(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
塩基のまたは酸付加塩の形態での、式（Ｉ）に相当する化合物：
【化１】
0005680640.tif 000025
（式中、Ｘは、塩素またはフッ素を表す。）。
【請求項２】
Ｘが塩素を表すことを特徴とする、塩基のまたは酸付加塩の形態での、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
下記の化合物：
【化２】
0005680640.tif 000026
と化合物：
【化３】
0005680640.tif 000027
とを、不活性媒体中、ジイソプロピルエチルアミンの存在下で反応させること、次に第二の段階で、該アミンをパラ−トルエンスルホン酸によって脱保護することを特徴とする、請求項１および２のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物を調製するための方法。
【請求項４】
不活性媒体が、極性非プロトン性媒体であることを特徴とする、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
不活性媒体が、テトラヒドロフランであることを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
式：
【化４】
0005680640.tif 000028
（式中、Ｘは、塩素またはフッ素を表す。）
の化合物。
【請求項７】
式：
【化５】
0005680640.tif 000029
（式中、Ｘは、塩素またはフッ素を表す。）
の化合物。
【請求項８】
請求項１および２のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはこの化合物の医薬的に許容される酸との付加塩を含むことを特徴とする薬物。
【請求項９】
請求項１および２のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはこの化合物の医薬的に許容される塩を含み、および少なくとも１つの医薬的に許容される賦形剤も含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項１０】
癌の治療における薬物として利用するための、請求項１および２のいずれか一項に記載の式（Ｉ）に相当する化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピラゾール誘導体に、これらの調製におよびこれらの治療用途に関する。
【０００２】
より詳細には、および第一の態様によると、本発明は、タンパク質、特にキナーゼの活性の変調による抗癌活性を有する、新規特異的置換ピラゾールに関する。
【背景技術】
【０００３】
プロテインキナーゼは、タンパク質の特定の残基、例えばチロシン、セリンまたはトレオニン残基のヒドロキシル基のリン酸化を触媒する酵素のファミリーである。このようなリン酸化は、主としてタンパク質の機能を修飾する。従って、プロテインキナーゼは、とりわけ代謝、細胞増殖、細胞分化、細胞移動または細胞生存を含む、多種多様な細胞過程の調節に重要な役割を果たす。プロテインキナーゼの活性が関与する様々な細胞機能の中で、一定の過程は、癌疾患およびまた他の疾患の治療の魅力的な標的の代表である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従って、本発明の目的の１つは、特にキナーゼに対して作用することにより、抗癌活性を有する組成物を提案することである。活性の変調が望まれるキナーゼの中では、ＫＤＲ、Ｔｉｅ２、ＶＥＧＦＲ−１（ＦＬＴ１）、ＶＥＧＦＲ−３（ＦＬＴ４）、ＰＤＧＦＲおよびＦＧＦＲの名を挙げることができる。キナーゼＫＤＲおよび／またはＴｉｅ２が好ましい。
【０００５】
下の一般式（Ｉ）に相当する化合物は、番号ＷＯ０８／０６５２８２で発行された特許出願から公知である：
【０００６】
【化１】
0005680640.tif 000002
（式中、
１）ＡおよびＡｒは、アリール、ヘテロアリール、置換アリール、置換ヘテロアリールにより構成される群から独立して選択される；
２）Ｌは、ＮＨ−ＣＨ−ＮＨおよびＯ−ＣＯ−ＮＨにより構成される群から選択される；
３）Ｒ１は、Ｈ、Ｒ６、ＣＯＲ６、ＳＯ２Ｒ６により構成される群から選択され、この場合のＲ６は、Ｈ、ＯＲ７、ＮＲ８Ｒ９、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールから選択され、この場合のＲ７は、Ｈ、フェニルおよびアルキルから選択され、ならびにＲ８およびＲ９は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールにより構成される群から独立して選択されるか、またはＲ８およびＲ９は、互いに連結して、飽和５から８員環（Ｏ、ＳおよびＮから選択される０から３個のヘテロ原子を含有する。）を形成する；
４）Ｘは、ＯおよびＮＨにより構成される群から選択される；
５）Ｒ３は、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキルにより構成される群から選択される；
６）Ｒ４ａは、Ｈおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルにより構成される群から選択される；
７）Ｒ４ｂは、Ｈおよび（Ｃ１−Ｃ４）アルキルにより構成される群から選択される；
８）Ｒ５は、Ｈ、ハロゲン、Ｒ１０、ＣＮ、Ｏ（Ｒ１０）、ＯＣ（Ｏ）（Ｒ１０）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、ＯＳ（Ｏ２）（Ｒ１０）、Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、Ｎ＝Ｃ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）（Ｒ１１）、Ｎ（Ｒ１０）Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｒ１１）、Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、Ｎ（Ｒ１０）Ｓ（Ｏ２）（Ｒ１１）、Ｃ（Ｏ）（Ｒ１０）、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｒ１０）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、Ｃ（＝Ｎ（Ｒ１１））（Ｒ１０）、Ｃ（＝Ｎ（ＯＲ１１））（Ｒ１０）、Ｓ（Ｒ１０）、Ｓ（Ｏ）（Ｒ１０）、Ｓ（Ｏ２）（Ｒ１０）、Ｓ（Ｏ２）Ｏ（Ｒ１０）、Ｓ（Ｏ２）Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）により構成される群から選択され；この場合のそれぞれのＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２は、Ｈ、アルキル、アルキレン、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、置換アルキル、置換アルキレン、置換アルキニル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクリルにより構成される群から、独立して選択される。）。
【０００７】
この出願において、好ましくは、Ｘは、Ｏであり、Ｒ３は、メチルであり、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、Ｈであり、Ｌは、ＮＨＣＯＮＨであり、Ａは、フェニルであり；Ａｒは、フェニルであるが、この出願には、Ａｒの置換および薬物動態に対するこの影響を記載する例がない。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の１つの目的は、式（Ｉ）：
【０００９】
【化２】
0005680640.tif 000003
（式中、
Ｘは、ＣｌまたはＦを表す。）
に相当する前記先行出願に含まれている２つの化合物である。
【００１０】
式（Ｉ）の化合物は、塩基のまたは酸付加塩の形態で存在することがある。このような付加塩は、本発明の一部である。
【００１１】
前記化合物の、下に示すこれらの２つの互変異性形態でのものは、本発明に属する：
【００１２】
【化３】
0005680640.tif 000004
これらの塩は、医薬的に許容される酸を用いて調製することができるが、例えば式（Ｉ）の化合物の精製または単離に有用である、他の酸の塩も本発明の一部である。使用することができる塩の中で、とりわけ塩酸塩の名を挙げることができる。
【００１３】
式（Ｉ）の化合物は、水和物または溶媒和物形態で、即ち、１つ以上の水分子とのまたは溶媒との会合体または組み合わせの形態で、存在することもある。このような水和物および溶媒和物も本発明の一部である。
【００１４】
本発明の主題である式（Ｉ）の化合物の中で、とりわけ下記の化合物の名を挙げることができる：
−４−｛３−［３−（２−クロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミドおよびこの塩酸塩；
−４−｛３−［３−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミドおよびこの塩酸塩。
【００１５】
本発明に従って、下記の方法によって一般式（Ｉ）の化合物を調製することが可能である。
【００１６】
下記のスキームにおいて、最初の化合物および反応物は、これらの調製方法を記載しない場合、市販されているか、文献に記載されており、でなければ該文献に記載されている方法または当業者に公知の方法に従って調製することができる。
【００１７】
本発明の態様のもう１つのものによると、本発明のもう１つの主題は、式：
【００１８】
【化４】
0005680640.tif 000005
および
【００１９】
【化５】
0005680640.tif 000006
（式中、Ｘは、ＦまたはＣｌ素を表す。）
の化合物である。
【００２０】
これらの化合物は、式（Ｉ）の化合物の合成中間体として役立つ。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下の実施例は、本発明による化合物の調製を説明するものである。これらの実施例は、限定的なものではなく、単に本発明の例証に役立つものである。
【００２２】
実施例の合成方法
アミノ−ピラゾール部の合成
【００２３】
【化６】
0005680640.tif 000007
ジアリール−ウレア部の合成
【００２４】
【化７】
0005680640.tif 000008
【実施例１】
【００２５】
４−｛３−［３−（２−クロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド塩酸塩
【００２６】
【化８】
0005680640.tif 000009
５０ｍＬのエタノール中の１．６４ｇ（３．４８ｍｍｏｌ）の４−｛３−［３−（２−クロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミドの懸濁液を周囲温度で、アルゴン雰囲気下で攪拌する。その後、ジエチルエーテル中の塩酸の溶液（１Ｎ）３５ｍＬ（３５ｍｍｏｌ）を滴加する。反応媒体は、透明溶液になる。１０時間、周囲温度で攪拌した後、ロータリーエバポレーターを使用して減圧下で溶媒を蒸発させる。得られた残留物を５０ｍＬのジエチルエーテル中で３０分間攪拌する。
【００２７】
濾過およびオーブン内での乾燥の後、１．８ｇの４−｛３−［３−（２−クロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド塩酸塩を淡黄色結晶の形態で得る。
【００２８】
ＭＳ：保持時間Ｔｒ（分）＝１．０１；［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ＝４７１；［Ｍ−Ｈ］−ｍ／ｚ＝４６９
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ）δ  ｐｐｍ  ４．３２（ｓ，２Ｈ）６．８９（ｂｒｏａｄ  ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ）７．１６（ｂｒｏａｄ  ｓ，１Ｈ）７．１８−７．６１（ｍ，４Ｈ）７．６８（ｂｒｏａｄ  ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）７．８６（ｂｒｏａｄ  ｓ，１Ｈ）８．４４（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）８．８１（ｂｒｏａｄ  ｍ，１Ｈ）１０．１７（ｂｒｏａｄ  ｍ，１Ｈ）
融点（Ｋｏｆｌｅｒ）＝１７７℃
４−｛３−［３−（２−クロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド
【００２９】
【化９】
0005680640.tif 000010
【００３０】
４００ｍＬのトルエン中の５．９ｇ（９．５ｍｍｏｌ）の４−｛３−［３−（２−クロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−（２，４−ジメトキシベンジルアミド）および４．５ｇ（２４ｍｍｏｌ）のパラ−トルエンスルホン酸の溶液を２時間還流させながら加熱する。沈降分離後、トルエン溶液を黄色ゴムから分離する。このゴムを１５０ｍＬのメタノールおよび５００ｍＬの酢酸エチルで希釈する。５００ｍＬの水を添加する。次に、この溶液を冷却し、その後、水酸化カリウムの水溶液（１０Ｎ）１００ｍＬで塩基性化する。沈降分離後、水性相を、４００ｍＬのエタノールおよび１００ｍＬのメタノールの溶液で抽出する。有機相を併せ、１００ｍＬの塩化ナトリウム飽和溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水させ、減圧下で濃縮して、淡黄色固体を得、この固体を、２００ｇのシリカを用いてジクロロメタン／メタノール／アセトニトリルの（容積で）８０／１０／１０の溶液で溶離することによって精製する：１．７７ｇの４−｛３−［３−（２−クロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミドを白色固体の形態で得る。
【００３１】
ＭＳ：保持時間Ｔｒ（分）＝４．２９；［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ＝４７１；［Ｍ−Ｈ］−ｍ／ｚ＝４６９
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ）δ  ｐｐｍ  ４．１９（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ）５．７４（ｂｒｏａｄ  ｍ，１Ｈ）６．８０（ｂｒｏａｄ  ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ）６．９５−７．１１（ｍ，３Ｈ）７．２４（ｂｒｏａｄ  ｕｎｒｅｓｏｌｖｅｄ  ｍ，１Ｈ）７．４２（ｄｔ，Ｊ＝１１．３，２．３Ｈｚ，１Ｈ）７．６７（ｂｒｏａｄ  ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）７．８６（ｂｒｏａｄ  ｓ，１Ｈ）８．４４（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）８．７０（ｂｒｏａｄ  ｓ  １Ｈ）９．９２（ｂｒｏａｄ  ｓ，１Ｈ）１２．５７（ｂｒｏａｄ  ｓ，１Ｈ）
融点（Ｋｏｆｌｅｒ）＝２２０℃
４−｛３−［３−（２−クロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−（２，４−ジメトキシベンジルアミド）
【００３２】
【化１０】
0005680640.tif 000011
【００３３】
３００ｍＬのテトラヒドロフラン中の１０ｇ（３２ｍｍｏｌ）の４−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−３−（２，４−ジメトキシベンジルアミド）塩酸塩および５．９ｍＬ（３５．２ｍｍｏｌ）のジイソプロピルエチルアミンの溶液を周囲温度で、アルゴン雰囲気下で攪拌する。３．８５ｇ（３５ｍｍｏｌ）の硫酸マグネシウムおよび１２．７０ｇ（３５．２ｍｍｏｌ）の１−（２−クロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−３−（３−フルオロ−５−ホルミルフェニル）ウレアを添加する。その後、この反応混合物を１４時間、還流させながら加熱する。その後、この混合物を２５℃に冷却し、その後、１０．０８ｇ（１６０ｍｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムをゆっくりと添加する。１２時間、周囲温度で攪拌した後、ロータリーエバポレーターを使用して混合物を濃縮乾固させる。得られたゴムを３００ｍＬの水および５００ｍＬの水酸化ナトリウム水溶液（１Ｎ）と共に攪拌する。この懸濁液を３０分間、１Ｌのジクロロメタンと共に攪拌する。Ｎｏ．３焼結ガラスによる濾過の後、得られた固体を２×５００ｍＬの水ですすぎ、その後、オーブンの中で真空下、４０℃で脱水させる。その後、固体を８００ｍＬのメタノール中、高温で再結晶させて、８．３ｇの４−｛３−［３−（２−クロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−（２，４−ジメトキシベンジルアミド）を白色粉末の形態で得る。
【００３４】
ＭＳ：保持時間Ｔｒ（分）＝４．９７；［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ＝６２１；［Ｍ−Ｈ］−ｍ／ｚ＝６１９
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ）δ  ｐｐｍ  ３．７３（ｓ，３Ｈ）３．８１（ｓ，３Ｈ）４．１９（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ）４．３３（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ）５．７１（ｂｒｏａｄ  ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ）６．４６（ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．３Ｈｚ，１Ｈ）６．５５（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ）６．８０（ｂｒｏａｄ  ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ）７．０４（ｂｒｏａｄ  ｓ，１Ｈ）７．０８（ｓ，１Ｈ）７．１０（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）７．４３（ｄｔ，Ｊ＝１１．４，２．３Ｈｚ，１Ｈ）７．６７（ｂｒｏａｄ  ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）７．８６（ｂｒｏａｄ  ｓ，１Ｈ）７．９４（ｂｒｏａｄ  ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ）８．４５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）８．６２（ｂｒｏａｄ  ｕｎｒｅｓｏｌｖｅｄ  ｍ，１Ｈ）９．７９（ｂｒｏａｄ  ｕｎｒｅｓｏｌｖｅｄ  ｍ，１Ｈ）１２．６０（ｂｒｏａｄ  ｕｎｒｅｓｏｌｖｅｄ  ｍ，１Ｈ）
融点（Ｋｏｆｌｅｒ）＝１６８℃
１−（２−クロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−３−（３−フルオロ−５−ホルミルフェニル）ウレア
【００３５】
【化１１】
0005680640.tif 000012
【００３６】
６００ｍＬのテトラヒドロフラン中の３３．１５ｇ（９２．６８ｍｍｏｌ）の１−（２−クロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−３−（３−シアノ−５−フルオロフェニル）ウレアの溶液を−１０℃で、アルゴン雰囲気下で攪拌する。次に、トルエン中２０％の濃度のジイソブチルアルミニウムヒドリドの溶液２３０ｍＬを規則正しい「滴下」動作で添加する。この反応混合物を周囲温度で１２時間攪拌する。次に、追加の８０ｍＬのジイソブチルアルミニウムヒドリドを−１０℃で添加する。１４時間、周囲温度で攪拌した後、ロータリーエバポレーターを使用して反応媒体を濃縮乾固させて濃稠油を得、攪拌しながらこの油に５００ｇの氷および１００ｍＬの１００％酢酸をゆっくりと添加する。得られた懸濁液を濾過する。その後、固体を２×８００ｍＬの酢酸エチルで希釈し、この有機溶液を６００ｍＬの塩化ナトリウム飽和溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水させ、濾過し、ロータリーエバポレーターを使用して濃縮乾固させ、オーブンの中で真空下、４０℃で脱水させて、２９．５７ｇの１−（２−クロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−３−（３−フルオロ−５−ホルミルフェニル）ウレアを淡黄色粉末の形態で得る。
【００３７】
ＭＳ：保持時間Ｔｒ（分）＝４．８６；［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ＝３６１；［Ｍ−Ｈ］−ｍ／ｚ＝３５９
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ）δ  ｐｐｍ  ７．３５（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，２．３，１．８Ｈｚ，１Ｈ）７．６７−７．７５（ｍ，２Ｈ）７．７８（ｔ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）７．８８（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）８．４５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）８．７２（ｂｒｏａｄ  ｓ，１Ｈ）９．９８（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）１０．０７（ｂｒｏａｄ  ｓ，１Ｈ）
１−（２−クロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−３−（３−シアノ−５−フルオロフェニル）ウレア
【００３８】
【化１２】
0005680640.tif 000013
【００３９】
１５０ｍＬのテトラヒドロフラン中の１５ｇ（１１０．２ｍｍｏｌ）の５−フルオロ−３−シアノアニリンの溶液を周囲温度で、アルゴン雰囲気下で攪拌する。次に、１７．５ｇ（１２１．２２ｍｍｏｌ）の２−クロロ−４−トリフルオロメチルフェニルイソシアナートを添加する。この反応媒体を３時間、還流させながら加熱し、その後、ロータリーエバポレーターを使用して濃縮乾固させる。得られた固体残留物を６０ｍＬの酢酸エチル中で高温で再結晶させて、３３．２５ｇの１−（２−クロロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−３−（３−シアノ−５−フルオロフェニル）ウレアを白色固体の形態で得る。
【００４０】
ＭＳ：保持時間Ｔｒ（分）＝４．９７；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ＝３５６
融点（Ｋｏｆｌｅｒ）＝２８６℃
５−フルオロ−３−シアノアニリンは、市販製品である。
【００４１】
４−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−３−（２，４−ジメトキシベンジルアミド）塩酸塩
【００４２】
【化１３】
0005680640.tif 000014
【００４３】
３４０ｍＬのエタノール中の６．１２ｇ（２０ｍｍｏｌ）の４−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−３−（２，４−ジメトキシベンジルアミド）の懸濁液を周囲温度で攪拌する。次に、１５．８ｇ（７０ｍｍｏｌ）の塩化すず二水和物を５分間かけて添加する。この反応混合物を１４時間、周囲温度で攪拌し、その後、ロータリーエバポレーターを使用して濃縮乾固させる。得られた残留物を、炭酸水素ナトリウムで飽和した水溶液３３０ｍＬおよびジクロロメタン３００ｍＬと共に攪拌する。沈降分離後、有機相を２×１５０ｍＬのジクロロメタンで抽出する。有機相を併せ、１５０ｍＬの塩化ナトリウム飽和溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水させる。ロータリーエバポレーターを使用して濃縮した後、４．５７ｇの４−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−３−（２，４−ジメトキシベンジルアミド）塩酸塩を紫がかった色の固体の形態で得る。
【００４４】
ＭＳ：ＥＩ：［Ｍ］＋。ｍ／ｚ＝２７６；ベースピーク  ｍ／ｚ＝１５１
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ）δ  ｐｐｍ  ３．７３（ｓ，３Ｈ）３．８１（ｓ，３Ｈ）４．３１（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ）４．５６（ｂｒｏａｄ  ｕｎｒｅｓｏｌｖｅｄ  ｍ，２Ｈ）６．４６（ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．９Ｈｚ，１Ｈ）６．５５（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ）７．０６−７．１３（ｍ，２Ｈ）７．８４（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）１２．５０（ｂｒｏａｄ  ｕｎｒｅｓｏｌｖｅｄ  ｍ，１Ｈ）
融点（Ｂｕｃｈｉ）＝１８６℃
４−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−３−（２，４−ジメトキシベンジルアミド）
【００４５】
【化１４】
0005680640.tif 000015
【００４６】
５０ｍＬのジメチルホルムアミド中の１４．６５（７６．４ｍｍｏｌ）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド二水和物および１０．３２ｇ（７６．４ｍｍｏｌ）の１−ヒドロキシベンゾトリアゾールの溶液を周囲温度で攪拌する。１１．７ｇ（７０．０３ｍｍｏｌ）の２，４−ジメトキシベンジルアミンを添加し、その後、１０．２ｇの４−ニトロ−３−ピラゾールカルボン酸を少しずつ添加する。周囲温度での１６時間の攪拌の後、反応媒体を５００ｍＬの水に注入する。この懸濁液を濾過し、その後、２×２５０ｍＬの水で洗浄する。得られた固体をオーブンの中で真空下、４０℃で脱水させて、１８．５８ｇの４−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−３−（２，４−ジメトキシベンジルアミド）を白色固体の形態で得る。
【００４７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ）δ  ｐｐｍ  ３．７５（ｓ，３Ｈ）３．８０（ｓ，３Ｈ）４．３５（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）６．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．４Ｈｚ，１Ｈ）６．５６（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）７．２１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）８．７１（ｂｒｏａｄ  ｓ，１Ｈ）８．８８（ｂｒｏａｄ  ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ）１４．１３（ｂｒｏａｄ  ｕｎｒｅｓｏｌｖｅｄ  ｍ，１Ｈ）
ＭＳ（ＥＳ＋／−）保持時間Ｔｒ（分）＝３．２３；［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ＝３０７；［Ｍ−Ｈ］−ｍ／ｚ＝３０５
融点（Ｋｏｆｌｅｒ）＝１９２℃
４−ニトロ−３−ピラゾールカルボン酸は、市販製品である。
【実施例２】
【００４８】
４−｛３−［３−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド塩酸塩
【００４９】
【化１５】
0005680640.tif 000016
【００５０】
４０ｍＬのエタノール中の１．８５ｇ（０．４０ｍｍｏｌ）の４−｛３−［３−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミドの懸濁液を周囲温度で、アルゴン雰囲気下で攪拌する。ジエチルエーテル中の塩酸の溶液（１Ｎ）２０ｍＬ（４０ｍｍｏｌ）を滴加する。反応媒体は、透明溶液になる。１２時間、周囲温度で攪拌した後、ロータリーエバポレーターを使用して減圧下で溶媒を蒸発させる。得られた残留物を２００ｍＬのジエチルエーテル中で３０分間攪拌する。
【００５１】
濾過およびオーブンでの乾燥の後、１．７５ｇの４−｛３−［３−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド塩酸塩を淡黄色結晶の形態で得る。
【００５２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ４．２４（ｓ，２Ｈ）６．８３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ）７．０８（ｓ  １Ｈ）７．１８（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．２３（ｓ，１Ｈ）７．３５（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）７．４２（ｄｔ，Ｊ＝１１．３，２．０Ｈｚ，１Ｈ）７．５４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）７．６９（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，１．５Ｈｚ，１Ｈ）８．４１（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）８．９９（ｓ，１Ｈ）９．５４（ｓ，１Ｈ）
ＭＳ：保持時間Ｔｒ（分）＝０．９７；［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ＝４５５
融点（Ｋｏｆｌｅｒ）＝１８４℃（分解を伴う）
４−｛３−［３−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド
【００５３】
【化１６】
0005680640.tif 000017
【００５４】
６００ｍＬのトルエン中の２２．３ｇ（３６．８９ｍｍｏｌ）の４−｛３−［３−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−（２，４−ジメトキシベンジルアミド）および１７．４ｇ（９２．２２ｍｍｏｌ）のパラ−トルエンスルホン酸の溶液を１４時間、還流させながら加熱する。沈降分離後、トルエン溶液を黄色ゴムから分離する。このゴムを２８０ｍＬの水および１００ｍＬの水酸化ナトリウム（１０Ｎ）と共に２時間攪拌する。この懸濁液を濾過する。得られた固体を３×３５０ｍＬの水ですすぎ、その後、乾燥させて、クリーム色の固体を得、この固体を、３５０ｇのシリカを用いてジクロロメタン／メタノール／アセトニトリルの（容積で）９５／２．５／２．５の溶液で溶離することにより精製する：３．８５ｇの４−｛３−［３−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミドを白色固体の形態で得る。
【００５５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ４．１８（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）５．６８−５．７７（ｍ，１Ｈ）６．８０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）７．０１−７．０８（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．０４（ｓ，１Ｈ）７．０６（ｓ，１Ｈ）７．２４（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．４０（ｄｔ，Ｊ＝１１．４，２．０Ｈｚ，１Ｈ）７．５４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）７．６９（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ）８．４１（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）８．９２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）９．４０（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）１２．５５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）
ＭＳ：保持時間Ｔｒ（分）＝４．０９；［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ＝４５５；［Ｍ−Ｈ］−ｍ／ｚ＝４５３
融点（Ｋｏｆｌｅｒ）＝２３３℃
４−｛３−［３−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−（２，４−ジメトキシベンジルアミド）
【００５６】
【化１７】
0005680640.tif 000018
【００５７】
３６０ｍＬのテトラヒドロフラン中の１１．４０ｇ（３６．４５ｍｍｏｌ）の４−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−３−（２，４−ジメトキシベンジルアミド）塩酸塩および６．６５ｍＬ（４０．０９ｍｍｏｌ）のジイソプロピルエチルアミンの溶液を周囲温度で、アルゴン雰囲気下で攪拌する。４．３５ｇ（３６．４５ｍｍｏｌ）の硫酸マグネシウムおよび１３．８０ｇ（３５．２ｍｍｏｌ）の１−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−３−（３−フルオロ−５−ホルミルフェニル）ウレアを添加する。その後、この反応混合物を還流させながら１４時間加熱する。その後、この混合物を２５℃に冷却し、その後、１１．４６ｇ（１８２．２５ｍｍｏｌ）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムをゆっくりと添加する。７２時間、周囲温度で攪拌した後、ロータリーエバポレーターを使用して混合物を濃縮乾固させる。得られたゴムを４００ｍＬの水および５００ｍＬの水酸化ナトリウム溶液（１Ｎ）と共に攪拌する。この懸濁液を１時間攪拌し、その後、Ｎｏ．３焼結ガラスによって濾過し、得られた固体を３×５００ｍＬの水ですすぎ、その後、オーブンの中で真空下、４０℃で脱水させて、２２．４５ｇの４−｛３−［３−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−５−フルオロベンジルアミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−３−（２，４−ジメトキシベンジルアミド）をピンク色がかった固体の形態で得る。
【００５８】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ３．７３（ｓ，３Ｈ）３．８１（ｓ，３Ｈ）４．１８（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ）４．３３（ｓ，２Ｈ）−５．７０（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）６．４７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）６．５５（ｓ，１Ｈ）６．７９（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ）７．０５（ｓ，１Ｈ）７．０７−７．１２（ｍ，２Ｈ）７．４１（ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，１Ｈ）７．５３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）７．６８（ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，１Ｈ）７．９５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）−８．４０（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）９．２５（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）１２．５２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）
ＭＳ：保持時間Ｔｒ（分）＝４．７９；［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ＝６０５；［Ｍ−Ｈ］−ｍ／ｚ＝６０３
融点（Ｋｏｆｌｅｒ）＝１５２℃
１−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−３−（３−フルオロ−５−ホルミルフェニル）ウレア
【００５９】
【化１８】
0005680640.tif 000019
【００６０】
１５０ｍＬのテトラヒドロフラン中の１１．９０ｇ（３８．４７ｍｍｏｌ）の１−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−３−（３−シアノ−５−フルオロフェニル）ウレアの溶液を−２℃で、アルゴン雰囲気下で攪拌する。次に、ヘキサン中２０％の濃度のジイソブチルアルミニウムヒドリドの溶液８６ｍＬを規則正しい「滴下」動作で添加する。この反応混合物を周囲温度で１２時間攪拌する。次に、追加の６０ｍＬのジイソブチルアルミニウムヒドリドを−２℃で添加する。３時間、周囲温度で攪拌した後、ロータリーエバポレーターを使用して反応媒体を濃縮乾固させて濃稠油を得、攪拌しながらこの油に５００ｇの氷および３００ｍＬの１００％酢酸をゆっくりと添加する。得られた懸濁液を濾過する。得られた固体を４×１５０ｍＬの水で洗浄し、遠心分離し、オーブンの中で真空下、４０℃で脱水させて、１３．９５ｇの１−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−３−（３−フルオロ−５−ホルミルフェニル）ウレアを淡黄色固体の形態で得る。
【００６１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ７．３３−７．３８（ｍ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）７．６９−７．７５（ｍ，２Ｈ）−７．７９（ｓ，１Ｈ）８．４１（ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）９．０５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）９．６５（ｓ，１Ｈ）９．９８（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ）
ＭＳ：保持時間Ｔｒ（分）＝４．６２；［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ＝３４５；［Ｍ−Ｈ］−ｍ／ｚ＝３４３
融点（Ｋｏｆｌｅｒ）＝２４７℃
１−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−３−（３−シアノ−５−フルオロフェニル）ウレア
【００６２】
【化１９】
0005680640.tif 000020
【００６３】
９０ｍＬのテトラヒドロフラン中の６．１５ｇ（４５．１８ｍｍｏｌ）の３−シアノアニリンの溶液を周囲温度で、アルゴン雰囲気下で攪拌する。４．３ｍＬ（３６．１４ｍｍｏｌ）のジホスゲンを滴加し、その後、３０ｍＬ（１３５．５４ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを滴加する。この反応混合物を３時間還流させた後、１０ｍＬのテトラヒドロフラン中の７．１０ｇ（３９．６４ｍｍｏｌ）の４−アミノ−３−フルオロトリフルオロメチルベンゼンの溶液をゆっくりと添加する。還流をさらに２時間維持する。その後、媒体を１００ｍＬの水に入れて攪拌し、その後、１００ｍＬの酢酸エチルで抽出する。有機相を１００ｍＬの塩化ナトリウム飽和溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水させ、ロータリーエバポレーターを使用して濃縮乾固させる。得られた固体残留物を高温で９０ｍＬのアセトニトリル中で再結晶させて、１０．３５ｇの１−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−３−（３−シアノ−５−フルオロフェニル）ウレアをクリーム色の固体の形態で得る。
【００６４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ７．４７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）７．６９（ｓ，１Ｈ）７．７０−７．７５（ｍ，２Ｈ）８．３７（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）９．１７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）９．６３（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）
ＭＳ：保持時間Ｔｒ（分）＝１．１；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ３４１。
【００６５】
融点（Ｋｏｆｌｅｒ）＝２５３℃
本発明の生成物は、キナーゼによって触媒される１つ以上の反応の阻害剤として有用である。ＫＤＲおよび／またはＴｉｅ２は、本発明の生成物が阻害剤として特に有用であるキナーゼである。
【００６６】
これらのキナーゼが選ばれる理由を下に与える：
ＫＤＲ
ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）は、ＶＥＧＦ−Ｒ２（血管内皮成長因子受容体２）としても公知であり、主として内皮細胞において発現される。この受容体は、血管新生促進性成長因子ＶＥＧＦを結合し、従って、この細胞内キナーゼドメインの活性化により導入シグナル媒介因子として役立つ。ＶＥＧＦ−Ｒ２のキナーゼ活性の直接阻害は、外因性ＶＥＧＦ（血管内皮成長因子）の存在下で血管新生現象を低減することを可能にする（Ｓｔｒａｗｎら、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ」、１９９６年、第５６巻、ｐ．３５４０−３５４５）。この過程は、とりわけ、ＶＥＧＦ−Ｒ２突然変異体を使用して立証されている（Ｍｉｌｌａｕｅｒら、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ」、１９９６年、第５６巻、ｐ．１６１５−１６２０）。ＶＥＧＦ−Ｒ２受容体は、ＶＥＧＦの血管新生活性と関連したもの以外の機能を成体では有さないようである。動的血管新生過程におけるこの中心的な役割に加えて、最近の成果は、ＶＥＧＦの発現が化学療法および放射線療法後の腫瘍細胞の生存の一因となることを示唆しており、ＫＤＲ阻害剤と他の作用因子の潜在的相乗作用を強調している（Ｌｅｅら、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ」、２０００年、第６０巻、ｐ．５５６５−５５７０）。
【００６７】
Ｔｉｅ２
Ｔｉｅ−２（ＴＥＫ）は、内皮細胞に特異的であるチロシンキナーゼ受容体ファミリーのメンバーである。Ｔｉｅ２は、チロシンキナーゼ活性の第一の受容体であり、この受容体の自己リン酸化および細胞シグナリングを刺激するアゴニスト（アンギオポエチン１またはＡｎｇ１）［Ｓ．Ｄａｖｉｓら（１９９６）「Ｃｅｌｌ」８７、１１６１−１１６９］とアンタゴニスト（アンギオポエチン２またはＡｎｇ２）［Ｐ．Ｃ．Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅら（１９９７）「Ｓｃｉｅｎｃｅ」２２７、６０−６０］の両方が公知である。アンギオポエチン１は、新血管新生の第一段階でＶＥＧＦと相乗効果を有し得る［Ａｓａｈａｒａ  Ｔ．ら、「Ｃｒｉｒｃ．Ｒｅｓ．」（１９９８）  ２３３−２４０］．Ｔｉｅ２のまたはＡｎｇ１の発現のノックアウト実験およびトランスジェニック操作は、血管形成異常を呈する動物をもたらす［Ｄ．Ｊ．Ｄｕｍｏｎｔら（１９９４）「Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．」８、１８９７―１９０９およびＣ．Ｓｕｒｉ（１９９６）「Ｃｅｌｌ」８７、１１７１―１１８０］。Ａｎｇ１のＡｎｇ１の受容体への結合は、新生血管形成に不可欠である共に血管の補充ならびに周皮細胞および平滑筋細胞との相互作用にも不可欠である、Ｔｉｅ２のキナーゼドメインの自己リン酸化につながる；これらの現象は、新たに形成される血管の成熟および安定の一因となる［Ｐ．Ｃ．Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅら（１９９７）「Ｓｃｉｅｎｃｅ」２７７、５５  ６０］。Ｌｉｎら（１９９７）「Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．」１００、８：２０７１−２０７８およびＬｉｎ  Ｐ．（１９９８）「ＰＮＡＳ」９５、８８２９−８８３４は、Ｔｉｅ−２（Ｔｅｋ）の細胞外ドメインの、アデノウイルス感染中のまたは黒色腫モデルおよび乳房腫瘍異種移植片への注射中の、腫瘍成長および血管形成の阻害ならびにまた肺転移の低減を証明した。
【００６８】
下記の理由のため、Ｔｉｅ２阻害剤は、新生血管形成または血管新生が不適切に起こる状況において、即ち、一般には癌において、しかし特に、癌、例えばカポジ肉腫または幼児性血管腫（ｉｎｆａｎｔｉｌｅ  ｈａｅｍｏａｎｇｉｏｍａ）、関節リウマチ、変形性関節症および／またはこの疾患に随伴する疼痛、腸の炎症性疾患、例えば出血性直腸結腸炎またはクローン病、目の病状、例えば加齢性黄斑変性、糖尿病性網膜症、慢性炎症および乾癬において使用することができる。
【００６９】
血管新生は、既存の血管からの新たな毛細血管の発生の過程である。腫瘍血管新生（新たな血管の形成）は、腫瘍成長に不可欠であり、転移性播種の必須因子の１つでもある（「Ｏｎｃｏｇｅｎｅ」、２００３年５月１９日；２２（２０）：３１７２−９；「Ｎａｔ．Ｍｅｄ．」、１９９５年１月；１（１）：２７−３１）。
【００７０】
この新生血管形成は、癌細胞および間質細胞により分泌される血管新生因子の影響下での内皮細胞の移動ならびにその後の増殖および分化に起因する（「Ｒｅｃｅｎｔ  Ｐｒｏｇ．Ｈｏｒｍ．Ｒｅｓ．」２０００；５５：１５−３５；３５−６）。
【００７１】
アンギオポエチン１／Ｔｉｅ２受容体系は、血管を安定させる内皮周囲細胞の補充を可能にすることにより血管の成熟に顕著な役割を果たす（「Ｃｅｌｌ」、１９９６年１２月２７日；８７（７）：１１６１−９、「Ｒｅｃｅｎｔ  Ｐｒｏｇ．Ｈｒｏｍ．Ｒｅｓ．」２００４；５９：５１−７１）。例えば、Ｔｉｅ−２受容体の細胞外ドメイン（ｅｘＴｅｋ）の可溶性組み換え形態の投与は、マウス腫瘍モデルにおける腫瘍血管新生およびまた転移成長を阻害することが証明されている（Ｐｅｎｇｎｉａｎ  Ｌｉｎ、Ｊａｋｅ  Ａ．Ｂｕｘｔｏｎ、Ａｎｎ  Ａｃｈｅｓｏｎ、Ｃｚｅｓｌａｗ  Ｒａｄｚｉｅｊｅｗｓｋｉ、Ｐｅｔｅｒ  Ｃ．Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅ、Ｇｅｏｒｇｅ  Ｄ．Ｙａｎｃｏｐｏｕｌｏｓ、Ｋｅｉｔｈ  Ｍ．Ｃｈａｎｎｏｎ、Ｌａｕｒａ  Ｐ．Ｈａｌｅ、Ｍａｒｋ  Ｗ．Ｄｅｗｈｉｒｓｔ、Ｓａｍｕｅｌ  Ｅ．ＧｅｏｒｇｅおよびＫｅｖｉｎ  Ｇ．Ｐｅｔｅｒｓ、「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」、１９９８年７月２１日；９５（１５）：８８２９−３４；Ｃｅｃｉｌｉａ  Ｍｅｌａｎｉ、Ａｎｔｏｎｅｌｌａ  Ｓｔｏｐｐａｃｃｉａｒｏ、Ｃｈｉａｒａ  Ｆｏｒｏｎｉ、Ｆｅｄｅｒｉｃａ  Ｆｅｌｉｃｅｔｔｉ、Ａｌｅｓｓａｎｄｒａ  ＣａｒeおよびＭａｒｉｏ  Ｐ．Ｃｏｌｏｍｂｏ、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．」、２００４年７月；５３（７）：６００−８）。培養での内皮細胞の場合、Ｔｉｅ−２の刺激は、細胞増殖および移動に関与するｐ４２／ｐ４４経路の；ＰＡＦの合成の（「Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌ．」、２００６年４月１４日；印刷に先駆けたオンライン出版）、ＰＩ３キナーゼ経路、炎症誘発活性に関与する経路を活性化する。Ｔｉｅ２の刺激は、Ａｋｔ経路、細胞生存におけるこの重要性について公知の導入経路を刺激し、アポトーシスを阻害する（Ｌａｕｒａ  Ｍ  Ｄｅｂｕｓｋ、Ｄｅｎｎｉｓ  Ｅ  Ｈａｌａｈａｎ、Ｐｅｎｇｎｉａｎ  Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｌｉｎ、「Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．」、２００４年８月１日；２９８（１）：１６７−７７）。
【００７２】
ｅｘＴｅｋ（Ｔｉｅ２の可溶性受容体）の添加は、Ｍｔｒｉｇｅｌ上での内皮細胞の偽細管（ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｕｌｅｓ）の形成を阻害する（Ｃｅｃｉｌｉａ  Ｍｅｌａｎｉ、Ａｎｔｏｎｅｌｌａ  Ｓｔｏｐｐａｃｃｉａｒｏ、Ｃｈｉａｒａ  Ｆｏｒｏｎｉ、Ｆｅｄｅｒｉｃａ  Ｆｅｌｉｃｅｔｔｉ、Ａｌｅｓｓａｎｄｒａ  Ｃａｒe
およびＭａｒｉｏ  Ｐ．Ｃｏｌｏｍｂｏ、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．」、２００４年７月；５３（７）：６００−８）。これらの研究は、Ｔｉｅ−２／アンギオポエチン系が、成体組織における血管蕾の形成の第一段階の間に必要であること、およびＴｉｅ−２受容体の１つの機能が、血管の形成中の内皮細胞の生存を増加させることであることを示している。さらに、アンギオポエチン−１は、リンパ系内皮細胞の増殖およびまたリンパ管新生（新たなリンパ管の発生）、転移成長の好適なアクセス経路を刺激する（Ｔｏｈｒｕ  Ｍｏｒｉｓａｄａ、Ｙｕｉｃｈｉ  Ｏｉｋｅ、Ｙｏｓｈｉｈｉｒｏ  Ｙａｍａｄａ、Ｔａｋａｓｈｉ  Ｕｒａｎｏ、Ｍａｓａｋｉ  Ａｋａｏ、Ｙｏｓｈｉａｋｉ  Ｋｕｂｏｔａ、Ｈｉｒｏｍｉｔｓｕ  Ｍａｅｋａｗａ、Ｙｏｓｈｉｓｈｉｇｅ  Ｋｉｍｕｒａ、Ｍａｓａｋｏ  Ｏｈｍｕｒａ、Ｔａｋｅｓｈｉ  Ｍｉｙａｍｏｔｏ、Ｓｈｉｒｏ  Ｎｏｚａｗａ、Ｇｏｕ  Ｙｏｕｎｇ  Ｋｏｈ、Ｋａｒｉ  ＡｌｉｔａｌｏおよびＴｏｓｈｉｏ  Ｓｕｄａ、「Ｂｌｏｏｄ．」、２００５年６月１５日；１０５（１２）：４６４９−５６）。
【００７３】
血管新生において役割を有する酵素の中では、ＰＤＧＦＲβ（ＧｕｚｍａｎおよびＬａｕｒｅｎｃｅ  Ｈ．Ｈｕｒｌｅｙ、Ｕｎｉｖ．ｏｆ  Ａｒｉｚｏｎａ、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  ＰＤＧＦＲ−ｂｅｔａ  Ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ａｎｄ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｇ−Ｑｕａｄｒｕｐｌｅｘ−Ｆｏｒｍｉｎｇ  Ｒｅｇｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ」、Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ／Ｇｅｎｔｉｃｓ，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）、ＦＧＦＲ１（Ｓｏｍａｉａ  Ｅｌｂａｕｏｍｙ  Ｅｌｓｈｅｉｋｈ、Ａｎｄｒｅｗ  Ｒ  Ｇｒｅｅｎ、１Ｍａｒｙｏｕ  ＢＫ  Ｌａｍｂｒｏｓ、Ｎｉｃｈｏｌａｓ  Ｃ  Ｔｕｒｎｅｒ、Ｍａｔｔｈｅｗ  Ｊ  Ｇｒａｉｎｇｅ、３Ｄｅｓ  Ｐｏｗｅ、１Ｉａｎ  Ｏ  ＥｌｌｉｓおよびＪｏｒｇｅ  Ｓ  Ｒｅｉｓ−Ｆｉｌｈｏ、「ＦＧＦＲ１  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ：ａ  ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ  ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ」；ＦＬＴ１（Ｓｈｉｂｕｙａ  Ｍ（２００７）、「Ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ−１（ＶＥＧＦＲ−１／Ｆｌｔ−１）：ａ  ｄｕａｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｆｏｒ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ」、Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ、９（４）：２２５−３０；ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ  ２３１およびＶＥＧＦＲ３（Ｔａｍｅｌａ，Ｔ．ら、「Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ＶＥＧＦＲ−３  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ｓｐｒｏｕｔｉｎｇ  ａｎｄ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ」、Ｎａｔｕｒｅ  ４５４、６５６−６６０（２００５８））の名を挙げることができる。
【００７４】
血管新生過程は、非常に多くの充実性腫瘍の進行にも顕著な役割を果たす。さらに、転移発症の確率は、原発性腫瘍の血管形成が増加するにつれて非常に大きく増加することが証明されている（Ｂｒ．Ｊ．、「Ｃａｎｃｅｒ．」、２００２年５月２０日；８６（１０）：１５６６−７７）。
【００７５】
白血病およびリンパ腫における血管新生促進剤の潜在的役割も最近立証された。具体的には、これらの病態における細胞クローンが、免疫系によって自然に破壊されることもあり、またはこれらの生存におよびさらにこれらの増殖に有利である血管新生性表現型に先祖返りすることもあることが一般に報告されている。表現型のこの変化は、とりわけマクロファージによる血管新生因子の過発現および／または細胞外マトリックスからのこれらの因子の動員によって誘導される（Ｔｈｏｍａｓ  ＤＡ、Ｇｉｌｅｓ  ＦＪ、Ｃｏｒｔｅｓ  Ｊ、Ａｌｂｉｔａｒ  Ｍ、Ｋａｎｔａｒｊｉａｎ  ＨＭ．。「Ａｃｔａ  Ｈａｅｍａｔｏｌ．」、（２００１）、第２０７巻、ｐｐ．１０６−１９０）。
【００７６】
骨髄の血管新生過程とＣＭＬ（慢性骨髄単球性白血病）における「髄外疾患」には相関関係がある。様々な研究が、血管新生の阻害がこの病態に関して一般に好まれる治療の代表であることを明示している（「Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．」、２００６年１月；３０（１）：５４−９；「Ｈｉｓｔｏｌ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．」、２００４年１０月；１９（４）：１２４５−６０）。さらに、多発性骨髄腫に罹患している患者の場合、Ｔｉｅ２／血管新生系の活性化が骨髄の血管新生の発現に関与することが、強く示唆されている（「Ｂｌｏｏｄ」、２００３年６月１５日；１０２（２）：６３８−４５）。
【００７７】
化合物の活性の判定−実験プロトコル
１．ＫＤＲ
化合物の阻害効果をシンチレーション技術（基本Ｆｌａｓｈ  Ｐｌａｔｅタイプの９６ウエルプレート）による基質のリン酸化のインビトロ試験で判定する。
【００７８】
ヒトＫＤＲ酵素の細胞質ドメイン（残基７９０から１３５６）をＧＳＴ融合形態のｐＦａｓｔＢａｃバキュロウイルス発現ベクターにクローニングした。タンパク質がＳＦ２１細胞において発現され、精製され、自己リン酸化によって活性化された。基質は、ＧＳＴ融合タンパク質形態で発現および精製されるＰＬＣγの残基６５８から８５０からなる。
【００７９】
ＫＤＲキナーゼ活性を、緩衝液２０ｍＭ  ＭＯＰＳ、１０ｍＭ、ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、ｐＨ＝７．４中で測定する。最初に化合物を１００％ＤＭＳＯで希釈し、その後、３０％ＤＭＳＯ／７０％緩衝液中の１０Ｘ溶液として調製する。１０μＬの１０Ｘ溶液を投入し、その後、４℃で１５０ｎｇ（１．６ｐｍｏｌ）のＫＤＲ酵素を含有する７０μＬの緩衝液を投入する。２μｇ（４１ｐｍｏｌ）のＰＬＣγ基質と０．５μＣｉのγ３３Ｐ［ＡＴＰ］と２μＭの冷ＡＴＰとを含有する２０μＬの溶液を添加することにより反応を開始させる。プレートを攪拌する。３０分間の３７℃でのインキュベーションの後、インキュベーション緩衝液を除去し、ウエルを３００μＬのＰＢＳで３回洗浄する。Ｔｒｉｌｕｘ−βＷａｌｌａｃ放射能カウンターを使用して、各ウエルの放射能を測定する。
【００８０】
バックグラウンドノイズは、酵素および化合物不在下でＡＴＰ（放射標識された低温のもの）および基質が入っている４つの異なるウエルにおける放射能を測定することにより決定する。対照活性は、すべての試薬が入っているが化合物不在の状態の４つの異なるウエルにおいて測定する。
【００８１】
本発明の化合物でのＫＤＲ活性の阻害を、化合物不在下で決定した対照活性に対する阻害の百分率として表示する。
【００８２】
２．Ｔｉｅ２
化合物の阻害効果をシンチレーション技術（基本Ｆｌａｓｈ  Ｐｌａｔｅタイプの９６ウエルプレート）による基質のリン酸化のインビトロ試験で判定する。
【００８３】
細胞内ドメイン７７４−１１２４のアミノ酸に対応するヒトＴｉｅ２のコーディング配列をＧＳＴ融合タンパク質の形態のｐＦａｓｔＢａｃＧＴバキュロウイルス発現ベクターに導入した。ＧＳＴ−Ｔｉｅ２は、自己リン酸化により精製および活性化された。基質は、ＧＳＴ融合タンパク質形態で発現および精製されるＰＬＣγの残基６５８から８５０からなる。
【００８４】
Ｔｉｅ２のキナーゼ活性を、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２と１０ｍＭ  Ｍｎ２と１ｍＭ  ＤＴＴとを含有するＭＯＰＳ  ２０ｍＭ  ｐＨ７．４中で測定する。最初に化合物を１００％ＤＭＳＯで希釈し、その後、３０％ＤＭＳＯ／７０％緩衝液中の１０Ｘ溶液として調製する。１０μＬの１０Ｘ溶液を投入し、その後、４℃で１００ｎｇ（１．５ｐｍｏｌ）のＴｉｅ２酵素を含有する７０μＬの緩衝液を投入する。２μｇ（４１ｐｍｏｌ）のＰＬＣγ基質と０．５μＣｉのγ３３Ｐ［ＡＴＰ］と２μＭの冷ＡＴＰとを含有する２０μＬの溶液を添加することにより反応を開始させる。プレートを攪拌する。３０分間の３７℃でのインキュベーションの後、インキュベーション緩衝液を除去し、ウエルを３００μＬのＰＢＳで３回洗浄する。Ｔｒｉｌｕｘ−βＷａｌｌａｃ放射能カウンターを使用して、各ウエルの放射能を測定する。
【００８５】
バックグラウンドノイズは、酵素および化合物が不在の状態でＡＴＰ（放射標識された低温のもの）および基質が入っている４つの異なるウエルにおける放射能を測定することにより決定する。対照活性は、すべての試薬が入っているが化合物が不在の状態の４つの異なるウエルにおいて測定する。
【００８６】
Ｔｉｅ２活性の阻害を計算し、化合物不在の状態で決定した対照活性に対する阻害百分率として表示する。
【００８７】
３．ＰＦＣγ基質の存在下でのＦＬＴ１キナーゼリン酸化活性を、放射標識により、測定することによる分子のスクリーニング
ＦＬＴ１のキナーゼ活性は、１ウエルにつき１３ｎＭのＦＬＴ１酵素を含有する７０μＬのキナーゼからなる反応混合物を用いて、Ｔｉｅ２の阻害と同じ方法で測定する。
【００８８】
ＦＬＴ１活性の阻害を計算し、化合物不在の状態で決定した対照活性に対する阻害百分率として表示する。
【００８９】
分子の各濃度に対応する阻害百分率をこのようにして計算する：
阻害％＝（処理したウエルの平均ＣＰＭ−対照ウエルの平均ＣＰＭ）／（未処理ウエルのＣＰＭ−対照の平均ＣＰＭ）×１００
【００９０】
４．ＰＬＣγ基質の存在下でのＰＤＧＦＲキナーゼリン酸化活性を、放射標識により、測定することによる分子のスクリーニング
この試験は、ＦＬＴ１酵素で行ったのと同様に行うが、１３ｎＭのＦｌｔ１の代わりに１６ｎＭのＰＤＧＦＲ酵素を使用し、および９６ウエルプレートにおいて１８μＬのＧＳＴ−ＰＤＧＦＲ酵素を４ｍｇ／ｍＬ（純度８０％の場合）で混合する、バッチＶＬＴ８０２。
【００９１】
５．ＰＬＣγ基質の存在下でのＦＧＦＲキナーゼリン酸化活性を、放射標識により、測定することによる分子のスクリーニング
この試験は、ＦＬＴ１酵素で行ったのと同様に行うが、１３ｎＭのＦｌｔ１の代わりに２７ｎＭのＦＧＦＲ酵素を使用し、および９６ウエルプレートにおいて１８μＬのＧＳＴ−ＦＧＦＲ酵素を１．１ｍｇ／ｍＬ（純度１００％の場合）で混合する：（バッチＪＣＥ３６６６）。
【００９２】
結果：
本発明の化合物は、一般に、ＫＤＲおよび／またはＴＩＥ２に対して０．１ｎＭと２μＭの間、好ましくは０．１ｎＭと５００ｎＭの間、ならびにさらに好ましくは０．１ｎＭと５０ｎＭの間である、キナーゼ活性の５０％を阻害する濃度を有する。下の表１からの値を実例として与える。
【００９３】
【表１】
0005680640.tif 000021
【００９４】
本発明による化合物は、該化合物の肝クリアランスを決定することができる薬理試験の対象であった。
【００９５】
ヒト肝細胞を使用する本化合物の固有クリアランスの評価：実験プロトコル
ＮＢ：ヒト肝臓細胞に関する、下で説明するインビトロ試験を用いて、重要な薬物動態パラメータ：所与の化合物についての該化合物を人に投与したときの肝臓による代謝を予測する。
【００９６】
培養条件：
ヒト肝細胞の凍結保存試料（ＩＶＴからのもの：Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ｉｎｃ．、米国メリーランド州バルティモアからのＩＶＴ−ＴＬＮ−１８０６８０）およびヒト肝細胞の新鮮な試料（Ｂｉｏｐｒｅｄｉｃからのもの：ＨＥＰ２００２３９）のインキュベーションを、４８のコラーゲン被覆ウエルを具備するプレートで行った。
【００９７】
実験条件：
１０μＭのケトコナゾール（ＣＹＰ３Ａ４阻害剤）の不在下または存在下、化合物の５μＭの最終濃度での培養基への添加により、動態を開始させた。インキュベーション容積は１００μＬであり、インキュベーション時間：０−２４時間（標準動態点０−０．５−１−２−４−６−８−２４時間）。
【００９８】
アセトニトリル／水を内部基準としてのコルチコステロイドと共に添加することにより、動態を停止させた。細胞を剥離させて溶解した。細胞内培地と細胞外培地を再び併せ、凍結（−２０℃）させて、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析まで保管した。
【００９９】
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析法：
併せた細胞外培地と細胞内培地を解凍し、超音波作用に付し、ボルテックスで攪拌し、３０００ｇで２０分間、遠心分離した。上清を注入し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析した。
【０１００】
データ処理および「分類」
・最大初期インビトロ速度をＰ４５０シトクロムの特異的代謝について計算し、ｎｍｏｌ／時／（細胞１００万個）で表示した。
Ｖ＝［Ｔ（ｎ）での濃度−Ｔ（ｎ−１）での濃度］／［Ｔ（ｎ）−Ｔ（ｎ−１）］
固有クリアランスを決定し、ｍＬ／時／（細胞１００万個）で表示した。
Ｃｌ固有＝用量／ＡＵＣ０−２４時間
用量＝Ｔ（０）での量（ｎｍｏｌ／（細胞１００万個））
ＡＵＣ０−２４時間：ＷｉｎＮｏｎｌｉｎにより、ボーラスタイプの静脈内注射をモデル化するノンコンパートメント解析を用いて計算した
固有クリアランスの分類は、次のように定義した：
Ｃｌ固有＜０．０４０ｍＬ・時−１・１０−６細胞：中等度固有クリアランス
０．０４０＜Ｃｌ固有＜０．１２０ｍＬ・時−１・１０−６細胞：低固有クリアランス
Ｃｌ固有＞０．０４０ｍＬ・時−１・１０−６細胞：高固有クリアランス
【０１０１】
ドナーに関する人口統計情報：
凍結保存ヒト肝細胞の試料：
ＩＶＴから：・ＩＶＴ、ＴＬＮ群：男性、白色人種、２５歳
新鮮なヒト肝細胞の試料：
Ｂｉｏｐｒｅｄｉｃから：・ＨＥＰ２００２３９：女性、不明、５８歳
この試験において、実施例１に記載した化合物の固有クリアランス値は、０．０５７ｍＬ／時／（細胞１００万個）（低い個人間変動で中等度に分類される値）である。
【０１０２】
実施例２に記載した化合物の固有クリアランス値は、０．０５５ｍＬ／時／（細胞１００万個）（低い個人間変動で中等度に分類される値）である。
【０１０３】
結腸腫瘍に対する本発明の化合物のインビボ活性を測定することに存する他の試験を行った。
【０１０４】
結腸腫瘍に対する本発明の化合物のこの活性を、Ｂ１６黒色腫で研究した。比較で、出願ＷＯ０８／０６５２８２の実施例１９からの生成物を試験した。
【０１０５】
生成物の有効性は、様々な基準によりインビボで決定することができ、治療第１２または１３日における治療群の腫瘍の平均重量（Ｔ）と対照群の腫瘍の平均重量（Ｃ）の間の比を表す腫瘍阻害百分率％Ｔ／Ｃによって決定することが可能である。生成物は、Ｔ／Ｃ比が４２％未満であるとき活性であるとみなされ、生成物は、Ｔ／Ｃが１０％未満であるときには高い抗腫瘍活性を有する。（Ｃｏｒｂｅｔｔ  ＴＨら、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ」、４２、１７０７−１７１５（１９８２）。
【０１０６】
化合物の有効性を実証するために、ｌｏｇ１０殺細胞を決定することも可能であり、この値は、次の方程式に従って決定される：
ｌｏｇ１０殺細胞＝Ｔ−Ｃ（日数）／３．３２×Ｔｄ
（式中、Ｔ−Ｃは、治療群の腫瘍の腫瘍（Ｔ）および対照群の腫瘍（Ｃ）が所定値（例えば７５０ｍｇ）に達した、日数での、平均時間である細胞の成長の遅れを表し、ならびにＴｄは、対照動物において腫瘍の容積が二倍になるために必要な、日数での、時間を表す。）［Ｔ．Ｈ．Ｃｏｒｂｅｔｔら、「Ｃａｎｃｅｒ」、４０、２６６０．２６８０（１９７７）；Ｆ．Ｍ．Ｓｃｈａｂｅｌら、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｐａｒｔ  Ｂ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ」、１７、３  ５１、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．（１９７９）］。生成物は、ｌｏｇ１０殺細胞が０．７以上である場合、活性であるとみなされる。生成物は、ｌｏｇ１０殺細胞が２．８より大きい場合、非常に活性であるとみなされる。
【０１０７】
充実性腫瘍に対する化合物の有効性は、下記の方法で実験的に決定することができる：
この実験に付す動物、一般にはＣ５７ＢＬ／６雌マウス、に第０日に３０ｍｇから６０ｍｇのＢ１６（腫瘍のレファレンス）ヒト腫瘍断片を両側皮下移植する。腫瘍を有する動物を無作為化した後、様々な治療および対照を施す。本発明の腫瘍の治療の場合、内植の３から４日後、早期に治療を開始した。本化合物での治療を受けた動物は、約２０ｇの体重を有した。腫瘍を有する動物に、賦形剤のみを用いて同じ治療も施して、腫瘍に対する化学療法の実際の効果から賦形剤の毒性効果を分離した。本化合物の投与は、表に示す用量でおよび表に示す賦形剤を用いて、１日２回の投与で経口的に行った。腫瘍内植後、研究に依存して、これらの投与を８から１１日にわたって行った。
【０１０８】
腫瘍がおおよそ２ｇに達するまで、または動物が死ぬまで（腫瘍が２ｇに達する前に後者（動物の死）が発生した場合）、週２または３回、腫瘍を測定する。動物を犠牲にした時点で剖検する。
【０１０９】
記録した様々なパラメータに従って、腫瘍活性を判定する。
【０１１０】
例として、本発明の化合物をその最適用量で使用して得た結果を下に表に示す。
【０１１１】
従って、本発明の１つの主題は、式（Ｉ）の化合物、または後者（式（Ｉ）の化合物）の塩を医薬的に許容される酸と共に含む薬物である。
【０１１２】
本発明の態様のもう１つのものによると、本発明は、癌の治療において薬物として使用するための、式（Ｉ）に相当する化合物に関する。本発明の化合物は、薬物、特に血管新生を阻害する薬物の調製のために使用することができる。
【０１１３】
これらの薬物は、これらの治療用途を癌性腫瘍、とりわけ充実性腫瘍の治療に見いだせる。
【０１１４】
本発明の態様のもう１つのものによると、本発明は、本発明による化合物を活性成分として含有する医薬組成物に関する。これらの医薬組成物は、本発明による少なくとも１つの化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩の有効量を含有し、少なくとも１つの医薬的に許容される賦形剤も含有する。
【０１１５】
前記賦形剤は、当業者に公知の通常の賦形剤から、剤型および所望の投与方式に従って選択される。
【０１１６】
経口、舌下、皮下、筋肉内、静脈内、局所、局部、気管内、経鼻、経皮または直腸内投与のための本発明の医薬組成物の場合、上記式（Ｉ）の活性成分、またはこの塩を標準的な製薬用賦形剤との混合物として単位投与形態で上記障害または疾患の治療のために動物におよび人間に投与することができる。
【０１１７】
適切な単位投与形態としては、経口形態、例えば錠剤、軟または硬ゲルカプセル、粉末、顆粒および経口溶液または懸濁液、舌下または頬側投与形態ならびに経皮、皮下、筋肉内または静脈内投与形態が挙げられる。
【０１１８】
例として、錠剤の形態での本発明の化合物の単位投与形態は、下記の成分を含む：
本発明による化合物  ５０．０ｍｇ
マンニトール  ２２３．７５ｍｇ
クロスカルメロースナトリウム  ６．０ｍｇ
トウモロコシデンプン  １５．０ｍｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース  ２．２５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム  ３．０ｍｇ
【０１１９】
経口投与するとき、１日に投与する活性成分の用量は、１回以上の摂取で１２００ｍｇ／ｋｇに達し得る。
【０１２０】
より高いまたはより低い投薬量が適する特殊な症例もあり得る。このような投薬量は、本発明の文脈から逸脱しない。通常の実施に依存して、各患者に適する投薬量は、医師により投与方法ならびに該患者の体重および応答依存して決定される。
【０１２１】
本発明の態様のもう１つのものによると、本発明は、上に示した病態を治療するための方法にも関し、該方法は、本発明による化合物、またはこの医薬的に許容される塩の有効量を患者に投与することを含む。
【０１２２】
【表２】
0005680640.tif 000022
ＢＣＭ−１９４８。腫瘍倍増時間＝０．８日。処方：実施例１＝９８％ＰＥＧ２００、２％ＰＳ８０。用いた略記：ＢＷＣ＝体重変化、ＨＮＴＤ＝最高非毒性用量、ＨＤＴ＝試験した最高用量。ａ第９および１０日に１日１回。ｂ偶発症候により第７日に用量を７％低減した。ｃ第８日における１匹の偶発死のため９匹のマウスで計算した。
ｐ．ｏ．＝経口的に
【０１２３】
【表３】
0005680640.tif 000023
ＢＣＭ−１９７９。腫瘍倍増時間＝０．９日。賦形剤群の腫瘍が７４０ｍｇに達する平均時間＝１１．９日。処方：実施例２＝２０％ラブラゾール、５％ソルトール、７５％グルコース、５％水。用いた略記：ＢＷＣ＝体重変化、ＨＮＴＤ＝最高非毒性用量、ＨＤＴ＝試験した最高用量。
ｐ．ｏ．＝経口的に
【０１２４】
【表４】
0005680640.tif 000024
ＢＣＭ−１７５５。腫瘍倍増時間＝１．１日。処方：実施例３＝水中の４０％Ｃａｐｔｉｓｏｌ、ｐＨ＝３。
【０１２５】
治療時間：実施例３＝１１日。用いた略記：ＨＤＴ＝試験した最高用量。ａ第３日に、マウスを１日１回治療した。ｂ第３、４および１１から１３日にＨＰＬＣにより母溶液のアッセイ後に総用量を再び評価した。ｃ偶発死、動物６匹について計算した有効性。