(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
たんぱく質を構成するアミノ酸である、リジン（Lysine）、ヒスチジン（Histidine）、アスパラギン酸（Aspartic acid）、アラニン（Alanine）、グリシン（Glycine）の中の１以上のアミノ酸を生合成するラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株（寄託番号：ＮＩＴＥ  Ｐ−01946）である乳酸菌。
【請求項２】
請求項１に記載の乳酸菌を培地に接種し、培養を行うことを特徴とするアミノ酸生合成能を有する乳酸菌菌体の培養物の製造方法。
【請求項３】
パイナップル果実を前記の請求項１又は請求項２に記載のラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株乳酸菌及びその培養物により発酵させて得られる醗酵組成物及びその醗酵エキス。
【請求項４】
パイナップル果汁を前記の請求項１又は請求項２に記載のラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株乳酸菌及びその培養物により発酵させて得られる醗酵組成物及びその醗酵エキス。
【請求項５】
前記の請求項３又は請求項４に記載のラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株乳酸菌により発酵させて得られる醗酵組成物及びその醗酵エキスを用いた飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規乳酸菌株、該乳酸菌株を用いて得られる発酵組成物及びその醗酵エキスに関する。
【背景技術】
【０００２】
沖縄県は亜熱帯地域に属し，温暖で雨の多い気候などの影響から、その気候に適応してきた多種多様な植物や動物が生息しており、沖縄県に生息する微生物群においても多様性がみられ、それらの微生物の中でも昔から一般に多くの発酵食品，健康食品等に利用されている乳酸菌においても着目を集めている。
【０００３】
近年では乳酸菌を摂取することで整腸作用を示すことや、抗酸化作用、免疫調節作用、血圧降下作用を示すことなどが報告され、乳酸発酵食品のプロバイオティクス作用が注目されている。
【０００４】
特開２００８−５４５５５号公報では、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）高生産能を有する乳酸菌、当該乳酸菌を使用するＧＡＢＡの製造方法およびＧＡＢＡ含有乳酸発酵食品の製造方法、ならびに当該乳酸菌より得られるグルタミン酸脱炭酸酵素（ＧＡＤ）およびそれをコードする核酸を提供することを目的とし、ＧＡＢＡ高生産能を有する新規乳酸菌Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．Ｌ１３（ＮＩＴＥ  Ｐ−２５３）、当該乳酸菌を使用するＧＡＢＡの製造方法およびＧＡＢＡ含有乳酸発酵食品の製造方法、ならびに当該乳酸菌より得られるＧＡＤおよびそれをコードする核酸について開示されている。
【０００５】
また、特開２００６−２６２７２４号公報では、タンパク質を高発現できる乳酸菌、より具体的には、より広範な乳酸菌株においてタンパク質を高発現するために適切なプロモーターを有する乳酸菌を提供することを目的として、本タンパク質高発現乳酸菌は、乳酸菌由来のプロモーター配列とＳ−ｌａｙｅｒタンパク質遺伝子の５’−非翻訳領域配列とが結合された高発現用プロモーター、および該高発現用プロモーターの制御下に連結された目的のタンパク質をコードするＤＮＡを有する。好適には、Ｓ−ｌａｙｅｒタンパク質は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ由来である。また、目的のタンパク質をコードするＤＮＡは、分泌シグナル配列または表層提示用配列と連結されていてもよい。
【０００６】
また、特開２００４−３５７５３５号公報では、短期間に効率よく高濃度のγ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）を産生し、高い免疫増強効果を有する新規乳酸菌の提供を目的とし、魚醤油に由来し、ＧＡＢＡ産生能を有し、免疫増強効果を有するラクトバチルスｓｐ．Ｙ−３（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９３１７） 。この菌株は大豆抽出液（ 大豆煮汁） によってＧＡＢＡの産生及び免疫増強効果が促進される。この乳酸菌培養物を添加して血圧上昇抑制等薬理効果のある食品を得ることができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００８−５４５５５号公報
【特許文献２】特開２００６−２６２７２４号公報
【特許文献３】特開２００４−３５７５３５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
このように、ＧＡＢＡの産生、タンパク質の発現など、種々のプロバイオティクス作用が発揮される乳酸菌が開示されている。
【０００９】
乳酸菌のゲノムサイズは通常１．７〜３．３Mbであり、自由生活性の細菌ゲノムとしては、比較的小さい。これは多くの生合成系の遺伝子群を欠失しているためであり、とくに乳酸菌ゲノムはTCA回路を構成する遺伝子の多くを欠失しているため栄養要求性が高い。
そのため乳酸菌は、解糖系を駆使することでエネルギーを確保し、溜まったピルビン酸を乳酸へと変換し菌体外へ放出する。
【００１０】
また、TCA回路はアミノ酸合成に必要な中間体の供給源であり、TCA回路を失った乳酸菌ゲノムはアミノ酸合成系の遺伝子の多くを欠失している。その代り、アミノ酸を外部から獲得するために、ペプチターゼ、アミノ酸トランスポーター等をコードする遺伝子が多くある。
【００１１】
また、アミノ酸とは、一般には、１分子中にアミノ基とカルボキシル基をもつ化合物の総称として用いられるが、アミノ酸の種類によっては、アミノ基はイミノ基である場合もあり、また、カルボキシル基でなく、スルフォノ基、ホスホノ基である場合もある。
【００１２】
アミノ酸は、自然界に遊離の形でも存在するほか、他のアミノ酸と結合してペプチドを形成している場合もある。しかし、大部分のアミノ酸は、生物のからだを構成するたんぱく質（ポリペプチド）の構成成分として存在している。食品も、大部分は生物体やその代謝産物であるので、食品に含まれるアミノ酸も、大部分はたんぱく質を構成するアミノ酸である。
【００１３】
本発明は、アミノ酸生合成回路が欠失していない乳酸菌、特にたんぱく質を構成するアミノ酸を生合成する乳酸菌を提供することを課題とする。また、その乳酸菌による醗酵組成物及びその醗酵エキス及びそれらを用いた飲食品を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、上記に示す課題を以下の手段によって解決することが出来る。
【００１５】
本発明の請求項１は、たんぱく質を構成するアミノ酸である、リジン（Lysine）、ヒスチジン（Histidine）、アスパラギン酸（Aspartic acid）、アラニン（Alanine）、グリシン（Glycine）の中の１以上のアミノ酸を生合成するラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株（寄託番号：ＮＩＴＥ  Ｐ−01946）である乳酸菌である。
【００１６】
本発明の請求項２は、請求項１に記載の乳酸菌を培地に接種し、培養を行うことを特徴とするアミノ酸生合成能を有する乳酸菌菌体の培養物の製造方法である。
【００１７】
本発明の請求項３は、パイナップル果実を前記の請求項１又は請求項２に記載のラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株乳酸菌及びその培養物により発酵させて得られる醗酵組成物及びその醗酵エキスとするものである。
【００１８】
本発明の請求項４では、パイナップル果汁を前記の請求項１又は請求項２に記載のラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株乳酸菌及びその培養物により発酵させて得られる醗酵組成物及びその醗酵エキスとするものである。
【００１９】
本発明の請求項５では、前記の請求項３又は請求項４に記載のラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株乳酸菌により発酵させて得られる醗酵組成物及びその醗酵エキスを用いた飲食品とするものである。
【発明の効果】
【００２０】
本発明は、以下の効果がある。
（１）アミノ酸を生合成できる乳酸菌及びその培養物を提供できる。
（２）たんぱく質を構成するアミノ酸である、リジン（Lysine）、ヒスチジン（Histidine）、アスパラギン酸（Aspartic acid）、アラニン（Alanine）、グリシン（Glycine）の中の１以上のアミノ酸を生合成することが可能な乳酸菌及びその培養物を提供できる。
（３）アミノ酸を生合成できるパイナップル果実由来の乳酸菌を提供することができる。
（４）アミノ酸生合成乳酸菌により発酵させて得られる新たな発酵組成物およびその発酵エキスを提供できる。
（５）パイナップル果実又は果汁をアミノ酸生合成乳酸菌により発酵させて得られる新たな発酵組成物およびその発酵エキスを提供できる。
（６）前記の発酵組成物およびその発酵エキスを用いた飲食品を提供できる。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明の乳酸菌の形態について、以下に説明する。
【００２２】
本発明における乳酸菌は、ラクトバチルス カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株である。該ラクトバチルス カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株は、以下のとおりである。
【００２３】
＜ラクトバチルス カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株の取得＞
パイナップルを輪切りにし、１週間ほど放置し、充分に発酵したパイナップル果実を回収する。回収した果実片1g を，滅菌水を9ml入れたチューブに加え，激しく撹拌して混釈液を得た。
【００２４】
滅菌綿棒を混釈液に浸し，0.1％炭酸カルシウム含有MRS寒天培地（Becton Dickinson社製）に塗沫した。
【００２５】
37℃のインキュベータにて、アネロパック（AS ONE社製）を入れた容器で48時間の嫌気培養後，周辺にハロー（炭酸カルシウムが酸により溶解して透明に抜けたもの）を形成したコロニーをピックアップした。
【００２６】
さらに，ピックアップしたコロニーについて5%過酸化水素水を用いたカタラーゼ試験を行い，陰性のコロニーを乳酸菌として選抜し、ラクトバチルス カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株（以下、本菌株と略記することがある）を取得した。
【００２７】
乳酸菌はカタラーゼを持たないため，過酸化水素がカタラーゼにより酸素と水に分解された時に生じる気泡の発生が見られない。
【００２８】
＜ラクトバチルス カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株の同定＞
（形態的性質）
本菌株の形態的性質は、前記培地で培養した時のコロニーを顕微鏡観察することにより確認した。
【００２９】
その結果、細胞形態は桿菌であり、ラクトバチルス カゼイ（Lactobacillus casei）標準株（以下、「基準株」と略記することがある）同様、胞子を有さず、運動性も有していなかった。
【００３０】
以下にその走査型電子顕微鏡画像を示す。
スケールバー（破線）は10μm, 加速電圧5.0kV，倍率5000倍，作動距離4.6mmである。
図１．ラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株の走査型電子顕微鏡画像
0005703513.tif 000002
【００３１】
現在の新しい菌株同定法として、以下の遺伝子検査を実施した。
【００３２】
（塩基配列）  
16S rRNA領域のシークエンシングによる乳酸菌分類
単離した乳酸菌の16S rRNA領域のシークエンスまでの流れは，次の通りである。まず，単離した乳酸菌をMRS寒天培地に植菌した。
【００３３】
37℃で24時間の嫌気培養後，PrepMan Ultra Sample Preparation Reagent（ABI社製）を用いて，増殖した乳酸菌コロニーからDNAの抽出を行った。
【００３４】
抽出したDNAをテンプレートとし，乳酸菌ゲノム上の16S rRNA 領域（約1500 bp）をPCR法により増幅した。
【００３５】
PCR反応のDNAポリメラーゼはKOD FX（TOYOBO社製）を用い，ユニバーサルプライマーとして9Fおよび1541R（グライナージャパン社製）を用いた。
表1．16S rRNA領域の増幅に用いたユニバーサルプライマーの塩基配列
0005703513.tif 000003
【００３６】
PCR産物をアガロースゲル電気泳動した後，ゲルをGelRed Nucleic Acid Gel Stain（Wako社製）で染色し，特定領域の増幅を確認した。
【００３７】
その後，DNAクリーナー（Wako社製）を用いてPCR産物の精製を行った。
【００３８】
精製後のPCR産物をテンプレートとし，ダイターミネーター法を利用したサイクルシークエンス反応を行った。
【００３９】
反応は，DTCS クイックスタートキット（Beckman Coulter社製）のプロトコルに従い，16S rRNA領域内に設計した４〜６つのプライマー（表3）を用い，16S rRNA領域を分割してサイクルシークエンス反応を行った。
表2．16S rRNA領域のシークエンスで用いたプライマーの塩基配列
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【００４０】
反応後，エタノール沈殿により精製し，DNAシークエンサー遺伝子解析システムCEQ 8800（Beckman Coulter社製）に供した。
【００４１】
シークエンスデータの解析は，フリーソフトChromas Liteおよび，SeqConv_v081を用いた。得られたデータ配列をFASTA形式に変換し，DDBJ（DNA Data Bank of Japan）のBLASTを利用して，塩基配列データベース上の16S rRNA領域の塩基配列との相同性を確認し，属および種の分類を行った。
【００４２】
BLASTを用いたシークエンスデータの16S rRNA領域の相同性検索により，LC-Ikematsu株はLactobacillus caseiと100%の相同性を示したため、LC-Ikematsu株をLactobacillus caseiと分類した。
【００４３】
パイナップル果実から単離したLC-Ikematsu株の16S rRNA領域（9-1512)のシークエンス結果を以下に示す。
gagtttgatc ctggctcagg atgaacgctg gcggcgtgcc taatacatgc aagtcgaacg
agttctcgtt gatgatcggt gcttgcaccg agattcaaca tggaacgagt ggcggacggg
tgagtaacac gtgggtaacc tgcccttaag tgggggataa catttggaaa cagatgctaa
taccgcatag atccaagaac cgcatggttc ttggctgaaa gatggcgtaa gctatcgctt
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acgggaggca gcagtaggga atcttccaca atggacgcaa gtctgatgga gcaacgccgc
gtgagtgaag aaggctttcg ggtcgtaaaa ctctgttgtt ggagaagaat ggtcggcaga
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tgctaggtgt tggagggttt ccgcccttca gtgccgcagc taacgcatta agcattccgc
ctggggagta cgaccgcaag gttgaaactc aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg
tggagcatgt ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt accaggtctt gacatctttt
gatcacctga gagatcaggt ttccccttcg ggggcaaaat gacaggtggt gcatggttgt
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agttgccagc atttagttgg gcactctagt aagactgccg gtgacaaacc ggaggaaggt
ggggatgacg tcaaatcatc atgcccctta tgacctgggc tacacacgtg ctacaatgga
tggtacaacg agttgcgaga ccgcgaggtc aagctaatct cttaaagcca ttctcagttc
ggactgtagg ctgcaactcg cctacacgaa gtcggaatcg ctagtaatcg cggatcagca
cgccgcggtg aatacgttcc cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca tgagagtttg
taacacccga agccggtggc gtaacccttt tagggagcga gccgtctaag gtgggacaaa
tgat
【００４４】
（乳酸菌の寄託）
本発明の乳酸菌である、ラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株は、平成２６年１０月２日に独立行政法人製品評価技術基盤機構の特許微生物寄託センターに寄託した。
寄託番号
ＮＩＴＥ  Ｐ−01946
【００４５】
（ゲノムシーケンシング）
LC-Ikematsu株の全ゲノム構造を把握するため、ゲノムシーケンシングを行った。
【００４６】
手順を以下に記す。
【００４７】
次世代シーケンサGS junior（Roche社）を用いてLC-Ikematsu株のゲノムをシーケンスした。
【００４８】
シーケンスには、ライブラリー調製とemPCRの前処理が必要であった。
【００４９】
ライブラリー調製は、GS Junior チタニウムシリーズラピッドライブラリ（ショットガン）調整マニュアルに従った。
【００５０】
emPCRは、GS Junior  チタニウムシリーズemPCR(Lib-L)マニュアルに従って行った。
【００５１】
シーケンシングデータは、解析ソフトNewbler2.7を用いたアセンブルの結果、179コンティグ、ゲノムサイズ3.0MBとなった。
【００５２】
（代謝機能遺伝子の比較）
この179コンティグを用いて以降の実験を行った。
【００５３】
比較対称として、LactobacillusのうちL.casei W56(lcw)、L.rhamnosus(lra)、L.sakei(lsa)、L.brevis(lbr)、L.gasseri（lga）の5株を用いた。
【００５４】
代謝機能遺伝子比較には、微生物向けオートアノテーションパイプラインMiGAP（国立遺伝学研究所）を用いた。
【００５５】
全コンティグにアノテーションし、1つのExcelファイルにデータをまとめた。MiGAPのアノテーションにはオーソログデータベースであるCOG（Clusters of Orthologous Groups of proteins）の機能分類も含まれており、COGの機能分類コードを元に代謝機能遺伝子比較を行った。代謝系に関与する機能分類コードは以下の表３の通りとなっている。
表3.  COG機能分類表
0005703513.tif 000005
【００５６】
ファイル内の上記機能分類コードの数を計測し、比較対象５種とLC-Ikematsu株において、代謝系に関わる遺伝子を比較した。
解析用ソフトRを用いてこれらを集計した。以下に解析結果を示す。
【００５７】
図２.COGの代謝機能に関わる遺伝子比較
0005703513.tif 000006
【００５８】
（アミノ酸合成経路の比較）
IM-1株のアミノ酸合成経路を、KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）を用いて解析した。KAAS（KEGG automatic annotation server）を用いてパスウェイ再構築を行い、アミノ酸代謝経路を画像として保存した（図３参照）。アミノ酸代謝経路を目視にて確認し、代謝経路が保持されているもの、いくつかの遺伝子が欠失しているもの、崩壊しているものなどに分類して判定した。同様の処理を比較対称５種でも行い、アミノ酸合成経路の比較としてまとめた。
図３.グリシン、セリン、トレオニンの代謝経路
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【００５９】
以下に解析結果を示す。
図４.アミノ酸合成経路の比較
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【００６０】
（アミノ酸分析）
バイオインフォマティクスの技術を用いて推測された機能が実際、現実にそのようになっているのかを確認するため、乳酸菌LC-Ikematsu株の培養液中に生産されるアミノ酸を解析した。
【００６１】
ウォーターズ社製超高速液体クロマトグラフィーシステムを用い、乳酸菌培養液サンプルを誘導体化し、測定した。アミノ酸スタンダードより検量線を引き、サンプルのアミノ酸量を個々に求めた。
以下に解析結果を示す。
図５.アミノ酸分析結果
0005703513.tif 000009
【００６２】
（アミノ酸要求性試験）
ＫＥＧＧによるパスウェイ再構築によって予測されたLC-Ikematsu株のアミノ酸合成経路が、実際に菌体内で機能しているか完全合成培地を用いて検証を行った。
【００６３】
完全合成培地から各アミノ酸を１種類ずつ欠損させたアミノ酸欠損培地を調製し、あるアミノ酸欠損培地にてLC-Ikematsu株の増殖が確認された場合、LC-Ikematsu株がそのアミノ酸合成経路を保持していることを示す。
【００６４】
[試験方法]
下記組成にてラクトバチルス カゼイ（Lactobacillus casei）用完全合成培地を調製した。
表４．完全合成培地組成
0005703513.tif 000010
【００６５】
完全合成培地から各アミノ酸を１類ずつ除き、各アミノ酸欠損培地を調製した。完全合成培地、各アミノ酸欠損培地に乳酸菌液を添加し、37℃にて48時間培養した。乳酸菌液は、液体培養したLC-Ikematsu株を遠心分離し、滅菌水で洗浄して調製した。各培養液の増殖をOD660にて測定し、コントロールと比較して増殖率（%）を求めた。
【００６６】
[試験結果]
増殖率が50%を超えたのは、Pro、Met、His、Lys、Asp、Serであった(表５)。
【００６７】
表５．各アミノ酸欠損培地によるLC-Ikematsu株の増殖率
0005703513.tif 000011
【００６８】
LC-Ikematsu株の遺伝子解析結果から合成経路を保持していると予測したアミノ酸は、Gly、Ala、Lys、His、Asp、Thrの6種類であった。一方、実際に欠損培地を用いて調査した結果、Pro、Met、His、Lys、Asp、Serの6種類がコントロールと比較して50%以上の増殖を示した。合成培地の組成に含まれていないGlyとAlaを含め、8種類のアミノ酸は個別に欠損しても生育することが確認された。
【００６９】
遺伝子解析結果から行った合成経路予測と、アミノ酸欠損培地を用いた合成能試験を比較したところ、Gly、Ala、His、Asp、Lysの5種類は同一の結果となり、アミノ酸合成経路を保持していることが示された。
【００７０】
Thrは合成経路を保持していると予測されたが、Thr欠損培地においてLC-Ikematsu株は十分に生育しなかった。合成経路の一部の酵素が偽遺伝子化しているためだと考えられる。
【００７１】
合成が困難であると予測されたMet、Pro、Serの3種類は、欠損培地において50%以上の生育を示した。この3種類について、再度コンピューターを使用してアミノ合成経路を再構築したところ、今回注目した合成経路とは別の経路が確認でき、SerはGlyから、MetはAspから、ProはGluから合成されたことが確認された。
【００７２】
LC-Ikematsu株は、遺伝子解析から推測された6種類のアミノ酸のうち、実際にGly、Ala、Lys、His、Aspの5種類の合成能力を有することが確認された。Thrについては、合成経路の遺伝子が何らかの理由で機能しなくなった結果、合成できなくなったと考えられる。
【００７３】
以上より、本菌株は、基準株と比較すると、16S rRNAの前記塩基配列が１００％の相同性を有し、前記形態的性質はゲノムサイズが約３．０Mbであり、乳酸菌としては比較的大きく、生理学的性質を有するものであった。
【００７４】
そして、他のラクトバチルス属と比較し、多くの代謝機能遺伝子を保有し、とくに、糖質、アミノ酸代謝に関わる遺伝子を多く保有しており、乳酸菌ゲノムは、通常多くのアミノ酸合成経路が崩壊しているが、本菌株では、大きな崩壊が少なく、合成可能なアミノ酸は５種ながら多くのアミノ酸合成に関わる遺伝子を保持しているという、顕著に優れた特徴を有しており、これは従来のラクトバチルス カゼイ（Lactobacillus casei）に属する乳酸菌株とは明らかに相違していた。
【００７５】
以上の結果より、本菌株は、ラクトバチルス カゼイ（Lactobacillus casei）に属する新規の乳酸菌株であることが示された。  
【００７６】
次に、上記の乳酸菌株を用いて、乳発酵物を調整した。
【００７７】
乳酸菌の培養には、乳酸菌が培養できる培地であれば、なんでもかまわないが、MRS液体培地が好ましい。乳酸菌を培養する場合、各種の条件において、培養温度は25〜45℃が好ましく、35〜40℃がより好ましい。また、培養時間は12〜72時間が好ましく、20〜30時間がより好ましい。培養条件は、好気培養、嫌気培養のどちらでも適宜調整することができるが、嫌気培養がより好ましい。
【００７８】
以下の実験においては、単離した乳酸菌をMRS液体培地に植菌し、37℃で24時間嫌気培養後に、発酵物や試作に使用した。
【００７９】
乳酸菌をMRS液体培地で37℃24時間嫌気培養後、培養液を遠心分離して上清を除き、0.85% 塩化ナトリウム溶液で菌体を洗浄した。菌体1g（wet weight）に対し牛乳（成分無調製牛乳、明治乳業製品）30mlを加え、37℃で24時間培養を行った。さらに、LC-Ikematsu株と同じLactobacillus属であり、食経験のあるラクトバチルス  ブレビス（Lactobacillus brevis）を用いて同様に乳発酵物を調製し、発酵特性として、凝固具合や色、匂い、味を比較した。
【００８０】
本発明の乳酸菌ラクトバチルス  カゼイLC-Ikematsu株及び同属のラクトバチルス  ブレビス（Lactobacillus brevis）を用いて乳発酵物を調製した結果，LC-Ikematsu株で調製した発酵物は、全体が白く、上部にホエーが観察され、牛乳中にタンパク質が凝固して小さな粒ができていた。また、味はヨーグルトのような酸味があった。ラクトバチルス  ブレビス（Lactobacillus brevis）で調製した乳発酵物と比較して、牛乳の凝固具合および匂い、味ともに同様なものであった。
図６．作製した乳発酵物（Lactobacillus brevis使用時（左）およびLC-Ikematsu株使用時（右））
0005703513.tif 000012
【００８１】
次に、上記の乳酸菌株を用いて、ゼリーを製造した。
【００８２】
（原料配合）
原料総量に対して、ゲル化剤としてキサンタンガム２．０重量%、ぶどう糖が１０重量％、クエン酸が０．１重量％、アスコルビン酸が０．１重量％、シークワーサーとパパイヤの乳酸発酵エキスが６５重量％、ラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株を１重量％、水が２１．８重量％とした。
【００８３】
（製造方法）
上記の原料のうち、ぶどう糖とゲル化剤を混合後、水を添加し８０℃で１０分間加熱しゲル化剤を溶解する。上記の原料液に、６０℃に加温したシークワーサーとパパイヤの乳酸発酵エキス、ラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株、その他副原料（クエン酸、アスコルビン酸）を加え、蒸発水を補正し、９５度まで加熱処理した。加熱処理後、レトルトパックに３０ｇずつ充填し、シール密封し、８５℃、３０分殺菌後、冷水し、乳酸菌入りスティックゼリーとした。
【００８４】
シークワーサーとパパイヤの乳酸発酵エキスは、ラクトバチルス  ブレビス（Lactobacillus brevis）  NBRC  12005を用いて乳酸発酵し、γ−アミノ酪酸（GABA）を生産させた乳酸発酵エキスであり、γ−アミノ酪酸の主な生理活性作用としては、脳の血流改善、血圧降下、精神安定、腎・肝機能活性、アルコール代謝促進作用、消臭など。また、大腸がんの抑制作用についても期待されている。
【００８５】
また、ラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株は、乳酸菌による腸内環境改善効果や風邪やインフルエンザを予防効果、免疫を活性化・調整する効果、花粉症の予防や改善，アトピー性皮膚炎の改善，ガン予防，コレステロールを下げる働き，高血圧を改善する効果があると報告されている。
【００８６】
加えて、癌の抑制効果や血糖値を抑制する効果等で注目されているシークワーサー果皮に含まれる有効成分（ノビレチン、タンゲレチンなど）の効果を有する、非常に優れた効能を有しており、かつ、パイナップル由来の乳酸菌であり、自然、天然素材による安全で安心して食できる、信頼性の高い健康ゼリー食品となる。
【００８７】
尚、上記の実施例に限定されるものではなく、例えば、ゼリーの製造においては、乳酸発酵エキスの配合量は、５０〜８０重量％、ゲル化剤の配合量は、１．０〜３．０重量％、ラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株の配合量は、０．１〜１０重量％程度が好ましい。
【００８８】
また、ラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株単体の使用でもよく、シークワーサー果皮、パパイヤ、パイナップルなどをラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株で乳酸発酵させた発酵エキスでも良い。ゲル化剤としては、ジェランガム、ファーセルラン、低メトキシルペクチン、グアーガム、ローカストビーンガム、キサンタンガム、カラギナン、または寒天、ゼラチン等の市販のゲル化剤が使用できる。
【要約】
【課題】アミノ酸生合成回路が欠失していない乳酸菌、特にたんぱく質を構成するアミノ酸を生合成する乳酸菌、乳酸菌の培養物及び発酵エキスを提供することを課題とする。
【解決手段】たんぱく質を構成するアミノ酸である、リジン（Lysine）、ヒスチジン（Histidine）、アスパラギン酸（Aspartic acid）、アラニン（Alanine）、グリシン（Glycine）の中の１以上のアミノ酸を生合成するラクトバチルス  カゼイ（Lactobacillus casei）LC-Ikematsu株である。
【選択図】          なし【配列表】
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