(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
キノコの担子菌の菌糸体を液体培地中で深部培養し、生成した菌糸体からエルゴチオネインを抽出精製してエルゴチオネインを製造する方法であって、
深部培養工程において培養された菌糸体を深部培養状態から離脱させ、菌糸体と培養タンク内の液体培地とを含む培養液から水分を減じるためのろ過処理を実施し、液体培地が付着した菌糸体を分別するろ別工程と、
前記ろ別した菌糸体の菌糸塊を生成し、当該菌糸塊を気中環境下で生存可能にするために水分含有率を調整する菌糸体水分含有率調整工程と、
前記水分含有率が調整された菌糸塊を生存環境下に保管し、当該菌糸塊に対し静置刺激及び低温環境下における温度刺激または電気刺激印加後の静置刺激及び低温環境下における温度刺激を印加してエルゴチオネインが増量した菌糸塊を生成するストレス印加工程と、
からなることを特徴とする深部培養法を用いたキノコの担子菌によるエルゴチオネイン製造方法。
【請求項２】
内部に液体培地を収容してキノコの担子菌の菌糸体の深部培養を行う培養タンクと、培養タンクの上部に取り付けられる気密ハッチと、培養タンク内の液体培地を攪拌する攪拌機構と、液体培地に所定量の無菌エアを供給する無菌エア供給機構と、液体培地のｐＨを所定の値に調整し維持するｐＨ調整機構と、液体培地の温度を所定の値に調整し維持する温度調整機構と、無菌エア供給機構から供給されたエアを培養タンクから外部に排気する排気機構と、を備え、菌糸体を深部培養する深部培養手段と、
前記深部培養手段により培養された菌糸体を培養タンクから取り出して深部培養状態から離脱させ、菌糸体と培養タンク内の液体培地とを含む培養液から水分を減じるためのろ過処理を実施し、当該ろ過処理された培養液をゾル又はゲル状の菌糸体とろ別後培養液とに分別するろ別手段と、
前記ろ別手段によりろ別された菌糸体の菌糸塊を生成し、当該菌糸塊が含有する水分量を菌糸体の生存に最適な水分含有率に調整する菌糸体水分含有率調整手段と、
前記菌糸体水分含有率調整手段により水分含有率が調整された菌糸塊を生存環境下に保管し、当該菌糸塊に対し静置刺激及び低温環境下における温度刺激または電気刺激印加後の静置刺激及び低温環境下における温度刺激を与え、エルゴチオネインの生産を増加したエルゴチオネイン増量菌糸塊を生成するストレス印加手段と、
を備えたことを特徴とする深部培養法を用いたキノコの担子菌によるエルゴチオネイン製造装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、担子菌又は子嚢菌を用いた有用物質の製造方法に関し、特に液体培地中で深部培養した担子菌又は子嚢菌の菌糸体をろ別した後、菌糸体を水分調整して菌糸塊を生成し、菌糸塊を生存環境下に保管して当該菌糸塊に対し低温静止等のストレスを印加することにより、菌糸塊に有用物質を増産させて有用物質を安価に製造する方法及び装置に関する。本発明において、有用物質とはエルゴチオネイン等の抗酸化物質、ペニシリン等の抗生物質、放射線による造血障害抑制物質等を意味し、担子菌とはキノコの菌糸体を意味し、キノコとしてはエノキタケ、タモギタケ、エリンギ、アギタケ、トキイロヒラタケ、霊芝等が挙げられる。子嚢菌の菌糸体とはトリフ、アオカビ等の菌糸体を意味する。
【背景技術】
【０００２】
エルゴチオネインの製造方法に関し、特許文献１はキノコの菌糸体を培養して得られた菌糸体よりエルゴチオネインを抽出して精製しエルゴチオネインを製造する方法を開示している。特許文献２は、タモギタケの菌子体をメチオニンを含む培地内で培養し、生成した菌子体からエルゴチオネインを抽出して製造する方法を開示するものであり、ここでは、キノコを、液体培地を用いて培養した後、菌子体をろ別し、凍結乾燥後、粉砕して目的とする有用物質を抽出することにより、有用物質であるエルゴチオネインをろ別した菌糸体を用いて製造する方法を開示している。これらの先行文献では、液体培地を用いてキノコを培養した後、菌子体を取り出し、取り出した菌子体を乾燥してエルゴチオネインを抽出するものである。なお、エルゴチオネインは抗酸化作用や抗老化作用を有することが知られており、化粧品、食品、医薬品、飼料などに利用されている。【０００３】
このような従来技術においては、液体培養した菌子体をろ別した時点で、培養液を失ったことにより深部培養状態から離脱し、菌糸体による有用物質（エルゴチオネイン）の生産活動は停止する。なお、菌子体をろ別し凍結乾燥した時点では菌子体は死滅する。そのため、有用物質であるエルゴチオネインの菌糸体による生産は液体培養の期間に限定されていた。一方、液体培養には多くのコストが必要となるために目的とする有用物資の製造費用が高価になるという問題点がある。そこで、菌糸体の生産による有用物質を安価に提供する方法が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００９−１５９９２０号公報
【０００５】
【特許文献２】特開２０１２−１０５６１８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、上述の問題を解決して安価な菌糸体由来の有用物質を提供することにあり、液体培地中で深部培養した担子菌又は子嚢菌の菌糸体をろ別した後、菌糸体を水分調整して菌糸塊を生成し、菌糸塊を生存環境下に保管して当該菌糸塊に対し低温静止等のストレスを印加することにより有用物質を増産させて有用物質を製造する方法及び製造装置を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明において、有用物質はエルゴチオネイン等の抗酸化物質、ペニシリン等の抗生物質、放射線による造血障害抑制物質等であり、担子菌の菌糸体はキノコ菌の菌糸体であり、キノコとしてはエノキタケ、タモギタケ、霊芝、冬虫夏草等が挙げられる。エルゴチオネインの生産に用いるキノコ菌として、エノキタケ菌の他にタモギタケ菌、アギタケ菌、トキイロヒラタケ菌、エリンギ菌等を挙げることができる。子嚢菌の菌糸体はトリフ菌、アオカビ菌等の菌糸体である。【０００８】
請求項１に記載の発明は、キノコの担子菌の菌糸体を液体培地中で深部培養し、生成した菌糸体からエルゴチオネインを抽出精製してエルゴチオネインを製造する方法であって、深部培養工程（ステップＳ１）において培養された菌糸体を深部培養状態から離脱させ、菌糸体と培養タンク内の液体培地とを含む培養液から水分を減じるためのろ過処理を実施し、液体培地が付着した菌糸体を分別するろ別工程（ステップＳ２）と、前記ろ別した菌糸体の菌糸塊を生成し、当該菌糸塊を気中環境下で生存可能にするために水分含有率を調整する菌糸体水分含有率調整工程（ステップＳ３）と、前記水分含有率が調整された菌糸塊を生存環境下に保管し、当該菌糸塊に対し静置刺激及び低温環境下における温度刺激または電気刺激印加後の静置刺激及び低温環境下における温度刺激を印加してエルゴチオネインが増量した菌糸塊を生成するストレス印加工程（ステップＳ４）と、からなる深部培養法を用いたキノコの担子菌によるエルゴチオネイン製造方法であることを特徴とする。
【０００９】
本発明においては、菌糸体をエノキタケ菌、タモギタケ菌、霊芝菌、冬虫夏草菌から選択されたいずれかの菌糸体とすることができ、本発明においては、菌糸体としてエリンギ菌、アギタケ菌、トキイロヒラタケ菌の菌糸体を利用することができる。また、子嚢菌であるトリフ菌の菌糸体を利用することもできる。
【００１０】
本発明においては、菌糸塊に対し与えるストレスを、静置刺激、温度刺激、電気刺激、ガスによる刺激から選択されたいずれかの刺激またはこれら２つ以上を組み合わせた刺激とすることができ、本発明においては、菌糸塊に対し与えるストレスを湿度の変化による刺激、ｐＨ環境の変化による刺激、薬品による刺激とすることができる。
【００１１】
請求項２に記載の発明は、内部に液体培地１１を収容してキノコの担子菌１２の菌糸体の深部培養を行う培養タンク１３と、培養タンクの上部に取り付けられる気密ハッチ１４と、培養タンク内の液体培地を攪拌する攪拌機構１５と、液体培地に所定量の無菌エアを供給する無菌エア供給機構１６と、液体培地のｐＨを所定の値に調整し維持するｐＨ調整機構１７と、液体培地の温度を所定の値に調整し維持する温度調整機構１８と、無菌エア供給機構から供給されたエアを培養タンクから外部に排気する排気機構１９と、を備え、菌糸体を深部培養する深部培養手段１０と、前記深部培養手段により培養された菌糸体を培養タンクから取り出して深部培養状態から離脱させ、菌糸体と培養タンク内の液体培地とを含む培養液ＣＦから水分を減じるためのろ過処理を実施し、当該ろ過処理された培養液をゾル又はゲル状の菌糸体ＨＳとろ別後培養液ＡＦＣＦとに分別するろ別手段２０と、前記ろ別手段によりろ別された菌糸体の菌糸塊ＨＳＬを生成し、当該菌糸塊が含有する水分量を菌糸体の生存に最適な水分含有率に調整する菌糸体水分含有率調整手段３０と、前記菌糸体水分含有率調整手段により水分含有率が調整された菌糸塊を生存環境下に保管し、当該菌糸塊に対し静置刺激及び低温環境下における温度刺激または電気刺激印加後の静置刺激及び低温環境下における温度刺激を与え、エルゴチオネインの生産を増加したエルゴチオネイン増量菌糸塊ＩＩＨＳＬを生成するストレス印加手段４０と、を備えた深部培養法を用いたキノコの担子菌によるエルゴチオネイン製造装置であることを特徴とする。ここでゾル又はゲル状の菌糸体とは液体中に菌糸体が含まれている状態を意味する。
【００１２】
本発明においては請求項５に記載の発明において、菌糸体としてエノキタケ菌、タモギタケ菌、霊芝菌又は冬虫夏草菌の菌糸体を利用することができ、有用物質をエルゴチオネインとすることができる。また、菌糸塊に対し与えるストレスとして、静置刺激、温度刺激、電気刺激、ガスによる刺激から選択されるいずれか、またはこれらの刺激２つ以上を組み合わせた刺激を利用することができる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明は、深部培養した菌糸体をろ別した後に、菌糸体の水分含有率を調整して菌糸塊を生成する工程と、菌糸塊を生存環境下に保管してストレスを印加する工程を設けたことにより、加えられたストレスに対応するために菌糸塊が有用物質を急速かつ大量に生産することになる。そのため、深部培養した菌糸体を利用して短期間で大量の有用物質を生産でき、有用物質の生産コストを大幅に削減できる。【００１４】
また、本発明においてはストレス印加工程を設けたことにより、深部培養工程で有用物質を生産した菌糸体と同じ菌糸体が追加して有用物質を生産するため、深部培養に使用される原料と同じ量の原料から数倍の有用物質を得ることができ、有用物質の原料費を大幅に削減できる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明に係る有用物質製造方法を実施するための主な工程を示すフロー図である。
【図２】本発明に係る有用物質製造装置の構成例並びに製造工程を説明する図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、添付図を参照しながら本発明に係る深部培養法を用いた担子菌又は子嚢菌による有用物質製造方法及び製造装置の実施の形態について説明する。図１は、本発明に係る菌糸体が生産する有用物質の製造手順を示すフロー図である。本発明においては、先ず、液体培地を用いて担子菌又は子嚢菌の菌糸体（以下、「菌糸体」という）を深部培養して菌糸体を増殖する工程（ステップＳ１）と、培養が完了した菌糸体と培養タンク内の液体培地を含む培養液をろ過して菌糸体を分別するろ別工程（ステップＳ２）とを実行した後、菌糸体の水分含有率を調整して菌糸塊を生成する菌糸体水分含有率調整工程（ステップＳ３）と、次いで菌糸塊を生存環境下に保管し、菌糸塊に対し各種ストレスを印加して当該菌糸塊に有用物質の生産を増加させ、有用物質が増量した菌糸塊を生成するストレス印加工程（ステップＳ４）を実行する。ろ別工程（ステップＳ２）でろ別された菌糸体は、培養液を失ったことにより深部培養状態から離脱し菌糸体の増殖が止まることにより、菌糸体の増加に伴う有用物質の生産活動は中止されることになる。
【００１７】
図２は本発明に係る有用物質製造方法を実施するための製造装置の構成例並びに製造工程を説明する図である。本発明に係る有用物質製造装置（以下、「製造装置」という）は、深部培養手段１０、ろ別手段２０、菌糸体水分含有率調整手段３０、ストレス印加手段４０により構成されている。
【００１８】
深部培養手段１０において、菌糸体を培養する培養タンク１３は内部に液体培地１１を収容して菌糸体１２の深部培養を行う容器である。気密ハッチ１４は培養タンク１３の上部に取り付けられ、原料の投入やタンク内の清掃用として用いられる。攪拌機構１５は培養タンクに接続され培養タンク内の液体培地を攪拌する。無菌エア供給機構１６は培養タンクに接続され液体培地に所定量の無菌エアを供給する。ｐＨ調整機構１７は培養タンクに接続され液体培地のｐＨ値を所定の値に調整して維持する。温度調整機構１８は培養タンクに接続され液体培地の温度を所定の値に調整して維持する。排気機構１９は無菌エア供給機構から供給されたエアを培養タンクから外部に排気する。
【００１９】
培養液ＣＦは、深部培養手段１０から送出されろ別手段２０に供給されるものであり、培養タンク内部で深部培養された菌糸体並びに液体培地を含む液体である。ろ別手段２０は、深部培養手段１０の培養タンク１３から培養液ＣＦの供給を受け、培養液を菌糸体ＨＳと、ろ別後培養液ＡＦＣＦに無菌的に分離して菌糸体を深部培養から離脱させる。菌糸体ＨＳはろ別手段２０により培養液ＣＦから分離して取り出されたゾル又はゲル状の菌糸体であり、ろ別後培養液ＡＦＣＦは培養液ＣＦから菌糸体ＨＳを取り出した残りの培養液である。
【００２０】
菌糸体水分含有率調整手段３０は、ろ別手段２０から菌糸体ＨＳの供給を受け、当該菌糸体ＨＳが含有する水分量を菌糸体の生存に最適な含有率に無菌的に調整し、菌糸塊ＨＳＬを生成する。菌糸塊ＨＳＬは菌糸体ＨＳが含有する水分量が菌糸体の生存に最適な状態に調整され、深部培養から離脱した状態であって気中で生存している菌糸の塊である。ストレス印加手段４０は、菌糸体水分含有率調整手段３０から菌糸塊ＨＳＬの供給を受け、当該菌糸塊ＨＳＬに対し各種ストレスＳＴを与える。菌糸塊は、ストレス印加手段４０によりストレスを受けることにより、目的とする有用物質の生産活動を活発化して有用物質を大幅に増加生産する。このようにストレス印加手段４０は有用物質が増加された有用物質増量菌糸塊ＩＩＨＳＬを生成する。
【００２１】
次に、図２を参照しながら本発明に係る有用物質の製造手順について詳細に説明する。先ず、気密ハッチ１４を開いて液体培地１１を培養タンク１３内に導入する。温度制御機構１８がタンク内を１２１℃周辺の高温に維持して内部の液体培地を滅菌する。滅菌が終了すると温度制御機構１８は培養タンクを冷却して内部の液体培地を菌糸の接種に適した温度、５℃〜３５℃程度に調整して当該温度を維持する。
【００２２】
そして、気密ハッチ１４から担子菌又は子嚢菌を培養タンク内の液体培地１１に接種する。液体培地攪拌機構１５は培養タンク内の液体培地を攪拌する。無菌エア供給機構１６は液体培地に気泡の形で空気を導入し深部培養を行う。培養タンク１３に導入された空気は排気機構１９により外部に排出される。ｐＨ調整機構１７は深部培養期間中の液体培地のｐＨ値をｐＨ３〜ｐＨ９程度に調整して当該ｐＨ値を維持する。これにより深部培養工程（ステップＳ１）が実行されることになる。深部培養が終了すると、液体培地内で担子菌又は子嚢菌の菌糸体が伸長して培養液ＣＦが得られる。
【００２３】
培養液ＣＦをろ別手段２０に供給する。ろ別工程（ステップＳ２）において、ろ別手段２０は無菌環境、例えば外気閉鎖環境等の下でフィルター濾過、遠心濾過、真空濾過又はサイクロン濾過を用いて、培養液ＣＦを菌糸体とろ別後培養液とにろ別分離し、ゾル又はゲル状の菌糸体ＨＳを生成する。ろ別された菌糸体ＨＳは、培養液を失ったことにより深部培養状態から離脱し菌糸体の増殖活動を中止する。
【００２４】
ろ別手段２０は菌糸体ＨＳを菌糸体水分含有率調整手段３０に供給する。菌糸体水分含有率調整工程（ステップＳ３）において、菌糸体水分含有率調整手段３０は、無菌環境の下で圧搾、乾燥、遠心脱水又は自重による水分のドリップにより、菌糸体ＨＳの水分含有率を菌糸が空気中で生存するための最適な値、７５％〜９９％程度に調整して菌糸塊ＨＳＬを生成する。菌糸塊ＨＳＬは、生存に最適な水分含有率を有し、生存に最適な温度５℃〜３５℃、湿度５０％〜１００％の空気環境下に置かれるため死滅せずに目的とする有用物質の生産活動を継続している。
【００２５】
菌糸体水分含有率調整手段３０は生存している菌糸塊ＨＳＬをストレス印加手段４０に供給する。ストレス印加工程（ステップＳ４）において、ストレス印加手段４０は菌糸塊ＨＳＬに対し以下のような各種のストレス（刺激）ＳＴを加える。菌糸塊ＨＳＬを６℃前後の低温又は３０℃前後の高温の環境を維持して、あるいは低温と高温を変化させる環境下に、２〜２０日間程度静置保管する（静置刺激、温度刺激）。菌糸塊ＨＳＬに対し直流電流による火花放電を２〜１０秒間程度印加する等の電気刺激を与える。菌糸塊ＨＳＬに対し、空気環境に炭酸ガスやオゾンガスを所定濃度で一定時間加えてガスによる刺激を与える。また、菌糸塊ＨＳＬを６０％前後の低湿又は９０％前後の高湿の環境を維持して、あるいは低湿と高湿を変化させる環境下に、２〜２０日間程度静置保管する（湿度刺激）。菌糸塊ＨＳＬをｐＨ５前後又はｐＨ８前後の環境を維持して、あるいはｐＨ値を変化させる環境下に、２〜２０日間程度静置保管する（ｐＨ環境の変化による刺激）。菌糸塊ＨＳＬに対し滅菌水で所定濃度に希釈した硫酸や苛性ソーダ溶液を噴霧して、２〜２０日間程度静置保管する（薬品による刺激）。なお、本発明においては、上記ストレスから選ばれるいずれか一つのストレスを採用することができるが、これらのストレス２つ以上を組み合わせたものを採用することができる。菌糸塊ＨＳＬはストレスＳＴを受けて、菌糸体がストレスの印加による環境変化に対応するために有用物質の生産活動を活発化する。これにより有用物質が増加された有用物質増量菌糸塊ＩＩＨＳＬが生成される。
【００２６】
目的とする有用物質は有用物質増量菌糸塊ＩＩＨＳＬから抽出し、得られた抽出液を遠心分離、結晶化、限外ろ過、エバポレーター、活性炭処理等の公知の方法により精製することができる。なお、培養液ＣＦ中に例えばペニシリン等のような有用物質が含有される場合は、ろ別後培養液ＡＦＣＦ及び有用物質増量菌糸塊ＩＩＨＳＬの抽出液から有用物質を公知の方法により精製することができる。本発明によれば、深部培養において生産されて得られる有用物質に加えて、ストレスの印加により有用物質が大幅に増加して生産された有用物質を得ることができる。
【００２７】
上述したように深部培養し、菌糸体を増殖する工程（ステップＳ１）において菌糸体により生産された有用物質に加えて、培養液から菌糸体をろ別（ステップＳ２）した後、さらに菌糸体の水分含有率を調整して菌糸塊を生成する工程（ステップＳ３）並びに菌糸塊を生存環境下に保管してストレスを印加する工程（ステップＳ４）を実行することにより、菌糸体は、培養液の中での良好な深部培養環境から気中環境に置かれることによって深部培養状態から離脱し、周囲に栄養分が乏しい厳しい環境の下で加えられるストレスに対応するために有用物質を急速に大量に生産すると考えられる。
【実施例１】
【００２８】
本発明に係る製造装置を使用して、キノコ菌糸としてエノキタケ菌糸を用いて以下のようにエルゴチオネインの製造を実施した。一次培養として、エノキタケ菌糸をポテトデキストロース寒天（ＰＤＡ）培地で平板培養して元種菌を得た。二次培養として、一次培養で得られた元種菌から平板地ごとキノコ菌そうを、コルクボーラーで直径５ｍｍに抜き取り、三角フラスコ内で滅菌、放冷された２００ｍｌ（ミリリットル）のＭＹＰＧ培地（麦芽抽出物５．７６ｇ／ｌ（リットル）、酵母抽出物３．８４ｇ／ｌ、グルコース３．８４ｇ／ｌ、豚膵消化カゼインペプトン３．８４ｇ／ｌ）等に２片接種し、１週間振とう培養して液体種菌を得た。【００２９】
水に３０ｇ／ｌの大豆粉を加えて３０分間抽出した抽出液に、砂糖２０ｇ／ｌと、硫酸マグネシウム七水和物０．５ｇ／ｌと、燐酸２水素カリウム０．５ｇ／ｌと、シリコン消泡剤０．５ｇ／ｌを加えた培養液を、気密ハッチから培養タンクに充填した。培養タンク内部の培養液を１２１℃の温度で２０分程度滅菌した後に放冷し培養液の温度を２０℃程度に維持した。【００３０】
そして、気密ハッチから前記二次培養で得られた液体種菌を培養タンク内の培養液に接種し、液体培地に対し無菌エア供給機構から空気を気泡の形で導入し２週間程度深部培養を行った。培養タンクに導入した空気は排気し、深部培養が終了すると液体培地内でエノキタケ菌糸が伸長した培養液となった。ここで深部培養工程（ステップＳ１）が終了する。【００３１】
深部培養で得た培養液を、メッシュ状のステンレスフィルターを用いて、エノキタケ菌糸体と培養液とに気密環境下で無菌的にろ別し、ゾル状あるいはゲル状のエノキタケ菌糸体を得た（ろ別工程ステップＳ２）。ここで菌糸体は培養液を失ったことにより深部培養状態から離脱することになる。続いて、上記ゾル状あるいはゲル状のエノキタケ菌糸体を、無菌環境の下で、ステンレスメッシュの上に置き、菌糸体の上に適度な重りを載せ、圧搾による水分のドリップにより、菌糸体の水分含有率を８０〜９８％に調整して菌糸体の塊（菌糸塊）を得た（菌糸体水分含有率調整工程ステップＳ３）。ここで、無菌的に生成した菌糸塊は、生存に最適な上記水分含有率を有し、生存に最適な温度並びに湿度の環境下に保管したので生存が確認された。【００３２】
そして、菌糸塊を６℃前後の低温環境下に２０日間静置保管することにより、菌糸塊に対し静置刺激および温度刺激（酸化ストレス）を与えた（ストレス印加工程ステップＳ４）。ここで、菌糸塊は酸化ストレス環境下に置かれたことにより、内部で抗酸化物質であるエルゴチオネインを急速に大量生産することになると考えられ、エルゴチオネインが多く含む菌糸塊（エルゴチオネイン増量菌糸塊）を得ることができた。そして、菌糸塊の静置保管を開始した日（初発）、１日目、３日目、６日目、９日目、１２日目、２０日目それぞれの日に、菌糸塊を乾燥後に粉砕したものから有機溶媒を使用してエルゴチオネインを抽出し、得られた抽出液を一般的な方法で精製した精製物のエルゴチオネイン含有量を計測した。ここに菌糸塊の静置保管経過日と当該日の精製物のエルゴチオネイン含有量との関係を示したＨＰＬＣ分析結果を表１に示す。【００３３】
【表１】
0005731082.tif 000002
【００３４】
表１に示すように、エノキタケ菌糸塊への静置刺激および温度刺激（低温静置ストレス）を加えることによるエルゴチオネインの含有量は１２日目で最大値（１．７０）となり、培養液からろ別したエノキタケ菌糸体の生産量にほぼ相当する、静置保管を開始した日（初発）の含有量（０．２８）の約６．０７倍となっていることが分かる。
【実施例２】
【００３５】
実施例１と同様にして得たエノキタケ菌糸塊に対してＤＣ１００ＫＶの火花放電を３秒間印加（電圧印加ストレス）した後に、当該菌糸塊を６℃前後の低温環境下に２０日間静置保管した。そして、実施例１と同様に、静置保管を開始した日（初発）、１日目、３日目、６日目、９日目、１２日目、２０日目それぞれの日に、エルゴチオネインを抽出精製した精製物のエルゴチオネイン含有量を計測した。ここに電圧印加後の菌糸塊の静置保管経過日と当該日の精製物のエルゴチオネイン含有量との関係を示したＨＰＬＣ分析結果を表２に示す。【００３６】
【表２】
0005731082.tif 000003
【００３７】
表２に示すように、電圧印加後のエノキタケ菌糸塊に低温静置ストレスを加えることによるエルゴチオネインの含有量は９日目で最大値（１．９２）となり、静置保管を開始した日（初発）の含有量（０．２８）の約６．８５倍となっていることが分かる。なお、静置保管を開始した日（初発）のエルゴチオネインの含有量は、培養液からろ別したエノキタケ菌糸体の含有量（従来技術に係る含有量）にほぼ相当する。この事実は、低温静置に電圧印加を加えたストレスを与えた実施例２は、低温静置ストレスのみを与えた実施例１と比較して初発から３日間早くエルゴチオネイン含有量の最大値に到達し、またその含有量も０．２２増加していることが分かる。【００３８】
上述の実施例から明らかなように、ろ別工程を実行した後、菌糸体水分含有率調整工程および各種ストレス印加工程を実行することにより、菌糸体は、深部培養工程において生産したエルゴチオネインに加えて抗酸化物質であるエルゴチオネインを急速に大量生産する。また、電圧印加後の菌糸塊に低温静置ストレスを加えることによりエルゴチオネインの増加速度を増すことができると共に含有量を増加させることができる。なお、エルゴチオネインの生産に用いるキノコ菌として、エノキタケ菌の他にタモギタケ菌、霊芝菌、冬虫夏草菌、アギタケ菌、トキイロヒラタケ菌、エリンギ菌等を用いても良い。また子嚢菌としてトリフ菌等を用いても良い。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明によれば、飼料、化粧品、薬品等に利用できるエルゴチオネイン等の抗酸化物質、抗生物質等をキノコ菌糸体により安価に製造できるので、本発明はキノコ業界のみならず、水産業、畜産業、医療業等において広く貢献でき、医薬品、化粧品、健康食品等広い用途がある。
【符号の説明】
【００４０】
１０    深部培養手段
１１    液体培地
１２    担子菌又は子嚢菌
１３    培養タンク
１４    気密ハッチ
１５    撹拌機構
１６    無菌エア供給機構
１７    ｐＨ調整機構
１８    温度調整機構
１９    排気機構
２０    ろ別手段
３０    菌糸体水分率調整手段
４０    ストレス印加手段
ＣＦ        培養液
ＨＳ        菌糸体
ＡＦＣＦ    ろ別後培養液
ＨＳＬ      菌糸塊
ＳＴ        ストレス
ＩＩＨＳＬ  有用物質増量菌糸塊
【図１】
0005731082.tif 000004
【図２】
0005731082.tif 000005