(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする毛乳頭細胞増殖促進剤。
【請求項２】
白眉草からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤。
【請求項３】
白眉草及び／又は仮鷹爪からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤。
【請求項４】
鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗男性ホルモン剤。
【請求項５】
前記植物からの抽出物が、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を有し、前記鳳凰木からの抽出物が、アンドロゲン受容体結合阻害作用をさらに有することを特徴とする請求項４に記載の抗男性ホルモン剤。
【請求項６】
鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする育毛剤。
【請求項７】
鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を配合したことを特徴とする頭髪化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤、抗男性ホルモン剤、育毛剤及び頭髪化粧料に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
毛髪の成長は、成長期、退行期、休止期からなる周期的なヘアサイクル（毛周期）に従って成長及び脱落を繰り返している。このヘアサイクルのうち、休止期から成長期へかけての新たな毛包が形成されるステージが、発毛に最も重要であると考えられており、このステージにおける毛包上皮系細胞の増殖・分化に重要な役割を果たしているのが、毛乳頭細胞であると考えられている。毛乳頭細胞は、毛根近傍にある外毛根鞘細胞とマトリックス細胞とからなる毛包上皮系細胞の内側にあって、基底膜に包まれている毛根の根幹部分に位置する細胞であり、毛包上皮系細胞へ働きかけてその増殖を促す等、毛髪への分化に重要な役割を担っている（非特許文献１参照）。
【０００３】
このように、毛乳頭細胞は、毛包上皮系細胞の増殖・分化および毛髪の形成において最も重要な役割を果たしており、従来、毛乳頭細胞に対象物質を接触させて、その細胞の増殖活性の有無及び／又は強弱を特定することで、その対象物質の育毛効果を検定する方法が提案されている（特許文献１参照）。また、従来、毛乳頭細胞増殖促進作用を有する生薬としては、例えば、ハトムギ抽出物、ワイルドタイム抽出物、スギナ抽出物、ショウブ抽出物、ローズマリー抽出物、ウコン抽出物、シラカバ抽出物及びコウチャ抽出物等が提案されている（特許文献２参照）。
【０００４】
多くのステロイドホルモンは産生臓器から分泌された分子型で受容体と結合してその作用を発現するが、アンドロゲンと総称される男性ホルモンの場合、例えばテストステロンは標的臓器の細胞内に入ってテストステロン５α−レダクターゼにより５α−ジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）に還元されてから受容体と結合し、アンドロゲンとしての作用を発現する。
【０００５】
アンドロゲンは重要なホルモンであるが、それが過度に作用すると、男性型禿頭、多毛症、脂漏症、座瘡、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等、さまざまな好ましくない症状を誘発する。そこで、過剰のアンドロゲンの作用を抑制することによりこれら好ましくない症状を改善する手法が検討されている。具体的には、テストステロンを活性型５α−ＤＨＴに還元するテストステロン５α−レダクターゼの作用を阻害することにより活性型５α−ＤＨＴを生じるのを抑制する方法と、テストステロンから生じた５α−ＤＨＴが受容体と結合するのを阻害することによりアンドロゲン活性を発現させない方法とが提案されている。
【０００６】
前記方法が検証された結果、シプロテンアセテート、オキセンドロン、酢酸クロマジノン等の有効性が確認された。しかしながら、これらの化合物はステロイド類似構造を有しているために、ホルモン様作用等の好ましくない副作用を有するという欠点がある。従来、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を有する生薬としては、例えば、Choerospondias属に属する植物（特許文献３参照）、五斂子（特許文献４参照）、紅豆杉、鳥欖、幌傘楓、穿心蓮（特許文献５参照）等が知られている。また、５α−ＤＨＴとその受容体との結合を阻害する作用を有する生薬としては、例えば、マジト、カチュア（特許文献６参照）、藤茶（特許文献７参照）等が報告されている。
【０００７】
線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）は線維芽細胞に対して増殖活性を有するだけでなく、様々な細胞に対する細胞増殖・分化活性を有する形態形成因子、組織障害のときに働く組織修復因子、生体の恒常性を維持するための代謝調節因子として重要な役割を果たしている多機能性分泌因子である。そのようなＦＧＦとして、例えばＦＧＦ−７がある。近年、ＦＧＦ−７について、男性型脱毛症における毛乳頭での発現低下が報告されている（非特許文献２参照）。これまで、ＦＧＦ−７の発現を促進させるものとしてアデノシンが知られているが（特許文献８参照）、植物からの抽出物にＦＧＦ−７産生促進作用のあるものはあまり知られていなかった。
【０００８】
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は、分子量３４〜４６ｋＤａの糖蛋白質であり、血管内皮細胞に特異的な増殖因子として、脳下垂体の濾胞細胞の培養液から発見され、血管透過性因子（ＶＰＦ）と同一物質であることがわかった。下垂体細胞以外には、平滑筋細胞、マクロファージ、肺胞上皮細胞、肝細胞、毛乳頭細胞等の正常細胞で産生されるほか、グリオーマ（神経膠腫）、乳癌、胃癌、大腸癌等の多くの腫瘍細胞からも産生されることが知られている。ＶＥＧＦは、血管内皮細胞にはたらき、細胞の増殖、遊走を促進させたり、血管を新生させたりする作用がある。生体においてＶＥＧＦは、胎生期の心臓の形成時期に強く発現することが認められている。ＶＥＧＦ遺伝子が欠損すると血管系の異常が起こり、胎生期に死亡することが報告されており、ＶＥＧＦは、個体の発達、組織形成において極めて重要なはたらきを持つことが示唆されている。最近では、ＶＥＧＦファミリーの新しいメンバーであるＶＥＧＦ−Ｃが、強力なリンパ管新生因子として皮膚におけるリンパ管の成長を仲介していることが同定された。
【０００９】
ところで、毛包においては、外毛根鞘細胞と毛乳頭細胞とがＶＥＧＦを産生することが知られている（非特許文献３，４参照）。毛包におけるＶＥＧＦの産生阻害は、ヘアサイクルの成長期の遅れと毛包サイズの矮小化とに繋がることが見出され（非特許文献５参照）、このことから毛包の発達や再生にＶＥＧＦが重要であることが示された。これまでに、ＶＥＧＦ産生を促進させる植物エキスとして、ヒルガオ科のアサガオカラクサ属植物（特許文献９参照）、ローヤルゼリー（特許文献１０参照）、Ｌ−グルタミン酸又はその塩、Ｌ−セリン、ＰＣＡ（ピロリドンカルボン酸）又はその塩、モノニトログアヤコールナトリウム、クロレラ（Chlorella vulgaris）の抽出物、ユズ（Citrus junos）の果実の抽出物、ウンシュウミカン（Citrus unshiu）の果皮の抽出物、エイジツ（Rosa multiflora）の果実の抽出物、イチョウ（Ginkgo biloba）の葉の抽出物より選択されるもの（特許文献１１参照）等が知られている。
【特許文献１】特開平１０−２２９９７８号公報
【特許文献２】特開２００６−２１９４０７号公報
【特許文献３】特開２００３−５５１６２号公報
【特許文献４】特開２００２−２４１２９６号公報
【特許文献５】特開２００２−８７９７６号公報
【特許文献６】特開２００２−２４１２９７号公報
【特許文献７】特開２００２−３０８７９０号公報
【特許文献８】特表２００５−４４２０５号公報
【特許文献９】特開２００３−１６０５０３号公報
【特許文献１０】特開２００３−１９２５４１号公報
【特許文献１１】特開２００６−２８２５９７号公報
【非特許文献１】「Trends Genet」，1992年，第8巻，p.56-61
【非特許文献２】「アンチエイジングシリーズ１  白髪・脱毛・育毛の実際」，2005年，p.91-104
【非特許文献３】「J. Invest. dermatol.」，1996年，Vol.106，p.17-23
【非特許文献４】「Arch. Dermatol. Res.」，1998年，Vol.209，p.661-668
【非特許文献５】「J. Clin. Invest.」，2001年，Vol.107，p.409-417
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
上述したように、安全性及び生産性に優れ、日常的に摂取可能であり、かつ安価でありながら高い毛乳頭細胞増殖促進作用、ＦＧＦ−７産生促進作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及びアンドロゲン受容体結合阻害作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有する天然系の各種製剤に対する需要者の要望は極めて高い。また、これらの作用及び効果を有する頭髪化粧料に対する需要者の要望も極めて高い。
【００１１】
しかしながら、従来においては、これらの作用及び効果を有する具体的な有効成分が、知られていないという問題があった。また、具体的な有効成分が知られているものについても、植物由来のものでなかったり、植物由来のものであったとしてもこれらの作用及び効果が十分ではなかったりするという問題があった。なお、植物由来であると、比較的安全性が高いので、日常的に摂取しやすいという利点がある。
【００１２】
そこで、本発明は第一に、安全性の高い天然物の中から毛乳頭細胞増殖促進作用を有するものを見出し、それを有効成分とする毛乳頭細胞増殖促進剤を提供することを目的とする。
【００１３】
本発明は第二に、安全性の高い天然物の中から線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進作用を有するものを見出し、それを有効成分とする線維芽細胞増殖促進因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤を提供することを目的とする。
【００１４】
本発明は第三に、安全性の高い天然物の中から血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用を有するものを見出し、それを有効成分とする血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤を提供することを目的とする。
【００１５】
本発明は第四に、安全性の高い天然物の中からテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を有するものを見出し、それを有効成分とする抗男性ホルモン剤を提供することを目的とする。
【００１６】
本発明は第五に、安全性の高い天然物の中から毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進作用及び血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有するものを見出し、それを有効成分とする育毛剤を提供することを目的とする。
【００１７】
本発明は第六に、安全性の高い天然物の中から毛乳頭細胞増殖促進作用、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進作用、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及びアンドロゲン受容体結合阻害作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有するものを見出し、それを配合した頭髪化粧料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
上記課題を解決するため、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤、抗男性ホルモン剤及び育毛剤は、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。また、本発明の線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ−７）産生促進剤は、金不換、ヒメハギ、小花遠志及び白眉草からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。さらに、本発明の血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤は、金不換、ヒメハギ、小花遠志、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。さらにまた、本発明の頭髪化粧料は、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を配合したことを特徴とする。
【００１９】
本発明の抗男性ホルモン剤においては、上記植物からの抽出物が、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を有し、上記鳳凰木からの抽出物が、アンドロゲン受容体結合阻害作用を有することが好ましい。
【００２０】
ここで、本発明において、「アンドロゲン受容体結合阻害」とは、５α−ＤＨＴとアンドロゲン受容体との結合の阻害を意味し、その阻害様式は特に限定されるものではなく、例えば、競合的拮抗薬、非競合的拮抗薬といったアンタゴニストとしての阻害が考えられる。
【００２１】
なお、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草又は仮鷹爪からの抽出物が、上述した作用及び効果を有することは、従来まったく知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。
【発明の効果】
【００２２】
本発明によれば、天然物である金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有し、安全性に優れた毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ−７）産生促進剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤、抗男性ホルモン剤、育毛剤又は頭髪化粧料を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
以下、本発明について説明する。
〔毛乳頭細胞増殖促進剤，線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ−７）産生促進剤，血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤，抗男性ホルモン剤，育毛剤〕
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤、抗男性ホルモン剤又は育毛剤は、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有する。また、本発明の線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ−７）産生促進剤は、金不換、ヒメハギ、小花遠志及び白眉草からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有する。さらに、本発明の血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤は、金不換、ヒメハギ、小花遠志、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有する。
【００２４】
ここで、本発明において「抽出物」には、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００２５】
本発明において使用する抽出原料は、金不換（キンフカン，学名：Polygala chinensis L.）、ヒメハギ（学名：Polygala japonica Houtt.）、小花遠志（ショウカオンジ，学名：Polygala arvensis Willd）、鳳凰木（ホウオウボク，学名：Delonix regina，Delonix regia）、白眉草（ハクビソウ，学名：Gerberia piloselloides Gerbera）及び仮鷹爪（カヨウソウ，学名：Desmos chinensis Lour.，Desmos cochinchinensis Lour.）からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物である。
【００２６】
金不換（Polygala chinensis L.）は、ヒメハギ科ヒメハギ属に属する草丈１０〜４０ｃｍの１年生草木であり、別名「大金牛草」とも呼ばれ、湖北、湖南、広東、広西等の中国各省に野生しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る金不換の構成部位としては、例えば、葉部、枝部、樹皮部、幹部、茎部、果実部、花部、地上部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは地上部である。
【００２７】
ヒメハギ（Polygala japonica Houtt.）は、ヒメハギ科ヒメハギ属に属する草丈１５ｃｍ程度の多年生草木であって、別名「爪子金」とも呼ばれ、東北、華北、西南等の中国各地方に分布しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得るヒメハギの構成部位としては、例えば、葉部、枝部、樹皮部、幹部、茎部、果実部、花部、地上部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは地上部である。
【００２８】
小花遠志（Polygala avensis Willd）は、ヒメハギ科ヒメハギ属に属する草丈５〜１５ｃｍの１年生草木であり、別名「細金牛草（サイキンギュウソウ）」とも呼ばれ、江西、湖南、広東、広西等に分布しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る小花遠志の構成部位としては、例えば、葉部、枝部、樹皮部、幹部、茎部、果実部、花部、地上部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは地上部である。
【００２９】
鳳凰木（Delonix regina，Delonix regia）は、マメ科ホウオウボク属に属する１５〜２０ｍの高木であり、別名「火炎樹（カエンジュ）」とも呼ばれ、シンガポール、インドネシア、沖縄等では街路樹、緑陰樹として広く植えられており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る鳳凰木の構成部位としては、例えば、葉部、枝部、樹皮部、幹部、茎部、果実部、花部、地上部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは葉部等の地上部である。
【００３０】
白眉草（Gerberia piloselloides Gerbera）は、キク科ガーベラ属に属する植物であり、別名「毛大丁草（モウダイテイソウ）」又は「満地香（マンチコウ）」とも呼ばれ、中国の江蘇省、淅江省、四川省、広西壮族自治区及び広東省等に分布しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る白眉草の構成部位としては、例えば、葉部、茎部、果実部、花部、地上部、根部、全草又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは全草である。
【００３１】
仮鷹爪（Desmos chinensis Lour.，Desmos cochinchinensis Lour.）は、バンレイシ科デスモス属に属する樹高３ｍ程度の低木であり、別名「酒餅葉」とも呼ばれ、海南、広東、広西等の中国各省に野生しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る仮鷹爪の構成部位としては、例えば、葉部、枝部、樹皮部、幹部、茎部、果実部、花部等の地上部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは葉部である。
【００３２】
金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草又は仮鷹爪からの抽出物に含有される毛乳頭細胞増殖促進作用、ＦＧＦ−７産生促進作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を有する物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草又は仮鷹爪からこれらの作用を有する抽出物を得ることができる。
【００３３】
例えば、上記植物を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより、毛乳頭細胞増殖促進作用、ＦＧＦ−７産生促進作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を有する抽出物を得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を使用して行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草又は仮鷹爪の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００３４】
抽出溶媒としては、極性溶媒を用いるのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００３５】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００３６】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００３７】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。
【００３８】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下（約９５℃以下）で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００３９】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでも毛乳頭細胞増殖促進剤、ＦＧＦ−７産生促進剤、ＶＥＧＦ産生促進剤、抗男性ホルモン剤又は育毛剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【００４０】
金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草又は仮鷹爪からの抽出物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、頭髪化粧料に配合する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。
【００４１】
以上のようにして得られる金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草又は仮鷹爪からの抽出物は、毛乳頭細胞増殖促進作用、抗男性ホルモン作用又は育毛作用を有しているため、それぞれの作用を利用して毛乳頭細胞増殖促進剤、抗男性ホルモン剤又は育毛剤の有効成分として用いることができる。
【００４２】
また、金不換、ヒメハギ、小花遠志又は白眉草からの抽出物は、ＦＧＦ−７産生促進作用を有しているため、その作用を利用してＦＧＦ−７産生促進剤の有効成分として用いることができる。なお、ＦＧＦ−７産生促進作用を有する金不換、ヒメハギ、小花遠志又は白眉草からの抽出物は、その作用を利用してＦＧＦ−７の欠乏に起因する疾患（例えば、創傷等）の予防・治療剤の有効成分としても用いることができる。
【００４３】
さらに、金不換、ヒメハギ、小花遠志、白眉草又は仮鷹爪からの抽出物は、ＶＥＧＦ産生促進作用を有しているため、その作用を利用してＶＥＧＦ産生促進剤の有効成分として用いることができる。なお、ＶＥＧＦ産生促進作用を有する金不換、ヒメハギ、小花遠志、白眉草又は仮鷹爪からの抽出物は、その作用を利用してＶＥＧＦの欠乏に起因する疾患（例えば、冠動脈疾患、閉塞性抹消動脈硬化症、軟骨損傷、血管形成不全、虚血性脚部疾患等）の予防・治療剤の有効成分としても用いることができる。
【００４４】
なお、本発明においては、上記植物のうちの１種の植物からの抽出物を上記有効成分として使用してもよいし、上記植物のうちの２種以上の植物からの抽出物を混合して上記有効成分として使用してもよい。上記植物のうちの２種以上の植物からの抽出物を混合して上記有効成分として用いる場合、その配合比は、それらの作用の程度に応じて適宜決定すればよい。
【００４５】
ここで、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有する抗男性ホルモン作用は、例えば、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有するテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用に基づいて発揮されてもよいし、鳳凰木からの抽出物が有するアンドロゲン受容体結合阻害作用に基づいて発揮されてもよいし、両作用に基づいて発揮されてもよい。ただし、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有する抗男性ホルモン作用は、上記作用に基づいて発揮される抗男性ホルモン作用に限定されるものではない。なお、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を有する金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物は、その作用を利用してテストステロン５α−レダクターゼ阻害剤の有効成分としても用いることができる。また、アンドロゲン受容体結合阻害作用を有する鳳凰木からの抽出物は、その作用を利用してアンドロゲン受容体結合阻害剤の有効成分としても用いることができる。
【００４６】
金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有する育毛作用は、例えば、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＦＧＦ−７産生促進作用及びＶＥＧＦ産生促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用に基づいて発揮される。ただし、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有する育毛作用は、上記作用に基づいて発揮される育毛作用に限定されるものではない。
【００４７】
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤、抗男性ホルモン剤又は育毛剤は、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物のみからなるものであってもよいし、上記抽出物を製剤化したものであってもよい。また、本発明のＦＧＦ−７産生促進剤は、金不換、ヒメハギ、小花遠志及び白眉草からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物のみからなるものであってもよいし、上記抽出物を製剤化したものであってもよい。さらに、本発明のＶＥＧＦ産生促進剤は、金不換、ヒメハギ、小花遠志、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物のみからなるものであってもよいし、上記抽出物を製剤化したものであってもよい。
【００４８】
金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を使用して、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物は、他の組成物（例えば、後述する頭髪化粧料等）に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。
【００４９】
なお、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤、ＦＧＦ−７産生促進剤、ＶＥＧＦ産生促進剤、抗男性ホルモン剤又は育毛剤は、必要に応じて、毛乳頭細胞増殖促進作用、ＦＧＦ−７産生促進作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、抗男性ホルモン作用又は育毛作用を有する他の天然抽出物を配合して有効成分として用いることができる。
【００５０】
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤、ＦＧＦ−７産生促進剤、ＶＥＧＦ産生促進剤、抗男性ホルモン剤又は育毛剤の投与方法としては、一般に経皮投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防、治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。また、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤、ＦＧＦ−７産生促進剤、ＶＥＧＦ産生促進剤、抗男性ホルモン剤又は育毛剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。
【００５１】
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有する毛乳頭細胞増殖促進作用を通じて、毛乳頭細胞を活性化し、毛包上皮系細胞の増殖・分化及び毛髪の形成を促進することができるとともに、毛周期において成長期から退行期及び休止期へと移行するのを防ぎ、成長期を延長させることができる。これにより、脱毛症を予防、治療又は改善することができる。本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤が予防、治療又は改善可能な脱毛症としては、例えば、男性型脱毛症、円形脱毛症、トリコチロマニア等が挙げられる。ただし、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、これらの用途以外にも毛乳頭細胞増殖促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５２】
本発明のＦＧＦ−７産生促進剤は、金不換、ヒメハギ、小花遠志及び白眉草からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有するＦＧＦ−７産生促進作用を通じて、毛乳頭細胞における線維芽細胞増殖因子−７の産生を促進し、脱毛症等を予防、治療又は改善することができるとともに、細胞全般の分化・増殖・成長因子、組織障害時に働く組織修復因子、生体の恒常性を維持するための代謝調節因子等としても利用することができる。ただし、本発明のＦＧＦ−７産生促進剤は、これらの用途以外にもＦＧＦ−７産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５３】
本発明のＶＥＧＦ産生促進剤は、金不換、ヒメハギ、小花遠志、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有するＶＥＧＦ産生促進作用を通じて、毛乳頭細胞での血管内皮増殖因子の産生を促進し、毛乳頭細胞において毛細血管を新生することができる。これにより、発毛・育毛を促進し、脱毛症等を予防、治療又は改善することができる。また、本発明のＶＥＧＦ産生促進剤は、血管内皮細胞の増殖・遊走促進因子、血管新生促進因子、血液凝固因子、血圧調節因子、皮膚におけるリンパ管の成長因子等としても利用することができる。ただし、本発明のＶＥＧＦ産生促進剤は、これらの用途以外にもＶＥＧＦ産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５４】
本発明の抗男性ホルモン剤は、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有するテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及び／又は鳳凰木からの抽出物が有するアンドロゲン受容体結合阻害作用を通じて、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビ等）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の抗男性ホルモン剤は、これらの用途以外にもテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５５】
本発明の育毛剤は、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有する毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＦＧＦ−７産生促進作用及びＶＥＧＦ産生促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、脱毛症等を予防、治療又は改善することができ、特に男性型脱毛症の予防、治療又は改善に好適である。ただし、本発明の育毛剤は、これらの用途以外にも毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、ＦＧＦ−７産生促進作用及びＶＥＧＦ産生促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５６】
〔頭髪化粧料〕
金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物は、毛乳頭細胞増殖促進作用、ＦＧＦ−７産生促進作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、抗男性ホルモン作用又は育毛作用を有しており、頭髪又は頭皮に適用した場合の使用感と安全性とに優れているため、頭髪化粧料に配合するのに好適である。この場合、頭髪化粧料には、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が配合されていてもよいし、当該抽出物から製剤化した毛乳頭細胞増殖促進剤、ＦＧＦ−７産生促進剤、ＶＥＧＦ産生促進剤、抗男性ホルモン剤又は育毛剤が配合されていてもよい。金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物、毛乳頭細胞増殖促進剤、ＦＧＦ−７産生促進剤、ＶＥＧＦ産生促進剤、抗男性ホルモン剤又は育毛剤を頭髪化粧料に配合することによって、頭髪化粧料に毛乳頭細胞増殖促進作用、ＦＧＦ−７産生促進作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、抗男性ホルモン作用又は育毛作用を付与することができる。
【００５７】
金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を配合し得る頭髪化粧料の種類は、特に限定されるものではなく、例えば、ヘアートニック、ヘアーローション、ヘアークリーム、整髪剤、シャンプー、リンス、トリートメント等が挙げられる。
【００５８】
金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を頭髪化粧料に配合する場合、その配合量は、頭髪化粧料の種類に応じて適宜調整することができるが、好適な配合率は、標準的な抽出物に換算して約０．０００１〜１０質量％であり、特に好適な配合率は、標準的な抽出物に換算して約０．００１〜１質量％である。
【００５９】
本発明の頭髪化粧料は、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有する毛乳頭細胞増殖促進作用、ＦＧＦ−７産生促進作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、抗男性ホルモン作用又は育毛作用を妨げない限り、通常の頭髪化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等を併用することができる。このように併用することで、より一般性のある製品となり、また、併用された上記成分との間の相乗作用が通常期待される以上の優れた効果をもたらすことがある。
【００６０】
なお、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤、ＦＧＦ−７産生促進剤、ＶＥＧＦ産生促進剤、抗男性ホルモン剤、育毛剤又は頭髪化粧料は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物、好ましくは哺乳類動物等に対して適用することもできる。
【実施例】
【００６１】
以下、製造例、試験例及び配合例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。
【００６２】
〔製造例１〕金不換地上部抽出物の製造
金不換の地上部の粗粉砕物１００ｇに抽出溶媒１０００ｍＬを加え、穏やかに攪拌しながら８０℃にて２時間保ち、熱時濾過した。得られた抽出液を４０℃で減圧下にて濃縮し、減圧乾燥機で乾燥して金不換地上部抽出物を得た（試料１〜３）。抽出溶媒として、水、５０容量％エタノール（水とエタノールとの容量比＝１：１）、８０容量％エタノール（水とエタノールとの容量比＝１：４）を用いたときの各抽出物の収率を表１に示す。
【００６３】
【表１】
0005676837.tif 000002
【００６４】
〔製造例２〕ヒメハギ地上部抽出物の製造
ヒメハギの地上部の粗粉砕物１００ｇに抽出溶媒１０００ｍＬを加え、穏やかに攪拌しながら８０℃にて２時間保ち、熱時濾過した。得られた抽出液を４０℃で減圧下にて濃縮し、減圧乾燥機で乾燥してヒメハギ地上部抽出物を得た（試料４〜６）。抽出溶媒として、水、５０容量％エタノール（水とエタノールとの容量比＝１：１）、８０容量％エタノール（水とエタノールとの容量比＝１：４）を用いたときの各抽出物の収率を表２に示す。
【００６５】
【表２】
0005676837.tif 000003
【００６６】
〔製造例３〕小花遠志地上部抽出物の製造
小花遠志の地上部の粗粉砕物１００ｇに抽出溶媒１０００ｍＬを加え、穏やかに攪拌しながら８０℃にて２時間保ち、熱時濾過した。得られた抽出液を４０℃で減圧下にて濃縮し、減圧乾燥機で乾燥して小花遠志地上部抽出物を得た（試料７〜９）。抽出溶媒として、水、５０容量％エタノール（水とエタノールとの容量比＝１：１）、８０容量％エタノール（水とエタノールとの容量比＝１：４）を用いたときの各抽出物の収率を表３に示す。
【００６７】
【表３】
0005676837.tif 000004
【００６８】
〔製造例４〕白眉草全草抽出物の製造
白眉草の全草の粗粉砕物１００ｇに抽出溶媒１０００ｍＬを加え、穏やかに攪拌しながら８０℃にて２時間保ち、熱時濾過した。得られた抽出液を４０℃で減圧下にて濃縮し、減圧乾燥機で乾燥して白眉草全草抽出物を得た（試料１０〜１２）。抽出溶媒として、水、５０容量％エタノール（水とエタノールとの容量比＝１：１）、８０容量％エタノール（水とエタノールとの容量比＝１：４）を用いたときの各抽出物の収率を表４に示す。
【００６９】
【表４】
0005676837.tif 000005
【００７０】
〔製造例５〕鳳凰木葉部抽出物
鳳凰木の葉部の粗粉砕物１００ｇに抽出溶媒１０００ｍＬを加え、穏やかに攪拌しながら８０℃にて２時間保ち、熱時濾過した。得られた抽出液を４０℃で減圧下にて濃縮し、減圧乾燥機で乾燥して鳳凰木葉部抽出物を得た（試料１３〜１５）。抽出溶媒として、水、５０容量％エタノール（水とエタノールとの容量比＝１：１）、８０容量％エタノール（水とエタノールとの容量比＝１：４）を用いたときの各抽出物の収率を表５に示す。
【００７１】
【表５】
0005676837.tif 000006
【００７２】
〔製造例６〕仮鷹爪葉部抽出物
仮鷹爪の葉部の粗粉砕物１００ｇに抽出溶媒１０００ｍＬを加え、穏やかに攪拌しながら８０℃にて２時間保ち、熱時濾過した。得られた抽出液を４０℃で減圧下にて濃縮し、減圧乾燥機で乾燥して仮鷹爪葉部抽出物を得た（試料１６〜１８）。抽出溶媒として、水、５０容量％エタノール（水とエタノールとの容量比＝１：１）、８０容量％エタノール（水とエタノールとの容量比＝１：４）を用いたときの各抽出物の収率を表６に示す。
【００７３】
【表６】
0005676837.tif 000007
【００７４】
〔試験例１〕毛乳頭細胞増殖促進作用試験
製造例１により得られた金不換地上部抽出物（試料１〜３）、製造例２により得られたヒメハギ地上部抽出物（試料４〜６）、製造例３により得られた小花遠志地上物抽出物（試料７〜９）、製造例４により得られた白眉草全草抽出物（試料１０〜１２）、製造例５により得られた鳳凰木葉部抽出物（試料１３〜１５）及び製造例６により得られた仮鷹爪葉部抽出物（試料１６〜１８）について、以下のようにして毛乳頭細胞増殖促進作用を試験した。
【００７５】
正常ヒト頭髪毛乳頭細胞（TOYOBO社製，CA60205）を、毛乳頭細胞増殖培地（TOYOBO社製，TPGM-250）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、１０％ＦＢＳ（Fetal Bovine Serum）含有ＤＭＥＭ（Dulbecco's modified minimal essential medium）培地を用いて１．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように希釈した後、コラーゲンコートした９６ウェルプレートに１ウェルあたり２００μＬずつ播種し、３日間培養した。培養後、培地を抜き、各試料（試料１〜１８）を無血清ＤＭＥＭに溶解した試料溶液（試料濃度は表７を参照）を各ウェルに２００μＬずつ添加し、さらに４日間培養した。
【００７６】
毛乳頭細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイを用いて測定した。培養終了後、培地を除き、無血清ＤＭＥＭに溶解したＭＴＴ（(3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyltetrazolium Bromide，同仁化学研究所社製，終濃度０．４ｍｇ／ｍＬ）を、各ウェルに１００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。なお、コントロールとして、試料溶液の代わりに無血清ＤＭＥＭを添加した場合についても同様の測定を行った。得られた結果から、下記式に基づいて、毛乳頭細胞増殖促進率（％）を算出した。
【００７７】
毛乳頭細胞増殖促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時の吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加時の吸光度」を表す。
上記試験の結果を表７に示す。
【００７８】
【表７】
0005676837.tif 000008
【００７９】
表７に示すように、金不換地上部抽出物、ヒメハギ地上部抽出物、小花遠志地上部抽出物、白眉草全草抽出物、鳳凰木葉部抽出物及び仮鷹爪葉部抽出物は、優れた毛乳頭細胞増殖促進作用を有することが確認された。また、各抽出物が有する毛乳頭細胞増殖作用は、各抽出物の濃度に依存して変化するため、毛乳頭細胞増殖促進作用の程度は、各抽出物の濃度によって調節可能であることが確認された。
【００８０】
〔試験例２〕テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用試験
製造例１により得られた金不換地上部抽出物（試料１〜３）、製造例２により得られたヒメハギ地上部抽出物（試料４〜６）、製造例３により得られた小花遠志地上物抽出物（試料７〜９）、製造例４により得られた白眉草全草抽出物（試料１０〜１２）、製造例５により得られた鳳凰木葉部抽出物（試料１３〜１５）及び製造例６により得られた仮鷹爪葉部抽出物（試料１６〜１８）について、以下のようにしてテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を試験した。
【００８１】
蓋付Ｖ底試験管にて、プロプレングリコールで調製した４．２ｍｇ／ｍＬのテストステロン（和光純薬工業社製）２０μＬと、１ｍｇ／ｍＬのＮＡＤＰＨを含有する５ｍｍｏｌ／ｍＬのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．１３）８２５μＬとを混合した。
【００８２】
さらに、各試料（試料１〜１８）のエタノール水溶液８０μＬ及びＳ−９（ラット肝臓ホモジネート，オリエンタル酵母工業社製）７５μＬを加えて混合し、３７℃にて３０分間インキュベートした。その後、塩化メチレン１ｍＬを加えて反応を停止させた。これを遠心分離し（１６００×ｇ，１０分間）、塩化メチレン層を分取して、分取した塩化メチレン層について、下記の条件にてガスクロマトグラフィー分析をし、３α−アンドロスタンジオール、５α−ジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）及びテストステロンの濃度（μｇ／ｍＬ）を定量した。コントロールとして、試料溶液の代わりに試料溶媒を同量（８０μＬ）使用して同様に処理し、ガスクロマトグラフィー分析をした。
【００８３】
＜ガスクロマトグラフィー条件＞
使用装置：Shimadzu GC-7A（島津製作所社製）
カラム：ＤＢ−１７０１（内径：０．５３ｍｍ，長さ：３０ｍ，膜厚：１．０μｍ，J&W Scientific社製）
カラム温度：２４０℃
注入口温度：３００℃
検出器：ＦＩＤ
試料注入量：１μＬ
スプリット比：１：２
キャリアガス：窒素ガス
キャリアガス流速：３ｍＬ／ｍｉｎ
【００８４】
３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ及びテストステロンの濃度の定量は、下記の方法により行った。
３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ及びテストステロンの標準品を塩化メチレンに溶解し、当該溶液についてガスクロマトグラフィー分析をし、これらの化合物の濃度（μｇ／ｍＬ）及びピーク面積から、ピーク面積と化合物の濃度との対応関係を予め求めておいた。そして、テストステロンとＳ−９との反応後の３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ及びテストステロンそれぞれのピーク面積あたりの濃度（μｇ／ｍＬ）を、予め求めておいた対応関係を利用して、下記式（１）に基づき、算出した。
【００８５】
Ａ＝Ｂ×Ｃ／Ｄ・・・（１）
式中、Ａは「３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ又はテストステロンの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｂは「３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ又はテストステロンのピーク面積」を表し、Ｃは「標準品の濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｄは「標準品のピーク面積」を表す。
【００８６】
式（１）に基づいて算出された化合物濃度を使用して、下記式（２）に基づき、変換率（テストステロン５α−レダクターゼによりテストステロンが還元されて生成した３α−アンドロスタンジオール及び５α−ＤＨＴの濃度と、テストステロンの初期濃度との濃度比）を算出した。
変換率(％)＝(Ｅ＋Ｆ)／(Ｅ＋Ｆ＋Ｇ)・・・（２）
式中、Ｅは「３α−アンドロスタンジオールの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｆは「５α−ＤＨＴの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｇは「テストステロンの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表す。
【００８７】
式（２）に基づいて算出された変換率を用いて、下記式（３）に基づき、テストステロン５α−レダクターゼ阻害率（％）を算出した。
阻害率(％)＝(１−Ｈ／Ｉ)×１００・・・（３）
式中、Ｈは「試料添加時の変換率」を表し、Ｉは「コントロールの変換率」を表す。
【００８８】
試料濃度を段階的に減少させて上記阻害率の測定を行い、テストステロン５α−レダクターゼの阻害率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。
上記試験の結果を表８に示す。
【００８９】
【表８】
0005676837.tif 000009
【００９０】
表８に示すように、金不換地上部抽出物、ヒメハギ地上部抽出物、小花遠志地上部抽出物、白眉草全草抽出物、鳳凰木葉部抽出物及び仮鷹爪葉部抽出物は、優れたテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を有することが確認された。また、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用の程度は、各抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００９１】
〔試験例３〕アンドロゲン受容体結合阻害作用
製造例５により得られた鳳凰木葉部抽出物（試料１３〜１５）について、以下のようにしてアンドロゲン受容体結合阻害作用を試験した。
【００９２】
マウス自然発生乳がん（シオノギ癌，ＳＣ−１１５）よりクローニングされたＳＣ−３細胞を、２％ＤＣＣ−ＦＢＳ及び１０−８ｍｏｌ／Ｌテストステロンを含有するＭＥＭ培地（ＭＥＭ−２培地）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように２％ＤＣＣ−ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地で希釈し、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。
【００９３】
培養終了後、培地を抜き、１０−９ｍｏｌ／ＬのＤＨＴを含む０．５％ＢＳＡ含有ＨａｍＦ１２＋ＭＥＭ培地（ＨＭＢ培地）に溶解した試料（試料１３〜１５，試料濃度；５０μｇ／ｍＬ）を１００μＬ添加し、４８時間培養した。その後、終濃度０．４ｇ／ｍＬでテストステロンを含有しないＭＥＭ−２培地に溶解したＭＴＴを各ウェルに１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出したブルーホルマザンを含有する２−プロパノールについて、ブルーホルマザンの吸収極大点がある５７０ｎｍの吸光度を測定した。
【００９４】
なお、付着細胞の影響を補正するため、同時に６５０ｎｍの吸光度も測定し、両吸光度の差をもってブルーホルマザンの生成量に比例する値とした（下記アンドロゲン受容体結合阻害率の計算式における吸光度は、この補正済み吸光度である）。
【００９５】
上記と並行して、試料単独でＳＣ−３細胞に及ぼす影響をみるため、ＨＭＢ培地にＤＨＴを添加せず試料のみを添加して、同様の培養と測定を行った。さらに、コントロールとして、試料及びＤＨＴを添加しないＨＭＢ培地で培養した場合、及び試料を添加せず１０−９ｍｏｌ／ＬのＤＨＴのみを添加したＨＭＢ培地で培養した場合についても同様の測定を行った。得られた結果から、下記式に基づいて、アンドロゲン受容体結合阻害率（％）を算出した。
【００９６】
アンドロゲン受容体結合阻害率(％)＝{１−(Ｃ−Ｄ)／(Ａ−Ｂ)}×１００
式中、Ａは「ＤＨＴ添加・試料無添加の場合の吸光度」を表し、Ｂは「ＤＨＴ無添加・試料無添加の場合の吸光度」を表し、Ｃは「ＤＨＴ添加・試料添加の場合の吸光度」を表し、Ｄは「ＤＨＴ無添加・試料添加の場合の吸光度」を表す。
上記試験の結果を表９に示す
【００９７】
【表９】
0005676837.tif 000010
【００９８】
表９に示すように、鳳凰木葉部抽出物は、優れたアンドロゲン受容体結合阻害作用を有することが確認された。
【００９９】
〔試験例４〕線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）及び血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）ｍＲＮＡ発現促進作用試験
製造例１により得られた金不換地上部５０容量％エタノール抽出物（試料２）、製造例２により得られたヒメハギ地上部５０容量％エタノール抽出物（試料５）、製造例３により得られた小花遠志地上物５０容量％エタノール抽出物（試料８）、製造例４により得られた白眉草全草５０容量％エタノール抽出物（試料１１）及び製造例６により得られた仮鷹爪葉部５０容量％エタノール抽出物（試料１７）について、以下のようにして線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）及び血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。なお、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進作用及び血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用の評価は、ｍＲＮＡの発現を評価することによって行った。
【０１００】
（１）一本鎖ＤＮＡの調製
正常ヒト頭髪毛乳頭細胞（TOYOBO社製，CA60205）を、毛乳頭細胞増殖培地（TOYOBO社製，TPGM-250）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２×１０５個／ｍＬの細胞密度になるように１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地で希釈した後、直径６０ｍｍシャーレに５ｍＬずつ播種し、一晩培養した。
【０１０１】
培養終了後、試料を添加した無血清ＤＭＥＭ培地に交換し６時間培養した後、細胞を１ｍＬのＲＮＡ抽出用試薬（ISOGEN，株式会社ニッポンジーン社製）で溶解し、クロロホルムを２００μＬ添加後、遠心（１２０００回転、４℃、１５分間）にて上層ＲＮＡ層を単離し、さらにイソプロパノールで濃縮した。濃縮沈殿させた総ＲＮＡをＴＥ溶液（１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ／１ｍＭのＥＤＴＡ，ｐＨ８．０）に溶解して総ＲＮＡ標品とし、ＰＣＲ装置（TaKaRa PCR Themal Cycler MP，タカラバイオ社製）及びリアルタイムＰＣＲキット（TaKaRa ExScript RT reagent Kit，RR035A，タカラバイオ社製）を用いて、ＦＧＦ−７及びＶＥＧＦｍＲＮＡ発現量を測定するための鋳型に使用する一本鎖ＤＮＡを合成した。
【０１０２】
（２）サイバーグリーン法を用いたリアルタイム−ＰＣＲ反応
ＦＧＦ−７遺伝子増幅用プライマーとして下記の配列を有するセンスプライマー及びアンチセンスプライマーを作製した（タカラバイオ社製）。
センスプライマー：5'-tctgtcgaacacagtggtacctgag-3'
アンチセンスプライマー：5'-gccactgtcctgatttccatga-3'
【０１０３】
ＶＥＧＦ遺伝子増幅用プライマーとして下記の配列を有するセンスプライマー及びアンチセンスプライマーを作製した（タカラバイオ社製）。
センスプライマー：5'-gagccttgccttgctgctctac-3'
アンチセンスプライマー：5'-caccagggtctcgattggatg-3'
【０１０４】
また、内部標準としてのＧ３ＰＤＨ遺伝子増幅用プライマーとして下記の配列を有するセンスプライマー及びアンチセンスプライマーを作製した（タカラバイオ社製）。
センスプライマー：5'-gcaccgtcaaggctgagaac-3'
アンチセンスプライマー：5'-atggtggtgaagacgccagt-3'
【０１０５】
「試料無添加」、「試料添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基に調製した一本鎖ＤＮＡ及び検量線作成用一本鎖ＤＮＡ溶液を用いて、リアルタイムＰＣＲ装置（Real Time PCR System Smart Cycler II，Cepheid社製）及びリアルタイムＰＣＲキット（SYBR Premix Ex TaqTM，RR041A，タカラバイオ社製）でリアルタイムＰＣＲ反応を行った。なお、検量線作成用一本鎖ＤＮＡ溶液は、原液濃度の相対値を便宜的に「１００００」とし、以降５倍希釈を繰り返して濃度値「２０００」、「４００」、「８０」及び「１６」の５段階の希釈系列とした。反応は、９５℃で１０秒間保温の後、９５℃で５秒間、６０℃で２０秒間の反応を４５サイクル繰り返し、１サイクルごとにサイバーグリーン色素の発光量を測定した。
【０１０６】
（３）解析
各サイクルのサイバーグリーン色素の発光量からＦＧＦ−７、ＶＥＧＦ及びＧ３ＰＤＨのそれぞれをコードするＤＮＡ断片の増幅曲線を作成した。検量線作成用一本鎖ＤＮＡ溶液の希釈系列の増幅曲線から横軸に濃度、縦軸に増幅曲線の２次導関数が最大となるサイクル数をとった検量線を作成した。各発現定量用サンプルについては増幅曲線の２次導関数が最大となるサイクル数を検量線上にプロットし、相対的な発現量を算出した。ＦＧＦ−７及びＶＥＧＦ発現量は、同一サンプルにおけるＧ３ＰＤＨの発現量の値で補正を行った後、さらに「試料無添加」の補正値を１００とした時の「試料添加」の補正値を算出した。ＦＧＦ−７ｍＲＮＡ発現促進率（％）及びＶＥＧＦｍＲＮＡ発現促進率（％）は、下記式に基づいて算出した。
【０１０７】
ｍＲＮＡ発現促進率(％)＝Ｂ／Ａ×１００
式中、Ａは「試料無添加時の補正値」を表し、Ｂは「試料添加時の補正値」を表す。
上記試験の結果を表１０に示す。
【０１０８】
【表１０】
0005676837.tif 000011
【０１０９】
表１０に示すように、金不換地上部抽出物、ヒメハギ地上部抽出物、小花遠志地上部抽出物及び白眉草全草抽出物は、優れたＦＧＦ−７産生促進作用を有することが確認された。また、金不換地上部抽出物、ヒメハギ地上部抽出物、小花遠志地上部抽出物、白眉草全草抽出物及び仮鷹爪葉部抽出物は、優れたＶＥＧＦ産生促進作用を有することが確認された。
【０１１０】
〔配合例１〕
下記組成の養毛ヘアートニックを常法により製造した。
金不換５０容量％エタノール抽出物（製造例１）          ０．５ｇ
白眉草８０容量％エタノール抽出物（製造例４）          ０．３ｇ
塩酸ピリドキシン                                      ０．１ｇ
レゾルシン                                            ０．０１ｇ
Ｄ−パントテニルアルコール                            ０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム                            ０．１ｇ
Ｌ−メントール                                        ０．０５ｇ
１，３−ブチレングリコール                            ４．０ｇ
ニンジンエキス                                        ０．２ｇ
エタノール                                          ２５．０ｇ
香料                                                適量
精製水                                残部（全量を１００ｇとする）
【０１１１】
〔配合例２〕
下記組成の養毛ヘアートニックを常法により製造した。
ヒメハギ８０容量％エタノール抽出物（製造例２）        ０．４ｇ
鳳凰木５０容量％エタノール抽出物（製造例５）          ０．３ｇ
仮鷹爪５０容量％エタノール抽出物（製造例６）          ０．３ｇ
酢酸トコフェロール                                  適量
セファラチン                                          ０．００２ｇ
イソプロピルメチルフェノール                          ０．１ｇ
ヒアルロン酸ナトリウム                                ０．１５ｇ
グリセリン                                          １５．０ｇ
エタノール                                          １５．０ｇ
香料                                                適量
キレート剤（エデト酸ナトリウム）                    適量
防腐剤（ヒノキチオール）                            適量
可溶化剤（ポリオキシエチレンセチルエーテル）        適量
精製水                                残部（全量を１００ｇとする）
【０１１２】
〔配合例３〕
下記組成の育毛シャンプーを常法により製造した。
小花遠志水抽出物（製造例３）                          ０．２ｇ
白眉草水抽出物（製造例４）                            ０．３ｇ
ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム                １０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン                  １０．０ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム    ２０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド                        ４．０ｇ
プロピレングリコール                                  ２．０ｇ
香料                                                適量
精製水                                残部（全量を１００ｇとする）
【０１１３】
〔配合例４〕
下記組成の育毛シャンプーを常法により製造した。
金不換水抽出物（製造例１）                            ０．４ｇ
鳳凰木５０容量％エタノール抽出物（製造例５）          ０．３ｇ
仮鷹爪水抽出物（製造例６）                            ０．３ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム    ３０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン                  ３０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム                ２０．０ｇ
ヤシ油ジエタノールアミド                              ３．０ｇ
ジステアリン酸エチレングリコール                      ２．０ｇ
香料                                                適量
防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）                    ０．１５ｇ
１，３−ブチレングリコール                            ３．０ｇ
精製水                                残部（全量を１００ｇとする）
【産業上の利用可能性】
【０１１４】
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤、ＦＧＦ−７産生促進剤、ＶＥＧＦ産生促進剤、抗男性ホルモン剤、育毛剤及び頭髪化粧料は、脱毛症等の予防、治療又は改善に大きく貢献できる。