(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式ＩＩＩ：
【化１】
0005680409.tif 000062
式中、
Ｒ１は、ピリジルまたはキノリニルであり、
Ｒ２は、ピリジル、キノリニルまたは−ＣＯＯＨであり、
ＡＡ１−ＮＨは、リジンであり、カルボニル部分を介してＺに結合し、
ＮＨ−ＡＡ２は、グルタミン酸であり、
ＸおよびＺは、各々独立してＣ１〜Ｃ８アルキレンであり、このそれぞれは０〜５個のＲＡで置換されていてもよく、
Ｙは、−ＮＨ−ＣＯ−であり、
ＲＡは、各々の出現において、ＣＯ２Ｈである
で表される化合物。
【請求項２】
以下：
【化２】
0005680409.tif 000063
【化３】
0005680409.tif 000064
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式ＩＸ：
【化４】
0005680409.tif 000065
式中、
ＭはＴｃ−９９ｍまたはＲｅであり、
ＲＬは、ＣＯであり、
ＡＡ１−ＮＨは、リジンであり、カルボニル部分を介してＷに結合し、
ＮＨ−ＡＡ２は、グルタミン酸であり、
Ｒ’は、ピリジルメチルまたはキノリニルメチルであり、
Ｒ’’は、ピリジルメチル、キノリニルメチルまたは−ＣＨ２ＣＯＯＨであり、
ＸおよびＺは、各々独立してＣ１〜Ｃ８アルキレンまたは結合であり、このそれぞれは０〜５個のＲＡで置換されていてもよく、
Ｗは、結合であり、
Ｙは、−ＮＨ−ＣＯ−であり、
ＲＡは、各々の出現において、ＣＯ２Ｈであり、
ｒは１〜５である
で表される、金属をさらに含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
以下の工程：
細胞または組織と式ＩＸ：
【化５】
0005680409.tif 000066
式中、
ＭはＴｃ−９９ｍまたはＲｅであり、
ＲＬは、ＣＯであり、
ＡＡ１−ＮＨは、リジンであり、カルボニル部分を介してＷに結合し、
ＮＨ−ＡＡ２は、グルタミン酸であり、
Ｒ’は、ピリジルメチルまたはキノリニルメチルであり、
Ｒ’’は、ピリジルメチル、キノリニルメチルまたは−ＣＨ２ＣＯＯＨであり、
ＸおよびＺは、各々独立してＣ１〜Ｃ８アルキレンまたは結合であり、このそれぞれは０〜５個のＲＡで置換されていてもよく、
Ｗは、結合であり、
Ｙは、−ＮＨ−ＣＯ−であり、
ＲＡは、各々の出現において、ＣＯ２Ｈであり、
ｒは１〜５であり、
ここで、式ＩＸの化合物は少なくとも１つの放射性同位体を含む
で表される放射性標識化合物、または薬学的に許容し得るその塩とを接触させる工程、
化合物を細胞または組織において検出する工程、および
化合物を細胞または組織においてイメージングする工程
を含む、対象（ヒトを除く）におけるイメージングの方法。
【請求項５】
イメージング方法が、ＰＳＭＡ阻害剤をイメージングすることに適している、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
イメージング方法が、がん、腫瘍または新生物のイメージングに適している、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）の活性を調整する化合物を同定するためのin vitro方法であって、該方法が：
ａ）ＰＳＭＡと、請求項３に記載の放射性標識化合物とを、ＰＳＭＡの活性の調整に適した条件下で接触させること、および
ｂ）前記化合物によるＰＳＭＡの活性の調整を検出すること（ここで、前記化合物はＰＳＭＡの結合部位と相互作用することができる）
を含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
この出願は、2007年6月26日出願の米国仮出願第60/937,242号および2008年1月15日出願の米仮出願第61/011,111号の利益を主張し、その教示を参照により本明細書に援用する。
【０００２】
本発明の背景
１．発明の分野
本発明は、尿素誘導体、リンカーおよび金属キレート基（metal chelating group）を含む新規化合物を提供する。本発明は、尿素誘導体、リンカー、金属キレート基、および放射性標識されたか、もしくは同位体標識された金属を含む、新規放射性標識化合物を提供する。この発明はまた、かかる放射性標識化合物を含む医薬組成物を提供する。さらに、この発明は、ＰＳＭＡおよびＰＳＭＡ発現腫瘍に結合する本発明の化合物の体内分布を検出する方法およびそのイメージング方法をも提供する。本発明の化合物は、がんの早期診断の提供、腫瘍血管新生のイメージング、腫瘍手術中の腫瘍マージンの改善された描写、およびがんへの治療的な放射性核種の小分子送達の改善に有用である。
【０００３】
２．背景
前立腺がん（ＰＣａ）は、米国民における主要ながんであり、男性のがん関連死の第２位の原因である。診断される頃には、ＰＣａ腫瘍の半数のみが臨床的に限局しており、半数は被膜外に播種している。現在、解剖学的方法、例えばコンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、磁気共鳴（ＭＲ）イメージングおよび超音波検査が、前立腺癌の臨床イメージングにおいて主流となっている。放射性標識モノクローナル抗体[111In]ProstaScintTMも用いられているが、この剤は解釈が難しいイメージを生成する傾向がある（Lange, P. H. PROSTASCINT scan for staging prostate cancer. Urology 2001, 57, 402-406、Haseman, M. K.; et al.Cancer Biother Radiopharm 2000, 15, 131-140、Rosenthal, S. A.; et al. Tech Urol 2001, 7, 27-37）。低分子量の、放射性医薬ベースのイメージング剤は、長い循環時間および非標的組織からの遅延したクリアランスを示す傾向がある放射性標識抗体よりも優れた、イメージングのための薬物動態を提供し得る。種々の実験的な低分子量ＰＣａイメージング剤が現在臨床的に追求されており、これは、放射性標識コリンアナログ［１８Ｆ］フルオロジヒドロテストステロン（［１８Ｆ］ＦＤＨＴ）、抗１−アミノ−３−［１８Ｆ］フルオロシクロブチル−１−カルボン酸（抗［18Ｆ］Ｆ−ＦＡＣＢＣ）、［１１Ｃ］酢酸塩、および、１−（２−デオキシ−２［１８Ｆ］フルオロ−Ｌ−アラビノフラノシル）−５‐メチルウラシル（［１８Ｆ］ＦＭＡＵ）を含む（Scher, B.; et al. Eur J Nucl Med Mol Imaging 2007, 34, 45-53、Rinnab, L.; et al. BJU Int 2007, 100, 786-793、Reske, S. N.; et al. J Nucl Med 2006, 47, 1249-1254、Zophel, K.; Kotzerke, J. Eur J Nucl Med Mol Imaging 2004, 31, 756-759、Vees, H.; et al. BJU Int 2007, 99, 1415-1420、Larson, S. M.; et al.J Nucl Med 2004, 45, 366-373、Schuster, D. M.; et al. J Nucl Med 2007, 48, 56-63、Tehrani, O. S.; et al. J Nucl Med 2007, 48, 1436-1441）。
【０００４】
各々は異なるメカニズムで作用し、特定の利点、例えば、［１１Ｃ］コリンについては低い尿排泄など、および不利点、例えば、陽電子放出核種の短い物理的半減期などを有する。新たな一連の有望な低分子量イメージング剤は、前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）を標的とする（Mease R.C. et al. Clin Cancer Res. 2008, 14, 3036-3043、Foss, C. A.; et al. Clin Cancer Res 2005, 11, 4022-4028、Pomper, M. G.; et al. Mol Imaging 2002, 1, 96-101、Zhou, J.; et al. Nat Rev Drug Discov 2005, 4, 1015-1026）。
【０００５】
ＰＳＭＡは、ＰＣａ、特にアンドロゲン非依存性の、進行し、転移した疾患におけるＰＣａの表面に大量かつ限定して発現するＩＩ型内在性膜タンパク質である（Schulke, N.; et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2003, 100, 12590-12595）。ほとんどすべてのＰＣａがアンドロゲン非依存性となるため、後者は重要である。それはまた、前立腺以外の大部分の固形腫瘍の内皮の中にも発現している（Chang, S. S.; et al. Cancer Res 1999, 59, 3192-3198）。ＰＳＭＡは、治療のための有望な標的の基準、すなわち疾患の全てのステージにおける大量の（前立腺に）限定した発現、細胞表面に提示されるが循環中に流れ出ることがないこと、および酵素活性またはシグナリング活性との関連を備えている（Schulke, N.; et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2003, 100, 12590-12595）。ＰＳＭＡ遺伝子は第１１染色体の短腕に位置し、葉酸加水分解酵素およびニューロペプチダーゼとして機能する。「脳ＰＳＭＡ」と称されるグルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩ（ＧＣＰＩＩ）と同等のニューロペプチダーゼ機能が、Ｎ−アセチルアスパルチルグルタミン酸(ＮＡＡＧ）をＮ−アセチルアスパラギン酸（ＮＡＡ）とグルタミン酸とに切断することにより、グルタミン酸伝達の調整が可能となる（Nan, F.; et al. J Med Chem 2000, 43, 772-774）。がん細胞１個あたり１０６までのＰＳＭＡ分子が存在することが、同分子放射性核種ベースの技法によるイメージングおよび治療の理想的な標的としてさらに示唆する（Tasch, J.; et al. Crit Rev Immunol 2001, 21, 249-261）。
【０００６】
最近、ＰＳＭＡを発現する異種移植片の選択的なイメージングが、小動物ポジトロンエミッショントモグラフィ（ＰＥＴ）、シングルフォトンエミッションコンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、および、尿素ベースのＰＳＭＡ阻害剤であるＮ−［Ｎ−［（Ｓ）−１，３−ジカルボキシプロピル］カルバモイル］−（Ｓ）−［１１Ｃ］メチル−Ｌ−システイン、［１１Ｃ］ＤＣＭＣ、Ｎ−［Ｎ−［（Ｓ）−１，３−ジカルボキシプロピル］カルバモイル］−（Ｓ）−３−［１２５Ｉ］ヨード−Ｌ−チロシン、［１２５Ｉ］ＤＣＩＴおよびＮ−［Ｎ−［（Ｓ）−１，３−ジカルボキシプロピル］カルバモイル］−（Ｓ）−４−［１８Ｆ］フルオロベンジル−Ｌ−システイン、［１８Ｆ］ＤＣＦＢＣを用いて実証された（Mease R.C. et al. Clin Cancer Res. 2008, 14, 3036-3043、Foss, C. A.; et al. Clin Cancer Res 2005, 11, 4022-4028、Pomper, M. G.; et al. Mol Imaging 2002, 1, 96-101）。
【０００７】
陽電子放出放射性核種は臨床医学でますます用いられるようになっているが、依然として９９ｍＴｃが、その有利な物理的性質（ｔ１／２＝６ｈ、Ｅγ＝１４０ｋｅＶ）、低いコストおよび広範囲にわたる利用可能性のため、臨床シンチグラフィーイメージングのために好んで選択される放射性核種である。放射性医薬としてのテクネチウム錯体の開発は、テクネチウムのＶＩＩＢ族同族元素であるレニウムの使用によって促進される。レニウムは、一般にテクネチウムの錯体に類似した物理的性質を有する錯体を生成し、大規模合成および構造特性化のためのテクネチウムの非放射性代替物としてしばしば用いられる。
【０００８】
望まれるのは、｛Ｍ（ＣＯ）３｝＋コア（Ｍ＝９９ｍＴｃ、１８６，１８８Ｒｅ）の結合のための三座配位キレーター（tridentate chelator）が組み込まれているが、依然ＰＳＭＡへの高い親和性を保持している低分子量の尿素ベースの阻害剤を提供することである。高い安定性と有利な標識化特性のため、有機金属のＲｅ（Ｉ）（ＣＯ）３／９９ｍＴｃ（Ｉ）（ＣＯ）３アプローチは、魅力的な放射性標識戦略である。窒素、硫黄、酸素供与原子の種々のセットを有する複数の三座配位キレーターが、｛Ｍ（ＣＯ）３｝＋コアと極めて安定な錯体を形成することが知られている（Alberto, R.; et al. J Am Chem Soc 1998, 120, 7987-798、Alberto, R.; et al. J Am Chem Soc 2001, 123, 3135-3136）。これらのうち、単一アミノ酸キレート（ＳＡＡＣ）コンセプト（Banerjee, S. R.; et al. Nucl Med Biol 2005, 32, 1-20、Stephenson, K. A.; et al. Bioconjug Chem 2005, 16, 1189-1195）が、新規な尿素ベースの阻害剤を設計するために有用であることが証明された。
【発明の概要】
【０００９】
一側面において、本発明は阻害剤、リンカーおよび金属キレーターを含む化合物を提供する。
別の側面において、本発明は式Ｉ：
Ａ−（Ｂ）ｂ−Ｃ              （Ｉ）
式中、Ａは金属キレーターであり、Ｂは、リンカーであり、Ｃは、ＰＳＭＡ阻害剤であり、ｂは１〜５である
で表される化合物を提供する。
【００１０】
特定の態様において、本発明は式ＩＩ
【化１】
0005680409.tif 000002
式中、
Ｒ’は、−ＣＯ−ＮＲｘＲｙ−、−ＣＳ−ＮＲｘＲｙ−、ＣＯＲｘ、ＣＳＲｘ、Ｃ（ＮＲｘ）Ｒｘ、−Ｓ（Ｏ）ｐＲｘ−、−ＣＯ２−ＮＲｘＲｙ−、または任意に置換されたアルキルであり、
Ｒ’’は、Ｈまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｘは、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｙは、Ｈ、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
ＸおよびＺは、各々独立してＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシまたは結合であり、このそれぞれは０〜５個のＲＡで置換されていてもよく、
ＹおよびＷは、各々独立して−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｐ−、−ＮＨ−、−ＮＲＢ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＲＢ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲＢ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ２−、−ＮＲＢ−ＣＯ−、−ＮＲＢ−ＣＯ２−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ２−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＲＢ−、−ＣＯ２−ＮＲＢ−または結合であり、
ｐは、０、１または２であり、
【００１１】
ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ＣＯ２Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロ、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアルキルスルフィニル、任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたモノもしくはジアルキルカルボキサミド、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
ＲＢは、各々の出現において、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールである
で表される化合物を提供する。
【００１２】
他の態様において、本発明は式ＩＩＩ：
【化２】
0005680409.tif 000003
式中、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、任意に置換されたアリール、任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換されたヘテロシクロ、−ＣＯＯＨ、ヒドロキシル、任意に置換されたアルコキシ、アミノ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、チオール、および任意に置換されたアルキルチオールから選択され、
ＡＡ１およびＡＡ２は、各々独立して、天然または非天然アミノ酸であり、
ＸおよびＺは、各々独立してＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシまたは結合であり、このそれぞれは０〜５個のＲＡで置換されていてもよく、
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｐ−、−ＮＨ−、−ＮＲＢ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＲＢ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲＢ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ２−、−ＮＲＢ−ＣＯ−、−ＮＲＢ−ＣＯ２−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ２−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＲＢ−、−ＣＯ２−ＮＲＢ−または結合であり、
ｐは、０、１または２であり、
【００１３】
ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ＣＯ２Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロ、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアルキルスルフィニル、任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたモノもしくはジアルキルカルボキサミド、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
ＲＢは、各々の出現において、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールである
で表される化合物を提供する。
【００１４】
特定の態様において、本発明は式ＩＶ：
【化３】
0005680409.tif 000004
式中、
ＡＡ１およびＡＡ２は、各々独立して天然アミノ酸であり、
Ｒ１は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリジジニル、キノリニル、チエニル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピロリル、フラニル、イソキノリニル、イミダゾリルまたはトリアゾリルであり、
Ｒ２は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリジジニル、キノリニル、チエニル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピロリル、フラニル、イソキノリニル、またはトリアゾリル、−ＣＯＯＨ、ヒドロキシル、アルコキシ、アミノ、モノもしくはジアルキルアミノであり、
ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロまたはＣＯ２Ｈであり、
ｍは、０または１であり、
各々のｎは、独立して１〜８であり、
各々のｑは、独立して０または１である
で表される化合物を提供する。
【００１５】
一態様において、本発明は式Ｖ：
【化４】
0005680409.tif 000005
式中、
各々のＲＤは、独立して、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたアリール、任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換されたヘテロシクロ、または任意に置換されたアラルキルであり、
各々のＲＥは、独立して、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたアリール、任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換されたヘテロシクロ、または任意に置換されたアラルキルであり、
Ｒ１は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリジジニル、イソキノリニル、イミダゾリル、またはキノリニルであり、
Ｒ２は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリジジニル、イソキノリニル、キノリニル、−ＣＯＯＨ、ヒドロキシル、アルコキシ、アミノ、モノもしくはジアルキルアミノであり、
ＲＡは、各々の出現において、ヒドロキシ、アミノ、またはＣＯ２Ｈであり、
各々のｍは、独立して、０または１であり、
各々のｎは、独立して１〜８である
で表される化合物を提供する。
【００１６】
別の態様において、本発明は式ＶＩ：
【化５】
0005680409.tif 000006
式中
ＡＡ１およびＡＡ２は、各々独立して天然アミノ酸であり、
Ｒ’は、−ＣＯ−ＮＲｘＲｙ−、−ＣＳ−ＮＲｘＲｙ−、ＣＯＲｘ、ＣＳＲｘ、Ｃ（ＮＲｘ）Ｒｘ、−Ｓ（Ｏ）ｐＲｘ−、−ＣＯ２−ＮＲｘＲｙ−、または任意に置換されたアルキルであり、
Ｒ’’は、Ｈまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｘは、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｙは、Ｈ、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロまたはＣＯ２Ｈであり、
各々のｎは、独立して０〜８であり、
各々のｑは、独立して０または１である
で表される化合物を提供する。
【００１７】
別の態様において、本発明は式ＶＩＩ：
【化６】
0005680409.tif 000007
式中、
Ｒ’’は、Ｈまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｘは、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｙは、Ｈ、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
ＡＡ１およびＡＡ２は、各々独立して、天然または非天然アミノ酸であり、
ＸおよびＺは、各々独立してＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、もしくはＣ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、もしくはＣ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、または結合であり、このそれぞれは０〜５個のＲＡで置換されていてもよく、
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｐ−、−ＮＨ−、−ＮＲＢ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＲＢ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲＢ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ２−、−ＮＲＢ−ＣＯ−、−ＮＲＢ−ＣＯ２−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ２−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＲＢ−、−ＣＯ２−ＮＲＢ−または結合であり、
ｐは、０、１または２であり、
【００１８】
ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ＣＯ２Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロ、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアルキルスルフィニル、任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたモノもしくはジアルキルカルボキサミド、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
ＲＢは、各々の出現において、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールである
で表される化合物を提供する。
【００１９】
一態様において、本発明は式ＶＩＩＩ：
【化７】
0005680409.tif 000008
式中、
Ｒ’’は、Ｈまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｘは、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
ＡＡ１およびＡＡ２は、各々独立して、天然または非天然アミノ酸であり、
ＸおよびＺは、各々独立してＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、もしくはＣ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、もしくはＣ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、または結合であり、このそれぞれは０〜５個のＲＡで置換されていてもよく、
Ｙは、各々独立して−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｐ−、−ＮＨ−、−ＮＲＢ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＲＢ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲＢ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ２−、−ＮＲＢ−ＣＯ−、−ＮＲＢ−ＣＯ２−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ２−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＲＢ−、−ＣＯ２−ＮＲＢ−または結合であり、
ｐは、０、１または２であり、
【００２０】
ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ＣＯ２Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロ、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアルキルスルフィニル、任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたモノもしくはジアルキルカルボキサミド、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
ＲＢは、各々の出現において、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールである
で表される化合物を提供する。
【００２１】
別の態様において、本発明は式ＩＸ：
【化８】
0005680409.tif 000009
式中、
Ｍは金属であり、
ＲＬは、金属配位子であり、
Ｒ’は、−ＣＯ−ＮＲｘＲｙ−、−ＣＳ−ＮＲｘＲｙ−、ＣＯＲｘ、ＣＳＲｘ、Ｃ（ＮＲｘ）Ｒｘ、−Ｓ（Ｏ）ｐＲｘ−、−ＣＯ２−ＮＲｘＲｙ−、または任意に置換されたアルキルであり、
Ｒ’’は、Ｈまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｘは、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｙは、Ｈ、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
ＸおよびＺは、各々独立してＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシまたは結合であり、このそれぞれは０〜５個のＲＡで置換されていてもよく、
ＹおよびＷは、各々独立して−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｐ−、−ＮＨ−、−ＮＲＢ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＲＢ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲＢ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ２−、−ＮＲＢ−ＣＯ−、−ＮＲＢ−ＣＯ２−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ２−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＲＢ−、−ＣＯ２−ＮＲＢ−または結合であり、
ｐは、０、１または２であり、
【００２２】
ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ＣＯ２Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロ、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアルキルスルフィニル、任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたモノもしくはジアルキルカルボキサミド、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
ＲＢは、各々の出現において、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
ｒは１〜５である
で表される化合物を提供する。
【００２３】
別の態様において、本発明は式Ｘ：
【化９】
0005680409.tif 000010
で表される化合物を提供する。
【００２４】
一側面において、本発明は、以下の工程：
式ＩＸ：
【化１０】
0005680409.tif 000011
式中、
Ｍは金属であり、
ＲＬは、金属配位子であり、
Ｒ’は、−ＣＯ−ＮＲｘＲｙ−、−ＣＳ−ＮＲｘＲｙ−、ＣＯＲｘ、ＣＳＲｘ、Ｃ（ＮＲｘ）Ｒｘ、−Ｓ（Ｏ）ｐＲｘ−、−ＣＯ２−ＮＲｘＲｙ−、または任意に置換されたアルキルであり、
Ｒ’’は、Ｈまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｘは、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｙは、Ｈ、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
【００２５】
ＸおよびＺは、各々独立してＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシまたは結合であり、このそれぞれは０〜５個のＲＡで置換されていてもよく、
ＹおよびＷは、各々独立して−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｐ−、−ＮＨ−、−ＮＲＢ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＲＢ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲＢ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ２−、−ＮＲＢ−ＣＯ−、−ＮＲＢ−ＣＯ２−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ２−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＲＢ−、−ＣＯ２−ＮＲＢ−または結合であり、
ｐは、０、１または２であり、
【００２６】
ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ＣＯ２Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロ、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアルキルスルフィニル、任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたモノもしくはジアルキルカルボキサミド、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
ＲＢは、各々の出現において、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
ｒは１〜５であり、
ここで、式ＩＸの化合物は少なくとも１つの放射性同位体を含む
で表される放射性標識化合物、または薬学的に許容し得るその塩を提供する工程、
細胞または組織と化合物とを接触させる工程、
化合物を細胞または組織において検出する工程、および
化合物を細胞または組織においてイメージングする工程
を含む、対象におけるイメージングの方法を提供する。
【００２７】
別の側面において、本発明は、前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）の活性を調整する（modulate）化合物を同定するための方法であって、該方法が：
ａ）ＰＳＭＡと、式ＩＸで表される放射性標識化合物とを、ＰＳＭＡの活性の調整に適した条件下で接触させること、および
ｂ）前記化合物によるＰＳＭＡの活性の調整を検出すること（ここで、前記化合物はＰＳＭＡの結合部位と相互作用することができる）
を含む、前記方法を提供する。
別の側面において、本発明は式ＩＩまたは式ＩＸで表される化合物を合成する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】図１は、ＲｅＬ２を用いた、ＰＳＭＡ＋  ＰＣ−３ＰＩＰ細胞およびＰＳＭＡ−ＰＣ−３  ｆｌｕ細胞の蛍光顕微鏡検査を示した図である。
【図２】図２は、ＰＳＭＡの活性部位へのＬ１の結合様式を示した図である（Ａ）。対応する等高線図をＢに示す。
【図３】図３は、担腫瘍マウスの［９９ｍＴｃ］Ｌ１〜Ｌ４（それぞれＡ〜Ｄ）によるＳＰＥＣＴ−ＣＴイメージングを示した図である。ＰＣ−３  ＰＩＰおよびＰＣ−３  ｆｌｕ担腫瘍マウスのデュアルピンホールＳＰＥＣＴ−ＣＴ。マウスに０．５〜１ｍＣｉ（１９〜３７ＭＢｑ）の放射性医薬を静脈内注入した後、４５分の取り込み期間をおいた。各々のケースでＰＳＭＡ−ｆｌｕ腫瘍における取り込みが実質的になかったこと注目されたい。腹部の放射活性は、主に肝臓、脾臓および腎臓内の取り込みによる。Ｂにおける横線は、視界の境界における再構成上のアーティファクトによるものである。ＰＩＰ＝ＰＣ−３  ＰＩＰ、ｆｌｕ＝ＰＣ−３  ｆｌｕ、ＣにおけるＧＢ＝胆嚢、Ｄにおける赤い円は、腎臓の位置を強調する、Ｌ＝左、Ｒ＝右。
【００２９】
【図４】図４は、担腫瘍マウスの［９９ｍＴｃ］Ｌ１および［９９ｍＴｃ］Ｌ３（それぞれＡおよびＢ）によるＳＰＥＣＴ−ＣＴイメージングを示した図である。ＰＣ−３  ＰＩＰおよびＰＣ−３  ｆｌｕ担腫瘍マウスのデュアルピンホールＳＰＥＣＴ−ＣＴ。マウスに０．５〜１ｍＣｉ（１９〜３７ＭＢｑ）の放射性医薬を静脈内注入した後、３．５〜４時間の取り込み期間をおいた。Ａにおいて、腫瘍外に放射性医薬が存在しないことに注目されたい。ただし、腎臓は視界外にある。
【図５】図５は、遮断剤として、強力な選択的ＰＳＭＡ阻害剤、ＰＭＰＡを用いたＰＳＭＡの遮断を伴う（左）または伴わない（右）ＬＮＣａＰ（ＰＳＭＡ＋）担腫瘍マウスの［９９ｍＴｃ］Ｌ１によるＳＰＥＣＴ−ＣＴイメージングを示した図である。ＰＭＰＡによる共処置による腫瘍および腎臓（もう１つのＰＳＭＡ＋部位）の両方におけるの放射性医薬の欠如は、ＰＳＭＡ特異的結合のさらなるチェックを提供する。イメージは、注入後３０〜６０分から取得した。Ｔ＝腫瘍、Ｋ＝腎臓。
【図６】図６は、担腫瘍マウスの［１１１Ｉｎ］−ＤＯＴＡ−Ｌ１によるＳＰＥＣＴ−ＣＴイメージングを示した図である。ＰＣ−３  ＰＩＰおよびＰＣ−３  ｆｌｕ担腫瘍マウスのデュアルピンホールＳＰＥＣＴ−ＣＴ。マウスに０．５ｍＣｉ（１９ＭＢｑ）の放射性医薬を静脈内注入した後、３．５〜４時間の取り込み期間をおいた。
【００３０】
発明の詳細な説明
一側面において、本発明は阻害剤、リンカーおよび金属キレーターを含む化合物を提供する。
一態様において、阻害剤は前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）の阻害剤である。
別の側面において、本発明は式Ｉ：
Ａ−（Ｂ）ｂ−Ｃ              （Ｉ）
式中、Ａは金属キレーターであり、Ｂは、リンカーであり、Ｃは、ＰＳＭＡ阻害剤であり、ｂは１〜５である
で表される化合物を提供する。
【００３１】
特定の態様において、本発明は式ＩＩ
【化１１】
0005680409.tif 000012
式中、
Ｒ’は、−ＣＯ−ＮＲｘＲｙ−、−ＣＳ−ＮＲｘＲｙ−、ＣＯＲｘ、ＣＳＲｘ、Ｃ（ＮＲｘ）Ｒｘ、−Ｓ（Ｏ）ｐＲｘ−、−ＣＯ２−ＮＲｘＲｙ−、または任意に置換されたアルキルであり、
Ｒ’’は、Ｈまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｘは、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｙは、Ｈ、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
ＸおよびＺは、各々独立してＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシまたは結合であり、このそれぞれは０〜５個のＲＡで置換されていてもよく、
ＹおよびＷは、各々独立して−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｐ−、−ＮＨ−、−ＮＲＢ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＲＢ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲＢ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ２−、−ＮＲＢ−ＣＯ−、−ＮＲＢ−ＣＯ２−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ２−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＲＢ−、−ＣＯ２−ＮＲＢ−または結合であり、
ｐは、０、１または２であり、
【００３２】
ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ＣＯ２Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロ、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアルキルスルフィニル、任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたモノもしくはジアルキルカルボキサミド、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
ＲＢは、各々の出現において、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールである
で表される化合物を提供する。
【００３３】
一態様において、ＡＡ１およびＡＡ２は、各々独立して、天然アミノ酸である。さらなる態様において、ＡＡ１およびＡＡ２は、各々独立して、リジン、グルタミン酸、チロシンまたはシステインである。
別の態様において、Ｒ’は、−ＣＯ−ＮＲｘＲｙ−、−ＣＳ−ＮＲｘＲｙ−、ＣＯＲｘ、ＣＳＲｘ、または任意に置換されたアルキルである。
さらに別の態様において、Ｘは、０〜５個のＲＡで置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシまたは結合であり、ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、またはＣＯ２Ｈである。
特定の態様において、Ｚは、０〜５個のＲＡで置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシまたは結合であり、ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、またはＣＯ２Ｈである。
さらに別の態様において、Ｙは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＮＲＢ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ２−、−ＮＲＢ−ＣＯ−、−ＮＲＢ−ＣＯ２−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ２−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＲＢ−、または−ＣＯ２−ＮＲＢ−である。さらなる態様において、Ｙは、−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−または−ＮＲＢ−ＣＯ−である。
【００３４】
他の態様において、本発明は式ＩＩＩ：
【化１２】
0005680409.tif 000013
式中、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、任意に置換されたアリール、任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換されたヘテロシクロ、−ＣＯＯＨ、ヒドロキシル、任意に置換されたアルコキシ、アミノ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、チオール、および任意に置換されたアルキルチオールから選択され、
ＡＡ１およびＡＡ２は、各々独立して、天然または非天然アミノ酸であり、
ＸおよびＺは、各々独立してＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシまたは結合であり、このそれぞれは０〜５個のＲＡで置換されていてもよく、
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｐ−、−ＮＨ−、−ＮＲＢ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＲＢ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲＢ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ２−、−ＮＲＢ−ＣＯ−、−ＮＲＢ−ＣＯ２−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ２−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＲＢ−、−ＣＯ２−ＮＲＢ−または結合であり、
ｐは、０、１または２であり、
【００３５】
ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ＣＯ２Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロ、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアルキルスルフィニル、任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたモノもしくはジアルキルカルボキサミド、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
ＲＢは、各々の出現において、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールである
で表される化合物を提供する。
【００３６】
さらなる態様において、ＡＡ１およびＡＡ２は、各々独立して、天然アミノ酸である。さらに別の態様において、ＡＡ１およびＡＡ２は、各々独立して、リジン、グルタミン酸、チロシンまたはシステインである。
特定の態様において、Ｒ１は、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリジジニル、キノリニル、チエニル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピロリル、フラニル、イソキノリニル、イミダゾリルまたはトリアゾリルであり、そのそれぞれは、任意にＲＣで単置換、二置換もしくは三置換されており、またはＲ１は、−ＣＯＯＨ、ヒドロキシル、アルコキシ、アミノ、モノもしくはジアルキルアミノであり、ＲＣは、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ＣＯ２Ｈ、アルキル、アルコキシ、モノもしくはジアルキルアミノ、アリール、またはヘテロアリールである。
【００３７】
別の態様において、Ｒ２は、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリジジニル、キノリニル、チエニル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピロリル、フラニル、イソキノリニル、またはトリアゾリルであり、そのそれぞれは、任意にＲＣで単置換、二置換もしくは三置換されており、またはＲ２は、−ＣＯＯＨ、ヒドロキシル、アルコキシ、アミノ、モノもしくはジアルキルアミノであり、ＲＣは、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ＣＯ２Ｈ、アルキル、アルコキシ、モノもしくはジアルキルアミノ、アリール、またはヘテロアリールである。
一態様において、Ｘは、０〜５個のＲＡで置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシまたは結合であり、ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、またはＣＯ２Ｈである。
別の態様において、Ｚは、０〜５個のＲＡで置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシまたは結合であり、ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、またはＣＯ２Ｈである。
さらに別の態様において、Ｙは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＮＲＢ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ２−、−ＮＲＢ−ＣＯ−、−ＮＲＢ−ＣＯ２−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ２−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＲＢ−、または−ＣＯ２−ＮＲＢ−であり、特定の場合において、Ｙは、−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−または−ＮＲＢ−ＣＯ−である。
【００３８】
特定の態様において、本発明は式ＩＶ：
【化１３】
0005680409.tif 000014
式中、
ＡＡ１およびＡＡ２は、各々独立して天然アミノ酸であり、
Ｒ１は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリジジニル、キノリニル、チエニル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピロリル、フラニル、イソキノリニル、イミダゾリルまたはトリアゾリルであり、
Ｒ２は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリジジニル、キノリニル、チエニル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピロリル、フラニル、イソキノリニル、またはトリアゾリル、−ＣＯＯＨ、ヒドロキシル、アルコキシ、アミノ、モノもしくはジアルキルアミノであり、
【００３９】
ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロまたはＣＯ２Ｈであり、
ｍは、０または１であり、
各々のｎは、独立して１〜８であり、
各々のｑは、独立して０または１である
で表される化合物を提供する。
一態様において、ＡＡ１はリジンであり、ＡＡ２はグルタミン酸またはチロシンである。さらなる態様において、ＡＡ１はリジンであり、ＡＡ２はシステインまたはチロシンである。
特定の態様において、各々のｎは、独立して５〜７である。他の態様において、ｍは１である。
【００４０】
一態様において、本発明は式Ｖ：
【化１４】
0005680409.tif 000015
式中、
各々のＲＤは、独立して、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたアリール、任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換されたヘテロシクロ、または任意に置換されたアラルキルであり、
各々のＲＥは、独立して、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたアリール、任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換されたヘテロシクロ、または任意に置換されたアラルキルであり、
Ｒ１は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリジジニル、イソキノリニル、イミダゾリル、またはキノリニルであり、
【００４１】
Ｒ２は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリジジニル、イソキノリニル、キノリニル、−ＣＯＯＨ、ヒドロキシル、アルコキシ、アミノ、モノもしくはジアルキルアミノであり、
ＲＡは、各々の出現において、ヒドロキシ、アミノ、またはＣＯ２Ｈであり、
各々のｍは、独立して０または１であり、
各々のｎは、独立して１〜８である
で表される化合物を提供する。
特定の態様において、Ｒ１は、ピリジル、イソキノリニル、イミダゾリル、またはキノリニルである。他の態様において、Ｒ２は、ピリジル、イソキノリニル、キノリニル、または−ＣＯＯＨである。
さらに別の態様において、各々のｎは、独立して５〜７である。さらに別の態様において、ｍは１である。
【００４２】
特定の態様において、本発明は以下から選択される化合物を提供する：
【化１５】
0005680409.tif 000016
【００４３】
別の態様において、本発明は式ＶＩ：
【化１６】
0005680409.tif 000017
式中
ＡＡ１およびＡＡ２は、各々独立して天然アミノ酸であり、
Ｒ’は、−ＣＯ−ＮＲｘＲｙ−、−ＣＳ−ＮＲｘＲｙ−、ＣＯＲｘ、ＣＳＲｘ、Ｃ（ＮＲｘ）Ｒｘ、−Ｓ（Ｏ）ｐＲｘ−、−ＣＯ２−ＮＲｘＲｙ−、または任意に置換されたアルキルであり、
Ｒ’’は、Ｈまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｘは、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｙは、Ｈ、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロまたはＣＯ２Ｈであり、
各々のｎは、独立して０〜８であり、
各々のｑは、独立して０または１である
で表される化合物を提供する。
【００４４】
別の態様において、本発明は式ＶＩＩ：
【化１７】
0005680409.tif 000018
式中、
Ｒ’’は、Ｈまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｘは、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｙは、Ｈ、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
ＡＡ１およびＡＡ２は、各々独立して、天然または非天然アミノ酸であり、
ＸおよびＺは、各々独立してＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、もしくはＣ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、もしくはＣ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、または結合であり、このそれぞれは０〜５個のＲＡで置換されていてもよく、
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｐ−、−ＮＨ−、−ＮＲＢ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＲＢ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲＢ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ２−、−ＮＲＢ−ＣＯ−、−ＮＲＢ−ＣＯ２−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ２−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＲＢ−、−ＣＯ２−ＮＲＢ−または結合であり、
ｐは、０、１または２であり、
【００４５】
ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ＣＯ２Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロ、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアルキルスルフィニル、任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたモノもしくはジアルキルカルボキサミド、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
ＲＢは、各々の出現において、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールである
で表される化合物を提供する。
【００４６】
特定の態様において、Ｒ’’およびＲｙはＨである。
他の態様において、Ｒｘは任意に置換されたアリールである。
別の態様において、アリールは、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロ、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアルキルスルフィニル、任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたモノもしくはジアルキルカルボキサミド、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換されたアルキル−ヘテロシクロ、または任意に置換されたアルキル−ヘテロアリールで置換されている。
さらなる態様において、アリールは任意に置換されたアルキル−ヘテロシクロまたは任意に置換されたアルキル−ヘテロアリールで置換されている。
【００４７】
さらに別の態様において、アリールは
【化１８】
0005680409.tif 000019
で置換されている。
【００４８】
一態様において、本発明は式ＶＩＩＩ：
【化１９】
0005680409.tif 000020
式中、
Ｒ’’は、Ｈまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｘは、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
ＡＡ１およびＡＡ２は、各々独立して、天然または非天然アミノ酸であり、
ＸおよびＺは、各々独立してＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、もしくはＣ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、もしくはＣ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、または結合であり、このそれぞれは０〜５個のＲＡで置換されていてもよく、
Ｙは、各々独立して−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｐ−、−ＮＨ−、−ＮＲＢ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＲＢ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲＢ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ２−、−ＮＲＢ−ＣＯ−、−ＮＲＢ−ＣＯ２−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ２−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＲＢ−、−ＣＯ２−ＮＲＢ−または結合であり、
ｐは、０、１または２であり、
【００４９】
ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ＣＯ２Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロ、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアルキルスルフィニル、任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたモノもしくはジアルキルカルボキサミド、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
ＲＢは、各々の出現において、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールである
で表される化合物を提供する。
【００５０】
一態様において、Ｒ’’はＨである。
別の態様において、Ｒｘは任意に置換されたアルキルである。さらなる態様において、アルキルは、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロ、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアルキルスルフィニル、任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたモノもしくはジアルキルカルボキサミド、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換されたアルキル−ヘテロシクロ、または任意に置換されたアルキル−ヘテロアリールで置換されている。さらなる態様において、アルキルは、任意に置換されたヘテロシクロまたは任意に置換されたヘテロアリールで置換されている。
【００５１】
特定の態様において、アルキルは
【化２０】
0005680409.tif 000021
で置換されている。
【００５２】
特定の態様において、本発明は以下の化合物を提供する：
【化２１】
0005680409.tif 000022
【００５３】
別の態様において、本発明は金属をさらに含む化合物を提供する。
別の態様において、本発明は式ＩＸ：
【化２２】
0005680409.tif 000023
式中、
Ｍは金属であり、
ＲＬは、金属配位子であり、
Ｒ’は、−ＣＯ−ＮＲｘＲｙ−、−ＣＳ−ＮＲｘＲｙ−、ＣＯＲｘ、ＣＳＲｘ、Ｃ（ＮＲｘ）Ｒｘ、−Ｓ（Ｏ）ｐＲｘ−、−ＣＯ２−ＮＲｘＲｙ−、または任意に置換されたアルキルであり、
Ｒ’’は、Ｈまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｘは、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｙは、Ｈ、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
ＸおよびＺは、各々独立してＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシまたは結合であり、このそれぞれは０〜５個のＲＡで置換されていてもよく、
ＹおよびＷは、各々独立して−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｐ−、−ＮＨ−、−ＮＲＢ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＲＢ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲＢ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ２−、−ＮＲＢ−ＣＯ−、−ＮＲＢ−ＣＯ２−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ２−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＲＢ−、−ＣＯ２−ＮＲＢ−または結合であり、
ｐは、０、１または２であり、
【００５４】
ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ＣＯ２Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロ、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアルキルスルフィニル、任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたモノもしくはジアルキルカルボキサミド、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
ＲＢは、各々の出現において、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
ｒは１〜５である
で表される化合物を提供する。
【００５５】
特定の態様において、Ｍは、Ｔｃ、Ｒｅ、Ｇａ、Ｃｕ、Ｙ、Ａｃ、ＢｉまたはＩｎである。さらなる態様において、金属は放射性同位体である。さらに別の態様において、ＭはＴｃ−９９ｍ、Ｒｅ−１８８、Ｒｅ−１８６、Ｇａ−６８、Ｃｕ−６４、Ｙ−９０、Ｙ−８６、Ａｃ−２２５、Ｂｉ−２１３、Ｉｎ−１１１、Ｔｃ−９４ｍ、Ｓｍ−１５３、Ｈｏ−１６６、Ｌｕ−１７７、Ｃｕ−６７、またはＤｙ−１６６である。
別の態様において、Ｒ’はＣＯである。
さらに別の態様において、ｒは１〜３である。
別の態様において、本発明は式Ｘ：
【化２３】
0005680409.tif 000024
で表される化合物を提供する。
【００５６】
一側面において、本発明は、以下の工程：
式ＩＸ：
【化２４】
0005680409.tif 000025
式中、
Ｍは金属であり、
ＲＬは、金属配位子であり、
Ｒ’は、−ＣＯ−ＮＲｘＲｙ−、−ＣＳ−ＮＲｘＲｙ−、ＣＯＲｘ、ＣＳＲｘ、Ｃ（ＮＲｘ）Ｒｘ、−Ｓ（Ｏ）ｐＲｘ−、−ＣＯ２−ＮＲｘＲｙ−、または任意に置換されたアルキルであり、
Ｒ’’は、Ｈまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｘは、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒｙは、Ｈ、任意に置換されたアリールまたは任意に置換されたアルキルであり、
【００５７】
ＸおよびＺは、各々独立してＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシまたは結合であり、このそれぞれは０〜５個のＲＡで置換されていてもよく、
ＹおよびＷは、各々独立して−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｐ−、−ＮＨ−、−ＮＲＢ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＲＢ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲＢ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ２−、−ＮＲＢ−ＣＯ−、−ＮＲＢ−ＣＯ２−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ２−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＲＢ−、−ＣＯ２−ＮＲＢ−または結合であり、
ｐは、０、１または２であり、
【００５８】
ＲＡは、各々の出現において、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ＣＯ２Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロ、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアルキルスルフィニル、任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたモノもしくはジアルキルカルボキサミド、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
ＲＢは、各々の出現において、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたモノもしくはジアルキルアミノ、任意に置換されたアルキルチオ、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり、
ｒは１〜５であり、
ここで、式ＩＸの化合物は少なくとも１つの放射性同位体を含む
で表される放射性標識化合物、または薬学的に許容し得るその塩を提供する工程、
細胞または組織と化合物とを接触させる工程、
化合物を細胞または組織において検出する工程、および
化合物を細胞または組織においてイメージングする工程
を含む、対象におけるイメージングの方法を提供する。
【００５９】
一態様において、本発明は、金属がＴｃ−９９ｍ、Ｒｅ−１８８、Ｒｅ−１８６、Ｇａ−６８、Ｃｕ−６４、Ｙ−９０、Ｙ−８６、Ａｃ−２２５、Ｂｉ−２１３、Ｉｎ−１１１、Ｔｃ−９４ｍ、Ｓｍ−１５３、Ｈｏ−１６６、Ｌｕ−１７７、Ｃｕ−６７、またはＤｙ−１６６である方法を提供する。
別の態様において、イメージング方法は、ＰＳＭＡ阻害剤をイメージングすることに適している。
さらに別の態様において、イメージング方法は、がん、腫瘍または新生物のイメージングに適している。さらなる態様において、がんは、眼または眼球のがん、直腸がん、大腸がん、子宮頸がん、前立腺がん、乳がんおよび膀胱がん、口腔がん、良性腫瘍および悪性腫瘍、胃がん、肝がん、膵臓がん、肺がん、子宮体がん、卵巣がん、前立腺がん、精巣がん、腎がん、脳／ＣＮＳがん（例えば神経膠腫）、喉頭がん、皮膚黒色腫、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、ユーイング肉腫、カポジ肉腫、基底細胞癌および扁平上皮細胞癌、小細胞肺がん、絨毛癌、横紋筋肉腫、血管肉腫、血管内皮腫、ウィルムス腫瘍、神経芽細胞腫、口腔／咽頭がん、食道がん、喉頭がん、リンパ腫、神経線維腫症、結節硬化症、血管腫、およびリンパ管形成から選択される。
【００６０】
特定の態様において、放射性標識化合物は、in vivoで安定している。
他の態様において、放射性標識化合物は、ポジトロンエミッショントモグラフィ（ＰＥＴ）またはシングルフォトンエミッションコンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）によって検出される。
一態様において、本発明は、対象が、ヒト、ラット、マウス、ネコ、イヌ、ウマ、ヒツジ、ウシ、サル、鳥類または両生類である方法を提供する。
別の態様において、細胞は、in vivoまたはin vitroである。
【００６１】
別の側面において、本発明は、前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）の活性を調整する化合物を同定するための方法であって、該方法が：
ａ）ＰＳＭＡと、式ＩＸで表される放射性標識化合物とを、ＰＳＭＡの活性の調整に適した条件下で接触させること、および
ｂ）前記化合物によるＰＳＭＡの活性の調整を検出すること（ここで、前記化合物はＰＳＭＡの結合部位と相互作用することができる）
を含む、前記方法を提供する。
一態様において、調整は阻害である。
別の態様において、結合部位は、二核の亜鉛イオン(binuclear zinc ion)および２つの基質結合ポケットを含む。
さらに別の態様において、ＰＳＭＡの活性の調整は、脱アセチル化活性アッセイによって検出される。
特定の態様において、ＰＳＭＡ阻害剤は、約０．１〜約２００ｎＭの範囲のＩＣ５０値を有する。さらなる態様において、ＰＳＭＡ阻害剤は、約０．５〜約１１８ｎＭの範囲のＩＣ５０値を有する。
【００６２】
別の側面において、本発明は式ＩＩまたは式ＩＸで表される化合物を合成する方法を提供する。
特定の場合において、本発明の化合物のアミノ酸部分は、本発明の化合物のリンカー部分に連結している。特定の場合において、アミノ酸（ＡＡ）は、官能基ＺまたはＷに連結している。一態様において、アミノ酸は、結合によってＺまたはＷに連結している。特定の態様において、アミノ酸は、二価のアルキル基（アルキレン）、アルケン、アルキン、エーテル、チオエーテル、アミン、単置換アミン、カルボニル、エステル、アミド、尿素、カルバメート、および炭酸塩から選択される官能基によって、ＺまたはＷに連結している。
【００６３】
特定の態様において、本発明の化合物は、少なくとも１つの放射性同位体を含む。
本発明の特定の好ましい化合物は、少なくとも１つの放射性同位体、またはより好ましくは、１つまたは２つ以上の陽電子放出放射性同位体を含む。特定の態様において、本発明は、放射線治療への使用に適した１または２以上の放射性同位体を含む化合物を提供する。特定の態様において、本発明の化合物は、Ｔｃ−９９ｍ、Ｔｃ−９４ｍ、Ｒｅ−１８６、Ｒｅ−１８８、Ｇａ−６８、Ｃｕ−６４、Ｃｕ−６７、Ｙ−９０、Ｙ−８６、Ａｃ−２２５、Ｂｉ−２１３、Ｉｎ−１１１、Ｓｍ−１５３、Ｈｏ−１６６、Ｌｕ−１７７、およびＤｙ−１６６を包含する、テクネチウム、レニウム、ガリウム、インジウム、銅、イットリウム、アクチニウム、ビスマス、サマリウム、ジスプロシウム、ホルミウム、またはルテチウムの少なくとも１つの放射性同位体を含む。
【００６４】
本発明の種々の化合物、特に本発明により提供されるイメージング方法での使用に適した化合物は、任意の標準的な放射線装置、例えば、ＰＥＴ、ＳＰＥＣＴ、ガンマカメラ、ＭＲＩなどによる検出に適した１種または２種以上の形態の放射線を放出することができる、１種または２種以上の放射性同位体を含む。
本発明により提供される好ましいイメージング方法は、少なくとも２：１の標的対バックグラウンド比の放射線強度、またはより好ましくは、約５：１、約１０：１もしくは約１５：１の、標的とバックグラウンドとの間の放射線強度比をもたらすことができる本発明の化合物の使用を含む。
【００６５】
本発明の好ましい方法において、本発明の化合物は、患者に投与される放射性標識化合物の放射線への長期の暴露を防ぐために、体の組織から迅速に排出される。典型的には、本発明の化合物は、約２４時間未満で体から除去される。より好ましくは、本発明の化合物は、約１６時間未満、約１２時間未満、約８時間未満、約６時間未満、約４時間未満、約２時間未満、約９０分未満または約６０分未満で体から除去される。典型的に好ましい化合物は、約６０分〜約１２０分で除去される。
本発明の好ましい化合物はin vivoで安定しており、注入された化合物の実質的に全て、例えばその約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、またはより好ましくは約９０％超が、排出の前に体によって代謝されない。
【００６６】
本発明の化合物を投与し得る典型的な対象は、哺乳動物、特に霊長類、とりわけヒトである。獣医用途のためには、多種多様な対象、例えば、家畜、例えばウシ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ブタなど、家禽、例えばニワトリ、カモ、ガチョウ、シチメンチョウなど、および、飼い慣らされた動物、特にペット、例えばイヌおよびネコが適している。診断または研究用途のためには、多種多様な哺乳動物が適した対象であり、これは、齧歯動物（例えばマウス、ラット、ハムスター）、ウサギ、霊長類、およびブタ、例えば、近交系豚を含む。さらに、in vitro用途、例えばin vitro診断および研究用途については、上記対象の体液および細胞サンプルが適しており、これは例えば、哺乳動物、特に霊長類、例えばヒトなどの血液、尿または組織サンプル、または獣医用途のために言及した動物の血液、尿または組織サンプルなどである。
【００６７】
本発明はまた、薬学的に許容し得る担体と、本発明の化合物とを含む包装された医薬組成物を提供する。特定の態様において、包装された医薬組成物は、放射性標識前駆体と組み合わせたときに本発明の化合物を生成するのに必要な反応前駆体を含む。
特定の好ましい態様において、本発明は、約１〜約３０ｍＣｉの上述の放射性核種で標識されたイメージング剤と、薬学的に許容し得る担体とを組み合わせて含む、本発明によるキットを提供する。イメージング剤および担体は、溶液または凍結乾燥形態で提供されてもよい。キットのイメージング剤および担体が凍結乾燥形態である場合、キットは、無菌の生理的に許容し得る再構成媒体、例えば、水、食塩水、緩衝食塩水などを任意に含んでもよい。
キットは、本発明の化合物を溶液または凍結乾燥形態で提供してもよく、本発明のキットのこれらの構成要素は、安定剤、例えば、ＮａＣｌ、ケイ酸塩、リン酸バッファー、アスコルビン酸、ゲンチジン酸などを任意に含んでもよい。この態様において、キットの構成要素のさらなる安定化が提供されてもよく、これは、例えば、還元剤を耐酸化形態で提供することなどによる。
【００６８】
かかる安定剤および安定化方法の決定および最適化は、十分に当業者のレベルの範囲内である。この態様のターゲティング分子／キレート剤が凍結乾燥形態である場合、キットは、無菌の生理的に許容し得る再構成媒体、例えば、水、食塩水、緩衝食塩水などを任意に含んでもよい。この態様の非標識ターゲティング分子／キレート剤、補助分子、および還元剤の量は、上記の心血管イメージング剤を製造するための方法に従って最適化される。市販の９９Ｍｏ／９９ｍＴｃ発生器から得た９９ｍＴｃを含むがこれに限されない放射性核種は、非標識ターゲティング分子／キレート剤および還元剤と、放射性核種をターゲティング分子／キレート剤にキレート化するのに十分な時間および温度で混合することができ、このようにして形成したイメージング剤を患者に注入する。
【００６９】
本発明のイメージング剤は、当業者が本発明の方法に従って用いることができる。イメージは、ＰＳＭＡと接触させたときに、部位に集積するイメージング剤の空間分布の違いに基づいて生成することができる。空間分布は、特定の標識に適した任意の手段、例えばガンマカメラ、ＰＥＴ装置、ＳＰＥＣＴ装置などを用いて測定することができる。イメージング剤の集積の程度は、放射性放出を定量化する既知の方法を用いて定量することができる。特に有用なイメージング手法は、同時調査を行なうために、２種以上のイメージング剤を利用する。
【００７０】
好ましくは、検出可能な有効量の本発明のイメージング剤が対象に投与される。本発明において、本発明のイメージング剤の「検出可能な有効量」は、臨床用途に利用できる機材を用いて許容できるイメージをもたらすのに十分な量として定義される。本発明のイメージング剤の検出可能な有効量は、２回以上の注入により投与することができる。本発明のイメージング剤の検出可能な有効量は、個体の感受性の程度、個体の年齢、性別、および体重、個体の特異体質反応、線量測定などの要因によって異なり得る。本発明のイメージング剤の検出可能な有効量はまた、機器およびフィルムに関連する要因によっても異なり得る。かかる要因の最適化は、十分に当業者のレベルの範囲内である。
診断目的で用いるイメージング剤の量およびイメージング調査の継続期間は、剤を標識するのに用いる放射性核種、患者の体重、処置する状態の性質および重篤度、患者が受けた治療処置の性質、患者の特異体質反応に依存する。最終的には、主治医が個々の患者に投与するイメージング剤の量およびイメージング調査の継続期間を決定する。
【００７１】
ＰＳＭＡ結合阻害剤の構造に基づく設計
ＰＳＭＡの結合部位は、二核の亜鉛イオンおよび２つの基質結合ポケット、すなわちＳ１（非ファーマコフォア）ポケットおよびＳ１’（ファーマコフォア）ポケットを含む。活性部位はまた、Ｓ１ポケットにおける塩化物イオンを含む。Ｓ１ポケットの近くに、深さ約２０Å、幅８〜９Åの漏斗形のトンネルが存在する。同様に、Ｓ１’ポケットの近くに狭い空洞が存在する。さらに、阻害剤のグルタミン酸部分が狭いＳ１’ポケットの内部に向かう傾向を有し、一方分子の残りは大きなＳ１ポケットの中に存することが確認された。これらの所見は、尿素系列、すなわち、ＤＣＭＣ、ＤＣＩＴおよびＤＣＦＢＣの化合物との共結晶化におけるＰＳＭＡのＸ線結晶構造に類似している。グルタミン酸を含む、尿素ベースの阻害剤と、［Ｒｅ（Ｉ）（ＣＯ）３］＋／［９９ｍＴｃ（Ｉ）（ＣＯ）３］＋の既知のキレーターとの結合体（conjugate）の合成が望まれた。これらの新規結合体の設計において、ＰＳＭＡと嵩高いキレーターとの間の相互作用を最適化することが重要であった。報告されたＸ線結晶構造から決定された、レニウムトリカルボニルおよびテクネチウムトリカルボニルのピリジルベースのキレートによる配位圏の直径が〜９Åであることを考慮すると、ビスピリジルによる金属トリカルボニルコアの平均計算体積（volume）は〜３７８Åであることが明らかとなった。想定されるイメージング剤のＰＳＭＡとの高親和性結合を可能にするために、メチレンリンカー（＞２０Å）を、尿素官能基のα炭素から、分子の残りに結合した。これにより、各々異なるリンカー長を有する３組の化合物を合成した：〜３１．５Åのリンカーを有するＬ１〜Ｌ３、〜３３Åのリンカー長を有するＬ４およびＬ７、および、それぞれ〜２２Åおよび７．７Åのリンカー長を有するＬ５およびＬ６。
【００７２】
尿素結合キレーターの合成
リジンを含有する一連のＰＳＭＡ阻害剤を、リジンのフリーのεアミンを好適な金属キレート基との連結または誘導体化に利用するために開発した。化合物１（スキーム１）は、記載された全ての想定されるイメージング剤の合成に不可欠な、キーとなる中間体である。保護されたリジンアナログ２は、２工程で調製した。市販のＮε−Ｂｏｃ−Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ｌ−リジンを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の炭酸セシウムおよび４−メトキシベンジルクロリドと反応させ、次いでＤＭＦ中の２０％ピペリジンを用いてＦｍｏｃ基を除去した。フラッシュクロマトグラフィーにより、所望の化合物２を８０％の収率で得た。尿素３は、ビス−４−メトキシベンジル−Ｌ−グルタミン酸ＨＣｌ４を、トリホスゲンおよびトリエチルアミンで−７８℃にて処理し、次いで、２の添加によるイソシアネート中間体のin situトラッピングを行なうことによって得た。３のＮ−Ｂｏｃ基の、エタノール／酢酸エチル中のｐ−トルエンスルホン酸による選択的な切断により５を生じた。ＣＨ２Ｃｌ２中の５の溶液の塩基性抽出（basic extraction）により、遊離塩基１を得た。ｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）基は、必要な結合を行なった後、最終工程において、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／アニソールまたはＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２溶液を用いて、室温で簡便に除去した。
【００７３】
【化２５】
0005680409.tif 000026
【００７４】
キレーターの合成と中間体１とのその結合をスキーム２〜６に示す。化合物１を用いて種々のリンカーおよび金属キレーターを結合し、｛９９ｍＴｃ（ＣＯ）３｝＋／｛Ｒｅ（ＣＯ）３｝＋の配位のための新規な一連のＰＳＭＡ阻害剤、Ｌ１−Ｌ７を生成した。スキーム２に示す重要なＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル中間体６は、ＤＭＦ中の過剰なスベリン酸ジスクシンイミジル（ＤＳＳ）の１との結合により調製した。その後、化合物６を、３種の異なるビスピリジルキレーター７、９および１３、ビスキノリンキレーター８、およびモノピリジル一酸キレーター（monopyridyl monoacid chelator）１１と反応させ、Ｌ１〜Ｌ４およびＬ７を調製した。キレーター７、８、９および１３は、公開された手順に従って調製した（例参照）。
【００７５】
【化２６】
0005680409.tif 000027
【００７６】
モノピリジル一酸キレーターの合成は、前述の手順の変法（スキーム３）により行なった。化合物１０は、既に報告された方法に従って調製した（例参照）。ジクロロエタン中のトリアセトキシボロヒドリドナトリウムの存在下で、グリオキシル酸を用いて１０を還元アミノ化し、次いで、室温でトリフルオロ酢酸／ＣＨ２Ｃｌ２の溶液を用いて保護基を除去することにより、１１を生じた。
【化２７】
0005680409.tif 000028
【００７７】
Ｌ５の合成を、スキーム４に概説する。化合物１２は、市販の８−アミノカプロン酸の、ピリジン−２−カルボキシアルデヒドおよびトリアセトキシボロヒドリドナトリウムによる還元アミノ化と、その後のＯ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）の存在下でのＮ−ヒドロキシスクシンイミドによるＮＨＳエステル形成により調製した。化合物Ｌ５は、１２を、ＣＨ２Ｃｌ２およびトリエチルアミン中の５と反応させ、その後、ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２を用いてＰＭＢ基を脱保護することにより得た。化合物Ｌ６は、ピリジン−２−カルボキシアルデヒドおよびトリアセトキシボロヒドリドナトリウムを用いて１を還元アミノ化し、次いで、ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２を用いてＰＭＢ基を脱保護することにより調製した（スキーム５）。
【００７８】
【化２８】
0005680409.tif 000029
【００７９】
【化２９】
0005680409.tif 000030
【００８０】
レニウムアナログ（ＲｅＬ１〜ＲｅＬ７）の合成
化合物［Ｒｅ（ＣＯ）３Ｌ］＋／０（Ｌ＝Ｌ１〜Ｌ７）の合成は、Ｌ１についてスキーム６に示すとおり、レニウムトリカルボニル前駆体、［Ｒｅ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３］Ｂｒ３７を用いた配位子交換反応によって行なった。等モル量の配位子（Ｌ１〜Ｌ７）および前駆体をアルゴン下で３時間還流し、各々のケースにおいて対応するレニウム錯体を定量的収率で得た。錯体化は、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によりモニターした。全ての錯体はＨＰＬＣにより精製し、標準的な分光学的方法によって特性化した。
【化３０】
0005680409.tif 000031
【００８１】
ＤＯＴＡアナログの合成
全てのＤＯＴＡ−Ｌ化合物は、スキーム７で示す同じ一般的手順を用いて調製した。鎖延長剤を、出発材料基質の撹拌溶液に添加した。新たに形成された基質の種々の基を脱保護し、これを次にＤＯＴＡ剤による反応に供した。次いで、ＤＯＴＡ化合物を放射性金属で標識し、所望の化合物を提供した（スキーム７）。
【００８２】
【化３１】
0005680409.tif 000032
【００８３】
ＰＳＭＡの活性部位におけるＬ１のモデリング
Ｌ１とＰＳＭＡとの分子モデル研究のために、最近公開された（Ｓ）−２（４−ヨードベンジルホスホノメチル）−ペンタン二酸（ＧＰＩ−１８４３１）と複合したＰＳＭＡの結晶構造（ＰＤＢ  ＩＤ：２Ｃ６Ｃ）を用いた（Mesters, J. R.; et al. Embo J 2006, 25, 1375-1384）。まず最初に、Ｌ１の２Ｃ６Ｃの結合部位とのドッキング研究を、Discovery Studio 1.7（DS 1.7, Accelrys Inc.）で実行されるLigandFitおよびCHARMm-based CDOCKERプロトコルを用いて行なった。しかしながら、これらのいずれも、Ｌ１の嵩高さのために、活性部位にドッキングした姿勢（docked pose）をもたらさなかった。このため、Ｌ１の可能な結合様式を明らかにするために、代替的な手法を利用した。ＧＰＩ−１８４３１、２−（ホスホノメチル）ペンタン二酸（２−ＰＭＰＡ）およびグルタミン酸を含む複数のリガンドとのＰＳＭＡの結晶構造は、Ｓ１’ポケットの中のこれらの化合物のグルタミン酸部分が実質的に重なることを示した。これは、グルタミン酸部分の向きが、同時にＳ１−ポケット内にある種々の構造モチーフにもかかわらず不変であることを示唆している。Ｌ１のグルタミン酸部分が、既知のＰＳＭＡ阻害剤（例えばＧＰＩ−１８４３１および２−ＰＭＰＡ）と類似の様式でＳ１’ポケットに向くと予想されていたため、それは意外なことでなかった。特に、アルギニン２１０と相互作用するグルタミン酸のαカルボン酸は、ＰＳＭＡの結合にとって不可欠であることが知られている（Mlcochova, P.; et al. Febs J 2007, 274, 4731-4741）。Ｌ１を、グルタミン酸の４つのテザー結合点（tether attachment point）を用いてＧＰＩ−１８４３１と重ね合わせた。重ね合わせたＬ１の座標を、リガンドＧＰＩ−１８４３１を取り除いた２Ｃ６Ｃのアポ形態に移し、統合した。
【００８４】
統合したＰＳＭＡ／Ｌ１錯体の分子動力学シミュレーションを、Generalized Born with a simple Switching（ＧＢＳＷ）により、陰溶媒モデルとして行なった。Ｌ１の７Å以内のアミノ酸残基を柔軟なままとし、一方、他の全てのアミノ酸を拘束した。分子動力学シミュレーションの後で、Ｌ１のリジン部分の中のカルボン酸の位置は劇的に変化し、２つのアルギニン（Ａｒｇ５３４およびＡｒｇ５３６、図１Ａ）と強く相互作用したが、グルタミン酸の２つのカルボン酸はわずかに変化したにすぎなかった。最初のＬ１の線形リンカーは、ＰＳＭＡのトンネル領域との相互作用を最大化するために溝にはまっており（grooved）、すなわち、最初のＬ１の柔軟な線形リンカーはコンパクトなコンフォメーションを取っており、そうして、分子動力学シミュレーションの後で、Ｌ１の、ＰＳＭＡのトンネル領域との相互作用を強化した（図１Ｂ）。このＰＳＭＡ／Ｌ１モデルからグルタミン酸のαカルボン酸は、Ａｒｇ２１０、Ｔｙｒ５５２およびＴｙｒ７００で水素結合相互作用を示し、γカルボン酸はＡｓｎ２５７およびＬｙｓ６９９と同様に相互作用した。さらに、尿素の２つのＮＨ基は、Ｇｌｙ５１８との相互作用に貢献する。
【００８５】
放射化学
［９９ｍＴｃ（ＣＯ）３（ＯＨ２）３］＋による放射性標識は、市販のIsolinkキットを用い、１０−５Ｍ〜１０−６Ｍの配位子濃度で、９５℃での３０分のインキュベーション時間で行なった。付加物は、高い放射化学収率（＞７０％）および純度（＞９８％）で得られた。［９９ｍＴｃ（ＣＯ）３Ｌ］＋／０（ＴｃＬ１〜ＴｃＬ７）錯体の形成は、遊離配位子および［９９ｍＴｃ（ＣＯ）３（ＯＨ２）３］＋と比較して、ＨＰＬＣ保持時間の顕著なシフト（より長い方への）をもたらし、放射性トレーサーの明確な分離が可能であった。
【００８６】
ＲｅＬ２の電子物性
ビスキノリン配位子Ｌ２により、等構造の蛍光｛Ｒｅ（ＣＯ）３｝＋コア錯体、および放射性｛９９ｍＴｃ（ＣＯ）３｝＋コア錯体の調製が可能となる。このため、レニウムベースの錯体が生物学的プローブとして用いるために適した特徴を備えているかを決定するために、ＲｅＬ２の蛍光特性を調査した（Stephenson, K. A.; et al. J Am Chem Soc 2004, 126, 8598-8599、James, S.; et al. Bioconjug Chem 2006, 17, 590-596）。ＲｅＬ２の電子スペクトルは、３２１ｎｍで吸光し、１７，２００Ｍ−１の吸光係数を示した。ＲｅＬ２の３２１ｎｍでの励起は、５５０ｎｍでの強い蛍光放出をもたらす。大きなストークスシフトは、このクラスの蛍光団の特徴である（Di Bilio, A. J.; et al. J Am Chem Soc 2001, 123, 3181-3182）。放出ピークは、Ｒｅ（Ｉ）トリカルボニル錯体の先の分光学的研究に基づき、３ＭＬＣＴ［ｄπ（Ｒｅ）→π＊（配位子）］励起状態によるものとされる（Di Bilio, A. J.; et al. J Am Chem Soc 2001, 123, 3181-3182、Guo, X. Q.; et al. Anal Chem 1998, 70, 632-637、Guo, X. Q.; et al. Anal Biochem 1997, 254, 179-186、Lo, K. K.; Commun (Camb) 2003, 2704-2705）。ＲｅＬ２の蛍光寿命は、アルゴン雰囲気下のエチレングリコール中で１１．８μｓ（λｅｍ＝５５０ｎｍ）であり、それは内因性蛍光の影響を克服するのに十分長い。細胞の自己蛍光はin vitroイメージング研究を困難にし得るが、それはナノ秒の時間スケールで生じるため、調査中のプローブが十分に長い寿命を有しているかぎり、それをタイムゲーティング技法により排除することができる。アルゴン下のエチレングリコール中のＲｅＬ２の０．０１８の蛍光量子収量は低いが、他の遷移金属群の蛍光プローブに関して報告されたものに匹敵する（Lo, K. K.; Commun (Camb) 2003, 2704-2705、Dattelbaum, et al. Bioconjug Chem 2000, 11, 533-536）。
【００８７】
in vitro結合研究
Ｌ１〜Ｌ７およびＲｅＬ１〜ＲｅＬ７の相対的な結合親和性を、既述のとおり、Ｎ−アセチル化α結合酸性ジペプチダーゼ（ＮＡＡＬＡＤａｓｅ）アッセイを用いて決定した。データを表１に示す（例参照）。全ての化合物がｌｙｓ−ＮＨＣＯＮＨ−ｇｌｕモチーフを有しているため、構造の差は、（ａ）キレーターと、リジン部分に結合したアミドカルボニル炭素との間のリンカーの長さ、（ｂ）ビスピリジル、ビスキノリンまたは混合（モノピリジルモノカルボキシル）官能基のいずれかであり得るキレーター、（ｃ）キレーターと、リジン部分に結合した第１のアミドとの間の第２のアミド官能基の有無、および（ｄ）キレーターに近接しているか、第２の（リンカー）アミド基に近接しているカルボキシル基の有無に由来する。直ちに明らかなのは、リジン自体の長さより長いメチレン鎖の長さの必要性であり、これは、Ｌ６のＲｅキレート化されたバージョンが、測定した全ての化合物の中で最も低いＰＳＭＡ阻害活性を示し、ＰＭＳＡ＋腫瘍をイメージングできなかったことによる。化合物Ｌ５は、キレーター窒素とアミドカルボニルとの間に７つのメチレン単位を含むリンカーが、ナノモルの低いＫｉを有する化合物をもたらすことを証明する。より長いリンカーもまた、容易に適合することができる（Ｌ４およびＬ７）。レニウムの導入は、阻害活性の一貫した変化を引き起こさず、Ｒｅ標識バージョンのＬ１、Ｌ４およびＬ５のみが、対応する非キレート化合物より高い阻害活性を示した。このクラスのキレーターへのＲｅ（ＣＯ）３コア／部分の導入は、キレーターに面配置（facial configuration）を強い、これは、活性部位への結合に予測できない影響を有する。カルボン酸を、リンカー（Ｌ１）のアミド窒素に近接してよりは、むしろキレーター（Ｌ３）に近接して配置することにより、非キレートバージョンについては１桁以上の阻害活性の増加が生じるが、Ｒｅ標識バージョンは同等であった。ビスピリジルより極性が極めて低いビスキノリンキレーターは、対応してより強いＰＳＭＡ阻害活性をもたらした。ピリジンの１つをカルボン酸部分で置換することにより（Ｌ７からＬ４へ）、非キレート分子については阻害活性の６倍の増加が生じるが、より生物学的に関連性のあるＲｅ標識化合物については活性の１２倍の減少が生じる。
【００８８】
ex vivo体内分布
化合物［９９ｍＴｃ］Ｌ１〜Ｌ３を、ＰＳＭＡ＋  ＰＣ３  ＰＩＰおよびＰＳＭＡ−ｆｌｕの両方の異種移植片を担持する重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスにおけるその薬物動態についてex vivoで評価した（Chang, S. S.; et al. Cancer Res 1999, 59, 3192-3198、Foss, C. A.; et al. Clin Cancer Res 2005, 11, 4022-4028）。表２〜４（例参照）は、それぞれ、化合物［９９ｍＴｃ］Ｌ１〜Ｌ３について、１グラムあたりの注入量の％（％ＩＤ／ｇ）で表示した選択された器官における取り込み値を示す。化合物［９９ｍＴｃ］Ｌ１は、ＰＣ３  ＰＩＰ腫瘍異種移植片において明確なＰＳＭＡ依存性の結合を示し、調査した時間の中で、注入３０分後において７．８７±３．９５％ＩＤ／ｇの最大取り込みに達した。ＰＳＭＡ＋腫瘍対ＰＳＭＡ−腫瘍（ＰＩＰ：ｆｌｕ）の取り込み比は、注入３０分後の２３から、高い方では注入３００分後の６８の範囲であった。正常器官および組織での分布も有利であり、非特異的な組織への取り込みは低く、クリアランスは迅速であった。観察された最も高い非特異的取り込みは、注入３０分後に脾臓において１０．５９±６．０５％ＩＤ／ｇであり、これは注入６０分後までに１．８１±１．１０に低下した。腎臓への取り込みは、主に近位尿細管内でのＰＳＭＡの高い発現のために予想通り高く、注入３０分後で９５．６６±２２．０６％ＩＤ／ｇのピークに達し、注入３００分後までに１．２６±０．６７％ＩＤ／ｇまで消失した。
【００８９】
化合物［９９ｍＴｃ］Ｌ２もまた、注入３０および６０分後においてのみだが、担腫瘍マウスにおけるその薬物動態学的特徴について評価した。表３は、この放射性リガンドについての取り込みの％ＩＤ／ｇを示す。［９９ｍＴｃ］Ｌ１と同様、［９９ｍＴｃ］Ｌ２は、ＰＳＭＡ依存性の腫瘍への取り込みを示し、注入６０分後に２．０４±０．２５％ＩＤ／ｇのピークに達した。これは、［９９ｍＴｃ］Ｌ１についてＰＣ３  ＰＩＰ腫瘍において観察された取り込みより顕著に低い。ＰＩＰ：筋肉比もまた顕著に低く、［９９ｍＴｃ］Ｌ１では注入１２０分後に４１．４の最大値に達したのに対し、注入６０分後にわずか７．７の最大値を達成したにすぎなかった。ビスキノリン部分の付加された親油性が追加の非特異的結合に寄与していることが考えられる（注入６０分後の比較的高い肝臓への取り込み（［９９ｍＴｃ］Ｌ２で１．１５±０．３３％ＩＤ／ｇであるのに対し、［９９ｍＴｃ］Ｌ１では０．２５±０．１５％ＩＤ／ｇ）、および、同時点における極めて高い脾臓への取り込み（１５．３２±６．６４％ＩＤ／ｇ）に注目されたい）。脾臓は、この研究の６０分の時間経過の間に未だ平衡に達しなかった。注入６０分後の腎臓への取り込みは８６．０±１３．９％ＩＤ／ｇと、［９９ｍＴｃ］Ｌ１についてみられた数値と同様であった。
【００９０】
化合物［９９ｍＴｃ］Ｌ３もまたＰＳＭＡ依存性の腫瘍への取り込みを示し、注入３０分後に最も高いＰＳＭＡ＋  ＰＩＰへの取り込みを示した、（１１．５６±２．８６％ＩＤ／ｇ）（表４）。ＰＩＰ：ｆｌｕ比は注入３０分後に２１．９９と最も高く、その後、注入３００分後までの間５：１前後で安定していた。この点に関して、［９９ｍＴｃ］Ｌ２および［９９ｍＴｃ］Ｌ３のいずれも、ＰＳＭＡ媒介イメージングの重要な基準である高いＰＩＰ：ｆｌｕ比の提供において、［９９ｍＴｃ］Ｌ１と比較して劣っていた。化合物［９９ｍＴｃ］Ｌ３は、肝臓、肺および脾臓において、［９９ｍＴｃ］Ｌ１および［９９ｍＴｃ］Ｌ２と同様の傾向を示した。［９９ｍＴｃ］Ｌ３については、脾臓および肝臓内への放射性トレーサー取り込み（非特異的結合）も極めて高かった。ＰＳＭＡ媒介性の腎臓への取り込みも、このクラスの他の化合物と類似しており、注入６０分後に１７８．５６±３５．４５のピークに達した。
【００９１】
代謝
その摘出された放射活性の２％を極性代謝物として含んでいた［９９ｍＴｃ］Ｌ１注入６０分後に摘出したマウス腎臓を除き、注入３０および６０分後の他の全ての組織抽出物、血漿および尿は、クロマトグラフされた放射活性の１００％を親化合物として含んでいた。
顕微鏡検査
Ｒｅ（ＣＯ）３によるＬ２のビスキノリン部分の配位により、この錯体は蛍光性となる。このため、ＲｅＬ２を用い、生細胞において顕微鏡検査を行なった（図２）。ＲｅＬ２のストークスシフトは比較的大きいため、４９４ｎｍで励起し、６２８ｎｍで放出蛍光を収集することが必要であった。このリガンドの量子効率が最高であると予想された３２１ｎｍで励起させる試みは極端な自己蛍光をもたらし、使用できるデータをもたらさなかった。しかしながら、スペクトルの緑色領域の励起は、ＰＳＭＡ＋  ＰＣ３  ＰＩＰ細胞内から、弱いが、観察可能な蛍光シグナルを導いた。この結果は、ＰＳＭＡに対する低分子量リガンドの内在化の視覚的確認を提供する。ＰＳＭＡの内在化のメカニズムは過去に研究されたが、小分子ではなく、むしろ抗体および抗体結合体が用いられたにすぎなかった（Rajasekaran, S. A.; et al. Mol Biol Cell 2003, 14, 4835-4845、Moffatt, S.; et al. Gene Ther 2006, 13, 761-772）。
【００９２】
イメージング
ＳＰＥＣＴ−ＣＴイメージングをＳＣＩＤマウスで行った。各々のマウスは、ＰＳＭＡ＋  ＰＣ３  ＰＩＰ異種移植片を一方の上側腹部に、ＰＳＭＡ−ＰＣ３ｆｌｕ異種移植片を他方の上側腹部にそれぞれ有していた。全ての放射性リガンドをこのようにしてスクリーニングし、得られた結果を、ex vivo体内分布アッセイがさらなる情報を追加するか否かを決定するのに用いた。図３は、明確なＰＩＰ腫瘍への取り込みを示した放射性リガンドによる、初期のレンダリングされたマウスのイメージを示す。マウスに、０．５〜１ｍＣｉ（１９〜３７ＭＢｑ）の対応する９９ｍＴｃ標識化合物を静脈内注入し、注入４５分後にイメージングした。良好な放射性リガンドは、いずれもＰＳＭＡを発現するＰＩＰ腫瘍および腎臓の両方の可視化を可能にした。化合物［９９ｍＴｃ］Ｌ１〜Ｌ４は、明確な特徴を有する陽性スキャン（positive scan）をもたらした。化合物［９９ｍＴｃ］Ｌ１は、強陽性のＰＩＰ腫瘍、胆嚢への取り込みおよび腎臓の明確な可視化を示した。化合物［９９ｍＴｃ］Ｌ２は、弱いＰＩＰ腫瘍への取り込み、強い胆嚢への取り込みおよび腎臓への取り込みを示した。化合物［９９ｍＴｃ］Ｌ３は、腫瘍のサイズが小さかったにも拘わらず強いＰＩＰ腫瘍への取り込みを示すとともに、胆嚢への取り込みおよび腎臓の明確な可視化を示した。化合物［９９ｍＴｃ］Ｌ４は、ＰＩＰ腫瘍への高い取り込み、ならびに、肝臓および腎臓への高い取り込みを示した。［９９ｍＴｃ］Ｌ１または［９９ｍＴｃ］Ｌ３の注入の数時間後に得たイメージは、バックグラウンドに対する腫瘍の高いコントラストを示し（図４）、［９９ｍＴｃ］Ｌ１については、腫瘍外に存在する放射活性はごくわずかであった。化合物［９９ｍＴｃ］Ｌ５は、［９９ｍＴｃ］Ｌ４と質的に類似したイメージを生成した。
【００９３】
in vivo結合特異性のさらなる試験として、ＬＮＣａＰ（ＰＳＭＡ＋）前立腺腫瘍モデルにおいて［９９ｍＴｃ］Ｌ１を用いて遮断実験を行なったが、最初に動物を、強力な選択的なＰＳＭＡ阻害剤である２（ホスホノメチル）ペンタン二酸（ＰＭＰＡ）５０ｍｇ／ｋｇで前処置した。図５は、ＰＭＰＡが、［９９ｍＴｃ］Ｌ１の結合を、腫瘍に対してだけでなく、このクラスの放射性医薬の別の特異的結合部位である腎皮質に対しても排除できることを示す。尿素ベースの阻害剤とは異なる化学クラスから遮断剤を、異なる、よく確立されたＰＳＭＡ＋前立腺腫瘍で用いたこれらの結果は、in vivo結合選択性のさらなるチェックを提供する。
【００９４】
種々のイメージングモダリティ、特にＭＲ分光学を用いた進歩にもかかわらず、臨床的に有効なＰＣａの分子イメージングは、依然として見出されていない。原発性および転移性腫瘍の同定ばかりでなく、治療モニタリングにおいても極めて良好に作用したＦＤＧ−ＰＥＴは、ＰＣａの場合には完全に不成功に終わった。これは、おそらくこれらの腫瘍の代謝速度が他の上皮がんと比べて比較的低いためである。解剖学的コレジストレーションによる反復再構成によってProstaScintTMイメージングを改善することができ、ＰＳＭＡの細胞外のエピトープに対するＪ５９１ヒトモノクローナル抗体の放射性標識バージョンの使用がいくらか有望であるが、これらの剤は、イメージングのための全てのインタクトな抗体と同じ欠点、すなわち、血液および非特異的部位からの遅いクリアランスを伴う。それでも、これらの抗体は、我々が前立腺がんのイメージングおよび治療の理想的な標的と考えるもの、すなわちＰＳＭＡと結合する。
【００９５】
本明細書に記載の発明により説明される放射性医薬は、一連の新規な低分子量のＰＳＭＡベースのイメージング剤の一部である。ＳＰＥＣＴおよびＰＥＴによるイメージングのための、好適に官能化された尿素のＰＳＭＡへの特異的結合は、先に示されている。しかしながら、それらの剤は、１２５Ｉ、１１Ｃまたは１８Ｆのいずれかで放射性標識されていた（Foss, C. A.; et al. Clin Cancer Res 2005, 11, 4022-4028、Pomper, M. G.; et al. Mol Imaging 2002, 1, 96-101、Mease R.C. et al. Clin Cancer Res. 2008, 14, 3036-3043）。ヨウ素１２５で標識された剤は、実験モデルを研究するために高解像度の小動物用イメージング装置とともに用いることができ、同位体はヒトのＳＰＥＣＴまたはＰＥＴのために、１２３Ｉまたは１２４Ｉにそれぞれ切り替えることができる。しかしながら、それらの同位体は高価であり（［１２４Ｉ］ＮａＩについては＄１，０００／ｍＣｉ）、緊急に得ることが困難な場合がある。炭素１１は、概して、施設内にサイクロトロンを有するセンターでのみ用いられる実験用の放射性核種である。フッ素１８で標識された放射性医薬は限られた距離に発送することができるが、これらの化合物の比放射活性は、使用場所に到着する頃には比較的低くなる。フッ素−１８も、製造のためにサイクロトロンを必要とする。これらの理由のため、そして、９９ｍＴｃの入手しやすさ（日常的に核医学検査部に届けられる発生器による）およびその理想的なイメージング特性のために、我々は９９ｍＴｃで標識したＰＳＭＡベースのイメージング剤を合成する計画に着手した。ＳＡＡＣ技術を用いることにより、９９ｍＴｃをこれらのＰＳＭＡ結合性尿素に立体配置的に邪魔にならない形で容易に組み込めることが見出された。Ｔｃは安定同位体を有しないため、我々はＰＳＭＡ阻害実験のためにＶＩＩＢ族の同族元素であるＲｅを用いた。
【００９６】
Ｌ１〜Ｌ７と称する種々の化合物を、そのＲｅ標識形態および９９ｍＴｃ標識形態で合成した。これらの７種の化合物はＤＣＬに由来し、リジンのεアミンとキレーターとの間に異なるリンカーを有する。ＳＡＡＣ技術を用いることにより、３種の異なるキレーター、すなわちビスピリジル、ビスキノリンおよびモノピリジル一酸を生成した。これらの異なるキレーターを用いる主な根拠は、その異なる程度の立体的な嵩高さおよび親油性を利用することであった。Ｌ１およびＬ２はいずれも、有機金属９９ｍＴｃ（ＣＯ）３／Ｒｅ（ＣＯ）３コアとの錯体化によりカチオン錯体をもたらす。他方、Ｌ４は、金属トリカルボニルのコアに対して中性錯体をもたらす。化合物Ｌ２は、最も親油性の剤をもたらす（表１）。この親油性の程度は、in vitro結合ならびにin vivoイメージングのいずれにも顕著な影響を及ぼし、ＲｅＬ２は、ＲｅＬ１より２０倍高いＰＳＭＡ阻害活性を示したが、９９ｍＴｃアナログについては、注入の１時間後に、６倍低いＰＩＰ：ｆｌｕおよび顕著に高い肝臓および脾臓への取り込みを示した（表１、図３）。ＰＩＰ腫瘍およびｆｌｕ腫瘍は、ＰＣ３ヒト前立腺がん細胞に由来するが、ＰＳＭＡの発現のみが異なる（ＰＩＰ＝ＰＳＭＡ＋、ｆｌｕ＝ＰＳＭＡ−）。これらの錯体の親油性を変える別の方法は、カルボン酸部分をリンカーの種々の位置に導入することである。リンカーのカルボン酸をキレーター窒素に近接する炭素の方へ動かすと、結合親和性が低下し（ＲｅＬ３）、化合物［９９ｍＴｃ］Ｌ１よりも低いＰＩＰ：ｆｌｕ、および、高い肝臓および脾臓への取り込みをもたらす（図３）。この系列の３種の化合物において、［９９ｍＴｃ］Ｌ１が、その比較的低いＰＳＭＡ阻害能力にもかかわらず、in vivoイメージングのための最良の特性を有する。
【００９７】
化合物ＲｅＬ４およびＲｅＬ７は、それぞれビスピリジルおよびモノピリジル一酸キレーターの比較を可能にする。化合物ＲｅＬ４は、ＲｅＬ７よりも約１２倍高いＰＳＭＡ阻害能力を有する。ex vivo体内分布アッセイはこれらの２種の化合物のためには行なわなかったが、［９９ｍＴｃ］Ｌ４はｆｌｕ腫瘍とは対照的にＰＩＰ腫瘍における強い取り込みを示したものの、肝臓内への顕著な取り込みもみられた。これは、おそらく、若干短いリンカー長を有し、リンカーの酸部分を包含するこの化合物の、［９９ｍＴｃ］Ｌ１および［９９ｍＴｃ］Ｌ３と比べた高い親油性による、望ましくないイメージング特性である（図３）。化合物［９９ｍＴｃ］Ｌ７は、ＰＩＰ腫瘍への特異的な取り込みの証拠を示さず、肝臓内での放射活性を示したにすぎなかった。
化合物Ｌ５は、リンカー内にアミドまたはカルボン酸を有さず、Ｌ６は、リジンのεアミン中に組み込まれたビスピリジルを有する。Ｌ５のリンカー鎖は、Ｌ１〜Ｌ３系列のものよりも６炭素短い。化合物ＲｅＬ６は極めて低いＰＳＭＡ阻害活性を示し、これは全系列中で最も低く、［９９ｍＴｃ］Ｌ６は、ＰＩＰ腫瘍特異的な取り込みを示さなかった。
【００９８】
この系列において、［９９ｍＴｃ］Ｌ１およびＲｅＬ２は、前立腺がんをそれぞれin vivoおよびin vitroでイメージングする有用性を提供することが明らかとなった。化合物［９９ｍＴｃ］Ｌ１は、その合成による入手のしやすさ、極めて高い標的対非標的比（注入の２時間後で、ＰＩＰ：ｆｌｕ＝４４：１）、迅速な排出動態、代謝安定性および上述の９９ｍＴｃの多くの有益な特徴のために、有望な臨床上の候補である。その使用のための最初の適応は、ProstaScintTMの適応と同様、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の上昇が検出され、前立腺切除術を受けた患者の研究となろう。化合物ＲｅＬ２は、低分子量剤の活性部位への結合後のＰＳＭＡの内在化を実証した（図２）。この化合物は、ＰＳＭＡ内在化の動態を研究するのに用いることができる。このクラスの化合物の内在化は、対応する放射線治療アナログの開発を示唆する。
【００９９】
化学的記載および用語
本明細書に記載の化合物は、１または２以上の不斉中心または不斉面を有していてもよい。非対称に置換された原子を含む本発明の化合物は、光学活性体またはラセミ体で単離してもよい。どのように光学活性体を調製するかは当該技術分野でよく知られており、これは例えば、ラセミ体（ラセミ化合物）の分割、不斉合成、または光学活性出発原料からの合成などによる。ラセミ化合物の分割は、例えば、慣用の方法、例えば分割剤の存在下での結晶化、または、例えばキラルＨＰＬＣカラムを用いたクロマトグラフィーなどによって達成することができる。オレフィンの種々の幾何異性体、Ｃ＝Ｎ二重結合なども本明細書に記載の化合物に存在することができ、全てのかかる安定異性体が本発明において意図される。本発明の化合物のシスおよびトランス幾何異性体が記載され、異性体の混合物として、または別々の異性体として単離することができる。特定の立体化学または異性体が特段示されない限り、全てのキラル体（エナンチオマーおよびジアステレオマー）およびラセミ体、ならびに、構造の全ての幾何異性体が意図される。
【０１００】
化合物の任意の構成要素または式において任意の変数が２回以上出現する場合、各々の出現におけるその定義は、他の全ての出現におけるその定義から独立している。したがって、例えば、基が０〜２個のＲ＊で置換されることが示されている場合、該基は任意に２個までのＲ＊基で置換されてもよく、Ｒ＊は、各々の出現において独立して、Ｒ＊の定義から選択される。また、置換基および／または変数の組合せは、かかる組合せが安定した化合物をもたらす場合にかぎり許容される。
上記のとおり、種々の式の種々の置換基は「任意に置換されている」。用語「置換されている」は、本明細書で用いる場合、指定された原子または基における任意の１個または２個以上の水素が、示された置換基の群からの選択物で置換されていることを意味し、ただし、指定された原子の通常の原子価を超過せず、置換が安定した化合物をもたらすことを条件とする。置換基がオキソ（ケト、すなわち＝Ｏ）である場合、原子上の２個の水素が置換される。本発明は、本発明の化合物に存在する原子の全ての同位体（放射性同位体を含む）を含むことを意図する。
【０１０１】
さらに置換されている場合、本発明の化合物は、１または２以上の利用可能な位置で、典型的には１〜３または４つの位置で、１個または２個以上の好適な基、例えば、本明細書に記載された基などで、そのように置換されていてもよい。「置換された」基上に存在し得る好適な基は、例えば、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシル、ニトロ、アジド、アルカノイル（例えば、Ｃ１〜６アルカノイル基、例えばアシルなど）、カルボキサミド、アルキル基（１〜約８個の炭素原子、好ましくは１、２、３、４、５または６個の炭素原子を有するシクロアルキル基を含む）、アルケニルおよびアルキニル基（１または２以上の不飽和結合、および２〜約８個、好ましくは２、３、４、５または６個の炭素原子を有する基を含む）、１または２以上の酸素結合、および１〜約８個、好ましくは１、２、３、４、５または６個の炭素原子を有するアルコキシ基、アリールオキシ、例えばフェノキシなど、１または２以上のチオエーテル結合、および１〜約８個の炭素原子、好ましくは１、２、３、４、５または６個の炭素原子を含むものを含むアルキルチオ基、１または２以上のスルフィニル結合、および１〜約８個の炭素原子、好ましくは１、２、３、４、５または６個の炭素原子を含むものを含むアルキルスルフィニル基、１または２以上のスルホニル結合、および１〜約８個の炭素原子、好ましくは１、２、３、４、５または６個の炭素原子を含むものを含むアルキルスルホニル基、１または２以上のＮ原子、および１〜約８個の炭素原子、好ましくは１、２、３、４、５または６個の炭素原子を含む基を含むアミノアルキル基、６個または７個以上の炭素、および１個または２個以上の環（例えば、フェニル、ビフェニル、ナフチルなど、各々の環は、置換または非置換芳香環）を有する炭素環式アリール、１〜３個の別々のもしくは縮合した環、および６〜約１８の環炭素原子を有するアリールアルキル（好ましいアリールアルキル基はベンジル）、１〜３個の別々のもしくは縮合した環、および６〜約１８の環炭素原子を有するアリールアルコキシ（好ましいアリールアルコキシ基はＯ−ベンジル）、または、１環あたり３〜約８員および１または２以上のＮ、ＯまたはＳ原子を含む、１〜３個の別々のもしくは縮合した環を有する、飽和、不飽和もしくは芳香族複素環基、例えば、クマリニル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジル、フラニル、ピロリル、チエニル、チアゾリル、トリアジニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、イミダゾリル、インドリル、ベンゾフラニル、ベンゾチアゾリル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ピペリジニル、モルホリニル、ピペラジニルおよびピロリジニルを含む。かかる複素環基は、例えばヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロゲンおよびアミノでさらに置換されていてもよい。
【０１０２】
本明細書で用いる場合、「アルキル」は、特定の炭素原子数を有する、分枝状および直鎖状脂肪族飽和炭化水素基の両方を含むことを意図する。アルキルの例は、限定されずに、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、およびｓ−ペンチルを含む。好ましいアルキル基は、Ｃ１〜６アルキル基である。特に好ましいアルキル基は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、および３−ペンチルである。用語Ｃ１〜４アルキルは、本明細書で用いる場合、１〜４個の炭素原子からなるアルキル基を含み、これはシクロプロピル部分を含んでもよい。好適な例は、メチル、エチル、およびシクロプロピルメチルである。
「シクロアルキル」は、特定の炭素原子数を有する飽和環状基、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、またはシクロヘキシルを含むことを意図する。シクロアルキル基は、典型的には３〜約８個の環員を有する。
【０１０３】
用語「（Ｃ３〜８シクロアルキル）Ｃ１〜４アルキル」において、シクロアルキルおよびアルキルは上記に定義したとおりであり、結合位置はアルキル基上にある。この用語は、限定されずに、シクロプロピルメチル、シクロヘキシルメチル、およびシクロヘキシルメチルを包含する。
「アルケニル」は、直鎖または分枝構造の炭化水素鎖、例えばエテニルおよびプロペニルなどを含むことを意図し、これは、鎖に沿った任意の安定した位置に存在してもよい１または２以上の不飽和の炭素−炭素結合を含む。アルケニル基は、典型的には２〜約８個の炭素原子、より典型的には２〜約６個の炭素原子を有する。
「アルキニル」は、直鎖または分枝構造の炭化水素鎖、例えばエチニルおよびプロピニルなどを含むことを意図し、これは、鎖に沿った任意の安定した位置に存在してもよい１または２以上の炭素−炭素三重結合を含む。アルキニル基は、典型的には２〜約８個の炭素原子、より典型的には２〜約６個の炭素原子を有する。
【０１０４】
「ハロアルキル」は、１個または２個以上のハロゲン原子で置換された、特定の炭素原子数を有する、分枝状および直鎖状脂肪族飽和炭化水素基の両方を含むことを意図する。ハロアルキルの例は、限定されずに、モノフルオロメチル、ジモノフルオロメチル、もしくはトリフルオロメチル、モノクロロメチル、ジモノクロロメチル、もしくはトリクロロメチル、モノフルオロエチル、ジフルオロエチル、トリフルオロエチル、テトラフルオロエチル、もしくはペンタフルオロエチル、およびモノクロロエチル、ジクロロエチル、トリクロロエチル、テトラクロロエチル、もしくはペンタクロロエチルを含む。典型的なハロアルキル基は、１〜約８個の炭素原子、より典型的には１〜約６個の炭素原子を有する。
「アルコキシ」は、酸素架橋を介して結合した示された数の炭素原子を有する、上記で定義したとおりのアルキル基を表す。アルコキシの例は、限定されずに、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、２−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、２−ペントキシ、３−ペントキシ、イソペントキシ、ネオペントキシ、ｎ−ヘキソキシ、２−ヘキソキシ、３−ヘキソキシ、および３−メチルペントキシを含む。アルコキシ基は、典型的には１〜約８個の炭素原子、より典型的には１〜約６個の炭素原子を有する。
【０１０５】
「ハロアルコキシ」は、酸素架橋を介して結合した示された数の炭素原子を有する、上記で定義したとおりのハロアルキル基を表す。
本明細書で用いる場合、用語「アルキルチオ」は、１または２以上のチオエーテル結合、および好ましくは１〜約８個の炭素原子、より典型的には１〜約６個の炭素原子を含む基を含む。
本明細書で用いる場合、用語「アルキルスルフィニル」は、１または２以上のスルホキシド（ＳＯ）結合基、および典型的には１〜約８個の炭素原子、より典型的には１〜約６個の炭素原子を含む基を含む。
本明細書で用いる場合、用語「アルキルスルホニル」は、１または２以上のスルホニル（ＳＯ２）結合基、および典型的には１〜約８個の炭素原子、より典型的には１〜約６個の炭素原子を含む基を含む。
本明細書で用いる場合、用語「アルキルアミノ」は、１または２以上の１級、２級および／または３級アミン基、および典型的には１〜約８個の炭素原子、より典型的には１〜約６個の炭素原子を含む基を含む。
本明細書で用いる「ハロ」または「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを指し、「対イオン」は、小さな、負に荷電した種、例えばクロリド、ブロミド、ヒドロキシド、アセテート、サルフェートなどを表すのに用いる。
【０１０６】
本明細書で用いる場合、「炭素環式の基」は、任意の安定な３〜７員の単環式基もしくは二環式基、または、７〜１３員の二環式基もしくは三環式基を意味することを意図し、これらのいずれも、飽和であっても、部分的に不飽和であっても、芳香族であってもよい。本明細書の他所で例示されているもののほか、かかる炭素環式化合物の例は、限定されずに、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、アダマンチル、シクロオクチル、［３．３．０］ビシクロオクタニル、［４．３．０］ビシクロノナニル、［４．４．０］ビシクロデカニル、［２．２．２］ビシクロオクタニル、フルオレニル、フェニル、ナフチル、インダニル、およびテトラヒドロナフチルを含む。
本明細書で用いる場合、用語「複素環基」は、１環あたり３〜約８員を含む、１〜３個の（好ましくは縮合した）環を有する、飽和、部分的に不飽和、もしくは不飽和の（芳香族）基であって、少なくとも１個の環がＮ、ＯまたはＳから選択される原子を含有するものを含むことを意図する。窒素および硫黄ヘテロ原子は、任意に酸化されていてもよい。用語「ヘテロシクロアルキル」は、飽和した複素環基を指すのに用いる。
【０１０７】
複素環は、安定な構造をもたらす任意のヘテロ原子または炭素原子で、そのペンダント基と結合していてもよい。本明細書に記載の複素環は、得られる化合物が安定であれば、炭素原子または窒素原子が置換されていてもよい。複素環の窒素は、任意に４級化されていてもよい。本明細書で用いる場合、用語「芳香族複素環系」は、炭素原子およびＮ、ＯおよびＳから独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を含む、任意の安定な５〜７員の単環式、または１０〜１４員の二環式複素芳香環系を含むことを意図する。芳香族複素環中のＳおよびＯ原子の総数が２を超えない、より好ましくは１を超えないことが好ましい。
【０１０８】
ヘテロ環の例は、限定されずに、本明細書の他所に例示されたものを含み、さらには、アクリジニル、アゾシニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフラニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサゾリル、ベンズチアゾリル、ベンズトリアゾリル、ベンズテトラゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンズイミダゾリニル、カルバゾリル、ＮＨ−カルバゾリル、カルボリニル、クロマニル、クロメニル、シンノリニル、デカヒドロキノリニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５，２−ジチアジニル、ジヒドロフロ［２，３−ｂ］テトラヒドロフラン、フラニル、フラザニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリル、１Ｈ−インダゾリル、インドレニル、インドリニル、インドリジニル、インドリル、３Ｈ−インドリル、イソベンゾフラニル、イソクロマニル、イソインダゾリル、イソインドリニル、イソインドリル、イソキノリニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル、ナフチリジニル、オクタヒドロイソキノリニル、オキサジアゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、オキサゾリジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、ピリミジニル、フェナントリジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサチイニル、フェノキサジニル、フタラジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、プテリジニル、プリニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリドオキサゾール、ピリドイミダゾール、ピリドチアゾール、ピリジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、４Ｈ−キノリジニル、キノキサリニル、キヌクリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，２，５−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、チアントレニル、チアゾリル、チエニル、チエノチアゾリル、チエノオキサゾリル、チエノイミダゾリル、チオフェニル、トリアジニル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、１，２，５−トリアゾリル、１，３，４−トリアゾリル、およびキサンテニルを含む。
【０１０９】
好ましい複素環基は、限定されずに、ピリジニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、ピロリジニル、モルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、およびイミダゾリルを含む。また、例えば、上記のヘテロ環を含む縮合環とスピロ化合物も含まれる。
本明細書で用いる場合、用語「炭素環式アリール」は、１〜３個の別々のまたは縮合した環、および６〜約１８個の環原子を含有するが、環員としてヘテロ原子は含まない基を含む。特に好ましい炭素環式アリール基は、フェニル、および１−ナフチルおよび２−ナフチルを含むナフチルを含む。
【０１１０】
「薬学的に許容し得る担体」は、無菌性、ｐＨ、等張性、安定性などにしかるべく配慮した生体適合性溶液を指し、任意のおよび全ての溶媒、希釈剤（無菌食塩水、塩化ナトリウム注入液、リンゲル注入液、デキストロース注入液、デキストロースおよび塩化ナトリウムの注入液、乳酸リンゲル注入液、および他の水性緩衝液を含む）、分散媒、コーティング、抗菌および抗真菌剤、等張剤などを含んでもよい。薬学的に許容し得る担体はまた、安定剤、防腐剤、酸化防止剤、または当業者によく知られた他の添加物、または当該技術分野で既知の他のビヒクルを含んでもよい。
【０１１１】
本明細書で用いる場合、「薬学的に許容し得る塩」は、開示された化合物の誘導体であって、親化合物をその無毒の酸性または塩基性塩とする修飾をしたものを指す。薬学的に許容し得る塩の例は、限定されずに、塩基性残基、例えばアミンなどの、無機または有機酸塩、酸性残基、例えばカルボン酸などの、アルカリまたは有機塩等を含む。薬学的に許容し得る塩は、例えば、無毒の無機または有機酸から形成される親化合物の慣用の無毒塩または４級アンモニウム塩を含む。例えば、慣用の無毒酸性塩は、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などに由来するもの、および、有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、メシル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、ギ酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、ｎが０〜４であるＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨなどから調製した塩を含む。本発明の薬学的に許容し得る塩は、塩基性または酸性部分を含む親化合物から、慣用の化学的方法によって合成することができる。一般的に、かかる塩は、これらの化合物の遊離酸形態を、化学量論量の好適な塩基（例えば、Ｎａ、Ｃａ、ＭｇまたはＫ水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩など）と反応させるか、これらの化合物の遊離塩基形態を、化学量論量の好適な酸と反応させることにより調製することができる。かかる反応は、典型的には水中または有機溶媒中で、または両者の混合物中で行なう。利用可能な場合には、一般的に、非水溶媒体、例えば、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルなどが好ましい。追加の好適な塩のリストは、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, p. 1418 (1985)で見出すことができる。
【０１１２】
この出願全体にわたって引用した全ての引用文献（参考文献、発行された特許、公開された特許出願を含む）の内容は、参照により本明細書に明確に援用する。
本発明、およびこれを製造および使用する手法および手順を、関係する任意の当業者がそれを製造および使用できるよう、かかる完全、明確、簡潔かつ正確な用語で今回記載した。上記が本発明の好ましい態様を説明したものであり、特許請求の範囲に記載された本発明の範囲から逸脱することなくそこに変更を加え得ることを理解すべきである。発明とみなされる主題を具体的に指し示し、明確にクレームするために、後続の特許請求の範囲がこの明細書を締めくくる。
【０１１３】
例
本発明は、決して限定的と解釈すべきでない以下の例によりさらに例証される。本発明の実施には、特に明記しない限り、当該分野の技術の範囲内の慣用の技法を用いる。かかる技法は、文献に完全に説明されている。
【０１１４】
一般的手順
全ての反応は、特に明記しない限り窒素雰囲気下で行なった。商業的供給源から得られる溶媒および化学物質は、分析グレード以上であり、さらなる精製なしで用いた。全ての実験は、再現性を確保するために、二反復または三反復で行なった。分析薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、Aldrichのアルミニウムで裏打ちされた０．２ｍｍのシリカゲルZ19, 329-1プレートを用いて行ない、紫外線（２５４ｎｍ）、Ｉ２およびＥｔＯＨ中の１％ニンヒドリンによって可視化した。フラッシュクロマトグラフィーは、Bodman (Aston PA)から購入したMP SiliTech 32-63 D 60Åを用いて行なった。ほとんどの場合、生成物の単離は、反応混合物から溶媒の除去、有機溶媒による抽出、水および塩水での洗浄、無水硫酸ナトリウムによる乾燥、濾過、および濾液の濃縮からなるものであった。かかるワークアップ条件の使用は、「生成物の単離」なる記載（その後に、括弧書きで抽出溶媒が続く）によって示す。精製は、ほとんどの場合フラッシュクロマトグラフィーによって達成され、用語「フラッシュクロマトグラフィー」（その後に、括弧書きで用いた溶出溶媒が続く）により示す。
【０１１５】
融点はMel-Temp装置を用いて測定し、補正はしなかった。１Ｈスペクトルは、Varian Mercury 400 MHzまたはBruker ultrashieldTM 400 MHzスペクトロメータで記録した。化学シフト（δ）は、ＮＭＲ溶媒の不完全な重水素化から生じる陽子共鳴を基準としたｐｐｍダウンフィールドで報告した。低分解能ＥＳＩマススペクトルは、Bruker Daltonics Esquire 3000 Plusスペクトロメータで得た。より高分解能のＦＡＢマススペクトルは、ノートルダム大学質量分析計施設内の JOEL JMS-AX505HA質量分析計で得た。旋光度は、Jasco P-1010偏光計で測定した。赤外線スペクトルは、Bruker Tensor 27スペクトロメータで得た。Phenomenex C18 Luna 10 ×250 mm2カラムを用いたＬ１〜Ｌ７およびＲｅＬ１〜ＲｅＬ７の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による精製は、いずれもEmpowerソフトウェアで制御される、Waters 486可変吸光UV/Vis検出器（tunable absorbance UV/Vis detector）を備えたWaters 600E Delta LCシステムで行なった。
【０１１６】
ＲｅＬ１〜Ｌ７および、［９９ｍＴｃ］Ｌ１〜Ｌ７のＨＰＬＣによる精製は、以下のアイソクラチック条件を用いて行なった：方法１、移動相は６５％の溶媒Ａ（水中の０．１％ＴＦＡ）および３５％の溶媒Ｂ（ＣＨ３ＣＮ中の０．１％ＴＦＡ）、流速２ｍＬ／分、方法２、移動相は６５％の溶媒Ａおよび３５％の溶媒Ｂ、流速４ｍＬ／分、方法３、移動相は７０％の溶媒Ａおよび３０％の溶媒Ｂ、流速２ｍＬ／分。溶離液は、２５４ｎｍおよび２２０ｎｍでモニターした。放射性合成における精製のために、２台の510EF型ポンプ、680型自動グラジエントコントローラ、490型ＵＶ吸光度検出器、およびBioscan Flow-countシステムに接続されたBioscan NaIシンチレーション検出器を備えたWaters Chromatography Division HPLC SystemによりＨＰＬＣを行なった。ＵＶ検出器およびFlow-count放射線検出システムからの出力は、IN/US System, Inc.のコンピュータカードが装着されたGateway 2000 P5-133コンピュータに供給し、Winflowソフトウェア(IN/US)を用いて分析した。吸収スペクトルは、Hewlett-Packard 8453分光光度計を用いて収集した。Isolinkキットは、Mallinckrodt-Tyco Health Care (St. Louis, MO, USA)からの寛大な寄贈品であった。
【０１１７】
例１：中間体の合成
２−アミノ−６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ヘキサン酸  ４−メトキシ−ベンジルエステル（２）
化合物２は２工程で調製した。窒素下にある火炎乾燥した２５０ｍＬの三首丸底フラスコ内に、Ｎε−Ｂｏｃ−Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ｌ−リジン（７．０ｇ、１５ｍｍｏｌ）および６０ｍＬの乾燥ＤＭＦを置いた。これに、炭酸セシウム（７ｇ、２１ｍｍｏｌ）および４−メトキシベンジルクロリド（２．５ｇ、１６ｍｍｏｌ）を添加した。生成物の単離（ＥｔＯＡｃ、５％Ｎａ２ＣＯ３、水、Ｎａ２ＳＯ４）と、その後の６０／４０（ｖ／ｖ）ヘキサン／ＥｔＯＡｃからの再結晶化により、無色固体を２回（2 crops）得た。ｍｐ  １１８〜１２０℃。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．３３（７０／３０ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）。収量：８．２２ｇ、１４ｍｍｏｌ、９３．４３％。
【化３２】
0005680409.tif 000033
【０１１８】
火炎乾燥した丸底フラスコ内に、５．０ｇ（８．５４ｍｍｏｌ）の完全に保護された２のアナログを置いた。これを、ＤＭＦ中のピペリジンの２０％溶液６０ｍＬに溶解した。反応物を室温で２時間撹拌した。生成物の単離（ＣＨ２Ｃｌ２、水、Ｎａ２ＳＯ４）と、その後のフラッシュクロマトグラフィー（４／９６  ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）により、純粋な２を、油状物（２．５９ｇ、７．０７ｍｍｏｌ）として、収率８３％で得た。
【化３３】
0005680409.tif 000034
【０１１９】
２−｛３−［１−ｐ−メトキシベンジルカルボキシレート−（５−ｔ−ブチルカルバミルペンチル）］−ウレイド｝−ジ−ｐ−メトキシベンジルペンタンジオエート（３）
ビス−４−メトキシベンジル−Ｌ−グルタミン酸ＨＣｌ４（３．６ｇ、８．５ｍｍｏｌ）を、窒素下にある火炎乾燥した三首丸底フラスコ内に置き、１５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解した。トリホスゲン（０．８３３ｇ、２．８ｍｍｏｌ）をバイアル内に置き、３ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、三首フラスコに添加した。フラスコを、窒素下で−７７℃に冷却した（ドライアイスエタノールスラリー）。これに、トリエチルアミン（１２ｍｌ、１０ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中８５ｍｍｏｌ）をゆっくり添加した。反応混合物を、−７７℃で１時間撹拌し、室温に温め、ｒｔで３０分撹拌した。これに、化合物２（３．１ｇ、７ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中８．５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を一晩撹拌した。生成物の単離（ＣＨ２Ｃｌ２、水、ＮａＣｌ、Ｎａ２ＳＯ４）と、その後のフラッシュクロマトグラフィー（２０／８０  ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２）により、放置すると固化する油状物を得た。収量：４．１３５ｇ、５．３ｍｍｏｌ、６２．３％。
【化３４】
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【０１２０】
２｛３−［１−ｐ−メトキシベンジルカルボキシレート−（５−アミノペンチル）］−ウレイド｝−ジ−ｐ−メトキシベンジルペンタンジオエート（５）のｐ−トルエンスルホン酸塩
２０ｍＬのＥｔＯＡｃに３（２ｇ、２．６ｍｍｏｌ）を溶解した溶液を氷浴で０〜２℃に冷却し、５ｍＬの無水エタノール中のｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．４９ｇ、２．６ｍｍｏｌ）を添加した。冷却浴を除去し、反応混合物を２時間室温に温めた。次いで、反応混合物を減圧下で濃厚な（thick）油状物に濃縮し、混合物を１０／９０  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を用いたフラッシュクロマトグラフィーで精製し、生成物を、無色の固体として、４５％（０．９８ｇ、１．１５ｍｍｏｌ）の収率で得た。
【化３５】
0005680409.tif 000036
【０１２１】
２｛３−［１−ｐ−メトキシベンジルカルボキシレート−（５−アミノペンチル）］−ウレイド｝−ジ−ｐ−メトキシベンジルペンタンジオエート（１）
５の溶液（０．１５ｇ、５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中０．１７ｍｍｏｌ）を分液漏斗に置き、０．５Ｍ炭酸水素ナトリウム１００ｍＬで洗浄した。有機層を回収し、無水のＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して、黄色のフィルム状物とした（０．１０７ｇ、０．０９ｍｍｏｌ、５２．５％）。
【化３６】
0005680409.tif 000037
化合物１は、直ちに次の工程で用いた。
【０１２２】
２｛３−［５−［７（２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルオキシカルボニル）−ヘプタノイルアミノ］−１−（４−メトキシ−ベンジルオキシカルボニル）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸ビス−（４−メトキシベンジル）エステル（６）
１００ｍＬの丸底フラスコを窒素下で火炎乾燥し、その後、１（０．０８ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を添加し、次いで１０ｍＬの乾燥ＤＭＦに溶解した。この溶液を、スベリン酸ビス−（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、ＤＳＳの溶液（０．１３ｇ、１０ｍＬのＤＭＦ中０．３５ｍｍｏｌ）に、室温で穏やかに撹拌しながら滴加した。２時間後、溶液の体積を真空下で減少させ、無色の固体残渣を、微量のＤＭＦを取り除くために、さらに２時間高真空下に維持した。残渣を１ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、シリカゲルカラム（１インチ×１２インチ）に負荷した。過剰なＤＳＳを除去するために、最初にカラムを４０／６０  ＣＨ３ＣＮ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出し、その後５０／５０  ＣＨ３ＣＮ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して、生成物を無色の固体として得た。収率：０．０６２ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ、５６．６％。
【化３７】
0005680409.tif 000038
【０１２３】
例２：２−［３−（５−｛７−［５−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−１−カルボキシ−ペンチルカルバモイル］−ヘプタノイルアミノ｝−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸（Ｌ１）。
７の溶液（Levadala, M. K.; et al. Synthesis 2004, 11, 1759-1766）（０．０３５ｇ、０．５ｍＬのＭｅＯＨ中０．１０７ｍｍｏｌ）を、室温の撹拌された６の溶液（０．１００ｇ、６ｍＬの乾燥ＤＭＦ中０．１０７ｍｍｏｌ）に室温で添加し、その後０．２ｍＬのＮＥｔ３を添加した。反応混合物を室温で１０時間撹拌した。次いで、反応混合物を減圧下で濃縮した。生成物の単離（ＣＨ２Ｃｌ２、水、Ｎａ２ＳＯ４）と、その後のフラッシュクロマトグラフィー（５０／５０ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）により、中間体化合物を無色の固体として７４％の収率（０．０９０ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）で得た。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４５（４０／６０  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）。ＥＳＩＭＳ  ｍ／ｚ：１１４６．７［Ｍ＋１］＋、１１６８．７［Ｍ＋Ｎａ］＋。上述の中間体化合物（２０ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（７ｍＬ）およびアニソール（０．３ｍＬ）の氷冷溶液に溶解し、１０分間撹拌した。氷浴を除去し、溶液をさらに１０分間撹拌し続けながら室温に温めた。
【０１２４】
溶液を減圧下で蒸発させ、淡褐色の残渣を高真空下で２時間乾燥した。残渣をジエチルエーテル（３×５ｍＬ）および水（１０×２ｍＬ）で洗浄し、粗製のＬ１を得た。収量：９ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、６５％。無色の生成物を真空下で乾燥し、移動相として７５／２５  水（０．１％ＴＦＡ）／アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）を用いた、流速２ｍｌ／分、Ｒｔ＝１４でのＨＰＬＣによってさらに精製した。
【化３８】
0005680409.tif 000039
化合物Ｌ１〜Ｌ３は、代表例としてＬ１についてスキーム２に示したのと同じ一般的合成手順に従って調製した。
【０１２５】
例３：２−［３−（５−｛７−［５−（ビス−キノリン−２−イルメチル−アミノ）−１−カルボキシ−ペンチルカルバモイル］−ヘプタノイルアミノ｝−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸（Ｌ２）
化合物Ｌ２は、化合物８（Stephenson, K. A.; et al. J Am Chem Soc 2004, 126, 8598-8599）と化合物６とを、Ｌ１について上記したのと同様に反応させることによって得た。ＨＰＬＣ精製を、移動相として７０／３０  水（０．１％ＴＦＡ）／ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）を用い、流速４ｍｌ／分、Ｒｔ＝９分で行なった。
【化３９】
0005680409.tif 000040
【０１２６】
例４：２−［３−（５−｛７−［５−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−５−カルボキシ−ペンチルカルバモイル］−ヘプタノイルアミノ｝−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸（Ｌ３）
化合物Ｌ３は、化合物９（Levadala, et al. Synthesis 2004, 11, 1759-1766）と化合物６とを、Ｌ１について上記したのと同様に反応させることによって得た。ＨＰＬＣ精製を、移動相として７５／２５  水（０．１％ＴＦＡ）／ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）を用い、流速２ｍｌ／分、Ｒｔ＝８分で行なった。
【化４０】
0005680409.tif 000041
【０１２７】
例５：２−［３−（１−カルボキシ−５−｛７−［６−（カルボキシメチル−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−ヘキシルカルバモイル］−ヘプタノイルアミノ｝−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸（Ｌ４）。
化合物１０は、公開された手順（Mueller, C.; et al. J Organometal Chem 2004, 689, 4712-4721）に従って調製した。化合物１１は、以下のように調製した：１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の化合物１０（０．５１７ｇ、１．７ｍｍｏｌ）の溶液に、グリオキシル酸一水和物の溶液（１．５５ｇ、活性化分子篩を含有する１ｍＬのＭｅＯＨ中１．６８ｍｍｏｌ）を添加し、３０分間撹拌した。トリアセトキシボロヒドリドナトリウム（０．７１２ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を溶液に少量ずつ添加し、室温で一晩撹拌した。生成物の単離（ＣＨ２Ｃｌ２、水、ＮａＣｌ、Ｎａ２ＳＯ４）により粗化合物を得、これをさらなる精製なしに次の工程に用いた。収量：０．４８３ｇ、１．３２ｍｍｏｌ、７８．６％。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．３７（１０／９０  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）。
【化４１】
0005680409.tif 000042
【０１２８】
ｔ−Ｂｏｃの除去は、粗化合物（０．４８３ｇ、１．３２ｍｍｏｌ）を、氷冷１／１  ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２溶液１０ｍＬに溶解することにより行なった。反応混合物を、室温で４時間撹拌した。溶液を減圧下で蒸発させ、真空下で乾燥して、無色の固体の１１を得、これをさらなる精製なしに用いた。収量：０．３１５ｇ、１．１９ｍｍｏｌ、９０％。
【化４２】
0005680409.tif 000043
【０１２９】
化合物Ｌ４は、化合物６と化合物１１とを結合させることにより調製した。化合物Ｌ４は、移動相として７６／２４  水（０．１％ＴＦＡ）／ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）を用いた、流速：２ｍＬ／分、Ｒｔ＝１０．２分でのＨＰＬＣにより精製した。
【化４３】
0005680409.tif 000044
【０１３０】
例６：２−（３−｛５−［８−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−オクタノイルアミノ］−１−カルボキシ−ペンチル｝−ウレイド）−ペンタン二酸（Ｌ５）
８−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−オクタン酸の溶液（Levadala, et al. Synthesis 2004, 11, 1759-1766）（０．９ｇ、２．６ｍｍｏｌ、１５ｍＬのＤＭＦ）に、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェイト（１．４９ｇ、３．９ｍｍｏｌ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（０．３６ｇ、３．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した後、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（１０／９０  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）により精製し、濃厚な無色の液体として１２を得た。収量:０．７５ｇ、０．１７ｍｍｏｌ、６５％。
【化４４】
0005680409.tif 000045
【０１３１】
１２の溶液（０．０５２ｇ、７ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中０．１１ｍｍｏｌ）に、５（０．１ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、次いでＮＥｔ３（０．２ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で５時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。生成物の単離（ＥｔＯＡｃ、水、ＮａＣｌ、Ｎａ２ＳＯ４）と、その後のフラッシュクロマトグラフィー（５０／５０  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）により、Ｌ５の４−メトキシベンジルエステルの純粋な化合物を５１％の収率（０．０６０ｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）で得た。１／１  ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中での２時間の撹拌によりＰＭＢ基を切断し、次いで溶媒を除去することにより、固体残渣を得た。残渣を７ｍＬの水に溶解し、３×１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、水層を真空下で濃縮して、粗製のＬ５を得た。化合物を、移動相として８０／２０  水（０．１％ＴＦＡ）／ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）溶液を用いたＨＰＬＣによりさらに精製した。流速は３ｍＬ／分であり、Ｒｔ＝８分であった。
【化４５】
0005680409.tif 000046
【０１３２】
例７：２−｛３−［５−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−１−カルボキシ−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸（Ｌ６）
ピリジン−２−アルデヒドの溶液（５０ｍｇ、４ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中０．４４ｍｍｏｌ）に、１の溶液（１００ｍｇ、４ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中０．１４７ｍｍｏｌ）を添加した。これを室温で２時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却し、次いでトリアセトキシボロヒドリドナトリウム（９３ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を添加し、室温に加温しながらさらに３時間撹拌した。生成物の単離（ＣＨ２Ｃｌ２、水、ＮａＣｌ、Ｎａ２ＳＯ４）と、その後のフラッシュクロマトグラフィー（１０／９０  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）により、Ｌ６のトリＰＭＢエステルとして無色の固体を得た。ＰＭＢ基の除去は、５ｍＬの５０／５０  ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２への溶解により行ない、室温で２時間撹拌した。得られた溶液を濃縮し、無色の固体を得た。固体を３ｍＬの水に溶解し、５×５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した。水層を濃縮し、固体を得た。収量：１３２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ、６１％。生成物を、移動相として８５／１５  水（０．１％ＴＦＡ）／ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）溶液を用いたＨＰＬＣにより精製した。流速は３ｍＬ／分、Ｒｔ＝１３分であった。
【化４６】
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【０１３３】
例８：２−［３−（５−｛７−［６−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−ヘキシルカルバモイル］−ヘプタノイルアミノ｝−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸（Ｌ７）
化合物Ｌ７は、１３（Levadala, et al. Synthesis 2004, 11, 1759-1766）と、６とを、Ｌ１について上記したのと同様に反応させることによって得た。ＨＰＬＣ精製は、移動相として７５／２５  水（０．１％ＴＦＡ）／ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）を用い、流速３ｍＬ／分、Ｒｔ＝５．５分で行なった。
【化４７】
0005680409.tif 000048
全てのレニウム化合物は、以下に詳細な例が提供されているＲｅＬ１と同様に合成した。
【０１３４】
例９：トリカルボニル（２−［３−（５−｛７−［５−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−１−カルボキシ−ペンチルカルバモイル］−ヘプタノイルアミノ｝−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸）レニウムブロミド（ＲｅＬ１）
化合物Ｌ１（０．０５８ｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの水に溶解した。［Ｒｅ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３］Ｂｒ３７の溶液（０．５ｍＬのメタノール中０．０２９ｍｇ）を添加し、反応混合物を４時間還流した。溶液を濃縮し、無色の固体を得、これを３×１０ｍＬのジエチルエーテル、３×１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２、そして最後に水で洗浄した。生成物を真空下で乾燥し、ＨＰＬＣ方法１により精製した。Ｒｔ＝１２分。
【化４８】
0005680409.tif 000049
【０１３５】
例１０：トリカルボニル（２−［３−（５−｛７−［５−（ビス−キノリン−２−イルメチル−アミノ）−１−カルボキシ−ペンチルカルバモイル］−ヘプタノイルアミノ｝−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸）レニウムブロミド（ＲｅＬ２）
ＨＰＬＣ精製のために方法２を用いた。Ｒｔ＝１６分。
【化４９】
0005680409.tif 000050
【０１３６】
例１１：トリカルボニル（２−［３−（５−｛７−［５−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−５−カルボキシ−ペンチルカルバモイル］−ヘプタノイルアミノ｝−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸）レニウムブロミド（ＲｅＬ３）
ＨＰＬＣ精製法３を用いた。流速は２ｍＬ／分、Ｒｔ＝１１．５分であった。
【化５０】
0005680409.tif 000051
【０１３７】
例１２：トリカルボニル（２［３（１−カルボキシ−５−｛７−［６−（カルボキシメチル−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−ヘキシルカルバモイル］−ヘプタノイルアミノ｝−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸）レニウムブロミド（ＲｅＬ４）
ＨＰＬＣ精製のために、方法１を用いた。Ｒｔ＝１８分。
【化５１】
0005680409.tif 000052
【０１３８】
例１３：トリカルボニル（２−（３−｛５−［８−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−オクタノイルアミノ］−１−カルボキシ−ペンチル｝−ウレイド）−ペンタン二酸）レニウムブロミド（ＲｅＬ５）
ＨＰＬＣ精製のために、方法１を用いた。Ｒｔ＝１７分。
【化５２】
0005680409.tif 000053
【０１３９】
例１４：トリカルボニル（２−｛３−［５−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−１−カルボキシ−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸）レニウムブロミド（ＲｅＬ６）
ＨＰＬＣ精製のために、方法１を用いた。Ｒｔ＝１０．１分。
【化５３】
0005680409.tif 000054
【０１４０】
例１５：トリカルボニル（２−［３−（５−｛７−［６−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−ヘキシルカルバモイル］−ヘプタノイルアミノ｝−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸）レニウムブロミド（ＲｅＬ７）
ＨＰＬＣ精製のために、方法１を用いた。Ｒｔ＝１８．０分。
【化５４】
0005680409.tif 000055
【０１４１】
例１６：２−｛３−［１−カルボキシ−５−（７−｛１−カルボキシ−５−［２−（４，７，１０−トリス−カルボキシメチル−１，４，７，１０−テトラアザ−シクロドデシ−１−イル）−アセチルアミノ］−ペンチルカルバモイル｝−ヘプタノイルアミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸（ＤＯＴＡ−Ｌ１）
Ｈ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯｔＢｕの溶液（０．３０ｇ、０．５ｍＬのＤＭＦ中０．１０７ｍｍｏｌ）を、６の撹拌された溶液（０．１００ｇ、５ｍＬの乾燥ＤＭＦ中０．１０７ｍｍｏｌ）に室温で添加し、次いで０．２ｍＬのＮＥｔ３を添加した。反応混合物を室温で１０時間撹拌した。次いで、反応混合物を減圧下で濃縮した。生成物の単離（ＣＨ２Ｃｌ２、水、Ｎａ２ＳＯ４）と、その後のフラッシュクロマトグラフィー（１０／９０  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）により、化合物１４を無色の固体として７４％の収率（０．０９０ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）で得た。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４５（１０／９０  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）。ＥＳＩＭＳ  ｍ／ｚ：１１８６．５［Ｍ＋１］＋。化合物１４（２０ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（２ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）の氷冷溶液に溶解し、１０分間撹拌した。氷浴を除去し、溶液を、１時間撹拌し続けながら室温に温めた。溶液を減圧下で蒸発させ、淡褐色の残渣を高真空下で２時間乾燥した。残渣をジエチルエーテル（３×５ｍＬ）および水（１０×２ｍＬ）で洗浄し、粗製尿素化合物１６を得た。収量：９ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、８８％。
【０１４２】
無色の生成物を真空下で乾燥し、移動相として８６／１４  水（０．１％ＴＦＡ）／アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）を用いた、流速４ｍｌ／分、Ｒｔ＝６分のＨＰＬＣによりさらに精製した。
【化５５】
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化合物１６（９ｍｇ、３００μｌのＰＢＳバッファー、ｐＨ７．２中０．０１５ｍｍｏｌ）に、ＤＯＴＡ−ＮＨＳ（Macrocyclics, TX, USAから購入）（０．０３９ｍｍｏｌ）を添加し、溶液をｒｔで３時間撹拌した。粗生成物を、移動相として８６／１４  水（０．１％ＴＦＡ）／アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）を用いた、流速４ｍｌ／分、Ｒｔ＝９分でのＨＰＬＣにより精製した。
【化５６】
0005680409.tif 000057
【０１４３】
Ｉｎ−１１１標識：溶液の最終的なｐＨが〜５．５となるように、０．２Ｎ  ＨＣｌ中の８００μＣｉの１１１ＩｎＣｌ３を、１００μｌの０．２Ｍナトリウム酢酸バッファーとともに９０℃で４５分間インキュベートした。放射性標識生成物を、移動相として９０／１０  水（０．１％ＴＦＡ）／アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）を用いた、流速４ｍｌ／分、Ｒｔ＝１８分でのＨＰＬＣにより精製した。放射性標識収率は５０％、放射化学純度は＞９５％であった。
【０１４４】
例１７：放射化学。
化合物Ｌ１〜Ｌ７を、［９９ｍＴｃ］Ｌ１について以下に記載するのと同じ一般的方法を用いて、放射性（９９ｍＴｃ標識）形態に合成した。全てのＴｃ−９９ｍ標識化合物は、＞７０％の放射化学収率、および＞９８％の放射化学純度で合成した。
［９９ｍＴｃ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３］＋の調製、典型例：１１．２ｍＣｉの９９ｍＴｃＯ４−（１ｍＬの食塩水中）をIsolinkキットに加え、反応混合物を９５℃のウォーターバスで３０分間加熱し、次いで室温まで放冷した。９９ｍＴｃＬの調製、典型例：５００μＬの［９９ｍＴｃ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３］＋溶液（２．３ｍＣｉ）を、５０μＬの１（Ｎ）ＨＣｌで中和した。これに、２００μＬのリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）溶液および３００μＬのＬ１の溶液（４ｍｇ、２．５ｍＬの水中５．０９μｍｏｌ）を添加した。これを、９５℃に３０分間保った。バイアルを室温で５分間冷却した。これを７５０μＬのＨＰＬＣ移動相で希釈し、ラジオＨＰＬＣ（方法１）により精製した。主要放射性ピークを構成する所望の生成物（１．６ｍＣｉ）は、１４分に溶出した。酸性の溶出液を１００μＬの０．１Ｍ  ＮａＨＣＯ３で中和し、減圧下で、体積を４００μＬに減少させた（ｐＨ８）。これをＰＢＳで、ex vivo体内分布実験およびイメージング実験のための所望の放射活性濃度に希釈した。放射化学収率［９９ｍＴｃ］Ｌ１：８２．０５％。放射化学純度＝９８．９９％。
【０１４５】
例１８：蛍光スペクトル
蛍光スペクトルは、Varian Cary Eclipse蛍光分光光度計を用いて、キセノンアーク灯からの３２１ｎｍの励起により記録した。化合物ＲｅＬ２は、エチレングリコールに溶解した。測定は、空気下または溶液のアルゴンパージの後で行なった。寿命の測定は、Model D2, ISS, Inc.周波数領域分光蛍光計を用いて行なった。励起波長は、ＵＶ  ＬＥＤからの３７０ｎｍであった。蛍光強度データは、スペクトル領域５４０〜６００ｎｍの帯域通過フィルターにより収集した。発光量子収量は、標準溶液として曝気した［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］Ｃｌ２の水溶液（φ＝０．０２８、４５５ｎｍの励起波長）（Crosby, G. A.; Demas, J. N. J Phys Chem 1971, 75, 991-1024）を用いた光学希釈法（optical dilute method）（Nakamaru, K. Bull Chem Soc Jpn 1982, 55, 2697-2705）により測定した。
【０１４６】
例１９：ＮＡＡＬＡＤａｓｅアッセイ
ＮＡＡＧ加水分解は、基本的に既述のとおりに行なった（Robinson, M. B.; et al. J Biol Chem 1987, 262, 14498-14506、Lupold, S. E.; et al. Cancer Res 2002, 62, 4029-4033）。簡潔に述べると、ＬＮＣａＰ細胞抽出物を、ＮＡＡＬＡＤａｓｅバッファー［５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）および０．５％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００］中、超音波処理により調製した。細胞溶解物を、阻害剤有りまたは無しで、３７℃にて１０分間インキュベートした。インキュベーション後、放射性標識基質、Ｎ−アセチル−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−（３，４−３Ｈ）グルタミン酸（NEN Life Science Products, Boston, MA）を、終濃度３０ｎＭで、１０〜５分間、３７℃にて添加した。反応を、等体積の氷冷１００ｍＭ  リン酸ナトリウムおよび２ｍＭ  ＥＤＴＡの添加により停止した。生成物を、AG 1-X8ホルメート樹脂（Bio-Rad Laboratories）陰イオン交換クロマトグラフィーにより分画し、１Ｍ  ギ酸ナトリウムで溶出し、液体シンチレーション計数により定量化した。阻害曲線は片対数プロットで決定し、ＩＣ５０値は、酵素活性が５０％阻害された濃度で決定した。アッセイは三反復で行ない、阻害実験全体を少なくとも１回繰り返し、親和性および阻害様式を確認した。データは、加水分解の線形相（linear phase）（すなわち総基質の＜２０％の切断）の間収集した。酵素阻害定数（Ｋｉ値）は、Cheng-Prusoff変換（Cheng, Y.; Prusoff, W. H. Biochem Pharmcol 1973, 22, 3099-3108）を用いて生成した。
【０１４７】
【表１】
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【０１４８】
例２０：細胞培養およびex vivo体内分布
安定してＰＳＭＡを発現するために操作されたＰＳＭＡ＋  ＰＣ３  ＰＩＰ細胞（ヒト［骨］転移性前立腺癌）およびＰＳＭＡ−ＰＣ３  ｆｌｕ細胞は、Warren Heston（Cleveland Clinic）により寄贈された。細胞は、Ｔ１７５フラスコ内で、１０％ＦＢＳおよびペニシリン／ストレプトマイシン（１００Ｕ／ｍＬ／１００μｇ／ｍＬ）添加ＲＰＭＩ１６４０培地（Sigma）を用い、３７℃にて、５％ＣＯ２を含む空気中で培養した。十分な数の細胞が培養物中に存在したときに、細胞をトリプシン処理し、無菌ハンクス緩衝生理食塩溶液（Sigma, HBSS）に入れ、血球計数器およびトリパンブルー色素を用いて計数し、細胞の生存を確認した。典型的には、２〜５×１０６個の細胞を皮下に注入し、ＰＣ３  ＰＩＰ細胞が、雄性重症複合免疫不全マウス（ＳＣＩＤ）の左肩の後方に注入され、ＰＣ３  ｆｌｕ細胞が右肩の後方に注入されるようにした。全てのin vivo実験手順は、動物実験に関する米国法に準拠して行ない、ジョンズホプキンス大学動物管理使用委員会の承認を得た。マウスは、腫瘍が直径３〜７ｍｍに達したときに、ex vivo体内分布実験またはin vivoＳＰＥＣＴ−ＣＴに用いた。
【０１４９】
異種移植片担持マウス（１７〜２０ｇ）に、２００μＬの食塩水中の３．７０ＭＢｑ（１００μＣｉ）の［９９ｍＴｃ］Ｌ１〜４を尾静脈から注入した。安楽死（頚椎脱臼）の直後に、血液を心臓穿刺により採集し、心臓、肺、肝臓、胃、膵臓、脾臓、白色脂肪、腎臓、筋肉、小腸、大腸、膀胱、腫瘍異種移植片を採取し、秤量し、オートガンマカウンター（LKB Wallace 1282 Compugamma CS Universal Gamma Counter）で計数した。動物は、注入後３０、６０、１２０と３００分に安楽死させた（１時点あたりｎ＝４）。組織への放射性医薬の取り込み値は、１：１０希釈の標準用量と比較した、１グラムあたりの注入用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として計算した。膀胱は空にし、水で洗浄し、次いで乾燥してから秤量および計数を行なった。
【０１５０】
【表２】
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【０１５１】
【表３】
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【０１５２】
【表４】
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【０１５３】
例２１：ＰＣ３  ＰＩＰおよびＰＣ３  ｆｌｕ異種移植片のＳＰＥＣＴ−ＣＴイメージング
化合物Ｌ１〜Ｌ４をイメージングにより検討した。異種移植片モデルは上記のとおりに作出した。マウスは、放射性医薬注入前および注入中に、流量０．６Ｌ／分の酸素中の１％イソフルランガスを用いて麻酔した。マウスに、尾静脈から、２００μＬのＰＢＳ、ｐＨ７中に配合した約４８０μＣｉ（１７．７６ＭＢｑ）のＬ１、Ｌ２、Ｌ３またはＬ４のいずれかを注入した。１５分間放射性医薬を取り込ませ、麻酔流量を０．８Ｌ／分に増加させながら、麻酔マウスをスキャナガントリに置き、医療テープで固定した。スキャンの間、マウスを解剖灯で照らし続けることに加えて、Chuxディスポーザブルパッドの複数の層で覆うことによりその体温を維持した。２つの対向する低エネルギーの口径０．５ｍｍのピンホールおよびチューナブル（tunable）ＣＴを備えたGamma Medica (Northridge, CA) X-SPECTスキャナを、全てのスキャンに用いた。マウスは、１８０°にわたり、５．５°、３０秒のインクリメントでスキャンした。ＣＴスキャンは、解剖学的コレジストレーションおよび減衰補正両方のために、シンチグラフィーの前に行なった。データは、2D-OSEMアルゴリズムを含む、ベンダー（Gamma Medica）が市販するソフトを用いて再構成し、融合した。
【０１５４】
例２２：in vivo結合特異性（遮断）実験
２００μＬの食塩水中の［９９ｍＴｃ］Ｌ１［１．１ｍＣｉ（４０．７ＭＢｑ）］を、ＬＮＣａＰ（ＰＳＭＡ＋）腫瘍を担持する麻酔動物に尾静脈から投与した。併行して、同様にＬＮＣａＰ腫瘍を担持する第２の動物に、総容積２００μＬの食塩水中に１．２ｍＣｉ（４４．４ＭＢｑ）の［９９ｍＴｃ］Ｌ１および１ｍｇのＰＭＰＡ（Axxora Platform, San Diego, CA）を含むカクテルを投与した。次いで、両方の動物をスキャナガントリに置いて、ＳＰＥＣＴ−ＣＴイメージングを上記のとおりに行なった。
【０１５５】
例２３：代謝実験
雄性ＣＤ−１マウス（Charles River Laboratories）に、食塩水中の１５μＣｉ（５５５ｋＢｑ）の［９９ｍＴｃ］Ｌ１を尾静脈から注入した。マウスを、注入後３０分または１時間のいずれかで頚椎脱臼により安楽死させ、その血液および選択された器官を取り出した。血液サンプルはヘパリン処理したシリンジを用いて採取し、組織はＰＢＳ（ｐＨ７．４）中での手動ホモジナイゼーションの前に氷上に置いた。血漿およびＰＢＳ中の組織ホモジネートは、１３，０００×ｇで２分間、室温にて遠心分離した。上清の一部を、５０ｍｇのクエン酸を含有する８Ｍの尿素で４ｍＬに希釈した。尿サンプルは、４ｍＬの酸性化した尿素溶液に直接添加した。次いで、サンプルを既述のとおりにＨＰＬＣによる分離に供した（Hilton, J.; et al. Nucl Med Biol 2000, 27, 627-630）。簡潔に述べると、８Ｍの酸性化された尿素中の４ｍＬのサンプルを、２ｍＬ／分で捕捉カラム（Strata-X, 19×4.4 mm, Phenomenex, Torrance, CA.）に通し、次いで、水中の１％アセトニトリルでカラムから血漿タンパク質を洗浄した。高極性成分のみを含む捕捉カラムからの流出物を、ダイオードモードで動作するデュアルＢＧＯ検出器（dual BGO detector）（Bioscan, Washington, DC）に流した。その後、事前に捕捉カラムに結合した放射性標識成分を、分析カラム（Synergi Polar-RP、250×4.6 mm、粒子径１０ミクロン、Phenomenex）上に溶離するために、溶媒を３０％アセトニトリル：５０ｍＭリン酸バッファー、ｐＨ２．４（２ｍＬ／分）に切り替えた。
【０１５６】
例２４：ＰＣ３  ＰＩＰおよびＰＣ３  ｆｌｕ細胞におけるＲｅＬ２のin vitro蛍光顕微鏡検査
化合物Ｌ２は、対応するビスキノリンキレーターが蛍光特性を有することが知られているため（Banerjee, S. R.; et al.Chem Commun (Camb) 2005, 1784-1786、Stephenson, K. A.; et al. J Am Chem Soc 2004, 126, 8598-8599、James, S.; et al. Bioconjug Chem 2006, 17, 590-596、Banerjee, S. R.; et al. Inorg Chim Acta 2006, 359, 1603-1612）、［Ｒｅ（Ｉ）（ＣＯ）３］＋コアに結合した場合に蛍光性になると仮定された。ＲｅＬ２を新たに調製した後、１０，０００個のＰＣ３  ＰＩＰおよびＰＣ３  ｆｌｕ細胞を、Lab-Tek II  ８ウェルチャンバースライド（Fisher Scientific）の各４個のウェルに別々に播種した。細胞を上記のとおりに培養し、５％ＣＯ２を含む空気中、３７℃で一晩ウェルの底に付着させた。ＲｅＬ２の連続希釈したアリコートを、６個のウェルの培地に、ウェルが、５００ｎＭ、２５０ｎＭまたは１２５ｎＭのＲｅＬ２を含み、残り２個が蛍光団を含まないように添加した。その後、結合を可能にするために、細胞を１時間インキュベーターに戻した。次に、各ウェルを、上清を除去した後に温かい培養培地を３０秒間加えることにより慎重に洗浄した。その後洗浄培地を除去し、ウェルチャンバーの内容物に添加した。次に、Dako Cytomation封入剤を適用し、ガラス製カバーグラスを付加した。封入剤を室温で２０分間乾燥させてから、スライドを４℃にて一晩保管した。その後、細胞を、Semrock DAPI/FITC/Texas Redトリプルフィルターキューブを備えたOlympus BX61蛍光顕微鏡を用いて観察した。励起は４９４ｎｍで行い、放出された蛍光を６２８ｎｍで収集した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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