(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のＲＮＡ鎖及び第２のＲＮＡ鎖の二本鎖を有する単離ｓｉＲＮＡであって、前記第１のＲＮＡ鎖は血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）イソ型の標的配列と結合することができるヌクレオチド配列を有し、前記ＶＥＧＦイソ型はヒトのＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１８９から成る群から選択されるものであり、さらに前記ｓｉＲＮＡはＶＥＧＦ１６５ｂと非相補的であり、前記ヌクレオチド配列は、ＧＴＡＣＴＴＧＣＡＧＡＴＧＴＧＡＣＡＡ（配列ＩＤ番号８８）又はＧＣＡＧＡＴＧＴＧＡＣＡＡＧＣＣＧＡＧ（配列ＩＤ番号９４）から転写される配列と同一であり、前記第２のＲＮＡ鎖は前記第１のＲＮＡ鎖と相補的である、単離ｓｉＲＮＡ。
【請求項２】
請求項１記載のｓｉＲＮＡであって、さらに、３’突出末端を有する、ｓｉＲＮＡ。
【請求項３】
請求項２記載のｓｉＲＮＡにおいて、前記３’突出末端は１〜６のヌクレオチドを有するものである、ｓｉＲＮＡ。
【請求項４】
請求項２記載のｓｉＲＮＡにおいて、前記３’突出末端は２のヌクレオチドを有するものである、ｓｉＲＮＡ。
【請求項５】
請求項１記載のｓｉＲＮＡにおいて、前記センスＲＮＡ鎖は第１の３’突出末端を有し、前記アンチセンスＲＮＡ鎖は第２の３’突出末端を有するものである、ｓｉＲＮＡ。
【請求項６】
ヒト細胞及びラット細胞からのＶＥＧＦの生産又は分泌を抑制するために使用される、請求項１記載のｓｉＲＮＡ。
【請求項７】
ヒト細胞、マウス細胞、及びラット細胞からのＶＥＧＦの生産又は分泌を抑制するために使用される、請求項１記載のｓｉＲＮＡ。
【請求項８】
請求項１記載のｓｉＲＮＡを有する医薬組成物。
【請求項９】
被験者の血管新生疾患を治療するために使用される、請求項８記載の医薬組成物。
【請求項１０】
請求項９記載の医薬組成物において、前記血管新生疾患は癌に関連した腫瘍を有するものである、医薬組成物。
【請求項１１】
請求項９記載の医薬組成物において、前記血管新生疾患は、糖尿病性網膜症、加齢黄班変性、及び炎症性疾患から成る群から選択されるものである、医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１１記載の医薬組成物において、前記血管新生疾患は加齢黄班変性である、医薬組成物。
【請求項１３】
請求項９記載の医薬組成物において、前記医薬組成物は、前記血管新生疾患を治療するための薬剤と組み合わせて投与されるものであり、この薬剤は短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）とは異なるものである、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００８年１２月４日出願の米国仮特許出願第６１／１１９７７９号（名称：「ＶＥＧＦを選択的に抑制する組成物および方法（Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＶＥＧＦ）」、２００９年４月２２日出願の米国仮特許出願第６１／１７１５７１号（名称：「ＶＥＧＦを選択的に抑制する組成物および方法（Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＶＥＧＦ）」、及び２００９年６月２４日出願の米国仮特許出願第６１／２１９８０８号（名称：「ＶＥＧＦを選択的に抑制する組成物および方法（Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＶＥＧＦ）」、に対して米国特許法１１９条（ｅ）のもとで優先権を主張するものであり、それぞれの前記出願は参照によりその全体が援用されるものである。
この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては、以下のものがある（国際出願日以降国際段階で引用された文献及び他国に国内移行した際に引用された文献を含む）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００２】
【特許文献００１】    米国特許第６，４７９，７２９号明細書
【特許文献００２】    米国特許第７，１４８，３４２号明細書
【特許文献００３】    米国特許第７，１９９，１０７号明細書
【特許文献００４】    米国特許第７，３４５，０２７号明細書
【特許文献００５】    米国特許第７，４６８，４３１号明細書
【特許文献００６】    米国特許第７，７０９，６２８号明細書
【特許文献００７】    米国特許第７，１７６，３０３号明細書
【特許文献００８】    米国特許出願公開第２００１／００２１７７２号明細書
【特許文献００９】    米国特許出願公開第２００２／００５４９０２号明細書
【特許文献０１０】  米国特許出願公開第２００２／００８６３５６号明細書
【特許文献０１１】  米国特許出願公開第２００２／０１３２７８８号明細書
【特許文献０１２】  米国特許出願公開第２００２／０１６２１２６号明細書
【特許文献０１３】  米国特許出願公開第２００２／０１６５１５８号明細書
【特許文献０１４】  米国特許出願公開第２００２／０１７３４７８号明細書
【特許文献０１５】  米国特許出願公開第２００２／０１８３６８３号明細書
【特許文献０１６】  米国特許出願公開第２００３／０１３８４０７号明細書
【特許文献０１７】  米国特許出願公開第２００３／０１５３５１９号明細書
【特許文献０１８】  米国特許出願公開第２００３／０２１６３３５号明細書
【特許文献０１９】  米国特許出願公開第２００４／００１８１７６号明細書
【特許文献０２０】  米国特許出願公開第２００４／００１８７１６号明細書
【特許文献０２１】  米国特許出願公開第２００４／００９６８４８号明細書
【特許文献０２２】  米国特許出願公開第２００４／０１１５６４０号明細書
【特許文献０２３】  米国特許出願公開第２００４／０１８０３５７号明細書
【特許文献０２４】  米国特許出願公開第２００４／０２２０１２９号明細書
【特許文献０２５】  米国特許出願公開第２００４／０２４８１７４号明細書
【特許文献０２６】  米国特許出願公開第２００４／０２５９２４７号明細書
【特許文献０２７】  米国特許出願公開第２００５／００１９９２７号明細書
【特許文献０２８】  米国特許出願公開第２００５／００４８５２９号明細書
【特許文献０２９】  米国特許出願公開第２００５／０１５９３８０号明細書
【特許文献０３０】  米国特許出願公開第２００５／０１８７１７４号明細書
【特許文献０３１】  米国特許出願公開第２００５／０１９７３１５号明細書
【特許文献０３２】  米国特許出願公開第２００５／０２２２０６１号明細書
【特許文献０３３】  米国特許出願公開第２００５／０２４６７９４号明細書
【特許文献０３４】  米国特許出願公開第２００６／０００３９１５号明細書
【特許文献０３５】  米国特許出願公開第２００６／００５１６３１号明細書
【特許文献０３６】  米国特許出願公開第２００６／００９４０３２号明細書
【特許文献０３７】  米国特許出願公開第２００６／０１８２７８３号明細書
【特許文献０３８】  米国特許出願公開第２００６／０２１７３３２号明細書
【特許文献０３９】  米国特許出願公開第２００６／０２２３７７０号明細書
【特許文献０４０】  米国特許出願公開第２００６／０２８６０７３号明細書
【特許文献０４１】  米国特許出願公開第２００６／０２９２１２０号明細書
【特許文献０４２】  米国特許出願公開第２００７／０００３５２３号明細書
【特許文献０４３】  米国特許出願公開第２００７／００３７７６０号明細書
【特許文献０４４】  米国特許出願公開第２００７／００３７７６２号明細書
【特許文献０４５】  米国特許出願公開第２００７／００３７７６１号明細書
【特許文献０４６】  米国特許出願公開第２００７／０１４９４７１号明細書
【特許文献０４７】  米国特許出願公開第２００７／０１７８０６８号明細書
【特許文献０４８】  米国特許出願公開第２００８／０１８８４３７号明細書
【特許文献０４９】  米国特許出願公開第２００９／００６１４７８号明細書
【特許文献０５０】  米国特許出願公開第２００９／０１０４２５９号明細書
【特許文献０５１】  米国特許出願公開第１２／６３６，０７５号明細書
【特許文献０５２】  米国特許第４，２３５，８７１号明細書
【特許文献０５３】  米国特許第４，３９４，４４８号明細書
【特許文献０５４】  米国特許第４，５０１，７２８号明細書
【特許文献０５５】  米国特許第４，６７０，３８８号明細書
【特許文献０５６】  米国特許第４，８３７，０２８号明細書
【特許文献０５７】  米国特許第４，９２０，０１６号明細書
【特許文献０５８】  米国特許第５，０１９，３６９号明細書
【特許文献０５９】  米国特許第５，１３９，９４１号明細書
【特許文献０６０】  米国特許第５，２５２，４７９号明細書
【特許文献０６１】  米国特許第５，３２２，９３３号明細書
【特許文献０６２】  米国特許第５，４９８，５２１号明細書
【特許文献０６３】  米国特許第５，５５０，２８９号明細書
【特許文献０６４】  米国特許第５，５８０，８５９号明細書
【特許文献０６５】  米国特許第５，５８８，９６１号明細書
【特許文献０６６】  米国特許第５，５８９，４６６号明細書
【特許文献０６７】  米国特許第５，６２４，８０３号明細書
【特許文献０６８】  米国特許第５，６３９，７３６号明細書
【特許文献０６９】  米国特許第５，６３９，８７２号明細書
【特許文献０７０】  米国特許第５，６６１，１３５号明細書
【特許文献０７１】  米国特許第５，６８３，９８６号明細書
【特許文献０７２】  米国特許第５，７１２，２５７号明細書
【特許文献０７３】  米国特許第５，７２８，０６８号明細書
【特許文献０７４】  米国特許第５，８０１，１５６号明細書
【特許文献０７５】  米国特許第５，８１４，６２０号明細書
【特許文献０７６】  米国特許第５，９０２，５９８号明細書
【特許文献０７７】  米国特許第６，０１５，８９４号明細書
【特許文献０７８】  米国特許第６，０２０，４６２号明細書
【特許文献０７９】  米国特許第６，０３７，３２９号明細書
【特許文献０８０】  米国特許第６，１２１，０００号明細書
【特許文献０８１】  米国特許第６，１５０，０９２号明細書
【特許文献０８２】  米国特許第６，２１９，５５７号明細書
【特許文献０８３】  米国特許第６，３３１，３１３号明細書
【特許文献０８４】  米国特許第６，３５５，２７１号明細書
【特許文献０８５】  米国特許第６，３７５，９７２号明細書
【特許文献０８６】  米国特許第６，４４３，１４５号明細書
【特許文献０８７】  米国特許第６，５０６，５５９号明細書
【特許文献０８８】  米国特許第６，８５２，５１０号明細書
【特許文献０８９】  米国特許第７，０５６，７０４号明細書
【特許文献０９０】  米国特許第７，０９０，８６４号明細書
【特許文献０９１】  米国特許第７，６７４，８９５号明細書
【特許文献０９２】  米国特許第７，７５０，１４３号明細書
【特許文献０９３】  加奈陀特許第２３５９１８０号明細書
【特許文献０９４】  欧州特許出願公開第０３０８０６６号明細書
【特許文献０９５】  欧州特許出願公開第１２２９１３４号明細書
【特許文献０９６】  欧州特許第１１４４６２３号明細書
【特許文献０９７】  欧州特許第１５７８９３３号明細書
【特許文献０９８】  イスラエル国特許出願公開第１６６２７４号明細書
【特許文献０９９】  ニュージーランド国特許第５３７８９３３号明細書
【特許文献１００】国際公開第１９９３／２４６４１号 
【特許文献１０１】国際公開第１９９４／０８０２６号 
【特許文献１０２】国際公開第１９９４／１３７８８号 
【特許文献１０３】国際公開第１９９４／２４２７４号 
【特許文献１０４】国際公開第１９９４／２９４６９号 
【特許文献１０５】国際公開第１９９５／３５３６７号 
【特許文献１０６】国際公開第１９９７／００９５７号 
【特許文献１０７】国際公開第１９９７／１８８５５号 
【特許文献１０８】国際公開第１９９７／２０５７９号
【特許文献１０９】国際公開第１９９８／１９８４７号
【特許文献１１０】国際公開第１９９８／２２１３２号
【特許文献１１１】国際公開第１９９８／４８００９号
【特許文献１１２】国際公開第１９９８／５６３６１号
【特許文献１１３】国際公開第１９９９／１２５７２号
【特許文献１１４】国際公開第１９９９／３２６１９号
【特許文献１１５】国際公開第２０００／０８１４１号
【特許文献１１６】国際公開第２０００／４４９１４号
【特許文献１１７】国際公開第２０００／６３３６４号
【特許文献１１８】国際公開第２００１／３６６４６号
【特許文献１１９】国際公開第２００１／５２９０４号
【特許文献１２０】国際公開第２００１／５７２０６号
【特許文献１２１】国際公開第２００１／６８８３６号
【特許文献１２２】国際公開第２００１／７７３５０号
【特許文献１２３】国際公開第２００１／８２９００号
【特許文献１２４】国際公開第２００１／８３７２９号
【特許文献１２５】国際公開第２００１／９８５２２号
【特許文献１２６】国際公開第２００２／０５５６９２号
【特許文献１２７】国際公開第２００２／０５５６９３号
【特許文献１２８】国際公開第２００２／０８２４２号
【特許文献１２９】国際公開第２００２／０８３１８４号
【特許文献１３０】国際公開第２００２／０８８３２０号
【特許文献１３１】国際公開第２００２／０９６９５７号
【特許文献１３２】国際公開第２００２／１１６６６号
【特許文献１３３】国際公開第２００３／００００１８号
【特許文献１３４】国際公開第２００３／０６６８０５号
【特許文献１３５】国際公開第２００３／０７０９１０号
【特許文献１３６】国際公開第２００３／０８７３６７号
【特許文献１３７】国際公開第２００３／０８７３６８号
【特許文献１３８】国際公開第２００３／０９９２９８号
【特許文献１３９】国際公開第２００４／００９７６９号
【特許文献１４０】国際公開第２００４／０１３３１０号
【特許文献１４１】国際公開第２００４／０６５５４６号
【特許文献１４２】国際公開第２００４／０９４６０６号
【特許文献１４３】国際公開第９５／０４１４２号
【特許文献１４４】国際公開第００／４４８９５号
【特許文献１４５】国際公開第０１／７５１６４号
【特許文献１４６】国際公開第０２／０９６９２７号
【特許文献１４７】国際公開第０２／４４３２１号
【特許文献１４８】国際公開第０３／０１２１０５号
【特許文献１４９】国際公開第０４／００９７６９号
【特許文献１５０】国際公開第０７／０６７９８１号
【特許文献１５１】国際公開第０７／１４６９５３号
【特許文献１５２】国際公開第０８／０３０９９６号
【特許文献１５３】国際公開第０８／１１０７７７号
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献０１】  ＡＣＨＥＡＭＰＯＮＧ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｒｉｍｏｎｉｄｉｎｅ  ｉｎｔｏ  Ａｎｔｅｒｉｏｒ  ａｎｄ  Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  Ｔｉｓｓｕｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｎｋｅｙ，Ｒａｂｂｉｔ，ａｎｄ  Ｒａｔ  Ｅｙｅｓ"，Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌ．ＩＳＭ  &  Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ（Ａｐｒｉｌ  １，２００２），３０（４）：４２１−４２９
【非特許文献０２】  ＡＤＡＭＩＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｐｒｅｖｅｎｔｓ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｉｓｃｈｅｍｉａ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｉｒｉｓ  Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  Ｎｏｎｈｕｍａｎ  Ｐｒｉｍａｔｅ，"Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌ．（Ｊａｎｕａｒｙ  １９９６），１１４（１）：６６−７１
【非特許文献０３】  ＡＤＤＩＳ−ＬＩＥＳＥＲ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｏｐｐｏｓｉｎｇ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｆａｃｔｏｒ  ５  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｆｉｂｒｏｓｉｓ"，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ａｕｇｕｓｔ  １，２００５），１７５（３）：１８９４−１９０２
【非特許文献０４】  ＡＧＡＭＩ，"ＲＮＡｉ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｕｓｅ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ"，  Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  １８，２００２），６（６）：８２９−８３４
【非特許文献０５】  ＡＧＲＡＷＡＬ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：  Ｉｓ  Ｉｔ  Ａｓ  Ｓｉｍｐｌｅ  Ａｓ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  Ｂａｓｅ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ？"，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｔｏｄａｙ  （Ｆｅｂｒｕａｒｙ  １，２０００），６（２）：７２−８１
【非特許文献０６】  ＡＬＥＸＩＯＮ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ，"Ａｌｅｘｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｉｔｉａｔｅｓ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｐｉｖｏｔａｌ  Ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  Ｅｃｕｌｉｚｕｍｍａｂ  Ｐｒｏｇｒａｍ  ｉｎ  Ｐａｒａｘｙｓｍａｌ  Ｎｏｃｔｕｒｎａｌ  Ｅｍｏｇｌｏｂｉｎｕｒｉａ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ"，Ｎｅｗｓ  ａｎｄ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ＠  ｗｗｗ．ａｌｅｘｉｏｎｐｈａｒｍ．ｃｏｍ．（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２３，２００４）
【非特許文献０７】  ＡＬＴＳＣＨＵＬ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ"，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  ５，  １９９０），２１５（３）：４０３−４１０
【非特許文献０８】  ＡＬＴＳＣＨＵＬ，  ｅｔ  ａｌ．，：  "Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ  ａｎｄ  ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴａ  Ｎｅｗ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａｂａｓｅ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｇｒａｍｓ"，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １，  １９９７），２５（１７）：３３８９−３４０２
【非特許文献０９】  ＡＭＡＲＺＧＵＩＯＵＩ，"Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｃｃｅｓｓａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｍＲＮＡ  ａｓ  ｔｏｏｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔａｒｇｅｔ  ｓｉｔｅｓ  ｆｏｒ  ｒｉｂｏｚｙｍｅｓ"，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １，  ２０００），２８（２１）：４１１３−４１２４
【非特許文献１０】  ＡＭＢＡＴＩ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｒａｎｓｓｃｌｅｒａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｒｅｔｉｎａ  ａｎｄ  Ｃｈｏｒｏｉｄ"，Ｐｒｏｇ：  Ｒｅｔｉｎ．Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．（Ｍａｒｃｈ  ２００２），２１（２）：１４５−１５１
【非特許文献１１】  ＡＭＥＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｎｏｎｐｐｔｉｄｅ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｎａｐｈｙｌａｔｏｘｉｎ  Ｃ３ａ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｔｈａｔ  Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｓ  Ａｎｔｉｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  Ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌｓ"，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ｍａｙ  １５，  ２００１），１６６（１０）：６３４１−６３４８
【非特許文献１２】  ＡＮＤＥＲＳＯＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａ  Ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ｌｏｃａｌ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｒｕｓｅｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ａｇｉｎｇ  Ｅｙｅ"，Ａｍ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２００２），１３４（３）：４１１−４３１
【非特許文献１３】  ＡＮＤＥＲＳＯＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ａｄｕｌｔ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｉｎａ"，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １９９９），４０（１３）：３３０５−３３１５
【非特許文献１４】  ＡＮＤＲＡ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｍｉｃｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  Ｃｏｂｒａ  Ｖｅｎｏｍ  Ｆａｃｔｏｒ"，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００２），３９（５−６）：３５７−３６５
【非特許文献１５】  ＡＳＡＨＡＲＡ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  Ｒａｂｂｉｔ  ｅｙｅ  ｂｙ  Ｉｏｎｔｏｐｈｏｒｅｓｉｓ：  Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  Ｒｅｐｏｒｔ"，  ＪＰＮ  Ｊ．ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．（Ｊａｎｕａｒｙ−Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２００１），４５（１）：３１−３９
【非特許文献１６】  ＡＶＧＥＲＯＰＯＵＬＯＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｎｅｗ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｇｌｉｏｍａｓ"，Ｔｈｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  （Ｊｕｎｅ  １９９９），４（３）：２０９−２２４
【非特許文献１７】  ＢＡＮＡＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｈｅ  Ｉｎｓ  ａｎｄ  Ｏｕｔｓ  ｏｆ  ＲＮＡｉ  ｉｎ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ"，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００４），５（５）：４４１−４５０
【非特許文献１８】  ＢＡＮＫＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｏｆ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  Ａｎｙｌｏｉｄ  β：  ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｏｆ  ｌｅａｒｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ｄｅｆｉｃｉｔｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  Ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ"，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．（Ｊｕｎｅ  １，２００１），２９７（３）：１１１３−１１２１
【非特許文献１９】  ＢＡＯ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃ５ａ  Ｐｒｏｍｏｔｅｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｌｕｐｕｓ  Ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ  ｗｈｉｃｈ  ｃａｎ  ｂｅ  Ｂｌｏｃｋｅｄ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ"，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ａｕｇｕｓｔ  ２００５），３５（８）：２４９６−２５０６
【非特許文献２０】  ＢＡＲＴＺ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｉｇｈ−Ｔｉｔｅｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｖｉｒｕｓ  Ｔｙｐｅ  １  Ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｖｅｓｉｃｕｌａｒ  Ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ"，Ｍｅｔｈｏｄｓ  （Ａｕｇｕｓｔ  １，  １９９７），１２（４）：３３７−３４２
【非特許文献２１】  ＢＡＳＳ，"Ｔｈｅ  Ｓｈｏｒｔ  Ａｎｓｗｅｒ"，Ｎａｔｕｒｅ  （Ｍａｙ  ２４，  ２００１），４１１：４２８−４２９
【非特許文献２２】  ＢＡＴＥＳ  ｅｔ  ａｌ．，"ＶＥＧＦ１６５ｂ，ａｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｓｐｌｉｃｅ  Ｖａｒｉａｎｔ  ｏｆ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ，  Ｉｓ  Ｄｏｗｎ−Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  Ｒｅｎａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ"，Ｊｕｌｙ  １５，  ２００２，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ６２：４１２３−４１３１
【非特許文献２３】  ＢＥＬＬＥＴＴＩ  ｅｔ  ａｌ．，"Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  Ｔｈｙｒｏｉｄ  Ｔｕｍｏｒ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅｓ  ｂｙ  Ｓｅｎｓｅ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｇｅｎｅ，  １９９９，  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，  １８：４８６０−４８６９
【非特許文献２４】  ＢＥＮＮＥＴＴ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｈｕｍｏｒａｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ａｆｔｅｒ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｌ−ｄｅｌｅｔｅｄ  Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｅｓ：  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｐｒｉｖｉｌｅｇｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｕｂｒｅｔｉｎａｌ  Ｓｐａｃｅ"，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １０，１９９６），７（１４）：１７６３−１７６９（Ａｂｓｔｒａｃｔ）
【非特許文献２５】  ＢＥＲＫＨＯＵＴ，"Ａｎ  Ｅｙｅ  Ｏｐｅｎｅｒ  ｆｏｒ  ＲＮＡｉ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  ２００８，  Ｊ．Ｆｏｒｍｏｓ  Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．，  １０７（１０）：７４９−７５０
【非特許文献２６】  ＢＥＲＮＳＴＥＩＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ａ  ｂｉｄｅｎｔａｔｅ  ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ  ｓｔｅｐ  ｏｆ  ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ"，Ｎａｔｕｒｅ．（Ｊａｎｕａｒｙ  １８，  ２００１），４０９（６８１８）：３６３−３６６
【非特許文献２７】  ＢＬＩＤＮＥＲ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｌｅｓｉｏｎ  Ｓｉｚｅ，  Ｖｉｓｕａｌ  Ａｃｕｉｔｙ，  ａｎｄ  Ｌｅｓｉｏｎ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｎ  Ｖｉｓｕａｌ  Ａｃｕｉｔｙ  Ｃｈａｎｇｅ  ｗｉｔｈ  ａｎｄ  ｗｉｔｈｏｕｔ  Ｖｅｒｔｅｐｏｒｆｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｔｏ  Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：  ＴＡＰ  ａｎｄ  ＶＩＰ  Ｒｅｐｏｒｔ  Ｎｏ．１"，Ａｍ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌ．（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２００３），１３６（３）：４０７−４１８
【非特許文献２８】  ＢＬＯＭ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｃ４ｂ−ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｆｒｉｅｎｄ  ｏｒ  Ｆｏｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ？"，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ａｐｒｉｌ  ２００４），４０（１８）：１３３３−１３４６
【非特許文献２９】  ＢＯＡＤＯ，"Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ"，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（Ｊｕｌｙ  １９９５），１５（１−３）：７３−１０７
【非特許文献３０】  ＢＯＡＤＯ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｂｒａｉｎ  ｆｏｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ＡＩＤＳ"，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １９９８），８７（１１）：１３０８−１３１５
【非特許文献３１】  ＢＯＫ，"Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ａｎ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  ｉｎ  Ａｇｅ−Related  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｇａｉｎｓ  Ｎｅｗ  Ｓｕｐｐｏｒｔ"，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ（Ｍａｙ  １７，  ２００５），１０２（２０）：７０５３−７０５４
【非特許文献３２】  ＢＯＮＩＬＨＡ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｅｚｒｉｎ  Ｐｒｏｍｏｔｅｓ  Ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  Ａｐｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｖｉｌｌｉ  ａｎｄ  Ｂａｓａｌ  Ｉｎｆｏｌｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｐｉｇｍｅｎｔ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ"，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２７，  １９９９），１４７（７）：１５３３−１５４８
【非特許文献３３】  ＢＯＯＣＯＣＫ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｉｔｓ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｉｔ  ａｎｄ  ＫＤＲ  ｉｎ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ"，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．（Ａｐｒｉｌ  ５，  １９９５），８（７）：５０６−５１６
【非特許文献３４】  ＢＯＲＡ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ａｔｔａｃｋ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  ｉｎ  Ｌａｓｅｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ"，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．（Ｊａｎｕａｒｙ  １，  ２００５），１７４（１）：４９１−４９７
【非特許文献３５】  ＢＲＡＮＴＬ，"Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ−ＲＮＡ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ＲＮＡ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ"，２００２，  Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，  １５７５：１５−２５
【非特許文献３６】  ＢＲＥＳＳＬＥＲ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｖｅｒｔｅｐｏｒｆｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｓｕｂｆｏｖｅａｌ  Ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ"，Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００２），１２０（１１）：１４４３−１４５４
【非特許文献３７】  ＢＲＵＭＭＥＬＫＡＭＰ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  Ｓｔａｂｌｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｈｏｒｔ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡｓ  ｉｎ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ"，  Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ａｐｒｉｌ  １９，  ２００２），２９６（５５６７）：５５０−５５３
【非特許文献３８】  ＢＵＬＬＡＲＤ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｄｉｒｅｃｔ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  Ｎｉｃｋ−Ｊｏｉｎｉｎｇ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｌｉｇａｓｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ  Ｔ４"，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．（Ａｕｇｕｓｔ  １５，  ２００６），３９８（１）：１３５−１４４
【非特許文献３９】  ＢＵＳＴＩＮ，"Ａｂｓｏｌｕｔｅ  Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍＲＮＡ  Ｕｓｉｎｇ  Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙｓ"，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２０００），２５（２）：１６９−１９３
【非特許文献４０】  ＣＡＩ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａ  Ｄｉｒｅｃｔ  Ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ｃ１  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｉｎ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ａｄｈｅｓｉｏｎ"，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ｍａｙ  １５，  ２００５），１７４（１０）：６４６２−６４６６
【非特許文献４１】  ＣＡＭＰＯＣＨＩＡＲＯ，"Ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｒｅｔｉｎａｌ  ａｎｄ  ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  ｄｉｓｅａｓｅｓ"，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．（Ｊｕｎｅ  ２００２），２（５）：５３７−５４４
【非特許文献４２】  ＣＡＰＥＡＮＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａ  ｃ−ｍｙｃ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｐｉｇｍｅｎｔ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ"，  Ｅｘｐ．Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．（Ｍａｙ  １９９８），６６（５）：５８１−５８９
【非特許文献４３】  ＣＡＰＬＥＮ，"Ａ  ｎｅｗ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ"，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（Ｆｅｂｒｕａｒｙ  １，  ２００２），２０（２）：４９−５１
【非特許文献４４】  ＣＡＰＬＥＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｓｍａｌｌ  ｄｏｕｂｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄ  ＲＮＡｓ  ｉｎ  ｉｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ  ａｎｄ  ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ  ｓｙｓｔｅｍｓ"，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ａｕｇｕｓｔ  １４，  ２００１），９８（１７）：９７４２−９７４７
【非特許文献４５】  ＣＡＰＬＥＮ，"Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Progress  ａｎｄ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔ．Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ"，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  （Ａｕｇｕｓｔ  ２００４），１１（１６）：１２４１−１２４８
【非特許文献４６】  ＣＡＰＬＥＮ，"ＲＮＡｉ  ａｓ  ａ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ａｐｐｒｏａｃｈ"，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．（Ｊｕｌｙ  ２００３），３（４）：５７５−５８６
【非特許文献４７】  ＣＡＲＬＳＯＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｅｒｉｎｅｕｒｉｕｍ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ （Ｄｉｐｔｅｒａ：  Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌｉｄａｅ）  Ｅｍｂｒｙｏ  ａｎｄ  Ｉｔｓ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｂｌｏｏｄ−Ｂｒａｉｎ／Ｎｅｒｖｅ  Ｂａｒｒｉｅｒ"，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｉｎｓｅｃｔ  Ｍｏｒｐｈｏｌ．Ｅｍｂｒｙｏｌ．（Ａｐｒｉｌ  １９９８），２７（２）：６１−６６
【非特許文献４８】  ＣＨＡＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ"，ＣＸＣＲ４  ａｎｄ  ＣＸＣＲ５，  ａｎｄ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ，  ＢＬＣ  ａｎｄ  ＳＤＦ−１，  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｙｅｓ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ  ｌｙｍｐｈｏｍａ"，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  （Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２００３），１１０（２）：４２１−４２６
【非特許文献４９】  ＣＨＥＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｙｐｅｒａｃｕｔｅ  Ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｉｇ−ｔｏ−Ｍｏｎｋｅｙ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ  ｂｙ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｃｏｂｒａ  Ｖｅｎｏｍ  Ｆａｃｔｏｒ"，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ−Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２００１），３３（７−８）：３８５７−３８５８
【非特許文献５０】  ＣＨＩＲＩＬＡ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ"，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  （Ｊａｎｕａｒｙ  ２００２），２３（２）：３２１−２４２
【非特許文献５１】  ＣＨＯ，"Ｓｍａｌｌ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ＴＬＲ３  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  Ｌｙｍｐｈａｔｉｃ  Ｖｅｓｓｅｌ  Ｇｒｏｗｔｈ"，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  （Ａｐｒｉｌ  ２８，  ２００９），１０６（１７）：７１３７−７１４２
【非特許文献５２】  ＣＯＢＵＲＮ，  ｅｔ  ａｌ．，  ｍＲＮＡｓ：  ａ  Ｎｅｗ  Ｗａｖｅ  ｏｆ  ＲＮＡ−Ｂａｓｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  Ｊ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．（Ａｐｒｉｌ  ２００３），５１（４）：７５３−７５６
【非特許文献５３】  ＣＯＬＬＩＮＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  β−ｓｕｂｕｎｉｔ  ｏｆ  Ｒｏｄ  Ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｃＧＭＰ  Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ：Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｒｅｔｉｎａｌ  ｃＤＮＡ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｒａｉｎ"，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  （Ｊｕｌｙ  １９９２），１３（３）：６９８−７０４
【非特許文献５４】  ＣＯＮＬＥＹ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  Ｇｅｎｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｕｇｇｅｓｔｓ  ａ  Ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ｆａｔｔｙ  Ａｃｉｄ  Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｅｔｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌｏｐａｔｈｙ"，Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ．（Ｊｕｌｙ  １５，  ２００５），１４（１４）：１９９１−１９９２
【非特許文献５５】  ＣＲＯＯＫＥ，"Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：  Ｔｈｅ  Ｅｎｄ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｅｇｉｎｎｉｎｇ"，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．（２０００），３１３：３−４５
【非特許文献５６】  ＤＡＩＧＥＲ，"Ｗａｓ  ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔ  Ｗｏｒｔｈ  ｔｈｅ  Ｅｆｆｏｒｔ？"，Ｓｃｉｅｎｃｅ  （Ａｐｒｉｌ  １５，  ２００５），３０８（５７２０）：３６２−３６４
【非特許文献５７】  ＤＡＶＩＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｈｅ  Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｅｙｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｓｔｕｄｙ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｓｃａｌｅ  ｆｏｒ  Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ"，ＡＲＥＤＳ  Ｒｅｐｏｒｔ  Ｎｏ．１７，  Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００５），１２３（１１）：１４８４−１４９８
【非特許文献５８】  ＤＥＯＮＡＲＡＩＮ，"Ｌｉｇａｎｄ−Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ"，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔ．（Ｊａｎｕａｒｙ  １９９８），８（１）５３−６９
【非特許文献５９】  ＤＥＴＲＩＣＫ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｄｅｌ  ｂｙ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ"，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ，  Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．（Ｊａｎｕａｒｙ  ２００１），４２（１）：１６３−１６９
【非特許文献６０】  ＤＥＶＲＯＥ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ−ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ  ｓｉＲＮＡ，  ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．（Ａｕｇｕｓｔ  ２８，  ２００２），２：１−５
【非特許文献６１】  ＤＯＲＮＢＵＲＧ，"Ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓｉｓ  Ｖｉｒｕｓｅｓ  ａｎｄ  Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｖｅｃｔｏｒｓ"，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐ．（Ｊｕｌｙ  １９９５），２（５）：３０１−３１０
【非特許文献６２】  ＤＯＲＳＥＴＴ，ｅｔ  ａｌ．，"ｓｉＲＮＡｓ：  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ"，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．（Ａｐｒｉｌ  ２００４），３（４）：３１８−３２９
【非特許文献６３】  ＤＯＷＮＷＡＲＤ，"Ｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ"，ＲＮＡ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ，  Ｍａｙ  ２２，  ２００４，  ＢＭＪ，  ３２８：１２４５−１２４８
【非特許文献６４】  ＤＲＡＧＵＮ  ｅｔ  ａｌ．，"ＩＣＡＭ−１  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｄｅｓｏｘｙｎｕｃｌｉｏｔｉｄｅｓ  Ｐｒｅｖｅｎｔ  Ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  Ｉｎｊｕｒｙ  ａｎｄ  Ｅｎｈａｎｃｅ  Ｉｍｍｅｄｉａｔｅ  Ｇｒａｆｔ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｒｅｎａｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ"，Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．（１９９８），５４（２）：５９０−６０２
【非特許文献６５】  ＤＲＹＪＡ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ａ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ｏｆ  ＴＨＥ  ｒｏｄ  ｃＧＭＰ−ｇａｔｅｄ  ｃｈａｎｎｅｌ  ｉｎ  ａｕｔｏｓｏｍａｌ  ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ  ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ"，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  （Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２４，  １９９５），９２（２２）：１０１７７−１０１８１
【非特許文献６６】  ＤＹＥＲ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｓｐｉｎａｌ  Ｃｏｒｄ"，Ｓｐｉｎａｌ  Ｃｏｒｄ  （Ｊｕｌｙ  １，  ２００５），４３（７）：４１７−４２５
【非特許文献６７】  ＤＺＩＴＯＹＥＶＡ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｉｎｔｒａ−ａｂｄｏｍｉｎａｌ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｏｕｂｌｅ  ｓｔｒａｎｄｅｄ  ＲＮＡ  ｉｎｔｏ  ａｎｅｓｔｈｅｔｉｚｅｄ  ａｄｕｌｔ  Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｔｒｉｇｇｅｒｓ  ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ"，Ｍｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  （Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００１），６（６）：６６５−６７０
【非特許文献６８】  ＥＢＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＧＳＮ−ＡＤＹ９０８３０  −  Ｒｅｔｒｉｅｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｏｎｌｉｎｅ  ｄａｔａｂａｓｅ  ６／１６／０５，  ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡ  ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３８６８，  ＸＰ００２４６８０９１
【非特許文献６９】  ＥＢＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＧＳＮ−ＡＤＹ９０８３０  −  Ｒｅｔｒｉｅｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｏｎｌｉｎｅ  ｄａｔａｂａｓｅ  ６／１６／０５，  ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡ  ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３８６７，  ＸＰ００２４６８０９０
【非特許文献７０】  ＥＤＷＡＲＤＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｈ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ａｎｄ  Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ"，Ｓｃｉｅｎｃｅ  （Ａｐｒｉｌ  １５，  ２００５），３０８（５７２０）：４２１−４２４
【非特許文献７１】  ＥＧＬＩＴＩＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ａｎａｔｏｍｙ  ｏｆ  ｓｉＲＮＡｓ  ｆｏｒ  Ｍｅｄｉａｔｉｎｇ  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ＲＮＡｉ  ｉｎ  Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ  Ｅｍｂｒｙｏ  Ｌｙｓａｔｅ"，ＥＭＢＯ  Ｊ．（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ３，  ２００１），２０（２３）：６８７７−６８８８
【非特許文献７２】  ＥＬＢＡＳＨＩＲ  ｅｔ  ａｌ．，"Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ｓｍａｌｌ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡｓ，  ２００２，  Ｍｅｔｈｏｄｓ，  ２６：１９９−２１３
【非特許文献７３】  ＥＬＢＡＳＨＩＲ  ｅｔ  ａｌ．，"Ｄｕｐｌｅｘｅｓ  ｏｆ  ２１−Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ＲＮＡｓ  Ｍｅｄｉａｔｅ  ＲＮＡ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ"，Ｍａｙ  ２４，  ２００１，  Ｎａｔｕｒｅ，  ４１１：４９４−４９８
【非特許文献７４】  ＥＬＢＡＳＨＩＲ  ｅｔ  ａｌ．，"Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ａｎａｔｏｍｙ  ｏｆ  ｓｉＲＮＡｓ  ｆｏｒ  Ｍｅｄｉａｔｉｎｇ  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ＲＮＡｉ  ｉｎ  Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ  Ｅｍｂｒｙｏ  Ｌｙｓａｔｅ"，ＥＭＢＯ  Ｊ．（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ３，  ２００１），２０（２３）：６８７７−６８８８
【非特許文献７５】  ＥＬＢＡＳＨＩＲ  ｅｔ  ａｌ．，"ＲＮＡ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｉｓ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ２１−  ａｎｄ  ２２−  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ＲＮＡｓ"，２００１，  Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，  １５：１８８−２００
【非特許文献７６】  ＥＮＧＳＴＲＯＭ  ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ３  ｉｓ  ａ  Ｒｉｓｋ  Ｆａｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ：  ａ  Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ−Ｂａｓｅｄ  Ｃｏｈｏｒｔ  Ｓｔｕｄｙ"，Ｄｉａｂｅｔｅｓ（Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２００５），５４（２）：５７０−５７５
【非特許文献７７】  ＥＰＳＴＥＩＮ，"Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ"，Ｍｅｔｈｏｄｓ  （Ｊａｎｕａｒｙ  １９９８），１４（１）：２１−３３
【非特許文献７８】  ＥＲＩＣＫＳＯＮ，"ＲＮＡｉ  Ｒｅｖｓ  Ｕｐ"，Ｓｔａｒｔ−Ｕｐ  Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｖｅｎｔｕｒｅｓ  （Ａｒｔ．＃２００２９００１６８）  （Ｏｃｔｏｂｅｒ  １，  ２００２），ｐｐ．１−１２
【非特許文献７９】  ＦＡＲ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｈｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｓｉＲＮＡ  In  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ  In  Ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｔａｒｇｅｔ  Ａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ：ａ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｗｉｔｈ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ"，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．（Ａｕｇｕｓｔ  １，  ２００３），３１（１５）：４４１７−４４２４
【非特許文献８０】  ＦＩＮＥＨＯＵＴ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｓｏｆｏｒｍｓ  ｉｎ  ＣＳＦ  ａｓ  Ｐｏｓｓｉｂｌｅ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ"，Ｄｉｓ  Ｍａｒｋｅｒｓ  （Ｍａｙ  １６，  ２００５），２１（２）：９３−１０１  （Ａｂｓｔｒａｃｔ）
【非特許文献８１】  ＦＩＲＥ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｂｙ  Ｄｏｕｂｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄ  ＲＮＡ  ｉｎ  Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  Ｅｌｅｇａｎｓ"，Ｎａｔｕｒｅ  （Ｆｅｂｒｕａｒｙ  １９，  １９９８，  ３９１（６６６９）：８０６−８１１
【非特許文献８２】  ＦＩＳＨＥＲ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｄｅｎｏ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｖｉｒｕｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｌｅａｄｉｎｇ−Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ"，Ｊ．Ｖｉｒａｌ．（Ｊａｎｕａｒｙ  １９９６），７０（１）：５２０−５３２
【非特許文献８３】  ＦＪＯＳＥ，ｅｔ  ａｌ．，"ＲＮＡｉ  ａｎｄ  ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ：  ｆｒｏｍ  Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｔｏ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ"，Ｂｉｒｔｈ  Ｄｅｆｅｃｔｓ  Ｒｅｓ．（Ｊｕｎｅ  ２００６），７８（２）：  １５０−１７１
【非特許文献８４】  ＦＵＪＩＴＡ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｓ  Ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ  Ｉｎｊｕｒｙｉｎ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｒａｔｓ"，Ｎｅｐｈｒｏｎ  （Ｆｅｂｒｕａｒｙ  １９９９），８１（２）：２０８−２１４
【非特許文献８５】  ＦＵＮＧ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ，  Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ，  ａｎｄ  Ｐｌａｔｅｌｅｔ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｂｙ  ａｎ  Ａｎｔｉ−Ｆａｃｔｏｒ  Ｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  Ｓｉｍｕｌａｔｅｄ  Ｃａｒｄｉｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｂｙｐａｓｓ  Ｃｉｒｃｕｉｔｓ"，Ｊ．Ｔｈｏｒａｃ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．（Ｊｕｌｙ  ２００１），１２２（１）：１１３−１２２
【非特許文献８６】  ＧＡＢＩＺＯＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ  Ｗｉｔｈ  Ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ｉｎ  Ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｕｐｔａｋｅ  ｂｙ  Ｔｕｍｏｒｓ"，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  （Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １９８８），８５（１８）：６９４９−６９５３
【非特許文献８７】  ＧＡＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｄｏｕｂｌｅ−Ｓｔｒａｎｄｅｄ  ＲＮＡ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｎａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅｓ"，Ｐｒｏｇｒａｍ  Ｎｏ．７７２，１０，２００１  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｐｌａｎｎｅｒ．Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ  （Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １４，  ２００１）（Ａｂｓｔｒａｃｔ）
【非特許文献８８】  ＧＡＮＥＳＨ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｖａｃｃｉｎｉａ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  ｗｉｔｈ  Ｈｅｐａｒｉｎ  ａｎｄ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ"，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  （Ｊｕｎｅ  １５，  ２００４），１０１（２４）：８９２４−８９２９
【非特許文献８９】  ＧＡＲＤＬＩＫ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｖｅｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ"，Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．Ｍｏｎｉｔ．（Ａｐｒｉｌ  ２００５），１１（４）：ＲＡ１１０−１２１
【非特許文献９０】  ＧＡＲＲＥＴＴ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｉｎ  Ｖｉｔｖｏ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ｔｏ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｓａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｙｅ"，Ｊ  Ｇｅｎｅ  Ｍｅｄ（Ｊｕｌｙ−Ａｕｇｕｓｔ  ２００１），３（４）：３７３−３８３
【非特許文献９１】  ＧＥＮＢＡＮＫ  "Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＡＪ２４５４４５"，１９９９  （Ｅｉｎｓｐａｎｉｅｒ  −Ｆｌｔｌ）
【非特許文献９２】  ＧＯＭＰＥＬＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ：  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｄｏｃｕｍｅｎｔ"，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ｍａｒｃｈ  ２００５），１３９（３）：３７９−３９４
【非特許文献９３】  ＧＯＮＣＡＬＶＥＳ，"Ａ  ｃｏｎｃｉｓｅ  ｐｅｅｒ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ，  ｉｎｉｔｉａｌ  ｔｈｏｕｇｈｔｓ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ"，ＢｉｏＥｓｓａｙｓ  （Ｍａｙ  ２００５），２７（５）：５０６−５１７
【非特許文献９４】  ＧＲＩＳＨＯＫ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  Ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ＲＮＡ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｍａｌｌ  Ｔｅｍｐｏｒａｌ  ＲＮＡｓ  ｔｈａｔ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｔｉｍｉｎｇ"，  Ｃｅｌｌ  （Ｊｕｌｙ  １３，  ２００１），１０６：２３−３４
【非特許文献９５】  ＧＲＯＯＴＨＵＩＳ，"Ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ａｎｄ  ｂｌｏｏｄ−ｔｕｍｏｒ  ｂａｒｒｉｅｒｓ：  ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ"，Ｎｅｕｒｏ  Ｏｎｃｏｌ．（Ｊａｎｕａｒｙ  ２０００），２（１）：４５−５９
【非特許文献９６】  ＧＵＯ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｃ５Ａ  ｉｎ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ"，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００５），２３：８２１−８５２
【非特許文献９７】  ＨＡＧＥＭＡＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａ  ｃｏｍｍｏｎ  ｈａｐｌｏｔｙｐｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｇｅｎｅ  ｆａｃｔｏｒ  Ｈ（ＨＦＩ／ＣＦＨ）  ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｅｓ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ  ｔｏ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ"，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  （Ｍａｙ  １７，  ２００５），１０２（２０）：７２２７−７２３２
【非特許文献９８】  ＨＡＧＥＭＡＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａｎ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓ  ｔｈａｔ  ｃｏｎｓｉｄｅｒｓ  Ｄｒｕｓｅｎ  ａｓ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ａｔ  ｔｈｅ  ＲＰＥ−Ｂｒｕｃｈ'ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  ｉｎ  Ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ"，Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００１），２０（６）：７０５−７３２
【非特許文献９９】  ＨＡＧＥＭＡＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｒｕｓｅｎ  ａｓ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｓｕｂｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ"，Ｍｏｌ．Ｖｉｓ．（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ３，  １９９９），５：２８−３７
【非特許文献１００】  ＨＡＩＮＥＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｈ  Ｖａｒｉａｎｔ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｔｈｅ  Ｒｉｓｋ  ｏｆ  Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ"，Ｓｃｉｅｎｃｅ  （Ａｐｒｉｌ  １５，  ２００５），３０８（５７２０）：４１９−４２１
【非特許文献１０１】  ＨＡＬＳＴＥＡＤ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  Ａｂｒｏｇａｔｅｓ  Ｔｅｒｍｉｎａｌ  Ｉｎｊｕｒｙ  ｉｎ  Ｍｉｌｌｅｒ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｙｄｎｒｏｍｅ"，Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ．（Ａｕｇｕｓｔ  ２００５），５８（２）：２０３−２１０
【非特許文献１０２】  ＨＡＭＩＬＴＯＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａ  Ｓｐｅｃｉｅｓ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ＲＮＡ  ｉｎ  ｐｏｓｔｔｒａｎｓｃｉｐｔｉｏｎａｌ  ｇｅｎｅ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｉｎ  ｐｌａｎｔｓ"，Ｓｃｉｅｎｃｅ  （Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２９，  １９９９），２８６（５４４１）：  ９５０−９５２
【非特許文献１０３】  ＨＡＭＭＯＮＤ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｃｉｐｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｅ  Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｂｙ  Ｄｏｕｂｌｅ−Ｓｔｒａｎｄｅｄ  ＲＮＡ"，ＮＡＴ  Ｒｅｖ  Ｇｅｎｅｔ  （Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２００１），２（２）：１１０−１１９
【非特許文献１０４】  ＨＡＲＢＯＲＴＨ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｓｅｌｆ  Ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｏｆ  ＮｕＭＡ  ｍｕｌｔｉａｒｍ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ  ａｓ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｕｎｉｔｓ  ｏｆ  ａ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｌａｔｔｉｃｅ"，ＥＭＢＯ  Ｊ．（Ｍａｒｃｈ  １５，  １９９９），１８（６）：１６８９−１７００
【非特許文献１０５】  ＨＡＲＢＯＲＴＨ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｓｅｑｕｅｎｃｅ，  Ｃｈｅｍｉｃａｌ，  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｍａｌｌ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡｓ  ａｎｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｈａｉｒｐｉｎ  ＲＮＡｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ，  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．（Ａｐｒｉｌ  ２００３），１３（２）：８３−１０５
【非特許文献１０６】  ＨＡＲＰＥＲ，ｅｔ  ａｌ．，"ＶＥＧＦ−Ａ  Ｓｐｌｉｃｉｎｇ：  Ｔｈｅ  Ｋｅｙ  ｔｏ  Ａｎｔｉ−Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ？"，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  （Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００８），８（１１）：８８０−８８７
【非特許文献１０７】  ＨＡＲＴ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｇｅｎｏｔｙｐｅ−Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｏｕｓｅ  Ｐｄｅｏｂ  Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ"，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍａｓ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２００５），４６（９）：３４４３−３４５０
【非特許文献１０８】  ＨＡＲＴ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ．Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ"，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ｊｕｎｅ  ２００４），４１（２−３）：１６５−１７１
【非特許文献１０９】  ＨＡＳＡＮ  ｅｔ  ａｌ．，"ＶＥＧＦ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ"，２００１，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  １（４）：７０３−７１８
【非特許文献１１０】  ＨＥ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｘｉｍａｌ  Ｔｕｂｕｌｅ  Ｐｒｅｖｅｎｔ  Ｉｎｊｕｒｙ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｎｅｐｈｒｏｔｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ａｎｄ  Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ  ａ  Ｋｅｙ  Ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ｃ５ｂ−９"，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ｍａｙ  １，２００５），１７４（９）：５７５０−５７５７
【非特許文献１１１】  ＨＩＬＬＥＢＲＡＮＤＴ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｆａｃｔｏｒ  ５  ｉｓ  ａ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｔｒａｉｔ  ｇｅｎｅ  ｔｈａｔ  ｍｏｄｉｆｉｅｓ  ｌｉｖｅｒ  ｆｉｂｒｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎｓ"，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ  （Ａｕｇｕｓｔ  ２００５），３７（８）：８３５−８４３
【非特許文献１１２】  ＨＯＤＧＥＴＴＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｍｙｏｂｌａｓｔ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ：  Ｄｏｎｏｒ  ｍｙｏｂｌａｓｔ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｓ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｏｓｔ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ３  ｕｓｉｎｇ  ｃｏｂｒａ  ｖｅｎｏｍ  ｆａｃｔｏｒ，  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｂｓｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｃ５"，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（Ｊｕｎｅ  ２００１），７９（３）：２３１−２３９
【非特許文献１１３】  ＨＯＥＧ，  ｅｔ  ａｌ．，    "Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａ  ＨＩＦ−１  Ａｌｐｈａ−Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｌｏｃｋｅｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ"，ＥＣＪ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ  （Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２４，  ２００３），ｐｐ．Ｓ２１２−Ｓ２１３  （Ａｂｓｔｒａｃｔ）
【非特許文献１１４】  ＨＯＬＡＳＨ，ｅｔ  ａｌ．，"ＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ：  Ａ  ＶＥＧＦ  ｂｌｏｃｋｅｒ  ｗｉｔｈ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｅｃｔｓ"，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  （Ａｕｇｕｓｔ  ２０，  ２００２），９９（１７）：１１３９３−１１３９８
【非特許文献１１５】  ＨＯＬＥＲＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｈｅ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｐａｔｈｗａｙ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ"，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ｊｕｎｅ  ２００４），４１（２−３）：１４７−１５２
【非特許文献１１６】  ＨＯＵＣＫ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｈｅ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｆａｍｉｌｙ： Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｆｏｕｒｔｈ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｐｅｃｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  Ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｏｆ  ＲＮＡ"，１９９１，  Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏ．，  ５（１２）：１８０６−１８１４
【非特許文献１１７】  ＨＵＮＴ  ｅｔ  ａｌ．，"Ｖｉｔｒｅｏｕｓ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｐｉｇｍｅｎｔ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌｓ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ  Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＦＧＦ−２"，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  １９９８），３９（１１）：２１１１−２１２０
【非特許文献１１８】  ＪＡＫＯＢＳＤＯＴＴＩＲ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｇｅｎｅｓ  ｆｏｒ  Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌｏｐａｔｈｙ  ｏｎ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  １０ｑ２６"，Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ．（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２００５），７７（３）：３８９−４０７
【非特許文献１１９】  ＪＥＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  ＲＮＡ：  Ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｏｐｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ"，Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  （２０００），１８（５）：３０７−３１９
【非特許文献１２０】  ＪＨＡ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｖａｃｃｉｎｉａ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ：  Ｍｕｌｔｉ−ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｗｏｎｄｅｒ  ｄｒｕｇ"，Ｊ  Ｂｉｏｓｃｉ．（Ａｐｒｉｌ  ２００３），２８（３）：２６５−２７１
【非特許文献１２１】  ＪＯＨＮＳＯＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｓｅｎ  Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ，  Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．（Ａｐｒｉｌ  ２０００），７０（４）  ：４４１−４４９
【非特許文献１２２】  ＪＯＨＮＳＯＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｓｅｎ  Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｇｅ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ"，  Ｅｘｐ，  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２００１），７３（６）：８８７−８９６
【非特許文献１２３】  ＪＯＨＮＳＯＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｈｅ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓ  Ａ６−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｓ  ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ  ａｔ  ｓｉｔｅｓ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  ｄｅｐｏｓｉｔｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ"，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  （Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ３，  ２００２），９９（１８）：１１８３０−１１８３５
【非特許文献１２４】  ＫＡＮＧ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｔｈｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｙｐｏｘｉａ−Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  Ｆａｃｔｏｒ−１  Ａｌｐｈａ  Ａｌｔｅｒｓ  Ｈｙｐｏｘｉａ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ"，Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  ｆｒｏｍ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｓｅｓｓｉｏｎｓ  ２００１  ＩＩ−５７：２７４  （Ａｂｓｔｒａｃｔ）
【非特許文献１２５】  ＫＡＳＳＣＨＡＵ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａ  Ｃｏｕｎｔｅｒｄｅｆｅｎｓｉｖｅ  ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｏｆ  Ｐｌａｎｔ  Ｖｉｒｕｓｅｓ：  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐｏｓｔｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｅ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ"，Ｃｅｌｌ  （Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １３，  １９９８），９５（４）：４６１−４７０
【非特許文献１２６】  ＫＡＴＺ，  ｅｔ  ａｌ．，  ＩＣＡＭ−１  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｉｍｐｒｏｖｅｓ  Ｉｓｌｅｔ  Ａｌｌｏｇｒａｆｔ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ"，    Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  （Ｎｏｖ−Ｄｅｃ  ２０００），９（６）：８１７−８２８
【非特許文献１２７】  ＫＩＭ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｏｔｅｎｔ  ＶＥＧＦ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｃａｕｓｅｓ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｏｐｔｅｄ  ｖｅｓｓｅｌｓ  ｉｎ  ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ"，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  ＵＳＡ．（Ａｕｇｕｓｔ  ２０，  ２００２），９９（１７）：１１３９９−１１４０４
【非特許文献１２８】  ＫＬＥＩＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｈ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ"，Ｓｃｉｅｎｃｅ  （Ａｐｒｉｌ  １５，  ２００５），３０８（５７２０）：３８５−３８９
【非特許文献１２９】  ＫＬＥＩＮＭＡＮ  ｅｔ  ａｌ．，"Ｓｅｑｕｅｎｃｅ−  ａｎｄ  Ｔａｒｇｅｔ−Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｓｉＲＮＡ  Ｖｉａ  ＴＬＲ３，  Ａｐｒｉｌ  ３，  ２００８，  Ｎａｔｕｒｅ，  ４５２：５９１−５９８
【非特許文献１３０】  ＫＮＩＧＨＴ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａ  Ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ＲＮａｓｅ  ＩＩＩ  Ｅｎｚｙｍｅ  ＤＣＲ−１  ｉｎ  ＲＮＡ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｇｅｒｍ  Ｌｉｎｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２１，  ２００１），２９３（５５３８）：２２６９−２２７１
【非特許文献１３１】  ＫＯＣＩＯＫ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＲＡＳ−ＧＴＰａｓｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  （ＧＡＰ）−Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  （Ｇ３ＢＰ），ｉｎ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ  ＲＰＥ  ｃｅｌｌｓ，  Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅ．（Ａｕｇｕｓｔ  １，  １９９９），７４（２）：１９４−２０１
【非特許文献１３２】  ＫＯＣＩＯＫ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｖｉｔｒｅｏｕｓ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｕｌｔｕｒｅｄ  Ｈｕｍａｎ  ＲＰＥ  Ｃｅｌｌｓ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  １０  Ｎｅｗ  Ｇｅｎｅｓ"，  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．（Ｊｕｌｙ  ２００２），４３（７）：２４７４−２４８０
【非特許文献１３３】  ＫＯＣＫ  ｅｔ  ａｌ，．"Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｃｏｂｒａ  Ｖｅｎｏｍ  Ｆａｃｔｏｒ"，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．（Ｊｕｌｙ  １６，  ２００４），２７９（２９）：３０８３６−３０８４３
【非特許文献１３４】  ＫＯＮＯＰＡＴＳＫＡＹＡ  ｅｔ  ａｌ．，"ＶＥＧＦ（１６５）ｂ，  ａｎ  Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  Ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  Ｓｐｌｉｃｅ  Ｖａｒｉａｎｔ  ｏｒ  ＶＥＧＦ，  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ，  Ｍａｙ  １，  ２００６，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｖｉｓｉｏｎ，  １２（６７−６９）：６２６−６３２
【非特許文献１３５】  ＫＯＳＴＥＬＮＹ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌｅｕｃｉｎｅ  Ｚｉｐｐｅｒｓ"，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ｍａｒｃｈ  １，  １９９２），１４８（５）：１５４７−１５５３
【非特許文献１３６】  ＫＲＩＳＨＮＡＭＡＣＨＡＲＹ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  Ｃｅｌｌ  Ｉｎｖａｓｉｏｎ  ｂｙ  Ｈｙｐｏｘｉａ−Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  Ｆａｃｔｏｒ  １"，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（Ｍａｒｃｈ  １，  ２００３），６３（５）：１１３８−１１４３
【非特許文献１３７】  ＫＵＥＨＮ，"Ｇｅｎｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｐｒｏｖｉｄｅｓ  Ｃｌｕｅｓ  ｔｏ  Ｃａｕｓｅ  ｏｆ  Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ"，ＪＡＭＡ．（Ａｐｒｉｌ  ２０，  ２００５），２９３（１５）：１８４１−１８４５
【非特許文献１３８】  ＫＵＲＳＣＨＡＴ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ  ｓｐｌｉｎｔｅｄ  ｌｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈｌｙ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ  ｓｍａｌｌ  ＲＮＡｓ"，ＲＮＡ．（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２００５），１１（１２）：１９０９−１９１４
【非特許文献１３９】  ＬＡＩ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｔｏ  Ｄｅｖｅｌｏｐ  ａ  Ｒａｔ  Ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  Ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ"，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．（Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２０００），４１（２）：５８０−５８４
【非特許文献１４０】  ＬＡＷＳＯＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｇｌａｕｃｏｍａ  Ｇｅｎｅ"，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  （２０００），６９−７４：１４ａ  （Ａｂｓｔｒａｃｔ）
【非特許文献１４１】  ＬＥＣＯＮＴＥ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｒｏｄ  ｃＧＭＰ−Ｇａｔｅｄ  Ｃｈａｎｎｅｌ  ａ−Ｓｕｂｕｎｉｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｌｅａｄｓ  ｔｏ  Ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｄ  Ｂｉｐｏｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ"，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ．Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．（Ｍａｒｃｈ  ２０００），４１（３）：９１７−９２６
【非特許文献１４２】  ＬＥＥ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡｓ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ＨＩＶ−１  ｒｅｖ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌｓ"，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（Ｍａｙ  ２００２），２０（５）：５００−５０５
【非特許文献１４３】  ＬＥＥ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｂｒａｉｎ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  ｉｎ  ａ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ'ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ｗｉｔｈ  ａｎ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ−Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ"，Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ．（Ｊｕｌｙ  ２００２），４３（７）：９４６−９５６
【非特許文献１４４】  ＬＥＶＹ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｏｓｔ−Ｔｒａｎｓｃｉｐｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  ｂｙ  Ｈｙｐｏｘｉａ"，Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２，  １９９６，  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，  ２７１（５）：２７４６−２７５３
【非特許文献１４５】  ＬＥＷＩＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｒｉｂｏｚｙｍｅ  ｒｅｓｃｕｅ  ｏｆ  ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ａ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｕｔｏｓｏｍａｌ  ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ"，Ｎａｔ  Ｍｅｄ．（Ａｕｇｕｓｔ  １，  １９９８），４（８）：９６７−９７１
【非特許文献１４６】  ＬＥＷＩＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａ  ｓｅｒｕｍ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｃｙｔｏｆｅｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｐｌａｓｍｉｄ  ＤＮＡ"，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．（Ａｐｒｉｌ  １６，  １９９６）９３（８）：３１７６−３１８１
【非特許文献１４７】  ＬＩＮＴＯＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｉｎ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ"，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２０００），４３（１１）：２５９０−２５９７  （Ａｂｓｔｒａｃｔ）
【非特許文献１４８】  ＬＩＵ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｒｉｂｏｚｙｍｅ  Ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  γ−Ｓｕｂｕｎｉｔ  ｏｆ  Ｒｏｄ  ｃＧＭＰ  Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  Ａｌｔｅｒｓ  ｔｈｅ  ＥＲＧ  ａｎｄ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ｗｉｌｄ−Ｔｙｐｅ  Ｍｉｃｅ"，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００５），４６（１０）：３８３６−３８４４
【非特許文献１４９】  ＬＵ  ｅｔ  ａｌ．，"Ｄｅｌｉｖｅｒｉｎｇ  ｓｉＲＮＡ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  ｆｏｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ａｎｄ  Ｎｏｖｅｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ"，  ｆｒｏｍ  ＲＮＡ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  ２００５，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＵＳＡ，  Ａｐｐａｓａｎｉ  ｅｄ．，  ｐｐ．３０３−３１７
【非特許文献１５０】  ＬＵＣＡＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｓｅｃｒｅｔｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  Ｖｉｒａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ"，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  １５，  ２００４），１７３（８）：４７６５−４７７４  
【非特許文献１５１】  ＭＡＮＯＨＡＲＡＮ，"ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡｓ"，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２００４），８（６）：５７０−５７９
【非特許文献１５２】  ＭＡＲＣＨＡＮＤ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＶＥＧＦ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｂｙ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ：  ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｆｌｋ−１  ａｎｄ  Ｆｌｔ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ"，Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｏ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．（Ｊａｎｕａｒｙ  ２００２），２８２（１）：Ｈ１９４−Ｈ２０４
【非特許文献１５３】  ＭＡＲＴＩＮＥＺ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｓｉｎｇｌｅ−Ｓｔｒａｎｄｅｄ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｓｉＲＮＡｓ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔａｒｇｅｔ  ＲＮＡ  Ｃｌｅａｖａｇｅ  ｉｎ  ＲＮＡｉ"，Ｃｅｌｌ  （Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ６，  ２００２），１１０（５）：５６３−５７４
【非特許文献１５４】  ＭＡＳＴＥＬＬＯＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｆｒｏｍ  ａｔｏｍｓ  ｔｏ  ａｙｓｔｅｍｓ：  ａ  ｃｒｏｓｓ−ｄｉｓｃｉｐｌｉｎａｒｙ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ"，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ｊｕｎｅ  ２００４），４１（２−３）：１５３−１６４
【非特許文献１５５】  ＭＡＳＴＥＬＬＯＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｎｏｖｅｌ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｎｅｔｗｏｒｋｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ"，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ｊｕｎｅ  ２００５），１１５（３）：２２５−２３５
【非特許文献１５６】  ＭｃＣＡＦＦＲＥＹ，ｅｔ  ａｌ．，"ＲＮＡ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔ  Ｍｉｃｅ"，Ｊｕｌｙ  ４，  ２００２，  Ｎａｔｕｒｅ，  ４１８：３８−３９
【非特許文献１５７】  ＭＥＲＲＩＡＭ−ＷＥＢＳＴＥＲ'Ｓ  ＯＮＬＩＮＥ  ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ，"Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｉｇａｎｄ"，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｅｒｒｉａｍ−ｗｅｂｓｔｅｒ．ｃｏｍ／ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ／ｌｉｇａｎｄ  （Ｊｕｎｅ  ２，  ２００８）
【非特許文献１５８】  ＭＩＬＬＥＲ，"Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ  Ｐａｃｋａｇｉｎｇ  Ｃｅｌｌｓ"，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．（Ｓｐｒｉｎｇ  １９９０），１（１）５−１４（Ａｂｓｔｒａｃｔ）
【非特許文献１５９】  ＭＩＹＡＧＩＳＨＩ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｕ６  ｐｒｏｍｏｔｅｒ−ｄｒｉｖｅｎ  ｓｉＲＮＡｓ  ｗｉｔｈ  ｆｏｕｒ  ｕｒｉｄｉｎｅ  ４  ｏｖｅｒｈａｎｇｓ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ  ｓｕｐｐｒｅｓｓ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ"，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（Ｍａｙ  ２００２），２０（５）：４９７−５００
【非特許文献１６０】  ＭＩＹＡＭＯＴＯ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｅｕｋｏｓｔａｓｉｓ  ａｎｄ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｌｅａｋａｇｅ  ｉｎ  ｓｔｒｅｐｔｏｚａｔｏｃｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ  ｖｉａ  ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ−１  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ"，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １４，  １９９９），９６（１９）：１０８３６−１０８４１
【非特許文献１６１】  ＭＩＹＡＭＯＴＯ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  （ＶＥＧＦ）−ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｉｓ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ  Ａｄｈｅｓｉｏｎ  ＭＯｌｅｃｕｌｅ  −１  （ＩＣＡＭ−１）"，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．（Ｍａｙ  ２０００），１５６（５）：１７３３−１７３９
【非特許文献１６２】  ＭＯＬＬＮＥＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｉｎｆａｌｍｍａｔｏｒｙ  ｔｉｓｓｕｅ  ｄａｍａｇｅ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ"，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２００２），２３（２）：６１−６４
【非特許文献１６３】  ＭＯＲＯＭＩＺＡＴＯ，ｅｔ  ａｌ．，"ＣＤ１８  ａｎｄ  ＩＣＡＭ−１  Ｄｅｐｅｎｄａｎｔ  Ｃｏｒｎｅａｌ  Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  Ｌｉｍｂａｌ  Ｉｎｊｕｒｙ"，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２０００），１５７（４）：１２７７−１２８１
【非特許文献１６４】  ＭＯＴＨＥ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｇｒｅｅｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｒａｔｓ  ｆｏｒ  Ｔｒａｃｋｉｎｇ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ  Ｎｅｕｒａｌ  Ｓｔｅｍ／Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  Ｃｅｌｌｓ"，Ｊ  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００５），５３（１０）：１２１５−１２２６
【非特許文献１６５】  ＭＯＵＬＴＯＮ，"Ｍｅｔｒｉｃｓ  ｏｎ  ＲＮＡ  Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ"，Ｊ  Ｃｏｍｐｕｔ  Ｂｉｏｌ．（Ｆｅｂｒｕａｒｙ−Ａｐｒｉｌ，  ２０００），７（１−２）：２７７−２９２
【非特許文献１６６】  ＭＵＬＬＩＮＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｄｒｕｓｅｎ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｃｏｎｔａｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｃｏｍｍｏｎ  ｔｏ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｅｐｏｓｉｔｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，  ｅｌａｓｔｏｓｉｓ，  ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ，  ａｎｄ  ｄｅｎｓｅ  ｄｅｐｏｓｉｔ  ｄｉｓｅａｓｅ"，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．（Ｍａｙ  １，  ２０００），１４（７）：８３５−８４６
【非特許文献１６７】  ＮＡＮＤＡＫＵＭＡＲ，ｅｔ  ａｌ．，"ＲＮＡ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｓｐｅｃｅｆｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｇｕｉｄｅｄ  ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ  Ｔ４  ＲＮＡ  Ｌｉｇａｓｅ  ２"，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．（Ｊｕｌｙ  ２３，  ２００４），２７９（３０）：３１３３７−３１３４７
【非特許文献１６８】  ＮＧＵＹＥＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｍｉｎｉｍｉｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ＲＮＡ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｂｙ  ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ：  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｂｙ  ｈｙｂｒｉｄｉｓａｔｉｏｎ"，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  １５，  ２０００），２８（２０）：３９０４−３９０９
【非特許文献１６９】  ＮＩＥＬＳＥＮ，"Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ．Ｔｈｅ  ｌａｓｔ  Ｈｕｒｄｌｅ？"，Ｍａｒｃｈ  １０，  ２００５，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  １２：９５６−９５７
【非特許文献１７０】  ＮＩＳＨＩＷＡＫＩ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｈｏｒｔ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ  ｔｏ  ｓｉｌｅｎｃｅ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ａｄｈｅｓｉｏｎ"，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  ３１，  ２００３），３１０（４）：１０６２−１０６６
【非特許文献１７１】  ＮＯＶＩＮＡ，ｅｔ  ａｌ．，"ｓｉＲＮＡ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＩＶ−１  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ"，Ｎａｔ  Ｍｅｄ．（Ｊｕｌｙ  ２００２），８（７）：６８１−６８６
【非特許文献１７２】  ＮＵＣＫＥＬ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｉｎ  Ｂ−ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃｈｒｏｍｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｂｙ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ"，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（Ｍａｙ  ９，  ２００５），５１４（２−３）：２１７−２２４
【非特許文献１７３】  ＯＧＡＴＡ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂａｓｉｃ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  （ｂＦＧＦ）  ｇｅｎｅ  ｏｒ  ｂＦＧＦ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｆｅｎｅ  ｉｎｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｆｅｔｉｎａｌ  ｐｉｇｍｅｎｔ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ"，Ｇｒａｆｅ'ｓ  Ａｒｃｈ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．（Ａｕｇｕｓｔ  １９９９），２３７（８）：６７８−６８７
【非特許文献１７４】  ＯＨＡＬＩ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｐｒｏｆｉｌｅ  ｉｎ  ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ  ｐｕｒｐｕｒａ：  ａ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｐｉｌｏｔ  ｓｔｕｄｙ"，Ａｎｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ．（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００５），８４（１２）：８１２−８１５
【非特許文献１７５】  ＯＰＡＬＩＮＳＫＡ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｎｕｃｌｅｉｃ−Ａｃｉｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：  Ｂａｓｉｃ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｃｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ"，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ．（Ｊｕｌｙ  ２００２），１（７）：５０３−５１４
【非特許文献１７６】  ＯＳＴＥＲＧＡＡＲＤ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ"，Ｃｌｉｎ  Ｃｈｉｍ  Ａｃｔａ．（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００５），３６１（１−２）：１０−１９
【非特許文献１７７】  ＰＡＤＤＩＳＯＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｓｈｏｒｔ  ｈａｉｒｐｉｎ  ＲＮＡｓ  （ｓｈＲＮＡｓ），ｉｎｄｕｃｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ"，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．（Ａｐｒｉｌ  １５，  ２００２），１６（８）：９４８−９５８
【非特許文献１７８】  ＰＡＲＤＲＩＤＧＥ，"Ｂｒａｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ"，Ｊｐｎ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００１），８７（２）：９７−１０３
【非特許文献１７９】  ＰＡＲＤＲＩＤＧＥ，"ＣＮＳ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｂｌｏｏｄ−Ｂｒａｉｎ  Ｂａｒｒｉｅｒ  Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ"，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．（Ｍａｙ  １９９８），７０（５）：１７８１−１７９２
【非特許文献１８０】  ＰＡＲＤＲＩＤＧＥ，"Ｄｒｕｇ  ａｎｄ  ｇｅｎｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｂｒａｉｎ  ｗｉｔｈ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｒｏｊａｎ  Ｈｏｒｓｅｓ"，  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．（Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２００２），１（２）：１３１−１３９
【非特許文献１８１】  ＰＡＲＤＲＩＤＧＥ，"Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｂｒａｉｎ"，Ｊ  Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ．（Ｊｕｌｙ  １９９７），１７（７）：７１３−７３１
【非特許文献１８２】  ＰＡＲＤＲＩＤＧＥ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｖｅｃｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ｐｏｌｙｍｉｄｅ  （'ｐｅｐｔｉｄｅ'），ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎａｌｏｇｕｅ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｉｎ  ｖｉｖｏ"，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．（Ｊｕｎｅ  ６，  １９９５），９２（１２）：５５９２−５５９６
【非特許文献１８３】  ＰＡＲＤＲＩＤＧＥ，"Ｖｅｃｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｂｒａｉｎ"，Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．（Ａｐｒｉｌ  ５，  １９９９），３６（２−３）：２９９−３２１
【非特許文献１８４】  ＰＡＲＯＯ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｈａｌｌｎｇｅｓ  ｏｆ  ＲＮＡｉ  ｉｎ  ｖｉｖｏ"，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（Ａｕｇｕｓｔ  ２００４），２２（８）：３９０−３９４
【非特許文献１８５】  ＰＡＴＴＥＲＳＯＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ｆｏｒ  ＫＤＲ／ｆｌｋ−１，  ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ"，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  （Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２９，  １９９５），２７０（３９）：２３１１１−２３１１８  （Ａｂｓｔｒａｃｔ）
【非特許文献１８６】  ＰＡＵＬ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌｓ"，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（Ｍａｙ  ２００２），２０（５）：５０５−５０８
【非特許文献１８７】  ＰＥＮＧ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｃ５  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｉｒｗａｙ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，  ａｉｒｗａｙ  ｈｙｐｅｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ，  ａｎｄ  ｏｎｇｏｉｎｇ  ａｉｒｗａｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ"，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．（Ｊｕｎｅ  ２００５），１１５（６）：１５９０−１６００
【非特許文献１８８】  ＰＥＮＩＣＨＥＴ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ａｖｉｄｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｓｅｒｖｅｓ  ａｓ  ａ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｖｅｈｉｃｌｅ  ｆｏｒ  Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  Ｂｒａｉｎ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ：  Ｉｎｉｔｉａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ    ｉｎ  Ａｎｔｉ−ＨＩＶ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｂｒａｉｎ"，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  １５，  １９９９），１６３（８）：４４２１−４４２６
【非特許文献１８９】  ＰＨＩＬＩＰ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｏｌａｒｉｚｅｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ  Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｐｉｇｍｅｎｔ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ  ａｎｄ  ＡＲＰＥ−１９  Ｃｅｌｌｓ"，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｚ  Ｓｃｉ．（Ａｐｒｉｌ  １，  ２００３），４４（４）：１７１６−１７２１
【非特許文献１９０】  ＰＩＮＥＤＡ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｈｅ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｏｆ  ｐｒｏｔｏｔｙｐｉｃ  ｐｌａｎａｒｉａｎ  ｅｙｅ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｉｓ  Ｐａｘ６  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ"，  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．（Ｍａｒｃｈ  ２００２），１２９（６）：１４２３−１４３４
【非特許文献１９１】  ＰＲＡＴＴ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｎｏｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｈｙｐｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｉｎ  Ｄｏｎｏｒ  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｉｓｃｈｅｍｉａ／Ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｄａｍａｇｅ，  ａｃｕｔｅ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ"，  ＡＭ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００３），１６３（４）：１４５７−１４６３
【非特許文献１９２】  ＱＩＡＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｖｉａ  ｔｈｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ  Ｐａｔｈｗａｙ"，  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｖ．（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２００２），５４（４）：５６１−５８７
【非特許文献１９３】  ＲＡＭＯＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  Ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ：  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ"，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａ．（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２００４），２（４）：３３９−３４９
【非特許文献１９４】  ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ'Ｓ  "Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ"，１７ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ．（１９８５），ＴＯＣ（Ｓｅｅ  Ｇｅｒｍａｒｏ）
【非特許文献１９５】  ＲＥＮＮＥＬ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｈｅ  Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  Ａｎｔｉ−Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ＶＥＧＦ  Ｉｓｏｆｏｒｍ，  ＶＥＧＦ（１６５）ｂ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｕｍｏｕｒ  Ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ"，Ａｐｒｉｌ  ２００８，  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，９８（７）：１２５０−１２５７
【非特許文献１９６】  ＲＥＮＮＥＬ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎ  ＶＥＧＦ１６５ｂ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｓ  ａｎ  Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ"，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １，  ２００８，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，  ４４（１３）：１８８３−１８９４
【非特許文献１９７】  ＲＯＢＥＲＴＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｒｉｂｏｚｙｍｅ  ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔｒｏｍｅｌｙｓｉｎ  ｍＲＮＡ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｔｉｓｓｕｅ  ｆｒｏｍ  ｒａｂｂｉｔ  ｋｎｅｅ  ｖｉａ  Ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｖｉｒｕｓ（ＡＡＶ）"，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １９９９），４：４５−５８
【非特許文献１９８】  ＲＯＳＥＮＦＥＬＤ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｔｏｌｅｒａｔｅｄ  Ｄｏｓｅ  ｏｆ  ａ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ａｎｔｉ−Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ"，Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．（Ｊｕｎｅ  ２００５），１１２（６）：１０４８−１０５３
【非特許文献１９９】  ＲＯＴＨＥＲ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ：ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ"，Ｌｕｐｕｓ（２００４），１３（５）：３２８−３３４
【非特許文献２００】  ＲＵＢＩＮＳＯＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａ  ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ−ｂａｓｅｄ  ｓｙｓｔｅｍ  ｔｏ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ  ｓｉｌｅｎｃｅ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ，ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ  ｂｙ  ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ"，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．（Ｍａｒｃｈ  ２００３），３３（３）：４０１−４０６  （Ａｂｓｔｒａｃｔ）
【非特許文献２０１】  ＲＵＭＭＥＬＴ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｒｉｐｌｅ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １，  ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，  ａｎｄ  ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １．Ｌｉｇｈｔ  ａｎｄ  ｅｌｅｃｔｒｏｎ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，  ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ａｎｄ  ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ"，  Ｏｐｈａｌｍｏｌｏｇｙ．（Ｆｅｂｒｕａｒｙ  １９９４），１０１（２）：２７０−２７９  （Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｏｎｌｙ）
【非特許文献２０２】  ＲＵＳＳＥＬＬ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｌｏｃａｔｉｏｎ，Ｓｕｂｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂａｓａｌ  Ｌａｍｉｎａｒ  Ｄｒｕｓｅｎ  Ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｄｒｕｓｅｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ"，Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．（Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２０００），１２９（２）：２０５−２１４
【非特許文献２０３】  ＳＡＫＵＲＡＩ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＤ１８  ｏｒ  ＩＣＡＭ−１  Ｇｅｎｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ"，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．（Ｊｕｎｅ  ２００３），４４（６）：２７４３−２７４９
【非特許文献２０４】  ＳＡＭＡＲＳＫＹ，ｅｔ  ａｌ．，"ＲＮＡｉ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ，Ｆｒｏｍ  ＲＮＡ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ"，２００５，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＵＳＡ，Ａｐｐａｓａｎｉ，ｅｄ．，ｐｐ．３８４−３９５
【非特許文献２０５】  ＳＡＭＵＬＳＫＩ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｐｌａｓｍｉｄ  ｆｒｏｍ  Ｗｈｉｃｈ  ａｎ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ａｄｅｎｏ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｖｉｒｕｓ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｃａｎ  ｂｅ  Ｅｘｃｉｓｅｄ  ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｕｓｅ  ｔｏ  Ｓｔｕｄｙ  Ｖｉｒａｌ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ"，Ｊ  Ｖｉｒａｌ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  １９８７），６１（１０）：３０９６−３１０１
【非特許文献２０６】  ＳＡＭＵＬＳＫＩ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｈｅｌｐｅｒ−Ｆｒｅｅ  Ｓｔｏｃｋｓ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｄｅｎｏ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｖｉｒｕｓｅｓ：Ｎｏｒｍａｌ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ  Ｄｏｅｓ  Ｎｏｔ  Ｒｅｑｕｉｒｅ  Ｖｉｒａｌ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ"，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １９８９），６３（９）：３８２２−３８２８
【非特許文献２０７】  ＳＡＴＯ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｈｕｍａｎ  ｃＤＮＡ  ｆｏｒ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｉｓｏｆｏｒｍ  ＶＥＧＦ１２１"，１９９９，ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＡＦ２１４５７０
【非特許文献２０８】  ＳＣＡＮＬＯＮ，"Ａｎｔｉ-Ｇｅｎｅｓ：ｓｉＲＮＡ，Ｒｉｂｏｚｙｍｅｓ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ"，Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００４），５（５）：４１５−４２０
【非特許文献２０９】  ＳＣＨＲＯＤＥＲ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａ  ｓｉｎｇｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ｆｏｒ  ＲＮＡ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ＩＩＩ"，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．（Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ４，２００３），１００（３）：９３４−９３９
【非特許文献２１０】  ＳＥＷＥＬＬ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ３  ａｎｄ  Ｃ５  ｐｌａｙ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｒｏｌｅｓ  ｉｎ  ｔｒａｕｍａｔｉｃ  ｂｒａｉｎ  ｃｒｙｏｉｎｊｕｒｙ：  ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ｅｘｔｒａｖａｓａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｃ５ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ"，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ（Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００４），１５５（１−２）：５５−６３
【非特許文献２１１】  ＳＨＥＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｃｏｂｒａ  Ｖｅｎｏｍ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ｅｘ  Ｖｉｖｏ  Ｐｉｇ  Ｌｉｖｅｒ  Ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ＭＯｄｅｌ"，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃ．（Ｎｏｖ−Ｄｅｃ  ２００１），３３（７−８）：３８６０−３８６１
【非特許文献２１２】  ＳＨＥＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｏｃｕｌａｒ  ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｓｉＲＮＡ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＶＥＧＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １"，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．（Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２００６），１３（３）：２２５−２３４
【非特許文献２１３】  ＳＨＩ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｒａｉｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ"，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １９，２０００），９７（２６）：１４７０９−１４７１４
【非特許文献２１４】  ＳＨＩ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｎａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｂｙ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ"，２００２，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８７（１）：１１９−１２６
【非特許文献２１５】  ＳＨＩＢＵＹＡ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｈｕｍａｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｔｙｐｅ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａａｓｅ  ｇｅｎｅ（ｆｌｔ），ｃｌｏｓｅｌｙ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｆｍｓ  ｆａｍｉｌｙ"，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．（Ａｐｒｉｌ  １９９０），５（４）：５１９−５２４
【非特許文献２１６】  ＳＨＩＭ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ−１  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ａｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ＲＮＡ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  Ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  Ｔｕｍｏｒ  Ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  Ｍｉｃｅ"，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  １，２００１），９４（１）：６−１５
【非特許文献２１７】  ＳＨＯＪＩ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｓｔａｔｕｓ  ｏｆ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｔｏ  Ｉｍｐｒｏｖｅ  Ｔａｒｇｅｔ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ"，Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ．（２００４），１０（７）：７８５−７９６
【非特許文献２１８】  ＳＨＵ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｍｅｄｉａｔｅｓ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒａｓ  ａｎｄ  Ｍｉｔｏｇｅｎ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｋｉｎａｓｅｓ"，Ｎｏｖ．２００２，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，２２（２２）：７７５８−７７６８
【非特許文献２１９】  ＳＩＭＥＯＮＩ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｅｐｔｉｄｅ−Ｂａｓｅｄ  Ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｆｏｒ  ｓｉＲＮＡ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｉｎｔｏ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ"，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２００５），３０９：２５１−２６０
【非特許文献２２０】  ＳＩＯＵＤ，"ｓｉＲＮＡ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ"，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，（２００５），３０９：２３７−２４９
【非特許文献２２１】  ＳＭＩＴＨ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｍｅｍｂｒａｎｅ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ"，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ａｕｇｕｓｔ  ２００１），３８（２−３）：２４９−２５５
【非特許文献２２２】  ＳＭＩＴＨ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｒａｔｉｏｎａｌ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ"，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２０００），１１（３）：１９１−１９８
【非特許文献２２３】  ＳＯＨＡＩＬ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｓｅｌｅｃｔｉｎｇ  ｏｐｔｉｍａｌ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｒｅａｇｅｎｔｓ"，Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  ３１，２０００），４４（１）：２３−３４
【非特許文献２２４】  ＳＯＨＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｏｗ  ｌｅｖｅｌ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈｉｎ  ｔｈｅ  Ｅｙｅ  ｉｓ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｂｙ  Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ"，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２０００），４１（１１）：３４９２−３５０２
【非特許文献２２５】  ＳＯＨＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｎｏｒｍａｌ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ  Ｆｌｕｉｄ  ｉｓ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ＭＣＰ，ＤＡＦ  ａｎｄ  ＣＤ５９"，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２０００），４１（１３）：４１９５−４２０２
【非特許文献２２６】  ＳＯＨＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｉｓ  ｄｅｐｅｎｄａｎｔ  ｏｎ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ３  ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｉＣ３ｂ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ  Ｃｅｌｌｓ"，Ｎａｔ  Ｍｅｄ．（Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２００３），９（２）：２０６−２１２
【非特許文献２２７】  ＳＯＮＧＳＩＶＩＬＡＩ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｕｔｏｂｏｄｙ：ａ  ｔｏｏｌ  ｆｏｒ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｉｓｅａｓｅ"，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ｍａｒｃｈ  １９９０），７９（３）：３１５−３２１
【非特許文献２２８】  ＳＰＡＩＤＥ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ  Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｔｏ  Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ"，Ｒｅｔｉｎａ  （２００６），２６（４）：３８３−３９０
【非特許文献２２９】  ＳＰＥＩＤＬ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｃ５ａ  ｐｒｅｄｉｃｔｓ  ｆｕｔｕｒｅ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｖｅｎｔｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ"，Ｅｕｒ  Ｈｅａｒｔ  Ｊ．（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００５），２６（２１）：２２９４−２２９９
【非特許文献２３０】  ＳＰＥＩＲＳ，  ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＶＥＧＦ  ａｎｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＶＥＧＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  Ｆｌｔ−１  ａｎｄ  ＫＤＲ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ａｎｄ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｂｒｅａｓｔ  ｔｕｍｏｕｒｓ"，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ（Ｍａｙ  １９９９），８０（５−６）：８９８−９０３
【非特許文献２３１】  ＳＴＥＩＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｓ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：ａ  Ｒｅｖｉｅｗ"，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（Ｍａｙ  １５，１９８８），４８（１０）：２６５９−２６６８
【非特許文献２３２】  ＳＴＲＡＣＨＡＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａ  ｎｅｗ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｃ５ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｔｈｅ  ｒｅｖｅｒｓｅ−ｐａｓｓｉｖｅ  ａｒｔｈｕｓ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｎｄｏｔｏｘｉｃ  ｓｈｏｃｋ  ｉｎ  ｒａｔｓ"，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ｊｕｎｅ  １９８０），９：４６７−５０８
【非特許文献２３３】  ＳＵＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｏｆ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｈｙｐｏｘｉａ  ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｆａｃｔｏｒ−１  ａ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｈｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ"，Ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒ．（Ａｐｒｉｌ  ２００１），８（８）：６３８−６４５
【非特許文献２３４】  ＳＵＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  ｃａｒｄｉａｃ  ｘｅｎｏｇｒａｐｈ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｇｕｉｎｅａ−ｐｉｇ−ｔｏ−ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ  ｂｙ  ａ  ｈｉｇｈｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ｃｏｂｒａ  ｖｅｎｏｍ  ｆａｃｔｏｒ"，Ｔｏｘｉｃｏｎ．（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １，２００３），４２（３）：２５７−２６２
【非特許文献２３５】  ＳＺＯＫＡ，Ｊｒ．，ｅｔ  ａｌ．，"Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ（ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）"，Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｂｉｏｅｎｇ．（Ｊｕｎｅ  １９８０），９：４５７−５０８
【非特許文献２３６】  ＴＨＵＲＭＡＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｐａｔｈｗａｙ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｒｅｇｎａｎｃｙ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ"，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ｊａｎｕａｒｙ  ２００５），４２（１）：８７−９７
【非特許文献２３７】  ＴＩＳＣＨＥＲ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  ｆｏｒ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆｏｒｍｓ  ａｒｅ  ｅｎｃｏｄｅｄ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｅｘｏｎ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ"，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ（Ｊｕｎｅ  ２５，１９９１），２６６（１８）：１１９４７−１１９５４
【非特許文献２３８】  ＴＯＬＥＮＴＩＮＯ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ    Ｓｍａｌｌ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  Ｌｅａｋａｇｅ  ｉｎ  ａ  Ｎｏｎｈｕｍａｎ  Ｐｒｉｍａｔｅ"，Ｌａｓｅｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ，２００４，Ｒｅｔｉｎａ，２４（１）：１３２−１３８
【非特許文献２３９】  ＴＯＳＣＨＩ，"Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｍＲＮＡ  ｓｅｌｆ−ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｎ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ：ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｔｏｏｌｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ"，Ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２０００），２２（３）：２６１−２６９
【非特許文献２４０】  ＴＲＵＤＥＡＵ，ｅｔ  ａｌ．，"Ａｎ  Ｉｎｔｅｒｓｕｂｕｎｉｔ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ  ｏｆ  Ｒｏｄ  Ｃｙｃｌｉｃ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ−Ｇａｔｅｄ  Ｃｈａｎｎｅｌｓ  ａｎｄ  ｉｓ  Ｄｉｓｒｕｐｔｅｄ  ｉｎ  ａｎ  ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ  ｆｏｒｍ  ｏｆ  ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ"，Ｎｅｕｒｏｎ．（Ａｐｒｉｌ  １１，２００２），３４（２）：１９７−２０７
【非特許文献２４１】  ＴＵＳＣＨＬ，"Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  ｓｍａｌｌ  ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ"，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（Ｍａｙ  ２００２），２０（５）：４４６−４４８
【非特許文献２４２】  ＴＵＳＣＨＬ，"Ｔｈｅ  ｓｉＲＮＡ  ｕｓｅｒ  ｇｕｉｄｅ"，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｐｉｄｐｃ．ｇｗｄｇ．ｄｅ／ａｂｔｅｉｌｕｎｇｅｎ／１００／１０５／ｓｉｍａ．ｈｔｍｌ（Ｍａｙ  ６，２００４）
【非特許文献２４３】  ＴＩＳＣＨＬ，"Ｔｈｅ  ｓｉＲＮＡ  ｕｓｅｒ  ｇｕｉｄｅ'，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｐｉｄｐｃ．ｇｗｄｇ．ｄｅ／ａｂｔｅｉｌｕｎｇｅｎ／１００／１０５／ｓｉｍａ．ｈｔｍｌ（Ｏｃｔｏｂｅｒ  １１，２００２）
【非特許文献２４４】  ＴＹＬＥＲ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｅｐｔｉｄｅ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｎｅｕｒｏｔｅｎｓｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｄ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｉ．ｐ．ｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ  ａｎｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｒｅｄｕｃｅ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ"，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．（Ｊｕｎｅ  ８，１９９９），９６（１２）：７０５３−７０５８
【非特許文献２４５】  ＶＡＮ  ＢＲＵＮＴ，"Ｓｈｏｏｔ  ｔｈｅ  ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ"，Ｓｉｇｎａｌｓ  Ｍａｇａｚｉｎｅ，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｉｇｎａｌｓｍａｇ．ｃｏｍ／ｓｉｇｎａｌｓｍａｇ／３ＤＦ５ＡＥＦ６０４９ＣＣ８１Ｃ９９２５６Ｃ１Ｄ００５５ＢＡＡ（Ａｕｇｕｓｔ  ２２，２００２）
【非特許文献２４６】  ＶＡＮ  ＤＥＲ  ＫＲＯＬ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  ＲＮＡｏｒ  ＤＮＡ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．（Ｎｏｖ−Ｄｅｃ  １９８８），６（１０）：９５８−９７６
【非特許文献２４７】  ＶＥＲＭＡ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ−ｐｒｏｍｉｓｅｓ，ｐｒｏｂｌｅｍｓ，ａｎｄ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ"，Ｎａｔｕｒｅ．（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １８，１９９７），３８９（６６４８）２３９−２４２
【非特許文献２４８】  ＶＥＲＭＡ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｔｗｅｎｔｙ−Ｆｉｒｓｔ  ＣＥｎｔｕｒｙ  Ｍｅｉｄｃｉｎｅ"，Ａｍｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ（２００５），７４：７１１−７３８
【非特許文献２４９】  ＶＩＣＫＥＲＳ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔａｒｇｅｔ  ＲＮＡｓ  ｂｙ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ  ａｎｄ  ＲＮａｓｅ  Ｈ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ａｇｅｎｔｓ"，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．（Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２８，２００３），２７８（９）：７１０８−７１１８
【非特許文献２５０】  ＶＯＧＥＬ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｃｏｂｒａ  ｖｅｎｏｍ  ｆａｃｔｏｒ"，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（Ｊｕｎｅ  ２００４），４１（２−３）：１９１−１９９
【非特許文献２５１】  ＷＡＬＰＯＲＴ，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  Ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｉｎｎａｔｅ  ａｎｄ  Ａｄａｐｔｉｖｅ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ，ｆｉｒｓｔ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｐａｒｔｓ"，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ａｐｒｉｌ  １２，２００１），３４４（１４）：１０５８−１０６６
【非特許文献２５２】  ＷＡＬＰＯＲＴ，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  Ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｉｎｎａｔｅ  ａｎｄ  Ａｄａｐｔｉｖｅ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ，Ｓｅｃｏｎｄ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｐａｒｔｓ"，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ（Ａｐｒｉｌ  １２，２００１），３４４（１５）：１１４０−１１４４
【非特許文献２５３】  ＷＡＲＤ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｇｅｎｏｍｉｃ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎｓ  ｓｈｏｗ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ−２"，Ｃｙｔｏｇｅｎｓｔ  Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｔ．（２００１），９４（３−４）：１４７−１５４
【非特許文献２５４】  ＷＡＲＲＥＮ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ  ＩＣＡＭ−１  Ｇｅｎｅ  Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ｕｓｉｎｇ  ＲＮＡ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｉｎ  Ｓｉｔｕ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ＡＮｔｉｓｅｎｓｅ／Ｒｉｂｏｚｙｍｅ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｅｓ"，Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ（２００２），ｐ．１０１Ａ（Ａｂｓｔｒａｃｔ）
【非特許文献２５５】  ＷＥＢＥＲ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｇｅｎｏｍｉｃ  ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｇｅｎｅ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ｔｈｅ  β−ｓｕｂｕｎｉｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃＧＭＰ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｌｏｃａｌｉｓａｔｉｏｎ  ｔｏ  ４ｐ１６．３，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２５，１９９１），１９（２２）：６２６３−６２６８
【非特許文献２５６】  ＷＵ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ−Ｂｒａｉｎ  Ｂａｒｒｉｅｒ  Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｏｆ  ［３Ｈ］−ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ  ｏｌｉｇｏｄｅａｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｔｏ  ａ  ｖｅｃｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ"，Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．（Ｊａｎｕａｒｙ  １９９６），２７６（１）：２０６−２１１
【非特許文献２５７】  ＸＩＡ，ｅｔ  ａｌ．，"ｓｉＲＮＡ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｇｅｎｅ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ"，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００２），２０（１０）：１００６−１０１０
【非特許文献２５８】  ＸＵ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｃｏｆａｃｔｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｊｕｒｙ"，Ａｃｔｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｉｎ．（Ａｕｇｕｓｔ  ２００５），２６（８）：９８７−９９１
【非特許文献２５９】  ＺＡＭＯＲＥ，ｅｔ  ａｌ．，"ＲＮＡｉ：ｄｏｕｂｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄ  ＲＮＡ  ｄｉｒｅｃｔｓ  ｔｈｅ  ＡＴＰ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｌｅａｖａｇｅ  ｏｆ  ｍＲＮＡ  ａｔ  ２１  ｔｏ  ２３  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｉｎｔｅｒｖａｌｓ，"Ｃｅｌｌ（Ｍａｒｃｈ  ３１，２０００），１０１：２５−３３
【非特許文献２６０】  ＺＡＲＥＰＡＲＳＩ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｓｔｒｏｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｙ４０２Ｈ  Ｖａｒｉａｎｔ  ｉｎ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｈ  ａｔ  ｌｑ３２  ｗｉｔｈ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ"，Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ．（Ｊｕｌｙ  ２００５），７７（１）：１４９−１５３
【非特許文献２６１】  ＺＨＥＮＧ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｎａｌ  Ｉｓｃｈｅｍｉａ  Ｉｎｊｕｒｙ  ｕｓｉｎｇ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｇｅｎｅ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ３  ａｎｄ  ｃａｓｐａｓｅ  ３  ｇｅｎｅｓ"，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２７，２００６），８２（１２）：１７８１−１７８６
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
毛細血管の成長又は「新血管新生（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）」と定義される血管新生（ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）は、成長及び発達における基礎的な役割を果たしている。成人においては、血管新生を開始する能力は全ての組織に存在するが、厳密な制御の元に置かれている。血管新生のカギとなる制御因子は、血管内皮増殖因子（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ、ＶＥＧＦ）であり、血管透過性因子（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｐｅｒｍａｂｉｌｉｔｙ  ｆａｃｔｏｒ、ＶＰＦ）とも呼ばれる。血管新生は分泌されたＶＥＧＦが、血管内日細胞の表面に発現しているＦｌｔ−１受容体およびＦｌｋ−１／ＫＤＲ受容体（ＶＥＧＦ受容体１およびＶＥＧＦ受容体２とも呼ばれる）に結合したときに開始される。Ｆｌｔ−１およびＦｌｋ−１／ＫＤＲは、膜貫通型のチロシンキナーゼであり、ＶＥＧＦと結合すると、最終的に周辺組織における新血管新生に繋がる細胞シグナルカスケードを開始させる。
ヒトにおいてはＶＥＧＦには主に３つの異なる選択的スプライシング型（すなわち、イソ型）が存在し（ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１６５、及びＶＥＧＦ１８９）、さらにその他に多くの変異型が存在する（ＶＥＧＦ２０６、ＶＥＧＦ１８３、ＶＥＧＦ１４８、ＶＥＧＦ１６５ｂ、及びＶＥＧＦ１４５）。注目すべきことに、前記イソ型の全てが血管新生促進性を持つわけではない。少なくともＶＥＧＦ１６５ｂが、ＶＥＧＦ１６５の血管新生を誘導する効果を相殺する能力を持つことが証明されている。理論に拘束されるわけではないが、ＶＥＧＦ１６５ｂはＶＥＧＦ受容体２のシグナルを阻害する能力を持つようである。このように、ＶＥＧＦ１６５ｂの分泌は、病理状態における血管新生を阻害又は遅延させることができる可能性がある。
異常な血管新生、すなわち新しい血管の病原性の増殖は、多くの疾患において関係している。そうした疾患には、糖尿病性網膜症、乾癬、滲出性つまり「湿性」の加齢黄班変性（ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ、ＡＲＭＤ）、関節リウマチ及びその他の炎症性疾患、並びに大部分の癌が挙げられる。これらの疾患に関連した患部組織又は腫瘍は異常に高いレベルのＶＥＧＦを発現しており、高い程度の血管新生反応又は血管透過性を示す。
【０００５】
特にＡＲＭＤは臨床的に重要な血管新生疾患である。この疾患は高齢の個体の片方又は両方の眼球における脈絡膜血管新生に特徴付けられ、先進工業国における失明の主要な原因となっている。
【０００６】
ＲＮＡ干渉（以下「ＲＮＡｉ」）は、多くの真核生物にわたって保存されている転写後遺伝子調節の方法である。ＲＮＡｉは、細胞中に存在する短い（すなわち、３０ヌクレオチド未満）二本鎖ＲＮＡ（「ｄｓＲＮＡ」）分子によって誘導される。これらの短いｄｓＲＮＡ分子は、「短鎖干渉ＲＮＡ」又は「ｓｉＲＮＡ」と呼ばれ、１ヌクレオチド以内の解像度で、当該ｓｉＲＮＡと配列相同性を共有するメッセンジャーＲＮＡ（「ｍＲＮＡ」）の破壊を引き起こす。前記ｓｉＲＮＡ及び標的ｍＲＮＡは「ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＮＡ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｃｏｍｐｌｅｘ）」すなわち「ＲＩＳＣ」と結合し、これが当該標的ｍＲＮＡを切断すると考えられている。前記ｓｉＲＮＡは、多重代謝回転酵素とよく似た形で再利用されるようであり、１個のｓｉＲＮＡ分子が約１０００個のｍＲＮＡ分子の切断を引き起こすことができる。従って、ｍＲＮＡのｓｉＲＮＡ媒介ＲＮＡｉ分解は、標的遺伝子の発現を抑制するために現在用いられている技術より効果的である。しかしながら、こうした方法は疾患を治療するための医薬品へ直接的に転換することができない。
【０００７】
従って、求められているものは、哺乳類において触媒作用的又は準化学量論的な量で血管新生促進性ＶＥＧＦの発現を抑制し、その一方で血管新生阻害性ＶＥＧＦイソ型の分泌を誘導又は維持する物質である。
【０００８】
本開示は、ＶＥＧＦ及びそのイソ型由来のｍＲＮＡのＲＮＡｉ誘導分解を特異的に標的とし発生させるｓｉＲＮＡを対象とする。本開示における前記ｓｉＲＮＡの化合物及び組成物は、血管新生の抑制のために、特に、癌性腫瘍、加齢黄班変性、及びその他の血管新生疾患の治療のために用いられる。
【０００９】
よって本開示は、ヒトＶＥＧＦのｍＲＮＡ、その選択的スプライシング型、その変異型、又はその同族を、標的とする単離ｓｉＲＮＡを提供する。例えばある実施形態において、前記ｓｉＲＮＡはＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１８９、ＶＥＧＦ２０６、ＶＥＧＦ１８３、ＶＥＧＦ１４８、及び／又はＶＥＧＦ１４５などの血管新生促進性ＶＥＧＦのｍＲＮＡイソ型を標的とし、その一方で血管新生抑制性ＶＥＧＦ１６５ｂのｍＲＮＡを選択的に看過する。特定の実施形態においては、前記ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ二本鎖を形成するＲＮＡセンスＲＮＡ鎖及びアンチセンスＲＮＡ鎖を有する。これらのセンスＲＮＡ鎖は標的ｍＲＮＡ中の約１９〜約２５の連続したヌクレオチドの標的配列と同一のヌクレオチド配列を有する。
【００１０】
本開示はまた、本明細書で開示される当該ｓｉＲＮＡを発現する組換えプラスミド及びウイルスベクター、並びにそうしたｓｉＲＮＡ及び薬学的に許容可能な担体を有する医薬組成物を提供する。
【００１１】
本開示はさらに、ヒトの血管新生促進性ＶＥＧＦのｍＲＮＡ、その選択的スプライシング型、その変異型、又はその同族を抑制し、その一方で血管新生抑制性ＶＥＧＦのｍＲＮＡを看過する方法であって、ｓｉＲＮＡの有効量を被験者に投与して標的ｍＲＮＡを分解する工程を有する方法を提供する。
【００１２】
本開示はさらに、被験者の血管新生を抑制する方法であって、血管新生促進性のヒトＶＥＧＦのｍＲＮＡ、その選択的スプライシング型、その変異型、又はその同族を標的とし、その一方で血管新生抑制性ＶＥＧＦのｍＲＮＡを看過するｓｉＲＮＡの有効量を被験者に投与する工程を有する方法を提供する。
【００１３】
本開示はさらに、血管新生疾患を治療する方法であって、そうした治療を要する被験者に対して、当該疾患に関連する血管新生を抑制するために、ヒトの血管新生促進性ＶＥＧＦのｍＲＮＡ、その選択的スプライシング型、その変異型、又はその同族を標的とし、その一方で血管新生抑制性ＶＥＧＦのｍＲＮＡの効果には影響を与えないｓｉＲＮＡをの有効量を投与する工程を有する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
本特許の出願は、カラーで処理された少なくとも１つの写真又は図を含む。カラーの図又は写真のコピーが、米国特許庁によって請求及び必要経費の支払いがあれば提供されるであろう。
【００１５】
本発明の性質及び利点をより完全に理解するためには、以下の詳細な説明を添付の図面と関連させて参照するべきである。その図面の詳細な説明を以下に示す。
【図１】図１Ａ及び図１Ｂは、ｓｉＲＮＡで未処理の（「−」）、非特異的なｓｉＲＮＡで処理した（「非特異的」）、又はヒトＶＥＧＦのｍＲＮＡを標的にするｓｉＲＮＡで処理した（「ＶＥＧＦ」）、低酸素状態の２９３細胞及びＨｅＬａ細胞における、ＶＥＧＦ濃度（ｐｇ／ｍｌ）のヒストグラムである。低酸素状態でない２９３細胞及びＨｅＬａ細胞におけるＶＥＧＦ濃度（ｐｇ／ｍｌ）も同様に示してある。各バーは４実験の平均値を表しており、誤差は平均値の標準偏差である。
【図２】図２は、ｓｉＲＮＡで未処理の（「−」）、非特異的なｓｉＲＮＡで処理した（「非特異的」）、又はヒトＶＥＧＦのｍＲＮＡを標的にするｓｉＲＮＡで処理した（「ＶＥＧＦ」）、低酸素状態のＮＩＨ  ３Ｔ３細胞における、マウスＶＥＧＦ濃度のヒストグラムである。各バーは６実験の平均値を表しており、誤差は平均値の標準偏差である。
【図３】図３は、ヒトＶＥＧＦを発現するアデノウイルス（「ＡｄＶＥＧＦ」）を注入したマウスの網膜における、ＧＦＰのｓｉＲＮＡ（暗灰色のバー）又はヒトＶＥＧＦのｓｉＲＮＡ（明灰色のバー）の存在下での、ヒトＶＥＧＦ濃度（ｐｇ／総タンパク質）のヒストグラムである。各バーは５眼球の平均値を表しており、誤差は平均値の標準偏差である。
【図４】図４は、ＧＦＰのｓｉＲＮＡを網膜下注入したコントロールの眼球（Ｎ＝９、「ＧＦＰ  ｓｉＲＮＡ」）、及びマウスＶＥＧＦのｓｉＲＮＡを網膜下注入した眼球（Ｎ＝９、「マウスＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡ」）における、レーザー誘起ＣＮＶの平均面積（ｍｍ２）のヒストグラムである。誤差は平均値の標準偏差である。
【図５】図５は、本発明において組換えＡＡＶウイルスベクターを作製するのに用いたシス作用性プラスミドである、ｐＡＡＶｓｉＲＮＡの概略図である。「ＩＴＲ」：ＡＡＶ末端逆位配列、「Ｕ６」：Ｕ６  ＲＮＡプロモーター、「センス」：ｓｉＲＮＡセンスコード配列、「アンチ」：ｓｉＲＮＡアンチセンスコード配列、「ポリＴ」：ポリチミジン終止シグナル。
【図６ＡＢ】図６Ａ及び図６Ｂは、網膜下に（Ａ）又は硝子体内に（Ｂ）、マウスアンチＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡ（「ｍＶＥＧＦ１．ｓｉＲＮＡ」）又はコントロールのｓｉＲＮＡ（「ＧＦＰ１．ｓｉＲＮＡ」）を注入処理したマウス眼球における、レーザー誘起ＣＮＶの平均面積（ｍｍ２）のヒストグラムである。誤差は平均値の標準偏差である。
【図６Ｃ】図６Ｃは、ｓｉＲＮＡを含まないリン酸緩衝食塩水をレーザー誘起１日後に（「ＰＢＳ」、ＣＮＶ面積はレーザー誘起１４日後に計測される）、コントロールのｓｉＲＮＡをレーザー誘起１４日後に（「ＧＦＰ．ｓｉＲＮＡ」、ＣＮＶ面積はレーザー誘起２１日後に計測される）、又はマウスアンチＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡをレーザー誘起１４日後に（「ｍＶＥＧＦ１．ｓｉＲＮＡ」、ＣＮＶ面積はレーザー誘起２１日後に計測される）、注入したマウス眼球における、レーザー誘起ＣＮＶの平均面積（ｍｍ２）のヒストグラムである。誤差は平均値の標準偏差である。
【図７】図７は、ヒトアンチＶＥＧＦｓｉＲＮＡ（「Ｃａｎｄ５」）及びコントロールｓｉＲＮＡ（「ＧＦＰ１．ｓｉＲＮＡ」）を網膜下に注入した、注入０日後（ｎ＝２、ｓｉＲＮＡ注入前）、６日後（ｎ＝３）、１０日後（ｎ＝３）、１４日後（ｎ＝３）のマウス眼球における、ＶＥＧＦタンパク質のパーセント（「％ＶＥＧＦ」）のグラフである。％ＶＧＥＦ＝（Ｃａｎｄ５眼球中の［ＶＥＧＦ］／ＧＦＰ１．ｓｉＲＮＡ眼球中の［ＶＥＧＦ］）＊１００。
【図８】図８は、ヒトＶＥＧＦのｓｉＲＮＡをトランスフェクトした２９３細胞、非特異的なｓｉＲＮＡ（ＥＧＦＰのｓｉＲＮＡ）をトランスフェクトした２９３細胞、又はｓｉＲＮＡ無しの模擬トランスフェクションをした２９３細胞における、ｈＶＥＧＦタンパク質レベルのグラフである。
【図９】図９は、Ｃａｎｄ５（ベバシラニブ（ｂｅｖａｓｉｒａｎｉｂ））、ｈＶＥＧＦ＃１、ｈＶＥＧＦ＃２、ｈＶＥＧＦ＃３、ｈＶＥＧＦ＃４、ｈＶＥＧＦ＃６、及びｈＶＥＧＦ＃７についての用量反応研究のグラフである。
【図１０】図１０は、ＶＥＧＦの様々なイソ型及びそれらのエクソン使用状況についての概略図である。
【図１１】図１１は、エクソン７／８接合部におけるＶＥＧＦ１６５とＶＥＧＦ１６５ｂの間の相同性比較の概略図である。
【図１２】図１２は、ＶＥＧＦ１６５エクソン７／８接合部を標的とする様々なｓｉＲＮＡについての、ＶＥＧＦタンパク質の発現量を図示するものである。
【図１３】図１３は、ＶＥＧＦ１６５エクソン７／８接合部を標的とする様々なｓｉＲＮＡについての、ヒトＶＥＧＦのノックダウンパーセントを図示するものである。
【図１４】図１４は、ＶＥＧＦ１６５エクソン７／８接合部を標的とするｓｉＲＮＡの２回目のスクリーニングにおける、ＶＥＧＦタンパク質の発現量を図示するものである。
【図１５】図１５は、ＶＥＧＦ１６５エクソン７／８接合部を標的とするｓｉＲＮＡの２回目のスクリーニングにおける、ヒトＶＥＧＦタンパク質のノックダウンのパーセントを図示するものである。
【図１６】図１６は、ＶＥＧＦ１６５エクソン７／８接合部を標的とするｓｉＲＮＡの２回目のスクリーニングにおける、異なる濃度についての、ヒトＶＥＧＦタンパク質のノックダウンのパーセントを図示するものである。
【図１７】図１７は、ＶＥＧＦ１６５エクソン７／８接合部を標的とするｓｉＲＮＡの２回目のスクリーニングにおける、７日間にわたる、ヒトＶＥＧＦタンパク質のノックダウンのパーセントを図示するものである。
【図１８】図１８は、ＶＥＧＦ１６５エクソン７／８接合部を標的とするｓｉＲＮＡの、ＲＴ−ＰＣＲを用いて調べたＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡの発現への影響を図示するものである。
【図１９】図１９は、ＶＥＧＦ１６５エクソン７／８接合部を標的とするｓｉＲＮＡの、ＲＴ−ＰＣＲを用いて調べたＶＥＧＦ１６５  ｍＲＮＡの発現への影響を図示するものである。
【図２０】図２０は、ＶＥＧＦ１６５エクソン７／８接合部を標的とするｓｉＲＮＡの、ＲＴ−ＰＣＲを用いて調べたＶＥＧＦ１８９  ｍＲＮＡの発現への影響を図示するものである。
【図２１】図２１は、ＶＥＧＦ１６５エクソン７／８接合部を標的とするｓｉＲＮＡの、ＲＴ−ＰＣＲを用いて調べたＶＥＧＦ１２１  ｍＲＮＡの発現への影響を図示するものである。
【図２２】図２２は、ＶＥＧＦ１６５エクソン７／８接合部を標的とするｓｉＲＮＡの、ＲＴ−ＰＣＲを用いて調べたＶＥＧＦ１２１  ｍＲＮＡの発現への影響を図示するものである。約６００ｂｐに見られる二重のバンドはアーティファクトである。
【図２３】図２３は、選択したｓｉＲＮＡによる処理後の、ＡＲＰＥ１９細胞のサイトカイン特性を図示するものである。
【図２４】図２４は、ｓｉＲＮＡの、ＡＲＰＥ１９細胞による総ＶＥＧＦタンパク質分泌への影響を図示するものである。
【図２５】図２５は、ｓｉＲＮＡの、ＡＲＰＥ１９細胞による総ＶＥＧＦタンパク質分泌への影響を図示するものである。
【図２６】図２６は、ｓｉＲＮＡの、ＡＲＰＥ１９細胞による総ＶＥＧＦタンパク質分泌への影響を図示するものである。
【図２７】図２７は、ｓｉＲＮＡの、ＡＲＰＥ１９細胞による総ＶＥＧＦタンパク質分泌への影響を図示するものである。
【図２８】図２８は、異なる温度条件下での、経時的なベバシラニブの安定性を図示するものである。
【図２９】図２９は、異なる温度条件下での、経時的なベバシラニブの安定性を図示するものである。
【図３０】図３０は、異なる温度条件下での、経時的なＯＰＫ−ＨＶＢ−００４の安定性を図示するものである。
【図３１】図３１は、異なる温度条件下での、経時的なＯＰＫ−ＨＶＢ−００９の安定性を図示するものである。
【図３２】図３２は、異なる温度条件下での、経時的なＯＰＫ−ＨＶＢ−０１０の安定性を図示するものである。
【図３３】図３３は、３’末端におけるヒトＶＥＧＦ、ラットＶＥＧＦ、及びマウスＶＥＧＦの配列間における相同性を図示するものである。
【図３４】図３４は、ｓｉＲＮＡの、Ｃ６細胞よるラットＶＥＧＦ分泌への影響を図示するものである。
【図３５】図３５は、ｓｉＲＮＡの、ＮＩＨ３Ｔ３細胞よるマウスＶＥＧＦ分泌への影響を図示するものである。
【図３６】図３６は、ｓｉＲＮＡの、ＡＲＰＥ１９細胞によるＶＥＧＦ分泌Ｆへの影響を図示するものである。
【図３７】図３７は、ｓｉＲＮＡの、ＡＲＰＥ１９細胞によるＶＥＧＦ分泌Ｆへの影響を図示するものである。
【図３８】図３８は、ｓｉＲＮＡの、ＡＲＰＥ１９細胞によるＶＥＧＦ分泌Ｆへの影響を図示するものである。
【図３９】図３９は、ｓｉＲＮＡの、ＮＩＨ３Ｔ３細胞によるマウスＶＥＧＦ分泌Ｆへの影響を図示するものである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明の組成物及び方法について記載する前に、本発明に記載されている特定の処理過程、組成物、又は方法論は変化しうるものであるため、本発明はこれらに限定されないことを理解するべきである。同様に、本記載内容において使用される専門用語は、実施形態の特定の例を記述する目的でのみ用いられており、本発明の範囲を限定することを意図したものではなく、本発明は添付の請求項によってのみ限定されるものであることを理解するべきである。別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的及び科学的な用語は、当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を持つ。本明細書に記載の方法及び材料に類似又は同等の、あらゆる方法及び材料が、本発明の実施形態の実施又は検証において使用される可能性があるが、好ましい方法、装置、及び材料を目下記載する。本明細書において言及される全ての出版物は、参照によりその全体が本明細書中に援用される。本明細書におけるいかなる記載も、先行発明の理由によって、そうした開示に対して本発明が先行する権利を有しないことを承認するものであると解釈されるべきではない。
【００１７】
本明細書及び添付の請求項において使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は文脈において明らかに別記されない限り、複数形への言及も含むことも留意しなければならない。従って、例えば、「分子」への言及は、１つ又は複数の分子及び当業者に周知のその分子の同等物への言及である。本明細書において使用される場合、「約」という用語は、用語とともに用いられる数字の±１０％の数値であることを意味する。従って、約５０％は４５％〜５５％の範囲を意味する。
【００１８】
本明細書で使用される場合、「被験者」はヒト又は非ヒト動物を含む。特定の実施形態において、前記被験者はヒトである。
【００１９】
本明細書で使用される場合、ｓｉＲＮＡの「有効量」とは、細胞中の標的ｍＲＮＡのＲＮＡｉ媒介分解を引き起こすのに十分な量のことである。臨床的有効量という用語は、被験者に投与したときにＲＮＡサイレンシングにより被験者の血管新生の進行を抑制するであろう量のことである。
【００２０】
本明細書で使用される場合、「単離」とはヒトの介在により自然状態から改変されたこと、又は取り出されたことを意味する。例えば、生きている動物中に天然に存在するｓｉＲＮＡは「単離」されていないが、合成ｓｉＲＮＡ、或いは部分的に又は完全にその自然状態において同時に存在する物質から分離されたｓｉＲＮＡは「単離」されている。単離ｓｉＲＮＡは実質的に精製された形で存在する場合もあるし、自然ではない環境、例えば、当該ｓｉＲＮＡが送達される細胞中などに存在する場合もある。
【００２１】
本明細書で使用される場合、「標的ｍＲＮＡ」とは、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖と相補的なセンス配列を有するｍＲＮＡを意味する。こうした標的ｍＲＮＡは、当該ｓｉＲＮＡが当該標的ｍＲＮＡをサイレンスするか又はそうでなくとも当該標的ｍＲＮＡとＲＩＳＣ複合体を形成するように機能する限り、当該ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖に１００％相同である必要はない。本開示の方法中の特定の使用における標的ｍＲＮＡには、例えば、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１６５、及びＶＥＧＦ１８９、ＶＥＧＦ２０６、ＶＥＧＦ１８３、ＶＥＧＦ１４８、及びＶＥＧＦ１４５、及びこれらの組み合わせなどの、血管新生促進性ＶＥＧＦのｍＲＮＡイソ型が含まれる。その他の特定の実施形態においては、前記標的ｍＲＮＡは血管新生抑制性ＶＥＧＦ１６５ｂのｍＲＮＡを有しないが、少なくとも１つのその他のＶＥＧＦイソ型を標的にする。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「部分的に非相補的」という用語は、非標的配列に対してある程度の配列相同性をおそらく共有しているが、それでもＲＮＡサイレンシングが当該非標的配列において発生しない程度に十分に異なっているｓｉＲＮＡ配列を意味するように意図されたものである。部分的に非相補的な配列には、非標的配列に対して９０％相同な配列、８５％相同な配列、８０％相同な配列、７５％相同な配列、７０％相同な配列、６５％相同な配列、６０％相同な配列、５５％相同な配列、５０％相同な配列、４５％相同な配列、４０％相同な配列、３５％相同な配列、３０％相同な配列、２５％相同な配列、２０％相同な配列、１５％相同な配列、１０％相同な配列、５％相同な配列、２％相同な配列、及び１％相同な配列が含まれる。非標的配列に完全に非相同である配列は、当該配列に対して非相補的であると見なされる。
【００２３】
本明細書で使用される場合、ヒトＶＥＧＦ又はｍＲＮＡに「同族」である遺伝子又はｍＲＮＡとは、他の哺乳動物種由来のヒトＶＥＧＦと相同の遺伝子又はｍＲＮＡである。例えば、マウス由来の同族ＶＥＧＦのｍＲＮＡが、配列ＩＤ番号１において示されている。
【００２４】
別記が無い限り、本明細書における全ての核酸配列は５’から３’の方向で示されている。同様に、核酸配列中の全てのデオキシリボヌクレオチドは、大文字（例えば、デオキシチミジンは「Ｔ」である）によって表わされており、核酸配列中のリボヌクレオチドは、小文字（例えば、ウリジンは「ｕ」である）で表わされている。
【００２５】
ＶＥＧＦ及びその様々なイソ型を標的とするｓｉＲＮＡを有する組成物及び方法は、血管新生を抑制するために、特に血管新生疾患の治療のために用いることが可能である。前記ｓｉＲＮＡは、前記ｍＲＮＡのＲＮＡｉ媒介分解を引き起こし、その結果、前記ＶＥＧＦ及びそのイソ型のタンパク質産物が生産されないか又は生産量を減少させると考えられている。血管新生の開始及び維持には、Ｆｌｔ−１受容体又はＦｌｋ−１／ＫＤＲ受容体へのＶＥＧＦの結合が必要とされるので、ＶＥＧＦ及びそのイソ型並びにＦｌｔ−１受容体又はＦｌｋ−１／ＫＤＲ受容体のｍＲＮＡに対するｓｉＲＮＡ媒介分解もまた、血管新生過程を抑制するために用いることができる。
【００２６】
従って、本開示の一態様においては、長さ約１７ヌクレオチド〜約２９ヌクレオチドの標的ｍＲＮＡを目標とした短鎖二本鎖ＲＮＡを、特定の実施形態においては長さ約１９ヌクレオチド〜約２５ヌクレオチドの標的ｍＲＮＡを目標とした短鎖二本鎖ＲＮＡを有する単離ｓｉＲＮＡを提供する。前記ｓｉＲＮＡは、標準的なワトソン・クリック塩基対相互作用（以下「塩基対形成」）によりアニールされた、センスＲＮＡ鎖及び相補的なアンチセンスＲＮＡ鎖を有する。以下により詳細に記載されているように、前記センス鎖は前記標的ｍＲＮＡに含まれている標的配列に同一又は密接に相同である核酸配列を有する。
【００２７】
前記ｓｉＲＮＡの前記センス鎖及びアンチセンス鎖は、２つの相補的な一本鎖ＲＮＡ分子を有していてもよく、また２つの相補的な部位が塩基対形成し、それが一本鎖の「ヘアピン」領域によって共有結合的に接続している、１個の分子を有していてもよい。いかなる理論にも拘束されるつもりはないが、後者の種類のｓｉＲＮＡ分子の前記ヘアピン領域は細胞内で「ダイサー（Ｄｉｃｅｒ）」タンパク質（またはその同等物）によって切断され、個別な２つの塩基対形成したＲＮＡ分子のｓｉＲＮＡを形成すると考えられている。
【００２８】
ヒトＶＥＧＦのスプライシング変異型は公知であり、ＶＥＧＦ１２１（配列ＩＤ番号２）、ＶＥＧＦ１６５（配列ＩＤ番号３）、ＶＥＧＦ１８９（配列ＩＤ番号４）、ＶＥＧＦ２０６（配列ＩＤ番号５、ＧｅｎＢａｎｋアクセス番号ＣＳ２４５５７９）、ＶＥＧＦ１８３（ＧｅｎＢａｎｋアクセス番号ＡＪ０１０４３８）、ＶＥＧＦ１４８（ＧｅｎＢａｎｋアクセス番号ＡＦ０９１３５２）、及びＶＥＧＦ１４５（ＧｅｎＢａｎｋアクセス番号ＣＳ２２４５５７８）などの血管新生促進性ＶＥＧＦのｍＲＮＡイソ型、並びに血管新生抑制性ＶＥＧＦのｍＲＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋアクセス番号ＡＦ４３０８０６）が含まれる。前記ヒトＶＥＧＦ及びそのイソ型並びにＦｌｔ−１（配列ＩＤ番号６）又はＦｌｋ−１／ＫＤＲ（配列ＩＤ番号７）遺伝子から転写されたｍＲＮＡは、当該技術分野で公知の手法を用いて選択的スプライシング型を解析することができる。そうした手法には、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、ノーザンブロッティング、及びｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションが含まれる。ｍＲＮＡ配列を解析する手法は、例えば、Ｂｕｓｔｉｎｇ  ＳＡ（２０００），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２５：１６９−１９３に記述されており、この文献の全開示が参照することにより本明細書中に援用される。選択的スプライシング型を同定する代表的な手法についても以下に記載する。
【００２９】
例えば、ある疾患遺伝子に関連するヌクレオチド配列を包含するデータベースを、選択的スプライシング型ｍＲＮＡを同定するのに用いることができる。こうしたデータベースには、ＧｅｎＢａｎｋ、Ｅｍｂａｓｅ、及び癌ゲノム解剖プロジェクト（Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｔｏｍｙ  Ｐｒｏｊｅｃｔ、ＣＧＡＰ）のデータベースが含まれる。前記ＣＧＡＰデータベースは例えば、様々な種類のヒト癌由来の発現配列タグ（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｔａｇ、ＥＳＴ）を包含する。前記ＶＥＧＦ及びそのイソ型並びにＦｌｔ−１又はＦｌｋ−１／ＫＤＲ遺伝子由来のｍＲＮＡ又は遺伝子配列は、こうしたデータベースに対して問い合わせを行い、選択的スプライシング型のｍＲＮＡを表わすＥＳＴがこれらの遺伝子において見つかるかどうかを決定するために用いることができる。
【００３０】
「ＲＮａｓｅプロテクション」と呼ばれる手法もまた、ＶＥＧＦ及びそのイソ型並びにＦｌｔ−１又はＦｌｋ−１／ＫＤＲの選択的スプライシング型ｍＲＮＡを同定するために用いることができる。ＲＮａｓｅプロテクションは、遺伝子配列の合成ＲＮＡへの翻訳に関与し、この合成ＲＮＡは他の細胞由来のＲＮＡ、例えば、新血管新生部位又はその周辺組織の細胞由来のＲＮＡとハイブリダイズする。次いで、前記ハイブリダイズしたＲＮＡを、ＲＮＡ：ＲＮＡのハイブリダイゼーションの不整合を認識する酵素によって処理する。予想される断片よりも小さい場合は、選択的スプライシング型ｍＲＮＡが存在することを示している。この推定選択的スプライシング型ｍＲＮＡをクローン化し、当業者に周である方法で配列決定することができる。
【００３１】
ＲＴ−ＰＣＲもまた、ＶＥＧＦ及びそのイソ型並びにＦｌｔ−１又はＦｌｋ−１／ＫＤＲの選択的スプライシング型ｍＲＮＡを同定するために用いることができる。ＲＴ−ＰＣＲにおいては、当業者に周知の方法を用いて、組織又は細胞由来のｍＲＮＡをｃＤＮＡに変換する。次いで、このｃＤＮＡのコード配列を、５’翻訳領域に位置させた順方向プライマーと、３’翻訳領域に位置させた逆方向プライマーとを用いたＰＣＲを通して増幅する。幾つかの実施形態においては、前記ｃＤＮＡをエンコードする全ての塩基が増幅される。この増幅産物を選択的スプライシング型のために解析することが可能であり、例えば、当該増幅産物のサイズと正常にスプライシングされたｍＲＮＡから想定される産物のサイズとの比較を、例えばアガロース電気泳動によって行う。前記増幅産物のサイズに変化がある場合は、選択的スプライシングを意味する可能性がある。
【００３２】
変異型ＶＥＧＦ及びそのイソ型並びにＦｌｔ−１又はＦｌｋ−１／ＫＤＲ遺伝子から生産されたｍＲＮＡもまた、上記の選択的スプライシング型を同定する手法を通して容易に同定が可能である。本明細書で使用される場合、「変異型」のＶＥＧＦ及びそのイソ型並びにＦｌｔ−１又はＦｌｋ−１／ＫＤＲの遺伝子又はＲＮＡには、本明細書に記載のＶＥＧＦ及びそのイソ型並びにＦｌｔ−１又はＦｌｋ−１／ＫＤＲの配列とは配列の異なる、ヒトＶＥＧＦ及びそのイソ型並びにＦｌｔ−１又はＦｌｋ−１／ＫＤＲの遺伝子又はＲＮＡが含まれる。従って、これらの遺伝子の対立形質型、及びそれより生産されるｍＲＮＡが、本発明の目的において「変異型」と見なされる。
【００３３】
ヒトＶＥＧＦ及びそのイソ型並びにＦｌｔ−１又はＦｌｋ−１／ＫＤＲのｍＲＮＡは、それら各々の選択的スプライシング型、同族、又は変異型と共通している標的配列を含有していると理解されている。そうした共通の標的配列を有する１個のｓｉＲＮＡは、それ故に、当該共通の標的配列を含有する異なる種類のＲＮＡに対してＲＮＡｉ媒介分解を引き起こすことができる。例えば、図１０に示されている通り、全てのＶＥＧＦイソ型はエクソン１〜５を共有する。しかしながら、ＶＥＧＦ１２１（配列ＩＤ番号２）においては、エクソン６及びエクソン７（７ａ及び７ｂ）が欠失している。ＶＥＧＦ１６５（配列ＩＤ番号３）においては、エクソン６（６ａ及び６ｂ）が欠失している。ＶＥＧＦ１８９（配列ＩＤ番号４）においては、エクソン６ｂが欠失している。ＶＥＧＦ１８３においては、エクソン６ａの一部及びエクソン６ｂの全配列が欠失している。ＶＥＧＦ１４８においては、エクソン６（６ａ及び６ｂ）、エクソン７ｂ、及びエクソン８の一部に欠失がある。ＶＥＧＦ１４５のいては、エクソン６ｂ及びエクソン７（７ａ及び７ｂ）が欠失している。ＶＥＧＦの唯一知られている血管新生阻害性イソ型であるＶＥＧＦ１６５ｂは、エクソン６（６ａ及び６ｂ）を欠失しているが、加えて偽エクソン９を含有している。前記偽エクソン９とは、停止コドンの欠失によりリーディングフレームにずれが発生し、それによって３’ＵＴＲの一部がタンパク質として翻訳されることを許した結果である。例えば、Ｂａｔｅｓら，Ｃａｎ．Ｒｅｓ．６２：４１２３（２００２）を参照されたい。この文献は参照によりその全体が援用される。ＶＥＧＦ２０６（配列ＩＤ番号５）は欠失の無いＶＥＧＦの配列全長である。従って、特定の実施形態において、当該ｓｉＲＮＡは特定のイソ型間で共有されるがその他のイソ型間では共有されないエクソンを標的とするので、当該ｓｉＲＮＡは、ＶＥＧＦ１２１（配列ＩＤ番号２）、ＶＥＧＦ１６５（配列ＩＤ番号３）、ＶＥＧＦ１８９（配列ＩＤ番号４）、ＶＥＧＦ２０６（配列ＩＤ番号５、ＧｅｎＢａｎｋアクセス番号ＣＳ２４５５７９）、ＶＥＧＦ１８３（ＧｅｎＢａｎｋアクセス番号ＡＪ０１０４３８）、ＶＥＧＦ１４８（ＧｅｎＢａｎｋアクセス番号ＡＦ０９１３５２）、及びＶＥＧＦ１４５（ＧｅｎＢａｎｋアクセス番号ＣＳ２２４５５７８）などのイソ型の、１つ又は複数を標的とし、ＶＥＧＦ１６５ｂなどのその他のイソ型は看過する。
【００３４】
ある実施形態においては、第１のＲＮＡ鎖及び第２のＲＮＡ鎖の二本鎖を有する単離ｓｉＲＮＡを提供し、この第１のＲＮＡ鎖は血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）イソ型の約１７〜約２５の連続したヌクレオチドの標的配列と同一なヌクレオチド配列を有するＲＮＡ鎖であり、このＶＥＧＦイソ型はヒトのＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１８９、ＶＥＧＦ２０６、ＶＥＧＦ１８３、ＶＥＧＦ１４８、ＶＥＧＦ１４５、及びその組み合わせから成る群から選択されるＶＥＧＦイソ型であり、さらにこのｓｉＲＮＡはＶＥＧＦ１６５ｂに対して当該ヒトＶＥＧＦのｍＲＮＡが配列ＩＤ番号４２ではないことを条件として、少なくとも部分的に非相補的であるｓｉＲＮＡである。さらに別の実施形態には、そうした血管新生を抑制するｓｉＲＮＡと、治療有効量のそうした血管新生を抑制するｓｉＲＮＡを有する医薬組成物とが含まれる。
【００３５】
前記ｓｉＲＮＡは、部分精製したＲＮＡ、実質的に純粋なＲＮＡ、合成したＲＮＡ、又は組換え技術で生産されたＲＮＡを有していてもよく、また同様に、１つ又は複数のヌクレオチドの付加、欠失、置換、及び／又は変化により、天然に存在するＲＮＡとは異なる改変ＲＮＡを有していてもよい。そうした改変は、非ヌクレオチド材料を当該ｓｉＲＮＡの末端や当該ｓｉＲＮＡ中の１つ又は複数のヌクレオチドなどに対して付加することを含み、また当該ｓｉＲＮＡを修飾してヌクレアーゼ分解に耐性を持たせることを含んでいてもよい。
【００３６】
前記ｓｉＲＮＡの片方又は両方の鎖は３’突出末端を有していてもよい。本明細書において使用される場合、「３’突出末端」とは、二本鎖ＲＮＡの３’末端から延びる少なくとも１つの不対のヌクレオチドを指す。幾つかの実施形態においては、前記ｓｉＲＮＡは突出末端を有さず、平滑末端を有する。幾つかの実施形態においては、前記ｓｉＲＮＡの両末端は平滑末端を有する。幾つかの実施形態においては、前記ｓｉＲＮＡは標的ｍＲＮＡに接触する１７ｍｅｒとｄＴｄＴ突出末端とを有する。幾つかの実施形態においては、前記ｓｉＲＮＡは、様々な種の細胞におけるＶＥＧＦの分泌又は生産を抑制することができるｓｉＲＮＡである。例えば、幾つかの実施形態においては、前記ｓｉＲＮＡは、ヒト細胞、ラット細胞、及び／又はマウス細胞におけるＶＥＧＦの分泌又は生産を抑制することができる。幾つかの実施形態においては、前記ｓｉＲＮＡは、マウス細胞及びヒト細胞におけるＶＥＧＦの分泌又は生産を抑制することができるが、ラット細胞においてはＶＥＧＦの分泌又は生産を抑制することができない。幾つかの実施形態においては、前記ｓｉＲＮＡは、ラット細胞及びヒト細胞におけるＶＥＧＦの分泌又は生産を抑制することができるが、マウス細胞においてはＶＥＧＦの分泌又は生産を抑制することができない。幾つかの実施形態においては、前記ｓｉＲＮＡは、ヒト細胞、マウス細胞、及びラット細胞におけるＶＥＧＦの分泌又は生産を抑制することができる。前記ｓｉＲＮＡの選択性は、異なる配列間の相同性を基にすることができる。例えば、図３３に、ヒト、マウス、及びラットのＶＥＧＦをエンコードする終末コドン間の相同性を示す。これらの違いは、１つ又は複数の種に由来するＶＥＧＦの生産を選択的に抑制することのできるｓｉＲＮＡを生産するのに利用することができる。
【００３７】
幾つかの実施形態においては、２１より少ない、例えば１７、１８、１９、又は２０のヌクレオチドを有するｓｉＲＮＡは、任意の非選択的なインビボ応答を避けるために使用することができる。（Ａｍｂａｔｉ，Ｎａｔｕｒｅ，４５２，５９１−５９７（３  Ａｐｒｉｌ  ２００８）を参照されたい）。例えば、２１より少ないヌクレオチドを有するｓｉＲＮＡは、インビボでのＴＬＲ３応答の潜在的な活性化を避けるために使用することができる。
【００３８】
従って、ある実施形態においては、前記ｓｉＲＮＡは少なくとも１つの３’突出末端を有し、この３’突出末端の長さは１〜約６ヌクレオチド（リボヌクレオチド又はデオキシヌクレオチドを含む）であり、好ましくは１〜約５ヌクレオチドであり、より好ましくは１〜約４ヌクレオチであり、特に好ましくは約２〜約４ヌクレオチドである。
【００３９】
前記ｓｉＲＮＡ分子の両方の鎖が３’突出末端を有する実施形態においては、この３’突出末端はそれぞれの鎖で同じ長さ又は異なる長さである。最も好ましい実施形態においては、前記３’突出末端は前記ｓｉＲＮＡの両方の鎖に存在し、２ヌクレオチドの長さである。例えば、前記ｓｉＲＮＡのそれぞれの鎖は、ジチミヂル酸（「ＴＴ」）又はジウリジル酸（「ｕｕ」）の３’突出末端を有する。
【００４０】
本発明のｓｉＲＮＡの安定性を向上させるために、前記３’突出末端は分解に対して安定化されていてもよい。ある実施形態においては、前記突出末端は、アデノシンヌクレオチド又はグアノシンヌクレオチドなどのプリンヌクレオチドを含むことによって安定化されている。或いは、例えば３’突出末端中のウリジンヌクレオチドの２’−デオキシチミジンへの置換といった、修飾された類似物質によるピリミジンヌクレオチドの置換は許容され、ＲＮＡｉ分解の効率に影響を与えない。特に、２’−デオキシチミジンにおいて２’のヒドロキシル基が存在しないことは、組織培養培地における前記３’突出末端のヌクレアーゼ耐性を顕著に向上させる。
【００４１】
特定の実施形態においては、前記ｓｉＲＮＡは、ＡＡ（Ｎ１９）ＴＴ又はＮＡ（Ｎ２１）の配列（Ｎは任意のヌクレオチドである）を有する。これらのｓｉＲＮＡは約３０〜７０％のＧ／Ｃを有し、好ましくは約５０％のＧ／Ｃを有する。前記ｓｉＲＮＡのセンス鎖の配列は、（Ｎ１９）ＴＴ又はＮ２１（つまり、位置３〜２３）にそれぞれ対応している。後者の場合においては、前記センスｓｉＲＮＡの３’末端はＴＴに変換される。この配列変換の理論的理由は、センス鎖及びアンチセンス鎖の３’突出末端の配列構成に関して、対称的になっている二重鎖を作成するためである。前記ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖が、次いで前記センス鎖の位置１〜２１に対して相補的に合成される。
【００４２】
これらの実施形態においては、２３ヌクレオチドの前記センス鎖の位置１は、前記アンチセンス鎖によって配列特異的な方式で認識されないため、前記アンチセンス鎖における３’最末端のヌクレオチド残基は、意図的に選択することができる。しかしながら、前記アンチセンス鎖の最後から２番目のヌクレオチド（いずれの実施形態においても、２３ヌクレオチドの前記センス鎖の位置２に相補的な位置）は、一般的に標的配列に対して相補的になっている。
【００４３】
別の実施形態においては、前記ｓｉＲＮＡはＮＡＲ（Ｎ１７）ＹＮＮの配列（Ｒはプリン（例えばＡ又はＧ）であり、Ｙはピリミジン（例えばＣ又はＵ／Ｔ））を有する。この実施形態におけるそれぞれ２１ヌクレオチドのセンスＲＮＡ鎖及びアンチセンスＲＮＡ鎖は、従って、一般的にプリンヌクレオチドから開始する。こうしたｓｉＲＮＡは、ｐｏｌＩＩＩプロモーターからのＲＮＡの発現は最初に翻訳されるヌクレオチドがプリンであるときのみ効果的であると考えられているので、標的部位に変更を加えることなくｐｏｌＩＩＩ発現ベクターから発現させることが可能である。
【００４４】
さらに別の実施形態においては、前記ｓｉＲＮＡは５以下の連続したプリン又はピリミジンを持つ配列を有する。さらに別の実施形態においては、前記ｓｉＲＮＡは５以下の連続した同じ核酸塩基（つまり、Ａ、Ｃ、Ｇ、又はＵ／Ｔ）を持つヌクレオチドを持つ配列を有する。
【００４５】
前記ｓｉＲＮＡは、任意の標的ｍＲＮＡ配列（「標的配列」）中の、約１９〜２５の連続したヌクレオチドの任意の部位を標的にすることができる。ｓｉＲＮＡの標的配列を選択する手法については、例えば、Ｔｕｓｃｈｌ  Ｔら，「Ｔｈｅ  ｓｉＲＮＡ  Ｕｓｅｒ  Ｇｕｉｄｅ」（２００２年１０月１１日改訂）において示されており、この全開示は参照により本明細書中に援用される。「Ｔｈｅ  ｓｉＲＮＡ  Ｕｓｅｒ  Ｇｕｉｄｅ」は、Ｔｈｏｍａｓ  Ｔｒｕｓｃｈｌ博士（ドイツ、３７０７７  Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ、マックス・プランク生物物理化学研究所、ＡＧ  １０５、細胞生化学部門）によって運営されるウェブサイトにおいてワールドワイドウェブ上で利用可能で、マックス・プランク研究所のウェブサイトにアクセスし、「ｓｉＲＮＡ」のキーワードを使って検索することで見つけることが可能である。従って、本発明のｓｉＲＮＡのセンス鎖は、前記標的ｍＲＮＡの約１９〜約２５のヌクレオチドの任意の連続部位と同一のヌクレオチド配列を有する。
【００４６】
幾つかの実施形態において、前記ｓｉＲＮＡは１９ヌクレオチドであり、標的ｍＲＮＡと同一の１７ヌクレオチドを有する。幾つかの実施形態において、前記ｓｉＲＮＡは１９ヌクレオチドであり、少なくとも１つの平滑末端を有する。幾つかの実施形態において、１９ｍｅｒのそれぞれの末端は平滑末端を有する。幾つかの実施形態において、前記１９ｍｅｒは少なくとも１つのｄＴ突出末端を有する。幾つかの実施形態において、前記１９ｍｅｒは２つのｄＴ突出末端を有する。
【００４７】
一般的に、前記標的ｍＲＮＡ中の標的配列は、標的ｍＲＮＡに対応する所与のｃＤＮＡ配列から選択することが可能であり、好ましくは、開始コドンから５０〜１００ｎｔ下流（つまり、３’方向）の位置から開始する。しかしながら、前記標的配列は５’非翻訳領域又は３’非翻訳領域に位置するか、又は開始コドンの周辺領域に位置することができる（例えば、以下の表１における配列ＩＤ番号７３及び７４の標的配列を参照されたいが、これらの配列はＶＥＧＦ１２１の５’末端から１００ｎｔ以内に位置している）。
【００４８】
本発明のさらに別の実施形態においては、前記標的ｍＲＮＡの配列は５以下の連続したプリン又はピリミジンを有する。例えば、ＶＥＧＦ１２１のｃＤＮＡの配列中の相応しい標的配列は、以下の通りである。
【００４９】
ＴＣＡＴＣＡＣＧＡＡＧＴＧＧＴＧＡＡＧ（配列ＩＤ番号８）
従って、この配列を標的とするｓｉＲＮＡであり、３’ｕｕ突出末端をそれぞれの鎖に有するｓｉＲＮＡ（突出末端は太字で示される）は、以下の通りである。
【００５０】
５’−ｕｃａｕｃａｃｇａａｇｕｇｇｕｇａａｇｕｕ−３’（配列ＩＤ番号９）
３’−ｕｕａｇｕａｇｕｇｃｕｕｃａｃｃａｃｕｕｃ−５’（配列ＩＤ番号１０）
同じ配列を標的とするが、３’ＴＴ突出末端をそれぞれの鎖に有するｓｉＲＮＡ（突出末端は太字で示される）は以下の通りである。
【００５１】
５’−ｕｃａｕｃａｃｇａａｇｕｇｇｕｇａａｇＴＴ−３’（配列ＩＤ番号１１）
３’−ＴＴａｇｕａｇｕｇｃｕｕｃａｃｃａｃｕｕｃ−５’（配列ＩＤ番号１２）
ｓｉＲＮＡを得ることのできる他のＶＥＧＦ１２１標的配列は、表１に示してある。表１に列挙された全てのＶＥＧＦ１２１標的配列は、ＶＥＧＦ１２１選択的スプライシング型の部分で、全てのヒトＶＥＧＦ選択的スプライシング型と共通の部分の中にあると理解される。従って、表１中の前記ＶＥＧＦ１２１標的配列は、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１８９、及びＶＥＧＦ２０６のｍＲＮＡも標的にすることができる。特定のＶＥＧＦイソ型を標的にする標的配列も、容易に同定することが可能である。例えば、ＶＥＧＦ１６５のｍＲＮＡを標的にするが、ＶＥＧＦ１２１のｍＲＮＡは標的にしない標的配列は、ＡＡＣＧＴＡＣＴＴＧＣＡＧＡＴＧＴＧＡＣＡ（配列ＩＤ番号１３）である。逆に、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１６５、及びＶＥＧＦ１８９、ＶＥＧＦ２０６、ＶＥＧＦ１８３、ＶＥＧＦ１４８、及びＶＥＧＦ１４５、及びこれらの組み合わせなどの、血管新生促進性ＶＥＧＦのｍＲＮＡイソ型を標的にするが、血管新生抑制性のＶＥＧＦ１６５ｂのｍＲＮＡを標的にしない標的配列は、当該ＶＥＧＦのｍＲＮＡが配列ＩＤ番号４２ではないことを条件として、表２に見られる配列を含む。特定の実施形態においては、前記ヒトＶＥＧＦのｍＲＮＡは、配列ＩＤ番号８６、配列ＩＤ番号８７、配列ＩＤ番号８８、配列ＩＤ番号８９、配列ＩＤ番号９０、配列ＩＤ番号９１、配列ＩＤ番号９２、配列ＩＤ番号９３、配列ＩＤ番号９４、配列ＩＤ番号９５、配列ＩＤ番号９６、配列ＩＤ番号９７、配列ＩＤ番号９８、配列ＩＤ番号９９、配列ＩＤ番号１００、配列ＩＤ番号１０１、配列ＩＤ番号１０２、配列ＩＤ番号１０３、配列ＩＤ番号１０４、配列ＩＤ番号１０５、配列ＩＤ番号１０６、配列ＩＤ番号１０７、配列ＩＤ番号１０８、配列ＩＤ番号１０９、配列ＩＤ番号１１０、配列ＩＤ番号１１１、配列ＩＤ番号１１２、配列ＩＤ番号１１３、配列ＩＤ番号１１４、配列ＩＤ番号１１５、配列ＩＤ番号１１６、配列ＩＤ番号１１７、及び配列ＩＤ番号１１８から成る群から選択される。特定の実施形態においては、前記ヒトＶＥＧＦのｍＲＮＡは、配列ＩＤ番号８８及び配列ＩＤ番号９４から選択される。
【００５２】
前記血管新生促進性のＶＥＧＦイソ型を選択的に標的にし、その一方で前記血管新生抑制性のイソ型を看過することによって、ｓｉＲＮＡ処理において血管新生抑制効果を向上させることが可能である。図１１に示しているように、エクソン７とエクソン９の間の領域は、前記血管新生促進性の配列と前記血管新生抑制性の配列の間で異なる。様々な実施形態によれば、前記ｓｉＲＮＡが、前記血管新生促進性のイソ型に対して少なくとも部分的に相補的であるが、前記血管新生抑制性イソ型に対して少なくとも部分的に又は完全に非相補的である、この領域を選択的に標的にすることが可能である。その結果として、特定の実施形態においては、前記ｓｉＮＡは、当該ＶＥＧＦのｍＲＮＡが配列ＩＤ番号４２ではないことを条件として、前記血管新生抑制性イソ型であるＶＥＧＦ１６５ｂの発現を抑制しないであろう。特定の実施形態においては、前記ヒトＶＥＧＦのｍＲＮＡは、配列ＩＤ番号８６、配列ＩＤ番号８７、配列ＩＤ番号８８、配列ＩＤ番号８９、配列ＩＤ番号９０、配列ＩＤ番号９１、配列ＩＤ番号９２、配列ＩＤ番号９３、配列ＩＤ番号９４、配列ＩＤ番号９５、配列ＩＤ番号９６、配列ＩＤ番号９７、配列ＩＤ番号９８、配列ＩＤ番号９９、配列ＩＤ番号１００、配列ＩＤ番号１０１、配列ＩＤ番号１０２、配列ＩＤ番号１０３、配列ＩＤ番号１０４、配列ＩＤ番号１０５、配列ＩＤ番号１０６、配列ＩＤ番号１０７、配列ＩＤ番号１０８、配列ＩＤ番号１０９、配列ＩＤ番号１１０、配列ＩＤ番号１１１、配列ＩＤ番号１１２、配列ＩＤ番号１１３、配列ＩＤ番号１１４、配列ＩＤ番号１１５、配列ＩＤ番号１１６、配列ＩＤ番号１１７、及び配列ＩＤ番号１１８から成る群から選択される。特定の実施形態においては、前記ヒトＶＥＧＦのｍＲＮＡは、配列ＩＤ番号８８及び配列ＩＤ番号９４から選択される。
【００５３】
ヒトＦｌｋ−１／ＫＤＲのヒトＦｌｔ−１の典型的な標的配列は、２００３年７月１８日出願の国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２００３／００２２４４４号に示されており、参照によりその全体が本明細書中に援用される。
【００５４】
【表１】
0005832293.tif 000002
【００５５】
0005832293.tif 000003
【００５６】
【表２】
0005832293.tif 000004
【００５７】
前記ｓｉＲＮＡは、当業者に公知の幾つかの手法を用いて得ることができる。例えば、前記ｓｉＲＮＡは、当該技術分野で公知の方法を用いて化学的に合成するか又は組換え技術で生産することが可能であり、この公知の方法としては、Ｔｕｓｃｈｌらの米国特許出願公報第２００２／００８６５３６号に記載されているハエインビトロシステムなどがあり、この全開示は参照により本明細書中に援用される。
【００５８】
特定の実施形態においては、前記ｓｉＲＮＡは、適切に保護されたリボヌクレオシドホスホラミダイト及び従来のＤＮＡ／ＲＮＡシンセサイザーを用いて、化学的に合成される。前記ｓｉＲＮＡは、２個の別個の相補的なＲＮＡ分子としてか、又は２つの相補的な領域を持つ１個のＲＮＡ分子として、合成することができる。合成ＲＮＡ分子又は合成試薬の市販業者には、Ｐｒｏｌｉｇｏ（ドイツ、Ｈａｍｂｕｒｇ）、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（米国、コロラド州、Ｌａｆａｙｅｔｔｅ）、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（Ｐｅｒｂｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅのグループ企業、米国、イリノイ州、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ），Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（米国、バージニア州、Ｓｔｅｒｌｉｎｇ）、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ（米国、マサチューセッツ州、Ａｓｈｌａｎｄ）、及びＣｒｕａｃｈｅｍ（英国、Ｇｌａｓｇｏｗ）が含まれる。
【００５９】
或いは、ｓｉＲＮＡは、適切なプロモーターを用いて、組換え環状ＤＮＡプラスミド又は組換え線状ＤＮＡプラスミドから発現させることもできる。ｓｉＲＮＡのプラスミドからの発現に適切なプロモーターには、例えば、Ｕ６又はＨ１  ＲＮＡ  ｐｏｌＩＩＩプロモーター配列及びサイトメガロウイルスプロモーターが含まれる。適切なプロモーターの選択は、当該技術分野の知識の範囲内である。本発明の組換えプラスミドは、特定の組織内、又は特定の細胞内環境において、前記ｓｉＲＮＡの発現を誘導可能又は調節可能なプロモーターを有することもできる。
【００６０】
組換えプラスミドから発現する前記ｓｉＲＮＡは、標準的な手法による培養細胞発現系から単離することもできるし、インビボの新血管新生領域又はその周辺において細胞内に発現させることもできる。インビボの細胞にｓｉＲＮＡを送達するための組換えプラスミドの使用については、以下でより詳細に議論する。
【００６１】
ｓｉＲＮＡは、２個の別個の相補的なＲＮＡ分子としてか、又は２つの相補的な領域を持つ１個のＲＮＡ分子として、組換えプラスミドから発現させることができる。
【００６２】
ｓｉＲＮＡを発現させるのに適切なプラスミドの選択、ｓｉＲＮＡを発現させるために核酸配列をそのプラスミド内に挿入する方法、及びその組換えプラスミドを関心ある細胞に送達する方法は、当該技術分野の知識の範囲内である。例えば、Ｔｕｓｃｈｌ，Ｔ．（２００２），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０：４４６−４４８、Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ  ＴＲら（２００２），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９６：５５０−５５３、Ｍｉｙａｇｉｓｈｉ  Ｍら（２００２），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：４９７−５００、Ｐａｄｄｉｓｏｎ  ＰＪら（２００２），Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１６：９４８−９５８、Ｌｅｅ  ＮＳら（２００２），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：５００−５０５、及びＰａｕｌ  ＣＰら（２００２），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：５０５−５０８を参照されたい。これらの全開示は参照により本明細書中に援用される。
【００６３】
ｓｉＲＮＡを発現する核酸配列を有するプラスミドは、後述の実施例７に記載してある。そのプラスミドは、ｐＡＡＶｓｉＲＮＡと呼ばれ、ヒトＵ６ＲＮＡプロモーターの制御下でポリＴ終止配列と操作的に接続する配列をコードするセンスＲＮＡ鎖と、ヒトＵ６ＲＮＡプロモーターの制御下でポリＴ終止配列と操作的に接続する配列をコードするアンチセンスＲＮＡ鎖とを有する。このｐＡＡＶｓｉＲＮＡプラスミドは、結局、ｓｉＲＮＡを発現させるためのものと同じ核酸配列を有する組換えアデノ随伴ウイルスベクターの作製における利用を意図したものである。
【００６４】
本明細書で使用する場合、「ポリＴ終止配列と操作的に接続する」とは、センス鎖又はアンチセンス鎖をコードする核酸配列が当該ポリＴ終止配列の５’側のすぐ隣に近接していることを意味する。前記プラスミドからセンス配列又はアンチセンス配列を転写する間、前記ポリＴ終止シグナルは転写を終止させるように働く。
【００６５】
本明細書に使用されているように、プロモーターの「制御下」とは、プロモーターがセンスまたはアンチセンスコーディング配列の転写を開始できるように、センスまたはアンチセンス鎖をエンコーディングする核酸配列が、プロモーターの３’に位置することを意味する。
【００６６】
ｓｉＲＮＡは、生体内で新血管形成の領域で、またはその近くで、細胞内の組換えウイルスベクターから発現されることもある。本発明の組換え型ウイルスベクターは、ｓｉＲＮＡ及びｓｉＲＮＡ配列を発現するための任意の適切なプロモーターをエンコーディングする配列を有する。適切なプロモーターには、例えば、Ｕ６またはＨ１  ＲＮＡ  ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーター配列及びサイトメガロウイルスプロモーターを含む。他の適当なプロモーターの選択は、従来技術における範囲内である。本発明の組換え型ウイルスベクターは、特定の組織または特定の細胞内環境においてｓｉＲＮＡの発現のための誘導可能な、または、調節可能なプロモーターを含むこともある。生体内において細胞にｓｉＲＮＡを導入する組換え型ウイルスベクターの使用は、以下にさらに詳細に述べられる。
【００６７】
ｓｉＲＮＡは、別々の２つの、相補的なＲＮＡ分子として、または、２つの相補的な領域を有する単一ＲＮＡ分子として、組換え型ウイルスベクターから発現されることができる。
【００６８】
ｓｉＲＮＡ分子が発現されるようにコーディング配列を受容できる任意のウイルスベクターが使用でき、例えば、アデノウイルス（ＡＶ）に由来するベクター；アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）；レトロウイルス（例えば、レンチウイルス（ＬＶ）、ラブドウイルス、マウス白血病ウイルス）；ヘルペスウイルスなどが挙げられる。ウイルスベクターの向性は、エンベロープ・タンパク質または他のウイルスから他の表面抗原を有するベクターをシュートタイピングすることにより、修正されることもできる。例えば、本発明のＡＡＶベクターは、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、狂犬病、エボラ、モコラウイルスなどから表面タンパク質によってシュートタイピングされることができる。
【００６９】
本発明の使用に適している組換え型ウイルスベクターの選択、ベクター内において、ｓｉＲＮＡを発現するための核酸配列を挿入する方法、及び、対象の細胞にウイルスベクターを導入する方法は、従来技術の範囲内である。例えば、Ｄｏｒｎｂｕｒｇ  Ｒ  （１９９５），Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐ．２：３０１−３１０；Ｅｇｌｉｔｉｓ  ＭＡ  （１９８８），Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：６０８−６１４；Ｍｉｌｌｅｒ  ＡＤ  （１９９０），Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐ．  １：５−１４；ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＷＦ（１９９８），Ｎａｔｕｒｅ  ３９２：  ２５−３０，を見ると、全体の開示は参照によって本明細書に組み込まれている。
【００７０】
好適なウイルスベクターは、ＡＶ及びＡＡＶ湯対のウイルスベクターである。とくに好適な実施形態では、ｓｉＲＮＡは、例えばＵ６またはＨ１  ＲＮＡプロモーターまたはサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターからなる組換え型ＡＡＶベクターからの、別々に２つの、相補的な一本鎖ＲＮＡ分子として発現される。
【００７１】
ｓｉＲＮＡを発現するための適当なＡＶベクター、組換え型ＡＶベクターを構成するための方法、及び、ターゲット細胞内にベクターを導入するための方法は、Ｘｉａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０：１００６−１０１０に記載されている。
【００７２】
ｓｉＲＮＡを発現するための適当なＡＡＶベクター、組換え型ＡＡＶベクターを構成するための方法、及び、ターゲット細胞内にＡＡＶベクターを導入する方法は、Ｓａｍｕｌｓｋｉ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７），Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６１：３０９６−３１０１；Ｆｉｓｈｅｒ  ＫＪ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６），Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７０：５２０−５３２；Ｓａｍｕｌｓｋｉ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９），Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３：３８２２−３８２６；米国特許番号５，２５２，４７９、米国特許番号５，１３９，９４１；国際特許出願番号ＷＯ９４／１３７８８及び国際特許出願番号  ＷＯ９３／２４６４１に記載されており、その全体の開示は、参照により本明細書に組み込まれている。本発明の組換え型ＡＡＶベクターを生成するための方法は、以下の実施例７において記載されている。
【００７３】
標的ｍＲＮＡのＲＮＡｉ媒介分解を引き起こすための、与えられた標的配列を含むｓｉＲＮＡの能力は、細胞内のＲＮＡまたはタンパク質の濃度を測定する標準的な技術を使用して評価することができる。例えば、ｓｉＲＮＡは、培養細胞に導入することができ、及び、標的ｍＲＮＡの濃度は、ノーザンブロットまたはドットブロット法技術によって、または定量的ＲＴ−ＰＣＲによって測定することができる。あるいは、ＶＥＧＦ及びそのイソ型の濃度は、培養細胞内のＦｌｔ−１またはＦｌｋ−１／ＫＤＲ受容体タンパク質と同様にＥＬＩＳＡまたはウエスタンブロットによって測定することができる。標的ｍＲＮＡまたはタンパク質濃度上において存在するｓｉＲＮＡの効果を測定するための適当な細胞培養システムは、下記の実施例１に記載されている。
【００７４】
与えられた標的配列を含むｓｉＲＮＡによる標的ｍＲＮＡのＲＮＡｉ媒介分解は、ＲＯＰまたはＣＮＶマウスモデルのような、新血管形成の動物モデルによって評価することもできる。例えば、ＲＯＰまたはＣＮＶマウスにおける新血管形成の領域は、ｓｉＲＮＡの投与前後で測定され、実施形態によっては、処置をしていない動物と比較される。ｓｉＲＮＡの投与されたこれらのモデルにおける新血管形成の領域の減少は、実施形態によっては、標的ｍＲＮＡの下向き調節を含む（下記の実施例６を参照）。
【００７５】
上記のように、ｓｉＲＮＡは、Ｆｌｔ−１またはＦｌｋ−１／ＫＤＲ  ｍＲＮＡ、または選択的スプライス型、それらの変異体または同族、好適にはＶＥＧＦ、さらに好適にはヒトＶＥＧＦと同様に、ＶＥＧＦ及びそのイソ型のＲＮＡｉ媒介分解を標的とし、及び引き起こすことができる。本発明のｓｉＲＮＡによる標的ｍＲＮＡの分解は、Ｆｌｔ−１またはＦｌｋ−１／ＫＤＲ遺伝子と同様にＶＥＧＦ及びそのイソ型から生成される機能的遺伝子の生成物を減少させる。したがって、本発明の他の実施形態は、対象におけるＦｌｔ−１またはＦｌｋ−１／ＫＤＲと同様に、ＶＥＧＦ１２１（配列ＩＤ番号：２）、ＶＥＧＦ１６５（配列ＩＤ番号：３）、及びＶＥＧＦ１８９（配列ＩＤ番号：４）、ＶＥＧＦ２０６（配列ＩＤ番号：５；ＧｅｎｅＢａｎｋ受付番号ＣＳ２４５５７９）、ＶＥＧＦ１８３（ＧｅｎｅＢａｎｋ受付番号ＡＪ０１０４３８）、ＶＥＧＦ１４８（ＧｅｎｅＢａｎｋ受付番号ＡＦ０９１３５２）、及び／またはＶＥＧＦ１４５（ＧｅｎｅＢａｎｋ受付番号ＣＳ２４５５７８）のようなＶＥＧＦまたはそのイソ型の発現を阻害する、標的ｍＲＮＡが分解されるように対象にｓｉＲＮＡの有効量を投与することからなる方法を提供する。Ｆｌｔ−１及びＦｌｋ−１／ＫＤＲ遺伝子と同様に、ＶＥＧＦ及びそのイソ型の生成物が、血管形成を開始または維持するのに必要とされるのと同様に、本発明の他の実施形態は、存在するｓｉＲＮＡによる標的ｍＲＮＡのＲＮＡｉ媒介分解によって対象における血管形成を阻害する方法を提供する。
【００７６】
標的ｍＲＮＡのＲＮＡｉ媒介分解は、対象の細胞内における標的ｍＲＮＡまたはタンパク質の濃度を測定することにより、上記のｍＲＮＡまたはタンパク質を分離及び定量化するための標準技術を使用することにより、検出することができる。
【００７７】
血管形成の阻害は、対象内の病原性または非病原性の血管形成の過程を直接測定することによって評価することができる。例えば、ｓｉＲＮＡによる治療前後での新血管形成領域のサイズを観察することが挙げられる。新血管形成領域のサイズが同じまま、または減少している場合に、血管形成の阻害が示されている。対象内の新血管形成領域のサイズを観察及び測定するための技術は、従来技術の範囲内である。例えば、脈絡膜新血管形成の領域は、例えばフルオレセイン血管造影法によって観察することができる。
【００７８】
血管形成の阻害は、血管形成と関連した病原性状態における変化または回復を観察することで推定することもできる。例えば、ＡＲＭＤにおいては、視野損失の減速、停止または回復は、脈絡膜における血管形成の阻害を示す。腫瘍において、腫瘍の成長の減速、停止、または回復、または、腫瘍転移の減速または停止は、腫瘍部位での、または腫瘍部位近くでの血管形成の阻害を示す。非病原性の血管形成の阻害は、例えば、ｓｉＲＮＡの投与に応じて、脂肪の消失やコレステロールの減少によっても推定できる。
【００７９】
ｓｉＲＮＡが、化学量論的量において、標的ｍＲＮＡを分解すること（したがって血管形成を阻害すること）は既知である。いかなる理論にも束縛されず、ｓｉＲＮＡが、触媒方法で標的ｍＲＮＡの分解を引き起こすと考えられる。したがって、標準的な抗血管形成治療と比較して、著しく少ないｓｉＲＮＡは、治療的な効果を有するために、新血管形成の部位またはその近くに導入されることを必要とする。
【００８０】
当業者は、対象のサイズ及び重量；新血管形成または疾患浸透の範囲；対象者の年齢及び健康状態、性別；投与経路；及び局所投与か全体投与であるか、のような要因を考慮することで、与えられた対象に投与するｓｉＲＮＡの有効量を直ちに決定することができる。一般的に、ｓｉＲＮＡの有効量は、約１ナノモル（ｎＭ）から約１００ｎＭ、好適には約２ｎＭから約５０ｎＭ、さらに好適には約２．５ｎＭから約１０ｎＭの新血管形成部位、またはその近くの細胞間の濃度からなる。ｓｉＲＮＡのより多くまたはより少ない量で投与できると考えられる。
【００８１】
本発明の方法は、非病原性である血管形成、例えば、対象において通常の過程により生じる血管形成を阻害するために用いることができる。非病原性血管形成の例には、子宮内膜新血管形成、及び脂肪組織またはコレステロールの生成に関係する過程が含まれる。したがって、本発明は、例えば、重量の制御または脂質の損失を促進するため、コレステロール濃度を低下させるため、または堕胎薬として、非病原性の血管形成を阻害するための方法を提供する。
【００８２】
本発明は、血管形成疾患、例えば、病原性が不適当な、または、制御されていない血管形成と関連する疾患に関連する血管形成を阻害することもできる。例えば、大部分の癌の固形腫瘍は、腫瘍部位の内外で血管形成を誘発することによって、腫瘍のための十分な血液供給を生成する。この腫瘍が誘発した血管形成は、腫瘍の成長にしばしば必要とされるものであり、及び、転移細胞が血流に入ることを可能にする。
【００８３】
他の血管形成疾患には、糖尿病網膜症、加齢黄斑変性（ＡＲＭＤ）、乾癬、慢性関節リウマチ及び他の炎症性疾患を含む。これらの疾患は、新血管形成の領域内に新しく形成された血管による通常の組織の滅失によって特徴づけられる。例えば、ＡＲＭＤにおいては、脈絡膜は毛細血管によって侵入され、破壊される。ＡＲＭＤおける脈絡膜の血管形成によってすすめられた滅失は、部分的または完全なる失明に結局つながる。
【００８４】
好適には、ｓｉＲＮＡは、例えば乳癌、肺癌、頭頚部癌、脳腫瘍、腹部の癌、大腸癌、結腸直腸癌、食道癌、消化器癌、神経膠腫、肝臓癌、舌癌、神経芽細胞腫、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、ウィルムス腫瘍、多発性骨髄腫、皮膚癌（例えば黒色腫）、リンパ腫、血液の癌といった癌に関連する固形腫瘍の増殖または転移を阻害するのに使用される。
【００８５】
さらに好適には、ｓｉＲＮＡは加齢黄斑変性症の脈絡膜血管新生を阻害するために使用される。
【００８６】
血管形成疾患を治療するために、ｓｉＲＮＡは、本発明のｓｉＲＮＡとは異なる薬剤と組み合わせて対象に投与されることがある。あるいは、ｓｉＲＮＡは、血管形成疾患を治療するために設計された他の治療方法と組み合わせて対象に投与されることがある。例えば、ｓｉＲＮＡは、癌を治療する、または腫瘍転移を防止するために現在使用されている治療方法（例えば、放射線療法、化学療法、及び手術）と組み合わせて対象に与えられることがある。腫瘍を治療するために、ｓｉＲＮＡは、好適には、放射線療法、または、シスプラチン、カルボプラチン、 シクロホスファミド、５−フルオロウラシル、アドリアマイシン、ダウノルビシンまたはタモキシフェンのような化学療法薬剤と組み合わせて投与される。
【００８７】
本発明の方法においては、本発明のｓｉＲＮＡは、導入試薬とともに、裸出ＲＮＡとして、またはｓｉＲＮＡを発現する組換え型プラスミドまたはウイルスベクターとして対象に投与されることができる。
【００８８】
本発明のｓｉＲＮＡとともに投与するための適当な導入試薬には、これに限定されないが、Ｍｉｒｕｓ  Ｔｒａｎｓｉｔ  ＴＫＯ親油性試薬、リポフェクチン、リポフェクタミン、セルフェクチン、またはポリカチオン（例えばポリリシン）またはリポソームを含む。実施形態によっては、導入試薬は、Ｒｉｂｏｊｕｉｃｅ（Ｎｏｖａｇｅｎ）、アミン及び脂質系試薬からなるｓｉＲＮＡトランスフェクション試薬である。好適な導入試薬は、リポソームである。実施形態によっては、ｓｉＲＮＡは、リポソーム型導入試薬なしで導入される。
【００８９】
リポソームは、レチナールまたは腫瘍組織のような特定の組織へのｓｉＲＮＡの導入を助けることができ、及び、ｓｉＲＮＡの血中半減期を増加させることもできる。本発明において使用するのに適当なリポソームは、標準的な小胞形成脂質から形成され、コレステロールのような、中性または負に荷電したリン脂質及びステロールが一般的に含まれている。脂質の選択は一般的に、目的とするリポソームのサイズ及び血中におけるリポソームの半減期のような要因を考慮して導かれる。リポソームを調製するための様々な方法が知られており、例えば、Ｓｚｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８０），  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｂｉｏｅｎｇ．  ９：  ４６７；及び米国特許番号４，２３５，８７１，  ４，５０１，７２８，  ４，８３７，０２８，及び５，０１９，３６９に記載されており、これらの全体の開示は、参照により本明細書に組み込まれている。
【００９０】
好適には、本発明のｓｉＲＮＡを封入するリポソームは、血管形成の部位またはその近くの特定の細胞または組織へのリポソームを標的とできるリガンド分子からなる。腫瘍抗原または内皮細胞表面抗原と結合する単クローン抗体のような、腫瘍または血管内皮細胞において高頻度にみられる受容体と結合するリガンドが好適である。
【００９１】
特に好適には、本発明のｓｉＲＮＡをカプセル化しているリポソームは、単核大食細胞及び細網内皮系、例えば、構造体の表面に結合したオプソニン化阻害部分を有することによる排除を回避するために修飾される。一つの実施形態においては、本発明のリポソームは、オプソニン化阻害部分及びリガンドの両方を有することができる。
【００９２】
本発明のリポソームを調製するのに使用するためのオプソニン化阻害部分は、典型的には、リポソーム膜に結合する大きな親水性ポリマーである。本明細書で使用されているように、オプソニン化阻害部分が膜に化学的または物理的に取り付けられるとき、例えば、膜自体の内部に脂溶性アンカーの挿入によって、または、膜脂質の活性群に直接結合することによって、オプソニン化阻害部分はリポソーム膜に「結合」している。これらのオプソニン化阻害親水性ポリマーは、単核大食細胞系（「ＭＭＳ」）及び細網内皮系（「ＲＥＳ」）、によってリポソームの取り込みを著しく減少させる保護表面層を形成する。これは、例えば、米国特許番号４，９２０，０１６に記載され、その全体の開示が本明細書に参照により組み込まれている。オプソニン化阻害部分に修飾されたリポソームは、従って、修飾のされていないリポソームよりも非常に長く、循環に残る。この理由のため、この種のリポソームは、時おり「ステルス」リポソームと呼ばれる。
【００９３】
ステルスリポソームは、多孔質または「漏出性」微小血管系によって供給される組織に
蓄積されることは既知である。したがって、例えば固形腫瘍のような微小血管系欠損によって特徴付けられる標的組織は、これらのリポソームを効率的に蓄積する。Ｇａｂｉｚｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８），Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．，ＵＳＡ，１８：６９４９〜５３を参照。加えて、ＲＥＳにより減らされた取り込みは、肝臓及び脾臓において重要な蓄積を防止することにより、ステルスリポソームの毒性を低下させる。したがって、オプソニン化阻害部分によって修飾された本発明のリポソームは、本発明のｓｉＲＮＡを腫瘍細胞に導入できる。
【００９４】
リポソームを修飾するのに適当なオプソニン化阻害部分は、平均して約５００から約４０，０００ダルトン、さらに好適には約２０００から約２０，０００ダルトンの分子量の好適な水溶性ポリマーである。この種のポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）誘導体、例えば、メトキシＰＥＧまたはＰＰＧ、または、ＰＥＧまたはＰＰＧステアリン酸、ポリアクリルアミドまたはポリ  Ｎ−ビニル  ピロリドンのような合成ポリマー、線型、鎖状、またはデンドリマーポリアミドアミン、ポリアクリル酸、ガングリオシドＧＭ１のようなガングリオシドと同様に、カルボキシル基を持つまたはアミンの群が科学的に結合されるポリビニルアルコール及びポリキシリトールのようなポリアルコール、を含む。ＰＥＧ、メトキシＰＥＧ、またはメトキシＰＰＧ、またはそれらの誘導体の共重合体もまた、適当である。加えて、オプソニン化阻害ポリマーは、ＰＥＧのブロック共重合体であることがあり、及び、ポリアミノ酸、多糖類、ポリアミドアミンまたはポリエチレンアミン、またはポリヌクレオチドでありうる。オプソニン化阻害ポリマーは、例えば、ガラクツロン酸、グルクロン酸、マンヌロン酸、ヒアルロン酸、ペクチン酸、ノイラミン酸、アルギン酸、カラギナンなどのようなアミノ酸またはカルボン酸を含む天然多糖類、アミノ化多糖類またはオリゴ糖（線型または鎖状）、または、例えば、カルボキシル基の結合により生じた炭酸誘導体と反応するカルボキル化された多糖類またはオリゴ糖であることもある。
【００９５】
好適には、オプソニン化阻害部分は、ＰＥＧ、ＰＰＧ、またはそれらの誘導体である。ＰＥＧまたはＰＥＧ誘導体により修飾されたリポソームは、「ＰＥＧ化されたリポソーム」と呼ばれることもある。
【００９６】
オプソニン化阻害部分は、多数の既知の技術の任意の一つによってリポソーム膜に結合させることができる。例えば、ＰＥＧのＮ−−ヒドロキシスクシンイミド  エステルは、ホスファチジルエタノールアミン脂溶性アンカーに結合することができ、その後に膜に結合する。同様に、デキストランポリマーは、Ｎａ（ＣＮ）ＢＨ３及び６０℃でテトラヒドロフラン：水が３０：１２のような溶剤混合物を使用する還元的アミノ化を介してステアリルアミン脂溶性アンカーにより誘導体化されることができる。
【００９７】
ｓｉＲＮＡを発現する組換え型プラスミドは上記で議論がなされている。この種の組換え型プラスミドは、直接投与、または、Ｍｉｒｕｓ  Ｔｒａｎｓｉｔ  ＬＴ１親油性試薬、リポフェクチン、リポフェクタミン、セルフェクチン、ポリカチオン（例えばポリリシン）またはリポソームを含む適当な導入試薬と組み合わせて投与されることができる。ｓｉＲＮＡを発現する組換え型ウイルスベクターも、上記で議論がなされており、及び、この種のベクターを患者の新血管形成領域に導入するための方法は、従来技術の範囲内である。
【００９８】
ｓｉＲＮＡは、新血管形成の領域で、またはその近くの組織の細胞にｓｉＲＮＡを導入するために適しているいかなる手段によっても対象に投与されることができる。例えば、ｓｉＲＮＡは、遺伝子銃、エレクトロポレーション、または他の適切な非経口または腸内投与経路により投与されることができる。
【００９９】
適当な腸内投与経路には、経口、直腸投与または経鼻投与を含む。
【０１００】
適当な非経口投与経路には、血管内投与（例えば、静脈内ボーラス注射、静脈内点滴、動脈内ボーラス注射、動脈内点滴、及び、血管内カテーテル滴下）、組織の周囲及び内部投与（例えば、腫瘍周囲及び腫瘍内部注射、網膜内注射または下位網膜注射）、（浸透圧ポンプによるような）皮下注射または皮下点滴を含む成膜、例えばカテーテルまたは他の配置デバイス（例えば、角膜ペレットまたは坐薬、点眼剤、または多孔性または非多孔性からなるインプラント、またはゼラチン状の材料）による新血管形成部位またはその近くの領域への直接（例えば、局所）適用、及び吸入を含む。適当な配置デバイスは、米国特許番号５，９０２，５９８及び６，３７５，９７２に記載された眼球インプラント、及び、米国特許番号６，３３１，３１３に記載された生分解性眼球インプラントを含む。これらの全体の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。この種の眼球インプラントは、Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｉｎｃ．（Ｗａｔｅｒｔｏｗｎ、マサチューセッツ州）及びＯｃｕｌｅｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．  （Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、カリフォルニア州）によって市販されている。
【０１０１】
好適な実施形態においては、ｓｉＲＮＡの注射または点滴は、新血管形成の部位、またはその近くで行われる。さらに好適には、ｓｉＲＮＡは、例えば、従来技術の範囲内のように、または目蓋下部または結膜盲嚢眼に液体またはゲルの形で、眼に局所的に投与される（例えば、Ａｃｈｅａｍｐｏｎｇ  ＡＡ  ｅｔ  ａｌ，  ２００２，  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌ．  ａｎｄ  Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  ３０：  ４２１−４２９を参照のこと、この全体の開示は参照により本明細書に組み込まれる。）。
【０１０２】
典型的には、ｓｉＲＮＡは、約５マイクロリットルから約７５マイクロリットル、例えば、約７マイクロリットルから約５０マイクロリットル、好適には約１０マイクロリットルから約３０マイクロリットルの量で、目に局所投与される。７５マイクロリットルよりも多い量でのｓｉＲＮＡの眼への局所的滴下は、眼からの流出及び排出により、結果としてｓｉＲＮＡを減少させうることが理解されている。したがって、可能な限り少ない量でｓｉＲＮＡの高濃度（例えば１００〜１０００ｎＭ）を投与することが望ましい。
【０１０３】
特に好適な非経口投与経路は、眼内投与である。本発明のｓｉＲＮＡの眼内投与は、投与経路によってｓｉＲＮＡが眼に入ることができる限り、眼に注射または直接（例えば局所的）投与によって、達成されうると理解されている。上記に記載された眼への投与の局所的経路に加えて、投与の適当な眼内経路には、硝子体内、網膜内、下位網膜、下位柄、眼窩周囲及び後眼窩、トランス角膜及びトランス胸膜投与を含む。この種の眼内投与経路は、従来技術の範囲内であり、例えば、Ａｃｈｅａｍｐｏｎｇ  ＡＡ  ｅｔ  ａｌ，  ２００２，  ｓｕｐｒａ及びＢｅｎｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６），  Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ７：  １７６３−１７６９及びＡｍｂａｔｉ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｒｅｔｉｎａｌ  ａｎｄ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  ２１：  １４５−１５１を参照のこと。これらの全体の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。他の好適な実施形態においては、ｓｉＲＮＡは、硝子体内注射によって投与される。
【０１０４】
ｓｉＲＮＡは単回投与または複数回投与で投与される。ｓｉＲＮＡの投与が点滴である場合、その点滴は、一回の持続投与または複数の点滴により導入されることがある。組織内への直接的な薬剤の注射は、望ましくは血管新生部位またはその知覚で行われる。血管新生部位またはその近くの組織内の薬剤の複数回の注射は特に好適である。
【０１０５】
当業者は、ｓｉＲＮＡを与えられた対象に投与するための適切な投薬計画をすぐに決定することができる。例えば、新血管形成部位で、またはその近くに単一で注射または成膜することにより、ｓｉＲＮＡは一度に対象に投与することが可能である。または、ｓｉＲＮＡは、毎日または毎週、複数回にわたって対象に投与することができる。例えば、ｓｉＲＮＡは、約７週から約２８週、または約７週から約１０週にわたって、週に１度、対象に投与することができる。特定の投薬計画において、ｓｉＲＮＡは、週に１度、７週間にわたって、新血管形成部位またはその近く（例えば、硝子体内）に注射される。期間の長さが不明確であるｓｉＲＮＡの周期的投与は、湿性ＡＲＭＤまたは糖尿病性網膜症のような慢性的新血管形成疾患により苦しめられている対象にとって必要となることがあると理解されている。
【０１０６】
投薬計画が複数回にわたる投与からなる場合、対象に投与されるｓｉＲＮＡの有効量は、投薬計画全体にわたって投与されるｓｉＲＮＡの総量からなることがあると理解されている。
【０１０７】
公知技術によると、ｓｉＲＮＡは、好適には、対象に投与するのに先立って、医薬組成物として形成される。本発明の医薬組成物は、少なくとも無菌及びピロゲンがないものであることにより特徴付けられる。本明細書に使用されているように、「製剤処方」は、ヒト及び獣医使用のための製剤を含む。本発明の医薬組成物を調製するための方法は、従来技術の範囲内であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  １７ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．  （１９８５）に記載されており、全体の開示は参照によって本明細書に組み込まれる。
【０１０８】
一実施形態において、製剤処方は、生理的に許容できる担体媒体と混合された、ｓｉＲＮＡ（例えば、０．１から９０重量％）または生理的に許容なそれらの塩からなる。好適な生理的に許容できる担体媒体は、水、緩衝用水、食塩水（例えば、通常の食塩水またはＨａｎｋまたはＥａｒｌｅの平衡食塩溶液のような平衡食塩溶液）、０．４％生理食塩水、０．３％グリシン、ヒアルロン酸などである。
【０１０９】
医薬組成物は、従来の医薬賦形剤及び／または添加物からなることもある。適当な医薬賦形剤には、安定剤、酸化防止剤、オスモル濃度調整剤、バッファー及びｐＨ調整剤を含む。適当な添加物には、生理的に生物学的適合性バッファー（例えば、トロメタミン塩酸塩）、キレート剤添加（例えばＤＴＰＡまたはＤＴＰＡ−ビスアミド）またはカルシウムキレート複合体（例えば、カルシウムＤＴＰＡ、ＣａＮａＤＴＰＡ−ビスアミド）、または随意に、カルシウム塩またはナトリウム塩の添加（例えば、塩化カルシウム、アスコルビン酸カルシウム、グルコン酸カルシウムまたは乳酸カルシウム）が含まれる。本発明の医薬組成物は、液体での使用のためにパッケージされることができ、または、凍結乾燥されることができる。
【０１１０】
眼への局所的投与のために、従来の眼内導入試薬を使用することができる。例えば、局所的な眼内導入のための本発明の医薬組成物は、上記に記載されているような食塩水、角膜浸透エンハンサー、不溶性粒子、ワセリン基剤または他のゲル基剤の軟膏、眼への滴下で粘性増加を受けるポリマーまたは粘膜付着性ポリマーからなることができる。好適には、眼内導入試薬は、角膜浸透を増加させる、または、粘性効果または角膜上皮をカバーしているムチン層を有する物理化学的な相互作用を確立することによってｓｉＲＮＡの眼球前方の滞留を長引かせる。
【０１１１】
局所的に眼内挿入のための好適な不溶性粒子は、全体の開示は本明細書に参照により組み込まれるＢｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，の米国特許第６，３５５，２７１号に記載されているリン酸カルシウム粒子を含む。眼への滴下で粘性増加を受ける適当なポリマーは、ポロキサマ４０７（例えば、２５％の濃度で）、セルロースアセトフタル酸塩（例えば、３０％の濃度で）のようなポリエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体、または、Ｇｅｌｒｉｔｅ（登録商標）（ＣＰ  Ｋｅｌｃｏ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、デラウェア州により市販されている）のような低アセチルのジェランガムを含む。適当な粘膜付着性ポリマーには、カルボキシル基、ヒドロキシル基、アミド及び／または硫酸塩群のような複数の親水性官能基を有する親水コロイド、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアクリル酸、高分子量ポリエチレングリコール（例えば、>２００，０００数平均分子量）、デキストラン、ヒアルロン酸、ポリガラクツロ酸及びキシロカイン（ｘｙｌｏｃａｎ）を含む。適当な角膜浸透エンハンサーには、シクロデクストリン、塩化ベンザルコニウム、ポリオキシエチレングリコールラウリルエーテル（例えば、Ｂｒｉｊ（登録商標）３５）、ポリオキシエチレングリコールステアリルエーテル（例えば、Ｂｒｉｊ（登録商標）７８）、ポリオキシエチレングリコールオレイルエーテル（例えば、Ｂｒｉｊ（登録商標）９８）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジギトニン、タウロコール酸ナトリウム、サポニン及びＣｒｅｍａｐｈｏｒ  ＥＬのようなポリオキシエチレン化ヒマシ油を含む。
【０１１２】
固形組成物としては、従来の非毒性個体担体が使用できる。例えば、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、滑石、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウムなどの医薬品グレードが挙げられる。
【０１１３】
例えば、経口投与のための固形医薬組成物は、任意の担体及び上記の賦形剤お及び一またはそれ以上のｓｉＲＮＡの１０〜９５％、好適には２５％〜７５％からなることができる。エアロゾル（吸入）投与のための医薬組成物は、上記に記載されたようにリポソーム内にカプセル化された一またはそれ以上のｓｉＲＮＡの０．０１〜２０重量％、好適には１重量％〜１０重量％及び噴霧剤からなることができる。担体は、例えば、鼻腔内導入のためのレシチンのように要望通りに含まれることもできる。
【０１１４】
本発明は、以下の非限定的な実施例により例示される。
【実施例１】
【０１１５】
ｓｉＲＮＡトランスフェクション及び生体外での低酸素誘導
ｓｉＲＮＡ設計−ヒトＶＥＧＦ  ｍＲＮＡの５’末端から３２９ｎｔで位置する１９ｎｔ配列は、標的配列：ＡＡＡＣＣＴＣＡＣＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＡＣ（配列ＩＤ番号：５１）として選択された。それが、他のいかなる遺伝子からもｍＲＮＡに含まれなかったことを確実にするために、この標的配列は、ＮＣＢＩによって提供されるＢＬＡＳＴ検索エンジンに入れられる。ＢＬＡＳＴアルゴリズムの使用は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０），  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５：  ４０３−４１０及びＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７），  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５：  ３３８９−３４０２に記載され、これらの全体の開示は参照により組み込まれている。標的配列を含んだ他のいかなるｍＲＮＡも見つからないため、二重ｓｉＲＮＡは、この標的配列に合成される（ｈａｒｍａｃｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  Ｉｎｃ．，  Ｌａｆａｙｅｔｔｅ，コロラド州）。
【０１１６】
二重ｓｉＲＮＡは、以下のセンス鎖及びアンチセンス鎖を有する。
センス：
５’−ａｃｃｕｃａｃｃａａｇｇｃｃａｇｃａｃＴＴ−３’（配列ＩＤ番号：７７）
アンチセンス：
５’−ｇｕｇｃｕｇｇｃｃｕｕｇｇｕｇａｇｇｕＴＴ−３’（配列ＩＤ番号：７８）
【０１１７】
ｓｉＲＮＡセンス鎖及びアンチセンス鎖は、共に、各鎖上のＴＴ３’突出末端（はっきりと示されている）と１９ｎｔ二本鎖ｓｉＲＮＡを形成する。このｓｉＲＮＡは、「候補者５」（Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ５）または「候補５」（Ｃａｎｄ５）と呼ばれる。ヒトＶＥＧＦｍＲＮＡを標的とする他のｓｉＲＮＡは、「候補５」（Ｃａｎｄ５）のために記載されたように設計され、及びテストされる。
【０１１８】
緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）ｍＲＮＡ内の以下の配列を標的とするｓｉＲＮＡは、非特異的制御として使用される、ＧＧＣＴＡＣＧＴＣＣＡＧＣＧＣＡＣＣ（配列ＩＤ番号：７９）．ｓｉＲＮＡは、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ（Ｌａｆａｙｅｔｔｅ、コロラド州）から購入される。
【０１１９】
ｓｉＲＮＡトランスフェクション及び生体外での低酸素誘導−ヒト細胞株（２９３、Ｈｅｌａ及びＡＲＰＥ１９）は、それらの細胞がトランスフェクション時に〜５０％融合性であるように、トランスフェクションの一日前に２５０マイクロリットルの完全なＤＭＥＭ培地の２４ウェルプレート内に、別々に播種される。細胞は、２．５ｎＭ  Ｃａｎｄ５  ｓｉＲＮＡによって、及び、ｓｉＲＮＡなしか、または、２．５ｎＭの非特異的ｓｉＲＮＡ（ＧＦＰを標的とする）の制御によってトランスフェクションされる。トランスフェクションは、製造業者（Ｍｉｒｕｓ）によって推奨される「輸送ＴＫＯトランスフェクション」試薬によって全ての細胞株内で実行される。
【０１２０】
トランスフェクションの２４時間後に、それぞれのウェル内に１３０ミクロモルの最終濃度のデフェロキサミンメシラートを付加することにより、低酸素が誘導される。トランスフェクションの２４時間後に、細胞培養培地は全てのウェルから除去され、及びヒトＶＥＧＦ  ＥＬＩＳＡ（Ｒ&Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ミネソタ州）は、製造業者から入手可能なＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ｈｕｍａｎ  ＶＥＧＦ  ＥＬＩＳＡプロトコルに記載されているように、培地にて行われる。なお、全体の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２１】
図１からわかるように、Ｃａｎｄ５  ｓｉＲＮＡによって誘導されるＲＮＡｉ低下は、低酸素症２９３及びＨｅＬａ細胞によって生成されるＶＥＧＦの濃度を著しく減少させる。ｓｉＲＮＡなし、または、非特異的ｓｉＲＮＡの制御によって治療される低酸素症細胞によって生成されるＶＥＧＦの量において、基本的に差はなかった。同様の結果は、同条件下で治療されるヒトＡＲＰＥ１９細胞によってもみられた。したがって、ＶＥＧＦを標的としたｓｉＲＮＡによるＲＮＡ干渉は、生体外でのヒト培養細胞におけるＶＥＧＦの病原性上方制御を中断させる。
【０１２２】
上記で概説される実験は、マウス特異的ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡを使用するマウスＮＩＨ３Ｔ３細胞で反復され（以下の実施例６を参照）、及び、ＶＥＧＦ生成は、製造業者から入手可能なＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ｍｏｕｓｅ  ＶＥＧＦ  ＥＬＩＳＡプロトコルに記載されているように、マウスＶＥＧＦ  ＥＬＩＳＡ（Ｒ&Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ミネソタ州）によって定量化される。なお、全体の開示は参照によって本明細書に組み込まれる。図１において報告されるヒト細胞株においても同様の結果が得られた。
【実施例２】
【０１２３】
ヒト培養細胞内のＶＥＧＦ生成物においてのｓｉＲＮＡ濃度増加の効果
実施例１で概説される実験は、ｓｉＲＮＡ濃度が１０ｎＭから５０ｎＭの範囲で使用されるヒト２９３、ＨｅＬａ及びＡＲＰＥ１９によって反復される。ＶＥＧＦ生成物を下方制御するＣａｎｄ５の能力は約１３ｎＭ  ｓｉＲＮＡまで適度に上昇したが、平たん効果が、この濃度以上においてみられた。平たん効果がｓｉＲＮＡによってトランスフェクションしないわずかな細胞からのＶＥＧＦ生成を反映するように示されるこれらの結果は、ｍＲＮＡのｓｉＲＮＡによって媒介されるＲＮＡｉ分解の触媒性質を強調する。ｓｉＲＮＡによってトランスフェクションした大多数の細胞において、低酸素症によって誘導されたＶＥＧＦ  ｍＲＮＡ生成の増加は、約１３ｎＭよりも高いｓｉＲＮＡ濃度での標的ｍＲＮＡのｓｉＲＮＡによる分解によって追い越される。
【実施例３】
【０１２４】
標的とするｓｉＲＮＡの特異性
ＮＩＨ  ３Ｔ３  マウス線維芽細胞は、トランスフェクションの一日前に細胞が〜５０％融合性であるように、標準条件下において２４ウェルプレート内で培養される。ヒトＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡ  Ｃａｎｄ５は、実施例１において、ＮＩＨ  ３Ｔ３  マウス線維芽細胞内でトランスフェクションされる。低酸素症はその後、トランスフェクションされた細胞内で誘導され、及び、マウスＶＥＧＦ濃度は実施例１におけるＥＬＩＳＡによって測定される。
【０１２５】
ヒトＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡ  Ｃａｎｄ５によって標的にされる配列は、１つのヌクレオチドによって、マウスＶＥＧＦ  ｍＲＮＡとは異なる。図２からわかるように、ヒトＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡは、低酸素症後のマウスＶＥＧＦを上方制御するマウス細胞の能力には影響を与えない。これらの結果は、ｓｉＲＮＡによるＲＮＡｉ分解が、１つのヌクレオチド分解能内で配列特異的であることを示す。
【実施例４】
【０１２６】
マウス網膜色素上皮細胞へのｓｉＲＮＡの生体内導入
ＶＥＧＦは、加齢黄斑変性症（ＡＲＭＤ）のヒト患者の網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）において上方制御される。機能的ｓｉＲＮＡが生体内のＲＰＥ細胞に導入されることを示すために、ＧＦＰは、組換え型アデノウイルスを有するマウス網膜内で発現され、及び、ＧＦＰ発現は、ｓｉＲＮＡによって発現抑制される。実験は、以下のとおりに行われた。５匹の成熟したＣ５７／Ｂｌａｃｋ６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ、  Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、メイン州）の各々からの１つの眼は、Ｂｅｎｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６），  ｓｕｐｒａ．において記載されているように、下位網膜に、ＣＭＶプロモーターによって運ばれたｅＧＦＰを含むアデノウイルスの〜１×１０８粒子及び輸送ＴＫＯ試薬（Ｍｉｒｕｓ）によって結合されるｅＧＦＰを標的とするｓｉＲＮＡの２０ピコモルを含む混合物を注射される。
【０１２７】
明確な対照として、反対の眼は、ＣＭＶプロモーターによって運ばれたｅＧＦＰを含むアデノウイルスの〜１×１０８粒子及び輸送ＴＫＯ試薬（Ｍｉｒｕｓ）によって結合されるヒトＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの２０ピコモルを含む混合物を注射される。ＧＦＰの発現は、注射の４８時間及び６０時間後に眼底部検眼鏡検査により検出される。動物は、注射後、４８時間後、または６０時間後に殺された。眼は摘出され、４％パラホルムアルデヒド内に固定され、平たんなプレパラートに調製されるか、または蛍光顕微鏡検査のための１０ミクロン低温切片内に処理される。
【０１２８】
ＧＦＰ蛍光が非特異的制御ｓｉＲＮＡを受容する反対の眼において検出可能であったが、５匹のマウスのうち４匹において、ＧＦＰ蛍光は、ＧＦＰ  ｍＲＮＡを標的とするｓｉＲＮＡを受容する眼において検出可能でなかった。蛍光顕微鏡検査によって分析される代表的な平たんなプレパラートは、非特異的制御ｓｉＲＮＡを受容した眼と比較すると、ＧＦＰ  ｓｉＲＮＡを受容した眼のＧＦＰ蛍光の不足を示した。他の網膜の低温切開片は、組換え型アデノウイルスが能率的にＲＰＥ細胞を標的とすること、及び、アデノウイルスが、ＧＦＰ  ｍＲＮＡを標的とするｓｉＲＮＡを伴う場合に、ＧＦＰ導入遺伝子の発現は停止することを示す。
【０１２９】
ＧＦＰ  ｍＲＮＡを標的とするｓｉＲＮＡを受容した眼において、蛍光顕微鏡によって検出可能な特定のＧＦＰ蛍光があるのに対し、非特異的ｓｉＲＮＡを受容した制御と比較して、蛍光は非常に抑制される。これらのデータは、機能的ｓｉＲＮＡが生体内でＲＰＥ細胞に導入されうることを証明している。
【実施例５】
【０１３０】
生体内における発現及びマウス網膜におけるヒトＶＥＧＦのｓｉＲＮＡによるＲＮＡｉ分解
ＶＥＧＦに標的とされるｓｉＲＮＡが生体内で機能することを証明するために、実施例４のように、下位網膜注射によるアデノウイルスを介してマウスＲＰＥ細胞に外因性ヒトＶＥＧＦ発現カセットが導入される。一つの眼はＣａｎｄ５  ｓｉＲＮＡを受容し、及び反対の眼はＧＦＰ  ｍＲＮＡに標的にされるｓｉＲＮＡを受容した。この動物は、注射の６０時間後に殺され、及び、注射された眼は除去され、摘出後に液体窒素内で即座に冷凍される。その後、眼は、溶解緩衝液内で均一にされ、及び、標準Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイ（Ｒｏｃｈｅ、ドイツ）を使用して全タンパク質が測定される。試料１は、実施例１で記載したように、ＥＬＩＳＡによりヒトＶＥＧＦのための分析の前に全タンパク質を規格化される。
【０１３１】
ＶＥＧＦの発現は、動物によってやや異なるものである。ＶＥＧＦレベルの可変性は、実施例４のＧＦＰ実験において観察されるそれらによく相関しているものであり、注射から注射までのいくつかのエラー及び、各動物における標的遺伝子を導入するアデノウイルスの能力の差異が起因している可能性がある。しかしながら、非特異的制御ｓｉＲＮＡを受容する眼と比較して、ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡを受容する眼においては、ＶＥＧＦ発現の著しい減衰がみられた（図４）。これらのデータは、Ｃａｎｄ５  ｓｉＲＮＡが強力であり、生体内におけるマウスＲＰＥのヒトＶＥＧＦ発現を抑制するのに効果的であることを示している。
【実施例６】
【０１３２】
マウスＣＮＶモデルにおける脈絡膜新血管形成の抑制
ＡＲＭＤにおける脈絡膜新血管形成はＲＰＥ細胞でのＶＥＧＦの上方制御によるものであるという証拠がある。このヒト病原性条件は、網膜上のスポットを焼くために、レーザーを使用することにより（「レーザー光凝固」または「レーザー誘導」）、マウスでモデル化することができる。治療過程の間、ＶＥＧＦは、燃焼領域のＲＰＥ細胞において上方制御され、脈絡膜の血管再生に至っていると考えられる。このモデルは、マウス脈絡膜新血管形成（「ＣＮＶ」）モデルと呼ばれている。
【０１３３】
マウスＣＮＶモデルを救うために、実施例１からヒト「Ｃａｎｄ５」ｓｉＲＮＡから１つのヌクレオチド変化に組み込まれるようにマウスｓｉＲＮＡは設計された。マウスｓｉＲＮＡは、配列ＡＡＡＣＣＵＣＡＣＣＡＡＡＧＣＣＡＧＣＡＣ（配列ＩＤ番号：８０）でマウスＶＥＧＦ  ｍＲＮＡを特異的に標的とする。マウスＶＥＧＦを標的とする他のｓｉＲＮＡもまた、設計され、テストされる。実施例１における非特異的制御として使用されるＧＦＰ  ｓｉＲＮＡは、ここでも非特異的制御として使用される。
【０１３４】
レーザー誘導から２４時間後、１１匹の成熟したＣ５７／Ｂｌａｃｋ６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ，  Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，メイン州）は、実施例４に示されるように、下位網膜に、ＣＭＶプロモーターによって運ばれたＬａｃＺを含むアデノウイルスの〜１×１０８粒子及び輸送ＴＫＯ試薬（Ｍｉｒｕｓ）によって結合されるヒトＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの２０ピコモルを含む混合物を注射される。対照として、反対の眼はＣＭＶプロモーターによって運ばれたＬａｃＺを含むアデノウイルスの〜１×１０８粒子及び輸送ＴＫＯ試薬（Ｍｉｒｕｓ）によって結合されるヒトＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの２０ピコモルを含む混合物を受容した。
【０１３５】
レーザー処理から１４日後、マウスはフルオレセインによって灌流され、及び、新血管形成領域が燃焼スポット周辺で測定された。反対の眼の燃焼領域が、対照として使用された。マウスＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡを受容する動物における燃焼領域周辺の新血管形成部位は、平均して、対象領域の１／４である。これらのデータは、ＡＲＭＤの治療において、ＶＥＧＦに誘導されたｓｉＲＮＡ（「アンチＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡ」とも呼ばれる）の使用を支持するものである。
【実施例７】
【０１３６】
ｓｉＲＮＡの発現におけるアデノ付随ウイルスベクターの生成
ｓｉＲＮＡを導入するための組換え型ＡＡＶベクターを生成する「シス活性型」プラスミドは、基本的にはＳａｍｕｌｓｋｉ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７），ｓｕｐｒａ．に記載された、ＰＣＲベースのサブクローニングによって生成される。シス活性型プラスミドは、「ｐＡＡＶｓｉＲＮＡ」と呼ばれた。
【０１３７】
ｐｓｕｂ２０１のｒｅｐ遺伝子及びｃａｐ遺伝子は、以下の配列とこの順で置換される：ヒトＵ６  ＲＮＡプロモーターの制御下でポリＴ終結配列と操作可能な結合において配列をコーディングする１９ｎｔセンスＲＮＡ鎖及びヒトＵ６  ＲＮＡプロモーターの制御下でポリＴ終結配列と操作可能な結合において配列をコーディングする１９ｎｔアンチセンスＲＮＡ鎖。ｐＡＡＶｓｉＲＮＡの概略図は図５によって与えられる。
【０１３８】
組換え型ＡＡＶ  ｓｉＲＮＡベクターは、Ｆｉｓｈｅｒ  ＫＪ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６），  ｓｕｐｒａ．に記載されたように、Ｅ１が削除されたアデノウイルスに感染しているヒト２９３細胞内にｐＡＡＶｓｉＲＮＡをトランスフェクションさせることにより得られた。ＡＡＶｒｅｐ及びｃａｐの機能は、Ｓａｍｕｌｓｋｉ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９），  ｓｕｐｒａ．に記載されているように、トランス活性型プラスミドｐＡＡＶ／Ａｄにより提供される。組換え型ＡＡＶ  ｓｉＲＮＡベクターの生成物の多くは、Ｆｉｓｈｅｒ  ＫＪ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６），  ｓｕｐｒａ．に記載されているように、１ｍｌあたりのゲノムコピー数にしたがって滴定される。
【実施例８】
【０１３９】
ＶＥＧＦに誘導されたｓｉＲＮＡは実験的な脈絡膜新血管形成を阻害する
マウスにおいて実験的にレーザーにより誘導された脈絡膜新血管形成（ＣＮＶ）を阻害するマウスＶＥＧＦに誘導されたｓｉＲＮＡの能力は、以下のようにテストされた。
【０１４０】
成熟したメスのＣ５７ＢＬ／６マウスの網膜は、８１０ｎｍダイオードレーザー（７５ｕｍ、１４０ｍｗ、０．１０秒）（ＯｃｕＬｉｇｈｔ  Ｓｉｘ；  ＩＲＩＳ  Ｍｅｄｉｃａｌ，  Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，カリフォルニア州）を用いてレーザー光凝固された。３つのレーザースポットがそれぞれのマウスの両眼に適用された。レーザー光凝固から３６時間後、マウスＶＥＧＦに標的とされるｓｉＲＮＡ（「ｍＶＥＧＦ．ｓｉＲＮＡ」）はそれぞれのマウスの１つの眼の下位網膜または硝子体内に導入された。下位網膜注射において、ｓｉＲＮＡは、輸送ＴＫＯトランスフェクション試薬（Ｍｉｒｕｓ）と結合され、及び、組換え型アデノウイルス（ｒアデノウイルス）と混合された。硝子体内注射において、ｓｉＲＮＡはトランスフェクション試薬及びｒアデノウイルスなしで導入された。対照として、各マウスの反対の眼は、ＧＦＰに標的とされるｓｉＲＮＡ（「ＧＦＰ１．ｓｉＲＮＡ」）を同一の処方で下位網膜または硝子体内に注射された。なお、ＧＦＰはマウスＶＥＧＦと相同ではない。
【０１４１】
レーザー処理から１４日後、全ての動物は高分子量ＦＩＴＣデキストランで灌流され、脈絡膜プレパラートが上述したように調製され、この平たんなプレパラートは撮影され、及び遮蔽された方法で、顕微鏡によって分析された。各平たんなプレパラートにおけるＣＮＶの領域は、Ｏｐｅｎｌａｂソフトウェア（Ｉｍｐｒｏｖｉｓｉｏｎ，  Ｂｏｓｔｏｎ，マサチューセッツ州）により測定された。ｍＶＥＧＦ１．ｓｉＲＮＡにより処理された眼のＣＮＶの平均領域は、下位網膜（図６Ａ、Ｐ<０．００３）及び硝子体内（図６Ｂ、Ｐ<０．０４）の両方にＧＦＰ１．ｓｉＲＮＡを導入する処理がされた眼における領域よりも著しく小さいものであった。
【０１４２】
第二の実験において、成熟したメスのＣ５７ＢＬ／６マウスは、上記に記載したようにレーザー光凝固され、及び、この動物は対照群及びテスト群に分けられた。レーザー光凝固から一日後、リン酸緩衝生理食塩水が対照群の動物の硝子体内に導入された。これらの動物は、レーザー処理から１４日後、デキストランフルオロセインによって灌流された。その後に脈絡膜プレパラートが調製され、各平たんなプレパラートにおけるＣＮＶの領域が上記に記載したように計測された。
【０１４３】
レーザー光凝固から１４日後、ｍＶＥＧＦ１．ｓｉＲＮＡはテスト群の各マウスの一つの眼の硝子体内に注射によって導入された。反対の眼は、対照として、ＧＦＰ１．ｓｉＲＮＡが注射された。レーザー処理から２１日後、テスト群の動物は、高分子量デキストランフルオロセインによって灌流された。その後、脈絡膜プレパラートが調製され、各平たんなプレパラートにおけるＣＮＶの領域は、上記のように測定された。
【０１４４】
この後者の実験において、ＣＮＶ成長前とは対照的に、アンチＶＥＧＦｓｉＲＮＡがＣＮＶ成長の間投与され、したがって、湿性ＡＭＤを呈するヒト患者の条件のより代表的なものとなる。図６からわかるように、ｍＶＥＧＦ１．ｓｉＲＮＡ処理された眼のＣＮＶ平均領域は、ＧＦＰ１．ｓｉＲＮＡ処理された眼において測定されたそれらの領域よりも著しく小さい（図６Ｃ、ｐ<０．０５）。２１日にｍＶＥＧＦ１．ｓｉＲＮＡ処理された眼及び１４日の対照（「ＰＢＳ」）眼のＣＮＶの平均領域は、著しく異なる（図６Ｃ、Ｐ＝０．４６９）
これらの実験結果は、加齢黄斑変性症がアンチＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡにより治療できることを示す。
【実施例９】
【０１４５】
マウスＲＰＥ細胞内のアンチＶＥＧＦｓｉＲＮＡより誘導されたヒトＶＥＧＦの生体内ＲＮＡ干渉
生体内においてＶＥＧＦのＲＮＡｉを誘導するＣａｎｄ５ｓｉＲＮＡの能力は以下のように評価される。
【０１４６】
ＡＡＶ．ＣＭＶ．ＶＥＧＦは、アデノ随伴ウイルスベクターからヒトＶＥＧＦを発現し、Ｄｒ．  Ａ．  Ａｕｒｉｃｃｈｉｏより豊富に提供される。ＡＡＶ．ＣＭＶ．ＶＥＧＦは、５匹のＣ５７Ｂ１／６マウスの眼の下位網膜及び両側に注射された。ＡＡＶ．ＣＭＶ．ＶＥＧＦの注射から２８日後、Ｃａｎｄ５  ｓｉＲＮＡは１ツの眼の中に硝子体内注射することで導入され、対照としてＧＦＰ１．ｓｉＲＮＡはそれぞれの動物の反対の眼に硝子体内注射により導入される。
【０１４７】
ｓｉＲＮＡ注射から、０日（ｓｉＲＮＡ注射前）、及び６、１０及び１４日後、マウスは殺され、眼は摘出後即座に液体窒素内で凍結された。その後、眼は溶解緩衝液（Ｒｏｃｈｅ，Ｂａｓｅｌ，スイス）において均質にされ、全タンパク質は、上記実施例５のように、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイを用いて測定される。０日時点において２匹のマウスが（ｎ＝２）、６日、１０日及び１４日時点においてそれぞれ３匹のマウスが（ｎ＝３）用いられる。試料は、製造業者（Ｒ&Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ミネソタ州）の推奨によって、ＥＬＩＳＡによるヒトＶＥＧＦ分析前に全タンパク質が規格化される。それぞれのマウスごとのＶＥＧＦの割合（％ＶＥＧＦ）は、眼にＣａｎｄ５と注射されたＶＥＧＦの濃度（［ＶＥＧＦ］）を、ＧＦＰ１．ｓｉＲＮＡと注射された［ＶＥＧＦ］によって割り、１００をかけて計算される。
【０１４８】
図７から分かるように、Ｃａｎｄ５の単一注射は、ＲＮＡｉの媒介による、ｓｉＲＮＡ注射後少なくとも１４日を通じて約３５％のＶＥＧＦ生成の減少と、ｓｉＲＮＡ注射後６日で約７０％のＶＥＧＦレベルの減少を誘発した。これらの結果は、ヒトＶＥＧＦに対するｓｉＲＮＡが、維持された期間において、生体内でヒトＶＥＧＦのＲＮＡｉを誘導することができることを示している。
【実施例１０】
【０１４９】
アンチＶＥＧＦｓｉＲＮＡを有するサルの生体内ＲＮＡ干渉
この研究の目的は、ＣＮＶの誘導後、オスのカニクイザルに単一硝子体内注射によって投与する際に、Ｃａｎｄ５の安全性および有効性を決定することにある。Ｃａｎｄ５は、投薬を受けていないオスのカニクイザルに以下の投与量レベルで与えられる：０ｍｇ／眼（対照）、０．０７ｍｇ／眼、０．１８ｍｇ／眼、０．３５ｍｇ／眼、及び０．７ｍｇ／眼。
【０１５０】
ＣＮＶは各動物の両眼の黄斑へのレーザー処理によって誘導され、及び、Ｃａｎｄ５の投与は、レーザー処理のすぐ後になされた。それらの動物は、臨床徴候、体重及び眼の状態（広範囲な眼の検査、網電図記録法及び振動計測）の変化について評価された。フルオロセイン血管造影法がなされ、及び、血液試料が収集された。研究の最後に（４４日）、全ての動物を安楽死させ、及び、完全で徹底的な検死が行われた。選択された組織は、組織病理評価のため収集され、保存された。
【０１５１】
レーザーによって黄斑の病変を引き起こした後及びＣＮＶの進行が続く間に、サルが最大０．７０ｍｇ／眼まで両眼に単一硝子体注射で投与される場合、Ｃａｎｄ５の全身性及び局所性（眼性）無副作用が検出された。
【実施例１１】
【０１５２】
ヒト胎児腎臓２９３細胞におけるアンチＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡによるＶＥＧＦの生体内ＲＮＡ干渉
ヒト胎児腎臓２９３細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ、バージニア州から得られる）
は、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ培地（ＤＭＥＭ、Ｃｅｌｌｇｒｏ，  Ｈｅｒｎｄｏｎ、バージニア州から得られる）において、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｅｎｅｘａ、カンザス州から得られる）及び細胞培養成長の汚染を防止するために使用される抗生−抗真菌試薬（Ｇｉｂｃｏ，Ｃａｒｌｓｂａｄ、カリフォルニア州から得られる）と培養される。
【０１５３】
ｓｉＲＮＡは統合的ＤＮＡ技術（Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ、アイオワ州）により合成される。ｓｉＲＮＡ標的配列は表２に示されている。陰性対照として強化された緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）の遺伝子を標的とするこの研究において、付加的ｓｉＲＮＡが使用されている。
【０１５４】
【表３】
0005832293.tif 000005
【０１５５】
ｓｉＲＮＡトランスフェクション及び生体内低酸素誘導。ヒト２９３細胞は、２４ウェルプレート内で、５％二酸化炭素と３７℃で一晩掛けて培養される。次の日、細胞が約５０％〜７０％灌流されると、トランスフェクションが行われる。ヒトＶＥＧＦに対して向けられたｓｉＲＮＡによって細胞はトランスフェクションされる。ｓｉＲＮＡはＣａｐｉ試薬内で混合され、２５０ｍＭ塩化カルシウム溶液の２０μｌに加えられる。ｓｉＲＮＡ／塩化カルシウム混合物は、ボルテックスによる混合を行いながら、２Ｘ  Ｈａｎｋｓ平衡塩溶液（ＨＢＳ）の２０μｌに液滴で加えられる。ｓｉＲＮＡ／塩化カルシウム／ＨＢＳ複合体は、各ウェルの培地に直接加えられる（３００μＬ／ウェル）。３７℃で４時間保温培養した後、培地は除去され、無血清培地を含む１０％ＤＭＳＯと、細胞はさらに保温培養される（３００μＬ／ウェル、室温で１〜２分）。この培地はその後除去され、及び、細胞は、増殖培地と再び培養される（５００μＬ／ウェル）。陰性対照は、ｓｉＲＮＡ及び非特異的ｓｉＲＮＡ（ＥＧＦＰ１  ｓｉＲＮＡ）欠損トランスフェクション試薬を含む。スクリーニング実験において、ｓｉＲＮＡは２５ｎＭの濃度で使用される。用量反応実験において、ｓｉＲＮＡは、１ｎＭ、５ｎＭ及び２５ｎＭの濃度で用いられる。低酸素症は、トランスフェクションが行われた４時間後、１３０μＭの最終濃度でデスフェリオキサミンにより引き起こされる。ヘムＦｅ２＋相互作用を阻害することによって、哺乳類細胞において正常な酸素を感知する経路を崩壊させることが提唱されているように、デスフェリオキサミンは低酸素状態を呈する。
【０１５６】
ＶＥＧＦタンパク質定量化。トランスフェクションから約４８時間後、全てのウェルから上澄みが除去され、及び、ヒトＶＥＧＦ  ＥＬＩＳＡ（Ｒ  &  Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ミネソタ州）は、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ｈｕｍａｎ  ＶＥＧＦ  ＥＬＩＳＡプロトコルに記載されているように２９３細胞において行われる。ＶＥＧＦ特異的抗体はプレートと結合するＶＥＧＦの量に比例して発色が生じる各ウェルに加えられる。ＥＬＩＳＡ結果は、４５０ｎｍで、ＡＤ３４０プレートリーダー上で読み取られる。
【０１５７】
結果。ヒトＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡは、２９３細胞におけるヒトＶＥＧＦタンパク質の上方制御による低酸素症を抑制する。ヒトＶＥＧＦは、低酸素のデスフェリオキサミンによって媒介される誘導によって上方制御された。ＯＤ  ４５０ｎｍの表示は、試料細胞におけるヒトＶＥＧＦタンパク質レベルを反映した。ｈＶＥＧＦタンパク質レベルの増加による低酸素症は、ヒトＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの全てによってトランスフェクションされた細胞において著しく減少した（図８）。ｈＶＥＧＦレベルの効果は、非特異的ｓｉＲＮＡ（ＥＧＦＰ  ｓｉＲＮＡ）によるトランスフェクションまたはｓｉＲＮＡなしの擬トランスフェクションにおいては観察されなかった。用量反応研究は、Ｃａｎｄ５、ｈＶＥＧＦ＃１、ｈＶＥＧＦ＃２、ｈＶＥＧＦ＃３、ｈＶＥＧＦ＃４、ｈＶＥＧＦ＃６及びｈＶＥＧＦ＃７において行われる（図９）。
【実施例１２】
【０１５８】
ＶＥＧＦイソ型の生体内ＲＮＡ干渉
ＶＥＧＦ１６５ｂは抗新血管形成ＶＥＧＦイソ型として同定された。ｓｉＲＮＡは、スペアＶＥＧＦ１６５ｂを含まないＶＥＧＦ１６５のような特定のＶＥＧＦイソ型を選択的に阻害するように設計される。
【０１５９】
方法：ＡＲＰＥ１９細胞を２４ウェルプレートに播種する（ウェルにつき５０，０００細胞）。播種後１８から２４時間で、細胞は５０〜７５％灌流され、及び、トランスフェクションのために使用される。１４ヒトＶＥＧＦ−Ａ特定ｓｉＲＮＡが設計され、テストされる。細胞は、製造業者のプロトコル後に、Ｒｉｂｏｊｕｉｃｅ（商標）ｓｉＲＮＡトランスフェクション試薬（Ｎｏｖａｇｅｎ）を用いるｓｉＲＮＡによりトランスフェクションされる。具体的には、細胞の単一ウェルにおいて、４０．５Ｌも無結成ＯＰＴＩ−ＭＥＭはエッペンドルフ管内にピペットで移され、その後、Ｒｉｂｏｊｕｉｃｅの２μＬがＯＰＴＩ−ＭＥＭに加えられた。溶液は、穏やかなボルテックスにより混合され、管の下部に内容物を集めるため短時間遠心分離にかけられ、室温で５分間保温培養される。ｓｉＲＮＡ（１μＭストックの７．５μＬ）がＲｉｂｏｊｕｉｃｅ／培地混合物に加えられ、管の下部に内容物を集めるため短時間遠心分離にかけられる。混合物は、室温で１５分間保温培養される。室温培養の間、培地は細胞から除去され、新しい完全なＡＲＰＥ１９増殖培地（ＤＭＥＭ／Ｆ１２、１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン）に交換される。３００Ｌの体積のｓｉＲＮＡの最終濃度は、２５ｎＭであった。細胞は、３７℃、５％二酸化炭素で２４時間維持される。さらなる実験において、反応は、各ｓｉＲＮＡを有する３倍のウェルにおいて細胞をトランスフェクションさせるために拡大された。トランスフェクション後２４時間で、トランスフェクション混合物は除去され、無血清ＤＭＥＭ／Ｆ１２、１０ｎｇ／ｍＬヒト組換え型ＴＧＦβＩＩを含むＤＭＥＭ／Ｆ１２または１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβＩＩ及び５μｇ／ｍＬシクロヘキシミドを含むＤＭＥＭ／Ｆ１２の５００μＬにより細胞は処理される。さらに２４時間、細胞は３７℃、５％二酸化炭素に戻された。その後、培地は細胞から除去され、及び、ＥＬＩＳＡによってタンパク質発現のために分析された（Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ｈｕｍａｎ  ＶＥＧＦ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ  （Ｒ&Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ））。培地は細胞から除去され、エッペンドルフ管に集められ、氷上に置かれて、ＥＬＩＳＡを介するＶＥＧＦタンパク質のためにすぐに分析される、または、−８０℃で保存され、後の時点におけるＶＥＧＦのために分析される。
【０１６０】
これらの結果に基づいて、選択された数のｓｉＲＮＡ候補は、付加的トランスフェクションスクリーンに通された。細胞は収集され、ＲＮＡは抽出され、及び半定量的ＲＴ−ＰＣＲがＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１６５ｂ、ＶＥＧＦ１２１及びＶＥＧＦ１８９におけるｓｉＲＮＡの阻害作用を測定するために実行された。ＧＡＰＤＨハウスキーピング遺伝子発現は対照として使用される。具体的には、ウェルから培地を除去した後、ＲＮＡｑｕｅｏｕｓ  Ｋｉｔ（Ａｍｂｉｏｎ）から溶解／結合溶液の２００μＬが各ウェルに加えられる。ＲＮＡは分光測光法（ＯＤ  ２６０ｎＭ）を介して定量化された。溶解した細胞は収集され、製造業者のプロトコル後にＲＮＡが抽出された。ＲＮＡは製造業者のプロトコルに従って、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩＩ逆転社酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して逆転写される。ｃＤＮＡはＰＣＲを使用してＧＡＰＤＨ、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１６５ｂ、ＶＥＧＦ１２１及びＶＥＧＦ１８９のために分析される。ＰＣＲのために使用されるプライマーが表３に示されている。
【０１６１】
【表４】
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【０１６２】
ＰＣＲ分析において、各プライマーの最終濃度が２００ｎＭとなるように、３μＬ  ｃＤＮＡは、それぞれ適切な順方向プライマー（１０μＭ）及び逆方向プライマー（１０μＭ）及びプラチナＰＣＲスーパーミックス（Ｐｌａｔｉｎｕｍ  ＰＣＲ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の４５μＬと結合される。ｃＤＮＡは以下のＰＣＲ条件によって、サーマルサイクラー内で増殖される。
【０１６３】
工程１：９４℃で２分
工程２：９４℃で１５秒
工程３：５５℃で３０秒
工程４：７２℃で３０秒
工程５：工程２〜４をＧＡＰＤＨ、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１２１、及びＶＥＧＦ１８９においては３０分、ＶＥＧＦ１６５ｂにおいては３５分繰り返す。
【０１６４】
工程６：７２℃で１０分
工程７：４℃
ＰＣＲ生成物はその後、１Ｘ  ＴＡＥバッファー内に調製された２％アガロースゲル上で視覚化される。
【０１６５】
結果、ＴＧＦβＩＩによるＡＲＰＥ１９細胞の処理は、ＡＲＰＥ細胞におけるＶＥＧＦ生成を誘導し、ＥＬＩＳＡ結果は、いくつかのｓｉＲＮＡ候補がＡＲＰＥ１９細胞においてＴＧＦ  ＩＩによって誘導されるＶＥＧＦの生成を阻害することが示されている。ＲＴ−ＰＣＲは、２つの候補が、スペアＶＥＧＦ１６５ｂを除くＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１２１、及びＶＥＧＦ１８９の生成を阻害することが確かめられた。図１２（ｐｇ／ｍＬ  ｈＶＥＧＦ）及び１３（％ノックダウンｈＶＥＧＦ）で示されたように、ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡ候補（表２）は、ＥＬＩＳＡによってテストされたように、ＡＲＰＥ１９細胞によるＶＥＧＦタンパク質生成を阻害する能力のスクリーニングが行われた。細胞はＶＥＧＦ生成を上方制御するために、１０ｎｇ／ｍＬ  ＴＧＦ  ＩＩにより処理される。ＥＬＩＳＡは全ＶＥＧＦタンパク質を測定し、いかなる特定のスプライシング変異体においても選択的ではなかった。いくつかの候補（ＯＰＫ−ＨＶＢ−００４、ＯＰＫ−ＨＶＢ−０１０、及びＯＰＫ−ＨＶＢ−０１１）は、抑制効果を示し、さらなる研究を保証した。図１４（ｐｇ／ｍＬ  ｈＶＥＧＦ）及び１５（％ノックダウンｈＶＥＧＦ）に示されているように、図１２及び図１３と同じ方法を使用するＶＥＧＦ生成の第二スクリーンは、ＯＰＫ−ＨＶＢ−００４及びＯＰＫ−ＨＶＢ−０１０がＶＥＧＦタンパク質の生成を阻害することを示し、さらなる研究を保証した。
【０１６６】
図１６、２４及び２７は、様々な濃度でのいくつかの候補（ＯＰＫ−ＨＶＢ−００４、ＯＰＫ−ＨＶＢ−０１０、及びＯＰＫ−ＨＶＢ−０１２）を有するヒトＶＥＧＦノックダウンの用量反応有効性を示す。
【０１６７】
図１７はいくつかの候補（ＯＰＫ−ＨＶＢ−００４、ＯＰＫ−ＨＶＢ−０１０、及びＯＰＫ−ＨＶＢ−０１２）の１週間（７日間）にわたるヒトＶＥＧＦの下方制御を示す。
【０１６８】
対照として、ＧＡＰＤＨ  ＲＴ−ＰＣＲが、図１８に示したような様々な処理がされた細胞において行われた。存在するＲＮＡの実際の量が定量化されなくても、対照レーン３を参照にして比較すると、手順は半定量的である。具体的には、ＲＮＡ生成の下方制御はバンドがかすかに見えると、ＲＮＡ生成の下方制御が示される。この実験において、レーン２〜１１における試料は、ＶＥＧＦの生成を上方制御するように１０ｎｇ／ｍＬ  ＴＧＦβＩＩによって処理される。他の処理がＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡに効果を有さないのに対し、ＦＡＭ−ＧＡＰＤＨ  ｓｉＲＮＡはＧＡＰＤＨメッセージを下方制御し（レーン４）、したがって、処理された細胞における全ＲＮＡ生成において変動性がないことを確認した。
【０１６９】
ＶＥＧＦ１６５イソ型ＲＴ−ＰＣＲも、図１９に示したように、処理された細胞において実行された。レーン２〜１１の試料は、ＶＥＧＦの生成を上方制御するために１０ｎｇ／ｍＬ  ＴＧＦβＩＩによって処理された。２５ｎＭ  ｂｅｖａｓｉｒａｎｉｂ（レーン６）、ｂｅｖａｓｉｒａｎｉｂは全ＶＥＧＦイソ型を下方制御することが知られている。２５ｎＭ  ＯＰＫ−ＨＶＢ−００４（レーン７）及び２５ｎＭ  ＯＰＫ−ＨＶＢ−０１０（レーン８）は、レーン３における対照よりも淡いバンドで示されるように、ＴＧＦβＩＩ（レーン２）により誘導された後、ＶＥＧＦ１６５ｍＲＮＡの生成を下方制御する。
【０１７０】
ＶＥＧＦ１８９イソ型ＲＴ−ＰＣＲは、図２０に示したようにして実行される。レーン２〜１１における試料は、ＶＥＧＦの生成を上方制御するように、１０ｎｇ／ｍＬ  ＴＧＦβＩＩによって処理された。
【０１７１】
２５ｎＭ  ｂｅｖａｓｉｒａｎｉｂ（レーン６）、２５ｎＭ  ＯＰＫ−ＨＶＢ−００４（レーン７）及び２５ｎＭ  ＯＰＫ−ＨＶＢ−０１０（レーン８）は、対照レーン３よりも淡いバンドで示されるように、ＴＧＦβＩＩ（レーン２）によって誘導された後ＶＥＧＦ１８９ｍＲＮＡの生成を下方制御する。
【０１７２】
ＶＥＧＦ１２１イソ型ＲＴ−ＰＣＲはその後、図２１に示したように実行される。レーン２〜１１における試料は、ＶＥＧＦの生成を上方制御するように、１０ｎｇ／ｍＬ  ＴＧＦβＩＩによって処理された。
【０１７３】
対照レーン３よりも淡いバンドで示されるように、ＶＥＧＦ１２１ｍＲＮＡはレーン６（２５ｎＭ  ｂｅｖａｓｉｒａｎｉｂ）において下方制御される。
【０１７４】
最終的に、ＶＥＧＦ１６５ｂイソ型ＲＴＰＣＲは図２２に示されたように実行される。
【０１７５】
レーン２〜１１における試料は、ＶＥＧＦの生成を上方制御するように１０ｎｇ／ｍＬ  ＴＧＦβＩＩによって処理された。最初の事項として、２つのバンド>６００ｂｐは人工的であるように決定される。しかしながら、ＶＥＧＦ１６５ｂ  ｍＲＮＡは、対照レーン３よちもバンドが弱いことから示されるように、ｂｅｖａｓｉｒａｎｉｂ（レーン６）によって下方制御された。反対に、ＯＰＫ−ＨＶＢ−００４（レーン７）及びＯＰＫ−ＨＶＢ−０１０（レーン８）においてのバンドは対照レーン３よりも弱くなっていない。したがって、これらのｓｉＲＮＡ構造物は、様々な他のＶＥＧＦイソ型を阻害できるのに対し、ＶＥＧＦ１６５ｂ発現を維持できる。したがって、ＶＥＧＦ１６５ｂをスペアとするｓｉＲＮＡは合成されることができ、全てのＶＥＧＦ−Ａイソ型をノックダウンするｓｉＲＮＡよりも有効であることがある。ＶＥＧＦ１６５ｂをスペアとするｓｉＲＮＡは、眼性新血管形成の治療において、有力な治療候補である。
【実施例１３】
【０１７６】
ｓｉＲＮＡによる処理後のサイトカインプロファイル
ポリイノシン−ポリシチジン酸ナトリウム塩［Ｐｏｌｙ（Ｉ  ：Ｃ）］による処理後のＡＲＰＥ１９細胞のサイトカイニン分泌プロファイルは、ｄｓＲＮＡ分析を決定した。ｓｉＲＮＡがＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）のように挙動するか否か測定するための、及び、同じサイトカイニンを生成する細胞を生じるかどうかのテストが行われる。
【０１７７】
方法。ＡＲＰＥ１９細胞は２４ウェルプレートに播種された（ウェルごと５０，０００細胞）。２４時間後、培地は除去され、細胞は、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）０〜１０００ｍｇ／ｍＬ（Ｓｉｇｍａ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，ミズーリ州）またはポリデオキシノシン−ポリデオキシチジン酸ナトリウム塩［Ｐｏｌｙ（ｄＩ：ｄＣ）、５０ｍＵ／ｍＬ〜８００ｍＵ／ｍＬ］（Ｓｉｇｍａ）で処理され、無血清ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，カリフォルニア州）内で調製される。処理から４８時間後、培地は細胞から収集され、製造業者のプロトコルに従って、ＥＬＩＳＡ（ＦＮ−γ、ＩＬ−８、ＩＬ−６、ＴＮＦａ、ＩＣＡＭ、ＩＬ−１２及びＭＣＰ−１において、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ（登録商標）  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ、Ｒ&Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ミネソタ州、ＩＦＮ−α及びＩＦＮ−βにおいてＶｅｒｉｋｉｎｅ（登録商標）ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔｓ、ＰＢＬ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ニュージャージー州）を介して分析される。
【０１７８】
ＡＲＰＥ１９細胞はｂｅｖａｓｉｒａｎｉｂ、ＯＰＫ−ＨＶＢ−００４、ＯＰＫ−ＨＶＢ−００９、ＯＰＫ−ＨＶＢ−０１０及びＯＰＫ−ＨＶＢ−０１２（Ｄｈａｍａｃｏｎ／Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃｈｉｃａｇｏ，イリノイ州）によってトランスフェクションされる。細胞は２４ウェルプレートに播種される（ウェルごとに４０，０００細胞）。２４時間後、製造業者のプロトコルに従って、細胞はＲｉｂｏｊｕｉｃｅ（登録商標）トランスフェクション試薬（Ｎｏｖａｇｅｎ／ＥＭＤ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，カリフォルニア州）を使用する２５ｎＭ  ｓｉＲＮＡによってトランスフェクションされる。トランスフェクションから２４時間後、細胞は１０ｎｇ／ｍＬヒト組換え型ＴＧＦβＩＩ（Ｒ&Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって処理される。トランスフェクションから４８時間（例えばＴＧＦＩＩ処理から２４時間）、培地は収集され、サイトカイニンレベルは上記に記載したように分析される。あるいは、培地はＥＬＩＳＡ（Ｒ&Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を介してｈＶＥＧＦのために分析される。結果は図２３に示されている。
【０１７９】
結論。上記に基づくと、（ｉ）Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）、ｄｓＲＮＡ類似体への応答において、ＡＲＰＥ１９細胞はいくつかの炎症性サイトカインを生成するが、３つの鍵となるメディエーター、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−βまたはＩＦＮ−γは生成しない、（ｉｉ）ＡＲＰＥ１９細胞は潜在的炎症性及びｓｉＲＮＡのようなｄｓＲＮＡの特異的効果の研究に用いることができる、（ｉｉｉ）ＯＰＫ−ＨＶＢ−００９及びＯＰＫ−ＨＶＢ−０１０はＡＲＰＥ１９細胞にテストされるサイトカインのいずれも分泌させず、それらには低い潜在的炎症性を有する可能性がある、ということが示唆された。
【実施例１４】
【０１８０】
用量反応曲線はｓｉＲＮＡの特異性を示す。
【０１８１】
図２６及び２７に示されたように、用量反応曲線は、様々なｓｉＲＮＡ、２１ｍｅｒｓを用いて生成される。用量反応は、使用されたｓｉＲＮＡへの特異的反応を示す特定のｓｉＲＮＡによってみられた。用量反応曲線は、図２５及び２６に示されたように、ＯＰＫ−ＨＶＢ−００９においても生成される。実施例１２及び１３に記載されたように、処理され、トランスフェクションされた。細胞は２４ウェルプレート内に播種された（４０，０００細胞／ウェル）。加えて、異なる濃度が使用され、及び、したがって、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ、Ｒｉｂｏｊｕｉｃｅ及びｓｉＲＮＡの体積は、５０μｌトランスフェクション混合を調製する際に、それに従って調製される。
【実施例１５】
【０１８２】
ｓｉＲＮＡの安定性
図２８、２９、３０、３１及び３２において示されたように、様々な条件下で保存されたｓｉＲＮＡにより、ＡＲＰＥ１９細胞はトランスフェクションされる。細胞は、実施例１２及び１３で記載したようにトランスフェクションされる。それは、ｓｉＲＮＡ分子が図２８、２９、３０、３１及び３２において示されたように、様々な条件下で安定的であることを示している。例えば、７．５μＭ  ｓｉＲＮＡは３つの管に分割され、それぞれの管は異なった温度（３７℃、室温、４℃）で最大８週間保存される。それぞれの管の分割量は、予定された時点（２４時間、４８時間、及び一週間）で収集される。分割量の収集に応じて−８０℃で保存される。それぞれの分割量は、ＡＲＰＥ１９細胞における有効性において、異なる環境条件下でｓｉＲＮＡが安定性を維持したかどうかをみるためにテストされた。ｓｉＲＮＡは、ウェルごとに４０，０００細胞が播種された実施例１２に記載された方法を使用してＡＲＰＥ１９細胞の中にトランスフェクションされた。
【実施例１６】
【０１８３】
ＶＥＧＦの異種間下方制御
Ｃ６細胞は２４ウェルプレートに播種される（Ｐ１２、ウェルごとに４０，０００細胞）。播種後１８から２４時間で、細胞は５０〜７０％灌流され、トランスフェクションのために使用される。細胞は、製造業者のプロトコル後に、Ｒｉｂｏｊｕｉｃｅ（登録商標）ｓｉＲＮＡトランスフェクション試薬（Ｎｏｖａｇｅｎ）を使用するＯＰＫ−ＨＶＢ−００４、ＯＰＫ−ＨＶＢ−００９、ＯＰＫ−ＨＶＢ−０１０及びＯＰＫ−ＨＶＢ−０１２によってトランスフェクションされる。一時的に、単一ウェルにおいて、無血清ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（４０．５μＬ〜４７μＬ）はエッペンドルフ管にピペットで移され、その後、Ｒｉｂｏｊｕｉｃｅの２μＬがＯＰＴＩ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）に加えられる。溶液は穏やかにボルテックスで混合され、管の下部に内容物を集めるために短時間遠心分離にかけられ、室温で５分保温培養される。ｓｉＲＮＡ（１００ｎＭまたは１μＭ保存されたものの０．３μＬ〜７．５μＬ）がＲｉｂｏｊｕｉｃｅ／培地混合物に加えられ、穏やかに混合され、管の下部に内容物を集めるために短時間遠心分離にかけられる。混合物は室温で１５分間保温培養される。保温培養の間、培地は細胞から除去され、新しいＣ６増殖培地（Ｆ−１２  Ｋａｉｇｈｎ’ｓ、２．５％ウシ胎児血清、１５％ウマ血清、１％ペニシリン／ストレプトマイシン）の２５０μＬに交換される。１５分の保温培養後、ｓｉＲＮＡ／Ｒｉｂｏｊｕｉｃｅ／培地混合物（５０μＬ）が細胞に液滴で加えられる。プレートは、複合体がウェル内で確実に均一となるよう穏やかに振動される。３００μＬの体積において、ｓｉＲＮＡの最終濃度は、２５０ｐＭ、５００ＰＭ、１ｎＭ、５ｎＭまたは２５ｎＭである。細胞は、３７℃、５％二酸化炭素で２４時間維持される。全体積は、各ｓｉＲＮＡが３倍の濃度でテストされるように拡大された。トランスフェクション後２４時間で、トランスフェクション混合物は除去され、及び、細胞は、新しいＣ６増殖培地または１０ｎｇ／ｍＬヒト組換え型ＴＧＦβＩＩが添加された新しいＣ６増殖培地の５００μＬによって処理される。さらに２４時間、細胞は、３７℃、５％二酸化炭素に戻された。その後、培地は細胞から除去され、ＥＬＩＳＡ（Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ｒａｔ  ＶＥＧＦ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ，  Ｒ&Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によってタンパク質発現のために分析された。
【０１８４】
ＮＩＨ３Ｔ３細胞は２４ウェルプレート内に播種される（Ｐ２〜Ｐ６、ウェルごとに４０，０００細胞）。播種後１８から２４時間で、細胞は５０〜７０％灌流され、トランスフェクションのために使用される。細胞は、製造業者のプロトコル後、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）試薬２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用するｓｉＲＮＡによってトランスフェクションされる。一時的に、単一ウェルにおいて、ｓｉＲＮＡ（１μＭまたは７．５μＭ）はエッペンドルフ管において５０μＬ  ＯＰＴＩ−ＭＥＭで希釈され、穏やかに混合され、ボルテックスされる。第二エッペンドルフ管において、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００の１μＬがＯＰＴＩ−ＭＥＭの４９μＬと結合される。混合物は穏やかに混合され、ボルテックスされ、室温で５分間保温培養される。５分後、希釈されたｓｉＲＮＡ（５０μＬ体積）は、希釈されたＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（５０μＬ）に加えられる。内容物は穏やかに混合され、室温で２０分間保温培養される。２０分間の保温培養の間、培地は細胞から除去され、新しいＮＩＨ３Ｔ３増殖培地（ＤＭＥＭ、１０％ウシ胎児血清）の５００μＬと交換される。２０分後、ｓｉＲＮＡ−Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００複合体（１００μＬ）が細胞に液滴で加えられる。プレートは、複合体がウェル内で確実に均一となるよう穏やかに振動される。その後、細胞は、３７℃、５％二酸化炭素で２４時間保温培養される。５００μＬ体積におけるｓｉＲＮＡの最終濃度は、１ｎＭ、５ｎＭまたは２５ｎＭであった。トランスフェクション後２４時間で、トランスフェクション混合物は除去され、細胞は、新しいＤＭＥＭまたは１０ｎｇ／ｍＬヒト組換え型ＴＧＦβＩＩを添加された新しいＤＭＥＭの５００μＬによって処理される。さらに２４時間、３７℃、５％二酸化炭素に戻された。ＥＬＩＳＡ（Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ｒａｔ  ＶＥＧＦ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ，  Ｒ&Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によってタンパク質発現のために分析された。
【０１８５】
実験の結果は、図３４，３５及び３９に示されている。図３４に示したように、ＯＰＫ−ＨＶＢ−００４及びＯＰＫ−ＨＶＢ−００９は、Ｃ６細胞によるＶＥＧＦ分泌を阻害することが可能であった。同様の実験がマウス細胞（ＮＩＨ３Ｔ３）でも行われ、図３５及び３９で示すように、ＯＰＫ−ＨＶＢ−００４、ＯＰＫ−ＨＶＢ−００９及びＯＰＫ−ＨＶＢ−０１０はマウスＶＥＧＦの分泌を阻害することが可能であった。
【実施例１７】
【０１８６】
異なるｓｉＲＮＡの比較
突出末端からなる２１ｍｅｒ  ｓｉＲＮＡは、一方の１９ｍｅｒ平滑末端と比較される。ＡＲＰＥ１９細胞は、実施例１２、１３及び１４に記載されたように、異なるｓｉＲＮＡによりトランスフェクションされ、ＶＥＧＦ生成は測定される。一方の平滑末端は、図３６に示された２１ｍｅｒのように、ＡＲＰＥ１９細胞におけるノックダウンＶＥＧＦ生成が等しく有効的であると見出される。
【実施例１８】
【０１８７】
１７ｂｐ及びＶＥＧＦ生成を阻害できる突出末端からなる１９ｍｅｒｓのスクリーン。
【０１８８】
１７ｍｅｒ及びｄＴｄＴ突出末端からなるｓｉＲＮＡは、実施例１２、１３及び１４に記載したように、ＡＲＰＥ１９細胞においてトランスフェクションされる。いくつかのｓｉＲＮＡは、図３７に示したように、ＶＥＧＦ生成を阻害するよう見出された。
【実施例１９】
【０１８９】
ｓｉＲＮＡの用量反応
平滑末端または突出末端の１９ｍｅｒ（１７ｂｐ＋ｄＴｄＴ以上）からなる１９ｍｅｒｓは、図３８に示したように様々な用量においてＡＲＰＥ１９細胞内でトランスフェクションされる。用量反応曲線は、実施例１２、１３及び１６で記載されたように、ＶＥＧＦ分泌を測定することにより生成する。用量反応は、ｓｉＲＮＡへの反応がｓｉＲＮＡに特異的であり、非特異的ｓｉＲＮＡ反応によってでは起きなかったことを示す。結果は図３８で見ることができる。ＮＩＨ３Ｔ３細胞においてテストされた平滑末端ｓｉＲＮＡは、特異的用量反応を示す（図３９を参照）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６ＡＢ】
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【図６Ｃ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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