(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
粒子コアおよび該粒子コアに結合したコーティングを含む表面改変粒子であって、該粒子コアは小分子、ペプチド、およびタンパク質からなる群より選択される活性薬剤を含み、該コーティングは式Ｉ：
【化３】
0005668055.tif 000014
（式中、ｎおよびｍは、１であり、
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、メチルであり、
Ｒ４およびＲ５は、ｃｉｓ−９−オクタデセノイルおよびｃｉｓ−９−オクタデセニルからなる群より独立して選択される）
を有する界面活性剤またはその塩を含み、該表面改変粒子の平均サイズは１ｎｍ〜２，０００ｎｍである、表面改変粒子。
【請求項２】
Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセノイルである、請求項１に記載の粒子。
【請求項３】
前記コーティングが、ポロクサマーおよびリン脂質のうちの少なくとも１つを含む第２の界面活性剤をさらに含む、請求項１から２のいずれか１項に記載の粒子。
【請求項４】
前記活性薬剤が、鎮痛薬、麻酔薬、蘇生薬、アドレナリン作動薬、アドレナリン遮断薬、抗アドレナリン薬、アドレノコルチコイド、アドレナリン模倣薬、抗コリン剤、抗コリンエステラーゼ、抗痙攣薬、アルキル化剤、アルカロイド、アロステリックインヒビター、タンパク同化ステロイド、食欲抑制薬、制酸薬、止瀉薬、解毒薬、抗葉酸薬、解熱薬、抗リウマチ薬、精神治療薬、神経遮断薬、抗炎症薬、駆虫薬、抗生物質、抗凝固薬、抗鬱薬、抗癲癇薬、抗真菌剤、抗線維化剤、抗感染症薬、抗寄生虫薬、抗ヒスタミン薬、抗ムスカリン薬、抗マイコバクテリア剤、抗新生物薬、抗原虫剤、抗ウイルス薬、抗不安鎮静剤、βアドレナリン受容体遮断薬、コルチコステロイド、鎮咳薬、ドーパミン作動薬、止血薬、血液作用薬、睡眠薬、免疫薬、ムスカリン作用薬、副交感神経刺激薬、プロスタグランジン、放射性医薬品、鎮静剤、刺激薬、交感神経刺激薬、ビタミン、キサンチン、成長因子、ホルモン、抗プリオン薬、およびその組み合わせからなる群より選択される治療薬である、請求項１から３のいずれか１項に記載の粒子。
【請求項５】
前記活性薬剤はパクリタキセルである、請求項１から４のいずれか１項に記載の粒子。
【請求項６】
前記活性薬剤が、プロテアーゼインヒビター、ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター、および非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターからなる群より選択される、請求項１から５のいずれか１項に記載の粒子。
【請求項７】
前記活性薬剤が抗炎症薬である、請求項１から６のいずれか１項に記載の粒子。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか１項に記載の複数の粒子を含む薬学的組成物。
【請求項９】
活性薬剤の細胞取り込みを増大させるための医薬の調製における複数の表面改変粒子の使用であって、該表面改変粒子は粒子コアおよび該粒子コアに結合したコーティングを含み、該粒子コアは小分子、ペプチド、およびタンパク質からなる群より選択される活性薬剤を含み、該コーティングは、式Ｉ：
【化５】
0005668055.tif 000015
（式中、ｎおよびｍは、１であり、
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、メチルであり、
Ｒ４およびＲ５は、ｃｉｓ−９−オクタデセノイルおよびｃｉｓ−９−オクタデセニルからなる群より独立して選択される）
を有する界面活性剤またはその塩を含み、該表面改変粒子の平均サイズは１ｎｍ〜２，０００ｎｍである、使用。
【請求項１０】
前記細胞が食細胞である、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
前記細胞が腫瘍細胞である、請求項９に記載の使用。
【請求項１２】
前記医薬が、静脈内、動脈内、筋肉内、皮下、皮内、関節内、髄腔内、硬膜外、脳内、口内、直腸、局所、経皮、経口、鼻腔内、肺経路、腹腔内、眼内、またはその組み合わせで投与することができるものである、請求項９から１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
前記医薬が、関節リウマチ、グレーブス病、重症筋無力症、甲状腺炎、糖尿病、炎症性腸疾患、自己免疫性卵巣炎、全身性エリテマトーデス、およびシェーグレン症候群からなる群より選択される炎症性疾患または炎症性障害の処置のために使用されるものである、請求項９から１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
前記医薬が、デングウイルス感染、エンテロウイルス感染、ＨＩＶ感染、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザ、真菌感染；アフリカトリパノソーマ症、マラリア、コレラ、髄膜炎、および結核からなる群より選択される感染性疾患または感染性障害の処置のために使用されるものである、請求項９から１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
前記医薬が、結腸がん、腎臓がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、腹膜腔がん、子宮頸がん、乳がん、前立腺がん、脳がん、肉腫、黒色腫、白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄腫、および膠芽細胞腫からなる群より選択される増殖性疾患または増殖性障害の処置のために使用されるものである、請求項９から１２のいずれか１項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（背景）
（開示分野）
本開示は、一般に、コーティングした粒子を含む組成物、ならびに、標的化薬物送達のためのかかる組成物の作製方法および使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（関連技術の簡単な説明）
本明細書中で集合的に「粒子」と呼ぶナノ粒子（ナノスフェアが含まれる）および微粒子（ミクロスフェアが含まれる）は、直径が約１ｎｍ〜約１０，０００ｎｍ（１０ミクロン）、好ましくは約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍ（２ミクロン）の固体粒子または半固体粒子である。かかる粒子を、種々の材料（タンパク質、合成ポリマー、ポリサッカリド、核酸、小分子、およびその組み合わせが含まれる）から形成することができ、多数の異なる適用（主に、分離、診断、および薬物送達）で使用されている。
【０００３】
かかる粒子を含む組成物は、薬物送達に有用であることが見出されている。例えば、特許文献１は、活性薬剤を含む粒子を水性懸濁物として処方し、粒子上または粒子周囲に界面活性剤コーティングを施すことによって凝集および粒子成長に対して安定化することができることを開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００６／００７３１９９号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
特に目的の薬物の送達における、粒子を含む組成物、ならびにその作製方法および使用方法の開発が必要とされ続けている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（概要）
本発明の１つの態様は、粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含む表面改変粒子を対象とする。粒子コアは、活性薬剤（治療薬または診断薬（例えば、有機小分子または生体高分子）など）を含む。コーティングは、式Ｉ：
【０００７】
【化１】
0005668055.tif 000002
（式中、ｎおよびｍは、１、２、３、４、５、および６からなる群より独立して選択され、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから独立して選択され、Ｒ４およびＲ５は、Ｃ６〜Ｃ４０アルキル、Ｃ６〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ６〜Ｃ４０アルキニル、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルケニル）、およびＣ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキニル）からなる群より独立して選択される）を有する界面活性剤またはその塩を含む。本発明の表面改変粒子の平均サイズは、一般に、約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである。
【０００８】
本発明の別の態様は、活性薬剤の細胞取り込みを増強する方法を対象とする。本方法は、表面改変粒子の細胞取り込みを増強するのに十分な条件下で細胞を表面改変粒子と接触させる工程を含む。粒子は粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアは活性薬剤を含み、コーティングは式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズは約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである。これらの方法を、エクスビボまたはインビボで行うことができる。活性薬剤の細胞取り込みを増強する各方法を、エクスビボで（すなわち、外科的処置または治療によるいかなるヒトまたは動物の身体への処置も使用しない）行うことができる。あるいは、本発明の活性薬剤の細胞取り込みを増強する方法を、インビボで行うこともできる。細胞は、食細胞（マクロファージ、単球、顆粒球、無顆粒球、好中球、およびその組み合わせなど）であり得る。さらに、細胞は腫瘍細胞であり得る。
【０００９】
本発明の別の態様は、活性薬剤の細胞取り込みを増大させるための医薬の調製における複数の表面改変粒子の使用であって、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが小分子、ペプチド、およびタンパク質からなる群より選択される活性薬剤を含み、コーティングが式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、使用を対象とする。
【００１０】
本発明の別の態様は、活性薬剤の細胞取り込みの増強で用いる複数の表面改変粒子であって、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが小分子、ペプチド、およびタンパク質からなる群より選択される活性薬剤を含み、コーティングが式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、複数の表面改変粒子を対象とする。
【００１１】
本発明の別の態様は、炎症性疾患または炎症性障害を有する被験体を処置する方法であって、被験体に複数の表面改変粒子を投与する工程を含み、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが活性薬剤（例えば、抗炎症薬）を含み、コーティングが式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍであり、投与が炎症性疾患または炎症性障害に関連する症状または病状の緩和、処置、および／または防止に有効である、方法を対象とする。
【００１２】
本発明の別の態様は、炎症性疾患または炎症性障害の処置のために使用する医薬の調製における複数の表面改変粒子の使用であって、医薬が炎症性疾患または炎症性障害に関連する症状または病状の緩和、処置、および／または防止に有効な量の表面改変粒子を含み、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが活性薬剤（例えば、抗炎症薬）を含み、コーティングが式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、使用を対象とする。
【００１３】
本発明の別の態様は、炎症性疾患または炎症性障害を有する被験体の処置で用いる複数の表面改変粒子またはその薬学的組成物であって、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが活性薬剤（例えば、抗炎症薬）を含み、コーティングが式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、複数の表面改変粒子またはその薬学的組成物を対象とする。
【００１４】
本発明の別の態様は、増殖性疾患または増殖性障害を有する被験体を処置する方法であって、被験体に複数の表面改変粒子を投与する工程を含み、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが活性薬剤（例えば、抗新生物薬などの抗増殖薬）を含み、コーティングが式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍであり、投与が増殖性疾患または増殖性障害に関連する症状または病状の緩和、処置、および／または防止に有効である、方法を対象とする。
【００１５】
本発明の別の態様は、増殖性疾患または増殖性障害の処置のために使用する医薬の調製における複数の表面改変粒子の使用であって、医薬が増殖性疾患または増殖性障害に関連する症状または病状の緩和、処置、および／または防止に有効な量の表面改変粒子を含み、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが活性薬剤（例えば、抗新生物薬などの抗増殖薬）を含み、コーティングが式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、使用を対象とする。
【００１６】
本発明の別の態様は、増殖性疾患または増殖性障害を有する被験体の処置で用いる複数の表面改変粒子またはその薬学的組成物であって、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが活性薬剤（例えば、抗新生物薬などの抗増殖薬）を含み、コーティングが式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、複数の表面改変粒子またはその薬学的組成物を対象とする。
【００１７】
本発明の別の態様は、感染性疾患または感染性障害を有する被験体を処置する方法であって、被験体に複数の表面改変粒子を投与する工程を含み、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが活性薬剤（例えば、抗感染症薬）を含み、コーティングが式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍであり、投与が感染性疾患または感染性障害に関連する症状または病状の緩和、処置、および／または防止に有効である、方法を対象とする。
【００１８】
本発明の別の態様は、感染性疾患または感染性障害の処置のために使用する医薬の調製における複数の表面改変粒子の使用であって、医薬が感染性疾患または感染性障害に関連する症状または病状の緩和、処置、および／または防止に有効な量の表面改変粒子を含み、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが活性薬剤（例えば、抗感染症薬）を含み、コーティングが式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、使用を対象とする。
【００１９】
本発明の別の態様は、感染性疾患または感染性障害を有する被験体の処置で用いる複数の表面改変粒子またはその薬学的組成物であって、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが活性薬剤（例えば、抗感染症薬）を含み、コーティングが式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、複数の表面改変粒子またはその薬学的組成物を対象とする。
【００２０】
別の態様では、本発明は、神経変性疾患または神経変性障害を有する被験体を処置する方法であって、被験体に複数の表面改変粒子を投与する工程を含み、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが活性薬剤（例えば、抗神経変性薬）を含み、コーティングが式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍであり、投与が神経変性疾患または神経変性障害に関連する症状または病状の緩和、処置、および／または防止に有効である、方法を対象とする。
【００２１】
本発明の別の態様は、神経変性疾患または神経変性障害の処置のために使用する医薬の調製における複数の表面改変粒子の使用であって、医薬が神経変性疾患または神経変性障害に関連する症状または病状の緩和、処置、および／または防止に有効な量の表面改変粒子を含み、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが活性薬剤（例えば、抗神経変性薬）を含み、コーティングが式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、使用を対象とする。
【００２２】
本発明の別の態様は、神経変性疾患または神経変性障害を有する被験体の処置で用いる複数の表面改変粒子またはその薬学的組成物であって、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが活性薬剤（例えば、抗神経変性薬）を含み、コーティングが式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、複数の表面改変粒子またはその薬学的組成物を対象とする。
【００２３】
本発明の別の態様は、感染性疾患もしくは感染性障害、炎症性疾患もしくは炎症性障害、神経変性疾患もしくは神経変性障害、または増殖性疾患もしくは増殖性障害を有する被験体を処置する方法であって、複数の表面改変粒子を被験体の疾患または炎症部位を有する体腔に投与する工程を含み、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが活性薬剤を含み、コーティングが式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍであり、投与が疾患または障害に関連する症状または病状の緩和、処置、および／または防止に有効である、方法を対象とする。
【００２４】
本発明の別の態様は、感染性疾患もしくは感染性障害、炎症性疾患もしくは炎症性障害、神経変性疾患もしくは神経変性障害、または増殖性疾患もしくは増殖性障害の処置のために使用する医薬の調製における複数の表面改変粒子の使用であって、医薬が疾患または障害に関連する症状または病状の緩和、処置、および／または防止に有効な量の表面改変粒子を含み、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが活性薬剤を含み、コーティングが式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、使用を対象とする。
【００２５】
本発明の別の態様は、感染性疾患もしくは感染性障害、炎症性疾患もしくは炎症性障害、神経変性疾患もしくは神経変性障害、または増殖性疾患もしくは増殖性障害を有する被験体の処置で用いる複数の表面改変粒子またはその薬学的組成物であって、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが活性薬剤を含み、コーティングが式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、複数の表面改変粒子またはその薬学的組成物を対象とする。
【００２６】
上記の各処置方法は、表面改変粒子を被験体の標的組織に送達させるための細胞輸送の使用、または表面改変粒子を体腔内に存在する疾患細胞または炎症細胞によって取り込ませることができるような被験体における疾患部位（例えば、がん、感染）および／または炎症部位を有する体腔への表面改変粒子の局所投与によって、達成することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】図１は、オレゴングリーンで標識したＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）１８８コーティングしたパクリタキセル粒子（ＤＯＴＡＰなし）およびオレゴングリーンで標識したＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子（ＤＯＴＡＰ）の取り込みを示すグラフを示す。
【図２】図２は、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８コーティングしたパクリタキセル粒子（ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８）、オレゴングリーンで標識し、３ヶ月間保存したＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子（ＤＯＴＡＰサンプル１）、オレゴングリーンで標識した新たに調製したＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子（ＤＯＴＡＰサンプル２）、およびオレゴングリーンで標識したプロタミンコーティングしたパクリタキセル粒子（プロタミン）の取り込みを示すグラフを示す。
【図３】図３は、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８コーティングしたパクリタキセル粒子の取り込みを示すグラフを示す。オレゴングリーンコーティングした粒子は、ＤＯＴＡＰを含んでいたか、ＤＯＴＡＰを含んでいなかった（ＤＯＴＡＰなし）かのいずれかである。細胞を、パクリタキセル粒子への細胞の曝露前に１、２、または６日間培養した。
【図４】図４は、オレゴングリーンで標識したＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８コーティングしたパクリタキセル粒子（ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８）、オレゴングリーンで標識したＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子（ＤＯＴＡＰ／ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８）、オレゴングリーンで標識したポリ乳酸−コ−グリコール酸コーティングしたパクリタキセル粒子（ＰＬＧＡ／ポロクサマー１８８）、およびオレゴングリーンで標識したホスファチジルセリンコーティングしたパクリタキセル粒子（ＰＳ／ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８）の取り込みを示すグラフを示す。
【図５−１】図５は、オレゴングリーンで標識したＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８コーティングしたパクリタキセル粒子（ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８）、オレゴングリーンで標識したＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子（ＤＯＴＡＰ／ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８）、およびオレゴングリーンで標識したセチルトリメチルアンモニウムブロミドコーティングしたパクリタキセル粒子（ＣＴＡＢ／ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８）の取り込みを示すグラフを示す。
【図５−２】図５は、オレゴングリーンで標識したＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８コーティングしたパクリタキセル粒子（ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８）、オレゴングリーンで標識したＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子（ＤＯＴＡＰ／ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８）、およびオレゴングリーンで標識したセチルトリメチルアンモニウムブロミドコーティングしたパクリタキセル粒子（ＣＴＡＢ／ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８）の取り込みを示すグラフを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
（詳細な説明）
特許請求の範囲の発明は、多数の異なる形態の実施形態を許容可能である。好ましい実施形態は、本明細書中で開示する場合、特許請求の範囲の発明の原理の例と解釈すべきである。したがって、特許請求の範囲の発明の広範な態様を、示した実施形態に制限することを意図しない。
【００２９】
本発明の１つの態様は、粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含む表面改変粒子を提供する。粒子コアは、小分子、ペプチド、およびタンパク質からなる群より典型的に選択される活性薬剤を含み、コーティングは、式Ｉ：
【００３０】
【化２】
0005668055.tif 000003
（式中、ｎおよびｍは、１、２、３、４、５、および６からなる群より独立して選択され、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから独立して選択され、Ｒ４およびＲ５は、Ｃ６〜Ｃ４０アルキル、Ｃ６〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ６〜Ｃ４０アルキニル、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルケニル）、およびＣ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキニル）からなる群より独立して選択される）を有する界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズは約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである。
【００３１】
本明細書中で使用する場合、用語「アルキル」は、直鎖および分岐鎖の飽和炭化水素基をいい、その限定されない例には、メチル、エチル、および直鎖および分岐鎖のプロピル基およびブチル基が含まれる。アルキル基を、任意選択的に、例えば、１つまたは複数のヒドロキシ（−ＯＨ）基、オキソ（＝Ｏ）基、ハロ（−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉ）基、およびチオ（−ＳＨ）基、またはその組み合わせに置換することができる。
【００３２】
本明細書中で使用する場合、用語「アルケニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含む直鎖および分岐鎖の炭化水素基をいい、その限定されない例には、直鎖および分岐鎖のヘキサデセニル基およびオクタデセニル基が含まれる。アルケニル基を、任意選択的に、例えば、１つまたは複数のヒドロキシ（−ＯＨ）基、オキソ（＝Ｏ）基、ハロ（−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉ）基、およびチオ（−ＳＨ）基、またはその組み合わせに置換することができる。
【００３３】
本明細書中で使用する場合、用語「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含む直鎖および分岐鎖の炭化水素基をいい、その限定されない例には、直鎖および分岐鎖のヘキサデシニル基およびオクタデシニル基が含まれる。アルキニル基を、任意選択的に、例えば、１つまたは複数のヒドロキシ（−ＯＨ）基、オキソ（＝Ｏ）基、ハロ（−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉ）基、およびチオ（−ＳＨ）基、またはその組み合わせに置換することができる。
【００３４】
式ＩのＲ１、Ｒ２、およびＲ３アルキル基は、例えば、１〜８個の炭素原子、１〜６個の炭素原子、および／または１〜４個の炭素原子を有することができる。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、メチルおよびエチルからなる群より独立して選択される。
【００３５】
式ＩのＲ４およびＲ５アルキル基は、例えば、６〜４０個の炭素原子、１０〜２４個の炭素原子、１４〜１８個の炭素原子、５〜３９個の炭素原子、９〜２３個の炭素原子、および／または１３〜１７個の炭素原子を有することができる。
【００３６】
式ＩのＲ４およびＲ５アルケニル基は、例えば、１、２、３、４、５、６、またはそれを超える二重結合を有することができる。Ｒ４およびＲ５アルケニル基は、例えば、６〜４０個の炭素原子、１０〜２４個の炭素原子、１４〜１８個の炭素原子、５〜３９個の炭素原子、９〜２３個の炭素原子、および／または１３〜１７個の炭素原子を有することができる。
【００３７】
式ＩのＲ４およびＲ５アルキニル基は、例えば、１、２、３、４、５、６、またはそれを超える三重結合を有することができる。Ｒ４およびＲ５アルキニル基は、例えば、６〜４０個の炭素原子、１０〜２４個の炭素原子、１４〜１８個の炭素原子、５〜３９個の炭素原子、９〜２３個の炭素原子、および／または１３〜１７個の炭素原子を有することができる。
【００３８】
いくつかの実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、オクチル、２−エチルヘキシル、ノニル、デシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル、オクタデシル、１６−メチルヘプタデシル、ｔｒａｎｓ−９−オクタデセニル、ｃｉｓ−９−オクタデセニル、ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１２−オクタデカジエニル、ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ−９，１２−オクタデカジエニル、ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１２，１５−オクタデカトリエニル、ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ−９，１２，１５−オクタデカトリエニル、１２−ヒドロキシ−９−オクタデセニル、エイコサニル、ドコサニル、ｃｉｓ−１３−ドコセニル、テトラコサニル、ヘキサコサニル、オクタコサニル、トリアコンタニル、テトラトリアコンタニル、オクタノイル、デカノイル、ドデカノイル、テトラデカノイル、ヘキサデカノイル、ヘプタデカノイル、オクタデカノイル、エイコサノイル、ドコサノイル、テトラコサノイル、ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１２，１５−オクタデカトリエノイル、ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−６，９，１２，１５−オクタデカテトラエノイル、ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−５，８，１１，１４，１７−エイコサペンテノイル、ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエノイル、ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１２−オクタデカジエノイル、ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−６，９，１２−オクタデカトリエノイル、ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−８，１１，１４−エイコサトリエノイル、ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−５，８，１１，１４−エイコサテトラエノイル、ｃｉｓ−９−オクタデセノイル、ｔｒａｎｓ−９−オクタデセノイル、ｃｉｓ−１３−ドコセノイル、およびｃｉｓ−１５−テトラコセノイルからなる群より独立して選択される。
【００３９】
いくつかの実施形態では、ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセノイルである（すなわち、式Ｉの界面活性剤はＮ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＡＰ）またはその塩（例えば、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルスルファートまたはＮ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド）である）。他の実施形態では、ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセニルである（すなわち、式Ｉの界面活性剤はＮ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）またはその塩（例えば、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルスルファートまたはＮ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド）である）。いくつかの実施形態では、活性薬剤はパクリタキセルであり、ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセノイルである（すなわち、式Ｉの界面活性剤はＮ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＡＰ）またはその塩（例えば、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルスルファートまたはＮ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド）である）。他の実施形態では、活性薬剤はパクリタキセルであり、ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセニルである（すなわち、式Ｉの界面活性剤はＮ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ），またはその塩（例えば、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルスルファートまたはＮ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド）である）。
【００４０】
本発明の別の態様は、粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含む表面改変粒子に細胞を曝露し、それにより、表面改変粒子を有する細胞を形成することによる食細胞または非食細胞による活性薬剤の取り込みを増強する方法を提供する。粒子コアは、小分子、ペプチド、およびタンパク質からなる群より典型的に選択される活性薬剤を含み、コーティングは式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズは約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである。活性薬剤の細胞による取り込みの増強が、式Ｉの界面活性剤またはその塩を含むコーティングを持たない粒子と接触した細胞と比較して少なくとも観察される。かかる方法を、インビボまたはエクスビボで行って、表面改変粒子を有する細胞を形成することができる。
【００４１】
別の実施形態では、本発明は、食細胞または非食細胞による活性薬剤の細胞取り込みを増大させるための医薬の調製における複数の表面改変粒子の使用を提供する。
【００４２】
さらに別の実施形態では、本発明はまた、表面改変粒子を有する上記細胞を使用した細胞輸送を介した哺乳動物被験体の標的組織への活性薬剤または複数の表面改変粒子を含む薬学的組成物の送達方法を提供する。有効な表面改変粒子の標的化送達方法により、低い全身性有害作用および毒性で、疾患部位、腫瘍部位、または感染部位に治療薬を高い濃度で投与することが可能である。種々の投与方法（静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、腹腔内、経口など）によって、リンパ系、肝臓、および他の組織標的に輸送される細胞による粒子取り込みの増強が容易になることが意図される。皮下投与は、例えば、リンパ管に沿って局所領域的に侵入する種々の疾患（頭頸部がんが含まれる）を意図する。
【００４３】
本明細書中で使用する場合、「標的組織」または「組織標的」は、処置すべき被験体の特定の組織をいう。かかる標的組織の例には、脳および中枢神経系の他の部分、リンパ系（例えば、リンパ節、骨髄、脾臓、胸腺など）、肝臓、および任意の感染部位、炎症部位、または腫瘍部位が含まれるが、これらに限定されない。
【００４４】
細胞輸送による送達に加えて、表面改変粒子を体腔内に存在する疾患細胞または炎症細胞によって取り込ませて活性薬剤を疾患組織標的の非常に近位に送達させることができるように、被験体中の疾患部位（例えば、がん、感染）および／または炎症部位を有する体腔に表面改変粒子を局所的に投与することによって標的組織に送達させることができる。例えば、腹膜腔がん（卵巣がん、腹膜中皮腫、および腹膜がん腫症など）を、粒子または粒子を含む薬学的組成物の腹膜腔への腹腔内投与によって処置することができる。同様に、膀胱のがん、感染、および／または炎症を、粒子または粒子を含む薬学的組成物の膀胱腔への投与によって処置することができ、肺のがん、感染、および／または炎症を、粒子の肺腔への投与（例えば、吸入による）によって処置することができ、胸膜腔のがん、感染、および／または炎症を、粒子の胸膜腔への投与によって処置することができ、心腔のがん、感染、および／または炎症を、粒子または粒子を含む薬学的組成物の心腔への投与によって処置することができ、眼のがん、感染、および／または炎症を、粒子または粒子を含む薬学的組成物の眼の房水または硝子体液への投与によって処置することができる。さらに、消化管のがん、感染、および／または炎症を、粒子または粒子を含む薬学的組成物の胃および／または腸への投与（例えば、経口投与による）によって処置することができる。有利には、表面改変粒子または表面改変粒子を含む薬学的組成物を疾患部位または炎症部位を含む体腔への投与によって疾患部位または炎症部位の近位および／または隣接部位に投与する場合、式Ｉの界面活性剤またはその塩を含むコーティングを持たない粒子と接触した細胞と比較して本発明の表面改変粒子の疾患細胞または炎症細胞による取り込みの増強が少なくとも認められるように、表面改変粒子を疾患部位または炎症部位に存在する疾患細胞（例えば、がん性細胞、感染細胞）または炎症細胞によって取り込ませることができる。
【００４５】
本明細書中で使用する場合、「体腔」は、支持組織に囲まれた比較的空いている空間または支持組織に囲まれた流体で満たされた空間をいう。本明細書中で使用する場合、体腔は、腔を囲む（および限定する）組織および腔の内部全体の両方を含む。例示的な体腔には、腹膜腔、膀胱腔、肺腔、胸膜腔、心腔、消化管腔、眼の房水、および硝子体液が含まれる。
【００４６】
１つの態様では、本発明は、炎症性疾患または炎症性障害を有する被験体の処置のための方法、組成物、および医薬であって、被験体に複数の表面改変粒子を投与する工程を含み、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが小分子、ペプチド、およびタンパク質からなる群より典型的に選択される活性薬剤を含み、コーティングが本明細書中に定義の式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍであり、投与が炎症性疾患または炎症性障害に関連する症状または病状の緩和、処置、および／または防止に有効である、方法、組成物、および医薬を意図する。１つの態様では、被験体が炎症性疾患または炎症性障害を有し、ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセノイルである。１つの態様では、活性薬剤は抗炎症薬である。活性薬剤の送達を、本明細書中に記載の細胞輸送によるか、本明細書中に記載の炎症部位への局所投与によって行うことができる。
【００４７】
別の態様では、本発明は、神経変性疾患または神経変性障害を有する被験体の処置のための方法、組成物、および医薬であって、被験体に複数の表面改変粒子を投与する工程を含み、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが小分子、ペプチド、およびタンパク質からなる群より典型的に選択される活性薬剤を含み、コーティングが本明細書中に定義の式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍであり、投与が神経変性疾患または神経変性障害に関連する症状または病状の緩和、処置、および／または防止に有効である、方法、組成物、および医薬を意図する。１つの態様では、被験体は神経変性疾患または神経変性障害を有し、ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセノイルである。１つの態様では、活性薬剤は抗神経変性薬である。活性薬剤の送達を、本明細書中に記載の細胞輸送によって行うことができる。
【００４８】
さらに別の態様では、本発明は、増殖性疾患または増殖性障害を有する被験体の処置のための方法、組成物、および医薬であって、被験体に複数の表面改変粒子を投与する工程を含み、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが小分子、ペプチド、およびタンパク質からなる群より典型的に選択される活性薬剤を含み、コーティングが本明細書中に定義の式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍであり、投与が増殖性疾患または増殖性障害に関連する症状または病状の緩和、処置、および／または防止に有効である、方法、組成物、および医薬を意図する。１つの態様では、被験体は増殖性疾患または増殖性障害を有し、ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセノイルである。１つの態様では、活性薬剤は、抗増殖薬（抗新生物薬など）である。活性薬剤の送達を、本明細書中に記載の細胞輸送または本明細書中に記載の疾患部位への局所投与によって行うことができる。
【００４９】
なおさらなる態様では、本発明は、感染性疾患または感染性障害を有する被験体の処置のための方法、組成物、および医薬であって、被験体に複数の表面改変粒子を投与する工程を含み、表面改変粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含み、粒子コアが小分子、ペプチド、およびタンパク質からなる群より典型的に選択される活性薬剤を含み、コーティングが本明細書中に定義の式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズが約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍであり、投与が感染性疾患または感染性障害に関連する症状または病状の緩和、処置、および／または防止に有効である、方法、組成物、および医薬を意図する。１つの態様では、被験体は感染性疾患または感染性障害を有し、ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセノイルである。１つの態様では、活性薬剤は抗感染症薬（抗真菌薬、抗ウイルス薬、抗菌薬、または抗寄生虫薬など）である。活性薬剤の送達を、本明細書中に記載の細胞輸送または本明細書中に記載の疾患部位への局所投与によって行うことができる。
【００５０】
したがって、本明細書中に開示の投与方法は、治療有効量の表面改変粒子の投与を意図する。本明細書中で使用する場合、用語「治療有効量」は、本明細書中に開示の処置方法に従った処置を意図する疾患または障害に関連する症状または病状の緩和、改善、除去、処置、および／または防止に十分な表面コーティングした粒子の量をいう。治療有効量の決定は、特に本明細書中に提供した開示を考慮して十分に当業者の能力の範囲内である。
【００５１】
以下の表面改変粒子の説明を、本明細書中に開示の全ての実施形態に適用する。表面改変粒子の活性薬剤は、難水溶性または水溶性であり得る。活性薬剤は、治療薬または診断薬であり得る。活性薬剤は、小分子または生体分子（タンパク質、ペプチド、炭水化物、またはその複合体、結合体、もしくは組み合わせなど）であり得る。１つの好ましい態様では、ＤＮＡ、ＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチドは、本発明の表面改変粒子と共に使用するのに適切な活性薬剤ではない。本明細書中に開示の組成物および方法に従って使用される活性薬剤は、食細胞または非食細胞によって取り込まれ、その後標的組織に送達させられ得るにもかかわらず、かかる活性薬剤に通常関連する薬学的活性を示す。上記に考察したように、活性薬剤を、哺乳動物被験体中の疾患部位（例えば、がん、感染）および／または炎症部位に局所投与し、疾患部位および／または炎症部位に存在する疾患細胞（感染細胞またはがん性細胞など）または炎症細胞によって取り込ませることもできる。
【００５２】
活性薬剤を、種々の公知の薬学的化合物（鎮痛薬、麻酔薬、蘇生薬、アドレナリン作動薬、アドレナリン遮断薬、抗アドレナリン薬、アドレノコルチコイド、アドレナリン模倣薬、抗コリン剤、抗コリンエステラーゼ、抗痙攣薬、アルキル化剤、アルカロイド、アロステリックインヒビター、タンパク同化ステロイド、食欲抑制薬、制酸薬、止瀉薬、解毒薬、抗葉酸薬、解熱薬、抗リウマチ薬、精神治療薬、神経遮断薬、抗炎症薬、駆虫薬、抗凝固薬、抗鬱薬、抗癲癇薬、抗線維化剤、抗感染症薬（例えば、抗真菌剤、抗ウイルス薬、例えば、抗レトロウイルス薬、例えば、ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター、非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター、および抗生物質）、抗ヒスタミン薬、抗ムスカリン薬、抗マイコバクテリア剤、抗新生物薬、抗原虫剤、抗不安鎮静剤、βアドレナリン受容体遮断薬、コルチコステロイド、鎮咳薬、ドーパミン作動薬、止血薬、血液作用薬、睡眠薬、免疫薬、ムスカリン作用薬、副交感神経刺激薬、プロスタグランジン、放射性医薬品、鎮静剤、刺激薬、交感神経刺激薬、ビタミン、キサンチン、成長因子、ホルモン、抗プリオン薬、プロテアーゼインヒビター、およびその組み合わせなどであるが、これらに限定されない）から選択することができる。
【００５３】
抗新生物薬の例には、パクリタキセル、パクリタキセル誘導体化合物、アルカロイド、代謝拮抗物質、酵素インヒビター、アルキル化剤、およびその組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【００５４】
活性薬剤はまた、プロテアーゼインヒビター（ＨＩＶプロテアーゼインヒビターなど）であり得る。プロテアーゼインヒビターの例には、インジナビル、リトナビル、サキナビル、ネルフィナビル、アタザナビル、およびその組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【００５５】
活性薬剤は、ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターであり得る。ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターの例には、ジドブジン、ジダノシン、スタブジン、ザルシタビン、ラミブジン、およびその組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【００５６】
活性薬剤は非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターであり得る。非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターの例には、エファビレンツ、ネビラピン、デラビラジン、およびその組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【００５７】
抗炎症薬の例には、非ステロイド性抗炎症薬、非選択性シクロオキシゲナーゼ（ｃｙｃｌｏｘｙｇｅｎａｓｅ）（ＣＯＸ）インヒビター、ＣＯＸ−１インヒビター、ＣＯＸ−２インヒビター、リポキシゲナーゼインヒビター、コルチコステロイド、抗酸化剤、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）インヒビター、およびその組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。ＣＯＸ−２インヒビターの例には、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、パレコキシブ、ルミラコキシブ、エトリコキシブ、およびその組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【００５８】
診断薬には、Ｘ線造影薬および造影剤が含まれる。Ｘ線造影薬の例には、ＷＩＮ−８８８３（エチル３，５−ジアセトアミド−２，４，６−トリヨードベンゾアート）（ジアトリゾ酸（ｄｉａｔｒａｚｏｉｃ  ａｃｉｄ）のエチルエステル（ＥＥＤＡ）としても公知）、ＷＩＮ  ６７７２２（すなわち、６−エトキシ−６−オキソヘキシル−３，５−ビス（アセトアミド）−２，４，６−トリヨードベンゾアート）；エチル−２−（３，５−ビス（アセトアミド）−２，４，６−トリヨード−ベンゾイルオキシ）ブチラート（ＷＩＮ  １６３１８）；エチルジアトリゾキシアセタート（ＷＩＮ  １２９０１）；エチル２−（３，５−ビス（アセトアミド）−２，４，６−トリヨードベンゾイルオキシ）プロピオナート（ＷＩＮ  １６９２３）；Ｎ−エチル２−（３，５−ビス（アセトアミド）−２，４，６−トリヨードベンゾイルオキシ）アセトアミド（ＷＩＮ  ６５３１２）；イソプロピル２−（３，５−ビス（アセトアミド）−２，４，６−トリヨードベンゾイルオキシ）アセトアミド（ＷＩＮ  １２８５５）；ジエチル２−（３，５−ビス（アセトアミド）−２，４，６−トリヨードベンゾイルオキシ）マロナート（ＷＩＮ  ６７７２１）；エチル２−（３，５−ビス（アセトアミド）−２，４，６−トリヨードベンゾイルオキシ）フェニルアセタート（ＷＩＮ  ６７５８５）；プロパン二酸、［［３，５−ビス（アセチルアミノ）−２，４，５−トリヨード（ｔｒｉｏｄｏ）ベンゾイル］オキシ］ビス（１−メチル）エステル（ＷＩＮ  ６８１６５）；および安息香酸、３，５−ビス（アセチルアミノ）−２，４，６−トリヨード−４−（エチル−３−エトキシ−２−ブテノアート）エステル（ＷＩＮ  ６８２０９）が含まれる。造影剤には、生理学的条件下で比較的迅速に崩壊され、それにより、任意の粒子に関連する炎症反応を最小にすると予想される造影剤が含まれる。崩壊は、酵素的加水分解、生理学的ｐＨでのカルボン酸の可溶化、または他の機構に起因し得る。したがって、難溶性のヨウ素化カルボン酸（ヨージパミド、ジアトリゾ酸、およびメトリゾ酸など）が、加水分解不安定性ヨウ素化種（ＷＩＮ６７７２１、ＷＩＮ１２９０１、ＷＩＮ６８１６５、およびＷＩＮ６８２０９など）とともに含まれる。
【００５９】
他の造影剤には、磁気共鳴画像法の助剤の特定の調製物（ガドリニウムキレートなど）または他の常磁性造影剤が含まれるが、これらに限定されない。かかる化合物の例は、ガドペンテト酸ジメグルミン（ＭＡＧＮＥＶＩＳＴ（登録商標））およびガドテリドール（ＰＲＯＨＡＮＣＥ（登録商標））である。
【００６０】
治療薬および診断薬のクラスならびに各クラス内の種のリストの記述を、Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ，Ｔｈｅ  Ｅｘｔｒａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，３１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９９６（本明細書中に参考として援用され、その一部を形成する）に見出すことができる。列挙された治療薬および診断薬は市販されており、そして／または公知の技術によって調製することができる。
【００６１】
特定の実施形態では、活性薬剤は、難水溶性化合物である。「難水溶性」は、化合物の水溶性が約１０ｍｇ／ｍＬ未満、好ましくは約１ｍｇ／ｍＬ未満であることを意味する。これらの難水溶性化合物は、水性懸濁調製物に特に適切である。なぜならば、水媒体中でこれらの化合物を処方する別法が限られているからである。有利には、本発明のコーティングが得られる式Ｉの界面活性剤またはその塩を、かかる難水溶性活性薬剤を含む粒子の表面に吸着させて、表面上に実質的に均一なコーティングを形成させることができる。例えば、式Ｉの界面活性剤またはその塩の疎水性テール部分は、粒子表面上の疎水性領域に会合することができる。さらに、式Ｉの界面活性剤またはその塩は正電荷であり、したがって、界面活性剤と粒子表面上の負電荷領域との間の静電相互作用は、式Ｉの界面活性剤またはその塩を含むコーティングを安定化することができる。１つの好ましい態様では、難水溶性活性薬剤化合物は、２５００グラム／ｍｏｌ未満、２０００グラム／ｍｏｌ未満、最も典型的には１０００グラム／ｍｏｌ未満（例えば、２００グラム／ｍｏｌと９００グラム／ｍｏｌとの間）の分子量を有する有機化合物である。かかる有機化合物を、本明細書中で「小分子」という。
【００６２】
あるいは、本発明を、水溶性化合物を使用して実施することができる。水溶性化合物の水性懸濁物を形成するために、水溶性活性化合物を、固体キャリアマトリックス（例えば、ポリ乳酸−ポリグリコール酸コポリマー、アルブミン、デンプン）中に封入するか、実質的に活性薬剤が不透過性の周囲のビヒクル中にカプセル化することができる。このカプセル化ビヒクルは、ポリアクリラートなどのポリマーコーティングであり得る。さらに、これらの水溶性化合物から調製した小粒子を、化学的安定性を改善するように、および粒子からの化合物の放出の調節によって化合物の薬物動態学的性質を調節するように改変することができる。水溶性化合物の例には、単純な有機化合物、タンパク質、ペプチド、ヌクレオチド、および炭水化物が含まれるが、これらに限定されない。
【００６３】
以下の粒子の説明を、本明細書中に開示の全ての実施形態にも適用する。粒子は、適切な分析方法（示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）またはＸ線回折など）によって決定した場合の非晶質、半結晶、結晶、またはその組み合わせであり得る。投与前に、粒子を均質化過程によって均質化することができる。粒子を、微量沈降／均質化過程によって均質化することもできる。
【００６４】
コーティングした粒子は、一般に、動的光散乱法（例えば、光子相関分光法、レーザー回折、低角度レーザー光散乱（ＬＡＬＬＳ）、中角度レーザー光散乱（ＭＡＬＬＳ））、光遮蔽法（ｌｉｇｈｔ  ｏｂｓｃｕｒａｔｉｏｎ）（例えば、コールター法）、レオロジー、または顕微鏡法（光学または電子）によって測定したとき、一般に約１ｎｍ〜約２μｍ（または２０００ナノメートル）の平均有効粒径を有する。好ましい平均有効粒径は、要因（化合物の意図する投与経路、処方、可溶性、毒性、および生物学的利用能など）に依存する。他の適切な粒径には、約１０ｎｍ〜約１μｍ、約５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、および／または約１００ｎｍ〜約２５０ｎｍが含まれるが、これらに限定されない。
【００６５】
すべての実施形態では、コーティングした粒子は、活性薬剤を含む固体または半固体の粒子である。コーティングした粒子は、一般に、少なくとも５％（ｗ／ｗ）活性薬剤、例えば、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）、少なくとも２５％（ｗ／ｗ）、少なくとも５０％（ｗ／ｗ）、および／または少なくとも７５％（ｗ／ｗ）、またはそれを超える活性薬剤からなる。
【００６６】
（粒子コアの調製）
本発明で使用される粒子の調製過程を、多数の技術によって行うことができる。代表的であるが非排他的な粒子調製技術の考察を以下に示す。
【００６７】
（Ｉ．小粒子分散物の形成のためのエネルギー付加技術）
一般に、エネルギー付加技術を使用した小粒子分散物の調製方法は、バルク形態の活性薬剤または薬学的に活性な化合物（時折、薬物というものとする）を適切なビヒクル、例えば、水または一般に１つもしくは複数の下記の界面活性剤を含む水溶液または薬学的化合物があまり溶解しない他の液体に添加して、第１の懸濁物（前懸濁物（ｐｒｅｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）というものとする）を形成する工程を含む。エネルギーを前懸濁物に付加して、前懸濁物よりも物理的に安定な粒子分散物を形成する。機械的粉砕（例えば、パールミル粉砕、ボールミル粉砕、ハンマーミル粉砕、流体エネルギーミル粉砕、ジェットミル粉砕、または湿式粉砕）によってエネルギーを付加する。かかる技術は、米国特許第５，１４５，６８４号（本明細書中で参考として援用され、その一部を形成する）に開示されている。
【００６８】
エネルギー付加技術は、さらに、前懸濁物を高剪断条件（マイクロフルイダイザーを使用したキャビテーション、剪断力、または衝撃力が含まれる）に供する工程を含む。本発明は、さらに、ピストンギャップホモジナイザーまたは向流フローホモジナイザー（米国特許第５，０９１，１８８号（本明細書中で参考として援用され、その一部を形成する）に開示のものなど）を使用した前懸濁物へのエネルギー付加を意図する。適切なピストンギャップホモジナイザーは、商品名ＥＭＵＬＳＩＦＬＥＸＴＭ（Ａｖｅｓｔｉｎ）およびＦＲＥＮＣＨ（登録商標）圧力セル（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）で市販されている。適切なマイクロフルイダイザーは、Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ  Ｃｏｒｐ．から市販されている。
【００６９】
エネルギー付加工程を、超音波処理技術を使用して行うこともできる。超音波処理工程を、任意の適切な超音波処理デバイスを使用して行うことができる。適切なデバイスには、ＢｒａｎｓｏｎモデルＳ−４５０ＡおよびＣｏｌｅ−Ｐａｒｍｅｒ５００／７５０ワットモデルが含まれる。かかるデバイスは、当該分野で周知である。典型的には、超音波処理デバイスは、超音波エネルギーを溶液に放出するために前懸濁物に挿入される超音波処理ホーンまたはプローブを有する。超音波処理デバイスは、本発明の好ましい形態では、約１ｋＨｚ〜約９０ｋＨｚ、より好ましくは約２０ｋＨｚ〜約４０ｋＨｚ、またはこれらの任意の範囲もしくは範囲の組み合わせの周波数で操作する。プローブサイズは変更することができ、好ましくは、１／２インチまたは１／４インチなどの異なるサイズである。
【００７０】
小粒子の分散物を、投与前に滅菌することができる。滅菌を、加熱滅菌、ガンマ線照射、濾過（２００ｎｍ未満の粒径を有する分散物としての直接濾過または固体分散物の形成前の沈殿過程で使用した溶液の濾過滅菌のいずれか）、および超高圧（２０００気圧超）の印加、または高圧および高温の組み合わせによって行うことができる。
【００７１】
（ＩＩ．サブミクロンサイズの粒子分散物の調製のための沈殿方法）
小粒子分散物を、沈殿技術によって調製することもできる。以下に、沈殿技術の例を記載する。
【００７２】
微量沈殿法。微量沈殿法の一例は、米国特許第５，７８０，０６２号（本明細書中で参考として援用され、その一部を形成する）に開示されている。’０６２号特許は、（ｉ）有機化合物を水混和性の第１の溶媒に溶解する工程；（ｉｉ）水性の第２の溶媒中のポリマーおよび両親媒性物質の溶液を調製し（この第２の溶媒中で有機化合物が実質的に不溶性である）、それにより、ポリマー／両親媒性物質複合体が形成される工程；および（ｉｉｉ）工程（ｉ）および（ｉｉ）由来の溶液を混合して有機化合物およびポリマー／両親媒性物質複合体の凝集体を沈殿させる工程を含む、有機化合物沈殿過程を開示している。
【００７３】
他の適切な沈殿過程は、米国特許第６，６０７，７８４号、同第７，０３７，５２８号、同第６，８６９，６１７号、同第６，８８４，４３６号（本明細書中で参考として援用され、その一部を形成する）に開示されている。開示の過程は、（１）有機化合物を水混和性の第１の有機溶媒に溶解して第１の溶液を作製する工程、（２）第１の溶液を第２の溶媒または水と混合して有機化合物を沈殿させ、前懸濁物を作製する工程、および（３）高剪断混合または加熱の形態で前懸濁物にエネルギーを付加して小粒子の分散物を得る工程を含む。任意選択的に、第１の有機溶媒を、任意の適切な手段（遠心分離法または濾過法など）によって混合物から除去する。さらに、分散物の連続相を、遠心分離および濾過などの方法を使用した第１の連続相の除去ならびに第２の連続相の添加およびその後の第２の連続相中の固体材料の再分散によって別の連続相に任意選択的に置換することができる。下記の１つまたは複数の任意選択的な界面活性剤を、第１の有機溶媒、第２の水溶液、または第１の有機溶媒および第２の水溶液の両方に添加することができる。
【００７４】
乳濁液沈殿法。１つの適切な乳濁液沈殿技術は、米国特許出願公開第２００５／００３７０８３号（本明細書中で参考として援用され、その一部を形成する）に開示されている。このアプローチでは、過程は、（１）有機相が薬学的に活性な化合物を有する、有機相および水相を有する多相系を準備する工程、および（２）系を超音波処理して有機相部分を蒸発させて水相中に化合物を沈殿させ、小粒子の分散物を形成する工程を含む。多相系を準備する工程は、（１）水不混和性溶媒を薬学的に活性な化合物と混合して有機溶液を定める工程、（２）１つまたは複数の表面活性化合物を使用して水ベースの溶液を準備する工程、および（３）有機溶液を水溶液と混合して多相系を形成する工程を含む。有機相と水相とを混合する工程は、ピストンギャップホモジナイザー、コロイドミル、高速撹拌装置、押出装置、手動の撹拌または震盪装置、マイクロフルイダイザー、または高剪断条件を得るための他の装置もしくは技術の使用を含むことができる。粗乳濁液は、およそ直径１μｍ未満のサイズの油滴を水中に有する。粗乳濁液を超音波処理してマイクロエマルジョンを定め、最終的に小粒子の分散物を得る。
【００７５】
小粒子の分散物を調製するための別のアプローチは、米国特許第６，８３５，３９６号（本明細書中で参考として援用され、その一部を形成する）に開示されている。このプロセスは、（１）有機相が薬学的化合物を有する、有機相および水相を有する多相系の粗分散物を準備する工程、（２）粗分散物にエネルギーを印可して微細分散物を形成する工程、（３）微細分散物を凍結する工程、および（４）微細分散物を凍結乾燥させて薬学的化合物の小粒子を得る工程を含む。小粒子を下記の技術によって滅菌することができ、または小粒子を水媒体中で再構成して滅菌することができる。
【００７６】
多相系を準備する工程は、（１）水不混和性溶媒を薬学的に有効な化合物と混合して有機溶液を定める工程、（２）１つまたは複数の表面活性化合物を使用して水ベースの溶液を調製する工程、および（３）有機溶液を水溶液と混合して多相系を形成する工程を含む。有機相と水相とを混合する工程は、ピストンギャップホモジナイザー、コロイドミル、高速撹拌装置、押出装置、手動の撹拌または震盪装置、マイクロフルイダイザー、または高剪断条件を得るための他の装置もしくは技術の使用を含む。
【００７７】
溶媒−貧溶媒（ａｎｔｉｓｏｌｖｅｎｔ）沈殿。小粒子分散物を、Ｆｅｓｓｉらの米国特許第５，１１８，５２８号およびＬｅｃｌｅｆらの米国特許第５，１００，５９１号（本明細書中で参考として援用され、その一部を形成する）に開示の溶媒−貧溶媒沈殿技術を使用して調製することもできる。両過程は、（１）１つまたは複数の界面活性剤を添加することができる溶媒または溶媒混合物中で生物活性物質の液相を準備する工程、（２）非溶媒が物質の溶媒または溶媒の混合物と混和性を示す、非溶媒または非溶媒の混合物の第２の液相を準備する工程、（３）撹拌しながら（１）および（２）の溶液を共に添加する工程、および（４）望ましくない溶媒を除去して小粒子の分散物を得る工程を含む。これらの方法は、高剪断混合または熱の形態で懸濁物にエネルギーを付加する最後の工程を提供しないと言う点で、上記節に記載の方法「微量沈殿法」と区別される。
【００７８】
相反転沈殿。小粒子分散物を、米国特許第６，２３５，２２４号、同第６，１４３，２１１号、および同第６，６１６，８６９号（それぞれ本明細書中で参考として援用され、その一部を形成する）に開示の相反転沈殿を使用して形成することができる。相反転は、連続相の溶媒系に溶解したポリマーが、ポリマーが連続相である固体高分子ネットワークに反転する物理的現象を説明するために使用される用語である。１つの相反転の誘導方法は、連続相への非溶媒の添加による方法である。ポリマーは、単相から不安定な二相混合物（ポリマーが豊富な画分およびポリマーが少ない画分）に移行する。ポリマーが豊富な相中の非溶媒のミセル液滴は、核生成部位としての機能を果たし、ポリマーでコーティングされるようになる。’２２４号特許は、一定の条件下でのポリマー溶液の相反転によって個別の微粒子（ナノ粒子が含まれる）を自発的に形成することができることを開示している。’２２４号特許は、溶媒中のポリマーの溶解または分散を開示している。医薬品はまた、溶媒に溶解または分散される。この過程で有効な結晶シード化（ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｅｅｄｉｎｇ）のために、薬剤を溶媒に溶解することが望ましい。ポリマー、薬剤、および溶媒は共に連続相を有する混合物を形成し、ここで、溶媒は連続相である。次いで、混合物を少なくとも１０倍過剰の混和性非溶媒に導入して、平均粒径が１０ｎｍと１０μｍとの間である薬剤のマイクロカプセル化微粒子を自発的に形成させる。粒径は、溶媒：非溶媒の容積比、ポリマー濃度、ポリマー−溶媒溶液の粘度、ポリマーの分子量、および溶媒−非溶媒対の特徴に影響を受ける。
【００７９】
ｐＨシフト沈殿。小粒子分散物を、ｐＨシフト沈殿技術によって形成することができる。かかる技術は、典型的には、薬物が溶解可能なｐＨを有する溶液に薬物を溶解する工程およびその後の薬物がもはや溶解しないポイントにｐＨを変化させる工程を含む。ｐＨは、特定の薬学的化合物に応じて酸性または塩基性であり得る。次いで、溶液を中和して小粒子の分散物を形成する。１つの適切なｐＨシフト沈殿過程は、米国特許第５，６６５，３３１号（本明細書中で参考として援用され、その一部を形成する）に開示されている。過程は、医薬品を結晶成長改変因子（ＣＧＭ）と共にアルカリ性溶液に溶解する工程、および適切な表面改変表面活性薬剤の存在下で酸を使用して溶液を中和して医薬品の小粒子分散物を形成する工程を含む。沈殿工程の後に、分散物のダイアフィルトレーションによる明澄化およびその後の所望のレベルまでの分散物濃度の調整が続き得る。
【００８０】
ｐＨシフト沈殿法の他の例は、米国特許第５，７１６，６４２号、同第５，６６２，８８３号、同第５，５６０，９３２号、および同第４，６０８，２７８号（本明細書中で参考として援用され、その一部を形成する）に開示されている。
【００８１】
注入沈殿法。小粒子分散物の形成に適切な注入沈殿技術は、米国特許第４，９９７，４５４号および同第４，８２６，６８９号（本明細書中で参考として援用され、その一部を形成する）に開示されている。第１に、適切な固体化合物を適切な有機溶媒に溶解して溶媒混合物を形成する。次いで、有機溶媒との混和性を示す沈殿非溶媒を約−１０℃と約１００℃との間の温度および約０．０１ｍｌ／分／５０ｍｌ容積〜約１０００ｍｌ／分／５０ｍｌ容積の注入速度で溶媒混合物に注入して、１０μｍ未満の実質的に均一な平均直径を有する化合物の沈殿した非凝集固体粒子の懸濁物を得る。沈殿非溶媒が注入される溶媒のかき混ぜ（例えば、撹拌による）が好ましい。非溶媒は、凝集から粒子を安定化するための界面活性剤を含むことができる。次いで、粒子を、溶媒から分離する。固体化合物および所望の粒径に応じて、温度、非溶媒対溶媒の比、注入速度、撹拌速度、および容積のパラメーターを、本発明にしたがって変化させることができる。粒径は、非溶媒：溶媒の容積比および注入温度に比例し、注入速度および撹拌速度に反比例する。沈殿非溶媒は、化合物の相対的溶解性および所望の懸濁ビヒクルに応じて水性または非水性であり得る。
【００８２】
温度シフト沈殿。温度シフト沈殿技術を使用して、小粒子分散物を形成することもできる。この技術は、米国特許第５，１８８，８３７号（本明細書中で参考として援用され、その一部を形成する）に開示されている。本発明の１つの実施形態では、リポスフェアを、（１）融解ビヒクル中に送達させるべき薬物などの物質を融解または溶解して送達すべき物質の液体を形成する工程、（２）物質またはビヒクルの融解温度を超える温度でリン脂質を水媒体と共に溶解した物質またはビヒクルに添加する工程、（３）均一な微細調製物が得られるまでビヒクルの融解温度を超える温度で懸濁物を混合する工程、および、次いで、（４）調製物を室温以下に急冷する工程によって調製する。
【００８３】
溶媒蒸発沈殿。溶媒蒸発沈殿技術は、米国特許第４，９７３，４６５号（本明細書中で参考として援用され、その一部を形成する）に開示されている。’４６５号特許は、（１）一般的な有機溶媒または溶媒の組み合わせに溶解した薬学的組成物およびリン脂質の溶液を調製する工程、（２）溶媒を蒸発させる工程、および（３）溶媒の蒸発によって得たフィルムを強い撹拌によって水溶液に懸濁して小粒子の分散物を形成する工程を含む微結晶を調製する方法を開示している。溶媒を、化合物を沈殿させるのに十分な量の溶媒の蒸発によって除去することができる。溶媒を、他の周知の技術（溶液への真空化の適用または溶液への窒素の吹き込みなど）によって除去することもできる。
【００８４】
反応沈殿。反応沈殿は、薬学的化合物および任意選択的な他の賦形剤を適切な溶媒に溶解して溶液を形成する工程を含む。化合物を、化合物の飽和点以下の量で溶媒に添加することができる。化合物または任意の賦形剤を、改変した化合物が溶媒へのより低い溶解性を有し、且つ溶液から沈殿して小粒子分散物を形成するような、化学物質との反応またはエネルギー（熱またはＵＶ光など）の付加に応答した改変によって溶液から沈殿させる。賦形剤の沈殿により、薬物が吸着した固体マトリックスが得られる。
【００８５】
圧縮流体沈殿。圧縮流体による沈殿に適切な技術は、ＪｏｈｎｓｔｏｎのＷＯ９７／１４４０７号（本明細書中で参考として援用され、その一部を形成する）に開示されている。本方法は、水不溶性薬物を溶媒に溶解して溶液を形成する工程を含む。次いで、溶液を、ガス、液体、または超臨界流体であり得る圧縮流体に噴霧する。溶質を含む溶媒の溶液への圧縮流体の添加により、溶質を過飽和状態にするかそれに近づけて微粒子として析出させる。この場合、圧縮流体は、薬物が溶解される溶媒の凝集エネルギー密度を低下させる貧溶媒として作用する。
【００８６】
あるいは、薬物を圧縮流体に溶解し、次いで、水相に噴霧することができる。圧縮流体の急速な拡大により、流体の溶媒力が減少し、それにより、水相中で溶質が小粒子として析出する。この場合、圧縮流体は溶媒として作用する。
【００８７】
粒子を凝集に対して安定化するために、表面改質剤（界面活性剤など）を本技術に含める。
【００８８】
低温流体への噴霧。圧縮流体による沈殿に適切な技術は、Ｗｉｌｌｉａｍｓらの米国特許出願公開第２００４／００２２８６１号（本明細書中で参考として援用され、その一部を形成する）に開示されている。本方法は、有効成分を水、１つまたは複数の溶媒、またはその組み合わせと混合し、得られた混合物を低温流体の表面または表面下に噴霧する小粒子生成のための系および方法を提供する。それにより、凍結粒子が得られる。固体粒子のカプセル化のための材料も添加することができ、その結果、カプセル化剤が活性薬剤を取り囲む凍結粒子が生成される。
【００８９】
タンパク質ナノスフェア／ミクロスフェア沈殿。本発明で使用される粒子を、高分子（タンパク質など）を水溶性ポリマーと混合するか溶解する工程を含む過程から生成することもできる。この過程は、米国特許第５，９８１，７１９号、同第６，０９０，９２５号、同第６，２６８，０５３号、同第６，４５８，３８７号、および米国特許出願公開第２００４／００４３０７７号（本明細書中で参考として援用され、その一部を形成する）に開示されている。本発明の１つの実施形態では、粒子を、高分子の等電点付近のｐＨでの高分子を含む溶液とポリマーまたはポリマーの混合物を含む溶液との混合によって調製する。混合物を、エネルギー源（熱、照射、またはイオン化など）の存在下で所定の時間インキュベートする。得られた粒子を、物理的分離方法によって溶液中に存在する任意の組み込まれていない成分から取り出すことができる。
【００９０】
本発明で使用することができる小粒子分散物の他の適切な調製方法が多数存在する。
【００９１】
（ＩＩＩ．薬学的組成物の粒子分散物のさらなる調製方法）
本発明で使用される薬学的組成物（すなわち、活性薬剤または有機化合物）の粒子の以下のさらなる調製過程を、４つの一般的なカテゴリーに分類することができる。過程の各カテゴリーは、（１）有機化合物を水混和性の第１の溶媒に溶解して第１の溶液を生成する工程、（２）第１の溶液を第２の水溶媒と混合して有機化合物を沈殿させ、前懸濁物を生成する工程、および（３）高剪断混合または加熱または両方の組み合わせの形態で前懸濁物にエネルギーを付加して上記定義の所望のサイズ範囲を有する有機化合物の安定形態を得る工程を共有する。混合工程およびエネルギー付加工程を、連続工程でまたは同時に行うことができる。
【００９２】
過程のカテゴリーを、Ｘ線回折研究、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）研究、またはエネルギー付加工程前およびエネルギー付加工程後に行う他の適切な研究によって決定した有機化合物の物理的性質に基づいて区別する。第１の過程カテゴリーでは、エネルギー付加工程前、前懸濁物中の有機化合物は、非晶質形態、半結晶形態、または超冷却液体形態を取り、平均有効粒径を有する。エネルギー付加工程後、有機化合物は、本質的に前懸濁物以下の平均有効粒径を有する結晶形態である。
【００９３】
第２の過程カテゴリーでは、エネルギー付加工程前、有機化合物は結晶形態であり、平均有効粒径を有する。エネルギー付加工程後、有機化合物は、エネルギー付加工程前と本質的に同一の平均有効粒径を有する結晶形態であるが、エネルギー付加工程後の結晶は、凝集や巨大な結晶の形成の可能性が低い。
【００９４】
有機化合物が凝集したり巨大な結晶を形成する傾向の低さが、レーザー動的光散乱および光学顕微鏡法によって認められる。
【００９５】
第３の過程カテゴリーでは、エネルギー付加工程前、有機化合物は、脆い結晶形態であり、且つ平均有効粒径を有する。用語「脆い」は、粒子が脆弱で、且つより容易により小さな粒子に破壊されることを意味する。エネルギー付加工程後、有機化合物は、前懸濁物の結晶よりも小さな平均有効粒径を有する結晶形態である。脆い結晶形態に有機化合物を置くのに必要な工程を取ることにより、その後のエネルギー付加工程を、あまり脆くは無い結晶形態の有機化合物と比較した場合に、より迅速且つ効率的に行うことができる。
【００９６】
第４の過程カテゴリーでは、第１の溶液および第２の溶媒をエネルギー付加工程に同時に供する。従って、エネルギー付加工程前後の有機化合物の物理的性質は測定しなかった。
【００９７】
エネルギー付加工程を、前懸濁物または第１の溶液および第２の溶媒をキャビテーション、剪断力、または衝撃力に供する任意の様式で行うことができる。１つの形態では、エネルギー付加工程はアニーリング工程である。アニーリングを、本発明では、１回または複数回のエネルギー（直接加熱または機械的ストレス）の印加およびその後の熱緩和によって、熱力学的に不安定な物質をより安定な形態に変換する過程と定義する。このエネルギーの低下を、規則性の低い格子構造から規則性のより高い格子構造への固体形態の変化によって行うことができる。あるいは、この安定化は、固体−液体界面での界面活性剤分子の再配列によって起こり得る。
【００９８】
これら４つの過程カテゴリーを以下に個別に示す。しかし、過程条件（界面活性剤または界面活性剤の組み合わせ、界面活性剤の使用量、反応温度、溶液の混合速度、および沈殿速度の選択など）を、次に考察したカテゴリーのうちのいずれか１つにおいて任意の薬物を処理することができるように選択することができると理解すべきである。
【００９９】
第１の過程カテゴリーを、第２、第３、および第４の過程カテゴリーも同様に、２つのサブカテゴリー（方法ＡおよびＢ）にさらに分類することができる。
【０１００】
以下の過程にしたがった第１の溶媒は、目的の有機化合物が比較的高い溶解性を示し、且つ第２の溶媒との混和性を示す溶媒または溶媒の混合物である。かかる溶媒には、分子中の水素原子が電気陰性原子（酸素、窒素、または元素周期表中の他の群ＶＡ、ＶＩＡ、およびＶＩＩＡなど）に結合する水混和性プロトン性化合物が含まれるが、これらに限定されない。かかる溶媒の例には、アルコール、アミン（第１級または第２級）、オキシム、ヒドロキサム酸、カルボン酸、スルホン酸、ホスホン酸、リン酸、アミド、および尿素が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０１】
第１の溶媒の他の例には、非プロトン性有機溶媒も含まれる。これらの非プロトン性溶媒のいくつかは、水と水素結合を形成することができるが、有効なプロトン供与基を欠くので、プロトン受容体としてのみ作用することができる。１つの非プロトン性溶媒クラスは、国際純正応用化学連合（ＩＵＰＡＣ  Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ、２ｎｄ  Ｅｄ．、１９９７）によって定義された双極性非プロトン性溶媒である（比較的高い比誘電率（または誘電定数）（約１５超）および強い水素結合を形成するための適切に不安定な水素原子を供与することができない大きな永久双極子モーメントを有する溶媒（例えば、ジメチルスルホキシド））。
【０１０２】
双極性非プロトン性溶媒を、アミド（完全置換、水素原子の結合を欠く窒素）、尿素（完全置換、窒素に結合した水素原子なし）、エーテル、環状エーテル、ニトリル、ケトン、スルホン、スルホキシド、完全置換されたホスファート、ホスホン酸エステル、ホスホラミド、およびニトロ化合物などからなる群より選択することができる。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ）、２−ピロリジノン、１，３−ジメチルイミダゾリジノン（ＤＭＩ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジオキサン、アセトン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、テトラメチレンスルホン（スルホラン）、アセトニトリル、およびヘキサメチルホスホラミド（ＨＭＰＡ）、ニトロメタンは、とりわけ、このクラスのメンバーである。
【０１０３】
一般に水不混和性であるが、低容積（１０％未満）で十分な水溶性を有し、これらの低容積で水混和性の第１の溶媒として作用する溶媒を選択することもできる。例には、芳香族炭化水素、アルケン、アルカン、ハロゲン化芳香族化合物、ハロゲン化アルケン、およびハロゲン化アルカンが含まれる。芳香族化合物には、ベンゼン（置換または非置換）および単環式または多環式アレーンが含まれるが、これらに限定されない。置換ベンゼンの例には、キシレン（オルソ、メタ、またはパラ）およびトルエンが含まれるが、これらに限定されない。アルカンの例には、ヘキサン、ネオペンタン、ヘプタン、イソオクタン、およびシクロヘキサンが含まれるが、これらに限定されない。ハロゲン化芳香族の例には、クロロベンゼン、ブロモベンゼン、およびクロロトルエンが含まれるが、これらに限定されない。ハロゲン化アルカンおよびアルケンの例には、トリクロロエタン、塩化メチレン、およびエチレンジクロリド（ＥＤＣ）などが含まれるが、これらに限定されない。
【０１０４】
第１の溶媒としての使用に適切な溶媒の他の具体例には、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン（Ｎ−メチル−２−ピロリドンとも呼ばれる）、２−ピロリジノン（２−ピロリドンとも呼ばれる）、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＩ）、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド、酢酸、乳酸、メタノール、エタノール、イソプロパノール、３−ペンタノール、ｎ−プロパノール、ベンジルアルコール、グリセロール、ブチレングリコール（ブタンジオール）、エチレングリコール、プロピレングリコール、モノアシル化およびジアシル化モノグリセリド（グリセリルカプリラートなど）、ジメチルイソソルビド、アセトン、ジメチルスルホン、ジメチルホルムアミド、１，４−ジオキサン、テトラメチレンスルホン（スルホラン）、アセトニトリル、ニトロメタン、テトラメチル尿素、ヘキサメチルホスホラミド（ＨＭＰＡ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサン、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ）、芳香族炭化水素、アルケン、アルカン、ハロゲン化芳香族、ハロゲン化アルケン、ハロゲン化アルカン、キシレン、トルエン、ベンゼン、置換ベンゼン、酢酸エチル、酢酸メチル、酢酸ブチル、クロロベンゼン、ブロモベンゼン、クロロトルエン、トリクロロエタン、塩化メチレン、エチレンジクロリド（ＥＤＣ）、ヘキサン、ネオペンタン、ヘプタン、イソオクタン、シクロヘキサン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ、例えば、ＰＥＧ−４、ＰＥＧ−８、ＰＥＧ−９、ＰＥＧ−１２、ＰＥＧ−１４、ＰＥＧ−１６、ＰＥＧ−１２０、ＰＥＧ−７５、ＰＥＧ−１５０）、ポリエチレングリコールエステル（例えば、ＰＥＧ−４ジラウラート、ＰＥＧ−２０ジラウラート、ＰＥＧ−６イソステアラート、ＰＥＧ−８パルミトステアラート、ＰＥＧ−１５０パルミトステアラートなど）、ポリエチレングリコールソルビタン（ＰＥＧ−２０ソルビタンイソステアラートなど）、ポリエチレングリコールモノアルキルエーテル（例えば、ＰＥＧ−３ジメチルエーテル、ＰＥＧ−４ジメチルエーテルなど）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリプロピレンアルギナート、ＰＰＧ−１０ブタンジオール、ＰＰＧ−１０メチルグルコースエーテル、ＰＰＧ−２０メチルグルコースエーテル、ＰＰＧ−１５ステアリルエーテル、プロピレングリコールジカプリラート／ジカプラート、プロピレングリコールラウラート、およびグリコフロール（テトラヒドロフルフリルアルコールポリエチレングリコールエーテル）が含まれるが、これらに限定されない。好ましい第１の溶媒はＮ−メチル−２−ピロリジノンである。別の好ましい第１の溶媒は乳酸である。
【０１０５】
第２の溶媒は水性溶媒である。この水性溶媒自体が水であり得る。この溶媒はまた、緩衝剤、塩、界面活性剤、水溶性ポリマー、およびこれらの賦形剤の組み合わせを含むことができる。
【０１０６】
方法Ａ。方法Ａでは、有機化合物（「活性薬剤」または「薬物」）を、第１の溶媒にまず溶解して第１の溶液を作製する。第１の溶媒への有機化合物の溶解性に応じて、約０．１％（ｗ／ｖ）〜約５０％（ｗ／ｖ）の有機化合物を添加することができる。濃縮物の約３０℃〜約１００℃への加熱は、第１の溶媒中の全ての化合物を確実に溶解するのに必要であり得る。
【０１０７】
第２の水性溶媒を、１つまたは複数の任意選択的な表面改質剤（陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両性イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、またはこれらに添加する生物学的な表面活性分子など）を使用して提供する。適切な陰イオン性界面活性剤には、スルホン酸アルキル、リン酸アルキル、ホスホン酸アルキル、ラウリン酸カリウム、トリエタノールアミンステアラート、ラウリル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、アルキルポリオキシエチレンスルファート、アルギン酸ナトリウム、ジオクチルナトリウムスルホスクシナート、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシン、ホスファチジルイノシトール、ジホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸およびその塩、カルボキシメチルセルロースナトリウム、コール酸および他の胆汁酸（例えば、コール酸、デオキシコール酸、グリココール酸、タウロコール酸、グリコデオキシコール酸）およびその塩（例えば、デオキシコール酸ナトリウムなど）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０８】
両性イオン性界面活性剤は電気的に中性であるが、同一分子内に局所的な正電荷および負電荷を有する。適切な両性イオン性界面活性剤には、両性イオン性リン脂質が含まれるが、これらに限定されない。適切なリン脂質には、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ジアシル−グリセロ−ホスホエタノールアミン（ジミリストイル−グリセロ−ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイル−グリセロ−ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジステアロイル−グリセロ−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、およびジオレオリル−グリセロ−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）など）が含まれる。陰イオン性および両性イオン性のリン脂質を含むリン脂質の混合物を、本発明で使用することができる。かかる混合物には、リゾリン脂質、卵またはダイズのリン脂質、またはその任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。リン脂質は、陰イオン性、両性イオン性、またはリン脂質の混合物であることと無関係に、加塩（ｓａｌｔｅｄ）または脱塩（ｄｅｓａｌｔｅｄ）され得るか、水素化または部分水素化され得るか、天然、半合成、もしくは合成であり得る。リン脂質を水溶性ポリマーまたは親水性ポリマーと結合体化して、本発明におけるマクロファージへの送達を特異的に標的化することもできる。しかし、結合体化したリン脂質を使用して、他の適用において他の細胞または組織に標的化することができる。好ましいポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（モノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）としても公知）である。ＰＥＧの分子量は、例えば、２００〜５０，０００で変化し得る。市販のいくつかの一般的に使用されているＰＥＧには、ＰＥＧ３５０、ＰＥＧ５５０、ＰＥＧ７５０、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ３０００、およびＰＥＧ５０００が含まれる。リン脂質またはＰＥＧ−リン脂質結合体はまた、リガンド（タンパク質、ペプチド、炭水化物、糖タンパク質、抗体、または薬学的に活性な薬剤が含まれるが、これらに限定されない）に共有結合することができる官能基を組み込むことができる。これらの官能基は、例えば、アミド結合形成、ジスルフィド形成、またはチオエーテル形成、またはビオチン／ストレプトアビジン結合によってリガンドと結合体化することができる。リガンド結合官能基の例には、ヘキサノイルアミン、ドデカニルアミン、１，１２−ドデカンジカルボキシラート、チオエタノール、４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチルアミド（ＭＰＢ）、４−（ｐ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−カルボキサミド（ＭＣＣ）、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＰＤＰ）、スクシナート、グルタラート、ドデカノアート、およびビオチンが含まれるが、これらに限定されない。
【０１０９】
適切な陽イオン性界面活性剤には、第四級アンモニウム化合物（塩化ベンザルコニウム、セチルトリメチルアンモニウムブロミド、キトサン、ラウリルジメチルベンジル塩化アンモニウム、アシルカルニチンヒドロクロリド、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、ジオレオイルトリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムとしても公知）、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）、ジミリストイルトリメチルアンモニウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）、ジメチルアミノエタンカルバモイルコレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、１，２−ジアシルグリセロ−３−（Ｏ−アルキル）ホスホコリン、Ｏ−アルキルホスファチジルコリン、アルキルピリジニウムハライド、または長鎖アルキルアミン（例えば、ｎ−オクチルアミンおよびオレイルアミンなど）など）が含まれるが、これらに限定されない。本明細書中に定義の式Ｉの界面活性剤またはその塩も適切な陽イオン性界面活性剤である。
【０１１０】
適切な非イオン性界面活性剤には、以下が含まれる：グリセリルエステル、ポリオキシエチレン脂肪アルコールエーテル（ＭＡＣＲＯＧＯＬＴＭおよびＢＲＩＪＴＭ）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（ポリソルベート）、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル（ＭＹＲＪＴＭ）、ソルビタンエステル（ＳＰＡＮＴＭ）、グリセロールモノステアラート、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、セチルアルコール、セトステアリルアルコール、ステアリルアルコール、アリールアルキルポリエーテルアルコール、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー（ポロクサマー）、ポロクサミン、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、非結晶セルロース、ポリサッカリド（デンプンおよびデンプン誘導体（ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）など）が含まれる）、ポリビニルアルコール、およびポリビニルピロリドン。好ましい形態では、非イオン性界面活性剤は、ポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレンコポリマーであり、好ましくは、プロピレングリコールとエチレングリコールとのブロックコポリマーである。かかるポリマーは、商品名ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ（時折、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ともいう）で販売されており、いくつかの供給業者（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ＣｈｅｍｉｃａｌおよびＲｕｇｅｒが含まれる）によって販売されている。ポリオキシエチレン脂肪酸エステルは、アルキル短鎖を有するもののなかに含まれる。かかる界面活性剤の一例は、ＳＯＬＵＴＯＬ（登録商標）ＨＳ１５（ポリエチレン−６６０−ヒドロキシステアラート）（ＢＡＳＦ  Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ製）である。
【０１１１】
表面活性生体分子には、アルブミン、カゼイン、ヒルジン、または他の適切なタンパク質などの分子が含まれる。例えば、親水性ドメインおよび疎水性ドメインを有するタンパク質も使用することができる。ポリサッカリド表面活性生体物質も含まれ、デンプン、ヘパリン、およびキトサンからなるが、これらに限定されない。他の適切な界面活性剤には、任意のアミノ酸（ロイシン、アラニン、バリン、イソロイシン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、メチオニン、フェニルアラニンなど）またはこれらのアミノ酸の任意の誘導体（例えば、アミドまたはエステル誘導体など）およびこれらのアミノ酸から形成されたポリペプチドが含まれる。
【０１１２】
第２の溶媒にｐＨ調整剤を添加することも望ましいことがある。適切なｐＨ調整剤には、塩酸、硫酸、リン酸、モノカルボン酸（例えば、酢酸および乳酸など）、ジカルボン酸（例えば、コハク酸など）、トリカルボン酸（例えば、クエン酸など）、ＴＨＡＭ（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、メグルミン（Ｎ−メチルグルコサミン）、水酸化ナトリウム、およびアミノ酸（グリシン、アルギニン、リジン、アラニン、ヒスチジン、およびロイシンなど）が含まれるが、これらに限定されない。第２の溶媒は、約３〜約１１の範囲内のｐＨを有するべきである。水媒体は、さらに、浸透圧調整剤（グリセリン、モノサッカリド（デキストロースなど）、ジサッカリド（スクロースなど）、トリサッカリド（ラフィノースなど）、および糖アルコール（マンニトール、キシリトール、およびソルビトールなど）などであるが、これらに限定されない）を含むことができる。
【０１１３】
経口投薬形態について、１つまたは複数の以下の賦形剤を使用することができる：ゼラチン、カゼイン、レシチン（ホスファチド）、アカシアゴム、コレステロール、トラガカント、ステアリン酸、塩化ベンザルコニウム、ステアリン酸カルシウム、モノステアリン酸グリセリル、セトステアリルアルコール、セトマクロゴール乳化蝋、ソルビタンエステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（例えば、マクロゴールエーテル（セトマクロゴール１０００など））、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、市販のＴＷＥＥＮＳＴＭ）、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンステアラート、コロイド状二酸化ケイ素、ホスファート、ドデシル硫酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタラート、非結晶セルロース、マグネシウムケイ酸アルミニウム、トリエタノールアミン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、およびポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）。これらの賦形剤のほとんどは、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎおよびＴｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｇｒｅａｔ  Ｂｒｉｔａｉｎの共同刊行，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６）に詳述されている。表面改質剤は、市販されており、そして／または当該分野で公知の技術によって調製することができる。２つ以上の表面改質剤を組み合わせて使用することができる。
【０１１４】
好ましい形態では、有機化合物の小粒子の調製方法は、第２の溶媒に第１の溶液を添加する工程を含む。添加速度は、有機化合物のバッチサイズおよび沈殿動態に依存する。典型的には、小規模実験室の過程について（１リットルの調製）、添加速度は約０．０５ｃｃ／分〜約１０ｃｃ／分である。添加中、溶液は、一定の攪拌条件下にあるべきである。光学顕微鏡法を使用して、非晶質粒子、半結晶性固体、または超冷却液体が形成され、それにより前懸濁物を作製することが認められている。本方法は、さらに、前懸濁物をエネルギー付加工程に供して非晶質粒子、超冷却液体、または半結晶性固体をより安定な結晶性固体状態に変換する工程を含む。得られた粒子は、動的光散乱法（例えば、光子相関分光法、レーザー回折、低角度レーザー光散乱（ＬＡＬＬＳ）、中角度レーザー光散乱（ＭＡＬＬＳ））、光遮蔽法（例えば、コールター法）、レオロジー、または顕微鏡法（光学または電子）によって測定したとき、上記の範囲内の平均有効粒径を有する。過程カテゴリー４では、エネルギー付加工程を同時に行いながら第１の溶液および第２の溶媒を合わせる。
【０１１５】
エネルギー付加工程は、超音波処理、均質化、向流フロー均質化、マイクロフルイダイゼーション、または衝撃力、剪断力、もしくはキャビテーション力が得られる他の方法によるエネルギー付加を含む。サンプルを、この段階中に冷却または加熱することができる。１つの形態では、エネルギー付加工程を、ピストンギャップホモジナイザー（Ａｖｅｓｔｉｎ  Ｉｎｃ．から製品名ＥｍｕｌｓｉＦｌｅｘ−Ｃ１６０で販売されるものなど）によって達成する。別の形態では、エネルギー付加工程を、超音波処理装置（Ｖｉｂｒａ−Ｃｅｌｌ超音波処理装置（６００Ｗ）（Ｓｏｎｉｃｓ  ａｎｄ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｉｎｃ．製）など）を使用した超音波処理によって行う。さらに別の形式では、エネルギー付加工程を、米国特許第５，７２０，５５１号（本明細書中で参考として援用され、その一部を形成する）に記載の乳化装置の使用によって行う。
【０１１６】
エネルギー付加速度に応じて、サンプルの処理温度をおよそ−３０℃〜３０℃の範囲内に調整することが望ましいことがある。あるいは、処理固体で望ましい相変化を行うために、エネルギー付加工程中に前懸濁物を約３０℃〜約１００℃の範囲内の温度に加熱することも必要なことがある。
【０１１７】
方法Ｂ。方法Ｂは、以下の点で方法Ａと異なる。第１の相違点は、界面活性剤または界面活性剤の組み合わせを第１の溶液に添加することである。界面活性剤を、上記の陰イオン性、非イオン性、陽イオン性界面活性剤、および表面活性生物修飾物質の群から選択することができる。
【０１１８】
方法Ａおよび方法Ｂならびに米国特許第５，７８０，０６２号の比較例。米国特許第５，７８０，０６２号は、適切な水混和性の第１の溶媒に化合物をまず溶解することによる有機化合物の小粒子の調製過程を開示している。第２の溶液を、水性溶媒へのポリマーおよび両親媒性物質の溶解によって調製する。次いで、第１の溶液を第２の溶液に添加して、有機化合物およびポリマー−両親媒性物質複合体からなる沈殿を形成する。’０６２号特許は、方法ＡおよびＢ中のこの過程のエネルギー付加工程の使用を開示していない。安定性の欠如は、典型的には、急速な凝集および粒子成長によって明白である。いくつかの例では、非晶質粒子は、大型結晶として再結晶する。上記開示の様式での前懸濁物へのエネルギー付加により、典型的には、粒子の凝集および成長の速度が減少し、生成物保存の際に再結晶を示さない粒子が得られる。
【０１１９】
方法ＡおよびＢは、さらに、沈殿前のポリマー−両親媒性物質複合体の形成工程が存在しないことによって’０６２号特許の過程と区別される。方法Ａでは、希釈（水）相にポリマーを添加しないため、かかる複合体を形成できない。方法Ｂでは、両親媒性物質としても作用し得る界面活性剤またはポリマーを有機化合物と共に第１の溶媒に溶解する。これにより、沈殿前のいかなる両親媒性物質−ポリマー複合体の形成も防止される。’０６２号特許では、小粒子の首尾の良い沈殿は、沈殿前の両親媒性物質−ポリマー複合体の形成に依存する。’０６２号特許は、両親媒性物質−ポリマー複合体が第２の水溶液中で凝集体を形成することを開示している。’０６２号特許は、疎水性有機化合物が両親媒性物質−ポリマー複合体と相互作用し、それにより、これらの凝集体の溶解性が減少して沈殿を生じると説明している。本過程では、界面活性剤またはポリマーを第１の溶媒中に含めること（方法Ｂ）により、その後の第２の溶媒への添加の際に’０６２号特許によって概説された過程によって得られるよりも均一で微細な粒子が形成されることを証明している。
【０１２０】
（粒子のコーティング）
本発明によって調製された粒子のコーティング過程を、当業者に公知の種々の技術によって行うことができる。コーティングは、種々の結合（共有および／または非共有結合（例えば、共有結合、イオン相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用、水素結合、ファンデルワールス力、疎水性／疎水性ドメイン相互作用、架橋、および／または任意の他の相互作用）が含まれる）によって粒子と結合することができる。
【０１２１】
非共有結合したコーティングを、例えば、本明細書中に開示の粒子コアの調製方法（式Ｉの界面活性剤またはその塩を使用して粒子を製造するという条件で）によって、または複数の既製の粒子と本明細書中に定義の式Ｉの界面活性剤またはその塩を含む溶液との混合によって調製して、本発明の表面改変粒子を形成することができる。溶液を、例えば、マイクロフルイダイザー、ピストンギャップホモジナイザー、向流フローホモジナイザー、または超音波処理装置を使用した高剪断条件下で混合することができる。粒子に首尾よく吸着するコーティングを確認するために、粒子の表面電位を、コーティング過程前後のゼータ電位の測定によって決定することができる。コーティングの吸着の他の公知の測定方法も使用することができ、例えば、式Ｉの界面活性剤またはその塩を蛍光標識で修飾し、蛍光標識した式Ｉの界面活性剤またはその塩の吸着を蛍光顕微鏡法によって検出することができる。有利には、式Ｉの界面活性剤またはその塩を含むコーティングは、例えば、粒子表面への吸着（式Ｉの界面活性剤またはその塩を含むコーティングの粒子コア（特に、上記で説明した難水溶性活性薬剤を含む粒子）への有効な結合方法である）によって粒子コアに結合することができる。
【０１２２】
コーティングは、さらに、式Ｉの界面活性剤またはその塩を含む溶液へのさらなる界面活性剤の添加およびその後の既製の粒子と前述の溶液との混合によって１つまたは複数のさらなる界面活性剤（さらなる式Ｉの界面活性剤またはその塩が含まれる）を含むことができる。かかるさらなる界面活性剤を、種々の公知の陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両性イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、および表面活性生物修飾物質から選択することができる。適切なさらなる界面活性剤には、本明細書中に既出の界面活性剤が含まれる。例示的なさらなる界面活性剤には、ポロクサマー、リン脂質、ポリエチレングリコール結合体化リン脂質、およびポリソルベートが含まれるが、これらに限定されない。例示的なさらなる界面活性剤の組み合わせには、ポロクサマーとリン脂質との組み合わせ、ポロクサマーとポリエチレングリコール結合体化リン脂質との組み合わせ、およびポロクサマーとポリソルベートとの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０１２３】
（コーティングした粒子の細胞取り込み）
本発明の１つの実施形態は、活性薬剤の細胞取り込みを増強する方法であって、細胞を複数の表面改変粒子と接触させる工程を含み、粒子が粒子コアおよび粒子コアに結合したコーティングを含む、方法を対象とする。細胞は、食細胞、弱食細胞（ｗｅａｋｌｙ  ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｃｅｌｌ）、または非食細胞であり得る。粒子コアは小分子、ペプチド、およびタンパク質からなる群より典型的に選択される活性薬剤を含み、コーティングは本明細書中に定義の式Ｉの界面活性剤またはその塩を含み、表面改変粒子の平均サイズは約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである。それにより、少なくとも上記コーティングを含まない粒子を使用した場合の活性薬剤の取り込みと比較して、細胞による活性薬剤の取り込みは増強される。
【０１２４】
開示のコーティングした粒子の取り込みを増強することができる種々の細胞型も疾患組織（例えば、がん性組織、感染組織）または炎症組織に輸送されるので、細胞による取り込みによって処置を必要とする標的組織に活性薬剤を送達させることが可能である。例えば、感染または炎症初期には好中球が優勢であり、その後は血管構造を離れて感染組織に侵入する単球由来食細胞が優勢であり、かかる細胞は、少なくとも式Ｉの界面活性剤またはその塩を含むコーティングを持たない粒子と比較して、本発明の表面改変粒子の取り込みの増強を証明している。肝臓、神経系、肺、リンパ節、骨髄、およびいくつかの他の組織などに関する固定マクロファージ（組織球）、ならびにかかる細胞はまた、少なくとも式Ｉの界面活性剤またはその塩を含むコーティングを持たない粒子と比較して、本発明の表面改変粒子の取り込みの増強を証明している。細菌、ウイルス、または真菌の病原体に最も影響を受け、炎症を起こす組織を、走化性によってこれらの炎症部位に向かう性質を有する薬物含有細胞（例えば、顆粒球）の送達によって標的とすることができる。したがって、上記細胞による取り込みの促進により、治療的に最も必要とされる領域中でこれらの細胞から医薬品が放出される。したがって、疾患または障害処置のための標的組織への薬剤の送達は、本発明のコーティングされた粒子を有する細胞によって容易となる。かかる疾患および障害には、感染性疾患または感染性障害、炎症性疾患または炎症性障害、神経変性疾患または神経変性障害、および増殖性疾患または増殖性障害が含まれるが、これらに限定されない。
【０１２５】
コーティングした粒子の取り込みを増強することができる食細胞型が多数存在する。これらの細胞には、マクロファージ、単球、顆粒球、無顆粒球、および好中球が含まれるが、これらに限定されない。本発明はまた、弱食細胞および非食細胞を含む。したがって、他の適切な細胞型には、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ヌル細胞、ナチュラルキラー細胞、リンパ球、赤血球、筋細胞、骨髄細胞、幹細胞、骨細胞、血管細胞、器官組織細胞、神経細胞、好塩基球、好酸球、樹状細胞、および内皮細胞が含まれるが、これらに限定されない。さらに他の細胞を使用して、薬学的に活性な化合物を被験体に送達させることができる。粒子を取り込むことができる限り、任意の細胞型を本発明で使用することができる。細胞による粒子の取り込みには、食作用もしくは他のエンドサイトーシス手段または細胞表面上への粒子の付着／吸着が含まれ得る。細胞表面に結合した粒子を、飲作用によって細胞に取り込んで（これは細胞膜の陥入である）粒子周囲に細胞内カプセルを形成することもできる。飲作用（「細胞飲み込み」）では、取り囲まれる粒子は比較的小さい（例えば、２０ｎｍ）（Ｗａｔｔｓら、Ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ：ｗｈａｔ  ｇｏｅｓ  ｉｎ  ａｎｄ  ｈｏｗ？，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９２，ｖｏｌｕｍｅ  １０３（１），ｐａｇｅｓ  １−８）。飲作用は、ほとんど全ての真核細胞中で連続して起こる。
【０１２６】
疾患細胞（例えば、がん性細胞）はまた、少なくとも式Ｉの界面活性剤またはその塩を含むコーティングを持たない粒子と接触した細胞と比較して、本発明の表面改変粒子の取り込みの増強を証明することができる。腫瘍細胞は、慣習的に、食細胞と見なされていない。しかし、実施例７に記載するように、表面改変粒子は、マウスの腹膜腔内の卵巣腫瘍細胞によって取り込まれた。取り込み増強の正確な機構は未知であるが、食作用、エンドサイトーシス、飲作用、または他の細胞取り込み機構に関与し得る。
【０１２７】
本明細書中で説明するように、粒子は、有利には、細胞取り込みを容易にするコーティングを含む。特に、コーティングは、細胞（単球、マクロファージ、およびＴ−リンパ球など）による取り込みを容易にし得、これらの細胞は、公知の機構（炎症、感染、および／または腫瘍部位への走化性など）によって輸送することができ、それにより、特定の標的組織に粒子を送達することができる。
【０１２８】
本発明の１つの態様では、細胞の表面改変粒子への接触（活性薬剤を有する細胞が形成される）を、エクスビボ（すなわち、哺乳動物被験体の外部）で行う。あるいは、またはさらに、細胞の表面改変粒子への接触をインビボ（すなわち、哺乳動物被験体の内部）で行うことができる。疾患または障害の処置に有効な表面改変粒子の量を、接触工程中に使用する。当業者は、一定量の粒子が、目的の標的組織に輸送されない細胞型によって取り込まれ得るか、または目的の標的組織で細胞によって放出されないことを理解している。したがって、当業者は、粒子の投与量を日常的なプロトコールによって至適化することができる（但し、かかる量は確立された投与プロトコールの範囲内であることを条件とする）と理解している。
【０１２９】
エクスビボ投与のために、細胞を、細胞分離装置またはアフェレーシスデバイスを使用して哺乳動物被験体から単離することができる。例えば、ＣＳ−３０００ＴＭ細胞分離装置（Ｆｅｎｗａｌ  Ｉｎｃ．，Ｌａｋｅ  Ｚｕｒｉｃｈ，ＩＩＩ．）またはＩＳＯＬＥＸＴＭ細胞分離装置（Ｂａｘｔｅｒ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＩＩ．）を使用して、種々の細胞を単離することができる。当業者に公知の他のエクスビボ細胞単離方法を使用して、本発明で有用な細胞を得ることができる。かかる方法には、末梢血のアフェレーシス、骨髄細胞の動員（例えば、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、またはＧＭ−ＣＳＦによる）、または脊椎穿刺、胸骨穿刺、腰椎穿刺、もしくは腸骨稜穿刺による骨髄細胞の直接的な取り出しが含まれるが、これらに限定されない。エクスビボ細胞を、細胞培養培地または当業者に公知の他の単離系中で維持することができる。各培地の例は、アルセバー液、エイムス培地、イーグル基礎培地、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）細胞培養液、クリック培地、ダルベッコ改変イーグル培地、リン酸緩衝化生理食塩水、リン酸緩衝化デキストロースまたはスクロース、アール平衡塩類溶液、遺伝子療法培地−３、ゲイ平衡塩類溶液、グラスゴー最小基本培地、ハンクス平衡塩類溶液、ハイブリドーマ培地、イスコフ改変ダルベッコ培地、クレブス・ヘンゼライト緩衝液（糖含有）、リーボビッツ培地（Ｌ−１５）、Ｍ１６培地、マッコイ培地、ＭＣＤＢ、ＭＤＢＫ（メイディン・ダービーウシ腎臓）、ＭＤＣＫ（メイディン・ダービーイヌ腎臓）、培地１９９、ＮＣＴＣ、ハム培地（例えば、栄養混合物Ｆ−１０）、クーン改変ハム培地、ＲＰＭＩ、および他の培地（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＆  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．，ＵＳＡ）に列挙した培地など）である。したがって、記載の培地の目的は、細胞を喪失させずに単に保存するため、または細胞拡大を促進するための成長因子、サイトカイン、および栄養素の適切な添加による細胞の増殖または拡大であり得る。かかる拡大は、細胞サンプルを取り出すために患者が準備しなければいけない回数を最小にする。
【０１３０】
一旦単離されると、細胞をコーティングした粒子と接触させ、短期間インキュベートして粒子の細胞取り込みを行うことができる。エクスビボ手順での粒子の使用濃度は、いくつかの要因（使用した細胞型、細胞濃度、使用した活性薬剤、小粒子分散物のサイズ、および処置すべき疾患などが含まれるが、これらに限定されない）によって変化する。しかし、一般に、細胞単離物を約１〜約３００ｍｇ／ｍｌの本発明の粒子と接触させる。粒子の細胞との接触中、粒子は熱力学的飽和溶解度よりも高い濃度で存在し、それにより、粒子は哺乳動物被験体への取り込みおよび送達中に特定の形態を保持することが可能である。薬物粒子を十分に細胞に取り込ませるために、２４時間までまたは２４時間以上細胞を粒子とインキュベートすることができる。
【０１３１】
細胞を破壊しないか、そうでなければ細胞を被験体への投与に関して無用にしないことを必用条件として、エクスビボ細胞による活性薬剤の粒子の任意の有効な取り込み方法を使用することができる。例えば、生体認識分子を介した粒子の部位特異的送達を使用することができる。例えば、中空ナノ粒子を介した特定の細胞または組織への遺伝子移入を開示している米国特許出願公開第２００３／００９２０６９号（本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。他のエクスビボ細胞に含有させる方法には、エレクトロポレーション、ソノポレーション、および細胞膜を破壊し、細胞への固体粒子の挿入を可能にする他の機械的手段（例えば、超音波処理）が含まれる。Ｚａｒｎｉｔｓｙｎら（Ｚａｒｎｉｔｓｙｎら、Ｐｈｙｓｉｃａｌ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ  ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ＤＮＡ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ，Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ  Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，２００４，ｖｏｌｕｍｅ  ３０（４），ｐａｇｅｓ  ５２７−５３８）は、超音波を首尾よく使用して細胞膜を一過性に破壊し、それにより、生細胞にＤＮＡを含有させることを容易にした。他の機械的手順は当業者に周知であり、本開示の一部として含まれる。細胞膜を化学的に一過性に不安定化する方法も周知である。トランスフェクション試薬は表面活性剤を含み、この試薬には、２９３ＦＥＣＴＩＮＴＭトランスフェクション試薬およびＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥＴＭ（共にＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆ．）の製品）が含まれる。細胞にＤＮＡを移入するために使用される界面活性剤の別の例は、Ｓｙｎｖｏｌｕｘ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｂ．Ｖ．Ｌ．Ｊ．（Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）のＳＡＩＮＴＴＭ試薬（ピリジニウム界面活性剤に基づく）である。
【０１３２】
粒子についての以下の記載も本明細書中に開示の全ての実施形態に適用する。難溶性薬物について、細胞が溶解過程の完了よりも速い速度でコーティングした活性薬剤粒子を取り込むことができるという条件で、細胞による含有手順を使用することができる。粒子は、細胞がコーティングした粒子を取り込み、これらを粒子の完全な溶解前に標的組織に送達するのに適切なサイズであるべきである。目的の標的組織に輸送されることが公知の細胞が粒子を取り込むことができるために、活性薬剤は、最終的に、細胞から放出されるか、そうでなければ標的組織周囲に送達される。さらに、活性薬剤組成物の濃度は、粒子が取り込み中に結晶状態を保持することができるように組成物の飽和溶解度よりも高い濃度を維持すべきである。
【０１３３】
以下の粒子の記載も本明細書中に開示の全ての実施形態に適用する。表面改変粒子の投与を、粒子投与のための当該分野で公知の種々の技術によって行うことができる。投与には、表面改変粒子の哺乳動物被験体への投与が含まれる。表面改変粒子またはその薬学的組成物の適切な投与方法には、粒子の静脈内、動脈内、筋肉内、皮下、皮内、関節内、髄腔内、硬膜外、脳内、口内、直腸、局所、経皮、経口、鼻腔内、肺経路、腹腔内、および／または眼内への投与が含まれるが、これらに限定されない。投与工程を、ボーラス注射、間欠的注入、または連続注入によって行うことができる。表面改変粒子の量および送達方法を、熟練した臨床医は決定することができる。種々の要因が送達量および送達方法に影響を及ぼす。要因には、使用細胞型（エクスビボ投与法のため）、処置すべき被験体の性別、体重、および年齢、処置すべき疾患または障害の型および成熟度、および投与すべき活性薬剤などが含まれるが、これらに限定されない。一般に、活性薬剤を、１ｐｇ化合物／ｋｇ体重〜１０００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、および１〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量にて、１日１回の用量として投与することもまたは等用量をより長いかより短い間隔で（例えば、隔日、週２回、週１回、または１日２回または３回）投与することもできる。
【０１３４】
種々の疾患または障害（感染性疾患または感染性障害、炎症性疾患または炎症性障害、神経変性疾患または神経変性障害、および増殖性疾患または増殖性障害が含まれるが、これらに限定されない）を、本方法によって処置することができる。これに関して、かかる疾患または障害の症状を、本発明の方法によって緩和することができる。
【０１３５】
「感染性疾患または感染性障害」は、本明細書中で使用する場合、病原性微生物（細菌、ウイルス、寄生虫、または真菌など）が原因である状態をいう。開示の方法から恩恵を受けることができる感染性疾患または感染性障害には、ウイルス感染（レトロウイルス感染が含まれる）（デング、エンテロウイルス感染、ＨＩＶ、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、およびインフルエンザなど）；真菌感染；寄生虫感染（アフリカトリパノソーマ症およびマラリアなど）；および細菌感染（コレラ、髄膜炎、および結核など）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１３６】
「炎症性疾患または炎症性障害」は、本明細書中で使用する場合、典型的には組織の損傷または破壊を伴なう発赤、発熱、腫脹、および疼痛（すなわち、炎症）によって特徴づけられる状態をいう。炎症性疾患または炎症性障害は、特に、白血球の流入および／または白血球の走化性に関連する。炎症状態は、病原性生物またはウイルスの感染および非感染性事象（心筋梗塞または卒中後の傷害または再灌流、外来抗原に対する免疫応答、および自己免疫応答が含まれるが、これらに限定されない）に起因し得る。したがって、本発明の方法および化合物での処置の影響を受けやすい炎症状態は、特異的防御システムの反応に関連する状態、非特異的防御システムの反応に関連する状態、および炎症性細胞活性化に関連する状態を含む。
【０１３７】
本明細書中で使用する場合、用語「特異的防御システム」は、特異的抗原の存在に反応する免疫系の成分をいう。特異的防御システムの応答に起因する炎症状態の例には、外来抗原に対する古典的応答、自己免疫疾患、および、Ｂ細胞および／またはＴ細胞（すなわち、Ｂリンパ球および／またはＴリンパ球）によって媒介される遅延型過敏症反応が含まれるが、これらに限定されない。慢性炎症性疾患、固体の移植組織および器官（腎臓および骨髄の移植片が含まれるが、これらに限定されない）の拒絶、および移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）は、特異的防御システムの応答に起因する炎症状態のさらなる例である。
【０１３８】
用語「非特異的防御システム」は、本明細書中で使用する場合、免疫学的記憶が不可能な白血球（例えば、顆粒球（好中球、好酸球、および好塩基球が含まれるが、これらに限定されない）、肥満細胞、単球、マクロファージ）によって媒介される炎症状態をいう。少なくとも一部が非特異的防御システムの反応に起因する炎症状態の例には、成人（急性）呼吸促進症候群（ＡＲＤＳ）、多臓器損傷症候群、再灌流障害、急性糸球体腎炎、反応性関節炎、急性炎症成分による皮膚炎、急性化膿性髄膜炎、他の中枢神経系炎症状態（卒中が含まれるが、これらに限定されない）、熱傷、炎症性腸疾患、顆粒球輸血関連症候群、およびサイトカイン誘導毒性が含まれるが、これらに限定されない。
【０１３９】
本発明の治療方法には、炎症性細胞活性化に関連する状態の改善方法が含まれる。「炎症性細胞活性化」は、刺激（サイトカイン、抗原、および自己抗体が含まれるが、これらに限定されない）による増殖性細胞応答の誘導、可溶性メディエーター（サイトカイン、酸素ラジカル、酵素、プロスタノイド、および血管作用性アミンが含まれるが、これらに限定されない）の産生、または新規もしくは増加した数のメディエーター（主要組織適合抗原および細胞接着分子が含まれるが、これらに限定されない）の炎症細胞（単球、マクロファージ、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、顆粒球（多形核白血球（好中球、好塩基球、および好酸球が含まれる））、肥満細胞、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、および内皮細胞が含まれるが、これらに限定されない）における細胞表面発現をいう。これらの細胞におけるこれらの表現型の１つまたは組み合わせの活性化が炎症状態の開始、永続化、または増悪に寄与し得ることが当業者に認識される。
【０１４０】
首尾よく処置することができる他の疾患または障害には、炎症または感染によって特徴づけられる疾患または障害（関節リウマチ、グレーブス病、重症筋無力症、甲状腺炎、糖尿病、炎症性腸疾患、自己免疫性卵巣炎、全身性エリテマトーデス、およびシェーグレン症候群が含まれるが、これらに限定されない）が含まれる。
【０１４１】
首尾よく処置することができる神経変性疾患または神経変性障害の例には、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、脳脊髄炎、脳炎（ＨＩＶ脳炎が含まれる）、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ルー・ゲーリック病としても公知）、前頭側頭型痴呆、プリオン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、および副腎脳白質ジストロフィが含まれるが、これらに限定されない。首尾よく処置することができる他の神経変性疾患または神経変性障害には、ピック病、前頭側頭葉変性症、進行性失語症、および文意認知症が含まれる。伝染性海綿状脳症（ＴＳＥ）としても公知のプリオン病には、クロイツフェルト・ヤコブ病、新変異型クロイツフェルト・ヤコブ病、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群、致死性家族性不眠症、およびクールーが含まれる。神経変性疾患または神経変性障害はまた、アレキサンダー病、アルパース病、毛細血管拡張性運動失調、バッテン病（シュピールマイヤー・フォークト・シェーグレン・バッテン病としても公知）、カナヴァン病、コケイン症候群、大脳皮質基底核変性、ＨＩＶ関連認知症、ケネディ病、クラッベ病、レヴィ小体痴呆、マシャド・ジョセフ病（脊髄小脳性運動失調３型）、多系統萎縮症、神経ボレリア症、ペリツェーウス・メルバッハー病、原発性側索硬化症、レフスム病、サンドホフ病、シルダー病、統合失調症、脊髄小脳性運動失調、脊髄性筋萎縮症、スティール・リチャードソン・オルゼウスキー病、および脊髄癆であり得る。
【０１４２】
開示の方法から恩恵を受けることができる増殖性疾患または増殖性障害には、結腸がん、腎臓がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺腺がん、頭頸部がん、腹膜腔がん（卵巣がん、消化管がん、腹部のがん、および中皮腫など）、子宮頸がん、乳がん、前立腺がん、脳がん（神経膠腫、髄膜腫、星状細胞腫など）、胃がん、腸がん、肉腫、黒色腫、白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄腫、および膠芽細胞腫が含まれるが、これらに限定されない。甲状腺炎には、橋本甲状腺炎、亜急性甲状腺炎（ドケルヴァン甲状腺炎としても公知）、無症候性甲状腺炎（無痛性甲状腺炎としても公知）、分娩後甲状腺炎、薬物誘導性甲状腺炎、照射誘導性甲状腺炎、および急性化膿性甲状腺炎が含まれる。
【０１４３】
本開示は、以下の実施例を参照してより深く理解することができる。実施例は、制限を意図せず、むしろ、開示の例示的実施形態を説明することのみを意図する。
したがって、本発明は以下の項目を提供する：
（項目１）  粒子コアおよび該粒子コアに結合したコーティングを含む表面改変粒子であって、該粒子コアは小分子、ペプチド、およびタンパク質からなる群より選択される活性薬剤を含み、該コーティングは式Ｉ：
【化３】
0005668055.tif 000004
（式中、ｎおよびｍは、１、２、３、４、５、および６からなる群より独立して選択され、
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから独立して選択され、
Ｒ４およびＲ５は、Ｃ６〜Ｃ４０アルキル、Ｃ６〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ６〜Ｃ４０アルキニル、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルケニル）、およびＣ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキニル）からなる群より独立して選択される）
を有する界面活性剤またはその塩を含み、該表面改変粒子の平均サイズは約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、表面改変粒子。
（項目２）  Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、メチルおよびエチルからなる群より独立して選択される、項目１に記載の粒子。
（項目３）  Ｒ４およびＲ５は、オクチル、２−エチルヘキシル、ノニル、デシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル、オクタデシル、１６−メチルヘプタデシル、ｔｒａｎｓ−９−オクタデセニル、ｃｉｓ−９−オクタデセニル、ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１２−オクタデカジエニル、ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ−９，１２−オクタデカジエニル、ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１２，１５−オクタデカトリエニル、ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ−９，１２，１５−オクタデカトリエニル、１２−ヒドロキシ−９−オクタデセニル、エイコサニル、ドコサニル、ｃｉｓ−１３−ドコセニル、テトラコサニル、ヘキサコサニル、オクタコサニル、トリアコンタニル、テトラトリアコンタニル、オクタノイル、デカノイル、ドデカノイル、テトラデカノイル、ヘキサデカノイル、ヘプタデカノイル、オクタデカノイル、エイコサノイル、ドコサノイル、テトラコサノイル、ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１２，１５−オクタデカトリエノイル、ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−６，９，１２，１５−オクタデカテトラエノイル、ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−５，８，１１，１４，１７−エイコサペンテノイル、ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエノイル、ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１２−オクタデカジエノイル、ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−６，９，１２−オクタデカトリエノイル、ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−８，１１，１４−エイコサトリエノイル、ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ，ｃｉｓ−５，８，１１，１４−エイコサテトラエノイル、ｃｉｓ−９−オクタデセノイル、ｔｒａｎｓ−９−オクタデセノイル、ｃｉｓ−１３−ドコセノイル、およびｃｉｓ−１５−テトラコセノイルからなる群より独立して選択される、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目４）  ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセノイルである、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目５）  ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセニルである、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目６）  上記コーティングが上記粒子コア表面に吸着している、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目７）  上記コーティングが第２の界面活性剤をさらに含む、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目８）  上記第２の界面活性剤が、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両性イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、表面活性生物修飾物質、およびその組み合わせからなる群より選択される、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目９）  上記第２の界面活性剤がポロクサマーおよびリン脂質のうちの少なくとも１つを含む、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目１０）  上記活性薬剤が治療薬である、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目１１）  上記治療薬が、鎮痛薬、麻酔薬、蘇生薬、アドレナリン作動薬、アドレナリン遮断薬、抗アドレナリン薬、アドレノコルチコイド、アドレナリン模倣薬、抗コリン剤、抗コリンエステラーゼ、抗痙攣薬、アルキル化剤、アルカロイド、アロステリックインヒビター、タンパク同化ステロイド、食欲抑制薬、制酸薬、止瀉薬、解毒薬、抗葉酸薬、解熱薬、抗リウマチ薬、精神治療薬、神経遮断薬、抗炎症薬、駆虫薬、抗生物質、抗凝固薬、抗鬱薬、抗癲癇薬、抗真菌剤、抗線維化剤、抗感染症薬、抗寄生虫薬、抗ヒスタミン薬、抗ムスカリン薬、抗マイコバクテリア剤、抗新生物薬、抗原虫剤、抗ウイルス薬、抗不安鎮静剤、βアドレナリン受容体遮断薬、コルチコステロイド、鎮咳薬、ドーパミン作動薬、止血薬、血液作用薬、睡眠薬、免疫薬、ムスカリン作用薬、副交感神経刺激薬、プロスタグランジン、放射性医薬品、鎮静剤、刺激薬、交感神経刺激薬、ビタミン、キサンチン、成長因子、ホルモン、抗プリオン薬、およびその組み合わせからなる群より選択される、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目１２）  上記活性薬剤が、パクリタキセル、パクリタキセル誘導体化合物、アルカロイド、代謝拮抗物質、酵素インヒビター、アルキル化剤、およびその組み合わせからなる群より選択される抗新生物薬である、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目１３）  上記活性薬剤はパクリタキセルであり、ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセノイルである、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目１４）  上記活性薬剤はパクリタキセルであり、ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセニルである、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目１５）  上記活性薬剤がプロテアーゼインヒビターである、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目１６）  上記プロテアーゼインヒビターが、インジナビル、リトナビル、サキナビル、ネルフィナビル、アタザナビル、およびその組み合わせからなる群より選択される、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目１７）  上記活性薬剤がヌクレオシド逆転写酵素インヒビターである、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目１８）  上記ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターが、ジドブジン、ジダノシン、スタブジン、ザルシタビン、ラミブジン、およびその組み合わせからなる群より選択される、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目１９）  上記活性薬剤が非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターである、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目２０）  上記非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターが、エファビレンツ、ネビラピン、デラビラジン、およびその組み合わせからなる群より選択される、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目２１）  上記活性薬剤が抗炎症薬である、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目２２）  上記抗炎症薬が、非ステロイド性抗炎症薬、非選択性シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）インヒビター、ＣＯＸ−１インヒビター、ＣＯＸ−２インヒビター、リポキシゲナーゼインヒビター、コルチコステロイド、抗酸化剤、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）インヒビター、およびその組み合わせからなる群より選択される、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目２３）  上記活性薬剤が、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、パレコキシブ、ルミラコキシブ、エトリコキシブ、およびその組み合わせからなる群より選択される、前述の項目のいずれか１つに記載の粒子。
（項目２４）  前述の項目のいずれか１つに記載の複数の粒子を含む薬学的組成物。
（項目２５）  活性薬剤の細胞取り込みを増強する方法であって、該方法は、
細胞を表面改変粒子と該表面改変粒子の細胞取り込みを増強するのに十分な条件下で接触させる工程を含み、該粒子は粒子コアおよび該粒子コアに結合したコーティングを含み、該粒子コアは小分子、ペプチド、およびタンパク質からなる群より選択される活性薬剤を含み、該コーティングは、式Ｉ：
【化４】
0005668055.tif 000005
（式中、ｎおよびｍは、１、２、３、４、５、および６からなる群より独立して選択され、
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから独立して選択され、
Ｒ４およびＲ５は、Ｃ６〜Ｃ４０アルキル、Ｃ６〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ６〜Ｃ４０アルキニル、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルケニル）、およびＣ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキニル）からなる群より独立して選択される）
を有する界面活性剤またはその塩を含み、該表面改変粒子の平均サイズは約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、方法。
（項目２６）  上記細胞が食細胞である、項目２５に記載の方法。
（項目２７）  上記細胞が腫瘍細胞である、項目２５に記載の方法。
（項目２８）  上記接触をエクスビボで行う、項目２５から２６７に記載の方法。
（項目２９）  上記接触をインビボで行う、項目２５から２８に記載の方法。
（項目３０）  上記細胞が、マクロファージ、単球、顆粒球、無顆粒球、好中球、およびその組み合わせからなる群より選択される食細胞である、項目２５、２８、または２９に記載の方法。
（項目３１）  上記接触を、感染性疾患もしくは感染性障害、炎症性疾患もしくは炎症性障害、神経変性疾患もしくは神経変性障害、または増殖性疾患もしくは増殖性障害を処置するのに有効な量の上記表面改変粒子の被験体への投与によって達成する、項目２５から３０に記載の方法。
（項目３２）  上記投与を、静脈内、動脈内、筋肉内、皮下、皮内、関節内、髄腔内、硬膜外、脳内、口内、直腸、局所、経皮、経口、鼻腔内、肺経路、腹腔内、眼内、またはその組み合わせで行う、項目２５から３０１に記載の方法。
（項目３３）  上記被験体が哺乳動物被験体である、項目２５から３２２に記載の方法。
（項目３４）  上記被験体が、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、脳脊髄炎、脳炎、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、前頭側頭型痴呆、プリオン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、および副腎脳白質ジストロフィからなる群より選択される神経変性疾患または神経変性障害を有する、項目２５から３３３に記載の方法。
（項目３５）  上記被験体が、関節リウマチ、グレーブス病、重症筋無力症、甲状腺炎、糖尿病、炎症性腸疾患、自己免疫性卵巣炎、全身性エリテマトーデス、およびシェーグレン症候群からなる群より選択される炎症性疾患または炎症性障害を有する、項目２５から３４３に記載の方法。
（項目３６）  上記被験体が、デングウイルス感染、エンテロウイルス感染、ＨＩＶ感染、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザ、真菌感染；アフリカトリパノソーマ症、マラリア、コレラ、髄膜炎、および結核からなる群より選択される感染性疾患または感染性障害を有する、項目２５から３４３に記載の方法。
（項目３７）  上記被験体が、結腸がん、腎臓がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、腹膜腔がん、子宮頸がん、乳がん、前立腺がん、脳がん、肉腫、黒色腫、白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄腫、および膠芽細胞腫からなる群より選択される増殖性疾患または増殖性障害を有する、項目２５から３５３に記載の方法。
（項目３８）  上記被験体が増殖性疾患または増殖性障害を有し、ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセノイルである、項目２５から３７３に記載の方法。
（項目３９）  上記被験体が増殖性疾患または増殖性障害を有し、ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセニルである、項目２５から３８３に記載の方法。
（項目４０）  活性薬剤の細胞取り込みを増大させるための医薬の調製における複数の表面改変粒子の使用であって、該表面改変粒子は粒子コアおよび該粒子コアに結合したコーティングを含み、該粒子コアは小分子、ペプチド、およびタンパク質からなる群より選択される活性薬剤を含み、該コーティングは、式Ｉ：
【化５】
0005668055.tif 000006
（式中、ｎおよびｍは、１、２、３、４、５、および６からなる群より独立して選択され、
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから独立して選択され、
Ｒ４およびＲ５は、Ｃ６〜Ｃ４０アルキル、Ｃ６〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ６〜Ｃ４０アルキニル、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルケニル）、およびＣ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキニル）からなる群より独立して選択される）
を有する界面活性剤またはその塩を含み、該表面改変粒子の平均サイズは約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、使用。
（項目４１）  上記細胞が食細胞である、項目４０に記載の使用。
（項目４２）  上記細胞が、マクロファージ、単球、顆粒球、無顆粒球、好中球、およびその組み合わせからなる群より選択される食細胞である、項目４０から４１に記載の使用。
（項目４３）  上記細胞が腫瘍細胞である、項目４０に記載の使用。
（項目４４）  上記医薬が、静脈内、動脈内、筋肉内、皮下、皮内、関節内、髄腔内、硬膜外、脳内、口内、直腸、局所、経皮、経口、鼻腔内、肺経路、腹腔内、眼内、またはその組み合わせで投与することができるものである、項目４０から４３に記載の使用。
（項目４５）  上記医薬が、哺乳動物被験体に投与することができるものである、項目４０から４４に記載の使用。
（項目４６）  上記医薬が、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、脳脊髄炎、脳炎、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、前頭側頭型痴呆、プリオン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、および副腎脳白質ジストロフィからなる群より選択される神経変性疾患または神経変性障害の処置のために使用されるものである、項目４０から４５に記載の使用。
（項目４７）  上記医薬が、関節リウマチ、グレーブス病、重症筋無力症、甲状腺炎、糖尿病、炎症性腸疾患、自己免疫性卵巣炎、全身性エリテマトーデス、およびシェーグレン症候群からなる群より選択される炎症性疾患または炎症性障害の処置のために使用されるものである、項目４０から４５に記載の使用。
（項目４８）  上記医薬が、デングウイルス感染、エンテロウイルス感染、ＨＩＶ感染、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザ、真菌感染；アフリカトリパノソーマ症、マラリア、コレラ、髄膜炎、および結核からなる群より選択される感染性疾患または感染性障害の処置のために使用されるものである、項目４０から４５に記載の使用。
（項目４９）  上記医薬が、結腸がん、腎臓がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、腹膜腔がん、子宮頸がん、乳がん、前立腺がん、脳がん、肉腫、黒色腫、白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄腫、および膠芽細胞腫からなる群より選択される増殖性疾患または増殖性障害の処置のために使用されるものである、項目４０から４５に記載の使用。
（項目５０）  上記医薬が増殖性疾患または増殖性障害の処置のために使用されるものであり、ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセノイルである、項目４０から４５に記載の使用。
（項目５１）  上記医薬が増殖性疾患または増殖性障害の処置のために使用されるものであり、ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセニルである、項目４０から４５に記載の使用。
（項目５２）  活性薬剤の細胞取り込みの増強で用いるための複数の表面改変粒子であって、該表面改変粒子は粒子コアおよび該粒子コアに結合したコーティングを含み、該粒子コアは小分子、ペプチド、およびタンパク質からなる群より選択される活性薬剤を含み、該コーティングは、式Ｉ：
【化６】
0005668055.tif 000007
（式中、ｎおよびｍは、１、２、３、４、５、および６からなる群より独立して選択され、
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから独立して選択され、
Ｒ４およびＲ５は、Ｃ６〜Ｃ４０アルキル、Ｃ６〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ６〜Ｃ４０アルキニル、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルケニル）、およびＣ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキニル）からなる群より独立して選択される）
を有する界面活性剤またはその塩を含み、該表面改変粒子の平均サイズは約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、複数の表面改変粒子。
（項目５３）  食細胞と接触させるものである、項目５２に記載の複数の表面改変粒子。
（項目５４）  腫瘍細胞と接触させるものである、項目５２に記載の複数の表面改変粒子。
（項目５５）  静脈内、動脈内、筋肉内、皮下、皮内、関節内、髄腔内、硬膜外、脳内、口内、直腸、局所、経皮、経口、鼻腔内、肺経路、腹腔内、眼内、またはその組み合わせで投与することができるものである、項目５２から５４に記載の複数の表面改変粒子。
（項目５６）  哺乳動物被験体に投与することができるものである、項目５２から５５に記載の複数の表面改変粒子。
（項目５７）  パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、脳脊髄炎、脳炎、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、前頭側頭型痴呆、プリオン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、および副腎脳白質ジストロフィからなる群より選択される神経変性疾患または神経変性障害の処置のために使用するための、項目５２から５６に記載の複数の表面改変粒子。
（項目５８）  関節リウマチ、グレーブス病、重症筋無力症、甲状腺炎、糖尿病、炎症性腸疾患、自己免疫性卵巣炎、全身性エリテマトーデス、およびシェーグレン症候群からなる群より選択される炎症性疾患または炎症性障害の処置のために使用するための、項目５２から５６に記載の複数の表面改変粒子。
（項目５９）  デングウイルス感染、エンテロウイルス感染、ＨＩＶ感染、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザ、真菌感染；アフリカトリパノソーマ症、マラリア、コレラ、髄膜炎、および結核からなる群より選択される感染性疾患または感染性障害の処置のために使用するための、項目５２から５６に記載の複数の表面改変粒子。
（項目６０）  結腸がん、腎臓がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、腹膜腔がん、子宮頸がん、乳がん、前立腺がん、脳がん、肉腫、黒色腫、白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄腫、および膠芽細胞腫からなる群より選択される増殖性疾患または増殖性障害の処置のために使用するための、項目５２から５６に記載の複数の表面改変粒子。
（項目６１）  増殖性疾患または増殖性障害の処置のために使用するためのものであり、ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセノイルである、項目５２から５６に記載の複数の表面改変粒子。
（項目６２）  増殖性疾患または増殖性障害の処置のために使用するためのものであり、ｍおよびｎは１であり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチルであり、Ｒ４およびＲ５はｃｉｓ−９−オクタデセニルである、項目５２から５６に記載の複数の表面改変粒子。
（項目６３）  感染性疾患もしくは感染性障害、炎症性疾患もしくは炎症性障害、神経変性疾患もしくは神経変性障害、または増殖性疾患もしくは増殖性障害を有する被験体を処置する方法であって、複数の表面改変粒子を該被験体の疾患または炎症部位を有する体腔に投与する工程を含み、該表面改変粒子は粒子コアおよび該粒子コアに結合したコーティングを含み、該粒子コアは活性薬剤を含み、該コーティングは式Ｉ：
【化７】
0005668055.tif 000008
（式中、ｎおよびｍは、１、２、３、４、５、および６からなる群より独立して選択され、
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから独立して選択され、
Ｒ４およびＲ５は、Ｃ６〜Ｃ４０アルキル、Ｃ６〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ６〜Ｃ４０アルキニル、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルケニル）、およびＣ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキニル）からなる群より独立して選択される）
の界面活性剤またはその塩を含み、該表面改変粒子の平均サイズは約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍであり、該投与は該疾患または該障害に関連する症状または病状の緩和、処置、および／または防止に有効である、方法。
（項目６４）  上記体腔が、腹膜腔、膀胱腔、肺腔、胸膜腔、消化管腔、心腔、眼の房水、および硝子体液からなる群より選択される、項目６３に記載の方法。
（項目６５）  上記疾患または障害ががんであり、上記活性薬剤が抗新生物薬である、項目６３から６４に記載の方法。
（項目６６）  感染性疾患もしくは感染性障害、炎症性疾患もしくは炎症性障害、神経変性疾患もしくは神経変性障害、または増殖性疾患もしくは増殖性障害を処置するための医薬の調製における複数の表面改変粒子の使用であって、該医薬は該疾患または該障害に関連する症状または病状の緩和、処置、および／または防止に有効な量の該表面改変粒子を含み、該表面改変粒子は粒子コアおよび該粒子コアに結合したコーティングを含み、該粒子コアは活性薬剤を含み、該コーティングは式Ｉ：
【化８】
0005668055.tif 000009
（式中、ｎおよびｍは、１、２、３、４、５、および６からなる群より独立して選択され、
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから独立して選択され、
Ｒ４およびＲ５は、Ｃ６〜Ｃ４０アルキル、Ｃ６〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ６〜Ｃ４０アルキニル、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルケニル）、およびＣ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキニル）からなる群より独立して選択される）
の界面活性剤またはその塩を含み、該表面改変粒子の平均サイズは約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、使用。
（項目６７）  上記医薬は体腔に投与することができるものであり、該体腔が、腹膜腔、膀胱腔、肺腔、胸膜腔、心腔、消化管腔、眼の房水、および硝子体液からなる群より選択される、項目６６に記載の使用。
（項目６８）  上記医薬はがん処置のために使用されるものであり、上記活性薬剤が抗新生物薬である、項目６６から６７に記載の使用。
（項目６９）  感染性疾患もしくは感染性障害、炎症性疾患もしくは炎症性障害、神経変性疾患もしくは神経変性障害、または増殖性疾患もしくは増殖性障害を有する被験体の処置で用いるための複数の表面改変粒子であって、該複数の表面改変粒子は粒子コアおよび該粒子コアに結合したコーティングを含み、該粒子コアは活性薬剤を含み、該コーティングは式Ｉ：
【化９】
0005668055.tif 000010
（式中、ｎおよびｍは、１、２、３、４、５、および６からなる群より独立して選択され、
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから独立して選択され、
Ｒ４およびＲ５は、Ｃ６〜Ｃ４０アルキル、Ｃ６〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ６〜Ｃ４０アルキニル、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルケニル）、およびＣ（＝Ｏ）（Ｃ５〜Ｃ３９アルキニル）からなる群より独立して選択される）
の界面活性剤またはその塩を含み、該表面改変粒子の平均サイズは約１ｎｍ〜約２，０００ｎｍである、複数の表面改変粒子。
（項目７０）  体腔に投与することができるものであり、該体腔が、腹膜腔、膀胱腔、肺腔、胸膜腔、心腔、消化管腔、眼の房水、および硝子体液からなる群より選択される、項目６９に記載の複数の表面改変粒子。
（項目７１）  がん処置のために使用されるものであり、上記活性薬剤が抗新生物薬である、項目６９または７０に記載の複数の表面改変粒子。
【実施例】
【０１４４】
（実施例）
（実施例１）
（ＤＯＴＡＰコーティングを有するパクリタキセル粒子の調製）
パクリタキセル粒子を、微量沈殿／均質化手順を使用して調製した。具体的には、パクリタキセル（０．５ｇ）を、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）（３ｇ）に溶解し、次いで、ローター−ステーター混合を使用して水性界面活性剤溶液Ａ（２５ｍＬ）に添加した。溶液Ａ（約ｐＨ７．８〜８．０）は、リン酸ナトリウム（二塩基性、無水物）（０．１３ｇ）、リン酸ナトリウム（一塩基性、一水和物）（０．０１ｇ）、グリセリン（２．２ｇ）、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００（０．２ｇ）、およびポロクサマー１８８（０．５ｇ）を１００ｍＬ水中に含んでいた（表１）。
【０１４５】
【表１】
0005668055.tif 000011
得られた懸濁物をホモジナイザー（Ａｖｅｓｔｉｎ  Ｃ５）に移し、懸濁物の温度が少なくとも５０℃に達するまで固定圧力で循環させた。次いで、懸濁物を、２０，０００±２，０００ｐｓｉの標的圧力および６０℃の標的温度で６０分間均質化した。懸濁物を回収し、１０，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。遠心サイクルの完了の際、上清を破棄し、等容積の水性界面活性剤溶液Ｂと交換した。溶液Ｂ（約ｐＨ７．８〜８．０）は、溶液Ａと同一の成分を含み、さらに、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルスルファート（ＤＯＴＡＰ、０．１ｇ）を含んでいた（表１）。ペレットを再懸濁し、各回で置換界面活性剤として溶液Ｂを使用して、遠心分離をさらに２回繰り返した。３回目の再懸濁後、ナノ懸濁物を、２０，０００±２，０００ｐｓｉの標的圧力および６０℃の標的温度で３０分間均質化した。最終懸濁物は、約１６０〜１７０ｎｍのサイズの粒子を含んでいた。
【０１４６】
蛍光標識したパクリタキセル粒子を、蛍光標識したパクリタキセルの薬物濃縮物への添加によって上記手順にしたがって調製した。具体的には、４００μｇオレゴングリーン標識したパクリタキセル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡから入手可能）を、上記薬物濃縮物に添加して、フローサイトメトリーおよび蛍光顕微鏡法で検出するのに適切な蛍光強度を有する蛍光標識したパクリタキセル粒子を得た。
【０１４７】
（実施例２）
（ＤＯＴＡＰコーティングを有するパクリタキセル粒子のヒト単核球による取り込み）
ヒト単核球によるＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子の取り込みを、プロタミンコーティングしたパクリタキセル粒子およびＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８コーティングしたパクリタキセル粒子の取り込みと比較した。プロタミンコーティングしたパクリタキセル粒子を、０．０８ｍＬの２５ｍｇ／ｍＬプロタミン溶液の、０．０１ｍＬの１０ｍｇ／ｍＬオレゴングリーン標識したパクリタキセル懸濁物への添加によって調製した。
【０１４８】
ＤＯＴＡＰコーティングした粒子およびプロタミンコーティングした粒子の両方は、取り込み実験のために使用した条件下でわずかに正に荷電している。したがって、プロタミンコーティングしたパクリタキセル粒子を使用した比較実験を、パクリタキセル粒子取り込みの増強がコーティングした粒子の正電荷のみに起因し得るかどうかが評価されるようにデザインした。
【０１４９】
１０ｍＬの１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．３８）への３０μＬ懸濁物の添加によって、図２（および表２）に示した細胞取り込み実験で使用したパクリタキセル処方物に対してゼータ電位測定を行った。ＤＯＴＡＰおよびプロタミンでコーティングしたパクリタキセルナノ粒子は、わずかな正のゼータ電位を有する一方で、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８コーティングしたパクリタキセルナノ粒子（ＤＯＴＡＰまたはプロタミンを欠く）は、試験条件下で負のゼータ電位を有する（データ示さず）。
【０１５０】
取り込み実験で用いるヒト単核球を、ヒトドナーの全血から精製した。これらの細胞を、組織培養液処理した６ウェルプレート（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中の培地Ａ中で２〜３日毎に培地を交換しながら５〜７日間培養した。培地Ａは、以下（１Ｌ作製用）：１０００Ｕ／ｍｌ組換えヒトマクロファージ−コロニー刺激因子−１（ｒｈＭ−ＣＳＦ−１）（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ）、１００ｍＬ熱失活ヒト血清、１０ｍＬの２００ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬカタログ番号２５０３０−０８１）、２ｍＬの５０ｍｇ／ｍｌゲンタマイシン（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｇ１３９７）、および４００μＬの２５ｍｇ／ｍＬシプロフロキサシン（Ｂａｙｅｒ  ｃｏｄｅ  ｎｏ．８９−００１−１）を補充したＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬカタログ番号１１９６０−０５１）を含んでいた。また、細胞を、顕微鏡法に適用するためにカバーガラス上で培養した。
【０１５１】
次いで、接着性単球由来マクロファージを、パクリタキセル処方物（ＤＯＴＡＰコーティングを有するパクリタキセル粒子、プロタミンコーティングを有するパクリタキセル粒子、またはＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８コーティングを有するパクリタキセル粒子）で３７℃にて種々の時間処理した。懸濁物処方物は、最終濃度約１０μＭのパクリタキセル（オレゴングリーン標識したパクリタキセルをドープした（ｄｏｐｅｄ））を含んでいた。インキュベーション後、細胞を２ｍＬ／ウェルのリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で少なくとも３回洗浄した。次いで、細胞をＰＢＳ中に掻き取り、マイクロフュージチューブに移した（または、細胞がカバーガラスに接着した場合、固定してマウントした）。
【０１５２】
パクリタキセル粒子の取り込みを評価するために、細胞をＣＤ１４発現について染色し、フローサイトメトリーで分析した。ゲートを、アイソタイプコントロール（ＣＤ１４＋選択ゲートの確立のため）および無処理細胞（オレゴングリーン選択ゲートの確立のため）の両方についてのドットプロットに基づいて確立した。パクリタキセル取り込みを、オレゴングリーン蛍光について陽性のＣＤ１４＋細胞（単球由来マクロファージ）の比（％パクリタキセル＋／ＣＤ１４＋）（すなわち、内在化または吸着したパクリタキセル粒子を有する細胞の割合）および平均蛍光強度（ＭＦＩ）の両方によって評価した。ＭＦＩ値は、細胞集団内に含まれるパクリタキセル濃度に直接相関する。
【０１５３】
パクリタキセル懸濁物の取り込み動態を図１および２に示す（結果を、ナノ懸濁物取り込み後のパクリタキセル陽性細胞の割合および細胞結合／内在化粒子のＭＦＩの両方として示す）。図１では、細胞をパクリタキセル粒子に０、３、５時間曝露した一方で、図２では、細胞をパクリタキセル粒子に０、０．２５、０．５、および１時間曝露した。ＤＯＴＡＰコーティングにより、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８コーティングした粒子（図１および２）およびプロタミンコーティングした粒子（図２）と比較して、パクリタキセル粒子の取り込みが実質的に改善された。これらの結果は、パクリタキセル粒子取り込みの増強が単にコーティングした粒子の正電荷に起因するのではないことを示唆している。
【０１５４】
さらに、図２は、保存の際のパクリタキセル処方物の安定性を証明している。ＤＯＴＡＰサンプル１を、取り込み実験前におよそ３ヶ月保存した。ＤＯＴＡＰサンプル２を、調製直後に取り込み実験で使用した。これらの結果は、ＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子の数ヵ月間の保存が粒子取り込み動態に有意に影響を及ぼさないことを示す。
【０１５５】
パクリタキセル粒子の取り込みを、逆相ＨＰＬＣによって定量化した。パクリタキセル取り込みを、細胞のパクリタキセル懸濁物との１５、３０、および６０分間のインキュベーション後に測定した。サンプルを、アセトニトリル（５００μＬ）の各細胞懸濁物の５００μＬアリコートへの添加およびボルテックスによる混合によって調製した。次いで、サンプルを１０，０００ｒｐｍにて２５℃で３０分間遠心分離し、上清を逆相ＨＰＬＣによって分析して、サンプル中のパクリタキセル量を決定した（表２）。
【０１５６】
【表２】
0005668055.tif 000012
図３は、培養１、２、または６日後のＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセルナノ懸濁物の単球由来マクロファージによる取り込みを示す。細胞を、パクリタキセル粒子に０〜３．５時間の種々の時間曝露した。結果は、細胞を長く培養するほどＤＯＴＡＰコーティングした粒子に対する応答が低下することを示す。細胞が単球からマクロファージに成熟するにつれて全ての食作用が増加すると予想され、したがって、ＤＯＴＡＰコーティングによって、より若い細胞（インビトロで比較的短期間培養した細胞）と比較した場合に、より成熟した細胞で細胞取り込みが増強するという大きな利点を提供できない可能性があると理論づけられる。他方では、比較的若い単球によるＤＯＴＡＰコーティングした粒子の取り込みの増強／促進により、治療薬がより有効に定方向送達され得る。これは、かかる単球が循環単球である傾向があるのに対して、より古い細胞が固定マクロファージに分化する（例えば、脾臓および肝臓中）傾向があるからである。
【０１５７】
（実施例３）
（ＰＬＧＡコーティングまたはホスファチジルセリンコーティングを有するパクリタキセル粒子のヒト単核球による取り込み）
ＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子の取り込みを、ポリ乳酸−コ−グリコール酸（ＰＬＧＡ）コーティングしたパクリタキセル粒子の取り込みおよびホスファチジルセリン（ＰＳ）コーティングしたパクリタキセル粒子の取り込みと比較した。ＰＬＧＡ粒子を均質化するのではなく超音波処理し、リン酸緩衝剤、グリセリン、ＰＬＧＡ、およびポロクサマー１８８を含む溶液を使用して処方したこと、ＰＳ粒子をリン酸緩衝剤、グリセリン、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００、ポロクサマー１８８、およびホスファチジルセリンを含む溶液を使用して処方したことを除いて、ＰＬＧＡコーティングしたパクリタキセル粒子およびＰＳコーティングしたパクリタキセル粒子を実施例１に記載の手順にしたがって調製した。
【０１５８】
パクリタキセル懸濁物の取り込み動態を図４に示す（結果を、ナノ懸濁物取り込み後のパクリタキセル陽性細胞の割合および細胞結合／内在化粒子のＭＦＩの両方として示す）。ＤＯＴＡＰコーティングは、ＰＬＧＡコーティングした粒子またはホスファチジルセリンコーティングした粒子と比較して、粒子取り込みが実質的に改善された。これらの結果は、パクリタキセル粒子取り込みの増強が単にポリマーまたは界面活性剤コーティングの存在に起因しているわけではないことを示唆している。
【０１５９】
（実施例４）
（ＣＴＡＢコーティングを有するパクリタキセル粒子のヒト単核球による取り込み）
ＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子の取り込みを、セチルトリメチルアンモニウムブロミド（ＣＴＡＢ）コーティングしたパクリタキセル粒子の取り込みと比較した。ＣＴＡＢ粒子をリン酸緩衝剤、グリセリン、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００、ポロクサマー１８８、およびＣＴＡＢを含む溶液を使用して処方したことを除いて、ＣＴＡＢコーティングしたパクリタキセル粒子を実施例１に記載の手順に従って調製した。
【０１６０】
パクリタキセル懸濁物の取り込み動態を図５に示す（結果を、ナノ懸濁物取り込み後のパクリタキセル陽性細胞の割合および細胞結合／内在化粒子のＭＦＩの両方として示す）。ＤＯＴＡＰコーティングは、ＣＴＡＢコーティングした粒子と比較して粒子取り込みを実質的に改善した。これらの結果は、パクリタキセル粒子取り込みの増強が単に正電荷基および疎水性基の両方を有するコーティングの存在に起因しているわけではないことを示唆している。
【０１６１】
（実施例５）
（全血中でのＤＯＴＡＰコーティングを有するパクリタキセル粒子の取り込み）
全血を、健康なヒトドナーからＥＤＴＡバキュテイナ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に採血した。オレゴングリーン標識したパクリタキセルをドープしたパクリタキセルナノ懸濁物を、全血（約１０μＭ最終濃度）と共に、チューブローテーター上の１．７ｍＬマイクロフュージチューブ中にて室温で１時間インキュベートした。全血画分を、低張溶解液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に曝露して赤血球を溶解した。次いで、溶解したサンプルを、ＣＤ１４発現について染色した。全血および染色した細胞の両方を、フローサイトメトリーによって分析した。
【０１６２】
赤血球（ＲＢＣ）集団および血小板集団のいずれにおいてもオレゴングリーン蛍光の明らかな増加は認められなかった。蛍光の実質的な増加は、ＤＯＴＡＰ処方したパクリタキセル懸濁物を使用した溶解サンプル中のＣＤ１４＋単球集団で認められた。ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８コーティングを有するパクリタキセル処方物はまた、ＣＤ１４＋単球集団中でいくらかの取り込みが認められた。オレゴングリーン蛍光によって評価したところ、他の主要細胞集団中に明らかな取り込みは認められなかった（データ示さず）。これらの結果は、ＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子が血液中に存在する赤血球、血小板、および他の細胞型よりも単球によって選択的に取り込まれることを示唆している。単球によるＤＯＴＡＰコーティングした粒子の選択的取り込みは、疾患部位、腫瘍部位、または感染部位への治療薬のより有効な定方向送達を示唆している。
【０１６３】
（実施例６）
（ＤＯＴＡＰコーティングを有するパクリタキセル粒子のマウス腹膜マクロファージによる取り込み）
腹膜マクロファージをマウスから単離し、ＤＯＴＡＰコーティングを有するパクリタキセル粒子およびかかるコーティングを持たないパクリタキセル粒子に曝露した。蛍光画像は、ＤＯＴＡＰコーティングした粒子に曝露した腹膜マクロファージの方がＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８コーティングした粒子に曝露したものよりもパクリタキセルの取り込み量が多いことを示していた（データ示さず）。この実施例は、ＤＯＴＡＰが腹膜マクロファージによる粒子の取り込みを増強することを支持している。
【０１６４】
（実施例７）
（ＤＯＴＡＰコーティングを有するパクリタキセル粒子のヒトＯＶＣＡＲ−３細胞による取り込み）
ヒトＯＶＣＡＲ−３細胞を、これらが赤色蛍光を発するように赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）でトランスフェクトした。次いで、これらの細胞を、ＤＯＴＡＰコーティングを有するオレゴングリーン−パクリタキセルを使用して調製したパクリタキセル粒子およびＤＯＴＡＰコーティングを持たないパクリタキセル粒子に曝露した。蛍光画像は、粒子をＤＯＴＡＰでコーティングした場合でのみＲＦＰ−ＯＶＣＡＲ−３細胞が粒子を取り込んだことを示した（データ示さず）。ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００／ポロクサマー１８８でコーティングした粒子の視覚可能な取り込みは認められなかった。本実施例は、ＤＯＴＡＰがヒト卵巣がん細胞による粒子の取り込みを増強することを支持している。ＯＶＣＡＲ−３細胞によるＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子の取り込み速度は、腫瘍細胞が粒子を直接取り込むことを示唆しているが、正確な機構は未知である。
【０１６５】
（実施例８）
（ＤＯＴＡＰコーティングを有するパクリタキセル粒子のマウス中の滞留時間）
ＤＯＴＡＰコーティングを有するオレゴングリーン標識したパクリタキセル粒子を、マウスに皮下注射した。蛍光画像を経時的に取得し、粒子の滞留時間を証明した。３０日目の緑色蛍光の残存は、皮下注射した場合にパクリタキセル粒子が少なくとも３０日間保持されることを示した（データ示さず）。
【０１６６】
個別の実験では、ＤＯＴＡＰを含むコーティングを有するオレゴングリーン標識したパクリタキセル粒子およびローダミン標識した界面活性剤（リサミンローダミンＢ１，２−ジヘキサデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、トリエチルアンモニウム塩（ｒＤＨＰＥ）；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を、健康なマウスに腹腔内（ＩＰ）注射した。蛍光画像を経時的に取得し、粒子の滞留時間を証明した。データは、パクリタキセルナノ粒子が健康なマウスの腹膜空間から迅速に（約２４時間以内）クリアランスされたことを示した（データ示さず）。
【０１６７】
試験マウスにＲＦＰ−ＯＶＣＡＲ−３細胞を移植し、腫瘍を成長させたマウスモデルを確立した。腫瘍はＲＦＰを発現し、赤色蛍光を発した。ＤＯＴＡＰコーティングを有するオレゴングリーン標識したパクリタキセル粒子を、ＲＦＰ発現腫瘍を有するマウスへの腹腔内注射によって投与した。ＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子の存在および位置を、蛍光を使用して、腫瘍と比較して検出した。
【０１６８】
腫瘍およびパクリタキセル粒子の両方を、蛍光顕微鏡法（腫瘍については赤色蛍光、粒子については緑色蛍光）によって観察した。粒子が腹膜腔から迅速にクリアランスされた健康なマウスと異なり、ＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子は注射３０日後まで担がんマウス中に存在した。これは、マウスの腹膜腔中に存在する腫瘍が滞留時間の増加を一部担うことを示している。さらに、ＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子は、腫瘍と頻繁に共局在していた。したがって、本実施例は、ＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子が健康な組織と対照的に腫瘍部位を標的とし、かなりの期間にわたって標的腫瘍部位内に残存することができ、その結果、有効に治療薬を徐放することができることを支持している。
【０１６９】
さらに、ＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子が存在していた場合、赤色蛍光強度は経時的に減少し、これは腫瘍細胞死と一致していた。逆に、パクリタキセル粒子の非存在下で、赤色蛍光は経時的に強化された。したがって、本実施例は、さらに、ＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子の投与がインビボでがんを有効に処置することを証明している。
【０１７０】
種々の用量のＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子（１５ｍｇ／ｋｇおよび２５ｍｇ／ｋｇ）を使用した用量範囲研究も行って、マウスモデルにおける卵巣腫瘍細胞の死の有効な誘導用量を同定した。種々の用量のＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子の投与に応答した腫瘍サイズを測定して、所与の用量の有効性を決定した。１日目に投与した２５ｍｇ／ｋｇの用量により、投与２５日後に腫瘍サイズが減少した。１５ｍｇ／ｋｇの用量の２回（１日目および１４日目）の投与によって２５日目までに腫瘍が無くなり、緑色蛍光薬物が滞留していた。本研究は、さらに、ＤＯＴＡＰコーティングしたパクリタキセル粒子の投与がインビボでがんを有効に処置することを支持している。
【０１７１】
（実施例９）
（ＤＯＴＡＰコーティングを有するプロテアーゼインヒビター粒子の調製）
プロテアーゼインヒビターであるインジナビル（ＩＤＶ）およびリトナビル（ＲＴＶ）の粒子を、微量沈殿／均質化手順（本明細書で前述）を使用して調製した。次いで、粒子を、ＤＯＴＡＰを含む種々の界面活性剤でコーティングした。異なるプロテアーゼインヒビター粒子処方物の取り込みおよび有効性を比較した。本研究で使用したプロテアーゼインヒビター処方物を表３に示す。
【０１７２】
【表３】
0005668055.tif 000013
粒子を、粒子をコーティングするためにＬｉｐｏｉｄ  Ｅ８０（１．４％）、Ｐ−１８８（０．５％）、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００（０．２％）、および／またはＤＯＴＡＰ（０．１％）を含む溶液に懸濁した。粒子を、重量−対−容積がおよそ２％で溶液に添加した。表面改変粒子の懸濁物を、コーティング溶液への粒子の添加および初期粒径を減少させるためのＵｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ  Ｔ−１８（ＩＫＡ  Ｗｏｒｋｓ  Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ，ＵＳＡ）ローター−ステーターミキサーを使用した４〜７分間の混合によって調製した。次いで、懸濁物を、２０，０００ポンド／平方インチでおよそ３０回の通過で、または所望の粒径に到達するまで均質化した。ＤＯＴＡＰ含有懸濁物について、均質化された懸濁物を遠心分離して（１２，１００×ｇにて５℃で３０分間）薬物粒子をペレット化した。薬物を、Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ  Ｔ−１８での混合によってＤＯＴＡＰを含む界面活性剤に再懸濁した。ナノ懸濁物を、緩衝液として１０ｍＭリン酸ナトリウムまたは１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳのいずれかを使用してわずかにアルカリ性（ｐＨ７．８）で処方した。張度を、グリセリン（２．２５％）またはスクロース（９．２５％）を使用して調整した。赤色蛍光標識であるリサミンローダミンＢ１，２−ジヘキサデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミントリエチルアンモニウム塩（ｒＤＨＰＥ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して粒子を標識した。
【０１７３】
全ての処方物について、粒径を、ＨＯＲＩＢＡ  ＬＡ  ９２０光散乱装置（ＨＯＲＩＢＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ，ＵＳＡ；ＲＲＩ＝１．０８（ＩＤＶについて）および１．２０（ＲＴＶについて））を使用して測定した。ゼータ電位を、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏシリーズ装置（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．，Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ，ＵＳＡ）にて０．１ｍｌ懸濁物の９．９ｍｌの１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）への希釈によって測定した。処方物の最終薬物含有量を、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定した。
【０１７４】
（実施例１０）
（ヒト単球由来マクロファージによるＤＯＴＡＰコーティングを有するプロテアーゼインヒビター粒子の取り込み）
ヒト単球を、白血球搬出によってＨＩＶ−１および肝炎のセロネガティブドナーから得、Ｄｏｕら（Ｂｌｏｏｄ，１０８（８）：２８２７−２８３５，２００６）に記載の向流遠心分離エルトリエーション（ｅｌｕｔｒｉａｔｉｏｎ）によって精製した。ライト染色サイトスピン調製を行い、細胞純度を抗ＣＤ６８（クローンＫＰ−１）での免疫標識によって評価した。単球を、１０％熱失活プールヒト血清、１％グルタミン、５０μｇ／ｍｌゲンタマイシン、１０μｇ／ｍｌシプロフロキサシン、および１０００Ｕ／ｍｌ組換えヒトマクロファージコロニー刺激因子を補充したダルベッコ改変イーグル培地中、１×１０６細胞／ｍｌの濃度にて３７℃の加湿雰囲気下（５％ＣＯ２）で培養した。マクロファージへの分化を誘導するために、Ｇｅｎｄｅｌｍａｎら（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７：１４２８−１４４１，１９８８）に記載のように単球をマクロファージコロニー刺激因子の存在下で７日間培養した。
【０１７５】
ＭＤＭ（２×１０６／ウェル）を、濃度が１、１０、および１００μＭの表面改変プロテアーゼインヒビター粒子と共に培養した。粒子取り込みを、培地交換を行わずに１時間毎に細胞を回収して２４時間評価した。接着ＭＤＭを、１ｍｌのリン酸緩衝化生理食塩水で３回の洗浄およびその後の１ｍｌリン酸緩衝化生理食塩水への細胞の掻き取りによって回収した。サンプルを、９５０×ｇにて４℃で１０分間遠心分離し、上清を除去した。細胞ペレットを、２００μ１のメタノール中で超音波処理し、１０，０００×ｇにて４℃で１０分間遠心分離した。メタノール抽出物を、ＲＰ−ＨＰＬＣ分析を行うまで−８０℃で保存した。
【０１７６】
２つの異なるＲＴＶ処方物を作製した（表３を参照のこと）。取り込みが最も遅く、且つ絶対量が最も少ないＲＴＶ処方物はＲＴＶ−１であった。これは、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ２０００のみでコーティングされ、サイズは２００ｎｍであり、ゼータ電位は−２５．６ｍＶであった（表３）。ＲＴＶの吸収速度が最も速く、且つ蓄積量が最も多いＲＴＶ処方物はＲＴＶ−４であった。これは、Ｐ−１８８、ＤＳＰＥ、ｍＰＥＧ２０００、およびＤＯＴＡＰの組み合わせでコーティングされ、サイズは６２０ｎｍであり、ゼータ電位は＋１５．５ｍＶであった。最大取り込みは、ＲＴＶ−４については８時間、ＲＴＶ−１については１２時間で起こった。絶対取り込み量は、ＲＴＶ−４（４０．９８μｇ／１×１０６細胞）がＲＴＶ−１（２４．６８μｇ／１×１０６細胞）のおよそ１．５倍高かった。ＲＴＶ−４の物理的性質は、ＤＯＴＡＰも含むＩＤＶ−４に類似していた。これは、ＩＤＶ粒子の取り込みを至適化する物理的性質がＲＴＶ粒子の取り込みも至適化することを示唆している。
【０１７７】
表面コーティングした粒子への最初の１２時間の曝露後、１日おきに培地の半分を交換しながら、ＭＤＭからの薬物放出を２週間にわたって評価した。培地サンプルを複製細胞と共にとっておき、Ｄｏｕら（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ３５８：１４８−１５８，２００７）に記載の方法の修正バージョンを使用して、ＲＰ−ＨＰＬＣ分析を行うことができるまで−８０℃で保存した。メタノール抽出細胞懸濁物を、２１，８００×ｇにて４℃で１０分間遠心分離した。培地サンプルを解凍し、メタノールの添加によってタンパク質を除去した（ｄｅｐｒｏｔｅｉｎａｔｅ）。サンプルを２１，８００×ｇにて４℃で１０分間遠心分離し、上清を真空下で蒸発乾燥させ、７０μｌの１００％メタノールに再懸濁した。三連の処理した培地または細胞の２０μｌサンプルを、Ｃ８ガードカートリッジを備えたＹＭＣパックオクチルＣ８カラム（Ｗａｔｅｒｓ  Ｉｎｃ．、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ、ＵＳＡ）を使用したＲＰ−ＨＰＬＣによって評価した。４７％アセトニトリル／５３％の２５ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ４．１５）（１Ｎ  ＨＣｌで調整）からなる移動相を０．４ｍｌ／分で供給し、２１２ｎｍでのＵＶ／Ｖｉｓ検出を使用した。全てのプロテアーゼインヒビター調製物について、メタノール中で作製された遊離薬物（０．０２５〜１００μｇ／ｍｌ）の標準曲線との比較によって定量化して評価した。
【０１７８】
各薬物および処方物について多様な放出プロフィールが認められた。細胞内に依然として含まれる薬物の量および培地中に放出された薬物の量を評価した。ＩＤＶ−１またはＩＤＶ−４のいずれかで処置したＭＤＭを比較した場合、細胞薬物含有量は、全ての時点で有意に（ｐ＜０．０５）異なっていた。ＩＤＶ−１で処理した細胞において１１日目に薬物は検出されなかった一方で、ＩＤＶ−４については１５日目で薬物が容易に存在した（１．６１μｇ／１×１０６細胞）。培地内の薬物濃度も３日目から１５日目までで有意に（ｐ＜０．０５）異なっていた。ＩＤＶ−１で処理した細胞では１３日目には培地中に薬物は検出不可能であった一方で、ＩＤＶ−４で処理したＭＤＭでは薬物が容易に存在していた（１６．３７μｇ／ｍｌ）。
【０１７９】
ＲＴＶ−１またはＲＴＶ−４のいずれかで処理したＭＤＭを比較した場合、細胞および培地の両方の薬物含有量は全ての時点で異なっていた（ｐ＜０．０５）。ＲＴＶ−１（０．１９μｇ／１×１０６細胞）およびＲＴＶ−４（８．６９μｇ／１×１０６細胞）の両方について、薬物は１５日目に細胞内に存在していた。ＲＴＶ−１（０．２８μｇ／ｍｌ）およびＲＴＶ−４（１１．６２μｇ／ｍｌ）の両方について、薬物は１５日目に培地内にも存在した。ＭＤＭは、ＤＯＴＡＰコーティングした粒子（ＩＤＶ−１およびＲＴＶ−１）を、ＤＯＴＡＰでコーティングしなかった粒子（ＩＤＶ−１およびＲＴＶ−１）よりも有意に長く保持した。
【０１８０】
これらの実験は、ＤＯＴＡＰコーティングしたプロテアーゼインヒビター粒子がＭＤＭによってより効率よく取り込まれ、これらのＤＯＴＡＰコーティングしたプロテアーゼインヒビター粒子が非ＤＯＴＡＰコーティングのプロテアーゼインヒビター粒子と比較した場合に、より長い期間ＭＤＭ内に保持されることを証明している。したがって、ＤＯＴＡＰコーティングしたプロテアーゼインヒビター粒子を有するＭＤＭは、感染組織への有効な薬物キャリアである。
【０１８１】
（実施例１１）
（ＤＯＴＡＰを含む粒子を有する細胞の機能的性質の評価）
細胞機能が、表面改変粒子を有する単球およびＭＤＭにおいて影響を受けているかどうかを評価するための研究を行った。単球およびＭＤＭを、１００μＭの粒子で１２時間処理し、細胞傷害性を、製造者の説明書にしたがってＡＬＡＭＡＲＢＬＵＥＴＭアッセイ（ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ，Ｒａｌｅｉｇｈ，ＮＣ，ＵＳＡ）を使用して２４時間にわたって評価した。ＡＬＡＭＡＲＢＬＵＥ試薬は酸化還元インジケーターが組み込まれており、このインジケーターは、細胞増殖に起因する増殖培地の化学的還元に応答して蛍光を発し、且つ変色する。したがって、酸化還元インジケーターの強度は、細胞増殖および細胞生存率に比例する。
【０１８２】
結果は、各ＩＤＶ粒子処方物が最高使用濃度（１００μＭ）で単球やＭＤＭの生存率を有意に変化させなかったことを示している。さらに、同様に１００μＭで試験した全てのＲＴＶ粒子調製物は、マクロファージ生存率を変化させなかったが、単球生存率は１５％減少した。
【０１８３】
血液脳関門を通過する単球移動を、Ｇｅｎｄｅｌｍａｎら（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７（４）：１４２８−１４４１，１９８８）およびＣｈａｕｄｈｕｒｉら（Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ．２８（４）：６９７−７１１）に記載のように行った。このアッセイのために、２×１０４ヒト脳微小血管内皮細胞（ＨＢＭＥＣ）を、コラーゲンコーティングしたＦＬＵＯＲＯＢＬＯＫＴＭ色付き組織培養インサート（孔径３μｍ）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ．ＮＪ，ＵＳＡ））上に播種した。ＨＢＭＥＣ単層はこれらのインサート上で視覚不可能であるので、経上皮電気抵抗の手動操作での読み取りをＥＶＯＭ電圧計（Ｗｏｒｌｄ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｓａｒａｓｏｔａ，ＦＬ，ＵＳＡ）を使用して評価して、単層形成およびコンフルエンスを確認した。単球を、カルセイン−ＡＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で５μＭ／１×１０６細胞にて４５分間標識し、リン酸緩衝化生理食塩水で洗浄した。移動について、２．５×１０５個の標識した単球をＨＢＭＥＣ単層上（ＦＬＵＯＲＯＢＬＯＫインサートの上室）に置き、２時間にわたって単層を横切って移動させた（３７℃、５％ＣＯ２）。下室への単球移動を、蛍光プレートリーダー（吸光度：４９４ｎｍ；発光：５１７ｎｍ）を使用して定量化し、既知数のカルセイン標識した細胞の連続希釈から導いた標準曲線と比較した。粒子の含有により、非含有単球およびＭＤＭと比較してＩＤＶ−４およびＲＴＶ−４の両方について人工血液脳関門モデルを横切る単球移動が増加したが、増加は統計的に有意ではなかった。
【０１８４】
これらの研究は、ＤＯＴＡＰコーティングしたプロテアーゼインヒビター粒子のＭＤＭ含有が細胞に有毒ではなく、ＭＤＭは細胞機能を保持することを証明している。したがって、ＤＯＴＡＰコーティングしたプロテアーゼインヒビター粒子を有するＭＤＭは、感染組織への薬物送達に有効である。
【０１８５】
（実施例１２）
（ＤＯＴＡＰ含有粒子調製物の抗レトロウイルス有効性）
ＭＤＭによって取り込まれたプロテアーゼインヒビター表面改変粒子のインビトロ抗レトロウイルス効果を決定するために、細胞を、１、１０、および１００μＭの濃度の各表面改変粒子処方物で１２時間処理し、感染ウイルス粒子／細胞の感染多重度０．０１にて薬物処理の１、５、１０、および１５日後にＨＩＶ−１（分離菌ＡＤＡ）でチャレンジした。ウイルス感染後、細胞を、１日おきに培地の半分を交換して１０日間培養した。培地サンプルを、ＲＴ活性によって評価する子孫ビリオン産生の測定のために、５、７、および１０日目に細胞培養物から回収した。感染細胞によるＨＩＶ−１ｐ２４抗原発現の並行分析を、感染１０日後に免疫染色によって行った。
【０１８６】
ＲＴ活性を測定するために、培地サンプル（１０μｌ）を、１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．９）、３００ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭジチオトレイトール（ＤＴＴ）、０．１％ノニルフェノキシルポリエトキシルエタノール−４０、および水を含む１０μｌの溶液と混合した。反応混合物を３７℃で１５分間インキュベートし、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．９）、１５０ｍＭ  ＫＣｌ、５ｍＭ  ＤＴＴ、１５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．０５％ノニルフェノキシルポリエトキシルエタノール−４０、１０μｇ／ｍｌポリ（Ａ）、０．２５０Ｕ／ｍｌオリゴｄ（Ｔ）１２−１８、および１０μＣｉ／ｍｌ  ３Ｈ−チミジン５’−三リン酸（ＴＴＰ）を含む２５μｌの溶液を各ウェルに添加し、プレートを３７℃で１８時間インキュベートした。インキュベーション後、５０μｌの冷１０％ＴＣＡを各ウェルに添加し、ウェルをグラスファイバーフィルター上に採取し、ＴｏｐＣｏｕｎｔ  ＮＸＴカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用した３−シンチレーション分光法によって３Ｈ−ＴＴＰ取り込みについてフィルターを評価した。
【０１８７】
実施例１０に記載の取り込みおよび放出研究のために使用した濃度と同一濃度の同一処方物を、確実にデータセットを比較することができるように抗レトロウイルス活性について試験した。試験した全ての時点でのＩＤＶ−４におけるＲＴ活性の用量依存性効果が認められた一方で、ＩＤＶ−１は１日目および５日目で潜在的な用量依存性応答のみを示した。１日目に１００μＭ用量を投与した場合、５日目から２処方物間の有意差（ｐ＜０．０５）が認められた。１５日目まで、ＩＤＶ−１処理群は感染コントロールと異ならなかった一方で、ＩＤＶ−４処理群は有意な（ｐ＜０．０５）ウイルス抑制を維持し、それにより、ＤＯＴＡＰを含む処方物の有効性の増加を証明している。
【０１８８】
ＲＴＶ−１およびＲＴＶ−４についてのＲＴ活性抑制の比較により、全ての時点で両薬物の潜在的な用量−応答傾向が明らかとなった。ＲＴ活性の減少はＲＴＶ−４で処理した細胞については期間にわたって維持されたが、ＲＴＶ−１で処理した細胞についてはそうでなかった。１５日目までに、ＲＴＶ−１はコントロールと比較してＲＴ活性の３４．８４％の減少を示した一方で、ＲＴＶ−４はＲＴ活性を９８．４２％抑制した。これもＤＯＴＡＰを含む処方物の有効性の増加を証明している。
【０１８９】
ＨＩＶ−１ｐ２４抗原の発現も使用して、表面改変粒子で処理し、その後にＨＩＶ−ｌを感染させたＭＤＭ中での抗レトロウイルス活性を実証した。ＨＩＶ−１感染から１０日後に細胞を４％リン酸緩衝化パラホルムアルデヒドで固定した。ＨＩＶ−１ｐ２４に対するマウスモノクローナル抗体（１：１０，Ｄａｋｏ，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して、ＨＩＶ−Ｉ感染細胞の密度を決定した。免疫染色の定量を、Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ，ｖ．４．０（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＵＳＡ）を使用したデンシトメトリーによって行った。ｐ２４の発現を、顕微鏡視野あたりの総画像領域の割合として陽性領域（指標）を決定することによって定量化した。
【０１９０】
ＩＤＶ−１およびＩＤＶ−４で処理した感染ＭＤＭによるｐ２４発現の評価は、ＩＤＶ−４で処理した細胞については全時点でｐ２４発現における用量−応答効果を示したが、ＩＤＶ−１で処理した細胞については１日目のみで示した。２処方物間の有意差（ｐ＜０．０５）は１日目から全ての濃度で認められた。１５日目に、１００μＭのＩＤＶ−１で処理した細胞は感染コントロールと異ならなかった一方で、１００μＭのＩＤＶ−４で処理した細胞は有意差（ｐ＝０．０００３）を示した。ＲＴＶ−１またはＲＴＶ−４で処理した群におけるＨＩＶ−１ｐ２４抗原密度の比較は、全濃度での両処方物について全時点で潜在的な用量−応答効果を示した。ＨＩＶ−１ｐ２４密度における有意差（ｐ＝０．０１５６）は、１日目から１００μＭのＲＴＶ粒子で処理した細胞について認められた。１５日目までに、すべての処理濃度で、ＲＴＶ処方物間で有意に異なっていた（ｐ＜０．０２１）。
【０１９１】
全体的にみて、ＩＤＶ−４およびＲＴＶ−４は、１５日間感染細胞におけるＨＩＶ−１子孫ビリオン産生を阻害した一方で、ＩＤＶ−１およびＲＴＶ−１はそうではなかった。これを、ｐ２４標識の密度の増加によって証明されるように、ｐ２４阻害の漸進的喪失および経時的なウイルス拡散の進展によって証明した。このデータセットは、ＲＴ分析のデータセットとよく似ており、ＲＴ活性およびＨＩＶ−１ｐ２４の両方の経時的減少を示すことによってＩＤＶ−４およびＲＴＶ−４のウイルス複製速度の減少を証明している。したがって、ＤＯＴＡＰコーティングしたプロテアーゼインヒビター粒子はレトロウイルス活性を保持し、ＤＯＴＡＰコーティングしたプロテアーゼインヒビター粒子を有するＭＤＭはＨＩＶ感染の処理で有効である。
【０１９２】
特定の実施形態を例示および記載している一方で、本発明の精神から逸脱することなく多数の修正形態が思い浮かび、保護範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ制限される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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