(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（Ｉ）：
（Ｉ）                      ［Ａ−（Ｂ）n］x−Ｃ
｛式中、
ｘは１、
ｎは１から３の整数、
Ａは、少なくともひとつの放射性核種金属を含む金属キレーター、
Ｂは、ＣのＮ−末端に結合したスペーサまたは共有結合、
Ｃは、以下の配列Ｃ−１：
Ｃ−１：  Ｘａａ16−Ｇｌｎ7−Ｔｒｐ8−Ａｌａ9−Ｖａｌ10−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−Ｘａａ313−Ｘａａ414−ＺＨ、
[当該配列において、
Ｘａａ1はＤ−Ｐｈｅ
であり、
Ｘａａ2はＧｌｙ、
Ｘａａ3は以下の：
【化１】
0005784911.tif 000042
で表されるスタチン、
Ｘａａ4はＬｅｕ、および
ＺはＮＨである]
のボンベシンアナログペプチドアンタゴニストである｝
を有するボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体、およびこれらの無機酸または有機酸の薬学的に許容される塩、これらの水和物、錯体、エステル、アミド、及び溶媒和物。
【請求項２】
前記金属キレーター（Ａ）が３価金属用の金属キレーターである、請求項１記載のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体。
【請求項３】
前記３価金属用の金属キレーターが、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸；１，４，７−トリアザシクロノナン−１−コハク酸−４，７−三酢酸−；１，４，７−トリアザシクロノナン−１−グルタル酸−４，７−二酢酸；１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸からなる群から選ばれる、請求項２に記載のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体。
【請求項４】
造影用の前記放射性核種金属が、133mＩｎ、68Ｇａ、111Ｉｎからなる群から選択される、請求項１記載のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体。
【請求項５】
放射線治療用の前記放射性核種金属が、90Ｙ、177Ｌｕからなる群から選択される、請求項１記載のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体。
【請求項６】
ＣのＮ末端に結合したスペーサＢが一般式ＩＩ：
ＩＩ                      Ｂ1−Ｂ2
｛式中、
Ｂ1は共有結合、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、線状ジアミン、またはサイクリックジアミンであり、
Ｂ2は共有結合、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、線状カルボン酸、またはサイクリックカルボン酸であり、
ただし、Ｂ1とＢ2が同時に共有結合であることはできず、Ｂ1がジアミンの場合、Ｂ2はカルボン酸である｝
を有する、請求項１記載のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体。
【請求項７】
ボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体が、以下の一般式（Ｉ’）：
（Ｉ’）                 ［Ａ’−（Ｂ）n］x−Ｃ
｛式中、Ａ’はＡの代わりであって、放射性核種金属を伴わない金属キレーターであること以外は、Ａと同じ意味を持つ｝
を有する、請求項１〜６いずれか１項に記載のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体。
【請求項８】
請求項１〜７いずれか１項に記載のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体いずれかを含む薬学的組成物。
【請求項９】
ボンベシン受容体への結合用の医薬組成物であって、請求項１〜７いずれか１項に記載のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体を含む、前記医薬組成物。
【請求項１０】
上記定義の一般式（Ｉ’）を有するボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体を、適当な放射性核種金属または金属原子と放射キレート化するステップを含む、請求項１記載のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体のいずれかの製法。
【請求項１１】
請求項１〜７いずれか１項記載のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体の放射性医薬的有効量を含む、ボンベシン受容体の造影用組成物。
【請求項１２】
ボンベシン受容体発現腫瘍細胞および／または腫瘍および腫瘍周辺血管をイメージングするための造影剤の製造のための、放射性医薬として薬効な量の請求項１〜７いずれか１項記載のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体の使用。
【請求項１３】
前記ボンベシン受容体が、ＧＲＰ受容体である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記腫瘍細胞が、以下の：
−転移癌を含む前立腺癌、
−転移癌を含む乳癌、
−消化管間質腫瘍、
−小細胞肺癌、
−腎細胞癌、
−膵内分泌腫瘍、
−頭頸部扁平上皮癌、
−神経芽細胞腫、および
−食道扁平上皮癌
からなる群から選択される癌を指し、ここで
前記腫瘍および腫瘍周辺血管が、
−卵巣癌、
−子宮内膜癌、および
−膵臓癌
を含む群から選択される癌を指す、請求項１２又は１３記載の使用。
【請求項１５】
請求項１〜７いずれか１項に記載の、治療有効量のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体を含む、腫瘍細胞および／または腫瘍血管および腫瘍周辺血管関連疾患を治療するための医薬組成物。
【請求項１６】
腫瘍細胞および／または腫瘍血管および腫瘍周辺血管関連疾患を治療または予防するための薬剤の製造のための、請求項１〜７いずれか１項記載の治療有効量のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体の使用。
【請求項１７】
前記腫瘍細胞関連疾患が
−転移癌を含む前立腺癌、
−転移癌を含む乳癌、
−消化管間質腫瘍、
−小細胞肺癌、
−腎細胞癌、
−膵内分泌腫瘍、
−頭頸部扁平上皮癌、
−神経芽細胞腫、および
−食道扁平上皮癌
からなる群から選択され、
前記腫瘍血管および腫瘍周辺血管関連疾患が
−転移癌を含む前立腺癌、および、
−転移癌を含む乳癌、
からなる群から選択される、請求項１６記載の使用。
【請求項１８】
金属キレーターで放射性同位元素標識するための、所定量の請求項１〜７のいずれか一項に記載のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体および、許容される担体、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含有したバイアルを含む、放射線治療薬または放射線医薬造影剤製造用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療用または診断用イメージングに用いる放射性医薬品、それらの製造および使用に関し、ここで、治療用または診断用イメージングに用いる放射性医薬品とは、ボンベシン受容体、特にガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）受容体、に対し親和性を有する結合モイエティとして定義され、該受容体に結合することができるものである。上記結合モイエティは、アルファ−、ベータ−、ガンマ−、および陽電子を放出するアイソトープのための金属錯化グループに分類される。上記使用には腫瘍性疾患の治療が含まれ、該治療には、患者にボンベシン受容体、特に腫瘍細胞上で過剰発現したガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）受容体に結合することのできるモイエティに結合したキレート基とキレートを形成する金属を有する放射性医薬品の治療有効量を投与するステップが含まれる。上記使用には腫瘍性疾患患者の診断やイメージングが含まれ、ボンベシン受容体、特に腫瘍細胞上で過剰発現したガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）受容体に結合することのできるモイエティに結合したキレート基とキレートを形成する金属を有する診断／イメージング用放射性医薬品の使用を含む。上記方法は、ボンベシン受容体、特に腫瘍細胞上で過剰発現したガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）受容体に結合することのできるモイエティと共有結合で結ばれた金属キレート基からなる前駆体化合物から、治療用または診断用化合物を製造することから構成される。
【背景技術】
【０００２】
診断薬として有効に使用される放射性医薬トレーサの設計においては、薬物が、生体内標的的な薬物速度論的特性を有することが不可欠である。Ｆｒｉｔｚｂｅｒｇら（１９９２，  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．，  ３３：３９４）は、放射性核種の化学や関連する結合を考えた場合、生体分子担体のアタッチメントや化学修飾のラベリングを最適化する必要性が大きくなる、と更に述べている。よって、放射性核種の種類、生体分子の種類、およびそれらを互い結合する方法は、放射性トレーサの特性に大きな影響を与えるだろう。
【０００３】
ペプチドは、神経伝達物質、ホルモン、抗生物質などによる活動を含む多くの生理学的過程で、重要な役割をはたす生体分子である。神経科学、免疫学、薬理学、および細胞生物学などの分野において、ペプチドの重要性が示されている。ペプチドの中には化学伝達物質として機能することができるものがある。これらは標的細胞表面の受容体に結合し、リガンドの生物学的効果が標的組織に伝達される。よって、リガンドの特異的受容体結合特性は、該リガンドを放射性核種で標識することで有効に利用することができる。理論的には、受容体に対するリガンドの親和性が高いと、受容体発現組織中での放射性標識リガンドの保持が容易になる。しかしながら、どういったペプチドが効果的に標識されるか、どういった条件下で標識化されるかはまだ研究途上である。化学反応の途中でリガンドペプチドの受容体特異性が変化する場合があることはよく知られている。従って、最適なペプチド構造体を明らかにする必要がある。
【０００４】
腫瘍は、ペプチドが特異的に結合する種々の受容体タイプを過剰に発現する。Ｂｏｅｒｍａｎらによる出版物、Ｓｅｍｉｎａｒ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ２０００，  ３０（３），  １９５）；  Ｒｅｕｂｉら，  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．，  ２００５，  ４６，  （ｓｕｐｐｌ）  ６７Ｓ；  Ｒｅｕｂｉ，  Ｊ．Ｃ．，  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，  ２００３，  ２４（４），  ３８９、は、ソマトスタチン、血管作動性腸管ペプチド  （ＶＩＰ）、ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）受容体に結合したボンベシン、ガストリン、コレシストキニン（ＣＣＫ）、およびカルシトニンなど、新生物中の細胞表面受容体に特異的に結合するペプチドの限定的なリストを提供している。
【０００５】
金属標識受容体特異性ペプチドの、シンチグラフィーイメージングおよび放射線治療における潜在的な可能性は、例えば、111In-DTPA 複合オクトレオチド、すなわちＦＤＡが承認し、米国のＣｏｖｉｄｉｅｎが販売している診断用造影剤Ｏｃｔｒｅｏｓｃａｎ（登録商標）などのソマトスタチンアナログで例示される(Ｌｏｗｂｅｒｔｚら，  Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，  １９９４，  １、および  Ｒｅｕｂｉら，  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．，  ２００５，  ４６，  ６７Ｓ−７５Ｓ  およびそれぞれの参考文献）。Ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅおよびそのアナログは、いくつかの造影用金属アイソトープ（99mＴｃ、111Ｉｎ、68Ｇａ）および治療用金属アイソトープ（105Ｒｈ、186/188Ｒｅ、153Ｓｍ、90Ｙ、166Ｈｏ、177Ｌｕ）に共有結合している。上記金属標識複合体は受容体に結合し、受容体に結合することでその構造体は受容体に内在化され、金属標識受容体特異性ペプチドまたはその代謝物は標的細胞中にトラップされる。
【０００６】
前述の原理は更に、ＧＲＰ受容体親和性ペプチド（ペプチドが受容体に対し強い親和性を有している）に対して拡張され、金属複合ボンベシンアゴニストがシンチグラフィーイメージングおよび放射線治療に使用される。（Ｓｍｉｔｈら，  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，  ２３  （２００３），  ６３−７０；  Ｂａｉｄｏｏら，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．  Ｃｈｅｍ．，  ９  （１９９８），  ２１８−２２５；  ＧａＩｉら，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．  Ｃｈｅｍ．，  １２  （２００１），  ３５４−３６３；  Ｓｍｉｔｈら，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．  Ｃｈｅｍ．，  １４  （２００３），  ９３−１０２，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ６３  （２００３），  ４０８２−４０８８；  Ｒｏｇｅｒｓら，  Ｉｎ，  Ｍ．  Ｎｉｃｏｌｉｎｉ  ａｎｄ  Ｕ．  Ｍａｚｚｉ，  Ｅｄｉｔｏｒｓ，  Ｔｅｃｈｎｅｔｉｕｍ，  ｒｈｅｎｉｕｍ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｍｅｔａｌｓ  ｉｎ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ＳＧＥ  Ｅｄｉｔｏｒｉａｌｉ，  Ｉｔａｌｙ  （１９９９），  ５１９−５２５；  Ｚｈａｎｇら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ６４  （２００４），  ６７０７−６７１５；  Ｌａｎｔｒｙら，  ＥＡＮＭ，  Ｈｅｌｓｉｎｋｉ  （Ｆｉｎｌａｎｄ）  （２００４）；  Ｌｉｎｄｅｒら，  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．，  ４５，  （２００４）  （５），  １６９Ｐ  ［ａｂｓｔｒａｃｔ  ４８２］．  Ｃｈｅｎら，  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．，  ４５  （２００４），  １３９０−１３９７；  Ｊｏｈｎｓｏｎら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｔｈｅｒ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．  ２００６，  ２１（２），  １５５−６６，  Ｓｍｉｔｈら，  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  Ｂｉｏｌ，  ２００５，  ３２  ７３３−４０）．
【０００７】
Ｃｈｅｎら（Ａｐｐｌ．  Ｒａｄｉａｔ．  Ｉｓｏｔ，  ２００７，  （Ｉｎ  Ｐｒｅｓｓ））、Ｗａｓｅｒら（Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ．  ＭｏＩ．  Ｉｍａｇｉｎｇ．  ２００７  ３４，  ９５−１００）、およびＬａｎｔｒｙら（Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．，  ２００６，  ４７，  １１４４−５２）  の文献には、ボンベシンアゴニスト、−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＯ−［４−アミノベンゾイル］−ＱＷＡＶＧＨＬＭ−ＮＨ2））（Ｘ177ＬＵ−ＡＭＢＡ）にカップリングした177Ｌｕ−ＤＯＴＡ、のイメージングおよび放射線治療が記載されている。
【０００８】
いくつかの特許および特許出願が、金属標識されたボンベシンアゴニストに言及している。Ｖｏｌｋｅｒｔら（ＵＳ  ２００７／００６５３６２  Ａ）は、金属標識モイエティ(Metal labeling moiety)−スペーサグループ−ボンベシンアゴニスト、の一般構造を有する金属標識ボンベシンアゴニストをクレームしている。同じ発明者による特許および特許出願には、他にＵＳ  ６，９２１，５２６  Ｂ  （２００５）、  ＵＳ  ７，０６０，２４７  Ｂ、ＵＳ  ７，１４７，８３８  Ｂ  （２００６）、およびＷＯ  ２００２／０８７６３１  Ａ１がある。
【０００９】
（技術水準）
上記公報すべてにおいて、放射性医薬品としてアゴニストを選択する際の基本原理は、それらが相互作用によってＧＲＰ受容体による応答を生成する、または引き出すことであって、放射性医薬品はその後にエンドサイトーシスによって細胞に内在化される。ＧＲＰアンタゴニストはアゴニストの効果を中和し、細胞中に取り込まれることはない。従って、アンタゴニストは放射線シンチグラフィーイメージングや放射線治療の目的にはあまり適していないだろう。これでのところ、放射性リガンド内在化特性が良好な化合物を開発し、体内における最適な視覚化および放射性核種治療に必要だと思われる、腫瘍中での放射性リガンドの高い体内蓄積を実現することにコンセンサスが得られている。分子薬理学の研究からは、効果的な内在化は主にアゴニストによってもたらされることはよく知られており(Ｂｏｄｅｉら，  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．，  ２００６；４７，  ３７５−３７７；  Ｋｏｅｎｉｇら，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｓｃｉ．，  １９９７；１８，  ２７６−２８７，  Ｃｅｓｃａｔｏら，  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．，  ２００６；４７，  ５０２−５１１．  Ｇｉｎｊら，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．  ２００６；  １０３，  １６４３６−１６４４１) 、また最近、ソマトスタチン受容体のケースで、高親和性金属標識ソマトスタチン受容体アンタゴニストは腫瘍細胞への内在化が小さく、動物腫瘍モデル中で多量に内在化される対応アゴニストと比較して、腫瘍への生体内取込みに関して、同等以上の働きをすることが実証された。ＧＲＰ受容体は、前立腺癌および転移癌、乳癌および転移癌、消化管間質腫瘍ｓ、小細胞肺癌、腎細胞癌，  膵内分泌腫瘍、頭頸部扁平上皮癌、神経芽細胞腫および食道扁平上皮癌など、いくつかの新生物中で過剰発現する（Ｃｏｒｎｅｌｉｏら，  Ａｎｎ．  Ｏｎｃｏ．，  ２００７，  １８，  １４５７−１４６６および参考文献）。ＧＲＰ受容体はまた、ヒト卵巣、子宮内膜、および膵臓癌の、腫瘍関連血管内でも発現する。従って、イメージングおよび放射線治療用に、アンタゴニスト性を有する強力な放射性医薬品を設計することが強く望まれる。
【００１０】
Ｊｅｎｓｅｎら（Ｐｈａｒｍａ．  Ｒｅｖｉｅｗｓ，  ２００８  （ｉｎ  Ｐｒｅｓｓ））は、最近、ＧＲＰ受容体がサブタイプ２に属する、３つの異なるボンベシン受容体サブタイプの受容体薬理についてレビューを行っている。
【００１１】
最近の文献では、Ｃｅｓｃａｔｏら（Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．，  ２００８，  ４９，  ３１８−２６）が、99mＴｃ−Ｎ4−標識ボンベシンアンタゴニストが、腫瘍標的用アゴニストよりむしろ好まれるかもしれないことを示している。
【００１２】
ＷＯ  ２００７／１０９４７５  Ａ２，  ＷＯ  ２００７／０９５４４３  Ａ２，  ＵＳ  ２００８／０００８６４９  Ａ１およびＵＳ  ７，２２６，５７７  Ｂ２には、後に示す一般スキームと共に、ＧＲＰ受容体標的化合物分野の初期の発明が、金属キレート−リンカー−ボンベシンと共に記載されている。
【００１３】
金属−キレート剤−リンカー−ボンベシンアナログ
【００１４】
ＷＯ  ２００７／０９５４４３  Ａ２によれば、特定のシーケンス177Ｌｕ−ＤＯＴＡ−Ｇｌｙ−４−アミノベンゾイル−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ2を有する。
Ｌ７０サンプルはアゴニストとして作用しており、１時間および２４時間での取込みが観測された。上記取込みは治療目的にとっては最適なものではなく、改良する必要がある。
【００１５】
これらの特許および出願のほかに、出版物として、臨床前および臨床研究がある（Ｗａｓｅｒら，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ２００７，  ３４，  ９５−１００；  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．，  ２００６，  ４７，  １１４４−５２）。
【００１６】
異なる部位にあるＧＲＰ受容体を高い親和性で標的とするアンタゴニストの選択に基づき、本発明では、非標的臓器に関しての少ない取込みと速やかな除去と組合せたスペーサ戦略の組合せによって、意外にも、高く持続性のある腫瘍取込みが実現されることを示す。比較研究では、類似のリンカーを用いた時、腫瘍中での優れて大きな取込み（＞  ２  Ｘ）が観察された。ボンベシンアナログのアンタゴニスト性を評価する生体内アッセイから開始し、以下のことが分かった；すなわち、スペーサ、キレート剤、および金属を加えた後であっても、これら拮抗の効果は維持され、腫瘍−バックグラウンド比の優れた生体内挙動に変換される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
従って、本発明の目的は、高い取込みおよび高い生体内安定性（ヒト血清および組織）を示す、新たなボンベシンペプチドアンタゴニスト複合体を提供することである。
【００１８】
一の態様では、本発明は、細胞内在化を誘発することなく、かつ、これら２つの系で、アゴニストに誘導された効果に拮抗する間にカルシウム動員を通じてシグナルを発することなく、ボンベシン受容体、特にＧＲＰ受容体に選択的に結合するボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体に関し、該ボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体は一般式（Ｉ）：
（Ｉ）                            ［Ａ−（Ｂ）n］x−Ｃ
｛式中、
ｘは１から３の整数、
ｎは１から６の整数、
Ａは、
少なくとも１つの放射性核種金属、
好ましくは、診断または治療用途に適したもの、
さらに好ましくは、イメージングまたは放射線治療用のもの、
を含む金属キレート、
ＢはＣのＮ−末端に結合したスペーサまたは共有結合、
Ｃは、以下の配列Ｃ−１からＣ−４：
Ｃ−１：Ｘａａ16−Ｇｌｎ7−Ｔｒｐ8−Ａｌａ9−Ｖａｌ10−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−Ｘａａ313−Ｘａａ414−ＺＨ
[当該配列において、
Ｘａａ1はＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｒｐまたは下記式のいずれか１つを有する残基：
【化１】
0005784911.tif 000002
（式中、ＫはＦ、Ｃｌ、Ｉ、またはＮＯ2である）
Ｘａａ2はＧｌｙまたはβ−Ａｌａ、
Ｘａａ3はスタチン、スタチンアナログおよび異性体、４−Ａｍ、５−ＭｅＨｐＡ、４−Ａｍ、５−ＭｅＨｘＡまたはα−置換アミノ酸、
Ｘａａ4はＬｅｕ、Ｃｐａ、Ｃｂａ、ＣｐｎＡ、Ｃｈａ、ｔ−ｂｕＧｌｙ、ｔＢｕＡｌａ、Ｍｅｔ、ＮＩｅ、またはｉｓｏ−Ｂｕ−Ｇｌｙ、および
ＺはＮＨまたはＯである]
Ｃ−２：  Ｘａａ16−Ｇｌｎ7−Trp8−Ａｌａ9−Ｖａｌ10−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ−ＣＨ2）−（ＣＨ2）2−ＣＨ3，
[当該配列において、
ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ−ＣＨ2）−（ＣＨ2）2−ＣＨ3は
【化２】
0005784911.tif 000003
であり、
Ｘａａ1はＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｒｐまたは下記式のいずれか１つを有する残基：
【化３】
0005784911.tif 000004
（式中、Ｋは、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、またはＮＯ2である）
Ｘａａ2は、Ｇｌｙまたはβ−Ａｌａである]；
Ｃ−３：  Ｘａａ16−Ｇｌｎ7−Ｔｒｐ8−Ａｌａ9−Ｖａｌ10−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−Ｘａａ513−Ｘａａ614−ＺＨ、
[当該配列において、
Ｘａａ1はＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｒｐまたは下記式のいずれか１つを有する残基：
【化４】
0005784911.tif 000005
（式中、ＫはＦ、Ｃｌ、Ｉ、またはＮＯ2である）
Ｘａａ2はＧｌｙまたはβ−Ａｌａ、
Ｘａａ5はＬｅｕΨ−ＣＨ2ＮＨ−、
Ｘａａ6はＣｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｐｉ、またはＴａｃ、
ここで、ＴｐｉおよびＴａｃは以下の：
【化５】
0005784911.tif 000006
を表し、そして、
ＺはＮＨ、またはＯである]；
Ｃ−４：  Ｘａａ16−Ｇｌｎ7−Ｔｉｐ8−Ａｌａ9−Ｖａｌ10−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−Ｘａａ7、
[当該配列において、
Ｘａａ1はＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｒｐまたは下記式のいずれか１つを有する残基：
【化６】
0005784911.tif 000007
（式中、ＫはＦ、Ｃｌ、Ｉ、またはＮＯ2である）
Ｘａａ2はＧｌｙまたはβ−Ａｌａ、
Ｘａａ7はＬｅｕ−Ｏ−アルキル、またはＬｅｕ−ＮＨ−アルキルである]
で表されるボンベシンアナログペプチドアンタゴニストある｝
を有する。
【００１９】
本発明は、更に、これらボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体の、薬学的に許容される無機または有機酸塩、および、一般式（Ｉ）を有するこれらの化合物の無水物、錯体、エステル、アミド、溶媒和物、およびプロドラッグに言及する。
【００２０】
説明A（金属キレート剤）：
本発明の好ましい実施態様では、金属キレート剤（Ａ）は、３価金属または５価金属用の金属キレート剤、およびそれらの近縁アナログ(close analog)である。
【００２１】
好ましくは、３価金属用の金属キレート剤（Ａ）は、ＤＯＴＡ−、ＮＯＤＡＳＡ−、ＮＯＤＡＧＡ−、ＮＯＴＡ−、ＤＴＰＡ−、ＥＤＴＡ−、ＴＥＴＡ−、およびＴＲＩＴＡ−ベースのキレート剤およびそれらの近縁アナログからなる集合から選択され、ここで、ＤＯＴＡは１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’テトラ酢酸，
ＤＴＰＡはジエチレントリアミン5酢酸、
ＥＤＴＡはエチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−テトラ酢酸、
ＴＥＴＡは１，４，８，１１−テトラアザシクロドデカン−１，４，８，１１−テトラ酢酸、および
ＮＯＴＡは１，４，７−トリアザシクロノナントリ酢酸、
を表わす。
【００２２】
さらに好ましくは、３価金属用の金属キレート剤（Ａ）は、ＤＯＴＡ−、ＮＯＴＡ−、ＤＴＰＡ−、およびＴＥＴＡ−ベースのキレート剤およびそれらの近縁アナログの集合から選択される。
【００２３】
これらキレートリガンド構造の、完全な脱プロトン化体は下記のとおりである。
【化７】
0005784911.tif 000008
【００２４】
さらに好ましくは、３価金属用の金属キレート剤（Ａ）は、ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン5酢酸）および、ＤＯＴＡ（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’テトラ酢酸）のようなポリアザ−ポリカルボキシレート大員環およびそれらの近縁アナログの集合から選択される。
【００２５】
好ましくは、５価金属用の金属キレート剤（Ａ）は、
２−ヒドラジノニコチンアミド  （ＨＹＮＩＣ）、
Ｎ4−キレート剤、
Ｎ4−Ｘ  （Ｎ4は線状またはマクロサイクリックであってよく、Ｘはアジドアミン、ＯＨ、ハロゲン、ｏ−、ｍ−、ｐ−アミノベンジルメタパラカルボキシベンジル、およびカルボキシであってよい（Ｎｏｃｋ，  Ｂ．ら（２００３［99mＴｃ］デモベシン１，  ＧＲＰ受容体標的腫瘍イメージング用の新規なボンベシンアナログ。Ｅｕｒ．  Ｉ．  Ｎｕｃｌ．  ＭｏＩ．  Ｉｍａｇｉｎｇ，  ３０，  ２４７−２５８）））、
デスフェリオキサミン（ＤＦＯ）、およびＮrＳ(4-r)キレート剤、そして
【化８】
0005784911.tif 000009
｛式中、
Ｒ1−Ｒ15は互いに独立して水素原子または（Ｃ1−Ｃ4）アルキル基、
上記式の
【化９】
0005784911.tif 000010
部分においてｔは１または２または３であり、そして当該部分： 
【化１０】
0005784911.tif 000011
において少なくとも１の炭素原子はＹで置換されているか又は置換されておらず、
Ｒ16は水素原子またはＣＯ2（Ｃ1−Ｃ4）アルキル基；
Ｒ17およびＲ18は互いに独立して（Ｃ1−Ｃ4）アルキル基またはフェニル基；
Ｒ19はＣＨ2−ＣＯＯＨまたはその官能性誘導体；
Ｅは（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン、またはフェニレンであり；
場合により（Ｃ1−Ｃ4）アルキレンは、ＣＯ2−アルキル、ＣＨ2−ＣＯアルキル、ＣＯＮＨ2、またはＣＯＮＨＣＨ2−ＣＯ2−アルキルで置換され；
場合によりフェニレンは、ＣＯ2−アルキルで置換され、式中、アルキル基は炭素原子を１から４有し；
ＧはＮＨまたはＳ；
Ｙはペプチド（Ｎ末端）のフリーのアミノ基、またはスペーサと結合することのできる官能基；および
Z' はSまたはOである｝
を含むグループから選択される。
【００２６】
Ｎ4−キレート剤は、好ましくは、
【化１１】
0005784911.tif 000012
｛式中、ｍは１から４の整数を意味する｝である。
【００２７】
ＮrＳ(4-r)キレート剤は、ｒが１から４の整数のものとして定義される。
【００２８】
上記官能基Ｙは、好ましくは、イソシアナート、イソチオシアナート、ホルミル、ハロニトロフェニル、ジアゾニウム、エポキシ、トリクロロ−ｓ−トリアジニル、エチレンイミノ、クロロスルホニル、アルコキシカルブ−イミドイル(alkoxycarb-imidoyl)、（置換または非置換）アルキルカルボニルオキシカルボニル、アルキルカルボニルイミダゾリル、スクシンイミド−オキシカルボニルを含み、該基は（Ｃ1−Ｃ10）炭化水素ビラジカルに結合している。炭化水素ビラジカルの適切な例としては、ベンゼン、（Ｃ1−Ｃ6）アルカン、（Ｃ2−Ｃ6）アルケンおよび（Ｃ1−Ｃ4）−アルキルベンゼン、およびそれらの近縁アナログから誘導されるビラジカルがある。
【００２９】
好ましくは、ＮrＳ(4-r)キレート剤は、テクネチウム放射性核種用ビスアミノビスチオール（ＢＡＴ）ベースのキレート剤、テクネチウム放射性核種用メルカプト−アセチル−グリシル−グリシル−グリシン（ＭＡＧ３）、およびそれらの近縁アナログ、からなるグループから選択される。
【００３０】
より好ましくは、５価金属用の金属キレート剤（Ａ）は、下記式
【化１２】
0005784911.tif 000013
｛式中、Ｒ1−Ｒ19、Ｚ’、Ｙ、Ｇおよびｔは上で定義した通りである｝
およびそれらの近縁アナログを含む群から選択される。
好ましくは、ｒは２から４の整数であり、より好ましくはｒは２または３である。
好ましくは、ｍは１から２の整数を意味し、より好ましくは、ｍは１である。
【００３１】
よく知られた金属キレートである、線形、マクロサイクリック、テトラピリジン、およびＮ3Ｓ，  Ｎ2Ｓ2またはＮ4キレート剤等は、ＵＳ  ５，３６７，０８０  Ａ，  ＵＳ  ５，３６４，６１３  Ａ，  ＵＳ  ５，０２１，５５６  Ａ，  ＵＳ  ５，０７５，０９９  Ａ，  ＵＳ  ５，８８６，１４２  Ａに開示されており、該開示は参照によってその全体が本明細書内に組込まれる。
【００３２】
よく知られた金属キレートである、ＨＹＮＩＣ、ＤＴＰＡ、ＥＤＴＡ、ＤＯＴＡ、ＴＥＴＡ、ビスアミノビスチオール（ＢＡＴ）ベースのキレート剤等は、ＵＳ  ５，７２０，９３４  Ａに開示されており、該開示は参照によってその全体が本明細書内に組込まれる。
【００３３】
よく知られた金属キレート剤であるデスフェリオキサミン（ＤＦＯ）は、Ｄｏｕｌｉａｓら（２００３）  Ｅｎｄｏｓｏｍａｌ  ａｎｄ  ｌｙｓｏｓｏｍａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｄｅｓｆｅｒｏｘａｍｉｎｅ：  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨｅＬａ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｐｅｒｏｘｉｄｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ＤＮＡ  ｄａｍａｇｅ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｌｌ−ｃｙｃｌｅ  ａｒｒｅｓｔ．  Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ．  Ｂｉｏｌ．  Ｍｅｄ．，  Ｖｏｌ．  ３５，  Ｉｓｓｕｅ  ７：７１９−２８．に開示されている。
【００３４】
多岐にわたるキレート化剤が利用可能であり、Ｂａｎｅｒｊｅｅら（Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ２００５，  ３２，  １−２０および参考文献）によってレビューされており、参照によって本明細書内に組込まれる。
【００３５】
２−ヒドラジノニコチンアミド（ＨＹＮＩＣ）は別のクラスのキレート化剤（Ａ）であって、共リガンド(coligand)の存在下、99mＴｃおよび186,188Ｒｅの取込みに広く使用されている（Ｓｃｈｗａｒｔｚら，  Ｂｉｏｃｏｎｊ．  Ｃｈｅｍ．，  １９９１，  ２，  ３３３−６；  Ｂａｂｉｃｈら，  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．，  １９９３，  ３４，  １９６４−７０；  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  Ｂｉｏｌ．，  １９９５，  ２２，  ２５−３０；  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  Ｂｉｏｌ．，  １９９５，  ２２，  ｐｐ．  ３２，  ｐｐ．  １−１０）。
【００３６】
ＤＴＰＡはＯｃｔｒｅｏｓｃａｎ（登録商標）（Ｃｏｖｉｄｉａｎが販売）中で、111Ｉｎを錯化するために使用されており、文献には様々な改良が記載されている（Ｂｒｅｃｈｂｉｅｌら，  Ｂｉｏｃｏｎ．  Ｃｈｅｍ．，  １９９１，  ２，  １８７−１９４；  Ｌｉら，  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  Ｂｉｏｌ，  ２００１，  ２８，  １４５−１５４）。
【００３７】
放射線治療用のＤＯＴＡタイプのキレートは、Ｔｗｅｅｄｌｅらによって、ＵＳ  Ｐａｔ  ４８８８５３６３に記載されている。３価アイソトープ金属をキレート化する他のポリアザマクロサイクルは、Ｍａｅｃｋｅら，  Ｂｉｏｃｏｎｊ．  Ｃｈｅｍ．，  ２００２，  １３，  ５３０、に記載され、参照によって本明細書内に組込まれる。
【００３８】
Ｎ4−キレート化剤、99mＴｃ−Ｎ4−キレート化剤はＣＣＫ−２受容体を標的としたミニガストリン（ｍｉｎｉｇａｓｔｒｉｎ）のケースにおいてペプチド標識に使用されている（Ｎｏｃｋら，  Ｊ．  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ．，  ２００５，  ４６，  １７２７−３６）。
【００３９】
本発明の好ましい態様では、金属キレート剤と錯化させイメージング用放射性金属キレート剤とするのに、放射性核種金属が適している。好ましくは、放射性核種金属は、133mＩｎ、99mＴｃ、67Ｇａ、52Ｆｅ、68Ｇａ、72Ａｓ、111Ｉｎ、97Ｒｕ、203Ｐｂ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、51Ｃｒ、52mＭｎ、157Ｇｄ、123Ｉ、124Ｉ、131Ｉ、75Ｂｒ、76Ｂｒ、77Ｂｒ、64Ｃｕおよび82Ｂｒを含むグループから選択される。より好ましくは、放射性核種金属は99mＴｃ、67Ｇａ、68Ｇａ、111Ｉｎ、および123Ｉを含むグループから選択される。更に好ましくは、放射性核種金属は68Ｇａである。更に好ましくは、放射性核種金属は99mＴｃである。
【００４０】
本発明の好ましい態様では、金属キレート剤と錯化させ、放射線治療用放射性金属キレート剤とするのにするのには、放射性核種金属が適している。好ましくは、放射性核種金属は、168Ｒｅ、90Ｙ、67Ｃｕ、68Ｇａ、69Ｅｒ、121Ｓｎ、127Ｔｅ、142Ｐｒ、143Ｐｒ、198Ａｕ、199Ａｕ、161Ｔｂ、109Ｐｄ、188Ｒｄ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、77Ａｓ、166Ｄｙ、166Ｈｏ、149Ｐｍ、151Ｐｍ、153Ｓｍ、159Ｇｄ、172Ｔｍ、90Ｙ、111Ｉｎ、169Ｙｂ、175Ｙｂ、177Ｌｕ、105Ｒｈ、111Ａｇ、125Ｉ、123Ｉ、213Ｂｉ、225Ａｃ、129１、64Ｃｕおよび177mＳｎを含むグループから選択される。より好ましくは、放射性核種金属は186Ｒｅ、188Ｒｅ、90Ｙ、153Ｓｍ、68Ｇａ、および177Ｌｕを含むグループから選択される。
【００４１】
第一の態様の更なる代替では、適切な放射性核種金属は放射性ハロゲン（ヨウ素および臭素アイソトープ）であり、該放射性ハロゲンは直接ペプチドに、ペプチド内のＴｙｒやＴｒｐモイエティなどへの化学反応によって結合する。または、任意に、ＡがＴｙｒまたはＴｒｐであってよい。
【００４２】
好ましい放射線診断薬（67Ｇａ、111Ｉｎ）および放射線治療薬（90Ｙ、153Ｓｍ、177Ｌｕ）は、任意に、ランタニドとして知られる元素のクラスからのキレート化した＋３金属イオンを含む。このクラスの典型的な放射性金属としては、アイソトープである90イットリウム、111インジウム、  149プロメシウム、153サマリウム、166ジスプロシウム、166ホルミウム、175イッテルビウム、および177ルテチウムがある。これら金属（およびランタニド系列中の他のもの）はすべて、＋３酸化状態となり、硬い（酸素／窒素）ドナー原子を有するリガンドにキレートしやすいといった点で非常に類似した化学的性質を有している。
【００４３】
Ｂ（スペーサ）の説明
ＢはＣのＮ末端に結合したスペーサまたは共有結合である。
【００４４】
本発明の好ましい態様では、Bは下記式（II）の化合物であって、
ＩＩ                          Ｂ1−Ｂ2
｛式中、
Ｂ1は共有結合、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、線状ジアミン、またはサイクリックジアミンであり、
Ｂ2は共有結合、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、線状ジアミン、またはサイクリックカルボン酸であり、
ただし、Ｂ1とＢ2が同時に共有結合であることはなく、かつＢ1がジアミンの時はＢ2はカルボン酸（すなわち、このケースでは、Ｂ2は結合であることはできず、または天然若しくは非天然のアミノ酸であることもできない）である｝である。
【００４５】
好ましくは、非天然アミノ酸は式（ＩＩＩ）、（ＩＶ），（Ｖ）または（ＶＩ）いずれか１つを有する化合物であり、ここで式（ＩＩＩ）は、以下の：
【化１３】
0005784911.tif 000014
｛式中、
ａは０から３の整数、
ｂは０から３の整数、そして
相対的な置換パターンは、任意に１，２−、１，３−、または１，４−であり、
好ましくは、ａは０または１、
ｂは０または１である｝
であり；
式（ＩＶ）は、以下の：
【化１４】
0005784911.tif 000015
｛式中、
ｃは１から２４の整数、
ｄは１から６の整数であり、
好ましくは、ｃは１から１５の整数、より好ましくは、ｃは１から８、
ｄは１から３の整数、より好ましくは、ｄは１である｝
であり；
式（Ｖ）は、以下の：
【化１５】
0005784911.tif 000016
｛式中、
Ｅ’はＮＨ、またはＣＨ2、
ｆは０から６の整数、
ｇは０から６の整数、
Ｅ’がＣＨ2の時、６員環は任意に、任意の６員環炭素位置において、環の同じ炭素上で、または異なった炭素上で置換され、
Ｅ’がＮＨの時、６員環は任意に、任意の６員環炭素位置において、環の同じ炭素原子上で、または異なった炭素原子上で、および／または窒素原子上で、置換され、
ただしここで、ｆまたはｇは１以上の整数である。
好ましくは、Ｅ’はＮＨ，
ｆは０から３の整数、
ｇは０から３の整数である｝
であり；
式（ＶＩ）は、以下の：
【化１６】
0005784911.tif 000017
｛式中、
ｉは１から６の整数、
ｊは１から６の整数、
ＰはＯまたはＨ2であり、
好ましくは、ｉは１から３の整数、
ｊは１から３の整数、
ＰはＯである｝
である。
【００４６】
より好ましくは、スペーサは、４−アミノ−ｌ−カルボキシメチルピペリジン、（Ｒ，Ｓ）−ジアミノ酢酸、ＰＥＧ1-24、Ｓａｒ5-10、８−アミノオクタン酸、６−アミノカプロン酸、４−（２アミノエチル）−ｌ−カルボキシメチルピペラジン、ジアミノ酪酸、馬尿酸、４−アミノ−ｌ−Ｂｏｃ−ピペリジン−４−カルボン酸、Ｇｌｙ−アミノ安息香酸、５−アミノ−３−オキサ−ペンチル−こはくアミド酸、Ｐｅｇ1-24−４−アミノ−ｌ−カルボキシメチルピペリジン、Ｄａｂ（シキミ酸）、（Ｄ−Ｇｌｎ）ｘ、（Ｄ−Ａｓｎ）ｘを含むグループから選択される。
【００４７】
Ｃ（ボンベシンアナログペプチドアンタゴニストシーケンス）の説明
本発明の好ましい実施態様では、ボンベシンアナログペプチドアンタゴニストシーケンスはＣ−１からＣ−３、好ましくはＣ−１からＣ−２を含むグループから選択される。
【００４８】
好ましくは、ボンベシンアナログペプチドアンタゴニストシーケンスは、
化合物１  配列：Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2  ；
化合物９  配列：Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ−ＣＨ2）−（ＣＨ2）2−ＣＨ3;；
化合物１２  配列：  Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨ2ＮＨ）−Ｐｈｅ−ＮＨ2；
化合物１３  配列：Ｄｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨ2ＮＨ）−Ｃｙｓ−ＮＨ2
を含むグループから選択される。
【００４９】
好ましくは、少なくとも１つの放射性核種金属を含む式（Ｉ）のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体は、
化合物１：  ＤＯＴＡ−Ｇｌｙ−アミノベンゾイル−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2；
化合物２：  ＤＯＴＡ−４−アミノ−１−カルボキシメチル−ピペリジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2；
化合物３：  ＤＯＴＡ−４−アミノ−１−ピペリジン−４−カルボン酸−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2；
化合物４：  ＤＯＴＡ−１５−アミノ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2；
化合物５：  ＤＯＴＡ−（１５−アミノ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸）−（４−アミノ−ｌ−カルボキシメチル−ピペリジン）−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｍ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2；
化合物６：  ＤＯＴＡ−ジアミノ酪酸−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2；
化合物７：  ＤＯＴＡ−４−（２−アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2；
化合物８：  ＤＯＴＡ−（５−アミノ−３−オキサ−ペンチル）−こはくアミド酸−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2；
化合物９：  ＤＯＴＡ−４−アミノ−１−カルボキシメチル−ピペリジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ−ＣＨ2）−（ＣＨ2）2−ＣＨ3；
化合物１０：  ＤＯＴＡ−（１５−アミノ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸−４−アミノ−ｌ−カルボキシメチル−ピペリジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ−ＣＨ2）−（ＣＨ2）2−ＣＨ3；
化合物１１：  ＤＯＴＡ−１５−アミノ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ−ＣＨ2）−（ＣＨ2）2−ＣＨ3；
化合物１２：  ＤＯＴＡ−４−アミノ−ｌ−カルボキシメチル−ピペリジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨ2ＮＨ）−Ｐｈｅ−ＮＨ2；
化合物１３  ：  ＤＯＴＡ−４−アミノ−１−カルボキシメチル−ピペリジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨ2ＮＨ）−Ｃｙｓ−ＮＨ2；
化合物１４：  Ｎ4−トリアゾール−ｄＰＥＧ1−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2
を含むグループから選択される。
【００５０】
他の好ましい実施態様：
本発明の好ましい態様では、式（Ｉ）の化合物に対して、ｘは１から２の整数であり、好ましくはｘは１である。
【００５１】
ｘが２以上の場合は、（Ｂ）ｎは
ボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト（Ｃ）のＮ末端に結合した
線状のスペーサまたは分岐状のスペーサである。
【００５２】
本発明の好ましい態様では、式（Ｉ）の化合物に対して、ｎは１から４の整数であり、好ましくは、ｎは１または３であり、より好ましくは１である。
【００５３】
本発明の好ましい実施態様では、
式（Ｉ）の化合物に対して、Ａはまた、
上記リストの放射性核種金属に対応する、またはそれと等価な
少なくとも１つの冷金属原子(cold metal atom)
を含む
金属キレート剤である。このような化合物は生体内・生体外結合アッセイ用に、参照化合物として有用である。好ましい実施態様では上記リストを適用する。
【００５４】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物に対して、ＫはさらにＨ、または好ましくはＨである。
【００５５】
第２の態様では、本発明は、細胞内在化を誘発することなく、かつ、これら２つの系で、アゴニストに誘導された効果に拮抗する間にカルシウム動員を通じてシグナルを発することなく、ボンベシン受容体、特にＧＲＰ受容体に選択的に結合するボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体に関し、該ボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体は、以下の一般式（Ｉ’）：
（Ｉ’）    [Ａ’−（Ｂ）n］x−Ｃ
｛式中、
ｘは１から３の整数、
ｎは１から６の整数、
Ａ’は金属キレート剤、
ＢはＣのＮ末端に結合したスペーサまたは共有結合、
ＣはＣ−１からＣ−４のボンベシンアナログペプチドアンタゴニストである｝
を有する。
【００５６】
金属キレート剤Ａ’はＡに関する最初の態様で定義した通り、放射性核種金属を有しない、金属キレート剤である。
【００５７】
スペーサＢおよびボンベシンアナログペプチドアンタゴニストＣは、上記最初の態様で定義した通りである。
【００５８】
本発明は、更に、ボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体の薬学的に許容される無機または有機酸塩に言及し、また、一般化学式（Ｉ’）を有するこれら化合物の水和物、錯体、エステル、アミド、溶媒和物、およびプロドラッグに言及する。
【００５９】
本発明の好ましい態様では、ｘは１から２の整数であり、好ましくはｘは１である。ｘが２以上の時、（Ｂ）ｎはボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト（Ｃ）のＮ末端に結合した、線状スペーサまた分岐状スペーサである。
【００６０】
本発明の好ましい態様では、式（Ｉ’）中、ｎは１から４の整数、好ましくは、ｎは１または３、より好ましくは１である。
【００６１】
第３の態様では、本発明は、式（Ｉ）または（Ｉ’）を有するボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体と薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物に関する。
【００６２】
第４の態様では、本発明は、ボンベシン受容体に結合する式（Ｉ）または（Ｉ’）を有するボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体の使用であって、ボンベシン受容体、特にガストリン放出ペプチド受容体（ＧＲＰ）への結合、および／または、ボンベシン受容体、特にガストリン放出ペプチド受容体（ＧＲＰ）の阻害、に関する。
【００６３】
第５の態様では、本発明は、以下の一般式（Ｉ）：
（Ｉ）      [Ａ−（Ｂ）n］x−Ｃ
｛式中、ｎ、ｘ、Ａ、Ｂ、およびＣは上記定義のとおりである｝
を有するボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体の製法であって、上で定義した一般式（Ｉ’）のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体を、適当な放射性核種金属または上記リストの放射性核種金属に対応する金属原子で放射キレート化するステップを含む製法に関する。
【００６４】
好ましくは、一般式（Ｉ）を有するボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体の製法は、適当な放射性核種金属と放射キレート化するステップを含む。
【００６５】
更なる実施態様では、一般式（Ｉ）：
（ＩＩ）      「Ａ−（Ｂ）n］x−Ｃ
｛式中ｎ、ｘ、Ａ、Ｂ、およびＣは上記定義のとおりである｝
を有するボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体の製法は、更に下記ａ）およびｂ）のステップ：
ａ）スペーサＢをボンベシンアナログペプチドアンタゴニストＣにカップリングして配列Ｃ−１からＣ−４のスペーサ−ボンベシンアナログペプチドアンタゴニストを得、任意にステップａ）を繰り返し；そして
ｂ）スペーサ−ボンベシンアナログペプチドアンタゴニストを金属キレート剤Ａ’とカップリングさせて、一般式（Ｉ’）のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体を得、任意にステップｂ）を繰り返す；
を含み、上記ステップは、式（Ｉ’）のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体と適当な放射性核種金属、または、上にリストした放射性核種金属に対応するかまたは等価な金属原子との放射キレート化の前に行われる。
【００６６】
本発明の好ましい実施態様では、ｎ、ｘ、金属キレート剤Ａ、金属キレート剤Ａ’、スペーサＢおよびボンベシンアナログペプチドアンタゴニストＣは上に定義した通りである。
【００６７】
第６の態様では、本発明は、ボンベシン受容体、特に、患者の腫瘍細胞および／または腫瘍血管および腫瘍周辺血管を発現するＧＲＰ受容体をイメージングする方法に関し、該方法は下記ステップ：
−患者に放射性医薬的有効量の、式（Ｉ）を有するボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体を投与する；そして、
−患者体内の放射性核種金属をイメージングする
を包含する。
【００６８】
第６の態様の好ましい実施態様は、ボンベシン受容体、特に、ＧＲＰ受容体発現腫瘍細胞および／または腫瘍および腫瘍周辺血管をイメージングするための式（Ｉ）のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体の、放射性医薬的有効量の使用に関する。
【００６９】
好ましい実施態様では、腫瘍細胞は、
−転移癌を含む前立腺癌、
−転移癌を含む乳癌、
−消化管間質腫瘍、
−小細胞肺癌、
−腎細胞癌、
−膵内分泌腫瘍、
−頭頸部扁平上皮癌、
−神経芽細胞腫、および
−食道扁平上皮癌
を含むグループから選択される癌に言及する。
【００７０】
さらにより好ましくは、腫瘍細胞は
−転移癌を含む前立腺癌、および
−転移癌を含む乳癌
から選択される癌に言及する。
【００７１】
更に好ましい実施態様では、腫瘍および腫瘍周辺血管は
−卵巣癌、 
−子宮内膜癌、および
−膵臓癌
から選択される癌に言及する。
【００７２】
好ましくは、腫瘍および腫瘍周辺血管は卵巣癌に言及する。
【００７３】
第７の態様では、本発明は、腫瘍細胞および／または腫瘍血管および腫瘍周辺血管関連の疾患を治療または予防する方法に関し、該方法は下記ステップを包含する：
−放射性医薬的有効量の、式（Ｉ）を有するボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体を投与する。
【００７４】
第７の態様の好ましい実施態様は腫瘍細胞および／または腫瘍血管および腫瘍周辺血管関連疾患を治療または予防するための薬剤の製造に、治療有効量の、式（Ｉ）のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体を用いることに関する。
【００７５】
好ましい態様では、腫瘍細胞関連疾患は
−転移癌を含む前立腺癌、
−転移癌を含む乳癌、
−消化管間質腫瘍、
−小細胞肺癌、
−腎細胞癌、
−膵内分泌腫瘍、
−頭頸部扁平上皮癌、
−神経芽細胞腫、および
−食道扁平上皮癌
からなるグループから選択される癌に言及する。
【００７６】
より好ましくは、該腫瘍細胞関連疾患は、
−転移癌を含む前立腺癌、および 
−転移癌を含む乳癌
からなるグループから選択される癌に言及する。
【００７７】
さらに好ましい実施態様では、腫瘍および腫瘍周辺血管関連疾患は
−卵巣癌、
−子宮内膜癌、および
−膵臓癌
からなるグループから選択される癌に言及する。
【００７８】
好ましくは、腫瘍および腫瘍周辺血管関連疾患は、卵巣癌に言及する。
【００７９】
第８の態様では、本発明は、式（Ｉ）を有する放射線治療薬または放射線医薬イメージング剤製造用キットに関し、該キットは、所定量の式（Ｉ’）ボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体および、金属キレートの放射性同位元素標識のための、許容される担体、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含むバイアルを含む。
【００８０】
第９の態様では、本発明は下記の配列Ｃ−１からＣ−４のボンベシンアナログペプチドアンタゴニストに関する：
Ｃ−１：Ｘａａ16−Ｇｌｎ7−Ｔｒｐ8−Ａｌａ9−Ｖａｌ10−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−Ｘａａ313−Ｘａａ414−ＺＨ、
当該配列において、Ｘａａ1はＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｒｐまたは下記式のいずれか１つを有する残基：
【化１７】
0005784911.tif 000018
（式中、ＫはＦ、Ｃｌ、Ｉ、またはＮＯ2である）
Ｘａａ2はＧｌｙまたはβ−Ａｌａ、
Ｘａａ3はスタチン、スタチンアナログおよび異性体、４−Ａｍ、５−ＭｅＨｐＡ、４−Ａｍ、５−ＭｅＨｘＡまたはα−置換アミノ酸、
Ｘａａ4はＬｅｕ、Ｃｐａ、Ｃｂａ、ＣｐｎＡ、Ｃｈａ、ｔ−ｂｕＧｌｙ、ｔＢｕＡｌａ、Ｍｅｔ、ＮＩｅ、またはｉｓｏ−Ｂｕ−Ｇｌｙ、および
ＺはＮＨまたはＯであり；
Ｃ−２：Ｘａａ16−Ｇｌｎ7−Trp8−Ａｌａ9−Ｖａｌ10−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ−ＣＨ2）−（ＣＨ2）2−ＣＨ3，
当該配列において、ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ−ＣＨ2）−（ＣＨ2）2−ＣＨ3は、下記式であり：
【化１８】
0005784911.tif 000019
Ｘａａ1はＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｒｐまたは下記式のいずれか１つを有する残基：
【化１９】
0005784911.tif 000020
そして、
（式中、ＫはＦ、Ｃｌ、Ｉ、またはＮＯ2である）
Ｘａａ2はＧｌｙまたはβ−Ａｌａであり；
Ｃ−３：  Ｘａａ16−Ｇｌｎ7−Ｔｒｐ8−Ａｌａ9−Ｖａｌ10−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−Ｘａａ513−Ｘａａ614−ＺＨ、
当該配列においてＸａａ1はＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｒｐまたは下記式のいずれか１つを有する残基：
【化２０】
0005784911.tif 000021
（式中、ＫはＦ、Ｃｌ、Ｉ、またはＮＯ2である）
Ｘａａ2はＧｌｙまたはβ−Ａｌａ、
Ｘａａ5はＬｅｕΨ−ＣＨ2ＮＨ−、
Ｘａａ6はＣｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｐｉ、またはＴａｃ、
ここで、ＴｐｉおよびＴａｃは以下を意味し：
【化２１】
0005784911.tif 000022
そして、
ＺはＮＨ、またはＯであり；
Ｃ−４：  Ｘａａ16−Ｇｌｎ7−Ｔｉｐ8−Ａｌａ9−Ｖａｌ10−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−Ｘａａ7、
当該配列において、Ｘａａ1はＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｒｐまたは下記式のいずれか１つを有する残基：
【化２２】
0005784911.tif 000023
（式中、ＫはＦ、Ｃｌ、Ｉ、またはＮＯ2である）
Ｘａａ2はＧｌｙまたはβ−Ａｌａ、
Ｘａａ7はＬｅｕ−Ｏ−アルキル、またはＬｅｕ−ＮＨ−アルキル
で表されるボンベシンアナログペプチドアンタゴニストに関する。
【００８１】
（定義）
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「アルキル」は、それ自身、または他のグループの一部として、炭素原子１から２０の直鎖または分岐鎖アルキル基を指し、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘプチル、ヘキシル、デシルなどが例示される。アルキル基はまた、ハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ基、Ｃ６−Ｃ１２−アリール基などで置換することができる。更に好ましくは、アルキルはＣ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルである。
【００８２】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「低級非分岐または分岐アルキル（アルキレン）」は以下の意味をもつものとする：置換または非置換の、直鎖または分岐鎖の１価、２価または３価のラジカルであって、炭素および水素からなり、不飽和を含まず、１から８の炭素原子を有し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルエチル（ｔ−ブチル）、ｎ−ヘプチルなどがあげられるが、これらに限定されるものではない。このモイエティは、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ基、Ｃ６−Ｃ１２−アリール基などにより、置換されていなくてもされていてもよい。
【００８３】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「フェニレン」基は、ジ−または任意にトリー置換ベンゼン環を基礎とする。例えば、ポリ（ｐ−フェニレン）は、パラーフェニレン繰り返し単位から構築されるポリマーである。フェニレンは置換されていても置換されていなくてもよい。フェニレンはハロゲン、ＯＨ、アルコキシ、好ましくは、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、カルボキシ、エステル、好ましくはＣ１−Ｃ４−エステル、アミド、ニトロで置換されてもよい。
【００８４】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「アルケン」は、以下の意味を有するものとする：不飽和脂肪族または脂環式化合物であって、炭素―炭素二重結合を少なくとも1つ有するもの。最も簡単なアルケンは、二重結合を１つ持ち、他の官能基は持たず、一般式ＣnＨ2n，の炭化水素の同族列を形成し、例えば、エチレン（Ｃ2Ｈ4）、プロピレン（Ｃ3Ｈ6）などである。アルケンは置換されていても置換されていなくてもよい。アルケンが置換される場合、それらはハロゲン原子、水酸基、C1-C4-アルコキシ基、Ｃ６−Ｃ１２−アリール基等で置換されてよい。
【００８５】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「アリール」は、不飽和の環系を意味するものとし、好ましくは芳香族環、より好ましくは６から１２の炭素原子を環骨格内に有するものである。これらの例はフェニルおよびナフタレニルである。アリールモイエティはハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ基、またはＣ６−Ｃ１２−アリール基などで置換されていても置換されていなくてもよい。
【００８６】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「ベンゼン」は、以下の意味を有するものとする：式C6H6の有機化合物。ベンゼンは芳香族炭化水素であり第2の［ｎ］アヌレン（［６］アヌレン）、連続したパイ結合を有する環状炭化水素である。ベンゼンは、ハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ基、またはＣ６−Ｃ１２−アリール基などで置換されていても置換されていなくてもよい。
【００８７】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「アルケニル」および「アルキニル」は、アルキルと同様に定義されるが、ただし炭素−炭素二重結合または三重結合をそれぞれ少なくとも１つ有する。アルケニルは、より好ましくはＣ２−Ｃ６−アルケニルであってよく、アルキニルは、より好ましくはＣ２−Ｃ６−アルキニルであってよい。
【００８８】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「ハロゲン」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを意味するものとする。
【００８９】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「無機または有機酸の塩」、「無機酸」、および「有機酸」は、鉱酸に言及し、例えば以下の酸を含むがこれらに限定されるものではなく：炭酸、硝酸、リン酸、塩酸、過塩素酸、または硫酸、または、カリウム塩、ナトリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などそれらの酸性塩であって、例えば硫酸水素カリウム、また、適当な有機酸に言及し、例えば以下の酸が含まれるがこれらに限定されるものではなく、脂肪族酸、脂環式酸、芳香族酸、アラリファティック酸、複素環酸、カルボン酸及びスルホン酸、 これらの例として蟻酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、フマル酸、ピルビン酸、安息香酸、アントラニル酸、メシル酸、フマル酸、サリチル酸、フェニル酢酸、マンデル酸、エンボニン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パントテン酸、トルエンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、およびスルファニル酸がある。同様に、有機酸は、例えばカリウム塩、ナトリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩など、塩として存在していてもよい。
【００９０】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「薬学的に許容される塩」、は、無機または有機酸の塩に関し、例えば、無機酸としては、炭酸、硝酸または硫酸を含むがこれらに限定されるものではなく、有機酸としては脂肪族酸、脂環式酸、芳香族酸、アラリファティック酸、複素環酸、カルボン酸及びスルホン酸を含むがこれらに限定されるものではなく、例えば蟻酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、フマル酸、ピルビン酸、安息香酸、アントラニル酸、メシル酸、サリチル酸、フェニル酢酸、マンデル酸、エンボニン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パントテン酸、トルエンスルホン酸、およびスルファニル酸などがある。
【００９１】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「プロドラッグ」、は、式（Ｉ）による活性親医薬を放出する、共有結合性化合物を意味する。
【００９２】
本出願では、用語「プロドラッグ」はまた、エステル、アミドおよびリン酸塩などの薬学的に許容される誘導体を含み、生体内での該誘導体の生体変化産物は式（Ｉ）で定義される活性薬物である。ＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌｍａｎの文献（Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  ８  ｅｄ，  ＭｃＧｒａｗ−ＨｉＭ，  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  １９９２，”Ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ”，  １３−１５）にはプロドラッグが記載されており、該開示は参照によって本明細書内に組込まれる。本発明の化合物のプロドラッグは、該化合物中の官能基を修飾することによって製造され、該修飾は、所定の操作または生体内のいずれかで開裂して親化合物を生じる。本発明の化合物のプロドラッグは、例えば、非対称炭素原子上の水酸基、またはアミノ基が任意の基に結合し、プロドラッグが患者に投与された時、開裂して、それぞれフリーの水酸基またはアミノ基を形成するような化合物を含む。
【００９３】
典型的なプロドラッグが、例えばＷＯ  ９９／３３７９５  Ａ、ＷＯ  ９９／３３８１５  Ａ、ＷＯ  ９９／３３７９３  ＡおよびＷＯ  ９９／３３７９２  Ａに記載されており、該開示は参照によってその全体が本明細書内に組込まれる。
【００９４】
プロドラッグは、優れた水溶解性、向上したバイオアベイラビリティによって特徴づけられ、生体内で容易に活性阻害剤へと代謝される。
【００９５】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「アミノ酸配列」、および「ペプチド」は、本明細書中では、少なくとも２つのアミノ酸の（重)縮合によって得られるポリアミドとして定義される。
【００９６】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「アミノ酸」は、本明細書中では、少なくとも1つのアミノ基および少なくとも1つのカルボキシル基を含み、分子内にペプチド結合を含まない任意の分子を意味する。言い換えれば、アミノ酸はカルボン酸官能基と、少なくとも1つのフリーな水素を好ましくはそのアルファ位に有するアミン窒素を持ち、分子構造内にアミド結合を有さない分子である。すなわち、フリーのアミノ基をN末端に有し、かつフリーのカルボキシル基をそのC末端に有するペプチドは上記定義内では単一のアミノ酸であるとは考えられない。そのような縮合によって得られる２つの隣接アミノ酸残基間のアミド結合は「ペプチド結合」と定義される。
【００９７】
本願において使用するアミド結合は下記構造を有する、任意の共有結合を意味する：
-C(O)-NH-CH- または -HC-HN-(O)C-
式中、カルボニル基は１の分子から与えられ、ＮＨ−基は、結合すべき他の分子から与えられる。かかる重縮合によって得られる、２つの隣接アミノ酸残基間のアミド結合は「ペプチド結合」として定義される。ポリアミド骨格の窒素原子（上記のＮＨ）は、例えば、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、好ましくは−ＣＨ3と、独立してアルキル化されてよい。
【００９８】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、アミノ酸残基は、対応するアミノ酸から、他のアミノ酸とペプチド結合を形成することによって導出される。
【００９９】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、アミノ酸は天然の、または非天然のアミノ酸であって、ここで、非天然のアミノ酸は合成／人口アミノ酸残基、タンパク新生の(proteinogenic)、および／または非タンパク新生のアミノ酸残基である。上記非タンパク新生のアミノ酸残基は、さらに
（ａ）タンパク新生アミノ酸のホモアナログ、
（ｂ）タンパク新生アミノ酸残基のβ−ホモアナログ、および
（ｃ）さらなる非タンパク新生アミノ酸残基、
に分類される。
【０１００】
したがって、アミノ酸残基は、その対応するアミノ酸、例えば、
【０１０１】
タンパク新生アミノ酸、すなわち、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒおよびＶａｌ；または
【０１０２】
非タンパク新生アミノ酸、例えば、その側鎖がメチレン基によって延長されたタンパク新生アミノ酸のホモアナログで、例えば、ホモアラニン（Ｈａｌ）、ホモアルギニン（Ｈａｒ）、ホモシステイン（Ｈｃｙ）、ホモグルタミン（Ｈｇｌ）、ホモヒスチジン（Ｈｈｉ）、ホモイソロイシン（Ｈｉｌ）、ホモロイシン（Ｈｌｅ）、ホモリジン（Ｈｌｙ）、ホモメチオニン（Ｈｍｅ）、ホモフェニルアラニン（Ｈｐｈ）、ホモプロリン（Ｈｐｒ）、ホモセリン（Ｈｓｅ）、ホモスレオニン（Ｈｔｈ）、ホモトリプトファン（Ｈｔｒ）、ホモチロシン（Ｈｔｙ）およびホモバリン（Ｈｖａ）など；
【０１０３】
メチレン基がα−炭素とβ−アミノ酸を生じるカルボキシル基間に挿入されたタンパク新生アミノ酸のβホモアナログで、例えば、β−ホモアラニン（βＨａｌ）、β−ホモアルギニン（βＨａｒ）、β−ホモアスパラギン（βＨａｓ）、β−ホモシステイン（βＨｃｙ）、β−ホモグルタミン（βＨｇｌ）、β−ホモヒスチジン（βＨｈｉ）、β−ホモイソロイシン（βＨｉｌ）、β−ホモロイシン（βＨｌｅ）、β−ホモリジン（βＨｌｙ）、β−ホモメチオニン（βＨｍｅ）、β−ホモフェニルアラニン（βＨｐｈ）、β−ホモプロリン（βＨｐｒ）、β−ホモセリン（βＨｓｅ）、β−ホモスレオニン（βＨｔｈ）、β−ホモトリプトファン（βＨｔｒ）、β−ホモチロシン（βＨｔｙ）およびβ−ホモバリン（βＨｖａ）など；
【０１０４】
さらに非タンパク新生アミノ酸、例えば、α−アミノアジピン酸（Ａａｄ）、β−アミノアジピン酸（βＡａｄ）、α−アミノ酪酸（Ａｂｕ）、α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、β−アラニン（βＡｌａ）、４−アミノ酪酸（４−Ａｂｕ）、５−アミノ吉草酸（５−Ａｖａ）、６−アミノヘキサン酸（６−Ａｈｘ）、８−アミノオクタン酸（８−Ａｏｃ）、９−アミノナノン酸（９−Ａｎｃ）、１０−アミノデカン酸（１０−Ａｄｃ）、１２−アミノドデカン酸（１２−Ａｄｏ）、α−アミノスベリン酸（Ａｓｕ）、アゼチジン−２−カルボン酸（Ａｚｅ）、β−シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、デヒドロアラニン（Ｄｈａ）、(−カルボキシグルタミン酸（Ｇｌａ）、α−シクロヘキシルグリシン（Ｃｈｇ）、プロパルギルグリシン（Ｐｒａ）、ピログルタミン酸（Ｇｌｐ）、α−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン（Ｔｌｅ）、４−ベンゾイルフェニルアラニン（Ｂｐａ）、(−ヒドロキシリシン（Ｈｙｌ）、４−ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、アロ−イソロイシン（ａｌｌｅ）、ランチオニン（Ｌａｎ）、（１−ナフチル）アラニン（１−Ｎａｌ）、（２−ナフチル）アラニン（２−Ｎａｌ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ノルバリン（Ｎｖａ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、フェニルグリシン（Ｐｈｇ）、ピペコリン酸（Ｐｉｐ）、サルコシン（Ｓａｒ）、セレノシステイン（Ｓｅｃ）、スタチン（Ｓｔａ）、β−チエニルアラニン（Ｔｈｉ）、１，２，３，４−テトラヒドロイソチノリン−３−カルボン酸（Ｔｉｃ）、アロ−スレオニン（ａＴｈｒ）、チアゾリジン−４−カルボン酸（Ｔｈｚ）、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、イソ−システイン（ｉｓｏ−Ｃｙｓ）、ジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）、２，４−ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、３，４−ジアミノ酪酸（(，βＤａｂ）、ビフェニルアミン（Ｂｉｐ）、−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、−ハライド、−ＮＨ2または−ＣＯ2Ｈ（Ｐｈｅ（４−Ｒ）（式中、Ｒは−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、−ハライド、−ＮＨ2または−ＣＯ2Ｈである）でパラ位において置換されたフェニルアラニン、ペプチド核酸（ＰＮＡ、Ｐ．Ｅ．Ｎｉｅｌｓｅｎ， Ａｃｃ． Ｃｈｅｍ． Ｒｅｓ．， ３２， ６２４−３０を参照）、またはこれらのＮ−アルキル化アナログ、例えばこれらのＮ−メチル化アナログ、から導出される。
【０１０５】
環状アミノ酸は、Ｐｒｏ、Ａｚｅ、Ｇｌｐ、Ｈｙｐ、Ｐｉｐ、ＴｉｃおよびＴｈｚなどのタンパク新生または非タンパク新生であってもよい。
【０１０６】
さらなる実施例および詳細については、例えば、該開示が参照によってその全体が本明細書内に組込まれる、Ｊ．Ｈ．Ｊｏｎｅｓ，  Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｃｉ．，  ２００３，  ９，  １−８を参照することができる。
【０１０７】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、「非タンパク質性アミノ酸」および「非タンパク質性アミノ酸残基」という用語は、タンパク新生アミノ酸の誘導体も包含する。例えば、タンパク新生アミノ酸残基の側鎖を誘導してタンパク新生アミノ酸残基を「非タンパク質性」にすることができる。同じことが、アミノ酸配列を終端させるタンパク新生アミノ酸残基のＣ末端および／またはＮ末端の誘導体にもあてはまる。
【０１０８】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、タンパク新生アミノ酸残基は、Ｌ−またはＤ−配置のいずれかのＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒおよびＶａｌからなる群から選択されるタンパク新生アミノ酸から生じ、ＴｈｒとＩｌｅの第２不斉中心はＲ−またはＳ−配置いずれかを有していてもよい。したがって、例えば、自然に生じるかもしれないＮ−アルキル化などのアミノ酸配列の翻訳後修飾により、その対応する修飾されたアミノ酸配列残基は、現実にはタンパク質に組み込まれるのだが、これは「非タンパク新生」とされる。好ましくは、修飾アミノ酸はN-アルキル化アミノ酸、β-アミノ酸、γ-アミノ酸、ランチオニン、デヒドロアミノ酸、およびアルキル化グアニジンモイエティを有するアミノ酸、から選択される。
【０１０９】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「カルボン酸」、または「ジカルボン酸」は、本明細書中では、１つのCOOH部分、または２個のCOOH部分をそれぞれ有する有機化合物を意味し、例えば、それぞれ蟻酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、シクロヘキサンカルボン酸、安息香酸、サリチル酸、乳酸(カルボン酸類)またはシュウ酸、マロン酸、コハク酸、アジピン酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、フタル酸(ジカルボン酸類)などがある。
【０１１０】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「ジアミン」は、２つのNR'R''部分を有する有機化合物であって、式中R'およびR''は互いに独立してアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールであってよい。ジアミンは、例えばエチレンジアミン, 1,4-シクロヘキサンジアミン、ピペラジンである。
【０１１１】
上記アミノ酸、カルボン酸、ジカルボン酸、またはジアミンへの言及に関する限りでは、該アミノ酸、カルボン酸、ジカルボン酸、またはジアミンは、例えば、−ＨＮ−．．．−ＣＯ−（アミノ酸）、−ＯＣ−．．．（カルボン酸）、−ＯＣ−．．．−ＣＯ−（ジカルボン酸）、−ＨＮ−．．．−ＮＨ−ジアミン）など、本発明の化合物に含まれる時、それぞれのラジカルもこれに含まれる。
【０１１２】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「金属キレート剤」("metal chelator ")は、放射線核種金属と錯化して、生理学的条件下で安定な金属キレートを形成し、スペーサを介して標的グループと複合化してもよい分子として定義される。上記金属キレート剤は金属放射性核種と錯化したりしなかったりする。
【０１１３】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「放射性核種金属」は、不安定な核を有する原子である放射性核種として定義される。ここで、上記核は、過剰エネルギーによって特徴づけられ、これは該核内に新しく生成した放射性粒子に、さもなければ、原子内電子（内部変換を見よ）に与えられる。本発明で使用する放射性金属核種は診断または治療用途に特に適しており、より好ましくは、イメージングまたは放射線治療に適している。放射性核種は上記手順によって、放射性崩壊を受け、ガンマ線および／または亜原子粒子を放出する。
【０１１４】
これらの粒子は電離放射線を構成する。放射性核種は天然に存在してよいが、人工的な産物でもありうる。
【０１１５】
これら放射性核種はガリウム（例えば、67Ｇａ、68Ｇａ）銅（例えば、67Ｃｕおよび64Ｃｕ）；テクネチウム（例えば、99mＴｃおよび94mＴｃ）；レニウム（例えば、186Ｒｅおよび  188Ｒｅ）；鉛（例えば、212Ｐｂ）；ビスマス（例えば、212Ｂｉ）；およびパラジウム（例えば、109Ｐｄ）を含むが、これらに限定されるものではない。これらアイソトープの製法は既知である。モリブデン／テクネチウム発生器が99mTcの製造用に市販されている。186Ｒｅの製法には、Ｄｅｕｔｓｃｈら、（Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  Ｂｉｏｌ．，  Ｖｏｌ．  １３：４：４６５−４７７，  １９８６））およびＶａｎｄｅｒｈｅｙｄｅｎら、（Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｖｏｌ．  ２４：１６６６−１６７３，  １９８５））が記述した方法が含まれ、188Ｒｅの製法はＢｌａｃｈｏｔら（Ｉｎｔｌ．  Ｊ．  ｏｆ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｓｏｔｏｐｅｓ，  Ｖｏｌ．  ２０：４６７−４７０，  １９６９）およびＫｌｏｆｕｔａｒら（Ｊ．  ｏｆ  Ｒａｄｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍ，  Ｖｏｌ．  ５：３−１０，  １９７０））が記述している。212Ｐｄの製造はＦａｗｗａｚら，  Ｊ．  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ，  （１９８４），  ２５：７９６、が記述している。212Ｐｂ  および21Ｂｉの製造はＧａｎｓｏｗら，Ａｍｅｒ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｓｙｍｐ，  Ｓｅｒ．  （１９８４），  ２４１  ：２１５−２１７、およびＫｏｚａｈら，Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  （Ｊａｎｕａｒｙ  １９８６），  ８３：４７４−４７８、によって記述されている。99mＴｃは診断用途に、リストされた他の放射性核種は治療用途に適している。
【０１１６】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「スペーサ」は、金属キレート剤とボンベシンペプチドアンタゴニストとの連結基として定義される。
【０１１７】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「アゴニスト」は、細胞の受容体分子上の特定部位に結合し、細胞内での信号変換を活性化する物質（リガンド）を意味する。これによって効果の測定が可能となる。
【０１１８】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「アンタゴニスト」は、アゴニスト物質に特異的な受容体細胞上の部位に結合する物質（リガンド）を意味し、この部位をアゴニストに対しブロックし、効果の発生をなくす。すなわち、アンタゴニストはアゴニストの効果を阻害する。
【０１１９】
本発明の記載および請求項において以下使用するように、用語「スタチンアナログ」は、下記一般構造を有するジペプチド類似構造として定義される：
【化２３】
0005784911.tif 000024
スタチン（Ｒ２＝ＯＨ、Ｒ１は、大きく変えることもできるが、典型的にはアミノ酸側鎖と同じである）。
スタチンアナログ（Ｒ２＝Ｈ、Ｒ１は大きく変えることもできるが、典型的にはアミノ酸側鎖と同じである）。
【０１２０】
略語：
ＮＯＤＡＳＡ  ＝１，４，７−トリアザシクロノナン−１−コハク酸−４，７−アセト酢酸
ＮＯＤＡＧＡ  ＝ｌ，４，７−トリアザシクロノナン−Ｎ−グルタル酸−Ｎ’，Ｎ’’−アセト酢酸
ＴＲＩＴＡ  ＝  １，４，７，１０  テトラアザシクロトリデカン−１，４，７，１０  Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，  Ｎ’’’−テトラ酢酸
Ｃｐａ  ＝  （Ｓ）−４−カルボキシアミドフェニルアラニン
４−Ａｍ−５−ＭｅＨｐＡ  ＝  ４−アミノ−５−メチルヘプタン酸
４−Ａｍ−５−ＭｅＨｘＡ  ＝  ４−アミノ−５−メチルヘキサン酸
ＤＦＯ  ＝  Ｎ’−［５−（アセチル−ヒドロキシ−アミノ）ペンチル］−Ｎ−［５−［３−（５−アミノペンチル−ヒドロキシ−カルバモイル）プロパノイルアミノ］ペンチル］−Ｎ−ヒドロキシ−ブタンジアミド
【化２４】
0005784911.tif 000025
【化２５】
0005784911.tif 000026
【０１２１】
さらなる詳細がなくても、当業者は、前述の記載をもとに本発明を十分に利用することができるだろう。以下の好ましい特定の実施態様は、従って、単に例示のためのものであり、開示された残りを限定するものでは全くない。
【図面の簡単な説明】
【０１２２】
【図１】カルシウム放出分析で測定したボンベシンアナログの用量反応曲線  カルシウム放出分析は、物質と方法(Materials and Methods)に記載の通りに行った。ＰＣ３細胞は、ボンベシン単独の濃度０．０１ｎｍｏｌ／Ｌ  および１０μｍｏｌ／Ｌの範囲で（●）、またはボンベシンアナログ化合物１、１０μｍｏｌ／Ｌの存在下で（黒三角）、またはＩｎ−化合物１の存在下で（◆）、またはボンベシンアナログ化合物１ａの存在下で（黒四角）、処理を行った。化合物１を単独で１μｍｏｌ／Ｌおよび１０μｍｏｌ／Ｌで試験したもの（△）、Ｉｎ−化合物１（×）、および化合物１ａ（□）、はＰＣ３細胞中のカルシウム放出に効果はなかった。化合物１ａは１の結合シーケンスであって、リンカーおよびキレート（Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2）がないものをいう。化合物１はキレート（Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2）をいう。Ｉｎ−化合物１はＩｎ−キレート化（Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2）をいう。
【図２】ＨＥＫ−ＧＲＰＲ細胞免疫蛍光顕微鏡検査法  マウスモノクローナルＨＡ−エピトープ抗体およびＨＥＫ−ＧＲＰＲ細胞を用いた、化合物１、Ｉｎ−化合物１、化合物１ｂおよびＧＲＰＲ−ＡＮＴＡＧ免疫蛍光顕微鏡検査法。（ａ）ペプチドなし、（ｂ）ボンベシン１０  ｎｍｏｌ／Ｌ（ｃ）化合物１ｂ（ｄ）化合物１ｂ＋ボンベシン１０  ｎｍｏｌ／Ｌ（ｄ，ｆ，ｈ，ｊ）１  μｍｏｌ／Ｌの類似化合物１ｂ、ＧＲＰＲ−ＡＮＴＡＧ、化合物１、およびＩｎ−化合物１の存在下、細胞をボンベシン１０  ｎｍｏｌ／Ｌで処理する。（ｃ，ｅ，ｇ，ｉ）細胞を化合物１ｂ、ＧＲＰＲ−ＡＮＴＡＧ、および化合物１で処理する。
【図３ａ】ＰＣ−３（３）およびＬｎＣａＰ（４）担腫瘍マウス中のＧａ−６８−ＤＯＴＡ化合物２のＰＥＴイメージング。ａ）１０ＭＢg放射性トレーサーの注射後１時間ｂ）１００μｇａボンベシンでブロック。
【図３ｂ】ＰＣ−３（３）およびＬｎＣａＰ（４）担腫瘍マウス中のＧａ−６８−ＤＯＴＡ化合物２のＰＥＴイメージング。ａ）１０ＭＢg放射性トレーサーの注射後１時間ｂ）１００μｇａボンベシンでブロック。
【図４ａ】ＰＣ−３（３）およびＬｎＣａＰ（４）担腫瘍マウス中のＧａ−６８−ＤＯＴＡ化合物２のＰＥＴイメージング。ａ）１０ＭＢg放射性トレーサーの注射後１時間ｂ）１００μｇａボンベシンでブロック。
【図４ｂ】ＰＣ−３（３）およびＬｎＣａＰ（４）担腫瘍マウス中のＧａ−６８−ＤＯＴＡ化合物２のＰＥＴイメージング。ａ）１０ＭＢg放射性トレーサーの注射後１時間ｂ）１００μｇａボンベシンでブロック。
【図５】
【図６】：ＰＣ−３担腫瘍マウス中における、99mＴｃ−ＡＲＮ４−０６  （１５  ＭＢｑ／２００  ｐｍｏｌ）のＳＰＥＣＴ／ＣＴイメージ
【図７】
【図８】：ＰＣ−３担腫瘍マウス中における、99mＴｃ−ＡＲＮ４−０５  （１５  ＭＢｑ／２００  ｐｍｏｌ）のＳＰＥＣＴ／ＣＴイメージ
【図９】逆相カラム上でのＧａ−６８−ＤＯＴＡ化合物２のＨＰＬＣ解析
【図１０ａ】ＨＰＬＣによる、マウスの血漿および尿中におけるＧａ−６８−ＤＯＴＡ化合物２の安定性分析
【図１０ｂ】ＨＰＬＣによる、マウスの血漿および尿中におけるＧａ−６８−ＤＯＴＡ化合物２の安定性分析
【図１０ｃ】ＨＰＬＣによる、マウスの血漿および尿中におけるＧａ−６８−ＤＯＴＡ化合物２の安定性分析
【図１０ｄ】ＨＰＬＣによる、マウスの血漿および尿中におけるＧａ−６８−ＤＯＴＡ化合物２の安定性分析
【図１０ｅ】ＨＰＬＣによる、マウスの血漿および尿中におけるＧａ−６８−ＤＯＴＡ化合物２の安定性分析
【図１１】Ｌｕ−１７７−ＤＯＴＡ化合物２のヒト血清安定性
【図１２】腫瘍／組織Ｇａ−６８ＲＭ２と、Ｆ１８ＦＤＧおよびＦ１８コリンの比較
【０１２３】
本明細書で引用されている出願、特許、および公表文献のすべての開示は、参照によってその全体が本明細書内に組込まれる。
【０１２４】
以下の実施例は、一般的にまたは具体的に記載された本発明の反応物および／または操作条件を入れ替えることで、繰り返し、類似の結果を得ることができる。
【０１２５】
前述の記載から、当業者は、本発明の本質的な特徴を容易に把握することができ、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、本発明を種々変形および修正し、様々な使用および条件に適合させることができる。
【実施例】
【０１２６】
ここで、Aは下記実施例のそれぞれに応じて適切に、ＡだけでなくＡ’の意味をも有する。
実施例１（Ａ−Ｂ−Ｃ）
ここで、Ａは下記実施例のそれぞれに応じて適切に、ＡだけでなくＡ’の意味をも有する。
【０１２７】
ａ）一般配列のボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体の合成
（Ａ＝ＤＯＴＡ、Ｂ＝スペーサーＢ1−Ｂ2、Ｃ＝Ｎ末端アミドＺを有するペプチド[Ｚ＝ＮＨ]）
ＤＯＴＡ−スペーサー−Ｘａａ16−ＧＩｎ7−Ｔｉｐ8−Ａｌａ9−Ｖａｌl0−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−Ｓｔａ13−Ｌｅｕ14−ＮＨ2
Ｆｍｏｃストラテジーを用いて、固相上にマニュアルでペプチドを合成した。Ｎ末端アミドを得るために、ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂ＬＬ（１００−２００メッシュ）（  ４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）−フェノキシアセトアミド−ノルロイシル−４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂）を用いた。理論負荷量(theoretical loading)０．３４ｍｍｏｌｅ／ｇの樹脂を有するＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂を反応機に投入した。Ν，Ν−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を反応機に加え、３０分間撹拌し、樹脂を膨張させた。溶媒除去後、ＤＭＦの２０％ピペリジン溶液を添加し、樹脂を１５分間振とうし、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）  保護基を除去した。このステップを２回繰り返した。この手順の後、樹脂をＤＭＦで５分間３回洗浄した。ピペリジン溶液と最新３回の洗浄ＤＭＦ溶液を集め、エタノールを添加し１００ｍＬにした。この溶液から一定分量をとり、除去されたＦｍｏｃ保護基の量を分光光度法により決定した。
【０１２８】
Ｆｍｏｃ−アミノ酸誘導体をカップリングする前に、上記樹脂をＤＭＦで２分間２回洗浄した。２等量のＦｍｏｃ−アミノ酸を２等量のＮ，Ｎ−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）  ／  Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）であらかじめ活性化して樹脂に添加し、約４等量のＮ−エチルジイソプロピルアミン（ＤＩＰＥＡ）を添加することでｐＨを８−９に調製した。軽い振とう下で２時間、反応をインキュベートした。上記反応の後、溶媒を除去し、固相をＤＭＦで５分間２回洗浄した。反応をＫａｉｓｅｒテストでモニターした。所定量の樹脂ビーズをエタノールで３回洗浄し、５０μＬの溶液１（１０ｍＬのエタノールに加えた２０ｇのフェノールを、４９ｍＬのピリジンに０．０１ＭのＫＣＮを加えた溶液の１ｍＬと混合）および５０μＬの溶液２（エタノール１０ｍＬにニンヒドリン５００ｇを添加）を加え、ビーズを９５℃で１０分間加熱した。青のビーズは、カップリングしていないフリーのアミノ基があることを示す。
【０１２９】
アミノ酸はすべてＮ末端Ｆｍｏｃ保護誘導体として使用され、同じような方法でカップリングされる。トリプトファンは側鎖上にｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護基をつけて使用され、一方、ヒスチジンおよびグルタミンはＴｒｔ保護した。各アミノ酸のカップリング後に行われたＫａｉｓｅｒテストによりアミノ基のカップリングが不十分だということが分かった場合、繰り返しカップリングが行われる。
【０１３０】
望みのペプチド配列全体を構築した後、樹脂をＤＣＭで５回、続いてジエチルエーテルで５回、それぞれ２分づつ洗浄を行い、真空乾燥する。
【０１３１】
ｂ）ＳＰＡＣＥＲおよびプロキレート化剤ＤＯＴＡ（tＢｕ）3とのカップリング
プロキレート化剤ＤＯＴＡ（tＢｕ）3はマクロサイクリック社（Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ  Ｉｎｃ．，  Ｄａｌｌａｓ，  ＵＳＡ）から購入した。SPACERをカップリングする前に、Ｎ末端Ｆｍｏｃ保護を樹脂結合ペプチドから除去した。上記樹脂をＤＭＦ中で１５分間膨潤し、ピペリジン２０％のＤＭＦ溶液で2回処理し（１５分）、ＤＭＦで３回洗浄した。ピペリジン処理およびそれに続くＤＭＦ洗浄からの溶液を集め、開裂したＦｍｏc基の量を決定した。
【０１３２】
２等量のＳＰＡＣＥＲを、ＤＭＦ中２−（１Ｈ−９−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，  １，３，３−テトラメチル−アミニウムヘキサフルオロリン酸  （ＨＡＴＵ）で２０分間あらかじめ活性化し、上記樹脂に添加した。ｐＨはＤＩＰＥＡを添加することで８−９に調製した。反応混合物を２時間振とうし、カップリングをＫａｉｓｅｒテストでモニターした。プロキレート化剤ＤＯＴＡ（tＢｕ）3を前述と同様にＦｍｏｃ除去後にカップリングした。終夜振とうし、ＤＯＴＡ（tＢｕ）3のカップリングを行った。溶媒除去後、樹脂をＤＭＦで３回、ＤＣＭで５回、続いてジエチルエーテルで５回、各２分間洗浄し、真空乾燥した。
【０１３３】
ｃ）脱保護、開裂および精製
上記ペプチド−樹脂をフリット付シリンジに採取した。トリフルオロ酢酸  （ＴＦＡ）／チオアニソール（ＴＡ）／トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）／Ｈ2Ｏ  （９４／２／２／１）溶液を加え、シリンジを２時間撹拌した。上記溶液を５０％  ジイソプロピルエーテルと５０％  ジエチルエーテルの混合物に、氷上添加し、ペプチドを析出させた。ペプチドを３０００ｒｐｍ５分間の遠心分離により収集し、上澄みを別の容器に移した。析出物をジエチルエーテルで数回洗浄し、真空乾燥した。粗生成物を水に溶解し、Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ  ＶＰ  ２５０／２１  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ  １００−５  Ｃ18カラム（溶離液：  溶離液１  ＝０．１％  ＴＦＡ水溶液、溶離液２  ＝  アセトニトリル；勾配：０−２０分，  ９０％−５０％溶離液１；流速：  １５  ｍＬ／ｍｉｎ）付Ｍｅｔｒｏｈｍ  ＨＰＬＣシステムＬＣ−ＣａＤＩ  ２２−１４  （Ｈｅｒｉｓａｕ，  Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）のセミ分別ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。
【０１３４】
上記複合体をＲＰ−ＨＰＬＣ分析装置で分析し、質量分析装置（ＥＳＩ−ＭＳ）で特徴を明らかにした。
Ａ−Ｂ−Ｃ−１
ＤＯＴＡ−Ｓｐａｃｅｒ−Ｘａａ16−Ｇｌｎ7−Ｔｒｐ8−Ａｌａ9−Ｖａｌ10−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−Ｘａａ313−Ｘａａ414−ＺＨ  （Ｚ＝ＮＨ）
【０１３５】
化合物１：  Ａ＝ＤＯＴＡ，  Ｂ1＝Ｇｌｙ，  Ｂ2＝４−アミノベンゾイル；  Ｘａａ1＝ＤＰｈｅ；  Ｘａａ2＝Ｇｌｙ；  Ｘａａ3＝Ｓｔａ；  Ｘａａ4＝Ｌｅｕ，  ＤＯＴＡ−Ｇｌｙ−アミノベンゾイル−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2  ；  Ｃ80Ｈ114Ｎ20Ｏ20，  計算値  （ｍ／ｚ）：  １６７５．８，  実測値［Ｍ＋Ｋ］+：  １７１５．１．
【０１３６】
化合物２：  Ａ＝ＤＯＴＡ，  Ｂ1＝４−アミノ−ｌ−カルボキシメチル−ピペリジニル；  Ｂ2＝なし，  Ｘａａ1＝ＤＰｈｅ；  Ｘａａ2＝Ｇｌｙ；  Ｘａａ3＝Ｓｔａ；  Ｘａａ4＝  Ｌｅｕ  ＤＯＴＡ−４−アミノ−１−カルボキシメチル−ピペリジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2；  Ｃ79Ｈ118Ｎ20Ｏ19；  計算値  （ｍ／ｚ）：  １６３９．９，  実測値［Ｍ＋Ｋ］+：  １６７８．１
【０１３７】
化合物３：  Ａ＝ＤＯＴＡ，  Ｂ1＝４−アミノ−ｌ−ピペリジン−４−カルボキシ；  Ｂ2＝なし，  Ｘａａ1＝ＤＰｈｅ；  Ｘａａ2＝ＧＩｙ；  Ｘａａ3＝Ｓｔａ；  Ｘａａ4＝Ｌｅｕ
ＤＯＴＡ−４−アミノ−ｌ−ピペリジン−４−カルボン酸−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2  Ｃ77Ｈ116Ｎ20Ｏ19，  計算値  （ｍ／ｚ）：  １６２４．９，  実測値［Ｍ＋Ｋ］+：  １６６３．７
【０１３８】
化合物４：  Ａ＝ＤＯＴＡ，  Ｂ1＝１５−アミノ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカノイル；  Ｂ2＝なし，  Ｘａａ1＝ＤＰｈｅ；  Ｘａａ2＝Ｇｌｙ；  Ｘａａ3＝Ｓｔａ；  Ｘａａ4＝  Ｌｅｕ
ＤＯＴＡ−１５−アミノ−４，７，  １０，  １３−テトラオキサペンタデカン酸−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2；  Ｃ82Ｈ127Ｎ19Ｏ23，  計算値  （ｍ／ｚ）：  １７４７．８，  実測値［Ｍ＋Ｋ］+：  １７８５．１
【０１３９】
化合物５：  Ａ＝ＤＯＴＡ，  Ｂ1＝１５−アミノ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカノイル；  Ｂ2＝４−アミノ−ｌ−ピペリジン−４−カルボキシ，  Ｘａａ1＝ＤＰｈｅ；  Ｘａａ2＝Ｇｌｙ；  Ｘａａ3＝  Ｓｔａ；  Ｘａａ4＝  Ｌｅｕ  ＤＯＴＡ−（  １５−アミノ−４，７，  １０，  １３−テトラオキサペンタデカン酸）−（４−アミノ−１−カルボキシメチル−ピペリジン）−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2；  Ｃ89Ｈ139Ｎ21Ｏ24，  計算値  （ｍ／ｚ）：  １８８６．０，  実測値［Ｍ＋Ｋ］+：  １９２４．９
【０１４０】
化合物６：  Ａ＝ＤＯＴＡ，  Ｂ1＝ジアミノ酪酸 ；  Ｂ2＝なし，  Ｘａａ1＝ＤＰｈｅ；  Ｘａａ2＝Ｇｌｙ；  Ｘａａ3＝Ｓｔａ；  Ｘａａ4＝Ｌｅｕ  ＤＯＴＡ−ジアミノ酪酸−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2；  Ｃ75Ｈ114Ｎ20Ｏ19，  計算値  （ｍ／ｚ）：  １５９８．９，  実測値［Ｍ＋Ｋ］+：  １６３８．４
【０１４１】
化合物７：  Ａ＝ＤＯＴＡ，  Ｂ1  ＝４−（２−アミノエチル）−ｌ−カルボキシメチル−ピペリジニル；  Ｂ2＝なし，  Ｘａａ1＝ＤＰｈｅ；  Ｘａａ2＝Ｇｌｙ；  Ｘａａ3＝Ｓｔａ；  Ｘａａ4＝  Ｌｅｕ  ＤＯＴＡ−４−（２−アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2；  Ｃ79Ｈ121Ｎ21０19，  計算値  （ｍ／ｚ）：  １６６７．９，  実測値［Ｍ＋Ｎａ］+：  １６９１．２
【０１４２】
化合物８：  Ａ＝ＤＯＴＡ，  Ｂ1＝（５−アミノ−３−オキサ−ペンチル）−こはくアミド酸；  Ｂ2＝なし，  Ｘａａ1＝ＤＰｈｅ；  Ｘａａ2＝Ｇｌｙ；  Ｘａａ3＝Ｓｔａ；  Ｘａａ4＝  Ｌｅｕ  ＤＯＴＡ−（５−アミノ−３−オキサ−ペンチル）−こはくアミド酸−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2
Ｃ79Ｈ120Ｎ20Ｏ21，  計算値  （ｍ／ｚ）：  １６８５．９，  実測値［Ｍ＋Ｋ］+：  １７２３．７
【０１４３】
実施例２（Ａ−Ｂ−Ｃ）
ａ）一般配列（Ａ＝Ｎ4−アジド，  Ｂ＝Ｓｐａｃｅｒ  Ｂ1−Ｂ2，  Ｃ＝Ｎ末端アミドＺのペプチド［Ｚ＝ＮＨ2］）のボンベシンペプチドアンタゴニスト複合体の合成
Ｎ4−トリアゾール−ｄＰＥＧ1−Ｘａａ16−Ｇｌｎ7−Ｔｒｐ8−Ａｌａ9−ＶａｌI0−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−Ｓｔａ13−Ｌｅｕ14−ＮＨ2
【０１４４】
ａ）ペプチド合成：Ｆｍｏｃ−Ｘａａ16−Ｇｌｎ7−Ｔｒｐ8−Ａｌａ9−Ｖａｌ10−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−Ｓｔａ13−Ｌｅｕ14−ＮＨ2
【０１４５】
Ｆｍｏｃ−ストラテジを用い、マニュアルでペプチドを固相上に合成した。Ｎ−末端アミドを得るために、ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂ＬＬ（１００−２００メッシュ）を用いた。合成は、実施例１の記載に従って行った。
【０１４６】
ｂ）  アルキル基プロパギル−ｄＰＥＧ1−ＮＨＳ−エステルとのカップリング
アルキル基とカップリングする前に、Ｎ末端Ｆｍｏｃ保護基を樹脂結合ペプチドから除去した。上記樹脂をＤＭＦ中１５分間膨潤し、２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液で２回処理し（１５分）、ＤＭＦで３回洗浄した。ピペリジン処理および続くＤＭＦ洗浄からの溶液を集め、Ｆｍｏｃを決定した。
【０１４７】
２等量のプロパギル−ｄＰＥＧ1−ＮＨＳ−エステルを樹脂に加えた。ＤＩＰＥＡを添加してｐＨを８−９に調製した。反応混合物を２４時間振とうし、カップリングをＫａｉｓｅｒテストでモニターした。
【０１４８】
ｃ）脱保護、開裂および精製
上記ペプチド−樹脂をフリット付シリンジに採取した。ＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ2Ｏ  （９４／２．５／２．５）溶液を加え、シリンジを２時間撹拌した。上記溶液を５０％  ジイソプロピルエーテルと５０％  ジエチルエーテルの混合物に、氷上添加し、ペプチドを析出させた。ペプチドを３０００ｒｐｍ５分間の遠心分離により収集し、上澄みを別の容器に移した。析出物をジエチルエーテルで数回洗浄し、真空乾燥した。粗生成物を水に溶解し、上述の通り半透膜ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。
【０１４９】
上記複合体をＲＰ−ＨＰＬＣ分析装置で分析し、質量分析装置（ＥＳＩ−ＭＳ）で特徴を明らかにした。
【０１５０】
ｄ）Ｎ4−アジドキレート剤の合成。該合成は下記３のステップを含む。
ｉ）  Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−テトラキス（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−６−（アジド）−ｌ，４，８，１１−テトラアザウンデカン  （Ｎ4（ＢｏＣ）4−Ｎ3）  ［３］の合成：
ａ）  Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−テトラキス（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−６−（ヒドロキシ）−１，４，８，１１−テトラアザウンデカン  （Ｎ4（Ｂｏｂ）4−ＯＨ）  ［Ｉ］：  ６−（ヒドロキシ）−１，４，８，１１−テトラアザウンデカン（１ｇ，  ３．１  ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液を０℃まで冷却した。これに二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３．３２  ｍＬ，  １５．５  ｍｍｏｌ）のＤＭＦ  （５  ｍＬ）  溶液を加え、続いてＤＩＰＥＡ  （２．７  ｍＬ，  １５．５  ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１８時間撹拌した。この反応の後、反応混合物を水と酢酸エチルに分配した。水相を酢酸エチルで３回抽出し、酢酸エチル相はあわせて塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。濾過および減圧下での溶媒の蒸発によって表題化合物を８６％の収率で得た。
【０１５１】
ｉｉ）  Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−テトラキス（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−６−（Ｏ−メチルスルホニル））−１，４，８，１１−テトラアザウンデカン（Ｎ4（Ｂｏｂ）4−Ｏ−ＳＯ2ＣＨ3）  ［２］：
１（３００  ｍｇ，  ０．５４  ｍｍｏｌ）のピリジン（３  ｍＬ）溶液に、塩化メチルスルホニル（８４  μＬ，  １．０８  ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で撹拌し、反応が終了するまでＴＬＣでモニターした。溶媒を減圧下に蒸発し、残渣は酢酸エチルに添加した。上記酢酸エチルを１０％ＮａＨＣＯ3および水で３回洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。濾過および減圧下での溶媒の蒸発によって粗製生物を得、これをさらにシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して表題化合物を８４％の収率で得た。
【０１５２】
ｉｉｉ）  Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−テトラキス（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−６−（アジド）−１，４，８，１１−テトラアザウンデカン
２（２５０  ｍｇ、０．３８  ｍｍｏｌ）とナトリウムアジド（１００  ｍｇ，  １．５２  ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）懸濁液を７５℃で５時間撹拌した。その後反応混合物を室温で１８時間撹拌した。続いて反応混合物を水と酢酸エチルに分配した。水相を酢酸エチルで３回抽出し、酢酸エチル相はあわせて塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。濾過および減圧下での溶媒の蒸発によって粗製生物が得られ、これをさらにカラムクロマトグラフィーで精製した（収率８８％）。
【０１５３】
ｄ）溶液中でのカップリング
末端アルキル基を有するペプチド（６．２  ｍｇ，  ５  μｍ）と３（３  ｍｇ，  ５  μｍ）を水とｔｅｒｔ−ブチルアルコール１：１混合物（１ｍＬ）に溶解した。銅粉（１０ｍｇ）、続けて０．１Ｍ硫酸銅（ＩＩ）５水和物（６０  μＬ，  ６  μｍ，  １．２  ｅｑｕｉｖ）を加え、反応混合物を室温で２４時間撹拌した。銅粉を濾別し、溶媒を減圧除去した。粗ペプチドを半透膜ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。
【０１５４】
キレート剤−ペプチド複合体をＴＦＡ：ＴＩＳ：Ｈ2Ｏ  （９５：２：３）で２時間処理した。溶媒を減圧除去した。粗生成物をジエチルエーテルで摩砕して、半透膜ＲＰ−ＨＰＬＣで前述の通り精製した。
【０１５５】
上記複合体をＲＰ−ＨＰＬＣ分析装置で分析し、質量分析装置（ＥＳＩ−ＭＳ）で特徴を明らかにした。
【０１５６】
化合物１４：Ａ  ＝Ｎ4−アジド、Ｂ1＝プロパルギル−ｄＰＥＧ1−ＮＨＳ−エステル；  Ｂ2＝なし，  Ｘａａ1＝ＤＰｈｅ；  Ｘａａ2＝ＧＩｙ；  Ｘａａ3＝Ｓｔａ；  Ｘａａ4＝Ｌｅｕ
Ｎ4−トリアゾール−ｄＰＥＧ1−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2；  Ｃ68Ｈ105Ｎ21Ｏ13，  計算値  （ｍ／ｚ）：  １４２４．７，  実測値［Ｍ＋Ｈ］+：  １４２５．５
【０１５７】
実施例３（Ａ−Ｂ−Ｃ２）
ＤＯＴＡ−Ｓｐａｃｅｒ−Ｘａａ16−Ｇｌｎ7−Ｔｒｐ8−Ａｌａ9−Ｖａｌ10−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ）−（ＣＨ2）2−ＣＨ3
【０１５８】
擬ペプチド(pseudopeptides)はすべて液相で、ヘプタペプチドＦｍｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｘａａ2−Ｈｉｓ−ＯＨを修飾アミノ酸Ｈ−ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ）−（ＣＨ2）3−ＣＨ3と縮合して合成した。
【０１５９】
ａ）ヘプタペプチドＦｍｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｘａａ2−Ｈｉｓ−ＯＨの合成
【０１６０】
Ｆｍｏｃストラテジーを用い、マニュアルでペプチドを２−クロロトリチル樹脂上に合成した。通常は、２−クロロトリチル樹脂を理論充填量１．４ｍｍｏｌ／ｇ樹脂で反応装置に供給した。上記樹脂をＤＣＭ中３０分間膨潤し、最初のアミノ酸をアミノ酸１等量加え、４倍モル過剰のＤＩＰＥＡのＤＣＭ溶液と混合し、カップリングした。カップリング反応混合物を室温で２時間撹拌し、樹脂をＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ  （１７／２／１）で２回、ＤＣＭで２回洗浄し、最後にＤＭＦ中で膨潤した。ピペリジン２０％ＤＭＦ溶液を用いてＦｍｏｃを脱保護し、除去されたＦｍｏｃ保護基の量を３００ｎｍの分光光度法で測定した。次のアミノ酸を、等モル量のＤＩＣ／ＨＯＢｔと、４倍モル過剰のＤＩＰＥＡのＤＣＭ溶液と共に、２倍モル過剰のアミノ酸を加えてカップリングした。樹脂を室温で２時間撹拌し、カップリングはＫａｉｓｅｒニンヒドリンテストでモニターした。各アミノ酸は同じストラテジーを用いてカップリングした。
【０１６１】
ｂ）ＳＰＡＣＥＲとプロキレート剤ＤＯＴＡ  （tＢｕ）3のカップリング
カップリングは上記と同様に行った。
【０１６２】
ｃ）開裂および精製
樹脂をＴＦＡ／ＴＩＳ／ＤＣＭ  （１／５／９４）混合物に分散することで、完全に保護したペプチドを、固体担体から開裂した。５ｍＬの開裂溶液をシリンジで数回調製し、１０分間インキュベートし、開裂フラクションを５０ｍＬフラスコに収集した。上記フラクションをすべて収集した後、３×１０ｍＬトルエンをフラスコに添加し、溶媒を蒸発させ、生成物をその後１時間オイルポンプ真空下乾燥した。
【０１６３】
ｄ）Ｂｏｃ−ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ）−（ＣＨ2）3−ＣＨ3の合成。合成には３ステップが含まれる。
ｉ）Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｎ（ＯＣＨ3）ＣＨ3の合成
Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ  （１  ｇ，  ４．３  ｍｍｏｌ）をＤＣＭ  （３０  ｍＬ）に溶解し、０℃で２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート  （ＴＢＴＵ）（１．３８０  ｇ，  ４．３  ｍｍｏｌ），  ＨＯＢｔ  （０．５８１  ｇ，  ４．３  ｍｍｏｌ）  およびＤＩＰＥＡ  （７４３  μＬ，  ４．３  ｍｍｏｌ）を添加した。５分間の撹拌の後、Ｏ，Ｎ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩  （０．４６１  ｇ，  ４．７３  ｍｍｏｌ）  およびＤＩＰＥＡ  （８１７  μＬ，  ４．７３  ｍｍｏｌ）を添加した。固形分はすべて１０分以内で溶解し、該混合物を終夜、室温で撹拌した。溶媒を蒸発させ、反応混合物をＡｃＯＥｔに再度溶解し、水、クエン酸、水、ＮａＨＣＯ3水溶液、飽和ＮａＣｌ溶液で数回洗浄した。上記溶液をＭｇＳＯ4乾燥し、溶媒を真空除去した。目的の化合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。ＥＳＩ−ＭＳ：  計算値  ２６９；  実測値  ２９２［Ｍ＋Ｎａ］+。
【０１６４】
ｉｉ）Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−（ＣＨ2）3−ＣＨ3の合成
マグネシウム（０．３３０  ｇ，  １３．６  ｍｍｏｌ）をＮ2下、トルエン中で３０分間活性化した。上記トルエンを除去し、Ｎ2下、上記Ｍｇを乾燥した。ＭｇのＴＨＦ  （２０  ｍＬ）懸濁液へ、ブロモブタン（１．４６  ｍＬ，  １３．６  ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を還流加熱した。すべてのマグネシウムを溶解した後、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｎ（ＯＣＨ3）ＣＨ3  のＴＨＦ溶液を滴下し、０℃で２時間撹拌反応させた。１Ｍ  ＨＣｌ  （１５０  ｍＬ）、次いで酢酸エチル（１００ｍＬ）を加えた。有機相を１Ｍ硫酸水素カリウム、水で洗浄、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、真空で濃縮した。予想される化合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。生成物の特徴を1Ｈ−ＮＭＲおよび13Ｃ−ＮＭＲで明らかにした。ＥＳＩ−ＭＳ：  計算値  ２７１；  実測値  ２９３．３  ［Ｍ  ＋Ｎａ］+．
【０１６５】
ｉｉｉ）Ｂｏｃ−ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ）−（ＣＨ2）3−ＣＨ3の合成
Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−（ＣＨ2）3−ＣＨ3  （０．１９０  ｇ，  ０．７  ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍＬ）溶液にＮａＢＨ4  （０．１０４  ｇ，  ２．８  ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をさらに１時間撹拌し、酢酸で中和し、溶媒を減圧除去した。予想される化合物を飽和重炭酸塩溶液で沈殿させた。濾過によりペプチドを収集し、水、ヘキサンで洗浄、乾燥した。生成物の特性を1Ｈ−ＮＭＲおよび13Ｃ−ＮＭＲで明らかにした。ＥＳＩ−ＭＳ：  計算値  ２７２；  実測値  ２７３  [M ＋H]+；  ５４７．７  ［２Ｍ＋Ｈ］+．
【０１６６】
ｉｖ）溶液中でのカップリング
Ｂｏｃ−ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ）−（ＣＨ2）3−ＣＨ3を、ＴＦＡ８０％のＤＣＭ溶液で脱保護した。１時間後、溶液を濃縮し、ＤＣＭで数回洗浄し、乾燥した。キレート剤−スペーサ−ペプチドをＤＭＦに溶解し、ＨＡＴＵ（１．２等量）を添加し、該混合物を１時間撹拌した。Ｈ−ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ）−（ＣＨ2）3−ＣＨ3をＤＭＦに溶解し、ペプチドに添加した。ＤＩＰＥＡを用いてｐＨを８に調節し、室温で４時間撹拌反応した。
【０１６７】
溶媒を濃縮し、氷上、水で完全保護ペプチドを析出させた。粗ペプチドを析出、冷却、遠心分離し、デカンテーションによって溶媒から分離した。完全に脱保護されたペプチドを得るために、ＤＣＭ／ＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ2Ｏ  １０／８５／２．５／２．５混合物に溶解した。４時間後、上記溶液を濃縮し、５０％ジエチルエーテルと５０％のジイソプロピルエーテルの混合物を用いて、ペプチドを氷上で析出した。上記ペプチドを３０００ｒｐｍで５分間遠心分離器にかけて収集し、上澄みをデカンテーションした。沈殿物をジエチルエーテルで数回洗浄し、粗生成物を真空中に終夜保持し、残った溶媒を除去した。粗生成物を水に溶解させ、先に述べた分別で精製した。
【０１６８】
上記複合体をＲＰ−ＨＰＬＣ分析装置で分析し、質量分析装置（ＥＳＩ−ＭＳ）で特徴を明らかにした。
【０１６９】
化合物９：  Ａ＝ＤＯＴＡ，  Ｂ1＝４−アミノ−ｌ−カルボキシメチル−ピペリジン；  Ｂ2＝なし，  Ｘａａ1＝ＤＰｈｅ；  Ｘａａ2＝Ｇｌｙ；ＤＯＴＡ−４−アミノ−ｌ−カルボキシメチル−ピペリジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｈｉ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ−ＣＨ2）−（ＣＨ2）2−ＣＨ3，  Ｃ74Ｈ112Ｎ18Ｏ17，  計算値  （ｍ／ｚ）：  １５２４．８，  実測値［Ｍ＋Ｋ］+：  １５６４．３
【０１７０】
化合物１０：  Ａ＝ＤＯＴＡ，  Ｂ1＝１５−アミノ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカノイル；  Ｂ2＝４−アミノ−ｌ−カルボキシメチル−ピペリジン，  Ｘａａ1＝ＤＰｈｅ；  Ｘａａ2＝ＧＩｙ；ＤＯＴＡ−ＰＥＧ4−４−アミノ−ｌ−カルボキシメチル−ピペリジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ−ＣＨ2）−（ＣＨ2）2−ＣＨ3；  Ｃ86Ｈ135Ｎ19Ｏ22，  計算値  （ｍ／ｚ）：１７８６．９，  実測値［Ｍ＋Ｋ］+：  １８１１．１
【０１７１】
化合物１１：  Ａ＝ＤＯＴＡ，  Ｂ1＝１５−アミノ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカノイル；  Ｂ2＝なし，  Ｘａａ1＝ＤＰｈｅ；  Ｘａａ2＝Ｇｌｙ；  ＤＯＴＡ−ＰＥＧ4−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ−ＣＨ2）−（ＣＨ2）2−ＣＨ3  Ｃ78Ｈ121Ｎ17Ｏ21，  計算値  （ｍ／ｚ）：  １６３２．８，  実測値［Ｍ＋Ｋ］+：  １６７２．２
【０１７２】
実施例４（Ａ−Ｂ−Ｃ−３）
ＤＯＴＡ−Ｓｐａｃｅｒ−Ｘａａ16−Ｇｌｎ7−Ｔｒｐ8−Ａｌａ9−Ｖａｌ10−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−Ｘaa3I3−Ｘaa414−ＮＨ2
【０１７３】
一般配列：ＤＯＴＡ−Ｓｐａｃｅｒ−Ｘａａ1−Ｔｒｐ−Ａｌａ9−Ｖａｌ10−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−ＬｅｕΨ（ＣＨ2ＮＨ）−Ｐｈｅ−ＮＨ2を有するボンベシン複合体の合成
ａ）ペプチド：  Ｆｍｏｃ−Ｘａａ16−Ｇｌｎ7−Ｔｒｐ8−Ａｌａ9−Ｖａｌ10−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−ＬｅｕΨ（ＣＨ2ＮＨ）−Ｐｈｅ−ＮＨ2  の合成。
【０１７４】
Ｆｍｏｃストラテジーを用いて、ＭＢＨＡ樹脂ＬＬ（１００−２００メッシュ）ＨＣｌ上にマニュアルでペプチドを合成した。通常、理論負荷量０．５９ｍｍｏｌｅ／ｇのＭＢＨＡ樹脂を反応機に投入、ＤＣＭ中で３０分間膨潤した。樹脂を、１０％ＤＩＰＥＡのＤＣＭ溶液で３回（１０分）処理した。Ｂｏｃ−ＬｅｕΨ（ＣＨ2ＮＨ）−Ｐｈｅ−ＯＨの最初のカップリングは、２等量のＨＯＢｔと２等量のＤＩＣで活性化された、Ｂｏｃ−アミノ酸を２等量使用して行った。カップリング反応混合物を室温で２時間撹拌し、該反応はＫａｉｓｅｒニンヒドリンテストでモニターした。ＢｏｃをＴＦＡ３０％のＤＣＭ溶液を用いて脱保護し、このステップを２回繰り返した。樹脂は、その後ＤＩＰＥＡ１０％のＤＣＭ溶液で処理し、上述のようにカップリングを行った。
【０１７５】
（Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨ2ＮＨ）−Ｐｈｅ−ＮＨ2：  Ｃ56Ｈ76Ｎ14Ｏ9，  計算値（ｍ／ｚ）：  １０８９．３，  実測値［Ｍ＋Ｈ］+：  １０８９．８
【０１７６】
ｂ）  ＳＰＡＣＥＲとプロキレート剤ＤＯＴＡ  （tＢｕ）3とのカップリング
カップリングは上記と同様に行った。
【０１７７】
ｃ）脱保護、開裂および精製
ペプチドをＴＦＡ  （１  ｍＬ）  およびＴＩＳ  （３０  μＬ）で処理し、混合物を室温で５分間撹拌した。上記混合物を次いでアイスバス中で冷却し、撹拌しながらトリフルオロメタンスルホン酸（ＴＦＭＳＡ）を滴下した。フラスコをストッパーで密封し、混合物を室温で２時間撹拌した。真空で体積を減少させ、冷ジエチルエーテルを加えてペプチドを析出させた。析出物をジエチルエーテルで数回洗浄し、粗生成物を真空乾燥した。粗生成物を水に溶解し、上述のＨＰＬＣ分別で精製した。
【０１７８】
上記複合体をＲＰ−ＨＰＬＣ分析装置で分析し、質量分析装置（ＥＳＩ−ＭＳ）で特徴を明らかにした。
【０１７９】
化合物１２：  Ａ＝ＤＯＴＡ，  Ｂ1＝４−アミノ−ｌ−カルボキシメチル−ピペリジン；  Ｂ2＝なし，  Ｘａａ1＝ＤＰｈｅ；  Ｘａａ2＝Ｇｌｙ；  Ｘａａ3  ＝ＬｅｕΨ（ＣＨ2ＮＨ）；  Ｘａａ4＝  Ｐｈｅ
【化２６】
0005784911.tif 000027
ＤＯＴＡ−４−アミノ−ｌ−カルボキシメチル−ピペリジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨ2ＮＨ）−Ｐｈｅ−ＮＨ2
Ｃ79Ｈ114Ｎ20Ｏ17，  計算値  （ｍ／ｚ）：  １６１５．９，  実測値［Ｍ＋Ｋ］+：  １６５４．９
【０１８０】
一般配列：ＤＯＴＡ−Ｓｐａｃｅｒ−Ｘａａ16−Ｇｌｎ7−Ｔｒｐ8−Ａｌａ9−Ｖａｌ10−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−ＬｅｕΨ（ＣＨ2ＮＨ）−Ｃｙｓ−ＮＨ2を有するボンベシン複合体の合成
【０１８１】
ａ）ペプチド：  Ｆｍｏｃ−Ｘａａ16−Ｇｌｎ7−Ｔｒｐ8−Ａｌａ9−Ｖａｌ10−Ｘａａ211−Ｈｉｓ12−ＬｅｕΨ（ＣＨ2ＮＨ）−ＣｙＳ−ＮＨ2の合成
【０１８２】
Ｂｏｃ−ストラテジを用い、マニュアルでペプチドをＭＢＨＡ樹脂（０．５９  ｍｍｏｌ／ｇ）上に固相で合成した。ＤＩＣ  （２．５  ｅｑ．）  とＨＯＢｔ  （２．５  ｅｑ．）を活性化剤として用い、Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（４−ＭｅＯＢｚｌ）−ＯＨ  （２．５  ｅｑ．）を樹脂にカップリングした。ｐＨをＤＩＰＥＡ（５  ｅｑ．）で８に調節した。酸性化ジメチルホルムアミドに溶解したＢｏｃ−Ｌｅｕ−アルデヒド  （２．５  ｅｑ．）を用いて還元結合（ｒｅｄｕｃｅｄ  ｂｏｎｄ）  13Ψ14（ＣＨ2−ＮＨ）の導入を行った。ＤＭＦに溶解したＮａＢＨ3ＣＮ  （２．５  ｅｑ．）をゆっくりと、２０分間で添加し、室温で１時間撹拌しながら反応を行った。還元ペプチド結合を形成した後は、カップリング反応はすべてＮ−Ｂｏｃ保護アミノ酸を用いて行った。
【０１８３】
ｂ）ＳＰＡＣＥＲおよびプロキレート化剤ＤＯＴＡ（tＢｕ）3とのカップリング
カップリングは上述の通り行った。
【０１８４】
ｃ）脱保護、開裂および精製
脱保護、開裂および精製は上述の通り実施した。上記複合体はＲＰ−ＨＰＬＣ分析装置で分析し、質量分析装置（ＥＳＩ−ＭＳ）で特徴を明らかにした。
【０１８５】
化合物１３：  Ａ＝ＤＯＴＡ，  Ｂ１＝４−アミノ−ｌ−カルボキシメチル−ピペリジン；  Ｂ2＝ｎｏｎｅ，  Ｘａａ１＝ＤＰｈｅ；  Ｘａａ2＝Ｇｌｙ；  Ｘａａ3  ＝ＬｅｕΨ（ＣＨ2ＮＨ）−；  Ｘａａ4＝Ｃｙｓ
【化２７】
0005784911.tif 000028
ＤＯＴＡ−４−アミノ−ｌ−カルボキシメチル−ピペリジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨ2ＮＨ）−Ｃｙｓ−ＮＨ2；  Ｃ73Ｈ110Ｎ20Ｏ17Ｓ，  計算値  （ｍ／ｚ）：  １５７１．８，  実測値［Ｍ＋Ｎａ］+：  １５９３．６
【０１８６】
実施例４  合成複合体の放射性同位元素標識（化合物１−１３）
基本手順
キレート剤−ボンベシンペプチドアンタゴニスト複合体水溶液のアリコート１０μｇに、（111ＩｎＣｌ3，  177ＬｕＣｌ3  または67/68ＧａＣｌ3）の水溶液１−２ｍＣｉ、および２５０−５００μＬの０．４Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝５）を添加した。この溶液を９５℃で３０分間加熱し、１０分間で室温まで冷却した。反応混合物の５μｌアリコートをＣａ−ＤＴＰＡ  溶液（０．１  Ｍ，  ｐＨ  ５．２）２５μｌに添加、ＨＰＬＣで分析し、非標識放射性核種の量を決定した。
【０１８７】
実施例５  合成複合体の115Ｉｎ標識化
ボンベシンアナログとnatＩｎの錯化は同じプロトコルに従って実施した。natＩｎはnatＩｎＣｌ3溶液の形で、モル比１：１で使用した。
【０１８８】
実施例６（生体内アッセイ）
ＧＲＰ受容体アンタゴニストの生体内特性評価
【０１８９】
試薬とペプチド
入手可能な特級の試薬を、一般の供給業者から購入した。マウスのモノクローナル血球凝集素（ＨＡ）エピトープ抗体をＣｏｖａｎｃｅ（Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，  ＣＡ）から購入した。第２の抗体Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８ヤギ抗マウスＩｇＧ  （Ｈ＋Ｌ）をＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，  Ｉｎｃ．  （Ｅｕｇｅｎｅ，  ＯＲ）から購入した。ボンベシンおよびそのアンタゴニスト［Ｄ−Ｐｈｅ6，  Ｌｅｕ−ＮＨＥｔ13，  ｄｅｓ−Ｍｅｔ14］−ボンベシン（６−１４）  （ＧＲＰＲ−ＡＮＴＡＧ）はＢａｃｈｅｍ（Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ，  Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から購入した。ＲＭ２６，  ＲＭ１ｂ，  Ｉｎ−ＲＭ１ｂ，  および175Ｌｕ−ＡＭＢＡは  Ｈ．Ｒ．  Ｍａｃｋｅ  （Ｂａｓｅｌ，  Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から提供された。Ｆｌｕｏ−４ＮＷ  Ｃａｌｃｉｕｍ  ＡｓｓａｙキットはＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，  Ｉｎｃ．  （Ｅｕｇｅｎｅ，  ＯＲ）から提供された。
【０１９０】
細胞株
ＨＡ−エピトープ標識ヒトＧＲＰ受容体（ＨＥＫ−ＧＲＰＲ）を発現するヒト胎児腎臓２９３  （ＨＥＫ２９３）細胞は、過去の記載通りに発生し（Ｃｅｓｃａｔｏら，  ２００８）、１０％  （ｖ／ｖ）  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１００  Ｕ／ｍｌ  ペニシリン、１００  μｇ／ｍｌ  ストレプトマイシン、および、７５０  μｇ／ｍｌ  Ｇ４１８を含む、ＧｌｕｔａＭＡＸTM−Ｉ添加ダルベッコ変法イーグル培地  （ＤＭＥＭ）中、３７℃、５％ＣＯ2で培養した。ヒト前立腺癌細胞（ＰＣ３細胞）はＤＳＭＺ（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ；  ＤＳＭＺ  Ｎｏ：  ＡＣＣ４６５）から入手し、３７℃、５％ＣＯ2で、２ｍＭＬ−グルタミンを含み、１０％  （ｖ／ｖ）  ＦＢＳ，  １００  Ｕ／ｍｌ  ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ  および１００  μｇ／ｍｌ  ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎを添加したＨａｍ’ｓ  Ｆ１２Ｋ中で培養した。培養試薬はすべてＧｉｂｃｏ  ＢＲＬ  （Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，  ＮＹ）のものを使用した。
【０１９１】
結合親和性測定
種々の化合物のＧＲＰ受容体結合親和性は、過去の記載通り、特性のよく知られた前立腺癌のクライオスタットセクション（ｃｒｙｏｓｔａｔ  ｓｅｃｔｉｏｎｓ）上の、またはＨＥＫ−ＧＲＰＲまたはＰＣ３細胞ペレットからのセクション上の、生体内における受容体オートラジオグラフィーによって測定した（Ｍａｒｋｗａｌｄｅｒら，  Ｃａｎ．  Ｒｅｓ．，  １９９９；  ５９，  １１５２−１１５９；  Ｒｅｕｂｉ  ら，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．，  ２０００；２７：  ２７３−２８２；  Ｒｅｕｂｉら，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２００２；８  １１３９−１１４６）。
【０１９２】
放射性リガンドはＧＲＰ受容体を優先的に標識するものとして知られている125Ｉ−［Ｔｙｒ4］−ｂｏｍｂｅｓｉｎ  （Ｖｉｇｎａら，  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．  １９８７；９３：  １２８７−１２９５）、および一般的なボンベシン受容体リガンドである125Ｉ−［Ｄ−Ｔｙｒ6，  β−Ａｌａ11，  Ｐｈｅ13，  Ｎｌｅ14］−ｂｏｍｂｅｓｉｎ（６−１４）  （Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．  １９８７；９３：  １２８７−１２９５）、を使用した。
表1の結果を参照。
【０１９３】
免疫蛍光顕微鏡検査法
免疫蛍光顕微鏡検査法を用いたＨＥＫ−ＧＲＰＲ細胞内在化解析を、過去の記載通りに実施した（Ｃｅｓｃａｔｏら，  ２００６；  Ｃｅｓｃａｔｏら，  ２００８）。簡単に言えば、ＨＥＫ−ＧＲＰＲ細胞を、ポリ−Ｄ−ｌｙｓｉｎｅ  （２０  μｇ／ｍｌ）  （Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）をコートした３５ｍｍの４穴プレート（Ｃｅｌｌｓｔａｒ，  Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ  ＧｍｂＨ，  Ｆｒｉｃｋｅｎｈａｕｓｅｎ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）上で培養した。実施例では、１０ｎＭボンベシン、または１μＭの各種ボンベシンアナログ、または潜在的拮抗性を評価するために、１００倍過剰のこれらアナログ存在下に１０ｎＭボンベシンで、細胞を３７℃、５％ＣＯ2で３０分間、成長培地で処理し、続けて、免疫蛍光顕微鏡検査のために、マウスモノクローナルＨＡ−エピトープ抗体を一次抗体として希釈度１：１，０００、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８ヤギ抗マウスＩｇＧ  （Ｈ＋Ｌ）を二次抗体として希釈度１：６００を用いて処理を行った。細胞のイメージングは、ライカＤＭ  ＲＢ免疫蛍光顕微鏡およびオリンパスＤＰｌＯカメラを用いて行った。
【０１９４】
ボンベシンによって誘発されるＧＲＰ受容体内在化は、ボンベシンアナログである化合物１、Ｉｎ−化合物１、化合物１ｂ、およびＧＲＰＲ−ＡＮＴＡＧによって効果的に拮抗される。ＨＥＫ−ＧＲＰＲ細胞はビヒクル（ペプチドなし、ａ）、またはボンベシン１０ｎｍｏｌ／Ｌ（ｂ）、すなわち亜最大の内在化効果を誘発する濃度、で３０分間処理を行った。パネル（ｄ、ｆ、ｈ、ｊ）はアナログ化合物１ｂ、ＧＲＰＲ−ＡＮＴＡＧ、化合物１、およびＩｎ−化合物１の１μｍｏｌ／Ｌ存在下に１０ｎｍｏｌ／Ｌボンベシンで処理を行った細胞を示す。濃度１μｍｏｌ／Ｌの化合物１ｂ、ＧＲＰＲ−ＡＮＴＡＧ、化合物１、および化合物Ｉｎ−化合物１単独での効果はパネル（ｃ、ｅ、ｇ、ｉ、ｋ）に示す。ペプチドでのインキュベーションに続いて、上記の通り、細胞を免疫細胞化学用に処理した。ボンベシンで処理した細胞には、点状の、核周辺の汚染が明らかに検出される。この点状汚染は、アナログ化合物１、Ｉｎ−化合物１、化合物１ｂおよびＧＲＰＲ−ＡＮＴＡＧの過剰で効果的に取り除くことができる。化合物−１、Ｉｎ−化合物１、化合物１ｂおよびＧＲＰＲ−ＡＮＴＡＧを単独で与えた場合にはＧＲＰ受容体内在化に影響は与えない。
表１および表２の結果を参照。
【０１９５】
カルシウム放出試験
細胞内カルシウム放出は、過去の記載通り、ＰＣ３細胞内で、Ｆｌｕｏ−４ＮＷ  Ｃａｌｃｉｕｍ  Ａｓｓａｙキットを用いて測定した（Ｍａｇｒｙｓら，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２００７，  ２７，  １８１−１９２；  Ｍｉｃｈｅｌら，；  Ｃｅｓｃａｔｏら，  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  ２００８；  ４９：  ３１８−３２６）。簡単にいえば、ＰＣ３細胞を９６穴プレートに播種し（１穴あたり１００００細胞）、３７℃、５％ＣＯ2で２日間、培地で培養した。実験当日、細胞を、２．５ｍＭプロベネシドを含む試験用緩衝液（１  ｘ  ＨＢＳＳ，  ２０  ｍＭ  ＨＥＰＥＳ）で洗浄し、Ｆｌｕｏ−４ＮＷ染料の２．５ｍＭプロベネシド含有試験用緩衝液１００μL／ｗｅｌｌを３７℃、５％ＣＯ2で３０分間、さらに室温で３０分間ロードした。試験用ボンベシンアナログで刺激を与えた後、細胞内カルシウム移動を測定するために、染料をロードした細胞をＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ２e  （Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，  Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，  ＣＡ）に移した。細胞内カルシウム移動は、指示濃度のアナログの存在下に、５２０ｎｍの蛍光放射（λex＝４８５  ｎｍ）をモニターしながら、室温で６０秒間、動的に記録した。２５μＭイオノマイシン添加後、最大蛍光（Ｆ−ｍａｘ）を測定した。染料をロードした未処理の細胞に対して、ベースライン（Ｆ−ベースライン）を測定した。データは、過去の報告  （Ｍａｇｒｙｓら，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２００７，  ２７，  １８１−１９２；  Ｍｉｃｈｅｌら，  Ｃｅｓｃａｔｏら，  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  ２００８；  ４９：  ３１８−３２６）  と同様に、最大カルシウム応答のパーセンテージ（Ｆ−ｍａｘ  −  Ｆ−ｂａｓｅｌｉｎｅ＝１００  ％  ｏｆ  ｍａｘｉｍｕｍ  ｃａｌｃｉｕｍ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）として示した。実験はすべてトリプリケートで３回繰り返して行った。
【０１９６】
図１は、Ｉｎ−Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  １  とｃｏｍｐｏｕｎｄ  １ａが、ボンベシン（ＢＢ）の存在下、ボンベシンの用量反応曲線を右にシフトさせるアンタゴニストと同様に挙動することを示す。
表１および図１の結果を参照。
【０１９７】
化合物１  ：  ＤＯＴＡ−Ｇｌｙ−アミノベンゾイル−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2
化合物２：  ＤＯＴＡ−４−アミノ−１−カルボキシメチル−ピペリジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2
化合物３  ：  ＤＯＴＡ−４−アミノ−１−ピペリジン−４−カルボン酸−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−
Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2
化合物４：  ＤＯＴＡ−１５−アミノ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−
Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2
化合物５：  ＤＯＴＡ−（１５−アミノ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸）−（４−アミノ−ｌ−カルボキシ−メチル−ピペリジン）−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｈｉ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2
化合物６：  ＤＯＴＡ−ジアミノ酪酸−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2
化合物７  ：  ＤＯＴ  Ａ−４−（２−アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−ＶａＩ−
Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2
化合物８：  ＤＯＴＡ−（５−アミノ−３−オキサ−ペンチル）−こはくアミド酸−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−
Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2
化合物９：  ＤＯＴＡ−４−アミノ−１−カルボキシメチル−ピペリジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−
ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ−ＣＨ2）−（ＣＨ2）2−ＣＨ3
化合物１０：  ＤＯＴＡ−（１５−アミノ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸−４−アミノ−ｌ−カルボキシメチル−ピペリジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ−ＣＨ2）−（ＣＨ2）2−ＣＨ3
化合物１１：  ＤＯＴＡ−１５−アミノ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン酸−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−
Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨＯＨ−ＣＨ2）−（ＣＨ2）2−ＣＨ3
化合物１２：  ＤＯＴＡ−４−アミノ−１−カルボキシメチル−ピペリジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−
Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨ2ＮＨ）−Ｐｈｅ−ＮＨ2
化合物１３：  ＤＯＴＡ−４−アミノ−１−カルボキシメチル−ピペリジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−
Ｈｉｓ−ＬｅｕΨ（ＣＨ2ＮＨ）−Ｃｙｓ−ＮＨ2
化合物１４：  Ｎ4−トリアゾール−ｄＰＥＧ1−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2.
【０１９８】
【表１】
0005784911.tif 000029
化合物１、２および９の結合親和性は、115Ｉｎ非放射性アイソトープとの錯化後に測定した。データからは、アイソトープとの錯化は、受容体との結合親和性だけでなく、アンタゴニスト特性にも影響を与えないことが分かった。
【０１９９】
関連公報中の標準方法：
Ｃｅｓｃａｔｏ  Ｒ，  Ｓｃｈｕｌｚ  Ｓ，  Ｗａｓｅｒ  Ｂら，  ｓｓｔ２、ｓｓｔ３、およびｓｓｔ５受容体の内在化：ソマトスタチンアゴニストおよびアンタゴニストの効果．  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．，  ２００６；４７：５０２−５１１．
【０２００】
Ｃｅｓｃａｔｏ  Ｒ，  Ｍａｉｎａ  Ｔ，  Ｎｏｃｋ  Ｂ，  Ｎｉｋｏｌｏｐｏｕｌｏｕ  Ａ，  Ｃｈａｒａｌａｍｂｉｄｉｓ  Ｄ，  Ｐｉｃｃａｎｄ  Ｖ，  Ｒｅｕｂｉ  ＪＣ．  腫瘍標的に関しボンベシン受容体アンタゴニストはアゴニストよりも好ましいかもしれない．  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．．  ２００８；  ４９：３１８−３２６．
【０２０１】
Ｍａｇｒｙｓ，  Ａ．；  Ａｎｅｋｏｎｄａ，  Ｔ．；  Ｒｅｎ，  Ｇ．；  Ａｄａｍｕｓ，  Ｇ．  自己免疫媒介網膜症の病原性におけるアンチ−アルファ−エノラーゼ自己抗体の役割．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２００７，  ２７，  １８１−１９２．
【０２０２】
Ｍａｒｋｗａｌｄｅｒ  Ｒ，  Ｒｅｕｂｉ  ＪＣ．  ヒト前立腺におけるガストリン放出ペプチド受容体：悪性形質転換との関係．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １９９９；５９：１１５２−１１５９．
【０２０３】
Ｍｉｃｈｅｌ，  Ｎ．；  Ｇａｎｔｅｒ，  Ｋ．；  Ｖｅｎｚｋｅ，  Ｓ．；  Ｂｉｔｚｅｇｅｉｏ，  Ｊ．；  Ｆａｃｋｌｅｒ，  Ｏ．  Ｔ．；  Ｋｅｐｐｌｅｔ，  Ｏ．  Ｔ．  ヒト免疫不全ウイルスはケモカイン受容体細胞表面レベルの広スペクトル調節因子であって、受容体エンドサイトーシスおよびＧａｌｐｈａｉシグナリングについての従来のモチーフとは独立して作用する．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  ２００６，  １７，  ３５７８−３５９０
【０２０４】
Ｒｅｕｂｉ  ＪＣ，  Ｓｃｈａｅｒ  ＪＣ，  Ｗａｓｅｒ  Ｂら，  シンチグラフィックおよび放射線治療用途のために選択されたソマトスタチン放射性トレーサの、ヒトソマスタチン受容体ｓｓｔ１―ｓｓｔ５親和性プロファイル．  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．，  ２０００；２７：２７３−２８２．
【０２０５】
Ｒｅｕｂｉ  ＪＣ，  Ｗｅｎｇｅｒ  Ｓ，  Ｓｃｈｍｕｃｋｌｉ−Ｍａｕｒｅｒ  Ｊ  ら，ヒト癌内ボンベシン受容体サブタイプ：ユニバーサル放射性リガンド（１２５）Ｉ−  ［Ｄ−ＴＹＲ（６），  ｂｅｔａ−ＡＬＡ（１１），  ＰＨＥ（１３），  ＮＬＥ（１４）］  ボンベシン（６−１４）を用いた検出．  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ２００２；８：ｌ  １３９−１１４６．
【０２０６】
Ｖｉｇｎａ  ＳＲ，  Ｍａｎｔｙｈ  ＣＲ，  Ｇｉｒａｕｄ  ＡＳ  ら，イヌ胃腸管におけるボンベシンの特異的結合部位の特定．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．  １９８７；９３：  １２８７−１２９５．
【０２０７】
実施例７  ＰＣ−３腫瘍を有するヌードマウスの生体内分布実験
メスのヌードマウスの皮下に、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）滅菌溶液中で新たに増殖したＰＣ−３腫瘍細胞を１０００万埋め込んだ。接種１１日後、マウスの尾静脈に１０ｐｍｏｌの放射性標識ペプチド（約０．１８  ＭＢｑ）をＮａＣｌで希釈したもの（０．１％ウシ血清アルブミン，  ｐＨ  ７．４，  注射総量＝１００  μＬ）を注射した。腫瘍内または受容体陽性臓器内の非特異的な取込みを測定するために、４動物のグループにあらかじめ０．０２μｍｏｌの非標識ペプチドの０．９％ＮａＣｌ溶液を注射し、５分後に放射性標識ペプチドを注射した。１、４、２４、４８、および７２時間のインターバルで、マウス（グループ３−４）を犠牲にし、興味のある臓器を集め、過剰の血液を洗い流し、秤量しγ−カウンターで測定した。
【０２０８】
【表２】
0005784911.tif 000030
【０２０９】
【表３】
0005784911.tif 000031
【０２１０】
【表４】
0005784911.tif 000032
【０２１１】
【表５】
0005784911.tif 000033
【０２１２】
【表６】
0005784911.tif 000034
【０２１３】
【表７】
0005784911.tif 000035
【０２１４】
【表８】
0005784911.tif 000036
実施例８  ＰＥＴ／ＣＴ−イメージング、ＰＣ−３およびＬＮＣａＰ  -腫瘍を有するマウスのＧａ−  ６８−ＤＯＴＡ  化合物２の生体内分布実験、結合親和性および安定性
イメージング＋生体内分布
化合物２：  ＤＯＴＡ−４−アミノ−１−カルボキシメチル−ピペリジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2
【化２８】
0005784911.tif 000037
示性式：Ｃ７８Ｈ１１５Ｎ２０Ｏ１９Ｇａ；  分子量：  １７０４．８９
【０２１５】
Ｇａ−６８−ＤＯＴＡ−化合物２はマイクロＰＥＴ／ＣＴ（Ｉｎｖｅｏｎ，  Ｓｉｅｍｅｎｓ）上で、ＰＣ−３  およびＬＮＣａＰ腫瘍を有するマウス中で、１０ＭＢｑ放射性トレーサを注射した１時間後にイメージングした。このボンベシンアンタゴニストの急速な腎クリアランスによって、観測されたバックグラウンド活性は非常に低く、腎臓および膀胱のわずかな取込みのみであった。両異種移植片中に見られる高い腫瘍コントラストは、１００μｇボンベシンまたは非放射性化合物２そのものによって効果的にブロックされた。ボンベシン受容体がボンベシンで有効にブロックされることでＰＣ−３腫瘍を有するマウスの腫瘍中における信号の重大な喪失が生じた。図３ａおよび３ｂではＰＣ−３腫瘍を有するマウス、および図４ａおよび４ｂではＬＮＣａＰ−腫瘍を有するマウス。
【０２１６】
結合親和性
Ｇａ−６８−ＤＯＴＡ−化合物２のＧＲＰｒに対する結合親和性は、２つの異なる方法で測定することができ、該方法はヒト組織上の受容体オートラジオグラフィおよびＰＣ−３細胞を用いた細胞分析を含む。両方法は、非放射性ＤＯＴＡ−化合物２ペプチドをベースにして、ＩＣ50〜８ｎＭと、化合物２の高い結合親和性を生じさせた。
【０２１７】
マウスプラズマおよびミクロソーム内の安定性
いくつかの生体内および生体外の方法による測定では、Ｇａ−６８−ＤＯＴＡ−化合物２は良好な代謝的安定性を示した。Ｇａ−６８−ＤＯＴＡ−化合物２の生体内プラズマ安定性は腫瘍を有しないマウスで観察され、マウスプラズマおよび尿は、Ｇａ−６８−ＤＯＴＡ−化合物２約２０  ＭＢｑの静注後１、３、５、１０、および１５分後にＨＰＬＣで分析した。数分後、放射性トレーサの小規模なプラズマ分解を観察、すなわち、２つの非常に小さな極性の代謝物の存在が１．３および１．５分の保持時間で見られ、これはまた、尿中の主代謝物としても存在した。化合物そのものは、開始５分ｐ．ｉ．で、保持時間１１．６−１１．７に現れ、ダブルピークを示した。
【０２１８】
Ｇａ−６８−ＤＯＴＡ−化合物２のミクロソーム安定性は、マウスおよびヒトミクロソームを放射性トレーサを用いてインキュベートしたものを用いて測定し、ＨＰＬＣで解析を行った。マウスまたはヒトミクロソームによるＧａ−６８−ＤＯＴＡ−化合物２の分解は見られなかった。ミクロソーム補因子なしで、クロマトグラム上に検出されたわずかな不純物も存在した。
【０２１９】
実施例９  ＰＣ−３腫瘍を有するマウスでの、99mＴｃ−ＡＲＮ４−０６のＳＰＥＣＴ／ＣＴ−イメージングおよび生体内分布実験
【表９】
0005784911.tif 000038
図６は99mＴｃ−ＡＲＮ４−０６  （１５  ＭＢｑ／２００  ｐｍｏｌ）のＳＰＥＣＴ／ＣＴイメージを示す。
【０２２０】
実施例１０  ＰＣ−３腫瘍を有するマウスにおける、９９ｍＴｃ−ＡＲＮ４−０５のＳＰＥＣＴ／ＣＴ造影実験及び生体分布実験
上記実験プロトコルを参照のこと。
【表１０】
0005784911.tif 000039
図８は99mＴｃ−ＡＲＮ４−０５  （１５  ＭＢｑ／２００  ｐｍｏｌ）のＳＰＥＣＴ／ＣＴイメージを示す。
【０２２１】
実施例１１  Ｇａ−６８−ＤＯＴＡ  化合物２の合成
ステップ１：非放射性ペプチドをポリスチレン担持Ｒｉｎｋアミド樹脂を用いた標準Ｆｍｏｃストラテジーに続く固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）で合成した。
ステップ２：
３５０μｌ  Ｗｈｅａｔｏｎ  Ｖバイアルの０．２５Ｍ  ＨＥＰＥＳ
・  ［６８Ｇａ］ＧａＣＢを４００μｌ  ９７．６％アセトン／０．０５Ｎ  ＨＣｌに添加
・  ０．１  Ｍ  ＨＣｌでｐＨを〜３．５に調整
・  ４０μｇ  ペプチドを４０μｌ  水に添加
・  ７５Ｗ  （９５°Ｃ）  で３０秒間加熱
・  ３０秒間保持
・  加熱と静置をさらに３回繰り返す
・  反応混合物に水を５ｍｌ添加
・  ｔＣ１８  Ｌｉｇｈｔ  ＳＰＥ固定
・  水洗  （５ｍｌ）
・  ＥｔＯＨ溶出  （５００μｌ）
【化２９】
0005784911.tif 000040
放射化学的収率（最適化なし）      ７９−２３１ＭＢｑ（３２−６０％ｄ．ｃ．）
開始時活性                        １８９−５９３  ＭＢｑ
標識数                            １０
不成功                            ０
放射化学的純度                    ＞９８％  （ＨＰＬＣ及びＩＴＬＣ）
比活性                            ３，２−１１．８ＧＢｑ／μｍｏｌ
【０２２２】
図９は、逆相カラムでのＧａ−６８−ＤＯＴＡ  化合物２のＨＰＬＣ解析を示す。
生成物純度
カラム：      ＡＣＥ  ５μ  Ｃ１８  ５０×４，６ｍｍ
溶媒：        溶媒Ａ：Ｈ2Ｏ±０．１％ＴＦＡ、
溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ±０．１％ＴＦＡ
勾配：        ７分間で、５〜９５％
流速：        ２ｍｌ／分
【０２２３】
実施例１２  Ｌｕ−１７７−ＤＯＴＡ化合物２の血清安定性
化合物２：  ＤＯＴＡ−４−アミノ−１−カルボキシメチル−ピペリジン−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−ＶａＩ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−Ｌｅｕ−ＮＨ2
ヒト血清内における、Ｌｕ−１７７で放射性標識したＬｕ−１７７−ＤＯＴＡ  化合物２の血清安定性を調べた。ＨＰＬＣ法で解析したところ、ヒト血清内でＬｕ−１７７−ＤＯＴＡ  化合物２を９６時間インキュベートした後、化合物の７０％がそのままだった。ヒト血清１ｍＬを新たに用意、３７℃５％ＣＯ２環境下であらかじめ平衡化し、０．０３  ｎｍｏｌ  177Ｌｕ標識ペプチド標準溶液を添加した。上記混合物を５％ＣＯ2、３７℃環境下でインキュベートした。いくつかのポイントで１００−μＬアリコート（３部）をとり、ＥｔＯＨ２００μＬで処理し、血清タンパクを析出させた。サンプルはその後５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。上澄みを５０μＬとり、γウエル型計算管で活性を測定、沈渣を１ｍＬＥｔＯＨで２回洗浄して測定し、上澄みの活性をペレットの活性と比較し、タンパクに結合していないペプチド、または血清タンパクに移動した放射性金属のパーセントを求めた。上澄みをＨＰＬＣで分析（溶離液：  Ａ＝０．１％  トリフルオロ酢酸水溶液および  Ｂ＝アセトニトリル；  勾配：  ０分  ９５％Ａ；  ２０分  ５０％Ａ）し、血清中のペプチドの安定性を測定した。
【０２２４】
図１１にヒト血清中のＬｕ−１７７−ＤＯＴＡ  化合物２の安定性を示す。
【０２２５】
実施例１３  Ｆ１８−塩素およびＦ１８−ＦＤＧとの比較
１時間ｐ．ｉ．でのＰＣ−３腫瘍担持マウス中のＧａ−６８  ＲＭ２の生体内分布を、前立腺癌イメージングに使用されるＦ−１８トレーサ［18Ｆ］フルオロエチルコリン（ＦＥＣ）、および腫瘍学における代表的なＦ１８トレーサであるＦＤＧと比較した。Ｇａ−６８  ＲＭ２は下表参照：
【表１１】
0005784911.tif 000041
腫瘍対組織比の高さは、ＰＥＴイメージング用のＧａ−６８化合物ＲＭ２の診断薬としての有用性を明確に示している。
図１２を参照。
【図１】
0005784911.tif 000043
【図２】
0005784911.tif 000044
【図３ａ】
0005784911.tif 000045
【図３ｂ】
0005784911.tif 000046
【図４ａ】
0005784911.tif 000047
【図４ｂ】
0005784911.tif 000048
【図６】
0005784911.tif 000049
【図８】
0005784911.tif 000050
【図９】
0005784911.tif 000051
【図１０ａ】
0005784911.tif 000052
【図１０ｂ】
0005784911.tif 000053
【図１０ｃ】
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【図１０ｄ】
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【図１０ｅ】
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【図１１】
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【図１２】
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