(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式Iまたは式IIで表される構造を有するトロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物。
【化１】
0005782569.tif 000055
[式中、
Rは、
a）置換および非置換の直鎖アルキル基、
b）置換および非置換のシクロアルキル基、
c）置換および非置換の分枝鎖アルキル基、
d）不飽和の直鎖炭化水素基、
e）不飽和の環状炭化水素基、
f）不飽和の分枝鎖炭化水素基、
g）置換および非置換のアリール基、ならびに
h）置換および非置換のアラルキル基
からなる群から選択される親油基であり、
R1は、
a）-(C =O)-、
b）-P(=O)(R’)-（ここで、R’はC1〜C6アルキル基、C1〜C6アルコキシ基またはアリール基である）、
c）-(C =O)(CH2)n (C =O)-（ここで、n =1〜10）、
d）-(C =O)CH2-O-CH2 (C =O)-、および
e）-(CH2)n(C =O)-（ここで、n =1〜10）
からなる群から選択される連結基であり、
Xは、-O-、-NH-または-NR’-（ここで、R’はC1〜C6アルキル基である）であり、
R2は、H、C1〜C6アルキル基または-Si(CH3)2tBuであり、
R3は、H、NO2、-CH2N(CH3)2、NH2、または
【化２】
0005782569.tif 000056
であり、
R4は、H、C1〜C6アルキル基または
【化３】
0005782569.tif 000057
である。]
【請求項２】
下記の式Iまたは式IIで表される構造を有することを特徴とする、請求項１に記載のトロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物。
【化４】
0005782569.tif 000058
[式Iにおいて、R2はHまたは-CH2CH3である。]
【請求項３】
前記の脂溶性抗がん剤化合物において、トロロックスがその光学異性体またはラセミ体を含むことを特徴とする、請求項１または２に記載のトロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物。
【請求項４】
請求項１に記載のトロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物の製造方法であって、
1）トロロックスとアルコールもしくはフェノールとをエステル化反応させてトロロックスエステルを生成する工程、またはトロロックスとアミンとをアミド化反応させてトロロックスアミドを生成する工程と、
2）トロロックスエステルまたはトロロックスアミドのフェノール性水酸基と連結分子とをエステル化反応またはエーテル化反応させて、トロロックスエステルの誘導体またはトロロックスアミドの誘導体を生成する工程と、
3）工程2）で得られたトロロックスエステルの誘導体もしくはトロロックスアミドの誘導体またはそれらのアシル塩化物と、カンプトテシンまたはその誘導体とをエステル化反応させてトロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物を生成する工程と
を含むこと、ならびに
前記連結分子が２つ以上の活性基を含む分子であり、該２つ以上の活性基を含む分子が、
（1）塩化オキサリルO=CCl2、
（2）アルキルホスホリルジクロリド、アルコキシホスホリルジクロリドまたはアリールホスホリルジクロリドO=POR’Cl2（ここで、R’はC1〜C6アルキル基、C1〜C6アルコキシ基またはアリール基である）、
（3）二価カルボン酸(CH2)n(COOH)2または環状酸無水物
【化５】
0005782569.tif 000059
（ここで、n=1〜10）、
（4）ジグリコール酸または無水ジグリコール酸、および
（5）ハロカルボン酸またはハロカルボン酸エステルZ-(CH2)nCOOR’（ここで、n=1〜10、ZはCl、BrまたはIであり、R’はアルキル基である）
から選択されるいずれか１つであること
を特徴とする、トロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物の製造方法。
【請求項５】
1）4-ジメチルアミノピリジンおよび2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージドを触媒として、もしくはN,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミドおよび4-ジメチルアミノピリジンを触媒として、トロロックスをアルコールもしくはフェノールと反応させてトロロックスエステルを生成する工程、または、N,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミドを触媒として、トロロックスをアミンと反応させてトロロックスアミドを生成する工程；
2）以下の方法のいずれか１つにより、トロロックスエステルまたはトロロックスアミドと連結分子とをエステル化反応またはエーテル化反応させて、トロロックスエステルの誘導体またはトロロックスアミドの誘導体を生成する工程、
a）2-エチルヘキサン酸スズ（II）もしくは炭酸セシウムを触媒として、トロロックスエステル（3）もしくはトロロックスアミド（9）を環状酸無水物
【化６】
0005782569.tif 000060
もしくは無水ジグリコール酸と反応させて、トロロックスエステルの誘導体またはトロロックスアミドの誘導体を生成するか、または4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）および2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージド（CMPI）を触媒として、もしくはN,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）および4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）を触媒として、トロロックスエステル（3）もしくはトロロックスアミド（9）を過剰量の二価カルボン酸(CH2)n(COOH)2もしくはジグリコール酸と反応させて、トロロックスエステルの誘導体またはトロロックスアミドの誘導体を生成する方法、
b）塩基を触媒として、トロロックスエステルもしくはトロロックスアミドをハロカルボン酸と反応させて、トロロックスエステルの誘導体またはトロロックスアミドの誘導体を生成するか、またはトロロックスエステルもしくはトロロックスアミドをハロカルボン酸エステルと反応させ、得られた生成物を脱アルキル化させて、トロロックスエステルの誘導体またはトロロックスアミドの誘導体を生成する方法、
c）塩基を触媒として、トロロックスエステルまたはトロロックスアミドをアルキルホスホニル（ホスホリル）ジクロリド、アルコキシホスホニル（ホスホリル）ジクロリドまたはアリールホスホニル（ホスホリル）ジクロリドと反応させて、トロロックスエステルの誘導体またはトロロックスアミドの誘導体を生成する方法、ならびに
d）塩基を触媒として、トロロックスエステルまたはトロロックスアミドを塩化オキサリルと反応させて、トロロックスエステルの誘導体またはトロロックスアミドの誘導体を生成する方法；
3）工程2）のa）またはb）で得られたトロロックスエステルの誘導体またはトロロックスアミドの誘導体をチオニル（ジ）クロリドと反応させてアシル塩化物を生成する工程；
4）4-ジメチルアミノピリジンおよび2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージドを触媒として、もしくはN,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミドおよび4-ジメチルアミノピリジンを触媒として、工程2）のa）もしくはb）で得られたトロロックスエステルの誘導体もしくはトロロックスアミドの誘導体をカンプトテシンもしくはその誘導体と反応させて、トロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物を生成する工程；または
5）塩基を触媒として、工程3）で得られたアシル塩化物または工程2のc）もしくはd）で得られたトロロックスエステルの誘導体もしくはトロロックスアミドの誘導体をカンプトテシンもしくはその誘導体と反応させて、トロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物を生成する工程
を含むことを特徴とする、請求項４に記載のトロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物の製造方法。
【請求項６】
前記塩基性触媒が、トリエチルアミン、ピリジン、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムおよび炭酸セシウムからなる群より選択されることを特徴とする、請求項５に記載のトロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物の製造方法。
【請求項７】
請求項１に記載の脂溶性抗がん剤化合物のエマルジョン製剤またはマイクロエマルジョン製剤であって、
1）a）式Iまたは式IIで表される構造を有するトロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物および
b）生体適合性の親油性媒体
を含む油相と、
2）界面活性剤および溶解補助剤と、
3）水相と
を含むことを特徴とする、エマルジョン製剤またはマイクロエマルジョン製剤。
【請求項８】
前記エマルジョン製剤またはマイクロエマルジョン製剤における前記抗がん剤化合物の含有量が0.005〜5.0重量％であり、親油性媒体の含有量が2〜20重量％であり、界面活性剤の含有量が1〜10重量％であることを特徴とする、請求項７に記載の脂溶性抗がん剤化合物のエマルジョン製剤またはマイクロエマルジョン製剤。
【請求項９】
請求項１に記載の脂溶性抗がん剤化合物のミセル製剤であって、
1）式Iまたは式IIで表される構造を有するトロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物と、
2）界面活性剤と、
3）溶解補助剤と、
4）水相と
を含むことを特徴とする、ミセル製剤。
【請求項１０】
前記ミセル製剤における前記抗がん剤化合物の含有量が0.005〜5.0重量％であり、界面活性剤の含有量が1〜10重量％であり、溶解補助剤の含有量が2〜20重量％であることを特徴とする、請求項９に記載の脂溶性抗がん剤化合物のミセル製剤。
【請求項１１】
抗がん薬を製造するための、請求項１に記載のトロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物の使用。
【請求項１２】
前記トロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物が、下記の式Iまたは式IIで表される構造を有することを特徴とする、請求項１１に記載の抗がん薬を製造するためのトロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物の使用。
【化７】
0005782569.tif 000061
[式Iにおいて、R2はHまたは-CH2CH3である。]
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な抗がん剤化合物ならびにその製造方法および使用に関し、特に、トロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物、該化合物を含む製剤、該化合物の製造方法および抗がん薬としての該化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗がん活性を有する化合物の多くは、水や他の生体適合性溶媒に溶けないか、あるいはこれらの溶媒中において不安定なため、医薬品開発が難しく、また、このことによって医薬品開発が遅延することが多い。スクリーニングされた潜在的価値のある医薬品候補化合物は、その最大40％が難水溶性であるため製剤研究開発の段階へと進むことができないと推定されている。加えて、既存の薬剤の30％が不溶性である。現在、難溶性の医薬化合物に関する問題を解決するために、いくつかの技術の研究開発が行われている。このような技術としては、溶解性を向上させるための複合体形成技術、ナノ粒子技術、マイクロエマルジョン技術、溶解性を向上させるための製剤化技術、脂溶性または水溶性プロドラッグ技術、新規ポリマー担体技術などが含まれる。
【０００３】
カンプトテシン（20(s)-camptothecin、式1の1）およびその誘導体は良好な抗腫瘍活性を有し、重要なDNAトポイソメラーゼI（TOP I）阻害薬の一つである。カンプトテシンおよびその誘導体は、TOP I-DNAクリーバブル複合体に結合して、CPT-TOP I-DNA三重複合体を形成することにより、クリーバブル複合体を安定させて、アポトーシスを引き起こす。しかし、カンプトテシンおよびその誘導体は、水や他の生体適合性溶媒に対して難溶性であり、また、毒性が高いため、臨床試験段階に進むことができない。水溶解性を向上させると共に親化合物の抗腫瘍特性を保持させたカンプトテシン誘導体が数多く合成されている。しかしながら、これらの誘導体のうち、トポテカン（topotecan、式1の2）およびイリノテカン（irinotecan、式1の3）のみが米国食品医薬品局の承認を受けて臨床試験を経た後に市販され、前者は卵巣がんの治療に、後者は肺がんおよび直腸がんの治療に用いられている。しかしながら、トポテカンおよびイリノテカンには、生体内半減期が短い、毒性が高い、副作用が強いなどの明らかな欠点がある。現在、これらの他にも多くのカンプトテシン誘導体が臨床研究段階にある。
【０００４】
また、カンプトテシン分子のEラクトン環は、カンプトテシンおよびその誘導体の抗がん活性に必須の機能性部位であり、塩基性または生理学的条件下では速やかに開環して、抗がん活性の失活を招く（式2）。血漿中においては、ラクトン環構造と開環構造との間で平衡状態にあることがいくつかの実験で確認されている。さらに、ヒト血漿蛋白は、開環構造を有する該分子に選択的に結合することによって、平衡状態を開環側へとシフトさせ、この種の薬物の血漿中有効濃度を低減させて、薬物の抗腫瘍活性を低下させる。
【０００５】
【化１】
0005782569.tif 000002
【０００６】
更なる研究により、開環構造は、例えば骨髄抑制、嘔吐、下痢などの有害な副作用を引き起こすことが確認されている。
【０００７】
【化２】
0005782569.tif 000003
【０００８】
薬物の溶解性を向上させるために、エマルジョン技術、ミセル技術などの技術が難水溶性または不水溶性薬物の製剤化に広く使用されている。しかしながら、カンプトテシンは水や有機溶媒に対して極めて難溶性であるため、現在までカンプトテシンに使用可能な製剤化技術は存在しない。従って、より高い抗がん活性だけでなく、より高い溶解性および安定性をも有する新規なカンプトテシン誘導体の開発がいまだ求められている。
【０００９】
本発明は、生体適合性の脂溶性溶媒に対してより高い溶解性を示し、新規な製剤化技術によってエマルジョン、マイクロエマルジョン、ミセル、リポソーム、ナノ粒子等の医薬剤形に製剤化することが可能な、一連の新規脂溶性カンプトテシン誘導体を提供する。本発明の新規医薬化合物は、生体内での作用持続時間（半減期）および薬効が改善されていると共に、副作用が低減されていることが期待される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、新規な脂溶性抗がん剤化合物を提供することを目的とする。抗がん活性を有する本発明の化合物は、親油性トロロックスエステルまたは親油性トロロックスアミドで修飾されたカンプトテシンまたはカンプトテシン誘導体であり、生体適合性の脂溶性溶媒に溶解することができる。
【００１１】
本発明の別の目的は、上記の脂溶性抗がん剤化合物の合成方法を提供することである。
【００１２】
本発明の別の目的は、上記の脂溶性抗がん剤化合物を含む製剤、即ち、エマルジョン製剤およびミセル製剤を提供することである。エマルジョン製剤は、本発明の抗がん剤化合物、１種以上の界面活性剤、油相（親油性媒体）および水相を含む。ミセル製剤は、上記の抗がん剤化合物、溶解補助剤、１種以上の界面活性剤および水相を含む。
【００１３】
また、本発明の別の目的は、抗がん薬を製造するための、上記の脂溶性抗がん剤化合物の使用を提供することである。
【００１４】
本発明の脂溶性抗がん剤化合物は、親油性トロロックスエステルまたは親油性トロロックスアミドで修飾されたカンプトテシンまたはカンプトテシン誘導体である。カンプトテシンまたはカンプトテシン誘導体は抗がん活性を有する。連結基（スクシニル、グルタリル、オキシジアセチル（ジグリコロイルまたはジグリコリル）、メチレンカルボニル、メチルホスホノなど）を介して、カンプトテシン分子またはカンプトテシン誘導体分子と、親油性トロロックスエステル（またはトロロックスアミド）分子とを共有結合することにより、本発明の脂溶性抗がん剤化合物を形成させる。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明の目的は、以下の技術的手段、即ち、下記の式Iまたは式IIで表される構造を有するトロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物によって達成される。
【化３】
0005782569.tif 000004
[式中、
Rは、
a）置換および非置換の直鎖アルキル基、
b）置換および非置換のシクロアルキル基、
c）置換および非置換の分枝鎖アルキル基、
d）不飽和の直鎖炭化水素基、
e）不飽和の環状炭化水素基、
f）不飽和の分枝鎖炭化水素基、
g）置換および非置換のアリール基、ならびに
h）置換および非置換のアラルキル基
のいずれか１つの群から選択される親油基であり、
R1は、
a）-(C =O)-、
b）-P(=O)(R’)-（ここで、R’はC1〜C6アルキル基、C1〜C6アルコキシ基またはアリール基である）、
c）-(C =O)(CH2)n (C =O)-（ここで、n=1〜10）、
d）-(C =O)CH2-O-CH2 (C =O)-、および
e）-(CH2)n(C =O)-（ここで、n=1〜10）
のいずれか１つの群から選択される連結基であり、
Xは、-O-、-NH-または-NR’-（ここで、R’はC1〜C6アルキル基である）であり、
R2は、H、C1〜C6アルキル基または-Si(CH3)2tBuであり、
R3は、H、NO2、-CH2N (CH3)2、NH2、または
【化４】
0005782569.tif 000005
であり、
R4は、H、C1〜C6アルキル基または
【化５】
0005782569.tif 000006
である。]
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図1は、R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステルの質量スペクトルである。
【図２】図2は、R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステルの水素核磁気共鳴スペクトルである。
【図３】図3は、R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-モノスクシナートの質量スペクトルである。
【図４】図4は、R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-モノスクシナートの水素核磁気共鳴スペクトルである。
【図５】図5は、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-スクシナートの質量スペクトルである。
【図６】図6は、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-スクシナートの水素核磁気共鳴スペクトルである。
【図７】図7は、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸n-ヘキシルエステル-6-スクシナートの質量スペクトルである。
【図８】図8は、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸n-ヘキシルエステル-6-スクシナートの水素核磁気共鳴スペクトルである。
【図９】図9は、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ドデシルエステル-6-スクシナートの質量スペクトルである。
【図１０】図10は、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ドデシルエステル-6-スクシナートの水素核磁気共鳴スペクトルである。
【図１１】図11は、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-スクシナートの質量スペクトルである。
【図１２】図12は、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-スクシナートの水素核磁気共鳴スペクトルである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明の脂溶性抗がん剤化合物において、親油性部分は親油基Rを有するトロロックスであり、親油基Rを有するトロロックスはトロロックスエステル化合物およびトロロックスアミド化合物から選択される。
【００１８】
トロロックスは、6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸（6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid）の化学名を有するビタミンEの水溶性誘導体であり、ビタミンEと同様に抗酸化剤として機能し、式3で表される構造を有する。トロロックスには２種の光学異性体、即ち、R-(+)-トロロックス（化学名：R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸（R-(+)-6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid））およびS-(-)-トロロックス（化学名：S-(-)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸（S-(-)-6- hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid））が存在し、そのラセミ体は(±)-トロロックス（化学名：(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸（(±)-6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid））である。
【００１９】
【化６】
0005782569.tif 000007
A：R-(+)-トロロックス、B：S-(-)-トロロックス、C：(±)-トロロックス
【００２０】
本発明の脂溶性抗がん剤化合物におけるトロロックスは、その光学異性体またはラセミ体を包含する。
【００２１】
トロロックスエステルは、トロロックスをアルコール化合物またはフェノール化合物と反応させることにより得られるエステル化合物である。トロロックスエステルと、抗がん活性を有するカンプトテシン分子またはカンプトテシン誘導体分子とを１つの連結基を介して共有結合することにより、本発明の新規抗がん剤化合物を形成させることができる。トロロックスエステルは式4で表される化学構造を有しており、上記と同様に、２種の光学異性体、即ち、R-(+)-トロロックスエステル（化学名：R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸エステル（R-(+)-6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid ester））およびS-(-)-トロロックスエステル（化学名：S-(-)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸エステル（S-(-)-6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid ester））が存在し、そのラセミ体は(±)-トロロックスエステル（化学名：(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸エステル（(±)-6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid ester））である。下記の分子構造における親油性官能基Rは、アルキル基、分枝鎖アルキル基もしくはシクロアルキル基；不飽和の炭化水素基、不飽和の分枝鎖炭化水素基、もしくは不飽和の環状炭化水素基；置換もしくは非置換のアリール基；または置換もしくは非置換のアラルキル基などであってもよい。
【００２２】
【化７】
0005782569.tif 000008
A：R-(+)-トロロックスエステル、B：S-(-)-トロロックスエステル、C：(±)-トロロックスエステル
【００２３】
トロロックスと共にトロロックスエステルを形成するアルコールは、脂肪族アルコールであればどのようなものであってもよく、例えば、飽和、不飽和、直鎖、分枝鎖または環状の、脂肪族アルコールおよび脂肪族エノール等が挙げられる。炭素数≧6のアルコール化合物が好ましく、例えば、ヘキサノール、カプリルアルコール（l-オクタノール）、2-エチルヘキサノール、ペラルゴンアルコール（l-ノナノール）、カプリンアルコール（1-デカノール、デシルアルコール）、ウンデシルアルコール（1-ウンデカノール、ウンデカノール、ヘンデカノール）、ラウリルアルコール（ドデカノール、l-ドデカノール）、トリデシルアルコール（1-トリデカノール、トリデカノール、イソトリデカノール）、ミリスチルアルコール（1-テトラデカノール）、ペンタデシルアルコール（1-ペンタデカノール、ペンタデカノール）、セチルアルコール（1-ヘキサデカノール）、パルミトレイルアルコール（cis-9-ヘキサデセン-1-オール）、ヘプタデシルアルコール、ステアリルアルコール（l-オクタデカノール）、イソステアリルアルコール（16-メチルヘプタデカン-1-オール）、エライジルアルコール（9E-オクタデセン-1-オール）、オレイルアルコール（cis-9-オクタデセン-1-オール）、リノレイルアルコール（9Z,12Z-オクタデカジエン-1-オール）、エライドリノレイルアルコール（9E,12E-オクタデカジエン-1-オール）、リノレニルアルコール（9Z,12Z,15Z-オクタデカトリエン-1-オール）、エライドリノレニルアルコール（9E,12E,15E-オクタデカトリエン-1-オール）、ノナデシルアルコール（l-ノナデカノール）、アラキジルアルコール（1-エイコサノール）、ヘンエイコシルアルコール（l-ヘンエイコサノール）、ベヘニルアルコール（l-ドコサノール）、エルシルアルコール（cis-13-ドコセン-1-オール）、リグノセリルアルコール（l-テトラコサノール）、セリルアルコール（l-ヘキサコサノール）、モンタニルアルコール（クルイチルアルコール（cluytyl alcohol）、l-オクタコサノール）、ミリシルアルコール（メリッシルアルコール、1-トリアコンタノール）、ゲジルアルコール（geddyl alcohol）（l-テトラトリアコンタノール）などが挙げられるが、それらに限定されない。トロロックスエステルを形成するアルコールは、他のアルコール化合物であってもよく、例えば、ベンジルアルコール、フェネチルアルコールなどの芳香族アルコール化合物などが挙げられる。
【００２４】
トロロックスと共にトロロックスエステルを形成する化合物としては、更に、フェノール化合物が挙げられ、例えば、フェノール、アルキルフェノール、アルコキシフェノール、アミノフェノール、ハロフェノール、および多置換フェノール、ならびに1-ナフトール、2-ナフトール、アルキルナフトール、アルコキシナフトール、ハロナフトール、多置換ナフトールなどが挙げられる。
【００２５】
トロロックスアミドは、トロロックスをアミン化合物（第一級または第二級アミン）と反応させることにより得られるアミド化合物である。トロロックスアミドと、抗がん活性を有するカンプトテシン分子またはカンプトテシン誘導体分子とを１つの連結基を介して共有結合することにより、本発明の新規抗がん剤化合物を形成させることができる。トロロックスアミドは式5で表される化学構造を有しており、上記と同様に、２種の光学異性体、即ち、R-(+)-トロロックスアミド（化学名：R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボキサミド（R-(+)-6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxamide））およびS-(-)-トロロックスアミド（化学名：S-(-)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボキサミド（S-(-)-6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxamide））が存在し、そのラセミ体は(±)-トロロックスアミド（化学名：(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボキサミド（(±)-6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxamide））である。下記の分子構造における官能基Rは、アルキル基、分枝鎖アルキル基もしくはシクロアルキル基；不飽和の炭化水素基、不飽和の分枝鎖炭化水素基、もしくは不飽和の環状炭化水素基；置換もしくは非置換のアリール基；または置換もしくは非置換のアラルキル基などであってもよい。置換基Rは、炭素数≧6であることが好ましい。下記の分子構造における置換基R1は、H、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH2CH2CH2CH3、-CH2CH2CH2CH2CH3または-CH2CH2CH2CH2CH2CH3であることが好ましい。
【００２６】
トロロックスと共にトロロックスアミドを形成するアミン化合物は、第一級または第二級アミンであればどのようなものであってもよく、脂肪族アミンまたは芳香族アミンが挙げられ、例えば、飽和、不飽和、直鎖、分枝鎖または環状の、脂肪族アミン、芳香族アミン、アラルキルアミン等が挙げられる。
【００２７】
【化８】
0005782569.tif 000009
A：R-(+)-トロロックスアミド、B：S-(-)-トロロックスアミド、C：(±)-トロロックスアミド
【００２８】
本発明の脂溶性抗がん剤化合物分子において、抗がん剤活性成分は、抗がん活性を有するカンプトテシンまたはカンプトテシン誘導体であり、これらの構造式は式6で表される。[式中、R2はH、C1〜C6アルキル基または-Si(CH3)2tBuであり、R3は、H、NO2、-CH2N(CH3)2、NH2または
【化９】
0005782569.tif 000010
であり、R4はH、OH、C1〜C6アルキル基または
【化１０】
0005782569.tif 000011
である。]
【００２９】
【化１１】
0005782569.tif 000012
【００３０】
本発明の脂溶性抗がん剤化合物分子において、抗がん活性部分は、カンプトテシン（1）、10-ヒドロキシカンプトテシン（2）または7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン（3）であることが好ましく、これらの分子構造は式7で表される。これらの活性部分それぞれと、トロロックスエステル（またはトロロックスアミド）とを連結基を介して共有結合することにより、本発明の脂溶性抗がん剤化合物を形成させることができる。
【００３１】
【化１２】
0005782569.tif 000013
【００３２】
本発明の脂溶性抗がん剤化合物分子は、抗がん剤活性部分と親油性部分とを含む。この２つの部分を連結基を介して共有結合することにより、新規な脂溶性抗がん剤化合物を形成させる。抗がん剤活性部分は、カンプトテシンまたはカンプトテシン誘導体であり、カンプトテシンまたはカンプトテシン誘導体は、フェノール性水酸基またはラクトン環上水酸基を有し、該水酸基が、カルボキシ基、クロロアシル基またはホスホノ（ホスホリル）基とエステル結合を形成することができる。親油性部分はトロロックスエステル（またはトロロックスアミド）であり、トロロックスエステル（またはトロロックスアミド）は、１つのフェノール性水酸基を有する脂溶性化合物であり、該フェノール性水酸基がカルボキシ基またはホスホノ（ホスホリル）基とエステル結合を形成するか、あるいはハロゲン化物と反応してエーテル結合を形成することができる。したがって、カンプトテシンまたはカンプトテシン誘導体と、親油性トロロックスエステル（またはトロロックスアミド）とを二官能性連結基を介して共有結合することによって、本発明の新規抗がん剤化合物分子を形成させることができる。例えば、１つの連結基（例えば、スクシニル、グルタリル、ジグリコリル、メチレンカルボニルなど）を介して、トロロックスエステル（またはトロロックスアミド）と、抗がん剤化合物であるカンプトテシン、10-ヒドロキシカンプトテシンまたは7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン（SN-38）とを共有結合することによって、新規な脂溶性抗がん剤化合物を形成させる。
【００３３】
上記の連結基は２つ以上の活性基を含む連結分子から提供される。例えば、カルボニル基（-(C=O)-）が塩化オキサリル（O=CCl2）から提供され、-P(=O)(OR’)-基がホスホリルジクロリド（O=POR’Cl2）から提供され、アルキレンカルボニル基（-(CH2)nCO-）がハロカルボン酸またはハロカルボン酸エステルから提供され、スクシニル基、グルタリル基、オキシジアセチル基（ジグリコロイル基、ジグリコリル基）等がそれぞれ異なる二価カルボン酸(CH2)n(COOH)2または環状酸無水物
【化１３】
0005782569.tif 000014
から提供される。
【００３４】
抗がん活性を有する親化合物（例えば10-ヒドロキシカンプトテシンまたは7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンのようなカンプトテシンまたはカンプトテシン誘導体）と比べると、本発明の新規抗がん剤化合物はより高い脂溶性（親油性）を有する。本発明の新規化合物は、抗がん剤親化合物部分と親油基部分とを含む。抗がん剤親化合物分子と親油性分子とを連結基を介して共有結合することによって、本発明の新規な抗がん剤化合物を形成させる。
【００３５】
本発明はまた、トロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物の製造方法であって、
1）トロロックスとアルコールもしくはフェノールまたはアミンとをエステル化反応またはアミド化反応させて、トロロックスエステルまたはトロロックスアミドを生成する工程と、
2）トロロックスエステルまたはトロロックスアミドのフェノール性水酸基と連結分子とをエステル化反応またはエーテル化反応させて、トロロックスエステルの誘導体またはトロロックスアミドの誘導体を生成する工程と、
3）工程2）で得られたトロロックスエステルの誘導体もしくはトロロックスアミドの誘導体またはそれらのアシル塩化物と、カンプトテシンまたはその誘導体とをエステル化反応させてトロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物を生成する工程と
を含むトロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物の製造方法に関する。
【００３６】
前記の連結分子は２つ以上の活性基を含む分子であり、該２つ以上の活性基を含む分子は、
（1）塩化オキサリルO=CCl2、
（2）アルキルホスホリルジクロリド、アルコキシホスホリルジクロリドまたはアリールホスホリルジクロリドO=POR’Cl2（ここで、R’はC1〜C6アルキル基、C1〜C6アルコキシ基またはアリール基である）、
（3）二価カルボン酸(CH2)n(COOH)2または環状酸無水物
【化１４】
0005782569.tif 000015
（ここで、n=1〜10）、
（4）ジグリコール酸または無水ジグリコール酸、
（5）ハロカルボン酸またはハロカルボン酸エステルZ-(CH2)nCOOR’（ここで、n=1〜10、ZはCl、BrまたはIであり、R’はアルキル基である）
から選択されるいずれか１つである。
【００３７】
より具体的には、上記の方法は以下の工程を含むことが好ましい。
1）4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）および2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージド（CMPI）を触媒として、もしくはN,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）および4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）を触媒として、トロロックス（1）をアルコールもしくはフェノール（2）と反応させて、トロロックスエステル（3）を生成する工程、または、N,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）を触媒として、トロロックス（1）をアミン（8）と反応させてトロロックスアミド（9）を生成する工程；
2）以下の方法のいずれか１つにより、トロロックスエステル（3）またはトロロックスアミド（9）と連結分子とをエステル化反応またはエーテル化反応させて、トロロックスエステルの誘導体またはトロロックスアミドの誘導体を生成する工程、
a）2-エチルヘキサン酸スズ（II）もしくは炭酸セシウムを触媒として、トロロックスエステル（3）もしくはトロロックスアミド（9）を環状酸無水物
【化１５】
0005782569.tif 000016
もしくは無水ジグリコール酸と反応させて、トロロックスエステルの誘導体（4）またはトロロックスアミドの誘導体（10）を生成するか、または4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）および2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージド（CMPI）を触媒として、もしくはN,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）および4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）を触媒として、トロロックスエステル（3）もしくはトロロックスアミド（9）を過剰量の二価カルボン酸(CH2)n(COOH)2もしくはジグリコール酸と反応させて、トロロックスエステルの誘導体（4）またはトロロックスアミドの誘導体（10）を生成する方法、
b）塩基（例えば、トリエチルアミン、ピリジン、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウムなど）を触媒として、トロロックスエステル（3）またはトロロックスアミド（9）をハロカルボン酸と反応させて、トロロックスエステルの誘導体（15a、R’=H）またはトロロックスアミドの誘導体（15a）を生成するか、またはトロロックスエステル（3）またはトロロックスアミド（9）をハロカルボン酸エステルと反応させ、得られた生成物（15b、R’=アルキル）を脱アルキル化させて、トロロックスエステルの誘導体（15a）またはトロロックスアミドの誘導体（15a）を生成する方法、
c）塩基（例えば、トリエチルアミン、ピリジン、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウムなど）を触媒として、トロロックスエステル（3）またはトロロックスアミド（9）をアルキルホスホニル（ホスホリル）ジクロリド、アルコキシホスホニル（ホスホリル）ジクロリドまたはアリールホスホニル（ホスホリル）ジクロリドと反応させて、トロロックスエステルの誘導体（19）またはトロロックスアミドの誘導体（19）を生成する方法、ならびに
d）塩基（例えば、トリエチルアミンまたはピリジンなど）を触媒として、トロロックスエステル（3）またはトロロックスアミド（9）を塩化オキサリルと反応させて、トロロックスエステルの誘導体またはトロロックスアミドの誘導体を生成する方法；
3）工程2）のa）またはb）で得られたトロロックスエステルの誘導体（4, 15a）またはトロロックスアミドの誘導体（10, 15a）をチオニル（ジ）クロリドと反応させて、アシル塩化物（5、11または16）を生成する工程；
4）4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）および2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージド（CMPI）を触媒として、またはN,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）および4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）を触媒として、トロロックスエステルの誘導体（4, 15a）またはトロロックスアミドの誘導体（10, 15a）をカンプトテシンまたはその誘導体と直接反応させて、トロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物（6、12、13、14、17または18）を生成する工程；または
5）塩基（例えば、トリエチルアミン、ピリジン、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウムなど）を触媒として、工程3）で得られたアシル塩化物（5、11もしくは16）または工程2のc）もしくはd）で得られたトロロックスエステルの誘導体（19）もしくはトロロックスアミドの誘導体（19）をカンプトテシンまたはその誘導体と直接反応させて、トロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物（6、12、13、14、17、18、20または21）を生成する工程。
【００３８】
式8に合成ルートの１つを挙げる。即ち、4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）および2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージド（CMPI）を触媒として、またはN,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）および4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）を触媒として、トロロックス（1）をアルコールまたはフェノール（2）と反応させて、トロロックスエステル（3）を生成する。次いで、2-エチルヘキサン酸スズ（II）（または炭酸セシウム）を触媒として、トロロックスエステル（3）を環状酸無水物（例えば、無水コハク酸、無水グルタル酸、無水ジグリコール酸など）と反応させて、トロロックスエステルの誘導体（4）を生成する。別法として、4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）および2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージド（CMPI）を触媒として、またはN,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）および4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）を触媒として、トロロックスエステル（3）を、二官能基を有する二価カルボン酸（例えば、コハク酸、グルタル酸、ジグリコール酸および他の二価カルボン酸）の過剰量と反応させて、トロロックスエステルの誘導体（4）を生成することもできる。トロロックスエステルの誘導体（4）をさらにチオニル（ジ）クロリドと反応させて、トロロックスエステルのアシル塩化物誘導体（5）を生成する。次いで、塩基（例えば、トリエチルアミン）を触媒として、アシル塩化物誘導体（5）の塩化アシル官能基を、10-ヒドロキシカンプトテシンまたは7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンのような10-ヒドロキシ置換カンプトテシンのフェノール性水酸基と選択的に反応させて、本発明の脂溶性抗がん剤化合物（6）を生成する。別法として、4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）および2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージド（CMPI）を触媒として、またはN,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）および4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）を触媒として、トロロックスエステルの誘導体（4）を、10-ヒドロキシカンプトテシンまたは7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンのような10-ヒドロキシ置換カンプトテシンと直接反応させて、本発明の脂溶性抗がん剤化合物（6）を生成することもできる。
【００３９】
【化１６】
0005782569.tif 000017
R：アルキル基、分枝鎖アルキル基もしくはシクロアルキル基、不飽和の炭化水素基、不飽和の分枝鎖炭化水素基、もしくは不飽和の環状炭化水素基、アリール基またはアラルキル基など
R1：-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2OCH2-など
R2：H、-CH2CH3など
【００４０】
式9に本発明の脂溶性抗がん剤化合物の別の合成ルートを示す。即ち、塩基（例えば、トリエチルアミン）の作用下で、トロロックスエステルのアシル塩化物誘導体（5）をカンプトテシン（またはその誘導体）のラクトン環上の水酸基と反応させて、本発明の新規抗がん剤化合物（7）を生成する。別法として、4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）および2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージド(CMPI）を触媒として、またはN,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）および4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）を触媒として、トロロックスエステルの誘導体（4）をカンプトテシン（またはその誘導体）と直接反応させて、本発明の新規抗がん剤化合物（7）を生成することもできる。
【００４１】
【化１７】
0005782569.tif 000018
R：アルキル基、分枝鎖アルキル基もしくはシクロアルキル基、不飽和の炭化水素基、不飽和の分枝鎖炭化水素基、もしくは不飽和の環状炭化水素基、アリール基またはアラルキル基など
R1：-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2OCH2-など
【００４２】
式10に本発明の脂溶性抗がん剤化合物の別の合成ルートを示す。即ち、N,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）をカップリング剤として、トロロックス（1）をアミン（8）と反応させて、トロロックスアミド（9）を生成する。次いで、2-エチルヘキサン酸スズ（II）または炭酸セシウムを触媒として、トロロックスアミド（9）を環状酸無水物（例えば、無水コハク酸、無水グルタル酸、無水ジグリコール酸など）と反応させて、トロロックスアミドの誘導体（10）を生成する。次いで、4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）および2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージド（CMPI）を触媒として、またはN,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）および4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）を触媒として、トロロックスアミドの誘導体（10）をカンプトテシン、10-ヒドロキシカンプトテシンまたは7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン等と反応させて、本発明の新規抗がん剤化合物（12）、（13)、（14）をそれぞれ生成する。別法として、トロロックスアミドの誘導体（10）をチオニル（ジ）クロリドと反応させてトロロックスエステルのアシル塩化物誘導体（11）を生成することもできる。次いで、塩基（例えば、トリエチルアミン）を触媒として、トロロックスエステルのアシル塩化物誘導体（11）の塩化アシル官能基を、10-ヒドロキシカンプトテシンもしくは7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンのような10-ヒドロキシ置換カンプトテシンのフェノール性水酸基と選択的に反応させ、またはカンプトテシン（またはその誘導体）のラクトン環上の水酸基と選択的に反応させ、本発明の脂溶性抗がん剤化合物（12）、（13)、（14）を生成する。
【００４３】
【化１８】
0005782569.tif 000019
R：アルキル基、分枝鎖アルキル基もしくはシクロアルキル基、不飽和のアルケニル基、不飽和の分枝鎖アルケニル基、もしくは不飽和のシクロアルケニル基、アリール基またはアラルキル基など
R1：-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2OCH2-など
R2：H、-CH2CH3など
【００４４】
式11および式12に本発明の脂溶性抗がん剤化合物の別の合成ルートを示す。即ち、塩基（例えば、トリエチルアミン、ピリジン、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウムなど）を触媒として、トロロックスエステル（3）またはトロロックスアミド（9）をハロ（ヨード、ブロモ、クロロ）カルボン酸（例えば、ブロモ酢酸）と反応させて、トロロックスエステルの誘導体（15a）を生成するか、またはハロカルボン酸エステル（例えば、ブロモ酢酸エチル）と反応させて（15b）を生成し、（15b）を水酸化リチウムと反応させた後、酸で処理して（15a）を生成する。トロロックスエステルの誘導体（15a）をチオニル（ジ）クロリドと反応させてアシル塩化物誘導体（16）を生成する。次いで、塩基（例えば、トリエチルアミン）を触媒として、アシル塩化物誘導体（16）の塩化アシル官能基を10-ヒドロキシカンプトテシンもしくは7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンのような10-ヒドロキシ置換カンプトテシンのフェノール性水酸基と選択的に反応させて、またはカンプトテシン（もしくはその誘導体）のラクトン環上の水酸基と選択的に反応させて、本発明の脂溶性抗がん剤化合物（17）および（18）を生成する。別法として、4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）および2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージド（CMPI）を触媒として、またはN,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）および4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）を触媒として、トロロックスエステルの誘導体（15a）を10-ヒドロキシ置換カンプトテシン（例えば、10-ヒドロキシカンプトテシンもしくは7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン）またはカンプトテシンと直接反応させて、本発明の脂溶性抗がん剤化合物（17）および（18）をそれぞれ生成することもできる。
【００４５】
式13に本発明の脂溶性抗がん剤化合物の別の合成ルートを示す。即ち、塩基（例えば、トリエチルアミン、ピリジン、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウムなど）を触媒として、トロロックスエステル（3）またはトロロックスアミド（9）をアルキル（アルコキシ）ホスホニル（ホスホリル）ジクロリド（例えばメチル（メトキシ）ホスホニル（ホスホリル）ジクロリド）またはアリール（アリールオキシ）ホスホニル（ホスホリル）ジクロリド（例えば、フェニル（フェノキシ）ホスホニル（ホスホリル）ジクロリド）と反応させて、トロロックスエステルの誘導体（19）を生成する。トロロックスエステルの誘導体（19）をカンプトテシンまたはその誘導体と直接反応させて、トロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物（20）および（21）を生成する。
【００４６】
【化１９】
0005782569.tif 000020
R：アルキル基、分枝鎖アルキル基もしくはシクロアルキル基、不飽和の直鎖炭化水素基、不飽和の分枝鎖炭化水素基、もしくは不飽和の環状炭化水素基、アリール基またはアラルキル基など
X：-O-、-NH-または-NR’-（ここで、R’はC1〜C6アルキル基である）
m=1〜10
R2：H、-CH2CH3など
【００４７】
【化２０】
0005782569.tif 000021
R：アルキル基、分枝鎖アルキル基もしくはシクロアルキル基、不飽和の直鎖炭化水素基、不飽和の分枝鎖炭化水素基、もしくは不飽和の環状炭化水素基、アリール基またはアラルキル基など
X：-O-、-NH-または-NR’-（ここで、R’はC1〜C6アルキル基である）
m=1〜10
【００４８】
【化２１】
0005782569.tif 000022
R：アルキル基、分枝鎖アルキル基もしくはシクロアルキル基、不飽和の直鎖炭化水素基、不飽和の分枝鎖炭化水素基、もしくは不飽和の環状炭化水素基、アリール基またはアラルキル基など
X：-O-、-NH-または-NR’-（ここで、R’はC1〜C6アルキル基である）
R1：C1〜C6アルキル基、フェニル基もしくは置換フェニル基、またはR’O-（R’：C1〜C6アルキル基、フェニル基または置換フェニル基）
R2：H、-CH2CH3
【００４９】
更に、本発明は上記の新規脂溶性抗がん剤の製剤に関し、該製剤はエマルジョン製剤およびミセル製剤を包含する。エマルジョン製剤は、本発明の新規抗がん剤化合物、１種以上の界面活性剤、油相（親油性媒体）および水相を含む。エマルジョン製剤は、水中油型または油中水型であってもよい。ミセル製剤は、本発明の新規抗がん剤化合物、溶解補助剤、１種以上の界面活性剤および水相を含む。
【００５０】
本発明の一実施態様は、上記の脂溶性抗がん剤化合物のエマルジョン製剤またはマイクロエマルジョン製剤であって、
1）a）式Iまたは式IIで表される構造を有するトロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物および
b）生体適合性の親油性媒体
を含む油相と、
2）界面活性剤および溶解補助剤と、
3）水相と
を含む、エマルジョン製剤またはマイクロエマルジョン製剤である。
【００５１】
別の実施形態では、上記の脂溶性抗がん剤化合物のミセル製剤は、
1）式Iまたは式IIで表される構造を有するトロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物と、
2）界面活性剤と、
3）溶解補助剤と、
4）水相と
を含む。
【００５２】
本発明の抗がん剤化合物は親油性媒体に可溶である。親油性媒体（または担体）は生体適合性の親油性媒体であればどのようなものであってもよい。生体適合性の親油性媒体の代表例として、以下のものが挙げられる。
a）脂溶性ビタミンEおよびその誘導体。ビタミンEとは、通常トコフェロール（tocopherol）およびトコトリエノール（tocotrienol）と呼ばれる天然または合成のビタミンE群である。トコフェロールには、α-トコフェロール（D型、DL型、L型）、β-トコフェロール（D型、DL型、L型）、γ-トコフェロール（D型、DL型、L型）、およびδ-トコフェロール（D型、DL型、L型）が含まれる。トコトリエノールはトコフェロールに似た構造を有するが、トコトリエノールはC-2位のフィチル側鎖に二重結合を３つ持っている。トコトリエノールには、α-トコトリエノール（D型、DL型、L型）、β-トコトリエノール（D型、DL型、L型）、γ-トコトリエノール（D型、DL型、L型）、およびδ-トコトリエノール（D型、DL型、L型）が含まれる。ビタミンE誘導体にはトコフェロールおよびトコトリエノールのあらゆる誘導体が含まれ、例えば、コハク酸ビタミンE、酢酸ビタミンEなどが挙げられる。
b）親油性媒体として用いることのできる油脂。このような油脂には、鎖長が異なる脂肪酸およびそのエステルが含まれ、これらのほとんどは直鎖状であるが、分枝鎖状であってもよい。例えば、カプリン酸、カプリル酸、ヘキサン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、ならびに他の飽和または不飽和の脂肪酸およびそのエステルが挙げられる。
c）脂肪酸とグリセリンとを反応させることにより得られるモノグリセリド、ジグリセリドまたはトリグリセリド。これらは、合成のものでも天然のものでも親油性媒体として用いることができる。例えば、大豆油、綿実油、菜種油、魚油、アセチル化モノグリセリド、グリセリンモノオレアート、グリセリントリアセテートおよびジアセチルタルトラート、モノグリセリド、ヒマシ油などのグリセリドが挙げられる。
d）脂肪族アルコール、例えば、ベンジルアルコール、ステアリルアルコール、ラウリルアルコールなど、またはそれらのエステルまたはエーテル、例えば安息香酸ベンジルが挙げられる。
【００５３】
界面活性剤の代表例として、以下のものが挙げられる。
a）ポリエチレングリコール系界面活性剤、例えば、Cremophor（登録商標）EL系界面活性剤、Tween（登録商標）系界面活性剤など
b）リン脂質界面活性剤、例えば、レシチン、PEG化リン脂質など
c）ポリエチレングリコールビタミンE誘導体、例えば、ビタミンEポリエチレングリコールコハク酸エステル（d-α-トコフェロールポリエチレングリコール1000コハク酸エステル（TPGS）など
d）ポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレンブロック共重合体：ポロキサマーまたはプルロニック（登録商標）ブロック共重合体（H(OCH2CH2)a(OCH2CH2CH2)b(OCH2CH2)aOH)など
【００５４】
有機溶解補助剤の代表例として、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、N-メチルピロリドンなどが挙げられる。ポリエチレングリコール（PEG）は、親水性であり、その繰り返し単位の化学構造は-CH2CH2O-である。ポリエチレングリコール（PEG）の一般式はH-(CH2CH2)n-OHであり、通常200〜10,000の範囲の分子量を有する。ポリエチレングリコール（PEG）としては、例えば、ポリエチレングリコール200、PEG-300、ポリエチレングリコール400などが挙げられる。
【００５５】
本発明に係るエマルジョン製剤、マイクロエマルジョン製剤およびミセル製剤は、いずれも本発明の脂溶性抗がん剤化合物を含む。
【００５６】
ここで言う「エマルジョン」とは、界面活性剤の作用下において、液滴の形態の１つの液相を別の液相中に分散させることによって形成される不均一な液体分散系である。液滴は例えば油と水からなり、一般的に0.1〜3.0μｍの直径を有する。
【００５７】
上記のエマルジョンは安定なマイクロエマルジョンを形成することができる。「マイクロエマルジョン」は、２つの非混和性液体からなる、熱力学的に安定で、等方性の、透明または半透明の分散系である。例えば、油と水からなるマイクロエマルジョン分散系は、界面活性剤分子から形成される界面膜によって安定化される。マイクロエマルジョンの液滴の平均直径は200nm未満であり、一般的には10nm〜50nmである。
【００５８】
エマルジョンまたはマイクロエマルジョンには、油相と水相が含まれる。エマルジョンまたはマイクロエマルジョンは、水中油型または油中水型であってもよい。
【００５９】
水の非存在下で、油相、非イオン性界面活性剤、乳化助剤、および医薬化合物を混合することにより形成される均質で透明な溶液は、自己乳化型薬物送達システム（self-emulsifying drug delivery system、SEDDS）と呼ばれ、自己乳化することにより、液滴径が100nm〜500nmのエマルジョンを形成し、親油性薬物の溶解性および経口吸収性を向上させるために用いられる。
【００６０】
上記のエマルジョン製剤またはマイクロエマルジョン製剤における、本発明の抗がん剤化合物の含有量は0.005重量％〜5.0重量％であり、好ましくは0.01重量％〜2.5重量％であり、より好ましくは0.1重量％〜1.5重量％である。
【００６１】
上記のエマルジョン製剤またはマイクロエマルジョン製剤における、親油性媒体の含有量は2重量％〜20重量％であり、好ましくは4重量％〜12重量％であり、より好ましくは6重量％〜10重量％である。
【００６２】
エマルジョンまたはマイクロエマルジョンの一実施態様において、親油性媒体は大豆油を含み、水性媒体は水である。エマルジョンおよびマイクロエマルジョンの別の実施形態において、親油性媒体には油溶性ビタミンEが含まれる。エマルジョンまたはマイクロエマルジョンの別の実施形態では、親油性媒体は油溶性ビタミンE誘導体を含む。
【００６３】
本発明の抗がん剤化合物に加えて、エマルジョン製剤またはマイクロエマルジョン製剤は、医薬製剤としてのエマルジョンおよびマイクロエマルジョンに通常用いられる他の成分をさらに含んでいてもよい。このような成分として界面活性剤および溶解補助剤が挙げられる。界面活性剤の代表例としては、例えば、Cremophor EL、Tween 80、ポリエチレングリコールビタミンE誘導体界面活性剤、他の界面活性剤ポリマーのような非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【００６４】
好適なポリエチレングリコールビタミンE誘導体界面活性剤には、ビタミンEポリエチレングリコールコハク酸エステル誘導体（例えば、ビタミンEポリエチレングリコールコハク酸エステル）が含まれる。ビタミンE誘導体分子において、ポリエチレングリコールは、コハク酸を介してビタミンEの水酸基に結合している。ビタミンEのポリエチレングリコール誘導体におけるポリエチレングリコールは、様々な分子量（例えば、200、300、400、600、1000など）を有していてよい。ここで言う「ビタミンEポリエチレングリコールコハク酸エステル」は、ビタミンEポリエチレングリコールコハク酸エステル（例えば、d-α-トコフェロールポリエチレングリコール1000コハク酸エステル（TPGS）、非イオン性界面活性剤の一種（HLB=16〜18）など）ならびにビタミンEポリエチレングリコールの各種エステル誘導体およびエーテル誘導体を含む。
【００６５】
上記のエマルジョン製剤またはマイクロエマルジョン製剤における界面活性剤の含有量は約1〜10重量％であり、好ましくは2〜6重量％であり、より好ましくは4〜5重量％である。
【００６６】
上記のエマルジョン製剤またはマイクロエマルジョン製剤における溶解補助剤の含有量は0重量％〜20重量％である。
【００６７】
更に、別の態様において本発明は、本発明の抗がん剤化合物、１種以上の界面活性剤、１種以上の溶解補助剤、および水相を含む、脂溶性抗がん剤化合物のミセル製剤を提供する。
【００６８】
上記のミセル製剤における脂溶性抗がん剤化合物の含有量は、約0.005重量％〜3.0重量％であり、好ましくは約0.01重量％〜2.5重量％であり、より好ましくは約0.1重量％〜1.0重量％である。
【００６９】
本発明のミセル製剤における好適な界面活性剤の含有量は約1重量％〜10重量％であり、好ましくは2重量％〜6重量％であり、より好ましくは4重量％〜5重量％である。
【００７０】
上記のミセル製剤は、上述した溶解補助剤のような他の成分を更に含む。一例では、ミセル製剤は、ポリエチレングリコールおよび低級アルキルアルコール（例えばエタノールなど）を含む。ミセル製剤における溶解補助剤の含有量は、約2重量％〜20重量％である。
【００７１】
上記のエマルジョン製剤、マイクロエマルジョン製剤およびミセル製剤はいずれも水相を含む。一例では、水相は脱イオン水を含む。別の例では、水相は生理食塩水を含む。また別の例では、水相は有機酸（例えばコハク酸、クエン酸など）緩衝液を含む。
【００７２】
また、本発明は、本発明の新規な医薬化合物の使用、即ち、抗がん薬を製造するための上記トロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物の使用を提供する。
【００７３】
例えば、本発明の医薬化合物は、がんの治療薬を製造するために使用される。本発明の医薬化合物は、白血病、リンパ腫、骨髄腫などの血液系がん；ならびに固形がん（例えば、乳がん、卵巣がん、膵臓がん、結腸がん、直腸がん、非小細胞肺がん、膀胱がんなど）、肉腫および神経膠腫などの非血液系がんの治療に使用される。
【００７４】
本発明の医薬化合物の薬効および毒性は、インビトロでの細胞試験またはインビボでの動物実験により決定され、このような試験としては、例えば、ED50（50％有効量：被験者群の50％に陽性反応が現れるときの薬物用量）、LD50（50％致死量：被験者群の50％が死亡するときの薬物用量）およびGI50（がん細胞の増殖を50％抑制する抗がん剤の濃度）がある。一般に、50％致死量（LD50）／50％有効量（ED50）の比は治療指数と呼ばれ、薬物の安全性を示す。薬物の治療指数が高ければ高いほど、低い治療指数を示す薬物よりも安全である。
【００７５】
本発明の新規抗がん剤化合物は、治療指数および薬物の安全性の向上、さらに治療効果の向上が図られたものである。インビトロでの細胞試験およびインビボでの動物実験から決定された薬物投与量から、ヒトに対する用量範囲を設定することができる。このような用量範囲は、毒性がほとんどないか全くない50％有効量範囲内であることが好ましい。投与量は、通常、使用される剤形、患者の感受性、投与経路などによって変動する。一般的には、例えばトポテカンまたはイリノテカンのような同一または類似の薬剤の通常の投与量を参考にすることができる。例えば、トポテカンの通常の投与量は0.2〜1.5mg/kgであり、イリノテカンの通常の投与量は100〜350mg/kgである。
【００７６】
本発明の医薬化合物は単独または１種以上の他の治療薬と組み合わせて使用することができる。例えば、がんを治療する場合、本発明の医薬化合物は以下の治療薬と組み合わせて使用することができる。例えば、フルタミド（flutamide）およびリュープロリド（luprolide）などのアンドロゲン阻害薬；タモキシフェン（tamoxifen）などのエストロゲン阻害薬；ダウノルビシン（daunorubicin）、フルオロウラシル（fluorouracil）、フロクスウリジン（floxuridine）、インターフェロン−α（interferon alpha）、メトトレキサート（methotrexate）、プリカマイシン（plicamycin）、メルカプトプリン（mercaptopurine）、チオグアニン（thioguanine）、アドリアマイシン（adriamycin）、カルムスチン（carmustine）、ロムスチン（lomustine）、シタラビン（cytarabine）、シクロホスファミド（cyclophosphamide）、ドキソルビシン（doxorubicin）、エストラムスチン（estramustine）、アルトレタミン（altretamine）、ヒドロキシウレア（hydroxyurea）、イホスファミド（ifosfamide）、プロカルバジン（procarbazine）、ムタマイシン（mutamycin）、ブスルファン（busulfan）、ミトキサントロン（mitoxantrone）、カルボプラチン（carboplatin）、シスプラチン（cisplatin）、ストレプトゾシン（streptozocin）、ブレオマイシン（bleomycin）、ダクチノマイシン（dactinomycin）、およびイダマイシン（idamycin）などの代謝拮抗薬および細胞毒性薬；メドロキシプロゲステロン（medroxyprogesterone）、エチニルエストラジオール（ethinyl estradiol）、エストラジオール（estradiol）、ロイプロリド（leuprolide）、メゲストロール（megestrol）、オクトレオチド（octreotide）、ジエチルスチルベストロール（diethylstilbestrol）、クロロトリアニセン（chlorotrianisene）、エトポシド（etoposide）、ポドフィロトキシン（podophyllotoxin）およびゴセレリン（goserelin）などのホルモン；メルファラン（melphalan）、クロラムブシル（chlorambucil）およびチオテパ（thiotepa）などのマスタゲン（mustargen）誘導体；ベタメタゾン（betamethasone）などのステロイド；ウシ結核菌（Mycobacterium bovis）の生菌、ダカルバジン（dicarbazine）、アスパラギナーゼ（asparaginase）、ロイコボリン（leucovorin）、ミトタン（mitotane）、ビンクリスチン（vincristine）、ビンブラスチン（vinblastine）、およびタキソテール（taxotere）などの他の抗腫瘍薬などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７７】
本発明によれば、抗がん活性を有する医薬化合物分子であるカンプトテシンまたはカンプトテシン誘導体と、親油性トロロックスエステルまたはトロロックスアミドとを結合基を介して共有結合することにより、トロロックス誘導体修飾脂溶性抗がん剤化合物が得られる。該抗がん剤化合物は、抗がん剤活性部分と親油性部分とを含有し、生体適合性の親油性溶媒に可溶である。本発明の新規抗がん剤化合物は、より高い抗がん活性を有すると共に、より良好な溶解性および安定性を有することから、生体内の生理学的条件下におけるカンプトテシンまたはその誘導体の作用持続時間（半減期）および治療効果が改善されているだけでなく、その毒性および副作用が低減されている。本発明の抗がん剤化合物は、エマルジョン製剤またはミセル製剤に製剤化できることから、血液系がんおよび非血液系がんの治療に広く用いることができる。本発明によれば、種々のカンプトテシン類およびそれらの誘導体を修飾することによってカンプトテシン類およびそれらの誘導体の適用分野を広げることができ、これによって、カンプトテシン類およびそれらの誘導体を臨床応用するための新規な方法およびアプローチを提供することができる。
【００７８】
以下、具体的な実施例を参照して本発明をより詳しく説明する。しかしながら、本発明の範囲はこれらの具体的な実施形態に限定されず、特許請求の範囲によって限定されるものとする。
【実施例】
【００７９】
以下の実施例により、本発明の新規抗がん剤化合物の合成、製剤化およびインビトロ細胞試験について説明する。実施例はすべて単に本発明の理解を助けその実施を容易にするために例示され、本発明を限定するものではない。
【００８０】
実施例1．  7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-スクシナートの合成
上記の脂溶性抗がん剤化合物の合成は、以下の工程を含む。
【００８１】
1）R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステルの合成
【化２２】
0005782569.tif 000023
工程：
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコに、ヘキサデカノール727mg（3mmol）、4-ジメチルアミノピリジン733mg（6mmol）、2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージド766mg（3mmol）およびN,N-ジメチルホルムアミド15mLを添加し、R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸750mg（3mmol）のN,N-ジメチルホルムアミド（10mL）溶液をゆっくり反応液に滴下した。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で12時間反応させた。ロータリーエバポレーターで、溶媒（N,N-ジメチルホルムアミド）を除去し、ジエチルエーテル50mLを残渣に加えて、2時間攪拌し、沈殿物を濾去した。濾液を10mLに濃縮し、カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサン：酢酸エチル（体積比）=10:1）により、R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル1026mg（収率：72.0％）を単離した。
得られた化合物の質量スペクトルおよび水素核磁気共鳴スペクトルを図1および図2に示す。
【化２３】
0005782569.tif 000024
MS(Positive ESI): m/z=475.3(M+H)+, 497.3(M+Na) +, 971.6(2M+Na) +.
lH NMR(400 MHz,CDCl3): δ ppm: 4.173 (s, 1H), 4.079-3.690 (m, 2H), 2.648-2.384 (m,3H), 2.161 (s, 3H), 2.136 (s, 3H), 2.038 (s, 3H), 1.879-1.802(m, 1H), 1.577 (s, 3H), 1.538-1.475(m, 2H), 1.302-1.176 (m, 26H), 0.880-0.846 (t, J=6.6 Hz, 3H).
【００８２】
2）R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-モノスクシナートの合成
【化２４】
0005782569.tif 000025
工程：
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコに、R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル949mg（2mmol）、無水コハク酸300mg（3mmol）、炭酸セシウム815mg（2.5mmol）およびN,N-ジメチルホルムアミド20mLを添加した。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で12時間反応させた。反応液を酢酸エチル100mLに加えて攪拌した。混合液を水（50mL×3）で洗浄し、有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、硫酸マグネシウムを濾去した。濾液を10mLに濃縮し、カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンとアセトンの混合液）により、R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-モノスクシナート908mg（収率：79.0％）を単離した。
合成により得られた化合物の質量スペクトルおよび水素核磁気共鳴スペクトルを図3および図4に示す。
【化２５】
0005782569.tif 000026
MS(Positive ESI): m/z=597.5(M+Na) +, 1194.0(2M+2Na) +.
1H NMR(400 MHz,CDCl3): δ ppm: 4.084-4.002(m, 2H), 2.911-2.879 (t, J=6.4 Hz, 2H), 2.809-2.776 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.633-2.363 (m, 3H), 2.137 (s, 3H), 1.995 (s, 3H), 1.903 (s, 3H), 1.867-1.791 (m, 1H), 1.580 (s, 3H), 1.514-1.499 (m, 2H), 1.330-1.240 (m, 26H), 0.878-0.844 (t, J=6.8 Hz, 3H).
【００８３】
3）7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-スクシナートの合成
【化２６】
0005782569.tif 000027
工程：
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコにR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-モノスクシナート519mg（1mmol）、塩化チオニル238mg（2mmol）、N,N-ジメチルホルムアミド10μLおよび無水トルエン20mLを添加した。電磁攪拌しながら、窒素ガスの保護下において室温で4時間反応させた。トルエンおよび過剰な塩化チオニルを減圧蒸留によって除去し、得られた粘稠液に無水クロロホルム10mLを加えて、溶液Aを得た。
攪拌しながら、50mLの反応フラスコに、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン196mg（0.5mmol）、無水トリエチルアミン61mg（0.6mmol）および無水N,N-ジメチルアセトアミド20mLを加え、溶液A 6mLをゆっくり加えた。攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で4時間反応させ、薄層クロマトグラフィーにより反応を追跡した。未反応の7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンが少量検出された場合、反応が完了するまで適量の溶液Aとトリエチルアミンを加えた。反応液を酢酸エチル100mLに加え、水（50mL×3）で洗浄し、有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。硫酸マグネシウムを濾去し、濾液を10mLに濃縮し、カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンとアセトンの混合液）により、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-スクシナート340mg（収率：76.2％）を単離した。
合成により得られた化合物の質量スペクトルおよび水素核磁気共鳴スペクトルを図5および図6に示す。
【化２７】
0005782569.tif 000028
MS(Positive ESI): m/z=949.7(M+H) +, 971.7(M+Na) +.
1H NMR(400 MHz,CDCl3): δ ppm: 8.223-8.200 (d, J=9.2Hz, 1H), 7.796 (s, 1H), 7.624 (s, 1H), 7.554-7.532(d, J=8.8 Hz, 1H), 5.757-5.717 (d, J=16 Hz, 1H), 5.312-5.271 (d, J=16.4 Hz, 1H), 5.240 (s, 2H), 4.092-4.021 (m, 2H), 3.714 (s, 1H), 3.142-3.081 (m, 6H), 2.632-2.389 (m, 3H), 2.146 (s, 3H), 2.020 (s, 3H), 1.929 (s, 3H), 1.903-1.802(m, 1H), 1.589-1.545 (m, 7H), 1.374-1.335 (t, J=7.8 Hz, 3H), 1.229 (m, 26H), 1.042-1.005 (t, J=7.4 Hz, 3H), 0.869-0.836 (t, J=6.6 Hz, 3H).
【００８４】
実施例2．  7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸n-ヘキシルエステル-6-スクシナートの合成
上記の脂溶性抗がん剤化合物の合成は、以下の工程を含む。
【００８５】
1）R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸n-ヘキシルエステルの合成
【化２８】
0005782569.tif 000029
工程：
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコに4-ジメチルアミノピリジン978mg（8mmol）、2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージド1022mg（4mmol）およびn-ヘキサノール20mLを加えた。R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸751mg（3mmol）のN,N-ジメチルホルムアミド（10mL）溶液を反応液にゆっくり滴下した。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で12時間反応させた。固形物を濾去し、ロータリーエバポレーターで濾液を10mLに濃縮し、カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンとアセトンの混合液）により、R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸n-ヘキシルエステル856 mg（収率：85.0％）を単離した。
MS(Positive ESI): m/z=335.3(M+H)+, 357.2(M+Na)+, 691.5 (2M+Na)+.
lH NMR(400 MHz,CDCl3): δ ppm: 4.081-3.959 (m, 2H), 2.674-2.392(m, 3H), 2.159 (s, 3H), 2.134 (s, 3H), 1.991 (s, 3H), 1.877-1.737 (m, 1H), 1.578 (s, 3H), 1.534-1.471 (m, 2H), 1.294-1.165 (m, 6H), 0.876-0.839 (t, J=7.4 Hz, 3H).
【００８６】
2）R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸n-ヘキシルエステル-6-モノスクシナートの合成
【化２９】
0005782569.tif 000030
工程：
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコにR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸n-ヘキシルエステル836mg（2.5mmol）、無水コハク酸300mg（3mmol）、炭酸セシウム815mg（2.5mmol）およびN,N-ジメチルホルムアミド20mLを加えた。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で12時間反応させた。反応液を酢酸エチル100mLに加えて攪拌した。混合液を0.1N HCl溶液（50mL×3)で、続いて水（50mL×3)で洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。硫酸マグネシウムを濾去し、濾液を10mLに濃縮し、カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンとアセトンの混合液）により、R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸n-ヘキシルエステル-6-モノスクシナート865mg（収率：79.0％）を単離した。
MS(Positive ESI): m/z=457.3 (M+Na)+, 891.6(2M+Na)+.
1H NMR(400 MHz,CDCl3): δ ppm: 4.086-3.974 (m, 2H), 2.915-2.883 (t, J=6.4 Hz, 2H), 2.809-2.777 (t, J=6.4 Hz, 2H), 2.667-2.373 (m, 3H), 2.135 (s, 3H), 1.992(s, 3H), 1.901 (s, 3H), 1.864-1.788 (m, 1H), 1.580 (s, 3H), 1.491 (s, 2H), 1.281-1.189 (m, 6H), 0.857-0.822(t, J=7 Hz, 3H).
【００８７】
3）7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸n-ヘキシルエステル-6-スクシナートの合成
【化３０】
0005782569.tif 000031
工程：
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコにR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8 -テトラメチルクロマン-2-カルボン酸n-ヘキシルエステル-6-モノスクシナート439mg（1mmol）、塩化チオニル238mg（2mmol）、N,N-ジメチルホルムアミド10μL、および無水トルエン20mLを加えた。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で4時間反応させた。トルエンおよび過剰な塩化チオニルを減圧蒸留によって除去し、得られた粘稠液に無水クロロホルム10mLを加え、溶液Aを得た。
攪拌しながら、50mLの反応フラスコに7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン196mg（0.5mmol）、無水トリエチルアミン61mg（0.6mmol）および無水N,N-ジメチルホルムアミド20mLを加え、溶液A 6mLをゆっくり加えた。攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で4時間反応させ、薄層クロマトグラフィーにより反応を追跡した。未反応の7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンが少量検出された場合、反応が完了するまで適量の溶液Aとトリエチルアミンを追加した。反応液を酢酸エチル100mLに加え、混合液を水（50mL×3）で洗浄し、有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。硫酸マグネシウムを濾去し、濾液を10mLに濃縮し、カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンとアセトンの混合液）により、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸n-ヘキシルエステル-6-スクシナート358mg（収率：90.0％）を単離した。
合成により得られた脂溶性抗がん剤化合物の質量スペクトルおよび水素核磁気共鳴スペクトルを図7および図8に示す。
【化３１】
0005782569.tif 000032
MS(Positive ESI): m/z=809.5(M+H)+, 831.5(M+Na) +.
1H NMR(400 MHz,CDCl3) δ ppm: 8.223-8.200 (d, J=9.2Hz, 1H), 7.795 (s, 1H), 7.625 (s, 1H), 7.555-7.532(d, J=9.2Hz, 1H), 5.759-5.718 (d, J=16.4 Hz, 1H), 5.313-5.273 (d, J=16 Hz, 1H), 5.241 (s, 2H), 4.066-4.020 (m, 2H), 3.705 (s, 1H), 3.142-3.083 (6H), 2.632-2.382(m, 3H), 2.144 (s, 3H), 2.018 (s, 3H), 1.927 (s, 3H), 1.901-1.799 (m, 1H), 1.590-1.512(m, 7H), 1.372-1.334 (t, J=7.6 Hz, 3H), 1.232-1.170 (m, 6H), 1.041-1.005 (t, J=7.2Hz, 3H), 0.857-0.822(t, J=7Hz, 3H).
【００８８】
実施例3．  7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ドデシルエステル-6-スクシナートの合成
上記の脂溶性抗がん剤化合物の合成は、以下の工程を含む。
【００８９】
1）R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ドデシルエステルの合成
【化３２】
0005782569.tif 000033
工程：
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコに、ドデカノール373mg（2mmol）、4-ジメチルアミノピリジン489mg（4mmol）、2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージド511mg（2mmol）およびN,N-ジメチルホルムアミド10mLを加えた。R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸500mg（2mmol）のN,N-ジメチルホルムアミド（10mL）溶液を反応液にゆっくり滴下した。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で12時間反応させた。固形物を濾去し、ロータリーエバポレーターで濾液を10mLに濃縮し、カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンと酢酸エチルの混合液）により、R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ドデシルエステル365mg（収率：43.6％）を単離した。
MS(Positive ESI): m/z=419.4(M+H)+, 441.4(M+Na)+, 859.7(2M+Na)+.
lH NMR(400 MHz,CDCl3): δ ppm: 4.183 (s, 1H), 4.079-3.961 (m, 2H), 2.655-2.383 (m, 3H), 2.161 (s, 3H), 2.135 (s, 3H), 2.037 (s, 3H), 1.879-1.803 (m, 1H), 1.578 (s, 3H), 1.525-1.459 (m, 2H), 1.304-1.178 (m, 18H), 0.884-0.849 (t, J=7.0 Hz, 3H).
【００９０】
2）R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ドデシルエステル-6-モノスクシナートの合成
【化３３】
0005782569.tif 000034
工程：
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコに、R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ドデシルエステル837mg（2mmol）、無水コハク酸300mg（3mmol）、炭酸セシウム815mg（2.5mmol）およびN,N-ジメチルホルムアミド20mLを加えた。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で12時間反応させた。反応液を酢酸エチル100mLに加えて攪拌した。混合液を0.1N HCl溶液（50mL×3）で、続いて水（50mL×3) で洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、硫酸マグネシウムを濾去し、濾液を10mLに濃縮し、カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンとアセトンの混合液）により、R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ドデシルエステル-6-モノスクシナート908mg（収率：86.0％）を単離した。
MS(Positive ESI): m/z=541.4(M+Na)+.
1H NMR(400 MHz,CDCl3): δ ppm: 4.089-3.999 (m, 2H), 2.911-2.879 (t, J=6.4 Hz, 2H), 2.807-2.774 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.664-2.363 (m, 3H), 2.136 (s, 3H), 1.994 (s, 3H), 1.902(s, 3H), 1.866-1.790 (m, 1H), 1.579 (s, 3H), 1.496 (m, 2H), 1.299-1.192(m, 18H), 0.878-0.844 (t, J=6.8 Hz, 3H).
【００９１】
3）7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ドデシルエステル-6-スクシナートの合成
【化３４】
0005782569.tif 000035
工程：
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコに、R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ドデシルエステル-6-モノスクシナート519mg（1mmol）、塩化チオニル238mg（2mmol）、N,N-ジメチルホルムアミド10μLおよび無水トルエン20mLを加えた。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で4時間反応させた。トルエンおよび過剰な塩化チオニルを減圧蒸留によって除去し、得られた粘稠液に無水クロロホルム10mLを加え、溶液Aを得た。
攪拌しながら、50mLの反応フラスコに、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン196mg（0.5mmol）、無水トリエチルアミン61mg（0.6mmol）および無水N,N-ジメチルアセトアミド20mLを加え、溶液A 6mLをゆっくり加えた。攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で4時間反応させ、薄層クロマトグラフィーにより反応を追跡した。未反応の7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンが少量検出された場合、反応が完了するまで適量の溶液Aとトリエチルアミンを追加した。反応液を酢酸エチル100mLに加え、混合液を水（50mL×3）で洗浄し、有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。硫酸マグネシウムを濾去し、濾液を10mLに濃縮し、カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンとアセトンの混合液）により、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ドデシルエステル-6-スクシナート340mg（収率：76.2％）を単離した。
合成により得られた脂溶性抗がん剤化合物の質量スペクトルおよび水素核磁気共鳴スペクトルを図9および図10に示す。
【化３５】
0005782569.tif 000036
MS(Positive ESI): m/z=893.7(M+H)+, 915.7(M+Na) +.
1H NMR(400 MHz,CDCl3): δ ppm: 8.220-8.197 (d, J=9.2Hz, 1H), 7.794 (s, 1H), 7.623 (s, 1H), 7.552-7.529 (d, J=9.2Hz, 1H), 5.755-5.714 (d, J=16.4 Hz, 1H), 5.310-5.269 (d, J=16.4 Hz, 1H), 5.238 (s, 2H), 4.075-4.108 (m, 2H), 3.739 (s, 1H), 3.140-3.081 (m, 6H), 2.633-2.397 (t, 3H), 2.145 (s, 3H), 2.020 (s, 3H), 1.929 (s, 3H), 1.902-1.801 (m, 1H), 1.589-1.506 (s, 7H), 1.373-1.335 (t, J=7.6 Hz, 3H), 1.272-1.223 (m, 18), 1.041-1.004 (t, J=7.4 Hz, 3H), 0.869-0.835 (t, J=6.8 Hz, 3H).
【００９２】
実施例4．  7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-スクシナートの合成
上記の脂溶性抗がん剤化合物の合成は、以下の工程を含む。
【００９３】
1）(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステルの合成
【化３６】
0005782569.tif 000037
工程：
電磁攪拌しながら、100mLの反応フラスコに、ヘキサデカノール970mg（4mmol）、4-ジメチルアミノピリジン1466mg（12mmol)、2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージド1533mg（6mmol）およびジオキサン20mLを加えた。（±）-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸1001mg（4mmol）のジオキサン（20mL）溶液を反応液にゆっくり滴下した。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で12時間反応させた。ロータリーエバポレーターで溶媒（ジオキサン）を除去し、ジエチルエーテル50mLを加えて、2時間攪拌し、沈殿物を濾去した。濾液を10mLに濃縮し、カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサン：酢酸エチル=10:1）により、(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル1242mg（収率：65.4％）を単離した。
MS(Positive ESI): m/z=475.3(M+H)+, 497.3(M+Na)+,971.5(2M+Na)+.
1H NMR(400 MHz,CDCl3) δ ppm: 4.167 (s, 1H), 4.077-3.974 (m, 2H), 2.647-2.383 (m, 3H), 2.160 (s, 3H), 2.135 (s, 3H), 2.037 (s, 3H), 1.878-1.801 (m, 1H), 1.577 (s, 3H), 1.535-1.471 (m, 2H), 1.282-1.174 (m, 26H), 0.879-0.844 (t, J=7.0 Hz, 3H).
【００９４】
2）(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-モノスクシナートの合成
【化３７】
0005782569.tif 000038
工程：
100mLの反応フラスコに、(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル949mg（2mmol）、無水コハク酸300mg（3mmol）、2-エチルヘキサン酸スズ（II）100μg、無水キシレン50mLを加え、窒素ガスの保護下で8時間加熱還流した。固形物を濾去し、ロータリーエバポレーターで溶媒（キシレン）を除去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンとアセトンの混合液）に供し、(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-モノスクシナート1002mg（収率：87.2％）を単離した。
MS(Positive ESI): m/z=597.3(M+Na)+.
lH NMR(400 MHz,CDCl3): δ ppm: 4.066-3.999 (m, 2H), 2.916-2.884 (t, J=6.4 Hz, 2H), 2.811-2.778 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.625-2.363 (m, 3H), 2.136 (s, 3H), 1.994 (s, 3H), 1.903 (s, 3H): 1.866-1.790 (m, 1H), 1.579 (s, 3H), 1.512-1.496 (m, 2H), 1.298-1.193 (m, 26H), 0.876-0.842(t, J=6.8 Hz, 3H).
【００９５】
3）7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-スクシナートの合成
【化３８】
0005782569.tif 000039
工程：
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコに、(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-モノスクシナート862mg（1.5mmol）、塩化チオニル357mg（3mmol）、N,N-ジメチルホルムアミド10μL、無水トルエン30mLを加えた。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で4時間反応させた。トルエンおよび過剰な塩化チオニルを減圧蒸留により除去し、得られた粘稠液に無水クロロホルム10mLを加えて、溶液Aを得た。
攪拌しながら、50mLの反応フラスコに、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン392mg（1mmol）、無水トリエチルアミン121mg（1.2mmol）および無水N,N-ジメチルホルムアミド20mLを加え、溶液A 6mLをゆっくり加えた。攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で4時間反応させ、薄層クロマトグラフィーにより反応を追跡した。未反応の7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンが少量検出された場合、反応が完了するまで適量の溶液Aとトリエチルアミンを追加した。反応液を酢酸エチル100mLに加え、混合液を水（50mL×3）で洗浄し、有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。硫酸マグネシウムを濾去し、濾液を10mLに濃縮し、カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンとアセトンの混合液）により、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-スクシナート475mg（収率：50.0％）を単離した。
合成により得られた脂溶性抗がん剤化合物の質量スペクトルおよび水素核磁気共鳴スペクトルを図11および図12に示す。
【化３９】
0005782569.tif 000040
MS(Positive ESI): m/z=949.4(M+H)+,1898.8 (2M+H)+.
1H NMR(400 MHz,CDCl3): δ ppm: 8.238-8.215 (d, J=4.6 Hz, 1H), 7.798 (s, 1H), 7.645 (s, 1H), 7.645-7.529 (m, 1H), 5.758-5.718 (d, J=8 Hz, 1H), 5.313-5.272(d, J=8 Hz, 1H), 5.243 (s, 2H), 4.075-4.017 (m, 2H), 3.709 (s, 1H), 3.144-3.082(m, 6H), 2.597-2.382(m, 3H), 2.145 (s, 3H), 2.020 (s, 3H), 1.928 (s, 3H), 1.902-1.801 (m, 1H), 1.598-1.507 (m, 5H), 1.374-1.336 (t, J=7.6 Hz), 1.289-1.187 (m, 26H), 1.024-1.005 (t,J=7.4 Hz), 0.869-0.835 (t, J=6.8 Hz, 3H).
【００９６】
実施例5．  7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンN-ヘキサデシルアミノR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボキサミド-6-スクシナートの合成
上記の脂溶性抗がん剤化合物の合成は、次の工程を含む。
【００９７】
1）N-ヘキサデシルアミノR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボキサミドの合成
【化４０】
0005782569.tif 000041
工程：
50mLの反応フラスコに、N,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）825mg（4mmol）、ヘキサデシルアミン724mg（3mmol）、R-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸751mg（3mmol）およびN,N-ジメチルホルムアミド20mLを加えた。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で12時間反応させた。固形物を濾去し、ロータリーエバポレーターで濾液からN,N-ジメチルホルムアミドを除去し、酢酸エチル10mLを加えて攪拌した。カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンとアセトンの混合液）により、N-ヘキサデシルアミノR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボキサミド1074mg（収率：75.6％）を単離した。
【００９８】
2）N-ヘキサデシルアミノR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボキサミド-6-モノスクシナートの合成
【化４１】
0005782569.tif 000042
工程：
50mLの反応フラスコに、N-ヘキサデシルアミノR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボキサミド947mg（2mmol）、無水コハク酸300mg（3mmol）、2-エチルヘキサン酸スズ（II）100mgおよび無水キシレン50mLを加え、窒素ガスの保護下で8時間加熱還流し、固形物を濾去した。カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンとアセトンの混合液）により、N-ヘキサデシルアミノR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボキサミド-6-モノスクシナート943mg（収率：82.2％）を単離した。
【００９９】
3）7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンN-ヘキサデシルアミノR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボキサミド-6-スクシナートの合成
【化４２】
0005782569.tif 000043
工程：
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコに、N-ヘキサデシルアミノR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボキサミド-6-モノスクシナート574mg（1mmol）、塩化チオニル238mg（2mmol）、N,N-ジメチルホルムアミド10μLおよび無水トルエン20mLを加えた。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で4時間反応させた。トルエンおよび過剰な塩化チオニルを減圧蒸留によって除去し、得られた粘稠液に無水クロロホルム10mLを加えて、溶液Aを得た。
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコに7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン196mg（0.5mmol）、無水トリエチルアミン61mg（0.6mmol）および無水N,N-ジメチルアセトアミド20mLを加え、溶液A 6mLをゆっくり加えた。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で4時間反応させ、薄層クロマトグラフィーにより反応を追跡した。未反応の7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンが少量検出された場合、反応が完了するまで適量の溶液Aとトリエチルアミンを追加した。反応液を酢酸エチル100mLに添加し、固形物を濾去した。濾液を10mLに濃縮し、カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンとアセトンの混合液）により、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンN-ヘキサデシルアミノR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボキサミド-6-スクシナート645 mg（収率：68.0％）を単離した。
【０１００】
実施例6．  カンプトテシンN-ヘキサデシルアミノR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボキサミド-6-スクシナートの合成
【化４３】
0005782569.tif 000044
工程：
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコに、カンプトテシン174mg（0.5mmol）、N-ヘキサデシルアミノR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボキサミド-6-モノスクシナート287mg（0.5mmol）、4-ジメチルアミノピリジン147mg（1.2mmol）、2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージド153mg（0.6mmol）および無水N,N-ジメチルアセトアミド20mLを加えた。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で4時間反応させた。反応液を酢酸エチル100mLに添加し、固形物を濾去した。濾液を10mLに濃縮し、カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンとアセトンの混合液）により、カンプトテシンN-ヘキサデシルアミノR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボキサミド-6-スクシナート316 mg（収率：70.0％）を単離した。
【０１０１】
実施例7．  7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-オキシアセテートの合成
【０１０２】
1）(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-オキシ酢酸エチルエステルの合成
【化４４】
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工程：
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコに、(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル948mg（2mmol）、ブロモ酢酸エチル501mg（3mmol）、炭酸セシウム652mg（2mmol）および無水N,N-ジメチルホルムアミド20mLを加えた。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で12時間反応させた。N,N-ジメチルホルムアミドを減圧蒸留によって除去し、得られた残渣に酢酸エチル100mLを加えて攪拌した。固形物を濾去し、濾液を10mLに濃縮し、カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンとアセトンの混合液）により、(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-オキシ酢酸エチルエステル864mg（収率：77.0％）を単離した。
【０１０３】
2）(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-オキシ酢酸の合成
【化４５】
0005782569.tif 000046
工程：
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコに、(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-オキシ酢酸エチルエステル1122mg（2mmol）およびメタノール20mLを加え、水酸化リチウム48mg（2mmol）および水5mLを加えた。(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-オキシ酢酸エチルエステルが完全に反応するまで、電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で1時間反応させた。メタノールを減圧蒸留によって除去した。pH3〜4になるように0.1N HClを滴下し、凍結乾燥した。酢酸エチル10mLを加えて攪拌した。固形物を濾去し、濾液をカラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンとアセトンの混合液）に供し、(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-オキシ酢酸938mg（収率：88％）を単離した。
【０１０４】
3）7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-オキシアセテートの合成
【化４６】
0005782569.tif 000047
工程：
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコに、(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-オキシ酢酸533mg（1mmol）、塩化チオニル238mg（2mmol）、N,N-ジメチルホルムアミド10μLおよび無水トルエン20mLを加えた。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で4時間反応させた。トルエンおよび過剰な塩化チオニルを減圧蒸留によって除去し、得られた粘稠液に無水クロロホルム10mLを加えて、溶液Aを得た。
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコに、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン196mg（0.5mmol）、無水トリエチルアミン61mg（0.6mmol）および無水N,N-ジメチルアセトアミド20mLを加え、溶液A 6mLをゆっくり加えた。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で4時間反応させ、薄層クロマトグラフィーにより反応を追跡した。未反応の7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンが少量検出された場合、反応が完了するまで適量の溶液Aとトリエチルアミンを追加した。反応液を酢酸エチル100mLに添加し、固形物を濾去した。濾液を10mLに濃縮し、カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンおよびアセトンの混合液）により、7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシン(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-オキシアセテート259mg（収率：57.0％）を単離した。
【０１０５】
実施例8．  カンプトテシン(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-オキシアセテートの合成
【化４７】
0005782569.tif 000048
工程：
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコに、カンプトテシン348mg（1mmol）、4-ジメチルアミノピリジン244mg（2mmol）、2-クロロ-1-メチルピリジニウムヨージド255mg（1mmol）、(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-オキシ酢酸533mg（1mmol）および無水N,N-ジメチルアセトアミド20mLを加えた。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で4時間反応させた。固形物を濾去し、ロータリーエバポレーターで濾液を10mLに濃縮し、カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンとアセトンの混合液）により、(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-オキシアセテート630mg（収率：73.0％）を単離した。
【０１０６】
実施例9．  カンプトテシン(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-メチルホスホニルエステルの合成
【化４８】
0005782569.tif 000049
工程：
電磁攪拌しながら、100mLの反応フラスコに、メチルホスホニルジクロリド293mg（2.2mmol）および無水ジエチルエーテル20mLを加え、(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル949mg（2mmol）とトリエチルアミン202mg（2mmol）の混合物を加え、無水ジエチルエーテル20mLをゆっくり滴下した。電磁攪拌しながら窒素の保護下において室温で8時間反応させた。ジエチルエーテルを減圧蒸留によって除去し、得られた残渣を真空下で乾燥させて、(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-メチルホスホニルクロリドエステル1096mg（収率：96.0％）を得た。
電磁攪拌しながら、50mLの反応フラスコに、カンプトテシン348mg（1mmol）、トリエチルアミン111mg（1.1mmol）、(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-メチルホスホニルクロリドエステル628mg（1.1mmol）および無水N,N-ジメチルアセトアミド20mLを加えた。電磁攪拌しながら窒素ガスの保護下において室温で4時間反応させた。固形物を濾去し、ロータリーエバポレーターで濾液を10mLに濃縮し、カラムクロマトグラフィー（固定相：230〜400メッシュのシリカゲル、溶離液：ヘキサンとアセトンの混合液）により、カンプトテシン(±)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-メチルホスホニルエステル732mg（収率：83.0％）を単離した。
【０１０７】
実施例10．  脂溶性抗がん剤化合物の製剤（エマルジョン製剤およびミセル製剤）
本実施例は、脂溶性抗がん剤化合物のエマルジョン製剤およびミセル製剤を含む。これらのエマルジョン製剤およびミセル製剤は、本発明の脂溶性抗がん剤化合物を含んでいてもよい。各製剤における各成分の含有量は重量％で計算される。各製剤における本発明の脂溶性抗がん剤化合物は、本発明の他の脂溶性抗がん剤化合物で置き換えてもよい。
【０１０８】
A：7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-スクシナートのエマルジョン
7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-スクシナート（MXL-003）を、大豆油、d-α-トコフェロールポリエチレングリコール1000コハク酸エステル（TPGS）およびポリエチレングリコールPEG（200）の混合物に溶解した。脱イオン水（DI水）を添加した後、混合物を攪拌し、超音波で乳化させた。得られたエマルジョンの組成を以下に示す。
0005782569.tif 000050
調製したエマルジョン製剤を0.2μmの孔径を有するフィルターで濾過し、滅菌ガラスバイアルに充填した。
【０１０９】
B：7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ドデシルエステル-6-スクシナートのエマルジョン
7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ドデシルエステル-6-スクシナート（MXL-002）を、d-α-トコフェロールアセテート、d-α-トコフェロールポリエチレングリコール1000コハク酸エステル（TPGS）およびポリエチレングリコールPEG（200）の混合物に溶解した。生理食塩水を加えた後、混合物を攪拌し、超音波で乳化させた。得られたエマルジョンの組成を以下に示す。
0005782569.tif 000051
調製したエマルジョン製剤を0.2μmの孔径を有するフィルターで濾過し、滅菌ガラスバイアルに充填した。
【０１１０】
C：7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-スクシナートのミセル溶液
7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-スクシナート（MXL-003）を、Tween 80、エタノールおよびポリエチレングリコールPEG（200）の混合物に溶解し、透明な液体を得た。脱イオン水（DI水）を加えた後、混合物を攪拌した。得られたミセル溶液の組成を以下に示す。
0005782569.tif 000052
調製したミセル製剤を0.2μmの孔径を有するフィルターで濾過し、滅菌ガラスバイアルに充填した。
【０１１１】
D：7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ドデシルエステル-6-スクシナートのミセル溶液
7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ドデシルエステル-6-スクシナート（MXL-002）を、d-α-トコフェロールポリエチレングリコール1000コハク酸エステル（TPGS）、エタノールおよびポリエチレングリコールPEG（200）の混合物に溶解し、透明な液体を得た。生理食塩水を加えた後、混合物を攪拌した。得られたミセル溶液の組成を以下に示す。
0005782569.tif 000053
調製したミセル製剤を0.2μmの孔径を有するフィルターで濾過し、滅菌ガラスバイアルに充填した。
【０１１２】
実施例11．  脂溶性抗がん剤化合物のインビトロ細胞毒性試験
本実施例では、ヒト卵巣癌細胞（A2780s）、結腸癌細胞（HT-29）、肝癌HePG2細胞および肺癌細胞（A549）に対する、本発明の新規抗がん剤化合物のGI50値（がん細胞の増殖を50％抑制する薬物濃度）をMTTアッセイにより測定し、抗がん剤であるイリノテカンと比較することにより、本発明の抗がん剤化合物のインビトロにおける細胞毒性を評価した。
【０１１３】
GI50値を表1に示す。本発明の他の抗がん剤化合物も類似の結果を示し、いずれの化合物でもGI50値が有意に低下した。試験結果より、本発明の抗がん剤化合物が、ヒト卵巣癌細胞（A2780s）、結腸癌細胞（HT-29）、肝癌HePG2細胞および肺癌細胞（A549）の増殖を有意に抑制することが示された。加えて、これらの細胞に対する本発明の抗がん剤化合物の増殖抑制作用は、抗がん剤化合物の濃度の上昇に伴って増強すると考えられ、濃度依存性であることが示された。同じ濃度の陽性対照薬のイリノテカンと比較すると、本発明の抗がん剤化合物は、ヒト卵巣癌細胞、結腸癌細胞、肝癌細胞および肺癌細胞に対してより顕著な抑制作用を有する。本発明の抗がん剤化合物は、ヒト卵巣癌細胞（A2780s）、結腸癌細胞（HT-29）、肝癌HePG2細胞および肺癌細胞（A549）の増殖に対して抑制作用を有することから、ヒト卵巣癌、結腸癌、肝癌および肺癌に対する医薬化合物の有力候補である。
【０１１４】
MTTアッセイ
対数増殖期の細胞を、細胞密度が105個/mLとなるように、96ウェル培養プレートに１ウェルあたり100μL播種した。細胞を18時間インキュベートした後、培地を交換した。異なる濃度の試験化合物サンプルを１ウェルあたり150μL添加した。ブランク群には、細胞を添加せずに、10％ウシ胎児血清を含むRPMI 1640培養液のみをウェルに添加した（ゼロ設定）。陰性対照群には10％ウシ胎児血清を含むRPMI 1640培養液を同量加え、陽性対照群には13μg/mLの陽性薬物を同量加えた。各群につきそれぞれ3ウェルを使用した。細胞を72時間インキュベートした後、MTT（5mg／mL）溶液を１ウェルあたり15μL添加し、細胞を更に4時間インキュベートした。上清を捨て、DMSOを１ウェルあたり150μL加えた。10分間振盪して混合した。結晶が完全に溶解した後、波長490nmにおける各ウェルの吸光度（D）をマイクロプレートリーダーで検出した。細胞の増殖抑制率は下記式により計算した。
細胞増殖抑制率＝（１−試験群の平均D値／対照群の平均D値）×100％
【０１１５】
【表１】
0005782569.tif 000054
ΝΡ：検出できず
MXL-001：7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸n-ヘキシルエステル-6-スクシナート
MXL-002：7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ドデシルエステル-6-スクシナート
MXL-003：7-エチル-10-ヒドロキシカンプトテシンR-(+)-6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸ヘキサデシルエステル-6-スクシナート
【図１】
0005782569.tif 000062
【図２】
0005782569.tif 000063
【図３】
0005782569.tif 000064
【図４】
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【図５】
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【図６】
0005782569.tif 000067
【図７】
0005782569.tif 000068
【図８】
0005782569.tif 000069
【図９】
0005782569.tif 000070
【図１０】
0005782569.tif 000071
【図１１】
0005782569.tif 000072
【図１２】
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