(57)【要約】  本発明は、APIホルモテロールおよび関連物質を分析するための新規なHPLC法に関する。第1の方法において、移動相は2つ以上の液体を含み、液体の相対濃度は所定の勾配に従って変化する。第2の方法において、移動相は、酢酸アンモニウム水溶液を含む第1の液体Aおよび双極性非プロトン性溶媒を含む第2の液体Bを含む。第3の方法において、移動相は、濃度0.001Mから0.025Mの酢酸アンモニウム水溶液を含む第1の液体A、および第2の液体Bを含む。本発明は、1つまたは複数の特定の不純物を検出し、場合により定量化することを含む、物質を分析するための方法にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
移動相が、第1の液体Aおよび第2の液体Bを含む2つ以上の液体を含み、液体の相対濃度が所定の勾配に従って変化する、ホルモテロールを分析するためのHPLC法。
【請求項２】
第1の液体Aが水性ベースである、請求項1に記載のHPLC法。
【請求項３】
第1の液体Aが、水、またはバッファー水溶液を含む、請求項2に記載のHPLC法。
【請求項４】
バッファーが、酸、または有機塩もしくは無機塩である、請求項3に記載のHPLC法。
【請求項５】
バッファーが、リン酸塩、酢酸塩、ギ酸塩、またはトリフルオロ酢酸である、請求項4に記載のHPLC法。
【請求項６】
バッファーがアンモニウム塩である、請求項4または5に記載のHPLC法。
【請求項７】
バッファーが酢酸アンモニウムである、請求項6に記載のHPLC法。
【請求項８】
バッファーが0.001Mから0.1Mの濃度で存在する、請求項3から7のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項９】
バッファーが0.001Mから0.01Mの濃度で存在する、請求項8に記載のHPLC法。
【請求項１０】
バッファーが0.005Mから0.01Mの濃度で存在する、請求項9に記載のHPLC法。
【請求項１１】
バッファーが約0.007Mの濃度で存在する、請求項10に記載のHPLC法。
【請求項１２】
バッファーが、0.001Mから0.01Mの濃度で存在する酢酸アンモニウムである、請求項7に記載のHPLC法。
【請求項１３】
酢酸アンモニウムが約0.007Mの濃度で存在する、請求項12に記載のHPLC法。
【請求項１４】
バッファーのpHが約2から6である、請求項3から13のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１５】
バッファーのpHが3.8と5.8の間である、請求項14に記載のHPLC法。
【請求項１６】
バッファーのpHが約4.8である、請求項15に記載のHPLC法。
【請求項１７】
第2の液体Bが有機溶媒である、請求項1から16のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１８】
第2の液体Bが実質的に水混和性の溶媒である、請求項1から17のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１９】
第2の液体Bが、酢酸、メタノール、エタノール、n-プロパノール、もしくはイソプロパノールなどの極性プロトン性溶媒、またはアセトン、アセトニトリル、ジメトキシエタン、DMF、DMSO、1,4-ジオキサン、ピリジン、もしくはTHFなどの双極性非プロトン性溶媒である、請求項1から18のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項２０】
第2の液体Bが、メタノール、エタノール、アセトニトリル、プロパノール、イソプロパノール、またはこれらの混合物から選択される、請求項17に記載のHPLC法。
【請求項２１】
第2の液体Bがアセトニトリルである、請求項20に記載のHPLC法。
【請求項２２】
第1の液体Aが酢酸アンモニウム水溶液であり、第2の液体Bがアセトニトリルである、請求項1から21のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項２３】
0.01ml/分と10ml/分の間の移動相の流速が用いられる、請求項1から22のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項２４】
約1ml/分の移動相の流速が用いられる、請求項23に記載のHPLC法。
【請求項２５】
液体AおよびBの相対濃度が、10分から180分にわたって操作して、99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間の勾配に従って変化するような勾配のプログラミングを含む、請求項1から24のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項２６】
勾配が30分から120分にわたって操作される、請求項25に記載のHPLC法。
【請求項２７】
勾配が30分から60分にわたって操作される、請求項26に記載のHPLC法。
【請求項２８】
第1の液体Aが0.007M酢酸アンモニウム水溶液であり、第2の液体Bがアセトニトリルである、請求項1から27のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項２９】
勾配が以下の通りである、請求項28に記載のHPLC法。
【表１】
2011501204.tif 000009
【請求項３０】
固定相がキラルである、請求項1から29のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項３１】
移動相がキラルセレクターをさらに含む、請求項1から30のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項３２】
固定相が逆相である、請求項1から31のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項３３】
用いられる固定相が、オクタデシルシリルシリカゲル、オクチルシリルシリカゲル、フェニルアルキルシリカゲル、シアノプロピルシリカゲル、アミノプロピルシリカゲル、またはアルキルジオールシリカゲルである、請求項32に記載のHPLC法。
【請求項３４】
用いられる固定相が、オクタデシルシリルシリカゲルまたはオクチルシリルシリカゲルである、請求項33に記載のHPLC法。
【請求項３５】
固定相がYMC Pack pro C18(250mm×4.6mm)、5μカラムを含む、請求項34に記載のHPLC法。
【請求項３６】
固定相の粒子サイズが0.1μmと100μmの間である、請求項1から35のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項３７】
固定相の粒子サイズが約5μmである、請求項36に記載のHPLC法。
【請求項３８】
固定相のポアサイズが1nmと100nmの間である、請求項1から37のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項３９】
固定相のポアサイズが約12nmである、請求項38に記載のHPLC法。
【請求項４０】
クロマトグラフィーが約15℃から40℃の間の温度で行われる、請求項1から39のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項４１】
クロマトグラフィーが長さ10mmと5000mmの間のカラムにおいて行われる、請求項1から40のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項４２】
クロマトグラフィーが長さ約250mmのカラムにおいて行われる、請求項41に記載のHPLC法。
【請求項４３】
クロマトグラフィーが内径0.01mmと100mmの間のカラムにおいて行われる、請求項1から42のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項４４】
クロマトグラフィーが内径約4.6mmのカラムにおいて行われる、請求項43に記載のHPLC法。
【請求項４５】
溶出液が、UVもしくは可視分光光度計、蛍光分光光度計、示差屈折計、電気化学検出器、質量分析機、光散乱検出器、または放射能検出器などの検出器によって分析される、請求項1から44のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項４６】
ホルモテロールがフマル酸ホルモテロール二水和物の形態である、請求項1から45のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項４７】
1回の操作において、以下の不純物の1つまたは複数:
N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノ]アセトフェノン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;および/または
4-ベンジルオキシ-3-ホルミルアミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコール
を検出し、場合により定量化する、請求項1から46のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項４８】
1回の操作において、以下の化合物:
N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノ]アセトフェノン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;
4-ベンジルオキシ-3-ホルミルアミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコール
から選択されるものを含む不純物を全て検出し、定量化する、請求項1から47のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項４９】
移動相が、酢酸アンモニウム水溶液を含む第1の液体A、および双極性非プロトン性溶媒を含む第2の液体Bを含む2つ以上の液体を含む、ホルモテロールを分析するためのHPLC法。
【請求項５０】
酢酸アンモニウム水溶液の濃度が0.001Mから0.1Mである、請求項49に記載のHPLC法。
【請求項５１】
酢酸アンモニウム水溶液の濃度が0.001Mから0.01Mである、請求項50に記載のHPLC法。
【請求項５２】
酢酸アンモニウム水溶液の濃度が0.005Mから0.01Mである、請求項51に記載のHPLC法。
【請求項５３】
酢酸アンモニウム水溶液の濃度が約0.007Mである、請求項52に記載のHPLC法。
【請求項５４】
水溶液のpHが約2から6である、請求項49から53のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項５５】
水溶液のpHが3.8と5.8の間である、請求項54に記載のHPLC法。
【請求項５６】
水溶液のpHが約4.8である、請求項55に記載のHPLC法。
【請求項５７】
第2の液体Bが実質的に水混和性の溶媒である、請求項49から56のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項５８】
第2の液体Bが、アセトン、アセトニトリル、ジメトキシエタン、DMF、DMSO、1,4-ジオキサン、ピリジン、またはTHFから選択される、請求項49から57のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項５９】
第2の液体Bがアセトニトリルである、請求項58に記載のHPLC法。
【請求項６０】
0.01ml/分と10ml/分の間の移動相の流速が用いられる、請求項49から59のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項６１】
約1ml/分の移動相の流速が用いられる、請求項60に記載のHPLC法。
【請求項６２】
HPLC法が定組成法である、請求項49から61のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項６３】
液体AおよびBの相対濃度が99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間に設定される、請求項62に記載のHPLC法。
【請求項６４】
液体AおよびBの相対濃度が約40%A:60%Bである、請求項63に記載のHPLC法。
【請求項６５】
移動相の液体の相対濃度が所定の勾配に従って変化する、請求項49から61のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項６６】
液体AおよびBの相対濃度が、10分から180分にわたって操作して、99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間の勾配に従って変化するような勾配のプログラミングを含む、請求項65に記載のHPLC法。
【請求項６７】
勾配が30分から120分にわたって操作される、請求項66に記載のHPLC法。
【請求項６８】
勾配が30分から60分にわたって操作される、請求項67に記載のHPLC法。
【請求項６９】
第1の液体Aが0.007M酢酸アンモニウム水溶液であり、第2の液体Bがアセトニトリルである、請求項65から68のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項７０】
勾配が以下の通りである、請求項69に記載のHPLC法。
【表２】
2011501204.tif 000010
【請求項７１】
固定相がキラルである、請求項49から70のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項７２】
移動相がキラルセレクターをさらに含む、請求項49から71のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項７３】
固定相が逆相である、請求項49から72のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項７４】
用いられる固定相が、オクタデシルシリルシリカゲル、オクチルシリルシリカゲル、フェニルアルキルシリカゲル、シアノプロピルシリカゲル、アミノプロピルシリカゲル、またはアルキルジオールシリカゲルである、請求項73に記載のHPLC法。
【請求項７５】
用いられる固定相が、オクタデシルシリルシリカゲルまたはオクチルシリルシリカゲルである、請求項74に記載のHPLC法。
【請求項７６】
固定相がYMC Pack pro C18(250mm×4.6mm)、5μカラムを含む、請求項75に記載のHPLC法。
【請求項７７】
固定相の粒子サイズが0.1μmと100μmの間である、請求項49から76のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項７８】
固定相の粒子サイズが約5μmである、請求項77に記載のHPLC法。
【請求項７９】
固定相のポアサイズが1nmと100nmの間である、請求項49から78のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項８０】
固定相のポアサイズが約12nmである、請求項79に記載のHPLC法。
【請求項８１】
クロマトグラフィーが約15℃から40℃の間の温度で行われる、請求項49から80のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項８２】
クロマトグラフィーが長さ10mmと5000mmの間のカラムにおいて行われる、請求項49から81のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項８３】
クロマトグラフィーが長さ約250mmのカラムにおいて行われる、請求項82に記載のHPLC法。
【請求項８４】
クロマトグラフィーが内径0.01mmと100mmの間のカラムにおいて行われる、請求項49から83のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項８５】
クロマトグラフィーが内径約4.6mmのカラムにおいて行われる、請求項84に記載のHPLC法。
【請求項８６】
溶出液が、UVもしくは可視分光光度計、蛍光分光光度計、示差屈折計、電気化学検出器、質量分析機、光散乱検出器、または放射能検出器などの検出器によって分析される、請求項49から85のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項８７】
ホルモテロールがフマル酸ホルモテロール二水和物の形態である、請求項49から86のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項８８】
1回の操作において、以下の不純物の1つまたは複数:
N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノ]アセトフェノン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;および/または
4-ベンジルオキシ-3-ホルミルアミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコール
を検出し、場合により定量化する、請求項49から87のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項８９】
移動相が、濃度0.001Mから0.025Mの酢酸アンモニウム水溶液を含む第1の液体A、および第2の液体Bを含む2つ以上の液体を含む、ホルモテロールを分析するためのHPLC法。
【請求項９０】
酢酸アンモニウム水溶液の濃度が0.001Mから0.01Mである、請求項89に記載のHPLC法。
【請求項９１】
酢酸アンモニウム水溶液の濃度が0.005Mから0.01Mである、請求項90に記載のHPLC法。
【請求項９２】
酢酸アンモニウム水溶液の濃度が約0.007Mである、請求項91に記載のHPLC法。
【請求項９３】
水溶液のpHが約2から6である、請求項89から92のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項９４】
水溶液のpHが3.8と5.8の間である、請求項93に記載のHPLC法。
【請求項９５】
水溶液のpHが約4.8である、請求項94に記載のHPLC法。
【請求項９６】
第2の液体Bが有機溶媒である、請求項89から95のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項９７】
第2の液体Bが実質的に水混和性の溶媒である、請求項89から96のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項９８】
第2の液体Bが、酢酸、メタノール、エタノール、n-プロパノール、もしくはイソプロパノールなどの極性プロトン性溶媒、またはアセトン、アセトニトリル、ジメトキシエタン、DMF、DMSO、1,4-ジオキサン、ピリジン、もしくはTHFなどの双極性非プロトン性溶媒である、請求項89から97のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項９９】
第2の液体Bが、メタノール、エタノール、アセトニトリル、n-プロパノール、イソプロパノール、またはこれらの混合物から選択される、請求項89から98のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１００】
第2の液体Bがアセトニトリルである、請求項99に記載のHPLC法。
【請求項１０１】
0.01ml/分と10ml/分の間の移動相の流速が用いられる、請求項89から100のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１０２】
約1ml/分の移動相の流速が用いられる、請求項101に記載のHPLC法。
【請求項１０３】
HPLC法が定組成法である、請求項89から102のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１０４】
液体AおよびBの相対濃度が99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間に設定される、請求項103に記載のHPLC法。
【請求項１０５】
液体AおよびBの相対濃度が約40%A:60%Bである、請求項104に記載のHPLC法。
【請求項１０６】
移動相の液体の相対濃度が所定の勾配に従って変化する、請求項89から102のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１０７】
液体AおよびBの相対濃度が、10分から180分にわたって操作して、99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間の勾配に従って変化するような勾配のプログラミングを含む、請求項106に記載のHPLC法。
【請求項１０８】
勾配が30分から120分にわたって操作される、請求項107に記載のHPLC法。
【請求項１０９】
勾配が30分から60分にわたって操作される、請求項108に記載のHPLC法。
【請求項１１０】
第1の液体Aが0.007M酢酸アンモニウム水溶液であり、第2の液体Bがアセトニトリルである、請求項106から109のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１１１】
勾配が以下の通りである、請求項110に記載のHPLC法。
【表３】
2011501204.tif 000011
【請求項１１２】
固定相がキラルである、請求項89から111のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１１３】
移動相がキラルセレクターをさらに含む、請求項89から112のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１１４】
固定相が逆相である、請求項89から113のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１１５】
用いられる固定相が、オクタデシルシリルシリカゲル、オクチルシリルシリカゲル、フェニルアルキルシリカゲル、シアノプロピルシリカゲル、アミノプロピルシリカゲル、またはアルキルジオールシリカゲルである、請求項114に記載のHPLC法。
【請求項１１６】
用いられる固定相が、オクタデシルシリルシリカゲルまたはオクチルシリルシリカゲルである、請求項115に記載のHPLC法。
【請求項１１７】
固定相がYMC Pack pro C18(250mm×4.6mm)、5μカラムを含む、請求項116に記載のHPLC法。
【請求項１１８】
固定相の粒子サイズが0.1μmと100μmの間である、請求項89から117のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１１９】
固定相の粒子サイズが約5μmである、請求項118に記載のHPLC法。
【請求項１２０】
固定相のポアサイズが1nmと100nmの間である、請求項89から119のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１２１】
固定相のポアサイズが約12nmである、請求項120に記載のHPLC法。
【請求項１２２】
クロマトグラフィーが約15℃から40℃の間の温度で行われる、請求項89から121のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１２３】
クロマトグラフィーが長さ10mmと5000mmの間のカラムにおいて行われる、請求項89から122のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１２４】
クロマトグラフィーが長さ約250mmのカラムにおいて行われる、請求項123に記載のHPLC法。
【請求項１２５】
クロマトグラフィーが内径0.01mmと100mmの間のカラムにおいて行われる、請求項89から124のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１２６】
クロマトグラフィーが内径4.6mmのカラムにおいて行われる、請求項125に記載のHPLC法。
【請求項１２７】
溶出液が、UVもしくは可視分光光度計、蛍光分光光度計、示差屈折計、電気化学検出器、質量分析機、光散乱検出器、または放射能検出器などの検出器によって分析される、請求項89から126のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１２８】
ホルモテロールがフマル酸ホルモテロール二水和物の形態である、請求項89から127のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１２９】
1回の操作において、以下の不純物の1つまたは複数:
N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノ]アセトフェノン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;および/または
4-ベンジルオキシ-3-ホルミルアミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコール
を検出し、場合により定量化する、請求項89から128のいずれか一項に記載のHPLC法。
【請求項１３０】
N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノ]アセトフェノン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;および/または
4-ベンジルオキシ-3-ホルミルアミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコール
から選択される1つまたは複数の不純物を検出し、場合により定量化することを含む、物質を分析するための方法。
【請求項１３１】
物質が薬理学的有効成分である、請求項130に記載の方法。
【請求項１３２】
物質がホルモテロールである、請求項130または131に記載の方法。
【請求項１３３】
ホルモテロールがフマル酸ホルモテロール二水和物の形態である、請求項132に記載の方法。
【請求項１３４】
物質が25重量%未満の1つまたは複数の不純物を含む、請求項130から133のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３５】
HPLCの使用を含む、請求項130から134のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３６】
移動相が、第1の液体Aおよび第2の液体Bを含む2つ以上の液体を含む、請求項135に記載の方法。
【請求項１３７】
第1の液体Aが水性ベースである、請求項136に記載の方法。
【請求項１３８】
第1の液体Aが、水、またはバッファー水溶液を含む、請求項137に記載の方法。
【請求項１３９】
バッファーが、酸、または有機塩もしくは無機塩である、請求項138に記載の方法。
【請求項１４０】
バッファーが、リン酸塩、酢酸塩、ギ酸塩、またはトリフルオロ酢酸である、請求項139に記載の方法。
【請求項１４１】
バッファーがアンモニウム塩である、請求項139または140に記載の方法。
【請求項１４２】
バッファーが酢酸アンモニウムである、請求項141に記載の方法。
【請求項１４３】
バッファーが0.001Mから0.1Mの濃度で存在する、請求項138から142のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４４】
バッファーが0.001Mから0.01Mの濃度で存在する、請求項143に記載の方法。
【請求項１４５】
バッファーが0.005Mから0.01Mの濃度で存在する、請求項144に記載の方法。
【請求項１４６】
バッファーが約0.007Mの濃度で存在する、請求項145に記載の方法。
【請求項１４７】
バッファーのpHが約2から6である、請求項138から146のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４８】
バッファーのpHが3.8と5.8の間である、請求項147に記載の方法。
【請求項１４９】
バッファーのpHが約4.8である、請求項148に記載の方法。
【請求項１５０】
第2の液体Bが有機溶媒である、請求項136から149のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５１】
第2の液体Bが実質的に水混和性の溶媒である、請求項136から150のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５２】
第2の液体Bが、酢酸、メタノール、エタノール、n-プロパノール、もしくはイソプロパノールなどの極性プロトン性溶媒、またはアセトン、アセトニトリル、ジメトキシエタン、DMF、DMSO、1,4-ジオキサン、ピリジン、もしくはTHFなどの双極性非プロトン性溶媒である、請求項136から151のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５３】
第2の液体Bが、メタノール、エタノール、アセトニトリル、n-プロパノール、イソプロパノール、またはこれらの混合物から選択される、請求項150に記載の方法。
【請求項１５４】
第2の液体Bがアセトニトリルである、請求項153に記載の方法。
【請求項１５５】
第1の液体Aが酢酸アンモニウム水溶液であり、第2の液体Bがアセトニトリルである、請求項136から154のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５６】
0.01ml/分と10ml/分の間の移動相の流速が用いられる、請求項136から155のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５７】
約1ml/分の移動相の流速が用いられる、請求項156に記載の方法。
【請求項１５８】
定組成HPLC法である、請求項136から157のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５９】
液体AおよびBの相対濃度が99.5%A:0.5%Bと0.5%A:99.5%Bの間に設定される、請求項158に記載の方法。
【請求項１６０】
液体AおよびBの相対濃度が約40%A:60%Bである、請求項159に記載の方法。
【請求項１６１】
移動相の液体の相対濃度が所定の勾配に従って変化する、請求項136から157のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６２】
液体AおよびBの相対濃度が、10分から180分にわたって操作して、99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間の勾配に従って変化するような勾配のプログラミングを含む、請求項161に記載の方法。
【請求項１６３】
勾配が30分から120分にわたって操作される、請求項162に記載の方法。
【請求項１６４】
勾配が30分から60分にわたって操作される、請求項163に記載の方法。
【請求項１６５】
第1の液体Aが0.007M酢酸アンモニウム水溶液であり、第2の液体Bがアセトニトリルである、請求項161から164のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６６】
勾配が以下の通りである、請求項165に記載の方法。
【表４】
2011501204.tif 000012
【請求項１６７】
固定相がキラルである、請求項136から166のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６８】
移動相がキラルセレクターをさらに含む、請求項136から167のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６９】
固定相が逆相である、請求項136から168のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７０】
用いられる固定相が、オクタデシルシリルシリカゲル、オクチルシリルシリカゲル、フェニルアルキルシリカゲル、シアノプロピルシリカゲル、アミノプロピルシリカゲル、またはアルキルジオールシリカゲルである、請求項169に記載の方法。
【請求項１７１】
用いられる固定相が、オクタデシルシリルシリカゲルまたはオクチルシリルシリカゲルである、請求項170に記載の方法。
【請求項１７２】
固定相がYMC Pack pro C18(250mm×4.6mm)、5μカラムを含む、請求項171に記載の方法。
【請求項１７３】
固定相の粒子サイズが0.1μmと100μmの間である、請求項136から172のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７４】
固定相の粒子サイズが約5μmである、請求項173に記載の方法。
【請求項１７５】
固定相のポアサイズが1nmと100nmの間である、請求項136から174のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７６】
固定相のポアサイズが約12nmである、請求項175に記載の方法。
【請求項１７７】
クロマトグラフィーが約15℃から40℃の間の温度で行われる、請求項136から176のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７８】
クロマトグラフィーが長さ10mmと5000mmの間のカラムにおいて行われる、請求項136から177のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７９】
クロマトグラフィーが長さ約250mmのカラムにおいて行われる、請求項178に記載の方法。
【請求項１８０】
クロマトグラフィーが内径0.01mmと100mmの間のカラムにおいて行われる、請求項136から179のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８１】
クロマトグラフィーが内径約4.6mmのカラムにおいて行われる、請求項180に記載の方法。
【請求項１８２】
溶出液が、UVもしくは可視分光光度計、蛍光分光光度計、示差屈折計、電気化学検出器、質量分析機、光散乱検出器、または放射能検出器などの検出器によって分析される、請求項136から181のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、APIホルモテロールおよび関連物質を分析するための新規なHPLC法に関する。第1の方法において、移動相は2つ以上の液体を含み、液体の相対濃度は所定の勾配に従って変化する。第2の方法において、移動相は、酢酸アンモニウム水溶液を含む第1の液体A、および双極性非プロトン性溶媒を含む第2の液体Bを含む。第3の方法において、移動相は、濃度0.001Mから0.025Mの酢酸アンモニウム水溶液を含む第1の液体A、および第2の液体Bを含む。本発明は、1つまたは複数の特定の不純物を検出し、場合により定量化することを含む、物質を分析するための方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
医薬製品に対する販売認可を確実にするために、製造者は、適切な規制当局に対して、製品が市場への販売に適することを示す詳細な証拠を提出しなければならない。規制当局は、とりわけ、製品がヒトに投与されるのに許容でき、販売すべき特定の医薬組成物が販売時に不純物がなく、許容できる貯蔵安定性(有効期間)を有することに納得しなければならない。
【０００３】
したがって、規制当局に対してなされる提出物には、製造時に薬剤有効成分(API)には不純物が存在せず、または無視できるレベルしか存在しないこと、および医薬組成物の有効期限が許容できることを実証する分析データが含まれなければならない。
【０００４】
APIおよび医薬組成物における潜在的な不純物には、残留量のAPIに対する合成前駆体(中間体)、有効薬剤の合成中に生じる副生成物、残留溶媒、有効薬剤の異性体、APIの合成において、または医薬組成物の調製において用いられる材料中に存在した汚染物質、および未同定の外来性物質が含まれる。貯蔵時に出現することがある他の不純物には、例えば、酸化または加水分解による、有効薬剤の分解に起因する物質が含まれる。
【０００５】
保健衛生当局は非常に厳格な基準を有しており、製造者はその製品に不純物が比較的なく(承諾される特定の限度内)、この基準は製造される医薬製品の各バッチに対して再現性があることを実証しなければならない。
【０００６】
APIおよび医薬組成物が安全かつ有効であることを関連の保健衛生当局に納得させるのに必要とされる試験には、純度アッセイ、含量均一性試験、溶解試験、および関連物質の試験が含まれる。純度アッセイは、既知純度の基準に比べた場合の試験製品(分析物)の純度を決定するものであり、関連物質の試験は、製品中に存在する不純物を全て定量化するのに用いられる。含量均一性試験は、製品(例えば、錠剤)のバッチが均一量のAPIを含んでいることを確実にし、溶解試験は製品の各バッチのAPIの溶解および放出が一定であることを確実にするものである。
【０００７】
APIまたは医薬組成物(例えば、錠剤もしくはカプセル剤)のいずれかを分析するためのこれらの方法を開発する場合、選り抜きの技術は、通常、UV-可視検出器と組み合わせた高速液体クロマトグラフィー(HPLC)である。APIおよび混合物中に存在するあらゆる不純物は、HPLCの固定相上で分離され、これらはUV-可視分光光度計による検出および測定によって定量化することができる。
【０００８】
HPLCは、高圧ポンプが、分析される物質または混合物(分析物)を、液体溶媒すなわち移動相(溶出液とも呼ばれる)と一緒に、固定相を含む分離カラムを通して押し出す、クロマトグラフィーの分離技術である。
【０００９】
HPLC分析は、定組成(isocratic)または勾配の方式において行われ得る。定組成のHPLC分離は、一定の移動相組成下で行われるものである。勾配のHPLC分離は、移動相を構成する2つ以上の溶媒のパーセント値における経時的な段階的変化を特徴とする。溶媒における変化は、カラムを通した溶媒の移動の直前に、溶媒を混合してHPLC移動相を生成する混合装置によってしばしば制御される。
【００１０】
構成成分物質が固定相と強力に相互作用する場合、構成成分物質は比較的長時間カラム中にとどまるが、強力に固定相と相互作用しない物質はカラムをより早く離れる。相互作用の強度に応じて、分析物質の様々な構成成分は、様々な時間(保持時間)でカラムを分離する終わりに出現し、ここでこれらは適切な検出器によって同定および定量化され得る。
【００１１】
ホルモテロールは、N-[2-ヒドロキシ-5-[1-ヒドロキシ-2-[[2-(4-メトキシフェニル)-1-メチルエチル]アミノ]エチル]フェニル]ホルムアミドに対する一般化学名であり、長時間作用型ベータ作動薬であり、喘息および慢性閉塞性肺疾患(COPD)などの様々な呼吸器障害の治療に有用である。ホルモテロールは、RR (I)およびSS配置を有するエナンチオマーのラセミ体のフマル酸塩の二水和物形態として、現在販売されている。
【００１２】
【化１】
2011501204.tif 000002
【００１３】
ホルモテロールを調製するための方法は当技術分野では知られており、これらの方法には、米国特許第3994974号に開示されているものが含まれる。
【００１４】
ホルモテロールを分析するいくつかの方法が文献において発表されているが、これらの様々な方法は、本来、生体液中のホルモテロールを検出および測定するために開発されたものである(例えば、J.Campestriniら、J.Chromatography B、704巻、221〜229頁、1997年、およびD.K.Nadarassanら、J.Chromatography B、850巻、31〜37頁、2007年によって公開された方法を参照されたい)。バルクの薬物製品中の(例えば、S.O.AkapoおよびM.Asif、J.Pharm.Biomed.Anal.、33巻、935〜945頁、2003年を参照されたい)、またはエアロゾル製剤中の(K.H.Assiら、J.Pharm.Biomed.Anal.、41巻、325〜328頁、2006年を参照されたい)、ホルモテロールを分析するのにより適する、代替のHPLC法が発表されている。
【００１５】
さらに、フマル酸ホルモテロール二水和物に対する公式の研究論文がEuropean Pharmacopoeia 5.0(第2巻、1632〜1634頁、2005年)に掲載されているが、名前の上げられた不純物または関連物質を全て検出および/または測定するには、2つの異なるHPLC法を使用しなければならない。
【００１６】
しかし、これら現在の方法は全て、ホルモテロール試料、特に米国特許第3994974号に開示した経路によって合成されるフマル酸ホルモテロール二水和物試料中に存在する合成の中間体、および他の関連物質全てを検出および定量化するのに適切ではない。現在の方法は、フマル酸ホルモテロール二水和物中の全不純物を推定する上でやはり不十分である。
【００１７】
したがって、先行技術において報告されているHPLC法は、バルクの薬物物質として、特に関連物質に関して、ホルモテロールを分析するのに特に便利でもなく、または適切でもない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１８】
【特許文献１】米国特許第3994974号
【非特許文献】
【００１９】
【非特許文献１】J.Campestriniら、J.Chromatography B、704巻、221〜229頁、1997年、
【非特許文献２】D.K.Nadarassanら、J.Chromatography B、850巻、31〜37頁、2007年
【非特許文献３】S.O.AkapoおよびM.Asif、J.Pharm.Biomed.Anal.、33巻、935〜945頁、2003年
【非特許文献４】K.H.Assiら、J.Pharm.Biomed.Anal.、41巻、325〜328頁、2006年
【非特許文献５】European Pharmacopoeia 5.0(第2巻、1632〜1634頁、2005年)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
したがって、ホルモテロールおよびその不純物を分析するためにいくつかのHPLC法が開示されているが、上記に記載した既知の方法に付随する問題を回避する代替の方法が依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明者らの研究によって、驚くべきことに、ホルモテロールを分析するための、特に合成中に形成される関連物質に関して、新規な、有効な、再現性ある、簡単なHPLC法の開発および確証がもたらされている。
【００２２】
本発明の一目的は、好ましくは、先行技術の方法に付随する典型的な先行技術の問題点を回避する一方で、ホルモテロール、その不純物、および関連物質を分析するための、新規な、代替の方法を提供することである。
【００２３】
本発明の別の目的は、特に米国特許第3994974号において開示されたプロセスによって合成する場合、フマル酸ホルモテロール二水和物のバッチ中に形成され、残存することがある中間体を定量化するための、新規な、正確な、高感度のHPLC法を提供することである。
【００２４】
本明細書で用いられる「ホルモテロール」の語は、本明細書および特許請求の範囲を通して、ホルモテロール、および/またはそのあらゆる塩、溶媒和化合物、異性体、ジアステレオマー、もしくはエナンチオマーを意味する。ホルモテロールが、RRおよびSS配置を有するエナンチオマーのラセミ体のフマル酸塩の二水和物の形態で用いられるのが好ましい。
【００２５】
本発明の第1の一態様は、移動相が、第1の液体Aおよび第2の液体Bを含む2つ以上の液体を含み、液体の相対濃度が所定の勾配に従って変化する、ホルモテロールを分析するためのHPLC法を提供する。好ましい一実施形態において、移動相が、2つ以上の液体を含み、液体の相対濃度が所定の勾配に従って変化し、用いられる固定相が逆相である、ホルモテロールおよび関連物質を分析するためのHPLC法が提供される。
【００２６】
好ましくは、第1の液体Aは、水またはバッファー水溶液などの水性ベースである。
【００２７】
好ましくは、バッファーは、酸、または有機塩もしくは無機塩である。
【００２８】
典型的には、バッファーは、リン酸塩、酢酸塩、ギ酸塩、またはトリフルオロ酢酸塩である。最も好ましくは、バッファーは酢酸アンモニウムなどのアンモニウム塩である。
【００２９】
バッファーは、0.001Mから0.1Mの濃度で、好ましくは0.001Mから0.01Mの濃度で、より好ましくは0.005Mから0.01Mの濃度で、より好ましくは約0.007Mの濃度で存在することができる。
【００３０】
好ましくは、バッファーは0.001Mから0.01Mの濃度で存在する酢酸アンモニウムである。最も好ましくは、バッファーは約0.007Mの濃度で存在する酢酸アンモニウムである。
【００３１】
好ましくは、バッファーのpHは約2から6であり、より好ましくはpHは3.8と5.8の間であり、より好ましくはバッファーのpHは約4.8である。
【００３２】
典型的には、本発明の第1の態様の方法は約15℃から40℃の間の温度で行われる。
【００３３】
第2の液体Bは、好ましくは、メタノール、エタノール、アセトニトリル、プロパノール、もしくはイソプロパノール、またはこれらの混合物などの有機溶媒である。
【００３４】
本発明の第1の態様の一実施形態において、第2の液体Bは実質的に水混和性の溶媒である。
【００３５】
本明細書で用いられる、「実質的に混和性である」の語は、XおよびYの2つの液体に関して、20℃および1大気圧で一緒に混和した場合、Yの2つのモル分画間にXおよびYが単一相を形成し(すなわちxY1およびxY2)、この場合、ΔxY (=xY2-xY1)の大きさが少なくとも0.05であることを意味する。例えば、XおよびYは、Yのモル分画であるxYが0.40から0.45であり、または0.70から0.75である場合、両方の場合ともΔxY=0.05であり、単一相を形成することができる。好ましくはΔxYの大きさは少なくとも0.10であり、より好ましくは少なくとも0.25であり、より好ましくは少なくとも0.50であり、より好ましくは少なくとも0.75であり、より好ましくは少なくとも0.90であり、さらにより好ましくは少なくとも0.95である。最も好ましくは「実質的に混和性である」の語は、XおよびYの2つの液体に関して、20℃および1大気圧で一緒に混和した場合、XおよびYをあらゆる比率で一緒に混和した場合、単一相を形成する。
【００３６】
好ましくは、第2の液体Bは、酢酸、メタノール、エタノール、n-プロパノール、もしくはイソプロパノールなどの極性プロトン性溶媒、またはアセトン、アセトニトリル、ジメトキシエタン、DMF、DMSO、1,4-ジオキサン、ピリジン、もしくはTHFなどの双極性非プロトン性溶媒である。より好ましくは、第2の液体Bが双極性非プロトン性溶媒である場合、これはアセトン、アセトニトリル、ジメトキシエタン、または1,4-ジオキサンから選択される。最も好ましくは、第2の液体Bはアセトニトリルである。
【００３７】
本発明の第1の態様の好ましい一実施形態において、第1の液体Aは酢酸アンモニウム水溶液であり、第2の液体Bはアセトニトリルである。
【００３８】
好ましくは、0.01ml/分と10ml/分の間の移動相の流速が用いられ、より好ましくは、0.1ml/分と4ml/分の間の移動相の流速が用いられ、より好ましくは、約1ml/分の移動相の流速が用いられる。
【００３９】
典型的には、本発明の第1の態様は、液体AおよびBの相対濃度が、10分から180分にわたって99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間の勾配に従って変化するような勾配のプログラミングを含む。好ましくは、勾配は、30分から120分にわたって99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間である。より好ましくは、勾配は、30分から60分にわたって99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間である。
【００４０】
あるいは、本発明の第1の態様は、液体AおよびBの相対濃度は、約95%A:5%Bから、または約90%A:10%Bから、または約85%A:15%Bから、約5%A:95%Bまで、または約10%A:90%Bまで、または約15%A:85%Bまでの勾配に従って変化するような勾配のプログラミングを含むことができる。勾配における変化は、典型的には、10分から180分にわたって、好ましくは30分から120分にわたって、より好ましくは30分から60分にわたって起こることができる。
【００４１】
本発明の第1の態様の特に好ましい一実施形態は、第1の液体Aが0.007M酢酸アンモニウム水溶液であり、第2の液体Bがアセトニトリルである。
【００４２】
本発明の第1の態様による特に好ましい一方法は、第1の液体Aが0.007M酢酸アンモニウム水溶液であり、第2の液体Bがアセトニトリルであり、勾配が以下の通りである場合である。
【００４３】
【表１】
2011501204.tif 000003
【００４４】
本発明の第1の態様の一実施形態において、固定相はキラルである。別の実施形態において、移動相はキラルセレクターをさらに含む。
【００４５】
好ましくは、本発明の第1の態様において用いられる固定相は、オクタデシルシリルシリカゲル、オクチルシリルシリカゲル、フェニルアルキルシリカゲル、シアノプロピルシリカゲル、アミノプロピルシリカゲル、またはアルキルジオールシリカゲルなどの逆相である。特に適切な固定相は、オクタデシルシリルシリカゲル、またはオクチルシリルシリカゲルを含む。特に好ましい固定相は、好ましくはポアサイズ12nmの、YMC Pack pro C18(250mm×4.6mm)、5μカラムを含む。
【００４６】
好ましくは、固定相の粒子サイズは0.1μmと100μmの間であり、または0.5μmと25μmの間であり、または1μmと10μmの間である。より好ましくは、固定相の粒子サイズは約5μmである。
【００４７】
好ましくは、固定相のポアサイズは1nmと100nmの間であり、または2nmと40nmの間であり、または5nmと15nmの間である。より好ましくは、固定相のポアサイズは約12nmである。
【００４８】
本発明の第1の態様の一実施形態において、クロマトグラフィーは長さ10mmと5000mmの間のカラムにおいて、または長さ50mmと1000mmの間のカラムにおいて、または長さ100mmと500mmの間において行われる。より好ましくは、クロマトグラフィーは長さ約250mmのカラムにおいて行われる。
【００４９】
クロマトグラフィーは内径0.01mmと100mmの間の、または内径0.1mmと50mmの間の、または内径1mmと10mmの間のカラムにおいて行われてよい。より好ましくは、クロマトグラフィーは内径約4.6mmのカラムにおいて行われる。
【００５０】
溶出液は、UVもしくは可視分光光度計、蛍光分光光度計、示差屈折計、電気化学検出器、質量分析機、光散乱検出器、または放射能検出器などの検出器によって分析することができる。
【００５１】
本発明の第1の態様の好ましい一実施形態において、ホルモテロールはフマル酸ホルモテロール二水和物の形態である。
【００５２】
本発明の第1の態様の一実施形態において、HPLC法は1回の操作において、以下の不純物の1つまたは複数:
N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノ]アセトフェノン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;および/または
4-ベンジルオキシ-3-ホルミルアミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールを検出し、場合により定量化する。
【００５３】
好ましい一実施形態において、本発明によるHPLC法は、1回の操作において、以下の化合物:
N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノ]アセトフェノン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;
4-ベンジルオキシ-3-ホルミルアミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールから選択されるものを含む不純物を全て効果的に検出し、定量化する。
【００５４】
本発明の第2の態様は、移動相が、酢酸アンモニウム水溶液を含む第1の液体A、および双極性非プロトン性溶媒を含む第2の液体Bを含む、2つ以上の液体を含む、ホルモテロールを分析するためのHPLC法を提供する。
【００５５】
好ましくは、酢酸アンモニウム水溶液の濃度は0.001Mから0.1Mであり、より好ましくは、酢酸アンモニウム水溶液の濃度は0.001Mから0.01Mであり、または0.005Mから0.01Mである。より好ましくは、酢酸アンモニウム水溶液の濃度は約0.007Mである。
【００５６】
好ましくは、水溶液のpHは約2から6であり、より好ましくは、pHは3.8と5.8の間であり、より好ましくは、水溶液のpHは約4.8である。
【００５７】
本発明の第2の態様の一実施形態において、第2の液体Bは実質的に水混和性の溶媒である。
【００５８】
好ましくは、第2の液体Bは、アセトン、アセトニトリル、ジメトキシエタン、DMF、DMSO、1,4-ジオキサン、ピリジン、またはTHFから選択される。より好ましくは、第2の液体Bは、アセトン、アセトニトリル、ジメトキシエタン、または1,4-ジオキサンから選択される。最も好ましくは、第2の液体Bはアセトニトリルである。
【００５９】
好ましくは、0.01ml/分と10ml/分の間の移動相の流速が用いられ、より好ましくは、0.1ml/分と4ml/分の間の移動相の流速が用いられ、より好ましくは、約1ml/分の移動相の流速が用いられる。
【００６０】
本発明の第2の態様の一実施形態において、HPLC法は、好ましくは、液体AおよびBの相対濃度が、99.5%A:0.5%Bと0.5%A:99.5%Bの間、または90%A:10%Bと約10%A:90%Bの間、より好ましくは75%A:25%Bと25%A:75%Bの間に設定されるような定組成法である。より好ましくは、液体AおよびBの相対濃度は約40%A:60%Bである。
【００６１】
本発明の第2の態様の代替の一実施形態において、移動相の液体の相対濃度は所定の勾配に従って変化する。典型的には、液体AおよびBの相対濃度が、10分から180分にわたって、99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間の勾配に従って変化するような勾配のプログラミングが用いられる。好ましくは、勾配は30分から120分にわたって99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間である。より好ましくは、勾配は30分から60分にわたって99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間である。あるいは、液体AおよびBの相対濃度は、約95%A:5%Bから、または約90%A:10%Bから、または約85%A:15%Bから、約5%A:95%Bまで、または約10%A:90%Bまで、または約15%A:85%Bまでの勾配に従って変化するような勾配のプログラミングが用いられてよい。勾配における変化は、典型的には、10分から180分にわたって、好ましくは30分から120分にわたって、より好ましくは30分から60分にわたって起こることができる。
【００６２】
本発明の第2の態様による特に好ましい一方法は、第1の液体Aが0.007M酢酸アンモニウム水溶液であり、第2の液体Bがアセトニトリルであり、勾配が以下の通りである場合である。
【００６３】
【表２】
2011501204.tif 000004
【００６４】
本発明の第2の態様の一実施形態において、固定相はキラルである。別の実施形態において、移動相はキラルセレクターをさらに含む。
【００６５】
好ましくは、本発明の第2の態様において用いられる固定相は、オクタデシルシリルシリカゲル、オクチルシリルシリカゲル、フェニルアルキルシリカゲル、シアノプロピルシリカゲル、アミノプロピルシリカゲル、またはアルキルジオールシリカゲルなどの逆相である。特に適切な固定相は、オクタデシルシリルシリカゲル、またはオクチルシリルシリカゲルを含む。特に好ましい固定相は、好ましくはポアサイズ12nmのYMC Pack pro C18(250mm×4.6mm)、5μカラムを含む。
【００６６】
好ましくは、固定相の粒子サイズは0.1μmと100μmの間であり、または0.5μmと25μmの間であり、または1μmと10μmの間である。より好ましくは、固定相の粒子サイズは約5μmである。
【００６７】
好ましくは、固定相のポアサイズは1nmと100nmの間であり、または2nmと40nmの間であり、または5nmと15nmの間である。より好ましくは、固定相のポアサイズは約12nmである。
【００６８】
典型的には、本発明の第2の態様の方法は、約15℃から40℃の間の温度で行われる。
【００６９】
本発明の第2の態様の一実施形態において、クロマトグラフィーは長さ10mmと5000mmの間のカラムにおいて、または長さ50mmと1000mmの間のカラムにおいて、または長さ100mmと500mmの間において行われる。より好ましくは、クロマトグラフィーは長さ約250mmのカラムにおいて行われる。
【００７０】
クロマトグラフィーは内径0.01mmと100mmの間の、または内径0.1mmと50mmの間の、または内径1mmと10mmの間のカラムにおいて行われてよい。より好ましくは、クロマトグラフィーは内径4.6mmのカラムにおいて行われる。
【００７１】
溶出液は、UVもしくは可視分光光度計、蛍光分光光度計、示差屈折計、電気化学検出器、質量分析機、光散乱検出器、または放射能検出器などの検出器によって分析されてよい。
【００７２】
本発明の第2の態様の好ましい一実施形態において、ホルモテロールはフマル酸ホルモテロール二水和物の形態である。
【００７３】
本発明の第2の態様の一実施形態において、HPLC法は、1回の操作において、以下の不純物の1つまたは複数:
N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノ]アセトフェノン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;および/または
4-ベンジルオキシ-3-ホルミルアミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールを検出し、場合により定量化する。
【００７４】
本発明の第3の一態様は、移動相が、濃度0.001Mから0.025Mの酢酸アンモニウム水溶液を含む第1の液体A、および第2の液体Bを含む2つ以上の液体を含む、ホルモテロールを分析するためのHPLC法を提供する。
【００７５】
好ましくは、酢酸アンモニウム水溶液の濃度は0.001Mから0.01Mであり、より好ましくは、
酢酸アンモニウム水溶液の濃度は0.005Mから0.01Mである。より好ましくは、酢酸アンモニウム水溶液の濃度は約0.007Mである。
【００７６】
好ましくは、水溶液のpHは約2から6であり、より好ましくは、pHは3.8と5.8の間であり、より好ましくは、水溶液のpHは約4.8である。
【００７７】
本発明の第3の態様の第2の液体Bは、好ましくは、メタノール、エタノール、アセトニトリル、n-プロパノール、もしくはイソプロパノール、またはこれらの混合物などの有機溶媒である。
【００７８】
本発明の第3の態様の一実施形態において、第2の液体Bは実質的に水混和性の溶媒である。
【００７９】
好ましくは、第2の液体Bは、酢酸、メタノール、エタノール、n-プロパノール、もしくはイソプロパノールなどの極性プロトン性溶媒、またはアセトン、アセトニトリル、ジメトキシエタン、DMF、DMSO、1,4-ジオキサン、ピリジン、もしくはTHFなどの双極性非プロトン性溶媒である。より好ましくは、第2の液体Bが双極性非プロトン性溶媒である場合、これは、アセトン、アセトニトリル、ジメトキシエタン、または1,4-ジオキサンから選択される。最も好ましくは、第2の液体Bはアセトニトリルである。
【００８０】
好ましくは、0.01ml/分と10ml/分の間の移動相の流速が用いられ、より好ましくは、0.1ml/分と4ml/分の間の移動相の流速が用いられ、より好ましくは、約1ml/分の移動相の流速が用いられる。
【００８１】
本発明の第3の態様の一実施形態において、HPLC法は、好ましくは、液体AおよびBの相対濃度が99.5%A:0.5%Bと0.5%A:99.5%Bの間、または90%A:10%Bと10%A:90%Bの間、より好ましくは、75%A:25%Bと25%A:75%Bの間に設定されるような定組成法である。より好ましくは、液体AおよびBの相対濃度は約40%A:60%Bである。
【００８２】
本発明の第3の態様の代替の一実施形態において、移動相の液体の相対濃度は所定の勾配に従って変化する。典型的には、液体AおよびBの相対濃度が、10分から180分にわたって、99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間の勾配に従って変化するような勾配のプログラミングが用いられる。好ましくは、勾配は30分から120分にわたって99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間である。より好ましくは、勾配は30分から60分にわたって99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間である。あるいは、液体AおよびBの相対濃度は、約95%A:5%Bから、または約90%A:10%Bから、または約85%A:15%Bから、約5%A:95%Bまで、または約10%A:90%Bまで、または約15%A:85%Bまでの間の勾配に従って変化するような勾配のプログラミングが用いられてよい。勾配における変化は、典型的には、10分から180分にわたって、好ましくは30分から120分にわたって、より好ましくは30分から60分にわたって起こってよい。
【００８３】
本発明の第3の態様による特に好ましい一方法は、第1の液体Aが0.007M酢酸アンモニウム水溶液であり、第2の液体Bがアセトニトリルであり、勾配が以下の通りである場合である。
【００８４】
【表３】
2011501204.tif 000005
【００８５】
本発明の第3の態様の一実施形態において、固定相はキラルである。別の実施形態において、移動相はキラルセレクターをさらに含む。
【００８６】
好ましくは、本発明の第3の態様において用いられる固定相は、オクタデシルシリルシリカゲル、オクチルシリルシリカゲル、フェニルアルキルシリカゲル、シアノプロピルシリカゲル、アミノプロピルシリカゲル、またはアルキルジオールシリカゲルなどの逆相である。特に適切な固定相は、オクタデシルシリルシリカゲル、またはオクチルシリルシリカゲルを含む。特に好ましい固定相は、好ましくはポアサイズ12nmの、YMC Pack pro C18(250mm×4.6mm)、5μカラムを含む。
【００８７】
好ましくは、固定相の粒子サイズは0.1μmと100μmの間、または0.5μmと25μmの間、または1μmと10μmの間である。より好ましくは、固定相の粒子サイズは約5μmである。
【００８８】
好ましくは、固定相のポアサイズは1nmと100nmの間、または2nmと40nmの間、または5nmと15nmの間である。より好ましくは、固定相のポアサイズは約12nmである。
【００８９】
典型的には、本発明の第3の態様の方法は約15℃から40℃の間の温度で行われる。
【００９０】
本発明の第3の態様の一実施形態において、クロマトグラフィーは長さ10mmと5000mmの間のカラムにおいて、または長さ50mmと1000mmの間のカラムにおいて、または長さ100mmと500mmの間において行われる。より好ましくは、クロマトグラフィーは長さ約250mmのカラムにおいて行われる。
【００９１】
クロマトグラフィーは内径0.01mmと100mmの間の、または内径0.1mmと50mmの間の、または内径1mmと10mmの間のカラムにおいて行われてよい。より好ましくは、クロマトグラフィーは内径4.6mmのカラムにおいて行われる。
【００９２】
溶出液は、UVもしくは可視分光光度計、蛍光分光光度計、示差屈折計、電気化学検出器、質量分析機、光散乱検出器、または放射能検出器などの検出器によって分析されてよい。
【００９３】
本発明の第3の態様の好ましい一実施形態において、ホルモテロールはフマル酸ホルモテロール二水和物の形態である。
【００９４】
本発明の第3の態様の一実施形態において、HPLC法は、1回の操作において、以下の不純物の1つまたは複数:
N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノ]アセトフェノン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;および/または
4-ベンジルオキシ-3-ホルミルアミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールを検出し、場合により定量化する。
【００９５】
本発明の第4の態様は、
N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノ]アセトフェノン;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-ニトロ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-I;
4-ベンジルオキシ-3-アミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールジアステレオマー-II;および/または
4-ベンジルオキシ-3-ホルミルアミノ-α-[N-ベンジル-N-(1-メチル-2-p-メトキシフェニルエチル)アミノメチル]ベンジルアルコールから選択される1つまたは複数の不純物を検出し、場合により定量化することを含む、物質を分析するための方法を提供する。
【００９６】
本発明の第4の態様の一実施形態において、物質は薬理学的有効成分である。好ましくは、物質はホルモテロールであり、最も好ましくは、フマル酸ホルモテロール二水和物の形態である。
【００９７】
本発明の第4の態様の別の実施形態において、物質は25重量%未満の1つまたは複数の不純物を含む。好ましくは、物質は10重量%未満の、5重量%未満の、または2重量%未満の、1つまたは複数の不純物を含む。より好ましくは、物質は1重量%未満の、または0.5重量%未満の、1つまたは複数の不純物を含む。
【００９８】
本発明の第4の態様の別の実施形態において、方法は、好ましくは、移動相が第1の液体Aおよび第2の液体Bを含む2つ以上の液体を含むような、HPLCの使用を含む。
【００９９】
好ましくは、第1の液体Aは、水、またはバッファー水溶液など、水性ベースである。
【０１００】
好ましくは、バッファーは酸、または有機塩もしくは無機塩である。
【０１０１】
典型的には、バッファーは、リン酸塩、酢酸塩、ギ酸塩、またはトリフルオロ酢酸塩である。より好ましくは、バッファーは、酢酸アンモニウムなどのアンモニウム塩である。
【０１０２】
バッファーは、0.001Mから0.1Mの濃度で、好ましくは0.001Mから0.01Mの濃度で、より好ましくは0.005Mから0.01Mの濃度で、最も好ましくは約0.007Mの濃度で存在することができる。
【０１０３】
好ましくは、バッファーのpHは約2から6であり、より好ましくは、pHは3.8と5.8の間であり、より好ましくは、バッファーのpHは約4.8である。
【０１０４】
第2の液体Bは、好ましくは、メタノール、エタノール、アセトニトリル、n-プロパノール、もしくはイソプロパノール、またはこれらの混合物などの有機溶媒である。
【０１０５】
好ましくは、第2の液体Bは実質的に水混和性の溶媒である。
【０１０６】
好ましくは、第2の液体Bは、酢酸、メタノール、エタノール、n-プロパノール、もしくはイソプロパノールなどの極性プロトン性溶媒、またはアセトン、アセトニトリル、ジメトキシエタン、DMF、DMSO、1,4-ジオキサン、ピリジン、もしくはTHFなどの双極性非プロトン性溶媒である。より好ましくは、第2の液体Bが双極性非プロトン性溶媒である場合、これはアセトン、アセトニトリル、ジメトキシエタン、または1,4-ジオキサンから選択される。最も好ましくは、第2の液体Bはアセトニトリルである。
【０１０７】
好ましくは、第1の液体Aは酢酸アンモニウム水溶液であり、第2の液体Bはアセトニトリルである。
【０１０８】
好ましくは、0.01ml/分と10ml/分の間の移動相の流速が用いられ、より好ましくは、0.1ml/分と4ml/分の間の移動相の流速が用いられ、より好ましくは、約1ml/分の移動相の流速が用いられる。
【０１０９】
好ましくは、方法は、好ましくは液体AおよびBの相対濃度が99.5%A:0.5%Bと0.5%A:99.5%Bの間、または90%A:10%Bと10%A:90%Bの間、より好ましくは75%A:25%Bと25%A:75%Bの間に設定されるような定組成HPLC法である。より好ましくは、液体AおよびBの相対濃度は約40%A:60%Bである。
【０１１０】
あるいは、移動相の液体の相対濃度は所定の勾配に従って変化する。典型的には、液体AおよびBの相対濃度が、10分から180分にわたって99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間の勾配に従って変化するような勾配のプログラミングが用いられる。好ましくは、勾配は30分から120分にわたって99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間である。より好ましくは、勾配は30分から60分にわたって99.5%A:0.5%Bから0.5%A:99.5%Bの間である。あるいは、液体AおよびBの相対濃度は、約95%A:5%Bから、または約90%A:10%Bから、または約85%A:15%Bから、約5%A:95%Bまで、または約10%A:90%Bまで、または約15%A:85%Bまでの間の勾配に従って変化するような勾配のプログラミングが用いられてよい。勾配における変化は、典型的には、10分から180分にわたって、好ましくは30分から120分にわたって、より好ましくは30分から60分にわたって起こってよい。
【０１１１】
本発明の第4の態様の特に好ましい一方法は、第1の液体Aが0.007M酢酸アンモニウム水溶液であり、第2の液体Bがアセトニトリルであり、勾配が以下の通りである場合である。
【０１１２】
【表４】
2011501204.tif 000006
【０１１３】
本発明の第4の態様の一実施形態において、固定相はキラルである。別の実施形態において、移動相はキラルセレクターをさらに含む。
【０１１４】
好ましくは、本発明の第4の態様において用いられる固定相は、オクタデシルシリルシリカゲル、オクチルシリルシリカゲル、フェニルアルキルシリカゲル、シアノプロピルシリカゲル、アミノプロピルシリカゲル、またはアルキルジオールシリカゲルなどの逆相である。特に適切な固定相は、オクタデシルシリルシリカゲル、またはオクチルシリルシリカゲルを含む。特に好ましい固定相は、好ましくはポアサイズ12nmの、YMC Pack pro C18(250mm×4.6mm)、5μカラムを含む。
【０１１５】
好ましくは、固定相の粒子サイズが0.1μmと100μmの間、または0.5μmと25μmの間、または1μmと10μmの間である。より好ましくは、固定相の粒子サイズは約5μmである。
【０１１６】
好ましくは、固定相のポアサイズは1nmと100nmの間、または2nmと40nmの間、または5nmと15nmの間である。より好ましくは、固定相のポアサイズは約12nmである。
【０１１７】
典型的には、本発明の第4の態様の方法は、約15℃から40℃の間の温度で行われる。
【０１１８】
本発明の第4の態様の一実施形態において、クロマトグラフィーは長さ10mmと5000mmの間のカラムにおいて、または長さ50mmと1000mmの間のカラムにおいて、または長さ100mmと500mmの間において行われる。より好ましくは、クロマトグラフィーは長さ約250mmのカラムにおいて行われる。
【０１１９】
クロマトグラフィーは内径0.01mmと100mmの間の、または内径0.1mmと50mmの間の、または内径1mmと10mmの間のカラムにおいて行われてよい。より好ましくは、クロマトグラフィーは内径4.6mmのカラムにおいて行われる。
【０１２０】
溶出液は、UVもしくは可視分光光度計、蛍光分光光度計、示差屈折計、電気化学検出器、質量分析機、光散乱検出器、または放射能検出器などの検出器によって分析されてよい。
【０１２１】
疑いを回避するために、実行可能である限り、本発明の所与の態様のあらゆる実施形態は、本発明の同じ態様のあらゆる他の実施形態と併せて生じてよい。さらに、実行可能である限り、本発明のあらゆる態様の、あらゆる好ましい、または任意選択の実施形態は、本発明のあらゆる他の態様の、好ましい、または任意選択の実施形態ともみなされなければならないことを理解されたい。
【発明を実施するための形態】
【０１２２】
本発明は、好ましくはフマル酸ホルモテロール二水和物の形態のホルモテロールAPIまたはホルモテロールが医薬組成物として調製される場合に、ホルモテロールAPIまたはホルモテロールを分析するために用いられ得る。
【０１２３】
本発明によって分析することができる医薬組成物は、固体および液体の組成物を含み、任意選択で、1つまたは複数の薬学的に許容される担体または賦形剤を含む。固体形態の組成物には、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤、および分散性顆粒剤が含まれる。液体組成物には、経口、注射、もしくは注入の経路によって投与することができる液剤、または懸濁剤が含まれる。
【０１２４】
本発明で用いられる「不純物」または「関連物質」の語は、本明細書を通して、APIもしくは医薬組成物の製造において形成される不純物、および/または貯蔵時にAPIの分解によって、もしくは医薬組成物中に形成される不純物のいずれかを意味することができる。
【０１２５】
上記で論じたように、先行技術において報告されたHPLC法は、特に米国特許第3994974号において記載されているスキームを用いて合成されるフマル酸ホルモテロール二水和物の合成において形成される関連物質に関して、ホルモテロールを分析するのに適さない。先行技術において遭遇する困難に対する理由は、関連物質とフマル酸ホルモテロール二水和物の間の極性の差が大きいことであり得る。
【０１２６】
しかし、本発明の好ましい一実施形態により、この問題点は解決され、1回の操作において、この特定の合成プロセスにおいて形成した全ての不純物および中間物が効率的に検出され、定量化される。本発明は、勾配方法により極性から非極性の不純物が全て溶出されるので、有利である。
【０１２７】
本発明は、フマル酸ホルモテロール二水和物中の関連物質を分析するのに、方法が、選択的であり、直線性があり、精度があり、正確さがあり、頑健性があるので、やはり有利である。さらに、本発明は感度が高く、保健衛生当局によって指定される承認限界よりずっと低いレベルの、フマル酸ホルモテロール二水和物中の関連物質の検出および定量化が可能になる。
【０１２８】
さらに、本発明の方法を用いて、ホルモテロールの試料の貯蔵時に形成される分解不純物を全て、容易に検出および定量化することができる。これは、ICH Q1Aガイドラインに従って強制的な分解試験を行うことによって確立され、特異性、直線性および範囲、精度(反復性、再現性、および中間精度)、正確さ、検出限界(LOD)、定量限界(LOQ)、頑健性、およびシステム適合性のパラメータを網羅する、ICH Q2Aガイドラインに従って確証された。
【０１２９】
第1の液体Aにおいて任意選択で用いられるバッファーは、リン酸、酢酸、またはギ酸の、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、リチウム塩、またはアルミニウム塩などの無機塩、およびこれらの混合物であってよい。あるいは、バッファーは、リン酸、酢酸、またはギ酸のアンモニウム塩などの有機塩、およびこれらの混合物であってよい。あるいは、バッファーは、鉱酸、または酢酸もしくはトリフルオロ酢酸などのカルボン酸であってよい。好ましくは、第1の液体Aは、酢酸アンモニウムの0.007M水溶液である。酢酸アンモニウムは、検出器として質量分析機が必要とされる場合(LC-MS)は適合性があるので、バッファーとして用いると特に有利である。
【０１３０】
第2の液体Bとして用いられる有機溶媒は、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、もしくはイソプロパノールなどの低級アルキルアルコール、またはこれらの混合物であってよい。あるいは、有機溶媒は、テトラヒドロフラン、もしくはアセトニトリル、またはあらゆる適切な有機溶媒であってよい。有機溶媒がアセトニトリルであるのが好ましい。
【０１３１】
本発明の方法において用いられる固定相が、オクタデシルシリルシリカゲル(RP-18)またはオクチルシリルシリカゲル(RP-8)から選択されるのが好ましい。
【０１３２】
所望により、内部標準化合物を、本発明の方法において用いてもよい。あるいは、分析する構成成分の濃度を、1つまたは複数の外部標準化合物と比較することによって決定してもよい。
【０１３３】
本発明者らは、本発明の方法に再現性、正確さ、精度、濃度に関する直線性、および頑健性があることを示すために、本発明の方法を広範囲にわたって試験した。
【０１３４】
本発明を、特定の実施形態に関して記載してきたが、当業者であればある種の改変および同等物は明らかであり、これらは本発明の範囲内に含まれものとされる。
【０１３５】
本明細書に開示した本発明の方法を、ホルモテロールと同様の化学構造および/または同様の化学的性質もしくは物理的性質を有する化合物の分析にやはり用いることができる。
【０１３６】
本発明を以下の実施例によって説明するが、これらによって限定されるものではない。
【実施例】
【０１３７】
実験条件:
カラム:YMC Pack pro C18(250mm×4.6mm)、5μ、ポアサイズ12nm
流速:1ml/分
検出:214nm
試料濃度:2000ppm
希釈液:水-アセトニトリル(1:1v/v)
移動相:0.007M酢酸アンモニウム水溶液(A)-アセトニトリル(B)勾配。勾配プログラムを以下に記載する:
【０１３８】
【表５】
2011501204.tif 000007
【０１３９】
全ての中間体およびフマル酸ホルモテロール二水和物に対して得られた、保持時間(RT)、相対保持時間(RRT)、検出限界(LOD)、および定量限界(LOQ)をTable 1(表6)に概要を示す。
【０１４０】
【表６】
2011501204.tif 000008
【国際調査報告】
2011501204.tif 000013
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