(57)【要約】  本発明は、アプリジンの、ソラフェニブ、テムシロリムス及びスニチニブから選択される別の抗癌薬との組合せ、ならびに癌の治療におけるこれらの組合せの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に治療上有効な量のアプリジンまたはその医薬として許容し得る塩、ならびにソラフェニブ、テムシロリムス及びスニチニブまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される治療上有効な量の別の抗癌薬を投与するステップを含む、方法。
【請求項２】
癌の治療において、ソラフェニブ、テムシロリムス及びスニチニブから選択される抗癌薬の治療効果を増強する方法であって、それを必要とする患者に治療上有効な量のアプリジンまたはその医薬として許容し得る塩を投与するステップを含む、方法。
【請求項３】
アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩、ならびにソラフェニブ、テムシロリムス及びスニチニブまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される前記別の抗癌薬が、同一組成物の部分を構成する、請求項1または2に記載の方法。
【請求項４】
アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩、ならびにソラフェニブ、テムシロリムス及びスニチニブまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される前記別の抗癌薬が、同時にまたは異なる時点で投与するための別々の組成物として提供される、請求項1または2に記載の方法。
【請求項５】
アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩、ならびにソラフェニブ、テムシロリムス及びスニチニブまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される前記別の抗癌薬が、異なる時点で投与するための別々の組成物として提供される、請求項4に記載の方法。
【請求項６】
アプリジンと併用される前記抗癌薬が、ソラフェニブまたはその医薬として許容し得る塩である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
アプリジンと併用される前記抗癌薬が、テムシロリムスまたはその医薬として許容し得る塩である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
アプリジンと併用される前記抗癌薬が、スニチニブまたはその医薬として許容し得る塩である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
治療すべき癌が、腎臓癌、肝細胞癌、メラノーマ、乳癌、肺癌、膵臓癌、神経芽細胞腫、及び消化管間質性腫瘍(GIST)から選択される、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法のための薬剤を製造するための、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩の使用。
【請求項１１】
請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法のための薬剤を製造するための、ソラフェニブ、テムシロリムス及びスニチニブまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される抗癌薬の使用。
【請求項１２】
請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法のための、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩。
【請求項１３】
請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法のための、ソラフェニブ、テムシロリムス及びスニチニブまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される抗癌薬。
【請求項１４】
アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩、ならびにソラフェニブ、テムシロリムス及びスニチニブまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬を含む医薬組成物。
【請求項１５】
癌の治療で使用するためのキットであって、一剤形のアプリジンまたはその医薬として許容し得る塩、ソラフェニブ、テムシロリムス及びスニチニブまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される一剤形の別の抗癌薬、ならびに双方の薬物を併用して使用するための説明書を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アプリジンと他の抗癌薬との、特に、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスから選択される他の抗癌薬との組合せ、ならびに癌治療におけるこれらの組合せの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌は、身体の一部の細胞が制御されずに増殖し始めると、発生する。癌には多くの種類があるが、それらは、すべて、異常な細胞の制御されない増殖から生じる。癌細胞は、近傍組織を侵襲することができ、かつ血流及びリンパ系を介して身体の他の部分に拡がることができる。癌には、いくつかの主な型がある。癌腫は、悪性新生物であり、上皮細胞から生じる制御されていない進行性の異常増殖である。上皮細胞は、臓器、脈管及びその他の小腔の内膜を含む、身体の内表面及び外表面を覆っている。肉腫は、骨、軟骨、脂肪、筋肉、血管、またはその他の結合もしくは支持組織内の細胞から生じる癌である。白血病は、骨髄などの造血組織中に生じ、多数の異常血球の産生を引き起こし、血流に入り込む癌である。リンパ腫及び多発性骨髄腫は、免疫系の細胞から生じる癌である。
【０００３】
加えて、癌は、侵襲性であり、周囲の組織に浸潤し、転移を起こす傾向がある。癌は、周囲の組織中に直接的に拡がることができ、リンパ系及び循環系を介して身体の他の部分に拡がる可能性もある。
【０００４】
限局性疾患のための手術及び放射線、ならびに化学療法を含む多くの治療法が、癌に対して利用可能である。しかし、多くの型の癌に対して利用可能な治療法の効力は、限られており、臨床的利益を示す改善された新たな治療形態が必要とされている。このことは、進行性及び/または転移性疾患を呈しているそれらの患者にとって、及び、確立された療法で前に治療された後に、耐性の獲得または付随する毒性による療法の適用制限によって無効または不耐容となっている進行性疾患を再発している患者にとって、特に当てはまる。
【０００５】
１９５０年代以来、化学療法による癌の管理において、重要な進歩があった。残念ながら、すべての癌患者の50%超は、初期療法に応答しないか、あるいは治療への初期応答の後に再発を経験し、結局、進行性の転移性疾患で死亡する。したがって、新規抗癌薬の設計及び発見に対する継続的関与が、決定的に重要である。
【０００６】
その古典的形態において、化学療法は、DNA、RNA及びタンパク質の合成を含む細胞の全般的代謝過程を標的とすることによって、急速に増殖している癌細胞を死滅させることに主として焦点を合わせていた。化学療法薬は、それらが癌細胞内の特定の化学物質にどのように影響を及ぼすか、該薬物が細胞のどの活動または過程を妨害するか、及び該薬物が細胞周期のどの特定の段階に影響を及ぼすかに基づいていくつかの群に分けられる。最も一般的に使用される型の化学療法薬には、DNA-アルキル化薬(シクロホスファミド、イフォスファミド、シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジンなど)、代謝拮抗薬(5-フルオロウラシル、カペシタビン、6-メルカプトプリン、メトトレキサート、ゲムシタビン、シタラビン、フルダラビンなど)、有糸分裂阻害薬(パクリタキセル、ドセタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチンなど)、アントラサイクリン(ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロンなど)、トポイソメラーゼI及びII阻害薬(トポテカン、イリノテカン、エトポシド、テニポシドなど)、及びホルモン療法薬(タモキシフェン、フルタミドなど)が含まれる。
【０００７】
理想的な抗腫瘍薬は、非癌細胞に対するその毒性に比較してかけ離れた指数で癌細胞を選択的に死滅させ、さらに、該薬物への長期暴露の後でさえも、癌細胞に対するその効力を保持する。残念ながら、既知薬剤を用いる現在のいずれの化学療法も、理想的なプロフィールを所持しない。ほとんどは、極めて狭い治療指数を所持し、加えて、わずかに致死量以下の濃度の化学療法薬に暴露された癌性細胞は、このような薬剤に対する耐性を、そして、他のいくつかの抗腫瘍薬に対してかなり頻繁に交差耐性を発現する可能性がある。
【０００８】
アプリジン(デヒドロジデムニンB)は、地中海の海洋性被嚢類であるアプリジウム・アプリカンス(Aplidium albicans)から単離された環状デプシペプチドであり、国際公開第91/04985号の主題である。これは、ジデムニンとして知られる化合物に関連付けられ、次の構造を有する：
【０００９】
【化１】
2011513429.tif 000002
【００１０】
アプリジン、その使用、製剤及び合成に関するさらなる情報は、特許出願、国際公開第91/04985号、同99/42125号、同01/35974号、同01/76616号、同2004/084812号、同02/30441号、同02/02596号、同03/33013号、同2004/080477号、同2004/080421号、同2007/101235号、同2008/135793号、及びPCT/EP2008/064117中に見出すことができる。本発明者らは、これらの特許出願本文のそれぞれの内容を具体的に参照して援用する。
【００１１】
動物での前臨床研究及びヒトでの第I相臨床研究の双方において、アプリジンは、白血病及びリンパ腫を含む広範な範囲の腫瘍型に対して細胞傷害能を有することが示されている。例えば、以下の文献を参照されたい：
Faircloth, G. et al.:「Dehydrodidemnin B(DDB) a new marine derived anticancer agent with activity against experimental tumour models」、9th NCI-EORTC Symp. New Drugs Cancer Ther. (March 12〜15, Amsterdam) 1996, Abst 111;
Faircloth, G. et al.:「Preclinical characterization of aplidine, a new marine anticancer depsipeptide」Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. 1997, 38: Abst 692;
Depenbrock H, Peter R, Faircloth GT, Manzanares I, Jimeno J, Hanauske AR.:「In vitro activity of aplidine, a new marine-derived anticancer compound,on freshly explanted clonogenic human tumour cells and haematopoietic precursor cells」Br. J. Cancer, 1998; 78: 739〜744;
Faircloth G, Grant W, Nam S, Jimeno J, Manzanares I, Rinehart K.:「Schedule-dependency of aplidine, a marine depsipeptide with antitumor activity」Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 1999; 40: 394;
Broggini M, Marchini S, D’Incalci M, Taraboletti G, Giavazzi R, Faircloth G, Jimeno J.:「Aplidine blocks VEGF secretion and VEGF/VEGF-R1 autocrine loop in a human leukemic cell line」Clin Cancer Res. 2000; 6 (suppl): 4509;
Erba E, Bassano L, Di Liberti G, Muradore I, Chiorino G, Ubezio P, Vignati S, Codegoni A, Desiderio MA, Faircloth G, Jimeno J and D'Incalci M.:「Cell cycle phase perturbations and apoptosis in tumour cells induced by aplidine」Br. J. Cancer 2002; 86: 1510〜1517;
Paz-Ares L, Anthony A, Pronk L, Twelves C, Alonso S, Cortes-Funes H, Celli N, Gomez C, Lopez-Lazaro L, Guzman C, Jimeno J, Kaye S:「Phase I clinical and pharmacokinetic study of aplidine, a new marine didemnin,administered as 24-hour infusion weekly」Clin. Cancer Res. 2000; 6 (suppl): 4509;
Raymond E, Ady-Vago N, Baudin E, Ribrag V, Faivre S, Lecot F, Wright T, Lopez Lazaro L, Guzman C, Jimeno J, Ducreux M, Le Chevalier T, Armand JP.:「A phase I and pharmacokinetic study of aplidine given as a 24-hour continuous infusion every other week in patients with solid tumor and lymphoma」Clin. Cancer Res. 2000; 6 (suppl): 4510;
Maroun J, Belanger K, Seymour L, Soulieres D, Charpentier D, Goel R, Stewart D, Tomiak E, Jimeno J, Matthews S.:「Phase I study of aplidine in a 5 day bolus q 3 weeks in patients with solid tumors and lymphoma」Clin. Cancer Res. 2000; 6 (suppl): 4509;
Izquierdo MA, Bowman A, Martinez M, Cicchella B, Jimeno J, Guzman C, Germa J, Smyth J.:「Phase I trial of aplidine given as a 1 hour intravenous weekly infusion in patients with advanced solid tumors and lymphoma」Clin. Cancer Res. 2006; 6 (suppl): 4509。
【００１２】
機構研究は、アプリジンが、ALL-MOLT4細胞中でのVEGF分泌を遮断できることを示し、低濃度(5nM)でのin vitro細胞傷害活性が、新生または再発性のALL及びAMLを有する小児患者に由来するAML及びALLの検体中で観察されている。アプリジンは、薬物でin vitro治療された白血病細胞においてG1及びG2分裂停止の双方を誘発すると思われる。VEGF受容体の下向き調節は別として、アプリジンの作用様式について、他にはほとんど知られていない。
【００１３】
アプリジンを用いた第I相臨床研究では、骨髄毒性を防止するために、L-カルニチンを、24時間前治療として与えるか、あるいは共投与した(例えば、国際公開第02/30441号を参照されたい)。L-カルニチンの共投与は、薬物誘導性筋毒性からの回復を改善すると考えられる。
【００１４】
アッセイされる薬物の組合せが、白血病及びリンパ腫を治療するための併用療法において有用であるかどうかを評価するため、以前に、in vitro及びin vivoでのアッセイが、他の抗癌薬と組み合わせたアプリジンを用いて実施された。国際公開第2004/080421号では、アプリジンを、メトトレキサート、シトシンアラビノシド、ミトキサントロン、ビンブラスチン、メチルプレドニゾロン及びドキソルビシンと組み合わせて、白血病及びリンパ腫の治療について詳細に評価した。一方、国際公開第2007/101235号では、アプリジンを、特に、パクリタキセル、ドキソルビシン、シスプラチン、三酸化砒素、5-フルオロウラシル、シトシンアラビノシド、カルボプラチン、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン、エトポシド、メルファラン、デキサメタゾン、シクロホスファミド、ボルテゾミブ、エルロチニブ、トラスツズマブ、レナリドミド、インターロイキン-2、インターフェロン-α2、ダカルバジン、ベバシズマブ、イダルビシン、サリドマイド及びリツキシマブと組み合わせて、肺癌、乳癌、結腸癌、前立腺癌、腎臓癌、メラノーマ、多発性骨髄腫、白血病及びリンパ腫の治療について評価した。国際公開第2008/135793号では、アプリジンを、ヒト患者において両薬物の組合せの投与を実行できる投与スケジュール及び投与量を準備し、カルボプラチンと組み合わせて詳細に評価した。最後に、PCT/EP2008/064117では、アプリジンを、ゲムシタビンと組み合わせて、膵臓癌腫の治療について詳細に評価した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】国際公開第91/04985号
【特許文献２】国際公開第99/42125号
【特許文献３】国際公開第01/35974号
【特許文献４】国際公開第01/76616号
【特許文献５】国際公開第2004/084812号
【特許文献６】国際公開第02/30441号
【特許文献７】国際公開第02/02596号
【特許文献８】国際公開第03/33013号
【特許文献９】国際公開第2004/080477号
【特許文献１０】国際公開第2004/080421号
【特許文献１１】国際公開第2007/101235号
【特許文献１２】国際公開第2008/135793号
【特許文献１３】PCT/EP2008/064117
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Faircloth, G. et al.:「Dehydrodidemnin B(DDB) a new marine derived anticancer agent with activity against experimental tumour models」、9th NCI-EORTC Symp. New Drugs Cancer Ther. (March 12〜15, Amsterdam) 1996, Abst 111
【非特許文献２】Faircloth, G. et al.:「Preclinical characterization of aplidine, a new marine anticancer depsipeptide」Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. 1997, 38: Abst 692
【非特許文献３】Depenbrock H, Peter R, Faircloth GT, Manzanares I, Jimeno J, Hanauske AR.:「In vitro activity of aplidine, a new marine-derived anticancer compound,on freshly explanted clonogenic human tumour cells and haematopoietic precursor cells」Br. J. Cancer, 1998; 78: 739〜744
【非特許文献４】Faircloth G, Grant W, Nam S, Jimeno J, Manzanares I, Rinehart K.:「Schedule-dependency of aplidine, a marine depsipeptide with antitumor activity」Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 1999; 40: 394
【非特許文献５】Broggini M, Marchini S, D’Incalci M, Taraboletti G, Giavazzi R, Faircloth G, Jimeno J.:「Aplidine blocks VEGF secretion and VEGF/VEGF-R1 autocrine loop in a human leukemic cell line」Clin Cancer Res. 2000; 6 (suppl): 4509
【非特許文献６】Erba E, Bassano L, Di Liberti G, Muradore I, Chiorino G, Ubezio P, Vignati S, Codegoni A, Desiderio MA, Faircloth G, Jimeno J and D'Incalci M.:「Cell cycle phase perturbations and apoptosis in tumour cells induced by aplidine」Br. J. Cancer 2002; 86: 1510〜1517
【非特許文献７】Paz-Ares L, Anthony A, Pronk L, Twelves C, Alonso S, Cortes-Funes H, Celli N, Gomez C, Lopez-Lazaro L, Guzman C, Jimeno J, Kaye S:「Phase I clinical and pharmacokinetic study of aplidine, a new marine didemnin,administered as 24-hour infusion weekly」Clin. Cancer Res. 2000; 6 (suppl): 4509
【非特許文献８】Raymond E, Ady-Vago N, Baudin E, Ribrag V, Faivre S, Lecot F, Wright T, Lopez Lazaro L, Guzman C, Jimeno J, Ducreux M, Le Chevalier T, Armand JP.:「A phase I and pharmacokinetic study of aplidine given as a 24-hour continuous infusion every other week in patients with solid tumor and lymphoma」Clin. Cancer Res. 2000; 6 (suppl): 4510
【非特許文献９】Maroun J, Belanger K, Seymour L, Soulieres D, Charpentier D, Goel R, Stewart D, Tomiak E, Jimeno J, Matthews S.:「Phase I study of aplidine in a 5 day bolus q 3 weeks in patients with solid tumors and lymphoma」Clin. Cancer Res. 2000; 6 (suppl): 4509
【非特許文献１０】Izquierdo MA, Bowman A, Martinez M, Cicchella B, Jimeno J, Guzman C, Germa J, Smyth J.:「Phase I trial of aplidine given as a 1 hour intravenous weekly infusion in patients with advanced solid tumors and lymphoma」Clin. Cancer Res. 2006; 6 (suppl): 4509
【非特許文献１１】www.nexavar.com
【非特許文献１２】Wilhelm SM et al. Cancer Res. 2004, 64, 7099〜7109
【非特許文献１３】www.sutent.com
【非特許文献１４】Bergers G et al. J. Clin. Invest. 2003, 111, 1287〜1295
【非特許文献１５】www.torisel.com
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
癌は、動物及びヒトにおける死亡の主要原因であるので、癌を患う患者に適用されるであろう安全で効果的な療法を獲得するために、いくつかの努力が、過去に企てられ、今なお行われている。本発明によって解決すべき課題は、癌治療において有用である抗癌療法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明は、アプリジンが、他の抗癌薬、特に、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスの効力を増強し、それによって、アプリジン及び他の抗癌薬を、癌を治療するための併用療法で成功裡に使用することができることを立証する。したがって、本発明は、併用療法を利用して癌を治療するための医薬組成物、キット、方法、及び併用療法のための薬剤の製造におけるアプリジンの使用を対象とする。
【００１９】
本発明の一態様によれば、本発明者らは、アプリジンをベースとし、かつソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスから選択される別の抗癌薬を使用する、癌を治療するための効果的な併用療法を提供する。
【００２０】
別の実施形態において、本発明は、このような治療を必要とする患者に、治療上有効な量のアプリジンまたはその医薬として許容し得る塩、ならびにソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択され、アプリジンを投与する前に、投与中に、または投与後に投与される治療上有効な量の別の抗癌薬を投与することを含む、癌の治療方法を包含する。この2種の薬物は、同一組成物の部分を構成してもよいし、あるいは、同時にまたは異なる時点で投与するための別々の組成物として提供することもできる。
【００２１】
別の態様において、本発明は、癌治療においてソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスから選択される抗癌薬の治療効力を増強する方法を包含し、該方法は、それを必要とする患者に治療上有効な量のアプリジンまたはその医薬として許容し得る塩を投与することを含む。アプリジンは、ソラフェニブ、スニチニブまたはテムシロリムスを投与する前に、投与中に、または投与後に投与される。
【００２２】
別の実施形態において、本発明は、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスから選択される別の抗癌薬との併用療法で癌を治療するための薬剤を製造するための、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩の使用を包含する。
【００２３】
関連する実施形態において、本発明は、アプリジンとの併用療法で癌を治療するための薬剤を製造するための、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される抗癌薬の使用を包含する。
【００２４】
さらなる態様において、本発明は、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩、ならびに/あるいは癌を治療するための併用療法で使用されるであろうソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬を含有する医薬組成物を包含する。
【００２５】
本発明は、また、癌の治療で使用するためのキットを包含し、該キットは、一剤形のアプリジンまたはその医薬として許容し得る塩、ならびに／あるいはソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される一剤形の別の抗癌薬、ならびに双方の薬物を併用して使用するための説明書を含む。
【００２６】
1つの好ましい態様において、本発明は、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩の、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬との相乗作用性組合せに関する。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、ソラフェニブ、またはアプリジン＋ソラフェニブで治療されたマウスにおけるCAKI-1腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、ソラフェニブは60mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後13日目に開始した。
【図２】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、ソラフェニブ、またはアプリジン＋ソラフェニブで治療されたマウスにおけるCAKI-1腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、ソラフェニブは30mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後13日目に開始した。
【図３】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、ソラフェニブ、またはアプリジン＋ソラフェニブで治療されたマウスにおけるCAKI-1腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.04mg/kg/日の投与量で、ソラフェニブは60mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後13日目に開始した。
【図４】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、ソラフェニブ、またはアプリジン＋ソラフェニブで治療されたマウスにおけるCAKI-1腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.04mg/kg/日の投与量で、ソラフェニブは30mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後13日目に開始した。
【図５】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、ソラフェニブ、またはアプリジン＋ソラフェニブで治療されたマウスにおけるMRI-H-121腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、ソラフェニブは60mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後14日目に開始した。
【図６】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、ソラフェニブ、またはアプリジン＋ソラフェニブで治療されたマウスにおけるMRI-H-121腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、ソラフェニブは30mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後14日目に開始した。
【図７】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、ソラフェニブ、またはアプリジン＋ソラフェニブで治療されたマウスにおけるMRI-H-121腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.04mg/kg/日の投与量で、ソラフェニブは60mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後14日目に開始した。
【図８】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、ソラフェニブ、またはアプリジン＋ソラフェニブで治療されたマウスにおけるMRI-H-121腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.04mg/kg/日の投与量で、ソラフェニブは30mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後14日目に開始した。
【図９】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、ソラフェニブ、またはアプリジン＋ソラフェニブで治療されたマウスにおけるA498腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、ソラフェニブは60mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後26日目に開始した。
【図１０】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、ソラフェニブ、またはアプリジン＋ソラフェニブで治療されたマウスにおけるA498腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、ソラフェニブは30mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後26日目に開始した。
【図１１】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、ソラフェニブ、またはアプリジン＋ソラフェニブで治療されたマウスにおけるA498腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.04mg/kg/日の投与量で、ソラフェニブは60mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後26日目に開始した。
【図１２】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、ソラフェニブ、またはアプリジン＋ソラフェニブで治療されたマウスにおけるA498腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.04mg/kg/日の投与量で、ソラフェニブは30mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後26日目に開始した。
【図１３】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、スニチニブ（SUTENT(登録商標)）、またはアプリジン＋スニチニブで治療されたマウスにおけるCAKI-1腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、スニチニブは40mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後23日目に開始した。
【図１４】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、スニチニブ(SUTENT(登録商標))、またはアプリジン＋スニチニブで治療されたマウスにおけるCAKI-1腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、スニチニブは30mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後23日目に開始した。
【図１５】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、スニチニブ(SUTENT(登録商標))、またはアプリジン＋スニチニブで治療されたマウスにおけるCAKI-1腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.04mg/kg/日の投与量で、スニチニブは40mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後23日目に開始した。
【図１６】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、スニチニブ(SUTENT(登録商標))、またはアプリジン＋スニチニブで治療されたマウスにおけるCAKI-1腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.04mg/kg/日の投与量で、スニチニブは30mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後23日目に開始した。
【図１７】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、スニチニブ(SUTENT(登録商標))、またはアプリジン＋スニチニブで治療されたマウスにおけるMRI-H-121腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、スニチニブは40mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後10日目に開始した。
【図１８】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、スニチニブ(SUTENT(登録商標))、またはアプリジン＋スニチニブで治療されたマウスにおけるMRI-H-121腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、スニチニブは30mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後10日目に開始した。
【図１９】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、スニチニブ(SUTENT(登録商標))、またはアプリジン＋スニチニブで治療されたマウスにおけるMRI-H-121腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.04mg/kg/日の投与量で、スニチニブは40mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後10日目に開始した。
【図２０】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、スニチニブ(SUTENT(登録商標))、またはアプリジン＋スニチニブで治療されたマウスにおけるMRI-H-121腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.04mg/kg/日の投与量で、スニチニブは30mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後10日目に開始した。
【図２１】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、スニチニブ(SUTENT(登録商標))、またはアプリジン＋スニチニブで治療されたマウスにおけるA498腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、スニチニブは40mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後19日目に開始した。
【図２２】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、スニチニブ(SUTENT(登録商標))、またはアプリジン＋スニチニブで治療されたマウスにおけるA498腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、スニチニブは30mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後19日目に開始した。
【図２３】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、スニチニブ(SUTENT(登録商標))、またはアプリジン＋スニチニブで治療されたマウスにおけるA498腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.04mg/kg/日の投与量で、スニチニブは40mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後19日目に開始した。
【図２４】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、スニチニブ(SUTENT(登録商標))、またはアプリジン＋スニチニブで治療されたマウスにおけるA498腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.04mg/kg/日の投与量で、スニチニブは30mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後19日目に開始した。
【図２５】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、テムシロリムス(TORISEL(登録商標))、またはアプリジン＋テムシロリムスで治療されたマウスにおけるMRI-H-121腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、テムシロリムスは20mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後12日目に開始した。
【図２６】対照(ビヒクル)、アプリジン(APLIDIN(登録商標))、テムシロリムス(TORISEL(登録商標))、またはアプリジン＋テムシロリムスで治療されたマウスにおけるMRI-H-121腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、テムシロリムスは10mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後12日目に開始した。
【図２７】対照(ビヒクル)、アプリジン、テムシロリムス、またはアプリジン＋テムシロリムスで治療されたマウスにおけるCAKI-1腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、テムシロリムスは10mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後21日目に開始した。
【図２８】対照(ビヒクル)、アプリジン、テムシロリムス、またはアプリジン＋テムシロリムスで治療されたマウスにおけるCAKI-1腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、テムシロリムスは20mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後21日目に開始した。
【図２９】対照(ビヒクル)、アプリジン、テムシロリムス、またはアプリジン＋テムシロリムスで治療されたマウスにおけるNCI-H-460腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、テムシロリムスは10mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後7日目に開始した。
【図３０】対照(ビヒクル)、アプリジン、テムシロリムス、またはアプリジン＋テムシロリムスで治療されたマウスにおけるNCI-H-460腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、テムシロリムスは20mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後7日目に開始した。
【図３１】対照(ビヒクル)、アプリジン、ソラフェニブ、またはアプリジン＋ソラフェニブで治療されたマウスにおけるHepG2腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、ソラフェニブは30mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後19日目に開始した。
【図３２】対照(ビヒクル)、アプリジン、ソラフェニブ、またはアプリジン＋ソラフェニブで治療されたマウスにおけるHepG2腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、ソラフェニブは60mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後19日目に開始した。
【図３３】対照(ビヒクル)、アプリジン、ソラフェニブ、またはアプリジン＋ソラフェニブで治療されたマウスにおけるLOX-IMVI腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、ソラフェニブは60mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後11日目に開始した。
【図３４】対照(ビヒクル)、アプリジン、ソラフェニブ、またはアプリジン＋ソラフェニブで治療されたマウスにおけるLOX-IMVI腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す図である。アプリジンは0.06mg/kg/日の投与量で、ソラフェニブは30mg/kg/日の投与量で投与した。治療は、移植後11日目に開始した。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明者らは、驚くべきことに、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスの抗癌活性が、それらのそれぞれを個々にアプリジンと併用すると、著しく増強されることを見出した。かくして、本発明は、アプリジンと、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムス、ならびにそれらの混合物から選択される別の抗癌薬との併用をベースにした癌の効果的な治療を提供することを対象とする。
【００２９】
「癌」とは、腫瘍、新生組織形成、及び任意のその他悪性の組織または細胞を包含することを意味する。
【００３０】
別の態様において、本発明は、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩、ならびにソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬を採用する相乗作用のある組合せに関する。このような相乗作用のある組合せは、実施例1〜7で説明されるものを含む本明細書に記載の方法論を適用すること、及び相乗作用のある組合せについての結果を解析することによって得ることができる。
【００３１】
用語「併用」は、本明細書中で使用される場合、治療薬群の同一または別々の医薬製剤での、同一または異なる時点での投与を包含することを意味する。治療薬群を異なる時点で投与するなら、それらの薬剤は、相乗作用のある応答が生じるように、十分に近接した時間で投与されるべきである。
【００３２】
別の態様において、本発明は、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩を、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬と共に採用する併用療法によって癌を効果的に治療するための薬剤を製造するための、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩の使用を対象とする。
【００３３】
関連する態様において、本発明は、ソラフェニブ、スニチニブまたはテムシロリムスあるいはその医薬として許容し得る塩を、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩と共に採用する併用療法によって癌を効果的に治療するための薬剤を製造するための、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される抗癌薬の使用を対象とする。
【００３４】
さらなる態様において、本発明は、癌を治療する方法であって、このような治療を必要とする患者に、治療上有効な量のアプリジンまたはその医薬として許容し得る塩を、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される治療上有効な量の別の抗癌薬と併用して投与することを含む、方法を対象とする。
【００３５】
本発明は、また、癌を治療する方法であって、このような治療を必要とする患者に、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される治療上有効な量の抗癌薬を、治療上有効な量のアプリジンまたはその医薬として許容し得る塩と併用して投与することを含む、方法を提供する。
【００３６】
本発明の治療方法による抗癌効果には、腫瘍の種類及び疾患の進行段階に応じて、限定はされないが、腫瘍増殖の阻害、腫瘍増殖の遅延、腫瘍の退縮、治療休止における腫瘍再増殖までの時間の増大、疾患進行の減速、及び転移の防止が含まれる。本発明の治療方法を、このような治療を必要とするヒト患者などの患者に適用した場合、前記の治療方法は、例えば、抗癌効果の程度、応答率、疾患進行までの時間、または生存率によって測定されるような効果をもたらすことが予測される。特に、本発明の治療方法は、ヒト患者、特に、再発しているまたは以前の化学療法に対して不応性である患者に適している。最初に使用する療法も考えられる。
【００３７】
前に言及したように、アプリジンは、次の構造を有する環状デプシペプチドである：
【００３８】
【化２】
2011513429.tif 000003
【００３９】
用語「アプリジン」は、本明細書中で、任意の医薬として許容し得る塩、エステル、溶媒和物、水和物、プロドラッグ、または患者に投与すると本明細書の記載のような化合物を(直接または間接的に)提供する能力を有する任意の他の化合物を包含すると解釈される。しかし、医薬として許容し得ない塩も、これらの塩が医薬として許容し得る塩の調製で有用である可能性があるので、本発明の範囲に包含されることを認識されたい。塩、エステル、溶媒和物、水和物及びプロドラッグの調製は、当技術分野で周知の方法によって実施することができる。
【００４０】
アプリジンのプロドラッグである任意の化合物は、本発明の範囲及び精神に包含される。用語「プロドラッグ」は、その最も広範な意味で使用され、in vivoでアプリジンに転換されるような誘導体を包含する。プロドラックを、生物学的条件下で加水分解し、酸化し、または別の方法で反応させてアプリジンを提供することができる。このような誘導体は、当業者にとって容易に思い浮かび、例えば、遊離ヒドロキシ基がエステル誘導体に転換された化合物が含まれる。
【００４１】
本明細書中で言及される任意の化合物は、このような特定の化合物、及びある種の変形体または形態を表すと解釈される。特に、本明細書中で言及される化合物は、不斉中心を有することができ、したがって種々のエナンチオマー形態で存在することができる。本明細書中で言及される化合物のすべての光学異性体及び立体異性体、及びそれらの混合物は、本発明の範囲に包含されると見なされる。したがって、本明細書中で言及される任意の所与の化合物は、ラセミ化合物、1つまたは複数のエナンチオマー形態、1つまたは複数のジアステレオマー形態、1つまたは複数のアトロプ異性形態、及びこれらの混合物のいずれか1つを表すと解釈される。特に、本発明の化合物としては、それらの不斉に応じたエナンチオマー、またはジアステレオ異性体を挙げることができる。二重結合についての立体異性も考えることができ、それゆえ、場合によって、分子は、(E)-異性体または(Z)-異性体として存在できる可能性がある。分子がいくつかの二重結合を含むなら、各二重結合は、該分子中の他の二重結合の立体異性と同一または異なってもよい、それ自体の立体異性を有する。単一異性体及び異性体混合物は、本発明の範囲に包含される。
【００４２】
さらに、本明細書中で言及される化合物は、幾何異性体(すなわち、シス及びトランス異性体)として、互変異性体として、またはアトロプ異性体として存在することができる。具体的には、用語「互変異性体」は、平衡状態で存在し、かつ一方の異性形態から別の異性形態に容易に転換される、ある化合物の2つまたはそれ以上の構造異性体の1つを指す。通常的な互変異性体の対は、アミン-イミン、アミド-イミド、ケト-エノール、ラクタム-ラクチムなどである。さらに、本明細書中で言及される任意の化合物は、水和物、溶媒和物、及び多形体、ならびにそのような諸形態が媒質中に存在するならその混合物を表すと解釈される。加えて、本明細書中で言及される化合物は、同位元素でラベルされた形態で存在することができる。本明細書中で言及される化合物のすべての幾何異性体、互変異性体、アトロプ異性体、水和物、溶媒和物、多形体、及び同位体でラベルされた形態、ならびにこれらの混合物は、本発明の範囲に包含されると見なされる。
【００４３】
本発明により使用するためのアプリジンは、参照により本明細書に援用される国際公開第02/02596号、同01/76616号及び同2004/084812号中に開示されている方法などの合成方法に従って調製することができる。
【００４４】
使用できるアプリジンの医薬組成物には、静脈内投与に適した賦形剤を含む溶液、懸濁液、乳液、凍結乾燥組成物などが含まれる。好ましくは、アプリジンは、治療用途に適した製剤中にアプリジン及び賦形剤を含有する滅菌凍結乾燥製品として供給し、貯蔵することができる。特にマンニトールを含有する製剤が好ましい。アプリジン製剤に関するさらなる手引きは、参照によりその全体で本明細書に援用される国際公開第99/42125号中に示されている。
【００４５】
アプリジンまたはその医薬組成物の投与は、好ましくは静脈内点滴による。本発明者らは、最長72時間までの、より好ましくは1〜24時間の点滴時間を採用するのが好ましく、約1、約3または約24時間が最も好ましいと思う。病院に終夜滞在しないで治療を実施することを可能にする短い点滴時間が、特に望ましい。しかし、点滴は、約24時間、または必要ならより長くてもよい。点滴は、様々なパターンの適切な間隔で、例を挙げれば、週に1回、週に2回、またはより多くの頻度で、場合によっては、典型的には1または数週間中断して、それぞれの週を繰り返して実施することができる。
【００４６】
ソラフェニブは、次の構造式を有するキナーゼ阻害薬である：
【００４７】
【化３】
2011513429.tif 000004
【００４８】
この薬物は、NEXAVAR(登録商標)の商品名でそのトシル酸塩の形態で市販されている。この薬物は、現在、ある種の型の癌の治療に、特に、肝細胞癌及び腎細胞癌の治療に適用されている。単剤として、経口で与えられる推奨1日量は、食物なしに(食事の少なくとも1時間前または2時間後に)1日2回で服用される400mgであり、治療は、患者が療法からもはや臨床的に利益を得ることがなくなるまで、または許容し得ない毒性が発生するまで、継続すべきである。薬物に関する情報は、ウェブサイト、www.nexavar.com.及びソラフェニブに関する多数の文献から入手できる。
【００４９】
ソラフェニブは、多様な細胞内キナーゼ(CRAF、BRAP及び突然変異BRAF)及び細胞表面キナーゼ(KIT、FLT-3、RET、VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3及びPDGFR-β)を阻害することが示された(Wilhelm SM et al. Cancer Res. 2004, 64, 7099〜7109)。これらのキナーゼのいくつかは、腫瘍細胞でシグナル伝達、血管新生及びアポトーシスに関連していると考えられる。ソラフェニブは、ヒト肝細胞癌及び腎細胞癌、ならびに免疫不全マウスにおけるいくつかの他のヒト腫瘍異種移植片の腫瘍増殖及び血管新生を阻害した。
【００５０】
スニチニブは、次の構造式を有するマルチキナーゼ阻害薬である：
【００５１】
【化４】
2011513429.tif 000005
【００５２】
この薬物は、SUTENT(登録商標)の商品名でそのリンゴ酸塩の形態で市販されている。この薬物は、現在、ある種の型の癌の治療に、特に、消化管間質性腫瘍(GIST)及び腎細胞癌に適用されている。単剤として、推奨される用量は、4週間治療し、続いて2週間休止するスケジュールにより1日1回服用される、1回50mgの経口投与である。個々の安全性及び耐容性に基づいて12.5mgの増分での用量の増減が推奨される。この薬物に関する情報は、ウェブサイト、www.sutent.com.及びスニチニブに関する多数の文献から入手できる。
【００５３】
スニチニブは、多様な受容体型チロシンキナーゼ(PTK)を阻害し、該チロシンキナーゼのいくつかは、腫瘍の増殖、異常な血管新生、及び癌の転移性進行に関連する。スニチニブは、各種のキナーゼ(＞80キナーゼ)に対するその阻害活性について評価され、血小板由来増殖因子受容体(PDGFRα及びPDGFRβ)、血管内皮増殖因子受容体(VEGFR1、VEGFR2及びVEGFR3)、幹細胞因子受容体(KIT)、Fms様チロシンキナーゼ-3(FLT3)、コロニー形成刺激因子受容体1型(CSF-1R)、及びグリア細胞由来神経栄養因子受容体(RET)の阻害薬として同定された(Bergers G et al. J. Clin. Invest. 2003, 111, 1287〜1295)。これらRTKの活性のスニチニブによる阻害は、生化学及び細胞アッセイにおいて立証されており、機能の阻害は細胞増殖アッセイにおいて立証されている。主な代謝産物は、生化学及び細胞アッセイにおいて、スニチニブと比較して類似の効力を示す。
【００５４】
スニチニブは、RTK標的を発現する腫瘍異種移植片において多様なRTK(PDGFRβ、VEGFR2、KIT)のリン酸化をin vivoで阻害し、癌のいくつかの実験モデルにおいて腫瘍増殖の阻害または腫瘍退縮を立証し、かつ/または転移を阻害した。スニチニブは、調節異常の標的RTK(PDGFR、RETまたはKIT)を発現する腫瘍細胞の増殖をin vitroで阻害し、かつPDGFRβ-及びVEGFR2-依存性腫瘍血管新生をin vivoで阻害する能力を立証した。
【００５５】
テムシロリムスは、次の構造式を有する、mTOR(ラパマイシンの哺乳動物標的)の阻害薬である：
【００５６】
【化５】
2011513429.tif 000006
【００５７】
この薬物は、TORISEL(登録商標)の商品名で市販されており、現在、腎細胞癌の治療に適用されている。単剤として、推奨される投与量は、1週間に1回、30〜60分にわたって点滴される25mgであり、治療は、疾患の進行または許容し得ない毒性が生じるまで継続すべきである。この薬物に関する情報は、ウェブサイト、www.torisel.com.及びテムシロリムスに関する多数の文献から入手できる。
【００５８】
テムシロリムスは、細胞内タンパク質(FKBP-12)に結合し、そのタンパク質-薬物複合体が、細胞分裂を制御するmTORの活性を阻害する。mTOR活性の阻害は、治療される腫瘍細胞におけるG1成長の停止をもたらす。mTORが阻害されると、P13キナーゼ/AKT経路においてmTORの下流にあるp70S6k及びS6リボソームタンパク質をリン酸化するその能力が遮断される。腎細胞癌の細胞株を使用するin vitro研究において、テムシロリムスは、mTORの活性を阻害し、低酸素誘導転写因子HIF-1及びHIF-2α、ならびに血管内皮増殖因子のレベル低下をもたらした。
【００５９】
本明細書中で言及される任意の薬物の医薬として許容し得る塩は、塩基性または酸性部分を含む親化合物から通常の化学的方法によって合成される。一般に、このような塩は、例えば、これらの化合物の遊離の酸または塩基形態を化学量論的量の適切な塩基または酸と水中または有機溶媒中あるいはこれら2種の混合物中で反応させることによって調製される。一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリルのような非水性媒質が好ましい。酸付加塩の例には、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩などの鉱酸付加塩、ならびに例えば、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩及びp-トルエンスルホン酸塩などの有機酸付加塩が含まれる。アルカリ付加塩の例には、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム及びアンモニウム塩などの無機塩、ならびに例えば、エチレンジアミン、エタノールアミン、N,N-ジアルキレンエタノールアミン、トリエタノールアミン及び塩基性アミノ酸塩などの有機アルカリ塩が含まれる。
【００６０】
加えて、本明細書中で言及される任意の薬物は、遊離化合物または溶媒和物(例えば、水和物)のいずれかとしての結晶性形態であってよく、双方の形態とも、本発明の範囲に包含されると解釈される。溶媒和化の方法は、一般に、当技術分野で周知である。
【００６１】
アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩、ならびにソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される他の抗癌薬は、同一または異なる時点で投与するための別々の薬剤として提供することができる。好ましくは、アプリジン及び他の抗癌薬は、異なる時点で投与するための別々の薬剤として提供される。別々にかつ異なる時点で投与する場合、アプリジンまたは他の抗癌薬のどちらかを最初に投与することができる。加えて、双方の薬剤を、同一または異なる日に投与することができ、かつ治療サイクル中に同一または異なる投与スケジュールを使用して投与することができる。したがって、本発明の医薬組成物は、単一の医薬として許容し得る製剤中にすべての成分(薬物)を含有することができる。別法として、成分は、別々に製剤し、互いに組み合わせて投与することもできる。本発明では、当業者に周知の医薬として許容し得る各種の製剤を、使用することができる。さらに、組合せ中の薬物は、異なる投与経路を利用して投与できる。例えば、一方の薬物は、例えば、錠剤またはカプセルのように経口投与に適した形態、他方の薬物は、例えば、無菌の溶液、懸濁液または乳液のように非経口注射(静脈内、皮下、筋内、血管内または点滴)に適した形態でよい。別法として、双方の薬物は、同一投与経路で投与できる。本発明で使用するのに適切な製剤の選択は、投与方式及び組成物中の成分の溶解特性に基づいて、当業者が定型的に実施することができる。
【００６２】
組合せ中の化合物の妥当な投与量は、個々の製剤、適用方式、ならびに治療される個々の部位、宿主及び腫瘍により異なる。年齢、体重、性別、食事、投与時刻、排泄速度、宿主の状態、薬物の組合せ、反応感受性、及び疾患の重症度のようなその他の因子を考慮するものとする。投与は、最大耐容投与量の範囲内で連続的にまたは周期的に実施することができる。アプリジンを投与するためのさらなる手引きは、参照によりその全体で本明細書に援用される国際公開第01/35974号中に示されている。
【００６３】
別の態様において、本発明は、癌の治療において、アプリジンを、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスから選択される別の抗癌薬と組み合わせて投与するためのキットであって、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩の少なくとも1サイクル用の投与単位での補給品、及び双方の薬物を組み合わせて使用するための印刷された説明書を含む、キットを対象とする。
【００６４】
関連する態様において、本発明は、癌の治療において、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスから選択される抗癌薬をアプリジンと組み合わせて投与するためのキットであって、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される抗癌薬の少なくとも1サイクル用の投与単位での補給品、及び双方の薬物を組み合わせて使用するための印刷された説明書を含む、キットを対象とする。
【００６５】
関連する態様において、本発明は、癌の治療において、アプリジンを、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスから選択される別の抗癌薬と組み合わせて投与するためのキットであって、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩の少なくとも1サイクル用の投与単位での補給品、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される抗癌薬の少なくとも1サイクル用の投与単位での補給品、及び双方の薬物を組み合わせて使用するための印刷された説明書を含む、キットを対象とする。
【００６６】
別の態様において、本発明は、また、癌の治療において、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬と組み合わせて使用するための、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩、及び医薬として許容し得る担体を含有する医薬組成物を提供する。
【００６７】
さらなる態様において、本発明は、また、癌の治療において、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩と組み合わせて使用するための、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される抗癌薬、及び医薬として許容し得る担体を含有する医薬組成物を提供する。
【００６８】
加えて、本発明は、また、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される抗癌薬、ならびに医薬として許容し得る担体を含有する、癌の治療において使用するための医薬組成物を提供する。
【００６９】
別の態様において、本発明は、さらに、癌の治療においてソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬と組み合わせて使用するための組成物の調製における、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩の使用を提供する。
【００７０】
関連する態様において、本発明は、さらに、癌の治療においてアプリジンまたはその医薬として許容し得る塩と組み合わせて使用するための組成物の調製における、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される抗癌薬の使用を提供する。
【００７１】
そしてさらなる態様において、本発明は、また、癌の治療で使用するための組成物の調製における、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩、ならびにソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬の使用を提供する。
【００７２】
別の態様において、本発明は、さらに、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬を用いる併用療法で癌を治療するための薬剤を製造するための、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩の使用を提供する。
【００７３】
関連する態様において、本発明は、さらに、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩を用いる併用療法で癌を治療するための薬剤を製造するための、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される抗癌薬の使用を提供する。
【００７４】
関連する態様において、本発明は、さらに、癌を治療するための薬剤を製造するための、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩の、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬と組み合わせた使用を提供する。
【００７５】
別の態様において、本発明は、さらに、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬を用いる併用療法で癌を治療するための、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩の使用を提供する。
【００７６】
関連する態様において、本発明は、さらに、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩を用いる併用療法で癌を治療するための、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される抗癌薬の使用を提供する。
【００７７】
別の態様において、本発明は、さらに、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩の、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬と組み合わせた、癌を治療するための使用を提供する。
【００７８】
別の態様において、本発明は、さらに、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬を用いる併用療法における、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩の、薬剤としての使用を提供する。
【００７９】
関連する態様において、本発明は、さらに、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩を用いる併用療法における、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される抗癌薬の、薬剤としての使用を提供する。
【００８０】
別の実施態様において、本発明は、さらに、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬と組み合わせた、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩の、薬剤としての使用を提供する。
【００８１】
別の態様において、本発明は、さらに、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬を用いる併用療法における、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩の、癌を治療するための薬剤としての使用を提供する。
【００８２】
関連する態様において、本発明は、さらに、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩を用いる併用療法における、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される抗癌薬の、癌を治療するための薬剤としての使用を提供する。
【００８３】
別の態様において、本発明は、さらに、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬と組み合わせた、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩の、癌を治療するための薬剤としての使用を提供する。
【００８４】
別の態様において、本発明は、治療上有効な量のアプリジンまたはその医薬として許容し得る塩を、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される治療上有効な量の抗癌薬と組み合わせて投与することを含む癌治療のための、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩を提供する。
【００８５】
関連する態様において、本発明は、さらに、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される治療上有効な量の抗癌薬を、治療上有効な量のアプリジンまたはその医薬として許容し得る塩と組み合わせて投与することを含む癌治療のための、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される抗癌薬を提供する。
【００８６】
別の態様において、本発明は、治療上有効な量のアプリジンまたはその医薬として許容し得る塩を、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される治療上有効な量の別の抗癌薬の投与と組み合わせて投与することを含み、該組合せが、一緒にまたは別々に投与されてもよい、癌の治療を提供する。本発明の好ましい実施形態において、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩、ならびにソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬は、相乗的に有効な量で投与される。
【００８７】
好ましくは、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩の、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬との組合せは、腎臓癌、肝細胞癌(ヘパトーマとしても知られる)、メラノーマ、乳癌、肺癌、膵臓癌、神経芽細胞腫及び消化管間質性腫瘍(GIST)の治療に使用される。特に好ましいのは、腎臓癌、肝細胞癌、メラノーマ、NSCLC及び乳癌を治療するための組合せの使用である。
【００８８】
一実施形態において、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩と、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩との組合せは、in vivoで腫瘍の増殖を阻害し、腫瘍の大きさを縮小する。特に、該組合せは、癌腫細胞、肉腫細胞、白血病細胞、リンパ腫細胞及び骨髄腫細胞のin vivoでの増殖を阻害する。好ましくは、該組合せは、腎癌細胞、肝細胞癌細胞、メラノーマ細胞、乳癌細胞、肺癌細胞、膵臓癌細胞、神経芽細胞腫細胞及びGIST細胞のin vivoでの増殖を阻害する。特に、該組合せは、ヒト腎癌細胞、ヒト肝細胞癌細胞、ヒトメラノーマ細胞及びヒトNSCLC細胞のin vivoでの増殖を阻害する。同様に、該組合せは、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫及び骨髄腫腫瘍の大きさをin vivoで縮小する。好ましくは、該組合せは、腎臓癌、肝細胞癌、メラノーマ、乳癌、肺癌、膵臓癌、神経芽細胞腫及びGISTの大きさをin vivoで縮小する。特に、該組合せは、ヒト腎臓腫瘍、ヒト肝細胞癌、ヒトメラノーマ及びヒトNSCL癌の大きさをin vivoで縮小する。
【００８９】
例えば、該組合せは、動物モデルにおいて、ヒト癌異種移植片、特にヒト腎臓腫瘍異種移植片、ヒト肝細胞癌異種移植片、ヒトメラノーマ異種移植片及びヒトNSCLC異種移植片の腫瘍の増殖を阻害するか、あるいは大きさを縮小する。組合せで投与された動物モデルにおけるヒト癌異種移植片の増殖低下または大きさの縮小は、その特定タイプの癌を有する患者を治療するのに有効であるような、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩とソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩との組合せを支持する。加えて、動物モデルにおける低レベルの毒性は、癌細胞に対して該組合せの選択的な細胞傷害活性を提供する。
【００９０】
本発明の実施形態によれば、腫瘍の増殖阻害は、2種の薬物(アプリジン及びソラフェニブ、アプリジン及びスニチニブ、またはアプリジン及びテムシロリムス)を併用した治療の平均腫瘍重量を、ソラフェニブ、スニチニブまたはテムシロリムスの単剤療法での治療のそれとそれぞれ比較して評価される。さらに、併用療法に関して効力増強及び相加性の程度を評価するための定義及び判定基準は、次の通りである：
・効力増強は、併用療法の応答が、併用療法で使用されるのと同様のスケジュール及び投与量で単剤(単剤療法)として投与された最大の活性を有する薬物の最良の応答を超える場合に、判定できる。
・相加性は、単剤療法治療の腫瘍増殖阻害%を併用治療のそれに対して次のように比較することによって判定される：
1.単剤療法として併用で使用される投与量で投与される各薬物について、100-%T/Cとして腫瘍増殖阻害%を求める。%T/Cは、治療群の平均腫瘍重量(T)を対照群の平均腫瘍重量(C)と対比して得られる(T/C×100%)。
2.2つの評点を一緒に加算して、各薬剤が、単剤療法として投与された場合と同様の応答をもたらすとした場合の「期待応答」を求める。
3.この「期待応答」を、併用療法群について求められた腫瘍増殖阻害%から引き算する：
a.負の数字は、2種の薬物を併用する効果が相加的に満たないことを意味する。
b.得られる数字がゼロに近いなら、2種の薬物を併用する効果が相加的であると判定される。
c.正の数字は、2種の薬物を併用する効果が相加的を超えることを意味する。
【００９１】
したがって、併用治療の相加的を超える効果が、相乗効果に相当し、2種の薬物を併用する効果は、単独で与えた場合の各薬物の効果を見込んで期待される効果よりも治療的に優れている。
【００９２】
したがって、別の態様において、本発明は、腫瘍の大きさを縮小する方法であって、有効量のアプリジンまたはその医薬として許容し得る塩を、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬と組み合わせて投与するステップを含む、方法を提供する。
【００９３】
関連する態様において、本発明は、腫瘍の大きさを縮小する方法であって、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される有効量の抗癌薬を、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩と組み合わせて投与するステップを含む、方法を提供する。
【００９４】
関連する態様において、本発明は、腫瘍の大きさを縮小する方法であって、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩と、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される抗癌薬との有効な組合せを、一緒にまたは別々に投与するステップを含む、方法を提供する。
【００９５】
別の態様において、本発明は、腫瘍の増殖を阻害する方法であって、有効量のアプリジンまたはその医薬として許容し得る塩を、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される別の抗癌薬と組み合わせて投与するステップを含む、方法を提供する。
【００９６】
関連する態様において、本発明は、腫瘍の増殖を阻害する方法であって、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される有効量の抗癌薬を、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩と組み合わせて投与するステップを含む、方法を提供する。
【００９７】
関連する態様において、本発明は、腫瘍の増殖を阻害する方法であって、アプリジンまたはその医薬として許容し得る塩と、ソラフェニブ、スニチニブ及びテムシロリムスまたはそれらの医薬として許容し得る塩から選択される抗癌薬との有効な組合せを、一緒にまたは別々に投与するステップを含む、方法を提供する。
【００９８】
以下の実施例により本発明をさらに説明する。実施例を、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきでない。
【００９９】
より簡潔な説明を提供するために、本明細書中に示される量的表現の中には、用語「約」で形容されないものもある。用語「約」を明示して使用しているかどうかにかかわらず、本明細書中に示されるすべての量は、現に示された値を指すことを意味し、かつまた、その量は、このような示された値に対する、当技術分野の通常の技能に基づいて合理的に推測されるであろう近似値(同一値またはこのような示された値を得るための実験及び/または測定条件に起因する近似値を含む)を指すことを意味すると理解される。
【０１００】
(実施例)
(実施例1)ヒト腎臓腫瘍異種移植片におけるソラフェニブと併用したアプリジンの効果を判定するためのin vivo研究
これらの研究の目的は、ヒト腎臓癌の3種の異種移植片モデルを使用して、ソラフェニブの抗腫瘍活性を増強するアプリジンの能力を評価することである。
【０１０１】
すべての実験で、雌性無胸腺ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、ウィスコンシン州)を使用した。5週齢のマウスに腫瘍断片または細胞懸濁液を移植した。動物は、換気ラック式ケージ中に、ケージ当たり５尾のマウスで、食物及び水を制約なしに与えて収容した。マウスは、腫瘍断片または細胞懸濁液を移植するに先立って1週間順化した。ビヒクル対象群には15尾のマウスを含め、治療群には群当たりそれぞれ10尾のマウスを配置した。
【０１０２】
これらの研究で使用する腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、ヴァージニア州)から入手したヒト腎明細胞癌の細胞株であるCAKI-1細胞株、初めにDCT Turmor Bankから入手したヒト腎臓癌の細胞株であるMRI-H-121細胞株、及びATCC(Manassas、ヴァージニア州)から入手したヒト腎臓癌の細胞株であるA498細胞株とした。
【０１０３】
MRI-H-121及びCAKI-1でのアッセイの場合、動物には、外套針を使用して、in vivoで移植可能な継代1の株から湿潤剤として無菌のEarle均衡塩溶液を使用して3mm3の組織腫瘍断片を皮下(SC)で右側腹部に移植した。移植時点で行った細菌培養は、移植後24及び48時間の双方の時点で汚染に関して陰性であった。
【０１０４】
A498細胞は、MEM培地(2mM L-グルタミン及び10%FBSを含む)中で増殖させた。in vitroでの継代4〜20からの細胞をSCで研究マウス中に、23Gの注射針及び1ccのシリンジを使用して、0.2mlの50%マトリゲル/50%抗生物質不含培地または血清中、5×106細胞/マウスで移植した。マトリゲルは、4℃で液体であり、かつ37℃で固体である生物学的細胞外マトリックスであり、それは、細胞を局所化された領域中で密接な会合状態に維持することによって腫瘍の増殖を促進する。移植用に調製された細胞のアリコートに関して細菌培養を実施した。すべての培養物は、移植後の24及び48時間の双方の時点で細菌汚染に関して陰性であった。
【０１０５】
腫瘍の寸法は、ノギスを使用し測定した。2次元の腫瘍寸法から腫瘍体積(mm3)を見積もるには、長軸楕円体についての体積計式を使用した：すなわち、腫瘍体積(mm3)＝[L×W2]÷2、ここで、Lは腫瘍の長さ(最長直径、mm)であり、Wは幅(最短直径、mm)である。単位密度を仮定して(すなわち1mm3=1mg)、容積を重量に変換した。腫瘍の大きさが、適切な範囲、MRI-H-121で143±2mg、CAKI-1で259±32mg、A498で111±3mg(平均±SD)の範囲内に到達したなら、マウスを、LabCat(登録商標)In Life module V 8.0 SP1腫瘍追跡及び測定ソフトウェアを使用して、腫瘍重量に基づいて治療及び対照群に無作為化した。
【０１０６】
MRI-H-121腫瘍を持つマウスの治療は、DPI(移植後日数)14日目に、CAKI-1ではDPI 13日目に、A498ではDPI 26日目に開始した。治療日、及び腫瘍の大きさの測定時に体重を記録した。同一日に2種の薬物を投与する場合、それらの日には、併用治療群を、治療を順番付けようとしないで同一時点で2種の薬物を共投与することによって治療した。
【０１０７】
アプリジンは、凍結乾燥アプリジン粉末のバイアル瓶の形態で提供し、15/15/70のCremophor EL/エタノール/水(CEW)で0.5mg/mlの濃度に再構成した。次いで、アプリジン/CEW溶液を、0.9%生理食塩水で、CEWの最終比率が0.18/0.18/0.84である投与製剤濃度まで希釈した。
【０１０８】
ソラフェニブは、ソラフェニブをそのトシル酸塩の形態の含有する赤色に着色した200mg錠剤の形態で提供した。ソラフェニブ溶液は、該錠剤をCremophor EL/エタノール(50/50)に50mg/mlの濃度で溶解することによって調製した。次いで、この溶液を、点滴用水(wfi)で12.5/12.5/75のCEWの最終比率まで希釈した。ソラフェニブ/CEW溶液を、wfiで投与製剤濃度まで希釈した。
【０１０９】
3種の異種移植片モデルに関する研究群及び治療方式をTable I(表1)に記載する。
【０１１０】
【表１】
2011513429.tif 000007
【０１１１】
腫瘍の大きさの測定値は、治療開始から研究終結まで、週2回記録した。腫瘍増殖の阻害は、2剤併用(アプリジンとソラフェニブ)での平均腫瘍重量をソラフェニブでの平均腫瘍重量と種々のアッセイ濃度で対比して評価した。
【０１１２】
すべての評価において、すべての動物群の腫瘍体積について、平均値、平均値の標準偏差、標準誤差を求めた。研究の終末時点を含む各測定日に、腫瘍体積についてスチューデントのt検定を実施して、併用治療群と単剤療法治療群との間になんらかの統計的有意差が存在するかどうかを判定した。
【０１１３】
併用療法に関して効力増強及び相加性の程度を評価するための定義及び判定基準は次の通りとした：
・効力増強は、併用群の応答が、併用療法で使用されるのと同様のスケジュール及び投与量で単剤(単剤療法)として投与された最大の活性を有する薬物の最良の応答を超える場合に、判定された。
・相加性は、前に考察したように、単剤療法群の腫瘍増殖阻害%を併用群のそれに対して次のように比較することによって判定した：
1.併用で使用される投与量で単剤療法として投与された各薬物について、100-%T/Cとして腫瘍増殖阻害%を求める。%T/Cは、治療群の平均腫瘍重量(T)を対照群の平均腫瘍重量(C)と対比して得られる(T/C×100%)。
2.2つの評点を一緒に加算して、各薬剤が、単剤療法として投与された場合と同様の応答をもたらすとした場合の「期待応答」を求める。
3.この「期待応答」を、併用療法群について求められた腫瘍増殖阻害%から引き算する：
a.負の数字は、2種の薬物を併用する効果が相加的に満たないことを意味する。
b.得られる数字がゼロに近いなら、2種の薬物を併用する効果が相加的であると判定される。
c.正の数字は、2種の薬物を併用する効果が相加的を超えることを意味する。
【０１１４】
したがって、相加的を超える併用治療の効果が、相乗効果に相当し、2種の薬物を併用する効果は、単独で与えた各薬物の効果を見込んで期待されるものよりも治療的に優れている。
【０１１５】
体重効果は、各マウスの体重測定値を最初(治療初日)の体重と比較することによって判定した。体重減少>20%のNCI活性判定基準を使用して、化合物の毒性を判断した。
【０１１６】
CAKI-1ヒト腎臓腫瘍異種移植片での結果
Table II(表2)に各治療で得られた%T/C値を報告し、図1〜4に、対照(ビヒクル)、種々の投与量のアプリジン、ソラフェニブ、またはアプリジン+ソラフェニブで治療されたマウスにおけるCAKI-1腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す。
【０１１７】
【表２】
2011513429.tif 000008
【０１１８】
Table III(表3)は、CAKI-1ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び60mg/kg/日のソラフェニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びソラフェニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとソラフェニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１１９】
【表３】
2011513429.tif 000009
【０１２０】
Table IV(表4)は、CAKI-1ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び30mg/kg/日のソラフェニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びソラフェニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとソラフェニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１２１】
【表４】
2011513429.tif 000010
【０１２２】
Table V(表5)は、CAKI-1ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.04mg/kg/日のアプリジン及び60mg/kg/日のソラフェニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びソラフェニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとソラフェニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１２３】
【表５】
2011513429.tif 000011
【０１２４】
アプリジン及びソラフェニブを、CAKI-1ヒト腎臓腫瘍の細胞株に対して単剤(単剤療法)として投与した場合、それらの薬剤は不活性であった。さらに、これらの治療は、平均体重の有意な減少を引き起こさず、すべてのマウスは、研究終末まで体重を増した。
【０１２５】
しかし、アプリジンを0.060mg/kg/日の投与量で60mg/kg/日の投与量のソラフェニブと併用すると、28日目から49日目の研究終末までの間、腫瘍増殖の統計的に有意な阻害が観察された。この併用は、抗腫瘍活性の相加的を超える効力増強をもたらした。さらに、0.040mg/kg/日の投与量のアプリジンと60mg/kg/日の投与量のソラフェニブとの併用も、抗腫瘍活性の相加的を超える効力増強をもたらした。この効果は、すべての場合に、終末の投与期間中にまたは投与期間に続いて直ぐに観察され、アッセイを終了するまで継続した。最終的に、併用療法は、毒性の証拠が増大することなしにマウスによって十分耐容された。
【０１２６】
MRI-H-121ヒト腎臓腫瘍異種移植片での結果
Table VI(表6)に各治療で得られた%T/C値を報告し、図5〜8に、対照(ビヒクル)、種々の投与量のアプリジン、ソラフェニブ、またはアプリジン+ソラフェニブで治療されたマウスにおけるMRI-H-121腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す。
【０１２７】
【表６】
2011513429.tif 000012
【０１２８】
Table VII(表7)は、MRI-H-121ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び60mg/kg/日のソラフェニブの投与量で単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びソラフェニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとソラフェニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１２９】
【表７】
2011513429.tif 000013
【０１３０】
Table VIII(表8)は、MRI-H-121ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び30mg/kg/日のソラフェニブの投与量で単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びソラフェニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとソラフェニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１３１】
【表８】
2011513429.tif 000014
【０１３２】
Table IX(表9)は、MRI-H-121ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.04mg/kg/日のアプリジン及び60mg/kg/日のソラフェニブの投与量で単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びソラフェニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとソラフェニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１３３】
【表９】
2011513429.tif 000015
【０１３４】
Table X(表10)は、MRI-H-121ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.04mg/kg/日のアプリジン及び30mg/kg/日のソラフェニブの投与量で単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びソラフェニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとソラフェニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１３５】
【表１０】
2011513429.tif 000016
【０１３６】
MRI-H-121ヒト腎臓腫瘍は、この研究で試験された投与量及びスケジュールで単剤(単剤療法)として投与された場合、アプリジン治療に対して不応性であった。加えて、60または30mg/kg/日で投与される単剤(単剤療法)としてのソラフェニブでの治療は、腫瘍増殖を統計的に有意に阻害したが、活性に関するNCI判定基準に到達しなかった。
【０１３７】
一方、アプリジンを0.060mg/kg/日の投与量で、60mg/kg/日の投与量のソラフェニブと併用すると、相加的〜相加的を超える統計的に有意な抗腫瘍活性の増強が観察された。さらに、アプリジンを0.040mg/kg/日の投与量で、30mg/kg/日の投与量のソラフェニブと併用すると、やはり、相加的を超える抗腫瘍活性の増強をもたらした。
【０１３８】
最終的に、アプリジンをソラフェニブと併用する治療は、平均体重の許容し得る減少をもたらし、34日目で最大15%の体重減少であった。若干の単離された個々の動物は、20%を超える体重減少を有した。
【０１３９】
A498ヒト腎臓腫瘍異種移植片での結果
Table XI(表11)に各治療で得られた%T/C値を報告し、図9〜12に、対照(ビヒクル)、種々の投与量のアプリジン、ソラフェニブ、またはアプリジン+ソラフェニブで治療されたマウスにおけるA498腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す。
【０１４０】
【表１１】
2011513429.tif 000017
【０１４１】
Table XII(表12)は、A498ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び60mg/kg/日のソラフェニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びソラフェニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとソラフェニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１４２】
【表１２】
2011513429.tif 000018
【０１４３】
Table XIII(表13)は、A498ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び30mg/kg/日のソラフェニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びソラフェニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとソラフェニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１４４】
【表１３】
2011513429.tif 000019
【０１４５】
Table XIV(表14)は、A498ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.04mg/kg/日のアプリジン及び60mg/kg/日のソラフェニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びソラフェニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとソラフェニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１４６】
【表１４】
2011513429.tif 000020
【０１４７】
Table XV(表15)は、A498ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.04mg/kg/日のアプリジン及び30mg/kg/日のソラフェニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びソラフェニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとソラフェニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１４８】
【表１５】
2011513429.tif 000021
【０１４９】
この研究で試験された投与量及びスケジュールで単剤(単剤療法)として投与されたアプリジンまたはソラフェニブでのA498ヒト腎臓腫瘍の治療は、腫瘍増殖の阻害に関して対照群に対して統計的有意性に向かう傾向があったが、活性に関するNCI判定基準に到達しなかった。
【０１５０】
併用群では、統計的に有意な抗腫瘍応答が観察された。アプリジンを0.060mg/kg/日の投与量で、60または30mg/kg/日の投与量のソラフェニブと併用すると、相加的を超える抗腫瘍活性の増強が観察された。
【０１５１】
最終的に、併用療法は、毒性の証拠が増加することなしに、マウスによって十分耐容された。
【０１５２】
(実施例2)ヒト腎臓腫瘍異種移植片におけるスニチニブと併用したアプリジンの効果を判定するためのin vivo試験
これらの研究の目的は、ヒト腎臓癌の3種の異種移植片モデルを使用して、スニチニブの抗腫瘍活性を増強するアプリジンの能力を評価することである。
【０１５３】
すべての実験で、雌性無胸腺ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、ウィスコンシン州)を使用した。5週齢のマウスに腫瘍断片または細胞懸濁液を移植した。動物は、換気ラック式ケージ中に、ケージ当たり５尾のマウスで、食物及び水を制約なしに与えて収容した。マウスは、腫瘍断片または細胞懸濁液を移植するに先立って1週間順化した。ビヒクル対象群は、15尾のマウスを含み、治療群には、それぞれ群当たり10尾のマウスを配置した。
【０１５４】
これらの研究で使用される腫瘍モデルは、実施例1と同様とした(CAKI-1、MRI-H-121、及びA498細胞株)。MRI-H-121及びA498腫瘍モデルを、実施例1で開示したように動物に移植した。
【０１５５】
CAKI-1細胞は、抗生物質不含のMcCoy培地(2mM L-グルタミン及び10%のFBSを含む)中で増殖させた。in vitroでの継代4〜20からの細胞をSCで研究マウス中に、23Gの注射針及び1ccのシリンジを使用して、0.2mlの50%マトリゲル/50%抗生物質不含培地または血清中、5×106細胞/マウスで移植した。移植用に調製された細胞のアリコートに関して細菌培養を実施した。すべての培養物は、移植後の24及び48時間の双方の時点で細菌汚染に関して陰性であった。
【０１５６】
腫瘍の値は、実施例1で開示したようにして求めた。腫瘍増殖の平均の大きさが、MRI-H-121で142±52mg、CAKI-1で181±7mg、A498で207±13mg(平均±SD)の範囲にあるなら、マウスを、LabCat(登録商標)In Life module V 8.0 SP1腫瘍追跡及び測定ソフトウェアを使用して、腫瘍重量に基づいて治療及び対照群に無作為化した。
【０１５７】
MRI-H-121腫瘍を持つマウスの治療は、DPI(移植後日数)10日目に、CAKI-1ではDPI 23日目に、A498ではDPI 19日目に開始した。治療日及び腫瘍の大きさの測定時に体重を記録した。2種の薬物を同一日に投与するような日には、併用療法群を、治療を順序付けようとしないで同一時点で2種の薬物を共投与することによって治療した。
【０１５８】
アプリジンは、凍結乾燥アプリジン粉末のバイアル瓶の形態で提供し、15/15/70のCremophor EL/エタノール/水(CEW)で0.5mg/mlの濃度に再構成した。アプリジン/CEW溶液を、0.9%生理食塩水で、CEWの最終比率が0.18/0.18/0.84である投与製剤濃度まで希釈した。
【０１５９】
スニチニブは、そのリンゴ酸塩の形態のスニチニブを含有する25mgカプセルの形態で提供した。製剤は、カプセル内容物を0.5%カルボキシメチルセルロース(CMC)中に溶解すること、さらにwfiで希釈することによって調製した。製剤は、懸濁液として経口で動物に投与した。
【０１６０】
3種の異種移植片モデルに関する研究群及び治療方式をTable XVI(表16)に記載する。
【０１６１】
【表１６】
2011513429.tif 000022
【０１６２】
腫瘍サイズの測定値は、治療開始から研究終結まで、週2回記録した。腫瘍増殖の阻害は、2剤併用(アプリジンとスニチニブ)での平均腫瘍重量をスニチニブでの平均腫瘍重量と種々のアッセイ濃度で対比して評価した。
【０１６３】
すべての評価において、すべての動物群に関する腫瘍体積について、平均値、平均値の標準偏差、標準誤差を求めた。研究の終末時点を含む各測定日に腫瘍体積に関してスチューデントのt検定を実施して、併用治療群と単剤療法治療群との間になんらかの統計的有意差が存在するかどうかを判定した。
【０１６４】
併用療法について効力増強及び相加性の程度を評価するための定義及び判定基準は、実施例1で開示したものと同様とした。
【０１６５】
体重効果は、各マウスの体重測定値を最初(治療初日)の体重と比較することによって判定した。体重減少>20%のNCI活性判定基準を使用して、化合物の毒性を判断した。
【０１６６】
CAKI-1ヒト腎臓腫瘍異種移植片での結果
Table XVII(表17)に各治療で得られた%T/C値を報告し、図13〜16に、対照(ビヒクル)、種々の投与量のアプリジン、スニチニブ、またはアプリジン+スニチニブで治療されたマウスにおけるCAKI-1腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す。
【０１６７】
【表１７】
2011513429.tif 000023
【０１６８】
Table XVIII(表18)は、CAKI-1ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び30mg/kg/日のソラフェニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びスニチニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとスニチニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１６９】
【表１８】
2011513429.tif 000024
【０１７０】
Table XIX(表19)は、CAKI-1ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.04mg/kg/日のアプリジン及び40mg/kg/日のスニチニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びスニチニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとスニチニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１７１】
【表１９】
2011513429.tif 000025
【０１７２】
Table XX(表20)はCAKI-1ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.04mg/kg/日のアプリジン及び30mg/kg/日のスニチニブの投与量、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びスニチニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとスニチニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１７３】
【表２０】
2011513429.tif 000026
【０１７４】
アプリジン及びスニチニブを単剤(単剤療法)としてCAKI-1ヒト腎臓腫瘍細胞株に対して投与すると、それらの薬剤は、不活性であった。さらに、これらの治療は、平均体重の有意な減少を引き起こさず、すべてのマウスは、研究終末まで体重が増加した。
【０１７５】
しかし、アプリジンを0.040g/kg/日の投与量で40mg/kg/日の投与量のスニチニブと併用すると、活性の増強が観察され、腫瘍増殖阻害の相加的を超える増強がもたらされた。加えて、アプリジンとスニチニブの併用は、体重減少が最大で7.2%である、許容し得る体重の減少をもたらした。
【０１７６】
MRI-H-121ヒト腎臓腫瘍異種移植片での結果
Table XXI(表21)に各治療で得られた%T/C値を報告し、図17〜20に、対照(ビヒクル)、種々の投与量のアプリジン、スニチニブ、またはアプリジン+スニチニブで治療されたマウスにおけるMRI-H-121腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す。
【０１７７】
【表２１】
2011513429.tif 000027
【０１７８】
Table XXII(表22)は、MRI-H-121ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び40mg/kg/日のスニチニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びスニチニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとスニチニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１７９】
【表２２】
2011513429.tif 000028
【０１８０】
Table XXIII(表23)は、MRI-H-121ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び30mg/kg/日のスニチニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びスニチニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとスニチニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１８１】
【表２３】
2011513429.tif 000029
【０１８２】
Table XXIV(表24)は、MRI-H-121ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.04mg/kg/日のアプリジン及び40mg/kg/日のスニチニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びスニチニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとスニチニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１８３】
【表２４】
2011513429.tif 000030
【０１８４】
Table XXV(表25)は、MRI-H-121ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.04mg/kg/日のアプリジン及び30mg/kg/日のスニチニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びスニチニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとスニチニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１８５】
【表２５】
2011513429.tif 000031
【０１８６】
MRI-H-121ヒト腎臓腫瘍は、試験された投与量及びスケジュールで単剤(単剤療法)として投与されると、アプリジン及びスニチニブに対して不応性であったが、アプリジン治療は、0.060mg/kg/日で腫瘍増殖の阻害に関して活性のわずかな徴候を示した。さらに、これらの治療は、平均体重の有意な減少を引き起こさず、すべてのマウスは、研究終末まで体重が増加した。
【０１８７】
しかし、双方の薬物を併用すると、統計的に有意な活性の増強が、試験されたすべての投与レベルで観察された。この増強は、相加的を超えると判定された。加えて、アプリジンとスニチニブとの併用は、体重減少が最大で8.7%である、許容し得る体重の減少をもたらした。
【０１８８】
A498ヒト腎臓腫瘍異種移植片での結果
Table XXVI(表26)に各治療で得られた%T/C値を報告し、図21〜24に、対照(ビヒクル)、種々の投与量のアプリジン、スニチニブ、またはアプリジン+スニチニブで治療されたマウスにおけるA498腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す。
【０１８９】
【表２６】
2011513429.tif 000032
【０１９０】
Table XXVII(表27)は、A498ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び40mg/kg/日のスニチニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びスニチニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとスニチニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１９１】
【表２７】
2011513429.tif 000033
【０１９２】
Table XXVIII(表28)は、A498ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び30mg/kg/日のスニチニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びスニチニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとスニチニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１９３】
【表２８】
2011513429.tif 000034
【０１９４】
Table XXIX(表29)は、A498ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.04mg/kg/日のアプリジン及び40mg/kg/日のスニチニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びスニチニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとスニチニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０１９５】
【表２９】
2011513429.tif 000035
【０１９６】
単剤(単剤療法)として投与されたアプリジンは、この研究で試験された投与量、投与経路及び投与スケジュールで、腫瘍増殖の阻害に関して効果を有さなかった。さらに、40mg/kgの投与量で単剤(単剤療法)として投与されたスニチニブは、腫瘍増殖の阻害に対する活性に向かう傾向をもたらしたが、この活性レベルは、NCI判定基準に到達しなかった。これらの治療は、平均体重の有意な減少をもたらさず、すべてのマウスは、研究終末まで体重が増加した。
【０１９７】
これに反して、アプリジンを0.060mg/kg/日の投与量で、40または30mg/kg/日の投与量のスニチニブと併用すると、相加的を超える抗腫瘍活性の増強が観察された。
【０１９８】
最終的に、アプリジンとスニチニブとの併用は、重量減少が最大で13%である、許容し得る体重の減少をもたらした。
【０１９９】
(実施例３)ヒト腎臓腫瘍異種移植片におけるテムシロリムスと組み合わせたアプリジンの効果を判定するためのin vivo研究
この研究の目的は、ヒト腎臓癌の異種移植片モデルを使用して、テムシロリムスの抗腫瘍活性を増強するアプリジンの能力を評価することである。
【０２００】
すべての実験で、雌性無胸腺ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、ウィスコンシン州)を使用した。5週齢のマウスに腫瘍断片を移植した。動物は、換気ラック式ケージ中に、ケージ当たり５尾のマウスで、食物及び水を制約なしに与えて収容した。マウスは、腫瘍断片を移植するに先立って1週間順化した。ビヒクル対象群は、15尾のマウスを含み、治療群には、群当たりそれぞれ10尾のマウスを配置した。
【０２０１】
この研究で使用する腫瘍モデルは、初めはDCT Tumor Bankから入手したヒト腎臓癌の細胞株であるMRI-H-121細胞株とした。MRI-H-121でのアッセイの場合、in vivoで移植可能な継代数1の株から湿潤剤として無菌のEarle均衡塩溶液を使用して3mm3の組織腫瘍断片を皮下(SC)で動物の右側腹部に外套針を使用して移植した。移植時に行った細菌培養は、移植後24及び48時間の双方の時点で汚染に関して陰性であった。
【０２０２】
腫瘍の測定値は、実施例1で開示したようにして求めた。腫瘍増殖の平均の大きさが、95±1.6mg(平均±SD)の範囲内にあるなら、LabCat(登録商標)In Life module V 8.0 SP1腫瘍追跡及び測定ソフトウェアを使用して、マウスを腫瘍重量に基づいて治療及び対照群に無作為化した。
【０２０３】
MRI-H-121腫瘍を持つマウスの治療は、DPI(移植後日数)12日目に開始した。治療日及び腫瘍の大きさの測定時に体重を記録した。2種の薬物を同一日に投与するような日には、併用療法群を、治療を順序づけるようにしないで同一時点で2種の薬物を共投与することによって治療した。
【０２０４】
アプリジンは、凍結乾燥アプリジン粉末のバイアル瓶の形態で提供し、15/15/70のCremophor EL/エタノール/水(CEW)で0.5mg/mlの濃度に再構成した。アプリジン/CEW溶液を、0.9%生理食塩水で、CEWの最終比率が0.18/0.18/0.84である投与製剤濃度まで希釈した。
【０２０５】
テムシロリムスは、テムシロリムスの非水性アルコール性無菌溶液(25mg/ml)を含むバイアル瓶の形態で提供した。この溶液を、ポリソルベート80(40%w/v)、ポリエチレングリコール400(42.8%w/v)及び脱水アルコール(19.9%w/v)を含有する希釈液で希釈した。次いで、この溶液を、0.9%生理食塩水でさらに希釈して投与製剤濃度とした。
【０２０６】
異種移植片モデルに関する研究群及び治療方式をTable XXX(表30)に記載する。
【０２０７】
【表３０】
2011513429.tif 000036
【０２０８】
腫瘍の大きさの測定値は、治療開始から研究終結まで、週2回記録した。腫瘍増殖の阻害は、2剤併用(アプリジンとテムシロリムス)での平均腫瘍重量をテムシロリムスでの平均腫瘍重量と種々のアッセイ濃度で対比して評価した。
【０２０９】
すべての評価において、すべての動物群に関する腫瘍体積について、平均値、平均値の標準偏差、標準誤差を測定した。研究の終末時点を含む各測定日に腫瘍体積に関してスチューデントのt検定を実施して、併用治療群と単剤療法治療群との間になんらかの統計的有意差が存在するかどうかを判定した。
【０２１０】
併用療法についての効力増強及び相加性の程度を評価するための定義及び判定基準は、実施例1で開示したものと同様とした。
【０２１１】
体重効果は、各マウスの体重測定値を最初(治療初日)の体重と比較することによって判定した。体重減少>20%のNCI活性判定基準を使用して、化合物の毒性を判断した。
【０２１２】
Table XXXI(表31)は、各治療で得られた%T/C値を報告し、図25〜26は、対照(ビヒクル)、種々の投与量のアプリジン、テムシロリムス、またはアプリジン+テムシロリムスで治療されたマウスにおけるMRI-H-121腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す。
【０２１３】
【表３１】
2011513429.tif 000037
【０２１４】
Table XXXII(表32)は、MRI-H-121ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び20mg/kg/日のテムシロリムスの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びテムシロリムスの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとテムシロリムスとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０２１５】
【表３２】
2011513429.tif 000038
【０２１６】
Table XXXIII(表33)は、MRI-H-121ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び10mg/kg/日のテムシロリムスの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びテムシロリムスの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとテムシロリムスとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０２１７】
【表３３】
2011513429.tif 000039
【０２１８】
MRI-H-121異種移植片腫瘍は、この実験で試験された投与量、投与スケジュール及び投与経路でのアプリジン療法に不応答であった。異種移植片腫瘍は、10及び20mg/kg/日で投与されたテムシロリムスでの療法の双方に極めて感受性があり、より高い投与量では、あまりにも大きな活性を示すので、アプリジン0.06mg/kg/日+テムシロリムス20mg/kg/日の併用効果は、適切に評価することができなかった。
【０２１９】
しかし、0.06mg/kg/日のアプリジンを10mg/kg/日のテムシロリムスと併用すると、統計的に有意な活性の増強が観察された。この増強は、相加的を超えると判定された。アプリジン+テムシロリムスの併用治療は、追加的毒性のいかなる証拠もなしに、マウスによって十分耐容された。
【０２２０】
(実施例4)ヒト腎臓腫瘍異種移植片CAKI-1におけるテムシロリムスと併用したアプリジンのin vivo研究
すべての実験で、雌性無胸腺ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、ウィスコンシン州)を使用した。6〜8週齢のマウスに細胞懸濁液を移植した。動物は、換気ラック式ケージ中に、食物及び水を制約なしに与えて収容した。マウスは、腫瘍移植に先立って少なくとも5日間順化した。ビヒクル対象群は、15尾のマウスを含み、治療群には、群当たりそれぞれ10尾のマウスを配置した。この研究で使用する腫瘍モデルは、CAKI-1とし、それを実施例2に開示したように動物に移植した。
【０２２１】
腫瘍の測定値は、実施例1で開示したように測定した。腫瘍増殖の平均の大きさが、140±34mg(平均±SD)の範囲内にあるなら、LabCat(登録商標)In Life module V 8.0 SP1腫瘍追跡及び測定ソフトウェアを使用して、マウスを、腫瘍重量に基づいて治療及び対照群に無作為化した。
【０２２２】
CAKI-1腫瘍を持つマウスの治療は、DPI(移植後日数)21日目に開始した。治療日及び腫瘍の大きさの測定時に体重を記録した。2種の薬物を同一日に投与するような日には、併用療法群を、治療を順序付けようとしないで同一時点で2種の薬物を共投与することによって治療した。
【０２２３】
アプリジンは、凍結乾燥アプリジン粉末のバイアル瓶の形態で提供し、15/15/70のCremophor EL/エタノール/水(CEW)で0.5mg/mｌの濃度に再構成した。アプリジン/CEW溶液を、0.9%生理食塩水で、CEWの最終比率が0.18/0.18/0.84である投与製剤濃度まで希釈した。
【０２２４】
テムシロリムスは、テムシロリムスの非水性アルコール性無菌溶液(25mg/ml)を含むバイアル瓶の形態で提供した。この溶液を、ポリソルベート80(40%w/v)、ポリエチレングリコール400(42.8%w/v)及び脱水アルコール(19.9%w/v)を含有する希釈液で希釈した。次いで、この溶液を、0.9%生理食塩水でさらに希釈して投与製剤濃度とした。
【０２２５】
3種の異種移植片モデルに関する研究群及び治療方式をTable XXXIV(表34)に記載する。
【０２２６】
【表３４】
2011513429.tif 000040
【０２２７】
腫瘍の大きさの測定値は、治療開始から研究終結まで、週2回記録した。腫瘍増殖の阻害は、2剤併用(アプリジンとテムシロリムス)での平均腫瘍重量をテムシロリムスでの平均腫瘍重量と種々のアッセイ濃度で対比して評価した。
【０２２８】
すべての評価において、すべての動物群に関する腫瘍体積について、平均値、平均値の標準偏差、標準誤差を求めた。研究の終末時点を含む各測定日に腫瘍体積に関してスチューデントのt検定を実施して、併用治療群と単剤療法治療群との間になんらかの統計的有意差が存在するかどうかを判定した。
【０２２９】
併用療法に関する効力増強及び相加性の程度を評価するための定義及び判定基準は、実施例1で開示したものと同様とした。
【０２３０】
体重効果は、各マウスの体重測定値を最初(治療初日)の体重と比較することによって判定した。体重減少>20%のNCI活性判定基準を使用して、化合物の毒性を判断した。
【０２３１】
Table XXXV(表35)は各治療で得られた%T/C値を報告し、図27〜28は、対照(ビヒクル)、種々の投与量のアプリジン、テムシロリムス、またはアプリジン+テムシロリムスで治療されたマウスにおけるCAKI-1腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す。
【０２３２】
【表３５】
2011513429.tif 000041
【０２３３】
Table XXXVI(表36)はCAKI-1ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び20mg/kg/日のテムシロリムスの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びテムシロリムスの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとテムシロリムスとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０２３４】
【表３６】
2011513429.tif 000042
【０２３５】
Table XXXVII(表37)は、CAKI-1ヒト腎臓腫瘍異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び10mg/kg/日のテムシロリムスの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びテムシロリムスの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとテムシロリムスとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０２３６】
【表３７】
2011513429.tif 000043
【０２３７】
アプリジンは、CAKI-1ヒト腎臓腫瘍の細胞株に対して単剤(単剤療法)として投与されると、不活性であった。加えて、10及び20mg/kg/日の投与量での単剤としてのテムシロリムスでの治療は、CAKI-1細胞株に対して用量応答に基づいて活性を示したが、活性に関するNCIの判定基準に合致しなかった。さらに、これらの治療は、平均体重の有意な減少を引き起こさず、すべてのマウスは、研究終末まで体重が増加した。
【０２３８】
しかし、アプリジンを0.060mg/kg/日の投与量で10mg/kg/日の投与量のテムシロリムスと併用すると、活性の増強が観察され、腫瘍増殖阻害の相加的増強がもたらされた。加えて、アプリジンとテムシロリムスとの併用は、体重の許容し得る減少をもたらし、すべてのマウスは、研究終末まで体重が増加した。
【０２３９】
(実施例5)ヒト非小細胞肺癌(NSCLC)異種移植片におけるテムシロリムスと併用したアプリジンのin vivo研究
すべての実験で、雌性無胸腺ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、ウィスコンシン州)を使用した。6〜8週齢のマウスに細胞懸濁液を移植した。動物は、換気ラック式ケージ中に、食物及び水を制約なしに与えて収容した。マウスは、腫瘍移植に先立って少なくとも5日間順化した。ビヒクル対象群は、15尾のマウスを含み、治療には、群当たりそれぞれ10尾のマウスを配置した。
【０２４０】
この研究で使用する腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、ヴァージニア州)から入手したヒトNSCLCの細胞株であるNCI-H-460とした。NCI-H-460細胞を、RPMI-1640培地(10%FBS、10mM Hepes、1mMピルビン酸ナトリウム、4.5g/lグルコース、1.5g/l重炭酸ナトリウム、及び2mM L-グルタミンを含む)中で増殖させた。in vitroでの継代11からの細胞を、23Gの注射針及び1ccのシリンジを使用して、研究マウス中にSCで、0.2mlの50%マトリゲル/50%抗生物質不含培地または血清を用い、5×106細胞/マウスで移植した。移植用に調製された細胞のアリコートに関して細菌培養を実施した。すべての培養物は、移植後の24及び48時間の双方の時点で細菌汚染に関して陰性であった。
【０２４１】
腫瘍の測定値は、実施例1に開示したようにして求めた。腫瘍増殖の平均の大きさが、110±25mg(平均±SD)の範囲内にあるなら、LabCat(登録商標)In Life module V 8.0 SP1腫瘍追跡及び測定ソフトウェアを使用して、マウスを、腫瘍重量に基づいて治療及び対照群に無作為化した。
【０２４２】
NCI-H-460腫瘍を持つマウスの治療は、DPI(移植後日数)7日目に開始した。治療日及び腫瘍の大きさの測定時に体重を記録した。2種の薬物を同一日に投与するような日には、併用療法群を、治療を順序付けようとしないで同一時点で2種の薬物を共投与することによって治療した。
【０２４３】
アプリジンは、凍結乾燥アプリジン粉末のバイアル瓶の形態で提供し、15/15/70のCremophor EL/エタノール/水(CEW)で0.5mg/mlの濃度に再構成した。アプリジン/CEW溶液を、0.9%生理食塩水で、CEWの最終比率が0.18/0.18/0.84である投与製剤濃度まで希釈した。
【０２４４】
テムシロリムスは、テムシロリムスの非水性アルコール性無菌溶液(25mg/ml)を含むバイアル瓶の形態で提供した。この溶液を、ポリソルベート80(40%w/v)、ポリエチレングリコール400(42.8%w/v)及び脱水アルコール(19.9%w/v)を含有する希釈液で希釈した。次いで、この溶液を、0.9%生理食塩水でさらに希釈して投与製剤濃度とした。
【０２４５】
3種の異種移植片モデルに関する研究群及び治療方式をTable XXXVIII(表38)に記載する。
【０２４６】
【表３８】
2011513429.tif 000044
【０２４７】
腫瘍の大きさの測定値は、治療開始から研究終結まで、週2回記録した、腫瘍増殖の阻害は、2剤併用(アプリジンとテムシロリムス)での平均腫瘍重量をテムシロリムスでの平均腫瘍重量と種々のアッセイ濃度で対比して評価した。
【０２４８】
すべての評価において、すべての動物群に関する腫瘍体積について、平均値、平均値の標準偏差、標準誤差を求めた。研究の終末時点を含む各測定日に腫瘍体積に関してスチューデントのt検定を実施して、併用治療群と単剤療法治療群との間になんらかの統計的有意差が存在するかどうかを判定した。
【０２４９】
併用療法に関する効力増強及び相加性の程度を評価するための定義及び判定基準は、実施例1で開示したものと同様とした。
【０２５０】
体重効果は、各マウスの体重測定値を最初(治療初日)の体重と比較することによって判定した。体重減少>20%のNCI活性判定基準を使用して、化合物の毒性を判断した。
【０２５１】
Table XXXIX(表39)は各治療で得られた%T/C値を報告し、図29及び30は、対照(ビヒクル)、種々の投与量のアプリジン、テムシロリムス、またはアプリジン+テムシロリムスで治療されたマウスにおけるNCI-H-460腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す。
【０２５２】
【表３９】
2011513429.tif 000045
【０２５３】
Table XXXX(表40)は、NCI-H-460ヒトNSCLC異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び20mg/kg/日のテムシロリムスの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びテムシロリムスの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとテムシロリムスとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０２５４】
【表４０】
2011513429.tif 000046
【０２５５】
Table XXXXI(表41)は、NCI-H-460ヒトNSCLC異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び10mg/kg/日のテムシロリムスの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びテムシロリムスの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとテムシロリムスとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０２５６】
【表４１】
2011513429.tif 000047
【０２５７】
アプリジンは、NCI-H-460ヒトNSCLC細胞株に対して単剤(単剤療法)として投与されると、不活性であった。加えて、10及び20mg/kg/日の投与量での単剤としてのテムシロリムスでの治療は、NCI-H-460細胞株に対して、活性に関するNCIの判定基準に合致する活性を示した。さらに、これらの治療は、平均体重の有意な減少を引き起こさず、すべてのマウスは、研究終末まで体重が増加した。
【０２５８】
しかし、アプリジンを0.060mg/kg/日の投与量で10及び20mg/kg/日の投与量のテムシロリムスと併用すると、双方とも活性の増強が観察され、研究の終末時点で相加的を超える腫瘍増殖阻害の増強がもたらされた。加えて、アプリジンとテムシロリムスとの併用は、体重の許容し得る減少をもたらし、すべてのマウスは、研究終末まで体重が増加した。
【０２５９】
(実施例6)ヒト肝細胞癌異種移植片におけるソラフェニブと併用したアプリジンのin vivo研究
すべての実験で、雌性無胸腺ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、ウィスコンシン州)を使用した。6〜8週齢のマウスに細胞懸濁液を移植した。動物は、換気ラック式ケージ中に、食物及び水を制約なしに与えて収容した。マウスは、腫瘍移植に先立って少なくとも5日間順化した。ビヒクル対象群は、15尾のマウスを含み、治療群には、群当たりそれぞれ9尾のマウスを配置した。
【０２６０】
この研究で使用する腫瘍モデルは、ATCC(Manassas、ヴァージニア州)から入手したヒト肝細胞癌の細胞株であるHepG2とした。HepG2細胞を、MEM培地(10%FBS、1.5g/l重炭酸ナトリウム、0.1mM非必須アミノ酸、1.0mMピルビン酸ナトリウム及び2mM L-グルタミンを含む)中で増殖させた。in vitroでの継代4〜20からの細胞を、SCで研究マウス中に、23Gの注射針及び1ccのシリンジを使用して、0.2mlの50%マトリゲル/50%抗生物質不含培地または血清を用い、5×106細胞/マウスで移植した。移植用に調製された細胞のアリコートに関して細菌培養を実施した。すべての培養物は、移植後の24及び48時間の双方の時点で細菌汚染に関して陰性であった。
【０２６１】
腫瘍の測定値は、実施例1で開示したようにして求めた。腫瘍増殖の平均の大きさが、130±44mg(平均±SD)の範囲内にあるなら、LabCat(登録商標)In Life module V 8.0 SP1腫瘍追跡及び測定ソフトウェアを使用して、マウスを、腫瘍重量に基づいて治療及び対照群に無作為化した。
【０２６２】
HepG2腫瘍を持つマウスの治療は、DPI(移植後日数)19日目に開始した。治療日及び腫瘍の大きさの測定時に体重を記録した。2種の薬物を同一日に投与するような日には、併用療法群を、治療を順序付けようとしないで同一時点で2種の薬物を共投与することによって治療した。
【０２６３】
アプリジンは、凍結乾燥アプリジン粉末のバイアル瓶の形態で提供し、15/15/70のCremophor EL/エタノール/水(CEW)で0.5mg/mlの濃度に再構成した。アプリジン/CEW溶液を、0.9%生理食塩水で、CEWの最終比率が0.18/0.18/0.84である投与製剤濃度まで希釈した。
【０２６４】
ソラフェニブは、そのトシル酸塩の形態のソラフェニブを含有する赤色に着色した200mg錠剤の形態で提供した。ソラフェニブ溶液は、該錠剤をCremophor EL/エタノール(50/50)で50mg/mlの濃度に溶解することによって調製した。次いで、この溶液を、点滴用水(wfi)で(12.5、12.5、75)のCEWの最終比率まで希釈した。ソラフェニブのCEW溶液を、wfiで投与製剤濃度まで希釈した。
【０２６５】
3種の異種移植片モデルに関する研究群及び治療方式をTable XXXXII(表42)に記載する。
【０２６６】
【表４２】
2011513429.tif 000048
【０２６７】
腫瘍の大きさの測定値は、治療開始から研究終結まで、週2回記録した。腫瘍増殖の阻害は、2剤併用(アプリジンとソラフェニブ)での平均腫瘍重量をソラフェニブでの平均腫瘍重量と種々のアッセイ濃度で対比して評価した。
【０２６８】
すべての評価において、すべての動物群に関する腫瘍体積について、平均値、平均値の標準偏差、標準誤差を求めた。研究の終末時点を含む各測定日に腫瘍体積に関してスチューデントのt検定を実施して、併用治療群と単剤療法治療群との間になんらかの統計的有意差が存在するかどうかを判定した。
【０２６９】
併用療法に関する効力増強及び相加性の程度を評価するための定義及び判定基準は、実施例1で開示したものと同様とした。
【０２７０】
体重効果は、各マウスの体重測定値を最初(治療初日)の体重と比較することによって判定した。体重減少>20%のNCI活性判定基準を使用して、化合物の毒性を判断した。
【０２７１】
Table XXXXIII(表43)は、各治療で得られた%T/C値を報告し、図31及び32は、対照(ビヒクル)、種々の投与量のアプリジン、ソラフェニブ、またはアプリジン+ソラフェニブで治療されたマウスにおけるHepG2腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す。
【０２７２】
【表４３】
2011513429.tif 000049
【０２７３】
Table XXXXIV(表44)は、HepG2ヒト肝細胞癌異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び60mg/kg/日のソラフェニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びソラフェニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとソラフェニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０２７４】
【表４４】
2011513429.tif 000050
【０２７５】
Table XXXXV(表45)は、HepG2ヒト肝細胞癌異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び30mg/kg/日のソラフェニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びソラフェニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとソラフェニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０２７６】
【表４５】
2011513429.tif 000051
【０２７７】
アプリジン及びソラフェニブをHepG2ヒト肝細胞癌細胞株に対して単剤(単剤療法)として投与すると、それらの薬剤は不活性であった。加えて、これらの治療は、平均体重の有意な減少を引き起こさなかった。
【０２７８】
しかし、アプリジンを0.060mg/kg/日の投与量で、30mg/kg/日の投与量のソラフェニブと併用すると、活性の増強が観察され、腫瘍増殖阻害の相加的を超える増強がもたらされた。加えて、アプリジンとソラフェニブとの併用は、体重の許容し得る減少をもたらした。
【０２７９】
(実施例7)ヒトメラノーマ異種移植片におけるソラフェニブと併用したアプリジンのin vivo研究
すべての実験で、雌性無胸腺ヌードマウス(Harlan Sprague Dawley、Madison、ウィスコンシン州)を使用した。6〜8週齢のマウスに腫瘍断片を移植した。動物は、換気ラック式ケージ中に、食物及び水を制約なしに与えて収容した。マウスは、腫瘍移植に先立って少なくとも5日間順化した。ビヒクル対象群は、15尾のマウスを含み、治療群には、群当たりそれぞれ10尾のマウスを配置した。
【０２８０】
この研究で使用する腫瘍モデルは、the Department of Developmemtal Therapeutics, National Cancer Institute(NCI)から入手したヒトメラノーマ細胞株であるLOX-IMVIとした。動物には、ゲージ13の外套針を使用して、in vivoで移植可能な継代1の株から湿潤剤として無菌のEarle均衡塩溶液を使用してLOX-IMVIの2mm3の組織腫瘍断片を皮下(SC)で右側腹部に移植した。移植時点で行った細菌培養は、移植後24及び48時間の双方の時点で汚染に関して陰性であった。
【０２８１】
腫瘍の測定値は、実施例1で開示したようにして求めた。腫瘍増殖の平均の大きさが、130±44mg(平均±SD)の範囲内にあるなら、LabCat(登録商標)In Life module V 8.0 SP1腫瘍追跡及び測定ソフトウェアを使用してマウスを、腫瘍重量に基づいて治療及び対照群に無作為化した。
【０２８２】
LOX-IMVI腫瘍を持つマウスの治療は、DPI(移植後日数)11日目に開始した。治療日及び腫瘍の大きさの測定時に体重を記録した。2種の薬物を同一日に投与するような日には、併用療法群を、治療を順序付けようとしないで同一時点で2種の薬物を共投与することによって治療した。
【０２８３】
アプリジンは、凍結乾燥アプリジン粉末のバイアル瓶の形態で提供し、15/15/70のCremophor EL/エタノール/水(CEW)で0.5mg/mlの濃度に再構成した。アプリジン/CEW溶液を、0.9%生理食塩水で、CEWの最終比率が0.18/0.18/0.84である投与製剤濃度まで希釈した。
【０２８４】
ソラフェニブは、そのトシル酸塩の形態のソラフェニブを含有する赤色に着色した200mg錠剤の形態で提供した。ソラフェニブ溶液は、該錠剤をCremophor EL/エタノール(50/50)で50mg/mlの濃度に溶解することによって調製した。次いで、この溶液を、点滴用水(wfi)で(12.5、12.5、75)のCEWの最終比率まで希釈した。ソラフェニブのCEW溶液を、wfiで投与製剤濃度まで希釈した。
【０２８５】
3種の異種移植片モデルに関する研究群及び治療方式をTable XXXXVI(表46)に記載する。
【０２８６】
【表４６】
2011513429.tif 000052
【０２８７】
腫瘍の大きさの測定値は、治療開始から研究終結まで、週2回記録した。腫瘍増殖の阻害は、2剤併用(アプリジンとソラフェニブ)での平均腫瘍重量をソラフェニブでの平均腫瘍重量と種々のアッセイ濃度で対比して評価した。
【０２８８】
すべての評価において、すべての動物群に関する腫瘍体積について、平均値、平均値の標準偏差、標準誤差を測定した。研究の終末時点を含む各測定日に腫瘍体積に関してスチューデントのt検定を実施して、併用治療群と単剤療法治療群との間になんらかの統計的有意差が存在するかどうかを判定した。
【０２８９】
併用療法に関する効力増強及び相加性の程度を評価するための定義及び判定基準は、実施例1で開示したものと同様とした。
【０２９０】
体重効果は、各マウスの体重測定値を最初(治療初日)の体重と比較することによって判定した。体重減少>20%のNCI活性判定基準を使用して、化合物の毒性を判断した。
【０２９１】
Table XXXXVII(表47)は各治療で得られた%T/C値を報告し、図33及び34は、対照(ビヒクル)、種々の投与量のアプリジン、ソラフェニブ、またはアプリジン+ソラフェニブで治療されたマウスにおけるLOX-IMVI腫瘍の腫瘍重量の漸進的変化(平均±SEM)を示す。
【０２９２】
【表４７】
2011513429.tif 000053
【０２９３】
Table XXXXVIII(表48)は、LOX-IMVIヒトメラノーマ異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び60mg/kg/日のソラフェニブの投与量で、単剤として及び併用して投与されたアプリジン及びソラフェニブの腫瘍増殖阻害%を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとソラフェニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０２９４】
【表４８】
2011513429.tif 000054
【０２９５】
Table XXXXIX(表49)はLOX-IMVIヒトメラノーマ異種移植片に対して0.06mg/kg/日のアプリジン及び30mg/kg/日のソラフェニブの投与量で単剤投与及び併用投与されたアプリジン及びソラフェニブの腫瘍増殖阻害％を示す。さらに、前記投与量でのアプリジンとソラフェニブとの併用の効力増強及び相加性の程度を示す。
【０２９６】
【表４９】
2011513429.tif 000055
【０２９７】
アプリジン及びソラフェニブは、LOX-IMVIヒトメラノーマ細胞株に対して単剤(単剤療法)として投与されると、それらの薬剤は不活性であった。加えて、これらの治療は、平均体重の有意な減少を引き起こさず、すべてのマウスは、研究終末まで体重が増加した。
【０２９８】
しかし、アプリジンを0.060mg/kg/日の投与量で、30及び60mg/kg/日の投与量のソラフェニブと併用すると、双方とも活性の増強が観察され、相加的を超える腫瘍増殖阻害の増強がもたらされた。加えて、アプリジンとソラフェニブとの併用は、体重の許容し得る減少をもたらし、すべてのマウスは、研究終末まで体重が増加した。
【図１】
2011513429.tif 000056
【図２】
2011513429.tif 000057
【図３】
2011513429.tif 000058
【図４】
2011513429.tif 000059
【図５】
2011513429.tif 000060
【図６】
2011513429.tif 000061
【図７】
2011513429.tif 000062
【図８】
2011513429.tif 000063
【図９】
2011513429.tif 000064
【図１０】
2011513429.tif 000065
【図１１】
2011513429.tif 000066
【図１２】
2011513429.tif 000067
【図１３】
2011513429.tif 000068
【図１４】
2011513429.tif 000069
【図１５】
2011513429.tif 000070
【図１６】
2011513429.tif 000071
【図１７】
2011513429.tif 000072
【図１８】
2011513429.tif 000073
【図１９】
2011513429.tif 000074
【図２０】
2011513429.tif 000075
【図２１】
2011513429.tif 000076
【図２２】
2011513429.tif 000077
【図２３】
2011513429.tif 000078
【図２４】
2011513429.tif 000079
【図２５】
2011513429.tif 000080
【図２６】
2011513429.tif 000081
【図２７】
2011513429.tif 000082
【図２８】
2011513429.tif 000083
【図２９】
2011513429.tif 000084
【図３０】
2011513429.tif 000085
【図３１】
2011513429.tif 000086
【図３２】
2011513429.tif 000087
【図３３】
2011513429.tif 000088
【図３４】
2011513429.tif 000089
【国際調査報告】
2011513429.tif 000090
2011513429.tif 000091
2011513429.tif 000092
2011513429.tif 000093