(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
静脈注射用の２，２’，６，６’−テトライソプロピル−４，４’−２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤であって、
前記製剤１００ｍｌあたり、重量百分率で０．１〜３％の２，２’，６，６’−テトライソプロピル−４，４’−２−ビフェノール、１０〜３０％の大豆油、１〜１．５％の注射用卵黄レシチン、０．５〜１％のビタミンＥ、０．０１〜１％の水酸化ナトリウム、０．１〜２．５％のグリセリン、０．０１〜１％のＥＤＴＡを含み、残部は注射用水であり、平均粒径は１５０ｎｍ〜３００ｎｍである、製剤。
【請求項２】
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、配合量の注射用卵黄レシチン及びビタミンＥを大豆油に加え完全に溶解させた後に、２，２’，６，６’−テトライソプロピル−４，４’−２−ビフェノールを加え、加熱攪拌して溶解させて、油相を得るステップ；
（２）配合量のグリセリンとＥＤＴＡを注射用水に溶解させて、均一に攪拌して水相を得るステップ；
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で、１００００ｒで５分間剪断を行って予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０に調節するステップ；及び
（４）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して最終生成物を得るステップを含むことを特徴とする、請求項１に記載の静脈注射用の２，２’，６，６’−テトライソプロピル−４，４’−２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は２，２’，６，６’−テトライソプロピル−４，４’−２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤及びその調製方法に関し、薬物製剤分野に属する。
【背景技術】
【０００２】
２，２’，６，６’−テトライソプロピル−４，４’−２−ビフェノール（以下、２−ビフェノールと略称する）は当社が新たに開発した抗てんかん発作化合物（特許文献１；てんかん治療薬物における２−ビフェノール及びその誘導体の応用）であって、全般性強直間代発作（大発作）、欠神発作（小発作）、単純部分発作、複雑部分発作（精神運動発作）及び自律神経発作（周期性発作）などの様々なてんかん症状を治療することができる。実験研究に示されるように、２−ビフェノールはＧＡＢＡレセプタに対して非常に強い親和性を有するとともに、ＧＡＢＡアゴニスト作用を有し、またＮＭＤＡレセプタに拮抗でき、Ｃａ２＋チャネルのＣａ２＋流入を調節し、またカイニン酸（ｋａｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）による興奮毒性に対して保護作用を有する。研究ではさらに、２−ビフェノールの抗酸化作用がプロポフォールより著しく強く、強い脳保護作用を有することも実証されている。特に重要なことは、２−ビフェノールは患者の意識喪失を起こすことがないため、異なるタイプの種々のてんかん患者の治療に対して重要な臨床応用価値を有する。
【０００３】
しかしながら、２−ビフェノールは脂溶性が極めて強い化合物であって、水に溶けにくい。過去の研究ではシクロデキストリン、ｔｗｅｅｎ８０、ＶＣ、ＤＭＳＯなどの界面活性剤を用いてその溶解を助けまたは増加させているが、いずれも所望の効果を達成することが困難なため、薬効の発揮に影響を及ぼし、その臨床応用が制限されていた。本発明はリピッドマイクロスフェアを２−ビフェノールの薬物送達システムとし、２−ビフェノールが水に溶けにくいという欠陥を解決するだけでなく、薬物が選択的に病変部位に蓄積することを可能とし、治療薬物が標的部位に最大限輸送されるようにし、治療薬物の標的部位における濃度が従来の製剤の数倍ひいては数百倍を超えるようにして、治療効果を向上させている。同時に、薬物の正常組織における分布量を極めて少なくして、薬物の毒性副作用と有害反応を著しく低減させ、高効果かつ低毒性の効果を達成する。現在、国内外において２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤に関する報告は未だなされていない。
【０００４】
よって、如何にして２−ビフェノールの特殊な物理化学的性質に基づいて合理的な製剤配合を設計して、安全、安定かつ有効な２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤を調製するかが本発明で解決すべき課題である。
【０００５】
本発明は２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤及びその調製方法を提供し、本発明は２−ビフェノールの酸化しやすい性質に対して特に０．５〜１％の酸化防止剤を加えており、特に抗酸化力が極めて強くかつ油相に溶解されやすいビタミンＥは、薬物の製剤における安定性を保証する。本発明はリン脂質系乳化剤のみを採用し、その使用量は１〜１．５％を占めるのみであり、助溶剤を含まず、溶血現象及び血栓炎性物質の発生を回避し、また本発明で採用する乳化剤は動物胚卵黄由来の卵黄レシチンであり、人体の吸収により有利で、より安全である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】中国特許第１０１８０４０４３Ａ号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の技術的解決手段は、２，２’，６，６’−テトライソプロピル−４，４’−２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤を提供し、同時に当該リピッドマイクロスフェア製剤の調製方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明に記載のリピッドマイクロスフェア製剤は、有効成分である２，２’，６，６’−テトライソプロピル−４，４’−２−ビフェノール（以下、２−ビフェノールと略称する）、注射用油、乳化剤、及び注射用水により加工される。具体的には、２−ビフェノールは０．１〜３％、注射用油は１０〜３０％、乳化剤は１〜１．５％、酸化防止剤は０・５〜１％、添加剤は０〜５％であり、残りは注射用水である。ここで単位は重量百分率である。
【０００９】
ここで、前記２−ビフェノールの化学構造式はそれぞれ下記の通りである。
【化１】
0005748926.tif 000002
【００１０】
ここで、前記注射用油は、大豆油、ＭＣＴ油、シーバックソーン油、茶油から選ばれる１種または複数種であり、
前記乳化剤は、大豆レシチン、水素化レシチン、人工合成リン脂質、卵黄レシチンから選ばれる１種または複数種であり、
前記酸化防止剤は、ビタミンＥ、アスコルビン酸、亜硫酸水素ナトリウムから選ばれる１種または複数種であり、
前記添加剤は、ｐＨ調節剤、張性調節剤、または錯化剤から選ばれる１種または複数種であり、前記ｐＨ調節剤は塩酸または水酸化ナトリウムであり、前記張性調節剤はグリセリンであり、前記錯化剤はＥＤＴＡであり、含有量は注射剤の組成の重量百分率に対し、それぞれ０．０１〜１％、０．１〜２．５％、０．０１〜１％である。
【００１１】
好ましくは、本発明に記載のリピッドマイクロスフェア製剤は以下の成分を含有する。
【００１２】
リピッドマイクロスフェア製剤１００ｍｌあたり、１０００ｍｇの２−ビフェノール、１０ｇの大豆油、１．２ｇの注射用卵黄レシチン、１ｇのビタミンＥ、２．５ｇのグリセリン、０．５ｇのＥＤＴＡを含み、残りは注射用水である。
【００１３】
本発明に記載のリピッドマイクロスフェア製剤のその他の好ましい配合組成は実施例に開示されている。
【００１４】
本発明の他の目的は２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤の調製方法を提供することである。
【００１５】
本発明に記載の調製方法は、以下のステップを含む：
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、注射用油を用いて乳化剤を完全に溶解させ、酸化防止剤を加えて攪拌して溶解させた後に、２−ビフェノールを加えて、加熱攪拌して溶解させて、油相を得るステップ；
（２）張性調節剤、錯化剤を注射用水に溶解させて、水相を得るステップ；
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で５ｍｉｎの剪断を行って、予備乳化物を得るステップ；及び、
（４）調製された予備乳化物を、高圧ホモジナイザーを用いて均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌することで最終生成物を調製するステップ。
【００１６】
本発明において、酸化防止剤の水溶性が異なるため、加える方式も異なる。油溶性酸化防止剤は油相に加え、水溶性酸化防止剤は水相に加える。
【００１７】
具体的には、前記２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤の調製方法は、下記のステップを含む：
（１）１ｇ〜３０ｇの２−ビフェノール、１００ｍｌ〜３００ｍｌの注射用油、２５ｇのグリセリン、１０ｇ〜１５ｇの乳化剤、５ｇ〜１０ｇの酸化防止剤、残りが注射用水となるように各原料を秤取するステップ；
（２）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、配合量の乳化剤と酸化防止剤（ビタミンＥ）を注射用油に加え、完全に溶解させた後に２−ビフェノールを加え、加熱攪拌して溶解させて、油相を得るステップ；
（３）配合量のグリセリンと錯化剤を注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得るステップ；
（４）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節するステップ；及び、
（５）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物（１０００ｍｌ）を得るステップ。
【００１８】
具体的には、前記２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤の調製方法は、下記のステップを含む：
（１）１ｇ〜３０ｇの２−ビフェノール、１００ｍｌ〜３００ｍｌの注射用油、２５ｇのグリセリン、１０ｇ〜１５ｇの乳化剤、５ｇ〜１０ｇの酸化防止剤、残りが注射用水となるように各原料を秤取するステップ；
（２）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、配合量の乳化剤を注射用油に加え、完全に溶解させた後に２−ビフェノールを加え、加熱攪拌して溶解させて、油相を得るステップ；
（３）配合量のグリセリン、酸化防止剤（アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム）及び錯化剤を注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得るステップ；
（４）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節するステップ；及び、
（５）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物（１０００ｍｌ）を得るステップ。
【００１９】
本発明のその他の好ましい調製方法は実施例で開示されている。
【００２０】
本発明に記載の製剤は静脈注射用リピッドマイクロスフェア製剤である。
【００２１】
本発明に記載のリピッドマイクロスフェアの粒径分布範囲は１００ｎｍ〜８００ｎｍであり、平均粒径は１５０ｎｍ〜３００ｎｍである。
【００２２】
本発明に記載の製剤において、２−ビフェノールはリピッドマイクロスフェアに包まれて、水中での溶解性を大幅に向上させており、薬物負荷量を増加させると同時に、製剤の安定性も増加させている。なお、リピッドマイクロスフェアは新規な薬物担体として、無毒性かつ非免疫原性であり、薬物の刺激を減少させており、薬物の毒性副作用を効果的に低減させている。
【００２３】
本発明は注射剤の安定性を向上させており、薬品の有効期間を延ばし、薬物の溶解性を改善し、薬品の安全を確保している。また、本発明の調製プロセスは簡単かつ実行可能であり、時間及びコストを節約し、大量生産に適している。なお、本発明に記載の製剤における配合組成と調製方法は、科学的にスクリーニングと論証が行われたものである。
【００２４】
本発明に記載の製剤は抗てんかん発作製剤に関する。
【００２５】
本発明に記載の製剤の抗てんかん発作作用の薬効は、ＣＭＣＮａ−２−ビフェノールと比較して大幅に向上している。
【００２６】
本発明は投与方式を経口投与から静脈投与に変更し、薬物の吸収を改善しており、薬物の治療効果を向上させている。
【００２７】
本発明に記載の製剤の抗てんかん発作作用に対する具体的な実験結果は実施例で開示されている。
【００２８】
本発明の上記の内容によれば、本分野の通常の技術知識及び慣用手段により、本発明の上記の基本的技術思想を離脱しないことを前提として、他の様々な形式の改変、置換または変更が可能であることは明らかである。
【００２９】
以下、実施例形式の具体的な実施形態によって、本発明の上記の内容についてさらに詳しく説明する。ただし、これを本発明の上記の主題の範囲を下記の実例に限定するものと理解すべきではない。本発明の上記の内容に基づいて実現される技術は、いずれも本発明の範囲に属する。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
以下の実施例は本発明をさらに説明するためのものであるが、本発明の範囲を制限するものではない。以下、実施例を参照して本発明についてさらに詳しく述べるが、当業者は本発明がこれらの実施例及び使用する調製方法に限定されないことを理解すべきである。また、当業者は本発明の説明に基づいて本発明に対して均等の置換、組み合わせ、改良または改変を行うことができるが、これらはいずれも本発明の範囲内に含まれる。
【実施例】
【００３１】
第一部  異なる２−ビフェノールの濃度で調製されるリピッドマイクロスフェア製剤  
実施例１  １％の２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤
【表１】
0005748926.tif 000003
【００３２】
調製プロセス
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、１００ｇの注射用油を用いて１２ｇの卵黄レシチンを完全に溶解させ、１０ｇの２−ビフェノールと１０ｇのビタミンＥを加え、窒素を通入して保護し、加熱攪拌して溶解させて、油相を得た。
（２）２５ｇのグリセリンと５ｇのＥＤＴＡを注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得た。
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）、予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節した。
（４）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物を得た。
【００３３】
実施例２  ０．１％の２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤
【表２】
0005748926.tif 000004
【００３４】
調製プロセス
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、１００ｇの注射用油を用いて１２ｇの水素化レシチンを完全に溶解させ、１ｇの２−ビフェノールを加え、窒素を通入して保護し、加熱攪拌して溶解させて、油相を得た。
（２）２５ｇのグリセリン、１０ｇのアスコルビン酸及び５ｇのＥＤＴＡを注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得た。
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）、予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節した。
（４）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物を得た。
【００３５】
実施例３  ３％の２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤
【表３】
0005748926.tif 000005
【００３６】
調製プロセス
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、１００ｇの注射用油を用いて１２ｇの大豆レシチンを完全に溶解させ、３０ｇの２−ビフェノールを加え、窒素を通入して保護し、加熱攪拌して溶解させて、油相を得た。
（２）２５ｇのグリセリン、１０ｇの亜硫酸水素ナトリウム及び５ｇのＥＤＴＡを注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得た。
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）、予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節した。
（４）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物を得た。
【００３７】
第二部  異なる注射用油の種類及び含有量で調製されるリピッドマイクロスフェア製剤
【００３８】
実施例４  ２０％の大豆油のリピッドマイクロスフェア製剤
【表４】
0005748926.tif 000006
【００３９】
調製プロセス
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、２００ｇの注射用油を用いて１２ｇの卵黄レシチンを完全に溶解させ、１０ｇの２−ビフェノールと１０ｇのビタミンＥを加え、窒素を通入して保護し、加熱攪拌して溶解させて、油相を得た。
（２）２５ｇのグリセリンと５ｇのＥＤＴＡを注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得た。
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）、予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節した。
（４）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物を得た。
【００４０】
実施例５  １０％のＭＣＴ油のリピッドマイクロスフェア製剤
【表５】
0005748926.tif 000007
【００４１】
調製プロセス
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、１００ｇの注射用油を用いて１２ｇの卵黄レシチンを完全に溶解させ、１０ｇの２−ビフェノールと１０ｇのビタミンＥを加え、窒素を通入して保護し、加熱攪拌して溶解させて、油相を得た
（２）２５ｇのグリセリンと５ｇのＥＤＴＡを注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得た
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）、予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節した。
（４）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物を得た。
【００４２】
実施例６  ３０％のシーバックソーン油のリピッドマイクロスフェア製剤
【表６】
0005748926.tif 000008
【００４３】
調製プロセス
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、３００ｇの注射用油を用いて１２ｇの卵黄レシチンを完全に溶解させ、１０ｇの２−ビフェノールと１０ｇのビタミンＥを加え、窒素を通入して保護し、加熱攪拌して溶解させて、油相を得た。
（２）２５ｇのグリセリンと５ｇのＥＤＴＡを注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得た。
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）、予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節した。
（４）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物を得た。
【００４４】
実施例７  １０％の茶油のリピッドマイクロスフェア製剤
【表７】
0005748926.tif 000009
【００４５】
調製プロセス
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、１００ｇの注射用油を用いて１２ｇの卵黄レシチンを完全に溶解させ、１０ｇの２−ビフェノールと１０ｇのビタミンＥを加え、窒素を通入して保護し、加熱攪拌して溶解させて、油相を得た。
（２）２５ｇのグリセリンと５ｇのＥＤＴＡを注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得た。
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）、予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節した。
（４）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物を得た。
【００４６】
第三部  異なる乳化剤の種類及び含有量で調製されるリピッドマイクロスフェア製剤
【００４７】
実施例８  １％の卵黄レシチンのリピッドマイクロスフェア製剤
【表８】
0005748926.tif 000010
【００４８】
調製プロセス
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、１００ｇの注射用油を用いて１０ｇの卵黄レシチンを完全に溶解させ、１０ｇの２−ビフェノールと１０ｇのビタミンＥを加え、窒素を通入して保護し、加熱攪拌して溶解させて、油相を得た。
（２）２５ｇのグリセリンと５ｇのＥＤＴＡを注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得た。
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）、予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節した。
（４）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物を得た。
【００４９】
実施例９  １．５％の大豆レシチンのリピッドマイクロスフェア製剤
【表９】
0005748926.tif 000011
【００５０】
調製プロセス
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、１００ｇの注射用油を用いて１５ｇの大豆レシチンを完全に溶解させ、１０ｇの２−ビフェノールと１０ｇのビタミンＥを加え、窒素を通入して保護し、加熱攪拌して溶解させて、油相を得た。
（２）２５ｇのグリセリンと５ｇのＥＤＴＡを注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得た。
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）、予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節した。
（４）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物を得た。
【００５１】
実施例１０  １．２％の水素化レシチンのリピッドマイクロスフェア製剤
【表１０】
0005748926.tif 000012
【００５２】
調製プロセス
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、１００ｇの注射用油を用いて１２ｇの水素化レシチンを完全に溶解させ、１０ｇの２−ビフェノールと１０ｇのビタミンＥを加え、窒素を通入して保護し、加熱攪拌して溶解させて、油相を得た。
（２）２５ｇのグリセリンと５ｇのＥＤＴＡを注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得た。
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）、予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節した。
（４）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物を得た。
【００５３】
実施例１１  １．２％の人工合成リン脂質のリピッドマイクロスフェア製剤
【表１１】
0005748926.tif 000013
【００５４】
調製プロセス
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、１００ｇの注射用油を用いて１２ｇの人工合成リン脂質を完全に溶解させ、１０ｇの２−ビフェノールと１０ｇのビタミンＥを加え、窒素を通入して保護し、加熱攪拌して溶解させて、油相を得た。
（２）２５ｇのグリセリンと５ｇのＥＤＴＡを注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得た。
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）、予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節した。
（４）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物を得た。
【００５５】
第四部  異なる酸化防止剤の種類と使用量で調製されるリピッドマイクロスフェア製剤
【００５６】
実施例１２  ０．５％のビタミンＥのリピッドマイクロスフェア製剤
【表１２】
0005748926.tif 000014
【００５７】
調製プロセス
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、１００ｇの注射用油を用いて１２ｇの卵黄レシチンを完全に溶解させ、１０ｇの２−ビフェノールと５ｇのビタミンＥを加え、窒素を通入して保護し、加熱攪拌して溶解させて、油相を得た。
（２）２５ｇのグリセリンと５ｇのＥＤＴＡを注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得た。
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）、予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節した。
（４）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物を得た。
【００５８】
実施例１３  １％のアスコルビン酸のリピッドマイクロスフェア製剤
【表１３】
0005748926.tif 000015
【００５９】
調製プロセス
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、１００ｇの注射用油を用いて１２ｇの卵黄レシチンを完全に溶解させ、１０ｇの２−ビフェノールを加え、窒素を通入して保護し、加熱攪拌して溶解させて、油相を得た。
（２）２５ｇのグリセリン、５ｇのＥＤＴＡ及び１０ｇのアスコルビン酸を注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得た。
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）、予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節した。
（４）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物を得た。
【００６０】
実施例１４  １％の亜硫酸水素ナトリウムのリピッドマイクロスフェア製剤
【表１４】
0005748926.tif 000016
【００６１】
調製プロセス
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、１００ｇの注射用油を用いて１２ｇの卵黄レシチンを完全に溶解させ、１０ｇの２−ビフェノールを加え、窒素を通入して保護し、加熱攪拌して溶解させて、油相を得た。
（２）２５ｇのグリセリン、５ｇのＥＤＴＡ及び１０ｇの亜硫酸水素ナトリウムを注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得た。
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）、予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節した。
（４）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物を得た。
【００６２】
第五部  異なる添加剤の含有量で調製されるリピッドマイクロスフェア製剤
【００６３】
実施例１５  １．５％のグリセリンと０．３％のＥＤＴＡを含むリピッドマイクロスフェア製剤
【表１５】
0005748926.tif 000017
【００６４】
調製プロセス
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、１００ｇの注射用油を用いて１２ｇの卵黄レシチンを完全に溶解させ、１０ｇの２−ビフェノールと１０ｇのビタミンＥを加え、窒素を通入して保護し、加熱攪拌して溶解させて、油相を得た。
（２）１５ｇのグリセリンと３ｇのＥＤＴＡを注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得た。
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）、予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節した。
（４）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物を得た。
【００６５】
実施例１６  ２％のグリセリンと１％のＥＤＴＡを含むリピッドマイクロスフェア製剤
【表１６】
0005748926.tif 000018
【００６６】
調製プロセス
（１）７０℃の水浴及び窒素の保護下で、１００ｇの注射用油を用いて１２ｇの卵黄レシチンを完全に溶解させ、１０ｇの２−ビフェノールと５ｇのビタミンＥを加え、窒素を通入して保護し、加熱攪拌して溶解させて、油相を得た。
（２）２０ｇのグリセリンと１０ｇのＥＤＴＡを注射用水に溶解させ、均一に撹拌して水相を得た。
（３）油相を水相にゆっくりと加えると同時に、窒素の保護下で剪断を行って（１００００ｒ、５ｍｉｎ）、予備乳化物を得て、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．０前後に調節した。
（４）調製された予備乳化物を、８００〜９００ｂａｒの圧力下で５〜８回均質化し、微小孔のフィルタでろ過し、窒素を充填して封止し、１１５℃で高圧滅菌して、最終生成物を得た。
【００６７】
実施例１７、配合スクリーニング試験
１．注射用油の選択
本実験はそれぞれ大豆油、ＭＣＴ油、シーバックソーン油、茶油を用いてそれぞれ２−ビフェノールのリピッドマイクロスフェア製剤を調製し、最終乳化物の外観は均一かつ良好であり、いずれも分層及び浮遊油現象は出現せず、作製したリピッドマイクロスフェア注射液をそれぞれ１ｍｌ取って１０００倍に希釈し、米国Ｍａｒｖｌｅｎ社のレーザ動的光散乱計を用いて粒径を検測した。結果に示すように、上記の注射用油で作製された微粒径は均一で、７０％の粒径が５００ｎｍより小さく、１００％の粒径が１μｍより小さく、静脈注射用リピッドマイクロスフェア製剤に関する要求を満たしている。その中でも大豆油及びＭＣＴ油が最も好ましく、９０％の粒径が５００ｎｍより小さく、１００％の粒径が１μｍより小さい。
【００６８】
２．乳化剤の選択
本実験はそれぞれ卵黄レシチン、大豆レシチン、水素化レシチンを採用して２−ビフェノールのリピッドマイクロスフェア製剤を調製し、最終乳化物の外観は均一かつ良好で、いずれも分層及び浮遊油現象は出現せず、作製したリピッドマイクロスフェア注射液をそれぞれ１ｍｌ取って１０００倍に希釈し、米国Ｍａｒｖｌｅｎ社のレーザ動的光散乱計を用いて粒径を検測した。結果に示すように、以上の注射用油で作製された微粒径は均一で、７０％の粒径が５００ｎｍより小さく、１００％の粒径が１μｍより小さく、静脈注射用リピッドマイクロスフェア製剤に関する要求を満たしている。
【００６９】
３．張性調節剤の選択
本実験は張性調節剤としてグリセリンを選択して、リピッドマイクロスフェア製剤の人体における張度を確保しており、浸透圧計（凝固点降下法）で測定された各最終乳化物の浸透圧は３００〜４００ｍｏｓｍ／Ｌであり、静脈注射用リピッドマイクロスフェア製剤に関する要求を満たしている。
【００７０】
４．酸化防止剤
本実験は酸化防止剤としてビタミンＥを選択して、酸化によって性状が不安定になることを防止する。得られた最終乳化物の外観は均一かつ良好で、いずれも分層及び浮遊油現象は出現せず、作製したリピッドマイクロスフェア注射液をそれぞれ１ｍｌ取って１０００倍に希釈し、米国Ｍａｒｖｌｅｎ社のレーザ動的光散乱計を用いて粒径を検測した。結果に示すように、以上の注射用油で作製された微粒径は均一で、７０％の粒径が５００ｎｍより小さく、１００％の粒径が１μｍより小さく、静脈注射用リピッドマイクロスフェア製剤に関する要求を満たしている。
【００７１】
５．錯化剤
本実験はリピッドマイクロスフェアの調製において常用されるイオン錯化剤であるＥＤＴＡを選択して、マイクロスフェア中で遊離するカチオンの濃度を減少させ、リピッドマイクロスフェア製剤の安定性の向上に寄与する。得られた最終乳化物の外観は均一かつ良好で、いずれも分層及び浮遊油現象は出現せず、作製したリピッドマイクロスフェア製剤をそれぞれ１ｍｌ取って１０００倍に希釈し、米国ｍａｒｖｌｅｎ社のレーザ動的光散乱計を用いて粒径を検測した。結果に示すように、以上の注射用油で作製されたリピッドマイクロスフェアは粒径が均一で、７０％の粒径が５００ｎｍより小さく、１００％の粒径が１μｍより小さく、静脈注射用リピッドマイクロスフェア製剤に関する要求を満たしている。
【００７２】
以下、上記の実施例によって調製されたリピッドマイクロスフェア製剤に対して物理化学的性質及び安全性の検測試験を行った。
【００７３】
試験例１  本発明の薬物の安定性の検測
本発明の一部実施例で調製された２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤を４℃で６ヵ月間放置し、高温４５℃で６ヵ月間放置し、室温で１２ヵ月間放置した後に、サンプルの外観、ｐＨ及び封入効率を検測して、本製品の安定性を考察し、結果は表１に示す。
【表１７】
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【表１８】
0005748926.tif 000020
【００７４】
表１から分かるように、本発明を採用して調製されたリピッドマイクロスフェアは安定性が良好である。低温４℃で６ヵ月間放置し、高温４５℃で６ヵ月間放置し、室温の２５℃で１２ヵ月間放置した後で、サンプルの外観及び封入効率にはいずれも顕著な変化がなく、ｐＨはある程度低下したが、製剤の安定性に影響を及ぼすほどではなかった。
【００７５】
上記の実験においては本発明の一部の実施例のみを示したが、本発明の他の実施例も上記と同一或いは類似の有益な効果を有する。
【００７６】
上記の結果から分かるように、本発明を採用して調製されたリピッドマイクロスフェア製剤は安定性が良好であり、中国の新薬研究技術指導原則における製剤の安定性に関する要求を満たしている。
【００７７】
試験例２  本発明の薬物の品質制御方法
本発明における２−ビフェノールの含有量の測定方法は、高速液体クロマトグラフィーを採用して２−ビフェノールの含有量を測定した。方法は：Ｃ１８カラム（４．６ｍｍ×２００ｍｍ、５μｍ）を採用し、メタノール〜アセトニトリル〜水（６０：２２：１８）を移動相とし、流速は１．０ｍｌ／ｍｉｎであり、紫外線検測波長２７５ｎｍである。結果は：平均回収率は９９．３５％で、ＲＳＤ＝０．７５％（ｎ＝１１）、２−ビフェノールの１〜１００μｇ／ｍｌの範囲内における濃度とピーク面積は良好な直線性を呈し、ｒ＝０．９９９９であった。
【００７８】
試験例３  本発明の薬物であるリピッドマイクロスフェア製剤の封入効率の測定
２−ビフェノールを指標とし、超高速遠心分離法を採用してリピッドマイクロスフェア製剤の遠心分離を行い、１００００ｒ／ｍｉｎで３０ｍｉｎ遠心分離し、０．５ｍｌの上清を取って、イソプロパノールを用いて溶解し、高速液体クロマトグラフィーで２−ビフェノールの含有量を測定したところ、封入された２−ビフェノールの含有量Ｍ１を確定できた。リピッドマイクロスフェア製剤における２−ビフェノールの総量はＭ０であり、下記の式により２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤の２−ビフェノールの重量に対する封入効率Ｑを算出した。
Ｑ＝Ｍ１／Ｍ０×１００％
【００７９】
結果は、２−ビフェノールを指標とし、本発明で調製される静脈リピッドマイクロスフェア製剤の封入効率はいずれも９８％より大きかった。
【００８０】
試験例４  本発明の薬物の無菌試験
本発明の方法で自製したリピッドマイクロスフェア製剤を取り、無菌試験法（中国薬典２０１０版附録）に基づいて試験を行ったところ、本発明の方法で調製されたリピッドマイクロスフェア製剤は無菌試験に合格した。
【００８１】
試験例５  本発明の発熱性物質試験
本発明の方法で自製したリピッドマイクロスフェア製剤を取り、発熱性物質試験法（中国薬典２０１０附録）に基づいて試験を行ったところ、本発明の方法で調製されたリピッドマイクロスフェア製剤は発熱性物質試験に合格した。
【００８２】
試験例６  本発明の薬物のアレルギー性試験
試験方法：モルモットを体重に基づいてランダムに３群に分け、各群は８匹であり、第１群、第２群のモルモットは、１日おきに１回、０．５ｍｌ／匹の２−ビフェノール注射用リピッドマイクロスフェア製剤を連続して３回腹腔注射して感作させ、第１群、第２群はそれぞれ１回目の腹腔注射後の１４日目と２１日目に１．０ｍｌ／匹の２−ビフェノール注射用リピッドマイクロスフェア製剤を足に静脈注射して刺激し；第３群のモルモットは、１日おきに１回、０．５ｍｌ／匹の２０％卵白液を連続して３回腹腔注射して感作させ、注射後の１４日目に１．０ｍｌ／匹の卵白液を足に静脈注射して刺激し、３群とも刺激注射後の１５ｍｉｎ内にアレルギー反応症状を観察した。
【００８３】
実験の結果：２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤を注射した２つの群のモルモットはそれぞれ１回目の腹腔注射後の１４日目及び２１日目に感作原薬液を用いて刺激したが、いずれもアレルギー反応は出現せず；陽性対照群であるモルモットは注射後２ｍｉｎ以内に呼吸困難が出現し、痙攣を起こしてその後死亡し、モルモットの死亡はいずれも注射後１〜３ｍｉｎ以内に発生した。
【００８４】
実験の結論：今回の実験条件において、２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤は、被験モルモットに対してアレルギー作用はない。
【００８５】
試験例７：本発明の薬物の溶血性試験
実験方法：７本の試験管を取り、１〜５番にはそれぞれ０．１ｍｌ、０．２ｍｌ、０．３ｍｌ、０．４ｍｌ、０．５ｍｌの２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤を加え、かつ１０％のグルコース注射液を用いて２．５ｍｌに希釈し、６番の試験管には１０％のグルコース注射液を２．５ｍｌ加え、７番の試験管には２．５ｍｌの蒸留水を加えた（完全溶血対照）。最後に各試験管にいずれも２％のウサギ赤血球懸濁液を２．５ｍｌ加えて、均一に軽く振り動かし、３７℃の水浴に置き、それぞれ１５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、４５ｍｉｎ、１ｈ、２ｈ、３ｈ、４ｈの各試験管の溶血及び凝集状況を記録した。
【００８６】
実験の結果：２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤の１〜５番はいずれも４時間以内に溶血及び凝集反応を起こさなかった。
【００８７】
実験の結論：本実験の条件において、２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤は、ウサギ赤血球に対して溶血及び凝集反応はない。
【００８８】
実験例８  本発明の薬物の刺激性実験
実験方法：ニュージーランドウサギを２匹取り、いずれも左耳介の静脈に５ｍｌ／ｋｇの２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤をゆっくりと注射した。右耳介の静脈に５ｍｌ／ｋｇの１０％グルコース注射液を毎日１回ゆっくりと注射し、連続して５日間注射し、注射第１日目から注射部位に腫れや発疹があるか否かを毎日観察し、最後の注射の２４時間後に、耳をつけ根から切断して１０％ホルムアルデヒド溶液中で固定してから、病理切片を作製して検査を行う。
【００８９】
実験の結果：ウサギの耳介に２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤を毎日１回５日間連続して静脈注射したが、２匹のウサギの耳の注射部位に腫れや発疹の発生は見られなかった。病理組織学的観察では、ウサギの耳の表皮構造は正常であった。表皮下の乳頭層及び網状層に炎症細胞の滲出はなく、出血はなく、血管内に血栓の形成はなかった。付属器の構造は正常であった。
【００９０】
実験の結論：２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤は、ウサギの耳介の静脈血管に対し刺激性はない。
【００９１】
以下、上記の実施例によって調製されたリピッドマイクロスフェア製剤について、てんかん治療効果の動物モデル検証試験を行った。
【００９２】
実験はモデル群、対照群（ＣＭＣ−Ｎａ−２−ビフェノール群）、投与群１、投与群２、投与群３の合計５群に分け、各群はそれぞれＫＭマウス２０匹である。
【００９３】
実施例１  様々な濃度の２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤の抗ＰＴＺてんかんマウスの薬力学実験
実験は５群に分け、投与方式、投与種類及び投与用量は下記の表の通りであり、投与１時間後にＰＴＺ（７５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔注射してモデル化した。結果は下記の表の通りである。
【表１９】
0005748926.tif 000021
【００９４】
発作レベルの評価はＲａｃｉｎｅ基準を参照して、てんかんモデル動物に対して評価を行った（ステージ０  反応なし  ステージＩ  口または顔面の律動性痙攣  ステージＩＩ  点頭或いは尾の振戦  ステージＩＩＩ  単肢痙攣  ステージＩＶ  多肢痙攣または強直  ステージＶ  全面性強直−クローヌス発作）
【００９５】
実験例２  様々な濃度の２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤の抗ビククリンてんかんマウスの薬力学実験
実験は５群に分け、投与方式、投与種類及び投与用量は下記の表の通りであり、投与１時間後にＢｉｃ（２．７ｍｇ／ｋｇ）を皮下注射してモデル化し、結果は下記の表の通りである。
【表２０】
0005748926.tif 000022
【００９６】
ビククリン（Ｂｉｃ）モデルの評価基準：当該モデルの死亡率は１００％であるため、投与後に死亡しなければ有効である。
【００９７】
実験例３  様々な濃度の２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤の抗３−メルカプトプロピオン酸てんかんマウスの薬力学実験
実験は５群に分け、投与方式、投与種類及び投与用量は下記の表の通りであり、投与１時間後に３−ＭＰ（６０ｍｇ／ｋｇ）を皮下注射してモデル化し、結果は下記の表の通りである。
【表２１】
0005748926.tif 000023
【００９８】
３−メルカプトプロピオン酸（３−ＭＰ）モデルの評価基準：Ｉ潜伏期
ＩＩクローヌス性痙攣発作（前肢クローヌス）  ＩＩＩ強直性痙攣発作（後肢強直）
【００９９】
実験例４  様々な濃度の２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤の抗電撃てんかんマウスの薬力学実験
実験は５群に分け、投与方式、投与種類及び投与用量は下記の表の通りであり、投与１時間後にＭＥＳでモデル化し、結果は下記の表の通りである。
【表２２】
0005748926.tif 000024
【０１００】
電撃発作（ＭＥＳ）モデルの評価基準：動物に四肢の強直が出現したか否かを評価基準とした。
【０１０１】
実験例５  様々な濃度のビフェノール製剤リピッドマイクロスフェア製剤の抗ペニシリンてんかんマウスの薬力学実験
実験は５群に分け、投与方式、投与種類及び投与用量は下記の表の通りであり、投与１時間後にペニシリン（６００万Ｕ／ｋｇ）を腹腔注射してモデル化し、結果は下記の表の通りである。
【表２３】
0005748926.tif 000025
【０１０２】
ペニシリン発作レベルの評価はＲａｃｉｎｅ標準を参照して、てんかんモデル動物に対して評価を行った（ステージ０  反応なし  ステージＩ  口または顔面の律動性痙攣  ステージＩＩ  点頭または尾の振戦  ステージＩＩＩ  単肢痙攣  ステージＩＶ  多肢痙攣または強直  ステージＶ  全面性強直−クローヌス発作）
実験の結果に示すように、２−ビフェノールリピッドマイクロスフェア製剤は、ＣＭＣ−Ｎａ−２−ビフェノールの薬効に比べて数倍ひいては数百倍向上している。
【０１０３】
以上の結果から分かるように、本発明を採用して調製されるリピッドマイクロスフェア製剤は安全性及び信頼性が高く、アレルギー性、溶血性及び刺激性がなく、臨床用薬物に関する要求を満たしている。
【０１０４】
上記の実験例において、本発明の実施例１を選択して実験用薬物としたが、本発明のその他の配合で調製される製剤はいずれも実施例１と同一または類似の効果を有する。
【０１０５】
本発明の方法を採用して調製されるリピッドマイクロスフェア製剤に対して、アレルギー性、溶血性及び刺激性実験を行い、実験の結果に示すように、本発明で調製されるリピッドマイクロスフェア製剤は、安定性が高く、アレルギー性、溶血性及び刺激性がなく、臨床用薬物に関する要求を満たしている。