(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
食物摂取の制限又は満腹現象を全く誘導することなしに、体重減少をもたらす又は体重増加を制限若しくは抑制するための魚類タンパク質の加水分解産物の非治療上の使用であって、該魚類タンパク質の加水分解産物が、ミクロメシスティウス・ポタソウ（Ｍｉｃｒｏｍｅｓｉｓｔｉｕｓ  ｐｏｕｔａｓｓｏｕ）のタンパク質供給源を酵素的加水分解することによって得られ、該酵素的加水分解はバチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来のエンドペプチダーゼ酵素によって実行されることを特徴とする、使用。
【請求項２】
体重減少をもたらす又は体重増加を制限若しくは抑制することは、体重の減少、体脂肪量の減少、体脂肪量／除脂肪体重の割合の改善、肥満の軽減、身体組成の改善、脂質代謝の調節、脂質分解の促進及び／又は脂質生成の抑制を含むことを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記魚類タンパク質の加水分解産物は、以下の分子プロファイル分布、３００Ｄａ未満の分子量の分子が３３％から３９％まで、３００Ｄａから１０００Ｄａまでの分子量の分子が３４％から３７％まで、１０００Ｄａから３０００Ｄａまでの分子量の分子が２１％から２４％まで、３０００Ｄａから５０００Ｄａまでの分子量の分子が３％から４％まで、及び、５０００Ｄａから１００００Ｄａまでの分子量の分子が１％から２％までと、
原材料の百分率として１％未満の脂質含有量と、
原材料の百分率として４％未満の糖質含有量と、
原材料の百分率として８０％よりも多いタンパク質含有量と、
原材料の百分率として５％から１０％までの無機質含有量とを有することを特徴とする、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
前記魚類タンパク質の加水分解産物は、魚類からすり身を回収するために水の存在下で、前記魚類、ミクロメシスティウス・ポタソウ（Ｍｉｃｒｏｍｅｓｉｓｔｉｕｓ  ｐｏｕｔａｓｓｏｕ）のタンパク質供給源をすりつぶすステップと、
反応混合物を得るために、バチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来のエンドペプチダーゼ酵素の添加後、１時間ないし５時間５０°Ｃから７５°Ｃまでの温度で前記タンパク質供給源を酵素的加水分解するステップと、
前記反応混合物の温度を７０°Ｃを下回らないレベルに８分間ないし２０分間上昇させた後、前記酵素を不活性化することによって前記酵素的加水分解を停止するステップと、
前記反応混合物の残余から得られた前記タンパク質の加水分解産物を分離するステップとを含む製造方法によって得られることを特徴とする、請求項１ないし３の１つに記載の使用。
【請求項５】
前記酵素的加水分解するステップは、５５°Ｃの加水分解温度において、酵素／タンパク質供給源の割合が０．０１％から２％までで実施されることを特徴とする、請求項１ないし４の１つに記載の使用。
【請求項６】
魚類タンパク質の加水分解産物は、食物摂取の制限又は満腹現象を全く誘導することなしに、太り過ぎ及び／又は太り過ぎに関連した疾病の治療及び／又は予防を目的とする栄養補助食品か、医薬又は栄養補助の組成物かを製造するために用いられることを特徴とする、請求項１ないし５の１つに記載の使用。
【請求項７】
太り過ぎの治療又は予防が、体重減少の誘導、体重増加の制限及び／又は抑制、体脂肪量の減少、体脂肪量／除脂肪体重の割合の改善、肥満の治療、脂質代謝の調節、脂質分解の促進及び／又は脂質生成の抑制を含むことを特徴とする、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記太り過ぎは、肥満、全身の代謝障害、又は、更年期の徴候の摂食障害に関係することを特徴とする、請求項６又は７に記載の使用。
【請求項９】
食物摂取の制限又は満腹現象を全く誘導することなしに、太り過ぎ及び／又は太り過ぎに関連した疾病の治療及び／又は予防に使用するための医薬組成物であって、魚類、ミクロメシスティウス・ポタソウ（Ｍｉｃｒｏｍｅｓｉｓｔｉｕｓ  ｐｏｕｔａｓｓｏｕ）のタンパク質供給源の酵素的加水分解によって得られ、該酵素的加水分解はバチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来のエンドペプチダーゼ酵素によって実行されることを特徴とする魚類タンパク質の加水分解産物を含有する医薬組成物。
【請求項１０】
太り過ぎの治療及び／又は予防は、体重減少の誘導、体重増加の制限及び／又は抑制、体脂肪量の減少、体脂肪量／除脂肪体重の割合の改善、肥満の治療、脂質代謝の調節、脂質分解の促進及び／又は脂質生成の抑制を含むことを特徴とする、請求項９に記載の魚類タンパク質の加水分解産物を含有する医薬組成物。
【請求項１１】
前記太り過ぎは、肥満、全身の代謝障害、又は、更年期の徴候の摂食障害に関係することを特徴とする、請求項９又は１０に記載の魚類タンパク質の加水分解産物を含有する医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１ないし５のいずれか一項に記載されることを特徴とする魚類タンパク質の加水分解産物を含有する、請求項９ないし１１に記載のいずれか一項記載の魚類タンパク質の加水分解産物を含有する医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１ないし５のいずれか一項に記載の魚類タンパク質の加水分解産物を経口投与するステップを含むことを特徴とする、体重減少の誘導か、体重増加の制限又は抑制かのための非治療上の処置方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、体重減少をもたらす、すなわち体重増加を制限及び／又は抑制するのに使用するための魚類タンパク質の加水分解産物に関する。また本発明は、太り過ぎ（ｅｘｃｅｓｓｉｖｅ  ｗｅｉｇｈｔ）及び／又は太り過ぎに関連した健康障害を予防及び／又は治療するためのかかる加水分解産物に関する。
【背景技術】
【０００２】
魚類タンパク質の加水分解産物は、化学的又は酵素的に得られる場合がある。最初に、前記タンパク質の加水分解は、厳密なｐＨ条件下で強酸又は強塩基を用いて実施される。これらの加水分解の条件は、得られた前記加水分解産物の質を著しく損なう。２番目に、前記加水分解産物は、内因性の酵素又は外因性の酵素を用いるタンパク質の加水分解によって得られる。これらの加水分解の条件は、加水分解の程度を制御可能にする、特に異種性の酵素を用いる加水分解に関する良質の加水分解産物を生じる。
【０００３】
多くの研究が、酵素的に得られた漁獲産物及び副産物（ｃｏ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｏｆ  ｆｉｓｈｉｎｇ）由来の加水分解産物は有用な栄養的及び機能的性質を有することを実証した（非特許文献１ないし５）。なぜなら、前記酵素的加水分解反応は、天然のタンパク質と比較して新たな生物学的性質を有する場合がある、異なる分子量のペプチドを得ることを可能にするためである。例えば、研究は、魚類、甲殻類及び軟体類のタンパク質の加水分解産物が、抗凝血性の性質（非特許文献６）、がん細胞株の抗増殖性の性質（非特許文献７）、腸上皮組織を修復する性質（非特許文献８）、抗酸化の性質（非特許文献９ないし１７）、免疫変調性の性質（非特許文献１８ないし２１）、及び、特定の細胞株の増殖を促進する性質（非特許文献２２及び２３）を有することを明らかにした。
【０００４】
したがって、従来、多くの医薬品、化粧品又は食品の業界が、魚類又はその他の海産物のタンパク質の加水分解産物の機能的性質に興味を持っている。
【０００５】
太り過ぎは、今日、不変的な関心事である。なぜなら、太り過ぎは、個人に不快感を生じさせるだけでなく、より重度の健康問題を生じさせるためである。
【０００６】
例えば、肥満は、循環器疾病、代謝障害、高血圧、又は、がんのような多くの健康問題のリスク因子である。
【０００７】
太り過ぎの発端は大いに異なる。例えば、この現象は、行動つまり貧しい食習慣か、女性の更年期のようなホルモンかが原因である場合がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｑｕａｇｌｉａら、１９８７
【非特許文献２】Ｓｈａｈｉｄｉら、１９９５
【非特許文献３】Ｌｉｃｅａｇａ−Ｇｅｓｕａｌｄｏら、１９９９
【非特許文献４】Ｋｒｉｓｔｉｎｓｓｏｎ及びＲａｓｃｏ、２０００
【非特許文献５】Ｌｉａｓｅｔら、２００３
【非特許文献６】Ｒａｊａｐａｋｓｅら、２００５
【非特許文献７】Ｐｉｃｏｔら、２００６
【非特許文献８】Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄら、２００５
【非特許文献９】Ｃｈｕａｎｇら、２０００
【非特許文献１０】Ｓｕｅｔｓｕｎａら、２０００
【非特許文献１１】Ｋｉｍら、２００１
【非特許文献１２】Ｓｕｅｔｓｕｎａ、２００２
【非特許文献１３】Ｗｕら、２００３
【非特許文献１４】Ｊｕｎら、２００４
【非特許文献１５】Ｓｕｅｔｓｕｎａら、２００４
【非特許文献１６】Ｊｅら、２００８
【非特許文献１７】Ｒａｇｈａｖａｎら、２００８
【非特許文献１８】Ｂｏｇｗａｌｄら、１９９６
【非特許文献１９】Ｇｉｌｄｂｅｒｇら、１９９６
【非特許文献２０】Ｋｏｔｚａｍａｎｉｓら、２００７
【非特許文献２１】Ｔａｎｇら、２００８
【非特許文献２２】Ｒａｖａｌｌｅｃ−Ｐｌeら、２０００
【非特許文献２３】Ｇｕｅｒａｒｄら、２００１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
さまざまな解決策が、現在、太り過ぎのこれらの問題を処置するために提案される。従来、太り過ぎの治療又は予防は食事によって達成される場合がある。しかし、かかる食事はかなり多くの対象を追跡調査することが困難であり、不適切な場合には、人体の機能に必須な栄養の欠乏を生じる場合があることが知られている。したがって、１つの代替案は、体重増加及び／又は体重減少を制限するためのメカニズムを干渉可能な有効成分を使用することである。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】第１の研究の開始時にマウスで測定された子宮のグラム重量（１００ｇあたりに言及されない）を示すグラフ。
【図２】第１の研究の３カ月にわたって各グループのマウスについて記録された全体重増加をグラムで示すグラフ。
【図３】記録された肥満指標、つまり除脂肪体重に対する前記体脂肪量の割合を示すグラフ。
【図４】第２の研究の開始時に測定された体重１００ｇあたりのマウスの子宮のグラム重量を示すグラフ。
【図５】第２の研究の３カ月の各グループのマウスの子宮について記録された全体重増加をグラムで示すグラフ。
【図６】第２の研究の３カ月後の各グループのマウスについての体重１００ｇあたりの全皮下脂肪組織の割合を示すグラフ。
【図７】グループ及び研究期間に応じて、グラムで示された平均食物サイズの測定結果を示すグラフ。
【図８】第２の研究時に、グループ及び研究期間に応じて、体重１００ｇあたりのグラムで示された食物サイズの測定結果を示すグラフ。
【図９】第２の研究時に、グループ及び研究期間に応じて、摂取された食事回数を示すグラフ。
【図１０】第２の研究時に、グループ及び研究期間に応じて、体重１００ｇあたりで言及された任意単位で示されたマウスの平均活性を示すグラフ。
【図１１】第３の研究中の各グループの動物の経時的なグラム体重増加を示す折れ線グラフ。
【図１２】第３の研究中のグループＮＬのマウスのＭＲＩによって１週間に１回測定された皮下組織及び内臓組織と、体脂肪量との平均グラム重量を示すグラフ。
【図１３】第３の研究中のグループＨＬのマウスのＭＲＩによって１４週間にわたり１週間に１回測定された皮下組織及び内臓組織と、体脂肪量との平均グラム重量を示すグラフ。
【図１４】第３の研究中のグループＮＬのマウスのＭＲＩによって該研究終了時に測定された皮下組織及び内臓組織と、体脂肪量との平均グラム重量を示すグラフ。
【図１５】第３の研究中のグループＨＬのマウスのＭＲＩによって該研究終了時に測定された皮下組織及び内臓組織と、体脂肪量との平均グラム重量を示すグラフ。
【図１６】第３の研究中のグループＨＬ及びＮＬのマウスのＭＲＩによって該研究終了時に記録された肥満指標、つまり屠殺体重量に対する体脂肪量の割合を示すグラフ。
【図１７】実施例５の各グループのラットについて記録された全体重増加をグラムで示すグラフ。
【図１８】実施例５の各グループのラットについて記録された全食物摂取量を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本明細書では、研究が、消費者の体重減少を誘導する又は体重増加を制限若しくは抑制する性質を有する特定の魚類からなるタンパク質供給源の酵素的加水分解から得られた加水分解産物を同定した出願人の会社によって実行された。
【００１２】
また本発明は、体重減少をもたらす又は体重増加を制限若しくは抑制するための魚類タンパク質の加水分解産物の非治療上の使用に関し、該魚類タンパク質の加水分解産物は、ミクロメシスティウス・ポタソウ（Ｍｉｃｒｏｍｅｓｉｓｔｉｕｓ  ｐｏｕｔａｓｓｏｕ）、クルペア・ハレングス（Ｃｌｕｐｅａ  ｈａｒｅｎｇｕｓ）、スコムベル・スコムブルス（Ｓｃｏｍｂｅｒ  ｓｃｏｍｂｒｕｓ）、サルディナ・ピルカルドゥス（Ｓａｒｄｉｎａ  ｐｉｌｃｈａｒｄｕｓ）、トリソプテルス・エスマルキ（Ｔｒｉｓｏｐｔｅｒｕｓ  ｅｓｍａｒｋｉ）、トラクルス属の複数種（Ｔｒａｃｈｕｒｕｓ  ｓｐｐ．）、ガドゥス・モルア（Ｇａｄｕｓ  ｍｏｒｈｕａ）、ポルラキウス・ヴィレンス（Ｐｏｌｌａｃｈｉｕｓ  ｖｉｒｅｎｓ）、メラノグランムス・アレグレフィヌス（Ｍｅｌａｎｏｇｒａｍｍｕｓ  ａｅｇｌｅｆｉｎｕｓ）、コリファエノイデス・ルペストリス（Ｃｏｒｙｐｈａｅｎｏｉｄｅｓ  ｒｕｐｅｓｔｒｉｓ）、シルリフォルメス（Ｓｉｌｕｒｉｆｏｒｍｅｓ）目に属する魚類からなるグループから選択される少なくとも１種類のタンパク質供給源を酵素的加水分解することによって得られ、該酵素的加水分解は、バチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来のエンドペプチダーゼ酵素によって実行される。
【００１３】
本発明の１つの実施態様によれば、体重減少を誘導すること、及び、体重増加を制限又は抑制することは、体重の減少、特に、体脂肪量の減少、体脂肪量／除脂肪体重の割合の改善、肥満の軽減、身体組成の改善、脂質代謝の調節、及び、より具体的には、脂質分解の促進及び／又は脂質生成の抑制も含む。
【００１４】
本発明による前記加水分解産物は、痩身食又は体重増加を予防するための食事で用いられる場合がある。
【００１５】
本発明の１つの特徴によれば、かかる加水分解産物は、食物摂取を全く制限しない又は満腹現象を全く引き起こさない。
【００１６】
本発明の１つの実施態様によれば、前記魚類タンパク質の加水分解産物は、以下の分子プロファイル分布、３００Ｄａ未満の分子量の分子が３３％から３９％まで、３００Ｄａから１０００Ｄａまでの分子量の分子が３４％から３７％まで、１０００Ｄａから３０００Ｄａまでの分子量の分子が２１％から２４％まで、３０００Ｄａから５０００Ｄａまでの分子量の分子が３％から４％まで、及び、５０００Ｄａから１００００Ｄａまでの分子量の分子が１％から２％までと、原材料の百分率として１％未満の脂質含有量と、原材料の百分率として４％未満の糖質含有量と、原材料の百分率として８０％よりも多いタンパク質含有量と、原材料の百分率として５％から１０％までの無機質含有量とを有する。
【００１７】
また、前記魚類タンパク質の加水分解産物は、アミノ酸の総質量に関しての質量あたりの百分率として、グルタミン酸  １６．９％、アスパラギン酸  １１．７％、リジン  １０％、ロイシン  ８．２％、アルギニン  ６．３％、アラニン  ６．８％、バリン  ４．８％、イソロイシン  ４．４％、グリシン  ５％、スレオニン  ４．５％、セリン  ４．４％、チロシン  ３．２％、フェニルアラニン  ３．９％、メチオニン  ２．６％、プロリン  ３．４％、ヒスチジン  ２％、システイン  １％、トリプトファン  ０．８％のアミノ酸組成を有することが好ましい。
【００１８】
かかる加水分解産物と、該加水分解産物の製造方法とは、出願人の会社によって出願された特許出願第０８  ００７５３号に記載され、第ＦＲ  ２  ９２７  ３３６号で開示された。
【００１９】
魚類タンパク質供給源は前記魚類の切り身から得られたすり身（ｐｕｌｐ）を含むことが好ましい。
【００２０】
また、前記魚類タンパク質の加水分解産物は、魚類からすり身を回収するために水の存在下で、前記魚類、ミクロメシスティウス・ポタソウ（Ｍｉｃｒｏｍｅｓｉｓｔｉｕｓ  ｐｏｕｔａｓｓｏｕ）、クルペア・ハレングス（Ｃｌｕｐｅａ  ｈａｒｅｎｇｕｓ）、スコムベル・スコムブルス（Ｓｃｏｍｂｅｒ  ｓｃｏｍｂｒｕｓ）、サルディナ・ピルカルドゥス（Ｓａｒｄｉｎａ  ｐｉｌｃｈａｒｄｕｓ）、トリソプテルス・エスマルキ（Ｔｒｉｓｏｐｔｅｒｕｓ  ｅｓｍａｒｋｉ）、トラクルス属の複数種（Ｔｒａｃｈｕｒｕｓ  ｓｐｐ．）、ガドゥス・モルア（Ｇａｄｕｓ  ｍｏｒｈｕａ）、ポルラキウス・ヴィレンス（Ｐｏｌｌａｃｈｉｕｓ  ｖｉｒｅｎｓ）、メラノグランムス・アレグレフィヌス（Ｍｅｌａｎｏｇｒａｍｍｕｓ  ａｅｇｌｅｆｉｎｕｓ）、コリファエノイデス・ルペストリス（Ｃｏｒｙｐｈａｅｎｏｉｄｅｓ  ｒｕｐｅｓｔｒｉｓ）、シルリフォルメス（Ｓｉｌｕｒｉｆｏｒｍｅｓ）目に属する魚類からなるグループから選択される少なくとも１種類のタンパク質供給源をすりつぶすステップと、反応混合物を得るために、バチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来のエンドペプチダーゼ酵素の添加後、１時間ないし５時間５０°Ｃから７５°Ｃまでの温度で前記タンパク質供給源を酵素的加水分解するステップと、前記反応混合物の温度を７０°Ｃを下回らないレベルに８分間ないし２０分間上昇させた後、前記酵素を不活性化することによって前記酵素的加水分解を停止するステップと、前記反応混合物の残余から得られた前記タンパク質の加水分解産物を分離するステップとを含む製造方法によって得られることが好ましい。
【００２１】
前記酵素的加水分解するステップは、５５°Ｃの加水分解温度において、酵素／タンパク質供給源の割合が０．０１％から２％までで実施されることが好ましく、０．７５％と同等で実施されることが好ましい。
【００２２】
バチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来のエンドペプチダーゼ酵素は、酵素委員会によって確立され、１９９２年に国際生化学分子生物学連合によって開示されたＥＣ分類のクラスＥＣ  ３．４．２４．２８に属するメタロエンドペプチダーゼ、すなわちバシロリシン（ｂａｃｉｌｌｏｌｙｓｉｎｅ）であることが好ましい。
【００２３】
本発明の別の局面によれば、本発明は、太り過ぎ及び／又は太り過ぎに関連した疾病の治療及び／又は予防での加水分解産物の使用のために、魚類、ミクロメシスティウス・ポタソウ（Ｍｉｃｒｏｍｅｓｉｓｔｉｕｓ  ｐｏｕｔａｓｓｏｕ）、クルペア・ハレングス（Ｃｌｕｐｅａ  ｈａｒｅｎｇｕｓ）、スコムベル・スコムブルス（Ｓｃｏｍｂｅｒ  ｓｃｏｍｂｒｕｓ）、サルディナ・ピルカルドゥス（Ｓａｒｄｉｎａ  ｐｉｌｃｈａｒｄｕｓ）、トリソプテルス・エスマルキ（Ｔｒｉｓｏｐｔｅｒｕｓ  ｅｓｍａｒｋｉ）、トラクルス属の複数種（Ｔｒａｃｈｕｒｕｓ  ｓｐｐ．）、ガドゥス・モルア（Ｇａｄｕｓ  ｍｏｒｈｕａ）、ポルラキウス・ヴィレンス（Ｐｏｌｌａｃｈｉｕｓ  ｖｉｒｅｎｓ）、メラノグランムス・アレグレフィヌス（Ｍｅｌａｎｏｇｒａｍｍｕｓ  ａｅｇｌｅｆｉｎｕｓ）、コリファエノイデス・ルペストリス（Ｃｏｒｙｐｈａｅｎｏｉｄｅｓ  ｒｕｐｅｓｔｒｉｓ）、シルリフォルメス（Ｓｉｌｕｒｉｆｏｒｍｅｓ）目に属する魚類からなるグループから選択される少なくとも１種類のタンパク質供給源を酵素的加水分解することによって得られた魚類タンパク質の加水分解産物にも関し、前記酵素的加水分解はバチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来のエンドペプチダーゼ酵素によって実行される。
【００２４】
本発明の１つの実施態様によれば、前記太り過ぎの治療及び／又は予防は、体重減少の誘導、体重増加の制限及び／又は抑制、特に、体脂肪量の減少、体脂肪量／除脂肪体重の割合の改善、肥満の治療、脂質代謝の調節、脂質分解の促進及び／又は脂質生成の抑制を含む。
【００２５】
本発明の１つの実施態様によれば、太り過ぎは、肥満、全身の代謝障害、又は、更年期の徴候の摂食障害（ｗｅｉｇｈｔ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）に関係する。
【００２６】
魚類タンパク質の加水分解産物は体重に影響するため、該魚類タンパク質の加水分解産物は太り過ぎに関連するいずれかの疾病の治療及び／又は予防でも用いられると予想される。これは、例えば、循環器疾病、高血圧、高コレステロール血症又はアテローム性動脈硬化症の病気となるであろう。
【００２７】
本発明のこれらの実施態様では、前記魚類タンパク質の加水分解産物は以前に定義されたものである。特に、本発明のこの局面によれば、前記加水分解産物は、食物摂取を全く制限しない又は満腹現象を引き起こさない。
【００２８】
したがって、以前に定義されたような前記魚類タンパク質の加水分解産物は、太り過ぎ及び／又は前述した太り過ぎに関連した疾病の治療及び／又は予防を目的とする栄養補助食品か、医薬又は栄養補助の組成物かを製造するために用いられる場合がある。
【００２９】
また、本発明による前記魚類タンパク質の加水分解産物は、美容上の痩身又は細くなる方法のいずれかで用いられる場合がある。
【００３０】
したがって、本発明は、以前に定義されたような魚類タンパク質の加水分解産物を経口投与するステップを含むことを特徴とする、体重減少の誘導か、体重増加の制限又は抑制かについての非治療上の処置のためのプロセス、すなわち方法にも関する。
【００３１】
最後に、本発明は、以前に定義されたような魚類タンパク質の加水分解産物を経口投与するステップを含むことを特徴とする、体重減少の誘導か、体重増加の制限又は抑制かについての治療上の処置及び／又は予防の方法に関する。
【００３２】
前述の本発明の特徴その他は以下の実施例の実施態様の記載を読むことでより明白に明らかになるであろうし、前記実施例は例示することを目的とし、限定することを目的としないであろう。
【実施例１】
【００３３】
実施例１  プタスダラから得られたタンパク質加水分解産物
プタスダラ（ミクロメシスティウス・ポタソウ（Ｍｉｃｒｏｍｅｓｉｓｔｉｕｓ  ｐｏｕｔａｓｓｏｕ））は北大西洋ニューファンドランドで釣られる。魚類は切り身に切り取られ、その後、そのすり身を得るためにすりつぶされる。この魚類のすり身は、加水分解産物を製造するためのタンパク質供給源の構成要素となる。前記すり身は使用するまで−２０°Ｃで保管される。
【００３４】
予め解凍されたプタスダラのすり身３キロは、質量比１で水と混合される。温度は５５°Ｃに上昇され、その後、ＡＢエンザイム社（フェルドバーグ通り７８、Ｄ−６４２９３、ドイツ国ダルムシュタット郡）によるコロラーゼＮという名前で販売されるバチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来のエンドペプチダーゼ酵素が、タンパク質供給源に対する酵素の割合０．７５％で反応物に添加される。
【００３５】
加水分解反応が２時間実施され、その後、前記酵素は反応物の温度を８５°Ｃに上昇させることによって不活性化される。この温度は１５分間維持される。
【００３６】
その後、得られたプタスダラのタンパク質加水分解産物（以下、「Ｈ１」という。）が固形物質を除去するために篩（２ｍｍ／２ｍｍのメッシュ）上で濾過され、その後、容器に回収される。その後、前記容器に回収された画分は、４０００ｒｐｍから７０００ｒｐｍまでの速度で３０分間±５分間遠心分離される。残渣の除去後、上清は回収され、凍結乾燥され、乾燥した冷暗所で保存される。前記上清は微粒子化される場合もある。
【実施例２】
【００３７】
本発明による別種の魚類から得られたタンパク質加水分解産物
サバ（Ｈ２）（スコムベル・スコムブルス（Ｓｃｏｍｂｅｒ  ｓｃｏｍｂｒｕｓ））、アジ（Ｈ３）（トラクルス属の複数種（Ｔｒａｃｈｕｒｕｓ  ｓｐｐ．））、コソダラ（Ｈ４）（コリファエノイデス・ルペストリス（Ｃｏｒｙｐｈａｅｎｏｉｄｅｓ  ｒｕｐｅｓｔｒｉｓ））、ビブ（Ｈ５）（トリソプテルス・エスマルキ（Ｔｒｉｓｏｐｔｅｒｕｓ  ｅｓｍａｒｋｉ））、イワシ（Ｈ６）（サルディナ・ピルカルドゥス（Ｓａｒｄｉｎａ  ｐｉｌｃｈａｒｄｕｓ））、ニシン（Ｈ７）（クルペア・ハレングス（Ｃｌｕｐｅａ  ｈａｒｅｎｇｕｓ））、パンガ（ｐａｎｇａ）（Ｈ８）（シルリフォルメス（Ｓｉｌｕｒｉｆｏｒｍｅｓ）目に属する魚類）、シロイトダラ（Ｈ１０）（ポルラキウス・ヴィレンス（Ｐｏｌｌａｃｈｉｕｓ  ｖｉｒｅｎｓ））、タイセイヨウマダラ（Ｈ９）（ガドゥス・モルア（Ｇａｄｕｓ  ｍｏｒｈｕａ））、及び、モンツキダラ（Ｈ１１）（メラノグランムス・アレグレフィヌス（Ｍｅｌａｎｏｇｒａｍｍｕｓ  ａｅｇｌｅｆｉｎｕｓ））のタンパク質加水分解産物は実施例１の方法に従って調製された。
【実施例３】
【００３８】
実施例１及び２によって得られた前記タンパク質加水分解物の物理的及び化学的な解析
Ｈ１ないしＨ１１の各タンパク質加水分解産物を構成しているペプチドの分子量を決定することが、立体排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）によって実施される。
【００３９】
凍結乾燥後の粉末形状の前記タンパク質加水分解産物は２０ｍｇ／ｍＬで超純水に懸濁され、その後、０．４５μｍの膜上で濾過され、ファルマシア社によって販売されたスパーデックスペプチドＨＲ１０／３０カラムに付随するゲルを通して濾過することによって解析される。前記カラムの基質は、アガロースとデキストランとを架橋した多孔性ゲル（直径１３−１５μｍ）全量２４ｍＬから構成される。画分ドメインは１００Ｄａから７０００Ｄａまでである。前記カラムは、ダイオネクス社によって販売された、ポンプを装備したＨＰＬＣ製品（ダイオネクスＰ６８０モジュール）に取り付けられる。測定は、多波長紫外線検出器（ダイオネクスＵＶＤ  １７０Ｕモジュール）によって実施される。前記タンパク質加水分解産物Ｈ１は、アセトニトリル、水及びＴＦＡを含む移動相によって溶出される。前記溶出は、０．５ｍＬ／分の割合で約１時間続く。
【００４０】
分子量分布は、以下の既知の分子量マーカー、シトクロムＣ（１２４００Ｄａ）、アプロチニン（６５１１Ｄａ）、ガストリンＩ（２１２６Ｄａ）、Ｐ物質の断片１−７（１３４８Ｄａ）、グリシン（７５Ｄａ）及びロイペプチン（４６３Ｄａ）のカラムの通過後、得られた検量線のパラメーターから算出される。データはクロメレオンソフトウェア（ダイオネクス）によって採取される。前記分子量の百分率は、ソフトウェア（ポリマーラボラトリーズからのＧＰＣシーラス）によって算出される。取得波長は２１４ｎｍである。ｄＷ／ｌｏｇＭによる前記分子量分布は、前記ソフトウェアによって提供される。曲線下面積の百分率は分子の百分率に対応する。サイズクラスあたりの前記分子量分布は表１で提供される。
【００４１】
サイズクラスあたりの前記分子量分布は以下の表１で提供される。曲線下面積の前記百分率はペプチド分子の前記百分率に対応する。
【００４２】
前記加水分解産物全ては、同一の分子量分布プロファイルを示す。
【００４３】
【表１】
0005687697.tif 000002
【００４４】
前記タンパク質加水分解産物Ｈ１のアミノ酸組成は表２で提供され、欧州指令９８／６４／ＣＥと、基準ＮＦ  ＥＮ  ＩＳＯ  １３９０４−２００５年１０月との指示に従って得られる。
【００４５】
【表２】
0005687697.tif 000003
【００４６】
タンパク質含有量は原材料の百分率（ケルダール法によって採取された−ＮＦ  Ｖ１８−１２０−１９９７年３月）において８０％より高い。
【００４７】
脂質含有量は、（欧州指令９８／６４／ＣＥに従う）原材料の百分率として１％未満である。
【００４８】
前記タンパク質加水分解産物Ｈ１の熱量は約３５０Ｋｃａｌ／１００ｇである。
【００４９】
糖質含有量は、（前記タンパク質及び糖質の含有量と、熱量とから導き出された）４％未満である。
【実施例４】
【００５０】
実施例４  プタスダラのタンパク質の加水分解産物Ｈ１の生物活性
タンパク質の加水分解産物Ｈ１は、哺乳類の体重におけるその活性に関して試験された。
【００５１】
以下の研究期間中、卵巣摘出したマウスのモデルが、エストロゲンの欠乏を生じさせ、閉経後の現象を模倣するために用いられた。
【００５２】
研究１
魚類タンパク質の加水分解産物Ｈ１を質量あたり１４％含有する食事が、カゼインを質量あたり１４％含有する参照標準食事と比較された。
【００５３】
ハーラン飼育センターから供給されたＣ３Ｈマウス３６匹が、逆転明暗周期（午前６時から午後６時までが夜）で２２°Ｃに温度を自動制御された部屋内のケージの中に入れられた。動物は、環境と、粉末の形状の食事とに２週間慣らされた。各動物は、３ヶ月の研究期間中、水と、食事（マウス１匹あたりに１日５グラム）とを自由に受け取った。
【００５４】
１２週間目に、前記マウスは、卵巣摘出か、卵巣を摘出しない外科的手術かが施された。術後、前記動物は、該動物が受けるべき食事に応じて１２匹の３つのグループに分けられた。
【００５５】
グループ１
前記マウスは前記卵巣の摘出を受けるために手術され、前記対照食事を受ける。
【００５６】
グループ２
前記マウスは前記卵巣を摘出されることなく手術され、前記対照食事、すなわち、１４％のカゼインを摂取する。
【００５７】
グループ３
前記マウスは前記卵巣の摘出を受けるために手術され、１４％のＨ１を含む食事（前記対照食事と同一の組成であるが、ミルク・プロテインは実施例１で得られた魚類タンパク質の加水分解産物に取り替えられる。）を受ける。
【００５８】
提供された全ての食事は１４％のタンパク質を含み、以下の表３に示されるような類似の熱量組成を有する。
【００５９】
【表３】
0005687697.tif 000004
【００６０】
食事ダイエットの３ヶ月後に、前記マウスは（体重１０グラムあたり、１ｍｇ／ｍＬのキシラジン及び１０ｍｇ／ｍＬのケタミン溶液を０．１ｍＬ注入することによって）麻酔された後、屠殺された。身体組成は、さまざまな脂肪組織（卵巣周囲脂肪組織、腸間膜脂肪組織、腎周囲脂肪組織、皮下脂肪組織、褐色脂肪組織）を採取し、計量することによって、確定された。さまざまな臓器（腎臓、肝臓、子宮、脾臓、腸）の重量も評価された。
【００６１】
モデルの妥当性評価
前記卵巣の摘出が正確に施されたことを確認するために、屠殺時に、前記子宮の重量が正確に測定された。このような場合に、前記子宮は萎縮しているように見えなければならない。反対の場合には、前記マウスは研究から除外された。この結果は図１に示され、前記マウスの測定された子宮のグラム重量（１００ｇあたりに言及されない）が報告される。結果は、卵巣摘出を施されなかったグループ２のマウスが、他の全てのグループのマウスの子宮と比較して、有意に大きい子宮を有することを示している。図１では、値は平均±標準偏差の形で得られる。同一の文字を有しないグループは統計学的に異なる（ｐ＜０．０５）。
【００６２】
したがって、前記卵巣摘出の効果の検証において、問題は検出されなかった。
【００６３】
経時的な体重増加
図２は、３ヶ月の研究期間中に、各グループのマウスについて記録された全体重増加をグラムで示す。値は平均±標準偏差の形で得られる。同一の文字を有しないグループは統計学的に異なる（ｐ＜０．０５）。前記卵巣摘出か、卵巣を摘出しない手術かが施される前に、全てのグループは、同程度の平均体重であった。食事ダイエットの１ヵ月後に、グループ間で違いが見られ、この違いは経時的に顕著になった。したがって、図２に示されるように、３ヶ月の食事ダイエット後に、参照グループ１で観察された全体重増加は、グループ２及び３で報告された全体重増加と比較して統計的に大きい（極めて有意な結果ｐ＜０．００１であった。）。グループ１のマウスはグループ２の前記参照マウスと比較して体重の増加が統計的に大きかったので、「卵巣の摘出」効果が観察された。３ヶ月の食事ダイエット後に、グループ３のマウスはグループ１のマウスに比べて統計的に痩せていたので、この効果はグループ３のマウスでは発見されない。グループ３が受けた前記食事が前記卵巣の摘出により引き起こされる体重増加を制限するのに有効であることが、この観察により確認された。
【００６４】
加水分解産物Ｈ１に基づく前記食事は、カゼインからなる前記食事と比較して、体重の増加を制限する。
【００６５】
肥満指標
３ヶ月の研究期間終了時に、各グループに対して、屠殺体の体重すなわち除脂肪体重、及び脂肪量が測定された。これら２種類のパラメーターにより、図３に示される肥満指標（除脂肪体重に対する体脂肪量の割合）を算出することが可能となる。前記肥満指標はグループ１及び２については同じであるのに対し、グループ３の肥満指標は、統計的に、より小さい。
【００６６】
加水分解産物Ｈ１に基づく前記食事は、体脂肪量の減少と、除脂肪体重の増加とを引き起こし、肥満指標を有意に改善する。
【００６７】
研究２
魚類タンパク質の加水分解産物Ｈ１を質量あたり７．５％又は１２．５％含有する食事が、カゼインを質量あたり１４．６％含有する参照標準食事と比較された。
【００６８】
ハーラン飼育センターから供給されたＣ３Ｈマウス４８匹が、逆転明暗周期（午前６時から午後６時までが夜）で２２°Ｃに温度を自動制御された部屋内のケージの中に入れられた。動物は、環境と、粉末の形状の食事とに２週間慣らされた。各動物は、３ヶ月の研究期間中、水と、食事（マウス１匹あたりに１日５グラム）とを自由に受け取った。
【００６９】
８週間目に、前記マウスは、卵巣摘出か、卵巣を摘出しない外科的手術かが施された。術後、前記動物は、該動物が受けるべき食事に応じて１２匹の４つのグループに分けられた。
【００７０】
グループ１
前記マウスは前記卵巣の摘出を受けるために手術され、前記対照食事を受ける。
【００７１】
グループ２
前記マウスは前記卵巣を摘出されることなく手術され、前記対照食事、すなわち１４．６％のカゼインを摂取する。
【００７２】
グループ３
前記マウスは前記卵巣の摘出を受けるために手術され、７．５％のＨ１を含む食事（前記対照食事と同一の組成であるが、前記ミルク・プロテインは実施例１で得られた魚類タンパク質の加水分解産物に取り替えられる。）を受ける。
【００７３】
グループ４
前記マウスは前記卵巣の摘出を受けるために手術され、１２．５％のＨ１を含む食事（前記対照食事と同一の組成であるが、前記ミルク・プロテインは実施例１で得られた魚類タンパク質の加水分解産物に取り替えられる。）を受ける。
【００７４】
提供された前記食事の熱量組成は、以下の表４に示される。
【００７５】
【表４】
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【００７６】
食事ダイエットの３ヶ月後に、前記マウスは（体重１０グラムあたり、１ｍｇ／ｍＬのキシラジン及び１０ｍｇ／ｍＬのケタミン溶液を０．１ｍＬ注入することによって）麻酔された後、屠殺された。身体組成は、さまざまな脂肪組織（卵巣周囲脂肪組織、腸間膜脂肪組織、腎周囲脂肪組織、皮下脂肪組織、褐色脂肪組織）を採取し、計量することによって、確定された。さまざまな臓器（腎臓、肝臓、子宮、脾臓、腸）の重量も評価された。
【００７７】
モデルの妥当性評価
研究１と同様に、前記卵巣の摘出が正確に施されたこと（萎縮した子宮）を確認するために、屠殺時に、前記子宮の重量が正確に測定された。図４に示されるこれらの結果（体重１００グラムあたりの子宮のグラム重量）は、卵巣摘出を施されなかったグループ２のマウスが、他の全てのグループのマウスの子宮と比較して、有意に大きい子宮を有することを示す。図４では、値は平均±標準偏差の形で得られる。同一の文字を有しないグループは統計学的に異なる（ｐ＜０．０５）。
【００７８】
前記モデルの妥当性の検証において、問題は検出されなかった。
【００７９】
経時的な体重増加
図５は、３ヶ月の研究期間中に、各グループのマウスについて記録された全体重増加をグラムで示す。期間Ｉ、II及びIIIは、それぞれ、食事ダイエットの１ヵ月後、２ヵ月後、３ヵ月後に実施された測定に対応する。値は平均±標準偏差の形で得られる。同一の文字を有しないグループは統計学的に異なる（ｐ＜０．０５）。前記卵巣摘出（グループ１、３及び４）か、卵巣を摘出しない手術（グループ２）かが施される前に、全てのグループは、同程度の平均体重であった。食事ダイエットの３ヵ月後に、グループ間で有意差が見られた。したがって、卵巣摘出したマウスである参照グループ１で観察される前記全体重増加は、グループ２、３及び４で報告された前記全体重増加と比較して統計的に大きい。また、最高量の魚類タンパク質の加水分解産物が摂取されたグループ４で観察された前記全体重増加は、グループ３で観察された前記全体重増加と比較して、有意に小さい。参照グループ２及び４で記録された前記全体重増加では、有意差は見られない。グループ３及び４により摂取された魚類タンパク質の加水分解産物が前記卵巣の摘出により引き起こされる経時的な体重増加を制限することが、これらの観察により証明された。
【００８０】
したがって、１２．５％及び７．５％の濃度の加水分解産物Ｈ１に基づく前記食事は、前記卵巣の摘出により引き起こされる体重増加を大幅に減少させ、この減少は食事ダイエットの２ヵ月後に生じる。
【００８１】
体重１００ｇに対する脂肪組織の割合
図６は、３ヶ月の研究期間終了時の、各グループのマウスの体重１００ｇに対する皮下脂肪組織の割合を示す。グループ４のマウスと、前記魚類タンパク質の加水分解産物を摂取しなかったグループ１の卵巣摘出したマウスとの間に、有意な差が観察された。後者のマウスは、グループ４のマウスで測定された皮下脂肪組織の割合と比較して、皮下脂肪組織の割合が大きかった。
【００８２】
よって、加水分解産物Ｈ１に基づく前記食事は、脂肪組織の減少に陽性効果を有する。
【００８３】
食物摂取量の測定
体重減少を生じさせるという体重において観察される魚類タンパク質の加水分解産物の効果が、食事に対する嫌悪感の結果又は食物摂取量を最小限にするであろう前記加水分解産物の満腹効果の結果ではないことを検証するためにマウスによる食物摂取量に関する研究が実施された。
【００８４】
この研究を実施するために、グループ１の５匹のマウス、グループ２の６匹のマウス及びグループ４の５匹のマウスが、丸５日間、代謝ケージに個別に入れられた。この代謝ケージは、時間の関数として、摂取された食物の量及びマウスの活性を記録することを可能にする。最初の３日は、この環境へのマウスの順応日である。最後の残り２日間に、前記食物摂取量及び前記活性が測定された。前記食事は、５日間、半流動状で給餌された。
【００８５】
マウスにより摂取される食物サイズ
図７は、グループ及び研究期間（Ｐ１：全期間、Ｐ２：昼、Ｐ３：夜）に応じて、グラムで表示される平均食物サイズの測定結果を示す。
【００８６】
図８は、グループ及び研究期間（Ｐ１：全期間、Ｐ２：昼、Ｐ３：夜）に応じて、体重１００ｇあたりのグラムで表示される平均食物サイズの測定結果を示す。
【００８７】
グループ及び研究期間に応じて摂取された食事回数
図９は、グループ及び研究期間（Ｐ１：全期間、Ｐ２：昼、Ｐ３：夜）に応じて摂取された食事回数を示す。値は平均±標準偏差の形で得られる。同一の文字を有しないグループは統計学的に異なる（ｐ＜０．０５）。
【００８８】
図７及び８から明らかなように、食物サイズに関して種々のグループ間で、有意差は観察されない。他方で、図９は、全期間（Ｐ１）及び夜の期間（Ｐ３）にマウスが摂取する食事回数について、グループ４と、グループ１又は２との間での有意な差を示す。前記魚類タンパク質の加水分解産物を含む食事を受けたグループ４のマウスは、前記魚類タンパク質の加水分解産物を含まない食事を受けたマウスと比較して、より多く摂食した。
【００８９】
本研究は、前記魚類タンパク質の加水分解産物が満腹効果を有さず、食事に対する嫌悪感も引き起こさないことを示す。
【００９０】
したがって、Ｈ１を含む前記食事を受ける前記グループは、他の参照グループと同一の食物サイズを有するが、食事回数は有意により多い。よって、Ｈ１を受ける前記グループは、カゼインを受ける２ヶ月の食事ダイエット後の前記参照グループと比較して、有意により多くの食物を摂取するが、有意により痩せている。
【００９１】
動物の活性の測定
図１０は、グループ及び研究期間（Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３）に応じる体重１００ｇあたりのマウスの平均活性（任意単位）を示す。
【００９２】
（卵巣摘出された）グループ１と、より大きな活性を示す（卵巣摘出されない）グループ２との間の有意差によって示されるように、卵巣の摘出は全活性での有意な減少を引き起こす。
【００９３】
マウスの卵巣の摘出は、エネルギー消費の有意な減少を引き起こす。
【００９４】
結論
よって、バチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来のエンドペプチダーゼによって得られる前記魚類タンパク質の加水分解産物Ｈ１は、食物の摂取を制限しなかったが、体重の増加を制限した。また、この加水分解産物の摂取は、マウスの身体活動の増加を伴わない。したがって、マウスの体重への前記加水分解産物の影響は、１又は２以上の生理現象に起因する。
【００９５】
研究３
雄のＣ３Ｈマウス７２匹が選択され、以下のグループに分けられた。
タンパク質が寄与する総エネルギーに対する百分率として０％（ＮＬと称されるグループ）か、５０％（ＮＬ５０％と称されるグループ）か、８０％（ＮＬ８０％と称されるグループ）かの魚類タンパク質の加水分解産物Ｈ１を含む正常脂質（ＮＬ）の食事を受ける３つのグループ。
タンパク質が寄与する総エネルギーに対する百分率として０％（ＮＬと称されるグループ）か、５０％（ＨＬ５０％と称されるグループ）か、８０％（ＨＬ８０％と称されるグループ）かの魚類タンパク質の加水分解産物Ｈ１を含む高脂質（ＨＬ）の食事を受ける３つのグループ。
【００９６】
各グループのマウスは、毎週、体重が計量され、該体重が記録された。１４週の食事ダイエットの終了時に、身体組成への前記加水分解産物Ｈ１の影響を分析するために、マウスは屠殺された。
【００９７】
図１１は、各グループの動物の経時的な体重増加を示す。値は、平均±標準偏差のグラムの形で記載される。同一の文字を有しないグループは統計学的に異なる（ｐ＜０．０５）。
【００９８】
高脂質食事及び正常脂質食事の両方の場合で、前記加水分解産物を摂取しなかったマウス（ＮＬグループ及びＨＬグループ）と比較して、前記加水分解産物Ｈ１を給餌されたマウスは体重がより軽いことが観察される。本発明による前記加水分解産物は、体重を有意に減少させ又は体重増加を制限した。
【００９９】
マウスの身体組成は、実験期間中及び実験の終了時に分析された。グループごとの皮下組織、内臓組織、体脂肪量及び屠殺体の平均グラム重量が決定され、その後、記録された。
【０１００】
マウスの身体組成は、１週間に１回、代謝ケージを通過後、直ちに、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）によって決定された。前記マウスはマスクを用いて、（麻酔で眠らせるために３％、睡眠状態を継続させるために１％に減少させた）イソフルランで麻酔された。マウスの直腸温は、電子的に測定され（ＳＡ  インストルメンツ）、加熱マットレスシステムで３７．０±０．５°Ｃに保持された。前記装置を用いて、動物を３次元で表示する９６枚の画像が撮影された。これらの画像は正確にわずか２ｃｍ強しかなく、全身の画像を撮影するためには、動物を移動させる必要があった。ＭＩＰＡＶ（登録商標）ソフトウェアが使用され、該ソフトウェアは全身の画像を再現し、データを処理するために、写真を結合することを可能にする。前記写真に白色で表示される脂肪組織は区切られ、該脂肪組織と、皮下組織と、内臓組織とが分離される。この処理は、前記全ての画像１枚ずつについて、実施される。
【０１０１】
図１２及び１３は、ＭＲＩ研究中、１週間に１回決定されたＮＬ及びＨＬグループそれぞれのマウスのさまざまな脂肪組織のグラム重量を示す。同様に、図１４及び１５は、マウスが屠殺されたときに採取されたさまざまな脂肪組織のグラム重量を示す。値は平均±標準誤差（ＳＥＭ）の形で得られる。統計学的差異：＊はｐが０．０５未満であり、＊＊はｐが０．０００１より大きく、かつ、０．０１未満であり、＊＊＊はｐが０．０００１未満である。
【０１０２】
加水分解産物Ｈ１が補強された食事の摂取は、該加水分解産物Ｈ１を摂取しなかった前記参照と比較して、マウスの体脂肪量の有意な減少を引き起こす。この有意差は、皮下脂肪組織の減少に関係する（図１２、１３、１４、１５）。
【０１０３】
ＭＲＩで得られた前記画像の分析は、Ｈ１加水分解産物補強食事を給餌されたマウスで、体脂肪量の重量の有意な減少が観察されることを示す（図１２、１３）。ＨＬグループでは、８０％ＨＬ食事を給餌された動物でのみ、有意な減少が観察された。この有意差は、皮下脂肪組織の重量の減少のみに起因する。Ｈ１加水分解産物での食事の補強は、マウスの内臓の脂肪組織に影響を及ぼさない。
【０１０４】
マウスの前記食事への加水分解産物Ｈ１の混入は、体重増加を制限した。この体重増加の制限は体脂肪量に関係し、該体脂肪量は、前記加水分解産物を給餌されなかったグループと比較して前記加水分解産物を給餌されたグループで、統計的に減少する。
【０１０５】
また、屠殺時の解剖により採取された前記身体組成から、体脂肪量の重量の有意な減少が観察された。Ｈ１加水分解産物を含まない前記食事が給餌されたマウスと比較して、前記５０％Ｈ１加水分解産物食事を摂取したマウスで、この有意な減少が観察されるが、前記８０％食事を給餌されたマウスでは前記体脂肪量の重量の減少がより顕著であった。Ｈ１加水分解産物補強食事が給餌されたマウスの２つのグループ（ＮＬ、ＨＬ）の皮下脂肪組織に関しても、重量の有意な減少が発見された。
【０１０６】
前記５０％ＨＬ食事を摂取した動物で、該摂取は、全体脂肪量の重量の有意な減少を全く引き起こさず、単に減少の傾向が観察されるだけであった。しかし、皮下脂肪組織の重量は、前記対照ＨＬ食事と比較して、有意に減少した部分であった。他方で、前記８０％ＨＬ食事が給餌されたマウスでは、全体脂肪量の重量の大幅な減少が観察された。また、この食事が給餌されたマウスの皮下脂肪組織及び内臓脂肪組織も、有意に減少した。
【０１０７】
また、加水分解産物Ｈ１の前記摂取が、皮下脂肪組織及び副睾丸脂肪組織の脂肪細胞の大きさを減じることが観察された。この効果は、内臓脂肪組織では観察されなかった。
【０１０８】
また、肥満指標（動物の屠殺体の体重と体脂肪量の割合）が算出された（図１６）。この肥満指標は、対照食事の摂取後と比較して、ＨＬ食事の摂取後に有意に増加する。
【０１０９】
前記対照食事ＨＬすなわちＨ１加水分解産物を含まない食事と比較して、８０％ＨＬ食事を摂取したマウスで前記肥満指標は有意に減少し、前記対照食事ＮＬすなわちＨ１加水分解産物を含まない食事と比較して、８０％ＮＬ食事を摂取したマウスで前記肥満指標は有意に減少する。タンパク質エネルギー寄与により、Ｈ１の前記５０％食事が給餌された動物で、前記肥満指標は減少する傾向にある。
【０１１０】
研究期間中、ＨＬ投与計画を受けた動物の肝臓は、前記対照マウスの肝臓と比較して、より大きいことも観察された。前記食事へのＨ１加水分解産物の添加は、ＮＬ対照食事の摂取か、ＨＬ食事の摂取かに関わらず、肝臓の重量の有意な減少を引き起こす。
【実施例５】
【０１１１】
バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来の酵素か、バチルス・アミロリクエファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）及びバチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来の酵素混合物かによって得られた魚類タンパク質の加水分解産物の生物活性
体重増加の活性を有する機能性ペプチドの採取物を濃縮するために、出願人の会社は、バチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来の酵素以外の酵素を用いる酵素消化によって得られた前記ペプチドのかかる活性についてテストすることによって研究を続けた。
【０１１２】
３４４±４ｇの雄のウィスターラット３２匹が、ＴＭＰ、魚類タンパク質、ペプチドＡ、ペプチドＰと称された８匹の４つのグループに分けられた。各食事のエネルギー寄与は、タンパク質５５％、脂質３０％及び糖質１５％によって達成された。それらは格子状のケージで個別に飼育され、昼夜周期の温度制御室（２２±１°Ｃ）に置かれ、ラットは夜に食事することが知られている。
【０１１３】
ラットは、トータル・ミルク・プロテイン１４％（ＴＭＰ）、糖質５６％及び脂質３０％を含む脂質の正常なタンパク質Ｐ１４食に１週間以上馴化した。ラットは自由に摂食した。１週間の馴化後、所要の体重に到達すると、ラットはそれらの実験食を２１日間毎日給餌された。さまざまなグループは、それらの名前に対応する食事を受け取った。
ＴＭＰ：トータル・ミルク・プロテイン
魚類タンパク質：赤身魚及び白身魚に由来する天然海洋資源のタンパク質
ペプチドＡ：アルカラーゼ（登録商標）（バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来の酵素）を用いるプタスダラの酵素加水分解の方法によって得られたペプチド
ペプチドＰ：プロタメックス（登録商標）（バチルス・アミロリクエファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）及びバチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来の酵素）を用いるプタスダラの酵素加水分解の方法によって得られたペプチド
計量と、グラム粉末消費量の評価とが、毎日実施された。
【０１１４】
体重の変化
図１７は、テストした食事を自由に食べたラットの２１日間の体重の全増加を示す（値は平均±標準偏差に相当する、ｎ＝８）。同一の文字を有しないグループは統計学的に異なる（ｐ＜０．０５）。
【０１１５】
実験条件への１週間の馴化後、それらがＰ１４の参照食（３４８±５ｇ）を給餌されるとき、前記グループの体重は異ならない。前記実験の終了時、全体重増加は、ペプチドのグループ（ペプチドＡ及びペプチドＰ）と、ＴＭＰ及び魚類タンパク質のグループとの間で、有意差を全く示さない。
【０１１６】
食物摂取量
馴化期間に、各グループは参照食と同一の食物摂取量だった（３３７±４ｋＪ）。その後、前記ラットはそれらの実験食を給餌されるとき、食物摂取量の減少がそれらの馴化期間と比較して４つのグループについて観察されたが、この減少はさまざまなペプチドと、参照グループとの間で有意ではない（図１８）。プロタメックス（登録商標）及びアルカラーゼ（登録商標）の酵素を用いて得られたプタスダラのタンパク質の加水分解産物を受け取るグループは、それ以上食物を摂取しなかった。
【０１１７】
体重増加に関して、ペプチドＡ及びペプチドＰのグループと、参照グループ（ＴＭＰ、魚類タンパク質）との間に違いが全くないので、ペプチドＡ及びＰは体重に全く影響しないと結論付けられた。結果として、研究作業はそれらの２種類の加水分解産物で継続されなかった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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