(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＣＡＭ−１（細胞接着分子−１）タンパク質を活性成分として含む、神経疾患の予防または処置のための医薬組成物であって、前記神経疾患がニューロンにおけるアミロイド−ベータ斑の形成、ニューロンにおけるネプリライシンの発現の低減、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも一つにより引き起こされる疾患である、医薬組成物。
【請求項２】
ＩＣＡＭ−１タンパク質が配列番号１のアミノ酸配列、または１番目から２７番目のアミノ酸残基に対応するシグナルペプチドが除去された前記アミノ酸配列を有する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
ＩＣＡＭ−１タンパク質が、アミロイド−ベータ（Ａβ）の分解を促進するためにネプリライシン（ＮＥＰ）の発現を誘導する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
神経疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、てんかん、および軽度認知機能障害からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ＩＣＡＭ−１タンパク質をニューロンと共培養することを含む、インビトロでニューロンにおけるネプリライシンの発現を増加する方法。
【請求項６】
ＩＣＡＭ−１タンパク質を活性成分として含む、ネプリライシンの発現を増加するための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
この出願は、出典明示によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１１年２月２日に出願された米国仮特許出願第６１／４３８，８０９号および２０１１年９月３０日に出願された米国仮特許出願第６１／５４１，４８７号の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病は、脳におけるアミロイド−ベータ（Ａβ）タンパク質の蓄積に部分的に起因する、脳細胞の破壊を呈する。アルツハイマー病は段階的に進行し、記憶、推論、判断およびスピーチの能力、並びに単純な作業を実行する能力を徐々に悪化させる。
【０００３】
パーキンソン病は、ドパミン作動性ニューロンとして知られる、特定の脳細胞の破壊を呈する。ドパミン作動性ニューロンの喪失は、運動制御の喪失が挙げられるがこれに限定されない臨床症状を引き起こす。パーキンソン病の発病の原因は知られていない。
【０００４】
抑鬱症または大鬱病性障害もまた脳の疾患である。診断は、気分の落ち込み、自分自身への低評価、および様々な活動への関心あるいは楽しみの喪失を含む、患者が自己報告する経験に基づく。
【０００５】
てんかんは脳の神経障害である。てんかんの患者は頻繁かつ予測不能な発作を患う。てんかんの発症は、脳において異常に増加したニューロンの活動を特徴とする。
【０００６】
多発性硬化症は、脳および脊髄の軸索のまわりの髄鞘の炎症を呈する。脱髄は、時間とともに、様々な身体機能および認識機能の喪失を引き起こす。
【０００７】
躁病は、一週間以上続くことも多い、異常に高いあるいは過敏な気分の状態である。躁病の発症を患う患者は、神経伝達を標的とする薬剤で処置されている。
【０００８】
筋萎縮性側索硬化症としても知られるルー・ゲーリッグ病は、脊髄におけるニューロンの変性を呈する、運動ニューロン疾患の一形態である。その疾患を患う患者は、筋萎縮、脱力感および呼吸困難を経験する。
【０００９】
軽度認知機能障害（ＭＣＩ、初期認知症（ｉｎｃｉｐｉｅｎｔ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）またはアイソレイテッドメモリインペアメント（ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ）としても知られる）は、毎日の活動を妨げるほどは重大ではないが、個人の年齢および教育に基づき予想されるものを超える、認知機能障害の発症および進行に関する脳機能症候群である。それは正常な老化と認知症の間の推移段階でよく見られる。ＭＣＩは様々な症状を示し得るが、記憶障害（ｍｅｍｏｒｙ  ｌｏｓｓ）が主症状である場合、「健忘性ＭＣＩ」と称され、アルツハイマー病の前駆症状的段階として見られることが多い。研究から、これらの個人は１年当たりおよそ１０％から１５％の割合で、推定アルツハイマー病に進む傾向があることが示唆される。
【００１０】
多発梗塞性認知症（ｍｕｌｔｉ−ｉｎｆａｒｃｔ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）は血管性認知症の一種である。血管性認知症は、高齢者におけるアルツハイマー病（ＡＤ）後の認知症の二番目に多い形態である。多発梗塞性認知症(ＭＩＤ）は認知症の不可逆的形態であると考えられ、その発症は、多数の小卒中、また時には、他のより小さな卒中が先行する、もしくは続く、一つの大きな卒中により引き起こされる。この用語は、脳における血管病変をもたらす、全ての異なるメカニズムにより引き起こされる症候群の群を指す。血管性認知症が少なくとも部分的に予防可能であるように、早期発見および正確な診断が重要である。
【００１１】
レビー小体認知症（Ｌｅｗｙ  ｂｏｄｙ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）、びまん性レビー小体病（ｄｉｆｆｕｓｅ  Ｌｅｗｙ  ｂｏｄｙ  ｄｉｓｅａｓｅ）、皮質性レビー小体病（ｃｏｒｔｉｃａｌ  Ｌｅｗｙ  ｂｏｄｙ  ｄｉｓｅａｓｅ）、およびレビー型老年性認知症（ｓｅｎｉｌｅ  ｄｅｍｅｎｔｉａ  ｏｆ  Ｌｅｗｙ  ｔｙｐｅ）を含む様々な他の名前でも知られる、レビー小体型認知症（ｄｅｍｅｎｔｉａ  ｗｉｔｈ  Ｌｅｗｙ  ｂｏｄｉｅｓ）（ＤＬＢ）は、アルツハイマー病およびパーキンソン病の両方に密接な関連がある認知症の一種である。それは、死後脳生検において検出可能な、レビー小体の存在、アルファ−シヌクレインの凝集およびニューロンにおけるユビキチンタンパク質により、解剖学的に特徴付けられる。レビー小体認知症は、アメリカ合衆国だけで１３０万人の人間に影響を及ぼす。
【００１２】
ネプリライシンは、アミロイドベータペプチドを分解する酵素である。ネプリライシンの欠損は、アミロイドの細胞外蓄積を加速させる。ネプリライシン発現の増加は、Ａβペプチドを低減させる。
【００１３】
細胞内接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）は、ＩＣＡＭ１遺伝子によりコードされる膜糖タンパク質である。ＩＣＡＭ１遺伝子の欠損マウスは正常に発生し、繁殖力があり、かつ中等度の顆粒球増加症を有していたが、化学的刺激および炎症反応における異常への好中球の遊出障害を示した。
【発明の概要】
【００１４】
本明細書に記載されるのは、ＩＣＡＭ−１（細胞接着分子−１）タンパク質、またはそれらの断片もしくは変種（ｖａｒｉａｎｔ）を活性成分として含む、神経疾患の予防または処置のための医薬組成物である。一実施形態では、該組成物のＩＣＡＭ−１タンパク質は配列番号１のアミノ酸配列、または１番目から２７番目のアミノ酸残基に対応するシグナルペプチドが除去された前記アミノ酸配列を有する。別の実施形態では、ＩＣＡＭ−１タンパク質の断片は、ＩＣＡＭ−１タンパク質のものと同等の生物活性を有する。別の実施形態では、ＩＣＡＭ−１タンパク質の変種は、一以上のアミノ酸が置換、欠失、挿入および／または付加されている配列番号１のアミノ酸配列を有し、かつＩＣＡＭ−１タンパク質のものと同等の生物活性を有する。別の実施形態では、ＩＣＡＭ−１タンパク質の変種は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＩＣＡＭ−１タンパク質の少なくとも約９０％、９３％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％と同一であるアミノ酸配列を有し、かつＩＣＡＭ−１タンパク質のものと同等の生物活性を有する。別の実施形態では、ＩＣＡＭ−１タンパク質、またはそれらの断片もしくは変種は、アミロイド−ベータ（Ａβ）の分解を促進するために、ネプリライシン（ＮＥＰ）の発現を誘導する。別の実施形態では、神経疾患は、ニューロンにおけるアミロイド−ベータ斑（ｐｌａｑｕｅ）の形成、ニューロンにおけるタウタンパク質の過剰リン酸化、神経突起の損傷、ニューロンにおけるネプリライシンの発現の低減、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも一つにより引き起こされる。別の実施形態では、神経疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病、抑鬱症、てんかん、多発性硬化症、躁病、ルー・ゲーリッグ病、軽度認知機能障害、多発梗塞性認知症、およびレビー小体型認知症からなる群から選択される。
【００１５】
本明細書に記載されるのは、ＩＣＡＭ−１タンパク質、またはそれらの断片もしくは変種を、必要とされる対象に投与することを含む、対象における神経疾患を予防または処置する方法である。
【００１６】
本明細書に記載されるのは、ＩＣＡＭ−１タンパク質、またはそれらの断片もしくは変種をニューロンと共培養することを含む、ニューロンにおけるネプリライシンの発現を増加する方法である。
【００１７】
本明細書に記載されるのは、ＩＣＡＭ−１（細胞接着分子−１）タンパク質、またはそれらの断片もしくは変種を対象に投与することを含む、対象におけるネプリライシンの発現を増加する方法である。
【００１８】
本明細書に記載されるのは、ＩＣＡＭ−１タンパク質、またはそれらの断片もしくは変種を含む組成物であって、該タンパク質、それらの断片または変種は、アミロイド−ベータペプチド、認知症の原因、を除去するために、ニューロンにおけるネプリライシンの発現を増加することができ、かつ、それゆえにアルツハイマー病を含む神経疾患を予防または処置するのに有用である、組成物である。
【００１９】
出典明示による組み込み
本明細書において言及されるすべての刊行物、特許および特許出願は、各個の刊公物、特許または特許出願が出典明示により具体的かつ個別に組み込まれることが示される場合と同じ程度に、出典明示により本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
本発明の新規な特徴が、添付の特許請求の範囲に具体的に記載されている。本発明の特徴および利点をより良く理解するには、本発明の原理が利用されている例示的な実施形態を説明する以下の詳細な説明、および以下の添付図面を参照するとよい：
【図１】図１はミクログリア細胞におけるネプリライシンの発現へのＩＣＡＭ−１の影響を説明する。
【図２】図２は海馬におけるネプリライシンの発現へのＩＣＡＭ−１の影響を説明する。
【図３】図３はアミロイド−ベータ４２へのＩＣＡＭ−１の影響を説明する。
【図４】図４ＡはＩＣＡＭ−１タンパク質の構造を説明する。図４Ｂは実施例４で調製された４種のＩＣＡＭ−１断片を説明する。
【図５】図５は実施例４で調製されたＩＣＡＭ−１断片をコードする４種のＩＣＡＭ−１遺伝子を説明する。
【図６】図６はＩＣＡＭ−１遺伝子を含有するプラスミドで形質転換された大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株から取得された核酸を説明する。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
発明の詳細な説明
本発明の好ましい実施形態を本明細書で示し、記載しているが、このような実施形態は例示によってのみ提供されることは当業者には自明であろう。多数のバリエーション、変更、および置換が本発明から逸脱しないかぎり当業者に起こるであろう。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な置換が本発明を実施するにあたって使用されてもよいと、理解されるべきである。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義し、かつこれらの請求項の範囲内の方法および構造ならびにそれらの均等物がそれによって含まれる。
【００２２】
他に特徴付けられない限り、本明細書中で用いられる専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
【００２３】
参照数値との関連で、用語「約」は、その数値からプラスまたはマイナス１５％の値の範囲を含む。例えば、量「約１０」は、８．５から１１．５の量を含む。
【００２４】
用語「アミロイド−ベータ（Ａβ）」は、アルツハイマー病を有する患者の脳に見られるアミロイド斑の主成分を指す。Ａβは、膜貫通糖タンパク質であるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）のＣ末端に由来するアミノ酸を含むペプチドとすることができる。Ａβはβ−セクレターゼおよびγ−セレクターゼの連続作用（ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｏｐｅｒａｔｉｏｎ）により、ＡＰＰから産生させることができる。Ａβは、３９から４３アミノ酸、または４０から４２アミノ酸であり得る。Ａβは、ＮＣＢＩ登録番号：ＮＰ＿０００４７５のアミノ酸配列の６７２−７１３残基（Ａβ４２）あるいは６７２−７１１残基（Ａβ４０）を含み得る。Ａβはヒトアミロイド−ベータＡ４タンパク質アイソフォーム前駆体であり得る。Ａβは哺乳動物に由来し得る。Ａβはヒトまたはマウスに由来し得る。Ａβは遺伝子組換えにより産生できる。
【００２５】
用語「タウタンパク質」は、中枢神経系のニューロンで見られる微小管結合タンパク質を指す。タウタンパク質は、チューブリンと相互作用して、微少管を安定化し、微少管のチューブリン会合を促進する。脳組織は６種の異なるタウアイソフォームを含み得る。タウタンパク質の過剰リン酸化はアルツハイマー病の発症（ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）に関連している。タウタンパク質は高可溶性であり得る。ヒトにおいて、タウタンパク質は非神経細胞よりも神経細胞において見られ得る。タンパク質は軸索微少管の安定化に関与し得る。タウタンパク質はＮＣＢＩ登録番号：ＮＰ＿００５９０１のアミノ酸配列を有する微少管結合タンパク質タウアイソフォーム２であり得る。タウタンパク質は哺乳動物に由来し得る。タウタンパク質はヒトまたはマウスに由来し得る。タウタンパク質は遺伝子組換えにより産生できる。
【００２６】
用語「ネプリライシン」は、多数の小さな分泌ペプチドを分解する亜鉛依存性メタロプロテアーゼ酵素を指す。ネプリライシンは、アミロイド−ベータが神経組織において異常にフォールディングされ凝集する場合に、アルツハイマー病を引き起こすアミロイド−ベータを分解することができる。ネプリライシンはＮＣＢＩ登録番号：ＮＰ＿０００８９３のアミノ酸配列を有するペプチドであり得る。ネプリライシンは哺乳動物に由来し得る。ネプリライシンはヒトまたはマウスに由来し得る。ネプリライシンは遺伝子組換えにより産生できる。
【００２７】
ＩＣＡＭ−１
本明細書に記載されるのは、活性成分としてＩＣＡＭ−１（細胞内接着分子−１）タンパク質、またはそれらの断片もしくは変種を含む、医薬組成物である。
【００２８】
一実施態様では、本明細書に記載される組成物および方法のために有用なＩＣＡＭ−１は、天然に存在する（ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ）ＩＣＡＭ−１を含む。一実施形態では、天然に存在するＩＣＡＭ−１には、動物と通常関連するＩＣＡＭ−１の野生型アミノ酸配列を有するＩＣＡＭ−１が挙げられるが、それらに限定されない。別の実施形態では、天然に存在するＩＣＡＭ−１には、ＩＣＡＭ−１の天然に存在する変種が挙げられるが、それらに限定されない。一実施形態では、天然に存在する変種は対立遺伝子バリアント（ａｌｌｅｌｉｃ  ｖａｒｉａｎｔ）である。別の実施形態では、天然に存在する変種は多型バリアント（ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ  ｖａｒｉａｎｔ）である。別の実施態様では、本明細書に記載される組成物および方法のために有用なＩＣＡＭ−１は、ＩＣＡＭ−１の変異体（ｍｕｔａｎｔ）を含む。一実施形態では、変異体は天然に見られる変異を有するＩＣＡＭ−１であり得る。別の実施形態では、変異体はＩＣＡＭ−１に人工的に導入された変異であり得る。一実施形態では、ＩＣＡＭ−１をコードする核酸配列（ｎｕｃｌｅｉｃ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）に一以上のアミノ酸を置換、欠失または挿入する影響を及ぼすまたは及ぼさない、ＩＣＡＭ−１の核酸配列に導入された変異であり得る。
【００２９】
一実施態様では、本明細書に記載される組成物および方法のために有用なＩＣＡＭ−１は、動物のＩＣＡＭ−１をコードするポリペプチド配列を含む。ＩＣＡＭ−１をコードする動物には、ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）、マウス（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）、ラット（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）、ウシ（Ｂｏｓ  ｔａｕｒｕｓ）、チンパンジー（Ｐａｎ  ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ）、イエイヌ（Ｃａｎｉｓ  ｌｕｐｕｓ  ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）、イノシシ（Ｓｕｓ  ｓｃｒｏｆａ）、ウサギ（Ｏｒｙｃｔｏｌａｇｕｓ  ｃｕｎｉｃｕｌｕｓ）、アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）、ホオジロテナガザル（Ｎｏｍａｓｃｕｓ  ｌｅｕｃｏｇｅｎｙｓ）、チャイニーズハムスター（Ｃｒｉｃｅｔｕｌｕｓ  ｇｒｉｓｅｕｓ）、ゴリラ（Ｇｏｒｉｌｌａ  ｇｏｒｉｌｌａ）、スマトラオランウータン（Ｐｏｎｇｏ  ａｂｅｌｉｉ）、コモンマーモセット（Ｃａｌｌｉｔｈｒｉｘ  ｊａｃｃｈｕｓ）、およびジャイアントパンダ（Ａｉｌｕｒｏｐｏｄａ  ｍｅｌａｎｏｌｅｕｃａ）が挙げられるが、それらに限定されない。これらの動物で発見された様々なＩＣＡＭ−１ペプチド配列が、国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）（ＮＣＢＩ）を含む公開データベースで入手可能である。一実施形態では、本明細書に記載される組成物および方法のために有用なＩＣＡＭ−１は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号に対応する配列を備える、動物のＩＣＡＭ−１である。本明細書に記載される組成物および方法のために有用なＩＣＡＭ−１のＧｅｎＢａｎｋ登録番号には、Ｐ１３５９７．１、Ｑ００２３８．１、ＣＡＡ４１９７７．１、ＡＡＢ１９９７８．１、Ｐ０５３６２．２、ＮＰ＿０３７０９９．１、ＮＰ＿０００１９２．２、ＮＰ＿７７６７７３．１、ＮＰ＿００１００９９４６．１、Ｐ３３７２９．２、Ｑ５ＮＫＶ４．１、Ｑ２８８０６．２、Ｑ９５１３２．１、ＮＰ＿００１０４０６００．１、ＤＡＡ２８００２．１、Ｑ５ＮＫＶ９．１、Ｑ５ＮＫＶ６．１、ＡＡＡ９２５５１．１、ＮＰ＿０３４６２３．１、ＮＰ＿９９８９８１．１、ＡＡＡ３７８７５．１、ＡＡＦ８０２８７．１、ＮＰ＿００１００３２９１．１、ＡＡＤ１３６１７．１、ＮＰ＿００１００９７３１．１、ＡＣＪ４９１４６．１、ＡＡＢ５１１４５．１、ＢＡＤ０４９２０．１、１ＩＡＭ＿Ａ、１ＭＱ８＿Ｃ、１ＭＱ８＿Ａ、３ＴＣＸ＿ｂ、３ＴＣＸ＿ａ、３ＴＣＸ＿Ｚ、３ＴＣＸ＿Ｙ、３ＴＣＸ＿Ｘ、３ＴＣＸ＿Ｗ、３ＴＣＸ＿Ｖ、３ＴＣＸ＿Ｕ、３ＴＣＸ＿Ｔ、３ＴＣＸ＿Ｓ、３ＴＣＸ＿Ｒ、３ＴＣＸ＿Ｑ、３ＴＣＸ＿Ｐ、３ＴＣＸ＿Ｏ、３ＴＣＸ＿Ｎ、３ＴＣＸ＿Ｍ、３ＴＣＸ＿Ｌ、３ＴＣＸ＿Ｋ、３ＴＣＸ＿Ｊ、３ＴＣＸ＿Ｉ、３ＴＣＸ＿Ｈ、３ＴＣＸ＿Ｇ、３ＴＣＸ＿Ｆ、３ＴＣＸ＿Ｅ、３ＴＣＸ＿Ｄ、３ＴＣＸ＿Ｃ、３ＴＣＸ＿Ｂ、３ＴＣＸ＿Ａ、２ＯＺ４＿Ｈ、２ＯＺ４＿Ｌ、２ＯＺ４＿Ａ、１Ｐ５３＿Ｂ、１Ｐ５３＿Ａ、１ＭＱ８＿Ｄ、１ＭＱ８＿Ｂ、１ＩＣ１＿Ｂ、１ＩＣ１＿Ａ、ＣＡＡ３００５１．１、１Ｄ３Ｅ＿Ｉ、１Ｄ３Ｅ＿４、１Ｄ３Ｅ＿３、１Ｄ３Ｅ＿２、１Ｄ３Ｅ＿１、１Ｄ３Ｌ＿Ａ、ＮＰ＿０３７０２１．１、１ＤＧＩ＿４��１ＤＧＩ＿３、１ＤＧＩ＿２、１ＤＧＩ＿１、１ＤＧＩ＿Ｒ、ＮＰ＿０３４６２４．１、ＮＰ＿００１０３２８６９．２、ＮＰ＿００１１８６７６３．１、ＮＰ＿５４２４１３．１、ＮＰ＿００１０６９．１、Ｐ９０４８９．１、ＮＰ＿５７９８４０．１、３ＥＯ９＿Ｈ、３ＥＯ９＿Ｌ、３ＥＯＢ＿Ｊ、３ＥＯＢ＿Ｂ、３ＥＯＢ＿Ａ、３ＥＯＢ＿Ｉ、３ＥＯＢ＿Ｈ、３ＥＯＢ＿Ｌ、３ＥＯＡ＿Ｊ、３ＥＯＡ＿Ｂ、３ＥＯＡ＿Ａ、３ＥＯＡ＿Ｉ、３ＥＯＡ＿Ｈ、３ＥＯＡ＿Ｌ、ＢＡＡ００７５９．１、ＣＡＡ３６５０７．１、ＮＰ＿９９９０５６．１、ＮＰ＿０３６８４３．１、ＡＡＡ８４８６６．１、３ＨＩ６＿Ｙ、３ＨＩ６＿Ｘ、３ＨＩ６＿Ｌ、３ＨＩ６＿Ｈ、３ＨＩ６＿Ｂ、３ＨＩ６＿Ａ、３ＨＩ５＿Ｌ、３ＨＩ５＿Ｈ、ＡＡＡ３７８７６．１、１ＭＪＮ＿Ａ、ＡＡＡ３５４１５．１、１ＭＱＡ＿Ａ、１ＭＱ９＿Ａ、ＮＰ＿００１１３９２８０．１、ＮＰ＿０００６２３．２、ＮＰ＿０００４２５．１、ＥＡＷ７２９５０．１、ＥＡＷ７２９４９．１、ＮＰ＿９３８０３３．１、ＮＰ＿００５４０８．１、ＮＰ＿００２２１９．１、Ｐ２９５３３．１、Ｐ１９３２０．１、Ｑ９ＵＭＦ０．３、Ｐ１３５９８．２、ＮＰ＿０３５８２３．３、ＮＰ＿９３７８８２．１、ＮＰ＿００３８７１．１、ＮＰ＿００１１０７８５２．１、ＮＰ＿００２２００．２、ＮＰ＿００１０９３２５９．１、ＮＰ＿００１０９３２５８．１、ＮＰ＿００１０９３２５７．１、ＮＰ＿０００８６４．２、ＮＰ＿００１０９３２５６．１、ＮＰ＿０３８９００．１、ＮＰ＿０５８５７７．１、ＮＰ＿００１１２６２００．１、ＮＰ＿００１０９５１２０．１、ＮＰ＿００１０９４６２８．１、ＮＰ＿００１０９４５０１．１、ＮＰ＿７７６９０９．１、ＮＰ＿６１２４０５．２、ＥＨＨ５０１０８．１、ＥＨＨ１４９９０．１、ＮＰ＿００１０７５６２１．１、ＥＨＢ０２１６５．１、ＸＰ＿００３４７９２２３．１、ＸＰ＿００３４０９４２１．１、ＡＥＨ１７９２９．１、ＮＰ＿００１００３２９８．１、ＡＤＳ８７９０７．１、ＡＤＳ８７８２１．１、ＡＤＳ１１２３５．１、ＸＰ＿００２９２８１９９．１、ＸＰ＿００１１３５５２７．２、ＸＰ＿００３２６０１６８．１、ＸＰ＿００３２６０１６７．１、ＸＰ＿００３２６０１６６．１、ＡＥＤ７０９１６．１、１ＹＯ４＿Ａ、１Ｚ７Ｚ＿Ｉ、１ＶＣＡ＿Ｂ、１ＶＣＡ＿Ａ、ＢＡＥ２５３６４．１、ＢＡＥ３７１３２．１、ＢＡＪ２０７６４．１、ＡＡＡ６１２６９．１、ＡＡＡ５２７０９．１、ＡＡＡ４２３３２．１、ＡＡＡ４０５４５．１、ＡＡＡ５１９１７．１、ＸＰ＿００２８０１７１６．１、ＸＰ＿００１１０７８６０．１、ＸＰ＿００１１０７９２４．１、ＤＡＡ３１４７７．１、ＤＡＡ３１４３９．１、ＸＰ＿００２７５１１８６．１、ＸＰ＿００２７５１１８５．１、ＸＰ＿００２７５１１８４．１、ＡＡＯ５２７４２．１、ＡＡＧ３０２８０．１、ＡＡＣ９７９３１．１、ＡＡＨ８９８１２．１、ＡＡＨ８１８３７．１、ＥＦＢ１７３４３．１、ＡＡＨ１１１５９．２、ＡＡＨ２９８２３．１、ＡＡＡ６１２７０．１、ＡＡＹ９９６２２．１、ＡＡＩ５１４６０．１、ＡＡＭ９６１９０．１、ＡＡＨ８５００３．１、ＡＡＨ６８４９０．２、ＡＡＨ１７２７６．３、ＡＡＡ��６９２１．１、１Ｄ３Ｉ＿Ｉ、ＡＣＰ５９４５４．１、ＣＡＪ１８５８０．１、ＡＣＥ８７４３０．１、ＡＣＥ８６７４４．１、ＣＡＨ９２０６３．１、ＡＢＳ８５１９２．１、ＢＡＦ８４４２１．１、ＢＡＤ９６９８６．１、ＥＤＬ８２０２３．１、ＥＤＬ７８３３４．１、ＥＤＬ１２３８９．１、ＥＤＬ１２３８８．１、ＣＡＡ３４６２１．１、ＣＡＡ４５２５４．１、ＣＡＡ４７９８９．１、ＡＡＸ０４６６３．１、ＡＡＱ８０６６６．１、ＡＡＥ８４８０９．１、ＡＡＥ８４８０８．１、ＢＡＢ１９７８２．１、ＢＡＢ１９６５０．１、２２６３４７、ＣＡＡ３７２１８．１、ＣＡＡ３３６３０．１、Ｑ２８２６０．１、ＮＰ＿７７６９７５．１、ＮＰ＿０００９４６．２、Ｐ２９５３４．１、ＡＡＢ４６８６３．１、ＮＰ＿９９７４０４．１、ＮＰ＿９９７４０３．１、ＮＰ＿０６５３９３．１、ＮＰ＿７２２５５０．１、ＮＰ＿００８９３９．１、ＮＰ＿９９９５６４．１、ＥＡＷ９４２２０．１、ＥＡＷ９４２１９．１、ＥＡＷ９４２１８．１、ＥＡＷ９４２１７．１、ＥＡＷ９４２１６．１、ＮＰ＿０３５０１２．２、ＮＰ＿００１１７１７４４．１、ＮＰ＿０５９４３０．２、ＮＰ＿００１０２００８３．１、ＮＰ＿０００５６６．３、ＮＰ＿００１７０３．２、ＮＰ＿００６５２４．１、ＮＰ＿００４７５３．１、Ｐ１５９４１．３、Ｐ２０７０１．３、Ｑ８６ＹＪ５．２、Ｐ０９４５０．１、ＮＰ＿０６５１０９．１、ＮＰ＿０３２２２３．２、ＮＰ＿００４０４５．１、Ｑ８２１２２．４、ＮＰ＿００１１９２２７３．１、ＮＰ＿００１１７１７４５．１、ＮＰ＿００１１７１７４２．１、ＮＰ＿００１５３５．１、ＸＰ＿５４２０７４．２、ＮＰ＿００３２５０．３、ＮＰ＿００４１９３．１、ＮＰ＿００１０２５４５９．１、ＮＰ＿００１００３３０１．１、ＮＰ＿９９９０１１．１、ＮＰ＿０７１６１４．１、ＮＰ＿００３１１４．１、ＮＰ＿００１１６４６２１．１、ＮＰ＿００１１１７１９６．１、ＮＰ＿００１１１７１９５．１、ＮＰ＿００１０９１７３１．１、ＮＰ＿０３１６４５．２、ＮＰ＿００１００７７２６．１、ＮＰ＿９９９１８７．１、ＮＰ＿６２０２３４．１、ＮＰ＿０３２４４２．１、ＥＨＨ５９１８９．１、ＥＨＨ２９６１８．１、ＮＰ＿００１０７５９０２．１、ＮＰ＿００１０３４２２１．１、ＮＰ＿４４６３１０．１、Ｑ２８７３０．１、ＮＰ＿０７１７７２．１、ＮＰ＿００１００９１６６．１、ＮＰ＿００１１８９４８２．１、Ｑ６０６２５．１、ＮＰ＿０７６３８１．１、ＸＰ＿００３５１４８２８．１、ＸＰ＿００３５１２８４０．１、ＥＨＢ０３３４１．１、ＸＰ＿００３１２３２６８．１、ＸＰ＿００３１２３２９２．３、ＮＰ＿００１７２７．１、ＮＰ＿０３２３４５．２、ＮＰ＿００４２１９．３、ＮＰ＿０５９４３１．１、Ｐ１０９２２．４、ＡＥＮ３４０９９．１、ＡＥＮ３４０９８．１、ＥＧＷ０２５９８．１、ＡＤＴ４６９５２．１、ＡＤＳ７３６６１．１、ＡＤＳ５８８６５．１、ＡＤＳ３０９１９．１、ＮＰ＿００１１６５５５０．１、ＡＤＴ４６９５１．１、ＡＤＳ５８８６６．１、ＡＤＳ１１２３６．１、ＡＡＣ５０９５９．１、ＮＰ＿９８７１０３．１、ＡＥＬ２１３８１．１、ＡＥＨ２１９３９．１、ＡＥＨ１７９５６．１、��ＥＨ１７９５５．１、ＡＥＨ１７９５４．１、ＡＥＨ１７９５３．１、ＡＥＨ１７９５２．１、ＡＥＨ１７９５１．１、ＡＥＨ１７９５０．１、ＡＥＨ１７９４９．１、ＡＥＨ１７９４８．１、ＡＥＨ１７９４７．１、ＡＥＨ１７９４６．１、ＡＥＨ１７９４５．１、ＡＥＨ１７９４４．１、ＡＥＨ１７９４３．１、ＡＥＨ１７９４２．１、ＡＥＨ１７９４１．１、ＡＥＨ１７９４０．１、ＡＥＨ１７９３９．１、ＡＥＨ１７９３８．１、ＡＥＨ１７９３７．１、ＡＥＨ１７９３６．１、ＡＥＨ１７９３５．１、ＡＥＨ１７９３４．１、ＡＥＨ１７９３３．１、ＡＥＨ１７９３２．１、ＡＥＨ１７９３１．１、ＡＥＨ１７９３０．１、ＡＥＦ７９４４８．１、ＡＥＦ７９４４７．１、ＡＥＦ７９４４６．１、ＡＥＦ７９４４５．１、ＡＥＦ７９４４４．１、ＡＥＦ７９４４３．１、ＡＥＦ７５６４３．１、ＸＰ＿００２９２１４２２．１、ＸＰ＿００３２６２６９０．１、ＸＰ＿００３２６２６８９．１、ＸＰ＿００３２６２６８８．１、ＸＰ＿００１９２２０１５．３、ＸＰ＿００２６６１３０７．２、ＸＰ＿６９４５５６．３、１ＲＭＦ＿Ｌ、１Ｚ７Ｚ＿５、１Ｚ７Ｚ＿４、１Ｚ７Ｚ＿３、１Ｚ７Ｚ＿２、１Ｚ７Ｚ＿１、１ＲＭＦ＿Ｈ、３ＢＮ３＿Ｂ、２Ｐ２８＿Ｂ、２Ｐ２８＿Ａ、２Ｐ２６＿Ａ、１ＺＸＱ＿Ａ、１ＵＯＴ＿Ｐ、１ＶＳＣ＿Ｂ、１ＶＳＣ＿Ａ、ＢＡＥ３１３１０．１、ＢＡＥ３１２８７．１、ＢＡＥ３１２８６．１、ＢＡＥ３０９９０．１、ＢＡＥ４０２２１．１、ＢＡＥ２９２７２．１、ＢＡＥ２９２６６．１、ＢＡＥ２９０７９．１、ＢＡＥ２９０５９．１、ＢＡＥ４２９４４．１、ＢＡＥ３０２１９．１、ＢＡＥ２２３９４．１、ＢＡＥ４２５０４．１、ＢＡＥ４２４９３．１、ＢＡＣ２６８３４．１、ＢＡＪ２０５５９．１、ＡＡＡ６４８３２．１、ＡＡＡ８３０３０．１、ＡＡＡ６７２０４．１、ＡＡＡ１８４７８．１、ＡＡＡ５２７０８．１、ＡＡＡ４０５４６．１、ＸＰ＿００２８２８６９８．１、ＸＰ＿００２８２７７５９．１、ＸＰ＿００２８０７８４１．１、ＡＡＡ６７３４９．１、ＸＰ＿２３３７３７．５、ＸＰ＿００１０７７２９３．２、ＡＡＢ３６３０５．１、ＡＡＱ１４９１０．１、ＡＡＱ１４９０９．１、ＡＡＱ１４９０８．１、ＡＡＱ１４９０７．１、ＡＡＱ１４９０６．１、ＡＡＱ１４９０１．１、ＡＡＱ１４８９８．１、ＡＡＱ１４８９７．１、ＡＡＱ１４８９６．１、ＡＡＦ１８９８０．１、ＡＡＨ
１５９６９．１、ＥＦＢ１２９８９．１、ＡＡＩ１３１４１．１、ＡＡＨ３０１３２．２、ＡＡＨ０８６２６．１、ＡＤＡ１８２０３．１、ＡＤＡ１８２０２．１、ＡＡＰ３６２３４．１、ＡＡＰ３５５００．１、ＡＡＯ３０１２８．１、ＡＡＨ２６３３８．１、ＡＡＳ８９２５９．１、ＡＡＨ０３０９７．１、ＡＡＦ８１２８０．１、ＡＡＢ１７５３２．１、ＡＡＡ６９８６２．１、ＡＡＡ８００１１．１、ＡＡＢ６０６６１．１、ＡＡＡ１６９２０．１、ＡＡＡ３６０３５．１、ＥＡＷ８４０９１．１、ＥＡＷ８４０８６．１、１Ｈ２Ｑ＿Ｐ、１Ｈ２Ｐ＿Ｐ、１Ｈ０３＿Ｑ、１Ｈ０３＿Ｐ、１ＩＪ９＿Ａ、１Ｄ３Ｉ＿４、１Ｄ３Ｉ＿３、１Ｄ３Ｉ＿２、１Ｄ３Ｉ＿１、１Ａ５Ｆ＿Ｈ、１Ａ５Ｆ＿Ｌ、１Ａ６Ｔ＿Ｄ、１Ａ６Ｔ＿Ｃ、１Ａ６Ｔ＿Ｂ、１Ａ６Ｔ＿Ａ、ＡＣＱ１５３４６．１、ＡＣＱ１５３４４．１、ＡＣＰ５７３２２．１、ＣＡＹ３９１４７．１、ＣＡＹ３９１４６．１、ＣＡＹ３９１４５．１、ＣＡＸ１４８２８．１、ＣＡＸ１４８２６．１、ＣＡＱ１４１４８．１、ＣＡＱ１４１４７．１、ＣＡＱ１４１４５．１、ＣＡＧ４６６３３．１、ＣＡＧ４６６１１．１、ＢＡＧ７３２９９．１、ＣＡＪ１８５１０．１、ＣＡＪ１８４５４．１、１Ｚ７Ｓ＿４、１Ｚ７Ｓ＿３、１Ｚ７Ｓ＿２、１Ｚ７Ｓ＿１、ＢＡＧ６０３４８．１、ＢＡＧ３５５２０．１、ＡＢＭ８５９５７．１、ＡＢＭ８４７１１．１、ＤＡＡ０６１４２．１、ＤＡＡ０６１４１．１、ＣＡＰ７２０５５．１、ＢＡＦ８５７９９．１、ＢＡＤ９６９３９．１、ＢＡＤ９３１１５．１、ＡＢＵ３７６７６．１、ＡＢＵ３７６７５．１、ＡＢＵ３７６７４．１、ＥＤＬ７８３３２．１、ＥＤＬ２５１５３．１、ＥＤＬ２５１５１．１、ＣＡＭ７３１８１．１、ＡＢＭ９２２３２．１、ＡＢＭ８２７６９．１、ＡＡＱ１４９２２．１、ＡＡＱ１４９０５．１、ＡＡＱ１４９０４．１、ＡＡＱ１４９０２．１、ＡＢＬ３００３１．１、ＡＢＬ１３８７６．１、ＣＡＡ４０４４１．１、ＣＡＬ４７７３０．１、ＣＡＥ８４０９４．１、ＣＡＥ８４０９１．１、ＣＡＡ３４６２２．１、ＡＡＸ４２１８２．１、ＡＡＸ４２１８１．１、ＡＡＸ２９６４１．１、ＡＡＸ２９６４０．１、ＡＡＸ３７０８７．１、ＡＡＸ３６６３６．１、ＡＡＸ０４６６１．１、ＡＡＱ８０６６４．１、ＡＡＱ７１９３６．１、ＡＡＱ７０９８７．１、ＡＡＱ５３６５１．１、ＡＡＱ５３６５０．１、ＡＡＱ５３６４９．１、ＡＡＱ５３６４８．１、ＡＡＱ５３６４７．１、ＡＡＱ５３６４６．１、ＣＡＤ９７５６２．１、ＣＡＤ９７５６５．１、ＡＡＥ２２２０４．１、ＡＡＥ２２２０２．１、ＡＡＥ２０９２１．１、ＡＡＥ２０９２０．１、ＡＡＥ２０９１９．１、ＡＡＥ１０１３９．１、ＡＡＣ８９９８４．１、ＡＡＣ８９９８２．１、ＡＡＣ８７７９６．１、ＡＡＣ８７７９４．１、ＡＡＣ１９９０５．１、ＡＡＣ１９９０３．１、ＡＡＣ１９６６０．１、２２５９３８、ＡＡＡ５５７４４．１、ＮＰ＿５７０１１６．２、Ｑ５ＮＫＶ２．１、Ｑ５ＮＫＶ１．１、ＮＰ＿５７０１１８．１、Ｐ４１３２３．１、ＮＰ＿００１０２９１７０．１、２Ｖ７Ｄ＿Ｓ、２Ｖ７Ｄ＿Ｒ、２Ｖ７Ｄ＿Ｑ、２Ｖ７Ｄ＿Ｐ、２Ｖ７Ｄ＿Ｄ、２Ｖ７Ｄ＿Ｃ、２Ｖ７Ｄ＿Ｂ、２Ｖ７Ｄ＿Ａ、２ＪＦ１＿Ｔ、２ＪＦ１＿Ａ、ＡＡＥ１８９３３．１、ＡＡＥ１８９３２．１、ＡＡＥ１８９３１．１、ＡＡＥ１８９３０．１、ＡＡＥ１８９２９．１、ＡＡＥ１８９２８．１、ＡＡＥ１８９２７．１、ＡＡＥ１８９２６．１、ＡＡＥ１８９２５．１、ＡＡＥ１８９２４．１、ＡＡＥ１８９２３．１、ＡＡＥ１８９２２．１、ＡＡＥ１８９２１．１、ＡＡＥ１８９２０．１、ＡＡＥ１８９１９．１、ＡＡＥ１８９１８．１、ＡＡＥ１８９１７．１、ＡＡＥ１８９１６．１、ＡＡＥ１８９１５．１、３Ｍ６Ｆ＿Ａ、ＡＡＡ６０３９３．１、およびＡＡＡ６０３９２．１が挙げられるが、それらに限定されない。
【００３０】
一実施態様では、本明細書に記載される組成物および方法のために有用なＩＣＡＭ−１は、グリコシル化されている。別の実施態様では、本明細書に記載される組成物および方法のために有用なＩＣＡＭ−１は、非グリコシル化されている。一実施形態では、グリコシル化は天然に起こり得る。別の実施形態では、グリコシル化は、当技術分野において一般に知られている組換えＤＮＡ技術によって、ＩＣＡＭ−１に人工的に導入できる。
【００３１】
一実施態様では、本明細書に記載される組成物および方法のために有用なＩＣＡＭ−１は、天然に修飾（ｍｏｄｉｆｙ）されている。一実施形態では、天然の修飾は翻訳後修飾である。一実施形態では、ＩＣＡＭ−１はＩＣＡＭ−１のシグナルペプチド部分を含有するポリペプチドを含む。別の実施形態では、ＩＣＡＭ−１はＩＣＡＭ−１のシグナルペプチド部分を欠くポリペプチドを含む。
【００３２】
一実施態様では、本明細書に記載される組成物および方法のために有用なＩＣＡＭ−１は、配列番号１（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＡＱ１４９０１）：ＭＡＰＳＳＰＲＰＡＬＰＡＬＬＶＬＬＧＡＬＦＰＧＰＧＮＡＱＴＳＶＳＰＳＫＶＩＬＰＲＧＧＳＶＬＶＴＣＳＴＳＣＤＱＰＫＬＬＧＩＥＴＰＬＰＫＫＥＬＬＬＰＧＮＮＲＫＶＹＥＬＳＮＶＱＥＤＳＱＰＭＣＹＳＮＣＰＤＧＱＳＴＡＫＴＦＬＴＶＹＷＴＰＥＲＶＥＬＡＰＬＰＳＷＱＰＶＧＫＮＬＴＬＲＣＱＶＥＧＧＡＰＲＡＮＬＴＶＶＬＬＲＧＥＫＥＬＫＲＥＰＡＶＧＥＰＡＥＶＴＴＴＶＬＶＲＲＤＨＨＧＡＮＦＳＣＲＴＥＬＤＬＲＰＱＧＬＥＬＦＥＮＴＳＡＰＹＱＬＱＴＦＶＬＰＡＴＰＰＱＬＶＳＰＲＶＬＥＶＤＴＱＧＴＶＶＣＳＬＤＸＬＦＰＶＳＥＡＱＶＨＬＡＬＧＤＱＲＬＮＰＴＶＴＹＧＮＤＳＦＳＡＫＡＳＶＳＶＴＡＥＤＥＧＴＱＲＬＴＣＡＶＩＬＧＮＱＳＱＥＴＬＱＴＶＴＩＹＳＦＰＡＰＮＶＩＬＴＫＰＥＶＳＥＧＴＥＶＴＶＫＣＥＡＨＰＲＡＫＶＴＬＮＧＶＰＡＱＰＬＧＰＲＡＱＬＬＬＫＡＴＰＥＤＮＧＲＳＦＳＣＳＡＴＬＥＶＡＧＱＬＩＨＫＮＱＴＲＥＬＲＶＬＹＧＰＲＬＤＥＲＤＣＰＧＮＷＴＷＰＥＮＳＱＱＴＰＭＣＱＡＷＧＮＰＬＰＥＬＫＣＬＫＤＧＴＦＰＬＰＩＧＥＳＶＴＶＴＲＤＬＥＧＴＹＬＣＲＡＲＳＴＱＧＥＶＴＲＥＶＴＶＮＶＬＳＰＲＹＥＩＶＩＩＴＶＶＡＡＡＶＩＭＧＴＡＧＬＳＴＹＬＹＮＲＱＲＫＩＫＫＹＲＬＱＱＡＱＫＧＴＰＭＫＰＮＴＱＡＴＰＰ（配列番号１）のアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、ＩＣＡＭ−１は、アミノ酸配列ＡＡＱ１４９０１に対応するが、配列番号１の１番目から２７番目のアミノ酸残基に対応するシグナルペプチドを欠く、ペプチドである。別の実施形態では、ＩＣＡＭ−１はチンパンジーのＩＣＡＭ−１タンパク質である。別の実施形態ではＩＣＡＭ−１は配列番号１０（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＡＱ１４８９６）のアミノ酸配列を有する。
【００３３】
一実施形態では、本明細書に記載される組成物および方法のために有用なＩＣＡＭ−１は、ＩＣＡＭ−１タンパク質の断片である。一実施形態では、ＩＣＡＭ−１タンパク質の断片は、ＩＣＡＭ−１タンパク質のものと同等の生物活性を有する。別の実施形態では、ＩＣＡＭ−１タンパク質の断片は、ＩＣＡＭ−１タンパク質のものと同等の生物活性を有さない。別の実施形態では、ＩＣＡＭ−１タンパク質の断片は生物学的に不活性である。
【００３４】
一実施態様では、ネプリライシン発現に対するＩＣＡＭ−１の効果を用いて、ＩＣＡＭ−１の生物活性を測定する。一実施形態では、効果はネプリライシン発現の増加レベルである。別の実施形態では、効果はネプリライシン発現の減少である。一実施形態では、ＩＣＡＭ−１断片の生物活性が、比較のための標準としての役割を果たす別のＩＣＡＭ−１の活性のパーセンテージとして測定される。比較のためのＩＣＡＭ−１標準は、完全長ＩＣＡＭ−１、切断型ＩＣＡＭ−１、変異型ＩＣＡＭ−１、翻訳後修飾型ＩＣＡＭ−１、または比較されるＩＣＡＭ−１とは異なるＩＣＡＭ−１の断片とすることができる。本明細書に記載される任意のＩＣＡＭ−１タンパク質またはポリペプチドが、比較でのタンパク質として用いることができる。生物活性における相違のパーセンテージは、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１０５％、１１０％、１１５％、１２０％、１２５％、１３０％、１３５％、１４０％、１４５％、１５０％、１５５％、１６０％、１６５％、１７０％、１７５％、１８０％、１８５％、１９０％、１９５％、または２００％とすることができる。一実施形態では、ＩＣＡＭ−１断片の生物活性が、比較のための標準としての役割を果たす別のＩＣＡＭ−１の活性の倍−増加または減少として測定される。倍−増加または減少は、約２倍、２．５倍、３倍、４倍、５倍、７倍、倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、８００倍、または１０００倍とすることができる。
【００３５】
一実施形態では、ＩＣＡＭ−１断片は、配列番号１の２８番目から４８３番目のアミノ酸を含む。別の実施形態では、配列番号１の２８番目から３８０番目のアミノ酸を含む。別の実施形態では、配列番号１の２８番目から３００番目のアミノ酸を含む。別の実施形態では、配列番号１の２８番目から２００番目のアミノ酸を含む。
【００３６】
本明細書に記載されるのは、神経障害の処置のために有用な配列番号１のＩＣＡＭ−１変種である。一実施形態では、配列番号１の変種は、置換、欠失または挿入された一以上のアミノ酸を有するポリペプチドである。別の実施形態では、変種の配列番号１との配列同一性は、少なくとも８０％、８２％、８５％、８７％、８９％、９０％、９３％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％である。別の実施形態では、変種の細胞外ドメインの、配列番号１のものとの配列同一性は、少なくとも８０％、８２％、８５％、８７％、８９％、９０％、９３％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％である。別の実施形態では、変種の細胞内ドメインの、配列番号１のものとの配列同一性は、少なくとも８０％、８２％、８５％、８７％、８９％、９０％、９３％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％である。別の実施形態では、変種の膜貫通ドメインの、配列番号１のものとの配列同一性は、少なくとも８０％、８２％、８５％、８７％、８９％、９０％、９３％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％である。
【００３７】
一実施態様では、本明細書に記載される組成物および方法は、ＩＣＡＭ−１の一以上の単離されたポリペプチドを含む。一実施形態では、ＩＣＡＭ−１の一以上の単離されたポリペプチドは、異なるアミノ酸配列のＩＣＡＭ−１である。別の実施形態では、ＩＣＡＭ−１の一以上の単離されたポリペプチドは、翻訳後修飾過程により、異なるプロセシングを受けたＩＣＡＭ−１である。
【００３８】
別の実施態様では、本明細書に記載される組成物および方法は、細胞に結合している一以上のＩＣＡＭ−１ポリペプチドを含む。一実施形態では、一以上のＩＣＡＭ−１ポリペプチドは細胞に共有結合している。別の実施形態では、前記ポリペプチドは細胞膜に埋め込まれている。細胞には、ほ乳類細胞、細菌細胞、真菌細胞または昆虫細胞が挙げられるが、それらに限定されない。一実施形態では、細胞はヒト細胞である。別の実施形態では、細胞はヒト幹細胞である。別の実施態様では、細胞はヒト間葉系幹細胞である。別の実施態様では、細胞はヒト間質細胞である。別の実施態様では、細胞は臍帯血細胞である。本明細書に記載される組成物および方法のために有用な臍帯血細胞には、臍帯、臍帯血、羊膜嚢および胎盤で通常見られる細胞、または通常見られる細胞から培養された細胞が挙げられるが、それらに限定されない。
【００３９】
別の実施態様では、本明細書に記載される組成物および方法は、一以上のＩＣＡＭ−１ポリペプチドおよびＩＣＡＭ−１ポリペプチドを分泌する細胞を含む。
【００４０】
別の実施態様では、本明細書に記載される組成物および方法は、別の生体物質とコンジュゲートされた一以上のＩＣＡＭ−１を含む。生体物質には、コンジュゲートされたポリペプチドを単離または同定するために有用な、（当分野において「タグ」として知られている）様々な小ペプチド、別のタンパク質、化学的手段が挙げられるが、それらに限定されない。
【００４１】
一実施態様では、本明細書に記載されるＩＣＡＭ−１ポリペプチドは、生物、組織または細胞から単離される。一実施形態では、ＩＣＡＭ−１は間葉系幹細胞（ＭＳＣ）またはそれらの培養物から単離される。間葉系幹細胞の源の例には、胚卵黄嚢（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｙｏｌｋ  ｓａｃ）、胎盤、臍帯、臍帯血、皮膚、末梢血、骨髄、脂肪組織、筋肉、肝臓、神経組織、骨膜、胎膜、滑膜、滑液、羊膜、半月板、前十字靱帯、関節軟骨細胞、乳歯、周皮細胞、骨梁、膝蓋下脂肪体、脾臓および胸腺が挙げられるが、それらに限定されない。一実施形態では、ＭＳＣの源は、臍帯血由来ＭＳＣまたは骨髄由来ＭＳＣである。
【００４２】
本明細書に記載されるのは、臍帯血からＭＳＣを単離する方法である。一実施形態では、ＩＣＡＭ−１は臍帯血由来ＭＳＣを回収することにより単離される。一実施形態では、臍帯血由来ＭＳＣは遠心分離により単離される。別の実施形態では、臍帯血由来ＭＳＣは蛍光活性化細胞選別により単離される。別の実施形態では、臍帯血由来ＭＳＣは磁性ビーズを含む様々なタグを用いることにより単離される。別の実施形態では、臍帯血由来ＭＳＣはＭＳＣ特異的抗体を用いて単離される。いくつかの態様では、細胞分離および単離の他の方法を用いることができる。当分野において周知である、これらの方法には、細胞の大きさ、重量または形、細胞表面分子の種類の相違、化学薬品、タンパク質または他の細胞への耐性または誘引（ａｔｔｒａｃｔｉｏｎ）、および非ＭＳＣからＭＳＣを分別するために有用な他の物理学的または化学的特性により分離することが挙げられるが、それらに限定されない。
【００４３】
一実施態様では、ＩＣＡＭ−１は組換えＤＮＡ技術により産生される。一実施形態では、ＩＣＡＭ−１またはそれらの断片をコードする核酸は、適切な組換え発現系にクローニングされる。一実施形態では、組換え発現系は微生物発現系である。別の実施形態では、組換え発現系は昆虫細胞発現系である。別の実施形態では、組換え発現系はほ乳類発現系である。一実施形態では、微生物組換え系はｐＥＴベクター発現系である。一実施形態では、本明細書に記載されるＩＣＡＭ−１を発現するために有用なｐＥＴベクター発現系は、ｐＥＴ−２８ａプラスミドＤＮＡである。別の実施形態では、本明細書に記載される組成物のために有用な微生物発現系は、配列番号２（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＭ＿０００２０１）のヌクレオチド配列、またはそれらの断片を有するＩＣＡＭ−１をコードする核酸を含有するｐＥＴベクターである：ｃａａｇｃｔｔａｇｃｃｔｇｇｃｃｇｇｇａａａｃｇｇｇａｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｃｃｇｇｇａｇｃａｇｃｃｃｃｃｇｇｇｇｔｃａｔｃｇｃｃｃｔｇｃｃａｃｃｇｃｃｇｃｃｃｇａｔｔｇｃｔｔｔａｇｃｔｔｇｇａａａｔｔｃｃｇｇａｇｃｔｇａａｇｃｇｇｃｃａｇｃｇａｇｇｇａｇｇａｔｇａｃｃｃｔｃｔｃｇｇｃｃｃｇｇｇｃａｃｃｃｔｇｔｃａｇｔｃｃｇｇａａａｔａａｃｔｇｃａｇｃａｔｔｔｇｔｔｃｃｇｇａｇｇｇｇａａｇｇｃｇｃｇａｇｇｔｔｔｃｃｇｇｇａａａｇｃａｇｃａｃｃｇｃｃｃｃｔｔｇｇｃｃｃｃｃａｇｇｔｇｇｃｔａｇｃｇｃｔａｔａａａｇｇａｔｃａｃｇｃｇｃｃｃｃａｇｔｃｇａｃｇｃｔｇａｇｃｔｃｃｔｃｔｇｃｔａｃｔｃａｇａｇｔｔｇｃａａｃｃｔｃａｇｃｃｔｃｇｃｔａｔｇｇｃｔｃｃｃａｇｃａｇｃｃｃｃｃｇｇｃｃｃｇｃｇｃｔｇｃｃｃｇｃａｃｔｃｃｔｇｇｔｃｃｔｇｃｔｃｇｇｇｇｃｔｃｔｇｔｔｃｃｃａｇｇａｃｃｔｇｇｃａａｔｇｃｃｃａｇａｃａｔｃｔｇｔｇｔｃｃｃｃｃｔｃａａａａｇｔｃａｔｃｃｔｇｃｃｃｃｇｇｇｇａｇｇｃｔｃｃｇｔｇｃｔｇｇｔｇａｃａｔｇｃａｇｃａｃｃｔｃｃｔｇｔｇａｃｃａｇｃｃｃａａｇｔｔｇｔｔｇｇｇｃａｔａｇａｇａｃｃｃｃｇｔｔｇｃｃｔａａａａａｇｇａｇｔｔｇｃｔｃｃｔｇｃｃｔｇｇｇａａｃａａｃｃｇｇａａｇｇｔｇｔａｔｇａａｃｔｇａｇｃａａｔｇｔｇｃａａｇａａｇａｔａｇｃｃａａｃｃａａｔｇｔｇｃｔａｔｔｃａａａｃｔｇｃｃｃｔｇａｔｇｇｇｃａｇｔｃａａｃａｇｃｔａａａａｃｃｔｔｃｃｔｃａｃｃｇｔｇｔａｃｔｇｇａｃｔｃｃａｇａａｃｇｇｇｔｇｇａａｃｔｇｇｃａｃｃｃｃｔｃｃｃｃｔｃｔｔｇｇｃａｇｃｃａｇｔｇｇｇｃａａｇａａｃｃｔｔａｃｃｃｔａｃｇｃｔｇｃｃａｇｇｔｇｇａｇｇｇｔｇｇｇｇｃａｃｃｃｃｇｇｇｃｃａａｃｃｔｃａｃｃｇｔｇｇｔｇｃｔｇｃｔｃｃｇｔｇｇｇｇａｇａａｇｇａｇｃｔｇａａａｃｇｇｇａｇｃｃａｇｃｔｇｔｇｇｇｇｇａｇｃｃｃｇｃｔｇａｇｇｔｃａｃｇａｃｃａｃｇｇｔｇｃｔｇｇｔｇａｇｇａｇａｇａｔｃａｃｃａｔｇｇａｇｃｃａａｔｔｔｃｔｃｇｔｇｃｃｇｃａｃｔｇａａｃｔｇｇａｃｃｔｇｃｇｇｃｃｃｃａａｇｇｇｃｔｇｇａｇｃｔｇｔｔｔｇａｇａａｃａｃｃｔｃｇｇｃｃｃｃｃｔａｃｃａｇｃｔｃｃａｇａｃｃｔｔｔｇｔｃｃｔｇｃｃａｇｃｇａｃｔｃｃｃｃｃａｃａａｃｔｔｇｔｃａｇｃｃｃｃｃｇｇｇｔｃｃｔａｇａｇｇｔｇｇａｃａｃｇｃａｇｇｇｇａｃｃｇｔｇｇｔｃｔｇｔｔｃｃｃｔｇｇａｃｇｇｇｃｔｇｔｔｃｃｃａｇｔｃｔｃｇｇａｇｇｃｃｃａｇｇｔｃｃａｃｃｔｇｇｃａｃｔｇｇｇｇｇａｃｃａｇａｇｇｔｔｇａａｃｃｃｃａｃａｇｔｃａｃｃｔａｔｇｇｃａａｃｇａｃｔｃｃｔｔｃｔｃｇｇｃｃａａｇｇｃｃｔｃａｇｔｃａｇｔｇｔｇａｃｃｇｃａｇａｇｇａｃｇａｇｇｇｃａｃｃｃａｇｃｇｇｃｔｇａｃｇｔｇｔｇｃａｇｔａａｔａｃｔｇｇｇｇａａｃｃａｇａｇｃｃａｇｇａｇａｃａｃｔｇｃａｇａｃａｇｔｇａｃｃａｔｃｔａｃａｇｃｔｔｔｃｃｇｇｃｇｃｃｃａａｃｇｔｇａｔｔｃｔｇａｃｇａａｇｃｃａｇａｇｇｔｃｔｃａｇａａｇｇｇａｃｃｇａｇｇｔｇａｃａｇｔｇａａｇｔｇｔｇａｇｇｃｃｃａｃｃｃｔａｇａｇｃｃａａｇｇｔｇａｃｇｃｔｇａａｔｇｇｇｇｔｔｃｃａｇｃｃｃａｇｃｃａｃｔｇｇｇｃｃｃｇａｇｇｇｃｃｃａｇｃｔｃｃｔｇｃｔｇａａｇｇｃｃａｃｃｃｃａｇａｇｇａｃａａｃｇｇｇｃｇｃａｇｃｔｔｃｔｃｃｔｇｃｔｃｔｇｃａａｃｃｃｔｇｇａｇｇｔｇｇｃｃｇｇｃｃａｇｃｔｔａｔａｃａｃａａｇａａｃｃａｇａｃｃｃｇｇｇａｇｃｔｔｃｇｔｇｔｃｃｔｇｔａｔｇｇｃｃｃｃｃｇａｃｔｇｇａｃｇａｇａｇｇｇａｔｔｇｔｃｃｇｇｇａａａｃｔｇｇａｃｇｔｇｇｃｃａｇａａａａｔｔｃｃｃａｇｃａｇａｃｔｃｃａａｔｇｔｇｃｃａｇｇｃｔｔｇｇｇｇｇａａｃｃｃａｔｔｇｃｃｃｇａｇｃｔｃａａｇｔｇｔｃｔａａａｇｇａｔｇｇｃａｃｔｔｔｃｃｃａｃｔｇｃｃｃａｔｃｇｇｇｇａａｔｃａｇｔｇａｃｔｇｔｃａｃｔｃｇａｇａｔｃｔｔｇａｇｇｇｃａｃｃｔａｃｃｔｃｔｇｔｃｇｇｇｃｃａｇｇａｇｃａｃｔｃａａｇｇｇｇａｇｇｔｃａｃｃｃｇｃａａｇｇｔｇａｃｃｇｔｇａａｔｇｔｇｃｔｃｔｃｃｃｃｃｃｇｇｔａｔｇａｇａｔｔｇｔｃａｔｃａｔｃａｃｔｇｔｇｇｔａｇｃａｇｃｃｇｃａｇｔｃａｔａａｔｇｇｇｃａｃｔｇｃａｇｇｃｃｔｃａｇｃａｃｇｔａｃｃｔｃｔａｔａａｃｃｇｃｃａｇｃｇｇａａｇａｔｃａａｇａａａｔａｃａｇａｃｔａｃａａｃａｇｇｃｃｃａａａａａｇｇｇａｃｃｃｃｃａｔｇａａａｃｃｇａａｃａｃａｃａａｇｃｃａｃｇｃｃｔｃｃｃｔｇａａｃｃｔａｔｃｃｃｇｇｇａｃａｇｇｇｃｃｔｃｔｔｃｃｔｃｇｇｃｃｔｔｃｃｃａｔａｔｔｇｇｔｇｇｃａｇｔｇｇｔｇｃｃａｃａｃｔｇａａｃａｇａｇｔｇｇａａｇａｃａｔａｔｇｃｃａｔｇｃａｇｃｔａｃａｃｃｔａｃｃｇｇｃｃｃｔｇｇｇａｃｇｃｃｇｇａｇｇａｃａｇｇｇｃａｔｔｇｔｃｃｔｃａｇｔｃａｇａｔａｃａａｃａｇｃａｔｔｔｇｇｇｇｃｃａｔｇｇｔａｃｃｔｇｃａｃａｃｃｔａａａａｃａｃｔａｇｇｃｃａｃｇｃａｔｃｔｇａｔｃｔｇｔａｇｔｃａｃａｔｇａｃｔａａｇｃｃａａｇａｇｇａａｇｇａｇｃａａｇａｃｔｃａａｇａｃａｔｇａｔｔｇａｔｇｇａｔｇｔｔａａａｇｔｃｔａｇｃｃｔｇａｔｇａｇａｇｇｇｇａａｇｔｇｇｔｇｇｇｇｇａｇａｃａｔａｇｃｃｃｃａｃｃａｔｇａｇｇａｃａｔａｃａａｃｔｇｇｇａａａｔａｃｔｇａａａｃｔｔｇｃｔｇｃｃｔａｔｔｇｇｇｔａｔｇｃｔｇａｇｇｃｃｃｃａｃａｇａｃｔｔａｃａｇａａｇａａｇｔｇｇｃｃｃｔｃｃａｔａｇａｃａｔｇｔｇｔａｇｃａｔｃａａａａｃａｃａａａｇｇｃｃｃａｃａｃｔｔｃｃｔｇａｃｇｇａｔｇｃｃａｇｃｔｔｇｇｇｃａｃｔｇｃｔｇｔｃｔａｃｔｇａｃｃｃｃａａｃｃｃｔｔｇａｔｇａｔａｔｇｔａｔｔｔａｔｔｃａｔｔｔｇｔｔａｔｔｔｔａｃｃａｇｃｔａｔｔｔａｔｔｇａｇｔｇｔｃｔｔｔｔａｔｇｔａｇｇｃｔａａａｔｇａａｃａｔａｇｇｔｃｔｃｔｇｇｃｃｔｃａｃｇｇａｇｃｔｃｃｃａｇｔｃｃｔａａｔｃａｃａｔｔｃａａｇｇｔｃａｃｃａｇｇｔａｃａｇｔｔｇｔａｃａｇｇｔｔｇｔａｃａｃｔｇｃａｇｇａｇａｇｔｇｃｃｔｇｇｃａａａａａｇａｔｃａａａｔｇｇｇｇｃｔｇｇｇａｃｔｔｃｔｃａｔｔｇｇｃｃａａｃｃｔｇｃｃｔｔｔｃｃｃｃａｇａａｇｇａｇｔｇａｔｔｔｔｔｃｔａｔｃｇｇｃａｃａａａａｇｃａｃｔａｔａｔｇｇａｃｔｇｇｔａａｔｇｇｔｔａｃａｇｇｔｔｃａｇａｇａｔｔａｃｃｃａｇｔｇａｇｇｃｃｔｔａｔｔｃｃｔｃｃｃｔｔｃｃｃｃｃｃａａａａｃｔｇａｃａｃｃｔｔｔｇｔｔａｇｃｃａｃｃｔｃｃｃｃａｃｃｃａｃａｔａｃａｔｔｔｃｔｇｃｃａｇｔｇｔｔｃａｃａａｔｇａｃａｃｔｃａｇｃｇｇｔｃａｔｇｔｃｔｇｇａｃａｔｇａｇｔｇｃｃｃａｇｇｇａａｔａｔｇｃｃｃａａｇｃｔａｔｇｃｃｔｔｇｔｃｃｔｃｔｔｇｔｃｃｔｇｔｔｔｇｃａｔｔｔｃａｃｔｇｇｇａｇｃｔｔｇｃａｃｔａｔｇｃａｇｃｔｃｃａｇｔｔｔｃｃｔｇｃａｇｔｇａｔｃａｇｇｇｔｃｃｔｇｃａａｇｃａｇｔｇｇｇｇａａｇｇｇｇｇｃｃａａｇｇｔａｔｔｇｇａｇｇａｃｔｃｃｃｔｃｃｃａｇｃｔｔｔｇｇａａｇｃｃｔｃａｔｃｃｇｃｇｔｇｔｇｔｇｔｇｔｇｔｇｔｇｔａｔｇｔｇｔａｇａｃａａｇｃｔｃｔｃｇｃｔｃｔｇｔｃａｃｃｃａｇｇｃｔｇｇａｇｔｇｃａｇｔｇｇｔｇｃａａｔｃａｔｇｇｔｔｃａｃｔｇｃａｇｔｃｔｔｇａｃｃｔｔｔｔｇｇｇｃｔｃａａｇｔｇａｔｃｃｔｃｃｃａｃｃｔｃａｇｃｃｔｃｃｔｇａｇｔａｇｃｔｇｇｇａｃｃａｔａｇｇｃｔｃａｃａａｃａｃｃａｃａｃｃｔｇｇｃａａａｔｔｔｇａｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｃｃａｇａｇａｃｇｇｇｇｔｃｔｃｇｃａａｃａｔｔｇｃｃｃａｇａｃｔｔｃｃｔｔｔｇｔｇｔｔａｇｔｔａａｔａａａｇｃｔｔｔｃｔｃａａｃｔｇｃｃａａａ（配列番号２）。一実施形態では、ＩＣＡＭ−１を発現するために有用な微生物細胞は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１変種である。一実施形態では、変種は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）である。一実施形態では、組換えＩＣＡＭ−１の微生物発現は、形質転換された微生物細胞をＩＰＴＧで処置することにより誘導される。
【００４４】
本明細書に記載されるのは、神経障害の予防または処置のために有用な医薬組成物である。一実施形態では、神経障害は、ニューロンにおけるアミロイド−ベータ斑の形成、ニューロンにおけるタウタンパク質の過剰リン酸化、神経突起の損傷、ニューロンにおけるネプリライシンの発現の減少、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるいずれか一つにより引き起こされる疾患である。別の実施形態では、神経障害は、アルツハイマー病、パーキンソン病、抑鬱症、てんかん、多発性硬化症、躁病、ルー・ゲーリッグ病、軽度認知機能障害、多発梗塞性認知症、およびレビー小体型認知症からなる群から選択される。
【００４５】
一実施態様では、本明細書に記載されるＩＣＡＭ−１ポリペプチドは、神経障害の進行に介入する（ｉｎｔｅｒｖｅｎｅ）ために、対象に投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるＩＣＡＭ−１ポリペプチドは、アルツハイマー病の進行を遅らせる、または停止させる、または解消（ｒｅｖｅｒｓｅ）するために、アルツハイマー病を患っている対象に投与される。一実施形態では、一用量のＩＣＡＭ−１ポリペプチドは、一度に対象に投与される。別の実施形態では、一用量のＩＣＡＭ−１ポリペプチドは、長期間一定の間隔で対象に投与される。間隔は、数日、数週、数ヶ月、または数年とすることができる。別の実施形態では、初回量（ｉｎｉｔｉａｌ  ｄｏｓｅ）のＩＣＡＭ−１ポリペプチドが対象に投与され、その後、対象の臨床転帰に応じて、後続量（ｆｏｌｌｏｗ  ｕｐ  ｄｏｓｅ）が低減あるいは増加される。臨床転帰は、自己評価、臨床認知症スコアリング（ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｄｅｍｅｎｔｉａ  ｓｃｏｒｉｎｇ）などの臨床アンケート（ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅｓ）、またはメンタルステート検査（ｍｅｎｔａｌ  ｓｔａｔｅ  ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ）が挙げられるが、それらに限定されない、神経心理検査により測定される。
【００４６】
本明細書に記載される組成物は、局所投与または全身投与を介して送達することができる。一実施形態では、本明細書に記載される組成物は、神経障害を予防または処置するために有効な量で投与される。一実施形態では、有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）は臨床試験により決定される。有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｄｏｓｅ）は、神経学的状態の種類、製造工程、製剤、投与経路、および賦形剤の種類が挙げられるが、それらに限定されない、様々な状況に応じて変化し得る。
【００４７】
軽度認知機能障害を示す前認知症症候群（ｐｒｅ−ｄｅｍｅｎｔｉａ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）は、神経心理検査を用いて診断され得る。１年に軽度認知機能障害患者の約１２％が、アルツハイマー病に進行することが報告されている。驚くべきことに、何らかの処置が無い場合、６年後、軽度認知機能障害患者の約８０％がアルツハイマー病に進行する。そのため、本発明によるＩＣＡＭ−１タンパク質、またはそれらの断片もしくは変種が軽度認知機能障害患者に投与された場合、アルツハイマー病への進行は防がれる、または遅延するだろう。
【００４８】
一実施態様では、本明細書に記載される組成物は、アルツハイマー病、パーキンソン病、抑鬱症、てんかん、多発性硬化症、躁病、ルー・ゲーリッグ病、軽度認知機能障害、多発梗塞性認知症、およびレビー小体型認知症の予防または処置に有効な、他の治療薬（ｒｅｍｅｄｉｅｓ）または治療（ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）と組み合わせて、投与される。一実施形態では、本明細書に記載される組成物は、他の治療薬または治療と同時に投与される。別の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、アルツハイマー病、パーキンソン病、抑鬱症、てんかん、多発性硬化症、躁病、ルー・ゲーリッグ病、軽度認知機能障害、多発梗塞性認知症、およびレビー小体型認知症の予防または処置に有効であると知られている、他の治療組成物（ｒｅｍｅｄｉａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）を含有するように製剤化される。
【００４９】
本明細書に記載される組成物は、有効成分に加え、医薬上許容される添加剤を含有できる。注射製剤（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）または局所投与製剤などの非経口投与のための製剤も用いることができる。例えば、非経口投与のための製剤は、必要であれば、水または他の医薬上許容される溶媒を採用し、無菌溶液または懸濁液の注射製剤の形態で用いることができる。例えば、単位用量製剤は、医薬上許容される担体または媒体（ｍｅｄｉｕｍ）、例えば滅菌水、生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁液、界面活性剤、安定剤、賦形剤、ビヒクル、保存剤、およびバインダーを用いて、調製され得る。非経口投与は、局所投与および全身投与を含むことができる。局所投与は、損傷領域または損傷領域の周辺領域、例えば、脳もしくは脊髄、それらの周辺領域、またはそれらの反対の領域に、医薬製剤を直接投与することにより、実施できる。局所投与は、鼻腔内投与および動脈内投与を含むことができる。全身投与は、髄液（ｓｐｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ）、静脈あるいは動脈内へ、医薬製剤を投与することにより、実施できる。髄液は、脳脊髄液（ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ）を含む。動脈は、損傷領域に血液を供給するための領域であり得る。一実施形態では、投与は、例えば、その全体が本明細書に組み込まれる、Ｄｏｕｇｌａｓ  Ｋｏｎｄｚｉｏｌｋａ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．５５，ｐｐ．５６５−５６９，２０００に開示される方法により、実施される。一実施形態では、対象の頭蓋骨を切開して約１ｃｍの直径を有する穴が作られ、かつハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）中のＩＣＡＭ−１懸濁液が、標的領域内に懸濁液を注入するために用いられる、長針シリンジおよび定位フレーム（ｓｔｅｒｅｏｔａｃｔｉｃ  ｆｒａｍｅ）を用いて、穴を通って注入される。ＩＣＡＭ−１の用量は、一日当たり５００から１０００ｎｇ／ｋｇ（体重）の範囲にわたってよく、単一用量または分割用量で投与することができる。
【００５０】
本明細書に記載されるのは、ＩＣＡＭ−１（細胞内接着分子−１）タンパク質、またはそれらの断片もしくは変種をニューロンと共培養することを含む、ニューロンにおけるネプリライシンの発現を増加する方法である。一実施形態では、ネプリライシン発現は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、または１２日未満の間、ニューロンとＩＣＡＭ−１を培養することにより、増加される。別の実施形態では、ネプリライシン発現は、１２日より長くニューロンと培養することにより、増加される。一実施形態では、ＩＣＡＭ−１がニューロンを含有する培地に添加され、かつ共培養される。別の実施形態では、ＩＣＡＭ−１発現細胞がニューロンを含有する培地に添加され、かつ共培養される。別の実施形態では、ＩＣＡＭ−１またはＩＣＡＭ−１発現細胞およびニューロンが、培養物中の細胞により分泌される、あるいは培養装置の各区画に添加される、タンパク質、リガンドまたは他の細胞生産物ではない、栄養の流れを可能にする、培養装置の分離した区画で共培養される。
【００５１】
本明細書に記載されるのは、ＩＣＡＭ−１（細胞内接着分子−１）タンパク質、またはそれらの断片もしくは変種を対象に投与することを含む、対象におけるネプリライシンの発現を増加する方法である。一実施形態では、投与は局所投与である。別の実施形態では、投与は全身投与である。一実施形態では、ネプリライシンの発現を増加するために有効な量が投与される。一実施形態では、有効量のＩＣＡＭ−１を含む製剤は、水、培養培地、バッファーおよび賦形剤からなる群から選択される添加剤をさらに含む。
【００５２】
実施例
以下に、本発明をより詳細に記載する。以下の実施例は、例示のみを目的として与えられるものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例１】
【００５３】
実施例１：ＮＥＰ発現に対するＩＣＡＭ−１タンパク質のインビトロ有効性
配列番号１のアミノ酸配列を有する組換えＩＣＡＭ−１タンパク質をＲ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳ（米国）から取得し、ＢＶ２細胞をソウル大学校（韓国）から取得した。ＢＶ２細胞は、ｖ−ｒａｆ／ｖ−ｍｙｃ組換えレトロウイルスでマウスのミクログリア細胞を感染させることにより調製される、不死化細胞であり、活性化したミクログリアの形質を表す。ＢＶ２細胞を無血清ＤＭＥＭ培地中で培養し、それぞれ５、１０および５０ｎｇ／ｍＬの濃度のＩＣＡＭ−１組換えタンパク質で処置し、その後２４時間、細胞を培養した。各群の回収した細胞をソニケーター（Ｂｒａｎｓｏｎ  Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｓ  Ｃｏｒｐ．）を用いて溶解し、バッファー（９．８Ｍ  尿素、４％  ＣＨＡＰＳ、１３０ｍＭ  ジチオスレイトール、４０ｍＭ  トリス−ＨＣｌ、および０．１％  ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ））を使用することにより、そこからタンパク質抽出物を取得した。抽出したタンパク質をブラッドフォードアッセイキット（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を用いて定量し、２０μｇのタンパク質抽出物をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離して、ニトロセルロース膜上にエレクトロトランスファーした。各ニトロセルロース膜を、一次抗体（抗−ＮＥＰ抗体；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）で一晩インキュベートし、ＰＢＳで３回洗浄し、二次抗体（抗−ヤギＩｇＧ；Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，米国）でインキュベートした。次いで、タンパク質をＥＣＬキット（Ａｍｅｒｓｈａｍ）により視覚化した。ベータ−アクチンを定量のための内因性コントロールとして用いた。
【００５４】
結果を図１の左側に示す。図１の左側の上の写真は免疫ブロットの結果であり、図１の左側の下のグラフは、濃度計により測定した、対照（無処置）と比べた各バンドの強度を示す（ｎ＝３，Ｐ＜０．０５）。
【００５５】
結果に示されるように、ＮＥＰ発現は、対照（無処置群）と比較してＩＣＡＭ−１処置群において増加した。さらに、ＮＥＰ発現量はＩＣＡＭ−１タンパク質の濃度に比例した。
【００５６】
その一方で、処置時間の観点からＩＣＡＭ−１タンパク質の有効性を評価するために、ＢＶ２細胞を、ＩＣＡＭ−１タンパク質（２０ｎｇ／ｍＬ）で、それぞれ１２、２４および３６時間処置し、次いでＮＥＰ発現を上記のように解析した。
【００５７】
結果を図１の右側に示す。結果に示されるように、ＮＥＰ発現はＩＣＡＭ−１タンパク質の処置時間に比例して増加した。
【実施例２】
【００５８】
実施例２：ＮＥＰ発現に対するＩＣＡＭ−１タンパク質のインビボ有効性
ＮＥＰ発現に対するＩＣＡＭ−１の有効性を評価するために、５μＬのＰＢＳ（ｎ＝４）、またはＰＢＳ中５００もしくは１０００ｎｇ／ｋｇのＩＣＡＭ−１タンパク質（５μＬ）（ｎ＝４／群）が、定位固定装置（ｓｔｅｒｅｏｔａｘｉｃ  ａｐｐａｒａｔｕｓ）を用いることにより、犠牲となる麻酔をかけられた正常マウス（Ｂ６Ｃ３Ｆ１／Ｊ、１３週齢、３０ｇ）それぞれの両方の海馬に投与された。７日後、マウスを犠死させ、脳組織を回収した。脳組織を溶解してタンパク質抽出物を取得し、実施例１のように、その抽出物をＮＥＰ発現に関して解析した。
【００５９】
結果を図２に示す。図２に示されるように、ＮＥＰ発現は対照（無処置群）と比較してＩＣＡＭ−１処置群において増加した。特に、１０００ｎｇ／ｋｇのＩＣＡＭ−１で処置された群のＮＥＰ発現量は、対照（ＰＢＳ）の２倍よりも多かった（Ｐ＝０．００５）。
【実施例３】
【００６０】
実施例３：アミロイド−ベータ４２に対するＩＣＡＭ−１の効果
アミロイド−ベータ４２の分解に対するＩＣＡＭ−１の効果を調査するために、以下の実験が実行された。具体的には、無血清ＤＭＥＭ培地で培養されたＢＶ２細胞を、ＩＣＡＭ−１タンパク質（５または１０ｎｇ／ｍＬ）およびアミロイド−ベータ４２（１０μＭ）で同時に前処置し、さらに２４時間培養した。培養培地中のアミロイド−ベータ４２の濃度は、ＥＬＩＳＡキット（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｌｔｄ．日本）を用いて測定した。結果を図３に示す。
【００６１】
図３に示されるように、Ａβ４２の濃度は、対照と比較してＩＣＡＭ−１タンパク質で処置された群において有意に減少した。特に、ＩＣＡＭ−１処置群に関して、Ａβ４２の低減はＩＣＡＭ−１タンパク質の濃度に比例した。結果はＩＣＡＭ−１タンパク質により誘導されたＮＥＰがＡβ４２を分解することを示す。
【実施例４】
【００６２】
実施例４：ＩＣＡＭ−１断片の調製およびそれらの活性の評価
ＩＣＡＭ−１活性の原因となる活性ドメインを調査するために、シグナルペプチドを除去したＩＣＡＭ−１ドメインの位置に基づき、４種の断片が設計された（図４）。ＩＣＡＭ−１遺伝子の正確な増幅を誘導するための事前ＰＣＲにおいて、全長ＩＣＡＭ−１を増幅するためのプライマー、ならびに制限酵素ＮｄｅＩ（ＮＥＢ，米国）およびＢａｍＨＩ（ＮＥＢ，米国）のための認識部位が挿入された、各遺伝子断片を増幅するためのプライマーが合成された。
【００６３】
Ｐｆｕ−ＰＣＲ条件は以下であった：９４℃、３０秒間；５８〜６０℃、４５秒間；７２℃、４０秒間を４０サイクル。このようにして得られたＩＣＡＭ−１断片およびｐＥＴ−２８ａプラスミドＤＮＡ（Ｎｏｖａｇｅｎ登録商標，米国）を、ＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩで消化した。プライマー配列、アニーリング温度、およびＰＣＲ産物サイズを表１に示す。
【表１】
0005784754.tif 000002
【００６４】
このようにして調製された断片Ａは、ＩＣＡＭ−１タンパク質のアミノ酸配列における２８番目から４８３番目のアミノ酸をコードする；断片Ｂ、２８番目から３８０番目のアミノ酸；断片Ｃ、２８番目から３００番目のアミノ酸；および断片Ｄ、２８番目から２００番目のアミノ酸。
【００６５】
調製されたＩＣＡＭ−１断片のサイズは、２％アガロースゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，米国）での電気泳動により確認された。電気泳動の結果を図５に示す。図５に示されるように、４種の断片が正確なサイズを有することが確認された。
【００６６】
断片は、Ｇｅｌ抽出キット（ＱＩＡＧＥＮ，米国）を用いて精製し、ＮｄｅＩ／ＢａｍＨＩで処理されたｐＥＴ−２８ａプラスミドＤＮＡ（Ｎｏｖａｇｅｎ登録商標，米国）と混合した、続いてＴ４ＤＮＡリガーゼ（ＮＥＢ，米国）でライゲーションした。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｓｉｇｍａｎ，米国）をライゲーションしたプラスミドで形質転換し、形質転換体をＬＢ寒天培地（ＢＤ，米国）で培養した。増殖したシングルコロニーをピックし、各ＰＣＲチューブ内に入れ、次いでＰＣＲ反応に供した。増幅したインサートを上述（図６）のような電気泳動により確認し、コロニーを選択した。選ばれたコロニーをＬＢブロス（ＢＤ，米国）で培養し、ＱＩＡＧＥＮ登録商標プラスミド精製キット（ＱＩＡＧＥＮ，米国）を用いて精製し、ＤＮＡを取得した。精製されたＤＮＡはＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩで消化され、次いで、所望の遺伝子を含有するシングルコロニーを、ＥｔＢｒで２％アガロースゲル上にて確認した。ＤＮＡはＰＣＲ精製キット（ＱＩＡＧＥＮ，米国）を用いて精製され、挿入された断片の正確な配列が確認された。ＤＮＡ配列が確認されたコロニーを、ＩＰＴＧ（Ｐｒｏｍｅｇａ，米国）存在下ＬＢブロスにて培養した。結果として得られた培養物を遠心分離し、沈殿した細胞を８Ｍ尿素（ｐＨ８．０）で処理して、細胞を溶解した。組換えタンパク質のＮ末端に付着する６×ＨｉｓとＮｉ−ＮＴＡの間の結合に基づき、組換えタンパク質を、Ｎｉ−ＮＴＡ（ニトリロ三酢酸ニッケル）アガロース（ＱＩＡＧＥＮ，米国）を用いて分離し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットにより確認した。
【００６７】
調製例１：注射用製剤
注射用製剤の調製のため、１００ｍｇのＩＣＡＭ−１タンパク質を水に溶解し、次いで、１０ｍＬの０．９％滅菌生理食塩水と混合した。混合物は注射に適した用量単位に組み込まれる。
【００６８】
調製例２：吸入用製剤
吸入送達のための製剤を調製するために、２０ｍｇのＩＣＡＭ−１タンパク質を５０ｍｇの無水クエン酸および１００ｍＬの０．９％塩化ナトリウム溶液と混合した。混合物は、吸入投与に適している、ネブライザーなどの吸入送達単位（ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｕｎｉｔ）に組み込まれる。
【００６９】
調製例３：経鼻送達のための製剤
経鼻スプレー溶液を調製するため、１０ｇのＩＣＡＭ−１タンパク質を３０ｍＬの０．０５Ｍリン酸バッファー溶液（ｐＨ４．４）と混合した。溶液は、各適用のために１００μＬのスプレーを送達するように設計された経鼻投与器具（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｏｒ）内に設置された。
【図１】
0005784754.tif 000003
【図２】
0005784754.tif 000004
【図３】
0005784754.tif 000005
【図４】
0005784754.tif 000006
【図５】
0005784754.tif 000007
【図６】
0005784754.tif 000008
【配列表】
0005784754000001.app