、脱脂治療（delipification therapy）は週に二回再実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約６０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約５０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約４５ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約４０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約３５ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。幾つかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約３０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。
【０１８３】
医薬組成物
特定の実施形態において、本明細書に開示されるものは、本明細書中に開示される抗体の治療上効果的な量を備える、炎症及び／又はＭＩＦ媒介性疾患を調節するための医薬組成物である。
【０１８４】
本明細書中の医薬組成物は、活性薬剤を薬学的に用いられる製剤へと加工することを促進する賦形剤及び佐剤（auxiliaries）を含む、１以上の生理学的に許容可能な担体を用いて処方される。適切な処方は、選択される投与経路に左右される。医薬組成物の概要は、例えば文献「Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995)」; 文献「Hoover, John E., Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975」; 文献「Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980」;及び文献「Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins, 1999)」に見出される。
【０１８５】
特定の実施形態において、心血管系の疾患を調節するための医薬組成物はさらに、薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤、又は担体を備える。幾つかの実施形態において、医薬組成物は、保存剤、安定化剤、湿潤剤又は乳化剤、溶解促進剤（solution promoters）、浸透圧を制御するための塩、及び／又は緩衝剤といった、他の薬用あるいは医薬用薬剤、担体、アジュバントを含む。加えて、医薬組成物はまた、他の治療上有用な物質をも含有する。
【０１８６】
本明細書中に記載の医薬組成物は、複数の投与経路により個体に任意に投与される。上記投与経路は、経口、非経口（例えば、静脈内、皮下、筋肉内）、鼻腔内、口腔、局所、直腸、又は経皮投与経路を含むが、これらに限定されない。本明細書中に記載の医薬組成物は、水性液体分散剤、自己乳化分散剤、固溶体、リポソーム分散剤、エアロゾル、固形の剤型、粉末、即放性製剤（immediate release formulations）、放出制御製剤、急速溶解製剤（fast melt formulations）、錠剤、カプセル剤、丸剤、遅延放出製剤、持続放出製剤（extended release formulations）、パルス放出型製剤（pulsatile release formulations）、多粒子製剤（multiparticulate formulations）、及び即放性製剤及び放出制御製剤の混合された製剤を含むが、これらに限定されない。
【０１８７】
本明細書中に記載の医薬組成物は、処置される個体により経口摂取されるための、水性経口分散剤、液体、ゲル、シロップ、エリキシル剤、スラリー、懸濁液などと、及び固形の経口剤形、エアロゾル、放出制御製剤、急速溶解製剤、発泡製剤、凍結乾燥製剤、錠剤、粉末、丸剤、糖衣錠（dragees）、カプセル剤、放出調節製剤（modified release formulations）、遅延放出製剤、持続放出製剤、パルス放出型製剤、多粒子製剤、及び即放性製剤及び放出制御製剤の混合された製剤を含むがこれらに限定されない任意の適した剤形へと処方される。
【０１８８】
幾つかの実施形態において、本明細書中に記載の医薬組成物は、多粒子製剤として処方される。幾つかの実施形態において、本明細書中に記載の医薬組成物は、粒子の第一ポピュレーション及び、粒子の第二ポピュレーションを備える。幾つかの実施形態において、第一ポピュレーションは活性薬剤を備える。幾つかの実施形態において、第二ポピュレーションは活性薬剤を備える。幾つかの実施形態において、第一ポピュレーションにおける活性薬剤の投与量は第二ポピュレーションにおける活性薬剤の投与量に等しい。幾つかの実施形態において、第一ポピュレーションにおける活性薬剤の投与量は第二ポピュレーションにおける活性薬剤の投与量に等しくない（例えば、それより多い又は少ない）。
【０１８９】
幾つかの実施形態において、第一ポピュレーションにおける活性薬剤は第二ポピュレーションにおける活性薬剤より前に放出される。幾つかの実施形態において、粒子の第二ポピュレーションは放出調節の（例えば、遅延放出性の、制御放出性の、あるいは持続放出性の）コーティングを備える。幾つかの実施形態において、粒子の第二ポピュレーションは放出調節の（例えば、遅延放出性の、制御放出性の、あるいは持続放出性の）マトリックスを備える。
【０１９０】
本明細書中に記載の医薬組成物とともに用いられるための被覆材は、ポリマー被覆剤（例えば、酢酸フタル酸セルロース、セルロースアセテートトリマレテート（cellulose acetate trimaletate）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ポリビニルアセテートフタレート）；アンモニオメタクリレートコポリマー（例えばＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＳ及びＲＬ）；ポリアクリル酸及びポリアクリレート及びメタクリレートコポリマー（例えば、Ｅｕｄｒａｇｉｔｅ Ｓ及びＬ、ポリビニルアセタルジエチルアミノアセテート（polyvinyl acetaldiethylamino acetate）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、シェラック）；ハイドロゲル及びゲル形成物質（例えば、カルボキシビニルポリマー、アルギン酸ナトリウム、カルメロースナトリウム（sodium carmellose）、カルメロースカルシウム（calcium carmellose）、カルボキシメチル澱粉ナトリウム、ポリビニルアルコール、ヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロース、ゼラチン、澱粉、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、架橋澱粉、結晶セルロース、キチン、アミノアクリル−メタクリレートコポリマー、プルラン、コラーゲン、カゼイン、寒天、アラビアガム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、（膨潤性親水性ポリマー）ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）（ｍ．ｗｔ．〜５ｋ−５，０００ｋ）、ポリビニルピロリドン（ｍ．ｗｔ．〜１０ｋ−３６０ｋ）、陰イオン性及び陽イオン性ヒドロゲル、低アセテート残渣を有するポリビニルアルコール、寒天及びカルボキシメチルセルロースの膨潤性混合物、無水マレイン酸  とスチレン、エチレン、プロピレン又はイソブチレンとのコポリマー、ペクチン（ｍ．ｗｔ．〜３０ｋ−３００ｋ）；寒天、アカシア、カラヤ、トラガカント、アルギン及びグアーなどといった多糖類、ポリアクリルアミド、Ｐｏｌｙｏｘ（登録商標）ポリエチレンオキシド（ｍ．ｗｔ．〜１００ｋ−５，０００ｋ）、ＡｑｕａＫｅｅｐ（登録商標）アクリレート重合体、ポリグルカン（polyglucan）、架橋されたポリビニルアルコール及びポリＮ−ビニル−２−ピロリドンのジエステル、スターチナトリウム（sodium starch）；親水性ポリマー（例えば、多糖類、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム又はカルボキシメチルセルロースカルシウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ニトロセルロース、カルボキシメチルセルロース、セルロースエーテル、ポリエチレンオキシド、メチルエチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、酢酸セルロース、酪酸セルロース、プロピオン酸セルロース、ゼラチン、コラーゲン、澱粉、マルトデキストリン、プルラン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリ酢酸ビニル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリアクリルアミド、ポリアクリル酸、メタクリル酸のコポリマー又はメタクリル酸、他のアクリル酸誘導体、ソルビタンエステル、天然ゴム、レシチン、ペクチン、アルギン酸塩、アルギン酸アンモニア、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カルシウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸プロピレングリコール、寒天、アラビアガム、カラヤガム、ローカストビーンガム、トラガカントガム、カラギーンガム（carrageens gum）、グアーガム、キサンタンガム、スクレログルカンガム（scleroglucan gum））；又はそれらの組合せを含むがこれらに限定されない。幾つかの実施形態において、コーティングは、可塑剤、潤滑剤、溶媒、又はそれらの組合せを備える。適切な可塑剤は、アセチル化モノグリセリド（acetylated monoglycerides）；ブチルフタリルブチルグリコラート；酒石酸ジブチル；フタル酸ジエチル；フタル酸ジメチル；エチルフタリルエチルグリコラート（ethyl phthalyl ethyl glycolate）；グリセリン；プロピレングリコール；トリアセチン；クエン酸塩；トリプロピオイン（tripropioin）；ジアセチン；フタル酸ジブチル；アセチルモノグリセリド；ポリエチレングリコール；ヒマシ油；クエン酸トリエチル；多価アルコール、グリセロール、酢酸エステル、グリセロールトリアセテート、クエン酸アセチルトリエチル、フタル酸ジベンジル、フタル酸ジヘキシル、フタル酸ブチルオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ブチルオクチル、アゼライン酸ジオクチル、エポキシ化タレート（epoxidised tallate）、トリメリット酸トリイソクチル（triisoctyl trimellitate），フタル酸ジエチルヘキシル、フタル酸ジ−ｎ−オクチル、フタル酸ジ−ｉ−オクチル、フタル酸ジ−ｉ−デシル、フタル酸ジ−ｎ−ウンデシル、フタル酸ジ−ｎ−トリデシル、トリメリット酸トリ−２−エチルヘキシル、アジピン酸ジ−２−エチルヘキシル、セバシン酸ジ−２−エチルヘキシル、アゼライン酸ジ−２−エチルヘキシル、セバシン酸ジブチルを含むがこれらに限定されない。
【０１９１】
幾つかの実施形態において、粒子の第二ポピュレーションは放出調節マトリックス材料を備える。本明細書中に記載の医薬組成物とともに使用される材料は微結晶性セルロース（microcrytalline cellulose）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシアルキルセルロース（hydoxyalkylcelluloses）（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びヒドロキシプロピルセルロース）、ポリエチレンオキシド、アルキルセルロース（例えば、メチルセルロース及びエチルセルロース）、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、酢酸セルロース（cellulose acteate）、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース（cellulose acteate phthalate）、酢酸トリメリット酸セルロース（cellulose acteate trimellitate）、ポリビニルアセテートフタレート、ポリアルキルメタクリレート、ポリ酢酸ビニル、又はそれらの混合物を含むがこれらに限定されない。
【０１９２】
幾つかの実施形態において、粒子の第一ポピュレーションは心血管障害薬剤を備える。幾つかの実施形態において、粒子の第二ポピュレーションは、（１）ＭＩＦの修飾剤、（２）ＲＡＮＴＥＳと血小板第４因子間の相互作用の修飾剤、又は（３）それらの組合せを備える。幾つかの実施形態において、粒子の第一ポピュレーションは（１）ＭＩＦの修飾剤、（２）ＲＡＮＴＥＳと血小板第４因子間の相互作用の修飾剤、又は（３）それらの組合せを備える。幾つかの実施形態において、粒子の第二ポピュレーションは心血管障害薬剤を備える。
【０１９３】
糖衣錠コアは適切なコーティングとともに提供される。この目的のため、濃縮糖溶液が一般的に用いられ、濃縮糖溶液は任意にアラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル（carbopol gel）、ポリエチレングリコール、及び／又は二酸化チタン、ラッカー溶液（lacquer solutions）、及び適切な有機溶媒又は溶媒混合液を含む。識別のため、あるいは活性薬剤の用量の異なる組合せを特徴づけるため、塗料又は顔料が錠剤又は糖衣錠コーティングに任意に加えられる。
【０１９４】
幾つかの実施形態において、本明細書中に開示される固形の剤形は、錠剤（懸濁錠剤、速溶性錠剤、噛み砕き錠剤（bite-disintegration tablet）、急速崩壊錠、発泡錠、又はカプレットを含む）、丸剤、粉末（無菌包装された粉末、分配可能な粉末、又は沸騰散を含む）カプセル剤（軟カプセル剤又は硬カプセル剤の両方、例えば、動物由来のゼラチン又は植物由来のＨＰＭＣから作られたカプセル剤、又は「スプリンクルカプセル（sprinkle capsules）」を含む）、固体分散剤、固溶体、生体内分解性剤形、放出制御製剤、パルス放出剤形、多粒子剤形、ペレット、顆粒剤、又はエアロゾルの形態である。他の実施形態において、医薬製剤は粉末の形態である。更に他の実施形態において、製剤処方は速溶性錠剤を含むがこれに限定されない錠剤の形態である。更に、本明細書中に開示される医薬製剤は単一のカプセル剤として、又は複数のカプセル剤形で任意に投与される。幾つかの実施形態において、医薬製剤は２、又は３、又は４つのカプセル剤あるいは錠剤にて投与される。
【０１９５】
もう一つの態様において、剤形はマイクロカプセル化した製剤を含む。幾つかの実施形態において、１以上の他の相溶性のある（compatible）材料がマイクロカプセル化材料中に存在する。代表的な材料は、ｐＨ調製剤、浸食促進剤（erosion facilitators）、消泡剤、酸化防止剤、香味料、及び、結合剤などの担体材料、懸濁化剤、崩壊剤、充填剤、界面活性剤、可溶化剤、安定剤、潤滑剤、湿潤剤、及び希釈剤を含むがこれらに限定されない。
【０１９６】
ＭＩＦ受容体インヒビターを含む製剤の放出を遅延させるために有用な、代表的なマイクロカプセル化材料は、Ｋｌｕｃｅｌ（登録商標）又はＮｉｓｓｏＨＰＣといったヒドロキシプロピルセルロースエーテル（ＨＰＣ）と、低置換ヒドロキシプロピルセルロースエーテル（Ｌ−ＨＰＣ）と、Ｓｅｐｐｉｆｉｌｍ−ＬＣ、Ｐｈａｒｍａｃｏａｔ（登録商標）、Ｍｅｔｏｌｏｓｅ  ＳＲ、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標）−Ｅ、Ｏｐａｄｒｙ  ＹＳ、ＰｒｉｍａＦｌｏ、Ｂｅｎｅｃｅｌ  ＭＰ８２４、及びＢｅｎｅｃｅｌ  ＭＰ８４３といったヒドロキシプロピルメチルセルロースエーテル（ＨＰＭＣ）と、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標）−Ａ、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレートＡｑｏａｔ（ＨＦ−ＬＳ，ＨＦ−ＬＧ，ＨＦ−ＭＳ）及びＭｅｔｏｌｏｓｅ（登録商標）といったメチルセルロースポリマーと、エチルセルロース（ＥＣ）及び、Ｅ４６１、Ｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標）、Ａｑｕａｌｏｎ（登録商標）−ＥＣ、Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ（登録商標）といった、それらの混合物と、Ｏｐａｄｒｙ  ＡＭＢといったポリビニルアルコール（ＰＶＡ）と、Ｎａｔｒｏｓｏｌ（登録商標）といったヒドロキシエチルセルロースと、カルボキシメチルセルロース及びＡｑｕａｌｏｎ（登録商標）−ＣＭＣといったカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）の塩と、Ｋｏｌｌｉｃｏａｔ  ＩＲ（登録商標）といったポリビニルアルコールとポリエチレングリコールの共重合体と、モノグリセリド（マイベロール（Ｍｙｖｅｒｏｌ））と、トリグリセリド（ＫＬＸ）と、ポリエチレングリコールと、加工された食品用澱粉と、アクリルポリマー及び、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＥＰＯ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ３０Ｄ−５５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＦＳ  ３０Ｄ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００−５５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＤ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｅ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１２．５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓ１２．５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＮＥ３０Ｄ、及びＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＮＥ  ４０Ｄといったアクリルポリマーとセルロースエーテルの混合物と、酢酸フタル酸セルロースと、ＨＰＭＣ及びステアリン酸の混合物といったセピフィルム（sepifilms）と、シクロデキストリンと、及びこれらの物質の混合物とを含むがこれらに限定されない。
【０１９７】
経口投与のための液体剤形は任意に、以下の群から選択される水性懸濁液である。それらは薬学的に許容可能な水性経口分散剤、エマルション、溶液、エリキシル剤、ゲル、及びシロップを含むがこれらに限定されない。例えば文献「Singh et al., Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, 2nd Ed., pp. 754-757 (2002)」を参照。ＭＩＦ受容体インヒビターに加えて、液体剤形は任意に以下のような添加物を含む。それらは、（ａ）崩壊剤；（ｂ）分散剤；（ｃ）湿潤剤；（ｄ）少なくとも１つの保存料、（ｅ）粘性増強剤、（ｆ）少なくとも１つの甘味剤、及び（ｇ）少なくとも１つの香味料である。幾つかの実施形態において、水性分散剤は更に結晶形成インヒビターを含む。
【０１９８】
幾つかの実施形態において、本明細書中に記載の医薬製剤は自己乳化型薬物送達システム（ＳＥＤＤＳ）である。エマルションは、他の通常であれば液滴形態中の一つの混ざらない相からなる分散剤である。通常、エマルションは活発な機械的分散により作られる。エマルション又はマイクロエマルションとは対照的に、ＳＥＤＤＳは、外部の機械的分散又は撹拌なしに過剰な水に加えられると、自然にエマルションを形成する。ＳＥＤＤＳの利点は、溶液中に液滴を分布させるために、ただそっと混ぜるだけで済むということである。加えて、水又は水相は投与の直前に任意に加えられ、それにより、不安定なあるいは疎水性の活性成分の安定性を確保する。このように、ＳＥＤＤＳは疎水性活性成分の経口及び非経口送達に効果的な送達システムを提供する。幾つかの実施形態において、ＳＥＤＤＳは、疎水性活性成分のバイオアベイラビリティの向上を提供する。自己乳化型剤形の製造方法は、例えば米国特許第５，８５８，４０１号、第６，６６７，０４８号及び第６，９６０，５６３号を含むがこれらに限定されない。
【０１９９】
適切な鼻腔内投与製剤は、例えば米国特許第４，４７６，１１６号、第５，１１６，８１７号、及び第６，３９１，４５２号に記載されるものを含む。経鼻剤形は一般的に、活性成分に加えて多量の水を含有する。ｐＨ調整剤、乳化剤あるいは分散剤、保存料、界面活性剤、ゲル化剤、又は緩衝及び他の安定及び可溶化剤といった少量の他の成分が任意に存在する。
【０２００】
吸入による投与のため、本明細書中に開示される医薬組成物は、任意にエアロゾル、ミスト又は粉末の形態である。本明細書中に記載の医薬組成物は、適切な噴霧剤を用いて、加圧パック又は噴霧器から提供されるエアロゾルスプレーの形態で好都合に送達される。適切な噴霧剤は例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の適切なガスである。加圧エアロゾルについては、投与量単位は計量された量を送達するためにバルブを提供することにより確定される。ほんの一例ではあるが、吸入器（inhaler）又は注入器（insufflator）に使用されるゼラチンなどのカプセル剤及びカートリッジは、粉末混合物及び、ラクトース又は澱粉などの適切な粉末基剤（powder base）を含有して処方される。
【０２０１】
口腔製剤は、米国特許第４，２２９，４４７号、第４，５９６，７９５号、第４，７５５，３８６号、及び第５，７３９，１３６号を含むがこれらに限定されない。加えて本明細書中に記載の口腔剤形は任意に更に、剤形を頬粘膜に付着させる働きを同様に行う、生体内分解性の（加水分解性の）ポリマー担体を含む。口腔剤形は、所定の期間にわたって次第に腐食するよう作られる。口腔薬物送達は、経口薬物投与に見られる不都合例えば、遅い吸収、消化管に存在する体液による活性薬剤の劣化、及び／又は肝臓における初回通過の不活性化を回避する。生体内分解性の（加水分解性の）ポリマー担体は一般的に、頬粘膜の濡れた表面に付着する親水性の（水溶性の及び水膨張性の）ポリマーを備える。本明細書中に有用なポリマー担体の例は、アクリル酸ポリマーなど、例えば、「カルボマー」（Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）、これはＢ．Ｆ．グッドリッチ（Ｇｏｏｄｒｉｃｈ）から得られ、１つの同様のポリマーである）として知られるものを含む。本明細書中に記載の口腔剤形に同様に組み込まれる他の成分は、錠剤分解物質、希釈剤、結合剤、潤滑剤、香料、着色剤、保存料などを含むがこれらに限定されない。口腔又は舌下投与のために組成物は任意に、従来のように処方された錠剤、トローチ剤、又はゲルの形態を取る。
【０２０２】
本明細書に開示される医薬組成物の経皮製剤は例えば以下に記載されるものにより投与される。それらは、米国特許第３，５９８，１２２号、第３，５９８，１２３号、第３，７１０，７９５号、第３，７３１，６８３号、第３，７４２，９５１号、第３，８１４，０９７号、第３，９２１，６３６号、第３，９７２，９９５号、第３，９９３，０７２号、第３，９９３，０７３号、第３，９９６，９３４号、第４，０３１，８９４号、第４，０６０，０８４号、第４，０６９，３０７号、第４，０７７，４０７号、第４，２０１，２１１号、第４，２３０，１０５号、第４，２９２，２９９号、第４，２９２，３０３号、第５，３３６，１６８号、第５，６６５，３７８号、第５，８３７，２８０号、第５，８６９，０９０号、第６，９２３，９８３号、第６，９２９，８０１号、及び第６，９４６，１４４号である。
【０２０３】
本明細書中に記載の経皮製剤は少なくとも３つの成分、すなわち、（１）活性薬剤、（２）浸透促進剤、及び（３）水性アジュバントを含む。加えて、経皮製剤はゲル化剤、クリーム及び軟膏基剤などの成分を含むがこれらに限定されない。幾つかの実施形態において、経皮製剤は、吸収を増進し、皮膚からの経皮製剤の除去を防ぐため、織った（woven）又は不織の（non-woven）裏当て材を更に含む。他の実施形態において、本明細書中に記載の経皮製剤は皮膚への拡散を促進するため、飽和又は過飽和状態を維持する。
【０２０４】
幾つかの実施形態において、経皮投与に適切な製剤は経皮送達装置及び経皮送達パッチを使用し、同製剤はポリマー又は粘着剤中に溶解及び／又は分散された、親油性エマルション、又は緩衝水溶液である。このようなパッチは、医薬品の連続的、拍動性の、又は応需型の送達のために任意に構成される。更には、経皮送達はイオン導入パッチ等の手段によって任意に成し遂げられる。更に、経皮パッチは制御された送達を提供する。律速膜を使用することにより、又はポリマーマトリックス又はゲル内に活性薬剤を閉じ込めることにより、吸収速度は任意に落とされる。反対に、吸収を増大させるために、吸収促進薬が用いられる。吸収促進薬又は担体は、皮膚の通過を助けるために、吸収性の薬学的に許容可能な溶媒を含む。例えば、経皮装置は裏当て部分、任意に担体を備える活性薬剤を含有するリザーバ、任意に、長時間にわたって制御された所定の速度で宿主の皮膚へ活性薬剤を送達する速度制御バリア、及び装置を皮膚に固定する手段を備える包帯の形態である。
【０２０５】
筋肉内、皮下、あるいは静脈内注射のために適切な製剤は、生理学的に許容可能な無菌の水性又は非水性溶液、分散剤、懸濁液又はエマルション、及び無菌の注入可能な溶液又は分散剤へと再構成されるための無菌散剤を含む。適切な水性又は非水性担体、希釈剤、溶媒、又はビヒクルの例は、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセリン、クレモフォー（cremophor）など）、それらの適切な混合物、植物油（オリーブ油など）及びオレイン酸エチルなどの注入可能な有機エステルを含む。適切な流動性は、例えばレシチンなどのコーティングの使用により、分散剤の場合は要求される粒径を維持することにより、そして界面活性剤の使用により維持される。皮下注射のために適切な製剤はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤及び分配剤（dispensing agents）といった任意の添加物を含有する。
【０２０６】
静脈注射には、活性薬剤は水溶液中に、望ましくはハンクス液、リンガー液、又は生理食塩緩衝液といった生理学的に相溶性の緩衝液中に任意に処方される。経粘膜投与については、透過されるバリアに適切な浸透剤が製剤に用いられる。他の非経口注射については、適切な製剤は、望ましくは生理学的に相溶性の緩衝液又は賦形剤を伴う水性又は非水性溶液を含む。
【０２０７】
非経口注射は任意にボーラス注入又は持続注入を含む。注射のための製剤は任意に、単位剤形例えば、アンプルで、又は多用量容器で保存料とともに提示される。幾つかの実施形態において、本明細書中に記載の医薬組成物は、油性又は水性ビヒクル中の無菌の懸濁液、溶液、又は乳剤のような非経口注射に適切な形態であり、懸濁剤、安定剤、及び／又は分散剤といった製剤化剤（formulatory agents）を含有する。非経口投与のための医薬製剤は、水溶性形状の活性薬剤の水溶液を含む。更に、適切な油性注射懸濁液として、懸濁液が任意に調製される。
【０２０８】
幾つかの実施形態において、本明細書中に開示される活性薬剤は局所に投与され、また様々な局所投与可能な組成物、例えば、溶液、懸濁液、ローション剤、ゲル、ペースト剤、薬用スティック、バルム剤、クリーム又は軟膏に調製される。このような医薬組成物は、可溶化剤、安定剤、張性増強剤（tonicity enhancing agents）、緩衝剤及び保存料を任意に含有する。
【０２０９】
本明細書中に開示される活性薬剤はまた、浣腸剤、直腸用ゲル、直腸用泡剤、直腸用エアロゾル、坐薬、ゼリー状の坐薬、又は停留浣腸といった直腸用組成物中に任意に調製され、この組成物は、ポリビニルピロリドン、ＰＥＧなどといった合成ポリマーだけでなく、カカオバター又は他のグリセリドといった、従来の座剤の基剤を含有する。組成物の坐剤形態においては、脂肪酸グリセリドの混合物（これに限定されない）といった低融点ワックスが任意にカカオバターと組み合わせて、最初に融解される。
【０２１０】
本明細書中に開示される活性薬剤は任意に、改善により少なくとも部分的に恩恵を受けるだろう炎症性疾患又は疾患の予防的及び／又は治療上の処置のための薬物の調製に用いられる。加えて、このような処置を必要とする個体において、本明細書中に記載の疾病又は疾患のいずれかを処置する方法は、本明細書中に開示される活性薬剤を含有する医薬組成物、又は薬学的に許容可能な塩、薬学的に許容可能なＮ−酸化物、薬学的に活性な代謝物、薬学的に許容可能なプロドラッグ、又は薬学的に許容可能なそれらの溶媒和物を、上記個体に治療上効果的な量で投与することを含む。
【０２１１】
個体の疾患が改善しない場合、医師の裁量に基づいて、本明細書中に開示される活性薬剤の投与は、個体の疾病又は疾患の症状を改善、又はそうでなければ制御又は制限するために、慢性的に、すなわち、個体の寿命の間中を含んで、長期間任意に投与される。
【０２１２】
個体の状態が改善しない場合、医師の裁量に基づいて、本明細書中に開示される活性薬剤の投与は任意に連続的に行われる。あるいは、投与される薬の投与量は一時的に減らされ、又は一時的に特定の期間（すなわち、「休薬期間」）停止される。休薬期間の長さは任意に２日から１年の間で変動し、ほんの一例であるが、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日１５日、２０日、２８日、３５日、５０日、７０日、１００日、１２０日、１５０日、１８０日、２００日、２５０日、２８０日、３００日、３２０日、３５０日、又は３６５日を含む。休薬期間の投与量減量は１０％から１００％までを含み、ほんの一例であるが、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％を含む。
【０２１３】
一度個体の疾患が改善されると、必要に応じて維持投与量が投与される。その後、投与量又は投与の頻度又は両方は、症状の機能として、改善した疾病、障害又は疾患が保持されるレベルまで減らされる。幾つかの実施形態において、任意の症状の再発が起こると、個体は長期間にわたって間欠的処置を要する。
【０２１４】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、正確な投薬量の１回の投与に適切な単位剤形である。単位剤形において、製剤は、本明細書中に開示される活性薬剤の適量を含有する単位投与量へ分けられる。幾つかの実施形態において、単位投薬量は製剤の分離量を含有するパッケージの形態である。非限定的な例は、パッケージ化された錠剤又はカプセル剤、及びバイアル又はアンプル中の粉末である。幾つかの実施形態において、水性懸濁液組成物は、単回投与用の再密閉不可能な容器内に詰められる。代替的に、組成物に保存料を含むことが典型的である場合、複数回投与用の再密閉可能な容器が用いられる。ほんの一例ではあるが、非経口注射用製剤は追加される保存料とともに、アンプルを含むがこれに限定されない単位剤形で、又は複数回投与用容器で提示される。
【０２１５】
本明細書中に開示される活性薬剤に適切な１日投薬量は、体重１キログラム当たり約０．０１から３ｍｇである。ヒトを含むがこれに限定されない大型哺乳類における示される１日投薬量は約０．５ｍｇから約１００ｍｇまでの範囲内であり、１日４回までを含むがこれに限定されない分割投与量で、又は持続放出型で、都合良く投与される。経口投与のための適切な単位剤形は約１から５０ｍｇまでの活性成分を含む。前述の範囲はただ示唆的なものにすぎない、というのは個体の処置レジメに関する変数の数が大きく、そしてこのような推奨値からの大幅な逸脱は珍しくないためである。このような投薬量は任意に多数の変数次第で変わる。変数は、以下に限定されないが、使用されるＭＩＦ受容体インヒビターの活性、処置される疾病又は障害、投与方法、個体の必要条件、処置される疾病又は疾患の重症度、及び医療従事者の判断である。
【０２１６】
このような治療レジメンの毒性及び治療効果は、細胞培養物又は実験動物において任意に決定され、このことにはＬＤ５０（個体数の５０％に致命的な投与量）及びＥＤ５０（個体数の５０％に治療上効果的な投与量）の決定を含むがこれに限定されない。毒性及び治療効果の間の投与量比は治療指数であり、ＬＤ５０とＥＤ５０の間の比として表わされる。高い治療指数を示す本明細書中に開示される活性薬剤は好ましい。細胞培養アッセイ及び動物実験から得られたデータはヒトに用いられるさまざまな投薬量を処方するのに任意に用いられる。本明細書中に開示されるこのような活性薬剤の投薬量は望ましくは、最低毒性を備えるＥＤ５０を含む血中濃度の範囲内にある。使用される剤形、及び利用される投与経路次第で、投薬量はこの範囲内において任意に変わる。
【０２１７】
実施例
以下の具体的な例は説明に役立つものとして理解されるものとし、本開示又は特許請求の範囲を制限するものではない。
【０２１８】
実施例１
細胞株及び試薬
ヒト大動脈（「Schober, A., et al. (2004) Circulation 109, 380-385」）及び臍静脈｛さいじょうみゃく｝（「Weber, K.S., et al. (1999) Eur. J. Immunol. 29, 700-712」）内皮細胞（プロモセル（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ））、ＭｏｎｏＭａｃ６細胞（「Weber, C., et al. (1993) Eur. J. Immunol. 23, 852-859」）及びチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）ＩＣＡＭ−１−トランスフェクタント（「Ostermann, G., et al. (2002) Nat. Immunol. 3, 151-158」）が記載されるように用いられた。ジャーカット細胞及びＲＡＷ２６４．７マクロファージが、ｐｃＤＮＡ３−ＣＸＣＲ２でトランスフェクトされた。ＨＬ−６０細胞がｐｃＤＮＡ３．１／Ｖ５−ＨｉｓＴＯＰＯ−ＴＡ−ＣＤ７４又はベクトル対照群（Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ  Ｋｉｔ  Ｖ，Ａｍａｘａ）でトランスフェクトされた。シミアンウィルス−４０で形質転換されたマウスの微小血管内皮細胞（ＳＶＥＣｓ）上でのアッセイのため、Ｌ１．２細胞がｐｃＤＮＡ３−ＣＸＣＲｓ又はｐｃＤＮＡ−ＣＣＲ５（ＵＭＲ  ｃＤＮＡ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ）でトランスフェクトされた。末梢血単核細胞が、軟膜から調製され、単球が接着又は免疫磁気分離法（ミルテニー（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ））によって調製され、プライマリーＴ細胞がフィトヘマグルチニン（phytohaemaglutinin）／インターロイキン−２（バイオソース（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ））刺激及び／又は免疫磁気選択（ＣＤ３／Ｍ−４５０に対する抗体ダイナビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ））により調製され、そして好中球がフィコール勾配遠心分離により調製された。ヒト胚腎臓−ＣＸＣＲ２トランスフェクタント（ＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２）は以前記載されている（「Ben-Baruch, A., et al. (1997) Cytokine 9, 37-45」）。
【０２１９】
組換えＭＩＦ（Recombinant ＭＩＦ）は記載（「Bernhagen, J., et al. (1993) Nature 365, 756-759」）されるように発現及び精製された。ケモカインはＰｅｐｒｏＴｅｃｈのものである。ヒトＶＣＡＭ−１．Ｆｃキメラ、ＣＸＣＲ１（４２７０５，５Ａ１２）、ＣＸＣＲ２（４８３１１）、ＣＸＣＲ４（４４７０８，ＦＡＢＳＰ２カクテル，Ｒ＆Ｄ）、ヒトＭＩＦ及びマウスＭＩＦ（ＮＩＨＩＩＩ．Ｄ．９）（「Lan, H.Y., et al. (1997) J. Exp. Med. 185, 1455-1465」）、ＣＤ７４（Ｍ−Ｂ７４１，ファーミンジェン（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ））、β２インテグリン（ＴＳ１／１８）、α４インテグリン（ＨＰ２／１）（「Weber, C., et al. (1996) J. Cell Biol. 134, 1063-1073」）及びＣＸＣＲ２（ＲＩＩ１１５）に対する遮断抗体、そしてαＬインテグリン（３２７Ｃ）に対する抗体（「Shamri, R., et al. (2005) Nat. Immunol. 6, 497-506」）が用いられた。ＰＴＸ及びＢ−オリゴマーはＭｅｒｃｋのものである。
【０２２０】
実施例に用いられる方法
接着アッセイ
カルセイン−ＡＭ（モレキュラープローブ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ））標識単球、Ｔ細胞及びＬ１．２トランスフェクタントの阻止は、平行に隔壁されたチャンバーにおいて流量で（１．５ダイン／ｃｍ２，５分間）、定量化された（「Schober, A., et al. (2004) Circulation 109, 380-385; Ostermann, G., et al. (2002) Nat. Immunol. 3, 151-158; Weber, C., et al. (1996) J. Cell Biol. 134, 1063-1073」）。  融合性内皮細胞、ＣＨＯ−ＩＣＡＭ−１細胞、ＶＣＡＭ−１．Ｆｃでコーティングされた血小板（plates）及び白血球が、ＭＩＦ、ケモカイン又は抗体を用いて事前処理された。ＭＩＦとともに（２時間）インキュベートされたＣＨＯ−ＩＣＡＭ−１細胞は、ＭＩＦ  Ｋａ５６５（「Leng, L., et al. (2003) J. Exp. Med. 197, 1467-1476」）に対する抗体、及びＦＩＴＣ接合（FITC-conjugated）抗体を用いて染色された。
【０２２１】
走化性アッセイ
トランスウェルチャンバー（コスター（Ｃｏｓｔａｒ））を用いて、蛍光顕微鏡により、又はカルセインＡＭ標識及びフルオロブロックフィルタ（FluoroBlok filters）（ファルコン（Ｆａｌｃｏｎ））を用いて、ＭＩＦ又はケモカインに対する主要な白血球遊走を定量化した。細胞はＰＴＸ／Ｂ−オリゴマー、Ｌｙ２９４００２、ＭＩＦ（脱感作用）、ＣＸＣＲ又はＣＤ７４に対する抗体、又はアイソタイプＩｇＧを用いて事前処理された。孔径及び間隔は５μｍと３時間（単球）、３μｍと１．５時間（Ｔ細胞）、及び３ｍｍと１時間（好中球）であった。
【０２２２】
Ｑ−ＰＣＲ及びＥＬＩＳＡ
ＲＮＡはオリゴ−ｄＴプライマーを用いて逆転写された。ＲＴＰＣＲが、ＳＹＢＲグリーン（キアゲン（Ｑｉａｇｅｎ））、特異的プライマー及びＭＪ Ｏｐｔｉｃｏｎ２  （Ｂｉｏｚｙｍ）とともに、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔキットを用いて実行された。ＣＸＣＬ８は、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ）により定量化された。
【０２２３】
αＬβ２インテグリン活性化アッセイ
ＭＩＦ又はＭｇ２＋／ＥＧＴＡ（正の対照群）に刺激された単球は、抗体３２７Ｃ及びマウスＩｇＧに対するＦＩＴＣ接合抗体と反応させた。フローサイトメトリーにより分析されたＬＦＡ−１活性化が、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の増大として、又は正の対照群（Shamri, R., et al. (2005) Nat. Immunol. 6, 497-506）に関連して報告される。
【０２２４】
カルシウム動員
好中球又はＬ１．２ＣＸＣＲ２トランスフェクタントがＦｌｕｏ−４ＡＭ（モレキュラープローブ）を用いて標識された。第一の又はその後の刺激（ＭＩＦ、ＣＸＣＬ８又はＣＸＣＬ７）を加えた後、ＭＦＩは細胞質のＣａ２＋濃度の指標としてＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｉａを用いて１２０秒間監視された。Ｌ１．２対照群がごくわずかなカルシウム流入を示しただけだった。
【０２２５】
受容体結合アッセイ
ヨウ素化されたＭＩＦは不活性（「Leng, L., et al. (2003) J. Exp. Med. 197, 1467-1476; Kleemann, R., et al. (2002) J. Interferon Cytokine Res. 22, 351-363」）であるため、競合的受容体結合（「Hayashi, S., et al. (1995) J. Immunol. 154, 814-824」）が、放射ヨウ素標識されたトレーサー（アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ））、すなわち、４ｎＭ（８０μＣｉ／ｍｌ）で最終濃度４０ｐＭに再構成された［Ｉ１２５］ＣＸＣＬ８、５ｎＭ（１００μＣｉ／ｍｌ）で最終濃度５０ｐＭに再構成された［Ｉ１２５］ＣＸＣＬ１２を用いて実行された。平衡結合アッセイにおけるＣＸＣＲ２結合用のＭＩＦとの［Ｉ１２５］ＣＸＣＬ８の競合、又はＣＸＣＲ４用のＭＩＦとの［Ｉ１２５］ＣＸＣＬ１２の競合のため、ＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２又はＣＸＣＲ４を有するジャーカット細胞に対するトレーサーを備える低温のＭＩＦ及び／又はＣＸＣＬが加えられた。分析は液体シンチレーション計数により実行された。ＥＣ５０及びＫｄ値を算出するため、一部位受容体リガンド結合モデルが想定され、チェン／プルソフ（Cheng/Prusoff）等式及びグラフパッドプリズム（GraphPad Prism）が用いられた。
【０２２６】
ビオチン−ＭＩＦ−ＣＸＣＲ複合体のプルダウンのため、ＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２トランスフェクタント又は対照群が、ビオチン標識ＭＩＦでインキュベートされ、（「Kleemann, R., et al. (2002) J. Interferon Cytokine Res. 22, 351-363」）免疫共沈降（ＣｏＩＰ）バッファで洗浄及び溶解された。複合体はストレプトアビジンでコーティングされた電磁ビーズ（Ｍ２８０，ダイナル（Ｄｙｎａｌ））により除去された可溶化液（cleared lysates）から分離され、ＣＸＣＲ２に対する抗体又はストレプトアビジン−ペルオキシターゼを用いて、ウェスタンブロット解析で分析された。フローサイトメトリーには、ＡＭＤ３４６５及び／又は２０倍（20-fold）過剰の非標識のＭＩＦで事前処理されたＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２トランスフェクタント又はジャーカット細胞がフルオレセイン標識されたＭＩＦでインキュベートされ、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒを用いて分析された。
【０２２７】
ＣＸＣＲ内在化アッセイ
ＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２又はジャーカット細胞がＣＸＣＬ８又はＣＸＣＬ１２でそれぞれに処理され、ＭＩＦで処理され、酸性のグリシン緩衝剤で洗浄され、ＣＸＣＲ２又はＣＸＣＲ４に対する抗体で染色され、そしてフローサイトメリーにより分析された。内在化は緩衝剤処理された細胞（１００％対照群）及び染色するアイソタイプ対照群（０％対照）の細胞表面発現に関して算出された。すなわち、幾何学的なＭＦＩ［実験用］−ＭＦＩ［０％対照群］／ＭＦＩ［１００％対照群］−ＭＦＩ［０％対照群］ｘ１００である。
【０２２８】
ＣＸＣＲ２及びＣＤ７４の共存
ＲＡＷ２６４．７−ＣＸＣＲ２トランスフェクタントがＣＸＣＲ２及びマウスＣＤ７４に対するネズミ抗体（Ｉｎ−１，ファーミンジェン）で、続いてＦＩＴＣ接合のネズミＩｇＧに対する抗体、及びＣｙ３接合のマウスＩｇＧに対する抗体で共染色され、そして共焦点レーザー走査顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ））により分析された。
【０２２９】
ＣＸＣＲ２及びＣＤ７４の免疫共沈降
ｐｃＤＮＡ３．１／Ｖ５−ＨｉｓＴＯＰＯ−ＴＡ−ＣＤ７４で一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２細胞が、非変性ＣｏＩＰバッファ中に溶解された。上清がＣＸＣＲ２抗体ＲＩＩ１１５又はアイソタイプ対照群とインキュベートされ、タンパク質Ｇ−セファロースとともに一晩予め遮断（preblock）された。タンパク質はＨｉｓ−タグ（サンタクルズ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ））に対する抗体を用いて、ウェスタンブロットにより分析された。同様に、ＣｏＩＰ及び免疫ブロットが、ヒス−タグ及びＣＸＣＲ２それぞれに対する抗体を用いて実行された。Ｌ１．２−ＣＸＣＲ２細胞がＣＸＣＲ２に対する抗体を用いて免疫沈降し、そして、マウスＣＤ７４に対する抗体を用いて免疫ブロットにさらされた。
【０２３０】
頸動脈のエクスビボの灌流及び生体顕微鏡検査
Ｍｉｆ−／−（「Fingerle-Rowson, G., et al. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100, 9354-9359」）から交雑されたＭｉｆ−／−Ｌｄｌｒ−／−マウス及びＭｉｆ＋／＋Ｌｄｌｒ−／−同腹子対照群、及びＬｄｌｒ−／−マウス（チャールズ・リバー（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ））、及びアポｅ−／−マウスが、高脂肪食（２１％脂肪；アルトロミン（Ａｌｔｒｏｍｉｎ））を６週間与えられた。あらゆる単一ノックアウト系統は、Ｃ５７ＢＬ／６のバックグラウンドにおいて１０回戻し交配された。Ｍｉｆ＋／＋及びＭｉｆ−／−マウスはＴＮＦ−α（腹腔内に（ｉ．ｐ．），４時間）で処理された。外植された動脈が、落射蛍光顕微鏡の試料台に移され、ＣＤ７４又はＣＸＣＲ２に対する抗体，アイソタイプ対照群ＩｇＧで処理された、又は未処理で放置されたカルセインＡＭ標識ＭｏｎｏＭａｃ６細胞を用いて、４μｌ／分で灌流された（「Huo, Y., et al. (2001) J. Clin. Invest. 108, 1307-1314」）。未処理の単球細胞はＭＩＦに対する抗体で３０分間遮断後、灌流された。生体顕微鏡検査のため、ローダミン−Ｇ（モレキュラープローブ）が静脈内に（ｉ．ｖ．）投与され、頸動脈が麻酔下のマウス中に暴露された。標識された白血球の阻止（＞３０  秒）は、落射蛍光顕微法（ツァイス  アキシオテック（Ｚｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｔｅｃｈ），  ２０ｘ  水浸）により分析された。全ての研究は地方局（行政区ケルン）により承認され、ドイツ動物愛護法Ａｚ：５０．２０３．２−ＡＣ ３６，１９／０５に従った。
【０２３１】
アテローム性動脈硬化症進行のマウスモデル
高脂肪食を１２週間与えられたアポｅ−／−マウスが、ＭＩＦ（ＮＩＨＩＩＩＤ、９）、ＣＸＣＬ１２（７９０１４）又はＣＸＣＬ１（１２４０１４、Ｒ＆Ｄ）（ｎ＝６-１０マウス）に対する抗体をさらに４週間注入された（１週間あたり３注射、それぞれ５０μｇ）。大動脈基部は、インサイチュー灌流により固定され、そしてアテローム性動脈硬化はオイルレッドＯを用いて横断面を染色することにより定量化された。関連するマクロファージ及びＴ細胞の内容物は、ＭＯＭＡ−２（ＭＣＡ５１９，セロテック（Ｓｅｒｏｔｅｃ））又はＣＤ３（ＰＣ３／１８８Ａ，ダコ（Ｄａｋｏ））に対する抗体、及びＦＩＴＣ接合抗体を用いて染色することにより決定される。３０週間固形飼料を食餌として与えられたＭｉｆ−／−Ｌｄｌｒ−／−及びＭｉｆ＋／＋Ｌｄｌｒ−／−マウスにおいて、大動脈基部内の多数の管腔の単球及び病変マクロファージが、記載される（「Verschuren, L., et al. (2005) Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 25, 161-167」）ように決定された。
【０２３２】
精巣挙筋微小循環モデル
ＣＸＣＲ２に対する抗体（１００μｇ  腹腔内）で処理されたマウスにおいて、ヒトＭＩＦ（１μｇ）が陰嚢内に注入され、そして精巣挙筋が露出された。４時間後、生体顕微鏡検査（ツァイス・アキシオプラン（Ｚｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｐｌａｎ）；２０ｘ）が、後毛細血管細静脈中で実行された（「Gregory, J.L., et al. (2004) Arthritis Rheum. 50, 3023-3034; Keane, M.P., et al. (2004) J. Immunol. 172, 2853-2860」）。接着は３０秒より長い間静止した白血球として、そして遊出はフィールド当たりの血管外白血球の数として測定された。
【０２３３】
骨髄移植
大腿及び脛骨が無菌で、ドナーＩｌ８ｒｂ−／−（ジャクソン・ラボラトリーズ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ））又はＢＡＬＢ／ｃマウスから除去された。細胞は、髄腔から流し出され、切除を伴う全身照射法（Zernecke, A., et al. (2005) Circ. Res. 96, 784-791）の２４時間後、Ｍｉｆ＋／＋又はＭｉｆ−／−マウスに細胞は静脈内に投与された。
【０２３４】
急性腹膜炎のモデル
Ｉｌ８ｒｂ＋／＋又はＩｌ８ｒｂ−／−骨髄を再配置されたマウスが、腹腔内にＭＩＦ  （２００ｎｇ）を注入された。４時間後、腹腔洗浄法が実行され、Ｇｒ-１＋ＣＤ１１５−Ｆ４／８０−好中球が関連する接合抗体を用いてフローサイトメトリーにより定量化された。
【０２３５】
統計分析
統計分析が、一方向分散分析（ＡＮＯＶＡ）及びニューマン−ケウルス（Newman-Keuls）ポストホックテスト（post-hoc test）又はウェルチの補正（Welch's correction）（グラフパッドプリズム）を用いるアンペアードスチューデントｔ−検定（unpaired Student's t-test）のいずれかを用いて実行された。
【０２３６】
実施例２：
表面結合のＭＩＦが、ＣＸＣＲ２を介して単球阻止を誘発した。
モノクローナル抗体及び百日咳毒素（ＰＴＸ）が、ＭＩＦ誘発性の単球阻止が、ＣＸＣＲ２のＧαｉ−共役活性に依存するかどうかを研究するために用いられた。組換えＭＩＦで２時間事前処理されていたヒト大動脈内皮細胞が、流動条件の下、主要なヒト単球の阻止を実質的に増大したが、これはＭＩＦに対する抗体に遮断される効果である（図１ａ）。特に、ＭＩＦ誘発性の、しかし自然発生ではない単球阻止が、ＣＸＣＲ２に対する抗体により、又はＰＴＸにより切断され、このことはＧαｉ共役のＣＸＣＲ２を暗に示した。ＣＸＣＲ２を介して単球阻止を誘発するＭＩＦの能力は、単球のＭｏｎｏ−Ｍａｃ６細胞を用いて確認され、この活動は、大動脈内皮細胞上のＭＩＦの固定化に関連付けられた（図１ｂ）。このデータは、ＭＩＦが内皮細胞表面上にあり、そして非同族ＣＸＣＲ２リガンドとして、ケモカインのような阻止機能を発揮したことを示した。標準的なＣＸＣＲ２アゴニスト（ＣＸＣＬ１／ＣＸＣＬ８）の遮断は、ＭＩＦのこれらの効果を妨げなかった（図１ａ）。
【０２３７】
β２インテグリンリガンド、ＩＣＡＭ−１（細胞間接着分子１）を発現させる、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）のトランスフェクタントが、ＭＩＦがインテグリン依存性の阻止を促進するメカニズムを分析するために用いられた。流動条件の下で定量化されたため、ＣＨＯトランスフェクタントをＭＩＦに２時間暴露することにより、ＭＩＦの表面提示をもたらし（図１ｂ）、またトランスフェクタントのＣＸＣＬ８への暴露のように、単球細胞の阻止を増大した（図１ｃ）。この効果はＰＴＸとβ２インテグリンに対する抗体とに完全に影響を受けやすく（図１ｃ）、ＭＩＦにより誘発されるβ２インテグリン媒介の阻止におけるＧαｉの役割を確認した。主要な単球及びＭｏｎｏＭａｃ６細胞は、ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２の両方を発現させる（「Weber, K.S., et al. (1999) Eur. J. Immunol. 29, 700-712」）。ＣＸＣＲ１の遮断が全く効果を有さなかった一方、ＣＸＣＲ２の遮断は実質的にしかし完全にではなく、ＭＩＦ誘発性の及びＣＸＣＬ８誘発性の単球細胞阻止を損なった。ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２の両方に対する抗体の追加は、ＭＩＦ又はＣＸＣＬ８の阻止機能を完全に抑制した（図１ｄ及び図８）。ＣＤ７４に対する抗体の使用は、ＭＩＦ誘発性の阻止においてＣＸＣＲ２とともにこのタンパク質に影響を及ぼした（図１ｄ）。自発阻止は影響されなかった（図８）。従って、ＣＤ７４により補助されたＣＸＣＲ２がＭＩＦ誘発性の阻止を媒介する。
【０２３８】
ＣＸＣＲ４を介したＭＩＦ誘発性のＴ細胞阻止
大動脈内皮細胞上に固定されたＭＩＦ又はＣＸＣＬ１２のいずれかが、主要なヒトエフェクターＴ細胞の阻止を引き起こした（図１ｅ）。ＭＩＦ誘発性の、しかし自然発生ではないＴ細胞阻止はＰＴＸに影響を受けやすく、ＣＸＣＲ４に対する抗体により抑制された（図１ｅ）。ＣＸＣＲ２を発現させる単球においてほど顕著ではないが（図１ｄ）、ＩＣＡＭ−１を発現させるＣＨＯトランスフェクタント上のＭＩＦ（又はＣＸＣＬ１２）の提示は、αＬβ２依存のジャーカットＴ細胞の阻止を引き起こした。これは、ＣＸＣＲ４により媒介される効果である（図１ｆ）。
【０２３９】
ジャーカットＴ細胞におけるＣＸＣＲ２の異所性発現は、ＭＩＦ誘発性の阻止を増大し（図１ｇ）、これは、ＣＸＣＲ２が白血球中のＭＩＦへの応答を伝えるという考えを実証するものである。ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２又はＣＸＣＲ３を発現させるＬ１．２プレ−Ｂリンパ腫トランスフェクタント、及び内在性のＣＸＣＲ４のみを発現させる細胞を用いる対照群が、ＣＸＣＲ４アンタゴニストＡＭＤ３４６５の存在下で用いられた。ＭＩＦは、正準リガンドＣＸＣＬ８及びＣＸＣＬ１２のものと同様の有効性を備える内皮細胞上で、ＣＸＣＲ２トランスフェクタント及びＣＸＣＲ４を有している対照群の阻止を引き起こし、その一方、ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ３トランスフェクタントは、ＣＸＣＬ８及びＣＸＣＬ１０にそれぞれ応答していたが、ＭＩＦにはそうでなかった（図１ｈ）。このデータにより、ＣＸＣＲ１又はＣＸＣＲ３ではなく、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４が、ＭＩＦ誘発性の阻止を支持することが立証された。
【０２４０】
実施例３
ＣＸＣＲ２／４活性化を介したＭＩＦ誘発性白血球の走化性
ケモカインは走化性の誘発因子として名祖的に（eponymously）定義されている（「Baggiolini, M., et al. (1994) Adv. Immunol. 55, 97-179; Weber, C., et al. (2004) Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24, 1997-2008」）。逆説的に、ＭＩＦは初めには、「ランダムな」遊走（Calandra, T., et al. (2003) Nat. Rev. Immunol. 3, 791-800）を妨げるものと思われていた。これは定方向の（directed）遊出の活動的な反発又は脱感作に起因し得るが、遊走を制御する、ＭＩＦにより喚起される特定メカニズムはまだ明確にされていない。ＭＩＦがＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＧαｉ媒介の機能を誘発したことを示す結果により、ＭＩＦがこれらの受容体を介して直接的に白血球走化性を引き起こすかどうかを確かめることが促された。
【０２４１】
トランスウェル・システム（transwell system）を用いて、ＭＩＦ及びＣＸＣＬ８のプロ遊走性の（promigratory）効果が、主要なヒト末梢血単核細胞由来の単球で比較された。ＣＣＬ２はまた、単球に対するプロトタイプのケモカインとして、単球に用いられた。ＣＸＣＬ８及びＣＣＬ２と同様に、ＭＩＦを下方チャンバーに加えることにより遊走が誘発され、遊走は、低いピークの遊走指数（図２ａ）を伴うにもかかわらず、２５から５０ｎｇ／ｍｌで最適値を取る、ケモカインに典型的な円錐型の用量反応曲線をたどった。熱処理又はＭＩＦに対する中和抗体が、ＭＩＦ誘発性の遊出を無効にした。対照的に、アイソタイプの一致した（isotype-matched）免疫グロブリン（ＩｇＧ）は効果を有さなかった（図２ｂ）。上方チャンバーに加えられると、ＭＩＦは下方チャンバーでＭＩＦ方向への遊走に対して用量依存的に脱感作したが（図２ｃ）、上方チャンバーにのみ存する時、遊走を引き起こさなかった。これはＭＩＦが化学運動性というより真の走化性を喚起することを示している。ホスホイノシチド−３−キナーゼを介したＧαｉ依存のシグナル伝達と一致して、ＭＩＦ誘発性の単球走化はＰＴＸに影響を受けやすく、Ｌｙ２９４００２により阻害された（図２ｄ）。ＣＸＣＲ２及びＣＤ７４の両方が、ＭＩＦ誘発性の単球走化性に特異的に貢献した（図２ｅ）。ＣＸＣＲ２の役割は、ＣＸＣＲ２をトランスフェクトされたＬ１．２細胞における、ＣＸＣＬ８誘発性走化性のＭＩＦ媒介の交差脱感作を示すことにより確認された。ＭＩＦの遊走能は、ＲＡＷ２６４．７マクロファージ（図８）及びＴＨＰ−１単球において確認された。これらのデータは、ＭＩＦがＣＸＣＲ２を介して単球走化性を引き起こすことを明示する。
【０２４２】
機能的ＭＩＦ−ＣＸＣＲ４相互作用を立証するため、ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２を持たない最初のＣＤ３＋Ｔリンパ球の遊出が評価された。ＣＸＣＬ１２、既知のＣＸＣＲ４リガンド及びＴ細胞化学誘引物質と同様に、抗体遮断及びＣＸＣＬ１２の交差脱感作により示されるように、ＭＩＦが遊出を、すなわち走化性で、かつＣＸＣＲ４を介して形質導入された工程を用量依存的に誘発した（図２ｆ及び図８）。従って、ＭＩＦはＣＸＣＲ４を介した定方向のＴ細胞の遊走を引き起こす。ＣＸＣＲ２を有する主要な細胞型である、主要なヒト好中球において、ＭＩＦは、ＣＸＣＲ１媒介ではなくＣＸＣＲ２媒介の遊走能を発揮し、これは円錐型の用量反応曲線を示し、ＣＸＣＬ８を交差脱感作するものである（図２ｇ，ｈ）。好中球のＭＩＦに向かう中程度の遊走能は、好中球におけるＣＤ７４の不在に関係し得る、というのは、ＣＤ７４−前骨髄球性ＨＬ−６０細胞におけるその異所性発現が、ＭＩＦ誘発性の遊走を増進したためである（図８）。他のＣＸＣＲ２リガンドのように、ＭＩＦは阻止（arrest）ケモカインとして機能するが、現在のデータは、ＭＩＦは同様に、単核細胞及び好中球にかなりの走化性特性を有することを明らかにした。
【０２４３】
実施例４
ＭＩＦが急速なインテグリン活性化及びカルシウム流動を引き起こす。
ＭＩＦの阻止機能は、直接的なＭＩＦ／ＣＸＣＲのシグナル伝達を反映し得るが、ＭＩＦの固定化に要する時間の間、ＭＩＦが他の阻止ケモカインを誘発するということは、完全には除外され得ない。ＭＩＦが直接的に白血球阻止を誘発する（図１）という証拠を強固にするため、リアルタイムＰＣＲ及びＥＬＩＳＡが実行され、ヒト大動脈（又は静脈）内皮細胞のＭＩＦとの２時間に及ぶインキュベーションが、ＣＸＣＲ２に結合すると知られている典型的な阻止ケモカインを上方制御できなかったことが分かった（図３ａ）。
【０２４４】
溶液中に存する、又はインテグリンリガンド（例えば、血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ）−１）に並置して固定化されたケモカインへの短期間暴露は、急速にインテグリン活性を上方制御することができ、このことが白血球阻止を媒介する（「Laudanna, C., et al. (2006) Thromb. Haemost. 95, 5-11」）。これはリガンド結合の直前に行われるクラスタリング（例えばα４β１）又は高次構造変化（例えばαＬβ２）により成し遂げられる。１から５分間の単球細胞のＭＩＦ（又はＣＸＣＬ８）による刺激は、ＣＨＯ／ＩＣＡＭ−１細胞上でαＬβ２依存性の阻止を引き起こした（図３ｂ）。単球インテグリン（monocyte integrins）の直接刺激の証拠を得るため、αＬβ２の広範な（extended）高親和性高次構造を認識するレポーター抗体３２７Ｃが用いられた（Shamri, R., et al. (2005) Nat. Immunol. 6, 497-506）。これらのアッセイはＭｏｎｏＭａｃ６細胞（図３ｃ）及びヒト血中単球（図３ｄ）内のαＬβ２活性化が、ＭＩＦへの暴露の１分後という早い時間に起こり、３０分間以上持続したことを明らかにした。ＭＩＦの作用がαＬβ２に限定されるかどうかを評価するために、ＶＣＡＭ−１上のα４β１依存性単球細胞の阻止が研究された。ＭＩＦへの１から５分間の暴露により顕著な阻止が誘発され、その阻止はＣＸＣＲ２、ＣＤ７４及びα４β１により媒介された（図３ｅ）。ＣＸＣＬ１２の作用と同様に、ジャーカットＴ細胞のＭＩＦによる１から5分間の刺激は、ＶＣＡＭ−１上でＣＸＣＲ４依存性の接着を引き起こした（図８）。
【０２４５】
ＣＸＣＲ２は、ＣＸＣＬ８により引き起こされる細胞質カルシウムの増加を媒介することができるため（Jones, S.A., et al. (1997) J. Biol. Chem. 272, 16166-16169）、ＭＩＦがカルシウム流入を刺激し、ＣＸＣＬ８シグナルを脱感作する能力が検査された。実際に、ＣＸＣＬ８のように、ＭＩＦは主要なヒト好中球中でカルシウム流入を誘発し、ＣＸＣＬ８又はＭＩＦのいずれかに応答するカルシウムトランジェントを脱感作し（図３ｆ）、ＭＩＦがＧＰＣＲ／Ｇαｉシグナル伝達を活性化することを確認した。好中球において見られるＭＩＦによるＣＸＣＬ８のシグナル伝達の部分的な脱感作は、他のＣＸＣＲ２リガンド（Jones, S.A., et al. (1997) J. Biol. Chem. 272, 16166-16169）を用いた調査結果と近似し、そしてＣＸＣＲ１の存在を反映する。ＣＸＣＲ２を発現するＬ１．２トランスフェクタントにおいて、ＭＩＦはＣＸＣＬ８誘発性のカルシウム流入を完全に脱感作し、そして好中球中において、ＭＩＦは、選択的ＣＸＣＲ２リガンドＣＸＣＬ７により誘発されたトランジェントを脱感作した（そして、ＣＸＣＬ７はＭＩＦにより誘発されるトランジェントを脱感作した）（図３ｆ）。ＣＸＣＲ２トランスフェクタントにおいて、ＭＩＦはカルシウム流入を用量依存的に誘発し、そしてわずかにＣＸＣＬ８又はＣＸＣＬ７ほど強力さ及び効果が及ばないのみであった（図３ｇ）。結論として、ＭＩＦはＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４に作用することによって、急速なインテグリン活性化及びカルシウム流入を引き起こした。
【０２４６】
実施例５
ＭＩＦはＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４と相互作用する。
ＭＩＦのＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４との物理的相互作用を評価するため、受容体結合競合及び、内在化研究を実施した。異所的にＣＸＣＲ２を発現するＨＥＫ２９３細胞において、ＭＩＦは平衡条件下で、ＣＸＣＲ２結合に関して１２５Ｉ標識ＣＸＣＬ８と強く競合した。ＣＸＣＬ８トレーサーの、ＣＸＣＲ２への結合は、１．５ｎＭの最大半減反応に対するエフェクター濃度（ＥＣ５０）を有するＭＩＦにより抑制された（図４ａ）。ＣＸＣＲ２のＭＩＦ（Ｋｄ＝１．４ｎＭ）への親和性は、ＣＸＣＬ８（Ｋｄ＝０．７ｎＭ）への親和性に近く、最適な走化性を誘発するＭＩＦ濃度の範囲内（２-４ｎＭ）であった。ＣＸＣＲ２への結合を確認するため、特異的な受容体−リガンド相互作用を報告する受容体内在化アッセイを用いた。安定的ＨＥＫ２９３トランスフェクタント上の表面ＣＸＣＲ２のＦＡＣＳ分析は、ＭＩＦが、ＣＸＣＬ８のものと似た用量反応を有するＣＸＣＲ２の内在化を誘発したことを示した（図４ｂ）。同等のデータが、ＣＸＣＲ２をトランスフェクトされたＲＡＷ２６４．７マクロファージ中でも得られた（図４ｂ挿入図）。
【０２４７】
ＭＩＦのＣＸＣＲ４との相互作用を検証するため、受容体結合研究が、内因的にＣＸＣＲ４を発現するジャーカットＴ細胞内で実施された。ＭＩＦはＣＸＣＲ４結合に対して、１２５Ｉ標識ＣＸＣＬ１２と競合した（ＣＸＣＬ１２のＫｄ＝１．５ｎＭ；ＥＣ５０＝１９．９ｎＭ、ＭＩＦのＫｄ＝１９．８ｎＭ）（図４ｃ）。ＫｄはＴ細胞走化性を誘発するＭＩＦ濃度に一致していた。一貫して、ＭＩＦはＣＸＣＬ１２のように、用量依存的様式でＣＸＣＲ４の内在化を引き起こした（図４ｄ）。ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ−誘発性の内在化はこれらの受容体に特異的であった。それはＭＩＦが同族のリガンドＣＣＬ５とは異なり、Ｌ１．２ＣＣＲ５トランスフェクタント中においてＣＣＲ５の内在化を誘発することができなかったためである。
【０２４８】
ＭＩＦのＣＸＣＲとの相互作用を確証するため、ＭＩＦはビオチン又はフルオレセインで標識され、それによりヨウ素化されたＭＩＦとは対照的に、直接的な受容体結合アッセイが可能となる。ベクター対照群ではなくＣＸＣＲ２トランスフェクタントは、フローサイトメトリー、ストレプトアビジンビーズを用いたプルダウン（図４ｅ挿入図）及び蛍光顕微鏡法により証明されるように、標識されたＭＩＦの直接結合を支持した（図４ｅ）。加えて、フルオレセイン−ＭＩＦのＣＸＣＲ４を有しているジャーカット細胞への特異的な結合は、ＣＸＣＲ４アンタゴニストＡＭＤ３４６５により抑制された。
【０２４９】
ＣＸＣＲ２及びＣＤ７４間の複合体形成
我々のデータは、機能的なＭＩＦの受容体複合体にはＧＰＣＲ及びＣＤ７４の両方が含まれるという可能性を示唆している。従って、内因性のＣＤ７４及びＣＸＣＲ２の共局在化が、ヒトＣＸＣＲ２を発現するＲＡＷ２６４．７マクロファージ中で共焦点蛍光顕微鏡法を用いて可視化された。この技術を用いて、顕著な共局在化が偏光パターン（polarized pattern)で、５０％以下の細胞において観察された（図４ｆ）。
【０２５０】
加えて、免疫共沈降アッセイが、ＣＸＣＲ２がＣＤ７４と物理的に相互作用することを明らかにした。ＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体は、安定的にＣＸＣＲ２を過剰発現させ、一過的にＨｉｓタグをつけたＣＤ７４を発現する、ＨＥＫ２９３細胞において検出された。これらの複合体は、ＣＸＣＲ２を用いた沈降により、及びＨｉｓタグに対するウェスタンブロットにより共沈されたＣＤ７４を検出することにより観察された。共沈はまた、使用された抗体の順序が逆にされた時にも見られた（図４ｇ）。複合体はまた、ＣＸＣＲ２に対する抗体を用いた免疫共沈降により評価されるように、ヒトＣＸＣＲ２を安定的に発現するＬ１．２トランスフェクタント中のＣＤ７４を用いて検出された。対照的に、Ｌ１．２対照群又はアイソタイプ対照群には複合体は観察されなかった（図４ｈ）。データは、ＭＩＦ機能を媒介するためにＣＤ７４がシグナル伝達複合体を形成するモデルと一致する。
【０２５１】
実施例６
ＣＸＣＲ２は動脈内でＭＩＦ誘発性の単球阻止を媒介する。
ＭＩＦは、大量の細胞増殖、マクロファージ浸潤、及び脂質沈着を伴う複合プラークの形成を促進する（「Weber, C., et al. (2004) Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24, 1997-2008; Morand, E.F., et al. (2006) Nat. Rev. Drug Discov. 5, 399-410」）。これはｏｘＬＤＬによる内皮のＭＩＦの誘導に関連しており、このことが単球阻止を引き起こすものである（Schober, A., et al. (2004) Circulation 109, 380-385）。ＣＸＣＲ２リガンドＣＸＣＬ１はまた、初期のアテローム硬化性の内皮を有するマウスのエクスビボで灌流された頸動脈内に、α４β１依存性単球の蓄積を引き起こすことができる（Huo, Y., et al. (2001) J. Clin. Invest. 108, 1307-1314）。このシステムは、ＭＩＦが動員を誘発するためにＣＸＣＲ２を介して作用するかどうかを検査するために用いられた。高脂肪食を与えられたアポｅ−／−マウスの頸動脈内の単球阻止は、ＣＸＣＲ２、ＣＤ７４、又はＭＩＦに対する抗体により抑制され（図５ａ及び図９）、ＭＩＦがＣＸＣＲ２及びＣＤ７４を介してアテローム発生の動員に貢献したことを示した。２４時間のＭＩＦ、ＣＸＣＲ２、及びＣＤ７４の遮断に続き、同様のパターンが腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−αで処理された野生型マウスの動脈中の単球阻止について観察され、急性の血管炎症に似た症状を示した（図５ｂ）。ＴＮＦ−αで処理されたＭｉｆ−／−マウスの動脈内で、ＣＤ７４への抑制効果は弱められ、遮断ＭＩＦは無効であったが、一方残存するＣＸＣＲ２による抑制が存在し、他の誘導リガンドの関与があったことを暗に示した（図５ｃ）。ＴＮＦ−αの刺激で観察されるＭＩＦ欠乏の効果と比較して、単球の蓄積はＭｉｆ−／−Ｌｄｌｒ−／−マウスの動脈内のＭＩＦ欠乏により、より明らかに損なわれた（アテローム発生のＭｉｆ＋／＋Ｌｄｌｒ−／−マウスと比較して。；図５ｄ，ｅ）。ＭＩＦの不存在下においては、ＣＸＣＲ２の明らかな関与はなかった。さらに、ＭＩＦを遮断することは、効果を有さなかった（図５ｄ，ｅ）。ＣＸＣＲ２を遮断することの抑制効果は外因性のＭＩＦを加えることによって回復された（図５ｆ）。
【０２５２】
ＣＸＣＲ２がインビボでのＭＩＦ媒介性の単球の動員に必要とされるという考えに対する更なる証拠を提供するため、野生型又はＩｌ８ｒｂ−／−骨髄を用いて再構成された、キメラの野生型Ｍｉｆ＋／＋及びＭｉｆ−／−マウスの頸動脈に生体顕微鏡検査が実行された（Ｉｌ８ｒｂはＣＸＣＲ２をコードする；図５ｇ，ｈ）。４時間ＴＮＦ−αで処理した後、ローダミンＧで標識された白血球の蓄積は、野生型骨髄で再構成された野生型マウス中に比べて、野生型骨髄で再構成されたＭｉｆ−／−マウス中では減じられた。骨髄のＣＸＣＲ２の欠乏による白血球蓄積の減少は、キメラのＭｉｆ−／−マウス中よりもキメラの野生型マウス中でより著しかった（図５ｇ，ｈ）。
【０２５３】
実施例７
インビボでのＭＩＦ誘発性炎症はＣＸＣＲ２に依存した。
アテローム発生の、又は炎症性の疾患下でのＭＩＦ媒介性の白血球の動員に関するＣＸＣＲ２の重要性は、インビボで確証された。大動脈基部の管腔表面への単球の接着は、初期のアテローム性動脈硬化を有するＭｉｆ＋／＋Ｌｄｌｒ−／−マウスに対して初期のアテローム性動脈硬化を持つＭｉｆ−／−Ｌｄｌｒ−／−マウスで減じられ、これは病変マクロファージ内容物の著しい減少と類似していた（図６ａ）。精巣挙筋中の微小循環の生体顕微鏡検査は、その筋に隣接したＭＩＦの注入が、後毛細血管細静脈中で（大部分はＣＤ６８＋の）白血球の接着及び遊出の著しい増加をもたらしたことを明らかにし、このことはＣＸＣＲ２に対する抗体により抑制されたものである（図６ｂ，ｃ）。循環する単球の数値は影響されなかった。
【０２５４】
次に、ＭＩＦ誘発性の腹膜炎のモデルが、野生型又はＩｌ８ｒｂ-／-骨髄で再構成されたキメラマウスに用いられた。ＭＩＦの腹腔内注射が４時間後、野生型骨髄を有するマウス内で好中球動員を引き起こし、このことはＩｌ８ｒｂ−／−骨髄を有するマウス内では妨げられた（図６ｄ）。集合的に、これらの結果はＭＩＦがＣＸＣＲ２を介して、インビボでアテローム発生の及び炎症性の疾患下で、白血球動員を引き起こすことを明示した。
【０２５５】
ＭＩＦを標的とすることがアテローム性動脈硬化の退行をもたらした。
本明細書中に記載されるように、ＭＩＦはＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４の両方を介して作用した。アテローム性動脈硬化症の進行におけるＭＩＦ及びＣＸＣＲ２の役割を前提として、ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２よりもむしろＭＩＦを標的とすることが、進行した病変及びそれらのＣＸＣＲ２＋単球及びＣＸＣＲ４＋Ｔ細胞の内容物を修飾するための方法として調査された。１２週間高脂肪食を与えられ、深刻なアテローム性動脈硬化症を発症したアポｅ-／-マウスは、ＭＩＦ、ＣＸＣＬ１、又はＣＸＣＬ１２に対する中和抗体で４週間処理された。免疫ブロット分析及び接着アッセイを用いることによって、ＭＩＦ抗体の特異性が検証された。これらのアッセイは、ＭＩＦ抗体が、ＣＸＣＬ１誘発性又はＣＸＣＬ８誘発性のではなく、ＭＩＦ誘発性の阻止を遮断したことを確認した（図１０）。
【０２５６】
ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２ではなくＭＩＦの遮断が、１６週で大動脈基部においてプラーク面積の減少をもたらし、そして１２週で基準値と比較して著しい（Ｐ＜０．０５）プラークの退縮をもたらした（図６ｅ，ｆ）。加えて、ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２ではなくＭＩＦの遮断が、１６週のそれほど炎症的ではないプラーク表現型に関連付けられ、このことはマクロファージ及びＣＤ３＋Ｔ細胞の両方の低い含有量に証明される（図６ｇ，ｈ）。従って、治療上の退行及び進行したアテローム性動脈硬化症の安定化が、ＭＩＦを標的とすることにより、及びＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４の活性化を抑制することにより、成し遂げられた。幾つかの実施形態において、本発明は、それを必要とする個体のプラーク面積を縮小する方法を備え、この方法は、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合、及び／又は（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化；又は（ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）の任意の組合せ、を抑制する１以上の薬剤を前述の個体に投与する工程を備える。
【０２５７】
実施例８
ＣＸＣＲ４による干渉がアテローム性動脈硬化を悪化させる。
アテローム性動脈硬化におけるＣＸＣＲ４の役割を研究するため、高脂肪食を与えられたアポｅ−／−マウスが、浸透圧ミニポンプを介してＣＸＣＲ４アンタゴニストＡＭＤ３４６５又はビヒクル（対照群）で連続的に処理され、そしてアテローム性動脈硬化のプラークの形成が１２週間後分析される。対照群と比較して、ＡＭＤ３４６５処理は、オイルレッドＯで染色された大動脈基部の切片中で（図９ａ）、そして正面（en face)で調製された胸腹部大動脈中で（図９ｂ）病変形成を著しく悪化させる。加えてアポｅ−／−マウスのＡＭＤ３４６５での連続的処理は２日以内に明白な血中の白血球増加を誘発し、それは研究期間中持続する。さらにこの連続的処理は循環好中球の相対数の拡大を誘発し、このことはさらに疾患進行中に増加する（図９ｃ）。
【０２５８】
実施例９
多発性硬化症のマウスモデルにおける遮断Ｔｈ−１７による発症
生後８乃至１２週間のＣ５７ＢＬ／６マウス（The Jackson Laboratory, Bar Harbor, Main, USAから獲得）は、前日（−１日目）に前処理され、その後、対照抗体（グループ１）、アンタゴニスト抗マウスＭＩＦ抗体（グループ２）、ＣＸＣＲ２のＭＩＦ結合及び／又は活性化を遮断するＣＸＣＲ２に対する抗体（グループ３）、ＣＸＣＲ４のＭＩＦ結合及び／又は活性化を遮断するＣＸＣＲ４に対する抗体（グループ４）、又は、ＣＸＣＲ４のＭＩＦ結合及び／又は活性化を遮断するＣＸＣＲ４に対する抗体及びＣＸＣＲ２のＭＩＦ結合及び／又は活性化を遮断するＣＸＣＲ２に対する抗体（グループ５）のいずれかを、毎週、５ｍｇ／ｋｇ腹腔内注射する。マウス（ｎ＝グループごとに３０）は、翌日（０日目）に、ＣＦＡ中の全部で２００μｌの乳化したＭＯＧ３５−５５ペプチド（ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ；Bachem AG社、スイス、ブーベンドルフ）を、背中に２度、皮下注射することによって免疫性を与えた。ペプチド及び結核菌の最終濃度は、それぞれ、１５０μｇ／マウス、及び、１ｍｇ／マウスである。ＰＴＸ（４００ｎｇ；LIST Biological Laboratories Inc.、米国カリフォルニア州カンベル）は、０日目及び２日目に、腹腔内に注入される。疾患は、上記の０乃至６のスケールで、麻痺を測定することによって毎日モニタされる。平均的な最大疾患スコアが一方向ＡＮＯＶＡを用いて各群で比較された。
【０２５９】
麻痺測定が、グループ２のマウスとグループ１とで比較されることによって、ＥＡＥを処置又は予防するための、アンタゴニスト抗ＭＩＦ抗体の有効性を測定する。グループ５のマウスは、ＥＡＥを処置又は予防するための、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ結合及び／又は活性化を遮断する抗体の有効性を測定するために、グループ１のマウスと比較された。グループ５のマウスは、ＣＸＣＲ２又はＣＸＣＲ４を個別に遮断する効果に対して、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４の双方のＭＩＦ結合及び／又は活性化の効果を測定するために、グループ３及び４と比較される。
【０２６０】
混合Ｔ細胞は、免疫性を与えた後、７−１１日目に、流入領域リンパ節及び脾臓から作られる。生存細胞（3.75 × 106/ml）は、様々な濃度において、（再刺激された）ＭＯＧペプチド（アミノ酸３５−５５）を含む、又は、含まない完全培地で、培養される。活性化細胞からの上清が７２時間後に採取され、ＴＮＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２３、及び、ＩＬ−１７が、ＥＬＩＳＡ（BD Pharmingen社）によって測定された。高いＩＬ−１７及びＩＬ−２３のレベルは、Ｔｈ−１７細胞と、Ｔｈ−１７媒介性疾患表現型の発症を示している。ＭＩＦ遮断抗体（グループ２）によるマウス又は細胞培養の処理、又は、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４（グループ５）双方のＭＩＦ結合及び／又は活性化の遮断による、このようなサイトカインの抑制は、Ｔｈ−１７細胞の発症、及び、Ｔｈ−１７媒介性炎症性疾患（つまり、多発性硬化症）の進行における、ＭＩＦの重要な制御的役割を示している。
【０２６１】
細胞内のサイトカイン染色のため、免疫性を当たられたマウスからの脾臓及びリンパ節細胞は、ペプチド抗原で２４時間、刺激され、ゴルジプラグ（GolgiPlug）（BD Pharmingen社）が最後の５時間に加えられるか、又は、５００ｎｇ／ｍｌのイオノマイシン、及び、５０ｎｇ／ｍｌのホルボール12-ミリスチン酸13-酢酸（PMA；Sigma-Aldrich社）に加えて、ゴルジプラグが５時間加えられる。細胞染色のために、細胞は、製造業者のプロトコルに従って、Cytofix／Cytoperm Plus Kit（BD Pharmingen社）で透過処理される。ゲート（Gated）ＣＤ４−陽性Ｔ細胞は、細胞内のＩＬ−１７、ＩＬ−２３、又は、細胞表面ＩＬ２３受容体（ＩＬ２３Ｒ）の存在に関して、フローサイトメトリーによって解析される。ＣＤ４＋、ＩＬ−１７＋二重陽性のＴ細胞の存在は、疾患の進行を駆り立てるＴｈ−１７表現型の発症を示す。さらに、ＣＤ４＋、ＩＬ−１７二重陽性細胞上のＩＬ−２３の増加は、Ｔｈ−１７表現型を裏付ける証拠を提供する。ＣＤ４＋、ＩＬ−１７二重陽性細胞、又は、任意の白血球に、高細胞内ＩＬ−２３が存在していることは、Ｔｈ−１７細胞の増殖及び／又は.維持を駆り立てるＩＬ２３Ｒを裏付ける更なる証拠を提供するものである。ＭＩＦ遮断薬（グループ２のマウス）、又は、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４（グループ５のマウス）のＭＩＦ結合／又は活性化を遮断する薬剤で、マウスを処理することによって、上記実験に記載の如く、低レベルのＩＬ−１７、ＩＬ−２３Ｒ、又は、ＩＬ−２３で定められるＴｈ−１７細胞の発症が抑制されることは、Ｔｈ−１７媒介性の自己免疫疾患の進行を駆り立てることにおけるＭＩＦの主要な役割を実証するものである。ＭＩＦを遮断することによって、マウスにおけるＴｈ−１７細胞の発症及びＥＡＥ進行が抑制されることは、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合、及び／又は、（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４のＭＩＦ−活性化、又は、（ｉｉｉ）多発性硬化症などのＴｈ−１７媒介性自己免疫性疾患の処置及び／又は予防のための、（ｉ）及び（ｉｉ）の 任意の組み合わせを遮断する、有益な実用性を実証するものである。
【０２６２】
実施例１０
ホモ接合性家族性高コレステロール血症の処置のためのヒトの臨床試験 
研究目的：本研究の主要な目的は、ホモ接合性家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）を用いて、個体の抗ＭＩＦ抗体１（ＡＢ１）の有効性を査定することである。ＡＢ１は、ＭＩＦのペプチド配列ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬに特異的に結合する。
【０２６３】
方法
研究デザイン：これは、ＨｏＦＨを用いた、１８歳以上の男女における、多目的な、非盲検の、ＡＢ１の単一グループ研究である。初期スクリーンの後、資格を満たした個体は、４週間のスクリーニング期間に突入する。このスクリーニング期間は、２度の来診（−４週目及び−１週目）からなり、この期間中、すべての高脂血症治療薬が中断されるとともに（胆汁酸捕捉剤及びコレステロール吸収阻害剤を除く）、治療のための生活習慣改善カウンセリング（therapeutic lifestyle change counseling）（ＴＬＣ）が、全米コレステロール教育プログラム（ＮＣＥＰ）の成人治療委員会（Adult Treatment Panel）（ＡＴＰ−ＩＩＩ）の臨床ガイドライン又は同等物にしたがって、開始される。すでにアフェレシス療法にある個体は、研究期間中に一貫した状態及び間隔を維持する処置計画を継続する。３度目の来診で（０週目）、ベースラインの効果／安全値が測定され、個体はＡＢ１の初期用量で処置を始める。処置の頻度は１２週間、週に一度行う。研究のための来診は、適用可能な場合には、来診手順の直前に起こる個体のアフェレシス処置に合わせされている。アフェレシス療法間の間隔が研究用の薬物療法期間と調整しにくい場合、次に予定されているアフェレシス療法まで、及び、その間隔が元々の時間の長さに戻るまで、個体は同じ薬物療法期間に置かれる。効果測定は、前回のアフェレシス療法の少なくとも２週間後、及び、研究来診の日に予定されるアフェレシス療法直前に行われる。
【０２６４】
参加者数：３０人から５０人。
【０２６５】
診断及び主な選定基準：世界保健機関のガイドラインによる家族性高コレステロール血症（ＦＨ）ホモ接合体の明確な証拠を有するとともに、２１歳以上の個体については空腹時血清トリグリセリド（ＴＧ））が４００ｍｇ／ｄＬ（4.52 mmol/L）以下で、１８〜２０歳以上の個体については２００ｍｇ／ｄＬ（2.26 mmol/L）の１８歳以上の男女が、研究に参加するために審査される。
【０２６６】
研究処置：ＡＢ１の初期投与は、５０ｍｇ／時間の速度で被検体に注入される。注入毒性が存在しない場合、５０ｍｇ／時間の増加注入速度は、３０分ごとに、最大で４００ｍｇ／時間まで増える。その後の各週、ＡＢ１は１００ｍｇ／時間の速度で注入される。注入毒性が存在しない場合、１００ｍｇ／時間の速度増加は、３０分間隔で、最大で４００ｍｇ／時間まで増える。
【０２６７】
効果測定：主要評価項目は、ベースラインから３週目、６週目、及び、１２週目までの、ＨＤＬ−Ｃ及びＬＤＬ−Ｃにおける平均的なパーセント変化である。ＨＤＬ−Ｃ及びＬＤＬ−Ｃを含む脂質プロファイルは、それぞれの研究来診において得られる。
【０２６８】
実施例１１
腹部大動脈瘤（ＡＡＡ）の処置のための動物モデル
動物モデルは、以下の様に用意される。生体の雄ラットは、２時間、エラスターゼを注入される。組織学的解析が、注入後１２−２４時間に行われることによって、断片化したエラスチン及び破壊されたエラスチンが存在することを確認する。超音波は、大動脈拡大領域を同定及びモニタするために、日々行われる。
【０２６９】
エラスターゼの投与後２週間、ラットは、（ＭＩＦペプチド配列 ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬと結合する）ＡＢ１を投与される。ＡＢ１の初回投与は、０．５ｍｇ／時間の速度で注入される。注入毒性が存在しない場合、０．５ｍｇ／時間の増加注入速度は、３０分ごとに、最大で２．０ｍｇ／時間まで増える。その後の各週、ＡＢ１は、１．０ｍｇ／時間の速度で注入される。注入毒性が存在しない場合、１．０ｍｇ／時間の増加速度は、３０分間隔で、最大で４．０ｍｇ／時間まで増える。
【０２７０】
効果評価：主要評価項目は、ベースラインから３週目、６週目、及び、１２週目までの、ＡＡＡの大きさ（すなわち、大動脈直径）の平均的なパーセント変化である。
【０２７１】
実施例１２
腹部大動脈瘤（ＡＡＡ）を処置するためのヒトの臨床試験
研究目的：本研究の主要な目的は、初回のＡＡＡを用いて、個体の抗ＭＩＦ抗体１（ＡＢ１）の有効性を査定することである。ＡＢ１は、ＭＩＦのペプチド配列ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬに特異的に結合する。
【０２７２】
方法
研究デザイン：これは、初回ＡＡＡを用いた、１８歳以上の男女における、多目的な、非盲検の、ＡＢ１の単一グループ研究である。初回ＡＡＡの存在は、連続断層像を用いて確認される。０週目にベースラインの効果／安全性が測定され、個体はＡＢ１の初回投与による処置を開始する。非検体は、１２週間、週に一度、ＡＢ１を投与される。
【０２７３】
参加者数：３０人から５０人。
【０２７４】
研究処置：ＡＢ１の初回投与は、５０ｍｇ／時間の速度で被検体に注入される。注入毒性が存在しない場合、５０ｍｇ／時間の増加注入速度は、３０分ごとに、最大で４００ｍｇ／時間まで増える。その後の各週、ＡＢ１は１００ｍｇ／時間の速度で注入される。注入毒性が存在しない場合、１００ｍｇ／時間の増加速度は、３０分間隔で、最大で４００ｍｇ／時間まで増える。
【０２７５】
効果評価：主要評価項目は、ベースラインから３週目、６週目、及び、１２週目までの、ＡＡＡの大きさ（すなわち、大動脈直径）の平均的なパーセント変化である。
【０２７６】
実施例１３
ポリクローナル抗ＭＩＦ抗体の産生
抗体は、以下のペプチド配列: ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬに対して産生する・ニュージーランドの白ウサギは、抗体を発生させるために用いられる宿主動物である。
【０２７７】
ペプチドＢＳＡ接合体（conjugate）は、ＧＭＢＳ接合を介して発生する。接合体は、その後、完全フロイントアジュバントを用いて、溶液として処方される。 
【０２７８】
０日目、ウサギは出血する（２５ｍＬ）。その後、ウサギは、０．２ｍｇの抗原組成物で免疫性を与えられる。２１日目に、ウサギは、０．１ｍｇの追加容量を処方される。３２日目、ウサギは、出血する（２５ｍｌ）。ＭＩＦ単量体、又は、ＭＩＦ多量体の特定の抗原に対して産生された抗体の相互作用は、０日目に獲得されたウサギの血清の相互作用を、３２日目にウエスタンブロットによって獲得されたウサギの血清の相互作用と比較することによって確認された。 
【０２７９】
本発明の好適な実施形態が本明細書に示され、記載される一方で、そのような実施形態がほんの一例にすぎないことは、当業者にとって自明のことである。多くの変更、変化、代用形態は、本発明を逸脱することなく当業者には思い当たることである。本明細書に記載の本発明の実施形態に対する様々な代替物は、本発明を実施する際に使用可能であることを理解されたい。以下の特許請求の範囲は本発明の範囲を定義するとともに、特許請求の範囲及び同等物の範囲内の方法及び構造はそれによって包含されるものであることが意図されている。
【図１ｆ】
2011515416.tif 000003
【図１ｇ】
2011515416.tif 000004
【図２ａ】
2011515416.tif 000005
【図２ｂ】
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【図２ｃ】
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【図２ｄ】
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【図２ｅ】
2011515416.tif 000009
【図２ｇ】
2011515416.tif 000010
【図２ｈ】
2011515416.tif 000011
【図３ａ】
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【図３ｂ】
2011515416.tif 000013
【図３ｄ】
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【図３ｆ】
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【図１１】
2011515416.tif 000016
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図１ｃ】
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【図１ｄ】
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【図１ｅ】
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【図１ｈ】
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【図２ｆ】
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【図３ｃ】
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【図３ｅ】
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【図３ｇ】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【図４ｃ】
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【図４ｄ】
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【図４ｅ】
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【図４ｆ】
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【図４ｇ】
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【図４ｈ】
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【図５ａ】
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【図５ｂ】
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【図５ｃ】
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【図５ｄ】
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【図５ｅ】
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【図５ｆ】
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【図５ｇ】
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【図５ｈ】
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【図６】
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【図７】
2011515416.tif 000044
【図８】
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【図９ａ】
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【図９ｂ】
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【図９ｃ】
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【図１０】
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【国際調査報告】
2011515416.tif 000050
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