(57)【要約】  特定の実施形態において、ＭＩＦ媒介性疾患の処置方法が、本明細書中に開示されている。いくつかの実施形態において、この方法は、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４との結合、及び/又は（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、（ｉｉｉ）ホモ多量体を形成するＭＩＦの能力、又はこれらの組み合わせを抑制する活性薬剤を投与する工程を含む。【選択図】図１ａ及び図１ｂ
2011526244.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＭＩＦ媒介性疾患を処置する方法であって、
前記方法は、処置上効果的な量の活性薬剤を、それを必要とする個体に投与する工程を備え、
前記抗体は、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合、（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、（ｉｉｉ）ホモ多量体を形成するＭＩＦの能力、（ｉｖ）ＭＩＦのＣＤ７４との結合、又は、これらの組み合わせを抑制することを特徴とする方法。
【請求項２】
前記活性薬剤が、ＭＩＦの偽のＥＬＲモチーフの全て又は一部と特異的に結合するか、又は、ＭＩＦの偽のＥＬＲモチーフと競合することを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記活性薬剤が、ＭＩＦのＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合するか、又は、ＭＩＦのＮ−ループモチーフと競合することを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記活性薬剤が、ＭＩＦの偽のＥＬＲ及びＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合することを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記活性薬剤が、ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、ＣＸＣＲ４アンタゴニスト、ＭＩＦアンタゴニスト、又は、それらの組み合わせから選択されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記活性薬剤が、ＣＸＣＬ８（３−７４）Ｋ１１Ｒ／Ｇ３１Ｐ、Ｓｃｈ５２７１２３、Ｎ−（３−（アミノスルホニル）−４−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）−Ｎ’−（２,３−ジクロロフェニル）尿素、ＩＬ−８（１−７２）、（Ｒ）ＩＬ−８、（Ｒ）ＩＬ−８，ＮＭｅＬｅｕ、（ＡＡＲ）ＩＬ−８、ＧＲＯα（１−７３）、（Ｒ）ＧＲＯα、（ＥＬＲ）ＰＦ４、（Ｒ）ＰＦ４、ＳＢ−２６５６１０、アンチロイキナート、ＳＢ−５１７７８５−Ｍ、ＳＢ２６５６１０、ＳＢ２２５００２、ＳＢ４５５８２１、ＤＦ２１６２、レパリキシン、ＡＬＸ４０−４Ｃ、ＡＭＤ−０７０、ＡＭＤ３１００、ＡＭＤ３４６５、ＫＲＨ−１６３６、ＫＲＨ−２７３１、ＫＲＨ−３９５５、ＫＲＨ−３１４０、Ｔ１３４、Ｔ２２、Ｔ１４０、ＴＣ１４０１２、ＴＮ１４００３、ＲＣＰ１６８、ＰＯＬ３０２６、ＣＴＣＥ−０２１４、ＣＯＲ１００１４０、又はそれらの組み合わせから選択されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項７】
前記活性薬剤は、ＭＩＦの偽のＥＬＲモチーフの全て又は一部に特異的に結合するペプチド、ＭＩＦのＮ−ループモチーフの全て又は一部に特異的に結合するペプチド、ＭＩＦの偽のＥＬＲ及びＮ−ループモチーフの全て又は一部に特異的に結合するペプチド、ＭＩＦとＣＸＣＲ２の結合を阻害するペプチド、ＭＩＦとＣＸＣＲ４の結合を阻害するペプチド、ＭＩＦとＪＡＢ−１の結合を阻害するペプチド、ＭＩＦとＣＤ７４の結合を阻害するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱと、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインとを模倣するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬと、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインとを模倣するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬと、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインとを模倣するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬＨＳＩの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬＨＳＩと、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインとを模倣するペプチド、又はそれらの組み合わせであることを特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項８】
マクロファージの泡沫細胞への変換が、本明細書に開示される活性薬剤の投与を受けて抑制されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項９】
心筋細胞のアポトーシスが、本明細書に開示される活性薬剤の投与を受けて抑制されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１０】
浸潤マクロファージのアポトーシスが、本明細書に開示される活性薬剤の投与を受けて抑制されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１１】
腹部大動脈瘤の形成が、本明細書に開示される活性薬剤の投与を受けて抑制されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１２】
腹部大動脈瘤の直径が、本明細書に開示される活性薬剤の投与を受けて減少することを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１３】
動脈瘤中の構造タンパク質が、本明細書に開示される活性薬剤の投与を受けて再発生することを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１４】
第２の活性薬剤を同時投与する工程をさらに備えることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１５】
ナイアシン、フィブラート、スタチン、アポ−Ａ１ペプチド模倣剤（例えば、ＤＦ−４、ノバルティス社）、アポＡ−Ｉ転写上方制御剤、ＡＣＡＴインヒビター、ＣＥＴＰ修飾剤、糖タンパク質（ＧＰ）ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体アンタゴニスト、Ｐ２Ｙ１２受容体アンタゴニスト、Ｌｐ−ＰＬＡ２−インヒビター、抗ＴＮＦ剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−２受容体アンタゴニスト、細胞毒性薬剤、免疫調節剤、抗生物質、Ｔ細胞共刺激遮断薬、障害改善抗リウマチ薬、Ｂ細胞除去剤、免疫抑制剤、抗リンパ球抗体、アルキル化剤、抗代謝物質、植物性アルカロイド、テルペノイド、トポイソメラーゼインヒビター、抗腫瘍抗生物質、モノクローナル抗体、ホルモン療法、又はそれらの組み合わせを同時投与する工程をさらに備えることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１６】
前記ＭＩＦ媒介性疾患が、アテローム性動脈硬化、腹部大動脈瘤、急性散在性脳脊髄炎、もやもや病、高安病、急性冠症候群、心臓同種移植片血管障害、肺炎症、急性呼吸促迫症候群、肺線維症、急性散在性脳脊髄炎、アジソン病、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性ホモリシス貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、水疱性類天疱瘡、シャーガス病、慢性閉塞性肺疾患、セリアック病、皮膚筋炎、１型糖尿病、２型糖尿病、子宮内膜症、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、間質性膀胱炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、メタボリック症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋炎、ナルコレプシー、肥満、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発筋炎、原発性胆汁性肝硬変、関節リウマチ、統合失調症、強皮症、シェーグレン症候群、脈管炎、白斑、ヴェーゲナー肉芽種、アレルギー性鼻炎、前立腺癌、非小細胞癌、卵巣癌、乳癌、メラノーマ、胃癌、結腸直腸癌、脳腫瘍、転移性骨障害、膵臓癌、リンパ腫、鼻ポリープ、消化管癌、潰瘍性大腸炎、クローン病、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット症候群、伝染性大腸炎、不確定大腸炎、炎症性肝障害、エンドトキシンショック、敗血性ショック、リウマチ様脊椎炎、強直性脊椎炎、痛風性関節炎、リウマチ性多発筋痛、アルツハイマー病、パーキンソン病、てんかん、エイズ認知症、喘息、成人呼吸窮迫症候群、気管支炎、嚢疱性線維症、急性白血球媒介性肺損傷、遠位直腸炎、ヴェーゲナー肉芽種、線維筋痛、気管支炎、嚢疱性線維症、ブドウ膜炎、結膜炎、乾癬、湿疹、皮膚炎、平滑筋増殖障害、髄膜炎、帯状疱疹、脳炎、腎炎、結核、網膜炎、アトピー性皮膚炎、膵炎、歯周歯肉炎、凝固壊死、液化壊死、フィブリノイド壊死、新生内膜過形成、心筋梗塞、卒中、移植臓器拒絶反応、又はそれらの組み合わせであることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１７】
個体において必要とされる、ＭＩＦ媒介性疾患を処置するための医薬組成物であって、
前記医薬組成物が、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４との結合、及び／又は、（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、（ｉｉｉ）ホモ多量体を形成するＭＩＦの能力、又は、これらの組み合わせを抑制する少なくとも１つの活性薬剤を備えることを特徴とする医薬組成物。
【請求項１８】
前記活性薬剤が、ＭＩＦの偽のＥＬＲモチーフの全て又は一部と特異的に結合することを特徴とする請求項１７記載の組成物。
【請求項１９】
前記活性薬剤が、ＭＩＦのＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合することを特徴とする請求項１７記載の組成物。
【請求項２０】
前記活性薬剤は、ＭＩＦの偽のＥＬＲ及びＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合することを特徴とする請求項１７記載の組成物。
【請求項２１】
前記活性薬剤が、ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、ＣＸＣＲ４アンタゴニスト、ＭＩＦアンタゴニスト、又はそれらの組み合わせから選択されることを特徴とする請求項１７記載の組成物。
【請求項２２】
前記活性薬剤が、ＣＸＣＬ８（３−７４）Ｋ１１Ｒ／Ｇ３１Ｐ、Ｓｃｈ５２７１２３、Ｎ−（３−（アミノスルホニル）−４−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）−Ｎ’−（２，３−ジクロロフェニル）尿素、ＩＬ−８（１−７２）、（Ｒ）ＩＬ−８、（Ｒ）ＩＬ−８，ＮＭｅＬｅｕ、（ＡＡＲ）ＩＬ−８、ＧＲＯα（１−７３）、（Ｒ）ＧＲＯα、（ＥＬＲ）ＰＦ４、（Ｒ）ＰＦ４、ＳＢ−２６５６１０、アンチロイキナート、ＳＢ−５１７７８５−Ｍ、ＳＢ２６５６１０、ＳＢ２２５００２、ＳＢ４５５８２１、ＤＦ２１６２、レパリキシン、ＡＬＸ４０−４Ｃ、ＡＭＤ−０７０、ＡＭＤ３１００、ＡＭＤ３４６５、ＫＲＨ−１６３６、ＫＲＨ−２７３１、ＫＲＨ−３９５５、ＫＲＨ−３１４０、Ｔ１３４、Ｔ２２、Ｔ１４０、ＴＣ１４０１２、ＴＮ１４００３、ＲＣＰ１６８、ＰＯＬ３０２６、ＣＴＣＥ−０２１４、ＣＯＲ１００１４０、又はそれらの組み合わせから選択されることを特徴とする請求項１７記載の組成物。
【請求項２３】
前記活性薬剤が、ＭＩＦの偽のＥＬＲモチーフの全て又は一部と特異的に結合するペプチド、ＭＩＦのＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合するペプチド、偽のＥＬＲ及びＮ−ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合するペプチド、ＭＩＦとＣＸＣＲ２の結合を阻害するペプチド、ＭＩＦとＣＸＣＲ４の結合を阻害するペプチド、ＭＩＦとＪＡＢ−１の結合を阻害するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱと、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインとを模倣するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬと、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインとを模倣するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬと、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインとを模倣するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬＨＳＩの全て又は一部と、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインとに特異的に結合するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬＨＳＩと、ＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインとを模倣するペプチド、又は、それらの組み合わせであることを特徴とする請求項１７記載の組成物。
【請求項２４】
第２活性薬剤をさらに含むことを特徴とする請求項１７記載の組成物。
【請求項２５】
ナイアシン、フィブラート、スタチン、アポ−Ａ１ペプチド模倣剤（例えば、ＤＦ−４、ノバルティス社）、アポＡ−Ｉ転写上方制御剤、ＡＣＡＴインヒビター、ＣＥＴＰ修飾剤、糖タンパク質（ＧＰ）ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体アンタゴニスト、Ｐ２Ｙ１２受容体アンタゴニスト、Ｌｐ−ＰＬＡ２−インヒビター、抗ＴＮＦ剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−２受容体アンタゴニスト、細胞毒性薬剤、免疫調節剤、抗生物質、Ｔ細胞共刺激遮断薬、障害改善抗リウマチ薬、Ｂ細胞除去剤、免疫抑制剤、抗リンパ球抗体、アルキル化剤、抗代謝物質、植物性アルカロイド、テルペノイド、トポイソメラーゼインヒビター、抗腫瘍抗生物質、モノクローナル抗体、ホルモン療法、又はそれらの組み合わせをさらに備えることを特徴とする請求項１７記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国仮特許出願第６１／０３８，３８１（出願日：２００８年３月２０日）、米国仮特許出願第６１／０３９，３７１（出願日：２００８年４月１７日）、及び米国仮特許出願第６１／１２１，０９５（出願日：２００８年１２月９日）の優先権を主張するものであり、これらの出願は、その全体を参照することにより本明細書中に組み込まれている。
【背景技術】
【０００２】
特定の炎症疾病は、影響を受けた組織へのリンパ球移動により部分的に特徴化される。リンパ球の移動は、組織の損傷を誘発し、炎症性疾病を悪化させる。多くの白血球は、影響を受けた組織に対するＭＩＦ勾配に従う。一般的に、ＭＩＦは、白血球上のＣＸＣＲ２受容体及びＣＸＣＲ４受容体と相互作用し、白血球遊走を誘発し、維持する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
特定の実施形態において、ＭＩＦ媒介性疾患を処置する方法が本明細書中に開示されており、ＭＩＦ媒介性疾患は、治療上効果的な量の活性薬剤を、それを必要とする個体に投与する工程を備え、この活性薬剤は、（i）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合、（ii）ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、（iii）ホモ多量体を形成するＭＩＦの能力、（iv）ＭＩＦのＣＤ７４との結合、又はそれらの組み合わせを抑制する。いくつかの実施形態において、活性薬剤は、ＭＩＦの偽のＥＬＲモチーフの全て又は一部と特異的に結合するか、又はＭＩＦの偽のＥＬＲモチーフと競合する。いくつかの実施形態において、活性薬剤は、ＭＩＦのＮ-ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合するか、又はＭＩＦのＮ-ループモチーフと競合する。いくつかの実施形態において、活性薬剤は、ＭＩＦの偽のＥＬＲ及びＮ-ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合する。いくつかの実施形態において、活性薬剤は、ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、ＣＸＣＲ４アンタゴニスト、ＭＩＦアンタゴニスト、又はそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、活性薬剤は、ＣＸＣＬ８（３-７４）Ｋ１１Ｒ／Ｇ３１Ｐ、Ｓｃｈ５２７１２３、Ｎ-（３-（アミノスルホニル）-４-クロロ-２-ヒドロキシフェニル）-Ｎ'-（２,３-ジクロロフェニル）尿素、ＩＬ-８（１-７２）、（Ｒ）ＩＬ-８、（Ｒ）ＩＬ-８,ＮＭｅＬｅｕ、（ＡＡＲ）ＩＬ-８、ＧＲＯα（１-７３）、（Ｒ）ＧＲＯα、（ＥＬＲ）ＰＦ４、（Ｒ）ＰＦ４、ＳＢ-２６５６１０、アンチロイキナート（Antileukinate）、ＳＢ-５１７７８５-Ｍ、ＳＢ２６５６１０、ＳＢ２２５００２、ＳＢ４５５８２１、ＤＦ２１６２、レパリキシン（Repalixin）、ＡＬＸ４０-４Ｃ、ＡＭＤ-０７０、ＡＭＤ３１００、ＡＭＤ３４６５、ＫＲＨ-１６３６、ＫＲＨ-２７３１、ＫＲＨ-３９５５、ＫＲＨ-３１４０、Ｔ１３４、Ｔ２２、Ｔ１４０、ＴＣ１４０１２、ＴＮ１４００３、ＲＣＰ１６８、ＰＯＬ３０２６、ＣＴＣＥ-０２１４、ＣＯＲ１００１４０、又はそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、活性薬剤は、具体的にＭＩＦの偽のＥＬＲモチーフの全て又は一部に結合するペプチド、ＭＩＦのＮ-ループモチーフの全て又は一部に特異的に結合するペプチド、ＭＩＦの偽のＥＬＲ及びＮ-ループモチーフの全て又は一部に特異的に結合するペプチド、ＭＩＦとＣＸＣＲ２の結合を抑制するペプチド、ＭＩＦとＣＸＣＲ４の結合を抑制するペプチド、ＭＩＦとＪＡＢ-１の結合を抑制するペプチド、ＭＩＦとＣＤ７４の結合を抑制するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱの全て又は一部、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインに特異的に結合するペプチド、以下のようなペプチド配列を模倣するペプチド：ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱ、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインを模倣するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインに結合するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬ、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインを模倣するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインに結合するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬ、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインを模倣するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬＨＳＩの全て又は一部、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインに結合するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬＨＳＩ、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインを模倣するペプチド、又はそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、マクロファージの泡沫細胞への変換は、本明細書中に開示される活性薬剤の投与を受けて抑制される。いくつかの実施形態において、心筋細胞のアポトーシスは、本明細書中に開示される活性薬剤の投与を受けて抑制される。いくつかの実施形態において、湿潤マクロファージのアポトーシスは、本明細書中に開示される活性薬剤の投与を受けて抑制される。いくつかの実施形態において、腹部大動脈瘤の形成は、本明細書中に開示される活性薬剤の投与を受けて抑制される。いくつかの実施形態において、腹部大動脈瘤の直径は、本明細書中に開示される活性薬剤の投与を受けて減少される。いくつかの実施形態において、動脈瘤の構造タンパク質は、本明細書中に開示される活性薬剤の投与を受けて再発生される。いくつかの実施形態において、この方法は更に、第二活性薬剤の同時投与工程を含む。いくつかの実施形態において、この方法は更に、ナイアシン、フィブラート、スタチン、アポ-Ａ１ペプチド模倣剤（例えば、ＤＦ-４、ノバルティス社）、アポＡ-Ｉ転写上方制御剤（up-regulator）、ＡＣＡＴインヒビター、ＣＥＴＰ修飾剤、糖タンパク質（ＧＰ）ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体アンタゴニスト、Ｐ２Ｙ１２受容体アンタゴニスト、Ｌｐ-ＰＬＡ２-インヒビター、抗ＴＮＦ剤、ＩＬ-１受容体アンタゴニスト、ＩＬ-２受容体アンタゴニスト、細胞毒性薬剤、免疫調節剤、抗生物質、Ｔ細胞共刺激遮断薬（co-stimulatory blocker）、障害改善抗リウマチ薬、Ｂ細胞除去剤、免疫抑制剤、抗リンパ球抗体、アルキル化剤、抗代謝物質、植物性アルカロイド、テルペノイド、トポイソメラーゼインヒビター、抗腫瘍抗生物質、モノクローナル抗体、ホルモン療法、又はそれらの組み合わせの同時投与工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＩＦ媒介性疾患は、アテローム性動脈硬化、腹部大動脈瘤、急性散在性脳脊髄炎、もやもや病、高安病、急性冠症候群、心臓同種移植片血管障害（Cardiac-allograft vasculopathy）、肺炎症、急性呼吸促迫症候群、肺線維症、急性散在性脳脊髄���、アジソン病、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性ホモリシス貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、水疱性類天疱瘡、シャーガス病、慢性閉塞性肺疾患、セリアック病、皮膚筋炎、１型糖尿病、２型糖尿病、子宮内膜症、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、間質性膀胱炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、メタボリック症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋炎、ナルコレプシー、肥満、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発筋炎、原発性胆汁性肝硬変、関節リウマチ、統合失調症、強皮症、シェーグレン症候群、脈管炎、白斑、ヴェーゲナー肉芽種、アレルギー性鼻炎、前立腺癌、非小細胞癌、卵巣癌、乳癌、メラノーマ、胃癌、結腸直腸癌、脳腫瘍、転移性骨障害、膵臓癌、リンパ腫、鼻ポリープ、消化管癌、潰瘍性大腸炎、クローン病、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット症候群、伝染性大腸炎、不確定大腸炎、炎症性肝障害、エンドトキシンショック、敗血性ショック、リウマチ性脊椎炎、強直性脊椎炎、痛風性関節炎、リウマチ性多発筋痛、アルツハイマー病、パーキンソン病、てんかん、エイズ認知症、喘息、成人呼吸窮迫症候群、気管支炎、嚢疱性線維症、急性白血球媒介性肺損傷（Acute leukocyte-mediated lung injury）、遠位直腸炎（Distal proctitis）、ヴェーゲナー肉芽種、線維筋痛、気管支炎、嚢疱性線維症、ブドウ膜炎、結膜炎、乾癬、湿疹、皮膚炎、平滑筋増殖障害、髄膜炎、帯状疱疹、脳炎、腎炎、結核、網膜炎、アトピー性皮膚炎、膵炎、歯周歯肉炎（Periodontal gingivitis）、凝固壊死、液化壊死、フィブリノイド壊死、新生内膜過形成、心筋梗塞、卒中、移植臓器拒絶反応、又はそれらの組み合わせである。
【０００４】
特定の実施形態において、個体において必要とされる、ＭＩＦ媒介性疾患を処置する医薬組成物が本明細書中に開示されており、医薬組成物は少なくとも一つの活性薬剤を含み、活性薬剤は、（i）ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４に結合するＭＩＦ、及び／又は（ii）ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、（iii）ホモマルチマーを形成するＭＩＦの能力、又はその組み合わせを抑制する。いくつかの実施形態において、活性薬剤は、ＭＩＦの偽のＥＬＲモチーフの全て又は一部と特異的に結合する。いくつかの実施形態において、活性薬剤は、ＭＩＦのＮ-ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合する。いくつかの実施形態において、活性薬剤は、ＭＩＦの偽のＥＬＲ及びＮ-ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合する。いくつかの実施形態において、活性薬剤は、ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、ＣＸＣＲ４アンタゴニスト、ＭＩＦアンタゴニスト、又はそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、活性薬剤は、ＣＸＣＬ８（３-７４）Ｋ１１Ｒ／Ｇ３１Ｐ、Ｓｃｈ５２７１２３、Ｎ-（３-（アミノスルホニル）-４-クロロ-２-ヒドロキシフェニル）-Ｎ’-（２,３-ジクロロフェニル）尿素、ＩＬ-８（１-７２）、（Ｒ）ＩＬ-８、（Ｒ）ＩＬ-８,ＮＭｅＬｅｕ、（ＡＡＲ）ＩＬ-８、ＧＲＯα（１-７３）、（Ｒ）ＧＲＯα、（ＥＬＲ）ＰＦ４、（Ｒ）ＰＦ４、ＳＢ-２６５６１０、アンチロイキナート（Antileukinate）、ＳＢ-５１７７８５-Ｍ、ＳＢ２６５６１０、ＳＢ２２５００２、ＳＢ４５５８２１、ＤＦ２１６２、レパリキシン（Repalixin）、ＡＬＸ４０-４Ｃ、ＡＭＤ-０７０、ＡＭＤ３１００、ＡＭＤ３４６５、ＫＲＨ-１６３６、ＫＲＨ-２７３１、ＫＲＨ-３９５５、ＫＲＨ-３１４０、Ｔ１３４、Ｔ２２、Ｔ１４０、ＴＣ１４０１２、ＴＮ１４００３、ＲＣＰ１６８、ＰＯＬ３０２６、ＣＴＣＥ-０２１４、ＣＯＲ１００１４０、又はそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、活性薬剤は、ＭＩＦの偽のＥＬＲモチーフの全て又は一部と特異的に結合するペプチド、ＭＩＦのＮ-ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合するペプチド、ＭＩＦの偽のＥＬＲ及びＮ-ループモチーフの全て又は一部と特異的に結合するペプチド、ＭＩＦとＣＸＣＲ２の結合を抑制するペプチド、ＭＩＦとＣＸＣＲ４の結合を抑制するペプチド、ＭＩＦとＪＡＢ-１の結合を抑制するペプチド、ＭＩＦとＣＤ７４の結合を抑制するペプチド、以下のようなペプチド配列の：ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱの全て又は一部、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインと特異的に結合するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱ、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインを模倣するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインと特異的に結合するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬ、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の���なくとも一つの対応する特徴／ドメインを模倣するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインと特異的に結合するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＧＫＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬ、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインを模倣するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬＨＳＩの全て又は一部、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインと特異的に結合するペプチド、以下のようなペプチド配列：ＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬＨＳＩを模倣するペプチド、又はそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、組成物は更に、第二活性薬剤を含む。いくつかの実施形態において、組成物は更に、ナイアシン、フィブラート、スタチン、アポ-Ａ１ペプチド模倣剤（例えば、ＤＦ-４、ノバルティス社）、アポＡ-Ｉ転写上方制御剤、ＡＣＡＴインヒビター、ＣＥＴＰ修飾剤、糖タンパク質（ＧＰ）ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体アンタゴニスト、Ｐ２Ｙ１２受容体アンタゴニスト、Ｌｐ-ＰＬＡ２-インヒビター、抗ＴＮＦ剤、ＩＬ-１受容体アンタゴニスト、ＩＬ-２受容体アンタゴニスト、細胞毒性薬剤、免疫調節剤、抗生物質、Ｔ細胞共刺激遮断薬、障害改善抗リウマチ薬、Ｂ細胞除去剤、免疫抑制剤、抗リンパ球抗体、アルキル化剤、抗代謝物質、植物性アルカロイド、テルペノイド、トポイソメラーゼインヒビター、抗腫瘍抗生物質、モノクローナル抗体、ホルモン療法、又はそれらの組合せを更に含む。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
本発明の新たな特徴は、添付の請求項において詳細に説明される。本発明の特徴及び利点は、説明的な実施形態を説明する以下の詳細な記述を参照することにより、よりよく理解され、これらの実施形態において、本発明の原理が利用され、添付の図面は以下の通りである：
【０００６】
【図１ａ】図１ａは、ＭＩＦ誘発性単核細胞の阻止がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４により媒介される図である。ヒト大動脈内皮細胞（ＨＡｏＥＣ）、ＩＣＡＭ-１（ＣＨＯ／ＩＣＡＭ-１）を安定に発現させるＣＨＯ細胞、及びマウスの細小血管内皮細胞（ＳＶＥＣ）は、図示されているように、ＭＩＦ（ＭＩＦに対する抗体、ＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ８に対する抗体、又はアイソタイプ対照群と共に）、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、又はＣＸＣＬ１２を用いて、又は用いずに、２時間、プレインキュベートされた。単核細胞は、図示されているように、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、β２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ７４、又はアイソタイプ対照群に対する抗体を用いて３０分間、又は百日咳毒素（ＰＴＸ）で２時間前処理された。（a）ＨＡｏＥＣは、主にヒト単球でかん流された。ａのデータは、３〜８の独立実験の平均値±ｓ.ｄ.を表す。
【図１ｂ】図１ｂは、ＭＩＦ誘発性単核細胞の阻止がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４により媒介される図である。ヒト大動脈内皮細胞（ＨＡｏＥＣ）、ＩＣＡＭ-１（ＣＨＯ／ＩＣＡＭ-１）を安定に発現させるＣＨＯ細胞、及びマウスの細小血管内皮細胞（ＳＶＥＣ）は、図示されているように、ＭＩＦ（ＭＩＦに対する抗体、ＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ８に対する抗体、又はアイソタイプ対照群と共に）、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、又はＣＸＣＬ１２を用いて、又は用いずに、２時間、プレインキュベートされた。単核細胞は、図示されているように、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、β２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ７４、又はアイソタイプ対照群に対する抗体を用いて３０分間、又は百日咳毒素（ＰＴＸ）で２時間前処理された。（b）ＭＩＦに対する抗体を用いる免疫蛍光法は、２時間の前処理後、ＨＡｏＥＣｓ及びＣＨＯ／ＩＣＡＭ-１細胞上で、ＭＩＦ（緑色）表面（surface presentation）を明らかにしたが、３０分間の前処理後では明らかにしなかった（図示せず）。対照的に、ＭＩＦは、バッファ処置細胞（対照群）中に存在しなかった。スケールバー、１００μｍ。
【図１ｃ】図１ｃは、ＭＩＦ誘発性単核細胞の阻止がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４により媒介される図である。ヒト大動脈内皮細胞（ＨＡｏＥＣ）、ＩＣＡＭ-１（ＣＨＯ／ＩＣＡＭ-１）を安定に発現させるＣＨＯ細胞、及びマウスの細小血管内皮細胞（ＳＶＥＣ）は、図示されているように、ＭＩＦ（ＭＩＦに対する抗体、ＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ８に対する抗体、又はアイソタイプ対照群と共に）、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、又はＣＸＣＬ１２を用いて、又は用いずに、２時間、プレインキュベートされた。単核細胞は、図示されているように、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、β２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ７４、又はアイソタイプ対照群に対する抗体を用いて３０分間、又は百日咳毒素（ＰＴＸ）で２時間前処理された。（ｃ）ＣＨＯ／ＩＣＡＭ-１細胞は、ＭｏｎｏＭａｃ６細胞でかん流された。ｃのデータは、３〜８の独立実験の平均値±ｓ.ｄ.を表す。
【図１ｄ】図１ｄは、ＭＩＦ誘発性単核細胞の阻止がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４により媒介される図である。ヒト大動脈内皮細胞（ＨＡｏＥＣ）、ＩＣＡＭ-１（ＣＨＯ／ＩＣＡＭ-１）を安定に発現させるＣＨＯ細胞、及びマウスの細小血管内皮細胞（ＳＶＥＣ）は、図示されているように、ＭＩＦ（ＭＩＦに対する抗体、ＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ８に対する抗体、又はアイソタイプ対照群と共に）、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、又はＣＸＣＬ１２を用いて、又は用いずに、２時間、プレインキュベートされた。単核細胞は、図示されているように、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、β２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ７４、又はアイソタイプ対照群に対する抗体を用いて３０分間、又は百日咳毒素（ＰＴＸ）で２時間前処理された。（ｄ）ＣＨＯ／ＩＣＡＭ-１細胞は、ＭｏｎｏＭａｃ６細胞でかん流された。ｄのデータは、３〜８の独立実験の平均値±ｓ.ｄ.を表す。
【図１ｅ】図１ｅは、ＭＩＦ誘発性単核細胞の阻止がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４により媒介される図である。ヒト大動脈内皮細胞（ＨＡｏＥＣ）、ＩＣＡＭ-１（ＣＨＯ／ＩＣＡＭ-１）を安定に発現させるＣＨＯ細胞、及びマウスの細小血管内皮細胞（ＳＶＥＣ）は、図示されているように、ＭＩＦ（ＭＩＦに対する抗体、ＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ８に対する抗体、又はアイソタイプ対照群と共に）、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、又はＣＸＣＬ１２を用いて、又は用いずに、２時間、プレインキュベートされた。単核細胞は、図示されているように、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、β２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ７４、又はアイソタイプ対照群に対する抗体を用いて３０分間、又は百日咳毒素（ＰＴＸ）で２時間前処理された。（e） ＨＡｏＥＣは、Ｔ細胞でかん流された。ｅのデータは、３〜８の独立実験の平均値±ｓ.ｄ.を表す。
【図１ｆ】図１は、ＭＩＦ誘発性単核細胞の阻止がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４により媒介される図である。ヒト大動脈内皮細胞（ＨＡｏＥＣ）、ＩＣＡＭ-１（ＣＨＯ／ＩＣＡＭ-１）を安定に発現させるＣＨＯ細胞、及びマウスの細小血管内皮細胞（ＳＶＥＣ）は、図示されているように、ＭＩＦ（ＭＩＦに対する抗体、ＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ８に対する抗体、又はアイソタイプ対照群と共に）、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、又はＣＸＣＬ１２を用いて、又は用いずに、２時間、プレインキュベートされた。単核細胞は、図示されているように、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、β２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ７４、又はアイソタイプ対照群に対する抗体を用いて３０分間、又は百日咳毒素（ＰＴＸ）で２時間前処理された。（ｆ）ＣＨＯ／ＩＣＡＭ-１細胞は、ジャーカットＴ細胞でかん流された。ｆのデータは、３〜８の独立実験の平均値±ｓ.ｄ.を表す。
【図１ｇ】図１ｇは、ＭＩＦ誘発性単核細胞の阻止がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４により媒介される図である。ヒト大動脈内皮細胞（ＨＡｏＥＣ）、ＩＣＡＭ-１（ＣＨＯ／ＩＣＡＭ-１）を安定に発現させるＣＨＯ細胞、及びマウスの細小血管内皮細胞（ＳＶＥＣ）は、図示されているように、ＭＩＦ（ＭＩＦに対する抗体、ＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ８に対する抗体、又はアイソタイプ対照群と共に）、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、又はＣＸＣＬ１２を用いて、又は用いずに、２時間、プレインキュベートされた。単核細胞は、図示されているように、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、β２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ７４、又はアイソタイプ対照群に対する抗体を用いて３０分間、又は百日咳毒素（ＰＴＸ）で２時間前処理された。（ｇ）ＣＨＯ／ＩＣＡＭ−１細胞は、ジャーカットＣＸＣＲ２トランスフェクタント又はベクター対照群で灌流された。ベクタートランスフェクトしたＣＨＯ細胞とのバックグラウンド結合は差し引かれた。ｇのデータは、３〜８の独立実験の平均値±ｓ.ｄ.を表す。
【図１ｈ】図１ｈは、ＭＩＦ誘発性単核細胞の阻止がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４により媒介される図である。ヒト大動脈内皮細胞（ＨＡｏＥＣ）、ＩＣＡＭ-１（ＣＨＯ／ＩＣＡＭ-１）を安定に発現させるＣＨＯ細胞、及びマウスの細小血管内皮細胞（ＳＶＥＣ）は、図示されているように、ＭＩＦ（ＭＩＦに対する抗体、ＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ８に対する抗体、又はアイソタイプ対照群と共に）、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、又はＣＸＣＬ１２を用いて、又は用いずに、２時間、プレインキュベートされた。単核細胞は、図示されているように、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、β２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ７４、又はアイソタイプ対照群に対する抗体を用いて３０分間、又は百日咳毒素（ＰＴＸ）で２時間前処理された。（ｈ）マウスＳＶＥＣは、ＣＸＣＲ４アンタゴニストＡＭＤ３４６５の存在下において、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２又はＣＸＣＲ３を安定に発現させるＬ１.２トランスフェクタントでかん流され、及び内因性ＣＸＣＲ４のみを発現させる対照群でかん流された。阻止は、細胞／ｍｍ２又は対照細胞付着の割合として測定される。ｈのデータは、４つの実験の一つの代表的な実験から生じた結果である。
【０００７】
【図２ａ】図２ａは、ＭＩＦ誘発性単核細胞の走化性がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４により媒介される図である。主なヒト単球（ａ〜ｅ）、ＣＤ３＋Ｔ細胞（f）及び好中球（ｇ、ｈ）は、ＭＩＦの存在下、又は欠如下において、遊走分析（transmigration analysis）に個々にかけられた。ＣＣＬ２（a）、ＣＸＣＬ８（ａ、ｇ、ｈ）及びＣＸＣＬ１２（f）は、陽性対照群としての役目を果たし、又はＭＩＦ（又はＣＸＣＬ８による、ｈ）による脱感作の検査のために使用された。単球（a）上のＭＩＦ、ＣＣＬ２及びＣＸＣＬ８の走化性効果、又は好中球（g）上のＭＩＦの走化性効果は、円錐型の用量反応曲線に従った。ａ及びｆ〜ｈにおけるデータは、走化指数として表され、ｃにおけるデータは対照群のパーセントとして表され、及びｂ、ｄ、並びにｅにおけるデータは入力のパーセントとして表される。データは、４〜１０の独立実験の平均値±ｓ.ｄ.を表すが、パネルａ、ｃ及びｇ、ｂの煮沸したＭＩＦ、及び二つの独立実験の平均値であるｂ並びにｅにおける活性薬剤のみの対照群は除く。
【図２ｂ】図２ｂは、ＭＩＦ誘発性単核細胞の走化性がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４により媒介される図である。主なヒト単球（ａ〜ｅ）、ＣＤ３＋Ｔ細胞（f）及び好中球（ｇ、ｈ）は、ＭＩＦの存在下、又は欠如下において、移動分析（transmigration analysis）に個々にかけられた。ＭＩＦ誘発性単球の走化性は、ＭＩＦに対する活性薬剤、煮沸（b）、又は示されている濃度でのＭＩＦ（頂部チャンバー内、ｃ）により、妨げられた。ａ及びｆ〜ｈにおけるデータは、走化指数として表され、ｃにおけるデータは対照群のパーセントとして表され、及びｂ、ｄ、並びにｅにおけるデータは入力のパーセントとして表される。データは、４〜１０の独立実験の平均値±ｓ.ｄ.を表すが、パネルａ、ｃ及びｇ、ｂの煮沸したＭＩＦ、及び二つの独立実験の平均値であるｂ並びにｅにおける活性薬剤のみの対照群は除く。
【図２ｃ】図２ｃは、ＭＩＦ誘発性単核細胞の走化性がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４により媒介される図である。主なヒト単球（ａ〜ｅ）、ＣＤ３＋Ｔ細胞（f）及び好中球（ｇ、ｈ）は、ＭＩＦの存在下、又は欠如下において、移動分析（transmigration analysis）に個々にかけられた。ＭＩＦ誘発性単球の走化性は、ＭＩＦに対する活性薬剤、煮沸（b）、又は示されている濃度でのＭＩＦ（頂部チャンバー内、ｃ）により、妨げられた。ａ及びｆ〜ｈにおけるデータは、走化指数として表され、ｃにおけるデータは対照群のパーセントとして表され、及びｂ、ｄ、並びにｅにおけるデータは入力のパーセントとして表される。データは、４〜１０の独立実験の平均値±ｓ.ｄ.を表すが、パネルａ、ｃ及びｇ、ｂの煮沸したＭＩＦ、及び二つの独立実験の平均値であるｂ並びにｅにおける活性薬剤のみの対照群は除く。
【図２ｄ】図２ｄは、ＭＩＦ誘発性単核細胞の走化性がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４により媒介される図である。主なヒト単球（ａ〜ｅ）、ＣＤ３＋Ｔ細胞（f）及び好中球（ｇ、ｈ）は、ＭＩＦの存在下、又は欠如下において、遊走分析（transmigration analysis）に個々にかけられた。（d）ＭＩＦ誘発性走化性は、Ｇ□ｉ／ホスホイノシチド-３-キナーゼシグナル伝達により媒介され、ＭＩＦ誘発性走化性は、百日毒素成分Ａ及びＢ（ＰＴＸ Ａ＋Ｂ）、ＰＴＸ成分Ｂのみ、又はＬｙ２９４００２を用いる処置によって証明された。ａ及びｆ〜ｈにおけるデータは、走化指数として表され、ｃにおけるデータは対照群のパーセントとして表され、及びｂ、ｄ、並びにｅにおけるデータは入力のパーセントとして表される。データは、４〜１０の独立実験の平均値±ｓ.ｄ.を表すが、パネルａ、ｃ及びｇ、ｂの煮沸したＭＩＦ、及び二つの独立実験の平均値であるｂ並びにｅにおける活性薬剤のみの対照群は除く。
【図２ｅ】図２ｅは、ＭＩＦ誘発性単核細胞の走化性がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４により媒介される図である。主なヒト単球（ａ〜ｅ）、ＣＤ３＋Ｔ細胞（f）及び好中球（ｇ、ｈ）は、ＭＩＦの存在下、又は欠如下において、遊走分析（transmigration analysis）に個々にかけられた。（e）ＭＩＦ媒介性単球の走化性は、ＣＤ７４又はＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２に対する抗体により遮断された。ａ及びｆ〜ｈにおけるデータは、走化指数として表され、ｃにおけるデータは対照群のパーセントとして表され、及びｂ、ｄ、並びにｅにおけるデータは入力のパーセントとして表される。データは、４〜１０の独立実験の平均値±ｓ.ｄ.を表すが、パネルａ、ｃ及びｇ、ｂの煮沸したＭＩＦ、及び二つの独立実験の平均値であるｂ並びにｅにおける活性薬剤のみの対照群は除く。
【図２ｆ】図２ｆは、ＭＩＦ誘発性単核細胞の走化性がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４により媒介される図である。主なヒト単球（ａ〜ｅ）、ＣＤ３＋Ｔ細胞（f）及び好中球（ｇ、ｈ）は、ＭＩＦの存在下、又は欠如下において、遊走分析（transmigration analysis）に個々にかけられた。（f）ＭＩＦにより誘発されるＴ細胞走化性は、ＭＩＦ及びＣＸＣＲ４に対する抗体により遮断された。ａ及びｆ〜ｈにおけるデータは、走化指数として表され、ｃにおけるデータは対照群のパーセントとして表され、及びｂ、ｄ、並びにｅにおけるデータは入力のパーセントとして表される。データは、４〜１０の独立実験の平均値±ｓ.ｄ.を表すが、パネルａ、ｃ及びｇ、ｂの煮沸したＭＩＦ、及び二つの独立実験の平均値であるｂ並びにｅにおける活性薬剤のみの対照群は除く。
【図２ｇ】図２ｇは、ＭＩＦ誘発性単核細胞の走化性がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４により媒介される図である。主なヒト単球（ａ〜ｅ）、ＣＤ３＋Ｔ細胞（f）及び好中球（ｇ、ｈ）は、ＭＩＦの存在下、又は欠如下において、移動分析（transmigration analysis）に個々にかけられた。（g）ＭＩＦにより誘発される好中球走化性。ａ及びｆ〜ｈにおけるデータは、走化指数として表され、ｃにおけるデータは対照群のパーセントとして表され、及びｂ、ｄ、並びにｅにおけるデータは入力のパーセントとして表される。データは、４〜１０の独立実験の平均値±ｓ.ｄ.を表すが、パネルａ、ｃ及びｇ、ｂの煮沸したＭＩＦ、及び二つの独立実験の平均値であるｂ並びにｅにおける活性薬剤のみの対照群は除く。
【図２ｈ】図２ｈは、ＭＩＦ誘発性単核細胞の走化性がＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４及びＣＤ７４により媒介される図である。主なヒト単球（ａ〜ｅ）、ＣＤ３＋Ｔ細胞（f）及び好中球（ｇ、ｈ）は、ＭＩＦの存在下、又は欠如下において、移動分析（transmigration analysis）に個々にかけられた。（h）ＣＸＣＬ８誘発性好中球走化性に対するＭＩＦ誘発性好中球走化、ＣＸＣＲ２又はＣＸＣＲ１に対する抗体の効果、及びＭＩＦによるＣＸＣＬ８の脱感作。ａ及びｆ〜ｈにおけるデータは、走化指数として表され、ｃにおけるデータは対照群のパーセントとして表され、及びｂ、ｄ、並びにｅにおけるデータは入力のパーセントとして表される。データは、４〜１０の独立実験の平均値±ｓ.ｄ.を表すが、パネルａ、ｃ及びｇ、ｂの煮沸したＭＩＦ、及び二つの独立実験の平均値であるｂ並びにｅにおける活性薬剤のみの対照群は除く。
【０００８】
【図３ａ】図３ａは、ＭＩＦが急速なインテグリン活性化及びカルシウムシグナル伝達を引き起こす図である。（a）ヒト大動脈内皮細胞は、ＭＩＦ又はＴＮＦ-αを用いて２時間刺激された。ＣＸＣＬ１及びＣＸＣＬ８ｍＲＮＡは、リアルタイムＰＣＲにより分析され、対照群に基準化された。上澄み由来のＣＸＣＬ８は、ＥＬＩＳＡ（ｎ＝繰り返し行われた３つの独立実験）により評価された。
【図３ｂ】図３ｂは、ＭＩＦが急速なインテグリン活性化及びカルシウムシグナル伝達を引き起こす図である。（b）ＭｏｎｏＭａｃ６細胞は、ＭＩＦ又はＣＸＣＬ８を用いて１分間直接刺激され、ＣＨＯ-ＩＣＡＭ-１細胞上で５分間（８つの独立実験の平均値±ｓ.ｄ.）かん流された。
【図３ｃ】図３ｃは、ＭＩＦが急速なインテグリン活性化及びカルシウムシグナル伝達を引き起こす図である。（c） ＭｏｎｏＭａｃ６細胞は、ＭＩＦを用いて、示された回数刺激された。ＬＦＡ−活性化（３２７ｃ抗体により検出）は、ＦＡＣＳＡｒｉａにより観察され、平均蛍光強度（ＭＩＦ）における伸び率として表された。ｃ〜ｅにおける阻止データは、５つの独立実験の平均値±ｓ.ｄ.を表す。
【図３ｄ】図３ｄは、ＭＩＦが急速なインテグリン活性化及びカルシウムシグナル伝達を引き起こす図である。（d）ｃのように、主な単球を別にすれば、データは、Ｍｇ２＋／ＥＧＴＡによる最大活性化に対して表される。ｃ〜ｅにおける阻止データは、５つの独立実験の平均値±ｓ.ｄ.を表す。
【図３ｅ】図３ｅは、ＭＩＦが急速なインテグリン活性化及びカルシウムシグナル伝達を引き起こす図である。（e） ＭｏｎｏＭａｃ６細胞は、α４インテグリン、ＣＤ７４又はＣＸＣＲ２に対する抗体を用いて前処理され、ＭＩＦを用いて１分間刺激され、ＶＣＡＭ-１．Ｆｃ上で５分間かん流された。接着は、対照群のパーセントとして表現される。ｃ〜ｅにおける阻止データは、５つの独立実験の平均値±ｓ.ｄ.を表す。
【図３ｆ】図３ｆは、ＭＩＦが急速なインテグリン活性化及びカルシウムシグナル伝達を引き起こす図である。（f）Ｆｌｕｏ-４ ＡＭ標識化好中球におけるカルシウムトランジェントは、ＭＩＦ、ＣＸＣＬ８、又はＣＸＣＬ７を用いて刺激された。カルシウム由来のＭＩＦは、ＦＡＣＳＡｒｉａにより０〜２４０秒記録された。脱感作のため、刺激が刺激作用前に１２０秒間加えられた。図示された跡は、４つの独立した実験を表す。
【図３ｇ】図３ｇは、ＭＩＦが急速なインテグリン活性化及びカルシウムシグナル伝達を引き起こす図である。（g）示された濃度での、Ｌ１.２-ＣＸＣＲ２トランスフェクタントにおける、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ７又はＭＩＦにより誘発されるカルシウム流入の用量反応曲線。データは、基準値とピークのＭＩＦ（４〜８の独立実験の平均値±ｓ.ｄ.）との差として表される。
【０００９】
【図４ａ】図４ａは、ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４とのＭＩＦ相互作用およびＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の形成の図である。ＨＥＫ２９３-ＣＸＣＲ２トランスフェクタント（a）又はＣＸＣＲ４を有するジャーカットＴ細胞（c）は、ＭＩＦ又は低温の同族リガンド（平均値±ｓ.ｄ.、ｎ＝６−１０）により、[Ｉ１２５]ＣＸＣＬ８（a）又は[Ｉ１２５]ＣＸＣＬ１２（c）の競合作用を分析する受容体結合アッセイにかけられた。
【図４ｂ】図４ｂは、ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４とのＭＩＦ相互作用およびＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の形成の図である。（b）図のような、ＨＥＫ２９３-ＣＸＣＲ２又はＲＡＷ２６４．７−ＣＸＣＲ２トランスフェクタント（挿入図は代表的なヒストグラムを示す）における、ＭＩＦ-及びＣＸＣＬ８-誘発性ＣＸＣＲ２の内在化、表面ＣＸＣＲ２発現のＦＡＣＳ分析（バッファの割合（Ｃｏｎ）、平均値±ｓ.ｄ.、ｎ＝５）により評価される。
【図４ｃ】図４ｃは、ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４とのＭＩＦ相互作用およびＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の形成の図である。ＨＥＫ２９３-ＣＸＣＲ２トランスフェクタント（a）又はＣＸＣＲ４を有するジャーカットＴ細胞（c）は、ＭＩＦ又は低温の同族リガンド（平均値±ｓ.ｄ.、ｎ＝６−１０）により、[Ｉ１２５]ＣＸＣＬ８（a）又は[Ｉ１２５]ＣＸＣＬ１２（c）の競合作用を分析する受容体結合アッセイにかけられた。
【図４ｄ】図４ｄは、ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４とのＭＩＦ相互作用およびＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の形成の図である。（d）ｂ（平均値±ｓ.ｄ.、ｎ＝４−６）におけるような、ジャーカットＴ細胞におけるＭＩＦ-及びＣＸＣＬ１２-誘発性ＣＸＣＲ４の内在化。
【図４ｅ】図４ｅは、ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４とのＭＩＦ相互作用およびＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の形成の図である。（e）フルオレセイン-ＭＩＦの、ＨＥＫ２９３-ＣＸＣＲ２トランスフェクタント、又はＦＡＣＳにより分析されるベクター対照群との結合。挿入図は、ビオチン-ＭＩＦの、ベクター対照群に対するＨＥＫ２９３-ＣＸＣＲ２トランスフェクタントからストレプトアゼジン（ＳＡｖ）をプルダウンした後に、ＣＸＣＲ２に対する抗体を用いるウェスタンブロットにより評価されるＣＸＣＲ２との結合を示す。データは３つの独立実験を表す（ｅ〜ｈ）。
【図４ｆ】図４ｆは、ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４とのＭＩＦ相互作用およびＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の形成の図である。（f）ＲＡＷ２６４．７−ＣＸＣＲ２トランスフェクタントにおけるＣＸＣＲ２及びＣＤ７４（橙黄色の重なり）の共局在化は、ＣＸＣＲ２、ＣＤ７４、及び核（ヘキスト社）に関して染色され、蛍光顕微鏡検査法（頂部）又は共焦点レーザー走査顕微鏡法（底部）により分析された。スケールバー、10μｍ。データは３つの独立実験を表す（ｅ〜ｈ）。
【図４ｇ】図４ｇは、ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４とのＭＩＦ相互作用およびＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の形成の図である。（g）Ｈｉｓタグを付けたＣＤ７４を発現させるＨＥＫ２９３-ＣＸＣＲ２トランスフェクタントのＣＨＡＰＳＯ-抽出物におけるＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の免疫共沈降。抗Ｈｉｓ−免疫沈降（ＩＰ）後、抗ＣＸＣＲ２又は抗Ｈｉｓ−ＣＤ７４のウェスタンブロット法（ＷＢ、頂部）が続き、又は抗ＣＸＣＲ２免疫沈降の後に、抗Ｈｉｓ−ＣＤ７４又は抗ＣＸＣＲ２ウェスタンブロット法（底部）が続いた。対照群：免疫沈降を含まない可溶化液、又はビーズのみ。データは３つの独立実験を表す（ｅ〜ｈ）。
【図４ｈ】図４ｈは、ＣＸＣＲ２／ＣＸＣＲ４とのＭＩＦ相互作用およびＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体の形成の図である。（ｈ）Ｌ１．２-ＣＸＣＲ２トランスフェクタントに関して、ｇにおける通り。Ｌ１．２-ＣＸＣＲ２トランスフェクタントからの抗ＣＸＣＲ２免疫沈降後、抗ＣＤ７４又は抗ＣＸＣＲ２ウェスタンブロット法（頂部）が続いた。アイソタイプＩｇＧ又はＣＸＣＲ２-陰性Ｌ１．２-細胞（底部）を伴う免疫沈降は、対照群として機能した。データは３つの独立実験を表す（ｅ〜ｈ）。
【００１０】
【図５ａ】図５ａは、インビボでＣＸＣＲ２を介したＭＩＦ誘発性アテローム生成及び微小血管炎症、及びＭＩＦの効果がプラーク退縮を遮断する図である。（ａ）インビボの管腔への単球付着、及び未変性の大動脈基部における病変マクロファージ内容物への単球付着は、固形飼料を30週間食事として与えられたＭｉｆ＋／＋Ｌｄｌｒ−／及びＭｉｆ−／Ｌｄｌｒ／−マウス（ｎ＝４）において測定された。代表的な画像が示されている。矢印は、管腔表面に付着した単球を示す。スケールバー、１００μｍ。
【図５ｂ】図５ｂは、インビボＣＸＣＲ２を介したＭＩＦ誘発性アテローム生成及び微小血管炎症、及びＭＩＦの効果がプラーク退縮を遮断する図である。（ｂ、ｃ）ＭＩＦ誘発性ＣＸＣＲ２−依存性白血球のインビボ動員への膨露。ＭＩＦのその後の陰嚢内注入、精巣挙筋の微小血管系は、生体顕微鏡検査により視覚化された。遮断ＣＸＣＲ２抗体を用いる前処理は、ＩｇＧ対照群（ｎ＝４）と比較して、接着及び遊走を妨げた。
【図５ｃ】図５ｃは、インビボでＣＸＣＲ２を介したＭＩＦ誘発性アテローム生成及び微小血管炎症、及びＭＩＦの効果がプラーク退縮を遮断する図である。（ｂ、ｃ）ＭＩＦ誘発性ＣＸＣＲ２−依存性白血球のインビボ動員への膨露。ＭＩＦの以下の陰嚢内注入、精巣挙筋の微小血管系は、生体顕微鏡検査により視覚化された。遮断ＣＸＣＲ２抗体を用いる前処理は、ＩｇＧ対照群（ｎ＝４）と比較して、接着及び遊走を妨げた。
【図５ｄ】図５ｄは、インビボでＣＸＣＲ２を介したＭＩＦ誘発性アテローム生成及び微小血管炎症、及びＭＩＦの効果がプラーク退縮を遮断する図である。（ｄ）ＭＩＦ又はビヒクルの腹腔内注入は、野生型、但しＩｌ８ｒｂ−／ではない骨髄で再構築される野生型マウス（ｎ＝３）における好中球動員を誘発した。
【図５ｅ】図５ｅは、インビボでＣＸＣＲ２を介したＭＩＦ誘発性アテローム生成及び微小血管炎症、及びＭＩＦの効果がプラーク退縮を遮断する図である。（ｅ〜ｈ）ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２でない遮断ＭＩＦは、進行したアテローム硬化性プラークの退行及び安定をもたらす。アポｅ−／マウスは、高脂肪食を12週間与えられ、続いてＭＩＦ、ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２に対する抗体を用いて、又はビヒクル（対照群）を用いて更に4週間、（ｎ＝６〜１０のマウス）処置された。大動脈基部におけるプラークは、オイルレッドＯを用いて染色された。代表的な画像は、ｅ（スケールバー、５００μｍ）において示される。ｆにおけるデータは、ベースライン時（１２週間）、及び１６週間後のプラーク領域を表す。ＭＯＭＡ−２＋マクロファージの相対含量は、ｇにおいて示されており、ｈのセクションごとのＣＤ３+Ｔ細胞の数。データは平均値± s.d.を表す。
【図５ｆ】図５ｆは、インビボでＣＸＣＲ２を介したＭＩＦ誘発性アテローム生成及び微小血管炎症、及びＭＩＦの効果がプラーク退縮を遮断する図である。（ｅ〜ｈ）ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２でない遮断ＭＩＦは、進行したアテローム硬化性プラークの退行及び安定をもたらす。アポｅ−／マウスは、高脂肪食を12週間与えられ、続いてＭＩＦ、ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２に対する抗体を用いて、又はビヒクル（対照群）を用いて更に4週間、（ｎ＝６〜１０のマウス）処置された。大動脈基部におけるプラークは、オイルレッドＯを用いて染色された。代表的な画像は、ｅ（スケールバー、５００μｍ）において示される。ｆにおけるデータは、ベースライン時（１２週間）、及び１６週間後のプラーク領域を表す。ＭＯＭＡ−２＋マクロファージの相対含量は、ｇにおいて示されており、ｈのセクションごとのＣＤ３+Ｔ細胞の数。データは平均値± s.d.を表す。
【図５ｇ】図５ｇは、インビボでＣＸＣＲ２を介したＭＩＦ誘発性アテローム生成及び微小血管炎症、及びＭＩＦの効果がプラーク退縮を遮断する図である。（ｅ〜ｈ）ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２でない遮断ＭＩＦは、進行したアテローム硬化性プラークの退行及び安定をもたらす。アポｅ−／マウスは、高脂肪食を12週間与えられ、続いてＭＩＦ、ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２に対する抗体を用いて、又はビヒクル（対照群）を用いて更に4週間、（ｎ＝６〜１０のマウス）処置された。大動脈基部におけるプラークは、オイルレッドＯを用いて染色された。代表的な画像は、ｅ（スケールバー、５００μｍ）において示される。ｆにおけるデータは、ベースライン時（１２週間）、及び１６週間後のプラーク領域を表す。ＭＯＭＡ−２＋マクロファージの相対含量は、ｇにおいて示されており、ｈのセクションごとのＣＤ３+Ｔ細胞の数。データは平均値± s.d.を表す。
【図５ｈ】図５ｈは、インビボでＣＸＣＲ２を介したＭＩＦ誘発性アテローム生成及び微小血管炎症、及びＭＩＦの効果がプラーク退縮を遮断する図である。（ｅ〜ｈ）ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２でない遮断ＭＩＦは、進行したアテローム硬化性プラークの退行及び安定をもたらす。アポｅ−／マウスは、高脂肪食を12週間与えられ、続いてＭＩＦ、ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２に対する抗体を用いて、又はビヒクル（対照群）を用いて更に4週間、（ｎ＝６〜１０のマウス）処置された。大動脈基部におけるプラークは、オイルレッドＯを用いて染色された。代表的な画像は、ｅ（スケールバー、５００μｍ）において示される。ｆにおけるデータは、ベースライン時（１２週間）、及び１６週間後のプラーク領域を表す。ＭＯＭＡ−２＋マクロファージの相対含量は、ｇにおいて示されており、ｈのセクションごとのＣＤ３+Ｔ細胞の数。データは平均値± s.d.を表す。
【００１１】
【図６】図６は、アテローム発生内容物におけるＭＩＦの細胞機構の図である。ＭＩＦ発現は、血管壁の細胞及び内膜マクロファージ内において、様々なプロアテローム生成的刺激（proatherogenic stimuli）、例えば、酸化型ＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ）又はアンジオテンシンＩＩ（ＡＴＩＩ）により誘発される。続いて、ＭＩＦは、内皮細胞付着分子（例えば、血管[ＶＣＡＭ-１]及び細胞内[ＩＣＡＭ-１]付着分子）並びにケモカイン（例えば、ＣＣＬ２）を上方制御し、ヘプタヘリカル（heptahelical）（ケモカイン）受容体ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介して結合又はシグナル伝達することにより、それぞれのインテグリン受容体（例えば、ＬＦＡ-１及びＶＬＡ-４）の直接的活性化を引き起こす。このことは単核細胞（単球及びＴ細胞）の動員、並びにマクロファージの泡沫細胞への変換を伴い、アポトーシスを抑制し、ＳＭＣの移動又は増殖を制御する（例えば、損なう）。ＭＭＰ及びカテプシンを誘発することにより、ＭＩＦは、エラスチン及びコラーゲン分解を促進し、最終的に不安定なプラークへの進行を招く。ＲＯＳは活性酸素種、ＰＤＧＦ-ＢＢ、血小板由来成長因子-ＢＢを示す。
【００１２】
【図７】図７は、機能的なＭＩＦ受容体複合体を介したシグナル伝達の図である。ＭＩＦは、サイトカイン生成を制御することによりその機能を無効にするグルココルチコイドにより誘発され、そのエンドサイトーシスの後、細胞内タンパク質、すなわちＪＡＢ-１と相互作用することが可能であり、それによりＭＡＰＫシグナル伝達を下方制御し、細胞酸化還元ホメオスタシスを調節する。いくつかの実施形態において、細胞外ＭＩＦは、細胞表面タンパク質ＣＤ７４（インバリアント鎖Ｉｉ）に結合する。ＣＤ７４は、シグナル伝達細胞内ドメインを欠いているが、プロテオグリガンＣＤ４４に相互作用すると共に、ＣＤ４４を介してシグナル伝達を媒介することで、Ｓｒｃ-ファミリーＰＴＫ及びＭＡＰＫ／細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）の活性化を誘発し、Ｐ１３Ｋ／Ａｋｔ経路を活性化し、又はｐ５３−依存性アポトーシス抑制を始める。ＭＩＦはまた、Ｇタンパク質共役型ケモカイン受容体（ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４）のみを介して、結合及びシグナル伝達を行う。付属結合を可能にする、ＣＤ７４を用いたＣＸＣＲ２の複合体形成は、ＧＰＣＲ活性化及びＧＰＣＲ-ＲＴＫのようなシグナル伝達複合体の形成を容易にして、カルシウム流入及び急速なインテグリン活性化を誘発する。
【００１３】
【図８】図８は、心筋病変におけるＭＩＦの効果の図である。虚血再かん流障害の内容物において、敗血症における低酸素、活性酸素種（ＲＯＳ）、及びエンドトキシン（例えば、リポ多糖体[ＬＰＳ]）は、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）依存性機構を介して、心筋細胞からＭＩＦの分泌を誘発し、心筋細胞アポトーシスに寄与する細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）活性化をもたらす。ＭＩＦは、生存している心筋細胞、又は、処置上の注入に用いられる内皮前駆細胞（例えば、ｅＥＰＣ）によって発現されるが、いくつかの実施形態において、ＭＩＦは、その受容体ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介して血管形成を促進し、ＭＡＰＫとＰＩ３Ｋの活性化を要求する。
【００１４】
【図９ａ】図９ａは、ＣＸＣＲ２による随伴性干渉を伴わないＣＸＣＲ４による干渉が、アテローム性動脈硬化を悪化させる図である。高脂質食を受けるアポｅ-／-マウスは、浸透圧ミニポンプを介して１２週間（ｎ＝各々６）、ビヒクル（対照群）又はＡＭＤ３４６５を用いて持続的に処置された。アテローム硬化性プラークは、オイルレッドＯでの染色後、大動脈基部（図１４ａ）及び胸腹部大動脈（図１４ｂ）において数量化された。好中球の相対数は、表示された時点（図１４ｃ）での末梢血液中のフローサイトメリー分析、又は標準的なサイトメトリーにより測定される。
【図９ｂ】図９ｂは、ＣＸＣＲ２による随伴性干渉を伴わないＣＸＣＲ４による干渉が、アテローム性動脈硬化を悪化させる図である。高脂質食を受けるアポｅ-／-マウスは、浸透圧ミニポンプを介して１２週間（ｎ＝各々６）、ビヒクル（対照群）又はＡＭＤ３４６５を用いて持続的に処置された。アテローム硬化性プラークは、オイルレッドＯでの染色後、大動脈基部（図１４ａ）及び胸腹部大動脈（図１４ｂ）において数量化された。好中球の相対数は、表示された時点（図１４ｃ）での末梢血液中のフローサイトメリー分析、又は標準的なサイトメトリーにより測定される。
【図９ｃ】図９ｃは、ＣＸＣＲ２による随伴性干渉を伴わないＣＸＣＲ４による干渉が、アテローム性動脈硬化を悪化させる図である。高脂質食を受けるアポｅ-／-マウスは、浸透圧ミニポンプを介して１２週間（ｎ＝各々６）、ビヒクル（対照群）又はＡＭＤ３４６５を用いて持続的に処置された。アテローム硬化性プラークは、オイルレッドＯでの染色後、大動脈基部（図１４ａ）及び胸腹部大動脈（図１４ｂ）において数量化された。好中球の相対数は、表示された時点（図１４ｃ）での末梢血液中のフローサイトメリー分析、又は標準的なサイトメトリーにより測定される。
【００１５】
【図１０】図１０は、ＭＩＦ三量体の結晶構造を図示している。偽のＥＬＲドメインは、三量体中に環を形成する一方で、Ｎ-ループドメインは、偽のＥＬＲ環から外向きに延出する。
【００１６】
【図１１】図１１は、Ｎ-ループドメイン及び偽のＥＬＲドメインに相当する配列を示すために注釈を付けた、ＭＩＦのヌレオクチド配列を図示している。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
特定の実施形態において、ＣＸＣＲ２およびＣＸＣＲ４を介したＭＩＦのシグナル伝達を抑制する方法が、本明細書中に開示される。いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２およびＣＸＣＲ４を介したＭＩＦのシグナル伝達は、活性薬剤を用いてＣＸＣＲ２およびＣＸＣＲ４というＭＩＦ結合ドメインを占有することにより抑制される。いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２およびＣＸＣＲ４を介したＭＩＦのシグナル伝達は、ＭＩＦ上のドメインを占有、遮蔽、又はそれ以外に破壊することにより抑制される。いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２およびＣＸＣＲ４を介したＭＩＦのシグナル伝達は、ＭＩＦ上のドメインを活性薬剤で占有、遮蔽、又はそれ以外に破壊すること、及びそれによりＭＩＦのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合を破壊することにより抑制される。いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２およびＣＸＣＲ４を介したＭＩＦのシグナル伝達は、ＭＩＦ上のドメインを活性薬剤で占有、遮蔽、またその他に破壊すること、及びそれによりＭＩＦ三量体形成を破壊することによって抑制される。
【００１８】
ＭＩＦの相互作用を抑制、又はＭＩＦの発現を下方制御する方法は多くある一方で、当該技術は、ＭＩＦの特定の部分が、白血球相互作用に関して他の部分よりも重要であるという認識を欠いている。本明細書中において解決される問題は、ペプチド及び小分子の認識並びに産生であり、ペプチド及び小分子は、白血球走化性に対して重要であるＭＩＦの選択部分に結合する。
【００１９】
更に、多くのペプチド及び小分子が存在し、ペプチド及び小分子は、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４とそれらのリガンドとの相互作用を抑制又は下方制御する。しかしながら、これらの受容体もまた、他のリガンド（例えば、ＩＬ−８／ＣＸＣＬ８、ＧＲＯｂｅｔａ／ＣＸＣＬ２及び／又はストロマ細胞由来因子-１ａ（ＳＤＦ-１ａ）／ＣＸＣＬ１２）との相互作用に関わる。有害な副作用は、これら後者の相互作用が抑制される場合、しばしば生じる。本明細書中において解決される問題は、ＭＩＦの抗ＣＸＣＲ２及び抗ＣＸＣＲ４との相互作用を選択的に抑制するペプチド及び小分子を設計するための当該技術分野の失敗である。
【００２０】
特定の定義
用語「個体」、「被検体」、又は「患者」は、交互に用いられる。本明細書中において使用されるように、これら用語は任意の哺乳動物（即ち、分類学的な分類動物界内の任意の目、群、または属の種：脊索動物：脊椎動物：哺乳動物）を意味する。いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物は、分類学目：霊長類（例えば、キツネザル、ロリス（lorids）、ガラゴ属、メガネザル、サル、類人猿、及びヒト）、げっ歯類（例えば、マウス、ネズミ、リス、シマリス、及びホリネズミ）、ウサギ目（例えば、ノウサギ、ウサギ、ナキウサギ）、ハリネズミ目（erinaceomorpha）（例えば、ハリネズミ及びジムヌラ（gymnures））、トガリネズミ目（例えば、トガリネズミ、モグラ、及びソレノドン）、翼手類（例えば、コウモリ）、クジラ目（例えば、クジラ、イルカ、及びネズミイルカ）、肉食動物（例えば、ネコ、ライオン、及びその他のネコ亜目、イヌ、クマ、イタチ、及びアザラシ）、 奇蹄類（例えば、ウマ、シマウマ、バク、及びサイ）、偶蹄類（例えば、ブタ、ラクダ、牛、及びシカ）、長鼻目（例えば、ゾウ）、海牛目（例えば、マナティ、ジュゴン、及び海牛）、哺乳動物目異節上目被甲目（cingulata）（例えば、アルマジロ）、有眉目（例えば、アリクイ及びナマケモノ）、 有袋類オポッサム目（didelphimophia）（例えば、アメリカンオポッサム（american opossums）、ケノレステス目（paucituberculata）（例えば、ケノレステス（shrew opossums））、ミクロビオテリウム目（例えば、チエロオポッサム（Monito del Monte））、フクロモグラ目（notoryctemorphia）（例えば、フクロモグラ）、フクロネコ目（dasyuromorphia）（例えば、有袋類の肉食動物（marsupial carnivores））、 バンディクート目（例えば、バンディクート及びビルビー（bilbies））、又はカンガルー目（例えば、ウォンバット、コアラ、ポッサム、モモンガ（glider）、カンガルー、ワラルー、及びワラビー）の一員である。いくつかの実施形態において、動物は爬虫類（即ち、分類学的な分類動物界内の任意の目、群、及び属の種：脊索動物：脊椎動物：爬虫類）である。いくつかの実施形態において、動物は鳥類（即ち、動物界：脊索動物：脊椎動物：鳥類）である。どの用語も、医療従事者（例えば、医師、正看護士、上級看護士、医師の助手、病棟勤務員、又はホスピスワーカー）の管理（例えば、定常性又は間欠性）により特徴化される状況を要求しない、又はこれに制限されない。 
【００２１】
結合分子（即ち、活性薬剤、例えば、ペプチド又はペプチド模倣剤）と、タンパク質又はポリペプチド或いはエピトープの間の相互作用に対する言及時、成句「特異的に結合する」は、一般的に結合分子を表し、この結合分子は、所望の対象となる標的を認識し、所望の対象となる標的を高い親和性で検出可能に特異的に結合する。好ましくは、指定の条件又は生理学的条件下で、特定の抗体又は結合分子は、特定のポリペプチド、タンパク質、又はエピトープに結合するが、検体中に存在する他の分子とは、莫大な、又は望ましくない量で結合しない。言い換えると、特定の抗体又は結合分子は、標的ではない抗原及び／又はエピトープとの望ましくない交差反応は行わない。様々なイムノアッセイ様式（immunoassay formats）を用いることにより、特定のポリペプチドと免疫的に活性であると共に、所望の特異性を備える抗体又は結合分子を選択する。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ、フローサイトメトリー、及びラジオイムノアッセイが、所望の免疫活性及び特異性を備える、モノクローナル抗体を選択するために使用される。イムノアッセイ様式、及び免疫活性と特異性を定義又は評価するために使用される条件の記載については、文献「Harlow, 1988, ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Publications,  New York  （hereinafter,  "Harlow"）」を参照する。
【００２２】
「選択的結合」、「選択性」などは、別の分子と比較して、一つの分子と相互作用する、活性薬剤の優先度を表す。好ましくは、本明細書中に記載されている活性薬剤とタンパク質の間の相互作用は、特異的であり選択的でもある。いくつかの実施形態において、活性薬剤は、他の望ましくない標的に結合することなく、二つの特徴的ではあるが同類の標的と、「特異的に結合」及び「選択的に結合」するために設計される。
【００２３】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを表し、本明細書中において交互に用いられる。この用語は、自然発生アミノ酸ポリマーに適応し、同様に１以上のアミノ酸残基が非自然にアミノ酸（例えば、アミノ酸類似物）を発生させるアミノ酸ポリマーにも適応する。この用語は、任意の長さのアミノ酸鎖を包含し、完全長タンパク質（即ち、抗原）を含み、この場合、アミノ酸残基は共益ペプチド結合により結び付けられる。
【００２４】
用語「抗原」は、抗体の産生を誘発することが出来る物質を表す。いくつかの実施形態において、抗原は抗体可変領域に特異的に結合する物質である。
【００２５】
用語「抗体（antidody）（antibodies）」は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二重特異性抗体、多特異的抗体、移植抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、合成抗体、キメラ抗体、ラクダ化（camelized）抗体、１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、１本鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、細胞内発現抗体（intrabody）、及び抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、並びに上記のいずれかの抗原結合フラグメントのことを言う。特に、抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性なフラグメント、即ち、抗原結合部位を含む分子を含む。重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンは異なるクラスに割り当てられることがある。免疫グロブリンの異なる分類に対応する重鎖定常ドメイン（Ｆｃ）は、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれている。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元立体構造がよく知られている。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ （例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（ＩｇＧ 1、ＩｇＧ 2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ 4、ＩｇＡ1 及びＩｇＡ2）又はサブクラスである。用語「抗体」及び「免疫グロブリン」は、広い意味において交互に使用される。いくつかの実施形態において、抗体は、より大きな分子の一部であり、１以上の他のタンパク質又はペプチドと抗体の共有結合性又は非共有結合性の関係により形成される。
【００２６】
抗体に関して、用語「可変ドメイン」は、その特定の抗原に関して各々の特定の抗体の結合及び特異性に使用される抗体の可変ドメインを表す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメインの全体に均一に分配されていない。むしろそれは、軽鎖及び重鎖の可変ドメインにおける、超可変領域（ＣＤＲとしても知られている）と呼ばれる３つのセグメントで濃縮される。可変ドメインの更に高度に保存された部分は、「フレームワーク領域」又は「ＦＲ」と呼ばれる。修飾されない重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、４つのＦＲ（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）を含み、ループ結合を形成する３つのＣＤＲが分散したβシート配置を選定し、いくつかの場合によって、βシート構造の一部を選定する。各々の鎖におけるＣＤＲは、ＦＲによって極めて近接にまとめられ、他の鎖からのＣＤＲを用いて、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. （1991）, pages 647-669を参照）。
【００２７】
用語「超可変領域」及び「ＣＤＲ」は、本明細書中における使用時、抗原結合の原因である抗体のアミノ酸残基を表す。ＣＤＲは、抗原と補完的に結合する３つの配列領域からのアミノ酸残基を備え、ＶH及びＶL 鎖の各々に関してＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３として知られている。軽鎖の可変ドメインにおいて、ＣＤＲは一般的に、およそ残基２４-３４（ＣＤＲＬ１）、５０-５６（ＣＤＲＬ２）及び８９-９７（ＣＤＲＬ３）に対応し、重鎖の可変ドメインにおいて、ＣＤＲは一般的に、およそ残基３１-３５（ＣＤＲＨ１）、５０-６５（ＣＤＲＨ２）及び９５-１０２（ＣＤＲＨ３）に対応し、これらのことは、文献「Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))」によるものである。異なる抗体のＣＤＲは、挿入を含むことが可能であり、従って、アミノ酸の番号付けは異なることがあるということが理解される。カバットによる番号付けシステムは、特定の残基（例えば、軽鎖におけるＣＤＲＬ１の２７Ａ、２７Ｂ、２７Ｃ、２７Ｄ、２７Ｅ、及び２７Ｆ）に付着する文字を利用する番号付け体系（a numbering scheme）を伴うそのような挿入を説明し、様々な抗体間の番号付けにおける任意の挿入を反映する。あるいは、軽鎖の可変ドメインにおいて、ＣＤＲは一般的に、およそ残基２６-３２（ＣＤＲＬ１）、５０-５２（ＣＤＲＬ２）及び９１-９６（ＣＤＲＬ３）に対応し、重鎖の可変ドメインにおいて、ＣＤＲは一般的に、およそ残基２６-３２（ＣＤＲＨ１）、５３-５５（ＣＤＲＨ２）及び９６-１０１（ＣＤＲＨ３）に対応し、これらは、文献「Chothia and Lesk, J. Mol. Biol., 196: 901-917 (1987))」によるものである。
【００２８】
抗体の定常ドメイン（Ｆｃ）は、抗体の抗原との結合に直接関わりはないが、むしろ、様々なエフェクター機能、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）などとの相互作用を介した抗体依存性細胞毒性への抗体の関与などを示す。Ｆｃドメインはまた、患者への投与を伴う循環において、抗体のバイオアベイラビリティを増加することもある。
【００２９】
本明細書中において使用されているように、用語「親和性」は、二つの薬剤の可逆的結合のための平衡定数を表し、ｋｄとして表される。エピトープのための抗体の親和性などの結合タンパク質の親和性は、例えば、約１００ナノモル（ｎＭ）から約０．１ｎＭ、約１００ｎＭから約１ピコモル（ｐＭ）、又は約１００ｎＭから約１フェムトモル（ｆＭ）である。本明細書中において使用されているように、用語「アビジティ」は、希釈後の解離に対する２以上の薬剤の複合体の抵抗性を表す。
【００３０】
用語「ペプチボディ（peptibody）」は、抗体、又は１以上の抗体ドメイン（例えば、抗体のＦｃドメイン）に直接又は間接的のどちらかで融合されるペプチド（複数種）を含む分子を表し、この場合、ペプチド成分は所望の標的に特異的に結合する。ペプチド（複数種）は、Ｆｃ領域に融合される、又はＦｃ−ループ、即ち修正されたＦｃ分子へと挿入されるかのいずれかである。用語「ペプチボディ」は、Ｆｃ融合タンパク質（例えば、Ｆｃドメインに融合される完全長タンパク質）を含まない。
【００３１】
用語「単離された」及び「精製された」は、実質的又は本質的に自然環境から除かれる、又は自然環境で濃縮される物質を表す。例えば、単離された核酸は、被検体において、通常隣接する核酸の少なくともいくつかから、又は他の核酸、或いは構成成分（タンパク質、脂質など）から分離されたものである。もう一つの例において、ポリペプチドは、実質的に自然環境から除かれる、又は自然環境で濃縮される場合に精製される。核酸及びタンパク質の精製並びに単離方法は、立証された方法論である。「実質的に」の実施形態は、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％を含む。
【００３２】
用語「処置する（treat）（treating）（treatment）」、及び他の文法的に同等のものは、本明細書中において使用されているように、症状を緩和、抑制、又は減少すること、疾患又は疾病の症状の重症度を減少又は抑制すること、疾患又は疾病の症状の発生率を減少させること、疾患又は疾病の症状の予防的治療、疾患又は疾病の症状の再発を減少又は抑制すること、疾患又は疾病の症状の発現を予防すること、疾患又は疾病の症状の発現を遅らせること、症状の再発を遅らせること、疾患又は疾病の症状を低減又は改善すること、症状の根本的な代謝の原因を改善すること、疾患又は疾病を抑制すること、例えば、疾患又は疾病の発症を阻止させること、疾患又は疾病を取り除くこと、疾患又は疾病の退行を引き起こすこと、疾患又は疾病により生じた状態を取り除くこと、又は疾患又は疾病の症状を阻止させることを含む。この用語は更に、治療効果を達成することを含む。治療効果によるものは、個体において改善が見受けられるような、処置されるべき根本的な障害の根絶又は改善、及び／又は根本的な障害と関連した１以上の生理学的な症状の根絶又は改善を意味する。
【００３３】
用語「予防（prevent）（preventing）（prevention）」、及び他の文法的に同等のものは、本明細書中において使用されているように、追加の症状を予防すること、症状の根本的な代謝原因を予防すること、疾患又は疾病を抑制すること、例えば、疾患又は疾病の発症を阻止することを含み、予防を含むことを目的としている。この用語は更に、予防効果の達成を含む。予防効果のために、組成物は、特定の疾患が進行する危険性がある個体、疾患の１以上の生理学的な症状を訴える個体、又は疾患の再発の危険性がある個体に対して、随意に投与される。
【００３４】
用語「効果的な量」又は「治療上効果的な量」は、本明細書中において使用されているように、所望の結果を達成する投与されるべき少なくとも一つの薬剤の十分な量を表し、この結果とは、例えば、処置される疾患又は疾病１以上の症状をある程度和らげることである。特定の例において、結果は、疾患の兆候、症状、又は原因の減少及び／又は緩和であり、又は生命システムの任意の他の所望の変質である。具体的な例において、結果は、少なくとも一つの異常増殖型細胞、例えば、癌幹細胞におけるアポトーシスの増殖、死滅、又は誘発を減少させることである。特定の例において、治療上の使用に「効果的な量」は、疾患を臨床的に著しく減少させるのに必要な本明細書中に記載の薬剤を含む組成物の量である。任意の個体の場合における適切で「効果的な」量は、任意の適切な技術、例えば用量増加研究などを使用して定められる。
【００３５】
用語「投与（administer）（administering）（administration）」等は、本明細書中において使用されているように、薬剤又は組成物を、所望の生物作用の部位へ送達できるようにするために使用される方法を表す。これらの方法は、経口経路、十二指腸内経路、注射剤（静脈、皮下、腹腔内、筋肉内、血管内、又は点滴を含む）、局所及び直腸投与を含むが、これらに限定されない。本明細書中に記載されている薬剤及び方法が随意に利用される投与技術は、例えば、文献「Goodman and Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, current ed、 Pergamon、 and Remington's, PharmaceuticalSciences （current edition）, Mack Publishing Co., Easton, Pa」の中で挙げられているものを含む。特定の実施形態において、本明細書中に記載されている薬剤及び組成物は、経口投与される。
【００３６】
用語「薬学的に許容可能な」は、本明細書中において使用されているように、本明細書中に記述されている薬剤の生物活動又は性質を無効化しない物質を表し、相対的に無毒（即ち、物質の毒性が物質の効果を大きく上回る）である。いくつかの例において、薬学的に許容可能な物質は、所望されない重大な生物学的効果を引き起こすことなく、又はその物質が含まれている組成物の任意の成分と有害的に著しい相互作用を起こすことなく、個体に投与される。
【００３７】
マクロファージ遊走抑制因子（ＭＩＦ）
いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、ＭＩＦの活性を（部分的又は完全に）抑制する。特定の例において、ＭＩＦは炎症促進性サイトカインである。特定の例において、ＭＩＦは、感染、炎症、又は組織傷害に応答して、活性化免疫細胞（例えば、リンパ球（Ｔ細胞））によって分泌される。特定の例において、ＭＩＦは、視床下部・下垂体・副腎系の刺激の後、脳下垂体前葉によって分泌される。特定の例において、ＭＩＦは、膵臓β細胞からインスリンと共に分泌され、自己分泌因子として作用し、インスリン放出を刺激する。特定の例において、ＭＩＦは、受容体ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、及びＣＤ７４のリガンドである。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されている方法及び／又は組成物は、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、及び／又はＣＤ７４の活性を（部分的又は完全に）抑制する。
【００３８】
特定の例において、ＭＩＦは、ＭＩＦ勾配に沿って、白血球（例えば、リンパ球、顆粒球、単球／マクロファージ、及びＴＨ−１７細胞）のそばで走化性を誘発する。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、ＭＩＦ勾配に沿って走化性を防ぎ、又はＭＩＦ勾配に沿って走化性を低下させる。特定の例において、ＭＩＦは、感染、炎症、又は組織傷害の部位に対する白血球（例えば、リンパ球、顆粒球、単球／マクロファージ、及びＴＨ−１７細胞）の走化性を誘発する。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、感染、炎症、又は組織傷害の部位に対する白血球の走化性を防ぐ又は低下させる。特定の例において、ＭＩＦ勾配に沿った白血球（例えば、リンパ球、顆粒球、単球／マクロファージ、及びＴＨ−１７細胞）の走化性は、感染、炎症、又は組織傷害の部位にて炎症を生じさせる。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、感染、炎症、又は組織傷害の部位での炎症を処置する。特定の例において、ＲＡＮＴＥＳ勾配に沿った単球の走化性は、傷害又は炎症の部位にて、単球阻止（arrest）（即ち、上皮での単球の蒸着（deposition））をもたらす。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、傷害又は炎症の部位での単球阻止を防ぐ又は低下させる。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、リンパ球媒介性疾患を抑制・処置する。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、顆粒球媒介性疾患を処置する。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、マクロファージ媒介性疾患を処置する。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、Ｔｈ−１７媒介性疾患を処置する。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、膵臓β細胞媒介性疾患を処置する。
【００３９】
特定の例において、ＭＩＦは、グルココルチコイド、即ちグルココルチコイド治療を要求する多くの疾患を伴うアテローム性動脈硬化の促進に関係がある機構により誘発できる。従って、いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される組成物及び方法は、グルココルチコイドによるＭＩＦ発現の誘発を抑制する。
【００４０】
特定の例において、ヒトＭＩＦポリペプチドは、細胞発生帯２２ｑ１１．２３．の染色体２２上に位置するヌレオクチド配列によりコードされる。特定の例において、ＭＩＦタンパク質は、１２．３ｋＤａタンパク質である。特定の例において、ＭＩＦタンパク質は、１１５のアミノ酸の三つのポリペプチドを備えるホモ三量体である。特定の例において、ＭＩＦタンパク質は、ケモカイン上で発見されるＥＬＲモチーフを模倣する偽のＥＬＲモチーフを備える。特定の例において、偽のＥＬＲモチーフは、非隣接性ではあるが、適切に間隔が空いた二つの残基（Ａｒｇ１２及びＡｓｐ４５、図１１参照）を備える。いくつかの実施形態において、偽のＥＬＲモチーフは、アミノ酸１２からアミノ酸４５（このような番号付けは、最初のメチオニン残基を含む）までのアミノ酸配列を備える。これは、最初のメチオニン残基が数えられないアミノ酸１１からアミノ酸４４までの偽のＥＬＲモチーフと等しい（このような例において、偽のＥＬＲモチーフはＡｒｇ１１及びＡｓｐ４４を備える）。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、偽のＥＬＲモチーフのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合を抑制することにより、ＭＩＦ媒介性疾患を処置する。 
【００４１】
特定の例において、ＭＩＦタンパク質は、１０−から２０−までの残基のＮ端末ループモチーフ（Ｎ−ループ）を含む。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループは、ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４受容体への結合を媒介する。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、ＭＩＦの配列残基（４７−５６）（即ち、Ｌ４７ Ｍ４８ Ａ４９ Ｆ５０ Ｇ５１ Ｇ５２ Ｓ５３ Ｓ５４ Ｅ５５ Ｐ５６、 図１１参照）を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４５〜６０を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４４〜６１を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４３〜６２を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４２〜６３を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４１〜６４を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４０〜６５を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４６〜５９を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４７〜５９を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４８〜５９を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸５０〜５９を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４７〜５８を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４７〜５７を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４７〜５６を備える。特定の例において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフは、アミノ酸４８〜５８を備える。いくつかの実施形態において、Ｎ−ループモチーフは、アミノ酸４８〜５７を備える。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、Ｎ−ループモチーフのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合を抑制することにより、ＭＩＦ媒介性疾患を処置する。
【００４２】
いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、（1）Ｎ−ループモチーフのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合、及び（2）偽のＥＬＲモチーフのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合を抑制することにより、ＭＩＦ媒介性疾患を処置する。
【００４３】
特定の例において、ＣＤ７４は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）を活性化し、ＣＸＣＲ２を活性化し、及び／又はこれらの分子と結びつき、シグナル伝達複合体を形成する。従って、いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、ＣＤ７４による活性化ＧＰＣＲ又はＣＸＣＲ２を抑制することにより、ＭＩＦ媒介性疾患を処置する。
【００４４】
特定の例において、ＭＩＦは、内皮細胞、ＳＭＣ、単核細胞、及び／又は動脈損傷を伴うマクロファージによって発現される。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、内皮細胞、ＳＭＣ、単核細胞、及び／又は動脈損傷を伴うマクロファージによるＭＩＦの発現を抑制する。特定の例において、ＭＩＦは、内皮細胞、ＳＭＣ、単核細胞、及び／又は酸化低密度リポタンパク質（ｏｘＬＤＬ）、ＣＤ４０リガンド、アンジオテンシンＩＩ、又はそれらの組合せへの暴露を伴うマクロファージによって発現される。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、内皮細胞、ＳＭＣ、単核細胞、及び／又は酸化低密度リポタンパク質、ＣＤ４０リガンド、アンジオテンシンＩＩ、又はそれらの組合せへの暴露を伴うマクロファージによるＭＩＦ発現を抑制する。
【００４５】
特定の例において、ＭＩＦは、内皮細胞中のＣＣＬ２、ＴＮＦ、及び／又はＩＣＡＭ−１の発現を誘発する。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、内皮細胞中のＣＣＬ２、ＴＮＦ、及び／又はＩＣＡＭ−１のＭＩＦ誘発性発現を抑制する。
【００４６】
特定の例において、ＭＩＦは、ＳＭＣ中のＭＭＰ及びカテプシンの発現を誘発する。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、ＳＭＣ中のＭＭＰ及びカテプシンのＭＩＦ誘発性発現を抑制する。
【００４７】
特定の例において、ＭＩＦは、ＣＸＣＲ２又はＣＸＣＲ４を介してカルシウム流入を引き起こし、インテグリンの急速な活性化を誘発し、ＭＡＰＫの活性化を誘発し、及び、単球並びにＴ細胞のＧαｉ−及びインテグリン依存性の阻止及び走化性を媒介する（図２及び３）。従って、いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、単球及び／又はＴ細胞におけるカルシウム流入を抑制し、ＭＡＰＫの活性化を抑制し、インテグリンの活性化を抑制し、単球及びＴ細胞のＧαｉ−及びインテグリン依存性の阻止、又はそれらの組み合わせを抑制する。
【００４８】
特定の例において、ＭＩＦにより誘発される単球動員は、ＭＩＦ−結合タンパク質ＣＤ７４に関わる。特定の例において、ＭＩＦ−結合タンパク質ＣＤ７４は、カルシウム流入、マイトジェン活性タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）活性化、又はＧαｉ−依存性インテグリン活性化を誘発する（図７）。いくつかの実施形態において、本発明は、それを必要とする個体におけるＭＩＦ媒介性ＭＡＰＫキナーゼ活性化を抑制する方法を備える。いくつかの実施形態において、本発明は、それを必要とする個体におけるＭＩＦ媒介性Ｇαｉ−依存性インテグリン活性化を抑制する方法を備える。
【００４９】
特定の例において、ＣＤ７４を介するＭＩＦ誘発性シグナル伝達は、ＣＤ４４及びＳｒｃキナーゼに関わる。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、ＣＤ７４媒介性Ｓｒｃキナーゼ活性化を抑制する。
【００５０】
特定の例において、エンドサイトーシスにより取り込まれるＭＩＦは、ＪＡＢ−１と直接的に相互作用する。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、ＭＩＦのエンドサイトーシスを抑制する。
【００５１】
特定の例において、アレスチンは、ＭＩＦ内面化を媒介するクラスリン被覆小胞に対するＧタンパク質結合受容体の動員を促進する。従って、いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は更に、アレスチンアンタゴニストを備える。ＧＰＣＲに結合するアレスチンを抑制する薬剤の例は、カルベジロール、イソブレナリン、イソプロテレノール、フォルモテロール、シメテロール、クレンブテロール、L-エピネフリン、スピノフィリン、及びサルメテロールを備える。
【００５２】
特定の例において、ＭＩＦのユビキチン化は、（部分的又は完全にのいずれかで）ＭＩＦの急速な内在化及びその後の分解を生じさせる。従って、いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は更に、ＭＩＦのユビキチン化の抑制を備える。ユビキチン化を抑制する薬剤の例は、ＰＹＲ−４１及び関連するピラゾンを含むが、これらに限定されない。
【００５３】
特定の例において、ＭＩＦは、クラスリン媒介性エンドサイトーシスを使用して細胞内に入る。従って、いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は更に、ＭＩＦのクラスリン媒介性エンドサイトーシスの抑制工程を備える。
【００５４】
特定の例において、ＭＩＦは、ＭＡＰＫシグナル伝達を負に制御し、又はＪＡＢ−１を介した細胞酸化還元ホメオスタシスを制御することにより細胞機能を調節する。特定の例において、ＭＩＦは、ｐ５３の発現を下方制御する。特定の例において、ｐ５３の発現のＭＩＦによる下方制御は、マクロファージのアポトーシス、及び生存期間の延長を抑制する。従って、いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、マクロファージのＭＩＦ調節された生存を抑制する。
【００５５】
特定の例において、ＭＩＦは、不安定なプラークにおいてＭＭＰ−１及びＭＭＰ−９を誘発する。特定の例において、不安定なプラークにおけるＭＭＰ−１及びＭＭＰ−９の誘発は、コラーゲン分解、線維性被膜の衰弱、及びプラーク不安定化をもたらす（部分的又は完全にのいずれかで）。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び／又は組成物は、（部分的又は完全にのいずれかで）コラーゲン分解、線維性被膜の衰弱、及びプラーク不安定化を抑制する。
【００５６】
ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦシグナル伝達インヒビター
特定の実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦシグナル伝達を抑制する方法が、本明細書中において開示される。いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦシグナル伝達は、小分子、ペプチド、及び／又はぺプチボディ（peptibody）で、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４（即ち、ＧＰＣＲアンタゴニスト手法）小分子、ペプチド、及び／又はぺプチボディのＭＩＦ結合ドメインを占有することにより抑制される。いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦシグナル伝達は、ＭＩＦ上のドメインを占有、遮蔽、又はそれ以外に破壊することにより抑制される（即ち、サイトカインインヒビター手法）。いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦシグナル伝達は、小分子、ペプチド、及び／又はぺプチボディによるＭＩＦ上のドメインを占有、遮蔽、又はそれ以外に破壊壊することにより抑制され、それによりＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４のＭＩＦへの結合を破壊する。いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦシグナル伝達は、小分子、ペプチド、及び／又はぺプチボディによるＭＩＦ上のドメインを占有、遮蔽、又はそれ以外に破壊することにより抑制され、それによりＭＩＦ三量体形成を破壊する。特定の例において、ＭＩＦ上のドメインを占有、遮蔽、又はそれ以外に破壊することは、他のアゴニスト／リガンド（例えば、ＩＬ−８／ＣＸＣＬ８、ＧＲＯｂｅｔａ／ＣＸＣＬ２及び／又はストロマ細胞由来因子−１ａ（ＳＤＦ−１ａ）／ＣＸＣＬ１２）により媒介されるＣＸＣＲ２およびＣＸＣＲ４のシグナル伝達に影響を及ぼさない。
【００５７】
ＭＩＦドメイン破壊剤
いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦシグナル伝達は、ＭＩＦ（例えば、Ｎ−ループ及び／又は偽のＥＬＲモチーフ）上のドメインを占有、遮蔽、又はそれ以外に破壊することにより抑制される。いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦシグナル伝達は、小分子、ペプチド、及び／又はぺプチボディによるＭＩＦ上のドメインの占有、遮蔽、又はそれ以外に破壊することにより抑制され、それによりＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４のＭＩＦへの結合を破壊する。いくつかの実施形態において、小分子、ペプチド、及び／又はぺプチボディは、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４との結合、及び／又は（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、又は（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）の任意の組み合わせを抑制する。特定の例において、ＭＩＦ上のドメインを占有、遮蔽、又はそれ以外に破壊することは、他のアゴニスト／リガンド（例えば、ＩＬ−８／ＣＸＣＬ８、ＧＲＯｂｅｔａ／ＣＸＣＬ２及び／又はストロマ細胞由来因子−１ａ（ＳＤＦ−１ａ）／ＣＸＣＬ１２）により媒介されるＣＸＣＲ２およびＣＸＣＲ４のシグナル伝達に影響を及ぼさない。  
【００５８】
特定の例において、Ｎ末端細胞外ドメインは、第一及び／又は第二細胞外ループと同様、ＭＩＦに結合するリガンドのメディエーターである。いくつかの実施形態において、小分子、ペプチド、及び／又はぺプチボディは、ＭＩＦの偽のＥＬＲモチーフへの結合により、ＭＩＦのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４のＭＩＦへの結合を抑制する。いくつかの実施形態において、小分子、ペプチド、及び／又はぺプチボディは、ＭＩＦのＮ−ループモチーフへの結合により、ＭＩＦのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４のＭＩＦへの結合を抑制する。いくつかの実施形態において、小分子、ペプチド、及び／又はぺプチボディは、必須基質を調節し、及び／又は受容体或いは基質の相互作用を防ぐ、ＭＩＦ中の高次構造変化を引き起こす。いくつかの実施形態において、小分子、ペプチド、及び／又はぺプチボディは、ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４結合並びにシグナル伝達に関係のあるモチーフを妨げる。
【００５９】
いくつかの実施形態において、活性薬剤は、ＭＩＦ及びＣＸＣＲ２の結合を抑制するペプチド、ＭＩＦ及びＣＸＣＲ４の結合を抑制するペプチド、ＭＩＦ及びＪＡＢ−１の結合を抑制するペプチド、ＭＩＦ及びＣＤ７４の結合を抑制するペプチド、又はそれらの組み合わせである。
【００６０】
いくつかの実施形態において、活性薬剤は、ＭＩＦの偽のＥＬＲモチーフの全て又は一部に特異的に結合するペプチド、ＭＩＦのＮ−ループモチーフの全て又は一部に特異的に結合するペプチド、ＭＩＦの偽のＥＬＲ及びＮ−ループモチーフの全て又は一部に特異的に結合するペプチド、又はそれらの組み合わせである。
【００６１】
いくつかの実施形態において、活性薬剤は、以下のペプチド配列に特異的：ＰＲＡＳＶＰＤＧＥＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＫＧＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱの全て又は一部、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の対応する少なくとも一つの特徴／ドメインに結合するペプチド、以下のペプチド配列：ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の対応する少なくとも一つの特徴／ドメインに特異的に結合するペプチド、以下のペプチド配列：ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＫＧＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬの全て又は一部、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の対応する少なくとも一つの特徴／ドメインに特異的に結合するペプチド、以下のペプチド配列：ＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬＨＳＩの全て又は一部、及びＭＩＦ単量体又はＭＩＦ三量体の対応する少なくとも一つの特徴／ドメインに特異的に結合するペプチド、又はそれらの組み合わせである。
【００６２】
ＭＩＦドメイン破壊剤を同定するアッセイ
いくつかの実施形態において、ペプチドを破壊するＭＩＦドメインが同定される。いくつかの実施形態において、ペプチドを破壊するＭＩＦドメインは、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４にて、ＭＩＦ依存性シグナル伝達イベントに影響を与えない。
【００６３】
いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４の細胞外Ｎ末端ドメイン及び／又は細胞外ループを覆うペプチドのライブラリが作られる。いくつかの実施形態において、ペプチドは、約５のアミノ酸から約２０のアミノ酸まで、約７のアミノ酸から約１８のアミノ酸まで、約１０のアミノ酸から約１５のアミノ酸までの大きさに及ぶ。いくつかの実施形態において、ペプチドライブラリは、いくつかの適切な方法（例えば、ＨＴＳ ＧＰＣＲスクリーニング手法）を用いて、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦ媒介性シグナル伝達の抑制のために選別される。任意の実施形態において、ペプチドライブラリは更に、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４上のＩ１−８及び／又はＳＤＦ−１媒介性シグナル伝達の抑制のために選別される。いくつかの実施形態において、ペプチドがＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦシグナル伝達を抑制するが、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＩ１−８及び／又はＳＤＦ−１媒介性シグナル伝達を許容すれば、ペプチドはペプチドを破壊するＭＩＦドメインとして同定される。
【００６４】
いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４の細胞外Ｎ末端ドメイン及び細胞外ループからのペプチド配列は、細胞膜上に配置される。いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４の細胞外Ｎ末端ドメイン及び細胞外ループからのペプチド配列は、細胞膜上に配置され、完全長ＭＩＦを用いて調べられる。いくつかの実施形態において、ＭＩＦは標識化される（例えば、同位体で標識化、放射活性物質で標識化、又は蛍光色素分子で標識化される）。いくつかの実施形態において、標識化されたＭＩＦが特異的に結合するペプチド配列は、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦ媒介性シグナル伝達の抑制のために分析される。いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦ媒介性シグナル伝達を抑制するぺプチド配列は、いくつかの適切な方法（例えば、ＧＰＣＲスクリーニングアッセイ）を使用して選別される。
【００６５】
いくつかの実施形態において、前述のペプチド又はポリペプチド（例えば、ＭＩＦの偽のＥＬＲモチーフ又はＭＩＦのＮ−ループモチーフに由来するペプチド）のいずれかは、「モデル」として使用され、構造−活性相関（ＳＡＲ）化学（本明細書中の詳細において提供されているように）を行う。いくつかの実施形態において、ＳＡＲ化学は、より小さなペプチドを生み出す。いくつかの実施形態において、より小さなペプチドは小分子を生み出し、小分子は、ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４に結合するためのＭＩＦの能力を破壊する（例えば、ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４に結合するためのＭＩＦの能力の破壊に関わるアミノ酸残基を定めることにより）。
【００６６】
ＭＩＦ三量体形成破壊剤
特定の実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦシグナル伝達を抑制する方法が、本明細書中において開示される。いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦシグナル伝達は、ＭＩＦ上のドメインを占有、遮蔽、又はそれ以外に破壊することにより抑制される。いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦシグナル伝達は、小分子、ペプチド、及び／又はぺプチボディによるＭＩＦ上のドメインを占有、遮蔽、又はそれ以外に破壊することにより抑制され、それによりＭＩＦ三量体形成を破壊する。いくつかの実施形態において、ホモ三量体を形成するＭＩＦペプチドの能力の損傷は、受容体（例えば、ＣＸＣＲ２、又はＣＸＣＲ４）に結合するＭＩＦの能力を（部分的又は完全に）破壊する。特定の例において、ＭＩＦ上のドメインを占有、遮蔽、又はそれ以外に破壊することは、他のアゴニスト／リガンド（例えば、ＩＬ−８／ＣＸＣＬ８、ＧＲＯｂｅｔａ／ＣＸＣＬ２及び／又はストローマ細胞由来因子−１ａ（ＳＤＦ−１ａ）／ＣＸＣＬ１２））により媒介されるＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４シグナル伝達に影響を及ぼさない。
【００６７】
特定の例において、ＭＩＦは、三つのＭＩＦポリペプチド配列（即ち、三量体）を備える。特定の例において、各々のＭＩＦポリペプチドの偽のＥＬＲモチーフは、三量体において環を形成する。特定の例において、各々のＭＩＦポリペプチドのＮ−ループモチーフは、偽のＥＬＲ環から外側へ広がる（図１０参照）。特定の例において、三量体の破壊は、ＭＩＦのその標的受容体への高親和性結合を破壊する。特定の例において、一つのサブユニットの残基３８−４４（β−２鎖）は、二つ目のサブユニットの残基４８−５０（β−３鎖）と相互作用する。特定の例において、一つのサブユニットの残基９６−１０２（β−５鎖）は、二つ目のサブユニットの残基１０７−１０９（β−６鎖）と相互作用する。特定の例において、Ｎ７３ Ｒ７４ Ｓ７７ Ｋ７８ Ｃ８１により形成される一つのサブユニット上のドメインは、二つ目のサブユニットのＮ１１１ Ｓ１１２ Ｔ１１３と相互作用する。
【００６８】
いくつかの実施形態において、ＭＩＦアンタゴニストは、ＭＩＦのアミノ酸残基３８−４４（β−２鎖）のいずれか又は全てに由来及び／又はそれらを組み込む。いくつかの実施形態において、ＭＩＦアンタゴニストは、ＭＩＦのアミノ酸残基４８−５０（β−３鎖）のいくつか又は全てに由来及び／又はそれらを組み込む。いくつかの実施形態において、ＭＩＦアンタゴニストは、ＭＩＦのアミノ酸残基９６−１０２（β−５鎖）のいずれか又は全てに由来及び／又はそれらを組み込む。いくつかの実施形態において、ＭＩＦアンタゴニストは、ＭＩＦのアミノ酸残基１０７−１０９（β−６鎖）のいずれか又は全てに由来及び／又はそれらを組み込む。いくつかの実施形態において、ＭＩＦアンタゴニストは、ＭＩＦのアミノ酸残基Ｎ７３、Ｒ７４、Ｓ７７、Ｋ７８、及びＣ８１のいずれか又は全てに由来及び／又はそれらを組み込むペプチドである。いくつかの実施形態において、ＭＩＦアンタゴニストは、ＭＩＦのアミノ酸残基Ｎ１１１、Ｓ１１２、及びＴ１１３のいずれか又は全てに由来及び／又はそれらを組み込むペプチドである。
【００６９】
ＭＩＦ三量体形成破壊剤を同定するアッセイ
いくつかの実施形態において、ペプチドを破壊するＭＩＦドメイン三量体形成が同定される。いくつかの実施形態において、ペプチドを破壊するＭＩＦドメイン三量体形成は、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４でのＭＩＦ非依存性シグナル伝達イベントに影響を及ぼさない。いくつかの実施形態において、任意の前述のアミノ酸配列（例えば、ＭＩＦのアミノ酸残基３８−４４（β−２鎖）、ＭＩＦのアミノ酸残基４８−５０（β−３鎖）、ＭＩＦのアミノ酸残基９６−１０２（β−５鎖）、ＭＩＦのアミノ酸残基１０７−１０９（β−６鎖）、ＭＩＦのアミノ酸残基Ｎ７３、Ｒ７４、Ｓ７７、Ｋ７８、及びＣ８１、及び／又はＭＩＦのアミノ酸残基Ｎ１１１、Ｓ１１２、及びＴ１１３）に由来するペプチド又はポリペプチドは、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦ媒介性シグナル伝達を抑制するため、任意の適切な方法（例えば、ＨＴＳ ＧＰＣＲスクリーニング技術）を使用して選別される。
【００７０】
いくつかの実施形態において、任意の前述のアミノ酸配列（例えば、ＭＩＦのアミノ酸残基３８−４４（β−２鎖）、ＭＩＦのアミノ酸残基４８−５０（β−３鎖）、ＭＩＦのアミノ酸残基９６−１０２（β−５鎖）、ＭＩＦのアミノ酸残基１０７−１０９（β−６鎖）、ＭＩＦのアミノ酸残基Ｎ７３、Ｒ７４、Ｓ７７、Ｋ７８、及びＣ８１、及び／又はＭＩＦのアミノ酸残基Ｎ１１１、Ｓ１１２、及びＴ１１３）に由来するペプチド又はポリペプチドは、「モデル」として使用され、構造-活性相関（ＳＡＲ）化学を行う。いくつかの実施形態において、ＳＡＲ化学は、より小さなペプチドを生み出す。いくつかの実施形態において、より小さなペプチドは小分子を生み出し、小分子は、ホモ三量体を形成するＭＩＦの能力を破壊する（例えば、ホモ三量体を形成するＭＩＦの能力の破壊に関わるアミノ酸残基を見つけ出すことにより）。
【００７１】
いくつかの実施形態において、ＭＩＦのアンタゴニストは、ＭＩＦ遺伝子及び／又はＭＩＦＲＮＡ配列に対するｓｉＲＮＡ分子及び／又はアンチセンス分子相補（antisense molecule complementary）である。いくつかの実施形態において、ｓｉＲＮＡ分子及び／又はアンチセンス分子は、ＭＩＦ ｍＲＮＡ及び／又はタンパク質のレベル又は半減期を、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は少なくともほぼ１００％減少させる。
【００７２】
ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４結合アンタゴニスト
特定の実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦシグナル伝達を抑制する方法が、本明細書中において開示される。いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４を介したＭＩＦシグナル伝達は、小分子又はペプチドを備えるＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４（即ち、ＧＰＣＲアンタゴニスト手法）のＭＩＦ結合ドメインの占有により抑制される。
【００７３】
いくつかの実施形態において、ＭＩＦのアンタゴニストは、ヒドロキシ桂皮酸エステル（hydroxycinnamate）、Schiff-basedトリプトファンアナログ、又はアセトアミノフェンのイミノ−キノン代謝物の誘導体である。
【００７４】
いくつかの実施形態において、ＭＩＦのアンタゴニストは、グルブリド、プロベネシド、ＤＩＤＳ（４，４−ジイソチオシアナトスチルベン−２，２−ジスルホン酸）、ブメタニド、フロセミド、スルホブロモフタレイン、ジフェニルアミン-２-カルボン酸、フルフェナム酸、又はそれらの組み合わせである。
【００７５】
いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ２のアンタゴニストは、ＣＸＣＬ８（3-74）Ｋ１１Ｒ／Ｇ３１Ｐ、ＩＬ−８（4-72）、ＩＬ−８（6-72）、組換え型ＩＬ−８（ｒＩＬ−８）、組換え型ＩＬ−８，ＮＭｅＬｅｕ（位置２５でＮメチル化したロイシンを備えるｒＩＬ−８）、（ＡＡＲ）ＩＬ−８（Ｇｌｕ４−Ｌｅｕ５の代わりにＮ末端Ａｌａ４−Ａｌａ５を備えるＩＬ−８）、ＧＲＯ−α（1-73）（ＣＸＣＬ１としても知られている）、ＧＲＯ−α（4-73）、ＧＲＯ−α（5-73）、ＧＲＯ−α（6-73）、組換え型ＧＲＯ（ｒＧＲＯ）、（ＥＬＲ）ＰＦ４（Ｎ末端でＥＬＲ配列を備えるＰＦ４）、組換え型ＰＦ４（ｒＰＦ４）、アンチロイキナート（Antileukinate）、Ｓｃｈ５２７１２３（−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−{２−[[（Ｒ）−１−（５−メチル−フラン−２−イル）−プロピル]アミノ]−３，４−ジオキソ-シクロブト−１−エニルアミノ}−ベンズアミド）、Ｎ−（３−（アミノスルホニル）−４−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）−Ｎ’−（２，３−ジクロロフェニル）尿素、ＳＢ−５１７７８５−Ｍ（ＧＳＫ）、ＳＢ２６５６１０（Ｎ−（２−ブロモフェニル）−Ｎ’−（７−シアノ−１Ｈ−ベンゾトリアゾル−４−イル）尿素）、ＳＢ２２５００２（Ｎ−（２−ブロモフェニル）−Ｎ’−（２−ヒドロキシ−４−ニトロフェニル）尿素）、ＳＢ４５５８２１（ＧＳＫ），ＳＢ２７２８４４（ＧＳＫ）、ＤＦ２１６２（４−[（１Ｒ）−２−アミノ−１−メチル−２−オキソエチル]フェニル トリフルオロメタンスルホン酸）、レパリキシン、又はそれらの組み合わせから由来する。
【００７６】
いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ４のアンタゴニストは、ＡＬＸ４０−４Ｃ（Ｎ−αセチル−ノナ−Ｄ−アルギニンアミド酢酸）、ＡＭＤ−０７０（ＡＭＤ１１０７０，ＡｎｏｒＭＥＤ）、プレリキサホル（ＡＭＤ３１００）、ＡＭＤ３４６５（ＡｎｏｒＭＥＤ）、ＡＭＤ−８６６４（１−ピリジン−２−イル−Ｎ−[４−（１，４，７−トリアザシクロテトラデカン−４−イルメチル）ベンジル]メタンアミン）、ＫＲＨ−１６３６（Kreha Chemical Industry Co. Limited）、ＫＲＨ−２７３１（Kreha Chemical Industry Co. Limited）、ＫＲＨ−３９５５（Kreha Chemical Industry Co. Limited）、ＫＲＨ−３１４０（Kreha Chemical Industry Co. Limited）、Ｔ１３４（Ｃ末端アミドのため、カルボン酸により置換されるＬシトルリン１６−ＴＷ７０）、Ｔ２２（[Ｔｙｒ5,2，Ｌｙｓ7]−ポリフェムシンＩＩ）、ＴＷ７０（デス−[Ｃｙｓ８，１３, Ｔｙｒ９，１２]−[Ｄ−Ｌｙｓ１０，Ｐｒｏ１１]−Ｔ２２）、Ｔ１４０（Ｈ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＤＬｙｓ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｃｉｔ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−ＯＨ）、ＴＣ１４０１２（Ｒ−Ｒ−Ｎａｌ−Ｃ−Ｙ−（Ｌ）Ｃｉｔ−Ｋ−（Ｄ）Ｃｉｔ−Ｐ−Ｙ−Ｐ−（Ｌ）シトルリン−Ｃ−Ｒ−ＮＨ２、この場合、Ｎａｌ＝Ｌ−３−（２−ナフチルアラニン）、Ｃｉｔ＝シトルリン、及びペプチドはシステインを用いて環化される）、ＴＮ１４００３、ＲＣＰ１６８（Ｎ末端に加えられるＤアミノ酸を備えるｖＭＩＰ−ＩＩ（11-71））、ＰＯＬ３０２６（Ａｒｇ（※）−Ａｒｇ−Ｎａｌ（２）−Ｃｙｓ（１ｘ）−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−（ｄ−Ｐｒｏ）−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｃｉｔ−Ｃｙｓ（１ｘ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−（ｄ−Ｐｒｏ）（※））、ＰＯＬ２４３８、化合物３（Ｎ−（１−メチル−１−フェニルエチル）−Ｎ−[（（３Ｓ）−１−{２−[５−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾル−４−イル）−１Ｈ−インドール−３−イル]エチル}ピロリジン−３−イル）メチル]アミン）、イソチオ尿素１ａ−１ｕ（イソチオ尿素１ａ−１ｕに関する情報は、文献「Gebhard Thoma, et al., Orally Bioavailable Isothioureas Block Function of the Chemokine Receptor ＣＸＣＲ４ In Vitro and In Vivo, J. Med. Chem., Article ASAP （2008）」を参照したものであり、その全体を引用することにより本明細書中に組み込まれている。）、又はそれらの組み合わせである。
【００７７】
いくつかの実施形態において、ＭＩＦのアンタゴニストは、ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４に結合するＭＩＦの能力を（部分的又は完全に）抑制する。いくつかの実施形態において、ＭＩＦのアンタゴニストは、ＣＯＲ１００１４０（Genzyme Corp／Cortical Pty Ltd.）、ＩＳＯ−１（（Ｓ，Ｒ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−４，５−ジヒドロ−５−イソキサゾール酢酸、メチルエステル）、４−ＩＰＰ（４−ヨード−６−フェニルピリミジン）、又はそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、ＭＩＦのアンタゴニストは、ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４由来のペプチドである。
【００７８】
いくつかの実施形態において、小分子、ペプチド、及び／又は抗体アンタゴニストは、ＭＩＦの生物学的活性型の放出を抑制する。いくつかの実施形態において、小分子、ペプチド、及び／又は抗体アンタゴニストは、ＭＩＦのステロイド誘発性、ＴＮＦα誘発性、ＩＦＮ−γ誘発性、及びＭＩＦのエンドトキシン誘発性放出（例えば、マクロファージから、肺から、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）輸送体から）を抑制する。
【００７９】
ＭＩＦ模倣剤
いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び組成物は、ＭＩＦを模倣し、ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４結合並びにシグナル伝達を抑制する、ＭＩＦのようなレドックス活性ペプチドを備える。
【００８０】
いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される方法及び組成物は、ＭＩＦのＮ−ループモチーフに類似した構造的又は機能的特徴を採用する小分子、ペプチド、及び／又は抗体を備える。いくつかの実施形態において、ペプチド、及び／又はポリペプチドは、残基Ｌ４７ Ｍ４８ Ａ４９ Ｆ５０ Ｇ５１ Ｇ５２ Ｓ５３ Ｓ５４ Ｅ５５ 及びＰ５６の少なくとも一つを備える。いくつかの実施形態において、小分子、ペプチド、及び／又は抗体は、残基Ｌ４７ Ｍ４８ Ａ４９ Ｆ５０ Ｇ５１ Ｇ５２ Ｓ５３ Ｓ５４ Ｅ５５ 及びＰ５６の全て又は一部を備える、ヒトＭＩＦの５〜１６の継続的なアミノ酸を備える。いくつかの実施形態において、ＭＩＦのＮ−ループモチーフに類似した構造的又は機能的特徴を採用するペプチド、及び／又はポリペプチドは、表１−Ｉ乃至表１−ＩＩから選択される１以上のペプチドを備える。いくつかの実施形態において、ペプチド、及び／又はポリペプチドは、ＡＤＭＥ−ＰＫを改善し、Ｎ−及び／又はＣ−末端化学修飾を備える。いくつかの実施形態において、ペプチド、及び／又はポリペプチドは、非自然アミノ酸を備える。いくつかの実施形態において、ペプチド、及び／又はポリペプチドは、周期性変異体を備える。
【００８１】
【表１−Ａ】
2011526244.tif 000003
【００８２】
【表１−Ｂ】
2011526244.tif 000004
【００８３】
ペプチド模倣剤
いくつかの実施形態において、ペプチド模倣剤は、本明細書中に記載されているポリペプチドの代わりに使用され、本明細書中に開示される疾患の処置又は予防における使用を含む。
【００８４】
ペプチド模倣剤（及びペプチド基礎のインヒビター）は、例えば、コンピュータ処理された分子モデリングを使用して作り出される。ペプチド模倣剤は、１以上のペプチドリンケージを備える構造を含むように設計され、ペプチドリンケージは、リンケージによって任意に置換され、リンケージは当該技術分野においてよく知られている方法により、−ＣＨ2ＮＨ−、−ＣＨ2Ｓ−、−ＣＨ2 −ＣＨ2 −、−ＣＨ＝ＣＨ-（シス及びトランス）、−ＣＨ＝ＣＦ-（トランス）、−ＣｏＣＨ2 −、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ2 −、及び−ＣＨ2ＳＯ−からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、このようなペプチド模倣剤は、より大きな化学安定性を備え、薬理学的特性（半減期、吸収、効力、有効性など）を高め、特異性（例えば、生物活性の広域スペクトル）を変え、抗原性を減少し、より経済的に調整される。いくつかの実施形態において、ペプチド模倣剤は、定量的な構造活性データ及び／又は分子モデリングにより予測される１以上のラベル又は抱合体のアナログ上の非妨害位置（s）に対し直接又はスペーサー（例えば、アミド群）を介した共有結合を含む。 このような非妨害位置は一般的に、受容体（複数種）との直接の接触を行わない位置であり、この受容体にペプチド模倣剤が治療効果を生み出すために特異的に結合する。いくつかの実施形態において、同じタイプのＤ-アミノ酸（例えば、Ｌ−リジンの代わりにＤ-リジン）を伴う共通配列の、１以上のアミノ酸の系統的置換は、所望の性質を備えるより安定したペプチドを産生するために使用される。
【００８５】
ファージディスプレイペプチドライブラリは、ペプチド模倣剤の産生における技術として表れた（Scott, J. K. et al.（1990）Science 249:386、 Devlin, J. J. et al.（1990）Science 249:404、米国特許第５，２２３，４０９号、米国特許第５，７３３，７３１号、米国特許第５，４９８，５３０号、米国特許第５，４３２，０１８号、米国特許第５，３３８，６６５号、米国特許第５，９２２，５４５号、国際公開公報第９６／４０９８７号、及び国際公開公報第９８／１５８３３号（それぞれがこのような開示に対する参照により組み込まれている）。このようなライブラリにおいて、ランダムなペプチド配列は、繊維状ファージのコートタンパク質との融合により表示される。一般的に、示されたペプチドは、抗体固定化細胞外ドメイン（この場合において、ＰＦ４又はＲＡＮＴＥＳ）に対し親和性溶出（affinity-eluted）される。いくつかの実施形態において、ペプチド模倣剤は、バイオパニング（Nowakowski, G.S, et al.（2004）Stem Cells 22:1030-1038）により単離される。いくつかの実施形態において、ＭＩＦを発現させる全体の細胞は、細胞に特異的に結合したファージを単離させるためにＦＡＣを利用するライブラリをスクリーニングするために使用される。保持されたファージは、バイオパニング及び再伝播を連続して行うことより濃縮される。最良の結合ペプチドは、１以上のペプチドの具体的に関連したファミリー内の主要残基を確認するために配列される。ペプチド配列は又、ＤＮＡレベルでのアラニンスキャニング又は変異原性により置換される残基を示す。いくつかの実施形態において、変異原性ライブラリは、最良の結合剤の配列を更に最適化するために作り出され、スクリーニングされる。文献「Lowman（1997）Ann.Rev.Biophys.Biomol.Struct. 26:401-24」を参照。
【００８６】
いくつかの実施形態において、タンパク質とタンパク質の相互作用の構造分析は、本明細書中に記載されているポリペプチドの結合活性を模倣するペプチドを示すために使用される。いくつかの実施形態において、このような分析の結果から生じる結晶構造は、ペプチドが設計されるポリペプチドの必須残基の固有性及び相対配向を示す。文献、例えば、「Takasaki, et al.（1997）Nature Biotech, 15:1266-70」を参照。
【００８７】
いくつかの実施形態において、活性薬剤はペプチド又はポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ペプチドは、以下のようなペプチド配列: ＰＲＡＳＶＰＤＧＥＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＫＧＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱ、及びＭＩＦ単量体又は三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインを模倣するペプチド、以下のようなペプチド配列: ＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬ、及びＭＩＦ単量体又は三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインを模倣するペプチド、以下のようなペプチド配列: ＰＲＡＳＶＰＤＧＦＬＳＥＬＴＱＱＬＡＱＡＴＫＧＰＰＱＹＩＡＶＨＶＶＰＤＱＬＭＡＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬ、及びＭＩＦ単量体又は三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインを模倣するペプチド、以下のようなペプチド配列: ＦＧＧＳＳＥＰＣＡＬＣＳＬＨＳＩ、及びＭＩＦ単量体又は三量体の少なくとも一つの対応する特徴／ドメインを模倣するペプチド、 又はそれらの組み合わせである。
【００８８】
細胞株
特定の実施形態において、組換え型ヒトＣＸＣＲ４に加えてヒトＣＤ７４を発現させる細胞株が、本明細書中において開示される。いくつかの実施形態において、組換え型ヒトＣＸＣＲ４に加えてヒトＣＤ７４を発現させる細胞株は、ヒト細胞株（例えば、ＨＥＫ２９３）である。いくつかの実施形態において、組換え型ヒトＣＸＣＲ４に加えてヒトＣＤ７４を発現させる細胞株は、非ヒト細胞株（例えば、ＣＨＯ）である。
【００８９】
炎症
いくつかの実施形態において、本明細書中において記述されている方法及び組成物は、炎症（例えば、急性又は慢性）を処置する。いくつかの実施形態において、本明細書中において記述されている方法及び組成物は、感染から生じる炎症を（部分的に又は完全に）処置する。いくつかの実施形態において、本明細書中において記述されている方法及び組成物は、組織の損傷（例えば、火傷、凍傷、細胞毒性薬への暴露、又は外傷によるもの）から生じる炎症を（部分的に又は完全に）処置する。いくつかの実施形態において、本明細書中において記述されている方法及び組成物は、自己免疫疾患から生じる炎症を（部分的に又は完全に）処置する。いくつかの実施形態において、本明細書中において記述されている方法及び組成物は、異物（例えば破片）の存在から生じる炎症を（部分的に又は完全に）処置する。いくつかの実施形態において、本明細書中において記述されている方法及び組成物は、毒及び／又は化学刺激物への暴露から生じる炎症を治療する。
【００９０】
本明細書中において使用されているように、「急性炎症」は、数分から数時間のうちに発症することで特徴付けられる炎症のことを言い、ひとたび刺激が取り除かれると治まる（例えば、感染病原体は免疫応答又は処置薬の投与によって死滅、異物は免疫応答又は抽出によって取り除かれ、又は、損傷した組織は治癒した）。短時間の急性炎症は、半減期の短いほとんどの炎症性メディエーターに由来する。
【００９１】
特定の例において、急性炎症は、白血球活性化（例えば、樹状細胞、内皮細胞、及びマスト細胞）から始まる。特定の例において、白血球は炎症性メディエーター（例えば、ヒスタミン、プロテオグリカン、セリンプロテアーゼ、エイコサノイド、及び、サイトカイン）を放出する。特定の例において、炎症性メディエーターは、（部分的又は全体のいずれか）炎症に関連する症状をもたらすことになる。例えば、特定の例において、炎症性メディエーターは、後毛細管細静脈を拡張させるとともに、血管透過性を増加させる。特定の例において、血管拡張を伴う増大した血流は、（部分的又は全体のいずれか）発赤及び熱をもたらす。特定の例において、血管の増加した透過性は、浮腫の原因となる組織への血漿の滲出をもたらすことになる。特定の例において、後者は、白血球が走化性勾配に沿って炎症刺激物の部位へ遊走することを可能にする。さらに、特定の例において、血管に対する構造的な変化（例えば、毛細管及び細静脈）が起こる。特定の例において、構造変化は、（部分的又は全体のいずれか）単球及び／又はマクロファージによって誘発される。特定の例において、構造変化は、血管リモデリング、及び血管形成を含むが、これらに限定されない。特定の例において、血管形成は、増加した白血球の輸送が可能となることによって、慢性的な炎症の維持に関与する。さらに、特定の例において、ヒスタミン及びブラジキニンは、かゆみ及び／又は疼痛の原因となる神経終末を刺激する。
【００９２】
特定の例において、慢性的な炎症は、持続性の刺激物（例えば、持続性の急性炎症、バクテリア感染症（例えば、結核菌による）、化学薬品（例えば、シリカ、又は、タバコの煙）への長期的な暴露、及び、自己免疫反応（例えば、関節リウマチ）の存在に由来する。特定の例において、持続性の刺激物は、絶え間ない炎症（例えば、単球の絶え間ない動員、及びマクロファージの増殖による）をもたらす。特定の例において、絶え間ない炎症はさらに組織を損傷し、この組織損傷は単核細胞のさらなる動員をもたらすことで、炎症を維持するとともに悪化させる。特定の例において、炎症に対する生理的反応は、血管形成及び線維症をさらに含む。
【００９３】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されている方法及び組成物は、炎症に関連する障害（即ち、ＭＩＦ媒介性疾患）を処置する。ＭＩＦ媒介性疾患は、アテローム性動脈硬化、腹部大動脈瘤、急性散在性脳脊髄炎、もやもや病、高安病、急性冠症候群、心臓同種移植片血管障害、肺炎症、急性呼吸促迫症候群、肺線維症、急性散在性脳脊髄炎、アジソン病、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、水疱性類天疱瘡、シャーガス病、慢性閉塞性肺疾患、セリアック病、皮膚筋炎、１型糖尿病、２型糖尿病、子宮内膜症、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、間質性膀胱炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、メタボリックシンドローム、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋炎, ナルコレプシー、肥満症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、関節リウマチ、統合失調症、強皮症、シェーグレン症候群、血管炎、白斑、ウェゲナー肉芽腫症、アレルギー性鼻炎、前立腺癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、乳癌、黒色腫、胃癌、結腸直腸癌、脳癌、転移性骨障害、膵癌、リンパ腫、鼻茸、消化器癌、潰瘍性大腸炎、クローン病、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病、感染性腸炎、分類不能大腸炎、炎症性肝疾患、エンドトキシンショック、敗血症性ショック、リウマチ性脊椎炎、強直性脊椎炎、痛風性関節炎、リウマチ性多発筋痛症、アルツハイマー病、パーキンソン病、てんかん、エイズ認知症、喘息、成人呼吸窮迫症候群、気管支炎、急性白血球媒介性肺損傷、遠位直腸炎、ウェゲナー肉芽腫症、線維筋痛症、気管支炎、嚢胞性線維症、ブドウ膜炎、結膜炎、乾癬、湿疹、皮膚炎、平滑筋増殖性疾患、髄膜炎、帯状疱疹、脳炎、腎炎、結核、網膜炎、アトピー性皮膚炎、膵炎、歯周歯肉炎、凝固壊死、液化壊死、フィブリノイド壊死、新生内膜過形成、心筋梗塞、卒中、移植臓器拒絶反応、又は、これらの組み合わせを含むが、これらに限定されるわけではない。 
【００９４】
アテローム性動脈硬化
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されている方法及び組成物は、アテローム性動脈硬化を処置する。本明細書中で使用されているように、「アテローム性動脈硬化」は、動脈壁の炎症を意味し、アテローム発生（例えば、脂質沈着、内膜中膜厚化（intima-media thickening）、及び単球による内膜下浸潤（subintimal infiltration））の全段階、並びに全ての動脈硬化病変（例えば、Ｉ型病変からＶＩＩＩ型病変まで）を含む。特定の例において、アテローム性動脈硬化は、マクロファージの蓄積に（一部又は全て）由来する。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されている方法及び組成物は、マクロファージの蓄積を防ぎ、蓄積したマクロファージの数を減らし、及び／又はマクロファージが蓄積する速度を低下させる。特定の例において、アテローム性動脈硬化は、酸化ＬＤＬの存在に（一部又は全て）由来する。特定の例において、酸化ＬＤＬは、動脈壁に損傷を与える。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、動脈壁への酸化ＬＤＬ−誘発性損傷を防ぎ、酸化ＬＤＬによって損傷を受ける動脈壁部分を減少させ、動脈壁への損傷の重症度を軽減し、及び／又は動脈壁が酸化ＬＤＬによって損傷を受ける速度を低下させる。特定の例において、単球は、損傷を受けた動脈壁に反応する（すなわち、該損傷を受けた動脈壁に対する走化性勾配を伴う）。特定の例において、単球はマクロファージを分化させる。特定の例において、マクロファージは、酸化ＬＤＬを取り込む（取り込まれたＬＤＬを備えるマクロファージ等の細胞は、「泡沫細胞」と呼ばれる）。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されている方法及び組成物は、泡沫細胞の形成を防ぎ、泡沫細胞の数を減少させ、及び／又は泡沫細胞が形成される速度を低下させる。特定の例において、泡沫細胞は死滅し、その後破裂する。特定の例において、泡沫細胞の破裂は、酸化コレステロールを動脈壁へ沈着させる。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されている方法及び組成物は、動脈壁へ沈着した酸化コレステロールの沈着を防ぎ、動脈壁へ沈着した酸化コレステロールの数を減少させ、及び／又は酸化コレステロールは動脈壁に沈着する速度を低下させる。特定の例において、動脈壁には、酸化ＬＤＬにより引き起こされた損傷によって炎症が生じる。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されている方法及び組成物は、動脈壁の炎症を防ぎ、炎症を起こす動脈壁部分を減少させ、及び／又は、炎症の重症度を軽減する。特定の例において、動脈壁の炎症は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）−２、ＣＤ４０リガンド、及び、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−αの（部分的又は全体的のいずれか）発現をもたらすことになる。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されている方法及び組成物は、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）−２、ＣＤ４０リガンド、及び、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−αの発現を防ぎ、又は、発現したマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）−２、ＣＤ４０リガンド、及び、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−αの量を減少させる。特定の例において、細胞は、炎症領域上を覆う硬質の覆いを形成する。いくつかの実施形態において、本明細書��に記載されている方法及び組成物は、硬質の覆いの形成を防ぎ、硬質の覆いによって影響を受ける動脈壁部分を減少させ、及び／又は、硬質の覆いが形成される速度を低下させる。特定の例において、細胞の覆いは動脈を狭める。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されている方法及び組成物は、動脈狭小化を防ぎ、動脈狭小化部分を減少させ、狭小化の重症度を軽減し、及び／又は、動脈が狭まる速度を低下させる。
【００９５】
特定の例において、動脈硬化性プラークは、（一部又は全て）狭窄症（すなわち、血管の狭小化）をもたらす。特定の例において、狭窄症は、（一部又は全て）血流の減少をもたらす。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されている方法及び組成物は、狭窄症及び／又は再狭窄症を処置する。特定の例において、経皮的インターベンション（例えば、バルーン血管形成術又はステント挿入）による狭窄症のアテローム硬化病変の機械的損傷は、新生内膜過形成の発症を誘発する。特定の例において、血管壁の急性損傷は、血管内壁中のＳＭＣのアポトーシスだけでなく、急性の内皮露出及び血小板粘着を誘発する。特定の例において、損傷に反応して内膜層内で表現型的に独特のＳＭＣが蓄積することは、動脈血管壁の統合性を回復させる機能を持つが、その後、血管の進行性狭窄を招くことになる。特定の例において、単球の動員は、より持続性及び慢性の炎症反応を引き起こす。いくつかの実施形態において、本明細書中で開示される方法及び組成物は、表現型的に独特のＳＭＣが内膜層内で蓄積することを抑制する。いくつかの実施形態において、本明細書中で開示される方法及び組成物は、バルーン血管形成術又はステント挿入によって処置される個体において、表現型的に独特のＳＭＣが内膜層内で蓄積することを抑制する。
【００９６】
特定の例において、動脈硬化性プラークの破裂は、組織に対する梗塞（例えば、心筋梗塞又は卒中）を（一部又は全て）もたらす。特定の例において、心筋のＭＩＦ発現は、急性（cute）の心筋虚血障害を伴う生存している心筋細胞及びマクロファージにおいて上方制御される。特定の例において、低酸素症及び酸化ストレスは、異型タンパク質キナーゼＣ−依存性排出メカニズムを介して、心筋細胞からＭＩＦの分泌を誘発するとともに、細胞外シグナル制御キナーゼの活性化をもたらす。特定の例において、増加したＭＩＦの血清中濃度は、急性心筋梗塞を有する個体において検知される。特定の例において、ＭＩＦは、梗塞領域中のマクロファージ蓄積、及び、梗塞の間の筋細胞誘発性損傷の炎症性を促進する役割に関与する。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されている方法及び組成物は、梗塞を処置する。特定の例において、再灌流傷害は梗塞を伴う。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されている方法及び組成物は、再灌流傷害を処置する。
【００９７】
いくつかの実施形態において、本明細書中で開示される抗体は、アテローム硬化性プラークを同定及び／又は位置づけるために投与される。いくつかの実施形態において、抗体は、画像化のために標識化される。いくつかの実施形態において、抗体は、医療画像のために標識化される。いくつかの実施形態において、抗体は、放射線画像（radio-imaging）、ＰＥＴ画像、ＭＲＩ画像、及び蛍光画像のために標識化される。いくつかの実施形態において、抗体は、高濃度のＭＩＦを有する循環系の領域に局在化させる。いくつかの実施形態において、高濃度ＭＩＦを有する循環器系の領域は、動脈硬化性プラークである。いくつかの実施形態において、標識化された抗体は、任意の適切な方法（例えば、ガンマカメラ、ＭＲＩ、ＰＥＴスキャナー、Ｘ線コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、機能的磁気共鳴画像法（ｆＭＲＩ）、及び、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）を用いることによるもの）によって検知される。
【００９８】
腹部大動脈瘤
特定の例において、アテローム硬化性プラークは、（一部又は全て）動脈瘤の発症をもたらす。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されている方法及び組成物は、動脈瘤を処置するために投与される。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されている方法及び組成物は、腹部大動脈瘤（「ＡＡＡ」）を処置するために投与される。本明細書中で使用されているように、「腹部大動脈瘤」は、通常の動脈直径よりも少なくとも５０％増加していることにより特徴付けられる、腹部大動脈の局在的なの拡張である。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されている方法及び組成物は、腹部大動脈の拡張を減少させる。
【００９９】
特定の例において、腹部大動脈瘤は、（一部又は全て）構造タンパク質（例えば、エラスチン及びコラーゲン）の分解に由来する。いくつかの実施形態において、本明細書中で開示される方法及び組成物は、構造タンパク質（例えば、エラスチン及びコラーゲン）の分解を、部分的に又は完全に抑制する。いくつかの実施形態において、本明細書中で開示される方法及び／又は組成物は、構造タンパク質（例えば、エラスチン及びコラーゲン）の再生を促進する。特定の例において、構造タンパク質の分解は、活性化ＭＭＰによって引き起こされる。いくつかの実施形態において、本明細書中で開示される方法及び／又は組成物は、ＭＭＰの活性化を部分的又は完全に抑制する。いくつかの実施形態において、本明細書中で開示される組成物及び／又は方法は、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−９、又は、ＭＭＰ−１２の上方制御を抑制する。特定の例において、ＭＭＰは、白血球（例えば、マクロファージ及び好中球）による腹部大動脈部分の浸潤を伴って活性化される。
【０１００】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されている方法及び組成物は、白血球の浸潤を低下させる。特定の例において、ＭＩＦは初期の腹部大動脈瘤で上方制御される。特定の例において、白血球は、ＡＡＡ（例えば、アテローム硬化性プラーク、感染症、嚢胞性中膜壊死、動脈炎、外傷、偽動脈瘤を生成する吻合破壊の影響を受けた大動脈部分）の発症に影響を受けやすい腹部大動脈部分へのＭＩＦ勾配を伴う。いくつかの実施形態において、本明細書中で開示される方法及び／又は組成物は、ＭＩＦの活動を部分的又は完全に抑制する。いくつかの実施形態において、本明細書中で開示される方法及び／又は組成物は、マクロファージ及び好中球に対してケモカインとして機能するＭＩＦの能力を部分的に又は完全に抑制する。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、本明細書中で開示される抗体は、それを必要としている個体のＡＡＡを同定する及び／又は位置づけるために投与される。いくつかの実施形態において、それを必要としている個体は、ＡＡＡを発症させる１以上の危険因子を示している（例えば、年齢が６０歳以上、男性、喫煙、高血圧、高血清コレステロール、糖尿病、アテローム性動脈硬化）。いくつかの実施形態において、抗体は、画像化のために標識化される。いくつかの実施形態において、抗体は、医療画像のために標識化される。いくつかの実施形態において、抗体は、放射線画像（radio-imaging）、ＰＥＴ画像、ＭＲＩ画像、及び、蛍光画像のために標識化される。いくつかの実施形態において、抗体は、高濃度ＭＩＦを有する循環器系の領域に局在化する。いくつかの実施形態において、高濃度ＭＩＦを有する循環器系の領域は、ＡＡＡである。いくつかの実施形態において、標識化された抗体は、任意の適切な方法（例えば、ガンマカメラ、ＭＲＩ、ＰＥＴスキャナー、Ｘ線コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、機能的磁気共鳴画像法（ｆＭＲＩ）、及び、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）を用いることによって）によって検知される。
【０１０２】
様々な障害
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法及び組成物は、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患を処置する。特定の例において、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患は、それ自体に対するＴ細胞媒介性免疫応答によって特徴づけられる（例えば、体内に生じた細胞及び組織）。Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患の例としては、大腸炎、多発性硬化症、関節炎、関節リウマチ、変形性関節症、若年性関節炎、乾癬性関節炎、急性膵炎、慢性膵炎、糖尿病、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ又はＩ型糖尿病）、膵島炎、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、自己免疫性溶血性貧血症候群（autoimmune hemolytic syndromes）、自己免疫性肝炎、自己免疫性神経疾患、自己免疫性卵巣不全（autoimmune ovarian failure）、自己免疫性精巣炎、自己免疫性血小板減少症、反応性関節炎、強直性脊椎炎、シリコーン・インプラントに関連した自己免疫性疾患、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、血管炎症候群（例えば、巨細胞性動脈炎、ベーチェット病＆ウェゲナー肉芽腫症）、白斑、自己免疫性疾患の第２の血液学的兆候（例えば、貧血）、薬物誘発性自己免疫、橋本甲状腺炎、下垂体炎、突発性血小板減少性紫斑病、金属誘発性自己免疫、重症筋無力症、天疱瘡、自己免疫性聴覚消失（例えば、メニエール病）、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ＨＩＶ関連性自己免疫症候群、及び、ギラン−バレー症候群が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法及び組成物は、疼痛を処置する。疼痛には、急性疼痛、急性の炎症性疼痛、慢性の炎症性疼痛、及び、神経因性疼痛が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法及び組成物は、過敏症を処置する。本明細書中で使用されているように、「過敏症」とは、好ましくない免疫系反応を表す。過敏症は、４つの分類に分けられる。Ｉ型過敏症は、アレルギー（例えば、アトピー、アナフィラキシー、又は、喘息）を含む。ＩＩ型過敏症は、細胞毒性／抗体媒介性（例えば、自己免疫性溶血性貧血、血小板減少症、胎児赤芽球症、又は、グッドパスチャー症候群）である。ＩＩＩ型過敏症は、免疫複合体疾患（例えば、血清病、アルサス反応、又は、ＳＬＥ）である。ＩＶ型過敏症は、遅発型過敏症（ＤＴＨ）、細胞媒介性免疫記憶応答、及び、抗体非依存性（例えば、接触性皮膚炎、ツベルクリン反応検査、又は、慢性的な移植拒絶反応）である。
【０１０５】
本明細書中で使用されているように、「アレルギー」は、ＩｇＥによるマスト細胞及び好塩基球の過剰な活性化によって特徴づけられる疾患である。特定の例において、ＩｇＥによるマスト細胞及び好塩基球の過剰な活性化は、（部分的又は完全のいずれか）炎症反応をもたらす。特定の例において、炎症反応は局所的なものである。特定の例において、炎症反応は、気道狭窄をもたらす（すなわち、気管支収縮）。特定の例において、炎症反応は、鼻の炎症をもたらす（すなわち、鼻炎）。特定の例において、炎症反応は、全身性である（すなわち、アナフィラキシー）。
【０１０６】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法及び組成物は、血管形成を処置する。本明細書中で使用されているように、「血管形成」は、新しい血管の形成を表す。特定の例において、血管形成は慢性的な炎症を伴って生じる。特定の例において、血管形成は、単球及び/又はマクロファージにより誘発される。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法及び／又は組成物は、血管形成を抑制する。特定の例において、ＭＩＦは内皮前駆細胞において発現される。特定の例において、ＭＩＦは、腫瘍関連の新生脈管構造において発現される。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、本発明は、腫瘍形成を処置する方法を備える。特定の例において、腫瘍形成細胞は、炎症反応を誘発する。特定の例において、腫瘍形成細胞に対する炎症反応の一部は血管形成である。特定の例において、血管形成は腫瘍形成の発症を促進する。いくつかの実施形態において、腫瘍形成は、血管肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、及び、他の肉腫、乳癌、盲腸癌、結腸癌、肺癌、卵巣癌、咽頭癌、直腸Ｓ状部癌、膵癌、腎癌、子宮内膜癌、胃癌、肝癌、頭頸部癌、乳癌、及び、他の癌、ホジキンリンパ腫及び他のリンパ腫、悪性黒色腫又は他の黒色腫、耳下腺腫瘍、慢性リンパ性白血病及び他の白血病、星状細胞腫、神経膠腫、血管腫、網膜芽細胞腫、神経芽細胞腫、聴神経腫瘍、神経線維腫、トラコーマ、及び、化膿性肉芽腫である。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、ＭＩＦ又はＭＩＦアナログを前記個体に投与する工程を備える血管新生を促進する方法は、本明細書中に開示される。
【０１０９】
本明細書中で使用されているように、「敗血症」とは、全身炎症によって特徴づけられる疾患である。特定の例において、ＭＩＦの発現及び活性を抑制することは、敗血症にかかった個体の生存率を高める。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法及び組成物は、敗血症を処置する。特定の例において、敗血症は、（部分的又は完全のいずれか）心筋機能不全（例えば、心筋機能不全）をもたらす。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法及び組成物は、敗血症由来の心筋機能不全を処置する（例えば、心筋機能不全）。
【０１１０】
特定の例において、ＭＩＦは心臓におけるキナーゼ活性化及びリン酸化（すなわち、心機能低下の指標）を誘発する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物は、敗血症由来の心筋機能不全（例えば、心筋機能不全）を処置する。
【０１１１】
特定の例において、ＬＰＳはＭＩＦの発現を誘発する。特定の例において、ＭＩＦは、敗血症の間にエンドトキシンによって誘発され、心筋の炎症反応、心筋細胞のアポトーシス、及び心機能不全の開始因子として機能する（図８）。
【０１１２】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法及び組成物は、エンドトキシン暴露由来の心筋の炎症反応を抑制する。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法及び組成物は、エンドトキシン暴露由来の心筋細胞のアポトーシスを抑制する。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法及び組成物は、エンドトキシン暴露由来の心筋の心機能不全を抑制する。
【０１１３】
特定の例において、ＭＩＦの抑制は、（部分的又は完全のいずれか）生存因子（例えば、Ｂｃｌ−２、Ｂａｘ、及び、ｐｈｏｓｐｈｏ−Ａｋｔ）において著しい増加をもたらすとともに、心筋細胞の生存及び心筋機能の改善をもたらす。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法及び組成物は、Ｂｃｌ−２、Ｂａｘ、又は、ｐｈｏｓｐｈｏ−Ａｋｔの発現を増加させる。
【０１１４】
特定の例において、ＭＩＦは、火傷に関連する組織損傷又は主要な組織損傷後の遅発型及び遅延性の心機能低下を媒介する。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法及び組成物は、火傷後の遅延性の心機能低下を処置する。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法及び組成物は、主要な組織損傷後の遅延性の心機能低下を処置する。
【０１１５】
特定の例において、ＭＩＦは敗血症の間、肺から放出される。
【０１１６】
特定の例において、ＭＩＦの抗体中和は、自己免疫性心筋炎の発症を抑制するとともに、自己免疫性心筋炎の重症度を軽減する。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法及び／又は組成物は、自己免疫性心筋炎を処置する。
【０１１７】
併用
特定の例において、心血管系の障害を調節するために本明細書で開示される方法及び医薬組成物は、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４との結合、及び／又は、（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、（ｉｉｉ）ホモ多量体を形成するＭＩＦの能力、又は、これらの組み合わせを抑制する（ａ）活性薬剤と、（ｂ）ＭＩＦ媒介性疾患を処置する薬剤（「ＭＩＦ媒介性疾患剤」）から選択される第２の活性薬剤との相乗的な組み合わせを備える。
【０１１８】
特定の実施形態において、心血管系の障害を調節するために本明細書で開示される方法及び医薬組成物は、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４との結合、及び／又は、（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、（ｉｉｉ）ホモ多量体を形成するＭＩＦの能力、又は、これらの組み合わせを抑制する（ａ）活性薬剤と、（ｂ）その１つの要素が炎症である障害を治療する薬剤から選択される第２の活性薬剤との相乗的な組み合わせを備える。
【０１１９】
特定の実施形態において、心血管系の障害を調節するために本明細書で開示される方法及び医薬組成物は、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４との結合、及び／又は、（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、（ｉｉｉ）ホモ多量体を形成するＭＩＦの能力、又は、これらの組み合わせを抑制する（ａ）活性薬剤と、（ｂ）その副作用が好ましくない炎症である薬剤から選択される第２の活性薬剤との相乗的な組み合わせを備える。特定の例において、スタチン（例えば、アトルバスタチン、ロバスタチン、及び、シンバスタチン）は炎症を誘発する。特定の例において、スタチンの投与は、（部分的又は完全に）筋炎をもたらす。
【０１２０】
本明細書中で使用されるように、用語「薬学的な併用」、「追加治療を実施する」、「追加治療薬を投与する」などは、１以上の活性成分の混合又は併用に由来する薬物療法のことを言い、活性成分の定型的な及び非定型的な併用の双方を含む。用語「定型的な併用」は、本明細書中に記載される薬剤の少なくとも１つ、及び、少なくとも１つの助剤（co-agent）の双方が、単一体又は単一容量の形状で同時に個体に投与されることを意味する。用語「非定型的な併用」は、本明細書中に記載される薬剤の少なくとも１つ、及び、少なくとも１つの助剤（co-agent）の双方が、別々の存在として、同時に、併用して、又は、中断期間をおいて別々に、個体に投与されることを意味し、このような投与は、個体の身体において、効果的なレベルの２つ以上の薬剤を提供する。いくつかの例において、助剤は、一度又は一定期間投与され、その後、薬剤が一度又は一定期間投与される。他の例において、助剤は、一定期間投与され、その後、助剤と薬剤の双方の投与を含む治療が実施される。さらに他の実施形態において、薬剤は、一度又は一定期間投与され、その後、助剤が、一度又は一定期間投与される。このような投与は、同様に、例えば、３つ以上の活性成分の投与などのカクテル療法にも応用される。
【０１２１】
本明細書中に使用されるように、用語「同時投与」、「併用投与」、及び文法的に等しい言葉は、選択された治療薬の単一個体への投与を包含することを意味するとともに、同一の又は異なる投与経路によって、あるいは、同一の又は異なる時間で、薬剤が投与される処置レジメンを含むよう意図されている。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される薬剤は、他の薬剤とともに同時投与される。このような用語は、薬剤及び／又はその代謝物が同時に動物内に存在するように、２つ以上の薬剤の動物への投与を包含する。このような用語は、別々の組成物における同時投与、別々の組成物における異なる時間での投与、及び／又は、両方の薬剤が存在する組成物における投与を含む。したがって、いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される薬剤、及び、他の薬剤は、単一組成物で投与される。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される薬剤、及び、他の薬剤（復数種）は、組成物において混合される。
【０１２２】
併用処置又は予防法が検討される場合、本明細書中に記載される薬剤が併用の特別な性質によって限定されることを意図したものではない。例えば、本明細書中に記載される薬剤は、化学合成物（chemical hybrids）と同様、単一の混合物として併用して任意で投与される。後者の一例は、標的の担体又は活性医薬品（an active pharmaceutical）と共役結合する薬剤である。共役結合は、市販の架橋剤の使用などの多くの手法で達成可能であるが、これに限定されない。さらに、併用処置は、任意で別々に又は同時に実施される。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、（ａ）本明細書中で開示される活性薬剤と、（ｂ）第２の活性薬剤との同時投与により、医療専門家が、ＭＩＦ媒介性疾患剤の規定の用量を増やすことが（部分的又は完全に）可能となる。特定の例において、スタチン誘発性筋炎は、用量依存性である。いくつかの実施形態において、活性薬剤を処方することにより、医療専門家がスタチンの規定の用量を増やすことが（部分的又は完全に）可能となる。
【０１２４】
いくつかの実施形態において、（ａ）活性薬剤と、（ｂ）第２の活性薬剤との同時投与により、医療専門家が、第２の活性薬剤を処方することが（部分的又は完全に）可能となる（即ち、同時投与が炎症性疾患薬を助ける）。
【０１２５】
いくつかの実施形態において、第２の活性薬剤は、間接的な手段（例えば、ＣＥＴＰ抑制）によってＨＤＬレベルを標的とする活性薬剤である。いくつかの実施形態において、非選択的なＨＤＬ療法を、本明細書中で開示される活性薬剤、（２）ＲＡＮＴＥＳと血小板第４因子との間の相互作用の修飾薬、又は、（３）これらの組み合わせ、と併用することによって、間接的な手段によりＨＤＬレベルを標的とする第２の活性薬剤を、さらに効果的な治療へと変換させる。
【０１２６】
いくつかの実施形態において、第２の活性薬剤は、炎症の修飾薬の前後、又は同時に、投与される。
【０１２７】
薬物療法
いくつかの実施形態において、第２の活性薬剤は、ナイアシン、フィブラート、スタチン、アポ−ＡＩ模倣ペプチド（例えば、ＤＦ−４、ノバルティス社）、アポＡ−Ｉ転写上方制御剤、ＡＣＡＴインヒビター、ＣＥＴＰ修飾剤、糖タンパク質（ＧＰ）ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体アンタゴニスト、Ｐ２Ｙ１２受容体アンタゴニスト、Ｌｐ−ＰＬＡ２−インヒビター、抗ＴＮＦ剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−２受容体アンタゴニスト、細胞毒性薬剤、免疫調節剤、抗生物質、Ｔ細胞共刺激遮断薬、障害を改善する抗リウマチ薬、Ｂ細胞除去剤、免疫抑制剤、抗リンパ球抗体、アルキル化剤、抗代謝産物、植物性アルカロイド、テルペノイド、トポイソメラーゼインヒビター、抗腫瘍抗生物質、モノクローナル抗体、ホルモン療法（例えば、アロマターゼインヒビター）、又は、これらの組み合わせである。  
【０１２８】
いくつかの実施形態において、第２の活性薬剤は、ナイアシン；ベザフィブラート；シプロフィブラート；クロフィブラート；ゲムフィブロジル；フェノフィブラート；ＤＦ４（Ａｃ−Ｄ−Ｗ−Ｆ−Ｋ−Ａ−Ｆ−Ｙ−Ｄ−Ｋ−Ｖ−Ａ−Ｅ−Ｋ−Ｆ−Ｋ−Ｅ−Ａ−Ｆ−ＮＨ２）；ＤＦ５；ＲＶＸ−２０８（Ｒｅｓｖｅｒｌｏｇｉｘ）；アバシミベ（avasimibe）；パクチミベ硫酸塩（pactimibe sulfate）（ＣＳ−５０５）；ＣＩ−１０１１(2,6-ジイソプロピルフェニル[(2,4,6-トリイソプロピルフェニル)アセチル]スルファミン酸)；ＣＩ−９７６ (2,2-ジメチル-N-(2,4,6-トリメトキシフェニル)ドデカンアミド)；ＶＵＬＭ１４５７(1-(2,6-ジイソプロピルフェニル)-3-[4-(4'-ニトロフェニルチオ)フェニル]尿素)；ＣＩ−９７６(2,2-ジメチル-N-(2,4,6-トリメトキシフェニル)ドデカンアミド)；Ｅ−５３２４ (n-ブチル-N'-(2-(3-(5-エチル-4-フェニル-1H-イミダゾル-1-イル)プロポキシ)-6-メチルフェニル)尿素); ＨＬ−００４(N-(2,6-ジイソプロピルフェニル)テトラデシルチオアセタミド)；ＫＹ−４５５(N-(4,6-ジメチル-1-ペンチルインドリン-7-イル)-2,2-ジメチルプロパンアミド)；ＦＹ−０８７(N-[2-[N'-ペンチル-(6,6-ジメチル-2,4-ヘプタジイニル)アミノ]エチル]-(2-メチル-1-ナフチル-チオ)アセトアミド)：ＭＣＣ−１４７（三菱製薬）; Ｆ １２５１１ ((S)-2',3',5'-トリメチル-4'-ヒドロキシ-α-ドデシルチオアセトアニリド)；ＳＭＰ−５００ （住友製薬）；ＣＬ ２７７０８２(2,4-ジフルオロ-フェニル-N[[4-(2,2-ジメチルプロピル)フェニル]メチル]-N-(ヘプチル)尿素)；Ｆ−１３９４((1s,2s)-2-[3-(2,2-ジメチルプロピル)-3-ノニルウレイド]アミノシクロヘキサン-1-イル 3-[N-(2,2,5,5-テトラメチル-1,3-ジオキサン-4-カルボニル)アミノ]プロピオン酸)；ＣＰ− １１３８１８(N-(2,4-ビス(メチルチオ)-6-メチルピリジン-3-イル)-2-(ヘキシルチオ)デカン酸アミド)；ＹＭ−７５０；トルセトラピブ；アナセトラピブ；ＪＴＴ−７０５(日本たばこ産業／ロシュ社)；アブシキシマブ；エプチフィバチド；チロフィバン；ロキシフィバン；バリアビリン；ＸＶ ４５９ (N(3)-(2-(3-(4-ホルムアミジノフェニル)イソキサゾリン-5-イル)アセチル)-N(2)-(1-ブチルオキシカルボニル)-2,3-ジアミノプロピオン酸)；ＳＲ １２１５６６Ａ(3-[N-{4-[4-(アミノイミノメチル)フェニル]-1,3-チアゾル-2-イル}-N-(1-カルボキシメチルピぺリド（carboxymethylpiperid）-4-イル)アミノプロピオン酸、三塩酸塩)；ＦＫ４１９((S)-2-アセチルアミノ-3-[(R)-[1-[3-(ピペリジン-4-イル)プロピオニル]ピペリジン-3-イルカルボニル]アミノ]プロピオン酸三水和物（trihydrate）)；クロピドグレル；プラスグレル；カングレロール；ＡＺＤ６１４０（アストラゼネカ）；ＭＲＳ ２３９５(2,2-ジメチル-プロピオン酸 3-(2-クロロ-6-メチルアミノプリン-9-イル)-2-(2,2-ジメチル-プロピオニルオキシメチル)-プロピルエステル)；ＢＸ ６６７(Berlex Biosciences)；ＢＸ ０４８(Berlex Biosciences)；ダラプラディブ（ＳＢ ４８０８４８）；ＳＢ−４３５４９５（グラクソスミスクライン社）；ＳＢ−２２２６５７（グラクソスミスクライン社）；ＳＢ−２５３５１４（グラクソスミスクライン社）；アレファセプト、エファリズマブ、メトトレキサート、アシトレチン、イソトレチノイン、ヒドロキシ尿素、ミコフェノール酸モフェチル、スルファサラジン、6-チオグアニン、ドボネックス、タクロネックス、ベタメタゾン、タザロテン、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、エタネルセプト、アダリムマブ、インフリキシマブ、アバタセプト、リツキシマブ、トラスツズマブ、抗ＣＤ４５モノクローナル抗体ＡＨＮ−１２（ＮＣＩ）、ヨード−１３１抗Ｂ１抗体（Corixa Corp.）、抗ＣＤ６６モノクローナル抗体ＢＷ ２５０／１８３（ＮＣＩ、Southampton General Hospital）、抗ＣＤ４５モノクローナル抗体（NCI, Baylor College of Medicine）、抗体抗ａｎｂ３インテグリン（ＮＣＩ）、ＢＩＷ−８９６２（BioWa Inc.）、抗体ＢＣ８（ＮＣＩ）、抗体ｍｕＪ５９１（ＮＣＩ）、インジウムＩｎ １１１モノクローナル抗体ＭＮ−１４（ＮＣＩ）、イットリウムＹ ９０モノクローナル抗体ＭＮ−１４（ＮＣＩ）、Ｆ１０５モノクローナル抗体（ＮＩＡＩＤ）、モノクローナル抗体ＲＡＶ１２（Raven Biotechnologies）、ＣＡＴ−１９２（ヒト抗ＴＧＦ−β１モノクローナル抗体、ジェンザイム社）、抗体３Ｆ８（ＮＣＩ）、１７７Ｌｕ−Ｊ５９１（Weill Medical College of Cornell University）、ＴＢ−４０３（BioInvent International AB）、アナキンラ、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、レフルノミド、ｄペニシラミン、アミトリプチリン、又は、ノルトリプチリン、クロラムブシル、ナイトロジェンマスタード、プラステロン、ＬＪＰ３９４（アベチムスナトリウム）、ＬＪＰ １０８２（La Jolla Pharmaceutical）、エクリズマブ、ベリムマブ（belibumab）、ｒｈｕＣＤ４０Ｌ（ＮＩＡＩＤ）、エピラツズマブ、シロリムス、タクロリムス、ピメクロリムス、サリドマイド、抗胸腺細胞グロブリン−ウマ（Atgam, Pharmacia Upjohn）、抗胸腺細胞グロブリン−ウサギ（サイモグロブリン、ジェンザイム社）、ムロモナブ−ＣＤ３（FDA Office of Orphan Products development）、バシリキシマブ、ダクリズマブ、リルゾール、クラドリビン、ナタリズマブ、インターフェロンβ−１ｂ、インターフェロンβ−１ａ、チザニジン、バクロフェン、メサラジン、アサコール、ペンタサ、メサラミン、バルサラジド、オルサラジン、６−メルカプトプリン、ＡＩＮ４５７（抗ＩＬ−１７モノクローナル抗体、ノバルティス社）、テオフィリン、Ｄ２Ｅ７（Knoll Pharmaceuticalsからヒト抗ＴＮＦｍＡｂ）、メポリズマブ（抗ＩＬ―５抗体、ＳＢ ２４０５６３）、カナキヌマブ（抗ＩＬ−１β抗体、ＮＩＡＭＳ）、抗ＩＬ−２受容体抗体（ダクリズマブ、ＮＨＬＢＩ）、ＣＮＴＯ ３２８（抗ＩＬ−６モノクローナル抗体、Centocor）、ＡＣＺ８８５（完全なヒト抗インターロイキン−１βモノクローナル抗体、ノバルティス社）、ＣＮＴＯ １２７５（完全なヒト抗ＩＬ−１２モノクローナル抗体、Centocor）、(3S)-N-ヒドロキシ-4-({4-[(4-ヒドロキシ-2-ブチニル)オキシ]フェニル}スルホニル)-2,2-ジメチル-3-チオモルホリンカルボキサミド（アプラタスタット（apratastat））、ゴリムマブ（ＣＮＴＯ １４８）、オネルセプト、ＢＧ９９２４（Biogen Idec）、セルトリズマブペゴール（CDP870、UCB Pharma）、ＡＺＤ９０５６（アストラゼネカ社）、 ＡＺＤ５０６９（アストラゼネカ社）、ＡＺＤ９６６８（アストラゼネカ社）、ＡＺＤ７９２８（アストラゼネカ社）、ＡＺＤ２９１４（アストラゼネカ社）、ＡＺＤ６０６７（アストラゼネカ社）、ＡＺＤ３３４２（アストラゼネカ社）、ＡＺＤ８３０９（アストラゼネカ社）、[(1R)-3-メチル-1-({(2S)-3-フェニル-2-[(ピラジン-2-イルカルボニル)アミノ] プロパノイル}アミノ)ブチル] ボロン酸（ボルテゾミブ）、ＡＭＧ−７１４、（抗ＩＬ１５ヒトモノクローナル抗体、アムジェン社）、ＡＢＴ−８７４（抗ＩＬ−１２モノクローナル抗体、Abbott Labs）、ＭＲＡ（トシリズマブ、抗ＩＬ−６受容体モノクローナル抗体、中外製薬）、ＣＡＴ−３５４（ヒト抗インターロイキン−１３モノクローナル抗体、Cambridge Antibody Technology, MedImmune）、アスピリン、サリチル酸、ゲンチシン酸、サリチル酸コリンマグネシウム（choline magnesium salicylate）、サリチル酸コリン、サリチル酸コリンマグネシウム、サリチル酸コリン、サリチル酸コリンマグネシウム、サリチル酸ナトリウム、ジフルニサル、カプロフェン、フェノプロフェン、フェノプロフェンカルシウム、フルロビプロフェン（flurobiprofen）、イブプロフェン、ケトプロフェン、ナブトン（nabutone）、ケトロラク（ketolorac）、ケトロラクトロメタミン、ナプロキセン、オキサプロジン、ジクロフェナク、エトドラク、インドメタシン、スリンダク、トルメチン、メクロフェナム酸、メクロフェナム酸ナトリウム、メフェナム酸、ピロキシカム、メロキシカム、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、パレコキシブ、エトリコキシブ、ルミラコキシブ、ＣＳ−５０２（三共）、ＪＴＥ−５２２（日本たばこ産業）、Ｌ−７４５，３３７(Almirall)、ＮＳ３９８（シグマ社）、ベタメタゾン（セレストン）、プレドニゾン(Deltasone)、アルクロメタゾン、アルドステロン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デオキシコルチコステロン、デソニド、デスオキシメタゾン、デスオキシコルトン、デキサメタゾン、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロン、フルドロコルチゾン、フルドロキシコルチド、フルメタゾン、フルニソリド、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルトロン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニデン、フルチカゾン、ホルモコータル、ホルモテロール、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンアセポン酸エステル、ヒドロコルチゾンブテプレート、ヒドロコルチゾン酪酸エステル、ロテプレドノール、メドリゾン、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、フロ酸モメタゾン、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、ウロベタゾール；シスプラチン；カルボプラチン；オキサリプラチン；メクロレタミン；シクロホスファミド；クロラムブシル；ビンクリスチン；ビンブラスチン；ビノレルビン；ビンデシン；アザチオプリン；メルカプトプリン；フルダラビン；ペントスタチン；クラドリビン；５−フルオロウラシル（５ＦＵ）；フロクスウリジン（ＦＵＤＲ）；シトシンアラビノシド；メトトレキサート；トリメトプリム；ピリメタミン；ペメトレキセド；パクリタキセル；ドセタキセル；エトポシド；テニポシド；イリノテカン；トポテカン；アムサクリン；エトポシド；エトポシドリン酸塩；テニポシド；ダクチノマイシン；ドキソルビシン；ダウノルビシン；バルルビシン（valrubicine）；イダルビシン；エピルビシン；ブレオマイシン；プリカマイシン；マイトマイシン；トラスツズマブ；セツキシマブ；リツキシマブ；ベバシズマブ；フィナステリド；ゴセレリン；アミノグルテチミド；アナストロゾール；レトロゾール；ボロゾール；エキセメスタン；4-アンドロステン-3,6,17-トリオン("6-オキソ"；1,4,6-アンドロスタトリエン-3,17-ジオン(ATD)；ホルメスタン；テストラクトン；ファドロゾール；ミラツズマブ；ドキソルビシンと共役したミラツズマブ；又は、これらの組み合わせである。
【０１２９】
遺伝子治療
特定の実施形態において、本明細書で開示されるＭＩＦ媒介性疾患を調節するための組成物は、（ａ）本明細書で開示される活性薬剤と、（ｂ）遺伝子治療との併用を備える。特定の実施形態において、本明細書で開示されるＭＩＦ媒介性疾患を調節するための方法は、（ａ）本明細書で開示される活性薬剤と、（ｂ）遺伝子治療との併用を同時に実施する工程を備える。
【０１３０】
いくつかの実施形態において、遺伝子治療は、それを必要としている個体の血液中の脂質及び／又はリポタンパク質（例えば、ＨＤＬ）の濃度を調節する工程を備える。いくつかの実施形態において、血液中の脂質及び／又はリポタンパク質（例えば、ＨＤＬ）の濃度を調節する工程は、それを必要としている個体にＤＮＡをトランスフェクトする工程を備える。いくつかの実施形態において、ＤＮＡは、アポＡＩ遺伝子、ＬＣＡＴ遺伝子、ＬＤＬ遺伝子、Ｉｌ−４遺伝子、ＩＬ−１０遺伝子、ＩＬ−Ｉｒａ遺伝子、ガレクチン−３遺伝子、又は、これらの組み合わせをコードする。いくつかの実施形態において、ＤＮＡは、肝細胞にトランスフェクトされる。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、ＤＮＡは、超音波を用いて肝細胞にトランスフェクトされる。超音波を用いたアポＡＩＤＮＡのトランスフェクトに関連する技術を開示するために、米国特許第７，２１１，２４８号を参照されたい。この文献は、開示目的のために参照することによって本発明に組み込まれるものとする。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、個体は、ヒト遺伝子（「遺伝子ベクター」）を運ぶように操作されたベクターを投与される。ＬＤＬ遺伝子を形成するための技術を開示するために、米国特許第６，７８４，１６２号を参照されたい。この文献は、開示目的のために参照することによって本明細書に組み込まれるものとする。いくつかの実施形態において、遺伝子ベクターは、レトロウィルスである。いくつかの実施形態において、遺伝子ベクターは、レトロウィルスではない（例えば、アデノウィルス；レンチウィルス；又は、METAFECTENE、SUPERFECT（登録商標）、EFFECTENE（登録商標）、又は、MIRUS TRANSITなどの重合体送達システム（polymeric delivery system）である）。特定の例において、レトロウィルス、アデノウィルス、又は、レンチウィルスは、その能力が失われるように突然変異を有している。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、ベクターは、インビボで（すなわち、ベクターが直接的に個体に、例えば、肝細胞に注入される）、エクスビボで（すなわち、個体の細胞がインビトロで成長し、遺伝子ベクターで形質導入され、担体に埋め込まれ、その後、個体に移植された）、又は、それらの組み合わせで、投与される。
【０１３４】
特定の例において、遺伝子ベクターの投与後、遺伝子ベクターは、投与部位（例えば、肝臓）の細胞に感染する。特定の例において、遺伝子配列は、個体のゲノムに組み込まれる（例えば、遺伝子ベクターがレトロウィルスの場合）。特定の例において、 この治療は、定期的に再実施される（例えば、遺伝子ベクターがレトロウィルスでない場合）。いくつかの実施形態において、この治療は、毎年再実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、半年ごとに再実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約６０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約５０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約４５ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約４０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約３５ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約３０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再実施される。
【０１３５】
ＲＮＡｉ治療
特定の実施形態において、本明細書で開示されるＭＩＦ媒介性疾患を調節するための組成物は、 （ａ）本明細書で開示される活性薬剤と、（ｂ）ＭＩＦ媒介性疾患（「標的遺伝子」）の発症及び／又は進行に関与する遺伝子の発現を阻止させるよう設計されたＲＮＡｉ分子との組み合わせを備える。特定の実施形態において、本明細書で開示されるＭＩＦ媒介性疾患を調節するための方法は、（ａ）本明細書で開示される活性薬剤と、（ｂ）ＭＩＦ媒介性疾患（「標的遺伝子」）の発症及び／又は進行に関与する遺伝子の発現を阻止させるよう設計されたＲＮＡｉ分子とを併用して投与する工程を備える。いくつかの実施形態において、標的遺伝子は、アポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）、熱ショックタンパク質１１０（Ｈｓｐ １１０）、プロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン９（Subtilisin Kexin 9）（Ｐｃｓｋ９）、ＣｙＤ１、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、心房性ナトリウム利尿ペプチド受容体Ａ（ＮＰＲＡ）、ＧＡＴＡ−３、Ｓｙｋ、ＶＥＧＦ、ＭＩＰ−２、ＦａｓＬ、ＤＤＲ−１、Ｃ５ａＲ、ＡＰ−１、又は、これらの組み合わせである。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、標的遺伝子は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）によって、発現を抑制される。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ治療は、ｓｉＲＮＡ分子の使用を備える。いくつかの実施形態において、発現が抑制される（例えば、アポＢ、Ｈｓｐ １１０、及び、Ｐｃｓｋ９）遺伝子のｍＲＮＡ配列に相補的な配列を有する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子は、（例えば、ＰＣＲによって）発生する。いくつかの実施形態において、発現を抑制される遺伝子のｍＲＮＡ配列に相補的な配列を有する２０−２５ｂｐ ｓｉＲＮＡ分子が発生する。いくつかの実施形態において、２０−２５ｂｐ ｓｉＲＮＡ分子は、各鎖の３’末端上で２−５ ｂｐのオーバーハング、及び、５’リン酸末端及び３’ヒドロキシ末端を有する。いくつかの実施形態において、２０−２５ｂｐ ｓｉＲＮＡ分子は、平滑末端を有する。ＲＮＡ配列を発生させる技術に関しては、文献「Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989)」、「Molecular Cloning: A Laboratory Manual, third edition (Sambrook and Russel, 2001)」（共に本明細書では「Sambrook」と呼ぶ）、「Current Protocols in Molecular Biology (F. M. Ausubel et al., eds., 1987, including supplements through 2001)」、「Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry John Wiley & Sons, Inc., New York, 2000 」を参照されたい。これらの文献は、開示目的のために参照することによって本明細書に組み込まれるものとする。
【０１３７】
いくつかの実施形態においてｓｉＲＮＡ分子は、標的遺伝子に対して「完全に相補的」（すなわち、１００％相補的）である。いくつかの実施形態において、アンチセンス分子は、標的遺伝子に対して「ほとんど相補的」（例えば、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８５％、８０％、７５％、又は、７０％相補的）である。いくつかの実施形態において、１ ｂｐのミスマッチ、２ ｂｐのミスマッチ、３ ｂｐのミスマッチ、４ ｂｐのミスマッチ、又は、５ ｂｐのミスマッチがある。
【０１３８】
特定の例において、ｄｓＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ分子の投与後、投与部位の細胞（例えば、肝臓及び／又は小腸の細胞）は、ｄｓＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ分子で形質転換する。形質転換を伴う特定の例において、ｄｓＲＮＡ分子は、約２０−２５ ｂｐの複数のフラグメントへ切断されることによって、ｓｉＲＮＡ分子を産生する。特定の例において、フラグメントは、各鎖の３’末端上で約２ｂｐのオーバーハングを有する。
【０１３９】
特定の例において、ｓｉＲＮＡ分子は、ＲＮＡ誘発性のサイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）によって、２つの鎖（ガイド鎖、及び、抗ガイド鎖）に分けられる。特定の例において、ガイド鎖は、ＲＩＳＣの触媒成分（すなわち、アルゴノート）に組み込まれる。特定の例において、ガイド鎖は、相補的ＲＢ１ ｍＲＮＡ配列と特異的に結合する。特定の例において、ＲＩＳＣは、発現が抑制される遺伝子のｍＲＮＡ配列を切断する。特定の例において、発現が抑制される遺伝子の発現は、下方制御される。
【０１４０】
いくつかの実施形態において、標的遺伝子のｍＲＮＡ配列に対して相補的な配列は、ベクターに組み込まれる。いくつかの実施形態において、配列は、２つのプロモーター間に配される。いくつかの実施形態において、この２つのプロモーターは、逆の方向に方向づけられる。いくつかの実施形態において、ベクターは、細胞と接触する。特定の例において、細胞は、ベクターで形質転換する。形質転換を伴う特定の例において、配列のセンス及びアンチセンス鎖が発生する。特定の例において、センス及びアンチセンス鎖は、ハイブリッド形成することによって、ｓｉＲＮＡ分子へ切断されるｄｓＲＮＡ分子を形成する。特定の例において、鎖がハイブリッド形成することによって、ｓｉＲＮＡ分子を形成する。いくつかの実施形態において、ベクターはプラスミドである（例えば、ｐＳＵＰＥＲ；ｐＳＵＰＥＲ.ｎｅｏ；ｐＳＵＰＥＲ.ｎｅｏ＋ｇｆｐ）。
【０１４１】
いくつかの実施形態において、ｓｉＲＮＡ分子は、インビボで（すなわち、ベクターは、個体に、例えば、肝細胞、又は、小腸細胞、又は、血流に直接的に注入される）で投与される。
【０１４２】
いくつかの実施形態において、ｓｉＲＮＡ分子は、送達媒体（delivery vehicle）（例えば、リポソーム、生分解性高分子、シクロデキストリン、ＰＬＧＡ微粒子、ＰＬＣＡ微粒子、生分解性ナノ粒子、生体接着微粒子、又は、タンパク質性ベクター）、担体及び希釈物、及び、他の薬学的に許容可能な賦形剤で処方される。核酸分子をそれを必要としている個体に処方及び投与する方法に関しては、文献「Akhtar et al., 1992, Trends Cell Bio., 2, 139; Delivery Strategies for Antisense Oligonucleotide Therapeutics, ed. Akhtar, 1995」、「Maurer et al., 1999, Mol. Membr. Biol., 16, 129-140」、「Hofland and Huang, 1999, Handb. Exp. Pharmacol., 137, 165-192」、「Lee et al., 2000, ACS Symp. Ser., 752, 184-192」、米国特許第６，３９５，７１３号（Beigelman et al.）、国際公開公報９４／０２５９５号（Sullivan et al.）、文献「Gonzalez et al., 1999, Bioconjugate Chem., 10, 1068-1074」、国際公開公報０３／４７５１８号及び０３／４６１８５号（Wang et al.）、米国特許第６，４４７，７９６号、米国公開特許公報第２００２１３０４３０号、国際公開公報第００／５３７２２号（O'Hare and Normand）、及び、米国公開特許公報第２００３００７７８２９号、米国仮特許出願第６０／６７８，５３１号を参照されたい。これら文献はすべて、開示目的のために、参照することによって本明細書に組み込まれるものとする。
【０１４３】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のｓｉＲＮＡ分子は、任意の適切な手法で肝臓に投与される（例えば、文献「Wen et al., 2004, World J Gastroenterol., 10, 244-9」、「Murao et al., 2002, Pharm Res., 19, 1808-14」、「Liu et al., 2003, Gene Ther., 10, 180-7」、「Hong et al., 2003, J Pharm Pharmacol., 54, 51-8」、「Herrmann et al., 2004, Arch Virol., 149, 1611-7」、及び、「Matsuno et al., 2003, Gene Ther., 10, 1559-66)」を参照）。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のｓｉＲＮＡ分子は、イオン泳動的に、例えば、特定の組織又はコンパートメント（例えば、肝臓又は小腸）に投与される。イオン泳動送達の非限定的な例は、例えば、国際公開公報０３／０４３６８９号、及び、国際公開公報０３／０３０９８９号に記載されており、これらは開示目的のために参照することによって本明細書に組み込まれるものとする。
【０１４５】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のｓｉＲＮＡ分子は、全身的（すなわち、血流中のｓｉＲＮＡ分子のインビボ体内吸収又は蓄積と、その後の全身への分布）に投与される。全身投与のために検討される投与経路は、静脈内、皮下、門脈、腹腔内、及び、筋肉内を含むが、これらに限定されない。このような投与経路の各々は、本発明のｓｉＲＮＡ分子を、到達可能な病変組織（例えば、肝臓）に暴露する。
【０１４６】
特定の例において、治療は、定期的に再度実施される必要がある。いくつかの実施形態において、この治療は毎年、再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、半年ごとに再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、毎月、実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、毎週、実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約６０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約５０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約４５ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約４０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約３５ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約３０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。
【０１４７】
アポＢ及び／又はＨｓｐ１１０の発現を抑制することに関する技術の開示については、米国公開公報第２００７／０２９３４５１号を参照。これはこのような開示のために参照することにより本明細書に組み込まれる。Ｐｃｓｋ９の発現を抑制することに関する技術の開示については、米国公開公報第２００７／０１７３４７３号を参照。これはこのような開示のために参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０１４８】
アンチセンス療法
特定の実施形態において、本明細書中に開示されるのは、ＭＩＦ媒介性疾患を調節するための組成物であり、この組成物は（ａ）本明細書中に開示される活性薬剤、及び、（ｂ）ＭＩＦ媒介性疾患（「標的配列」）の発症及び／又は進行に関与するＤＮＡ又はＲＮＡ配列の発現及び／又は活性を抑制するよう設計されたアンチセンス分子、の組合せを備える。特定の実施形態において、本明細書中に開示されるのは、ＭＩＦ媒介性疾患を調節するための方法であり、この方法は、（ａ）本明細書中に開示される活性薬剤、及び、（ｂ）ＭＩＦ媒介性疾患（「標的配列」）の発症及び／又は進行に関与するＤＮＡ又はＲＮＡ配列の発現及び／又は活性を抑制するよう設計されたアンチセンス分子、を同時投与する工程を備える。いくつかの実施形態において、標的配列の発現及び／又は活性を抑制する工程は、標的配列に相補的なアンチセンス分子の使用を備える。いくつかの実施形態において、標的配列はマイクロＲＮＡ−１２２（ｍｉＲＮＡ−１２２又はｍＲＮＡ−１２２）、分泌型ホスホリパーゼＡ２（ｓＰＬＡ２）、細胞内接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）、ＧＡＴＡ−３、ＮＦ−κＢ、Ｓｙｋ、又はこれらの組合せである。特定の例において、ｍｉＲＮＡ−ｌ２２の発現及び／又は活性を抑制することは、血液中のコレステロール及び／又は脂質濃度の減少を（部分的に又は完全に）もたらす。
【０１４９】
いくつかの実施形態において、標的配列に相補的なアンチセンス分子が（例えば、ＰＣＲによって）産生される。いくつかの実施形態において、アンチセンス分子は約１５から約３０のヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、アンチセンス分子は約１７から約２８のヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、アンチセンス分子は約１９から約２６のヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、アンチセンス分子は約約２１から約２４のヌクレオチドである。ＲＮＡ配列の産生の技術は、文献「Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989)」、及び「Molecular Cloning: A Laboratory Manual, third edition (Sambrook and Russel, 2001)」共に本明細書中に「Sambrook」と称される); 文献「Current Protocols in Molecular Biology (F. M. Ausubel et al., eds., 1987), (2001までの補足を含む)」; 文献「Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry John Wiley & Sons, Inc., New York, 2000）」を参照。なおこれらはこのような開示のため参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、アンチセンス分子は一本鎖、二本鎖、環状、又はヘアピンである。いくつかの実施形態において、アンチセンス分子は構造要素を含有する（例えば、インターナル（internal）又はターミナル（terminal）バルジ若しくはループ）。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、アンチセンス分子は、標的配列に対して「完全に相補的」（すなわち、１００％相補的）である。いくつかの実施形態において、アンチセンス分子は、標的ＲＮＡ配列に対して「ほとんど相補的」（例えば、９９％、９８%、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８５％、８０％、７５％、又は、７０％相補的）である。いくつかの実施形態において、１ ｂｐのミスマッチ、２ ｂｐのミスマッチ、３ ｂｐのミスマッチ、４ ｂｐのミスマッチ、又は、５ ｂｐのミスマッチがある。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、アンチセンス分子は標的配列にハイブリッド形成する。本明細書中に用いられる「ハイブリッド形成する」とは、アンチセンス分子のヌクレオチドと、標的配列の対応するヌクレオチドとの対合を意味する。特定の例において、ハイブリット形成法は、対合を成すヌクレオチド間の１もしくはそれより多い水素結合（例えばワトソン−クリック、フーグスティーン又は逆（reversed）フーグスティーン水素結合）の形成を含む。
【０１５３】
特定の例において、ハイブリッド形成することは、ＲＮＡ配列の分解、切断及び／又は隔離を（部分的に又は完全に）もたらす。
【０１５４】
いくつかの実施形態において、ｓｉＲＮＡ分子は、送達媒体（delivery vehicle）（例えば、リポソーム、生分解性高分子、シクロデキストリン、ＰＬＧＡ微粒子、ＰＬＣＡ微粒子、生分解性ナノ粒子、生体接着微粒子、又は、タンパク質性ベクター）、担体及び希釈物、及び、他の薬学的に許容可能な賦形剤で処方される。核酸分子を、それを必要としている個体に処方及び投与する方法に関しては、文献「Akhtar et al., 1992, Trends Cell Bio., 2, 139; Delivery Strategies for Antisense Oligonucleotide Therapeutics, ed. Akhtar, 1995」、文献「Maurer et al., 1999, Mol. Membr. Biol., 16, 129-140」、文献「Hofland and Huang, 1999, Handb. Exp. Pharmacol., 137, 165-192」、文献「Lee et al., 2000, ACS Symp. Ser., 752, 184-192」、米国特許第６，３９５，７１３号（Beigelman et al.）、国際公開公報９４／０２５９５号（Sullivan et al.）、文献「Gonzalez et al., 1999, Bioconjugate Chem., 10, 1068-1074」、国際公開公報第０３／４７５１８号及び第０３／４６１８５号（Wang et al.）、米国特許第６，４４７，７９６号、米国公開特許公報第２００２１３０４３０号、国際公開公報第００／５３７２２号（O'Hare and Normand）、及び、米国公開特許公報第２００３００７７８２９号、米国仮特許出願第６０／６７８，５３１号を参照されたい。これらの文献はすべて、開示目的のために、参照することによって本明細書に組み込まれるものとする。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のｓｉＲＮＡ分子は、任意の適切な手法で肝臓に投与される（例えば、文献「Wen et al., 2004, World J Gastroenterol., 10, 244-9」、文献「Murao et al., 2002, Pharm Res., 19, 1808-14」、文献「Liu et al., 2003, Gene Ther., 10, 180-7」、文献「Hong et al., 2003, J Pharm Pharmacol., 54, 51-8」、文献「Herrmann et al., 2004, Arch Virol., 149, 1611-7」、及び、文献「Matsuno et al., 2003, Gene Ther., 10, 1559-66)」を参照）。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のｓｉＲＮＡ分子は、イオン泳動的に、例えば、特定の組織又はコンパートメント（例えば、肝臓又は小腸）に投与される。イオン泳動送達の非限定的な例は、例えば、国際公開公報第０３／０４３６８９号、及び、国際公開公報第０３／０３０９８９号に記載されており、これらは開示目的のために参照することによって本明細書に組み込まれるものとする。
【０１５７】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のｓｉＲＮＡ分子は、全身的（すなわち、血流中のｓｉＲＮＡ分子のインビボ体内吸収又は蓄積と、その後の全身への分布）に投与される。全身投与のために検討される投与経路は、静脈内、皮下、門脈、腹腔内、及び、筋肉内を含むが、これらに限定されない。このような投与経路の各々は、本発明のｓｉＲＮＡ分子を、到達可能な病変組織（例えば、肝臓）に暴露する。
【０１５８】
特定の例において、治療は、定期的に再度実施される必要がある。いくつかの実施形態において、この治療は毎年、再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、半年ごとに再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、毎月、実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、毎週、実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約６０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約５０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約４５ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約４０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約３５ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約３０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。
【０１５９】
ｍｉＲＮＡ−１２２の発現を抑制することに関する技術の開示については、国際公開公報第０７／０２７７７５号Ａ２を参照。これはこのような開示のために参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０１６０】
装置を介した治療
いくつかの実施形態において、装置を介した戦略は、それを必要としている個体内のＨＤＬ分子から脂質を除去すること（脱脂（delipification））、それを必要としている個体の血液又は血漿からＬＤＬ分子を除去すること（脱脂（delipification））、あるいはそれらの組合せを備える。それを必要としている個体のＨＤＬ分子から脂質を除去する技術、及びそれを必要とする血液又は血漿からＬＤＬ分子を除去するための技術の開示については、米国公開公報第２００８／０２３０４６５号を参照。なおこれはそれらの開示のために参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０１６１】
特定の例において、脱脂治療（delipification therapy）は定期的に再実施される必要が生じる。いくつかの実施形態において、脱脂治療（delipification therapy）は毎年再実施される。いくつかの実施形態において、脱脂治療（delipification therapy）は半年ごとに再実施される。いくつかの実施形態において、脱脂治療（delipification therapy）は毎月再実施される。いくつかの実施形態において、脱脂治療（delipification therapy）は週に二回再実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約６０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約５０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約４５ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約４０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約３５ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。いくつかの実施形態において、この治療は、個体のＨＤＬレベルが約３０ｍｇ／ｄＬ以下に減少すると、再度実施される。
【０１６２】
医薬組成物
特定の実施形態において、本明細書に開示されるものは、本明細書中に開示される活性薬剤の治療上効果的な量を備える、炎症及び／又はＭＩＦ媒介性疾患を調節するための医薬組成物である。
【０１６３】
本明細書中の医薬組成物は、活性薬剤を薬学的に用いられる製剤へと加工することを促進する賦形剤及び佐剤（auxiliaries）を含む、１以上の生理学的に許容可能な担体を用いて処方される。適切な処方は、選択される投与経路に依存する。医薬組成物の概要は、例えば文献「Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995)」; 文献「Hoover, John E., Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975」; 文献「Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980」;及び文献「Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins, 1999)」に見出される。
【０１６４】
特定の実施形態において、心血管系の疾患を調節するための医薬組成物はさらに、薬学的に許容可能な希釈剤（複数種）、賦形剤（複数種）、又は担体（複数種）を備える。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、他の薬用又は医薬用薬剤、担体、保存剤、安定化剤、湿潤剤又は乳化剤、溶解促進剤（solution promoters）、浸透圧を制御するための塩、及び／又は緩衝剤等のアジュバントを含む。加えて、医薬組成物はまた、他の治療上有用な物質をも含有する。
【０１６５】
本明細書中に記載の医薬製剤は、複数の投与経路により個体に任意に投与される。上記投与経路は、経口、非経口（例えば、静脈内、皮下、筋肉内）、鼻腔内、口腔、局所、直腸、又は経皮投与経路を含むが、これらに限定されない。本明細書中に記載の医薬製剤は、水性液体分散剤、自己乳化分散剤、固溶体、リポソーム分散剤、エアロゾル、固形の剤型、粉末、即放性製剤（immediate release formulations）、放出制御製剤、急速溶解製剤（fast melt formulations）、錠剤、カプセル剤、丸剤、遅延放出製剤、持続放出製剤（extended release formulations）、パルス放出型製剤（pulsatile release formulations）、多粒子製剤（multiparticulate formulations）、及び即放性製剤及び放出制御製剤の混合された製剤を含むが、これらに限定されない。
【０１６６】
本明細書中に記載の医薬組成物は、処置される個体により経口摂取されるための、水性経口分散剤、液体、ゲル、シロップ、エリキシル剤、スラリー、懸濁液などと、及び固形の経口剤形、エアロゾル、放出制御製剤、急速溶解製剤、発泡製剤、凍結乾燥製剤、錠剤、粉末、丸剤、糖衣錠（dragees）、カプセル剤、放出調節製剤（modified release formulations）、遅延放出製剤、持続放出製剤、パルス放出型製剤、多粒子製剤、及び即放性製剤及び放出制御製剤の混合された製剤を含むがこれらに限定されない任意の適した剤形へと処方される。
【０１６７】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の医薬組成物は、多粒子製剤として処方される。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の医薬組成物は、粒子の第一ポピュレーション及び、粒子の第二ポピュレーションを備える。いくつかの実施形態において、第一ポピュレーションは活性薬剤を備える。いくつかの実施形態において、第二ポピュレーションは活性薬剤を備える。いくつかの実施形態において、第一ポピュレーションにおける活性薬剤の投与量は第二ポピュレーションにおける活性薬剤の投与量に等しい。いくつかの実施形態において、第一ポピュレーションにおける活性薬剤の投与量は第二ポピュレーションにおける活性薬剤の投与量に等しくない（例えば、それより多い又は少ない）。
【０１６８】
いくつかの実施形態において、第一ポピュレーションにおける活性薬剤は第二ポピュレーションにおける活性薬剤より前に放出される。いくつかの実施形態において、粒子の第二ポピュレーションは放出調節の（例えば、遅延放出性の、制御放出性の、あるいは持続放出性の）コーティングを備える。いくつかの実施形態において、粒子の第二ポピュレーションは放出調節の（例えば、遅延放出性の、制御放出性の、あるいは持続放出性の）マトリックスを備える。
【０１６９】
本明細書中に記載の医薬組成物とともに用いられるための被覆材は、ポリマー被覆材（例えば、酢酸フタル酸セルロース、セルロースアセテートトリマレテート（cellulose acetate trimaletate）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ポリビニルアセテートフタレート）；アンモニオメタクリレートコポリマー（例えばＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＳ及びＲＬ）；ポリアクリル酸及びポリアクリレート及びメタクリレートコポリマー（例えば、Ｅｕｄｒａｇｉｔｅ Ｓ及びＬ、ポリビニルアセタルジエチルアミノアセテート（polyvinyl acetaldiethylamino acetate）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、シェラック）；ハイドロゲル及びゲル形成物質（例えば、カルボキシビニルポリマー、アルギン酸ナトリウム、カルメロースナトリウム（sodium carmellose）、カルメロースカルシウム（calcium carmellose）、カルボキシメチル澱粉ナトリウム、ポリビニルアルコール、ヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロース、ゼラチン、澱粉、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、架橋澱粉、結晶セルロース、キチン、アミノアクリル−メタクリレートコポリマー、プルラン、コラーゲン、カゼイン、寒天、アラビアガム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、（膨潤性親水性ポリマー）ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）（ｍ．ｗｔ．~５ｋ−５，０００ｋ）、ポリビニルピロリドン（ｍ．ｗｔ．~１０ｋ−３６０ｋ）、陰イオン性及び陽イオン性ヒドロゲル、低アセテート残渣を有するポリビニルアルコール、寒天及びカルボキシメチルセルロースの膨潤性混合物、無水マレイン酸とスチレン、エチレン、プロピレン又はイソブチレンとのコポリマー、ペクチン（ｍ．ｗｔ．~３０ｋ−３００ｋ）；寒天、アカシア、カラヤ、トラガカント、アルギン及びグアーなどといった多糖類、ポリアクリルアミド、Ｐｏｌｙｏｘ（登録商標）ポリエチレンオキシド（ｍ．ｗｔ．~１００ｋ−５，０００ｋ）、ＡｑｕａＫｅｅｐ（登録商標）アクリレート重合体、ポリグルカン（polyglucan）、架橋されたポリビニルアルコール及びポリＮ−ビニル−２−ピロリドンのジエステル、スターチナトリウム（sodium starch）；親水性ポリマー（例えば、多糖類、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム又はカルボキシメチルセルロースカルシウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ニトロセルロース、カルボキシメチルセルロース、セルロースエーテル、ポリエチレンオキシド、メチルエチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、酢酸セルロース、酪酸セルロース、プロピオン酸セルロース、ゼラチン、コラーゲン、澱粉、マルトデキストリン、プルラン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリ酢酸ビニル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリアクリルアミド、ポリアクリル酸、メタクリル酸のコポリマー又はメタクリル酸、他のアクリル酸誘導体、ソルビタンエステル、天然ゴム、レシチン、ペクチン、アルギン酸塩、アルギン酸アンモニア、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カルシウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸プロピレングリコール、���天、アラビアガム、カラヤガム、ローカストビーンガム、トラガカントガム、カラギーンガム（carrageens gum）、グアーガム、キサンタンガム、スクレログルカンガム（scleroglucan gum））；又はそれらの組合せを含むがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、被覆材は、可塑剤、潤滑剤、溶媒、又はそれらの組合せを備える。適切な可塑剤は、アセチル化モノグリセリド（acetylated monoglycerides）；ブチルフタリルブチルグリコラート；酒石酸ジブチル；フタル酸ジエチル；フタル酸ジメチル；エチルフタリルエチルグリコラート（ethyl phthalyl ethyl glycolate）；グリセリン；プロピレングリコール；トリアセチン；クエン酸塩；トリプロピオイン（tripropioin）；ジアセチン；フタル酸ジブチル；アセチルモノグリセリド；ポリエチレングリコール；ヒマシ油；クエン酸トリエチル；多価アルコール、グリセロール、酢酸エステル、グリセロールトリアセテート、クエン酸アセチルトリエチル、フタル酸ジベンジル、フタル酸ジヘキシル、フタル酸ブチルオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ブチルオクチル、アゼライン酸ジオクチル、エポキシ化タレート（epoxidised tallate）、トリメリット酸トリイソクチル（triisoctyl trimellitate），フタル酸ジエチルヘキシル、フタル酸ジ−ｎ−オクチル、フタル酸ジ−ｉ−オクチル、フタル酸ジ−ｉ−デシル、フタル酸ジ−ｎ−ウンデシル、フタル酸ジ−ｎ−トリデシル、トリメリット酸トリ−２−エチルヘキシル、アジピン酸ジ−２−エチルヘキシル、セバシン酸ジ−２−エチルヘキシル、アゼライン酸ジ−２−エチルヘキシル、セバシン酸ジブチルを含むがこれらに限定されない。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、粒子の第二ポピュレーションは放出調節マトリックス材料を備える。本明細書中に記載の医薬組成物とともに使用される材料は微結晶性セルロース（microcrytalline cellulose）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシアルキルセルロース（hydoxyalkylcelluloses）（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びヒドロキシプロピルセルロース）、ポリエチレンオキシド、アルキルセルロース（例えば、メチルセルロース及びエチルセルロース）、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、酢酸セルロース（cellulose acteate）、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース（cellulose acteate phthalate）、酢酸トリメリット酸セルロース（cellulose acteate trimellitate）、ポリビニルアセテートフタレート、ポリアルキルメタクリレート、ポリ酢酸ビニル、又はそれらの組合せを含むがこれらに限定されない。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、粒子の第一ポピュレーションは心血管疾患薬剤を備える。いくつかの実施形態において、粒子の第二ポピュレーションは、（１）ＭＩＦの修飾剤、（２）ＲＡＮＴＥＳと血小板第４因子間の相互作用の修飾剤、又は（３）それらの組合せを備える。いくつかの実施形態において、粒子の第一ポピュレーションは（１）ＭＩＦの修飾剤、（２）ＲＡＮＴＥＳと血小板第４因子間の相互作用の修飾剤、又は（３）それらの組合せを備える。いくつかの実施形態において、粒子の第二ポピュレーションは心血管疾患薬剤を備える。
【０１７２】
糖衣錠コアは適切な被覆材とともに提供される。この目的のため、濃縮糖溶液が一般的に用いられ、濃縮糖溶液は任意にアラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル（carbopol gel）、ポリエチレングリコール、及び／又は二酸化チタン、ラッカー溶液（lacquer solutions）、及び適切な有機溶媒又は溶媒混合液を含む。同定のため、あるいは活性薬剤の用量の異なる組合せを特徴づけるため、塗料又は顔料が錠剤又は糖衣錠コーティングに任意に加えられる。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される固形の剤形は、錠剤（懸濁錠剤、速溶性錠剤、噛み砕き錠剤（bite-disintegration tablet）、急速崩壊錠、発泡錠、又はカプレットを含む）、丸剤、粉末（無菌包装された粉末、分配可能な粉末、又は沸騰散剤を含む）カプセル剤（軟カプセル剤又は硬カプセル剤の両方、例えば、動物由来のゼラチン又は植物由来のＨＰＭＣから作られたカプセル剤、又は「スプリンクルカプセル（sprinkle capsules）」を含む）、固体分散剤、固溶体、生体内分解性剤形、放出制御製剤、パルス放出剤形、多粒子剤形、ペレット、顆粒剤、又はエアロゾルの形態である。他の実施形態において、医薬製剤は粉末の形態である。更に他の実施形態において、製剤処方は速溶性錠剤を含むがこれに限定されない錠剤の形態である。更に、本明細書中に開示される医薬製剤は単一のカプセル剤として、又は複数のカプセル剤形で任意に投与される。いくつかの実施形態において、医薬製剤は２、又は３、又は４つのカプセル剤あるいは錠剤にて投与される。
【０１７４】
もう一つの態様において、剤形はマイクロカプセル化した製剤を含む。いくつかの実施形態において、１以上の他の相溶性のある（compatible）材料がマイクロカプセル化材料中に存在する。代表的な材料は、ｐＨ調製剤、浸食促進剤（erosion facilitators）、消泡剤、酸化防止剤、香味料、及び、結合剤などの担体材料、懸濁化剤、崩壊剤、充填剤、界面活性剤、可溶化剤、安定剤、潤滑剤、湿潤剤、及び希釈剤を含むがこれらに限定されない。
【０１７５】
ＭＩＦ受容体インヒビターを含む製剤の放出を遅延させるために有用な、代表的なマイクロカプセル化材料は、Ｋｌｕｃｅｌ（登録商標）又はＮｉｓｓｏＨＰＣといったヒドロキシプロピルセルロースエーテル（ＨＰＣ）と、低置換ヒドロキシプロピルセルロースエーテル（Ｌ−ＨＰＣ）と、Ｓｅｐｐｉｆｉｌｍ−ＬＣ、Ｐｈａｒｍａｃｏａｔ（登録商標）、Ｍｅｔｏｌｏｓｅ  ＳＲ、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標）−Ｅ、Ｏｐａｄｒｙ  ＹＳ、ＰｒｉｍａＦｌｏ、Ｂｅｎｅｃｅｌ  ＭＰ８２４、及びＢｅｎｅｃｅｌ  ＭＰ８４３といったヒドロキシプロピルメチルセルロースエーテル（ＨＰＭＣ）と、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標）−Ａ、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレートＡｑｏａｔ（ＨＦ−ＬＳ，ＨＦ−ＬＧ，ＨＦ−ＭＳ）及びＭｅｔｏｌｏｓｅ（登録商標）といったメチルセルロースポリマーと、エチルセルロース（ＥＣ）及び、Ｅ４６１、Ｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標）、Ａｑｕａｌｏｎ（登録商標）−ＥＣ、Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ（登録商標）といった、それらの混合物と、Ｏｐａｄｒｙ  ＡＭＢといったポリビニルアルコール（ＰＶＡ）と、Ｎａｔｒｏｓｏｌ（登録商標）といったヒドロキシエチルセルロースと、カルボキシメチルセルロース及びＡｑｕａｌｏｎ（登録商標）−ＣＭＣといったカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）の塩と、Ｋｏｌｌｉｃｏａｔ  ＩＲ（登録商標）といったポリビニルアルコールとポリエチレングリコールの共重合体と、モノグリセリド（マイベロール（Ｍｙｖｅｒｏｌ））と、トリグリセリド（ＫＬＸ）と、ポリエチレングリコールと、加工された食品用澱粉と、アクリルポリマー及び、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＥＰＯ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ３０Ｄ−５５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＦＳ  ３０Ｄ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００−５５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＤ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｅ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１２．５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓ１２．５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＮＥ３０Ｄ、及びＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＮＥ  ４０Ｄといったアクリルポリマーとセルロースエーテルの混合物と、酢酸フタル酸セルロースと、ＨＰＭＣ及びステアリン酸の混合物といったセピフィルム（sepifilms）と、シクロデキストリンと、及びこれらの物質の混合物とを含むがこれらに限定されない。
【０１７６】
経口投与のための液体剤形は任意に、以下の群から選択される水性懸濁液である。それらは薬学的に許容可能な水性経口分散剤、エマルション、溶液、エリキシル剤、ゲル、及びシロップを含むがこれらに限定されない。例えば文献「Singh et al., Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, 2nd Ed., pp. 754-757 (2002)」を参照。ＭＩＦ受容体インヒビターに加えて、液体剤形は任意に以下のような添加物を含む。それらは、（ａ）崩壊剤；（ｂ）分散剤；（ｃ）湿潤剤；（ｄ）少なくとも１つの保存料、（ｅ）粘性増強剤、（ｆ）少なくとも１つの甘味剤、及び（ｇ）少なくとも１つの香味料である。いくつかの実施形態において、水性分散剤は更に結晶形成インヒビターを含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の医薬製剤は自己乳化型薬物送達システム（ＳＥＤＤＳ）である。エマルションは、他の通常であれば液滴形態中の一つの混ざらない相からなる分散剤である。通常、エマルションは活発な機械的分散により作られる。エマルション又はマイクロエマルションとは対照的に、ＳＥＤＤＳは、外部の機械的分散又は撹拌なしに過剰な水に加えられると、自然にエマルションを形成する。ＳＥＤＤＳの利点は、溶液中に液滴を分布させるために、ただそっと混ぜるだけで済むということである。加えて、水又は水相は投与の直前に任意に加えられ、それにより、不安定なあるいは疎水性の活性成分の安定性を確保する。このように、ＳＥＤＤＳは疎水性活性成分の経口及び非経口送達に効果的な送達システムを提供する。いくつかの実施形態において、ＳＥＤＤＳは、疎水性活性成分のバイオアベイラビリティの向上を提供する。自己乳化型剤形の製造方法は、例えば米国特許第５，８５８，４０１号、第６，６６７，０４８号及び第６，９６０，５６３号を含むがこれらに限定されない。
【０１７８】
適切な鼻腔内投与製剤は、例えば米国特許第４，４７６，１１６号、第５，１１６，８１７号、及び第６，３９１，４５２号に記載されるものを含む。経鼻剤形は一般的に、活性成分に加えて多量の水を含有する。ｐＨ調整剤、乳化剤あるいは分散剤、保存料、界面活性剤、ゲル化剤、又は緩衝及び他の安定及び可溶化剤といった少量の他の成分が任意に存在する。
【０１７９】
吸入による投与のため、本明細書中に開示される医薬組成物は、任意にエアロゾル、ミスト又は粉末の形態である。本明細書中に記載の医薬組成物は、適切な噴霧剤を用いて、加圧パック又は噴霧器から提供されるエアロゾルスプレーの形態で好都合に送達される。適切な噴霧剤は例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の適切なガスである。加圧エアロゾルについては、投与量単位は計量された量を送達するためにバルブを提供することにより確定される。ほんの一例ではあるが、吸入器（inhaler）又は注入器（insufflator）に使用されるゼラチンなどのカプセル剤及びカートリッジは、粉末混合物及び、ラクトース又は澱粉などの適切な粉末基剤（powder base）を含有して処方される。
【０１８０】
口腔製剤は、米国特許第４，２２９，４４７号、第４，５９６，７９５号、第４，７５５，３８６号、及び第５，７３９，１３６号を含むがこれらに限定されない。加えて本明細書中に記載の口腔剤形は任意に更に、剤形を頬粘膜に付着させる働きを同様に行う、生体内分解性の（加水分解性の）ポリマー担体を含む。口腔剤形は、所定の期間にわたって次第に腐食するよう作られる。口腔薬物送達は、経口薬物投与に見られる不都合例えば、遅い吸収、消化管に存在する体液による活性薬剤の劣化、及び／又は肝臓における初回通過の不活性化を回避する。生体内分解性の（加水分解性の）ポリマー担体は一般的に、頬粘膜の濡れた表面に付着する親水性の（水溶性の及び水膨張性の）ポリマーを備える。本明細書中に有用なポリマー担体の例は、アクリル酸ポリマーなど、例えば、「カルボマー」（Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）、これはＢ．Ｆ．グッドリッチ（Ｇｏｏｄｒｉｃｈ）から得られ、１つの同様のポリマーである）として知られるものを含む。本明細書中に記載の口腔剤形に同様に組み込まれる他の成分は、錠剤分解物質、希釈剤、結合剤、潤滑剤、香料、着色剤、保存料などを含むがこれらに限定されない。口腔又は舌下投与のために組成物は任意に、従来のように処方された錠剤、トローチ剤、又はゲルの形態を取る。
【０１８１】
本明細書に開示される医薬組成物の経皮製剤は例えば以下に記載されるものにより投与される。それらは、米国特許第３，５９８，１２２号、第３，５９８，１２３号、第３，７１０，７９５号、第３，７３１，６８３号、第３，７４２，９５１号、第３，８１４，０９７号、第３，９２１，６３６号、第３，９７２，９９５号、第３，９９３，０７２号、第３，９９３，０７３号、第３，９９６，９３４号、第４，０３１，８９４号、第４，０６０，０８４号、第４，０６９，３０７号、第４，０７７，４０７号、第４，２０１，２１１号、第４，２３０，１０５号、第４，２９２，２９９号、第４，２９２，３０３号、第５，３３６，１６８号、第５，６６５，３７８号、第５，８３７，２８０号、第５，８６９，０９０号、第６，９２３，９８３号、第６，９２９，８０１号、及び第６，９４６，１４４号である。
【０１８２】
本明細書中に記載の経皮製剤は少なくとも３つの成分、すなわち、（１）活性薬剤、（２）浸透促進剤、及び（３）水性アジュバントを含む。加えて、経皮製剤はゲル化剤、クリーム及び軟膏基剤などの成分を含むがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、経皮製剤は、吸収を増進し、皮膚からの経皮製剤の除去を防ぐため、織った（woven）又は不織の（non-woven）裏当て材を更に含む。他の実施形態において、本明細書中に記載の経皮製剤は皮膚への拡散を促進するため、飽和又は過飽和状態を維持する。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、経皮投与に適切な製剤は経皮送達装置及び経皮送達パッチを使用し、同製剤はポリマー又は粘着剤中に溶解及び／又は分散された、親油性エマルション、又は緩衝水溶液である。このようなパッチは、医薬品の連続的、拍動性の、又は応需型の送達のために任意に構成される。更には、経皮送達はイオン導入パッチ等の手段によって任意に成し遂げられる。更に、経皮パッチは制御された送達を提供する。律速膜を使用することにより、又はポリマーマトリックス又はゲル内に活性薬剤を閉じ込めることにより、吸収速度は任意に落とされる。反対に、吸収を増大させるために、吸収促進薬が用いられる。吸収促進薬又は担体は、皮膚の通過を助けるために、吸収性の薬学的に許容可能な溶媒を含む。例えば、経皮装置は裏当て部分、任意に担体を備える活性薬剤を含有するリザーバ、任意に、長時間にわたって制御された所定の速度で宿主の皮膚へ活性薬剤を送達する速度制御バリア、及び装置を皮膚に固定する手段を備える包帯の形態である。
【０１８４】
筋肉内、皮下、あるいは静脈内注射のために適切な製剤は、生理学的に許容可能な無菌の水性又は非水性溶液、分散剤、懸濁液又はエマルション、及び無菌の注入可能な溶液又は分散剤へと再構成されるための無菌散剤を含む。適切な水性又は非水性担体、希釈剤、溶媒、又はビヒクルの例は、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセリン、クレモフォー（cremophor）など）、それらの適切な混合物、植物油（オリーブ油など）及びオレイン酸エチルなどの注入可能な有機エステルを含む。適切な流動性は、例えばレシチンなどのコーティングの使用により、分散剤の場合は要求される粒径を維持することにより、そして界面活性剤の使用により維持される。皮下注射のために適切な製剤はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤及び分配剤（dispensing agents）といった任意の添加物を含有する。
【０１８５】
静脈注射には、活性薬剤は水溶液中に、望ましくはハンクス液、リンガー液、又は生理食塩緩衝液といった生理学的に相溶性の緩衝液中に任意に処方される。経粘膜投与については、透過されるバリアに適切な浸透剤が製剤に用いられる。他の非経口注射については、適切な製剤は、望ましくは生理学的に相溶性の緩衝液又は賦形剤を伴う水性又は非水性溶液を含む。
【０１８６】
非経口注射は任意にボーラス注入又は持続注入を含む。注射のための製剤は任意に、単位剤形例えば、アンプルで、又は多用量容器で保存料とともに提示される。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の医薬組成物は、油性又は水性ビヒクル中の無菌の懸濁液、溶液、又は乳剤のような非経口注射に適切な形態であり、懸濁剤、安定剤、及び／又は分散剤といった製剤化剤（formulatory agents）を含有する。非経口投与のための医薬製剤は、水溶性形状の活性薬剤の水溶液を含む。更に、適切な油性注射懸濁液として、懸濁液が任意に調製される。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、本明細書中に開示される活性薬剤は局所に投与され、また様々な局所投与可能な組成物、例えば、溶液、懸濁液、ローション剤、ゲル、ペースト剤、薬用スティック、バルム剤、クリーム又は軟膏に調製される。このような医薬組成物は、可溶化剤、安定剤、張性増強剤（tonicity enhancing agents）、緩衝剤及び保存料を任意に含有する。
【０１８８】
本明細書中に開示される活性薬剤はまた、浣腸剤、直腸用ゲル、直腸用泡剤、直腸用エアロゾル、坐薬、ゼリー状の坐薬、又は停留浣腸といった直腸用組成物中に任意に調製され、この組成物は、ポリビニルピロリドン、ＰＥＧなどといった合成ポリマーだけでなく、カカオバター又は他のグリセリドといった、従来の座剤の基剤を含有する。組成物の坐剤形態においては、脂肪酸グリセリドの混合物（これに限定されない）といった低融点ワックスが任意にカカオバターと組み合わせて、最初に融解される。
【０１８９】
本明細書中に開示される活性薬剤は任意に、改善により少なくとも部分的に恩恵を受けるであろう炎症性疾患又は疾病の予防的及び／又は治療上の処置のための薬物の調製に用いられる。加えて、このような処置を必要とする個体において、本明細書中に記載の疾病又は疾患のいずれかを処置する方法は、本明細書中に開示される活性薬剤を含有する医薬組成物、又は薬学的に許容可能な塩、薬学的に許容可能なＮ−酸化物、薬学的に活性な代謝物、薬学的に許容可能なプロドラッグ、又は薬学的に許容可能なそれらの溶媒和物を、上記個体に治療上効果的な量で投与する工程を含む。
【０１９０】
個体の疾患が改善しない場合、医師の裁量に基づいて、本明細書中に開示される活性薬剤の投与は、個体の疾病又は疾患の症状を改善、又はそうでなければ制御又は制限するために、慢性的に、すなわち、個体の寿命の間中を含んで、長期間任意に投与される。
【０１９１】
個体の状態が改善しない場合、医師の裁量に基づいて、本明細書中に開示される活性薬剤の投与は任意に連続的に行われる。あるいは、投与される薬の投与量は一時的に減らされ、又は一時的に特定の期間（すなわち、「休薬期間」）阻止される。休薬期間の長さは任意に２日から１年の間で変動し、ほんの一例であるが、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日、１５日、２０日、２８日、３５日、５０日、７０日、１００日、１２０日、１５０日、１８０日、２００日、２５０日、２８０日、３００日、３２０日、３５０日、又は３６５日を含む。休薬期間の投与量減量は１０％から１００％までを含み、ほんの一例であるが、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％を含む。
【０１９２】
一度個体の疾病が改善されると、必要に応じて維持投与量が投与される。その後、投与量又は投与の頻度又は両方は、症状の機能として、改善した疾病、障害又は疾患が保持されるレベルまで減らされる。いくつかの実施形態において、任意の症状の再発が起こると、個体は長期間にわたって間欠的処置を要する。
【０１９３】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、正確な投薬量の１回の投与に適切な単位剤形である。単位剤形において、製剤は、本明細書中に開示される活性薬剤の適量を含有する単位投与量へ分けられる。いくつかの実施形態において、単位投薬量は製剤の分離量を含有するパッケージの形態である。非限定的な例は、パッケージ化された錠剤又はカプセル剤、及びバイアル又はアンプル中の粉末である。いくつかの実施形態において、水性懸濁液組成物は、単回投与用の再密閉不可能な容器内に詰められる。代替的に、組成物に保存料を含むことが典型的である場合、複数回投与用の再密閉可能な容器が用いられる。ほんの一例ではあるが、非経口注射用製剤は追加される保存料とともに、アンプルを含むがこれに限定されない単位剤形で、又は複数回投与用容器で提示される。
【０１９４】
本明細書中に開示される活性薬剤に適切な１日の投薬量は、体重１キログラム当たり約０．０１から３ｍｇである。ヒトを含むがこれに限定されない大型哺乳動物において示される１日の投薬量は約０．５ｍｇから約１００ｍｇまでの範囲内であり、１日４回までを含むがこれに限定されない分割投与量で、又は持続放出型で、都合良く投与される。経口投与のための適切な単位剤形は約１から５０ｍｇまでの活性成分を含む。前述の範囲はただ示唆的なものにすぎない、というのは個体の処置レジメに関する変数の数が大きく、そしてこのような推奨値からの大幅な逸脱は珍しくないためである。このような投薬量は任意に多数の変数次第で変わる。変数は、使用されるＭＩＦ受容体インヒビターの活性、処置される疾患又は疾病、投与方法、個体の必要条件、処置される疾病又は疾患の重症度、及び医療従事者の判断に限定されない。
【０１９５】
このような治療レジメンの毒性及び治療効果は、細胞培養物又は実験動物において任意に決定され、この効果はＬＤ５０（個体数の５０％に致命的な投与量）及びＥＤ５０（個体数の５０％に治療上効果的な投与量）の決定を含むがこれに限定されない。毒性及び治療効果の間の投与量比は治療指数であり、ＬＤ５０とＥＤ５０の間の比として表わされる。高い治療指数を示す本明細書中に開示される活性薬剤は好ましい。細胞培養アッセイ及び動物実験から得られたデータはヒトに用いられるさまざまな投薬量を処方するのに任意に用いられる。本明細書中に開示されるこのような活性薬剤の投薬量は望ましくは、最低毒性を備えるＥＤ５０を含む血中濃度の範囲内にある。使用される剤形、及び利用される投与経路次第で、投薬量はこの範囲内において任意に異なる。
【０１９６】
実施例
以下の具体的な例は説明に役立つものとして理解されるものとし、本開示又は特許請求の範囲を制限するものではない。
【０１９７】
実施例１
細胞株及び試薬
ヒト大動脈（「Schober, A., et al. (2004) Circulation 109, 380-385」）及び臍静脈｛さいじょうみゃく｝（「Weber, K.S., et al. (1999) Eur. J. Immunol. 29, 700-712」）内皮細胞（プロモセル（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ））、ＭｏｎｏＭａｃ６細胞（「Weber, C., et al. (1993) Eur. J. Immunol. 23, 852-859」）及びチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）ＩＣＡＭ−１−トランスフェクタント（「Ostermann, G., et al. (2002) Nat. Immunol. 3, 151-158」）が記載されるように用いられた。ジャーカット細胞及びＲＡＷ２６４．７マクロファージが、ｐｃＤＮＡ３−ＣＸＣＲ２でトランスフェクトされた。ＨＬ−６０細胞がｐｃＤＮＡ３．１／Ｖ５−ＨｉｓＴＯＰＯ−ＴＡ−ＣＤ７４又はベクトル対照群（Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ  Ｋｉｔ  Ｖ，Ａｍａｘａ）でトランスフェクトされた。シミアンウィルス−４０で形質転換されたマウスの微小血管内皮細胞（ＳＶＥＣ）上でのアッセイのため、Ｌ１．２細胞がｐｃＤＮＡ３−ＣＸＣＲ又はｐｃＤＮＡ−ＣＣＲ５（ＵＭＲ  ｃＤＮＡ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ）でトランスフェクトされた。末梢血単核細胞が、軟膜から調製され、単球が接着又は免疫磁気分離法（ミルテニー（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ））によって調製され、プライマリーＴ細胞がフィトヘマグルチニン（phytohaemaglutinin）／インターロイキン−２（バイオソース（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ））刺激及び／又は免疫磁気選択（ＣＤ３／Ｍ−４５０ダイナビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ）に対する抗体）により調製され、そして好中球がフィコール勾配遠心分離により調製された。ヒト胚腎臓−ＣＸＣＲ２トランスフェクタント（ＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２）は前もって記載されている（「Ben-Baruch, A., et al. (1997) Cytokine 9, 37-45」）。
【０１９８】
組換えＭＩＦ（Recombinant ＭＩＦ）は記載（「Bernhagen, J., et al. (1993) Nature 365, 756-759」）されるように発現及び精製された。ケモカインはＰｅｐｒｏＴｅｃｈ由来のものである。ヒトＶＣＡＭ−１．Ｆｃキメラ、ＣＸＣＲ１（４２７０５，５Ａ１２）、ＣＸＣＲ２（４８３１１）、ＣＸＣＲ４（４４７０８，ＦＡＢＳＰ２カクテル，Ｒ＆Ｄ）、ヒトＭＩＦ及びマウスＭＩＦ（ＮＩＨＩＩＩ．Ｄ．９）（「Lan, H.Y., et al. (1997) J. Exp. Med. 185, 1455-1465」）、ＣＤ７４（Ｍ−Ｂ７４１，ファーミンジェン（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ））、β２インテグリン（ＴＳ１／１８）、α４インテグリン（ＨＰ２／１）（「Weber, C., et al. (1996) J. Cell Biol. 134, 1063-1073」）及びＣＸＣＲ２（ＲＩＩ１１５）に対する遮断抗体、そしてαＬインテグリン（３２７Ｃ）に対する抗体（「Shamri, R., et al. (2005) Nat. Immunol. 6, 497-506」）が用いられた。ＰＴＸ及びＢ−オリゴマーはＭｅｒｃｋ社由来のものである。
【０１９９】
実施例に用いられる方法
接着アッセイ
カルセイン−ＡＭ（分子プローブ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ））標識単球、Ｔ細胞及びＬ１．２トランスフェクタントの阻止は、平行に隔壁されたチャンバーにおいて流量で（１．５ダイン／ｃｍ２，５分間）、定量化された（「Schober, A., et al. (2004) Circulation 109, 380-385; Ostermann, G., et al. (2002) Nat. Immunol. 3, 151-158; Weber, C., et al. (1996) J. Cell Biol. 134, 1063-1073」）。融合性内皮細胞、ＣＨＯ−ＩＣＡＭ−１細胞、ＶＣＡＭ−１．Ｆｃでコーティングされた血小板及び白血球が、ＭＩＦ、ケモカイン又は抗体を用いて事前処理された。ＭＩＦで（２時間）インキュベートされたＣＨＯ−ＩＣＡＭ−１細胞は、ＭＩＦ  Ｋａ５６５（「Leng, L., et al. (2003) J. Exp. Med. 197, 1467-1476」）に対する抗体、及びＦＩＴＣ接合（FITC-conjugated）抗体を用いて染色された。
【０２００】
走化性アッセイ
トランスウェルチャンバー（コスター（Ｃｏｓｔａｒ））を用いて、蛍光顕微鏡により、又はカルセインＡＭ標識及びフルオロブロックフィルタ（FluoroBlok filters）（ファルコン（Ｆａｌｃｏｎ））を用いて、ＭＩＦ又はケモカインに対する主要な白血球遊走を定量化した。細胞はＰＴＸ／Ｂ−オリゴマー、Ｌｙ２９４００２、ＭＩＦ（脱感作用）、ＣＸＣＲ又はＣＤ７４に対する抗体、又はアイソタイプＩｇＧを用いて事前処理された。孔径及び間隔は５μｍと３時間（単球）、３μｍと１．５時間（Ｔ細胞）、及び３ｍｍと１時間（好中球）であった。
【０２０１】
Ｑ−ＰＣＲ及びＥＬＩＳＡ
ＲＮＡはオリゴ−ｄＴプライマーを用いて逆転写された。ＲＴＰＣＲが、ＳＹＢＲグリーン（キアゲン（Ｑｉａｇｅｎ））、特異的プライマー及びＭＪ Ｏｐｔｉｃｏｎ２（Ｂｉｏｚｙｍ）とともに、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔキットを用いて実行された。ＣＸＣＬ８は、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ）により定量化された。
【０２０２】
αＬβ２インテグリン活性化アッセイ
ＭＩＦ又はＭｇ２＋／ＥＧＴＡ（正の対照群）に刺激された単球は固定され、活性薬剤３２７Ｃ及びマウスＩｇＧに対するＦＩＴＣ接合抗体と反応させた。フローサイトメトリーにより分析されたＬＦＡ−１活性化が、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の増大として、又は正の対照群（Shamri, R., et al. (2005) Nat. Immunol. 6, 497-506）に関連して報告される。
【０２０３】
カルシウム動員
好中球又はＬ１．２ＣＸＣＲ２トランスフェクタントがＦｌｕｏ−４ＡＭ（分子プローブ）を用いて標識化された。第一の又はその後の刺激（ＭＩＦ、ＣＸＣＬ８又はＣＸＣＬ７）を加えた後、ＭＦＩは細胞質のＣａ２＋濃度の指標としてＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｉａを用いて１２０秒間監視された。Ｌ１．２対照群がごくわずかなカルシウム流入を示した。
【０２０４】
受容体結合アッセイ
ヨウ素化されたＭＩＦは不活性（「Leng, L., et al. (2003) J. Exp. Med. 197, 1467-1476; Kleemann, R., et al. (2002) J. Interferon Cytokine Res. 22, 351-363」）であるため、競合的受容体結合（「Hayashi, S., et al. (1995) J. Immunol. 154, 814-824」）が、放射ヨウ素標識されたトレーサー（アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ））、すなわち、４ｎＭ（８０μＣｉ／ｍｌ）で最終濃度４０ｐＭに再構成された［Ｉ１２５］ＣＸＣＬ８、５ｎＭ（１００μＣｉ／ｍｌ）を用いて最終濃度５０ｐＭに再構成された［Ｉ１２５］ＣＸＣＬ１２を用いて実行された。平衡結合アッセイにおけるＣＸＣＲ２結合用のＭＩＦとの［Ｉ１２５］ＣＸＣＬ８の競合、又はＣＸＣＲ４結合用のＭＩＦとの［Ｉ１２５］ＣＸＣＬ１２の競合のため、ＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２又はＣＸＣＲ４を有するジャーカット細胞に対するトレーサーを備える低温のＭＩＦ及び／又はＣＸＣＬが加えられた。分析は液体シンチレーション計数により実行された。ＥＣ５０及びＫｄ値を算出するため、一部位受容体リガンド結合モデルが想定され、チェン／プルソフ（Cheng/Prusoff）等式及びグラフパッドプリズム（GraphPad Prism）が用いられた。
【０２０５】
ビオチン−ＭＩＦ−ＣＸＣＲ複合体のプルダウンのため、ＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２トランスフェクタント又は対照群が、ビオチン標識ＭＩＦでインキュベートされ、（「Kleemann, R., et al. (2002) J. Interferon Cytokine Res. 22, 351-363」）免疫共沈降（ＣｏＩＰ）バッファで洗浄及び溶解された。複合体はストレプトアビジンでコーティングされた電磁ビーズ（Ｍ２８０，ダイナル（Ｄｙｎａｌ））により除去された可溶化液（cleared lysates）から分離され、ＣＸＣＲ２に対する抗体又はストレプトアビジン−ペルオキシターゼを用いて、ウェスタンブロット解析で分析された。フローサイトメトリーには、ＡＭＤ３４６５及び／又は２０倍（20-fold）過剰の非標識のＭＩＦで事前処理されたＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２トランスフェクタント又はジャーカット細胞がフルオレセイン標識されたＭＩＦでインキュベートされ、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒを用いて分析された。
【０２０６】
ＣＸＣＲ内在化アッセイ
ＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２又はジャーカット細胞がＣＸＣＬ８又はＣＸＣＬ１２でそれぞれに処理され、ＭＩＦで処理され、酸性のグリシン緩衝剤で洗浄され、ＣＸＣＲ２又はＣＸＣＲ４に対する抗体で染色され、そしてフローサイトメリーにより分析された。内在化は緩衝剤処理された細胞（１００％対照群）及び染色するアイソタイプ対照群（０％対照）の表面発現に関して算出された。すなわち、幾何学的なＭＦＩ［実験用］−ＭＦＩ［０％対照群］／ＭＦＩ［１００％対照群］−ＭＦＩ［０％対照群］ｘ１００である。
【０２０７】
ＣＸＣＲ２及びＣＤ７４の共存
ＲＡＷ２６４．７−ＣＸＣＲ２トランスフェクタントがＣＸＣＲ２及びマウスＣＤ７４に対するネズミ抗体（Ｉｎ−１，ファーミンジェン）で、続いてＦＩＴＣ接合のネズミＩｇＧに対する抗体、及びマウスＩｇＧに対するＣｙ３接合抗体で共染色され、そして共焦点レーザー走査顕微鏡（ツァイス（Ｚｅｉｓｓ））により分析された。
【０２０８】
ＣＸＣＲ２及びＣＤ７４の免疫共沈降
ｐｃＤＮＡ３．１／Ｖ５−ＨｉｓＴＯＰＯ−ＴＡ−ＣＤ７４で一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３−ＣＸＣＲ２細胞が、非変性ＣｏＩＰバッファ中に溶解された。上清がＣＸＣＲ２抗体ＲＩＩ１１５又はアイソタイプ対照群とインキュベートされ、タンパク質Ｇ−セファロースで一晩予め遮断（preblock）された。タンパク質はＨｉｓ−タグ（サンタクルズ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ））に対する活性薬剤を用いて、ウェスタンブロットにより分析された。同様に、ＣｏＩＰ及び免疫ブロットが、Ｈｉｓ−タグ及びＣＸＣＲ２それぞれに対する抗体を用いて実行された。Ｌ１．２−ＣＸＣＲ２細胞がＣＸＣＲ２に対する抗体を用いて免疫沈降にさらされ、そして、マウスＣＤ７４に対する抗体を用いて免疫ブロットにさらされた。
【０２０９】
頸動脈のエクスビボの灌流及び生体顕微鏡検査
Ｍｉｆ-／-（「フィンゲルリ-ロウソン（Fingerle-Rowson）, G., et al. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100, 9354-9359」）から交雑されたＭｉｆ-／-Ｌｄｌｒ-／-マウス及びＭｉｆ＋／＋Ｌｄｌｒ-／-  同腹子対照群、及びＬｄｌｒ-／-マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）、及びアポｅ-／-マウスが、高脂肪食（２１％脂肪；アルトロミン（Ａｌｔｒｏｍｉｎ））を６週間与えられた。あらゆる単一ノックアウト系統は、Ｃ５７ＢＬ／６のバックグラウンドにおいて１０回戻し交配された。Ｍｉｆ＋／＋及びＭｉｆ-／-マウスはＴＮＦ−α（腹腔内に（ｉ．ｐ．），４時間）で処理された。外植された動脈が、落射蛍光顕微鏡の試料台に移され、ＣＤ７４又はＣＸＣＲ２に対する抗体，アイソタイプ対照群ＩｇＧで処理された、又は未処理で放置されたカルセインＡＭ標識ＭｏｎｏＭａｃ６細胞を用いて、４μｌ／分で灌流された（「Huo, Y., et al. (2001) J. Clin. Invest. 108, 1307-1314」）。未処理の単球細胞はＭＩＦに対する抗体で３０分間遮断後、灌流された。生体顕微鏡検査のため、ローダミン−Ｇ（分子プローブ）が静脈内に（ｉ．ｖ．）投与され、頸動脈が麻酔下のマウス中に暴露された。標識された白血球の阻止（＞３０  秒）は、落射蛍光顕微法（ツァイス  アキシオテック（Ｚｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｔｅｃｈ），  ２０ｘ  水浸）により分析された。全ての研究は地方局（行政区ケルン）により承認され、ドイツ動物愛護法Ａｚ：５０．２０３．２−ＡＣ ３６，１９／０５に従った。
【０２１０】
アテローム性動脈硬化症進行のマウスモデル
高脂肪食を１２週間与えられたアポｅ-／-マウスが、ＭＩＦ（ＮＩＨＩＩＩＤ、９）、ＣＸＣＬ１２（７９０１４）又はＣＸＣＬ１（１２４０１４、Ｒ＆Ｄ）（ｎ＝６−１０マウス）に対する抗体をさらに４週間注入された（１週間あたり３注射、それぞれ５０μｇ）。大動脈基部は、インサイチュー灌流により固定され、そしてアテローム性動脈硬化はオイルレッドＯを用いて横断面を染色することにより定量化された。関連するマクロファージ及びＴ細胞の内容物は、ＭＯＭＡ−２（ＭＣＡ５１９，セロテック（Ｓｅｒｏｔｅｃ））又はＣＤ３（ＰＣ３／１８８Ａ，ダコ（Ｄａｋｏ））に対する抗体、及びＦＩＴＣ接合抗体を用いて染色することにより決定される。３０週間固形飼料を食餌として与えられたＭｉｆ-／-Ｌｄｌｒ-／-及びＭｉｆ＋／＋Ｌｄｌｒ-／-マウスにおいて、大動脈基部内の多数の管腔の単球及び病変マクロファージが、記載される（「Verschuren, L., et al. (2005) Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 25, 161-167」）ように決定された。
【０２１１】
精巣挙筋微小循環モデル
ＣＸＣＲ２に対する抗体（１００μｇ  腹腔内）で処理されたマウスにおいて、ヒトＭＩＦ（１μｇ）が陰嚢内に注入され、そして精巣挙筋が露出された。４時間後、生体顕微鏡検査（ツァイス・アキシオプラン（Ｚｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｐｌａｎ）；２０ｘ）が、後毛細血管細静脈中で実行された（「Gregory, J.L., et al. (2004) Arthritis Rheum. 50, 3023-3034; Keane, M.P., et al. (2004) J. Immunol. 172, 2853-2860」）。接着は３０秒より長い間静止した白血球として、そして遊出はフィールド当たりの血管外白血球の数として測定された。
【０２１２】
骨髄移植
大腿及び脛骨が無菌で、ドナーＩｌ８ｒｂ-／-（ジャクソン・ラボラトリーズ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ））又はＢＡＬＢ／ｃマウスから除去された。細胞は、髄腔から流し出され、切除を伴う全身照射法（Zernecke, A., et al. (2005) Circ. Res. 96, 784-791）の２４時間後、Ｍｉｆ＋／＋又はＭｉｆ-／-マウスに細胞は静脈内に投与された。
【０２１３】
急性腹膜炎のモデル
Ｉｌ８ｒｂ＋／＋又はＩｌ８ｒｂ-／-骨髄を再配置されたマウスが、腹腔内にＭＩＦ  （２００ｎｇ）を注入された。４時間後、腹腔洗浄法が実行され、Ｇｒ-１＋ＣＤ１１５-Ｆ４／８０-ｃ好中球が、関連する接合抗体を用いてフローサイトメトリーにより定量化された。
【０２１４】
統計分析
統計分析が、一方向分散分析（ＡＮＯＶＡ）及びニューマン−ケウルス（Newman-Keuls）ポストホックテスト（post-hoc test）又はウェルチの補正（Welch's correction）（グラフパッドプリズム）を用いるアンペアードスチューデントｔ−検定（unpaired Student's t-test）のいずれかを用いて実行された。
【０２１５】
実施例２：  
ＣＸＣＲ２を介した表面結合のＭＩＦ誘発性の単球阻止
モノクローナル抗体及び百日咳毒素（ＰＴＸ）が、ＭＩＦ誘発性の単球阻止が、ＣＸＣＲ２のＧαｉ−共役活性に依存するかどうかを研究するために用いられた。組換えＭＩＦで２時間事前処理されていたヒト大動脈内皮細胞が、流動条件の下、主要なヒト単球の阻止を実質的に増大したが、これはＭＩＦに対する抗体に遮断される効果である（図１ａ）。特に、ＭＩＦ誘発性の、しかし自然発生ではない単球阻止が、ＣＸＣＲ２に対する抗体により、又はＰＴＸにより切断され、このことはＧαｉ共役のＣＸＣＲ２を暗に示した。ＣＸＣＲ２を介して単球阻止を誘発するＭＩＦの能力は、単球のＭｏｎｏ−Ｍａｃ６細胞を用いて確認され、この活動は、大動脈内皮細胞上のＭＩＦの固定化に関連付けられた（図１ｂ）。このデータは、ＭＩＦが内皮細胞表面上にあり、そして非同族ＣＸＣＲ２リガンドとして、ケモカインのような阻止機能を発揮したことを示した。標準的なＣＸＣＲ２アゴニスト（ＣＸＣＬ１／ＣＸＣＬ８）の遮断は、ＭＩＦのこれらの効果を妨げなかった（図１ａ）。
【０２１６】
β２インテグリンリガンド、ＩＣＡＭ−１（細胞間接着分子１）を発現させる、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）のトランスフェクタントが、ＭＩＦがインテグリン依存性の阻止を促進する機構を分析するために用いられた。流動条件の下で定量化されたため、ＣＨＯトランスフェクタントをＭＩＦに２時間暴露することにより、ＭＩＦの表面提示をもたらし（図１ｂ）、またトランスフェクタントのＣＸＣＬ８への暴露のように、単球細胞の阻止を増大した（図１ｃ）。この効果はＰＴＸとβ２インテグリンに対する抗体とに完全に影響を受けやすく（図１ｃ）、ＭＩＦにより誘発されるβ２インテグリン媒介の阻止におけるＧαｉの役割を確認した。主要な単球及びＭｏｎｏＭａｃ６細胞は、ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２の両方を発現させる（「Weber, K.S., et al. (1999) Eur. J. Immunol. 29, 700-712」）。ＣＸＣＲ１の遮断が全く効果を有さなかった一方、ＣＸＣＲ２の遮断は実質的に、しかし完全にではなく、ＭＩＦ誘発性の及びＣＸＣＬ８誘発性の単球細胞阻止を損なった。ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２の両方に対する抗体の追加は、ＭＩＦ又はＣＸＣＬ８の阻止機能を完全に抑制した（図１ｄ及び図８）。ＣＤ７４に対する抗体の使用は、ＭＩＦ誘発性の阻止においてＣＸＣＲ２とともにこのタンパク質に影響を及ぼした（図１ｄ）。自発阻止は影響されなかった（図８）。従って、ＣＤ７４により補助されたＣＸＣＲ２がＭＩＦ誘発性の阻止を媒介する。
【０２１７】
ＣＸＣＲ４を介したＭＩＦ誘発性のＴ細胞阻止
大動脈内皮細胞上に固定されたＭＩＦ又はＣＸＣＬ１２のいずれかが、主要なヒトエフェクターＴ細胞の阻止を引き起こした（図１ｅ）。ＭＩＦ誘発性の、しかし自然発生ではないＴ細胞阻止はＰＴＸに影響を受けやすく、ＣＸＣＲ４に対する抗体により抑制された（図１ｅ）。ＣＸＣＲ２を発現させる単球におけるほど顕著ではないが（図１ｄ）、ＩＣＡＭ−１を発現させるＣＨＯトランスフェクタント上のＭＩＦ（又はＣＸＣＬ１２）の提示は、αＬβ２依存性のジャーカットＴ細胞の阻止を引き起こした。これは、ＣＸＣＲ４により媒介される効果である（図１ｆ）。
【０２１８】
ジャーカットＴ細胞におけるＣＸＣＲ２の異所性発現は、ＭＩＦ誘発性の阻止を増大し（図１ｇ）、これは、ＣＸＣＲ２が白血球中のＭＩＦへの応答を伝えるという考えを実証するものである。ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２又はＣＸＣＲ３を発現させるＬ１．２プレ−Ｂリンパ腫トランスフェクタント、及び内在性のＣＸＣＲ４のみを発現させる細胞を用いる対照群が、ＣＸＣＲ４アンタゴニストＡＭＤ３４６５の存在下で用いられた。ＭＩＦは、正準リガンドＣＸＣＬ８及びＣＸＣＬ１２のものと同様の有効性を備える内皮細胞上で、ＣＸＣＲ２トランスフェクタント及びＣＸＣＲ４を有している対照群の阻止を引き起こし、その一方、ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ３トランスフェクタントは、ＣＸＣＬ８及びＣＸＣＬ１０にそれぞれ応答していたが、ＭＩＦに対してはそうでなかった（図１ｈ）。このデータにより、ＣＸＣＲ１又はＣＸＣＲ３ではなく、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４が、ＭＩＦ誘発性の阻止を支持することが立証された。
【０２１９】
実施例３
ＣＸＣＲ２／４活性化を介したＭＩＦ誘発性白血球の走化性
ケモカインは走化性の誘発因子として名祖的に（eponymously）定義されている（「Baggiolini, M., et al. (1994) Adv. Immunol. 55, 97-179; Weber, C., et al. (2004) Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24, 1997-2008」）。逆説的に、ＭＩＦは最初、「ランダムな」遊走（Calandra, T., et al. (2003) Nat. Rev. Immunol. 3, 791-800）を妨げるものと思われていた。これは定方向の（directed）遊出の活動的な反発又は脱感作に起因し得るが、遊走を制御するＭＩＦにより喚起される特定の機構はまだ明確にされていない。ＭＩＦがＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＧαｉ媒介の機能を誘発したことを示す結果により、ＭＩＦがこれらの受容体を介して直接的に白血球走化性を引き起こすかどうかを確かめることが促された。
【０２２０】
トランスウェル・システム（transwell system）を用いて、ＭＩＦ及びＣＸＣＬ８のプロ遊走性の（promigratory）効果が、主要なヒト末梢血単核細胞由来の単球で比較された。ＣＣＬ２はまた、単球に対するプロトタイプのケモカインとして用いられた。ＣＸＣＬ８及びＣＣＬ２と同様に、ＭＩＦを下方チャンバーに加えることにより遊走が誘発され、遊走は、低いピークの遊走指数（図２ａ）を伴うにもかかわらず、２５〜５０ｎｇ／ｍｌで最適値を取る、ケモカインに典型的な円錐型の用量反応曲線をたどった。熱処理又はＭＩＦに対する中和抗体が、ＭＩＦ誘発性の遊出を無効にした。対照的に、アイソタイプの一致した（isotype-matched）免疫グロブリン（ＩｇＧ）は効果を有さなかった（図２ｂ）。上方チャンバーに加えられると、ＭＩＦは下方チャンバーでＭＩＦ方向への遊走に対して用量依存的に脱感作したが（図２ｃ）、上方チャンバーにのみ存する時、遊走を引き起こさなかった。これはＭＩＦが化学運動性というより真の走化性を喚起することを示している。ホスホイノシチド−３−キナーゼを介したＧαｉ依存性のシグナル伝達と一致して、ＭＩＦ誘発性の単球走化はＰＴＸに影響を受けやすく、Ｌｙ２９４００２により抑制された（図２ｄ）。ＣＸＣＲ２及びＣＤ７４の両方が、ＭＩＦ誘発性の単球走化性に特異的に貢献した（図２ｅ）。ＣＸＣＲ２の役割は、ＣＸＣＲ２をトランスフェクトされたＬ１．２細胞における、ＣＸＣＬ８誘発性走化性のＭＩＦ媒介性の交差脱感作を示すことにより確認された。ＭＩＦの遊走能は、ＲＡＷ２６４．７マクロファージ（図８）及びＴＨＰ−１単球において確認された。これらのデータは、ＭＩＦがＣＸＣＲ２を介して単球走化性を引き起こすことを明示する。
【０２２１】
機能的ＭＩＦ−ＣＸＣＲ４相互作用を立証するため、ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２を持たない最初のＣＤ３＋Ｔリンパ球の遊出が評価された。ＣＸＣＬ１２、既知のＣＸＣＲ４リガンド及びＴ細胞化学誘引物質と同様に、抗体遮断及びＣＸＣＬ１２の交差脱感作により示されるように、ＭＩＦが遊出を、すなわち走化性であり、かつＣＸＣＲ４を介して形質導入された工程を用量依存的に誘発した（図２ｆ及び図８）。従って、ＭＩＦはＣＸＣＲ４を介した定方向のＴ細胞の遊走を引き起こす。ＣＸＣＲ２を有する主要な細胞型である、主要なヒト好中球において、ＭＩＦは、ＣＸＣＲ１媒介ではなくＣＸＣＲ２媒介の遊走能を発揮し、これは円錐型の用量反応曲線を示し、ＣＸＣＬ８を交差脱感作するものである（図２ｇ，ｈ）。ＭＩＦに向かう好中球の中程度の遊走能は、好中球におけるＣＤ７４の不在に関係し得る、というのは、ＣＤ７４−前骨髄球性ＨＬ−６０細胞におけるその異所性発現が、ＭＩＦ誘発性の遊走を増進したためである（図８）。他のＣＸＣＲ２リガンドのように、ＭＩＦは阻止（arrest）ケモカインとして機能するが、現在のデータは、ＭＩＦは同様に、単核細胞及び好中球にかなりの走化性特性を有することを明らかにした。
【０２２２】
実施例４
ＭＩＦが急速なインテグリン活性化及びカルシウム流動を引き起こす。
ＭＩＦの阻止機能は、直接的なＭＩＦ／ＣＸＣＲのシグナル伝達を反映し得るが、ＭＩＦの固定化に要する時間の間、ＭＩＦが他の阻止ケモカインを誘発するということは、完全には除外され得ない。ＭＩＦが直接的に白血球阻止を誘発する（図１）という証拠を強固にするため、リアルタイムＰＣＲ及びＥＬＩＳＡが実行され、ヒト大動脈（又は静脈）内皮細胞のＭＩＦとの２時間に及ぶインキュベーションが、ＣＸＣＲ２に結合すると知られている典型的な阻止ケモカインを上方制御できなかったことが分かった（図３ａ）。
【０２２３】
溶液中に存在する、又はインテグリンリガンド（例えば、血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ）−１）に並べて置いて固定化されたケモカインへの短期間暴露は、急速にインテグリン活性を上方制御することができ、このことが白血球阻止を媒介する（「Laudanna, C., et al. (2006) Thromb. Haemost. 95, 5-11」）。これはリガンド結合の直前に行われるクラスタリング（例えばα４β１）又は高次構造変化（例えばαＬβ２）により成し遂げられる。１から５分間の単球細胞のＭＩＦ（又はＣＸＣＬ８）による刺激は、ＣＨＯ／ＩＣＡＭ−１細胞上でαＬβ２依存性の阻止を引き起こした（図３ｂ）。単球インテグリン（monocyte integrins）の直接刺激の証拠を得るため、αＬβ２の広範な（extended）高親和性高次構造を認識するレポーター抗体３２７Ｃが用いられた（Shamri, R., et al. (2005) Nat. Immunol. 6, 497-506）。これらのアッセイはＭｏｎｏＭａｃ６細胞（図３ｃ）及びヒト血中単球（図３ｄ）内のαＬβ２活性化が、ＭＩＦへの暴露の１分後という早い時間に起こり、３０分間以上持続したことを明らかにした。ＭＩＦの作用がαＬβ２に限定されるかどうかを評価するために、ＶＣＡＭ−１上のα４β１依存性単球細胞の阻止が研究された。ＭＩＦへの１から５分間の暴露により顕著な阻止が誘発され、その阻止はＣＸＣＲ２、ＣＤ７４及びα４β１により媒介された（図３ｅ）。ＣＸＣＬ１２の作用と同様に、ジャーカットＴ細胞のＭＩＦによる１から５分間の刺激は、ＶＣＡＭ−１上でＣＸＣＲ４依存性の接着を引き起こした（図８）。
【０２２４】
ＣＸＣＲ２は、ＣＸＣＬ８により引き起こされる細胞質カルシウムの増加を媒介することができるため（Jones, S.A., et al. (1997) J. Biol. Chem. 272, 16166-16169）、カルシウム流入を刺激し、ＣＸＣＬ８シグナルを脱感作するＭＩＦの能力が検査された。実際に、ＣＸＣＬ８のように、ＭＩＦは主要なヒト好中球中でカルシウム流入を誘発し、ＣＸＣＬ８又はＭＩＦのいずれかに応答するカルシウムトランジェントを脱感作し（図３ｆ）、ＭＩＦがＧＰＣＲ／Ｇαｉシグナル伝達を活性化することを確認した。好中球において見られるＭＩＦによるＣＸＣＬ８のシグナル伝達の部分的な脱感作は、他のＣＸＣＲ２リガンド（Jones, S.A., et al. (1997) J. Biol. Chem. 272, 16166-16169）を用いた調査結果と近似し、そしてＣＸＣＲ１の存在を反映する。ＣＸＣＲ２を発現するＬ１．２トランスフェクタントにおいて、ＭＩＦはＣＸＣＬ８誘発性のカルシウム流入を完全に脱感作し、そして好中球中において、ＭＩＦは、選択的ＣＸＣＲ２リガンドＣＸＣＬ７により誘発されたトランジェントを脱感作した（そして、ＣＸＣＬ７はＭＩＦにより誘発されるトランジェントを脱感作した）（図３ｆ）。ＣＸＣＲ２トランスフェクタントにおいて、ＭＩＦはカルシウム流入を用量依存的に誘発し、そしてＣＸＣＬ８又はＣＸＣＬ７の強力さ及び効果にわずかに及ばないだけであった（図３ｇ）。結論として、ＭＩＦはＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４に作用することによって、急速なインテグリン活性化及びカルシウム流入を引き起こした。
【０２２５】
実施例５
ＭＩＦはＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４と相互作用する。
ＭＩＦのＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４との物理的相互作用を評価するため、受容体結合競合及び、内在化研究を実施した。異所的にＣＸＣＲ２を発現するＨＥＫ２９３細胞において、ＭＩＦは平衡条件下で、ＣＸＣＲ２結合に関して１２５Ｉ標識ＣＸＣＬ８と強く競合した。ＣＸＣＬ８トレーサーの、ＣＸＣＲ２への結合は、１．５ｎＭの最大半減反応に対するエフェクター濃度（ＥＣ５０）を有するＭＩＦにより抑制された（図４ａ）。ＣＸＣＲ２のＭＩＦ（Ｋｄ＝１．４ｎＭ）への親和性は、ＣＸＣＬ８（Ｋｄ＝０．７ｎＭ）への親和性に近く、最適な走化性を誘発するＭＩＦ濃度の範囲内（２-４ｎＭ）であった。ＣＸＣＲ２への結合を確認するため、特異的な受容体−リガンド相互作用を報告する受容体内在化アッセイを用いた。安定的ＨＥＫ２９３トランスフェクタント上の表面ＣＸＣＲ２のＦＡＣＳ分析は、ＭＩＦが、ＣＸＣＬ８のものと似た用量反応を有するＣＸＣＲ２の内在化を誘発したことを示した（図４ｂ）。同等のデータが、ＣＸＣＲ２をトランスフェクトされたＲＡＷ２６４．７マクロファージ中でも得られた（図４ｂ挿入図）。
【０２２６】
ＭＩＦのＣＸＣＲ４との相互作用を検証するため、受容体結合研究が、内因的にＣＸＣＲ４を発現するジャーカットＴ細胞内で実施された。ＭＩＦはＣＸＣＲ４結合に対して、１２５Ｉ標識ＣＸＣＬ１２と競合した（ＣＸＣＬ１２のＫｄ＝１．５ｎＭ；ＥＣ５０＝１９．９ｎＭ、ＭＩＦのＫｄ＝１９．８ｎＭ）（図４ｃ）。ＫｄはＴ細胞走化性を誘発するＭＩＦ濃度に一致していた。一貫して、ＭＩＦはＣＸＣＬ１２のように、用量依存的様式でＣＸＣＲ４の内在化を引き起こした（図４ｄ）。ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ誘発性の内在化はこれらの受容体に対し特異的であった。それはＭＩＦが同族のリガンドＣＣＬ５とは異なり、Ｌ１．２ＣＣＲ５トランスフェクタント中においてＣＣＲ５の内在化を誘発することができなかったためである。
【０２２７】
ＣＸＣＲとの相互作用を確証するため、ＭＩＦはビオチン又はフルオレセインで標識化され、それによりヨウ素化されたＭＩＦとは対照的に、直接的な受容体結合アッセイが可能となる。ベクター対照群ではなくＣＸＣＲ２トランスフェクタントは、フローサイトメトリー（図４ｅ）、ストレプトアビジンビーズを用いたプルダウン（図４ｅ挿入図）及び蛍光顕微鏡法により証明されるように、標識化されたＭＩＦの直接結合を支持した。加えて、フルオレセイン−ＭＩＦのＣＸＣＲ４を有しているジャーカット細胞への特異的な結合は、ＣＸＣＲ４アンタゴニストＡＭＤ３４６５により抑制された。
【０２２８】
ＣＸＣＲ２及びＣＤ７４間の複合体形成
我々のデータは、機能的なＭＩＦの受容体複合体にはＧＰＣＲ及びＣＤ７４の両方が含まれるという可能性を示唆している。従って、内因性のＣＤ７４及びＣＸＣＲ２の共局在化が、ヒトＣＸＣＲ２を発現するＲＡＷ２６４．７マクロファージ中で共焦点蛍光顕微鏡法を用いて可視化された。この技術を用いて、顕著な共局在化が、５０％以下の細胞において偏光パターン（polarized pattern)で観察された（図４ｆ）。
【０２２９】
加えて、免疫共沈降アッセイが、ＣＸＣＲ２がＣＤ７４と物理的に相互作用することを明らかにした。ＣＸＣＲ２／ＣＤ７４複合体は、安定的にＣＸＣＲ２を過剰発現させると共に、一過的にＨｉｓタグをつけたＣＤ７４を発現するＨＥＫ２９３細胞において検出された。これらの複合体は、ＣＸＣＲ２に対する抗体を用いた沈降により、及びＨｉｓタグに対するウェスタンブロットにより共沈されたＣＤ７４を検出することにより観察された。共沈はまた、使用された抗体の順序が逆にされた時にも見られた（図４ｇ）。複合体はまた、ＣＸＣＲ２に対する抗体を用いた免疫共沈降により評価されるように、ヒトＣＸＣＲ２を安定的に発現するＬ１．２トランスフェクタント中のＣＤ７４を用いて検出された。対照的に、Ｌ１．２対照群又はアイソタイプ対照群では複合体は観察されなかった（図４ｈ）。データは、ＭＩＦ機能を媒介するためにＣＤ７４がシグナル伝達複合体を形成するモデルと一致する。
【０２３０】
実施例６
ＣＸＣＲ２は動脈内でＭＩＦ誘発性の単球阻止を媒介する。
ＭＩＦは、大量の細胞増殖、マクロファージ浸潤、及び脂質沈着を伴う複合プラークの形成を促進する（「Weber, C., et al. (2004) Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24, 1997-2008; Morand, E.F., et al. (2006) Nat. Rev. Drug Discov. 5, 399-410」）。これはｏｘＬＤＬによる内皮のＭＩＦの誘導に関連しており、このことが単球阻止を誘発するものである（Schober, A., et al. (2004) Circulation 109, 380-385）。ＣＸＣＲ２リガンドＣＸＣＬ１はまた、初期のアテローム硬化性の内皮を有するマウスのエクスビボで灌流された頸動脈内に、α４β１依存性単球の蓄積を引き起こすことができる（Huo, Y., et al. (2001) J. Clin. Invest. 108, 1307-1314）。このシステムは、ＭＩＦが動員を誘発するためにＣＸＣＲ２を介して作用するかどうかを検査するために用いられた。高脂肪食を与えられたアポｅ-／-マウスの頸動脈内の単球阻止は、ＣＸＣＲ２、ＣＤ７４、又はＭＩＦに対する抗体により抑制され（図５ａ及び図９）、ＭＩＦがＣＸＣＲ２及びＣＤ７４を介してアテローム発生の動員に貢献したことを示した。２４時間のＭＩＦ、ＣＸＣＲ２、及びＣＤ７４の遮断に続き、同様のパターンが腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−αで処理された野生型マウスの動脈中の単球阻止について観察され、急性の血管炎症に似た症状を示した（図５ｂ）。ＴＮＦ−αで処理されたＭｉｆ-／-マウスの動脈内で、ＣＤ７４への抑制効果は弱められ、遮断ＭＩＦは無効であったが、一方残存するＣＸＣＲ２による抑制が存在し、他の誘導リガンドの関与があったことを暗に示した（図５ｃ）。ＴＮＦ−αの刺激で観察されるＭＩＦ欠乏の効果と比較して、単球の蓄積はＭｉｆ-／-Ｌｄｌｒ-／-マウスの動脈内のＭＩＦ欠乏により、より明らかに損なわれた（アテローム発生のＭｉｆ＋／＋Ｌｄｌｒ-／-マウスと比較して。；図５ｄ，ｅ）。ＭＩＦの不在下においては、ＣＸＣＲ２の明らかな関与はなかった。さらに、ＭＩＦを遮断することは、効果を有さなかった（図５ｄ，ｅ）。ＣＸＣＲ２を遮断することの抑制効果は外因性のＭＩＦを加えることによって回復された（図５ｆ）。
【０２３１】
ＣＸＣＲ２がインビボでのＭＩＦ媒介性の単球の動員に必要とされるという考えに対する更なる証拠を提供するため、野生型又はＩｌ８ｒｂ-／-骨髄を用いて再構成された、キメラの野生型Ｍｉｆ＋／＋及びＭｉｆ-／-マウスの頸動脈に生体顕微鏡検査が実行された（Ｉｌ８ｒｂはＣＸＣＲ２をコードする；図５ｇ，ｈ）。ＴＮＦ−αで４時間処理した後、ローダミンＧで標識化された白血球の蓄積は、野生型骨髄で再構成された野生型マウス中に比べて、野生型骨髄で再構成されたＭｉｆ-／-マウス中では減少した。骨髄のＣＸＣＲ２の欠乏による白血球蓄積の減少は、キメラのＭｉｆ-／-マウス中よりもキメラの野生型マウス中でより著しく確認された（図５ｇ，ｈ）。
【０２３２】
実施例７
インビボでのＭＩＦ誘発性炎症はＣＸＣＲ２に依存した。
アテローム発生の、又は炎症性の疾患下でのＭＩＦ媒介性の白血球の動員に関するＣＸＣＲ２の重要性は、インビボで確証された。大動脈基部の管腔表面への単球の接着は、初期のアテローム性動脈硬化を有するＭｉｆ＋／＋Ｌｄｌｒ-／-マウスに対して初期のアテローム性動脈硬化を持つＭｉｆ-／-Ｌｄｌｒ-／-マウスで減少し、これは病変マクロファージ内容物の著しい減少と類似していた（図６ａ）。精巣挙筋中の微小循環の生体顕微鏡検査は、その筋に隣接したＭＩＦの注入が、後毛細血管細静脈中で（大部分はＣＤ６８＋の）白血球の接着及び遊出の著しい増加をもたらしたことを明らかにし、このことはＣＸＣＲ２に対する抗体により抑制されたものである（図６ｂ，ｃ）。循環する単球の数値は影響されなかった。
【０２３３】
次に、ＭＩＦ誘発性の腹膜炎のモデルが、野生型又はＩｌ８ｒｂ-／-骨髄で再構成されたキメラマウスで用いられた。ＭＩＦの腹腔内注射が４時間後、野生型骨髄を有するマウス内で好中球動員を引き起こし、このことはＩｌ８ｒｂ-／-骨髄を有するマウス内では妨げられた（図６ｄ）。集約すると、これらの結果はＭＩＦがＣＸＣＲ２を介して、インビボでアテローム発生の及び炎症性の疾患下で、白血球動員を引き起こすことを明示した。
【０２３４】
ＭＩＦを標的とすることがアテローム性動脈硬化の退行をもたらした。
本明細書中に記載されるように、ＭＩＦはＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４の両方を介して作用した。アテローム性動脈硬化症の進行におけるＭＩＦ及びＣＸＣＲ２の役割を前提として、ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２よりもむしろＭＩＦを標的とすることが、進行した病変及びそれらのＣＸＣＲ２＋単球及びＣＸＣＲ４＋Ｔ細胞の内容物を修飾するための方法として調査された。１２週間高脂肪食を与えられ、深刻なアテローム性動脈硬化症を発症したアポｅ-／-マウスは、ＭＩＦ、ＣＸＣＬ１、又はＣＸＣＬ１２に対する中和抗体で４週間処理された。免疫ブロット分析及び接着アッセイを用いることによって、ＭＩＦ抗体の特異性が検証された。これらのアッセイは、ＭＩＦ抗体が、ＣＸＣＬ１誘発性又はＣＸＣＬ８誘発性のものではなく、ＭＩＦ誘発性の阻止を遮断したことを確認した（図１０）。
【０２３５】
ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２ではなくＭＩＦの遮断が、１６週で大動脈基部においてプラーク面積の減少をもたらし、そして１２週で基準値と比較して著しい（Ｐ＜０．０５）プラークの退縮をもたらした（図６ｅ，ｆ）。加えて、ＣＸＣＬ１又はＣＸＣＬ１２ではなくＭＩＦの遮断が、１６週のそれほど炎症的ではないプラーク表現型に関連付けられ、このことはマクロファージ及びＣＤ３＋Ｔ細胞の両方の低い含有量によって証明される（図６ｇ，ｈ）。それゆえ、進行したアテローム性動脈硬化症の治療上の退行及び安定化が、ＭＩＦを標的とすることにより、及びＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４の活性化を抑制することにより、成し遂げられた。いくつかの実施形態において、本発明は、それを必要とする個体のプラーク面積を縮小する方法を備え、この方法は、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合、及び／又は（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化；又は（ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）の任意の組合せ、を抑制する１以上の薬剤を前述の個体に投与する工程を備える。
【０２３６】
実施例８
ＣＸＣＲ４による干渉がアテローム性動脈硬化を悪化させる。
アテローム性動脈硬化におけるＣＸＣＲ４の役割を研究するため、高脂肪食を与えられたアポｅ−／−マウスが、浸透圧ミニポンプを介してＣＸＣＲ４アンタゴニストＡＭＤ３４６５又はビヒクル（対照群）で連続的に処理され、そしてアテローム性動脈硬化のプラークの形成が１２週間後分析される。対照群と比較して、ＡＭＤ３４６５処理は、オイルレッドＯで染色された大動脈基部の切片中で（図９ａ）、そして正面（en face)で調製された胸腹部大動脈中で（図９ｂ）病変形成を著しく悪化させる。加えてＡＭＤ３４６５によるアポｅ−／−マウスの連続的処理は２日以内に明白な血中の白血球増加を誘発し、それを研究期間中持続する。さらにこの連続的処理は循環好中球の相対数の拡大を誘発し、このことはさらに疾患進行中に増加する（図９ｃ）。
【０２３７】
実施例９
多発性硬化症のマウスモデルにおける遮断Ｔｈ−１７による発症
生後８乃至１２週間のＣ５７ＢＬ／６マウス（The Jackson Laboratory, Bar Harbor, Main, USAから獲得）は、前日（−１日目）に前処理され、その後、対照抗体（グループ１）、アンタゴニスト抗マウスＭＩＦ抗体（グループ２）、ＣＸＣＲ２のＭＩＦ結合及び／又は活性化を遮断するＣＸＣＲ２に対する抗体（グループ３）、ＣＸＣＲ４のＭＩＦ結合及び／又は活性化を遮断するＣＸＣＲ４に対する抗体（グループ４）、又は、ＣＸＣＲ４のＭＩＦ結合及び／又は活性化を遮断するＣＸＣＲ４に対する抗体及びＣＸＣＲ２のＭＩＦ結合及び／又は活性化を遮断するＣＸＣＲ２に対する抗体（グループ５）のいずれかを、毎週、５ｍｇ／ｋｇ腹腔内注射する。マウス（ｎ＝グループごとに３０）は、翌日（０日目）に、ＣＦＡ中の全部で２００μｌの乳化したＭＯＧ３５−５５ペプチド（ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ；Bachem AG社、スイス、ブーベンドルフ）を、背中に２度、皮下注射することによって免疫性を与えた。ペプチド及び結核菌の最終濃度は、それぞれ、１５０μｇ／マウス、及び、１ｍｇ／マウスである。ＰＴＸ（４００ｎｇ；LIST Biological Laboratories Inc.、米国カリフォルニア州カンベル）は、０日目及び２日目に、腹腔内に注入される。疾患は、上記の０乃至６のスケールで、麻痺を測定することによって毎日モニタされる。平均的な最大疾患スコアが一方向ＡＮＯＶＡを用いて各群で比較された。
【０２３８】
麻痺測定が、グループ２のマウスとグループ１とで比較されることによって、ＥＡＥを処置又は予防するための、アンタゴニスト抗ＭＩＦ抗体の有効性を測定する。グループ５のマウスは、ＥＡＥを処置又は予防するための、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４のＭＩＦ結合及び／又は活性化を遮断する薬剤の有効性を測定するために、グループ１のマウスと比較された。グループ５のマウスは、ＣＸＣＲ２又はＣＸＣＲ４を個別に遮断する効果に対して、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４の双方のＭＩＦ結合及び／又は活性化を遮断する効果を測定するために、グループ３及び４と比較される。
【０２３９】
混合Ｔ細胞は、免疫性を与えた後、７−１１日目に、流入領域リンパ節及び脾臓から作られる。生存細胞（3.75 × 106/ml）は、様々な濃度で、（再刺激された）ＭＯＧペプチド（アミノ酸３５−５５）を含む、又は、含まない完全培地で、培養される。活性化細胞からの上清が７２時間後に採取され、ＴＮＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２３、及び、ＩＬ−１７が、ＥＬＩＳＡ（BD Pharmingen社）によって測定された。高いＩＬ−１７及びＩＬ−２３のレベルは、Ｔｈ−１７細胞と、Ｔｈ−１７媒介性疾患表現型の発症を示している。ＭＩＦ遮断抗体（グループ２）によるマウス又は細胞培養の処理、又は、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４（グループ５）双方のＭＩＦ結合及び／又は活性化の遮断による、このようなサイトカインの抑制は、Ｔｈ−１７細胞の発症、及び、Ｔｈ−１７媒介性炎症性疾患（つまり、多発性硬化症）の進行における、ＭＩＦの重要な制御的役割を示している。
【０２４０】
細胞内のサイトカイン染色のため、免疫性を与えたマウスからの脾臓及びリンパ節細胞は、ペプチド抗原で２４時間、刺激され、ゴルジプラグ（GolgiPlug）（BD Pharmingen社）が最後の５時間に加えられるか、又は、５００ｎｇ／ｍｌのイオノマイシン、及び、５０ｎｇ／ｍｌのホルボール12-ミリスチン酸13-酢酸（PMA；Sigma-Aldrich社）に加えて、ゴルジプラグが５時間加えられる。細胞染色のために、細胞は、製造業者のプロトコルに従って、Cytofix／Cytoperm Plus Kit（BD Pharmingen社）で透過処理される。ゲート（Gated）ＣＤ４−陽性Ｔ細胞は、細胞内のＩＬ−１７、ＩＬ−２３、又は、細胞表面ＩＬ２３受容体（ＩＬ２３Ｒ）の存在に関して、フローサイトメトリーによって解析される。ＣＤ４＋、ＩＬ−１７＋二重陽性のＴ細胞の存在は、疾患の進行を駆り立てるＴｈ−１７表現型の発症を示す。さらに、ＣＤ４＋、ＩＬ−１７二重陽性細胞上のＩＬ−２３の上方制御は、Ｔｈ−１７表現型を裏付ける証拠を提供する。ＣＤ４＋、ＩＬ−１７二重陽性細胞、又は、任意の白血球に、高細胞内ＩＬ−２３が存在していることは、Ｔｈ−１７細胞の増殖及び／又は.維持を駆り立てるＩＬ２３Ｒを裏付ける更なる証拠を提供するものである。ＭＩＦ遮断薬（グループ２のマウス）、又は、ＣＸＣＲ２及びＣＸＣＲ４（グループ５のマウス）のＭＩＦ結合／又は活性化を遮断する薬剤で、マウスを処理することによって、上記実験に記載の如く、低レベルのＩＬ−１７、ＩＬ−２３Ｒ、又は、ＩＬ−２３で定められるＴｈ−１７細胞の発症が抑制されることは、Ｔｈ−１７媒介性の自己免疫疾患の進行を駆り立てることにおけるＭＩＦの主要な役割を実証するものである。ＭＩＦを遮断することによって、マウスにおけるＴｈ−１７細胞の発症及びＥＡＥ進行が抑制されることは、（ｉ）ＭＩＦのＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４との結合、及び／又は、（ｉｉ）ＣＸＣＲ２及び／又はＣＸＣＲ４のＭＩＦ活性化、又は、（ｉｉｉ）多発性硬化症などのＴｈ−１７媒介性自己免疫性疾患の処置及び／又は予防のための、（ｉ）及び（ｉｉ）の 任意の組み合わせを抑制する薬剤の、有益な実用性を実証するものである。
【０２４１】
実施例１０
ＭＩＦドメイン破壊剤の同定
ＣＸＣＲ２の細胞外Ｎ―末端ドメインを覆うペプチドのライブラリが生成される。ペプチドは約１２個のアミノ酸から約１５個のアミノ酸の大きさにわたる。
【０２４２】
ペプチドライブラリは、ＨＴＳ  ＧＰＣＲスクリーニング技術を用いて、ＣＸＣＲ２を介したＭＩＦ媒介性シグナル伝達を抑制するためにスクリーンされる。
【０２４３】
ＭＩＦ媒介性シグナル伝達を抑制するペプチドは次に、ＣＸＣＲ２上のＩｌ−８及び/又はＳＤＦ−１媒介性シグナル伝達を抑制するためにスクリーンされる。
【０２４４】
ＣＸＣＲ２を介したＭＩＦ媒介性シグナル伝達を抑制するものの、ＣＸＣＲ２を介したＳＤＦ−１及びＩＬ−８媒介性シグナル伝達を許可するペプチドが、更に調査するために選択される。
【０２４５】
実施例１１
ＭＩＦ三量体形成破壊剤の同定
ＭＩＦのアミノ酸残基３８−４４（β−２鎖）を備えるポリペプチドが生成される。  
【０２４６】
ポリペプチドは、ＨＴＳ  ＧＰＣＲスクリーニング技術を用いて、ＣＸＣＲ２を介したＭＩＦ媒介性シグナル伝達を抑制するためにスクリーンされる。
【０２４７】
ＭＩＦ媒介性シグナル伝達を抑制するポリペプチドは次に、ＣＸＣＲ２上のＩｌ−８及び/又はＳＤＦ−１媒介性シグナル伝達を抑制するためにスクリーンされる。
【０２４８】
ＣＸＣＲ２を介したＭＩＦ媒介性シグナル伝達を抑制するものの、ＣＸＣＲ２を介したＳＤＦ−１及びＩＬ−８媒介性シグナル伝達を許可するペプチドが、更に調査するために選択される。
【０２４９】
実施例１２
ヒト臨床試験
研究目的：本研究の主要な目的は、ホモ接合性家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）を有する個体において、ペプチド  ２（Ｃ−ＫＥＹＦＹＴＳＧＫＣＳＮＰＡＶＶＦＶＴＲ−Ｃ）（Ｐ２；２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ）の有効性を査定することである。
【０２５０】
方法
研究デザイン：これは、ＨｏＦＨを用いた、１８歳以上の男女における、多目的な、非盲検の、定型的な配合Ｐ２の単一群強制の滴定研究（single-group forced titration study）である。初期スクリーンの後、資格を満たした個体は、４週間のスクリーニング期間に突入する。このスクリーニング期間は、２度の来診（−４週目及び−１週目）からなり、この期間中、すべての高脂血症治療薬が中断されるとともに（胆汁酸捕捉剤及びコレステロール吸収抑制剤を除く）、治療のための生活習慣改善カウンセリング（therapeutic lifestyle change counseling）（ＴＬＣ）が、全米コレステロール教育プログラム（ＮＣＥＰ）の成人治療委員会（Adult Treatment Panel）（ＡＴＰ−ＩＩＩ）の臨床ガイドライン又は同等物にしたがって、開始される。すでにアフェレシス療法にある個体は、研究期間中に一貫した状態及び間隔を維持する処置計画を継続する。３度目の来診で（０週目）、ベースラインの効果／安全値が測定され、個体は６週間１日１回（ＱＤ）、Ｐ２（２０ｍｇ）の初期用量で処置が開始される。６週目（４度目の来診）で、用量は６週間１日１回、Ｐ２（４０ｍｇ）に設定され、個体が以前の用量を許容する場合、１２週目（５度目の来診）で、用量は再び６週間１日１回、Ｐ２（８０ｍｇ）に設定される。最後の来診（６度目の来診）は１８週目になる。研究のための来診は、適用可能な場合には、来診手順の直前に起こる個体のアフェレシス処置に合わせられている。アフェレシス療法間の間隔が研究用の薬物療法期間と調整しにくい場合、次に予定されているアフェレシス療法まで、及び、その間隔が元々の時間の長さに戻るまで、個体は同じ薬物療法期間に置かれる。効果測定は、前回のアフェレシス療法の少なくとも２週間後、及び、研究来診の日に予定されるアフェレシス療法直前に行われる。
【０２５１】
参加者数：３０人から５０人。
【０２５２】
診断及び主な選定基準：世界保健機関のガイドラインによる家族性高コレステロール血症（ＦＨ）ホモ接合体の明確な証拠を有する１８歳以上の男女であるとともに、２１歳以上の個体については空腹時血清トリグリセリド（ＴＧ）が４００ｍｇ／ｄＬ（4.52 mmol/L）以下で、１８〜２０歳までの個体については２００ｍｇ／ｄＬ（2.26 mmol/L）である個体が、研究に参加するために審査される。
【０２５３】
研究処置：６週間３回の非盲検の処置期間中、個体は朝食直後、食事と共に１日１回錠剤を１錠摂取する。下方滴定（down titration）は許可されない。個体が容量の増加を許容できない場合、研究を中断する。
【０２５４】
効果測定：主要な終点は、ベースラインから各々の処置期間（即ち、６週目、１２週目、及び１８週目）の終わりまでの、ＨＤＬ−Ｃ及びＬＤＬ−Ｃにおける平均的なパーセント変化である。ＨＤＬ−Ｃ及びＬＤＬ−Ｃを含む脂質プロファイルは、それぞれの研究来診において得られる。
【０２５５】
安全性評価: 安全性は、日常的な臨床研究所の評価(−４週目、０週目、及び１８週目での血液学及び検尿パネル、及び６週目並びに１２週目での化学も同様に)を用いて査定される。バイタルサインは毎回の来診でモニタされ、身体検査及び心電図（ＥＧＧ）は０週目及び１８週目に行われる。尿妊娠検査（Urine pregnancy testing）は、−１週目を除いた毎回の来診で実行される。個体は０週目から１８週目まで有害イベント（ＡＥ）をモニタされる。１８週目の安全性査定は、これが起こるのであれば初期の終結で達成される。
【０２５６】
統計的な方法: 主な有効性終点は、ベースラインから各々の処置期間（即ち、６週目、１２週目、及び１８週目）の終わりまでの、ＨＤＬ−Ｃ及びＬＤＬ−Ｃにおけるパーセント変化である。主な有効性分析個体群（The primary efficacy analysis population）は、完全分析セット（the full analysis set）（ＦＡＳ）であり、完全分析セットは研究薬を少なくとも１用量受けた全ての固体を含み、各々の分析期間でベースライン及び少なくとも１つの妥当なポストベースライン（post-baseline）測定の両方を有した。
【０２５７】
主な有効性終点は、パーセント（又は名目上の）変化のサンプルの平均値、それらの９５％の信頼区間（ＣＩ）、１−サンプル  ｔ−検定統計量、及び対応するｐ−値の算出を介して分析される。異なる用量レベル間の増加性処置の差異もまた測定され、９５％のＣＩが得られる。仮定試験は、複数回繰り返された検定全体において第一種の過誤の割合が５％（an overall family-wise type I error rate of 5%）（即ち、ｐ＝０．０５の有意性レベル）である、両側検定である。 ホックベルグの手順（Hochberg's procedure）は、多重比較に関する複数回繰り返された検定における過誤の割合（the family-wise error rate）を制御するために使用される。
【０２５８】
実施例１３
腹部大動脈瘤（ＡＡＡ）の処置のための動物モデル
動物モデルは、以下の様に用意される。生体の雄ラットは、２時間、エラスターゼを注入される。組織学的解析が、注入後１２−２４時間に行われることによって、断片化したエラスチン及び破壊されたエラスチンが存在することを確認する。超音波は、大動脈拡大領域を同定及びモニタするために、日々行われる。
【０２５９】
エラスターゼの投与後２週間、ラットは、ペプチド２（Ｐ２；Ｃ−ＫＥＹＦＹＴＳＧＫＣＳＮＰＡＶＶＦＶＴＲ−Ｃ）を投与される。Ｐ２の初回投与は、０．５ｍｇ／時間の速度で注入される。注入毒性が存在しない場合、０．５ｍｇ／時間の増加注入速度は、３０分ごとに、最大で２．０ｍｇ／時間まで増える。その後の各週、Ｐ２は、１．０ｍｇ／時間の速度で注入される。注入毒性が存在しない場合、１．０ｍｇ／時間の増加速度は、３０分間隔で、最大で４．０ｍｇ／時間まで増える。
【０２６０】
有効性評価：主な終点は、ベースラインから３週目、６週目、及び、１２週目までの、ＡＡＡの大きさ（すなわち、大動脈直径）の平均的なパーセント変化である。
【０２６１】
例１４
腹部大動脈瘤（ＡＡＡ）を処置するためのヒト臨床試験
研究目的：本研究の主要な目的は、初期のＡＡＡを有する固体用いて、個体のペプチド２（Ｐ２；Ｃ−ＫＥＹＦＹＴＳＧＫＣＳＮＰＡＶＶＦＶＴＲ−Ｃ）の有効性を査定することである。
【０２６２】
方法
研究デザイン：これは、初期ＡＡＡを用いた、１８歳以上の男女における、多目的な、非盲検の、Ｐ２の単独群研究である。初期ＡＡＡの存在は、連続断層像を用いて確認される。０週目にベースラインの効果／安全性が測定され、個体はＰ２の初回投与による処置を開始される。非検体は、１２週間、週に一度、Ｐ２を投与される。
【０２６３】
参加者数：３０人から５０人。
【０２６４】
研究処置：Ｐ２の初回投与は、５０ｍｇ／時間の速度で被検体に注入される。注入毒性が存在しない場合、５０ｍｇ／時間の増加注入速度は、３０分ごとに、最大で４００ｍｇ／時間まで増える。その後の各週、Ｐ２は１００ｍｇ／時間の速度で注入される。注入毒性が存在しない場合、１００ｍｇ／時間の増加速度は、３０分間隔で、最大で４００ｍｇ／時間まで増える。
【０２６５】
有効性評価：主な終点は、ベースラインから３週目、６週目、及び、１２週目までの、ＡＡＡの大きさ（すなわち、大動脈直径）の平均的なパーセント変化である。
【０２６６】
本発明の好適な実施形態が本明細書中に示され、記載される一方で、そのような実施形態がほんの一例にすぎないことは、当業者にとって自明のことである。多くの変更、変化、代用形態は、本発明を逸脱することなく当業者には思い当たることである。本明細書に記載の本発明の実施形態に対する様々な代替物は、本発明を実施する際に使用可能であることを理解されたい。以下の特許請求の範囲は本発明の範囲を定義するとともに、特許請求の範囲及び同等物の範囲内の方法及び構造はそれによって包含されるものであることが意図されている。
【図１ｃ】
2011526244.tif 000005
【図１ｄ】
2011526244.tif 000006
【図１ｇ】
2011526244.tif 000007
【図１ｈ】
2011526244.tif 000008
【図２ａ】
2011526244.tif 000009
【図２ｂ】
2011526244.tif 000010
【図２ｄ】
2011526244.tif 000011
【図２ｅ】
2011526244.tif 000012
【図２ｆ】
2011526244.tif 000013
【図２ｇ】
2011526244.tif 000014
【図２ｈ】
2011526244.tif 000015
【図３ａ】
2011526244.tif 000016
【図３ｂ】
2011526244.tif 000017
【図３ｄ】
2011526244.tif 000018
【図３ｆ】
2011526244.tif 000019
【図１１】
2011526244.tif 000020
【図１ａ】
2011526244.tif 000021
【図１ｂ】
2011526244.tif 000022
【図１ｅ】
2011526244.tif 000023
【図１ｆ】
2011526244.tif 000024
【図２ｃ】
2011526244.tif 000025
【図３ｃ】
2011526244.tif 000026
【図３ｅ】
2011526244.tif 000027
【図３ｇ】
2011526244.tif 000028
【図４ａ】
2011526244.tif 000029
【図４ｂ】
2011526244.tif 000030
【図４ｃ】
2011526244.tif 000031
【図４ｄ】
2011526244.tif 000032
【図４ｅ】
2011526244.tif 000033
【図４ｆ】
2011526244.tif 000034
【図４ｇ】
2011526244.tif 000035
【図４ｈ】
2011526244.tif 000036
【図５ａ】
2011526244.tif 000037
【図５ｂ】
2011526244.tif 000038
【図５ｃ】
2011526244.tif 000039
【図５ｄ】
2011526244.tif 000040
【図５ｅ】
2011526244.tif 000041
【図５ｆ】
2011526244.tif 000042
【図５ｇ】
2011526244.tif 000043
【図５ｈ】
2011526244.tif 000044
【図６】
2011526244.tif 000045
【図７】
2011526244.tif 000046
【図８】
2011526244.tif 000047
【図９ａ】
2011526244.tif 000048
【図９ｂ】
2011526244.tif 000049
【図９ｃ】
2011526244.tif 000050
【図１０】
2011526244.tif 000051
【国際調査報告】
2011526244.tif 000052
2011526244.tif 000053
2011526244.tif 000054