(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
２５−ヒドロキシビタミンＤ３及びビタミンＤ３を有効成分として含む、高血糖治療剤。
【請求項２】
２５−ヒドロキシビタミンＤ３及びビタミンＤ３を有効成分として含む、高血糖予防剤。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［技術分野］
本発明は、２５−ヒドロキシビタミンＤ３（カルシフェジオール）を使用して、ヒトの高血糖を治療することに関する。血糖は、基線よりも正常値に近いレベルまで低減される。任意に、ビタミンＤ３を２５−ヒドロキシビタミンＤ３と一緒に使用してもよい。
【０００２】
［背景技術］
ビタミンＤ（エルゴカルシフェロールおよびコレカルシフェロールなど）とは、それぞれの生物活性によって定義される脂溶性化合物の総称である。ビタミンＤの欠乏によって、子どもではくる病、成人では骨軟化症が起こる。しかしながら、数ヶ月間にわたって１日あたりの推奨摂取量（すなわち、ビタミンＤ５〜１５μｇまたは２００〜６００ＩＵ）の１００倍を超えて慢性的に摂取すると、毒性が生じる可能性がある。ビタミンＤの場合、「毒性の閾値は体重１ｋｇあたり１日で５００〜６００ｍｃｇである。通常、成人はＲＤＡの３倍を超えて長期間消費すべきではない」（Ｇａｒｒｉｓｏｎ  ＆  Ｓｏｍｅｒ，  Ｔｈｅ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，  Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄ．，  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，  ｐｇ．  ８２，  １９９７）。高カルシウム血症は、２５−ヒドロキシビタミンＤの血中濃度が３７５ｎｍｏｌ／Ｌを超えると生じることがある。最近になって、ビタミンＤの安全な上限レベルは少なくとも２５０μｇ／日（１０’０００ＩＵ）であることが確認された（Ｈａｔｈｃｏｃｋら  Ａｍ．Ｊ  Ｃｌｉｎ．  Ｎｕｔｒ．  ８５：６〜１８，  ２００７）。このような健康補助食品を摂取すると、２５−ヒドロキシビタミンＤの血中濃度が約２００ｎｍｏｌ／Ｌになることが明らかになっている。
【０００３】
ビタミンＤは、２５−ヒドロキシビタミンＤ（カルシフェジオール；２５−ＯＨビタミンＤ；２５−ＯＨ  Ｄ）を生成するのに肝臓でのヒドロキシル化が必要なプロホルモンの１つであり、この２５−ヒドロキシビタミンＤが腎臓や他の組織でさらにヒドロキシル化されて、ビタミンＤの活性ホルモン形態である１，２５−ジヒドロキシビタミンＤが生成される。１，２５−ジヒドロキシビタミンＤは、血液中に放出され、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）と結合し、標的組織まで運ばれる。１，２５−ジヒドロキシビタミンＤとビタミンＤ受容体とが結合することで、この複合体が細胞核で転写因子として機能するようになる。
【０００４】
ビタミンＤ欠乏によって、骨吸収が促進されることがある。また、それによって、心臓血管系、免疫系、筋肉系の機能が調節されることもある。疫学的研究では、ビタミンＤ摂取とそれが血圧またはグルコース代謝におよぼす影響との関連性が見いだされている。ビタミンＤの活性は、副甲状腺ホルモンによる負のフィードバック制御下にある。
【０００５】
ビタミンＤと２５−ＯＨ  Ｄ３は、ともに今まで医薬品として投与されてきている。ビタミンＤは、言うまでもなく、広く利用可能である。米国では以前、２５−ＯＨ  Ｄ３がオルガノン（Ｏｒｇａｎｏｎ）  ＵＳＡから「ＣＡＬＤＥＲＯＬ」という商品名で販売されていたが、現在はＦＤＡの販売中止対象薬の一覧に含まれている。これは、コーン油と２５−ＯＨ  Ｄ３を含有するゼラチンカプセルであった。
【０００６】
現在は、液状の２５−ＯＨ  Ｄ３が、スペインにてＦＡＥＳ  Ｆａｒｍａから「ＨＩＤＲＯＦＥＲＯＬ」という商品名で油性溶液として販売されている。
【０００７】
また、ビタミンＤと２５−ＯＨ  Ｄ３との組み合わせが、動物の飼料に用いられている。飼料用の２５−ＯＨ  Ｄ３は、ＤＳＭから「ＲＯＶＩＭＩＸ  ＨＹ−Ｄ」という商品名で市販されている。
【０００８】
５％〜５０％（ｗｔ／ｗｔ）の量で油に溶解された少なくとも２５−ＯＨ  Ｄ３と酸化防止剤、２５−ＯＨ  Ｄ３と油の液滴をカプセル化する作用剤、栄養添加剤（ビタミンＤ３など）を含む飼料プレミックス組成物が、Ｔｒｉｔｓｃｈら（米国特許出願公開第２００３／０１７０３２４号明細書）によって開示されている。このプレミックスを、家禽類、ブタ、イヌまたはネコ用の食品に添加してもよい。この組成物は、２５−ＯＨ  Ｄ３を酸化に対して安定させる。
【０００９】
２５−ＯＨビタミンＤ３とビタミンＤ３の組み合わせを動物用の飼料に添加することが、Ｓｉｍｏｅｓ−Ｎｕｎｅｓら（米国特許出願公開第２００５／００６４０１８号明細書）によって開示されている。特に、約１０μｇ／ｋｇ〜約１００μｇ／ｋｇの２５−ＯＨビタミンＤ３と、約２００ＩＵ／ｋｇ〜約４，０００ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ３を、ブタ用の飼料に添加する。この添加によって、ブタの骨強度が改善される。
【００１０】
２５−ＯＨビタミンＤ３とビタミンＤ３の組み合わせを家禽類用の飼料に添加して、脛骨軟骨発育不全症の影響を改善することが、Ｓｔａｒｋら（米国特許第５，６９５，７９４号明細書）によって開示されている。
【００１１】
Ｂｏｒｅｎｓｔｅｉｎらの米国特許第５，０４３，１７０号明細書には、産卵鶏および老齢鶏の卵殻強度および下肢強度を改善するための、ビタミンＤ３と、１−α−ヒドロキシコレカルシフェロールまたは１α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールのいずれかとの組み合わせが開示されている。
【００１２】
Ｃｈｕｎｇらによる国際公開第２００７／０５９９６０号パンフレットには、ビタミンＤ３と２５−ヒドロキシビタミンＤ３の両方を含有する食餌を与えられた雌ブタで、全身の健康状態、体格、産仔数と健康、その他の生産パラメータが改善されることが開示されている。また、ヒト用の２５−ＯＨ  Ｄ３栄養補助食品が開示されているが、体重１ｋｇあたり５〜１５マイクログラムというその投与量の範囲（一人あたり３００〜９００マイクログラムという極めて高い一日投与量に相当）は極めて高い。
【００１３】
本発明者らの知るところでは、従来技術は、２５−ヒドロキシビタミンＤ３をヒト用の薬として使用して高血糖を治療することについては、何ら教示も示唆もしていない。血糖を正常化するためにヒトを有効量のビタミンＤ３および２５−ヒドロキシビタミンＤ３で治療する場合、組成物の形態と投与量によって望ましい効果が得られる。他の利点および改善点については、後述するか、あるいは本明細書の開示内容から自明であろう。
【００１４】
［発明の概要］
２５−ヒドロキシビタミンＤ３（カルシフェジオール）を薬として使用して、ヒトの高血糖を抑えるまたは血糖を正常なレベルに維持することが可能であることが見いだされている。この薬は、任意にビタミンＤ３（コレカルシフェロール）をさらに含むものであってもよい。ヒトは、子どもや若者をはじめとして、誕生から成人まで、１８歳から８０歳まで、あるいは８０歳を超えるなど、どの年齢であってもよい。医薬組成物の形態と投与量ならびに、薬の製造方法についても開示する。
【００１５】
第１の態様では、少なくとも２５−ヒドロキシビタミンＤ３をヒトに投与する方法が得られる。これによって、正常なレベル（空腹時の成人の血漿１リットルあたりグルコース７ｍｍｏｌ未満など）に近いレベルまで血糖を下げるか、そのレベルに維持することができる。任意に、２５−ヒドロキシビタミンＤ３と一緒にまたは別々に、ビタミンＤ３を投与してもよい。これについては、１日１回、１週間に１回または１ヶ月に１回投与すればよい。
【００１６】
別の態様では、ビタミンＤ３と、２５−ヒドロキシビタミンＤ３と、薬学的に許容されるキャリアとを、ヒトの血糖レベルを下げる量で含む、ヒトでの用途に適した医薬組成物が得られる。
【００１７】
別の態様については、以下の説明および特許請求の範囲ならびに、これらを一般化したものから自明であろう。
【００１８】
［発明の詳細な説明］
本明細書および特許請求の範囲全体で使用する場合、以下の定義を適用する。
【００１９】
「ビタミンＤ」は、ビタミンＤ３（コレカルシフェロール）および／またはビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）のいずれかを示す。ヒトは、ビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）を生成できないが、これをビタミンＤ源として使うことはできる。ビタミンＤ２は、さまざまな植物によって合成可能であり、ビタミンＤに相当するものとしてサプリメントでビタミンＤに使用されることが多い。
【００２０】
「ビタミンＤ代謝物」は、２５−ヒドロキシビタミンＤ３以外のビタミンＤの代謝物を意味する。
【００２１】
「２５−ＯＨ  Ｄ３」は、具体的には２５−ヒドロキシビタミンＤ３を示す。
【００２２】
「２５−ＯＨ  Ｄ」は、血漿中に見られる主要な循環型であるビタミンＤ２またはビタミンＤ３のいずれかの２５−ヒドロキシル化代謝物を示す。
【００２３】
「予防する」には、疾患の寛解、症候の重篤度の低減、早期介入、疾患の発症期間の延長を含むことを想定しており、患者がその疾患にもはや羅患しないとか、何の症候も経験しないとかいった状況に限定されることを意図したものではない。
【００２４】
ビタミンＤ３および２５−ヒドロキシビタミンＤ３は、どのような供給源から入手したものであってもよく、その組成物も従来の技術を用いて調製してもよい。通常、ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３またはその両方の結晶を、加熱攪拌しながら（別々にまたは一緒に）油に溶解させる。好ましくは、油を容器に移して加熱する。その後、油の温度を維持または経時的に上昇させながら、ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３またはその両方を容器に入れる。組成物を攪拌して、ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３またはその両方の結晶を溶解させる。油に入れる前に、製粉および／または篩過によって結晶の大きさを小さくし、溶解しやすくしておいてもよい。組成物の攪拌は、かき回し、容器の回転、混合、均質化、再循環または超音波処理によって実施してもよい。好ましくは、油を容器に入れて約８０℃〜約８５℃の温度まで加熱し、大きさを揃えた結晶を容器に入れ、中身をかき回して結晶を油に溶解させる。
【００２５】
「油」は、ババス油、ココナッツ油、コフネヤシ油、ムルムル脂、パーム核油またはホシダネヤシ油など、食用油、脂質または脂肪のいずれであってもよい。油は、天然油、合成油、半合成油またはこれらの組み合わせであってもよい。天然油は、どのような供給源に由来するものであってもよい（動物、植物、真菌、海洋など）；合成または半合成油は、都合のよい技術で製造してもよい。好ましくは、油は、植物中鎖トリグリセリド、主にカプリル酸およびカプリン酸の混合物である。組成物は、任意に、たとえば、酸化防止剤、保存剤、溶解剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤または緩衝剤、湿潤剤、これらの組み合わせなどの１種類以上の他の好適な成分を含むものであってもよい。上記は、薬学的に許容されるキャリアの例である。
【００２６】
好適な酸化防止剤としては、トコフェロール、混合トコフェロール、天然または合成供給源由来のトコフェロール、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ローズマリー抽出物のような天然酸化防止剤、没食子酸プロピル、ヒト用医薬品の製造に用いられる他の任意の酸化防止剤があげられる。好ましくは、酸化防止剤がトコフェロールである。好適な保存剤としては、メチルパラベン、プロピルパラベン、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、安息香酸、これらの組み合わせがあげられる。好適な溶解剤としては、アルコール、塩素化炭化水素、これらの組み合わせなどの無機溶媒または有機溶媒があげられる。好適な界面活性剤は、パルミチン酸アスコルビル、ポリソルベート、ポリエチレングリコール、これらの組み合わせなど、アニオン系、カチオン系または非イオン系であってもよい。好適なｐＨ調整剤または緩衝剤としては、クエン酸−クエン酸ナトリウム、リン酸−リン酸ナトリウム、酢酸−酢酸ナトリウム、これらの組み合わせがあげられる。好適な湿潤剤としては、グリセロール、ソルビトール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、これらの組み合わせがあげられる。
【００２７】
油組成物を形成したら、これを他のさまざまな有用な組成物に取り込むことができる。そのうちのいくつかを、以下にあげておく。たとえば、エマルションを形成してもよく、これを任意にカプセル化または噴霧乾燥させてもよい。上述した非水性組成物を水性組成物と組み合わせることで、多岐にわたるエマルションを調製できる。エマルションは、どのようなタイプであってもよい。好適なエマルションとしては、水中油滴型エマルション、油中水滴型エマルション、無水エマルション、固体エマルション、マイクロエマルションがあげられる。エマルションの調製には、都合のよい任意の技術を使用してもよい。エマルションは、水性組成物と非水性（油など）組成物を含有し、後者は、油組成物の総重量に対して約３重量％〜約５０重量％の量で油に溶解されたビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３またはその両方を（別々にまたは一緒に）含む。本明細書で使用する場合、「水性組成物」および「水性相」は同義に用いられる。通常、エマルションは約２０％〜約９５％の水性組成物と、約５％〜約８０％の非水性組成物とを含み得る。しかしながら、好ましくは、エマルションが約８５％〜約９５％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）の水性組成物と、約５％〜約１５％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）の非水性組成物とを含有する。都合のよいことに、非水性組成物が液滴として水性組成物中に分散していてもよい。たとえば、液滴の平均直径が水性組成物中で約５００ｎｍ未満であってもよい。都合のよいことに、液滴の平均直径が約１００ｎｍ〜約２００ｎｍである。
【００２８】
特に有利な実施形態では、エマルションは、後にエマルションをさらに処理する（噴霧乾燥など）際に、油組成物のカプセル化を容易にするカプセル化剤を含有する。カプセル化剤は、油組成物をカプセル化できる食用物質であれば何でもよい。好ましくは、カプセル剤が主にコロイド状物質である。このような物質としては、デンプン、動物供給源由来のタンパク質（ゼラチンを含む）、植物供給源由来のタンパク質、カゼイン、ペクチン、アルギン酸塩、寒天、マルトデキストリン、リグニンスルホン酸塩、セルロース誘導体、糖質、糖類、ソルビトール、ゴム、これらの組み合わせがあげられる。
【００２９】
好適なデンプンとしては、植物デンプン（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｒｃｈ  ＆  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹのＣＡＰＳＵＬ（登録商標）またはＨＩ−ＣＡＰ（登録商標）など）、他の食品用化工デンプン、これらの組み合わせがあげられる。好ましくは、デンプンがＣＡＰＳＵＬ（登録商標）化工植物デンプンである。動物供給源由来の好適なタンパク質としては、ゼラチン（ウシゼラチン、ブルーム強度の異なるブタゼラチン（Ａ型またはＢ型）、魚ゼラチンなど）、脱脂乳タンパク質、カゼイン塩、これらの組み合わせがあげられる。好ましくは、動物タンパク質がゼラチンである。植物供給源由来の好適なタンパク質としては、ジャガイモタンパク質（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ  Ｐｒｅｒｅｓ  Ｓｏｃｉｅｔｅ  Ａｎｏｎｙｍｅ，  Ｌｅｓｔｒｅｍ，ＦｒａｎｃｅのＡＬＢＵＲＥＸ（登録商標）など）、マメタンパク質、ダイズタンパク質、これらの組み合わせがあげられる。好ましくは、植物タンパク質がＡＬＢＵＲＥＸ（登録商標）ジャガイモタンパク質である。デキストロース当量の異なる好適なマルトデキストリンとして、マルトデキストリン５、マルトデキストリン１０、マルトデキストリン１５、マルトデキストリン２０、マルトデキストリン２５、これらの組み合わせがあげられる。好ましくは、マルトデキストリンが、マルトデキストリン１５である。好適なセルロース誘導体として、エチルセルロース、メチルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、これらの組み合わせがあげられる。好適な糖類として、ラクトース、スクロースまたはこれらの組み合わせがあげられる。好ましくは、糖類がスクロースである。好適なゴムとして、アカシア、ローカストビーン、カラギーナン、これらの組み合わせがあげられる。好ましくは、ゴムがアカシアゴムである。
【００３０】
エマルションがカプセル化剤を含む場合、このカプセル化剤を都合のよい技術で水に分散させ、水性相を形成してもよい。水性相は、選択した成分の特性に応じて、溶液であっても混合物であってもよい。選択した成分の分散には、均質化、混合、乳化、再循環、静的混合、超音波処理、かき混ぜ、加熱またはこれらの組み合わせをはじめとする都合のよい技術を用いればよい。その後、得られる水性相の粘度を、必要に応じて水を加えて調整してもよい。エマルションの水性組成物は、非水性組成物に関して上述したものを含むがこれに限定されるものではない、他の好適な物質を任意に含むものであってもよい。好ましくは、水性組成物は、カプセル化剤、成膜剤、可塑剤、保存剤、酸化防止剤またはこれらの組み合わせを含むものであってもよい。好適な保存剤として、メチルパラベン、プロピルパラベン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、これらの組み合わせがあげられる。好適な酸化防止剤として、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸、クエン酸、これらの組み合わせがあげられる。
【００３１】
好ましくは、水性相が、オクテニルスクシニルデンプン（ＣＡＰＳＵＬ（登録商標））、マルトデキストリン、アスコルビン酸ナトリウムなどの食品用化工デンプンを含有する。別の好ましい水性相は、ジャガイモタンパク質（ＡＬＢＵＲＥＸ（登録商標））、マルトデキストリン２０、アスコルビン酸ナトリウムを含有する。選択した成分を水に溶解させるには、都合のよい技術、好ましくはかき混ぜを使用してもよい。混合物を、好ましくはこれが均一で塊のないものになるまで均質化する。好ましくは、約５０℃〜約７５℃の温度で均質化を実施する。その後、得られる水性相の最終粘度を、好ましくは約２５０ｃｐ〜約４５０ｃｐ、一層好ましくは約３００ｃｐ〜約４００ｃｐ、なお一層好ましくは約３８５ｃｐの所望の粘度に調整してもよい。
【００３２】
エマルションを形成するには、均質化、ロータ−ステータ剪断、高圧剪断およびキャビテーション、高速「カウリング」または剪断攪拌、これらの組み合わせをはじめとする任意の手段で、非水性組成物と水性相を乳化してもよい。エマルションの容量および粘度については、好ましくは、乳化後に水を加えて調整してもよい。好ましくは、非水性組成物および水性組成物を均質化によって乳化する。好ましくは、エマルションは、鉱物、遷移金属またはペルオキシドを含有しないものとする。
【００３３】
上述したように、他の有用な組成物、特に噴霧乾燥粉末などのカプセル化油の製造時に、エマルションを取り込むかまたは利用してもよい。通常、カプセル化油は、油組成物と、油組成物をカプセル化するカプセル剤とを含み、この場合の油組成物は、油に溶解されたビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３またはその両方を、油組成物の総重量に対して約５重量％〜約５０重量％の量で含有する。カプセル化油の製造には、噴霧乾燥、フリーズドライ、流動床乾燥、トレイ乾燥、吸着、これらの組み合わせをはじめとする従来の技術による上述したエマルションの乾燥など、都合のよい任意の技術を用いればよい。好ましくは、カプセル剤を含有する上記の水性相を有するエマルションを噴霧乾燥してカプセル化油を生成する。噴霧乾燥のパラメータは、最終的なカプセル化油に望ましい物理的特徴に左右される。このような物理的パラメータとしては、粒度、粉末の形状とフロー、水分含有量があげられる。好ましくは、油が、カプセル化油の総重量に対して約３０重量％未満、約２０重量％未満、約１０重量％未満または約５重量％未満の量である。カプセル化油は流動性に優れたものでなければならず、ビタミンＤ３および／または２５−ヒドロキシビタミンＤ３が組成物全体に均一に分散しなければならない。都合のよいことに、カプセル化油が粉末である。他の好適な添加剤をカプセル化油に加えてもよい。このような添加剤の１つが、カプセル化油の流動性を高めるための二酸化ケイ素などのフロー剤であってもよい。
【００３４】
［投与量］
毎日．２種類の有効成分を別々にまたは単独で投与する場合の本発明による組成物は、ビタミンＤまたは２５−ＯＨ  Ｄ３を、約１μｇ〜約５０μｇ、好ましくは約５μｇおよび２５μｇの量で含有する。あるいは、ビタミンＤと２５−ＯＨ  Ｄ３の両方を含む１日の単回投与量に、各有効成分を、約１μｇ〜約５０μｇ、好ましくは約５μｇおよび２５μｇの量で含有する。
【００３５】
ビタミンＤ対２５−ＯＨ  Ｄ３の用量比については、約５０：１〜約１：５０であってもよく、一層好ましくは約２５：１〜約１：２５、なお一層好ましくは約６：１〜約１：６であってもよい。
【００３６】
別個の複数の投与量を単一のキット（または容器）に梱包してもよい。たとえば、１日の投与量３０組を、両方の活性成分を別々に分けて（すなわち別々の６０の投与量）キットを構成してもよいし、混合（すなわち両方の有効成分を含有する３０の投与量）して構成してもよい。この投与量をヒトに投与するための指示をキットに入れておいてもよい。
【００３７】
毎週．１週間の単回投与量には、ビタミンＤまたは２５−ＯＨ  Ｄ３を約７μｇ〜約３５０μｇ、好ましくは約３５〜１７５μｇの量で含有する。あるいは、１週間の単回投与量が、ビタミンＤと２５−ＯＨ  Ｄ３の両方をそれぞれ約７μｇ〜約３５０μｇ、好ましくは約３５〜１７５μｇの量で含有してもよい。ビタミンＤ対２５−ＯＨ  Ｄ３の用量比については、約５０：１〜約１：５０であってもよく、一層好ましくは約２５：１〜約１：２５、なお一層好ましくは約６：１〜約１：６であってもよい。
【００３８】
毎月．１ヶ月の単回投与量には、ビタミンＤまたは２５−ＯＨ  Ｄ３を３０μｇ〜約１５００μｇ、好ましくは約７５μｇ〜約５００μｇの量で含有する。あるいは、１ヶ月の単回投与量が、ビタミンＤと２５−ＯＨ  Ｄ３の両方をそれぞれ、３０μｇ〜約１５００μｇ、好ましくは約７５μｇ〜約５００μｇの量で含有してもよい。１週間または１ヶ月の投与量を１組、２組、３組、４組、５組、６組、７組、８組、９組、１０組、１１組または１２組でキットを構成してもよい。
【００３９】
ビタミンＤ対２５−ＯＨ  Ｄ３の用量比については、５０：１〜約１：５０の範囲とし、一層好ましくは約２５：１〜約１：２５、なお一層好ましくは約６：１〜約１：６の範囲とする。
【００４０】
血糖は、血液またはその画分（血漿および血清など）中のグルコースの量を求めるための酵素結合アッセイを用いて簡便に測定可能である。糖尿病患者の血糖を監視するには、多くの異なるアッセイや装置を利用可能である。長期間にわたって高レベルのグルコースに曝露されるとヘモグロビンがグリコシル化されるため、グリコシル化ヘモグロビンを測定すれば慢性高血糖を監視できる。高血糖は、糖尿病患者での顕著な空腹感（過食症）、過剰な口渇（多飲症）、過剰な排尿（多尿）、疲労、体重減少、創傷治癒のしにくさなどの症候につながることがある。血中（血漿）グルコースの正常なレベルは、空腹時の成人において約４ｍｍｏｌ／Ｌから約７ｍｍｏｌ／Ｌとされている。
【００４１】
ヒトに経口投与した２５−ヒドロキシビタミンＤ３と、それによって生じる全身濃度との関係について、ビタミンＤ３を経口投与した場合と比較したデータが不足している。ビタミンＤ３および２５−ヒドロキシビタミンＤ３の動態に関する現時点までの最も包括的な分析は、Ｂａｒｇｅｒ−Ｌｕｘらによって実施された（Ｏｓｔｅｏｐｅｒｏｓｉｓ  ８：２２２〜２３０，  １９９８）。健康な男性に最大１２５０μｇ／日のビタミンＤ３を８週間にわたって投与し、最大５０μｇ／日の２５−ヒドロキシビタミンＤ３を４週間にわたって投与した。ビタミンＤ３と血漿２５−ヒドロキシビタミンＤ３との関係についての曲線動態が実証され、これが肝臓でのヒドロキシラーゼ活性の飽和によるものである可能性も示唆された。これは、２５−ヒドロキシビタミンＤ３の投薬が曲線動態を生成するものとして報告されてはいないという点で裏付けられた（Ｂａｒｇｅｒ−Ｌｕｘら、１９９８）。２５−ヒドロキシビタミンＤ３に関するデータはまさに曲線動態を示すが、これは生理学的な利益が最大限になると思われるレベルを超えて用量を延ばした場合に明らかになるものにすぎず、極めて高用量で圧倒される恒常性維持機構の活性を示すことがある。生理学的範囲内で、この関係は線形でＢａｒｇｅｒ−Ｌｕｘらのものに匹敵するように見える。これらのデータから、健康上の最大の利点を得るには２５−ヒドロキシビタミンＤの一日量として１０μｇ〜６０μｇが必要であることが分かる。
【００４２】
噴霧乾燥した２５−ヒドロキシビタミンＤ３、噴霧乾燥したビタミンＤ３またはその両方を経口投与して、ヒトでの薬物動態に関する研究を開始し、その生理学的相互作用を調査した。特に、その用量反応曲線（単に得られた平均濃度や最大濃度ではなく、一定時間内の経時的なビタミンＤ３および２５−ヒドロキシビタミンＤ３の循環濃度を示す）の形状と定常状態の動態を対象とした。前者の点に関しては、ビタミンＤ３と２５−ヒドロキシビタミンＤ３の両方に曝露した場合の用量反応曲線の形状の変化を調査することが重要である。後者の点に関しては、投与が毎日よりも少ない場合の定常状態の動態を調査することも必要である。なぜなら、（高齢者など）毎日摂取しにくい場合もあり得るグループでは、そのほうが好ましいレジメンだからである。
【００４３】
以下の非限定的な実施例は、本発明を一層よく例示するために示すものである。
【００４４】
［実施例］
［実施例１］
［治験］
［製剤］
［材料および方法］
２５−ヒドロキシビタミンＤ３の噴霧乾燥製剤を粉末として提供した。要約すると、２５−ヒドロキシビタミンＤ３およびＤＬ−α−トコフェロールを中鎖トリグリセリドの油に溶解させた後、化工デンプン、スクロース、アスコルビン酸ナトリウムの水溶液に乳化した。このエマルションを二酸化ケイ素の存在下にて噴霧乾燥器で微粒化した。水分含有量（ＬＤＯ）が４％未満になったら、得られた粉末を回収し、４００μｍで篩過した。これをアルミ製の袋に包装して封止した後、１５℃未満の乾燥した場所で保管し、製造から１２ヶ月以内に使用した。
【００４５】
３種類のロットを製造した。詳しく説明すると、アンカー型攪拌羽根を備えるＦＲＹＭＩＸプロセスユニットで、７０℃にて真空下で１２０分間混合してマトリクスを生成した。
・１７．３００ｋｇの水（ＷＢＩ）
・１３．４６０ｋｇの食品用化工デンプン（ＣＡＰＳＵＬ  ＨＳ）
・３．２７０ｋｇのスクロース
・０．７３０ｋｇのアスコルビン酸ナトリウム
【００４６】
プロペラスターラーを備える二重壁容器で、８２℃にて３５分間混合して、油相を調製した。
・０．５５０ｋｇのＢＥＲＧＡＢＥＳＴ  ＭＣＴ油６０／４０
・０．０４９ｋｇのカルシフェジオール（ＨＹ−Ｄ  ＵＳＰ）
・０．１８３ｋｇのＤＬ−α−トコフェロール
【００４７】
油相をＦＲＹＭＩＸプロセスユニット内のマトリクスに移し、内部のコロイドミル（６０分、７０℃）で事前乳化させた。この事前乳化物を高圧ホモジナイザに循環させた（２０分）。７０℃での粘度が６０ｍＰａ・ｓ〜９０ｍＰａ・ｓのエマルションを高圧ポンプでスプレーノズルまで送った。流動化剤として、二酸化ケイ素（ＳＩＰＥＲＮＡＴ  ３２０  ＤＳ）を塔に供給した。噴霧乾燥パラメータを以下にあげておく。
【００４８】
【表１】
0005691072.tif 000002
【００４９】
３ロットの２５−ヒドロキシビタミンＤ３それぞれについて、２５−ヒドロキシビタミンＤ３含有量約０．２５％の噴霧乾燥粉末平均８．４ｋｇを得た。製剤の他の成分は、食品用化工デンプン７３．２％、スクロース１７．６％、アスコルビン酸ナトリウム４．０％、中鎖トリグリセリド３．０％、二酸化ケイ素１．０％、ＤＬ−α−トコフェロール１．０％である。
【００５０】
ビタミンＤ３の噴霧乾燥製剤を粉末として提供した。要約すると、ビタミンＤ３およびＤＬ−α−トコフェロールを中鎖トリグリセリドの油に溶解させた後、化工デンプン、スクロース、アスコルビン酸ナトリウムの水溶液に乳化した。このエマルションを二酸化ケイ素の存在下にて噴霧乾燥器で微粒化した。水分含有量（ＬＯＤ）が４％未満になったら、得られた粉末を回収し、篩過して大きな塊を取り除いた。これを１５℃未満の乾燥した場所で保管し、製造から１２ヶ月以内に使用した。
【００５１】
［治験］
［被験者］
インフォームドコンセントを用いて健康な閉経後の女性（５０〜７０歳）を募集し、以下の基準でふるい分けた。血清２５−ヒドロキシビタミンＤ３が２０ｎｍｏｌ／Ｌ〜５０ｎｍｏｌ／Ｌ、肥満度指数１８ｋｇ／ｍ２〜２７ｋｇ／ｍ２、血圧１４６／９５ｍｍ  Ｈｇ未満、血清カルシウム２．６ｎｍｏｌ／Ｌ未満、空腹時グルコース１００ｍｇ／ｄｌ未満、１週間に３回を超えて激しい運動をしない、高血圧症の治療歴なし、骨代謝に影響する高用量ビタミンＤまたはカルシウムサプリメントまたは薬物（ビスホスホネート、カルシトニン、エストロゲン受容体調節因子、ホルモン補充療法、副甲状腺ホルモン）の使用歴なし、研究中は「日当たりの良い」場所に足を運ばない。
【００５２】
被験者を７つの処理群（すなわち、毎日、毎週、一用量でのボーラス、組み合わせ用量でのボーラス）に無作為に振り分けた。各群を被験者５名ずつで構成した。彼らをスイスのチューリッヒで冬季に４ヶ月間追跡した。
【００５３】
［計画］
目的は、ヒトに投与したビタミンＤ３および２５−ヒドロキシビタミンＤ３の薬物動態特性を研究および比較することであった。両方の物質を等モル量で調査した。レジメンは、２５−ヒドロキシビタミンＤ３を２０μｇ／日（またはそれに相当する量を週ベースで）とした。比較目的で、等モル量のビタミンＤ３または２５−ヒドロキシビタミンＤ３のいずれかを投与する必要があった。ビタミンＤ３の投与に関しては、バックグラウンドのばらつきに影響されず、参加者にとっての有効用量を提供するのに十分な用量であると思われた。
【００５４】
毎日：１２０回投与
１．  ２５−ヒドロキシビタミンＤ３    ２０μｇ
２．  ビタミンＤ３        ２０μｇ（８００ＩＵ）
毎週：１６回投与
３．  ２５−ヒドロキシビタミンＤ３    １４０μｇ
４．  ビタミンＤ３        １４０μｇ（５６００ＩＵ）
ボーラス：単回投与
５．  ２５−ヒドロキシビタミンＤ３    １４０μｇ
６．  ビタミンＤ３        １４０μｇ（５６００ＩＵ）
ボーラス：組み合わせ投与
７．  Ｄ３および２５（ＯＨ）Ｄ３      １４０μｇ（５６００ＩＵ）＋１４０μｇ
【００５５】
ハードゲルカプセル（瓶入り）には、噴霧乾燥ビタミンＤ３または２５−ヒドロキシビタミンＤ３のいずれかが１カプセルあたり２０μｇまたは１４０μｇのいずれかで含まれている。各投与量を朝食時に経口摂取した。研究期間は、「毎日」および「毎週」群で４ヶ月であった。「ボーラス」群に登録された被験者は、２回目の研究での来訪時に単一投与量を経口摂取した。
【００５６】
この投与量を摂取後、さまざまな時点で被験者から試料を入手して、２５−ヒドロキシビタミンＤ３の血漿濃度（ピークおよび定常状態など）を求めた。スクリーニング目的と基線値を確立するために、研究への参加前に血液試料を採取し、臨床検査室で、血清中のビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３、カルシウム、クレアチニン、アルブミン、空腹時グルコースを測定した。研究１週目の月曜日に、血清ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の薬物動態；血清マーカー（すなわち、ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３、カルシウム、クレアチニン、アルブミン、ＰＴＨ、ＧＯＴ、ＧＰＴ、ＡＬＰ、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬ、総コレステロール、ｂＡＬＰ、空腹時グルコース）；尿マーカー（すなわち、カルシウム、クレアチニン、ＤＰＤ）を２４時間かけて評価した。１週目の残りの日と２週目の月曜日の１日試料を採取して、血清ビタミンＤ３および２５−ヒドロキシビタミンＤ３、血清マーカー（すなわち、カルシウム、クレアチニン、アルブミン）、尿マーカー（すなわち、カルシウム、クレアチニン）を評価した。３、５、７、９、１１、１３、１５週目の月曜日にも評価を継続した。１６週目の月曜日には、試料を採取して、血清ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３；血清マーカー（すなわち、ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３、カルシウム、クレアチニン、アルブミン、ＰＴＨ、ＧＯＴ、ＧＰＴ、ＡＬＰ、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬ、総コレステロール、ｂＡＬＰ、空腹時グルコース）；尿マーカー（すなわち、カルシウム、クレアチニン、ＤＰＤ）の薬物動態を評価した。
【００５７】
［結果］
得られた結果の厳密な統計解析については、２つの理由で実施できなかった。第１に、データを非盲検化するにあたり、各群の基線グルコースレベルに差があり、この差が研究の最初から最後まで継続していたことが発覚した。第２に、個々のインスリンレベルを調べるにあたって、そのうちの多数が少なくとも１回の来訪において「０．０」で記録されたことに留意された。このことから、分析、試料、方法のいずれかに問題があるか、あるいはその組み合わせだったことが分かる。
【００５８】
しかしながら、上記の問題にもかかわらず、以下の観察を実施した。
【００５９】
［グルコースレベル：］
ビタミンＤ３を毎日または毎週摂取した１０名の個体のうち、７名で２週目よりも１５週目にグルコースレベルの低下が認められた。２５−ＯＨ  Ｄ３の場合、１０名のうち６名でグルコースレベルが低下した。よって、ビタミンＤ３と２５−ＯＨのどちらもグルコースレベルを下げることができると思われる。
【００６０】
［インスリンレベル：］
ビタミンＤ３を毎日または毎週摂取した１０名の個体のうち、どの来訪時にもインスリンレベルに「０．０」の結果が含まれなかったのは４名しかいなかった。この４名のうち、３名で２週目よりも１５週目のほうがインスリンレベルが高くなり、値が下がったのはわずか１名であった。
【００６１】
２５−ＯＨ  Ｄ３を毎日または毎週摂取した１０名の個体のうち、５名はどの来訪時にもインスリンレベルに「０．０」の結果が含まれなかった。この５名のうち、１名は２週目よりも１５週目のほうがインスリンレベルが高かったが、４名はレベルが低下した。
【００６２】
インスリンレベルが下がったのは、インスリン感受性が改善されたことを示すため、望ましい結果である。よって、ビタミンＤ３よりも２５−ＯＨ  Ｄ３のほうがインスリン感受性を改善する機能が優れていたと思われる。
【００６３】
［実施例２］
［マウスによる研究］
２５−ＯＨ  Ｄ３または２５−ＯＨ  Ｄ３とビタミンＤ３との組み合わせが血糖に対しておよぼす作用を、マウスでの２つの研究で試験した。
【００６４】
第１の研究では、筋肥大のモデルで、２５−ＯＨ  Ｄ３が血糖に対しておよぼす影響を判断した。簡単に説明すると、２つの群の動物１０匹を麻酔し、動物の左後肢を固定した。すべての動物に鎮痛剤を与えた。腓腹筋上の皮膚に小さな切開創を作った。腓腹筋と腱全体を露出させた。腓腹筋の両方の頭部を、下にある無傷の筋肉から慎重に切り離し、神経と血管を破断しないよう注意を払った。絹の縫合糸で皮膚を閉じ、動物をケージに戻した。麻酔が切れた後、動物はケージの中で何ら問題なく直接動くことができた。動物に経管栄養で１日投与量５０μｇ／ｋｇの２５−ＯＨ  Ｄ３を与え、対照群にはビヒクルを与えて３週間処理した。研究終了時、血液を採取し、Ｈｉｔａｃｈｉ  ９１２  Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ａｎａｌｙｓｅｒで血漿グルコース濃度を分析した。
【００６５】
第２の研究では、筋萎縮のモデルで、２５−ＯＨ  Ｄ３または２５−ＯＨ  Ｄ３とビタミンＤ３の組み合わせが血糖に対しておよぼす影響を試験した。簡単に説明すると、研究開始時に、９ヶ月齢の動物を１群あたり動物１０匹で無作為に５群に分けた。これらの動物を３週間にわたって特別なケージに入れて尾部を懸垂した。これによって、負荷軽減した後肢の骨格筋萎縮につながる。負荷軽減の影響を検出するために、後肢の負荷軽減なしで別の群を同様のケージに入れた。すべてのマウスを別々に分けて収容し、水と餌をいつでも自由に摂取できるようにしておいた。３週間にわたる実験の最初から最後まで、経管栄養で動物を毎日処理した。
１．負荷軽減なしの対照群はビヒクル（ゼラチン）を摂取
２．負荷軽減ありの対照群はビヒクル（ゼラチン）を摂取
３．負荷軽減ありのビタミンＤ３群はビタミンＤ３（５０μｇ／ｋｇ／ｂｗ）を摂取
４．負荷軽減ありの２５−ＯＨ  Ｄ３群は２５−ＯＨ  Ｄ３（５０μｇ／ｋｇ／ｂｗ）を摂取
５．負荷軽減ありの２５−ＯＨ  Ｄ３＋ビタミンＤ３群はビタミンＤ３＋２５−ＯＨ  Ｄ３（５０＋５０μｇ／ｋｇ／ｂｗ）を摂取
【００６６】
表１に、研究１終了後の血漿グルコース値を示す。
【００６７】
【表２】
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【００６８】
表２に、研究２終了後の血漿グルコース値を示す。
【００６９】
【表３】
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【００７０】
表１の結果から、２５−ＯＨ  Ｄ３で処理すると、未処理の対照群に比して血漿グルコースが減少したことが分かる。表２の結果は、後肢負荷軽減によって血糖レベルが上昇する（負荷軽減なしの対照群対負荷軽減ありの対照群）ことを示している。ビタミンＤ３または２５−ＯＨ  Ｄ３での処理によって、血糖レベルは適度に減少した。しかしながら、ビタミンＤ３と２５−ＯＨ  Ｄ３の組み合わせで処理すると、血漿グルコースレベルが相乗的に減少して負荷軽減なしの対照動物のレベルにほぼ達し、よって負荷軽減の影響が改善された。したがって、本発明者らのデータは、ビタミンＤ３と２５−ＯＨ  Ｄ３を組み合わせることで、上昇した血糖レベルが相乗的に低下し、病理的に変化したグルコースレベルが正常化されることを示している。