(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
亜塩素酸塩を使用する養殖用水中の水カビ防除方法であって、
前記方法は、
pHが5.5以上8.5以下である養殖用水に、亜塩素酸塩を有効二酸化塩素換算で2.5ppm以上200ppm以下の濃度範囲で添加し、60分間以上反応させることにより水カビを防除し、
有機酸又は無機酸は養殖用水に添加しないことを特徴とする、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、亜塩素酸塩（有効成分は二酸化塩素）を利用して、淡水又は海水を問わず、養殖用水中の水カビを防除するための水カビ防除方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、漁業資源確保のために養殖漁業が広く行われているが、水質汚染による魚場環境の悪化等により、細菌又はウイルス等による魚介類の感染症が大きな問題となっている。こうした魚介類の感染症のうち、水カビ病は、Saprolegniasisと呼ばれるように、一般的にはSaprolegnia菌（卵菌）の感染により、白又は灰色をした菌糸塊（水カビ）が魚の傷口又は卵の表面に付き、炎症又は潰瘍を発生させる感染症である。さらにAeromonas属菌（細菌）等による細菌感染も併発し、最終的には感染した個体は死に至る。また、魚卵孵化時には、酸欠によって卵致死も引き起こされる。水カビ病は、卵菌が原因菌であるため、真菌が原因菌であるカビ対策方法を応用することには無理がある。
【０００３】
従来、魚類の水カビ病の有効な予防薬及び治療薬としては、マラカイトグリーン（Malachite green）が広く使用されてきた。しかし、マラカイトグリーンは、動物に対する催奇性及び発ガン性があると指摘されたことから、現在は薬事法によって養殖魚への使用が禁止されている。また、食品衛生法によってマラカイトグリーンが検出された養殖魚は、流通及び販売等が禁止されている。このため、有害性の低い水カビ病の予防薬及び治療薬の開発が期待されている。その一方、マラカイトグリーンの使用が禁止されて以来、各地の養殖場又は孵化場において、体全体が水カビで覆われた斃死魚が出現する疾病が多発しており、我が国の水産分野においては大きな問題となっている。
【０００４】
特許文献１は、水道水又はこれに食塩のような電解助剤を添加した水を電気分解すると、プラス電極側に強酸性水が生成し、マイナス電極側に強アルカリ水が生成するが、強酸性水は次亜塩素酸（HOCl）、次亜塩素酸イオン（OCl-）又は塩素ガス（Cl2）のような残留塩素（溶存塩素）を含有し、この残留塩素、特に次亜塩素酸が水カビの遊走子及び菌糸に対して有効であることを開示している。
【０００５】
特許文献２は、生物を灰化して抽出した多種類の水溶性ミネラルからなり、該水溶性ミネラル水溶液に魚介類又は魚介類の卵を浸漬することによって魚介類の感染症を治癒させ又は予防する魚介類の感染症の治療又は予防剤を開示している。
【０００６】
特許文献３は、特定のベンゾチアゾリルアゾ化合物を有効成分とする水産養殖用水カビ防除剤を開示している。
【０００７】
最近では、ブロノポールを有効成分とするパイセス（登録商標、ノバルティスアニマルヘルス株式会社）が、孵化を目的とした魚卵の消毒（ミズカビ類の寄生繁茂の蔓延抑制）に適しているとの報告がなされている（非特許文献１〜３）。
【０００８】
一方、亜塩素酸塩（有効成分は二酸化塩素）は、水産分野においても毒性の低い殺菌剤として着目されている。特許文献４は、コイヘルペスのようなウイルス性魚病の予防として、養殖用水の消毒に二酸化塩素を0.01〜2mg/Lの濃度で使用することを開示している。特許文献５は、魚介類受精卵を二酸化塩素の孵化率向上を目的として、受精卵を二酸化塩素濃度0.01〜1mg/Lの水に浸漬し、受精卵に付着した病原菌を殺菌することを開示している。特許文献６は、二酸化塩素が魚類の寄生虫病であるスクーチカ症にも有効であることを開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００１−２３８５６１号公報
【特許文献２】特開２００９−２３９９７号公報
【特許文献３】特公昭６１−６００４１号公報
【特許文献４】特開２００６−２８０２１２号公報
【特許文献５】特開２００７−２５９８０８号公報
【特許文献６】特許第３８８２９３９号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】長野県水産試験場、情報提供、卵の水カビ防除にはパイセスを、2014年6月20日更新
【非特許文献２】静岡県水産試験場富士養鱒場、富士養鱒場だより、第190号、平成18年1月号
【非特許文献３】SALMON情報, No.5, 2011年3月, p15-17
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
特許文献４〜６に開示されている発明は、水産分野への亜塩素酸又は二酸化塩素の使用に関連しているが、水カビ病を防除対象とはしていない。一方、特許文献１に開示されている方法は、残留塩素による魚への影響が大きく、実用性に欠けると考えられる。また、特許文献２及び３に開示されている方法も、実際には養殖場における水カビ病対策として普及していないのが現実である。
【００１２】
このように、現在の我が国においては、養殖場又は孵化場における水カビ病の予防には、ブロノポール以外に使用する薬剤がないのが実情である。しかし、ブロノポールは、マラカイトグリーンと比較すれば毒性が低いが、50ppmで1時間、又は100ppmで30分間、使用回数は1日1回、受精卵は発眼期までに制限されている。また、排水時には、50ppmの場合には3333倍、100ppmの場合には6666倍に希釈することが義務付けられており、0.015ppm以下の濃度としなければ排水できないという制限がある。
【００１３】
一方、二酸化塩素は、細菌類の殺菌又はカビの防除等の用途では使用されているが、二酸化塩素を含有する水カビ防除剤は市販されておらず、養殖場又は孵化場においても水カビ病の防除を目的とした公開された使用実績もない。二酸化塩素を有効殺菌成分とする亜塩素酸塩製剤についても同様である。
【００１４】
本発明は、ブロノポールよりも毒性が低く、安全性の高い二酸化塩素を使用して、養殖用水中の水カビ防除方法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
二酸化塩素（ClO2）は、常温において気体である。そのため、亜塩素酸ナトリウム（NaClO2）又は亜塩素酸カリウム（KClO2）のような亜塩素酸塩の水溶液（pH12程度）に有機酸又は無機酸を添加してpHを酸性とすることにより、二酸化塩素を発生させる。アルカリ水溶液中では、亜塩素酸塩は、亜塩素酸イオン（ClO2-）として存在しており、安定である。一方、酸性水溶液中では、亜塩素酸塩は、亜塩素酸（HClO2）、亜塩素酸イオン及び二酸化塩素が共存した状態となる。
【００１６】
亜塩素酸塩は、殺菌目的で使用する場合には、有機酸又は無機酸を併用することが一般的である。また、水産分野で亜塩素酸を使用する場合には、特許文献４又は５のように、有機酸又は無機酸を併用しない場合もあるが、特許文献４又は５では、1ppm以下の低濃度においてウイルス又は病原菌に有効とされている。しかし、二酸化塩素製剤は、水カビ対策には効果が期待できず、これまで水カビ防除方法として実用的には使用されてこなかった。そして、上述したように、我が国おいては、ブロノポール製剤が現在唯一の実用的製剤として認められている。
【００１７】
本発明者は、ブロノポールよりも毒性が低く、安全性の高い二酸化塩素を水カビ防除に利用することについて鋭意検討した。その結果、有機酸又は無機酸を併用せず、養殖用水中の二酸化塩素濃度を特許文献４又は５に開示されている発明よりも高濃度とすることにより、意外にもブロノポール製剤よりも高い水カビ防除効果が発揮されることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１８】
具体的に、本発明は、
亜塩素酸塩を使用する養殖用水中の水カビ防除方法であって、
前記方法は、
pHが5.5以上8.5以下である養殖用水に、亜塩素酸塩を有効二酸化塩素換算で2.5ppm以上200ppm以下の濃度範囲で添加し、60分間以上反応させることにより水カビを防除し、
有機酸又は無機酸は養殖用水に添加しないことを特徴とする、方法に関する。
【００２０】
pHが5.5以上8.5以下である養殖用水に、亜塩素酸塩を有効二酸化塩素換算で2.5ppm以上200ppm以下の濃度範囲で添加した後、60分間以上経過すると、水カビの遊走子を殺菌可能であり、養殖用水を入れ替えずに使用しても、「もや」の発生を抑制し得る。また、魚類卵の表面を殺菌し、水カビが発生することも抑制し得る。二酸化塩素製剤は、白点病等の魚類病の防除には使用されてきたが、水カビ病の防除にも非常に効果が高いことは、本発明者が初めて見出した知見である。
【００２１】
ここで、本発明の「養殖用水」には、魚の養殖用に使用される水の他に、魚類卵の孵化用に使用される水（孵化用水）も含まれる。また、「養殖用水」には、海水及び淡水の両方が含まれる。
【００２２】
また、本発明の「有効二酸化塩素換算」濃度とは、水中の二酸化塩素濃度の測定値であり、第8版食品添加物公定書に開示されている亜塩素酸ナトリウムの定量法、又は市販の測定機器（例えば、株式会社エムケー・サイエンティフィック社AL100-MT）を利用して測定し得る。
【００２３】
養殖用水には、様々な薬剤等が添加されたり、有機物が存在したりする。そのため、養殖用水に亜塩素酸塩を所定の二酸化塩素濃度となるように添加しても、薬剤又は有機物等によって発生した二酸化塩素が消費され、有効二酸化塩素濃度は低下してしまう。例えば、魚卵の孵化用水には、卵皮膜強化のため大量のカテキンが使用されるが、カテキンは還元剤に一種であるため、酸化剤である二酸化塩素が水カビ抑制以前にカテキンによって消費される。そこで、養殖用水の水カビ抑制のためには、養殖用水中に残存し、殺菌効果を発揮する二酸化塩素塩の有効濃度を適正範囲に調整することが重要である。
【００２４】
亜塩素酸塩は、粉末として養殖用水に添加されてもよく、水溶液として養殖用水に添加されてもよい。本発明では、pHが5.5以上8.5以下である養殖用水の亜塩素酸塩が、有効二酸化塩素に換算して2.5ppm以上200ppm以下の範囲であればよく、特に亜塩素酸塩を水溶液として養殖用水に添加する場合、食品添加物である亜塩素酸水であってもよい。
【００２７】
ここで、本発明の「有機酸又は無機酸を養殖用水に添加しない」とは、養殖用水に有機酸又は無機酸を全く添加しない場合以外に、有機酸又は無機酸の濃度が4ppm以下となるように添加する場合も含む。同様に、本発明の「有機酸又は無機酸は含有せず」とは、有機酸又は無機酸を全く含有しない場合以外に、養殖用水に添加する時における有機酸又は無機酸の濃度が4ppm以下となるように含有する場合も含む。
【発明の効果】
【００２８】
本発明によれば、より安全かつ低コストで、養殖用水中の水カビ病を有効に防除することが可能である。また、排水処理時の希釈作業も不要となる。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明を実施するための形態について、以下に説明する。本発明は、以下の記載に限定されない。
【００３０】
［実験１：感作時間30分］
「上水道試験方法（2001年版）日本水道協会、VIII微生物試験  4.4.2.2  ミズカビ類
培用法」に基づき、水カビの生えた麻の実子葉１枚と300mLの滅菌水道水を入れた滅菌済み500mL三角フラスコに、滅菌した麻の実子葉を5枚入れ常温で培養した。この水カビは、鮭及び鱒を養殖するための養殖場内の孵化場から採取した水カビ（Saprolegnia類）である。15日後、三角フラスコ内の水を顕微鏡下（倍率1000倍）で観察し、水カビの遊走子を確認し、定量した。三角フラスコ内の水を滅菌水道水によって希釈し、水カビの遊走子が10〜12個/100μLである遊走子液を調製した。なお、水道水として、神戸市内の上水道水（pH6.0）を使用した。
【００３１】
麻の実子葉3枚を入れた滅菌チューブ（5mL容量）に、上記遊走子液を添加して撹拌した後、3日室温で静置した。3日後、滅菌チューブに薬液900μLを添加し、撹拌した後、30分間静置して感作した。感作終了後、滅菌チューブ内の液体を捨て、麻の実子葉のみを40mLの滅菌水道水の入ったガラスシャーレに移し、15℃で7日間培養した。
【００３２】
7日後、ガラスシャーレを顕微鏡下で観察し、(1) 内部の水に遊走子が存在するか、(2) 内部の水に「もや」が発生しているか、の2点について調べた。その結果に基づいて、薬液中の有効成分の最小殺菌濃度を確認した。
【００３３】
ここで使用された薬液は、薬液１：亜塩素酸ナトリウム水溶液、薬液２：亜塩素酸ナトリウム及びリンゴ酸を同じ質量％で含有する水溶液、薬液３：亜塩素酸ナトリウム、塩酸及び硫化第一鉄を同じ質量％で含有する水溶液、薬液４：ブロノポールを含有する水溶液（パイセス（登録商標））の4種類である。各薬液は、滅菌水道水を用いて希釈され、薬液１〜３については、二酸化塩素として0.1ppm〜1200ppmの濃度に調整され、薬液４については、ブロノポールとして0.1ppm〜1200ppmの濃度に調整された。なお、亜塩素酸ナトリウム製剤として、助川化学製「食品添加物  亜塩素酸ナトリウム液（二酸化塩素として濃度50000ppm）」を使用した。
【００３４】
［実験２：感作時間60分］
滅菌チューブに薬液900μLを添加し、撹拌した後、60分間静置して感作する以外、すべて実験１と同じ操作を行った。
【００３５】
実験１及び実験２の実験結果を、それぞれ表１及び表２に示す。表１及び表２には、薬液の代わりに滅菌水道水900μLを添加したBlank試験の結果も示す。なお、薬液１〜薬液３については、薬液900μL添加後の滅菌チューブ内液のpHも記載した。
【００３６】
【表１】
0005711846.tif 000002
【００３７】
【表２】
0005711846.tif 000003
【００３８】
表１より、感作時間が30分間の場合、薬液１及び薬液２は二酸化塩素濃度300ppm以上、薬液３は二酸化塩素濃度500ppm以上であれば、遊走子が確認されず、「もや」も確認されなかった。一方、薬液４は、ブロノポール濃度1200ppmであっても、「もや」が確認された。
【００３９】
表２より、感作時間が60分間の場合、薬液１のみ二酸化塩素濃度2.5ppm以上であれば遊走子が確認されず、「もや」も確認されなかった。
【００４０】
このように、感作時間を60分間とした実験２の結果から、亜塩素酸塩（亜塩素酸ナトリウム）は、有機酸又は無機酸と併用しない場合、水カビ（Saprolegnia類）に対する最小殺菌濃度は、2.5ppmであることが確認された。pHに関する水道水質基準値は、5.8〜8.6とされているが、薬液900μL添加後の滅菌チューブ内液のpH5.5及び8.5に調整した場合にも、実験１及び実験２と同じ結果が得られた。
【００４１】
一方、我が国において、養殖場における水カビ病の予防に有効な唯一の薬剤とされているブロノポールは、1200ppmという高濃度であっても、60分間の感作によっては「もや」の発生を防止することができなかった。「もや」は、水カビのコロニーであるため、実験１及び実験２の結果から、亜塩素酸塩（亜塩素酸ナトリウム）は、ブロノポールよりもはるかに低濃度で、水カビに対して優れた殺菌効果を発揮することが確認された。
【００４２】
ブロノポールは、使用時の上限濃度が100ppmに設定されているが、実験１及び実験２の結果からは、そのような濃度では水カビの遊走子殺菌には有効であっても、「もや」の防除には効果がないことが確認された。そして、上限濃度の10倍以上高濃度としても、「もや」の防除はできなかった。
【００４３】
パイセス（登録商標）は、有効成分ブロノポールを50質量％含有する1L製品が市販されており、ブロノポール1200ppmに調整するためのコストは約18円/Lである。これに対し、亜塩素酸ナトリウム水溶液は、二酸化塩素として2.5ppmに調整するためのコストは0.055円/Lである。すなわち、本発明の方法においては、ブロノポールを使用する場合の1/300未満の費用で、有効な水カビ病の防除及び魚類卵の殺菌が可能である。さらに、使用済み養殖用水を希釈してから排水する必要もないため、さらに経済的、かつ、効率よく水カビ病の防除及び魚類卵の殺菌が可能である。
【００４４】
亜塩素酸塩は、二酸化塩素として2.5ppm以上とし、感作時間を60分間以上とする必要があるが、水カビの遊走子が多い場合等には、さらに二酸化塩素濃度を高く設定し、感作時間を60分間以上とすることが好ましい。養殖水中の二酸化塩素濃度を高くしすぎると、薬剤コストが上昇し、養殖魚又は魚類卵に対する悪影響も懸念されることから、養殖水中の亜塩素酸濃度は、有効二酸化塩素として200ppm以下とすることが実用的である。二酸化塩素濃度として200ppmに調整するためのコストは4.4円/Lであり、ブロノポール1200ppmに調整するためのコスト約18円/Lと比較して約1/4のコストである。
【００４５】
亜塩素酸塩（二酸化塩素）による感作時間は、60分間以上としなければならないが、感作時間をより長くすれば、より低濃度の二酸化塩素濃度でも水カビに対する殺菌効果を期待し得る。
【００４６】
ここで、薬液２及び薬液３も二酸化塩素を薬液１と同じ濃度で含有しているが、表２より、有効成分である二酸化塩素の最小殺菌濃度は、薬液２では100ppm、薬液３では300ppmであった。このように、水カビに対する殺菌効果を発揮する有効成分が二酸化塩素であっても、薬液２及び薬液３の効果は、薬液１と比較して低いことも確認された。薬液１は亜塩素酸ナトリウムのみを含有し、薬液２及び薬液３は、それぞれリンゴ酸（有機酸）及び塩酸（無機酸）も含有している。亜塩素酸ナトリウムのような安定化二酸化塩素は、有機酸又は無機酸を活性化成分として併用することにより、亜塩素酸、亜塩素酸イオン及び二酸化塩素を発生させて、殺菌効果を発揮させることが技術常識である。しかし、薬剤１のように有機酸及び無機酸を併用しないことにより、意外にもより低濃度で水カビに対する殺菌効果が発揮されることがはじめて確認された。
【００４７】
亜塩素酸ナトリウムは、酸と併用してpH2.3〜2.9とした酸性化亜塩素酸ナトリウムとしなければ、食品添加物として十分な殺菌効果が得られないとされている（平成25年4月3日、厚生労働省、薬事・食品衛生審議会食品衛生分科会添加物部会、添付資料1-2）。また、亜塩素酸ナトリウムの水溶液はアルカリ性であり、亜塩素酸ナトリウム自体には殺菌力は殆どないとされている（日本食糧新聞、2014年5月26日）。しかし、実験１及び実験２の結果から、亜塩素酸ナトリウムは、有機酸又は無機酸を使用することなく、水カビに対して優れた殺菌効果を発揮することが確認された。
【００４８】
薬液１の最小殺菌濃度は、感作時間が30分である実験１では300ppmであったのに対し、感作時間が60分である実験２では2.5ppmであった。このように、本発明では、感作時間を60分以上とすることにより、ブロノポール製剤であるパイセス（登録商標）と同じ感作時間30分の場合と比較して最小殺菌濃度が1/120以下にまで減少するという予想外の効果が発揮されることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００４９】
本発明は、養殖業又は水産業の技術分野において有用である。
【要約】
【課題】ブロノポールよりも毒性が低く、安全性の高い二酸化塩素を使用して、養殖用水中の水カビ防除方法及び魚類卵殺菌方法を提供すること。二酸化塩素を有効成分として含有する養殖用水用の水カビ防除剤及び魚類卵用殺菌剤を提供すること。
【解決手段】本発明では、pHが5.5以上8.5以下である養殖用水に、亜塩素酸塩を有効二酸化塩素換算で2.5ppm以上200ppm以下の濃度範囲で添加し、60分間以上反応させることにより水カビを防除する。このとき、有機酸又は無機酸は養殖用水に添加しない。
【選択図】なし