(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
結晶形の無水８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオントリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（式（ＩＡ））：
【化１】
0005666464.tif 000013
である化合物。
【請求項２】
結晶形が、以下のピーク：
【表１】
0005666464.tif 000014
を含むＸＲＰＤパターンを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
結晶形が、ＤＳＣサーモグラムで２１２±２℃の融解開始温度を有する溶融吸熱を特徴とする、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
結晶形が、固体生成物のＡＴＲ−ＩＲスペクトルにおける以下の吸収ピーク：３３７０、３０４１、２９４６、２８５８、１６８０、１６５６、１５２８、１２６６、１２４３、１０７８、１０６８、１０４９±１ｃｍ−１を特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
ａ）請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物およびｂ）１種または複数の治療活性剤を含んでなる、組合せ物。
【請求項６】
ａ）請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物およびｂ）ナイアシンまたはアトロバスタチンナトリウムを含んでなる、組合せ物。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物を含んでなる、医薬組成物。
【請求項８】
混合型脂質異常症、糖尿病の脂質異常症または高リポ蛋白血症の治療のための、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ＩＩ型糖尿病の治療のための、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
糖尿病の脂質異常症、混合型脂質異常症、心不全、高コレステロール血症、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、高トリグリセリド血症、ＩＩ型糖尿病、Ｉ型糖尿病、インスリン抵抗性、高脂血症、神経性食欲不振症、肥満症、冠動脈疾患、血栓症、アンギナ、慢性腎不全、末梢血管疾患または卒中の治療のための、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ａ）請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物およびｂ）１種または複数の薬学的に許容される担体を含んでなる、医薬製剤。
【請求項１２】
式（Ａ）：
【化２】
0005666464.tif 000015
の化合物をトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンと混合するステップを含んでなる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオンの特定の新規の塩に関する。
【０００２】
本発明は、詳細には、本明細書において式（ＩＡ）の化合物と呼ばれる、８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン（すなわち、８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオントリスヒドロキシメチルアミノメタン（ＣＡＳ名で）、または８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール（ＩＵＰＡＣ名で）としても定義される）のトリスヒドロキシメチルアミノメタン（トリス）塩、前記化合物を含む医薬製剤、その調製方法およびその使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＰＣＴ国際特許公開ＷＯ２００５／０７７９５０（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）は、式（Ｉ）：
【化１】
0005666464.tif 000002
の治療上活性なキサンチン化合物、対応する前記化合物の製造、前記活性化合物を含む医薬製剤、および療法、特にＨＭ７４Ａ受容体の不十分な活性化を一因とするまたは受容体の活性化が有益となる疾患の治療における化合物の使用を開示している。
【０００４】
８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン化合物（すなわち遊離酸形）は、ＰＣＴ国際特許出願公開ＷＯ２００５／０７７９５０中の式（Ａ）：
【化２】
0005666464.tif 000003
として実施例１２に記載されている。ＷＯ２００５／０７７９５０は、その全体が引用により本明細書に包含される。
【０００５】
本発明はここで、８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオントリスヒドロキシメチルアミノメタン（ＣＡＳ名で）、または８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール（ＩＵＰＡＣ名で）としても知られる、８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン（上記「式（Ａ）」として識別される）の新規のトリス塩（すなわち、トリスという用語が、式（ＨＯＣＨ２）３ＣＮＨ２を有するトリスヒドロキシメチルアミノメタンとして知られる有機化合物の略語である）を識別する。８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン（式（Ａ））のトリス塩は本明細書において式（ＩＡ）と呼ばれる。
【化３】
0005666464.tif 000004
トリス塩（式（ＩＡ））は上で定義された遊離酸（式（Ａ））より優れている。詳細には、トリス塩は、特に遊離酸形と比較した場合に、強化された物理的安定性を示すことがわかっている。「強化された物理的安定性」という用語は、トリス塩が、不可欠な製造工程中の水和によっても、その本来の形態にとどまること、および容易に別の形態に転化（または部分的に転化）しないことを意味する。対照的に遊離酸は、水性の処理ステップ中（例えば湿式造粒中）に水和した形態に容易に転化されることがわかっている。
【０００６】
さらにトリス塩は、より速い吸収を示すＣｍａｘの増加とＴｍａｘの減少を示し、遊離酸より高い溶解性を持つ。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
一態様において、本発明は、８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオントリスヒドロキシメチルアミノメタン（ＣＡＳ名で）、または８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール（ＩＵＰＡＣ名で）としても知られる、８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオンの新規のトリス塩（式（ＩＡ））に関する。
【０００８】
別の態様において、式（ＩＡ）の化合物は、無水物である。本発明の文脈において、無水物という用語は、結晶格子内に水が存在しないことを意味する。
【０００９】
式（ＩＡ）の化合物は、非晶質または結晶である。一態様において、式（ＩＡ）の化合物は結晶である。
【００１０】
一態様において、結晶形の無水物としての式（ＩＡ）の化合物は、次のピークを含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを特徴とする：
【表１】
0005666464.tif 000005
【００１１】
別の態様において、結晶形の無水物としての式（ＩＡ）の化合物は、次のピークを含むＸＲＰＤパターンを特徴とする：
【表２】
0005666464.tif 000006
【００１２】
別の態様において、結晶形の無水物としての式（ＩＡ）の化合物は、図２に実質的に示されるようなＸＲＰＤパターンを特徴とする。
【００１３】
一態様において、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）によって、適切には、アルミニウムパンを使用し、密封しないで軽く圧縮し１０℃・ｍｉｎ−１の加熱速度で求められる２１２±２℃の融解開始温度を有する融解吸熱を、結晶形の無水物としての式（ＩＡ）の化合物は特徴とする。
【００１４】
一態様において、結晶形の無水物としての式（ＩＡ）の化合物は、固体生成物の全反射吸収分光法赤外線（ＡＴＲ−ＩＲ）スペクトル中に、３３７０、３０４１、２９４６、２８５８、１６８０、１６５６、１５２８、１２６６、１２４３、１０７８、１０６８、１０４９±１ｃｍ−１の吸収ピークを持つことを特徴とする。
【００１５】
別の態様において、結晶形の無水物としての式（ＩＡ）の化合物は、図６に実質的に示されるＡＴＲ−ＩＲスペクトルを持つことを特徴とする。
【００１６】
全体にわたって論じ示されてきたように、本発明は特定の固体状の結晶形を含む。このような形態を特徴づける方法はいくつか存在し、本発明は、本発明の化合物を特徴づけるのに選択される方法または使用される計測機によって限定されるべきではない。例えばＸ線干渉パターンに関して、当業界で知られているように試験パターンの回折ピーク強度は、主として用意された試料中の好ましい配置（結晶の非ランダム配置）により変動することがある。したがって本発明の範囲は、当業者によって認識される特性評価の変動性に照らして考慮する必要がある。
【００１７】
一態様において、本発明は、式（ＩＡ）の化合物を含む薬剤組成物に関する。
【００１８】
一態様において、本発明は、式（ＩＡ）の化合物の治療における使用に関する。
【００１９】
別の態様において、本発明は、ＨＭ７４Ａ受容体の不十分な活性化を一因とするまたは受容体の活性化が有益となる疾患、詳細には、脂質異常症、高リポたんぱく血症、混合型脂質異常症、糖尿病性脂質異常症、心不全、過コレステリン血心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、高トリグリセリド血症、ＩＩ型糖尿病、Ｉ型糖尿病、インシュリン抵抗性、高脂血症、神経性食欲不振症、肥満症、冠動脈疾患、血栓症、アンギナ、慢性腎不全、末梢血管疾患または脳卒中の治療に使用する式（ＩＡ）の化合物に関する。
【００２０】
別の態様において、本発明は、ＨＭ７４Ａ受容体の不十分な活性化を一因とする疾患または受容体の活性化が有益となる疾患、詳細には、脂質異常症、高リポたんぱく血症、混合型脂質異常症、糖尿病性脂質異常症、心不全、過コレステリン血心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、高トリグリセリド血症、ＩＩ型糖尿病、Ｉ型糖尿病、インシュリン抵抗性、高脂血症、神経性食欲不振症、肥満症、冠動脈疾患、血栓症、アンギナ、慢性腎不全、末梢血管疾患または脳卒中の治療に使用する薬剤の製造における式（ＩＡ）の化合物の使用に関する。別の態様において、本発明は、式（ＩＡ）の化合物の治療有効量の投与を含む、ＨＭ７４Ａ受容体の不十分な活性化を一因とする疾患または受容体の活性化が有益となる疾患、詳細には、脂質異常症、高リポたんぱく血症、混合型脂質異常症、糖尿病性脂質異常症、心不全、過コレステリン血心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、高トリグリセリド血症、ＩＩ型糖尿病、Ｉ型糖尿病、インシュリン抵抗性、高脂血症、神経性食欲不振症、肥満症、冠動脈疾患、血栓症、アンギナ、慢性腎不全、末梢血管疾患または脳卒中の治療方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン（式（ＩＡ））の無水物形トリス塩のＩＲスペクトルを示す図である。
【図２】８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン（式（ＩＡ））の無水物形トリス塩のＸ線の粉末回折を示す図である。
【図３】８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン（式（ＩＡ））の無水物形トリス塩の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図４】８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン（式（ＩＡ））の無水物形トリス塩の１３ＣのＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図５】８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン（式（ＩＡ））の無水物形トリス塩のエレクトロスプレーイオン化スペクトルを示す図である。
【図６】８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン（式（ＩＡ））無水物形トリス塩の全反射吸収分光法（ＡＴＲ）赤外線スペクトルを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本明細書および付随の特許請求の範囲の全体を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および変形の「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの語は、包括的に解釈されるべきである。すなわちこれらの語は、文脈が許せば、特に記述されない他の要素または完全体が包含され得ることを伝えるように意図している。
【００２３】
本明細書において使用する用語「治療有効量」とは、例えば研究者または臨床医が求めている組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を引き起こすであろう薬物または薬剤の量を意味する。更に、用語「治療的有効量」とは、そのような量を投与されていない対応する被験体と比較して、疾患、障害もしくは副作用の改善された治療、治癒、予防もしくは軽減、または疾患もしくは障害の進行速度の低下をもたらす任意の量を意味する。この用語はまた、正常な生理的機能を増大させるために効果的な量をその範囲内に包含する。
【００２４】
本明細書において使用される場合、用語「薬学的に許容される」は、薬学的な使用に適切な化合物を意味する。医薬での使用に適切な式（ＩＡ）の化合物の溶媒和物は、対イオンまたは付随する溶媒が薬学的に許容されるものである。
【００２５】
本明細書において使用される場合、用語「治療すること」または「治療」は、病気の症候の緩和および／または悪化の遅延を意味し、また無症候性の患者の症候再発の抑制を含むことができる。
【００２６】
式（ＩＡ）の化合物への言及は、化合物の溶媒和物（例えば水和物）を包含する。
【００２７】
有機化学の当業者は、多くの有機化合物が、反応する、または沈澱するもしくは結晶化する溶媒と、錯体を形成することができることを認識しているものである。
【００２８】
式（ＩＡ）の化合物の溶媒和物は本発明の範囲内に包含される。本明細書において使用される場合、用語「溶媒和物」は、溶質（式（ＩＡ）の化合物）および溶媒によって形成される可変の化学量論の錯体を指す。本発明のためのそのような溶媒は、溶質の生物学的活性を妨害することはできない。適切な溶媒の例は、水、メタノール、エタノールおよび酢酸などを含むが、これらに限定されない。
【００２９】
一態様において、本発明で使用される適切な溶媒（複数可）は、薬学的に許容される溶媒（複数可）である。適切な薬学的に許容される溶媒の例は、水、エタノールおよび酢酸などを含むが、これらに限定されない。本明細書において使用される場合、用語「水和物」は、水と、または水の存在下において形成される可変の化学量論の錯体を指す。本発明の一態様において、使用される溶媒は水である。
【００３０】
医薬での可能性のある使用のため、一態様において、８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオンのトリス塩は薬学的に許容される。本発明は、式（ＩＡ）の化合物の化学量的および非化学量的な形態のすべての範囲内に含まれる。
【００３１】
一態様において、本発明は、８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオンのトリス塩形に関し、その溶媒和物または水和物を含むことができる。
【００３２】
本発明のさらなる態様として、脂質異常症、高リポ蛋白血症、糖尿病の脂質異常症、混合型脂質異常症、心不全、高コレステロール血症、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、高トリグリセリド血症、ＩＩ型糖尿病、Ｉ型糖尿病、インスリン抵抗性、高脂血症、神経性食欲不振症および肥満症の治療で使用される医薬の製造における式（ＩＡ）の化合物の使用が提供される。したがって、本化合物はまた、冠動脈疾患、血栓症、アンギナ、慢性腎不全、末梢血管疾患または卒中の治療における使用に提供される。
【００３３】
さらに、本発明は、関節の炎症性疾患または症状、特に関節炎（例えば関節リウマチ、変形性関節炎、人工関節障害）の、または胃腸管（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病、および他の炎症性腸、胃腸疾患、感染に起因する胃炎および粘膜の炎症、非ステロイド系抗炎症薬により誘発される腸疾患）の、肺（例えば成人型呼吸窮迫症候群、喘息、嚢胞性繊維症または慢性閉塞性肺疾患）の、心臓（例えば心筋炎）の、神経組織（例えば多発性硬化症）の、膵臓（例えばｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｉｔｕｓに付随する炎症およびその合併症）の、腎臓（例えば糸球体腎炎）の、皮膚（例えば皮膚炎、乾癬、湿疹、じんましん、熱傷）の、眼（例えば緑内障）の、ならびに移植器官（例えば拒否反応）の、多臓器疾患（例えば全身性エリテマトーデス、敗血症）およびウイルスまたは細菌感染の炎症性後遺症ならびにアテローム性動脈硬化症および後続の低酸素性または虚血性損傷（再潅流を伴うまたは伴わない）に付随する炎症性症状（例えば脳の、または虚血性心疾患において）の治療で使用される医薬の製造における式（ＩＡ）の化合物の使用を提供する。
【００３４】
さらなるまたは代替の態様において、ＨＭ７４Ａ受容体の不十分な活性化を一因とする、またはこの受容体の活性化が有益であろう症状を有するヒト被験体の治療方法であって、前記ヒト被験体に式（ＩＡ）の化合物の有効量を投与することを含む方法が提供される。
【００３５】
より詳しくは、本発明は、治療を必要とするヒト被験体において、脂質異常症、高リポ蛋白血症、糖尿病の脂質異常症、混合型脂質異常症、心不全、高コレステロール血症、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、高トリグリセリド血症、２型糖尿病、Ｉ型糖尿病、インスリン抵抗性、高脂血症、神経性食欲不振症または肥満症、の治療方法であって、前記ヒト被験体に式（ＩＡ）の化合物の治療有効量を投与することを含む方法を提供する。
【００３６】
したがって、これらの化合物は、また冠動脈疾患、血栓症、アンギナ、慢性腎不全、末梢血管疾患または卒中の治療方法であって、前記ヒト被験体に式（ＩＡ）の化合物の治療有効量を投与することを含む方法にとって好都合である。
【００３７】
所望の生物学的作用を達成するために必要な式（ＩＡ）の化合物の量は、当然多くの因子、例えば投与の様式およびレシピエントの正確な臨床症状に依存する。一般に、一日量は、１ｍｇから５００ｍｇ、通常５ｍｇから２５０ｍｇまたは５ｍｇから２００ｍｇの範囲にある。例えば７．３５ｍｇ、３６．７５ｍｇ、７３．５ｍｇまたは１４７ｍｇは５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇおよび１００ｍｇの遊離酸に相当する。静脈内の用量は、例えば、０．０１ｍｇから０．１ｇ、通常０．０１ｍｇから１０ｍｇの範囲にあってよく、毎分０．１μｇから１ｍｇの浸剤として都合よく投与することができる。この目的に対して適切な浸剤液は、例えば、１ミリリットル当たり、０．０１μｇから０．１ｍｇを含んでいてもよい。単位用量は、例えば０．０１μｇから１ｇのトリス塩を含んでいてもよい。したがって、注射用のアンプルは、例えば、０．０１μｇから０．１ｇ含んでいてもよく、また錠剤またはカプセル剤などの経口的に投与可能な単位用量製剤は、例えば０．１ｍｇから１ｇ含んでいてもよい。本発明の化合物が上記用量範囲で投与される場合、毒物学上の作用は示されない／予想されない。
薬剤組成物
【００３８】
本発明の方法で使用するために、式（ＩＡ）の化合物を原体物質として投与することができるが、活性成分を医薬製剤中に与えることは好ましく、例えば、意図する投与ルートおよび標準的な薬学の慣行に関して選択される少なくとも１種の薬学的に許容される担体と、この薬剤は混合される。
【００３９】
したがって、本発明は、１種または複数の薬学的に許容される担体（複数可）、希釈剤（複数可）および／または添加剤（複数可）と付随して、式（ＩＡ）の化合物を含む薬剤組成物を提供する。担体、希釈剤および／または賦形剤は、組成物の他の原料と適合し、かつそのレシピエントに対して有害でないという意味において「許容」されなければならない。
【００４０】
したがって、本発明は、ａ）式（ＩＡ）の化合物およびｂ）１種または複数の薬学的に許容される担体を含む薬剤組成物を提供する。
【００４１】
用語「担体」は、活性化合物が投与される希釈剤、賦形剤および／またはビヒクルを指す。本発明の薬剤組成物は、複数の担体の組合せを含んでいてもよい。そのような製薬担体は、水、塩水、デキストロース水溶液、グリセリン水溶液、および石油、動物、植物または合成起源のものを含むオイル（落花生油、大豆油、鉱油、ごま油など）無菌の液体であってもよい。水または塩水溶液ならびに水性のデキストロースおよびグリセリン溶液は、担体として、特に注射剤用に好ましくは使用される。適切な製薬担体はＥ．Ｗ．  Ｍａｒｔｉｎ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”に記載されている。製薬担体の選択は意図する投与ルートおよび標準的な薬学の慣行に関して選択することができる。さらに、薬剤組成物は、担体に加えて、適切な結合剤（複数可）、潤滑剤（複数可）、懸濁剤（複数可）、被覆剤（複数可）および／または可溶化剤（複数可）を含むことができる。
【００４２】
製剤は、経口、直腸、局所、口腔内（例えば、舌下）および非経口（例えば、皮下、筋肉内、皮内または静脈内）の投与に対して適切なものを含む。投与の最も好ましい形態は経口である。
【００４３】
経口投与に適する製剤は、錠剤、カプセル剤、カシェ剤、ロゼンジ剤などの不連続単位として提供され、その各々は、散剤もしくは粒剤として、水性もしくは非水性の液体溶液もしくは懸濁液として、または水中油型もしくは油中水型乳剤として、所定量の式（ＩＡ）の化合物を含有してもよい。一般に、製剤は、式（ＩＡ）の活性化合物を、液体もしくは微粉固体担体または両方と、一様に密接に混ぜ、また必要ならば、次に、生成物を成形することにより調製される。例えば、錠剤は、式（ＩＡ）の化合物の粉体または顆粒、場合によって１種または複数の副成分とともに圧縮または成型することにより、調製することができる。圧縮錠剤は、場合によって、結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤および／または界面活性／分散剤（複数可）と混合された、粉体または顆粒などの自由流動形態のコンパウンドを、適切な機械で、圧縮することにより調製することができる。湿製錠剤は、不活性希釈液で湿らせた粉末コンパウンドを適切な機械で、成型することにより製造することができる。
【００４４】
経口投与のための錠剤およびカプセル剤は、結合剤（例えば、シロップアラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントゴム、デンプンの糊液またはポリビニルピロリドン）；充填材（例えばラクトース、微結晶性セルロース、砂糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウムまたはソルビトール）；潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ポリエチレングリコール、シリカ）；崩壊剤（例えばジャガイモでんぷん、クロスカルメロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム）；またはラウリル硫酸ナトリウムなどの湿潤剤などの、従来からの賦形剤を含んでいてもよい。錠剤は当業界で周知の方法によって被覆することができる。経口液状調合薬は、例えば水溶性か油性の、懸濁液、溶液、乳濁液、シロップまたはエリキシルの形態をしていてもよく、または使用の前に水または他の適切なビヒクルで構成される乾燥生成物として提供することができる。そのような液状調合薬は、従来からの添加剤、例えば懸濁化剤（例えばソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース／糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル剤、水素化食用脂など）；乳化剤（例えばレシチン、ソルビタンモノオレアート、アラビアゴム）；（食用油を含んでよい）非水性のビヒクル（例えば扁桃油、ヤシ油、油性エステル、プロピレングリコールまたはエチルアルコール）；または防腐剤（例えばｐ−オキシ安息香酸メチル、ｐ−オキシ安息香酸プロピルまたはソルビン酸）を含んでよい。その調合薬は、また適切な緩衝塩、着香剤、着色剤および／または甘味剤（例えばマンニトール）を含んでもよい。
【００４５】
口腔内（舌下）投与に適切な製剤は、風味をつけた基剤（通常、スクロースおよびアラビアゴムまたはトラガカントゴム）中に式（ＩＡ）の化合物を含むロゼンジ剤、および不活性基剤（ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアラビアゴムなど）中に式（ＩＡ）の化合物を含むトローチを含む。
【００４６】
非経口的投与に適切な本発明の製剤は、式（ＩＡ）の化合物の無菌の水性調合薬を含むのが好都合である。製剤は意図するレシピエントの血液と等張とすることができる。これらの調合薬を静脈内に投与することができるが、投与は皮下、筋肉内または皮内注射によっても達成することができる。そのような調合薬は、式（ＩＡ）の化合物を水と混ぜて結果として得られる溶液を無菌および血液と等張とすることによって調製することができる。本発明による注射可能な組成物は、一般的に０．１から５重量／重量％の式（ＩＡ）の化合物を含む。
【００４７】
したがって、本発明による化合物を含む非経口的投与に適切な本発明の製剤は、大量注射または持続注入による非経口的投与用に製剤化することができ、また、例えば、アンプル、バイアル、少量の浸剤またはプレフィルドシリンジとして、単位用量形態で、または添加防腐剤を含む多用量容器で提供することができる。組成物は、水性または非水性のビヒクル中で溶液、懸濁液または乳濁液などの形態をとることができ、また抗酸化剤、緩衝剤、抗菌薬および／または毒性調節剤などの製剤化剤を含んでいてもよい。代替として、活性成分は、使用の前に適切なビヒクル（例えば無菌の、発熱性物質を含まない水）で構成するための粉末形態であってもよい。乾燥固体組成物（ｄｒｙ  ｓｏｌｉｄ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）は、無菌粉末を個々の無菌容器内に無菌で充填することによって、または無菌溶液を各容器内に無菌で充填し、凍結乾燥することによって調製することができる。
【００４８】
直腸投与に適切な製剤は単位用量坐薬として提供することができる。これらは、１種または複数の従来の固体の担体、例えば、カカオ脂またはグリセリドと、式（ＩＡ）の化合物を混ぜ、次いで結果として得られる混合物を成形することにより調製することができる。
【００４９】
［１１］  皮膚への局所塗布に適切な製剤は、軟膏、クリーム剤、ローション剤、パスタ剤、ゲル剤、スプレー剤、エアゾール剤またはオイル剤の形態をとってもよい。使用することができる担体は、ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、アルコールおよびこれらの２種以上の組合せを含む。式（ＩＡ）の化合物は、一般に、組成物の０．１から１５重量／重量％、例えば０．５から２％の濃度で存在する。
【００５０】
本明細書において使用される局所投与によって、本発明者らはガス注入法および吸入による投与を含む。局所投与についての様々なタイプの製剤の例は、吸入器または注入器、または点滴薬（例えば点眼または点鼻剤）で使用される、軟膏、クリーム剤、ローション剤、散剤、ペッサリー、スプレー剤、エアゾール剤、カプセル剤またはカートリッジを含む。
【００５１】
軟膏およびクリーム剤は、例えば、水性または油性の基剤を用いて、適切な増粘剤および／またはゲル化剤および／または溶媒を添加して製剤化することができる。したがって、そのような基剤は、例えば、水および／または流動パラフィンまたは落花生油もしくはヒマシ油などの植物油などのオイル、またはポリエチレングリコールなどの溶媒を含むことができる。使用することができる増粘剤は、液性パラフィン、ステアリン酸アルミニウム、セトステアリルアルコール、ポリエチレングリコール、微結晶ワックスおよびみつろうを含む。
【００５２】
ローション剤は水溶性または油性の基剤を用いて製剤化され、一般に、１種または複数の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁化剤または増粘剤を含む。
【００５３】
外用のための散剤は、任意の適切な粉末基剤、例えば、タルク、ラクトースまたはデンプンの助力により形成することができる。点滴薬は、一種または複数の分散剤、可溶化剤または懸濁化剤を含む水性または非水性基剤を用いて製剤化することができる。
【００５４】
スプレー組成物は、例えば、加圧パックから送達される水性の溶液もしくは懸濁液として、またはエアゾールとして、適切な推進薬（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン、１，１，１，２−ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｅｔｈａｎｅ、二酸化炭素または他の適切なガス）を使用して製剤化することができる。
【００５５】
吸入器または注入器において使用するための例えばゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、本発明の化合物と適切な粉末基剤、例えばラクトースまたはデンプンとの粉末混合物を含有するように製剤化することができる。
【００５６】
本発明による薬剤組成物を、他の治療活性剤と組み合わせ、例えば、他の種類の脂質異常症薬（例えば、スタチン、フィブレート、胆汁酸結合樹脂またはニコチン酸）と併用することもできる。
【００５７】
式（ＩＡ）の化合物を、１種または複数の他の治療活性剤と組み合わせ、例えば他の種類の脂質異常症薬、例えば、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリール−補酵素Ａ還元酵素阻害薬（スタチン）もしくはフィブレートまたは胆汁酸結合樹脂もしくはニコチン酸と併用することができる。
【００５８】
一態様において、本発明は、ａ）式（ＩＡ）の化合物およびｂ）１種または複数の治療活性剤を含んでなる組合せを提供する。
【００５９】
したがって、本発明は、さらなる実施形態において、ＨＭ７４Ａ受容体の不十分な活性化を一因とする、または該受容体の活性化が有益である疾患の治療におけるそのような組合せの使用、ならびに脂質異常症、高リポ蛋白血症、糖尿病の脂質異常症、混合型脂質異常症、心不全、高コレステロール血症、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症および高トリグリセリド血症、ＩＩ型糖尿病、Ｉ型糖尿病、インスリン抵抗性、高脂血症、神経性食欲不振症または肥満症の組合せ治療のための医薬の製造における式（ＩＡ）の化合物の使用を提供する。
【００６０】
本発明の化合物が他の治療剤と組み合わせて使用される場合、化合物は任意の都合のよい経路によって連続してまたは同時に投与することができる。
【００６１】
上に言及された組合せは、医薬製剤の形態での使用に都合よく提供することができ、薬学的に許容される担体または賦形剤と一緒に上に最適に定義される組合せをこのようにして含む医薬製剤は、本発明のさらなる態様を含む。そのような組合せの個々の成分は、別々の医薬製剤または混ぜ合わせた医薬製剤で連続してまたは同時に投与されてもよい。
【００６２】
同一の製剤に組み合わせる場合、２つの成分が安定で、かつ、互いおよび製剤の他の成分と適合しなければならず、投与に対して製剤化することができることが認識されよう。別々に製剤化される場合は、当分野でその種の化合物について知られている方法で都合よく、任意の好都合な製剤で提供することができる。
【００６３】
同じ疾患に対して活性を有する第２の治療剤と組み合わせる場合、各成分の用量は、本化合物が単独で使用される場合の用量と異なっていてもよい。適切な用量は、当業者に容易に認識されるだろう。
【００６４】
したがって本発明は、さらなる態様において、他の治療活性剤と一緒に式（ＩＡ）の化合物を含んでなる組合せを提供する。ナイアシンまたはアトロバスタチンナトリウムである他の治療活性剤の例。
【００６５】
上に言及された組合せは、医薬製剤の形態での使用に対して都合よく提供することができる。したがって、その薬学的に許容される担体と一緒に上に定義される組合せを含む医薬製剤は、本発明のさらなる態様を表す。
【００６６】
本発明の化合物は有用な作用持続時間を有する。
調製の方法
【００６７】
本発明は、以下のスキーム１に示される８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオンのトリス塩を調製する方法をさらに提供する。スキーム１：
【化４】
0005666464.tif 000007
【００６８】
ステージ１、２、３、４および５は国際公開第２００５／０７７９５０号に記載される通りであり、これはその全体を参照として組み込む。
【００６９】
ステージ１：臭化アリルを用いるグアノシンのアルキル化
ステージ２：亜硝酸ナトリウムを用いるジアゾ化およびそれに続くキサンチンを形成するための加水分解
ステージ３：塩素化
ステージ４：Ｎ３位のアルキル化ならびに／またはＮ１位およびＮ３位のジアルキル化  
ステージ５：パラジウム触媒によるアリル基の除去
【００７０】
代替として、ステージ５もジメチルバルビツル酸を用いる脱保護により行うことができる。
【００７１】
トリス塩を調製する最終ステージは、下記に示すトリスヒドロキシメチルアミノメタンと式（Ａ）の化合物の反応である。
【化５】
0005666464.tif 000008
【００７２】
以下に述べる実施例は、本発明の例証であって、決して本発明の範囲を限定するようには意図されない。
実施例
実施例１：８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオントリスヒドロキシルメチルアミノメタン塩（すなわち８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン−２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール（ＩＵＰＡＣ名）としても公知）
【００７３】
１０容積のアセトニトリル中で８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン１．０グラムのスラリーを形成し、これに水１．２容積中のトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン１．１当量を添加した。反応混合物を加熱して約７５から７７℃で還流し、前述の成分を溶解した。成分は初め溶解し、迅速で自発的な結晶形成が続いた。８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオントリスヒドロキシルメチルアミノメタン塩の結晶は濾過によって単離した（生成物収率：９４％）。
実施例２：８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオントリスヒドロキシルメチルアミノメタン塩の調製
【００７４】
スラリーを８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン（２２ｋｇ、およそ１６％の水を含む）およびアセトン（１２５Ｌ）から形成し、これに、水（７９．８ｋｇ）中のトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（９．３ｋｇ）の溶液を室温で添加した。還流温度に近いおよそ５５℃に加熱した後、この溶液を５５℃で１．２ミクロンのフィルターカートリッジを通して濾過し、バッチ温度を６１から６３℃に調節した。
【００７５】
３０分間保持した後、その溶液は５３から５７℃に冷却し、種結晶（０．０６２ｋｇ）をまいたが、これは同じ方法でアセトン水晶出から得られたか、または上記実施例１の手順でアセトン（２Ｌ）中のスラリーとして得られた。この工程において、晶出は、粒子サイズの制御を提供し、かつ所望の生成物の形態を確実に得るために種をまく。その混合物は５３から５７℃で１時間撹拌した。次いで、結果として得られたスラリーは、撹拌しながら１８から２２℃に徐々に冷却し、アセトン（７５Ｌ）を３０分にわたり装填した。１８から２２℃で３０分間撹拌した後、結果として得られたスラリーを−５から０℃に冷却し、１８時間保持し、濾過し、予め冷却された（−５から０℃）アセトン（７５Ｌ）を用いて洗浄した。結果として得られた８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオントリスヒドロキシルメチルアミノメタン塩は真空下で４５から５０℃で乾燥した。収量：１８．２ｋｇ（６７％収率）。
実施例３：８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオントリスヒドロキシルメチルアミノメタン塩の調製
【００７６】
８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン（２９ｋｇ）を約９０から１００°Ｃの高温でＤＭＳＯ（４０Ｌ）に溶解し、５ミクロンのフィルターを通して濾過し、続いてＤＭＳＯ（１３Ｌ）で管路洗浄した。トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（１５．１ｋｇ）を水（４４Ｌ）に溶解し、５ミクロンのフィルターを通して濾過して親酸と同一の容器に入れ、続いて水（１５Ｌ）で管路洗浄した。次いで、容器の内容物をおよそ９５℃に加熱し、透明な溶液が得られたことを確認した。内容物は８８℃に冷却し、種結晶をまいたが、これは、同じ方法でアセトン水晶出から得られたか、または上記実施例１の手順で得られた。この工程において、晶出は、粒子サイズの制御を提供し、かつ所望の生成物の形態を確実に得るために種をまく。種のあるスラリーは、およそ３０分間保持し、０℃に冷却した。生成物を、濾過によって単離し、〜５℃のＤＭＳＯ／水（１：１、５８Ｌ）および〜５℃のアセトン（２×５８Ｌ）を用いて洗浄した。結果として得られた生成物は真空下で５０℃で乾燥した。収量：３５．４ｋｇ（８３％収率）
実施例４：８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオントリスヒドロキシルメチルアミノメタン塩製剤の調製
【００７７】
【表３】
0005666464.tif 000009
１  ３６．７５ｍｇ、７３．５０ｍｇまたは１４７．００ｍｇの量のトリス塩が、１．４７の変換係数で算定して、２５ｍｇ、５０ｍｇまたは１００ｍｇの遊離酸それぞれを得るために必要である。
薬物物質の量は純度アッセイに基づいて調節することができる。
２  水は加工中に除去する。
３  植物起源。
トリス塩、マンニトール粉末、ポビドン、クロスポビドンおよび純水は、液床造粒機を用いて造粒した。次いで、液床を乾燥した。次いで、造粒物は、微結晶性セルロース、クロスポビドンおよびステアリン酸マグネシウムとブレンドし、タブレット成形機で圧縮した。次いで、結果として得られた錠剤を、ｏｐａｄｒｙの水溶性のフィルムコーティングおよび水で覆った。
【００７８】
ポビドン（ポリビニルピロリドン）は、ＢＡＳＦ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓによって供給される、直鎖状の１−ビニル−２−ピロリドン基からなる平均分子量約１０，０００から約７００，０００の範囲の合成高分子である。ポビドンは造粒工程の間、結合剤として使用される。
【００７９】
クロスポビドンは架橋したポビドンで、錠剤中で２から５％の濃度で使用される水不溶性の錠剤崩壊剤および溶解剤である。これはＢＡＳＦ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓによって供給される。
【００８０】
Ｏｐａｄｒｙ  Ｗｈｉｔｅ  ＯＹ−Ｓ−９６０３  はＣｏｌｏｒｃｏｎによって供給される商標のフィルムコーティング材料である。
Ｏｐａｄｒｙ  Ｗｈｉｔｅ  ＯＹ−Ｓ−９６０３  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｆｉｌｍ  Ｃｏａｔｉｎｇ．の製造および管理についてはＣｏｌｏｒｃｏｎ  Ｄｒｕｇ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｆｉｌｅ  Ｎｕｍｂｅｒ  ７２１を参照する。
【００８１】
本発明によると、本発明の化合物（すなわちその溶媒和物を含む）の様々な形態は、異なる特性評価または同定法を使用して、互いを識別する。そのような手法は、固体１３Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）、３１Ｐ核磁気共鳴（ＮＭＲ）、赤外線（ＩＲ）、ラマン、Ｘ線粉末回析など、および／または示差走査熱量測定（ＤＳＣ）（すなわち、加熱し、冷却し、または一定温度で保持するときに試料に吸収されまたは放出されるエネルギー量（熱量）を測定する手段）などの他の手法を含む。
【００８２】
具体的には、本発明のトリス塩は、図１から６に記載されたデータによって実質的に示す。
【００８３】
下記の特性データを、本発明（式（ＩＡ））の８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオンのトリスヒドロキシメチルアミノメタン（トリス）塩について作成した。
【００８４】
スペクトルおよび回析データは、用いる温度、濃度および計測などの様々な因子によって多少変動することが認識されるであろう。
実施例５：紫外／可視吸収スペクトル
【００８５】
紫外／可視吸収スペクトルはアセトニトリル：水、９５：５において得られた。トリス塩０．０２ｍｇ／ｍｌの試料を調製し、１ｃｍの路長で分析した。スペクトルは、Ｖａｒｉａｎ  Ｃａｒｙ  ５０分析装置で３００ｎｍ／分のスキャン速度で収集した。
【表４】
0005666464.tif 000010
実施例６：示差走査熱量測定（ＤＳＣ）：
融点
【００８６】
本発明のトリス塩の融点または温度特性は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を用いて調べた。溶融の開始は、典型的には２１２℃±２℃で観察される。ＤＳＣトレースはＴＡ  Ｑ１０００熱量計を使用して得られた。試料を、アルミニウムパンに量り取り、パン蓋を上に置き、パンを密閉せずに軽く圧縮した。試験は１０＊Ｃ分−１の加熱速度を使用して行った。
実施例７および８：１Ｈおよび１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル
【００８７】
１ＨＮＭＲスペクトルは４００ＭＨｚのＶａｒｉａｎ分析装置で２９８Ｋで得られた。試料をＤＭＳＯ−ｄ６に溶解し、化学シフトは０ｐｐｍのテトラメチルシラン（ＴＭＳ）シグナルに対するｐｐｍで報告した。結合定数（Ｊ）の単位はヘルツ（Ｈｚ）である。分裂パターンは見かけの多重度を記載し、ｓ（一重線）、ｄ（二重線）、ｔ（三重線）、ｑ（四重線）、ｄｄ（２重の二重線）、ｄｔ（２重の三重線）、ｍ（多重線）、ｂｒ（ブロード）で示す。
【００８８】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ：１０．０７−５．４１（ｂｒ，７Ｈ）、３．８０（ｔ，２Ｈ）、３．５２（ｓ，６Ｈ）、１．６１（ｍ，２Ｈ）、１．２９（ｍ，１Ｈ）、１．２８（ｍ，２Ｈ）、０．８６（ｔ，３Ｈ）
【００８９】
１３ＣＮＭＲスペクトルは１００ＭＨｚのＶａｒｉａｎ分析装置で２９８Ｋで得られた。試料はＤＭＳＯ−ｄ６に溶解し、化学シフトは０ｐｐｍのＴＭＳシグナルに対して報告した。
【００９０】
１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、２５ｍｇ／ｍＬ、２５℃）δｐｐｍ：１５７．０、１５１．０、１５０．９、１４２．８、１１５．２、６１．０、５９．４、４２．０、２８．４、２７．３、２２．０、１３．９
実施例９：プラスイオンエレクトロスプレーイオン化質量スペクトル
【００９１】
質量スペクトルをＱ−ＴＯＦ  Ｐｒｅｍｉｅｒ  ＬＣ−ＭＳで採取した。試料をアセトニトリル／水に溶解し、エレクトロスプレーイオン化によってイオン化した。脱溶媒ガス温度は３５０℃であり、脱溶媒ガス流速は６００Ｌ／時間であった。スプレー電圧は３．５ｋＶであり、ソース温度は１２０℃に維持した。衝突ガス流速は０．５ｍｌ／分であった。
【００９２】
プロトン化分子の正確な質量は２５７．０８０４Ｄａで測定した。このイオンの算定質量は２５７．０８０５Ｄａである。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２５７．０８０４Ｄａ［Ｍ＋Ｈ］＋：１８７、１７０、１４４（測定値は、０．３ｐｐｍの誤差でこのイオンの元素組成と一致する。）
実施例１０：赤外線スペクトル（ＩＲ）
【００９３】
ＡＴＲ赤外線スペクトル：ピーク波数（ｃｍ−１）３３７０、３０４１、２９４６、２８５８、１６８０、１６５６、１５２８、１２６６、１２４３、１０７８、１０６８、１０４９．
【００９４】
ＤＡＴＲ赤外線スペクトルは、ＳｅｎｓＩＲ  Ｔｒａｖｅｌ  ＩＲ  ＤＡＴＲで分解能４ｃｍ−１、１２８回スキャンして得られた。
実施例１１：Ｘ線粉末回析（ＸＲＰＤ）
【００９５】
本発明の８−クロロ−３−ペンチル−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオンのトリス塩は、Ｘ線粉末回析（ＸＲＰＤ）データに示すように結晶性であり、図２に示す通りである。
【００９６】
図２に示すＸ線粉末回折図（ＸＲＰＤ）は、Ｘ’Ｃｅｌｅｒａｔｏｒ検出器が搭載され、固定発散スリットを用いるＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ  Ｘ’Ｐｅｒｔ  Ｐｒｏ粉末回折計で得られた。取得条件は次のとおりであった：照射：ＣｕＫα、発生器圧：４０ｋＶ、発生器電流４０ｍＡ、開始角度：２．０度２シータ、終了角度４０度２シータ、ステップサイズ０．０１７度２シータ。試料をデータ収集の間、回転した。特徴的なＸＲＰＤ角度およびｄ間隔は表１に記録する。
【００９７】
表１：特徴的なＸＲＰＤピーク角度およびｄ間隔
当業者は、ＸＲＰＤピーク位置が試料高さの違いによって影響されることを認識するだろう。したがって本明細書において引用したピーク位置は、＋／−０．２度２シータの変動を受ける。
【表５】
0005666464.tif 000011
実施例１２：元素分析
【００９８】
トロメタミン（トリス）塩の化学量論は提示した元素分析データによって確認され、対応する分子式に対して理論値と一致している。
【表６】
0005666464.tif 000012
【００９９】
本発明が上記に例証された実施形態に限定されず、例証された実施形態および、以下の特許請求の範囲の範囲内である、すべての修正に権利が留保されることは理解されるべきである。
【０１００】
本明細書において引用される雑誌、特許および他の刊行物への様々な言及は、現状技術を含み、また、あたかもすべて述べたかのように参照により本明細書に組み込む。
【図１】
0005666464.tif 000016
【図２】
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【図３】
0005666464.tif 000018
【図４】
0005666464.tif 000019
【図５】
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【図６】
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